Pengaruh Ekstrak Alga Cokelat ( Sargassum sp.) terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli Secara In Vitro
Effect of Brown Algae Extract ( Sargassum sp.) on Growth of Escherichia coli In Vitro
Moch. Amin Alamsjah, Dwi Nurhayati dan Wahju Tjahjaningsih
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031 - 5911451

## Abstract
Algae Sargassum sp.  showed  the  ability  to  inhibit  the  growth  of  a  maximum  of  several  types  of pathogenic  bacteria  such  as Escherichia  coli .  Because  of Sargassum sp.  have  antibacterial  with  2  active ingredients  are  compounds  of  phenol  and  tannin  fiber.  So Sargassum sp.  potential  to  serve  as  antibakteri substances  against  several  types  of  bacterial  pathogens  such  as  bacteria  that  cause  diarhea.The  aim  of  the  study was  to  determine  antibacterial  activity  brown  algae  exstract  ( Sargassum sp.)  and  determine  best  concentration from brown algae exstract ( Sargassum sp.) to kill of E. coli.
This study was conducted at several places such as Saints and Technology Faculty and Veterinary Faculty, Airlangga University Surabaya. Research was done September 2010. This study was conducted in the laboratory using experimental method completely randomized design with twelve treatments and there replications. The main objectives of this study were MBC extract of Sargassum sp. Result of the study analyzed with Khi-Khuadrat. Result of the study showed that extract Sargassum sp. has antimicrobial activity against E. coli were determined with in vitro method. Based on MBC data were found to be effective to kill of E. coli at 50 %. Exploration potential of extracts from brown algae ( Sargassum sp.) against various species of bacteria that cause  diarrhea  are  expected  to  become  a  new  information  about  the  content  of  extracts  of Sargassum sp.  as  an antibacterial. Also from this research will be obtained an alternative treatment of diarrheal diseases that come from living marine resources and will eventually increase the economic value of fishery commodities which have not explored its use as Sargassum sp.
Keywords : brown algae ( Sargassum sp.), exstract, E. coli , In vitro
Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan Vol. 3,No. 1, April 2011

## Pendahuluan
Salah  satu  kekayaan  hayati  laut  Indonesia adalah  rumput  laut.  Namun,  penggunaannya  selama itu  masih  terbatas  untuk  makanan  dan  obat.  Belum ada  upaya  pengembangan  lebih  lanjut  pada  produk lain  yang  punya  nilai  ekonomis  lebih  tinggi  (Irwan, 2003).  Menurut  Sastry  dan  Rao  (1994),  bahwa ekstrak Sargassum menunjukkan  kemampuan menghambat  pertumbuhan  yang  maksimal  terhadap beberapa  jenis  bakteri  patogen  seperti Pseudomonas aeruginosa,  Sthapylococcus  aureus,  Salmonella typhii ,  dan Escherichia  coli , Bacillus  cereus dimana hal  tersebut  dapat  diketahui  setelah  dilakukan  suatu percobaan  secara in  vitro .  Dari  keterangan  tersebut, maka  dapat  dikatakan  bahwa Sargassum sp.  potensi untuk  dijadikan  sebagai  bahan  antimikroba  terhadap beberapa  jenis  bakteri  patogen  seperti  bakteri penyebab  diare.  Diare  adalah  sebuah  penyakit  di mana  penderita  mengalami  buang  air  besar  yang sering dan masih memiliki kandungan air berlebihan.
Melalui  penelitian  ini  dilakukan  suatu eksplorasi  potensi  ekstrak  dari  alga  cokelat ( Sargassum sp.)  terhadap  berbagai  spesies  bakteri penyebab diare, sehingga melalui penelitian ini akan
diperoleh  suatu  informasi  baru  tentang  kandungan ekstrak  terhadap  berbagai  spesies  bakteri  penyebab diare.  Selain  itu  dari  penelitian  ini  akan  diperoleh suatu  pengobatan  alternatif  dari  penyakit  diare  yang berasal  dari  sumber  daya  hayati  laut  dan  akhirnya akan  meningkatkan  nilai  ekonomis  dari  komoditas perikanan  yang  selama  ini  tidak  tereksplorasi kegunaannya seperti Sargassum sp.

## Tujuan
Mengetahui  kemampuan  daya  antibakterial dari ekstrak alga cokelat ( Sargassum sp.).
Mengetahui konsentrasi terbaik ekstrak alga coklat  ( Sargassum sp.)  dalam  membunuh  bakteri E. coli.

## Manfaat
Sebagai  informasi  bagi  masyarakat  tentang ekstrak Sargassum sp. menggunakan metanol sebagai obat herbal antibakteri untuk berbagai spesies bakteri penyebab diare. Melalui penelitian ini akan diperoleh suatu  informasi  untuk  pengobatan  alternatif  dari penyakit  diare  yang  berasal  dari  sumber  daya  hayati laut.

## Metodologi Penelitian
Tempat dan Waktu
Penelitian  dilaksanakan  pada  pada  bulan September 2010 di Laboratorium Kimia Organik dan Biokima,  Fakultas  Sains  dan  Teknologi,  Universitas Airlangga  dan  Laboratorium  Bakteriologi  dan Mikologi,  Fakultas  Kedokteran  Hewan,  Universitas Airlangga.
Materi Penelitian Bahan Penelitian Bahan  penelitian  yang  digunakan  adalah Sargassum sp.  yang  diperoleh  dari  pesisir  pantai Madura,  bakteri Escherichia  coli ATCC  25922  yang diperoleh  dari  Laboratorium  Bakteriologi  dan Mikologi,  Fakultas  Kedokteran  Hewan,  Universitas Airlangga , metanol,  akuades  steril, Nutrient  Brooth (NB),  kertas  saring ,  Eosin  Methylen  Blue  Agar (EMBA), Sulfide  Indol  Motility (SIM), Triple  Sugar Iron Agar (TSIA), Simon  Sitrat  Agar ,  Urea  Agar. Media  untuk  uji  gula-gula  yaitu  glukosa,  laktosa, maltosa dan sukrosa.
Alat Penelitian
Peralatan  penelitian  yang  digunakan meliputi rotary  vacuum  evaporator ,  tabung erlenmeyer,  tabung  reaksi,  cawan  petri,  rak,  pipet, jarum  ose,  inkubator, autoclave ,  mikropipet,
pembakar  bunsen,  mikroskop,  kapas, vortex dan object glass .
Metode Penelitian Penelitian  ini  dilaksanakan  secara in  vitro d e n g a n   p e n e n t u a n M i n i m u m   B a c t e r i c i d a l Concentration (MBC)  melalui  metode  dilusi. Menurut  Lennete et  al .  (1974)  untuk  mengetahui Minimum  Bactericidal  Concentration (MBC) dilakukan  dengan  menginokulasikan  larutan  dari kedua  tabung Minimum  Inhibitory  Concentration (MIC)  terjernih  pada  media Eosin  Methylen Blue
Agar (EMBA),  kemudian  diinkubasi  37  °C  selama 24 jam.
Rancangan Pecobaan Rancangan  percobaan  menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari 12 perlakuan  dengan  3  kali  ulangan.  Penelitian  ini menggunakan  metode  pengenceran  ( dilution m e t h o d s )   m e l a l u i M i n i m u m   B a c t e r i c i d a l Concentration (MBC) Test .
Prosedur Kerja Tahapan Persiapan Pembuatan Simplisia
Simplisia  adalah  bahan  alamiah  yang digunakan  sebagai  obat  yang  belum  mengalami pengolahan  apapun  kecuali  dinyatakan  lain  berupa bahan  yang  dikeringkan  (Fanani,  2009). Sargassum sp.  diperoleh  dari  pantai  pesisir  Madura,  kemudian dikering  anginkan  di  tempat  teduh  dengan  suhu kamar  25  °C  dan  tidak  dikeringkan  dengan  suhu  > 45°C  atau  tidak  terkena  matahari  secara  langsung (Harbone, 1987).
Ekstrak Sargassum sp.
Ekstraksi  adalah  penarikan  kandungan kimia  yang  dapat  larut  sehingga  terpisah  dari  bahan yang  tidak  dapat  larut  dengan  pelarut  cair.  Metode yang  digunakan  adalah  metode  maserasi.  Maserasi adalah cara ekstraksi yang paling sederhana. Rumput laut sebanyak 3 kg yang sudah dikeringkan kemudian dimaserasi  dengan  menggunakan  1  liter  methanol  . R u m p u t   l a u t   k e m u d i a n   d i s a r i n g   d e n g a n menggunakan  kertas  saring  dan  filtrat  ditampung dalam  tabung  erlenmeyer.  Selanjutnya,  pelarut diuapkan  dengan  menggunakan rotary  vacuum evaporator pada  suhu  40  °C.  Ekstrak Sargassum sp. yang  didapatkan  berupa  ekstrak  kental  (Depkes  RI, 2000).
Pembuatan suspensi bakteri Escherichia coli
Pembuatan  suspensi  kuman E.  coli dilakukan dengan cara mengambil koloni pada media EMBA  sebanyak  4  -  5  koloni  dengan  menggunakan jarum  ose  dan  dimasukkan  ke  dalam  NB  lalu diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam. Kekeruhan dari suspensi bakteri tersebut disesuaikan
8 dengan  kepadatan  bakteri  3x10 CFU/ml  (suspensi Mc.Farland ). Semua proses dilakukan secara aseptis (Bailey and Scott , 1986).

## Pelaksanaan Penelitian
Pembuatan  Ekstrak Sargassum sp.  dengan  Berbagai Konsentrasi
Metode yang digunakan pada penelitian ini metode  pengenceran  dengan  berbagai  kosentrasi larutan ekstrak Sargassum sp. Ekstrak Sargassum sp. diencerkan dengan akuades steril. Dalam pembuatan MIC, caranya terlebih dahulu menyiapkan 12 tabung reaksi  dan  pemberian  nomor  satu  sampai  12.  Pada tabung  nomor  satu  dan  dua  diisi  1  ml  ekstrak
Sargassum sp.,  kemudian  pada  tabung  nomor  dua hingga  10  diisi  1  ml  akuades  steril.  Pada  tabung nomor  dua  diaduk  hingga  homogen,  setelah  itu diambil  1  ml  dan  dimasukkan  pada  tabung  ketiga kemudian  diaduk  hingga  homogen.  Demikian seterusnya  hingga  tabung  nomor  10.  Dari  tabung nomor  10  diambil  1  ml  dan  dibuang.  Adapun perlakuan tersebut adalah sebagai berikut : Tabung  1  :  1  ml  ekstrak Sargassum sp . konsentrasi 100 % + 1 ml suspensi E. coli
Tabung  2  :  1  ml  ekstrak Sargassum sp.    konsentrasi 50 % + 1 ml suspensi E. coli Tabung 3 : 1 ml ekstrak Sargassum sp.  konsentrasi 25
% + 1 ml suspensi E. coli Tabung 4 : 1 ml ekstrak Sargassum sp. konsentrasi 12, 5% + 1 ml suspensi E. coli Tabung 5 : 1 ml ekstrak Sargassum sp. konsentrasi 6, 25 % + 1 ml suspensi E. coli
Tabung  6  :  1  ml  ekstrak Sargassum sp.  konsentrasi 3,125 % + 1 ml suspensi E. coli Tabung  7  :  1  ml  ekstrak Sargassum sp.konsentrasi 1,5625 % + 1 ml suspensi E. coli Tabung  8  :  1  ml  ekstrak Sargassum sp.  konsentrasi
0,781% + 1 ml suspensi E. coli
Tabung  9  :  1  ml  ekstrak Sargassum sp.  konsentrasi 0,391 % + 1 ml suspensi E. coli
Tabung  10  :  1  ml  ekstrak Sargassum sp.  konsentrasi 0,195  %  +  1  ml  suspensi E.  Coli dan  diambil  1  ml kemudian dibuang, sehingga volumenya tinggal 1 ml Tabung 11 : 1 ml ekstrak Sargassum sp. + 1 ml akuades steril sebagai kontrol positif (+) Tabung 12 : 1 ml suspensi E. coli + 1 ml akuades steril sebagai kontrol negatif (-) Setelah  itu  diinkubasi  pada  suhu  pada  suhu  37  °C selama 24 jam
Penentuan Minimal  Bactericidal  Concentration (MBC)
Terlebih  dahulu  disiapkan  media  EMBA steril. Selanjutnya kedua tabung MIC terjernih diambil 0,025 ml dengan menggunakan mikropipet kemudian ditanam  pada  media  EMBA  sesuai  dengan  nomor. Kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam. Selanjutnya hasil inkubasi diamati untuk menentukan ada tidaknya pertumbuhan bakteri E. coli . Hasil yang diamati  adalah  konsentrasi  terendah  yang  tidak terdapat pertumbuhan bakteri (Bailey and Scott, 1986).
Analisis Data
Data  hasil  penelitian  diolah  secara  statistik menggunakan Khi-Khuadrat dengan tingkat signifikan 0,05 % (Schefler, 1987). Dari 12 perlakuan  hanya akan
dilakukan  pengamatan  pada  dua  tabung  terjernih, kemudian  akan digolongkan ke dalam data enumerasi yaitu tidak tumbuh dan tumbuh.

## Hasil dan Pembahasan
Identifikasi Bakteri Escherichia coli
Identifikasi  bakteri  dilakukan  untuk memastikan  kebenaran  identitas  bakteri E.  coli yang diperoleh  dari  Laboratorium  Bakteriologi  dan Mikologi,  Fakultas  Kedokteran  Hewan,  Universitas Airlangga, Surabaya. Metode yang digunakan adalah pengamatan morfologi koloni bakteri dan pengamatan secara  mikroskopik  menggunakan  pewarnaan  Gram serta pengujian sifat biokimia dari E. coli (Cowan dan Steel's,  1981).  Berdasarkan  pengamatan  morfologi koloni  bakteri,  pewarnaan  Gram  dan  pengujian  sifat biokimia  dari  kultur  murni  bakteri E.  coli ,  diperoleh hasil  identifikasi  bakteri  seperti  ditampilkan  pada Tabel 1.
Berdasarkan  pengamatan  ciri-ciri  tersebut, setelah  dibandingkan  dengan  ciri-ciri  bakteri  yang diuraikan oleh Puspaningrum (2008), Acun (2010) dan Ardian  (2010)  maka  bakteri  ini  diidentifikasikan sebagai bakteri E. coli.
Hasil  penelitian  mengenai  daya  antibakteri ekstrak Sargassum sp.  terhadap  bakteri E.  coli dilakukan dengan metode dilusi yaitu penentuan hasil Minimum  Bactericidal  Concentration (MBC)  yaitu konsentrasi minimum yang dapat membunuh bakteri E. coli (Bailey and Scott's, 1994). Hasil pengamatan uji MBC  menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi pengenceran 100 % dan 50 % ekstrak Sargassum sp. tidak  memberikan  perbedaan  nyata  terhadap pertumbuhan bakteri E. coli secara in vitro.
Hasil  penelitian  tentang  daya  antibakteri ekstrak Sargassum sp. dapat diketahui bahwa ekstrak Sargassum sp.  mempunyai  aktivitas  menghambat
Tabel 1. Hasil uji biokimia bakteri Eschericia coli
Parameter Hasil Warna koloni (EMBA) Bentuk koloni
Pewarnaan gram :
Bentuk sel
Motilitas
Produksi H2S
Produksi Indol
Uji gula-gula : Glukosa Laktosa Maltosa Sukrosa >
>
> > > >
Hijau metalik Bundar
Negatif Batang +
-
+ + + + +
pertumbuhan  bakteri E.  coli .  Hasil  pengamatan  uji MIC  secara  visual  menunjukkan  hambatan pertumbuhan  terjadi  pada  konsentrasi  50  %.  Hal  ini tampak  pada  tabung  reaksi  konsentrasi  50  %  yang memiliki  kejernihan  hampir  mendekati  kejernihan tabung  reaksi  kontrol  positif  dan  tidak  keruh  seperti tabung reaksi tabung kontrol negatif.
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  dalam laboratorium  dengan  kondisi  aseptis  dan  dalam keadaan  terkontrol.  Hal  ini  dibuktikan  bahwa  tidak terdapat pertumbuhan koloni bakteri lain selain bakteri E.  coli pada  media  EMBA.  Hal  ini  sesuai  dengan pendapat Christofilogiannis (2001) yang menyatakan bahwa,  faktor-faktor  yang  dapat  mempengaruhi keakuratan  hasil  akhir  uji  MIC  antara  lain  :  agen antibakteri,  suhu,  jumlah  inokulum  bakteri  yang digunakan dalam media kultur.
MBC  ekstrak Sargassum sp.  pada  konsentrasi  50  %  terdapat pertumbuhan koloni bakteri E. coli hanya pada ulangan 1,  sedangkan  ulangan  ke  2  dan  ulangan  ke  3  tidak terdapat  pertumbuhan  bakteri.  Hal  ini  dikarenakan ekstrak Sargassum sp. mempunyai daya antibakterial terhadap E.  coli .  Trono  dan  Ganzon  (1988) menyatakan bahwa kandungan bahan kimia utama dari Sargassum sp. adalah sumber alginat, tanin dan fenol. Ekstrak Sargassum sp.  mempunyai  kandungan antibakteri  berupa  senyawa  fenol  dan  serat  tanin berperan  utama  sebagai  penghambat  pertumbuhan koloni  bakteri  patogen  (Kandhasamy  dan Arunachalam, 2008). Mekanisme kerja senyawa fenol dalam  membunuh  sel  bakteri,  yaitu  dengan  cara mendenaturasi  protein  sel  bakteri  (Purwanti,  2007). MBC ekstrak Sargassum sp. dapat ditentukan setelah menginokulasikan larutan ekstrak Sargassum sp. dari dua tabung MIC terjernih yaitu konsentrasi 100 % dan 50 % pada media EMBA.
Pada Tabel 2 dapat dilihat ekstrak Sargassum sp.  pada  konsentrasi  50  %  terdapat  pertumbuhan koloni bakteri E. coli pada ulangan 1, sedangkan pada
ulangan  1  dan  2  tidak  terdapat  pertumbuhan  koloni bakteri E. coli . Pada konsentrasi 100 % tidak terdapat pertumbuhan koloni bakteri E. coli sama sekali pada ulangan 1 sampai dengan ulangan 3. Berdasarkan hasil uji MBC ekstrak Sargassum sp. mempunyai aktifitas menghambat  atau  bersifat  bakteriostatik  terhadap bakteri E. coli pada konsentrasi 50 %.
Konsentrasi  50  %  mempunyai  kemampuan menghambat  bakteri E.  coli sehingga  dapat  diduga bahwa  ekstrak Sargassum sp.  lebih  efektif  bila digunakan  sebagai  obat.  Hasil  dugaan  ini  didukung oleh Gonzales et al., (2001) yang menyatakan bahwa alga  cokelat  mempunyai  kemampuan  antibakterial pada  konsentrasi  53  %.    Ernst  (1991)  menyatakan, untuk  terapi  obat  yang  bermanfaat,  pemberian konsentrasi  yang  cukup  dan  tidak  berlebihan merupakan syarat utama. Pemberian konsentrasi yang cukup,  berarti  pemberian  konsentrasi  yang  dapat menimbulkan efek yang diinginkan tanpa konsentrasi yang berlebihan, sehingga efek toksik dapat dihindari.
Senyawa  aktif  lain  yang  dapat  membunuh bakteri E.  coli adalah  tanin.  Diduga  tanin  dapat digunakan sebagai antibakteri. Hal ini sesuai dengan pendapat  Juliantina  (2007)  yang  menyatakan  bahwa tanin memiliki aktivitas antibakteri, secara garis besar mekanisme yang diperkirakan adalah toksisitas tanin dapat  merusak  membran  sel  bakteri  dan  senyawa astringent. Tanin diduga dapat mengkerutkan dinding sel  atau  membran  sel  sehingga  mengganggu permeabilitas  sel  itu  sendiri.  Akibat  terganggunya permeabilitas,  sel  tidak  dapat  melakukan  aktivitas hidup  sehingga  pertumbuhannya  terhambat  atau bahkan mati.

## Kesimpulan
Ekstrak Sargassum sp.  dapat  membunuh bakteri E. coli secara in vitro.
Konsentrasi minimum ekstrak Sargassum sp. yang dapat menghambat E. coli adalah 50%.
Perlu  dilakukannya  penelitian  lebih  lanjut secara in  vivo terhadap  hewan  coba  sehingga  dapat dijadikan  informasi  dasar  dalam  penerapan  obat alternatif  di  lapangaan  sebagai  bentuk  pencegahan dalam  penanganan  penyakit  yang  disebabkan  karena bakteri E. coli .

## Daftar Pustaka
Acun,  Sodiyc.  2010.  Tabel  Uji  Biokimia  Bakteri Familia  Enterobacteriaceae.  Jakarta. http://sodiycxacun.com/2010/07/tabel-uji- biokimia-bakteri-familia.html.
Tabel 2. Hasil pengamatan uji Minimum Bactericidal Concentration (MBC)
Tabel 2.
Nomor Cawan Konsentrasi (%) Ulangan I II III Kontrol Positif - - - 1 2 100 50 0 - + - - - - Kontrol Negatif + + +
Keterangan : (-) : Tidak tumbuh koloni (+) : Tumbuh koloni Keterangan :
Ardian.  2010.  Uji  Biokimia  Metabolisme  Bakteri. Jakarta. http://dydear.multiply.com/journal/ item/3/Uji_Biokimia_Mikroba.
th Bailey and Scott's. 1994. Diagnostic Microbiology. 8
Edition. Toronto. p. 313-328.
Bailey.  W.  R  and  E.  G.  Scott.  1986.  Diagnostic th Microbiology.  7 Ed.  The  CV.  Mosby Company. Saint Louis.
Christofilogiannis,  P.  2001.  Current  Inoculation
M e t h o d s   i n   M I C   D e t e r m i n a t i o n . Aquaculture , 208 : 1 – 10.
Cowan and Steel's. 1981. Manual for the Identification of  Medical  Bacteria.  Second  edition.
Cambridge University Press. New York.
Depkes RI. 2000. Parameter Standart Umum Ekstrak
Tumbuhan  Obat.  Direktorat  Pengawasan Obat Tradisional. Jakarta. Ernst, M. 1991. Dinamika Obat.Alih Bahasa : M. B. Widianto.ITB Press. Bandung.
Fanani,  Rizal.  2009.  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak Etanol Daun Dewandaru   ( Eugenia uniflora L . )  Per  Oral  pada  Tikus  Galur  Spragues Dawley.  Fakultas  Farmasi.  Universitas Muhammadiyah Surakarta. Surakarta.
Gonzales  A.,  B.  Angela.,  M.  J.  Rio  and  F.  Pelaez. Screening of antimicrobial activities in red, green,  and  brown  macroalgaes  from  Gran Canaria  (Canary  Islands,  Spain).  Spain.  4  : 35-40.
Harbone, J. B. 1987. Metode Fitokimia. Penuntun Cara Menganalisa Tumbuhan. ITB.
Irwan.  2003.  Menggali  Manfaat  Rumput  Laut.  Riset
Unggulan ITB. Bandung.
Juliantina,F.  R.  2007.  Manfaat  Sirih  Merah  (Piper crocatum)  Sebagai  Agen  Anti  Bakterial Gram  Negatif  dan  Gram  Positif.  Jurnal Kedokteran  dan  Kesehatan  Indonesia. Yogyakarta.
Kandhasamy,  M  dan  K.D.  Arunachalam.  2008. Evaluation of in vitro antibacterial property of  seaweeds  of  southeast  coast  of  India African Journal of Biotechnology Vol. 7 (12), pp.  http://www.academicjournals.org/AJB. 18/09/2008.
Lennete, H. Edwin, E. H. Spaulding and J. P. Truant. 1974.  Manual  Clinical  Microbiology. Second  Edition.  American  society  for Microbiology. Washington D.C.
Purwanti,  Elly.  2007.  Senyawa  Bioaktif  Tanaman
Sereh  ( Cymbopogon  nardus) Ekstrak Kloroform  dan  Etanol  serta  Pengaruhnya Terhadap Mikroorganisme Penyebab Diare. Jurysan  Pendidikan  Biologi.  Fakultas Pendidikan  Biologi  dan  Ilmu  Pendidikan.
Universitas Muhammadiyah Malang.
Puspaningrum,  Anglia.  2008.  Penerapan  Metode Konvensional  pada Escherichia  coli . Universitas Indonesia. Jakarta.
Sastry  and Rao. 1994. Antibacterial Substance From Marine Algae. Successive Extraction Using Benzene,  Chloroform  and  Methanol. Department  of  Biochemistry,  Institute  of Medical Science, Banaras Hindu University. India.
Schelfler, C. William. 1987. Statistika Untuk Biologi, farmasi,  Kedokteran,  dan  Ilmu  yang Bertautan. Terbitan kedua. ITB. Bandung.
Trono,  J.R.  G.C  and  E.T.  Ganzon  1988. Philippine Seaweeds Publ. by National book store. Inc.