102 Jaya et, al.

## ISOLASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI PELARUT FOSFAT DARI TANAH RAWA DENGAN TINGKAT KEMASAMAN YANG TINGGI

## ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF PHOSPHATE SOLVING BACTERIA FROM SWAMP SOIL WITH HIGH LEVELS OF ACIDITY
Galang Indra Jaya 1a , Sri Nuryani Hidayah Utami 2 , Jaka Widada 2 , Wahida Annisa Yusuf 3 ,Saipul Abbas 4 , Nur Fatturahman Ridwan 5 , Amir Noviyanto 1
1 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian INSTIPER Yogyakarta .
2 Fakultas Pertanian, Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.
3 Badan Standarisasi Instrumen Pertanian, Kementerian Pertanian.
4 Program Studi Proteksi Tanaman, Fakultas Pertanian, Universitas Lambung Mangkurat.
5 Pusat Studi Bioteknologi, Sekolah Pascasarjana, Universitas Gadjah Mada
a Koresponden : Galang Indra Jaya; Email : galang@instiperjogja.ac.id
(Diterima: 20-07-2023; Ditelaah: 23-07-2023; Disetujui: 20-09-2023)

## ABSTRACT
Phosphate solubilizing bacteria (PSB) are one of the microbes that play an important role in soil and plant cycles. Phosphate (P) is a very important macronutrient for plants. In soil, most of the P element is found to be unavailable to plants because it is fixed by Ca, Al or Fe. This research aims to identify BPF in acid soil which has the potential to dissolve phosphate elements.  The  method used in this research is  the isolation  of  BPF  from  acid  soil  using  the  National  Botanical  Research  Institute's  Phosphate  (NBRIP) medium, phosphate dissolution index test and UV Visual. Soils from overflow type C (TLC) swamps have higher diversity compared to TLB soils. The abundance of BPF in TLC soil was higher (5,4 10 7 CFU per gram) compared to soil from overflow zone B (TLB) (2,9 10 7 CFU per gram) because TLC soil had a lower acidity level than TLB. There were 55 BPF isolates obtained from these two types of soil. Two isolates (TLB1  and  TLB2)  had  a  better  phosphate  solubilization  index  and  all  potential  isolates  that  were extracted and subjected to gDNA amplification showed a DNA band at 1330-1500 bp.
Keywords: Isolate, Phosphate Dissolution Index, Abundance, Amplification.

## ABSTRAK
Bakteri pelarut fosfat (BPF) merupakan salah satu mikroba yang berperan penting dalam siklus tanah dan tanaman. Fosfat (P) merupakan makronutrien yang sangat penting bagi tanaman. Di dalam tanah unsur  P  sebagian  besar  ditemukan  tidak  tersedia  bagi  tanaman  karena  difiksasi  oleh  Ca,  Al  atau  Fe. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengidentifikasi  BPF  pada  tanah  masam  yang  berpotensi  melarutkan unsur fosfat. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah isolasi BPF dari tanah masam dengan media National Botanical Research Institute's Phosphate (NBRIP), Uji indeks pelarutan fosfat serta UV Visual. Tanah dari rawa tipe luapan C (TLC) memiliki keanekaragaman yang lebih tinggi dibandingkan dengan  tanah  TLB.  Kelimpahan  BPF  di  tanah  TLC  lebih  tinggi  (5,4  10 7 CFU  per  gram)  dibandingkan dengan tanah dari tpe luapan B (TLB) (2,9 10 7 CFU per gram) karena pada tanah TLC memiliki tingkat kemasaman yang lebih rendah dibandingkan TLB. Terdapat 55 isolat BPF yang diperoleh dari kedua jenis tanah tersebut. Dua isolat (TLB1 dan TLB2) memiliki indeks pelarutan fosfat lebih baik serta semua isolat potensial yang diekstraksi dan dilakukan amplifikasi gDNA menunjukkan pita DNA pada 1330-1500 bp. Kata Kunci: Isolat, Indeks Pelarutan Fosfat, Kelimpahan, Amplifikasi.
Lamdo, H., Anissa, N., & Damsir (2023). Isolasi dan karakterisasi bakteri pelarut fosfat dari tanah rawa dengan tingkat kemasaman yang tinggi. Jurnal Pertanian, 14 (2), 102-110.

## PENDAHULUAN
Fosfor  (P)  merupakan  makronutrien  utama setelah  Nitrogen.  Fosfor  selalu  disebutkan setelah  Nitrogen  di  hampir  semua  buku tentang  kesuburan  tanah  atau  pemupukan. Fungsi  fosfor  pada  tumbuhan  adalah  untuk penyimpanan  dan  transfer  energi  (ADP  dan ATP), namun jumlah unsur ini di dalam tanah sangat rendah hanya mencapai 0,0005-0,15% di  permukaan  tanah  (Havlin  et  al.,  2014). Menurut Kasno dkk., 2009 fosfat di alam dapat diklasifikasikan  menjadi  tiga  jenis,  yaitu mineral fosfat apatit, khususnya fluorin apatit {Ca5(PO4)3F}, fosforit dan guano. Ketersediaan  P  dalam tanah ditentukan  oleh bahan  induk  tanah  dan  faktor  lain  seperti reaksi tanah (pH), kadar oksida Al dan Fe pada tanah  masam  serta  kadar  Ca  dan  Mg  pada tanah basa.
Provinsi  Kalimantan  Selatan  merupakan daerah yang memiliki lahan rawa. Lahan rawa dikategorikan  menjadi  beberapa  jenis,  salah satunya  adalah  tanah  sulfat  masam  (TSM) yang ditandai dengan adanya pirit. pH tanah yang mengandung pirit, jika dikeringkan akan turun  drastis  hingga  di  bawah  2.  Kondisi  ini menyebabkan  peningkatan  kelarutan  Fe 3+ , Al 3+ dan Mn 4+ (Rorison 1978). Oleh karena itu tanaman  berpotensi  mengalami  defisiensi nutrisi (terutama P) dan keracunan oleh Fe 3+ , Al 3+ dan Mn 4+ .
Mikroorganisme  dalam  tanah  dapat menguntungkan atau merugikan. Mikroorganisme  yang  merugikan  terutama bersifat  patogen  bagi  tanaman,  sedangkan mikroorganisme yang menguntungkan menjadi pengurai bahan organik yang masuk ke  dalam  sistem  tanah  dan  memperbaiki siklus  hara  seperti  C,  P,  dan  S  dalam  sistem tanah-tanaman (Salam, 2012). Mikroorganisme  yang  melakukan  siklus  P  di dalam tanah adalah kelompok Bakteri Pelarut Fosfat  (BPF). Peran  BPF dalam  tanah adalah membantu  melarutkan  P  yang  umumnya dalam bentuk tidak larut, untuk dimanfaatkan oleh tanaman.
Mikroorganisme  dalam  tanah  merupakan komponen  penting  dalam  tanah  karena mikroorganisme  merupakan  bagian  dari
siklus  biokimia,  seperti  kehidupan  flora, fauna, dan mikroorganisme itu sendiri. Reaksi penting  dalam  siklus  biokimia  adalah mineralisasi  dan  imobilisasi  unsur  hara esensial  yang  dibutuhkan  tanaman.  Bakteri yang  berperan  dalam  reaksi  tersebut  adalah BPF. Informasi tentang keanekaragaman BPF di  dalam  tanah  sangat  diperlukan  karena dapat  digunakan  untuk  merencanakan strategi  pengembangan  pengelolaan  lahan untuk menjamin keberlanjutan dan produktivitas agroekosistem.
Penelitian mengenai karakterisasi BPF telah banyak  dilakukan  dan  beberapa  isolat  telah ditemukan  seperti Azotobacter ,  (Islamiati, 2015). Bacillus (Ulfiyati  and  Zulaika,  2015)
Pseudomonas dan Leclercia (Teng, et al 2019). Isolat  tersebut  bersumber  dari  perairan  dan tanah dengan  karakter  pH  cenderung  netral, sumber  isolate  yang  diidentifikasi  pada penelitian  ini  berasal  dari  tanah  yang memiliki  sifat  kemasaman  tinggi  sehingga dapat  memperkaya  ilmu  pengetahuan  dan menjadi sedikit solusi pada masa mendatang terkait  dengan  permasalahan  pemupukan terutama  unsur  fosfat.    Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengidentifikasi  serta karaterisasi  BPF  pada  beberapa  jenis  tanah mineral  masam  serta  menguji  kemampuan BPF melarutkan fosfat secara kualitatif.

## MATERI DAN METODE
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret 2019 – Mei 2019. Analisis dan Isolasi BPF di Laboratorium  Klinik  Penyakit  Tumbuhan, Fakultas Pertanian, Universitas Gadjah Mada. Data  yang  diperoleh  dari  hasil  penelitian disajikan  dalam  bentuk  grafik,  tabel deskriptif,  foto  hasil  penelitian  serta  foto sebagai bukti otentik.

## Lokasi Pengambilan Sampel Tanah
Sampel tanah diambil di Provinsi Kalimantan Selatan, Kabupaten Barito Kuala seperti pada Gambar 1 berikut ini.
Gambar  1.  Lokasi  Pengambilan  Sampel  Tanah untuk  Diidentifikasi  Bakteri  Pelarut Fosfat.
Sampel  tanah  merujuk  pada  Gambar  1., pengambilan  sampel  tanah  yang  akan diisolasi BPF dari dua tempat berbeda yaitu di Desa  Tanjung  Harapan,  Kecamatan  Alalak (nomor 1) yang terdiri dari tanah dengan tipe luapan  B  (areal  ini  hanya  tergenang  pada pasang  besar)  TLB  dan  Desa  Simpang  Jaya, Kecamatan Belawang (nomor 2) dengan tipe luapan  C  (tidak  tergenang  tetapi  kedalaman air tanah pada waktu pasang kurang dari 50 cm) berkode TLC.

## Analis pH Tanah
Analisis pH tanah dilakukan dengan pH meter. Sampel  tanah  yang  digunakan  sebanyak  5 gram dan akuades sebanyak 12,5 ml.

## Isolasi BPF dari Dalam Tanah
Sampel  tanah  ditimbang  sebanyak  10  gram dan dilarutkan dalam air dan ditambahkan 90 ml  akuades  hingga  pengenceran  10 − 1 .  1  ml larutan  dipipet  dan  ditambahkan  9  ml  air suling menjadi pengenceran 10 − 2 . Ini diulang hingga 10 − 6 , 10 − 7 dan 10 − 8 . Pengenceran 10 − 6 , 10 − 7 dan  10 − 8 ditumbuhkan  pada  media NBRIP ( National Botanical Research Institute's Phosphate )  yang  terbuat  dari  10  g,  glukosa, 0,20  g  l-1  KCl,  0,25  g  MgSO 4 .7H 2 O,  5  g,, MgCl 2 .6H 2 O, 0,10 g (NH 4 )2SO 4 dan 15 g agar ditambahkan dengan unsur sumber P yaitu 5 g l-1Ca 3 (PO 4 ), tiga ulangan (Nautiyal, 1999) . Hasil inokulasi selanjutnya diinkubasi selama 7 hari hingga terlihat zona bening. Kemudian kepadatan  BPF  dihitung  dengan  rumus berikut.
C x fp
Populasi BPF: bk Keterangan: C =  Jumlah Koloni fp =  Faktor Pengenceran bk =  Berat kering tanah

## Observasi Morfologi Koloni Bakteri
Kultur  murni  bakteri  ditumbuhkan  pada media  agar  dengan  metode  penuangan  dan diinkubasi  selama  7  hari  pada  suhu  25°C. Morfologi koloni bakteri yang terbentuk pada media diamati. Variabel meliputi bentuk, tepi, elevasi,  keseluruhan  dan  warna  koloni  yang terbentuk. Uji pewarnaan gram BPF bertujuan untuk mengetahui reaksi gram bakteri. Kultur bakteri diambil satu ose lalu diratakan di atas kaca objek. Setetes KOH 3% diteteskan pada sampel dan kemudian dihomogenkan sampai koloni dan larutan menyatu.

## Analisa Pelarutan Fosfat Secara Kualitatif
Kultur  murni  BPF  potensial  dari  tanah  diuji untuk  mengetahui  kemampuannya  dalam melarutkan fosfat pada media NBRIP selama 7 hari  sebanyak  sembilan  kali  ulangan.  Zona bening  dan  koloni  yang  terbentuk  diukur setiap hari. Adanya zona bening menunjukkan kemampuan bakteri dalam melarutkan fosfat. Solubilizing  Index (SI)/  indeks  pelarutan fosfat,  rasio  diameter  zona  bening  terhadap diameter koloni bakteri, dihitung menggunakan rumus berikut: Indeks Pelarutan  Fosfat:  (Diameter  koloni  bakteri  + Diameter  zona  bening)/  Diameter  koloni bakteri (Karpagam & Nagalakshmi, 2014)

## Ekstraksi DNA Bakteri & Amplifikasi
Metode yang digunakan dalam ekstraksi DNA mikroba  tanah  berdasarkan  protokol  yang dibuat  oleh  Geneaid.  Satu  perangkat  Kit Bakteri  gDNA  Mini  Presto ™ .  Elektroforesis dengan cara menimbang Agarose 3% (0,30g) yang  dimasukkan  ke  dalam  gelas  kaca  dan ditambahkan TBE 1X 30 mL kemudian bahan dihomogenkan dandipanaskan dengan
microwave  selama  5  menit,  setelah  selesai dituangkan  ke  dalam  piring  kaca  dan  diberi sisir  pencetak  sumuran  gel.  Gel  kemudian didiamkan ± 30 menit. Setelah gel memadat, pelat  kaca  dirangkai  dengan  rangkaian elektroforesis  dan  sisir  dilepaskan.  TBE  1X kemudian dituangkan ke dalam tangki mesin elektroforesis. Gel yang telah dicetak, sampel DNA target dimasukkan ke dalam lubang sisir, masing-masing 5 µl dan terakhir penanda 5 µl ditempatkan  di  tengah  gel.  Setelah  itu dimasukkan  ke  dalam  mesin  elektroforesis. Pastikan gel terendam dalam TBE 1X. Running dilakukan  pada  100  V  selama  22 menit.  Setelah running ,  gel  dikeluarkan  dari cetakan dan direndam dalam larutan etidium bromida  selama  15  menit  untuk pewarnaan. Kemudian  gel  dipindahkan  ke  injeksi  air untuk dicuci. Selama proses pencucian, wadah air  dikocok  secara  perlahan  agar  proses pencucian  berlangsung.  Pita  DNA  yang terbentuk pada gel diamati di bawah sinar UV menggunakan  UV Transilluminator .  Band target sekitar 1300-1500 bp.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa sifat tanah yang berbeda mempengaruhi kelimpahan BPF di dalam tanah. Tanah yang digunakan dalam objek penelitian memmiliki nilai  pH  yang  rendah  (masam).  Berdasarkan analisis pH tanah, kedua jenis tanah TLB dan TLC  bersifat  sangat  masam  yaitu  3,8  &  4,8, nikai  yang  lebih  rendah  tersebut  dapat disebabkan  karena  keberadaan  pirit  yang dapat menyebabkan kemasaman tanah tinggi.

## Kelimpahan Bakteri Pelarut Fosfat
Permasalahan lahan rawa di beberapa daerah adalah adanya sumber keasaman yang tinggi yang menimbulkan hambatan seperti efek H + yang menyebabkan luka pada tanaman (akar), terganggunya serapan unsur hara Ca, Mo, Mg dan P yang terserap oleh Al, defisiensi Ca, Mg, K  dan  kemungkinan  Na,  penurunan  fiksasi siklus nitrogen, penurunan aktivitas mikoriza, peningkatan  serangan  patogen  tular  tanah dan akumulasi asam organik tanah atau unsur toksik  yang  tidak  bermanfaat  pada  kondisi
oksidasi/reduksi.  Metode  yang  digunakan dalam  dalam  mengatasi  permasalahan  ini dapat menggunakan pupuk dolomit (Kusnadi et  al.  2022)  atau  penanganan  dapat  secara alamiah dengan menggunakan BPF(Syahputra  et  al.,  2018).  Berikut  ini merupakan hasil pengamatan mikroba.
Tabel  1.  Kelimpahan  jumlah  Bakteri  serta Golongan  Bakteri  Pelarut  Fosfat  dari Tanah Kalimantan Selatan .
Kode Jenis Tanah Kelimpahan (Pengenceran 10 8 ) Jumlah BPF (CFU per g kering tanah*) TLB 15 2.9 10 7 TLC 40 5.4 10 7
Hasil  pengamatan  kelimpahan  bakteri ditampilna dalam Tabel 1., pada tabel tersebut menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan kelimpahan  BPF  pada  kedua  jenis  tanah tersebut.  Tanah  TLC  memiliki  jumlah  BPF lebih  tinggi  dari  tanah  TLB  masing-masing mencapai  5,4  10  7  dan  2,9  10  7  CFU  per  g tanah kering. Kelimpahan mikroba dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya adalah  pH  tanah,  seperti  yang  disampaikan oleh  Taha  (1969)  pada  penelitiannya disebutkan  bahwa  pH  tanah  mempengaruhi pertumbuhan  BPF,  pH  tanha  yang  optimum untuk  pertumbuhan  BPF  pada  pH  netral. Tanah  dengan  kode  TLC  cenderung mendekati  pH  netral  dibandingkan  TLB sehingga kelimpahan BPF lebih tinggi.

## KESIMPULAN
Gambar 2. Isolasi Bakteri Pelarut Fosfat (BPF) di media  NBRIP.  A:  Isolasi  BPF  dari  tanah pada pengenceran 10 8 ; B: Pengujian BPF isolate Tunggal.
Gambar  2.  menunjukkan  isolasi  BPF  dari tanah.  Banyak  bakteri  yang  tumbuh  pada media  NBRIP.  Namun,  hanya  koloni  bakteri yang  membentuk  zona  bening  pada  media padat yang merupakan bakteri pelarut fosfat. Terdapat  55  isolat  BPF  yang  diperoleh  dari tanah, namun hanya 4 isolat terpilih yang diuji lebih  lanjut  yaitu  dengan  pertimbangan pembentuk  zona  bening  terluas  serta kemurnian  bakteri.  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Jaya  et  al. (2020) pada penelitian tersebut bakteri yang diidentifikasi  dapat  melarutkan  fosfat
diindikasikan  membentuk  zona  bening  pada media  NBRIP  yang  memiliki  warna  dasar putih.

## Morfologi Koloni Bakteri
Pada Tabel 2. Kode isolate berupa TLB1 dan TLB2  merupakan  isolat  yang  berasal  dari lahan rawa dengan luapan tipe B, sedangkan TLC1  &  TLC2  merupakan  isolat  yang diperoleh dari lahan rawa dengan luapan tipe C.
Tabel 2. Identifikasi Koloni Bakteri Pelarut Fosfat yang Telah Dimurnikan.
No Nama Isolat Morfologi koloni (Color, Elevation, Edge, Overall) Gram 1 TLB1 Cream, Plateau, Smooth, Round Negative 2 TLB2 Cream, Flat, Erode, Round Negative 3 TLC1 Cream, Plateau, Erode, Round Negative 4 TLC2 Cream, Flat, Erode, Irregular Negative
Pada  tabel  ini  dapat  diketahui  bahwa isolate  TLB1  dan  TLC  1  diduga  masuk  ke dalam  famili  yang  sama,  sedangkan  TLB2 diduga  memiliki  famili  yang  sama  dengan TLC2,  hal  tersebut  di  dasarkan  pada kemiripan  morfologi  koloni  bakteri  serta perbedaan saat pewarnaan gram. Isolat TLB2 &  TLC2  diduga  merupakan  famili  dari golongan bacillus s.p didasarkan  pada kemiripan  morfologi  serta  pada  pewarnaan gram (Puspita dkk., 2017). Isolat TLB1 & TLC1 memiliki kemiripan dengan Burkholderia spp, sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Ghosh  et  al,  (2015)  bakteri  tersebut  dapat melarutkan  fosfat  cukup  baik  pada  media NBRIP.

## Pelarutan Fosfat Secara Kualitatif
Identifikasi dilakukan hanya pada isolat yang menunjukkan  kemampuan  membentuk  zona bening yang luas. Dua isolat BPF dari masing- masing jenis tanah diuji kemudian diidentifikasi. Hasil identifikasi menunjukkan adanya  perbedaan  morfologi  koloni.  Namun koloni yang diperoleh dari kedua jenis tanah
tersebut  cenderung  memiliki  warna  yang sama.
Gambar  3 . Uji  kualitatif  kemampuan  melarutkan fosfat  pada  media  padat  NBRIP.  TLB1 dan TLB2 merupakan isolat yang berasal dari  lahan  rawa  dengan  luapan  tipe  B, sedangkan  TLC1  &  TLC2  merupakan isolat  yang  diperoleh  dari  lahan  rawa dengan luapan tipe C. Bilah menunjukkan  kesalahan  standar  pada tingkat kesalahan 5%.
0 2 4 6 8 0 1 2 3 4 5 6 7 Inde ks Pelar utan Hari Indeks Pelarutan Fosfat TLB1 TLB2 TLC1
TLC2
Isolat BPF yang telah teridentifikasi kemudian diuji  secara  kualitatif  untuk  mengetahui kemampuannya  dalam  melarutkan  fosfat seperti  pada  Gambar  3.  indeks  pelarutan fosfat  adalah  selisih  antara  diameter  zona bening  yang  terbentuk  dengan  diameter diameter  koloni  dibagi  dengan  diameter koloni.  Berdasarkan  gambar  tersebut,  isolat TLB1 secara nyata memiliki indeks pelarutan fosfat  tertinggi  diikuti  oleh  TLB2,  TLC2  dan TLC1.
Gambar  3.  menunjukkan  uji  kemampuan isolat dalam melarutkan fosfat yang dilakukan pada  media  NBRIP.  Masing-masing  media padat diatur dengan ketebalan yang sama (10 ml/cawan Petri) untuk menghindari kesalahan saat pengamatan. Zona bening yang terbentuk  pada  media  padat  menunjukkan bahwa  bakteri  ini  memiliki  kemampuan melarutkan  fosfat  dalam  air  dengan mekanisme BPF dalam aktivitasnya menghasilkan asam-asam organik, antara lain asam  sitrat,  format  dan  glaukonik  (Pande  et al.,  2017)  Asam-asam  tersebut  terbukti mampu mengubah P yang tidak tersedia bagi tanaman  di  dalam  tanah  menjadi  tersedia.  P dalam  tanah  yang  diikat  oleh  Al/Fe  dapat menjadi  ion  dalam  tanah  karena  Al/Fe menjadi Al/Fe-khelat dalam tanah oleh asam fosfatase.  Asam  fosfatase  merupakan  salah satu  indikator  yang  dapat  digunakan  untuk melihat  tingkat  mineralisasi  P  dalam  tanah (Suliasih  &  Rahmat,  2007).  Unsur  P  penting bagi  pertumbuhan  tanaman,  menurut penelitian  yang  dilakukan  oleh  Rahayu, (2017) menunjukkan bahwa perlakuan pupuk fosfat  dapat  mempengaruhi  lebar  daun, artinya  dengan  lebar  dau  yang  lebih  tinggi fotosintesis  berjalan  lebih  baik  sehingga produktivitas tanaman berpotensi meningkat.

## Ekstraksi DNA Bakteri & Visualisasi
Visualisaisi  DNA  menggunakan  metode elektroforesis,  yaitu  cara  untuk  memisahkan molekul selular karena perbedaan ukurannya
yang  dipengaruhi  oleh  medan  listrik.
Gambar 4. Analisis Fragmen DNA; M: Marker 1 kb, TLB1  dan  TLB2  merupakan  isolat  yang berasal  dari  lahan  rawa  dengan  luapan tipe  B,  sedangkan  TLC1  &  TLC2 merupakan  isolat  yang  diperoleh  dari lahan rawa dengan luapan tipe C.
Hasil visualisasi pada gambar 4. menunjukkan  bahwa  dari  keempat  bakteri terpilih  yang  memiliki  kemampuan  untuk melarutkan  fosfat  yang  diamplifikasi  dengan primer 16sDNA (27f dan 1492r) pada kisaran 1.380-1.500  bp,  berarti  keenam  bakteri tersebut  memiliki  sekitar  1.380-1.500 pasangan basa. Pasangan basa menggambarkan  fragmen  DNA.  Menurut penelitian yang dilakukan oleh (Hakovirta et al.,  2016)  bahwa  DNA Bacillu s  diamplifikasi pada  kisaran  1500  bp,  selain  itu  (Mursyida, 2015) terungkap bahwa Pseudomonas putida, Serratia  marcescens & Burkholderia  cepacia juga  diamplifikasi  pada  kisaran  1.500  bp. Bakteri  tersebut  masuk  ke  dalam  BPF  serta PGPR  yang  sering  digunakan  sebagai  agen kelarutan fosfat untuk mendukung pertumbuhan tanaman.

## KESIMPULAN
Terdapat  perbedaan  kelimpahan  BPF  pada jenis tanah  yang diamati  pada  penelitian  ini. Kelimpahan BPF pada tanah TLC lebih tinggi dibandingkan  tanah  TLB,  yaitu  masing- masing  5,4  10 7 dan  2,9  10 7 CFU  per  g  tanah kering. Terdapat 55 isolat BPF yang diperoleh dari kedua jenis tanah tersebut dan dua isolat (TLB1  dan  TLB2)  berpotensi  digunakan sebagai  pupuk  hayati  untuk  meningkatkan kelestarian  dan  produktivitas  lahan.  Semua isolat  yang  diekstraksi  dari  DNA  dan diekstraksi dari amplifikasi gDNA
menunjukkan 1330-1500 bp. Pada penelitian selanjutnya
disarankan untuk mengidentifikasi isolat sampai tahap molekuler,  menguji  kemampuan  isolat melarutkan  fosfat  secara  kuantitatif,  dan mengkaji pengaruh isolat terhadap
pertumbuhan jagung.

## DAFTAR PUSTAKA
Ghosh,  R,  Soma  Barman  S,  Mukherjee,  R  , Narayan, Mandal, 2016.Role of phosphate solubilizing Burkholderia spp.  for  successful colonization  and  growth  promotion  of Lycopodium cernuum L. ( Lycopodiaceae ) in  lateritic  belt  of  Birbhum  district  of West Bengal,India.. https://doi.org/10.1016/j.micres.Micro biological Research.2017.09.008 Hakovirta, R. J, Prezioso, S., Hodge, D., Pillai, S. P.,  &  Weigel,  L.  M.  2016.Identification and
Analysis  of  Informative  Single  Nucleotide Polymorphisms  in  16S  rRNA  Gene Sequences of the Bacillus cereus Group. J. Clin.  Microbiol  54,  2749 – 2756  doi:
10.1128/JCM.01267-16.
Havlin,  John.,  Samuel  L  Tisadle,  Werner  L Nelson,  and  James  D  Beaton.  2014.Soil Fertility and
Fertilizer.  Edition,  8.  New  Jersey,  USA: Pearson inc Islamiati  ,  A.  2015.  Potensi Azotobacter Sebagai Pelarut Fosfat. J. Sains Dan Seni Pomits, 2 2 – 4.
Joe, M., Deivaraj, S., Benson, A., Henry, J., And, &  Narendrakumar,  G.2018.  Soil  extract calcium phosphate media for screening of  phosphate-solubilizing  bacteria.  Agri Nat Res, 52, 305 – 308.doi:
10.1016/j.anres.2018.09.014
Jaya, G. I., S. N. H. Utami, J. Widada, and W. A.
Yusuf.  2020.  “Characterization  of
Phosphate-Solubilizing Bacteria Isolated  from  Acidic  Ultisol  Soil,  South Borneo.” IOP  Conference  Series:  Earth and  Environmental  Science 449(1).  doi: 10.1088/1755-1315/449/1/012005.
Karpagam,  T  and  Nagalakshmi,  P.K.  2014  , “Isolation  and  Characterization  of

## Phosphate
Solubilizing Microbes from Agricultural Soil,” I  J  Cur  Microbiol  and  Appl  Scie,  3  601- 614. https://doi.org/10.3389/fmicb.2020.00
752 Kasno,  A,      Rochayati,  S,  dan  Prasetyo.  B.  H. 2009 .Deposit, Penyebaran Dan Karakteristik
Fosfat  Alam.  in:  Fosfat  Alam  Pemanfaatan Pupuk  Fosfat  Alam  Sebagai  Sumber Pupuk P. Balai penelitian Tanah. 1-21
Kusnadi,  H.,  Desayati,  Fauzi,  E.,  Ishak,  A., Firizon, J., & Wawan Eka Putra. (2022). Produktivitas Padi  Di  Lahan  Rawa  Dengan  Kapur  Dolomit.
Jurnal Pertanian, 13(2), 47 – 53. https://doi.org/10.30997/jp.v13i2.5548 Mursyida. E, Mubarik, N. R., & Tjahjoleksono, A. 2015. Selection and Identification of Phosphate-Potassium  Solubilizing  Bacteria from  the  Area  Around  the  Limestone Mining  in  Cirebon  Quarry.  Res.  J.
Microbiol 10, 270 – 279. DOI: 10.3923/jm.2015.270.279 Nautiyal, C Shekhar.1999.An Effcient Microbiological  Growth  Medium  for Screening Phosphate Solubilizing Microorganisms C. FEMS Microbiol Lett 170, 265 – 70.doi: 10.1111/j.1574-6968.1999.tb13383.x Pande.,A,  Pandey,  P.,  Mehra,  S.,  Singh,  M.,  &
Kaushik,  S.  2017.Phenotypic  and genotypic characterization  of  phosphate  solubilizing bacteria  and  their  efficiency  on  the growth  of  maize.  IJGEB,  15,  379 – 391. doi: /10.1016/j.jgeb.2017.06.005
Puspita, F, Ali, M., Pratama, R.2017. Isolasi dan Karakterisasi  Morfologi  dan  Fisiologi Bakteri
Bacillus sp.  Endofitik  dari  Tanaman  Kelapa Sawit  ( Elaeis  guineensis Jacq.).  Jurnal Agrotek Tropika.https://jatt.ejournal.unri.ac.id/ index.php/JATT/article/view/6219. Rahayu,  A,  Setyono,  dan  S  Susanto  (2017).
Pengaturan Keragaan Tanaman  Pamelo (Citrus
Maxima (Burm.) Merr.) Dengan Pemangkasan Dan Kombinasi Pupuk N, P, Dan K Plant Performance  Setting  Of  Pummelo  (Citrus Maxima  (Burm.)  Merr.)  Through
Pruning And Combining  of  N,  P,  And  K  Fertilizer.  Jurnal Pertanian, 7(1), 7 – 13. Https://Doi.Org/10.30997/Jp.V7i1.31. Rorison, H.I. 1973.The Effect Of Extreme Soil Acidity  On  The  Nutrient  Uptake  And Physiology Of Plants. Nat Cons Gras Res Un, 1(582), 223 – 254. https://doi.org/10.1038/023178a0 Salam,  A.K.  2012  .Ilmu  Tanah  Fundamental. Global Madani Press. Lampung. 362 hlm Suliasih dan Rahmat.2007.Aktivitas Fosfatase Dan  Pelarutan  Kalsium  Fosfat  Oleh Beberapa
Bakteri  Pelarut  Fosfat.  Biod.  8.23-26.  doi: 10.13057/biodiv/d080105
Syahputra,  R.,  Hanafiah,  A.  S.,  &  Tengku Sabrina.  (1970).  Pengaruh  Pemberian Azolla dan Bakteri Pelarut Fosfat Terhadap Pertumbuhan dan Produksi Padi Sawah
(Oryza sativa L.) Di Tanah Sulfat Masam. Jurnal Pertanian Tropik, 5(2), 301 – 308. https://doi.org/10.32734/jpt.v5i2.302 4
Taha,  S.  M,.  and  S.  A.Z.  Mahmoud,  A.H.El- Damaty,  A.M.  Abd.  El-Hafez.  1969.
Activity of phosphate-dissolving  bacteria  in  Egyptian Soils. Plant Soil 31(1): 149- 160.https://doi.org/10.1007/BF01373 034
Teng.,Z,  Shao,  W.,  Zhang,  K.,  Huo,  Y.,  &  Li, M.2019. Characterization of phosphate solubilizing  bacteria  isolated  from  heavy metal  contaminated  soils  and  their potential  for  lead  immobilization.  J Environ  Manage,  231,  189 – 197.  doi: 10.1016/j.jenvman.2018.10.012.
Ulfiyati, N and Zulaika, E. 2015. Isolat Bacillus Pelarut Fosfat Dari Kalimas Surabaya. J. Sains  dan  Seni  Pomits  ITS  4,  6 – 8.  DOI:
10.12962/j23373520.v4i2.14049