## PENGARUH SUHU REFLUKS TERHADAP AKTIVITAS ANTIOKSIDAN PADA EKSTRAK DAUN SALAM (Syzygium polyanthum) DAN FORMULASINYA SEBAGAI SEDIAAN SERUM WAJAH

## Fitria Kusuma Dyas Pratiwi
fitriakusuma212@gmail , Universitas Nahdlatul Ulama Sunan Giri

## Abstract
Free radicals cause premature aging of the skin. This can be achieved through the use of antioxidants. Bay leaves (Syzygium polyanthum) contain antioxidants. Bay leaf extract can be obtained through reflux extraction. The reflux method  is  used  to  extract  bay  leaves  at  temperatures  of  58℃,  68℃,  and  78℃.  The  extract  was  tested  for antioxidant activity using the DPPH method. The best results were obtained from extraction at a temperature of 58℃ with an IC 50 value of 50.40 ppm, category: strong antioxidant. The extract was formulated into a facial serum and evaluated according to SNI  16-4399-1996, including organoleptic tests, homogeneity, pH, specific gravity, viscosity  and  antioxidant  activity.  Organoleptic  testing  showed  that  the  bay  leaf  extract  serum  formula  was brownish green, thick, had a distinctive bay leaf smell, and was homogeneous. pH between 6-7, specific gravity of all preparations 1.00. Viscosity 237-240 cPs. The best serum antioxidant activity in formulation 3 with the addition of 8% extract from the extraction at 58℃ was 55.43 ppm in the strong antioxidant category.
Keywords: Antioxidants activity, Bay leaf, Facial serum, Reflux temperature

## Abstrak
Radikal bebas menyebabkan penuaan dini pada kulit. Hal ini dapat diatas melalui penggunaan antioksidan. Daun salam  ( Syzygium  polyanthum )  mengandung  antioksidan.  Ekstrak  daun  salam  dapat  diperoleh  melalui  ekstraksi refluks. Metode refluks digunakan untuk mengekstraksi daun salam dengan suhu 58℃, 68℃, dan 78℃. Ekstrak diuji aktivitas antioksidannya dengan metode DPPH. Hasil terbaik diperoleh dari ekstraksi pada suhu 58℃ dengan nilai  IC 50 sebesar  50,40  ppm,  kategori:  antioksidan  kuat.  Ekstrak  diformulasikan  menjadi  serum  wajah  dan dievaluasi sesuai dengan SNI 16-4399-1996, termasuk uji organoleptik, homogenitas, pH, berat jenis, viskositas, dan  aktivitas  antioksidan.  Pengujian  organoleptik  menunjukkan  bahwa  formula  serum  ekstrak  daun  salam berwarna  hijau  kecoklatan,  kental,  berbau  khas  daun  salam,  dan  homogen.  pH  antara  6-7,  bobot  jenis  semua sediaan  1,00.  Viskositas  237-240  cPs.  Aktivitas  antioksidan  serum  terbaik  di  formulasi  3  dengan  penambahan ekstrak 8% dari hasil ekstraksi suhu 58℃ sebesar 55,43 ppm kategori antioksidan kuat.
Kata kunci : Aktivitas antioksidan, Daun salam, Serum wajah , Suhu refluks

## PENDAHULUAN
Radikal bebas merupakan salah satu penyebab penyakit degeneratif. Karena ekspansi industri maka terjadi ekspansi polusi, radikal bebas terus menerus terbentuk di dalam tubuh kita secara tidak sadar. Paparan sinar UV, asap rokok dapat meningkatkan risiko penyakit degeneratif (Suiraoka, 2013). Selain itu radikal bebas juga dapat menyebabkan permasalahan pada kulit yang dapat mempengaruhi kesehatannya seperti munculnya noda hitam, kulit kering ataupun penuaan dini pada kulit (Perez- Jimenez, 2018).
Penuaan kulit dapat diatasi dengan penggunaan serum.  Serum merupakan sediaan dengan viskositas  rendah,  yang  mengandung  zat  aktif  dalam  konsentrasi  tinggi,  dan  lebih  nyaman  saat digunakan  karena  tidak  berkesan  lengket  atau  berminyak.  Selain  itu,  gel  serum  juga  memiliki kandungan air yang tinggi sehingga dapat melarutkan senyawa yang bersifat hidrofilik sehingga dapat membantu terjadinya hidrasi kulit (Baki & Alexander, 2015).
Penuaan kulit dapat dicegah dengan menggunakan antioksidan untuk mencegah reaksi ini terjadi. (Irianti dkk, 2021). Sistem antioksidan merupakan mekanisme pertahanan tubuh dari radikal bebas (Kesuma, 2015).
Menurut  sumbernya,  antioksidan  eksogen  terbagi  dalam  dua  kategori:  alami  dan  sintetis. Antioksidan  sintetik  dapat  diperoleh  dari  hasil  sintesa  reaksi  kimia,  sedangkan  antioksidan  alami diperoleh  dari  bagian  tumbuhan  seperti  kayu,  kulit  batang,  akar,  daun,  buah,  bunga,  dan  biji. Antioksidan  alami  tidak  terkontaminasi  bahan  kimia  dan  dianggap  aman  bagi  tubuh.  Contoh
antioksidan alami antara lain vitamin A, C, E, antosianin, karotenoid, flavonoid, senyawa fenolik, dan asam folat (Agustina, 2017). Kandungan flavonoid daun salam digunakan sebagai antioksidan untuk mencegah penuaan dini sel (Made dkk., 2021).
Antioksidan alami yang terdapat pada daun salam dapat diperoleh melalui ekstraksi. Salah satu metode ekstraksi yang dapat digunakan adalah metode refluks. Pengaruh perlakuan panas pada refluks  dapat  meningkatkan  kemampuan  pelarut  untuk  mengekstraksi  suatu  senyawa,  sehingga memaksimalkan aktivitas ekstraktif senyawa atau mencapai hasil yang lebih tinggi. Selain itu, efek termal yang dihasilkan dari proses refluks dapat membantu proses difusi pelarut ke dalam dinding sel tanaman. Karena senyawa antioksidan dalam ekstrak dapat rusak pada suhu di atas 60°C (Hasanah, 2015).
Pengujian aktivitas antioksidan daun dapat dilakukan secara in vitro dengan menggunakan metode DPPH ( 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl ). Metode DPPH dapat memberikan data atau informasi tentang kereaktifan senyawa yang diuji dengan radikal stabil. DPPH menunjukkan absorbansi yang kuat pada 517 nm dan menunjukkan warna ungu tua (Lung & Destiani, 2018). as.

## METODE Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Maret  hingga  bulan  Mei  2023  di Laboratorium Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Nahdlatul Ulama Sunan Giri Bojonegoro.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah wadah, blender, neraca analitik, ayakan mesh no. 60, beaker glass, batang pengaduk, erlenmeyer, gelas ukur, kaca arloji, corong kaca, bola hisap, pipet volume, pipet tetes, labu ukur, tabung reaksi, refluks, rotary evaporator, spektrofotomer visibel. Bahan utama yang digunakan pada penelitian adalah daun salam. Bahan untuk ekstraksi yaitu etanol 96%. Bahan uji aktivitas antioksidan yaitu metanol p.a dan serbuk DPPH. Bahan untuk pembuatan sediaan serum adalah natrosol, gliserin, DMDM hydantoin, ethoxydiglycol dan aquadest.

## Prosedur Penelitian

## 1. Pembuatan Serbuk Simplisia
Dalam  pembuatan  simplisia  daun  salam,  langkah  pertama  yang  dilakukan  adalah mengumpulkan daun salam yang kondisinya segar, berwarna hijau tua dan tidak busuk. Daun salam  kemudian  dicuci  dengan  air  bersih  dan  mengalir  untuk  menghilangkan  kotoran  yang menempel dan ditiriskan. Setelah itu daun salam dirajang tipis-tipis lalu dikeringkan di bawah sinar matahari dengan ditutup kain hitam. Kemudian simplisia daun salam disortir lagi apakah terdapat kotoran atau tidak. Simplisia daun salam dihaluskan dengan menggunakan blender dan diayak dengan ayakan mesh no. 60 sehingga siap untuk diekstraksi.
2. Proses Ekstraksi dengan Metode Refluks
Tahap ini dilakukan dengan mengikuti prosedur yang dilakukan oleh (Maulida, 2018) dengan modifikasi  pada  bobot  serbuk  simplisia  dan  pelarut  yang  digunakan.  Serbuk  daun  salam diekstraksi menggunakan metode refluks dengan pelarut etanol 96%. Sebanyak 80 gram serbuk simplisia dimasukkan ke dalam labu alas bulat kemudian ditambahkan pelarut etanol sebanyak 400 mL atau dengan perbandingan simplisia dan pelarut 1:5. Kemudian sampel diisolasi dengan metode  refluks  selama  30  menit  pada  suhu  58°C,  68°C,  78°C.  Selanjutnya  sampel  disaring menggunakan  corong  dan  kertas  saring  untuk  memisahkan  antara  filtrat  dan  residunya. Kemudian filtrat dipekatkan menggunakan rotary evaporator.
3. Uji Antioksidan Ekstrak dengan Metode DPPH
Membuat larutan DPPH 40 ppm dalam methanol. Kemudian larutan induk dibuat dengan konsentrasi 100 ppm dan diencerkan menjadi konsentrasi 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, dan 80 ppm. Larutan uji dipipet sebanyak 2 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan 2 mL  larutan  DPPH  40 ppm  ke  masing-masing  kadar konsentrasi  larutan uji  dan didiamkan
selama kurang lebih 30 menit kemudian diukur nilai absorbansinya pada panjang gelombang 520 nm. Sebagai kontrol digunakan 2 mL larutan DPPH 40 ppm dengan ditambah 2 mL metanol p.a.
4. Pembuatan Sediaan Serum
Seluruh hasil ekstraksi simplisia daun salam diformulasikan menjadi sediaan serum wajah sesuai dengan formulasi pada tabel.

## Tabel 1 Formulasi Sediaan Serum
Siapkan  alat  dan  bahan  dan  timbang  masing-masing  bahan.  Natrosol  (gelling  agent) dikembangkan dalam aquadest pada suhu 50℃ dengan menggunakan magnetic stirrer hingga terbentuk suspensi  yang  rata.  Kemudian  ethoxydiglycol ditambahkan  aduk hingga  homogen. Tambahkan  gliserin  aduk  hingga  homogen.  Tambahkan  ekstrak  etanol  daun  salam  dengan konsentrasi 2%, 5% dan 8% ke dalam masing-masing formulasi basis yang sudah dibuat, gerus hingga homogen. Tambahkan DMDM hydantoin aduk hingga homogen. Kemudian tambahkan aquadest hingga 50 mL dan di aduk hingga homogen. Masukan ke dalam wadah botol serum. Selanjutnya  dilakukan  evaluasi  mutu  sediaan  serum  wajah  yang  meliputi  pemeriksaan organoleptik, homogenitas, pengukuran pH, bobot jenis, viskositas, daya sebar, dan uji aktivitas antioksidan.
5. Uji Aktivitas Antioksidan Serum
Setiap  formula  serum  ditimbang  10  mg  kemudian  dilarutkan  dengan  metanol  p.a  sampai tanda batas labu takar 100 ml sehingga diperoleh konsentrasi 100 ppm. Larutan kemudian dibuat seri pengenceran yakni 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, dan 80 ppm. Setiap larutan uji diambil 2 mL dan dimasukkan tabung reaksi kemudian ditambahkan dengan 2mL larutan DPPH 40 ppm yang sudah dibuat sebelumnya pada pengukuran aktivitas antioksidan ekstrak daun salam. Penentuan IC 50 dilakukan  dari  hasil  pengukuran  absorbansi  pada  5  seri  konsentrasi  dengan  gelombang maksimum 520 nm sehingga menghasilkan persen inhibisi. Hasil perhitungan persen inhibisi kemudian digunakan untuk mencari persamaan linear dan nilai IC 50 .

## 6. Analisis Data
Data utama pada penelitian ini adalah aktivitas antioksidan ekstrak daun salam yang diperoleh dari metode refluks dengan variasi suhu 58°C, 68°C dan 78°C serta aktivitas antioksidan sediaan serum yang dibuat dengan variasi konsentrasi ekstrak daun salam. Data utama tersebut dianalisis menggunakan IBM SPSS dengan metode Two Way ANOVA untuk memperlihatkan perbedaan yang signifikan (p<0,05) antara variasi suhu refluks terhadap aktivitas antioksidan ekstrak daun salam  dan  variasi  konsentrasi  ekstrak  pada  formulasi  terhadap  aktivitas  antioksidan  sediaan serum. Kemudian dilakukan uji T-Paired untuk membandingkan apakah terdapat perbedaan atau
Bahan Kontrol (-) F1 (%) F2 (%) F3 (%) Ekstrak daun salam 0 2 5 8 Natrosol 1 1 1 1 Gliserin 10 10 10 10 DMDM Hydantoin 0,3 0,3 0,3 0,3 Ethoxydiglycol 2 2 2 32 Aquadest Ad 50 Ad 50 Ad 50 Ad 50
kesamaan  dari  aktivitas  antioksidan  sebelum  dilakukan  formulasi  dan  setelah  dilakukan formulasi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Daun salam yang digunakan ada penelitian ini adalah daun salam yang didapat dari kebun milik  pribadi  di  daerah  Kecamatan  Dander,  Kabupaten  Bojonegoro.  Secara  umum  tata  cara pengolahan  simplisia  meliputi  pengumpulan  bahan  baku,  sortasi  basah/pencucian,  perajangan, pengeringan,  dan  sortasi  kering  (Rahmiani,  2019).  Setelah  serbuk  simplisia  daun  salam  siap, dilakukan proses ekstraksi. Ekstraksi dilakukan dengan metode refluks pada variasi suhu 58ºC, 68ºC, dan 78ºC. Setelah proses ekstraksi selesai, sampel disaring untuk memisahkan filtrat dan residu yang kemudian filtrate dipekatkan dengan alat rotary evaporator agar menjadi ekstrak kental.
Pada  ekstrak  daun  salam  perlu  dilakukan  uji  aktivitas  antioksidan  untuk  mengetahui kandungan  antioksidan  yang  dapat  berikatan  dengan  radikal  bebas.  Uji  antioksidan  dilakukan menggunakan  metode  DPPH  (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl).  Metode  DPPH  adalah  metode  uji kuantitatif  yang  berfungsi  untuk  menentukan  nilai  aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun  salam. Kelebihan  dari  metode  DPPH  yaitu  cepat,  metode  ini  sederhana  dan  murah  untuk  mengukur antioksidan (Shalaby & Shanab, 2013).
Tabel 2 Hasil Uji Antioksidan Sampel Ekstrak Suhu Ekstraksi Nilai IC 50 (ppm) Kategori Antioksidan 58℃ 50,40 Kuat 68℃ 140,28 Sedang 78℃ 319,48 Sangat lemah
Berdasarkan hasil pada Tabel 4.2 diketahui bahwa sampel dengan ekstraksi pada suhu 58℃ memiliki nilai IC 50 terbaik yaitu sebesar 50,40 ppm dengan kategori antioksidan kuat. Hasil ekstraksi pada suhu 68℃ memiliki nilai IC 50 sebesar 140,28 ppm dengan kategori antioksidan sedang. Hasil ekstraksi pada suhu 78℃ memiliki nilai IC 50 sebesar 319,48 ppm dengan kategori antioksidan sangat lemah.
Berdasarkan  hasil  tersebut  dapat  diketahui  bahwa  perbedaan  suhu  ekstraksi  berpengaruh terhadap  aktivitas  antioksidan.  Hal  ini  dikarenakan  komponen  bioaktif  seperti  flavonoid  sebagai sumber antioksidan tidak dapat bertahan pada suhu di atas 60°C, sehingga terjadi perubahan struktur dan berkurangnya daya antioksidan dari ekstrak. Jumlah total flavonoid dalam ekstrak dapat menurun dengan meningkatnya suhu ekstraksi. Hal ini dikarenakan flavonoid mudah rusak pada suhu tinggi (Sa’adah & Nurhasnawati, 2017).
Evaluasi fisik dilakukan uji sesuai dengan standart sediaan serum berupa uji organoleptik, uji homogenitas, uji pH, uji bobot jenis dan uji viskositas.
Uji organoleptik atau uji sensori adalah suatu metode pengujian yang menggunakan indra manusia  sebagai  alat  utama  untuk  mengukur  daya  penerimaan  terhadap  produk  (Purgiyanti  dkk., 2020). Hasil uji organoleptik sediaan serum dapat dilihat pada gambar dibawah ini.
Secara organoleptik dapat dilihat pada Gambar 1 basis serum yang dibuat tanpa penambahan ekstrak  memiliki  warna  putih  sedikit  bening,  sedangkan  pada  F1  hingga  F3  dengan  penambahan ekstrak memiliki warna hijau kecoklatan. Hal ini dikarenakan warna dari ekstrak yang digunakan juga berwarna hijau kecoklatan. Tekstur pada basis serum atau formulasi tanpa penambahan ekstrak yaitu kental dan pada formulasi dengan penambahan ekstrak juga memiliki tekstur yang kental. Penambahn ekstrak  tidak  mempengaruhi  tekstur  pada  masing-masing  formulasi  serum  yang  dihasilkan.  Pada basis serum memiliki memiliki bau khas basis seperti bau natrosol yang lemah. Sedangkan pada F1 hingga  F3  dengan  penambahan  ekstrak  memiliki  bau  khas  daun  salam.  Secara  organoleptik,  dari keseluruhan hasil formulasi serum baik dari F1 sampai F3 tidak ditemukan perbedaan yang signifikan pada warna, tekstur dan aroma.
Uji homogenitas bertujuan untuk mengetahui homogenitas dari formulasi yang telah dibuat. Formulasi yang homogen menghasilkan kualitas yang baik karena bahan aktif formulasi terdistribusi secara merata pada bahan dasar dan setiap bagian formulasi mengandung bahan aktif dalam jumlah yang sama. Formulasi tidak dapat mencapai efek terapeutik yang diinginkan jika bahan aktif tidak terdistribusi secara merata dalam bahan dasar. (Dominica & Handayani, 2019). Hasil uji homogenitas dapat dilihat pada tabel dibawah ini.
Tabel 3 Hasil Uji Homogenitas
Suhu  Formulasi  Homogenitas  Standart SNI Basis Homogen F1 Homogen 58℃ F2 Homogen F3 Homogen F1 Homogen 68℃ F2 Homogen Homogen F3 Homogen F1 Homogen 78℃ F2 Homogen F3 Homogen
Berdasarkan  hasil  pengamatan  yang  telah  dilakukan  basis  serum  atau  formulasi  tanpa penambahan ekstrak memiliki hasil yang homogen, setelah penambahan ekstrak pada F1 hingga F3 memiliki hasil yang homogen. Dari keseluruhan hasil formulasi tersebut dapat diketahui bahwa pada masing-masing  formulasi  sudah  homogen  dan  penambahan  ekstrak  tidak  mempengaruhi  dari homogenitas serum yang dihasilkan.
Uji pH dimaksudkan untuk menentukan pH formulasi yang dapat diterima oleh kulit yaitu pada rentang pH 4,5-6,5 (Khaira dkk., 2022). pH yang direkomendasikan untuk formulasi topikal sesuai dengan standart (SNI 16-4399-1996) adalah 4.5-8. Kondisi sediaan dengan tingkat keasaman

## Gambar 1 Hasil Formulasi
Sediaan Serum
yang berlebihan dapat menyebabkan kulit menjadi iritasi. Sebaliknya, jika sediaan terlalu basa, kulit menjadi  bersisik  (Putri  dkk.,  2020).  Hasil  pengujian  pH  sediaan  serum  dapat  dilihat  pada  tabel dibawah ini.

## Tabel 4 Hasil Uji pH Sediaan Serum
Penambahan ekstrak daun salam mengakibatkan perubahan pH menjadi lebih asam walaupun masih pada rentang standart sediaan serum, hal ini dikarenakan pada ekstrak daun salam mengandung senyawa asam kafeat dan asam gallat sehingga menyebabkan nilai pH cenderung menurun (Sulastri dkk.,  2020).  Berdasarkan  hasil  pengujian  tersebut  dapat  diketahui  bahwa  nilai  pH  pada  masing- masing  formulasi  dengan  penambahan  ekstrak  sudah  memenuhi  standart  sesuai  dengan  (SNI  16- 4399-1996) dan penelitian (Khaira dkk., 2022).
Pengujian bobot jenis formulasi bertujuan untuk mengetahui pengaruh bahan yang digunakan dalam formulasi terhadap stabilitas formulasi serum, sesuai dengan persyaratan (Rasyadi dkk., 2019). hasil pengukuran bobot jenis sediaan serum yang dibuat pada masing-masing formulasi adalah pada rentang 1,00. Basis serum memiliki bobot jenis sebesar 1,007. Pada formulasi dengan penambahan hasil ekstraksi suhu 58℃, F1 memiliki bobot jenis sebesar 1,008; F2 dan F3 memiliki bobot jenis sebesar 1,009. Perubahan bobot jenis ini dikarenakan ekstrak yang digunakan memiliki tekstur yang sangat  kental.  Pada  formulasi  dengan  penambahan  hasil  ekstraksi  suhu  68℃  dan  78℃  memiliki bobot  jenis  sebesar  1,008.  Penambahan  ekstrak  mengakibatkan  bobot  jenis  sediaan  menjadi bertambah meskipun tidak terlalu signifikan. Hal ini sudah sesuai dengan standart (SNI 16-4399-1996) dimana bobot jenis yang baik untuk sediaan topikal adalah pada rentang 0,95-1,05.
Pengujian viskositas sediaan dilakukan untuk mengetahui konsistensi sediaan yang nantinya akan berpengaruh terhadap beberapa aspek seperti pengaplikasian sediaan, dan mudah dikeluarkan dari kemasannya (Rasyadi dkk., 2019). Hasil pengukuran viskositas sediaan serum yang dibuat pada masing-masing  formulasi  diperoleh  visikositas  pada  rentang  237–240  cPs.  Hal  ini  sudah  sesuai dengan standart karena viskositas sediaan serum wajah berbasis gel yang baik berada pada rentang 230 – 1150 cPs (Ernawati dkk., 2021). Berdasarkan hasil tersebut dapat diketahui viskositas sediaan mengalami kenaikan seiring dengan penambahan jumlah ekstrak. Hal ini dikarenakan penambahan jumlah konsentrasi ekstrak mengakibatkan jumlah air dalam sediaan akan menurun sehingga sediaan menjadi lebih kental (Khaira dkk., 2022).
Viskositas berkaitan dengan daya serap dan daya sebar pada sediaan serum. Sediaan yang memiliki  viskositas  lebih  besar  maka  akan  semakin  sulit  untuk  dioleskan  pada  kulit,  sehingga memberikan  daya sebar yang  kecil. Semakin  besar  daya  sebar  suatu  sediaan  maka  akan  semakin mudah untuk obat berdifusi ke dalalam kulit. Hal tersebut dikarenakan, dengan semakin luasnya area penyebaran, maka akan menyediakan luas permukaan membran yang besar untuk obat berdifusi ke dalam kulit, sehingga jumlah zat yang terpenetrasi akan lebih banyak dan tercapai efikasi maksimum (Ali, 2015).
Suhu Formulasi pH Standart SNI Basis 7 F1 6 58℃ F2 6 4,5-8 F3 6 F1 6 68℃ F2 6 F3 6 F1 6 4,5-8 78℃ F2 6 F3 6
Pada hasil sediaan serum ekstrak daun salam yang telah dibuat perlu dilakukan uji aktivitas antioksidan untuk mengetahui kandungan antioksidan yang dapat berikatan dengan radikal bebas. Pengukuran  absorbansi  sampel  dilakukan  pngulangan  sebanyak  3  kali  untuk  mendapatkan  hasil absorbansi yang stabil.
Hasil sampel sediaan serum dengan penambahan ekstrak hasil ekstraksi pada suhu 58℃  pada formulasi 1, 2 dan 3 secara berturut-turut memiliki nilai IC 50 sebesar 94,27 ppm; 72,84 ppm; 55,43 ppm. Nilai IC 50 tersebut masuk ke dalam kategori antioksidan kuat. Hal ini dikarenakan formulasi tersebut ditambahkan ekstrak terbaik dengan kategori antioksidan yang kuat. Hasil sampel sediaan serum dengan penambahan ekstrak hasil ekstraksi pada suhu 68℃ pada formulasi 1, 2 dan 3 secara berturut-turut memiliki nilai IC 50 sebesar 367,30 ppm; 253,20 ppm; 145,51 ppm. Hasil sampel sediaan serum dengan penambahan ekstrak hasil ekstraksi pada suhu 788℃  pada formulasi 1, 2 dan 3 secara berturut-turut memiliki nilai IC50 sebesar 839,97 ppm; 617,09 ppm; 585,88 ppm. Seiring dengan penambahan jumlah ekstrak pada formulasi mengakibatkan penurunan nilai IC 50 , dimana semakin kecil nilai IC 50 maka semakin baik aktivitas antioksidannya.
Berdasarkan hasil tersebut dapat diketahui bahwa formulasi 3 dengan penambahan ekstrak hasil ekstraksi dengan suhu 58℃  memiliki nilai IC 50 terbaik yaitu sebesar 55,43 ppm dengan kategori antioksidan kuat. Hal ini dikarenakan jumlah ekstrak yang digunakan merupakan jumlah tertinggi dan berasal dari ekstrak yang aktivitas antioksidanya terbaik. Variasi formulasi dengan perbedaan jumlah ekstrak sebagai zat aktif sediaan serum berpengaruh terhadap aktivitas antioksidan. Semakin tinggi jumlah ekstrak yang digunakan, maka akan semakin tinggi pula aktivitas antioksidan sediaan tersebut (Ramadhani & Widiyanti, 2022).
Hasil analisis data untuk memperlihatkan perbedaan yang signifikan (p<0,05) antara variasi suhu refluks terhadap aktivitas antioksidan ekstrak daun salam dan variasi konsentrasi ekstrak pada formulasi terhadap aktivitas antioksidan sediaan serum menggunakan metode Two Way Anova pada software SPSS menunjukkan nilai signifikansi sebesar 0,038. Dasar pengambilan keputusan pada uji Two  Way  Anova  adalah  jika  sig.  <0,05  maka  terdapat  pengaruh  antara  nilai  IC50  berdasarkan variabel faktor berupa suhu ekstraksi dan variasi formulasi serum, sedangkan jika nilai sig. >0,05 maka tidak terdapat pengaruh antara nilai IC 50 berdasarkan variabel faktor berupa suhu ekstraksi dan variasi  formulasi  serum.  Maka  dapat  dikatakan  bahwa  hasil  analisis  data  yang  diperoleh  nilai signifikansi sebesar 0,038 yaitu terdapat pengaruh antara nilai IC 50 berdasarkan variabel faktor. Kemudian pada uji Paired T-Test yang  dilakukan untuk membandingkan apakah terdapat perbedaan atau tidak dari aktivitas antioksidan sebelum dilakukan formulasi dan setelah dilakukan formulasi. Dasar pengambilan keputusan pada uji Paired T-Test adalah jika nilai sig (2-tailed) <0,05 maka terdapat perbedaan yang berarti, jika nilai sig (2-tailed) >0,05 maka tidak terdapat perbedaan yang berarti. Berdasarkan hasil analisis yang telah dilakukan diperoleh hasil sig (2-tailed) sebesar 0,028. Hal ini menunjukan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antara aktivitas antioksidan sebelum dilakukan formulasi dan setelah dilakukan formulasi.

## PENUTUP
Suhu  refluks  berpengaruh  terhadap  aktivitas  antioksidan  ekstrak  dimana  suhu  ekstraksi terbaik pada metode refluks terhadap aktivitas antioksidan sebelum dan setelah dilakukan formulasi adalah pada suhu 58℃.
Hasil  aktivitas  antioksidan  sediaan  serum  terbaik  terdapat  pada  formulasi  3  dengan penambahan ekstrak hasil ekstraksi pada suhu 58℃ dengan nilai IC50 serum sebesar 55,43 ppm. Aktivitas  antioksidan  sebelum  dilakukan  formulasi  dan  setelah  dilakukan  formulasi  tidak  stabil, dibuktikan pada uji Paired T-Test menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antara aktivitas antioksidan sebelum dilakukan formulasi dan setelah dilakukan formulasi.
n

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina. (2017). Kajian Karakterisasi Tanaman Pepaya (Carica Papaya L.) Di Kota Madya Bandar  Lampung. Fakultas  Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas Lampung.
Baki, G., & Alexander, S. K. (2015). Introduction To Cosmetics Formulations . John Wiley & Sons, Inc.
Dominica,  D.,  &  Handayani,  D.  (2019). Formulasi  Dan  Evaluasi  Sediaan  Lotion  Dari Ekstrak Daun Lengkeng (Dimocarpus Longan) Sebagai Antioksidan. Jurnal Farmasi Dan Ilmu Kefarmasian Indonesia, 6(1), 1.
Hasanah, N. (2015). Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Salam . Jurnal Pena Medika, 5(1), 55–59.
Kesuma, D. (2015). Analisis Jenis Material Kemasan Keripik Gadung Produksi Kelompok Usaha Tani Rekso Bawono Prambanan-Sleman . Khaira, Z., Monica, E., & Yoesditira, C. D. (2022). Formulasi Dan Uji Mutu Fisik Sediaan Serum Mikroemulsi Ekstrak Biji Melinjo (Gnetum Gnemon L.). 3(1). Lung, J. K. S., & Destiani, D. P. (2018). Uji Aktivitas Antioksidan Vitamin A, C, E Dengan Metode DPPH. Farmaka , 15(1), 53–62.
Perez-Jimenez. (2018). The Effect Of Dietary Methionine And White Tea On Oxidative Status Of Gilthead Sea Bream (Sparus Aurata) . British Journal Of Nutrition, 1–8. Purgiyanti, Nurcahyo, H., Muldiyana, T., & Azizah, A. N. (2020). Uji Aktivitas Antioksidan Serum  Antiaging  Dari  Ekstrak  Pegagan  (Centella  Asiatica  L  Urban). Suparyanto  Dan Rosad (2015, 5(3), 248–253.
Rahmiani, D. (2019). Penetapan Parameter Non Spesifik Ekstrak Batang Parang Romang (Boehmeria Virgata (Forst) Guill. ) . In Αγαη (Vol. 8, Issue 5). Sa’adah,  H.,  &  Nurhasnawati,  H.  (2017). Perbandingan  Pelarut  Etanol  Dan  Air  Pada Pembuatan  Ekstrak  Umbi  Bawang  Tiwai  (Eleutherine  Americana  Merr)  Menggunakan Metode Maserasi . Jurnal Ilmiah Manuntung, 1(2), 149.