## POTENSI ANTIMIKROBIA KRIM EKSTRAK RANTING PATAH TULANG
( Euphorbia tirucalli Linn.) TERHADAP Propionibacterium acnes ATCC 11827 DAN Candida albicans ATCC 24433
Melina Scandinovita Setiorini 1 , C.J. Soegihardjo 2 , Kianto Atmodjo 1
1 Program Studi Teknobiologi Industri, Fakultas Teknobiologi, Universitas Atma Jaya Yogyakarta
2 Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma Yogyakarta
Abstract: Euphorbia tirucalli L. (Euphorbiaceae) or patah tulang has been used traditionally in Java for treatment  of  fungal  infections  ( Propionibacterium  acnes  causing  acne  and  Candida  albicans  causing candidasis).  Information  on  their  use  is  available,  but  scientific  data  on  their  bioactivity  and  safety  of actions still scanty. A study was conducted on the effect of organic extracts of this plant on fungal strains. Aceton  extract  were  evaluated  through  the  disc  diffusion  assay.  Aceton  extract  was  prepared  by  Soxhlet apparatus  for  eight  hours.  Bacteria  and  yeast  test  strains  were  cultured  on TSA  (Trypthone  Soya  Agar) and  on PDA  (Potato  Dextrose  Agar) for  Candida  albicans.  A  0.5  McFarland  standard  suspension  was prepared.  Sterile  paper  discs  6  mm  in  diameter  impregnated  with  10  ml  of  the  test  extract  (100  mg/ml) were aseptically placed onto the surface of the inoculated media. Thymol 0,5% and ketokonazol 2% were used  as  standards.  Discs  impregnated  with  dissolution  medium  were  used  as  controls.  Activity  of  the extracts was expressed according to zone of inhibition diameter. Dimethylsulfoxide (DMSO) was used for preparing test extracts (10, 20, 40, 60, 80, 100%) and were tested for Minimum Inhibitory Concentration (MIC) to  Propionibacterium acnes and Candida albicans. MIC were obtained that 100% test extract was greatest and 10% test extract was weakest. Then, test extracts were prepared by concentrations 10, 9, 8, 7, 6, 5%, and the result were the best were 10% test extract to Propionibacterium acnes and 6% test extract to  Candida  albicans.  Antimicrobial  test  for  pharmaceutical  preparation,  i.e.  cream  (o/w)  were  prepared using 9 and 10% test extracts mixed with cream for testing to Propionibacterium acnes and 5 and 6% test extracts  with  cream  for  testing  Candida  albicans.The  final  results  were  10%  test  extract  had  MIC  to Propionibacterium acnes and 6% test extract had MIC in cream to Candida albicans.
Keywords: Euphorbia tirucalli L., DMSO, Thymol, antimicrobial potency, cream (o/w), Propionibacterium acnes, Candida albicans
1. Pendahuluan
Bakteri dan jamur tertentu diketahui merupakan  mikrobia  sumber  penyakit  (patogen) bagi  manusia,  misalnya  penyakit  kulit  seperti jerawat  yang  disebabkan  oleh Propionibacterium acnes dan  kandidiasis  yang  disebabkan Candida albicans (Absor, 2006 ; Gaspari dan Tyring, 2008 ; Corwin,  2008).  Pada  umumnya  banyak  orang menggunakan  obat  sintetis  untuk  mengobati penyakit  kulit,  selain  harganya  lebih  mahal  juga menimbulkan  efek  ketergantungan  pada  pasien (Absor,  2006).  Hal  ini  memunculkan  kesadaran untuk  beralih  dari  obat-obatan  sintetik  ke  obat- obatan herbal/tradisional untuk pengobatan penyakit  kulit  tersebut.  Bahan  baku  yang  bisa
dijadikan  obat  tradisional  dapat  diambil  dari berbagai  macam  sumber.  Tumbuhan  tertentu diyakini  memiliki  komponen  senyawa  aktif  yang dapat  bersifat  antimikrobia  (Absor,  2006  ;  Prasad dan kawan-kawan, 2011).
Salah  satu  bahan  baku  untuk  dijadikan  obat tradisional  adalah  tanaman  patah  tulang  yang jarang  sekali  digunakan  oleh  masyarakat,  karena bersifat  toksik  yang  digunakan  sebagai  pestisida tanaman (Absor, 2006). Menurut Toana dan Natsir (2011), ranting patah tulang mengandung alkaloida, tanin, steroid, flavonoid, triterpenoid, dan hidroquinon.  Berdasarkan  penelitian  sebelumnya senyawa  mengandung  alkaloida,  tanin,  steroid, flavonoid,  triterpenoid,  saponin  memiliki  aktivitas
antimikrobia (Nurhanifah, 2009 ; Robinson, 1995 ; Upadhyay, dan kawan-kawan., 2010).
Menurut  Prasad  dan  kawan-kawan  (2011), patah tulang memiliki sifat antimikrobia  yang baik dengan menggunakan metode uji potensi antimikrobia  dengan  konsentrasi  hambat  terkecil 500  µg.  Absor  (2006)  menemukan  bahwa  filtrat ranting  patah  tulang  tanpa  pemanasan  memiliki aktivitas  antibakteri  yang  lebih  tinggi  daripada dengan  pemanasan.  Bubuk  ranting  patah  tulang konsentrasi 500 mg/ml memiliki aktifitas antibakteri terhadap Bacillus substilis dan Escherichia  coli ,  dengan  zona  hambat  yang dihasilkan melebihi antibiotik ampisilin 100 µg/ml. Wardhani  (2005),  meneliti  tentang  pengisolasian fraksi  aktif  dari  tanaman  patah  tulang  terhadap Candida  albicans ,  hasilnya  konsentrasi  ekstrak 10%  merupakan  konsentrasi  yang  paling  efektif menghambat pertumbuhan jamur.
Oleh sebab itu, diperlukan adanya pembuktian potensi  tanaman  patah  tulang  ini,  agar  tanaman toksik  ini  dapat  menjadi  obat  tradisional  yang bermanfaat  tentunya  dan  dapat  diolah  lebih  lanjut menjadi sediaan obat kulit, yang mampu menghambat  mikrobia  penyakit  kulit,  diantaranya Propionibacterium  acnes dan Candida  albicans . Krim  herbal  yang  sudah  diteliti  sebelumnya  oleh Kusumaningtyas dan kawan-kawan. (2008) menyatakan  bahwa,  daya  hambat  krim  daun  sirih lebih kecil dibandingkan daya hambat ekstrak daun sirih.  Penelitian  dari  Shabnum  dan  Wagay  (2011), melaporkan  bahwa  ekstrak Thymus  vulgaris mengandung  senyawa  timol  yang  mempunyai fungsi sebagai antiseptik.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya hambat  ekstrak  ranting  patah  tulang  terhadap mikrobia Propionibacterium  acnes dan Candida albicans dan  mengetahui  konsentrasi  ekstrak  dan sediaan  krim  ekstrak  ranting  patah  tulang  yang efektif menghambat pertumbuhan mikrobia Propionibacterium  acnes dan Candida  albicans . Sampai  saat  ini  belum  pernah  diteliti  tentang potensi  antimikrobia  ekstrak  ranting  patah  tulang dalam  bentuk  krim  seperti  yang  dilakukan  oleh Kusumaningtyas dan kawan-kawan (2008) terhadap  daun  sirih.  Belum  diketahui  potensi penghambatan  ekstrak    patah  tulang  terhadap
mikrobia P.acnes dan C.albicans ,  maka  perlu dilakukan penelitian ini.

## 2. Metode Penelitian

## 2.1.Preparasi simplisia ranting patah tulang
Ranting patah tulang diambil dalam satu pohon dengan  tinggi  ±  2  m  dan  usia  ±  6  tahun,  yang diambil di Yogyakarta (Jl. Mangga II no 46 Depok Sleman  DIY).  Ranting  dipotong  menggunakan pisau stainless  steel .  Ranting  yang  dipilih  adalah ranting yang tidak berkayu, yang tidak terlalu muda atau  tua,  berwarna  hijau  muda  hingga  hijau,  ±  20 cm  dari  ujung  ranting  sebanyak  0,5  kg.  Ranting kemudian dicuci dengan air mengalir, lalu dipotong kecil-kecil  menggunakan  pisau stainless  steel ukuran 4-5 mm. Kemudian dibawa ke laboratorium menggunakan  bungkus alumunium  foil agar  tidak terkena  cahaya  matahari.  Sampel  yang  telah dipotong  dikeringkan  menggunakan oven suhu 50˚C  selama  24  jam,  ditimbang  dan  dihancurkan menggunakan blender hingga  halus.  Serbuk simplisia  disimpan  dalam  kantung  plastik,  dengan suhu  ruang  yang  tidak  terkena  cahaya  matahari langsung.

## 2.2. Ekstraksi  ranting patah tulang
Serbuk  simplisia  sebanyak  150  g  dibungkus menurut  aturan  menggunakan  kertas  saring  dijahit dan  diberi  tali  pengikat.  Serbuk  simplisia diekstraksi menggunakan alat Soxhlet selama 8 jam dengan pelarut aseton sebanyak 200 ml. Kemudian dipekatkan  menggunakan waterbath dilengkapi dengan  kipas  angin  dengan  suhu  50  °C  selama  2 jam  hingga  pekat.  Ekstrak  diuji  residu  aseton metode  Rothera  menurut  Pudjaatmaka  (2002), untuk  mengamati  aseton  tertinggal.  Kemudian ekstrak  diuji  fitokimia  diantaranya  uji  alkaloida (Marliana,  dan  kawan-kawan.,  2005),  uji  saponin (DepKes RI, 1979), uji flavonoida, uji triterpenoida dan  steroida  (Kristanti,  dan  kawan-kawan.,  2008), uji  tanin  (Marliana,  dan  kawan-kawan.,  2005),  uji glikosida (DepKes RI, 1979).

## 2.3.Preparasi konsentrasi ekstrak untuk larutan uji
Ekstrak  sebanyak  0,5  g  dilarutkan  dalam DMSO  sebanyak  5  ml  (konsentrasi  10%),  Ekstrak sebanyak 1 gr dilarutkan dalam DMSO sebanyak 5 ml  (konsentrasi  20%),  Ekstrak  sebanyak  2  g
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas   66 dilarutkan dalam DMSO sebanyak 5 ml (konsentrasi 40%), Ekstrak sebanyak 3 g dilarutkan dalam  DMSO  sebanyak  5  ml  (konsentrasi  60%), Ekstrak  sebanyak  4  g  dilarutkan  dalam  DMSO sebanyak  5  ml  (konsentrasi  80%),  Ekstrak sebanyak  5  g  dilarutkan  dalam  DMSO  sebanyak  5 ml  (konsentrasi  100%).  Konsentrasi  ekstrak disimpan dalam suhu ruang.

## 2.4.Preparasi mikrobia uji
Propionibacterium  acnes ATCC  ( American Type Culture Collection ) 11827 dari  Laboratorium Mikrobiologi UII dan
Candida albicans ATCC 24433  diperoleh  dari  Prof.  J.K.  Hwang (Korea  Selatan),  berbentuk  kultur  padat  tiga  kali subkultur.  Kedua  kultur  disubkultur  2  minggu sekali  pada  media  agar  miring  TSA  ( Trypthone Soya  Agar )  untuk P.acnes dan  media  agar  miring PDA  ( Potato  Dextrose  Agar )  untuk C.albicans . Pembuatan biakan dilakukan dengan menginokulasikan 1 ose kultur dari agar miring ke dalam  media Nutrient  Broth ,  biakan  diinkubasi  24 jam  pada  inkubator  anaerob  suhu  25  °C  untuk P.acnes dan  incubator  aerob  suhu  37  °C  untuk C.albicans .

## 2.5. Uji potensi antimikrobia ekstrak ranting patah tulang
Biakan  sebanyak  100  µl  diinokulasikan  ke dalam  medium  TSA  dan  PDA  secara pour  plate . Medium diberi lubang sebesar 5 mm menggunakan perforator. Larutan uji ekstrak patah tulang dengan konsentrasi  10,20,40,60,80,100%  dimasukkan  ke dalam  lubang  pertama  masing-masing  petri sebanyak  40  µl  dan  lubang  kedua  diisi  kontrol timol 0,5 % sebanyak 40 µl, dan lubang ketiga diisi DMSO 40 µl. Selanjutnya, diinkubasi anaerob suhu 25°C  selama  24  jam  untuk P.  acnes dan  inkubasi aerob  suhu  37ºC  selama  2  hari  untuk C.albicans . Potensi  antimikrobia  ditunjukkan  dengan  diameter zona hambat dikurangi diameter sumuran. Kekuatan  antimikrobia  ditentukan  dengan  metode David Stout dalam Suryawiria (1978).
2.6. Penentuan  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM) ekstrak ranting patah tulang
Biakan mikrobia sebanyak 0,5 ml
diinokulasikan  pada  4  ml  medium  NB,  kemudian 0,5 ml ekstrak masing-masing konsentrasi dimasukan  dalam  tabung.  Tabung  diinkubasi anaerob  selama  24  jam  suhu  25  °C  untuk P.acnes dan inkubasi aerob suhu 37ºC selama 2 hari untuk C.albicans .  Masing-masing  tabung  diambil  1  ose dan  dilakukan streak  plate pada  media  TSA  dan PDA steril. Nilai KHM ditentukan dari konsentrasi terkecil  yang  menunjukkan  pertumbuhan  bakteri yang paling sedikit.
2.7. Pembuatan  basis  krim  ekstrak  ranting  patah tulang
Bahan  ditimbang  sebagai  berikut: Paraffin liquidium (25  g),  asam  stearat  (14,5  g), trietanolamina  (1,5  g),  lanolin  (3  g),  nipagin  (0,1 g),  nipasol  (0,05  g),  aquadest  (sampai  100  ml). Fase  minyak  ( paraffin  liquidum ,  asam  stearat, adeps  lanae )  dan  fase  air  (nipagin,  nipasol, trietanolamina,  dan  aquadest)  masing-masing dipanaskan  di  atas waterbath pada  suhu  60-70 o C sampai lebur. Campurkan fase air dan fase minyak sekaligus  lalu  diaduk  dalam  mortir  sampai  dingin, sehingga terbentuk masa basis krim yang homogen. Ekstrak  ranting  patah  tulang  yang  konsentrasinya telah  dipilih  paling  baik  dimasukkan  ke  dalam mortir, tambahkan basis krim untuk masing-masing formula  sedikit  demi  sedikit  kemudian  diaduk hingga homogen. Kemudian masing-masing formula disimpan dalam pot krim.

## 2.8.  Uji  potensi  antimikrobia  krim  ekstrak  ranting patah tulang
Dibuat  tiga  lubang  sumuran  diameter  5  mm pada cawan petri yang  telah  berisi TSA dan PDA agar dua lapis. Masing-masing sumuran diisi 50 mg sediaan  krim  ekstrak  ranting  patah  tulang,  50  mg kontrol  basis  krim,  50  mg  krim  Timol  0,5%  untuk P.acnes dan  Ketokonazol  2%  untuk C.  albicans . Kemudian  diinkubasi  secara  anaerob  selama  48 jam  pada  suhu  25  ºC  untuk  bakteri  dan  diinkubasi secara  aerob  pada  suhu  37ºC  selama  3  hari  untuk C.albicans .  Potensi  antimikrobia  ditunjukkan dengan  diameter  zona  hambat  dikurangi  diameter sumuran. Kekuatan antimikrobia ditentukan dengan metode David Stout dalam Suryawiria (1978) .

## 67   SETIORINI, SOEGIHARDJO, ATMOJO

## 3. Hasil dan Pembahasan
Ekstrak  yang    diperoleh  berwarna  hijau kehitaman  pekat  dengan  rendemen  ekstrak  sebesar 4%, serta diperoleh ekstrak seberat 6 g. Pemekatan dilakukan  sampai  aseton  menguap  sempurna, karena  aseton  memiliki  daya  hambat  terhadap mikrobia. Oleh karena itu, dilakukan uji pendahuluan  menggunakan  metode  Rothera  untuk residu aseton sesuai Pudjaatmaka (2002) hasil yang diperoleh  adalah  larutan  berwarna  merah,  yang berarti aseton negatif.
Tabel I . Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Aseton
Ranting Patah Tulang No Golongan Senyawa Hasil 1 Flavonoid + 2 Alkaloida + 3 Steroid / Triterpenoid + (Steroida) 4 Saponin + 5 Tanin + 6 Glikosida +
Skrining  fitokimia  terhadap  ekstrak  aseton ranting  patah  tulang  bertujuan  untuk  mengetahui kandungan  senyawa  fitokimia  dalam  ranting  patah tulang  (Kristianti,  dkk.,  2008).  Metode  yang digunakan  adalah  metode  kualitatif  terhadap komponen  senyawa  kimia  flavonoid,  alkaloida, steroid/triterpenoid,  tanin,  saponin,  dan  glikosida (Wal,  2013;  Absor, 2006;  Toana dan Natsir, 2010; dan  Upadhyay,  dkk.,  2010).  Hasil  skrining fitokimia ekstrak aseton  ranting patah tulang dapat dilihat pada Tabel I.
Seluruh  golongan  senyawa  tersebut  dapat ditemukan  karena  pelarut  aseton  memiliki  sifat semipolar,  sehingga  mudah  melarutkan  senyawa semipolar, maka aseton dinilai sebagai pelarut yang tepat  (Suarsa,  dan  kawan-kawan.,  2011).  Pada pengujian steroid dan triterpenoid dihasilkan warna hijau  yang  berarti  terdapat  steroida  dalam  ekstrak ranting  patah  tulang.  Hal  tersebut  membuktikan bahwa  ranting  patah  tulang  merupakan  sumber steroida  (Wal  dkk.,  2013).  Senyawa  glikosida, saponin,  dan  tanin  juga  memberikan  pengamatan positif  yang  berarti  membuktikan  pernyataan Dalimartha  (2007),  bahwa  ranting  patah  tulang memiliki  kandungan  glikosida,  sapogenin,  dan asam  elagat.  Senyawa-senyawa  ini  merupakan senyawa yang diduga memberikan efek antimikrobia.      Senyawa  yang  terkandung  dalam ekstrak  aseton  ranting  patah  tulang,  merupakan senyawa aktif yang bersifat nonvolatil tidak terurai atau  hilang  (Absor,  2006).  Semua  golongan senyawa ini, yaitu flavonoid dan tanin, mengandung gugus hidroksil aromatis yang bersifat antimikrobia (Wal dkk., 2013).
Ekstrak  yang  sudah  diuji  fitokimianya,  dibuat dalam  beberapa  konsentrasi,  kemudian  dilakukan uji potensi antimikrobia. Potensi antimikrobia yang dihasilkan  adalah  daya  hambat  pada  kedua mikrobia  uji,  karena  zona  yang  dihasilkan  adalah zona  iradikal  (zona  hambat)  bukan  zona  radikal (zona  bunuh)  (Sulistyowaty  dan  Mulyati,  2009). Hasil zona hambat dapat dilihat pada Tabel II.
Tabel 2. Potensi Antimikrobia dari Ekstrak Ranting Patah Tulang terhadap Propionibacterium acnes dan Candida albicans Konsentrasi ekstrak Zona Hambat (mm) P. acnes Zona Hambat (mm) C. albicans DMSO 0 0 Timol 0,5% 13 ± 1,6 13 ± 2,1 10% 7 ± 1,1 2 ± 0 20% 6 ± 1,3 3 ± 0 40% 8 ± 0 3 ± 0,4 60% 11 ± 1,7 5 ± 0,4 80% 14 ± 2 6 ± 0 100% 17 ± 1,6 6 ± 3,5
DMSO  menghasilkan  zona  hambat  0  mm, sehingga  pelarut  tidak  mempengaruhi  proses penghambatan  mikrobia P.acnes dan C.albicans. Ditinjau  dari  keseluruhan  konsentrasi  yang  diuji diperoleh hasil yang paling baik dalam menghambat mikrobia  adalah  konsentrasi  100%.  Menurut Suryawiria  (1978),  kekuatan  antimikrobia  (metode David & Stout) dari ekstrak 100% terhadap P.acnes adalah  antimikrobia  kuat,  sedangkan  terhadap C.albicans memiliki  kekuatan antimikrobia sedang.
Menurut
Parahita (2013), ekstrak dengan konsentrasi  100%  tidak  dimungkinkan  menjadi dosis terapi karena dikhawatirkan dapat mengiritasi kulit  di  tempat  penerapannya,  misalnya  terjadi hiperplasia  (peningkatan  ketebalan  lapisan  keratin pada  epidermis)  (Supriyanto  dan  Luviana,  2010). Menurut Prasad, dan kawan-kawan (2011), aktivitas antimikrobia  pada  ekstrak  ranting  akan  semakin besar  seiring  dengan  tingginya  konsentrasi  ekstrak, sehingga  disimpulkan  bahwa  daya  hambat  terbesar pada  konsentrasi  paling  kecil  yang  dipilih  menjadi konsentrasi paling efektif (Absor, 2006). Konsentrasi ekstrak 10% dipilih sebagai konsentrasi paling kecil yang masih memiliki daya hambat.
Berdasarkan  hasil  ini  diketahui  bahwa  sediaan krim  ranting  patah  tulang  memiliki  potensi antibakteri  lebih  baik  daripada  antijamur.  Hal  ini sesuai penelitian Prasad, dan kawan-kawan. (2011), pada  ekstrak  aseton  ranting  patah  tulang,  bakteri memiliki  daya  hambat  terhadap  bakteri  yang  lebih besar  daripada  jamur.  Menurut  Pelczar  dan  Chan (1986),  dinding  sel  bakteri  terutama  bakteri  Gram positif  relatif  sederhana,  sehingga  memudahkan senyawa  antimikrobia  masuk  ke  dalam  sel  dan sampai pada sasaran untuk bekerja.
Aktivitas  antimikrobia  yang  dihasilkan  oleh krim ekstrak aseton ranting patah tulang
berhubungan  dengan  adanya  senyawa  fitokimia yang dikandung oleh ranting patah tulang (Prasad, dan  kawan-kawan.,  2011).  Ranting  patah  tulang memiliki  senyawa  fitokimia  flavonoida,  asam elagat,  dan  sapogenin  yang  memiliki  sifat antimikrobia (Nurhanifah, 2009 ; Robinson, 1995 ; Upadhyay, dkk.., 2010). Senyawa fenolik (flavonoid  dan  tanin)  dan  saponin  bersifat  larut dalam air dan mengandung gugus fungsi hidroksil (-OH),  sehingga  lebih  mudah  masuk  ke  dalam  sel dan membentuk kompleks dengan protein membran sel (Setyowati, dkk., 2014).
Ekstrak  aseton  patah  tulang    mengandung senyawa    flavonoid  yang    dapat    mengganggu aktivitas  transpeptidase    peptidoglikan    sehingga pembentukan    dinding    sel    terganggu    dan menyebabkan lisis sel. Alkaloida dapat menghambat  pertumbuhan C.  albicans .  Alkaloida bekerja  dengan  menghambat  biosistesis  asam nukleat  (Mc  Charty  dkk.,  1992).  Flavonoida mempunyai aktivitas anti kapang dan khamir pada C.  albicans dengan  mengganggu  pembentukkan pseudohifa  selama  proses  patogenesis  (Cushnie dan Lamb, 2005).
Konsentrasi  ekstrak  aseton  ranting  patah tulang yang paling efektif menghambat pertumbuhan  mikrobia  menurut  hasil  pengujian potensi  antimikrobia  adalah  sediaan  krim  dengan konsentrasi  ekstrak  10%,  dari  konsentrasi  ekstrak 10%  tersebut  dibuat  konsentrasi  untuk  KHM dibuat  krim  dengan  kisaran  5-10%.  Untuk menetapkan  KHM  digunakan    metode  dilusi  cair dan  padat  (Rostinawati,  2009).  Hasil  dari  tabung pengenceran,  kemudian  dilakukan streak  plate pada  agar plate hasil  yang  diperoleh  ditunjukkan pada Tabel III.
Tabel III . Hasil uji KHM 10% 9% 8% 7% 6% 5% K+ K- P.acnes - + + + + + + - C.albicans - - - - - + + -
Keterangan: +
= menunjukkan adanya pertumbuhan mikrobia - = menunjukkan tidak adanya pertumbuhan mikrobia
Pada Tabel III, hasil KHM pada Propionibacterium  acnes adalah  ekstrak  10%  , sedangkan  untuk Candida  albicans adalah  ekstrak 6%,  karena  pada  konsentrasi  tersebut  sudah  tidak terdapat  pertumbuhan  mikrobia,  sehingga  dapat disimpulkan antimikrobia masih dapat menghambat pertumbuhan  mikrobia  uji.  Ekstrak  yang  terbaik dibuat  krim  dengan  tipe  krim  m/a  (minyak/air). Pengujian  daya  antimikrobia  krim  ekstrak  ranting patah tulang ini bertujuan untuk mengetahui ekstrak ranting  patah  tulang  yang  diformulasikan  ke  dalam sediaan mampu menghambat pertumbuhan mikrobia Propionibacterium  acnes dan Candida albicans , sehingga dapat menjadi alternatif pembuatan  sediaan  obat  baru.  Metode  yang digunakan  adalah  metode  dilusi  agar,  karena merupakan sediaan semisolid dan tidak memungkinkan  menggunakan paper  disc karena tidak akan bercampur.
Pada  pengujian  ini,  kontrol  positif  yang digunakan  adalah  timol  0,5%  yang  dibuat  krim untuk Propionibacterium acnes dan krim ketokonazol  2%  untuk Candida  albicans .  Kontrol negatif  yang  digunakan  adalah  basis  krim.  Hasil dari  pengujian  potensi  sediaan  krim  ekstrak  aseton ranting  patah  tulang  yang  bersifat  antimikrobia terhadap P.acnes dan C.albicans ditunjukkan  pada Tabel IV .
Tabel IV. Aktivitas antimikrobia krim ekstrak aseton ranting patah tulang terhadap Propionibacterium acnes P. acnes Zona hambat (mm) Krim 9% 2,7 ± 0,6 Krim 10% 8,3 ± 1,2 Kontrol positif 11,3 ± 1,2 Kontrol negatif 0
Pengamatan  terhadap  sediaan  krim  ekstrak aseton  ranting  patah  tulang  selama  pengujian potensi  antimikrobia  metode  dilusi  agar,  krim tersebut  tidak  mengalami  perubahan  warna,  tidak berbau  tengik,  dan  tetap  homogen,  sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  krim  dalam  keadaan  baik  saat diuji.  Berdasarkan  tabel  5  dan  6,  dapat  diketahui sediaan  krim  ekstrak  aseton  ranting  patah  tulang 10%  efektif  untuk  menghambat  pertumbuhan P.acnes ,  sedangkan  sediaan  krim  ekstrak  aseton ranting  patah  tulang  6%  efektif  untuk  menghambat pertumbuhan C.albicans .  Aktivitas  antimikrobia krim  10%  dan  krim  6%  merupakan  antimikrobia
sedang  menurut  David  &  Stout  karena  hanya memiliki  diameter  antara  5-10  mm  (Suryawiria, 1978).  Pada  pengujian  potensi  antimikrobia terhadap sediaan krim ekstrak aseton ranting patah tulang  ini  sama-sama  menghasilkan  zona  hambat atau zona iradikal.
Tabel V. Aktivitas antimikrobia krim ekstrak ranting patah tulang terhadap Candida albicans C. albicans Zona hambat (mm) Krim 5% 1,5 ± 0,7 Krim 6% 9,5 ± 0,7 Kontrol positif 9,5 ± 0,7 Kontrol negatif 0
Kontrol  positif  dari  krim  timol  0,5% menghambat lebih tinggi dari sediaan krim ekstrak aseton  ranting  patah  tulang  10%,  hal  ini menandakan  bahwa  krim  timol  0,5%  memberikan kemampuan yang lebih baik daripada sediaan krim ekstrak  aseton  ranting  patah  tulang  dalam menghambat  bakteri Propionibacterium  acnes . Hal  ini  dapat  disebabkan  oleh  pengunaan konsentrasi ekstrak yang memberikan daya hambat mimimum.  Selain  itu,  hal  ini  dapat  dipengaruhi oleh  konsistensi  krim  yang  kental  menyebabkan proses  difusi  krim  pada  media  menjadi  lebih lambat  sehingga  zona  yang  terbentuk  kecil (Parahita,  2013). Paraffin  liquidum juga  dapat menjadi  penyebab  kecil  dan  tipisnya  daya  hambat yang dihasilkan karena paraffin liquidum melepaskan ekstrak perlahan sehingga membutuhkan waktu yang lama agar ekstrak dapat terlepas  sempurna  (Smolinske,  1953).  Krim  dapat digunakan  sebagai  kandidat  antijamur  apabila diameter  zona  hambat  kontrol  positif  lebih  kecil daripada  ekstrak,  karena  dianggap  ekstrak  lebih efektif  daripada  pembanding  yang  sudah  beredar dipasaran,  sehingga  dapat  disimpulkan  sediaan krim  ekstrak  aseton  ranting  patah  tulang  tidak dapat  digunakan  sebagai  kandidat  antibakteri karena  diameter  zona  hambat  ekstrak  lebih  kecil daripada  kontrol  positif  (Kusumaningtyas  dkk., 2008).
Kontrol  positif  ketokonazol  2%  mempunyai daya  hambat  yang  sama  seperti  sediaan  krim ekstrak  aseton  ranting  patah  tulang    6%,  hal  ini menandakan  bahwa  ketokonazol  2%  memberikan kemampuan  yang  sama  dengan  sediaan  krim ekstrak aseton ranting patah tulang 6%. Basis krim yang  dipilih  tidak  menghasilkan  daya  hambat,
sehingga dapat disimpulkan basis krim yang dipilih sudah  memenuhi  syarat  karena  tidak  mempunyai daya  antimikrobia.  Hasil  dari  Tabel  V  menyatakan bahwa,  sediaan  krim  ekstrak  aseton  ranting  patah tulang  dapat  digunakan  sebagai  kandidat  antijamur karena  memiliki  diameter  hambat  yang  sama dengan  ketokonazol  2%  (Kusumaningtyas  dkk., 2008).  Dari  hasil  yang  diperoleh,  kandungan senyawa  yang  terkandung  dalamekstrak  aseton ranting  patah  tulang  tidak  rusak  pada  proses pembuatan  sediaan  krim.  Flavonoida  dan  tanin mudah  bercampur  dengan  basis  tipe  minyak-air, sehingga tidak terjadi penggumpalan atau pemisahan fase (Setyowati, dkk., 2014).

## 4. Kesimpulan dan Saran
Sediaan  ekstrak  aseton  ranting  patah  tulang ( Euphorbia  tirucalli Linn.)  memiliki  kemampuan menghambat
pertumbuhan mikrobia uji Propionibacterium acnes
dan Candida albicans .Kadar  ekstrak  aseton  ranting  patah  tulang yang  paling  efektif  untuk  menghambat  kedua mikrobia  uji  adalah  100%,  sediaan  krim  ekstrak aseton  ranting  patah  tulang    10%  merupakan sediaan  krim  ekstrak  aseton  ranting  patah  tulang yang paling efektif menghambat Propionibacterium acnes ,  sedangkan  kadar  6%  merupakan  sediaan krim  ekstrak  aseton  ranting  patah  tulang  yang paling efektif menghambat Candida albicans.
Seluruh pereaksi kimia sebaiknya menggunakan  pereaksi  yang  pro  analisa,  karena pereaksi p.a. memiliki kemurnian yang lebih tinggi, sehingga diharapkan dapat  menunjang keberhasilan hasil uji. Diperlukan pengujian klinis untuk sediaan krim  ekstrak  aseton  ranting  patah  tulang    sesuai dengan  PERKBPOM  No.  13  Tahun  2014  dan dilakukan  pengujian  iritasi  dan  daya  alergi  sediaan krim ekstrak aseton ranting patah tulang.

## Daftar Pustaka
Absor,  U.  2006.  Aktifitas  Antibakteri  Tanaman  Patah  Tulang (Euphorbia  tirucalli. Linn ).    Skripsi. Institut  Pertanian Bogor. Bogor.
Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan  Republik  Indonesia.
2008. Acuan Sediaan Herbal. BPOM RI, Jakarta. Corwin,  E.J,.  2008. Buku  Saku  Patofisiologi .  Penerbit  EGC, Jakarta.
Costa,  A.F.,  2002. Farmacognosia.  In:  Fundacao  Calouste Gulbenkian . Lisboa, 788–790.
Cushnie T.P. and A..J. Lamb. 2005. Antimicrobial activity  of flavonoida . J. Nat. Prod. 26(5): 343 – 356.
Dalimartha, S. 2007. Atlas Tanaman Obat Indonesia . Puspa
Swara, Jakarta. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1979.
Farmakope Indonesia Edisi III . Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.    1986. Cara Pembuatan    Simplisia. Departemen  Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. pp.105-125. Distantina,  S.  2009. Penanganan  Bahan  Padat .  S1  Teknik Kimia  Fakultas  Teknik.  Universitas  Sebelas  Maret, Surakarta.
Gaspari,  A.A.  dan  Trying,  S.K.  2008. Clinical  and  Basic Immunodermatology. Springer, USA. Graham-Brown,  R.  dan  Burns,  T.  2005. Dermatologi . Penerbit Erlangga Medical Series, Jakarta.
Kristianti,  A.  N,  N.  S.  Aminah,  M.  Tanjung,  dan  B. Kurniadi.    2008. Buku  Ajar  Fitokimia .  Surabaya: Jurusan  Kimia  Laboratorium  Kimia  Organik  FMIPA Universitas Airlangga. 47-48.
Kusumaningtyas, E., Widiati, R.R., dan Gholib, D. 2008. Uji Daya  Hambat  Ekstrak  dan  Krim  Ekstrak  Daun  Sirih ( Piper betle ) terhadap Candida albicans dan
Trichophyton mentagrophytes . Naskah Seminar Teknologi Peternakan dan Veteriner . 805-812.
Marliana,  S.D.,  Suryanti,  V.,  dan  Suyono.  2005.  Skrining Fitokimia  dan  Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis Komponen  Kimia  Buah  Labu  Siam  ( Sechium  edule Jacg.  Swartz.)  dalam  Ekstrak  Etanol. Biofarmasi . 3(1):26-31.
McCharty P.J., T.P. Pitts, Geewanda, M.K. Borges dan S.A. Pomponi.  1992.  Antifungal  activity  of  meridine,  a natural product from the marine sponge Corticum sp . J. Nat. Prod. 55(11): 1664 – 1668. Nurhanifah. 2009. Karakterisasi Simplisia, Skrining Fitokimia  dan  Isolasi  Senyawa  Flavonoida  dari  Daun Tanaman Ekor Naga ( Rhaphidophora pinnata Schott.). Skripsi . Universitas Sumatera Utara.
Parahita,  M.L.  2013.  Daya  Antibakteri  Minyak  Atsiri  Daun Kemangi ( Ocimum basilicum L.) sebagai Zat Aktif dan Sediaan  Gel  terhadpa Staphylococcus  epidermidis ATCC  12228  dan Bacillus  substilis ATCC  6633. Skripsi . Universitas Sanata Dharma.
Pelczar,  M.J.,  dan  Chan,  E.C.S.  1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi volume ke-12 . UI Press, Jakarta.
Prasad,  S.H.K.R.  2011.  Efficacy Euphorbia  tirucalli Towards mikrobisidal Activity Againts Human Patogen. International  Journal  of  Pharma  and  Bio Sciences.
Pudjaatmaka,  A.H.  2002. Kamus  Kimia .  Balai  Pustaka, Jakarta.
Robinson,  T.  1995. The    Organic    Constituens    of    Higher Plants. 6th  edition. diterjemahkan oleh Padmawinata. Kosasih. ITB, Bandung.
Rostinawati,  T.  2009.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Bunga  Rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  terhadap Escherichia  coli , Salmonella  thypi dan Streptococcus aureus dengan Metode Difusi Agar. Skripsi, Universitas Padjajaran, Jatinagor.
Setyowati,  H.,  Hanifah,  H.Z.,  dan  Nugraheni,  Rr.  P.  2014. Krim  Kulit  Buah  Durian  ( Durio  zibethinus L.)  sebagai
Obat  Herbal  Pengobatan  Infeksi  Jamur Candida albicans . Jurnal Farmasi , Semarang.
Shabnum,  S.  dan  Wagay,  M.G.  2011.  Essential  Oil Composition  of Thymus  vulgaris L.  and  their  Uses. Journal of Research & Development. 11: 83-94. Smolinske,  S.C.  1953. Handbook  of  Food,  Drug,  and Cosmetic Excipients . CRC Press. America.
Suarsa,  I.  W.,  Suarya,  P.  dan  Kurniawati,  I.  2011.  Optimasi Janis  Pelarut  dalam  Ekstraksi  Zat  Warna  Alam  dari Batang  Pisang  Kepok  ( Musa  paradisiaca L.  cv kepok ) dan  Batang  Pisang  susu  ( Musa  paradisiaca L.  cv susu ). Jurnal Kimia . 5(1): 72-80.
Sukmasari,  M.  2003.  Analisis  kadar  sari  air  daun  kumis kucing  ( Orthosiphon  stamineus )  dengan  perbedaan kehalusan. Prosiding  Temu  Teknis  Fungsional  non Peneliti. Puslitbangnak, Bogor. 116-119.
Sulistyowati,  D.,  dan  Mulyati,  S.  2009.  Uji  Aktifitas Antijamur  Infusa  Daun  Jambu  Mete  ( Anacardium occidentale , L) terhadap Candida albicans .
BIOMEDIKA . 2(1): 47-51.
Supriyanto  dan  Luviana,  L.A.I.  2010.  Pengaruh  Pemberian Getah  Tanaman  Patah  Tulang  secara  Topikal  terhadap Gambaran Histopatologis dan Ketebalan Lapisan Keratin Kulit. Seminar Pendidikan Biologi FKIP UNS . 431-439.
Suryawiria,  U.  1978. Mikroba  Lingkungan .  Ed.  ke-  2.  ITB, Bandung.
Toana,  M.H.  dan  B.  Nasir.  2010.  Studi  Bioaktivitas  dan Isolasi  Senyawa  Bioaktif  Tanaman Euphorbia  tirucalli L. (Euphorbiaceae) sebagai Insektisida Botani Alternatif. Agroland Journal. 17(1):47-55.
Upadhyay, B., Singh, K.P., Kumar, A. 2010. Ethno-medical,
Phytochemical, and Antimicrobial Studies of Euphorbia tirucalli L. Journal of Phytology . 2 (4) : 65- 77.
Wal,  Ankita,  Pranay.  W.,  Nishi  G.,  Garima  V.,  dan  Dr.R.S Srivasta.  2013.  Medical  Value  of Euphorbia  tirucalli . International  Journal  of  Pharmaceutical  &  Biological Archives . 4 (1): 31-40.
Wardhani,  Q.R.  2005.  Isolasi  Fraksi  Aktif  Antimikrobia Herba  Patah  Tulang  ( Euphorbia  tirucalli )  terhadap Candida albicans . Skripsi . Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Yenti,  R.,  Ria,  A.,  dan  Linda,  A.  2011.  Formulasi  Krim Ekstrak  Etanol  Daun  Kirinyuh  ( Eupatorium  odoratum L)  untuk  Penyembuhan  Luka. Majalah  Kesehatan PharmaMedika Journal. 3(1): 227-230.