## RESEARCH ARTICLE

## Antibacterial Activity of Liverworts of Dumortiera hirsute (Sw.) Nees Ethyl Acetate Extract Against Pathogenic Bacteria
(Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Lumut Hati Dumortiera hirsuta (Sw.) Nees terhadap Bakteri Patogen)
Dwi Setyati *) , Luthfiah, Sattya Arimurti Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Jember Jalan Kalimantan 37, Jember 68121

## ABSTRACT
Dumortiera hirsuta is one of the liverworts that can be  used as a medicinal to prevent infection by pathogenic bacteria. The content of  secondary  metabolites  of D.  hirsuta has  potential  as  antibacterial  properties  includes  flavonoids,  alkaloids  and  steroids.  This research is to analyze the antibacterial activity of moss D. hirsuta against pathogenic bacteria that will be beneficial to humans. Liverworts of D. hirsuta were extracted using ethyl acetate solvent and tested against three types of pathogenic bacteria using the agar well-diffusion method. The results of this study indicated that the ethyl acetate extract of D. hirsuta at 100% concentration could inhibit the growth of Escherichia coli , Staphylococcus aureus , and Salmonella typhi bacteria . The range of antibacterial activity categories of the ethyl acetate extract of D. hirsuta to E. coli , S. aureus , and S. typhi between weak to moderate.
Dumortiera hirsuta (Sw.) Nees merupakan salah satu lumut hati yang dapat dimanfaatkan sebagai bahan obat untuk mencegah infeksi oleh bakteri patogen. Kandungan senyawa metabolit sekunder D. hirsuta yang berpotensi sebagai antibakteri diantaranya adalah flavonoid, alkaloid dan steroid. Penelitian ini bertujuan menganalisis aktivitas antibakteri lumut D. hirsuta terhadap bakteri patogen sehingga nantinya dapat bermanfaat bagi manusia. Lumut hati D. hirsuta diekstrak menggunakan pelarut etil asetat dan diujikan terhadap tiga jenis bakteri patogen menggunakan metode difusi sumuran. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat D. hirsuta pada konsentrasi 100% dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli , Staphylococcus aureus , dan Salmonella typhi . Kisaran kategori aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat D. hirsuta terhadap bakteri E. coli , S. aureus , dan S. typhi yaitu antara lemah sampai sedang
Keywords: Antibacteria, Concentration, D. hirsuta .

## PENDAHULUAN
Selama  ini,  antibiotik  digunakan  untuk  mengatasi penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri  patogen. Penggunaan  antibiotik  yang  berlebihan  dapat menyebabkan  bakteri  tersebut  menjadi resisten terhadap  antibiotik  [1].  Semakin  meningkatnya resistensi bakteri terhadap antibiotik maka diperlukan upaya lain untuk mengatasinya yaitu melalui pencarian obat  alternatif  dari  tumbuhan,  salah  satunya  dari kelompok tumbuhan lumut, yaitu Dumortiera. Hirsuta .
Lumut D. hirsuta merupakan salah satu jenis lumut hati yang dapat ditemukan di Indonesia. Berdasarkan hasil eksplorasi lapang Kawasan Gunung Gumitir di Jawa  Timur,  lumut  hati D.  hirsuta bisa  ditemukan dengan  mudah.Jalur  di  Kawasan  Gumitir  terdapat tebing  di  sepanjang  tepi  jalan  yang  menjadi  tempat melekatnya  lumut D.  hirsuta . Kawasan Gunung Gumitir sering turun hujan yang menyebabkan tanah menjadi lembab sehingga lumut dapat tumbuh dengan baik. Lumut D. hirsuta dapat dimanfaatkan sebagai bahan obat  untuk  mencegah  infeksi  oleh  bakteri  patogen.
*)Corresponding author: Dwi Setyati E-mail: setyatidwi@yahoo.com
Setyati et al, Antibacterial Activity of Liverworts …
Kandungan  senyawa  metabolit  sekunder D.  hirsuta diantaranya adalah flavonoid, alkaloid dan steroid [10]. Ketiga  jenis  senyawa  tersebut  diketahui  memiliki potensi  sebagai  antibakteri  [2],  [3],  [4],  [5],  dan  [6]. Penelitian  tentang aktivitas antibakteri  ekstrak  lumut telah dilakukan antara lain oleh Widyana, dkk. [7]dan Junairiah,  dkk.  [8].  Widyana,  dkk.  [7] dalam penelitiannya  menggunakan  ekstrak  methanol  lumut Octoblepharum  albidum Hedw.  terhadap  bakteri Staphylococcus  epidermidis dan Pseudomonas  aeruginosa . Hasil  penelitian  Widyana, dkk. [7] konsentrasi  60%, ekstrak O.  albidium mampu  menghambat pertumbuhan S.  epidermidis dengan  katagori  kuat sedangkan untuk bakteri P. aeruginosa masih tergolong katagori  sedang.  Penghambatan  dengan  katagorikan kuat  pada  bakteri P.  aeruginosa baru  terjadi  pada konsentrasi  ekstrak O.  albidium 80%. Penelitian Junairiah, dkk. [8] sampel  yang  digunakan  adalah lumut hati D. hirsuta yang diperoleh dari hutan Cangar Batu  Malang  dengan  menggunakan  tiga  macam pelarut  yaitu  kloroform,  methanol  dan  air  dan pengujian  aktivitas  mikroba menggunakan  metode difusi cakram. Dari ketiga jenis ekstrak yang digunakan tersebut  ekstrak  kloroform  mempunyai  aktivitas antimikroba  paling  tinggi. Pada  penelitian  kali  ini sampel yang digunakan sama yaitu D.hirsuta tetapi yang diperoleh dari Kawasan Gunung Gumitir dan pelarut yang  digunakan  adalah  etil  asetat  dan  untuk  uji aktivitas antibakteri menggunakan metode sumuran.
Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk menganalisis aktivitas  antibakteri  ekstrak  methanol  lumut  hati D. hirsuta terhadap  bakteri  patogen  ( Escherichia coli, Staphylococcus aureus, dan Salmonella typhi ).  Pemilihan ketiga bakteri tersebut untuk uji aktivitas antimikrob karena ketiga jenis bakteri tersebut merupakan bakteri yang memiliki struktur dinding sel yang berbeda. E.coli dan S. typhi adalah bakteri Gram negatif sedangkan S. aureus adalah bakteri Gram positif  sehingga memiliki kemampuan  aktivitas  yang  berbeda.Selain  itu ketiga bakteri  tersebut  merupakan  kelompok  mikroba penyebab infeksi dan resisten terhadap obat [8].

## METODE PENELITIAN
Bahan yang digunakan adalah lumut hati D. hirsuta (Sw.)  Nees  yang  diperoleh  di  Kawasan  gunung Gumitir, Bakteri patogen yang digunakan yaitu E. coli, S.  aureus dan S.  typhi koleksi  Laboratorium Mikrobiologi  Prodi  Biologi  FMIPA  Universitas
Jember, Nutrien  Agar (NA)  dan Nutrien  Broth (NB), pelarut  etil  asetat,  akuades,  dan  antibiotik  ampisilin, serta  ciprofloxacin.  Alat  yang  digunakan rotary evaporator, Laminar  Air  Flow (LAF),  inkubator, spektrofotometer UV-vis erlenmeyer, gelas ukur.labu Erlenmeyer,  tabung  reaksi, cored  borer ,  neraca ohaus , jangka  sorong,  mikrotip  dan  mikropipet,  serta eppendorf .
Pengambilan dan Ekstraksi Sampel Lumut Sampel  lumut  yang  diperoleh  dari  Kawasan Gunung  Gumitir  dibersihkan  dan  dikeringanginkan selama 14 hari [9], lalu diblender sehingga didapatkan serbuk simplisia. Serbuk simplisia dimaserasi dengan etil  asetat  menggunakan  perbandingan  (g/ml)    1:40. Proses maserasi dilakukan selama 3×24 jam, kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator sehingga diperoleh  ekstrak  kasar  [7].    Ekstrak  kasar  yang diperoleh  dikelompokkan  menjadi ekstrak  steril  dan nonsteril . Ekstrak steril adalah ekstrak yang diperoleh dengan cara menyaring ekstrak kasar etil asetat lumut hati D. hirsuta menggunakan millipore ukuran 0,2 µm. sedangkan ekstrak nonsteril adalah ekstrak kasar tanpa melalui  penyaringan  dengan  Millipore.  Ekstrak  steril dan  nonsteril  tersebut  digunakan  untuk  uji  aktivitas antibakteri  masing-masing  pada  konsentrasi  25% (250.000  ppm),  50%  (500.000  ppm),  dan  100% (1.000.000 ppm).
Uji Antibakteri Ekstrak Lumut terhadap Bakteri Uji Persiapan bakteri  uji  dilakukan  dengan menginokulasi satu ose  biakan  murni  dari  masing- masing bakteri uji pada media NA miring pada 10 ml media NB pada labu Erlenmeyer 150 ml dan dishaker ± 100 rpm selama 24 jam pada suhu ruang. Suspensi bakteri  kemudian  dilakukan pengukuran  nilai Optical Density (OD) menggunakan  spektrofotometer  pada panjang gelombang 600 nm.Selanjutnya pada suspensi dibuat pengenceran sehingga didapatkan OD dengan nilai 0.1.
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  lumut  dilakukan menggunakan metode sumuran. Sebanyak 1 ml kultur bakteri uji ditumbuhkan pada 15 ml media NA dengan metode pour plate , selanjutnya dibuat lubang sumuran dengan  cored  borer  ( ́ diameter  tiga  mm)  sebanyak sembilan  sumuran.  Sebanyak  enam  lubang  diisi dengan  perlakukan  ekstrak  lumut,  tiga  lubang  untuk aquades (kontrol negatif), antibiotik (kontrol positif) dan  etil  asetat  (kontrol  pelarut)  masing-masing
Setyati et al, Antibacterial Activity of Liverworts …
sebanyak  10 μl.Setiap  perlakuan  diulang  tiga  kali. Kultur diinkubasi pada suhu 37°C selama 1x24 jam di incubator.  Analisis  aktivitas  antibakteri  didasarkan pada pengukuran diameter daya hambat (DDH) yang terbentuk menggunakan jangka sorong.
Diameter  daya  hambat  yang  diperoleh dikategorikan menjadi empat bagian yaitu lemah jika diameter ˂ 5  mm,  sedang  jika  diameter  antara  5-10 mm, kuat jika diamater 11-19 mm,dan sangat kuat jika diameter ≥20 mm [7]. Data yang diperoleh selanjutnya dianalisis  menggunakan  program  aplikasi  SPSS menggunakan  metode  analisis  ragam  dua  arah  ( Two Way Anova ) pada taraf signifikasi (Sig.) 0,05 (α=5%).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
D. hirsuta merupakan salah satu spesies lumut hati dari  ordo  Marchantiales  yang  dapat  ditemukan  di Indonesia. Analisis fitokimia oleh Junairiah, dkk. [10] menunjukkan  bahwa  lumut D. hirsuta mengandung senyawa  metabolit  sekunder  berupa  flavonoid, alkaloid  dan  steroid.  Ketiga  jenis  senyawa  tersebut berpotensi  sebagai  antibakteri  dengan  mekanisme kerjanya pada senyawa flavonoid berupa penghambatan sintesis asam nukleat, fungsi membran sel dan, metabolisme sel; alkaloid dengan cara merusak dinding  sel [6]; dan steroid  berupa  peningkatan permeabilitas membran sel yang dapat mengakibatkan terjadinya kebocoran sitoplasma [3].
Berdasarkan Tabel 1, menunjukkan bahwa ekstrak etil  asetat D. hirsuta memiliki  kemampuan sebagai antibakteri.  Terdapat  perbedaan  aktivitas  antibakteri pada  konsentrasi  yang  berbeda. Semakin  tinggi konsentrasi  maka  semakin  besar  aktivitas  antibakteri yang ditunjukkan oleh DDH yang terbentuk. Aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat D. hirsuta terendah pada konsentrasi 25%, dan terbesar yaitu pada konsentrasi 100%. Ekstrak etil asetat D.hirsuta pada konsentrasi 25% tidak menunjukkan aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri E. coli , S. aureus , dan S. typhi , sedangkan pada konsentrasi  50%  tidak menunjukkan aktivitas antibakteri pada E.  coli . Pada  konsentrasi  25%  tidak terdapat aktivitas antibakteri, hal ini dapat disebabkan oleh rendahnya konsentrasi senyawa aktif antibakteri sehingga bakteri  dapat  bertahan  terhadap  senyawa ekstrak  yang  diujikan. Berdasarkan  DDH  yang terbentuk,  pada  konsentrasi 100%  menunjukkan aktivitas  antibakteri  terbesar  dengan  kategori
aktivitasantibakteri  yaitu  dari  lemah  sampai  sedang, baik pada ekstrak steril maupun nonsteril. Konsentrasi 100%  memiliki  aktivitas  antibakteri  terbesar. Hal  ini diduga  karena tingginya  konsentrasi  senyawa  aktif antibakteri  sehingga  sel-sel  bakteri  dapat  dihambat pertumbuhannya. Hasil yang diperoleh sesuai dengan penelitian Junairiah, dkk. [10] yang menyatakan bahwa besarnya aktivitas  antibakteri  pada  konsentrasi  yang tinggi  dapat  terjadi  karena  sel-sel  bakteri  yang terhambat pertumbuhannya semakin banyak.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pelarut  etil asetat  juga  memiliki  aktivitas  antibakteri  (Tabel  1). Kemampuan  daya  hambat  pelarut  sama  dengan aktivitas ekstrak etil asetat D. hirsuta konsentrasi 50% pada  ketiga  bakteri,  dan  konsentrasi  100%  pada bakteri E. coli . Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa aktivitas antibakteri esktrak etil asetat D. hirsuta diduga juga  dipengaruhi  oleh  keberadaan  sisa  pelarut  etil asetat.Etil  asetat  merupakan  hasil  esterifikasi  dari alkohol  (etanol)  dan  asam  asetat  [11]. Alkohol memiliki  aktivitas  antimikroba  spektrum  luas  yang dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri,  virus  dan fungi.Mekanisme  antibakteri  yang  mungkin  terjadi yaitu perusakan membran sel, denaturasi protein, dan gangguan metabolisme sel [12].
Daya  antibakteri  ekstrak  etil  asetat D.  hirsuta konsentrasi 50% pada bakeri S. typhi serta konsentrasi 100% pada bakteri S. aureus dan S. typhi lebih tinggi dibandingkan pelarut etil asetat. Hal ini menunjukkan bahwa  aktivitas  antibakteri,  selain  dipengaruhi  oleh pelarut,  juga  dipengaruhi  oleh  senyawa  metabolit sekunder yang terkandung dalam esktrak etil asetat D. hirsuta ,  misalnya senyawa flavonoid. Penelitian  oleh Junairiah,  dkk. [10] menunjukkan  bahwa  flavonoid, alkaloid  dan  steroid merupakan jenis senyawa metabolit  sekunder  yang  terdapat  dalam  lumut D. hirsuta . Flavonoid  merupakan  salah  satu  senyawa  yang berpotensi  sebagai  antibakteri.Senyawa  flavonoid menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  cara menghambat  sintesis  asam  nukleat,  fungsi  membran sel  dan  metabolisme  sel  bakteri [6]. Penghambatan sintesis asam nukleat terjadi melalui proses interkalasi atau  ikatan  hidrogen  oleh  cincin  B  flavonoid  yang menyebabkan terhambatnya sintesis DNA dan RNA pada bakteri. Penghambatan fungsi membran sel dapat terjadi akibat perubahan fluiditas membran di daerah hidrofilik dan hidrofobik. Penghambatan metabolisme sel  melalui  penghambatan  proses  respirasi  bakteri
Setyati et al, Antibacterial Activity of Liverworts …
sehingga mengganggu metabolisme  energi  yang diperlukan untuk berbagai aktivitas metabolisme dan untuk biosintesis makromolekul bakteri [2].
Alkaloid  menghambat  pertumbuhan  bakteri dengan  cara  merusak  dinding  sel  karena  mampu mengganggu  integritas  peptidoglikan [6]. Senyawa squalamine,  misalnya,  dapat  menembus  lapisan lipopolisakarida, menyebabkan depolarisasi membran sitoplasma  dan  menyebabkan  kebocoran  isi sitoplasma. Selain itu, alkaloid juga dapat menghambat sintesis asam nukleat dengan menghambat kerja enzim dihidrofolat reduktase dan enzim topoisomerase I [4].
Mekanisme aktivitas antibakteri oleh  steroid berupa peningkatan permeabilitas membran sel yang dapat mengakibatkan terjadinya kebocoran sitoplasma.  Peningkatan  permeabilitas  membran  sel disebabkan  oleh  interaksi  ionik  antara  gugus  amina bebas  pada  steroid  dengan  lipid  A  pada  bakteri [3]. Permeabilitas  membran  yang  meningkat  akan menfasilitasi  masuknya  senyawa  antibakteri  dan senyawa lain. Sel kemudian akan lisis karena dinding sel  tidak  mampu  menahan  tekanan  osmotik  dan mempertahankan struktur sel. Sel lalu mengkerut dan menyebabkan kematian sel [5].
Tabel 1 Diameter Daya Hambat (DDH) ekstrak etil asetat D.hirsuta (Sw.) Nees terhadap bakteri E. coli, S. aureus , dan S. typhi Perlakuan Bakteri DDH (Rata-rata±SD) (mm) Kategori Kekuatan Antibakteri S1 E. coli 0,00±0,00 a Tidak ada S. aureus 0,00±0,00 a Tidak ada S. typhi 0,00±0,00 a Tidak ada N1 E. coli 0,00±0,00 a Tidak ada S. aureus 0,00±0,00 a Tidak ada S. typhi 0,00±0,00 a Tidak ada S2 E. coli 0,00±0,00 a Tidak ada S. aureus 4,72±0,54 b* Lemah S. typhi 3,06±5,31 ab* Lemah N2 E. coli 0,00±0,00 a Tidak ada S. aureus 5,35±1,32 b* Sedang S. typhi 4,78±4,22 b* Lemah S3 E. coli 4,78±1,12 b* Lemah S. aureus 5,64±0,76 bc* Sedang S. typhi 8,27±1,71 c* Sedang N3 E. coli 4,41±0,31 b* Lemah S. aureus 5,30±0,45 bc* Sedang S. typhi 8,26±0,21 c* Sedang + E. coli 20,21±2,65 d Sangat Kuat S. aureus 27,79±3,30 e Sangat Kuat S. typhi 44,61±2,75 f Sangat Kuat - E. coli 0,00±0,00 a Tidak ada S. aureus 0,00±0,00 a Tidak ada S. typhi 0,00±0,00 a Tidak ada P E. coli 3,77±0,11 b Lemah S. aureus 3,89±0,29 b Lemah S. typhi 0,00±0,00 a Tidak ada
Keterangan:
(S1) : Ekstrak steril etil asetat D.hirsuta 25% (S2) : Ekstrak steril etil asetat D.hirsuta 50%
(S3) : Ekstrak steril etil asetat D.hirsuta 100% (N1) : Ekstrak nonsteril etil asetat D.hirsuta 25%
(N2) : Ekstrak nonsteril etil asetat D.hirsuta 50%
(N3) : Ekstrak nonsteril etil asetat D. hirsuta 100% (+) : Kontrol positif  (ampisilin 5% untuk bakteri E. coli dan S. aureus , serta ciprofloxacin 0,1% untuk bakteri S. typhi )
(-) : Kontrol negatif  (akuades)
(P) : Kontrol pelarut (etil asetat) Huruf superscript menunjukkan hasil pengamatan uji beda nyata, angka-angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom menunjukkan tidak beda nyata pada taraf  uji 95% (α = 0,05) Tanda *: menunjukkan nilai sig. (2-tailed) >0,05 melalui uji Independent T Test
Setyati et al, Antibacterial Activity of Liverworts …
(a) E. coli ; (b) S. aureus ; (c) S. typhi
(+) Kontrol positif; (−) Kontrol negatif; (P) Kontrol pelarut; (S1) Ekstrak steril etil asetat D. hirsuta 25%; (S2) Ekstrak steril etil asetat D. hirsuta 50%; (S3) Ekstrak steril etil asetat D. hirsuta 100%; (N1) Ekstrak nonsteril etil asetat D. hirsuta 25%; (N2) Ekstrak nonsteril etil asetat D. hirsuta 50%; (N3) Ekstrak nonsteril etil asetat D. hirsuta 100%
Gambar 1 Zona bening yang terbentuk pada media NA Perbandingan  ekstrak  etil  asetat D.hirsuta semua konsentrasi  terhadap  ketiga  bakteri  patogen  dengan kontrol  negatif  menunjukkan  adanya  aktivitas antibakteri  sehingga  berpotensi  sebagai  antibakteri. Kisaran  kategori  kekuatan  antibakteri  ekstrak  etil asetat D.hirsuta terhadap bakteri E. coli, S. aureus, dan S. typhi yaitu antara lemah sampai sedang, sedangkan antibiotik  yaitu  sangat  kuat.  Hal  ini  menunjukkan bahwa aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat D.hirsuta tidak sebaik antibiotik (Tabel 1, Gambar 1).
Antibakteri ekstrak etil asetat D. hirsuta yang steril dan non steril menunjukkan tidak terdapat perbedaan aktivitas  antibakteri  (Tabel  1).  Sterilisasi  ekstrak dilakukan  dengan  penyaringan  menggunakan millipore 0,2 µm sehingga pada ekstrak steril tidak ada kontaminasi mikroorganisme yang kemungkinan ada selama  proses  ekstraksi.  Hasil  yang  tidak  berbeda menunjukkan bahwa antara ekstrak steril dan nonsteril tidak terdapat mikroorganisme pada proses ekstraksi yang  dapat  mempengaruhi  aktivitas  antibakteri ekstrak.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etil  asetat D.  hirsuta memiliki  aktivitas antibakteri terhadap bakteri patogen. Kisaran kategori kekuatan  antibakteri  ekstrak  etil  asetat D.  hirsuta terhadap  bakteri E. coli , S. aureus ,  dan S. typhi yaitu antara  lemah  sampai  sedang, menunjukkan  bahwa lumut D.  hirsuta berpotensi  sebagai  antibakteri, sedangkan antibiotik yaitu sangat kuat menunjukkan bahwa  aktivitas  antibakteri  lumut D.  hirsuta tidak sebaik antibiotik.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Yogita, S. P., Hendrayana, M. A., dan Sukrama, I. D. M., “Pola Kepekaan Bakteri Salmonella typhi Terisolasi dari Darah terhadap Siprofloksasin  dan  Seftriakson  di RSUP Sanglah Periode Januari 2015 - Maret 2017,” E- Jurnal Medika , vol.7, pp. 1-6, December 2018..
[2] R. Hendra, S.  Ahmad, A. Sukari,  M. Y. Shukor and E.Oskoueian, “Flavonoid Analyses and Antimicrobial Activity  of   Various  Parts  of Phaleria  macrocarpa (Scheff.)  Boerl  Fruit,” International  Journal  Molecular Sciences , vol. 12, pp. 3422-3431, May 2011.
[3] Valvere, F., Cedillo D., Ramos, L., Cervera, G., Gomez P.,  dan  Cutz, T, “Antibacterial  Activity  Induced  by Several Steroid Derivatives Against E. coli, S. typhi, K. pneumonia and S.  aureus ,” Bio  Technology ,  vol.40,  pp. 5452-5455, November 2011.
[4] Cushnie, T.P.T., Cushnie, B., Lamb, A.J,“Alkaloids: An overview  of   Their  Antibacterial,  Antibiotic- Enhancing and Antivirulence Activities,” International Journal  of   Antimicrobial  Agents ,  vol.44,  pp. 377–386, November 2014.
[5]  Liwa,  A.  C.,  dan  Jaka,  H, “Antimicrobial  Resistance: Mechanisms  of Action  of  Antimicrobial  Agents,” Formatex ,May 2015, ed. A. Méndez-Vilas, pp. 876-885. https://www.researchgate.net/publication/27596683
9 [Diakses pada 20 Juli 2019]
[6] Rahman,  F.  A.,  Haniastuti,  T.,  dan Utami,  T.  W., “Skrining Fitokimia dan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol  Daun  Sirsak  ( Annina  muricata L.)  pada Streptococcus  mutans ATCC 35668,” Majalah  Kedokteran Gigi Indonesia , vol. 3, pp. 1-7, April 2017.
[7] Widyana, W., Khotimah, S., dan Lovadi, I., “Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Lumut Octoblepharum  albidum Hedw terhadap pertumbuhan S taphylococcus epidermidis dan Pseudomonas aeruginosa ,” Jurnal Protobiont, vol. 3, pp. 166-170, August 2014.
S1 S3 P + _ N1 N2 N3 S2 S1 S3 P + _ N1 N2 N3 S2 S1 S3 P + _ N1 N2 N3
Setyati et al, Antibacterial Activity of Liverworts …
[8]  Junairiah,  S.  Moeljopawiro, E.  Semiarti  dan Nimatuzahroh, “Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak Lumut Hati  Dumortiera  hirsuta,” Berkala Penelitian Hayati , vol. 16, pp. 75 – 81, December
2010.
[9] Fadhilla,  R.,  Iskandar, I.A.P.,  dan  Kusumaningrum, H.D., “Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Tumbuhan Lumut  Hati  ( Marchantia  paleacea )  terhadap  Bakteri Patogen  dan  Perusak  Pangan,” Jurnal  Teknologi  dan Industri Pangan , vol. 23, pp. 126-131, July 2012.
[10]Junairiah,  Sa’idiyah,  M.,  dan  Salamun,“Identifikasi Metabolit Sekunder dan Aktivitas AntimikrobaEkstrak Etil Asetat Dumortiera hirsuta ,” Sains &Matematika vol. 3, pp.45-49, April2015.
[11]  Bijay  N.  Pattanaik,  Hiren  C.  and  Mandalia, “Ethyl Acetate  :  Properties  Production  Processes  and Applications-A Review,” International Journal of  Current Research and Review, Vol. 03, pp. 23-40, December 2011.
[12] Talaro, Foundation  in  Microbiology Basic  Principle,  Fifth Edition, Mc Graw Hill Higher Education, USA, 2008.