EFEKTIFITAS  ANTIBAKTERI Vibrio sp.  DARI  EKSTRAK  DAUN

## MANGROVE Rhizopora apiculata
ANTIBACTERIAL  EFFECTIVENESS  OF Vibrio sp.  FROM Rhizopora  apiculata MANGROVE LEAF EXTRACT
Hendro Hitijahubessy 1* , Yuni Irmawati 1
1 Program Studi Bioteknologi Perikanan, Politeknik Perikanan Negeri Tual , Tual - Indonesia * Corresponding Author e-mail : hendro@polikant.ac.id

## ABSTRACT
Keywords : mangrove leaves; Rhizopora apikulata;
Vibrio sp.; f itokimia Research was carried out by analyzing the antibacterial ability of the ethanol extract of  mangrove  Rhizopora  apiculata  leaves  against  Vibrio  sp.  Maceration  using  70% ethanol  resulted  in  an  extract  yield  of  3.09%.  The  highest  average  inhibition  zone results  were  found  in  mangrove  leaf  extract  at  a  concentration  of  100%  with  an inhibition zone of 24.68 mm. The smallest inhibition zone was found in mangrove leaf extract with a concentration of 6.25% with an inhibition zone of 3.85 mm, a positive control  inhibition  zone  (30  mg  tetracycline)  of  26.35  mm  and  a  negative  control inhibition  zone  (DMSO  10%)  of  0  mm.  This  can  be  seen  from  the  results  of  the average  inhibition  zone  which  shows  strong  antibacterial  activity  of  mangrove  leaf extract at a concentration of 100% and moderate antibacterial activity of mangrove leaf  extract  at  a  concentration  of  75%  to  50%  and  no  antibacterial  activity  at concentrations  of  mangrove  leaf  extract  below  25  %,  the  positive  control  inhibition zone  (30  mg  tetracycline)  was  26.35  mm  and  the  negative  control  inhibition  zone (DMSO 10%) was 0 mm. Phytochemical analysis was also carried out on mangrove leaves with the results showing the presence of several visible secondary metabolites. The secondary metabolites found in Rhizopora apiculata mangrove leaves consist of alkaloids, flavanoids, steroids, saponins and tannins.

## Article History:
Recieved: 28 Juli 2023 Revised: 26 November 2023 Accepted: 30 November 2023 © 2023 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Pattimura
Copyright © 2023 Biofaal Journal Homepage: https://ojs3.unpatti.ac.id/index.php/biofaal/index E-mail: biofaaljournal@gmail.com
This  article  is  an  open  access  article  distributed a  Creative  Commons  Attribution-NonCommercial-ShareAlike  4.0 International License
How to cite:
Hitijahubessy  H,  dan  Irmawati  Y.  2023.  Efektifitas  Antibakteri Vibrio sp.  Dari  Ekstrak  Daun  Mangrove Rhizopora  apiculata .  Biofaal Journal. 4(2): 81-89

## BIOFAAL Journal Desember 2023   Volume 4 Nomor 2   Halaman 081-089 E-ISSN: 2723-4959
https://doi.org/10.30598/biofaal.v4i2pp081-089

## A. PENDAHULUAN
Bakteri yang menyebabkan penyakit vibriosis adalah bakteri Vibrio sp.(Irianto, 2005). Ciri-ciri ikan yang terserang vibriosis yaitu pada insang dan hepatopankreas berwarna merah agak  kecoklatan,  bagian  telson,  uropod  dan  abdominal  semuanya  berwarna  merah,  dan berenang lambat atau terlihat lemah (Ramesh et al., 2014). Meluasnya penggunaan antibiotik selama  beberapa  tahun  terakhir  telah  mengakibatkan  dalam  residu  antibiotik  dalam  produk perikanan  yang  dibudidayakan  mengalami  resistensi  (Hemamalini  et  al.,  2022).  Hal  ini ditemukan  bahwa  bakteri Vibrio menunjukkan  resistensi  terhadap  banyak  antibiotik, termasuk  ampisilin, penisilin,  dan  tetrasiklin  (Elmahdi  et  al.,  2016; Li  et  al.,  2023).  Dengan demikan  membutuhkan  antibiotik  baru  dari  bahan  alam  yang  berguna  mengatasi  resistensi terhadan antibiotik sintesis.
Tumbuhan  mangrove Rhizopora  apiculata memiliki  banyak  manfaat  bagi  kehidupan manusia,  mulai  dari  manfaat  ekologis  hingga  manfaat  sebagai  sumber  pangan  dan  obat- obatan (Nurjanah et al., 2015). Mangrove Rhizopora apiculata merupakan salah satu vegetasi hutan  tropis  dan pemanfaatannya  terkait  dengan  potensi  zat bioaktifnya yang  memiliki  nilai farmasi sebagai antibakteri (Latief et al., 2015). Hasil penelitian melaporkan bahwa tanaman mangrove  menunjukkan  respon  antibakteri  karena  mengandung  komponen  alkaloid,  minyak atsiri,  asam  fenolat,  flavonoid,  kina,  tanin,  dan  terpenoid  (Jithesh  et  al.,  2006;  Ravikumar, 2014). Penelitian antibakteri dari bahan alam terhadap Vibrio sp. belum banyak diteliti, perlu diteliti  lebih  lanjut  kemampuan  antibakteri  ekstrak  daun  Mangrove Rhizopora  apiculata dalam menghambat pertumbuhan Vibrio sp. bakteri.

## B. METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilakukan  di  Pantai  Difur  Kota  Tual  dan  di  UPTD  Balai  Budidaya Perikanan Kota Tual dengan suhu rata-rata tahunan berkisar antara 27 o C sampai 31 o C.

## Alat dan Bahan
Air  laut,  daun  mangorve,  media  Thiosulfate  citrate  bile  salts  sucrose  (TCBS),  air suling,  etanol,  penyeka  kapas  steril,  kertas  cakram  antibiotik  tetrasiklin,  kertas  cakram kosong,  handuk  kertas,  pembakar  Spirit,  konsep  inkubator  udara,  konsep bio  inkubator,  hot plate , timbangan, sarung tangan steril, oven, evaporator, saringan 60 mesh, cawan petridish, erlenmeyer, tabung reaksi, spatula, gelas ukur, labu ukur, gelas kimia, pipet, pinset, bunsen, neraca analitik, colloni counter, blender, tray, mortar dan alu.

## Metode Pengambilan Sampel
Pengambilan  sampel  air  laut  di  daerah  Watdek  Kabupaten  Maluku  Tenggara. Pengambilan sampel daun mangrove dilakukan dengan cara dipetik langsung dari pohonnya yang berada di Desa Ngilngof.

## Preparasi Sampel
Daun mangrove Rhizopora apiculata diambil, dibersihkan dengan air mengalir untuk menghilangkan  residu  kotor.  Kemudian  daun  dipotong  kecil-kecil  dan  dihamparkan  pada nampan untuk ditiriskan dan dikeringkan pada suhu ruang selama 5-7 hari. Daun kering yang dihasilkan kemudian dihaluskan dengan pengiling bubuk dan diayak menggunakan saringan 60 mesh untuk menghasilkan serbuk.

## Ekstraksi, Pengenceran Ekstrak dan Pembuatan Larutan Kontrol
Proses  ekstraksi  dalam  penelitian  ini  adalah  dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  etanol  70%.  Hasil  maserasi  disaring  menggunakan  kertas  saring  untuk  memisahkan filtrat dan ampas. Filtrat ekstrak yang diperoleh dimasukkan ke dalam Erlenmeyer, kemudian pelarut  yang  terkandung  dalam  ekstrak  dihilangkan  sehingga  diperoleh  ekstrak  berbentuk pasta.  Proses  penguapan  ekstrak  cair  menjadi  pasta  dilakukan  dengan  menggunakan  oven pada suhu 78 o C (Bintoro et al., 2017). Ekstrak daun mangrove berbentuk pasta yang disebut sebagai  ekstrak  kosentrasi  100%.  Ekstrak  konsentrasi  75%  dapat  dibuat  dengan  cara melarutkan  3,75  gram  serbuk  ekstrak  dalam  0,5  ml  DMSO  10%  dan  5  ml  akuades. Selanjutnya  dilakukan  pengenceran  bertingkat  dari  ekstrak  75%  sampai  konsentrasi  ekstrak mencapai  3,125%.  Kontrol  positif  menggunakan  kertas  cakram    yang  berisi  antibiotik tetrasiklin dan kontrol negatif menggunakan DMSO 10%.

## Prosedur Kerja

## 1. Persen Rendemen
Menurut  (Sudarmadji  &  Haryono,  1996),  rendemen  ekstrak  merupakan  hasil  bagi berat  ekstrak  daun  (pasta)  dibagi  dengan  berat  serbuk  daun,  kemudian  dikalikan  100%. Adapun perhitungan rendemen ekstrak dalam rumus sebagai berikut:
% = ( ) 100%

## 2. Uji Aktivitas Antibakteri

## a) Sterilisasi
Proses  sterilisasi  alat  gelas  laboratorium,  awalnya  peralatan  yang  digunakan  terlebih dahulu  dicuci  dengan  detergen,  dibilas  dengan  air  bersih  hingga  bersih  dan  dikeringkan. Peralatan  seperti  pipet,  cawan  petri  dan  tabung  reaksi  dibungkus  dengan  crab  paper  dan disterilkan dalam oven pada suhu 170 o C (Irmawati & Sudirjo, 2017).

## b) Persiapan Media TCBS
Media  agar  TCBS  sebanyak  8,8  gram  dihomogenkan  dalam  100  ml  akuades  dalam erlenmeyar  (sesuai  dosis  yang  digunakan),  mulut  tabung  erlenmeyer  ditutup  menggunakan kapas dan alumunium foil kemudian dipanaskan menggunakan hot plate sampai Media agar TCBS larut.
c) Isolasi dan Analisis Aktivitas Antibakteri
Ekstrak  daun  mangrove  digunakan  untuk  analisis  aktivitas  antibakteri  menggunakan metode  difusi  cakram  Kirby-Bauer.  Metode  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas antibakteri ekstrak daun mangrove dalam menghambat pertumbuhan Vibrio sp. dengan jenis konsentrasi ekstrak. Bakteri yang telah diisolasi dari sampel air laut dikulturkan pada media
TCBS  menggunakan  metode  streak  plate  dengan  kapas  lidi  steril  (Difco,  1977).  Kemudian dimasukkan  kertas  cakram  kontrol positif  (tetrasiklin  30  mg),  kertas  cakram  yang  direndam dalam  kontrol  negatif  (DMSO  10%)  dan  kertas  cakram  yang  direndam  dalam  ekstrak  yang telah diencerkan secara bertahap dari konsentrasi 100%, 75%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25% dan 3,125%, kemudian diinkubasi pada suhu 35°C selama ±24 jam.

## 3. Uji Fitokimia
Analisis fitokimia didasarkan pada warna yang merupakan analisis kuatlitatif meliputi analisis alkaloid, flavonoid, steroid/triterpen, tanin dan saponin (Sangi et al., 2019).

## a) Analisis Alkaloid
Serbuk  daun  ditimbang  sebanyak  4  gram,  kemudian  ditambahkan  5  ml  kloroform kemudian dihaluskan kembali dengan lumpang dan alu. Kemudian ditambahkan amoniak dan kloroform  dengan  perbandingan  1:1.  Larutan  disaring  ke  dalam  tabung  reaksi,  dan  10  tetes H 2 SO 4 2N ditambahkan ke filtrat. Filtrat dikocok dengan vortex kemudian dibiarkan beberapa saat hingga terbentuk dua lapisan. Lapisan atas diambil dan dimasukkan ke dalam tiga tabung reaksi  sebanyak  2,5  ml.  Ketiga  larutan  ini  direaksikan  dengan  pereaksi  Mayer,  Dragendorff dan  Wagner.  Adanya  endapan  menunjukkan  bahwa  sampel  mengandung  alkaloid.  Pereaksi Mayer akan menghasilkan endapan putih, pereaksi Dragendorff akan muncul endapan merah jingga dan pereaksi Wagner akan terbentuk endapan berwarna coklat.

## b) Analisis Triterpen dan Steroid
Serbuk  halus  daun  sebanyak  50-100  mg  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan  asam  asetat  anhidrat  sampai  sampel  terendam,  kemudian  sampel  dibiarkan selama  ±15  menit,  enam  tetes  larutan  dimasukan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan asam  sulfat  pekats  sebanyak  2-3  tetes.  Terbentuknya  triterpen  ditunjukkan  warna  merah jingga atau ungu, sedangkan pembentukan steroid ditunjukkan warna biru.

## c) Analisis Flavonoid
Serbuk halus daun sebanyak 200 mg ditambahkan 5 ml etanol dan dipanaskan selama ±  5  menit  dalam  tabung  reaksi  menggunakan  api  bunsen.  Kemudian  ditambahkan  beberapa tetes  HCl  pekat.  Selanjutnya  ditambahkan  serbuk  Mg  sebanyak  0,2  g.  Adanya  flavanoid ditunjukkan warna merah tua setelah ± 3 menit.

## d) Analisis Saponin
Serbuk  halus  daun  sebanyak  2  g  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  ditambahkan akuades  sehingga  semua  serbuk  terendam,  dipanaskan  selama  2-3  menit,  kemudian didinginkan, lalu dikocok kuat-kuat. Adanya saponin ditunjukkan dengan adanya busa yang stabil.

## e) Analisis Tanin
Serbuk  halus  daun  sebanyak  20  mg  direndam  dengan  etanol  96%.  1  ml  larutan dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi  kosong,  selanjutnya  ditambahkan  2-3  tetes  FeCl 3 1%. Adanya tanin ditunjukkan warna hitam kebiruan atau hijau.

## Analisis Data
Pengukuran zona hambat (Davis & Stout, 1971; Fiana et al., 2020).
= ( )   ( )
2
Analisis  diameter  dan  inhibisi  dalam  metode  difusi  cakram  dapat  diklasifikasikan kekuatan penghambatan oleh (Greenwood et al., 1995) dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Klasifikasi Penghambatan Pertumbuhan Bakteri
Zona hambat (mm) Kekuatan penghambatan >20 Kuat 16-20 Sedang 10-15 Lemah <10 Tanpa Penghambatan

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Persen Rendemen
Hasil  penelitian  menunjukkan  berat  ekstrak  kering  (pasta)  adalah  15,44  gram  dan berat  serbuk  daun  mangrove Rhizopora  apiculata untuk  maserasi  adalah  500  gram.  Maka persen  rendemen  ekstrak  pada  penelitian  ini  dapat  diperoleh  sebesar  3,09%.  Rendemen diperoleh  dari  hasil  bagi  berat  produk  (ekstrak)  yang  kemudian  dibagi  dengan  berat  bahan baku,  dan  dikalikan  100%.  Analisis  rendemen  ekstrak  bertujuan  untuk  mengetahui  jumlah potensi  ekstrak  yang  larut  dengan  pelarut  yang  digunakan.  Pelarut  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  etanol.  Etanol  bersifat  polar,  sehingga  mampu  mengekstrak  metabolit jauh  lebih  banyak  karena  sebagian  besar  metabolit  sekunder  bersifat  polar.  Menurut (Verdiana et al., 2018) pemilihan pelarut sangat mempengaruhi metabolit sekunder yang akan larut  dalam  pelarut  tersebut.  Pelarut  polar  akan  melarutkan  metabolit  sekunder  polar, sedangkan pelarut nonpolar akan melarutkan metabolit sekunder nonpolar. Etanol merupakan pelarut  yang  umum  digunakan  sebagai  pelarut  pada  proses  maserasi  karena  sebagian  besar metabolit sekunder larut dalam etanol.

## 2. Uji Aktivitas Antibakteri
Hasil  pengukuran  zona  hambat  berdasarkan  pengenceran  ekstrak  daun  mangrove Rhizopora apiculata pada beberapa konsentrasi 100%, 75%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, dan 3,125%  dengan  dua  perlakuan  (duplo),  kontrol  positifnya  adalah  tetrasiklin  30  mg,  kontrol negatifnya adalah Dimetil Sulfooksida 10% (DMSO), dapat dilihat pada Tabel 2.
Keterangan :
DV   : Diameter vertikal DH   : Diameter horisontal DKC: Diameter cakram kertas

## Tabel 2.Hasil Pengukuran Rata-Rata Zona Hambat
No Sampel Rata-rata Zona hambat (mm) 1 EDS 100% 24.68 2 EDS 75% 19.95 3 EDS 50% 19.23 4 EDS 25% 9.50 5 EDS 12,5% 3.93 6 EDS 6,25% 3.85 7 EDS 3,125% 0 8 Kontrol (+) 26.35 9 Kontrol (-) 0
Keterangan: EDS: Ekstrak daun mangorve; kontrol (+): Tetrasiklin 30 mg; Kontrol (-): DMSO 10%
Zona  hambat  yang  terbentuk  pada  media  dapat  diklasifikasikan  menjadi  empat golongan  yaitu  Tidak  ada  zona  hambat  dengan  zona  hambat  kurang  dari  10  mm,  klasifikasi lemah dengan zona hambat antara 10-15 mm, klasifikasi sedang dengan zona hambat berkisar antara  16-20  mm  dan  klasifikasi  kuat  dengan  zona  hambat  antara  lebih  20  mm.  Pada penelitian  ini  rata-rata  zona  hambat  terbesar  ditemukan  pada  konsentrasi  ekstrak  100% dengan zona hambat sebesar 24,675 mm. Zona hambat terkecil terdapat pada ekstrak 12,5% dengan zona hambat 3,625 mm, zona hambat kontrol positif (tetrasiklin) 26,35 mm dan zona hambat kontrol negatif (DMSO 10%) 0 mm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa hasil rata- rata  zona  hambat  menunjukkan  aktivitas  antibakteri  yang  kuat  dari  ekstrak  daun  mangrove pada  konsentrasi  100%  dan  aktivitas  antibakteri  sedang  pada  konsentrasi  75%  sampai  50% dan  tidak  ada  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  daun  mangrove  pada  konsentrasi  di  bawah 25%.  Jika  dibandingkan  aktivitas  antibakterinya  dengan  kontrol  positif  yaitu  antibiotik tetrasiklin  dalam  dosis  30  mg,  hasil  antibiotik  tersebut  masih  tergolong  kuat  sebagai antibakteri dan sama kekuatannya dengan ekstrak daun mangrove pada konsentrasi 100%.
Penggunaan  pelarut  DMSO  10%  digunakan  sebagai  kontrol  negatif  dan  dipastikan tidak akan membentuk zona hambat karena akan berfungsi sebagai pelarut pengencer ekstrak daun mangrove. DMSO merupakan pelarut yang dapat melarutkan senyawa polar yang sulit larut  dalam  air  suling.  Tetrasiklin  30  mg  sebagai  kontrol  positif  sebagai  antibiotik  atau antibakteri  yang  merupakan  senyawa  murni  yang  dapat  dipastikan  dapat  membentuk  zona hambat.  Menurut    Patel  et  al.,  (2015)  dan  (Saraswati,  2018),  Metode  analisis  antibakteri dalam  penelitian  ini  adalah  metode  difusi  cakram  yang  menggunakan  cakram  kertas  untuk membantu proses penghambatan bakteri dengan ekstrak. Metode ini didasarkan pada ukuran atau diameter zona hambat yang terbentuk dan hasilnya dalam milimeter.

## 3. Uji Fitokimia
Analisis  fitokimia  serbuk  daun  mangrove Rhizopora  apiculata dan  hasil  analisis fitokimia pada penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 3.

## Tabel 3. Analisis Fitokimia Daun Mangrove
No. Analisis Fitokimia Hasil Informasi Hasil 1 Alkaloid: Wagner + Endapan merah Mayer + Endapan putih Dragendorff + Endapan coklat 2 Triterpen - - 3 Steroid + Biru 4 Flavonoid + Merah magenta 5 Saponin + Busa 6 Tanin + Biru tua atau hitam
Keterangan: (+): terbentuk sesuai informasi hasil ; (-): tidak terbentuk sesuai informasi hasil
Analisis  fitokimia  merupakan  analisis  kualitatif  berdasarkan  perubahan  warna  yang akan  terbentuk  dari  suatu  reaksi  kimia  (Sangi  et  al.,  2019).  Metabolit  sekunder  yang dihasilkan  dari  analisis  fitokimia  pada  penelitian  ini  adalah  alkaloid,  steroid,  flavonoid, saponin dan tanin. Terbentuknya zona bening hasil analisis aktivitas antibakteri ekstrak daun mangrove Rhizopora apiculata terhadap Vibrio sp. menunjukkan adanya metabolit sekunder yang diduga berfungsi sebagai antibakteri.
Salah  satu  bahan  aktif  dari  ekstrak  etanol  daun  mangrove Rhizopora  apiculata yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri Vibrio sp. merupakan senyawa flavanoid. Senyawa flavonoid  sebagai  antibakteri  membentuk  protein  ekstraseluler  dari  senyawa  kompleks  dan terlarut  yang  dapat  merusak  membran  sel  bakteri  dan  diikuti  dengan  pelepasan  senyawa intraseluler.  Penelitian  (Ngozi  et  al.,  2009)  menyatakan  bahwa  senyawa  flavanoid menghambat  energi  dan  sistem  pernapasan  bakteri,  karena  bakteri  membutuhkan  energi untuk menyerap berbagai metabolit dan biosintesis senyawa makromolekul. Bahan aktif lain yang diduga dapat menghambat pertumbuhan bakteri Vibrio sp adalah senyawa alkaloid. Ini juga  telah  dipelajari  oleh  (Brooks  et  al.,  2005)  yang  menyatakan  bahwa  senyawa  alkaloid dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  cara  merusak  membran  sel  dan mendenaturasi protein  sel bakteri  yang  menyebabkan bakteri  mati.  Selain  itu,  terdapat  tanin pada  ekstrak  etanol  daun  mangrove.  Menurut  (Cowan,  1999),  tanin  berfungsi  untuk menonaktifkan  adhesi  sel  dan  enzim  pada  bakteri.  Tanin  juga  dapat  mengganggu  distribusi protein  di  lapisan  dalam  sel.  Tanin  memiliki  kemampuan  untuk  mencegah  pembentukan dinding sel bakteri secara sempurna, karena tanin dapat melisiskan polipeptida pada dinding sel  bakteri.  Selain  itu,  ditemukan  adanya  steroid  pada  ekstrak  daun  mangrove.  Menurut (Bontjura et al., 2015)fungsi metabolit steroid adalah sebagai antibakteri yang dapat merusak membran  sel  sehingga  menjadi  rapuh  dan  lisis.  Metabolit  sekunder  yang juga  terdapat pada daun mangrove adalah saponin. (Rijayanti, 2014) menyatakan bahwa saponin dapat merusak susunan  peptidoglikan  dinding  sel  bakteri  dan  merusak  DNA  bakteri  dengan  busa  yang terbentuk dari tanaman tersebut.

## D. KESIMPULAN
Penelitian  yang  telah  dilakukan  meliputi  penentuan  rendemen  ekstrak  etanol  daun mangrove Rhizopora  apiculata ,  analisis  aktivitas  antibakteri  daun  mangrove Rhizopora
apiculata terhadap  bakteri Vibrio sp  dan  analisis  fitokimia  dari  serbuk  daun  mangrove Rhizopora  apiculata .  Rendemen  ekstrak  etanol  daun  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini adalah 3,09%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa hasil rata-rata zona hambat menunjukkan aktivitas  antibakteri  yang  kuat  dari  ekstrak  daun  pada  konsentrasi  100%  dan  aktivitas antibakteri sedang pada konsentrasi 75% sampai 50% dan tidak ada aktivitas antibakteri dari ekstrak  daun  pada  konsentrasi  di  bawah  25%.  Jika  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun dibandingkan  dengan  kontrol  positif  yaitu  antibiotik  tetrasiklin  30  mg,  hasil  antibiotik tergolong  kuat  sebagai  antibakteri  dan  sama  dengan  daya  hambat  konsentrasi  ekstrak  daun 100%  daun  mangrove Rhizopora  apiculata .  Analisis  fitokimia  pada  serbuk  daun  mangrove Rhizopora  apiculata yang  dilakukan  pada  penelitian  ini  menunjukkan  adanya  metabolit sekunder yaitu alkaloid, flavanoid, steroid, saponin dan tanin.

## E. UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  terselenggara  berkat  hibah  dari  Program  Penelitian  Mahasiswa  Dana Hibah  DIPA  UPPM  Politeknik  Perikanan  Negeri  Tual  tahun  2022.  Kami  mengucapkan terima kasih kepada Kepala UPPM Politeknik Perikanan Negeri Tual yang telah mendorong kami untuk melaksanakan penelitian ini dari awal sampai akhir dengan sangat baik.

## F. DAFTAR PUSTAKA
Bintoro, A., Ibrahim, A. M., Situmeang, B., Kimia, J., & Cilegon, B. (2017). Analisis dan identifikasi senyawa saponin dari daun bidara (Zhizipus mauritania L.). Jurnal Itekima , 2 (1), 84–94.
Bontjura,  S.,  Waworuntu,  O.  A.,  &  Siagian,  K.  V.  (2015).  Antibacterial  effect  of  leilem  leaf  extract (Clerodendrum minahassae l.) On streptococcus mutans bacteria. Pharmacon , 4 (4), 96–101.
Brooks, G. F., Butel, J. S., & Morse, S. A. (2005). Mikrobiologi kedokteran. Jakarta: Salemba Medika , 6 , 328– 335.
Cowan,  M.  M.  (1999).  Clinical  Microbiology  Reviews-Plants  Products  as  Antimicrobial  Agents. Miami University, Miami, FL .
Davis,  W.  W.,  &  Stout,  T.  R.  (1971).  Disc  Plate  Method  of  Microbiological  Antibiotic  Assay:  II.  Novel Procedure Offering Improved Accuracy 1. Applied Microbiology , 22 (4), 666. Difco,  L.  (1977).  Difco  manual  of  dehydrated  culture  media  and  reagents  for  Microbiology  and  Clinical laboratory procedures. Difco Laboratories .
Elmahdi, S., DaSilva, L. V, & Parveen, S. (2016). Antibiotic resistance of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio vulnificus in various countries: a review. Food Microbiology , 57 , 128–134.
Fiana,  F.  M.,  Kiromah,  N.  Z.  W.,  &  Purwanti,  E.  (2020).  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Sukun (Artocarpus  altilis)  Terhadap  Bakteri  Staphylococcus  aureus  Dan  Escherichia  coli. Pharmacon:  Jurnal Farmasi Indonesia , 10–20.
Greenwood,  D.,  Finch,  R.,  Davey,  P.,  &  Wilcox,  M.  (1995).  Antibiotics,  susceptibility  (Sensitivity)  test antimicrobial and chemoterapy. United State of America: Mc Graw Hill Company . Hemamalini, N., Shanmugam, S. A., Kathirvelpandian, A., Deepak, A., Kaliyamurthi, V., & Suresh, E. (2022). A  critical  review  on  the  antimicrobial  resistance,  antibiotic  residue  and  metagenomics‐assisted antimicrobial  resistance  gene  detection  in  freshwater  aquaculture  environment. Aquaculture  Research , 53 (2), 344–366.
Irianto, A. (2005). Patologi ikan teleostei . Gadjah Mada University Press. Yogyakarta. Irmawati, Y., & Sudirjo, F. (2017). Infection Vibrio sp. bacteria on Kappaphycus seaweed varieties brown and green. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science , 89 (1), 12016.
Jithesh,  M.  N.,  Prashanth,  S.  R.,  Sivaprakash,  K.  R.,  &  Parida,  A.  (2006).  Monitoring  expression  profiles  of antioxidant  genes  to  salinity,  iron,  oxidative,  light  and  hyperosmotic  stresses  in  the  highly  salt  tolerant grey mangrove, Avicennia marina (Forsk.) Vierh. by mRNA analysis. Plant Cell Reports , 25 , 865–876. Latief, M., Nazarudin, & Nelson. (2015). Aktivitas antioksidan ekstrak daun dan buah prepat (Sonneratia alba) asal tanjung jabung timur provinsi jambi. Prosiding SEMIRATA , 0 (0), 112–117. https://jurnal.untan.ac.id/index.php/semirata2015/article/view/14142
Li, Z., Ren, Y., Wang, Z., Qi, Z., Murtaza, B., & Ren, H. (2023). Characterization and genomic analysis of the
vibrio phage R01 lytic to Vibrio parahaemolyticus. Aquaculture Reports , 30 , 101628. Ngozi,  I.  M.,  Jude,  I.  C.,  &  Catherine,  I.  C.  (2009).  Chemical  profile  of  Chromolaena  odorata  L.(King  and Robinson) leaves. Pakistan Journal of Nutrition , 8 (5), 521–524. Nurjanah, N., Jacoeb, A. M., Hidayat, T., & Shylina, A. (2015). Bioactive compounds and antioxidant activity of lindur stem bark (Bruguiera gymnorrhiza) .
Patel BJ, Cockerill FR, Bradford PA, Eliopolus GM, Hindler JA, Jenkins SG, Lewis JS, Limbago B, Miller LA, Nicolau  DP,  Powell  M,  Swenson  JM,  Traczewski  MM,  Turnidge  JD,  Weinstein  MP  and  BL  Zimmer. 2015. Methods  For  Dilution  Antimicrobial  Susceptibility  Test  For  Bacteria;  That  Grow  Aerobically; Approved  Standard  Tenth  Edition .  Clinical  and  Laboratory  Standards  Institute.  950  West  Valley  Road, Suite 2500, Wayne, PA 19087 USA.
Ramesh,  K.,  Natarajan,  M.,  Sridhar,  H.,  &  Umamaheswari,  S.  (2014).  Virulence  determination  among  Vibrio harveyi  hatchery  isolates  through  haemolysis  and  growth  constraint. Global  of  Journal  Bio-Science  and Biotechnology , 3 (1), 109–114. Ravikumar, C. (2014). Review on herbal teas. Journal of Pharmaceutical Sciences and Research , 6 (5), 236.
Rijayanti,  R.  P.  (2014).  Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun  mangga  bacang  (Mangifera  Foetida  L.) terhadap  Staphylococcus  aureus  secara  in  vitro. Jurnal  Mahasiswa  PSPD  FK  Universitas  Tanjungpura , 1 (1).
Sangi,  M., Runtuwene, M. R.  J.,  Simbala, H.  E.  I., & Makang, V.  M. A.  (2019). Analisis fitokimia tumbuhan obat di Kabupaten Minahasa Utara. Chemistry Progress , 1 (1), 47–53. Saraswati, D. K. (2018). Uji MIC (Minimum Inhibitory Concentration) Ekstrak Methanol Jamur Tiram Merah Muda  (Pleurotus  flabellatus)  Terhadap  Bakteri  Multidrug  Resistance  Staphylococcus  aureus  Secara  In Vitro . Universitas Muhammadiyah Semarang.
Sudarmadji, S., & Haryono, B. (1996). Suhardi, Analisa Bahan Makanan dan Pertanian . Liberty, Yogyakarta. Verdiana,  M.,  Widarta,  I.  W.  R.,  &  Permana,  I.  (2018).  Pengaruh  jenis  pelarut  pada  ekstraksi  menggunakan gelombang ultrasonik terhadap aktivitas antioksidan ekstrak kulit buah lemon (Citrus limon (Linn.) Burm F.). Jurnal Ilmu Dan Teknologi Pangan , 7 (4), 213–222.