Volume 6, No 1, Januari - Juni 2023 e-ISSN : 2598-7453 DOI: https://doi.org/10.31539/bioedusains.v6i1.5285

## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI LIPOLITIK DARI LIMBAH
CAIR KELAPA SAWIT ( Elaeis quineensis Jacq .)
Khairani 1 , Kartika Manalu 2
Universitas Islam Negeri Sumatera Utara 1,2

## Khairaniaja0803@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kemampuan  bakteri  lipolitik  dalam mendegradasi lipid dengan memperoleh isolat-isolat bakteri lipolitik pada limbah cair  industri  kelapa  sawit.  Metode  penelitian  yang  digunakan  adalah  metode deskripsi  dengan  teknik  isolasi  bakteri  menggunakan  media  NA( Nutrient  Agar ) dan  media  selektif  agar  lipolitik,  dengan  menguji  kemampuan  aktivitas  indeks lipolitik. Hasil penelitian menunjukkan terdapat 10 isolat bakteri lipolitik dengan karakteristik morfologi dan biokimia menunjukkan tiga genus bakteri yaitu, genus Bacillus , Pseudomonas dan Klebsiella .  Data  analisa  memperlihatkan  bahwa  10 isolat  bakteri  lipolitik    memiliki  potensi  dalam  mendegradasi  lipid,  nilai  indeks aktivitas  lipolitik  isolat  terbesar  pada  isolat  BL 1 sebesar  0,48  mm  dan  indeks lipolitik  terendah  dengan  isolat  BL 9 sebesar  0,16  mm.  Kesimpulanya,  dengan melakukan  isolasi  dan  mengidentifikasi  bakteri  lipolitik  pada  limbah  cair  kelapa sawit merupakan salah satu cara untuk mengurangi pencemaran lingkungan yang merusak ekosistem yang ada dilingkungan.
Kata Kunci : Bakteri Lipolitik, Isolasi, Limbah Cair Kelapa Sawit, Lipid

## ABSTRACT
This study aims to determine the ability of lipolytic bacteria to degrade lipids by obtaining  isolates  of  lipolytic  bacteria  in  palm  oil  industrial  wastewater.  By testing the ability of the lipolytic index, the research method used is a description method  with  bacterial  isolation  techniques  using  NA  media  (Nutrient  Agar)  and selective media for lipolytic agar. The results showed that there were 10 isolates of  lipolytic  bacteria  with  morphological  and  biochemical  characteristics indicating three bacterial genera, namely, the genera Bacillus, Pseudomonas, and Klebsiella.  Data  analysis  showed  that  10  isolates  of  lipolytic  bacteria  had  the potential to degrade lipids; the highest lipolytic activity index value of the isolates was found in isolate BL1 at 0.48 mm, and the lowest lipolytic index was found in isolate BL9 at 0.16 mm. In conclusion, isolating and identifying lipolytic bacteria in  palm  oil  wastewater  is  one  way  to  reduce  environmental  pollution  that damages existing ecosystems in the environment.
Keywords : Lipolytic Bacteria, Isolation, Palm Oil Effluent, Lipid

## PENDAHULUAN
Indonesia  ialah  negara  penghasil  kelapa  sawit  ( Elaeis  quineensis  Jacq ) yang  mempunyai  potensi  dalam  peningkatan  industri  kelapa  sawit.  Kelapa  sawit adalah  komoditas  utama  perkebunan  yang  ada  di  Indonesia,  karena  semakin luasnya  areal  perkebunan  sawit  maka  produksi  minyak  sawit  juga  akan meningkat. Adanya peningkatan industri kelapa sawit yang diiringi pembangunan pabrik akan berdampak buruk di lingkungan (Chairunnisa, 2019). Limbah industri ada  yang bersifat padat dan cair. Limbah cair industri yang mengandung minyak kelapa  sawit  banyak  mengandung  senyawa  fosfolipid,  sehingga  mengakibatkan terjadinya  pencemaran  lingkungan.  Limbah  cair  industri  banyak  mengandung mikroorganisme  serta  memiliki  kemampuan  untuk  menghidrolisis  lipid  dan minyak (Amanda et al., 2019).
Upaya  yang  dilakukan  sebelum  limbah  cair  industri  minyak  kelapa  sawit dibuang ke lingkungan yaitu dengan metode pengolahan. Pengolahan limbah cair yang  dilakukan  yaitu  menggunakan  metode  biologi.  Limbah  yang  mengandung senyawa  organik  bisa  didegradasi  oleh  mikroba  dan  dapat  dikendalikan  secara biologis.  Metode  isolasi  menggunakan  media  spesifik  adalah  salah  satu metodenya  (Kawuri  &  Darmayasa,  2022).  Salah  satu  mikroba  yang  dapat mengurai senyawa fosfolipid pada limbah cair industri kelapa sawit adalah bakteri lipolitik.
Bakteri  lipolitik  merupakan  jenis  mikroorganisme  yang  mengandung enzim  lipase  yang  memiliki  kemampuan  untuh  memecah  lemak  atau  minyak. Dengan memecah ikatan ester dan triasigliserol menjadi asam lemak dan gliserol yang larut dalam air, sehingga enzim lipase pada bakteri lipolitik dapat membantu sebagai pengurai bahan organik berupa minyak (Chairunnisa, 2019). Kemampuan bakteri  untuk  menghasilkan  enzim  lipase  berkaitan  dengan  aktivitas  bakteri lipolitik  dalam  mendegradasi  lemak  dalam  air  limbah.  Lipase  ( Triasilgliserol lipase ) merupakan enzim  yang bisa membebaskan gliserol dan asam lemak serta menghidrolisis trigliserol (Melati, 2020).
Semakin  tinggi  keanekaragaman  bakteri  baik  secara  biologis,  morfologis, dan  fisiologi  maka  semakin  bagus  dalam  mengurangi  tingkat  pencemaran  sesuai dengan kemampuanya. Salah satu peran bakteri ialah dapat memanfaatkan bahan- bahan yang ada dihabitatnya sebagai sumber nutrisi untuk sistem metabolismenya, salah  satunya  adalah  polutan  yang  mencemari  lingkungan  (Jekti,  2018).  Di lingkungan  yang  tidak  tercemar  minyak,  sekitar  1  %  mikroorganisme menggunakan  hidrokarbon  sebagai  sebagai  sumber  karbonya,  namun  di lingkungan  yang  tercemar  minyak  komunitas  mikroba  akan  meningkat  menjadi 100 % di lingkungan tersebut (Jekti, 2018).
Penelitian  tentang  bakteri  lipolitik  yang  mampu  mendegradasi  lipid  atau lemak  di  lingkungan  yang  tercemar  limbah  cair  industri  kelapa  sawit  telah dilakukan sebelumnya oleh Chairunnisa, (2019)  yang menemukan bahwa bakteri lipolitik  mampu  menderadasi  lipid  atau  lemak  di  lingkungan  tercemar  dengan
menemukan  8  isolat  yang  memiliki  potensi  yang  berbeda.  Menurut  penelitian (Kawuri  &  Darmayasa.,  2022)  menemukan  3  jenis  bakteri  lipolitik  yang  mampu mendegradasi lipid yaitu genus Bacillus , Pseudomonas , dan Klebsiella sp .
Desa  Simangalam  merupakan  desa  yang  terletak  di  Kecamatan  Kualuh Selatan Kabupaten  Labuhanbatu Utara  yang memiliki aliran sungai kecil di desa tersebut.  Air  sungainya  bercampur  dengan  limbah  pabrik  kelapa  sawit  sehingga menyebabkan sungai  mengalami pencemaran dengan memiliki warna hitam dan berminyak.  Jika  kandungan  senyawa  organik  limbah  cair  tinggi  dalam  sungai yang  tercemar  akan  menyebabkan  rusaknya  ekosistem  yang  ada  disungai  Desa Simangalam.  Limbah  cair  tersebut  mengandung  fosfolipid  yang  tinggi,  sehingga untuk mengetahui kemampuan bakteri lipolitik dalam menderadasi lipid di limbah cair  perlu  dilakukan  isolasi  pada  limbah  untuk  mengurangi  tingkat  pencemaran. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  apakah  limbah  cair  kelapa  sawit mengandung  bakteri  lipolitik  dan  apakah  bakteri  tersebut  mampu  mendegradasi lipid  atau  lemak.  Penelitian  ini  dapat  dijadikan  sebagai  referensi  untuk  para peneliti untuk mengetahui lebih jauh mengenai bakteri lipolitik.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  UPT.  Laboratorium  Mikrobiologi  FMIPA USU,  Medan,  Jalan  Bioteknologi  No.  1  Unit  3,  FMIPA,  Padang  Bulan,  Medan Baru.  Penelitian  dilakukan  pada  bulan  November-Desember  2022.  Untuk mengetahui  keberadaan  bakteri  dan  karakteristik  isolat  bakteri  sebagai pendegradasi  lipid  dalam  limbah  cair  kelapa  sawit,  penelitian  ini  dilakukan dengan  metode  deskriptif  yaitu  mengambil  sampel  dari  aliran  limbah  menuju sungai kemudian diisolasi.
Alat-alat  dingunakan  adalah  Bunsen,  autoklaf,  cawan  petri,  laminar  air flow,  neraca  analitik,  hot  plate,  incubator,  kertas  cakram  ( paperdisk ),  jarum inokulasi  ( ose ),  gelas  ukur,  tabung  reaksi,  pipe  tetes  Erlenmeyer,  mikropipet, mikroskop,  pinset,  batang  pengaduk,  rak  tabung  reaksi,  penjepit  tabung,  lemari pendingin, cover glass, object glass, kertas label, dan kamera. Bahan-bahan yang diperlukan yaitu sampel limbah cair kelapa sawit diambil dari tempat pembuangan terakhir  limbah  kelapa  sawit  menuju  sungai  tempat  limbah  tersebut  dibuang, media  NA  ( Nutrient  Agar )  aquades  steril,  alcohol  96%,  aluminium  foil,  minyak imersi, safranin, lugol, gentian violet, Hidrogen peroksida (H 2 O 2 ), minyak zaitun, tween-80, NaCl, dan racikan media selektif lipolitik.

## Pengambilan Sampel
Sampel  diambil  dari  3  titik  limbah  cair  industri  kelapa  sawit  sebelum menuju  sungai  tempat  limbah  akan  dibuang.  Pengambilan  sampel  pada  saluran kolam  dengan  teknik purposive .  Sampel  diambil  menggunakan  botol  yang  steril dengan  cara  menenggelamkan  botol  tersebut  kedalam  sungai  yang  tercemar.
Sampel  yang  telah  diambil  kemudian  ditutup  kembali  dan  diberi  label  kemudian disimpan di dalam coolbox.

## Pembuatan Media
Dilarutkan  media  NA  ( Nutrient  Agar )  sebanyak  5  gram,  kemudian ditambahkan  aquades  100  ml  dilarutkan  kedalam  beaker  glass,  lalu  dipanaskan diatas  hot  plate  kemudian  diaduk  hingga  homogen  dan  mendidih.  Setelah  itu, media disterilkan selama 15 menit dengan suhu 121 o C dalam autoklaf. Kemudian media akan dituang ke dalam cawan petri secara steril, kemudian dibiarkan hingga media memadat pada suhu ruangan.

## Isolasi Bakteri Lipolitik
Sampel  limbah  cair  kelapa  sawit  diencerkan  10  ml,  lalu  dimasukkan  ke dalam  erlenmeyer  yang  berisi  90  ml  (NaCl)  yang  dihomogenkan  dengan  vortex sehingga  terbentuk  pengenceran  bertingkat  dari  10 -1 sampai  10 -7 .  Kemudian diambil 1 ml suspensi pada seri pengenceran terakhir, lalu ditambahkan media NA (Nutrient Agar), lemak gliserol dan tween-80 dengan metode cawan tuang  ( power plate ) dan diinkubasi selama 2 x 24 jam pada suhu 37 o .
Pemurnian  isolat  bakteri  dilakukan  dengan  metode  cawan  gores  ( streak plate )  yang  menunjukkan  morfologi  dan  warna  koloni  yang  berbeda-beda. Pemurnian  ini  dilakukan  secara  berulang  hingga  diperoleh  kultur  murni  untuk dipisahkan. Isolat murni akan diambil sebanyak 2-3 ose kemudian dipindahkan ke media NA ( Nutrient Agar ) kemudian diinkubasi selama 2 x 48 jam dengan suhu 37 o C.

## Karakterisasi dan Morfologi Isolat Bakteri
Karakteristik  dan  morfologi  bakteri  yang  tumbuh  secara  makroskopis seperti  bentuk  koloni,  warna  koloni,  elevasi,  tepi  koloni  dan  permukaan  koloni akan  diamati  pada  isolat  baktei  yang  ditumbuhkan  pada  media  NA  ( Nutrient Agar ).  Pengamatan  secara  mikroskopis  dilakukan  dengan  melakukan  pewarnaan gram. Uji biokimia bakteri dilakukan untuk mengidentifikasi isolat bakteri yang di dapat,  kemudian  dilakukan  pengujian  seperti:  uji  SIM  ( Sulfid  Indol  Motility ),  uji katalase, uji TSIA ( Triple Sugar Iron Agar ), dan uji Simmon sitrat .
Uji  SIM ( Sulfid Indol Motility )
Bakteri diambil 1 ose isolat bakteri kemudian diinokulasikan dengan cara ditusukkan  pada  media  secara  tegak,  lalu  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  48 jam.  Apabila    pertumbuhan  bakteri  menyebar  disekitar  bekas  tusukan  jarum  ose menandakan hasil positif, sedangkan jika hanya berupa garis di sepanjang tusukan saja akan menandakan hasil negatif.

## Uji Katalase
Isolat  diambil  1  ose  isolat  bakteri  murni  bakteri  menggunakan  jarum  ose steril,  lalu  diletakkan  pada  permukaan  object  glass  steril,  lalu  ditetesi  reagen Hidrogen  peroksida  (H2O2)  3%  1-2  tetes.  Reaksi  positif  akan  ditandai  dengan terdapatnya gelembung-gelembung oksigen.
Uji  SC ( Simmon Sitrat )
Satu koloni biakan bakteri diambil satu jarum ose kemudian ditanam pada media Simmon  sitrat dengan  cara  menggoreskan  jarum  ose  secara  zig-zag. Kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C . Reaksi dinyatakan positif bila timbul warna biru terang.

## Uji TSIA (Triple Sugar Iron Agar)
Biakan  bakteri  diambil  dengan  menggoreskan  biakan  dengan  jarum  ose steril  pada  media  uji  TSIA  dengan  cara  menusuk  ose  sampai  sepertiga  dasar tabung.  Kemudian  diangkat  dan  digores  secara  zig-zag  pada  bagian  miring permukaanya setelah itu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C.

## Pewarnaan Gram
Tujuan pewarnaan gram adalah untuk mengidentifikasi isolat bakteri yang diisolasi. Dicuci gelas objek dengan alkohol 70 % kemudian di fiksasi. Letakkan satu  tetes  aquadest  pada  gelas  objek.  Kemudian  di  suspensikan  satu  ose  biakan koloni  bakteri,  ratakan  dan  fiksasi  diatas  nyala  api.  Tambahkan  satu  tetes  kristal gentian  violet  selama  30  detik.  Kemudian  dibilas  dengan  aquades,  lalu ditambahkan  satu  tetes  larutan  lugol  diamkan  selama  30  detik,  kemudian  bilas dengan aquades. Cuci gelas objek dengan alkohol 96 % selama 20 detik, lalu bilas dengan  air.  Kemudian  tetes  larutan  safranin  0,25%  selama  30  detik,  cuci  larutan safranin dengan aquadest steril, lalu dikeringkan. Setelah kering lalu tetesi minyak imersi.  Setelah  selesai,  dapat  dilihat  menggunakan  mikroskop  perbesaran  100x, amati  warna  dan  bentuk  dari  bakteri.  Warna  ungu  menunjukkan  bakteri  gram positif, dan warna pink menunjukkan bakteri gram negatif.

## Pengukuran Aktivitas Indeks Lipolitik
Bakteri  hasil  pemurnian  diambil  1-2  ose  dan  dibiakkan  selama  24  jam pada 5 ml media cair dengan komposisi pepton 2 %, Tween-80 1 %, dan NaCl 1 %  dan  minyak  zaitun.  Dicelupkan  kertas  cakram  berdiameter  ±  5  mm  ke  media cair selama 10-15 menit. Kemudian diletakkan ketas cakram diatas media selektif lipolitik  dengan  komposisi  NaCl  0,5  g,  CaCl  0,1  g,  Pepton  10  g,  agar  20  g, Tween-80 2,5 %, dan minyak zaitun 5 %, lalu diinkubasi selama 7 x 24 jam dan hari ke-7 dihitung diameter zona bening dan diameter koloninya untuk mengukur aktivitas indeks bakteri lipolitik.
Untuk  mengetahui  potensi  masing-masing  isolat  bakteri  dalam mendegradasi  lipid  dan  lemak,  dilakukan  pengukuran  indeks  aktivitas  bakteri lipolitik.  Koloni  bakteri  yang  membentuk  zona  bening,  kemudian  setiap  isolat bakteri  yang  diperoleh  dihitung  indeks  bakteri  lipolitiknya.  Diasumsikan  bahwa isolat dengan nilai indeks lipolitik yang tinggi memiliki tingkat aktivitas lipolitik yang tinggi. Indeks lipolitik isolat dapat diukur dengan rumus:
Indeks lipolitik =

## HASIL PENELITIAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  10  isolat  bakteri  yang  mampu berkembang  dan  tumbuh  pada  media  uji  yang  diperoleh  dari  limbah  cair  kelapa sawit  yang  diambil  dari  3  titik  sampel.  Hasil  isolasi  limbah  cair  kelapa  sawit adalah sebagai berikut:
(a)                                     (b)                              (c)
Gambar 1. (a) Sampel 1 limbah cair kelapa sawit, (b) Sampel 2 limbah cair kelapa sawit, (c) Sampel 3 limbah cair kelapa sawit
Dari gambar 1 dapat dilihat pada sampel 1 koloni bakteri yang tumbuh ada 3  koloni  bakteri.  Pada  sampel  ke  2  terdapat  4  koloni  bakteri.  Kemudian  sampel limbah 3 terdapat 3 koloni bakteri yang tumbuh pada media.

## Karakterisasi dan Morfologi
Bakteri  yang  dominan  yang  berhasil  diisolasi  kemudian  diamati  secara makroskopis  dan  mikroskopis.  Hasil  pengamatan  morfologi  secara  makroskopis dari 10 isolat bakteri yang di beri kode BL (Bakteri Lipolitik).
Tabel 1 . Karakterisasi Morfologi Isolat Bakteri Kode Isolat Bentuk Margin Elevasi Warna BL1 Circuler Entire Flat Putih susu BL2 Circuler Entire Convex Putih Susu BL3 Circuler Entire Flat Putih susu BL4 Circuler Entire Convex Putih susu BL5 Irregular Undule Convex Hijau BL6 Circuler Undule Convex Putih Susu BL7 Circuler Entire Flat Putih Susu BL8 Circuler Entire Convex Putih Kekuningan BL9 Circuler Entire Convex Putih susu BL10 Circuler Entire Flat Putih Susu
Data Tabel 1 menunjukkan bahwa morfologi isolat bakteri terlihat adanya perbedaan  dari  bentuk,  permukaan,  tepi  bakteri  dan  warna  dari  isolat  tersebut. Isolat  dengan  kode  BL 1 ,  BL 3 ,  BL 7 ,  dan  BL 10 memiliki  bentuk  bulat  ( Circuler) , mempunyai tepian rata (Entire) , berwarna putih susu dengan elevasi datar (Flat) . Isolat  dengan  kode  BL 2 ,  BL 4 ,  BL 8 dan  BL 9 memiliki  bentuk  bulat (Circuler) , mempunyai  tepian  rata (Entire) ,  berwarna  putih  susu  dengan  elevasi  cembung (Convex) .  Isolat  kode  BL-5  memiliki  bentuk (Irreguler) ,  memiliki  tepi bergelombang (Undulate) ,  berwarna  hijau  serta  mempunyai  elevasi  cembung (Convex) .  Isolat  kode  BL-6  berbentuk  bulat (Circuler) ,  mempunyai  tepian  rata (Entire) , berwarna putih susu dengan elevasi cembung (Convex) .

## Pewarnaan Gram
Pewarnaan  gram  bertujuan  untuk  menentukan  isolat  yang  telah  tunggal serta koloni tersebut termasuk  gram negatif maupun gram positif. Sepuluh isolat baktei  yang  ditemukan  pada  limbah  cair  kelapa  sawit,  kemudian  dilakukan  uji pewarnaan gram. Hasil pengamatan isolat bakteri secara mikroskopik dapat dilihat pada tabel.
Tabel 2. Hasil Pewarnaan Gram Kode Isolat Bentuk Sel Sifat Gram BL1 Basil Negatif BL2 Monobasil Positif BL3 Monobasil Positif BL4 Streptobasil Negatif BL5 Monobasil Positif BL6 Monococus Positif BL7 Streptobasil Positif BL8 Streptobasil Positif BL9 Streptobasil Positif BL10 Streptobasil Negatif
Data  tabel  2  dari  10  isolat  diketahui  terdapat  70  %  isolat  yang  bersifat gram  positif  dengan  kode  isolat  (B 2 ,  BL 3 ,  BL 5 ,  BL 6 ,  BL 7 ,  BL 8 dan  BL 9 )  dan terdapat 30%  isolat yang bersifat gram negatif dengan kode isolate (BL 1 , BL 4 dan BL 10 ). Pada tabel 1 dan tabel 3 menunjukkan 10 koloni bakteri yang diidentifikasi secara  morfologi  (makroskopis  dan  mikroskopis)  serta  uji  biokimia  dan dibandingkan  dengan  buku Bergey’s  Manual  of  Determinative  Bacteriology  Seventh Edition adalah  yang diduga bakteri dari genus Pseudomonas, Bacillus , dan genus Klebsiella sp.

## Uji Aktivitas Biokimia
Uji  biokimia  bertujuan  untuk  mengetahui  sifat  fisiologis  isolat  bakteri. Karena  setiap  isolat  bakteri  memiliki  aktivitas  uji  biokimia  yang  berbeda-beda, maka perlu dilakukan uji biokimia untuk menentukan genus bakteri. Selanjutnya dilakukan uji biokimia terhadap 10 isolat yang berasal dari hasil isolasi tersebut.
Tabel  dibawah  ini  menampilkan  hasil  uji  biokimia  yang  diamati  pada sepuluh isolat yang diperoleh.
Tabel 3 . Hasil Uji Biokimia Uji Biokimia Kode Isolat BL 1 BL 2 BL 3 BL 4 BL 5 BL 6 BL 7 BL 8 BL 9 BL 10 Katalase + + + + + + + + + - Motilitas + + + - + + + - - - Sitrat + - - - - + + + - - TSIA K/A K/A K/A A/A A/A K/K K/A A/A A/A A/A H 2 S - - - - - - - - - - Gas - - - + - + - - - -
Hasil  tabel  3  menunjukkan  terdapat  10  isolat  memiliki  hasil  uji  biokimia yang  berbeda-beda.  Pada  uji  TSIA,  terdapat  4  isolat  mampu  memfermentasikan sebagian  karbohidrat  yaitu  isolat  BL 1 ,  BL 2 ,  BL 3 ,  dan  BL 7 .  Uji  sitrat  yang dilakukan  diketahui  4  isolat  yang  menunjukkan  reaksi  positif.  Terdapat  6  isolat yang  menunjukkan  reaksi  positif  pada  uji  motilitas.  Kemudian  uji  katalase terdapat 9 isolat yang menunjukkan reaksi positif.

## Pengukuran Aktivitas Indeks Lipolitik
Ditemukan  10  isolat  yang  tumbuh  pada  media  selektif  lipolitik  yang ditandai  terbentuknya  zona  bening  disekitar  koloni,  kemudian  dilakukan pengukuran aktivitas indeks lipolitik. Adapaun hasil indeks lipolitik dari 10 isolat tersebut dapat dilihat pada tabel.
Tabel 4. Hasil Pengukuran Indeks Lipolitik
Kode Isolat Karakteristik Makroskopis Isolat Diameter Koloni (mm) Diameter Zona Bening (mm) Indeks Lipolitik (mm) BL1 18,1 8,6 0,48 BL2 19,4 8,8 0,45 BL3 45,1 8,9 0,20 BL4 40,4 7,1 0,18 BL5 62,7 8,7 0,14 BL6 23,8 8,5 0,36 BL7 44,3 8,9 0,20 BL8 40,5 9,4 0,23 BL9 50,8 8,2 0,16 BL10 20,2 70,2 0,36
Data  Tabel  4  dengan  10  isolat  yang  didapat,  isolat  dengan  kode  BL-1 memiliki  indeks  lipolitik  paling  besar.  Hal  ini  terlihat  pada  potensi  kemampuan isolat  dengan  kode  BL-1  lebih  besar  dalam  mendegradasi  minyak  dibandingkan dengan isolat lainnya dengan indeks lipolitik sebesar 0,48 mm.
Gambar 2. Zona Bening pada Media Selektif Lipolitik pada Isolat BL 1

## PEMBAHASAN
Hasil  isolasi  bakteri  lipolitik  dari  limbah  cair  kelapa  sawit  ( Elaeis quieneensis. Jacq .) terdapat  10  isolat  dari  3  sampel  yang  dingunakan,  lalu ditumbuhkan  dengan  media  NA,  dan  media  selektif  agar  lipolitik.  Tween-80 adalah  komponen  utama  media  lipolitik  selektif  karena  berfungsi  sebagai  uji kemampuan  lipolitik  untuk  mendegradasi  minyak  (lipid)  dan  merupakan  nutrisi utama yang dibutuhkan bakteri lipolitik. Jika bakteri lipolitik dapat mendegradasi tween  dalam  media  lipolitik,  minyak  akan  tampak  terdegradasi.  Adanya penambahan  tween-80  pada  media  bertujuan  untuk  mengefektifkan  kerja  dari enzim lipase yang dihasilkan oleh bakteri (Kawuri & Darmayasa, 2022).
Data  pada  Tabel  1,  menunjukkan  morfologi  isolat  bakteri  terdapat perbedaan  dari  bentuk,  permukaan,  tepi  bakeri  dan  warna  dari  isolat  tersebut. Isolat  dengan  kode  BL 1 ,  BL 3 ,  BL 7 ,  dan  BL 10 memiliki  bentuk Circuler (bulat), mempunyai tepian rata (Entire) , berwarna putih susu dengan elevasi Flat (datar). Isolat  dengan  kode  BL 2 ,  BL 4 ,  BL 8 dan  BL 9 memiliki  bentuk Circuler (bulat), mempunyai  tepian  rata (Entire) ,  berwarna  putih  susu  dengan  elevasi  cembung (Convex) . Isolat dengan kode BL 5 berbentuk tidak beraturan ( Irreguler) , memiliki tepian  bergelombang  ( Undulate) ,  berwarna  hijau  dengan  elevasi Convex (cembung).  Isolat  kode  BL 6 berbentuk  bulat (Circuler) ,  mempunyai  tepian  rata
(Entire) , berwarna putih susu dengan elevasi cembung Convex .
Hasil  pada  tabel  2  terkait  morfologi  bakteri  secara  mikroskopik menunjukkan 70 % isolat yang bersifat gram positif dan terdapat 30% isolat yang bersifat gram negatif. Pewarnaan gram bertujuan untuk mengamati morfologi sel bakteri.  Pada  hasil  pengamatan  bakteri  dikatakan  bersifat  gram  positif  ditandai dengan  terbentuknya  warna  ungu  pada  sel  bakteri.  Bakteri  dikatakan  bersifat negatif dilihat dengan terbentuknya warna merah pada sel bakteri (Rahmawati et al., 2021).
Tabel 3 menunjukkan hasil uji biokimia yang dilakukan pada media Triple Sugar  Iron  Agar  (TSIA)  yang  meliputi  fermentasi  karbohidrat.  Hasil  uji  TSIA umumnya dilihat dari lereng media. Bakteri hanya dapat memfermentasi sebagian karbohidrat  jika  hasil  uji  menunjukkan  lereng  kuning  dan  dasar  merah  (K/A). Hasil  uji  menunjukkan  (A/A)  berarti  bakteri  dapat  memfermentasi  semua  jenis karbohidrat  sedangkan  hasil  (K/K)  menunjukkan  bakteri  tidak  dapat memfermentasi  semua  jenis  karbohidrat.  Sedangkan  untuk  uji  fermentasi karbohidrat,  hasil  positif  ditunjukkan  dengan  penyesuaian  warna  medium  dari
ungu  menjadi  kuning  hingga  jernih,  hasil  negatif  dilihat  dari  tidak  adanya perubahan warna medium setelah 24 jam pasca inokulasi (Kosasi et al., 2019).
Hasil  uji  TSIA  dari  10  diketahui  terdapat  4  isolat  bakteri  yang  dapat memfementasikan  sebagaian  karbohidrat  dengan  menunjukkan  hasil  uji  (K/A) (lereng berwarna kuning dengan dasar berwarna merah, dengan kode isolat yaitu: BL 1 ,  BL 2 ,  BL 3 dan  BL 7 .  Dan  terdapat  5  isolat  bakteri  yang  dapat memfementasikan  semua  jenis  karbohidrat  dengan  menunjukkan  hasil  uji  (A/A) dengan kode isolat yaitu : BL 4 , BL 5 , BL 8 , BL 9 , BL 10 . Isolasi bakteri dengan kode isolat  BL 4 memiliki  kemampuan  dalam  memfementasikan  gula  untuk menghasilkan  asam  atau  gas  (Kosasi  et  al.,  2019).  Kemudian  terdapat  1  isolat bakteri  yang  tidak  mampu  memfementasikan  semua  jenis  karbohidrat  dengan kode  isolat  yaitu:  BL 6 .  Hasil  uji  TSIA  bisa  terjadi  karena  dari  berbagai  jenis bakteri  mempunyai  kemampuan  yang  berbeda  dalam  penggunaan  gula,  sebagian melakukan fermentasi dan sebagian tidak.
Uji  biokima  dengan  uji  Sitrat (Simmon’s  Citrate) bertujuan  untuk mengetahui  apakah  bakteri  dapat  memanfaatkan  sitrat  sebagai  satu-satunya sumber  karbon  dan  energi.  Hasil  positif  ditunjukkan  dengan  perubahan  warna media  dari  hijau  menjadi  biru.  Penggunaan  sitrat  oleh  bakteri  menyebabkan hilangnya  sitrat  dari  biakan,  dan  mengalami  peningkatan  pH  serta  perubahan warna media dari hijau menjadi biru. Ini adalah penyebab perubahan warna pada media (Kosasi et al., 2019) . Hasil dari 10 isolat yang didapat, diketahui terdapat 4 isolat  yang  benilai  positif  yaitu  yang  mampu  menggunakan  sitrat  dengan mengubah media dari hijau menjadi biru  dengan kode isolat BL 1 , BL 6 , BL 7 , dan BL 8 .  Serta  6  isolat  yang  bernilai  negatif  yang  tidak  mampu  menggunakan  sitrat dengan kode isolat BL 2 , BL 3 , BL 4 , BL 5 , BL 9 dan BL 10.
Uji SIM ( Sulfid Indol Motility) bertujuan untuk melihat pergerakan bakteri di  media  yang  ditusuk,  dengan  melihat  pergerakan  dari  bakteri  yang  disebabkan adanya gerakan pasif ataupun aktif. Teknik pengujian motilitas ini menggunakan media Nutrient Agar (NA). Menurut (Kosasi et al., 2019) mengatakan bahwa hasil negatif  pada  uji  motilitas terjadi  pada  pertumbuhan  bakteri  tidak  menyebar  serta tumbuh  lurus  sesuai  area  tusukan  dan  hasil  positif  akan  menunjukkan pertumbuhan  bakteri  menyebar  di  sekitar  penusukan  sampai  permukaan  media. Hasil dari 10 isolat yang didapat, diketahui terdapat 6 isolat yang bernilai positif dengan  bersifat  motil  yang  di  tandai adanya  pertumbuhan  menyebar  di sekitar tusukan  ose  dengan  kode  isolat  BL 1 ,  BL 2 ,  BL 3 ,  BL 5 ,  BL 6 , dan  BL 7 .  Terdapat  4 isolat yang bernilai negatif degan kode isolat BL 4 , BL 8 , BL 9 , dan BL 10. Uji  katalase  bertujuan  untuk  mengetahui  apakah  bakteri  dapat menghasilkan  enzim  untuk  memecah  atau  mendegradasi  hidrogen  peroksida (H 2 O 2 ).  Dengan  mengubah  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  menjadi  oksigen  dan  air, organisme  akan  menghasilkan  enzim  katalase  yang  ditunjukkan  dengan  adanya gelembung-gelembung  oksigen  pada  hasil  positif,  (Kosasi  et  al.,  2019). Menurut (Nurzhulian et al., 2021) bahwa hidrogen peroksida memiliki sifat toksik sehingga
cepat merusak komponen dari sel bakteri. Pada 10 isolat yang didapat terdapat 9 isolat  yang  bernilai  positif  yang  menghasilkan  enzim  katalase.  Hal  ini menunjukkan  sampel  mampu  memecah  H 2 O 2 yang  merupakan  hasil  aerobic bakteri  yang  hasil  respirasi  tersebut  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri karena  memiliki  sifat  toksik  pada  bakteri  itu  sendiri,  sehingga  komponen  ini dipecah  oleh  bakteri  supaya  tidak  besifat  toksik  (Rahmawati  et  al.,  2021). Kemudian  terdapat  1  isolat  yang  benilai  negatif  yang  tidak  dapat  menghasilkan enzim katalase dengan kode isolat BL 10.
Data  tabel  4  terkait  aktivitas  indeks  lipolitik  dimulai  dari  kode  BL-1 hingga BL-10. Diketahui 10 isolat bersifat positif mengandung enzim lipase, yang dibuktikan  dengan  adanya  zona  bening  di  sekitar  koloni  bakteri  yang  tumbuh. Bakteri  lipolitik  akan  menghidrolisis  lipid  yang  terkandung  dalam  media  NA  + lemak  yang dimodifikasi, hingga terbentuk asam  lemak dan gliserol. Media  NA akan ditambahkan lemak berupa minyak zaitun yang befungsi untuk substrat yang akan  dihidrolisis  oleh  bakteri  lipolitik.  Isolat  akan  bersifat  lipolitik  jika menghasilkan zona bening disekitar koloni lipolitik (Astuti, 2017).
Kandungan  Enzim  lipase  adalah  faktor  penting  bagi  bakteri  untuk mendegradasi  minyak  dalam  limbah  cair  kelapa  sawit.  Enzim  lipase  dapat dimanfaatkan secara langsung jika substratnya mengandung lemak dan tergantung dari  berbagai  faktor.  Enzim  akan  disekresikan  dan  menghidrolisis  trigliserida menjadi  gliserol  dengan  tiga  asam  lemak  rantai  panjang.  Dimana  media  selektif tersebut  mengandung  emulsi  minyak  zaitun.  Bakteri  akan  menghasilkan  enzim lipase  dan  menghidrolisis  minyak  zaitun  sehingga  menghasilkan  zona  bening disekitar pertumbuhan koloni bakteri (Chairunnisa, 2019).
Isolat bakteri  yang bersifat bakteri lipolitik akan membentuk zona bening disekitar  koloni  bakteri.  Zona  ini  terbentuk  karena  isolat  mampu  menghidrolisis tween-80  menjadi  asam  lemak  dan  menghasilkan  enzim  lipase.  Penggunaan CaCl 2 , 2H 2 O pada media menghasilkan ion kalsium  yang berhubungan langsung dengan  asam  lemak.  Adanya  endapan  putih  keruh  dari  asam  lemak  dan  ion kalsium dapat terlihat di sekitar area koloni bakteri (Mazhar et al., 2018).
Untuk  melihat  kemampuan  bakteri  lipolitik  dapat  dilakukan  dengan perhitungan aktivitas indeks lipolitik. Diameter zona bening dapat diukur dengan mengukur  diameter  terendah  dan  tertinggi  (Khurniyati  et  al,  2022).  Menurut (Rosdi et al., 2022), untuk melihat kemampuan indeks aktivitas lipolitik dihitung dengan membagi diameter zona bening dan diameter koloni bakteri. Zona bening dipengaruhi  oleh  media  dan  kondisi  lingkungan.  Menurut  (Astuti,  2017) mengatakan  bahwa  menurunya  kadar  lemak  terjadi  karena  lemak  terhidrolisis menjadi  gliserol  dan  asam  lemak  bebas.  Asam  lemak  mudah  mengalami kerusakan sehingga kadar lemak mengalami penurunan.
Dari  10  isolat  yang  didapat,  isolat  dengan  kode  BL 1 memiliki  indeks lipolitik tertinggi.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  isolat  dengan  kode  BL 1 memiliki kemampuan  mendegradasi  minyak  lebih  besar  dibandingkan  dengan  isolat
lainnya.  Menurut  penelitian  (Chairunnisa,  2019),  adanya  bakteri  yang  tumbuh  di area  zona  bening  menunjukkan  bahwa  bakteri  memiliki  kemampuan  dalam mendegradasi  lipid/lemak.  Karena  semakin  besar  daerah  zona  bening  yang terbentuk,  maka  semakin  besar  kemampuan  bakteri  dalam  menghasilkan  enzim ekstraseluler  lipase  untuk  mendegradasi  lipid.  Sehingga  dapat  dikatakan  bakteri yang terdapat pada limbah cair kelapa sawit toleran tehadap minyak dan mampu memanfaatkan sumber karbon minyak tersebut.

## SIMPULAN
Kesimpulan  penelitian  yang  telah  dilakukan  didapatkan  10  isolat  bakteri lipolitik  dari  3  sampel.  Hasil  10  jenis  isolat  yang  didapatkan  memiliki  potensi dalam  mendegradasi  lipid,  isolat  yang  memiliki  indeks  lipolitik  tertinggi  adalah isolat    dengan  kode  BL 1 sebesar  0,48  dengan  zona  bening  8,6.  Dan  isolat  yang memiliki  indeks  lipolitik  terendah  adalah  isolat  dengan  kode  BL 5 sebesar  0,14 mm  dengan  diameter  zona  bening  8,7.  Secara  mikroskopis  berdasarkan pewarnaan  gram  diketahui  terdapat  70  %  isolat  yang  bersifat  gram  positif  dan terdapat 30% isolat yang bersifat gram negatif.

## DAFTAR PUSTAKA
Amanda,  N.  W.,  Artika,  I.  M.,  &  Rusmana,  I.  (2019). Pemanfaatan  Bakteri Pereduksi  Emisi  Gas  Metana  pada  Limbah  Cair  Kelapa  Sawit  (  Elaeis guineensis Jacq .) . 4 (2), 23–37.
Astuti,  M.  E.  (2017).  Identifikasi  Uji  Kemampuan  Hidrolisis  Lemak  dan Penentuan  Indeks  Zona  Bening  Asam  Laktat  pada  Bakteri  dalam  Wadi Makanan  Traditional  Kalimantan  Tengah. Jurnal  Bionature ,  18  (2)  ,  87- 98.
Chairunnisa,  R.  dan  A.  K.  (2019). Jurnal  Ilmiah  Biologi  UMA  (  JIBIOMA  ) . 1 (November 2019), 44–52.
Ibiyemi,  F. M.,  & Oluwafemi, O, J. (2022). Assessment of lipolytic activities of bacteria isolated from palm oil processing cottage industries in Ekiti State, Nigeria. World  Journal  of  Advanced  Research  and  Reviews , 15 (1),  225– 232. https://doi.org/10.30574/wjarr.2022.15.1.0696
Jekti, D. S. (2018). Prosiding Seminar Nasional Pendidikan Biologi ( ISBN : 978- 602-61265-2-8 ), Juni 2018 . 1–9.
Khurniyati  et  al.  (2022).  Screening  Lipolytic  from  Soil  Bacterial. ALKIMIA : Jurnal Ilmu Kimia dan Terapan , 6 (1), 224–228.
Kosasi,  C.,  Lolo,  W.  A.,  &  Sudewi,  S.  (2019).  Isolasi  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri dari Bakteri yang Berasosiasi dengan Alga Turbinaria ornata (Turner)  J.  Agardh  serta  Identifikasi  secara  Biokimia. Pharmacon , 8 (2), 351. https://doi.org/10.35799/pha.8.2019.29301
Mazhar, H., Abbas, N., Zamir, T., Hussain, Z., & Ali, S. S. (2018). Optimization Study  of  Lipolytic  Enzyme  from  Bacillus  Cereus,  PCSIR  NL-37. Punjab
University Journal of Zoology , 33 (2), 217–224. https://doi.org/10.17582/journal.pujz/2018.33.2.217.224
Melati, I. (2020). Pusat Penelitian Limnologi LIPI . Rahayu 2005 , 272–286. Nurzhulian, V. M., Sulistyaningtyas, A. R., & Ethica, S. N. (2021). Karakterisasi Bakteri  Lipolitik  Bacillus  sp.  pada  Wadi  Organ  Pencernaan  Ikan  Sidat (Anguilla sp.). Pro Food (Jurnal Ilmu Dan Teknologi Pangan) , 7 (2), 59– 67.
Panjaitan,  F.  J.,  Bachtiar,  T.,  Arsyad,  I.,  Lele,  O.  K.,  &  Indriyani,  W.  (2020). Karakterisasi Mikroskopis dan Uji Biokimia Bakteri Pelarut Fosfat (BPF) dari  Rhizosfer  Tanaman  Jagung  Fase  Vegetatif. Jurnal  Ilmu  Pertanian Dan Lingkungan , 1 (1), 9–17.
Rahmawati,  L.  R.,  Adlina,  S.,  &  Yuliana,  A.  (2021).  Isolasi  dan  Identifikasi Bakteri  Penghasil  Protease  Ekstraseluler  dari  Limbah  Cair  Tahu  Putih. Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada: Jurnal Ilmu Keperawatan, Analis Kesehatan dan Farmasi , 21 (2), 187–193.
Kawuri, R., &  Darmayasa,  I. B.  G. (2022). Journal of Biological Sciences . 9 (1), 184–189. https://doi.org/10.24843/metamorfosa.2021.v09.i01.p18
Rosdi, A., Dahalan, F. A., Zhan, L. Z., Babakhani, P., Shams, S., Engineering, C., & Area, P. (2022). Collection of Samples. Environmental and Toxicology Management , 2 , 1–5.