## EFEKTIVITAS MINYAK ATSIRI KULIT JERUK BERGAMOT
( Citrus bergamia) DALAM MASKER GEL PEEL-OFF SEBAGAI ANTI BAKTERI Staphylococcus aureus ATCC 29213
Submitted : 8 November 2017 Edited : 19 Desember 2017
Accepted : 29 Desember 2017
Intan Martha Cahyani, Retno Artiyani
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi “Yayasan Pharmasi Semarang” Email : intanmartha20@gmail.com

## ABSTRACT
Staphylococcus aureus is a bacterial strain that causes acne. Linalool and limoneneis are the ingredients of Citrus bergamia essensial oil which has antibacterial activity Staphylococcus aureus. This research aimed to examine the effective consentration of Citrus bergamiaessensial oil as antibacterial Staphylococcus aureus ATCC 29213. Citrus bergamia essensial oil is made in series a concentration of 1%, 2% and 3% for testing of antibacterial activity using the pitting diffusion method. Based on the test results of antibacterial activity gained an average diameter of  inhibitory  zone  Citrus  bergamiaessensial  oil  in  a  row  1,151  cm;  1,529  cm;  1,683  cm.  The statistically  test  results  showed  significant  difference  in  the  antibacterial  activity  of  Citrus bergamiaessensial  oil  in  concentrations  1%,  2%  and  3%  to  the  growth  of  Staphylococcus aureus  ATCC  29213.  Citrus  bergamiaessensial  oil  has  effective  concentration  3%  as stapgylocuccus aureus antibacterial and made peel-off gel mask  formula. Test of antibacterial activity  obtained  resistibility  zone  diameter  1,259  cm.  The  result  of  t-test  indicated  that  the Citrus bergamiaessensial oil peel-off gel mask has significant affect on antibacterial activity of Citrus bergamiaessensial oil.
Keywords : Citrus bergamia essensial oil, antibacterial affectivity, peel-off gel mask.

## PENDAHULUAN
Jerawat  merupakan  penyakit  kulit yang  umum  terjadi  pada  remaja,  walaupun jerawat tidak mengancam jiwa, namun dapat memengaruhi kualitas hidup dengan memberikan  efek  psikologis.  Faktor  utama dalam pembentukan jerawat adalah peningkatan  produksi  sebum,  peluruhan keratinosit, pertumbuhan bakteri dan inflmasi.  Bakteri  penyebab  jerawat  salah satunya Staphylococcus  aureus (1 ) .  Obat antijerawat  yang  saat  ini  banyak  dipasaran merupakan  senyawa  kimia  dari  golongan antibiotik.  Penggunaan  antibiotik  dapat menyebabkan  terjadinya  resistensi  pada penggunaan  jangka  panjang.  Upaya  untuk mengantisipasi terjadinya hal tersebut
dilakukan dengan cara peningkatan pemanfaatan bahan alam sebagai
antijerawat.
Jeruk  bergamot  merupakan  tanaman penghasil  minyak  atsiri  yang  mempunyai aktivitas  sebagai  antibakteri.  Mekanisme kerja  minyak  atsiri  kulit  jeruk  bergamot dengan merusak dinding sel dan menghambat  pertumbuhan  serta  mematikan bakteri  dengan  mengganggu  terbentuknya dinding  sel (2 ) .  Minyak  atsiri  kulit  jeruk bergamot mampu menghambat pertumbuhan dan  membunuh  bakteri Staphylococcus aureus .  Kandungan  senyawa  aktif  pada minyak  atsiri  kulit  jeruk  bergamot  yang dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri adalah limonen dan linalool (3 ) . Minyak atsiri
kulit  jeruk  bergamot  diformulasikan  dalam bentuk  sediaan  untuk  mencegah  terjadinya jerawat salah satunya masker gel peel-off . Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  perlu dilakukan  penelitian  untuk  menentukan konsentrasi  efektif  minyak  atsiri  kulit  jeruk bergamot dalam menghambat bakteri Staphylococcus aureus ATCC 29213.

## BAHAN DAN METODE
Alat
Alat  yang  digunakan  adalah  LAF ( Laminar  Air  Flow ),  otoklaf  ( All  American type B0011062) cawan petri ( pyrex ), tabung reaksi  ( pyrex ),  pinset,  ose  bulat,  lampu spiritus,  mikropipet, yellow  tip,  blue  tip , inkubator  ( Binder ),  jangka  sorong, cylinder cup.

## Bahan
Bahan yang digunakan adalah minyak atsiri  kulit  jeruk  bergamot  (diperoleh  dari CV.Lansida), bakteri Staphylococcus aureus
ATCC  29213  (diperoleh  dari  Fakultas
Kedokteran
Universitas Diponegoro),
Nutrien  Broth (Merck), Nutrien  Agar (Oxoid), Mannitol  Salt  Agar ,  kontrol  positif (klindamisin HCl), kontrol negatif (DMSO). Minyak atsiri kulit jeruk bergamot dianalisis menggunakan metode GCMS di
Laboratorium  Teknik  Kimia  Universitas Negeri Semarang.

## Sterilisasi alat dan media
Sterilisasi  menggunakan  otoklaf  pada suhu 121 o C selama 15 menit dengan tekanan 1  atm  perhitungan  waktu  dilakukan  setelah mencapai suhu 121 o C.
Pembuatan  agar  miring  NA  ( Nutrient Agar)
Pembuatan  media  NA  dilakukan dengan  menimbang  sebanyak  2,8  gram, dimasukkan  dalam beaker  glass ,  kemudian ditambahkan  aquadest  hingga  mencapai volume  100  ml.  Larutan  dipanaskan  di  atas
penangas  air  sampai  larut  dan  disterilkan dengan otoklaf pada  suhu  121 o C  selama  15 menit.  Media  NA  yang  telah  disterilkan didinginkan  sampai  suhu  50 o C  kemudian dituang  pada  tabung  reaksi  yang  telah  steril sebanyak  5  ml  kemudian  diletakkan  miring dan  dibiarkan  pada  suhu  kamar  hingga memadat ( 4) .

## Pembuatan  media  agar  NB  ( Nutient Broth)
Pembuatan  media  NB  dilakukan dengan  menimbang  sebanyak  3,25  gram dalam  250  ml  aquadest,  media  diaduk–aduk sampai  larut,  kemudian  disterilkan  dengan otoklaf suhu 121°C selama 15 menit ( 4) .
Pembuatan  media  MSA  ( Manitol  Salt Agar)
Pembuatan  media  MSA  dilakukan dengan menimbang 111,1 g MSA dilarutkan dalam  1  liter  air,  dipanaskan  sambil  diaduk hingga  larut.  Setelah  itu  disterilkan  dengan otoklaf  pada  suhu  121 o C  tekanan  1  atm selama 15 menit ( 4) .
Pembuatan suspensi bakteri Staphylococcus aureus ATCC 29213 Pembuatan  biakan  murni  bakteri Staphylococcus aureus ATCC 29213 diambil  menggunakan  ose  yang  telah disterilkan  kemudian  ditanam  dalam  media miring  NA  ( Nutrient  Agar )  kemudian diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24  jam. Bakteri  yang  telah  diinkubasi  di  dalam media NA ( Nutrient Agar ) diambil
menggunakan  ose  yang  telah  disterilkan kemudian ditanam pada media NB ( Nutrient Broth ) kemudian diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam, kemudian dibaca absorbansinya  menggunakan  spektrometer
UV-Vis pada panjang gelombang 625 nm.
Uji  aktivitas  antibakteri  dengan  metode difusi sumuran (5) Sebanyak 10 ml media MSA
( Mannitol  Salt  Agar )  dituang  kedalam cawan  petri  steril  dan  dibiarkan  memadat sebagai  lapisan  dasar,  kemudian  diletakkan 5 cylinder  cup dengan  jarak  yang  tidak terlalu  berdekatan.  Suspensi Staphylococcus aureus sebanyak 3 μl dimasukkan ke dalam erlenmeyer  yang  berisi  20  ml  media  MSA, kemudian suspensi kultur bakteri dan media dihomogenkan.  Media  MSA  yang  berisi kultur  bakteri  dituang  secara  aseptis  pada cawan petri yang telah diisi lapisan pertama dan cylinder cup untuk membentuk sumuran.  Setelah  media  atas  memadat, cylinder  cup diambil  dan  masing-masing sumuran  diisi  dengan  minyak  atsiri  kulit jeruk  bergamot  konsentrasi  1%,  konsentrasi 2%, konsentrasi 3%, kontrol positif (klindamisin HCl 0,01%) dan kontrol negatif
(DMSO).  Medium  diinkubasi  pada  suhu 37ºC selama 24 jam. Diameter  zona  hambat diukur menggunakan jangka sorong. Dilakukan preparasi dengan  cara yang sama pada  masker  gel peel  off minyak  atsiri  kulit jeruk bergamot dengan konsentrasi 3%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Minyak  atsiri  kulit  jeruk  bergamot berdasarkan  hasil  uji  GCMS  didapatkan senyawa β-Pinene ( 1,61%), limonen ( 30,39%),  terpinolen ( 1,43%) α-pinen  ( 2%), linalool ( 18,7%), 3,3,5-trimethylhexyl acetat
( 2,09%),α-terpineol (4,7%), bergamiol
(28,6%), α-sitral  (0,66%),  α-terpineol acetate  ( 7,96%), geraniol  acetate  ( 1,86%). Senyawa  dalam  minyak  atsiri  kulit  jeruk bergamot  yang  berperan  sebagai  antibakteri adalah limonen dan linalol ( 3) .  kandungan monoterpen dalam minyak atsiri
mempengaruhi  permeabilitas  dan  aktivitas protein  transmembran  dari  mikroba  yang mengakibatkan  membran  plasma  pada bakteri  menjadi  berlubang  sehingga  dapat menghambat pertumbuhan bakteri.
Pengujian aktivitas antibakteri minyak atsiri  dilakukan  untuk memastikan  bahwa kandungan  senyawa  yang  terdapat  dalam minyak  atsiri  kuit  jeruk  bergamot  memiliki kemampuan menghambat bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  29213  dan menentukan konsentrasi efektif dalam menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC 29213. Pengujian aktivitas
antibakteri  dilakukan  dengan  metode  difusi sumuran.  Prinsip  dari  metode  ini  adalah mendifusikan  senyawa  antibakteri  kedalam media  melalui  lubang  sumuran.  Media  yang digunakan  adalah  MSA  ( Mannitol  Salt Agar) karena  bersifat  selektif  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus .  Bakteri Staphylococcus  aureus pada  media  MSA mampu memfermentasi manitol menghasilkan  asam  organik  dan  asam tersebut  dapat  mengubah  pH  indikator phenol  red dari  merah  menjadi  kuning. Pembuatan  konsentrasi  minyak  atsiri  kulit jeruk  bergamot  dilarutkan  dengan  DMSO ( Dimethyl  Sulphoxide ),  sehingga  kontrol negatif  yang  digunakan  adalah  DMSO. Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah klindamisin HCL 0,01% yang memiliki efek menghambat pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus (6) .
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  minyak atsiri  minyak  atsiri  kulit  jeruk  bergamot Tabel  1.  Diameter  zona  hambat  hasil  uji aktivitas antibakteri minyak atsiri kulit jeruk bergamot dengan pembanding kontrol positif  (klindamisin  HCl  0,01%)  diolah secara statistika dengan menggunakan SPSS ( Statistical  Product  and  Service  Solution ) kemudian  dilakukan  uji  normalitas  dan homogenitas.
Hasil uji normalitas dinyatakan  bahwa  data  yang  diperoleh berdistribusi  normal  dengan  nilai  signifikasi p>0,05. Berdasarkan uji homogenitas dinyatakan  bahwa  data  menunjukan  hasil yang homogen dengan nilai signifikasi 0,655 (p>0,05).
Berdasarkan hasil uji Post Hoc,  untuk mengetahui konsentrasi efektif minyak atsiri kulit  jeruk  bergamot  dalam  menghambat bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi  1%  yang  dibandingkan  dengan kontrol  positif  klindamisin  HCl  0,01%  dan konsentrasi  2%  yang  dibandingkan  dengan kontrol  positif  klindamisin  HCL  0,01% didapatkan  nilai  signifikasi  <0,05  sehingga mempunyai  efek  yang  berbeda  signifikan dalam  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus ATCC  29213  dibandingkan  dengan kontrol  positif  positif  klindamisin  HCl 0,01%.  Namun,  pada  konsentrasi  3%  yang dibandingkan dengan kontrol positif klindamisin  HCl  0,01%  didapatkan  nilai signifikasi >0,05 menunjukkan hasil berbeda tidak  signifikan  artinya  pada  kelompok konsentrasi  3%  dengan  kontrol  positif klindamisin  HCl  0,01%  memiliki  efek  yang sama dalam menghambat bakteri Staphylococcus aureus ATCC 29213 (Tabel 2) Berdasarkan  dari  hasil  pengujian menunjukkan bahwa konsentrasi 3% memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  sama dengan  kontrol  positif  klindamisin  HCl 0,01%  sehingga  konsentrasi  3%  dapat
digunakan  untuk  formulasi  sediaan  untuk mencegah  terjadinya  jerawat  salah  satunya sediaan  masker  gel peel-off .  Formula sediaan  masker  gel peel-off merupakan masker gel yang praktis dalam penggunaannya karena setelah kering masker dapat langsung dilepas dan menghilangkan sisa-sisa kotoran yang menempel  pada  permukaan  kulit  wajah (7) . Masker  gel peel-off mampu  memberikan sistem penghantaran zat aktif berupa minyak atsiri untuk mencapai target yang diinginkan yaitu  membran  sel  bakteri  sehingga  dapat meningkatkan efektivitasnya sebagai antibakteri.  Perbandingan  formula  optimum sediaan  masker  gel peel-off dengan  basis PVA 5,92% dan Na CMC 2,08%, kemudian dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri  sediaan dan antibakteri diperoleh hasil diameter zona hambat  bakteri  sebesar  1,258  cm,  basis masker  gel peel-off tidak  memiliki  aktifitas antibakteri sehingga basis tidak mempengaruhi  zona  hambat  pada  sediaan. Hasil pengujian  aktivitas antibakteri minyak atsiri  kulit  jeruk  bergamot  selanjutnya dibandingkan dengan hasil pengujian formula  optimum  masker  gel peel-off
minyak atsiri kulit jeruk bergamot menggunakan  uji one  sample  t-test dengan taraf  kepercayaan  95%.  Hasil  uji  aktivitas antibakteri dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 1. Hasil uji aktivitas antibakteri minyak atsiri minyak atsiri kulit jeruk bergamot
Replikasi Minyak Atsiri 1% (cm) Minyak Atsiri 2% (cm) Minyak Atsiri 3% (cm) Kontrol + Klindamisin 0,01% (cm) Rerata ± SD 1,151 ± 0,183 1,529 ±0,228 1,684 ±0,371 1,121 ±0,242
Tabel 2. Hasil Uji Post Hoc Perbedaan Konsentrasi Minyak Atsiri kulit jeruk bergamot Kelompok Signifikasi Keterangan Konsentrasi 1% vs kontrol positif 0,001 Berbeda signifikan Konsentrasi 2% vs kontrol positif 0,036 Berbeda signifikan Konsentrasi 3% vs kontrol positif 0,145 Berbeda tidak signifikan
Tabel 3. Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  Minyak  atsiri  kulit  jeruk  bergamot  dalam  masker  gel peel-off Uji Minyak atsiri 3% Minyak atsiri 3% dalam formula Signifikasi Kesimpulan Diameter zona hambat (cm) 1,683 1,258 0,004 Berbeda signifikan Berdasarkan  Tabel  3,  hasil  pengujian aktivitas antibakteri minyak atsiri
konsentrasi  3%  dibandingkan  dengan  hasil pengujian  aktivitas  antibakteri  minyak  atsiri konsentrasi  3%  dalam  formula  masker  gel peel-off didapatkann nilai signifikasi p<0,05 , menunjukkan  bahwa  minyak  atsiri  kulit jeruk bergamot berpengaruh terhadap formula  masker  gel peel-off minyak  atsiri kulit jeruk bergamot.

## SIMPULAN
Efektivitas  antibakteri  minyak  atsiri kulit  jeruk  bergamot  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus  aureus ATCC  29213  pada konsentrasi  3%.  Formula  masker  gel  peel- off  berpengaruh  signifikan  pada  aktivitas antibakteri minyak atsiri kulit jeruk bergamot.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Fissy,  O.N.,  Sarim,  R.,  dan  Pratiwi,  L.
2014.  Efektivitas  gel  anti  jerawat ekstrak  etanol  rimpang  jahe  merah
( Zinggiber officinale rosc. Var. Rubrum) terhadap Propionibacterium acnes , Staphylococcus  epidermidis dan
Staphylococcus  aureus.  Jurnal  Ilmu Kefarmasian  Indonesia. 12(2):  194- 201.
2. Yuliani, R., Peni, I., & Septi S.R. 2011.
Aktivitas  Antibakteri  Minyak  Atsiri
Daun  Jeruk  Purut  ( Citrus  hystrix ) terhadap Staphylococcus  aureus dan
Escherichia  coli. Pharmacom .  12(2):
50-4
3. Navarra,  M.,  Mannucci,  C.,  Delbo,  M.,
&  Calapai,  G.  2015.  Citrus  Bergamia
Essensial  Oil  :  From  Basic  Research  to Clinical Application. Ethnopharmacology . 6(36): 1-3. 4. Atlas,  R.M.  2004. Handbook  of Microbiological  Media. 3rd  Edition. London: CRC Press.
5. Brooks,  G.F.,  Janet,  S.B.,  Stephen, A.M.,  Jawetz,  Melnick  and  Adelbergs. 2007.  Mikrobiologi  Kedokteran  Edisi 23,  Alih  bahasa  oleh  Mudihardi,  E.,
Kuntaman,  Wasito,  E.B.,  Mertaniasih, N.M.,  Harsono,  S.,  dan  Alimsardjono, L.  Jakarta  :  Penerbit  Buku  Kedokteran
EGC.
6. Tjay,  T.H.,  &  Kirana,  R.  2007. Obat- Obat Penting Khasiat, Penggunaan dan Efek-efek  Sampingnya .  Edisi  Keenam. Jakarta: Elex Media Komputindo.
7. Syarifah,  R.S.,  Mulyanti,  D.,  &  Gadri, A.  2015.  Formulasi  sediaan  masker  gel peel-off ekstrak  daun  papaya  ( carica papaya  L .)  sebagai  antijerawat  dan  uji aktifitas terhadap bakteri propionibacterium  acnes . Prosiding
Penelitian  Sivitas  Akademika  Unisba (Kesehatan dan Farmasi ) : 662-670.