## IDENTIFIKASI SENYAWA BIOFLAVONOID PADA PROPOLIS HASIL EKSTRAKSI DARI SARANG LEBAH MADU HUTAN SUMBAWA ( APIS DORSATA)
Wawat Rodiahwati 1 , Ariskanopitasari 2 , Imam K Saleh 3
123 Program Studi Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Teknologi Sumbawa
* Corresponding author. E-mail: wawat.rodiahwati@gmail.com

## Diterima
Bulan Juni 2019
Diterbitkan Bulan Agustus 2019
Kata Kunci:
sarang lebah Apis dorsata, propolis , bioflavonoid

## Abstrak
Propolis merupakan salah satu produk potensial yang dapat dihasilkan dari olahan sarang lebah madu hutan. Selama ini, petani madu di Desa Batu Dulang, Kabupaten Sumbawa hanya  mengambil  madu  hutan  dengan  cara  ditiriskan  dan  disaring  langsung  dari sarangnya. Setelah itu, sarang lebah tidak dimanfaatkan dengan optimal. Padahal, pada sarang lebah madu tersebut terdapat propolis yang kaya akan bioflavonoid.Tujuan dari penelitian  ini  adalah  untuk  menghasilkan  propolis  dari  sarang  lebah  madu  hutan Sumbawa Apis dorsata dan mengidentifikasi senyawa bioflavonoid yang terkandung di dalamnya.
Metode  yang  dilakukan  adalah  metode  eksperimen  yang  terdiri  atas  dua  tahap. Tahap pertama  adalah  ekstraksi  propolis  dari  sarang  lebah  madu  Apis  dorsata  dengan menggunakan metode maserasi dan pemanasan gelombang mikro (microwave assisted extraction).  Setelah  ekstrak  propolis  diperoleh,  tahap  penelitian  selanjutnya  adalah mengidentifikasi  senyawa  bioflavonoid  yang  terkandung  menggunakan  metode spektrofotometer UV-Vis.  Analisis  yang dilakukan adalah  analisis rendemen dan total bioflavonoid.
Pada laporan kemajuan ini, propolis berhasil diekstrak dari sarang lebah madu hutan Apis dorsata,  dari  Desa  Batu  Dulang,  Kabupaten  Sumbawa.  Rata-rata  rendemen  yang dihasilkan adalah 24.43% untuk perlakuan konsentrasi dan pemanasan microwave. Dari tiga  konsentrasi  pelarut  propilen  glikol  yang  digunakan,  konsentrasi  20%  merupakan konsentrasi pelarut yang optimal dalam menghasilkan rendemen propolis ekstrak pada penelitian ini, yaitu mencapai 30%. Senyawa bioflavonoid dari ketiga konsentrasi akan diuji pada tahap selanjutnya dari penelitian ini.

## PENDAHULUAN
Lebah  madu  hutan  ( Apis  dorsata )  merupakan salah satu sumber daya kearifan lokal dan produk andalan dari Kabupaten Sumbawa. Luas hutan di Kabupaten  Sumbawa  mencapai  516.242  ha  dan sebanyak  45.21%  dari  luas  hutan  tersebut merupakan  kawasan  hutan  lindung  yang  sangat erat  kaitannya  dengan  produksi  madu  hutan  di wilayah  Sumbawa  (Julmansyah,  2010).  Selain produksi madu, produk turunan bisa dikembangkan  dari  lebah  madu,  seperti  lipbalm, makanan  dan  minuman,  lilin  lebah  ( bees  wax ), sabun dan propolis.
Propolis  merupakan  salah  satu  produk potensial yang dapat dihasilkan dari olahan sarang lebah madu hutan. Pada dasarnya, propolis adalah resin  yang  dihasilkan  oleh  lebah  madu  untuk membangun, memperbaiki dan melindungi sarang dari  mikroorganisme  karena  propolis  memiliki kandungan  kompleks    yang  terdiri  dari  beberapa senyawa  kimia  termasuk  bioflavonoid  dan polifenol. Pada lima puluh tahun terakhir, berbagai studi  sudah  mengungkapkan  aktivitas  biologis
serbaguna dari propolis yaitu sebagai anti bakteri, anti  jamur,  anti  virus,  anti  oksidan,  anti peradangan dan immunomodulator (Burdock GA, 1998; Benskota et al., 2001; Sforcin dan Bankova, 2011).
Selama ini, petani madu di Desa Batu Dulang, Kabupaten  Sumbawa  hanya  mengambil  madu hutan dengan cara ditiriskan dan disaring langsung dari  sarangnya.  Setelah  itu,  sarang  lebah  tidak dimanfaatkan dengan optimal. Hal ini dikarenakan kurangnya  pengetahuan  masyarakat  Sumbawa akan  potensi  sarang  lebah  madu.  Padahal,  pada sarang lebah madu tersebut terdapat propolis yang kaya  akan  bioflavonoid.  Terlebih  lagi,  madu Sumbawa adalah madu hutan asli yang berasal dari tanaman khas di daerah dataran tinggi Sumbawa, maka kualitas dan jenis bioflavoidnya kemungkinan  besar  juga  beragam  (Bankova, 2009).
Melalui  penelitian  ini  diharapkan  dapat mengidentifikasi  senyawa  bioflavonoid  yang terkandung  pada  propolis  hasil  ekstraksi  lebah madu hutan Sumbawa Apis dorsata.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah sarang lebah  madu hutan Apis dorsata yang  diambil  dari  Desa  Batu  Dulang,  Kabupaten Sumbawa,  Nusa  Tenggara  Barat.    Pelarut  yang digunakan  untuk  mengekstraksi  adalah  Propilen Glikol    dengan  metode  maserasi  dikombinasikan dengan Microwave-Asissted
Extraction . Sedangkan bahan untuk analisis yang dibutuhkan adalah  H 2 SO 4 pekat,  aquades,  metanol  96%, AlCl3, standar quercetin, kalium asetat dan etanol. Adapun alat yang digunakan adalah rangkaian ekstraktor,  tabung  Erlenmeyer, incubator  shaker , Microwave  oven ,  kertas  filter,  pipet,  neraca analitik,  blender,  tabung  reaksi,  alat  sentrifugasi, tabung  sentrifugasi  dan  spektrofotometer  UV- VIS.

## Prosedur Penelitian
Metode  yang  dilakukan  adalah  metode eksperimen  yang  terdiri  atas  dua  tahap.  Tahap pertama  adalah  ekstraksi  propolis  dari  sarang lebah  madu Apis  dorsata dengan  menggunakan metode  maserasi  dan  pemanasan  gelombang mikro  ( microwave  assisted  extraction ).  Setelah ekstrak  propolis  diperoleh,  tahap  penelitian selanjutnya  adalah  mengidentifikasi  senyawa bioflavonoid  yang  terkandung  menggunakan metode  spektrofotometer  UV-Vis.  Tahapan penelitian selengkapnya dijelaskan melalui diagram alir yang tercantum  pada Gambar 1.
Rancangan penelitian yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktorial dengan dua  perlakuan  yaitu  konsentrasi  pelarut  Propilen Glikol  (PG)  dan  pemanasan microwave .  Peubah yang diamati (variabel terikat) adalah kandungan bioflavonoid dan rendemen.
Sedangkan perlakuan yang dilakukan
(variabel  bebas)  adalah  konsentrasi  Propilen Glikol yang terdiri dari tiga taraf yaitu 10%, 20% dan 30%. Sedangkan perlakuan microwave terdiri atas dua taraf yaitu dengan pemanasan microwave dan  tanpa  pemanasan microwave .  Perlakuan dilakukan  sebanyak  dua  kali  ulangan  (duplo) sehingga diperoleh 12 unit percobaan.
Kontrol  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah perlakuan tanpa pelarut propilen glikol dan tanpa  pemanasan microwave .  Data  dan  hasil percobaan akan dianalisis menggunakan software SPSS  16.0  yaitu Analysis  of  Variance (Anova) dengan  taraf  5%.  Jika  terdapat  perbedaan  nyata, maka akan dilanjutkan dengan Uji Duncan.
Gambar 1. Diagram alir percobaan
Model umum rancangan percobaan adalah sebagai berikut :
Y ijk = µ + A i + B i + (AB) ij + ɛ ijk (1)
Keterangan : Y ijk : nilai pengamatan pada perlakuan konsentrasi pelarut Propilen Glikol  taraf ke- i, pemanasan microwave taraf ke-j, dan pada ulangan ke-k
µ : nilai rataan umum
A i : pengaruh perlakuan konsentrasi pelarut Propilen Glikol pada taraf ke-i B j : pengaruh perlakuan pemanasan microwave pada taraf ke-j
(AB) ij : pengaruh interaksi perlakuan konsentrasi pelarut Propilen Glikol ke-i dan perlakuan pemanasan microwave pada taraf ke-j ɛ ijk : galat percobaan
i : konsentrasi pelarut Propilen Glikol j : Perlakuan pemanasan microwave k : ulangan

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengumpulan Sarang Lebah Apis dorsata
Pengumpulan  sarang  lebah  madu  hutan ternyata  tidak  semudah  mencari  produk  madu yang  dihasilkan.  Sebagian  besar  pencari  madu hutan  liar  di  Kabupaten  Sumbawa  tidak memanfaatkan  sarang  lebah  yang  sudah  diperas atau diambil  madunya. Kebanyakan sarang lebah yang  sudah  diperas  hanya  dibuang.  Selain  itu, musim  hujan  yang  sedang  melanda  Kabupaten Sumbawa  membuat  produksi  madu  hutan menurun sehingga pengumpulan sarang lebah pun semakin sulit dan jarang sekali ditemukan.
Peneliti  baru  berhasil  mendapatkan  sampel sarang  lebah  Apis  dorsata  dari  pencari  madu  liar pada  awal  bulan  Juli  di  Desa  Batu  Dulang, Kecamatan  Batu  Lanteh,  Kabupaten  Sumbawa. Masyarakat setempat menyebutnya dengan istilah polen,  yang  sudah  diperas  dan  dibentuk  bulatan- bulatan  seperti  pada  Gambar  2.  Proses  preparasi atau persiapan bahan baku untuk ekstraksi adalah pengecilan ukuran menggunakan blender sehingga dihasilkan  bahan  baku  yang  siap  diberikan perlakuan.
Gambar 2.Sarang lebah Apis dorsata setelah diperas madunya dan sarang lebah yang sudah dihaluskan menggunakan blender.
Sarang  lebah Apis  dorsata ini  memiliki karakteristik yang cukup lengket, berwarna kuning kecokelatan, namun masih cukup mudah dihancurkan pada suhu ruang (25ºC). Namun pada suhu  yang  cukup  tinggi  (>50ºC),  bentuk  sarang lebah  ini  menjadi  semakin  cair  karena wax yang terkandung  di  dalamnya  mengalami  pelelehan, namun struktur sarang akan semakin lengket jika sudah  didinginkan.  Oleh  karena  itu,  untuk mengurangi kandungan wax pada propolis, bagian yang  lengket  ( wax )  dipisahkan  dari  bagian propolis yang tidak lengket.
Proses  ekstraksi  propolis  dari  sarang  lebah madu hutan Apis dorsata
Proses  ekstraksi  propolis  dari  sarang  lebah madu  hutan Apis  dorsata dilakukan  dalam  dua tahap.  Tahap  pertama  adalah  maserasi,  yaitu proses  ekstraksi  bahan  dengan  larutan  propilen glikol pada suhu ruang. Proses maserasi dilakukan menggunakan incubator  shaker selama  24  jam. Tujuan dan prinsip dari maserasi ini adalah untuk mengikat  senyawa  –senyawa  penting  pada propolis  yaitu  senyawa  fenol,  flavon,  dan
flavonoid  menggunakan  pelarut  organik.  Pelarut propilen glikol dipilih dalam penelitian ini karena daya ekstraknya yang cukup baik dan merupakan pelarut  yang  aman  digunakan  pada  industri makanan dan farmasi.
Gambar 3.Proses ekstraksi sarang lebah tahap satu (maserasi)
Proses  maserasi  yang  standar  membutuhkan waktu  yang  cukup  lama  (4  hingga  7  hari)  untuk mendapatkan keseimbangan ekstraksi dari pelarut dan  bahan  yang  terlarut.  Untuk  mengurangi lamanya  proses  maserasi  ini,  proses  ekstraksi propolis  dari  sarang  lebah  madu  hutan Apis dorsata dikombinasikan  dengan  proses  ekstraksi menggunakan microwave ( microwave  assisted extraction ) untuk meningkatkan proses pengikatan bahan  yang  diinginkan  oleh  pelarut.  Namun, propolis mempunyai daya tahan yang kurang baik terhadap  panas  sehingga  waktu  yang  dibutuhkan untuk  proses  ekstraksi  menggunakan microwave hanya sebentar saja yaitu 30 detik agar kandungan bioflavonoid  pada  propolis  tidak  mengalami kerusakan.
Pada saat ekstraksi  menggunakan microwave , sarang  lebah  terlarut  sempurna  dengan  pelarut propilen glikol dan tidak tampak granula padatan pada larutan tersebut. Namun setelah dingin, wax yang  mencair  mengalami  pemadatan  dan  bahan menjadi sangat lengket. Setelah ekstraksi menggunakan microwave ,  bahan  didiamkan sejenak  dan  bagian  yang  keras  ( wax )  dipisahkan sehingga  propolis  ekstrak  yang  cair  tanpa wax dihasialkan.  Setelah  itu,  propolis  ekstrak  ini disentrifugasi  untuk  mendapatkan  supernatan yang merupakan propolis ekstrak yang diinginkan.

## Proses pemurnian propolis ekstrak
Proses  pemurnian  yang  dilakukan  pada propolis  ekstrak  adalah  dengan  penyaringan  dari hasil  sentrifugasi  propolis  ekstrak.  Supernatan yang  dihasilkan  setelah  proses  sentrifugasi disaring  menggunakan  kertas  saring    untuk memisahkan      bagian  padatan  yang  tidak  terlarut (sepah)  yang  masih  tertinggal  pada  larutan propolis  ekstrak.      Proses  penyaringan  memakan waktu  sekitar  tiga  hari  pada  suhu  ruang  dan tekanan  1  atm.    Rendemen  propolis  dihitung berdasarkan jumlah propolis ekstrak yang berhasil disaring.  Setelah  itu,  sampel  propolis  ekstrak disimpan di refrigerator sebelum dilakukan proses
identifikasi dan perhitungan kandungan bioflavnoid dengan standar kuersetin.
Rata-rata  rendemen  propolis  ekstrak  yang dihasilkan  adalah  24.43%  untuk  perlakuan konsentrasi dan pemanasan microwave, sedangkan tanpa pemanasan mempunyai rata-rata rendemen  24%.Dari  hasil  perhitungan  rendemen, pemanasan menggunakan
microwave memberikan pengaruh terhadap rendemen. Pengaruh  konsentrasi  propilen  glikol  terbaik dengan  pemanasan  microwave  terhadap  hasil rendemen adalah konsentrasi 20%, yaitu menghasilkan rendemen
sebesar 29.13%. Sedangkan tanpa pemanasan microwave, rendemen propolis pada konsentrasi 20% dan 30% tidak memberikan perbedaan yang signifikan.
Tabel 1. Perlakuan pada proses ekstraksi propolis sarang lebah Apis dorsata dan rendemen yang dihasilkan.
Gambar 4.Rendemen propolis ekstrak dengan variasi perlakuan konsentrasi pelarut propilen glikol dan microwave assisted extraction .
Pada  konsentrasi  propilen  glikol  10%, rendemen yang dihasilkan lebih rendah dibandingkan rendemen yang didapat pada kontrol (tanpa pelarut propilen glikol dan microwave ). Hal ini  bisa  terjadi  karena  pada  pelarut  dengan konsentrasi rendah, proses pengikatan zat terlarut oleh pelarut tidak begitu optimal. Selain itu, proses pemanasan microwave meningkatkan  pemekatan pada bahan ( wax ) yang terpisahkan setelah proses microwaveassisted extraction.
Sedangkan  pada  konsentrasi  propilen  glikol 30%,  proses  ekstraksi  telah  melewati  fase kesetimbangan  maksimal  yaitu  pada  konsentrasi 20%,  sehingga  peningkatan  propilen  glikol  tidak serta  merta  diikuti  peningkatan  rendemen  pada hasil propolis ekstrak.
Tahap selanjutnya dalam penelitian ini adalah identifikasi senyawa bioflavonoid dalam propolis ekstrak.

## Identifikasi senyawa bioflavonoid
Senyawa  bioflavonoid  merupakan  senyawa aktif  yang  mempunyai  aktivitas  antioksidan dengan  mereduksi  radikal  bebas  (Hasan  et  al., 2013).  Pengukuran  kadar  bioflavonoid  total dilakukan dengan metode spektrofotometer metode Chanda dan Dave (2009).
Tabel 2. Kadar flavonoid ekstrak propolis sarang lebah Apis dorsata
Gambar  5. Kadar flavonoid propolis ekstrak dengan variasi perlakuan konsentrasi pelarut propilen glikol dan microwave assisted extraction .
Rata-rata  kadar  bioflavonoid  ekstrak  propolis yang dihasilkan untuk perlakukan variasi konsentrasi  dan  pemanasan  microwave  adalah 513.51  µg/ml,  sedangkan  tanpa  pemanasan microwave  memiliki  rata-rata  kadar  flavonoid sebanyak 382, 98 µg/ml. Kadar flavonoid tertinggi terukur  pada  30%  propilen  glikol  dengan pemanasan  microwave  yaitu  sebanyak  519.05 µg/ml,  sedangkan  kadar  terendah  terukur  pada 20% propilen glikol tanpa pemanasan microwave yaitu sebanyak 333.75 µg/ml.
Semua perlakuan baik menggunakan propilen glikol  maupun  pemanasan  microwave  terhadap ekstrak  propolis  menghasilkan  kadar  flavonoid yang  lebih  tinggi  dibandingkan  kadar  flavonoid yang  dihasilkan  pada  perlakuan  kontrol  (tanpa pelarut  propilen  glikol  dan  microwave).  Hal  ini terjadi  karena  pemanasan  oleh  microwave (gelombang  mikro)  dapat  memecah  dinding  sel melalui  energi  yang  ditransfer  kedalam  pelarut (Destandau,  2013).  Penggunaan  pelarut  berupa propilen  glikol  juga  dapat  mempengaruhi perbedaan  kadar  flavonoid  yang  dihasilkan.  Hal ini dikarenakan propilen glikol dan kuersetin dari golongan  flavonoid  memiliki  sifat  serupa  yaitu bersifat semi polar sehingga propilen glikol dapat
melarutkan flavonoid lebih baik dibandingkan air yang bersifat polar (Monache, 1996).

## PENUTUP
Berdasarkan eksperimen yang telah dilakukan, didapatkan kesimpulan bahwa sarang lebah madu hutan Apis  dorsata dari  Desa  Batu  Dulang, Kabupaten Sumbawa memiliki potensi dimanfaatkan  sebagai  bahan  baku  propolis. Perlakuan  variasi  konsentrasi  propilen  glikol  dan pemanasan microwave pada  proses  ekstraksi sarang  lebah  memberikan  pengaruh  terhadap rendemen  propolis  dan  kadar  flavonoid  propolis yang dihasilkan.
Berdasarkan pengukuran kadar flavonoid pada ekstrak propolis Apis dorsata disimpulkan bahwa perlakuan  yang  terbaik  adalah  perlakuan  dengan kombinasi pelarut 30% dan pemanasan microwave yaitu sebanyak 519.05 µg/ml.

## Ucapan Terima kasih
Penelitian ini dapat terlaksana dengan baik atas pendanaan  dari  Hibah  Kompetitif  Penelitian Dosen  Pemula  (PDP)  dari  Kementerian  Riset Teknologi  dan  Pendidikan  Tinggi,  Indonesia. Selain  itu,  peneliti  juga  berterima  kasih  kepada pihak Science dan Techno  Park Sumbawa (Sumbion) yang telah menyediakan fasilitas untuk mendukung penelitian ini.

## REFERENSI
Bankova, V. 2005. Chemical diversity of propolis and  the  problem  of  standardization. J. Ethnopharmacol. 100, 114–117. Bankova, V. 2009. Chemical Diversity of Propolis makes  it  a  Valuable  Source  of  New
Biologically Active Compounds. J ApiProducts ApiMed Sci 1: 23 – 28. Benskota,  A.H.,  Tezuka,  Y.,  Kadota,  S.  2001. Recent progress in pharmacological research of propolis. Phytoter Res 15: 561 – 571. Burdock, G.A. Review of the biological properties and  toxicity  of  bee  propolis. Food  Chem Toxicol 1998, 36: 347 - 636.
Chanda, S dan Dave, R. 2009. In vitro models for antioxidant  activity  evaluation  and  some medicinal  plants  possessing  antioxidant properties: An overview.  African Journal of Microbiology Research  Vol 3 (13), pp 981- 996.
Farre,  R.,  Frasquet,  I.,  Sanchez,  A.  2004.  El Propolis  y  La  Salud  (Propolis  and    Human
Health).Ars  Pharmaceutica,  Vol.  45,  No.  1, Hal. 21-43.
Hasan,  AEZ.,  Mangunwidjaja,  D.,  Sunarti,  T.C., Suparno,  O.,  dan  Setiyono,  A.  2013. Optimasi  ekstraksi  propolis  menggunakan cara maserasi dengan pelarut etanol 70% dan pemanasan gelombang mikro serta karakterisasinya  sebagai  bahan  anti  kanker payudara. Jurnal Teknologi Industri Pertanian  Vol  23,  No.  1,  Hal.  13-21.Heo, H.J.,  Lee,  C.Y.  2004.  Protective  effects  of quercetin  and  vitamin  C  against  oxidative stress  induced  neurodegeneration. Journal Agric Food Chem , 52: 7514-7517.
Jack,  C.J.,  Lucas,  H.M.,  Webster,  T.C.,  Sagili, R.R.  2016.  Colony  Level  Prevalance  and Intensity of Nosema ceranae in Honey Bees ( Apis  mellifera L.). PLoS  ONE  11  (9): e0163522. DOI:
10.1371/journal.pone.0163522. Julmansyah.  2010. Madu  Hutan  Menekan Deforestasi, Jalan Lain Konservasi DAS dan Adaptasi  Perubahan  Iklim .  Jaringan  Madu Hutan  Sumbawa  (JMHS).CV.  Arti  Bumi Intaran. Yogyakarta.
Koeniger, N., Koeniger, G., and Tingek, S. 2010. Honey Bees of Borneo: Exploring the centre of Apis diversity. Natural History Publications  (Borneo). Kota  Kinabalu, Sabah, Malaysia.
L. Taiz, E. Zeiger. 2008. Plant Physiology edisi 5. Mentor-Marcel et  a l.  2001.  Genistein  in  the  diet reduces the incidence of poorly differentiated prostatic adenocarcinoma in transgenic mice (TRAMP). Cancer Res , 61: 6777-6782. Middleton et  al .  2000.  The  Effect  of  Plant Flavonoids  on  Mamalian  cells  :  Implication for information, heart isease, and cancer .Pharmacol, Rev . 52: 673-751. Miyagi et al . 2000. Inhibit ion of azoxymethane- induced  colon  cancer  by  orange  Juice. Nutr Cancer , Vol. 36: 224-229.
Oldroyd,  B.P.,  Wongsiri,  S.  2006. Asian  Honey Bess:  Biology,  Conservations  and  Human Interactions. Harvard  University  Press Cambridge. United Kingdom.
Rahmawan,  L.S.  2008.    Isolasi  dan  Identifikasi Flavonoid  dari  daun  Dewandaru  (Eugenia uniflora  L). Skripsi .  Univ  Muhammadiyah, Surakarta.
Sforcin, J.M., Bankova, V. 2011. Propolis: Is there a  potential  for  the  development  of  a  new drugs? . J Ethnopharmacol 133: 253 – 260.