Versi Online: http://journal.ipb.ac.id/index.php/jtip DOI: 10.6066/jtip.2013.24.1.97 Hasil Penelitian
Vol. 24 No. 1 Th. 2013 ISSN : 1979-7788 Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012

## OPTIMASI RENDEMEN EKSTRAKSI LESITIN DARI MINYAK KEDELAI VARIETAS ANJASMORO DENGAN WATER DEGUMMING
[Yield Optimization of Lecithin Extraction of Anjasmoro Variety Soybean Oil by Water Degumming]
Teti Estiasih 1) *, Kgs. Ahmadi 2) , Erliana Ginting 3) dan Deny Kurniawati 1)
1) Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan, Jurusan Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Brawijaya, Malang - Jl. Veteran, Malang, Jawa Timur 65141
2) Jurusan Teknologi Industri Pangan, Fakultas Pertanian, Universitas Tribhuwana Tunggadewi, Malang
3) Balai Penelitian Kacang-kacangan dan Umbi-umbian, Malang
Diterima 10 Februari 2012 / Disetujui 15 Juli 2013

## ABSTRACT
Lecithin is one of natural emulsifiers widely used in food industries. The main source of lecithin  is soybean  and it is obtained during water degumming in soybean oil purification.  This research  was aimed to optimize  the yield of lecithin during  water degumming of Anjasmoro variety soybean oil by response surface methodology. The factors optimized were added water (%), temperature (ºC), and extraction time (minute). The relationship between lecithin yield and the parameters was quadratic. The response increased up to a certain point, and then decreased. Optimum water degumming was obtained at water additon of 2.95%, temperature of 61.96  C, and extraction time of 30.02 minutes. At optimum condition, the lecithin yield was 1.55% and the phosphor content was 3865.30 ppm suggesting lecithin purity of 56.24%. Verification showed that the yield was close to the prediction value of 1.49%. The purification process resulted in lecithin purity of 83.96% which was in compliance with the legal purity specification of food grade lecithin.
Key words: lecithins, phospholipids, water degumming, purification, optimization

## ABSTRAK
Lesitin  merupakan  pengemulsi  alami  yang  paling  banyak  digunakan  di  industri  pangan.  Sumber  utama  lesitin  adalah  kedelai  dan  lesitin diperoleh  dari  proses  penghilangan  gum  pada  proses  pemurnian  minyak  kedelai.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengoptimasi  rendemen  lesitin pada  peghilangan  gum  ( water degumming )  minyak  kedelai  varietas  Anjasmoro  menggunakan  metodologi  permukaan  respon.  Faktor  yang dioptimasi adalah tingkat penambahan air (%), suhu (  C), and waktu proses (menit). Hubungan antara rendemen lesitin dan semua faktor bersifat kuadratik. Respon meningkat sampai titik tertentu dan kemudian menurun. Kondisi water degumming optimum diperoleh pada tingkat penambahan air  2.95%,  suhu  61.96  C,  dan  waktu  proses  30.02  menit.  Pada  kondisi  optimum  ini,  rendemen  yang  diperoleh  adalah  1.55%  dan  kadar  fosfor 3865.30  ppm  atau  kemurnian  lesitin  56.24%.  Verifikasi  menunjukkan  rendemen  lesitin  hampir  mendekati  nilai  prediksi  yaitu  1.49%.  Pemurnian terhadap lesitin menghasilkan lesitin dengan kemurnian 83.96 yang sesuai dengan standar kemurnian lesitin untuk pangan.
Kata kunci: lesitin, fosfolipid, water degumming , pemurnian, optimasi

## PENDAHULUAN
1
Lesitin  merupakan  pengemulsi  alami  yang  paling  banyak digunakan  secara  komersial  di  industri  pangan,  kosmetik,  dan farmasi  (Cabezas et  al. 2009).    Lesitin  merupakan  kompleks campuran  dari  fosfolipida  alami  (Joshi et  al. 2006).  Lesitin kedelai mempunyai sifat multifungsional, fleksibel, dan versatile . Lesitin  merupakan  pengemulsi  paling  baik  yang  berperan meningkatkan soliditas margarin dan membentuk tekstur, selain berkontribusi pada sifat gurih.  Lesitin digunakan pada industri coklat dan confectionary , industri farmasi, kosmetik, dan kimia seperti tekstil, pelumas, dan lilin (Lin dan Blank, 2003).
Pemenuhan  kebutuhan  lesitin  untuk  industri  pangan  di Indonesia  masih  disuplai  oleh  lesitin  kedelai  impor.  Beberapa
*Korespondensi Penulis:
E-mail: teties@yahoo.co.id dan teties@ub.ac.id
kedelai  varietas  unggul  yang  telah  dilepaskan  di  Indonesia seperti  Anjasmoro,  Argomulyo,  Malikka,  Burangrang,  Bromo, dan Tampomas berpotensi sebagai bahan baku minyak kedelai karena  varietas-varietas  unggul  tersebut  mengandung  kadar lemak  >18%  di  samping  produktivitasnya  yang  tinggi  (  2 ton/ha) (Ginting et al. 2009). Varietas kedelai unggul merupakan bahan yang potensial sebagai minyak kedelai. Lesitin dihasilkan dari  proses  pemurnian  minyak  kedelai  pada  proses water degumming sehingga  varietas  kedelai  unggul  merupakan sumber  potensial  lesitin  untuk  menggantikan  lesitin  kedelai impor. Saat ini, varietas yang banyak dikenalkan dan digunakan petani  adalah  varietas  Anjasmoro  yang  dilepas  pada  tahun 2001.  Varietas  ini  yang  dipilih  pada  pelaksanaan  program SLPTT  (Sekolah  Lapang  Pengelolaan  Tanaman  Terpadu)  dari Kementerian  Pertanian  dan  Dinas  Pertanian  di  16  propinsi  di Indonesia.  Kadar  lemak  dalam  kedelai  varietas  Anjasmoro adalah  18.60%  (Ginting et  al. 2009)  sehingga  varietas  ini
Versi Online: http://journal.ipb.ac.id/index.php/jtip DOI: 10.6066/jtip.2013.24.1.97 Hasil Penelitian
potensial digunakan sebagai bahan baku minyak kedelai. Oleh karena  itu,  pengembangan  metode water  degumming yang tepat untuk mendapatkan lesitin dari kedelai varietas Anjasmoro penting untuk dikaji.
Minyak kedelai mengandung fosfor (P) 800–1200 ppm yang ekivalen  dengan  lesitin  komersial.  Fosfolipid  dipisahkan  dari minyak  pada  proses degumming karena  minyak  kedelai  murni harus  mempunyai  kadar  P  yang  rendah  (Nieuwenhuyzen  dan Tomás,  2008).  Proses degumming yang  tepat  dari  minyak kedelai varietas unggul perlu dikembangkan. Tujuannya adalah mendapatkan hasil samping lesitin kedelai yang optimum, yaitu kemurnian fosfolipid yang tinggi, residu fosfolipid dalam minyak yang  rendah,  serta  karakteristik  minyak  kedelai  yang  sesuai dengan  standar.  Optimasi  kondisi  proses water  degumming perlu  dikaji  pada  minyak  kedelai  dari  kedelai  varietas  unggul Anjasmoro untuk mendapatkan lesitin kedelai dengan kemurni- an tinggi.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan baku yang digunakan adalah kedelai varietas unggul Anjasmoro  dari  Balai  Penelitian  Kacang-kacangan  dan  Umbi- umbian  (Balitkabi)  –  Malang.  Bahan-bahan  kimia  yang  di- gunakan  adalah  standar  asam-asam  lemak,  standar  fosfolipid (PC=fosfatidilkolin,  PE=fosfatidiletanolamin,  PI=fosfatidilinositol, PA=asam  fosfatidat,  LPC=lisofosfatidilkolin,  LPE=lisofasfatidi- letanolamin,  LPI=lisofosfatidilinositol),  fosfolipase  A1  (Sigma Co.), akuades, asam fosfat, etanol, toluena, heksana, dietileter, aseton,  BF 3 -metanol  14%,  metilenklorida,  NaOH,  benzena, metanol, KOH, HCl, asam sulfat, plat TLC (silika gel G60 F254), kalium  dihidrogen  fosfat,  amonium  sulfat,  BaCl 2 ,  amonium tiosianat,  H 2 O 2 ,  ferrosulfat  (p.a.  dari  Merck),  aseton,  etanol (teknis), dan gas nitrogen.
Optimasi water  degumming untuk  mendapatkan  lesitin dengan rendemen tinggi
Pada  tahap  ini  dilakukan  proses  pengepresan  untuk  men- dapatkan minyak kedelai. Biji kedelai yang digunakan adalah biji kedelai  yang  telah  dikeringkan.  Minyak  kedelai  yang  diperoleh dihilangkan  gumnya  dengan  menggunakan  air.  Pada  tahap  ini beberapa  faktor  dioptimasi  untuk  mendapatkan  kadar  lesitin kedelai  kasar  yang  optimum  dalam  gum.  Optimasi  dilakukan dengan  menggunakan  metodologi  permukaan  respon  (RSM) dengan faktor yang dikaji adalah jumlah air yang ditambahkan (%),  suhu  (  C),  dan  waktu  proses  (menit)  (Tabel  1).  Respon yang dioptimasi adalah rendemen lesitin yang diperoleh (% b/b minyak).
Lesitin  yang  diperoleh  dari  kondisi  proses  optimum  lebih lanjut  dikeringkan  dengan  menggunakan  evaporator  berputar untuk  menurunkan  kadar  air.  Kadar  air  yang  diperoleh  harus sesuai  standar  yang  ditetapkan  untuk  kemurnian  legal food grade  lecithin dari Food  Chemical  Codex ,  yaitu  kurang  dari 1.5% (Tabel 2). Lebih lanjut, lesitin hasil pengeringan dihilang- kan  minyaknya  dengan  menggunakan  aseton  sesuai  dengan prosedur dari Nasir et al. (2007). Minyak kedelai yang dihasilkan dari  proses water  degumming ini  harus  memenuhi  standar
kadar  fosfor  yang  ditetapkan  oleh US  National  Oilseed Processor Association (NOPA) yaitu kurang dari 0.02% (USDA, 2010).
Optimasi  dilakukan  sebagai  berikut:  minyak  kedelai  dari hasil  pengepresan  ditambah  dengan  air  panas  dengan  kadar sesuai  perlakuan  (Faktor  1)  dan  suhu  air  bervariasi  sesuai perlakuan.  Minyak  dan  air  kemudian  dipanaskan  pada  suhu bervariasi sesuai perlakuan (Faktor 2) dengan diagitasi selama waktu  tertentu  sesuai  perlakuan  (Faktor  3).  Minyak  kemudian disentrifugasi  pada  suhu  50-70  C.  Residu  yang  diperoleh merupakan  gum  dan  dikeringkan  dengan  evaporator  sampai kadar  air  <1.5%  lalu  dihilangkan  minyaknya  dengan  meng- gunakan  aseton.  Aseton  dipisahkan  dari  lesitin  dengan  cara sentrifugasi  pada  3000  rpm  selama  15  menit,  dilanjutkan dengan hembusan nitrogen untuk menghilangan residu aseton dalam lesitin.
Tabel 1.  Rancangan  komposit  pusat  ordo  kedua  dengan  tiga  faktor pada optimasi water degumming Variabel Sebenarnya Variabel Terkode Respon Rendemen (% b/b) Kadar Air (%) Suhu (  C) Waktu Proses (menit) X 1 X 2 X 3 2 40 20 -1 -1 -1 1.23 2 40 40 -1 -1 +1 1.17 2 80 20 -1 +1 -1 1.03 2 80 40 -1 +1 +1 1.31 4 40 20 +1 -1 -1 1.07 4 40 40 +1 -1 +1 1.01 4 80 20 +1 +1 -1 1.20 4 80 40 +1 +1 +1 1.05 3 60 30 0 0 0 1.49 3 60 30 0 0 0 1.54 3 60 30 0 0 0 1.61 3 60 30 0 0 0 1.60 3 60 30 0 0 0 1.28 3 60 30 0 0 0 1.445 1.32 60 30 -1.68 0 0 1.01 4.68 60 30 +1.68 0 0 1.11 3 26.36 30 0 -1.68 0 0.99 3 93.64 30 0 +1.68 0 1.14 3 60 13.18 0 0 -1.68 1.08 3 60 46.82 0 0 +1.68 1.03

## Rancangan percobaan
Rancangan  penelitian  yang  digunakan  pada  proses optimasi water degumming adalah Rancangan Komposit Pusat ordo kedua dari RSM. Faktor yang dikaji adalah suhu yaitu 40, 60, dan 80  C, tingkat penambahan air yaitu 2, 3, 4%, dan waktu proses  yaitu  20,  30,  dan  40  menit.  Respon  yang  dioptimasi adalah  rendemen  gum  atau  ekstrak  lesitin  kasar  yang  dihasil- kan.  Faktor  yang  dikaji  mengacu  pada  kondisi  terbaik  dari penelitian Eshratabadi (2008) yaitu tingkat penambahan air 3%, suhu 75  C, dan lama agitasi 20 menit.
Purifikasi lesitin kedelai varietas unggul (Nasir et al. 2007) Purifikasi dilakukan dengan cara penghilangan minyak pada lesitin  yang  sudah  dikeringkan.  Proses  penghilangan  minyak
Versi Online: http://journal.ipb.ac.id/index.php/jtip DOI: 10.6066/jtip.2013.24.1.97 Hasil Penelitian
ditujukan  untuk  mendapatkan  lesitin  kedelai  yang  lebih  murni. Lesitin kedelai sebanyak 25 g dilarutkan dalam aseton 150 ml dan diaduk dengan pengaduk magnet selama 60 menit. Pelarut yang  mengandung  lipid  netral  dipisahkan  dengan  dekantasi, kemudian proses diulang sampai pelarut tidak berwarna. Lesitin hasil purifikasi merupakan lesitin kasar dari kedelai.

## Karakterisasi lesitin kasar kedelai varietas unggul
Lesitin  kasar  yang  diperoleh  dikarakterisasi  lebih  lanjut dengan mengacu pada spesifikasi kemurnian legal dari Codex Allimentarius  (FAO/WHO),  European  Union E322,  dan Food Chemical  Codex (FCC)  (Tabel  2).  Karakterisasi  meliputi: rendemen, Hexane  Insoluble,  Toluene  Insoluble,  Acetone Insoluble (AOCS,  2003) , bilangan  asam,  bilangan  peroksida, kadar  air,  susut  pengeringan  (IUPAC,  1979),  logam  berat (sebagai  Pb,  As,  Hg)  dengan  X Ray  Fluorescence (XRF) (Minipal  4  X-RF), Hydrophillic-Lipophillic  Balance (HLB), komposisi fosfolipid dengan kromatografi lapis tipis (KLT) (Nzai dan  Proctor,  1998),  komposisi  asam  lemak  menggunakan kromatografi  gas  dengan  metilasi  menurut  Park  dan  Goins (1994).  Kemurnian  lesitin  dinyatakan  sebagai  kadar  lesitin  (%) dalam ekstrak lesitin kasar yang diperoleh.
Tabel 2.  Spesifikasi  kemurnian  legal  untuk food  grade  lecithins dan mutu  lesitin  kedelai  varietas  Anjasmoro  dari  kondisi water degumming optimum dengan respon rendemen Kemurnian Codex Allimentarius (FAO/WHO) Europe- an Union E322 Food Chemical Codex Lesitin Kedelai Varietas Anjasmoro Acetone Inso l uble (AI) (%) >60 >60 >50 66.5 Hasil hidrolisis >56 Hexane Insoluble (HI) (%) <0.3 0.19 Toluene Insoluble (TI) (%) <0.3 <0.3 0.26 Kadar air (%) <1.5 1.20 Susut pengeringan (%) <2.0 <2.0 1.20 Bilangan asam (mgKOH/g) <36 <35 <36 8.63 Hasil hidrolisis <45 Bilangan peroksida (mek/kg) <10 <10 <100 t.a Arsen (ppm) <3 <3 Tidak terdeteksi Timbal (ppm) <10 <5 <1 Tidak terdeteksi Raksa (ppm) <1 Tidak terdeteksi Logam berat (sebagai Pb) (ppm) <40 <10 Tidak terdeteksi
Analisis fosfolipid dengan KLT (Nzai dan Proctor, 1998) Sebanyak  20  L  sampel  dengan  konsentrasi  20  mg/mL dilarutkan  dalam  campuran  kloroform:metanol  95:5  (v/v)  dan ditutulkan  pada  plat  silika  gel  G60.  Pelarut  yang  digunakan untuk elusi adalah kloroform:metanol:air (75:25:3 v/v). Elusi di- lakukan  selama  40  menit.  Visualisasi  dilakukan  dengan  me-
nyemprotkan  larutan  asam  sulfat  dalam  air  (1:1)  dilanjutkan dengan pemanasan 140  C selama 20 menit. Kuantifikasi jenis- jenis fosfolipid pada spot  KLT yang terpisah dilakukan dengan menggunakan  pemayar  Pemayar  KLT  (Shimadzu)  dengan dibandingkan dengan standar masing-masing jenis fosfolipid.

## Analisis asam lemak dengan kromatografi gas
Analisis  asam  lemak  dilakukan  dengan  kromatografi  gas (Shimadzu  GC  8A)  setelah  sampel  lesitin  dimetilasi  mengikuti metode Park dan Goins (1994). Kolom yang digunakan adalah kolom  kapiler  CBP20  0.25  m  silika  dengan  panjang  50  m, diameter  internal  0.22  mm,  diameter  luar  0.33  mm.  Gas pembawa adalah nitrogen (tekanan 200 kg/m 2 ), gas pendorong adalah udara (tekanan 0.15 kg/cm 2 ), dan gas pembakar adalah hidrogen dengan tekanan 0.6 kg/cm 2 . Suhu injektor, kolom, dan detektor adalah 230  C, 250  C, and 230  C. Sampel dan standar diinjeksikan dengan volume 2  L.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Optimasi rendemen pada water degumming untuk ekstraksi lesitin
Rendemen lesitin yang diperoleh dari proses optimasi water degumming dapat dilihat pada Tabel 1. Rendemen dihitung dari berat awal minyak yaitu berat lesitin dibagi berat minyak dikali- kan 100%.
Pemilihan  model  berdasarkan sequential  model  sum  of square (Tabel  3)  menunjukkan  bahwa  model  yang  signifikan adalah  kuadratik  dan  kubik,  sedangkan  model  2FI  (interaksi), dan linear tidak signifikan (P>0.05). Model ordo yang dianjurkan berdasarkan sequential  model  sum  of  square ini  adalah kuadratik sehingga model tersebut yang terpilih.
Tabel 3.  Uraian  jumlah  kuadrat  dari  urutan  model  ( Sequential  Model Sum of Square ) untuk optimasi rendemen pada proses water degumming Sumber Jumlah Kuadrat db Kuadrat Tengah Fhit Prob>F Ketera- ngan Rata-rata 29.76 1 29.76 Linear 0.01 3 4.72E-003 0.09 0.96 2FI 0.04 3 0.01 0.02 0.88 Kuadratik 0.63 3 0.21 13.57 0.00 Suggest ed Kubik 0.05 4 0.01 0.69 0.62 Aliased Residu 0.11 6 0.02
Pemilihan  model  yang  kedua  adalah  berdasarkan  uji simpangan  model  (Tabel  4).  Model  dianggap  tepat  jika  nilai P>0.05  (P>5%)  yang  berarti  ketidaktepatan  model  tidak  ber- pengaruh  nyata  atau  signifikan.  Dari  uji  ini  semua  model menunjukkan tepat karena nilai P>5%.
Dilihat dari Tabel 4, model kuadratik merupakan model yang nyata  yang  disarankan.  Berdasarkan  alasan  ini  maka  model yang  terpilih  adalah  kuadratik  yang  oleh  program  dinyatakan dianjurkan,  sesuai  dengan  pemilihan  model  berdasarkan sequential  model  sum  of  square .  Proses  pemilihan  model berikutnya berdasarkan ringkasan model secara statistik (Tabel 5). Parameter yang digunakan untuk memilih model yang tepat
Versi Online: http://journal.ipb.ac.id/index.php/jtip DOI: 10.6066/jtip.2013.24.1.97 Hasil Penelitian
adalah  standar  deviasi  terendah, R-square tertinggi, Adjusted R-square tertinggi, Predicted  R-square tertinggi,  dan  PRESS ( Prediction  Error  Sum  of  Square )  terendah.  Di  antara  model yang memenuhi kriteria adalah model kubik, akan tetapi model kubik  tidak  dianjurkan  sehingga  model  yang  terpilih  adalah model kuadratik.
Tabel 4.  Uji  simpangan  model  ( lack  of  fit  test )  untuk  optimasi rendemen pada proses water degumming
Sumber Jumlah Kuadrat db Kuadrat Tengah Fhit Prob>F Keterangan Linear 0.74 11 0.07 4.56 0.05 2FI 0.71 8 0.09 5.94 0.03 Kuadratik 0.08 5 0.02 1.07 0.47 Suggested Kubik 0.31 1 0.31 2.09 0.21 Aliased Galat 0.07 5 0.02
Berdasarkan  ringkasan  statistik,  model  kuadratik  mem- punyai nilai Adj.R 2 sebesar 64.88%. (Tabel 5).  Berarti variabel tingkat  penambahan  air,  suhu,  dan  waktu  proses water degumming berpengaruh terhadap keragaman respon sebesar 64.88% sedangkan sisanya sebesar 35.12% dipengaruhi faktor lain yang tidak dijadikan variabel yang diteliti. Berdasarkan tiga proses  pemilihan  model  tersebut  model  yang  sesuai  untuk optimasi  rendemen  pada  proses water  degumming adalah model  kuadratik.  Hasil  analisis  ragam  dari  permukaan  respon kuadratik  menunjukkan  model  kuadratik  mempunyai  pengaruh yang  nyata  terhadap  respon.  Hasil  analisis  ragam  (Tabel  6) faktor  yang  dikaji  yaitu  penambahan  air  (%),  suhu,  dan  waktu proses  (linear) water  degumming tidak  berpengaruh  nyata terhadap  respon.  Faktor  lain  yaitu  interaksi  antar  faktor  dan kadar  air  (kuadratik)  juga  tidak  mempengaruhi  respon.  Faktor yang berpengaruh terhadap respon adalah kadar air, suhu, dan waktu proses water degumming yang bersifat kuadratik. Dari  Tabel  6  terlihat  bahwa  hubungan  antara  rendemen dengan  penambahan  air,  suhu,  serta  waktu  proses water degumming bersifat  kuadratik  yaitu  meningkat  sampai  titik tertentu  yang  optimum,  peningkatan  lebih  lanjut  menyebabkan rendemen  mengalami  penurunan.  Dasar  ekstraksi  fosfolipid adalah  fosfolipid  menjadi  mengembang  jika  diberi  perlakuan hidrasi dan dipisahkan dengan presipitasi. Air biasa digunakan untuk  memisahkan  fosfolipid  dari  minyak  nabati  (Eshratabadi, 2008).
Menurut Shahidi (2005), jumlah air yang ditambahkan untuk hidrasi fosfolipid merupakan faktor kritis. Jika air yang ditambah- kan terlalu sedikit, hidrasi tidak akan sempurna. Pada penelitian
ini,  jumlah  air  yang  ditambahkan  mengakibatkan  pengaruh signifikan terhadap rendemen lesitin yang diperoleh.
Menurut  Shahidi  (2005),  jumlah  air  yang  ditambahkan  ter- gantung pada kadar fosfatida dalam minyak nabati. Peningkat- an  jumlah  air  yang  ditambahkan  menyebabkan  peningkatan rendemen  sampai  kadar  air  tertentu.  Hal  ini  disebabkan  keter- sediaan air yang cukup menyebabkan lesitin terhidrasi sehingga jumlah lesitin yang terekstrak meningkat. Peningkatan kadar air lebih lanjut menyebabkan penurunan rendemen. Kemungkinan pada  jumlah  air  yang  berlebihan,  terbentuk  emulsi  air  dalam minyak yang distabilisasi lesitin sehingga rendemen menurun.
Hubungan  antara  rendemen  dengan  suhu water degumming bersifat kuadratik dan secara signifikan suhu mem- pengaruhi  rendemen.  Semakin  tinggi  suhu,  rendemen  me- ningkat  sampai  titik  tertentu  yang  kemudian  peningkatan  suhu lebih lanjut menyebabkan rendemen menurun. Hasil penelitian Eshratabadi  (2008)  menunjukkan  bahwa  pada  suhu  25  C, efisiensi  ekstraksi  lesitin  hanya  33%,  tetapi  meningkat  sampai suhu  75  C.  Penurunan  yang  nyata  tampak  pada  suhu  90  C. Oleh  karena  itu  kisaran  suhu  yang  digunakan  pada water degumming dalam penelitian ini adalah 40-80  C. Suhu ekstraksi juga  akan  mempengaruhi  warna  dari  lesitin  yang  dihasilkan. Pada suhu tinggi, warna lesitin yang dihasilkan akan cenderung berwarna coklat gelap (Eshratabadi, 2008).
Hubungan  antara  rendemen  dengan  waktu  proses water degumming adalah  kuadratik  dan  bersifat  signifikan  (Tabel  6). Peningkatan  waktu  proses  ekstraksi  diharapkan  menyebabkan peningkatan rendemen atau jumlah lesitin yang terekstrak. Akan tetapi,  waktu  ekstraksi  yang  terlalu  lama  dapat  berdampak negatif.  Lesitin  kedelai  mengandung  asam  lemak  tidak  jenuh dalam kadar tinggi. Semakin lama waktu proses ekstraksi, asam lemak  dapat  teroksidasi  sehingga  dapat  mengakibatkan  efek merugikan  seperti  perubahan  warna.  Peningkatan  waktu ekstraksi  dapat  menyebabkan  pelarutan  lesitin  sehingga rendemen menurun.
Persamaan  kuadratik  dapat  digunakan  untuk  memprediksi respon  dari  berbagai  taraf  penambahan  air,  suhu,  dan  waktu proses water degumming . Persamaan kuadratik yang diperoleh adalah  Y  =  -2.03  +  0.85X 1 +  0.03X 2 +  0.09X 3 +1.42E-3X 1 X 2 – 5.43E-3X 1 X 3 +  1.58E-4X 2 X 3 –  0.13X 12 –  3.23E-4X 22 –  1.35E- 3X 32 dengan X 1 = kadar air X 2 = suhu, dan X 3 = waktu proses. Pada penelitian ini ada 3 faktor yang dikaji, maka terdapat tiga  grafik  respon  yang  menggambarkan  hubungan  antara kadar air, suhu, dan  waktu proses water degumming (Gambar 1).  Dari  Gambar  1  diketahui  bahwa  pengaruh  kadar  air  dan suhu water degumming bersifat kuadratik.
Tabel 5. Ringkasan model secara statistik untuk optimasi rendemen pada proses water degumming
Sumber Standar Deviasi R- Squared Adjusted R- Squared Predicted R- Squared PRESS Keterangan Linear 0.23 0.02 -0.17 -0.35 1.12 2FI 0.24 0.06 -0.37 -0.94 1.61 Kuadratik 0.12 0.82 0.65 0.10 0.75 Suggested Kubik 0.13 0.87 0.60 -7.33 6.93 Aliased
Versi Online: http://journal.ipb.ac.id/index.php/jtip DOI: 10.6066/jtip.2013.24.1.97 Hasil Penelitian
C: Waktu Proses 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 4.00 40.00 20.00 2.50 3.00 3.50 2.00 25.00 30.00 35.00 A: Kadar Air R en de m en 80.00 72.00 64.00 56.00 48.00 40.00 A: Kadar Air B: S uh u Rendemen 4.00 2.00 2.50 3.00 3.50 1.3 1.3 1.3 1.3 1.4 1.2 Tabel 6. Analisis ragam optimasi rendemen pada proses water degumming
Sumber Jumlah Kuadrat db Kuadrat Tengah Nilai F p-value Prob > F Keterangan Model 0.68 9 0.75 4.90 0.01 Signifikan A-Kadar Air 3.92E-003 1 3.92E-003 0.26 0.62 B-Suhu 9.84E-003 1 9.84E-003 0.64 0.44 C-Waktu Proses 4.06E-004 1 4.06E-004 0.03 0.87 AB 6.45E-003 1 6.45E-003 0.42 0.53 AC 0.024 1 0.024 1.53 0.24 BC 8.01E-003 1 8.01E-003 0.52 0.49 A 2 0.25 1 0.25 16.18 0.00 Signifikan B 2 0.24 1 0.24 15.62 0.00 Signifikan C 2 0.26 1 0.26 16.98 0.00 Signifikan Residual 0.15 10 0.015 Lack of Fit 0.080 5 0.016 1.07 0.47 Tidak signifikan Galat 0.074 5 0.015
Gambar 1.  Grafik  respon  (A)  dan  kontur  (B)  hubungan  antara  suhu dan  kadar  air  pada water  degumming dengan  respon rendemen
Gambar  2  menunjukkan  hubungan  antara  kadar  air  dan waktu proses ekstraksi. Dari Gambar 2 terlihat bahwa pengaruh kadar air dan waktu proses water degumming bersifat kuadratik terhadap respon rendemen. Gambar 3 menunjukkan pengaruh suhu  dan  waktu  proses water  degumming terhadap  rendemen lesitin  kedelai  yang  dihasilkan.  Pengaruh  kedua  variabel  ter- sebut terhadap respon bersifat kuadratik.
Pengaruh variabel kadar air yang ditambahkan pada minyak pada water degumming terhadap respon rendemen dapat dilihat dengan mengikuti garis horizontal putus-putus sejajar sumbu X (Gambar  1  dan  2).  Respon  akan  terus  meningkat  dengan
meningkatnya kadar air sampai diperoleh respon tertinggi yaitu 2.95%.  Jika  kadar  air  terus  ditingkatkan,  respon  akan  me- ngalami penurunan.
Gambar 2.  Grafik respon (A) dan kontur (B) hubungan antara kadar air dan  waktu  proses water degumming dengan  respon rendemen
Pengaruh suhu terhadap respon bersifat kuadratik (Gambar 1  dan  3).  Semakin  tinggi  suhu,  rendemen  meningkat  sampai suhu  61.96  C.  Peningkatan  suhu  kebih  lanjut  menyebabkan penurunan  respon  rendemen.  Peningkatan  suhu  menyebakan proses  hidrasi  fosfolipid  lebih  mudah.  Akibatnya  rendemen lesitin meningkat sampai suhu optimum. Peningkatan suhu lebih lanjut  menyebabkan  rendemen  menurun.  Penurunan  tersebut dapat disebabkan lesitin teroksidasi, mengalami reaksi dengan
1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 80.00 4.00 72.00 64.00 56.00 48.00 40.00  2.00 2.50 3.00 3.50 A: Kadar Air B: Suhu R en de m en C : W ak tu P ro se s 4.00 2.00 2.50 3.00 3.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 A: Kadar Air Rendemen 1.2 1.3 1.3 1.3 1.4 A B A B
Versi Online: http://journal.ipb.ac.id/index.php/jtip DOI: 10.6066/jtip.2013.24.1.97 Hasil Penelitian
1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 72.00 40.00 20.00 48.00 56.00 64.00 40.00 30.00 35.00 25.00 B: Suhu R en de m en 80.00
produk oksidasi minyak, atau interaksi fosfolipid minyak mening- kat sehingga lesitin sulit untuk dipisahkan.
Pengaruh  waktu water  degumming terhadap  respon rendemen  bersifat  kuadratik  (Gambar  2  dan  3).  Peningkatan waktu proses ekstraksi menyebabkan lebih banyak lesitin yang terhidrasi  sehingga  rendemen  lesitin  mengalami  peningkatan. Peningkatan  terjadi  sampai  titik  optimum  pada  waktu  proses ekstraksi 30.02 menit. Peningkatan waktu proses ekstraksi lebih lanjut menyebabkan rendemen menurun yang diduga disebab- kan lesitin mengalami solubilisasi dalam minyak.
Gambar 3.  Grafik respon (A) dan kontur  (B) hubungan antara suhu dan  waktu  proses water degumming dengan  respon rendemen
Kondisi  optimum  diperoleh  dengan  jumlah  air  yang  di- tambahkan 2.95%, suhu water degumming 61.96  C, dan waktu proses ekstraksi 30.02 menit. Pada kondisi optimum ini respon rendemen  diprediksi  sebesar  1.49%.  Kisaran  parameter  yang dapat digunakan untuk mendapatkan kedua respon yang tinggi adalah  penambahan  air  sekitar  3%,  suhu water  degumming sekitar  60  C,  dan  waktu  proses water  degumming sekitar  30 menit.
Hasil  verifikasi  menunjukkan  bahwa  pada  kondisi  optimum rendemen  yang  diperoleh  adalah  1.55%,  dengan  kadar  fosfor 3865.30 ppm, kadar fosfatida 11.60% atau kadar lesitin 56.24%. Hasil  verifikasi  menunjukkan  bahwa  respon  rendemen  tidak berbeda  jauh  dari  hasil  prediksi  yaitu  perbedaan  sebesar 3.87%.  Faktor  konversi  kadar  fosfor  ke  kadar  fosfatida  adalah 30  (Racicot  dan Handal  (1983)  dalam  Eshratabadi  (2008)). Faktor konversi dari kadar fosfatida ke kadar lesitin adalah 4.85. Jika lesitin dengan asam lemak pada posisi sn -1 dan 2 adalah
asam  linoleat  sebagai  asam  lemak  terbanyak  dalam  kedelai, maka faktor konversi dari asam fosfatidat ke lesitin adalah 4.51 untuk PE, 4.82 untuk PC, dan 5.23 untuk PI dengan rerata 4.85.
Purifikasi lesitin dari kondisi water degumming optimum Purifikasi lesitin dari kondisi proses optimasi optimum meng- hasilkan  lesitin  dengan  kemurnian  83.96%.  Nilai  ini  menunjuk- kan kemurnian lesitin yang sangat tinggi. Sebelumnya Choo et al. (2004) melakukan separasi fosfolipid dari serat sawit meng- gunakan  ektraksi  heksana  dan  etanol.  Kemudian  dilakukan pemisahan lipid polar (fosfolipid) dan lipid netral menggunakan kromatografi  kolom  dengan  adsorben  Florisil.  Ekstrak  heksana mengandung  fosfolipid  sebesar  1.367  ppm  sedangkan  ekstrak etanol  mengandung  fosfolipid  sebesar  46.800  ppm.  Hasil penelitian  sebelumnya  (Estiasih et  al. 2010)  menunjukkan bahwa  separasi  fosfolipid  dengan  metode  pelarutan  kloroform untuk  menghilangkan  lipid  netral  dan  metanol  untuk  meng- ekstrak  lipid  polar  berhasil  mendapatkan  ekstrak  fosfolipid dengan  kadar  61.67%  (b/b).  Sebelumnya  Palacios  dan  Wang (2005)  melakukan  ektraksi  fosfolipid  dari  kuning  telur  ayam dengan  menggunakan  etanol  untuk  lesitin  yang  tidak  dihilang- kan  minyaknya  ( undeoiled  lecithin )  dan  aseton  untuk  ekstraksi lesitin yang dihilangkan minyaknya ( deoiled lecithin ). Kemurnian lesitin  yang  diperoleh  pada  fraksi  kaya  fosfatidilkolin  adalah 34.9%  dan  36.4%  untuk  kuning  telur  yang  dipanaskan  dan tanpa pemanasan.
Karakteristik lesitin dari kondisi water degumming optimum Karakterisasi  dilakukan  pada  lesitin  dari  kondisi  proses water  degumming optimum  dengan  respon  yang  dioptimasi adalah  rendemen.  Kondisi  proses water  degumming yang  di- gunakan  adalah  jumlah  air  yang  ditambahkan  2.95%,  suhu water degumming 61.96  C, dan waktu proses 30.02 menit.
Tabel 7.  Komposisi  asam  lemak  penyusun  lesitin  kedelai  varietas
Anjasmoro Jenis Asam Lemak Kadar (%) Asam laurat (C12:0) 0.13 Asam miristat (C14:0) 0.21 Asam palmitat (C16:0) 2.99 Asam stearat (C18:0) 26.08 Asam oleat (C18:1  -9) 17.19 Asam linoleat (C18:2  -6) 46.00 Asam alfa linolenat (C18:3  -3) 4.98 Asam arakidonat (C20:4  -6) 1.37
Jenis-jenis asam lemak penyusun lesitin kedelai dari kondisi water  degumming optimum  dapat  dilihat  pada  Tabel  7.  Dari Tabel  7  tersebut  terlihat  bahwa  lesitin  kedelai  varietas Anjasmoro  mengandung  asam  lemak  yang  didominasi  oleh asam  linoleat,  diikuti  dengan  stearat  dan  oleat.  Kedelai  me- rupakan  sumber  asam  linoleat.  Hasil  penelitian  sebelumnya (Estiasih et al. 2011) menunjukkan bahwa kedelai dari varietas unggul  mempunyai  komposisi  asam  lemak  yang  didominasi asam linoleat dengan kadar 48-52%.
Menurut  Choo et  al. (2004),  asam  lemak  dalam  fosfolipid lebih  bersifat  tidak  jenuh  dibandingkan  trigliserida.  Hal  ini  ber- kaitan  dengan  distribusi  asam  lemak  dalam  fosfolipid  dan
C: Waktu Proses B: Suhu Rendemen C : W ak tu P ro se s 72.00 40.00 48.00 56.00 64.00 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 1.2 1.3 1.3 1.3 1.4 80.00 A B
Versi Online: http://journal.ipb.ac.id/index.php/jtip DOI: 10.6066/jtip.2013.24.1.97 Hasil Penelitian
trigliserida. Pada fosfolipid asam lemak menempati posisi sn -1 dan sn -2 karena sn -3 ditempati oleh gugus fosfat. Adapun pada trigliserida,  asam  lemak  bisa  menempati sn -1, sn -2,  dan sn -3. Pada  minyak  kedelai,  jenis  asam  lemak  yang  dominan  adalah linoleat  (Sanibal  dan  Mancini-Filho,  2004).  Fosfolipid  kedelai mengandung  asam  palmitat  27.3%,  asam  stearat  1.6%,  asam oleat 14.7%, asam linoleat 52.5%, asam asam  linolenat  3.8%, dan  asam  lemak  lain  0.1%  (Das  dan  Bhattacharyya,  2006). Komposisi asam lemak hasil penelitian ini berbeda dengan yang dilaporkan  oleh  Das  dan  Bhattacharyya  (2006)  yang  ke- mungkinan  disebabkan  oleh  perbedaan  varietas  kedelai  yang digunakan  atau  perlakuan  modifikasi  terhadap  lesitin.  Lesitin biasa dimodifikasi untuk meningkatkan sifat fungsionalnya.
Dari  hasil  analisis  kromatografi  lapis  tipis  diperoleh  4 spot yang menunjukkan jenis-jenis fosfolipid dalam lesitin adalah  PI (15.1%),  PC  (26.1%),  PE  (5.8%),  dan  PA  (10.9%)  (Tabel  8). Lesitin  kedelai  mengandung  PC  (fosfatidilkolin)  18%,  PE (fosfatidiletanolamin)  14%,  PI  (fosfatidilinositol)  9%,  PA  (asam fosfatidat)  2%,  PL  (fosfolipid)  minor  2%,  glikolipid  11%,  gula kompleks  5%,  dan  lipid  netral  37%  (Wu  dan  Wang,  2004). Judde et al. (2003) menunjukkan komposisi fosfolipid beberapa lesitin kedelai komersial dengan kadar PC, PE, PI, dan PA yang bervariasi.
Tabel 8. Jenis fosfolipid pada lesitin kasar kedelai varietas Anjasmoro
Jenis Fosfolipid Kadar (%) Fosfatidilinositol (PI) 15.1 Fosfatidilkolin (PC) 26.1 Fosfatidiletanolamin (PE) 5.8 Asam fosfatidat (PA) 10.9
Fraksi  fosfolipid  lesitin  kedelai  yang  berbeda  ternyata mempunyai  komposisi  asam  lemak  yang  juga  berbeda  (Tabel 9).  Asam  lemak  yang  mendominasi  untuk  PC,  PE,  dan  PA adalah  asam  linoleat,  sedangkan  untuk  PI  adalah  asam  oleat. Wang  dan  Wang  (2008)  menunjukkan  bahwa  asam  lemak dominan  penyusun  fosfolipid  kedelai  adalah  asam  linoleat. Perbedaan  komposisi  asam  lemak  pada  masing-masing  jenis fosfolipid dalam lesitin diduga akan berpengaruh terhadap sifat fungsional fosfolipid.
Karakteristik  lesitin kedelai varietas Anjasmoro dari kondisi proses water  degumming optimum  dengan  respon  rendemen jika dibandingkan dengan legal purity specification of food grade lecithin menunjukkan bahwa lesitin tersebut memenuhi standar mutu (Tabel 2). Lesitin kedelai dari varietas Anjasmoro tersebut telah  memenuhi  standar  internasional  untuk  lesitin  kedelai komersial. Nilai Acetone Insoluble (AI) menunjukkan kemurnian lesitin.  Nilai  AI  66.5%  menunjukkan  bahwa  lesitin  tersebut cukup  murni  karena  pada  proses  ekstraksi  dilakukan  purifikasi dengan menggunakan aseton. Ekstraksi aseton menyebabkan fosfolipid menjadi terkonsentrasi sehingga meningkatkan kadar- nya  dan  mengurangi  jumlah  yang  dibutuhkan  untuk  aplikasi. Demikian  pula  sifat  fungsional  lesitin  mengalami  peningkatan (Vikbjerg et al. 2006). Minyak  kedelai  hasil water  degumming mempunyai  kadar air  0.03%  jauh  lebih  rendah  dari  batasan  maksimum  standar minyak kedelai dari US NOPA yaitu 0.3%. Kadar fosfor  dalam minyak  masih  tinggi  yaitu  0.108%  padahal  standar  US  NOPA
adalah 0.02%. Tingginya kadar fosfor menunjukkan bahwa tidak semua lesitin tergumpalkan pada proses hidrasi dengan meng- gunakan  air.  Diperlukan  perlakuan  tambahan  berupa acid degumming untuk  menghilangkan  residu  fosfor  yang  masih tersisa dalam minyak. Kadar asam lemak bebas dalam minyak hasil degumming adalah  4.84%.  Standar  US  NOPA  untuk minyak  hasil degumming adalah  kadar  asam  lemak  bebas maksimum  0.75%.  Kualitas  minyak  yang  lain  sebelum  dan sesudah water degumming tidak dianalisis dalam penelitian ini.
Tabel 9.  Jenis-jenis asam lemak penyusun jenis-jenis fosfolipid dalam
lesitin dari kedelai varietas Anjasmoro Jenis Spot 1 (PI) Spot 2 (PC) Spot 3 (PE) Spot 4 (PA) Asam laurat (C12:0) 7.39 td td 3.09 Asam miristat (C14:0) 6.42 5.96 7.64 8.04 Asam palmitat (C16:0) 17.02 23.85 17.75 20.34 Asam palmitooleat (C16:1) 10.46 9.31 10.06 13.03 Asam stearat (C18:0) 7.60 6.73 td 5.62 Asam oleat (C18:1) 29.85 5.99 10.06 td Asam linoleat (C18:2) 17.85 44.51 51.44 40.49 Asam linolenat (C18:3) 1.99 td td 4.08 Asam arakidat (C20:0) 1.41 3.64 3.04 5.30
Keterangan: PI = fosfatidilinositol, PC = fosfatidilkolin, PE = fosfatidiletanolamin, PA =asam fosfatidat

## KESIMPULAN
Faktor  yang  berpengaruh  pada  proses water  degumming minyak  kedelai  dari  varietas  Anjasmoro  adalah  suhu,  tingkat penambahan air, dan waktu proses. Optimasi rendemen meng- hasilkan  model  kuadratik  yang  bersifat  signifikan  untuk  mem- prediksi respon. Kondisi optimum tercapai pada tingkat penam- bahan  air  2.95%,  suhu  61.96%,  dan  waktu  proses  ekstraksi 30.02  menit.  Hasil  verifikasi  menunjukkan  nilai  prediksi  men- dekati  nilai  verifikasi  dengan  perbedaan  1.49%.  Pada  kondisi optimum  ini  rendemen  diperoleh  sebesar  1.55%  dengan kemurnian  lesitin  56.24%.  Lesitin  dari  kedelai  varietas  unggul Anjasmoro  yang  dihasilkan  dengan  teknik water  degumming pada  kondisi  proses  optimum  telah  memenuhi  standar internasional  untuk legal  purity  specification  of  food  grade lecithin yang  digunakan  untuk  produk  pangan.  Pada  kondisi optimum, lesitin kedelai yang dihasilkan mempunyai kemurnian yang  tinggi  dan  purifikasi  melalui  penghilangan  minyak  meng- hasilkan lesitin dengan kemurnian yang sangat tinggi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada  Direktorat Jenderal  Pendidikan  Tinggi  -  Kementerian  Pendidikan  dan Kebudayaan  atas  dana  Hibah  Penelitian  Strategis  Nasional Tahun 2010 dengan kontrak No. 522/SP2H/PP/DP2M/VII/2010, tanggal 24 Juli 2010.
Versi Online: http://journal.ipb.ac.id/index.php/jtip DOI: 10.6066/jtip.2013.24.1.97 Hasil Penelitian

## DAFTAR PUSTAKA
[AOCS] American Oil Chemists Society. 2003. Official Methods and Recommended Practices of the American Oil Chemistry Society.  5 th ed.  Revision.  Broadmaker  Drive,  Champaign, Illinois.
Cabezas  DM,  Diehl  BWK,  Tomás  MC.    2009.    Sunflower lecithin: application of a fractionation process with absolute ethanol.  J  Am  Oil  Chem  Soc  86:  189-196. DOI: 10.1007/s11746-008-1336-5.
Choo  YM,  Bong  SC,  Ma  AN,  Chuah  CH.  2004.  Phospholipids from palm-pressed fiber. J Am Oil Chem Soc 81: 471-475. DOI: 10.1007/s11746-004-0925-4.
Das  S,  Bhattacharyya  DK.  2006.  Preparation  and  surface- active properties of hydroxy and epoxy fatty acid-containing soy phospholipids. J Am Oil Chem Soc 83: 1015-1020. DOI: 10.1007/s11746-006-5156-1.
Eshratabadi P. 2008. Effect of different parameters on removal and quality of soybean lecithin. Res J Biol Sci 3: 874-879.
Estiasih T, Ahmadi K, Nisa FC, Khuluq AD. 2010. Rekoveri dan fraksinasi fosfolipid dari limbah pengolahan minyak sawit.  J Teknol dan Industri Pangan 21: 151-159.
Estiasih  T,  Ahmadi  K,  Sunarharum  B,  Destryana  RA.    2011. Saponifikasi  dan  ekstraksi  satu  tahap  untuk  ekstraksi minyak  tinggi  linoleat  dan  linolenat  dari  kedelai  varietas lokal.   Agritech 31: 36-45.
Ginting  E,  Antarlina  SS,  Widowati  S.  2009.  Varietas  unggul kedelai  untuk  bahan  baku  industri  pangan.  J  Litbang Pertanian 28: 79-87.
[IUPAC]  International  Union  of  Pure  and  Applied  Chemistry. 1979. Standard Methods for the Analysis of Oils, Fats, and Derivatives. 6 th ed. Pergamon Press, British.
Joshi A,  Paratkar SG, Thorat BN.  2006.  Modification of lecithin by  physical,  chemical  and  enzymatic  methods.  Eur  J  Lipid Sci Technol 108: 363–373. DOI: 10.1002/ejlt.200600016. Judde A, Villeneuve P , Rossignol-Castera A, Guillou AL.  2003. Antioxidant effect of soy lecithin on vegetable oil stability and their synergism with tocopherols.   J  Am Oil Chem  Soc 80:
1209–1215.
Lin J, Blank I.  2003. Odorants generated by thermally induced degradation of phospholipids.  J Agric Food Chem 51: 4364- 4369. DOI: 10.1021/jf034300m.
Nasir  MI,  Bernards  MA,  Charpentier  PA.  2007.  Acetylation  of soybean  lecithin  and  identification  of  components  for solubility in supercritical carbon dioxide. J Agric Food Chem 55: 1961-1969. DOI: 10.1021/jf0618832.
Nieuwenhuyzen  WV,  Tomás  MC.  2008.  Update  on  vegetable lecithin  and  phospholipid  technologies.  Eur  J  Lipid  Sci Technol 110: 472–486. DOI: 10.1002/ejlt.200800041.
Nzai  JM,  Proctor  A.  1998.  Phospholipids  determination  in vegetable  oil  by  thin-layer  chromatography  and  imaging densitometry.  Food  Chem  63:  571-576. DOI:  10.1016/ S0308-8146(98)00043-0.
Palacios  LE,  Wang  T.  2005. Extraction  of  egg-yolk  lecithin. J Am Oil Chem Soc 82: 565-569. DOI: 10.1007/s11746-005- 1110-5.
Park  PW,  Goins  RE.  1994.  In  situ  preparation  of  fatty  acids methyl  esters  for  analysis  of  fatty  acids  composition  in foods.  J  Food  Sci  59:  1262-1266. DOI:  10.1111/j.1365- 2621.1994.tb14691.x.
Sanibal  EAA,  Mancini-Filho  J.  2004.  Frying  oil  and  fat  quality measured by chemical, physical, and test kit analyses. J Am Oil Chem Soc 81: 847-852. DOI: 10.1007/s11746-004-0990- 8.
Shahidi  F.  2005.  Bailey’s  Industrial  Oil  and  Fat  Product.  6 th edition. John Wiley & Sons, Newfoundland, Canada.
[USDA]  United  State  Department  of  Agriculture.  2010.  Quality Standards  for  U.S.  Soybeans  and  Soy  Products. http://www.usda. gov.gipsa. [24 April 2010].
Wang  G,  Wang  T.  2008.    Oxidative  stability  of  egg  and  soy lecithin  as  affected  by  transition  metal  ions  and  pH  in emulsion.    J  Agric  Food  Chem  56:  11424-11431. DOI: 10.1021/jf8022832.
Wu Y, Wang T.  2004.  Fractionation of crude soybean lecithin with aqueous ethanol.  J Am Oil Chem Soc 81: 697–704.
Vikbjerg  AF,  Rusig  JY,  Jonsson  G,  Mu  H,  Xu  X.    2006.
Comparative  evaluation  of  the  emulsifying  properties  of phosphatidylcholine  after  enzymatic  acyl  modification.    J Agric Food Chem 54: 3310-3316. DOI: 10.1021/jf052665w.