ANALISIS KORELASI ANTARA FLAVONOID TOTAL DENGAN AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAN FRAKSI DAUN GEDI HIJAU ( Abelmoschus maniho t L.)
Josua A.T. Suoth 1) , Sri Sudewi 1) , Defny S. Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
One chemichal component that is often reported to have pharmacological activity against treatment or  prevention  of  disease  is  flavonoids  which  can  be  found  in  gedi  hijau  leaves.  Staphylococcus aureus  is  the  main  cause  of  infection  in  humans  which  can  cause  various  severe  infections.  This study aims to determine the total flavonoids content, minimum inhibitory concentration  (MIC). To determine  the  correlation  between  total  flavonoids  and  antibacterial  activity  of  extract  and fractions (Abelmoschus manihot L.), The method of this study was done by obtaining the results of total  flavonoid  content,  testing  the  antibacterial  activity  by  dilution  using  a  positive  control  of ciprofloxacin. The results showed the highest total flavonoid content in ethyl acetate fraction, and the best antibacterial activity in ethyl acetate fraction. Correlation between total flavonoid content from  extract  and  fraction  (Abelmoschus  manihot  L.)  with  antibacterial  activity  against Staphylococcus aureus bacteria on ethyl acetate fraction, n-hexane fraction, and ethanol extract at a  concentration  of  1000  µg  /  mL  had  good  values  with  kneeling  significance  values  according  to 0.012  (p  <0.05),  0.034  (p  <0.05),  and  0.023  (p  <0.05)  with  total  flavonoid  content  affecting  how much  antibacterial  activity  is  40%  for  ethyl  acetate  fraction,  35%  fraction  n  -heksane  and  33% ethanol extract.
Keywords : Antibacterial, Total Flavonoids, Staphylococcus aureus, Abelmoschus manihot L.

## ABSTRAK
Salah satu komponen kimia yang sering dilaporkan memiliki aktivitas farmakologi terhadap pengobatan atau pencegahan  penyakit  adalah  flavonoid  yang  dapat  ditemukan  pada  daun  gedi hijau. Staphylococcus  aureus merupakan  kuman  penyebab  utama  infeksi  pada  manusia  yang  dapat  menyebabkan  berbagai  infeksi  berat. Penelitian  ini  bertujuan  menentukan  kandungan  flavonoid  total,  aktivitas  antibakteri  dan  korelasi  antara flavonoid  total  dengan  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  dan  fraksi  ( Abelmoschus  manihot L.).  Metode penelitian  ini  dilakukan  dengan  mendapatkan  hasil  kandungan  flavonoid  total,  uji  aktivitas  antibakteri dengan  cara  dilusi  menggunakan  kontrol  positif  ciprofloxacin.  Hasil  penelitian  didapatkan  kandungan flavonoid total tertinggi pada fraksi etil asetat, dan aktivitas antibakteri paling bagus pada fraksi etil asetat. Korelasi antara kandungan flavonoid total dari ekstrak dan fraksi ( Abelmoschus manihot L.) dengan aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus pada  fraksi  etil  asetat,  fraksi  n-heksane,  dan  ekstrak etanol  pada  konsentrasi  1000  µg/mL  memiliki  nilai  yang  baik  baik  dengan  nilai  signifikansi  bertutut-turut 0,012  (p  <0,05),  0,034    (p  <0,05),  dan  0,023  (p  <0,05)  dengan  kandungan  flavonoid  total  mempengaruhi seberapa besar aktivitas antibakteri yaitu 40% untuk fraksi etil asetat, 35% fraksi n-heksane dan 33% ekstrak etanol.
Kata kunci : Antibakteri, Flavonoid Total, Staphylococcus aureus , Abelmoschus manihot L.

## PENDAHULUAN
Salah satu komponen kimia yang sering dilaporkan  memiliki  aktivitas  farmakologi terhadap  pengobatan  atau  pencegahan  penyakit adalah  flavanoid.  Senyawa  flavanoid  terdapat pada semua tubuh tumbuhan yaitu akar, batang, daun,  buah,  biji  dan  bunga.  Beberapa  tanaman obat  yang  mengandung  flavanoid  memiliki aktivitas  antioksidan,  antibakteri,  antivirus, antiradang, antialergi, antikanker dan antibakteri (Ipandi, 2016).
Angka  kejadian  penyakit  infeksi  terus meningkat  dalam  beberapa  tahun  terakhir. Penyakit  infeksi  yang  disebabkan  bakteri banyak  menyerang  penduduk  di  negara berkembang, termasuk Indonesia.
Staphylococcus  aureus merupakan  kuman penyebab  utama  infeksi  pada  manusia  yang dapat menyebabkan berbagai infeksi berat yang terjadi  baik  di  komunitas  maupun  rumah  sakit (Dellyna, 2014).
Staphylococcus aureus merupakan salah satu  bakteri  patogen  penting  yang  berkaitan dengan virulensi  toksin,  invasif, dan ketahanan terhadap  antibiotik.  Ajizah et  al .  (2007) menyatakan  bahwa  bakteri Staphylococcus aureus dapat  menyebabkan  terjadinya  berbagai jenis  infeksi  mulai  dari  infeksi  kulit  ringan, keracunan  makanan  sampai  dengan  infeksi sistemik. Infeksi yang terjadi misalnya keracunan  makanan  karena Staphylococcus , salah satu jenis faktor virulensi yaitu Staphylococcus enterotoxin (Ses). Gejala keracunan  makanan  akibat Staphylococcus adalah  kram  perut,  muntah-muntah  yang kadang-kadang di ikuti oleh diare (Brown et al , 2005).
Salah satu tumbuhan  yang mengandung senyawa  flavanoid  dan  digunakan  untuk pengobatan  tradisional  adalah  daun  gedi ( Abelmoschus manihot L.), sinonimnya ( Hibiscus  manihot L.),  suku  malvacae.  Di
Sulawesi  Utara  daun  gedi  telah  lama  dikenal dan  dimanfaatkan  sebagai  sayuran,  dengan nama  sayur  yondok  (Mandey,  2013) . Mamahit dan  soekamto  (2010)  melaporkan  bahwa masyarakat  juga  memanfaatkan  sebagai  obat tradisional  dengan  cara  merebus  tanpa  garam untuk  mengobati  penyakit  ginjal,  maag, kolesterol, demam dan rematik.
Gedi ( Abelmoschus manihot L.) merupakan  tanaman  tropis  famili  Malvacea. Sebagian kecil penduduk Indonesia memanfaatkan bagian daun gedi sebagai bahan pangan.  Sri  Sudewi et  al (2017)  melaporkan terdapat  kandungan  flavonoid  total  dan  fenolik total  serta  aktivitas  penangkal  radikal  bebas dalam  ekstrak  daun  gedi  yang  di  ambil  dari Kota  Minahasa,  Minahasa  Utara,  Minahasa Selatan,  Minahasa  Tenggara,  Bitung,  Manado, Tomohon,  dan  Kotamobagu.  Daun  gedi memiliki  flavonoid  total  terbesar  pada  sampel dari Minahasa Tenggara sebesar 38,104%.

## METODOLOGI PENELITIAN Alat
Alat-alat  ukur  analitis  yang  digunakan ialah  Spektrofotometri  UV-VIS  (Shimadzu 00780),  Komputer  pengolah  data  (Acer  Aspie ES  11),  Alat-alat  gelas,  Vortex  (Mixer Hwashin), Blender (Phillips) Rotary Evaporator (RV 10 digital V), alat maserasi (Pyrex), neraca analitik  (Mettler  Toledo  tipe  PL  303,  Dragon 205), Rotary evaporator (Heidolph tipe Heizbad WB),  waterbath,  corong  pisah  (Pyrex),    pipet ukur dengan berbagai ukuran (Pyrex), autoklaf, LAF  (ESCO  Class  II  BSC),  incubator (Memmert), mikropipet.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  dipakai  ialah  simplisia kering  daun  gedi  hijau  (daerah  Minahasa Tenggara),  etanol  96%),  etanol  p.a,    n-heksane (Merck), etil asetat (Merck), aquadest,
Staphylococcus  aureus  ATCC  25923  yang diperoleh  dari  Laboratorium  Mikrobiologi farmasi unsrat, Standar kuersetin, Nutrient Agar (NA),  Nutrient  Broth  (NB),  DMSO,  Antibiotik Ciprofloxacin,  Larutan  standar  McFarland, NaCl, AlCl3 (Merck), CH 3 COOH (Merck)

## Prosedur Kerja
1. Pengambilan sampel
Sampel  daun  Gedi  Hijau  ( Abelmoschus manihot L . )  diambil  dari  Minahasa  Tenggara. Selanjutnya sampel daun gedi hijau ( Abelmoschus  manihot L . )  dibuat  menjadi bentuk  simplisia.  Kemudian  simplisia  dibuat menjadi ekstrak menggunakan metode maserasi.

## 2. Ekstraksi
Sebanyak  75  gram  serbuk  simplisia dimasukkan  ke  dalam  maserator  375  mL  dan kemudian  ditambahkan  etanol  96%.  Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi selama 24 jam dengan beberapa kali pengocokan. Ekstrak hasil maserasi  kemudian  diuapkan  dengan  rotary evaporator hingga terbentuk ekstrak kental.

## 3. Fraksinasi
Sebanyak  5  g  ekstrak  kental  sampel dilarutkan  dengan  25  mL  air.  Larutan selanjutnya  difraksinasi  dengan  50  mL  n- heksan.  Dikocok  dalam  labu  pemisah  dan didiamkan  selama  10-15  menit  hingga  terdapat dua  lapisan  air  (air  pada  lapisan  bawah  dan  n- heksan  pada  lapisan  atas).  Kedua  lapisan  yang terbentuk kemudian dipisahkan. Proses penambahan n-heksan pada lapisan bawah (air) yang  sudah  dipisahkan  diulangi  dua  kali. Lapisan  atas  (n-heksan)  yang  terbentuk  selama tiga  kali  fraksinasi  digabungkan  dan  disebut dengan  fraksi  n-heksan.  Bagian  air  sisa  dari proses  fraksinasi  yang  terjadi  sama  dengan proses  fraksinasi  n-heksan  kemudian  difraksi lebih  lanjut  dengan  etil  asetat.  Proses  yang
terjadi  sama  dengan  proses  fraksinasi  dari  n- heksan.  Lapisan  etil  asetat  yang  nantinya  akan terbentuk selama tiga kali fraksinasi digabungkan  dan  disebut  sebagai  fraksi  etil asetat dan sisa lapisan aquadest disebut sebagai fraksi aquadest.

## 4. Dilusi
Untuk  Masing-masing  tabung  yang  telah disiapkan  dimasukan  1,4  ml  Nutrien  Broth (NB)  lalu  ditambahkan  0,5  mL  larutan  uji. Kemudian tiap-tiap tabung ditambahkan 0,1 mL suspensi  bakteri S.Aureus dan  di vortex. Sebelum  diinkubasi,  setiap  tabung  dilusi diamati secara seksama dan liat absorbansi pada spektrofotometer UV-VIS pada panjang gelombang  600  nm.  Kemudian  seluruh  tabung diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  18-24  jam. Setelah  inkubasi,  setiap  tabung  dilusi  kembali diamati  secara  seksama  dan  diliat  kembali absorbansinya  pada  spektrofotometer  UV-VIS dengan panjang gelombang 600 nm. Dibandingkan  hasil  pengamatan  kekeruhan antara  sebelum  dan  sesudah  proses  inkubasi serta  dibandingkan  nilai  absorbansi  sebelum dan sesudah proses inkubasi, adanya peningkatan  nilai  absorbansi  setelah  inkubasi menunjukan  adanya  pertumbuhan  bakteri, sedangkan  nilai  yang  tetap  dan  berkurang absorbansinya  setelah  inkubasi  menunjukan tidak  adanya  pertumbuhan  bakteri  sehingga dapat  dianggap  pada  konsentrasi  ini  adalah KHM  (Konsentrasi  Hambat  Minimum)  yang dapat  menghambat  pertumbuhan.  Selanjutnya untuk  membuktikan  apakah  sampel  memiliki kemampuan membunuh, maka dilakukan penentuan KBM (Konsentrasi Bunuh Minimal) yaitu  dengan  mengambil  1  ose  dari  masing- masing  tabung  kemudian  diinokulasi  pada media  Nutrient  Agar dalam  cawan  petri  dan diinkubasi  selama  18-24  jam  pada  suhu  37 o C. Replikasi  dilakukan  sebanyak  3  kali.  Setelah
diinkubasi  diamati  jika  ada  pertumbuhan bakteri  berarti  sampel  bersifat  bakteriostatik, dan  apabila  sampel  tidak  menunjukan  adanya pertumbuhan  bakteri  maka  dapat  disebut sampel  bersifat bakterisidal.

## 5. Pengukuran Kadar Flavonoid Total
Total  flavonoid  dari  ekstrak  dan  fraksi- fraksi  daun  gedi  hijau  dihitung  berdasarkan metode kolorimetri  yang dilakukan oleh Chang et  al.  (2002).  Setiap  0,2  mL  larutan  sampel ditambahkan 3,7 mL etanol 95%, 0,1 mL AlCl 3 10%,  0,1  mL  kalium  asetat  1  M  dan  ditam bahkan  aquades  hingga  tanda  batas,  lalu dicampur  hingga  homogen  dan  didiamkan selama  waktu  inkubasi  yang  paling  optimal. Kemudian  diukur  absorbansinya  pada  panjang gelombang  maksimum.  Kadar  flavonoid  total dihitung ekuivalen dengan jumlah (g) kuersetin/100  g  sampel.  Penentuan  nilai flavonoid  akhir  dilakukan  berdasarkan  formula yang  dikembangkan  oleh  Pan et al .  (2012), yaitu:
Flavonoid Total = ( ) =
Keterangan :
Y  =  konsentrasi  flavonoid  contoh  yang dihitung dengan menggunakan
persamaan  kurva standard (mg g -1 )
N = Faktor pengenceran.
V = volume Sampel (mL).
W = berat Sampel (g).

## 6. Analisis Data
Analisis  data  dengan  menggunakan program  Microsoft  Excel  dan  spss.  Data  yang diperoleh  kemudian  dianalisis  menggunakan metode One Sample Kolmogorov Smirnov test dengan  taraf  kepercayaan  95%  untuk  melihat apakah  data  yang  diperoleh  tiap  kelompok terdistribusi normal  atau  tidak.  Apabila terdistribusi  normal,  setelah  itu  dilihat  korelasi
antara keduanya menggunakan korelasi Pearson dan regresi linear sederhana.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Determinasi sampel dilakukan di Laboratorium  Taksonomi  Tumbuhan  Jurusan Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi, Manado.  Determinasi  tumbuhan  merupakan proses  dalam  menentukan  nama  atau  jenis tumbuhan secara spesifik. Determinasi tumbuhan bertujuan untuk memastikan kebenaran  identitas  dari  tanaman  yang  akan digunakan  dalam  penelitian  sehingga  pada  saat pengambilan  sampel  tidak  terjadi  kesalahan. Hasil determinasi menunjukkan bahwa tanaman yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah Abelmoschus manihot L.

## Preparasi Sampel
Daun  gedi  hijau  yang  telah  diambil  dari daerah  Minahasa  Tenggara,  disortasi  basah untuk  menghilangkan  tanah,  kerikil,  rumput- rumputan, bagian tanaman lain atau bagian lain yang  tidak  digunakan  dan  bagian  daun  yang rusak.  Kemudian  dicuci  untuk  menghilangkan kotoran  dan  getah  yang  menempel  pada  daun gedi  hijau  dan  dikeringkan  diruangan  terbuka dengan panas ruangan selama 5 hari. Pengeringan  ini  bertujuan  untuk  mengurangi kadar  air  didalam  daun,  dari  tumbuhnya  jamur sehingga mendapatkan sampel dengan senyawa kimia  yang  tidak  mudah  rusak,  dan  dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama.

## Ekstraksi
Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi selama 24 jam dengan beberapa kali pengocokan.  Metode  maserasi  ini  digunakan karena  memiliki  keuntungan  dimana  prosedur dan peralatannya sederhana dan mudah (Agoes,
0.785 0.64 0.66 0.68 0.7 0.72 0.74 0.76 0.78 0.8 400 405 410 415 420 425 430 435 A b so rb an si Panjang gelombang (nm) Panjang Gelombang maksimum
2007), serta dapat menghindari adanya perubahan  kimia  terhadap  senyawa-senyawa tertentu oleh karena pemanasan.
Ekstraksi  merupakan  langkah  awal  dalam memisahkan  komponen  bioaktif.  Ekstraksi dengan pelarut sering digunakan untuk mengekstraksi  senyawa  bioaktif  tanaman. Ekstraksi  antioksidan  tanaman  tergantung  pada kelarutan  komponen  antioksidan  dari  tanaman dalam pelarut (Spigno et al ., 2010).
Maserasi  dilakukan  selama  24  jam  dengan beberapa  kali  pengocokan  dengan  tujuan  agar senyawa  yang  terdapat  dalam  sampel  dapat tertarik,  kemudian  dilakukan  penyaringan  dan didapatkan  filtrat  dan  residu,  selanjutnya  filtrat yang  di  dapat  akan  diuapkan  dengan  di masukan kedalam oven dengan suhu 40 o c untuk menguapkan  pelarut  serta  tidak  merusak senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak, hingga diperoleh ekstrak kental. Setelah proses ekstraksi  didapatkan  hasil  rendemen  dari ekstrak  daun  gedi  hijau  yaitu  6,80%  dari  250 gram berat sampel daun gedi hijau.

## Fraksinasi
Fraksinasi  dilakukan  dengan  menggunakan teknik partisi yaitu menggunakan corong pisah, teknik  partisi  ini  adalah  cara  yang  sederhana. Partisi adalah proses pemisahan untuk memperoleh  komponen  zat  terlarut  dari campurannya dalam padatan dengan menggunakan  pelarut  yang  sesuai  ( Kwon, 2001)  dimana  prinsip  dari  partisi  adalah digunakannya  dua  pelarut  yang  tidak  saling bercampur  untuk  melarutkan  zat-zat  yang  ada dalam  ekstrak.  Pada  proses  ini  zat  yang  ada dalam  ekstrak  akan  berpindah  atau  terdistibusi kedalam fasenya sendiri sesuai dengan kelarutannya terhadap fase tersebut dua pelarut yang  tidaks  aling  bercampur  dimasukan kedalam corong pisah beserta ekstrak dan akan dikocok  setelah  itu  didiamkan  beberapa  saat
setelah  itu  akan  terbentuk  2  lapisan  dimana pelarut  yang memiliki  kelarutan  lebih  besar pada  lapisan  bawah  dan  pelarut  yang  memiliki kelarutan lebih kecil berada di atas.
Operating  Time dan  Penentuan  Panjang Gelombang Maksimum
a. Operating Time
Menurut hasil yang didapat dari pengukuran operating time waktu ke 1   hingga ke 20 menunjukan angka yang stabil atau tetap. Operating time merupakan waktu yang dibutuhkan  oleh  larutan  untuk  mencapai absorbansi  yang  konstan  dimana  pada  rentan waktu  ini  adalah  saat  dimana  larutan  memiliki tingkat  absorbansi  yang  baik  dan lebih optimal dibanding  dengan  waktu  yang  memiliki absorbansi yang berubah-ubah.
b. Penetuan Panjang
Gelombang

## Maksimum
Pada  penelitian  ini  panjang  gelombang maksimum  dilakukan  untuk  mengetahui  pada serapan berapa zat yang dibaca oleh spektrofotometer  UV  secara  optimum,  pada penelitian  ini  hasil  scanning  dilakukan  pada rentang  panjang  gelombang  400-500  nm dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV- Vis.  Sesuai  dengan  hasil  yang  didapat  pada panjang  gelombang  415  nm  mendapat  hasil absorbansi  senilai  0,78  dengan  menggunakan
Gambar 1. Scanning panjang gelombang maksimum
konsentrasi 40 ppm.

## Penentuan Kurva Baku Linearitas
Standar  kurva  baku  yang  dilakukan dalam  penelitian  ini  dibuat  dengan  beberapa seri  konsentrasi  10,  20,  30,  40,  dan  50  ppm dengan  hasil  absorbansi  yang  didapat  pada pengukuran panjang gelombang 415 nm.
Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan bisa  disimpulkan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi  yang  digunakan  maka  semakin tinggi  pula  absorbansi  yang  diperoleh.  Hasil kurva baku kuersetin yang diperoleh diplotkan antara konsentrasi dan absorbansinya, sehingga  diperoleh  persamaan  regresi  linear yaitu  y  =  0,0135x  -  0,0152  dengan  nilai  R 2 yang diperoleh sebesar 0,9885. Hasil persamaan  kurva  kalibrasi  kuersetin  ini mempunyai  hubungan  yang  linear  atau berbanding  lurus  antara  konsentrasi  yang dibuat dengan nilai absorbansi yang didapatkan,  serta  pengukuran  ini  sesuai dengan  kriteria  yang  dapat  di  terima  yaitu  ≥ 0,98 yang dapat digunakan sebagai pembanding  untuk  menentukan  konsentrasi senyawa flavonoid total (Basset, 1994).

## Penentuan Kandungan Flavonoid Total
Penetapan  kandungan  flavonoid  total pada  Ekstrak  dan  Fraksi  Daun  Gedi  Hijau  ini dilakukan  perhitungan  dengan  menggunakan persamaan  Regresi  Linear  Kurva  Baku  yang telah  dibuat  yaitu  y  =  0,0135x  -  0,0152  yang kemudian nilai x akan di masukan dengan nilai rata-rata  dari  hasil  pengukuran  absorbansi ekstrak  dan  fraksi  yang  dibuat,  dan  didapatlah hasil  kandungan  flavonoid  total  pada  ekstrak etanol  sebesar  3,837  ±  0,033 mg  QE/g,  fraksi n-heksan  4,214  ±  0,01  mg  QE/g,  fraksi  etil asetat 5,026 ± 0,025 mg QE/g dan untuk fraksi etanol sebesar 2,435 ± 0,007 mg QE/g dan dari hasil  perhitungan  yang  didapatkan  diatas  dapat diketahui  bahwa  nilai  kandungan  flavonoid total  paling  tinggi  adalah  dari  fraksi  etil  asetat dengan nilai kandungan flavonoid yaitu 5,026 ± 0,025  mg  QE/g,  dimana  hal  ini  juga membuktikan  bahwa  etil  asetat  mempunyai kemampuan  lebih  baik  dalam  mengikat senyawa-senyawa  pada  Daun  Gedi  hijau terutama flavonoid dibandingkan dengan pelarut lainnya.

## Tabel 1. Data Kandungan Flavonoid Total
y1 y2 ̅ (y- ̅ ) 2 Konsentrasi (x)
Kandungan flavonoid total (ekstrak ± SD mg QE/g) Ekstrak Etanol 0,349 0,415 0,382 0,000049 18,666 ppm 3,837 ± 0,033 mg QE/g Fraksi N- Heksane 0,411 0,432 0,421 0,0001 32,296 ppm 4,214 ± 0,01 mg QE/g Fraksi Etil Asetat 0,480 0,531 0,505 0,000625 38,518 ppm 5,026 ± 0,025 mg QE/g Fraksi Etanol 0,244 0,230 0,237 0,001089 29,407 ppm 2,435 ± 0,007 mg QE/g
Uji Aktivitas Antibakteri Dalam pengujian aktivitas antibakteri  dari  Daun  Gedi  hijau digunakan bakteri Staphylococcus aureus yang adalah bakteri gram positif serta  menggunakan  pengujian  dengan cara  dilusi  cair  dan  digunakan  seri konsentrasi  sebesar  1000  µg/mL,  500 µg/mL,  dan  terakhir  250  µg/mL. Sebagai  kontrol  positif  dari  uji  ini digunakan  Ciprofloxacin  penggunaan antibiotik  ini  karena  Ciprofloxacin memiliki  spektrum  yang  luas  dan bersifat  bakteriostatik,  sedangkan  untuk kontrol negatif digunakan pelarut
DMSO,  Uji  MIC  ( Minimum  Inhibitory Concentration ) dengan pengukuran nilai OD ( optical density) yang didapatkan dengan melihat nilai absorbansi  yang  di  lihat  pada  panjang gelombang  600  nm  sebelum  dan sesudah  masa  inkubasi  selama  24  jam, untuk  melihat  adanya  hambatan  pada pertumbuhan  bakteri  dapat  dilihat  dari nilai  OD  yang  didapat  dan  kemudian akan  diolah  menjadi  ∆OD  yaitu  nilai OD  setelah  inkubasi  dikurangi  dengan nilai  OD  sebelum  inkubasi,  untuk  hasil dari  ∆OD  positif  berarti  tidak  adanya aktivitas  antibakteri  dan  menunjukan jumlah  sel  bakteri  yang  meningkat sedan kan  untuk  nilai  ∆OD  negatif berarti  adanya  aktivitas  antibakteri  atau turunnya jumlah sel bakteri.
Korelasi Antara Kandungan Flavonoid  Total  dengan  Aktivitas Antibakteri Untuk korelasi dari kandungan flavonoid  total  dan  aktivitas  antibakteri
bisa didapatkan dari hasil uji nilai KBM yang  di  olah  dengan  uji  Kolmogrov  – Smirnov,  lalu  dilanjutkan  dengan  uji Korelasi  Pearson  dan  setelah  itu  uji Regresi  Linear  Sederhana.  Pada  uji yang  pertama  yaitu  uji  Kolmogrov  – Smirnov  data  nilai  kbm  diuji  untuk melihat apakah data tersebut terdistribusi normal atau tidak hasil data yang  baik  /  terdistribusi  normal  adalah nilai  signifikansi  >  0,05.  Pada  hasil  uji Kolmogrov  –  Smirnov  untuk  ekstrak etanol  daun  gedi  hijau  didapat  nilai 0,149,  untuk  fraksi  n-heksane  0,200, fraksi  etil  assetat  0,228,  dan  fraksi etanol  sebesar  0,145.  Berdasarkan  hasil diatas  semua  nilai  berada  diatas  atau  > 0,05  yang  berarti  nilai  terdistribusi normal dan bisa dilanjutkan uji korelasi pearson. Untuk nilai uji korelasi pearson ekstrak etanol mendapat nilai 0,023,fraksi  n-heksane 0,034, fraksi  etil asetat  0,012,  dan  utnuk  fraksi  etanol mendapat  nilai  sebesar  0,036  dimana semua hasil signifikansi lebih kecil dari 0,05  (p<0,05)  yang  berarti  bahwa terdapat  hubungan  antara  konsentrasi dari  ekstrak  dan  fraksi  –  fraksi  daun gedi  hijau  terhadap  jumlah  koloni, untuk  besaran  korelasi  koefisien  antara konsentrasi  dan  koloni  bakteri,  fraksi etil  asetat  mendapat  hasil  -0,444,  fraksi n-heksane  -0,344,  dan  ekstrak  etanol  - 0,300  dimana  tanda  negatif  berarti berlawanan  arah,  yakni  semakin  besar kandungan  flavonoid  totalnya  semkain kecil  nilai  KBMnya.  Dengan  kata  lain semakin  besar  kandungan  flavonoid totalnya,  semakin  besar  pula  aktivitas antibakterinya (Dellyna, 2014).
Selanjutnya  berdasarkan  dari  hasil  data yang  didapat  dari  KBM  (Kadar  Bunuh Minimum)  pada  konsentrasi 1000 µg/Ml untuk etil asetat, fraksi n-heksane dan  ekstrak  etanol  memiliki  nilai  yang tidak  jauh  berbeda  dan  pada  hasil  uji statistik  untuk  melihat  apakah  nilai berbeda  secara  nyata  atau  tidak,  dan pada uji statistic didapatkan bahwa nilai tidak  berbeda  secara  nyata  sehingga dapat  disimpulkan  hasil  KBM  antara fraksi  etil  asetat,  fraksi  n-heksane,  dan ekstrak  etanol  dikategorikan  memiliki nilai  KBM  yang  baik,  menurut  Galih, (2014)  hal  ini  disebabkan  karena  pada kandungan  fraksi  etil  asetat,fraksi  n- heksane  dan  ekstrak  etanol  dari  daun gedi hijau terdapat beberapa kandungan metabolit  sekunder  selain  flavonoid seperti tannin, yang memiliki
mekanisme penghambatan pertumbuhan bakteri  masing-masing.  Pada  tannin
mampu  mengkerutkan  dinding  sel bakteri  sehingga  dapat  mengganggu permeabilitas sel. Terganggunya permeabilitas  sel  bakteri  menyebabkan sel  tersebut  tidak  dapat  melakukan aktivitas hidup
sehingga pertumbuhannya  terhambat  atau  mati.
Pada hasil uji Regresi Linear Sederhana pada  koefisien  nilai Adjusted  R  Square nilai  terbesar  didaptkan  oleh  etil  asetat yaitu  0,400  berarti  sebesar  40% kandungan flavonoid total atau senyawa flavonoid  memiliki  aktivitas  antibakteri dan  sisanya  60%  adalah  senyawa  lain yang juga memiliki aktivitas antibakteri, berikutnya  ada  fraksi  n-heksane  0,349 atau  sebesar  35%  kandungan  total flavonoid atau  senyawa  flavonoid
memiliki  aktivitas  antibakteri  dan  65% adalah senyawa lain yang juga memiliki aktivitas  antibakteri,  untuk  ekstrak etanol  dengan  nilai  sebesar  0,334  atau sebesar  33%  kandungan  flavonoid  total atau senyawa flavonoid memiliki aktivitas  antibakteri  dan  67%  sisanya adalah senyawa lain yang juga memiliki aktivitas  antibakteri.  Berdasarkan  hasil diatas dapat disimpulkan bahwa ekstrak dan  fraksi-fraksi  dari  daun  gedi  hijau memiliki  aktivitas  antibakteri,  serta untuk  fraksi  etil  asetat  memiliki  nilai lebih  tinggi  dari  fraksi  dan  ekstrak lainnya  di  karenakan  sesuai  dengan (Dellyna,  2014)  kandungan  flavonoid total  yang  lebih  besar  akan  mempunyai efek  aktivitas  antibakteri  yang  lebih besar  juga,  hal  ini  juga  membuktikan bahwa  kandungan  flavonoid  memiliki peran penting pada aktivitas antibakteri.

## KESIMPULAN
1. Kandungan  flavonoid  total  dari  ekstrak dan  fraksi Abelmoschus  manihot L. Diperoleh  nilai  untuk  ekstrak  etanol sebesar  3,837  ±  0,033  mg  QE/g,  fraksi n-heksane  sebesar  4,214  ±  0,01  mg QE/g,  fraksi  etil  asetat  sebesar  5,026  ± 0,025  mg  QE/g  dan  untuk  fraksi  etanol sebesar 2,435 ± 0,007 mg QE/g.
2. Menurut hasil pada uji dilusi menunjukkan  bahwa  jumlah  rata-rata koloni    yang  paling  sedikit  terdapat pada  fraksi  etil  asetat,  fraksi  n-heksane dan  ekstrak  etanol  dengan  konsentrasi yang sama yaitu 1000 µg/mL
3. Korelasi  antara  kandungan  flavonoid total dari ekstrak dan fraksi Abelmoschus manihot L. dengan
aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri
Staphylococcus aureus
dianalisis menggunakan program SPSS dan menunjukkan  hasil  dari  uji  kolmogrov smirnov  dimana  data  hasil  uji  kbm memiliki nilai signifikansi yang terdistribusi  normal  dengan  nilai  fraksi etil asetat yaitu 0,228 (x>0,05), fraksi n- heksane  0,200  (x>0,05),  dan  ekstrak etanol  0,149  (x>0,05)    yang  berarti signifikan  dan  dilanjutkan  dengan  uji Korelasi  Pearson  memperoleh  hasil signifikan  fraksi  etil  asetat,  fraksi  n- heksane,  dan  ekstrak  etanol  secara berturut-turut 0,012 (p <0,05), 0,034  (p <0,05), dan 0,023 (p <0,05) . Kandungan flavonoid total
mempengaruhi  seberapa  besar  aktivitas antibakteri  yaitu sebesar 40% untuk etil asetat,  35%  untuk  fraksi  n-heksane  dan 33% untuk ekstrak etanol.

## SARAN
Disarankan untuk melakukan penelitian lebih lanjut tentang bagaimana korelasi aktivitas
antioksidan  dari  kandungan  flavonoid total  ekstrak  dan  fraksi  daun  gedi  hijau ( Abelmoschus manihot L.).

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes.  G.  2007. Teknologi  Bahan  Alam .
Penerbit ITB. Bandung.
Ajizah,  A.,  Thirhana,  Mirhanuddin.  2007,
Potensi Ekstrak Kayu Ulin ( Eusideroxylon  zwageri T  et  B) dalam  Menghambat  Pertumbuhan
Bakteri Staphylococcus aureus
Secara in  vitro . Bioscientiae. 4:37- 42.
Basset,  J.,  R.  C.  Denney,  G.H  Jeffrey,  J. Mendhom.,  1994. Buku  Ajar  Vogel
Kimia
Analisis
Kuantitatif Anorganik . EGC, Jakarta. Brown,  D.F.J.,  Edwards,  D.I.,  Hawkey, P.M., Morrison, D., Ridgway,
G.L.,Towner,  K.J.,  Wren,  M.W.D. 2005.  Guidelines  for  the  laboratory diagnosis  and  susceptibility  testing of
methicillin-resistant
Staphylococcus aureus (MRSA), Journal  Antimicrob  Chemother ,  56, 1000-1018.
Dellyna,  F.  2014.  Analisis  Korelasi  Antara
Kadar  Flavonoid  Dengan  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  dan Fraksi-Fraksi Daun Kersen
(Muntingia  calabura  L.)  Terhadap Staphylococcus aureus. Yogyakarta : Universitas Islam Indonesia.
Ipandi,  I.,  Triyasmono,  L.,  Prayinto,  B., 2016.  Penentuan  Kadar  Flavonoid total  dan  Aktivitas  Antioksidan
Ekstrak Etanol daun Kajajahi ( leucosyke capitella Wedd. ). Program Studi  Farmasi  Universitas  Lambung Mangurat Banjarmasin. Jurnal Farmasi . 3(1). Hal. 95-96. Kwon,  Y.  2001. Handbook  of  Essential Pharmacokinetics,
Pharmacodynamics and Drug Metabolism  for  Industrial  Scientists. (secondary).  New  York:  Kluwer Academic/Plenum Publishers.
hlm. 44.
Mamahit  L.P.,  Soekarno,N.H.,  2010.  Satu senyawa  organic  yang  diisolasidari daun  gedi  ( Albemoschus  manihot L. Medik).  Sulawesi  utara: Chemistry Progress , Vol. 3 No. 1, P. 45.
Mandey, J. S. 2013. Daun Gedi (Abelmoschus  manihot(L)  Medik) Asal Sulawesi Utara Sebagai Sumber Bahan Pakan Ayam Pedaging . Disertasi. Program Pascasarjana,
Universitas Brawijaya. Malang. Pan  G,  G  Yu,  C  Zhu.,  J  Qiao.  2012. Optimization of Ultrasound-
assisted Extraction (UAE) of Favonoids  Compounds  (FC)  from Hawthorn  Seed  (HS). Ultrasonics Sonochemistry 19: 486-490.
Sudewi,  S.,  Lolo,  W.,  Rifai,  Y.,  Rante,  H.
2017. Analisis Finger Print Tanaman
Gedi ( Abelmoscus manihot L.)
dengan  metode  Spektroskopi  FTIR dan  Kemometrik  serta  Aktivitas Penagkal  Radikal  Bebas. Laporan Penelitian  Kemenristekdikti 2017. LPPM. UNSRAT.
Spigno,  G.,  Tramelli,  L.,  De  Faveri,  D.M.
(2010).  Effects  of  extraction  time,
temperature and solvent on
AGRITECH,  Vol.  35,  No.  3,
Agustus 2015 287 concentration and antioxidant  activity  of  grape  marc phenolics.
Journal of Food
Engineering 81: 200-208