Khikmah et al.

## Uji Antifungi Susu Fermentasi Komersial pada Candida non -albicans
Antifungal Activity of Commercial Fermented Milk against Candida non - albicans
Nur Khikmah 1 * dan Nunung Sulistyani 1
1 Akademi Analis Kesehatan Manggala, Yogyakarta, Indonesia
Abstrak
Bakteri Asam Laktat (BAL) yang terkandung dalam susu fermentasi akan menghasilkan asam-asam organik, hidrogen peroksida, diasetil, asetaldehid, asetoin, reutinin, reuterisiklin dan bakteriosin, dapat sebagai anti- Candida . Spesies Candida non -albicans seperti C. tropicalis dan C. glabrata sebagai penyebab kandidiasis oral cenderung meningkat. Tujuan penelitian ini mengetahui aktivitas antifungi susu fermentasi komersial pada Candida non- albicans dan viabilitas bakteri asam laktat di dalam susu fermentasi komersial. Aktivitas antifungi pada Candida non- albicans dilakukan dengan metode difusi sumuran. Viabilitas bakteri asam laktat dihitung berdasarkan jumlah bakteri asam laktat sebagai jumlah bakteri total ( Total Plate Count ). Hasil penelitian menunjukkan bahwa susu fermentasi komersial lebih mampu menghambat C. tropicalis dibandingkan C. glabrata .  Viabilitas bakteri asam laktat dalam susu fermentasi  komersial 10 7 -10 10 CFU/mL.
Kata kunci: susu fermentasi, Candida non- albicans , bakteri asam laktat
Abstract Lactic Acid Bacteria (LAB) contained in fermented milk will produce organic acids, hydrogen peroxide, diacetyl, acetaldehyde, acetoin, reutinin, reuterycline and bacteriocin, as anti-Candida. Candida non-albicans species such as C. tropicalis and C. glabrata as causes of oral candidiasis tend to increase. The aim of this research was to determine the antifungal activity of commercial fermented milk against Candida non-albicans and viability of lactic acid bacteria in commercial ermented milk. The antifungal activity was determined using well diffusion method. Viability of lactic acid bacteria is calculated as Total Plate Count.  The results showed that commercial fermented milk was more able to inhibit C. tropicalis compared C. glabrata. Viability of lactic acid bacteria 10 7 -10 10 CFU/mL.
Keywords: fermented milk, Candida non-albicans, lactic acid bacteria
* Corresponding Author : Nur Khikmah Akademi Analis Kesehatan Manggala Yogyakarta Jl. Bratajaya No. 25, Sokowaten, Banguntapan, Bantul, Indonesia E-mail : khikmahnr@gmail.com
Khikmah et al.
Pendahuluan Susu fermentasi didefinisikan sebagai produk susu yang melibatkan mikroba untuk menghasilkan rasa, warna, tekstur dan konsistensi yang diinginkan dan mampu mencegah lactose intolerance . Produk susu fermentasi yang umum dikonsumsi adalah yakult , yoghurt, dan kefir. Produk tersebut dibedakan berdasarkan adalah jenis mikroba yang memfermentasi. Mikroba yang berperan penting dalam fermentasi susu adalah kelompok Bakteri Asam Laktat (BAL) (Wibowo, 2002). Selama proses fermentasi, BAL akan menghasilkan asam- asam organik (asam laktat, asam asetat dan asam format), hidrogen peroksida, diasetil, asetaldehid, asetoin, reutinin, reuterisiklin dan bakteriosin. Senyawa yang dihasilkan tersebut dapat bersifat anti- Candida (Suskovic et al ., 2010). Pada  produk  susu  fermentasi dapat ditambahkan bakteri probiotik. Probiotik sebagian besar adalah BAL golongan Lactobacillus dan Bifidobacterium (Adriani, 2010). Penambahan bakteri probiotik ditujukan agar mempunyai efek fungsional bagi kesehatan (Irianto, 2013). Penelitian yang dilakukan oleh Khikmah dan Sulistyani (2017), mendapatkan susu fermentasi komersial dengan kandungan Lactobacilus acidophilus, Bifidobacterium, S. thermophilus, dan Lactobacilus burgaricus mampu menghambat Candida albicans dengan diameter zona hambat tertinggi.
Candida merupakan genus penyebab kandidiasis oral, yaitu kelainan pada mukosa rongga mulut. Kandidiasis tersebut dapat terjadi karena pengobatan antibiotik dalam jangka waktu lama dan pada kondisi imunosuspression (pasien kanker, diabetes, Acquired Immunodeficiency Syndrome /AIDS) (Hakim & Ramadhian, 2015). Sebagian besar kandidiasis oral disebabkan oleh Candida albicans (CA), dapat juga disebabkan oleh non -Candida albicans Candida (NCAC), yaitu C. tropicalis , C. krusei , C. parapsilosis , dan C. guilliermondi (Gravina et al ., 2007).
Lukisari et al . (2010), melaporkan bahwa C. tropicalis dapat diisolasi pada kandidiasis oral dari pasien anak dengan gangguan sistemik. Walangare et al . (2014), juga  berhasil  mengidentifikasi Candida non -albicans sebagai penyebab Kandidiasis Oral pada pasien HIV & AIDS di RSUD Dr. Saiful Anwar Malang. Ditemukan spesies C. albicans (88,8%), C. glabrata (7,4%), dan C. tropicalis (3,8%).
Penelitian  Pfaller et al . (2007), menyebutkan secara epidemiologi dari tahun 1999-2003 spesies C. albicans tetap spesies terbanyak yang menyebabkan infeksi di Amerika Serikat, meskipun kecenderungan terus menurun dari tahun 1992 sebesar 52% menjadi 45% pada tahun 2000. Spesies Candida non -albicans seperti C. glabrata, C. parapsilosis, C. krusei, dan C. tropicalis cenderung meningkat. Pada tahun 1992- 2000 terjadi peningkatan insiden infeksi oleh C. glabrata dari 12% menjadi 24% sehingga spesies ini dikatakan sebagai spesies opurtunistik yang paling berkembang di Amerika Serikat. Penelitian Hasrulliana et al . (2010), menyebutkan dominasi spesies Candida non -albicans (65,62%) yang terdiri dari C. tropicalis (29,41%) , C. dubliniensis (14,71%) , C. glabrata (14,71%) , dan C. guillermondii
(5,88%) dibandingkan spesies C.albicans (34,38%) pada kandidiasis oral penderita HIV/AIDS RSUD Dr. Soetomo. Produk  minuman  susu  fermentasi komersial telah banyak beredar di pasaran dengan berbagai macam merk. Informasi tentang manfaat susu fermentasi masih terbatas pada kemampuan dalam mencegah dan mengobati infeksi bakteri pada saluran pencernaan. Berdasarkan hal tersebut penelitian  tentang  aktivitas  antifungi susu fermentasi komersial pada Candida, khususnya Candida non -albicans penyebab kandidiasis oral dan viabilitas bakteri di dalam susu fermentasi perlu dilakukan. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antifungi susu fermentasi komersial pada Candida non -albicans dan viabilitas
Khikmah et al.
bakteri di dalam susu fermentasi. Penelitian ini diharapkan menjadi rujukan dalam menjadikan susu fermentasi sebagai salah satu alternatif dalam pencegahan infeksi oleh Candida no n-albicans pada kandidiasis oral.
Materi dan Metode Persiapan sampel Sampel  susu  fermentasi  diperoleh dengan cara membeli produk susu fermentasi di toko swalayan yang ada di Yogyakarta. Sampel terdiri dari berbagai jenis dan merk susu fermentasi, dipilih yang belum melampaui batas kadaluwarsa. Jumlah susu fermentasi adalah 12 sampel, disimpan di almari pendingin sampai akan digunakan.

## Pembuatan Suspensi Candida non-albicans
Kultur Candida non- albicans yang digunakan adalah C. tropicalis FNCC 3023
(koleksi PAU Pangan dan Gizi UGM) dan C. glabrata InaCC Y 68 (koleksi LIPI Cibinong).  Kultur uji diinokulasikan pada medium Saboraud Dextrose Agar (SDA) miring, diinkubasi pada suhu kamar selama 24 jam.  Suspensi Candida uji dibuat dengan cara mengambil 1 ose dari kultur stock
Candida pada medium SDA miring, dibuat suspensi menggunakan larutan NaCl 0,85% steril. Suspensi distandarkan kekeruhannya sampai 10 8 CFU/mL menggunakan standart Mc Farland I sebagai pembanding kekeruhan (NCCLS, 2002).
Uji Antifungi Susu Fermentasi Komersial pada Candida non-albicans Uji antifungi susu fermentasi komersial pada Candida non -albicans dilakukan dengan metode difusi sumuran ( well diffusion methods ) (Purwijantiningsih, 2011).  Suspensi C. non - albicans uji sebanyak 0,1% diinokulasikan pada cawan petri yang berisi 30 mL media SDA secara pour plate . Media ditunggu sampai membeku, selanjutnya dibuat 6 sumuran dengan diameter 5 mm. Pada 5 sumuran dimasukan 60 µL susu fermentasi dengan merk yang berbeda. Kontrol negatif digunakan Dimethyl sulfoxide (DMSO) dan kontrol positif adalah nistatin dalam bentuk disc antifungi (100 units). Selanjutnya diinkubasi pada suhu kamar selama 72 jam. Kemampuan antifungi susu fermentasi pada Candida non- albicans ditunjukan adanya zona jernih di sekitar sumuran, diukur sebagai mm diameter zona jernih dikurangi diameter sumuran.
Viabilitas Bakteri Viabilitas bakteri dihitung berdasarkan jumlah bakteri asam laktat yang ada di dalam susu fermentasi, dihitung dengan metode hitungan cawan ( plate count ) (Akalin et al ., 2004). Setiap susu fermentasi dibuat seri pengenceran sampai 10 -6 . Pada pengenceran 10 -5 dan 10 -6 dilakukan pour plating pada medium De Man Rogosa Sharpe Agar (MRSA), kemudian diinkubasi pada suhu kamar
jernih di sekitar sumuran, diukur sebagai mm diameter zona jernih dikurangi diameter sumuran.

## Viabilitas Bakteri
Viabilitas bakteri dihitung berdasarkan jumlah bakteri asam laktat yang ada di dalam susu fermentasi, dihitung dengan metode hitungan cawan ( plate count )  (Akalin et al ., 2004).  Setiap susu fermentasi  dibuat seri pengenceran sampai 10 -6 . Pada pengenceran 10 -5 dan 10 -6 dilakukan pour plating pada medium De Man Rogosa Sharpe Agar (MRSA), kemudian diinkubasi pada suhu kamar selama 72 jam. Diamati koloni Bakteri Asam Laktat (BAL) yang tumbuh dan dilakukan perhitungan jumlah koloni sebagai Total Plate Count (TPC).

## Pengukuran pH
Pengukuran  pH  dilakukan dengan mencelupkan pH meter ke dalam susu fermentasi, ditunggu sampai angka pada layar pH meter konstan (Akalin et al ., 2004).

## HASIL
Uji antifungi susu fermentasi komersial  menunjukkan bahwa susu fermentasi ada yang mempunyai aktivitas antifungi dan ada yang tidak mempunyai aktivitas antifungi  pada C. tropicalis (Gambar  1)  dan  pada
C. glabrata (Gambar 2).  Adanya aktivitas antifungi tersebut ditunjukkan dengan terbentuknya zona hambat di sekitar sumuran.  Zona hambat tersebut termasuk dalam kategori zona irradikal.
N N N O A C B D O E F G H O I J K L
Gambar 1. Uji antifungi susu fermentasi komersial pada C. tropicalis dengan waktu inkubasi 3 x 24  jam. Keterangan : N = nistatin, O = DMSO dan A-L= susu fermentasi komersial.  Tanda panah (  ) menunjukkan zona  irradikal.
Khikmah et al.
selama 72 jam. Diamati koloni Bakteri Asam Laktat (BAL) yang tumbuh dan dilakukan perhitungan jumlah koloni sebagai Total Plate Count (TPC).
Pengukuran pH Pengukuran pH dilakukan dengan mencelupkan pH meter ke dalam susu fermentasi, ditunggu sampai angka pada layar pH meter konstan (Akalin et al ., 2004).
Hasil Uji antifungi susu fermentasi komersial menunjukkan  bahwa  susu  fermentasi ada yang mempunyai aktivitas antifungi dan ada yang tidak mempunyai aktivitas antifungi pada C. tropicalis (Gambar 1)
dan pada C. glabrata (Gambar 2). Adanya aktivitas antifungi tersebut ditunjukkan dengan terbentuknya zona hambat di sekitar sumuran. Zona hambat tersebut termasuk dalam kategori zona irradikal.
Diameter zona irradikal  yang dihasilkan oleh susu fermentasi komersial disajikan pada Tabel 1.
Susu fermentasi komersial mengandung bakteri asam laktat yang berbeda. Bakteri asam laktat yang terdapat dalam susu fermentasi disajikan pada Tabel 2.
Koloni BAL yang tumbuh pada medium MRSA disajikan pada Gambar 3. BAL tumbuh membentuk zona jernih.
Viabilitas BAL ditentukan dengan menghitung bakteri hidup yang terdapat dalam susu fermentasi. Jumlah BAL total yang terkandung pada 12 susu fermentasi komersial dan pH disajikan pada Tabel 3.
Pembahasan Adanya  aktivitas  antifungi  susu fermentasi komersial pada C. tropicalis dan C. glabrata ditunjukkan dengan terbentuknya zona irradikal di sekitar sumuran (Gambar 1 dan 2).  Zona irradikal menunjukkan bahwa
Gambar 2. Uji antifungi susu fermentasi komersial pada C. glabrata dengan waktu inkubasi 3 x 24  jam.
Keterangan : N = nistatin, O = DMSO dan A-L = susu fermentasi komersial.  Tanda panah (  ) menunjukkan zona irradikal.
Gambar  1. Uji antifungi susu fermentasi komersial pada C.  tropicalis dengan waktu inkubasi 3 x 24  jam.  Keterangan : N = nistatin, O = DMSO dan A-L= susu fermentasi komersial.  Tanda panah (       ) menunjukkan zona irradikal.
Gambar  2. Uji antifungi susu fermentasi komersial pada C. glabrata dengan waktu inkubasi 3 x 24  jam.  Keterangan : N = nistatin, O = DMSO dan A-L = susu fermentasi komersial.  Tanda panah (      ) menunjukkan zona irradikal.
Diameter zona  irradikal  yang dihasilkan oleh susu fermentasi komersial disajikan pada Tabel 1.
Tabel  1. Rata-rata diameter zona irradikal susu fermentasi komersial pada C. tropicalis dan C. glabrata
Susu Fermentasi Diameter Zona Irradikal (mm) C. tropicalis   C. glabrata A 0 0 B 6 3 C 9 0 D 0 0 E 0 0 F 0 0 G 8 0
H
0 0
I 0 0 J 15 0
K
5 0 L 0 0 DMSO 0 0 Nistatin 17 15
N N N O A C B D O E F G H O I J K L
Tabel 1. Rata-rata diameter zona irradikal susu fermentasi komersial pada C. tropicalis dan C. glabrata Susu Fermentasi Diameter Zona Irradikal (mm) C. tropicalis C. glabrata A 0 0 B 6 3 C 9 0 D 0 0 E 0 0 F 0 0 G 8 0 H 0 0 I 0 0 J 15 0 K 5 0 L 0 0 DMSO 0 0 Nistatin 17 15
Khikmah et al.
susu  fermentasi  komersial  mempunyai potensi menghambat C. tropicalis dan
C. glabrata tetapi belum mempunyai kemampuan mematikan.
Kemampuan antifungi susu fermentasi pada C. tropicalis dan C. glabrata dikarenakan selama  fermentasi  bakteri  asam  laktat yang terkandung dalam susu fermentasi mampu menghasilkan senyawa antifungi, diantaranya asam-asam organik (asam laktat, asam asetat), hidrogen peroksida, diasetil dan bakteriosin. Dalam penelitian ini belum diidentifikasi jenis senyawa antifungi yang dihasilkan. Kemampuan antifungi susu fermentasi pada C. tropicalis dan C. glabrata berbeda-beda (Tabel 1).  Perbedaan tersebut dikarenakan adanya perbedaan komposisi dan jumlah BAL dalam susu fermentasi (Tabel 2), sehingga aktivitas senyawa-senyawa antifungi yang dihasilkan juga berbeda. Pada penelitian ini, kemampuan antifungi susu fermentasi kemungkinan disebabkan oleh asam organik.  Hal ini ditandai dengan terbentuknya zona irradikal. Menurut Rai et al . (2009), aktivitas antimikroba asam organik dapat dibedakan dengan aktivitas bakteriosin.  Bakteriosin akan menghasilkan zona jernih yang jelas, bulat dan luas. Zona jernih tersebut termasuk dalam zona radikal, yang menunjukkan bahwa senyawa antimikroba mampu mematikan mikroba uji.
Efek  penghambatan  asam  organik terutama disebabkan oleh molekul asam yang tidak terdisosiasi, berdifusi melintasi membran sel menuju sitoplasma yang lebih basa.  Hal  tersebut  mengganggu  fungsi metabolik yang penting (Suskovic et al ., 2010). Diantaranya mengganggu transpor nutrisi ke dalam sel dan menyebabkan metabolit internal keluar dari sel, yang akhirnya akan menyebabkan kerusakan sel (Parada et al ., 2007).
Susu  fermentasi  komersial  dalam menghambat C. tropicalis dan C. glabrata mempunyai aktivitas yang berbeda-beda. Hal tersebut ditunjukkan oleh perbedaan diameter zona irradikal yang terbentuk
Gambar 3. Koloni BAL tumbuh  pada medium MRSA membentuk zona jernih
Susu fermentasi komersial mengandung bakteri asam laktat yang berbeda.  Bakteri asam laktat yang terdapat dalam susu  fermentasi disajikan pada Tabel 2.

## Tabel 2.  Bakteri Asam Laktat (BAL) yang terkandung dalam susu fermentasi komersial

## Susu Fermentasi
Bakteri Asam Laktat A
Bifidobacterium BB-12, L. acidophilus LA-5
L. bulgaricus E
L. thermophilus, L. bulgaricus,

## L. acidophilus, Bifidobacterium
L. thermophilus, L. bulgaricus, L. acidophilus, Bifidobacterium
L. acidophilus, Bifidobacterium, S. thermophilus, L. bulgaricus

## Yoghurt Skim
L. bulgaricus, L. acidophilus
Koloni BAL yang tumbuh pada medium MRSA disajikan pada Gambar 3.
BAL tumbuh membentuk zona jernih.

## Gambar 3. Koloni BAL tumbuh  pada medium MRSA membentuk zona jernih
Tabel 3.  Jumlah BAL dan pH susu fermentasi komersial
Susu Fermentasi Jumlah BAL (CFU/mL) pH A 9,9 x 10 7 3,4 B 8,4 x 10 10 3,9 C 3,8 x 10 7 3,5 D 2,5 x 10 7 3,3 E 4,1 x 10 7 3,9 F 1,1 x 10 7 3,8 G 2,3 x 10 7 4,2 H 3,1 x 10 7 3,7 I 1,0 x 10 7 3,01 J 1,9 x 10 8 4,1 K 9,5 x 10 9 4,3 L 1,9 x 10 7 4,1
Tabel 2.  Bakteri Asam Laktat (BAL) yang terkandung dalam susu fermentasi komersial Susu Fermentasi Bakteri Asam Laktat A Lactobacillus casei strain Shirota B L. acidophilus, Bifidobacterium, Streptococcus thermophilus C Bifidobacterium BB-12, L. acidophilus LA-5 D L. bulgaricus E Kultur BAL F S. thermophilus, L. delbrueckii Sub sp bulgaricus G L. thermophilus, L. bulgaricus, L. acidophilus, Bifidobacterium H L. thermophilus, L. bulgaricus, L. acidophilus, Bifidobacterium I BAL + Khamir J L. acidophilus, Bifidobacterium, S. thermophilus, L. bulgaricus K Yoghurt Skim L L. bulgaricus, L. acidophilus
Khikmah et al.
(Tabel 1). Susu fermentasi (B, C, G, J dan
K) mampu menghambat pertumbuhan C. tropicalis ,  dengan aktivitas antifungi tertinggi pada susu fermentasi J.  Susu fermentasi yang dapat menghambat pertumbuhan C.  glabarta hanya susu fermentasi B. Hasil tersebut menunjukkan  bahwa  susu  fermentasi lebih mampu menghambat C. tropicalis dibandingkan C. glabrata . Hasil berbeda diperoleh pada penelitian
Adeniyi et al . (2011), supernatan yang dihasilkan oleh BAL dari salad sayuran lebih mampu menghambat C. glabrata UCH 1208 dibandingkan C. tropicalis UHC 1408. Lactobacillus mesenteroides lebih mampu menghambat C. glabarta UCH 1208
dibandingkan C. tropicalis UHC 1408. L. brevis hanya dapat menghambat C. tropicalis . L. delbruesckii, L. plantarum dan Pediococcus spp. hanya mampu menghambat C. glabarta UCH 1208. Bakteri asam laktat ( Lactobacillus plantarum , L. curvatus , Pediococcus acidilactici , dan P. pentosaceus ) yang diisolasi dari madu alam mampu menghambat semua Candida uji, yaitu C. albicans ATCC 14053, C. glabrata ATCC 2001, C. krusei ATCC 6258, C. parapsilosis ATCC 22019, dan C. tropicalis ATCC 750 .  Penghambatan tinggi terjadi pada C. glabrata oleh L. curvarus dan P. pentocaeus . Hasil uji supernatan dari keempat BAL juga mampu menghambat semua Candida uji (diameter hambat 10 - 22 mm). Supernatan L. curvatus tertinggi dalam menghambat C. glabrata (diameter hambat 22 mm).  Diameter zona hambat supernatan BAL terhadap C. glabrata lebih tinggi dibandingkan C. tropicalis (Bulgasem et al ., 2016). Hasil penelitian Biyari dan Fozouni
(2018), supernatan dari bakteri probiotik Leuconostoc mesenteroides , Lactobacillus plantarum (diisolasi dari yoghurt lokal, yoghurt Poonak, susu domba dan susu sapi) dan Lactobacillus divergence efektif menghambat pertumbuhan Candida spesies yang diisolasi dari mulut dan air liur lansia. Penghambatan Leuconostoc mesenteroides dan
Lactobacillus plantarum pada C. albicans , C. glabarta , C. kefyr dan C. tropicalis lebih efektif dibandingkan Lactobacillus divergence . Adanya perbedaan hasil penelitian ini dengan penelitian sebelumnya dikarena perbedaan senyawa yang diujikan. Pada penelitian ini senyawa yang diujikan masih tercampur dalam susu fermentasi, sedangkan pada penelitian sebelumnya senyawa dalam bentuk supernatan bebas sel. Senyawa antifungi dalam supernatan lebih murni dibandingkan senyawa yang masih tercampur dalam susu fermentasi, sehingga aktivitas antifungi juga lebih tinggi.
Coman et al . (2014), melakukan uji aktivitas antimikroba bakteri probiotik pada patogen, metode yang digunakan salah satunya modified cross-streak . Hasil menunjukkan Lactobacillus rhamnosus IMC 501 ® mempunyai kemampuan tinggi dalam menghambat C. albicans (ATTC 10261 dan ISS7). Lactobacillus paracasei IMC 502 ® mampu menghambat dengan kategori tinggi pada semua Candida yang diujikan, kecuali C. glabarta ISS3 dan C. tropicalis ISS6 tidak mampu dihambat.  Kombinasi kedua bakteri probiotik tersebut (1:1) dalam SYNBIO ® mempunyai aktivitas fungisida. Kemampuan penghambatan tinggi ditunjukkan pada C. albicans ATCC 10261, ISS2, ISS7, ISS1 dan C. krusei ISS4, diikuti pada C. parasilosis ISS5. Pada C. glabrata ISS3 dan C. tropicalis ISS6 tidak terjadi penghambatan. Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa Lactobacillus paracasei IMC 502 ® dan SYNBIO ® mempunyai kemampuan menghambat semua Candida yang diujikan dibandingkan Lactobacillus rhamnosus IMC 501 ® . Koloni BAL yang tumbuh pada medium MRSA (Gambar 3), membentuk zona jernih. Menurut Hartayanie et al . (2015), zona jernih yang terbentuk menunjukan kemampuan BAL menggunakan sumber karbon untuk menghasilkan metabolit sekunder berupa asam. Asam yang dihasilkan mampu mendegradasi CaCO 3 pada medium, menghasilkan kalsium laktat (C 6 H 10 CaO 6 )
Khikmah et al.
yang larut dalam medium dan terlihat sebagai zona jernih.
Viabilitas bakteri asam laktat dalam susu  fermentasi  merupakan  hal  yang penting berkaitan dengan senyawa-senyawa yang dihasilkan yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba termasuk Candida . Viabilitas BAL ditentukan dengan menghitung bakteri hidup yang terdapat dalam susu fermentasi (Tabel 3).  Dua belas sampel susu fermentasi mengandung jumlah BAL yang telah memenuhi standar yang ditetapkan, yaitu 10 7 -10 10 CFU/mL. Susu  fermentasi  agar  memberikan manfaat kesehatan, maka jumlah bakteri probiotik 10 6 -10 8 CFU/mL produk. Hal ini bertujuan untuk mengimbangi kemungkinan penurunan jumlah bakteri probiotik pada saat berada dalam saluran pencernaan (Shah , 2000). Dosis yang direkomendasikan 10 7 -10 10 CFU ( Colony Forming Unit ) setiap serving dan setiap hari dapat mengkonsumsi 1-4 serving (Lee, 2009 dalam Rahayu et al ., 2013). Beberapa penelitian juga memperoleh jumlah bakteri asam laktat sesuai dengan standar yang ditetapkan. Guevarra et al . (2015), melakukan perhitungan jumlah bakteri asam laktat pada yoghurt komersial di Philipina.  Jumlah Streptococcus thermophilus dan Lactobacillus bulgaricus dalam 7 (tujuh) yoghurt komersial memenuhi batas minimal 10 6 CFU/mL yang direkombinasikan untuk kesehatan dan efek terapi. Pada 4 (empat) yoghurt komersial rata-rata S. thermophilus lebih tinggi dari L. bulgaricus. da Silva et al . (2013), jumlah bakteri asam laktat pada yoghurt susu kambing adalah 2,6 x 10 7 –1,8 x 10 8 CFU/mL. Yoghurt disimpan selama 29 hari, pada 4°C. Perhitungan bakteri dilakukan dengan interval waktu 7 (tujuh) hari.  Khalil dan Anwar (2016), jumlah bakteri asam laktat (CFU/mL) dari 4 (empat) yoghurt komersial adalah 7,2 x 10 6 ; 1,0 x 10 6 ; 5,6 x 10 7 ; dan 1,5 x 10 7 . Urbiene dan Leskauskaite (2006), asam laktat merupakan hasil utama fermentasi laktosa dalam susu dan produk susu oleh
bakteri. Tergantung dari jenis BAL yang memfermentasi, maka dapat melalui jalur glikolisis menghasilkan asam laktat atau jalur pentosa phosphat menghasilkan asam laktat dan asam asetat. Dihasilkannya asam-asam tersebut menyebabkan penurunan pH susu fermentasi Derajat keasaman (pH) mempunyai peran penting dalam aktivitas anti- Candida. Aktivitas akan stabil pada pH 3,0-5,0. Nilai pH melebihi 5,0 menunjukkan efek sinergis antara asam laktat dan senyawa antifungi lainnya (Magnusson & Schnurer, 2001). Nilai pH yoghurt komersial 3,5-4,3 (Bamise & Bamise, 2008). Pada penelitian ini susu fermentasi mempunyai pH 3,5-4,3. Berdasarkan hal tersebut, kemungkinan aktivitas penghambatan C. non albicans pada penelitian ini dikarenakan oleh asam organik. Hasil penelitian Bulgasem et al .
(2017), supernatan dari L. curvatus dan P. pentosaceus dengan pH 3 mempunyai kemampuan antifungi tinggi pada C. glabrata ATCC 2001.
Kesimpulan Susu fermentasi komersial lebih mampu menghambat C. tropicalis dibandingkan C. glabrata .  Viabilitas bakteri asam laktat dalam susu fermentasi  komersial 10 7 -10 10 CFU/mL.

## Ucapan Terima Kasih
Terima kasih disampaikan kepada Direktorat Riset dan Pengabdian Kepada Masyarakat Kemristekdikti melalui Hibah Penelitian Dosen Pemula dengan Nomor Kontrak: 044/HB-LIT/III/2016 tanggal 15 Maret 2016 dan Akademi Analis Kesehatan Manggala Yogyakarta melalui anggaran rutin Unit Penelitian dan Pengabdian  Masyarakat (UPPM) 2015/2016.

## Daftar Pustaka
Adriani, L. ( 2010).  Yoghurt Sebagai Probiotik. Dalam: Soeharsono (eds), Probiotik. Widya Padjadjaran, Bandung, hlm 117-130.
Khikmah et al.
Adeniyi, B & Damsa, I. (2011). Antifungal Capacity of Lactic Acid Bacteria Isolated From Salad Vegetables. Afr. J. Biomed . Res. , 14, 137-141. Akalin, A.S., Fenderya, S., & Akbulut, N. (2004). Viability and Activity of Bifidobacteria in Yoghurt Containing Fructooligosaccharide During Refrigerated  Storage. International Journal of Food Science and Technology , 39, 613-621.
Bamise, C.T & Bamise, O.F. (2008). Quantifying The Acidic Content of Commercial Yoghurt Drinks in Nigeria. Int. J. Dent. Sci ., 6 (1), 16. Biyari, S  & Fozouni, L.  (2018).  The Inhibitory E ff ect of Probiotic Bacteria against Drug – Resistant Candida Species Isolated from the Oral Cavity of the Elderly. Shiraz E-Med J ., 16 (6), 1-7. Bulgasem, Y.B., Lani, M.Z., Hassan, Z., Yusofi, W.M.W., & Fnaish, S.G.  (2016). Antifungal Activity of Lactic Acid Bacteria Strains Isolated from Natural Honey against Pathogenic Candida spesies. Mycobiology , 44 (4), 302-309. Bulgasem, B.Y., Hassan, Z., Huda-Faujan, N., Omar, R.H.A., Lani, M.N., & Alshelmani,
M.I. (2017).  Effect of pH, Heat Treatment and Enzymes on The Antifungal Activity of Lactic Acid Bacteria Against Candida Species. Malaysian Journal of Microbiology , 13 (3), 195-202. Coman, M.M., Verdenelli, M.C., Cecchini, C., Silvi, S., Orpianesi, C., Boyko, N., & Cresci, A.  (2014).  In Vitro Evaluation of Antimicrobial Activity of Lactobacillus rhamnosus IMC 501®, Lactobacillus paracasei IMC 502® and SYNBIO®. Journal of Applied Microbiology 117, 518- 527.
da Silva, D.C.G., Brugnera, D.F., & de Abreu, L.R. (2013). Quantification of Lactic Acid Bacteria and Bifidobacteria in Goat Milk Based Yoghurts with Added Water-Soluble Soy Extract.
Afr. J. Food
Sci ., 7, 10, 392-398.
Gravina, H.G., de Morán, E.G., Zambrano, O., Chourio, M.L., de Valero, S.R., Robertis,
S., & Mesa L. (2007).  Oral Candidiasis in Children and Adolescents with Cancer. Identification of Candida spp.. Med Oral Patol Oral Cir Bucal ., 12,  E419-E423. Guevarra, R.B., Virginia, L., &  Barraquio. (2015). Viable Counts of  Lactic Acid Bacteria in Philippine Commercial Yoghurts. Int J Dairy Sci Process , 2, 5, 24-28. Hakim, L & Ramadhian, M.R. (2015). Kandidiasis Oral. Majority , 4 (8), 53-57. Hartayanie, L., Lindayani., & Murniati, M.P. (2015). Isolasi dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat dari Asinan Rebung Bambu Betung yang Difermentasi pada Suhu 15°C. Dalam: Kusumaningrum, H.P.,Lindyani, Nurjanah, S., Rukmi, MG.I., & Gunawan, I. (eds).  Prosiding Pertemuan Ilmiah Tahunan Perhimpunan Mikrobiologi Indonesia, 8-9 Oktober, Permi, Semarang, hlm. 216-223. Hasrulliana, N,W., Suyoso, S., & Rosita, C.S.P. (2010). Surabaya Manifestasi Klinis dan Identifikasi Spesies Penyebab Kandidiasis Oral pada Pasien HIV/ AIDS RSUD Dr.Soetomo Surabaya. Berkala Ilmu Kesehatan Kulit & Kelamin , 22,1, 11-16.
Irianto, K. (2013). Mikrobiologi Medis. Alfabeta, Bandung. Hlm 363-364.
Khalil, Md. I & Anwar, Md. N.  (2016). Isolation, Identification and Characterization of Lactic Acid Bacteria from Milk and Yoghurts. RRJFPDT, 4, 3, 17-26.
Khikmah, N & Sulistyani, N.  (2017).  Potensi Beberapa Susu Fermentasi Komersial Sebagai Antifungi Candida albicans . Biota , 2 (1), 14-20. Lukisari, C., Setyaningtyas, D., & Djamhari, M.  (2010).  Penatalaksanaan Kandidiasi Oral disebabkan Candida tropicalis pada Anak dengan Gangguan Sistemik.
Dentofasial ,  9 (2): 78-85. Magnusson, J & Schnurer, J. (2001).
Lactobacillus coryniformis subsp.
Khikmah et al.
coryniformis strain Si3 Produced a Broad- Spectrum Proteinaceous Antifungal Compound. Appl. Environ. Microbiol., 67 (1), 1-5.
[NCCLS] National Committee for Clinical L a b o r a t o r y   S t a n d a r d .   ( 2 0 0 2 ) . Performance Standart for Antimicrobial Disc Susceptibility Testing. Twelfth International Supplement.
Parada, J.L., Caron, C.R., Medeiros, A.D.P. ,& Soccol, C.R. (2007). Bacteriocins from Lactic Acid Bacteria: Purification, Properties and Use as Biopreservatives. Braz Arch Biol. Tech .,  50, 521-524. Pfaller,  M.A  &  Diekema,  J.D.  (2007). Epidemiology of Invasive Candidiasis: a Persistent Public Health Problem. Clinical Microbiology Reviews , 20 (1), 133-63.
Purwijantiningsih, E.  (2011).  Uji Antibakteri Yoghurt Sinbiotik Terhadap Beberapa Bakteri Patogen Enterik. Biota , 16 (2), 173-177.
Rahayu, E.S., Yogeswara, A., Mariyatun, Haryono, P., Utami, I.S., Utami, T., Nurfiani, S., & Cahyanto, M.N. (2013). Bakteri Asam Laktat Indigenous Berpotensi Probiotik Dan Aplikasinya Untuk Produksi Susu Fermentasi. Dalam: Karmiadji, D.W., Gunadi, A.D., Soebagyo, H., & Fazri, R. (eds). Prosiding Seminar Intensif Riset SINas, 7-8 November 2013, Kemristek, Jakarta, hlm. 149-159. Rai, A.K., Bhaskar, N., Amani, P.M., Indriani,
K., Suresh, P.V., & Mahendrakar, N.S.
(2009). Characterization and Aplication of Native Lactic Acid Bacterium Isolated From Tannery Fleshing for Fermentative Bioconversion of Tannery Fleshing. Application Microbiology Biotechnology , 83, 757-766.
Suskovic, J., Kos, B., Beganovic, J., Pavunc, A.L., Habjanic, K., & Matosic, S.  (2010). Antimicrobial Activity-The Most Important Property of Probiotic and
Stater Lactic Acid Bacteria. Food Technol. Biotechnol. , 48, 3, 296-307. Shah, N.P. (2000). Probiotic Bacteria : Selective Enumeration and Survival in Dairy Food. Dairy Science J ., 5: 515-521. Urbiene, S & Leskauskaite, D. (2006). Formation  of  Some  Organic  Acids During Fermentation of Milk. Pol. J.
Food. Nutr. Sci ., 15/16, 3, 277-281. Walangare, T., Hidayat, T., & Basuki, S. (2014). Profil Spesies Candida pada Pasien Kandidiasis Oral dengan Infeksi HIV & AIDS. Berkala Ilmu Kesehatan Kulit & Kelamin , 26, 1, 29-35. Wibowo, W. (2002). Bioteknologi Fermentasi Susu .  Pusat Pengembangan Bioteknologi. Universitas Muhammadiyah Malang.