p-ISSN 2550-1232 https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.1.125 e - ISSN 2550-0929

## Pendekatan DNA Barcoding untuk Identifikasi Cassidula
angulifera (Petit, 1841) (Moluska: Gastropoda)
DNA barcoding approach to identification of Cassidula angulifera (Petit, 1841) (Mollusca: Gastropoda)
Dandi Saleky 1)*, Sendy L. Merly 1
1 Jurusan Manajemen Sumberdaya Perairan, Universitas Musamus, Indonesia *Korespondensi: dandi@unmus.ac.id

## ABSTRAK
Banyaknya  spesies  gastropoda  yang  memiliki  kemiripan  morfologi  ( cryptic ) membuat  kesalahan  identifikasi  sangat mungkin  terjadi.  Identifikasi  spesies  yang  akurat sangat  diperlukan  dalam  mempelajari  bioekologi  spesies.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengidentifikasi spesies Cassidula sp. yang dikoleksi dari Pantai Payum Merauke dengan teknik  DNA barcoding menggunakan  marka  gen  COI.  Primer  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  primer forward (LCO1490)  dan  primer reverse (HCO2198).  Hasil identifikasi dengan DNA barcoding , spesies yang dianalisis adalah Cassidula angulifera dengan  tingkat  kemiripan  99.53  %  dengan    panjang  sekuen  DNA  650  bp.  Rekonstruksi filogenetik  memperlihatkan  seluruh  sekuen Cassidula sp.  yang  dianalisis  terpisah berdasarkan  jenis  dan  jarak  genetik  dengan  nilai boostrap yang  tinggi.  Rekonstruksi filogenetik Cassidula sp. membentuk kelompok monofiletik yang berarti spesies tersebut berasal  dari  tetua  yang  sama.  DNA barcoding sangat  baik  dan  akurat  dalam mengidentifikasi spesies.
Kata  kunci : Cassidula  angulifera , Criptic ,  DNA barcoding ,  Filogenetik, Monofiletik

## ABSTRACT
A  large  number  of  gastropod  species  have  similarities  in  morphology  (cryptic) makes  misidentification  probably  happen/occurred.  Accurate  species  identification  is needed in studying bioecology of  species. This research aims to identify the species of Cassidulla  sp.  Which  was  collected  from  Peyum  Beach  Merauke  with  DNA  barcoding techniques using COI gene markers. The primers used in this study are forward primers (LCO1490)  and reverse primers  (HCO2198).  The  result  of  identification  with  DNA barcoding  showed  that  the  species  analyzed  was Cassidula  angulifera with  a  99.53% similarity  level  with  a  DNA  sequence  length  of  650  bp.  Phylogenetic  reconstruction showing  the  entire  sequence  of Cassidula sp . which  were  analyzed  separately  based  on the  type  and  genetic  distance  with  high  bootstrap  value.  Phylogenetic  reconstruction  of Cassidula sp.  form  a monophyletic  group,  which means  that the species  come from  the same ancestors. DNA barcoding is very good and accurate in identifying species.
Keywords : Cassidula angulifera, Criptic, DNA barcoding, Philogenetic, Monophyletic

## PENDAHULUAN
Gastropoda  adalah  salah  satu kelompok  invertebrata  laut yang paling  banyak  dipelajari  (Borges  et al., 2016). Memiliki penyebaran yang sangat  luas  dari  laut  dalam  sampai
pesisir  (Saleky  et  al.,  2019;  Syahrial, 2019).  Gastropoda  memiliki  berbagai peranan baik secara ekonomi maupun secara  ekologi  (Borges  et  al.,  2016; Carlén & Olafsson, 2002). Banyaknya spesies  gastropoda  yang  memiliki
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.1.125
kemiripan morfologi ( cryptic ) membuat kesalahan identifikasi spesies sangat mungkin terjadi (Bickford  et  al.,  2007).  Identifikasi spesies  yang  akurat  dan  benar  sangat diperlukan dalam
mempelajari bioekologi  suatu  spesies  termasuk gastropoda  laut  (Galan  et  al.,  2018). Identifikasi  secara  morfologi  cukup sulit dilakukan karena banyak spesies yang  hanya  dapat  diidentifikasi  pada tahapan  hidup  tertentu  saja  (Gossner &  Hausmann,  2009).  Identifikasi dengan  DNA barcoding selain  dapat dilakukan  pada  berbagai  tahapan kehidupan  mulai  dari  fase  larva sampai  dewasa  (Panprommin  et  al., 2019, 2020) tetapi juga pada
spesimen  hon  hayati  dan  juga  dapat mengunakan  specimen  feses,  rambut atau  bahan  lainnya  (Taberlet  & Luikart, 1999).
Identifikasi  dengan  menggunakan DNA barcoding telah  terbukti  secara
efektif mampu membedakan antar spesies secara akurat (Borges et al., 2016;
Fuentes-López et al., 2020; Saleky et al., 2016).  Metode  taksonomi  molekuler telah
banyak digunakan untuk melengkapi  pendekatan  morfologi  dalam identifikasi spesies dan dalam membangun hubungan filogenetik (Galan et  al.,  2018).  Gen  COI  ( Cytochrome Oxidase  Subunit I)  terdapat  di  dalam genom  mitokondria.  Salah  satu  gen  ini umum  dipakai  dalam  DNA barcoding (Wirdateti  et  al.,  2016)  yang  berperan penting  dalam  produksi  energi  serta memiliki  urutan  pasang  basa  bersifat conserve (Suriana et al., 2019).
Gastropoda termasuk
kelas moluska  yang  paling  melimpah,  yang menyebabkan  seringkali  terjadi  masalah dalam  taksonomi  (Layton  et  al.,  2014). Untuk  itulah  diperlukan  identifikasi dengan  teknik  DNA barcoding yang telah
terbukti efektif dalam
mengidentifikasi  berbagai  spesies  secara cepat  dan  akurat  (Fuentes-López  et  al., 2020).  Selain  itu  teknik  DNA barcoding juga  dilakukan  untuk  melengkapi  teknik
identifikasi secara morfologi (Setiamarga et  al.,  2019).  DNA barcoding telah dilakukan untuk mengidentfikasi berbagai  spesies  seperti  udang  air  tawar (Purnamasari et al., 2016), berbagai jenis gastropoda (Leatemia et al., 2018; Saleky et  al.,  2020;  Saleky  et  al.,  2020)  dan berbagai jenis ikan (Shirak et al., 2009) .
Identifikasi molekuler pada berbagai spesies gastropoda pada ekosistem  mangrove  di  Merauke  belum pernah dilakukan sebelumnya yang mana identifikasi dengan DNA barcoding akan mempercepat pengungkapan spesies. Penelitian ini dilakukan dengan mengidentifikasi spesies gastropoda dengan  DNA barcoding menggunakan gen  COI.  Gen  COI  secara  luas  telah digunakan  dalam  identifikasi  berbagai spesies secara akurat dan efektif
(Leatemia  et  al.,  2018;  Saleky  et  al., 2020).  Data  yang  dihasilkan  dapat menjadi dasar dalam mempelajari bioekologi  dan  pengelolaan  spesies gastropoda.

## METODE PENELITIAN

## Koleksi sampel
Sampel dikoleksi dari Pantai Payum  Kabupaten  Merauke  (Gambar  1) dengan  cara koleksi  bebas. Buku identifikasi  gastropoda Indonesian  Shells
I (Dharma,  1988)  dan Recent  &  Fossil Indonesian Shell (Dharma, 2005) digunakan untuk mengidentifikasi sampel berdasarkan  karakter  morfologi.  Sampel jaringan  ( tissue )  untuk  analisis  DNA diambil dari jaringan kaki perut gastropoda  kemudian  disimpan  dan diawetkan  menggunakan  etanol  96% sampai digunakan untuk analisis DNA.

## Analisis Molekuler
Proses  Isolasi  DNA  dilakukan  dengan menggunakan DNA extraction kit (Qiagen  kit,  USA)  dengan  prosdur standar  dari  produsen.  Perbanyakan  COI menggunakan  Teknik polymerase  chain reaction (PCR)  dengan  primer forward LCO1490  (5’-ggtcaacaaatcataaagatattgg- 3')  dan  primer reverse HCO2198  (5’- taaacttcagg  gtgaccaaaaaatca-3’)  (Folmer
p-ISSN 2550-1232 https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.1.125 e - ISSN 2550-0929
et  al.,  1994).  Produk  PCR  dielektrofo- resis  menggunakan  gel  agarosa  1%, buffer  TBE  dengan  tegangan  100  volt selama  30  menit.  Pewarnaan  DNA dilakukan  dengan  menggunakan  Etidium Bromida  dan  divisualisasi  menggunakan UV transluminator. Sekuensing dilakukan dengan mengirim produk PCR ke lembaga 1 st Base Malaysia.
Analisis Data Sekuens DNA C. angulifera yang diperoleh dari perusahaan jasa sekuensing kemudian disejajarkan (alignment)  dengan  metode  ClustalW (1.6) (Kumar et al., 2016) dalam program
MEGA  ( Moleculer  Evolutionary  Genetic Analysis ) 6 (Tamura et al., 2013).
Gambar 1. Lokasi penelitian identifikasi Cassidula angulifera (Petit, 1841)
Tabel  1.  Sekuen  DNA Cassidula  angulifera, Cassidula  vespertilionis, Cassidula schmackeriana, Cassidula crassiuscula , Cassidula zonata , Cassidula nucleus dan Terebralia  palustris yang  digunakan  dalam  rekonstruksi  filogenetik termasuk  lokasi,  nomor  akses  dari  National  Center  for  Biotechnology Information (NCBI)
No Spesies Lokasi Acc. No Sumber 1 C. angulifera Quensland Australia HQ660015 (Dayrat et al., 2011) 2 C. angulifera Quensland Australia KM281106 (Romero et al., 2016) 3 C. vespertilionis Sabah, Malaysia KM281110 (Romero et al., 2016) 4 C. schmackeriana Ishigaki-Jima, Jepang KM281109 (Romero et al., 2016) 5 C. crassiuscula Okinawa, Jepang KM281107 (Romero et al., 2016) 6 C. zonata Australia KF141904 (Colgan & da Costa, 2013) 7 C. nucleus Hainan, Cina MN389192 (Ran et al., 2020) 8 C. nucleus Hainan, Cina MN389193 (Ran et al., 2020) 9 T. palustris Kenya LT634392 (Ratsimbazafy & Kochzius, 2018 ) 10 T. palustris Australia AM932805 (Reid et al., 2008)
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.1.125
Data  sekuen  DNA  dibandingkan dengan  data  GenBank  ( National  Center for  Biotechnology  Information ,  NCBI) dengan  aplikasi  BLAST  ( Basic  Local Alignment Search Tools ) (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov) untuk
menentukan  spesies  berdasarkan  data pembanding  yang  tersedia  di  GenBank. Analisis  DNA  juga  dilanjukan  dengan menghitung  jarak  genetik  antar  spesies dan  juga  analisis  pohon  filogenetik C. angulifera menggunakan metode Neighbor-Joining (NJ)  (Saitou  &  Nei, 1987) dengan model Kimura 2-
parameter,  nilai bootstrap 1000x    (Efron et al., 1996).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Identifikasi Morfologi
Identifikasi  morfologi  gastropoda dilakukan dengan mencocokan morfologi cangkang  dengan  buku  identifikasi. Gastropoda  yang  dianalisis  adalah C. angulifera dengan    panjang  cangkang 2.3  –  3.10  cm  dan  berat  total  1.0  –  1.7 gram. C.  angulifera yang  dikoleksi terdistribusi dan melimpah pada ekosistem  mangrove  di  pesisir  pantai Payum  Merauke  yang  didominasi  oleh spesies mangrove Avicennia alba , Rhizophora  stilosa , Aegiceras  lunuata , Aegiceras  lunuata dan Ceriops  tagal . C. angulifera secara
umum  ditemukan melimpah  pada  ekosistem  mangrove (Ariyanto et al., 2018).
Gambar 2. Morfologi C. angulifera yang dikoleksi dari Pantai Payum, Merauke
Ekosistem  Mangrove  memiliki banyak  fungsi  ekologis  dan  juga  nilai
ekonomis  (Sianturi  &  Saleky,  2020; Syahrial,  2019).  Interaksi  antara  faktor geofisika, geomorfik dan biologis berpengaruh  terhadap  distribusi  dan keanekaragaman  mangrove  di  pesisir (Djamaluddin,  2019;  Syahrial  et  al., 2020).  Mangrove  menjadi  tempat  hidup bagi  berbagai  jenis  biota  salah  satunya adalah C.  angulifera . C  angulifera memanfaatkan  mangrove  sebagai  habitat untuk  hidup,    pengadaan  makanan, perlindungan,  dan  berkembang  biak (Ariyanto  et  al.,  2018).  Secara  ekologis dan  fisiologis, C  angulifera dapat melakukan  migrasi  antara  wilayah  laut dan daratan .

## Karakter Molekuler
Hasil identifikasi dengan menggunakan  BLAST  ( Basic  local Alignment  Search  Tool )  pada  NCBI, spesies  yang  dianalisis  adalah Cassidula angulifera dengan  tingkat  kemiripan 99.53%,  panjang  sekuen  DNA  yang diperoleh adalah 650 bp. Panjang sekuen DNA  tersebut  relatif  sama  dengan panjang  sekuen  yang  ditemukan  pada beberapa sekuen DNA gastropoda seperti Turbo  stenogyrus (Saleky  et  al.,  2020) , Turbo  setosus (Saleky  et  al.,  2020) , Turbo  bruneus (Leatemia  et  al.,  2018) . Komposisi basa  DNA  yang  ditemukan adalah thymine (T) (35.2  %), cytosine (C)(17.8  %), adenine (A)(23.7  %),  dan guanine (G)  (23.7  %).  Hasil  tersebut memperlihatkan basa T adalah basa yang paling banyak ditemukan sedangkan basa C memiliki  komposisi  paling  sedikit. C. angulifera memiliki  karakter  haplotype yang  berbeda dengan C.  angulifera yang berasal dari Australia . Hal tersebut dapat terjadi  akibat  perbedaan  karateristik habitat antar wilayah. Jumlah dan variasi haplotype dapat bertambah dengan menambahkan jumlah sampel C.
angulifera yang dianalisis (Hoehe, 2003) .

## Jarak Genetik dan Filogenetik
Analisis  jarak  genetik  dilakukan dengan  melihat  tingkat  perbedaan  gen (perbedaan  sekuen  DNA)  pada  suatu populasi atau spesies yang diukur melalui
p-ISSN 2550-1232 https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.1.125 e - ISSN 2550-0929
kuantitas  numeric  (Saitou  &  Nei,  1987; Suriana  et  al.,  2019).  Jarak  genetik  yang terbentuk merupakan akibat dari perbedaan genetik spesies dan juga akibat dari  respon  genetik  terhadap  kondisi ekologi  suatu  populasi  (Fatmarischa  et al.,  2014).  Perbadingan  jarak  genetik C. angulifera dengan beberapa sekuen DNA gastropoda  yang  diambil  dari  GenBank memperlihatkan  bahwa  jarak  genetik berkisar antara 0.003 - 0.309.
Jarak  genetik  antar  spesies C. angulifera berkisar  antara  0.003  -  0.010, yang  mana  hasil  tersebut  mengindikasi bahwa  ketiga  sekuen  DNA  tersebut merupakan  spesies  yang  sama.  Jarak genetik  terbesar  adalah  antara  jarak genetik C.  angulifera asal  merauke dengan C.  zonata asal Australia  dengan jarak genetik 0.297.
Gen  COI  selain  digunakan  dalam mengidentifkasi, mengukur  jarak  genetik
tetapi  juga  dapat  digunakan  dalam merekonstruksi  filogentik  suatu  spesies termasuk  di  dalamnya  proses  evolusi (Palumbi, 1994).
Rekonstruksi filogenetik dilakukan dengan mengggunakan 1 sekuen DNA C. angulifera asal Merauke dengan berbagai spesies Cassidula sp.  dari  genbank termasuk T.  palustris dan T.  semistriata yang digunakan sebagai outgrup
(Gambar  3).  Pohon  filogenetik  (Gambar
3)    yang  terbentuk  memperlihatkan C.
angulifera asal  Merauke membentuk clade tersendiri  dengan  spesies C. angulifera asal  Australia  dengan  tingkat kemiripan sekuen sebesar 0.003 dan 0.01. Nilai  tersebut  kurang  dari  2  %    semakin memperkuat bahwa sekuen yang dianalisis  adalah  benar C.  angulifera. Pada  spesies  yang  sama  jarak  genetik kurang dari 2 % (Cai et al., 2016; Ward, 2009).
Tabel 2. Perbandingan jarak genetik antara C. angulifera asal merauke dengan   beberapa sekuen yang diambil dari GenBank No Spesies 1 2 3 4 5 6 7 8 1 C.  angulifera Merauke * * * * * * * * 2 C. angulifera (HQ660015 - Quensland, Australia) 0.010 * * * * * * * 3 C. angulifera (KM281106 - Quensland, Australia) 0.003 0.013 * * * * * * 4 C. vespertilionis (KM281110 - Sabah, Malaysia) 0.236 0.245 0.231 * * * * * 5 C. schmackeriana (KM281109 - Ishigaki Jima, Jepang) 0.236 0.235 0.231 0.149 * * * * 6 C. crassiuscula (KM281107 – Okinawa, Jepang) 0.284 0.284 0.279 0.231 0.234 * * * 7 C. zonata (KF141904 - Australia) 0.297 0.312 0.302 0.302 0.267 0.312 * * 8 C. nucleus (MN389192 - Hainan, Cina) 0.224 0.233 0.229 0.282 0.309 ● 0.279 0.307 * 9 C. nucleus (MN389193 – Hainan, Cina) 0.243 0.252 0.238 0.258 0.268 0.288 0.307 0.053
• Jarak genetik terbesar
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.1.125
Gambar 3. Pohon filogenetik Cassidula sp.  menggunakan metode Neighbor-Joining (NJ) dengan  model  Kimura  2-parameter, bootstrap 1000  replikasi.  Angka  pada setiap cabang menunjukkan nilai bootstrap yang diperoleh.
Pohon  filogenetik  menunjukkan bahwa  setiap  sekuen  DNA  terpisah berdasarkan  spesies  dan  juga  terpisah berdasarkan nilai jarak genetik.
Rekonstruksi pohon filogenetik C.
angulifera yang  terbentuk  dengan  nilai bootstrap yang  tinggi.  Nilai bootstrap
yang
terbentuk mengindikasikan
percabangan pada pohon filogenetik yang terbentuk memiliki tingkat validitas yang tinggi  dari  percabangan  tersebut  (Saleky et  al.,  2020).  Jarak  genetik  yang  kecil mengindikasikan terdapat hubungan kekerabatan antar semua spesies Cassidula sp.  Pohon  filogenetik  yang terbentuk  juga  menunjukkan  adanya monofiletik pada seluruh sekuen Cassidula sp.  yang  berarti  sekelompok taksa  yang  berasal  dari  nenek  moyang yang sama (Suriana et al., 2019).

## KESIMPULAN
Hasil  identifikasi  dengan  DNA barcoding , spesies yang dianalisis adalah Cassidula  angulifera dengan  tingkat kemiripan  99.53%  dengan  jarak  genetik terdekat  sebesar  0.003.  Hasil  analisis jarak genetik juga memperlihatkan bahwa    individu pada  spesies  yang sama memiliki  jarak  genetik  kurang  dari  2  %.
Rekonstruksi  filogenetik,  masing-masing spesies terpisah berdasarkan jenis dengan nilai boostrap yang  tinggi.    Keseluruhan sekuen Cassidula sp.  yang  dianalisis membentuk  kelompok  monofiletik  yang berarti berasal dari tetua yang sama .

## Ucapan Terima Kasih
Penelitian ini dibiayai oleh Universitas  Musamus    melalui  DIPA Internal  Skim  Penelitian  Dosen  Pemula tahun  2020  dengan  Nomor  Kontrak 177.6/UN52.8/LT/2020.

## DAFTAR PUSTAKA
Ariyanto,  D.,  Bengen,  D.  G.,  Prartono, T.,  &  Wardiatno,  Y.  (2018).  The association  of  cassidula  nucleus (Gmelin 1791) and cassidula angulifera (petit 1841) with mangrove  in  banggi  coast,  Central Java,  Indonesia. AACL  Bioflux ,
11 (2), 348–361.
Bickford,  D.,  Lohman,  D.  J.,  Sodhi,  N. S., Ng, P. K. L., Meier, R., Winker, K., Ingram, K. K., & Das, I. (2007).
Cryptic  species  as  a  window  on diversity  and  conservation.  In Trends  in  Ecology  and  Evolution (Vol.  22,  Issue  3,  pp.  148–155).
p-ISSN 2550-1232 https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.1.125 e - ISSN 2550-0929
https://doi.org/10.1016/j.tree.2006.1 1.004 Borges,  L.  M.  S.,  Hollatz,  C.,  Lobo,  J., Cunha, A. M., Vilela, A. P., Calado,
G.,  Coelho,  R.,  Costa,  A.  C., Ferreira, M. S. G., Costa, M. H., & Costa,  F.  O.  (2016).  With  a  little help from DNA barcoding: Investigating the diversity of Gastropoda  from  the  Portuguese coast. Scientific  Reports , 6 (August 2015), 1–11. https://doi.org/10.1038/srep20226 Cai,  Y.,  Zhang,  L.,  Wang,  Y.,  Liu,  Q., Shui, Q., Yue, B., Zhang, Z., & Li, J.  (2016).  Identification  of  deer species  (Cervidae,  Cetartiodactyla)
in China using mitochondrial cytochrome  c  oxidase  subunit  I
(mtDNA COI). Mitochondrial DNA
Part A: DNA Mapping, Sequencing, and  Analysis , 27 (6),  4240–4243.
https://doi.org/10.3109/19401736.2 014.1003919
Carlén,  A.,  &  Olafsson,  E.  (2002).  The effect  of  the  gastropod Terebralia
palustris on  infaunal  communities in a mangrove forest in East Africa. Wetlands Ecology and Management , 10 , 303–311. Colgan,  D.  J.,  &  da  Costa,  P.  (2013).
Recent  evolutionary  dynamism  in three  pulmonate  gastropods  from south-eastern  Australia. Estuarine, Coastal  and  Shelf  Science , 128 ,  1–
8.
https://doi.org/10.1016/j.ecss.2013.
04.016
Dayrat,  B.,  Conrad,  M.,  Balayan,  S.,
White, T. R., Albrecht, C., Golding, R.,  Gomes,  S.  R.,  Harasewych,  M. G.,  &  de  Frias  Martins,  A.  M. (2011).  Phylogenetic  relationships and evolution of pulmonate gastropods (Mollusca): New insights from increased taxon
sampling. Molecular  Phylogenetics and  Evolution , 59 (2),  425–437. https://doi.org/10.1016/j.ympev.201 1.02.014 Dharma,  B.  (2005). Recent  and  Fossil Indonesian Shells (p. 424). Dharma,  Bunjamin.  (1988).  Siput  dan Kerang Indonesia (Indonesian Shells I).pdf. In Buku (p. 25).
Djamaluddin,  R.  (2019).  Growth  pattern in  tropical  mangrove  trees  of Bunaken  National  Park,  North Sulawesi,  Indonesia. Biodiversitas , 20 (6), 1713–1720. https://doi.org/10.13057/biodiv/d20 0630 Efron,  B.,  Halloran,  E.,  &  Holmes,  S.
(1996).  Bootstrap confidence  levels for  phylogenetic  trees. Proceedings of the National Academy  of Sciences  of  the  United  States  of America , 93 (23),  13429–13434. https://doi.org/10.1073/pnas.93.14.7
085
Fatmarischa,  N.,  Sutopo,  -,  &  Johari,  S.
(2014).  Jarak  Genetik  dan  Faktor Peubah  Pembeda  Entok  Jantan  dan
Betina Melalui Pendekatan Analisis Morfometrik. Jurnal  Peternakan Indonesia  (Indonesian  Journal  of Animal Science) , 16 (1), 33. https://doi.org/10.25077/jpi.16.1.33 -39.2014 Folmer,  O.,  Black,  M.,  Hoeh,  W.,  Lutz, R.,  &  Vrijenhoek,  R.  (1994).  DNA primers for amplification of mitochondrial cytochrome c oxidase  subunit  I  from  diverse metazoan  invertebrates. Molecular Marine Biology and Biotechnology ,
3 (5), 294–299. Fuentes-López,  A.,  Ruiz,  C.,  Galián,  J., &  Romera,  E.  (2020).  Molecular identification of forensically
important fly species in Spain using COI  barcodes. Science  and  Justice , 60 (3), 293–302. https://doi.org/10.1016/j.scijus.2019 .12.003 Galan, G. L., Mendez, N. P., & Cruz, R.
Y.  Dela.  (2018).  DNA  bacoding  of three  selected  gastropod  species using  cytochrome  oxidase  (COI) gene. Annals  of  West  University  of Timisoara, Ser. Biology , 21 (1), 93–
102.
Gossner,  M.,  &  Hausmann,  A.  (2009).
DNA barcoding enables the identification of caterpillars feeding on  native  and  alien  oak. Mitt
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.1.125
Münchn Ent Ges , 99 , 135–140.
Hoehe, M. R. (2003). Haplotypes and the systematic  analysis  of  genetic variation  in  genes  and  genomes. Pharmacogenomics , 4 (5),  547–570.
https://doi.org/10.1517/phgs.4.5.54 7.23791 Kumar,  S.,  Stecher,  G.,  &  Tamura,  K. (2016). MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis Version  7.0  for  Bigger  Datasets. Molecular  Biology  and  Evolution , 33 (7), 1870–1874. https://doi.org/10.1093/molbev/ms w054 Layton,  K.,  Martel,  A.,  &  Hebert,  P.  D.
(2014).  Patterns  of  DNA  Barcode Variation  in  Canadian  Marine Molluscs. PLoS ONE , 9 (4), e95003. https://doi.org/10.1371/journal.pone .0095003.s002 Leatemia,  S.  P.  .,  Manumpil,  A.  W., Saleky,  D.,  &  Dailami,  M.  (2018).
DNA Barcode  dan  Molekuler
Filogeni  Turbo  sp.  di  Perairan Manokwari  Papua  Barat. Prosiding
Seminar  Nasional  MIPA  UNIPA , 3 (1), 103–114. https://prosiding.fmipa.unipa.ac.id/i ndex.php/SNMIPAUNIPA/article/v iew/12 Palumbi, S. R. (1994). Genetic divergence,  reproductive  isolation, and  marine  speciation.  In Annual Review  of  Ecology  and  Systematics (Vol.  25,  pp.  547–572).  Annual Reviews Inc. https://doi.org/10.1146/annurev.es.2 5.110194.002555 Panprommin, D., Iamchuen, N., Soontornprasit,  K.,  &  Tuncharoen, S.  (2020).  The  utility  of  DNA barcoding for the species identification  of  larval  fish  in  the lower  ing  river,  Thailand. Turkish Journal  of  Fisheries  and  Aquatic Sciences , 20 (9), 671–679. https://doi.org/10.4194/1303-2712-
v20_9_02 Panprommin,  D.,  Soontornprasit,  K.,  & Pangeson,  T.  (2019).  Comparison of  three  molecular  methods  for species  identification  of  the  family Cichlidae in Kwan Phayao, Thailand. Mitochondrial  DNA  Part A:  DNA  Mapping,  Sequencing,  and Analysis , 30 (1), 184–190. https://doi.org/10.1080/24701394.2 018.1472248 Purnamasari,  L.,  Farajallah,  A.,  &
Wowor,  D.  (2016).  Application  of DNA  Barcode  in  Determination  of Shrimp  Species  of  Fresh  Water From  the  Province  of  Jambi. BioCENCETTA , II (1), 50–59.
Ran,  K.,  Li,  Q.,  Qi,  L.,  Li,  W., &  Kong, L.  (2020).  DNA  barcoding  for identification  of  marine  gastropod species  from  Hainan  island,  China.
Fisheries  Research , 225 (August
2019). https://doi.org/10.1016/j.fishres.202 0.105504
Ratsimbazafy,  H.  A.,  &  Kochzius,  M.
(2018). Restricted gene flow among western  Indian  Ocean  populations of  the  mangrove  whelk  Terebralia palustris (Linnaeus, 1767) (Caenogastropoda: Potamididae). Journal  of  Molluscan  Studies , 84 (2), 163–169. https://doi.org/10.1093/mollus/eyy0 01 Reid,  D.  G.,  Dyal,  P.,  Lozouet,  P.,
Glaubrecht,  M.,  &  Williams,  S.  T.
(2008). Mudwhelks and mangroves: The  evolutionary  history  of  an ecological  association  (Gastropoda: Potamididae). Molecular Phylogenetics and Evolution , 47 (2),
680–699. https://doi.org/10.1016/j.ympev.200 8.01.003 Romero, P. E., Pfenninger, M., Kano, Y., &  Klussmann-Kolb,  A.  (2016). Molecular phylogeny of the Ellobiidae (Gastropoda: Panpulmonata) supports independent  terrestrial  invasions. Molecular Phylogenetics and Evolution , 97 , 43–54. https://doi.org/10.1016/j.ympev.201 5.12.014 Saitou,  N.,  &  Nei,  M.  (1987).  The neighbor-joining  method:  a  new method for reconstructing
p-ISSN 2550-1232 https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.1.125 e - ISSN 2550-0929
phylogenetic trees. Molecular Biology  and  Evolution , 4 (4),  406–
425.
https://doi.org/10.1093/oxfordjourn als.molbev.a040454 Saleky,  D.,  Leatemia,  Simon  P.O
Pattiasina,  T.  F.,  Isma,  Rosa,  P., Welliken,  M.  A.,  &  Melmambessy, Edy  H.P  Dailami,  M.  (2020). Analisis  Pola  Pertumbuhan  Dan Pendekatan  DNA Barcoding Untuk IdentifikasI Turbo  stenogyrus P. Fischer, 1873 (MOLLUSCA: GASTROPODA). Biotropika - Journal  of  Tropical  Biology , 8 (2),
79–86.
https://doi.org/10.21776/ub.biotropi ka.2020.008.02.03
Saleky,  D.,  Leatemia,  S.  P.  .,  Yuanike,
Y., Rumengan, I., & Putra, I. N. G. (2019).  Temporal  Distribution  of Gastropods  In  Rocky  Intertidal Area  In  North  Manokwari,  West Papua. JURNAL  SUMBERDAYA AKUATIK  INDOPASIFIK ,  1–10. https://doi.org/10.30862/jsai-fpik- unipa.2019.vol.3.no.1.58 Saleky,  D.,  Setyobudiandi,  I.,  Toha,  A. H. A., Takdir, M., & Madduppa, H. H. (2016). Length-weight relationship  and  population  genetic of  two  marine  gastropods  species (Turbinidae:  Turbo  sparverius  and Turbo bruneus) in the Bird Seascape Papua, Indonesia. Biodiversitas, Journal of Biological Diversity , 17 (1), 208–217. https://doi.org/10.13057/biodiv/d17 0130 Saleky, D., Supriyatin, F. E., & Dailami, M.  (2020). Pola  Pertumbuhan  dan
Identifikasi  Genetik  Turbo  setosus
Gmelin  ,  1791 . 23 (November), 305–315.
Setiamarga,  D.  H.  E.,  Nakaji,  N., Iwamoto,  S.,  Teruya,  S.,  &  Sasaki, T.  (2019).  Dna  barcoding  study  of shelled  gastropods  in  the  intertidal rocky  coasts  of  central  Wakayama Prefecture,  Japan,  using  two  gene markers. International  Journal  of GEOMATE , 17 (62), 9–16. https://doi.org/10.21660/2019.62.45
21
Shirak,  A.,  Cohen-Zinder,  M.,  Barroso, R.  M.,  Seroussi,  E.,  Ron,  M.,  & Hulata,  G.  (2009).  DNA  Barcoding of Israeli Indigenous and Introduced Cichlids.  In The  Israeli  Journal  of Aquaculture-Bamidgeh (Vol.  61, Issue 2). http://www.siamb.org.il Sianturi,  R.,  &  Saleky,  D.  (2020).
Produksi  Serasah  Mangrove  di Biangkuk  ,  Kabupaten  Merauke  ( Litterfall  Production  of  Mangrove in  Biangkuk  ,  Merauke  Regency  ) . 10 (September), 58–65. Suriana, S., Marwansyah, M., & Amirullah,  A.  (2019).  Karakteristik
Segmen  Gen  sitokrom  C  Oksidase Subunit  I  (COI)  Ngengat  Plusia chalcites  (Lepidoptera:  Noctuidae). BioWallacea :  Jurnal  Penelitian Biologi  (Journal  of  Biological
Research) , 6 (2), 985. https://doi.org/10.33772/biowallace a.v6i2.8824 Syahrial,  M.  (2019).  Status  Biota Penempel Pasca Penanaman Mangrove Rhizophora spp.  di
Kepulauan  Seribu:  Studi  Kasus Filum  Moluska. JFMR-Journal  of
Fisheries  and  Marine  Research , 3 (2), 46–57. https://doi.org/10.21776/ub.jfmr.20 19.003.02.7
Syahrial Syahrial, Saleky Dandi, A. P. A. S.,  &  Tasabaramo  Ilham  Antariksa. (2020).  Ekologi  Perairan  Pulau Tunda  Serang  Banten:  Keadaan Umum  Hutan  Mangrove. Jurnal
Sumberdaya  Akuatik  Indopasifi , 4 (1), 53–67. https://doi.org/10.46252/jsai - fpik - unipa.2020.Vol.4.No.1. 103
Taberlet,  P.,  &  Luikart,  G.  (1999).  Non- invasive  genetic  sampling  and individual  identification. Biological
Journal  of  the  Linnean  Society , 68 (1–2), 41–55. https://doi.org/10.1111/j.1095- 8312.1999.tb01157.x
Tamura,  K.,  Stecher,  G.,  Peterson,  D., Filipski,  A.,  &  Kumar,  S.  (2013).
MEGA6:  Molecular  evolutionary genetics analysis version 6.0.
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.1.125
Molecular  Biology  and  Evolution , 30 (12), 2725–2729.
https://doi.org/10.1093/molbev/mst 197
Ward,  R.  D.  (2009).  DNA  barcode divergence  among  species  and genera of birds and fishes. Molecular Ecology Resources , 9 (4), 1077–1085. https://doi.org/10.1111/j.1755- 0998.2009.02541.x Wirdateti, W., Indriana, E., & Handayani,  H.  (2016). Analisis Sekuen DNA Mitokondria Cytochrome Oxidase I (COI) mtDNA  Pada  Kukang  Indonesia (Nycticebus  spp)  sebagai  Penanda Guna  Pengembangan  Identifikasi Spesies . 12 (1), 119–128.
https://doi.org/10.14203/jbi.v12i1.2 322