Versi Online: http://profood.unram.ac.id/index.php/profood
Vol 3 No. 2 November 2017 ISSN online: 2443-3446 I
S S N o n l i n e
: 2 4 4 3 - 3 4 4 6 I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4
6
I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6

## KETOKSIKAN AKUT ORAL ZAT PEWARNA MAKANAN
DAUN JATI ( Tectona grandis L. f.) PADA TIKUS WISTAR
[ORAL ACUTE TOXICITY OF FOOD DYING JATI LEAF (Tectona grandis L. f. ) ON WISTAR RAT]
Candra Dwipayana Hamdin 1) *Dheni Cahyo 2) dan Dandiko Galanova 2)
1) Program Studi Farmasi Universitas Mataram
2) Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada
*email: candradwipayana@unram.ac.id

## Diterima 15 September 2017/ Disetujui 16 November 2017

## ABSTRACT
Jati leaf becomes one of the alternative natural food coloring in some food producers. A research is needed to determine the potential of acute ketoxicity (LD50) and determine the clinical symptoms that arise also to see the groos patologi of organs resulting from single oral dosage of jati leaf extract. This research was conducted with complete randomized design using OECD 423 method. The test animal used was Wistar strain female rats. In this study, the test animals were divided into 2 groups, namely the control and treatment groups, each consisting of 3 test animals. Control group given Na CMC 0.5% and treatment group given jati leaf extract with a single dose of 2000 and 5000 mg/kg bw. Dosage starts from 2000 mg/kg bw, then increased to 5000 mg / kg bw in different rat. Observations were made for 14 days because single dose administration did not cause death. Test animals were sacrificed for gross observation of the vital organ pathologies (liver, kidney, heart, stomach, spleen, and small intestine). The results showed the potential toxicity (LD50) jati leaf extract using Wistar female rat test animal included in V category (not classified). The dosage of 2000 mg/kg bw did not show any change in behavior, the  dosage  of  5000  mg/kg  bw  gave  clinical  symptom  on  the  central  and  somatomotor  nerves  in  the  form  of  increased aggressiveness and vocalization and gastrointestinal disturbances in the form of singultus in the test animals.
Keywords : Acute toxicity (LD50), gross pathology, histopathology, jati leaf extract (Tectona grandis L. f.), OECD 423.

## ABSTRAK
Daun jati menjadi salah satu alternatif pewarna alami makanan pada sebagian produsen makanan. Perlu dilakukan penelitian untuk menentukan potensi ketoksikan akut (LD50) untuk mengetahui gejala-gejala klinik yang timbul dan melihat gambaran  gross  patologi  organ  akibat  pemberian  oral  dosis  tunggal  ekstrak  daun  jati.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan rancangan  acak  lengkap  pola  searah  menggunakan  metode  OECD  423.  Hewan  uji  yang  digunakan  adalah  tikus  betina galur Wistar. Pada penelitian ini, hewan uji dibagi menjadi 2 kelompok, yaitu kelompok kontrol dan perlakuan yang masing- masing terdiri dari 3 hewan uji. Kelompok kontrol dipejani Na CMC 0,5% dan kelompok perlakuan dipejani ekstrak daun jati dengan  dosis  tunggal  2000  dan  5000  mg/kg  BB.  Dosis  pemejanan  dimulai  dari  2000  mg/kg  BB,  kemudian  dinaikkan menjadi 5000 mg/kg BB pada tikus yang berbeda. Pengamatan dilakukan selama 14 hari karena pemejanan dosis tunggal tidak menyebabkan kematian. Hewan uji dikorbankan untuk pengamatan gross patologi organ vitalnya (hati, ginjal, jantung, lambung, limpa, dan usus halus). Hasil penelitian menunjukkan potensi ketoksikan (LD50) ekstrak daun jati menggunakan hewan uji tikus betina galur Wistar termasuk dalam kategori V (tidak terklasifikasikan). Pemejanan dosis 2000 mg/kg BB tidak menunjukkan perubahan tingkah laku, pada pemejanan dosis 5000 mg/kg BB memberikan gejala klinis pada saraf pusat dan somatomotor berupa peningkatan agresifitas dan vokalisasi serta gangguan pada saluran cerna berupa singultus pada hewan uji.
Keywords: ekstrak daun jati ( Tectona grandis L. f.), gross patologi, histopatologi, OECD 423, toksisitas akut (LD50)

## PENDAHULUAN
Makanan  tidak  hanya  sebagai  sarana untuk  pemenuhan  kebutuhan  gizi  seseorang tetapi  juga  berguna  untuk  mempertahankan hidup  manusia,  selain  itu  jika  ditangani dengan  sungguh-sungguh  akan  menjadi sumber  pendapatan  masyarakat  (Marwanti dkk.,  2009).  Untuk  memperoleh  hasil  seperti
yang  dimaksud  dibutuhkan  berbagai  bahan pendukung  yang  lazim  untuk  pangan  yang disebut bahan tambahan makanan (BTM) atau zat  aditif.  Salah  satu  bahan  tambahan makanan  untuk  menarik  perhatian  konsumen adalah zat pewarna (Fachruddin, 1998).
Zat  pewarna  makanan  secara  umum dibagi  dalam  tiga  golongan,  yaitu natural colours (zat  warna  alami), nature-identical
Versi Online: http://profood.unram.ac.id/index.php/profood
Vol 3 No. 2 November 2017 ISSN online: 2443-3446 I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6 I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4
6
I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6
I S S N
colours (zat pewarna yang identik dengan zat pewarna  alami),  dan synthetic  colours (zat pewarna sintetis). Sekarang ini lebih dari 90% zat  pewarna  yang  digunakan  oleh  industri pangan adalah zat pewarna sintetis (Fachruddin, 1998).
Pewarna  sintetik  yaitu  pewarna  yang biasa  digunakan  untuk  non  pangan.  Pewarna jenis ini berbahaya bagi kesehatan. (Mudjajanto,  2005).  Beberapa  pewarna  yang masih banyak digunakan meskipun penggunaannya  dilarang  seperti  Rhodamin  B dan Metanil Yellow (Fachruddin, 1998).
Bahaya  penggunaan  pewarna  sintetik pada makanan terutama industri pangan telah lama  diketahui.  Oleh  karena  itu,  mulai dikembangkan  pewarna  makanan  dengan bahan  alami.  Pewarna  alami  yang  dikenal diantaranya  adalah  daun  suji  (warna  hijau), daun  jambu  dan  daun  jati  (warna  oranye), serta kunyit (warna kuning) (Syah, 2005).
Berdasarkan komponen zat pewarnanya,  Fachruddin  (1998)  membagi pewarna  alami  dibagi  menjadi  5  jenis,  salah satunya  adalah  antosianin  yang  menghasilkan warna  oranye,  merah,  ungu,  biru,  dan  coklat yang  berasal  dari  daun  jati.  Daun  jati  telah sejak  lama  digunakan  masyarakat  secara tradisional  sebagai  pewarna  makanan.  Daun jati memiliki kandungan pigmen alamiah, salah satunya  adalah  golongan  antosianin,  yaitu pelargonidin  (Erinda,  2011).  Antosianin  ini memiliki  struktur  dasar  flavyllium  ion  yang dapat  menjadi  senyawa  yang  berbeda  warna. Antosianin  bisa  dimodifikasi  dengan  merubah struktur  senyawa  pada  posisi  atom  hidrogen, hidroksida,  dan  gugus  metoksi  (Anonim, 2011).
Seiring dengan berkembangnya penggunaan  daun  jati  sebagai  pewarna  alami pada  makanan,  maka  perlu  dilakukan penelitian untuk mengetahui potensi ketoksikan  (LD50)  dan  gejala-gejala  klinik yang timbul secara cepat atau tertunda akibat pemejanan  oral  dosis  tunggal  ekstrak  daun jati.

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada  penelitian ini adalah:
a. Sampel  uji  ekstrak  daun  jati  dengan komposisi  20%  ekstrak  daun  jati  muda dan 80% maltodekstrin.
b. Bahan-bahan lain yang digunakan adalah: akuades, Na CMC 0,5%, formalin 10%.
c. Hewan  uji  tikus  betina  galur  Wistar sebanyak
18
ekorAlat-alat yang digunakan pada penelitian:
Alat-alat  gelas  yang  dipakai  pada  penelitian pada  umumya  seperti,  gelas  beker,  labu takar, gelas ukur, cawan petri, dan pipet.
a. Alat-alat  bedah  yang  lazim  dipakai seperti,  gunting,  pinset,  jarum,  dan skapel.
b. Alat-alat lain seperti, spuit injeksi, neraca elektrik,  timbangan  tikus,  spidol,  pot organ, lup, mortir, dan stamper.

## Persiapan
Bahan utama untuk penelitian ini adalah daun jati muda (bagian kuncup daun). Pelarut yang  digunakan  untuk  ekstraksi  adalah campuran  etanol,  aseton,  dan  air.  Bahan pengisi  yang  digunakan  dalam  pembuatan serbuk  zat  warna  adalah  maltodekstrin (Karawuri, 2012).
Tahapan  pembuatan  ekstrak  dimulai dari  pengumpulan  bahan  baku  utama  yaitu daun  jati  muda,  kemudian  diblender,  setelah itu  hasil  blender  dikeringkan  dengan  oven selama  ±  15  menit.  Daun  jati  yang  telah diblender  diekstraksi  dengan  labu  leher  tiga. Setelah  diekstraksi  dengan  labu  leher  tiga, hasil  dianalisis  secara  gravimetri  kemudian dilakukan  pengeringan  dengan  oven.  Namun sebelum  dilakukan  pengeringan,  terlebih dahulu  ekstrak  ditambahkan  maltodekstrin. Campuran  ekstrak  dengan  maltodekstrin menggunakan  perbandingan  1:5.    Sehingga komposisi  ekstrak  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  20%  ektrak  daun  jati muda dan 80% maltodekstrin.
Larutan  Na  CMC  0,5%  digunakan sebagai suspending  agent ekstrak  daun  jati. Dalam  penelitian  ini  ekstrak  dibuat  suspensi dengan  volume  maksimal  pemberian  3  mL untuk  tikus  yang  berbobot  200  gram,  karena berat  badan  hewan  uji  yang  digunakan  tidak ada  yang  melebihi  200  gram.  Perhitungan tersebut  berdasarkan  pada  aturan  yang ditetapkan  oleh  OECD  423  bahwa  pemberian maksimal  volume  sediaan  suspensi  sebesar  2 mL/100 gram berat badan hewan uji. Sediaan uji  diberikan  dalam  bentuk  suspensi  dengan rute pemberian per oral.
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah  tikus betina  galur  Wistar,  sehat,  umur  2-3  bulan, berat badan 150-200 gram, dan dengan pakan berupa  pelet.  Hewan  uji  diperoleh  dari  Unit Pengembangan  Hewan  Percobaan  (UPHP- LPPT) Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.
Versi Online: http://profood.unram.ac.id/index.php/profood
Vol 3 No. 2 November 2017 ISSN online: 2443-3446 I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6 I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4
6
I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6

## Rancangan Percobaan
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental  rancangan  acak  lengkap  pola searah  dengan  variabel  penelitian  sebagai berikut:
1. Variabel  bebas:  dosis  pemejanan  ekstrak daun pada tikus betina galur wistar.
2. Variabel  tergantung:  potensi  ketoksikan akut  ekstrak  daun  jati,  gejala-gejala klinik, dan gross patologi pada organ hati, ginjal, jantung, lambung, limpa, dan usus halus.
3. Variabel  terkendali:  jenis  kelamin,  galur, umur, jumlah makan, dan volume minum, berat badan jalur pemejanan sediaan uji, dan kondisi lingkungan.

## Analisis
Data  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini meliputi  data  kualitatif  dan  kuantitatif.  Data kualitatif  meliputi  pengamatan  fisik  gejala klinik,  dan  gross  patologi  hati,  ginjal,  usus halus, lambung, jantung, dan limpa. Sedangkan  data  kuantitatif  meliputi  purata kenaikan  berat  badan  perhari  (PKBP)  hewan uji, purata berat organ hati, ginjal, usus halus, lambung,  jantung,  dan  limpa  serta  purata berat  pakan  dan  volume  minum  hewan  uji. Purata kenaikan berat badan perhari diperoleh dari data penimbangan berat badan hewan uji. Selanjutnya  purata  kenaikan  berat  badan perhari,  serta  berat  organ  hati,  ginjal,  usus halus,  lambung,  jantung,  dan  limpa  dianalisis secara statistik dengan SPSS 19.
Urutan  uji  yang  dilakukan  adalah  uji distribusi  normal  dengan  menggunakan informasi  dari  uji  Kolmogorov-Smirnov. Dilanjutkan  dengan  uji  homogenitas  varian untuk  mengetahui  kesamaan  varian  data. Analisis  parametrik  yang  digunakan  adalah ANOVA  untuk  menganalisa  apakah  sampel- sampel  mempunyai  rata-rata  yang  sama. Apabila  dari  uji  ANOVA  didapatkan  rata-rata sampel tidak identik (P<0,05) maka dilanjutkan  dengan  uji  Post  Hoc  Test  untuk mengetahui  letak  perbedaan  nilai  rata-rata pada sampel yang tidak identik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sediaan uji diberikan lewat oral sebagai dosis  tunggal,  dengan  terlebih  dahulu  ekstrak daun  jati  dilarutkan  dalam  Na  CMC  0,5% sebagai  pelarutnya.  Pada  metode  OECD  423, dosis  yang  dipejankan  pada  hewan  uji  sudah ditetapkan  yaitu  5,  50,  300,  dan  2000  mg/kg BB  (dosis  tambahan  5000  mg/kg  BB  dapat dipertimbangkan).
Pada penelitian ini dosis yang  diberikan pertama  kali  pada  hewan  uji  sebesar  2000 mg/kg BB. Hal ini dikarenakan penggunaannya di masyarakat sebagai zat pewarna alami pada makanan, sehingga diperkirakan ekstrak daun jati  ini  tidak  toksik.  Selain  itu  belum  ada informasi  mengenai  ketoksikan  akut  dari ekstrak  daun  jati.  Pengamatan  hewan  uji dilakukan sejak masa persiapan sebelum diberi perlakuan  (masa  penyesuaian  hewan  uji terhadap  situasi  dan  kondisi  pelaksanaan eksperimen)  selama  1  minggu.  Sediaan  uji kemudian  dipejankan  pada  hewan  uji  secara oral  dengan  dosis  tunggal  bagi  kelompok hewan  sediaan  uji  dan  larutan  Na  CMC  0,5% bagi  kelompok  kontrol  negatif.  Setelah mendapat  perlakuan,  dilakukan  pengamatan secara  intensif  selama  4  jam  kemudian pengamatan  dilanjutkan  selama  24  jam sesering mungkin.
Apabila  pada  kelompok  perlakuan terdapat  2  atau  3  hewan  uji  mati,  dilakukan penambahan  kelompok  perlakuan  dengan penurunan  dosis  sampai  dosis  yang  hanya memberikan  1  kematian  hewan  uji  atau bahkan  tidak  ada  kematian.  Tetapi  jika  tidak ada  hewan  uji  atau  hanya  1  ekor  hewan  uji yang  mati,  maka  dapat  langsung  ditetapkan LD50.  Sebelum  menetapkan  LD50  perlu dilakukan  pengulangan  dosis  pada  kelompok tambahan  dengan  perlakuan  yang  sama seperti kelompok sebelumnya. Hewan uji tetap diamati  selama  14  hari  untuk  melihat  efek tertunda  akibat  pemejanan  sediaan  uji.  Berat pakan  dan  volume  minum  tetap  dikontrol, termasuk penimbangan berat badan tikus tiap 3 hari sekali (Anonim, 2001b).
Data yang diperoleh dalam penelitian uji toksisitas  akut  ini  meliputi  data  kualitatif  dan kuantitatif.  Data  kualitatif  yang  diperoleh berupa  gejala  klinik,  hasil  pengamatan  organ secara gross patologi, wujud efek toksik serta spektrum  efek  toksik  setelah  pemejanan sediaan uji terhadap hewan uji selama 24 jam, terutama 4 jam setelah pemejanan sampai 14 hari  setelahnya  untuk  melihat  efek  yang tertunda.  Sedangkan  data  kuantitatif  meliputi jumlah  kematian  hewan  uji  yang  digunakan untuk  menentukan  nilai  potensi  ketoksikan akut  (LD50),  berat  badan  tiap  3  hari  selama 14 hari dan berat organ dari hewan uji setelah hewan  uji  dikorbankan.  Selain  itu  juga  dilihat berat  organ  hewan  uji  setelah  dibedah,  berat pakan dan volume hewan uji.
Versi Online: http://profood.unram.ac.id/index.php/profood
Vol 3 No. 2 November 2017 ISSN online: 2443-3446 I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6 I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4
6
I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6

## Potensi Ketoksikan Akut (LD50)
Dosis  yang  diberikan  pada  hewan  uji dimulai  dari  dosis  2000  mg/kg  BB  dengan perhitungan volume pemberian maksimal 3 mL untuk tikus berbobot 200 gram. Pada dosis ini, tidak  terdapat  hewan  uji  yang  mati,  sehingga dilakukan  pengulangan.  Setelah  pengulangan menghasilkan data yang sama maka dosis pun dinaikkan  menjadi  5000  mg/kg  BB  dengan aturan  volume  pemberian  yang  sama.  Pada dosis ini tidak ditemukan hewan uji yang mati sehingga dilakukan pengulangan dengan dosis yang  sama.  Pengulangan  pun  menunjukkan hasil  yang  sama.  Sehingga  tiap  tingkat  dosis dipejankan  per  oral  pada  tikus  sebanyak  6 ekor  tikus,  yaitu  3  tikus  pada  pemberian pertama  kemudian  3  ekor  berikutnya  adalah perulangan.  Pada  kelompok  kontrol  negatif, hewan  uji  diberikan  Na  CMC  0,5%  dengan volume  3  ml  untuk  tikus  200  gram  untuk mempermudah perhitungan pemberian.
Pengamatan  dilakukan  selama  24  jam setelah  pemberian  sediaan  uji.  Apabila  ada hewan  uji  yang  mati  sebelum  24  jam  maka hewan  uji  tersebut  segera  dibedah,  diambil organ  vitalnya  seperti  hati,  ginjal,  usus  halus, jantung, lambung, paru-paru, dan limpa untuk diamati  secara  makroskopis.  Pada  kasus  ini tikus yang dipejani sediaan uji tidak ada yang mengalami kematian pada dosis 2000 dan 500 mg/kgBB  pada  24  jam  pertama  baik pemberian  pertama  maupun  pengulangan pada  hewan  yang  berbeda  hingga  hari  ke  14 penelitian. Sehingga pada hari ke 14 hewan uji dikorbankan untuk melihat efek tertunda yang mungkin muncul. Pengamatan secara mikroskopis  dilakukan  pada  7  organ  vitalnya yaitu  hati,  ginjal,  usus  halus,  jantung, lambung, limpa, dan paru.
Jumlah  kematian  hewan  uji  pada masing-masing  kelompok  kontrol  maupun kelompok  dosis  setelah  pemberian  ekstrak daun jati dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1. Jumlah  Kematian  Hewan  Uji  pada Masing-masing Kelompok Kontrol dan Kelompok  Dosis  Setelah  Pemberian Ekstrak Daun Jati ( Tectona grandis L.

## f .) secara Oral Dosis Tunggal
Kelompok Langkah I (3 ekor) Langkah II (3 ekor) Σ hewan uji mati Σ hewan uji mati Kontrol Na CMC 0,5% 0 0 Dosis 2000 mg/kg BB 0 0 Dosis 5000 mg/kg BB 0 0
Kategori  yang  didapatkan  dari  Globally Harmonized  Classification  System  (GHS)  pada Pedoman  OECD  423  menunjukkan  bahwa sediaan uji ekstrak daun jati termasuk kategori V  (tidak  terklasifikasikan).  Sehingga  LD50 yang  dapat  disimpulkan  berupa  suatu perkiraan ( cut off ) yaitu tidak terklasifikasikan pada tikus betina galur Wistar.

## Pengamatan Gejala Toksik
Gejala  toksik  yang  diamati  meliputi perubahan  perilaku,  gerakan,  kereaktifan terhadap rangsang, reflek serebral dan spinal, ukuran  pupil,  sekresi,  pernafasan,  palpitasi kardiak, kulit, rambut, dan kondisi umum.
Hasil  pengamatan  kualitatif  gejala- gejala  toksik  pada  hewan  uji  setelah pemberian  sediaan  ekstrak  daun  jati memperlihatkan  adanya  gejala-gejala  toksik yang  cukup  jelas  pada  dosis  5000  mg/kg  BB tahap  I  dan  II.  Gejala  yang  terjadi  pada kelompok dosis 2000 mg/kg BB tahap I dan II hampir  sama  dengan  yang  terjadi  pada kelompok  kontrol  yaitu  tidak  ada  perilaku hewan  uji  yang  menunjukkan  gejala-gejala klinik yang berarti. Gejala-gejala klinik sebagai tanda ketoksikan yang muncul selama 24 jam dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel  2.  Hasil  Pengamatan  Kualitatif  Gejala Toksik  pada  Tikus  Jantan  Galur Wistar
24  Jam  Pertama  Hingga Sesaat Sebelum Dikorbankan Setelah Pemberian Ekstrak Daun Jati ( Tectona  grandis L. f .)  Secara  Oral Dosis Tunggal
Kl Kd Gejala toksik K a Tidak ada gejala b Tidak ada gejala c Tidak ada gejala 1 a Tidak ada gejala b Tidak ada gejala c Tidak ada gejala 1* a Tidak ada gejala b Tidak ada gejala c Tidak ada gejala 2 a Vokalisasi luar biasa. Tikus tetap hidup 14 hari hingga waktu dikorbankan. b Vokalisasi luar biasa. Tikus tetap hidup 14 hari hingga waktu dikorbankan.
c
Mengalami  singultus  (cegukan)  beberapa kali  pada  40  menit  awal.  Vokalisasi  luar biasa.  Tikus  tetap  hidup  14  hari  hingga waktu dikorbankan.
2* a Vokalisasi luar biasa. Tikus tetap hidup 14 hari hingga waktu dikorbankan.
b Vokalisasi luar biasa. Tikus tetap hidup 14 hari hingga waktu dikorbankan.
c
Sedikit agresif. Vokalisasi luar biasa. Tikus tetap  hidup  14  hari  hingga  waktu dikorbankan.
Versi Online: http://profood.unram.ac.id/index.php/profood
Vol 3 No. 2 November 2017 ISSN online: 2443-3446 I S S
N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6
I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4
6
I S S N o n l i n e :
2 4 4 3
- 3 4 4 6
Keterangan: (Kl) kelompok (Kd) kode hewan
(K) Kontrol Na CMC 0,5%
(1) Dosis 2000 mg/kgBB
(2) Dosis 5000 mg/kgBB
(*) dosis pengulangan
Pengamatan  dilanjutkan  hingga  14  hari pada  dosis  2000  mg/kg  BB  dan  dosis  5000 mg/kg  BB,  termasuk  kelompok  pengulangan dan  kelompok  kontrol.  Hasil  pengamatan kualitatif  gejala  toksik  selama  14  hari  terlihat dalam Tabel 3.
Tabel  3.  Hasil  Pengamatan  Kualitatif  Gejala Toksik  Ekstrak  Daun  Jati  ( Tectona grandis L. f .) Secara Oral Dosis Tunggal Selama Pengamatan 14 Hari pada Tikus Betina Galur Wistar
K l K d Gejala toksik hari ke- 1  2  3  4  5  6  7  8  9  1 0 1 1 1 2 1 3 1 4
K  a  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - b  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - c  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - 1  a  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - b  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - c  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -
1 * a  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - b  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - c  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - 2  a  +  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -
b  +  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - c  ^  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - 2
* a  +  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - b  +  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - c  + >  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  -  - Keterangan: (-) tidak menunjukkan gejala toksik
(*) dosis pengulangan
(+) vokalisasi luar biasa (^) singultus (cegukan)
(>) agresif (Kl) kelompok (Kd) kode hewan (K) Kontrol Na CMC 0,5% (1) Dosis 2000 mg/kgBB
(2) Dosis 5000 mg/kgBB (*) dosis pengulangan
Dari  Tabel  2  reaksi  yang  tampak  pada hari  pertama  tersebut  tidak  tampak  lagi  pada hari  berikutnya  sampai  hari  ke-14.  Hal  ini menunjukkan bahwa gejala yang muncul pada kelompok  perlakuan  bersifat  reversible  pada gejala  klinik.  Dari  Tabel  3  dapat  disimpulkan bahwa  setelah  pemberian  sediaan  uji dihentikan  tidak  muncul  efek  toksik  yang tertunda.

## Kondisi Umum
Pengamatan  terhadap  kondisi  umum hewan  uji  meliputi  perubahan  berat  badan, kematian,  berat  pakan,  dan  volume  minum hewan  uji.  Pada  penelitian  ketoksikan  akut data  perubahan  berat  badan  hewan  uji merupakan  salah  satu  parameter  yang digunakan untuk mengevaluasi kondisi kesehatan  secara  umum  dari  hewan  uji. Pengamatan  ini  dapat  digunakan  untuk mempelajari  kemungkinan  mekanisme  efek toksik akibat pemberian sediaan uji.
Penimbangan  berat  badan  hewan  uji dilakukan  pada  hari  ke-0,  yaitu  sebelum pemejanan sediaan
uji,
kemudian penimbangan  dilakukan  lagi  sebelum  hewan uji  dikorbankan.  Hewan  uji  dipelihara  sampai 14  hari  dan  dilakukan  penimbangan  berat badan  tiap  3  hari  sekali  untuk  menghindari terjadinya stres.
Tabel  IV.  Hasil  Purata  Kenaikan  Berat  Badan per  Hari  (PKBP  SD)  (g/hari)  Tikus Betina  Galur Wistar Selama  14  Hari Setelah  Pemberian  Ekstrak  Daun  Jati ( Tectona  grandis L. f .)  Secara  Oral
Dosis Tunggal Kl  Kd Perubahan berat badan (gram/hari) ke- 1 4 7 10 13 14 PKBP  SD K a 0 10 5 5 3 1 1,71 b 3 6 2 3 3 0 1,21 c 5 3 3 -1 3 0 0,93 RR 2,7  6,3  3,3  2,3  3,0 0,3 1,28  0,33 1 a 7 3 4 1 -5 0 0,71 b 5 1 4 5 6 0 1,14 c 5 0 1 4 5 0 1,07 RR 5,7  1,3  3,0  3,3  2,0 0 0,97  0,19 1* a 4 5 1 2 3 0 1,07 b 3 2 3 2 5 -1 1,00 c 3 6 2 5 4 0 1,43 RR 3,3  4,3  2,0  3,0  4,0 -0,3 1,17  0,19 2 a 3 3 11 3 3 0 1,64 b 5 5 6 2 3 -1 1,43 c 6 5 4 4 3 1 1,57 RR 4,6  4,3  7,0  3,0  3,0 0 1,55  0,09 2* a 3 5 6 11 3 0 2,00 b 5 6 7 2 3 3 1,86 c 5 4 2 1 3 1 1,14 RR 4,3  5,0  5,0  4,6  3,0 1,3 1,67  0,37 Keterangan: Rata – rata PKBP identik (p:0,12) (Kl) Kelompok (Kd) Kode hewan
(K) Kontrol Na CMC 0,5% (1) Dosis 2000 mg/kgBB (2) Dosis 5000 mg/kgBB (RR) Rata – rata (*) dosis pengulangan
Pengamatan
terhadap
pengaruh pemberian  ekstrak  daun  jati  secara  oral  dosis tunggal  dilakukan  selama  14  hari.  Hal  ini dilakukan  untuk  melihat  efek  tertunda
Versi Online: http://profood.unram.ac.id/index.php/profood
Vol 3 No. 2 November 2017 ISSN online: 2443-3446 I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6 I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4
6
I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6
ketoksikan  akut  ekstrak  daun  jati.  Selain  itu untuk
melihat hubungan
antara perkembangan  berat  badan  hewan  uji dievaluasi  menggunakan  parameter  purata kenaikan  berat  badan  perhari  (PKBP)  dengan efek  toksik  yang  muncul.  Digunakan  PKBP karena  pada  awal  penelitian  berat  badan hewan  uji  untuk  setiap  kelompok  tidak  sama. Selain  itu,  dengan  menggunakan  perhitungan PKBP  akan  lebih  memudahkan  pengamatan perubahan  berat  badan  hewan  uji  dari  setiap kelompok.  Data  purata  kenaikan  berat  badan perhari (PKBP) hewan uji selama 14 hari dapat dilihat pada Tabel 4.
Analisis  terhadap  perbedaan  purata kenaikan  berat  badan  perhari  (PKBP)  hewan uji antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan tidak berbeda signifikan berdasarkan hasil uji ANOVA.
Tabel 5. Data Berat Pakan dan Volume Minum Hewan Uji
Kl  Parameter
Minggu ke- Rata-rata I II K Pakan (g) 7,50 7,50  1,07 g/hari Minum (L) 1,25 1,35  0,19 L/hari 1 Pakan (g) 8,00 9,00  1,21 g/hari Minum (L) 1,25 1,35  0,19 L/hari 1* Pakan (g) 8,00 8,00  1,14 g/hari Minum (L) 1,25 1,25  0,17 L/hari 2 Pakan (g) 9,75 8,75  1,32 g/hari Minum (L) 1,35 1,25  0,19 L/hari 2* Pakan (g) 9,00 8,25  1,23 g/hari Minum (L) 1,25 1,20  0,18 L/hari Keterangan : Dosis pengulangan (*) Rata-rata pakan identik (sig. 0,23) Rata-rata minum identik (sig. 0,10)
(Kl) Kelompok (K) Kontrol Na CMC 0,5%
(1) Dosis 2000 mg/kgBB

## (2) Dosis 5000 mg/kgBB
Data  lain  yang  dianalisis  selain  PKBP adalah  data  berat  pakan  dan  volume  minum dari hewan uji. Penimbangan berat pakan dan pengukuran volume minum dilakukan setiap 7 hari  sekali.  Hal  ini  dilakukan  untuk  melihat kaitan antara peningkatan berat badan dengan asupan  jumlah  pakan  dan  minum  hewan  uji. Perubahan  berat  badan  yang  terjadi  pada hewan  uji  bisa  mengindikasikan  terjadinya gangguan  atau  patologi  pada  hewan  uji. Namun  dalam  penelitian  ini  tidak  ditemukan pebedaan  bermakna  pada  PKBP.  Sehingga dapat  dikatakan  tidak  terjadi  patologi  yang berarti pada hewan uji. Data berat pakan dan volume  minum  hewan  uji  dapat  dilihat  pada Tabel 5.
Dari  analisis  SPSS  didapatkan  nilai probabilitas  normalitas,  varian,  dan  hasil
ANOVA diatas 0,05. Sehingga dapat dikatakan berat pakan dan volume minum tiap kelompok tidak berbeda signifikan dengan kata lain rata- rata berat pakan dan volume minum hewan uji semua kelompok adalah identik.

## Pemeriksaan gross patologi
Pemeriksaan  makroskopis  dikenal  juga dengan  gross  patologi.  Pemeriksaan  gross patologi  menggunakan  lup  atau  kaca pembesar, hasil gross patologi tidak memperlihatkan perbedaan secara kasat mata antara kontrol dengan perlakuan.
Pengamatan makroskopis
yang dilakukan  terhadap  organ  vital  hewan  uji dengan  cara  mengamati  organ  hewan  uji dibawah lup/kaca pembesar dilengkapi dengan penerangan  yang  cukup.  Hasil  pengamatan pada  kelompok  kontrol  Na  CMC  0,5%    tidak menunjukkan  adanya  kerusakan  secara  kasat mata.  Hal  yang  sama  juga  terjadi  pada kelompok perlakuan dosis 2000 mg/kg BB dan dosis 5000 mg/kg BB juga tidak menunjukkan adanya  kerusakan  pada  organ  hewan  uji. Pengamatan makroskopis pada semua kelompok  perlakuan  selama  14  hari  untuk melihat efek yang tertunda tidak menunjukkan adanya  kerusakan.  Dari  hasil  pengamatan makroskopis ini masih belum dapat disimpulkan  pengaruh  sediaan  uji  terhadap hewan  uji  karena  perlu  dilihat  hasil pemeriksaan histopatologinya.
Tabel  VI.  Berat  Rata-rata  Organ  (g)  (x±SD) Tikus  Betina  Galur  Wistar,  14  Hari Setelah  Pemberian  Ekstrak  Daun  Jati ( Tectona  grandis L. f .)    Secara  Oral
Dosis Tunggal O K 1 1* 2 2* J 0,69 ±0,04 0,73 ±0,05 0,73 ±0,05 0,68 ±0,04 0,71 ±0,05 P 1,86 ±0,15 2,18 ±0,34 2,00 ±0,14 2,20 ±0,34 1,99 ±0,28 H 6,74 ±0.10 6,87 ±0,96 8,00 ±0,46 7,34 ±0,09 7,10 ±1,17 G 1,47 ±0,03 1,42 ±0,08 1,43 ±0,03 1,41 ±0,05 1,54 ±0,18 Li 0,64 ±0,03 0,57 ±0,04 0,58 ±0,08 0,67 ±0,05 0,73 ±0,07 La 1,77 ±0,10 1,69 ±0,07 1,72 ±0,05 1,60 ±0,05 0,74 ±0,07 Keterangan: (*) dosis pengulangan Rata-rata tiap organ identic (K) Kontrol Na CMC 0,5%
(1) Dosis 2000 mg/kgBB
Versi Online: http://profood.unram.ac.id/index.php/profood
Vol 3 No. 2 November 2017 ISSN online: 2443-3446 I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6 I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4
4 6
I S S N o n l i n e :
2 4 4 3 - 3 4 4 6
I
S S N
(2) Dosis 5000 mg/kgBB (O) Organ (J) Jantung (P) Paru paru (H) Hati (G) Ginjal
(Li) Limpa (La) Lambung
Selain itu dilakukan penimbangan organ yang  bertujuan  untuk  mengetahui  apakah pemberian  sediaan  uji  dapat  mempengaruhi organ  vital.  Penimbangan  dilakukan  sesaat setelah  hewan  uji  dikorbankan.  Hasil penimbangan  dapat  dibandingkan  dengan hasil  pemeriksaan  histopatologinya.  Apabila organ  hewan  uji  mengalami  peradangan, kemungkinan  terjadi  penambahan  berat organ.  Namun  apabila  hasil  pemeriksaan histopatologi normal maka penambahan berat organ  kemungkinan  akibat  faktor  dari  diri hewan  uji  tersebut.  Hasil  penimbangan  organ hewan uji tersaji dalam tabel VI.
Analisa dengan SPSS 19 uji Kolmogorov- Semirnov  didapatkan  hasil  semua  sampel terdistribusi  normal  dan  Test  of  Homogenitas of  Varian  mendapatkan  hasil  yang  homogen pada semua varian. Sehingga dapat dikatakan rata-rata  berat  organ  tidak  berbeda  signifikan antar  kelompok,  baik  kontrol  maupun perlakuan.

## KESIMPULAN
1. Berdasarkan  kategori  yang  didapatkan dari Globally  Harmonized  Classification System (GHS) pada Pedoman OECD 423, potensi  ketoksikan  (LD50)  ekstrak  daun jati  yang  diberikan  secara  oral  dosis tunggal  pada  tikus  betina  galur  Wistar termasuk  kategori  V  ( cut  off tidak terklasifikasikan)
2. Pengamatan  secara  gross  patologi terhadap  pemberian  ekstrak  daun  jati dosis  2000  dan  5000  mg/kg  BB  tidak memberikan efek toksik pada organ  hati, ginjal,  usus  halus,  jantung,  lambung, limpa, dan paru.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim a , 2001, OECD Guideline for Testing of Chemicals,  Acute  Oral  Toxicity-Acute Toxic  Class  Method  No.423,  OECD, Paris.
Anonim b , 2011, Anthocyanins and Anthocyanidins, http://www.food- info.net/uk/colour/anthocyanin.htm, [diakses tanggal 1 Mei 2017] Fachruddin L. 1998, Memilih dan Memanfaatkan Bahan Tambahan
Makanan,  1,  34-46,  Trubus  Agriwidya, Ungaran.
Karawuri  T.  2012,  Ekstraksi  Senyawa  Flavon dari Daun Jati (Tectona grandis Linn f.) sebagai  Alternatif  Zat  Warna  Alami,
[Laporan Penelitian]. Yogyakarta:
Laboratorium  Proses  Pemisahan  MIPA UGM.
Marwanti,  Prihastuti  E,  Palupi  S.  2009, Pengembangan  Mutu  Produk  Makanan Kudapan Melalui Diversifikasi Pengolahan Untuk Meningkatkan
Pendapatan  Produsen,  Laporan  Hasil Pelaksanaan PPM, Pusat Pengembangan Pangan Yogyakarta, Yogyakarta.
Mudjadjanto SE. 2005, Tahu, Makanan Favorit yang  Perlu  Diwaspadai,  Arsip  KOMPAS, Jakarta.
Syah  D.  2005,  Manfaat  dan  Bahaya  Bahan Tambahan  Makanan,  Skripsi,  Institut Pertanian Bogor, Bogor.