## Jurnal Pro-Life, Volume 11 Nomor 2, Juli 2024
Potensi Antioksidan, Skrining, dan Identifikasi Metabolit Sekunder Ekstrak Beras Hitam (Oryza sativa L. Indica)
Fri Rahmawati 1,3* , Maria Bintang 1,3 , Albert Jackson Yang 2,3 , Ni Made Devi Damayanti 4 1 Departemen Biokimia Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Kristen Indonesia, Jakarta 2 Departemen Biomedik, Fakultas Kedokteran, Universitas Kristen Indonesia, Jakarta 3 Pusat Studi Herbal Medik dan Biodiversitas, Universitas Kristen Indonesia, Jakarta
4 Fakultas Kedokteran, Universitas Kristen Indonesia, Jakarta *Corresponding author : fri_rahmawati@yahoo.co.id

## Article History
Received    :   02 Maret 2024 Approved   :   28 Juni 2024 Published   :  19 Juli 2024
Keywords antioxidants, black rice,
identification, secondary metabolites, screening

## ABSTRACT
Black rice (Oryza sativa L. indica) is a variety of pigmented rice that, apart from acting as a popular food ingredient, can also be used for health because it has active compounds that have the potential to act as  antioxidants.  The  research  carried  out  aimed  to  determine antioxidant  potency,  conduct  secondary  metabolite  screening,  and characterize the active compound content of black rice extract. It was macerated  using  a  96%  pro-analysis  (p.a.)  ethanol  solvent. Antioxidant  potency  was  tested  using  the  2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl  (DPPH)  and  ferric  reducing  antioxidant  power (FRAP) methods, secondary metabolite screening using the Harbone method,  and  identification  of  active  compounds  using  Gas Chromatography-Mass  Spectrometry  (GC-MS).  It  was  found  that black  rice  extract  has  potential  as  an  antioxidant,  using  the  DPPH method, the 50% Inhibition Concentration (IC 50 ) value of black rice extract and vitamin C was 97.34 ppm and 2.64 ppm, respectively, but using  the  FRAP  method,  the  IC 50 values  of  black  rice  extract  and vitamin  C  were  181.83 ppm and  7.84 ppm,  respectively.  Secondary metabolite  screening  detected  that  in  black  rice  extract  there  were active  compounds  in  the  flavonoid  and  steroid  groups,  GC-MS identification  results  showed  that  the  extract  contained  the  most compound, hexadecanoic acid.

## PENDAHULUAN
Radikal bebas dihasilkan dalam tubuh manusia  melalui  berbagai  mekanisme. Keseimbangan  antara  radikal  bebas  dan antioksidan diperlukan secara fisiologis agar
bekerja  dengan  baik.  Apabila  dalam  tubuh manusia  terdapat  radikal  bebas  yang  lebih tinggi  dari  kemampuan  tubuh  untuk mengendalikannya maka tubuh akan menghasilkan  stres  oksidatif  yang  dapat
© 2024 Universitas Kristen Indonesia Under the license CC BY-SA 4.0

## Pro-life

## Jurnal Pendidikan Biologi, Biologi, dan Ilmu Serumpun
ejo
Jurnal Pro-Life, 11(2): 129-141, Juli 2024
menyebabkan  berbagai  penyakit  dalam tubuh (Alkadi & Hourieh, 2020). Antioksidan  berperan  penting  menghadapi stres oksidatif.
Antioksidan  adalah  senyawa  kimia yang  bisa  menunda  atau  mencegah  reaksi oksidasi  dan  banyak  digunakan  di  berbagai bidang  seperti  kedokteran,  kosmetik,  dan industri  makanan  (Hu  et  al.,  2024).  Tubuh manusia membutuhkan antioksidan dari luar ketika terpapar radikal bebas yang berlebih. Antioksidan  eksogen  dapat  diperoleh  dari bahan  makanan,  selain  sebagai  bahan pangan,  senyawa  bioaktif  yang  terdapat  di dalam  pangan    tertentu  juga  memiliki banyak  peranan  dengan  berbagai  aktivitas biologis,  salah  satunya  bertindak  sebagai antioksidan.  Senyawa  antioksidan  terdapat dalam  banyak  tumbuhan  pangan,  salah satunya  antosinin.  Aktivitas  antioksidan antosianin  dalam  makanan  sudah  diketahui dan  banyak  diteliti,  sehingga  antosianin dapat mencegah proses oksidasi yang terjadi secara alami (Tena et al., 2020).
Antosianin adalah metabolit sekunder tumbuhan  golongan  flavonoid.  Antosianin pada  banyak  tanaman  merupakan  pigmen warna yang larut dalam  air dan terkandung dalam  bunga,  daun,  buah,  akar,  umbi- umbian  dan  biji.  Antosinin  berperan  dalam meningkatkan  toleransi  tanaman  terhadap berbagai  tekanan  abiotik  seperti  salinitas, kekeringan,  cahaya  berlebihan,  radiasi ultraviolet  dan  stres  dingin  (Alappat  &
Alappat,  2020).  Antosianin  selain  sebagai fitopigmen juga berperan sebagai antioksidan, sehingga berpotensi dimanfaatkan  untuk  pencegahan  berbagai penyakit  kronis  pada  manusia  (Nassour  et al., 2020).
Antosianin  merupakan  antioksidan yang digunakan sebagai pewarna alami dan bermanfaat bagi kesehatan manusia (Khoo et al., 2017). Antosianin berkontribusi terhadap detoksifikasi
Reactive Oxygen Species (ROS),  beras  yang  diperkaya antosianin  atau  varietas  padi  berpigmen merupakan  alternatif  yang  memungkinkan untuk mengurangi malnutrisi (Mackon et al., 2021). Antosianin banyak digunakan dalam industri  makanan,  salah  satu  bahan  pangan yang banyak mengandung antosianin adalah beras hitam.
Beras hitam merupakan beras berpigmen  yang  kaya  antosianin,  sehingga dapat digunakan  sebagai pangan fungsional dalam menjamin keamanan pangan dan gizi di seluruh dunia (Arifa et al., 2021; Mackon et al., 2023). Sampai sekarang, beras hitam sudah  terdapat  lebih  dari  200  varietas  di seluruh  dunia,  terutama  tersebar  di  Asia Tenggara dan sebagian Afrika (Panda et al., 2022).  Selain  sebagai  bahan  pangan, pemanfaatan  beras  hitam  dalam  bidang kesehatan  sudah  banyak  dilakukan  dan dikembangkan. Kandungan senyawa bioaktif  beras  berpigmen  berperan  besar dalam  menghasilkan  aktivitas  antioksidan
Jurnal Pro-Life, 11(2): 129-141, Juli 2024
yang  tinggi  sehingga  mampu  mengurangi stres oksidatif, mencegah kanker, komplikasi kardiovaskular, diabetes, penuaan dan lain-lain (Seawan et al., 2014; Kumar  et  al.,  2020).  Menurut  Hernawan  et al.  (2016)  dinyatakan  bahwa  beras  hitam mempunyai  kadar  gula  pereduksi  terendah dengan kandungan serat terbesar dibandingkan  beras  putih  dan  beras  merah, sehingga  beras  hitam  dapat  dimanfaatkan dalam  mencegah  Diabetes  Melitus  (DM). Beras  hitam  dilaporkan  dapat  menurunkan konsentrasi  glukosa  darah  dan  trigliserida secara  bermakna  (Daeli  et  al.,  2020). Peranan  beras  hitam  dalam  mencegah  DM diduga  sangat  terkait  dengan  kandungan senyawa  bioaktif  pada  beras  hitam  yang bertindak  sebagai  antioksidan.  Antioksidan memiliki efek antidiabetes dengan mencegah  terjadi  hiperglikemia,  sehingga autooksidasi  glukosa  untuk  membentuk radikal bebas dapat dihambat.
Pembentukan radikal bebas
melampaui kemampuan pertahanan antioksidan  endogen  dapat  menyebabkan disfungsi makro dan mikrovaskuler (González  et  al.,  2023),  maka  untuk mengatasi hal tersebut dibutuhkan antioksidan eksogen yang berasal dari bahan makanan  seperti  beras  hitam.  Selama  ini penelitian  aktivitas  antioksidan  beras  hitam telah  banyak  dilakukan,  namun  identifikasi senyawa  aktif  beras  hitam  belum  banyak dilakukan, sehingga selain mengukur
kemampuan  menangkap  radikal  bebas  dan kapasitas  antioksidan  juga  perlu  dilakukan skrining  serta  identifikasi  senyawa  aktif beras  hitam.  Berdasarkan  hal  tersebut penelitian  bertujuan  untuk  mengetahui potensi antioksidan, skrining serta identifikasi  metabolit  sekunder  beras  hitam ( Oryza sativa L. indica ).

## METODE PENELITIAN
Penelitian  yang  dilakukan  tergolong penelitian  eksperimental  laboratorium  pada beras  hitam  merek  “X”  dari  Tegal-Jawa Tengah dan telah dideterminasi di Laboratorium  Herbarium  Badan  Riset  dan Inovasi  Indonesia  (BRIN)  Cibinong-Jawa Barat.  Penelitian  meliputi  uji  potensi antioksidan, skrining dan identifikasi senyawa aktif ekstrak beras hitam. Prosedur penelitian dijelaskan sebagai berikut.

## Persiapan Ekstrak Beras Hitam
Beras  hitam  sebanyak  500  g  dicuci, ditiriskan  dan  keringkan  dengan  oven  suhu 60 o C  hingga  berat  konstan  lalu  ditimbang. Kemudian beras hitam dihaluskan menggunakan blender sampai  menjadi bubuk,  ayak  dengan  ayakan  100  mesh sehingga diperoleh bubuk beras hitam.
Sebanyak  400  g  bubuk  beras  hitam dilarutkan dalam 1,2 L etanol 96% p.a untuk dimaserasi dalam waktu 3 hari, namun setiap 24  jam  filtrat  disaring  dan  pelarut  diganti dengan  1,2  L  etanol  96%  p.a  yang  baru. Pelarut dalam filtrat diuapkan dengan rotary
Jurnal Pro-Life, 11(2): 129-141, Juli 2024
evaporator di  temperatur  60 o C  hingga didapatkan ekstrak kental yang tidak berbau etanol kemudian di simpan di dalam lemari pendingin.

## Potensi Antioksidan Beras Hitam
Potensi  antioksidan  ekstrak  beras hitam  diuji  melalui  2  metode  yaitu  metode DPPH  dan  FRAP  modifikasi  dengan memakai asam askorbat (vitamin C) sebagai standar antioksidan.
Metode DPPH modifikasi (Baliyan et al.,  2022)  menggunakan  pereaksi  DPPH sebagai  molekul  radikal  bebas  dengan mengukur absorbansi perubahan warna dari ungu  menjadi  kuning  pada  sampel  setelah ditambahkan pereaksi DPPH.  Ekstrak beras hitam  dilarutkan  dalam  etanol  dengan masing-masing konsentrasi 10 ppm, 50 ppm, 100  ppm,  150  ppm  dan  200  ppm.  Deret konsentrasi vitamin C yang dipakai adalah 1 ppm, 2.5 ppm, 5 ppm, 7.5 ppm dan 10 ppm. Stok  pereaksi  DPPH  0,1mM  dibuat  pada temperatur  rendah  dan  terjaga  dari  cahaya matahari.
Larutan stok ekstrak 1000 ppm dibuat dengan  cara  melarutkan  0,05  g  ekstrak dalam 50 mL etanol sedangkan larutan stok vitamin  C  100  ppm  dibuat  dengan melarutkan 0,1 g vitamin C dalam etanol 100 mL.  Pereaksi  DPPH  0,1  mM  dalam  etanol diambil  sebanyak  2  mL  lalu  ditambahkan pada  200  µL  dari  masing-masing  deretan konsentrasi ekstrak beras hitam dan standar vitamin C. Kemudian masing-masing
campuran ekstrak dan vitamin C dihomogenisasi  dan  disimpan  dalam  ruang gelap  dengan  temperatur  37 o C  selama  30 menit, kemudian serapan ekstrak dan standar diukur  memakai  spektrofotometer  UV-VIS pada  panjang  gelombang  (λ)  517  nm. Potensi  antioksidan  ekstrak  dan  standar diperoleh dari persen inhibisi dengan rumus sebagai berikut.
Nilai  konsentrasi  dan  persen  inhibisi bahan yang diuji dan standar masing-masing diplotkan ke sumbu x dan y pada persamaan regresi linear yang diperoleh yaitu y = a + bx sehingga nilai  IC 50 (inhibitor concentration 50%) dari bahan yang diuji dan standar dapat ditentukan  dengan  menyatakan  nilai  y sebesar 50 dan nilai x yang diperoleh sebagai IC 50 . Nilai IC 50 merupakan besar konsentrasi larutan bahan uji maupun standar vitamin C yang  dibutuhkan  dalam  mengurangi  50% radikal bebas DPPH.
Metode FRAP modifikasi (Iqbal et al., 2017 ) ,  sebanyak  1  ml  ekstrak  beras  hitam yang  terlarut  dalam  etanol  diencerkan dengan  berbagai  konsentrasi  (12.5  ppm,  25 ppm, 50 ppm, 100, 200 ppm, 500 ppm dan 1000  ppm),  ke  dalam  masing-masing  deret konsentrasi ekstrak tersebut dimasukan 1 ml bufer  fosfat  0.2  M  (pH  =  6.6)  dan  kalium heksasianoferat, lalu dikocok dan diinkubasi selama 20 menit dalam penangas air bersuhu 50°C.  Sebanyak  1  ml  asam  trikloroasetat
% Inhibisi = Absorbansi blanko − absorbansi sampel Absorbansi blanko
× 100%
(TCA)  1%  dimasukkan  ke  masing-masing deret konsentrasi ekstrak, lalu dicampurkan dan  disentrifugasi  dengan  kecepatan  3000 rpm selama 10 menit.
Supernatan  ekstrak  pada  masing- masing  konsentrasi  diambil  sebanyak  1  ml dan  dicampurkan  0.2  ml  FeCl 3 0.1%,  lalu campuran diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 30  menit  di  ruangan  gelap.  Absorbansi ekstrak  dengan  konsentrasi  yang  berbeda- beda diukur memakai spektrofotometer UV- Vis  pada  λ  =  700  nm.  Sebagai  blanko digunakan  etanol  dan  kurva  standar  dibuat memakai  larutan  vitamin  C.  Potensi antioksidan  dibandingkan  dengan  daya reduksi dari ekstrak, nilai % reducing powe r ekstrak  diperoleh  menggunakan  persamaan berikut.
Keterangan: A ekstrak merupakan serapan sampel A blanko merupakan serapan blanko
Skrining  Metabolit  Sekunder  Beras Hitam
Skrining metabolit sekunder (senyawa aktif) ekstrak beras hitam  memakai metode Harbone yang dimodifikasi oleh Rahmawati et al. (2022), meliputi uji alkaloid, flavonoid, saponin,  steroid,  tanin  dan  triterpenoid.  Uji alkaloid,  ekstrak  beras  hitam  sebanyak  1  g direaksikan dengan 6-7 tetes NH 3 dan 5 ml CHCl 3 lalu  disaring.  Filtrat  yang  diperoleh ditambahkan dengan 1 ml H 2 SO 4 2 M hingga
membentuk 2 lapisan, lapisan atas merupakan  lapisan  asam.  Beberapa  tetes lapisan  asam  diteteskan  ke  3  sumur  yang berbeda pada microplate . Filtrat asam dalam sumur pertama ditambahkan dengan beberapa  tetes  pereaksi  Mayer,  filtrat  asam sumur  kedua  ditambahkan  dengan  pereaksi wagner sedangkan filtrat asam sumur ketiga ditambahkan  dengan  pereaksi  Dragendorf. Ekstrak  beras  hitam  positif  terkandung alkaloid  bila  dihasilkan  endapan  jingga dengan pereaksi Dragendorf, endapan putih dengan pereaksi Mayer dan endapan coklat dengan pereaksi Wagner dan.
Uji  flavonoid ,  ekstrak  beras  hitam sebanyak  5  g  dilarutkan  dan  dipanaskan dengan akuades secukupnya selama 5 menit. Filtrat disaring dan dicampurkan dengan 0,5 g  bubuk  magnesium,  tambahkan  asam klorida 37% dan etanol 96% masing masing sebanyak  10  tetes,  lalu  1  ml  amil  alkohol kemudian  dikocok.  Ekstrak  beras  hitam terkandung  flavonoid  bila  lapisan  amil alkohol berwarna jingga.
Uji  saponin ,  sebanyak  5  g  ekstrak beras  hitam  dilarutkan  dengan  akuades secukupnya lalu dipanaskan selama 5 menit, lalu saring. Filtrat dikocok dengan kuat-kuat selama 5 menit, bila dihasilkan busa bersifat stabil  dan  tidak  hilang  selama  10  menit setelah  ditambahkan  1  tetes  HCl  2  N menandakan  dalam  ekstrak  beras  hitam terkandung saponin.
% reducing powe r = A ekstrak – A blanko / A ekstrak
Jurnal Pro-Life, 11(2): 129-141, Juli 2024
Uji  tanin , sebanyak 5 g  ekstrak beras
hitam dilarutkan dengan akuades secukupnya,  panaskan  selama  5  menit, dinginkan  lalu  filtrat  disaring.  Kemudian filtrat  tersebut  direaksikan  dengan  3  tetes FeCl 3 10%. Ekstrak beras hitam terkandung tanin  jika  larutan  berubah  menjadi  hitam kehijauan.
Uji  triterpenoid  dan  steroid ,  ekstrak beras  hitam  sebanyak  1  g  dilarutkan  dalam 25 ml etanol panas 50 o C lalu disaring. Filtrat dipanaskan sampai mengering, lalu direaksikan dengan 1 ml dietil eter. Larutan dihomogenasikan  lalu  ditambahkan  dengan H 2 SO 4 pekat  dan  CH 3 COOH  anhidrat masing-masing  sebanyak  1  tetes.  Warna merah atau ungu yang terbentuk menyatakan terdapat  triterpenoid  serta  warna  hijau  atau biru  menandakan  terkandung  steroid  dalam ekstrak beras hitam.

## Identifikasi Senyawa Beras Hitam
Identifikasi  senyawa  aktif  dalam ekstrak  beras  hitam  ditentukan  dengan memakai  GC-MS.  Sebanyak  5  μL  ekstrak hitam  dimasukkan  ke  dalam  alat  analisis GC-MS  berkolom  HP  Ultra  2  dengan panjang  30  m,  diameter  0.20  mm  dan ketebalan  0.11  μm.  Temperatur  awal  oven sebesar  80°C  dan  naik  3°C/menit  hingga suhu  150 o C  ditahan  selama  1  menit  lalu temperatur ditingkatkan 20°C/menit sampai 280°C  ditahan  kembali  selama  26  menit, sedangkan suhu injeksi dilakukan pada suhu
250°C. Helium dipakai sebagai gas pembawa  dengan  laju  kolom  sebesar  1.2 mL/menit dan split rasio sebesar 8:1.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Potensi Antioksidan Beras Hitam
Potensi  antioksidan  ekstrak  beras hitam diuji menggunakan metode DPPH dan FRAP  dengan  memakai  asam  askorbat sebagai  kontrol  positif.    Penggunaan  kedua metode  antioksidan  tersebut  didasarkan karena  terdapat  korelasi  yang  sangat  besar antara  kemampuan  dalam  menghambat radikal  bebas  dengan  potensi  reduksi polihidroksi  pada  ion  besi,  sehingga pemakaian kedua metode tersebut dalam uji antioksidan  sangat    memungkinkan  karena saling    mempengaruhi  dan  bahkan  dapat menggantikan  (Maesaroh et  al., 2018). Penggunaan metode DPPH dan FRAP dalam pengukuran antioksidan berdasarkan konsep bahwa  metode  DPPH  untuk  mengukur kemampuan  menangkap  radikal  bebas sedangkan  dan  metode  FRAP  mampu mengukur  kapasitas  antioksidan  suatu senyawa.
Berdasarkan hasil penelitian diketahui ekstrak beras hitam memiliki potensi sebagai antioksidan,  potensi  antioksidan  ekstrak beras hitam dan vitamin C yang dinyatakan dengan  nilai  IC 50 menggunakan  metode DPPH dan FRAP. Grafik nilai  IC 50 ekstrak beras hitam dan vitamin C memakai metode DPPH dan FRAP disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1. Grafik nilai IC 50 ekstrak beras hitam dan vitamin C memakai metode DPPH dan FRAP
Nilai  IC 50 antioksidan  ekstrak  beras hitam  dan  vitamin  C  memakai  metode DPPH  masing-masing  sebesar  97,34  ppm dan  2,64  ppm,  sedangkan  dengan  metode FRAP  diperoleh  nilai  IC 50 ekstrak  beras hitam dan vitamin C masing-masing sebesar 181,  83  ppm  dan  7,84  ppm.  Berdasarkan hasil  tersebut  diketahui  hasil  pengujian potensi antioksidan ekstrak beras hitam lebih tinggi memakai metode DPPH dibandingkan dengan metode FRAP. Kondisi asam dalam pengujian  antioksidan  metode  FRAP  bisa mengurangi kemampuan reduksi zat antioksidan karena senyawa asam mengalami  protonasi  (Sharma    dan  Bhat 2009).  Perbedaan  nilai  IC 50 ekstrak  beras hitam  dengan  menggunakan  DPPH  dan FRAP  dapat  disebabkan  karena  perbedaan prinsip  pengukuran  antioksidan  diantara kedua metode antioksidan tersebut. Metode DPPH  mengukur  kekuatan  antioksidan
dalam menangkap radikal bebas, sedangkan metode  FRAP  menunjukkan  kemampuan antioksidan  untuk  mencegah  terbentuknya radikal bebas (Hetharia et al., 2020). Faktor lain  yang  dapat  menyebabkan  perbedaan nilai  IC 50 beras  hitam  adalah  pemanasan. Pemanasan ekstrak etanol 70% beras hitam cenderung meningkatkan kemampuan penangkapan radikal bebas (metode DPPH) dan  menstabilkan  aktivitas  antioksidan (metode  FRAP)  (Tan  et  al.,  2016).  Hasil tersebut sejalan dengan pernyataan Yuliantari  et  al.  (2017)  bahwa  temperatur dan waktu ekstraksi mempengaruhi aktivitas antioksidan.
Antioksidan ekstrak etanol 96% beras hitam  memakai  metode  DPPH  tergolong sangat  kuat  dengan  nilai  IC 50 <  10  ppm (Prasetyo et al., 2021) tetapi hasil penelitian menunjukkan  antioksidan  ekstrak  beras hitam  tergolong  kuat,  perbedaan  hasil
Jurnal Pro-Life, 11(2): 129-141, Juli 2024
tersebut  dapat  disebabkan  oleh  berbagai faktor  misalnya  perbedaan  asal dan penyosohan pada beras hitam yang berbeda sehingga  senyawa  aktif  dalam  beras  hitam jadi berkurang. Kekuatan antioksidan merupakan  kemampuan  suatu  senyawa untuk  menangkap  dan  mereduksi  radikal bebas.  Kekuatan  antioksidan  berbanding terbalik  dengan  nilai  IC 50 (Amin  et  al.,
2022).  Kekuatan  antioksidan  tergolong sangat  besar,  besar,  sedang  dan  rendah dengan  nilai inhibitor  concentration 50% masing-masing  sebesar  <  50  ppm,  51-100 ppm, 101-150 ppm dan > 151 ppm, namun tidak bersifat aktif bila nilai IC 50 > 500 ppm (Jun  et  al.,  2006).  Beras  hitam  pada penelitian mempunyai nilai IC 50 lebih kecil dibandingkan  beras  hitam  lokal  asal Bulungan Kalimantan Utara yang mempunyai nilai IC 50 kisaran antara 176,62 -  287,14  ppm  (Pangerang,  2021).  Beras hitam mampu menangkal radikal bebas lebih besar  dibandingkan  varietas  beras  warna putih dan merah, sehingga dapat digunakan untuk meningkatkan kesehatan dan menjadi produk  pangan  fungsional  (Tyagi  et  al., 2022).
Skrining  Metabolit  Sekunder  Beras

## Hitam
Skrining metabolit sekunder dilakukan dalam rangka menelusuri golongan senyawa aktif    ekstrak  beras  hitam  secara  kualitatif. Hasil  pengujian  menunjukkan  di  dalam
ekstrak beras hitam terdeteksi senyawa aktif golongan  flavonoid  dan  steroid.  Flavonoid banyak  ditemukan  pada  berbagai  tanaman, berperan  penting    pada  pertumbuhan  dan perkembangan  tanaman  serta  memiliki potensi  pemanfaatan  yang  besar  dalam makanan  dan  obat-obatan.  Salah  satu  jenis flavonoid  yang  sangat  penting  adalah antosianin (Liu et al 2021).
Beras  berpigmen  sebagian  besar berwarna  hitam,  ungu,  dan  merah  serta mengandung  berbagai  metabolit  sekunder (flavonoid, tanin, fenol, sterol, dan oryzanol ) dan  minyak  atsiri.  Profil  fitokimia  beras hitam  ditandai  dengan  adanya  antosianin, yaitu golongan flavonoid berwarna kemerahan hingga ungu yang terdapat pada beras hitam dan biji-bijian sereal berpigmen lainnya  (Pornngarm et  al 2019).  Flavonoid dan  fenol  memiliki  potensi  yang  besar sebagai  antioksidan  alami  (Kaurinovic  & Vastag  2019).  Hasil  skrining  metabolit sekunder ekstrak beras hitam disajikan pada Tabel 1 .
Tabel  1. Hasil  skrining  metabolit  sekunder ekstrak beras hitam
No. Golongan Senyawa Aktif Hasil Pengujian 1 Alkaloid: - Wagner - Mayer - Dragendorf - - - 2 Flavonoid + 3 Saponin - 4 Steroid + 5 Tanin - 6 Triterpenoid - Keterangan:
(+) terdeteksi terdapat golongan senyawa aktif yang diuji (-) tidak terdeteksi terdapat golongan senyawa aktif yang diuji
Jurnal Pro-Life, 11(2): 129-141, Juli 2024
Hasil  penelitian  lain  menunjukkan dalam  ekstrak  beras  hitam  selain  terdapat flavonoid  juga  terkandung  tanin  dan triterpenoid (Prasetyo et al., 2021). Perbedaan  hasil  skrining  fitokimia  dapat terjadi karena perbedaan pelarut dan variasi konsentrasi  pelarut  pada  ekstraksi  bahan alam sehingga dapat mempengaruhi kandungan  senyawa  aktif  yang  terdapat dalam  suatu  ekstrak.  Hal  tersebut  sejalan dengan  Widarta  &  Arnata  (2017)  bahwa ekstraksi  bahan  alam  dipengaruhi  oleh berbagai faktor seperti temperatur dan lama waktu  ekstraksi,  jenis  dan  konsentrasi pelarut, perbandingan pelarut dengan bahan, serta  ukuran  partikel.  Menurut  Cirak  & Radusiene  (2019)  kandungan  senyawa bioaktif  suatu  tanaman  sangat  bervariasi
karena dipengaruhi berbagai  faktor internal dan  eksternal  seperti  lokasi  pada  organ tanaman,  tahap  fenologi,  profil  genetik, faktor abiotik dan biotik lingkungan (tempat tumbuh,  cahaya,  suhu,  radiasi,  kekeringan dan  salinitas  tanah,  patogen,  dan  serangan herbivora).

## Identifikasi Beras Hitam
Analisis  GC-MS  merupakan  tahap awal  untuk  memahami  sifat  dasar  senyawa bioaktif pada tanaman obat, sehingga dapat membantu  proses  isolasi  suatu  senyawa sesuai  aktivitas  biologis  yang  dimilikinya. Berdasarkan hasil identifikasi menggunakan GC-MS terdeteksi terdapat 20 jenis senyawa yang  terdapat  dalam  ekstrak  beras  hitam. Analisis GC-MS ekstrak beras hitam disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Analisis GC-MS ekstrak beras hitam
No. Retention Time (menit) Quality Nama Senyawa Kandungan (%) 1 8,332 72 Glycerin 1,42 2 27,087 91 Ar-tumerone 2.25 3 28,542 81 Xanthorrhizol 2,09 4 28.686 58 Naphthalene,2-(1-methyl-2-propenyl) 1,27 5 29.093 59 Bensene,1,4dimethyl-2,5-bis(1,methylethyl)- 1,66 6 29.397 45 5-(2’,3’,5’,6’-tetradeuterioocta-2’,5’,-dien-1’-yl)-4,5- dideteriotera hydrofuran-2-one 1,56 7 29.679 98 Hexadecanoic,methyl ester 1,95 8 29.741 38 Alpha-methyl mannofuranoside 1,75 9 30.328 99 Hexadecanoic acid* 24,83 10 30.803 99 9-octadecenoic acid,methhyl ester 3,64 11 31.341 99 9,12-octadecadienoic acid(z,z)- 13,15 12 31.424 99 Octadecanoic acid 3,00 13 32.113 90 1,9-tetradecadiene 1,47 14 40.436 97 Vitamin E 2,51 15 46,890 60 Ergosta-8,25-dien-3-one,14,24-dimethyl- 1,33 16 47.835 60 Stigmast-5-en-3-ol 5,89 17 47.862 64 taraxasterol 2,99 18 49.290 97 12-oleanen-3-yl acetate,(3.alpha.)- 1,90 19 49.765 95 Stigmast-4-en-3-one 4,82 20 51.103 94 Methyl 3-oxours-12-en-23-oate 14,02
Keterangan: (*) senyawa yang paling banyak terkandung
Jurnal Pro-Life, 11(2): 129-141, Juli 2024
Bioaktivitas beberapa senyawa utama dalam ekstrak beras hitam dapat dilihat pada Tabel  2 .  Komponen  senyawa  terbanyak pada  ekstrak  hitam  adalah hexadecanoic acid dengan  %  kandungan  (nilai retention area )  sebesar  24,83%.  Merujuk  situs pubcem dan webbook  National  Institute  of Standards and Technology (NIST) diketahui senyawa hexadecanoic  acid memiliki beberapa nama sinomin  yaitu n-hexadecoic acid , palmitic
acid dan pentadecanecarboxylic  acid .  Salah  satu asam  lemak  jenuh  yang  banyak  ditemukan pada beras hitam adalah hexadecanoic acid (Kang  et  al.,  2011). N-hexadecanoic  acid memiliki aktivitas biologis yang cukup baik, n-hexadecanoic  acid yang  terkandung dalam  ekstrak  etanol  daun Ipomoea eriocarpa dapat  digunakan  sebagai  agen antioksidan  dan  antibakteri  alami  dalam industri farmasi masa depan (Ganesan et al., 2022). n-hexadecanoic  acid memiliki aktivitas antiandrogenik, antioksidan, hemolitik, penghambatan 5-alpha- reduktase,  hipokolesterolemia,  nematisida, aktivitas pestisida dan bahkan juga digunakan sebagai bahan penyedap makanan (Jananie et al., 2011).
Hexadecanoic  acid dari  alga T.  ornata memiliki  aktivitas  antioksidan  sehingga dapat digunakan sebagai senyawa antikanker potensial di masa depan (Bharath et al., 2021).

## SIMPULAN
Ekstrak beras hitam  memiliki  potensi antioksidan dengan  metode  FRAP  dan DPPH dihasilkan nilai  IC 50 masing-masing sebesar 181,  83  ppm  dan    97,34  ppm. F lavonoid  dan  steroid terkandung  dalam ekstrak  beras  hitam. Hasil  Identifikasi dengan GC-MS menunjukkan bahwa dalam ekstrak  beras  hitam  terdapat  senyawa  aktif dengan kandungan terbesar berupa hexadecanoic acid.

## DAFTAR PUSTAKA
Alappat B., Alappat J. (2020). Anthocyanin Pigments: Beyond
Aesthetics. Molecules ,  25  (23),  5500. doi: 10.3390/molecules25235500 Alkadi, Hourieh. (2020). A Review on Free Radicals  and  Antioxidants. Infectious Disorders  -  Drug  Targets  (Formerly Current  Drug  Targets  -  Infectious Disorders) , 20 (1), 16-26.
Amin  A.,  Khairi  N.,  Hendrarti  W.  (2022).
Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol Batang,  Daun,  dan  Akar  Kopasanda ( Chromolaena  odorata L.)  dengan Metode  FRAP  ( Ferric  Reducing Antioxidant Power ). Jurnal Sains dan Kesehatan , 4 (5), 473-480.
Arifa A.H., Elvira Syamsir E., Budijanto S. (2021). Karakterisasi fisikokimia beras hitam  ( Oryza  sativa L.)  dari  Jawa Barat, Indonesia. Agritech , 41 (1), 15- 24. DOI: http://doi.org/10.22146//agritech.5330 7 Baliyan S.,  Mukherjee R., Priyadarshini A.,
Vibhuti  A.,    Gupta  A.,  Pandey  R.P., Chan  C.M.  (2022).  Determination  of antioxidants by DPPH radical scavenging  activity  and  quantitative phytochemical  analysis  of Ficus religiosa . Molecules , 27, 1326.
Jurnal Pro-Life, 11(2): 129-141, Juli 2024
Bharath  B.,  Perinbam  K.,  Devanesan  S., AlSalhi  M.S.,  Saravanan  M.  (2021). Evaluation  of  the  anticancer  potential of  hexadecanoic  acid  from  brown algae Turbinaria  ornata on  HT–29 colon cancer cells. Journal of Molecular  Structure ,  1235,  130229.
https://doi.org/10.1016/j.molstruc.202 1.130229
Daeli  E.,  Ardiaria  M.,  Candra  A.  (2020).
Pengaruh pemberian nasi beras merah ( Oryza  nivara )  dan  nasi  beras  hitam ( Oryza  sativa L.Indica)  terhadap perubahan  kadar  gula  darah  dan trigliserida tikus wistar ( Rattus norvegicus )  diabetes  melitus  tipe  2. Journal of Nutrition and Health, 6 (2), 42-56.
https://doi.org/10.14710/jnh.6.2.2018.
42-56
Farasat  M.,  Khavari-Nejad  R.A.,  Nabavi S.M., Namjooyan F. (2014).
Antioxidant  activity,  total  phenolics and flavonoid contents of some edible green seaweeds from Northern Coasts of the Persian Gulf. Iranian Journal of Pharmaceutical  Research ,  13(1),163- 170.
Ganesan T., Subban M., Christopher Leslee
D.B.,  Kuppannan  S.B.,  Seedevi  P.
(2022).  Structural  characterization  of
n-hexadecanoic acid from the leaves of
Ipomoea eriocarpa and its antioxidant and  antibacterial  activities. Biomass Conversion and Bioreﬁnery . DOI:10.1007/s13399-022-03576-w
González  P.,  Lozano  P.,  Ros  G., Solano  F.
(2023). Hyperglycemia and Oxidative Stress:  An  Integral,  Updated  and
Critical  Overview  of  Their  Metabolic
Interconnections.
International Journal of Molecular Sciences , 24(11), 9352. doi: 10.3390/ijms24119352 Hernawan  E.,  Meylani  V.  (2016).  Analisis Karakteristik Fisikokimia Beras Putih, Beras Merah, dan Beras Hitam ( Oryza sativa L., Oryza  nivara dan Oryza sativa L.  indica). Jurnal  Kesehatan Bakti  Tunas  Husada ,  15  (1),  79-91.
DOI: http://dx.doi.org/10.36465/jkbth .v15i1.154
Hetharia  G.E.,  Briliannita  A.,  Astuti  M.,
Marsono  Y.  (2020).  Antioxidant extraction based on black rice  ( Oryza Sativa L .  Indica )  to  prevent  free radical. IOP  Conference  Series:
Materials  Science  and  Engineering ,
823(1):012002. DOI:10.1088/1757-
899X/823/1/012002
Hu Y., Zheng  Z.,  Zhai  D.,  Liang  P.,
Wang Z., Jiang  C.,  Guo Y.,  Chen  H.,
Shen  C.,  Wu  Y., Liu L.,  Yi  Y., Zhu H., Liu Q. (2024). A mini-review: Exploring the application prospects of the  three  major  rules  in  the  field  of antioxidants. Journal  of  Molecular
Structure , 1304, 137746. https://doi.org/10.1016/j.molstruc.202 4.137746
Iqbal S., Sivaraj C., Gunasekaran K. (2017).
Antioxidant and anticancer activity of methanol  extract  of  seed  of Datura stramonium
L. Free Radicals
Antioxidants ,  7(2),  184-189.  DOI: 10.5530/fra.2017.2.28
Jananie  R.K.,  Priya  V.,  Vijayalakshmi  K.
(2011).  Determination  of  bioactive components  of Cynodon  dactylon by GC-MS  analysis. New  York  Science Journal , 4,4, 16–20
Jun M., Fu H.Y., Hong  J., Wang X.,  Yang
CS.,  Ho  C.T.  (2006).  Comparison  of antioxidant  activities  of  isoflavones from kudzu root ( Pueraria lobateohwi ). Journal of Food Science , 68(6), 2117 – 2122. DOI:10.1111/j.1365- 2621.2003.tb07029.x
Kang M.Y., Kim J.H., Rico C.W., Nam S.H.
(2011).  A  comparative  study  on  the physicochemical  characteristics  of black  rice  varieties. International Journal  of  Food  Properties ,  14(6),
1241–1254. https://doi.
org/10.1080/10942911003637350
Kaurinovic B., Vastag D. (2019).
Flavonoids  and  phenolic  acids  as potential  natural  antioxidants.  In  E.
Jurnal Pro-Life, 11(2): 129-141, Juli 2024
Shalaby (Ed.), A ntioxidants, 127-140. IntechOpen.
Khoo  H.E.,  Azlan  A,  Tang  S.T.,  Lim  S.M.
(2017). Anthocyanidins
and anthocyanins:  colored  pigments  as food,  pharmaceutical  ingredients,  and the  potential  health  benefits. Food  & Nutrition  Research ,  61(1),  1361779. doi: 10.1080/16546628.2017.1361779 Kumar Deepak., Mehra, Kumar G., Koli
G.K., Tiwari P.K., Kumar B. (2020).
Pigmented rice: A miracle food for
Modern-day world. Food and Scientific Reports , 1(10), 83-86.
Liu W., Feng Y., Yu S., Fan Z., Li X., Li J., Yin H. (2021). The flavonoid biosynthesis network in plants. International  Journal  of  Molecular Sciences ,
22(12824),1-18. https://doi.org/10.3390/ijms22231282 4 Mackon  E.,  Guibeline  Charlie  Jeazet
Dongho  Epse  Mackon  G.C.J.D.E.,
Yao Y., Guo Y., Ma Y., Dai X., Jandan
T.H.,  Liu  P.  (2021).  recent  insights into anthocyanin pigmentation,
synthesis,  trafficking,  and  regulatory mechanisms  in  rice  ( Oryza  sativa L.) Caryopsis. Biomolecules , 11 (3),
394. https://doi.org/10.3390/biom110
30394
Mackon  E.,  Guibeline  Charlie  Jeazet
Dongho  Epse  Mackon  G.C.J.D.E.,
Yao Y., Guo Y., Ma Y., Dai X., Jandan T.H., Liu P. (2023). Integrative HPLC profiling  and  transcriptome  analysis revealed  insights  into  anthocyanin accumulation  and  key  genes  at  three developmental  stages  of  black  rice ( Oryza sativa . L) caryopsis . Frontiers Plant Science, 14, 1211326. doi: 10.3389/fpls.2023.1211326
Maesaroh  K.,  Kurnia  D.,  Anshori  J.A.
(2018).  Perbandingan  metode    uji aktivitas    antioksidan    DPPH,    FRAP dan  FIC terhadap asam askorbat, asam galat dan kuersetin. Chimica et Natura Acta , 6 (2), 93-100.
Nassour  R.,  Ayash  A.,  Al-Tameemi  K.
(2020). Anthocyanin pigments:
Structure  and  biological  importance.
Journal of Chemical and
Pharmaceutical  Sciences, 13(4),  45- 57.
Panda  D.K.,  Jyotirmayee  B.,  Mahalik  G. (2022). Black rice:  A review from its history  to  chemical  makeup  to  health advantages,  nutritional  properties  and dietary uses. Plant Sci. Today . 9 (SP3): 01–15.
DOI: https://doi.org/10.14719/pst.181
7
Pangerang  F.  (2021).  Kandungan  gizi  dan aktivitas antioksidan beras merah dan beras  hitam  padi  ladang  lokal  dari Kabupaten Bulungan,
Provinsi
Kalimantan Utara. Journal of Tropical AgriFood , 3(2), 93-100. DOI: http://dx.doi.org/10.35941/jtaf.3
.2.2021.8475.93-100
Pornngarm L, Warathit S, Sariya M. (2019). “ Anthocyanins and proanthocyanidins in  natural  pigmented  rice  and  their bioactivities” in Phytochemicals  in Human Health. Eds. Venketeshwer R., Dennis  M.,  Leticia  R.  (Rijeka:
IntechOpen;). DOI: 10.5772/intechopen.86962
Prasetyo  B.F.,  Purwono  R.M.,  Novarino A.V.  (2021).  Potensi  antioksidan menggunakan   metode DPPH   ekstrak beras  hitam  ( Oryza  Sativa L  Indica) dan  penghambatan tirosinase . Jurnal Health Sains , 2 (9), 1132-1140.
Rahmawati  F.,  Yang  J.J.,  Bavelina  I.R. (2022).  Potensi  Antijamur  Ekstrak
Andaliman ( Zanthoxylum acanthopodium DC) terhadap Candida albicans. Prolife , 9(3), 610–62.
Seawan  N.,  Vichit  W.,  Thakam  A.,
Thitipramote N., Chaiwut P., Pintathong P., Thitilertdech N. (2014). Antioxidant capacities, phenolic, anthocyanin  and  proanthocyanidin contents  of  pigmented  rice  extracts obtained by microwave-assisted method. Suranaree Journal of Science and Technology ,  21(4), 301–306.
Jurnal Pro-Life, 11(2): 129-141, Juli 2024
Sharma  O.P.,  Bhat  T.K.  (2009).  DPPH antioxidant  assay    revisited. Food Chemistry ,  113(4),  1202-1205. Tan  P.,  Mayulu  N.,  Kawengian  S.  (2016). Gambaran  aktivitas  dan  stabilitas antioksidan ekstrak beras hitam ( Oryza sativa L.) kultivar Enrekang Sulawesi Selatan. Jurnal e-Biomedik , 4 (1), 184- 187.
Tena  N.,  Martín  J.,  Asuero  A.G.  (2020).
State  of  the  art  of  anthocyanins: antioxidant activity, sources,
bioavailability,  and  therapeutic  effect in  human  health. Antioxidants ,    9(5), 451. doi: 10.3390/antiox9050451
Tyagi A., Shabbir U., Chen X., Chelliah R., Elahi  F.,  Ham  H.J.,  Oh  D.H.  (2022). Phytochemical  profiling  and  cellular antioxidant  efficacy  of  different  rice varieties in colorectal adenocarcinoma cells exposed to oxidative stress. PLoS One ,    2022,  7(6),  e0269403.  doi:
10.1371/journal.pone.0269403 Yuliantari N.W.A., Widarta I.W.R.,
Permana  I.D.G.M.  (2017).  Pengaruh Suhu  dan  Waktu  Ekstraksi  terhadap
Kandungan  Flavonoid  dan  Aktivitas
Antioksidan  Daun  Sirsak  ( Annona muricata L.) Menggunakan Ultrasonik. Scientific Journal of Food Technology , 4(1), 35-42.