## IDENTIFIKASI KEBERAGAMAN BAKTERI PADA LUMPUR HASIL PENGOLAHAN LIMBAH CAT DENGAN TEKNIK KONVENSIONAL
IDENTIFICATION OF BACTERIAL DIVERSITY IN WASTE RECYCLING PAINT SLUDGE

## BY CONVENTIONAL MICROBIOLOGICAL TECHNIQUE
1* Dwipayana , 2 Herto Dwi Ariesyady, dan 3 Sukandar 1,2,3 Program Studi Teknik Lingkungan Fakultas Teknik Sipil dan Lingkungan, Institut Teknologi Bandung Jl Ganesha 10 Bandung 40132
* nhulz_nih@yahoo.com
Abstrak: Biodegradasi  dengan  metode  lumpur  aktif  dilakukan  dengan  memanfaatkan  bakteri  yang digunakan selama proses pengolahan yang kemudian diresirkulasi kembali ke proses setelah mengalami pengendapan. Pengolahan ini dapat juga diterapkan pada pengolahan limbah cat. Tujuan dari penelitian ini  adalah  untuk  mengidentifikasi  bakteri  pendegradasi  limbah  cat  dari  lumpur  hasil  pengolahan  serta membandingkannya  dengan  keberagaman  bakteri  yang  ada  pada commercial  seed .  Bakteri  yang dihasilkan  dari  identifikasi  pada  lumpur  terdiri  dari  lima  jenis,  yaitu  Bacillus  subtilis,  Bacillus licheneformis, Bacillus cereus, Bacillus megaterium, dan Pseudomonas flourescens. Keberadaan bakteri- bakteri  tersebut  menunjukkan  proses  pengolahan  menggunakan  bakteri  konsorsium  yang  setiap bakterinya  memiliki  pola  perumbuhan  yang  berbeda.  Hal  itu  ditunjukkan  oleh  perbedaan  waktu generasi(g)  dan  konstanta  laju  pertumbuhan  (k).  Nilai  waktu  generasi  dan  konstanta  laju  pertumbuhan adalah  44,67  menit  dan  0,93  jam -1 untuk  Pseudomonas  flourescens;  45,04  menit  dan  0,92  jam -1 untuk Bacillus  subtilis;  35  menit  dan  1,17  jam -1 untuk  Bacillus  licheniformis;  18  menit  dan  2,27  jam -1 untuk Bacillus cereus, 19 menit dan 2,18 jam -1 untuk Bacillus megaterium, serta 53 menit dan 0,79 jam -1 untuk kultur campuran. Bakteri commercial seed yang digunakan pada saat pengolahan dan kembali terdapat di  lumpur  hasil  pengolahan  menandakan  bahwa  bakteri  tersebut  mampu  menggunakan  limbah  sebagai sumber karbon dan berperan dalam pengolahan limbah.
Kata kunci : lumpur limbah cat, identifikasi, waktu generasi, konstanta laju pertumbuhan
Abstract : Biodegradation with activated sludge method is done by using bacteria that are used during treatment process, which was then returned to the treatment process after had been settled.  This process can  be  applied  to  liquid  waste  paint  treatment.  The  objectives  of  this  research  are  to  identify  the  paint waste  degradation  bacteria  of  sludge  and  to  compare  them  with  the  bacterial  types  in  the  commercial seed.  The  result  of  bacteria  identification  from  sludge  obtained  five  species.  They  are  Bacillus  subtilis, Bacillus  licheneformis,  Bacillus  cereus,  Bacillus  megaterium,  and  Pseudomonas  flourescens.  The presence of five kinds bacteria indicates that the biological process used a consortium bacteria, that has different growth pattern. It was shown by the difference of generation time(g) and growth rate constant of (k) both pure cultures and mixed culture. Value of generation time (g) and growth rate constant (k) for each bacteria were 44.67 minutes and 0.93 hour -1 for Pseudomonas flourescens; 45.04 minutes and 0.92 hour -1 for  Bacillus  subtilis;  35  minutes  and  1.17  hour -1 for  Bacillus  licheniformis;  18  minutes  and  2.27 hour -1 for Bacillus cereus, 19 minutes and 2.18 hour -1 for Bacillus megaterium, and 53 minutes and 0.79 hour -1 for mixed culture. Commercial seed bacteria used during the treatment process and then present in the produced sludge indicates that the bacteria are able to use waste as a source of carbon, and indeed a role in waste treatment process.
Key words : paint waste sludge, identification, generation time, growth rate constant

## PENDAHULUAN
Dalam  setiap  proses  yang  terjadi  di  suatu  industri,  selain  dihasilkan  produk  yang diinginkan  juga  dihasilkan  produk  samping (by  product) baik  yang  masih  dapat  dimanfaatkan maupun  yang  tidak  dapat  dimanfaatkan  dan  dikategorikan  sebagai  limbah.  Salah  satu  jenis limbah  industri  adalah  limbah  cat  yang  memiliki  kandungan  zat  warna  yang  dapat  berbahaya bagi lingkungan bila tidak ditangani dengan tepat.
Salah  satu  alternatif  pengolahan  yang  dapat  diaplikasikan  dalam  mengolah  limbah adalah pengolahan secara biologi yang dikenal sebagai biodegradasi. Biodegradasi didefinisikan sebagai  suatu  proses  oksidasi  senyawa  organik  oleh  mikroorganisme,  baik  di  tanah,  perairan, atau  pada  instalasi  pengolahan  air  limbah  (Reynold,  1982).  Pengolahan  limbah  secara  biologi sering  dipilih  karena  membutuhkan  biaya  yang  relatif  sedikit  dan  menghasilkan  lumpur  hasil pengolahan  yang  tidak  terlalu banyak  bila  dibandingkan  dengan  pengolahan  secara  kimia  atau fisik (Meitiniarti et al ., 2008). Proses biodegradasi yang umum dilakukan adalah lumpur aktif, yang  didefinisikan  sebagai  suatu  proses  biologi  dalam  pengolahan  limbah  cair,  dimana pencampuran antara limbah cair dengan lumpur aktif diaerasi pada suatu tangki aerasi. Padatan biologi yang aktif tersebut mengoksidasi limbah kemudian padatannya dialirkan kembali ke bak pengendap akhir, hingga mengalami siklus yang berulang (Reynold, 1982).
Biodegradasi  limbah  cat  dapat  dilakukan  melalui  dua  pendekatan  utama,  yaitu modifikasi  lingkungan  dan seeding .  Modifikasi  lingkungan  bertujuan  untuk  meningkatkan aktivitas  metabolisme  mikroba  dengan  penambahan  nutrisi,  terutama  nitrogen  dan  fosfor, peningkatan  jumlah  oksigen  dan  kelembaban  nutrisi,  serta  penambahan  kosubstrat  sebagai penunjang pertumbuhan mikroba, sedangkan seeding dilakukan dengan menginokulasi mikroba ke  dalam  instalasi  pengolahan  limbah.  Mikroba  yang  digunakan  dapat  asli  berasal  dari  lokasi tercemar ( indigenous ) atau dari luar lokasi yang tercemar ( non indigenous ). Seeding umumnya  dilakukan  dengan  menggunakan  mikroba  komersial  yang  lebih mahal  dan  belum  tentu  sesuai  dengan  karakteristik  limbah  yang  diolah.  Mikroba  yang diisolasikan  dari  lumpur  hasil  pengolahan  limbah  cair  cat  tentu  memiliki  kemampuan  untuk mendegradasi  limbah  cat,  sehingga  akan  didapat  mikroba  dari seeding yang  mampu  bertahan dan  berpengaruh  terhadap  degradasi    imbah  cat,  serta  mikroba indigenous yang  mampu mengurangi penggunaaan bakteri komersil dan mengurangi biaya pengolahan limbah cat secara biologis.
Beberapa  penelitian  memperlihatkan  bahwa  terdapat  bakteri  yang  dapat  mendegradasi zat  warna,  diantaranya  adalah Pseudomonas  luteola,  Pseudomonas sp., Escherichia  coli, Bacillus sp , Alcaligenes faecalis, Rhodococcus erythropolis, dan Enterococcus faecalis (Chang et al ., 2000; Kalyani et al ., 2009; Mutafov et al .,2008; Meitiniarti et al ., 2008). Berdasarkan hal tersebut,  masih  diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk  menganalisis  keanekaragaman  bakteri yang dapat mendegradasi zat warna dan limbah cat.
Tujuan  dari  penelitian  adalah  mengidentifikasi  isolat  bakteri  yang  didapatkan  dari lumpur  hasil  pengolahan  limbah  cat  kemudian  membandingkan  dengan  isolat  bakteri  yang didapatkan  dari seeding .  Pengidentifikasian  ini  akan  menghasilkan  informasi  lebih  lanjut mengenai  karakteristik  bakteri  yang  didapat  dan  dapat  digunakan  untuk  penelitian  lebih lanjut mengenai kemampuan degradasi limbah cat oleh bakteri tersebut.

## METODOLOGI
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Higiene  Industri  dan  Toksikologi, Laboratorium  Kualitas  Air,  dan  Laboratorium  Buangan  Padat  dan  Bahan  Berbahaya  dan Beracun Program Studi Teknik Lingkungan ITB.

## Pengembangan Kultur Bakteri Pendegradasi Limbah Cat
Sampel  lumpur  hasil  pengolahan  limbah  cat  dikumpulkan  di  suatu  reactor  aerob  skala laboratorium  dengan  volume  1500  ml  di  Laboratorium  Higiene  Industri  dan  Toksikologi Program Studi Teknik Lingkungan ITB. Reaktor ini disimpan pada suhu kamar 25oC dan diberi suplai oksigen untuk menjamin kondisi selalu aerob.

## Isolasi Bakteri
Mikroorganisme dikembangbiakkan dengan menginokulasikan mikroorganisme ke agar nutrien.  Teknik  inokulasi  yang  digunakan  adalah  teknik  cawan  tuang,  dengan  sebelumnya dilakukan    engenceran  terlebih  dahulu  agar  hasil  koloni  yang  didapat  berupa  biakan  murni. Setelah  iinkubasi dalam keadaan aerob selama 24 jam, koloni tunggal yang terbentuk diperiksa menggunakan  pewarnaan  Gram  untuk  melihat  karakteristik  dinding  sel  dan  bentuk  dari  sel tersebut.  Pengamatan  dengan  mikroskop  dilakukan  dengan  menggunakan  mikroskop  jenis mikroskop cahaya. Untuk pengamatan dinding sel bakteri, digunakan perbesaran sebesar 1000x dan menggunakan minyak imersi.

## Media
Medium kultur yang digunakan terdiri dari agar nutrien dan kaldu nutrisi atau nutrient broth (NB) (Merck, Jerman). Komposisi medium tersebut dalam gram per liter adalah 1 gram ekstrak  sapi,  2  gram  ekstrak  yeast,  5  gram  peptone,  5  gram  NaCl,  1  liter  akuades,  serta tambahan  15  gram  agar  khusus  untuk  media  agar  nutrisi.  Media  lain  yang  dibutuhkan  adalah media  untuk  uji  biokimia  untuk  masing-masing  genus  yang  didapat.  Media  kemudian disterilkan menggunakan autoclave.

## Identifikasi Bakteri
Setelah  diperoleh  bakteri  kultur  murni,  maka  dilakukan  identifikasi  untuk  dapat engetahui jenis bakteri yang terdapat dalam reactor. Metode identifikasi bakteri yang dilakukan adalah dengan cara konvensional (Cowan, 1974). Testerhadap tiap jenis bakeri dilakukan secara duplo dan bila hasilnya berbeda dilakukan triplo.

## Uji Pertumbuhan
Uji  pertumbuhan  dilakukan  untuk  mengetahui  sifat  pertumbuhan  suatu  jenis  bakteri melalui  kurva  pertumbuhan  dengan  cara  mengukur  jumlah  bakteri  yang  ditandai  dengan ekeruhan  pada  media  cair  (NB)  menggunakan  spektrofotometer (Spectronic  20  Genesys) dari suatu biakan bakteri dengan bantuan alat penggoyang ( shaker ) dan inkubator.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Pengayaan Mikroorganisme
Kultur  dikembangkan  dalam  suatu  reaktor  aerob  yang  berisi  lumpur  hasil  pengolahan limbah cair cat. Hal ini dimaksudkan agar bakteri yang tumbuh di reaktor tersebut merupakan bakteri  yang  berperan  dalam  proses  degradasi  limbah  cair  cat.  Kultur  dalam  reaktor  tersebut hanya  diberi  nutrisi  berupa  glukosa  0,5  mg/l  setiap  hari.  Glukosa  dipilih  karena  merupakan sumber karbon yang sederhana dan dapat digunakan oleh sebagian besar bakteri sebagai sumber karbon untuk pertumbuhan bakteri.
Setelah  dikembangkan  selama  1  bulan,  kondisi  reaktor  mengalami  perubahan,  seperti perubahan  warna  menjadi  lebih  gelap  dari  hari  ke  hari.  Glukosa  tidak  lagi  ditambahkan  ke dalam  kultur  setelah  pengembangan  kultur  selama  1  bulan.  Kemudian  pengukuran  nilai  COD terlarut dilakukan selama 12 hari. Gambar 1 memperlihatkan bahwa nilai COD terlarut setelah kultur  tidak  lagi  diberi  nutrisi  mengalami  penurunan.  Hal  itu  menandakan  bahwa  limbah  cat tersebut dijadikan sumber karbon oleh bakteri dan bakteri yang tumbuh diperkirakan merupakan bakteri  yang  dapat  menggunakan  limbah  cat  sebagai  sumber  karbonnya.  BerdasarkanHvitved- Jacobson  (2002),  COD  terlarut  merupakan  komponen  karbon  yang  terlarut  di  dalam  air  dan dapat digunakan oleh mikroorganisme sebagai sumber karbonnya.
Gambar 1 . Grafik penurunan COD terlarut

## Hasil Isolasi dan Identifikasi Mikroorganisme
Isolasi  diawali  dengan  pengenceran  pada  sampel  lumpur  dengan  akuades  steril kemudian  dilanjutkan  dengan  penanaman  sampel  ke  media  agar  nutrisi.  Pengenceran  ini dilakukan  untuk  mengetahui  perkiraan  jumlah  koloni  bakteri  yang  terdapat  dalam  sampel lumpur. Selain itu, hal ini juga dilakukan agar koloni bakteri yang tumbuh pada agar nutrisi tidak  terlalu  padat  dan  memudahkan  dalam  pengidentifikasian  bakteri  selanjutnya. Pengenceran  dilakukan  dari  10-1  hingga  10-7.  Hasil  pengenceran  pada  sampel  lumpur ditunjukkan pada Tabel 1 .

## Tabel 1
Jumlah Koloni yang Didapat Hasil Metode Cawan Tuang
No. Tingkat pengenceran Jumlah koloni 1 10 -1 Too Numerous To Count (TNTC) 2 10 -2 TNTC 3 10 -3 TNTC 4 10 -4 TNTC 5 10 -5 207 6 10 -6 21 7 10 -7 -
Jumlah  koloni  yang  dapat  dijadikan  acuan  untuk  penentuan  jumlah  koloni  bakteri  per ml  sampel  adalah  jumlah  koloni  yang  berkisar  antara  30-300,  yaitu  pada  pengenceran  10-5. Pada  bakteri  dengan  jumlah  koloni  lebih  dari  300,  pertumbuhan  bakteri  terlalu  padat  dan mengakibatkan  terjadi  pertumbuhan  koloni  yang  saling  menumpuk  satu  sama  lain  sehingga tidak  seluruh  koloni  dapat  terhitung.  Maka  nilai  tersebut  dianggap  tidak  valid.  Bila  koloni bakteri yang tumbuh dengan jumlah koloni kurang dari 30, data yang didapat juga tidak valid karena  pertumbuhan  bakteri  yang  sangat  sedikit  dan  tidak  representatif.  Dari  seluruh  koloni bakteri yang tumbuh pada masing-masing hasil pengenceran, diambil beberapa koloni berbeda untuk  kemudian  diidentifikasi.  Pemilihan  koloni  yang  berbeda  didasarkan  pada  morfologinya. Berdasarkan pemilihan tersebut, didapat 6 koloni bakteri, yang diberi nama A, B, C, D, E, dan F. Tabel 2 menunjukkan hasil pengamatan morfologi untuk setiap bekteri.

## Tabel 2
Ciri-ciri morfologi bakteri hasil isolasi pada lumpur
Kode Bakteri A B C D E F Id en tifik asi Par am eter Utam a Bentuk Koloni Tidak beraturan Rhizoid Rhizoid Filamentous Tidak beraturan Filamentous Tepian Keriting Rhizoid Rhizoid Filamentous Keriting Filamentous Elevasi Timbul Timbul Timbul Timbul Timbul Timbul Ukuran Koloni sedang Besar Sedang Sedang Sedang Sedang Tekstur Lembut Lembut Lembut Lembut Lembut Lembut Penampakan Kusam Kusam Kusam Kusam Kusam Kusam Pigmentasi Cream Tan / Kecoklatan Tan / Kecoklatan Tan / Kecoklatan Cream / Kehijauan Tan / Kecoklatan Optikal Tembus cahaya Tembus cahaya Tembus cahaya Tembus cahaya Tembus cahaya Tembus cahaya
Untuk  identifikasi  pada  tahap  awal  dilakukan  pemurnian  dan  pewarnaan  Gram  untuk  melihat apakah bakteri tersebut sudah murni atau belum. Pewarnaan Gram juga dilakukan untuk melihat bentuk  bakteri  dan  reaksi  terhadap  pewarnaan  Gram.  Bila  bakteri  sudah  murni  maka  dapat dilakukan  uji  biokimia  selanjutnya  untuk  menentukan  genus  dan  spesies  dari  masing-masing bakteri (Cowan, 1974). Hasil uji pendahuluan untuk penetuan genus ditampilkan pada Tabel 3 dan Tabel 4 .

## Tabel 3

## Hasil Uji Penentuan Genus Bakteri Gram Positif
No Jenis Bakteri Identifikasi/Penentuan Genus untuk Gram Positif Bentuk Bakteri Spora Motilitas Pertumbuhan Katalase Glukosa Di Udara Secara Anaerob 1 B Batang + + + + + + 2 C Batang + + + + + + 3 D Batang berantai + + + + + + 4 F Batang berantai + + + + + +

## Tabel 4 Hasil Uji Penentuan Genus Bakteri Gram Negatif
No Jenis Bakteri Identifikasi/Penentuan Genus untuk Gram Negatif Bentuk Bakteri Motilitas Pertumbuhan Katalase Glukosa OF Di Udara Secara Anaerob 1 A Batang pendek + + + + - 0 2 E Batang pendek + + + + - 0
Berdasarkan  uji  biokimia  untuk  penentuan  genus  yang  dilakukan,  bakteri  B,  C,  D,  dan  F memiliki  sifat-sifat  yang  serupa  dengan  Genus Bacillus ,  sedangkan  untuk  bakteri  A  dan  E memiliki sifat-sifat yang serupa dengan Genus Pseudomonas . Dengan diketahuinya genus dari masing-masing bakteri maka identifikasi dapat dilanjutkan hingga  ke tahap penentuan spesies. Dilakukan  kembali  serangkaian  uji  biokimia  yang  sesuai untuk  penentuan  spesies  pada  Genus
Bacillus dan  Genus Pseudomonas . Tabel  5 menunjukkan  hasil  uji  biokimia  terhadap  Genus Bacillus dan Tabel 6 menunjukkan hasil uji biokimia untuk Genus Pseudomonas .

## Tabel 5
Hasil Uji Biokimia untuk Genus Bacillus
Kode Bakteri B C D F
O v al T es Ka rak ter is tik Gram +
+ + + Motilitas + + + + Morfologi 1 1 1 1 Spora Bentuk Oval oval oval oval Posisi tengah tengah tengah tengah Pembekakan tubuh - - - - Pertumbuhan 45 0 C + + + + 65 0 C - - - - Glukosa anaerob - + + - pH 5,7 + + + + 7 % NaCl + + + - Hidrolisa Pati + + + + Kasein + + + + Gelatin + + + + Sitrat - + - - Uji Gula-gula Glukosa + + + + Arabinosa + + - - Manitol + + - - Xylose - - - + VP + + - - Indol - - - - Urease - - - - Keterangan   : +  = Hasil positif -   = Hasil negative
1 =  spora berbentuk oval atau silinder, berada ditengah, tidak mengalami pembekakan pada bagian tubuh
Teori  dari  identifikasi  bakteri  dengan  teknik  konvensional  adalah  membandingkan bakteri  yang  sedang  diidentifikasi  dengan  bakteri  yang  telah  teridentifikasi  sebelumnya.  Bila tidak  terdapat  bakteri  yang  ciri-cirinya  100%  serupa,  maka  dilakukan  pendekatan  terhadap bakteri  yang  memiliki  ciri-ciri  yang  paling  menyerupai.  Oleh  karena  itu  teknik  identifikasi dengan  metodekonvensional  akan  selalu  menghasilkan  suatu  bakteri  tertentu  yang  sudah teridentifikasi sebelumnya dan tidak akan dapat menemukan spesies baru (Cowan, 1974). Hasil uji biokimia memberikan lima jenis spesies bakteri yang ada pada Tabel 7 .
Berdasarkan  serangkaian  uji  biokimia  yang  dilakukan,  didapat  bakteri  dengan  spesies Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus cereus, dan Bacillus megaterium untuk Genus Bacillus ,  serta  spesies Pseudomonas  flourescens untuk  Genus Pseudomonas .  Bakteri  yang diidentifikasi  dari  lumpur  pengolahan  limbah  cat  kemungkinan  besar  merupakan  bakteri  yang turut berperan dalam proses pengolah limbah cat yang dilakukan secara biologis dengan metode lumpur  aktif.  Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  untuk  mengidentifikasi  bakteri  pada commercial seed untuk pengolahan limbah ini didapat bakteri dengan spesies Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, dan Bacillus cereus . Seluruh bakteri yang ada pada seeding ini dijumpai lagi pada lumpur hasil pengolahan limbah cat. Dapat dikatakan bahwa seluruh bakteri tersebut dapat  bertahan  hidup  dengan  keberadaan  limbah  cat  dan  menggunakan  limbah  cat  tersebut
sebagai  sumber  karbon  untuk  pertumbuhannya.  Maka  bakteri-bakteri  tersebut  merupakan bakteri yang berperan dalam degradasi limbah cat. Dengan kata lain, proses biodegradasi limbah cat dilakukan dengan bakteri konsorsium. Penggunaan bakteri konsorsium memiliki keunggulan dalam  proses  biodegradasi  dibandingkan  dengan  bakteri  galur  murni,  jika  pemilihan  bakteri konsorsium tersebut tepat(Jadhav et al ., 2008).

## Tabel 6
Hasil Uji Biokimia untuk Genus Pseudomonas
Kode Bakteri A E
Tes K a ra kte ris tik
Motilitas
+ + Pigmen + + Flourescence pada lampu UV + + Pertumbuhan 5 0 C + + 42 0 C + + Mac Conkey + + Uji Gula-gula Glukosa - - Laktosa - - Maltosa - - Manitol - - Salicin - - Sukrosa - - Xylose - - Hidrolisis Pati - - Gelatin - - Kasein + + Reduksi Nitrat + + Nitrit + + Urease - - Arginin dihidrilase + + Keterangan   : +  = Hasil positif -   = Hasil negative

## Tabel 7
Hasil Identifikasi Bakteri
No Kode Jenis bakteri 1 A Pseudomonas Flourescens 2 B Bacillus subtilis 3 C Bacillus licheniformis 4 D Bacillus cereus 5 E Pseudomonas Flourescens 6 F Bacillus megaterium

## Laju Pertumbuhan Mikroorganisme
Laju  pertumbuhan  mikroorganisme  diukur  dengan  menumbuhkan  isolate  setiap  kultur bakteri  murni  dan  campuran  dalam  media  kaldu  nutrisi  (NB),  diinkubasi  pada  37oC  dan dilakukan  pengukuran  nilai  OD  setiap  satu  jam  sekali  WW7-9  selama  24  jam.  Kurva pertumbuhan  dari  kultur  murni  dan  campuran  diplot  pada  skala  logaritmik  dan  dapat  dilihat pada Gambar 2 .
Gambar 2 . Kurva pertumbuhan bakteri (a) Pseudomonas flourescent (b) Bacillus subtilis (c) Bacillus cereus (d) Bacillus cereus (e) Bacillus megaterium (f) kultur campuran
Kurva pertumbuhan bakteri dibuat dengan tujuan untuk melihat fase-fase pertumbuhan dari masing-masing bakteri, yaitu fase lag, eksponensial, stasioner, dan kematian. Pada beberapa bakteri  tidak  terlihat  adanya  fase  lag  karena  pengukuran  dilakukan  satu  jam  sekali,  sehingga perubahan  yang  terjadi  dalam  rentang  waktu  kurang  dari  satu  jam  tidak  diketahui.  Fase kematian  juga  tidak  terlihat  karena  pembuatan  kurva  pertumbuhan  dengan  metode  tidak langsung  ini  tidak  dapat  membedakan  sel  mati  serta  sel  yang  hidup,  sehingga  seolah-seolah tidak ada fase  kematian.
Hasil linearisasi dari fase eksponensial digunakan untuk menentukan waktu generasi (g) dan konstanta laju pertumbuhan (k) dan dapat dilihat pada Gambar 3 .
Gambar 3. Linearisasi fase eksponensial pada kurva tumbuh bakteri: (a) Pseudomonas flourescent (b) Bacillus subtilis (c) Bacillus cereus (d) Bacillus cereus (e) Bacillus megaterium (f) kultur campuran
Dari  hasil  linearisasi  fase  eksponensial,  nilai  g  dan  k  dapat  dihitung  dangan  formula (Madigan, et al ., 2003) : g = 0,301 / slope k = 0,693 / g
Nilai waktu generasi dan konstanta laju pertumbuhan untuk masing-masing bakteri dapat dilihat pada Tabel 8 .

## Tabel 8
Waktu generasi dan konstanta laju pertumbuhan untuk masing-masing bakteri
Bakteri Waktu generasi (menit) Konstanta laju pertumbuhan (jam -1 ) Pseudomonas Flourescens 44,67 0,93 Bacillus subtilis 45,04 0,92 Bacillus licheniformis 35,42 1,17 Bacillus cereus 18,29 2,27 Bacillus megaterium 19,04 2,18 Bakteri konsorsium 52,70 0,79
Waktu  generasi  dari  masing-masing  bakteri  memiliki  nilai  yang  berbeda  dan  berkisar antara 18,29 menit hingga 52,70 menit. Konstanta laju pertumbuhan dari masing-masing bakteri juga  memiliki  nilai  yang  berbeda,  yang  tergantung  pada  kemampuan  metabolisme  masing- masing bakteri. Konstanta laju pertumbuhan ini menunjukkan banyaknya bakteri yang tumbuh per  unit  waktu  pada  kultur  yang  tumbuh  secara  eksponensial.  Nilainya  bervariasi  antara  0,79 jam-1  hingga  2,27  jam-1.  Terlihat  bahwa  laju  pertumbuhan  tertinggi  terjadi  pada Bacillus cereus ,  sedangkan  laju  pertumbuhan  terendah  terjadi  pada  bakteri  konsorsium.  Hal  ini mengindikasikan  terjadi  kompetisi  dalam  memperebutkan  substrat  pada  bakteri  konsorsium, sehingga pertumbuhan bakteri menjadi lambat.
Pada  penelitian  biodegradasi  skala  laboratorium,  kosubstrat  ditambahkan  sebagai substrat awal selama bakteri beradaptasi dengan substrat utamanya, dalam hal ini limbah. Maka pemilihan  bakteri  konsorsium  yang  digunakan  pada  pengolahan  limbah  harus  didasarkan  pada kurva pertumbuhan. Bakteri konsorsium akan bekerja optimal jika masing-masing bakteri yang digabungkan  memiliki  fase  eksponensial  tahap  kedua  yang  berbeda.  Dengan  demikian, masingmasing  bakteri  tidak  akan  mengalami  kompetisi  sumber  karbon,  dalam  hal  inilimbah, selama pertumbuhannya.

## KESIMPULAN
Bakteri yang didapat dari hasil identifikasi bakteri pada lumpur pengolahan limbah cat adalah Bacillus  subtilis,  Bacillus  licheneformis,  Bacillus  cereus,  Bacillus  megaterium ,  dan Pseudomonas  flourescens .  Seluruh  bakteri  yang  berasal  dari seeding mampu  bertahan  selama proses pengolahan limbah cat dan terdapat pula pada lumpur hasil pengolahan limbah cat.
Nilai  waktu  generasi  (g)  dan  konstanta  laju  pertumbuhan  (k)  untuk  masing-masing bakteri  adalah  44,67  menit  dan  0,93  jam-1  untuk Pseudomonas  flourescens; 45,04  menit  dan 0,92  jam-1  untuk Bacillus  subtilis; 35  menit  dan  1,17  jam-1  untuk Bacillus  licheniformis; 18 menit dan 2,27 jam-1 untuk Bacillus WW7-12 cereus, 19 menit dan 2,18 jam-1 untuk Bacillus megaterium ,  serta  53  menit  dan  0,79  jam-1  untuk  kultur  campuran.  Perbedaan  nilai  ini didasarkan pada kemampuan metabolisme masing-masing bakteri.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  merupakan  bagian  dari  penelitian  yang  dibiayai  oleh  PT  Showa  Mfg. melalui Yayasan LAPI ITB Tahun 2009.

## DAFTAR PUSTAKA
Chang, Jo-Shu., Kuo, Tai-Shin., Chao, Yun-Peng., Ho, Jin-Yen., Lin, Ping-Jei. 2000. Azo dye decolorization  with  a  mutan Escherichia  coli strain .  Biotechnology  Letters 22 pp 807-812
Cowan, S.T. 1974. Manual for the Identification of Medical Bacteria . Great Britain : Cambridge University Press Hvitved-Jacobsen.,2002. Sewer processes , CRC Press, USA.
Jadhav, S.U., Jadhav, U. U., Dawkar, V. V., Govindwar, S. P., 2008. Biodegradation of Dispere Dye  Brown  3REL  by  Microbial  Consortium  of Galactomyces  geotrichum MTCC 1360 and Bacillus sp. VUS. Biotechnology and Bioprocess Engineering . Vol. 13 pp 232-239
Kalyani, Dayanad C., Telke, Amar A., Govindwar, S. P., Jadhav, J. P. 2009. Biodegradation and Detoxification  of  Reactive  Textile  Dye  by  Isolated Pseudomonas  sp. Water Environment Research. ProQuest Agriculture Journals . p 298 Madigan, M.T.,Martinko,J.M.,Parker, P. 2003. Biology of Microorganism . 10 th Edition. Prentice Hall.USA.
Mutafov,  S.,  Avramora,  T.,  Stevanofa,  L.,  Angelova,  B.  2007.  Decolorization  of  Acid Orang  7  by  Bacteria  of  Different  Tinctorial  Type .  World  Journal  Microbial Biotechnol .
Meitiniarti, V. Irene., Soetarto, Endang S., Sugiharto, Eko., Timotius, Kris Herawan. 2008.
Optimum  Concentration  of  Glucose  and  Orange  II  for  Growth  and Decolorization  of  Orange  II  by Enterococcus  faecalis ID6017  under  Static Culture . Microbiology Indonesia. Vol. 2 pp 73-78 Reynolds,  D.  Tom.  1982. Unit  Operations  and  Processes  In  Environmental  Engineering. Belmont, California: wadsworth Inc.