## Artikel Penelitian

## THE EFFECT OF DECELLULARIZATION TECHNIQUE ON COLLAGEN TYPE II AND MATRICES POROSITY OF CARTILAGE BOVINE SCAFFOLD
Dwikora Novembri Utomo 1* , Ika Benny Kartika Sari 2
1 Senior Consultant of Orthopaedic and Traumatology Department, Faculty of Medicine, Universitas Airlangga, Dr Soetomo General Hospital, Surabaya
2 Resident of Orthopaedic and Traumatology Department, Faculty of Medicine, Universitas Airlangga, Dr Soetomo General Hospital, Surabaya
*Corresponding  Author:  Dwikora  Novembri  Utomo,  Senior  Consultant  of  Orthopedic  and Traumatology  Department,  Faculty  of  Medicine,  Universitas  Airlangga,  Jl.  Mayjen  Prof.  Dr. Moestopo 6-8, Surabaya E-mail: dwikora_utomo@yahoo.com

## ABSTRAK
Latar Belakang: Tulang rawan sendi orang dewasa memiliki kemampuan perbaikan jaringan yang  terbatas  apabila  terjadi  kerusakan.  Rekayasa  jaringan  berbasis  stem  sel  telah  menjadi alternatif  terapi  untuk  pengobatan  kerusakan  tulang  rawan  sendi.  Penggunaan cartilage bovine yang  mengalami  deselularisasi  dapat  berfungsi  sebagai scaffold untuk  mendukung proliferasi dan diferensiasi stem sel.
Tujuan: Penelitian  ini  membandingkan  pengaruh  teknik  deselularisasi  terhadap  kadar kolagen tipe II dan porositas matriks cartilage bovine scaffold.
Metode: Penelitian laboratoris eksperimental ini menggunakan scaffold tulang rawan bovine yang dilakukan deselularisasi menggunakan teknik physical , kimiawi, dan enzimatik dengan variasi  waktu  dan  konsentrasi  yang  berbeda-beda,  kemudian  dilakukan  pengukuran konsentrasi  kolagen  tipe  II  dengan    metode  imunohistokimia  dan  evaluasi  ukuran  porositas dengan mikroskop elektron.
Hasil: Pada preparat dengan konsentrasi tertinggi dan waktu perendaman terlama yakni SDS 5%  adalah  selama  72  jam,  proses  deselularisasi  terjadi  secara  sempurna.  Didapatkan kandungan  kolagen  tipe  II  dengan  konsentrasi  yang  signifikan  lebih  tinggi  dibandingkan kontrol dan preparat lainnya, serta memiliki porositas yang saling berhubungan dalam ukuran besar.
Kesimpulan: Konsentrasi kolagen tipe II  yang tinggi dan diameter porus yang besar setelah proses  deselularisasi  pada cartilage  bovine  scaffold menegaskan  bahwa scaffold ini  masih memiliki biochemical  cues yang  cukup  optimal  sehingga  dapat  menjadi  kerangka  mekanik dan  lingkunan  stem  sel  yang  baik  dalam  upaya  memperbaiki  kerusakan  tulang  rawan. Diharapkan hasil ini menjadi standar baku pembuatan deselularisasi cartilage bovine scaffold. Kata kunci: Tulang rawan sendi, cartilage bovine scaffold , deselularisasi

## ABSTRACT
Background: Cartilage has limited capacity for self-repair in case of defect. Stem cell based tissue engineering has become an alternative therapy for the treatment of cartilage defect. The use  of  decellularized  cartilage  bovine  can  serve  as  scaffold  to  support  proliferation  dan differentiation of the stem cell.
Purpose: This  research  is  to  compare  the  effect  of  decellularization  technique  on  collagen type II and matrices porosity of cartilage bovine scaffold.
Methods: This  experimental  laboratory  research  used  cartilage  bovine  scaffold  which  was decellularized  using  physical,  chemical  and  enzymatic  techniques  with  different  time  and concentration  variations,  then  collagen  type  II  measurement  was  performed  by immunohistochemical method and evaluation of porosity size with electron microscopy.

## Artikel Penelitian
Results: In the preparations with the highest concentration and the longest immersion time of 5%  SDS  for  72  hours,  the  decellularization  process  occurs  perfectly.  The  collagen  type  II content  was  found  to  have  significantly  higher  concentrations  than  the  controls  and  other preparations, and have interconnected porosities in large size.
Conclusion: High  concentrations  of  collagen  type  II    and  large  diameter  of  porus  after decellularization  process  in  cartilage  bovine  scaffold  confirm  that  this  scaffold  still  has optimum biochemical cues that can be a good mechanical framework and microenvironment stem  cell  in  effort  to  repair  the  cartilage  defects.  This  result  was  expected  to  become  a standard for the deselularization making of cartilage bovine scaffold.
Keywords: cartilage joint, cartilage bovine scaffold, decellularization

## PENDAHULUAN
Tulang rawan sendi orang dewasa memiliki kemampuan perbaikan jaringan yang  terbatas  apabila  terjadi  kerusakan. Pada  awalnya,  akan  terjadi  peningkatan aktivitas mitosis dan sintesis matriks oleh kondrosit untuk menutup defek, dan akan berlanjut  dengan  menyisakan  jaringan fibrocartilage .
Angka  kejadian osteoarthritis di Indonesia sangat tinggi, yaitu sekitar 5% pada  usia  <40th,  30%  pada  usia  40-60 tahun dan 65% pada usia >61 tahun. 2
Mesenchymal stem cell merupakan  sel  induk  yang  bersifat multipotensial,  apabila  berada  dalam scaffold yang mendukung, disertai dengan signaling biokimia, akan menghasilkan  diferensiasi  stem  sel  yang baik  untuk  mengganti  jaringan  tulang rawan  yang  rusak  baik  yang  disebabkan oleh trauma maupun penyakit degeneratif dengan suatu jaringan hyaline-like cartilage. 3
Teknik  pembuatan scaffold pun berkembang,  mulai  dari  bahan  sintetis sampai  alami,  dari autograft ,  sampai xenograft .  Di  Indonesia, scaffold sintetik yang  diproduksi  dalam  negeri  dan  juga scaffold natural  untuk  tulang  rawan belum  ada.  Penelitian  mengenai scaffold yang  telah  dilakukan  sebelumnya,  baru pada  tahap  penelitian  binatang  coba  dan dilaporkan  menimbulkan  suatu  reaksi inflamasi  lokal.  Dengan  adanya  teknik deselularisasi diharapkan komponen seluler  yang  dikenal  sebagai  “gal epitope” yang dapat menimbulkan respon imun  dan  inflamasi  terhadap scaffold biologis dapat dihilangkan. 4,5
Penelitian mengenai teknik deselularisasi beragam dengan hasil yang beragam  serta  belum  adanya  protokol teknik  deselularisasi  yang  optimal  untuk dipergunakan  pada cartilage  bovine scaffold .  Dalam  penelitian  ini  kami berusaha  menemukan scaffold yang lebih optimal dengan teknik deselularisasi dibandingkan scaffold

## Artikel Penelitian
tulang  rawan  sebelumnya  yakni  FDBC ( Freeze Dried Bovine Cartilage Powder ) sehingga dapat bermanfaat untuk penyediaan kebutuhan scaffold yang bisa digunakan  dalam tissue  engineering pada articular  cartilage  defect .  Bahan dasar scaffold yang berasal dari cartilage bovine dipilih  karena relatif  mudah diperoleh  dan  memungkinkan  untuk diproduksi  secara  lokal  sehingga  bisa secara luas dipergunakan, sarta terjangkau  untuk  masyarakat  Indonesia, tetapi  dengan  hasil  yang  optimal. Diharapkan  dari  penelitian  ini  bisa memberikan  teknik  penyediaan scaffold yang  lebih  baik untuk  rekayasa  jaringan berbasis stem  cell dalam  pengobatan defek tulang rawan sendi. 6-8

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  ini  dilakukan  dengan menggunakan rancangan penelitian experimental  study  pre-post  control group  design pada bovine  cartilage scaffold yang dilakukan proses deselularisasi.  Tujuan  dari  penelitian  ini adalah  untuk  mengetahui  apakah  teknik deselularisasi tertentu pada bovine cartilage scaffold dapat mempertahankan    kadar  kolagen  tipe  II sekaligus tetap memiliki porositas sehingga  dapat  digunakan  pada  teknik penggantian jaringan di masa depan.
Unit  penelitian  pada  penelitian ini  adalah  tulang  rawan  sendi  lutut hewan  coba  sapi  jenis ongole berumur minimal  24  bulan  yang  disediakan  oleh Rumah  Pemotongan  Hewan  Pegirian (RPH  Pegirikan)  Surabaya  yang  telah bersertifikat bahwa sapi yang disediakan adalah  sapi  sehat  dan  sesuai  dengan kriteria  inklusi  penelitian,  kemudian diolah  oleh  Bank  Jaringan  RSUD  Dr. Soetomo  Surabaya  dan  dijadikan  unit sample penelitian.
Cartilage yang  telah  dilepas  dari tulang  rawan  sendi  lutut  sapi  dengan potongan  silinder  diameter  1  cm, kemudian  dicuci  bersih,  dan  dibekukan di freezer dengan  suhu  -80°C.  Setelah beku  dilakukan  pengeringan  dengan mesin freeze  dryer selama  2x24  jam.
Kemudian  dilanjutkan  dengan  sterilisasi radiasi  sinar Gamma sekaligus  untuk menurunkan sifat antigennya.
Sampel yang digunakan sebanyak  96  buah cartilage  bovine scaffold yang  didapat  dari  rumus Steel and Torrie . Sebanyak 16 buah kelompok kontrol dan 80 buah kelompok perlakuan yang akan mengalami proses deselularisaasi. Sebanyak 40 buah dengan konsentrasi SDS 2% dan 40 buah dengan  konsentrasi  SDS  5%.  Kemudian masing-masing  konsentrasi  SDS  dibagi lagi  menjadi  5  kelompok  berdasarkan
variasi  waktu  (1  jam,  2  jam,  24  jam,  48 jam, 72 jam), masing-masing sebanyak 8 buah cartilage bovine scaffold.
Selanjutnya  dilakukan proses deselularisasi menggunakan teknik physical, kimiawi, dan enzimatik.
Tulang  rawan  sendi  lutut  hewan  coba sapi yang telah dipotong dan disterilkan, kemudian  dicuci  dengan Phosphate Buffered Saline (PBS) kemudian dibekukan  dalam  suhu  -4°C  sebagai langkah  awal  tahap physical dari  proses deselularisasi. Spesimen tersebut kemudian  dicairkan  pada  suhu  ruangan dan  diulang  dicuci  menggunakan  PBS. Setelah  itu,  spesimen  tersebut  direndam dalam  nitrogen  cair  selama  2  menit, dicairkan  ( freeze  thaw )  dalam  air destilasi  dan  dipindahkan  dalam  larutan PBS  pada  suhu  ruangan  selama  10 menit.  Langkah  akhir  tersebut  diulang sebanyak 5 kali. 9-11
Dalam  tahap  kimiawi  dari  proses deselularisasi, spesimen diberikan konsentrasi  yang  berbeda  (2%  dan  5%) dalam sodium  dodecyl  sulfate (SDS) selama  1 jam, 2 jam, 24 jam, 48 jam, 72 jam dalam suhu 37°C kemudian diaduk- aduk secara perlahan. 12,13
Tahap selanjutnya, segmen cartilage dicuci  selama  3x10  menit dalam  PBS  pada  suhu  ruangan  sambil diaduk  perlahan.  Kemudian  dilakukan inkubasi  dalam  50  U/ml  (0,5  mg/ml) DNAse dan  1  U/ml  (50  µg/ml RNAse ). Untuk menghilangkan SDS, serta menghilangkan  sisa  air  dari  spesimen, kemudian cartilage ditempatkan  pada cawan steril, dicuci dengan 75% ethanol, air  destilasi  steril  dan  PBS  secara berturut-turut. 12,14
Terakhir  dilakukan  pengukuran variabel  pada cartilage  bovine  scaffold kontrol  dan  perlakuan.  Variabel  kadar kolagen  tipe  II  dengan  menggunakan metode  imunohistokimia  yang  dinilai secara  semi  kuantitatif  menurut  metode Remmele  yang  sudah  dimodifikasi, dimana  Indeks skala Remmele ( Immuno Reactive    Score /IRS)  merupakan  hasil perkalian  antara  skor  persentase  sel immunoreaktif  dengan  skor  intensitas warna pada sel immunoreaktif. Sedangkan  variabel  ukuran  porositasnya dengan menggunakan mikroskop elektron.
2jam (8) (10)
Gambar 1. Skema Alur Penelitian

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dengan
pengecatan imunohistokimia, tampak jelas
perbedaan  ekspresi  kolagen  tipe  II dengan  sel  di  sekitarnya  sebagaimana
yang  terlihat  pada  Gambar  2.  Ekspresi kolagen tipe II yang terbentuk selanjutnya  dihitung  pada  5  lapang pandang  dengan  mikroskop  cahaya
Proses Deselularisasi (80)
Physical (Freeze Thaw)
Chemical (SDS) 1 jam (8) SDS 2%  (40) SDS 5%  (40) Kontrol (16) Decellularized Bovine Cartilage IHC IHC IHC IHC SEM SEM SEM SEM SEM IHC Proses IHC digunakan untuk melihat : Kolagen tipe II
24 jam (8) 48jam (8) 72 jam (8) 1 jam (8) 2 jam (8) 24jam (8) 48 jam (8) 72jam (8)
Enzymatic (DNAse/ RNAse) Enzymatic (DNAse/ RNAse) Enzymatic (DNAse/ RNAse) Enzymatic (DNAse/ RNAse) Enzymatic (DNAse/ RNAse) Enzymatic (DNAse/ RNAse) Enzymatic (DNAse/ RNAse) Enzymatic (DNAse/ RNAse) Enzymatic (DNAse/ RNAse) Enzymatic (DNAse/ RNAse) Decellularized Bovine Cartilage Decellularized Bovine Cartilage Decellularized Bovine Cartilage Decellularized Bovine Cartilage Decellularized Bovine Cartilage Decellularized Bovine Cartilage Decellularized Bovine Cartilage Decellularized Bovine Cartilage Decellularized Bovine Cartilage IHC SEM IHC SEM IHC SEM IHC SEM IHC SEM IHC SEM Proses SEM digunakan untuk melihat :
Ukuran Porositas
BOVINE CARTILAGE (96)
perbesaran  400X.  Dari  uji  homogenitas didapatkan seluruh kelompok data terdistribusi  normal  (p>0,5).  Pada  uji
ANOVA diketahui bahwa terdapat kadar kolagen  tipe  II  yang  signifikan  pada kelompok perlakuan (P<0,05).
Gambar 2. Ekspresi Kolagen Tipe II dengan Perbesaran 400X
Gambar 3. Kondisi cartilage bovine scaffold di bawah mikroskop sebelum dan setelah proses deselularisasi
Gambar 4. Grafik uji deskriptif kadar kolagen tipe II pada cartilage bovine scaffold

## Artikel Penelitian
Gambar 5. Grafik uji deskriptif porositas (luas) pada cartilage bovine scaffold
Dengan menggunakan mikroskop elektron menunjukkan diameter
cartilage  bovine  scaffold setelah  proses deselularisasi. Pada pemeriksaan mikroskop  elektron  terlihat  hanya  pada perlakuan  SDS  5%  72  jam  saja  yang sudah  tidak  didapatkan  inti  sel,  hal  ini dapat  diartikan  bahwa  pada  perlakuan SDS  5%  72  jam, cartilage  bovine scaffold terdeselularisasi secara sempurna. Dari uji homogenitas didapatkan  kelompok  data  terdistribusi normal. Ini karena semua kelompok data didapatkan  p>0,05.  Pada  uji  ANOVA didapatkan  p=0,0001.  Karena  p<0,05 maka terdapat perbedaan antara beberapa kelompok data. Untuk mengetahui  kelompok  yang  berbeda maka  dilakukan  uji post  hoc dengan hasil  didapatkan  terdapat  perbedaan bermakna  ukuran  porositas  pada  semua kelompok SDS 5% 48 jam dan SDS 5% 72 jam dibandingkan kelompok lainnya.
Terjadi peningkatan kadar kolagen  tipe  II  pada  sediaan cartilage bovine  scaffold yang  terdeselularisasi pada  24  jam,  48  jam  dan  72  jam  baik pada  konsentrasi  SDS  2%  maupun  SDS 5%  dibandingkan  kelompok  kontrol. Fenomena ini secara teori dapat dijelaskan karena terjadi normalisasi dari jumlah  kolagen  tipe  II  terhadap  berat sebelum  dilakukan  proses  deselularisasi, karena berat sebelum dilakukan deselularisasi  menjadi  berkurang  setelah proses  deselularisasi,  sementara  berat kolagen  tidak  terpengaruh.  Di  samping itu,  jumlah  glikosaminoglikan  (GAG) juga berkurang karena proses deselularisasi, yang memberikan kontribusi  terhadap  jumlah  kolagen  tipe II secara keseluruhan meningkat. Sedangkan  pemaparan  waktu  yang cukup  singkat  yakni  1  jam  dan  2  jam pada  SDS  2%  dan  5%  keduanya menghasilkan  kadar  kolagen  dengan
jumlah yang sedikit menurun dibandingkan kontrol.
Bovine merupakan  hewan  ternak yang  cukup  mudah  didapatkan  di Indonesia,  tingginya  konsumsi  daging sapi di masyarakat kita dipenuhi dengan kurang lebih 3 juta ekor sapi per tahun. 11
Bovine articular cartilage juga memiliki komponen morphogenic  factor yang disebut cartilage  derived  morphogenic proteins (CDMP),  sehingga  kita  juga akan  mendapatkan  keuntungan  material lain  dari  kandungan  komponen  matriks ekstraseluler  tulang  rawan  sendi  yang berasal dari bovine articular cartilage ini berupa  kolagen  tipe  II  serta  komponen matriks ekstraseluler lain di dalamnya. 15,16
Scaffold merupakan  kerangka awal  yang  bersifat  temporer  sebagai media  perlekatan  dari stem  cell ,  seiring berjalannya proses proliferasi dan diferensiasi stem  cell akan  mensintesa matriks  baru.  Dalam  proses  ini scaffold bukan hanya berperan sebagai mechanical cues namun juga merupakan biochemical  cues yang  menjadi  cetakan terhadap  matriks  baru  yang  akan dihasilkan  oleh stem  cell .  Hal  Ini  juga merupakan  salah  satu  dasar  keunggulan dari natural  scaffold dibandingkan syntethic scaffold , dimana natural scaffold akan  memiliki  peran  tambahan
dalam segi biochemical cues dibandingkan syntethic  scaffold yang memiliki peran dominan dalam konstruksi mekaniknya saja. 17-19
Penggunaan scaffold yang berasal  dari bovine  articular  cartilage pada penelitian ini ditujukan selain untuk memberikan  kerangka  mekanik  juga menjadi microenvironment bagi stem cell .  Kandungan  matriks  ekstraseluler bovine articular cartilage berupa kolagen  tipe  II  diharapkan  masih memiliki  kadar  yang  cukup  tinggi sehingga  fungsi  sebagai biochemical cues masih cukup optimal. 20
Pada penelitian ini, proses deselularisasi yang dilakukan menggunakan  kombinasi  dari  perlakuan fisik,  kimiawi  dan  enzimatik  karena memandang  kompaknya  struktur  dari cartilage  dan  rendahnya  kemampuan penetrasi  dari  larutan.  Pada  tahap  fisik, bovine  cartilage dicuci  dengan  larutan PBS  dan  ditempatkan  pada  suhu  -4°C untuk  menimbulkan  pembentukan  dari kristal es yang nantinya dapat mengganggu kondrosit dan menyebabkan  lisisnya  sel.  Setelah  itu, bahan dipaparkan pada proses pembekuan  menggunakan  nitrogen  cair yang  dapat  menyebabkan  kerusakan membran  lebih  jauh  dan  menghilangkan protein.  Proses  fisik  ini  merusak  sel
namun  tidak  serta  merta  menghilangkan fragmen-fragmennya. 21-23
Tahap  selanjutnya  yaitu  tahap kimiawi, kami menggunakan cairan SDS yang dapat berinteraksi dengan membran sel  termasuk  plasma  dan  membran nuklear  serta  melisiskan  mereka  namun disisi  lain  dapat  mengganggu  protein dengan  cara  melipat  kembali  molekul- molekulnya. Khusus pada tahap kimiawi,  kami  melakukan  beberapa perlakuan yang berbeda. Pada penelitian ini,  kami  menggunakan  2  macam konsentrasi yaitu cairan SDS 2% dan 5% serta  tenggat  waktu  perendaman  yang berbeda.  Namun  dari  penelitian  yang kami lakukan, hanya dengan menggunakan  SDS  5%  selama  72  jam, yang  dapat  menghilangkan  sel  dari bovine  cartilage secara  total.  Setelah tahap kimiawi, bovine cartilage mengalami  tahap  enzimatik  dengan DNAse/RNAse untuk menghindari penularan penyakit, mengurangi inflamasi  dan  respon  imun  terhadap scaffold dan mengurangi risiko penolakan  setelah  implantasi,  terutama dengan  jaringan  donor xenogenic atau alogenic. 22
Setelah  itu  bahan  kembali  dicuci menggunakan  PBS  untuk  kemudian dilakukan  pemeriksaan  IHC  dan  SEM. Seperti ditampilkan di rangkaian gambar
konsentrasi  SDS  yang  lebih  kecil  dan waktu  yang  lebih  singkat  tidak  dapat menghilangkan  sel  dari bovine  cartilage secara  sempurna.  Pada  preparat  yang direndam SDS 5% selama 72 jam, proses deselularisasi  terjadi  secara  sempurna, meskipun demikian dari pewarnaan IHC (pada akhir proses deselularisasi) tampak ditemukan  adanya  kandungan  kolagen tipe  II  dengan  kadar  yang  signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol  ( bovine  cartilage tanpa  proses deselularisasi),  hal  ini  dimungkinkan karena  menurunnya  kandungan  air setelah  mengalami  proses  deselularisasi secara  fisikal.  Tidak  hanya  itu,  bila dibandingkan  dengan  preparat  yang lainnya, tetap kadar kolagen tipe II lebih tinggi pada preparat yang terdeselularisasi sempurna. 24
Ukuran scaffold juga  merupakan variabel  yang  cukup  penting.  Apabila ukuran  pori  yang  terbentuk  terlalu  kecil akan menyebabkan terganggunya migrasi  sel,  terhambatnya  proses  difusi nutrisi dan pembuangan bahan metabolism  dari  sel.  Demikian  pula sebaliknya  apabila  ukurannya  terlalu besar  akan  mengurangi  luas  permukaan yang  tersedia  untuk  perlekatan stem  cell pada scaffold. 25
Diameter  pori scaffold optimal yang berkisar antara 85  m–325  m akan

## Artikel Penelitian
memfasilitasi terjadinya attachment pada fase  awal  sekaligus  memungkinkan untuk  terjadinya  difusi  nutrisi  dan pembuangan  hasil  metabolisme  sel. Rentang  diameter scaffold yang  berkisar antara  100  m-300  m  akan  memberikan lingkungan yang optimal untuk terjadinya  proliferasi  sel  dengan  tetap memiliki  peran  untuk  melakukan  retensi terhadap  matriks  ekstraseluler  yang diproduksi  oleh  sel.  Faktor  lain  yang tidak  kalah  penting  adalah  bagaimana scaffold yang  dibuat  bisa  memadukan fungsi  sebagai  kerangka  mekanik  yang cukup kokoh namun tetap bisa
memberikan  ruang  untuk  terjadinya transportasi elemen biologis bisa berjalan dengan baik di dalamnya. 24,25
Konstruksi scaffold yang  terlalu
“stiff” juga  kurang  menguntungkan karena akan membatasi kecepatan migrasi  sel  untuk  membentuk  jaringan yang  baru.  Rancang  bangun scaffold hendaknya  cukup  memberikan  ruang sehingga chondrocyte yang  memiliki ukuran  9  m–10  m  bisa  bergerak  secara bebas,  termasuk  juga  harus  tersedia ruang yang cukup untuk deposisi matriks baru  yang  dihasilkan  oleh chondrocyte tersebut,  apabila  semua  persyaratan tersebut dipenuhi maka integrasi jaringan  yang  baru  bisa  dicapai  lebih cepat. 25
Dari  pemeriksaan  SEM  pada preparat cartilage  bovine  scaffold yang terdeselularisasi  sempurna  (SDS  5%  72 jam) didapatkan memiliki porositas yang saling  berhubungan  dalam  jumlah  besar sehingga  memungkinkan  infiltrasi  dan penempelan  sel.  Ukuran  diameter  pori yang  ditemukan  dalam  penelitian  kami pada decellularized  bovine  cartilage sebesar 200µm, merupakan ukuran yang ideal  untuk  terbentuknya scaffold yang dapat  memberikan  ruang  bagi stem  cell dan  memungkinkan  adanya  transport materi elemen biologis. 24,25

## KESIMPULAN
Kesimpulan:
1. Decellularized cartilage bovine scaffold sebagai  formula scaffold mesenchymal  stem  cell didapatkan mengandung komponen matriks ekstraseluler, yang dibuktikan dengan  didapatkannya  komponen kolagen  tipe  II  didalamnya  serta memiliki  porositas  yang  saling berhubungan  dalam  jumlah  besar sehingga  memungkinkan  infiltrasi dan penempelan sel..
2. Kadar kolagen tipe II pada decellularized cartilage bovine scaffold mengalami  peningkatan yang signifikan pada perlakuan SDS 5%,  72  jam  dibandingkan  dengan

## Artikel Penelitian
kontrol fresh  bovine  cartilage, serta perlakuan  lainnya.  Hal  ini  bisa terjadi  karena  normalisasi  dari jumlah  kolagen  tipe  II  terhadap
berat sebelum dilakukan
deselularisasi.
3. Porositas pada decellularized cartilage bovine scaffold mengalami peningkatan  yang  signifikan  pada perlakuan SDS 5%, 72 jam dibandingkan  dengan  kontrol fresh bovine  cartilage, serta  perlakuan lainnya.

## REFERENSI
1. Heriawan R. Perkembangan
Indikator  Utama  Sosial  Ekonomi Indonesia.  Subdirektorat  Layanan dan  Promosi  Statistik  Badan  Pusat Statistik  Indonesia.  Jakarta:  ISSN. 2011; 2085.5664.
2. Claire  V,  Carine  Bouffi,  Christophe Merceron,  Jan  Gordeladze,  Jean- Marc  Brondello,Christian  Jorgensen
,Pierre  Weiss,  Jérome  Guicheux, Danièle  Noël;  Cartilage  Tissue Engineering: Towards a Biomaterial- Assisted  Mesenchymal  Stem  Cell Therapy; Current Stem Cell Research
&Therapy. Hospital Lapeyronie, Montpellier, Bentham Science Publishers  Ltd,  France.  2009;  318- 332.
3. Myron  Spector;  Biomaterials-Based Tissue
Engineering And Regenerative  Medicine  Solutions  To Musculoskeletal  Problems  Tissue Engineering, Boston Healthcare
System,  And  Orthopaedic  Research
Laboratory, Harvard Medical School, Boston,USA,Swiss Med
Wkly. 2006;136:293–301.
4. Dwikora,  Sasetia  DR,  Taufik  A, Rofi’i,  Sadabaskara,  Bembie  R, Musbhida  A  and  Adi  G.  Freeze dried  bovine  cartilage  powder  as  an alternative  scaffold  for  cartilage defect.  International  symposia  of stem cell and Tissue bank. Surabaya. 2011.
5. Asheesh Bedi, Brian T. Feeley, Riley J. Williams, Management of Articular  Cartilage  Defects  ofthe Knee;  Journal  of  Boneand  Joint Surgery, Am. 2010; 92:994- 1009./JBJS.I.00895 6. M. Wessling D.Stamatialis, K. Boller,  C.A.van  Blitterswijk,  D.W. Grijpma; Design Strategies for Tissue Engineering Scaffolds.
Bernke  Papenburg,    Enschede,    The Netherlands. 2009.
7. Ferdiansyah.  Use  of  Freeze-Dried Irradiated  Bones  in  Orthopaedic Surgery.In  Radiation  in  Tissue
Banking  Basic  Science  and  Clinical Applications  of  Radiated  Tissue Allografts  (edited  by  Nather  A, Yusof N, Hilmy N). World Scientific,  Singapore.  2007;  317- 326.
8. Konakci  KZ,  Bohle  B,  Blumer  R, Hoetzenecker W, Roth  G, Moser  B, et  al.  Alpha-Gal  on  bioprostheses: xenograft  immune  response  in cardiac  surgery.  Eur  J  Clin  Invest 2005;35:17–23.
9. Badylak  SF,  Taylor  D,  Uygun  K. Whole-organ  tissue  engineering: decellularization
and
recellularization of three-

## Artikel Penelitian
dimensional  matrix  scaffolds.  Annu Rev Biomed Eng 2011;13:27–53.
10. Salter  MB.  Textbook  of    Disorders and  Injuries  of the  Musculoskleletal System. 2 nd ed.1983 p.6-25 11. Scott  J.  Hollister  ;  Porous  scaffold design  for  tissue  engineering  Is  At The  Scaffold  Tissue  Engineering
Group,  Departments  Of  Biomedical
Engineering, Surgery and Mechnical
Engineering,The University of
Michigan,  Ann  Arbor,  Michigan 41809, USA
12. Baltimore.Tissue Engeneering,
Journal  of  Bone  and  Joint  Surgery. 2005; 86 : 1541-1557.
13. Cook SD, Barrack RL, Skinner HB. Basic Science in Orthopaedic
Surgery,  In  :  Skinner  HB,  ed.
Current  Diagnosis  and Treatment  in
Orthopaedics.  2 nd ed.  New  York  :
Lange  Medical  Book.  2000;  p.  8  – 11.
14. Akeson  WH,  Amiel  D,  Gershuni DH.  Articular  Cartilage  Physiology and  Metabolism.  In:  Resnick  D,  ed. Diagnosis  of  Bone  and  Joint Disorders.  3 rd ed.  Philadelphia:
Saunders WB.1996; p.769 – 90.
15. Vunjak-Novakovic G. The fundamentals  of  tissue  engineering: scaffolds and bioreactors. In: Tissue Engineering  of  Cartilage  and  Bone (Novartis  Foundation  Symposium) .
Editors:  Bock  G  and  Goode  J.  John Wiley  &  Sons  Ltd,  Chichester. 2003; 249, 34-51.
16. Erdag  G,Morgan  JR.  Allogeneic versus  xenogeneic  immune  reaction to  bioengineered  skin  grafts. Cell Transplant. 2004 ; 13:701–12.
17. Gock  H,  Murray-Segal  L,  Salvaris E, Cowan P, D’Apice AJ.
Allogeneic  sensitization  is  more effective than xenogeneic sensitization in eliciting Gal- mediated skin graft rejection.
Transplantation. 2004 ; 77:751–53.
18. Ross  JR,  Kirk  AD,  Ibrahim  SE, Howell  DN,  Baldwin  WM  3rd,
Sanfilippo  FP.  Characterization  of human anti-porcine “natural antibodies”  recovered  from  ex  vivo perfused  hearts—predominance  of IgM and IgG2. Transplantation. 1993 . 55:1144–50.
19. BernardMP,  ChuML,  Myers  JC, Ramirez  F,Eikenberry  EF,  Prockop DJ. Nucleotide sequences of complementary deoxyribonucleic acids  for  the  pro  alpha  1  chain  of human type I procollagen. Statistical evaluation  of  structures  that  are conserved during evolution.
Biochemistry 22. 1983; :5213–23.
20. Bernard  MP,  Myers  JC,  Chu  ML, Ramirez  F,  Eikenberry  EF,  Prockop DJ. Structure of a cDNA for the pro alpha  2  chain  of  human  type  I procollagen. Comparison with chick cDNA  for  pro  alpha  2(I)  identifies structurally  conserved  features  of the protein and the gene.
Biochemistry 22.1983;1139–45.
21. Constantinou  CD,  Jimenez  SA. Structure  of  cDNAs  encoding  the triple-helical  domain  of  murine alpha  2  (VI)  collagen  chain  and comparison  to  human  and  chick homologues.  Use  of  polymerase chain reaction and partially degenerate oligonucleotide for generation  of  novel  cDNA  clones.
Matrix. 1991;11:1–9.
22. Exposito  JY,  D’AlessioM,  Solursh M,  Ramirez  F.  Sea  urchin  collagen
evolutionarily homologous
to vertebrate pro-alpha 2(I) collagen. J.
Biol. Chem. 1992;267:15559–62.
23. McPherson  TB,  Liang  H,  Record
RD,  Badylak  SF.  Galalpha(1,3)Gal epitope  in  porcine  small  intestinal submucosa. Tissue Eng. 2000;6:233– 39.
24. Raeder RH, Badylak SF, Sheehan C,
Kallakury  B,  Metzger  DW.  Natural anti-galactose  alpha1,3  galactose antibodies delay, but do not prevent the  acceptance  of  extracellular matrix xenografts.
Transplant.Immunol. 2002;10:15–24.
25. Daly  K,  Stewart-Akers  A,  Hara  H, Ezzelarab  M,  Long  C,  et  al.  Effect of  the  alphaGal  epitope  on  the response to small intestinal submucosa  extracellular  matrix  in  a nonhuman  primate  model. Tissue Eng. Part A 2009;15:3877–88.