Vol. 10 (2): 97 - 108

## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL Acalypha hispida
TERHADAP BAKTERI Shigella flexneri DAN Bacillus cereus IHB B 379
(Antibacterial activity of Acalypha hispida  flower methanol extract against to  Shigella flexneri
and Bacillus cereus IHB B 379 bactery)
Elvi Rusmiyanto Pancaning Wardoyo 1*) , Devinda Ekarizky Diputri 1) , Rikhsan Kurniatuhadi 1)
1 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Tanjungpura, Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Pontianak, Indonesia
*e-mail korespondensi: elvi.rusmiyanto@fmipa.untan.ac.id

## Abstract
Acalypha hispida (ekor kucing) is one of the traditional medicinal plants that has been used by people for generations to treat diarrhea and cancer. The purpose of this study was to determine the  antibacterial  activity  and  effective  concentration  of A.  hispida flower  methanol  extract against Shigella flexneri and Bacillus cereus bacteria. The research sample used was A. hispida flowers obtained from Pontianak City. The solvent used is methanol. Antibacterial activity test uses the disk diffusion method (Kirby-Bauer) with 5 levels of methanol extract concentration of A. hispida flowers on S. flexneri bacteria, which is 1.2, 1.3, 1.4, 1.5 and 1.6 g / ml and B. cereus IHB B 379 for 0.75; 0.80; 0.85; 0.90; and 0.95 g / mL. The negative control used 10% DMSO solution and the positive control used ciprofloaxin as a comparison. The results showed that the concentration of methanol extract of A. hispida flowers which effectively inhibited the growth of S. flexneri and B. cereus bacteria was 1.2 g / mL and 0.75 g / mL. The methanol extract of A. hispida flower  contains  compounds  of  alkaloids,  flavonoids,  tannins,  phenols,  steroids  and terpenoids
Keywords: Acalypha hispida, antibacterial, Shigella flexneri, Bacillus cereus

## Abstrak
Acalypha hispida (ekor  kucing)  adalah  salah  satu  tanaman  obat  tradisional  yang  sudah dimanfaatkan  masyarakat  secara  turun  temurun  untuk  mengobati  diare  dan  kanker.  Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  dan  konsentrasi  efektif  ekstrak metanol  bunga  A.  hispida  terhadap  bakteri Shigella  flexneri dan Bacillus  cereus .  Sampel penelitian  yang  digunakan  adalah  bunga A.  hispida yang  diperoleh  dari  Kota  Pontianak. Pelarut yang digunakan adalah methanol. Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi cakram (Kirby-Bauer) dengan perlakuan 5 taraf konsentrasi ekstrak methanol bunga A. hispida pada  bakteri  S.  Flexneri,  yaitu  1,2;  1,3;  1,4;  1,5;  dan  1,6  g/ml  serta  pada  bakteri B.  cereus sebesar  0,75;  0,80;  0,85;  0,90;  dan  0,95  g/mL.  Kontrol  negatif  menggunakan  larutan  DMSO 10%  dan  control  positif  menggunakan  senyawa  ciprofloaxin  sebagai  pembanding.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  ekstrak  methanol  bunga A.  hispida yang menghambat secara efektif pertumbuhan bakteri S. flexneri dan B. cereus sebesar 1,2 g/mL dan 0,75  g/mL.  Ekstrak  methanol  bunga A.  hispida mengandung  senyawa  golongan  alkaloid, flavonoid, tannin, fenol, steroid dan terpenoid.
Kata kunci: Acalypha hispida , antibakteri, Shigella flexneri , Bacillus cereus

## PENDAHULUAN
Masyarakat  di  Indonesia  telah menggunakan  pengobatan  tradisional dengan  cara  memanfaatkan  beberapa jenis tumbuhan untuk mengatasi masalah kesehatan, seperti meningkatkan  daya  tahan  tubuh  dan menyembuhkan  penyakit  (Kasenda et al., 2016).  Salah  satu  organisme penyebab penyakit yang banyak diderita oleh  masyarakat  adalah  bakteri,  seperti Shigella flexneri dan Bacillus  cereus
yang menyebabkan muntah-muntah dan diare.
Sampai saat ini, masyarakat cenderung melakukan pengobatan secara medis dengan menggunakan obat antibiotik untuk
menyembuhkan penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri. Selain  harganya  yang  tinggi  dan  dapat menimbulkan  efek  samping  yang  tidak diinginkan,  penggunaan  obat  antibiotik yang  tidak  tepat  dan  secara  terus menerus  dapat  menyebabkan  bakteri menjadi  resistensi  bakteri.  Oleh  karena itu,  perlu  dilakukan  usaha  untuk mencari  alternatif  pengobatan  yang memiliki  efek  samping  yang  kecil harganya  terjangkau  masyarakat.  Salah satu  alternatif  yang  digunakan  adalah dengan memanfaatkan tumbuhan sebagai  bahan  pengobatan  tradisional sebagai alternatif pengganti obat antibiotik (Moningka et al ., 2015).
Salah  satu  jenis  tumbuhan  yang diketahui  memiliki khasiat  sebagai  obat dan  dapat  digunakan  untuk  mengobati penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri adalah tumbuhan A. hispida . Tumbuhan A. hispida termasuk famili
Euphorbiaceae  dan  dikenal  masyarakat sebagai tumbuhan ekor kucing. Tumbuhan A.  hispida merupakan tumbuhan  yang  sudah  dimanfaatkan masyarakat  sejak dulu  untuk mengobati penyakit antara lain bercak putih dikulit (vitiligo), batuk darah, sariawan, disentri,  dan  mimisan.  Tumbuhan A. hispida juga diketahui memiliki aktvitas sebagai  antioksidan  (Noumedem  et  al.,
2013),  antimikrobia  (Adesina et  al ., 2000),  diare  ( Manikanta et  el .,  2014), dan  bersifat  sitotoksik  (Bokshi et  al .,
2012).
Berdasarkan  penelitian  Moningka t et  al .  (2015),  daun A.  hispida dapat menghambat  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli pada konsentrasi sebesar 0,02 g/mL dan 0,04 g/mL.  Menurut Bokshi et  al .  (2012)
ekstrak etanol daun A. hispida menunjukkan aktivitas terhadap pertumbuhan  bakteri Salmonella  typhe , Enterococcus
coli , Streptococcus saprophyticus , Streptococcus  agalactin dan Shigella  disentri .  Tumbuhan A. hispida mengandung  beberapa  senyawa kimia  antara  lain  saponin,  tanin, flavonoid,  steroid  (Bokshi et  al .,  2012; Manikanta et  el .,  2014;  Rahayu et  al ., 2012)  dan  minyak  atsiri  (Aboaba  & Omotoso, 2012).
Penelitian  yang  telah  dilakukan
oleh Noumedem et al . (2013) menunjukkan  bahwa  ekstrak  methanol daun A. manniana mengandung alkaloid,  tanin,  antosianin,  flavonoid, fenol  dan  steroid.  Menurut Aboaba  & Omotoso  (2012),  minyak  esensial  daun A. hispida dan A. wilkesiana terdiri atas
neral (11,04%), citral (12,87%),
6,10,14, trimethyl-2-pentadecanone
(13,43%)  dan  n-hexadecanoic,  acid
(14,69%).  Senyawa yang  berpotensi memiliki  aktivitas  antimikroba telah diisolasi  dari ekstrak  etanol  daun A. wilkesiana dan A.  hispida adalah senyawa  asam  galat,  corilagin  dan geraniin,  quercetin  3-O-rutinoside  dan kaempferol  3-O-rutinoside  (Adesina et al ., 2000).
Kumoro (2015) menyatakan bahwa senyawa metabolit sekunder yang terkandung  pada  tumbuhan,  seperti saponin,  flavanoid,  tanin,  dan  minyak atsiri memiliki aktivitas biologi  tertentu sehingga berpotensi untuk dikembangkan  sebagai  obat  herbal. Berdasarkan  hal  tersebut  diatas,  maka
penelitan yang mengkaji aktivitas biologi  ekstrak  metanol A.  hispida terhadap  bakteri Shigella  flexneri dan
Bacillus  cereus perlu  untuk  dilakukan.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  dan menentukan  konsentrasi  efektif  ekstrak metanol  bunga A.  hispida terhadap bakteri S. flexneri dan B. cereus.

## METODE PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilakukan selama 4 bulan yang  dimulai  pada  bulan  September sampai  Desember  2019.  Preparasi ekstrak  bunga  sampel  dan  uji  fitokimia dilakukan  di  Laboratorium  Biologi.  Uji aktivtas antibakteri dilakukan di
Laboratorium  Mikrobiologi,  Jurusan Biologi  Fakultas  MIPA  Universitas Tanjungpura Pontianak, sedangkan vakum evaporasi ekstrak metanol
dilakukan  di  Laboratorium  Rekayasa, Politeknik Negeri Pontianak.
Alat dan Bahan Alat yang digunakan adalah petridsh  (Iwaki),  blender  (National), autoklaf  (Memmert),  vortex  (Biorad), laminar  air  flow  (Esco),  inkubator (Memmert),  jangka  sorong  dan vacum rotary  evaporator (Buchi).  Sedangkan bahan  yang  digunakan  adalah  alkohol 70%,  akuades,  antibiotik ciprofloxacin 500  mg,  Bunga A.  hispida ,  biakan bakteri S.  flexneri dan B.  cereus  IHB  B 379 , Dimethyl Sulfoxsida (DMSO) 10%, metanol  p.a  (Merck), Mueller  Hinton Agar (MHA), Nutrient  Agar (NA),
larutan Mc Farland 0,5.

## Prosedur Kerja
Pembuatan Simplisia
Sampel  bunga A.  hispida diambil dan  dikumpulkan  sebanyak  3  kg, dilanjtkan dengan dibersihkan
menggunakan  air  mengalir  kemudian dikeringkananginkan  (Kumoro,  2015). Sampel  yang  telah  kering  dibuat menjadi  serbuk  dengan  menggunakan blender.
Pembuatan Ekstrak Bunga A. hispida
Pembuatan ekstrak dilakukan dengan  menggunakan  metode  maserasi. Seberat 100 g simplisia direndam dalam larutan  methanol  1000  ml  (Wardoyo et al ., 2014). Perendaman dilakukan selama  3x24  jam  dan  dilakukan pengadukan  setiap  1x24  jam.  Setelah perendaman,  maserat  diambil  dengan cara  disaring,  kemudian  maserat  hasil penyaringan  dipekatkan  menggunakan vacum rotary evaporator pada kecepatan  70-110  rpm  dan  suhu  40-
45°C, sehingga diperoleh ekstrak kental. Ekstrak  kental  disimpan  dalam  wadah steril  kemudian  dibungkus  dengan aluminium foil.
Peremajaan Kultur Murni Bakteri
Peremajaan  dari  isolat  bakteri S. flexneri dan B.  cereus IHB  379 dilakukan  dengan  menginokulasikan sebanyak 1 ose pada media agar miring NA  ( Nutrient  Agar )  di  dalam  tabung reaksi dengan cara menggoreskan secara  aseptik  pada  permukaan  agar. Selanjutnya  diinkubasi  selama  24  jam pada suhu 37 °C (Heryati et al ., 2016) Pembuatan Larutan Konsentrasi
Perlakuan konsentrasi ekstrak methanol bunga A. hispida dibuat dalam 5 taraf konsentrasi sebesar 1,2; 1,3; 1,4; 1,5, dan 1,6 g/mL  untuk S. flexneri dan konsentrasi  sebesar  0,75;  0,80;  0,85; 0,90;  dan  0,  95,  g.mL  untuk B.  cereus .
Setelah  ditambahkan  DMSO    10% sebanyak 1 ml larutan digojog menggunakan  vortex  sampai  larut. Kontrol  positif  menggunakan  antibiotik ciprofloxacin , sedangkan kontrol negatif menggunakan larutan DMSO 10%.
Persiapan Inokulum Bakteri S. flexneri dan B. cereus
Isolat  kultur  bakteri S.  flexneri dan B.  cereus IHB  B  397  yang  telah  dibuat diambil menggunakan jarum ose kemudian  dimasukkan  ke  dalam  9  mL akuades steril sampai kekeruhan inokulum  sama  dengan  kekeruhan
larutan standar Mc Farland 0,5 (Sutton, 2011).
Uji Aktivitas Antibakteri Pengujian aktivitas ekstak methanol  bunga A.  hispida dilakukan
dengan  cara  difusi  cakram  ( Kirby- Bauer ) dengan mengunakan teknik apus (Heryati et al., 2016). Media agar MHA ( Mueller  Hinton  Agar) yang  telah dibuat  dituang  sebanyak  20  mL  ke dalam  masing-masing  cawan  petri  dan dibiarkan  media  hingga  memadat. Setelah media memadat diambil suspensi  bakteri  kemudian  diapus  di atas permukaan agar. Kertas cakram yang telah disterilkan  direndam  ke  dalam  ekstrak methanol  bunga A.  hispida pada masing-masing botol vial sesuai konsentrasi  perlakuan  selama  ±  30 menit  (Dewi,  2010).  Kertas  cakram diangkat  dari  botol  vial  menggunakan pinset  kemudian  diletakkan  di  atas media  agar.  Masing-masing  media  agar diletakkan 4 ulangan ekstrak metanol A. hispida untuk setiap konsentrasi perlakuan.  Cara  yang  sama  juga dilakukan  terhadap  kontrol  positif  dan kontrol  negatif.  Kemudian  masing- masing  cawan  petri  diinkubasi  pada waktu  24  jam  dan  48  jam  dalam  suhu 37°C (Moningka et al ., 2015).
Uji Fitokimia 1. Uji Alkaloid Sebanyak 1 mL ekstrak ditambahkan beberapa tetes asam klorid (HCl)  1%.  Kemudian  ditambahkan enam  tetes  reagen  Wagner.  Adanya alkaloid  ditandai  dengan  terbentuknya endapan  berwarna  coklat  (kemerahan) (Harborne, 2006).
2. Uji Flavanoid Sebanyak 1 mL ekstrak ditambahkan  dengan  beberapa  tetes larutan  NaOH.  Terbentuknya  warna
Vol. 10 (2): 97 - 108
kuning  menujukkan  adanya  kandungan flavanoid (Roopashree et al., 2008).
3. Uji Saponin Sebanyak 1 mL ekstrak
ditambahkan  1  mL  etanol.  Selanjutnya ditambahkan  beberapa  tetes  akuades dan  di  kocok  kuat  selama  beberapa menit.  Adanya  kandungan  saponin ditandai dengan terbentuknya busa yang stabil  setinggi  ±  1cm  selama  kurang lebih  20  menit  (Roopashree et  al.,
2008).
4. Uji Tanin
Sebanyak 1 mL ekstrak ditambahkan  ke  dalam  2  mL  akuades.
Kemudian  di  tambahkan  dua  atau  tiga tetes  larutas  FeCl 3 1%.  Terbentuknya warna  biru-kehitaman  maka  ekstrak tersebut  mengandung  senyawa  tanin (Harborne, 2006).
5. Uji Fenol
Sebanyak  1  mL  ekstrak  dua  tetes larutan FeCl 3 . Pembentukan warna hijau atau  hijau  biru  menujukkan  adanya kandungan fenol (Harborne, 2006). 6. Uji Steroid
Ekstra ditambahkan dengah beberapa  tetes  asam  asetat,  kemudian didihkan  dan  didinginkan.  Setelah  itu, ditambahkan asam sulfat pekat. Terbentuknya  warna  merah  kecoklatan menunjukkan  adanya  steroid  (Abbas et al., 2012).
7. Uji Terpenoid
Sebanyak  1  mL  ekstrak  tumbuhan ditambahkan beberapa tetes asam  sulfat hingga  terbentuk  lapisan.  Terbentuknya warna  coklat  kemerahan  pada  batas antar  lapisan,  maka  ekstrak  tersebut mengandung  terpenoid  (Abbas et  al.,

## 2012).

## Analisis dan Penyajian Data
Analisis  data  dilakukan  dengan menggunakan  aplikasi  SPSS  versi  18. Data  diameter  zona  hambat  pada  setiap perlakuan dianalisis dengan menggunakan  analisi  variansi  (Anova) dan  jika  menunjukkan  beda  nyata  akan dilanjutkan dengan uji Duncan Multiple Range Test (DMRT) (Sugiyono, 2018).
HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Hasil uji DMRT perlakuan konsentrasi ekstrak methanol A. hispida terhadap pertumbuhan S. flexneri menunjukan  tidak  berbeda  nyata  antar perlakuan  untuk  masa  inkubasi  24  jam (F 6.21 =298,302, p=0,000), namun menunjukkan  hasil  yang  berbeda  nyata antar  perlakuan  pada  masa  inkubasi  48
jam  (F 6 . 21 =  611,060,  p=  0,000)  (Tabel.
1)
Berdasarkan  Tabel  2,  hasil  uji DMRT  perlakuan  konsentrasi  ekstrak methanol A. hispida terhadap pertumbuhan B.  cereus menunjukkan tidak  berbeda  nyata  antar  perlakuan untuk  masa  inkubasi  24  jam  (F 6.21 = 1050, 558, p= 0,000), namun menunjukkan  hasil  yang  berbeda  nyata antar  perlakuan  pada  masa  inkubasi  48 jam (F 6 . 21 = 1093,927, p= 0,000).
Hasil  uji  fitokimia  menunjukkan bahwa  ekstrak  methanol  bunga A. hispida mengandung senyawa metabolit sekunder  golongan  alkaloid,  flavonoid, tanin,  fenol,  steroid  dan  terpenoid (Tabel. 3 ).
Tabel  1.  Rerata  diameter  zona  hambat  S.  flexneri  dengan pemberian  konsentrasi ekstrak metanol bunga A. hispida yang berbeda
Konsentrasi (g/mL) Rerata Diameter (mm) Kategori Inkubasi 24 jam Inkubasi 48 jam DMSO 10% (K-) 0,00 ±0,00 a 0,00±0,00 a - 1,2 16,26±2,06 b 16,29±1,04 b Kuat 1,3 16,81±1,04 b 16,85±0,74 bc Kuat 1,4 16,92±0,74 b 16,95±0,84 bcd Kuat 1,5 17,64±0,84 b 17,67±0,68 cd Kuat 1,6 17,83±0,68 b 18,08±0,49 d Kuat Ciprofloxacin (K+) 29,84±2,06 c 31,66±0,88 e Sangat Kuat
Keterangan  tabel:  angka  pada  kolom  yang  sama  dan  diikuti  oleh  huruf  yang  sama  menunjukkan  hasil  yang  tidak berbeda nyata pada taraf 95% menurut uji Duncan.
(K-) = kontrol negatif, K(+) = kontrol positif, (-) tidak terdeteksi
Tabel  2.  Rerata  diameter  zona  hambat  B.  cereus  dengan  pemberian  konsentrasi ekstrak metanol bunga A. hispida yang berbeda
Konsentrasi (g/mL) Rerata Diameter (mm) Kategori Inkubasi 24 jam Inkubasi 48 jam DMSO 10% (K-) 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a - 0,75 18,20±0,28 b 18,92±0,5 b Kuat 0,80 18,60±0,49 b 19,15±0,88 b Kuat 0,85 18,79±0,54 b 19,31±0,59 bc Kuat 0,90 18,88±0,75 b 19,61±0,19 bc Kuat 0,95 18,89±0,78 b 20,08±0,57 c Sangat Kuat Ciprofloxacin (K+) 29,84±0,58 c 30,56±0,56 d Sangat Kuat
Keterangan  tabel:  angka  pada  kolom  yang  sama  dan  diikuti  oleh  huruf  yang  sama  menunjukkan  hasil  yang  tidak berbeda nyata pada taraf 95% menurut uji Duncan.
(K-) = kontrol negatif, K(+) = kontrol positif, (-) tidak terdeteksi
Gambar 1. Zona hambat yang terbentuk pada S. flexneri setelah pemberian ekstrak methanol bunga A. hispida setelah inkubasi 48 jam.
Keterangan:  Kontrol  negatif (A) ,  Konsentrasi  1,2  g/mL (B) , Konsentrasi 1,3 g/mL (C) , Konsentrasi 1,4 g/mL (D) , Konsentrasi 1,5
g/mL (E) , Konsentrasi 1,6 g/mL (F), Kontrol positif (G)
Vol. 10 (2): 97 - 108
Gambar  2.  Zona  hambat  yang  terbentuk  pada B.  cereus setelah  pemberian  ekstrak methanol  bunga A.  hispida setelah  nkubasi  48  jam.  Kontrol  negatif (A) , Konsentrasi 0,75 g/mL (B) , Konsentrasi 0,80 g/mL (C) , Konsentrasi 0,85 g/mL (D) ,  Konsentrasi  0,90  g/mL (E) ,  Konsentrasi  0,95  g/mL (F), Kontrol positif (G)
Tabel. 3 Hasil uji fitokimia ekstrak metanol bunga A. hispida No. Metabolit sekunder Pereaksi Hasil 1 Alkaloid Wagner + 2 Flavonoid NaOH + 3 Saponin Etanol & akuades - 4 Tanin FeCl 3 + 5 Fenol Etanol + 6 Steroid Asam asetat & Asam sulfat + 7 Terpenoid Asam sulfat +
Keterangan tabel: (+) = kadar rendah, (++) = kadar sedang, (+++) = kadar tinggi, (-) tidak terdeteksi

## Pembahasan
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan selama  24  dan  48  jam  dilakukan  untuk mengetahui sifat bakteriostatik dan baktriosida  ekstrak  methanol  bunga A. hispida terhadap  pertumbuhan  bakteri S. flexneri dan B. cereus . Berdasarkan tabel 1 dapat  dilihat  bahwa  perbedaan  waktu inkubasi  24  dan  48  jam  terhadap peningkatan diameter zona hambat pertumbuhan  bakteri S.  flexneri secara nyata  terjadi  pada  konsentrasi  1,6  g/mL dan  kontrol  positif.  Demikian  juga  untuk
Tabel  2,  menunjukkan  bahwa  perbedaan waktu  inkubasi  24  dan  48  jam  terhadap peningkatan  zona  hambat  pertumbuhan bakteri B. cereus secara nyata terjadi pada konsentrasi 0,95 g/mL dan kontrol positif. Pengujian  aktivitas  antibakteri  selama inkubasi  24  jam  disebabkan  pada  saat  24 jam  bakteri  masih  berada  pada  fase  log. Penghambatan  pertumbuhan  bakteri  yang diujikan  pada  fase  log  menunjukkan sensitivitas yang lebih optimal dibandingkan  fase  lag  dan  fase  stasioner.
Kondisi  ini  dikarenakan saat  fase log  laju
metabolisme  pada  bakteri  sangat  tinggi dan  berlangsung  dalam  kondisi  tidak stabil.  Pada  saat  seperti  ini,  bakteri  akan lebih  peka  terhadap  senyawa  kimia  dan antibiotik.
Pengamatan aktivitas antibakteri selama  masa  inkubasi  48  jam  mengalami penambahan  zona  hambat.  Penambahan zona hambat menunjukkan bahwa ekstrak metanol  bunga A.  hispida bersifat bakteriosida. Senyawa yang memiliki sifat bakteriosida  berkerja  membunuh  bakteri (Aini et al., 2017). Kontrol positif dengan ciprofloaxin  pada  inkubasi  48  jam mengalami penambahan zona hambat. Hal ini  menyatakan  bahwa  ciprofloxacin sebagai kontrol positif bersifat bakteriosida terhadap bakteri S. flexneri dan B. cereus .
Berdasarkan hasil uji DMRT
diketahui bahwa konsentrasi 1,6 g/mL dari ekstrak  methanol  bunga A.  hispida me miliki  zona  hambat  terbesar  1,2  g/mL pada  bakteri S.  flexneri (Tabel.  1)  dan konsentrasi  0,90  g/mL  pada  bakteri B. cereus dengan  respon  hambatan  sangat kuat  (Tabel.  2).  Perlakuan  pada  ekstrak metanol  bunga A.  hispida menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak, maka semakin besar diameter daya hambat yang terbentuk. Menurut Syaifuddin et al . (2018), perbedaan besar zona daya hambat suatu  bakteri  ditentukan  dari  kadar konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan. Perbedaan  kadar  kandungan  senyawa antimikroba  dalam  suatu  konsentarasi ekstrak  mempengaruhi  zona  hambat  yang terbentuk. Semakin besar konsentrasi yang digunakan,  semakin  besar  pula  kadar antimikroba  di  dalamnya,  maka  semakin besar  zona  hambat  yang  dihasilkan
(Cowan, 1999).
Kontrol positif bakteri S. flexneri dan B.  Cereus menunjukkan  hasil  berbeda nyata pada semua ekstrak yang digunakan (Tabel  1  dan  Tabel  2).  Kontrol  positif merupakan uji pembanding yang menghasilkan  zona  hambat  terbesar.    Hal ini  dikarenakan  ciprofloxacin  memiliki bersifat  bakteriosidal  dengan  spektrum luas terhadap bakteri gram-positif maupun negatif.  Mekanisme  kerja  ciprofloxacin adalah menghambat aktivitas DNA-gyrase bakteri  dan  perubahan  permeabilitas membran (Irene & Hatta, 2009).
Pembentukan  zona  hambat  pada ekstrak  methanol  bunga A.  hispida juga dipengaruhi oleh bakteri uji yang digunakan.  Perbedaan  ini  disebabkan  dari susunan  dinding  sel  bakteri  gram  negatif dan  positif  yang  tidak  sama.  Bakteri S. flexneri merupakan  bakteri  gram  negatif yang memiliki sistem seleksi terhadap zat- zat asing yaitu pada lapisan lipopolisakarida.  Struktur  dinding  sel bakteri gram negatif relatif lebih kompleks,  berlapis  tiga  yaitu  lapisan  luar yang  berupa  lipoprotein,  lapisan  tengah yang  berupa  lipopolisakarida,  lapisan dalam  berupa  peptidoglikan,  dan  terdapat porin yang terbentuk dari protein  (Allison &  Gilbert,  2004). Struktur  yang  lebih kompleks  mengakibatkan  dinding  sel bakteri  gram  negatif  lebih  sulit  untuk dilalui senyawa antimikroba.
Bakteri B.  cereus IHB  B  379 merupakan  bakteri  gram  positif      yang memiliki  susunan  dinding  sel  lebih sederhana. Dinding sel bakteri gram positif banyak  mengandung  teikoat  dan  asam teikoronat  serta  molekul  polisakarida,
sehingga memudahkan senyawa antimikroba untuk masuk ke dalam sel dan menemukan sasaran untuk bekerja
(Allison  &  Gilbert,  2004). Penghambatan terhadap  pertumbuhan  koloni  mikroba diduga disebabkan karena kerusakan yang terjadi pada komponen struktural membran sel mikroba. Membran sel yang tersusun  atas  protein  dan  lipid  sangat rentan terhadap zat kimia yang menurunkan tegangan
permukaan.
Kerusakan  membran  sel  menyebabkan terganggunya  transport  nutrisi  melalui membran  sel  sehingga  sel  mikroba mengalami  kekurangan  nutrisi  yang diperlukan  bagi  pertumbuhannya (Allison
& Gilbert, 2004).
Berdasarkan hasil uji fitokimia ekstrak  methanol  bunga A.  hispida menunjukkan  bahwa  metabolit  yang terkandung  adalah  alkaloid,  flavanoid, tanin,  fenol,  steroid,  dan  terpenoid. Menurut  Manikanta et  al .  (2014), tumbuhan A.  hispida memiliki  senyawa yang memiliki aktivitas sebagai
antibakteri,  antara  lain  alkaloid  dan flavonoid.  Penelitian  yang  dilakukan  oleh Moningka et  al .  (2015)  menyatakan bahwa  senyawa  kimia  seperti  tanin, saponin, minyak atsiri, flavonoid, acalyphin  dapat  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia coli dengan  konsentrasi  hambat  minimum sebesar  0,02  g/mL  dan  0,04  g/mL  yang termasuk kategori respon hambatan kuat.
Senyawa  alkaloid  memiliki  gugus basa  yang  mengandung  nitrogen  akan bereaksi  dengan  senyawa  asam  amino yang  menyusun  dinding  sel  bakteri  dan DNA  bakteri.  Flavonoid  bersifat  polar
sehingga  lebih  mudah  menembus  lapisan peptidoglikan  yang  juga  bersifat  polar pada bakteri gram positif, sehingga fungsi normalnya  menonaktifkan  enzim  dan merusak  dinding  sel  serta  membran  sel bakteri. Tanin merupakan senyawa organik  komplek  yang  berperan  sebagai antimikrobial.  Adanya  tanin  sebagai antibakteri  akan  mengganggu  sintesa peptidoglikan sehingga pembentukan dinding sel menjadi kurang sempurna. Penghambatan pertumbuhan sel mikroba  oleh  senyawa  fenol  disebabkan kemampuan  fenol  untuk  mendenaturasi protein dan merusak membran sel dengan cara melarutkan lemak yang terdapat pada dinding sel. Senyawa golongan steroid dan terpenoid  dapat  bereaksi  dengan  porin (protein  transmembran)  pada  membran luar dinding sel bakteri, membentuk ikatan polimer yang kuat dan merusak porin serta mengurangi  permeabilitas  dinding  sel bakteri,  yang  berakibat  sel  bakteri kekurangan  nutrisi  dan  pertumbuhan bakteri  terhambat  atau  mati  (Aini et  al., 2015).

## KESIMPULAN
Semakin  besar  konsentrasi  ekstrak methanol bunga A. hispida yang diberikan, semakin  besar  zona  hambat  pertumbuhan bakteri S.  flexneri dan B.  cereus IHB  B 379.  Konsentrasi  efektif  ekstrak  metanol bunga A.  hispida dalam  menghambat pertumbuhan bakteri S. flexneri sebesar 1,2
g/mL  dengan  kategori  respon  hambatan kuat  dan  bakteri B.  cereus IHB  B  379 sebesar 0,75 g/mL dengan kategori respon hambatan sangat kuat.

## DAFTAR PUSTAKA
Aboaba,  S.,  &  Omotoso,  O.  (2012). Chemical  constituents,  toxicity  and
Vol. 10 (2): 97 - 108
larvicidal activity of the essential oil from the leaves of Acalypha hispida and Acalypha  wilkesiana in  south- west Nigeria. Elixir Applied Chemistry , 52, 11263- 11265. https://www.elixir publishers.com/articles/1398854304
_70%20(2014)%2023793-23798 .
Abbas,  M.N.,  Rana,  S.A.,  Shadid  M, Hassan, M.M. & Husain, M. (2012). Chemical  Evaluation  Of  Weed Seeds  Moxed  With  Wheat  Grains At  Harvest.  The  Journal  of  Animal and Plant Sciences, 22 (2), 283–288. http://www.thejaps.org.  pk/docs/v- 22-2/08.pdf
Adesina,  S.K.,  Idowu,  O.,  Ogundaini, A.O.,  Oladimeji,  H.,  Olugbade, T.A.,  Onawunmi, G.O.,  & Pais,  M. (2000).  Antimicrobial  Constituents of the Leaves of Acalypha
wilkesiana and Acalypha  hispida.
Phytotherapy Research, 14 (8), 371– 374. http://doi.org/10.1002/  1099- 1573(200008)14:5<371::aid-
ptr625>3.0.co;2-f
Aini, N.H., Saleh, C., & Erwin. (2015). Uji Toksisitas dan Aktivitas Antibakteri
Ekstrak  Daun  Merah  Tanaman Pucuk Merah ( Syzygium myrtifolium Walp.) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli . Jurnal  Kimia Mulawarman , 13 (1), 35 – 40.
http://jurnal.kimia.fmipa.unmul.ac.id
/index.php/JKM/article/view/43
Aini,  N.P.,  Kalor,  H.,  &  Atun,  S.  (2017).
The antibacterial activity of Curcuma xanthorrhiza extract against Escherichia  coli ATCC 11229  and Staphylococcus  aureus
ATCC  25923. Jurnal  Penelitian
Saintek , 22 (2), 140 – 147. https://doi.org/10.21831/jps.v22i2.1
7122 . Allison,  D.,  &  Gilbert,  P.  (2004). Pharmaceutical  Microbiology  (7th ed). Blackwell Science Massachusets. Bokshi, B., Sayeed, M.A.S., Ahmed, M.I., Karmakar,  U.K.,  &  Sadhu,  S.K.
(2012). Assessment of antimicrobial and  cytotoxic  activities  of  ethanolic extract  of  leaves  of Acalypha hispida . International  Journal  of Pharmaceutical Sciences and Research , 3(6), 1705 – 1708. http://dx.doi.org/10.13040/IJPSR.09 75-8232.3(6).1705-08 . Cowan,  M.M.  (1999).  Plant  Products  as Antimicrobial Agents. Clinical Microbiology Reviews . 12 (4), 564– 582. https://doi.org/10.1128/ CMR.12.4.564
Harborne,  J.B.  (2006)  Metode  fitokimia penuntun cara modern menganalisis tumbuhan. Penerbit ITB, Bandung
Heriyati,  Khotimah,  S.,  Wardoyo,  E.R.P.
(2016).  Aktivitas  antibakteri  fraksi diklorometan  dan  N-heksana  paku sisik naga ( Drymoglossum piloselloides (L)  Presl.)  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dan Salmonella  typhi.  Protobiont ,  5  (3),
82 – 88. http://jurnal.untan.ac.id/
index.php/jprb/article/view/17094/1 4601
Dalimartha,  S.  (2007). Atlas  Tumbuhan Obat  Indonesia  Jilid  3. Puspa Swara, Jakarta.
Irene,  E.R.,  &  Hatta,  M.  (2009)  Deteksi mutasi gen gyrase a porphyromonas
gingivalis resisten terhadap ciprofloxacin berdasarkan  teknik polymerase  chain  reaction, Jurnal Kedokteran  Yarsi, 17  (1),  11 – 20. http://academicjournal. yarsi. ac.id/index.php/jurnal-fk-
yarsi/article/view/192/128
Kasenda, J.C., YamLean, P.V.Y., & Lolo,
W.A. (2016). Formulasi dan pengujian aktivitas antibakteri sabun
cair ekstrak etanol daun ekor kucing ( Acalypha hispida Burm.F) terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus . Jurnal Ilmiah  Farmasi,  5  (3),  40 – 47.
https://ejournal.unsrat.ac.id/index. php/pharmacon/article/view/12936/
12523 .
Kumoro, A.C. (2015) Teknologi Ekstraksi Senyawa Bahan Aktif dari Tanaman Obat . Plantaxia, Yogyakarta.
Manikanta,  B.,  Varma,  P.R.,  Krishna,
P.V.,  Kumar,  A.R.,    &  Rathina,
K.M.S.  (2014).  Phytochemical  and anti diarrhoeal activity of combined extracts of Acalypha hispida,Acalypha nervosa and Acalypha  fruiticosa .  Journal  of Chemical and Pharmaceutical Sciences, 7 (3), 194 – 196. https://www.jchps.com/issues/Volu me%207_Issue%203/jchps%207(3) %204%20bhargav2%20197- 199.pdf
Moningka, K.S., Kojong, N.S., & Sudewi, S.  (2015)  Uji  aktivitas  antibakteri ekstrak daun ekor kucing ( Acalypha
hispida Burm.  F.)  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli secara in-vitro .
Jurnal  Ilmiah  Farmasi ,  4  (3),  193 –
202. https://ejournal.
unsrat.ac.id/index.php/pharmacon/ar ticle/view/8859/8417
Noumedem, J.A.K., Tamokou, J.D., Teke, G.N.,  Momo, R.C.D.,  Kuete, V.,  & Kuiate,  J.R.  (2013).  Phytochemical analysis,  antimicrobial  and  radical- scavenging  properties  of  Acalypha manniana  leaves. SpringerPlus ,  2 (503),  1 – 6. https://doi.org/10.1186/ 2193-1801-2-503
Prihatiningtyas, W., Mariani, Y., Oramahi, H.A.,  Yusro,  F.,  &  Sisillia,  L. (2018).  Uji  aktivitas  antibakteri ekstrak  etanol  kulit  batang  mangga kweni  (Mangifera  odorata  Griff) terhadap Escherichia  coli ATCC 25922 DAN Staphylococcus aureus
ATCC  25923. Jurnal  Tengkawang . 8 (2), 59–74. http://jurnal.untan.ac.id/ index.php/tengkawang/article/view/
30206/75676579470
Roopashree,  T.S.,  Dang,  R.,  Rani,  R.H.S. & Narendra, C. (2008) Antibacterial activity  of  antipsoriatic  herbs: Cassia  tora , Mamordica  charantia and
Calendulla officinalis , International  Journal  of  Applied
Research in Natural Products, 1, 20- 28. http://www.oalib.com/paper/258738 1#.XqGAv_kzbIU
Sugiyono.  (2018).  Metode  Penelitian
Kombinasi. Penerbit Alfabeta,
Bandung.
Sutton,  S.  (2011).  Measurement  of microbial  cells  by  optical  density.
Journal  of  Validation  Technology , 17 (1), 46-47. https://www.ivtnetwork.com/article/
measurement-microbial-cells- optical-density
Syaifuddin,
M.Q., Agus, M.K.B., Sukarsono  &  Wahyuni,  SH,  2018, Efektivitas  berbagai konsentrasi ekstrak daun kayu manis ( Cinnamomum  burmannii [Ness.] BI)  terhadap  diameter  zona  hambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus  epidermidis,  Jurnal Biota, 4 (1), 12-18 http://jurnal.radenfatah.ac.id/index.p
hp/biota/article/view/1454/pdf
Wardoyo,  E.R.P.,  Nugroho,  L.  H., Santosa,  Moeljopawiro,  S.  (2011). Efek  sitotoksik  ekstrak  kloroform, methanol  dan  air  buah  Brucea javanica  (L.)  Merr.  terhadap  sel kanker  payudara  (T47D).  Berkala Penelitian  Hayati,  4D,  (13–16). http://berkalahayati.org/files/journal s/1/articles/287/submission/287- 913-1-SM.pdf