## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL ASCIDIAN
Herdmania Momus DENGAN METODE DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)

## ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF ETHANOL EXTRACTS OF ASCIDIAN
Herdmania momus USING DPPH METHOD (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)
Frelinsia V.M Damanis 1) , Defny S Wewengkang 1) , Irma Antasionasti 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *damanisv@gmail.com

## ABSTRACT
Ascidian  Herdmania  momus  is  one  of  the  components  of  coral  reef  biota  that  has  bioactive potential.  Bioactive  compounds  function  as  self-defense  and  also  function  for  human  life,  one  of which  can  be  used  as  a  source  of  antioxidants.  The  purpose  of  this  study  is  to  determine  the antioxidant  activity  from  the  ethanol  extracts  of  the  Ascidian  Herdmania  momus.  Ascidian Herdmania  momus  was  extracted  using  maceration  method  with  ethanol  as  a  solvent.  As  a parameter,  testing  of  antioxidant  activity  was  carried  out  by  the  DPPH  (1,1-diphenil-2- picrylhydarzyl)  method  measured  using  UV-Vis  spectrophotometry  with  variations  in concentrations of 25, 50, 75, 100, and 125 μg / mL. The results of the average % inhibition values obtained were 59.13% (25 μg / mL), 60.93% (50 μg / mL), 61.73% (75 μg / mL), 63.86% (100 μg / mL) and 66.16% (125 μg / mL). The highest antioxidant activity was found at a concentration of 125 μg / mL with an average % inhibition value of 66.16%. The conclusion is the ethanol extracts of Ascidian Herdmania momus was shown to have antioxidant activity in each concentration of the test.
Keywords : Ascidian Herdmania momus, Antioxidants, Extraction, DPPH

## ABSTRAK
Ascidian Herdmania momus merupakan salah satu komponen biota penyusun terumbu karang yang mempunyai  potensi  bioaktif.  Senyawa  bioaktifnya  berfungsi  sebagai  pertahanan  diri  dan  juga berfungsi  bagi  kehidupan  manusia,  salah  satunya  dapat  dijadikan  sebagai  sumber  antioksidan. Tujuan dari penelitian ini yaitu, untuk mengetahui aktivitas senyawa antioksidan dari ekstrak etanol Ascidian Herdmania  momus. Ascidian Herdmania  momus diekstraksi  menggunakan  metode maserasi  dengan  etanol  sebagai  pelarut.  Sebagai  parameter,  pengujian  aktivitas  antioksidan dilakukan  dengan  metode  DPPH  (1,1- diphenil -2- picrylhydarzyl )  yang  diukur  menggunakan Spektrofotometri UV-Vis dengan variasi konsentrasi 25, 50, 75, 100, dan 125 μg/mL. Hasil nilai % inhibisi rata-rata yang didapat yaitu 59.13% (25 μg/mL), 60.93% (50 μg/mL), 61.73% (75 μg/mL), 63.86%  (100  μg/mL)  dan  66.16%  (125  μg/mL).  Aktivitas  antioksidan  tertinggi  terdapat  pada konsentrasi  125  μg/mL  dengan  nilai  %  inhibisi  rata-rata  66.16%.  Kesimpulan  yang  didapat  yaitu ekstrak  etanol  Ascidian Herdmania  momus terbukti  memiliki  aktivitas  antioksidan  disetiap konsentrasi pengujian.
Kata Kunci : Ascidian Herdmania momus , Antioksidan, Ekstraksi, DPPH

## PENDAHULUAN
Ascidian merupakan salah satu komponen  biota  penyusun  terumbu  karang yang  mempunyai  potensi  bioaktif,  sehingga menjadikan ascidian target yang sangat menar ik karena keanekaragamannya yang tinggi dan unik diantara avertebrata laut karena menghas ilkan sejumlah besar senyawa yang mengandu ng  nitrogen  (Wang  and  Namikoshi,  2007). Senyawa  bioaktif  ascidian  berfungsi  sebagai pertahanan  diri  dan  juga  berfungsi  bagi kehidupan manusia,  yaitu sebagai  antikanker, antiinflamasi,  antimikroba  dan  antioksidan (Khoeri, 2009).
Antioksidan  atau  senyawa  penangkal radikal  bebas  merupakan  zat  yang  dapat menetralkan  radikal  bebas,  atau  suatu  bahan yang  berfungsi  mencegah  sistem  biologi tubuh  dari  efek  yang  merugikan  yang  timbul dari proses ataupun reaksi yang menyebabkan oksidasi  yang  berlebihan.  Berbagai  bukti ilmiah menunjukkan bahwa senyawa antioksi dan mengurangi resiko terhadap penyakit kro nis seperti kanker dan penyakit jantung koron er (Prakash, 2001). Radikal bebas merupakan salah  satu  bentuk  senyawa  reaktif,  yang secara umum diketahui sebagai senyawa yang memiliki  elektron  yang  tidak  berpasangan  di kulit terluarnya. Elektron yang tidak memiliki pasangan  cenderung  akan  menarik  elektron dari  senyawa  lain,  sehingga  elektron  tersebut akan  dimiliki  bersama  oleh  dua  atom  atau senyawa dan terbentuk suatu senyawa radikal bebas  yang  baru  yang  lebih  reaktif  (Uppu,  et al.,  2010).  Antioksidan  bekerja  dengan  cara mendonorkan satu elektronnya kepada senyawa  yang  besifat  oksidan  sehingga aktivitas  senyawa  oksidan  tersebut  bias terhambat.  Antioksidan  menstabilkan  radikal bebas dengan melengkapi kekurangan elektron  yang  dimiliki  radikal  bebas  dan menghambat  terjadinya  reaksi  berantai  dari pembentukan radikal bebas (Winarsi, 2007).
Herdmania  momus merupakan  jenis tunikata yang soliter, dan jarang keberadaann ya, bentuk tubuhnya bulat berkisar antara 50- 100 mm. Jenis ini sangat rentan jika disentuh dan  biasanya  berwarna  29  merah  dengan perpaduan putih (Hakim, 2014).
Pada  penelitian  ini  dilakukan  uji  aktivitas antioksidan ekstrak etanol ascidian Herdmania momus yang diambil dari Perairan Pulau  Bangka  Likupang  dengan  metode DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhidrazil ).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan November  2019  -  Juli  2020  di  laboratorium penelitian  lanjutan  Program  studi  Farmasi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  yaitu  eksperimen laboratorium  dengan  rancangan  penelitian dimana  sampel  ascidian Herdmania  momus disiapkan  dan  diekstraksi  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut etanol kemudian  dilakukan  uji  aktivitas  antioksidan terhadap  DPPH  ( 1,1-diphenil-2-picrylhydarz yl ).

## Alat dan Bahan
Alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu  peralatan scuba  diving , kamera,  gunting,  pisau,  wadah  botol  air kemasan  600  mL,  ziplok,  sarung  tangan, telenan,  kertas  saring, aluminium  foil , tissue , kertas  label,  cawan  petri,  gelas  ukur, erlenmeyer,  tabung  reaksi, baker  glass , vortex , corong, pipet,  mikro pipet, timbangan digital,  spatula,  oven,  spektrofotometer  UV- Vis .

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  yaitu  Ascidian Herdmania momus, etanol  96%,  serbuk  Vitamin  C  p.a dan serbuk DPPH ( 1,1-diphenil-2-picrylhydra zyl ).

## Prosedur Penelitian Pengambilan dan Preparasi Sampel
Sampel  ascidian Herdmania  momus diperoleh dari perairan Pulau Bangka Likupang Kabupaten Minahasa Utara. Sampel diambil  dengan  menggunakan  alat  bantu
(peralatan scuba  diving ,  ziplok  dan  pisau), kemudian  dimasukkan  dalam  ziplok  dan diberikan  label.  Sampel  yang  telah  didapat langsung  dibersihkan  dari  pengotor,  lalu dipotong kecil-kecil dan langsung dimasukkan kedalam botol yang berisi pelarut etanol  96%,  dan  dimasukkan  kedalam cool box

## Ekstraksi dengan Metode Maserasi
Sampel  direndam  dengan  mengguna kan  larutan  etanol  96%.  Metode  ekstraksi dilakukan  dengan  cara  merendam  sampel dengan  larutan  penyari  selama  3  kali  24  jam pada  temperatur  kamar  yang  dilindungi  dari cahaya  dan  sesekali  dikocok.  Kemudian diambil  filtratnya  dan  residu  dibuang  dan menghasilkan  3  filtrat  yang  kemudian dicampur  menjadi  satu.  Filtrat  tersebut dipekatkan  dengan  menggunakan  oven  pada suhu 40 o C sampai etanol menguap.

## Pembuatan Larutan Stok
Sebanyak  100  mg  ekstrak  etanol ascidian Herdmania momus dilarutkan didalam  etanol  96%  ad.  100  mL  (konsentrasi 1000  ppm).  Dengan  masing-masing  konsent rasi  125  µg/mL,  100  µg/mL,  75  µg/L,  50 µg/mL,  dan  25  µg/mL  dihitung  dengan menggunakan rumus pengenceran, yaitu :
Pada  kelima  konsentrasi,  masing- masing  hasil  yang  didapatkan  dari  hasil  V 1 dipipet  dan  ditambahkan  etanol  96%  hingga mencapai  tanda  batas  (10  mL),  kemudian dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditutup  dengan  menggunakan aluminium  foil untuk digunakan pada perlakuan selanjutnya.
Pembuatan dan Pengujian Larutan
Kontrol DPPH
Sebanyak 4 mg serbuk DPPH ditimbang  dan  dilarutkan  dalam  etanol  96% sebanyak  100  mL.  Selanjutnya  larutan  stok DPPH  dilakukan  pengujian  kontrol,  dengan diukur  serapannya  menggunakan  spektrofoto
meter  UV-Vis  pada  panjang  gelombang maksimum yaitu 517nm.
Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  Esktrak dengan Metode DPPH
Sebanyak  2  mL  ekstrak  etanol Ascidian
Herdmania momus
dengan konsentrasi  125  µg/mL,  100  µg/mL,  75 µg/mL, 50 µg/mL dan 25 µg/mL ditambahkan  masing-masing  2  mL  larutan DPPH  dalam  etanol  dan  divorteks  selama  5 detik. Berubahnya warna ungu menjadi warna kuning  menunjukkan  efisiensi  penangkal radikal  bebas.  Diukur  absorbansi  pada spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang 517 nm, setelah diinkubasi selama 30 menit. Kemudian diamati perbandingannya dengan vitamin C p.a sebagai standar.
Pembuatan dan Pengujian Larutan Pembanding Vitamin C (p.a) Larutan Vitamin C ditimbang
sebanyak  10  mg.  Kemudian,  vitamin  C  p.a dilarutkan  dalam  etanol  96%  sebanyak  10 mL,  buat  larutan  stok  dengan  konsentrasi yang  sama  sebelumnya  yaitu  konsentrasi  125 µg/mL, 100 µg/mL, 75 µg/mL, 50 µg/mL dan 25  µg/mL  dengan  ditambahkan  masing- masing  larutan  dengan  etanol  p.a  mencapai tanda  batas  (10  mL),  dengan  pengulangan sebanyak 3 kali pada masing-masing konsentrasi.  Pada  masing-masing  konsentrasi di pipet 2 mL dan ditambahkan larutan DPPH 2  mL,  di  vorteks  selama  5  detik  dan diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu  37 0 C. Sampel vitamin C p.a diuji pada spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang  517  nm.  Setelah  absorbansi didapat,  aktivitas  penangkapan  radikal  bebas (persen  inhibisi)  dihitung  sebagai  persentase berkurangnya warna DPPH dengan menggunakan rumus berikut:
% inhibisi = 1- x 100%

## Analisis Data
Aktivitas  antioksidan  di  ukur  dengan menggunakan spektrovotometer UV-Vis,
M 1 ×V 1 = M 2 ×V 2
kemudian  data  yang  diperoleh  disajikan dalam bentuk tabel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Penelitian    dilakukan  pada  ekstrak etanol  Ascidian Herdmania  momus untuk mengetahui  adanya  aktivitas  dari  penangkal
radikal bebas yang di uji dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis. Data  absorbansi  sampel  ekstrak  etanol Ascidian Herdmania momus , Vitamin C (p.a) sebagai  pembanding  dan  kontrol  DPPH disajikan  pada  Tabel  1  dan  Data  %  inhibisi ekstrak  etanol  Ascidian Herdmania  momus dan  Vitamin  C    (p.a)  sebagai  pembanding disajikan pada Tabel 2 berikut ini :
Tabel 1. Data absorbansi sampel ekstrak etanol Ascidian Herdmania momus , Vitamin C (p.a) dan Kontrol DPPH
Tabel 2. Hasil pengujian perbandingan Ekstrak Etanol Ascidian Herdmania momus dan Vitamin C (p.a).
KONSENTRASI
Ekstrak dan Vitamin C ABSORBANSI PENGULANGAN I II III 25 µg/mL Ekstrak 0.306 0.303 0.322 Vit. C 0.112 0.111 0.134 50 µg/mL Ekstrak 0.296 0.284 0.310 Vit. C 0.108 0.104 0.110 75 µg/mL Ekstrak 0.297 0.295 0.279 Vit. C 0.101 0.113 0.110 100 µg/mL Ekstrak 0.267 0.293 0.263 Vit. C 0.110 0.111 0.106 125 µg/mL Ekstrak 0.257 0.264 0.249 Vit. C 0.108 0.101 0.100 KONTROL DPPH 0.728 KONSENTRASI Ekstrak dan Vitamin C PENGULANGAN RATA -RATA I II III 25 µg/mL Ekstrak 59.70% 60.10% 57.60% 59.13% Vit. C 85.30% 85.40% 82.40% 84.36% 50 µg/mL Ekstrak 61.0% 62.60% 59.20% 60.93% Vit. C 85.80% 86.30% 85.50% 85.86% 75 µg/mL Ekstrak 60.90% 61.10% 63.20% 61.73% Vit. C 86.70% 85.10% 85.50% 85.76% 100 µg/mL Ekstrak 64.80% 61.40% 65.40% 63.86% Vit. C 85.50% 85.40% 86.10% 85.66%

## Pembahasan
Pada  Pada  penelitian  ini,  Ascidian
Herdmania momus digunakan sebagai sampel.  Dilakukan  Preparasi  sampel,  sampel dipotong kecil-kecil bertujuan untuk memperbesar  ukuran  permukaan  sampel sehingga  proses  ekstraksi  berjalan  optimal karena semakin luas permukaan sampel maka interaksi  antara  pelarut  dan  sampel  semakin besar (Mardiyah et al., 2014).
Sampel kemudian di ekstraksi menggunakan  metode  maserasi. Tujuan pemilihan  metode  maserasi  karena  cara pengerjaannya  yang  sederhana  dan  cepat namun  sudah  dapat  menarik  senyawa  kimia dari  sampel  dengan  maksimal.  Keuntungan utama  dari  metode  ini  ialah  tidak  dilakukan pemanasan sehingga dapat mencegah kemungkinan  terjadinya  penguraian  zat  aktif yang  terkandung  di  dalam  sampel  akibat pengaruh suhu dan senyawa  yang tidak tahan pemanasan  (Sa’adah et  al., 2015).  Agar senyawa  kimia  di  dalam  sampel  dapat terekstrak secara menyeluruh maka dilakukan remaserasi atau pengulangan dengan penggantian  pelarut  sebanyak  tiga  kali. Pemilihan pelarut pada umumnya dipengaruhi oleh  beberapa  faktor  antara  lain  selektivitas, kelarutan, dan titik didih. Pada penelitian ini, sampel Ascidan Herdmania momus diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi dan  pelarut  yang  digunakan  adalah  etanol 96%,  alasan  pemilihan  etanol  96%  sebagai pelarut  dalam  proses  maserasi  adalah  karena lebih  selektif,  tidak  toksik,  absorbsinya  baik dan dapat mencegah pertumbuhan bakteri dan jamur (Suryanto, 2012).
Konsentrasi  ekstrak  etanol  Ascidian Herdmania  momus yang  digunakan  adalah 125,  100,  75,  50,  dan  25  µg/mL.  Masing- masing  konsentrasi  dicampurkan  dengan larutan  DPPH.  Campuran  dihomogenkan  dan diinkubasi selama 30 menit pada tempat gelap dengan suhu 37 0 C. Setelah sampel diinkubasi, kemudian  masing-masing  ekstrak  dilakukan pengukuran absorbansi dengan menggunakan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang  517  nm.  Pada  tiap  konsentrasi dilakukan  sebanyak  3  kali  pengulangan. Pengukuran  aktivitas  antioksidan  sampel dilakukan  pada  panjang  gelombang  517  nm karena DPPH memberikan serapan yang kuat pada panjang gelombang tersebut.
Berdasarkan hasil yang diperoleh pada pengujian DPPH persen  inhibisi pada ekstrak etanol  Ascidian Herdmania  momus dan Vitamin C disajikan pada Tabel 2 mengalami peningkatan  dari  konsentrasi  terendah  25 μg/mL yakni 59.13% sampai pada konsentrasi tertinggi  125  μg/mL  dengan  nilai  rata-rata 66.16%.  Peningkatan  persen  inhibisi  ini  pada ekstrak  menandakan  bahwa  semakin  besar konsentrasi  ekstrak  maka  semakin  besar persen  inhibisi.  Hal  ini  didukung  oleh penelitian  yang  dilakukan  oleh  Hanani  et  al., (2005)  yang  menyatakan  bahwa  presentase penghambatan  (persen  inhibisi)  terhadap aktivitas  radikal  bebas  akan  ikut  meningkat seiring  dengan  meningkatnya  konsentrasi. Hasil pengujian perbandingan aktivitas antioksidan ekstrak etanol Ascidian Herdmania  momus dan  Vitamin  C  menun jukkan  bahwa  kemampuan  penangkal  radikal bebas dari Vitamin C lebih kuat dibandingkan dengan  ekstrak  etanol  Ascidian Herdmania momus.
Pembanding  yang  digunakan  sebagai kontrol  positif  adalah  vitamin  C,  digunakan sebagai pembanding karena berfungsi sebagai antioksidan sekunder yaitu menangkap radikal  bebas,  mencegah  terjadinya  reaksi berantai,  aktivitas  antioksidannya  sangat tinggi,  mudah  diperoleh  dan  vitamin  C  lebih polar  dari  vitamin  yang  lain.  Vitamin  C mempunyai  gugus  hidroksi  bebas  yang bertindak  sebagai  penangkap  radikal  bebas (Isnindar, 2011). Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  dengan  bertambahnya konsentrasi  ekstrak  maka  absorbansi  sampel akan menurun dan tingkat  inhibisi akan naik. Absorbansi sampel turun karena elektron pada DPPH  menjadi  berpasangan  dengan  elektron
125 µg/mL Ekstrak 66.10% 65.20% 67.20% 66.16% Vit. C 85.80% 86.70% 86.90% 86.46%
sampel  yang  mengakibatkan  warna  larutan berubah  dari  ungu  pekat  menjadi  kuning bening. Kondisi ini sesuai dengan pernyataan Green  (2004)  bahwa  nilai  tingkat  inhibisi meningkat  seiring  meningkatnya  konsentrasi sampel dikarenakan semakin banyak senyawa antioksidan pada sampel yang dapat menangkal radikal bebas.

## KESIMPULAN
Berdasarkan dari hasil penelitian yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  Ascidian Herdmania  momus dari perairan  Pulau  Bangka  Likupang,  memiliki aktivitas  antioksidan  pada  setiap  konsentrasi dan  aktivitas  antioksidan  tertinggi  terdapat pada  konsentrasi  125μg/mL  dengan  nilai persen inhibisi rata-rata 66.16%.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk  mengetahui  senyawa  aktif  yang terkandung  dalam  ekstrak  etanol  Ascidian Herdmania  momus dan  pengujian  aktivitas antioksidan  dengan  metode  lain  FC  ( Folin- Ciocalteu ), FRAP ( Ferric Reducing Antioxidant  Power ),  RP  ( Reducing  Power ) PV  ( Peroxide  Value ),  TBA  ( 2-thiobarbituric acid ) dan sebaiknya membandingkan hasilnya dengan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Green,  R.J.  2004. Antioxidant  activity  of peanut  plant  Tissues. North  caroline state  university  departemen  of  food science, Raleigh.
Hakim,  M.F.B.A.  2013.  Distribusi  dan Keanekaragaman Tunikata ( Ascidiace
a) Pada  Kondisi  Perairan  yang  Berb eda  di  Pulau  Badi,  Bone  Batang  dan Lae-Lae [Skripsi]. Universitas Hasanu ddin, Makassar.
Hanani  E,  Mun’im  B,  Sekarini  R.  2005.
Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam  spons Callispongia sp.  dari Kepulauan Seribu.
Jurnal Ilmu
Kefarmasian . 2 (3) : 127-133.
Isnindar.  2011.  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Antioksidan  Daun  Kesemek ( Diopyroskaki  Thunb) dengan Metode DPPH. Majalah  Obat  Tradisional . 16
(3) : 157-164.
Khoeri,  M.  M.  2009.  Bioprospeksi  Bakteri Simbion  pada  Tunikata Didemnum molle dari  Perairan  Pulau  Sambangan Karimunjawa Jepara. Universitas
Dipoengoro, Semarang.
Mardiyah, U., Fasya, G. A. Fauziyah, B., dan Amalia,  S.  2014.  Ekstraksi  Uji Aktivitas Antioksidan dan  Identifikasi Golongan Senyawa  Aktif Alga Merah Eucheuma  spinosum dari  Perairan Banyuwangi. Jurnal  Achemy . 3  (1) :
42
Prakash, A., F. Rigelhof., and E. Miller. 2001.
Antioxidant Activity: Medallion
Laboratories.  Analithycal  Progress. 19(2) : 1-4.
Sa’adah,  H.,  Nurhasnawati,  H.  2015.
Perbandingan  Pelarut  Etanol  Dan  Air Pada Pembuatan Ekstrak Umbi Bawang Tiwai ( Eleutherine Americana Merr ) Menggunakan Metode  Maserasi. Jurnal  Ilmiah
Manuntung . 1(2) : 149-153.
Suryanto,  E.  2012.  Fitokimia  Antioksidan. Putra Media Nusantara, Surabaya.
Uppu, R. M., S.N. Murthy., W.A. Pryor., and N.L.  Parinandi.  2010. Free  Radical and  Antioxidant  Protocols. Humana Press, New York.
Wang,  W.,  and  Namikoshi,  M.  2007. Bioactive  Nitrogenous  Metabolites from Ascidians. Heterocycles . 74 : 53-
88.
Winarsih,  H.  2007.  Antioksidan  Alami  dan Radikal Bebas. Kanisius, Jogjakarta.