Menara Perkebunan 2011, 79(1), 15-22
Pengaruh jenis penutup botol kultur terhadap pertumbuhan planlet kelapa sawit ( Elaeis guineensis Jacq.)
Effect of different culture vessel closures on the growth of oil palm ( Elaeis guineensis Jacq.) plantlets

## Masna Maya SINTA, Imron RIYADI & SUMARYONO
Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan, Jl. Taman Kencana No.1, Bogor 16151, Indonesia
Diterima 10 Februari 2011/Disetujui 26 April 2011

## Abstract
Microenvironment  inside  the  culture  vessel  such  as temperature,  light  intensity,  relative  humidity,  and  aeration affect  growth  and  development  of  plantlets.  This  experiment was  conducted  to  determine  the  effect  of  different  culture vessel  closures  on  microenvironmental  conditions  inside  the vessel  and  on  growth  of  plantlets  of  oil  palm.    Shoots  of  oil palm  derived  from  somatic  embryos  were  cultured  on  DF medium  for  eight  weeks  in  transparent  culture  bottles covered with five different vessel closures e.i. screw cap with plastic  wrap,  screw  cap,  plastic  wrap,  aluminum  foil,  and autoclavable  plastic.  The  culture  vessels  were  placed  in  the culture room with light intensity 20 µmol/m 2 /sec for 12 hours photoperiod,  at  room  temperature  26°C.  Parameters observed on plantlet growth were shoot height, biomass fresh weight,  leaf  number,  and  leaf  color  grade,  while  on microenvironment  were  temperature  and  light  intensity.  At the  end  of  experiment,  the  volume  and  fresh  weight  of  the remaining  medium  were  measured  to  determine  evaporation rate of each treatment. Results show that the use of different culture  vessel  closures  affected  the  microenvironment inside the  vessel,  the  volume  of  the  remaining  medium,  and  the growth  of  the  plantlets.  The  closure  increased  the temperature by 1.6 – 2.6°C and decreased the light intensity by  1.7  –  8.7  µmol/m 2 /sec  inside  the  culture  vessels  depends on the culture vessel closures. Culture vessels with aluminum foil  closure  had  the  lowest  temperature  (28.9°C)  and  the lowest light intensity (10.8 µmol/m 2 /sec) gave the best result in  the  growth  of  the  plantlets.  Better  plantlets  growth  was also  observed  in the  culture  vessel  with  autoclavable  plastic closure  that  less  expensive,  therefore  it  can  be  used  as  an alternative vessel closure for the growth of oil palm plantlets.
[ Key  words: Elaeis  guineensis ,  microenvironment, in  vitro culture ]

## Abstrak
Lingkungan  mikro  di  dalam  botol  kultur  seperti  suhu, intensitas  cahaya,  kelembaban  nisbi  dan  aerasi  mem- pengaruhi pertumbuhan dan perkembangan planlet. Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh penggunaan  penutup  botol  kultur  yang  berbeda  terhadap kondisi  lingkungan  mikro  di  dalam  botol  kultur  dan pertumbuhan  planlet  kelapa  sawit.  Planlet  kelapa  sawit  asal embrio  somatik  dikulturkan dalam botol  kultur bening  berisi medium DF selama delapan minggu dan ditutup menggunakan  lima  jenis  penutup  botol  yang  berbeda  yaitu
tutup  ulir  dengan  plastik wrap ,  tutup  ulir,  plastik wrap , aluminium  foil  dan  plastik  tahan  diautoklaf.  Kultur diletakkan  dalam  ruang  kultur,  di  bawah  lampu  TL  dengan intensitas  cahaya  20  µmol/m 2 /detik  dan  suhu  ruang  26 o C. Parameter  pertumbuhan  planlet  yang  diamati  adalah  tinggi planlet,  bobot  basah,  jumlah  daun  dan  kelas  warna  daun, sedangkan  lingkungan  mikro  adalah  suhu  dan  intensitas cahaya.  Pada  akhir  eksperimen,  volume  dan  bobot  basah medium  yang  tersisa  diukur  untuk  mengetahui  tingkat penguapan pada setiap perlakuan. Hasil penelitian menunjuk- kan  bahwa  penggunaan  penutup  botol  yang  berbeda berpengaruh  terhadap  lingkungan  mikro,  volume  medium tersisa dalam  botol kultur  dan  pertumbuhan  planlet. Penutup botol  meningkatkan  suhu  1,6  –  2,6 o C  dan  menurunkan intensitas  cahaya  1,7  –  8,7  µmol/m 2 /detik  di  dalam  botol tergantung  pada  jenis  penutup  botol  yang  digunakan.  Botol kultur  dengan  penutup  berbahan  aluminium  foil  mempunyai intensitas  cahaya  terendah  (10,8  µmol/m 2 /detik)  dan  suhu terendah (28,9 o C) memberikan hasil terbaik pada pembesaran planlet  kelapa  sawit.  Pertumbuhan  planlet  yang  baik  juga terdapat  pada  botol  kultur  dengan  penutup  plastik  tahan diautoklaf  yang  lebih  murah,  sehingga  penutup  ini  dapat digunakan  sebagai  pilihan  untuk  pembesaran  planlet  kelapa sawit.
[Kata  kunci: Elaeis  guineensis ,  lingkungan  mikro,  kultur in vitro ]

## Pendahuluan
Kelapa  sawit  merupakan  tanaman  tahunan penghasil  minyak  komersial  yang  paling  penting  di Indonesia.  Perbanyakan  kelapa  sawit  pada  umumnya menggunakan  benih  hibrida  Tenera,  yaitu  hasil  per- silangan  antara  jenis  Dura  dan  Pisifera.  Perbanyakan kelapa  sawit  secara in  vitro melalui  teknik  embrio- genesis somatik telah banyak dilakukan (Kancanapoom &  Chourykaew,  1998;  Rival,  2000;  Sumaryono et  al., 2008).  Keuntungan  teknik  kultur  jaringan  adalah produksi  bibit  secara  klonal  sehingga  secara  genetik seragam,  dilakukan  dalam  skala  besar  dan  bibit  bebas dari  hama  dan  penyakit.  Persyaratan  yang  diperlukan dalam kultur jaringan tanaman adalah (1) ketersediaan hara, air dan zat pengatur tumbuh (2) lingkungan mikro yang  sesuai  dan,  (3)  bebas  dari  kontaminan (Ahloowalia & Savangikar, 2002).
Pengaruh jenis penutup botol kultur terhadap pertumbuhan planlet ……………( Sinta et al.)
Kultur in  vitro di  laboratorium  seperti    miniatur “rumah   kaca”.  Lingkungan mikro pada kultur in vitro merupakan lingkungan yang dibatasi oleh suatu wadah yang  menyebabkan  kultur  menjadi  terpisah  dari lingkungan  luar.  Wadah  yang  digunakan  umumnya adalah botol kaca atau plastik dengan bentuk bulat atau kotak  (Chen,  2003).  Lingkungan  mikro  yang  mem- pengaruhi  pertumbuhan  planlet  antara  lain  suhu, kelembaban  udara,  iradiasi,  pertukaran  udara,  karbon dioksida,  dan  etilen  (Chen,  2003;  2004;  Huang  & Chen, 2005; Chen et al ., 2006).
Persyaratan botol  yang digunakan dalam kultur in vitro adalah  dapat  melewatkan  cahaya,  mampu  meng- isolasi  medium  dari  kehilangan  air,  mencegah  konta- minasi,  memungkinkan  pertukaran  udara  dan  me- nyediakan  area  tumbuh  yang  mencukupi  (Smith  & Spomer,  1995).  Penutup  botol  kultur  yang  digunakan umumnya  sangat  rapat  terutama  untuk  mencegah kontaminasi  dari  luar.  Penggunaan  penutup  yang terlalu  rapat  dapat  menghalangi  pertukaran  udara  luar dan  dalam  botol,  meningkatkan  kelembaban,  dan meningkatkan  kandungan  etilen  yang  dapat  mem- pengaruhi  pertumbuhan  planlet  (Jackson,  2003). Lingkungan  di  luar  botol  dan  kondisi  botol  kultur mempengaruhi  lingkungan  mikro  kultur in  vitro . Penguapan  juga  dapat  terjadi  pada  medium,  yang lajunya  dipengaruhi  oleh  suhu,  kelembaban  udara  dan iradiasi (Chen, 2004). Suhu di dalam botol kultur dapat lebih tinggi hingga  3 o C dibanding di luar botol (Chen, 2003).  Laju  fotosintesis  planlet  dipengaruhi  oleh kondisi  lingkungan  mikro,  sirkulasi  udara  antara lingkungan  di  dalam  kultur  dan  di  luar  kultur, konsentrasi  karbon  dioksida  dan  konsentrasi  gula dalam medium (Ibaraki, 2006).
Penutup  botol  menentukan  daya  hidup  dan perkembangan  planlet  serta  mencegah  terjadinya kontaminasi pada kultur microcutting karet (Nurhaimi- Haris et  al. ,  2009).  Penggunaan  tutup  botol  yang berbeda  akan  mempengaruhi  intensitas  cahaya  yang masuk  ke  dalam  kultur.  Spektrum  cahaya  yang diterima planlet dipengaruhi oleh bahan botol dan tutup botol kultur (Huang & Chen, 2005). Lingkungan mikro kultur in  vitro yang  tidak  sesuai  dapat  memberikan dampak  negatif  terhadap  pertumbuhan  planlet  seperti rendahnya  lapisan  kutikula  epidermis  sel,  disfungsi stomata, hyperhidricity planlet  yang  menyebabkan rendahnya  daya  hidup  planlet  pada  saat  aklimatisasi (Cassel  &  Walsh,  1994;  Lucchesini  &  Mensuali-Sodi, 2004;  Hazarika,  2006).  Beberapa  penelitian  mengenai lingkungan  mikro  telah  dilakukan  untuk  mendapatkan planlet dengan kualitas tinggi. Tutup botol berventilasi biasa digunakan untuk mengurangi hyperhydricity pada planlet serta meningkatkan daya hidup planlet (Casells & Walsh, 1994; Lai et al ., 2006).
Teknik  kultur in  vitro membutuhkan  biaya  yang cukup  tinggi.  Penghematan  produksi  bibit  melalui
kultur in  vitro perlu  dilakukan  sesuai  prinsip  efisiensi biaya    kultur in  vitro .  Prinsip  kultur in  vitro adalah produksi  planlet  secara  hemat  baik  dari  segi  teknis maupun  bahan  peralatan  yang  digunakan  tanpa mengurangi kualitas planlet yang dihasilkan (Savangikar,  2002).  Penutup  botol  kultur  merupakan salah  satu  komponen  bahan  yang  mahal  terutama dalam produksi benih skala besar.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh  penggunaan  penutup  botol  terhadap  ling- kungan mikro serta pertumbuhan planlet kelapa sawit.

## Bahan dan Metode

## Bahan tanam dan kondisi kultur
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biak Sel &  Mikropropagasi,  Balai  Penelitian  Bioteknologi Perkebunan  Indonesia,  Bogor.  Bahan  tanam  yang digunakan  berupa  tunas  (planlet  tanpa  akar)  kelapa sawit  yang  berasal  dari  embrio  somatik  dengan  tinggi rata-rata  1  cm  dan  memiliki  dua  daun  (Gambar  1a). Embrio  somatik tersebut  merupakan hasil  induksi  dari kalus  noduler  yang  diinisiasi  dari  daun  pupus  kelapa sawit  klon  MK  649  berasal  dari  Balai  Penelitian Marihat, Pusat Penelitian Kelapa Sawit, Medan.
Planlet  terpilih  dikulturkan  dalam  botol  berisi medium  DF  (de  Fossard,  1974)  yang  ditambahkan sukrosa 30 g/L (3 %), arang aktif 1 g/L, BA 0,5 mg/L, dan  GA 3 0,5  mg/L.  pH  medium  diatur  5,7,  kemudian ditambahkan gelrite 3 g/L. Medium disterilisasi dalam autoklaf  dengan  tekanan  1  atm  pada  suhu  120 o C selama  20  menit.  Medium  tersebut  dituangkan  dalam botol  kaca  bening  dengan  ukuran  tinggi    9  cm  dan diameter  5,5  cm,  dengan  volume  45  mL  per  botol. Setiap  botol  berisi  lima  planlet  kelapa  sawit dikulturkan  di  dalam  ruang  terang  13  cm  di  bawah lampu  TL  36  watt  dengan  periode  penyinaran  12  jam dan suhu ruangan 26 ± 1 o C.

## Perlakuan
Perlakuan jenis penutup botol yang diuji adalah (1) Tutup  ulir dan  plastik wrap (tutup  ulir  berwarna  putih berbahan polipropilen dibalut plastik wrap pada daerah pertemuan antara tutup dan botol), (2) Tutup ulir (tutup ulir  berwarna  putih  berbahan  polipropilen),  (3)  Plastik wrap (potongan  dua  lembar  plastik wrap berbahan polivinil klorida dengan ketebalan 0,01 mm yang diikat dengan  karet  gelang),  (4)  Aluminium  foil  (potongan satu  lembar  aluminium  foil heavy  duty dengan ketebalan  0,02  mm  yang  diikat  karet  gelang),  dan  (5) Plastik tahan diautoklaf  (potongan dua lembar plastik transparan  tahan  perlakuan  sterilisasi  dalam  autoklaf yang diikat dengan karet gelang).

## Menara Perkebunan 2011, 79(1), 15-22
Gambar  1.  Kultur in  vitro planlet  kelapa  sawit  (a)  Kondisi  awal  planlet  kelapa  sawit  di  botol  kultur  dengan  lima  tutup berbeda, dari  kiri ke  kanan  berurut-turut: tutup ulir dengan plastik wrap , tutup ulir,  plastik wrap ,  aluminium foil  dan  plastik  tahan diautoklaf. (b)  Kondisi  planlet dan medium delapan minggu setelah tanam.
Figure  2. In  vitro culture  of  oil  palm  plantlets  (a)  Initial    condition    of    oil  palm  plantlet  in  culture  vessel    with  five different closures from  left to right: screw cap and   plastic wrap,  screw cap, plastic  wrap, aluminum foil, and autoclavable plastic, respectively, (b) Plantlets and media condition  eight- weeks old  after planting.

## Intensitas cahaya dan suhu
Intensitas  cahaya  pada  permukaan  medium  di dalam botol kultur diukur dengan menempatkan sensor kuantummeter  dari  alat  lightmeter  LI-COR  250  pada tiap botol sesuai perlakuan. Botol kultur ditempatkan di ruang  kultur  di  bawah  dua  lampu  TL  36  watt  dengan suhu  ruangan  26 o C.  Pengukuran  intensitas  cahaya dalam  botol  tanpa  tutup  juga  dilakukan  sebagai perbandingan. Pengukuran intensitas cahaya dilakukan pada  sembilan  titik  lokasi  di  bawah  lampu  sebagai ulangan.  Suhu  di  dalam  botol  diukur  dengan menempatkan ujung sensor dari termometer digital HI- 9040  dalam  botol  kultur  yang  berisi  planlet. Pengamatan  suhu  dilakukan  selang  satu  jam  selama sepuluh  jam  untuk  mengetahui  perubahan  suhu  di dalam botol kultur selama periode pencahayaan.

## Pertumbuhan planlet
Pengamatan  pertumbuhan  planlet  dilakukan  pada minggu  ke-8  setelah  kultur  untuk  mengetahui  kondisi kultur  dengan  parameter  tinggi  planlet,  bobot  basah dan  kelas  warna  daun.  Kelas  warna  daun  ditentukan dengan  menggunakan  bagan  warna  daun  yang dikeluarkan  IRRI  dengan  skala  dua  (hijau  muda) sampai dengan lima (hijau tua).

## Perubahan bobot dan volume medium
Bobot  dan  volume  medium  pada  akhir  penelitian pada masing-masing perlakuan diukur untuk mengetahui  kecepatan  pengeringan  medium.  Medium padat  pada  awal  dan  akhir  penelitian  ditimbang  untuk mengetahui  bobot  basah.  Pengukuran  volume  medium dilakukan dengan cara memasukkan medium ke dalam air  50  mL  pada  gelas  ukur,  peningkatan  volume  air merupakan volume medium.

## Analisis statistik
Penelitian  dilakukan  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap    (RAL).  Pertumbuhan  planlet  sawit dilakukan dengan 50 ulangan (10 botol masing-masing lima  planlet)  dan  10  ulangan  untuk  kecepatan pengeringan  medium.  Data  hasil  penelitian  diolah dengan  analisis  ragam.  Perbedaan  antar  perlakuan ditentukan  dengan  uji  jarak  berganda  Duncan  pada taraf uji α = 5 %.

## Hasil dan Pembahasan
Pengaruh  tutup  botol  terhadap  suhu  dan  intensitas cahaya
Penggunaan dua lampu TL 36 watt meningkatkan suhu di lingkungan bawah lampu. Suhu di dalam botol lebih  tinggi  dibandingkan  suhu  lingkungan  ruang kultur  di  luar  botol  (Tabel  1).  Selisih  suhu  antara lingkungan  luar  botol  dan  lingkungan  mikro  di  dalam botol  berkisar  antara  1,6  –  2,6 o C.  Botol  dengan  tutup ulir  berbalut  plastik wrap mampu  menahan  panas paling  baik  (suhu  30 o C).  Terbatasnya  sirkulasi  udara dari  dan  ke  dalam  botol  menyebabkan  suhu  di  dalam botol  menjadi  lebih  tinggi.  Hasil  yang  tidak  berbeda terdapat  pada  botol  dengan  tutup  ulir  tanpa  plastik wrap (29,8 o C).  Suhu  di  dalam  botol  bertutup aluminium  foil  paling rendah  dibandingkan  suhu  pada perlakuan  lain,  yaitu  29 o C.  Hal  ini  terjadi  karena rendahnya intensitas cahaya yang diterima oleh planlet dalam  botol  kultur,  yaitu  sebesar  10,8  µmol/m 2 /detik (Tabel  1).  Iradiasi  dilaporkan  mempengaruhi  suhu  di dalam  botol  (Chen,  2003).  Aluminium  foil  lebih  sulit ditembus    cahaya,    permukaan    aluminium    foil  yang mengkilap  memantulkan  cahaya.  Suhu  di  dalam  botol dengan  tutup  plastik wrap lebih  rendah  dibandingkan
a
b
Pengaruh jenis penutup botol kultur terhadap pertumbuhan planlet ……………( Sinta et al.)
dengan  suhu  di  dalam  botol  bertutup  ulir  meskipun intensitas  cahaya  yang  diterima  kedua  tutup  tersebut sama. Hal ini disebabkan masih terdapatnya pori yang dapat  dilalui  udara,  sehingga  masih  terdapat  sirkulasi udara  yang  lebih  besar  pada  tutup  berbahan  plastik wrap ini.  Pertukaran  udara  dengan  lingkungan  luar menurunkan  suhu  udara  dalam  botol  (Chen,  2003). Hasil  yang  sama  terdapat  pada  botol  bertutup  plastik tahan  diautoklaf.  Kekedapan  dan  tebalnya  tutup  botol ini  menyebabkan  air  yang  sudah  menguap  tidak  bisa keluar.  Hal  ini  menyebabkan  munculnya  embun  di dalam  botol  sehingga  suhu  di  lingkungan  ini  menjadi lebih rendah dibandingkan pada botol bertutup ulir.
Intensitas  cahaya  yang  diterima  planlet  dalam botol  kultur  dengan  dua  lampu  TL  36  watt  relatif rendah  yaitu  antara  10,8  -  17,8  µmol/m 2 /detik  (Tabel 1).  Penggunaan  tutup  botol  menghalangi  masuknya cahaya  ke  dalam  botol  kultur  antara  1,7-8,7  µmol/m 2 / detik  (selisih  intensitas  cahaya  antara  di  luar  dan  di dalam botol). Penggunaan botol kaca juga mengurangi intensitas  cahaya  yang  masuk  sebesar  3,8µmol/m 2 / detik.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  yang  lakukan oleh  Huang  &  Chen  (2003)  bahwa  iradiasi  yang diterima  oleh  planlet  dipengaruhi  oleh  intensitas cahaya dan bahan botol serta penutup yang digunakan.
Fluktuasi  suhu  di  dalam  dan  di  luar  botol  selama sembilan  jam  periode  pencahayaan  dapat  dilihat  pada Gambar  2.  Pagi  hari  sebelum  lampu  dinyalakan,  suhu udara di ruang  kultur adalah  26 o C,  sedangkan  suhu  di dalam  botol  lebih  tinggi  1  –  2 o C.  Peningkatan  suhu dengan  tajam  terjadi  pada  satu  jam  pertama  setelah lampu  dinyalakan  dengan  peningkatan  rata-rata mencapai  2,1 o C,  selanjutnya  peningkatan  suhu menurun  pada  jam  berikutnya.  Dua  jam  setelah
penyinaran,  suhu  di  dalam  botol  relatif  konstan sepanjang periode cahaya (Gambar 2).

## Pengaruh penutup botol terhadap medium
Bobot  basah  dan  volume  medium  di  dalam  botol bertutup  plastik  tahan  diautoklaf  dan  aluminium  foil paling tinggi, yaitu sebesar 39,4 g dan 39,5 mL (Tabel 2). Hasil terendah terdapat pada medium di dalam botol bertutup  plastik wrap ,  yaitu  bobot  15,9  g  dan  volume 16,3  mL  (Gambar  1b).  Bobot  basah  dan  volume medium pada botol  bertutup ulir berbalut plastik wrap dan botol bertutup aluminium foil tidak berbeda nyata. Bobot  basah  dan  volume  medium  pada  botol  bertutup ulir  sedikit  lebih  rendah.  Perbedaan  bobot  basah  dan volume medium pada botol dengan tutup yang berbeda setelah  delapan  minggu  menunjukkan  perbedaan penggunaan  air  oleh  planlet  dan  perbedaan  tingkat penguapan media di dalam botol kultur. Botol bertutup plastik tahan autoklaf memiliki bobot dan volume yang tinggi  karena  tutup  botol  ini  bersifat  kedap,  sehingga uap  air  tidak  bisa  keluar  dari  botol  kultur.  Hasil  yang sama  juga  terjadi  pada  botol  bertutup  aluminium  foil dan  tutup  ulir  dengan  balutan  plastik wrap . Berdasarkan data pada Tabel 1, terlihat  bahwa penutup dengan  bahan  aluminium  foil  lebih  sulit  meneruskan cahaya,  sehingga  intensitas  cahaya  yang  diterima medium  pun  lebih  rendah.  Hal  ini  menyebabkan  laju penguapan  dari  medium  menurun.  Volume  medium pada  botol  bertutup  ulir  lebih  rendah  dibandingkan dengan  botol  bertutup  ulir  yang  dibalut  plastik wrap karena  masih  adanya  sedikit  rongga  sepanjang  ulir yang mampu ditembus uap air. Volume medium tersisa yang terendah terdapat pada botol bertutup
Tabel 1. Pengaruh penutup botol terhadap suhu dan intensitas cahaya di dalam botol kultur Table 1. Effect of culture vessel closure on the temperature and light intensity in the vessel
Perlakuan tutup Closure treatment Suhu Temperature ( o C) Intensitas cahaya (µmol/m 2 /detik) Light intensity (µmol/m 2 /sec) Tutup ulir dan plastik wrap Screw cap and plastic wrap 30,0  a* 16,8  a Tutup ulir  ( Screw cap ) 29,8  a 17,6  a Plastik wrap ( Plastic wrap ) 29,5  b 17,8  a Aluminium foil Aluminum foil 29,0  c 10,8  b Plastik tahan diautoklaf Autoclavable plastic 29,6  ab 17,3  a Di luar botol Outside bottle 27,4  d 19,4  a
*) Angka dalam kolom  yang  sama  diikuti  oleh  huruf  yang  sama  berarti  tidak  berbeda nyata menurut uji jarak berganda Duncan pada α = 0,05.
*)  Means in the same column  followed  by  the same  letters  are not significantly different according to Duncan’s multiple range test at α = 0.05.
Menara Perkebunan 2011, 79(1), 15-22
plastik wrap (Tabel  2),  hal  ini  diduga  karena  adanya pori-pori pada plastik wrap yang masih dapat melewat- kan  uap  air.  Tingginya  penguapan  pada  medium dipengaruhi  oleh  intensitas  cahaya  dan  aerasi. Semakin  tinggi  intensitas  cahaya  dan  aerasi  pada medium, semakin tinggi laju penguapan medium keluar dari botol kultur (Huang & Chen, 2005).

## Pengaruh penutup botol terhadap pertumbuhan planlet kelapa sawit
Hasil  pengamatan  pertumbuhan  planlet  kelapa sawit  pada  medium  DF  dalam  botol  kultur  dengan berbagai  jenis  penutup  disajikan  dalam  Tabel  3. Analisis ragam menunjukkan bahwa perlakuan penutup botol  secara  statistik  berpengaruh  nyata  terhadap ke-
ragaman  planlet  kelapa  sawit.  Planlet  paling  tinggi terdapat  pada  botol  dengan  tutup  aluminium  foil dengan  tinggi rata-rata mencapai    2,40  cm,  sedangkan yang terendah terdapat pada botol dengan tutup plastik wrap dengan  tinggi  1,81  cm.  Planlet  pada  tutup  ulir baik  yang  dilapisi  oleh  plastik wrap maupun  tanpa dilapisi  plastik wrap dan  plastik  tahan  diautoklaf menunjukkan  hasil  yang  tidak  berbeda  nyata.  Tinggi planlet berkorelasi positif (r= 0,93) dengan bobot basah planlet.  Jumlah  daun  planlet  sawit  pada  tutup  ulir dengan  lapisan  plastik wrap menunjukkan  hasil  yang paling tinggi. Hasil sebaliknya terdapat pada perlakuan tutup ulir tanpa lapisan plastik wrap . Kelas warna daun planlet  kelapa  sawit  paling  tinggi  terdapat  pada  botol dengan  penutup  aluminium  foil,  sedangkan  terendah pada botol dengan tutup ulir.
Gambar 2. Fluktuasi suhu di dalam botol dengan berbagai jenis penutup dan di luar botol kultur pada periode pencahayaan.
Figure 2.  Temperature fluctuation inside and outside the bottle with different vessel closures during  light period.
Tabel 2. Pengaruh jenis penutup botol terhadap bobot basah dan volume media Table 2. Effect of culture vessel closure on fresh weight and volume of medium
Perlakuan tutup Closure treatment Bobot basah medium Medium fresh weight (g) Volume medium Medium volume (mL) Tutup ulir dan plastik wrap Screw cap and plastic wrap 39,0 ab* 38,5 ab Tutup ulir ( Screw cap ) 38,0 b 38,0 b Plastik wrap ( Plastic wrap ) 15,9 c 16,3 c Aluminium foil Aluminum foil 38,9 ab 38,5 ab Plastik tahan diautoklaf Autoclavable plastic 39,4 a 39,5 a
*) Angka dalam kolom yang sama diikuti oleh huruf yang sama berarti tidak berbeda nyata menurut uji jarak berganda Duncan pada α = 0,05.
*) Means in the same column followed by the same letters are not significantly different according to Duncan’s multiple range test at α = 0.05.
Su hu ( T em pe rat ur e ) (◦ C ) Jam setelah lampu dinyalakan Hours after the lamps were turned on
Pengaruh jenis penutup botol kultur terhadap pertumbuhan planlet…………… ( Sinta et al.)
Dari  parameter  pertumbuhan  planlet  kelapa  sawit yang  diamati  terlihat  bahwa  pertumbuhan  planlet terbaik terdapat pada botol dengan penutup aluminium foil.  Intensitas  cahaya  yang  diterima  oleh  planlet  pada penutup  aluminium  foil  paling  rendah  di  antara  per- lakuan  yang  dicoba  yaitu  sebesar  10,8  µmol/m 2 /detik (Tabel 1). Hasil  tersebut   sama dengan hasil penelitian yang  dilaporkan  oleh  Marks  &  Simpson  (1999)  dan Eun-Jo et  al .  (2008)  yang  menunjukkan  bahwa  per- tumbuhan  planlet  terbaik  diperoleh  pada  intensitas cahaya  yang  rendah,  yakni  11,  15  dan  30,8  µmol/m 2 / detik untuk tiga spesies tanaman yang berbeda.
Eun-Jo et  al. (2008)  melaporkan  terjadi  penurun- an kandungan  klorofil  a dan b pada  saat    intensitas cahaya  tinggi  pada Alocasia  amazonica ,  sedangkan pertumbuhan  pada Disanthus dan Rhododendron, planlet  dan  kandungan  klorofil  daun  mengalami penurunan  seiring  dengan  peningkatan  intensitas cahaya  (Mark  &  Simpson,  1999).  Namun,  hasil  yang agak  berbeda  dilaporkan  oleh  Soontornchainaksaeng et  al .,  (2001).  Pertumbuhan  planlet Phaius tanker- villiae dan Vanda  coerulea terbaik  pada  intensitas cahaya  yang  cukup  tinggi    (74  µmol/m 2 /detik),  tetapi pertumbuhan planlet menjadi terhambat pada intensitas cahaya yang lebih tinggi. Intensitas cahaya yang tinggi memacu terjadinya fotooksidasi dan destruksi klorofil. Hasil-hasil  penelitian  tersebut  menunjukkan  bahwa kebutuhan  cahaya  untuk  pertumbuhan  planlet  berbeda pada  spesies  tanaman  yang  berbeda.  Pertumbuhan planlet  dipengaruhi  oleh  kondisi  lingkungan  mikro  di dalam  botol  kultur.  Suhu  ruang  yang  digunakan  di ruang kultur umumnya adalah 25 – 27 o C, tetapi adanya
lampu  sebagai  sumber  cahaya  meningkatkan  suhu  di sekitar  lingkungan  kultur.  Botol  kultur  terbuat  dari kaca  atau  plastik  bening  sehingga  cahaya  dapat menembus  ke  dalam  botol  yang  tertutup  rapat menyebabkan terjadi “efek rumah kaca”. Planlet kelapa sawit  masih  dapat  tumbuh  dengan  baik  pada  suhu 30 o C.  Pertumbuhan  planlet  terbaik  dari  penelitian  ini adalah  dari  botol  dengan  tutup  botol  aluminium  foil dengan  suhu  rata-rata  di  dalam  botol  paling  rendah yaitu 28,9 o C dan intensitas cahaya paling rendah yaitu 10,8 µmol/m 2 /detik. Tutup  berbahan  plastik wrap bersifat  porous, memungkinkan  terjadinya  sirkulasi  udara  dari  dan  ke dalam  botol.  Sirkulasi  ini  juga  menyebabkan  terjadi- nya  penguapan  air  dari  medium  ke  luar  botol  kultur sehingga  medium  menjadi  kekurangan  air.  Diduga pori-pori  dalam  plastik wrap cukup  besar  untuk melewatkan  udara  dan  uap  air.  Banyaknya  air  yang keluar dari botol kultur menyebabkan medium menjadi pekat.  Hal  ini akan  mempengaruhi  tingkat  penyerapan medium  oleh  planlet,  sehingga  menghambat  pertum- buhan planlet kelapa sawit. Dari penelitian  ini   terlihat bahwa    penutup  berbahan  aluminium  foil  paling  baik untuk pembesaran planlet kelapa sawit in vitro , disusul oleh  tutup  ulir  dengan  lapisan wrap ,  penutup  plastik tahan diautoklaf dan tutup ulir. Tutup berbahan plastik wrap kurang  sesuai  digunakan  untuk  pembesaran planlet  sawit  karena  sifatnya  yang  tidak  mampu mencegah hilangnya  air dari medium dan planlet yang dihasilkan  pun  lebih  jelek  dibandingkan  dengan  pada perlakuan tutup botol lainnya.
Tabel 3. Pengaruh penggunaan penutup botol yang berbeda terhadap tinggi planlet, bobot basah, jumlah daun dan kelas warna daun planlet kelapa sawit.
Table 3.The effect of different vessel closures on height, fresh weight, leaf number and leaf color grade of oil palm plantlets.
Perlakuan tutup Closure treatment Tinggi planlet Plantlet height (cm) Bobot basah planlet Plantlet fresh weight (g) Jumlah daun Leaf number Kelas warna daun Leaf color grade Tutup ulir dan plastik wrap Screw cap and plastic wrap 2,21 ab 0,139 a* 4,80 a 2,27 ab Tutup ulir ( Screw cap ) 2,25 ab 0,126 ab 3,80 b 1,96 b Plastik wrap ( Plastic wrap ) 1,81 b 0,093 b 3,80 b 2,10 ab Aluminium foil Aluminum foil 2,40 a 0,142 a 4,60 ab 2,40 a Plastik tahan diautoklaf Autoclavable plastic 2,14 ab 0,113 ab 4,40 ab 2,18 ab
*)  Angka  dalam  kolom  yang  sama  diikuti  oleh  huruf  yang  sama  berarti  tidak  berbeda  nyata  menurut  uji  jarak berganda Duncan pada α = 0,05.
*)  Means  in the  same  column followed  by  the  same  letters  are  not  significantly different  according to  Duncan’s multiple range test at α = 0.05.

## Analisis ekonomi
Ditinjau  dari  segi  biaya,  penutup  berbahan aluminium  foil  paling  mahal  dan  penutup  berbahan plastik wrap paling  murah.  Harga  penutup  berbahan aluminium foil mencapai Rp 97,- per tutup setiap satu kali  pemakaian.  Penutup  dari  bahan  ini  dapat digunakan  sebanyak  tiga  kali  pemakaian.  Tutup  ulir dari bahan polipropilen dapat digunakan berulang kali. Dengan  asumsi  penutup  jenis  ini  dapat  digunakan untuk 100 kali pemakaian, dan ditambah dengan biaya pencucian  dan  sterilisasi  penutup  botol,  maka  harga penutup botol menjadi Rp 43,- per tutup setiap satu kali pemakaian  untuk  tutup  ulir  dengan  balutan  plastik wrap dan Rp 42,- per tutup setiap satu kali pemakaian untuk tutup ulir tanpa plastik wrap . Penutup dari bahan plastik wrap paling  murah,  dengan  tambahan  karet sebagai  pengikat  untuk  mencegah  terlepasnya  plastik seperti pada tutup berbahan aluminium foil dan plastik tahan  diautoklaf,  harga  tutup  ini  sebesar  Rp  12,-  per tutup  setiap  satu  kali  pemakaian,  namun  pertumbuhan planlet  kelapa  sawit  lebih  jelek.  Penutup  berbahan plastik tahan  diautoklaf  lebih mahal  dari  plastik wrap . Penutup  ini  dapat  digunakan  sebanyak  dua  kali pemakaian,  dengan  harga  mencapai  Rp  19,-  per  tutup setiap  satu  kali  pemakaian.  Harga  ini  lebih  rendah daripada  harga  tutup  ulir  serta  aluminium  foil,  dan planlet  yang  dihasilkan  pada  perlakuan  ini  memiliki kualitas  yang  setara  dengan  planlet  yang  dihasilkan dengan aluminium foil, oleh karena itu penutup plastik tahan  diautoklaf  dapat  digunakan  untuk  pembesaran planlet kelapa sawit.
Prinsip  biaya-rendah  kultur in  vitro penting untuk produksi  bibit  kultur  jaringan  tanaman  secara  massal. Modifikasi  dapat  dilakukan  untuk  mengurangi  biaya produksi  dengan  memperhatikan  kebutuhan  planlet terhadap medium dan lingkungan mikro kultur in vitro , misalnya  dengan  menggunakan  agar,  sukrosa  dan bahan  lain  yang  lebih  murah,  botol  yang  lebih ekonomis,  serta  meningkatkan  efisiensi  penggunaan listrik  dan  air  (Levin  &  Tanny,  2002,  Savangikar, 2002;  Kacar et  al .,  2010).  Namun,  semua  upaya penghematan  tersebut  tidak  boleh  menurunkan  secara nyata mutu dari kultur tanaman in vitro .

## Kesimpulan
Penggunaan penutup yang berbeda mem- pengaruhi  secara  nyata  kondisi  lingkungan  mikro  di dalam  botol  kultur  dan  pembesaran  planlet  kelapa sawit.  Suhu  di  dalam  botol  kultur  lebih  tinggi  1,6  – 2,6 0 C  dibandingkan  suhu  di  luar  botol  kultur. Penggunaan  penutup  botol  mengurangi  intensitas cahaya  yang  masuk  sebesar  1,7  –  8,7  µmol/m 2 /detik tergantung pada jenis penutup botol. Penutup berbahan aluminium  foil  memberikan  lingkungan  mikro  yang paling  sesuai  untuk  pembesaran  planlet  kelapa  sawit.
Dengan  hasil  yang  tidak  jauh  berbeda  dengan perlakuan  tutup  aluminium  foil,  plastik  tahan diautoklaf dapat digunakan sebagai penutup botol yang lebih murah.

## Daftar Pustaka
Ahloowalia  BS  &  VA  Savangikar  (2002).  Low  cost  option for energy and labour: Low cost option for tissue culture technology  in  developing  countries. In : Proc  Internat Atomic Energy Agency . p. 41-45.
Cassells  AC  &  C  Walsh  (1994).  The  influence  of  gas permeability  of  the  culture  lid  on  calcium  uptake  and stomatal  function  in Dianthus microplants. Plant  Cell Tiss Org Cult 37, 171-178.
Chen C (2003). Development of heat transfer model for plant tissue culture vessels. Biosys Engin 85 (1), 67-77.
Chen  C  (2004).  Humidity  in  plant  tissue  culture  vessels.
Biosys Engin 88 (2), 231-241.
Chen U, C Hsia, DC. Agrawal & HS Tsay (2006). Influence of  ventilation  closures  on  plant  growth  parameters, acclimation and anatomy of leaf surface in Scrophularia yoshimurae Yamazakia  medicinal  plant  native  to Taiwan. Bot  Stud 47, 259-266.
De  Fossard  RA,  A  Myint  &  ECM  Lee  (1974).  A  broad spectrum  tissue  culture  experiment  with  tobacco ( Nicotiana tabacum L.) pith tissue callus. Physiol Plant 30, 125-130.
Eun-Jo A, RK Tewari, EJ Hahn & KY Paek (2008). Effect of photoperiod  and  light  intensity  on in  vitro propagation of Alocasia  amazonica.  Plant  Biotechnol  Rep 2,  207- 212.
Hazarika  BN  (2006).  Morpho-physiological  disorders  in in vitro culture of plants. Sci Hort 108, 105-120.
Huang  C  &  C  Chen  (2005).  Physical  properties  of  culture vessel for plant tissue culture. Biosyst Engin 91(4), 501- 511.
Ibaraki  Y  (2006).  Evaluation  of  photosynthetic  capacity  in micropropagated plants by image analysis. In : SD Gupta &  Y  Ibaraki  (eds.) Plant  Tissue  Culture  Engineering. Netherlands, Springer . p. 15-29.
Jackson  MB  (2003).  Aeration  stress  in  plant  tissue  culture. Bulg J Plant Pysiol 28,  96-109.
Kacar YA, B Bicen, I Varol, YY Mendi, S Serce & S Cetiner (2010).  Gelling  agents  and  culture  vessel  effect  in in vitro multiplication  of  banana  plantlets. Gen  Mol  Res 9(1), 416-424.
Kanchanapoom  K  &  B  Chourykaew  (1998).  Somatic embryogenesis from cell suspension cultures of oil palm ( Elaeis  guineensis Jacq.). J  Sci  Soc  Thailand 24,  241- 250.
Pengaruh jenis penutup botol kultur terhadap pertumbuhan planlet…………… ( Sinta et al.)
Lai CC, HM Lin, SM Nalawade, W Fang & HS Tsay (2006). Hyperhdricity  in  shoot  cultures  of Scrophularia yoshimurae can be effectively reduced by  ventilation of culture vessels. J Plant  Physiol 162, 335-361.
Levin R & G Tanny (2002). Bioreactors as a low cost option for  tissue  culture. In : Proc  Internat  Atomic  Energy
Agency . p.47-53.
Lucchesini  M  &  A  Mensuali-Sodi  (2004).  Influence  of medium  composition  and  vessel  ventilation  on in  vitro propagation  of Phillyrea  latifolia L. Sci  Hort 100, 117- 125.
Marks  TR  &  SE  Simpson  (1999).  Effect  of  irradiance  on shoot  development in vitro . Plant  Growth  Reg 28, 133- 142.
Nurhaimi-Haris, Sumaryono & MP Carron (2009). Pengaruh bahan  pra-sterilan,  tutup  tabung  kultur,  dan  musim terhadap  tingkat  kontaminasi  eksplan  pada  kultur microcutting karet. Menara Perkebunan 77(2), 84-93.
Rival  A  (2000).  Somatic  embryogenesis  in  oil  palm. In : SM  Jain,  PK  Gupta  &  RJ  Newton  (eds.) Somatic
Embryogenesis  in  Woody  Plants .  Netherlands, Kluwer Acad Publisher . p.249-290.
Savangikar  VA  (2002).  Role  of  low  cost  option  in  tissue culture. In : Proc Internat Atomic Energy Agency . p. 11- 13.
Smith  M  &  L  Spomer  (1995).  Vessels,  gels,  liquid  media, and  support  system. In :  J  Aitken-Christie,  T  Kozai  & ML  Smith  (eds.) Automation  and  Environmental Control  in  Plants  Tissue  Culture .  Netherlands, Kluwer Academic Publishers . p. 371-404.
Soontornchainaksaeng  P,  S  Chaicharoen,  M  Sirijuntarut  &
M  Kruatachue  (2001). In  vitro studies  on  the  effect  of light  intensity  on  plant  growth  of Phaius  tankervilliae (Banks  ex  L’Herit.)  BI  and Vanda  coerulea Griff. Sci Asia 27, 233-237.
Sumaryono,  I  Riyadi,  PD  Kasi  &  G  Ginting  (2008).  Growth and  differentiation  of  embryogenic  callus  and  somatic embryos  of  oil  palm  ( Elaeis  guineensis Jacq.)  in temporary  immersion  system. Indonesian  J  Agric 1(2), 109-114.