## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (2), 23-33
Skrining Aktivitas Antioksidan dari Mikroalga
Yunita Syawal 1* , Wilmar Maarisit 2 ,  Tan Tjie Jan 1 , dan Reinhard Pinontoan 1
1 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Pelita  Harapan-Tangerang
2 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia-Tomohon *Alamat Korespondensi: yunitasyawal@gmail.com Diterima: 10 Mei 2019; Disetujui : 20 Mei 2019

## ABSTRAK
Skrining aktivitas antioksidan dari mikroalga dilakukan untuk mengetahui potensi substansi bioaktif dari mikroalga sebagai alternatif pengganti antioksidan sintetik. Penelitian ini  menggunakan  lima jenis mikroalga, yaitu Porphyridium sp. , Platymonas sp. , Dunaliella sp ., Chlorella stigmatophora dan Isochrysis  sp. ( T.  iso ).  Kelima  jenis  mikroalga  dikulturkan  dengan  menggunakan  10  liter  air laut steril dengan salinitas 30 ppm yang ditambahkan medium ekstrak tauge dan vitamin. Mikroalga dimaserasi  dengan  aseton,  selanjutnya  dipartisi  dengan  etil  asetat  (EtOAc).  EtOAc  extrak selanjutnya  difraksinasi  menggunakan  metode  kromatografi  kolom.  Studi  aktivitas  antioksidan dilakukan  dengan  metode  kualitatif  dan  kuantitatif  DPPH.  Hasil  penelitian  secara  kualitatif menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar  EtOAc  dari  mikroalga Dunaliella  sp .  dan C.stigmatophora memiliki  aktivitas  antioksidan.  Uji  aktivitas  antioksidan  secara  kuantitatif  dari  hasil  fraksinasi ekstrak  EtOAc Dunaliella  sp .  dan C.stigmatophora menunjukkan  bahwa  fraksi  nomor  7.3  dari Dunaliella sp. memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 445,86  g/ml dan fraksi nomor 10 dari C. stigmatophora dengan IC 50 1192,13  g/ml.
Kata Kunci : Mikroalga, antioksidan, DPPH, IC 50

## ABSTRACT
Screening  of  antioxidant  activity  from  microalgae  were  conducted  to  determine  the  potencies  of bioactive compounds from microalgae as an alternative for synthetics antioxidant. This study used five  types  of  microalgae: Porphyridium  sp. , Platymonas  sp. , Dunaliella  sp ., Chlorella stigmatophora dan Isochrysis sp. ( T. iso ). These microalgae in 10 liters of sterile seawater with 30 ppm salinity and added with 100 ml of bean sprout extract medium a 10 ml of vitamins. Microalgae were macerated using acetone then partitioned with ethyl acetate (EtoAc). Fractionation of EtoAc crude  extract  was  conducted  with  column  chromatography  method.  Screening  of  antioksidant activity was done by qualitative analylis. Afterwards, fractions of extract which have antioaxidant activity were analyzed quantitatively. The results showed that EtOAc crude axtracts of microalgae Dunailella sp. and C. stigmatophora have antioaxidant activity qualitatively. Fractination of column chromatography of EtOAc crude extract  have antioxidant activity were shown by fraction numbr 7.3 of Dunailella sp . with IC 50 value 445,7  g/ml and fraction number 10 of C. stigmatophora with IC 50 value 1192,13  g/ml.
Keywords : microalgae, antioxidant, DPPH, IC 50

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (2), 23-33

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  penyakit  yang menjadi  penyebab  utama  kematian  di  Negara maju  dan  penyebab  kematian  kedua  di  Negara berkembang (Jemal et al ., 2011) salah satu factor yang  dapat  meningkkatkan  resiko  terjadinya kanker  adalah  radikal  bebas.  Antioksidan merupakan  senyawa  yang  berfungsi  sebagai radikal  bebas  sehingga  dapat  mencegah  kanker (Kusumawati, 2009)
Radikal  bebas  adalah  senyawa  kimia yang  memiliki  satu  atau  lebih  elektron  tidak berpasangan  di  kulit  terluar  sehingga  sangat reaktif  dan  mampu  bereaksi  dengan  protein, lipid,  atau  DNA.  (Jacobi  and  Burri,  1996). Reaksi antara radikal bebas dan molekul tersebut dapat  berujung  pada  timbulnya  suatu  penyakit seperti: kanker, anemia, asma, artritis, inflamasi, degerenasi  syaraf,  parkinson,  dan  proses penuaan  dini  (Polterait,  1997).  Berdasarkan sumbernya,  terdapat  antioksidan  alami  dan antioksidan sintetis, Senyawa antioksidan sintetis umumnya lebih murah, lebih efektif dan lebih  stabil  dibandingkan  dengan  senyawa antioksidan  alami  namun  antioksidan  sintetis memiliki efek samping (Kusumawati, 2009).
Berdasarkan permasalahan tersebut maka  sangatlah  penting  untuk  mencari  sumber senyawa  antibakteri  dan  antioksidan  baru  yang berasal  dari  alam.  Dalam  decade  terahir  ini, pencarian  senyawa  bioaktif  yang  berasal  dari organisme  laut  semakin  pesat  dilakukan. Indonesia  dengan  tingkat  biodiversitas  yang tinggi  memiliki  potensi  yang  besar  untuk menghasilkan  beragam  senyawa  bioaktif  yang dapat dimanfaatkan sebagai sumber obat-obatan yang  baru.  Salah  satu  organisme  yang  dapat dimanfaatkan  sebagai  sumber  senyawa  bioaktif adalah  microalga  (Maarisit  and  Pinontoan, 2010).
Senyawa  bioaktif  yang  dihasilkan mikroalga  diketahui  memiliki  manfaat  sebagai antiinflamasi  (Guzmán et  al .,  2001),  antivirus (Ohta et  al. ,  1998),  antitumor  (Palozza et  al .,
2009), antijamur (Bhadury & Wright, 2004) dan antibakteri (Das et al ., 2005). Selain itu senyawa bioaktif  dari  mikroalga  juga  diduga  memiliki potensi  sebagai  antioksidan  alami  karena mikroalga  merupakan organisme  fototropik dan selalu  terekspos  radikal  secara  terus  menerus (Hajimahmoodi et  al. ,  2009).  Penelitian  ini dilakukan  untuk  mengetahui  pontensi  dari  lima jenis mikroalga dalam menghasilkan antioksidant alami.

## METODE PENELITIAN

## Kultur Mikroalga
Lima jenis mikroalga yaitu Porphyridium  sp. , Platymonas  sp. , Dunaliella sp ., Chlorellastigmatophora dan Isochrysis  sp. ( T. iso ) diperoleh dari stok kultur Laboratorium Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam,  Universitas Pelita  Harapan. Mikroalga dikultur dengan menggunakan air laut steril, salinitas 30 ppm dan ditambahkan 100 ml ekstrak  tauge  (MET)  dan  10  ml  vitamin  (1  mg vitamin  B12  dan  1  mg  biotin).  Kondisi  kultur mikroalga  diberi  aerasi  menggunakan aerator dan sistem fotoperiodisitas 24 jam. Pengamatan pola  pertumbuhan  mikroalga  dilakukan  dengan cara menghitung jumlah sel mikroalga menggunakan hemasitometer di bawah mikroskop. Selain itu dilakukan pengukuran pH dengan  menggunakan  pH  meter.  Penghitungan jumlah  sel  mikroalga  dan  pengukuran  pH dilakukan setiap 24 jam selama kurang lebih 30 hari.  Hasilnya  diplotkan  dalam  suatu  grafik sehingga diperoleh kurva pertumbuhan mikroalga dan pH.

## Ekstraksi
Kultur  mikroalga  yang  telah  mencapai fase  pertumbuhan  stationer,  disentrifugasi dengan  kecepatan  2500  rpm  selama  5  menit, hingga  didapatkan  endapan  yang  merupakan biomassa mikroalga pada dasar tabung sentrifuse.  Biomassa  yang  diperoleh,  diekstrak dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut aseton sebanyak dua kali ulangan, dan dipartisi

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (2), 23-33
dengan  etil  asetat.  Ekstrak  diuapkan  dengan rotary evaporator pada suhu 40 0 C, ekstrak kasar kelima  jenis  mikroalga,  selanjutnya  diuji aktivitas antioksidan secara kualitatif.

## Fraksinasi
Dari  hasil  pengujian  antioksidan  secara kualitatif, ekstrak kasar etil asetat C.stigmatophora dan Dunaliella sp.  memiliki aktivitas  antioksidan.  Kedua  jenis  ekstrak tersebut  selanjutnya  dianalisa  menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT). Dari hasil analisa KLT didapakan perbandingan pelarut yang tepat untuk pemisahan senyawa pada ekstrak mikroalga C.stigmatophora dan Dunaliella sp. adalah  heksana:  etil  (2  :  1).  Kombinasi  pelarut tersebut  dapat  digunakan  sebagai  acuan  untuk fraksinasi ektrak kasar dengan Kolom kromatografi. Deteksi spot pada KLT dilakukan secara  kasat  mata  dan  UV transilluminator dengan  panjang  gelombang  254  nm.  Fraksinasi ekstrak  kasar  mikroalga  menggunakan  Kolom kromatografi  Si  60  ( silica  gel 60  )  dengan kombinasi  pelarut  heksan  :  etil  asetat  dengan perbandingan mulai dari 4 : 1 hingga 1 : 3. Dari hasil  fraksinasi  ekstrak  kasar  selanjutnya dianalisa  menggunakan  KLT.  Fraksi  yang memiliki  spot  yang  sama  disatukan  selanjutnya diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 40 0 C.  Fraksinasi  ekstrak C.  stigmatophora dan Dunaliella sp.  masing-masing  diperoleh  12 fraksi.  Untuk  fraksi  7-9  dari Dunaliella sp digabungkan  menjadi  satu  fraksi  nomor  7, karena dari hasil analisis KLT ketiga fraksi (7-9) memiliki  spot  yang  sama.  Fraksi  nomor  7 selanjutnya  difraksinasi  kembali  menggunakan kromatografi  kolom  dan  diperoleh  4  fraksi. Setiap fraksi yang ada diuji aktivitas antioksidan secara  kualitatif,  selanjutnya  fraksi  yang  positif sebagai  antioksidan  diuji  kembali  aktivitas antioksidanya dengan metode kuantitatif.
Uji      Aktivitas      Antioksidan        Kualitatif (Devi et al. , 2011)
Uji  antioksidan  kualitatif  dilakukan dengan cara melakukan fraksinasi ekstrak kasar
mikroalga  dengan  kromatografi  lapis  tipis (KLT), selanjuntnya plat KLT disemprot dengan menggunakan  larutan  DPPH  (1,1- diphenyl- 2 - picrylhydrazyl )  0,4  mM.  Ekstrak  dikatakan positif sebagai antioksidan jika terbentuk warna kuning pada plat KLT.
Uji Aktivitas Antioksidan Kuantitatif (Molyneux, 2004) Pengujian aktivitas antioksidan kuantitatif digunakan larutan DPPH 0,2 mM. Kosentrasi ekstrak mikroalga Dunalilella sp . yang digunakan adalah 25, 50, 100 dan 200  g/ml, sedangkan konsentasi ekstrak mikroalga C.stigmatophora yang digunakan adalah 200, 300, 400 dan 500  g/ml. Larutan DPPH,  metanol  dan  ekstrak  di  gabungkan dan dihomogenkan dengan vortex , didiamkan  selama  30  menit  pada  ruang gelap.  Setelah  itu  dilakukan  pengukuran absorbansi
dengan
menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang  517  nm.  Kontrol  positif  yang digunakan adalah vitamin C yang dilarutkan dalam  metanol  dengan  konsentrasi  25,  50, 100  dan  200  g/ml.  Kontrol  negatif  yang digunakan  adalah  1,5  ml  larutan  DPPH  0,2 mM  yang  ditambahkan  2,5  ml  metanol. Larutan  blanko  yang  digunakan  adalah metanol.  Aktivitas  antioksidan  dinyatakan dalam  persentase  inhibisi  yang  dapat dihitung dengan rumus sebagai berikut :
Penentuan  IC 50 ( Inhibition   Concentration
50%) (Zuhra et al. , 2008)
IC 50 adalah  nilai  yang  menggambarkan besarnya  konsentrasi  ekstrak  yang  dapat menangkap  radikal  sebesar  50%.  Nilai  IC 50 diperoleh  dengan  menggunakan  persamaan regresi linier yang menyatakan hubungan antara konsentrasi ekstrak sebagai sumbu X dan nilai % inhibisi sebagai sumbu Y. Nilai IC 50 dari

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (2), 23-33
perhitungan  pada  saat  %  inhibisi  sebesar  50% adalah Y=aX+b.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kultur Mikroalga
Mikroalga dikulturkan dengan menggunakan air laut steril salinitas 30 ppm dan ditambahkan 100 ml ekstrak tauge (MET) dan 10 ml vitamin (1 mg vitamin B12 dan 1 mg biotin). Ekstrak  tauge  digunakan  sebagai  media  alami bagi  pertumbuhan  mikroalga  karena  tauge kacang hijau mengandung makronutrien, mikronutrien,  vitamin,  asam  amino,  serta  gula yang  dibutuhkan  bagi  pertumbuhan  mikroalga (Prihantini et  al. ,  2007).  Penambahan  vitamin B12  dan  biotin  dilakukan  karena  mikroalga membutuhkan vitamin sebagai kofaktor pertumbuhan (Barsanti & Gualtieri, 2006).
Untuk  mengetahui  pola  pertumbuhan mikroalga  dilakukan  penghitungan  jumlah  sel mikroalga dengan hemasitometer di bawah
mikroskop setiap 24 jam dan diplotkan menjadi sebuah  grafik  pertumbuhan  mikroalga.  Dari grafik pertumbuhan mikroalga (Gambar 1) dapat dilihat bahwa masing-masing mikroalga memiliki  laju  pertumbuhan  yang  berbeda-beda. Dari  grafik  kurva  pertumbuhan  dapat  diketahui bahwa C. stigmatophora mencapai fase stasioner pada  hari  ke-8  hingga  ke-12, Dunaliella sp. mencapai fase stasioner pada hari ke-17 hingga ke-20, Isochrysis sp . ( T.  iso )  mencapai  fase stasioner  pada  hari  ke-15  hingga  ke-19, Platymonas sp . mencapai fase stasioner pada hari ke-13 hingga hari ke-20, sedangkan Porphyridium sp . mencapai  fase  stationer  pada hari  ke-21  hingga  hari  ke-25.  Pembuatan  kurva pertumbuhan bertujuan untuk mengetahui kapan masing-masing mikroalga mencapai fase stasioner  sehingga  dapat  dilakukan  proses ekstraksi metabolit sekunder. Menurut Setyaningsih et  al (2008),  bahwa  metabolit sekunder dari mikrolaga banyak dihasilkan pada fase stasioner.
Gambar 1. Grafik pertumbuhan mikroalga
Selama  pengkulturan  mikroalga  juga dilakukan pengukuran pH dengan menggunakan pH meter dan hasilnya diplotkan menjadi sebuah grafik  yang  dapat  dilihat  pada  Gambar  2.  Dari
Gambar  2.  dapat  dilihat  bahwa  terjadi peningkatan pH selama pengkulturan mikroalga. Peningkatan  pH  kemungkinan  disebabkan  oleh meningkatnya  proses  fotosintesis  mikroalga.
180 160 140 120 100 80 60 40 C. stigmatophora
Dunaliella sp.
Isochrysis sp. (T. iso)
Platymonas sp.
Porphyridium sp.
20
0
1 3 5 7 9  11    13    15    17    19    21    23    25    27 Waktu (hari) Kera p at an S e l (x 10 ^4 / m l)

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (2), 23-33
Pada  saat  fotosintesis,  mikroalga  menggunakan CO 2 bebas sebagai sumber karbon utama. Selain itu di dalam air, CO 2 dapat berupa ion karbonat (CO 3 2- )  atau  ion  bikarbonat  (HCO 3 - )  yang berdasarkan reaksi : CO 2 + H 2 O  H 2 CO 3  H + + HCO 3 -  2H + + CO 3 2- . Penyerapan CO 2 bebas, ion karbonat atau ion bikarbonat oleh mikroalga menyebabkan terjadinya peningkatan pH. Selain itu  peningkatan  pH  dapat  disebabkan  karena terjadinya  penguraian  protein  dan  senyawa nitrogen.  Senyawa  nitrogen  yang  umumnya digunakan  pada  proses  metabolisme  mikroalga
adalah  amonium,  Amonium  terbentuk  melalui proses  disosiasi  amonium  hidroksida  melalui reaksi: NH 3 + H 2 O  NH 4 OH  NH 4 + + OH - . Proses pembentukan amonium tersebut menyebabkan terjadinya peningkatan pH (Setyaningsih et  al. ,  2005).  Peningkatan  pH berhubungan  juga  dengan  proses  metabolisme mikroalga. Peningkatan pH juga dapat menandakan  adanya  peningkatan  sel  mikroalga karena  semakin  banyak  jumlah  sel  mikroalga maka  proses  metabolisme  yang  terjadi  juga semakin tinggi.

## Gambar 2. Grafik pH kultur mikroalga

## Uji  Aktivitas Antioksidan Kualitatif
Uji  antioksidan  kualitatif  dari  ke  lima ekstrak  mikroalga  dilakukan  dengan  cara menyemprot plat kromatografi lapis tipis (KLT) dengan  menggunakan  larutan  DPPH  (1,1- diphenyl- 2 -picrylhydrazyl )  0,4  mM.  Hasil  uji aktivitas antioksidan kualitatif dapat dilihat pada Gambar 3. Dari Gambar 3. dapat dilihat  bahwa terdapat  spot  berwarna  kuning  yang  terbentuk pada ekstrak kasar mikroalga C. stigmatophora dan Dunaliella sp.  Hal  ini  menandakan  bahwa pada ekstrak etilasetat mikroalga C. stigmatophora dan Dunaliella sp. terdapat
aktivitas antioksidan. Oleh sebab itu mikroalga C.  stigmatophora dan Dunaliella sp.  dipilih untuk penelitian uji aktivitas antioksidan lanjut. Untuk penelitian lebih lanjut dilakukan pengkulturan  ulang C.  stigmatophora dan Dunaliella sp.  dalam  skala  20  liter  yang menghasilkan  ekstrak  kering  EtOAC C. stigmatophora sebanyak  420  mg  dan  ekstrak kering EtOAc Dunaliella sp. sebanyak 270 mg. Ekstrak  kasar  tersebut  selanjutnya  dilakukan fraksinasi dengan menggunakan kolom kromaografi.  Dari  hasil  fraksinasi  kolom kromatografi  diperoleh  bahwa  mikroalga C. stigmatophora diperoleh  12  fraksi,  sedangkan
8.60 8.40 8.20 8.00 7.80 7.60 7.40 C. stigmatophora
Dunaliella sp.
Isochrysis sp. (T. iso)
Platymonas sp.
Porphyridium sp.
7.20
7.00
1 3 5 7 9  11    13    15    17    19    21    23    25    27
Hari ke- pH

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (2), 23-33
dari  ekstrak Dunaliella sp.  diperoleh  14  fraksi. Fraksi-fraksi  dari  ekstrak C.stigmatophora dan Dunaliella sp.  dilakukan  pengujian  aktivitas
antioksidan  secara  kualitatif,  selanjutnya  fraksi yang  aktif  sebagai  antioksidan  di  lakukan  uji lanjut dengan metode kuantitatif.
Ket:  S  = C.stigmatophora  ; D =  Dunaliella sp.  ;  T.  iso  = Isochrysis sp . ( T.  iso )  ;  Pl  = Platymonas sp .; P = Porphyridium sp..
Gambar 3. Hasil uji antioksidan kualitatif (a : plat KLT sebelum disemprot DPPH 0,4 mM; b : plat KLT sesudah disemprot DPPH 0,4 mM)
Uji  Aktivitas  Antioksidan  Kualitatif  Fraksi Kromatografi Kolom Ekstrak C. stigmatophora dan Dunaliella sp.
Pengujian aktivitas antioksidan kualitatif  fraksi  kolom  kromatografi  dilakukan untuk mengetahui fraksi yang memiliki aktivitas antioksidan  yang  nantinya  akan  dianalisis  lebih lanjut aktivitas antioksidannya secara kuantitatif. Dari Gambar 4. dapat dilihat bahwa pada fraksi nomor  10  dari  ekstrak  EtoAc C.  stigmatophora terdapat spot kuning yang terbentuk setelah plat KLT  disemprot  dengan  DPPH  0,4  mM. Terbentuknya spot kuning tersebut menandakan bahwa  fraksi  nomor  10  memiliki  aktivitas antioksidan.  Sedangkan  Ekstrak  EtoAc  dari
Dunaliela Sp  terdapat  tiga  spot  kuning  yang terbentuk, yaitu pada fraksi nomor 7-9.  (Gambar 5).  Dari  hasil  analisis  KLT  ketiga  fraksi  (7-9) memiliki spot yang sama sehingga ketiga fraksi tersebut digabungkan menjadi satu fraksi nomor 7.  Fraksi  nomor  7  selanjutnya  difraksinasi kembali  menggunakan  kromatografi  kolom  lalu diuji  kembali  aktivitas  antioksidannya  secara kualitatif.  Hasil  uji  aktivitas  antioksidan kualitatif  kromatografi  kolom  fraksi  nomor  7 dapat  dilihat  pada  Gambar  6.  Dari  Gambar  6 dapat  dilihat  bahwa  fraksi  nomor  7.3  ekstrak Dunaliella sp.  memiliki  aktivitas  antioksidan dengan  ditandai  terbentuknya  spot  kuning  pada plat KLT.

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (2), 23-33
Gambar 4. Hasil uji antioksidan kualitatif fraksi kromatografi kolom ekstrak Chlorellastigmatophora (a : plat KLT sebelum disemprot DPPH 0,4 mM; b : plat KLT sesudah disemprot DPPH 0,4 mM)
Gambar 5. Hasil uji antioksidan kualitatif fraksi kromatografi kolom ekstrak Dunaliella sp. (a : plat KLT sebelum disemprot DPPH 0,4 mM; b : plat KLT sesudah disemprot DPPH 0,4 mM)

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (2), 23-33
Ket : I = fraksi nomor 7.1; II = fraksi nomor 7.2; III = fraksi nomor 7.3; dan IV = fraksi nomor 7.4.
Gambar 6. Hasil uji antioksidan kualitatif fraksi nomor tujuh kromatografi kolom ekstrak Dunaliella sp.  (a  :  plat  KLT  sebelum  disemprot  DPPH  0,4  mM;  b  :  plat  KLT  sesudah  disemprot DPPH 0,4 mM)
Uji Aktivitas Antioksidan Kuantitatif  Fraksi Kolom Kromatografi Ekstrak C.stigmatophora dan Dunaliella sp.
Uji  aktivitas  antioksidan  kuantitatif dilakukan  pada  fraksi  nomor  10  dari  ekstrak C.  stigmatophora dan  fraksi  nomor  7.3  dari ekstrak Dunaliella sp.  Konsentrasi  ekstrak mikroalga Dunalilella sp . yang  digunakan adalah  25,  50,  100  dan  200  g/ml,  sedangkan konsentasi  ekstrak  mikroalga C.stigmatophora yang  digunakan  adalah  200,  300,  400  dan  500  g/ml.  Hal  tersebut  dikarenakan  pada  uji pendahuluan yang dilakukan dengan menggunakan konsentrasi
ekstrak C.stigmatophora sebesar  25,  50,  100  dan  200  g/ml,  baru  menunjukkan  adanya  aktivitas antioksidan  pada  konsentrasi  200  g/ml.  Hasil uji aktivitas antioksidan secara kuantitatif dapat dilihat pada Tabel 1. Dari Tabel 1. dapat dilihat bahwa kontrol positif yaitu vitamin C memiliki %  inhibisi  paling  tinggi  dibandingkan  dengan ekstrak Dunalilella sp.dan C.stigmatophora. Selain  itu  diketahui  juga  bahwa  ekstrak Dunalilella sp.  memiliki  aktivitas  antioksidan
yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  ekstrak C.  stigmatophora dikarenakan  %  inhibisi  yang dihasilkan  oleh  ekstrak Dunalilella sp.  dengan konsentrasi  25  g/ml,  lebih  tinggi  apabila dibandingkan  dengan  ekstrak C.stigmatophora konsentrasi 200  g/ml, bahkan ekstrak Dunalilella sp.  dengan  konsentrasi  200  g/ml tetap  memiliki  %  inhibisi  yang  lebih  tinggi apabila dibandingkan dengan ekstrak C.stigmatophora konsentrasi 200  g/ml dan 500  g/ml.
Meskipun memiliki perbedaan % inhibisi  yang  dihasilkan,  fraksi  yang  memiliki aktivitas  antioksidan  dari Dunalilella sp.  dan C.stigmatophora diperkirakan memiliki kandungan  senyawa  yang  sama.  Hal  tersebut dikarenakan pada hasil uji aktivitas antioksidan kualitatif  ekstrak  kasar  dari  kedua  mikroalga tersebut menghasilkan spot kuning dengan nilai Rf yang sama yaitu 0,4. Berdasarkan penelitian El-Baky et  al. (2004)  diketahui  bahwa Dunaliella sp.dan Chlorella sp. mengakumulasi
 -karoten, astaxanthin ,  lutein  dan zeanxanthin dalam  jumlah  yang  banyak  di  dalam  selnya.

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (2), 23-33
Perbedaan  aktivitas  antioksidan  antara fraksi ekstrak
Dunalilella sp. dan C.stigmatophora mungkin disebabkan pengkulturan yang dilakukan bukan  merupakan kondisi  yang  optimum  bagi C.stigmatophora
sehingga  kandungan  senyawa  antioksidan  yang terdapat  di  dalam ekstraknya  lebih  sedikit
apabila dibandingkan dengan ekstrak Dunalilella sp. El-Baky et al. (2004) menyatakan bahwa kultur Dunaliella ditumbuhkan  pada  kondisi  di  bawah  kondisi optimum  memiliki  kandungan  -karoten  yang lebih rendah.
Tabel 1.  Hasil uji aktivitas antioksidan kuantitatif  fraksi nomor 10 dari ekstrak C. stigmatophora dan fraksi nomor 7.3 dari ekstrak Dunaliella sp.
Sampel Konsentrasi (  g/ml) % Inhibisi Dunaliella sp. 25 3,76 ± 0,03 50 7,24 ± 0,44 100 15,72 ± 0,70 200 22,59 ± 0,49 C.stigmatophora 200 3,04 ± 0,05 300 5,65 ±  0,20 400 13,48 ± 0,15 500 16,52 ± 0,08 Kontrol (+) 25 48,35 ± 0,28 50 93,99 ± 0.98 100 96,70 ± 1.76 200 98,21 ± 0.19
Keterangan : Data yang ditampilkan merupakan nilai rata-rata % inhibisi ± standar deviasi.
Penentuan  IC 50 ( Inhibition    Concentration 50%)
Nilai IC 50 diperoleh dengan
menggunakan  persamaan  regresi  linier  yang menyatakan hubungan antara konsentrasi ekstrak  sebagai  sumbu  X  dan  nilai  %  inhibisi sebagai  sumbu  Y.  Nilai  IC 50 dari  perhitungan pada  saat  %  inhibisi  sebesar  50%  adalah Y=aX+b. Kurva penentuan IC 50 fraksi nomor 10 dari  ekstrak Chlorellastigmatophora dan  fraksi
nomor  7.3  dari  ekstrak Dunaliella sp.dapat dilihat pada Gambar 7. Dari Gambar 7. diketahui bahwa  nilai  regresi  linier  untuk  ekstrak Dunaliella sp . adalah  Y  =  0,107X  +  2,293, ekstrak C.stigmatophora adalah  Y  =  0,048X  – 7,222.  Berdasarkan  persamaan  regresi  linier tersebut,  maka  nilai  IC 50 dapat  ditentukan.  Dari hasil  perhitungan  diketahui  bahwa  IC 50 ekstrak Dunaliella sp . adalah  445,86  g/ml,  sedangkan IC 50 ekstrak C.stigmatophora 1192,13  g/ml.

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (2), 23-33
Gambar  7.  Kurva  penentuan IC 50 fraksi nomor  10 dari ekstrak C.stigmatophora dan  fraksi nomor  7.3  dari ekstrak Dunaliella sp.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  ini  dapat  disimpulkan bahwa mikroalga C.stigmatophora dan Dunaliella sp.  memiliki  potensi  sebagai senyawa  antioksidan  alami,  dengan  nilai  IC 50 C.stigmatophora 1192,13  g/ml dan Dunaliella sp . 445,86  g/ml.  Perlu  dilakukan  penelitian lebih  lanjut  untuk  menentukan  karakterisasi senyawa yang aktif sebagai antioksidan dengan mengunakan 1D dan 2D NMR.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdul.  M.  2003.  Peranan  radikal  bebas  dan
antioksidan dalam kesehatan dan penyakit.
Http://www.intisari.com/radikal.html.
Diakses Tanggal 5 Agustus 2012.
Barsanti,  L.  &  Gualtieri  P..  2006. Algae  : Anatomy, Biochemistry and Biotechnology . United States of America :
CRC Press.
Bhadury, P. & Wright P. C.. 2004. Exploitation of  Marine  Algae  :  Biogenic  Compounds for  Potential  Antifouling  Applications .
Planta , 219 : 561–578.
Das, B. K., Pradhan J., Pattnaik P., Samantaray B. R. & Samal S. K.. 2005. Production of antibacterials from freshwater alga Euglena viridis (Ehren). World Journal of Microbiology and Biotechnology , 21 : 45- 50.
Devi, G., John A., Devi R. S. & Prabhakaran V. A..  2011.  Pharmacognostical  Studies  on Acacia  Catechu  Willd  and  Identification of  Antioxidant  Principles. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3 : 108-111.
El-Baky, H. H. ABD, El Baz F. K. & El-Baroty G. S.. 2004. Production of Antioxidant by The  Green  Alga Dunaliella  salina . International  Journal  of  Agriculture andBiology, 6 : 49-57.
Guzmán,  S.,  Gato  A.  &  Calleja  J.  M..  2001. Antiinflammatory,  analgesic  and  free
30 25 y = 0.107x + 2.2935 R² = 0.9525 20 15
y = 0.0483x - 7.222 R² = 0.9584 Dunaliella sp. C. stigmatophora 10 5 0 0 100 200 300 400 500 Konsentrasi (μg/ml) % In h ib is i

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (2), 23-33
radical scavenging activities of the marine microalgae Chlorella  stigmatophora and Phaeodactylumtriconutum . Phytotherapy Research, 15 : 224 – 230.
Hajimahmoodi, M ., Faramarzi M. A.,
Mohammadi N., Soltani N., Oveisi M. R.
&  Nafissi-Varcheh  N..  2010.  Evaluation of  Antioxidant  Properties  and  Total Phenolic  Contents  of  Some  Strains  of Microalgae. Journal of Applied
Phycology, 22 : 43-50.
Ito,  N.,  Hirose  M.,  Fukushima  S.,  Tsuda  H.,
Shirai  T.  & Tatematsu  M.. 1986.  Studies on Antioxidants : Their Carcinogenic and Modifying Effects on Chemical
Carcinogenesis. Food  and  Chemical
Toxicology , 24 : 1071-1082.
Jacob, R.A.; Burri, B.J. 1996. Oxidative damage and defense. Am. J. Clin. Nutr., 63, 985– 990.
Jemal,  A.,  Bray,  F.,  Center  M.M.,  Ferlay,  J., Ward,  E  &  Forman,  D.  Global  cencer statistics. CA Cancer Journal Clinication. 2011. 61:69-90
Kusmiyati  &  Agustini  N.  W.  S..  2007.  Uji Aktivitas Senyawa Antibakteri dari Mikroalga Porphyridium cruentum.
Biodiversitas, 8 : 48-53. Kusumawati,  P..  2009.  Potensi  Pengembangan Produk Pangan Fungsional Berantioksidan dari Makroalga dan
Mikroalga. Oseana, 34 : 9-18.
Maarisit,  W  dan  Pinontoan  R.  2010.  Isolasi Senyawa  Antimikroba  dari  Mikroalgae Asal  Perairan  Teluk  Jakarta.  Laporan Penelitian LPPM.
Molyneux, Philip. 2003. The use of The Stable Free  Radical  DPPH  for  Estimating
Antioxidant Activity.
Ohta, S., Ono F., Shiomi  Y., Nakao T., Aozasa O.,  Nagate  T.,  Kitamura  K.,  Yamaguchi
S.,  Nishi  M.  &  Miyata  H..  1998.  Anti- herpes Simplex Virus Substances Produced  by  The  Marine  Green  Alga, Dunaliella primolecta . Journal of Applied Phycology , 10 : 349-356.
Palozza,  P., Torelli  C.,  Boninsegna  A.,  Simone R.,  Catalano  A.,  Mele  M.  C.  &  Picci  N.. 2009.  Growth-inhibitory  Effects  of  The Astaxanthin-rich  Alga Haematococcus pluvialis in  Human  Colon  Cancer  Cells.
Cancer Letters , 283 : 108-117.
Polteraid, O. 1997. Antioxidants and free radical scavengers of natural origin. Current Org. Chem 1. p. 415–440.
Prihantini,  N.  B.,  Damayanti  D.  &  Yuniati  R.. 2007.  Pengaruh  Konsentrasi  Medium
Ekstrak Tauge (MET) terhadap Pertumbuhan Scenedesmus Isolat Subang.
Makara Sains, 11 : 1-9.
Safer,  A.  M.,  &  Al-Nughamish,  A.  J.  (1999).
Hepatotoxicity  induced  by  the  anti- oxidant food additive butylated hydroxytoluene  (BTH)  in  rats:  An electron  microscopical  study.  Histology and Histopathology, 14, 391–406.
Setyaningsih,  I.,  Desniar,  Pangagabean  L.  & Widyah  T.  H..  2004.  Pemisahan  Ekstrak Intraseluler  dari  Mikroalga Nitzschia closterium dan  Penentuan  Konsentrasi
Hambatan Minimumnya terhadap Bakteri Patogen. Buletin Teknologi Hasil
Perikanan, 8 : 35-44.
Zuhra,  C.  F.,  J.  Br.  Tarigan,  dan  H.  Sihotang.
2008.  Aktivitas  Antioksidan  Senyawa Flavonoid  dari  Daun  Katuk  ( Sauropus androgunus (L)  Merr.). Jurnal  Biologi Sumatera, 3 : 7-10.