A
PRODUKSI ENZIM AMILOGLUKOSIDASE DARI Aspergillus niger
Fatmawati Nur*
* Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Alauddin Makassar email: fatenurkhalik@yahoo.com .
Abstrak : Semua  mikroorganisme  memerlukan  nutrien  dasar  sebagai sumber karbon,  nitrogen, energi,  dan  faktor  esensial  pertumbuhan. Molekul-molekul  sederhana  seperti  gula  dan  komponen  lain  yang larut  di  sekelilingnya  dapat  langsung  digunakan,  tetapi  molekul  yang lebih  kompleks  harus  dipecah  dahulu  sebelum  diserap  ke  dalam  sel. Untuk  memecahkan  molekul  besar  menjadi  molekul  sederhana, mikroba  mengeluarkan  enzim  tertentu  ke  lingkungannya  yang  lazim disebut  enzim  ekstraselluler  misalnya  amiloglukosisase. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui kondisi pH dan waktu fermentasi optimum  Aspergillus  niger  dengan  memanfaatkan  selaput  biji markisa sebagai substrat untuk menghasilkan enzim amiloglukosidase. Perlakuan pH yang diberikan adalah  4.0, 4.5, 5.0, dan 5.5, serta waktu fermentasi 3, 4, 5, dan 6 x 24 jam. Hasil yang  diperoleh  memperlihatkan  kemampuan  Aspergillus  niger menghasilkan enzim amiloglukosidase melalui uji aktivitas metode Somogyi-Nelson adalah  pada  pH  4.5  senilai  433.675  unit,  waktu fermentasi 5 x 24 jam senilai 529.513 unit.
Keywords : Aspergillus niger, Enzim, Amiloglukosidase, pH, Waktu Fermentasi

## PENDAHULUAN
spergillus  terdapat  di  mana-mana,  baik  di  daerah  kutub  maupun  daerah tropik, dan hampir pada semua substrat (Fraizer, 1978). Disamping adanya species yang patogen,  ada  pula  spesies  yang  dimanfaatkan oleh manusia dalam  perindustrian.  Aspergillus  banyak  digunakan  dalam  studi  tentang enzimologi, biokimia,  pembuatan  asam  sitrat,  asam  glukonat,  dan  beberapa  asam  organik  lainnya dengan mempergunakan Aspergillus niger (Lay,1984).
Seperti  halnya  mikroorganisme  yang  lain,  pertumbuhan Aspergillus  niger dipengaruhi    oleh    berbagai   keadaan   fisik   dan   kimiawi.   Karena   enzimlah   yang
180 _ Jurnal Teknosains, Volume 11, Nomor 2, Juli-Desember 2017 , hlm. 179 – 189
mengkatalisis  reaksi-reaksi  yang  berhubungan  dengan  proses  kehidupan,  maka keadaan-keadaan  lingkungan  yang  mempengaruhi  enzim  dan  karenanya  juga mempengaruhi pertumbuhannya (Pelczar,1985).
Faktor-faktor  yang  mempengaruhi  aktivitas  pertumbuhan  mikroorganisme adalah konsentrasi ion H + (pH), suhu, kadar air dan aktivitas air (a w ), potensial oksidasi reduksi, komposisi makanan, dan adanya komponen inhibitor (Sa’id, 1987).
Setiap mikroorganisme memiliki suhu optimum untuk pertumbuhannya, misalnya Aspergillus niger pada suhu 37.8 o C, dan masa inkubasinya seperti kapang pada umumnya berkisar pada 3 x 24 jam sampai 7 x  24 jam. Sedangkan pH yang optimum berlaku pada semua  kapang  yaitu  sekitar  4.5  –  5.5  yang  berarti  bahwa  pH  aktivitas  enzim  yang mempengaruhi  pertumbuhannya  berada  pada  kisaran  tersebut,  karena  pada  dasarnya pertumbuhan mikroorganisme itu adalah akibat adanya kerja enzim.
Molekul-molekul  sederhana  seperti  gula  dan  komponen  lain  yang  larut  di sekelilingnya  dapat  langsung  digunakan.  Molekul-molekul  lain  yang  lebih  kompleks seperti  selulosa,  pati,  dan  protein  harus  dipecah  dahulu  sebelum  diserap  ke  dalam  sel (Hardjo,  1989).  Untuk  memecahkan  molekul  besar  menjadi  molekul  sederhana, mikroba  mengeluarkan  enzim  tertentu ke lingkungannya sesuai dengan jenis zat yang akan  diuraikan.  Produksi  enzim  ini  merupakan  kebutuhan  utama  untuk  pertumbuhan normal mikroba (Rahman, 1992).
Enzim  yang  dikeluarkan  oleh  mikroorganisme  ke  lingkungan,  lazim  disebut enzim ekstraselluler. Jenis enzim inilah  yang mula-mula diusahakan secara komersial, misalnya  amiloglukosidase  yang  sangat  penting  digunakan  dalam  bidang  produksi alkohol,  roti,  juice,  dan  pati.  Mikroorganisme  yang  berkemampuan  baik  untuk menghasilkan  enzim  ini  adalah  jenis Aspergillus  niger,  Aspergillus  oryzae, dan Endomycopsis bisfora (Rahman, 1992) .
Buah markisa atau siuh (Passiflora edulis) adalah salah satu jenis buah-buahan yang tumbuh subur di  Indonesia, khususnya di Sumatera Utara dan Sulawesi Selatan. Umumnya buah ini diolah dalam industri dengan dibuat sirup, soda, jelly, dan selei. Bagian buah yang dimanfaatkan untuk keperluan industri adalah sari buah berupa air yang dibungkus selaput (Smith, 1993) . Bahan buangan berupa kulit, biji, dan selaput yang masih   mengandung   air,   protein,   lemak,  serat,  karbohidrat,  serta mineral,  telah
Fatmawati Nur, Produksi Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus niger _ 181
diusahakan pengolahannya (Pelczar,1985) , misalnya kulit dan biji yang diolah menjadi makanan ternak, sedangkan endocarp yang mengandung pektin dapat dijadikan bahan untuk jelly (Smith, 1993).
Melihat kandungan zat-zat yang terdapat pada limbah industri markisa di  atas, maka  sangat  besar  kemungkinannya  dapat  digunakan  sebagai  media  pertumbuhan mikroba.
Kemampuan  mikroorganisme  untuk  tumbuh  dan  mensintesis  produk  pada suatu  lingkungan tertentu ditentukan oleh perilaku genetika mikroorganisme tersebut. Pengembangan  proses  fermentasi  yang  berhasil  sangat  tergantung  pada  strain  yang baik, serta pengetahuan mengenai efek parameter lingkungan terhadap pertumbuhan sel dan pembentukan produknya (Winarno, 1995).

## TUJUAN PENELITIAN
1. Untuk  mengetahui  kondisi  pH  yang  optimum  untuk  fermentasi Aspergillus niger pada substrat selaput biji markisa.
2. Untuk mengetahui waktu fermentasi optimum untuk fermentasi Aspergillus niger pada substrat selaput biji markisa .

## METODELOGI PENELITIAN
Penelitian  dilakukan  dalam  beberapa  tahapan  yang  tujuannya  mengarah kepada  kondisi  optimum  fermentasi Aspergillus  niger pada  substrat  selaput  biji markisa  dengan  cara  mendeteksi  aktivitas  enzim  amiloglukosidase  pada  tiap  pH dan  masa  fermentasi  yang  diperlakukan  pada  medium  fermentasinya.  Urutan tahapan penelitian sebagai berikut :

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat dari gelas disterilkan dengan oven pada suhu 180 °C selama 2 jam. Sedangkan alat dari logam seperti ose dan jarum spoit disterilkan dengan api. Untuk sterilisasi bahan dan medium dilakukan pada otoklaf suhu 121 °C tekanan 2 atm selama 15 menit.
182 _ Jurnal Teknosains, Volume 11, Nomor 2, Juli-Desember 2017 , hlm. 179 – 189

## Pembuatan Medium PDA (Potato Dextrose Agar)
Medium  PDA  ditimbang  sesuai  kebutuhan,  dimasukkan    ke  dalam erlenmeyer,  ditambahkan  air  suling  sampai  volume  yang  dibutuhkan.  Selanjutnya dipanaskan   sambil   diaduk,   kcmudian  distcrilkan.  Ditambahkan  16%  Asam tartrat  10% sebelum dimasukkan ke dalam tabung reaksi steril sebanyak 5 ml tiap tabung, ditutup dengan kapas, dan dimiringkan dalam keadaan masih panas sampai agar  dalam tabung reaksi membeku.

## Pengolahan Selaput Biji Markisa
Selaput  biji  markisa  dipisahkan  dari  kulitnya,  kemudian  dikeringkan  pada sinar  matahari.  Bahan  kering  dihaluskan,  dan  ditimbang  sesuai  keperluan  untuk medium fermentasi.

## Pembuatan Inokulum
Aspergillus niger yang ditumbuhkan pada medium PDA umur 4 x 24 jam, suhu kamar ditambahkan cairan yang terdiri dari 0.1% Tween 80 dan 0.9% NaCl fisiologis, kemudian dikeruk dan dikocok hingga semua spora mikroorganismenya lepas. Suspensi ini  digunakan  sebagai  inokulum  yang  akan  dimasukkan  ke  dalam  medium fermentasi.

## Medium Fermentasi
Medium fermentasi terdiri dari : tepung selaput biji markisa (8%), NaH 2 PO 4 (4.7%), CaCl 2 (0.1%), KC1 (0.02%), dan MgCl 2 .6H 2 O (0.02%) diatur pHnya menjadi 4.0,  4.5,  5.0, dan  5.5,  kemudian  ditambahkan  buffer  sitrat.  Medium  disterilkan  pada otoklaf suhu 121 °C tekanan 2 atm selama 15 menit, diinokulasikan dengan Aspergillus niger dari inokulum sebanyak 1 ml pada volume 100 ml, difermentasikan pada shaker, suhu kamar dengan dua kali ulangan. Pengambilan sampel enzim dilakukan pada waktu fermentasi 3, 4, 5, dan 6 x 24 jam yang diekstraksi dengan sentrifuge 3000 rpm selama 10 menit, kemudian ditentukan aktivitas enzim amiloglukosidase secara Sacharifying.
Fatmawati Nur, Produksi Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus niger _ 183

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Semua  mikroorganisme  memerlukan  nutrien  dasar  sebagai  sumber  karbon, nitrogen,  energi,  dan  faktor  esensial  pertumbuhan.  Unsur-unsur  nutrien  dasar tersebut  disamping  menyediakan  energi  juga  digunakan  untuk  pembentukan konstituen selluler (Britz, 1985).
Penggunaan  Aspergillus  sebagai  organisme  penguji  berbagai  zat  sering dilakukan, karena jamur ini peka sekali terhadap unsur-unsur kimia tertentu, misalnya Aspergillus niger yang aslinya berwarna hitam menjadi berwarna abu-abu jika tembaga yang tersedia dalam tempat tumbuhnya kurang dari 2.5 mg. Warna hitam berubah menjadi warna kuning jika jamur tersebut tidak diberi tembaga sama sekali (Dwijosepoetro, 1978).
Ciri  khas  yang  dimiliki  jamur  ini  ialah  cara  bagaimana  konidia  terbentuk, sedang untuk membedakan species yang satu dengan yang lain digunakan terutama kriteria warna  (Dwijosepoetro, 1978).
Kenampakan  konidiophora  berupa  panjang  pendek,  besar  kecil,  serta  halus kasarnya,  menjadi  kriteria  dalam  pembedaan  species  (Dwijosepoetro,  1978).  Begitu  pula halnya keragaman konidia terutama dalam hal warna dan ukuran. Konidia berbentuk bulat dapat  ditemukan  pada Aspergillus  niger, hemisperikel  pada Aspergillus  tricola, clips pada Aspergillus elevatus, dan bentuk kolumnar pada Aspergillus flavus (Prescott, 1959). Dwidjoseputro  (1978)  mengelompokkan Aspergillus  niger ke  dalam  suatu sistematik sebagai berikut : regnum Plantarum, divisio Mycota, sub divisio Eumycotina, classis  Ascomycetes,  sub  classis  Euascomycctidae,  ordo  Eurotiales,  familia  Euroticeae, genus Aspergillus, dan species Aspergillus niger.
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  memanfaatkan  limbah  selaput  biji  markisa sebagai  substrat/media  fermentasai  untuk Aspergillus  niger, sehingga  mikroorganisme tersebut  dapat  mengeluarkan  metabolit  sekundernya  berupa  enzim  amiloglukosidase yang  dapat  mendegradasi  pati  pada  substrat  menjadai  glukosa  sebagai  sumber karbonnya,sehingga dapat diserap masuk ke dalam selnya.
Kondisi  pH  sangat  menentukan  pertumbuhan  dan  produksi  metabolit  sekunder sebuah  mikroorganisme  karena  pH  berpengaruh  pada  fungsi  membran  dan  enzim. Perubahan pH medium dapat mempengaruhi sifat permeabel sel (Hardjo, 1989) .
184 _ Jurnal Teknosains, Volume 11, Nomor 2, Juli-Desember 2017 , hlm. 179 – 189
Pengujian aktivitas enzim untuk mengukur kondisi optimum pH memperlihatkan hasil terbaik pada pH 4.5 senilai  433.675 unit aktivitas enzim yang berbeda nyata dengan perlakuan pH yang lain (tabel 1).
Tabel 1. Aktivitas Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus niger dengan Variasi pH pada Substrat Selaput Biji Markisa pH 4.0 4.5 5.0 5.5 Unit 359.975  c 433.675  a 386.238  b 338.250  d
Hal  ini  disebabkan  karena  pada  pH  tersebut  kondisi  yang  tepat  untuk  gugus pemberi  atau  penerima  proton  pada  sisi  katalitik  enzim  yang  dihasilkan  berada  pada tingkat ionisasi yang diinginkan.
Gambar  1. Diagram Batang Aktivitas Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus niger dengan Variasi pH pada Substrat Selaput Biji Markisa
Perlakuan pH sebelum dan setelah 4.5 menunjukkan nilai yang lebih rendah dapat pula  dilihat pada diagram batang aktivitas enzim amiloglukosidase dari Aspergillus niger pada gambar 1 dan gambar 2. Berkurangnya aktivitas terjadi karena laju reaksi disebabkan karena pH tinggi atau rendah mempengaruhi permeabilitas sel.
Sewaktu  pertumbuhan  mikroorganisme,  konsentrasi  ion  H + (pH)  dalam medium  mempengaruhi  protein  (enzim  dan  sistem  transport)  yang  terdapat  pada membran sel. Struktur protein berubah bila pH dalam  medium berubah. Mikroorganisme
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 pH 4.0 pH 4.5 pH 5.0 pH 5.5
Fatmawati Nur, Produksi Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus niger _ 185
memiliki  enzim  yang  befungsi  pada  pH  tertentu  (Lay,1984).  Rentang  pH  optimum berbagai mikroorganisme adalah sebagai berikut: (1) Bakteri  memiliki  pH  optimum 6.5 – 7.5, pH minimum 3 - 5, dan pH maksimum 8 - 10. (2) Khamir memiliki pH optimum 4.5  –  5.5,  pH  minimum  1  -  2,  dan  pH  maksimum  7  -  8. (3)  Kapang  memiliki  pH optimum 4.5 – 5.5, pH minimum 1 - 2, dan pH maksimum 7 - 8. (Moat, 1979).
Gambar  2. Grafik Aktivitas Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus niger dengan Variasi pH pada Substrat Selaput Biji Markisa
Meninjau  waktu  fermentasi,  enzim  amiloglugosidase  yang  dihasilkan  oleh Aspergillus  niger memperlihatkan  aktivitas  tertinggi  pada  waktu  fermentasi  5  x  24  jam senilai  529.513  unit  yang  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  waktu  fermentasi  yang  lain tabel 2).
Tabel 2. Aktivitas Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus niger dengan Variasi Waktu fermentasi pada Substrat Selaput Biji Markisa Waktu 3 x  24 jam 4  x  24 jam 5  x  24 jam 6  x  24 jam Unit 239.525  d 390.363  b 529.513  a 358.738  c
Setelah  melewati  fase  eksponensial  yang  merupakan  proses  fisiologis  tertinggi, nutrien mulai berkurang sehingga Aspergillus niger membutuhkan nutrien alternatif yang memerlukan  enzim  untuk  mengubahnya  menjadi  nutrien  sederhana  sehingga  dapat diserap masuk ke dalam selnya.
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 pH 4.0 pH 4.5 pH 5.0 pH 5.5
186 _ Jurnal Teknosains, Volume 11, Nomor 2, Juli-Desember 2017 , hlm. 179 – 189
Gambar  3. Diagram Batang Aktivitas Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus niger dengan Variasi Waktu Fermentasi pada Substrat Selaput  Biji Markisa
Gambar  4. Grafik Aktivitas Enzim Amiloglukosidase dari
Aspergillus niger dengan Variasi Waktu Fermentasi pada Substrat Selaput Biji Markisa
Seperti halnya mikroorganisme yang lain, Aspergillus niger memiliki kurva pertumbuhan  dengan  tiga  fase  yang  berbeda,  yakni  masing-masing  fase  awal  (lag phase),  fase  eksponensial  (log  phase),  dan  fase  stasioner.  Fase  awal  adalah  sejak inokulasi sel pada medium dan merupakan periode adaptasi. Selama fase ini massa sel  dapat  berubah  tanpa  adanya  suatu  perubahan  jumlah  sel.  Fase  Logaritmik/fase eksponensial dicirikan oleh suatu garis lurus antar Ln X melawan waktu. Periode ini adalah keadaan pertumbuhan yang seimbang atau mantap, dengan laju pertumbuhan spesifik, konstan. Fase stasioner terjadi bila seluruh sel berhenti membagi diri atau bilamana  sel-sel  hidup  telah  mencapai  keseimbangan  dengan  sel-sel  mati,  yakni dengan kecepatan kematian. Meskipun pertumbuhan telah terhenti, metabolisme dan akumulasi  produk  masih  terjadi.  Massa sel  total dapat tetap konstan, tetapi jumlah
0 100 200 300 400 500 600 3 x 24 jam 4 x 24 jam 5 x 24 jam 6 x 24 jam 0 100 200 300 400 500 600 3 x 24 jam 4 x 24 jam 5 x 24 jam
6 x 24 jam
Fatmawati Nur, Produksi Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus niger _ 187
sel  hidup  cenderung  menurun.  Pada  saat  ketahanan  hidupnya  menurun,  lisis mungkin terjadi dan massa sel akan menurun (Sa’id, 1987).
Untuk keperluan tersebut, Aspergillus niger mengeluarkan enzim amiloglukosidase beserta enzim amylase lain untuk mengubah pati pada substrat menjadi glukosa.  Hal  ini  diperkuat  oleh  pernyataan  Smith  (1993)  bahwa  enzim  sebagian  besar diproduksi selama fase pertumbuhan pasca eksponensial.
Seperti halnya mikroorganisme yang lain, Aspergillus niger memiliki kurva pertumbuhan  dengan  tiga  fase  yang  berbeda,  yakni  masing-masing  fase  awal  (lag phase),  fase  eksponensial  (log  phase),  dan  fase  stasioner.  Fase  awal  adalah  sejak inokulasi sel  pada  medium  dan merupakan periode adaptasi. Selama fase ini massa sel  dapat  berubah  tanpa  adanya  suatu  perubahan  jumlah  sel.  Fase  Logaritmik/fase eksponensial dicirikan oleh suatu garis lurus antar Ln X melawan waktu. Periode ini adalah keadaan pertumbuhan yang seimbang atau mantap, dengan laju pertumbuhan spesifik, konstan. Fase stasioner terjadi bila seluruh sel berhenti membagi diri atau bilamana  sel-sel  hidup  telah  mencapai  keseimbangan  dengan  sel-sel  mati,  yakni dengan kecepatan kematian. Meskipun pertumbuhan telah terhenti, metabolisme dan akumulasi produk masih terjadi. Massa sel total dapat tetap konstan, tetapi jumlah sel hidup  cenderung  menurun.  Pada  saat  ketahanan  hidupnya  menurun,  lisis  mungkin terjadi dan massa sel akan menurun (Sa’id, 1987).
Pada  waktu  fermentasi  6  x  24  jam,  enzim  yang  dihasilkan  memperlihatkan penurunan  aktivitas  (gambar  3  dan  gambar  4).  Hal  ini  disebabkan  oleh  adanya  produk akhir  amiloglukosidase  berupa  monomer  glukosa  dan  kemudian  menghambat  sintesis enzim  selanjutnya.  Hal  ini  diperkuat  oleh  Sa’id  (1987)  yang  mengatakan  bahwa kebanyakan  enzim  yang  diproduksi  selama  pertumbuhn  sel,  menjadi  tertekan  bilamana produk akhir terbentuk.
Setiap  mikroba  memiliki  suhu  optimum  untuk  pertumbuhannya,  misalnya Aspergillus  niger pada  suhu  37,8  °C.  Tetapi  hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa fermentasi pada suhu kamar (25 °C - 28°C) dapat menghasilkan enzim amiloglukosidase lebih  baik  pada  keadaan  suhu  lebih  rendah  dari  suhu  optimum  untuk  pertumbuhan.  Pada suhu di atas 30 °C, sintesis enzim akan menurun karena energi dari respirasi lebih banyak digunakan untuk pembentukan spora daripada untuk pembentukan miselium (Hardjo, 1989) .
188 _ Jurnal Teknosains, Volume 11, Nomor 2, Juli-Desember 2017 , hlm. 179 – 189
Produksi  enzim  amiloglukosidase  oleh Aspergillus  niger ini  dilakukan  pada fermentasi  medium  cair,  karena  menurut  Smith  (1993)  suatu  keuntungan  dari  fermentasi medium  cair  itu  ialah  tidak  terlalu  banyak  menghasilkan  enzim  lain  yang  tidak diharapkan. Selain itu medium cair mempunyai beberapa kelebihan antara lain jenis  dan konsentrasi komponen-komponen medium dapat diatur, dan kondisi yang optimum untuk pertumbuhan dapat dikontrol .
Dalam penelitian ini fermentasi medium cair difermentasi pada penangas goyang (shaker).  Shaker  menyebabkan  agitasi  dalam  medium  sehingga  dapat  mempercepat transfer  nutrien  ke  dalam  sel  dan  mencampur  cairan  fermentasi  sehingga  membentuk suspensi yang seragam (Hardjo, 1989) .

## KESIMPULAN
1. Kondisi pH yang optimum untuk fermentasi Aspergillus niger pada substrat selaput biji markisa adalah pada pH 4.5 senilai  433.675 unit.
2. Waktu  fermentasi  optimum  untuk  fermentasi Aspergillus  niger pada substrat selaput biji markisa adalah pada 5  x  24 jam senilai 529.513 unit.

## DAFTAR PUSTAKA
Britz,  M.L.  dan  Demain,  A.L.,  1985, "Regulation  of  Metabolite  Synthesis" dalam "Comprehensive Biotechnology", (Moo-Young, M.ed), Pergamon Press, New York.
Dixon, E.G. dan Webb, M.A., 1979, "Enzimes", Longman, Australia.
Dwidjoseputro, D., 1978, " Pengantar Mikologi", Alumni, Bandung.
Fraizer, W.C.dan  Westhoff , D.C., 1978, " Food Microbiology ", Tata Mc Graw Hill Publishing Company Ltd, New Delhi.
Hardjo, S., Indrasti, N.S. dan Bantacut, T., 1989, "Biokonversi : Pemanfaatan   Limbah Industri Pertanian" , PAU Pangan dan Gizi IPB, Bogor.
Lay, B. W., 1994, " Analisis Mikroorganisme di Laboratorium" , Raja Grafindo Persada, Jakarta.
Page,  D.S.,  1985, "Prinsip-prinsip  Biokimia  ", Terjemahan  oleh  R.  Soendoro, Erlangga, Jakarta.
Fatmawati Nur, Produksi Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus niger _ 189
Pelczar,  M.J.  dan  Chan.,  1985, "Dasar-dasar  Mikrobiologi  1", Terjemahan  oleh  R.S. Hadioetomo, T.
Imas, S.S. Tjitrosoepomo, S.L. Angka, Universitas Indonesia Press, Jakarta.
Prescott, S.C., 1959 ," Industrial Microbiology", Mc Graw Hill Publishing Company Ltd,
New York.
Rahman, A., 1992, "Teknologi Fermentasi" , Arcan, Jakarta.
Sa'id, E.G., 1987, "Bioindustri: Penerapan Teknologi Fermentasi", Mediyatama Sarana Perkasa, Jakarta.
Smith,  I.E.,  1993, "Prinsip  Bioteknologi" , Terjemahan  oleh  V.F.  Sumo,  B.Sumantri, dan Subono, Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Winarno, F.G., 1995, "Enzim Pangan", Gramedium Pustaka Utama, Jakarta.