## VIABILITAS BAKTERI PROBIOTIK IN-VITRO DAN PENGARUH PEMBERIAN AIR OKSIGEN TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI PROBIOTIK SECARA IN-VIVO
(Viability of Probiotic BacteriaIn-Vitro and the Effect of Oxygenated Water On Viability of Probiotic Bacteria in Vivo)
Enok Sobariah 1 , Ali Khomsan 2 dan Ingrid S. Surono 3

## ABSTRACT
The aim of this study were  to identify the in-vitro tolerance of pro-biotic bacteria to acid and bile salt condition; and  to prove a hypothesis that the supplementation of oxygenated water has a positive effect on the body weight of rat and on viability of pro- biotic bacteria.  The first study was carried out at PAU Laboratory of Bogor Agricultural University, while the second study was conducted at Department of Community Nutrition of Bogor Agricultural University and Microbiology Laboratory of Indonesia Institute of Technology. Forty five rats aged 6 weeks were divided into three groups, i.e., control group without probiotic (a0), Lactobacillus casei Shirota (a1), and Lactobacillus IS-7257 (a2).  Each group (consisting of 5 rats each) has three different treatments, namely, control without oxygenated water (b0), 50 ppm oxygenated water (b2), and 80 ppm oxygenated water (b2). Oxygenated water was administered to the rats twice a day in the morning (3.25 ml) and afternoon (3.00 ml). Observation was carried out on the body  weight of the rats, fecal lactic acid bacteria, coliform, and anaerob bacteria by plate counting, for 4 periods, i.e, prior to the treatment (C0), after three-day treatment (C1), after seven-day treatment (C2), and on the 10 th day treatment or three days after washed out period. The results indicated that probiotic bacteria are resistant to acid and bile acid condition. Oxygen concentration in water has a significant positive influence on the body weight of rats towards viability of probiotic bacteria (p-level < 0.05).  The supplementation of  oxygenated water 50 ppm significantly increase the population of viable fecal lactic acid bacteria in L. casei Shirota and Lactobacillus IS-7257 groups after 3 and 7 days of treatment.  Lactobacillus IS-7257 gave better response than L. casei Shirota. The supplementation of oxygenated water 80 ppm significantly reduces the fecal coliform in-vivo in both L. casei Shirota and Lactobacillus IS-7257 groups (p-level < 0.05).
Keywords : oxygenated water, probiotic bacteria, viability
PENDAHULUAN 1

## Latar Belakang
Air merupakan unsur yang sangat penting dalam semua kehidupan. Hampir semua meta- bolisme zat gizi di dalam tubuh memerlukan air. Selain berfungsi untuk transportasi zat gi- zi, air juga bermanfaat untuk pengeluaran zat- zat racun atau sisa hasil pencernaan. Selain itu juga berfungsi untuk keseimbangan fungsi tubuh dan mengatur suhu tubuh.
Selain air, unsur yang tidak kalah pen- tingnya dalam kehidupan adalah oksigen. Oksi- gen diperlukan untuk proses pembakaran da- lam tubuh, yaitu mengubah zat-zat gizi men- jadi energi yang diperlukan oleh tubuh untuk
1 Alumni Program Studi Sekolah Pascasarjana Gizi Masyarakat IPB.
2 Staf Pengajar Departemen Gizi Masyarakat, Fakultas Ekologi Manusia (FEMA), IPB.
3 Staf Pengajar SEAMEO TROPMED UI
melakukan aktivitas sehari-hari. Hipoksia atau kekurangan oksigen ditingkat jaringan merupa- kan penyebab utama terjadinya penyakit degeneratif.
Penelitian tentang air beroksigen telah menghasilkan temuan yang menarik dari sisi ilmiah. Hipotesis bahwa oksigen dalam air beroksigen akan mempengaruhi pertumbuhan ataupun akan meracuni mikroba yang berman- faat atau bakteri probiotik tidak terbukti. Pada kultur Lactobacillus casei strain Shirota, penambahan O 2 30-35 ppm menghasilkan kul- tur dengan populasi bekteri asam laktat yang jauh lebih tinggi dibandingkan kontrol (Rumawas, Ahza, Elizabeth, & Dewanti, 2004).
Probiotik adalah bakteri ”baik” yang ha- rus mencapai saluran pencernaan dalam kea- daan hidup dengan jumlah yang cukup guna menghasilkan efek kesehatan yang positif. Pro- biotik menghasilkan metabolit yaitu asam or- ganik, hidrogen peroksida, karbondioksida dan
senyawa bersifat antimikroba terhadap bakteri patogen. Bakteri ini mampu mengikat senyawa racun hasil metabolisme protein dan lemak, serta hasil pemecahan enzim tertentu, sehing- ga meringankan tugas organ hati (Salminen, Wright, dan Ouwenhand, 2004).
Probiotik juga merupakan bakteri hidup yang dapat diberikan sebagai suplemen makan- an. Pemberian probiotik dapat berpengaruh menguntungkan bagi kesehatan karena probio- tik dapat menghasilkan asam lemak rantai pendek dan menyebabkan suasana usus menja- di asam sehingga menekan pertumbuhan bak- teri patogen serta memperbaiki keseimbangan mikrobiota usus. Mikroflora yang digolongkan sebagai probiotik terutama adalah dari golong- an Lactobacillus dan Bifidobacterium.
Pengendalian penyakit pada manusia dan ternak menggunakan probiotik telah dilakukan sejak lama dan terdokumentasi dengan baik (Fuller, 1987). Tikus merupakan hewan menyu- sui yang  mempunyai peranan penting dalam kehidupan manusia, terutama dalam hal peng- gunaanya sebagai hewan percobaan di labora- torium, seperti tikus putih (Rattus norvegicus strain albino) atau mencit putih (strain albino) yang sering dijadikan hewan percobaan untuk menguji obat dan tingkat toksisitas racun hama terhadap manusia  (Priyambodo, 2003), karena tikus merupakan hewan omnivore  (pe- makan segala) biasanya mau mengonsumsi se- mua makanan yang dapat dimakan oleh manu- sia, baik yang berasal dari tumbuhan maupun dari hewan. Tikus memiliki kesamaan saluran pencernaan dan proses metabolisme dengan manusia (Priyambodo, 2003).
Perubahan konsentrasi oksigen diduga akan meningkatkan aktivitas bakteri aerob ma- upun mikroaerofilik sehingga akan meningkat- kan probiotik dalam tubuh.

## Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini dapat dirumuskan sebagai berikut:
1. Mengetahui toleransi bakteri probiotik ter- hadap kondisi asam dan garam empedu.
2. Mengetahui pengaruh oksigen dengan kon- sentrasi 50 ppm dan 80 ppm terhadap per- tumbuhan berat badan tikus.
3. Mengetahui pengaruh air oksigen konsen- trasi 50 ppm dan 80 ppm terhadap pertum- buhan bakteri asam laktat.
4. Mengetahui pengaruh air oksigen konsen- trasi 50 ppm dan 80 ppm terhadap pertum- buhan bakteri coliform.

## METODE PENELITIAN

## Desain, Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian dilaksanakan selama satu bu- lan yang terbagi dalam dua tahapan percoba- an, yaitu secara in-vitro  untuk menguji keta- hanan bakteri probiotik terhadap asam dan garam empedu yang dilakukan di laboratorium PAU IPB (Institut Pertanian Bogor), dan secara in-vivo  menggunakan hewan percobaan tikus putih Spraque Dauley, dengan dua jenis kultur bakteri asam laktat yaitu Lactobacillus casei Shirota, dan Lactobacillus IS-7257 yang dilaku- kan di laboratorium hewan GMSK IPB (Institut Pertanian Bogor), analisis mikrobiologi dilaku- kan di laboratorium mikrobiologi ITI (Institut Teknologi Indonesia).
Ada tiga variabel perlakuan yang diberi- kan pada uji in-vivo  yaitu AirOx (air beroksi- gen) konsentrasi 0 ppm, 50 ppm dan 80 ppm. Parameter yang diamati adalah berat tubuh tikus, jumlah mikrobiologi yaitu jumlah fekal bakteri asam laktat, bakteri fekal coliform, dan bakteri fekal anaerob.

## Bahan dan Alat
Penelitian ini menggunakan hewan per- cobaan tikus putih Spraque Dauley yang bera- sal dari Bali Penelitian Veteriner Boor. Kultur bakteri asam laktat yaitu Lactobacillus casei Shirota dan Lactobacillus IS-7257 berasal dari hasil penelitian Dr. Ingrid S Surono. Bahan lain yang digunakan dalam penelitian ini yaitu  air oksigen konsentrasi 50 ppm dan 80 ppm. Bahan yang dipakai untuk ransum hewan percobaan meliputi tepung maizena, casein, CMC, vita- min, mineral, dan minyak jagung mazola.
Analisis uji viabilitas in-vitro mengguna- kan bahan-bahan MRSA, MRSB, larutan HCl 10% dan 0.5% garam empedu. Untuk analisis mikro- biologi  in-vivo digunakan bahan kultur Lacto- bacillus casei Srirota, Lactobacillus IS-7257, air oksigen konsentrasi 50 ppm dan konsentrasi 80 ppm, media MRSA (untuk bakteri asam laktat), media VRBA (untuk bakteri coliform). Berbagai peralatan yang digunakan dalam penelitian ini tercantum pada Tabel 1.

## Pelaksanaan Penelitian

## Uji in-vitro
Kultur kering beku ditumbuhkan dalam MRSB selama 24 jam pada suhu 37ºC, kemudi- an diinokulasi ke MRSB selama 18 jam dan dia- tur pHnya menjadi pH 2, 3, dan 4 dengan me- nambahkan HCL. Kemudian di shaker selama 0 jam,  0.5 jam  dan 1  jam, jumlah sel hidup di-
Tabel 1. Berbagai Alat Bantu Penelitian No Tempat Alat Fungsi 1  Laboratorium GMSK Timbangan analitik - Menimbang berat tikus - Menimbang feses - Menimbang pakan Anaerob jar Alat penyimpan dan membawa sampel steril bersifat anaerob Seperangkat inkubator - tempat inkubasi - Tempat  perlakuan steril Seperangkat lamina dan Seperangkat oven Untuk persiapan media tumbuh bakteri VRBA, MRNA,PCA. 2 Laboratorium Mikrobiologi Aotoclaf Cawan petri, tabung reaksi tumbuhkan pada MRSA pada pengenceran ter- tentu, kemudian diinkubasi pada suhu 37ºC se- lama 48 jam, dan dihitung jumlah bakteri yang bertahan hidup (modifikasi Zavaglia et al., 1998).
Kultur kering beku ditumbuhkan dalam MRSB selama 24 jam pada suhu 37ºC, kemudi- an diinokulasi ke MRSB selama 18 jam pada su- hu 37ºC. Untuk mengetahui ketahanan terha- dap garam empedu, maka dibandingkan probi- otik yang tumbuh pada MRSB + bile 0.5% seba- gai perlakuan dan tanpa bile sebagai pemban- ding. Setelah itu dilakukan inkubasi selama 48 jam pada suhu 37ºC, kemudian dihitung jumlah sel hidup pada masing-masing cawan (Zavaglia et al., 1998).

## Uji in-vivo
Binatang percobaan tikus Spraque Dau- ley (SD) dimasukan ke dalam kandang metabo- lik dan dikelompokkan menjadi 3 kelompok, masing-masing 15 ekor, kelompok kontrol (A0) tanpa bakteri probiotik, kelompok probiotik Lactobacillus casei Shirota (A1) dan kelompok probiotik  Lactobacillus IS-7257 (A2), ada tiga variabel perlakuan, yaitu tanpa air oksigen (B0) sebagai kontrol, pemberian AirOx konsen- trasi 50 ppm (B1), dan AirOx konsentrasi 80 ppm (B2), sehingga terbentuk suatu model percobaan :
• A0B0  : tanpa bakteri probiotik dan tanpa air oksigen
• A0B1 : tanpa bakteri probiotik dengan  pe- nambahan air oksigen 50 ppm
• A0B2 : tanpa bakteri probiotik dengan  pe- nambahan air oksigen 80 ppm
• A1B0 : dengan bakteri probiotik 1 tanpa penambahan air oksigen
• A1B1 : dengan bakteri probiotik 1 dengan air oksigen 50 ppm
• A1B2 : dengan bakteri probiotik 1 dengan air oksigen 80 ppm
• A2B0 : dengan bakteri probiotik 2 tanpa penambahan air oksigen
• A2B1  : dengan bakteri probiotik 2 dengan air oksigen 50 ppm
• A2B2  : dengan bakteri probiotik 2 dengan air oksigen 80 ppm
Probiotik diberikan satu kali setiap pagi hari sebanyak 10 mg, sedangkan air oksigen di- berikan 2 kali , pagi 3,25 ml dan sore 3 ml, de- ngan cara dicekok atau dipaksa.
Variabel yang diamati adalah berat tu- buh tikus dan fekal bakteri yaitu asam laktat, bakteri  coliform. Pengamatan dilakukan pada periode 0 hari (C0), 3 hari (C1), 7 hari (C2) dan 10 hari (C3).

## Analisis mikrobiologi
Fekal segar dimasukkan ke dalam anae- rob jar kemudian dianalisis di laboratorium dengan cara : sampel dipipet sebanyak 1 ml ke dalam larutan buffer (phosphate buffet saline) steril dengan pH 6.8 sebanyak 9 ml, kemudian di-vortex agar homogen, dilakukan pengencer- an sesuai dengan yang diinginkan, lalu diplat- ing dan dilakukan pemupukan pada cawan pet- ri steril menggunakan MRSA untuk asam laktat dan VRBA untuk coliform.  Selanjutnya diinku- basi pada suhu 37ºC, kemudian jumlah koloni dihitung setelah 48 jam (metode Standard Plate Count).

## Rancangan Percobaan dan Analisis Statistik
Model matemetika yang digunakan da- lam penelitian ini adalah:
Yijk =  +  i +  j + (  )ij +  ijk Yijk
= nilai pengamatan pada faktor A taraf ke-i, faktor B taraf ke-j, dan ulangan ke-k 
= rataan dari perlakuan
 i = pengaruh utama faktor A
 j = pengaruh utama faktor B (  )ij   = komponen interaksi dari faktor A dan faktor B
 ijk = pengaruk  acak  yang  menyebar nor-
mal (0,  2 ) A = perlakuan penambahan probiotik B = perlakuan penambahan air oksigen i = 3 taraf (1: tanpa penambahan probi- otik,  2:  penambahan Lactobacillus casei Shirota, 3 : penambahan Lacto- bacillus  IS-7257) j = 3 taraf (1: tanpa air oksigen, 2 : air oksigen 50  ppm,  3 : air oksigen 80 ppm) k
= 5 ulangan (5 ekor tikus untuk setiap perlakuan)
Metode yang di pakai dalam penelitian eksperimental ini adalah case control dengan uji statistik ANOVA untuk mengetahui penga- ruh perlakuan  yang digunakan terhadap varia- bel yang diamati. Sementara untuk uji lanjut- nya digunakan uji beda nyata terkecil (LSD).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji In-vitro
Hasil penelitian menunjukkan bahwa IS- 7257 lebih tahan terhadap asam dan garam empedu dibandingkan dengan L. casei Shirota (Tabel 2).
Tabel 2. Ketahanan Bakteri  Probiotik terhadap Asam pH Waktu (jam) Jumlah bakteri (log cfu/ml) L. casei Shirota IS-7257 2 0 7.11 8.45 0.5 0 5.23 1 0 5.05 3 0 9.11 10.70 0.5 9.37 8.54 1 9.45 9.68 4 0 9.48 9.68 0.5 9.06 9.79 1 9.63 9.84 Tabel 3. Ketahanan Probiotik terhadap  Garam Empedu Perlakuan Jumlah bakteri (log cfu/ml) L. casei Shirota IS-7257 MRSA 9.50 9.44 MRSA + garam empedu 0 9.37
Berdasarkan data pada Tabel 2 diketahui L.casei Shirota pada pH2 hanya tahan selama 0 jam, pada pH3 dan pH4 dapat bertahan selama 0.5 dan 1 jam, sedangkan L. IS-7257 dapat ber- tahan  pada pH2, pH3 dan pH4 selama 0 jam, 0.5 jam dan 1 jam.
Jadi dapat disimpulkan kedua jenis bak- teri ini memenuhi syarat sebagai probiotik, yang diharapkan akan mampu melewati salur- an pencernaan dengan berbagai cairan pencer- naan yang disekresikan oleh organ pencernaan dengan kondisi asam. Toleransi terhadap asam merupakan salah satu syarat penting suatu iso- lat untuk dapat menjadi probiotik, yaitu harus mampu bertahan pada pH asam lambung seki- tar 3.5 (Kimoto at al., 1999).
Bakteri probiotik L. IS-7257 mampu hi- dup pada media yang mengandung garam em- pedu 0.5%, hampir tidak mengalami perubahan atau penurunan. Hasil penelitian ini sesuai de- ngan pernyataan Kimoto et al. (1999), Zavaglia et al. (1998), dan Jacobsen et al. (1999), yaitu semua mikroba yang berhasil hidup setelah ditumbuhkan pada media MRSA yang ditambah 0.5% garam empedu dinyatakan bersifat tahan terhadap garam empedu. Bakteri L. casei Shirota dari hasil analisis hanya tahan pada media MRSA 9.5 log/ml, dan tidak tahan pada media MRSA + bile.
Uji in-vivo

## Berat Badan Tikus
Tabel 4 menunjukkan bahwa semua tikus berat badannya meningkat baik kelompok perlakuan maupun kontrol, pada periode pengamatan hari ke-3, 7 dan 10 hari.
Hasil analisis ragam menunjukkan bahwa jenis probiotik, konsentrasi air oksigen, peri- ode pengamatan maupun interaksinya nyata berpengaruh pada pertumbuhan berat badan tikus (p < 0.05). Hasil uji lanjut beda nyata terkecil (LSD) menunjukkan bahwa perlakuan A1B0 berbeda dengan A1B1 dan A1B2. Penga- matan periode hari ke 0 berbeda dengan hari ke 3, ke 7 dan hari ke 10, sedangkan hari ke 7 tidak berbeda dengan hari ke 10.
Lactobacillus casei Shirota (A1) dengan tanpa penambahan air oksigen memberikan pengaruh penambahan berat badan yang lebih baik pada periode pengamatan hari ke 3, ke 7, dan ke 10 (p < 0.05). Dalam penelitian ini in- take makanan tidak dihitung, sedangkan Mc Donald, Adwards dan Greenhalgh (1973) me- nyatakan bahwa untuk pertumbuhan dan per- kembangan tikus harus ada kecukupan nutrisi dalam ransum sehingga berpengaruh positif
pada pertambahan berat badan tikus. Berapa- pun kadar oksigen yang diberikan terhadap ti- kus tidak memberikan efek penambahan berat badan yang signifikan apabila konsumsi zat gizi kurang.

## Tabel 4. Delta Perubahan Berat Badan Tikus
Perlakuan Periode Pengamatan 0 hari  3 hari 7 hari  10 hari A0B0 0 5.52 20.3 28.06 A0B1 0 8.78 19.26 24.8 A0B2 0 4.46 12.26 21.6 A1B0 0 8.26 21.92 28.38 A1B1 0 2.78 10.7 10.54 A1B2 0 2.82 9.58 10.48 A2B0 0 6.38 16.3 20.9 A2B1 0 0.65 18.66 16.35 A2B2 0 7.44 15.9 21.2 Keterangan: A0B0  : tanpa  bakteri  probiotik  dan tanpa air oksigen A0B1  : tanpa bakteri probiotik dengan penam- bahan air oksigen 50 ppm A0B2  : tanpa   bakteri   probiotik   dengan  pe- nambahan air oksigen 80 ppm A1B0  : dengan   bakteri   Lactobacillus   casei Shirota tanpa penambahan air oksigen A1B1  : dengan   bakteri   Lactobacillus   casei Shirota dan dengan air oksigen 50 ppm A1B2  : dengan   bakteri   Lactobacillus   casei Shirota dan dengan air oksigen 80 ppm A2B0  : dengan  bakteri  Lactobacillus  IS-7257 tanpa penambahan air oksigen A2B1  : dengan  bakteri  Lactobacillus  IS-7257 dan dengan air oksigen 50 ppm A2B2  : dengan  bakteri  Lactobacillus  IS-7257 dan dengan air oksigen 80 ppm

## Total Bakteri Fekal Asam Laktat
Hasil analisis ragam menunjukkan bahwa interaksi antara jenis probiotik, air oksigen dan periode pengamatan berpengaruh nyata terhadap total bakteri fekal asam laktat.(p < 0.05). Perlakuan L. casei Shirota dan L. IS-7257 dengan konsentrasi 50 ppm dan 80 ppm mem- berikan pengaruh yang nyata terhadap kenaik- an jumlah asam laktat. L. IS 7257 dengan kon- sentrasi air oksigen 50 ppm lebih baik jika dibandingkan dengan air oksigen konsentrasi 80 ppm dalam penambahan jumlah bakteri asam laktat (p < 0.05).
Uji lanjut beda terkecil (LSD) menunjuk- kan bahwa pengamatan hari ke-0 berbeda de- ngan hari ke-3, hari ke-3 berbeda dengan hari ke-7, dan hari ke-3 berbeda dengan hari ke-10.
Pengamatan yang paling baik pada hari ke 3 (p<0.05). Rata-rata jumlah asam laktat dengan berbagai perlakuan tersaji pada Tabel 5.
Tabel 5. Delta Perubahan Jumlah Bakteri Asam Laktat Perlakuan Periode pengamatan 0 hari 3 hari 7 hari  10 hari A0B0 0 -0.61 -0.71 -0.87 A0B1 0 -0.11 -0.04 -0.91 A0B2 0 -0.05 -0.01 -0.08 A1B0 0 0.78 0.93 0.84 A1B1 0 1.62 1.56 0.86 A1B2 0 1.38 1.35 0.17 A2B0 0 3.42 1.41 0.76 A2B1 0 3.25 1.76 1 A2B2 0 0.45 2.27 -1.19
Keterangan:
A0B0  : tanpa  bakteri  probiotik  dan tanpa air oksigen A0B1  : tanpa bakteri probiotik dengan penam- bahan air oksigen 50 ppm A0B2  : tanpa   bakteri   probiotik  dengan   pe- nambahan air oksigen 80 ppm A1B0  : dengan   bakteri   Lactobacillus   casei Shirota tanpa penambahan air oksigen A1B1  : dengan   bakteri   Lactobacillus   casei Shirota dan dengan air oksigen 50 ppm A1B2  : dengan   bakteri   Lactobacillus   casei Shirota dan dengan air oksigen 80 ppm A2B0  : dengan   bakteri   Lactobacillus IS-7257 tanpa penambahan air oksigen A2B1  : dengan  bakteri   Lactobacillus  IS-7257 dan dengan air oksigen 50 ppm A2B2  : dengan  bakteri   Lactobacillus  IS-7257 dan dengan air oksigen 80 ppm
Pada pengamatan hari ke 3, perlakuan A2B0 berbeda dengan A2B2 dan perlakuan A2B2 berbeda dengan A2B1. Interaksi antara Lactobacillus IS-7257 dengan konsentrasi air oksigen 50 ppm (A2B1) memberikan respon le- bih baik dibandingkan dengan konsentrasi oksi- gen 80 ppm (A2B2) dan kontrol.
Hasil penelitian ini memberikan gambar- an bahwa total fekal asam laktat yang diamati selama perlakuan mencerminkan total bakteri asam laktat probiotik yang bersifat homofer- mentatif.
Bakteri probotik yang bersifat homofer- mentatif dalam proses metabolismenya akan menghasilkan 85% asam laktat sebagai produk metabolitnya, sehingga asam laktat yang di- hasilkan mampu memberikan suasana asam (Surono, 2004). Hal ini akan memberikan res-
pon yang positif terhadap mikroflora pada saluran pencernaan karena bakteri patogen tidak tahan terhadap kondisi asam atau pH di bawah 3.5 (Kimoto at al., 2005), sehingga bak- teri probiotik dapat mendominasi saluran cer- na dan memperbaiki saluran pencernaan.
Pemberian  Lactobacillus IS-7257 (A2) meningkatkan total bakteri fekal asam laktat (cfu/gram feces) selama perlakuan yaitu pada pengamatan hari ke 3 (C1) dan pengamatan hari ke 7 (C2). Setelah hari ke 10 rata-rata to- tal bakteri fekal asam lakat menurun kembali.
Kehadiran oksigen berperan sebagai eks- ternal elektron akseptor, sehingga meningkat- kan produksi asam piruvat hasil fermentasi karbohidrat, dalam hal ini glukosa (Axelsson 2004), untuk selanjutnya menambah jumlah ATP, dan mempercepat pertumbuhan bakteri asam laktat. Dengan adanya suplai oksigen ma- ka pertumbuhan bisa melalui jalur metabolis- me aerobik, sehingga menghasilkan ATP lebih banyak. Satu molekul glukosa menghasilkan 38 ATP dengan produk akhir asam laktat yang ten- tu saja akan semakin meningkatkan laju per- tumbuhannya mengingat jenis probiotik yang digunakan pada uji in-vivo ini ádalah homofer- mentatif (Surono, 2004).
Hasil penelitian ini didukung juga dengan adanya interaksi nyata antara probiotik, kon- sentrasi air oksigen dan periode pengamatan, yang berarti suplemen probiotik bersama-sama dengan air oksigen berpengaruh positif terha- dap total bakteri fekal asam laktat. Interaksi antara probiotik dengan periode perlakuan memperlihatkan pengaruh nyata yang positif dalam meningkatkan total bakteri fekal asam laktat selama periode perlakuan.

## Total Bakteri Fekal Coliform
Hasil analisis ragam menunjukkan bahwa jenis probiotik, konsentrasi air oksigen dan in- teraksinya berpengaruh nyata pada total bak- teri fekal coliform (p<0.05).  Interaksi konsen- trasi air oksigen dan periode pengamatan ber- pengaruh nyata terhadap penurunan total bak- teri fekal coliform (p-level < 0.05). Uji lanjut terkecil menunjukkan bahwa pengamatan hari ke-0 berbeda nyata dengan hari ke-3 dan ke-7.
Hasil analisis ragam menunjukkan bahwa perlakuan kontrol tanpa penambahan probiotik (A0) berbeda nyata dengan perlakuan Lacto- bacillus casei Shirota (A1) dan Lactobacillus IS- 7257 (A2) dalam memberikan pengaruh terha- dap total bakteri fekal coliform. A0B0 dan A0B1 berbeda nyata terhadap A0B2. Perlakuan A1B0 berbeda nyata terhadap A1B1, dan A1B1
berbeda nyata dengan A1B2. Perlakuan A2B0 berbeda nyata dengan A2B1 dan A2B2. Periode pengamatan hari ke 0 berbeda dengan hari ke 3 dan ke 10 (p < 0.05).
Konsentrasi pemberian air oksigen 50 ppm berbeda nyata dengan 80 ppm. Pemberia- an air oksigen 80 ppm lebih baik dalam menu- runkan jumlah bakteri coliform. Interaksi yang terbaik dalam menurunkan bakteri coliform adalah L. casei Shirota dengan air oksigen kon- sentrasi 80 ppm (A1B2) (p<0.05).
Rata-rata jumlah bakteri coliform tersaji pada Tabel 5. Pada Tabel 3 terlihat bahwa to- tal bakteri fekal coliform terendah ditemukan pada perlakuan penambahan Lactobacillus casei Shirota dengan air oksigen 80 ppm (A1B2) pada hari pengamatan ke 3. Hal ini menunjuk- kan bahwa bakteri probiotik Lactobacillus casei  Shirota (A1) lebih mampu berkompetisi dengan bakteri coliform dibandingkan dengan Lactobacillus IS-7257, sehingga dapat menekan jumlah coliform.
Tabel 5. Delta Perubahan Bakteri Coliform (log cfu/g) Perlakuan Periode pengamatan 0 hari 3 hari 7 hari  10 hari A0B0 0 -0.48 -0.68 0.21 A0B1 0 -0.12 0.33 0.41 A0B2 0 -1.25 -1.54 -1.01 A1B0 0 -1.26 -1.49 -1.06 A1B1 0 -1.31 -0.17 -0.28 A1B2 0 -1.46 -1.24 -1.25 A2B0 0 -1.92 -1.31 -1.8 A2B1 0 -0.3 -0.25 -0.61 A2B2 0 -1.38 6.46 -1.49
Keterangan: A0B0  : tanpa  bakteri  probiotik  dan tanpa air oksigen A0B1  : tanpa bakteri probiotik dengan penam- bahan air oksigen 50 ppm A0B2  : tanpa bakteri probiotik dengan penam- bahan air oksigen 80 ppm A1B0  : dengan   bakteri   Lactobacillus   casei Shirota tanpa penambahan air oksigen A1B1  : dengan   bakteri   Lactobacillus   casei Shirota dan dengan air oksigen 50 ppm A1B2  : dengan   bakteri   Lactobacillus   casei Shirota dan dengan air oksigen 80 ppm A2B0  : dengan   bakteri   Lactobacillus IS-7257 tanpa penambahan air oksigen A2B1  : dengan   bakteri   Lactobacillus IS-7257 dan dengan air oksigen 50 ppm A2B2  : dengan   bakteri   Lactobacillus IS-7257 dan dengan air oksigen 80 ppm
Hal ini juga terjadi atas peran bakteri probiotik yang mampu berkompetisi dan mam- pu menempel pada sel epithelial, sehingga berkesempatan untuk menjalankan perannya sebagai probiotik, seperti berkompetisi terha- dap  coliform, dan mengeliminasi clostridium perfringens, dan clostridium difficile. Bakteri anaerob yang jumlahnya mendominasi populasi bakteri di saluran cerna menghasilkan toxin dan menyebabkan diare dan colitis (Mikelsaar et al., 2004).

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Lactobacillus casei  Shirota tahan terha- dap kondisi asam pada pH3, namun pada me- dia MRSA + bile 0.5% bakteri tersebut tidak tumbuh.  Lactobacillus IS-7257 pada pH 2 juga tahan pada media MRSA + bile 0,5% secara in- vitro. Hal ini membuktikan bahwa kedua bak- teri tersebut adalah bakteri probiotik.
Perlakuan  Lactobacillus casei Shirota, baik tanpa penambahan air oksigen maupun dengan penambahan 50 ppm dan 80 ppm ber- pengaruh baik dalam meningkatkan berat ba- dan tikus. Konsentrasi air oksigen 50 ppm lebih baik dibandingkan dengan 80 ppm pada penga- matan hari ke 3, 7, dan 10 (p < 0.05).
Jenis probiotik, periode pengamatan dan interaksinya nyata berpengaruh terhadap total bakteri asam laktat (p < 0.05). Konsentrasi air oksigen 50 ppm memberikan hasil yang lebih baik dibandingkan air oksigen 80 ppm. Respon paling baik pada perlakuan Lactobacillus IS- 7257 dengan konsentrasi 50 ppm (A2B1) pada pengamatan hari ke 3 dan hari ke-7.
Jenis probiotik, konsentrasi air oksigen dan periode pengamatan berpengaruh positif dalam penekanan bakteri coliform  (p < 0.05). Respon yang paling baik pada Lacto-  bacillus casei Shirota dengan konsentrasi air oksigen 80 ppm (A1B2) pada periode penga- matan hari ke 3, dan 7.
Pemberian probiotik dan air oksigen mempunyai manfaat masing-masing mening- katkan bakteri probiotik dan menurunkan bak- teri coliform secara in-vivo, sehingga diharap- kan akan membantu meningkatkan kesehatan saluran pencernaan, agar penyerapan nutrisi lebih baik.

## Saran
Hasil uji in-vivo ini menunjukkan  bahwa konsentrasi air oksigen 50 ppm berpengaruh baik terhadap pertumbuhan bakteri asam lak- tat, konsentrasi oksigen 80 ppm baik terhadap penekanan total bakteri fekal coliform  dan penekanan bakteri anaerob, maka untuk lebih ideal perlu dilakukan penelitian lajutan secara klinis ter- hadap manusia agar diketahui dosis optimum pada manusia.

## DAFTAR PUSTAKA
Fuller R. 1989.Probiotik in man and animals. J Appl Bacteriol, 66, 365-378.
Jacobsen CN, Nielsen VR, Hayford AE, Moller PL, Michaelsen KF, Erregaard AP, Sansdtrom B, Tvede M & Jakobsen M. 1999. Screening of probiotic activities of forty-seven strains of Lactobacillus spp. By in vitro techniques and evaluation of the colonization ability of five selected strain in humans. J Appl and Environ, 65, 4949-4956.
Kimoto H, Kurisaki J, Tsuji Mn, Ohmomo S, & Okamoto T. 1999. Lactococci asprobiotic strains: adhesion to human enterocyte- like caco-2 cells and tolerans to  low pH and bile. Lett in Appl Microbiol, 29, 313- 316.
McDonald P, Adwards RA, & Greenhalgh JFD. 1973. Animal Nutrition Fifth Edition. Longman Group Ltd, London, 221 – 237.
Priyambodo S. 2003. Pengendalian Hama Tikus. Penebar Swadaya, Jakarta.
Rumawas F, Basuki A, Elizabeth R, Dewanti R. 2004. Pengaruh AirOx terhadap Bakteri asam laktat Probiotik. Bogor.
Salminen S, Wright AV, & Ouwenhand A. 2004. Lactic Acid Bacteria Microbiology and Fungtional  aspects.  Marcel  Dekker,  New York. Pp 211- 254.
Surono. 2004. Probiotik Susu Fermentasi dan Kesehatan, YAPMMY. ISBN 979-98871.
Zavaglia AG, Kociubinski G, Perez P, & Antoni GD. 1998. Isolation and Characterization of  Bifidobacterium  Strains of Probiotik Formulation. J Food Protect, 61(7), 865-
873.