Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 7(1), Maret 2022, 92-101 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902

## VALIDASI METODE ANALISIS DAN PENGUJIAN
FORCE DEGRADATION STUDY PADA MEREK DAGANG

## YANG MENGANDUNG PARACETAMOL

## Chresiani Destianita Yoedistira*, Gytha Novella Ongkowijoyo
Program Studi Farmasi, Universitas Ma Chung
*Email: chresiani.destianita@machung.ac.id
Artikel diterima: 24 November 2021; Disetujui: 17 Maret 2022 DOI: https://doi.org/10.36387/jiis.v7i1.829

## ABSTRAK
Parasetamol  merupakan  obat  yang  paling  banyak  dikonsumsi  masyarakat, sehingga perlu dilakukan pemastian mutu secara ketat. Oleh karena itu  dilakukan forced  degradation  study menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  dengan berbagai kondisi degradasi yang direkomendasikan oleh International Council on Harmonisation (ICH).  Penelitian  dilakukan  pada  lima  merek  obat  tablet parasetamol  yang  diberi  perlakuan  hidrolisis,  oksidasi, photolytic ,  dan thermal yang  dideteksi  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  243nm. Metode  yang  dikembangkan  divalidasi  dengan  parameter  linieritas,  selektivitas, akurasi,  presisi,  batas  deteksi  dan  kuantifikasi.  Hasil  yang  didapatkan  selektif, linier  dengan  regresi  0,99;  akurat  dengan  %Recovery  antara  99,4  -  100,9%  dan %CV  <2%;  dan  presisi  dengan  %RSD  <2%;  LOD  24,35706967  mg/L;  LOQ 79,95750448 mg/L. Lima merek obat yang diuji perlakuan mengalami degradasi hidrolisis,  oksidasi, photolysis ,  dan thermal. Pada  perlakukan  basa  dan  oksidasi hasil  degradasi  yang  didapat  tidak  memenuhi  persyaratan  dari  Farmakope Indonesia  yaitu Indonesia 90% - 110%.
Kata kunci: Parasetamol, Forced Degradation Study , Spektrofotometer UV-Vis

## ABSTRACT
Paracetamol  is  the  drug  most  consumed  by  the  public,so  it’s  necessary  to carry  out  strict  quality  assurance.  Therefore,  a  forced  degradation  study  was carried  out  using  a  UV-Vis  spectrophotometer  with  various  degradation conditions recommended by ICH. The research was conducted on five brands of paracetamol  tablets  that  were  treated  with  hydrolysis,  oxidation,  photolytic,  and thermal  treatment,  which  were  detected  by  UV-Vis  spectrophotometer  at  a wavelength  of  243nm.  The  developed  method  is  validated  with  linearity, selectivity,  accuracy,  precision,  detection  limit,  and  quantification  parameters. The results obtained are selective, linear with a regression of 0.99; accurate with %Recovery  between  99.4  -  100.9%  and  %CV  <2%;  and  precision  with  %RSD <2%; LOD 24.35706967 mg/L; LOQ 79.95750448 mg/L. The five brands of drugs tested  were  subjected  to  hydrolysis,  oxidation,  photolysis,  and  thermal degradation.  Under  alkaline  and  oxidizing  conditions,  it  was  found  that  the degradation  was  beyond  the  limit  of  levels,  according  to  the  Indonesian
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 7(1), Maret 2022, 92-101 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Pharmacopoeia 90% - 110%.
Keywords: Paracetamol, Forced Degradation Study, UV-Vis spectrophotometer

## PENDAHULUAN
Parasetamol  termasuk  dalam salah satu obat analgesik dan antipiretik yang paling banyak dikonsumsi masyarakat untuk pengobatan  nyeri  dan  demam.  Hal tersebut dikarenakan parasetamol
memiliki aktifitas yang mampu
menekan  fungsi  sistem  saraf  pusat dan  memiliki  harga  yang  terjangkau.
Parasetamol bekerja dengan menghambat  aktivitas  prostaglandin endoperoksida sintase, atau
siklooksigenase  (Bertolini et  al. ,
2006).  Dikarenakan  banyak  nya penggunaan paracetamol di masyarakat  maka  tidak  menutup kemungkinan adanya kesalahan terhadap  penyimpnaan  obat  ini.
Kesalahan  dalam  penyimpanan  obat dapat  menyebabkan  produk  tersebut
mengalami penuruanan kualitas
dengan ada nya proses degradasi. Produk farmasi rentan mengalami  degradasi  dalam  berbagai bentuk fisik dan kimia serta
menghasilkan
kotoran yang
mempengaruhi  kinerja  bahan  aktif
obat.  Oleh  karena  itu,  diperlukan metode  untuk  melihat  bahwa  obat mengalami  degradasi  atau  tidak dengan  menggunakan  metode force
degradation study . Forced
degradation  study adalah  teknik dimana  bahan  obat  akan  diberi perlakuan kondisi stres yang berbeda- beda  yaitu  asam,  bsa,  oksidasi, photolytic , dan thermal sesuai dengan pedoman  ICH  (Venkataraman  and Manasa, 2018). Pada beberapa penelitian telah melaporkan kromatografi cair kinerja tinggi untuk mendeteksi degradasi
dalam
parasetamol,  tetapi  tidak  banyak metode spektrofotometer UV-Vis yang digunakan untuk forced
degradation  study (Venkataraman and Manasa, 2018). Teknik
spektrofotometer  UV-Vis  umumnya lebih  disukai  dikarenakan  biaya  yang dibutuhkan  lebih  murah  dan  proses pengerjaan yang cepat (Naveed et al., 2014).  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini melakukan forced  degradatin  study obat parasetamol menggunakan
spektrofotometri UV-Vis.
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 7(1), Maret 2022, 92-101 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902

## METODE PENELITIAN
Bahan-bahan  yang  digunakan
dalam penelitian
ini adalah
parasetamol p.a, sampel tablet
parasetamol  dengan  beberapa  merek yang  dibeli  dari  berbagai  apotek, metanol, aquadest, HCl 0,1 M, NaOH
0,1  M,  H 2 O 2 3%.  Alat  yang
digunakan  dalam  penelitian  yaitu spektrofotometer UV-Vis, mortir, labu  ukur  100  ml,  labu  ukur  10  ml,
timbangan analitik, pipet, gelas
beaker, mikropipet 100-1000µm,
mikropipet  20-200µm,  lampu  7000
lux, oven.

## Preparasi Larutan Standar
20mg parasetamol
murni
dilarutkan  dalam  metanol  sebanyak 10  ml  dan  air  hingga  100ml, konsentrasi akhir 200mg/L.

## Preparasi Sampel
Sebanyak 20 tablet parasetamol dari  masing-masing  merek  ditimbang satu  persatu  dan  digerus  hingga menjadi  serbuk,  Serbuk  sampel  ini yang akan digunakan untuk pengujian
forced degradation study .

## Validasi Metode Analisis

## Linieritas
Linieritas  dilakukan  sebanyak 10  seri  konsentrasi  dalam  rentang  3-
12 mg/L (3 mg/L, 4 mg/L, 5 mg/L, 6 mg/L,  7  mg/L,  8  mg/L,  9  mg/L,  10 mg/L,  11  mg/L,  dan  12  mg/L)  . Analisis larutan diukur pada spektrofotometer  Uv-Vis,  didapatkan nilai absorbansi untuk dibuat persamaan regresi linier y = bx + a.

## LOD & LOQ
Batas deteksi dan batas kuantitasi  untuk  parasetamol  dapat dihitung dari data linieritas.

## Selektivitas
Selektivitas diukur dengan menganalisis larutan blanko, standart, dan  sampel  dengan  kondisi  yang sama.

## Akurasi
Akurasi dilakukan dengan menggunakan  3  konsentrasi  standart yang  berbeda  yaitu  1,8  mg/L,  2,7 mg/L, 3,6 mg/L untuk masing-masing 30%,  45%,  60%  dan  konsentasi sampel  6  mg/L.  Setiap  konsentrasi yang di buat dibuat replikasi sebanyak 3 kali.

## Presisi
Presisi  dilakukan  sebanyak  6 kali  replikasi  dari  tiga  konsentrasi yang  berbeda.  Presisi  dilakukan secara intraday dan interday dengan 3 hari berturut-turut.
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 7(1), Maret 2022, 92-101 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902

## Forced Degradation Study

## Sebelum Perlakuan
10mg sampel dilarutkan dengan
metanol  10%  dan  air  hingga  volume
10 ml, sehingga didapatkan konsentrasi  1000  mg/L.  Kemudian diambil  0,1  ml  dilarutkan  dengan  air hingga 10 ml,  didapatkan konsentrasi 10mg/L.  Preparasi  ini  dilakukan sebanyak 3 kali replikasi dan
absobansi diukur menggunakan spektrofotometer Uv-Vis serta
dihitung konsentrasi yang didapatkan.

## Kondisi Asam
10mg sampel dilarutkan dengan metanol  1  ml    dan  HCl  0,1M  9  ml hingga  volume  akhir  10  ml.  Larutan didiamkan  selama  1,  3,  dan  7  hari.
Selanjutnya diambil sampel sebanyak 0,1  ml  dan  dilarutkan  dengan  air hingga  10  ml  didapatkan  konsentrasi 10mg/L.  Preparasi  ini  dilakukan sebanyak  3  kali  replikasi  pada masing-masing  hari  dan  absobansi
diukur menggunakan spektrofotometer Uv-Vis serta
dihitung konsentrasi yang didapatkan.

## Kondisi Basa
10mg sampel dilarutkan dengan metanol  1  ml  dan  NaOH  0,1M  9  ml hingga  volume  akhir  10  ml.  Larutan
didiamkan  selama  1,  3,  dan  7  hari.
Selanjutnya diambil sampel sebanyak 0,1  ml  dan  dilarutkan  dengan  air hingga  10  ml  didapatkan  konsentrasi 10mg/L.  Preparasi  ini  dilakukan sebanyak  3  kali  replikasi  pada masing-masing  hari  dan  absobansi
diukur menggunakan spektrofotometer Uv-Vis serta
dihitung konsentrasi yang didapatkan.

## Kondisi Oksidasi
10mg sampel dilarutkan dengan metanol  1  ml  dan  H 2 O 2 3%  9  ml hingga  volume  akhir  10  ml.  Larutan didiamkan  selama  1,  3,  dan  7  hari. Selanjutnya diambil sampel sebanyak 0,1  ml  dan  dilarutkan  dengan  air hingga  10  ml  didapatkan  konsentrasi 10mg/L.  Preparasi  ini  dilakukan sebanyak  3  kali  replikasi  pada masing-masing hari dan diukur menggunakan  spektrofotometer  Uv- Vis.

## Kondisi Photolytic
10mg sampel dilarutkan dengan metanol  1  ml  dan  air  hingga  volume 10  ml.  Larutan  didiamkan  dibawah sinar 7000 lux selama 1, 3, dan 7 hari. Selanjutnya diambil sampel sebanyak 0,1  ml  dan  dilarutkan  dengan  air hingga  10  ml  didapatkan  konsentrasi
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 7(1), Maret 2022, 92-101 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
10mg/L.  Preparasi  ini  dilakukan sebanyak  3  kali  replikasi  pada masing-masing  hari  dan  absobansi
diukur menggunakan spektrofotometer Uv-Vis serta
dihitung konsentrasi yang didapatkan.

## Kondisi Thermal
10mg sampel dilarutkan dengan metanol  10%  dan  air  hingga  volume 10 ml. Larutan didiamkan dalam oven dengan suhu 60  C selama 1, 3, dan 7 hari.  Selanjutnya  diambil  sampel sebanyak  0,1  ml  dan  dilarutkan dengan  air  hingga  10  ml  didapatkan konsentrasi    10mg/L.  Preparasi  ini dilakukan  sebanyak  3  kali  replikasi pada masing-masing hari dan
absobansi diukur menggunakan spektrofotometer Uv-Vis serta dihitung konsentrasi yang didapatkan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Validasi Metode Analisis
Validasi metode analisis bertujuan  untuk  membuktikan  bahwa metode yang digunakan dapat
memenuhi persyaratan untuk pengunaannya (Harmita, 2004). Panjang gelombang parasetamol yang
didapatkan  yaitu  243  nm.  Linieritas diamati  dengan  konsentrasi  3-12
mg/L  didapatkan  hasil  yang  linier dengan regresi sebesar 0,9981852299 dengan  persamaan  y=  -0,0169  + 0,064x (Gambar 1).
Gambar 1. Hasil Linieritas
Hasil parameter LOD dan LOQ yang  didapatkan  dalam  validasi
metode paracetamol yaitu
24,35706967  mg/L  dan  79,95750448
mg/L. Selektivitas didapatkan selektif dengan  mengamati  larutan  standart dan  sampel  (Gambar  2).  Gambar tersebut menunjukkan persamaan gambaran  spektra  antara  standar paracetamol  dan  sampel  sedangkan blanko  tidak  menunjukkan  gambaran spektra.
Parameter Akurasi
didapatkan  hasil  %Recovery  antara 99,4  -  100,9%  dan  %CV  <2%  yang mengindikasikan  metode  ini  akurat
y = 0,064x - 0,0169 R² = 0,9964 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0 5 10 15 Linieritas
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 7(1), Maret 2022, 92-101 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
(Tabel  1).  Parameter  presisi intraday
dan interday didapatkan  hasil  %RSD
<2%  yang  menunjukan  metode  yang digunakan presisi (Tabel 2).
Gambar 2. Penetuan Panjang Gelombang Maksimum Paracetamol
Tabel 1. Hasil Akurasi Level Konsen- trasi % Recovery Rata- rata % Recovery SD % CV 30% 99,42% 100,26% 0,788  0,786% 100,98% 100,37% 45% 100,78% 100,35% 0,591  0,589% 99,68% 100,60% 60% 100,02% 100,14% 0,279  0,279% 99,94%
100,46%

## Tabel 2. Hasil Presisi
Konsen- trasi (mg/L) Intraday (Rata- rata %Kadar, SD, %RSD) n=6 Interday (Rata-rata %Kadar, SD, %RSD) n=6 Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3 7,8 106,01%; 1,18; 1,11 105,7; 1.34; 1,26 108,14; 1,43; 1,32 102,71; 1,37; 1,33 8,7 108,46; 1,21; 1,12 108,21; 1,35; 1,24 108,4; 1,83; 1,69 103,19; 1,45; 1,41 9,6 106,19; 1,31; 1,23 105,92; 1,12; 1,06 108,02; 1,23; 1,14 102,33; 1,36; 1,33

## Forced Degradation Study
Degradasi  dalam  suatu  bahan obat  akan  mempengaruhi  suatu  mutu produk.  Ketidakstabilan  kimia  dari bahan  obat  di  bawah  kondisi  asam, basa, oksidasi, photolytic dan thermal
dapat  ditemui  selama  penyimpanan, pembuatan,  atau  formulasi.  Batas kadar yang ditetapkan dalam
Farmakope  Indonesia  yaitu  pada tablet parasetamol mengandung 90%- 110%  dari  jumlah  yang  tertera  pada etiket  (DepKes,  2020).  Semua  merek parasetamol  terjadi  perubahan  kadar dari  sebelum  dan  sesudah  perlakuan sehingga  dapat  dikatakan  bahwa semua  merek  parasetamol  terjadi degradasi  (Tabel  3).  Pada  kondisi asam merek PCT A, PCT B, dan PCT C  terjadi  degradasi  dengan  kadar yang  masih  didalam  batas.  Pada kondisi photolytic merek  PCT  B  dan
PCT E terjadi degradasi dengan kadar yang  masih  didalam  batas.  Pada kondisi thermal merek  PCT  C  dan PCT D terjadi degradasi dengan kadar yang  masih  didalam  batas.  Pada kondisi  basa  semua  merek  tablet parasetamol  mengalami  degradasi dengan  ditunjukan  pada  gambar grafik yang terlihat adanya
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 7(1), Maret 2022, 92-101 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
pergeseran  panjang  gelombang.  Hal tersebut  dapat  dikarenakan  adanya pencampuran  pelarut  dengan  NaOH dan  adanya  substituen  pada  gugus kromofor,  sehingga  dapat  dikatakan struktur parasetamol berubah menjadi produk  yang  terdegradasi  karena adanya  penambahan  NaOH.  Pada kondisi  oksidasi  semua  merek  obat parasetamol  dikatakan  mengalami
degradasi dikarenakan perubahan grafik  dari  sebelum  dan  sesudah perlakuan  terjadi  perbedaan  yang signifikan  dan  tidak  ditemukannya panjang  gelombang.  Hasil  spektrum pada  hari  ke  1,3  dan  7  memiliki spektrum  yang  sama  pada  masing- masing  perlakuan  konsidi forced degradation study (Gambar 3-7).
Tabel 3. Hasil %Kadar Forced Degradation Study
Merek Perlakuan Hari Replikasi Rata-Rata 1 2 3 PCT A Sebelum 0 104,52  102,11  101,47 102,7 Asam 1 97,52 105,01 98,26 100,26 3 92,43 94,33 94,23 93,67 7 98,29 96,72 97,35 97,45 Basa 1 87,22 99,59 87,68 91,5 3 76,29 73,58 74,50 74,79 7 90,96 90,86 92,91 91,58 Oksidasi 1, 3 & 7 - - - - Photolytic 1 107,07  105,22  105,94 106,07 3 91,55 90,02 90,14 90,57 7 83,5 85,35 85,47 84,77 Thermal 1 87,80 94,15 89,45 90,47 3 102,58  107,51 99,67 103,25 7 84,39 84,90 86,99 85,43 PCT B Sebelum 0 103,3 103,86  107,09 104,75 Asam 1 104,68  109,01  108,55 107,41 3 93,25 95,52 96,36 95,04 7 109,91  110,33  110,08 110,11 Basa 1 96,87 92,37 92,82 94,02 3 78,66 79,20 78,77 78,88 7 81,91 86,53 86,42 84,95 Oksidasi 1, 3 & 7 - - - - Photolytic 1 105,69  104,24  103,39 104,44 3 93,47 91,97 91,58 92,34 7 105,62  107,51  107,03 106,72 Thermal 1 128,22  126,78  129,88 128,3 3 98,69 96,51 96,97 97,39 7 108,43  112,94  113,64 111,67 PCT C Sebelum 0 104,9 105,37  105,71 105,33 Asam 1 104,33  104,47  105,48 104,76 3 102,45 99,34 101,59 101,13 7 101,21 99,34 96,67 99,07
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 7(1), Maret 2022, 92-101 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Merek Perlakuan Hari Replikasi Rata-Rata 1 2 3 Basa 1 92,55 90,55 95,95 93,02 3 93,84 95,92 95,66 95,14 7 93,41 97,27 95,6 95,43 Oksidasi 1, 3 & 7 - - - - Photolytic 1 109,49  110,22  107,96 109,22 3 123,10  120,82  122,78 122,23 7 101,18 99,43 101,62 100,75 Thermal 1 102,74 92,72 98,66 98,04 3 103,05  102,52  103,69 103,09 7 93,96 92,56 96,48 94,33 PCT D Sebelum 0 106,08  105,17  106,53 105,93 Asam 1 109,89  110,63  110,56 110,36 3 105,74  105,66  104,41 105,27 7 120,27  121,65  122,05 121,32 Basa 1 92,13 93,99 92,14 92,75 3 95,87 96,58 95,39 95,95 7 80,73 83,2 83,05 82,33 Oksidasi 1, 3 & 7 - - - - Photolytic 1 116,43  116,89  116,23 116,52 3 112,80  112,12 112,5 112,47 7 99,45 95,78 93,84 96,35 Thermal 1 103,04  104,45  100,89 102,79 3 108,76  107,87  108,52 108,38 7 96,92 97,67 98,33 97,64 PCT E Sebelum 0 104,44  105,79  106,05 105,42 Asam 1 101,94 98,93 99,94 100,27 3 83,09 89,79 84,32 85,74 7 88,23 93,76 88,82 90,27 Basa 1 93,79 94,70 88,85 92,45 3 72,13 68,45 68,23 69,6 7 87,41 82,78 81,85 84,01 Oksidasi 1, 3 & 7 - - - - Photolytic 1 96,20 97,88 106,20 100,09 3 96,49 92,88 91,43 93,60 7 96,4 94,89 94,28 95,19 Thermal 1 100,68  107,13  106,20 104,67 3 129.05  127.95  131.59 129.53 7 101.18  102.54  100.15 101.29
Gambar 3. Spektrum Degradasi Kondisi Asam
Gambar 4. Spektrum Degradasi Kondisi Basa
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 7(1), Maret 2022, 92-101 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Gambar 5. Spektrum Degradasi Kondisi Oksidasi
Gambar 6. Spektrum Degradasi
Kondisi Photolytic
Gambar 7. Spektrum Degradasi
Kondisi Thermal

## KESIMPULAN
Metode analisis yang
dikembangkan untuk parasetamol didapatkan  hasil  yang  sederhana,
akurat,  presisi,  dan  selektif  terhadap
produk.  Forced  degradation  study didapatkan hasil bahwa kelima merek parasetamol  yang  diuji  mengalami degradasi    asam,  basa,  oksidasi, photolytic  dan  thermal.  Namun, beberapa  merek  parasetamol  dalam kondisi  tertentu  masih  dalam  batas kadar yang ditentukan oleh Farmokope Indonesia yaitu parasetamol  tidak  kurang  dari  90% dan tidak lebih dari 110% dari jumlah yang  tertera  pada  etiket.  Kelima merek parasetamol yang diuji mengalami  degradasi  parah  dengan kadar  diluar  batas  yaitu  pada  kondisi basa dan oksidasi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terima kasih  atas  dukungan  kerabat  dan sahabat  Semoga  Tuhan  Yang  Maha Esa  selalu  melimpahkan  rahmat-Nya kepada  semua  pihak  yang  membantu dalam penyelesaian penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Bertolini, A. et al. , 2006,
‘Paracetamol: New Vistas of an Old Drug’, CNS  Drug  Reviews , 12, 250–275.
DepKes,  2020, Farmakope  Indonesia Edisi VI , Departemen Kesehatan  Republik  Indonesia .
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 7(1), Maret 2022, 92-101 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Jakarta. Harmita, 2004, ‘Petunjuk Pelaksanaan  Validasi  Metode dan Cara Perhitungannya’, Majalah  Ilmu  Kefarmasian ,  1,
117–135. Naveed,  S.,  Waheed,  N.  and  Nazeer, S.,  2014,  ‘Degradation  Study  f Metronidazole  in  Active  and Different  Formulation  by  UV Spectroscopy’, Journal of Bioequivalece & Bioavailability , 6, 124–127. Venkataraman,  S.  and  Manasa,  M., 2018, ‘Forced degradation studies:  Regulatory  guidance, characterization  of  drugs,  and their  degradation  products  -  a review’, Drug  Invention  Today .