BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 6, Nomor 2 (2024): 85-94 E-ISSN: 2714-8564

## Pertumbuhan Anggrek Vanda limbata Blume ‘Jawa’ pada Aplikasi Flurprimidol dan GA
3
Growth of the Vanda limbata Blume 'Java' Orchid on Application of Flurprimidol and GA 3
Aprilia Rahmawati, Iman Budisantoso, Murni Dwiati *
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman, Jalan dr. Suparno 63 Purwokerto, Indonesia * Corresponding author , Email :  murni.dwiati@unsoed.ac.id
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 15/05/2024
Disetujui  : 20/06/2024

## Abstract
Orchids are members of the Orchidaceae family with beautiful flowers. One interesting type of orchid is the Vanda limbata 'Java' orchid. This native Indonesian orchid is often found on the island of Java. This orchid is listed in CITES with appendix II status. Preservation can be done using the in  vitro culture  method,  which  is  a  plant propagation  technique  in  a  controlled  and sterile  environment.  Several  compounds  can  be  added  to  the  culture  medium  to  ensure  good growth,  one  of  which  is  flurprimidiol.  However,  Flurprimidol  can  inhibit  the  biosynthesis  of gibberellic acid thereby reducing plant height, therefore this study also added GA 3 which plays a role in the process of cell elongation in the sub apical area. This study aims to determine the effect of administering Flurprimidol and GA 3 at different concentrations on the growth of Vanda limbata 'Java' plantlets in vitro. Determining the appropriate concentration of Flurprimidol and GA 3 to influence the growth of Vanda limbata 'Java' orchid plantlets in vitro. This research uses an  experimental  method  with  a  Completely  Randomized  Design  (CRD)  with  a  two-factor factorial pattern. The first factor was Flurprimidol (0; 1; 2 mgL-1), and the second factor was GA 3 (0;  1;  2;  3  mgL-1).  The  parameters  observed  were  chlorophyll  a,  chlorophyll  b,  total chlorophyll content, plant height, number of leaves, leaf length and width, number of roots and root length, as well as environmental conditions. Data were analyzed using analysis of variance (F test at test levels of 0,05 and 0,01, followed by the DMRT test (Duncan Multiple Range Test) using SPSS software at test levels of 0,05. Administration of Flurprimidol and GA 3 can influence the growth of V. limbata orchid pantlets in vitro. Application of Flurprimidol and GA 3 increased the  contents  of  chlorophyll  a,  chlorophyll  b,  and  total  chlorophyll,  as  well  as  root  length.  In addition, Flurprimidol application can increase leaf width and length. Flurprimidol treatment of 2 mg/L and GA 3 of 2 mg/L was the best treatment in influencing the growth of V. limbata 'Java'. Key Words : Flurprimidol, GA 3 , orchid, Vanda limbata 'Java'

## Abstrak
Anggrek merupakan anggota suku Orchidaceae dengan bunga yang indah. Salah satu jenis anggrek yang menarik adalah anggrek Vanda limbata 'Jawa’. Anggrek asli Indonesia ini banyak dijumpai di  Pulau  Jawa.  Anggrek  ini  tercatat  dalam  CITES  berstatus  apendiks  II.  Pelestariannya  dapat dilakukan  dengan  metode  kultur in  vitro, yaitu  teknik  perbanyakan  tanaman  dalam  lingkungan yang stabil dan steril.  Beberapa senyawa dapat ditambah dalam media kultur agar pertumbuhan berlangsung baik, salah satunya yaitu flurprimidiol. Akan tetapi, Flurprimidol dapat menghambat biosintesis asam giberelat sehingga menurunkan tinggi tanaman, oleh karena itu penelitian ini juga ditambahkan GA 3 yang berperan dalam proses pemanjangan sel di daerah sub apikal. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian Flurprimidol dan GA 3 dengan konsentrasi yang berbeda  terhadap  pertumbuhan  planlet Vanda  limbata 'Jawa’  secara in  vitro. Menentukan konsentrasi Flurprimidol dan GA 3 yang tepat dalam mempengaruhi pertumbuhan planlet anggrek Vanda limbata 'Jawa’ secara in vitro . Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL) pola faktorial dua faktor. Faktor pertama adalah Flurprimidol (0; 1;  2  mgL -1 ),  dan  faktor  ke  dua  adalah  GA 3 (0;  1;  2;  3  mgL -1 ).  Parameter  yang  diamati  yaitu kandungan  klorofil  a,  klorofil  b,  klorofil  total,  tinggi  tanaman,  jumlah  daun,  panjang  dan  lebar daun,  jumlah  akar,  dan  panjang  akar,  serta  kondisi  lingkungan.  Data  dianalisis  menggunakan analisis ragam (Uji F pada taraf uji 0,05 dan 0,01, dilanjutkan dengan uji lanjut DMRT ( Duncan Multiple Range Test )  menggunakan software SPSS  pada taraf  uji 0,05.  Pemberian Flurprimidol dan GA 3 dapat mempengaruhi pertumbuhan pantlet anggrek V. limbata secara in vitro . Aplikasi Flurprimidol  dan  GA 3 meningkatkan  kandungan  klorofil  a,  klorofil  b,  dan  klorofil  total,  serta panjang  akar.  Selain  itu,  aplikasi  Flurprimidol  dapat  meningkatkan  lebar  dan  panjang  daun. Perlakuan  Flurprimidol  2  mg/L  dan  GA 3 sebesar  2  mg/L  merupakan  perlakuan  terbaik  dalam mempengaruhi pertumbuhan V. limbata ‘Jawa’. Kata kunci: anggrek, Flurprimidol, GA 3 , Vanda limbata ‘Jawa’

## PENDAHULUAN
Jenis  anggrek  asli  Indonesia  yang  banyak dijumpai di Pulau Jawa salah satunya adalah Vanda limbata 'Jawa’.  Anggrek  ini  tumbuh  menempel (epifit) pada batang tanaman Jati, dan cocok tumbuh di  wilayah  tropis. V.  limbata memiliki  aroma  yang mirip  dengan  kayu  manis  (Renjana  &  Hendrawati, 2019).  Warna  bunga  anggrek  ini  sangat  bervariasi, didominasi  warna  dasar  kuning  dengan  pola  totol berwarna  coklat  pada  sepal  dan  petalnya,  dengan bagian tepi berwarna kuning dan labellum berwarna ungu (Metusala, 2011)
Pengembangan anggrek V. limbata di Indonesia masih sangat terbatas. Budidaya anggrek ini dengan bahan  tanaman  masih diambil  langsung  dari  hutan, sehingga dikhawatirkan berdampak pada kelestariannya. Anggrek V. limbata terancam punah dan telah diklasifikasikan dalam CITES ( Convention on  International  Trade  in  Endangered  Species  of Wild  Fauna  and  Flora )  berstatus appendix II. Kepunahan tersebut didukung oleh adanya kerusakan hutan  akibat  bencana  alam  dan  aktivitas    manusia (Kasutjianingati & Firgiyanto, 2018).
Diperlukan  adanya  pelestarian  anggrek V. limbata guna  mencegah  terjadinya  kepunahan . Pelestarian  dapat  dilakukan  di  habitat  aslinya  ( in situ ), dapat pula dilestarikan di luar habitat aslinya ( ex situ ).  Pelestarian  anggrek V.  limbata secara ex  situ dilakukan dengan melestarikannya di dalam kultur in vitro .  Kultur in vitro merupakan  teknik  budidaya (perbanyakan)  sel,  jaringan,  dan  organ  tanaman dalam  suatu  lingkungan  yang  stabil  dan  keadaan steril.  Media  kultur  merupakan  salah  satu  kunci kesuksesan  perbanyakan  anggrek  dengan  teknik kultur in  vitro .  Pembuatan  media  kultur  anggrek biasanya dilakukan dengan mencampurkan beberapa bahan  organik  yang  mengandung  unsur  hara  untuk mendukung    pertumbuhan  planlet  secara in  vitro (Hardianti & Soetopo, 2019).
Beberapa senyawa dapat ditambahkan di dalam media kultur in vitro, agar pertumbuhan tanaman V. limbata cukup  baik.  Flurprimidol  merupakan  salah satu senyawa yang dapat digunakan untuk meningkatkan pertumbuhan.  Flurprimidol, termasuk ke  dalam  senyawa  retardant,  merupakan  senyawa heterosiklik  yang  mengandung  nitrogen  dari  kelas kimia  pirimidin.  Flurprimidol  bertindak  sebagai penghambat enzim  yang mengkatalisis jalur biosintesis GA yang melibatkan oksidasi ent kauren menjadi  asam ent  kauren .  Pada  tumbuhan, Flurprimidol  diketahui  dapat  meningkatkan  warna daun dan ketebalan daun, serta meningkatkan jumlah klorofil  (Neware,  2019).  Flurprimidol  mampu mendorong  perkembangan  daun   serta  akar  pada kultur  pucuk  labu  runcing, Trichosanthes  dioica (Singh et  al .,  2015).  Akan  tetapi,  Flurprimidol mengurangi  tinggi  tanaman  melalui  penghambatan biosintesis  asam  giberelat  (Neware,  2019).  Oleh karena  itu,  dalam  penelitian  ini  ditambahkan  GA 3 yang berperan dalam menstimulasi pemanjangan sel
di daerah sub apikal. GA 3 bertanggung jawab untuk memacu  pemanjangan  batang  dan  menstimulasi pembelahan  sel.  Seiring  dengan  dihambatnya  GA 3 akibat  aplikasi  Flurprimidol,  GA 3 eksternal  dapat menggantikan  peran  ketidak  tersediaan  GA 3 akibat aplikasi Flurprimidol, yang secara langsung berpengaruh terhadap pertumbuhan bagian vegetatif tanaman (Salachna et al ., 2020). Penambahan  Flurprimidol dan GA 3 diharapkan dapat  meningkatkan  pertumbuhan  tanaman  pada anggrek V.  limbata .   Neware  (2019)  menambahkan bahwa pemberian Flurprimidol mampu meningkatkan  kualitas  tanaman,  tanpa  mengurangi pertumbuhan tanaman. Desta & Amare (2021) dalam penelitiannya  juga  menjelaskan  bahwa  pemberian Paklobutrazol (zat penghambat tumbuh yang efeknya sama  dengan  Flurprimidol)  mampu  meningkatkan produksi  ABA,  dan  klorofil  yang  bermanfaat  bagi pertumbuhan, dan kesehatan tanaman. Paklobutrazol juga  akan  mempercepat  pembentukan  akar  pada tanaman Lycopersicum esculentum.
Dalam  makalah  ini  akan  diungkap  aplikasi Flurprimidol, dan GA 3 terhadap pertumbuhan Vanda limbata 'Jawa’  secara in  vitro. Menentukan konsentrasi Flurprimidol, dan GA 3 yang tepat dalam mempengaruhi pertumbuhan anggrek Vanda limbata 'Jawa’ secara in vitro .

## MATERI DAN METODE
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Fisiologi Tumbuhan Fakultas Biologi Unsoed. Bahan yang  diperlukan  yaitu  planlet  anggrek V.  limbata ‘Jawa’  yang  berasal  dari  koleksi  Laboratorium Fisiologi  Tumbuhan  Fakultas  Biologi  Unsoed, Flurprimidol,  GA 3 ,  alkohol  96%,  akuades,  sukrosa, arang  aktif,  vitamin  C,  agar,  medium  MS,  aseton, NaOH 1N, HCl 1 N, air kelapa, air alkali, dan  pepton. Alat yang diperlukan yaitu timbangan analitik, botol kultur, autoklaf, Laminar Air Flow (LAF), pH meter, oven, wrapping  plastic ,  jangka  sorong, mortar dan pestle , thermometer , hygrometer , lux meter , microsyringe dan spektrofotometer.
Penelitian  dilakukan  secara  eksperimental dengan  Rancangan  Acak  Lengkap  pola  Faktorial, dengan  dua  faktor . Faktor  pertama  berupa Flurprimidol dengan 3 taraf konsentrasi yaitu F (0; 1; 2  mg/L).  Faktor  kedua  berupa  GA 3 dengan  4  taraf yaitu  G  (  0;  1;  2;  3  mg/L).  Ulangan  dilakukan  tiga kali,  sehingga  terdapat  36  satuan  percobaan. Parameter  yang  diamati  antara  lain  kandungan klorofil  a,  klorofil  b,  klorofil  total,  tinggi  tanaman, jumlah  daun,  panjang,  dan  lebar  daun,  jumlah  akar, dan panjang akar, serta faktor lingkungan yang terdiri atas suhu, kelembaban, dan intensitas cahaya di rak inkubasi.
Planlet V. limbata ‘Jawa’yang digunakan dalam penelitian ini berumur 1 tahun, dan telah disubkultur sebanyak  3  kali,  serta  memiliki  daun  sebanyak  tiga helai. Penanaman planlet dilakukan dalam dua tahap.
Tabel 1. Analisis  ragam pengaruh  pemberian  Flurprimidol dan  GA 3 terhadap  pertumbuhan  anggrek Vanda  limbata ‘Jawa’ pada pengamatan 122 hari mst.
Sumber ragam dB F-Hitung F-Tabel 0,05 F-Tabel 0,01 Klorofil a ( µ𝒈 𝒎𝑳 ) Klorofil b ( µ𝒈 𝒎𝑳 )
Klorofil
Total ( µ𝒈 𝒎𝑳 ) Tinggi Tanaman (cm) Jml. Daun Jml Akar Lebar Daun (cm) Pjg. Daun (cm) Pjg. Akar (cm) F 2 25,17 ** 61,53 ** 73,47 ** 1,38 ns 1,38 ns 0,44 ns 21,17 ** 6,36 * 1,94 ns 4,30 9,92 G 3 6,86 ** 8,29 ** 8,99 ** 4,11 * 2,07 ns 1,33 ns 2,15 ns 3,10 ns 0,37 ns 3,18 5,84 Interaksi F & G 6 4,21 ** 5,39 ** 5,72 ** 1,75 ns 0,63 ns 1,63 ns 1,54 ns 1,39 ns 2,93 * 2,44 3,70
Keterangan: F: Flurprimidol; G: GA 3 ; ns: tidak signifikan; *: berbeda nyata pada taraf uji 0,05; **: berbeda sangat nyata pada taraf uji 0,01
Tahap  pertama  planlet  ditanam  pada  media perlakuan Flurprimidol dan diinkubasi pada lingkungan  gelap  selama  empat  minggu.  Tahap kedua,  setelah  diinkubasi  pada  ruang  gelap,  secara bertahap  planlet  diberi  penyinaran  selama  dua  jam dalam  sehari,  delapan  jam  dalam  sehari,  16  jam dalam  sehari,  dan  24  jam.  Setelah  dilakukan penyinaran bertahap, planlet dipindahkan pada media GA 3 dan  diinkubasi  di  cahaya  terang  selama  empat minggu.
Data  dianalisis  menggunakan  analisis  ragam atau  uji  F  pada  taraf  0,05  dan  0,01.  Dilanjutkan menggunakan DMRT ( Duncan Multiple Range Test ) pada taraf uji 0,05, menggunakan software SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Vanda  limbata ‘Jawa’  dalam  penelitian  ini diinkubasi  pada  dua  keadaan  lingkungan  yang berbeda.  Pada  tahap  pertama V.  limbata diinkubasi pada  lingkungan  yang  gelap,  dengan  rerata  suhu  di 23 ℃ dan  kelembaban  75%.  Kondisi  gelap  ini  akan merangsang  terjadinya  organogenesis.  Hal  ini didukung  oleh  Dwiati et  al .  (2023)  yang mengemukakan  bahwa  eksplan  yang  diinkubasi dalam  ruang  gelap  dapat  menunda  degradasi  zat pengatur  tumbuh  sehingga  mampu  merangsang regenerasi  eksplan  secara in  vitro. Tahap  kedua diinkubasi  pada  lingkungan  terang  dengan  suhu  di ruang inkubasi cenderung stabil sebesar 21 ℃ dengan rerata kelembaban 82% dan intensitas cahaya sebesar 1.260  lux.  Kondisi  lingkungan  ini  sedikit  berbeda dengan   penelitian  Adiguna et  al. (2018)   subkultur anggrek V.  tricolor dilakukan  pada  suhu  ruang inkubasi  berkisar  24  dan  26 ℃ dengan  kelembaban 67 dan 75%. Zahra et al . (2023) menjelaskan bahwa suhu  ruang,  cahaya  dan  kelembabannya  merupakan lingkungan  yang  berpengaruh  dalam  pertumbuhan kultur.  Suhu  ruang  inkubasi  berpengaruh  terhadap kerja enzim dan hormon baik secara eksogen maupun endogen.  Cahaya  dalam  ruang  inkubasi  diperlukan oleh tanaman  untuk fotosintesis.
Hasil  analisis  ragam  pemberian  Flurprimidol dan GA 3 terhadap pertumbuhan tanaman anggrek V. limbata disajikan  pada  Tabel  1.  Flurprimidol  dan GA 3 mampu  meningkatkan  kandungan  klorofil  a, klorofil b, dan klorofil total. Selain itu, aplikasi kedua senyawa tersebut dapat meningkatkan panjang akar, lebar dan panjang daun.

## A. Kandungan Klorofil a, Klorofil b, dan Klorofil total
Hasil analisis ragam perlakuan Flurprimidol dan GA 3 terhadap  kandungan  klorofil  a,  klorofil  b,  dan klorofil  total  menunjukkan  adanya  interaksi  antara Flurprimidol dan GA 3 (Tabel 1.).
Kandungan  klorofil  total  F2G1  tidak  berbeda nyata  dengan  F2G2  (Tabel  4).  Artinya,  perlakuan F2G2  merupakan  interaksi  perlakuan  yang  paling baik  untuk  kandungan  klorofil  total.  Klorofil  a merupakan  pusat  reaksi  fotosistem  I  dan  klorofil  b merupakan  pusat  reaksi  pada  fotosistem  II.  Dengan meningkatnya  kedua  klorofil  tersebut,  maka  reaksi terang  baik  pada  fotosistem  I  maupun  fotosistem  II terpacu. Hasil NADPH 2 dan ATP meningkat semakin banyak.  Kedua  senyawa  hasil  reaksi  terang  tersebut meningkat, maka hasil reaksi karbon berupa heksosa juga  akan  meningkat.  Heksosa  sebagai  hasil fotosintesis meningkat, diasumsikan heksosa digunakan  untuk  memacu  pertumbuhan  planlet. Selain  itu,  parameter  lebar  daun  dan  panjang  daun juga meningkat (Tabel 1).
Neware (2019) mengemukakan bahwa Flurprimidol memiliki fungsi meningkatkan kandungan  klorofil.  Hal  ini  juga  didukung  dengan pernyataan Dwiati et al . (2023) yang mengemukakan bahwa kombinasi perlakuan Flurprimidol 2 mg/L dan GA 3 2  mg/L  mampu  meningkatkan  kandungan klorofil  a,  klorofil  b,  dan  kandungan  klorofil  total pada kultur Nepenthes mirabilis .
Kandungan  klorofil  a  dan  klorofil  b  tertinggi terdapat pada perlakuan F2G2 (Tabel 2 dan Tabel 3). Perlakuan ini merupakan perlakuan yang paling baik dibandingkan dengan perlakuan lainnya.
Tabel  2. Interaksi  antara  Flurprimidol  dan  GA 3 terhadap  Kandungan  Klorofil  a  pada  Anggrek V.  limbata ‘Jawa’  pada pengamatan 122 hari mst .
Flurprimidol GA 3 G0 (0 mg/L) G1 (1 mg/L) G2 (2 mg/L) G3 (3 mg/L) F0 (0 mg/L) 3,91±0,91 a p 3,14±0,12 a
p 5,74±0,30 a r 5,36±0,15 a q F1 (1 mg/L) 5,73±1,04 c p 5,45±0,20 bc p 5,53±0,36 a p 5,07±0,17 a p F2 (2 mg/L) 5,67±0,58 bc p 6,06±1,28 c
p 6,83±0,33 b r 6,53±0,04 b p
Keterangan: Angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05 DMRT. Huruf a, b, bc, dan c merupakan tanda beda secara vertikal. Sementara itu,  huruf p,q, dan r merupakan tanda beda secara horizontal
Tabel  3. Interaksi  antara  Flurprimidol  dan  GA 3 terhadap  kandungan  klorofil  b  pada  Anggrek V.    limbata ‘Jawa’  pada pengamatan 122 hari mst.
Flurprimidol GA 3 G0 (0 mg/L) G1 (1 mg/L) G2 (2 mg/L) G3 (3 mg/L) F0 (0 mg/L) 4,70±0,84 a p 4,12±0,20 a p 6,73±0,48 a q 6,92±0,30 a r F1 (1 mg/L) 7,07±0,70 bc p 7,40±0,23 b p 7,26±0,41 a p 7,43±0,84 a p F2 (2 mg/L) 7,53±0,57 c p 8,75±1,24 c q 8,82±0,42 b r 8,37±0,07 b p
Keterangan: Angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05 DMRT. Huruf a, b, dan c merupakan tanda beda secara vertikal.  Huruf p,q, dan r merupakan tanda beda secara horizontal
Tabel 4. Interaksi antara Flurprimidol dan GA 3 terhadap kandungan klorofil total a nggrek V. limbata ‘ Jawa’ pada pengamatan 122 hari mst
Flurprimidol GA 3 G0 (0 mg/L) G1 (1 mg/L) G2 (2 mg/L) G3 (3 mg/L) F0 (0 mg/L) 2,89±0,49 a p 2,62±0,13 a p 4,13±0,32 a q 4,37±0,21 a r F1 (1 mg/L) 4,41±0,32 bc p 4,75±0,15 b p 4,61±0,25 a p 4,87±0,65 a p F2 (2 mg/L) 4,80±0,32 c p 5,71±0,71 c r 5,58±0,29 b qr 5,28±0,05 b p
Keterangan: Angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji  0,05 DMRT . Huruf a, b, dan c merupakan tanda beda secara vertikal. Dan huruf p, q, qr, dan r merupakan tanda beda secara horizontal
Paklobutrazol salah satu retardan yang mempunyai  efek  sama  dengan  Flurprimidol  dapat mempengaruhi  jalur  terpenoid,  melalui  adaptasi fisiologi,  yang  melibatkan  adanya  perubahan  kadar fitohormon.  Fitohormon  endogen  yang  terpengaruh oleh  Paklobutrazol  antara  lain  asam  absisat  (ABA), giberelin  (GA 3 ),  asam  indol  asetat  (IAA),  dan sitokinin (Soumya et al ., 2017). Efek zat penghambat tumbuh Flurprimidol mampu meningkatkan kandungan  sitokinin.  Sitokinin  diketahui  dapat meningkatkan perkembangan kloroplas (Wiraatmaja, 2017).  Paklobutrazol  diketahui  dapat  meningkatkan biosintesis  klorofil  akibat  adanya  peningkatan kandungan  sitokinin.  Akhirnya,  kandungan  klorofil meningkat. Soumya et al . (2017) menekankan bahwa zat penghambat Paklobutrazol juga dapat meningkatkan kandungan klorofil, klorofil total pada
daun, dan karotenoid. Selain itu, Kumar et al . (2012) menyatakan  bahwa  aplikasi  Paklobutrazol  juga meningkatkan  kandungan  sitokinin  endogen,  dan mendorong  terbentuknya  klorofil  sehingga  mampu memperpanjang  masa staygreen. Adanya  masa staygreen dalam  jangka  waktu  lama,  dan  juga peningkatan pigmen antena, serta pigmen pada pusat reaksi  akan  memperbaiki  hasil  reaksi  terang  berupa NADPH2  dan  ATP.  Akibatnya,  reaksi  karbon  juga akan  terpacu  sehingga  secara  keseluruhan  aplikasi Paklobutrazol dapat meningkatkan proses fotosintesis  pada  daun  dan  pada  akhirnya  dapat meningkatkan produktivitas bunga Camelina sativa. Performance  tanaman  perlakuan  F2G2  dapat dilihat pada Gambar 1. Tanaman V. limbata terlihat segar dengan daun berwarna hijau tua.
Gambar  1. Performance  daun V.  limbata ‘Jawa’  pada pengamatan 122 hari mst.
Keterangan: a. V. limbata pada perlakuan F0G0; b. V. limbata pada perlakuan F2G2
Dari  Gambar  1  dapat  diungkapkan  bahwa tanaman  perlakuan  F2G2 (Gambar  1.b)  mempunyai warna  daun  hijau  lebih  tua  dibandingkan  dengan perlakuan  F0G0  yang  berwarna  hijau  kekuningan. Perlakuan  F2G2  merupakan  perlakuan  yang  paling baik  dalam  meningkatkan  kandungan  klorofil dibandingkan dengan perlakuan lainnya (Tabel 2 dan 3.).  Hasil  penelitian  ini  sejalan  dengan  penelitian Sumenda et  al .  (2011)  yang  mengemukakan  bahwa daun  yang  berwarna  hijau  tua  pekat  memiliki kandungan klorofil lebih tinggi dibandingkan dengan daun  berwarna  hijau  muda  pada  daun  tanaman mangga.  Pada  proses  perkembangannya  daun  yang berwarna  hijau  muda,  biosintesis  klorofil  b  berasal dari klorofilid a atau klorofil a, yang diikuti dengan
berkembangnya daun tersebut. Biosintesis klorofil b akan terus berlanjut bersamaan dengan perkembangan  daunnya  yang  ditandai  dengan berubahnya  warna  daun  hijau  muda  menjadi  hijau tua.

## B. Tinggi Tanaman
Hasil analisis ragam perlakuan Flurprimidol dan GA3  terhadap  tinggi  tanaman  menunjukkan  bahwa perlakuan  GA 3 secara  mandiri  berpengaruh  nyata terhadap tinggi tanaman (Tabel 1.).
Flurprimidol  diketahui  dapat  menurunkan tinggi tanaman karena terjadinya penghambatan jalur biosintesis  asam  giberelat  akibat  efek  pemberian Flurprimidol.  Namun,  perlakuan  GA 3 eksogen berpengaruh  terhadap  tinggi  tanaman V.  limbata seiring bertambahnya konsentrasi. Artinya, GA 3 yang diaplikasikan dapat menggantikan GA 3 endogen yang terhambat pembentukannya akibat aplikasi Flurprimidol.  Salachna et  al .  (2020)  menyatakan bahwa GA 3 eksogen mampu menstimulasi perpanjangan sel di daerah meristem sub apikal ujung batang,  sehingga  mempengaruhi  tinggi  batang Amarine tubergenii.
Mobini et  al .  (2015)  menjelaskan  bahwa pemberian  Flurprimidol  menurunkan  panjang  ruas melalui  penghambatan  biosintesis  asam  giberelat. Sementara  itu,  Neware  (2019)  menunjukkan  bahwa Flurprimidol menghambat biosintesis asam giberelat dengan cara menghambat produksi giberelin di awal jalur  terpenoid  dengan  mengikat  besi  proheme  dari sitokrom  P450.  Selanjutnya,  akan  menonaktifkan enzim  monooksigenase  yang  bertanggung  jawab untuk  mengonversi ent-kaurene menjadi  GA12- aldehida.  Soumya et  al .  (2017)  menekankan  bahwa keadaan  ini  dapat  menurunkan  tinggi  tanaman  pada perlakuan yang diberi Flurprimidol.
Gambar 2. Perlakuan GA 3 terhadap tinggi tanaman anggrek V.  limbata ‘Jawa’ pada pengamatan 122 hari mst. Keterangan : Grafik dengan standar deviasi yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05 DMRT. Huruf a dan b merupakan tanda beda antar perlakuan.
0,00 0,10 0,20 0,30 0,40 0,50 0,60 0,70 0,80 0,90 1,00 G0 G1 G2 G3 T in g g i T a n a m a n ( cm ) Rata-Rata Perlakuan: G0: GA 3 0 mg/L G1: GA 3 1 mg/L
G2: GA 3 2 mg/L G3: GA 3 3 mg/L Perlakuan a a a b
a. b.
Gambar 3 . Jalur terpenoid biosintesis Giberelin dan degradasi Asam Absisat akibat aplikasi Flurprimidol, Sumber: (Soumya et al ., 2017)
Pemberian  Flurprimidol  mampu  meningkatkan kandungan  ABA  dan  sitokinin.  ABA  disintesis melalui  jalur  terpenoid.  Aplikasi  Flurprimidol membuat  enzim  8-hidroksilase  dapat  mendegradasi ABA menjadi phaseic acid (Gambar 3) Peningkatan ABA mampu mendorong produksi rantai fitol. Dubey et al . (2003) menjelaskan bahwa biosintesis sitokinin dapat  terjadi  secara  katabolik,  melalui  jalur  non mevalonat pada jalur terpenoid yang terjadi di dalam plastida.  Isopentyl  diphospate  dan  dimethylallyl diphospate  dapat  disintesis  secara independent melalui  peran  isomerase  pada  tanaman Matricaria recutita .
Flurprimidol  diketahui  mampu  mendorong produksi rantai fitol melalui peningkatan kandungan ABA.  Produksi  rantai  fitol  yang  meningkat,  akan memacu kandungan klorofil dengan cara mengonversi fitol bebas melalui jalur fosforilasi fitol menjadi phytyl- PP  (Gutbroad et  al .,  2019). Peningkatan  klorofil  dapat  meningkatkan  molekul ATP dan NADPH2 hasil reaksi terang. Reaksi terang fotosintesis  membutuhkan  cahaya  matahari.  Reaksi ini terjadi di dalam grana. NADP + direduksi menjadi NADPH2 oleh atom hidrokarbon dari molekul H 2 O. ATP  yang  terbentuk  melalui  proses  penyimpanan energi  matahari  diserap  dan  diubah  menjadi  energi kimia.  Dengan  adanya  ADP  dan  Pi  maka terbentuklah  ATP.  Tahap  kedua  dari  fotosintesis adalah reaksi fiksasi/reduksi CO 2 yang sering disebut reaksi  karbon.  Reaksi  karbon  dapat  berlangsung
tanpa  peran  cahaya  matahari.  Reaksi  ini  terjadi  di dalam  stroma.  Enzim-enzim  stroma  pada  kloroplas akan  menggunakan  ATP  dan  NADPH 2, hasil  reaksi terang untuk aktivitasnya (Song, 2012).
V.  limbata merupakan  tanaman  yang  termasuk dalam tanaman C3, sehingga reduksi CO 2 menggunakan  daur  C3  atau  sering  disebut  dengan daur Calvin. Daur reaksi disebut C3 karena senyawa yang  dihasilkan  pertama  kali  merupakan  senyawa yang  memiliki  3  atom  karbon  berupa  asam fosfogliserat.  Ribolusa  -1,5-bifosfat  diubah  menjadi 3-fosfogliserat  dari  CO 2 dan  H 2 O.  Dalam  daur  C3, satu molekul fosfogliseraldehida dibentuk dari fiksasi 3 molekul
CO 2 . Selanjutnya molekul fosfogliseraldehida  diubah  menjadi  heksosa  (Song, 2012).
Adanya aplikasi Flurprimidol mampu meningkatkan  kandungan  klorofil,  maka  heksosa yang  dihasilkan  dari  reaksi  reduksi  CO 2 juga meningkat.  Akibatnya,  pertumbuhan  planlet V. limbata tetap berjalan . Meskipun aplikasi Flurprimidol dapat menekan tinggi tanaman, aktivitas meristem  tetap  berjalan.  Aplikasi  Flurprimidol diketahui  dapat  meningkatkan  kandungan  sitokinin, sehingga  aktivitas  meristem  meningkat  (Soumya et al. ,  2017).  Proses  pembelahan  dan  diferensiasi  sel pada  planlet V.  limbata meningkat,  sehingga pertumbuhan  akar  dan  daun  berlangsung  dengan baik.
Flurprimidol Paklobutrazol Tetcyclacis
Gambar 4. Perlakuan Flurprimidol secara mandiri terhadap lebar daun anggrek V. limbata pada pengamatan 122 hari mst Keterangan: Grafik dengan standar deviasi yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05 DMRT. Huruf a, b, dan c merupakan tanda beda antar perlakuan.
Gambar 5. Pengaruh Perlakuan Flurprimidol secara mandiri terhadap panjang daun anggrek V.  limbata pada pengamatan 122 hari mst
Keterangan: Grafik dengan standar deviasi yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05 DMRT. Huruf a dan b merupakan tanda beda
Tabel 5. Interaksi antara Flurprimidol dan GA 3 terhadap panjang akar anggrek V. limbata pada pengamatan 122 hari mst
Flurprimidol GA 3 G0 (0 mg/L) G1 (1 mg/L) G2 (2 mg/L) G3 (3 mg/L) F0 (0 mg/L) 0,77±0,75 a p 0,20±0,20 a p 0,10±0,17 a p 0,93±0,40 a p F1 (1 mg/L) 0,53±0,47 a p 1,10±0,61 b p 1,53±0,76 b q 0,27±0,23 a p F2 (2 mg/L) 0,47±0,72 a p 0,73±0,64 b p 0,57±0,06 a p 0,30±0,26 a p
Keterangan: Angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05 DMRT. Huruf a dan b merupakan tanda beda secara vertikal. Dan huruf p dan q merupakan tanda beda secara horizontal.

## B. Jumlah, Lebar dan Panjang Daun
Hasil analisis ragam interaksi Flurprimidol dan GA 3 ,  terhadap  jumlah,  lebar,  dan  panjang  daun V. limbata tidak  berbeda  nyata.    Demikian  pula perlakuan  Flurprimidol dan  GA3  secara  mandiri terhadap jumlah daun V. limbata tidak berbeda nyata (Tabel  1.).  Sementara  itu,  aplikasi  Flurprimidol secara mandiri menunjukkan perbedaan yang sangat
nyata  terhadap  lebar  daun  (Tabel  1  dan  Gambar 4). Flurprimidol  yang  diberikan,  ternyata  semakin meningkatkan lebar daun V. limbata . Dari Gambar 4. dapat  dikemukakan bahwa  daun  perlakuan  F2  lebih lebar  bila  dibandingkan  dengan  daun  perlakuan  F1. Singh et  al .  (2015)  menjelaskan  bahwa  perlakuan Flurprimidol sebesar (1; 2; 5 µM) mampu mendorong perkembangan daun pada kultur pucuk labu runcing,
-0,05 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 F0 F1 F2 L eba r Da un ( cm ) Rata-Rata Perlakuan F0: Flur 0 mg/L F1: Flur 1 mg/L F2: Flur 2 mg/L Perlakuan a b c 0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20 1,40 1,60 F0 F1 F2 P a nja ng Da un ( cm ) Rata-Rata Perlakuan F0: Flur 0 mg/L F1: Flur 1 mg/L F2: Flur 2 mg/L Perlakuan a b a
Trichosanthes  dioica .  Baik  panjang  maupun  lebar daun  terpengaruh  oleh  perlakuan  Flurprimidol.  Hal ini secara tidak langsung mampu mempengaruhi luas daun V. limbata. Sementara itu, aplikasi Flurprimidol secara mandiri mempengaruhi panjang daun (Tabel 1 dan Gambar 5).
Aplikasi  perlakuan  Flurprimidol  (F1)  pada parameter  panjang  daun  lebih  baik  dibandingkan dengan  perlakuan  kontrol  (F0)  (Gambar  5).  Namun seiring dengan bertambahnya konsentrasi Flurprimidol yang diberikan, ternyata dapat menurunkan panjang daun pada anggrek V. limbata . Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat  Demİr  &  Çelİkel (2018) yang menekankan bahwa penurunan panjang daun  terjadi  seiring  dengan  adanya  peningkatan konsentrasi  Flurprimidol  yang  diberikan  (sampai konsentrasi  20  mg/L).  Hal  ini  dapat  mengakibatkan bertambahnya  tebal  daun,  dan    bertambahnya kandungan  klorofil  per  satuan  luas  pada  daun tanaman Narcissus cv.  ‘Ice  Follies’  pada  perlakuan Flurprimidol 20 mg/L.

## C. Jumlah dan Panjang Akar Terpanjang
Hasil  analisis  ragam  aplikasi  Flurprimidol  dan GA 3 terhadap  jumlah  akar  baik  interaksi,  perlakuan mandiri  Flurprimidol  maupun  GA3  tidak  berbeda nyata  (Tabel  1.).  Akan  tetapi,  untuk  parameter panjang  akar  terpanjang  terdapat  interaksi  antara aplikasi Flurprimidol dan GA3 (Tabel 1).
Interaksi  Flurprimidol  dan  GA 3 terbaik  dalam memacu panjang akar adalah perlakuan F1G2 (Tabel 5.).  Akan  tetapi,  semakin  tinggi  perlakuan Flurprimidol yang diberikan, maka mampu menekan pertumbuhan panjang akar V. limbata . Dari Gambar 6 dapat diungkapkan bahwa tanaman perlakuan F1G2 (Gambar  6.b)  mempunyai  akar  paling  panjang dibandingkan  perlakuan  lainnya.  Untuk  tanaman perlakuan kontrol (F0G0) dapat dilihat pada Gambar 6.a  akar  yang  terbentuk  sangat  pendek.  Perlakuan F1G2  menjadi  perlakuan  yang  paling  baik dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya  (Tabel  5.). Hasil  penelitian  ini  sejalan  dengan  hasil  penelitian Singh et  al. (2015)  yang  mengemukakan  bahwa aplikasi Flurprimidol (1;2;5 µM) mampu mendorong perkembangan akar lebih baik dibandingkan dengan perlakuan kontrol kultur pucuk labu runcing, Trichosanthes dioica . Flurprimidol mampu menginduksi pertumbuhan  akar,  diasumsikan  oleh  adanya peningkatan kadar sitokinin endogen. Desta & Amare (2021)  menjelaskan  bahwa  aplikasi  Paklobutrazol sebesar  0,05  mg/L  dan  0,2  mg/L  mampu menstimulasi  panjang  akar  pada  kondisi  suhu minimum  (18-21 ℃ )  hingga  maksimum  (20-24 ℃ ). Paklobutrazol  dapat  meningkatkan  diameter  akar tanaman kedelai. Jaringan xylem akar kedelai tampak sedikit tidak beraturan. Perlakuan Paklobutrazol akan mendukung  banyaknya  pembuluh  xilem  sekunder yang terbentuk. Paklobutrazol juga diketahui mampu
Gambar 6. Performance panjang akar V. limbata ‘Jawa’ pada pengamatan 122 hari mst Keterangan: a . V. limbata pada perlakuan F0G0; b. V. limbata pada perlakuan F1G2.
meningkatkan  diameter  dan  panjang  akar  tanaman jagung.  Peningkatan  panjang  akar  tanaman  jagung yang diberi perlakuan Paklobutrazol disebabkan oleh bertambahnya  ukuran  sel  parenkim  korteks.  Hal  ini akan  mendorong  ekspansi  sel  parenkim  korteks secara radial.
Aplikasi  Flurprimidol  dan  GA 3 berpengaruh terhadap  pertumbuhan  tanaman  anggrek V.  limbata . Dalam  kondisi  yang  tercekam,  Flurprimidol  dapat memacu  tanaman  untuk  membentuk  ABA  secara endogen.  Selanjutnya,  secara  berangsur-angsur tanaman V.  limbata akan  mengalami  proses pemulihan, antara lain dengan terbentuknya klorofil, sitokinin.  Dengan  dibantu  oleh  pemberian  GA 3 eksogen, maka pertumbuhan V. limbata tetap berjalan dengan  baik.  Pemberian  Flurprimidol  dan  GA 3 mampu meningkatkan kandungan klorofil a, klorofil b,  dan kandungan klorofil  total,  serta  meningkatkan panjang  akar.  Selain  itu,  aplikasi  Flurprimidol  juga dapat  meningkatkan  lebar  dan  panjang  daun V. limbata. Perlakuan  F2G2  merupakan  perlakuan terbaik  untuk  memacu  pertumbuhan  anggrek V. limbata. Perlakuan  F1G2  merupakan  perlakuan terbaik dalam memacu panjang akar. Perlakuan F1G2 dapat diterapkan untuk memperbaiki perakaran bagi anggrek V.  limbata ‘Jawa’  yang  kelak  dapat menunjang proses aklimatisasinya.

## SIMPULAN
Flurprimidol dan GA 3 dengan konsentrasi yang berbeda  mampu  mempengaruhi  pertumbuhan V. limbata ‘Jawa’  secara in  vitro .  Terdapat  interaksi antara  Flurprimidol  dan  GA 3 dalam  meningkatkan kandungan  klorofil  a,  klorofil  b,  dan  kandungan klorofil  total,  serta  panjang  akar.  Perlakuan Flurprimidol  2  mg/L  dan  GA3  sebesar  2  mg/L
a.
b.
merupakan  perlakuan  terbaik  dalam  memacu pertumbuhan V. limbata ‘Jawa’ secara in vitro .

## DAFTAR REFERENSI
Adiguna,  E.,  Dwiati,  M.,  &  Kamsinah,  K.,  2018.
Penambahan Ekstrak Alga Sargassum duplicatum Bory pada Medium Kultur In vitro terhadap  Pertumbuhan  Seedling  Anggrek Vanda  tricolor Lindl. Biosfera ,  35(1), pp.  49- 53.
Demİr,  S.,  &  Çelİkel,  F.  G.,  2018.  Plant  Height Control  of Narcissus cv  .  ‘Ice  Follies’  by Gibberellin  Inhibitors  as  Bulb  Soak. Yyü  Tar Bil Derg , 28, pp. 102–110.
Desta,  B.,  &  Amare,  G.,  2021.  Paclobutrazol  as  a Plant  Growth  Regulator. Chemical  and Biological Technologies in Agriculture , 8(1),pp. 1–15.
Dubey,  S.  V.,  Bhalla,  R.,  &  Luthra,  R.,  2003.  an Overview of the Non-Mevalonate Pathway for Terpenoid  Biosynthesis  in  Plants. J.  Biosci , 28(5),pp. 637–646.
Dwiati,  M.,  Widodo,  P.,  &  Susanto,  A.  H.,  2023. Shoot Regeneration in N epenthes mirabilis as Affected by Flurprimidol and GA 3 Application. Biodiversitas, 24(7), pp. 4168–4174.
Dwiyanto, W., Soelistijono, R., & Susilo Utami, D., 2017.  Karakterisasi  Morfologi  dan  Anatomi Isolat Rhizoctonia Mikoriza  Anggrek Vanda limbata . Agrineca, 17(1), pp. 854–2813.
Gutbroad,  K.,  Romer,  J.,  &  Dormann,  P.,  2019. Phytol Metabolism in Plant. Progress in Lipid Research, 74(1), pp. 1-17.
Hardianti,  O.,  &  Soetopo,  L.,  2019.  Pengaruh Konsentrasi Pupuk Daun pada Media Anggrek Dendrobium dan Cattleya secara In  vitro . Jurnal Produksi Tanaman , 7(5), pp. 881–888.
Kasutjianingati,  K.,  &  Firgiyanto,  R.,  2018. Characterization  of  Morphology  from  Orchid Vanda sp. as a Genetic Information Source for Preservation  and  Agribusiness  of  Orchids  in Indonesia. IOP  Conference  Series:  Earth  and Environmental Science , 207(1), pp. 1-7.
Kumar,  S.,  Ghatty,  S.,  Satyanarayana,  J.,  Guha,  A., Chaitanya,  B.  S.  K.,  &  Reddy,  A.  R.,  2012. Paclobutrazol Treatment as a Potential Strategy for Higher Seed and Oil Yield in Field-Grown Camelina  sativa L.  Crantz. BMC  Research Notes , 5, pp. 1-13.
Kumar,  V.,  Kumar,  V.,  Umrao,  V.,  &  Singh,  M., 2012.  Effect  of  GA 3 and  Iaa  on  Growth  and Flowering of Carnation. in HortFlora Research Spectrum , 1(1), pp. 69-72
Metusala,  D.,  2011.  Keragaman Vanda  spp .
(Orchidaceae)  di  Kepulauan  Sunda  Kecil  - Indonesia. Journal of Biologycal Researchers , 5(A), pp. 29–33.
Mobini,  S.  H.,  Lulsdorf,  M.,  Warkentin,  T.  D.,  &
Vandenberg, A., 2015. Plant Growth Regulators  Improve In  vitro Flowering  and Rapid  Generation  Advancement  in  Lentil  and Faba Bean. In-vitro Cellular and
Developmental Biology - Plant , 51(1), pp. 71– 79.
Neware,  M.  R.,  2019.  Flurprimidol:  A  Growth Retardant. Journal  of  Pharmacognosy  and Phytochemistry , 8(6), pp. 141–143.
Rademacher, W., 2000. Growth Retardants : Effects on  Gibberellin. Annual  Review  of  Plant Physiology & Plant Molecular Biology , 51, pp. 501–531.
Renjana,  E.,  &  Kris  Hendrawati,  R.,  2019. Inventarisasi  Koleksi  Anggrek  ( Orchidaceae ) di  Kebun  Raya  Purwodadi  sebagai  Sumber Informasi  Kegiatan  Kunjungan  Studi.  in Prosceeding  Biology  Education  Conference:
Biology Science, Enviromental, and Learning , 16(1), pp. 182-189.
Sabatini,  A.P.,  Nurcahyani,  E.,  Yulianty,  Y.,  & Agustrina,  R.,  2022.  Respon  Planlet  Anggrek Cattleya  sp .  Hasil  Seleksi In  vitro terhadap Cekaman  Kekeringan  dengan  Polietilenglikol (PEG)  6000.  In Indonesian  Journal  of Biotechnology  and  Biodiversity, 6(2),  pp.  61- 67.
Salachna,  P.,  Mikiciuk,  M.,  Zawadzińska,  A., Piechocki,  R.,  Ptak,  P.,  Mikiciuk,  G.,  Pietrak, A.,  &  Łopusiewicz,  Ł.,  2020.  Changes  in Growth  and  Physiological  Parameters  of  × Amarine Following an Exogenous Application of  Gibberellic  Acid  and  Methyl  Jasmonate.
Agronomy , 10(7), pp. 1-13.
Singh, H., Kumar, S., & Singh, B. D., 2015. In-vitro
Conservation of
Pointed Gourd ( Trichosanthes  dioica )  Germplasm  Through Slow-Growth  Shoot  Cultures:  Effect  of Flurprimidol and Triiodobenzoic Acid.
Scientia Horticulturae , 182, pp. 41–46.
Song,  N.  A.,  2012.  Evolusi  Fotosintesis  pada Tumbuhan. Jurnal Ilmiah Sains , 12(1), pp. 28- 34.
Soumya,  P.  R.,  Kumar,  P.,  &  Pal,  M.,  2017. Paclobutrazol: a Novel Plant Growth Regulator and Multi-Stress Ameliorant. Indian Journal of Plant Physiology , 22(3), pp. 267–278.
Sumenda,  L.,  Henny,  L.  R.,  &  Feky,  R.  M.,  2011. Analisis  Kandungan  Klorofil  Daun  Mangga ( Mangifera indica L.) pada Tingkat Perkembangan  Daun  yang  Berbeda. Jurnal
Bios Logos , 1(1), pp. 20-24.
Wardani, F. F., Damayanti, F., & Rahayu, S., 2020. Respon Pertumbuhan dan Pembungaan Bunga Lisptik  ‘Soedjana  Kasan’  terhadap  Aplikasi GA 3 ,  Etefon,  dan  Paklobutrazol. Jurnal Agronomi Indonesia , 48(1), pp. 75–82.
Wiraatmaja,  I.  W.,  2017.  Zat  Pengatur  Tumbuh Giberelin  dan  Sitokinin. Jurnal  Fakultas Pertanian Universitas Udayana , pp. 1–44.
Zahra, J. A. Z., Sasmita, E. R., & Wijayani, A., 2023. Subkultur  Anggrek  Bulan  ( Phalaenopsis sp.) pada Media MS dengan Penambahan Thiamin dan Ekstrak Tauge. Agro Wiralodra , 6(2), 34– 39.