Majalah Farmasi, Sains, dan Kesehatan ISSN 2442-9791
Uji  Daya  Hambat  Fraksi  Rumput  Laut  Cokelat  ( Sargassum sp.)
Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus
Asmarani * , Amiruddin Eso, Sufiah Asri Mulyawati
Fakultas Kedokteran Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu Kendari 93232

## Abstrak
This study aimed to find out the inhibitory fraction of brown seaweed (Sargassum sp. ) against the growth of Staphylococcus aureus. This study applied quasi experimental method which used posttest-only control design. Samples used in the form of brown seaweed treatment fraction derived from Desa Bungin Permai Kecamatan Tinanggea Kabupaten Konawe Selatan. The inhibition test was conducted by diffusion agar method used variant concentration (20%, 40%, 60%, 80%, 100%) with three repetitions. Erythromycin as  control  (+)  and  DMSO  10%  as  control  (-).  The result  showed  that  the  fraction  of brown  seaweed  extract  has  antibacterial properties  towards  Staphylococcus  aureus  with  the  clear  zone  around  the  paper  disc.  The  Minimum  Inhibitory  Concentration (MIC) of n-hexane and ethyl acetate fraction was at the concentration of 20%. Fraction of n-hexane and ethyl acetate have strong inhibition towards Staphylococcus aureus.
Keywords : Inhibitory , Staphylococcus aureus, n-hexane, ethyl acetate, MIC

## 1. Pendahuluan
Beberapa  tahun  terakhir,  angka  kejadian  penyakit infeksi  semakin  meningkat,  termasuk  angka  kejadian infeksi  yang  disebabkan  oleh Staphylococcus  aureus . Staphylococcus  aureus adalah  salah  satu  penyebab utama infeksi yang dapat menyebabkan morbiditas dan mortalitas  [1].  Resistensi Staphylococcus  aureus terhadap  antibiotik  terjadi  dalam  waktu  singkat  sejak penggunaan  penisilin  pada  tahun  1940-an  setelah penggunaan antibiotik untuk kepentingan klinis. Seiring dengan kecenderungan perubahan pola penyakit seperti adanya  resistensi  bakteri  penyakit  pada  obat  tertentu, maka  usaha  penemuan  obat-obat  baru  terus  dilakukan dan saat ini penelitian cenderung dikembangkan ke laut karena  sebagian  besar  sumber  daya  alamnya  belum dieksploitasi  secara  maksimal  [2].  Infeksi  oleh Staphylococcus  aureus ditandai  dengan  kerusakan jaringan  yang  disertai  abses  bernanah.  Beberapa penyakit  infeksi  yang  disebabkan  oleh Staphylococcus aureus adalah bisul, jerawat, impetigo, dan infeksi luka. Infeksi  yang  lebih  berat  diantaranya  pneumonia, mastitis,  phlebitis,  meningitis,  infeksi  saluran  kemih, osteomielitis,  dan  endokarditis. Staphylococcus  aureus
* Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran UHO Email: rhanyzahira85@gmail.com
juga  merupakan  penyebab  utama  infeksi  nosokomial, keracunan makanan, dan sindrom syok toksik [3].
Masalah-masalah  tersebut  sangat  merugikan, sehingga  diperlukan  pengobatan  alternatif  lain  untuk mengatasi  penyakit  infeksi  yang  lebih  efektif,  aman, tidak resisten dan sedikit efek samping. Oleh karena itu, saat  ini  penelitian-penelitian  yang  bertujuan  untuk menentukan  dan  mengembangkan  senyawa  bioaktif sebagai antibakteri menjadi sangat penting [4]. Melihat melimpahnya  sumber  daya  alam  yang  dimiliki Indonesia, eksplorasi untuk pencarian senyawa antibakteri tersebut tidak saja dilakukan pada organisme darat seperti tanaman obat, namun juga pada organisme laut [5].
Indonesia  dikenal  sebagai  negara  bahari  dengan luas 75% berupa lautan, memiliki kekayaan sumber daya hayati  yang  melimpah.  Beberapa  jenis  diantaranya dilaporkan  memiliki  senyawa  bioaktif  yang  dapat digunakan  dalam  bidang  kesehatan  [2].  Sulawesi Tenggara  adalah  salah  satu  provinsi  di  Indonesia  yang mempunyai  potensi  keanekaragaman  hayati  perairan yang cukup tinggi [6]. Bachtiar (2012) mengemukakan hasil  penelitiannya  yang  menunjukkan  bahwa  ekstrak
Asmarani, dkk: Uji Daya Hambat Fraksi Rumput Laut Cokelat (Sargassum sp.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus
rumput laut cokelat ( Sargassum sp.) dapat menghambat bakteri E.  coli 107  sel/ml  dan  konsentrasi  ekstrak Sargassum sp.  yang  dapat  menghambat E.  coli 107 sel/ml sesuai standar antibiotika adalah konsentrasi 80%, 90% dan 100% dengan diameter hambat 13 mm (cukup peka),  15,7  mm  dan  18,6  mm  (sangat  peka)  [6,  7]. Rumput  laut  cokelat  ( Sargassum sp.)  mengandung senyawa fenol seperti flavonoid yang berfungsi sebagai zat antibakteri dan antioksidan. Zat antibakteri tersebut dapat  menjadi  penghambat    aktivitas    dari  bakteri,  dan antioksidan yang terkandung dalam rumput laut cokelat dapat berfungsi sebagai pencegah kerusakan pangan [6, 8].
Berdasarkan  latar  belakang  maka  peneliti  tertarik melakukan  penelitian  tentang  uji  daya  hambat  fraksi rumput  laut  cokelat  ( Sargassum sp.)  terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus menggunakan  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat,  dan fraksi air dari ekstrak rumput laut cokelat pada berbagai konsentrasi

## 2. Metode Penelitian

## 2.1 Jenis Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian quasi eksperimental  dengan  metode Post-test  only  control . Fraksi rumput laut cokelat ( Sargassum sp.) dibuat dalam lima  konsentrasi,  yaitu  konsentrasi  20%,  40%,  60%, 80%,  100%  dan  dua  kelompok  kontrol,  yaitu  kontrol positif dan kontrol negative dengan pengulangan untuk setiap perlakuan sebanyak tiga kali.

## 2.2 Pengambilan dan Persiapan Sampel
Rumput  laut  ( Sargassum sp.)  yang  digunakan sebagai  sampel  diambil  dan  dikumpulkan  di  Desa Bungin  permai    Kecamatan  Tinanggea,  Kabupaten Konawe  Selatan  Provinsi  Sulawesi  Tenggara.  Berat basah sampel 10 Kg, berat serbuk 784 gram.

## 2.3 Ekstraksi dan Fraksinasi
Serbuk sampel  yang telah berada di dalam  wadah dicampurkandengan  pelarut  etanol.Proses  maserasi serbuk rumput laut cokelat pada penelitian ini dilakukan selama  3  x  24  jam  agar  maserat  yangdihasilkan  lebih optimal dalam menarik senyawa metabolit sekunder dari jaringan  tumbuhan  yang  diteliti  kemudian  diuapkan dengan  menggunakan  alat rotary  vacuum  evaporator (Rotavapor,  Buchi)  pada  suhu  ±  55°C  sehingga diperoleh  ekstrak  kental.  Fraksinasi  dilakukan  dengan ekstraksi  cair-cair  dengan  cara  ekstrak  yang  telah disuspensikan  dalam  100  mL  air  suling,  kemudian ditambahkan 100 mL n -heksana, dikocok dan dibiarkan
sampai homogen dan memisah menjadi dua fase. Fase n- heksan dipisahkan dengan fase yang tidak larut n-heksan dan ditampung dalam  wadah  berbeda. Selanjutnya fase yang tidak larut n -heksan ditambahkan kembali dengan pelarut n -heksan beberapa kali hingga diperoleh fraksi n - heksan yang jernih. Kemudian terhadap sisa ditambahkan 100 ml pelarut etil asetat (Prosedur sesuai dengan fraksinasi n-heksan) sampai diperoleh fraksi etil asetat yang jernih, sisanya diperoleh sisa fase yang tidak larut n -heksan,  etil  asetat,  dan  fraksi  air  masing-msing selajutnya diuapkan dengan rotary evaporator.

## 2.4 Uji daya hambat antibakteri
Uji daya hambat dilakukan dengan menggunakan metode  difusi  cakram.  Pembuatan  medium Muller Hinton Agar sebanyak 34 gr yang dilarutkan dalam 1000 mL akuades kemudian disterilkan dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 0 C dengan tekanan 1 atm. Media MHA yang telah disterilkan kemudian dituang kedalam cawan  petri  steril  sebanyak  20  ml  dan  dibiarkan memadat.  Suspensi  bakteri Staphylococcus  aureus sebanyak 20 µl dimasukkan dalam cawan petri kemudian diinokulasikan secara merata. Kertas cakram yang telah dibuat diteteskan fraksi rumput laut cokelat ( Sargassum sp.)  yang  telah  dibuat  dalam  berbagai  konsentrasi, kemudian diletakkan dalam cawan petri. Sebagai kontrol positif digunakan eritromisin dan sebagai kontrol negatif digunakan  DMSO 10%. Selanjutnya diinkubasi selama 24  jam  pada  suhu  37 0 C.  Uji  efektivitas  ditentukan berdasarkan zona hambat yang terbentuk disekitar kertas cakram.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Uji  daya  hambat  fraksi  rumput  laut  cokelat ( Sargassum sp.)  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus memberikan hasil yang signifikan. Fraksi rumput laut cokelat ( Sargassum sp.) yang dibuat dalam beberapa konsentrasi  memperlihatkan  respon  hambatan  terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus .  Respon hambatan  yang  terbentuk  bervariasi  tergantung  dari konsentrasi  yang  diberikan.  Adanya  respon  hambatan oleh  fraksi  rumput  laut  cokelat  ( Sargassum sp.) dikarenakan terdapatnya senyawa aktif yang mempunyai sifat  sebagai  antibakteri,  yaitu  senyawa  metabolit sekunder  seperti  flavonoid,  steroid,  tanin,  dan  saponin. Hasil  uji  daya  hambat  fraksi  rumput  laut  cokelat ( Sargassum sp.) memperlihatkan respon hambatan yang bervariasi pada setiap konsentrasi yang diberikan.
Hasil  pengukuran  terhadap  diameter  zona  hambat tertinggi didapatkan pada konsentrasi 100% dengan zona hambat rata-rata 29,6 mm pada fraksi etil asetat dan 27,7 pada fraksi n-heksana sedangkan diameter zona hambat
terendah  terdapat  pada  konsentrasi  20%  dengan  zona hambat  rata-rata  4,6  mm  fraksi  etil  asetat  dan  9,6mm fraksi  n-heksan.  Kontrol  positif  yaitu  eritromisin didapatkan diameter zona hambat rata-rata 38 mm pada fraksi  etil  asetat  dan  38,6  mm  fraksi  n-heksana.  Nilai rata-rata diameter zona hambat fraksi etil asetat pada tiga kali pengulangan yaitu pada konsentrasi 100% dan 80% fraksi  etil  asetat  dengan  diameter  rata-rata  masing- masing  29,6  mm  dan  27,6  dengan  interpretasi  sangat kuat,  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri. Konsentrasi  60%  dan  40%  dengan  diameter  rata-rata masing-masing 19,3 mm dan 16 mm dengan interpretasi kuat.  Sementara  konsentrasi  20  %  memiliki  diameter rata-rata  4,6  mm  dengan  interpretasi  lemah.  Untuk kontrol  (+)  dengan  diameter  rata-rata  38  mm  termasuk dalam  kategori susceptible sesuai  dengan  indikator untuk eritromisin.
Tabel 1. Interpretasi hasil pengukuran rata-rata diameter zona hambat  dalam  beberapa  konsentrasi  terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus . Fraksi Uji Konsentrasi (%) Diameter Zona Hambat (mm) Rata-rata Interpretasi Etil asetat 100 29,6 Sangat kuat 80 27,6 Sangat kuat 60 19,3 kuat 40 16 kuat 20 4,6 Lemah Kontrol (+) 38 Susceptible Kontrol (-) - - n-heksana 100 27,7 Sangat kuat 80 27 Sangat kuat 60 25,6 Sangat kuat 40 12,3 kuat 20 9,3 sedang Kontrol (+) 38,6 Susceptible Kontrol (-) - -
Nilai  rata-rata  diameter  zona  hambat  fraksi  etil asetat  pada  tiga  kali  pengulangan  didapatkan  bahwa konsentrasi 100%, 80 %, 60 % fraksi n -heksan dengan diameter rata-rata masing-masing 27,7 mm, 27 mm, 25,6 mm dengan interpretasi sangat kuat dalam menghambat pertumbuhan  bakteri.  Konsentrasi  40%  diameter  rata- rata  12,3  mm  dengan  interpretasi  kuat  dan  20  % diameter  rata-rata  9,3  mm    dengan  interpretasi  sedang. Untuk  kontrol  (+)  dengan  diameter  rata-rata  38,6  mm termasuk  dalam  kategori susceptible sesuai  dengan indikator  untuk  eritromisin  dan  kontrol  (-)  tidak memiliki  kemampuan  menghambat.  Diameter  zona hambat fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat rumput laut cokelat  ( Sargassum sp.)  dari  konsentrasi  100%
mengalami  penurunan secara  signifikan hingga konsentrasi  20%.  Sedangkan  pada  kontrol  positif memiliki diameter zona hambat yang sangat tinggi jika dibandingkan dengan konsentrasi lainnya, pada kontrol negatif  tidak  memiliki  zona  hambat  sama  sekali. Sehingga dapat disimpulkan bahwa konsentrasi hambat minimum dari kedua fraksi berada pada konsentrasi 20% (Gambar 1).
Gambar 1. Diagram Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan rumput laut cokelat  ( Sargassum sp.)  terhadap  pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus
Berdasarkan  hasil  di  atas  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi  fraksi  rumput  laut  cokelat  ( sargassum sp.) yang digunakan maka respon hambatnya akan semakin besar. Hal ini dikarenakan semakin tinggi konsentrasi zat aktif yang berperan sebagai antibakteri seperti flavonoid, steroid,  tanin,  dan  saponin  jumlahnya  semakin meningkat. Konsentrasi tinggi berbanding lurus dengan kemampuannya  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri  yang  ditandai  semakin  besarnya  zona  bening yang terbentuk disekitar kertas cakram.
Konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)  fraksi rumput laut cokelat, didapatkan bahwa pada konsentrasi 100 % mampu menghambat pertumbuhan bakteri hingga konsentrasi  20%.  Bentuk  dan  besarnya  perubahan  atau kerusakan  struktur  sel  dipengaruhi  oleh  jenis  senyawa antibakteri  yang  terkandung  dalam  fraksi  dan  besarnya konsentrasi  yang  digunakan.  Hal  ini  sesuai  dengan Pelczar dan Chan (2007) bahwa beberapa hal yang dapat mempengaruhi kerja antimikroba antara lain konsentrasi atau intensitas zat antimikrobial, jumlah mikroorganisme,  suhu,  spesies  mikroorganisme  dan adanya  bahan  organik  [10].  Dengan  demikian didapatkan  bahwa  konsentrasi  hambat  minimum  dari
0 5 10 15 20 25 30 35 100% 80% 60% 40% 20% Kontrol (+) Kontrol (-) D ia m e te r Z o n a H a m b a t (m m ) Konsentrasi Hambat Minimum (KHM ) Etil asetat n-heksana
Asmarani, dkk: Uji Daya Hambat Fraksi Rumput Laut Cokelat (Sargassum sp.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus
kedua fraksi rumput laut cokelat yaitu pada konsentrasi 20%.
Adanya  perbedaan  rerata  diameter  zona  hambat yang dapat disebabkan karena adanya perbedaan jumlah dan jenis senyawa aktif di dalam masing-masing fraksi yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Dapat pula  dilihat  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  suatu fraksi  maka  akan  berbanding  lurus  dengan  daya hambatnya  dan  dari  uji  analisis  sebelumnya  juga  telah dibuktikan  bahwa  kedua  fraksi  memiliki  daya  hambat yang kuat. Namun pada konsentrasi 20 % pada fraksi n- heksan  lebih  tinggi  dari  pada  fraksi  etil  asetat  dengan rerata  diameter  zona  bening  yaitu  9,3  mm  fraksi  n- heksan  dan  4,6  mm  fraksi  etil  asetat,  Sedangkan  pada konsentrasi  60%  di  dapatkan  hal  yang  sama  dimana fraksi  n-heksan  lebih  tinggi  diameter  zona  hambatnya daripada  fraksi  etil  asetat  dengan  rerata  diameter  zona bening  yaitu  25,6  mm  fraksi  n-heksan  dan  19,3  mm fraksi  etil  asetat.  Hal  ini  terjadi  karena  semakin  tinggi konsentrasi  maka  semakin  banyak  senyawa  aktif  yang terkandung, maka semakin besar kemampuannya untuk mengendalikan dan membunuh mikroorganisme tertentu.  Selain  itu,  perbedaan  jenis  fraksi  juga menentukan  senyawa  aktif  apa  yang  dominan  di dalamnya sebagai antibakteri.
Flavonoid bekerja sebagai antibakteri dengan cara inaktivasi  protein  pada  sel  bakteri  dan  menyebabkan ketidakstabilan  pada  dinding  sel  serta  membran  sel bakteri  [8].  Pada  perusakan  membran  sel,  ion  H + dari senyawa  fenol  dan  turunannya  (Flavonoid)  akan menyerang gugus polar (gugus fosfat) sehingga molekul fosfolipid akan terurai menjadi gliserol, asam karboksilat dan asam fosfat. Hal ini mengakibatkan fosfolipid tidak mampu  mempertahankan  bentuk  membrane  sel, sehingga  membrane  sel  bakteri  akan  bocor  dan  bakteri akan  mengalami  hambatan  pertumbuhan  atau  bahkan mati [11].
Saponin  merupakan  senyawa  metabolit  sekunder yang  juga  mempunyai  kemampuan  sebagai  antibakteri dengan cara berinteraksi dengan kolestrol pada membran sel  dan  menyebabkan  membrane  sel  mengalami modifikasi  lipid  yang  akan  mengganggu  kemampuan bakteri untuk berinteraksi dengan membran yang sudah mengalami modifikasi tersebut. Terganggunya interaksi antara  bakteri  dengan  membran  sel  nya  akan menyebabkan  kemampuan  bakteri  untuk  merusak  atau berinteraksi  dengan host akan  terganggu.  Ketika membran  sel  terganggu,  zat  antibakteri  akan  dapat dengan  mudah  masuk  kedalam  sel  dan  akan mengganggu  metabolism  hingga  akhirnya  terjadilah kematian bakteri [12].
Tanin  dapat  berperan  sebagai  antibakteri  karena sifatnya  yang  dapat  menginaktivasi  enzim,  bereaksi dengan  membran  sel,  destruksi  atau  inaktivasi  fungsi
materi genetik yang berada pada sel bakteri.  Tanin diduga  berhubungan  dengan  kemampuannya  dalam menginaktivasi adhesion  enzim dan  protein  transport pada membran sel bakteri sehingga proses metabolisme dan transport materi yang dibutuhkan sel bakteri menjadi terganggu dan tidak terkontrol.
Mekanisme steroid sebagai antibakteri berhubungan  dengan  membran  lipid  dan  sensitivitas terhadap  komponen steroid yang menyebabkan kebocoran  pada  liposom.  Steroid  dapat  berinteraksi dengan membran fosfolipid sel yang bersifat permeabel terhadap senyawa-senyawa lipofilik sehingga menyebabkan  integritas  membran  menurun  serta morfologi membran sel berubah yang menyebabkan sel rapuh dan lisis [13].

## 4. Kesimpulan
Fraksi  n-heksan  dan  fraksi  etil  asetat  rumput  laut cokelat ( Sargassum sp.) memiliki daya hambat terhadap bakteri Staphylococcus  aureus. Konsentrasi  Hambat Minimum (KHM)  fraksi n-heksan dan  fraksi etil asetat terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus adalah pada konsentrasi 20 %, fraksi n-heksan memiliki kemampuan  daya  hambat  yang  tinggi  dibandingkan fraksi  etil  asetat  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus .

## Daftar Pustaka
1. Anna,  F.D.M.W.  2010. Pengaruh  Faktor  Demografi Terhadap  Kejadian  infeksi  dan  Pola  Resistensi Staphylococcus  aureus. Skripsi.  Semarang:  Program Pendidikan  Sarjana  Kedokteran  Fakultas  Kedokteran Universitas Diponegoro.
2. Latundra,  A.I.,  dan  Ahyar,  A.  2013.  Isolasi  Dan Karakterisasi Protein Bioaktif Dari Beberapa Jenis Spons Sebagai Agent Antimikroba. Skripsi. FMIPA Universitas Hasanuddin, Makassar, 90245.
3. Kusuma,  F.A.S.  2009. Strategi  Pembinaan  Pengobatan
Tradisional Untuk Menempatkan Pengobatan
Tradisional  Menjadi  Salah  Satu  Sumber  Daya Pelayanann  Yang  Diakui .  Pusat  Penelitian  dan Pengembangan  Sistem  dan  Kebijakan  Kesehatan, Surabaya.
4. Dian, M. M. 2008. Pemisahan Minyak Atsiri Kayu Manis (Cinnamomum  zeylanicum)  secara  Kromatografi  Lapis Tipis  dan  Aktivitas  Antijamur  Terhadap  Malassezia Furfur  In  Vitro .  Artikel  Penelitian  Karya  Tulis  Ilmiah. Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.
5. Dash,  S.,  Jin,  C.,  Leo,  O.,  Xu,  Y.,  and  Pei,  Y.Q.  2009. Antibacterial  and  Antilarvalsettlement  Potential  and Metabolite  Prowies  of  Novel  Sponge  Associated  Merine Bacteria.J. Ind. Microbiol Biotchnol, 36: 1047-1056
6. Bahtiar.  2012. Studi  Bioekologi  dan  Dinamika  Populasi Pokea  (Batissa  Violacea  Var.  Celebensis  Von  Martens, 1897) yang Tereksploitasi Sebagai Dasar Pengelolaan Di
Asmarani, dkk: Uji Daya Hambat Fraksi Rumput Laut Cokelat (Sargassum sp.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus
Sungai Pohara Sulawesi Tenggara . Tesis. Bogor: Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
7. Bachtiar.Y.S.  2012. Pengaruh  ekstrak  alga  cokelat (Sargassum sp.) terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia  coli .  Skripsi  Fakulatas  PerikananDan  Ilmu Kelautan Universitas Airlangga. Surabaya.
8. Santoso,  R.M.  Daya  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Pare ( Momordica Charantia ) Dalam Menghambat Pertumbuhan Streptococcus  Viridans .  Jember:  Fakultas Kedokteran, Universitas Jember, 2013.
9. Wadud,  S.A. Uji  Efektivitas  Ekstrak  Jintan  Hitam (Nigella sativa) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Shigella dysentriae. Jakarta:  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Hidayatullah Jakarta.
10. Pelczar,  M.J.,  dan  S.  Chan.  2007. Dasar-Dasar Mikrobiologi 2 . UI Press : Jakarta.
11. Sari, F.P dan Sari, S.M. Ekstraksi Zat Aktif Antimikroba Dari Tanaman Yodium ( Jatropha Multifida Linn ) Sebagai Bahan  Baku  Alternatif  Antibiotik  Alami.  Semarang: Fakultas Teknik, Universitas Diponegoro, 2011.
12. Majidah,  Dewi,  Fatmawati,  D.W.A,  Gunadi,  Achmad. Daya  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Seledri  ( Apium graveolens  L )  terhadap  Pertumbuhan Streptococcus Mutans sebagai  Alternatif  Obat  Kumur.  Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Jember: Kalimantan, 2014.
13. Rijayanti,  R.P.  2014. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol  Daun  Mangga  Bacang  (Mangifera  foetida L.)Terhadap  Staphylococcus  aureus  secara  in  vitro . Naskah  Publikasi.  Pontianak:  Fakultas  Kedokteran Universitas Tanjungpura.