## DAUN  KOPASANDA  SEBAGAI  TANAMAN  ALTERNATIF PENANGKAL RADIKAL BEBAS
St. Maryam 1 , Widyawati 2 , Uni Angreni Putri 3 , Dian Lestari 4 Email : st.maryam@umi.ac.id 1,2,3,4 Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia, Indonesia

## ABSTRACT

## ARTICLE INFO
Kopasanda  leaves  (Chromolaena  folium)  are  rich  in  flavonoids,  including polyphenolic  compounds  that  are  closely  related  as  substances  that  have  the antioxidant  capacity  to  ward  off  free  radicals.  Polyphenols  in  kopasanda  include catechins, epicatechins, procyanidins and anthocyanidins. Kopasanda contains total phenols  and  a  higher  antioxidant  capacity  than  wine  or  tea.  So  it  is  said  that Kopasanda  has  high  levels  of  antioxidants.  The  total  antioxidant  potential  of  the sample is determined by the ability to reduce iron (Fe) as a measure of "antioxidant strength".  This  study  aims  to  examine  the  antioxidant  activity  and  levels  of flavonoid  compounds  in  kopasanda  leaves  (Chromolaena  folium),  which  will  be analyzed using the FRAP method. The FRAP test was  carried out by changing the blue color of FeII, a colorless tripyridyltriazine compound from FeIII that works to donate electrons. This method is widely used to analyze and determine the levels of antioxidants and flavonoid compounds in a plant. In the test, the absorbance results and  the  standard  concentration  of  quercetin  as  a  standard  for  antioxidant  levels, from the linear regression results obtained the average value of the ethanol extract sample  of  kopasanda  leaf  (Chromolaena  folium)  of  16.914  mgQE/g  extracts, meaning that in each gram of extract it is equivalent to 16.914 mg quercetin.
Keywords: Kopasanda leaves; Quartz; Free Radical Antidote; FRAP method ABSTRAK DOI: 10.24252/kesehatan.v14i1.13365
Daun  kopasanda  (Chromolaena  folium)  kaya  dengan  flavonoid  diantaranya adalah  senyawa  polifenol  yang  erat  kaitannya  sebagai  zat  yang  mempunyai kapasitas  antioksidan  dalam  menangkal  radikal  bebas.  Polifenol  dalam kopasanda diantaranya adalah katekin, epikatekin, prosianidin dan antosianidin. Kopasanda mengandung total fenol dan  kapasitas antioksidan yang lebih tinggi dibandingkan anggur maupun teh. Sehingga dikatakan kopasanda memiliki kadar antioksidan cukup tinggi. Potensial total antioksidan dari sampel ditentukan oleh kemampuan  mereduksi  besi  (Fe)  sebagai  ukuran  “kekuatan  antioksidan”. Penelitan ini bertujuan untuk menguji aktivitas antioksidan serta kadar senyawa flavonoid  pada  daun  kopasanda  (Chromolaena  folium),  yang  akan  dianalisis dengan menggunakan metode FRAP. Pengujian FRAP melalui perubahan warna biru FeII senyawa tripyridyltriazine dari FeIII yang tidak berwarna yang bekerja menyumbangkan  elektron.  Metode  ini  banyak  digunakan  untuk  menganalisis serta  menenukan  kadar  antoksidan  dan  senyawa  flavonoid  pada  suatu tumbuhan. Pada pengujian didapatkan hasil absorbansi dan konsentrasi standar kuarsetin  sebagai  standar  untuk  kadar  antioksidan,  dari  hasil  regresi  linear didapatkan  nilai  rata-rata  dari  sampel  ekstrak  etanol  daun  kopasanda (Chromolaena folium) sebesar  16,914   mgQE/g  ekstrak,  artinya dalam setiap gram ekstrak setara dengan 16,914  mg kuarsetin.
Kata kunci :
Daun kopasanda; Kuarseti; Penangkal Radikal Bebas; Metode FRAP

## Pendahuluan
Radikal  bebas  merupakan  salah  satu  bentuk  senyawa  reaktif,  yang  secara  umum  diketahui sebagai senyawa yang memiliki elektron yang tidak berpasangan di kulit terluarnya (1) . Radikal bebas  berperan  penting  pada  terjadinya  arterosklerosis,  penyakit  jantung  koroner,  stroke, kanker, gagal ginjal, dan proses penuaan (2)(3).
Meskipun manusia juga dapat memproduksi senyawa-senyawa yang dapat berperan aktif dalam menanggulangi  radikal  bebas,  seperti  enzim  SOD  (superoksida  dismutase),  glutathione,  dan katalase,  namun  jumlahnya  seringkali  tidak  mencukupi,  oleh  sebab  itu  dibutuhkan  asupan makanan  yang  banyak  mengandung  antioksidan  dan  flavonoid    seperti  vitamin  C,  E, betakaroten,  maupun  antioksidan  fitokimia  dari  golongan  fenolik,  sehingga  dapat  melindungi dari  serangan  radikal  bebas.  Sumber  antioksidan  alami  ini  dapat diperoleh  dari  buah-buahan dan sayur-sayuran (2) .
Salah  satu  tanaman  yang  banyak  mengandung  antioksidan  dan  flavonoid  ditemukan  dalam tumbuhan daun kopasanda ( Chromolaena odorata. ), salah satunya pada bagian daun. Penelitian
sebelumnya terhadap ekstraksi daun kopasanda ( Chromolaena odorata.) menunjukkan adanya aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  dalam  proses in  vivo dan in  vitro selain  itu  dalam  daun kopasanda ( Chromolaena odorata) yang kaya akan kandungan tannin, fenol, flavonoid, saponin, dan steroid (4) .
Metode  FRAP  ( Ferric  Reducing  Antioxidant  Power )  adalah  salah  satu  metode  yang  secara langsung mengukur antioksidan dalam bahan. Benzie & Strain mengemukakan bahwa metode FRAP  adalah  metode  yang  digunakan  untuk  menguji  antioksidan  dalam  tumbuh-tumbuhan. Kelebihan  metode  FRAP  ini  yaitu  metodenya  murah,  reagennya  mudah  disiapkan  dan  cukup sederhana  dan  cepat.  Metode  ini  dapat  menentukan  kandungan  antioksidan  total  dari  suatu bahan  berdasarkan  kemampuan  senyawa  antioksidan  untuk  mereduksi  ion  Fe 3+ menjadi  Fe 2+ sehingga  kekuatan  antioksidan  suatu  senyawa  dianalogikan  dengan  kemampuan  mereduksi dari senyawa tersebut (5) .
Daun  kapasanda  dinyatakan  sebagai  bahan  yang  kaya  dengan  flavonoid  diantaranya  adalah senyawa  polifenol  yang  erat  kaitannya  sebagai  zat  yang  mempunyai  kapasitas  antioksidan dalam  menangkal  radikal  bebas.Polifenol  dalam  kopasanda  diantaranya  adalah  katekin, epikatekin,  prosianidin  dan  antosianidin.  Kopasanda  mengandung  total  fenol  dan    kapasitas antioksidan yang lebih tinggi dibandingkan anggur maupun teh. Sehingga dikatakan kopasanda memiliki kadar antioksidan cukup tinggi (4) .
Oleh  karena  itu  penelitian  ini  dimaksudkan  untuk  dapat  mengetahui  kadar  antioksidan  yang terkandung dalam Daun Kopasanda dengan metode FRAP ( Ferric Reducing Antioxidant Power ) yang merupakan metode untuk mengukur kadar antioksidan dari suatu sampel ekstrak.

## Material dan Metode

## 1. Pengambilan sampel
Sampel  yang  akan  dianalisis  dalam  penelitian  ini  adalah  daun  Kopasanda  ( Chromolaena odorata ) yang diperoleh dari daerah Pare-pare Sulawesi Selatan.

## 2. Pengolahan Sampel
Sampel  daun  Kopasanda  ( Chromolaena  odorata )  dibersihkan  dari  kotoran  yang  melekat  pada daun  menggunakan  air  mengalir  lalu  dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan.  Setelah  kering diblender, lalu siap untuk diekstraksi dengan metode maserasi.

## 3. Ekstraksi
Simplisia daun Kopasanda dalam bentuk serbuk sebanyak 300 g dimasukan kedalam wadah toples. Ditambahkan etanol 96% hingga simplisia tersebut terendam, dibiarkan selama 3 hari dalam bejana tertutup dan terlindung dari cahaya sambil berulang-ulang diaduk. Setelah 3 hari simplisia disaring dan ampasnya direndam lagi dengan cairan penyari yang baru, hal ini dilakukan sebanyak 3 kali. Hasil penyarian yang didapat kemudian dikumpulkan dan diuapkan hingga diperoleh ekstrak etanol yang kental.

## 4. Penyiapan pada sampel ekstrak etanolik
Ekstrak  etanol  ditimbang  dengan  3  replikasi  yaitu  masing-masing  5  mg.  Masing-masing  ekstrak dilarutkan dengan etanol 96% sebanyak 5 mL. kemudian dihomogenkan.

## 5. Penyiapan Larutan Kurva Baku
a. Penyiapan Larutan Standar
Larutan stok 1000 ppm dibuat dengan melarutkan 5 mg kuarsetin  yang dilarutkan dengan etanol 96% hingga batas labu ukur 5 mL. Selanjutnya dari larutan stok 1000 ppm dipipet 0,5 mL  dimasukkan  dalam  labu  takar  5  mL  dengan  etanol  96%  hingga  batas  tanda  (100ppm). Kemudian diambil masing-masing 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; dan 0,7 mL dan ditempatkan dalam labu ukur 5 mL yang berbeda dan diencerkan dengan etanol 96%  hingga 5 mL dan dihomogenkan. Konsentrasi larutan standar 100 ppm asam askorbat yakni  6, 8, 10, 12, dan 14 ppm.
b. Penyiapan Pada Larutan
a) Larutan Dapar Fosfat 0,2 M pH 6,6
Larutan disiapkan dengan menimbang 2 gram NaOH dan dilarutkan dengan aquades bebas CO 2 hingga tepat 250 mL dalam labu takar. Kemudian sebanyak 6,8 gram KH 2 PO 4 yang dilarutkan dengan aquades bebas CO 2 250 mL dalam labu takar. Kemudian dipipet sebanyak  16,4  mL  NaOH  dimasukkan  dalam  labu  takar  dan  dicampurkan  50  mL KH 2 PO 4 , selanjutnya diukur sampai pH 6,6 dan dicukupkan dengan aquades bebas CO 2 hingga 200 mL
b) Larutan Kalium Ferrisianida 1%
Larutan disiapkan dengan melarutkan 1 gram kalium ferrisianida dalam aquades dan diencerkan dalam labu takar 100 mL
c) Larutan FeCl 3 0,1%
Larutan disiapkan dengan melarutkan 0,1 gram FeCl 3 dalam aquades dan diencerkan dalam labu takar 100 mL
d) Larutan asam trikloroasetat (TCA) 10%
Larutan  disiapkan  dengan  melarutkan  10  gram  TCA  dalam  aquades  dan  diencerkan dalam labu takar 100 mL

## 6. Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode FRAP
Sebanyak 5 mg ekstrak dilarutkan dalam 5 mL etanol 96%, lalu dipipet 1 mL, ditambahkan 1 mL dapar  fosfat  0,2  M  (pH  6.6)  dan  1  mL  K 3 Fe(CN) 6 1%  setelah  itu,diinkubasi  selama  20  menit dengan  suhu  50°C.  Setelah  diinkubasi  ditambahkan  1  mL  TCA  lalu  disentrifuge  dengan kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit.  Setelah  disentifuge  dipipet  1  mL  lapisan  bagian  atas kedalam  tabung  reaksi,  dan  ditambahkan  1  mL  aquades  dan  0,5  mL  FeCl 3 0,1%.  Larutan didiamkan selama 10 menit dan diukur absorbansinya pada 720 nm.Sebagai blangko digunakan campuran  larutan  oksalat.  Kurva  kalibrasi  dibuat  menggunakan  larutan  kuarsetin  dengan berbagai konsentrasi. Nilai FRAP dinyatakan dalam mg equivalen kuarsetin/gr ekstrak.

## 7. Analisis Data
Analisis  data  yang  digunakan  pada  penentuan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun Kopasanda ( Chromolaena odorata ), dilakukan pada panjang gelombang maksimum 752,29 nm pada spektrofotometer UV-Vis sehingga didapatkan nilai berupa absorbansi. Setelah didapatkan nilai  absorbansi  maksimum,  sampel  kemudian  dihitung  total  antioksidan  dengan  cara memasukkan dalam persamaan regresi kurva standar asam askorbat dengan persamaan linear y = bx + a.

## Hasil dan Pembahasan
Daun  kapasanda  dinyatakan  sebagai  bahan  yang  kaya  dengan  flavonoid  diantaranya  adalah senyawa  polifenol  yang  erat  kaitannya  sebagai  zat  yang  mempunyai  kapasitas  antioksidan dalam  menangkal  radikal  bebas.  Polifenol  dalam  kopasanda  diantaranya  adalah  katekin, epikatekin,  prosianidin  dan  antosianidin.  Kopasanda  mengandung  total  fenol  dan    kapasitas antioksidan yang lebih tinggi dibandingkan anggur maupun teh. (Alisi, dkk., 2011).
Pada  penelitian  ini  dilakukan  pengujian  terhadap  daun  kopasanda  yang  bertujuan  untuk menentukan  kapasitas  antioksidan  yang  ada  dalam  sampel  ekstrak  daun  kopasanda.  Dimana daun kopasanda ini diketahui memiliki kandungan flavonoid polifenol yang dapat berkhasiat sebagai  antioksidan.  Oleh  karena  itu  dilakukan  pengujian  terhadap  ekstrak  daun  kopasanda untuk  memastikan  kandungan  flavonoid  serta  menentukan  kadar  flavonoid  polifenol  yang terdapat dalam ekstrak tersebut.
Beberapa  metode  yang  telah  dikembangkan  untuk  mengukur  aktivitas  antioksidan  suatu sampel salah satunya dengan menggunakan metode FRAP ( Ferric Reducing Antioxidant Power ). Pengujian  FRAP  telah  digunakan  untuk  menentukan  aktivitas  antioksidan  karena  sederhana dan  cepat  serta  metode  ini  dapat  digunakan  untuk  mengukur  kapasitas  antioksidan  yang terdapat  dalam  suatu  ekstrak  tanaman.  Disamping  itu,  reaksi  yang  direproduksi  linear    yang berkaitan  pada    konsentrasi  molar    dari  antioksidan  dan  reagen  yang  digunakan  cukup sederhana serta tidak menggunakan alat khusus untuk menghitung total antioksidan.
Larutan      standar      yang      digunakan    adalah  kuarsetin.  Kuarsetin  digunakan  sebagai pembanding  karena  berfungsi  sebagai  antioksidan  sekunder  yaitu  menangkap  radikal  bebas dan  mencegah  terjadinya  reaksi  berantai.  Kuarsetin  termasuk      golongan      antioksidan sekunder      yang  mampu          menangkal          berbagai          radikal  bebas  ekstraseluler.  Hal  itu dikarenakan kuarsetin  mempunyai gugus  hidroksi bebas  yang  bertindak sebagai   penangkap radikal  bebas (6) .
Pengukuran  aktivitas  antioksidan  dari  daun  kopasanda  menggunakan  uji  FRAP  ini  dengan larutan  kuarsetin  sebagai   standar  atau  pembanding  dalam  penentuan  kapasitas  antioksidan. Penambahan  dapar  posfat  pH  6,6  digunakan  untuk  mempertahankan  keseimbangan  pH dalam  larutan.  Adapun  penambahan  TCA  bertujuan  agar  kompleks  kalium  ferrisianida mengendap. Penambahan FeCl3  juga bertujuan untuk membentuk  kompleks  berwarna  hijau sampai    biru  (biru  berlin).  Daya  reduksi  merupakan  indikator  potensi  suatu  senyawa antioksidan.  Daya  reduksi  dalam  hal  ini  diukur  dari  kemampuan  suatu  antioksidan    untuk mengubah  Fe3+    menjadi  Fe2+ (6) .
Senyawa      yang     mempunyai     daya  reduksi        kemungkinan       dapat       berperan        sebagai antioksidan   karena   dapat   menstabilkan   radikal dengan mendonorkan elektron atau atom hidrogen sehingga senyawa radikal berubah menjadi lebih stabil.

## Tabel 1. Hasil Pengukuran Absorbansi Larutan Standar Kuarsetin pada Panjang Gelombang
752,29 nm Konsentrasi (ppm) Absorbansi (y) 6 0,278 8 0,378 10 0,442 12 0,555 14 0,628 16 0,752
Pada  pengukuran  kadar  antioksidan  total  dalam  ektrak  etanol  daun  kopasanda  ini, menggunakan spektrofotometri UV-Vis karena memiliki panjang gelombang yang berkisar dari 380-780  nm.  Digunakan  alat  instrumen  tersebut  untuk  mendapatkan  nilai  absorbansi  atau kadar  antioksidan  yang  diperoleh  dari  hasil  persamaan  y  =  a+bx.  Adapun  dari  hasil running panjang  gelombang  untuk  standar  kuarsetin  didapatkan  absorbansi  tertinggi  pada  panjang gelombang 752,29 nm.
Tabel 2. Hasil Pengukuran Absorbansi Larutan Ekstrak Etanol Daun Kopasanda ( Chromolaena odorata ) pada Panjang Gelombang 752,29 nm Ekstrak Etanol Daun Kopasanda (5 ppm) Absorbansi (y) 752,29 Aktivitas Antioksidan (mgK/g ekstrak) Replikasi 1 0,745 16,605 Replikasi 2 0,789 17,609 Replikasi 3 0,744 16,528 Rata-rata 16,914
Pada analisis data untuk hasil absorban yang didapatkan, dilakukan perhitungan  regresi  dari konsentrasi    (x)    dengan  nilai  absorbansi  (y)  larutan  pembanding  kuarsetin    diperoleh persamaan  yaitu  y  =  0,0438x + 0,0177 dengan nilai R2 = 0,997 dan untuk menghitung nilai aktivitas     antioksidan     dimasukkan     nilai absorbansi sampel kedalam persamaan tersebut. Nilai FRAP   dinyatakan   dalam   mg   equivalen   kuarsetin/gr ekstrak.
Hasil  pengukuran  absorbansi  dan  nilai  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun  kopasanda ( Chromolaena  odorata )  tercantum  pada  table  hasil  penelitian  sehingga  didapatkan  nilai  rata- rata  dari  sampel  ekstrak  etanol  daun  kopasanda  ( Chromolaena  odorata )  sebesar    16,914 mgK/g   ekstrak,   artinya dalam setiap gram ekstrak setara dengan 16,914  mg kuarsetin.

## Kesimpulan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa:
1. Ekstrak etanol daun kopasanda ( Chromolaena odorata ) dapat digunakan sebagai penangkal radikal bebas (antioksidan).
2. Ekstrak etanol daun kopasanda memiliki aktivitas dalam menangkal radikal bebas dimana mengandung kadar flavonoid total 16,914  mgK/g  ekstrak.

## Daftar Pustaka
1.  Winarsi H. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Yogyakarta: Kanisus; 2007.
2.  Kumalaningsih S. Antioksidan Alami. Surabaya: Trubus Agrisarana; 2006.
3.  Youngson  R.  Antioksidan:  Manfaat  Vitamin  C  dan  E  Bagi  Kesehatan,  alih  bahasa  Susi Purwoko. Jakarta: Arcan; 2005.
4.  Alisi  C.  Free  Radical  Scavenging  and  In-vitro  Antioxidant  Effects  of  Ethanol  Extract  of  the Medicinal Herb Chromolaena odorata Linn. Br J Pharm Res. 2011 Jan 10;1:141–55.
5.  Halvorsen BL, Holte K, Myhrstad MCW, Barikmo I, Hvattum E, Remberg SF, et al. A systematic screening of total antioxidants in dietary plants. J Nutr. 2002 Mar;132(3):461–71.
6.  Kim J. Radical Scavenging Capacity and Antioxidant Activity of the E Vitamer Fraction in Rice Bran. J Food Sci. 2005 Apr 1;70:C208–13.