Copyright © 2024, JPLP, e ISSN 2654-251X
Suplementasi Ekstrak Daun Ketapang ( Terminalia catappa) pada Potato Sucrose Agar (PSA) untuk Menggantikan Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol (DRBC) pada Praktikum Mikrobiologi Pangan dan Pengolahan

## Anang Juni Yastanto, Retno Indrati
Departemen Teknologi Pangan dan Hasil Pertanian Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Gadjah Mada,Yogyakarta Corresponding Author: anangjuniyastanto@ugm.ac.id
Received: 08 th November  2023; Revised: 08 th May 2024; Accepted: 29 th May 2024;
Available online: 30 th May 2024; Published regularly: July  2024

## Abstract
Ketapang  (Terminalia  catappa)  trees  are  commonly  utilized  as  shade plants.  In  addition  to  their  beneficial seeds, their leaf extracts also possess antimicrobial properties. Aquous leaf extract of ketapang, exhibits antifungal activity.  The  aim  of  this  study  is  to  apply  ketapang  leaf  extract  on  Potato  Sucrose  Agar  (PSA)  medium  for Microbiology  of  Food  and  Processing  laboratory  experiments  on  food  spoilage  fungi  testing.  Rhizopus  sp.  fungi were  inoculated  on  PSA  medium  containing  young  and  old  ketapang  leaf  extracts  (at  concentrations  of  10%  and 20%). The fungi were then incubated at room temperature for 4 days, and their growth diameter was measured daily to determine the inhibitory effect of the extract. Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol (DRBC) medium was used as  a  control  medium,  as  utilized  in  food  spoilage  fungi  testing  experiments.  The  research  results  indicate  that  the highest  inhibitory  effect  was  obtained  with  20%  young  ketapang  leaf  extract.  The  inhibitory  effect  decreases  with lower  concentrations  of  ketapang  leaf  extract;  it  decreased  by  17%  after  heat  sterilization.  Application  of  food spoilage fungi testing using corn samples revealed similar contamination levels of seeds and fungal genera growth on PSA medium compared to DRBC medium. Therefore, the addition of 20% ketapang leaf extract to PSA medium can be utilized as a substitute for DRBC medium in food spoilage fungi testing
Key Words : ketapang leaf extract, antifungal, Rhizopus sp, PSA media, DRBC media

## Abstrak
Ketapang  biasanya  digunakan  sebagai  tanaman  peneduh.  Selain  bijinya  yang  bermanfaat  ekstrak  daunnya juga  memiliki  antimikrobia.  Ekstrak  daun  ketapang  (Terminalia  catappa)  dengan  menggunakan  pelarut  akuades memiliki  aktivitas  antijamur.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengaplikasikan  ekstak  daun  ketapang  pada  media Potato Sucrose Agar (PSA) untuk praktikum Mikrobiologi Pangan dan Pengolahan pada uji jamur perusak pangan. Jamur  Rhizopus  sp.  diinokulasikan  pada  media  PSA  yang  mengandung  ekstrak  daun  ketapang  muda  dan  tua (konsentrasi  10%  dan  20%).  Jamur  kemudian  diinkubasikan  pada  suhu  ruang  selama  4 hari  dan  tiap hari  diukur diameter  pertumbuhannya  untuk  menentukan  daya  hambat  ekstrak.  Media  DRBC  digunakan  sebagai  media pembanding seperti yang digunakan pada praktikum acara uji jamur perusak pangan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa daya hambat tertinggi diperoleh pada ekstrak daun ketapang daun muda 20%. Semakin rendah konsentrasi ekstrak daun ketapang akan semakin rendah daya hambatnya, Daya hambat ekstrak daun ketapang ini mengalami penurunan  sebesar  17%  setelah  dilakukan  sterilisasi  panas.  Aplikasi  uji  jamur  perusak  pangan  menggunakan sampel  jagung  diperoleh  hasil  cemaran  biji  dan  genus  jamur  yang  yang  tumbuh  pada  media  PSA  sama  dengan jamur  yang  tumbuh  pada  media  DRBC.  Oleh  karena  itu  penambahan  ekstrak  daun  ketapang  sebanyak  20%  pada media PSA dapat digunakan sebagai pengganti media DRBC pada uji jamur perusak pangan.
Kata Kunci : ekstrak daun ketapang, antijamur, Rhizopus sp, media PSA, media DRBC .

## PENDAHULUAN
Uji  jamur  perusak  pangan  merupakan  salah  satu  acara  praktikum  Mikrobiologi  Pangan  dan Pengolahan  (MPP)  di  Departemen  Teknologi  Pangan  dan  Hasil  Pertanian  Fakultas  Teknologi  Pertanian Universitas  Gadjah  Mada.  Media  yang  digunakan  dalam  acara  ini  salah  satunya  adalah Dichloran  Rose Bengal  Chloramphenicol (DRBC).  Media  ini  berfungsi  menahan  pertumbuhan  jamur  yang  menyebar sehingga  dapat  diamati  semua  jamur  yang  mengontaminasi  pada  bahan  pangan.  Selain  media  DRBC, jamur juga bisa tumbuh pada media Potato Dextrosa Agar (PDA) dan media Potato Sucrose Agar (PSA) (Dwinawati 2018). Pemakaian media PSA dapat menekan biaya operasional praktikum, hanya saja media PSA  tidak  mengandung  senyawa  penghambat  pertumbuhan  miselia  jamur  seperti  dichloran  pada  media DRBC.  Jamur  dengan  miselia  yang  lebat  dapat  tumbuh  menutupi  seluruh  media  sehingga  akan menyulitkan pengamatan genus jamur yang lain.
Ketapang ( Terminalia catappa ) merupakan tanaman yang banyak tumbuh di  Indoonesia, karena berfungsi sebagai pohon peneduh dengan rantingnya yang tumbuh melebar. Pohon ini memiliki akar yang kuat,  tahan  terhadap  kadar  garam  yang  tinggi  sehingga  biasanya  tumbuh  di  pinggir  pantai.  Selain  itu pohon ini tumbuh dengan kondisi cukup air, aerasi dan tanah yang berpasir (Marjenah dan Putri, 2017). Hampir  semua  bagian  dari  pohon  ketapang  dapat  difungsikan  misalnya  biji  dan  daun  ketapang.  Biji ketapang  mengandung  air  4.13%,  serat  kasar  4.94%,  protein  23.78%,  abu  4.27%,  lemak  51,8%, karbohidrat 16.02% dan total kalori 548.78 kcal (Gao dkk, 2014). Dengan kandungan biji ketapang yang cukup baik ini, maka banyak masyarakat yang mengonsumsi secara langsung.
Selain  biji  ketapang,  daunnya  juga  memiliki  manfaat  yang  cukup  banyak.  Daun  ketapang mengalami  perubahan  warna  dari  hijau,  merah,  kuning  hingga  coklat  pada  musim  kering  dan  kemudian jatuh  ke  tanah.  Biasanya  daun  ketapang  yang  sudah  kering  dimanfaatkan  untuk  penjernihan air  maupun sebagai antijamur pada ikan. Ekstrak daun ketapang dapat menurunkan pH air dan logam beracun (Chyau dkk,  2006)  di  samping  itu  ekstrak  ini  merupakan  antibakteri  pada  ikan  hias  (Chansue  & Assawawongkasem 2008). Ekstak daun ketapang fraksi methanol mengandung komponen flavonoid yang berfungsi  sebagai  antijamur  terhadap Curvularia  lunata (Mandloi  dkk,  2013).  Penelitian  Satish  dkk (2007)  juga  menyimpulkan  bahwa  daun  ketapang  yang  diekstrak  dengan  akuades  dan  solvent  memiliki antijamur terhadap Aspergillus sp .
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  pengaruh  penambahan  ekstrak  daun  ketapang  pada  media PSA terhadap daya hambat pertumbuhan miselia jamur yang tumbuh menyebar (sebagai contoh Rhizopus sp .) dibandingkan dengan media kontrol DRBC. Hasil penelitian ini dapat dimanfaatkan untuk pengujian jamur perusak pangan pada praktikum MPP . .

## BAHAN DAN METODE Rancangan percobaan
Rancangan Acak Lengkap Faktorial (RALF), penelitian ini mengevaluasi 2 macam ekstrak daun (daun muda dan daun tua) dengan 2 konsentrasi (10% dan 20%).
HM 10%
: Ekstrak daun Hijau Muda konsentrasi 10%
HM 20% : Ekstrak daun Hijau Muda konsentrasi 20% HT 10% : Ekstrak daun Hijau Tua konsentrasi 10% HT 20% : Ekstrak daun Hijau Tua konsentrasi 20% HM 20%S : Ekstrak daun Hijau Muda konsentrasi 20% ditambahkan sebelum sterilisasi HT 20%S : Ekstrak daun Hijau Tua konsentrasi 20% ditambahkan sebelum sterilisasi Kontrol
: Media PSA dan DRBC
Pengujian dilakukan sebanyak 6 kali ulangan.
Konsentrasi  ekstrak  daun  ketapang  yang  memiliki  daya  hambat  tertinggi,  kemudian  dicoba  untuk  uji ketahanan ekstrak terhadap pemanasan autoklaf. Selanjutnya media dicoba untuk menguji jamur perusak
pangan pada sampel biji kemiri dan jagung. Hasilnya dibandingkan dengan biji yang ditumbuhkan pada media DRBC.

## Peralatan :
Peralatan  yang  digunakan  meliputi:  autoklaf,  timbangan  semi  analitik  (Mettler  Toledo),  Laminer  flow, hotplate, erlenmeyer, cawan petri, pH meter (Mettler Toledo), Chromameter (Konica Minolta) Bahan:  daun  ketapang  yang  diperoleh  dari  pohon  ketapang  di  lingkungan  Fakultas  Teknologi  Pertanian Universitas Gadjah Mada, isolat Rhizopus sp ., jagung kuning, kemiri, kentang, gula pasir, media DRBC (Oxoid) dan tusuk gigi Cara kerja: Pembuatan ekstrak kentang induk (Dwinawati, 2018)
Kentang sebanyak 200 gram ditimbang kemudian dikupas dan dicuci hingga bersih. Kentang bersih ditambah  air,  direbus  mendidih  selama  15  menit.  Ekstrak  kemudian  disaring  untuk  memisahkan  ampas dan volume ekstrak dikembalikan menjadi 500 ml dengan menambahkan akuades.

## Pembuatan ekstrak daun ketapang
Daun  ketapang  segar  (daun  muda  dan  tua)  dicuci  hingga  bersih  kemudian  diblender  dengan penambahan  akuades  perbandingan  1:1.  Larutan  kemudian  disaring  dengan  kertas  saring  untuk memisahkan ampas dengan ekstrak. Ekstrak selanjutnya disentrifuge dengan kecepatan 4000 rpm selama 15 menit untuk memisahkan dengan endapannya.  Ekstrak disimpan di pendingin untuk uji selanjutnya.
Pengujian pH ekstrak daun ketapang (SNI 6989.11 :2019)
Pengukuran pH ekstrak menggunakan pH meter merk Mettler Toledo.

## Peremajaan jamur Rhizopus sp.
Jamur  yang  digunakan  untuk  fermentasi  diremajakan  pada  media  PSA  dengan  metode  (Yastanto, 2019). Suspensi spora Rhizopus sp . diinokulasikan pada media PSA steril pada suhu 40 °C dengan cara pour  plate .  Jamur  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  ruang  selama  5  hari  hingga  menghasilkan  spora berwarna hitam.
Pembuatan media PSA dengan penambahan ekstrak daun ketapang ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Formulasi media PSA dengan suplementasi ekstrak daun ketapang
Perlakuan Ekstrak daun (mL) Ekstrak kentang induk (mL) Gula pasir (g) Tepung Agar (g) Akuades (mL) Total media (mL) HM 10% 3 15 0,3 0,45 12 30 HM 20% 6 15 0,3 0,45 9 30 HT 10% 3 15 0,3 0,45 12 30 HT 20% 6 15 0,3 0,45 9 30 PSA 0 15 0,3 0,45 15 30
Percobaan  pertama  ekstrak  daun  ketapang  ditambahkan  setelah  sterilisasi  autoklaf  pada  media dingin  suhu  40  °C.  Percobaan  kedua  untuk  sampel  HM  20%  dan  HT  20%  ekstrak  daun  ketapang ditambahkan sebelum sterilisasi.
Pembuatan media DRBC (Oxoid)
Serbuk  DRBC  ditimbang  sebannyak  3,65  g,  kemudian  ditambahkan  100  ml  akuades  dan dipanaskan  hingga  mendidih  dengan  hotplate.  Setelah  mendidih  kemudian  disterilisasi  dengan  autoklaf 121 °C selama 15 menit. Setelah media suhu 40 °C kemudian dituang pada cawan petri steril dan media yang sudah padat bisa digunakan.
Pengujian pertumbuhan jamur Rhizopus sp. pada media uji
Copyright © 2024, JPLP, e ISSN 2654-251X
Suspensi spora dengan jumlah spora 10 6 spora/ml dimasukkan ke agar semi solid 0,5% sebanyak 1 ml. Setelah tercampur diinokulasikan 3 titik pada media uji yang sudah disiapkan.  Kemudian diinkubasi pada  suhu  ruang  selama  4  hari.  Pertumbuhan  jamur  diamati  setiap  hari  dengan  mengukur  diameter koloninya.
Penguian aktivitas antijamur terhadap jamur Rhizopus sp .
Aktivitas  antijamur  pada  ekstrak  ditentukan  dengan Food  poison  technique (Mandloi  dkk,  2013). Kadar  toksisitas  antijamur  dari  ekstrak  merupakan  persentasi  penghambatan  dari  pertumbuhan  miselia pada media, dan dihitung dengan rumus :

## Uji Jamur perusak pangan
Sampel  yang  dipakai  dalam  uji ini  yaitu  kemiri  dan jagung.  Sampel  ditumbuhkan  dengan  metode direct plate (Rahayu dkk, 2014). Kemiri dan jagung disterilkan permukaannya dengan larutan klorin 0,5% selama  2  menit  kemudian  dibilas  dengan  akuades  steril.  Supaya  tidak  terlalu  basah,  biji  dimasukkan  ke kertas  saring  steril  kemudian  diinokulasikan  ke  media  DRBC  dan  PSA  yang  mengadung  ekstrak  daun ketapang sebanyak 11 biji dalam 1 cawan. Biji yang sudah diinokulasikan kemudian diinkubasi pada suhu ruang selama 4 hari. Setelah diinkubasi kemudian diamati pertumbuhan jamurnya

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Daun ketapang yang dipakai yaitu daun yang berwarna hijau dan dipisahkan antara daun muda dan tua.  Ciri-ciri  daun  muda  yaitu  daun  berada  di  posisi  pucuk  hingga  nomor  5  sedangkan  untuk  daun  tua berada lebih dari nomor 6 dan struktur daun yang lebih kuat. Gambar 1. menunjukkan foto daun ketapang muda dan tua.
Keterangan gambar: (a) daun hijau muda, (b) daun hijau  tua

## Gambar 1. Daun ketapang
Untuk membedakan warna daun ketapang muda dan tua, dalam penelitian ini dianalisis warna daun dengan  menggunakan  Chromameter.  Tabel  1.  merupakan  hasil  analisis  warna  daun  ketapang  muda  dan tua. Pembacaan hasil uji warna dapat dilihat bahwa terdapat hasil L, a dan b. Untuk membedakan warna hijau  data  yang  diamati  yaitu  dengan  hasil  pembacaan  kode  a.  Daun  muda  menunjukkan  angka  - 11,92+0,13 sedangkan daun tua menunjukkan angka -17,5+0,07. Sehingga dapat disimpulkan bahwa jika hasil a semakin kecil maka warna akan semakin hijau tua.
a b
Tabel 2 . Warna daun ketapang diuji dengan Chromameter
Daun ketapang L a b Muda 29,23+0,07 -11,92+0,13 11,52+0,20 Tua 35,48+0,06 -17,5+0,07 20,88+0,18
Ekstraksi  daun  ketapang  menggunakan  akuades  supaya  mudah  untuk  diaplikasikan.  Gambar  2. Menunjukkan hasil ekstraksi daun ketapang muda dan tua. Pada Gambar 2. dapat diamati bahwa ekstrak daun  muda  lebih  keruh  dibandingkan  dengan  ekstrak  daun  tua.  Hal  ini  kemungkinan  dikarenakan  ada partikel  yang  tidak  terendapkan  ketika  disentrifuge.  Hasil  penelitian  sebelumnya  (data  tidak dipublikasikan)  menunjukkan  bahwa  hasil  ekstrak  ini  tidak  terdapat  kontaminasi  jamur  maupun  bakteri sehingga bisa langsung dicampurkan ke media tanpa disterilisasi terlebih dahulu.

## Gambar 2. Ekstrak daun ketapang muda (kiri) dan tua (kanan
Ekstrak  daun  ketapang  dilakukan  pengecekan  pH  yang  ditunjukkan  pada  Tabel  3.  Analisis  pH bertujuan untuk mengetahui derajat keasaman ekstrak. Jika pH ekstrak terlalu asam (< 3,5) maka ekstrak harus  ditambahkan  pada  media  steril.  Hal  ini  dikarenakan  sterilisasi  pada  pH  yang  rendah  agar  akan terhidrolisis dan tidak akan bisa memadat. Oxoid (2001) menjelaskan bahwa untuk menekan pertumbuhan bakteri bisa mengatur keasaman media hingga pH 3,5. Bisa dilakukan dengan menambahkan asam laktat 10%  sebanyak  1  ml  tiap  100  ml  media  steril  suhu  50  °C.  Media  yang  sudah  ditambahkan  asam  tida dilakukan  pemanasan  kembali  karena  akan  terjadi  hidrolisis  agar  sehingga  tidak  bisa  memadat.  Ekstrak daun  ketapang  muda  dan  tua  memiliki  pH  hampir  sama  yaitu  daun  ketapang  muda  sebesar  4,85+0,01 sedangkan  daun  ketapang  tua  5,03+0,07.  Dengan  pH  yang  tidak  terlalu  asam  bisa  dilakukan  percobaan penambahan ekstrak pada media PSA sebelum sterilisasi.
Tabel 3 . pH ekstrak daun ketapang Ekstrak daun ketapang pH Muda 4,85 + 0,01 Tua 5,03 + 0,07
Pertumbuhan jamur Rhizopus sp pada media PSA dengan ekstrak daun ketapang diamati setiap hari selama 4 hari dengan mengukur diameternya dan ditunjukkan pada Gambar  3. Sedangkan penghitungan daya  hambat  ekstrak  ditunjukkan  pada  Gambar  3.  Untuk  melihat  penghambatan  ekstrak  maka dibandingkan dengan kontrol media PSA. Pada  Gambar 3. dapat diamati bahwa media DRBC  memiliki penghambatan  yang  paling  tinggi  dibanding  dengan  media  PSA  dengan  ekstrak  daun  ketapang  yaitu
sebesar  56,36+1,1%.  Hal  ini  kemungkinan  karena  kandungan dichloran dan rose  bengal yang  terdapat dalam  media  DRBC.  Pertumbuhan Rhizopus  sp .  pada  media  PSA  dengan  ekstrak  daun  ketapang  juga mengalami penghambatan pada kedua ekstrak daun. Hal ini menunjukkan bahwa ekstraksi daun ketapang dengan  akuades  memiliki  antijamur.  Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  maka  daya  hambatnya  juga semakin  besar.  Daya  hambat  ekstrak  dari  yang  terbesar  hingga  terkecil  secara  berturut-turut  yaitu  hijau muda  20%,  hijau  tua  20%,  hijau  muda  10%  dan  hijau  tua  10%  sebesar  42,27+1,03%;  40,91+0,75%; 33,18+0,89%;  dan  30,23+0,75%.  Penelitian  Jagessar  dan  Alleyne  (2011)  menyimpulkan  bahwa  daun ketapang  yang  diekstrak  dengan  akuades  memiliki  antimikrobia  terhadap Klebsiella  pneumonia, Staphylococcus  aureus,  Escheria.  coli,  Candida  albicans tetapi  lebih  rendah  dibanding  dengan  standar antibiotik.  Citmanat  dkk  (2005)  juga  menyimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  ketapang  memiliki  aktivitas antijamur,  antibakteri  dan  antiparasit  sehingga  bisa  digunakan  sebagai  pengobatan  alternatif  pengganti bahan kimia dan antibiotik.
Setelah  diketahui  daya  hambat  ekstrak  daun  ketapang  yang  mendekati  media  DRBC,  tahap selanjutnya  yaitu  mencoba  melihat  pengaruh  sterilisasi  terhadap  kestabilan  daya  hambat  ekstrak.  Tahap ini bertujuan untuk memudahkan pembuatan media karena bisa ditambahkan sebelum sterilisasi.
Gambar 3. Pengukuran diameter pertumbuhan Rhizopus sp pada media
Gambar 4 . Daya hambat ekstrak daun ketapang terhadap jamur Rhizopus sp. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 1 2 3 4 5 Dia mte r pe rtumb uh an (mm) Lama inkubasi (hari) PSA DRBC HT 10% HT 20% HM 10% HM 20% 0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 DRBC HT 10% HT
20% HM 20% HM 20% Da ya ha mb at ek str ak ( %) Media pertumbuhan
Konsentrasi  ekstrak  yang  dipilih  yaitu  20%  untuk  masing-masing  daun  ketapang.  Pengukuran diameter pertumbuhan Rhizopus sp . pada media yang ditambahkan ekstrak sebelum dan setelah setrilisasi ditunjukkan pada Gambar 5. dan daya hambat ditunjukkan pada Gambar 6. Pada Gambar 6. terlihat bahwa terjadi penurunan daya hambat pada perlakuan ekstrak yang dengan media sebelum sterilisasi. Penurunan daya  hambatnya  kurang  lebih  17%  untuk  kedua  ekstrak  daun.  Hal  ini  kemungkinan  terjadi  penurunan kadar fenolik di dalam ekstrak.
Gambar 5 . Pengukuran diameter pertumbuhan Rhizopus sp . pada media DRBC, PSA dan PSA mengandung ekstrak daun ketapang muda (atas) dan tua (bawah) dicampur sebelum dan sesudah sterilisasi
Gambar 6 . Daya hambat ekstrak daun ketapang muda dan tua (dicampur sebelum dan sesudah sterilisasi)
Penelitian  Suhartatik  (2013)  menyimpulkan  terjadi  pengurangan  kadar  fenolik  pada  beras  dengan adanya  pemanasan.  Dengan  adanya  pengurangan  kadar  fenolik  selama  pemanasan  akan  mengakibatkan penurunan daya hambat ekstrak daun ketapang terhadap jamur Rhizopus sp.
Penambahan ekstrak daun ketapang pada media PSA diaplikasikan untuk uji jamur perusak pangan. Percobaan  uji  cemaran  jamur  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  kemampuan  media  dalam  menggantikan media  DRBC.  Metode  yang  digunakan  dalam  uji  ini  seperti  yang  dilakukan  di  praktikum  yaitu  dengan metode direct  plating .  Sampel  yang  diuji  merupakan  biji-bijian  yang  biasanya  dipakai  untuk  praktikum seperti  jagung  kuning  dan  kemiri.  Pengamatan  pertumbuhan  jamur  pada  media  PSA+ekstrak  daun ketapang dan DRBC biji jagung kuning dan kemiri ditunjukkan pada Gambar 7.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 1 2 3 4 5 Dia me te r pe rtumb uh an (mm) Lama Inkubasi (hari) PSA DRBC HM 20% HM 20% S 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 1 2 3 4 5 Dia me te r pe rtumb uh an (mm) Lama inkubasi (hari) PSA DRBC HT 20% HT 20% S 0 10 20 30 40 50 60 DRBC HT 20% HT 20% S HM 20% HM 20% S Da ya ha mb at ek str ak ( %) Media pertumbuhan
Pengamatan  warna  koloni  pertumbuhan  jamur  pada  ketiga  media  uji  terlihat  sama,  hal  ini menunjukkan  bahwa  tidak  ada  penghambatan  pertumbuhan  jamur.  Seperti  terlihat  pada  Gambar  7  (1) warna koloni jamur yang tumbuh pada jagung sama untuk semua biji yang ditanam. Yang membedakan yaitu  pada  media  HM  20%  dan  HT  20%  terlihat  ada  miselia  jamur  putih  yang  tumbuh  menempel  di permukaan  media.  Jamur  ini  merupakan  jamur Fusarium  sp ,  dan  kemungkinan  tidak  terhambat  oleh ekstrak daun ketapang. Gambar 7 (2) menunjukkan uji jamur perusak pangan sampel kemiri. Pengamatan pertumbuhan  jamur  terlihat  perbedaan  pada  media  DRBC.  Terlihat  jamur  yang  menutupi  seluruh permukaan biji sehingga jamur yang lain tidak bisa langsung diamati. Menurut pengamatan genus jamur yang menutupi media DRBC yaitu Rhizopus sp. Berbeda dengan pertumbuhan di media HM 20% dan HT 20%,  terdapat  pertumbuhan Rhizopus  sp .  juga  tetapi  pertumbuhannya  terhambat  sehingga  pengamatan jamur yang lain lebih mudah karena tidak tertutupi jamur Rhizopus sp .
Keterangan Gambar : Kode 1 sampel jagung kuning sedangkan kode 2 sampel kemiri Kode A : media PSA+ekstrak daun ketapang muda 20% (HM 20%), kode B : media PSA+ekstrak daun ketapang tua 20% (HT 20%), dan kode C : media DRBC

## Gambar 7 Pengamatan pertumbuhan jamur pada media PSA+ekstrak daun ketapang dan DRBC
Tabulasi data pengamatan uji jamur perusak pangan ditunjukkan pada Tabel 4. yang menunjukkan bahwa  jamur  yang  mencemari  pada  sampel  jagung  kuning  didominasi  oleh Aspergillus  sp .  Genus Aspergillus  sp .  terdapat  3  spesies  yang  mencemari  pada  sampel  jagung  kuning  berdasarkan  warna koloninya.  Sedangkan  genus  yang  lain  yaitu Penicillium  sp. dan Fusarium  sp. Total  biji  tercemar Aspergillus sp. 1 berkisar antara 30 sampai 32 biji, Aspergillus sp.2 antara 8 sampai 10 biji dan Aspergillus sp.3 antara 6 sampai 10 biji.
Penelitian  Puspitasari  dkk  (2015)  juga  menyimpulkan  bahwa  cemaran  jamur  yang  mendominasi sampel  biji  jagung  pakan  ternak  yang  berasal  dari  Klaten,  Sleman  dan  Muntilan  yaitu Aspergillus  sp. isolat As2 dengan intensitas cemaran jamur tertinggi di daerah Klaten 89% (blotter), Sleman 73% (PDA), dan  Muntilan  44%  (blotter).  Total  biji jagung  kuning  yang  tercemar Penicillium  sp .  sebesar  4  sampai  5 biji dan Fusarium sp. sebesar 2 sampai 3 biji
1 2 A B C A B C
Tabel 4. Pengamatan hasil uji jamur perusak pangan
Sampel Warna Koloni Jumlah biji tercemar pada media Genus teridentifikasi DRBC HM 20% HT 20% Jagung kuning Kuning 32 30 31 Aspergillus sp. 1 Hitam 11 10 8 Aspergillus sp. 2 coklat 10 8 6 Aspergillus sp. 3 Abu-abu 4 5 4 Penicillium sp. Putih 2 3 2 Fusarium sp. Kemiri Hijau 33 33 33 Aspergillus sp. 1 Hitam 32 33 33 Aspergillus sp. 2 Coklat kehitaman 33 12 10 Rhizopus sp.
Cemaran  jamur  sampel  kemiri  didominasi  oleh Aspergillus  sp .  dan  ditunjukkan  pada  Tabel  4. Aspergillus  sp. yang  mencemari  terdapat  2  spesies  yaitu  warna  koloni  hijau  dan  hitam.  Menurut pengamatan, semua biji kemiri tercemar Aspergillus sp.1 dan Aspergillus sp.2 . sedangkan jamur yang lain yaitu Rhizopus  sp .  Pada  media  DRBC  jamur Rhizopus  sp .  terhitung  sebanyak  33  biji  tercemar  karena jamur  ini  tumbuh  menutupi  seluruh  biji  di  cawan  petri  sehingga  tidak  bisa  dibedakan  biji  mana  yang tercemar  jamur Rhizopus  sp .  ini.  Menurut  Sardjono  (1993)  cemaran  pada  kemiri  didominasi  oleh Aspergillus flavus , A.niger , A. wentii , dan A.tamarii , berturut-turut mencemari sebanyak 95%, 84%, 37% dan  32%  sampel.  Beberapa  spesies Rhizopus dan Neurospora juga  ditemukan  sebagai  jamur  pencemar kemiri.  Dari  tabulasi  cemaran  jamur  pada  Tabel  menunjukkan  bahwa  media  PSA  yang  mengandung ekstrak  daun  ketapang  20%,  baik  itu  daun  muda  atau  tua,  memperlihatkan  hasil  cemaran  jamur  yang sangat mirip dengan ahsil cemaran yang ditumbuhkan pada media DRBC

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  ketapang  baik  muda  maupun  tua  dapat  ditambahkan  pada  media  PSA  dengan konsentrasi 20%, dan media ini bisa digunakan untuk menggantikan media DRBC pada uji jamur perusak pangan pada praktikum Mikrobiologi Pangan dan Pengolahan

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Prof.  Dr.  Ir.  Tyas  Utami,  M.Sc  selaku  Ketua Departemen TPHP FTP UGM yang sudah mendukung dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
A. J.  Yastanto,  Karakteristik  pertumbuhan  jamur  pada  media  PDA  dengan  metode Pour  Plate Indonesian Journal of Laboratory, (2020), p. 33-39
Anonim. 2019. Air dan Air Limbah. SNI 6989.11 :2019. Badan Standarisasi Nasional, Jakarta C.  Chyaua, P. Kob, J. Maub, Antioxidant properties of aqueous extracts from Terminalia catappa leaves. LWT (2006), 36: p:1099-1108
D.P.I.  Puspitasari,  A.Widiastuti,  A.  Wibowo,  A.  Priyatmojo,  intensitas  cemaran  jamur  pada  biji  jagung pakan  ternak  selama  periode  penyimpanan,  Jurnal  Perlindungan  Tanaman  Indonesia.  (2015)  19; p:27-32
E.  S.  Rahayu,  Sardjono,  dan  R.  A.  Samsons.  Jamur  Benang  ( Mold )  pada  Bahan  Pangan.  Kanisius. Yogyakarta: 2014
J.  Gao,  X.  Tang,  H.  Dou,  Y.  Fan,  X.  Zhaodan,  dan  Q.  Xu,  Hepatoprotective  activity  of  Terminalia catappa L. leaves and its two triterpenoids. J Pharm Pharmacol (2004),56: p.1449-1455
Marjenah dan N.P.Putri, Morphological characteristic and physical environment of Terminalia catappa in East Kalimantan, Indonesia. Asian Journal of Forestry (2017), 1: p. 33-39
N. Chansue dan N. Assawawongkasem, The in vitro antibacterial activity and ornamental fish toxicity of the water extract of Indian almond leaves ( Terminalia catappa Linn.). KKU (2008) 18(1): p. 36-45 N.  Dwinawati , Pengaruh  konsentrasi  gula  pasir  sebagai  pengganti  dektrose  pada  medium  potato  agar terhadap  waktu  pertumbuhan  dan  sporulasi Aspergillus  sp. dan Penicillium sp, Prosiding  Seminar Nasional  II  Hasil  Penelitian  Pranata  Laboratorium  Pendidikan  Indonesia,  Yogyakarta  (2018),  p. 209-215
R. C. Jagessar dan R. Alleyne, Antimicrobial Potency of The Aqueous Extract of Leaves of Terminalia Catappa , Academic Research International (2011), 1
S.  Mandloi,  R.  Mishra,  R.  Varma,  B.  Varughese  dan  J.  Tripathi,  A  Study  on  Phytochemical  and Antifungal  Activity  of  Leaf  Extracts  of Terminalia  catappa ,  International  Journal  of  Pharma  and Bio Sciences (2013); 5: p.1385-1393
Sardjono,  Pencemaran  Pangan  oleh  Jamur,  Potensi  Bahaya  dan  Pencegahannya.  Agritech  (1998),  18;
p:23-27
Satish,  S.,  Mohana,  D.C.,  Ranhavendra,  M.P.  and  Raveesha,  K.A.  Antifungal  activity  of  some  plant extracts  against  important  seed  borne  pathogens  of Aspergillus  sp .  Journal  of  Agricultural Technology (2007). 3(1): 109-119
Suhartatik,  Aktivitas  antioksidan  antosianin  beras  ketan  hitam  selama  fermentasi.  Jurnal  Teknologi  dan Industri Pangan. (2013) 24 (1): p. 115-119