BIOAKTIVITAS MINYAK ATSIRI DAUN BANDOTAN ( Ageratum conyzoides ) TERHADAP RESPON FISIOLOGIS (GLUKOSA DARAH DAN TACHIVENTILASI) IKAN KOI ( Cyprinus carpio )
BIOACTIVITY ESSENTIAL OIL OF BANDOTAN LEAF ( Ageratum conyzoides ) ON KOI ( Cyprinus carpio) PHYSIOLOGICAL RESPONSES (BLOOD GLUCOSE AND TACHIVENTILATION)
Laksmi Sulmartiwi, Mardiah Rahma Umami, Moch. Amin Alamsjah dan Sri Subekti
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Koi (C. carpio) is one of famous ornamental fish in Indonesia. Fish often be subject of change or stessor like physical, chemical and biology on culture. Stress in fish caused released cortisol hormone and cathecolamine hormone. Cathecolamine increase glicogenolisis, cardiovascular regulation and respiration fungtion.  Blood  glucose  and  tachiventilation  (opercular  movement)  can  indicate  stress  respon  in  fish. Essential  oil  of A.  conyzoides have  central  analgesic  activity.  Analgesic  drugs  in  vertebrae  can  reduce stress in fish.  Essential oil   shown inhibitory effect of GABA transminase, an enzime  GABA (gamma- aminobutryic  acid) degradation  which  can  provoking  sedation.  Sedation  effect  in  fish  reduce  blood glucose  and  tachiventilation.  Potency  bioactive  essential  oil  of  bandotan  leaf  compound  haven’t  been know in aquaculture. The potency based of LC 50 ( Lethal Consentration 50 %) value Purpose  of  this  research  determined  effect  of  essential  oil Ageratum  conyzoides leaf  on  Koi ( Cyprinus carpio) Phsycology Response (Blood Glucose and Tachiventilation) every 4 hours durung 24 hours  and  LC 50- 24  hours.  Research  was  conducted  at  Laboratory  of  Faculty  of  Fisheries  and  Marine Airlangga University Surabaya. Research design  used  Completely Randomized Design and followed by Duncan's Multiple range test.
Results  of  analysis  of  variance  (ANAVA)  from  early  observation  and  every  4  hours  during  24 hours  day  showed  that  each  treatment  of  essential  oil Ageratum  conyzoides leaf  gave  a  significantly different effect on the blood glucose and tachiventilation (P <0.05). The highest average of blood glucose was found in D treatment at second observation (443,67 mg/dl) and the lowest was found in C treatment (60,67 mg/dl). The highest average of tachiventilation was found in D treatment at first observation (1730 bit/9 minute) and the lowest was found in A treatment (437,67 bit/9 minute) at early observation. LC 50- 24 hours  essenial  oil Ageratum  conyzoides leaf  is  34,047  ppm.  Based  on  measurements  of  water  quality, treatments  was  still  viable  and  good  to  supported  viability  of  Cyprinus  carpio  during  research,  water temperature  range  between  29-31 o C,  range  of  dissolved  oxigen  4-6  mg/l,  pH  ranges  7,5-8,3  and  0,006- 0,27 mg/l on ammonia.
Keywords : Ageratum conyzoides, Cyprinus carpio , LC 50 -24 hours, Blood Glucose, Tachiventilation
Pendahuluan Koi  ( Cyprinus  carpio )  merupakan salah satu ikan hias yang sejak dulu hingga saat ini  terkenal  di  masyarakat,  khususnya  pencinta ikan  hias  dan  pebisnis  yang  terjun  langsung memelihara koi dan mengomersialkannya. Pada kondisi  budidaya,  ikan  sering  menjadi  subyek terhadap perubahan atau stresor seperti handling , kepadatan, transportasi dan perubahan kualitas  air  (Kubilay  and  Ulukoy,  2002).  Stres pada  ikan  menyebabkan  pelepasan  hormon kortisol dan katekolamin. Kortisol
mengaktifkan proses glikogenolisis dan glukoneogenesis pada ikan. Hormon katekolamin  tersebut  selanjutnya  meningkatkan
proses  glikogenolisis,  mengatur  kardiovaskular dan  fungsi  pernafasan  (Porchaz et  al., 2009). Evans and Claiborne (2006) menyatakan bahwa ikan yang mengalami stres dapat dilihat melalui meningkatnya tachiventilasi (buka tutup operkulum  ikan)  dan  kadar  glukosa  darah. Minyak  atsiri  daun  bandotan (Ageratum conyzoides) memiliki aktivitas central analgesic (Almeida et  al., 2001).  Pada  bidang  perikanan, untuk  mengurangi  stres  pada  ikan  masih digunakan  obat  anastesi  dan sedative atau  obat analgesik yang digunakan pada hewan vertebrata (Neiffer and Stamper, 2009). Minyak atsiri  menunjukkan  efek  penghambatan  GABA transminase,  suatu  enzim  yang  mendegradasi
GABA  ( gamma-aminobutryic  acid) dimana proses  penghambatan  enzim  tersebut  akan menimbulkan  efek  sedasi  (Almeida et  al., 2009).  Efek  sedasi  akan  menurunkan  glukosa darah  dan  tachiventilasi  pada  ikan  (Neiffer  and Stamper,  2009).  Penelitian  bioaktivitas  minyak atsiri  daun  bandotan  belum  dilakukan  sehingga potensi  bioaktif  minyak  atsiri  daun  bandotan belum diketahui terutama pada bidang perikanan. Potensi bioaktivitas tersebut didasarkan pada nilai LC 50 ( Lethal
Concentration 50%)  yaitu  konsentrasi  senyawa yang  dapat  membunuh  50%  hewan  uji (Pasaribu, 2009).
Tujuan dari penelitian ini adalah : Mengetahui  pengaruh  pemberian  minyak  atsiri daun  bandotan  terhadap  respon  fisiologis (glukosa  darah  dan  tachiventilasi)  ikan  koi ( Cyprinus carpio ). Mengetahui  LC 50 -24  jam  minyak  atsiri  daun bandotan  ( Ageratum  conyzoides )  terhadap  ikan koi ( Cyprinus carpio ).
Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat memberikan informasi ilmiah mengenai  potensi penggunaan  minyak  atsiri  daun  bandotan ( Ageratum  conyzoides )  terhadap  ikan  koi ( Cyprinus  carpio) ,  respon  fisiologis  pada  ikan tersebut  serta  sebagai  dasar  pengembangan penelitian selanjutnya mengenai potensi minyak atsiri daun bandotan dalam bidang perikanan.

## Materi dan Metode
Penelitian ini
dilakukan
di
Laboratorium Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas  Airlangga,  Surabaya.  Ekstraksi minyak  atsiri  daun  bandotan  dilakukan  di Laboratorium  Kimia  Organik  di  Departemen Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga Surabaya. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Februari-April 2013.
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  metode  eksperimen,  yaitu mengadakan  percobaan  untuk  melihat  suatu hasil.    Perlakuan  yang  diberikan  berupa perbedaan  konsentrasi  minyak  atsiri  daun bandotan  yang  diberikan,  yang  meliputi, perlakuan K (tanpa penambahan  minyak atsiri), perlakuan  A  (minyak  atsiri  dengan  konsentrasi 10  ppm),  perlakuan  B  (minyak  atsiri  dengan konsentrasi 20 ppm), perlakuan C (minyak atsiri dengan  konsentrasi  30  ppm),  perlakuan  D (minyak  atsiri  dengan  konsentrasi  40  ppm), perlakuan  E  (minyak  atsiri  dengan  konsentrasi 50  ppm),  perlakuan  F  (minyak  atsiri  dengan konsentrasi 60 ppm), perlakuan G (minyak atsiri dengan  konsentrasi  70  ppm),  perlakuan  H (minyak atsiri dengan konsentrasi 80 ppm), dan
perlakuan  I  (minyak  atsiri  dengan  konsentrasi 90 ppm). Ekstraksi Minyak Atsiri Pada tahap awal dilakukan penyulingan minyak  atsiri  daun  bandotan.  Penyulingan dilakukan  dengan  cara  destilasi  uap  daun bandotan kering yang diremas dengan perbandingan jumlah antara air dan daun adalah 1:5.  Minyak  atsiri  yang  mengapung  diatas komponen uap air kemudian diekstraksi dengan heksan  dengan  perbandingan  2:1  kemudian dikocok  dalam  corong  pisah  dan  diulang sebanyak  3  kali  (Bouda et  al ,  2001;  Tripathi et al , 2007). Hasil pengocokan kemudian didiamkan  dan  diambil  bagian  supernatannya. Bagian  tersebut  kemudian  diuapkan  heksannya dengan  alat rotary  vacum  evaporator sehingga terpisah antara minyak atsiri dan heksan dengan suhu  35ᵒC    dengan  tekanan  550  mmHg  (Sani dkk., 2012).
Persiapan Penelitian Persiapan  penelitian  yang  dilakukan adalah  menyeleksi  ikan  dengan  ukuran  5-7  cm (Laili,  2007).  Setelah  dilakukan  seleksi  ikan berdasarkan ukuran, aklimatisasi dan dipuasakan  selama  sehari  sebelum  penelitian. Wadah  plastik  dan  akuarium    yang  akan digunakan  dicuci  hingga  bersih,  wadah  plastik dan  akuarium  tersebut  diisi  dengan  air  tawar dan  diberi  minyak  atsiri  konsentrasi  yang berbeda pada masing-masing perlakuan. Pengukuran Glukosa Darah Pengambilan  sampel  darah  ikan  koi dilakukan  dengan  memotong  bagian caudal penduncle menggunakan gunting bedah. Pengukuran  kadar  glukosa  darah  ikan  koi dilakukan  dengan  glucosemeter  One  Touch Horizon.  Jumlah  ikan  koi  yang  digunakan sebanyak  25  ekor    dengan  ukuran  5-7  cm. Kepadatan  tiap  wadah  sebesar  3  ekor  /1,5  liter (Laili,  2007).  Wadah  yang  digunakan  adalah wadah  plastik  dengan  ukuran  panjang  37,5  cm, lebar 30 cm dan tinggi 12 cm. Perhitungan Tachiventilasi Perhitungan  tachiventilasi  dilakukan dengan menghitung jumlah operkulum
membuka  dan  menutup  dengan  menggunakan handcounter. Perhitungan tachiventilasi menggunakan ikan koi dengan jumlah sebanyak 10 ekor dengan ukuran 5-7 cm. Kepadatan ikan koi  pada  tiap  wadah    sebesar  3  ekor/1,5  liter (Laili,  2007).  Wadah  yang  digunakan  adalah wadah  plastik  dengan  ukuran  panjang  37,5  cm, lebar 30 cm dan tinggi 12 cm.
Penentuan Lethal Concentrate 50 (LC 50- 24 jam) Penentuan Lethal  Concentrate 50 (LC 50- 24  jam)  menggunakan  ikan  koi  dengan jumlah sebanyak 10 ekor dengan ukuran 5-7 cm
dan  kepadatan  tiap  wadah  sebesar  3  ekor/1,5 liter  (Laili,  2007).  Wadah  yang  digunakan adalah  akuarium  berukuran  panjang  dan  lebar sebesar 15 cm serta tinggi  sebesar 25 cm. Nilai LC 50- 24 jam diperoleh  dari data mortalitas ikan koi    dari  perlakuan  yang  diolah  menggunakan analisis probit dengan program SPSS ver. 32 for windows (Marlinda,  2012).  Data  mortalitas dihitung  dengan  rumus  (Hasnah  dan  Nasril, 2009):
P 0 =  r   x 100 %
N Keterangan:
P 0 : Mortalitas r : Jumlah hewan uji yang mati n : Jumlah hewan uji awal Pengambilan Data
Pengambilan data glukosa darah dilakukan pada awal perlakuan dan setiap 4 jam selama  24  jam.  Pengambilan  data  tachiventilasi dilakukan dengan menghitung jumlah membuka dan  menutupnya  operkulum  dengan  cara sampling  pada  tiap  satuan  percobaan  (Sanjaya, 2011).  Perhitungan  tachiventilasi  dilakukan pada  awal  pengamatan  selama  9  menit,  dan dilanjutkan pengamatan setiap 4 jam selama 24 jam  (Sulmartiwi  dkk.,  2009).  Penentuan  nilai LC 50- 24 jam diperoleh  dari data mortalitas ikan koi  dari  perlakuan  yang  diolah  menggunakan analisis probit dengan program SPSS ver.32 for windows (Marlinda, 2012).
Analisa Data Data yang diperoleh untuk perhitungan tachiventilasi  dan  pengukuran  glukosa  darah ikan  diolah  dengan  menggunakan  ANOVA (Analysis  of  Variance) dan  dilanjutkan  dengan uji jarak berganda Duncan. Data mortalitas ikan koi    dianalisa  dengan  analisis  probit  dengan program SPSS untuk menentukan LC 50 -24 jam.

## Hasil Dan Pembahasan
Hasil  analisa  mortalitas  ikan  koi selama  24  jam  diperoleh  kematian  ikan  koi keseluruhan  terjadi  pada  perlakuan  50  ppm hingga  90  ppm.  Kematian  ikan  koi  juga  terjadi pada konsentrasi 20, 30 dan 40 ppm. Persentase
kematian ikan koi dapat ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1.  Data  persentase  mortalitas  ikan  koi  ± SD selama penelitian
Konsentrasi (ppm) Mortalitas (%) ± SD 0 0 ± 0 10 0 ± 0 20 13,33 ± 2,31 30 20 ± 3,46 40 53,33 ± 1,15 50 100 ± 0 60 100 ± 0 70 100 ± 0 80 100 ± 0 90 100 ± 0 Data  mortalitas  yang  diperoleh  diolah dengan  analisis  probit  menggunakan  program
SPSS untuk menentukan besar lethal concentration 50  %  selama  24  jam  (LC 50 -24 jam).  Hasil  analisis  probit  dengan  program SPSS  ver.  32 for  windows diperoleh konsentrasi lethal concentration 50 % (LC 50 -24 jam)  sebesar  34,047  ppm  dengan  nilai konsentrasi  batas  terendah  sebesar  28,036  ppm dan  batas  tertinggi  39,863  ppm.  Berdasarkan analisis  tersebut,  terdapat  korelasi  antara pemberian  miyak atsiri daun  bandotan terhadap mortalitas ikan koi.
Rata-rata  kadar  glukosa  darah  selama penelitian  dapat  dilihat  pada  Tabel  2  dan Gambar 1.
Hasil  analisis  varian  (ANAVA)  yang dilakukan  mulai  awal  pengamatan  hingga pengamatan  empat  jam  keenam  menunjukkan bahwa setiap perlakuan pemberian minyak atsiri bandotan  memberikan  pengaruh  yang  berbeda nyata  terhadap  glukosa  darah  dari Cyprinus carpio (p<0,05).    Pada  perlakuan  D  terjadi kematian ikan  sebesar 100 % pada pengamatan 4  jam  ke-3  sehingga  data  glukosa  darah  tidak diperoleh.

## Tachiventilasi
Rata-rata  kadar  glukosa  darah  selama penelitian dapat dilihat pada tabel 2 dan gambar 2.
Hasil  analisis  varian  (ANAVA)  yang dilakukan  mulai  awal  pengamatan  hingga pengamatan  empat  jam  kedua  menunjukkan bahwa setiap perlakuan pemberian minyak atsiri bandotan  memberikan  pengaruh  yang  berbeda
nyata  terhadap  tachiventilasi  dari Cyprinus carpio (p<0,05).  Pada  pengamatan  ketiga hingga  keenam  menunjukkan  bahwa  setiap perlakuan  pemberian  minyak  bandotan  tidak memberikan  pengaruh  yang  berbeda  nyata terhadap  tachiventilasi  dari  ikan  koi  ( Cyprinus carpio) (p<0,05).
Kisaran  data  kualitas  air  selama penelitian ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel 2. Rata-rata glukosa darah ikan koi selama penelitian ± SD
Pengamatan 4 jam ke- Perlakuan (ppm) K A B C D 0 100 c ±1 149,33 a ±1,52 107,33 b ±1,52 89,33 d ±1,52 71,33 e ±3,21 1 139,3 e ±3,21 276 d ±5,29 291,6 c ±5,03 336 b ±2,64 380,3 a ±1,52 2 68 d ±2 336 b ±3,60 229 c ±3 336,3 b ±2,51 443,67 a ±3,51 3 139,3 d ±2,51 352 a ±3 205,67 c ±3,51 256 b ±3 .0000 e ±.00000 4 115,3 d ±1,52 224,6 b ±1,52 249 a ±2 167,6 c ±1,52 .0000 e ±.00000 5 115,33 a ±1,52  104,67 b ±4,50 94 c ±3,60 89,66 c ±3,05 .0000 d ±.00000 6 97 c ±2 103,7 b ±3,51 110,67 a ±2,08  60,667 d ±3,78 .0000 e ±.00000
Gambar 1. Grafik rata-rata glukosa darah selama penelitian
Tabel 3. Rata-rata tachiventilasi
Pengamatan 4 jam ke- Perlakuan (ppm) K A B C D 0 1792 a ±199,59 437,67 c ±4,04 1247,7 b ±137,95 1203,3 b ±8,73 1159,3 b ±4,93 1 1477 c b±83,80 1243,3 d ±20,55 1347,7 c ±52,63 1538,7 b ±1,52 1730 a ±65,81 2 1502,3 a ±49,50 1316 b ±19 1366 ab ±182,39 1253,3 bc ±20,22 1315,7 c ±143,5 3 1435 a ±99,41 123 ab ±9,96 1192 a ±67,02 1176,7 ab ±2,08 771,33 b ±668,02 4 1510,3 a ±290,05 1316,3 a ±10,11 1226,7 a ±102,79 1235 a ±4,58 825,3 a ±714,93 5 1328 a ±159,80 119,1 a ±9,84 1313,7 a ±146,37 1318 a ±8,50 879 a ±761,37 6 1205,3 a ±147,89 1063,3 a ±4,04 1292,7 a ±107,93 1256 a ±2 811 a ±702,49
Tabel 4. Kisaran parameter kualitas air Parameter Kisaran Oksigen terlarut (mg/l) 4-6 Ammonia (mg/l) 0,006-0,27 Suhu(°C) 29-31 pH 7,5-8,4
Penentuan  potensi  senyawa  bioaktif tersebut    berdasarkan  atas  nilai  LC 50 ( Lethal Concentration 50%)  yaitu  konsentrasi  senyawa yang  dapat  membunuh  50%  hewan  uji.    Hasil pengolahan  data  mortalitas  ikan  koi  dengan analisis  probit  diperoleh  konsentrasi lethal concentration 50  %  (LC 50 -24  jam)  atau konsentrasi  yang  dapat  membunuh  50  % populasi sebesar 34,047 ppm.
Mortalitas  pada  ikan  koi  tersebut diduga  disebabkan  oleh  senyawa  toksik  yang terkandung  pada  minyak  atsiri  daun  bandotan. Kelimpahan  komponen  terpen  dalam  minyak atsiri  bersifat  toksik  pada  ikan  (Servizi et  al.,
(1976) dalam Andrews  and  Spence  (1980)). Kadar  glukosa  dengan  perlakuan  pemberian minyak atsiri daun bandotan menunjukkan nilai rata-rata yang lebih tinggi dibandingkan dengan rata-rata  glukosa  kontrol  (tanpa  pemberian minyak  atsiri  daun  bandotan)  hingga  akhir penelitian.  Kadar  glukosa  yang  tinggi  diduga disebabkan  tingginya  hormon  kortisol  dan katekolamin  akibat  stresor  kimia  berupa pemberian  minyak  atsiri  daun  bandotan.  Seyle (1936) dalam Porchaz et al., (2009) menyatakan bahwa  6  hingga  48  jam  setelah  organisme mengalami kondisi yang merugikan akan terjadi perubahan  kimia  pada  darah  (peningkatan kortisol),  dimana  kondisi  tersebut  disebut general  alarm  reaction (GAR).  Komponen kimia  darah  akan  kembali  normal (general adaption syndrome)
dengan melakukan beberapa perubahan pada metabolisme. Pemberian minyak  atsiri  daun  bandotan memberikan  pengaruh  pada  tachiventilasi. Tachiventilasi  dengan  perlakuan  pemberian minyak atsiri daun bandotan menunjukkan nilai rata-rata  yang  lebih  rendah  dibandingkan dengan  rata-rata  tachiventilasi  kontrol  (tanpa pemberian  minyak  atsiri  daun  bandotan). Minyak atsiri  menunjukkan efek penghambatan GABA transminase, suatu enzim yang mendegradasi  GABA  ( gamma-aminobutryic acid) dimana  proses  penghambatan  enzim tersebut akan menimbulkan efek sedasi (Almeida et  al., 2009).    Efek  sedasi  akan menurunkan  glukosa  darah  dan  tachiventilasi pada  ikan  (Neiffer  and  Stamper,  2009). Pemberian  minyak  atsiri  daun  bandotan  tidak
berpengaruh pada kualitas air selama penelitian. Kualitas  air  pada  perlakuan  pemberian  minyak atsiri  tidak  mengalami  perbedaan  dibandingkan dengan  kualitas  air  tanpa  pemberian  minyak atsiri  daun  bandotan.  Pemberian  minyak  atsiri tidak  mempengaruhi  kelarutan  oksigen.  Secara umum  kadar  oksigen  terlarut  sebesar  6  mg/l sesuai  dengan  kadar  oksigen  yang  mendukung bagi  kelangsungan  hidup  ikan C.  Carpio (Assareh, 2012).

## Kesimpulan
Kesimpulan yang diperoleh dari penelitian ini adalah terdapat pengaruh terhadap pemberian minyak atsiri daun bandotan terhadap  peningkatan  glukosa  darah  dan penurunan tachiventilasi pada ikan koi.
Konsentrasi lethal concentration 50 % (LC 50 -24 jam) minyak atsiri daun bandotan terhadap ikan koi sebesar 34,047 ppm.
Minyak  atsiri  daun  bandotan  dapat dijadikan sebagai kandidat bahan sedative untuk mengurangi  stres  pada  ikan  koi  sehingga  dapat dimanfaatkan secara berkelanjutan dalam bidang perikanan.

## Daftar Pustaka
Almeida,  R.N.,  D.S.  Navaro  and  J.M.  Barbosa- Filho.  2001.  Plants  with  Central Analgesic Activity. Phytomedicine 8(4): 310-322.
Almeida,  R.N.,  D.A.M.  Araújo,J.  C.  R.
Gonc¸alves,  F.  C.  Montenegro,  D.  P. De Sousa, J. R. Leite, R. Mattei, M. A. C.  Benedito,J.  G.  B.  de  Carvalho,  J. S.Cruz,  J.G.Soares.  2009.  Rosewood oil  induced  sedation  and  inhibition compound  action  potential  in  rodents. Journal  of  Ethnopharmacology  124: 440-443.
Andrews, R.E. and K. D. Spencer. 1980. Action of  Douglas  Fir  Tussock  Moth  Larvae and  Their  Microflora  on  Dietary Terpenes.  Applied  and  Environtmental Microboiology, 40 (6): 959-963. Assareh, R., M.M.N. Shamoushaki, H.F.Langroodi  and  A.K.  Ravari.  2012. Effect of Starvation Periode on Growth
Performances and Survival of Cyprinus carpio (Linnaeus,  1758).  Jurnal  of Research in Biologi 2 (5): 418-423 Bouda,  H.,  L.A.  Tapon  Djou,  D.A    Fontem, M.Y.D,  Gumed  Zoe.  2001.  Effect  of
Essential Oils from Leaves of Ageratum conyzoides , Lantana camara and Cromolaena  odorata on  The Mortality of Sithopilus zeamais (coloptera,  curculionidae).  Journal  of
Stored Products Research 37(2001):193-199. Evans,  D.H. and J.B.  Claiborne.  2006.  The Physiology  of  Fishes,  Third  Edition. CRC Press, Taylor and Francis Group : Florida. Hal. 319-322.
Hasna  dan  Nasril.  2009.  Efektivitas  Ekstrak
Buah  Mengkudu (Morinda  citrifolia L.) Terhadap Mortalitas Plutella xylostella L.  Pada  Tanaman  Sawi.  J. Florantek 4: 29-40.
Kubilay, A. and G. Ulukoy. 2002. The Effect of
Acute  Stress  on  Rainbow  Trout ( Oncorhyncus mykiss ). Turk J Zool, 26:
249. Laili,  Ulfatul.  2007.  Pengaruh  Pemberian Ekstrak Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb) Terhadap Prevalensi  dan  Kelulushidupan  Ikan Mas (Cyprinus  carpio) yang  Diinfeksi Bakteri Aeromonas hydrophyla . Skripsi.  Fakultas  Sain  dan  Teknologi.
Universitas  Islam  Negeri  Malang. Malang. 24 hal.
Marlinda,  M.,  M.S.  Sangi,  A.D.  Wuntu.  2012. Analisis Senyawa Metabolit    Sekunder dan  Uji  Toksisitas  Ekstrak  Etanol  Biji Buah  Alpukat  ( Persea  americana Mill.).  Jurnal  MIPA  UNSRAT  Online 1 (1): 24-28.
Neiffer,  D.L.  and  M.A.  Stemper.  2009.  Fish Sedation,  Anesthesia,  Analgesia,  and Euthanasia:  Considerations,  Methods, and  Types  of  Drugs.  ILAR  Journal Vol.50 (4): 343-360. Pasaribu,  S.P.  2009.  Uji  Boaktivitas  Metabolit
Sekunder dari Daun Tumbuhan Babandotan  ( Ageratum  conyzoides L.). Jurnal Kimia Mulawarman, VI (2): 23-
29.
Porchaz, M.M, L.R.M. Cordova and R.R.Enriquez.  2009.  Cortisol  and
Glucose:  Reliable  Indocators  of  Fish
Stress?.  Pan  American  Journal  of
Aquatic Sciences, 4 (2): 158-178.
Sani,  N.S.,  R.  Rachmawati  dan  Mahfud.  2012. Pengambilan Minyak Atsiri dari Melati dengan Metode Enfleurasi dan Ekstraksi  Pelarut  Menguap.  Jurnal Teknik POMITS Vol.1 (1): 1-4.
Sanjaya, Y. 2011. Pengaruh  Kosentrasi  Larutan Daun Bandotan ( Ageratum conyzoides)
Terhadap  Tingkat  Kelulusan  dan  Buka Tutup  Operkulum  Benih  Ikan  Koi (Cyprinus  carpio)  dalam  Transportasi Sistem  Tertutup.  Skripsi.  Fakultas
Perikanan  dan  Kelautan.  Universitas Airlangga. Surabaya. v, 24 hal. Sulmartiwi, L., D.N. Chotimah. W. Tjahjaningsih.  T.V.  Widiyanto  dan  J. Triastuti.  2009.  Respon  Daya  Cerna dan Respirasi Benih Ikan Mas ( Cyprinus  carpio )  Pasca  Transportasi Dengan  Menggunakan  Daun  Bandotan ( Ageratum  conyzoides )  Sebagai  Bahan Antimetabolik. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan I (1):  79-86.
Tripathy.  P.,  N.K.  Dubey,  A.K.  Shukla.  2008. Use  of  Shome  Essential  Oils  at  Post- Harvest  Botanical  Fungicides  in  the Management of Grey Mould of Grapes Caused  by  Botry  Cinerea.  Word  J. Microbial Biotech