## SKRINING AKTIVITAS ANTIBAKTERI BEBERAPA JENIS SPONS TERHADAP
PERTUMBUHAN STRAIN BAKTERI Staphylococcus aureus , Escherichia coli, Staphylococcus saprophyticus, dan Pseudomonas aeruginosa
(Antibacterial Screening Activity of Several Sponges Against Staphylococcus aureus , Escherichia coli, Staphylococcus saprophyticus, dan Pseudomonas aeruginosa)
Deiske A. Sumilat
Staf Pengajar pada Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115, Sulawesi Utara, Indonesia email: deiske.sumilat@gmail.com

## ABSTRACT
Sponge  samples  collected  around  Manado  waters  were  obtained  30 species  and  their  crude  extracted  have  been  tested  in  vitro  for  their  activity  in inhibiting bacterial growth. Based on the results of antibacterial screening in 30 sponge extracts, there were 23 sponge extracts which had bioactivity in inhibiting the  growth  of S.  aureus,  E.  coli,  S.  saprophyticus and P.  aeruginosa, Sponge extract  No.  43  (of  30  sponge  extracts  tested)  was  the  most  active  in  inhibiting bacterial growth and had the widest inhibition zone diameter.
Keywords : screening, sponge, crude extract, antibacterial, Manado

## ABSTRAK
Sampel  spons  dikoleksi  di  sekitar  Perairan  Manado  sebanyak  30 jenis/spesies,  dimana  ekstrak  kasarnya  telah  diuji  secara  in  vitro  aktivitasnya dalam menghambat pertumbuhan bakteri. Berdasarkan hasil skrining antibakteri pada 30 ekstrak spons didapatkan hasil ada 23 ekstrak spons yang mempunyai bioaktivitas  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri S.  aureus,  E.  coli , S. saprophyticus dan P.  aeruginosa ,  Ekstrak  spons  No.  3  (dari  30  ekstrak  spons yang diuji) adalah yang paling aktif dalam menghambat pertumbuhan bakteri dan memiliki diameter zona hambat yang paling lebar.
Kata kunci : skrining, spons, ekstrak kasar, antibakteri, Manado

## PENDAHULUAN
Organisme bentik mempunyai kandungan senyawa bioaktif yang tinggi karena memiliki kemampuan
menghasilkan metabolit sekunder serta dapat  mensintesis  bermacam-macam komponen  organik  seperti  polyketida, alkaloid,  peptida  dan  terpen.  sebagian senyawa  yang  diisolasi  mempunyai aktivitas  toksik  yang  tinggi  terhadap bakteri, sel kanker dan parasit. Senyawa antibakteri termasuk ke dalam
antimikroba  yang  digunakan  untuk menghambat pertumbuhan bakteri.
Substansi  atau  bahan  aktif  antibakteri merupakan  senyawa  kimia  yang  bisa menghambat pertumbuhan
mikroorganisme  tertentu.  Kemampuan menghambat  yang  dimiliki  senyawa  ini sangatlah penting dalam bidang farmakologi  sebagai  obat  terhadap penyakit  khususnya  yang  disebabkan oleh mikroba.
Beberapa  penelitian  spons  yang memiliki  aktifitas  sebagai  antibakteri telah  dilakukan  di  laboratorium  Biologi
Molekular dan Farmasitika Laut Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan Unsrat,  seperti  aktivitas  antibakteri spons Dictyonella funicularis dan Phyllospongia lamellose terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli (Ngantung dkk., 2016); antibakteri fraksi ODS spons Agelas sp. (Luissandy dkk., 2017); spons Plakortis
sp.  (Pasodung  dkk.,  2018);  skrining ekstrak kasar spons yang menghambat pertumbuhan bakteri Bacillus megaterium dan Escherichia coli (Nowin, dkk., 2018), aktivitas antibakteri spons  yang menghambat  pertumbuhan bakteri tuberklosis
Mycobacterium smegmatis (Sumilat, 2019).
Melalui  skrining  dengan  metode difusi  agar,  telah  dilakukan  penelitian terhadap  bebrapa  spons  yang  memiliki daya  hambat  terhadap  pertumbuhan bakteri S. aureus , E. coli, S. saprophyticus, dan P.  aeruginosa . S. aureus dan S.  saprophyticus adalah bakteri  yang  tergolong  Gram  positif, sedangkan E.  coli, dan P.  aeruginosa adalah  bakteri  Gram  Negatif.  Hasil
penelitian ini menunjukkan bahwa spons merupakan  organisme  avertebrata  laut yang sangat berpotensi dalam menghambat pertumbuhan bakteri.

## METODE PENELITIAN

## Pengambilan organisme Spons
Sampel  spons  dikoleksi  di  sekitar Perairan Manado pada kedalaman 5-10 meter  dengan  peralatan  scuba  diving dan selanjutnya dilakukan di Laboratorium  Biologi  Molekuler  dan Farmasetika  Laut  Fakultas  Perikanan dan  Ilmu  Kelautan  Universitas  Sam Ratulangi Manado untuk proses proses maserasi,  evaporasi  dan  pengujian aktivitas antibakteri.

## Gambar 1. Peta lokasi sampling

## Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  pada penelitian ini, antara lain autoklaf, 1 set rotary  vacuum  evaporator , laminar  air flow,  corong  pisah,  statif,  corong  kaca, kertas saring, mikropipet, kertas cakram, timbangan analitik, erlenmeyer, cawan petri, dan lain lain.
Bahan  kimia  yang  digunakan adalah  kloramfenikol,  etanol  95%, metanol, n-Heksana, etil asetat,
sedangkan  media  kultur  bakteri  adalah media B1 yang terdiri dari agar, pepton, ekstrak  daging (meat  extract) ,  natrium klorida (NaCl), air laut steril serta ekstrak kasar spons.

## Bakteri
Bakteri S.  aureus , E.  coli, S. saprophyticus dan P. aeruginosa , diperoleh dari Laboratorium
Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Sam Ratulangi. Ekstraksi Spons Sampel spons dimaserasi bertahap  selama  3  kali  (500  ml)  dalam larutan etanol selama 24 jam selanjutnya  untuk  mendapatkan  filtrat disaring  menggunakan  kertas  cakram whattman dan  kemudian  filtrat  untuk masing masing sampel spons diambil 50 ml dan dievaporasi menggunakan rotary vacuum  evaporator pada  suhu  40º hingga  etanol  terevaporasi  sempurna dan  tersisa  ekstrak  kasar  (modifikasi dari Ebada et al., 2008).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Media  cair  dan  padat  B1  untuk kultur bakteri terbuat dari 0,5 g pepton, 0,3  g  NaCl,  0,3  g  ekstrak  daging,  dan aquades  50  ml  dan  air  laut  steril sebanyak  50  ml,  untuk  media  padat ditambahkan  agar  1,5  g.  Kemudian media  diautoklaf untuk  disterilkan  pada suhu 121 o C selama 15 menit.
Pengujian  antibakteri  dari  ekstrak spons pada penelitian ini menggunakan konsentrasi  dari  20  mg/ml  (200.000 ppm)  dan  diambil  50  µl  untuk  setiap kertas cakram. Metode yang digunakan pada  penelitian  ini  adalah  difusi  agar ( disc diffusion Kirby and Bauer Method ). Pengujian aktivitas antibakteri untuk tiap bakteri dilakukan 3 kali ulangan.
Pengamatan  dilakukan  setelah 1x24  jam  masa  inkubasi.  Hasil  data pengukuran  yang  diperoleh  berupa diameter  zona  bening  dari  setiap fraksi ekstrak sampel
spons diukur menggunakan mistar dan dibandingkan dengan zona bening kontrol positif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Skrining  uji  antibakteri  dilakukan pada 30 jenis spons yang dikoleksi dari Perairan Manado (Gambar 1.). Diameter zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh setiap ekstrak spons dalam menghambat pertumbuhan bakteri ditunjukkan pada Tabel 1 dan Gambar 2 untuk masing masing bakteri S. aureus ,
E.  coli,  S.  saprophyticus, dan P.
aeruginosa .  Diameter  zona  hambat ekstrak kasar spons terhadap bakteri S. aereus (Gambar 3), E. coli (Gambar 4), S.  saprophyticus (Gambar  5),  dan P. aeruginosa (Gambar  6),  menunjukkan ekstrak  spons  No  3  memiliki  zona hambat yang paling tinggi dibandingkan dengan ekstrak spons lainnya.   Secara umum  uji  antibakteri  dengan  metode difusi  agar  (disc  diffusion  Kirby  and Bauer  Method)  menyimpulkan  apabila zona  hambat  yang  terbentuk  di  sekitar organisme uji lebih besar atau sama jika dibandingkan  dengan  kontrol,  maka dapat dikatakan bahwa ekstrak tersebut memiliki  aktivitas  antibakteri  yang kuat. Diameter  zona  hambat  pada  kontrol positif  apabila  dibandingkan  dengan diameter  zona  hambat  yang  terbentuk pada ekstrak spons No. 3 adalah 30 mm untuk S. aereus , E. coli , S.
saprophyticus, dan  20  mm  untuk P. aeruginosa (Tabel  1),  hal  ini  dapat membuktikan bahwa ekstrak spons No 3 memiliki  daya  hambat  yang  kuat terhadap pertumbuhan
bakteri pathogen.  Menurut  Davis  and  Stout
(1971)  penggolongan  kriteria  kekuatan suatu bahan antibakteri, yakni diameter zona  hambat  5  mm  atau  kurang dikategorikan  lemah,  dan  zona  hambat 5-10 mm dikategorikan sedang, sedangkan diameter zona hambat 10-20 mm  dikategorikan  kuat  dan  bahkan melebihi  dari  20  mm  dikategorikan sangat  kuat.  Kontrol  positif  (Tabel  1) yang  digunakan  sebagai  pembanding adalah obat antibiotik kloramfenikol dan telah  diketahui konsentrasi  paling  tepat untuk menghambat aktivitas pertumbuhan bakteri serta telah diketahui bahwa kloramfenikol merupakan antibiotik berspektrum luas. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa senyawa antibakteri yang terdapat pada ke  23  jenis  spons  berspektrum  luas dikarenakan
kemampuannya
menghambat  bakteri  Gram  positif  dan Gram  negatif.  Hal  ini  diduga  bahwa spons memproduksi senyawa antibakteri  dalam  bentuk  metabolit sekunder untuk melawan semua
tekanan  di  dalam  laut.  Senyawa antibakteri  dapat  digolongkan  juga sebagai  spektrum  luas  dan  spektrum sempit.  Spektrum  luas  bekerja  aktif terhadap  lebih  dari  dari  satu  jenis
bakteri, Gram  positif dan Gram negatif. Sedangkan  spektrum  sempit  artinya suatu  senyawa  bekerja  aktif  hanya terhadap  satu  golongan  Gram  positif atau Gram negatif. (WHO, 2014).
Diameter zona hambat ekstrak kasar spons terhadap bakteri S. aereus
Diameter zona hambat ekstrak kasar spons terhadap bakteri E.coli
Diameter zona hambat ekstrak kasar spons terhadap bakteri S. saprophyticus
Diameter zona hambat ekstrak kasar spons terhadap bakteri P. aeruginosa
Gambar 2. Skrining antibakteri ekstrak kasar spons terhadap bakteri S. aereus , E. coli, S. saprophyticus , dan P. aeruginosa
Tabel 1.  Skrining Ekstrak Spons dalam menghambat Pertumbuhan Bakteri S. aereus , E. coli, S. saprophyticus dan P. aeruginosa
Berat kering ekstrak kasar dari 50 mL filtrat (mg) No Sampel
Nomor
Identifikasi
Sampel
Zona Hambat (mm) S. aereus E. coli S. saprophyticus P. aeruginosa 229,3 1 41 - - 13 - 295,4 2 42 10 13 20 16 220,6 3 43 24 28 25 24 2401 4 45 9 11 7 12 422,8 5 46 - - 13 - 889 6 47 - - 13 - 168,8 7 48 - - 6 8 74,7 8 51 - - - - 232,2 9 52 - - - - 74,5 10 53 - - 10 8 283,4 11 54 - - 13 - 194,1 12 55 - - 8 10 144,1 13 56 - - - - 115,9 14 57 9 11 13 17 576,6 15 58 - - - - 128,4 16 171 - - 8 8 393,8 17 172 - - 8 9 234,4 18 173 - - 8 - 147,5 19 174 15 13 15 19 149,1 20 175 - - 19 7 178,8 21 176 12 10 12 8 283,8 22 178 - - - - 276 23 179 - - - - 119,2 24 181 18 16 10 14 585,8 25 182 15 13 10 12 132,6 26 183 - - 9 - 163,7 27 185 - - - - 268,2 28 186 - - 10 - 158,4 29 187 - - 8 - 454 30 189 - - 10 - Kontrol Positif 30 30 30 20 Kontrol Negatif - - - -
Kontrol Positif: Chloramfenicol; Kontrol Negatif: Metanol; Diameter Paper Disc: 6 mm
Gambar 3. Diagram batang zona hambat ekstrak spons terhadap bakteri S. aereus
0 5 10 15 20 25 30 35 1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112131415161718192021222324252627282930 - + Staphylococcus aereus
Gambar 4. Diagram batang zona hambat ekstrak spons terhadap bakteri E. coli
Gambar 5. Diagram batang zona hambat ekstrak spons terhadap bakteri S. saprophyticus
Gambar 6. Diagram batang zona hambat ekstrak spons terhadap bakteri P. aeruginosa

## KESIMPULAN
Dari  Perairan  Manado  ditemukan 30  jenis  spons  dan  berdasarkan  hasil skrining  antibakteri  pada  30  ekstrak spons diperoleh 23 ekstrak spons yang mempunyai bioaktivitas dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri S. aureus, E. coli, S. saprophyticus dan P.
aeruginosa dibandingkan dengan
kontrol  positif  dan  kontrol  negatif. Ekstrak spons No. 2, 3, 5, 14, 19, 21, 24, 24  memiliki  daya  hambat  terhadap pertumbuhan keempat bakteri uji tersebut.    Ekstrak spons  No.  7,  10,  12, 16,  17,  20  memiliki  daya  hambat
0 5 10 15 20 25 30 35 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 - Escherichia coli 0 5 10 15 20 25 30 35 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 - Staphylococcus saprophyticus 0 5 10 15 20 25 30 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 - Pseudomonas aeruginosa
terhadap pertumbuhan bakteri S. saprophyticus dan P. aeruginosa . Ekstrak spons No. 1, 5, 6, 11, 18, 26 28, 29, 30. memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan  bakteri S.  saprophyticus.
Ekstrak  spons  No.  3  (dari  30  ekstrak spons  yang  diuji)  adalah  yang  paling aktif  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri S. aureus, E. coli, S.
saprophyticus dan P.  aeruginosa dan memiliki  diameter  zona  hambat  yang paling lebar. Diperlukan penelitian lanjut untuk uji antibakteri dengan menggunakan ekstrak murni dari spons, dan diperlukan identifikasi dan taksonomi untuk jenis jenis spons yang berpotensi sebagai kandidat obat antibiotik/antibakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
Davis, W.W and Stout, T.R. 1971. Disc Plate Method of Microbial Antibiotic Assay. Applied Microbiology. 22 (4): 659 –665. Ebada,  S.S.,  Edrada,  R.A.,  Lin,  W., Proksch,  P.  2008.  Methods  for isolation, purification and structural elucidation of bioactive secondary metabolites from marine invertebrates.  Nature  Protocols, 3(12): 1820-1831. Ngantung,  A.E.C.,  Bara,  R.A.,  Sumilat, D.A. 2016. Uji aktivitas antibakteri dari  spons Dictyonella  funicularis dan Phyllospongia lamellosa yang diambil  pada  perairan  Bunaken. Jurnal Pesisir dan Laut Tropis 2(1): 10 –16. ISSN: 2339-1537.
Nowin, E, Warouw, V, Rimper, J.R.T.S.L., Paulus, J.H., Pangkey, H., Sumilat, D.A. 2018. Penapisan (Skrining) Aktivitas Antibakteri Beberapa  Ekstrak  Spons  dari Teluk Manado. Jurnal Pasodung,  A.,  Losung,  F.,  Angkouw, E.D.,  Lintang,  R.A.J.,  Mantiri, D.H.M.,  Sumilat,  D.A.  2018.    Uji Aktivitas Antibakteri Spons Plakortis sp.  yang  Dikoleksi  dari Perairan  Bunaken.  Jurnal  Pesisir dan  Laut  Tropis.  1(1):  44-51. ISSN: 2339-1537.
Sumilat, D.A. 2019. Antibacterial Activity ODS  Fractions  of  Marine  Sponge Auletta sp. Against Mycobacterium smegmatis . Jurnal Ilmiah Platax. 7
(1): 329 –334. ISSN: 2302-3589.
WHO.  2014.  Antmicrobial  resistance: global report on survaillance 2014. World Health Organization. p 257.