Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2 Desember 2021 Hal 48 - 54 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI: http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v8i2.31760

## Validasi Metode Spektrofotometri UV untuk Penetapan Kadar Lopinavir dan Ritonavir Secara Simultan
Validation of UV Spectrophotometry Method for Determination of Lopinavir and Ritonavir

## Simultaneously
Siti Umi Anisah, Asri Darmawati*, Amirudin Prawita
Departemen Ilmu Kefarmasian, Fakultas Farmasi Universitas Airlangga, Gedung Nanizar Zaman Joenoes, Kampus C Unair, Jl. Mulyorejo, Surabaya 60115, Indonesia
* Corresponding author, email e-mail: asri-d@ff.unair.ac.id
Article History
Received: 1 September 2021; Received in Revision: 23 September 2021; Accepted: 1 October 2021

## ABSTRAK
Lopinavir dan ritonavir merupakan senyawa anti virus yang memiliki struktur kimia mirip dan profil spektra UV tumpangsuh. Kombinasi kedua senyawa ini sedang dipromosikan sebagai obat anti COVID19. Penetapan kadar lopinavir dan ritonavir secara simultan menggunakan metode spektrofotometri UV memerlukan teknik khusus agar hasilnya valid. Tujuan dari penelitian ini adalah mendapatkan teknik analisis yang cocok untuk penetapan kadar lopinavir-ritonavir  secara  simultan  menggunakan  metode  spektrofotometri  UV  yang  memenuhi  persyaratan validasi metode. Dalam penelitian ini digunakan teknik persamaan simultan, perbandingan faktor absorptivitas, dan teknik derivatif pertama untuk mengatasi adanya pengaruh absorban lopinavir/ritonavir pada panjang gelombang terpilih untuk analisis masing-masing senyawa secara simultan. Uji statistik one way ANOVA digunakan untuk membandingkan  hasil  analisis  menggunakan  ketiga  teknik  tersebut.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa dengan menggunakan tiga teknik tersebut hasil analisis lopinavir dan ritonavir telah memenuhi syarat selektivitas dan linieritas. Sedangkan hasil uji akurasi dan presisi belum memenuhi persyaratan validasi menurut AOAC. Hasil analisis one way ANOVA menunjukkan ada perbedaan signifikan antara rerata perolehan kembali kadar lopinavir dengan menggunakan teknik faktor absorptivitas dan derivatif. Sedangkan hasil analisis one way ANOVA untuk ritonavir  tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  diantara  ketiga  teknik  tersebut.  Dari  penelitian  ini  dapat disimpulkan bahwa metode spektrofotometri UV dengan teknik persamaan simultan, teknik faktor absorptivits, dan teknik  derivatif  untuk penetapan  kadar  campuran lopinavir-ritonavir  memenuhi  persyaratan  validasi  selektivitas dan  linieritas.  Namun  belum  memenuhi  persyaratan  uji  akurasi  dan  presisi.  Teknik  derivatif  pertama  cocok dikembangkan lebih lanjut untuk penetapan kadar lopinavir dan ritonavir secara simultan.
Kata kunci: Lopinavir, Ritonavir, Spektrofotometri UV, Validasi metode, kesehatan yang baik dan kesejahteraan

## ABSTRACT
Lopinavir and ritonavir are anti-viral compounds that have similar chemical structures and overlapping UV spectral profiles. The combination of these two compounds is being promoted as an anti-COVID19 drug. Determination of these  two  compounds  simultaneously  using  UV  spectrophotometry  method  requires  special  technique  so  that  the result  will  be  valid.  The  purpose  of  this  study  was  to  obtain  a  suitable  analytical  technique  using  UV spectrophotometry  for  the  determination  of  lopinavir-ritonavir  simultaneously  that  fulfill  the  method  validation requirement. In this study, the simultaneous equation technique, absorptivity comparison factor, and first derivative technique  were  used  to  overcome  the  effect  of  lopinavir/ritonavir  absorbance  at  selected  wavelengths  for determination of each compound simultaneously. The one-way ANOVA statistical test was used to compare the result of the three analytical techniques. The results showed that the three techniques fullfilled the AOAC requirements for selectivity and linearity. The accuracy and precision test result have not met the requirements of the AOAC method validation. Statistically. the one-way ANOVA analysis showed there was a significant difference between the mean recovery of lopinavir using the absorptivity factor and first derivative technique. Whereas, there was no significant differences among the mean of ritonavir recoveries that were determined using those three techniques. As conclusion, that the UV spectrophotometric method using the simultaneous equation technique, the absorptivity factor technique, and  the  derivative  technique  for  assaying  the  lopinavir  and  ritonavir  simultaneously  met  the  requirements  for selectivity and linearity parameters. However, the accuracy and precision have not met the requirements. The first derivative technique is suitable for further developed for ritonavir and lopinavir determination simultaneously
Keywords: Lopinavir, Ritonavir, UV Spectrophotometry, Method validation, Good health and well being
Cite this as: Anisah, S.U., Darmawati, A., Prawita, A. (2021). Validasi Metode Spektrofotometri UV untuk Penetapan Kadar Lopinavir dan Ritonavir Secara Simultan. Berkala Ilmiah Kimia Farmasi , 8(2), 48 -54.
This is an open access article under the CC BY-SA license (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/)

## Research Article
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Desember 2021 Hal 49 - 54 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048

## Pendahuluan
Sejak  akhir  tahun  2019,  terjadi  pandemi  yang  disebabkan oleh virus Corona yang disebut dengan COVID-19 ( Corona Virus  Disease-19 )  (Mas’udi  dkk,  2020).  Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Wang dkk (2020) beberapa obat dipromosikan untuk digunakan sebagai farmakoterapi untuk COVID-19 antara lain lopinavir-ritonavir, remdesivir,  ribavirin,  favipiravir,  dan  klorokuin.  Saat  ini tablet  kombinasi  lopinavir  dan  ritonavir  sudah  digunakan untuk  antivirus  selain  COVID-19.  Lopinavir  dan ritonavir merupakan  obat  golongan  antivirus  dengan  mekanisme kerja  mengambat  enzim  protease  (Sweetman,  2014). Struktur  kimia  lopinavir  dan  ritonavir  dapat  dilihat  pada Gambar 1 (Kemenkes, 2020).
Penetapan  kadar  resmi/farmakope  lopinavir  dan  ritonavir dalam  sediaan  tablet  kombinasi  adalah  kromatografi  cair kinerja  tinggi  (Kemenkes,  2020).  Namun  analisis  dengan metode  KCKT  ini  berbiaya  tinggi  dan  fase  gerak  yang digunakan umumnya pelarut organik yang relatif toksik dan mahal  (Mofavvaz  dkk,  2020),  sehingga  kurang  efisien untuk digunakan dalam proses penelitian dan pengembangan  obat  (R&D)  maupun  dalam  proses pengembangan formula obat. Salah satu metode yang dapat diharapkan sebagai metode alternatif untuk penetapan kadar campuran  lopinavir  dan  ritonavir  yang  efisien  adalah metode spektrofotometri UV (Kamal et.al. , 2016).
Metode spektrofotometri UV dapat digunakan untuk analit yang memiliki gugus kromofor, auksokrom, seperti lopinavir dan ritonavir. Keuntungan menggunakan metode ini, diantaranya adalah sederhana, murah, dan akurat (Kamal et.al. , 2016). Berdasarkan data kelarutan, lopinavir dan ritonavir mudah larut dalam metanol dan etanol (Kemenkes, 2020). Namun metanol merupakan pelarut yang lebih toksik jika dibandingkan dengan etanol (Bajpai, 2021). Sehingga pada penelitian ini dipilih pelarut etanol. Lopinavir dan ritonavir memiliki struktur kimia yang mirip dan spektra UV yang tumpang-suh, sehingga apabila dianalisis secara simultan menggunakan metode spektrofotometri UV akan menyebabkan hasil uji tidak akurat. Phechkrajang et al . (2012) mengatasi masalah ini dengan menggunakan teknik khemometri. Peneliti lain melakukan analisis lopinavir dan ritonavir, dalam berbagai matrik, secara simultan menggunakan teknik analisis multivariat, persamaan simultan, rasio absorbansi, derivatif dan teknik area under curve (AUC) (Diaz C.L., 2009;
(a) (b)
Gambar 1. Struktur kimia dari (a) lopinavir dan (b) ritonavir

## 2. Metode

## Bahan:
Lopinavir  BPFI,  ritonavir  BPFI,  bahan  matriks  simulasi (manitol,  CMC  Na  dan  tween,  kemurnian  untuk  farmasi), etanol p.a (E.Merck), air suling.

## Alat dan Instrumen
Spektrofotometer UV-Vis Hewlett Packard 8542A, neraca analitik ( O Hous Pioner d = 0,0001 g),  neraca mikrogram ( Mettler Toledo d = 0,001 mg), ultrasonik shaker ( Branson 3510), mikropipet socorex (d = 1,0 μl), alat-alat gelas untuk analisis kuantitatif.

## Teknik A (Persamaan Simultan)
Analisis dilakukan dengan menggunakan panjang gelombang  maksimum  masing-masing  lopinavir  dan ritonavir  (Kamal  dkk,  2016).  Pada  panjang  gelombang maksimum,  lopinavir  dan  ritonavir  memiliki  nilai absorptivitas  (a)  yang  paling  tinggi  dibandingkan  pada panjang  gelombang  yang  lain.  Dengan  nilai  absorptivitas yang  tinggi  maka  sensitivitas  analisis  suatu  senyawa  akan lebih  tinggi  (Wenzel,  2021).  Sehingga,  perbedaan konsentrasi  kecil  analit  dapat  menghasilkan  signal  yang tinggi.  Pada  penelitian  ini  panjang  gelombang  maksimum lopinavir dan ritonavir masing-masing  adalah 240 nm  dan 260 nm. Kemudian untuk perhitungan kadar dari lopinavir dan ritonavir digunakan rumus :
A 240 a R260 − A 260 a R240 Nagulwar and Bhusari, 2012; Phechkrajang et al. , 2012; Salunke et al. , 2013; Devineni, 2017; Sunkara, 2017). Pada
C L = a L240 a R260 − a L260 a R240 penelitian  ini  akan  dilakukan  validasi  metode  penentuan kadar  lopinavir  dan  ritonavir  secara  simultan  digunakan teknik  persamaan  simultan,  faktor  absorptivitas,  dan derivatif pertama, menggunakan pelarut etanol 70%.
C R = A 240 a L260 − A 260 a L240 a R240 a L260 − a R260 a L240
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Desember 2021 Hal 49 - 54 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Keterangan: C L , C R = konsentrasi lopinavir, ritonavir A 240 , A 260 = Absorban campuran Lopinavir dan ritonavir pada λ 240 , λ 260 a L240 , a L260 = absorptivitas lopinavir pada λ 240 , λ 260 a R240 , a R260 = absorptivitas ritonavir pada λ 240 , λ 260

## Teknik B (Faktor Absorptivitas)
Teknik perbandingan/faktor absorptivitas umumnya digunakan untuk analisis secara simultan dua senyawa yang memiliki  perbedaan  nilai  absorptivitas  yang  besar  (Kamal dkk,  2016).  Pada  penelitian  ini,  lopinavir  memiliki  nilai absorptivitas  yang  jauh  lebih  kecil  dibandingkan  dengan ritonavir  (Gambar  1).  Pada  teknik  ini  digunakan  panjang gelombang  pada  perpotongan  spektra  UV  lopinavir  dan ritonavir,  yaitu  pada  titik  ketika  lopinavir  memiliki absorptivitas  cukup  besar  (panjang  gelombang  228  nm). Pada  panjang  gelombang  tersebut  absorban  dari  lopinavir sama dengan absorban ritonavir namun dengan konsentrasi yang  berbeda.  Perhitungan  kadar  dari  lopinavir  dan ritonavir dilakukan dengan menggunakan rumus berikut:
a L
F = a
ultrasonic  shaker .  Campuran  dipindahkan  kuantitatif  ke dalam labu ukur 25,0 ml dan ditambah etanol 70% hingga tepat  tanda.  Cairan  disaring  menggunakan  kertas  saring Whatman No. 42 dan pindahkan ke dalam vial.
Tabel 1. Komposisi matriks per tablet (Lal et al. , 2017)
Nama Bahan Jumlah (mg) Tween 80 5,7 Manitol 113,0 CMC-Na 2,8

## Pembuatan Larutan Campuran Simulasi Tablet
Ditimbang baku lopinavir dan ritonavir masing-masing 10,0 mg dan 2,5 mg, untuk dilarutkan dalam etanol 70% dalam labu takar 10,0 ml. Kemudian dibuat campuran larutan matriks dengan larutan baku campuran lopinavir dan ritonavir dengan tiga konsentrasi yaitu 80%, 100% dan 120% sesuai Tabel 2.
Tabel 2. Komposisi simulasi tablet lopinavir-ritonavir
R A m = a R (F. C L + C R ) C L = [(FC L + C R ) – C R ].1/F
Keterangan: C L , C R = konsentrasi lopinavir, ritonavir A m = Absorban campuran lopinavir dan ritonavir, pada λ 228 a L , a R = absorptivitas lopinavir, ritonavir pada λ 228 F = Faktor perbandingan absorptivitas lopinavir dan ritonavir pada λ 228

## Teknik C (Derivatif Pertama)
Teknik  derivatif  dilakukan  dengan  membuat  spektra  UV derivatif  pertama  dari  masing-masing  lopinavir,  ritonavir dan  campuran  matrik  tablet  pada  rentang  panjang gelombang  200-300  nm.  Setelah  ditentukan zero-crossing lopinavir  maupun  ritonavir , penentuan  kadar  lopinavir dilakukan  pada zero  crossing ritonavir.  Demikian  pula sebaliknya.  Pada  penelitian  ini  digunakan  panjang gelombang  228  nm  untuk  analisis  lopinavir  dan  254  nm untuk  ritonavir.  Pada  kedua  panjang  gelombang  tersebut nilai  derivatif  absorban  dari  lopinavir  dan  ritonavir  cukup besar (Gambar 2).

## Pembuatan Larutan Baku Tunggal
Ditimbang  baku  lopinavir  dan  baku  ritonavir  masing- masing  sebanyak  10,0  mg  dengan  neraca  analitik  mikro, kemudian masing-masing dilarutkan dalam etanol 70% dan dipindahkan  ke  dalam  labu  ukur  10,0  ml.  Selanjutnya ditambah etanol hingga tepat tanda.

## Pembuatan Larutan Matrik
Ditimbang  campuran  bahan  matriks  sesuai  Tabel  1, dimasukkan  ke  dalam  gelas  piala  dan  ditambah  +15  ml pelarut etanol 70%, selanjutnya digetarkan dengan

## Validasi Metode Selektivitas
Pemilihan  panjang  gelombang  untuk  analisis  Teknik  A maupun Teknik B dilakukan dengan menggunakan larutan baku tunggal lopinavir dengan konsentrasi 100-250 μg/ml, larutan  baku  tunggal  ritonavir  dengan  konsentrasi  20-60 μg/ml,  larutan  baku  campuran  lopinavir-ritonavir  dan larutan  matriks  yang  dianalisis  pada  rentang  panjang gelombang 200-300 nm.

## Linieritas
Uji  linieritas  dilakukan  dengan  menggunakan  enam konsentrasi yang berbeda dari masing-masing larutan baku tunggal lopinavir dan baku tunggal ritonavir pada Panjang gelombang  maksimum  masing-masing  (Teknik  A).  Pada Teknik  B,  uji  linieritas  dilakukan  dengan  pengukuran absorban  lopinavir  maupun  ritonavir  pada  panjang gelombang  228  nm.  Sedangkan  pada  teknik  derivatif (Teknik  C)  dilakukan  pengukuran  absorban  derivatif pertama  (ðA/ð λ )  pada  panjang  gelombang  228  nm  untuk lopinavir dan 254 nm untuk ritonavir, masing-masing pada zero-crossing analit  pengganggunya.  Parameter  linieritas adalah  koefisien  korelasi  serta  nilai  Vxo  dari  persamaan regresi.

## Akurasi dan Presisi
Uji akurasi dan presisi dilakukan dengan melakukan dengan cara  adisi  matrik,  yaitu  pengukuran  absorban  dari  larutan campuran lopinavir-ritonavir baku, yang ditambahkan
Konsentrasi Volume larutan matriks (μl) Volume larutan baku campuran (μl) 80% 800 640 100% 765 800 120% 730 960
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Desember 2021 Hal 49 - 54 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Ritonavir Lopinavir
dengan matriks dan tanpa penambahan matriks. Konsentrasi dari  larutan  campuran  lopinavir-ritonavir  yang  digunakan adalah  80%,  100%,  dan  120%.  Analisis  masing-masing konsentrasi  analit  dilakukan  dengan  replikasi  tiga  kali. Parameter akurasi dan presisi, masing-masing adalah persen (%) perolehan kembali dan nilai koefisien variasi (KV)

## Hasil dan Pembahasan

## Selektivitas
Lopinavir  dan  ritonavir  memiliki  spektra  saling  tumpang- suh ( overlapping ) pada rentang λ 200-300 nm (Gambar 1) .
Gambar  1.  Profil  spektra  larutan  baku  tunggal  lopinavir 140,0 ppm dan 280,0 ppm overlay dengan ritonavir 45,0 ppm
Berdasarkan  spektra  tersebut  diketahui λ maksimum Lopinavir adalah 260 nm, sedang Ritonavir adalah 240 nm. Penentuan  kadar  lopinavir  maupun  ritonavir  berdasarkan perbandingan  absorban  langsung  dengan  senyawa  baku tunggalnya,  pada λ maksimum  masing-masing,  akan diganggu  oleh  adanya  absorban  senyawa  lain  yang spektranya  overlap  pada  Panjang  gelombang  tersebut. Permasalahan  tersebut  diselesaikan  dengan  menggunakan teknik  A  (Persamaan  simultan)  dan  teknik  B  (Faktor absorptivitas).
Uji selektifitas menggunakan teknik C (derivatif pertama), ðA/ðλ  lopinavir  pada  228  nm  tidak  diganggu  ritonavir. Sedangkan  ðA/ðλ  ritonavir  pada  254  nm  tidak  diganggu oleh lopinavir (Gambar 2).
Gambar 2. Profil spektra derivatif pertama larutan baku tunggal lopinavir overlay dengan ritonavir

## Linieritas
Hasil uji linieritas lopinavir maupun ritonavir berdasarkan Teknik  A,  Teknik  B  maupun  Teknik  C  tercantum  pada Tabel 1 berikut. Rentang konsentrasi yang digunakan pada uji  linieritas  dipilih  berdasarkan  nilai  absorban  yang memenuhi  Hukum  Lambert-Beer.  Konsentrasi  lopinavir yang  digunakan  adalah  140  –  300  ppm,  sedangkan  untuk ritonavir 35 – 60 ppm.
Data  Tabel  3  menunjukkan  linieritas  lopinavir  maupun ritonavir  telah  memenuhi  syarat  parameter  uji  linieritas menurut  AOAC,  yaitu  nilai  koefisien  korelasi  (R)  >  0,99 dan nilai koefisien variasi fungsi (Vxo) < 5% (Yuwono and Indrayanto,  2005).  Nilai  regresi  yang  lebih  dari  0,9 menunjukkan  adanya  hubungan  yang  baik  antara  kedua parameter,  yaitu  konsentrasi  dan  absorban  (Schober  and Schwarte,  2018),  sehingga  rentang  konsentrasi  tersebut dapat dijadikan acuan untuk penetapan konsentrasi masing- masing analit pada uji validasi yang lain.

## Akurasi dan Presisi
Hasil  uji  akurasi  penetapan  kadar  lopinavir  dan  ritonavir secara simultan menggunakan teknik A, teknik B maupun teknik C tercantum pada Tabel 4. Persen perolehan kembali (rekoveri)  diukur  dengan  cara  adisi  matrik,  berdasarkan perhitungan berikut.
Data  pada  Tabel  4,  menunjukkan  bahwa  penggunaan  tiga teknik  untuk  perhitungan  kadar  lopinavir-ritonavir  dalam larutan  campuran  baku  belum  memenuhi  persyaratan parameter uji akurasi. Nilai persen perolehan kembali yang dipersyaratkan untuk analit dengan kadar >10% adalah (98- 102) % (Yuwono and Indrayanto, 2005). Hasil ini berbeda dengan  hasil  penelitian  sebelumnya  yang  menggunakan pelarut  metanol  dan  asetonitril  (Nagulwar  and  Bhusari, 2012;  Devineni, 2017). Hasil penelitian sebelumnya rerata perolehan  kembali  lopinavir  dan  ritonavir  99,03  %  dan 99,05 % memenuhi persyaratan validasi
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Desember 2021 Hal 49 - 54 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Tabel 3 . Hasil uji linieritas larutan baku tunggal lopinavir dan ritonavir
Lopinavir Ritonavir Parame ter Teknik A Teknik B Teknik C  Teknik A Teknik B Teknik C 240 nm 260 nm 228 nm 228 nm 240 nm 260 nm 228 nm 254 nm Persam aan regresi y= 0,006.10 ־¹x +0,409.1 0־¹ y = 0,007.10 ־¹x +0,390. 10־¹ y = 0,021.10 ־¹x +0,927.1 0־¹ y = - 0,004.10 ־ ¹x - 0,137.10 ־ ¹ y = 0,123. 10 ¹x 0,251.10 ־ y = ־0,025. 10 ־ -¹x - ¹0,122.10־¹ y = 0,098. 10־¹x – 0,095.  10 ־ ¹ y = -0,007. 10־¹x + 0,014.  10 ־ ¹ koefisie n  relasi (r) 0,9979 0,9979 0,9991 0,9991 0,9999 0,9986 0,9999 0,9999 Vxo 4,66% 3,71% 1,73% 1,33% 0,32% 1,29% 0,28% 3,06%
Tabel 4. Hasil uji akurasi dan presisi penetapan lopinavir dan ritonavir Analit Hasil Uji Akurasi dan Presisi Persamaan simultan Faktor absorptivitas Derivatif pertama Campuran baku (%) Simulasi matriks (%) Campuran baku (%) Simulasi matriks (%) Campuran baku (%) Simulasi matriks (%) Lopinavir 82,70±3,70 91,53±10,34  90,62±1,85 99,51±4,08 89,78±1,51 90,71±4,58 KV = 4,47 KV = 11,29 KV = 2,04 KV = 4,1 KV = 1,67 KV = 5,05 Ritonavir 92,82±1,70 95,09±4,68 95,98±1,05 96,54±3,08 94,38±2,05 94,41±4,54 KV = 1,83 KV = 4,93 KV = 1,10 KV = 3,19 KV = 2,17 KV = 4,8

## Pengaruh matrik
Rerata  perolehan  kembali  lopinavir  dalam  campuran baku  dengan  matriks  dan  tanpa  matriks  dengan  teknik derivatif  tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan (Tabel
5). Sedangkan perolehan kembali ritonavir dalam campuran yang mengandung matrik maupun yang tidak mengandung matrik  dengan  3  teknik  yang  digunakan  tidak  terdapat perbedaan yang signifikan (Tabel 6). Hal ini berarti adanya penambahan larutan simulasi matriks tidak mempengaruhi uji akurasi.
Nilai KV untuk rekoveri lopinavir dalam campuran dengan matriks maupun tanpa matriks tidak memenuhi persyaratan validasi.  Nilai  KV  yang  dipersyaratkan  adalah  2,7% (AOAC,  2011).  Untuk  teknik  derivatif  presisi  lopinavir adalah  <  5,05%.  Sedangkan  nilai  KV  rekoveri  ritonavir menggunakan 3 teknik lebih baik dari KV lopinavir yaitu < 5% (Tabel 4).

## Pengaruh Teknik analisis
Analisis  statistik one  way ANOVA  dilakukan  untuk mengetahui adanya perbedaan rerata perolehan kembali
lopinavir maupun ritonavir dalam campuran akibat menggunakan 3 teknik analisis A, B, C.
Hasil analisis rekoveri  lopinavir menunjukkan ada perbedaan yang  signifikan  antara  penggunaan  teknik faktorabsorptivitas dengan  teknik  derivatif  pertama.  Perbedaan  yang  signifikan ditunjukkan dengan nilai signifikasi yang kurang dari 0,05. Sedangkan  analisis  terhadap  rata-rata  perolehan  kembali kadar  ritonavir  menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  yang signifikan  diantara  3  teknik  analisis  tersebut.  Sehinggateknik persamaan  simultan,  faktor  absorptivitas  dan    derivatif pertama  dapat  digunakan  untuk  analisis  ritonavir.  Hasil  uji yang  tidak  memenuhi  persyaratan  dapat  disebabkan  oleh beberapa  hal.  Salah  satunya  adalah  nilai  absorptivitas lopinavir  yang  relatif  lebih  rendah  dari  ritonavir  sehingga kurang  sensitif  untuk  mengukur  adanya    perbedaan konsentrasi  pada  analit.  Sesuai  hasil  penelitian  ini,  dapat disimpulkan  bahwa  parameter  validasi  yangterpenuhi  adalah uji  selektivitas  dan  uji  linieritas.  Sedangkan  uji  akurasi  dan presisi  belum  memenuhi  persyaratan.  Teknik  derivatif pertama  cocok  untuk  dikembangkan  lebih  lanjut  untuk penetapan kadar lopinavirdan ritonavir secara simultan.
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Desember 2021 Hal 49 - 54 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Tabel 5. Analisis pengaruh penambahan larutan matrik pada perolehan kembali lopinavir
Tabel 6. Analisis pengaruh penambahan larutan matrik pada perolehan kembali Ritonavir.
Tabel 7. Analisis penggunaan 3 teknik analisis pada perolehan kembali lopinavir

## Multiple Comparisons
Dependent Variable: Recovery
Tukey HSD Mean Difference (I-J) Std. Error Sig. 95% Confidence In (I) Metode (J) Metode Lower Bound Uppe Pers. SImultan Faktor Absorptivitas -7.97778 3.44374 .073 -16.5778 Derivatif .82333 3.44374 .969 -7.7767 Faktor Absorptivitas Pers. SImultan 7.97778 3.44374 .073 -.6222 Derivatif 8.80111 * 3.44374 .044 .2011 Derivatif Pers. SImultan -.82333 3.44374 .969 -9.4233 Faktor Absorptivitas -8.80111 * 3.44374 .044 -17.4011
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Tabel 8. Analisis penggunakan 3 teknik analisis pada perolehan kembali ritonavir

## Kesimpulan
Metode  spektrofotometri  UV  dengan  teknik  persamaan simultan,  teknik  faktor  absorptivits,  dan  teknik  derivatif untuk  penetapan  kadar  campuran  lopinavir-ritonavir memenuhi  persyaratan  validasi  selektivitas  dan  linieritas. Namun  untuk  persyaratan  uji  akurasi  dan  presisi  belum memenuhi persayaratan.
Teknik derivatif pertama cocok untuk dikembangkan lebih lanjut untuk penetapan kadar lopinavir dan ritonavir secara simultan.

## Daftar Pustaka
AOAC.  (2011).   Annex   I :   Validation   Study   Protocols. Bajpai,  P  (2021)  Development  in  Bioethanol,  Green  Energy and  Technology.  doi:  10.1007/978-981-15-8779- 5_12.
BPOM  RI.  (2005).  Peraturan  Badan  pengawas  Obat  dan Makanan  Republik  Indonesia.  Badan  Pengawas  Obat dan Makanan RI.
Devineni,  J.  (2017)  New  sensitive  UV  spectrophotometric method  for  simultaneous  estimation  of  lopinavir  and ritonavir  in  fixed  dose  combination  as  soft  gels, International  Journal  of Pharmaceutical  Development
& Technology , 7 (1), 25-30.
Dias,  C.L.,  Bergold,  A.M.  and  Froehlich,  P.E.  (2009)  UV-
Derivative spectrophotometric determination of ritonavir  capsules  and  comparison  with  LC  method, Analytical Letters , 42 (12), 1900–1910.
Kamal,  A.H.,  El.-Malla,  S.F.,  and  Hammad,  S.F.  (2016)  A review  on  UV  spectrophotometric  methods  for simultaneous  multicomponent  analysis, European Journal  of  Pharmaceutical  and  Medical  Research ,  3 (2), 348–360.
Kementerian  Kesehatan  RI.  (2020)  Farmakope  Indonesia edisi VI. Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.
Lal,  M.,  Lai,  M.,  Estrada,  M.,  Zhu,  C.  (2017)  Developing  a flexible  pediatric  dosage  form  for  antiretroviral therapy: a fast-dissolving tablet, Journal of Pharmaceutical Sciences , 106 (8), 2173–2177. Mas’udi,  Wawan  dan  Winanti,  Poppy  S.  (2020) Tata  Kelola Penanganan  COVID-19  di  Indonesia:  Kajian  Awal. D.I., Gadjah Mada University Press, Gajahmada Mofavvaz,  S.,  Sohrabib,  M.R.  and  Heydari,  A.  (2020)
Application  of  UV/vis  spectrophotometry  based  on using  least  squares  support  vector  machine  and continuous  wavelet  transform  methods  for  the simultaneous  analysis  of  antibiotics  drugs  in  tablet formulation:  Comparison  with  HPLC  method, Optik , 220 (April), 165246.
Methodology ,  32  (05),  241–260.  Nagulwar,  V.  P.  and Bhusari,  K.  P.  (2012)  Development  of  UV spectrophotometric first order derivative methodfor the simultaneous, International Journal ofPharmaceutical Sciences & Research, 3 (07), 2317– 2320.
Phechkrajang,  C.M.,  Thin,  El  El.,  Sratthaphut,  L.,
Nacapricha,  D.,  Wilairat,  P.  (2012)  Chemometrics- Assisted UV spectrophotometric method for determination of loinavir-ritonavir in  Syrup,
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.2, Desember 2021 Hal 49 - 54 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 4 (1), 4–8.
Salunke,  J.M.,  Pawar,    D.S.,    Chavhan,    V.D.,    and Ghante,
M.R.  (2013)  Simultaneous  UV  spectrophotometric method for estimation  of ritonavir and lopinavir in bulk  and  tablet  dosage  form, Der  Pharmacia Lettre ,5 (3), 156–162.
Schober,  P.  and  Schwarte,  L.  A.  (2018)  Correlation coefficients:  Appropriate  use  and  interpretation, Anesthesia and Analgesia , 126 (5), 1763–1768. Sunkara, N. and Viyajalaksmi, A. (2017) UV spectrophotometric method development and validation of lopinavir in bulk and in pharmaceutical  dosage  form, Centre  for  Info  Bio Technology Journal  of Pharmaceutical  Sciences , 6 (2), 1–4.
Sweetman,  Sean  C.  (2014)  Martindale:  The  Complete
Drug Reference 38th
edition. London:
Pharmaceutical Press.
Wang,  D.,  Li,  Z.  and  Liu,  Y.  (2020)  An  overview  of  the safety, clinical application and antiviral research of the  COVID-19  therapeutics, Journal  of  Infection andPublic Health , 13 (10), 1405–1414. Wenzel, T. 2021. Molecular and Atomic Spectroscopy. LibreTexts. doi: 10.1021/ed010p308. Yuwono,  M.  and  Indrayanto,  G.  (2005)  Validation  of Chromatographic Methods of Analysis, Profiles of Drug Substances, Excipients and Related