UJI EFEK EKSTRAK DAN FRAKSINASI DAUN SALUNG ( Psychotria viridiflora Reinw. Ex. Blume) PADA SEL KANKER PAYUDARA T47D
Eka Maya Cristiandari
Akademi Kebidanan Persada Palembang, Indonesia
E-mail: ekamaya_c@yahoo.com
Diterima : 25 Juni 2018         Direvisi : 05 Juli 2018
Disetujui : 05 Agustus 2018

## ABSTRAK
Kanker  merupakan  salah  satu  penyebab  kematian  yang  utama  dengan jumlah penderita yang terus bertambah setiap tahunnya. Proses timbulnya kanker payudara merupakan kejadian kompleks yang melibatkan berbagai faktor. Selain adanya  defek  pada  gen  BRCA1  dan  BRCA2,  masih  banyak  kelainan  yang  pada prinsipnya meningkatkan aktivitas proliferasi sel serta kelainan yang menurunkan atau  menghilangkan  regulasi  kematian  sel.  Tanaman  salung  merupakan  tanaman famili rubiaceae yang dimanfaatkan oleh masyarakat sebagai pengobatan diduga mengandung  unsur  senyawa  antikanker  pada  sel  kanker  payudara  T47D.  Tujuan penelitian ini untuk mengetahui aktivitas ekstrak dan fraksi Psychotria viridiflora Reinw .ex. Blume dalam menginduksi apoptosis dan menghambat proliferasi pada sel  kanker  payudara  secara  in  vitro.  Penelitian  ini  menggunakaan  sel  T47D payudara  sebagai  objek  dan  menggunakan  beberapa  konsentrasi  dari  ekstrak  dan fraksi daun salung.
Hasil penelitian menunjukkan nilai IC 50 ekstrak etanol 360 μg/ml, fraksi n-heksan 215,31  μg/ml,  fraksi  etil  asetat  103,9  μg/ml,  fraksi  etanol  air  498,57  μg/ml  dan 49,55  cisplatin  μg/ml.  Sehingga  dari  hasil  IC50  diketahui  fraksi  yang  aktif  dari daun salung adalah fraksi etil asetat. Dapat disimpulkan  bahwa ekstrak dan fraksi daun  salung  memiliki  aktivitas  sitotoksik  mampu  berperan  dalam  menginduksi apoptosis dan menghambat proliferasi.
Kata kunci :Daun salung, ekstrak, fraksi

## ABSTRACT
Cancer  is  the  one  of  the  main  causes  of  death  with  total  patient  that growing  every  year.  Process  to  become  a  breast  cancer  will  be  complex  that involves some factor. In addition to defects on BRCA 1 and BRCA 2 gene, there are  a  lot  abnormalities  that  principaliy  increase  cell  proliferation  activity  and decrease or eliminate regulation of cell death. Salung plants is rubiceae family that need as treatment is suspected to countain elements of anticancer on T47D breast cancer cell. The objective of this study was to assess the activity of the extract and fraction  of Psychotria  viridiflora Reinw.  ex.  Blume  in  inducing  apoptotic  and inhibiting  proliferation  on  breast  cancer  cell  in  vitro.  This  study  used  T47D  cell breast cancer as an object and used some concentrations from extract and fraction of salung leaves .
The  result  showed  IC50  extract  ethanol  360  μg/ml,  n-heksan  fraction  215,31 μg/ml, ethyl acetat fraction103,9 μg/ml, water ethanol fraction 498,57 μg/ml and cisplatin 49,55 μg/ml. Based on value of IC50 active fraction of salung leaves in ethyl acetat fraction for further testing the researcher only performs the test on the only active fraction of ethyl acetat fraction. So can be concluded that the extract
and fraction of salung leaves have cytotoxic activity, acting in inducing apoptotic and inhibiting proliferative.
Keyword: Salung Leaves, extracts, fractions

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  salah  satu penyebab  kematian  yang  utama dengan  jumlah  penderita  yang  terus bertambah  setiap  tahunnya.  Sel kanker  pada  awalnya  adalah  sel normal,  karena  adanya  kerusakan komponen berubah menjadi sel ganas yang tumbuh tidak terkendali
(Ruddon,  2007).  Kerusakan  sel  bisa disebabkan  oleh  berbagai  hal,  antara lain  infeksi  virus,  paparan  senyawa karsinogenik  (senyawa  kimia  yang dapat menimbulkan proses pembentukan  sel  kanker),  paparan radiasi  sinar  radioaktif  (sinar  X  dan ultra violet), faktor genetik dan gaya hidup (Mangan, 2003). Proses timbulnya kanker payudara merupakan  kejadian  kompleks  yang melibatkan  berbagai  faktor.  Selain adanya  defek  pada  gen  BRCA1  dan
BRCA2,  masih  banyak  kelainan yang  pada  prinsipnya  meningkatkan aktivitas proliferasi sel serta kelainan yang menurunkan atau menghilangkan regulasi kematian sel (Nugrahaningsih,  2004).  Menurut
WHO  kejadian  kanker  payudara sebanyak  1.677.000  kasus.  Kanker payudara  merupakan  kanker  yang paling  banyak  di  derita  oleh  kaum wanita dengan jumlah 883.000 kasus.
Di  negara  berkembang  terdapat 794.000 kasus dan merupakan penyebab  kematian  pada  wanita  di negara  berkembang  yaitu  sebanyak 324.000  kasus,  insidennya  semakin tinggi  diseluruh  dunia  (Houghton, 2012).  Kanker  payudara  merupakan penyakit  genetik,  akibat  akumulasi kelainan  genetik  dalam  jaringan. Pada penderita kanker payudara yang baru  terdiagnosa  dapat  ditemukan
adanya  mutasi.  Mutasi  ini  dapat melibatkan sedikitnya 4-6 gen regulator  utama,  yang  berada  di kromosom sel kanker payudara. Gen- gen ini berperan menjaga keseimbangan fisiologis antara proliferasi, apoptosis dan diferensiasi (Harris,  1986).  Gen  tumorsupressor ini berfungsi mengendalikan proliferasi atau diferensiasi sel sedangkan gen p53 mengkode
protein  yaitu  protein p53 yang berperan  di  sejumlah  proses  seluler yaitu  transkripsi  gen,  reparasi  DNA, siklus  sel,  stabilitas  genomik,  dan apoptosis.  Sel  T47D  dipengaruhi oleh  adanya p53.  P53 merupakan protein supresor tumor yang berperan utama  dalam  menentukan  stabilitas genetik  dan  proliferasi  sel  (Harris, 1996).  Sel  T47D  adalah  model  sel kanker payudara yang belum resisten terhadap agen kemoterapi doxorubicin, tetapi diketahui memiliki  gen p53 yang  telah termutasi.  Jika p53 tidak  dapat mengikat  respons  element  pada DNA,  maka  akan  mengurangi  atau menghilangkan kemampuannya dalam  meregulasi  siklus  sel  dan menginduksi  apoptosis  (Schafer, et al .,2000). Upaya penyembuhan kanker payudara dengan cara
pembedahan, kemoterapi, terapi hormon,  terapi  radiasi,  dan  terapi imunologi antikanker belum
memberikan  hasil  yang  optimal dikarenakan  obat  tersebut  bekerja tidak spesifik, karena selain menyerang  sel  kanker  juga  merusak sel  normal.  Selain  itu  metode  terapi kanker  masih  tergolong  mahal. Penggunaan  tumbuhan  alami  untuk keperluan  pengobatan,  hingga  saat ini  masih  diminati  sebagian  besar
penduduk  di  Indonesia  sebagai pilihan pengobatan alternatif (Ibrahim,  2010).  Menurut  penelitian golongan  senyawa  dalam herbal medicine mengandung  antara  lain alkaloid, flavonoid, minyak atsiri/terpenoid,  dan  tanin  yang mempunyai potensi sebagai antikanker. Flavonoid berperan dalam in aktivasi karsinogen, antiproliferasi,  penghambatan  siklus sel, induksi apoptosis dan diferensiasi,  inhibisi  angiogenesis,
dan  pembalikan  resistensi  multi-obat atau  kombinasi  dari  mekanisme- mekanisme  tersebut  (Ren  2003). Antioksidan  dan  antikanker  dalam senyawa  flavonoid  dapat  membantu menginduksi  apoptosis  sehingga  sel yang tidak terkontrol akibat
kerusakan  genetik  dapat  ditekan pertumbuhannya  (Silalahi,  2006). Senyawa  flavonoid  dapat  menunda siklus  sel  sehingga  menghambat proliferasi  melalui  mekanisme  yang diperantarai penurunan enzim Xanthin  Oksidase  Siklooksigenase (COX)  dan Lipooksigenase (LOX) yang diperlukan dalam proses prooksidasi (Roth, 1986). Sedangkan senyawa alkaloid memiliki mekanisme  penghambatan  dengan cara  mengganggu  proliferasi  sel karena  senyawa  alkaloid  mampu mengikat tubulin (komponen penyusun  peptidoglikan)  yang  dapat menghambat polimerasi protein (Harbone,  2004).  Penelitian  ini  telah dilakukan terhadap beberapa tanaman yang termasuk dalam famili rubiaceae antara  lain:  tanaman  daun kaca  piring  ( Gardenia  Jasminoides Ellis), tanaman sarang semut ( Myrmecodia pendans Merr & Perry ),  tanaman gambir  ( Uncaria gambir ), tanaman mengkudu
( Morinda Citrifolia L), dan tanaman kopi (Coffea  L). Adapun  kandungan
senyawa yang terdapat dalam tanaman  famili rubiaceae diketahui mengandung senyawa antikanker dan digunakan  sebagai  obat  tradisional, misalnya daun kaca piring ( Gardenia Jasminoides Ellis) yang mengandung senyawa  flavonoid  dan  terpenoid berpotensi  menginduksi  apoptosis dan menghambat proliferasi pada sel (Lestari,  2010),  gambir  ( Uncaria gambir ) mengandung senyawa flavonoid  yang  bersifat  antioksidan (Noviantri  dkk,  2004),  sarang  semut
( Myrmecodia pendans Merr & Perry ) mengandung  flavonoid  dan  tanin yang memiliki aktivitas antiproliferasi dan antikanker (Budhiani,  2007),  buah  mengkudu yang  mengandung  senyawa  alkaloid mampu mengacaukan gen sel kanker saat  melakukan  proliferasi  pada  sel kanker  payudara  (Wang et  al ,.2007) serta  biji  kopi  yang  mengandung senyawa  alkaloid  yang  bersifat antikanker  dan  antioksidan  (Haquea et al ,.2013). Metode yang digunakan dalam  penapisan  senyawa  aktif antikanker  dapat  dilakukan  dengan cara kemotaksonomi yaitu didasarkan pada  kemiripan  kandungan  kimia pada  familia  atau  genus  tanaman yang sama. Tanaman salung merupakan tanaman famili rubiaceae yang  dimanfaatkan  oleh  masyarakat
Musi  Rawas  sebagai  pengobatan secara turun menurun untuk
mengobati  berbagai  penyakit  (Salni, 2009),  diduga  mengandung  unsur senyawa yang sama sehingga penelitian ini diajukan untuk
mengetahui  fraksi-fraksi  senyawa antikanker  yang  terkandung  dari ekstrak  dan  fraksinasi  daun  salung ( Psychotria  viridiflora )  serta  efek pada sel kanker payudara T47D.

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan Blender, tabung elemeyer, corong, kertas saring, rotary evaporator ,  gelas  ukur,  labu  pisah 1000  ml,  penangas  air,  cawan  petri, tiang  penyangga,  botol,  timbangan analitik,  plat  silica,  mikropipet  10, 20, 200 dan 1000 µl, botol duran 100 ml, conical  tube ,  pipet  pasteur  steril atau  mikropipet  1000  µl,  tabung reaksi kecil, rak tabung kecil, 96- well plate , 6- well plate, conical tube , dan ELISA reader dengan panjang gelombang  595  Nm  dan  550  Nm, votex ,  tabung  sentrifus  1,5  ml,  rak tabung kecil, sentrifugator, inkubator CO 2 , penangas air (37°C) dan FACS- Calibur,  simplisia  dari  daun  salung, pelarut  n-heksan,  etil  asetat  dan etanol  air,  cisplatin,  sel  T47d  yang merupakan koleksi dari laboratorium parasitologi UGM, FBS ( Fetal Bouvin Serum ) 10%, penisilin- streptomisin  1%,fungizone  0,5%, tripsinEDTA( Ethylenediaminetetraa cetic  acid )  0,25%,  PBS  dan  MK
(DMEM/RPMI),3-(4,5dimetilthiazol- 2-il)-2,5-difeniltetrazolium  bromida
(MTT), SDS ( Sodium Dodecyl Sulphate )  10%  dalam  0,01  N  HCl, stok sampel (10mg) dalam eppendorf,  pelarut  DMSO,  Media Kultur (MK), Phosphat Buffer Saline (PBS),  tripsin-EDTA  0,25%,  RNase, Propidium iodide, Triton-X, buangan untuk media bekas dan PBS
Jalannya Penelitian Ekstraksi dan Fraksinasi
Ekstraksi  dan  fraksinasi  simplisia daun salung dilakukan di Laboratorium Kampus Biologi UNSRI Indralaya Palembang.

## Penentuan Golongan Senyawa
Golongan  senyawa  yang  terdapat dalam  fraksi  aktif  akan  ditentukan dengan  uji  KLT.  Prosedur  uji  KLT adalah  sebagai  berikut  fraksi  aktif dengan  konsentrasi  1%  ditotolkan pada plat silika gel F 254 ukuran 1cm x
7cm, kemudian dikembangkan dengan eluen/ fase gerak yang sesuai, biarkan hingga eluen sampai diujung plat  silika  gel  F 254 lalu  dikeluarkan dan  biarkan  mengering.  Plat  silika gel F 254 disemprotkan dengan larutan H 2 SO 4 1%  lalu  diletakkan  diatas hot plate. Diamati  bercak  warna  yang muncul

## Preparat dan Panen Sel
Sel diambil dari tangki nitrogen cair, kemudian  dicairkan  dalam  penangas air
.  Setelah  itu  disemprot dengan  etanol  70%,  sel  dalam cryotube  dimasukkan  ke  dalam  LAF dan dipindahkan
dengan menggunakan  mikropipet  ke  dalam tabung  conikel  yang  berisi  suspensi sel  disentrifugasi  pada  600  rpm selama  5  menit,  lalu  sepernatan dibuang.  Selanjutnya  ditambahkan media  yang  baru  kedalam  konikel yang  berisi  pelet  dan  disuspensikan hingga homogen. Suspensi sel ditumbuhkan  dalam tissue  culture dish yang diinkubasi dalam inkubator CO 2 5%  dengan  suhu  37 o C.  Kondisi sel  selanjutnya  diamati  di  bawah mikroskop kemudian diinkubasi pada inkubator  CO 2 5%.  Setelah  24  jam dilakukan  penggantian  media  kultur. Sel  ditumbuhkan  sampai  konfulen dan jumlahnya cukup untuk perlakuan. Setelah konfulen dilakukan  panen  sel  dengan  cara membuang  media  kultur  lalu  dicuci dengan  PBS  2x  untuk  melepas  sel dari  dasar culture  dish ditambahkan tripsin-EDTA 0,25% kemudian diinkubasi  selama  3  menit  dalam
inkubator CO 2, tripsin_EDTA diinaktivasi  dengan  menambahkan media  kultur  kemudian  suspensi  sel diresuspensi lalu suspensi sel dipindahkan  pada conical  tube . Jumlah sel dihitung dengan
menggunakan hemocytometer dan cell counter .
. Rumus Perhitungan sel T47D yaitu:

## Pembuatan  Larutan  Stok  Uji Ekstrak dan Fraksi
Sebelum  dilakukan  uji  sitotoksisitas, terlebih  dahulu  dibuat  larutan  stok sampel  dengan  cara  mencampur ekstrak  etanol,  fraksi  etil  asetat, fraksi  n-heksan  dan  fraksi  etanol  air dari daun salung ( Psychotria viridiflora Reinw. Ex. Blume)
dengan  media  DMEM  ( Dulbecco’s modification  of  Eagle  medium). Larutan  stok  dibuat  dengan  cara menimbang ekstrak etanol, fraksi etil asetat,  fraksi  n-heksan  dan  fraksi etanol air dari daun salung kemudian ditambah DMSO atau tween sebanyak  30
dan  ditambahkan dengan  media  DMEM  hingga  1000
,  sehingga  diperoleh  konsentrasi tertentu.  Dari  konsentarsi  larutan tersebut  kemudian  dibuat  seri  kadar dan  larutan  dalam  berbagai  kadar tersebut  dapat  diujikan  pada  sel T47D.  Pembuatan  larutan  uji  ini dilakukkan  didalam  Laminar  Air Flow  Cabinet  secara  aseptis  (Utami, 2011).

## Uji Sitotoksisitas
Dari  uji  ini  dapat  diperoleh  kadar yang  menyebabkan  penghambatan pertumbuhan  sel  sebesar  50%  dari populasi sel atau IC 50 yang
merupakan  parameter  ketoksikan sehingga  dapat  diketahui  kisaran kadar  yang  berefek  toksik  terhadap sel  kanker.  Uji  sitotoksisitas  ini dilakukan  dengan  metode  MMT assay.Sebelum dilakukan uji sitotoksisitas terlebih dahulu dilakukan  preparasi  dan  panen  sel. Jumlah sel dihitung dengan menggunakan hemocytometry . Setelah panen sel dibuat larutan stok sampel sehingga diperoleh konsentrasi  640;  320;  160;  80;  40 µl/ml untuk ekstrak etanol dan fraksi n-heksan,fraksi  etil asetat,  dan  fraksi etanol air 640; 320; 160; 80; 40 µl/ml untuk  Cisplatin  diencerkan  dengan DMEM sehingga diperoleh
konsentrasi 200, 100, 50, 25 µl/ml. Selanjutnya  sel  diberi  perlakuan ekstrak  dan  fraksi,  setelah  itu diinkubasi  dalam  inkubator  CO 2 selama  24  jam,  kemudian  tiap sumuran diberi larutan MTT sejumlah 10 µl, empat jam kemudian dilanjutkan dengan pemberian reagen stopper (SDS 10 % dalam HCL 0,01
N). Kemudian plate dibungkus dengan  kertas  atau  alumunium  foil dan inkubasikan ditempat gelap pada temperatur  kamar  selama  semalam. Setelah  24  jam  plate  dimasukkan  ke dalam ELISA reader Baca
absorbansi  masing-masing  sumuran dengan  panjang  gelombang  550  nm. Pengukuran  dilakukan  pada  panjang gelombang  550  nm,  yaitu  panjang gelombang  optimum  agar  diperoleh pengukuran yang peka dan spesifik. Data dari uji sitotoksisitas digunakan untuk menghitung kadar yang menyebabkan  hambatan  proliferasi sel  50%  (IC 50 )  dengan  anlisa  probit.
Persentase sel hidup setelah perlakuan pada masing-masing kadar dihitung dengan rumus:
Dibuat  grafik,  dihitung  prosentase kematian  sel  dan  dianalisis  harga IC 50 . Untuk menentukan IC 50 , diperlukan  persamaan  kurva  standar dari % kematian sel sebagai sumbu y dan  konsentrasi  fraksi  antioksidan sebagai  sumbu  x.  IC 50 dihitung dengan  cara  memasukkan  nilai  50% ke  dalam  persamaan  kurva  standar sebagai  sumbu  y  kemudian  dihitung nilai  x  sebagai  konsentrasi  IC 50 . Semakin  besar  harga  IC 50 maka senyawa  tersebut  semakin  tidak toksik (Anggrianti, 2008).

## Analisis Data
Uji  sitotoksik  diperoleh  dari  hasil pembacaan absorbansi dengan menggunakan  ELISA  reader  pada setiap  sumuran  yang  kemudaian dikonvensi  dalam  persen  sel  hidup (viabilitas  sel)  dengan  menggunakan Microsoft  Excel  2007.  Pada  uji sitotoksik  presentase  sel  yang  hidup digunakan  untuk  menentukan  nilai IC 50 merupakan  konsentrasi  yang dapat  menyebabkan  penghambatan pertumbuhan  sel  banyak  50%  dari populasi  sel.  Dalam  menentukan nilai  IC 50 menggunakan  Microsoft Excel  2007  (Regresi  Linear  dari  % kematian  sel  dan  kadar  konsentrasi perlakuan). Data persen kematian sel ditampilkan  dalam  bentuk  grafik garis.  Nilai  IC50  diperoleh  dengan mengganti  nilai  y=50  (Ghosal  and Mandal, 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
HASIL Ekstraksi  dan  Fraksinasi  Daun Salung ( Psychotria viridiflora

## Reinw. Ex. Blume)
Pada hasil penelitian ini dapat dilihat bahwa  dari  250  gram  simplisia  daun salung  dihasilkan  sebanyak  45,7 gram  ekstrak  yakni  18,20%  dari jumlah simplisia. Kandungan ekstrak dalam simplisia berbeda-beda tergantung  pada  jumlah  senyawa organik  didalamnya.  Ekstrak  yang sudah  dijadikan  pasta  dibagi  lagi untuk perlakuan ekstrak etanol terhadap  sel  kanker  payudara  T47D seberat  13,9  gram  atau  kadar ekstraknya sebesar 30,4%. Ekstrak kental daun salung difraksinasi  dengan  metode  fraksi cair-cair (FCC) menggunakan 3 jenis pelarut  dengan  tingkat  kepolaran yang  berbeda,  yaitu  n-heksan  (non polar),  etil  asetat  (semi  polar)  dan metanol  air  (polar),  dari  fraksinasi tersebut  didapatkan  berat  masing- masing fraksinasi sebagai berikut:
Tabel 1 Hasil Fraksinasi ( Psychotria  viridiflora Reinw  .Ex. Blume) Pelarut Berat (gram) Persentase (%) Fraksi  n- heksan Fraksi  etil asetat Fraksi etanol air 4,7 8,4 18,7 14,8 26,4 58,8 Total 31,8 100 Dari  tabel  1  dapat  dilihat  hasil fraksinasi  ekstrak  daun  salung  yang memiliki  berat  lebih  besar  adalah fraksi etanol air dibandingkan dengan  fraksi  n-heksan  dan  etil asetat.  Hal  tersebut  dikarenakan pelarut etanol air mempunyai kemampuan  memisahkan  senyawa
dalam ekstrak berdasarkan kepolarannya (Hutauruk, 2010). Ketiga  macam  fraksi  yang  diperoleh akan  diuji  aktivitas  antikankernya terhadap sel T47D untuk menentukan fraksi aktifnya.

## PEMBAHASAN
Penentuan Golongan Senyawa Untuk menentukan golongan senyawa yang terdapat dalam ekstrak dan fraksi daun salung menggunakan metode  Kromatografi  Lapis  Tipis
(KLT)  yaitu  mengamati  bercak warna yang muncul.
Gambar 1 Uji KLT Daun Salung (1) Ekstrak, (2) Fraksi N- heksan,  (3)  Fraksi  Etil Asetat, (4) Fraksi etanol Air Pada pengamatan bercak yang muncul  setelah  uji  KLT  pada
Gambar 1 diatas, maka hasil uji KLT dirangkum  dalam  tabel  2  dibawah ini:
Tabel  2  Hasil  Uji  KLT  Ekstrak dan  Fraksi  Daun  Salung ( Psychotria viridiflora Reinw. ex Blume) Bahan Uji Warna Bercak Golongan Senyawa Ekstrak etanol Fraksi n- heksan Fraksi etil asetat Fraksi etanol air Coklat, merah muda,orange,hijau Hijau dan orange Merah muda dan Coklat Coklat Terpenoid,alkaloid flavonoid dan tanin Terpenoid dan flavonoid Alkaloid dan Flavonoid Tanin Pada uji KLT diatas menunjukkan  bahwa  pada  ekstrak dan  fraksi  daun  salung  terdapat komponen terpenoid, flavonoid, alkaloid, dan tanin. Dimana kandungan senyawa antikanker dalam  daun  salung  belum  pernah diteliti,  maka  digunakan  metode dengan  cara kemotaksonom i  yaitu didasarkan pada kemiripan kandungan  kimia  pada  famili  atau genus  yang  sama.  Hal  ini  sejalan dengan penelitian yang tanaman satu famili rubiceae seperti daun mengkudu memiliki kandungan penting  seperti  flavonoid,  alkaloid (Budhiani,  2007).  Penelitian  ini  juga sejalan  dengan  penelitian  Lestari (2010),  dimana  hasil  penelitian menunjukan  bahwa  senyawa  yang terkandung  dalam  daun  kaca  piring yang satu famili dengan daun salung mengandung terpenoid dan flavonoid,  serta  biji  kopi  yang mengandung  senyawa  flavonoid  dan alkaloid  (Haquea et  al. 2013),
Subroto dan Saputro (2006)
menyebutkan  bahwa  ekstrak  dari sarang semut mengandung flavonoid, alkaloid dan tanin.

## Uji Sitotoksik
Uji  sitotoksisitas  merupakan  uji  in vitro yang pada umumnya menggunakan  kultur  sel.  Uji  ini merupakan  uji  pendahuluan  untuk mengetahui potensi ketoksikan senyawa  terhadap  sel  kanker  dan dapat digunakan sebagai acuan untuk menentukan kadar pada uji selanjutnya  yaitu  uji  antiproliferasi. Dari  uji  ini  dapat  diperoleh  kadar yang  menyebabkan  penghambatan pertumbuhan  sel  sebesar  50%  dari populasi sel atau IC 50 yang merupakan  parameter  ketoksikan sehingga  dapat  diketahui  kisaran
kadar  yang  berefek  toksik  terhadap sel kanker.
Tabel  3  Hasil  Uji  Sitotoksik
Ekstrak  dan  Fraksi  Daun Salung Gambar  2  Grafik  Persamaan  Linear Antara  %  Kematian  dengan Kadar Konsentrasi, (1) Ekstrak  Etanol,  (2)  Fraksi N-heksan,  (3)  Fraksi  Etil Asetat,  (4)  Fraksi  Etanol Air, (5) Cisplatin. Berdasarkan Tabel 4.3 menunjukan  bahwa  kematian  sel  (% sel  mati)  berbeda-beda  disetiap konsentrasi perlakuan yang diberikan. Kematian sel yang tertinggi  terdapat  pada  fraksi  etil asetat  dimana  pada  konsentrasi  640
μg/ml  terdapat  70,9%  sel  yang  mati. Kemudian  disusul  oleh  fraksi  n- heksan  dengan  konsentrasi  640 μg/ml  terdapat  67,6%  sel mati.  Pada sel  T47D  yang  diberi  perlakuan dengan fraksi etanol air hanya sedikit sel yang mati dimana pada konsentrasi  640  μg/ml  terdapat 54,5% sel yang mati. Uji sitotoksisitas dilakukan untuk konfirmasi dari kemampuan sitotoksik  bahan  uji  terhadap  sel T47D.  Berdasarkan  tabel  4.3  diatas diketahui  bahwa  aktivitas  sitotoksik sebagai  antikanker  pada  sel  T47D ditunjukkan  oleh  ekstrak  etanol, fraksi n-heksan, dan fraksi etil asetat daun  salung.  Hal  ini  ditunjukkan dengan  semakin  tinggi  konsentrasi bahan  uji  semakin  meningkat  persen kematian  sel  T47D.  Sedangkan  pada fraksi  etanol  air  persen  kematian  sel T47D  hampir  tidak  terhambat  oleh fraksi etanol air. Hal ini terlihat pada konsentrasi  640  μg/ml  terdapat 54,25% sel T47D yang mati sehingga bisa  dikatakan  fraksi  etanol  air  tidak toksik.  Kematian  sel  terbesar  terjadi pada  fraksi  etil  asetat  yang  dimana pada  konsentrasi  tertinggi  yaitu  640 μg/ml  jumlah  sel  T47D  yang  mati 70,9%.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa keberadaan  senyawa  aktif  yang mempunyai  efek  sitotoksik  adalah fraksi etil asetat.
Berdasarkan  tabel  4.3  dan gambar  4.6  nilai  IC 50 yang  terendah adalah  fraksi  etil  asetat  dengan  nilai IC 50 103,9  μg/ml  dan  merupakan fraksi  paling  aktif.  Nilai  tersebut menunjukkan bahwa fraksi etil asetat cukup berpotensi untuk dikembangkan dalam penelitian lebih lanjut mengingat kandungan
senyawanya yang belum murni. Nilai IC 50 dari  fraksi  etil  asetat  untuk masuk  dalam  kategori  cukup  aktif sebagai  senyawa  yang  memiliki
aktivitas  sitotoksik  ekstrak  terhadap sel  kanker  hal  ini  sesuai  dengan Weerapreeyakul et  al. (2012)  yang menyatakan bahwa klarifikasi aktivitas  sitotoksik  ekstrak  terhadap sel kanker dapat digolongkan kategori sangat aktif jika nilai IC 50 < 10  μg/ml,  kategori  aktif  jika  nilai IC 50 10-100  μg/ml  dan  kategori cukup  aktif  jika  nilai  IC 50 100-500 μg/ml.
Pada cisplatin yang  merupakan kontrol  positif  nilai  IC 50 yang dihasilkan  sangat  rendah  yaitu  49,55 μg/ml  sehingga  lebih  toksik  dari ekstrak  dan  fraksi  daun  salung. Tingkat  keberhasilan  terapi  kanker dengan cisplatin sebanding  dengan tingginya dosis yang diberikan. Akan tetapi,  penggunaannya  dibatasi  oleh efek  sampingnya  terhadap  jaringan normal.  Di  antara  berbagai  efek samping  yang  mungkin  terjadi  pada penggunaan cisplatin , seperti ototoksisitas, gastrotoksisitas , supresi  sumsum  tulang,  dan  reaksi alergi.  Efek  samping  utama  yang membatasi pemberian dosis cisplatin adalah  nefrotoksisitas  (Kurniandari, 2015) Belum ada penelitian mengenai  aktivitas  antikanker  dari ekstrak  dan  fraksi  daun  salung namun berdasarkan penelitian sebelumnya  pada  tumbuhan  satu famili rubiceae , berdasarkan penelitian Yulia (2009) pada fraksinasi daun mengkudu menunjukkan nilai IC50 yang rendah 6,9  μg/ml  dan  menunjukkan  adanya
kenaikan persen kematian sel.

## A. KESIMPULAN
Dari penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan:  Nilai  IC 50 ekstrak etanol  daun  salung  pada  sel  T47D kanker  payudara  sebesar  360  μg/ml, fraksi n-heksan sebesar 215,31
μg/ml, fraksi etil asetat sebesar 103,9 μg/ml,  fraksi  etanol  air  sebesar 498,57  μg/ml  .Jadi  fraksi  yang mempunyai  aktivitas  cukup  baik adalah  fraksi  etil  asetat.  Golongan senyawa  yang  aktif  terdapat  dalam ekstrak  dan  fraksi  daun  salung mengandung alkaloid dan flavonoid.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis
menyampaikan terima kasih kepada: Dr. dr. H. Mgs. Irsan  Saleh,  M.Biomed  selaku  ketua program  studi  Biomedik,  Drs.  Joko Marwoto,  MS,  selaku  koordinator BKU,  DR.  Salni,  MSi  selaku Pembimbing satu yang telah membimbing dengan baik, dr. Triwani,  M.Kes  selaku  pembimbing dua, seluruh staf dosen dan karyawan bagian  Biologi  Fakultas  Kedokteran Universitas  Sriwijaya,  Kedua  orang tuaku  yang  selalu  mensuportku, suami  dan  ketiga  buah  hatiku  yang selalu mendukung dan memberi doa, Direktur  dan  Seluruh  Staf  Akademi Kebidanan  Persada  palembang  yang telah  membantu  dalam  penyelesaian Tesis ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdul,  R.,  Sugeng,  R.,  2004, Aktivitas Antioksidan dan Antiradikal Buah Mengkudu (Morinda  citrifolia,  L) ,  Laporan Penelitian lembaga penelitian UGM, Yogyakarta. Anggrianti, Padmi., 2008. Uji Sitotoksik  ekstrak  etanol  70% buah  kemukus  (Piper  cubeda L)terhadap sel payudara . Surakarta: Fakultas Farmasi Universitas Muhammadyah Surakarta Aziz AYM, Omar RA, Subramani T, Yeap  KS,  Ho  YW,  Ismail  HN, et al. Damnacanthal  Is  A  Potent
Inducer Of Apoptosis With
Anticancer Activity By Stimulating p53  and  p21  Genes  In  MCF-7 Breast Cancer Cells . 526 Jurnal e- Biomedik  (eBm),  Volume  3, Nomor  1,  Januari-April  2015 Oncology  Letters.  2014.7:  1479- 1484.
Budiani  DR.,  Setiawan  Y.,  Wijono WY.,  Pesik  RN.  2007, Pengaruh Ekstrak  Batang  Sarang  Semut (Myrmecodia  pendans,  Merr  & Perry) Terhadap Ekspresi Protein p53  Mutan  Galur  Sel  Kanker Payudara T47D . PIT,IAPI Banjarmasin Burdall, E.S., Hanby M.A.,
Landsdown,  R.J.M.,  dan  Speirs, V.,  2003, Breast  Cancer  Cell Line,  Breast  Cancer  Res .,  5(2): 89-95. CCRC, 2009. Penghitungan sel . Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. http//www.ccrc.farmasi.ugm.ac.id .  Diakses  pada  tamggal  14
Desember 2016 Cooper GM and Hausman RE, 2004, The  Cell:  A  Molecular  Approach ,
Fifth  Edition,  ASM  Press  and Sinauer Associates, Inc.
Dalimartha,  S.,  2004, Deteksi  Dini Kanker  dan  Simplisia  Antikanker ,
Penebar Swadaya, Jakarta
Doyle,  A.,and  Griffiths  J.  B.,  2000.
Cell  and  Tissue  Culture  for medical Research , John Willey &
Sons LTD, England
Dhulipala,  V.C.,  Welshons,  W.V., and Reddy, C.S., 2006, Cell Cycle Proteins in Normal and Chemically  Induced  Abnormal Secondary Palate Development: a
Review, Human Exp. Toxicol. 25: 675-682 Freshney,  RI.  2005. Culture  of Animal  Cell:  A  Manual  of  Basic Techique.Fifthy Edition. New
Jersey. J willey
Fisher DE. 1994. Apoptosis in cancer therapy:  crossing  the  threshold . Cell.78: 539-542 Gewies  A,  2003.  Introduction  of apoptosis. Aporeview 1:1-26 Hanahan,  D.  dan  Weinberg,  A.R. 2002.  The  Hallmarks  of  Cancer  . Cell. 100: 57-70 Handa  S.S.,  Khanuja  S.P.S.,  Longo G.  Et  al.,  2010. Extraction Thechnologies  for  Medicinal  and
Aromatic  Plants .  ICS  UNIDO.
Trieste.p.21-22 Harborne.2004. Metode  Fitokimia Penunutun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan .Ed II.Bandung : ITB Harris.DC. 2003. Quantitaive Chemical Analysis 6th Ed. Philadelphia  (US):  WH  Freeman and Co Haquea MR, Ansaria SA, Raskish A.
2013. Coffea arabica seed extract stimulate  the  cellular  immune function  and  cyclophosphamide- induced immunosupression in mice .Iranian  J  Pharmaceutic  Res
12 (1):101-108 Hermawati,R,&Sasmito,S.2014. Khas iat Ajaib Sarang Semut.Jakarta :Padi. http:www.abcam.com/indeks.html
/datasheet=14899,diakses Desember 2016.Jakarta Hermansyah.,  Herlina  SugiyanaM Harashima.2010. Yeast
Saccharomycess  Cerevisiae  as model to identtify mengkudu as an anticancer medicinal plants candidates  with  antiproliferatif properties .
Ibrahim,  Syarif  dan  Syarifuddin Wahid.  2010. Immunotherapy  on Breast  Cancer The  Indonesia Journal of medical Science, 2 (1): 54-60
Kimball.JW . 1990 .Biology. Erlangga. Jakarta . Robbins  and  cotran  Pathologic  basic of  disease,  7th  Ed.  Philadelphia: Elservier Saunders. 2005 Kurniandari,N.,Susantiningsih, T., dan  Berawi,  K.  N.,2015.  Efek ekstrak  etanol  kulit  jeruk  nipis sebagai  senyawa  nefroprotektor terhadap  gambaran  histopatologis ginjal  yang  diinduksi  cisplatin. Majority , 4 (9) ;140-143 Lapenna, S., and Giordano, A., 2009,
Cell Cycle Kinases as Therapeutic Targets  for  Cancer ,  Nat.  Rev.
Drug Discov. 8(7): 547-566 Larasati,  Sarmoko.  2012. Regulasi siklus sel, cancer chemoprevention Research Center , Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta
Lestari,  P.  (2013). Efek  Kombinasi Ekstrak  Aktif  Daun  Poguntano
(Picria  fel-terrae  Lour.)  dengan Doxorubicin  terhadap  Sel  Kanker Payudara  secara  In  Vitro .  Tesis. Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Mangan  Y.  2009. Solusi  Sehat Mencegah dan Mengatasi Kanker.
PT. Agro Media Pustaka, Jakarta..
Meiyanto,E.,R.,Fitria,danR.,Sugeng. 2007. ’Efek Sitotoksik Fraksi Semipolar Ekstrak Metanolik Kulit Batang Cangkring (Erytharina Fusca Lour.) Terhadap  Sel  Hela’ .Majalh  Obat Tradisional,11(41):11 Nugrahaningsih, Ekspresi  Protein
Bcl-2  pada  Kanker  Mammae ,  M Med Indonesiana, 2004, Vol. 39  : 53 – 57.
Putra  SE.  2007. Alkaloid:  Senyawa
Organik  terbanyak  di  Alam . www.chem-Is- Try.org/artikel_kimia/biokimia/al kaloid_senyawa_organik_terbany
ak_di alam  [internet].  [diunduh 2014 Maret 13].
Rebecca  A.  Alderden,  Matthew  D. Hall,  and  Trevor  W.  Hambley. 2006. The Discovery and Development  of  Cisplatin .  J. Chem. Ed 83: 728-724 Ren,W.,Qiao,Z.,Wang,H.,Zhu,L.,Zha ng,L.,2003, Flavonoids:Promosing Anticancer Agents ,Medicinal Reserach Review,23(4):519-534 Ritiasa,  K.,  dkk.,2000.  Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Departemen Kesehatan  RI  DIRJEN  POM Direktorat Pengawasan Obat Tradisional. Rudhon  AY. Gangguan  Siklus  Sel
Dan  Mutasi  Gen  Pada  Kanker Payudara 2007 . 04:  (10).  CDK- 209.
Robbins, S. L., Kumar, V., & Cotran, R.  S.  (2002). Dasar  patologi penyakit .  Edisi  5.  Alih  bahasa  : Tjarta, A., Himawan, S., Kurniawan. Jakarta : EGC. Robinson, T.1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tingkat Tinggi ,ITB:Bandung Roth  A,  Kuballa  B,  Bounthanh  P, Sevent  T,  Beck  JP,  Anton  R,
1986. Cytotoxic Activity of Polyndoline Alkaloids of Psychotria For steriana (Rubiaceae) Universitas  Louis
Pasteur.France Salni,  2003. Karakterisasi  dan  Uji Aktifitas Topikal Senyawa antibakteri dari Daun Karamunting (Rhodormyrtus tomenfusa  (Ait) Hassk  Desertasi Penerbit ITB Savitri A, Larasati A,Utami EDR.2015. Kupas  Tuntas  Kanker Payudara,  Leher  Rahim  dan Rahim .Pustaka Baru Press.Yogyakarta
Smeltzer,  S.C.  &  Bare  B.G.  (2002).
Buku  ajar  keperawatan  medikal bedah edisi  8  volume  1.  Jakarta  : EGC. Soeksmanto A, Subroto, MA, Wijaya H, Simanjuntak P. 2010. Anticancer Activity testfor Extract of Sarang Semut Plant( Myrmecodya  Pendens)  to  HeLa and MCM-B2Cells. Pakistan Journal  of  Biological  Science
13(3): 148-151. Subroto,  M.A  &  Saputro  H.  2006. Gempur  penyakit  dengan  sarang semut .Penebar  Swadaya.  Jakarta. Hal.2 Sudiana  IK. Patobiologi  Molekuler
Kanker . Jakarta: Salemba Medika; 2008.p. 29-32.
Ulfa  M,2010. Flowcitometry  untuk Evaluasi Aktivitass obat Antiplasmodial  pada  Gametosit Plasmodium  Falciparum .Malaria Journal:9:49
Utami Dewi,2011. Aktifitas Sitotoksik Isolat  5  Fraksi  EtilAsetat  Ekstrak Petroleumeter Daun Phaleria Macro  Carva  (Scheff)  boerl.Pada Turunan  Kanker  Serviks  manusia (Hela) . Jurnal Ilmiah Kefarmasian,1(1):17-25. Wang  YM,  West  JB,  Jensen  JC,
Nowick  D,  Su  C,  Palu  AK,  et  al.
Morinda  Citrifolia  (NONI): A
Literature  Review  And  Recent Advances  In  Noni  Research .  Acta pharmacol  Sin.  2012.  233:  1127- 1141. Yulia  .2009. Uji  Penghambatan Proliferasi  Sel  Hela  dan  Sel  Raji oleh Ekstrak Etanol Buah Mengkudu  (Morinda  Cirifolia) Tesis. Fakultas Farmasi Universitas Pancasila Zampieri,  L.,  Bianchi,  P.,  Ruff,  P., dan Arbuthnot, P., 2002, Differential modulation by estradiol  of  P-glycoprotein  drug
resistance  protein  expression  in cultured  MCF7  and  T47D  breast cancer  cells,  Anticancer Res.,  22 (4):2253-9.