## EFEK ANTIMIKROBA EKSTRAK ETANOL DAUN PEPAYA ( CARICA PAPAYA L) TERHADAP SHIGELLA DYSENTERIAE SECARA IN VITRO DENGAN METODE DILUSI TABUNG  DAN DILUSI AGAR
Senja Ristya Hertanti 1 , Irma Suswati 2 , Indra Setiawan 3
Fakultas Kedokteran, Univesitas Muhammadiyah Malang, Jl. Bendungan Sutami No. 188, Malang, 65114, Indonesia, +62 341 582 060

## ABSTRAK
Efek  Antimikroba  Ekstrak  Etanol  Daun  Pepaya (Carica  papaya,  L.) terhadap  Shigella  dysenteriae  secara In  Vitro dengan Metode Dilusi Tabung dan Dilusi Agar. Daun pepaya merupakan salah satu tanaman yang mengandung zat aktif, terdiri dari asam organic dan fitosterol, alkaloid, saponin, flavonoid, tannin, dan polifenol berfungsi sebagai  antimikroba  terhadap  bakteri,  salah satunya  adalah Shigella  dysenteriae. Tujuan untuk membuktikan efek antimikroba ekstrak etanol daun pepaya terhadap pertumbuhan bakteri Shigella dysenteriae secara in vitro. Penelitian memakai rancangan true experiments dengan menggunakan Post  Test  Only  Control. Konsentrasi  ekstrak  daun  pepaya yang digunakan adalah 5%, 10%, 15%, 20%, 25%,30% dan 2 kontrol (kontrol bahan dan kontrol kuman). Analisa data menggunakan one way ANOVA, korelasi, dan regresi. Hasil: Nilai KBM (Kadar Bunuh Minimal) pada konsentrasi 30%. Hasil uji one way ANOVA  menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  sangat  signifikan  antar perlakuan  (p=0,004).  Semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  pepaya, semakin   besar   kemampuan   menghambat   dan   membunuh bakteri Shigella dysenteriae (r=-0,472).   Pemberian   konsentrasi   ekstrak   etanol   daun   pepaya berpengaruh terhadap penurunan jumlah koloni bakteri Shigella dysenteriae per ml (106) (R2= 22,3%). Nilai KHM (Kadar Hambat Minimal) pada konsentrasi 10%. Hasil uji one way ANOVA (p=0,066), pada uji korelasi (r=-0,564) dan pada uji regresi didapatkan (R2= 31,9%). Kesimpulan:  Ekstrak  etanol  daun  pepaya  memiliki  efek  antimikroba terhadap pertumbuhan koloni Shigella dysenteriae.
Kata kunci: Ekstrak   etanol   daun   pepaya,   Shigelladysenteriae, KBM, KHM.

## ABSTRACT
The Antimicrobial Effect of  Papaya Leaf  (Carica papaya L.) Ethanol Extraction to Shigella dysenteriae Growth in-Vitro Using The  Agar  Dilution  And  Tube  Dilution. Papaya  leaf   as  one  of   the  herbal  medicine  containing  active material such as asam organic dan fitosterol, alkaloid, saponin, flavonoid, tannin, and polifenol that has function as an antimicrobial, one of the bacteria that can be killed  is  Shigella  dysenteriae Research  Purpose:  To  prove  the  antimicrobial  effect  of   papaya  leaf   (Carica papaya) extract to the growth of Shigella dysenteriae. This study was using the true experiments design and post test only control. The concentration of papaya leaf extract that used were 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30% and 2 controls (material control, and germ control). Analysis of  data used one way ANOVA, corellation, and regression. Result: MBC (Minimum Bactericidal Concentration) was the 30% level.   One way  ANOVA  test  showed  a  significant  difference  among  papaya  leaf   extract concentration  (p=0,004).  The  higher  concentration of  papaya  leaf  extract,  the better  its  ability  to  reduce  the  Shigella  dysenteriae  burdens  (r=  -0,472).  The concentration of  papaya  leaf  extract  affected  the  decrease  of  the  number  of Shigella   dysenteriae   colonies   (R2=   22,3%).   MIC (Minimum   Inhibitory Concentration) was the 10% level. One way ANOVA test (p=0,066), corelation test (r= -0,564) and regresi test (R2= 31,9%). Conclusion: Papaya leaf  ethanol  extraction elicited antimicrobial effect to the growth of  Shigella dysenteriae colonies.
Key words: Papaya leaf  ethanol extraction, Shigella dysenteriae, MBC, MIC

## PENDAHULUAN
Shigellosis merupakan salah satu masalah   kesehatan yang ditemukan diseluruh dunia terutama terjadi pada negara berkembang  termasukIndonesia. Dinegara maju diperkirakan insiden shigellosis sekitar 0,5-2episode/ orang/tahun sedangkan  di  negara  berkembang  lebih  dari  itu.Shigellosis disebabkan oleh bakteri Shigella sp dan dapat menyebabkanpenyakit  disentri  yaitu  diare  akut  yang disertai  oleh  darah  dan  lendir. Disentri  basiler  yang  berat
pada umumnya disebabkan oleh Shigelladysenteriae, akan tetapi  dapat  juga  disebabkan  oleh Shigella  flexneri,Salmonella dan Enteroinvasive  E.coli  (E IEC).  Penyakit  ini  menyerang semua  golongan  umur  dengan  jumlah  penderita  baru terbanyak  pada golongan umur 1-4 tahun yang jumlahnya mencapai 5.231 orang (Subekti et  al, 2001).  Survei morbiditas  yang  dilakukan  oleh  Subdit  Diare, Departemen Kesehatan  dari  tahun  2000-2010  terlihat
kecenderunganinsiden naik. Pada tahun 2000 terdapat 301 kasus diare/1000 penduduk,pada  tahun  2003  naik  menjadi 341/1000  penduduk,  tahun  2006  naikmenjadi 423/1000 penduduk dan tahun 2010 menjadi 411/1000 penduduk(Subdit Pengendalian Diare dan Infeksi Saluran Pencernaan Kemenkes RI, 2011). Shigella dysenteriae merupakan   bakteri pathogen penyebab shigellosis atau disentri basiler yang merupakan penyakit peradangan akut saluran pencernaan manusia. Gejala klinis dari Shigellosis adalah peradangan usus, diare tiba-tiba disertai nanah, darah dan lendir. Bakteri ini menyebarlewat  kontaminasi  feses pada  makanan  dan  air,  menyebabkan  disentri karena toksin  Shiga  yang  dihasilkan.  Toksin  yang  diproduksi dapat menyerang lapisan usus besar, menyebabkan pembengkakan,  timbulnya nanah pada dinding usus dan diare berdarah. Gejala lain yang ditimbulkan antara  lain kejang  perut,  demam  tinggi,  hilangnya  nafsu  makan, mual, muntah dan nyeri saat buang air besar setelah 1-2 hari terinfeksi bakteriini.
Terapi antibiotik  diberikan  untuk  mempersingkat berlangsungnya penyakit dan penyebaran penyakit (Procop, 2003). Hasil survei pada balita di rumah sakit di Indonesia menunjukkan proporsi  Shigella  sp  sebagai  etiologi  diare yaitu Shigella dysenteriae 5,9%; Shigella flexneri 70,6%; Shigella boydii 5,9%; Shigella sonnei 17,6%. Meskipun proporsi Shigellady senteriae rendah tetapi kita harus selalu waspada karena Shigella  dysenteriae dapat muncul sebagai KLB (Kejadian Luar Biasa). Lebih berbahaya lagi, KLB ini dapat disebabkan oleh Shigella dysenteriae yang telah resistenterhadap berbagai antibiotik (Sapardiyah dkk, 2004). Pada tahun 2002 di India telah dilaporkan bahwa S. dysenteriae telah resisten terhadap asamnalidixat, siprofloksasin, norfloksasin, ofloksasin dan fluorokuinolon. Padatahun 2004  S.  dysenteriae  telah  mengalami  resistensi  silang tehadap kloramfenikol,  trimetoprim,  kuinolon  dan tetrasiklin  (Uppal  and  Arora,2004).
Saat ini dengan kembali maraknya gerakan kembali ke alam (backto  nature),  kecenderungan  penggunaan  bahan obat  alam     atau  herbal  didunia  semakin  meningkat. Gerakan tersebut  dilatarbelakangi  perubahan lingkungan, pola  hidup   manusia,  dan perkembangan   pola   penyakit. Kondisi perekonomian yang terpuruk yang dialami bangsa kita berdampakjuga dengan melonjaknya biaya pengobatan dan harga obat-obatan. Di sisilain,  adanya  kenyataan bahwa  tingkat kebutuhan  masyarakat  terhadap  pengobatan semakin  meningkat.  Sementara  taraf  kehidupan  sebagian masyarakat kita masih banyak yang kemampuannya pas- pasan. Maka dariitu,  pengobatan tradisional  yang  ekonomis merupakan  solusi  yang baik untuk menanggulangi masalah tersebut (Khalid, 2009). Salah  satu  tanaman  tradisional yang  diduga  dapat  digunakan sebagai  antimikroba adalah daun pepaya. Penelitian ter dahulumembuktikan  bahwa secara  in  vitro  ekstrak   daun  pepaya  memiliki aktivitas antibakteri  yang  signifikan  terhadap  bakteri  gram  positif dangram  negative  (Anibijuwon,  2009).  Berdasarkan penelitian  yang  telah dilakukan  oleh  Tadhfirah  (2010) ekstrak  etanol  daun  pepaya  memilkiaktivitas antibakteri secara in vitro terhadap bakteri Shigella dysenteriae. Semakin besar  konsentrasi  larutan  ekstrak  etanol  daun  pepaya makasemakin  sedikit  jumlah  koloni Shigella  dysenteriae
yang  tumbuh  padamedia  NAP. Peran  itu  dimungkinkan oleh  kandungan  senyawa  yangterdapat  pada  daun pepaya,  seperti  alkaloid  carpaine,  asam  organik, β sitosterol, flavonoid, saponin, tannin, dan polifenol (Masenchipz, 2010). Dalam  penelitian  ini  menggunakan  ekstrak  daun pepaya  denganpelarut  etanol  dikarenakan  sebagian  besar zat  aktif  antimikroba  yang terkandung dalam daun pepaya larut dalam etanol.  Penelitian terdahulu menggunakan metode dilusi tabung dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) saja  yang  diketahui  besarnya  tetapi  besarnya  Kadar Hambat  Minimum(KHM) belum diketahui secara pasti dikarenakan sifat larutan yang keruh. Untuk itu dalam penelitian ini peneliti  menggunakan dilusi  tabung dandilusi agar supaya besarnya  Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) bisa diketahui.Dengan dasar  di  atas  perlu  dilakukan  penelitian  yang  bertujuan untuk  mengetahui  apakah  ekstrak  etanol  daun  pepaya memiliki  efekantimikroba  terhadap  koloni Shigella dysenteriae, dengan  mengukurKadar Hambat Minimum (KHM) dan mengukur Kadar Bunuh Minimum (KBM).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini memakai rancangan penelitian berupa true eksperimental dengan menggunakan post test only control. Penelitian   dilaksanakan   di   Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang dan dilakukan pada bulan Februari 2012.
Populasi  penelitian  berupa bakteri Shigella dysenteriae biakan murni yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang. Sampel penelitian bakteri Shigella dysenteriae biakan murni diambil secara simple random sampling. Pengambilan sampel  dilakukan  dengan  bantuan  ose  yang  dimasukkan secara  tegak lurus ke dalam wadah kultur bakteri dengan tingkat kedalaman yang sama untuk setiap perlakuan.
Pada penelitian   ini menggunakan 8   kelompok, yang   terbagi   menjadi 6 kelompok perlakuan ekstrak etanol daun pepaya dan 2 kelompok sebagai kontrol.
Variabel bebas pada penelitian ini adalah ekstrak etanol daun pepaya dengan konsentrasi 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%. Variabel  tergantung pada  penelitian ini adalah pertumbuhan  Shigella dysenteriae dengan mengukur jumlah koloni bakteri Shigella dysenteriae. Penentuan  aktivitas antimikroba  dilakukan  dengan  2  metode  dilusi yaitu dilusi tabung dan dilusi agar.
Dilusi tabung dikerjakan dengan  menggunakan  satu seri  tabung reaksiyang diisi  media  cair  dan  sejumlah tertentu  sel  mikroba  yang  diuji.Kemudian  masing- masing  tabung  diisi  dengan  antimokroba  yang telahdiencerkan secara serial. Selanjutnya, seri tabung diinkubasikan pada suhu 37 o C selama 18-24 jam dan diamati terjadinya kekeruhan pada tabung.Konsentrasi terendah antimikroba pada tabung yang ditunjukkan denganhasil biakan yang mulai tampak jernih (tidak ada pertumbuhan mikroba)adalah   Kadar   Hambat   Minimal   (KHM)   dari antimikroba.   Untukmenentukan KHM bahan uji, dapat juga menggunakan médium agar padatyang disebut dengan metode E test. Selanjutnya biakan dari semua tabung yang jernih  diinokulasikan  pada  media  agar  padat (streaking
satu  osebakteri  dari  masing-masing  konsentrasi  ke  plate- plate  yang  berbeda),diinkubasikan dan keesokan harinya diamati ada tidaknya koloni mikroba yang tumbuh. Konsentrasi terendah antimikroba pada biakan padat yangditunjukkan  dengan  tidak  adanya  pertumbuhan koloni  mikroba  adalah Kadar Bunuh Minimal (KBM) dari bahan uji  terhadap bakteri uji. Bahanuji  seringkali  tidak dapat  memubunuh  secara  total  sekuruh  populasi bakteri, sehingga KBM merupakan kadar terendah yang memungkinkanpertumbuhan  bakteri  uji  hanya < 0,1% dari  jumlah  bakteri  uji yang diinokulasikan. Jumlah bakteri yang diinokulasikan adalah setara dengan jumlah koloni yang ditemui pada subkultur kontrol bakteri pada NutrientAgar  Plate (NAP)  segera  setelah  suspensi inokulum  terbentuk  (Dzen, 2003).
Dilusi agar digunakan bila dengan menggunakan tubedilution tidak dapat dilihat KHM nya, yaitu menggunakan cara agar dilution. Pada  metode  ini,  bahan antimikroba  dengan  konsentrasitertentu dicampur dengan agar plate, satu plate untuk satu konsentrasi yang ingin diuji. Bakteri yang akan diujikan dibuat dengan turbiditas sedikit lebih besar dari standard spectrofotometry. Kemudian sejumlah bakteri diletakkan pada sebuah replicating  inoculator (yang dinamakan Steers-Folts replicator) yang sudah dikalibrasi (biasanya0,001ml). Setelah itu   suspensi bakteri tersebut diletakkan pada permukan agar. Pada cara ini ada sekitar 104CFU pada permukaanagar plate. Kemudian agar plate diinkubasi. Konsentrasi terendah yang  menampakkan pertumbuhan  koloni  kurang  dari  3  disebut  sebagai kadar hambat mínimum (KHM). Kadar bunuh  minial (KBM) tidak dapat dilihat pada metode ini (Dzen, 2003).

## HASIL PENELITIAN
Sebelum digunakan dalam penelitian ini, sampel bakteri diidentifikasi ulang.  Identifikasi  dilakukan  dengan  cara melakukan  pewarnaan  gram dengan  hasil  batang  gram negatif  (ditandai  dengan  warna  merah),  tesbiokimia, yang terdiri dari tes IMViC (Indole, Methyl red, Voges- Proskauer,Citrate  test), tes  motilitas,  dan  tes  urease.  Hasil tes  biokimia Shigellady senteriae dengan hasil: Motilitas (- ), Urease (-), Indole (+), Methyl red(+), Citrate (-), dan Voges Proskauer (-).Prosedur dari metode dilusi tabung adalah untuk menentukan KadarHambat  Minimal (KHM) dan Kadar Bunuh Minimal (KBM), namun padapenelitian ini nilai KHM tidak dapat dianalisis, karena tingkat kekeruhannyabukan menunjukkan adanya pertambahan jumlah koloni bakteri, melainkanwarna asli dari ekstrak yang keruh, sehingga   yang  dinilai   hanya KBM Kadar Bunuh Minimal (KBM) ditentukan jika didapatkan penurunanjumlah koloni bakteri < 0,1% dari inokulum asal. Hasil pertumbuhan koloni bakteri. Untuk memudahkan penghitungan danmemperkecil  kesalahan  hitung  jumlah koloni  maka  digunakan colony  counter. Hasil  dari perhitungan  rata-ratajumlah koloni Shigella dysenteriae per cawan dalam beberapa konsentrasiekstrak etanol daun papaya (Carica papaya L.) dapat dilihat pada tabel 1.
Dari tabel 1 terlihat bahwa terjadi penurunan jumlah rata-rata koloni bakteri Shigella   dysenteriae seiring dengan peningkatan konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya. Pada
penelitian ini Kadar Bunuh Minimal  (KBM)  ekstrak etanol  daun  pepaya  terhadap  koloni Shigellady senteriae, ditetapkan pada konsentrasi 30%.
Sedangkan   hasil   perhitungan   rata-rata   jumlah koloni   S higellady senteriae per 0,2ml (106) dalam beberapa konsentrasi ekstrak etanol daunpapaya (Carica papaya L.) dapat dilihat pada tabel 2.
Dari  tabel  2  dapat  dilihat  bahwa  rata-rata  jumlah koloni  bakteri Shigellady senteriae per 0,2ml (106) yang dihasilkan pada agar SS berbedatiap kelompok perlakuan. Jumlah rata-rata koloni Shigella dysenteriae per0,2ml (106) terus menurun seiring dengan peningkatan konsentrasi ekstraketanol daun pepaya.
Untuk menganalisis perbedaan bermakna terhadap pengaruh beberapa konsentrasi  ekstrak  etano daun  pepaya dalam  menghambat  pertumbuhanShigella  dysenteriae  per 0,2ml  (106) dilakukan  uji One  Way ANOVA, dimana syaratnya adalah distribusi data harus normal dan varians data harus sama.  Pada Uji  normalitas,  didapatkan  nilai p=0,181. Karena nilai p > 0,05, maka dapat disimpulkan bahwa distribusi datanormal
Pada Test of homogenity, terlihat bahwa nilai signifikansi(p) = 0.076. Karena nilai p > 0,05 maka dapat diambil kesimpulan bahwatidak ada perbedaan karakteristik antar kelompok data yang dibandingkan dengan kata lain varians data adalah homogen. Karena varians data sama,maka uji One way ANOVA adalah valid. Pada uji One way ANOVA diperoleh p= 0.004, karena p < 1% maka dapat disimpulkan bahwa terdapat  perbedaan  yang  sangat  signifikan  pada jumlah  koloni  bakteri Shigella  dysenteriae  per  0,2ml (106)  akibat  pengaruh  perlakuan  padaberbagai macam konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya  yang dilakukan.
Untuk mengetahui konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya mana saja yang berbeda secara signifikan dengan yang tidak signifikan pengaruhnya terhadap pertumbuhan koloni Shigella dysenteriae, maka dilakukan uji Post-Hoc test sebagai uji lanjutan dari One way ANOVA. Dengan hasil pengujian seperti pada lampiran 4. Pada uji Post-Hoc test, jika nilai p > 0,05 maka variabel tidak signifikan. Pada perbandingan jumlah koloni bakteri Shigellady senteriae per 0,2ml (106) yang dihasilkan pada agar SS antar kelompok kontrol  negatif  dengan  berbagai  macam  konsentrasi ekstrak  etanol  daunpepaya menunjukkan perbedaan yang signifikan.
Plot   respon   dari   pengaruh   perlakuan   berbagai macam konsentrasi  ekstrak  etanol  dau pepaya  terhadap jumlah  koloni  bakteri Shigella  dysenteriae per  0,2ml  (106), dapat  ditunjukkan pada  gambar 1.
Tabel  1  Jumlah  koloni  rata-rata Shigella  dysenteriae per  cawan  dalam beberapa konsentrasi ekstrak etanol daun papaya (Carica papaya L.) pada dilusi tabung
Tabel  2  Jumlah  koloni Shigella  dysenteriae per  0,2ml  (106)  dalam beberapa konsentrasi ekstrak etanol daun papaya (Carica papaya L.) padadilusi tabung
Gambar 1. Plot respon pengaruh perlakuan dari variasi konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya terhadap jumlah koloni bakteri Shigella dysenteriaeper 0,2ml (106) pada dilusi tabung.
Plot respon   di   atas   menunjukkan   besarnya pengaruh   perlakuan berbagai  macam  konsentrasi  ekstrak etanol  daun  pepaya  terhadap  jumlah koloni bakteri Shigella dysenteriae per 0,2ml (106). Berdasarkan plot respontersebut  dapat dibentuk  urutan  dari  perlakuan konsentrasi  ekstrak  etanol.
Daun pepaya dengan rata-rata jumlah koloni bakteri Shigella dysenteriae per 0,2ml (106) yang dihasilkan pada agar SS dari urutan rata-rata terbanyakhingga  rata-rata  jumlah koloni  bakteri  Shigella  dysenteriae  yang  palingsedikit.
Ulangan
bakteri Rata-rata bakteri 1 2 3 8631 5013 7770 21414 7138 6498 9557 0 16055 5352 0 4895 1885  6780 2260 528 197 2905  3630 1210 490 1057 257 1804 601 0 39 6 45 15 6 0 0 6 2 0 0 0 0 0 Ulangan bakteri Rata-rata bakteri 1 2 3 3,331 1,935 2,999 8,265 2,755 2,508 3,689  0 6,197 2,066 0 1,890 0,728  2,618 0,873 0,204 0,076 1,121 1,401 0,467 0,189 0,408 0,099 0,696 0,232 0 0,015 0,002  0,017 0,006 0,002 0  0 0,002 0,001 0 0 0 0 0
Pada konsentrasi 0% menunjukkan jumlah koloni bakteri Shigella dysenteriae terbanyak, sedangkan  konsentrasi  25%, 30%,  100% sudah terlihat penurunan koloni bakteri Shigella dysenteriae yang semakin drastis.
Besarnya hubungan dan pengaruh dari beberapa konsentrasi ekstraketanol  daun  pepaya  dengan  jumlah Shigella  dysenteriae per  0,2ml  (106), maka  dilakukan  uji korelasi  dan  uji  regresi  linier.  Nilai  kolerasi  dari konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya dengan jumlah koloni bakteri per0,2ml (106) sebesar -0,472 dengan nilai signifikansi (p=0,000 < 0,01), hal inimenunjukkan kolerasi yang terjadi adalah kolerasi berbanding terbalik, yangartinya kenaikan  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  pepaya menyebabkan penurunan jumlah koloni per 0,2ml (106).
Analisis regresi  linier dilakukan  untuk  mengetahui seberapa  besarpengaruh berbagai macam konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya terhadap koloni Shigella dysenteriae per 0,2ml (106). Berdasarkan uji regresi linier, nilai koefisien determinasi (R Square=R2) untuk jumlah koloni per 0,2ml(106)   sebesar   22,3%.   Artinya   bahwa   22,3% jumlah   koloni   Shigellady senteriae dipengaruhi oleh ekstrak etanol daun pepaya. Sedangkan sisanya yaitu 77,7% dipengaruhi oleh faktor lain yang tidak dibahas pada penelitianini,  seperti  kandungan  senyawa  antimikroba, suhu,  pH  lingkungan,  ataumateri organik.
Prosedur  dari  metode  dilusi  agar  adalah  untuk menentukan  KadarHambat Minimal (KHM). Kadar Hambat Minimal (KHM) ditentukan jika didapatkan pertumbuhan bakteri kurang dari 3 pada media dilusi agar. Hasil pertumbuhan koloni bakteri Shigella dysenteriae pada
media dilusi agar tiap konsentrasi ekstrak daun pepaya dapat dilihat pada lampiran 3. Hasil dari perhitungan  rata-rata jumlah  koloni  Shigella  dysenteriae  per  plate  dalambeberapa konsentrasi ekstrak etanol daun papaya (Carica papaya L.) dapat dilihat pada tabel 3.
Dari tabel 3 terlihat bahwa terjadi penurunan jumlah rata-rata   koloni   bakteri   Shigella   dysenteriae   seiring dengan   peningkatan konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya. Pada penelitian ini Kadar Hambat Minimal  (KHM)  ekstrak etanol  daun  pepaya  terhadap  koloni  Shigellady senteriae, ditetapkan pada konsentrasi 10%. Untuk menganalisis perbedaan bermakna terhadap pengaruh beberapa konsentrasi ekstrak  etanol  daun  pepaya  dalam  menghambat pertumbuhan Shigella dysenteriae per 10 μ l (104)  dilakukan uji One Way ANOVA, dimana syaratnya adalah distribusi data harus normal dan varians data harus sama.
Pada  bagian  Uji  normalitas  pada  lampiran  4, didapatkan  nilai  p=  0,983.Karena nilai p > 0,05, maka dapat disimpulkan bahwa distribusi data normal.
Pada test of homogenity pada terlihat bahwa nilai signifikansi (p) = 0.058. Karena nilai p>0,05 maka dapat diambil kesimpulan bahwa tidak  ada  perbedaan  karakteristik antar  kelompok  data  yang  dibandingkan dengan kata lain varians data adalah homogen. Karena varians data sama, maka uji One way ANOVA adalah valid. Pada uji One way ANOVA diperoleh p=0.066, karena p<1% maka dapat disimpulkan terdapat perbedaan   yang  sangat  signifikan pada  jumlah  koloni  bakteri   Shigellady senteriae per 10 μ l (104) akibat pengaruh perlakuan pada berbagai macam konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya  yang dilakukan.
Untuk mengetahui konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya mana saja yang  berbeda  secara  signifikan  dengan yang  tidak  signifikan  pengaruhnya terhadap pertumbuhan koloni         Shigella dysenteriae, maka dilakukan uji Post- Hoc test sebagai uji lanjutan dari One way ANOVA. Pada uji Post-Hoc test, jika nilai  p>0,05  maka variabel tidak signifikan. Pada perbandingan jumlah koloni bakteri Shigellady senteriae per  10 μ l  (104)  yang  dihasilkan  pada  agar  SS  antar kelompok kontrol  negatif  dengan  berbagai  macam konsentrasi  ekstrak  etanol  daun pepaya menunjukkan perbedaan yang signifikan.
Plot   respon   dari   pengaruh   perlakuan   berbagai macam konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  pepaya  terhadap jumlah  koloni  bakteri Shigella  dysenteriae  per  10 μ l  (104), dapat  ditunjukkan  pada  gambar  2.
Plot   responpada gambar 2 menunjukkan   besarnya pengaruh   perlakuan berbagai  macam  konsentrasi  ekstrak etanol  daun  pepaya  terhadap  jumlah koloni bakteri Shigella dysenteriae per 10 μ l (104). Berdasarkan plot respon tersebut  dapat  dibentuk  urutan  dari  perlakuan  konsentrasi ekstrak  etanoldaun pepaya dengan rata-rata jumlah koloni bakteri Shigella dysenteriae per10 μ l  (104)  yang  dihasilkan pada  agar  SS  dari  urutan  rata-rata  terbanyak hingga  rata- rata  jumlah koloni  bakteri  Shigella  dysenteriae  yang paling sedikit.
Gambar 5.2. Plot respon pengaruh perlakuan dari variasi konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya terhadap jumlah koloni bakteri Shigella dysenteriaeper 10 μ l (104) pada dilusi agar
Pada konsentrasi 0% menunjukkan jumlah koloni bakteri Shigelladysenteriae terbanyak, sedangkan konsentrasi 10%, 15%, 20%, 25%, 30%sudah terlihat penurunan koloni bakteri Shigella dysenteriae yang semakindrastis.
Besarnya hubungan dan pengaruh dari beberapa konsentrasi ekstraketanol  daun  pepaya  dengan  jumlah Shigella  dysenteriae per  10 μ l  (104),maka  dilakukan  uji korelasi  dan  uji  regresi  linier.  Nilai  kolerasi darikonsentrasi ekstrak etanol daun pepaya dengan jumlah koloni bakteri per10 μ l (104) sebesar -0,564 dengan nilai signifikansi (p=0,000 < 0,01), hal inimenunjukkan kolerasi yang terjadi adalah kolerasi berbanding terbalik, yang artinya kenaikan  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  pepaya menyebabkanpenurunan jumlah koloni per 10 μ l (106).
Analisis  regresi  linier  dilakukan  untuk  mengetahui seberapa  besarpengaruh berbagai macam konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya terhadap koloni Shigella dysenteriae per 10 μ l (104). Berdasarkan uji regresi linier,nilai  koefisien determinasi  (R  Square=R2)  untuk  jumlah  koloni  per 10 μ l (104)   sebesar   31,9%.   Artinya   bahwa   31,9% jumlah   koloni   Shigellady senteriae dipengaruhi oleh ekstrak etanol daun pepaya. Sedangkan sisanya yaitu 68,1% dipengaruhi oleh faktor lain yang tidak dibahas pada penelitianini,  seperti  kandungan  senyawa  antimikroba, suhu,  pH  lingkungan,  ataumateri organik.

## PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efek antimikroba ekstrak  etanoldaun pepaya (Carica papaya L.) terhadap bakteri Shigella dysenteriae. Rancangan penelitian yang digunakan adalah true eksperimental dengan menggunakan Post test only control.
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, Kadar Bunuh Minimum (KBM)didapatkan pada konsentrasi 30% dan nilai R2 sebesar 22,3%. KBM ditentukan jikapada cawan didapatkan penurunan jumlah koloni bakteri sampai <0,1% dari original inoculum  dengan  menggunakan dilusi tabung. Pada  tabel  5.1  dan  5.2pengulangan konsentrasi  5%,  10%  menunjukkan selisih  perbedaan jumlah  kolonibakteri Shigella   dysenteriae   yang   sangat
signifikan,   hal   ini   disebabkan   oleh kekurangan  dari penelitian  ini  yaitu  pada  saat  pengambilan  satu  mata ose  darisuspensi   bakteri   dalam   broth   tidak   sama pada   tiap   pengulangan   sehingga menyebabkan jumlah koloni bakteri tiap pengulangan pada konsentrasi tertentu ada perbedaan  yang  sangat  signifikan. Pada  dilusi  tabung Kadar  Hambat  Minimum (KHM) tidak dapat diketahui dikarenakan warna larutan ekstrak daun pepaya yangkeruh. Untuk  itu  selain  dilakukan  dilusi  tabung dilakukan  juga penelitian  dengan menggunakan  dilusi  agar  sehingga KHM  dapat  diketahui.  Pada  dilusi agar  KHM didapatkan pada konsentrasi 10% dan nilai R2 sebesar 31,9%. KHM ditentukan jikapada plate didapatkan <3 koloni bakteri.
Hasil penelitian ini sesuai dengan teori mengenai berbagai macam faktoryang mempengaruhi pertumbuhan bakteri, salah satu contohnya adalah konsentrasizat antimikroba, di mana pada umumnya semakin tinggi konsentrasi suatu zat, makasemakin tinggi pula daya antimikrobanya (Dzen, 2003).
Perbedaan   rentang   nilai   antara   KBM   dan   KHM cukup   jauh,   hal   inidikarenakan pada perbedaan teknik kedua metode. Pada dilusi tabung untuk mencarinilai  KBM penghitungan  bakteri  dilakukan  pada  hari  ke-3,  setelah bakteri  disuspensikan  pada SS  broth  lalu  diinkubasikan selama 18-24  jam  pada  suhu  37ºCkemudian di streaking pada media SS plate diinkubasikan lagi dan keesokan harinyabakteri dihitung dengan colony counter. Sedangkan pada dilusi agar untuk mencari nilai KHM penghitungan bakteri dilakukan pada hari ke-2, setelah bakteri diteteskan pada media dilusi agar diinkubasikan selama 18-24 jam pada suhu 37ºC lalu dihitung jumlah  koloni  bakteri.  Hal  inilah yang  menyebabkan  perbedaaan  nilai  KBM  dan KHM yang  sangat  signifikan  karena  semakin lama  waktu diinkubasikan  semakinbanyak pula jumlah koloni bakteri Shigella dysenteriae yang tumbuh.
Pada penelitian  ini,  menggunakan  zat  kimia  berupa etanol  sebagai  pelarutekstrak, tetapi kemungkinan zat kimia ini tidak berpengaruh pada efek antimikroba yang terjadi, karena ekstrak etanol telah mengalami proses evaporasi. Sedangkan suhu, kemungkinannya sebagai faktor yang berpengaruh sangat kecil, karena suhu inkubator telah diatur sesuai dengan habitat pertumbuhan bakteri. Jadi kemungkinan faktor lain yang berpengaruh adalah pH lingkungan, materi organik dan senyawa antimikroba. Beberapa  bakteri  dapat  melakukan  penguraian  materi organik  secara anaerob, dengan cara menghidrolisa komponen organik kompleks menjadi komponen organik sederhana. Selain itu, kerja anti bakteri juga memerlukan pH tertentu, namun pada umumnya bakteri memiliki jarak pH yang sempit (Dzen, 2003).
Penelitian terdahulu membuktikan bahwa secara in vitro dengan metode difusi agar  ekstrak  daun  pepaya  memiliki aktivitas  antibakteri  yang  signifikan  terhadap bakteri gram positif dan gram negative. Bakteri yang digunakan pada penelitian ini meliputi bakteri Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebseilla pneumonia, Staphylococcus aureus, Proteus   mirabilis.   Pada   penelitian   ini   aktivitas telah didapatkan bahwa ekstrak daun pepaya memilki aktivitas menghambat bakteri lebih tinggi  pada  bakteri  gram  negatif dibanding  gram  positif.  Aktivitas  ekstrak  daun pepaya
tertinggi didapatkan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa yaitu dengan zonainhibisi sebesar 4,2 mm (Anibijuwon,2009).
Penelitian lain membuktikan bahwa secara in vitro ekstrak etanol daun pepaya memiliki aktivitas antibakteri yang signifikan terhadap Shigella dysenteriae, dengan nilai KBM sebesar 10% dan nilai regresi R2 sebesar 87,8%. Peneliti menggunakan metode dilusi tabung sehingga hanya KBM yang dapat diketahui dan KHM tidak dapat diketahui dikarenakan warna ekstrak yang keruh (Tadhfirah, 2010). Perbedaan hasil  nilai  KBM  dan  nilai  regresi  R2  yang sangat  signifikan  antara  penelitian  ini dengan penelitian yang dilakukan oleh Tadhfirah dikarenakan  beberapa perbedaan pada teknik penelitian. Pada penelitian Tadhfirah media yang digunakan adalah NAP sedangkan  pada penelitian  ini  menggunakan  media  selektif   yaitu  media agar Salmonella-Shigella (SS),  dimana  media  agar  SS  adalah media  yang  baik  untuk pertumbuhan bakteri Shigella dysenteriae. Pelarut etanol dalam ekstrak daun pepaya juga dapat membunuh bakteri Shigella dysenteriae, jika dalam ekstrak pelarut etanol belum menguap secara   keseluruhan akan   membunuh   bakteri.   Hal   ini   dapat menyebabkan perbedaan nilai KBM  dan regresi R2 yang sangat signifikan.
Hasil penelitian  di  atas  membuktikan  bahwa  ekstrak etanol  daun  pepaya dapat berfungsi sebagai anti mikroba terhadap Shigella dysenteriae. Hal ini diduga karena ekstrak etanol daun pepaya mengandung berbagai senyawa yang berpotensi sebagai anti mikroba, yaitu alkaloid carpaine, asam organik, β sitosterol, flavonoid, saponin, tannin, dan polifenol (Masenchipz, 2010).
Salah satu zat antimikroba yang paling banyak terkandung dalam daun pepaya adalah  alkaloid.  Mekanisme kerja  dari  alkaloid  dalam  membunuh  bakteri  adalah dengan kemampuan mereka untuk berinterkalasi dengan asam deoksiribosa nukleat (DNA) bakteri yaitu dengan meletakkan diri di antara untaian DNA (Cowan, 1999).
Perubahan susunan rantai asam amino ini jelas akan mempengaruhi keseimbangan genetic pada DNA yang berlanjut pada kerusakan DNA. Kerusakan DNA tentunyajuga akan menyebabkan rusaknya inti sel, sehingga inti sel akan lisis. Lisisnya inti sel bakteri akan menyebabkan juga kerusakan sel pada bakteri karena inti sel merupakan pusat kegiatan sel. Kerusakan sel pada bakteri ini lama kelamaan akan membuat sel-sel bakteri tidak mampu melakukan metabolisme sehingga juga akan mengalami lisis.
Dengan demikian bakteri akan menjadi inaktif dan hancur (Gunawan, 2009).

## KESIMPULAN
Dari penelitian yang dilakukan, didapatkan kesimpulan bahwa KBM ekstrak etanol daun papaya ditentukan pada konsentrasi 30%. Ekstrak   etanol   daun papaya   mempunyai daya antimikroba terhadap pertumbuhan koloni bakteri Shigella dysenteriae. KHM ekstrak etanol daun papaya ditentukan pada konsentrasi 10%. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak etanol daun pepaya menyebabkan semakin sedikit pertumbuhan bakteri Shigella dysenteriae. Sebaliknya, semakin rendah konsentrasi ekstrak etanol daun papaya menyebabkan semakin meningkatnya jumlah koloni bakteri Shigella dysenteriae yang tumbuh pada SSP.

## DAFTAR PUSTAKA
Adam, 2001, Shigella dysenteriae , diakses 10 Juni 2011, (http:/ /www.adam.com).
Anibijuwon,  2009, Antimicrobial  Activity  of   Carica  Papaya (pawpaw  leaf) on Some  Pathogenic  Organisms of   Clinical Origin  from  South-Western Nigeria , Nigeria: Departement of Microbiology University of Ilorin .
Ardiansyah,  2005,  Antimikroba  dari  Tumbuhan,  diakses pada  24  Maret  2011, (http://www.beritaiptek.com/ zberita-beritaiptek-2007-06-09).
Ardina  Y,  2007,  Pengembangan  Formulasi  Sediaan  Gel Antijerawat  serta Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum Ekstrak Daun Pepaya, diakses 15 Oktober 2011, (http://digilib.itb.ac.id/gdl.php? mod=browse&node=6489).
Balai Besar Pelatihan Pertanian Lembang, 2010, Budidaya Pepaya, diakses 21 Maret 2011, (http:// www.bbplembang.com).
Bonang  G,  1982,  Mikrobiologi  Kedokteran:  Untuk Laboratorium dan  klinik. Jakarta: Gramedia, Hal: 10- 15.
Bukhori M.F.M, Rahman N.A, et al, 2005, Carpaine from Carica Papaya L. Var Eksotika I , Prosiding Simposium Kimia Analisis Malaysia Kelapan Belas, Johor Bahru. Cowan,  1999, Plant  Produk  as  antimicrobial  agents  Clinical Microbiology Reviews , California: Addison Wesley Longman Inc. hal 565-582.
Clark  J,  2007,  Pembuatan  Ester,  diakses  20  Mei  2011, (http://www.chem-is-try.org/materi kimia/ sifat_senyawa_organik/ ester1/pembuatan_ester/). Dall A.R, Ferraz A, Bernardi A.P, et al, 2003, Antimicrobial Activity of Some Hypericum    species , Brazil: TANAC SA, Hal: 511-516.
Davidson   M.W,   2004, Saponin ,   diakses   pada   tanggal 24   Maret   2011, (http://micro.magnet.fsu.edu/ phytochemicals/pages/saponin.html).
Doughari   J.H,   Elmahmood   A.M,   &   Manzara   S, 2007, Studies   on   the Antibacterial activity of Root Extracts of  Carica Papaya L , diakses 15 Juni 2011, (http://www.academicjournals.org/ajmr).
Dzen,  Sjoekoer  M,  Roekistiningsih,  et  al,  2003, Bakteriologi  Medik,  Malang: Bayumedia, Hal: 122- 187.
Dzen, Sjoekoer M, Roekistiningsih, et al, 2005, Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Kedokteran, Malang: Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran Universitas Brawijaya, Hal: 17, 24-27, 43-44.
Farlex, 2010, Fight Cancer With the Part of  This Tropical Plant That’s Thrown Away , telah diakses pada tanggal 10 Oktober 2011, (http://www. academicjournals. faqs.org/patents/app/20090310839+Nan+Dang, +journal, +carica+papaya+L &cd=9&hl=i d&ct= clnk&gl=id&client=firefox-a).
Florakita,  2008,  Carica  Papaya,  telah  diakses  pada  tanggal 20  Juni  2011, (http://www.proseanet. org/florakita). Gunawan I. W. A, 2009, Potensi Buah Pare (Momordica Charantia L) Sebagai Antibakteri Salmonella typhimurium, Denpasar: Program Studi Pendidikan Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Mahasaraswati.
Hismiogullari, Sahin, Karasartova, et al, 2008, Investigation of Antibacterial andCytotoxic Effects of Organic Acids Including Ascorbic Acid, Lactic Acid,and Acetic Acid on Mammalian Cells , Journal of  Animal and VeterinaryAdvances 7 (6): 681-684.
Jawetz E, Melnick J.L & Adelberg E.A, 2001, Mikrobiologi Kedokteran (Medical Microbiology), Jakarta: Salemba Medika, Hal: 347-350
Jawetz E, Melnick J.L, & Adelberg E.A, 2004, Mikrobiologi Kedokteran (MedicalMicrobiology) edisi 20, Jakarta: EGC, Hal: 259-260
Jawetz E, Melnick J.L, & Adelberg E.A, 2005, Mikrobiologi Kedokteran (Medical Microbiology) edisi 22, Jakarta: Salemba Medika, Hal: 362-364.
Katzung,  Bertram  G,  1994,  Farmakologi  Dasar  dan Klinik,  Jakarta:  EGC,Hal: 699.
Khalid, 2009, Khasiat Daun Pepaya, telah diakses pada tanggal 20 Maret 2011,(http://www.carahidup. um.ac.id).
Laily  N,  2009,  Mikrobia  Patogen,  telah  diakses  pada tanggal  25  Juni 2011,(http://dinkes. kulonprogokab. go.id).
Masenchipz,  2010,  Khasiat  Pepaya  Untuk  Wanita, diakses  10  Januari 2011,(http://www.masenchipz. com).
Nuri  M.S,  &  Puspitasari  E,  2008,  Buku  Petunjuk Praktikum  Fitokimia.  EdisiRevisi  III,  Jember: Bagian  Biologi  Farmasi  Program  Studi FarmasiUniversitas Jember.
Procop  G.W  &  Cockerill  F.V,  2003, Current  Diagnosis and  Treatment  inInfectious Disease , New York: Lange Medical Books , Hal: 13-603.
Robinson  T,  1995,  Kandungan  Organik  Tumbuhan Tinggi, Terjemahan  oleh Prof. Dr. Kosasih Padmawinata FMIPA ITB, Bandung: ITB, Hal. 4, 71- 72,191-202.
Ross,  2006 ,  Enteric  Demonstrations;  Medical  Microbiology ; USA,  diakses  10September 2011, (www.spiceisle.com/ zross/Enteric%20Demo.html).
Rukmana R, 1994, Pepaya Budidaya dan Pascapanen, Yogyakarta : Kanisius.
Sabri Luknis, 2006, Statistik Kesehatan, Rajagrafindo, Jakarta, pp. 12-14.
Sastroasmoro Sudigdo, 2005, Dasar-Dasar Metodologi Penelitian Klinis, Jakarta: Binarupa Aksara.
Shuid A.N, Anwar M.S, Yusof  A.A, 2005, The Effects of Carica papaya Linn, Latex on the healing of  Burn Wounds in Rats , Jurnal Sains Kesihatan Malaysia 3 (2): 39-  47. Subdit Pengendalian Diare dan Infeksi Saluran Pencernaan Kemenkes RI, 2011, Situasi Diare di Indonesia, diakses tanggal 8 februari 2012,(www.depkes.go.id/ downloads/Buletin%20Diare_Final(1).pdf).
Subekti D, et al, 2001, Shigella spp. Surveillance in Indonesia: the Emergence or Reemergence of S. Dysenteriae , telah diakses pada tanggal 10 Juni 2011, (http:// as.medscape.com).
Tadhfirah F, 2010, Pengaruh Ekstrak Daun Pepaya ( Carica papaya L .) terhadap Pertumbuhan Shigella  dysenteriae secara In  Vitro ,  Skripsi  Universitas Brawijaya, Malang.
Uppal B, Arora VM, 2004, India Changing resistence pattern Shigella of  isolates in  a  Delhi  hospital:  An  alarming trend,  Department  of  Microbiology,Maulana Azad Medi- cal College and Associated LN Hospital, New Delhi, diakses 10Juni 2011, (http://www.cria.org.br/sp/ index?en+Shigella+dysenteriae). Zpravy, 2006, Resistance to Clindamycin , diakses  pada tanggal 21 Maret 2011, (http://www.szu.cz/cem/zpravy/ zpr0306? klinda.htm).