## OPTIMASI FORMULA MATRIKS KITOSAN DENGAN METILSELULOSA PADA PELEPASAN TERKENDALI SEDIAAN GRANUL TEOFILIN
Submitted : 13 Nov 2015
Edited : 15 Des 2015
Accepted : 21 Des 2015
Suprianto
Dosen Kopertis Wilayah I dpk Stikes Helvetia Medan Email : ekahasbi@gmail.com

## ABSTRACT
The  in  vitro  study  was  carried  out  on  the  release  of  active  ingradient  theophylline  from  granules prepared  by  moist  granulation  method.  The  granule  matrix  was  prepared  from  the  mixture  of  chitosan isolated  from  SwaIIo  shrimp  (Metapenaeus  monoceros)  (in  accordance  with  the  Protan  Laboratories,  Inc standard  requirement)  and  methylceliuiose  1500  cps.  The  granules  were  filled  into  850  mg  capsules containing 200 mg theophylline. The maximum weight of chitosan and methylcellulose for each capsule was determined by factorial design 2 2 .The result showed that, when the amount of chitosan was kept constant, an increase in the amount of methylcellulose will increase the release rate of theophylline from granules. The optimum weight of chitosan and methyIceIIuIose are 609.24 mg and 20.00 mg, respectively for one capsule.
Keywords : theophylline, chitosan and methylcellulose

## PENDAHULUAN
Pemberian  obat  secara  berulang  sering menyebabkan  pola  pelepasan  obat  tidak  terkontrol sehingga  kurva  konsentrasi  obat  dalam  plasma berfluktuasi. Produk pelepasan terkendali menawarkan  beberapa  keuntungan,  antara  lain: kadar obat dalam plasma relatif konstan, memperkecil  toksisitas,  menurunkan  efek  samping akibat  fluktuasi  kadar  obat,  frekuensi  pemberian obat  sekali  sehari  dan  menjamin  terapi  optimum (1) . Obat  dalam  bentuk  produk  tersebut  harus mempunyai waktu paruh lebih kecil dari 8 jam dan tidak  kurang  dari  satu  jam,  diabsorbsi  efektif  di ujung usus halus dan dosis tidak lebih dari 1 g serta indeks terapi sempit (2,3 ) .
Teofilin  adalah  salah  satu  bronkodilator dengan  indeks  terapi  sempit,  yaitu  berkisar  antara 10-20  mcg/ml  darah,  dapat  diberikan  pada penderita  asma  kronis,  dosis  lazim  200  mg  sekali pemakaian  dan  waktu  paruh  3-7  jam  serta mempunyai harga pKa sebesar 8,6 (4) .
Bahan  tambahan  yang  digunakan  sebagai pengikat  harus inert ,  tidak  toksik  dan  mampu melepaskan  bahan  obat  relatif  konstan  dalam jangka  waktu  tertentu (3) .  Metilselulosa  merupakan
polimer  yang  larut  larut  dalam  air  sedangkan kitosan  suatu  polimer  yang  tidak  larut  dalam  air berfungsi  sebagai  pengikat  yang inert dan  tidak toksik (5) .
Kitosan  telah  dimanfaatkan  untuk  membuat granul  dengan  bahan  aktif  indometasin  dan dilaporkan  bahwa  granul  kitosan  mempunyai potensi sebagai sediaan oral pelepasan terkendali (6) . Kitosan merupakan senyawa yang tidak larut dalam air,  larutan  basa  kuat,  H 2 SO 4 dan  beberapa  pelarut organik, seperti: alkohol, aseton, dimetilformamida dan  dimetilsulfoksida,  sedikit  larut  dalam  HCl, HNO 3 dan H 3 PO 4 0,5% dan larut baik dalam asam asetat (7) .
Kitosan  mempunyai  gugus  amino  sehingga kitosan  mempunyai  reaktifitas  kimia  yang  tinggi dan  menyumbangkan  sifat  elektrolit  polikation (8,9) . Metilselulosa  telah  digunakan  untuk  membuat matriks yang dapat mengontrol pelepasan obat dari sediaan  lepas  lambat (10) .  Metilselulosa  dinyatakan menghasilkan  pelepasan  obat  mendekati  orde  nol dari  matriks  yang  tidak  larut  dalam  air,  misalnya: gliseril  stearat,  alkohol  berlemak,  lilin  dan etilselulosa (3) .
Penelitian  optimasi  formula  matriks  kitosan dengan  metilselulosa  pada  pelepasan  terkendali sediaan granul teofilin dilakukan dengan menggunakan rancangan faktorial.

## BAHAN DAN ALAT
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini antara lain teofilin p.a (Metcorp, Ltd), asam klorida p.a  (E.Merck),  natrium  hidroksida  p.a  (E.Merck), kalium  dihidrogen  fosfat  p.a  (E.Merck),  kalium klorida  p.a  (E.Merck),  asam  asetat  glasial  p.a (E.Merck),  metilselulosa  1500  cps  (Wako  Pure Industries,  LTD)  dan  kitosan  hasil  isolasi  limbah padat  udang  Swallo  Tambak  Sari  Mabar  (Standar Protan  Laboratories,  Inc),  natrium  hipoklorit  p.a (E.Merck).
Alat yang digunakan diantaranya Spektrofotometer  ultra  violet  (Milton  Roy  21D), alat disolusi (Erweka), pengaduk magnetik (Ikamag),  timbangan  listrik  (Sartorius),  pH-meter stick (HBI), alat-alat gelas dan lain-lain.

## METODE
Metode  penelitian  pelepasan  terkendali teofilin  sediaan  granul  campuran  metilselulosa dengan kitosan meliputi:

## Pembuatan Granul Teofilin
Formula  F 1 sampai  F 4 dibuat  dengan melarutkan teofilin dalam larutan natrium hidroksida  0,1  N  sebanyak  5  ml  di  tambah  gel kitosan-metilselulosa. Gel dibuat dengan menambahkan  10  ml  asam  asetat  10%  setiap  400 mg kitosan. Kemudian pelarut  diuapkan pada suhu 60 0 C hingga massa dapat digranulasi dengan mesh 12.  Kemudian  didiamkan  pada  suhu  kamar  selama 6  jam  dan  dikeringkan  pada  suhu  60 0 C  selama  8 jam.  Sediaan  dibuat  dengan  berbagai  formula seperti terlihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Formula Matriks Sediaan Granul Teofilin
No. Formula Teofilin (mg) Kitosan (mg) Metilselul osa (mg) 1 F 1 200 600 20 2 F 2 200 600 400 3 F 3 200 800 20 4 F 4 200 800 400 5 F 5 200 X 1 X 2
Keterangan:
X 1 = Massa Kitosan Optimum X 2 = Massa Metilselulosa Optimum

## Penetapan Konsentrasi Teofilin dalam Granul
Seratus  miligram  granul  dimasukkan  ke dalam  beaker  glass  dan  ditambah  100  ml  medium pH 6,8 dan diaduk selama 8 jam dengan pengaduk magnetik.  Alikuot  diambil  dan  ditentukan  serapan pada  panjang  gelombang  maksimum  dengan spektrofotometer (11) .

## Uji Disolusi
Pelepasan  obat  secara in  vitro ditentukan dengan  memodifikasi  metode  uji  disolusi  USP XXII  dengan  menggunakan  keranjang  berputar. Granul yang mengandung kira-kira 200 mg teofilin dimasukkan  ke  dalam  keranjang  dan  di  putar dengan  kecepatan  100  rpm  pada  ketinggian  kira- kira  2  cm  dari  dasar  labu  yang  berisi  1000  ml medium  II  (pH  6,8)  pada  suhu  37  ±  0,5 0 C (6,12) . . Alikuot  dipipet  dengan  volume,  selang  dan  lama waktu  tertentu  dan  diukur  serapan  pada  panjang gelombang  270  nm  dengan  spektrofotometer  ultra violet.  Jumlah  teofilin  yang  dilepaskan  ditentukan dengan  menggunakan  kurva  kalibrasi  teofilin. Volume  cairan  dalam  labu  tetap  dijaga  1000  ml dengan  menambahkan  medium  yang  sama  dan setiap  formula  diuji  6  kali.  Uji  disolusi  juga dilakukan  dengan  menggunakan  medium  I  dan serapan diukur pada panjang gelombang 272 nm (11) . Jumlah  teofilin  yang  terlepas  ditentukan  dengan kurva kalibrasi teofilin.

## Penetapan  Massa  Optimum  Kitosan  dan Metilselulosa
Massa  optimum  kitosan  dan  metilselulosa sebagai  pengikat  teofilin  dengan  massa  maksimum kapsul  1  gram  dan  dosis  muat  150  mg  ditentukan dengan  rancangan  faktorial  22  melalui  studi kombinasi  kitosan  dengan  metilselulosa  seperti Tabel 2 (13) .
Massa  rata-rata  granul  yang  didisolusi  dari Tabel  2,  diamati  untuk  menentukan  koefisien persamaan  1.  Demikian  juga  respon  terhadap persen  kumulatif  teofilin  terlarut  sampai  waktu tertentu  sehingga  diperoleh  koefisien  persamaan 2 (13) .
Tabel 2 .   Rancangan Faktorial Kombinasi Kitosan-Metilselulosa No.  Formula Transpormasi Potensi Respon
AX 1 BX 2 CX 1 X 2 Y 1 Y 2 1 F 1 -1 -1 +1 Y 11 Y 21 2 F 2 -1 +1 -1 Y 12 Y 22 3 F 3 +1 -1 -1 Y 13 Y 23 4 F 4 +1 +1 +1 Y 14 Y 24
Keterangan : AX 1 = transformasi potensi kitosan.
BX 2 = transformasi potensi metilselulosa.
CX 1 X 2 = transformasi potensi interaksi.
Y 1 = respon massa rata-rata granul terdisolusi. Y 2 = respon persen kumulatif teofilin terlarut.
Y 1 =  o +  1 X 1 +  2 X 2 +  12 X 1 X 2 …………..  1 Y 2 =  o +  2 X 2 +  2 X 2 +  12 X 1 X 2 …………..  2 Massa kitosan maupun metilselulosa terendah  dan  tertinggi  yang  direncanakan  pada Tabel 2, disubstitusikan pada persamaan 3 dan 4. (3)
2 2 11 13 22 13 1 / ) X (X )/ X (X - A
AX    ……………………..   3
2 2 21 22 21 22 2 / ) X (X )/ X (X - B BX    ……..…………………  4
Keterangan :A = Massa Kitosan Optimum B = Massa Metilselulosa Optimum
Persamaan 1 dan 2 untuk memprediksi massa maksimum  satu  kapsul  granul  teofilin  dan  persen kumulatif teofilin yang terlarut pada waktu tertentu. Sedangkan  persamaan  3  dan  4  untuk  menentukan massa kitosan dan metilselulosa optimum berdasarkan  transformasi  potensi  kitosan  dan metilselulosa  dari  prediksi  massa  maksimum  satu kapsul granuI teofilin melalui parsamaan 1.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Penentuan Konsentrasi Teofilin dalam Granul
Tabel  3  menunjukkan  jumlah  obat  yang terperangkap  di  dalam  granul  makin  kecil  dengan bertambah  konsentrasi  kitosan  atau  campuran kitosan  dengan  metilselulosa.  Hal  ini  diakibatkan jumlah  obat  yang  terperangkap  di  dalam  granul merupakan perbandingan antara bahan obat dengan pengikat.
Tabel 3. Konsentrasi Teofilin dalam Granul
No. Formula Teofilin (%) 1 F 1 16,3194 ± 0,5373 2 F 2 19,1147 ± 0,8360 3 F 3 13,9460 ± 0,5466 4 F 4 23,2916 ± 0,8326
Keterangan: * = Standar deviasi (n = 3).

## Pemeriksaan Uji Disolusi
Interpretasi data disolusi (Tabel 4) dilakukan dengan mengamati profil pelepasan teofilin masing- masing  formula.  Profil  pelepasan  dibuat  dengan memplotkan  persen  teofilin  yang  terlepas versus waktu  dalam  menit  (Gambar  1).  Proses  pelepasan obat yang paling lambat adalah formula F 3 , dengan komposisi kitosan-metilselulosa 40 : 1 (b/b). Hal ini menunjukkan  bahwa  kitosan  bersifat  kationik  akan lebih  memperlambat,  hal  ini  disebabkan  kitosan berikatan  ionic  dengan  teofilin  sedangkan  dengan metilselulosa hanya terdispesi.
Pelepasan  teofilin  melalui  sistem  tekanan osmosa,  difusi  dan  erosi  serta  pengontrolan  reaksi kimia  ( chemically  controlled  system ).  Hal  ini disebabkan  pengembangan  granul  matriks  kitosan sampai  3/2  kali  volume  awal,  perpindahan  zat terlarut  dari  konsentrasi  tinggi  ke  konsentrasi rendah  dan  pelarutan  matriks  metilselulosa  yang mengandung  teofilin  serta  pemutusan  ikatan  ion teofilin dengan kitosan.
Penentuan  laju  pelepasan  teofilin  granul dilakukan  dengan  membuat  persamaan  regresi masing-masing  sistem  pelepasan  obat dari  sediaan. Laju  orde  nol  diperoleh  dengan  plot  antara konsentrasi kumulatif teofilin terlarut dengan waktu dan  harus  diperoleh  garis  lurus  dengan  koefisien determinasi  tertinggi.  Laju  orde  satu  dilakukan dengan plot antara logaritma pengurangan konsentrasi  zat aktif  dengan  waktu, juga  dan  harus diperoleh  garis  lurus  dengan  koefisien  determinasi tertinggi (2,14) . Sedangkan laju orde Higuchi dilakukan dengan plot antara konsentrasi kumulatif teofilin  terlarut  dengan  akar  waktu  dan  dan  harus diperoleh  garis  lurus  dengan  koefisien  determinasi tertinggi (3,5,14) .
Model  laju  pelepasan  obat  ditentukan  oleh harga  koefisien  determinasi  terbesar  dari  ketiga analisis  regresi  model  laju  pelepasan  obat.  Hasil analisis  laju  pelepasan  obat  untuk  orde  nol,  orde satu dan orde Higuchi ditampilkan pada Tabel 5.
Tabel  4. Data Disolusi Granul Formula F 1 sampai F 4 dalam Medium pH = 6,8
No. Waktu (Menit) Persen Kumulatif Teofilin Terlarut* F 1 F 2 F 3 F 4 1 30 25,1686 ± 0,4849  46,8708 ± 0,6365  16,4703  ± 0,4396 34,2891  ± 0,3831 2 60 41,9574 ± 0,3153  70,0356 ± 0,5974 31,7956   ± 0,9405 52,6390 ± 0,7150 3 90 56,6832 ± 1,0463  83,1038 ± 1,0953  44,9390  ± 0,6910  73,8012 ± 0,6376 4 120 68,6977 ± 1,0747  92,7326 ± 1,7290  55,6924  ± 0,6003  82,1449 ± 0,9766 5 150 83,4324 ± 1,8691  96,5443 ± 0,4089  65,8596  ± 0,9074  86,3088 ± 1,0156 6 180 89,0680 ± 0,4415  98,2740 ± 0,2951  74,5341  ± 0,6962  92,8563 ± 0,9362 7 210 94,1762 ± 0,6650 82,9575  ± 1,3667  93,9706 ± 1,4758 8 240 96,5699 ± 0,4457 90,8485  ± 0,3905  95,9919 ± 1,0636 9 270 97,7062 ± 0,3271 94,1778  ± 0,9433  96,8604 ± 1,3182 10 300 96,7803  1,1948 11 330 97,4002  1,0919
Keterangan : * Standar deviasi (n = 6)
Gambar 1. Profil Pelepasan Teofilin dari Masing-Masing Formula
Tabel 5. Hasil Analisis Kinetika Pelepasan Teofilin dari Matriks Formula Optimasi
No. Formula Komposisi Matriks Nilai Koefisien Determinasi Kitosan(mg) Metilselulosa (mg) Orde Nol  Orde Satu  Orde Higuchi 1 F 1 600 20 0,8332 0,8662 0,9622 2 F 2 600 400 0,6810 0,9896 0,9431 3 F 3 800 20 0,8844 0,9251 0,9545 4 F 4 800 400 0,6354 0,9845 0,9151
Koefisien  detenminasi  tertinggi  formula  F 1 , konsentrasi  kitosan  terendah  (600  mg)  dan metilselulosa  terendah  (20  mg)  sebesar  0,9622 (Tabel  5)  menerangkan  bahwa  sistem  pelepasan obat  mengikuti  orde  Higuchi.  Sementara,  formula F 2 ,  konsentrasi  kitosan  terendah  (600  mg)  dan metilselulosa  tertinggi  (400  mg)  mempunyai koefisien  determinasi  tertinggi  0,9896  (Tabel  5) menerangkan bahwa pelepasan teofilin dari formula F 2 mengikuti orde satu. Hal ini menunjukkan bahwa ada batas konsentrasi kitosan yang dapat memberikan  kinetika  pelepasan  teofilin  dengan orde tertentu.
Sedangkan  koefisien  determinasi  tertinggi dari  formula  F 3 ,  konsentrasi  kitosan  tertinggi  (800 mg)  dan  metilselulosa  terendah  (20  mg)  sebesar 0,9545  (Tabel  5)  menerangkan  bahwa  pelepasan obat  dari  formula  F 3 mengikuti  orde  Higuchi.  Dan koefisien determinasi terbesar formula F 4 , konsentrasi  kitosan  tertinggi  (800  mg)  dan metilselulosa  tertinggi  (400  mg)  sebesar  0,9845 (Tabel  5)  menerangkan  bahwa  pelepasan  obat  dari formula F 4 mengikuti orde satu.
Semakin  tinggi  konsentrasi  kitosan  maka pelepasan  teofilin  cenderung  mengikuti  laju pelepasan orde Higuchi. Matriks kitosan memberikan  pelepasan  bahan  obat  mengikuti  orde Higuchi (5,15) . Ini  menunjukkan  bahwa  model pelepasan  teofilin  dari  granul  kitosan  cenderung mengikuti  orde  Higuchi.  Metilselulosa  dinyatakan menghasilkan  pelepasan  obat  mendekati  orde  nol dari  matriks  yang  tidak  larut  dalam  air,  misalnya: gliseril  stearat,  alkohol  berlemak,  lilin  dan etilselulosa (3) .

## Optimasi  Formula  Campuran  Kitosan  dan Metilselulosa
Tabel  6  menunjukkan  massa  rata-rata  granul teofilin  yang  mengandung  pengikat  kombinasi, kitosan  dengan  metilselulosa  yang  diamati  pada studi  kombinasi  kitosan-metilselulosa  tanpa  dosis muatan (Tabel 2).
Berdasarkan  massa  rata-rata  satu  kapsul granul  teofilin  dari  Tabel  6  diperoleh  koefisien persamaan 1 dan 2, yaitu:
Y 1 = 113,0575 +10,3375 X 1 + 18,8175 X 2 + 0,1575 X 1 X 2 Y 2 = 88,6830 - 4,9879 X 1 + 6,8821 X 2 + 2,2791 X 1 X 2
Tabel 6. Berat Granul Kitosan-Metilselulosa
No. Formula Granul (mg) 1 F 4 840,7000 ± 1,0677* 2 F 5 1213,9000 ± 0,6976 3 F 6 1044,2000 ± 0,8602 4 F 7 1432,7000 ± 1,0033
Keterangan: * standar deviasi (n = 6)
Berat  kitosan  maupun  metilselulosa  dari Tabel  1  setelah  disubstitusikan  pada  pesamaan  3 dan 4 diperoleh persamaan 5 dan 6.
Massa optimum kitosan ={(Potensi x 100) + (700) } mg.................. 5
Massa optimum metilselulosa ={ (Potensi x 190) + (210)} mg ................. 6
Berat  maksimum  satu  kapsul  teofilin  tanpa dosis  muatan,  yaitu  delapan  ratus  lima  puluh milligram (850,0063 mg) dengan potensi; AX 1 , = - 0,9076 dan BX 2 = -1 dengan teofilin 200 mg, maka berat maksimum kitosan dan metilselulosa masing- masing sebesar 609,2400 mg dan 20 mg.

## Formula Kitosan dan Metilselulosa Optimum
Tabel  7  dan  Gambar  2  menunjukkan  hasil  uji disolusi  dan  profil  pelepasan  teofilin  dari  sediaan formula dengan massa optimum satu kapsul 850 mg (F 8 )  yang  mengandung  massa  kitosan  dan metilseiulosa  masing-masing  sebesar  609,2400  mg dan  20  mg  dalam  medium  berbeda.  Pelarutan teofilin  dalam  medium  I  (pH  =  1,2)  lebih  lambat jika dibandingkan dalam medium II (pH = 6,8). Hal ini  karena  teofilin  bersifat  asam  lemah  dengan harga pKa = 8,6 sehingga lebih mudah larut dalam medium  yang  bersifat  basa  dan  mungkin  pengaruh permeabilitas kitosan maupun metilselulosa terhadap medium II (pH = 6,8) lebih besar daripada medium I (pH = 1,2).
Tabel 7. Data Disolusi Granul Formula F 8 dalam Medium Berbeda
No. Waktu (menit) Persen Kumulatif Teofilin Terlarut pH = 1,2 pH = 6,8 1 30 8,3453 ± 0,2479* 22,4050 ± 0,4179* 2 60 12,8644 ± 0,4955 41,7365 ± 1,1224 3 90 15,8807 ± 0,4647 51,9546 ± 1,2665 4 120 19,9823 ± 0,4642 68,4271 ± 0,9667 5 150 25,7194 ± 0,5357 76,6114 ± 0,8198 6 180 32,1670 ± 0,6608 87,8080 ± 1,1951 7 210 35,4589 ± 1,2082 92,1606 ± 1,2010 8 240 44,4921 ± 0,4849 96,8700 ± 1,0067 9 270 51,3658 ± 0,8052 97,9637 ± 1,0551
Keterangan : * Standar deviasi (n = 6)
Gambar 2. Profil Pelepasan Teofilin Formula Optimum dalam Medium Berbeda
Tabel 8. Hasil Analisis Kinetika Pelepasan Teofilin dari Matriks Formula Optimum
No. Medium Nilai Koefisien Determinasi Orde Nol Orde Satu Orde Higuchi 1 I 0,9744 0,9241 0,8000 2 II 0,8616 0,9113 0,9631
Koefisien  determinasi  terbesar  pada  medium  I (pH  =  1,2)  dan  medium  II  (pH  =  6,8)  masing- masing  sebesar  0,9744  dan  0,9631  (Tabel  8) menerangkan bahwa pelepasan obat dari formula F 8 mengikuti  orde  no1  pada  medium  I  dan  Higuchi pada  medium  II.  Hal  ini  terjadi  karena  teofilin bersifat  asam  lemah  dengan  harga  pKa  =  8,6 sehingga  lebih  mudah  larut  dalam  medium  yang
bersifat  basa  dan  mungkin  pengaruh  permeabilitas kitosan  maupun  metilselulosa  terhadap  medium  II (pH  =  6,8)  lebih  besar  daripada  medium  I  (pH  = 1,2).

## SIMPULAN
Pelepasan  teofilin  makin  lambat  dengan kenaikan  konsentrasi  kitosan.  Dan  penambahan
metilselulosa  mempercepat  pelepasan  teofilin  dari sediaan granul (Uji t, p  0,05).
Massa  optimum  kitosan  dan  metilselulosa dalam  satu  kapsul  teofilin,  yaitu  850  mg  adalah 609,24  mg  dan  20,00  mg.  Pelepasan  teofilin  dari formula  yang  menggunakan  pengikat  campuran maksimum kitosan dengan metilselulosa sekitar 4,5 jam  dengan  persen  kumulatif  teofilin  terlarut (97,9637 ± 1,0551)% pada medium pH = 6,8. Uji t tehadap pelepasan teofilin saat t = 180 menit antara penelitian  dengan  yang  diharapkan,  hasil  prediksi tidak menunjukkan perbedaan yang nyata untuk uji dua  pihak  dengan  α  =  0,05;  dk  =  5  (t tabel =  ±  2,57 dan t hitung = - 0,30).
Laju  pelepasan  obat  mengikuti  orde  Higuchi pada  medium  II  dan  orde  nol  pada  medium  I  serta jenis  sediaan  granul  termasuk  pada prolonged action.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Shaji  J,  Jain  V,  Lodha  S.    Chitosan:  A  Novel Pharmaceutical Excipient. International Journal  of  Pharmaceutical  and  Applied Sciences. 2010; 1(1): 1-28.
2. Allache  JM.  Farmasetika  2.  Biofarmasi.  Edisi Surabaya: Airlangga University Press; 1993. p 154-339.
3. Lordi NG. Bentuk Sediaan Pelepasan Berkesinambungan.  Dalam: Teori dan Praktek Farmasi Industri. Edisi III. jilid 2, editor: Leon Lachman,  H.A.  Lieberman  dan  J.L.  Kanig,
Jakarta: UI-Pres; 1994. p. 893-940.
4. Barnes  PJ.  Theophylline.  Pharmaceuticals. 2010; 3: 725-747
5. Rani M, Agarwal A, Maharana T, Negi YS. A Comparative Study for Interpenetrating Polymeric  Network  (IPN)  of  Chitosan  Amino Acid  Beads  for  Controlled  Drug  Release. African Journal of Pharmacy and
Pharmacology. 2010; 4(2): 35-54.
6. Miyazaki  S,  Yamaguchi  H,  Yokouchi  C, Takada  M,    How  WM.  Sustained  Release  of Indomethacin  from  Chitosan  Granules  in Beagle Dogs. J. Pharm. Pharmacol. 1988; 40 : 642–643
7. Knorr D. Dye Binding Properties of Chitin and Chitosan. J.Pharm.Sci. 1983; 48:36-41.
8. Matthew HW, Salley SO, Peterson, WD, Klien MD.  Complex  Coacenvte  Microcapsules for Mammalian  Cell  Culture  and  Artificial  Organ Development. J. Biotechnol. Prog. 1993; 9(5): 510.
9. Zielinski  BA,  Aebischer  P.  Chitosan  as  a Matrix . for  Mammalian  Cell  Encapsulation.  J.
Biomaterials. 1994; I5(13): 1049.
10. Siswanto A. Optimasi Formula Sediaan Tablet Lepas  Lambat Teofilin  dengan  Bahan Matriks NaCMC  dan  Xanthan  Gum.  Pharmacy.  2006; 3(2): 40-45
11. Clarke  EGC.  Isolation  and  Identification  of Drug.  London:  The  Pharmaceutical  Press; 1969. p. 270-271
12. Vashi  VI,  Meyer  MC.  Effect  pH  on  the  in Vitro  Dissolution  and  in  Vivo  Absoption  of Controlled-Release  Theophilline  in  Dogs.    J. Pharm. Sci. 1988; 77(9): 760-764.
13. Bolton  S.  Pharmaceutical  Statistict  Practical and  Clinical  Application.  In:  Drug  and  The Parmaceutical Sciences. editor: James Swarbrick.  New  York:  Marcel  Dekker,  Inc; 1984. p.125-435.
14. Sudjana.  Metode  Statistik.  Edisi  Kelima. Bandung: Tarsito; 1992. p. 227-372.
15. Murtaza G, Ahmad M, Khan SA, dan Hussain I.  Evaluation  of  Cefixime  Loaded  Chitosan Microspheres:  Analysis  of  Dissolution  Data Using  DD  Solver.    [internet].  2012.  [cited 2013 August 12]. Available from: http://www.dissolutiontech.com/DTresour/201 205Articles/DT201205_A02.pdf