PENGARUH SUPLEMENTASI EKSTRAK MINYAK HABATUSSAUDA ( Nigella sativa ) TERHADAP REPRODUKSI MENCIT JANTAN ( Mus musculus )
THE EFFECT OF SUPPLEMENTATION EXTRACT OIL HABATUSSAUDA ( Nigella sativa ) ON MALE MICE REPRODUCTION ( Mus musculus )
A Rahmi 1 , Estuningsih S 2 , Agungpriyono DR 2 , A Baharun 1a
1 Program Studi Peternakan Fakultas Pertanian Universitas Djuanda Bogor, Jl. Tol Ciawi No. 1, Kotak Pos 35 Ciawi,  Bogor 16720.
2 Departemen Klinik Reproduksi dan Patologi Sekolah Kedokteran Hewan dan Biomedis IPB University, Jl. Agatis Kampus IPB Dramaga Bogor, 16680
a Korespondensi: Abdullah Baharun, E-mail: abdullah.baharun@unida.ac.id
(Diterima oleh Dewan Redaksi: 14 July 2022) (Dipublikasikan oleh Dewan Redaksi: 30 April 2023 )

## ABSTRACT
The increased of free radicals and DNA damage in spermatozoa may effected to male fertility, so we need  antioxidant  component  to  prevent  the  damage.  Habbatussauda  ( Nigella  sativa )  is  a  herbal indicated  to  improved  spermatogenesis  function.  This  study  was  aimed  to  get  information  about Habbatussauda suplementation effect on mice testicle function. Thirty six male mice of 4 week aged were divided into four group, each group consists of nine mice. Group I was negative control (received aquadest),  group  II  (received  0.1  ml  Habbatussauda  oil  extract),  group  III  (received  0.2  ml Habbatussauda  oil  extract),  and  group  IV (received  0.3  ml  mixed  of  Habbatussauda  oil  extract  and honey).  This  treatment  during  for  two  month,  and  the  mice  were  euthanized  and  necropsied  for collection  testis  organ  as  sample.  The  sample  was  processed  to  prepare  histology  slides  with Hematoxylin-Eosin  stain.  The  parameters  observed  include  to  count  on  and  differenciate  of  the spermatogenic  cells,  Sertoli  cell,  and  Leydig  cell  using  software  Image  J ® .  Qualitative  data  were analyzed with SPSS ® software with ANOVA test and followed by Duncan test. The result showed that Habbatussauda caused increasing of spermatogenic cells, Sertoli cell, and Leydig cell on group II, III, and IV which were significant (P<0.05) with the negative control group.
Keywords: habbatussauda, spermatogenesis, testicle histology

## ABSTRAK
Peningkatan  radikal  bebas  dapat  menyebabkan  kerusakan  pada  DNA  spermatozoa  yang  dapat memengaruhi  fertilitas  pria.  Habatussauda  ( Nigella  sativa )  merupakan  salah  satu  herbal  yang dipercaya  dapat  meningkatkan  fungsi  spermatogenesis  melalui  pencegahan  kerusakan  DNA. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan informasi mengenai efektivitas pemberian Habatussauda terhadap fungsi organ reproduksi mencit jantan melalui gambaran histologi testis. Sebanyak 36 ekor mencit  jantan  berusia  4  minggu  dibagi  ke  dalam  4  kelompok  perlakuan,  sehingga  dalam  setiap kelompok  perlakuan  terdiri  dari  9  ekor  mencit.  Kelompok  I  adalah  kontrol  negatif  (diberikan aquadest), kelompok II (diberikan 0,1 ml ekstrak minyak Habatussauda), kelompok III (diberikan 0,2 ml  ekstrak  minyak  Habatussauda),  dan  kelompok  IV  (diberikan  0,3  ml  campuran  ekstrak  minyak Habatussauda  dan  madu).  Perlakuan  diberikan  selama  2  bulan,  kemudian  mencit  dieuthanasi  dan dikoleksi  organ  testisnya.  Sampel  organ  testis  dibuat  menjadi  preparat  histologi  dan  diwarnai menggunakan  pewarnaan  Hematoksilin-Eosin.  Parameter  yang  diobservasi  adalah  jumlah  dan diferensiasi sel-sel spermatogenik, sel Sertoli, dan sel Leydig dengan menggunakan perangkat lunak Image J ® . Selanjutnya data kualitatif dianalisis dengan menggunakan perangkat lunak SPSS ® versi 20 dengan  menggunakan  uji  ANOVA  dan  diikuti  oleh  uji  lanjut  Duncan.  Hasil  menunjukan  bahwa pemberian ekstrak minyak Habatussauda menyebabkan peningkatan jumlah sel-sel spermatogenik,
sel  Sertoli,  dan  Sel  Leydig  pada  kelompok  perlakuan  II,  III,  dan  IV  secara  signifikan  (P<0,05)  jika dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif.
kata kunci: habatussauda, spermatogenesis, histologi testis
Rahmi A, Estuningsih S, Agungpriyono DR, dan Baharun A. 2023.  Pengaruh Pemberian Ekstrak Minyak Habatussauda  ( Nigella  sativa )  terhadap  Reproduksi  Mencit  Jantan  ( Mus  musculus ). Jurnal Peternakan Nusantara 9 (1): 9-14.

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  tropis dengan  suhu  dan  kelembaban  yang  sesuai untuk  pertumbuhan  berbagai  makhluk hidup,  termasuk  agen  penyakit  infeksius. Dalam menangkal berbagai macam penyakit dibutuhkan  daya  tahan  tubuh  yang  baik. Salah  satu  cara  untuk  meningkatkan  daya tahan  tubuh  adalah  dengan  mengkonsumsi suplemen.  Habatussauda  merupakan  salah satu  jenis  suplemen  makanan  yang  sering digunakan  untuk  meningkatkan  daya  tahan tubuh.  Komponen  bioaktif  Habatussuda seperti thymoquinone dan nigellimin bermanfaat dalam pengobatan kasus COVID- 19 (Rahman, 2020).
Habatussauda  merupakan  produk suplemen  yang  berasal  dari  ekstrak  jintan hitam  ( Nigella  sativa ).  Tanaman  ini merupakan herbal berbunga tahunan (Datta et  al., 2012).  Spesies  tumbuhan  semak rendah  ini  termasuk  dalam family Racunculaceae (Sultana et  al., 2015),  di daerah  subtropis  tumbuh  baik  pada  suhu <20 ˚C (Telafih et al., 2007) dan pH tanah 7,0- 7,8)  (Tuncturk et  al., 2012).  Beberapa penelitian  menunjukkan  efek  jintan  hitam sebagai  antioksidan,  analgesik,  antipiretik, antihipertensi,  bronkhodilator,  anti  ulkus, antibakteri,  imunomodulator,  antijamur, atau pun antihelmentik (Sultana et al., 2015). Jintan  hitam  berpotensi  meningkatkan sistem  kekebalan  tubuh,  antitumor,  dan antidiabetik (Zafar et al., 2016). Jintan hitam efektif sebagai agen antiperadangan dengan menghambat  keluarnya  histamin  pada kejadian asthma (Ikhsan et al., 2018 ). Zafar et al. (2019) melaporkan suplementasi minyak jintan hitam mampu meningkatkan pengobatan  pasien  penyakit  ginjal  kronis stadium 3 dan 4.
Jintan  hitam  dalam  bentuk  komersial dikenal  sebagai  Habatussauda  yang  sering digunakan  sebagai  suplemen  makanan  dan sering dikombinasikan dengan madu. Madu mengandung  senyawa  penofilik  yang berfungsi  sebagai  antioksidan  yang  dapat mencegah  terjadinya  karsinogenesis  dan mutagenesis  (Abdul-Ghani et  al ., 2008). Habatussauda dan  madu  dipercaya  dapat meningkatkan  fertilitas  pada  pria  yang mengkonsumsinya  secara  rutin.  Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efektivitas pemberian  ekstrak  jintan  hitam  atau Habatussauda,  baik  yang  diberikan  secara tunggal  maupun  yang  dikombinasikan dengan  madu  terhadap  fungsi  reproduksi mencit  jantan  melalui  gambaran  histologi organ  testis.  Hasil  penelitian  ini  dapat dijadikan sebagai pembuktian secara ilmiah mengenai pengaruh konsumsi Habatussauda terhadap fungsi reproduksi pria.

## MATERI DAN METODE

## Masa Pra Perlakuan
Sebanyak 36 ekor mencit jantan ( Mus musculus ) usia 4 minggu dipelihara di dalam kandang  dari  kotak  plastik  yang  sudah dimodifikasi.  Digunakan  alas  kandang  dari kain yang diganti setiap hari untuk menjaga kebersihan.  Masa  pra  perlakuan  yaitu pemberian  beberapa  obat-obatan  seperti antihelmintik  (Albendazole)  10  mg/Kg  BB banyak  2  kali  dosis  tunggal  yaitu  pada minggu  1  dan  minggu  ke  3,  antibiotik (Amoxycillin) 1 mg/kg BB diberikan selama 5  hari  berturut-turut,  dan  antijamur (Flagyl ® )  30  mg/kg  BB  selama  5  hari berturut-turut  setelah  konsumsi  antibiotik selesai.  Penentuan  dosis  obat-obatan berdasarkan  Hrapkiewiez  dan  Mediana (2007).

## Masa Perlakuan
Mencit kemudian dibagi menjadi 4 kelompok perlakuan.  Perlakuan  diberikan  secara peroral  dengan  bantuan  sonde  lambung. Kelompok  I  (diberikan  0,1  ml  aquades), kelompok  II  (diberikan  0,1  ml  ekstrak minyak  Habatussauda),  kelompok  III (diberikan 0,2 ml ekstrak minyak
Habatussauda), dan kelompok IV (diberikan 0,3 ml kombinasi ekstrak minyak Habatussauda  dan  madu).  Perlakuan  ini diberikan setiap hari selama 8 minggu.
Koleksi  Sampel,  Pembuatan  Preparat Histologi, dan Parameter Pengamatan Mencit  diterminasi  dengan  cara dislokasi  os  occipitalis  dan  dilakukan pengoleksian organ testis. Selanjutnya organ testis  diproses  menjadi  preparat  histologi dengan menggunakan pewarnaan hematoksilin-  eosin  (HE).  Parameter  yang diamati  adalah  jumlah  dari  sel-sel spermatogenik  yang  ada  di  tubulus seminiferus,  jumlah  sel  Sertoli,  dan  sel Leydig pada 10 buah tubulus seminiferus.

## Analisis Data
Data  kuantitatif  yang  diperoleh dianalisis  secara  menggunakan  uji  ANOVA yang  dilanjutkan  dengan  uji  Duncan menggunakan SPSS ® versi 20.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  jumlah sel-sel spermatogenik pada tubulus seminiferus  didapatkan  dengan  cara menghitung  jumlah  sel  spermatogonia, spermatosit  primer,  spermatosit  sekunder, dan spermatid (Tabel 1).
Hasil analisis menunjukkan pemberian ekstrak  minyak  Habatussauda  dapat meningkatkan jumlah sel-sel spermatogenik, yaitu:  sel  spermatogonia,  spermatosit primer, spermatosit sekunder, dan spermatid pada semua perlakuan (Tabel 1). Jumlah  sel-sel  spermatogenik  lebih  tinggi (P<0,05) pada kelompok yang diberi ekstrak minyak Habatussauda (KII, KIII, dan KIV) jika
dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol negatif  (KI).  Kohladooz et  al. (2014) melaporkan hal serupa yaitu suplementasi 5 ml/hari  ekstrak  minyak Nigella  sativa selama 2 bulan dapat memperbaiki kualitas semen pada pria yang mengalami infertilitas. Marbat et  al. (2013)  turut  melaporkan bahwa terjadi peningkatan volume, viabilitas,  dan  morfologi  sperma  normal pada pria yang mengkonsumsi 2 gram/hari ekstrak Nigella sativa selama 60 hari, selain itu terjadi pula peningkatan signifikan pada level FSH, LH, dan teststeron di dalam serum. Peningkatan  jumlah  sel-sel  spermatogenik, sel  Sertoli,  dan  sel  Leydig  pada  kelompok perlakuan  II,  III,  dan  IV  kemungkinan disebabkan oleh khasiat Habatussauda yang dapat  merangsang  kelenjar  hipofisis  untuk menghasilkan  hormon  perangsang  folikel ( follicle  stimulating  hormone /  FSH)  dan hormon  lutein  ( luteinizing  hormone /  LH). FSH  akan  merangsang  sel  Sertoli  untuk menghasilkan  ABP  ( androgen  binding protein ) yang akan memacu spermatogonium untuk memulai
spermatogenesis,  sedangkan  LH  akan merangsang sel Leydig untuk menghasilkan hormon testosteron (Senger, 2012).
Spermatogenesis  merupakan  proses pembentukan sel spermatozoa, yang terjadi di organ kelamin jantan yaitu testis, tepatnya di  dalam  tubulus  seminiferus  (Agustinus et al. ,  2018).  Tubulus  seminiferus  terdiri  dari sejumlah  besar  sel  germinal  yang  disebut spermatogonia  (jamak).  Sel  spermatogonia terletak di dua sampai tiga lapis luar sel-sel epitel tubulus seminiferus (Agustinus et al. , 2018). Spermatogonia berdiferensiasi melalui tahap-tahap perkembangan tertentu untuk membentuk sperma. Spermatogenesis terdiri  dari  tiga  tahap,  yaitu:  pertama, spermatositogenesis  (spermatogonia  yang mengalami  mitosis  berkali-kali  yang  akan menjadi  spermatosit  primer).  Kedua,  tahap meiosis (meiosis I spermatosit primer akan menjadi spermatosit sekunder, dan meiosis II spermatosit sekunder menjadi spermatid). Ketiga,  tahap  spermiogenesis  (spermatid menjadi spermatozoa).
Ekstrak minyak
Habatussauda mengandung  komponen  antioksidan  yaitu thymoquinone dan  asam  lemak  tak  jenuh seperti asam linoleat dan oleat (Islam et al ., 2017).  Koohladoz et  al. (2014)  melaporkan bahwa  kandungan thymoquinone di  dalam Habatussauda  kemungkinan  mampu  untuk menetralisir  radikal  bebas  di  dalam  semen, selain  itu  kandungan  asam  lemak  tak jenuhnya  mampu  meningkatkan  parameter evaluasi  sperma  seperti  meningkatkan motilitas  spermatozoa  dan  menurunkan jumlah  sperma  abnormal.  Komponen  asam lemak  tak  jenuh  di  dalam  ektrak  minyak Habatussauda  berperan  dalam  sintesis hormon testosteron dengan cara meningkatkan aktivitas  enzim  17  beta- hidroksisteroid  dehydrogenase  (Bashandy, 2006).  Enzim  ini  berperan  penting  dalam sintesa  hormon  testosteron,  sedangkan testosteron  sangat  dibutuhkan  dalam spermatogenesis (Mahdavi et al., 2014).  Ping et  al. (2014)  melaporkan  kandungan thymoquinone dapat  mempengaruhi  enzim fosforilasi oksidatif dan melindungi sel dari radikal  bebas  yang  dapat  memengaruhi kualitas spermatozoa.
Thymoquinone di dalam Habatussauda dilaporkan  dapat  mencegah  terjadinya kerusakan  sel  akibat  stres  oksidatif  (El- Dakhakhny et  al. 2002).  Salah  satu  pemacu terjadinya stres oksidatif adalah keberadaan radikal  bebas.  Radikal  bebas  adalah sekelompok  bahan  kimia  baik  berupa  atom maupun  molekul  yang  memiliki  elektron
tidak  berpasangan  pada  lapisan  luarnya. Radikal  bebas  merupakan  suatu  kelompok bahan  kimia  dengan  reaksi  jangka  pendek yang memiliki satu atau lebih elektron bebas (Droge 2002). Kerusakan sel-sel spermatogenik  oleh  faktor  radikal  bebas dapat  dicegah  dengan  mengkonsumsi makanan  yang  mengandung  antioksidan. Kandungan antioksidan dalam Habatussauda juga berperan penting dalam melindungi  organ  sistem  reproduksi  dari efek  toksik  radikal  bebas  akibat  makanan yang  dikonsumsi  dan  radikal  bebas  dari lingkungan (Bashandy 2007).
Kombinasi  Habatussauda  dan  madu pada  kelompok  IV  memperlihatkan  jumlah sel-sel  spermatogenik,  sel  Sertoli,  dan  Sel Leydig  tertinggi  jika  dibandingkan  dengan kelompok lainnya. Hal ini dapat disebabkan oleh  adanya  kandungan  madu  yang  dapat meningkatkan  fertilitas  dan  vitalitas  pada pria dengan mengkonsumsinya secara rutin (Sirisinghe et al ., 2006).
Gambar 1 Histologi organ testis mencit; (A) kelompok  perlakuan  I  (B) kelompok perlakuan IV
Hasil  analisis  menunjukkan  terjadi peningkatan  jumlah  sel-sel  spermatogenik, sel  Sertoli,  dan  sel  Leydig  pada  gambaran tubulus  seminiferous  (Gambar  1).  Pada kedua gambar yaitu 1A dan 1B dapat secara cepat dilihat perbandingan kerapatan sel-sel pada  sebuah  tubulus  seminiferus  mencit yang  telah  diberikan  perlakuan  yang berbeda.  Hasil  ini  dimungkinkan  oleh pemberian  ekstrak  minyak  Habatussauda yang dikombinasikan dengan madu memiliki efektivitas  dalam  meningkatkan  hormon tertosteron dalam spermatogenesis. Mahaneem et al. (2011) melaporkan bahwa madu  bekerja  dengan  cara  mendukung fungsi  sel  Leydig  dalam  menghasilkan tertosteron, sehingga kombinasinya dengan Habatussauda  memiliki  efek  potensiasi dalam menghasilkan testosteron.
Kemungkinan lainnya adalah kombinasi Habatussauda dan madu memiliki efektivitas  sebagai  antioksidan  yang  akan menghambat  kerusakan  sel  akibat  radikal bebas.  Sirisinghe et  al. (2006)  melaporkan bahwa  madu  memiliki  aktivitas  antibakteri dan  antiradang,  selain  itu  madu  juga memiliki  aktivitas  sebagai  antioksidan (Mandal  &  Mandal, 2011).  Adanya  kedua aktivitas tersebut membuat jumlah sel yang rusak oleh radikal bebas menjadi menurun. Bashandy  (2007)  melaporkan  bahwa aktivitas  antioksidan  di  dalam  madu mencegah  terjadinya  radikal  bebas  yang dapat  merusak  sel-sel  spermatogenik,  sel Sertoli,  maupun  sel  Leydig.  Lebih  dari  itu, suplementasi
kombinasi minyak Habatussauda  dan  madu  pada  media preservasi semen
domba dapat memperpanjang angka recovery pada semen segar  dan  pasca  thawing  (Maidin et  al., 2018).

## KESIMPULAN

## Kesimpulan
Konsumsi ekstrak minyak jintan hitam atau  Habatussauda,  baik  secara  tunggal maupun  dikombinasikan  dengan  madu dapat  meningkatkan  fungsi  reproduksi mencit  jantan  melalui  peningkatan  jumlah
sel-sel  spermatogenik,  sel  Leydig  dan  sel Sertoli.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdul-Ghani AS, Dabdoub N, Muhammad R, Abdul-Ghani R, Qazzaz M. 2008. Effect of
Palestinian honey on spermatogenesis  in  rats. Journal  of Medicinal Food. 11(4):799-802.
Agustinus,  I’tishom  R,  Pramesti  D.  2018. Biologi  reproduksi  pria .  Airlangga University Press, Surabaya.
Bashandy  AES.  2006.  Effect  of  fixed  oil Nigella  sativa on  male  fertility  in normal  and  hyperlipidemic  rats. International  Journal  of  Parmacology . 2(1):104-109.
Datta AK, Saha A, Bhattacharya A, Mandal A, Paul R, Sengupta S. 2012. Black cumin ( Nigella  sativa  L. )-a  review. Journal  of Plant Development Sciences. 4(1)1-43.
Droge  W.  2002.  Free  radicals  in  the physiological  control  of  cell  function. Physiological Review. 82:47-95.
El-Dakhakhny  M,  Madi  NJ,  Lambert  N, Ammon  HP.  2002. Nigella  sativa oil, nigellone  and  derived  thymoquinone inhibit  synthesis  of  5-lipoxygenase products in polymorphonuclear leukocytes  from  rats. Journal  of Ethnopharmacology. 81:161-164.
Hrapkiewiez  K,  Mediana  L.  2007. Clinical Laboratory  Animal  Medicine .  Ed  ke-3. US of America: Blackwell Publishing.
Ikhsan  M,  Hiedayati  N,  Maeyama  K, Nurwidya  F.  2018. Nigella  sativa as anti-inflammatory  agent  in  asthma. BMC Research Note. 11:744.
Islam MT, Guha B, Hosen S, Riaz TA, Shahadat S, Sousa L, Santos JV, Junior JJ, Torres de Lima RM, Braga AL, Campino de Reis A, Barros  de  Alencar  MVO,  Melo-
Cavalcante  AA.  2017.  Nigellalogy:  a review on Nigella sativa. Bioequil Avail . 3(6):00056.
Kolahdooz  M,  Nasri  S,  Modarres  SZ, Kianbakht S, Huseini HF. 2014. Effects of Nigella sativa L. seed oil on abnormal semen  quality  in  infertile  men:  a randomize,  double-blind,  placebo- controlled clinical trial. Phytomedicine . 21(6):901-905.
Mahdafi  R,  Heshmati  J,  Namazi  N.  2015. Effects of seed ( Nigella sativa ) on male infertility: A systematic review. Journal of Herbal Medicine. 5 (3):133-139.
Maidin  MS,  Padlan MH, Azuan  SAN,  Jonit  R, Mohammed  NH,  Abdullah  R.  2018. Supplementation  of Nigella  sativa oil and honey prolong the survival rate of fresh  and  post  thawed  goat  sperm. Tropical  Animal  Science  Journal .
41(2):94-99.
Mandal  MD,  Mandal  S.  2011.  Honey:  its medicinal  property  and  antibacterial activity. Asian Pasific Journal of Tropical Biomedicine . 1(2)154-160.
Marbat MM, abid Ali M, Hadi AM. 2013. The use of Nigella sativa as a single agent in treatment  of  male  infertility.  Tikrit Journal  of  Pharmaceutical  Science. 9(1):19-29.
Ping NC, Hashim NH, Adli DSH. 2014. Effects of Nigella  sativa (Habatus  sauda)  oil and  nicotine  chronic  treatments  on sperm parameters and testis histological  features  of  rats.  Hindawi.
http://dx.doi.org/10.1155/2014/218
293 .
Rahman  MT.  2020.  Potential  benefits  of combination  of Nigella  sativa and  Zn supplements to treat COVID-19. Journal of Herbal Medicine . 23:100382.
Sirisinghe RG, Halim AS, Ravichandran M, Al- Shabasi  Y,  Shokri  AA.  2006.  Abstracts
1st  international  conference  on  the medicinal  use  of  honey.  First  Nourth- South  Conference  and  Workshop  on Pharmacogenetics. hlm 101- 127.
Sultana  S,  Asif  HM,  Akhtar  N,  Nazar  H,  Ur Rahman  R.  2015. Nigella  sativa : monograph. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry . 4(4):103-106.
Talafih KA, Haddad NI, Hattar BI, Kharallah K. 2007.  Effect  of  some  agricultural practices  on  the  productivity  of  blac cumin  ( Nigella  sativa )  grown  under rainfed  semi-arid  conditions. Jordan Journal of Agricultural Sciences . 3:385- 397.
Tuncturk R, Tuncturk M, Ciftci V. 2012. Effect of varying nitrogens doses on yield and some yield components of black cumin ( Nigella  sativa  L. ). Advances  in Environmental Biology. 5:371-374.
Zafar  K,  Noorul  H,  Vartika  S,  Khalid  M, Prashant  S,  Zeeshan  A,  Zahrameena  S. 2016.  Pharmacological  activity  of Nigella sativa : a review. World Journal of  Pharmaceutical  Science. 4(5):234- 241.
Zafar MA, Nishat S, Nasiruddin M. 2019. Role of Nigella  sativa in  renoprotection. International  Journal  of  Scientific Research. 8(7):28-30.