## AKTIVITAS ANTIBAKTERI JAMUR ENDOFITIK RS-2 YANG DIISOLASI DARI
TUMBUHAN SAMBILOTO (Andrographis paniculata )

## ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF ENDOPHYTIC FUNGUS RS-2 ISOLATED FROM
SAMBILOTO (Andrographis paniculata )
Riga Riga 1* , Suryelita 2 , Sri Benti Etika 3 , Rani Aulia Suhanah 4 , Varel Anshar Al Khairi 5
12345 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Padang, Jalan Prof. Dr. Hamka, Air Tawar Barat, Padang 25132
* e-mail korespondensi: rigakimia@fmipa.unp.ac.id

## Abstrak
Andrographis paniculata yang dikenal dengan tumbuhan sambiloto dilaporkan menghasilkan berbagai metabolit sekunder dengan aktivitas antibakteri. Potensi senyawa  antibakteri dari tumbuhan ini dapat dikaji  lebih  lanjut  dari  jamur  yang  berasosiasi  dengan  tumbuhan  sambiloto.  Tujuan  dari  studi  ini adalah  menganalisis  potensi  jamur  endofitik  yang  berasosiasi  dengan  ranting  tumbuhan  sambiloto. Hasil  inokulasi  terhadap  tumbuhan  sambiloto  menghasilkan  jamur  endofitik  dengan  kode  RS-2.  Uji aktivitas  antibakteri  terhadap  ekstrak  jamur  RS-2  mengindikasikan  bahwa  jamur  RS-2  mampu menghambat  pertumbuhan  dua  bakteri  uji  dengan  konsentrasi  1%,  3%,  dan  5%.  Studi  lebih  lanjut terkait senyawa bioaktif yang berkontribusi dalam aktivitas antibakteri jamur RS-2 perlu dilanjutkan.
Kata kunci: Andrographis paniculata , antibakteri, jamur endofitik, RS-2

## Abstract
Andrographis paniculata known as Sambiloto reportedly produces a variety of secondary metabolites with  anti-bacterial  activity.  The  potential  of  antibacterial  compounds  from  this  plant  can  be  studied further  from  endophytic  fungus  associated  with  sambiloto.  The  aim  of  the  study  was  to  analyze  the potential  of  endophytic  fungi  associated  with  the  twigs  of  the  sambiloto.  Inoculation  of  sambiloto yielded  endophytic  fungi  with  the  code  RS-2.  An  anti-bacterial  activity  test  against  RS-2  fungal extract indicates that RS-2 fungus is able to inhibit the growth of two test bacteria with concentrations of  1%,  3%,  and  5%.  Further  studies  of  bioactive  compounds  that  contribute  to  RS-2  fungal  anti- bacterial activity need to continue.
Keywords: Andrographis paniculata , anti bacteri, endophytic fungus, RS-2

## PENDAHULUAN
Pada tahun 2019 WHO merilis data terkait beragam  ancaman  kesehatan  dalam  satu  dekade terakhir.  Salah  satu  ancaman  kesehatan  tersebut adalah  resistensi  bakteri  terhadap  berbagai antibiotik yang ada. Fenomena ini menjadi fokus penelitian  di  berbagai  belahan  dunia  untuk menemukan  beragam  senyawa  bioaktif  sebagai lead  compound untuk  antibakteri  (Wang et  al ., 2018;  Windels et  al .,  2019).  Salah  satu tumbuhan obat yang banyak dilaporkan memproduksi  beragam  metabolit  sekunder
dengan aktivitas antibakteri adalah
Andrographis paniculata.
Tanaman A.  paniculata juga  dikenal dengan  nama  sambiloto  atau  empedu  tanah merupakan  salah  satu  genus  tumbuhan  yang penting  dari  famili Achantaceae .  Berbagai jaringan  tumbuhan  ini  telah  banyak  digunakan secara  tradisional  untuk  mengobati  bermacam- macam  penyakit  seperti  masuk  angin,  radang amandel,  radang  usus  besar  dan  demam (Suhanah et  al .,  2021;  Silalahi,  2020).  Kajian fitokimia  terhadap  berbagai  jaringan  tumbuhan A.  paniculata (sambiloto)  menunjukkan  bahwa
2 | Jurnal Zarah , Vol. 10 No. 1 (2022)
metabolit  sekunder  yang  pernah  diisolasi  dari tumbuhan  ini  antara  lain  senyawa  fenolik  dan non  fenolik  (Chao  &  Lin,  2010;  Gajalakshmi et al ., 2012; Jeeva, 2014). Metabolit sekunder hasil isolasi  tersebut  juga  dilaporkan  mempunyai beragam  bioaktivitas,  termasuk  antibakteri (Singha et  al .,  2003).  Hasil  penelitian  tersebut menunjukkan  bahwa  tumbuhan A.  paniculata memiliki  potensi  besar  sebagai  sumber lead compound antibiotik.  Selain  dari  tumbuhannya, senyawa  bioaktif  dari A.  paniculata juga  dapat diperoleh dari jamur endofitiknya.
Jamur  endofitik  secara  umum  dapat didefiniskan  sebagai  jamur  yang  hidup  dalam berbagai  jaringan  tumbuhan.  Jamur  endofitik dilaporkan memiliki hubungan simbiosis mutualisme dengan tumbuhan inangnya (Riga et al ., 2019a, 2019b; 2019c). Jamur endofitik akan memproduksi  berbagai  senyawa  bioaktif  untuk memberikan  perlindungan  atau  proteksi  bagi tumbuhan  inangnya.  Beragam  senyawa  yang pernah  diisolasi  dari  jamur  endofitik  antara  lain senyawa  golongan  non  fenolik  (terpenoid, steroid)  dan  fenolik  (alkaloid,  antrakuinon). Senyawa  tersebut  juga  dilaporkan  memiliki aktivitas antibakteri (Liu et al ., 2008).
Riset  tentang  kajian  biologi  dari  jamur endofitik  yang  berasosiasi  dengan  batang,  akar, bunga  dan  daun  tumbuhan  tumbuhan A. paniculata telah  pernah  dilaporkan  sebelumnya. Lebih  lanjut,  penelitian  tentang  kajian  fitokimia dan  sifat  antibakteri  dari  jamur  endofitik  yang diisolasi  dari  daun  dan  bunga  tumbuhan A. paniculata juga telah pernah dilaporkan (Suhanah et  al .,  2021;  Suryelita et  al .,  2021).
Hasil  penelitian  tersebut  dijadikan  dasar  dalam melakukan  riset  lebih  lanjut  terkait  sifat antibakteri  dari  ekstrak  organik  jamur  endofitik yang  berasosiasi  dengan  ranting  tumbuhan A. paniculata .  Berdasarkan  hal  tersebut,  riset  ini akan  menggali  potensi  terkait  kandungan metabolit  sekunder  dari  jamur  endofitik  yang berasal dari ranting tumbuhan A. paniculata dan berpotensi dimanfaatkan sebagai lead compound antibakteri.

## METODE PENELITIAN
Inokulasi Jamur Endofitik Tumbuhan A.  paniculata diperoleh  dari Tabing  Banda  Gadang,  Padang,  Indonesia. Ranting  segar tumbuhan A. paniculata dipotong menjadi berukuran 2x2 cm dan kemudian dialiri dengan air bersih. Strelisasi permukaan dilakukan  dengan  merendamnya  dalam  larutan etanol  70%  (45  detik)  dan  larutan  NaOCl  3,5%
(30  detik).  Ranting  yang  telah  steril  kemudian ditempelkan  pada  media  padat  PDA  sebagai kontrol  negatif.  Ranting  selanjutnya  dipotong (1x1  cm)  dan  diinokulasi  di  atas  media  padat PDA  dan  diinkubasi  pada  suhu  28 0 C  selama  7 hari.  Jamur  endofitik  yang  tumbuh  dipindahkan ke media PDA lainnya sehingga diperolah isolat tunggal jamur endofitik.

## Identifikasi Mikroskopik Jamur Endofitik
Isolat  tunggal  jamur  hasil  isolasi  ini kemudian  diidentifikasi  secara  mikroskopis melalui  metode  pewarnaan.  Pengamatan  secara mikroskopis  dilakukan  dengan  melakukan pewarnaan  jamur  endofit  menggunakan  metode slide  culture .  Metode  ini  digunakan  untuk mempermudah dalam melihat ciri-ciri mikroskopis  dari  jamur  sehinga  jamur  lebih mudah dapat teridentifikasi.

## Optimasi Waktu Kultivasi Jamur Endofitik
Waktu  kultivasi  isolat  tunggal  jamur endofitik dalam memproduksi metabolit sekunder  dilakukan  optimasi.  Jamur  endofitik (2x2  cm)  dari  media  padat  dipindahkan  ke dalam  sembilan  media  beras  pada  Erlenmeyer 250 mL.  Tiga  erlenmenyer  pada  minggu  kedua, ketiga  dan  keempat  dipanen  dan  diekstraksi dengan pelarut etil asetat hasil destilasi sehingga didapatkan ekstrak pekat. Ekstrak pekat dianalisis  berdasarkan  massa  yang  diperoleh untuk menentukan waktu kultivasi optimumnya.

## Kultivasi Jamur Endofitik
Kultivasi  terhadap  isolat  tunggal  jamur dilakukan dalam Erlenmeyer yang berisi 100 mL media beras dan kemudian diinkubasi pada suhu 28 0 C  selama  waktu  kultivasi  optimumnya. Kemudian  kultivar  jamur  endofitik  diekstraksi padat-cair  dengan  etil  asetat  sebanyak  tiga  kali sehingga  diperoleh  ekstrak  pekat  EtOAc. Ekstrak  pekat  EtOAc  ini  kemudian  digunakan dalam uji aktivitas antibakteri dan uji kandungan metabolit sekunder.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Ekstrak  pekat  jamur  endofitik    diuji aktivitas  antibakterinya  menggunakan  metode difusi cakram (Suryelita et al ., 2021). Bakteri uji yang  digunakan  adalah Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus .  20  µL  ekstrak  pekat pada  berbagai  konsentrasi  (1%,  3%,  dan  5% (pelarut:  DMSO)),  kontrol  positif  dan  kontrol negatif  diteteskan  pada  kertas  cakram  yang terletak  diatas  inokulan  masing-masing  bakteri
uji.  Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah amoksilin.  Setelah  diinkubasi  1x24  jam, aktivitas  antibakteri  masing-masing  ekstrak diukur  dan  dinyatakan  dalam  zona  hambat. Aktivitas antibakteri dilakukan sebanyak triplo.

## Uji Kandungan Metabolit Sekunder
Uji  kandungan  metabolit  sekunder  yang meliputi terpenoid/steroid, alkaloid dan senyawa fenolik  dilakukan  terhadap  ekstrak  pekat  jamur endofitik  yang  diisolasi  dari  ranting A. paniculata .  Metode  yang  digunakan  untuk  uji fitokimia  mengikuti  prosedur  yang  telah dilaporkan sebelumnya (Suryelita et al ., 2021).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  bertujuan  mengeksplorasi sifat antibakteri jamur yang diisolasi dari ranting tumbuhan A. paniculata (sambiloto). Selama ini, tumbuhan A. paniculata telah banyak dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional  oleh masyarakat.  Kajian  etnobotani  inilah  yang menjadi  dasar  pemilihan  sampel  tumbuhan inang  pada  penelitian  ini.  Analisis  ini  didukung oleh  data  kemampuan  tumbuhan  sebagai  obat- obatan  dipengaruhi  oleh  kapasitasnya    dalam memproduksi  senyawa  biokatif  (Jarukamjorn  & Nemoto, 2008).  Kajian tentang aktivitas ekstrak organik dan senyawa murni dari jamur endofitik yang  berasosiasi  dalam  berbagai  tumbuhan inang  telah  banyak  dilaporkan.  Meskipun demikian, penelitian terkait sifat  antibakteri dari jamur  endofitik  yang  diisolasi  dari  ranting A. paniculata masih sangat terbatas.
Tahapan  awal  dalam  riset  ini  yaitu inokulasi jamur endofitik dari ranting  tumbuhan A.  paniculata .  Ranting A.  paniculata dicuci dengan  air  mengalir  untuk  mengeliminasi pengotor yang terdapat di permukaan rantingnya. Mikroba epifit permukaan ranting A. paniculata dihilangkan melalui proses sterilisasi menggunakan  etanol  70%  dan  NaOCl  3,5%. Tahapan  ini  bertujuan  untuk  mengkomfirmasi bahwa  jamur  yang  tumbuh  pada  media  PDA adalah  jamur  endofitik  atau  jamur  yang  berasal dari  jaringan  dalam  ranting A.  paniculata . Ranting steril selanjutkan diinokulasi di permukaan  media  PDA  yang  telah  ditambahkan antibiotik.  Penambahan  antibiotik  bertujuan untuk  mengeliminasi  bakteri  endofitik  yang berasal  dari  jaringan  tumbuhan  yang  sama. Cawan  petri  kemudian  diinkubasi  selama  tujuh hari  dan  jamur  yang  hidup  dipindahkan  ke media  agar  PDA  lainnya  dan  didapatkan  dua isolat  tunggal  jamur  endofitik.  Jamur  endofitik
(kode  RS-2)  dipilih  untuk  dilanjutkan  pada proses  berikutnya  berdasarkan  pengamatan morfologi  jamur  yang  meliputi  bentuk  dan warna koloni (Gupta et al ., 2020).
Gambar 1. Jamur RS-2
Warna  koloni  dari  isolat  jamur  RS-2 (Gambar  1)  adalah  hijau  tua.  Sedangkan  bentuk koloni  dari  jamur  RS-2  adalah  bulat  dan membentuk  koloni  yang  memusat.  Jamur dengan morflogi makroskopik seperti jamur RS- 2  belum  pernah  dilaporkan  dari  tumbuhan A. paniculata .  Isolat  tunggal  hasil  isolasi  ini kemudian  diidentifikasi  secara  mikroskopis melalui  metode  pewarnaan  di  Laboratorium Kesehatan Daerah (Labkesda) Padang. Pengamatan  secara  mikroskopis  dilakukan dengan  melakukan  pewarnaan  jamur  endofitik menggunakan  metode slide  culture .  Metode  ini digunakan  untuk  mempermudah  dalam  melihat ciri-ciri  mikroskopis  dari  jamur  sehinga  jamur lebih  mudah  dapat  teridentifikasi.  Secara mikroskopis  isolat  RS-2  memiliki  ciri-ciri  hifa bercabang  dan  berwarna  biru  setelah  dilakukan pewarnaan dengan methylene blue (Gambar 2).
Jamur  RS-2  kemudian  dikultivasi  skala kecil untuk menentukan waktu kultibasi optimum  jamur  dalam  menghasilkan  metabolit sekunder.  Massa  esktrak  etil  asetat  jamur  RS-2 pada  minggu  kedua,  ketiga  dan  keempat dianalisis  untuk  mengetahui  waktu  kultivasi optimumnya. Metabolit sekunder akan dihasilkan  oleh  jamur  endofitik  pada  tahap stasioner.  Pada  tahap  ini  terjadi  keseimbangan antara kecepatan pertumbuhan dan kematian sel. Tahap  stasioner  suatu  jamur  akan  terjadi  saat nutrisi  pada  media  pertumbuhan  menipis. Kondisi  ini  mengakibatkan  enzim-enzim  yang berkontribusi  dalam  menghasilkan  senyawa akan  terakumulasi  sehingga  kuantitas  senyawa akan  semakin  banyak  (Manoharachary  & Nagaraju,  2016).    Tabel  1  terkait  ekstrak  jamur RS-2 pada berbagai minggu kultivasi menunjukkan  bahwa  perbedaan  massa  ekstrak pada  minggu  dua,  tiga  dan  empat  tidak
4 | Jurnal Zarah , Vol. 10 No. 1 (2022)
mengalami  perubahan  yang  cukup  signifikan sehingga dapat dinyatakan bahwa minggu kedua adalah  fase  stasioner  dari  jamur  tersebut.  Hasil ini  mengindikasikan  bahwa  waktu  kultivasi optimum jamur RS-2 adalah dua minggu.

## Gambar 2. Hasil Pewarnaan Jamur RS-2
Berdasarkan  data  tersebut,  jamur  RS-2 kamudian  dikultivasi  skala  besar  ke  dalam  15 Erlenmeyer  yang  berisi  media  beras.  Kultivasi skala  besar  ini  bertujuan  untuk  memperoleh massa  ekstrak  dalam  kuantitas  yang  lebih banyak.  Hasil  ekstraksi  jamur  RS-2  setelah dikultivasi selama dua minggu dipekatkan untuk menghasilkan  ekstrak  pekat  EtOAc.  Ekstrak pekat  EtOAc  jamur  RS-2  tersebut  selanjutnya diuji  sifat  antibakterinya.  Dua  bakteri  uji  yang digunakan untuk menganalisis aktivitas antibakteri  jamur  RS-2  adalah E.  coli dan S. aureus .  Ekstrak  jamur  RS-2  yang  digunakan terdiri  dari  tiga  variasi  konsentrasi,  yaitu  1%, 3%  dan  5%.  Adapun  kontrol  positif  yang digunakan  pada  uji  antibakteri  ini  adalah amoksilin. Uji aktivitas antibakteri ini dilakukan secara  triplo  dan  hasil  uji  dinyatakan  sebagai zona hambat yang ditampilkan pada Tabel 2.
Uji  aktivitas  penghambatan  antibakteri menunjukkan  bahwa  diameter  zona  hambat ekstrak terhadap bakteri Gram positif ( S. aureus ) lebih  kuat  dibandingkan  terhadap  bakteri  Gram negatif  ( E.  coli ).  Hasil  ini  sesuai  dengan  sifat dinding  sel  yang  dimiliki  bakteri  tersebut. Bakteri  Gram  negatif  memiliki  struktur  dinding sel  yang  lebih  kompleks  dibandingkan  struktur dinding  sel  bakteri  Gram  positif.  Struktur dinding  sel  bakteri  Gram  negatif  yang  relatif kompleks akan mengakibatkan senyawa antibakteri  lebih  sukar  masuk  ke  dalam  sel (Singha et al ., 2003).

## Tabel 1. Optimasi Kultivasi Jamur Endofitik
Jamur Minggu 2 3 4 RS-2 25,3 mg 24,6 mg 24,0 mg
Tabel  2  tersebut  mengindikasikan  bahwa ekstrak  EtOAc  jamur  RS-2  yang  diperoleh  dari
ranting A.  paniculata mempunyai  kemampuan menghambat  pertumbuhan  kedua  bakteri  uji. Zona hambat pada tabel 2 juga mengindikasikan bahwa  kemampuan  antibakteri  ekstrak  jamur RS-2  berkorelasi  positif  dengan  konsentrasi ekstrak  tersebut.  Fakta  ini  dipengaruhi  oleh jumlah  senyawa  aktif  dalam  ekstrak  yang  juga semakin banyak.
Tabel 2. Data Zona Hambat Ekstrak EtOAc Konsentrasi Bakteri Uji E. coli S. aureus 1% 3,67 ± 0,58 3,67 ± 1,15 3% 4,00 ± 0 6,00 ± 2,65 5% 5,67 ± 0,58 7,33 ± 1,53 Kontrol (+) 10,67 ± 0,58 11,33 ± 0,58
Aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  EtOAc jamur  RS-2  menunjukkan  kehadiran  metabolit sekunder  yang  mempunyai  aktivitas  biologi. Berdasarkan  hal  tersebut,  ekstrak  EtOAc  jamur RS-2  diuji  kandungan  metabolit  sekunder (alkaloid,  terpenoid,  steroid,  dan  fenolik).  Hasil uji  fitokimia  ekstrak  EtOAc  jamur  RS-2  dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel  3. Hasil  uji  kandungan  metabolit  sekunder ekstrak EtOAc jamur RS-2 Uji Metabolit Sekunder Hasil Uji Terpenoid/Steroid + Alkaloid + Fenolik + Senyawa golongan alkaloid dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  cara merusak  komponen  penyusun  peptidoglikan pada  sel  bakteri.  Sementar  itu,  mekanisme senyawa  terpenoid  sebagai  antibakteri  adalah dengan  mengganggu  sintesis  membran  atau dinding  sel  sehingga  dinding  atau  membran  sel tidak  akan  terbentuk  dengan  optimal.  Sifat antibakteri  senyawa  fenolik  didukung  oleh faktor  lipofilisitas,  sifat  elektronik  dan  muatan polifenol  yang  dapat  mengahmbat  kerja  enzim reverse  transkripsi  dan  DNA  topoisomerase (Suhanah et  al .,  2021).  Riset  tentang  metabolit sekunder  yang  berkontribusi  dalam  sifat antibakteri  pada  jamur  RS-2  perlu  dilakukan secara  komprehensif  di  masa  depan  sehingga dapat memperoleh senyawa yang dapat berperan sebagai lead compound antibakteri.

## KESIMPULAN
Aktivitasi  antibakteri  dari  ekstrak  EtOAc jamur  endofitik  RS-2  yang  berasosiasi  dengan ranting A.  paniculata menunjukkan  hasil  yang
positif terhadap dua bakteri uji, yaitu E. coli dan S. aureus . Hal ini mengindikasikan bahwa jamur RS-2  memiliki  potensi  dalam  menghasilkan senyawa  yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai lead compound antibakteri.

## DAFTAR RUJUKAN
Chao, W. W., & Lin, B. F. (2010). Isolation and identification  of  bioactive  compounds  in Andrographis  paniculata  (Chuanxinlian).
Chinese Medicine , 5 , 1–15. https://doi.org/10.1186/1749-8546-5-17
Gajalakshmi,  S.,  Iswarya,  V.,  Ashwini,  R., Bhuvaneshwari,  M.,  Mythili,  S.,  & Sathiavelu, A. (2012).
Secondary metabolite  production  by  Endophytic Fungi isolated from Andrographis paniculata . 5 (3), 12–17.
Gupta,  S.,  Chaturvedi,  P.,  Kulkarni,  M.  G.,  & Van Staden, J. (2020). A critical review on exploiting  the  pharmaceutical  potential  of plant  endophytic  fungi. Biotechnology
Advances , 39 , 107462. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2019.1
07462 Jarukamjorn,  K.,  &  Nemoto,  N.  (2008). Pharmacological  aspects  of  Andrographis paniculata  on  health  and  its  major diterpenoid  constituent  andrographolide.
Journal of Health Science , 54 (4), 370–381. https://doi.org/10.1248/jhs.54.370
Liu, X., Dong, M., Chen, X., Jiang, M.,  Lv,  X., &  Zhou,  J.  (2008).  Antimicrobial  activity of  an  endophytic  Xylaria  sp.YX-28  and identification of its antimicrobial compound 7-amino-4-methylcoumarin.
Applied  Microbiology  and  Biotechnology , 78 (2), 241–247. https://doi.org/10.1007/s00253-007-1305-1
Manoharachary,  C.,  &  Nagaraju,  D.  (2016).
Endophytic
hyphomycetous fungi associated  with  some  medicinal  plants from  Telangana  state,  India. Indian Phytopathology , 69 (2), 169–172.
Riga,  R.,  Happyana,  N.,  &  Hakim,  E.  H.
(2019a). Chemical Constituents of
Pestalotiopsis  microspora  HF  12440. Journal of Applied Pharmaceutical Science , 9 (1).
https://doi.org/10.7324/JAPS.2019.90116
Riga,  R.,  Happyana,  N.,  &  Hakim,  E.  H.
(2019b).  Sesquiterpenes  produced  by Pestalotiopsis microspora HF 12440 isolated  from  Artocarpus  heterophyllus. Natural Product Research .
https://doi.org/10.1080/14786419.2019.15 78764
Riga,  R.,  Happyana,  N.,  Quentmeier,  A., Zammarelli,  C.,  Kayser,  O.,  &  Hakim,  E.
H.  (2019c).  Secondary  metabolites  from Diaporthe lithocarpus isolated from Artocarpus  heterophyllus. Natural Product Research . https://doi.org/10.1080/14786419.2019.16 72685 Riga,  Riga,  Aulia  Suhanah,  R.,  Suryelita,  S., Benti Etika, S., & Ulfah, M. (2021). Jamur Endofitik  Yang  Diisolasi  Dari  Bunga Andrographis Paniculata (Sambiloto) Sebagai  Sumber  Senyawa  Antibakteri. Jurnal  Insan  Farmasi  Indonesia , 4 (1), 139–148. https://doi.org/10.36387/jifi.v4i1.664 Silalahi,  M.  (2020). Sambiroto  (Andrographis paniculata)  dan  Bioaktivitasnya . 3 (1),
2614–8064.
Singha,  P.  K.,  Roy,  S.,  &  Dey,  S.  (2003).
Antimicrobial  activity  of  Andrographis paniculata. Fitoterapia , 74 (7–8),  692–694. https://doi.org/10.1016/S0367- 326X(03)00159-X
Solomon  Jeeva,  J.  J.  (2014).  Andrographis paniculata:  A  Review  of  its  Traditional Uses,  Phytochemistry  and  Pharmacology. Medicinal  &  Aromatic  Plants , 03 (04). https://doi.org/10.4172/2167-
0412.1000169
Suhanah,  R.,  Suryelita,  S.,  Etika,  S.  B.,  Ulfah, M.  &  Riga,  R.  (2021).  Jamur  Endofitik yang  Diisolasi  dari  Bunga  Andrographis Paniculata  (Sambiloto)  Sebagai  Sumber Senyawa Antibakteri. Jurnal Insan Farmasi Indonesia, 4(1), 139-48. https://doi.org/10.36387/jifi.v4i1.664
Suryelita, S., Riga, R., Etika, S. B., Ulfah, M., & Artasasta,  M.  A.  (2021). Antibacterial Screening  of  Endophytic  Fungus  Xylaria sp . derived from Andrographis paniculata ( Sambiloto ) . 9 , 971–975.
Wang, W., Arshad, M. I., Khurshid, M., Rasool,
M.  H.,  Nisar,  M.  A.,  Aslam,  M.  A.,  & Qamar, M. U. (2018). Antibiotic resistance :  a  rundown  of  a  global  crisis. Infection  and  Drug  Resistance ,  1645– 1658.
Windels,  E.  M.,  Michiels,  J.  E.,  van  den  Bergh, B.,  Fauvart,  M.,  &  Michiels,  J.  (2019). Antibiotics:  Combatting  tolerance  to  stop resistance. MBio , 10 (5), 1–7. https://doi.org/10.1128/mBio.02095-19