## AQUASAINS
PERTUMBUHAN Tetraselmis Sp DI MEDIA KULTUR BERBEDA
DENGAN PENAMBAHAN Pb 2+
Astri Pujiastuti 1 · Moh. Muhaemin 2 · Henni Wijayanti 2
Ringkasan Lead has known as toxic me- tal element in water environment which may come from domestic and industrial waste systems. Recent research proved that mi- croalgae may reduce lead concentration by using bioaccumulation mechanism to the threshold level approximately. Tetraselmis is marine microalgae which has sensitive respond to heavy metal. The research aim was to determined the bioacumulation tre- shold effect of specific heavy metal (lead) on marine microalgae Tetraselmis sp. The research was conducted on July 2010 in BBPBL Hanura Lampung Province. The research was used two different media (TMRL and Conwy) and each treatment was added lead of 0,25 mg/l. Data was analyzed by using simple linier regression model to fo- und the correlation between microalgae den- sity and present of heavy metal. The result showed that the media has not significant effect on bioaccumulation ability of Tetra- selmis sp. In the other hand, the present of heavy metal on media has positive corrella- tion to initial concentration of heavy me- tal on microalgae biomass (rConwy=0,657; rTMRL=0,682).
Keywords pertumbuhan, tetraselmis, Pb
Alumni Mahasiswa Program Studi Budida- ya Perairan, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung 1 )Dosen Program Studi Budidaya Per- airan, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung 2 )

## PENDAHULUAN
Pencemaran lingkungan perairan menjadi masalah yang sangat krusial bagi negara maju dan sedang berkembang. Pencemar- an bisa bersumber dari aktivitas domestik maupun industri. Intensitas, kualitas, dan kuantitas pencemarpun akan semakin me- ningkat seiring dengan meningkatnya jum- lah aktivitas domestik maupun industrI [1].
Air sering tercemar oleh berbagai macam logam berat yang berbahaya. Beberapa lo- gam berat tersebut banyak digunakan da- lam berbagai keperluan sehari-hari dan se- cara langsung maupun tidak langsung da- pat mencemari lingkungan dan apabila su- dah melebihi batas yang ditentukan ber- bahaya bagi kehidupan. Logam-logam ber- at yang berbahaya yang sering mencemari lingkungan antara lain merkuri (Hg), tim- bal (Pb), arsenik (As), kadmium (Cd), khro- mium (Cr), dan nikel (Ni). Logam-logam berat tersebut diketahui dapat terakumu- lasi di dalam tubuh suatu mikroorganisme, dan tetap tinggal dalam jangka waktu la- ma sebagai racun [2].
Salah satu logam berat yang banyak men- cemari kawasan pesisir adalah timbal (Pb). Pb yang telah mencemari lingkungan da- pat mengkontaminasi makanan yang dikon- sumsi, air yang diminum dan udara yang dihirup, sehingga timbal disebut juga seba- gai non essential trace element yang terda- pat di dalam tubuh manusia.
Astri Pujiastuti
1 et al.

## MATERI DAN METODE
Penelitian dilakukan di Balai Besar Pengem- bangan Budidaya Laut (BBPBL) Lampung pada bulan Maret-Mei 2011. Penelitian pen- dahuluan dilakukan untuk mengamati fa- se pertumbuhan microalgae dengan meng- gunakan media kultur TMRL dan Conwy tanpa penambahan Pb 2+ .
Tahapan awal penelitian dilakukan dengan mensterilisasi alat dan media kultur yang digunakan. Sterilisasi alat dilakukan dengan beberapa tahapan yaitu perebusan, peren- daman dalam larutan kaporit/chlorine 150 ppm, pemberian alkohol, di- autoclave de- ngan temperatur 1000 C pada tekanan 1 atm selama 20 menit. Sterilisasi media kul- tur dilakukan dengan cara perebusan se- lama 10 menit, penggunaann sinar ultra- violet, penyaringan dengan menggunakan plankton net ukuran 15 mikron, serta pem- berian larutan chlorine 60 ppm kemudian dinetralkan dengan Natrium Thiosulfat 20 ppm.
Konsentrasi logam berat Pb 2+ awal pada media kultur diukur sebagai kontrol. Lo- gam berat Pb 2+ cair ditambahkan pada media kultur hingga konsentrasi akhir Pb 2+ dalam media kultur mencapai 0,025 ppm.
Mikroalga dikultur pada skala semi massal ( outdoor ) dalam akuarium bervolume 100 liter. Total volume yang digunakan adalah 80% dari volume total akuarium. mikroal- ga yang digunakan untuk kultur semi mas- sal berasal dari kultur murni sebanyak 5 – 10% dari volume total akuarium. Media kultur yang akan digunakan berupa media cair berformula Conwy dan TMRL. Media kultur diberikan pada volume yang sama dengan rasio media kultur dan air laut kul- tur adalah 1:1000. Formula pupuk Conwy dan TMRL dapat dilihat pada Tabel 1 dan 2.
Pengambilan contoh untuk pengamatan ke- limpahan microalgae dan Pb 2+ dilakukan setiap 24 jam. Pengukuran konsentrasi Pb 2+ dilakukan dengan menggunakan AAS ( Ato- mic Absorption Spectrometry ) di Labora-
Tabel 1
Formulasi pupuk fitoplankton skala semi massal No Bahan Kimia Conwy TMRL 1 NaNO 3 / KNO 3 100/116 gr 100 gr 2 Na 2 EDTA 45 gr - 3 FeCl 3 1,3 gr 3,0 gr 4 MnCl 0,36 gr - 5 H 2 BO 3 33,6 gr - 6 Na 2 HPO 4 20 gr 10gr 7 Na 2 SiO 3 - 1gr/(0.7) 8 Trace metal * 1 ml - 9 Vitamin 1 ml - 10 Aquadest Hingga 1 liter Hingga 1 liter Tabel 2 Kandungan trace metal (cair) pada me- dia Conwy No Bahan Kimia Pupuk Conwy/Wayne 1 ZnCl 2 2,1 gram 2 CuSO 4 . 5H 2 O 2,0 gram 3 ZnSO 4 . 7H 2 O 4 CoCL 2 . 6H 2 O 2,0 gram 5 (NH 4 ) 6 . Mo 7 O 24 . 4H 2 O 0,9 gram 6 Aquabides 100 ml
torium BBPBL Lampung. Pengamatan ke- limpahan mikroalga dilakukan dengan meng- gunakan haemocytometer , mikroskop, dan hand counter . Kelimpahan mikroalga dihi- tung dengan menggunakan rumus :
K = P n i =1 ( sel hasil cacahan ) x 10 5 sel/ml
dimana:
i = jumlah kotak pada haemocytometer yang diamati
i = 1, 2, 3, 4, 5

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengamatan pertumbuhan mikroalga pa- da kedua media kultur menunjukkan ke- cenderungan pola yang sama (Gambar 1). Gambar 1 mengindikasikan adanya 3 (ti- ga) fase pertumbuhan mikroalga yaitu fase lag, eksponensial, dan deklinasi. Mikroalga Tetraselmis sp yang dikultur pada media Conwy cenderung memiliki kelimpahan sel yang selalu lebih tinggi jika dibandingkan dengan kelimpahan sel mikroalga pada me- dia TMRL. Perbedaan kelimpahan terse- but tampak pada ketiga fase pertumbuhan
Gambar 1 Kelimpahan sel Tetraselmis sp pada media Conwy dan TMRL
yang teramati. Perbedaan kelimpahan se- makin besar dan mencapai puncaknya pa- da akhir fase stasioner.
Tabel 3 menunjukkan perubahan laju per- tumbuhan dan prosentse relatifnya. Seca- ra umum, laju pertumbuhan Tetraselmis sp yang dikultur pada kedua media me- nunjukkan pola yang cenderung sama. Pola pertumbuhan mikroalga DOC 1-5 menun- jukkan kecenderungan adanya peningkatan dengan prosentase relatif yang makin be- sar. Laju pertumbuhan dan prosentase re- latifnya akan mencapai puncak pada DOC 5, dan selanjutnya akan mengalami penu- runan hingga DOC 6. Laju pertumbuhan dan prosesntase relatif mikroalga yang di- kultur dengan menggunakan media Conwy cenderung selalu lebih tinggi jika diban- dingkan dengan mikroalga yang dikultur dengan menggunakan media TMRL.
Fenomena yang tampak pada Gambar 1 dan Tabel 3 mengindikasikan :
1. Media Conwy cenderung lebih mampu meningkatkan kelimpahan sel, laju per- tumbuhan, dan prosentase laju pertum- buhan relatif jika dibandingkan dengan media TMRL. Hal tersebut diduga ber- kaitan dengan komposisi senyawa kimia yang terkandung di tiap media terse- but. Komposisi senyawa pada media Co- nwy lebih lengkap jika dibandingkan de- ngan dengan media TMRL, sehingga lebih mampu memenuhi kebutuhan nu- trien mikroalga untuk pertumbuhan;
Gambar 2 Konsentrasi intraseluler Pb2+ pada media Conwy dan TMRL
2. Mikroalga yang dikultur dengan media Conwy lebih mampu meminimalisir pe- ngaruh keberadaan Pb 2+ dalam media.
[3] menyatakan bahwa terdapat dua ke- mungkinan pendekatan yaitu pertama; komposisi, dan kelengkapan senyawa ki- mia pada media Conwy yang lebih ting- gi jika dibandingkan dengan media TMRL memungkinkan tersedianya cukup ener- gi bagi mikroalga untuk beradaptasi de- ngan keberadaan Pb 2+ pada habitat- nya. Atau kedua; keberadaan trace ele- ment pada media Conwy berpeluang me- nimbulkan reaksi kimia tertentu dengan Pb 2+ dan mampu mengurangi efek tok- sik Pb 2+ pada media [4];[5].
Konsentrasi intraseluler Pb 2+ pada kedua media kultur tampak pada Gambar 2. Se- cara umum tidak menunjukkan perbeda- an pola, bahkan cenderung berimpit satu dengan lainnya. Hal tersebut menunjukkan bahwa konsentrasi intraseluler Pb 2+ pada mikroalga yang dikultur dengan kedua me- dia (TMRL dan Conwy) tidak menunjukk- an perbedaan yang signifikan.
Pola bioakumulasi sel cenderung sama pa- da kedua media (Tabel 4). Tampak bah- wa prosentase bioakumulasi Pb 2+ pada sel terus meningkat hingga DOC 3 dan dan cenderung menurun pada rentang DOC 3 hingga DOC 5. Perbedaan kecil tampak pada prosentase kemampuan bioakumulasi sel terhadap Pb 2+ .
Prosentase bioakumulasi tertinggi terdapat pada mikroalga yang dikultur pada media
Astri Pujiastuti
1 et al.
Tabel 3 Laju pertumbuhan (µ) Tetraselmis sp dengan media Conwy dan TMRL setelah penambahan Pb 2+
DOC µ % µ µ % µ Conwy (10 5 sel/ml) Conwy (%) TMRL (10 5 sel/ml) TMRL (%) 1 5.85 - 5.65 2 7 19.65 5.7 0.88 3 7.75 10.71 6.25 9.64 4 10.4 34.19 8.6 37.6 5 18.85 81.25 13.95 62.2 6 10.7 -43.23 9.3 -33.33 Tabel 4 Bioakumulasi Pb ( a ) Tetraselmis sp dengan media Conwy dan TMRL DOC a % a a % a Media Conwy (mg/l) Media Conwy(%) Media TMRL (mg/l) Media TMRL(%) 1 0.0601 0 0.0623 0 2 0.09645 60.48 0.0934 49.87 3 0.1602 66.09 0.1574 68.51 4 0.1821 13.67 0.1818 15.53 5 0.2081 14.2 0.2109 16
TMRL, yaitu sebesar 68,51%. Kondisi ter- sebut sedikit lebih tinggi jika dibandingkan dengan prosentase bioakumulasi tertinggi mikroalga yang dikultur pada media Co- nwy, yaitu sebesar 66,09%. Tingginya ke- mampuan bioakumulasi sel pada media TMRL diduga berkaitan erat dengan rendahnya kemampuan sel mikroalga untuk mengelu- arkan Pb 2+ dari dalam tubuhnya. [6] me- nyatakan bahwa rendahnya kemampuan ter- sebut bisa saja disebabkan oleh kurang ter- sedianya cukup energi untuk menopang pro- ses pengeluaran senyawa-senyawa toksik da- ri dalam tubuh. Sehingga diduga, nutrien yang diperoleh dari media TMRL hanya cukup untuk digunakan bagi sebagian pro- ses metabolism sel, namun tidak mema- dai untuk menunjang proses pengeluaran Pb 2+ dari dalam sel.

## KESIMPULAN
Pengunaan media kultur yang berbeda mem- berikan pengaruh yang berbeda terhadap Tetraselmis sp saat merespon keberadaan Pb 2+ dalam media kultur. Perbedaan ter- sebut tampak dari kelimpahan dan kemam- puan untuk mengekskresikan Pb 2+ intrase- luler ke luar tubuh. Media Conwy membe- rikan kemampuan topang yang baik bagi
Tetraselmis sp untuk mengurangi kebera- daan Pb 2+ intraseluler dalam tubuh. Na- mun penggunaan media kultur TMRL le- bih disarankan penggunaanya untuk keper- luan bioremediasi Pb 2+ spesifik terhadap Tetraselmis sp .

## PUSTAKA
1. Florence, T.M. 1982. The speciation of trace elements in water. Talanta. 29: 345-364
2. Santana-Casiano, J.M., Gonzales-Davila, M., Perez-Pena, J., and Millero, F.J. 1995. Pb2+ interaction with marine phytoplankton Duna- liella tertiolecta. Mar. Chem. 48: 115-129
3. Muhaemin, M. 2004. Toxicity and bioaccumu- lation of lead in Chlorella and Dunaliella. J. Coast. Dev. Vol 8(1): 27-33
4. Bruland, K.W., Donat, J.R., and Hutchinson, D.A. 1991. Interactive influences of bioactive trace metals on biological production in ocea- nic waters. Limnol. Oceanogr. 36: 1555-1577
5. Crist, R.H., Oberholser, K., McGarrity, J., Crist, D.R., Johnson, J.K., and Brittson, J.M. 1992. Interaction of metals and protons with algae. 3. Marine algae, with emphasis on lead and aluminium. Environ. Sci. Technol. 26: 496-502
6. Garnham, G.M., Codd, G.A., and Gadd, G.M. 1992. Kinetics of uptake and intracellular lo- cation of cobalt, manganese and zinc in the es- tuarine green alga Chlorella salina. Appl. Mi- crobiol. Biotechnol. 37: 270-276