## Artikel Penelitian

## THE EFFECTIVENESS OF ZINC AND RISEDRONATE ON BONE TURNOVER IN RAT MODEL OF OSTEOPOROSIS ASSESSED WITH THE EXPRESSION OF β- CROSSLAPS
Adam Fajar 1* , Mohammad Rizal Chaidir 2 , Dicky Mulyadi 2 , Ahmad Ramdan 2 , Yoyos Dias Ismiarto 3*
1 Resident of Orthopaedic and Traumatology Department, Faculty of Medicine Universitas Padjadjaran/Dr. Hasan Sadikin General Hospital, Bandung
2 Staff of Orthopaedics and Traumatology Department, Faculty of Medicine Universitas Padjadjaran/Dr. Hasan Sadikin Hospital, Bandung
3 Head of Study Program of Orthopaedics and Traumatology Department, Faculty of Medicine Universitas Padjadjaran/Dr. Hasan Sadikin Hospital, Bandung
*Corresponding  Author: Yoyos  Dias  Ismiarto, Head  of Study  Program  of Orthopaedics  and Traumatology  Department,  Faculty  of  Medicine  Universitas  Padjadjaran/Dr.  Hasan  Sadikin Hospital, Bandung, Jl. Pasteur No. 38, Jawa Barat 4016, Telp : (022) 2035477 Email: adam_fajar@yahoo.com.sg

## ABSTRAK
Latar  Belakang: Angka  kejadian  osteoporosis  di  Indonesia  masih  tinggi.  Risedronate merupakan  bifosfonat  yang  sering  digunakan.  Namun,  pemberian  jangka  panjang  dapat menimbulkan efek samping berbahaya bagi pasien. Penelitian sebelumnya pada tikus model osteoporosis,  Zink  terbukti  memiliki  potensi  dalam  pencegahan  dan  pengembalian  struktur tulang  dengan  menstimulasi  osteoblas  dalam  proses  pembentukan  tulang  dan  menghambat aktivitasosteoklas  dalam  meresorpsi  tulang,  dengan  cara  meningkatkan  produksi Osteoprotegerin yang menghambat ikatan antara RANKL dan RANK.
Tujuan: Untuk  mengetahui  efektivitas  Zink  dan  Risedronate  terhadap bone  turnover pada tikus model osteoporosis yang dinilai menggunakan ekspresi β-CrossLaps.
Metodologi: Penelitian  ini  merupakan  penelitian  uji  eksperimental  menggunakan  25  tikus Galur Wistar betina yang dibagi menjadi kelompok Non-Ovariektomi dan Ovariektomi untuk menginduksi  terjadinya  osteoporosis.  Pemberian  perlakuan  dibedakan  menjadi  Zink- Risedronate, Zink, dan Risedronate. One Way Anova dan T-test tidak berpasangan digunakan untuk mengetahui adanya kemaknaan secara statistik.
Hasil: Hasil  uji  statistika One  Way  Anova ,  menunjukkan  bahwa  ekspresi  β-CrossLaps  pada pengambilan  ke-3  memiliki  nilai  p  lebih kecil  dari  0,05  (nilai  p<  0,05),  yang  menunjukkan adanya  perbedaan  rerata  yang  signifikan  secara  statistik  antara  variabel  pada  semua kelompok.  Selanjutnya,  hasil  uji  statistika  menggunakan  T-test  tidak  berpasangan, menunjukkan  bahwa  perbandingan  ekspresi  β-CrossLaps  pada  pengambilan  ke-3  terhadap kelompok  Ovari  dengan  Ovari+Zink,  dan  Ovari  dengan  Ovari+Zink+Rise  memiliki  nilai  p lebih kecil dari 0,05 (nilai p< 0,05), yang menunjukkan bahwa terdapat perbedaan rerata yang signifikan secara statistik antara kedua kelompok tersebut.
Kesimpulan: Pemberian Zink-Risedronate lebih menurunkan bone turnover dan ekspresi β- CrossLap dibandingkan dengan Zink atau Risedronate saja pada tikus model osteoporosis. Kata Kunci : Osteoporosis, Risedronate, Zink, β-CrossLaps

## ABSTRACT
Background: Osteoporosis prevalence in Indonesia is high. Risedronate commonly used for treating  the  osteoporosis.  Unfortunately,  long  term  therapy  can  cause  hazardous  adverse effect to the patient. Previous research in rat model osteoporosis, Zinc have a potential effect to  prevent  and  rebuild  bone  structure  with  osteoblast  stimulation  in  bone  formation  and

## Artikel Penelitian
osteoclast  activity  inhibition  in  bone  resorption  by  increasing  Osteoprotegerin  production, that inhibit bond between RANKL and RANK.
Purpose: To  determine  the  effectiveness  of  Zink  and  Risedronate  on  bone  turnover  in osteoporotic model rats assessed the β-CrossLaps expression.
Methods: This  research  is  conducted  as  experimental  comparative  method  used  25  female Galur  Wistar  rat  that  divided  into  Non-ovariectomy  and  Ovariectomy  group  to  induce osteoporosis. The treatment is divided into Zinc-Risedronate, and Zinc, or Risedronate only. One  Way  Anova  and  Independent  T-test  was  used  to  analyzed  the  significant  difference between groups.
Result: One  Way  Anova  statistic  test  forβ-CrossLaps  expression  value  in  the  3rd  Taken blood  sample  showed  that  p  is  less  than  0.05  (p<0.05),  which  indicated  that  are  significant difference in the mean between variable at 3rd Taken blood sample in all group. Meanwhile, Independent T-test was used to compare β-CrossLaps expression in 3rd  taken blood sample between  Ovari  and  Ovari+Zinc,  Ovari  and  Ovari+Zinc+Rise  showed  p  is  less  than  0.05 (p<0.05), which indicated that there are significant difference in the mean between variable 2 groups.
Conclusion: Zinc-Risedronate  administration  will  decrease  bone  turnover  and  β-CrossLaps expression more than Zinc or Risedronate only in rat model osteoporosis.
Keyword : Osteoporosis, Risedronate, Zink, β-CrossLaps

## PENDAHULUAN
Osteoporosis ditandai dengan adanya  pengurangan  massa  tulang  dan gangguan  mikro-arsitektur  jaringan  tulang, yang  mengakibatkan  tulang  menjadi  rapuh dan meningkatkan risiko fraktur. Hilangnya massa  tulang  terjadi  dengan  seiringnya bertambahnya  usia.  Pada  wanita  hal  ini secara  langsung  berkaitan  dengan  fungsi ovarium,  sehingga  pencegahan  terhadap komplikasi,  menjadi  salah  satu  tujuan penatalaksanaan. 1 Masalah  usia  lanjut  dan osteoporosis  semakin  menjadi  perhatian dunia, termasuk Indonesia. Hal ini dilatarbelakangi  oleh  meningkatnya  usia harapan  hidup.  Keadaan  ini  menyebabkan peningkatan penyakit menua yang menyertainya,  antara  lain  osteoporosis. Berdasarkan  penelitian Bone  Mineral Density (BMD)  yang dilakukan pada tahun
2006  di  Indonesia,  prevalensi  osteoporosis pada  wanita  usia  50-80  tahun  adalah sebesar  23%  dan  70-80  tahun  sebesar 53%. 2
Secara umum penyebab dari osteoporosis  adalah  ketidakseimbangan pada bone  remodeling ,  yakni  aktivitas resorpsi oleh osteoklas lebih tinggi dibandingkan dengan aktivitas formasi oleh osteoblas.  Pada  wanita,  defisiensi  estrogen yang  terjadi  selama  masa  perimenopausal dan  postmenopausal  akan  menyebabkan peningkatan produksi RANKL, yang akhirnya  mempercepat  proses  kehilangan kepadatan tulang. 3,4
Bifosfonat  merupakan  obat  yang paling  umum  digunakan  untuk  pengobatan osteoporosis.  Namun,  penggunaan  obat- obat  ini  dalam  jangka  waktu  lama  pun

## Artikel Penelitian
memiliki  beberapa  efek  samping  yang dapat  membahayakan  pasien,  diantaranya osteonecrosis  of  the  jaw (ONJ), atypical subtrochanteric  and  diaphyseal  femur fractures (AFF).  Risedronate  merupakan Nitrogen-containing  bisphosphonates (N- BPs).  Efek  anti  resorpsi  pada  risedronate merupakan  hasil  kemampuannya  dalam menghambat  enzim  Farnesil  Pirofosfat Sintase  (FPPS)  pada  level  osteoklastik. Risedronate  terdistribusi  secara  luas  di tulang  karena  tidak  berikatan  kuat  dengan mineral,  sehingga  memiliki  waktu  paruh sampai  dengan  berminggu-minggu.  Hal  ini menyebabkan  efek  inhibisi bone  turnover yang  kuat  selama  pemberian  jangka panjang  dan  menetap  walaupun  terapi dihentikan. Risedronate mampu menurunkan bone  turnover hingga  50%, akan  kembali  seperti  semula  setelah  12 bulan terapi dihentikan. 4-6
Osteogenesis  adalah  suatu  proses pembentukan  tulang  yang  terdiri  dari  3 tahapan  utama,  yaitu:  1)  produksi  matriks organik ekstraseluler (osteoid); 2) mineralisasi  matriks  untuk  membentuk tulang;  dan  3) bone  remodeling oleh aktivitas  resorpsi  dan  deposisi.  Aktivitas seluler  dari  osteoblas,  osteoklas  dan osteosit  diperlukan  pada  proses  ini.  Zink diketahui  memiliki  peran  penting  dalam regulasi  aktivitas  selular  sebagai  kofaktor yang  menstimulasi  protein  sintesis  yang
diperlukan  dalam  pembentukan  matriks organik (produksi kolagen). Matriks organik  tulang  mengandung  90%-95% kolagen  yang  akan  membentuk  kerangka struktural dimana mineralisasi akan terjadi. Komponen  mineral  utama  dari  tulang adalah  garam  kristalin  yang  terbuat  dari kalsium  hidrosiapatit  (Ca 10 (PO 4 ) 6 (OH) 2 ). Kristal  hidroksiapatit  juga  mengandung zink  dan  metal  transisi  lainnya.  Zink  juga berfungsi  sebagai  komponen  metal  dari alkalin  fosfatase,  yaitu  suatu  metaloenzym yang  berperan  dalam  pembentukan  tulang baru.  Satu  molekul  alkalin  fosfatase mengandung  4  atom  zink,  yakni  dua  atom zink  sangat  penting  untuk  aktivitas  enzim tersebut. Zink dapat mempengaruhi peningkatan alkaline fosfatease-related DNA  synthesis yang  dapat  menstimulasi pertumbuhan  tulang.  Terdapat  penelitian yang menyatakan bahwa pemberian suplementasi  zink  memiliki  efek  stimulasi langsung  pada  alkaline  fosfatase  dan ostecalcin.
Zink juga berperan dalam mengatur aktivitas sel yang terlibat dalam pembentukan  kerangka  tulang.  Secara umum,  zink  meningkatkan  sintesis insulin like  growth  factor 1  (IGF-1)  dan  efeknya pada  jaringan.  Zink  juga  menstimulasi proliferasi dan diferensiasi osteoblas melalui  mekanisme  yang  mempengaruhi aktivitas calcium-regulating  hormon 1,  24-

## Artikel Penelitian
vitamin  D  dan  hormon  paratiroid  (PTH). Zink  juga  menghambat  PTH-induced  bone resorption. Zink dibutuhkan dalam aktivitas osteoblas, Aminoacyl-tRNAsynthetase yang  terdapat  didalam  osteoblas  diaktifkan oleh zink.
Zink  berperan  sebagai  regulator lokal  pada  fungsi  osteoblas  dan  osteoklas. Secara in  vitro ,  zink  akan  menstimulasi produksi  TGF-β  pada  osteoblas.  TGF-β berfungsi  sebagai coupling  factor pada proses  pembentukan  dan  resorpsi  tulang. TGF-β memiliki efek stimulasi dan inhibisi pada  pembentukan osteoclast-like  cell ,  dan zink dapat menghambat efek stimulasi dari TGF-β tersebut.
Zink memiliki efek inhibisi terhadap  resorpsi  tulang  dengan  cara mencegah  aktivitas  osteoklas,  mekanisme terjadinya  hal  ini  belum  sepenuhnya diketahui. Selain itu, zink juga menghambat  aktivitas  hormon  paratiroid dan  prostaglandin  E 2 ,  sehingga  akan menghambat  pembentukan osteoclast-like cell . Secara tidak langsung, zink menghambat RANKL-stimulated osteoclastogenesis dengan  cara  menekan jaras  sinyal  yang  dibutuhkan  dalam stimulasi  RANKL  untuk  perkembangan dan diferensiasi sel osteoklas.
OPG  adalah  faktor  pertama  yang ditemukan  untuk  meregulasi  diferensiasi osteoklas.  Pre-osteoblas  akan  mengekspre-
sikan RANKL dalam jumlah besar dibandingkan dengan OPG, dimana RANKL ini akan menstimulasi diferensiasi dan  fungsi  osteoklas.  Osteoblas  dewasa akan  mengekspresikan  OPG  yang  lebih besar  dibandingkan  dengan  RANKL  yang akan  menghambat  diferensiasi  dan  fungsi dari  osteoklas.  Pada  tulang  yang  sehat, OPG berfungsi untuk menjaga keseimbangan  antara  resorpsi  dan  formasi. OPG  berperan  sebagai  reseptor  tipuan ( decoy  receptor )  untuk  mencegah  RANKL berikatan dengan reseptornya, atau menetralisir  aktivitas  RANKL.  Dengan keberadaan  zink  pada  sel  osteoblas,  akan menstimulasi TGF-β yang selanjutnya akan meningkatkan  produksi  OPG,  yakni  OPG akan  berikatan  dengan  RANKL  dan mencegah  interaksinya  dengan  RANK, sehingga  akan  menghambat  pembentukan dan aktivasi osteoklas.
Penelitian  yang  dilakukan  dengan cara  memberikan  genistein,  isoflavone  dan zink  secara  oral  kepada  model  hewan osteoporosis  menunjukan  bahwa  zink saling bersinergis dalam mencegah hilangnya massa tulang. 3,7,8
Saat ini telah dikembangkan pemeriksan  β-CrossLaps  yang  dapat digunakan  sebagai marker resorpsi  tulang yang  sensitif  dan  spesifik.  β-Crosslap merupakan  pemeriksaan  kuantitatif  untuk mengukur  kadar  resorpsi  tulang  dalam
serum, plasma atau cairan biologis lainnya.
Sensitivitas mencapai >70% karena memiliki Detection Range yang sangat luas dan  spesifisitas  80%,  karena  tidak  adanya reaktivitas silang dan pengaruh dari protein antibodi  analog  β-CrossLap  lain.  β- CrossLaps  adalah  hasil  pemecahan  protein kolagen  tipe  1  yang  spesifik  tulang  dan merupakan  produk  metabolisme  tulang secara  langsung.  Metabolisme  tulang  yang dilakukan oleh osteoklas akan menghancurkan  kolagen  tipe  1  dan terbentuk  bentuk  α  dan  β.  Bentuk  β  ini disebut  β-CrossLaps  dan  kadarnya  dapat diukur dari serum, plasma atau urin. 9-11

## METODOLOGI PENELITIAN
Objek  penelitian  ini  adalah  tikus galur  Wistar  betina  umur  lebih  dari  9 minggu  dengan  berat  badan  rata-rata  250- 290 gram. Penelitian ini telah mendapatkan Persetujuan  Penelitian  dari  Komite  Etik Penelitian  Kesehatan  Rumah  Sakit  Umum Pusat  Dr.  Hasan  Sadikin  Bandung  dengan No  Surat  :  LB.04.01/A05/EC/043/II/2017 dengan  periode  penelitian  April  sampai dengan Juni 2017.
Kriteria  inklusi  pada  penelitian  ini yaitu,  tikus  dalam  keadaan  sehat  untuk dilakukan tindakan ovariektomi, sedangkan kriteria  ekslusi  yaitu,  adanya  perubahan perilaku  pada  tikus  (tidak  mau  bergerak, infeksi). Berdasarkan rumus Federer,
jumlah  sampel  yang  dibutuhkan  pada penelitian  ini  adalah  5  tiap  kelompok penelitian.  Sebanyak  10-20%  ditambahkan sebagai sample dropout.
Bahan yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu,  larutan  Zinc  (ZincPro; Zinc  sulphate  sirup  20  mg/5  mL, Combiphar), Risedronate (Osteonate;
Risedronate sodium 5 mg Kalbe), Dexamethasone  injeksi  (Dexamethasone 0,5  mg,  Phapros).  Sedangkan  alat  yang digunakan dalam penelitian ini yaitu mouse β-CrossLaps ELISA kit (Korain Biotech,China)  dan  Microplate  Reader Rayto RT-6500 (Shenzhen, China).

## Artikel Penelitian
Tabel 1. Nilai Ekspresi β -CrossLaps untuk semua sampel
Simple Randomization Sampling digunakan  untuk  membagi  keseluruhan sampel  kedalam  5  kelompok  penelitian yaitu:
1)  Kelompok yang tidak mendapat perlakuan ovariektomi dan tidak diberikan  injeksi  dexamethasone,  Zink atau  Risedronate,  serta  diinkubasi selama 2 bulan.
2)  Kelompok  ovariektomi  (Gambar  1)
adalah  kelompok  yang  mendapat perlakuan  ovariektomi  dan  injeksi
dexamethasone dengan dosis 0,3 mg/kgBB  atau  0,02  mL/minggu  tiap minggu  selama  2  bulan.  Kelompok  ini dibagi  menjadi  empatbagian,  yaitu sebagai berikut 12-15 :
a. Kelompok  yang  mendapat  perlakuan ovariektomi dan injeksi
dexamethasone  selama  satu  bulan,
tanpa diberikan Zink atau
Risedronate selama 1 bulan. b. Kelompok  yang  mendapat  perlakuan ovariektomi dan injeksi dexamethasone  selama  satu  bulan, kemudian  diikuti  dengan  pemberian zink  1x  tiap  hari  pada  pagi  hari dengan  dosis  10  mg/kgBB/hari  atau 0,75 mL/hari selama 1 bulan.
c. Kelompok  yang  mendapat  perlakuan ovariektomi
dan injeksi dexamethasone  selama  satu  bulan, kemudian  diikuti  dengan  pemberian Risedronate  1x/minggu  dengan  dosis 35 μg/kgBB/minggu 0,05 mL/minggu selama 1 bulan.
d. Kelompok  yang  mendapat  perlakuan ovariektomi dan injeksi dexamethasone  selama  satu  bulan, kemudian  diikuti  dengan  pemberian zink  1x  tiap  hari  pada  pagi  hari dengan  dosis  10  mg/kgBB/hari  dan risedronate  1x/minggu  dengan  dosis 35 μg/kgBB/minggu selama 1 bulan.
Kelompok  Sampel Pengambilan ke-1 Pengambilan ke-2 Pengambilan ke-3 Kontrol 0 1 6,376 6,532 6,965 (Non- Ovari) 2 6,731 7,023 8,193 3 4,631 4,654 4,281 4 5,488 5,242 5,313 5 4,906 5,246 5,388 Kontrol 1 6 3,651 4,955 5,747 (Ovari) 7 6,022 6,251 8,083 8 7,256 8,294 8,334 9 7,293 10,394 12,238 10 3,901 5,919 6,889 Treatment 1 11 6,431 8,783 5,129 (Ovari + Zink 12 5,588 4,879 5,751 13 5,412 6,371 4,236 14 5,088 6,073 6,605 15 3,924 6,772 6,014 Treatment 2 16 3,610 4,938 5,921 (Ovari + Rise) 17 6,793 6,367 7,161 18 5,593 6,976 8,413 19 8,241 9,128 5,276 20 4,026 6,338 4,637 Treatment 3 21 4,661 6,056 4,556 (Ovari + Zink + Rise) 22 4,212 4,509 6,567 23 4,319 6,748 4,167 24 6,418 7,981 3,679 25 6,315 6,913 4,016

## Artikel Penelitian

## Tabel 2. Uji One Way ANOVA
Darah sampel dilakukan sebanyak 3 kali, yaitu saat awal penelitian;  akhir bulan pertama (1 bulan setelah ovariektomi); dan akhir  bulan  kedua  (1  bulan  setelah perlakuan).  Pengambilan  dua  sampel  darah awal dari ekor tikus, sedangkan pengambilan  ke-3  dari  jantung  tikus.  Tiap pengambilan  sampel  darah  dimasukkan  ke dalam  tabung  vakum  ( plain), pencatatan waktu  dari  mulai  dimasukkan  darah  ke dalam tabung. Tabung pengambilan sampel merupakan  tabung  sekali  pakai, non- pyrogenic , dan non-endotoxin . Selanjutnya,
sampel  dikirim  dari  Lab.  farmakologi  ke Lab.  Patologi  Klinik  dengan  menggunakan tas/boks  dengan  suhu  ruangan.  Kemudian disimpan dalam suhu -80°C.
Setelah  semua  sampel  lengkap, sampel  kemudian  di  keluarkan  dari pendingin  dan  dibiarkan  pada  suhu ruangan,  sampai  dengan  siap  dilakukan
pemeriksaan  β-crossLaps  ELISA  kit  yang menggunakan  prinsip competitive  enzyme- linked immuno-sorbent assay . 16
Analisis  statistik  digunakan  untuk menilai proporsi kemaknaan setiap variabel menggunakan One  Way  Anova dan  T-test tidak berpasangan pada program SPSS 23.
Gambar 1. Proses ovariektomi pada tikus.
(A) Identifikasi ovari, (B) Ligasi ovari, (C) Ovari sudah dibuang, (D) Ovari tikus
Variabel Kelompok Nilai P Non Ovari Ovari Ovari+Zink Ovari+ Rise Ovari+Zink +Rise N=5 N=5 N=5 N=5 N=5 Pengambilan ke-2 0,682 Mean±STD 5,73±0,993 7,16±2,177 6,57±1,421 6,74±1,525 6,44±1,281 Median 5,246 6,251 6,371 6,367 6,748 Range (min- max) 4,65-7,02 4,96-10,39 4,88-8,78 4,94-9,13 4,51-7,98 Pengambilan ke-3 0,024** Mean±STD 6,02±1,544 8,25±2,452 5,54±0,904 6,28±1,513 4,59±1,145 Median 5,388 8,083 5,751 5,921 4,167 Range (min- max) 4,28-8,19 5,75-12,24 4,24-6,61 4,64-8,41 3,68-6,57 A B C D

## Artikel Penelitian

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Setelah 60 hari penelitian, perhitungan ekspresi β-crossLaps dilakukan pada  75  sampel  (Tabel  1).  Tidak  terdapat efek  samping  terhadap  hewan  coba  selama penelitian.  Analisis  statistik  untuk  data yang terdistribusi normal pada pengambilan ke-3 dan pengambilan ke-2 diuji menggunakan One  Way  Anova sehingga didapatkan  nilai  p=0,024  (p<0,05)  yang menunjukan bahwa adanya perbedaan yang signifikan  diantara  kelompok  setelah  dan sebelum  dilakukan  perlakuan  (pemberian Zink  dan/atau  Risedronate)  seperti  tampak pada Tabel 2.
Analisis  statistik  bagi  data  numerik yang  terdistribusi  secara  normal  pada Pengambilan sampel ke-3 diuji menggunakan  T  tidak  berpasangan.  Pada uji  diantara  kelompok  Ovari  dengan
Ovari+Zink dan
Ovari dengan Ovari+Zink+Risedronate didapatkan nilai p sebesar  0,049  dan  0,016  (p<0,05).  Hal  ini menunjukkan  adanya  perbedaan  yang signifikan  atau  bermakna  secara  statistik.
Sedangkan,  untuk  kelompok  ovari  dan ovari+Risedronate didapatkan nilai p 0,164 (p>0,05),  yang  berarti  tidak  ada  perbedaan yang signifikan atau tidak bermakna secara statistik (Tabel 3).
Tabel 3. Uji T tidak berpasangan
Variabel Kelompok Nilai P Ovari Ovari +Zink N= 5 N= 5 Pengambilan ke-2 0,627 Mean±STD 7,16±2,177  6,57±1,421 Median 6,251 6,371 Range 4,96-10,39 4,88-8,78 Pengambilan ke-3 0,049* Mean±STD 8,25±2,452  5,54±0,904 Median 8,083 5,751 Range 5,75-12,24 4,24-6,61 Variabel Kelompok Nilai P Ovari Ovari+Zink+Rise N= 5 N= 5 Pengambilan ke-2 0,541 Mean±STD 7,16±2,177 6,44±1,281 Median 6,251 6,748 Range 4,96-10,39 4,51-7,98 Pengambilan ke-3 0,016* Mean±STD 8,25±2,452 4,59±1,145 Median 8,083 4,167 Range 5,75-12,24 3,68-6,57 Variabel Kelompok Nilai P Ovari Ovari +Rise N= 5 N= 5 Pengambilan ke-2 0,737 Mean±STD 7,16±2,177 6,74±1,525 Median 6,251 6,367 Range (min- max) 4,96-10,39 4,94-9,13 Pengambilan ke-3 0,164 Mean±STD 8,25±2,452 6,28±1,513 Median 8,083 5,921 Range 5,75-12,24 4,64-8,41
Pada penelitian ini, digunakan tikus galur Wistar betina yang berumur lebih dari 9  minggu.  Hal  ini  dikarenakan.  tikus  telah mengalami  kematangan  secara  seksual,

## Artikel Penelitian
namun  kematangan  tulang  baru  didapatkan setelah  usia  10  bulan,  sehingga low  peak bone mass dapat dicapai. Pembuatan model tikus osteoporosis dicapai melalui tindakan ovariektomi  dan  pemberian  dexametasone injeksi.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Jiang et al dan  Govindarajan et  al yang  menjelaskan bahwa tindakan ovariektomi dan pemberian dexametasone memberikan efek osteoporosis  lebih  besar  dan  lebih  cepat, dibandingkan  hanya  tindakan  ovariektomi atau  pemberian  dexametasone  saja.  Hal  ini disebabkan  oleh  efek  kombinasi  antara penurunan  formasi  tulang  dan  peningkatan resorpsi  tulang  akibat  defisiensi  estrogen dan glucocorticoid  induce  osteoporosis . Adanya  peningkatan  ekspresi  β-Crosslap pada  pengambilan  ke-2  dibandingkan pengambilan ke-1, menunjukkan keberhasilan proses pembuatan tikus model osteoporosis.  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Jiang et  al dan  Govindarajan et  al yang menjelaskan  bahwa  tindakan  ovariektomi dan  pemberian  dexametasone  memberikan efek  osteoporosis  lebih  besar  dan  lebih cepat. 12-15
Uji One Way Anova pada pengambilan  ke-3  didapatkan  nilai  p  = 0,024 (p<0,05)  yang berarti  signifikan atau bermakna secara statistik Hasil ini menunjukkan  keberhasilan  bahwa  terdapat
hubungan  yang  bermakna  antara  proses tikus  sebagai  model  hewan  osteopororsis dengan  terapi  yang  diberikan  (Zink dan/atau  Risedronate)  pada  semua  sampel penelitian. Hasil ini sesuai dengan penelitian  sebelumnya  yang  menyatakan bahwa Zink dan/atau Risedronate memiliki keberhasilan dalam terapi osteoporosis. 4-8
Hasil  bermakna  ditunjukkan  pada kelompok  yang  diberikan  Zink  saja  dan kombinasi antara Zink+Risedronate. Hal ini sesuai  dengan  penelitian  sebelumnya  yang dilakukan  oleh  Molokwu et  al dan Yamaguchi et al yang menunjukkan bahwa pemberian zink oral terhadap hewan model osteoporosis memiliki efek potensial terhadap proses osteogenik, yaitu menstimulasi formasi tulang oleh osteoblas, sekaligus  menekan  resorpsi  tulang  oleh osteoklas. 3,7,8 Selain  itu,  terdapat  pula penelitian  yang  memanfaatkan  Risedronate sebagai carrier untuk Zinc-Hydroxyapatite nanoparticles . Hal ini dikarenakan, tingginya  afinitas  Risedronate  terhadap tulang,  sehingga  memungkinkan Zinc- Hydroxyapatite  nanoparticles untuk  dapat bekerja secara optimal dalam mengembalikan  struktur  mikroarsitektur tulang. Penambahan Zink terhadap Risedronate  mampu  meningkatkan  onset kerja Risedronate terhadap tulang. 17
Sedangkan, tidak adanya kemaknaan  pada  kelompok  yang  diberikan

## Artikel Penelitian
Risedronate  saja  dapat  diakibatkan  waktu pemberian  yang  terlalu  singkat  yaitu,  30 hari  atau  4x  pemberian.  Padahal  onset Risedronate  agar  memulai  efek  anti resorptif yaitu minimal 6 – 12 bulan. 4-6

## KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  penelitian  ini,  Zink mampu  menurunkan bone  turnover pada tikus model osteoporosis. Hal ini ditunjukkan  dengan  menurunnya  ekspresi β-CrossLap.  Hasil  yang  lebih  baik  bahkan ditunjukkan  ketika  Zink  dikombinasikan dengan Risedronate.
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  dan  dengan  durasi  yang  lebih  lama untuk  mengetahui  efek  jangka  panjang terhadap  pemberian  oral  Zink  dan/atau Risedronate.  Selain  itu,  perlu  adanya penelitian terhadap manusia sebelum temuan  ini  dapat  digunakan  secara  luas sebagai terapi pada osteoporosis.

## REFERENSI
1. Noor  Z,  Kania  N,  Setiawan  B.  Tibia Bone  Properties  at  Different  Time Course of Ovariectomized Rats. Journal of  Diabetes  &  Metabolic  Disorder . 2014;13(91): 1-7
2. Mithal  A,  Ebeling  P.  The  Asia-Pacific Regional Audit. Epidemiology, cost and burden  of  Osteoporosis  in  2013. International  Osteoporosis  Foundation .
2015; 56-60
3. Gurban CV, Mederle O. The OPG/RANKL System and Zinc Ions are
Promoters  of  Bone  Remodeling  by
Osteoblast Proliferation
in
Postmenopausal Osteoporosis.
Department  of  Biochemistry,  University of  Medicine  and  Pharmacy,  Timisoara. Rom  J  Morphol  Embryol. 2011,  52(3 Suppl):1113–1119
4. Watts  NB,  Camacho  PM,  Harris  ST,
Kleerekoper  M.  American  Association of  Clinical  Endocrinologist  Medical Guidelines for Clinical Practice For The Diagnosis and Treatment of Postmenopausal  Osteoporosis.  AACE
Guidelines. Endocrine  Practice Vol  16 (Suppl 3). 2010; 5-14
5. Nuti  R.  Updates  on  Mechanism  of Action and Clincal Efficacy on Risedronate  in  Osteoporosis.  Medical and  Surgical  Science  and  Neuroscience Department. University of Siena. Clinical  Cases  in  Mineral  and  Bone Metabolism . 2014; 11(3): 208-214
6. Lolascon  G,  Sirico  F,  Ferrante  A. Risedronate’s Efficacy. From Randomized  Clinical  Trial  to  Real Clinical Practice. Department of Orthopaedics and Rehabilitation
Medicine. University of Naples. Clinical Cases in Mineral and Bone Metabolism . 2010; 7(1): 19-22
7. Yamaguchi  M.  Osteoporosis  Treatment with New Osteogenic Factors.
Department of Hematology and Medical Oncology,  Emory  University  School  of Medicine. J Mol Genet Med . 2013; 7: 2
8. Yamaguchi    M.    New  Development  in Osteoporosis
Treatment. The
Synergistical  Osteogenic  Effects  with Vitamin  D3,  Menaquinone-7,  Genistein and Zinc. Vitam Miner 2013; S6-e001
9. Puspitawati  I,  Windarwati,  Sukorini  U, Herowati  P,  Prabowo  A.  Kadar  CTX Perempuan  Osteoporosis  Lebih  Tinggi Daripada Perempuan Normal dan Osteopenia. Indonesian Jurnal of Clinical Pathology and Medical Laboratory .  2013;  Vol.19,No.  3:  161-
166
10. Lee J, Vasikaran S. Current
Recommendations for Laboratory
Testing  and  Use  of  Bone  Turnover Markers in Management of
Osteoporosis.  Department  of  Core
Clinical  Pathology  and  Biochemistry.
PathWest-Royal  Perth  Hospital. Ann
Lab Med . 2012; 2: 105-112
11. Arslan  M,  Cogendez  E,  Eken  M,
Arioglu  PF,  Eren  S.  Serum  Beta Crosslaps as a Predictor for Osteoporosis in Postmenopausal Women.  Zeynep  Kamil  Education  and Research Hospital, Obstetric and Gynecology Department. Istanbul, Turkey. 2015; 78 (2): 36-40
12. Govindarajan P, Khassawna T,
Kampschulte M . Implication of Combined Ovariectomy and Glucocorticoid (dexamethasone) Treatment on Mineral, Microarchitectural,  Biomechanical  and Matrix Properties of rat bone.
Laboratory  of  Experimental  Trauma
Surgery. Int.  J.  Exp.  Path. 2013;  94:
387–398
13. Yao W, Cheng Z, Pham A. Glucocorticoid-Induced  Bone  Loss  in Mice Can Be Reversed by the Actions of Parathyroid  Hormone  and  Risedronate on Different Pathways for Bone
Formation  and  Mineralization.  Arthritis and  Rheumatism. American  Collage  of
Rheumatology . 2008; Vol.58,No.11:
3485–3497
14. Lelovas  P,  Xanthos  T,  Thoma  SE, Lyritis  GP.  The  Laboratory  Rat  as  an
Animal Model for Osteoporosis Research.    American  Association  for
Laboratory  Animal  Science.  2008;  Vol
58,No.5: 424-430.
15. Ren  H,  Liang  D,  Shen  G,  Yao  Z,  Jiang X.  Effects  of  Combined  Ovariectomy with  Dexamethasone  on  Rat  Lumbar Vertebrae.  Menopause: The  Journal  of The  North  American  Society .  2015; Vol.23.No.4: 441-450.
16. Abbexa  Ltd. Rat  beta  Crosslaps  (bCTx) ELISA  Kit. Cambridge  Science  Park.
2017. Cat. No. abx256110
17. Khajuria  DK,  Disha  C,  Vasireddi  R,
Mahapatra R. Risedronate/Zinc-
Hydroxyapatite  Base  Nanomedicine  for
Osteoporosis. Material  Science  and Engineering . 2016;Vol.63: 78-87.