## PERBEDAAN INDIKATOR-INDIKATOR PENYEMBUHAN LUKA TIKUS WISTAR DIABETIK DIINDUKSI CURCUMIN
Tejo Jayadi*, Arum Krismi Fakultas Kedokteran Universitas Kristen Duta Wacana *Email: jeremytejo1@yahoo.com

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan mengenali efek kurkumin pada penyembuhan luka pada tikus wistar diabetik  dengan  mengukur  ekspresi  TGF  beta-1  dan  p63,  level  inflamasi,  pembentukan jaringan granulasi dan penutupan dermis.
Penelitian  ini  dikerjakan  dengan  metode  quasi  eksprerimental  berdesain  post-test  only dengan  kelompok  kontrol,  pada  32  hewan  coba  diabetik.  Enam  belas  hewan  coba  diinsisi diberi placebo (A) , 16 berikutnya diinsisi diterapi salep kurkumin (B). Eksisi 3 hewan coba dikerjakan pada hari pertama, ke- 3, ke- 12, ke-18, ke- 30. Inflamasi sampel B cenderung lebih berat dibandingkan sampel A, uji marginal homogeneity 0,197.  Peningkatan  inflamasi  ini,  dimungkinkan  karena  infeksi,  sehingga  pembentukan jaringan granulasi cenderung lebih lambat  uji marginal homogeneity 0,564, dan penutupan dermis lebih lama dengan uji marginal homogeneity  0,083. Ekspresi TGF beta1 sampel B dibandingkan  sampel  A  tidak  didapatkan  perbedaan  dengan  uji  marginal  homogeneity 0,814.  Pada  penelitian  ini  pemberian  salep  kurkumin  meningkatkan  ekspresi  p63  semua pada semua sampel eksisi kulit tikus wistar diabetik.
Kata  Kunci: curcumin,  TGF  beta-1,  p63,  level  inflamasi,  jaringan  granulasi,  penutupan dermal

## 1. PENDAHULUAN
Prevalensi  penderita  DM  pada  orang  dewasa  di  dunia  menurut American  Diabetes Ascociation (ADA) berkisar 8,7 % pada tahun 2002 sebagian besar tergolong diabetes tipe 2. World  Health  Organization (WHO)  memprediksi  akan  terjadi  kenaikan  jumlah  pasien  dari 8,4 juta pada tahun 2000 menjadi 21,3 juta pada tahun 2030. Diabetes Melitus di Indonesia diduga  belum  terdiagnosis  sekitar  50  %.  Prevalensi  DM  di  Menado  mencapai  6  %,  di Kotamadya  Surabaya  4,16  %.  Di  Desa  Sangsit  Buleleng  Bali  prevalensi  DM  7,5  %  (Yasa et.al.,  2009).  Penderita  diabetes  sering  mengalami  komplikasi  ulserasi  kaki,  infeksi, neuropati  perifer,  yang  sering  menyebabkan  amputasi  pada  ekstremitas  yang  terkena, sehingga  cara  penatalaksanaan  dan  perawatan  luka  baik  dan  benar  adalah  strategi pencegahan yang tepat (Clayton and Elasy, 2009).
Diabetes  melitus  dapat  menimbulkan  ulserasi  kronik,  disebabkan  karena  rendahnya bioaviabilitas  faktor-faktor  pertumbuhan  dan  reseptornya,  produksi/  modifikasi  protein- protein  matrik  yang  tidak    normal,  hilangnya  kapasitas  proliferasi  sel-  sel  di  dalam  lokasi luka,  dan  gangguan  perfusi  (Demidova-Rice  et.al.,  2012).  Sel-  sel  punca  epidermis  berada pada  daerah  tonjolan  folikel  rambut, interfollicular  epidermis ,  kelenjar  sebasea  dan didapatkan  juga  pada  sel-  sel  mononuklear  dalam  darah  perifer.  Sel-  sel  punca  keratinosit tersebut  berproliferasi  dan  berdiferensiasi  menjadi  sel  dewasa,  dapat  dideteksi  dengan marker  p63,  di  mana  p63  juga  merupakan  faktor  transkripsi  (Marasso  and  Tomic-Canic, 2005; Nair and Krishnan, 2013). Ekspresi TGF-β1 tidak meningkat pada ulkus kaki diabetik dibandingkan  dengan  jaringan  kulit  penderita  diabetik  dan  yang  sehat.  Kurangnya up- regulation TGF-β1  pada  ulkus  kaki  diabetes  menjelaskan  gangguan  penyembuhan  luka
kronik  ini  (Jude  et.al.,  2002).  TGF-β1  adalah  stimulator  terpenting  untuk  sintesis  kolagen dan  proteoglikan  serta  mencegah  kerusakan  matrik  ekstraseluler,  mendorong  migrasi keratinosit dan reepitelisasi pada luka partial thickness hewan coba tikus. Autoinduksi TGF- β1 pada sel keratinosit kulit murine, terjadi induksi maksimal TGF-β1 yang terjadi antara 12 dan 24 jam dan membutuhkan sintesis protein (Bascom et.al., 1989). Penelitian pada hewan coba  tikus  dan  guinea  pig,  curcumin  mempercepat  penyembuhan  luka punch  out dibandingkan  dengan  kontrol.  Biopsi  pada  luka  menunjukkan  reepitelisasi  epidermis peningkatan  migrasi  berbagai  sel  yaitu  miofibroblas,  fibroblas  dan  makrofag  ke  dalam daerah  luka.  Berbagai  daerah  luka  menunjukkan  banyak  neovaskularisasi,  dan  pada pengecatan  Masson’s  Trichrome  menunjukkan  deposisi  kolagen  yang  lebih  banyak  pada pengaplikasian  curcumin.  Pengecatan  imunohistokimia  menunjukkan  peningkatan  ekspresi transforming  growth  factor-beta 1  (TGF-β1)  pada  pengaplikasian  curcumin  (Sidhu  et.al., 1999).
Selama penyembuhan luka, semua respon seluler terutama dikoordinasi oleh sel- sel punca  mesenkimal  yang  mencetuskan  signal  parakrin  dan  melibatkan  sel-sel  punca hematopoiesis,  sel-sel  punca  folikel  rambut,  sel-sel  prekursor  endotelial  dan  sel-sel  punca epidermal. Reepitelisasi diorkestrai oleh proliferasi dan migrasi keratinosit yang berkorelasi dengan  ekspresi  p63,  suatu  marker  dari  sel-sel  tidak  terdiferensiasi  yang  berproliferasi,  dan pertumbuhan  dari  epitel  bertingkat  (Barui  et.al.,2011).  p63  mempunyai  peranan  esensial dalam  perkembangan  epidermal  dengan  meregulasi  program  transkripsinya  yaitu diferensiasi, senescence dan  adesi  pada  berbagai  jaringan  epitelial  dewasa.  Pada  pasien dengan  epidermis  sehat,  p63  menjaga  potensial  sel  progenitor  dengan  menjaga kemampuannya  untuk  membelah  (Demidova-Rice  et.al.,  2012).  Juga  bertanggung  jawab memproteksi fenotipe epitelial dari deplesi karena sel-selnya bermigrasi. Penurunan ekspresi p63 pada pasien dengan ulserasi venosa menyimpulkan insufisiensi protein untuk perawatan autoregenerasi  dan  pembelahan  berkesinambungan;  keduanya  dibutuhkan  untuk  menunjang migrasi  sel-sel  tersebut.  Disimpulkan  adanya  peranan  p63  dalam  regulasi  proses penyembuhan dan patofisiologi dari ulserasi vena tungkai kronik. Ekspresi p63 dikonfirmasi terletak  di  lapisan  suprabasal  dalam  epitelia  yang  telah  mengalami  reepitelisasi  (Kurokawa et.al.,2007).  Pada  penelitian  dengan  hewan  coba  tikus  dengan  perlakuan  luka  bakar  dan diaplikasikan  curcumin  secara  topikal  didapatkan  luka  dengan  aplikasi  curcumin  sembuh lebih  cepat  yang  mengindikasikan  terjadi  peningkatan  jumlah  sel-sel  inflamasi,  deposisi kolagen,  angiogenesis, pembentukan  jaringan granulasi, dan reepitelisasi  yang dikonfirmasi dengan  pemeriksaan  histopatologi  dan  biokimia.  Didapatkan  juga  peningkatan  ekspresi proliferating  cell  nuclear  antigen di  dalam  jaringan  kulit  dari  hewan  coba  yang  diberi aplikasi curcumin (Kulac  et. al., 2013).
Masalah  dalam  penelitian  ini  yaitu  mencari  perbedaan  ekspresi  TGF-β1,  p63  dan waktu  penyembuhan  luka  dinilai  dari  indikator  faktor-faktor  histopatologi  yaitu  penutupan luka,  inflamasi  dan  penutupan  dermis,  yang  diinduksi  oleh  curcumin  dibandingkan  dengan placebo , pada penyembuhan luka tikus Wistar diabetik.

## 2. METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dikerjakan  dengan  metode  penelitian  quasi  eksperimental  dengan model posttest  only  with  control  group  design ,  di  mana  pengujian  dilakukan  setelah perlakuan dengan kelompok kontrol sebagai pembandingnya.
Populasi  pada  penelitian  ini  adalah  tikus  wistar  usia  12-6  bulan  dengan  berat  250- 300  gram  didapat  dari  penangkaran  di  LPPT  IV  UGM.  Sampel  penelitian  diambil  dari jaringan  lokasi  luka  dan  dibuat  blok  parafin  untuk  pemeriksaan  histopatologi  dan imunohistokimia. Kriteria inklusi: Tikus wistar jantan, kondisi sehat (bergerak dengan aktif). Kriteria eksklusi: Tikus wistar jantan menunjukkan perubahan perilaku (aktivitasnya tampak lemah dan malas).
Salep  berisi  curcumin  dan  salep  berisi  vaselin  (placebo)  disiapkan.  Curcumin diperoleh  dengan  cara  mengekstrak  metabolit  sekunder  dari  kunyit  (curcuma  longa) kemudian  difraksinasi  dengan  etil  asetat.  Pembuatan  salep  curcumin  dilakukan  di  Fakultas Farmasi UGM dan LPPT I UGM.
Induksi  diabetes  dengan  Streptozotocin  40mg/kgBB  dosis  tunggal.  Sepuluh  hari setelah  kadar  glukosa  darah  mencapai  dua  kali  dari  level  gula  darah  awal,  tikus  wistar digunakan sebagai hewan coba.
Sejumlah  dua  hewan  coba  tikus  wistar  jantan  diabetik  tanpa  perlakuan  dikerjakan eksisi pada hari ke 30 dan dilanjutkan pemeriksaan histopatologi dan imunohistokimia. Tiga puluh  tikus  wistar  diabetik  dikerjakan  injeksi  streptozotocin  sesuai  prosedur  untuk menginduksi diabetes. Lima belas hewan coba tikus wistar jantan dengan perlakuan diabetik dilakukan  insisi  berdasarkan  prosedur,  kemudian  diberikan  placebo  satu  hari  sekali,  dan dilakukan  pengambilan  tiga  sampel  sesuai  prosedur  setiap  hari  ke-1,  3,  12,  18  dan  30. Sampel diberi label A. Lima belas hewan coba tikus wistar jantan dengan perlakuan diabetik dilakukan  insisi  berdasarkan  prosedur,  kemudian  diberikan  salep  curcumin  satu  hari  sekali. Sampel diberi  label B. Tiga hewan  coba dieksisi  sesuai prosedur  setiap hari  ke-1, 3, 12, 18 dan 30.  Sampel A dan B dikerjakan pemeriksaan histopatologi dengan pewarnaan H&E dan pengecatan imunohistokimia TGF-beta1 dan p63.
Insisi  dilakukan  dengan  anestesi  umum  menggunakan  ketalar  2  mg  intraperitoneal. Setelah  hipoestesia  tercapai,  rambut  pada  regio  tulang  belakang  di  punggung  paling  atas dicukur,  kemudian  dilakukan  insisi  sepanjang  2  cm  sampai  seluruh  ketebalan  kulit (epidermis sampai hipodermis) terpisah (Braiman-Wiksman et.al., 2007; Lima et.al., 2012).
Salep  curcumin  (0,1%  salep  dalam  dasar  vaselin)  diaplikasikan  pada  luka  sehari sekali,  tipis-tipis  menutupi  seluruh  permukaan  luka.  Luka  dibiarkan  terbuka,  tidak  ditutup dengan  penutup  apapun.  Pengaplikasian  salep  curcumin  dilakukan  sampai  hewan  coba mendapatkan perlakuan eksisi (Mani et.al., 2002).
Pengambilan  jaringan  luka  dilakukan  dengan  mengorbankan  hewan  coba menggunakan eter. Setelah efek tercapai, dilakukan eksisi pada bagian luka yang paling luas dengan mengikutsertakan jaringan kulit normal. Jaringan hasil eksisi segera dibentangkan di kertas  untuk  mempermudah  pemotongan  dengan microtome ,  kemudian  difiksasi  dalam formalin  buffer 10%  dan  dibuat  blok  parafin,  kemudian  dipotong  dengan  ketebalan  4-6 mikron untuk dilakukan pemeriksaan histopatologi dan imunohistokimia.
Variabel penelitian adalah: variabel bebas: placebo (vaselin album), salep curcumin 0,1%;  dan  variabel  tergantung:  ekspresi  TGF-β1,  p63,  waktu  penutupan  luka,  tingkat inflamasi, dan penutupan dermal.
Penghitungan  densitas  ekspresi  TGF  beta  1  dengan  cara  semiquantitatif.  Intensitas ekspresi  diskor  4  yaitu  0  bila  tidak  ada  ekspresi  pada  sel;  1  bila  pewarnaan  lemah;  2  bila pewarnaan sedang; 3 bila pewarnaan kuat. Persentasi sel yang terwarnai diskor: 0 bila tidak ada ekspresi pada sel; 1 bila < 33% ekspresi pada sel; 2 bila 33- 66% ekspresi pada sel, 3 bila >66%  ekspresi  pada  sel.  Dihitung  pada  100  sel  pada  daerah  hot  spot.  Kemudian  dijumlah bila  skor  0-1:  negatif,  2:  positif  lemah,  3-4: positif  sedang,  5-6:  positif  kuat  (Culhaci  et.al., 2005). Ekspresi TGF beta 1 diekspresikan pada fibroblast, neutrofil, limfosit, sel plasma dan makrofag (Epivatianos et.al., 2013; Brandes   et.al., 1991). Pada penelitian ini ekspresi TGF beta  1  pada  fibroblast  yang  dihitung  dan  diekspresikan  pada  sitoplasma  dan  membran sitoplasma.
Penghitungan  ekspresi  p63  secara  semikuantitatif  pada  sel-sel  basal  dan  suprabasal epidermis serta pada epitel di tonjolan folikel rambut : 0 bila tidak ada ekspresi pada sel;  +1 bila <10% ekspresi sel positif; +2 bila 10-50% ekspresi pada sel; +3 bila >50% ekspresi pada sel.  Intensitas  diskor  0  bila  tidak  ada  ekspresi  pada  sel;  +1  bila  ekspresi  lemah;  +2  bila ekspresi sedang; +3 bila ekspresi kuat. Dihitung pada 100 sel dari daerah hot spot. Kemudian
dijumlah bila skor 0-1: negatif, 2: positif lemah, 3- 4: positif sedang, 5- 6: positif kuat (Das et.al., 2010).
Waktu  penutupan  luka  merupakan  waktu  yang  dibutuhkan  untuk  terbentuknya jaringan  granulasi  dengan  baik  (100%).  Jaringan  granulasi  dianggap  terbentuk  dengan  baik setelah  parameter  berikut  ini  terpenuhi:  (a)  lapisan  yang  kontinu  dari  jaringan  granulasi sepanjang kedalaman luka, (b) lapisan jaringan granulasi memenuhi seluruh kedalaman luka. Bila polanya  setempat-  setempat, dianggap negatif.  Inflamasi dilihat melalui tiga parameter yaitu:  (a)  sebukan  leukosit  yang  padat  di  tempat  gap  luka  (>200  sel  dalam  area  tertentu, dengan  pembesaran  200X),  (b)  banyak  leukosit  dalam  pembuluh  darah  pada  gap  luka,  dan (c) abses pada gap luka. Luka dikategorikan sangat terinflamasi bila ada 2 parameter dalam gap  luka(Braiman-Wiksman  et.al.,  2007).  Penutupan  dermal  dilihat  menggunakan pewarnaan  H&E,  dengan  mengukur  penutupan  gap  luka  menggunakan  ukuran  milimeter pada  mikroskop  binokuler  (Olympus  CX21)  dengan  pembesaran  40X.  Luka  dengan  gap kurang dari 2 mm antara dua tepi dermal dianggap telah menutup. Penghitungan jarak celah ditentukan dengan cara mengkonfersi actual field of view (AFV) 5 mikrometer dengan skala yang ada pada program microsoftpaint 2007 . Dengan perbesaran 100% pada microsoftpaint 2007 , satu kotak  kecil = 1,875 mm. Bila 5 mikrometer (AFV) = 76 kotak kecil, maka  hasil konfersi adalah 142,5 mm pada monitor.
Rerata  kadar  ekspresi  TGF-β1,  p63,  dan  faktor-faktor  histopatologi  dianalisa menggunakan uji non parametrik marginal homogeneity dan uji korelasi kendall’s tau-b .

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  telaah  artikel  oleh  Gupta  et.al.,  dipertegas  dalam  artikel  oleh  Chitragia  et.al., menyebutkan curcumin mempercepat penyembuhan luka dengan menekan inflamasi, dengan mengatakan  bahwa  neutrofil  dan  makrofag  pada  ulkus  kaki  diabetes  memproduksi  radikal bebas  dan  protease  yang  meningkatkan  inflamasi  dan  menurunkan  penyembuhan  luka. Curcumin  memiliki  aktifitas  antibakterial  terhadap  berbagai  gram  negatif  dan  positif  yaitu Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli  dan  Pseudomonas  yang  merupakan  organisme tersering ditemukan pada ulkus kaki diabetik. Pada hari ke-7 dan ke-11, luka diabetes yang diolesi  curcumin  menunjukkan  jaringan  granulasi  padat,  peningkatan  migrasi  berbagai  sel yaitu  fibroblast  dan  miofibroblas,  peningkatan  jumlah  pembuluh  darah  dan  peningkatan kandungan kolagen (Chitragari  et.al., 2013). Pada penelitian yang dikerjakan oleh Dwivedi dan  Chaudhary,  luka  pada  tikus  diabetik  diterapi  dengan Azadirachta  indica dan Curcuma longa ,  tidak  didapatkan  debris  nekrotik  dan  neutrofil  pada  hari  ke-14.  Kurkumin meningkatkan  reepitelisasi,  memperbaiki  neovaskularisasi,  dan  meningkatkan  migrasi berbagai sel pada penyembuhan luka kulit. Hal ini disebabkan karena peningkatan level TGF beta1 (Zhang  et.al., 2013).
Pada  penelitian  ini  ketiga  sampel  A  terinflamasi  berat  pada  hari  pertama  dan  satu sampel pada hari ketiga serta satu sampel hari ke 18 terinflamasi, sisa sampel hari ketiga, ke- 12,  ke-18,  ke-30  tidak  terinflamasi.  Pembentukan  jaringan  granulasi  ketiga  sampel  A  pada hari  pertama  dan  satu  sampel  hari  ke-3  luka  belum  tertutup  jaringan  granulasi,  sisa  sampel hari  ke-3,  hari  ke-12,  hari  ke-18,  hari  ke-30  sudah  tertutup  jaringan  granulasi.  Penutupan dermis  pada  sampel  A  ketiga  sampel  hari  pertama  dan  hari  ke-3  belum  menutup,  dermis menutup pada semua  sampel pada  hari ke-12, ke-18, ke-30. Ekspresi TGF beta-1 pada hari pertama  ketiga  sampel  kuat,  hari  ke-3  satu  sampel  sedang  dua  sampel  negatif,  hari  ke  dua belas ketiga sampel negatif, hari ke-18 dan ke-30 semua sampel terekspresi kuat.
Pada hewan coba diabetik diterapi salep kurkumin yaitu sampel B, pada hari pertama 1  sampel  terinflamasi  berat  dua  sampel  terinflamasi,  hari  ke-3  ketiga  sampel  terinflamasi berat, pada hari ke-12 satu sampel terinflamasi berat  dua sampel terinflamasi, pada hari ke- 18  dan  ke-30  semua  sampel  tidak  terinflamasi.  Pembentukan  jaringan  granulasi  sampel  B, pada  hari  pertama  ketiga  sampel  belum  menutup,  hari  ke-3,  ke-12,  ke-18,  ke-30  semua
sampel  telah  menutup.  Pembentukan  dermis  pada  sampel  B  hari  ke-1,  ke-3,  ke-12  semua sampel  belum  menunjukkan  penutupan  dermis,  hari  ke-18  dan  ke-30  semua  sampel  telah menunjukkan penutupan dermis. Ekspresi TGF beta1 sampel B hari ke-1 menunjukkan dua sampel terekspresi kuat 1 sampel negatif, hari ke-3 dua sampel terekspresi kuat satu sampel terekspresi  sedang,  hari  ke-12  dua  sampel  terekspresi  kuat  satu  sampel  terekspresi  sedang, hari  ke-18  dua  sampel  terkespresi  kuat  satu  sampel  negatif,  hari  ke-30  satu  sampel terekspresi kuat 2 sampel negatif.
Penelitian ini tidak sesuai dengan teori di atas dan menunjukkan inflamasi sampel B cenderung  lebih  berat  dibandingkan  sampel  A  tanpa  terapi  kurkumin,  meskipun  tidak bermakna  secara  statistik  uji marginal  homogeneity 0,197.  Peningkatan  inflamasi  ini, dimungkinkan  karena  terjadi  infeksi,  sehingga  pembentukan  jaringan  granulasi  sampel  A cenderung  lebih  cepat  dibandingkan  sampel  B  meskipun  tidak  bermakna  secara  statistik dengan  uji marginal  homogeneity 0,317,  sedang  penutupan  dermis  sampel  B  lebih  lama dibandingkan  sampel  A  dengan  uji marginal  homogeneity 0,083.  Ekspresi  TGF  beta1 sampel  B  dibandingkan  sampel  A  tidak  didapatkan  perbedaan  dengan  uji marginal homogeneity 0,814.
Pada  penelitian  ini  sampel  A  ekspresi  p63  hari  pertama,  1  sampel  ekspresi  kuat  2 sampel ekspresi sedang, hari ke-3 1 sampel ekspresi kuat 2 sampel ekspresi sedang, hari ke- 12  2  sampel  ekspresi  kuat  1  sampel  ekspresi  sedang,  hari  ke-18  2  sampel  ekspresi  kuat  1 sampel ekspresi sedang, hari ke-30 ketiga sampel ekspresi kuat. Sedangkan p63 pada semua sampel B terekspresi kuat. Sehingga didapatkan perbedaan ekspresi p63 antara sampel A dan sampel B, dengan uji marginal homogeniti 0,025.

## Tabel I. Inflamasi dengan hari penyembuhan luka
Sangat terinflamasi 3/1 1/3 0/1 0/0 0/0 Terinflamasi 0/2 0/0 0/2 0/0 0/0 tidak terinflamasi 0/0 2/0 3/0 3/3 3/3 Hari ke 1  Hari ke 3  Hari ke 12 Hari ke 18 Hari ke 30 Tabel II. Ekspresi TGF beta satu dengan hari penyembuhan luka Ekspresi kuat 3/2 0/2 0/2 3/2 3/1 Ekspresi sedang 0/0 1/1 0/1 0/0 0/0 Ekspresi lemah 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Negatif 0/1 2/0 3/0 0/1 0/2 Hari 1 Hari 3 Hari 12 Hari 18 Hari 30 Keterangan tabel 1 dan 2:  A/B A: DM kurkumin (-), B: DM kurkumin (+) Tabel III. Jaringan granulasi dengan hari penyembuhan Luka sudah menutup 0/0 2/3 3/3 3/3 3/3 Luka belum menutup 3/3 1/0/ 0/0 0/0 0/0 Hari 1 Hari 3 Hari 12 Hari 18 Hari 30 Tabel IV. Penutupan dermis dengan hari penyembuhan luka Sudah menutup 0/0 0/0 3/0 3/3 3/3 Belum menutup 3/3 3/3 0/3 0/0 0/0 Hari 1 Hari 3 Hari 12 Hari 18 Hari 30 Keterangan tabel 3 dan 4. A/B A: DM kurkumin (-), B: DM kurkumin (+)
Tabel V. Ekspresi p63 dengan hari penyembuhan luka Ekpresi kuat 1/3 1/3 2/3 2/3 3/3/ Ekspresi sedang 2/0 2/0 1/0 1/0 0/0 Ekspresi lemah 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Negatif 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Hari 1 Hari 3 Hari 12 Hari 18 Hari 30
Keterangan tabel 5. A/B. A: DM kurkumin (-), B: DM kurkumin (+)

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN
Pada  penelitian  ini  pemberian  salep  kurkumin  meningkatkan  ekspresi  p63  semua pada  semua  sampel  eksisi  kulit  tikus  wistar  diabetik.  Meskipun  demikian  waktu penyembuhan  luka  dan  penutupan  dermis  tikus  wistar  diabetik  yang  diberi  salep  kurkumin maupun  yang  tidak  diberi  salep  kurkumin  tidak  menunjukkan  perbedaan  secara  bermakna, hal  ini  dimungkinkan  karena  adanya  infeksi  pada  luka  kulit  tikus  wistar.  Kurkumin  dapat memodulasi sel punca epitel epidermis di mana, t erapi modulasi stem cells sendiri maupun yang  telah  berdiferensiasi  Transient  Amplifying    (TA)  keratinocyte,  dapat  mempercepat proses penyembuhandengan hasil yang baik (Senoo , 2013).
Peneliti menyarankan penelitian dengan jumlah sampel yang lebih besar dan tertuju pada  satu  kondisi  klinis  dan  satu  waktu  tertentu,  sehingga  khasiat  kurkumin  pada  proses penyembuhan luka dapat benar- benar diketahui.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Barui A, Banerjee P, Das RK, Basu SK, Dhara S, Chatterjee J, 2011. Immunohistochemical Evaluation of p63, E-Chaderin, Collagen I and III Expression in Lower Limb Wound
Healing  under  Honey.  Evidence-Based  Complementary  and  Alternative  Medicine, volume 2011, Article ID 239864, 8 pages.
Bascom  CC,  Wolfshohl  JR, Coffey  Jr  RJ,  Madisen  L,  Webb  NR, Purchio  AR,  Derynck  R, Moses  HL;  1989.  Complex  regulation  of  transforming  growth  factor  beta1,  beta2, beta3 mRNA expression in mouse fibroblas and keratinocyte by transforming factor beta1 and beta2. Molecular and Cellular Biology, volume 9, no12: 5508- 15.
Braiman-Wiksman L, Solomonik I, Spira R, Tennenbaum T; 2007. Novel insight into wound healing sequence of events. Toxicologic Pathology, 35: 767- 79.
Brandes ME, Mai UE, Ohura K, Wahi SM, 1991. Type I transforming factor-beta receptors on  neutrophil  mediate  chemotaxis  to  transforming  growth  factor  beta;  Journal  of Immunology, 147(5): 1600-6.
Chitragari G, Sumpio BJ, Sumpio BE, 2013. Indian Spices for Management of Diabetic Foot Complications. Angiology, volume 1, issue 2, 1000114.
Clayton  W,  Elasy  TA,  2009.    A  Review  of  the  Pathophysiology,  Classification,  and Treatment of Foot Ulcers in Diabetic Patients. Clinical Diabetes, volume 27, number 2: 52- 8.
Culhaci  N,  Sagol  O,  Karademir  S,  Astarcioglu  H,  Astarcioglu  I,  Soyturk  M  et  al  2005. Expression  of  transforming  growth  factor  beta-  1  and  p27 Klp  I in  pancreatic adenocarcinoma:  relation  with  cell-  cycle  associated  proteins  and  clinicopathologic characteristics. Boston Medical Center Cancer, 5:98.
Das  RK,  Venkatraghavan  V,  Sheet  D,  Chakraborty  C,  Ray  AK,  Chatterjee  J,  2010.
Evaluation  of  p63  Expression  in  Oral  Sub-mukus  Fibrosis.  Proceedings  of  2010 International Conference on Systems in Medicine and Biology.
Demidova-Rice TN, Durham JT, Herman IM, 2012.Wound Healing Angiogenesis: Inovation and  Challenges  in  Acute  and  Chronic  Wound  Healing.  Advances  In  Wound  Care, volume 1, number 1, doi: 10.1089/wound.2011.0308.
Dwivedi  VK,  Chaudhary  M,  2012.  Comparative  wound  healing  efficacy  of  ampucare  and becaplermin  in  diabetic  rat.  African  Journal  of  Pharmacy  and  Pharmacology,  vol  6 (12): 883- 892.
& Therapy, 4: 38.
Epivatianos  A,  Andreadis  D,  Iordanidis  S,  2013.  Myofibroblasts  and  Transforming  Growth Factor-Beta  1  in  Reactive  Gingival  Overgrowths.  Journal  of  Oral  &  Maxillofacial Research, vol.4, no 1, e3.
Gupta SC, Patchva S, Koh W, Aggarwal BB, 2012. Discovery of Curcumin, a Component of the  Golden  Spice,  and  Its  Miraculous  Biological  Activities.  Clinical  and Experimental Pharmacology and Physiology, 39 (3): 283- 299.
Jude  EB,  Blakytny  R,  Bulmer  J,  Boulton  AJ,  Ferguson  MW,  2002. Transforming  growth factor-beta 1, 2, 3 and receptor type I and II in diabetic foot ulcers. - Diabet. Med. - ; 19(6); 440-7.
Kulac M, Aktas C, Tulubas F, Uygur R, Kanter M, Erboga M, Ceber M, Topcu B, Ozen OA, 2013.  The  effects  of  topical  tratment  with  curcumin  in  burn  wound  healing  in  rats. Journal of Molecular Histology, 44 (1): 83- 90.
Kurokawa I, Mizutani H, Kusumoto K, Nishijima S, Tsujita-Kyutoku M, Shikata N, Tsubara A,  2007.  Cytokeratin,  filaggrin,  and  p63  expression  in  reepithelialiation  during human cutaneous wound helaling. Wound Repiar Regen, 14 (1): 38- 45.
Lima  MHM,  Caricilli  AM,  de  Abreu  LL,  Araujo  EP,  Pelegrinelli  FF,  Thirone  ACP,
Tsukumo  DM,  Pessoa  AFM,  dos  Santos  FM,  de  Moraes  MA,  Carvalheira  JBC, Velloso LA, Saad MJA, 2012. Topical insulin accelerates wound healing in diabetes by  enhancing  the  AKT  and  ERK  pathway:  Adoouble-blind  placebe-controlled clinical trial. PLoS ONE 7(5): e36974.
Mani  H,  Sidhu  GS,  Kumari  R,  Gaddipati  JP,  Seth  P,  Maheshwari  RK,  2002.  Curcumin differentially  regulates  TGF-β1,  its  receptors  and  nitric  oxide  synthase  during impaired wound healing. BioFactors 16; 29- 43.
Marasso  MI,  Tomic-Canic  M,  2005.  Epidermal  stem  cells:  the  cradle  of  epidermal determination,
differentiation and wound healing. Biology of the Cell, 97: 173- 83. Nair  RP,  Krishnan  LK,  2013.  Identification  of  p63 + keratinocyte  progenitor  cells  in circulation  and  their  matrix-directed  differentiation  to  epithelial  cells.  Stem  Cell Research
Sidhu  GS,  Mani  H,  Gaddipati  JP,  Singh  AK,  Seth  P,  Banaudha  KK,  Patnaik  GK, Maheshwari RK, 1999. Curcumin enhances wound healing in streptozotocin induced diabetic rats and genetically diabetic mice. Wound Repair and Regeneration, volume 7, Issue 5; 362- 74.
Senoo  M,  2013.  Epidermal  Stem  Cells  in  Homeostasis  and  Wound  Repair  of  the  Skin.
Advance in Wound Care, volume 2, number 6.
Yasa IWP, Suastika K, Djelantik AAGS, Astawa IYM, 2009. Hubungan positif antara ulkus kaki  diabetic  dengan  presentase  sel  bermarka  CD4+  pembawa  malondialdehid. Journal of Internal Medicine, 10(1): 1-21
Zhang  DW,  Fu  M,  GaoSH,  Liu  JL,  2013.  Curcumin  and  Diabetes:  A  Systemic  Review. Hindawi  Publishing  Corporation  Evidence-Based  Complementary  and  Alternative Medicine, colume 2013, article ID 63603.