L
UJI AKTIFITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN SIRSAK ( Annona muricata ) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus

## SECARA IN VITRO
Irmawati* *Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Alauddin Makassar email: irmawatibiologi85@gmail.com
Abstrak : Daun sirsak ( Annona muricata L) dikenal memiliki zat anti-kanker  yang  dapat  membunuh  sel-sel  kanker  tanpa mengganggu  sel-sel  sehat  dalam  tubuh  manusia  yang  disebut acetogenins.  Acetogenins  adalah  senyawa  polyketides  dengan struktur  30-32  rantai  karbon  tidak  bercabang  yang  terikat  pada gugus  5-methyl-2-furanone.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui daya  antibakteri  ekstrak daun sirsak terhadap bakteri Staphylococcus  aureus secara  in  vitro.  Sebelum  dilakukan  uji antibakteri,  sampel  yang  telah  diekstrak  secara  maserasi  diuji fitokimia terlebih dahulu untuk menentukan kandungan metabolit sekunder  yang telah  diketahui berperan  sebagai  agen  antibakteri. Lalu dilakukan uji fitokimia, ekstrak diuji aktivitas antibakterinya terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  menggunakan teknik  difusi  agar  dengan  cara  sumuran.  Kemudian  ekstrak dilarutkan pada aquades disteril dengan perbandingan 2 g ekstrak pada 2 mL air. Untuk kontrol positif, digunakan ciprofloxacin dan aquades steril sebagai kontrol negatif. Oleh karena itu daun sirsak memilki  kandungan  yang  berpotensi  untuk  membunuh  atau menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
Kata  Kunci: Annona  muricata, Antibakteri, Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
ingkungan  yang  tidak  sehat  adalah  salah  satu  faktor  penyebab penyakit infeksi. Penyakit infeksi disebabkan oleh bakteri, virus, fungi dan   parasit.   Misalnya   bakteri Staphylococcus  aureus merupakan bakteri  patogen  penyebab  infeksi. Staphylococcus  aureus dapat  menyebabkan infeksi  pada  tulang,  sendi  dan  infeksi  nosokomial.  Oleh  karena  itu dalakukan
20 _ Jurnal Teknosains, Volume 12, Nomor 1, Januari-Juni 2018 , hlm. 19 – 26
untuk  membunuh  atau  menghambat  pertumbuhan  bakteri  biasanya  digunakan suatu  formula  yang  mengandung  zat  untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri tersebut,  atau  bahkan  membunuhnya.  Zat  ini  umum  dikenal  sebagai  antibakteri dan dalam dunia medis lebih dikenal dengan antibiotik.
Selama  ini,  antibiotik  merupakan  produk  dalam  pengobatan  dan penanggulangan infeksi pada pelayanan kesehatan. Berbagai jenis antibiotik yang digunakan  dalam  pengobatan  infeksi  yang  semakin  banyak  dapat  meningkatkan terjadinya resistensi terhadap berbagai antibiotik yang beredar (Ratna, 2015).
Obat-obatan  yang  biasa  digunakan  untuk  terapi  penyakit infeksi  biasanya berupa  obat  modern  atau  obat  tradisional.  Akan  tetapi,  obat  modern  tersebut berisiko tinggi timbulnya efek samping  yang tidak diinginkan, bahkan tak jarang dapat  menimbulkan  resistensi  bakteri.  Oleh  karena  itu,  penggunaan  obat-obatan tradisional  dapat  digunakan  sebagai  alternatif  pengobatan  sehingga  penggunaan obat  tradisional  menjadi semakin meningkat  dan  berkembang luas di  masyarakat (Sari, 2010).
Negara  Indonesia  merupakan  negeri  yang  kaya  akan  keanekaragaman hayati  yang  dimiliki  oleh  hewan  dan  tumbuhannya.  Khusus  untuk  tumbuhan. Dimana  tumbuhan  memilki  berbagai  jenis  spesies  yang  dapat  dimanfaatkan sebagai  obat  maupun  bahan  makanan,  contonnya  daun  sirsak  yang  dapat manfaatkan  sebagai  obat  anti  kanker,  diabetes  militus,  diare  dan  sebagainya (Ngajow, 2013).
Daun    sirsak    ( Annona  muricata L)  memiliki  kandungan  kimia  berupa alkaloid, tannin, dan beberapa kandungan lainnya termasuk senyawa annonaceous acetogenins.  Annonaceous  acetogenins  merupakan  senyawa  yang  memiliki potensi  sitotoksik.  Senyawa  sitotoksik  merupakan  senyawa  yang  dapat  bersifat toksik untuk menghambat dan menghentikan pertumbuhan sel kanker.
Kandungan  senyawa  dalam  daun sirsak  ( Annona  muricata L)  antara  lain steroid atau terpenoid, flavonoid, kumarin, alkaloid, dan tanin. Senyawa flavonoid berfungsi  sebagai  antioksidan  untuk  penyakit  kanker,  anti  mikroba,  antivirus, pengatur fotosintetis, dan pengatur tumbuh (Puspitasari, 2016).
Irmawati, Uji Aktifitas Antibakteri Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata)…_ 21
Di  sisi  lain  daun  sirsak  ( Annona  muricata L)  dikenal  memiliki  zat  anti- kanker  yang  dapat  membunuh  sel-sel  kanker  tanpa  mengganggu  sel-sel  sehat dalam  tubuh  manusia  yang  disebut  acetogenins.  Acetogenins  adalah  senyawa polyketides dengan struktur 30-32 rantai karbon tidak bercabang yang terikat pada gugus  5-methyl-2-  furanone.  Salah  satu  gugus  dari  acetogenin  adalah  fenol sehingga  menyebabkan  kandungan  total  fenol  yang  terdapat  pada  daun  sirsak tergolong tinggi. Ekstrak etanol daun sirsak ditemukan asam fenolat dalam bentuk bebas,  bentuk  glikosida,  dan  bentuk  ester  adalah  asam  kafeat,  asam  p-kumarat, asam  phidroksibenzoat,  dan  asam  vanilat.  Sedangkan  asam  ferulat  hanya  ada dalam  bentuk  glikosida  dan  ester.  Flavonoid  yang  ditemukan  diduga  kaemferol. Hasil  identifikasi  golongan  flavonoid  menunjukkan  ekstrak  daun  sirsak mengandung  flavonoid  golongan  flavon,  dihidroflavonol,  flavonol,  dan  flavanon (Puspitasari, 2016).
Daun    sirsak    ( Annona  muricata L)  dimanfaatkan  sebagai  pengobatan alternatif untuk pengobatan kanker, yakni dengan mengkonsumsi air rebusan daun sirsak. Selain untuk pengobatan kanker, tanaman sirsak juga dimanfaatkan untuk pengobatan  demam,  diare,  antikejang,  anti  jamur,  anti  parasit,  antimikroba,  sakit pinggang, asam urat, gatal-gatal, bisul, flu, dan sebagainya. Daun sirsak ( Annona muricata L)  berpotensi  sebagai  antihipertensi,  antispasmodik,  obat  pereda  nyeri, hipoglikemik,  antikanker,  emetik  (menyebabkan  muntah),  vermifuge  (pembasmi cacing).  Daun  sirsak  ( Annona  muricata L)  juga  memiliki  efek  yang  bermanfaat dalam  meningkatkan  aktivitas  enzim  antioksidan  dan  hormon  insulin  pada jaringan  pankreas  serta  melindungi  dan  menjaga  selsel  β-pankreas  (Puspitasari, 2016).
Pada  daun  sirsak  ( Annona  muricata L)  ditemukan  senyawa  acetogenin yang  bermanfaat  mengobati  berbagai  penyakit.  Acetogenin  berperan serta  dalam melindungi  sistem  kekebalan  tubuh  serta  mencegah  infeksi  yang  mematikan. Daun  sirsak  mengandung  acetogenin  yang  mampu  melawan  12  jenis  sel  kanker. Banyaknya manfaat sirsak membuat orang mulai beralih mengonsumsi suplemen herbal  daun  sirsak  sebagai  alternatif  pencegahan  dan  pengobatan  konvensional. Pada  daun  sirsak,  telah  ditemukan  18  jenis  annonaceous  acetogenin dan telah
22 _ Jurnal Teknosains, Volume 12, Nomor 1, Januari-Juni 2018 , hlm. 19 – 26
terbukti  secara  in  vitro  bersifat  sitotoksik.  Daun  sirsak  ( Annona  muricata L) memiliki  sifat  toksik  yang  tinggi  terhadap  sel  kanker  ovarium,  serviks,  dan  sel kanker kulit pada dosis rendah. Acetogenins sering disebut sebagai inhibitor I atau penghambat pertumbuhan sel kanker paling kuat (Puspitasari, 2016).
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas,  maka  dilakukan  penelitian tentang  uji aktivitas  antibakteri  daun  sirsak  ( Annona  muricata L)  terhadapa  bakteri Staphylococcus aureus secara in vitro.

## METODE PENELITIAN

## Preparasi sampel
Sampel utama dari penelitian ini adalah daun sirsak ( Annona muricata L) yang  diambil  dari  perkebunan  warga  Desa  Kappuna  Kecamatan  Masamba.  lalu dibersihkan  dan  dikeringanginkan  selama  3  hari,  kemudian  digiling  menjadi serbuk dan diayak dengan ukuran 65 mesh.

## Ekstraksi
Pada  daun  sirsak  yang  telah  menjadi  serbuk  diambil  50  g  kemudian dimaserasi  2  kali  dengan  500  mL  etanol  95%  selama  6  x  24  jam,  kemudian disaring  dengan  kertas  saring  dan  dievaporasi  dengan  rotary  evaporator.  Setelah itu, sample dimasukkan ke dalam oven selama 1 x 24 jam pada 102oC, kemudian disimpan dalam desikator. Setelah itu dihitung rendemen ekstrak dengan menggunakan rumus:
Berat Ekstrak X 100

## Berat Sampel

## Analisis Fitokimia (Harborne, 1987)

## 1. Analisis senyawa alkaloid
Sebanyak  2  g  sampel  tumbuhan  yang  telah  dihaluskan  ditambahkan kloroform  secukupnya  lalu  dihaluskan  lagi.  Kemudian  ditambah  10  ml  amoniak dan  10  ml  kloroform.  Larutan  disaring  ke  dalam  tabung  reaksi,  dan  difiltrat ditambahkan  asam  sulfat  2N  sebanyak  10  tetes.  Filtrat dikocok dengan teratur
Irmawati, Uji Aktifitas Antibakteri Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata)…_ 23
kemudian  dibiarkan  beberapa  lama  sampai  terbentuk  dualapisan.  Lapisan  atas dipindahkan  ke  dalam  tiga  tabung  reaksi  masing-  masing  2,5  ml.  Ketiga  larutan ini dianalisis dengan pereaksi Dragendorff. Terbentuknya endapan jingga dengan pereaksi Dragendorff menunjukkan hasil positif.

## 2. Analisis senyawa triterpenoid dan steroid
Sebanyak 2  g sampel  tumbuhan  yang telah dihaluskan, ditempatkan pada plat  tetes  dan  ditambahkan  asam  asetat  anhidrat  sampai  sampel  terendam semuanya, dibiarkan selama  kira-kira15 menit, enam tetes larutan dipindahkan ke dalam  tabung  reaksi  dan    ditambah  2-3  tetes  asam  sulfat  pekat.  Adanya triterpenoid  ditunjukkan  dengan  terjadinya  warna  merah,  jingga  atau  ungu, sedangkan adanya steroid ditunjukkan dengan adanya warna biru.

## 3. Analisis senyawa flavanoid
Sebanyak 2 g sampel tumbuhan  yang telah diekstrak dengan 5 ml etanol, dipanaskan  selama  lima  menit  di  dalam  tabung  reaksi.  Selanjutnya  ditambah beberapa tetes HCl pekat. Kemudian ditambahkan 0,2 g bubuk Mg. Hasil positif ditunjukkan dengan timbulnya warna merah tua dalam waktu 3 menit.

## 4. Analisis senyawa saponin
Sebanyak  2  g  sampel  tumbuhan  yang  telah  dihaluskan  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi,  ditambah  air  suling  sehingga  seluruh  cuplikan  terendam, dididihkan  selama  2-3  menit,  dan  selanjutnya  didinginkan,  kemudian  dikocok kuatkuat. Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil.

## 5. Analisis senyawa tanin
Sebanyak  2  g  sampel  tumbuhan  yang  telah  dihaluskan,  ditambah  etanol sampai sampel terendam semuanya. Kemudian sebanyak 1 ml  larutan dipindahkan kedalam tabung reaksi dan ditambahkan 2-3 tetes larutan FeCl3 1%. Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya warna hitam kebiruan atau hijau.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Untuk  metode  uji  antibakteri  diadaptasi  dari  metode  Lay  (1994)  dengan menggunakan  teknik  Sumuran  (Difusi  Agar)  yang  telah  dimodifikasi.  Pertama- tama,  alat-alat  non  gelas  disterilkan terlebih dahulu di dalam autoklaf pada suhu
24 _ Jurnal Teknosains, Volume 12, Nomor 1, Januari-Juni 2018 , hlm. 19 – 26
121°C  selama  15  menit  dan  alat-alat  gelas  disterilkan  di  oven  suhu  160-170°C selama 2 jam. Jarum ose dibakar dengan api bunsen.

## Pembuatan Media
1. Media Agar Miring
Diambil  Nutrient  Agar  (NA)  sebanyak  0,46  g  dilarutkan  dalam  20  mL aquades  (23  g/1000  mL)  menggunakan  erlenmeyer.  Selanjutnya  dihomogenkan dengan stirrer di atas penangas air sampai mendidih. Sebanyak 5 mL dituangkan masing-  masing  pada  3  tabung  reaksi  steril  dan  ditutup  dengan  aluminium  foil. Media disterilkan dalam autoklaf dengan suhu 121ºC selama 15 menit, kemudian dibiarkan  pada  suhu  ruangan  selama  ±  30  menit  sampai  media  memadat  pada kemiringan 30º. Media agar miring digunakan untuk inokulum bakteri.

## 2. Media Dasar dan Media Pertumbuhan
Media  dasar  dibuat  dengan  cara  ditimbang  Nutrient  Agar  (NA)  sebanyak 2,3  gram,  lalu  dilarutkan  dalam  100  mL aquades  (23  g/1000  mL)  menggunakan Erlenmeyer.  Sedangkan  media  pembenihan  dibuat  dengan  cara  ditimbang  4,6  g NA,  lalu  dilarutkan  dalam  100  mL  aquades  (46  g/1000  mL)  menggunakan Erlenmeyer. Setelah itu, masing-masing media dihomogenkan dengan stirer diatas penangas air sampai mendidih. Media-media yang dihomogenkan dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit, kemudian didinginkan sampai suhu ± 45-50oC. Media dasar dan media pembenihan digunakan dalam pembuatan media pengujian sebagai lapisan dasar dan lapisan kedua.

## Pembuatan Standar Kekeruhan Larutan (Larutan Mc. Farland)
Larutan asam sulfat 0,36 N sebanyak 99,5 mL dicampurkan dengan larutan BaCl2.2H2O  1,175  %  sebanyak  0,5  mL  dalam  Erlenmeyer  kemudian  dikocok sampai  terbentuk  larutan  yang  keruh.  Kekeruhan  ini  dipakai  sebagai  standar kekeruhan suspensi bakteri uji.

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji  pada  media  agar  miring  diambil  dengan  kawat  ose  steril  lalu disuspensikan  ke  dalam  tabung  yang  berisi  2  mL  larutan  NaCl  0,9  %  hingga diperoleh kekeruhan yang sama dengan standar kekeruhan larutan Mc. Farland.

## Pembuatan Media Pengujian
Lapisan  dasar  dibuat  dengan  menuangkan  masing-masing  10  mL  NA  ke dalam 3 cawan petri, kemudian dibiarkan memadat. Setelah memadat, permukaan lapisan  dasar  ditanam  5  pencadang  baja  yang  diatur  jaraknya  agar  daerah pengamatan tidak bertumpu.  Suspensi  bakteri  dicampurkan  ke  dalam  media pembenihan  NA.  Selanjutnya  dituangkan  25  mL  NA  pada  tiap cawan  petri  yang diletakkan  pencadang  sebagai  lapisan  kedua.Setelah  lapisan  kedua  memadat, pecadang diangkat menggunakan pinset dari  masing-masing cawan petri, sehingga terbentuk sumur-sumur yang akan digunakan dalam uji bakteri.

## Penentuan Aktivitas Antibakteri
Kegiatan  ini  dibuat  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol kulit  batang  matoa  yang  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar,  dengan  cara mengukur diameter hambatan pertumbuhan bakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus . Cara penentuannya adalah sebagai berikut: sumuran yang sudah  dibuat  pada  media  pengujian  diteteskan  larutan  uji  yaitu  ekstrak  yang dilarutkan dalam aquades steril sebanyak 2 gr dalam 2 mL aquades sebanyak 50 μl menggunakan mikropipet,  kemudian diinkubasi  dalam inkubator pada suhu 37ºC selama 24 jam, setelah itu dilihat ada tidaknya zona hambat yang terbentuk. Jika ada, diukur diameter daerah hambatan di sekitar pencadang menggunakan jangka sorong dengan cara mengukur secara horizontal dan vertikal kemudian hasil yang didapat dikurangi diameter sumuran 7 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Ngajowa  M,  dkk.  “Pengaruh  Antibakteri  Ekstrak  Kulit  Batang  Matoa  ( Pometia pinnata )  terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus secara  In  vitro”. Jurnal Mipa Unsrat . Vol 2 No 2. (November, 2013).
26 _ Jurnal Teknosains, Volume 12, Nomor 1, Januari-Juni 2018 , hlm. 19 – 26
Puspitasar  M,  L,  dkk.  “Aktivitas  Antioksidan  Suplemen  Herbal  Daun  Sirsak ( Annona muricata L.) Dan Kulit Manggis ( Garcinia mangostana L.): Kajian Pustaka”. Jurnal Pangan dan  Agroindustri Vol  4  No 1. (Januari, 2016).
Ratna Y, R, dkk. “Daya Antibakteri Ekstrak dan Fraksi-Fraksi Daun Jambu Mete ( Anacardium  occidentale L.)  terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus Sensitif  dan  Multiresisten”. Jurnal  Ilmu  Kefarmasian  Indonesia .  Vol  4  No 1. (April, 2016).
Sari Y, D, dkk. “Uji Aktivitas Antibakteri Infusa Daun Sirsak ( Annona muricata L.)  Secara  In  Vitro  Terhadap Staphylococcus  aureus Atcc  25923  Dan Escherichia  coli Atcc  35218  Serta  Profil  Kromatografi  Lapis  Tipisnya”. Jurnal KES MAS Vol 4 No 3. (September, 2010).