## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOLIK
HERBA ALFALFA ( Medicago sativa L.) DENGAN METODE DPPH (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil)
Herni Widyowati 1) , Maria Ulfah 1) , Sumantri 2)
1) Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
2) Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta

## INTISARI
Tanaman  alfalfa  ( Medicago  sativa L.)  diketahui  mengandung  senyawa  flavonoid  dan vitamin  C  yang  dapat  berperan  sebagai  antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanolik  herba  alfalfa  dengan  metode  DPPH  dan  untuk  mengetahui kandungan senyawa aktifnya.
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  membuat  ekstrak  etanolik  herba  alfalfa  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut penyari etanol 70%. Ekstrak dibagi menjadi konsentrasi (10, 20, 40 dan  80  µg/mL).  Sebagai  pembanding  digunakan  vitamin  C  dengan  konsentrasi  (1,  2,  4  dan  8 µg/mL).  Sebagai  blanko  digunakan  DPPH  0,1  mM.  Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan dengan  mereaksikan  50  µL  ekstrak  etanolik  herba  alfalfa  dengan  4,0  mL  DPPH  0,1  mM, kemudian  diukur  absorbansinya  dengan  spektrofotometri  visibel  dengan  panjang  gelombang  525 nm. Data yang diperoleh dihitung untuk mengetahui aktivitas antioksidannya. Nilai IC 50 diperoleh dari  analisa  probit,  sedangkan  analisa  secara  statistik  menggunakan  uji  T  dan  untuk  mengetahui kandungan senyawa aktif dalam ekstrak etanolik herba alfalfa dilakukan uji KLT.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanolik herba alfalfa mempunyai aktivitas antioksidan, dengan nilai IC50 ekstrak etanolik herba alfalfa sebesar 59,339 µg/mL, nilai IC 50 dari larutan  standar  vitamin  C  sebesar  4,768  µg/mL.  Hasil  uji  KLT  memberikan  warna  kuning  yang menunjukkan bahwa ekstrak etanolik herba alfalfa mengandung flavonoid. Hasil uji statistik untuk aktivitas antioksidan menunjukkan perbedaaan yang tidak signifikan antara ekstrak etanolik herba alfalfa  dengan  vitamin  C.  Dengan  demikian  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanolik  herba alfalfa yang mengandung flavonoid memiliki aktivitas antioksidan.
Kata kunci : ekstrak etanolik herba alfalfa ( Medicago sativa L.), IC 50 , Antioksidan

## ABSTRACT
Alfalfa  ( Medicago  Sativa L.)  plant  is  known  to  have  compounds  of  flavonoid  and vitamine C which can serve as antioxidants. This research aims knowing the antioxidant activity of alfalfa  herbal  ethanolic  extract using  DPPH (1,1-diphenyl-2-pikrilhydrazil  method  and  knowing the content of its active compound have wan.
The  research  was  performed  by  making  alfalfa  herbal  ethanolic  extract  by  maceration method using ethanol extracting solvent 70%. The extract was divided into some concentrations of 10, 20, 40 and 80 μg/ml. As a comparison, vitamine C was used with concentrations of 1, 2, 4, and 8 μg/ml. The test of antioxidant activity was conducted by reacting 50 μl of alfalfa herbal ethanolic extract with  4.0  ml  DPPH  0.1  mM,  then  it  was  measured  for  the  absorbance  using  visible spectrophotometry with a wavelength of 525 nm. The obtained data was calculated to discover its antioxidant  activity.  The  statistical  analysis  used  was  Mann-Whitney  test.  The  IC 50 value  was gained  using probit analysis and  the  statistical analysis used  t-test and  to  discover  the content  of active compound in alfalfa herbal ethanolic extract, TLC test was performed.
The  research  result  indicated  that  the  alfalfa  herbal  ethanolic  extract had  antioxidant activities with alfalfa herbal ethanolic extract IC 50 value of 59.339 μg/ml, and standard solution of vitamine  C  IC 50 value  of  4.768  μg/ml.  The  result  of  statistical  test  for  IC 50 indicated  an unsignificant difference between alfalfa herbal ethanolic extract and vitamine C. Otherside it could
be  concluded  that  the  alfalfa  herbal  ethanolic  extract  containing  flavonoid  had  antioxidant activities.
Keywords: Alfalfa ( Medicago sativa L.) herbal ethanolic extract, IC 50 , antioxidant

## PENDAHULUAN
Radikal bebas adalah suatu molekul atau  atom  yang  memiliki  satu  atau  lebih elektron  yang  tidak  berpasangan.  Elektron tersebut  sangat  reaktif  dan  cepat  bereaksi dengan  molekul  lain  sehingga  terbentuk radikal  bebas  baru  dalam  jumlah  besar secara  terus  menerus.  Radikal  bebas  dapat menimbulkan  kerusakan  di  berbagai  bagian sel  dan  menyebabkan  berbagai  penyakit seperti tumor, kanker, aterosklerosis, katarak,  keriput,  penuaan  dan  lainnya (Anonim, 2007).
Salah  satu  senyawa  kimia  yang mampu menghambat penuaan dan mengatasi berbagai  macam  penyakit  kronis  yang diakibatkan  oleh  radikal  bebas,  dapat mencegah proses oksidasi atau menghambat radikal  bebas  adalah  antioksidan(Halliwel and  Guteridge,  2000).  Mekanisme  kerja antioksidan secara umum adalah menghambat  oksidasi  lemak  yang  terdiri dari  tiga  tahap  utama  yaitu  inisiasi, propagasi,  dan  terminasi  (Kumalaningsih,
2006).  Ada  dua  jenis  antioksidan  yaitu antioksidan endogen dan antioksidan
eksogen. Berdasarkan fungsinya antioksidan dibedakan menjadi 5 (lima) yaitu antioksidan  primer,  antioksidan  sekunder, antioksidan  tersier, oxygen  scavenger ,  dan chelators . Penentuan  aktivitas  antioksidan salah  satunya  dapat  dilakukan  dengan menggunakan  metode  DPPH.  Metode  ini sering  digunakan  karena  bersifat  sederhana, mudah,  cepat,  dan  peka  serta  hanya memerlukan  beberapa  sampel.  Senyawa antioksidan  akan  bereaksi  dengan  radikal DPPH  melalui  mekanisme  donasi  atom hidrogen dan menyebabkan terjadinya peluruhan warna DPPH dari ungu ke kuning (Hanani et al ., 2005). Inhibiton
Concentration 50 (IC 50 ) didefinisikan  sebagai konsentrasi  efektif  zat  dalam  sampel  yang dapat  menghambat  50%  absorbansi  DPPH. Harga  IC 50 berbanding  terbalik  dengan kemampuan  zat/senyawa  yang  bersifat sebagai antioksidan. Semakin kecil nilai IC 50 berarti semakin kuat daya antioksidannya. Alfalfa  merupakan  tanaman  dari famili  fabaceae  secara  empiris  dapat
digunakan,  antara  lain  untuk  antikolesterol, antifungi, antispasmodik, antitrombotik, diuretik,  antihiperglikemik,  antiinflamasi, dan antikanker (Newall et al ., 1996). Alfalfa juga  kaya  akan  serat  yang  dapat  mengikat lemak  dan  zat  karsinogen  penyebab  kanker (Anonim, 2007). Penelitian terhadap tanaman  alfalfa  sebelumnya  sudah  pernah dilakukan diantaranya adalah uji
antihiperglikemik  ekstrak  etanolik  batang dan  daun  alfalfa  pada  tikus  jantan  yang dibebani glukosa dan identifikasi kandungan senyawa  aktifnya  (Laksmonowati,  2006), dan  uji  antiinflamasi  ekstrak  etanolik  herba alfalfa  pada  tikus  jantan  yang  diinduksi karagenin,  beserta  identifikasi  kandungan senyawa aktifnya (Yuniarti, 2007). Berdasarkan  uraian  di  atas,  belum  pernah dilakukan penelitian tentang aktivitas antioksidan pada tanaman alfalfa maka perlu dilakukan  penelitian  mengenai  manfaat tanaman alfalfa sebagai antioksidan berdasarkan  nilai Inhibition  Concentration 50 (IC 50 ).

## METODOLOGI Alat
Alat  penelitian  yang  digunakan: seperangkat  alat  gelas  (Iwaki  pyrex), timbangan  elektrik  (Ohaus),  mikropipet, stirer,  spektrofotometer  UV-Vis (Genesys) 10  UV,  lempeng  KLT, chamber, tutup chamber ,  pipa  kapiler,  kertas  penjenuh,  alat penampak  bercak,  lampu  UV254  nm,  dan lampu UV365 nm, evaporator.

## Bahan
Bahan  penelitian  yang  digunakan: akar,  batang  dan  daun  tanaman  alfalfa, etanol 70%, silika gel 60 F 254 p.a. (E.Merck), sellulose p.a. (E.Merck), kloroform, metanol,  etil  asetat,  asam  formiat,  asam asetat,  asam  fosfomolibdat  p.a.  (E.Merck), ammonia  p.a.  (E.Merck),  vitamin  C  p.a. (E.Merck), rutin p.a. (E.Merck), DPPH (1,1- Difenil-2-Pikrilhidrazil)  p.a.  (Sigma),  etanol p.a.
Jalannya Penelitian Identifikasi tanaman Determinasi tanaman alfalfa ( Medicago sativa L.) dilakukan di Laboratorium Taksonomi Tumbuhan Jurusan  Biologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam (FMIPA) Universitas Negeri Semarang. Pengumpulan bahan
Bahan yang digunakan adalah akar, batang dan daun alfalfa ( Medicago sativa L.) yang  diperoleh  dari  desa  Pandean  Kidul, Magelang.  Bahan  diambil  secara  acak  pada musim penghujan dan usianya 2 bulan.

## Pembuatan serbuk simplisia
Bahan  yang  telah  diperoleh  dari pengumpulan,  dicuci  bersih  dengan  air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang menempel,  tiriskan,  kemudian  diangin- anginkan  di  tempat  yang  teduh  atau  tidak terkena  sinar  matahari  langsung  dan  ditutup dengan kain hitam sampai kering.
Tujuannya  adalah  simplisia  tidak  mudah rusak dan tidak terjadi kerusakan dekomposisi  kandungan  senyawa  dalam tanaman alfalfa.
Pembuatan ekstrak etanolik herba alfalfa ( Medicago sativa L.)
Pembuatan  ekstrak  dengan  metode maserasi adalah sebagai berikut kurang lebih 100,0 gram serbuk simplisia dimasukkan ke dalam  toples,  kemudian  dituangi  750  ml etanol  70%,  ditutup  dan  dibiarkan  selama  5 hari terlindung dari cahaya, sambil berulang- ulang diaduk. Setelah 5 hari diserkai dengan bukner  dan  ampas  ditambah  cairan  penyari secukupnya,  diaduk  dan  siserkai  kembali sehingga  diperoleh  seluruh  sari  sebanyak 1000  ml.  Kemudian  sari  ditutup  dan dibiarkan di tempat sejuk, terlindung cahaya selama 2 hari, kemudian endapan dipisahkan
(Depkes RI, 1986). Sari kemudian dipekatkan  dan  diuapkan  dengan  evaporator sampai  diperoleh  ekstrak  kental.  ekstrak kental yang diperoleh dibuat seri konsentrasi 0,001%, 0,002%, 0,004%, 0,008% b/v.

## Pembuatan blanko DPPH 0,1 mM
Serbuk  DPPH  ditimbang  sebanyak 3,9  mg  dan  dilarutkan  dalam  etanol  p.a sampai tepat 100,0 mL (0,1 mM) (Nugraheni, 2007).
Pembuatan pembanding vitamin C
Vitamin  C  sebanyak  0,5  mg ditambahkan  air  sampai  50,0  ml  sehingga
diperoleh  kadar  1%.  Dari  kadar  ini  dibuat seri konsentrasi sebesar 1, 2, 4 dan 8 µg/mL. Penentuan  panjang  gelombang  maksimal larutan  DPPH 0,1 mM
Penentuan  panjang  gelombang  (λ) dengan  cara  mengukur  4,0  mL  larutan DPPH  0,1  mM  pada  spektrofotometer dengan  panjang  gelombang  400-600  nm untuk  mendapatkan  absorbansi  ±  0,2-0,8 (Nugraheni, 2007).
Penentuan operating  time larutan  DPPH 0,1mM Penentuan operating time dilakukan  dengan  cara  mereaksikan  50  µl baku  pembanding  vitamin  C  ditambah  4,0 mL  larutan  DPPH  0,1  mM,  dihomogenkan dengan  stirer  selama  1  menit  dan  diukur absorbansinya  pada  menit  ke  0,  5,  10,  15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, dan 60 pada λ maksimal  yang  sudah  diperoleh(Nugraheni, 2007).
Uji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode DPPH
Sebanyak  4,0  mL  DPPH  0,1  mM dimasukkan  tabung  reaksi,  tambahkan  50,0 µL    ekstrak  etanolik  herba  alfalfa  dengan berbagai  konsentrasi,  kemudian  distirer  1 menit sampai homogen dan diamkan selama 30 menit ditempat gelap, baca absorbansinya pada  λ  maksimal  (525  nm).  Untuk  uji aktivitas  baku  pembanding  vitamin  C perlakuannya sama.
Uji  kromatografi  lapis  tipis  untuk identifikasi kandungan senyawa aktif dari ekstrak  etanolik  herba  alfalfa  ( Medicago sativa L.) Bejena pengembang (chamber) dijenuhi  dengan  fase  gerak  yang  sesuai untuk  masing-masing  golongan  senyawa aktif.  Fase  gerak  untuk  vitamin  C  adalah kloroform-metanol  (50:50),  fase  gerak flavonoid  adalah  etil  asetat,  asam  formiat, asam asetat dan air (100:11:11:27). Totolkan ekstrak  pada  lempeng  KLT  (silika  gel  60 F 254 )  untuk  vitamin  C  dan  selulosa  untuk flavonoid,  pastikan  ekstrak  yang  ditotolkan sampai  kering.  Kemudian  lempeng  KLT dielusi,  dikeringkan  kemudian  dideteksi sinar  UV  λ  254  nm  dan  365  nm  kemudian disemprot  dengan  penampak  bercak  untuk vitamin  C  adalah  asam  fosfomolibdat  dan flavonoid  adalah  uap  amoniak.  Kemudian dihitung Rf-nya.
Analisis Data Data  nilai  absorbansi  dari  ekstrak etanolik herba alfalfa serta baku pembanding, dihitung dengan rumus:
% aktivitas antioksidan = Absorbansi blanko (Absorbansi DPPH)-Absorbansi sampel (Absorbansi  ekstrak  etanolik  herba  alfalfa dan  vitamin  C  dibagi  Absorbansi  blanko (Absorbansi  DPPH)  dikali  100%.  Data diolah  menggunakan  analisa  probit  antara log  konsentrasi  larutan  uji  (x)  dengan persentase aktivitas antioksidan (y) sehingga diperoleh IC 50. Untuk mengetahui perbedaan aktivitas  antioksidan  antara  ekstrak  etanolik herba alfalfa digunakan uji Tukey .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Identifikasi tanaman alfalfa
Determinasi  ini  dilakukan  dengan tujuan  untuk  mengetahui  bahwa  buah  yang akan  digunakan  dalam  penelitian  adalah benar-benar tanaman yang dimaksud. Adapun  hasil  determinasi  dari  tanaman alfalfa adalah sebagai berikut:1b – 2b – 3b – 4b  –  12b  –  13b  –  14b  –  17b  –  18b  –  19b  –
20b – 21b – 22b – 23b – 24b – 25b – 26b – 27a – 28b – 29b – 30b – 31a – 32a – 33a – 34a – 35a – 36a – 37b – 38b – 39b – 41b – 42b  –  43a  -  ………………………..14, Medicago (Backer and Van de Brink). Pembuatan serbuk simplisia Penyerbukan  simplisia  bertujuan untuk memperluas permukaan dari simplisia, sehingga akan mempermudah kelarutannya. Ekstrak Etanolik Herba Alfalfa ( Medicago sativa L.)
Ekstrak yang diperoleh dari proses maserasi adalah  32,65  gram  dengan  randemen 32,65%. Penentuan panjang gelombang (λ) maksimal larutan  DPPH 0,1 mM Hasil penentuan panjang
gelombang  maksimal  DPPH  0,1  mM  pada nilai  absorbansi  tertinggi  yaitu  pada  λ  525 nm,  sehingga  pengujian  sampel  dan  kontrol positif dilakukan pada λ 525 nm (Gambar 1). Operating  time vitamin  C  dengan  DPPH 0,1 mM
Hasil  penentuan operating  time vitamin  C  dengan  DPPH  0,1  (Tabel  I).
Gambar I. Grafik penentuan panjang gelombang maksimal DPPH 0,1 mM
Tabel I. Penentuan operating time vitamin C dengan DPPH 0,1 mM
Waktu (menit ke -) Absorbansi 0 0,664 5 0,665 10 0,667 15 0,670 20 0,671 25 0,674 30 0,675 35 0,662 40 0,660 45 0,657 50 0,655 55 0,652
60
0,650
0.724 0.726 0.728 0.73 0.732 0.734 0.736 0.738 51 5 51 6 51 7 51 8 51 9 52 0 52 1 52 2 52 3 52 4 52 5 52 6 52 7 52 8 52 9 53 0 panjang gelombang (nm) ab so rb an si
Tabel  I  (Gambar  2)  menunjukkan bahwa operating  time dengan  serapan  yang stabil  terjadi  pada  absorbansi  stabil  yaitu pada  menit  ke  15  sampai  30.  Maka pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan pada  menit  ke  30  setelah  dilakukan penambahan  senyawa  kompleks  radikal bebas  DPPH  0,1  mM  dengan  ekstrak  herba alfalfa dan vitamin C
.
Gambar 2. Hasil penentuan operating time larutan DPPH 0,1mM

## Uji aktivitas antioksidan
Hasil  uji  Aktivitas  antioksidan perasan  ekstrak  etanolik  herba  alfalfa dengan  metode  DPPH  dapat  dilihat  pada Tabel II di  bawah ini. Tabel  II  menunjukkan  semakin besar konsentrasi maka aktivitas antioksidannya  juga  semakin  besar  ditandai dengan perubahan warna dan nilai absorbansi.  Senyawa  yang  dimungkinkan berperan sebagai antioksidan adalah flavonoid dan vitamin C (Gambar 3).
Tabel  II.  Aktivitas  antioksidan  perasan  ekstrak  etanolik  herba  alfalfa  dengan  metode
DPPH Sampel Konsentrasi sampel (µg/ml) Absorbansi* Aktivitas antioksidan (%)* Persamaan garis Vitamin C 1 0,679 7,87 Y  = 8,5546x+2,9952 r   = 0,9853 2 0,589 20,08 4 0,415 43,69 8 0,231 68,66 Ekstrak etanolik herba alfalfa 10 0,640 13,16 Y   = 0,5509x+14,113 r   = 0,9403 20 0,532 27,82 40 0,417 43,42 80 0,334 54,68
Absorbansi blanko DPPH pada pengukuran aktivitas antioksidan = 0,737
Ket : * = hasil tersebut merupakan hasil dari 3 kali pengukuran
0.635 0.64 0.645 0.65 0.655 0.66 0.665 0.67 0.675 0.68 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Waktu (menit ke) A bs or ba ns i
+  AH
+       A ● Difenilpikrilhidrazil Antioksidan Difenilpikrilhidrazil non radikal
Gambar 3. Reaksi peredaman DPPH dengan senyawa antioksidan (Molyneux, 2004) . Metode  DPPH  digunakan  pada pengujian  aktivitas  antioksidan.  Metode  ini berdasarkan pada kemampuan suatu senyawa  antioksidan  untuk  mengurangi radikal  DPPH  melalui  mekanisme  donasi atom  hidrogen.  Sebagai  pembanding  yang berfungsi sebagai  kontrol positif  dari zat uji yang  mengandung  senyawa  antioksidan digunakan vitamin C. Dari data pada Tabel
II  dibuat  grafik  hubungan  antara konsentrasi  ekstrak  etanolik  herba  alfalfa serta  pembanding  vitamin C  dengan persentase  aktivitas  antioksidan  (Gambar  4 dan 5). Dari Gambar 4 dan 5 dapat diketahui bahwa  seiring  dengan  kenaikan  konsentrasi sampel  yang  digunakan  maka  aktivitas antioksidan juga semakin besar.
Gambar  4.  Grafik  hubungan  antara  konsentrasi    vitamin  C  (µg/ml) dengan  aktivitas antioksidan (%) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 A kti v itas ant ioksidan (% ) Konsentrasi vitamin C (mcg/ml) N N ● NO 2 O 2 N NO 2 N NH NO 2 O 2 N NO 2
Gambar  5.  Grafik  hubungan  antara  konsentrasi  ekstrak  etanolik  herba  alfalfa (µg/ml) dengan aktivitas antioksidan (%)
Inhibition Concentration (IC 50 ) Nilai  IC 50 ekstrak  etanolik  herba alfalfa  dan    vitamin  C  dapat  dilihat  pada Tabel  III  dibawah  ini.  Dari  data  pada  Tabel III  dibuat  grafik  hubungan  antara  log
konsentrasi  ekstrak  etanolik  herba  alfalfa dengan hasil probit (Gambar 6), serta grafik hubungan  antara  log  konsentrasi  vitamin  C dengan hasil probit (Gambar 7).
Tabel III. Nilai IC 50 ekstrak etanolik herba alfalfa dan  vitamin C Sampel Konsentrasi sampel (µg/ml) Log konsentrasi Probit Nilai IC 50 (µg/ml) ± Ekstrak etanolik herba alfalfa 10 1,000 0,149 Y    = 0,4674x-0,3312 r      = 0,997 IC 50 = 59,339
20 1,301 0,262 40 1,602 0,409 80 1,903 0,569 Vitamin C 1 0,000 0,074 Y    = 0,6827x + 0,0425
r      = 0,992
IC 50 = 4,768 2 0,301 0,210 4 0,602 0,435 8 0,903 0,684
Gambar 6. Grafik hubungan antara log konsentrasi ekstrak dengan hasil probit
0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 A kti v itas ant ioksidan Konsentrasi sampel (mcg/ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0 0.5 1 1.5 2 Pr ob it Log Konsentrasi
Gambar 7. Grafik hubungan antara log konsentrasi vitamin C dengan hasil probit
Dari  data  tabel  III,  menunjukkan bahwa  besarnya  konsentrasi  sampel  yang dapat  menghambat  50%  absorbansi  DPPH (IC 50 ) dengan taraf kepercayaan 95% adalah pada konsentrasi 59,339 µg/ml untuk ekstrak etanolik  herba  alfalfa.  Semakin  kecil  nilai IC 50 berarti semakin kuat daya antioksidannya.  Nilai  IC 50 dari    ekstrak etanolik  herba  alfalfa  lebih  besar  dari  nilai IC 50 vitamin  C  yaitu  sebesar  4,768  µg/ml. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  daya  aktivitas antioksidan ekstrak etanolik herba alfalfa 10 kali  lebih  kecil  dibanding  dengan  daya aktivitas  antioksidan  vitamin  C  dengan menggunakan metode DPPH. Uji normalitas data dengan
Shapiro-Wilk menunjukkan  hasil  yang signifikan.  Hasil  ini  menunjukkan  data homogen  dan  normal.  Dari  uji  T diketahui bahwa  perbedaan  aktivitas  antioksidan antara  perasan tanaman alfalfa tidak signifikan  dengan  nilai  signifikansi  0,971 (p>0,05).
Uji  kualitatif  golongan  senyawa  aktif ekstrak  herba  alfalfa  dengan    metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Dari Tabel IV menunjukkan bahwa golongan  senyawa  aktif  dalam  ekstrak etanolik herba alfalfa adalah flavonoid.
Tabel IV. Nilai Rf golongan senyawa dalam ekstrak herba alfalfa
No . Pembanding Rf Golongan senyawa dalam sampel Rf 1 Rutin 0,62 Flavonoid 0,76 2 Vitamin C 0,71 Vitamin C Negatif KESIMPULAN 1. Ekstrak etanolik herba alfalfa mempunyai aktivitas antioksidan
dengan metode DPPH.
2. Nilai  IC 50 dari  ekstrak  etanolik  herba alfalfa  sebesar  59,339  µg/ml  dan vitamin C 4,768 µg/ml.
3. Senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam ekstrak  etanolik  herba  alfalfa  adalah flavonoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2007, Antiaging atau Antipenuaan , http://www.medicastore.com , diakses tanggal 6 Maret 2008.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia, 1986, Sediaan Galenik, Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia, Jakarta, 8, 12, 13, 16. Hanani,  E.,  Mun’im,  A.,  dan  Sekarini,  R., 2005, Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam Spons Callyspongia  SP  dari  Kepulauan Seribu, Majalah Ilmu Kefarmasian ,
2 , 3, 130.
Jork,  H.,  Funk,  W.,  Fischer,  W.,  and Wimmer,  H.,  1990, Thin  Layer Chromatography Reagents and
Detecsion  Methods ,    Volume  1a, VCH, New York,
Kumalaningsih, S., 2006, Antioksidan Alami Penangkal  Radikal  Bebas ,  Trubus
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 Pr ob it Log Konsentrasi
Agrisarana,    Surabaya,  17-21,  34- 35, 40.
Mursyidi,  1984, Statistika  Farmasi  dan Biologi , Gratia Indonesia, 20.
Molyneux, P., 2004, The  Use  of  The  Stable Free  Radical  Diphenylpicrilhidrazil (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity, J. Sci. Techn , 26 (2), 211- 219.
Nugraheni,  2007,  Perbandingan  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Metanol  dan
Ekstrak  Etanol  Daun  Tempuyung ( Sunchus arvensis
L.) serta Penentuan  EC 50 dengan  Metode DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil), Skripsi , 36-39, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi, Semarang.
Voigt,  1995, Buku  Pelajaran  Teknologi Farmasi , diterjemahkan oleh Soendari Noerrono Soewandi,
Gadjah  Mada  University  Press, Yogyakarta, 25.
Wagner,  H.,  1984, Plant  Drug  Analysis  a Thin  Layer  Chromatography  Atlas , Springer, Verlag, 164.