ISSN: 1410-8917 Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 14 (1) (2011) : 12 – 16

## Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi
Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Uji Aktivitas Trichoderma Viride dalam Hidrolisis Selulosa Eceng Gondok ( Eichhornia Crassipes ) dengan Variasi Temperatur dan

## Waktu Inkubasi
Wirnia Sinar Setyani a , Purbowatiningrum Ria Sarjono a , Nies Suci Mulyani a*
a Biochemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang 50275
* Corresponding author: niessuci@live.undip.ac.id Art ic le   Info Ab s t rac t Keywords:
Trichoderma viride, cellulose hydrolysis, optimum temperature and incubation time
Trichoderma viride activity was tested in hydrolyzing cellulose water hyacinth ( Eichhornia crassipes )  with  variation  of  temperature  and  incubation  time  to  obtain  optimum temperature and incubation time. Trichoderma viride activity was based on the ability of the cellulase enzyme produced to break the β -1,4-glycoside bond on the cellulose chain in water hyacinth and was observed based on the amount of glucose produced as a result of the hydrolysis reaction. The results of the Trichoderma viride activity test showed that the highest glucose levels were obtained at 35°C and the optimum incubation time of glucose at 96 hours was 1.3864 mg / L.

## Ab s t rak
Kata kunci: Trichoderma viride ,
hidrolisis selulosa, temperatur dan waktu inkubasi optimum
Telah  dilakukan  pengujian  aktivitas Trichoderma  viride dalam  menghidrolisis  selulosa eceng gondok ( Eichhornia crassipes ) dengan variasi temperatur dan waktu inkubasi untuk memperoleh  temperatur  dan  waktu  inkubasi  optimum.  Aktivitas Trichoderma  viride didasarkan pada kemampuan enzim selulase yang dihasilkan untuk memecah ikatan β - 1,4-glikosida  pada  rantai  selulosa  dalam  eceng  gondok  dan  diamati  berdasarkan banyaknya  glukosa  yang  dihasilkan  sebagai  hasil  reaksi  hidrolisis.  Hasil  pengujian aktivitas Trichoderma  viride menunjukkan  bahwa  kadar  glukosa  paling tinggi  diperoleh pada temperatur 35 o C dan waktu inkubasi optimum dihasilkannya glukosa pada jam ke- 96 sebesar 1,3864 mg/L.

## 1. Pendahuluan
Selulosa  adalah  karbohidrat  paling  melimpah  dan sering  ditemukan  di  alam  [1].  Selulosa  terdiri  atas monomer  glukosa  yang  dihubungkan  dengan  ikatan β - 1,4-glikosida.  Dengan  menghidrolisis  ikatan  glikosida dapat  diperoleh  glukosa  yang  kemudian  diharapkan dapat digunakan untuk berbagai tujuan, seperti produksi sirup gula, asam organik [2] dan bioetanol [3].
Salah satu sumber selulosa yang mudah ditemukan adalah eceng gondok. Tumbuhan ini memiliki kecepatan tumbuh yang tinggi [4] sehingga dianggap sebagai gulma yang  dapat  merusak  lingkungan  perairan  [5].  Eceng gondok  dapat  bermanfaat  dalam  bidang  bioteknologi
sebagai  alternatif  substrat  lignoselulosa  [4]  dan  media pertumbuhan mikroorganisme. Eceng gondok mengandung bobot kering selulosa 21,50%, hemiselulosa 33,90% dan lignin 7,01% [4].
Proses  hidrolisis  selulosa  dapat  dilakukan  dengan bantuan  mikroorganisme  selulolitik  salah  satunya adalah Trichoderma  viride .  Menurut  [6], Trichoderma viride merupakan kapang yang berpotensi memproduksi selulase dalam jumlah yang relatif banyak yang mampu mendegradasi  ikatan β -1,4-glikosida  pada  selulosa untuk  menghasilkan  glukosa.  Berdasarkan  penelitian terdahulu yang dilakukan [3], Trichoderma viride mampu mendegradasi  selulosa  pada  batang  pisang  dan
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 14 (1) (2011) : 12 – 16
menghasilkan glukosa dengan jumlah yang cukup tinggi sebesar 0,5676 mg/mL.
Dalam  melakukan  aktivitasnya, Trichoderma  viride sebagai  penghasil  enzim  selulase  dipengaruhi  oleh temperatur dan waktu inkubasi. Temperatur mempengaruhi pertumbuhan, jumlah sel dan daya tahan hidup  mikroba,  aktivitas  metabolisme  sel  dan  sistem reaksi  enzim  yang  bekerja  di  dalam  sel.  Waktu  inkubasi yang  merupakan  waktu  yang  diperlukan  oleh Trichoderma  viride untuk  menghasilkan  enzim  selulase dan  membentuk  produk  hidrolisis,  oleh  karena  itu diperlukan temperatur dan waktu inkubasi optimum bagi Trichoderma viride yang aktivitasnya ditandai dari produk glukosa yang dihasilkan. Untuk mengetahui  temperatur dan waktu inkubasi optimum aktivitas Trichoderma viride pada eceng gondok maka dilakukan uji aktivitas dengan rentang temperatur 30 sampai 60°C dan waktu inkubasi 24 sampai 96 jam.
Pada penelitian ini dimaksudkan untuk memanfaatkan  eceng  gondok  sebagai  sumber  karbon untuk  pertumbuhan Trichoderma  viride dan  melakukan uji  aktivitas Trichoderma  viride dalam  menghidrolisis eceng  gondok  untuk  menghasilkan  glukosa  dengan variasi  temperatur  dan  waktu  inkubasi  sehingga diperoleh data aktivitas berbagai temperatur dan waktu inkubasi dalam menghasilkan glukosa.
Penentuan  aktivitas Trichoderma  viride didasarkan pada  kemampuannya  dalam  menghidrolisis  selulosa pada eceng gondok, setelah proses delignifikasi, menjadi glukosa.  Kadar  glukosa  ditentukan  dengan  metode Nelson-somogyi.

## 2. Metodologi

## Alat dan Bahan
Bahan yang digunakan adalah biakan murni kapang Trichoderma  viride TNCC6013,  eceng  gondok,  aquades, media  PDB  ( Potato  Dextrose  Broth ), CMC  ( Carboxymethyl cellulose ),  reagen  Nelson  Somogyi,  buffer  asetat  0,05M pH  5,  reagen  arsenomolibdat,  Ba(OH) 2 0,01M,  ZnSO 4 0,01M dan NaOH.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain: alat-alat  gelas  laboratorium  kimia,  lampu  spirtus, autoklaf, penangas air, inkubator, mikropipet, alumunium  foil,  spektrofotometer  UV-Vis,  kuvet, sentrifus,  neraca  analitik,  shaker,  oven,  kompor  listrik, kertas  label,  pH  stick,  korek  api,  kertas  saring,  tabung reaksi, rak tabung reaksi, blender, pendingin, kapas, kain kasa, botol  semprot  dan  pipet  tetes.  Alat-alat  dari  kaca dibungkus menggunakan alumunium foil dan plastik lalu diautoklaf pada temperatur 121 o C tekanan 2 atm selama 20  menit,  termasuk  dalam  hal  ini  media  cair  CMC ( Carboxymethyl cellulose ), PDB ( Potato Dextrose Broth ) dan eceng gondok.

## Delignifikasi Eceng Gondok
Eceng  gondok  yang  sudah  dikeringkan  dilarutkan dengan  larutan  NaOH  (%  w/v),  kemudian  dipanaskan pada  temperatur  90°C  selama  3  jam  (Hamisan dkk.,2009).  Larutan  disaring  dengan  kertas  saring,
selanjutnya  residu  larutan  yang  merupakan  eceng gondok  bebas  lignin  dicuci  dengan  aquades  hingga  pH residu  netral.  Eceng gondok  dikeringkan  di  dalam  oven dan diblender hingga berbentuk serbuk. Serbuk tersebut yang digunakan untuk uji lanjutan.
Peremajaan dan Pengadaptasian Trichoderma viride ke Media Modifikasi
Inokulum  kapang Trichoderma  viride dari  biakan induk ditempatkan secara aseptik pada 50 mL media PDB yang  telah  disterilkan  dan  di shaker pada  temperatur ruang selama 192 jam sampai kapang tumbuh. Kemudian inokulum kapang Trichoderma viride yang sudah tumbuh tersebut  ditempatkan  secara  aseptik  dan  bertahap  pada 50  mL  media  PDB  modifikasi  (antara  CMC  dengan kentang  dan  dekstrosa)  yang  telah  disterilkan  dan kemudian  di shaker pada  temperatur  ruang  selama  192 jam sampai kapang tersebut tumbuh.
Tabel 1. Modifikasi Media PDB dengan CMC Adaptasi Media PDB (%) CMC (%) PDB 100 0 PDB I 75 25 PDB II 50 50 PDB III 25 75 PDB IV 0 100
Inolulom  kapang  yang  tumbuh  pada  media  PDB  IV kemudian ditempatkan secara aseptik dan bertahap pada 50 mL media substrat eceng gondok (CMC diganti dengan eceng gondok) yang telah disterilkan dan dishaker pada temperatur  ruang  selama  192  jam  sampai  kapang tumbuh.
Tabel 2. Modifikasi Media CMC dengan Eceng Gondok Adaptasi Media CMC (%) Eceng Gondok (%) CMC 100 0 CMC I 50 50 CMC II 0 100

## Pembuatan Kurva Pertumbuhan
Sebanyak 28 buah erlenmeyer masing-masing diisi dengan 50 mL media eceng gondok dalam buffer asetat pH  5  kemudian  disterilisasi  dengan  autoklaf  selama  20 menit.  Pada  12  buah  erlenmeyer  masing-masing ditambahkan  1  mL  inokulum  kapang Trichoderma  viride (sebagai sampel) secara aseptik dan 12 buah erlenmeyer yang  lain  dijadikan  sebagai  kontrol.  Kemudian  ke-24 erlenmeyer  tersebut  dishaker  pada  temperatur  ruang, selanjutnya  sampel  diambil  tiap  24  jam  sekali  selama kurun  waktu  288  jam  untuk  diukur  berat  keringnya. Penentuan  pertumbuhan  kapang Trichoderma  viride dilakukan  menggunakan  metode  pengukuran  berat kering. Data yang didapatkan adalah jumlah berat kering yang diplotkan terhadap waktu sehingga akan diperoleh grafik jumlah berat kering vs waktu.

## Pembuatan Stater
Inokulum  kapang Trichoderma  viride diambil  dan ditempatkan secara aseptik pada 25 mL media cair yang
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 14 (1) (2011) : 12 – 16
telah  disterilkan  untuk  pembuatan  stater.  Kemudian Erlenmeyer  tersebut  dishaker  pada  temperatur  ruang selama  kurun  waktu  tertentu  (berdasarkan  kurva pertumbuhan).
Fermentasi Kapang Trichoderma viride pada Media Eceng Gondok dengan Variasi Temperatur dan Waktu Inkubasi
Untuk  menentukan  pengaruh  variasi  temperatur pada aktivitas hidrolisis selulosa pada eceng gondok oleh kapang Trichoderma viride, diperlukan 7 buah erlenmeyer 250  mL  yang  berisi  50  mL  media  eceng  gondok  dalam buffer  asetat  pH  5  yang  sudah  disterilkan.  Diambil sebanyak  1  mL  inokulum  (dari  stater)  dan  ditempatkan secara  aseptik  ke  dalam  masing-masing  erlenmeyer tersebut. Kemudian semua erlenmeyer diinkubasi selama waktu tertentu (fase log dari kurva pertumbuhan). Untuk mengetahui  temperatur  optimum  serta  pengaruh temperatur  terhadap  aktivitas Trichoderma  viride dalam menghidrolisis  eceng  gondok,  maka  erlenmeyer  yang berisi  inokulum  diinkubasi  pada  temperatur  yang bervariasi yaitu 30°C, 35°C, 40°C, 45°C, 50°C, 55°C, 60°C dan  masing-masing  dengan  waktu  inkubasi  24  sampai 96 jam, setelah itu dilakukan pengukuran kadar glukosa.
Penentuan Aktivitas Trichoderma viride dalam Menghidrolisis Eceng Gondok Menghasilkan Glukosa dengan Metode Nelson-Somogyi.
Erlenmeyer  yang  berisi  inokulum  diinkubasi  pada temperatur yang bervariasi selama waktu tertentu, filtrat (media  cair)  diukur  kandungan  glukosanya  (hasil hidrolisis eceng gondok oleh kapang Trichoderma viride ). Selanjutnya  disiapkan  7  buah  tabung  reaksi  yang masing-masing  diisi  dengan  0,1  mL  larutan  inkubasi (media cair kapang) dari masing-masing hasil inkubasi dari  perlakuan  2.7.  Kemudian  larutan  inkubasi diencerkan dengan aquades sampai volumenya menjadi 1,5 mL serta masing-masing tabung diisi dengan 0,2 mL Ba(OH) 2 0,01M  dan  0,2  mL  ZnSO 4 0,01M.  Selanjutnya disentrifus  selama  30  menit.  Larutan  hasil  sentrifus diambil sebanyak 1 mL ditempatkan pada tabung reaksi kemudian  ditambahkan  dengan  1  mL  larutan  Nelson Somogyi, agar larutan dapat cepat bereaksi maka tabung reaksi  yang  berisi  larutan  dipanaskan  di  dalam  air mendidih selama 15 menit, lalu didinginkan. Setelah itu dibubuhi  1  mL  reagen  arsenomolibdat  dan  dibiarkan selama  1  menit.  Larutan  hasil  yang  berwarna  hijau kebiruan  diencerkan  dengan  aquades  hingga  volume menjadi 10 ml. Kemudian masing-masing tabung reaksi dilakukan  pengukuran  absorbansi  pada  panjang gelombang maksimum (754 nm) dengan Spektrofotometer  UV-Vis.  Kadar  glukosa  dapat ditentukan  dari  nilai  absorbansi  yang  diperoleh  dengan menggunakan kurva standar.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Delignifikasi Eceng Gondok
Di alam selulosa selalu berikatan dengan lignin dan hemiselulosa membentuk suatu lignoselulosa. Keberadaan  lignin  akan  menghambat  proses  hidrolisis selulosa  karena  lignin  merupakan  molekul  kompleks
yang terdiri atas unit-unit fenilpropana yang umumnya sulit didegradasi [7].
Serbuk  eceng  gondok  dilarutkan  dengan  larutan NaOH  agar  lignin  dapat  larut  dan  selulosa  dapat mengendap.  Selulosa  mengendap  pada  kondisi  alkali sehingga  dengan  penambahan  NaOH,  selulosa  akan mengendap  [8].  Lignin  dalam  larutan  NaOH  akan membentuk  garam  fenolat  yang  larut  dalam  air.  Garam fenolat  terbentuk  maka  ikatan  antara  selulosa  dengan lignin  akan  lepas  sehingga  diperoleh  selulosa  dalam keadaan bebas lignin.
Peremajaan dan Pengadaptasian Trichoderma viride
Peremajaan Trichoderma  viride dilakukan  agar Trichoderma  viride aktif  saat  digunakan  dan  maksimal perannya. Pengadaptasian Trichoderma viride pada media pertumbuhan dilakukan secara bertahap. Media awal dari biakan  murni Trichoderma  viride adalah  PDA  sehingga adaptasi diawali dari media PDA ke media PDB, kemudian dilanjutkan  ke  media  PDB  modifikasi  CMC  untuk  tahap adaptasi awal Trichoderma viride pada sumber karbonnya, yaitu  kentang  dan  dektrosa  ke  CMC.  Adaptasi Trichoderma  viride ke  media  PDB  modifikasi  CMC ditunjukkan pada tabel 3.
Tabel 3. Pertumbuhan Trichoderma viride pada Media
PDB Modifikasi CMC PDB (%) CMC (%) Hasil Pengamatan 100 0 Tumbuh 75 25 Tumbuh 50 50 Tumbuh 25 75 Tumbuh 2 98 Tumbuh
Dari  tabel  3  dapat  diketahui  bahwa  pada  berbagai variasi  persentase  sumber  karbon  dari  media  PDB modifikasi  CMC, Trichoderma  viride mampu  tumbuh dengan  baik. Trichoderma  viride hanya  mampu  tumbuh sampai CMC 98% dan PDB 2% karena kapang ini masih membutuhkan nutrien dari media PDB.
Tahap  adaptasi  selanjutnya  adalah  media  PDB modifikasi  CMC  ke  media  eceng gondok  untuk  adaptasi selanjutnya  dari Trichoderma  viride pada  sumber karbonnya, yaitu CMC ke eceng gondok. Pengadaptasian ke  media  eceng  gondok  juga  dilakukan  secara  bertahap agar memudahkan Trichoderma viride dalam beradaptasi. Hasil pengadaptasian ditunjukkan pada tabel 4.
Tabel 4. Pertumbuhan Trichoderma viride pada Media
Modifikasi Eceng Gondok CMC (%) Eceng Gondok (%) Hasil Pengamatan 98 0 Tumbuh 50 50 Tumbuh 0 100 Tumbuh
Dari  tabel  4  dapat  diketahui  bahwa  pada  media modifikasi  eceng  gondok, Trichoderma  viride mampu tumbuh  dengan  baik, dengan  kandungan  eceng gondok 100%.
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 14 (1) (2011) : 12 – 16

## Pembuatan Kurva Pertumbuhan
Pembuatan  kurva  pertumbuhan  dilakukan  dengan metode  berat  kering  yaitu  dengan  menghitung pertambahan  massa  sel  dari Trichoderma  viride selama 288  jam. Trichoderma  viride dalam  media  cair  diambil setiap 24 jam untuk kemudian disaring dan dikeringkan lalu ditimbang massanya.
Gambar 1. Grafik Kurva Pertumbuhan Trichoderma viride
Dari  gambar  1  dapat  diketahui  bahwa  waktu  yang tepat  untuk  panen  sel Trichoderma  viride agar  dapat digunakan  untuk  proses  fermentasi  selanjutnya  yaitu pada  jam  ke-96  yang  berada  pada  fase  eksponensial. Pada  fase  ini  pertumbuhan  sel Trichoderma  viride yang paling  maksimal  sehingga  pada  fase  ini  juga  akan dihasilkan enzim selulase yang maksimal
Uji Aktivitas Trichoderma viride dalam Hidrolisis Eceng Gondok dengan Variasi Temperatur dan Waktu Inkubasi
Pada  inkubasi  jam  ke-24,  diperoleh  kadar  glukosa dengan kisaran 0,6-1,1 mg/L. Aktivitas Trichoderma viride menghidrolisis selulosa dan menghasilkan glukosa pada jam ke-24 dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar 2. Grafik Kadar Glukosa pada berbagai Variasi Temperatur pada Jam ke-24
Pada  gambar  2  menunjukkan  bahwa Trichoderma viride melakukan  aktivitasnya  pada  semua  temperatur dan  menghasilkan  glukosa  sebagai  produk  hidrolisis. Pada  temperatur  30,  35,  40  dan  45°C  terukur  kadar glukosa yang lebih tinggi dibandingkan pada temperatur 50,  55  dan  60°C  karena  pada  temperatur  yang  lebih tinggi, kemampuan Trichoderma viride dalam menghasilkan  enzim  untuk  menghidrolisis  selulosa menjadi berkurang.
Pada jam ke-48, temperatur 30, 35, 40, 45 dan 60°C mengalami  penurunan  kadar  glukosa  sedangkan  pada temperatur  50°C  dan  55°C  sedikit  mengalami peningkatan  kadar  glukosa  dari  awal  inkubasi  yang terlihat pada gambar 3.
Gambar 3. Grafik Kadar Glukosa pada Berbagai Variasi Temperatur pada Jam ke-48
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  penurunan  pada temperatur 30, 35, 40, 45 dan 60°C ini disebabkan kapang Trichoderma  viride menggunakan  glukosa  yang  berasal dari  hasil  hidrolisis  pada  jam  ke-24  sebagai  sumber karbon. Menurut [9]Martina dkk. (2002), mikroorganisme  akan  menggunakan  sumber  karbon yang  lebih  sederhana  terlebih  dahulu  seperti  glukosa sebelum menggunakan selulosa.
Pada hari ketiga atau jam ke-72 terjadi peningkatan kadar  glukosa  pada  tiap  temperatur.  Pada  temperatur 35°C dihasilkan kadar glukosa paling tinggi dibandingkan  temperatur  30,  40,  45,  50,  55  dan  60°C yang ditunjukkan pada gambar 4 berikut ini.
Gambar 4. Grafik Kadar Glukosa pada Berbagai Variasi Temperatur pada Jam ke-72
Pada  inkubasi  72  jam  ini,  temperatur  35°C menunjukkan  bahw Trichoderma  viride memberikan aktivitas  yang  tinggi  dengan  dihasilkan  glukosa  yang tinggi yaitu sebesar 1,1118 mg/L.
Pada inkubasi jam ke-96 dengan data kadar glukosa pada gambar 5 menunjukkan bahwa terjadi peningkatan kadar  glukosa  pada  temperatur  30,  35  dan  40°C.  Pada temperatur  35°C,  dihasilkan  kadar  glukosa  yang  paling tinggi  dibandingkan  temperatur  lainnya  yaitu  sebesar 1,3864 mg/L.
Gambar 5. Grafik Kadar Glukosa pada Berbagai Variasi Temperatur pada Jam ke-96
Pada  temperatur  35°C  telah  menunjukkan  kadar glukosa  yang  tinggi  dari  waktu  inkubasi  jam  ke-72 hingga  jam  ke-96  sehingga  temperatur  ini  merupakan temperatur  optimum  untuk  kapang Trichoderma  viride dalam  mensintesis  kompleks  enzim  selulase  yang mampu  menghidrolisis  selulosa  dan  menghasilkan glukosa yang tinggi.
Berdasarkan  pengamatan  yang  ditunjukkan  dari gambar 2 hingga 5 dapat disimpulkan bahwa temperatur optimum  hidrolisis  selulosa  terdapat  pada  temperatur 35°C  yang  memiliki  kadar  glukosa  tertinggi  pada inkubasi jam ke-96 yaitu sebesar 1,3864 mg/L.

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan yang telah  dipaparkan  sebelumnya,  maka  dapat  disimpulkan bahwa  pada  penelitian  ini  diperoleh Trichoderma  viride yang  mampu  tumbuh  pada  media  pertumbuhan  eceng gondok dan aktivitas tertinggi Trichoderma  viride dalam hidrolisis  selulosa  dari  eceng  gondok  pada  temperatur optimum  35°C  dan  waktu  inkubasi  optimum  dalam menghasilkan  glukosa  pada  jam  ke-96  sebesar  1,3864 mg/L dari 0,25 gram bubuk eceng gondok.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  G. Ramanathan, S. Banupriya, D. Abirami, Production and  optimization  of  cellulase  from  Fusarium oxysporum by submerged fermentation, CSIR, 2010.
[2]  Xue-Cai  Hao,  Xiao-Bin  Yu,  Zhong-Li  Yan, Optimization  of  the  medium  for  the  production  of cellulase by the mutant Trichoderma reesei WX-112 using  response  surface  methodology, Food Technology and Biotechnology , 44, 1, (2006) 89-94
[3]  D.S.  Kamara,  Rachman,  S.D.,  dan  Gaffar,  S.,  , Degradasi  Enzimatik  Selulosa  dari  Batang  Pohon Pisang  untuk  Produksi  Enzim  Selulase  dari  Kapang Trichoderma  viride, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam,  Universitas  Padjajaran,  Bandung ,
(2006)
[4]  SK  Deshpande,  MG  Bhotmange,  T  Chakrabarti,  PN Shastri,  Production  of  cellulase  and  xylanase  by Trichoderma  reesei  (QM  9414  mutant),  Aspergillus niger and mixed culture by solid state fermentation (SSF)  of  water  hyacinth  (Eichhornia  crassipes),
(2008)
[5]  Enny  K  Artati,  Ahmad  Effendi,  Tulus  Haryanto, Pengaruh Konsentrasi Larutan Pemasak Pada Proses Delignifikasi  Eceng  Gondok  dengan  Proses Organosolv, Ekuilibrium , 8, 1, (2009) 25-28
[6]  Mary  Mandels,  James  Weber,  The  production  of cellulases, in, ACS Publications, 1969.
[7]  Mohammad  J  Taherzadeh,  Keikhosro  Karimi,
Enzymatic-based  hydrolysis  processes  for  ethanol from lignocellulosic materials: A review,
BioResources , 2, 4, (2007) 707-738
[8]  Nur Richana, Tun Tedja Irawadi, M Anwar Nur, Illah Sailah, Khaswar Syamsu, Yandra Arkenan, Ekstraksi xilan dari tongkol jagung, J. Pascapanen , 4, 1, (2007) 38-43
[9]  A  Martina,  Nuryati  Yuli,  Mumu  Sutisna,  Optimasi beberapa  faktor  fisik  terhadap  laju  degradasi selulosa  kayu  albasia  (Paraserianthes  falcataria  L. Nielsen)  dan  karboksimetilselulosa  (CMC)  secara enzimatik  oleh  jamur, Jurnal  Natur  Indonesia ,  4,  2, (2002) 156-163