ISOLASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI PENGHASIL AMILASE DARI SAMPEL AIR TAWAR DANAU TOBA
Saronom Silaban 1 , Polmar Simamora 2
1,2 Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Negeri Medan, Medan 20221, Indonesia
E-mail: saronomsilaban@unimed.ac.id
Diterima: 07 Juni 2018. Disetujui: 11 Juli 2018. Dipublikasikan: 30 Juli 2018 DOI: 10.30870/educhemia.v3i2.3438
Abstract: Amylases  are  starch  hydrolyzing  enzymes.  These  proteins  are  very  important  to various  industrial  processes.  Microorganisms  are  considered  as  a  best  source  of  amylase production.  This  study  aims  to  isolate  the  amylolytic  bacteria  from  freshwater  samples  of Lake  Toba  which  have  the  potential  to  produce  amylase  enzymes.  Freshwater  samples  of Lake  Toba  were  collected  from  three  locations,  that  is  Muara,  Tipang  and  Bakkara  and subjected for isolation on defined medium. The isolate was identified and characterized on microscopically  and  biochemically  with  catalase  and  MR-VP  test.  The  results  showed  that from  three  locations,  obtained  18  bacteria  isolates  were  potential  to  produce  amylase.  The microscopic  characterization  show  results  in  irregular,  cream-colored,  wavy  edges  and elevation arise, while the catalase and MR-VP tests also showed positive results.
Keywords: starch; amylase; amylolytic bacteria; isolation
Abstrak: Amilase  adalah  enzim  penghidrolisis  pati.  Protein  ini  sangat  penting  untuk berbagai  proses  industri.  Mikroorganisme  dianggap  sebagai  sumber  produksi  amilase terbaik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi  bakteri  amilolitik  dari  sampel  air  tawar Danau  Toba  yang  berpotensi  menghasilkan  enzim  amilase.  Sampel  air  tawar  Danau  Toba dikumpulkan  dari  tiga  lokasi,  yaitu  Muara,  Tipang  dan  Bakkara  dan  diisolasi  pada  media yang  ditentukan.  Isolat  diidentifikasi  dan  dikarakterisasi  secara  mikroskopis  dan  biokimia dengan  uji  katalase  dan  MR-VP.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  dari  tiga  lokasi, diperoleh 18 isolat bakteri yang berpotensi menghasilkan amilase. Karakterisasi mikroskopis menunjukkan hasil yang tidak teratur, berwarna krem, tepi bergelombang dan timbul elevasi, sementara uji katalase dan MR-VP juga menunjukkan hasil positif.
Kata kunci: pati; amylase; bakteri amilolitik; isolasi

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu
Negara
yang memiliki sumber karbohidrat  yang  melimpah,  salah satunya  adalah  pati.  Pati  diperoleh  dari berbagai  macam  sumber  antara  lain: singkong, jagung, kentang, dan sagu. Pati dan  hasil  hidrolisis  pati  banyak dimanfaatkan  untuk  industri  makanan, farmasi,  dan  sebagai  sumber  energi alternatif  yang  terbarukan.  Pati  juga  bisa diolah  menjadi  bentuk  pati  termodifikasi yang memiliki nilai ekonomi lebih tinggi, dimana  sampai  saat  ini  Indonesia  masih mengimpor  pati  jenis  ini  (Howeler  & Hershey 2002).
Amilase  merupakan  enzim  yang banyak  dimanfaatkan  dalam  teknologi bioproses  (Indrawati  &  Fifendi  2011). Sebagaimana  LIPI  (1999)  melaporkan bahwa  enzim  ini  menyumbang  30%  dari total  enzim  dunia.  Amilase  merupakan enzim yang berperan dalam mendegradasi  pati  menjadi  gula  yang lebih sederhana seperti maltosa, dekstrin, dan  glukosa.  Amilase  telah  dipakai  pada berbagai  bidang  industri  seperti  industri makanan  (Van  der  Maarel et  al .  2002), industri  alkohol,  gula,  tekstil  dan  sirup (Pangastuti dkk .  2002; Wirawan dkk . 2008),  industri  kertas  (Mitidieri et  al . 2006),  industri  deterjen  (Gupta et  al .
2003)  dan  industri  biodisel  (Singh et  al .
2014).  Amilase  yang  paling  umum digunakan  dalam  industri  makanan adalah  golongan α -amilase  (EC.3.2.1.1) dan β -amilase (EC 3.2.1.2) (Souza, 2010;
Singh et  al .  2014).  Sampai  saat  ini,
Indonesia  masih  mengimpor  enzim  ini dari  beberapa  negara,  karena  belum adanya industri yang memproduksi enzim ini. Padahal
Indonesia memiliki biodiversitas  mikroba  yang  tinggi (Widyastuti 2008; Panjaitan & Madayanti 2017, yang potensial untuk menghasilkan α -amilase.
Amilase  umumnya  dapat  diisolasi dari  berbagai  macam  sumber,  seperti tanaman,  hewan  dan  mikroorganisme. Namun,  enzim  amilase  untuk  keperluan industri  sebagian  besar  diisolasi  dari mikroba.  Pemilihan  mikroba  sebagai sumber  enzim  karena  mempunyai beberapa  keuntungan  bila  dibandingkan dengan  enzim  yang  diisolasi  dari tumbuhan maupun hewan, seperti mudah ditumbuhkan,  pertumbuhan  cepat,  skala produksi  sel  mudah  ditingkatkan,  biaya produksi relatif lebih murah, dan kondisi produksi  tidak  tergantung  perubahan musim  dan  waktu  (Poernomo  &  Djoko 2003).  Untuk  pemanfaatan  kekayaan biodiversitas  mikroba  nasional  sebagai salah  satu  sumber  enzim  amilase  yang potensial,  maka  dalam  penelitian  ini dilakukan  eksplorasi  enzim  golongan
hidrolitik  seperti  amilolitik  melalui isolasi  mikroba  lokal  yang  bersumber dari  air  tawar  yang  tercemar.  Penelitian ini diharapkan dapat memberikan bermanfaat bagi pengembangan produksi enzim amilase dari mikroba lokal.

## METODE
Bahan, Bahan Kimia dan Media
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  sampel  air  dari  air tercemar  Danau  Toba  Sumatera  Utara. Bahan  untuk  isolasi  dan  karakterisasi digunakan  nutrien  agar  (NA),  Triple Sugar Iron Agar, Simmons Citrate Agar, Methyl  Red-Voges  Proskauer (MR-VP),
Methyl Red , hidrogen peroksida, natrium klorida, akuades, alkohol, spiritus, larutan iodin, kristal violet, safranin dan lugol.

## Isolasi Mikroorganisme Amilolitik
Sampel  air  diambil  dari  tiga  lokasi yaitu  Bakkara,  Muara  dan  Tipang  dari kedalaman  5  cm.  Masing-masing  1  mL sampel  air  disebar  ke  permukaan  media NA menggunakan mikropipet, selanjutnya  diinkubasi  selama  24  jam pada  suhu  37  °C.  Koloni  mikroba  yang tumbuh  diambil  dan  digoreskan  kedalam cawan  petri  yang  mengandung  media NA, kemudian diinkubasi selama 48 jam pada  suhu  37°C.  Isolasi  dilakukan berulang-ulang  sampai  diperoleh  koloni
tunggal  untuk  masing-masing  sampel. Selanjutnya diteteskan larutan iodin pada permukaan  medium  NA  yang  telah mengandung  koloni  tunggal,  kemudian didiamkan selama 15 menit. Penambahan larutan iodin bertujuan untuk mendeteksi keberadaan  enzim  amilase  dalam  sampel (Setyati & Subagiyo 2012). Zona bening pada  media  NA  mengindikasikan  enzim amilase  diproduksi  oleh  isolat,  sehingga di daerah tersebut pati sudah dihidrolisis. Media  yang  berwarna  biru  kehitaman mengindikasikan  bahwa  pati  pada  media tersebut  belum  terhidrolisis.  Tahapan isolasi  bakteri  amilolitik  menggunakan metode Sebayang (2005).
Karakterisasi Morfologi

## Isolat Penghasil Amilase
Bakteri  hasil  isolasi  dari  ketiga sampel, selanjutnya dikarakterisasi secara makroskopis  menggunakan  lup.  Setiap koloni  bakteri  yang  tumbuh  pada  media NA  diamati  morfologinya.  Pengamatan morfologi dari tiap isolat meliputi warna, bentuk dan tepi koloni yang diamati dari bagian atas, sedangkan permukaan koloni diamati dari bagian samping.

## Karakterisasi Mikroskopis dengan Perwarnaan Garam
Kultur  isolat  yang  berumur  24  jam diambil dengan menggunakan jarum ose, kemudian  dibuat  preparat  olesan  (pada
objek  kaca)  dengan  menggunakan
natrium klorida fisiologis dan dikeringkan.  Kemudian  difiksasi  di  atas Bunsen. Preparat ditetesi larutan Gram A (kristal  violet)  dan  dibiarkan  selama  3 menit,  kemudian  dibilas  dengan  air mengalir.  Selanjutnya  ditetesi  dengan larutan  Gram  B  (lugol)  selama  1  menit, lalu  dicuci  dengan  air  mengalir.  Larutan Gram B (lugol) berfungsi untuk mengikat warna  dasar  ungu  atau  sebagai  penguat warna  dan  membentuk  kristal  iodin (Marc 2001). Selanjutnya ditetesi dengan alkohol  sampai  sisa  zat  warna  hilang (sekitar 30 detik), dibilas kembali dengan air  mengalir.  Pada  tahap  akhir,  preparat ditetesi dengan larutan gram C (safranin) dan dibiarkan hingga mengering.
Sebelum pengamatan dilakukan, preparat terlebih  dahulu  ditetesi  dengan  minyak imersi, selanjutnya dilakukan pengamatan di bawah mikroskop dengan pembesaran 1000x. Pengamatan dilakukan  dengan  melihat  morfologi  sel dan  warna.  Bakteri  Gram-positif  akan memberikan  warna  biru  keunguan,
sedangkan
bakteri Gram-negatif memberikan  warna  merah  (Dali dkk . 2013).

## Uji Biokimia Bakteri Penghasil Amilase
Uji  bakteri  penghasil  amilase dilakukan  dalam  dua  tahap  pengujian,
yaitu  uji  katalase  dan  uji Methyl  Red- Voges  Proskauer (MR-VP).  Uji  katalase dilakukan dengan cara mengambil 2 tetes hidrogen  peroksida  3%  diletakkan  pada kaca  objek,  selanjutnya  isolat  diambil dengan  mengunakan  jarum  ose  dan diletakkan  di  atas  cairan hidrogen peroksida  tersebut.  Uji  katalase  positif jika  dihasilkannya gelembung  udara.
Sedangkan uji Methyl Red-Voges Proskauer (MR-VP) dilakukan  dengan menginokulasi  1  ose  biakan  bakteri  ke dalam media MR-VP, kemudian diinkubasi  selama  24  jam.  Untuk pengujian Methyl  Red, inokulat  ditetesi dengan  2  tetes  reagen Methyl  Red, jika terbentuk  cincin  merah  artinya  reaksi positif (Dali dkk . 2013).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi Mikroorganisme Amilolitik
Dari  ketiga  lokasi  sampel  diperoleh sebanyak  69  isolat  mikroba  (Tabel  1). Selanjutnya  isolat  dari  Bakkara  di  beri simbol  MR,  Bakkara  diberi  simbol  BK, dan  Tipang  diberi  simbol  TP.  Adanya koloni  dalam  sampel  air  menunjukkan bahwa  mikroorganisme  dalam  sampel memiliki kemampuan untuk tumbuh pada medium agar NA (Aiyer 2004;
Kathiresan  dan  Manivannan  2006; Mahdavi et  al .  2010; Demirkan  2011). Hal ini sejalan dengan Singh et al . (2014)
yang  menyatakan  bahwa  kemampuan mikroorganisme  untuk  tumbuh  pada medium  agar  pati  karena  kemampuan mikroorganisme  tersebut  menggunakan pati sebagai substratnya.
Tabel  1. Karakterisasi  Pertumbuhan  Mikroba pada Medium Isolasi Agar NA Lokasi Sampel Air Koloni Isolat Muara 26 BK1, BK2, BK3, BK4, BK5, BK6, BK7, BK8, BK9,  BK10,  BK11, BK12,  BK13,  BK14, BK15,  BK16,  BK17, BK18,  BK19,  BK20, BK21 Bakkara 21 MR1,  MR2,  MR3, MR4,  MR5,  MR6, MR7,  MR8,  MR9,
MR10,  MR11,  MR12, MR13,  MR14,  MR15, MR16,  MR17,  MR18,
MR19,  MR20,  MR21, MR22,  MR23,  MR24, MR25, MR26 Tipang 22 TP1,  TP2,  TP3,  TP4, TP5,  TP6,  TP7,  TP8, TP9,  TP10,  TP11,
TP12,  TP13,  TP14, TP15,  TP16,  TP17,
TP18,  TP19,  TP20,
TP21, TP22
Kemampuan  untuk  mendegradasi pati  digunakan  sebagai  kriteria  untuk penentuan produksi amilase oleh mikroba pada  reaksi  dengan  yodium.  Isolat  yang ditandai  menunjukkan  respon  secara berbeda  dengan  yodium  seperti  yang ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Analisis Kualitatif Produksi Amilase
oleh Isolat Isolat Hasil MR2, MR7, MR9, MR10 Positif MR3 Nagatif BK5, BK6, BK7, BK8 Positif BK1, BK2, BK9 Nagatif TP5, TP6, TP10 Positif TP2, TP4, TP8 Nagatif
Hasil  positif  dalam  Tabel  2 menunjukkan  adanya  zona  hidrolisis, sementara  hasil  negatif  berarti  tidak  ada zona  bening  yang  diamati  pada penambahan  larutan  yodium  pada  pati (Gambar  1).  Ini  menyiratkan  tidak adanya  produksi  enzim  ekstraseluler. Produksi  warna  di  atas  adalah  karena fakta  bahwa  yodium  (dalam  bentuk  ion I 3 – )  terjebak  dalam  gulungan  molekul beta amilosa. Pati memaksa atom yodium menjadi  pengaturan  linier  di  alur  pusat koil  amilosa.  Ada  beberapa  transfer muatan  antara  pati  dan  yodium.  Itu mengubah  cara  elektron  terkurung  dan dengan  demikian  mengubah  jarak  dari tingkat energi. Kompleks tepung yodium memiliki  jarak  level  energi  yang  tepat untuk  menyerap  cahaya  tampak  yang memberikan  warna  biru  intens  yang kompleks.  Ketika  pati  dipecah  menjadi unit  karbohidrat  yang  lebih  kecil  karena aksi  amilase,  warna  biru-hitam  tidak diproduksi.
Gambar 1. Penentuan Kualitatif Produksi Amilase Pada Media Agar NA
Zona  yang  jelas  diamati  ke  berbagai luasan  karena  berbagai  jumlah  produksi amilase,  kecuali  dalam  kontrol  di  mana seluruh  kemiringan  tetap  biru  karena
reaksi  yodium  dengan  pati  dalam medium. Tidak adanya penampakan zona bening  menunjukkan  tidak  adanya produksi  enzim  intraseluler  atau  tidak adanya  produksi  enzim  (Singh et  al .,
2014). Karakterisasi Morfologi

## Isolat Penghasil Amilase
Isolat  positif  dimurnikan  pada medium agar pati. Koloni yang terisolasi ditandai  secara  morfologis.  Terlihat muncul dengan fitur yang berbeda seperti yang diberikan pada Tabel 3.
Tabel 3. Karakterisasi Morfologi Isolat Murni pada Media Agar Pati
Lokasi Sampel Kode Isolat Bentuk Warna Tepi Elevasi Muara MR2 Tidak Beraturan Putih Licin Timbul MR3 Tidak Beraturan Krem Licin Timbul MR7 Tidak Beraturan Krem Bercabang Datar MR9 Bundar Putih Bercabang Datar MR10 Tidak Beraturan Krem Licin Timbul Bakkara BK1 Bundar Putih Licin Timbul BK2 Tidak Beraturan Putih Licin Timbul BK5 Tidak Beraturan Krem Berombak Cembung BK6 Tidak Beraturan Putih Berombak Cembung BK7 Tidak Beraturan Putih Licin Timbul BK8 Tidak Beraturan Putih Berombak Cembung BK10 Tidak Beraturan Putih Berombak Timbul Tipang TP2 Bundar Putih Licin Cembung TP4 Tidak Beraturan Putih Licin Cembung TP5 Tidak Beraturan Krem Bundar Cembung TP6 Tidak Beraturan Putih Bundar Timbul TP8 Bundar Putih Bundar Timbul TP10 Bundar Krem Bundar Timbul Karakterisasi Mikroskopis dengan Perwarnaan Garam Isolat  bakteri  yang  berpotensi menghasilkan amilase selanjutnya
dikarakterisasi
kembali dengan pewarnaan  gram.  Isolat  positif  ditandai dengan  perubahan  warna  isolat  menjadi
violet,  sedangkan  isolat  negatif  ditandai dengan  perubahan  warna  isolat  menjadi merah (Tabel 4).
Tabel  4. Karakterisasi  Bakteri  Amilolitik  secara Mikroskopis dengan Pewarnaan Gram
Isolat Hasil MR2, MR7, MR9, MR10 Gram Positif MR3 Gram Nagatif BK5, BK6, BK7, BK8 Gram Positif BK1, BK2, BK9 Gram Nagatif TP5, TP6, TP10 Gram Positif TP2, TP4, TP8 Gram Nagatif

## Uji Biokimia Bakteri Penghasil Amilase
Bakteri yang berpotensi
menghasilkan enzim amilase diuji secara biokimia  menggunakan  uji  MR-VP  dan uji  katalase.  Terbentuknya  cincin  merah setelah  penambahan  reagen Methyl  Red menunjukkan reaksi positif.
Terbentuknya  gelembung  udara  setelah penambahan hidrogen peroksida pada uji katalase menunjukkan hasil positif (Tabel 5).
Tabel 5 . Uji Katalase Isolat Bakteri Amilolitik
Isolat Hasil MR2, MR3, MR9, MR10 Positif MR7 Negatif BK2, BK5, BK6, BK8, BK9  Positif BK1, BK7 Negatif TP5, TP6 Positif TP2, TP4, TP8, TP10 Negatif Meningkatnya  kandungan  fosfor  di perairan  Danau  Toba  dari  bahan  organik
pakan  ikan,  menyebabkan  sumber nitrogen bagi pertumbuhan dan
kelimpahan  mikroorganisme  semakin meningkat  (Wardoyo  1981).  Selain  itu,
dalam  pakan  ikan  juga  terdapat kandungan protein, lemak dan karbohidrat.  Jumlah  karbohidart  dalam pakan  ikan  diperkirakan  sekitar  40,2%. Karbohidrat  yang  terdapat  dalam  air memicu  tumbuhnya  bakteri  amilolitik (Marzuqi 2015). Bakteri amilolitik adalah jenis  bakteri  yang  dapat  memproduksi enzim amilase dan mampu memecah pati (Türker  &  Özcan  2015).  Mikroba tersebut  dapat  menempati  habitat  air tawar,  seperti  danau,  sungai  dan  kolam (Waluyo  2009).  Genus  bakteri  amilolitik yang cukup luas dikenal adalah Bacillus, Bacteriods,  Lactobacillus,  Clostridium,
Micrococcus,
Thermus, dan Actinomycetes (Reddy 2003).

## KESIMPULAN
Telah  berhasil  diisolasi  mikroba amilolitik  dari  sumber  air  tawar  Danau Toba yang potensial menghasilkan enzim amilase.  Berdasarkan  zona  bening  yang dihasilkan, isolat MR10 merupakan isolat positif yang paling berpotensi menghasilkan  enzim  amilase  dalam jumlah besar.

## DAFTAR RUJUKAN
Aiyer, PD, 2004, ‘Effect of C: N ratio on alpha amylase production by Bacillus licheniformis  SPT  27’, Afr  J
Biotechnol ,  vol.  3,  no.  10,  hh.  519-
522.
Dali,  S,  Arfah,  R,  Karim,  A,  &  Patong, AR, 2013, ‘Eksplorasi enzim amilase dari  mikroba  yang  diisolasi  dari sumber  air  panas  di  Sulawesi Selatan  dan  aplikasinya  dalam produksi  maltodekstrin’. Laporan Penelitian BOPTN, Universitas Hasanuddin, Makassar. Demirkan, E, 2011,
‘Production,
purification,  and  characterization of\alpha-amylase by Bacillus subtilis and  its  mutant  derivates’, Turkish  J Biology , vol. 35, no. 6, hh. 705-712.
Gupta,  R,  Gigras,  P,  Mohapatra,  H,
Goswami, VK, & Chauhan, B, 2003,
‘Microbial α -amylases: a biotechnological perspective’, Process Biochem , vol. 38, no. 11, hh.
1599-1616.
Howeler,  RH,  &  Hershey,  CH,  2002,
‘ Cassava  in  Asia:  Research  and development to increase its potential use  in  food’, feed  and  industry:  a
Thai example.
Irdawati  &  Fifendy,  M,  2011, ‘Isolasi bakteri  termofilik  penghasil  amilase dari  sumber  air  panas  Rimbo  Panti
Pasaman.  Laporan  Penelitian  DIPA Reguler  UNP’, Universitas  Negeri Padang, Padang.
Kathiresan,  K,  &  Manivannan,  S,  2006, ‘Amylase  production  by  Penicillium fellutanum  isolated  from  mangrove rhizosphere  soil’, Afr  J  Biotechnol , vol. 5, no. 10, hh. 929-932.
Mahdavi, A, Hassan Sajedi, R, Rassa, M, & Jafarian, V, 2010,
‘Characterization  of  an  a-amylase with broad temperature activity from an  acid-neutralizing  Bacillus  cereus strain’, Iranian  J  Biotechnol ,  vol.  8, no. 2, hh. 103-111.
Marc,  J,  Maarel,  D,  &  Bart,  V,  2001, ‘Properties and aplications of strach- comverting  enzymes  of  the α - amylase family’, J. Biotech , vol. 94, no. 1, hh. 137-155.
Marzuqi,  M,  2015,  ‘ Pengaruh  kadar karbohidrat  dalam  pakan  terhadap pertumbuhan,  efisiensi  pakan  dan aktivitas  enzim  amilase  pada  ikan bandeng (Chanos chanos Forrskal)’ , (Doctoral dissertation, Tesis. Universitas Udayana).
Mitidieri,  S,  Martinelli,  AHS,  Schrank,
A.  &  Vainstein,  MH,  2006, ‘Enzymatic  detergent  formulation containing amylase from Aspergillus niger:  a  comparative  study  with
commercial  detergent  formulations’,
Bioresource Technology , vol. 97, no.
10, hh. 1217-1224.
Panjaitan,  RS,  &  Madayanti,  F,  2017,
‘Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak kasar  lipid  ulva  fasciata  terhadap Bacillus cereus’, EduChemia (Jurnal Kimia dan Pendidikan) , vol. 2, no. 1,
hh. 14-24.
Pangastuti,  A,  Wahjuningrum,  D,  & Suwanto, A, 2002, ‘Isolasi,
karakterisasi  dan  kloning  gen penyandi alfa-amilase bakteri halofil moderat  asal  bledug  kuwu’, Hayati , vol. 9, no. 1, hh. 10-14.
Poernomo, AT, & Djoko, DA, 2003, ‘Uji aktivitas  crude  enzim  proteolitic
Baciluus  subtilis FNCC0059  hasil fermentasi  curah’, Majalah  Farmasi
Erlangga , vol. 3, hh. 103-107.
Reddy,  NS,  Nimmagadda,  A,  Rao,
KRSS,  2003,  A  overview  of  the michrobiology α -amylase  family’,
African J. Biotehnol , vol. 2, hh. 645-
648.
Setyati,  WA,  &  Subagiyo,  S,  2012,
‘Isolasi dan seleksi bakteri penghasil enzim ekstraseluler (proteolitik, amilolitik,  lipolitik  dan  selulolitik) yang  berasal  dari  sedimen  kawasan mangrove’, Ilmu Kelautan:
Indonesian  Journal  of  Marine
Sciences , vol. 17, no. 3, hh. 164-169.
Sebayang, F, 2005, ‘Isolasi dan pengujian
aktivitas  enzim α -amilase  dari Aspergillus niger dengan menggunakan media campuran onggok dan dedak’, Jurnal
Komunikasi  Penelitian’ ,  vol.  17,  no.
5, hh. 81-86.
Singh,  H,  Saharan,  R,  &  Sharma,  KP, 2014,  ‘Isolation  and  characterization of  amylase  producing  bacteria  from diverse  environmental  samples’, J. Microbiol Biotech Res , vol. 4, no. 4, hh. 8-18.
Souza,  PMD,  2010,  ‘Application  of microbial α -amylase  in  industry-A review’, Brazilian  J.  Microbiol ,  vol.
41, no. 4, hh. 850-861.
Türker, C, & Özcan, BD, 2015, ‘Isolation
of Alpha-amylase producing thermophilic  bacillus  strains  and partial characterization of the enzymes’, Turkish  J  Agriculture- Food  Sci  Technol ,  vol.  3,  no.  6,  hh.
387-393.
Van  Der  Maarel,  MJ,  Van  der  Veen,  B, Uitdehaag,  JC,  Leemhuis,  H,  & Dijkhuizen, L, 2002, ‘Properties and applications  of  starch-converting enzymes of the α -amylase family’, J.
Biotech, vol. 94, no. 2, hh. 137-155. Wardoyo,  STH,  1981,  ‘ Kriteria  kualitas air  untuk  keperluan  pertanian  dan perikanan, Tranining Analisa
Dampak  Lingkungan  PPLH-PSL’ , Bogor.
Waluyo, L, 2009, ‘ Mikrobiologi lingkungan’ , UMM Press, Malang.
Widyastuti, 2008, ‘Kadar alginat rumput laut  yang  tumbuh  di  perairan  laut
Lombok’, J.  Teknologi  Pertanian, vol. 10, no. 3, hh 144-152.
Wirawan,  SK,  Rismijana,  J,  &  Hidayat,
T,  2008,  ‘Aplikasi α -amilase  dan selulase  pada  proses  deinking  kertas bekas  campuran’, Berita  Selulosa , vol. 43, no. 1, hh. 11, 18.