Analisis Rhodamin B dalam Bolu Kukus yang Beredar di Kota Jambi dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis
Armini Hadriyati, Linda Lestari*, Lia Anggresani
Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Harapan Ibu Jambi, Jambi, Indonesia
*Corresponding author: lindalestari@stikes-hi.ac.id
Submitted: 16 Maret 2020 Accepted: 26 Agustus 2020 Published: 27 April 2021

## Abstract
Background:  Rhodamin  B is  a  synthetic  dye  commonly  used  as  a  textile  dye,  the  presence  of  Rhodamine  B in foods cause intoxication, rhodamine B is prohibited from being used as a food additive. Objective: The research aimed to determine the presence rhodamie B and its concentrations in steamed sponge cakes marketed in Jambi city.  Methods:  Sampling  was  random  in  8  sub-districts  of  11  sub-districts  Jambi  City.  Rhodamine  B  in  the samples  was  determined  by  2  methods  that  were  thin  layer  chromatography  and  UV-Vis  spectrophotometry. Rhodamine B qualitative analysis was conducted by thin layer chromatography with silica gel GF 254 plate and a mixture of n-butanol : acetic acid : ammonia of (10 : 4 : 5) as a mobile phase. Quantitative analysis was done by UV-Vis  spectrophotometry at  the wavelenght of  557 nm.  Results: TLC data showed that three samples have similar  spot  colour  and  Rf  value  as  the  rhodamine  standard  which  was  0.8.  The  acquired  Rhodamine  B consentrations in  sample B 0.88210 µg/mL, sampel E 1.3475 µg/mL and sampel F 0.80684 µg/mL. Conclusion: The results of the identification test showed that 3 of 8 steamed sponge cakes samples were positive containing rhodamie B dyes.

## Keywords: steamed sponge cakes, rhodamine B, thin-layer chromatography, UV-Vis spectrophotometry

## Abstrak
Pendahuluan : Rhodamin B adalah pewarna sintetik yang umum digunakan sebagai pewarna tekstil, Rhodamin B  dalam  makanan  dapat  menyebabkan  keracunan,  sehingga  Rhodamin  B  dilarang  digunakan  sebagai  bahan tambahan  pangan. Tujuan :  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  secara  kualitatif  dan  kuantitatif  adanya Rhodamin B dalam kue bolu kukus yang beredar di Kota Jambi. Metode : Pengambilan sampel dilakukan secara acak  dalam  8  kecamatan  dari  11  kecamatan  di  Kota  Jambi.  Analisis  Rhodamin  B  pada  kue  bolu  kukus  ini ditentukan  dengan  2  metode  yaitu  Kromatografi  Lapis  Tipis  dan  Spektrofotometri  UV-Vis.  Pada  analisa kualitatif dengan Kromatografi Lapis Tipis menggunakan plat silica gel GF 254 dengan mengunakan fase gerak campuran  n-butanol  :  asam  asetat  :  ammonia  dengan  perbandingan  (10  :  4  :  5). Hasil :  Hasil  dari  analisis Rhodamin  B  yang  dilakukan  dengan  KLT  didapatkan  nilai  Rf  sama  antara  sampel  dengan  pembanding Rhodamin B yaitu 0,8. Spektrofotometri UV-Vis didapat panjang gelombang maksimum 557 nm, dan diperoleh kadar  Rhodamin  B  pada  sampel  B  0,88210  µg/mL,  sampel  E  1,3475  µg/mL  dan  sampel  F  0,80684  µg/mL. Kesimpulan :  Hasil  uji  identifikasi  menunjukan  bahwa  dari  8  sampel  kue  bolu  kukus,  3  sampel  diantaranya positif mengandung pewarna Rhodamin B.
Kata kunci : kue bolu kukus, rhodamin B, kromatografi lapis tipis, spektrofotometri UV-Vis

## PENDAHULUAN
Bahan Tambahan Pangan (BTP) merupakan bahan tambahan  yang  segaja  di  tambahkan  ke  dalam  pangan untuk  mempengaruhi  sifat  atau  bentuk  suatu  pangan. termasuk di  dalamnya adalah pewarna, penyedap  rasa,
pengawet,  pengental,  pengeras,  dan  pengembang (Permenkes RI, 2012).
Bahan  pewarna  sintesis  adalah  pewarna  yang diperoleh  secara  sintesis  kimiawi  (BPOM,  2013). Rhodamin  B  biasanya  dipergunakan  sebagai  bahan
dalam pembuatan kain, kertas, dan lain-lain. Berdasarkan  peraturan  (BPOM,  2013)  RI  No.37 menyebutkan bahwa  Rhodamin  B merupakan pewarna yang  dilarang  penggunaannya.  Larangan  penggunaan Rhodamin  B  pada  makanan  dikarenakan  sifat  toksik yang  jika dikonsumsi  dapat  menyebabkan iritasi  pada saluran  pernafasan,  kulit,  mata,  saluran  pencernaan, keracunanan,  gangguan  pada  hati  dan  bersifat karsinogenik  jika  digunakan  dalam  jangka  panjang dapat  terjadi  kanker  pada  hati  (Kumalasari,  2015). Rhodamin  B  ditemukan  pada  makanan  seperti  jajanan tradisional  berwarna  merah  salah  satunya  kue  bolu kukus, berdasarkan penelitian (Yamlean, 2011) di Kota Manado  tentang  jajanan  kue  bolu  kukus  berwarna merah  muda  didapat  hasil  positif  mengandung Rhodamin B.
Jajanan  tradisional  memiliki  beberapa  keunggulan yaitu  harga  yang  murah,  sangat  mudah  didapat,  serta cita  rasa  yang  cocok  dengan  selera  masyarakat  di indonesia.  Meskipun  memiliki  beberapa  keunggulan tetapi  ada  beberapa  faktor  beresiko  bagi  kesehatan akibat  dari  penggunaan  bahan  tambahan  yang  tidak diizinkan (Yamlean, 2011).
Berdasarkan  hal  tersebut  penelitian  ini  memiliki tujuan  untuk  mengidentifikasi  apakah  Rhodamin  B yang  terdapat  dalam  jajanan  tradisional  di  Kota  Jambi khususnya  kue  bolu  kukus  yang  memiliki  warna mencolok. Analisis  Rhodamin B dilakukan melalui  uji identifikasi  menggunakan  metode  kromatografi  lapis tipis sedangkan penentuan panjang gelombang maksimum  sampel  dan  penentuan  kadar  Rhodamin  B dilakukan dengan menggunakan metode Spektrofotometer  UV-VIS  pada  panjang  gelombang 557 nm.

## BAHAN DAN METODE Bahan
Pembanding  (Rhodamin  B),  kue  bolu  kukus,  air suling, n -butanol,  asam  asetat,  ammonia  26%,  etanol 96%, Dietil eter, Silica gel GF 254, NaOH, HCl 37%. Alat
Spektrofotometer UV (Shimadzu-1800), seperangkat alat untuk KLT, hot plate (AKEBONNO), timbangan  analitik  (Shimadzu),  erlenmeyer,  labu  ukur 10,0 mL (iwaki), labu ukur 50,0 mL (iwaki), labu ukur 100,0 mL (iwaki), cawan penguap, gelas ukur 10,0 mL , gelas  ukur  100,0  mL,  pipet  ukur  1  mL,  batang pengaduk,  corong  pisah , pipa  kapiler,  oven,  kertas saring  ( Whatman no  42),  dan chamber kromatografi lapis tipis .

## Metode Pengambilan sampel
Sampel  yang  digunakan  adalah  kue  bolu  kukus yang  berwarna  merah  muda.  Pengambilan  sampel dilakukan  secara  acak  dalam  8  kecamatan  dari  11 kecamatan di Kota Jambi diantaranya Kecamatan Alam Barajo,  Kecamatan  Danau  Sipin,  Kecamatan  Jambi Selatan, Kecamatan Jambi Timur, Kecamatan Jelutung, Kecamatan  Kota  Baru,  Kecamatan  Pasar  Jambi  dan Kecamatan Telanaipura.

## Ekstraksi sampel
Ekstraksi  dilakukan  dengan  menimbang  sampel sebanyak  10  gram,  dimasukkan  kedalam  erlenmeyer 250 mL, lalu tambahkan 100 mL ammonia 2% (dalam etanol  70%)  lalu  diamkan  selama  1  x  24  jam. Penyaringan  menggunakan  kertas  saring Whatman no 42 kemudian filtrat  diuapkan di  atas hot  plate (sampel menjadi  pekat). Residu  penguapan ditambah air suling 30  mL  dan  diaduk,  dimasukkan  kedalam  corong pisah 250  mL  ditambah  6  mL  NaOH  10%,  diekstraksi dengan 30 mL dietileter. Ekstrak eter dipisahkan dan di cuci  dengan  5  mL  NaOH  0,5%  dan  lapisan  airnya dibuang.  Ekstrak  eter  diekstraksi  3  kali  dengan  HCl 0,1  N  sebanyak  10  mL,  lapisan  eter  dibuang  dan ekstrak  HCl  0,1  N  ditampung  pada  labu  ukur  50  mL dan  di  tambahkan  HCl  0,1  N  sampai  tanda  batas (Nahdi, 2018).

## Analisis kualitatif rhodamin B dengan KLT
Disiapkan  plat  KLT  kemudian  diberi  tanda  tepi atas  dan  tepi  bawah  masing-masing  diberi  jarak 1  cm. Sampel  ditotolkan  dengan  menggunakan  pipa  kapiler kemudian  dikeringkan.  Plat  KLT  dimasukan  kedalam bejana  kromatografi  yang  telah  terlebih  dahulu dijenuhkan  dengan  fase  gerak n -butanol:asam  asetat  : ammonia  dengan  perbandingan  (10  :  4  :  5)  (Nahdi, 2018).  Fase  gerak  dibiarkan  merambat  naik  sampai garis batas, kemudian plat KLT dikeluarkan dari bejana dan  dkeringkan,  lalu  diamati  dibawah  lampu  UV.  Jika sampel dilihat dengan sinar lampu UV 254 nm nampak bercak  berfluoresensi  orange  dan  jika  dilihat  dibawah sinar  UV  366  nm  nampak  bercak  berfluoresensi kuning, sampel tersebut dinyatakan positif mengandung pewarna rhodamin B (Sari, 2015).
Analisis  kuantitatif  rhodamin  B  menggunakan spektrofotometri UV-Vis

## Larutan standar
Dibuat  larutan  induk  standar  rhodamin  B  dengan konsentrasi  100    ppm.  Larutan  seri  konsentrasi  dibuat dengan  konsentrasi  sebesar  1  ppm,  2  ppm,  4  ppm,
6 ppm dan 8 ppm. Pelarut yang digunakan adalah HCl 0,1 N (Nahdi, 2018).

## Penentuan panjang gelombang maksimum
Panjang gelombang maksimum ditentukan dengan mengukur  absorban  dari  larutan  standar  Rhodamin  B 10  ppm.  Rhodamin  B  10  ppm  dibuat  dengan  cara memipet  larutan  standar  rhodamin  B  100  ppm sebanyak 5,0 mL, kemudian dimasukkan kedalam labu ukur 50,0 mL, dan tambahkan HCl 0,1 N sampai tanda batas (Sari, 2015).

## Pembuatan kurva kalibrasi
Seri  konsentrasi  larutan  rhodamin  B  diukur panjang gelombang maksimal menggunakan spektrofotometer  UV-Vis.  Dipipet  larutan  rhodamin  B 10 ppm  secara  berturut-turut 0,2 mL, 0,4 mL, 0,8 mL, 1,2 mL, 1,6 mL (1, 2, 4, 6, 8 ppm), dimasukkan dalam labu  ukur  10,0  mL  kemudian  ditambahkan  HCl  0,1  N sampai  batas.  Pada  semua  larutan  seri  konsentrasi rhodamin  B  (1  -  8  ppm)  diukur  absorbannya  dengan menggunakan Spektrofotometer pada panjang
gelombang maksimun, yang digunakan sebagai  blanko adalah HCl 0,1 N (Sari, 2015).

## Penetapan kadar rhodamin B pada sampel
Ekstrak  sampel  10  gr  dalam  50,0  mL,  masing- masing  sampel  diambil  sebanyak  5,0  mL  dimasukkan kedalam  labu  ukur  10,0  mL  dan  ditambahkan  dengan HCl  0,1  N  sampai  batas,  sampel  yang  telah  disiapkan diukur absorbannya pada panjang gelombang maksimum  dan  dihitung  berapa  kadar  Rhodamin  B dalam sampel berdasarkan kurva kalibrasi.

## HASIL DAN DISKUSI

## Analisis secara kromatografi lapis tipis
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan  dari  8  sampel  didapat  3  sampel  yang dicurigai  mengandung  Rhodamin  B  dengan  melihat nilai  Rf-nya  dimana  nilai  Rf  sampel  sama  atau mendekati dari nilai standar Rhodamin B (Tabel 1) dan di  lihat  dengan  bercak  warna  pada  sinar  UV  366  nm (Gambar 1).
Tabel 1 . Hasil analisis kromatografi lapis tipis dengan eluen n -butanol : asam asetat:ammonia (10 : 4 : 5)
Keterangan
P : Pembanding (Rhodamin B); A : Telanaipura; B : Alam Barajo; C : Danau  Sipin; D : Jambi Selatan; E : Jambi Timur; F : Pasar Jambi; G : Jelutung; H : Kota Baru
Gambar 1 . Hasil KLT dibawah lampu UV 366 nm
Analisis secara spektrofotometri
Analisis kuantitatif Rhodamin B secara Spektrofotometri  UV-Vis,  dilakukan  pada  panjang gelombang  maksimum  standar  pembanding  yaitu 557    nm  (Gambar  2).  Analisis  panjang  gelombang
maksimum  masing-masing  sampel  didapat  yaitu 557  nm  (Tabel  2  dan  Gambar  3).  Sehingga  diperoleh kadar  yaitu  sampel  B  0,88210  µg/mL,  sampel  E 1,3475 µg/mL dan sampel F 0,80684 µg/mL (Tabel 3).
Kode asal Sampel Warna visual Sinar UV 366 nm Nilai Rf P Merah muda/merah jambu Fluoresensi Kuning 0,8 A Merah muda/merah jambu - - B Merah muda/merah jambu Fluoresensi Kuning 0,8 C Merah muda/merah jambu - - D Merah muda/merah jambu - - E Merah muda/merah jambu Fluoresensi Kuning 0,8 F Merah muda/merah jambu Fluoresensi Kuning 0,78 G Merah muda/merah jambu - - H Merah muda/merah jambu - -
Gambar 2 . Larutan standar rhodamin B panjang gelombang λ max 557,00 nm
Gambar 3. Larutan sampel diperoleh λ max 557,00 nm
Tabel 2 . Analisis panjang gelombang maksimum pada masing-masing sampel
No Kode Sampel Panjang Gelombang Maks (λ) 1 B 557 nm 2 E 557 nm 3 F 556,50 nm Tabel 3 .  Hasil penentuan kadar Rhodamin B pada sampel No. Kode Sampel Kadar Rhodamin B dalam sampel 10 gr 1 B 0,88210 µg/mL 2 E 1,3475 µg/mL 3 F 0,80684 µg/mL
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui apakah  terdapat  pewarna  Rhodamin  B  dan  berapa kadar  pewarna  tersebut  dalam  kue  bolu  kukus  yang beredar di kota Jambi. Analisis kualitatif penelitian ini menggunakan  metode  KLT  untuk  mengetahui  ada tidaknya  rhodamin  B  dalam  sampel  yang  akan  diteliti
sebelum  dilakukan  analisis  kuantitatif.  Pada  metode KLT  terjadinya  pemisahan  senyawa  berdasarkan adsorpsi  dan  partisi,  pelarut  yang  bersifat  polar  akan berikatan  dengan  senyawa  yang  bersifat  polar  juga begitupun  sebaliknya.  Analisis  kuantitatif  dilakukan dengan mengunakan metode Spektrofotometri UV-Vis.
Pada analisis Rhodamin B pada KLT menggunakan n -butanol  :  asam  asetat  :  ammonia dengan  perbandingan  (10  :  4  :  5)  sebagai  fase  gerak dan  fase  diam  Silica  gel  GF  254.  Fase  gerak  yang digunakan  bersifat  polar  sama  dengan  Rhodamin  B yang  juga  bersifat  polar,  sehingga  eluen  dapat mengelusi  Rhodamin  B  dengan  baik    (Samosir  dkk., 2018).
Tabel 1 menunjukan bahwa dari 8 sampel hanya 3 sampel dengan kode B, kode E dan kode F yang positif mengadung  pewarna  Rhodamin  B  (Gambar  1).  Hasil dapat  dikatakan positif bila antara sampel (ekstrak kue bolu  kukus)  dan  pembanding  (Rhodamin  B)  memiliki bercak berwarna flouresensi kuning yang sama dengan pembanding  (Tabel  1)  dan  nilai  Rf    berada  dalam (≤  0,2  -  0,5)  dengan  pembanding  artinya  sampel dinyatakan  positif  mengandung  rhodamin  B  (Gambar 1) (Samosir dkk., 2018).
Larutan  standar  pada  panjang  gelombang  pada instrumen Spektrofotometri UV-VIS memiliki kepekaan  maksimum,  yaitu  perubahan  absorban  untuk setiap konsentrasi adalah paling besar. Pada Spektrofotometer  kesalahan  pembacaan  absorban adalah  kecil  pada  nilai  absorban  antara  0,2  –  0,8 (Gandjar  &  Rohman,  2007).  Persamaan  regresi  yang diperoleh  yaitu  y  =  0,08703x  +  0,12795  dan  koefisien korelasi  (r)  =  0,999  didapatlah  linearitas  mendekati satu. Hasil yang diperoleh  dari 8 kecamatan terdapat 3 yang  positif  mengandung  pewarna  sintesis  Rhodamin B yaitu sampel dari kecamatan : kode B (Alam Barajo), kode  E  (Jambi  Timur)  dan  kode    F  (Pasar  Jambi) (Tabel 3).
Rhodamin  B  adalah  zat  pewarna  yang  dilarang penggunaannya menurut PerMenKes RI No. 033/Menkes/Per/IX/2012  yang  membahas  tentang bahan  tambahan  pada  makanan.  Rhodamin  B merupakan  jenis  pewarna  yang  bersifat  toksik,    jika diberikan  pada  makanan  atau  pun  minuman  dapat memberikan  dampak  yang  membahayakan  bagi kesehatan manusia (Permenkes RI, 2021).
Gambar 4. Struktur kimia rhodamin B
Rhodamin  B  tidak  dapat  di  metabolisme  oleh  hati sehingga  terjadinya  penumpukan  di  dalam  hati  yang
akan  menyebabkan  gangguan  fungsi  hati.  Struktur kimia    dari  Rhodamin  B  mengandung  unsur  N+ (nitronium)  (Gambar  4)  yang  bersifat  karsinogenik sehingga  memacu  pertumbuhan  sel-sel  kanker  dan menyebabkan  terjadinya  kanker  hati  dan  tumor  hati (Arfina, 2012).
Menurut  (Peraturan  Menteri  Perdagangan  RI  No 75/M-DAG/PER/10/2014) bahan berbahaya adalah zat, bahan  kimia  maupun  biologi,  baik  itu  dalam  bentuk tunggal ataupun dalam bentuk campuran yang beresiko memberikan  dampak  berbahayakan  pada  kesehatan secara  langsung  ataupun  tidak  langsung,  yang mempunyai  sifat  racun  (toksisitas)  bagi  kesehatan, Karsinogenik,  mutagenik,  dan  iritasi.  Rhodamin  B merupakan jenis zat yang dinyatakan berbahaya dalam lampiran  1  peraturan  Menteri  Perdagangan  tersebut sehingga  penggunaannya  sama  sekali  di  larang  dan keberadaannya  dalam  makanan  merupakan  suatu pelanggaran  dengan  sanksi  pidana  (Kementerian Perdagangan RI, 2014).

## KESIMPULAN
Hasil  analisis  kualitatif  didapatkan  3  sampel  kue bolu  kukus  dari  8  kecamatan  kota  Jambi  positif mengandung  pewarna  Rhodamin  B  yang  dilihat  dari nilai  Rf  yang  sama  dengan  pembanding  yaitu  0,8  dan warna  bercak  yang  berflouresensi  dibawah  sinar 366  nm.  Hasil  penetapan  kadar    Rhodamin  B  pada sampel kue bolu kukus diperoleh kadar yaitu sampel B (Alam  Barajo)  0,88210  µg/mL,  sampel  E  (Jambi Timur)  1,3475  µg/mL  dan  sampel  F  (Pasar  Jambi) 0,80684 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Arfina. (2012). Analisis Kandungan Rhodamin B Pada Kosmetik  Perona  Pipi  Yang  Beredar  Di  Pasar Tradisional  Kota  Makassar.  Diterbitkan  Di Ejournal. Skripsi; Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan  Universitas  Islam  Negeri  Alauddin,
Makassar.
BPOM. (2013). Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia No.37 Tahun 2013  Tentang Batas Maksimum Penggunaan Bahan Tambahan Pangan Pewarna. Jakarta: BPOM.
Gandjar,  I.  G.  &  Rohman,  A.  (2007).  Kimia  Farmasi Analisis (cetakan 2). Jakarta: Pustaka Pelajar.
Kementerian  Perdagangan  RI.  (2014).  Permendag 75/M-DAG/PER/10/2014  tentang  Pengadaan, Distribusi  dan  Pengawasan  Bahan  Berbahaya. Jakarta: Kementerian Perdagangan RI.
Kumalasari,  E.  (2015).  Identifikasi  dan  Penetapan Kadar  Rhodamin  B  dalam  Kerupuk  Berwarna Merah  yang  Beredar  di  Pasar  Antasari  Kota Banjarmasin. Jurnal  Ilmiah  Manuntung;  1; 85–
89.
Nahdi, S. B. (2018). Analisis Kualitatif  dan Kuantitatif Zat  Pewarna Berbahaya Rhodamin B  pada Saus yang  Beredar  di  Pasar  Gamping  Kabupaten Sleman Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis Dan  Spektrofotometri  Uv-Vis .  Skripsi; Fakultas Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan  Universitas Muhammadiyah Yogyakarta, Yogyakarta.
Permenkes  RI.  (2012).  Bahan  Tambahan  Pangan.
Jakarta: Permenkes RI.
Samosir,  A.  S.,  Bialangi,  N.  &  Iyabu,  H.  (2018).
Analisis  Kandungan  Rhodamin  B  pada  Saos Tomat  yang  Beredar  di  Pasar  Sentral  Kota Gorontalo dengan Menggunakan Metode Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT). Entropi ; 13;
45–49.
Sari,  R.  P.  (2015).  Identifikasi  dan  Penetapan  Kadar
Rhodamin B pada Kue Berwarna Merah di Pasar Antasari  Kota  Banjarmasin. Jurnal  Ilmiah Manuntung; 1; 75–84.
Yamlean,  P.  V.  Y.  (2011).  Identifikasi  dan  Penetapan
Kadar Rhodamin B pada Jajanan Kue Berwarna Merah  Muda  yang  Beredar  di  Kota  Manado. Universitas  Sam  Ratulangi  Manado. Jurnal Ilmiah Sains; 11; 289-295.