p-ISSN: 0853 - 7658 e-ISSN: 2721-3757
https://ppnp.e-journal.id/lutjanus_PPNP
Pemberian Dosis yang Berbeda Melalui Rotifer dan Artemia Diperkaya dengan Probiotik Bacillus Sp Terhadap Tingkat Ketahanan Stres Larva Kepiting Bakau ( Scylla olivacea ) dan Populasi Bakteri
Giving Different Dose Through Rotifers and Artemia Enhanced With the Probiotic Bacillus SP on The Level of Stress Larva Resistance Mangrove Crab Scylla ( Scylla olivacea ) and Bacterial
Population
Nursyahran 1) ,Hasri 2) , Dina U 2)
1 Sekolah Tinggi Teknologi Kelautan Balikdiwa Makassar
2 Pranata Laboaratorium Pendidikan Politeknik Pertanian Negeri Pangkaje Kepulauan
Article history: received Oktober 7, 2020 Accepted Desember 10, 2020
Keyword: Mangrove Crab scylla, probiotics, stress resistance, bacterial population
. *Corresponding Author: nursyahran00@gmail.com
Abstrak: Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian probiotik Bacillus sp  melalui  Rotifer  dan Artemia dengan  dosis  yang berbeda terhadap tingkat ketahanan stres zoea kepiting bakau ( S. olivacea ). Penelitan  ini  dilaksanakan  di  Balai  Budidaya  Air  Payau  (BBAP),  Desa Bontoloe,  Kecamatan  Galesong  Selatan,  Kaupaten  Takalar,  Sulawesi Selatan dari bulan Maret sampai Juni 2012. Hewan uji yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  larva  kepiting  bakau  stadia  zoea.  Larva  tersebut diperoleh  dari  hasil  penetasan  di  Balai  Budidaya  Air  Payau  Takalar. Rancangan  Percobaan  yang  digunakan  adalah  rancangan  acak  lengkap (RAL)  yang  terdiri  dari  4  perlakuan  3  ulangan.  Data  dianalisis  dengan menggunakan  analisis  ragam  dan  uji  tukey  digunakan  untuk  mengetahui perbedaan antar perlakuan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ketahanan larva kepiting bakau terhadap stres tertinggi dicapai pada perlakuan dengan dosis 0.1 g/L (perlakuan C) dan terendah pada perlakuan dengan dosis 0.0 g/L  (perlakuan  A).    Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa  perbedaan dosis probiotik Bacillus sp melalui rotifer dan artemia berpengaruh sangat nyata  (P<0.01)  terhadap  tingkat  stres  larva  kepiting  bakau  stadia  zoea sampai megalopaSementara kualitas air Suhu media untuk semua perlakuan berkisar  26.7-29.4 o C,  oksigen  terlarut  5,37  –  6,37  ppm,  pH  7.5-8.0  dan amonia 0.003-0.009 ppm
Abstract: This study aims to determine the effect of probiotic Bacillus sp through  Rotifer  and  Artemia  at  different  doses  on  the  level  of  stress resistance of mangrove crab zoea (S. olivacea).This research was conducted at the Brackish Water Cultivation Center (BBAP), Bontoloe Village, South Galesong  District,  Takalar  District,  South  Sulawesi  from  March  to  June 2012. The test animal used in this study was the larva of mangrove crab at zoea stage. The larvae were obtained from hatching at the Takalar Brackish Water Cultivation Center. The experimental design used was a completely randomized  design  (CRD)  consisting  of  4  treatments  and  3  replications. Data were analyzed using analysis of variance and the Tukey test was used to  determine  the  differences  between  treatments. The  results  showed that the  highest  resistance  of  mud  crab  larvae  to  stress  was  achieved  in  the treatment with a dose of 0.1 g / L (treatment C) and the lowest was in the
Nursyahran et al., / Lutjanus 25 (2),49 -59 (2020)
treatment with a dose of 0.0 g / L (treatment A). The results of the analysis of variance showed that the difference in the probiotic dose of Bacillus sp through rotifer and artemia  had a  very  significant effect (P <0.01) on the stress  level  of  mangrove  crab  larvae  from  zoea  stage  to  megalopa,  while water quality. - 6.37 ppm, pH 7.5-8.0 and ammonia 0.003-0.009 ppm

## PENDAHULUAN
Kepiting  bakau  ( Scylla  olivacea )  merupakan  salah  satu  jenis  komoditi  perikanan bernilai  ekonomis  penting.  Kepiting  bakau  telah    dibudidayakan  dibeberapa  daerah  di Indonesia  termasuk  Sulawesi  Selatan.  Pengembangan  komoditas  ini  diharapkan  dapat menciptakan  lapangan  kerja  dan  meningkatkan  taraf  hidup  petani  tambak.  Disisi  lain ketersediaan benih menjadi penentu keberhasilan budidaya kepting bakau
Selama ini kebutuhan benih kepiting bakau masih dipenuhi dari hasil penangkapan di alam  yang  sifatnya  fluktuatif.  Seiring  dengan  meningkatnya  permintaan  konsumen  akan kepiting bakau maka kebutuhan benih untuk budidaya kepting bakau menjadi faktor penentu keberhasilan  budidaya,  oleh  sebab  itu,  diperlukan  upaya  untuk  memproduksi  benih  kepting bakau secara massal melalui usaha pembenihan.
Usaha  pembenihan  kepiting  bakau  sampai  saat  ini  masih  menghadapi  masalah  utama yaitu,  masih  rendahnya  sintasan  larva.    Jantrarotai et.  al .  (2000)  melaporkan  sintasan S. olivacea stadia  zoea  hingga  megalopa  berkisar  22,91%.  Sementara  Funjaya et  al .  (2002) melaporkan  sintasan  larva  terutama  pada  stadia  zoea  berkisar  18,70%-25,57%  dan  Ekawati (2008) mendapatkan sintasan larva S. olivacea berkisar 18,80%-49,07%.
Pada  fase  larva  kepting  bakau  sangat  rentan  terhadap  stres  yang  disebabkan  oleh guncangan  lingkungan.  Sehingga  dibutuhkan  pemelihraan  yang  baik.    Salah  satu  upaya tersebut adalah dengan pemberian pakan alami yang diperkaya dengan probiotik
Upaya  yang  akhir-akhir  ini  banyak  dilakukan  adalah  dengan  aplikasi  probiotik  karena dianggap  lebih  aman  dan  ramah  lingkungan.  Menurut  Verschuere et  al .,  (2000)  probiotik merupakan agen mikrob hidup yang memberikan pengaruh menguntungkan pada inang dengan memodifikasi  komunitas  mikrob  atau  berasosiasi  dengan  inang,  menjamin  perbaikan  dalam penggunaan pakan atau memperbaiki nutrisinya, memperbaiki respon inang terhadap penyakit, atau memperbaiki kualitas air lingkungan ambangnya.
Aplikasi  pemberian  bakteri  probiotik  dapat  diberikan  langsung  ke  dalam  media pemeliharaan  udang  (Haryanti et  al .,  2000;  Muliani et  al .,  2003),  melalui  pakan  buatan (Rengpipat et al ., 1998a; Rengpipat et al ., 2000) atau pakan alami seperti Artemia (Rengpipat et al ., 1998b; Widanarni et al ., 2008a).
Bakteri  probiotik  yang  akan  digunakan  pada  dalam  penelitian  ini  adalah  bakteri probiotik bacillus sp . Penelitian sebelumnya aplikasi penggunaan bakteri probiotik bacillus sp yang dicampur dengan pakan buatan oleh Abd. Mansyur et al (2008) dan melalui pakan alami seperti Artemia (Widanarni et al. ,2008a) mampu meningkatkan kesintasan udang windu.  Akan tetapi, dosis penggunaan bakteri probiotik bacillus sp melalui Rotifer dan Artemia yang efektif untuk mencapai hasil yang optimal terhadap tingkat ketahanan sters larva kepiting bakau belum begitu jelas. Sehingga hal inilah yang melatarbelakangi dilakukannya penelitian ini.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian bakteri probiotik bacillus sp melalui Rotifer dan Artemia dengan dosis yang berbeda terhadap tingkat ketahanan stress larva kepiting bakau ( S. olivacea )

## METODE Waktu dan Tempat
Penelitan  ini  dilaksanakan  di  Balai  Budidaya  Air  Payau  (BBAP),  Desa  Bontoloe, Kecamatan  Galesong  Selatan,  Kaupaten  Takalar,  Sulawesi  Selatan.    Pelaksanaan  kegiatan mulai pemeliharaan induk kepiting bakau sampai penetasan dan pemeliharaan larva kepiting bakau  ( O.  olivacea )  dilaksanakan  pada  unit  pembenihan  kepiting  bakau,  sedangkan  anlisa proximat  dan  perhitungan  populasi  bakteri  dilaksanakan  di  Laboratorium  BBAP  Takalar. Penelitian dilaksanakan dari bulan Maret sampai Mei 2012.

## Materi Penelitian

## Hewan Uji
Hewan uji yang akan digunakan pada penelitian ini adalah larva kepiting bakau ( Scylla olivacea ). Larva tersebut diperoleh dari hasil penetasan  di Balai Budidaya Air Payau Takalar

## Probiotik
Probiotik Bacillus sp.    dari  produk  komersil.    Spesies  bakteri  terdiri  atas Bacillus subtilis, B. pumilus dan B. licheformis dengan kepadatan 2 x 10 10 cfu/g.

## Pakan
Pakan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  rotifer  ( B.  plicatilis ),  dan  nauplius artemia.    Rotifer  sebagai  pakan  uji  diperoleh  dari  hasil  kultur  secara  massal,  sedangkan nauplius Artemia berasal dari hasil penetasan kista strain Great Salt Lake produksi USA.

## Wadah dan Media
Wadah  percobaan  yang  akan  digunakan  ember  plastik  hitam  berkapisitas  5  L berjumlah 12 buah yang diisi dengan air laut bersalinitas  26 – 28 ppt (Rusdi, 2007), sebelum digunakan, air laut disaring terlebih dahulu dengan menggunakan sand-Filter lalu ditampung pada  bak  penampungan,  selanjutnya  dari  bak  penampungan,  air  ditreatment    dengan penyinaran UV untuk selanjutnya dialirkan ke wadah-wadah percobaan.  Pergantian air dengan salinitas yang sama dilakukan setiap hari sebanyak 25% dari volume wadah.  Kelarutan oksigen media penelitian dapat dipertahankan dengan melengkapi aerasi setiap media percobaan.
Penelitian  didahului  dengan  tahap  persiapan  yang  meliputi:  penyediaan  bahan  dan peralatan, pengadaan dan pemeliharan induk matang gonad, penetasan dan kultur pakan alami.

## Pemeliharaan Induk
Induk betina yang matang gonad dipelihara dalam bak beton berukuran panjang, lebar dan tinggi masing-masing: 5 x 1 x 1,5 m yang dilengkapi dengan aerasi.  Wadah diisi air laut bersalinitas  32  sampai  34  ppt  dengan  suhu  berkisar  30  smpai  33 o C.    selama  pemeliharaan, induk  kepiting  diberi  pakan  berupa  ikan  rucah  dan  daging  kerang.    Dosis  pakan  diberikan sebanyak 15% dari bobot tubuh dengan frekuensi pemberian dua kai sehari yakni pada pagi dan sore hari.  Induk kepiting yang siap menetaskan telur-telurnya segera dipindahkan ke media penetasan.

## Penetasan
Wadah  penetasan  terbuat  dari  fibre  glass  berbentuk  bulat  berdiameter  1,2  m  dan berukuran tinggi 0,5 m.  setelah induk kepiting bakau menetaskan telur-telurnya dalam wadah penetasan, induk segera dipisahkan dari larva selanjutnya dipindahkan ke media pemeliharaan dan dipelihara seperti semula.

## Penyediaan Probiotik
Penyediaan probiotik dengan pengaktifan bakteri dilakukan dengan merendam dalam air pada toples sesuai dengan dosis yang akan digunakan selama 1 jam untuk setiap perlakuan, kemudian  dilakukan  penyaringan  dengan  menggunakan  plankton  net  ukuran  20  µm  untuk
membuang sisa kotoran dalam proses aktivasi bakteri.  Air hasil  saringan kemudian ditebar kedalam tiap-tiap wadah penelitian.
Penyediaan Rotifer ( B. plicatilis )
Penyediaan  rotifer  dilakukan  dengan  mengkultur  secara  massal.  Wadah  yang digunakan  untuk  kultur  rotifer  adalah  bak  beton  berkapasitas  2  ton  air.  Kultur  rotifer  diberi pakan berupa Clorella sp. Clorella sp dikultur murni dan ditumbuhkan pada air media yang dipupuk dengan urea 100 mg/L, TSP 20 mg/L dan FeCl 3 2 mg/L serta diberi aerasi agar pupuk dan algae tersebar merata.
Setelah Clorella sp. Berkembang baik (± 4 hari), bibit rotifer dipindahkan ke dalam wadah kultur massal rotifer dalam waktu 5 hari siap dipanen dan siap untuk diperkaya dengan probiotik Bacillus sp. sesuai perlakuan Penetasan Kista Artemia
Sebelum dilakukan penetasan kista Artemia , maka kista terlebih dahulu  didekapsulasi dengan larutan  hipokhlorit. Tujuan dekapsulasi ini adalah untuk menghilangkan lapisan luar kista  tanpa  mempengaruhi  kelangsungan  hidup  embrionya.    Wadah  yang  digunakan  untuk dekapsulasi  ini  berbentuk  kerucut  yang  diberi  aerasi  dari  dasar  wadah.  Proses  dekapsulasi berlangsung  selama  5  -  15  menit.    Apabila  terjadi  perubahan  warna  kista  dari  coklat  gelap menjadi abu-abu kemudian oranye maka dekapsulasi dihentikan selanjutnya dicuci dengan  air laut hingga bau khlorin hilang dan tidak ada sisa busa pada kista tersebut.
Untuk  mendapatkan  nauplius Artemia, maka  kista  yang  telah  didekapsulasi diinkubasikan  ke  dalam  wadah  penetasan    yang  berisi  air  laut  bersalinitas  30  -  33  ppt  dan ditambahkan ke dalamnya 2g NaHCO 3 per liter medium penetasan. Wadah yang digunakan untuk penetasan kista Artemia terbuat dari fibre glass dengan dasar berbentuk kerucut berkapasitas 100 liter. Wadah ini dilengkapi dengan  aerasi. Kista hasil dekapsulasi yang menetas menjadi nauplius Artemia dipanen dengan cara menyipon, kemudian ditampung dalam saringan berdiameter 120 mikron, selanjutnya nauplius Artemia diperkaya dengan Probiotik Bacillus sp. sesuai dengan perlakuan.
Perlakuan dan Perancangan Penelitian
Penelitian  dilakukan  dalam  tiga  tahap  percobaan  yaitu  :  (1)  Percobaan  rotifer  yang diperkaya  dengan  probiotik Bacillus sp.  (2)  Percobaan  nauplius Artemia yang  diperkaya dengan probiotik Bacillus sp dan (3) percobaan pemelihraan larva kepiting bakau ( S. olivacea ) yang diberi rotifer dan artemia hasil pengkayaan oleh probiotik Bacillus sp. Pengkayaan Rotifer oleh  probiotik Bacillus sp. Pengkayaan Rotifer dengan Bacillus  sp dilakukan  pada  wadah  yang  berbeda  yaitu masing-masing dengan dosis A (0,0 g/L), B (0,01 g/L), C (0,1 g/L), D (1 g/L/) .Pengkayaan dilakukan selama 5 jam (Budi, 2010) dengan kepadatan Rotifer pada masing-masing perlakuan adalah 500.000 individu/l .
Wadah pengkayaan yang digunakan terbuat dari ember plastik dan corong berbentuk dasar    kerucut    bervolume  1  L  diisi  air  laut  0.5  L  dilengkapi    aerasi.        Penempatan  wadah dilakukan secara acak dalam ruangan tertutup pada suhu 29 sampai 30 o C, salinitas 32 sampai 35 ppt.
Pengkayaan nauplius Artemia oleh probiotik Bacillus sp.
Naupli Artemia yang  telah  dipanen  langsung  dilakukan  pengkayaan  dengan  bakteri probiotik Bacillus  sp .  Pengkayaan Artemia dengan Bacillus  sp dilakukan  pada  wadah  yang berbeda yaitu masing-masing dengan dosis A (0,0 g/L), B (0,01 g/L), C (0,1 g/L), D (1 g/L/) .Pengkayaan dilakukan selama 4 jam (Widanarni et al ., 2008a) dengan kepadatan Artemia pada masing-masing perlakuan adalah 300.000 individu/l
Untuk  mendapatkan  sejumlah  nauplius Artemia tersebut  maka  terlebih  dahulu dilakukan  perhitungan  persentase  penetasan  (hatching  rate)  kista Artemia .    Persentase penetasan dihitung menggunakan rumus sebagai berikut :
N HP =
X 100%
(N + C)
di mana: HP = Persentase penetasan N = Jumlah nauplius yang menetas C = Jumlah telur (kista) yang berisi tetapi tidak menetas.
Cara menghitung persentase penetasan adalah dengan menimbang kista Artemia 250 mg (48.250 kista, hasil perhitungan),  kemudian dimasukkan dalam tabung gelas berdasar kerucut yang  berisi  air  laut  100  ml  bersalinitas  30  ppt.    Kista  diaerasi  dan  diinkubasikan  pada  suhu kamar  (30 o C)  selama  24  jam.  Setelah  inkubasi,  diambil  lima  sampel  masing-masing  250 mikroliter dengan menggunakan pipet dan. selanjutnya dimasukkan ke dalam petri disc kecil. Agar semua nauplius masuk dalam petri disc maka  ujung pipet disemprot dengan air, kemudian ditetesi formalin 40% sebanyak 3 - 5 tetes dan selanjutnya dilakukan penghitungan nauplius.  Jumlah total nauplius pada kelima petri disc dibagi lima, sehingga didapatkan jumlah nauplius rata-rata.  Dalam percobaan ini didapatkan persentase penetasan kista Artemia sebesar 88,08%.  Dengan  demikian  untuk  mendapatkan  300.000  nauplius Artemia harus  ditetaskan sekitar 1,77g kista.
Setelah dilakukan pengkayaan sesuai dengan waktu yang ditentukan, yaitu 8 jam (Karim 1998), maka nauplius Artemia dipanen untuk selanjutnya diberikan kepada larva kepiting uji sesuai dengan dosis yang dicobakan pada perlakuan.
Pemberian pakan pada larva kepiting uji dilakukan setiap hari, yakni pada pagi hari. Pergantian air dilakukan setiap hari sebelum pemberian pakan sebanyak 20% dari total volume media.
Adapun dosis perlakuan yang digunakan untuk percobaan-percobaan tersebut  sebagai berikut :
A. 0 gram/L air media (Kontrol)
B. 0.01 gram/L air media
C. 0,1 gram/L air media
D. 1 gram/L air media

## Pengukuran dan Pengamatan Peubah Ketahanan Stres
Untuk  mengetahui  kondisi  fisiologis  larva    kepiting  bakau  maka  dilakukan  uji ketahanan stres.  Dalam uji ini dilakukan pengukuran resistensi larva  kepiting bakau terhadap kejutan osmotik mengikuti petunjuk Tackaert, Abelin, Dhert dan Sorgeloos (1989) dalam Ress, Cure, Piyatirativorakul, Sorgeloos dan Menasveta (1994). 15 ekor larva  kepiting bakau  secara acak diambil  dari media pemeliharaan dan dimasukkan ke dalam beker  gelas yang berisi air bersalinitas rendah (0 - 1 ppt) dengan volume 1 liter.   Banyaknya larva kepiting bakau yang stres diamati pada setiap interval 5 menit selama periode 1 jam.
Penilaian ketahanan larva kepiting bakau uji terhadap stres dilakukan secara kualitatif, yang didasarkan atas respon tingkah laku atau pergerakan larva kepiting bakau uji  yang tidak normal hingga mati selama percobaan stres berlangsung.
Untuk  mengevaluasi  ketahanan  larva  kepiting  uji  terhadap  stres  dihitung  dengan menggunakan formula Cumulative Stress Index (CSI) dari Ress et al , (1994) sebagai berikut :
CSI =  D 5 + D 10 + .........+ D 60 di mana:
CSI = Indeks stres kumulatif DT = Jumlah larva yang stress pada waktu t.

## Kualitas air
Peubah kualitas air yang diukur meliputi salinitas,  suhu, pH, oksigen terlarut,   dan amoniak. Salinitas media pemeliharaan larva kepiting bakau diukur dengan menggunakan hand refraktometer yang mempunyai ketelitian 0,1 ppt, suhu dengan thermometer air raksa dengan ketelitian 0,1 o C,  pH dengan pH meter dengan ketelitian 0,1.  Oksigen terlarut  diukur dengan menggunakan DO Meter, dan kadar amoniak dengan menggunakan spektrofotometer.
Pengukuran salinitas, suhu dan pH dilakukan setiap hari sebanyak 3 kali, yaitu pukul 06.00,  12.00,  dan  18.00;  oksigen  terlarut  setiap  tiga  hari  sekali  sampai  akhir  percobaan, sedangkan kadar amoniak diukur tiga kali selama penelitian yaitu awal, peretengahan dan akhir percobaan.

## Populasi Bakteri
Perhitungan populasi bakteri ditenkankan pada jumlah populasi bakteri total dan populasi bakteri probiotik ( Bacillus sp.). Sampel air untuk perhitungan populasi bakteri diambil pada akhir  pengamatan  sebanyak  10  mL,  kemudian  ditempatkan  pada  botol  gelap  dan  disimpan dalam coolbox .Metode  perhitungan  populasi  bakteri  menggunakan  metode  TSA.Sampel  air yang dipergunakan dilakukan pengenceran sebanyak 10 kali, kemudian air sampel digoreskan pada media agar (TSA) di wadah cawan petri dan didiamkan selama 3 hari.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  menggunakan  analisis  ragam  (ANOVA). Apabila  asilnya  berbeda  nyata,  maka  dilanjutkan  dengan  Uji  Tukey.    Untuk mengetahui keeratan hubungan sebagai respon perlakuan, digunakan korelasi regresi (Steel and Torrie, 1993).  Sebagai alat bantu untuk uji statistic digunakan paket Program SPSS Versi 17.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ketahan Stres
Salah satu penyebab tingginya kematian pada pemeliharaan larva adalah lingkungan dan nutrisi yang tidak optimal. Lingkungan yang buruk akan menyebabkan tekanan fisiologis pada  hewan  kultivan  yang  umum  disebut  stres.    Tekanan  fisiologis  yang  besar  akan mempengaruhi  neuroendokrin  untuk  melakukan  stimulasi  terhadap  hormon  steroid  seperti cortisol  dan  cathecolamin.    Dampak  negatif  adalah  distribusi  leukosit  dan  produksi  antibodi terhambat.  Hal ini menyebabkan penurunan  sistem kekebalan  tubuh sehingga patogen akan mudah menginfeksi (Almendras 2001)
Ketahanan larva kepiting bakau terhadap stres dievaluasi berdasarkan formula indeks stres kumulatif ( cumulative stress indeks , CSI).  Besarnya indeks stres kumulaitf larva kepiting bakau yang diperoleh dalam percobaan ini disajikan pada Tabel 1
Tabel  1.  Rata-rata  indeks  stres  kumulatif  larva  kepiting  bakau  (S.  olivacea)  pada  setiap perlakuan stadia zoea sampai megalopa
Perlakuan Indeks stes kumulatif A (0.0 g/L) B (0.01 g/L) C (0.1 g/L) D (1 g/L) 71.67 ± 3.06 a
60.33 ± 2.31 b
50.33 ± 4.16 a
59.17 ± 9.21 a
Keterangan: huruf yang sama menunjukkan berbeda nyata (P<0.05)
Tabel  1.  Memperlihatkan  bahwa  ketahanan  larva  kepiting  bakau  terhadap  stres tertinggi  dicapai  pada  perlakuan  dengan  dosis  0.1  g/L  (perlakuan  C)  dan  terendah  pada perlakuan  dengan  dosis  0.0  g/L  (perlakuan  A).    rendahnya  ketahanan  larva  kepting  bakau terhadap  stres  pada  perlakuan  A  (0.0  g/L)  diduga  disebabkan  karena  kualitas  air  media pemeliharaan kurang baik menyebabkan tekanan fisiologis pada larva sehingga nafsu makan berkurang  yang pada gilirannya akan menurunkan sistem kekebalan tubuh karena kurangnya asupan  makanan  sehingga  agen  patogen  akan  mudah  menginfeksi.  Indeks  stres  kumulatif minimum  dicapai  pada  perlakuan  dengan  dosis  0.1  g/L  (perlakuan  C)  adalah  50.33%  dan berbeda dengan semua perlakuan yaitu perlakuan A (71.67%), B (60.33%) dan C (53.33%), akan tetapi perlakuan A dan B tidak berbeda.
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa  perbedaan  dosis  probiotik Bacillus sp melalui  rotifer  dan  artemia  berpengaruh  sangat  nyata  (P<0.01)  terhadap  tingkat  stres  larva kepiting  bakau  stadia  zoea  sampai  megalopa.    Hal  ini  disebabkan  karena  dosis  probiotik Bacillus sp yang diberikan melalui rotifer dan artemia dapat meningkatkan  nilai  nutrisi atau memperbaiki  nutrisi  pakan,  mampu  memproduksi  antibiotik  serta  mampu  memproduksi vitamin-vitamin  (B  kompleks)  sehingga  meningkatkan  kadar  antibodi  yang  selanjutnya meningkatkan  kondisi  fisiologis  larva  kepiting  bakau  untuk  melawan  stres.    Hal  ini  sesuai dengan  pernyataan  Moriarty    (1999). Bacillus  subtilis memiliki  kemampuan  memproduksi antibiotik dalam bentuk lipopeptida, salah satunya adalah iturin. Iturin membantu pakan alami berkompetisi  dengan  mikroorganisme  lain  sebagai  antibiotik  bagi  mikroorganisme  lain  atau menurunkan tingkat pertumbuhannya. Iturin juga memiliki aktivitas antibiotik terhadap bakteri dan  virus  pathogen.  Selanjutnya  menurut  Fuller  (1992)  probiotik  merupakan  mikroba  hidup yang ditambahkan ke dalam pakan yang dapat memberikan efek menguntungkan bagi hewan inang dengan cara memperbaiki keseimbangan mikrob ususnya.
Hubungan antara dosis probiotik Bacillus sp yang diberikan melalui rotifer dan artemia dengan  indeks  stress  kumulatif  larva  kepiting  bakau  stadia  zoea  sampai  megalopa  berpola kuadratik  dengan persamaan regresi  Y = 187.1x 2 – 200.1x + 67.20 dengan R 2 0.696 (Gambar 1)
y = 187,17x 2 - 200,1x + 67,261 R² = 0,6962 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 C u m u la ti f S tr e s I n d e k s Dosis Probiotik Bacillus sp (g/L)
Gambar 1. Hubungan antara dosis probiotik Bacillus sp dengan indeks stres kumulatif larva kepiting bakau ( S. Olivacea ) stadi zoea sampai megalopa
Gambar  1  diatas  memperlihatkan  bahwa  penggunaan  probiotik Bacillus sp yang diberikan melalui rotifer dan artemia menghasilkan nilai indeks stres kumulatif  yang rendah  atau  tingkat  ketahanan  larva  kepiting  bakau  terhadap  stres  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  tanpa  probiotik.    Berdasarkan  persamaan  regresi  tersebut  dapat diprediksi  bahwa nilai indeks sters kumulatif minimum larva kepiting bakau dicapai pada dosis 0,53 g/L.  Hal ini dibuktikan pula pada larva  kepting bakau (Karim, 2006), Larva Rajungan (Effendy. dkk 2005) dan Udang Litopenaeus Stylirostris (Castex et al ,  2009) Populasi Bakteri Probiotik
Jumlah  total  bakteri  probiotik  pada  media  pemeliharaan  relatif  baik  untuk  semua perlakuan dan kontrol (Gambar 2). Pada awal perlakuan, jumlah total populasi bakteri sekitar 1 x 10 6 sampai 10 7. Atmomarsono  (2000),  mengatakan  bahwa  pada  dasarnya  jumlah  bakteri total di perairan yang tidak tercemar adalah sekitar 1,0 x 10 6 sampai 10 9. dan sedikit mengalami penurunan  pada  akhir  perlakuan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  bakteri  probiotik Bacillus sp yang diberikan ke larva kepiting bakau melalui Rotifer dan Artemia diduga dapat dicerna dan dimanfaatkan oleh larva kepiting bakau dan tidak dilepaskan sehingga tidak terakumulasi pada media pemeliharaan.  Hal ini sama dengan penelitian Susanti (2009)  bahwa populasi bakteri awal pada media pemeliharaan larva udang windu yang diberi probiotik melalui artemia sekitar 1 x 10 3 sampai 10 6 dan sedikit mengalami penurunan akhir sekitar  1 x 10 5 . Sementara pada kontrol terlihat peningkatan jumlah bakteri yang diduga merupakan bakteri pathogen, karena pada kontrol tidak diberikan bakteri probiotik sehingga kondisi media kultur yang kurang baik.
Aplikasi  probiotik  kedalam  media  kultur  akan  meningkatkan  kualitas  air.  Moriarty (1998)  menggunakan  probiotik  yang  mengandung Bacillus sp.  yang  bertujuan  untuk memperbaiki  kualitas  air  melalui  dekomposisi  materi  organik,  menyeimbangkan  komunitas
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 0 0,01 0,1
1 Dosis Probiotik Bacillus sp (g/L) Total awal Populasi Bakteri probitik Total akhir Poulasi bakteri Probiotik
mikroba  serta  menekan  pertumbuhan  patogen  sehingga  menyediakan  lingkungan  yang  lebih baik bagi kehidupan organisme kultur.
Gambar  2.  Populasi  total  Probiotik Bacillus sp  pada  awal  dan  akhir  perlakuan  (satuan  Log CFU/ml)

## Kualitas Air
Kualitas air dari media pemeliharaan larva yang terdiri dari peubah fisika dan kimia berperan  penting  dalam  menentukan  tingkat  kelayakan  habitat  sebagai  penopang  bagi kehidupan  dan  perkembangan  larva  kepiting  bakau.  Parameter  kualitas  selama  perlakuan terkontrol seperti suhu, salinitas, pH, DO dan ammonia.  Suhu media untuk semua perlakuan berkisar 26.7-29.4 o C, oksigen terlarut 5,37 – 6,37 ppm, pH 7.5-8.0 dan amonia 0.003-0.009 ppm. Kisaran  nilai-nilai  tersebut  masih  berada  dalam  rentang  yang  layak  untuk  mendukung kehidupan larva kepiting bakau (Hoang 1999, Rusdi et al ., 1999; Ruscoe et al., Kumulu dan Kir,  2005).  Hal  ini  juga  berarti  peran Bacillus sp.  terhadap  penurunan  kandungan amoniak.Penggunaan  bakteri Bacillus sp.  memiliki  kemampuan  dalam  mengurai  amoniak dalam  perairan.  Austin  (1987)  menyatakan,  bahwa  kandungan  amoniak  dalam  perairan dipengaruhi  oleh  adanya  proses  amonifikasi  bahan  organik  dan  protein  yang  ada  dalam  air dengan  enzim  urease  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  pengurai  organik.  Sementara  itu,  Thye (2005)  menambahkan  bahwa  selain  mekanisme  diatas  probiotik  dapat  bekerja  melalui mekanisme  penguraian  senyawa  toksik  yang  berada  di  perairan  seperti  NH 3 ,  NO 2 ,  NO 3 , penguraian bahan organik, menekan populasi alga hijau ( blue-gree algae ), penghasil vitamin yang bermanfaat bagi inang, dan penetralisir  senyawa toksik yang ada dalam makanan  serta perlindungan secara fisik inang dari patogen. Probiotik sebagai agen pengurai ( bioremediation ) merupakan kelompok mikroorganisme terpilih yang menguntungkan seperti Bacillus subtilis . Penambahan bakteri yang berperan sebagai pengurai senyawa toksik dapat mempertahankan kualitas media pemeliharaan sehingga dapat mendukung kehidupan larva kepiting bakau

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil yang diperoleh dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa :
1. Indeks stres kumulatif minimum dicapai pada perlakuan dengan dosis 0.1 g/L (perlakuan C) adalah 50.33% A (71.67%), B (60.33%) dan C (53.33)
2. Jumlah total populasi bakteri sekitar 1 x 10 6 sampai 10 7.
3. Parameter  kualitas  selama  perlakuan  terkontrol  seperti  suhu,  salinitas,  pH,  DO  dan ammonia.  Suhu media untuk semua perlakuan berkisar 26.7-29.4 o C, oksigen terlarut 5,37 – 6,37 ppm, pH 7.5-8.0 dan amonia 0.003-0.009 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
Almendras,  J.M.E.,    2001.  Immunity  and  Biological  Methods  of  Disease  Prevention  And Control  In  lio-Po,  G.D., et  al,    2001 .  Healt  Management  In  aquaculture. SEAFDECAQD.  Tigbaun,  IIloilo, Philippnes.
Castex, M., Limaire, P., Wabete, N., Chim, L.  2009.  Effect of dietary probiotic Pediococcus acidilactici on antioxidant defences and oxidative stress status of shrimp Litopenaeus stylirostris . Journal of Aquaculture, September 2009, Volume 294, Issues 3-4, pages 306-313. Elsevier B.V. Al rights reseved. New Caledonia
Effendy,  S.,  Faidar,  Sudirman dan E.  Nurcahyono.  2005.  Pemeliharaan  rajungan  ( Portunus pelagicus Limneus) pada berbagai tingkat salinitas media. Laporan Penelitian. Balai Budidaya Air Payau. Takalar.
Effendy,  S.,  Faidar,  Sudirman dan E.  Nurcahyono.  2005.  Penggunaan  Probiotik  pada pemeliharaan Larva Kepiting Bakau Scylla olivacea Herbst.  Laporan Penelitian. Balai Budidaya Air Payau. Takalar.
Ekawati, S.R.  2008.  Peningkatan Sintasan dan Pertumbuhan Kepiting Bakau (Syclla olivacea) Stadia Zoea Melalui Aplikasi Pakan Alamihasil Bioenkapsulasi karatenoid Cangkang Kepiting Non Ekonomis. Tesis Pascasarjana Unhas. Makassar
Fujaya, Y. 2008. Kepiting komersil di dunia, biologi, pemanfaatan, dan pengelolaannya. Citra Emulsi. Makassar
Fujaya, Y., M. Y. Karim, S. Sampelling, dan H. Juddawi.  2002.  Sintasan larva kepiting bakau ( Scylla serrata Forsskal) yang diberi pakan alami hasil bioenkapsulasi karotenoid yang diisolasi  dari  limbah  cold  storage  udang.    Laporan  Penelitian.    Lembaga  Penelitian UNHAS-BPTP, Makassar
Irmawati.  2005. Keanekaragaman  Jenis  Kepiting  Bakau  Scylla  sp  Di  Kawasan  Mangrove Sungai  Keera  Kabupaten  Wajo  Sulawesi  Selatan,  Lembaga  Penelitian  UNHAS, (Online), (http://www.unhas.ac.id, diakses 30 April 2008).
Jantrarotai,  P.,  K. Taweechuer,  and S. PripanapongS. 2002. Salinity Levels on Survival Rate and  Development  of  Mud  Crab  ( Scylla  olivacea )  from  Zoea  to  Megalopa  and  from Megalopa to Crab Stage. Kasetsart J. (Nat. Sci.) , 36: 278-284.
Karim,  M.  Y.  2006.    Respon  Fisiologis  Larva  Kepiting  Bakau  (Scylla  serrata)  yang  di  Beri Nauplius Artemia Hasil Bienkapsulasi Asam Lemak  -3 Hufa. Jurnal Protein. Volume 13 no 1. Th 2006.
Karim, M. Y., H. Y. Azis dan Afriani. 2003. Vitalitas Larva Kepiting Bakau ( Scylla serrata Forsskal) yang Dipelihara pada Berbagai Kondisi Pencahayaan.  2003. Jurnal Ilmiah Bumi Kita, Lingkungan Hidup dan Pengelolaan Sumber Daya Alam, Vol. 2 (3)  116 – 120.
Karim, M.Y. 2005. Kinerja pertumbuhan kepiting bakau betina ( Scylla serrata Forsskal) pada berbagai salinitas media dan evaluasinya pada salinitas optimum dengan kadar protein berbeda (disertasi). Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor
Moriarty,  D.J.W.  1998.  Control  of Luminous  vibrio Spesies  in  Penaeid  Aquaculture  Pond. Journal Aquaculture, 164: 351-358.
Moriarty,  D.J.W.  1999.  Disease  control  in  shrimp  aquaculture  with  probiotic  bacteria. Proceeding of the 8th International Symposium on Microbial Ecology, Atlantic Canada Society for Microbial Ecology, Halifax: 7 hlm.
Rusdi,  I.    2007.    Peningkatan  Sintasan  Larva  Kepiting  Bakau  (Sylla  olivacea)  Melalui Optimalisasi  Salinitas.    Tesis.    Program  Pascasarjana,  Universitas  Hasanuddin, Makassar.  66 hal.
Verschuere.  L.,  Rombaut,  G.  Sorgeloos,  P.  and  Verstraete,  W.,  2000.  Probiotic  bacteria  as biological control agents in aquacuture. Microbiology and Molecular Biology revie 64: 655 – 671.
Watson, A. K., H. Kaspar, M. J. Lategan & L. Gibson. 2008. Probiotics in aquaculture: The need, principles and mechanisms of action and screening processes. Aquaculture 274: 1 –14.