PENGARUH EKSTRAK METANOL DAUN PEPAYA ( Carica papaya L.) TERHADAP

## AKTIVITAS ENZIM LIPASE
[The Effects of Methanol Extract of Leaves Papaya ( Carica papaya L.)  Against Lipase Enzyme Activity]
Nurhaeni 1 , Ahmad Ridhay 1 , Magfira 1*
1 Jurusan Kimia Fakultas MIPA, Universitas Tadulako Jl. Soekarno Hatta Km.9, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu, Telp. 0451- 422611
*)Coresponding author: magfirahalmin99@gmail.com
Diterima  21 Juni 2017, Disetujui 30 Agustus 2017

## ABSTRACT
Has  conducted  research  on  the  effects  of  methanol  extract  of  leaves  papaya  ( Carica  papaya L.) Against Lipase Enzyme Activity. This study aimed to obtain information in a methanol extract inhibits lipase activity. The method used is Complete Random Design (RAL), with goal attainment is done by determining the incubation time lipase enzyme, pH optimum lipase enzyme, and maximum substrate concentration lipase enzyme. And determining the effect of the methanol  extract to inhibit the  lipase enzyme  activity.  The  results  showed  that  the  best  incubation  time  of  lipase  obtained  by  time  of  120 minutes, the optimum pH 7 and the maximum substrate concentration of 4%. With the highest activity were  obtained  16.94  mol  /ml.menit,  13.33  mol  /  ml.menit,  and  12.89  mol  /  ml.menit.  The  methanol extract of papaya leaves can inhibit the lipase enzyme activity the best concentration of 2% with the acquisition activity of 3.67 mol/ml.menit.
Keyword: papaya, lipase, incubation time, optimum pH, substrate concentration.

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  tentang  pengaruh  Ekstrak  Metanol  Daun  Pepaya  ( Carica  papaya L.) Terhadap  Aktivitas  Enzim  Lipase.  Penelitian  ini  bertujuan    untuk  mendapatkan  keterangan  ekstrak metanol dalam menghambat aktivitas enzim lipase. Metode yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL), dengan pencapaian tujuan dilakukan melalui penentuan waktu inkubasi enzim lipase, pH  optimum  enzim  lipase  dan  konsentrasi  substrat  maksimum  enzim  lipase.  Serta  penentuan pengaruh  ekstrak  metanol  dalam  menghambat  aktivitas  enzim  lipase.  Hasil  menunjukkan  bahwa waktu  inkubasi  terbaik  enzim  lipase  diperoleh  dengan  waktu  120  menit,  pH  optimum  7  dan konsentrasi  substrat  maksimum  4%.  Dengan  aktivitas  tertinggi  masing-masing  diperoleh  16,94 µmol/ml.menit,  13,33  µmol/ml.menit,  dan  12,89  µmol/ml.menit.  Ekstrak  metanol  daun  papaya  dapat menghambat aktivitas enzim lipase pada konsentrasi terbaik 2% dengan perolehan aktivitas sebesar 3,67 µmol/ml.menit.
Kata kunci : papaya, lipase, waktu inkubasi, pH optimum, konsentrasi substrat

## LATAR BELAKANG
Tanaman  pepaya  termasuk  salah satu tanaman hortikultura yang ditemukan tumbuh  dengan  pertumbuhan  subur  di daerah  Lembah  Palu.  Disamping  itu  daun pepaya  telah  banyak  dikenal  masyarakat kota Palu dan keberadaannya juga mudah ditemukan.  Menurut  Dalimartha  (2003) dalam  ekstrak  daun  pepaya  terdapat metabolit sekunder salah satunya senyawa  alkaloid  yang  ditandai  dengan rasa  pahit.  Akan  tetapi  hingga  saat  ini belum  ada  ditemukan  penelitian  tentang penghambatan  enzim  lipase  oleh  ekstrak dari  daun  pepaya.  Aktivitas  atau  kerja enzim  dipengaruhi  oleh  banyak  faktor, seperti  suhu,  pH,  konsentrasi  substrat, waktu inkubasi, konsentrasi enzim, inhibitor,  dan  pelarut  organik.    Kholifah (2008)  yang  meneliti  tentang  pengaruh ekstrak  kasar  daun  dewa  terhadap aktivitas  lipase  menghasilkan  bahwa ekstrak kasar daun dewa dapat menghambat aktivitas lipase pada konsentrasi  ekstrak  30  mg/10  ml  (aq) hingga  90  mg/10  ml  (aq).  Kondisi  ini berlangsung dengan waktu inkubasi terbaik  6  menit,  konsentrasi  substrat  1% dengan suasana pH optimum 7.
Rahardjo (2005) menyatakan bahwa ekstrak  jati  belanda  dapat  menurunkan aktivitas  enzim  lipase  pada  tikus  (ratus) yang  ditandai  dengan  penurunan  berat badan secara bertahap pada tikus (ratus). Hal  ini  dikarenakan  ekstrak  daun tersebut mempunyai  kandungan  senyawa  alkaloid yang  diduga  memiliki  efek  menghambat
aktivitas  enzim  lipase  karena  mempunyai struktrur  kimia  yang  mirip  orlistat  (sejenis obat).
Keberadaan  enzim  di  dalam  tubuh sangatlah  penting  akan  tetapi  jika  kondisi aktivitas  enzim  berlebih  maka  akan membawa  dampak  negatif  bagi  tubuh, seperti  obesitas.  Publikasi  penghambatan enzim  lipase  oleh  ekstrak  pepaya  belum ditemukan,  sehingga  perlu  dilakukan penelitian tentang penghambatan aktivitas enzim oleh ekstrak daun pepaya.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Peralatan  yang  digunakan  terdiri atas  :  Blender,    ayakan  60  mesh,  statif, klem,  neraca  analitik,  rotari  evaporator, frez  dryer,  shaker  inkubator,  lemari pendingin,  peralatan  sentrifuge,  kain saring  dan  alat-alat  gelas  yang  umum digunakan dalam Laboratorium kimia.
Bahan dasar yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun pepaya muda (3 tangkai  teratas)  dan  daun  pepaya  tua  (3 tangkai  terbawah)  yang  diperoleh  dari Desa  Dalika  Kecamatan  Labuan  Toposo. Bahan  pengekstrak  :  metanol  teknis, heksan  teknis,  dan  larutan  CaCl 2 0,01  M. Bahan-bahan  pembantu:  Kloroform  p.a, larutan H 2 SO 4 2 N, larutan NH 4 OH 0,1 M, larutan NaOH 0,1 N, larutan H 2 C 2 O 4 0,1 N, amonium sulfat teknis (pupuk ZA), indikator  pp,  minyak  zaitun,  aquades, larutan gum arab 10%, buffer fosfaat pH 6, 7,  8,  9  dan  10  larutan  fosfat  0,2  M (Na 2 HPO 4 ),  kertas  indikator,  pereaksi
dragendorf,  pereaksi  mayer,  pereaksi wagner dan label.

## Prosedur Penelitian
Preparasi Sampel Daun Pepaya
Tumbuhan daun pepaya tua diambil bagian daunnya, dibersihkan dan dikeringkan dengan cara diangin-anginkan selama 5 hari. Kemudian sampel dihancurkan  dengan  blender  dan  diayak dengan  menggunakan  ayakan  60  mesh untuk  mendapatkan  daun  pepaya  dalam bentuk tepung.

## Ekstraksi Daun Pepaya Dengan Metode
Maserasi (Lusiana H., 2009)
Daun  pepaya  yang  telah  diayak menjadi  tepung  ditimbang  sebanyak  200 gram, kemudian diekstraksi menggunakan metode  maserasi  dengan  menggunakan pelarut  metanol  pada  perbandingan  1:3 (b/v) selama 3 x 24 jam. Setiap 1 x 24 jam dilakukan  penyaringan.  Setelah  disaring, sampel dimaserasi kembali dengan metanol  yang  baru.  Pengerjaan  dilakukan sebanyak 3 kali. Selanjutnya hasil maserasi ketiganya yang diperoleh digabungkan, lalu diuapkan dengan evaporator  pada  suhu  40 o C.  Sehingga diperoleh ekstrak metanol kental.
Selanjutnya ekstrak metanol kental sebanyak  100  ml  diekstrak  cair-cair dengan pelarut heksan dengan perbandingan 1:1 (v/v) sehingga diperoleh ekstrak metanol bebas minyak.  Perlakuan diulang  sebanyak  tiga  kali.  Ekstrak ditimbang untuk menentukan rendemennya dengan persamaan :

## ( )
Identifikasi  Senyawa  Alkaloid  (Qurota Ayun et al., 2015)
Sebanyak 2 gram sampel dilarutkan dalam  kloroform  secukupnya.  Larutan kemudian  ditambahkan  10  ml  amoniak dan 10 tetes H 2 SO 4 2 N. Larutan kemudian dimasukkan  kedalam  corong  pisah  serta dikocok  secara  teratur  selama  beberapa menit.  Kemudian  didiamkan  beberapa menit hingga terbentuk 2 lapisan. Lapisan atas  dipindahkan  kedalam    3  tabung reaksi. Ketiga larutan diuji dengan pereaksi  wagner,  dragendorf,  dan  meyer. Terbentuknya endapan menunjukkan larutan  mengandung  alkaloid,  dimana dengan  larutan  wagner  menghasilkan endapan berwarna coklat, pereaksi dragendorf  menghasilkan  endapan  merah jingga  dan  pereaksi  mayer  menghasilkan endapan warna putih.

## Ekstraksi  Enzim  Lipase  Dari  Daun Pepaya Muda
Enzim lipase yang digunakan diambil  dari  daun  pepaya    muda  hal  ini berdasarkan  penelitian  Ikbal   (2012)  yang mendapatkan  pada  daun  pepaya  muda memiliki  aktivitas  enzim  lipase  tertinggi. Tahapannya  adalah:  Daun  pepaya  muda diambil  dan  dipisahkan  dari  tangkai daunnya.  Kemudian  ditimbang  sebanyak 500  gram  dan  dihancurkan  dengan blender  dengan  menggunakan  pelarut CaCl 2 0,01 M sebanyak 500 ml. Selanjutnya  disaring  dengan  kain  saring
dan ditampung filtratnya. Filtrat selanjutnya  disentrifuge  selama  20  menit, kemudian  didekantasi  diruangan  terbuka selama 24 jam. Hasil dekantasi kemudian disaring  untuk  memisahkan  endapan  dan filtrat.  Filtrat  yang  diperoleh  berwarna kuning.

## Isolasi Enzim Lipase (Ikbal, 2012)
Isolasi  lipase  dari  ekstrak  daun pepaya  muda  dilakukan  menggunakan metode  pengendapan/koagulasi  dengan bahan  pengendap  amonium  sulfat  (pupuk ZA). Ekstrak lipase dengan volume 500 ml ditambahkan  dengan  amonium  sulfat hingga mencapai tingkat kejenuhan 65 %. Hal  ini  sebagaimana  penelitian  ikbal (2012)  yang  mendapatkan  rendemen  dan aktivitas  tertinggi  enzim  lipase  pada tingkat  kejenuhan  65%  amonium  sulfat. Selanjutnya  diaduk  dan  disimpan  dalam lemari pendingin selama 24 jam. Koagulan yang  terbentuk  disaring  secara  vakum, kemudian dibekukan selama 1 hari dan di frez  dryer.  Sehingga  diperoleh  endapan enzim  lipase  kering  yang  berwarna kuning.  Perlakuan  diulang  sebanyak  tiga kali. Rendemen ditimbang dengan persamaan berikut :
( )
Penentuan Waktu Inkubasi Enzim Lipase (Kholifah, 2008)
Kedalam labu ukur 25 ml dimasukkan  1  ml  minyak  zaitun  dan  9  ml gum  arab  10%  dalam  air,  dihomogenkan selama  2  menit.  Kemudian  campuran
diatur pada pH 7 dengan menambahkan 2 ml  larutan  fosfat  0,2  M  (Na 2 HPO 4 )  dan  3 ml    buffer  fosfat  pH  7.  Selanjutnya campuran dijadikan tepat 25 ml.
Campuran diatas dimasukkan kedalam erlenmeyer 100 ml untuk dijadikan  substrat  dan  ditambahkan  0,5 gram  enzim  lipase.  Campuran  kemudian diinkubasi  dalam    shaker  inkubator dengan  variasi  waktu  inkubasi  30  menit, 60  menit,  90  menit  dan  120  menit. Hidrolisis  terjadi  selama  inkubasi  dan dihentikan dengan menambahkan aseton : etanol (1:1) sebanyak 10 ml.  Sampel hasil hidrolisis ditambahkan 3 tetes indikator pp dan  dititrasi  dengan  NaOH  0,1  N  hingga berwarna  merah  jambu  yang  tidak  hilang selama  30  detik.  Volume  NaOH  yang digunakan  titrasi  dicatat  dan  digunakan untuk menghitung aktivitas hidrolisis lipase menggunakan persamaan sebagai berikut:
( )
Waktu  inkubasi  dengan  aktivitas  enzim tertinggi dinyatakan sebagai waktu inkubasi  terbaik  untuk  digunakan  pada penelitian  selanjutnya.  Dan  perlakuan diulang sebanyak tiga kali.
Penentuan  pH  Optimum  Enzim  Lipase (Kholifah, 2008)
Kedalam labu ukur 25 ml dimasukkan  1  ml  minyak  zaitun  dan  9  ml gum  arab  10%  dalam  air,  dihomogenkan selama  2  menit.  Kemudian  campuran diatur  pada  variasi  pH  6,  7,  8,  9  dan  10.
dengan  menambahkan  larutan  fosfat  0,2 M  dan  5  ml  buffer  fosfat  sesuai  pHnya. Selanjutnya campuran ditepatkan 25 ml.
Campuran diatas dimasukkan kedalam erlenmeyer 100 ml untuk dijadikan  substrat  dan  ditambahkan  0,5 gram  enzim  lipase.  Campuran  kemudian diinkubasi dalam shaker inkubator selama waktu  inkubasi  terbaik.  Hidrolisis  terjadi selama  inkubasi  dan  dihentikan  dengan menambahkan  aseton  :  etanol  (1:1) sebanyak    10  ml.  Sampel  hasil  hasil hidrolisis ditambahkan 3 tetes indikator pp dan  dititrasi  dengan  NaOH  0,1  N  hingga berwarna  merah  jambu  yang  tidak  hilang selama  30  detik.  Selanjutnya  aktivitas hidrolisis lipase dihitung.
Penentuan Konsentrasi Substrat
Maksimum  Enzim  Lipase  (Kholifah,
2008) Kedalam labu ukur 25 ml dimasukkan  minyak  zaitun  dan  9  ml  gum arab  10%  dalam  air,  dihomogenkan selama 2 menit. Campuran diatur pada pH optimum  dengan  menambahkan  larutan fosfat  0,2  M  (Na 2 HPO 4 )  dan  5  ml    buffer fosfat pH optimum. Selanjutnya campuran dijadikan  tepat  25  ml.  Campuran  dibuat dengan  variasi  konsentrasi  substrat    3%, 3,5%, 4% dan 4,5%
Campuran diatas dimasukkan kedalam erlenmeyer 100 ml untuk dijadikan  substrat  dan  ditambahkan  0,5 gram  enzim  lipase.  Campuran  kemudian diinkubasi dalam shaker inkubator selama waktu  inkubasi  terbaik.  Hidrolisis  terjadi selama  inkubasi  dan  dihentikan  dengan
menambahkan  aseton  :  etanol  (1:1) sebanyak    10  ml.  Sampel  hasil  hasil hidrolisis ditambahkan 3 tetes indikator pp dan  dititrasi  dengan  NaOH  0,1  N  hingga berwarna  merah  jambu  yang  tidak  hilang selama  30  detik.  Selanjutnya  aktivitas hidrolisis lipase dihitung.
Pengaruh Ekstrak Metanol Daun Pepaya Terhadap Aktivitas Enzim Lipase (Kholifah, 2008) Kedalam labu ukur 25 ml dimasukkan minyak zaitun dan ditambahkan  9  ml  gum  arab  10%  dalam air,  dihomogenkan  selama  2  menit. Campuran  diatur  pada  pH  optimum dengan  menambahkan  larutan  fosfat  0,2 M  (Na 2 HPO 4 )  dan  5  ml    buffer  fosfat  pH optimum.  Selanjutnya  campuran  dijadikan tepat  25  ml.  Campuran  dibuat  dengan konsentrasi substrat maksimum.
Campuran diatas dimasukkan kedalam erlenmeyer 100 ml untuk dijadikan  substrat  dan  ditambahkan  0,5 gram enzim lipase. Kemudian ditambahkan ekstrak metanol daun pepaya  dengan  variasi  konsentrasi  0  %, 1%,  1,5%,2%  dan  2,5%.  Campuran kemudian diinkubasi dalam shaker inkubator  selama  waktu  inkubasi  terbaik. Hidrolisis  terjadi  selama  inkubasi  dan dihentikan dengan menambahkan aseton : etanol  (1:1)  sebanyak    10  ml.    Sampel hasil  hasil  hidrolisis  ditambahkan  3  tetes indikator pp dan dititrasi dengan NaOH 0,1 N  hingga  berwarna  merah  jambu  yang tidak  hilang  selama  30  detik.  Selanjutnya aktivitas hidrolisis lipase dihitung.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstrak Daun Pepaya
Pemilihan  pelarut  metanol  pada proses  ekstraksi  karena  metanol  mampu melarutkan  seluruh  golongan  metabolit sekunder, salah satunya senyawa alkaloid.  Kemampuan  pelarut  metanol karena  sifatnya  yang  tidak  terlalu  besar kepolarannya, sehingga mampu melarutkan baik senyawa polar, semipolar,  maupun  nonpolar.  Pemilihan metode maserasi karena untuk menghindari  kerusakan  dari  senyawa- senyawa  yang  tidak  tahan  terhadap  suhu panas. Kelebihan lain dari metode maserasi    yaitu  ekstrak  yang  didapatkan lebih  banyak.  Rendemen  ekstrak  metanol yang diperoleh adalah 22,76 %.

## Hasil Identifikasi senyawa alkaloid
Analisis  senyawa  alkaloid  dilakukan dengan  tiga  pereaksi  yaitu  dragendorf, wagner dan mayer.
Tabel 1. Hasil uji alkaloid
Ekstrak metanol pepaya Pereaksi dan Perubahan Hasil Uji Dragendorf Mayer Wagner 2 gr Endapan merah jingga Endapan putih Endapan coklat + Ketiga pereaksi diatas adalah pereaksi  yang  umum  digunakan  dalam mengidentifikasi  senyawa  alkaloid  (uji kualitatif).  Uji  positifnya  ditandai  dengan terbentuknya  endapan  (Tabel  1).  Temuan tersebut  sama  dengan  yang  ditemukan Q         ’ et  al., (2015)  ekstrak
pepaya  yang  dianalisis  dengan  tiga pereaksi di atas memberikan reaksi positif dengan  terbentuknya  endapan.  Prinsip dari metode ini adalah reaksi pengendapan  yang  terjadi  karena  adanya Q         ’ et    al. , 2015).

## Spektrum Inframerah
Spektrum  inframerah  memberikan informasi terhadap gugus fungsional yang terkandung dalam struktur molekul, terutama  bermanfaat  dalam  menetapkan jenis  ikatan  yang  ada  dalam  molekul. Serapan pada 3358,66 cm -1 mengindikasikan  adanya  gerak  ulur  N-H yang tidak muncul karena adanya serapan gugus –OH  yang  lebih kuat  dibandingkan –NH  (Gambar  1).  Ikatan  hidrogen mempunyai  pengaruh  pada  lebarnya absorpsi  infra  merah  yang  berasal  dari ikatan OH atau NH (Fessenden &Fessenden, 1999). Absorpsi amina (NH) lebih  lemah  dari  pada  alkohol  (OH). Karena ikatan hidrogen amina lebih lemah dari  pada  ikatan  gugus  fungsi  alkohol (Silverstein et al. , 1984).
Serapan  pada  2943  cm -1 dan  2839 cm -1 diduga  merupakan  serapan  dari  CH 3 stretch .  Serapan  pada  816,09  cm -1 merupakan  serapan  dari  gugus  CN stretch .  Gugus  C=C  teridentifikasi  pada serapan  16646,59  cm -1 dan  1522,31  cm -
1 .Gugus  fungsi  pendukung  lain  yang ditunjukkan oleh gambar spektrum inframerah  adalah  C-H.  alifatik  didaerah 1452,64  cm -1 ,  Kibasan  NH  pada  serapan
816,09 cm -1 dan 1409,79 cm -1 serta gugus eter  C-O  di  daerah  1020,17  cm -1 .  Hasil pembacaan  spektrum  inframerah  pada gambar 1 dikelompokkan dalam beberapa gugus  fungsi    yang  ditampilkan  pada
Tabel  2.  Dari  hasil  yang  spektrum  yang diperoleh  ditambah  dengan  uji  alkaloid menggunakan  pereaksi  dapat  dikatakan bahwa ekstrak daun pepaya mengandung alkaloid.
Gambar 1. Spektrum inframerah ekstrak   metanol daun pepaya
Tabel 2. Interpretasi  data  Infra  Red  (IR) ekstrak alkaloid daun pepaya No. Fraksi aktif (cm -1 ) Literatur * (cm -1 ) Gugus fungsi
1 2 3 4 5
6
7 8 9 816,09 1522,31 1646,59 2943,21, 2839,85 3358,66 3358,66 816,09 1020,17 2943,21 2839,85 800-1100 1450-1600 1500-1675 2960-3000 3000-3700 3200-3400 666-909 1000-1260 2700-3000 C-N stretch C=C aromatik
C=C CH 3 stretch
OH N-H Kibasan N-H C-O eter C-H alifatik
*) Sumber : Silverstein et al . (1984), Fesenden dan Fesenden (1999), Creswell et al (2005)

## Isolat Enzim Lipase
Ekstraksi  enzim  lipase  dilakukan dengan metode dekantasi diruang terbuka selama 24 jam dengan menggunakan  pelarut  CaCl 2 0,01  M. Dekantasi  bertujuan  untuk  memisahkan zat  hijau  daun  (klorofil)  pada  daun pepaya. Hal ini sesuai dengan penelitian Ikbal (2012) melakukan ekstraksi enzim lipase dari daun pepaya dengan metode dekantasi diruang terbuka. Waktu dekantasi dengan aktivitas  tertinggi  (5,69  µmol/ml.menit) diperoleh  pada  waktu  24  jam.  Menurut Aismaratu  (2008)  penggunaan  pelarut CaCl 2 0,01 dikarenakan CaCl 2 juga bisa bertindak sebagai aktivator untuk enzim lipase itu sendiri.
Isolasi  enzim  lipase  dilakukan dengan  metode salting  out ,  yakni menggunakan  amonium  sulfat  teknis pada  tingkat  kejenuhan  amonium  sulfat 65%.  Hal  ini  berdasarkan  dengan penelitian
Ikbal (2012)
yang mendapatkan  rendemen  dan  aktivitas enzim  terbaik    pada  tingkat  kejenuhan amonium  sulfat  65%.  Prinsip  dari metode  ini  yaitu  tingkat  konsentrasi amonium  sulfat  akan  membuat  enzim keluar dari larutan membentuk koagulan. Penggunaan garam amonium sulfat karena memiliki sifat yang mudah larut  dalam  air  serta  tidak  menggangu bentuk  kerja  enzim  (Winarno,  1982).
Sehingga  memudahkan  dalam  proses isolasi  enzim  lipase.  Rendemen  enzim lipase yang diperoleh sebesar 1,069  %. Penelitian Ikbal (2012) juga mengisolasi enzim  lipase  daun  pepaya  menemukan rendemen tertinggi pada tingkat kejenuhan 65% sebesar 1,15%.

## Waktu Inkubasi Enzim Lipase
Waktu  inkubasi  aktivitas  enzim lipase  dilakukan  dengan  variasi  waktu 30  menit,  60  menit,  90  menit  dan  120 menit. Waktu inkubasi akan memberikan  kesempatan  enzim  dan substrat saling kontak (proses hidrolisis)  membentuk  kompleks  enzim- substrat.
Hasil  pengamatan  aktivitas  enzim lipase  yang  didapatkan  (Gambar  2) menunjukkan  aktivitas  tertinggi  (16,94 µmol/ml.menit)  ditemukan  pada  waktu
inkubasi  120  menit  (2  jam).  Hal demikian  menunjukkan  bahwa  waktu inkubasi berpengaruh terhadap aktivitas enzim.  Semakin  lama  waktu  inkubasi maka  akan  semakin  tinggi  aktivitas enzim lipase yang diperoleh.
Gambar 2.  Hubungan  aktivitas  enzim lipase terhadap waktu inkubasi (menit)
Gambar  2  menunjukkan  waktu inkubasi  120  menit  merupakan  waktu inkubasi  terbaik  enzim  lipase.  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  Ikbal  (2012) yang  menggunakan  waktu  2  jam  dalam menghidrolisis  enzim  lipase  pada  daun pepaya muda.

## pH Optimum Enzim Lipase
Aktivitas  enzim  lipase  dilakukan dengan  variasi  pH  yaitu  pH  6,  7,  8,  9 dan  10.  Hasil  pengamatan  aktivitas enzim  lipase  yang  didapatkan  (gambar 3) menunjukkan aktivitas tertinggi (13,33  µmol/ml.menit)  ditemukan  pada pH  7  dan  aktivitas  terendah  (5,44 µmol/ml.menit)  ditemukan  pada  pH  10. Aktivitas  tertinggi  menunjukkan  kondisi
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 0 50 100 150 A kt iv itas e n zi m (l µ m o l/ m l.m e n it
Waktu inkubasi (menit)
optimum  enzim  lipase  berada  pada  pH 7.
Hasil  yang  sama  juga  dilaporkan pada penelitian Sri Wahyu Murni et  al.,
(2011),  dimana  aktivitas  enzim  lipase optimum  dari Apergilus  niger berada pada pH 7 dengan aktivitas sebesar 1,5 µmol/ml.menit.  Penelitan  Ari  Asnani &
Puji  (2009)  menemukan  aktivitas  lipase dari  cacing peryonix  excavatus (fraksi 70  %)  tertinggi  pada  pH  7,  dengan aktivitas sebesar 1.050 unit/ml.
Gambar 3.  Pengaruh pH terhadap aktivitas enzim lipase
Menurut  Christakopoulus  (1992) pada  kondisi  pH  tinggi  atau  rendah memungkinkan  terjadinya  denaturasi dan  ini  mengakibatkan  menurunnya aktivitas enzim. Karena enzim merupakan protein, perubahan pH akan menyebabkan  ionisasi  pada  molekul protein  berubah  pula.  Perubahan  ini akan mengakibatkan struktur tiga dimensi berubah, sehingga fungsi katalitiknya  terganggu.  Hal  tersebut dapat  dilihat  dari  grafik  dibawah  ini. Pada
pH 8-10 aktivitas enzim semakin menurun,  dan  aktivitas  enzim  pada  pH 6  masih  menunjukkan  aktivitas  lebih rendah dibanding pada  pH 7.
Konsentrasi Substrat Maksimum

## Enzim lipase
Penentuan  konsentrasi  substrat
terbaik, dilakukan dengan variasi konsentrasi substrat 3%, 3,5%, 4%, dan 4,5%.    Substrat  yang  digunakan  adalah minyak zaitun. Hasil pengamatan aktivitas  enzim  lipase  yang  didapatkan (gambar 3) menunjukkan aktivitas tertinggi (12,89 µmol/ml.menit) ditemukan  pada  konsentrasi  substrat  4 % dan aktivitas terendah (7,61 µmol/ml.menit)
ditemukan pada
konsentrasi substrat 3 %
Gambar 4. Hubungan  aktivitas  enzim lipase  terhadap  konsentrasi substrat (%)
Gambar  4  menunjukkan  bahwa aktivitas  tertinggi  (12,89  µmol/ml.menit) yang ditemukan pada konsentrasi substrat  4%  merupakan kondisi terbaik enzim lipase.(konsentrasi substrat maksimu)  Kemudian  aktivitas  enzim
0 2 4 6 8 10 12 14 0 5 10 15 A kti itas en zi m
(l µ m o l/ m l.m e n it ) pH 0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 Akti ita s e n zi m
(l µm o l/ ml .men it
Konsentrasi Substrat (%)
perlahan menurun menjadi 11,89
µmol/ml.menit. Menurut Poedjiadi
(1994)  hal  ini  menunjukkan  seluruh substrat  sudah  terhidrolisis  menjadi asam  lemak,  sehingga  tidak  ada  lagi kontak  antara  enzim  dengan  substrat membentuk  kompleks  enzim-substrat. Penurunan aktivitas enzim kemungkinan disebabkan oleh tingginya konsentrasi  substrat  yang  bisa  berefek menghambat  (inhibitor)  aktivitas  enzim lipase.
Pengaruh  ekstrak    metanol  daun pepaya  terhadap aktivitas  enzim lipase.
Esktrak  metanol  daun  pepaya digunakan  dalam  menghambat  aktivitas enzim lipase. Penelitian Kholifah (2008) menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol daun  dewa  dapat  menghambat  kerja enzim lipase. Hal ini juga didukung oleh penelitian  Lusiana  H.,  (2008)  yang menemukan  bahwa  ekstrak  kasar  dari akar Albertisia  papuana Becc  mampu menghambat  pertumbuhan  skizon P.
Fulciparum .
Pengaruh konsentrasi ekstrak
metanol daun pepaya dilakukan dengan variasi  konsentrasi  0%,  1%,  1,5%,  2% dan 2,5 %. Hasil pengamatan menunjukkan  aktivitas  enzim    lipase mengalami penghambatan pada konsentrasi  1%-2,5%  ekstrak  metanol. Grafik dibawah ini menunjukkan hubungan  antara  aktivitas  enzim  lipase terhadap ekstrak metanol daun pepaya.
Gambar 5. Hubungan  aktivitas  enzim lipase  terhadap  konsentrasi ekstrak metanol (%)
Berdasarkan  grafik  diatas  pada konsentrasi  ekstrak  metanol  1%-2,5% perlahan  aktivitas  enzim  menurun.  Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun pepaya mampu menginhibisi aktivitas  enzim  lipase  pada  berbagai konsentrasi. Konsentrasi terbaik ditunjukkan pada konsentrasi 2%. Penghambatan kemungkinan disebabkan oleh adanya senyawa alkaloid  yang  terdapat  dalam  ekstak pepaya. Selain itu kemungkinan adanya pemakaian pelarut metanol pada esktrak  pepaya  telah  merusak  enzim sehingga  aktivitasnya  menurun.  Hal  ini sebagaimana diungkapkan oleh Suhartono  (1989)  bahwa  enzim  akan hilang  kestabilannya  pada  lingkungan pelarut organik seperti metanol.

## KESIMPULAN
Aktivitas  enzim  lipase terbaik diidapatkan  pada  waktu  inkubasi  120
0 2 4 6 8 10 12 0 1 2 3 A k tiv ita s e nz im konsentrasi ekstrak metanol (%)
menit  (16,94  µmol/ml.menit),  pH  7 (13,33  µmol/ml.menit)  dan  konsentrasi substrat  4%  (12,89  µmol/ml.menit)  dan ekstrak  metanol  daun  pepaya  dapat menghambat  aktivitas  enzim  lipase pada  konsentrasi  terbaik  2%  dengan aktivitas terendah sebesar 3,67 µmol/ml.menit.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Secara khusus peneliti
menyampaikan ucapan terima kasih kepada  Laboran  Jurusan  Kimia  dan Himpunan  Mahasiswa  Kimia  (HIMAKIM) FMIPA UNTAD.

## DAFTAR PUSTAKA
Aismaratu. 2008. Kajian Sifat
Kespesifikan  Lipase  Daun  Pepaya (Carica  papaya L. ) Dari  Berbagai
Varietas. ( Skripsi ). Palu: Universitas Tadulako. Asnani  A.,  Puji  L.  2009.  Aktivitas Amilase, Lipase  dan  Protease  dari Cacing
Peryonix excavatus. Molekul . 4(2): 115-121. Christakopoulus,  P.  1992.  Production and Characterization of
Extracelluler  Lipase  From Calvatia
gigantea . Appl Microbiol Biotecnol . 38(2): 194-197.
Creswell  CJ.,  Olaf  A.  Rinquist,  Malcolm
M. Campbel. 2005. Analisis Spektrum Senyawa Organik .
Bandung: ITB. Dalimartha,  S.  2006. 36  Resep  Obat
Untuk Menurunkan Kolesterol . Penebar Jakarta: Swadaya.
Fesenden  RJ,  Fesenden  JS.  1999.
Kimia  Organik  Jilid  I .  Terjemahan Aloysius  Hadyana  Pudjaatmaka. Jakarta: Erlangga.
Harborne,  J.B.  1996. Metode  Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan . Bandung: ITB. Lusiana,  H.  2009.  Isolasi  dan  Uji  Anti Plasmodium Secara In Vitro
Senyawa  Alkaloid  Dari Albertisia papuana BECC. (Tesis). Bogor:
Sekolah Pascasarjana IPB.
Ikbal  M.  2012.  Isolasi  Lipase  dari  Daun Pepaya  Varietas  Lokal (Carica papaya L)  dan  Aplikasinya  dalam Biosintesis  Monolaurin .  (Skripsi) . Jurusan  Kimia.  FMIPA  UNTAD. Palu.
Kholifah  N.  2008.  Pengaruh  Ekstrak Alkaloid  dari  Daun  Dewa (Gynura pseudo-cina (L)(DC))  Terhadap Aktivitas  Enzim  Lipase.  ( Skripsi ).
Jurusan  Kimia  Fakultas  Sains  dan Teknologi.Universitas Negeri Malang. Malang. Murni SW., Kholisah SD., DL. Tanti, EM Petrissia. 2011. Produksi,
Kerakterisasi  dan  Isolasi  Lipase dari Apergilus  niger . Prosiding Seminar  Nasional  Teknik  Kimia “Kejuangan” . Pengembangan Teknologi Kimia untuk Pengolahan Sumber  Daya  Alam  Indonesia Yogyakarta,  22  Februari  2011.
Hlm A08-1 – A08-7.
Poedjiadi, A. 1994. Dasar-Dasar
Biokimia . Jakarta: UI-Press.
Q         ’ et  al .  2015.  Analisis Fitokimia  Daun  Pepaya (Carica papaya L) Dibalai Penelitian Tanaman Aneka Kacang dan Umbi
Kendalpayak. Prosiding  Seminar Nasional Konservasi dan Pemanfaatan  Sumber  Daya  Alam 2015. Pendidikan Biologi, Pendidikan  Geografi,  Pendidikan Sains, PKLH –  FKIP  UNS.
Surakarta,  13  Januari  2015.  Hlm 134-137.
Rahardjo.,  S.S.  2005.  Influen  Of  Etanol Extract Of Jati Belanda Leaves On
Lipase  Enzym  Activity  Of  Rattus Norvegitus
Serum. Inovasi.
4(17):48-53.
Silverstein RM.,  Bassler,  G.  Clayton, Terence  C.  Morrill.  1984. Penyidik Spektrometrik  Senyawa  Organik.
Edisi Keempat . Terjemahan
Hartomo  A.J.,  Anny  Victor  Purba. Jakarta: Erlangga.
Suhartono  M.T.  1989. Enzim  dan
Bioteknologi. Bogor:  Departemen
Pendidikan    dan    Kebudayaan, Direktorat    Jenderal    Pendidikan Tinggi Antar Universitas Bioteknologi,    Institut    Pertanian Bogor.