© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586

## PERBANDINGAN HASIL PEMERIKSAAN HBA1C METODE BORONATE AFFINITY DAN NEPHELOMETRY PHOTOMETRY
Rizka Amalia 1) , Christina Destri Wiwis Wijayanti 2) , Setyo Dwi Santoso 1)
1) Sarjana Terapan Teknologi Laboratorium Medis, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Maarif Hasyim Latif
2) D3 Teknologi Laboratorium Medis, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Maarif Hasyim Latif Email: ch.destri@dosen.umaha.ac.id

## ABSTRACT
HbA1C  is  glycosylated  hemoglobin  at  the  N-terminal  group,  HbA1C  is  hemoglobin  with  a minor component closely related to blood glucose. HbA1C is referred to as the breakdown of sugar in the  body's  metabolism  or  glycosylated  hemoglobin  or  glycohemoglobin.  HbA1C  has  several examination  methods  such  as  the  Boronate  Affinity  method  and  Nephelometry  Photometry.  The  two main  concepts  of  HbA1C  measurement  are  based  on  the  separation  of  hemoglobin  fractions  and chemical reactions. Both of these methods offer a fast, simple, precise and accurate alternative to the currently  used  methods  and  provide  substantial  freedom  from  many  common  hassles.  This  type  of research  is  comparative  analytic  experimental.  In  this  study,  25  samples  were  used  during  the November-January 2023 period. The purpose of this study was to evaluate the results of the HbA1C examination using two methods. In this study it was concluded that based on the Independent T Test it showed the results of Sig 0.913 > α (0.05) so that it could be concluded that there was no significant difference in the results of the two examination methods Keywords : HbA1C, Boronate Affinity, Nephelometry Photometry

## PENDAHULUAN
Indonesia  telah  diprediksi  mengalami peningkatan  kasus  diabetes  mellitus  tipe  2 (DM2)  menjadi  sekitar  21,3  juta  pada  tahun 2030  yang  telah  dilakukan  oleh  World  Health Organization (WHO). DM2 juga telah diprediksi  meningkat  sebesar  2-3  kali  lipat pada  tahun  2035  oleh  International  Diabetes Federation (IDF) (Perkeni, 2015; ADA, 2017).
DM  2  merupakan  penyakit  dengan adanya  gejala  hiperglikemia  yang  terjadi termasuk penurunan sekresi insulin, penurunan pemanfaatan glukosa, dan peningkatan produksi glukosa. Homeostasis glukosa adalah keseimbangan antara produksi glukosa hepatik dan  penyerapan  serta  pemanfaatan  glukosa perifer.  Insulin  adalah  pengatur  homeostasis glukosa  yang  paling  penting  (Simon  dan Wittman, 2019).
Peningkatan prevalensi DM 2
menyebabkan peningkatan kebutuhan
pemeriksaan  hemoglobin  terglikasi  (HbA1c) untuk  kontrol  glikemik.  American  Diabetes Association (ADA), WHO dan IDF menyatakan  bahwa HbA1c merupakan marker dalam  pemeriksaan  dan  diagnosis  DM  2 (Perkeni, 2015; ADA, 2017).
HbA1c  merupakan  hemoglobin  A  yang mengalami reaksi enzimatik terglikosilasi pada 1  atau  2  teminal  N-valin  rantai  β  hemoglobin. Selama masa hidup eritrosit, HbA1c memberikan  ukuran  kontrol  glikemik  yang baik dalam darah pasien diabetes (Syed, 2011; Gupta et al ., 2017; ADA 2017)
Pemeriksaan  HbA1C  dapat  dilakukan dengan  pemisahan  fraksi  HbA1C  dengan Hemoglobin  lain  dan  dapat  dilakukan  dengan reaksi  kimia  (Karami  &  Baradaran,  2014). Metode nephelometry mengukur  cahaya  yang tersebar  dari  permukaan  partikel  lateks.  Oleh karena  itu,  sistem  otomatis  ini  telah  diadopsi
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
dan  menghasilkan  reproduktifitas  yang  sangat baik (Ackerman dan Rosevear, 1979). Kromatografi afinitas boronat ( boronate affinity )  didasarkan  pada  pengikatan  boronat pada  konfigurasi  cis-diol  yang  dibentuk  oleh ikatan  glukosa  dengan  hemoglobin  dan mengukur  total  hemoglobin  terglikasi  (Stirk dan Allen, 1999).
Penelitian  tentang  perbandingan  kadar HbA1c metode boronate affinity dan
nephelometry photometry belum pernah dilakukan  di  Laboratorium  Wijaya  Kusuma Mojokerto.  Berdasarkan  latar  belakang  di  atas peneliti tertarik untuk mengetahui perbandingan  kadar  HbA1c  menggunakan metode boronate affinity dan nephelometry photometry pada pasien DM tipe 2.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Desain penelitian yang digunakan adalah penelitian eksperimental analitik.
Lokasi  pelaksanaan  penelitian  adalah  Klinik Wijaya Kusuma Mojokerto. Penelitian dilaksanakan  pada  bulan  November  2022 hingga Juni 2023.

## Sampel penelitian
Populasi  dalam  penelitian  ini  yaitu sampel  acak  dengan  parameter  pemeriksaan HbA1C  yang  dilakukan  di  Laboratorium Klinik  Wijaya  Kusuma  Mojokerto.  Penelitian ini  menggunakan  sebanyak  25  sampel  dari sampel  pemeriksaan  HbA1C  yang  periksa  di
Laboratorium Klinik Wijaya Kusuma
Mojokerto.  Metode  sampling  menggunakan accidental sampling .  Alat  yang  digunakan untuk pengukuran afinitas boronate adalah alat
Ephitod  616 sementara  untuk  pengukuran nephelometry adalah alat Mispa

## Prosedur Penelitian
Pasien diminta mengisi formulir pemeriksaan  medis.  Pasien  diberi  penjelasan mengenai  penanganan  sampel.  Darah  diambil dari  pasien  merupakan  darah  kapiler whole blood yang kemudian dicampur dengan EDTA.
Selanjutnya  sampel  darah  dan  EDTA  dibagi dua  kelompok  yaitu  pengujian  dengan  alat Ephitod  616 dan  alat  Mispa.  HbA1c  normal berada  pada  rentang  3,5  –  5,5%  sedangkan yang di atas normal adalah ≥ 6,5%.

## Analisis data
Data  dianalisis  menggunkanan  program SPSS,  dengan  melakukan  uji  normalitas,  uji homogenitas dan uji T independent .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  dari  penelitian  adalah  dari  25 sampel  pasien diperoleh rata-rata hasil pemeriksaan  HbA1c  dengan  metode Boronate affinity adalah 6.4 % sedangkan menggunakan nephelometry  photometry adalah  6.7  %.  Uji normalitas  keduanya  didapatkan  adalah  p  = 0.321 > α sehingga dapat dikatakan bahwa data berdistribusi normal sedangkan uji homogenitas  adalah  0.907.  Uji  T  Independent menunjukkan  hasil  p  =  0.913  >  α  (0,05) sehingga dapat dikatakan bahwa tidak terdapat
perbedaan  yang  signifikan  pada  kedua  hasil metode pemeriksaan tersebut.
Penelitian  lain  pernah  dilakukan  untuk membandingkan  hasil  pemeriksaan  HbA1c yaitu dengan metode nephelometry, HPLC dan ion exchange resin . Hasil pengukuran menunjukkan  adanya  hubungan  terhadap ketiga metode. Rerata hasil pengukuran HbA1c dengan  metode nephelometry,  HPLC dan ion exchange resin berurutan adalah 7.62%, 8,16% dan 7.84%. korelasi signifikan yang lebih baik
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
ditunjukkan  pada  metode nephelometry dan HPLC (Prathima et al ., 2020). Pengujian menggunakan
HPLC merupakan gold  standar dalam  pemeriksaan
HbA1c,  namun  biaya  yang  diperlukan  terlalu mahal. Selain itu, pengujian HPLC membutuhkan kemampuan dan peralatan yang memadai dan juga waktu yang lebih lama. Uji nephelometri dan ion  exchange  resin lebih cepat  sebagai  alternatif  (Dam et  al ,  2013;
Nathan et al., 2008).
Penelitian  lain  melakukan  pengujian terhadap metode boronate affinity,
immunoturbidimetry dan HPLC memberikan hasil yang tidak jauh berbeda. Hasil pengukuran metode boronate affinity, immunoturbidimetry dan HPLC terhadap HbA1c berturut-turut adalah 7.81%, 9.16% dan
8.82%.  Pada  uji  cepat boronate  affinity
terdapat  kecenderungan  menurunkan  hasil  uji HbA1c  sehingga  hasil  uji  boron  terdapat kemungkinan  menyebabkan  hasil  uji  DM2 positif terbaca sebagai uji negatif (Sood, 2012; Schwartz,  2005).  Hal  ini  sesuai  dengan  hasil penelitian  ini  yang  memberikan  nilai  HbA1c lebih kecil dibandingkan dengan uji
nephelometry Pemeriksaan HbA1c dilaksanakan terhadap pasien dengan glukosa darah sewaktu >200  mg/dl  atau  glukosa  darah  puasa  >126 mg/dl.  HbA1c  yang  terukur  sesuai  dengan umur sel darah merah (100-120 hari) dan dapat dipastikan  memberikan  informasi  kadar  tinggi glukosa  pada  waktu  1  bulan  yang  lalu. Pemeriksaan juga memberi informasi mengenai  kepatuhan  berobat  dan  pola  makan penderita DM2 (Suprihrtini, 2017).
Tabel 1. Hasil pemeriksaan kadar HbA1c pada pasien DM2 laboratorium Wijaya Kusuma Mojokerto
No. Kode Sampel Usia (tahun) Jenis Kelamin Hasil HbA1c Boronate af (%) Nephelometry (%) 1 TNS1 60 L 7.4 8.4 2 NYI1 57 P 8.1 7.8 3 NYK1 54 P 7.8 6.8 4 NYR1 56 P 7.3 6.0 5 TND1 50 L 6.6 7.4 6 NYS1 51 P 5.3 6.4 7 NYS2 63 P 5.3 6.7 8 NYN1 66 P 5.3 5.0 9 NYS3 50 P 4.9 5.5 10 TNS2 53 L 5.3 7.4 11 NYW1 46 P 6.2 6.0 12 NYW2 54 P 4.9 5.5 13 TNS3 66 L 7.4 8.3 14 NYR2 74 P 4.8 5.2 15 NYR3 55 P 5.3 6.7 16 NYM1 51 P 5.1 6.2 17 NYS4 53 P 6.3 7.5 18 TNS4 55 L 6.1 6.2 19 TNS5 57 L 5.7 4.8 20 NYS5 50 P 7.3 8.3 21 NYN2 53 P 10.1 11.0 22 TNM1 57 L 7.9 8.7 23 NYT1 71 P 6.1 7.5 24 NYS5 50 P 8.3 9.5 25 TNK1 55 L 5.9 6.7
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
Tabel 2. Rata-rata hasil pemeriksaan HbA1c boronate affinity dan nephelometry photometry
Metode pengukuran Jumlah Hasil Jumlah sampel Rata-rata (mean) boronate affinity 160.9 25 6.4 nephelometry photometry 168.1 25 6.7 Tabel 3. Frekuensi kadar normal dan di atas normal HbA1C No. HbA1c Frekuensi Persentase (%) 1 Di atas normal 15 60 2 Normal 10 40 Jumlah 25 100

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  mengenai perbandingan HbA1c yang diukur menggunakan boronate affinity dan
nephelometry photometry menunjukkan bahwa, dari 25 sampel yang telah diukur tidak menunjukkan  perbedaan  signifikan  antara kedua metode. Hasil ini telah ditunjukkan pada uji  T  independen  dengan  hasil  p=0.913>α.
Kedua metode dapat dijadikan sebagai metode
utama  pengukuran  HbA1c  dan  metode  untuk mengkonfirmasi hasil.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis selaku peneliti ingin mengucapkan  terima  kasih  atas  semua  pihak yang  terlibat  dalam  penelitian  ini,  terutama untuk  selurih  staf  Laboratorium  Wijaya Kusuma Mojokerto yang turut serta membantu dalam proses pengambilan data.

## DAFTAR PUSTAKA
Ackerman  E.  dan  Rosevear  JW.  1976.
Immunonephelometric  assays. Medical Progress  Through  Technology .  6(2):81- 90 American Diabetes Association. 2014.
Standards  of  Medical  Care  In  Diabetes. Diabetes Care , 37(1):14–80
Dam  A.R,  Ahuja  A.J,  Singh  M,  dan  Singh  R.
2013. Limitation of HPLC methodology for  HBA1c  estimation. Indian  J  Pathol Microbiol . 56(4):483-484
Gupta  S.,  Jain  U.  dan  Chauhan  N.  2017. Laboratory  Diagnosis  of  HbA1c:  A Review. Journal of  Nanomedicine Research . 5(4):1-8
Karami  A  dan  Baradaran,  2014.  Comparative
Evaluation  Of  Three  Different  Methods
For  HbA1c  Measurement  With  High- Performance Chromatography
In
Diabetic  Patient. Advanced  Biomedical Research . 3 (94): 6-10
Nathan  D.M,  Kuenen  J,  Borg  R,  Zheng  H, Schoenfeld  D,  dan  Heine  RJ.  2008. Translating the A1C assay into estimated average glucose values.
Diabetes Care . 31(8):1473-78. PB.  PERKENI.  2015. Konsensus  Pengelolaan dan  Pencegahan  Diabetes  Melitus  Tipe 2  di  Indonesia  2015 .  1st  edn.  Jakarta: PB.PERKENI
Prathima, M.B., Reshma,S., Susith, Shetty, P.,
Janice,  D.,  Kalal,  B.S.,  Madan,  G.R.
2020. Estimation of Glycated
Haemoglobin  by  Nephelometry,  Ion Exchange  Resin  and  High  Performance Liquid  Chromatography:  A  Cross- sectional Study. Journal of Clinical and Diagnostic Research . 14(9): 1-4 Schawrtz, K.L., Monsur, J.C., Bartoces, M.G., West,  P.A.,  dan  Neale,  A.V.  2005. Correlation  of  same-visit  HbA1c  test with  laboratory-based  measurements:  A
© Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
MetroNet  study. BMC  Family  Practice . 6(28): 1-7
Simon  K,  dan  Wittmann  I.  2019.  Can  blood glucose  value  really  be  referred  to  as  a metabolic parameter? Rev Endocr Metab
Disord . 20(2):151-160
Sood, , R.D. 2012. Underestimation of HbA1c values  by  the  rapid  boronate  affinity assay  as  compared  to  HPLC,  the  gold standard and a direct immunoturbidimetric assay for
assessment  of  glycemic  control  in diabetics .  Scientific  Reports.  Tulip Group.  Diakses  pada  Desember  2023. https://www.tulipgroup.com/Evaluations
/Quantia-HBA1c.pdf
Stirk,  H.  dan  Allen,  K.R.  1999.  Measurement of  glycated  haemoglobin  by  boronate- affinity high-pressure
liquid
chromatography. Ann  Clin  Biochem . 36:233-234 Suprihartini, 2017. Hubungan HbA1c Terhadap  Kadar  Glukosa  Darah  Pada Penderita  Diabetes  Mellitus  Di  RSUD. Abdul  Wahab  Syahranie  Samarinda Tahun 2016. Mahakam Medical Laboratory Technology. 4(3): 171-180
Syed I.A.A. 2011. Glycated Haemoglobin;
Past,  Present  and  Future  Are  We Ready  For  The  Change. J  Pak  Med Assoc , 61(4): 383-388