## Indonesian Dental Association

## Journal of Indonesian Dental Association
http://jurnal.pdgi.or.id/index.php/jida ISSN: 2621-6183 (Print); ISSN: 2621-6175 (Online)
Research Article
Antibiofilm of Arumanis Mango Leaves ( Mangifera indica L.)

## Ethanol Extract Against Staphylococcus aureus in vitro
Evangelista Rachel Hepziba 1 , Sheila Soesanto 2§ , Armelia Sari Widyarman 3
1 Undergraduate student, Faculty of Dentistry, Universitas Trisakti University, Indonesia
2 Department of Pharmacology, Faculty of Dentistry, Universitas Trisakti, Indonesia 3 Department of Microbiology, Faculty of Dentistry, Universitas Trisakti, Indonesia

## KEYWORDS
dentoalveolar abscess; Staphylococcus aureus;
Mangifera indica L.; antibacterial; antibiofilm

## ABSTRACT
Introduction: Staphylococcus aureus is a pathogen bacteria that forms biofilm and induces acute inflammation associated with dentoalveolar abscess, which needs antibiotics such as amoxicillin for the treatment. Due to antibiotic resistance and various side effects, natural ingredients are needed as an alternative treatment. Arumanis mango leaves ( Mangifera indica L.) contains mangiferin, flavonoid, and tannin which are expected to inhibit the growth of Staphylococcus aureus and its biofilm formation. Objective: The aim of this study was to determine the antibacterial and antibiofilm effects of Mangifera indica L. leaves against Staphylococcus aureus in vitro. Methods: This study was in vitro laboratory experiment with post test only control group design. Antibacterial test was carried out by plate count method and antibiofilm test was carried out by microtiter plate biofilm assay method. Staphylococcus aureus ATCC 25923 was cultured in BHI broth in 37 o C for 24h with anaerobic condition. The present study used ethanol extract of Mangifera indica L. leaves in 6 different concentrations: 3,125%, 6,25%, 12,5%, 25%, 50%, and 100%. Amoxicillin was used as positive control and DMSO 10% used as negative control. Data was analyzed with Shapiro-wilk test, One-way ANOVA test, and post hoc Tukey HSD test with p<0,05 as the level of significance. Results: The most effective concentration to inhibit the growth of Staphylococcus aureus was 100% extract compared to negative control (p<0,05). The most effective concentration against Staphylococcus aureus biofilm formation was 100% extract in 3hr incubation compared to negative control (p<0,05). Conclusion: Ethanol extract of Mangifera indica L. leaves has been shown in vitro to have antibacterial and antibiofilm properties against Staphylococcus aureus .
§ Corresponding Author E-mail address: sheilasoesanto@trisakti.ac.id (Soesanto S)
DOI: 10.32793/jida.v5i2.846
Copyright: ©2023 Hepziba ER, Soesanto S, Widyarman AS. This is an open access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium provided the original author and sources are credited.
Received date: February 14, 2022. Accepted date: August 5, 2022. Published date: January 9, 2023.

## KATA KUNCI
abses dentoalveolar; Staphylococcus aureus ; Mangifera indica L.;
antibakteri; antibiofilm

## ABSTRAK
Pendahuluan: Staphylococcus aureus adalah bakteri patogen yang berperan dalam pembentukan biofilm serta menginduksi terjadinya inflamasi akut terkait abses dentoalveolar, sehingga dibutuhkan antibiotik seperti amoksisilin dalam perawatannya. Sehubungan dengan terjadinya resistensi dan berbagai efek samping dari pemakaian antibiotik, maka diperlukan bahan alam sebagai alternatif pengobatan. Daun mangga arumanis ( Mangifera indica L.) mengandung mangiferin, flavonoid, dan tanin yang diharapkan dapat menghambat pertumbuhan bakteri dan pembentukan biofilm Staphylococcus aureus . Tujuan: Mengetahui efek antibakteri dan antibiofilm daun Mangifera indica L. terhadap Staphylococcus aureus secara in vitro. Metode: Eksperimental laboratoris secara in vitro dengan rancangan post test only control group design . Uji antibakteri dilakukan dengan metode plate count dan uji antibiofilm dilakukan dengan metode microtiter plate biofilm assay . Staphylococcus aureus ATCC 25923 dikultur menggunakan media BHI-B pada suhu 37 o C selama 24 jam dalam kondisi anaerob. Larutan uji yang digunakan adalah ekstrak etanol daun Mangifera indica L. dalam 6 konsentrasi yang berbeda, yaitu 3,125%, 6,25%, 12,5%, 25%, 50%, dan 100%. Amoksisilin digunakan sebagai kontrol positif dan DMSO 10% sebagai kontrol negatif. Data dianalisis menggunakan uji Shapiro-wilk , uji ANOVA satu jalan, dan uji post hoc Tukey HSD (p<0,05). Hasil: Ekstrak konsentrasi 100% memiliki efek antibakteri paling efektif dibandingkan kontrol negatif (p<0,05). Ekstrak konsentrasi 100% masa inkubasi 3 jam memiliki efek antibiofilm paling efektif dibandingkan kontrol negatif (p<0,05). Kesimpulan: Ekstrak etanol daun Mangifera indica L. terbukti memiliki efek antibakteri dan antibiofilm terhadap Staphylococcus aureus secara in vitro .

## PENDAHULUAN
Abses dentoalveolar merupakan rongga patologis berisi pus akibat karies sekunder, trauma, kegagalan perawatan saluran akar (PSA), dan oral hygiene (OH) yang buruk. Faktor-faktor ini mendukung perkembangan Staphylococcus aureus yang berperan penting dalam pembentukan abses dentoalveolar. 1,2
Staphylococcus aureus termasuk bakteri Gram positif yang terdapat pada membran mukosa dan kulit manusia maupun hewan. S.aureus merupakan mikroflora normal yang tidak menyebabkan penyakit, namun saat terjadi penurunan daya tahan tubuh dan ketidakseimbangan mikroorganisme, S. aureus akan berkembang menjadi patogen. Infeksi akibat bakteri ini antara lain peradangan, nekrosis, infeksi mukosa dan kulit, infeksi saluran pernafasan, serta terjadinya abses. 3,4 Pembentukan biofilm merupakan tahap awal terjadinya abses dentoalveolar melalui kolonisasi beberapa bakteri sehingga menimbulkan respon inflamasi. 1,2 S. aureus memiliki biofilm berlapis yang tertanam dalam lapisan glikokalik dengan ekspresi protein heterogen. 5 Faktor virulensi S. aureus dalam pembentukan biofilm antara lain kapsul, adhesin, koagulase, hyaluronidase, stafilokinase, α toksin, β toksin, enterotoksin, dan leukosidin. 6 Abses dentoalveloar harus diatasi secara dini melalui tindakan insisi drainase, perawatan saluran akar, pemberian antibiotik, dan pencabutan gigi untuk mencegah penyebaran lebih lanjut ke struktur anatomi yang berdekatan. 7
Antibiotik yang sering digunakan untuk mengatasi abses dentoalveolar antara lain amoksisilin, penisilin, metronidazole, klindamisin, sefalosporin, dan eritromisin. 1,2 Amoksisilin merupakan antibiotik spektrum luas turunan penisilin yang menghambat bakteri Gram positif dan negatif melalui pengikatan pada Penicillin Binding Protein (PBP) yang akan menghambat proses transpeptidasi. Namun demikian, amoksisilin dapat menimbulkan efek samping seperti mual, muntah, dan diare. 8,9
Belakangan ini, resistensi bakteri terhadap antibiotik meningkat, akibatnya infeksi yang bersifat sedang sulit dikendalikan. Hal ini terjadi akibat penggunaan antibiotik secara berlebihan maupun tidak tepat sasaran. 10 Resistensi akan mengurangi efektivitas obat sehingga bakteri gagal memberikan respons terhadap pengobatan dan meminimalkan kadar hambat bakteri pada pemberian dosis normal. 11 Penelitian terhadap daging mentah yang terkontaminasi S. aureus di Nepal menunjukkan adanya resistensi terhadap amoksisilin. 12 Hasil studi meta analisis terhadap antimikrobial yang sering digunakan di Ethiopia menunjukkan adanya tingkat resistensi S. aureus yang tinggi terhadap amoksisilin sebesar 77% (95% confidence interval (CI): 68%, 0.85%). 13
Alternatif pengobatan herbal banyak dikembangkan untuk meminimalkan efek samping dan resistensi dari antibiotik. Campuran berbagai komponen aktif pada obat herbal akan menimbulkan efek antibakterial yang sinergis sehingga bermanfaat dalam menimbulkan efek terapi.
Salah satu pengobatan herbal dengan mangiferin sebagai komponen aktif yang bersifat antibakteri adalah daun M. indica L atau mangga arumanis. Daun M. indica L. dapat mengobati berbagai macam penyakit seperti demam, diare, diabetes, infeksi saluran pernafasan, infeksi gigi dan gusi. Ekstrak etanol daun M. indica L mengandung senyawa metabolit sekunder seperti fenol (mangiferin, tanin, flavonoid), alkaloid, saponin, dan steroid yang memiliki khasiat antibakteri, antimikroba, antioksidan, antiinflamasi, antifungal, antivirus, antialergi, antidiabetes, antikanker, antitumor, dan analgesik. Fenol pada daun M. indica L. dapat menghambat pertumbuhan Escherichia coli, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pyogenes, Bacillus cereus , dan Staphylococcus aureus . Hasil studi yang menelaah tentang daun M. indica L menyatakan bahwa tidak ada resistensi daun M. indica L terhadap S. aureus . 14 Oleh sebab itu, penelitian ini bertujuan untuk menetapkan efek ekstrak etanol daun M. indica L. terhadap pertumbuhan dan pembentukan biofilm S. aureus secara in vitro .

## BAHAN DAN METODE
Jenis penelitian ini adalah eksperimental laboratoris secara in vitro dengan rancangan post test only control group design yang dilakukan di Laboratorium Microbiology Centre of Research and Education (MiCORE), Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Trisakti, Jakarta, Indonesia. Larutan uji yang digunakan pada penelitian ini adalah Dimetil Sulfoksida (DMSO) 10% sebagai kontrol negatif, amoksisilin sebagai kontrol positif, dan ekstrak etanol daun M. indica L. dengan konsentrasi 3,125%, 6,25%, 12,5%, 25%, 50%, dan 100%. Penelitian ini memiliki 8 kelompok perlakuan dengan 3 kali pengulangan pada setiap kelompok yang dihitung dengan rumus Federer (n = jumlah pengulangan dan t = jumlah kelompok perlakuan dalam penelitian) sebagai berikut :
(n-1)(t-1) > 15 (n-1)(8-1) > 15 (n-1)(7) > 15 n-1 > 2,142 n > 3,142 = 3 kali pengulangan Ekstrak Etanol Daun M. indica L.
Pembuatan ekstrak etanol daun mangga arumanis ( Mangifera indica L.) dilakukan di Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat (BALITTRO) di Bogor, Jawa Barat, Indonesia. Ekstrak etanol daun M. indica L. dibuat dengan metode maserasi. Daun mangga dicuci, dikeringkan, dan dihaluskan. Serbuk daun mangga
direndam menggunakan pelarut etanol 70% dengan perbandingan 1:5. Proses maserasi dilakukan selama 2-3 jam lalu hasil maserat didiamkan selama 24 jam dan disaring hingga didapatkan ekstrak kental. Ekstrak 100% diencerkan dengan DMSO 10% hingga didapatkan ekstrak konsentrasi 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, dan 3,125%.

## Kultur Bakteri
Staphylococcus aureus ATCC 25923 dari Laboratorium MiCORE, Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Trisakti yang dikultur pada medium Brain Heart Infusion Broth /BHI-B (Sigma Aldrich, Burlington, Amerika) dan diinkubasi dalam anaerobic jar (Oxoid, Basingstoke, Inggris) dengan suhu 37 o C selama 24 jam dalam kondisi anaerob. Kemudian, dilakukan pengukuran absorbansi hingga didapatkan standar McFarland 0,5 = 1,5 x 10 8 CFU/mL (OD 600 = 0,132).

## Plate Count
Uji antibakteri dilakukan dengan metode mikrodilusi. Staphylococcus aureus ATCC 25923 yang telah dikultur didistribusikan ke dalam sumuran 96 -well plates (Nest Biotech, Jiangsu, Cina) menggunakan mikropipet (Lambda, San Fransisco, Amerika) sebanyak 100 μ L. Larutan uji sebanyak 100 μ L ditambahkan ke dalam sumuran dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam dalam keadaan anaerob. Kemudian, masing-masing perlakuan diencerkan sebanyak 10.000 kali lalu diambil sebanyak 5 μ L dan diletakkan pada media Brain Heart Infusion Agar (BHI-A) dalam cawan petri. Pertumbuhan koloni bakteri dihitung setelah diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam.

## Microtiter Plate Biofilm Assay
Kultur bakteri sebanyak 200 μ L dimasukkan pada setiap sumuran 96- well plates menggunakan mikropipet dan diinkubasi dalam inkubator (Jisico, Seoul, Korea Selatan) pada suhu 37 o C selama 24 jam dalam keadaan anaerob. Kemudian setelah diinkubasi, supernatan yang terbentuk dibuang hingga tersisa selapis tipis pada permukaan sumuran dan dibilas menggunakan Phosphate Buffer Saline /PBS (Biomatik, Ontario, Kanada). Ekstrak etanol daun M. indica L. konsentrasi 3,125%, 6,25%, 12,5%, 25%, 50%, dan 100%, amoksisilin sebagai kontrol positif, dan biofilm tanpa perlakuan sebagai kontrol negatif ditambahkan pada masing-masing sumuran sebanyak 200 μ L. Kemudian diinkubasi selama 1, 3, dan 24 jam pada suhu 37 o C. Sumuran dibilas sebanyak 2 kali dengan PBS dan difiksasi diatas api. Kristal violet (Merck, Darmstadt, Jerman) ditambahkan dalam sumuran sebanyak 200 μ L dan didiamkan selama
(n-1)(t-1) > 15
15 menit. Pembilasan dilakukan lagi sebanyak 2 kali dan didiamkan selama 15 menit. Etanol 96% ditambahkan sebanyak 200 μ L lalu dilakukan pengukuran Optical Density (OD) menggunakan microplate reader (Safas, Monaco, Monako) dengan panjang gelombang 490 nm.

## Analisis Statistik
Data penelitian diolah dengan program komputer Statistical Product and Service Solution (SPSS) versi 26. Uji normalitas menggunakan metode Shapiro-Wilk . Jika data terdistribusi normal (p>0,05), maka dilanjutkan dengan uji Analysis of Variance (ANOVA) satu jalan. Kelompok data yang bermakna (p<0,05) akan dilanjutkan dengan uji post hoc menggunakan metode Tukey Honestly Significance Difference (HSD) dengan tingkat kemaknaan p<0,05 untuk mengetahui adanya perbedaan bermakna antar kelompok.

## HASIL
Hasil uji antibakteri menggunakan metode plate count menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun M. indica L. menghambat pertumbuhan S. aureus (Gambar 1 dan 2). Ekstrak konsentrasi 100% memperlihatkan efek antibakteri yang paling efektif terhadap S. aureus dengan total koloni sebesar (1 ± 0,58) x 106 CFU/mL.
Hasil uji biofilm metode microtiter plate biofilm assay menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun M. indica L. memiliki efek antibiofilm terhadap S. aureus . Ekstrak konsentrasi 25% memiliki tertinggi terhadap biofilm S. aureus setelah inkubasi 1 jam dengan nilai OD 0,08 ± 0,01 (Gambar 3). Ekstrak konsentrasi 100% memiliki daya hambat tertinggi terhadap biofilm S. aureus setelah inkubasi 3 jam dengan nilai OD 0,14 ± 0,05 (Gambar 4). Pada masa inkubasi 24 jam, konsentrasi 100% memiliki daya hambat tertinggi terhadap biofilm S. aureus dengan nilai OD 0,15 ± 0,04 (Gambar 5).
Hasil uji normalitas menunjukkan bahwa seluruh kelompok data terdistribusi normal (p>0,05) dan terdapat perbedaan bermakna antar larutan uji (p<0,05). Hasil uji post hoc Tukey HSD pada uji antibakteri, seluruh konsentrasi larutan uji menunjukkan perbedaan bermakna terhadap kontrol negatif.
Pada uji antibiofilm pada masa inkubasi 1 jam, ekstrak etanol daun M. indica L. mulai konsentrasi 12,5% berbeda bermakna terhadap kontrol negatif. Pada masa inkubasi 3 jam seluruh konsentrasi ekstrak etanol daun M. indica L. berbeda bermakna terhadap kontrol negatif. Sementara itu, masa inkubasi 24 jam, ekstrak etanol daun M. indica L. mulai konsentrasi 50% berbeda bermakna terhadap kontrol negatif.
Gambar 1. Hasil uji daya hambat pertumbuhan S. aureus metode plate count
Gambar 2. Pertumbuhan total koloni S. aureus setelah diberikan ekstrak etanol daun M. indica L. Amoksisilin digunakan sebagai kontrol positif dan DMSO 10% sebagai kontrol negatif
Gambar 3. Pembentukan biofilm S. aureus setelah diberikan ekstrak etanol daun M. indica L. pada masa inkubasi 1 jam. Amoksisilin digunakan sebagai kontrol positif dan biofilm tanpa perlakuan sebagai kontrol negatif
Gambar 4. Pembentukan biofilm S. aureus setelah diberikan ekstrak etanol daun M. indica L. pada masa inkubasi 3 jam. Amoksisilin digunakan sebagai kontrol positif dan biofilm tanpa perlakuan sebagai kontrol negative
Gambar 5. Pembentukan biofilm S. aureus setelah diberikan ekstrak etanol daun M. indica L. pada masa inkubasi 24 jam. Amoksisilin digunakan sebagai kontrol positif dan biofilm tanpa perlakuan sebagai kontrol negative

## PEMBAHASAN
Penelitian ini menggunakan jenis mangga arumanis yang memiliki kandungan mangiferin tertinggi dibandingkan jenis mangga lainnya. 15 Belum banyak penelitian tentang daun M. indica L. sebagai antibakteri dan antibiofilm terhadap S. aureus in vitro , maka pada penelitian ini digunakan konsentrasi ekstrak dari 3,125% hingga 100%. Diharapkan penelitian ini dapat menjadi landasan untuk mendapatkan konsentrasi yang lebih akurat dalam menghambat pertumbuhan dan pembentukan biofilm S. aureus .
Pada uji antibakteri, seluruh konsentrasi ekstrak etanol daun M. indica L. menunjukkan jumlah koloni bakteri yang lebih sedikit dan berbeda bermakna
(p<0,01) terhadap kontrol negatif. Hal ini membuktikan ekstrak memiliki efek antibakteri terhadap pertumbuhan S. aureus secara in vitro . Sejalan dengan bertambah besarnya konsentrasi ekstrak, jumlah koloni bakteri yang terbentuk semakin sedikit. Ekstrak menghambat pertumbuhan S. aureus mulai konsentrasi 3,125% dan konsentrasi 100% memiliki efek antibakteri paling efektif dengan total koloni bakteri paling sedikit yaitu sebesar (1±0,58) x 106 CFU/mL. Hasil penelitian ini sejalan dengan penelitian Kurniasih dkk bahwa ekstrak daun M. indica L menghambat pertumbuhan S. mutans menggunakan metode yang berbeda, yaitu metode difusi cakram. Diameter zona hambat yang terbentuk pada penelitian ini bertambah besar sejalan dengan bertambah tingginya konsentrasi ekstrak. 16 Ekstrak daun M. indica L. menunjukkan aktivitas antibakteri yang poten dinyatakan oleh Cardenas et al. yang melakukan perbandingan aktivitas antibakteri ekstrak etanol dan ekstrak hidroalkoholik daun M. indica L terhadap S. aureus . Pada penelitian ini, ekstrak M. indica L. dengan pelarut hidroalkoholik 50% dan 100% menunjukkan zona hambatan yang lebih besar daripada pelarut etanol. 10
Penelitian ini menggunakan tiga masa inkubasi pada metode biofilm assay yaitu 1 jam, 3 jam, dan 24 jam. Pembentukan biofilm terjadi pada menit pertama di mana terjadi fase pembentukan pelikel, dilanjutkan fase adhesi inisial selama 2 sampai 4 jam, dan fase maturasi sel selama 24 jam. Pada tahap ini, biofilm sudah terbentuk sempurna 1.000-1.500 kali lebih resisten dibandingkan bakteri planktonik. 17 Perbedaan waktu ini bertujuan untuk mengetahui waktu yang paling efektif dibutuhkan oleh ekstrak etanol daun M. indica L. dalam menghambat pembentukan biofilm S. aureus .
Hasil uji antibiofilm menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun M. indica L. dapat menghambat pertumbuhan biofilm S. aureus secara in vitro. Pada masa inkubasi 1 jam ekstrak etanol daun M. indica L. menghambat pembentukan biofilm S. aureus pada paling efektif pada konsentrasi 25% (OD = 0,08 ± 0,01). Ekstrak konsentrasi 12,5% hingga 100 % memiliki nilai OD lebih kecil (p<0,01) dan berbeda bermakna terhadap kontrol positif. Dengan demikian, ekstrak mulai 12,5% lebih efektif dibanding kontrol positif. Sementara itu, pada inkubasi 3 jam, seluruh konsentrasi ekstrak memiliki nilai OD yang lebih rendah dan berbeda bermakna (p<0,01) terhadap kontrol negatif, yang berarti bahwa seluruh konsentrasi ekstrak memiliki daya hambat terhadap pembentukan biofilm S. aureus dan ekstrak konsentrasi 50% (OD = 0,18 ± 0,07) memiliki efek antibiofilm paling efektif. Ekstrak konsentrasi 50% dan 100% memiliki efek antibiofilm terhadap S. aureus lebih efektif dibandingkan dengan kontrol positif. Hal ini ditunjukkan dengan nilai OD lebih kecil dan berbeda bermakna terhadap kontrol
positif. Pada masa inkubasi 24 jam, ekstrak etanol daun M. indica L. konsentrasi 50% (OD = 0,23 ± 0,02) memiliki efek antibiofilm paling efektif. Ekstrak konsentrasi 50% dan 100% menunjukkan hasil lebih efektif dibandingkan dengan kontrol positif. Bila dibandingkan dengan masa inkubasi 3 jam, aktivitas antibiofilm ekstrak konsentrasi 3,125%, 6,25%, dan 12,5% bersifat bakteriostatik yang dibuktikan dengan peningkatan nilai OD pada masa inkubasi 24 jam. 18 Berdasarkan hasil di atas, maka ekstrak etanol daun M. indica L. menghambat pembentukan biofilm S. aureus terbaik pada masa inkubasi 3 jam, yaitu pada fase adhesi inisial.
Pembentukan biofilm dapat didefinisikan sebagai salah satu penyebab utama bakteri mengembangkan resistensi terhadap antibiotik. 19 Biofilm yang dihasilkan S. aureus memiliki lapisan polisakarida ekstraseluler homolog sebagai matriks yang membantu adhesi koloni bakteri ke permukaan yang berbeda-beda. Selain itu, biofilm dapat memperpanjang waktu kolonisasi S. aureus , infeksi, dan penyebaran ke berbagai bagian tubuh. 20 Hasil penelitian ini menunjukkan, bahwa ekstrak etanol daun M. indica L. yang mengandung senyawa fenolik, flavonoid, saponin, tanin, alkaloid, dan steroid yang memiliki potensi sebagai antibakteri dan antibiofilm terhadap S. aureus . 20 Senyawa fenol yang paling banyak terdapat pada daun M. indica L. adalah mangiferin yang memiliki efek antimikroba. Flavonoid mengubah membran sitoplasma yang mengakibatkan terhambatnya pertukaran nutrisi dan metabolit sehingga suplai energi bakteri berkurang yang diikuti kematian bakteri.
21 Pada proses pembentukan biofilm, flavonoid dapat mengganggu mekanisme quorum sensing yang merupakan sistem komunikasi antar sel dengan berbagai fungsi seluler seperti patogenesis, perolehan nutrisi, konjugasi, motilitas, dan produksi metabolit sekunder dari bakteri. 22,23 Saponin dapat meningkatkan permeabilitas membran dan dinding sel melalui proses difusi sehingga mengganggu kestabilan sel. 24 Tanin bekerja dengan melarutkan lapisan lemak dan mengikat protein pembentuk dinding sel. 25 Alkaloid mengganggu terbentuknya dinding peptidoglikan sel bakteri sehingga tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel. 26 Senyawa steroid dalam interaksinya dengan fosfolipid sel juga dapat menyerang membran lipid sehingga terjadi kebocoran lisosom yang menurunkan integritas membran sel serta diikuti lisisnya sel. 24
Perkembangan biofilm dipengaruhi oleh pelepasan senyawa polimer ekstraseluler yang dimediasi oleh quorum sensing (QS) yang berperan dalam meregulasi gen termasuk faktor virulensi pada S. aureus . Mangifera indica L. merupakan QS inhibitor yang dapat menonaktifkan sistem QS sehingga mencegah produksi
faktor virulensi dan menghambat pertumbuhan dari S. aureus . 27
Penelitian ini merupakan penelitian awal, oleh karena itu dibutuhkan penelitian lanjutan untuk mengkonfirmasi hasil penelitian ini. Pada penelitian selanjutnya, diharapkan pada ekstrak etanol daun M. indica L. dilakukan uji toksisitas, preklinis, dan klinis secara in vivo agar dapat menjadi alternatif pengobatan pada abses dentoalveolar dalam mengurangi resistensi akibat pemakaian antibiotik.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun M. indica L. menghambat pertumbuhan S. aureus paling efektif pada konsentrasi 100%. Ekstrak etanol daun M. indica L. menghambat pembentukan biofilm S. aureus paling baik pada masa inkubasi 3 jam, yaitu pada fase adhesi inisial dan konsentrasi 50% menghambat pembentukan biofilm lebih efektif dibanding kontrol positif.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Laboratorium Microbiology Centre of Research and
Education (MiCORE), Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Trisakti karena telah membantu jalannya penelitian ini.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Tidak ada konflik kepentingan dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Sanders JL, Houck RC. Dental Abscess. In: StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2021.
2. Shweta N, Prakash SK. Dental abscess: a microbiological review. Dent Res J. 2013;10(5):585– 591.
3. Archer NK, Mazaitis MJ, Costerton JW, Leid JG, Powers ME, Shirtliff ME. Staphylococcus aureus biofilms: properties, regulation, and roles in human disease. Virulence. 2011;2(5):445–459.
4. Taylor TA, Unakal CG. Staphylococcus aureus. In: StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2021.
5. Periasamy S, Joo H-S, Duong AC, Bach T-HL, Tan VY, Chatterjee SS. How Staphylococcus aureus biofilms develop their characteristic structure. Proc Natl Acad Sci. 2012;109(4):1281–1286.
6. Huang R, Li M, Gregory RL. Bacterial interactions in dental biofilm. Virulence. 2011;2(5):435–444.
7. Siqueira JF, Rôças IN. Microbiology and treatment of acute apical abscesses. Clin Microbiol Rev. 2013;26(2):255–273.
8. Akhavan BJ, Khanna NR, Vijhani P. Amoxicillin. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2021 [cited 2021 May 13]. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK4822
50/
9. Evans J, Hannoodee M, Wittler M. Amoxicillin clavulanate. In: StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2021.
10. Cardenas V, Mendoza R, Chiong L, del Aguila E. Comparison of the Antibacterial Activity of the Ethanol Extract vs Hydroalcoholic Extract of the Leaves of Mangifera indica L. (Mango) in Different Concentrations: An In Vitro Study. J Contemp Dent Pract. 2020;21(2):202-206
11. Humaida R. Strategy to handle resistance of antibiotics. J Major. 2014;3(7):113–120.
12. Bantawa K, Sah SN, Subba Limbu D, Subba P,
Ghimire A. Antibiotic resistance patterns of Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella, Shigella and Vibrio isolated from chicken, pork, buffalo and goat meat in eastern Nepal. BMC Res Notes. 2019;12:766
13. Deyno S, Fekadu S, Astatkie A. Resistance of
Staphylococcus aureus to antimicrobial agents in Ethiopia: a meta-analysis. Antimicrob Resist Infect Control. 2017;6:85
14. Chirayath RB, A. AV, Jayakumar R, Biswas R,
Vijayachandran LS. Development of Mangifera indica leaf extract incorporated carbopol hydrogel and its antibacterial efficacy against Staphylococcus aureus. Colloids Surf B Biointerfaces. 2019;178:377–384. 15. Cahyanto T, Fadillah A, Ulfa RA, Hasby RM,
Kinasih I. Kadar Mangiferin Pada Lima Kultivar Pucuk Daun Mangga (Mangifera indica L.). Al- Kauniyah J Biol. 2020;13(2):242–249. 16. Kurniasih R. Program Studi Pendidikan Dokter Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Muhammadiyah Surakarta 2016. :11.
17. Vukosavljevic D, Custodio W, Buzalaf MAR, Hara AT, Siqueira WL. Acquired pellicle as a modulator for dental erosion. Arch Oral Biol. 2014;59(6):631– 638.
18. Joshua M, Takudzwa M. Antibacterial Properties of Mangifera Indica On Staphylococcus aureus. Afr J Cln Exper Microbiol. 2013;14(2):62-74.
19. Lu L, Hu W, Tian Z, Yuan D, Yi G, Zhou Y, et al. Developing natural products as potential anti-biofilm agents. Chin Med. 2019;14:11-17
20. Ningsih Dr. Ekstrak Daun Mangga (Mangifera Indica L.) Sebagai Antijamur Terhadap Jamur Candida Albicans dan Identifikasi Golongan Senyawanya. J Kim Ris. 2017;2(1):61.
21. Ma Y, Ding S, Fei Y. Antimicrobial activity of cathechins against foodborne pathogens Escherichia coli and Salmonella . Vol. 106. Elsevier; 2019. 78– 80 p.
22. Solano C, Echeverz M, Lasa I. Biofilm dispersion and quorum sensing. Curr Opin Microbiol. 2014;18:96–104.
23. Ikalinus R, Widyastuti SK, Setiasih NLE. Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Kulit Batang Kelor (Moringa oleifera). Indones Med Veterinus. 2015;4(1):75.
24. Madduluri S, Rao KB, Sitaram B. In Vitro Evaluation of Antibacterial Activity of Five Indigenous Plants Extracts Against Five Bacteria Pathogens of Humans. Int J of Pharm and Pharm Sci. 2013;5:679–684.
25. Norhayati N, Ujrumiah S, Noviany A, Carabelly AN. Antibacterial Potential of Kapul Fruit Skin (Baccaurea macrocarpa) on Streptococcus sanguis. Odonto Dent J. 2019;6(2):118.
26. Aksara R, Musa WJA, Alio L. Identifikasi Senyawa Alkaloid Dari Ekstrak Metanol Kulit Batang Mangga (Mangifera indica L.). J Entropi. 2013;3(1):6.
27. Husain FM, Ahmad I, Al-thubiani AS, Abulreesh HH, AlHazza IM, Aqil F. Leaf Extracts of Mangifera indica L. Inhibit Quorum Sensing – Regulated Production of Virulence Factors and Biofilm in Test Bacteria. Front Microbiol.2017;8:727