http://jiss.publikasiindonesia.id/ P-ISSN:2723 – 6692
INDUKSI KALUS TANAMAN NILAM (POGOSTEMON CABLIN BENTH) DENGAN PEMBERIAN KONSENTRASI AUKSIN JENIS 2,4-D (DICHLOROPHENOXYACETIC ACID) DAN PICLORAM

## Dwika Karima Wardani
Medan Area University, Medan Indonesia Email: karima.dkw@gmail.com
Artikel info Artikel history: Diterima: 29-11-2020 Direvisi: 13-12-2020
Disetujui: 19-12-2020
Keywords:
Patchouli (Pogestemon cablin Benth), 2,4-D, Picloram, Tissue Culture
Kata Kunci: Nilam (Pogestemon cablin Benth), 2,4-D, Picloram, Kultur Jaringan
Abstract:  This  study  aims  to  determine  the  concentration  of auxin growth regulators of 2,4-D and Picloram types which are most  effective  in  the  formation  of  callus  of  the  West  Pasaman endemic  patchouli,  namelySituak  Accession  In-Vitro.  The research was carried out at the Tissue  Culture Laboratory of the Faculty  of  Agriculture,  Andalas  University.  The  analytical method  used  was  a  completely  randomized  design  (CRD)  with treatment,  namely  without  concentration,  1  mg  /  L  2,4-D  +  1 mg / L BAP, 2 mg / L 2,4-D + 1 mg / L BAP, 3 mg / L 2,4-D + 1 mg / L BAP, 1 mg / L Picloram + 1 mg / L BAP, 2 mg / L Picloram + 1 mg / L BAP, 3 mg / L Picloram + 1 mg / L BAP , the total consisted of 7 treatments with 3 replications with 3 bottles per replication. Data were analyzed statistically with the F test at the 5%  real  level.  If  F  count  is  greater  than  F  table 5%,  then proceed with the Duncan's New Multiple Range Test (DNMRT) at  the  5%  level.  The  results  showed  that  the  treatment concentrations of 1.0 mg / L 2,4-D + 1.0 mg / L BAP and 2.0 mg /  L  Picloram  +  1.0  mg  /  L  BAP  were  the  best  auxin concentrations.
Abstrak: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui konsentrasi zat pengatur tumbuh auksin dari jenis 2,4-D dan Picloram yang paling  efektif  terhadap  pembentukan  kalus  tanaman  nilam endemik  Pasaman  Barat  yaitu  Aksesi  Situak  secara In-Vitro. Penelitian  telah  dilaksanakan  di  Laboratorium  Kultur  Jaringan Fakultas  Pertanian  Universitas  Andalas.  Metode  analisis  yang digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan perlakuan yaitu Tanpa Konsentrasi, 1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP, 2 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP, 3 mg/L 2,4-D + 1 mg/L BAP, 1 mg/L Picloram + 1 mg/L BAP, 2 mg/L Picloram + 1 mg/L BAP, 3 mg/L Picloram + 1 mg/L BAP, total keseluruhan terdiri dari 7 perlakuan  dengan  3  ulangan  dengan  3  botol  per  ulangan.  Data dianalisis  secara  statistik  dengan  uji  F  pada  taraf  nyata  5%. Apabila F hitung lebih besar dari F tabel 5%, maka dilanjutkan dengan uji Duncan’s New Multiple Range Test (DNMRT) pada taraf 5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
Induksi  Kalus  Tanaman  Nilam  ( Pogostemon  Cablin Benth) dengan Pemberian Konsentrasi Auksin Jenis 2,4-D ( Dichlorophenoxyacetic Acid ) dan Picloram perlakuan  konsentrasi 1,0  mg/L 2,4-D  +  1,0  mg/L  BAP  dan  2,0 mg/L  Picloram  +  1,0  mg/L BAP merupakan konsentrasi auksin yang terbaik.
Coresponden author: Dwika Karima Wardani Email: karima.dkw@gmail.com artikel dengan akses terbuka dibawah lisensi CC BY SA 2020

## Pendahuluan
Tanaman  nilam  merupakan  salah  satu  jenis  tanaman  penghasil  minyak  atsiri  yang memiliki nilai ekonomis tinggi. Dalam dunia flavour terutama industri parfum dan aroma terapi, tanaman  nilam  memberikan  konstribusi  terhadap  devisa  negara  dan  petani.  Penyembaran budidaya tanaman nilam di Indonesia sudah cukup luas. Adapun daerah penyebarannya yaitu Jawa Timur, Sumatera Barat, Aceh, Jawa Tengah, Jambi, Sulawesi Selatan, dan diikuti Jawa Barat,  Sumatera  Utara,  Sulawesi  Barat,  Sumatra  Selatan,  Sulawesi  Tengah,  Gorontalo, Lampung, Yogyakarta, Bali, Nusa Tenggara Timur, dan Kalimantan Timur. Kualitas minyak nilam sangat penting diperhatikan (Paul et al., 2010) melaporkan bahwa kadar Pathouli Alcohol tanaman nilam secara in vitro lebih tinggi yaitu 56,30 % dibandingkan dengan tanaman nilam secara in  vivo  yaitu 44,35%. Semakin tinggi  kandungan  PA (Patchouly  Alcohol) maka akan semakin  baik  pula  kualitas  minyak  nilam.  Upaya  untuk  meningkatkan  kandungan  Patchouly Alcohol  pada  minyak  nilam  pun  terus  dilakukan.  Salah  satu  solusinya  yaitu  dengan  kultur jaringan.  Berhasil  tidaknya  teknik  kultur  menggunakan  eksplan  tergantung  pada  faktor  yang dimiliki oleh eksplan itu sendiri (ukuran, umur fisiologis, sumber dan genotipe eksplan), kondisi aseptik, pemilihan media yang tepat, dan faktor lingkungan. Pemilihan media yang tepat dengan kombinasi  zat  pengatur  tumbuh  merupakan  faktor  penentu  dalam  menginduksi  senyawa metabolit  sekunder. Adapun zat  pengatur tumbuh yang  biasa  digunakan  untuk  tujuan  induksi kalus  adalah  jenis  auksin  dan  sitokinin.  Zat pengatur  tumbuh  Auksin  yang  paling  banyak digunakan  yaitu  dari  jenis  2,4-D  dan  Picloram.  Berdasarkan  hasil  penelitian  (Dwika,  2019), menunjukkan adanya pengaruh interaksi antara zat pengtur tumbuh 2,4-D dan BAP terhadap induksi  kalus  yang terdapat  pada perlakuan  konsentrasi  1,0 mg/l 2,4-D + 1,0 mg/l BAP,  1,0 mg/l 2,4-D + 1,5 mg/l BAP, 1,0 mg/l 2,4-D + 2,0 mg/l BAP 1,5 mg/l 2,4-D dan tanpa BAP. Merujuk dari penelitian tersebut,  perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk melihat pengaruh dari pemberian konsentrasi jenis auksin lainnya.

## Metode Penelitian
Bahan yang digunakan pada percobaan ini adalah tanaman nilam Aksesi Situak, 2,4-D (Dichlorophenoxyacetic  acid),  Picloram,  BAP  (Benzil  Amino  Purin),  media  MS  (Murashige and Skoog), agar (Pure agar) 7 g/L, fungisida 300 mg/L, bakterisida (Agrept 20WP) 30 mg/L, aquades steril, alkohol 70% dan 96%, sukrosa 3%, HCL 1 mol/L, NaOH 1 mol/L, pH  meter digital, plastik, karet gelang, plastic wrap, tissue, spritus, selotip (lakban bening), desinfektan (formalin),  alumunium  foil,  tip  mikropipet,  dan  kertas  label.  Alat  yang  digunakan  pada percobaan  ini  adalah  Laminar  Air  Flow  Cabinet  (LAFC),  autoklaf,  timbangan  analitik,  hot
plate magnetic stirer, oven, pisau scalpell, pinset, erlenmeyer 1000 mL, gelas piala 50 mL, botol kultur, bunsen, petridisk, gelas ukur 10 mL, botol kaca, rak kultur, mikropipet, handsprayer alat tulis, kamera.
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  memberikan  perlakuan  eksplan  daun  tanaman  nilam dengan beberapa konsentrasi zat pengatur tumbuh auksin jenis 2,4-D dan Picloram . Maing- masing perlakuan ditambahkan zat pengatur tumbuh BAP dengan konsentrasi  yang sama yaitu 1,0 mgl/L. Pemberian konsentrasi 1,0 mg/l BAP dirujuk dari hasil penelitian (Dwika, 2019). Adapun parameter pengamatan yang dilakukan yaitu waktu muncul kalus, Persentase eksplan hidup,  persentase  eksplan  membentuk  kalus,  warna  kalus  dan  tekstur  kalus.      Data  yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan uji F pada taraf 5%, apabila F hitung lebih besar dari F tabel maka analisis dilanjutkan dengan uji DMNRT pada taraf 5%. Berikut gambar tanaman nilam Aksesi Situak.
Gambar 1. Tanaman Aksesi Situak

## Hasil dan Pembahasan
1. Induksi Kalus
Kalus terbentuk dari eksplan yang mengalami pada proses penanaman  yang ditandai dengan  adanya  pembengkakan  dari  eksplan  tersebut  (Zulkarnain,  2014).  Waktu  muncul kalus dihitung dari ketika terlihat kalus mengalami perubahan atau pembengkakan eksplan (Marlin  et  al.,  2012)  juga  menjelaskan  pembengkakan  eksplan  merupakan  respon  dari tanaman yang mengakibatkan sebagian besar karbohidrat dan protein yang ada terakumulasi pada jaringan yang diberi pelukaan. Adapun rata-rata kalus, persentase eksplan hidup dan persentase eksplan membentuk kalus dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Induksi Kalus Tanaman Nilam Berbagai Perlakuan
Perlakuan Rata-rata Waktu Muncul Persentase Eksplan Hidup Persentase Eksplan Membentuk
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  rata-rata  waktu  muncul  kalus  tercepat  terdapat  pada perlakuan 1,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP yaitu 9,8 HST. Selanjutnya dilanjutkan dengan
Kalus (HST) Kalus Tanpa Perendaman Auksin 30,0 100% 56% 1,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP 9,8 100% 100% 2,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP 11,2 100% 89% 3,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP 17,4 100% 67% 1,0 mg/L Picloram + 1,0 mg/L BAP 19,7 100% 78% 2,0 mg/L Picloram + 1,0 mg/L BAP 11,3 100% 100% 3,0 mg/L Picloram + 1,0 mg/L BAP 25,3 100% 67%
A1
A2
A3
A4 A5 A6 A7
Induksi Kalus Tanaman Nilam ( Pogostemon Cablin Benth) dengan Pemberian Konsentrasi Auksin Jenis 2,4-D ( Dichlorophenoxyacetic Acid ) dan Picloram perlakuan 2,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP yaitu 11,2 HST, perlakuan 2,0 mg/L Picloram +  1,0  mg/L  BAP  11,3  HST,  perlakuan  3,0  mg/L  2,4-D  +  1,0  mg/L  BAP  17,4  HST,  1,0 mg/L Picloram + 1,0 mg/L BAP yaitu 19,7 HST, perlakuan 3,0 mg/L Picloram + 1,0 mg/L BAP yaitu 25,3 HST dan perlakuan Tanpa Perendaman Auksin 30 HST. Untuk persentase eksplan hidup, seluruh perlakuan menunjukkan persentase 100% eksplan hidup. Dan untuk pengamatan persentase  eksplan membentuk  kalus  menunjukkan pada perlakuan 1,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP dan 2,0 mg/L Picloram + 1,0 mg/L BAP menghasilkan persentase 100%.
Data  diatas  dapat  disimpulkan  pengaruh  pemberian  Auksin  dari  jenis  2,4-D  dan Picloram terbaik dalam pembentukan kalus nilam terdapat pada perlakuan 1,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP dan 2,0 mg/L Picloram + 1,0 mg/L BAP. Pertumbuhan  kalus dipenngaruhi oleh bebrapa faktor seperti ketersediaan sumber energi, lingkungan dan zat pengatur tumbuh yang  digunakan  terutama  keseimbangan  dan  kecocokan  konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh auksin dan sitokinin dalam kultur jaringan.

## 2. Tekstur dan Warna Kalus
Pembelahan  sel  yang  mengarah  pada  pembentukan  kalus  ditandai  dengan  adanya perubahan  yang  terjadi  pada  eksplan  dengan  pengangkatan  daun-daun.  Pembelahan  tidak terjadi  pada  semua  sel  dalam  jaringan  asal  ,  tetapi  hanya  sel  dilapisan  periphery  yang mengalami  diferensiasi  secara  terus  menerus  (Gunawan,  1988).  Warna  kalus menggambarkan  penampilan  visual  kalus  dan  diamati  dengan  melihat  secara  langsung sehingga dapat diketahui kalus yang masih memiliki sel-sel aktif dan atau sel-sel  yang telah mati  (tidak  mengalami  diferensiasi).  Gambar  2.  Menunjukkan  warna  dan  tekstur  kalus setelah  diberi  perlakuan  beberapa  konsentrasi  auksin  jenis  2,4-D  dan  Picloram  dengan maisng-masing ditambahkan BAP 1,0 mg/L. Pengamatan dilakukan selama  30 HST (Hari Setalah  Tanam).  Untuk  peelakuan  Tanpa  perendaman  Auksin  menunjukkan  eksplan berwarna  putih  dan  tidak  membentuk  kalus,  perlakuan  1,0  mg/L  2,4-D  +  1,0  mg/L  BAP terlihat  kalus  sebagian  berwana  putih  dan  sebagian  lagi  masih  berkembang  menuju pembentukan kalus yang ditandai dengan pembengkan dibagian eksplan daun yang berwarna hijau, perlakuan 2,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP hampir sama dengan perlakuan 1,0 mg/L 2,4-D  +  1,0  mg/L  BAP  dengan  sebagian  sisi  membentuk  kalus  dan  sebagian  sisi  lainnya masih proses perkembangan membentuk kalus, perlakuan 3,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP sudah membentuk kalus  dengan tekstur remah dan warna putih kecoklatan, perlakuan 1,0 mg/L  Picloram  +  1,0  mg/L  BAP  membentuk  kalus  remah  dan  warna  putih  kecoklatan, perlakuan  2,0  mg/L  Picloram  +  1,0  mg/L  BAP  membentuk  kalus  hijau  keputihan  dan perlakuan  pemberian  konsentrasi  3,0  mg/L  Picloram+  1,0  mg/L  BAP  membentuk  kalus dengan warna kecoklatan (browning).
Gambar 2. Perlakuan Tanpa Perendaman  Auksin ;  (A1), perlakuan 1,0 mg/L 2,4-D  + 1,0 mg/L BAP ; (A2), perlakuan 2,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP (A3), perlakuan 3,0 mg/L 2,4- D + 1,0 mg/L BAP (A4), perlakuan 1,0 mg/L Picloram +  1,0 mg/L BAP (A5), 2,0 mg/L Picloram + 3,0 mg/L BAP (A6), 3,0 mg/L Picloram + 1,0 mg/L BAP (A7).
Warna  kecoklatan  (browning)  ini  diakibatkan  adanya  metabolisme  senyawa  fenol bersifat toksik, yang sering terangsang akibat proses sterilisasi ekplan sehingga menghambat pertumbuhan  atau  bahkan  dapat  menyebabkan  kamatian  jaringan.  Zat  pengatur  tumbuh Auksin dari jenis 2,4-D dan picloram pada berbagai konsentrasi memberikan respon warna kalus yang berbeda. Kalus berwarna hijau merupakan kalus berkualitas tinggi (Fatmawati, 2008) menjelaskan warna kalus mengindikasi keberadaan klorofil dalam jaringan, semakin hijau warna kalus maka kandungan klorofilnya semakin banyak. Auksin jenis 2,4-D dalam perlakuan  induksi  kalus  yang  terbaik  pada  kosentrasi  1,0 mg/L  dibandingkan  dengan kosentrasi 2,0 mg/L dan 3,0 mg/L. (Budiarti, 2017) menjelaskan bahwa auksin jenis 2,4-D memiliki kelamahan yaitu pemberian 2,4-D dalam konsentrasi tinggi mengakibatkan eksplan daun termutasi. Maka dari itu pertumbuhan eksplan dengan konsentrasi tinggi 2,4-D pada induksi kalus nilam tidak tumbuh dengan baik.

## Kesimpulan
Pemberian konsentrasi Auksin jenis Picloram dan 2,4-D memberikan pengaruh terhadap pembentukan  kalus  tanaman  nilam.  Konsentrasi  terbaik  dalam  pembentukan  kalus  terdapat pada perlakuan konsentrasi 1,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP dan 2,0 mg/L Picloram + 1,0 mg/L. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan konsentrasi 1,0 mg/L 2,4-D + 1,0 mg/L BAP dan 2,0 mg/L Picloram + 1,0 mg/L BAP merupakan konsentrasi auksin yang terbaik.
Induksi Kalus Tanaman Nilam ( Pogostemon Cablin Benth) dengan Pemberian Konsentrasi Auksin Jenis 2,4-D ( Dichlorophenoxyacetic Acid ) dan Picloram

## Bibliografi
Budiarti, C. (2017). Pengaruh Teknik Sterilisasi dan Zat Pengatur Tumbuh 2, 4-D (2, 4 Dikloro Fenoksiasetat), BAP  (Benzil Amino Purin) terhadap Induksi Kalus Nilam (Pogostemon cablin Benth) Secara In Vitro. UIN Sunan Gunung Djati Bandung.
Dwika, K. W. (2019). PENGARUH KONSENTRASI 2, 4-D (Dichlorophenoxyacetic acid) DAN BAP  (Benzil  Amino  Purin)  TERHADAP  PEMBENTUKAN  KALUS TANAMAN NILAM (Pogostemon cablin Benth) SECARA IN VITRO . UNIVERSITAS ANDALAS.
Fatmawati. (2008). Peranan Hormon Tumbuh Dalam Memacu Pertumbuhan Algae. Makalah Falsafah Sains. Program Pasca Sarjana S , 3 .
Marlin, M., Yulian, Y., & Hermansyah, H. (2012). INISIASI KALUS EMBRIOGENIK PADA KULTUR  JANTUNG  PISANG  ‘CURUP’DENGAN  PEMBERIAN  SUKROSA,  BAP DAN 2, 4-D. Agrivigor , 11 (2), 276–284.
Paul, A., Thapa, G., Basu, A., Mazumdar, P., Kalita, M. C., & Sahoo, L. (2010). Rapid plant regeneration,  analysis  of  genetic  fidelity  and  essential  aromatic  oil  content  of micropropagated plants of Patchouli, Pogostemon cablin (Blanco)  Benth.–An industrially important aromatic plant. Industrial Crops and Products , 32 (3), 366–374.
Zulkarnain. (2014). Kultur Jaringan Tanaman . Bumi Aksara.