Website : jurnal.umj.ac.id/index.php/konversi Email :  jurnalkonversi@umj.ac.id

## U  N  I  V  E  R  S  I  T  A  S   M  U  H  A  M  M  A  D  I  Y  A  H   J  A  K  A  R  T  A

## PENGARUH VARIASI PH TERHADAP KADAR FLAVONOID PADA EKSTRAKSI PROPOLIS DAN KARAKTERISTIKNYA SEBAGAI ANTIMIKROBA
Suci Nurfazri Rismawati 1 , Ismiyati 2
1 Jurusan Teknik Kimia, FakultasTeknik, UniversitasMuhammadiyah Jakarta sucinurfazri@gmail.com

## ABSTRAK
Propolis  telah  dikenal  dikalangan  masyarakat  sebagai  obat,    dan  makanan  kesehatan.  Propolis merupakan  zat  resin  yang  dikumpulkan  oleh  lebah  madu  ( stingless  bee  dan  honey  bee )  dari berbagai tanaman yang memiliki  khasiat seperti antimikroba, antioksidan, induksi  apoptosis  dan anti kanker.  Propolis  adalah  substansi  resin  keras,  maka  diperlukan  adanya  proses  ekstraksi  untuk mendapatkan  propolis  yang  siap    dikonsumsi.  Tujuan    penelitian    ini  adalah    untuk  menganalisa pengaruh  variasi  pH  terhadap  proses  ekstraksi  propolis  dengan  pelarut  air  dan  karakterisasinya sebagai  zat antimikroba. Ekstraksi  dilakukan dengan teknik  maserasi, dengan perbandingan bubuk propolis dan pelarut adalah 2:8, dengan variasi pH 2,4,6,8 dan 10. Flavonoid diukur dengan metode kolorimetri kompleksasi aluminium – flavonoid. Aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus diukur  dengan  metode  difusi  disk  dan  pembentukan  zona  hambatan.  Dari  deret  standar  didapatkan hasil  regresi  sebesar  0,9995  dan  kandungan  flavonoid  tertinggi  didapatkan  dengan  menggunakan pelarut air pH 8 yaitu sebesar 62,6098 ppm. Aktifitas antibakteri dari propolis menunjukan hasil positif membentuk  zona  hambat  pada  pelarut  air  pH  8  yaitu  sekitar  2,0  mm.  Didapatkan  persamaan persamaan garis linearnya yaitu y = 5,6029x - 4,2001 dengan nilai dengan R 2 adalah 0,8289. Kadar flavonoid optimum ditunjukkan  pada ekstraksi pada pH 8
Kata kunci :aktivitas antimikroba, flavonoid, pH, propolis

## ABSTRACT
Propolis  has  been recognized  among  people as a medicine,  and  health food.  Propolis  is  a resin  substance  collected  by  honey  bee  from  various  plants  that  have  properties  such  as antimicrobials, antioxidants, apoptosis and anti-cancer. Propolis is a hard resin substance, it needs an extraction process to get propolis ready for consumption. The purpose of this study was to analyze the influence of pH variation on the extraction process of propolis with water solvent  and  its  characterization  as  an  antimicrobial  agent.  The  extraction  was  done  by maceration technique, with the ratio of propolis powder and solvent was 2: 8, with variation of pH  2,4,6,8  and  10.  Flavonoids  were  measured  by  colorimetric  complexation  method  of aluminum  - flavonoids. Antimicrobial  activity  against  Staphylococcus aureus  was measured by  the  disk  diffusion  method  and  the  formation  of  the  inhibitory  zone.  From  the  standard series  obtained  regression  of  0.9995  and  the  highest  flavonoid  content  obtained  by  using water solvent pH 8 which is equal to 62.6098 ppm. Antibacterial activity of propolis showed positive result form resistor zone on water solvent pH 8 which is about 2.0 mm. The linear equation  equation  equation  is  y  =  5,6029x  -  4,2001  with  with  R2  is  0,8289.  The  optimum flavonoid content is indicated on the extraction at pH 8
Keywords: antimicrobial activity, flavonoids, pH, propolis

## PENDAHULUAN
Propolis  adalah  zat  resin  yang  dihasilkan dari  tunas,  daun  dan  eksudat  pohon  dan tanaman  yang  tercampur  dengan  serbuk  sari, lilin  dan  enzim  kemudian  disekresikan  oleh lebah  jenis  lebah Trigona  sp .  Propolis berwarna hijau tua atau coklat tua dengan rasa yang  pahit  memiliki  beberapa  karakteristik penting seperti efek antimikroba dan antioksidan,  sifat  anestesi  dan  lain-lain. Karena  karakteristik  inilah,  telah  menarik perhatian  masyarakat  dalam  beberapa  tahun terakhir  sebagai  zat  penting  yang  dapat digunakan  dalam    bahan  makanan, minuman, kosmetik dan obat-obatan untuk meningkatkan kesehatan  dan  mencegah  penyakit.  Propolis adalah substansi resin keras, maka diperlukan adanya  proses  ekstraksi  untuk  mendapatkan propolis yang siap  dikonsumsi Ekstrak  propolis  mengandung  senyawa golongan  flavonoid,  fenol,  triterpenoid,  mono- dan siskuiterpen, tanin, dan alkaloid. Flavonoid merupakan  salah  satu  konstituen  yang  paling penting dapat mewakili sekitar 50% kandungan dari propolis. Kandungan flavonoid tergantung  pada  daerah  mana  propolis tersebut  dikumpulkan,  karena  karakteristiknya dipengaruhi  oleh  tanaman,  faktor  geografis dan  cuaca.  Senyawa  flavonoid  merupakan senyawa  yang  larut  dalam  air,  memiliki aktivitas  antioksidan  sehingga,  propolis  bisa menjadi  zat  antibakteri,  antivirus,  dan antijamur.  Aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak propolis  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri stappylococcus (Hasan dkk,  2013) Pengaruh  pH  selama  ekstraksi  propolis berpengaruh  pada  hasil  kandungan flavonoid  nya.  Terdapat  tiga  ukuran  yang menunjukan kepolaran suatu pelarut yaitu momen  dipol,  konstanta  dielektrik  dan kelarutannya  dengan  air.  Molekul  dari pelarut dengan momen  dipol  yang  besar dan    konstanta    dielektrik    yang    tinggi termasuk    polar.  Menurut  Mello  dkk, (2006), air merupakan pelarut yang paling polar  dengan konstanta dielektrik  sebesar 80,  dengan  adanya  variasi  pH  pada pelarut air yang digunakan maka polaritas air  sedikit  menurun  sehingga  dapat mengekstrak  tidak  hanya  senyawa  polar dalam  propolis  tetapi  juga  senyawa  semi polarnya.
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengevaluasi  efek  dari  variasi  pH terhadap hasil ekstraksi  propolis, dengan menggunakan pelarut air. Serta menganalisa  uji  kandungan  flavonoid dalam ekstrak propolis optimal.  Selain itu, dilakukan  analisis  untuk  mengetahui
karakteristik  propolis  sebagai  anti  bakteri, terutama terhadap bakteri stappylococcus.

## METODE
Metode    yang  digunakan  adalah metode  ekstraksi  maserasi.  Digunakan metode maserasi karena propolis memiliki sifat  termostabil  dengan  titik  didih  60 o C- 65 o C  sehingga  metode  maserasi  tepat digunakan  untuk  mengekstrak  propolis karena  tidak  menggunakan  suhu  tinggi, dan  peralatan  yang  digunakan  pun  cukup sederhana.  Pelarut  yang  digunakan adalah  air,  dibantu    HCl  dan NaOH untuk mengatur pH. Perbandingan bubuk propolis dan pelarut adalah 2:8. Kemudian dimasukan ke dalam waterbath pada suhu 45°C  selama  10  menit  dan  disimpan selama  5  hari  pada  kondisi  gelap  dan setiap  harinya  dilakukan  pengocokan. Pada  hari  ke-5  sampel  di  centrifuge selama  20  menit  pada  kecepatan  8800 rpm  ,  kemudian  di  filtrasi  dan  disimpan pada suhu 4°C selama semalam kemudian  filtrate  difiltrasi  kembali  untuk mengurangi kandungan lilin dalam ekstrak.  Pelarut  air  dengan  variasi  pH diatur  dengan  menambahkan  larutan  HCl 1N untuk menurunkan pH dan NaOH 1 N untuk  menaikan  pH  sehingga  pH  selama ekstraksi stabil.
Sedangkan  metode  analisa  kadar flavonoid menggunakan alat
spektrofotometer  UV-VIS  pada  panjang gelombang  434,2  nm,  dan  menggunakan pereaksi  AlCl 3 .  Langkah  pertama  yang dilakukan  adalah  membuat  deret  standar menggunakan  standar  quercetin  untuk mendapatkan  nilai  slope  (b)  dan  intersep (a)  nya.  Kemudian  melakukan  pengujian flavonoid  pada  sampel  sebanyak  3  kali pengujian,  agar  didapatkan  nilai  abs  dari masing-masing  sampel,  setelah  itu  dapat dihitung  kadar  total  flavonoid  dalam sampel  (f)  dengan  menggunakan  rumus sebagai berikut :
f =
Keterangan Abs  = Absorbansi sampel f= Kadar total flavonoid sampel (µg/mL) a = Intersep dari kurva standar b = Slope dari kurva standar
Untuk pengujian aktivitas daya antimikroba  digunakan  Metode  cakram kertas    yaitu  meletakkan  cakram  kertas
(Suci Nurfazri Rismawati 1 , Ismiyati 2 )
yang  telah  direndam  dalam  larutan  uji  di atas media padat    yang telah diinokulasi dengan bakteri. Setelah diinkubasi, pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat
ada tidaknya daerah hambatan disekeliling cakram.

## Diagram Alir      Penelitian
Gambar 1. Diagram Alir Proses Ekstraksi Propolis

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak  propolis  diperoleh  dari  hasil ekstraksi  sarang  lebah Trigona  sp menggunakan  metode  maserasi  dengan variasi pH 2, pH 4, pH 6, pH 8, pH 10. Uji visual dengan cara mengamati hasil
ekstrak  yang  di  hasilkan.  Pada  ekstrak propolis  pH  2    dan  pH  4  memiliki  warna yang  sama  yaitu coklat muda,  sedangkan ekstrak  propolis  pH  6,  pH  8,  dan  pH  10 memiliki  warna  coklat  yang  lebih  pekat. Hasil  pengukuran  absorbansi  sampel dengan  metode  AlCl 3 dan  menggunakan alat  Spektofotometri  UV-Visible,  disajikan pada Tabel 1
Tabel 1 . Data absorbansi sampel
Hasil  pengukuran  absorbansi  deret standar    quercetine  dengan  metode  AlCl 3 dan  menggunakan  alat  Spektofotometri UV-Visible  disajikan  pada  Tabel  2  dan Gambar 2
Tabel 2. Deret standar quersetine
Gambar 2.Kurva deret standar quersetine
Dari  kurva  deret  standar  quersetine tersebut  maka  dapat  dihitung  nilai  slope (b)  dan  intersep  (a)  nya.  Nilai  slope  (b) yang  didapatkan  sebesar    0,007  dan intersep  (a)  nya  sebesar  0,0086  serta  R 2 sebesar  0,9992  .  Maka  setelah  dihitung menggunakan  rumus  perhitungan  kadar flavonoid  didapatkan hasil sebagai berikut
Tabel 3. Kadar flavonoid pada masing- masing kondisi pH
Dari  data  tabel  diatas  dapat  dicari regresi  linear  dari  pengaruh  variasi  pH terhadap kadar flavonoid dengan memplotkan  nilai  pH  pada  sumbu  x  dan memplotkan  kadar  flavonoid  pada  sumbu y, yang disajikan pada Gambar 3.
Gambar 3 .Hubungan variasi pH dan kadar Flavonoid
Dari  kurva  pengaruh  variasi  pH terhadap  kadar  Flavonoid  tersebut  maka dapat  dilihat  persamaan  garis  linearnya yaitu  y  =  5,6029x  -  4,2001  dengan  nilai slope (b) yang didapatkan sebesar 5,6029 dan intersep(a) nya sebesar - 4,2001. Dan regresinya  (R 2 )  0,8289.  Dari  kurva  diatas juga  menunjukan  hasil  positif  karena dengan  bertambahnya nilai  pH  maka nilai kadar  flavonoid  semakin  meningkat terkecuali pada kondisi pH 10.
Hasil  penelitian  ini  dapat  diketahui  ekstrak propolis  yang  memiliki  warna  yang  paling gelap  adalah  adalah  pada  pH  10  ,  namun setelah  dilakukan  analisa  kadar  flavonoid ternyata  ekstrak  propolis  yang  memiliki  kadar paling  tinggi  justru  pada  pH  8,  meskipun perbedaan kadar flavonoid pada pH 8 dan pH 10  tidak  terlalu  berbeda,  Hal  tersebut disebabkan    oleh    perbedaan    konstanta dielektrik  pada  variasi pH air yang digunakan untuk  ekstraksi    propolis.  Semakin    tinggi  pH air maka  semakin  menurun  polaritasnya,  hal tersebut    dapat    diketahui    dari  konstanta dielektriknya.  Hasil  kadar  flavonoid  pada
(Suci Nurfazri Rismawati 1 , Ismiyati 2 )
ekstrak  pH  10  menunjukan  penurunan  bila dibandingkan  dengan  ekstrak  pH  8,  Hal tersebut  dikarenakan  penurunan  polaritas  air cukup  signifikan  pada  pH  10  sehingga menyebabkan  ada  senyawa  polar  dalam propolis  yang  tidak  bisa  terekstrak  dan menyebabkan  kadar  flavonoid  menurun.  Data yang  terjadi  menunjukan  bahwa  senyawa terbanyak  dalam  propolis  dapat  terekstrak dengan  baik  dengan  pelarut  yang  memiliki konstanta    dielektrik  atau    kepolaran  yang sesuai.    Pengukuran    kadar    flavonoid    total menggunakan    metode    spektrofotometri sesuai  yang    dilakukan    oleh    Mihai    (2010). Prinsip  dari metode  ini  adalah  terbentuknya kompleks    AlCl 3 dengan    flavonoid    yang menghasilkan    reaksi  warna.    Pereaksi    AlCl 3 hanya    dapat    digunakan  untuk    mendeteksi flavonoid  dengan  gugus  orto dihidroksi  dan hidroksi  karbonil   atau   yang   hanya memiliki gugus  orto  dihidroksi  saja.
Dilakukan  uji  anova  untuk  mengetahui ada  tidaknya  perbedaan  kadar  flavonoid dalam      ekstrak  propolis  dengan  variasi pH.  Dasar  pengambilan  keputusan  dalam analisa  adalah  jika  nilai  probabilitas signifikasi  >  0,05  maka  tidak  terdapat perbedaan yang signifikan terhadap kadar flavonoid  yang  terkandung  dalam  ekstrak propolis  dan  juga  daya  hambat  terhadap mikroba  dengan  ekstraksi  menggunakan berbagai pelarut dan variasi pH. Sedangkan jika nilai probabilitas signifikasi <  0,05  maka  terdapat  perbedaan  yang signifikan  terhadap  kadar  flavonoid  yang terkandung  dalam  ekstrak  propolis.  Uji anova atau analisis
varian  terhadap  lima  kondisi  sampel berbeda  pH,  serta  dilakukan  3  replikasi didapatkan hasil :
Tabel 4. Hasil perhitungan Anova
Tabel 5. Hasil perhitungan Anova varian
Dapat dilihat pada tabel anova varian di  bagian  P-value  menunjukan  hasil 9,75E-06  atau  bila  ditulis  dalam  angka desimal nilainya sebesar 9,75x 10 -6 , hasil ini  menunjukan  adanya  perbedaan  yang signifikan  terhadap  kadar  flavonoid  yang terkandung  dalam  ekstrak  propolis  pada tiap-tiap pH karena nilai probabilitas < 0,05
.
Pada  pengamatan  hasil  uji  efektivitas antimikroba terhadap bakteri
Stapylococcus  aureus  ,  tampak  zona hambatan  pertumbuhan  yang  jernih sekitar  difusi  disk  ekstrak  propolis  pH  8. Sedangkan  pada  ekstrak  propolis  pH  2, pH 4, pH 6, dan pH 10 tidak terlihat zona hambat yang terbentuk ( lihat Gambar  4 ).
Gambar 4.Hasil uji antimikroba pH 2, pH 4,pH 6 dan pH10
Gambar 5. Perbesaran hasil uji antimikroba pH 8
Data    perhitungan  luas  zona  hambat dapat  dilihat  pada  tabel  6,  pada  ekstrak propolis  pH  8  terbentuk  zona  hambat sekitar  2,00  mm,  ini  menunjukan  bahwa ekstraksi  propolis  menggunakan  pelarut air  pH  8  efektif  sebagai  antimikroba,
khususnya  untuk  mikroba  Stapylococus aureus.
Tabel  6. Hasil uji aktifitas antimikroba propolis
Namun  bila  kita  lebih  teliti  melihat hasil  uji  antimikroba  pada  gambar  diatas ada  perbedaan  antara  kontrol  positif  dan sampel  uji  ,  dimana  pada  kontrol  positif, disk  yang  ada  di  dalam  media  juga ditumbuhi bakteri sedangkan pada sampel uji  bakteri  hanya  tumbuh  di  sekitar  disk  , ini  menunjukan  pada  sampel  uji  yang  lain pun  ada  daya  antimikroba  namun  hanya sedikit  sehingga  tidak  menghasilkan  daya hambat.
Uji  aktivitas  antimikroba  dilakukan dengan  menggunakan  difusi  dicsk  karena filtrat  yang  dihasilkan  berupa  cairan sehingga  cara  yang  tepat  dan  mudah digunakan  adalah  cara  difusi  ,  hasil  yang diperoleh  dari  penelitian  uji  aktifitas antimikroba  yaitu  pada  ekstraksi  propolis pH  8  terbentuk  zona  hambat  seluas  2.00 mm  ini  menandakan  bahwa  propolis memiliki  daya  antimikroba  khususnya terhadap  bakteri  stappylococcus  aureus. Namun bila kita lebih teliti melihat hasil uji antimikroba  pada  gambar  diatas    ada perbedaan  antara  kontrol  positif  dan sampel  uji  ,  dimana  pada  kontrol positif,disk  yang  ada di  dalam  media juga ditumbuhi bakteri sedangkan pada sampel uji,bakteri  hanya  tumbuh  di  sekitar  disk  , ini  menunjukan  pada  sampel  uji  yang  lain pun  ada  daya  antimikroba  namun  hanya sedikit  sehingga  tidak  menghasilkan  daya hambat.

## SIMPULAN DAN SARAN
Adapun  kesimpulan  dari  hasil  penelitian yaitu:
Variasi pH berpengaruh pada ekstraksi propolis.  pH  optimal  untuk  ekstraksi propolis menggunakan air  terjadi pada pH 8.  Hal  tersebut  dikarenakan  penurunan polaritas air cukup signifikan. Pada pH 10 sehingga  menyebabkan  ada  senyawa
polar  dalam  propolis  yang  tidak  bisa terekstrak  dan  menyebabkan  kadar flavonoid menurun Ekstrak  propolis  yang  dihasilkan menunjukan  daya  antimikroba.  Aktifitas antimikroba  propolis  terhadap  bakteri stappylococcus aureus dapat terlihat pada ekstrak  menggunakan  air  pH  8  dengan luas zona hambat sebesar 2,00 mm .

## DAFTAR PUSTAKA
Hasan,  Akhmad  E.Z.,  Mangunwidjaja, Djumali,  2013, Optimasi  Ekstraksi Propolis Menggunakan Cara Maserasi
Dengan  Pelarut  Etanol  70%  Dan
Pemanasan  Gelombang  Mikro  Serta Karakterisasinya Sebagai Bahan Antikanker Payudara, Jurnal Teknologi Industri Pertanian. Kusuma,  Sri  A.F.,  2009, Staphylococcus aureus , Universitas Padjadjaran
Fakultas Farmasi.
Mello,  Beatriz C.B.S. Kakuda, Paula M. , 2006, Influence of pH variation during propolis  extraction  with  the  use  of water  as  solvent .  Dept.  of  Food Engineering, Faculty of Food Engineering,  University  of  Campinas, Brazil.
Mihai,  Cristina  Manuela,  Mărghita,  Liviu
Al.,  2010, Estimation  of  Flavonoid Content  in  Propolis  by  Two  Different
Colorimetric Methods , Scientific Papers: Animal Science and Biotechnologies.
Mukhriani,  2011, Ekstraksi,  Pemisahan Senyawa,  Dan  Identifikasi  Senyawa Aktif . Program Studi Farmasi Fakultas
Ilmu Kesehatan UIN Alauddin
Makassar.
Paviani,  Losiane  C.,  Fiorito,Giulia,  2013, Different  Solvents  For  Extraction  Of Brazilian Green Propolis: Composition And  Extraction  Yield  Of  Phenolic Compounds. Pujirahayu, Niken, Ritonga, 2014,
Properties And Flavonoids Content In Propolis  Of  Some  Extraction  Method Of Raw Propolis, International Journal of  Pharmacy  and  Pharmaceutical Sciences.
Waji, Resi Agestia, Sugrani, Andis , 2009. Flavonoid  (Quercetine), Program  S2
Kimia  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Universitas Hasanuddin.