Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan

## PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL TEH HITAM MENINGKATKAN
PERTUMBUHAN LEMPENG METAFISIS DAN PANJANG OS FEMUR MENCIT (BLACK TEA ETHANOL EXTRACT INCREASES THE GROWTH OF METAPHYSIS PLATE AND LENGTH OF OS FEMUR IN MICE)
Wendra Rasyad 1
1 Departemen Anatomi, Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani Cimahi Email korespondensi: wendrarasyad@gmail.com

## ABSTRAK
Tulang merupakan salah satu jaringan tubuh manusia yang selalu mengalami perombakan dan pembentukan  kembali  sehingga  dalam  proses  pertumbuhan  tulang  terjadi  perubahan  tebal lempeng  metafisis  dan  ukuran  panjang  tulang,  khususnya  pada  masa  pertumbuhan. Pertumbuhan  tulang  panjang  ini  dimulai  dari  pusat  metafisis.  Pada  masyarakat  awam  teh hitam  dipercaya  berkhasiat  bagi  kesehatan  tulang.  Salah  satu  senyawa  aktif  yang  terdapat dalam teh hitam adalah katekin Penelitian  bertujuan untuk  mengetahui pengaruh ekstrak teh hitam  terhadap  perubahan  pada  lempeng  metafisis os  femur dan  pertumbuhan  panjang os femur . Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan rancangan penelitian berupa rancangan acak lengkap. Objek penelitian yang digunakan adalah  24 ekor mencit betina galur DDY  usia  8  minggu  dan    dibagi    6  kelompok  perlakuan,  yaitu;  1  kelompok  kontrol  negatif (P 0 ) dan 5 kelompok perlakuan (P 1 , P 2 , P 3 , P 4 dan P 5 ) yang diberikan teh hitam dengan dosis masing-masing 40 mg/kgBB, 60 mg/kgBB, 80mg/kgBB, 100mg/kgBB dan 120mg/kgBB per oral  dosis  tunggal  selama  28  hari  berturut-turut.  Pengukuran  panjang  os  femur  diukur menggunakan  Kaliper  Vernier.  Tebal  lempeng  metafisis  diukur  menggunakan  mikrometer mikroskop  pada  sediaan  HE  (400X).  Analisis  data  menggunakan  uji  beda  ANOVA  dan  uji lanjut  Duncan  (p<0,05).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  terdapat  pengaruh  signifikan pemberian ekstrak  teh hitam  dosis 120mg/kgBB terhadap tebal lempeng metafisis (p=0,019) dan  terdapat  pengaruh  signifikan  pemberian  ekstrak    teh  hitam  dosis  100mg/kgBB  terhadap pertumbuhan  panjang  (0,000).  Penambahan  panjang  dan  tebal  lempeng  metafisis  tulang
ARTIKEL PENELITIAN

## DOI
DOI
diduga  akibat  pengaruh    senyawa    katekin  pada  ekstrak  teh    hitam  yang  akan  memicu osteoblastogenesis dan mencegah aktivasi osteoklas sehingga tulang akan bertambah panjang termasuk pada bagian lempeng metafisis.
Kata Kunci : lempeng metafisis, teh hitam, tulang femur

## ABSTRACT
Bone  is  always  undergoing  reshuffle  and  reshaping  so  that  in  the  process  of  bone  growth changes  in  metaphysical  plate  thickness  and  bone  length  size.  This  long  bone  growth  starts from the metaphysical center. Black tea is believed to be effective for bone  health. One of the active  compounds  in  black  tea  is  catechins.  The  study  aims  to  determine  black  tea  extract effect  on  growth  of  os  femur  metaphysis  plate  and  os  femur  length.  This  research  was experimental  study  with  completely  randomized  design.  The  research  object  used  was  24 female DDY strain mice, divided into 6 treatment groups:1 negative control group (P0) and 5 treatment  groups  (P1,  P2,  P3,  P4  and  P5)  who  were  given  black  tea  with  40  mg/kgBW,  60 mg/kgBW,  80mg/kgBW,  100mg/kgBW,  and  120mg/kgBW  orally  in  a  single  dose  for  28 consecutive  days,  respectively.  Os  femur  length  was  measured  using  Vernier  Calipers. Metaphysical  plate  thickness  was  measured  using  a  microscope  micrometer.  Data  analysis used  ANOVA  and  Duncan  (p  <0.05).  The  results  showed  that  there  was  a  significant  effect black  tea  extract  120mg/kgBW  on  metaphysical  plate  thickness(p=0.019)  and  black  tea extract  100mg/kgBW  on  growth  length(p=0,000).  The  length  and  thickness  of  bone metaphysis plates growth were thought due to catechin compounds on black tea extracts that will trigger osteoblastogenesis and prevent osteoclast activation so that the bones will grow longer.
Keywords: black tea, metaphysis plate, os femur

## PENDAHULUAN
Tulang  merupakan  struktur  yang tersusun  oleh  protein  dan  mineral  yang bersifat  dinamis  karena  selalu  mengalami perombakan  dan  pembentukan  kembali (remodeling ). Tulang  terdiri  atas  matriks organik  untuk  memperkuat  struktur  tulang (30%) dan timbunan garam kalsium (70%).
Tulang berfungsi sebagai penyokong tubuh dan  pelindung  jaringan  sekitarnya,  seperti otot,  pembuluh  darah,  saraf,  lemak,  dan kulit. 1-2 Pada  proses    pertumbuhan  tulang di  usia  pertumbuhan    terjadi  penambahan panjang tulang. Pertumbuhan tulang panjang ini dimulai di metafisis.
Mekanisme  penambahan  panjang  tulang terjadi  di  metafisis  yang  ditandai  dengan proliferasi  kondrosit,  aktivasi  osteoblas, dan osteoklas. 1-3
Teh  merupakan  minuman  yang dihasilkan  dari  pengolahan  daun  teh (C amellia  sinensis ) . Berdasarkan  hasil penelitian  Lembaga  MARS  tahun  1984, jenis  teh  yang  tingkat  konsumsinya  tinggi di  Indonesia  adalah  teh  hitam  (79%).  Teh hitam dihasilkan melalui proses  fermentasi sempurna daun teh. 4
Data Kementerian Pertanian RI tahun 2016  menunjukkan  konsumsi  teh  di Indonesia mengalami perubahan peningkatan  konsumsi  teh  hitam. 5 Pada masyarakat,  mengonsumsi  teh  dipercaya bermanfaat untuk kesehatan tulang. 6
Namun  dosis  optimal  dan  pengaruhnya terhadap  penambahan  panjang  tulang  dan tebal  metafisis  belum  diketahui. Salah satu  senyawa  aktif  yang  terdapat  pada ekstrak  teh  hitam  yang  dapat  membantu pertumbuhan tulang adalah katekin. Katekin  merupakan  senyawa  polifenol yang  memengaruhi  pertumbuhan  tulang melalui empat mekanisme, yaitu meningkatkan osteoblastogenesis,
meningkatkan daya tahan osteoblas, menekan osteoklastogenesis, dan menurunkan jumlah osteoklas. Jenis katekin  yang  terkandung  pada  ekstrak  teh hitam  adalah epigallocatechin  gallate
(EGCG) dan epicatechin gallate (ECG). 7-11
Penelitian  Shen, et  al tahun  2009,  teh hitam dosis 80 mg/kgBB secara signifikan meningkatkan  densitas os  femur tikus. 9
Namun  belum  ada  penelitian  mengenai pengaruh  ekstrak  teh  hitam  asal  Gambung Bandung  Indonesia  terhadap  lempeng metafisis dan pertumbuhan panjang tulang. Berdasarkan  latar  belakang,  dan dosis  acuan  tersebut,    peneliti  tertarik untuk mengetahui apakah ekstrak teh hitam dosis 40 mg/kgBB, 60 mg/kgBB,
80mg/kgBB, 100mg/kgBB, dan
120mg/kgBB dapat memengaruhi pertumbuhan  panjang os  femur, dan perubahan  pada  lempeng  metafisis os femur yang  diujikan  pada  hewan  coba mencit betina galur DDY.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental dengan rancangan penelitian berupa rancangan acak lengkap. Penelitian ini  dilakukan  di  Laboratorium  Anatomi Fakultas  Kedokteran  Unjani  dan  Bagian Patologi  Anatomi  Rumah  Sakit  Hasan Sadikin Bandung.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  sebagai  berikut:  jarum gavage , bedah  minor  set,  mikroskop  Olympus  CX 21,  dan  kaliper  Vernier.  Bahan  penelitian, yaitu ekstrak teh hitam   didapat dari Pusat Penelitian Teh dan Kina (PPTK, Gambung
Bandung), yang diekstraksi dengan pelarut etanol  96%  di  Fakultas  Farmasi  ITB Bandung.  Hewan  coba  berupa  mencit betina galur DDY yang didapatkan dari PT Biofarma  Bandung.  Selama  masa  adaptasi mencit diberi makan minum standar.
Subjek  penelitian  yang  digunakan adalah  mencit  jantan  galur  DDY  yang memenuhi kriteria inklusi penelitian mencit  dalam  keadaan  sehat  dengan  ciri– ciri  rambut  sehat,  aktif  bergerak,  memiliki respons  yang  bagus  bila  dikejutkan,  tidak terdapat  luka,  jenis  kelamin  betina,  umur 8-12  minggu,  berat  badan  20-30  gram. Kriteria  eksklusi  mencit  dalam  penelitian ini  adalah  penurunan  berat  badan  lebih besar dari 10% dibandingkan dengan berat badan awal.

## Jumlah Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  24  ekor  mencit  dengan jumlah setiap kelompok empat ekor mencit yang dihitung menggunakan rumus Federer.  Objek  dikelompokan  menjadi enam kelompok yaitu: P 0 (n=4), kelompok kontrol negatif hanya diberikan makan dan minum standar dan tidak diberikan ekstrak teh hitam. P 1-5 (n=20), kelompok perlakuan,  yaitu    P 1 ,  diberikan  ekstrak  teh hitam  dosis  40mg/kgBB/hari/peroral;  P 2 , diberikan ekstrak teh hitam dosis 60mg/kgBB/hari/peroral; P 3 , diberikan
ekstrak teh hitam dosis 80mg/kgBB/hari/peroral; P 4 , diberikan ekstrak teh hitam dosis
100mg/kgBB/hari/peroral;  P 5 ,  diberikan ekstrak teh hitam dosis 120mg/kgBB/hari/peroral.

## Prosedur Penelitian
Prosedur penelitian dibagi menjadi tiga tahapan,  yaitu  :  tahap  persiapan,  tahap perlakuan,  tahap  pengambilan  sampel,  dan tahap pembuatan preparat.
Mencit  diadaptasikan    selama  tujuh hari.  Selama  adaptasi,  mencit  diberikan antihelmin  ( pyrantel  pamoat )  per  oral dengan  dosis  11  mg  dosis  tunggal  pada hari  pertama  adaptasi  dan  diberikan antibiotik  (Amoksisilin)  per  oral  dengan dosis  30  mg,  pada  hari  kedua,  ketiga,  dan keempat  adaptasi.  Tujuan  pemberian  obat ini agar dapat menyingkirkan zoonosis dari hewan percobaan yang dapat memengaruhi hasil  penelitian.  Mencit  diberi  perlakuan selama  masa  remaja  (umur  8–12  minggu) yaitu  selama  empat  minggu.  Pemberian perlakuan dilakukan dengan dosis tunggal. Ekstrak teh hitam dilarutkan dalam pelarut akuabides  steril  dengan  perbandingan  1:1 dengan  menggunakan  sonde  oral  mencit. Proses  Anestesi  dilakukan  dengan  cara menganestesi  mencit  terlebih  dahulu. Prosedur dilanjutkan dengan proses dekapitasi  sebagai  cara  eutanasia  mencit.
Cara pengambilan tulang dilakukan dengan teknik  diseksi.  Setelah  tulang  femur diambil  maka  dimasukkan  ke  dalam formalin 10%. 12,13

## Tahapan Pembuatan Preparat
Melakukan dekalsifikasi tulang dengan merendam  tulang  femur  mencit  dalam larutan  EDTA  4%  1M  dengan  pemanasan suhu  37 o C  selama  15  hari.  Proses pembuatan  blok  preparat,  yaitu  memotong jaringan, proses dehidrasi, vakum, mencetak blok parafin, memotong cetakan, metode pewarnaan hematoksilin eosin, dan pembacaan preparat. 13,14

## Analisis Data
Mengetahui efektivitas dari teh hitam dalam  menambah  ketebalan  lempeng metafisis,  dilakukan  pengukuran  dengan
menggunakan mikrometer pada mikroskop yang  diukur  di  sembilan  lapang  pandang besar  (400x).  Selanjutnya  dilakukan  uji beda  (ANOVA),  dan  dilanjutkan  dengan uji  lanjut Post-Hoc  Duncan .  Derajat kepercayaan  yang  digunakan  ialah  95%. Perhitungan dilakukan dengan menggunakan  program  statistik  SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengaruh Ekstrak Teh Hitam terhadap
Tebal Lempeng Metafisis
Hasil penelitian terhadap tebal lempeng  metafisis  mencit  tampak  bahwa kelompok  P 5, yang  diberikan  ekstrak  teh hitam dosis 120 mg/kgBB memiliki  rerata tebal  lempeng  metafisis  terbesar  yaitu
123,94 µm (Tabel 1). Tabel 1 Data Deskriptif  Tebal Lempeng Metafisis Os Femur Kelompok n Rerata (µm) Min. (µm) Max. (µm) SD P 0 (Kontrol negatif) 4 107,25 100,56 112,89 5,19 P 1 (Teh hitam 40mg/kgBB) 4 109,79 94,17 119,72 11,03 P 2 (Teh hitam 60mg/kgBB) 4 107,73 103,28 113,78 4,84 P 3 (Teh hitam 80mg/kgBB) 4 111,27 102,22 117,94 7,56 P 4 (Teh hitam 100mg/kgBB) 4 109,15 103,61 118,94 6,78 P 5 (Teh hitam 120mg/kgBB) 4 123,94 113,61 128,06 6.,91
Pada  Tabel  1  tampak  rerata  tebal lempeng  metafisis  kelompok  P 0 atau kelompok  negatif  yaitu  107,25  µm  lebih kecil  tebalnya  jika  dibandingkan  dengan
kelompok  perlakuan  lainnya.  Melihat efektivitas  serta  pengaruh  teh  hitam terhadap  densitas  tulang,  maka  kelompok yang diberikan ekstrak teh hitam dibandingkan dengan kelompok yang tidak diberikan  ekstrak  teh  hitam.  Melihat apakah  ada  perbandingan  pengaruh  yang
diperoleh dari tiap kelompok, dilakukan uji parametrik  menggunakan  Analisis One Way  ANOVA (Tabel  2).  Hasil  dari  uji ANOVA tampak terdapat perbedaan signifikan  minimal  diantara  kelompok penelitian (p<0,05).
Tabel 2 Pengaruh Teh Hitam terhadap Tebal Lempeng Metafisis Os Femur Jumlah kuadrat Derajat bebas Rerata (µm) F Nilai p Antar kelompok 911,717 5 182,343 3,642 0,019* Dalam kelompok 901,216 18 50,068 Total 1812,933 23 Keterangan Uji One Way ANOVA, * p < 0,05 bermakna
Berdasarkan hasil uji ANOVA tersebut,  dilakukan  uji  lanjut (Post  Hoc Test)  Duncan dengan  tingkat  kepercayaan
95%  untuk  mengetahui  rerata  kelompok yang memiliki nilai berbeda (Tabel 3).
Tabel 3 Perbedaan Antarkelompok Pengaruh Teh Hitam terhadap Tebal Lempeng Metafisis Os Femur Kelompok N Subkelompok alfa = 0,05 1 2 P 0 (Kontrol negatif) 4 107,25 P 1 (Teh hitam 40mg/kgBB) 4 107,74 P 2 (Teh hitam 60mg/kgBB) 4 109,15 P 3 (Teh hitam 80mg/kgBB) 4 109,79 P 4 (Teh hitam 100mg/kgBB) 4 111,28 P 5 (Teh hitam 120mg/kgBB) 4 125,19 Nilai p 0,478 1,000 Keterangan Uji Duncan , * p < 0,05 bermakna
Berdasarkan analisis Post Hoc Test Duncan dapat dilihat di Tabel 3, data tebal lempeng  metafisis  dari  masing-masing kelompok  akan  dikategorikan  ke  dalam  2 subset.  Kelompok  yang  berada  dalam  satu subset  menunjukkan    adanya  kemiripan atau  perbedaan  yang  tidak  signifikan, sedangkan kelompok yang memiliki perbedaan signifikan akan berada di subset yang berbeda.
Pada  Tabel  3  tampak  kelompok  P 5 yang merupakan kelompok perlakuan yang diberikan  teh  dosis  120mg/kgBB  berada dalam  subset  kedua  dan  berbeda  dengan subset pertama, sehingga dinyatakan pemberian ekstrak teh hitam dosis 120mg/kgBB  menunjukkan  hasil  yang berpengaruh signifikan dibandingkan kelompok lainnya.
Secara  teori  dapat  diduga  senyawa yang  terkandung  didalam  teh  memicu osteoblastogenesis dengan cara
peningkatan proliferasi osteoblas.
Peningkatan jumlah osteoblas pada akhirnya  akan  menekan  produksi  TNF-α dan IL-6 oleh osteoklas  sehingga menekan proses  apoptosis  osteoblas. 12-14 Selain  itu, senyawa  yang  terkandung  di  dalam  teh  di antaranya katekin, yaitu mencegah aktivasi osteoklas  sehingga  proliferasi  osteoblas  di lempeng  metafisis  terus  berlangsung  dan penebalan lempeng metafisis dapat terjadi. 7-9

## Pengaruh Ekstrak Teh Hitam terhadap Panjang Os Femur
Pengukuran  panjang  tulang  pada femur  kiri  mencit  betina  pada  hari  ke-29 setelah  perlakuan.  Semua  data  dianalisis dengan  statistika  ANOVA  karena  hasil  uji normalitas data dan homogenitas didapatkan  normal.    Nilai  rerata  terendah pada  kelompok  P 0 dengan  nilai  panjang tulang  terendah  15,10  mm  dan  rerata tertinggi  pada  kelompok  P 5 dengan  nilai terendah 15,50 mm (Tabel 4).
Tabel 4 Deskripsi  Pengukuran Panjang Os Femur Kelompok N Rerata (mm) Min. (mm) Max (mm) SD P 0 (Kontrol negatif) 4 15,18 15,10 15,30  0,096 P 1 (Teh hitam 40mg/kgBB) 4 15,23 15,10 15,40  0,150 P 2 (Teh hitam 60mg/kgBB) 4 15,28 15,20 15,40  0,096 P 3 (Teh hitam 80mg/kgBB) 4 15,30 15,20 15,40  0,096 P 4 (Teh hitam 100mg/kgBB) 4 15,48 15,40 15,60  0,096 P 5 (Teh hitam 120mg/kgBB) 4 15,58 15,50 15,70  0,096
Dari  Tabel  4  tampak  bahwa  panjang tulang  femur  mencit  kelompok  P 0 lebih rendah  dari  kelompok  perlakuan  ( P 1 ,  P 2 , P 3 , P 4 dan  P 5 )  setelah  uji  statistik.  Data tersebut menunjukkan bahwa dosis
berdampak terhadap penambahan  panjang os  femur .  Melihat  pengaruh  teh  hitam terhadap panjang os femur , maka dilakukan  uji  beda  menggunakan  analisis One Way ANOVA (Tabel 5).
Tabel 5 Pengaruh Teh Hitam terhadap Panjang Os Femur Jumlah kuadrat Derajat bebas Rerata (mm) F Nilai p Antar kelompok Dalam kelompok Total 0,479 198 0,676 5 18 23 0,096 0,011 8,727 0,000*
Keterangan Uji One Way ANOVA, * p < 0,05 bermakna
Hasil  dari  uji ANOVA ,  didapatkan nilai    maka  dapat  diambil  kesimpulan bahwa  terdapat  pengaruh  bermakna  teh hitam  terhadap panjang  os  femur  diantara
semua  kelompok  perlakuan  (p  ≤  0,05). Berdasarkan  hasil  tersebut  dilakukan  Uji Lanjut (Post  Hoc  Test)  Duncan dengan tingkat kepercayaan 95% (Tabel 6).
Tabel 6 Perbedaan Antarkelompok Pengaruh Teh terhadap Panjang Os Femur Kelompok N Subkelompok alfa = 0,05 1 2 P 0 (Kontrol negatif) 4 15,18 P 1 (Teh hitam 40mg/kgBB) 4 15,23 P 2 (Teh hitam 60mg/kgBB) 4 15,28 P 3 (Teh hitam 80mg/kgBB) 4 15,30 P 4 (Teh hitam 100mg/kgBB) 4 15,48 P 5 (Teh hitam 120mg/kgBB) 4 15,58 Nilai p 0,138 0,194 Keterangan Uji Duncan , * p < 0,05 bermakna
Berdasarkan  analisis Post  Hoc  Test Duncan dapat  dilihat  di  Tabel  6,  data panjang femur dari masing-masing kelompok  akan  dikategorikan  kedalam  2 subset.  Kelompok  yang  berada  dalam  satu
subset  menunjukkan    adanya  kemiripan atau  perbedaan  yang  tidak  signifikan, sedangkan kelompok yang memiliki perbedaan signifikan akan berada di subset yang  berbeda.    Dalam  subset  yang  kedua
didapatkan  dua  kelompok  yang  termasuk kedalam  kategori  ini  yaitu  kelompok  P 4, dosis  100  mg/kgBB dan  P 5, dosis  120 mg/kgBB  sehingga  dapat  disimpulkan bahwa  pemberian  ekstrak  teh  hitam  dosis 100  dan  120  mg/kgBB  memberikan  efek yang  signifikan  meningkatkan    panjang tulang femur mencit.
Hal  tersebut  sejalan  dengan  hasil pada  Tabel  4,  dengan  penambahan  tebal lempeng  metafisis  maka  memacu  proses osifikasi  pada  tulang  femur.  Osifikasi endokondral  yang  terjadi  pada  tulang panjang,  dalam  hal  ini  tulang  femur    akan berdampak  terhadap  penambahan  panjang tulang tersebut. Kandungan yang
membantu  pertumbuhan  tulang  yaitu katekin yang termasuk senyawa
epigallocatechin gallate
(EGCG),
epicatechin gallate (EGC), dan epicatechin (EC)  membantu  osteoblastogenesis  dan menekan  osteoklastogenesis.  Senyawa  ini merupakan  senyawa  fitoestrogen  yang memberikan  efek  seperti  fungsi  hormon estrogen pada proses pembentukan tulang. 15-17 Hasil  tersebut  sejalan  dengan hasil  penelitian  Shen, et  al pada  tahun 2009  yang  melaporkan  bahwa  teh  dapat meningkatkan  kepadatan  tulang femur tikus. 9
KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  teh  hitam  dosis 120  mg/kgBB  berpengaruh  signifikan terhadap peningkatan tebal lempeng metafisis  dan  panjang os  femur pada mencit betina galur DDY.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Guyton  AC,  Hall  JE.  Bone  and  its relation  to  extracellular  calcium  and phosphate.  Textbook  of  medical physiology. 12 th Edition. USA: Saunders Elsevier; 2011.
2. Ganong  WF.  Pengendalian  hormonal pada metabolisme kalsium dan
fisiologi tulang. Dalam: Widjajakusumah HMD, editor.
Fisiologi kedokteran. Ed. 20. Jakarta:
EGC; 2002.
3. Sherwood L. Kontrol endokrin terhadap pertumbuhan. Dalam:
Santoso BI, editor. Fisiologi manusia. Ed. 2. Jakarta: EGC; 2001. 4. Tortora GJ, Derrickson B.
Introduction to the human body. New York:  John  Wiley  and  Sons,  Inc.; 2007.
5. Rizzo  DC.  Delmar  fundamentals  of anatomy  and  physiology.  Australia Canada  Mexico  Singapore  Spain United  Kingdom  United  States: Delmar Thomson Learning; 2001.
6. Junquiera  LC.  Tulang.  Dalam:  Frans
Dany, editor. Histologi dasar: teks & atlas.  Edisi  10.  Jakarta:  EGC;  2007. hal.134-147.
7. Chaney SG. Principles of nutrition II: Micronutrients. Textbook of biochemistry: with
clinical correlations. 5 th Edition. 2015.
8. Martini  F.  Osseous  tissue  and  bone structure.  In:  Martini  F,  Ober  WC, Garrison C, Welch K, Hutchings RT.
Fundamentals of anatomy &
physiology.7 th ed.  USA:  Pearson Education Inc.; 2006. p. 196-8.
9. Shen  LC,  Yeh  KJ,  Cao  JJ, Wang  SJ.
Green  tea  and  bone  health:  Evidence from laboratory studies. USA; Elsevier Science Direct; 2011.
10. Graham  HN.  Tea:  Tea  plant  and  its manufacture: chemistry and consumption of tea beverage. In: Liss AR.  Tea  Methylxanthine  Beverages and Foods: Chemistry, Consumption, and  Health  Effects.  Prog  Clin  Biol Rev; 1984.
11. Itoh  Y,  Yasui  T,  Okada  A,  Tozawa K,  Hayashi  Y,  Kohri  K.  Preventive effect  of  green  tea  on  bone metabolism  and  role  of  oxidative stress in bone. J  Urol; 2005.; 173(1): 271-5.
12. Ratri  F.  Perpustakaan  MB  IPB.
Institut  Pertanian  Bogor.  (Diunduh
dari:
http://elibrary.mb.ipb.ac.id/files/disk1 /11/mbipb-12312421421421412- fiananatri-542-10-r28-05-f-i.pdf) [Diakses  pada  tanggal  28  Agustus 2012].
13. Fawcett DW. Tulang. Dalam: Tambayong, editor. Buku ajar histologi.  Edisi  12.  Jakarta:  EGC; 2002.
14. Callis  GM.  Bone.  Dalam  Bancroft JD,  Gamble  M.  Theory  and  practice of  histological  techniques.  Edisi  6. Amerika Serikat: Elsevier; 2008. Hal 321-335.
15. Romas  E,  Gillespie  MT,  Martin  TG. Involvement  of  receptor  activator  of TNF  ligand  and  TNF  alpha  in  bone. Bone; 2002.
16. Miyaura  C,  Inada  M,  Matsumoto  C, Ohsiba  T,  Shimizu  T.  An  Essential role  of  cytosolic  phospholipase  A2 alpha  in  PGE2  mediated  bone resorption.  Journal  Exp  Medical; 2003; 197:1303-10
17. Vali  B,  Rao  LG,  El-Sohemny  A. Epigallocatechin  3  gallate  increases the  formation  of  mineralized  bone nodules by human osteoblast. Journal nutrition biochemical; 2007;18
(5):341-7