DOI : 10.35311/jmpi.v9i2.309
Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Bunga Krisan ( Chrysanthemum morifolium Ramat) dengan Metode DPPH: Fraksi Larut Air, Etil Asetat, n- Heksan dari Varietas lamet dan sheena
Kharisma Mayda Mahera, Rizqa Salsabila Firdausia *
Program Studi Farmasi, Fakultas Kesehatan, Universitas Jenderal Achmad Yani Yogyakarta

## ABSTRAK
Bunga  krisan  ( Chrysanthemum  morifolium Ramat)  varietas lamet dan sheena diketahui dapat  berperan  sebagai  antioksidan  alami  yang  berpotensi  mencegah  radikal  bebas karena  mempunyai  kandungan  senyawa  fenolik  dan  flavonoid.  Untuk  mendapatkan senyawa  yang  lebih  spesifik  yang  berfungsi  dalam  aktivitas  antioksidan  pada  bunga krisan  dilakukan  dengan  fraksinasi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas antioksidan dari ekstrak fraksi larut air, n-heksan, dan etil asetat pada bunga krisan  varietas lamet dan sheena menggunakan  metode  DPPH.  Serbuk  bunga  krisan diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  70%.  Selanjutnya difraksinasi  menggunakan  air,  n-heksan,  dan  etil  asetat.  Filtrat  dipekatkan menggunakan waterbath pada  suhu  60 ○ C  hingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Kemudian diidentifikasi fenolik dan flavonoid secara kuantitatif menggunakan spektrofotometer UV-Vis.  Analisis  antioksidan  dilakukan  menggunakan  metode  peredaman  radikal bebas DPPH untuk mengukur nilai IC 50 . Hasil dari penelitian ini menunjukkan bahwa total  kadar  fenolik,  flavonoid,  dan  antioksidan  yang  paling  baik  dari  varietas lamet sebesar  2,342%  (fraksi  etil  asetat),  3,077%  (fraksi  n-heksan),  dan  137,589  ppm  (fraksi etil asetat). Sedangkan dari varietas sheena terdapat pada fraksi etil asetat dengan nilai sebesar 6,174%; 4,824%; dan 21,208 ppm. Sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak fraksi  larut  air,  n-heksan,  dan  etil  asetat  pada  bunga  krisan  varietas lamet dan sheena terdapat aktivitas antioksidan.
Kata kunci :   Antioksidan, Chrysanthemum morifolium Ramat varietas lamet dan sheena , DPPH, Fenolik, Flavonoid, Fraksinasi

## ABSTRACT
Chrysanthemum  (Chrysanthemum  morifolium  Ramat)  varieties  of  lamet  and  sheena are known to act as natural antioxidants that have the potential to prevent free radicals because  they  contain  phenolic  compounds  and  flavonoids.  Fractionation  is  used  to obtain  more  specific  compounds  that  function  in  antioxidant  activity  in chrysanthemum  flowers.  The  aim  of  this  research  is  to  determine  the  antioxidant activity  of  extracts  of  water-soluble  fractions,  n-hexane,  and  ethyl  acetate  on chrysanthemum  varieties  of  lamet  and  sheena  using  the  DPPH  method. Chrysanthemum  flower  powder  was  extracted  by  the  maceration  method  using  70% ethanol. Then it was fractionated using water, n-hexane, and ethyl acetate. The filtrate was  concentrated  using  a  water  bath  at  60 0 C  to  obtain  a  thick  extract.  Then  we quantitatively identified phenolics and flavonoids using a UV-Vis spectrophotometer. Antioxidant analysis was carried out using the DPPH free radical scavenging method to  measure  the  IC 50 value.  The  results  of  this  study  indicated  that  the  best  total phenolic,  flavonoid,  and  antioxidant  levels  of  the  lamet  variety  were  2,342%  (ethyl acetate fraction), 3,077% (n-hexane fraction), and 137,589 ppm (ethyl acetate fraction). Meanwhile, the sheena variety was found in the  ethyl acetate fraction with values of 6,174%; 4,824%; and 21,208 ppm. So it can be concluded that the extracts of the water- soluble fraction, n-hexane, and ethyl acetate in chrysanthemum varieties of lamet and sheena have antioxidant activity.
Keywords :  Antioxidant, Chrysanthemum  morifolium Ramat  varieties lamet and sheena , DPPH, Phenolic, Flavonoids, Fractionation
Sitasi: Mahera, K. M., & Firdausia, R. S.  (2023). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Bunga Krisan ( Chrysanthemum morifolium Ramat) dengan Metode DPPH: Fraksi Larut Air, Etil Asetat, n-Heksan dari Varietas Lamet dan Sheena. Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, 9(2), 179-188. https://doi.org/10.35311/jmpi. v9i2.309
Submitted: 03 Mei 2023 Accepted: 23 Agustus 2023 Published: 18 Desember 2023
*Penulis Korespondensi: Rizqa Salsabila Firdausia Email:
rizqasalsabilaf@gmail.com
Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License
Mahera & Firdausia

## PENDAHULUAN
Senyawa  radikal  bebas  mempunyai efek  bahwa  dapat  mengakibatkan  terjadinya kerusakan  sel  dalam  tubuh  manusia.  Hal tersebut  dapat  memicu  adanya  berbagai penyakit  seperti  kanker,  katarak,  penyakit jantung  dan  penyakit  degeneratif  lainnya (Purnama et al ., 2015). Sehingga, pembentukan  radikal  bebas  di  dalam  tubuh harus dicegah dengan menggunakan senyawa  antioksidan  (Hasanah et  al .,  2017). Antioksidan  dapat  diperoleh  dari  senyawa sintetik  dan  alami,  dimana  senyawa  alami yang  biasa  dapat  ditemukan  terdapat  pada beberapa  jenis  tanaman.  Terdapat  senyawa yang  berperan  sebagai  antioksidan  pada tanaman  seperti  flavonoid,  fenolik,  beta karoten,  asam  askorbat,  tokoferol  dan lainnya.
Antioksidan  terbesar  yang  banyak ditemui  di  alam  diketahui  berasal  dari senyawa  flavonoid  dan  fenolik.  Kedua senyawa  tersebut  dapat  bertindak  melalui donor  elektron  atau  pereduksi  dengan  cara menstabilkan senyawa radikal bebas
menggunakan
elektronnya untuk melengkapi  kekurangan  elektron  dalam radikal  bebas,  mencegah  reaksi  berantai dengan  menangkap  senyawa  radikal  bebas, pengkelat  logam  yang  terbawa  dalam produksi senyawa radikal bebas (Irianti et al ., 2019).  Salah  satu  tanaman  yang  diketahui memiliki  kandungan  flavonoid  dan  fenolik adalah  bunga  krisan.  Diketahui  bahwa fenolik  yang  paling  umum  yang  terkandung dalam bunga krisan ( Chrysanthemum morifolium )  antara  lain acacetin,  linarin, asam 3,5-di-O- caffeoylquinic dan  asam  klorogenat. Sedangkan  pada  golongan  flavonoid  yang terkandung dalam bunga krisan ( C.morifolium ) meliputi quercetin , apigenin dan luteolin (Chen et  al .,  2021;  Gong et  al .,  2019; Han et  al .,  2017;  Hu et  al .,  2017;  Nugroho, 2015; Shin et al ., 1995) .
Senyawa  fenolik  dan  flavonoid  yang terdapat dalam bunga krisan dapat diekstraksi  dengan  menggunakan  metode maserasi  dengan  pelarut  etanol  yang  secara
umum  akan  menarik  senyawa  yang  bersifat polar hingga semi polar. Untuk mendapatkan senyawa  yang  berfungsi  sebagai  antioksidan yang lebih spesifik, dapat dilanjutkan dengan proses  fraksinasi  metode  cair-cair  dengan  3 pelarut  yang  memiliki  polaritas  berbeda seperti  air,  etil  asetat  dan  n - heksan. Perbedaan  pelarut  ekstraksi  diketahui  akan berpengaruh terhadap kemampuan antioksidan.  Sehingga  pada  penelitian  ini dilakukan  uji  antioksidan  terhadap  ketiga fraksi  dari  ekstrak  etanol  bunga  krisan. Bunga  krisan  yang  digunakan  berasal  dari dua varietas yang berbeda yaitu Chrysanthemum morifolium Ramat  varietas lamet dan sheena . Pemilihan varietas didasarkan  pada  perbedaan  warna  dari mahkota  bunga  krisan  dengan  lokasi perkebunan  yang  sama.  Diketahui  bahwa perbedaan  warna  dapat  mempengaruhi aktivitas  farmakologisnya  salah  satunya antioksidan.  Sehingga  pada  penelitian  ini, peneliti  ingin  mengetahui  pengaruh  dari pelarut yang digunakan pada masing-masing fraksi pada dua varietas bunga yang berbeda.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan:  alat-alat  gelas, cawan  porselin ( Pyrex ),  corong pisah ( Pyrex ), hotplate magnetic stirrer , mikropipet ( Eppendorf ) , neraca  analitik  (Ohaus),  oven, pipet ukur ( Pyrex ), propipet, seperangkat alat spektrofotometer  UV-Vis,  tabung  reaksi ( Pyrex ) dan waterbath . Sampel dalam penelitian  ini  adalah  bunga  krisan  varietas lamet dan sheena yang  diambil  dari  daerah Kaliwinong, Banyukuning, Bandungan, Semarang,  Jawa  Tengah.  Bahan-bahan  yang dipakai:  AlCl 3 10%, water  for  injection , aquades,  asam  asetat  5%,  asam  galat,  DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ), etanol 70%
(teknis),  etanol  (p.a),  etil  asetat  (p.a), kuersetin,  metanol  (p.a),  Na 2 CO 3 7%,  n- heksan (p.a), Folin-Ciocalteu dan vitamin c.

## Preparasi Sampel
Bunga krisan diambil dari perkebunan di daerah Kaliwinong,
Mahera & Firdausia
Banyukuning,  Bandungan,  Semarang,  Jawa Tengah,  pada  ketinggian  1073  mdpl  dengan usia  bunga  125  HST.  Determinasi  tanaman bunga  krisan  dilakukan  di  Laboratorium Sistematika  Tumbuhan,  Fakultas  Biologi, Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Mahkota  bunga  krisan  dicuci  bersih  dan ditiriskan.  Lalu  dikeringkan  dengan  oven pada  suhu  50 o C  selama  ±72  jam.  Simplisia yang  sudah  kering  diukur  kadar  lembabnya dengan moisture  balance ,  memenuhi  standar jika  kadar  lembabnya  <10%.  Simplisia diblender  hingga  didapatkan  serbuk  dan diayak  menggunakan  ayakan  ukuran  40 mesh  (Hasanah et  al .,  2017;  Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2017).

## Pembuatan Ekstrak Etanol Bunga Krisan
Serbuk  simplisia  dimaserasi  dengan etanol  70%  sebanyak  10  bagian,  selama  72 jam  sambil  sesekali  diaduk  dan  disimpan ditempat  gelap  (Hana et  al .,  2020).  Hasil maserasi  disaring  dan  dilakukan  remaserasi selama  24  jam  dengan  jumlah  pelarut  yang sama  saat  maserasi.  Filtrat  yang  didapatkan digabungkan dan dipekatkan dengan penangas  pada  suhu  terkontrol  50-70 o C hingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Hasil ekstrak  kental  yang  didapatkan  dihitung rendemennya dengan rumus:
Fraksinasi Air, Etil Asetat dan n - Heksan

## Dari Ekstrak Etanol Bunga Krisan
Ditimbang  ekstrak  kental  10  gram dilarutkan  menggunakan  air  dengan  suhu 60 o C sebanyak 100 mL (Maravirnadita, 2019). Fraksinasi dilakukan secara bertingkat menggunakan  corong  pisah,  yang  pertama dengan  n-heksan  (2:1  v/v)  digojog  perlahan selama  5  menit  sambil  sesekali  dibuka tutupnya  (Irianti et al .,  2019),  lalu  didiamkan hingga terbentuk 2 lapisan dan dipisahkan ke dalam  wadah  yang  berbeda.  Lapisan  fraksi tidak larut  n-heksan  dimasukkan  kembali  ke dalam  corong  pisah  untuk  direfraksinasi sebanyak  dua  kali  dengan  jumlah  n-heksan yang  sama.  Selanjutnya,  dilakukan  prosedur
yang  sama  untuk  fraksi  etil  asetat.  Hasil filtrat  dikumpulkan  dan  dipekatkan  diatas waterbath dengan  suhu  60 o C  (Hasanah et  al ., 2017).  Sehingga  diperoleh  ekstrak  kental fraksi  n-heksan,  etil  asetat  dan  air,  hasil ekstrak kental dihitung rendemennya dengan rumus:

## Uji Organoleptik
Uji  organoleptik  tiap  ekstrak  kental meliputi  bau,  tekstur,  warna  dan  rasa. Pernyataan  meliputi “berbau  khas  lemah”, “praktis tidak berbau”, “tidak berbau” atau yang lainnya,  ditentukan  dengan  diamati  setelah sampel  terpapar  udara  selama  15  menit.  Bau ekstrak  tidak  dianggap  sebagai  standar kemurnian,  bau  tersebut  hanya  bersifat deskriptif  saja  (Kementerian  Kesehatan Republik Indonesia, 2017).

## Penentuan Kadar Total Fenolik
Penetapan
kadar fenolik menggunakan  metode  kolorimetri Folin- Ciocalteu (Baba & Malik, 2015; Djuleng, 2021). Larutan  standar  asam  galat  dibuat  dengan konsentrasi  2000  ppm  dan  dibuat  seri konsentrasi  100,  200,  300,  400  dan  500  ppm dicukupkan  dengan  metanol  p.a  sampai  10 mL. Larutan sampel dibuat dengan menimbang ekstrak kental dan melarutkannya menggunakan pelarut metanol p.a. Penetapan panjang gelombang maksimal (nm) dan operating time menggunakan  seri  larutan  konsentrasi  500 ppm  diambil  0,1  mL,  ditambahkan  0,1  mL Folin-Ciocalteu dan  didiamkan  selama  4-8 menit. Setelah itu ditambahkan 1 mL Na 2 CO 3 7% dan dicukupkan dengan water for injection hingga 5 mL. Discanning untuk mendapatkan panjang  gelombang  maksimal  (nm)  dengan interval  1  nm  rentang  600-800  nm.  Untuk operating  time ,  absorbansi  larutan  dibaca dengan panjang gelombang yang didapatkan yaitu  738  nm  selama  0-2  jam  dengan  selang waktu  5  menit,  sampai  diperoleh  nilai serapan yang stabil.
Mahera & Firdausia
Pengukuran  larutan  standar  asam galat  dan  sampel,  diambil  sebanyak  0,1  mL ditambahkan Folin-Ciocalteu 0,1  mL  dan didiamkan selama 4-8 menit. Lalu ditambahkan  1  mL  Na 2 CO 3 7%  dan dicukupkan dengan water for injection hingga 5 mL. Didiamkan selama 1 jam 30 menit dan dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 738 nm.

## Penentuan Kadar Total Flavonoid
Penentuan  kadar  total  flavonoid dengan  metode  kolorimetri  menggunakan pereaksi kompleks aluminium klorida (Ahmad et  al .,  2014;  Chang et  al .,  2002; Ramadhan et  al .,  2021).  Dibuat  larutan standar  kuersetin  konsentrasi  1000  ppm  dan dibuat seri konsentrasi 40, 60, 80, 120 dan 140 ppm  dicukupkan  dengan  pelarut  etanol  p.a sampai  10  mL.  Larutan  sampel  dibuat dengan  menimbang  ekstrak  kental  dan dilarutkan menggunakan etanol p.a.
Penetapan panjang gelombang maksimal (nm) dan operating time dilakukan 1 mL  dari  seri  larutan  konsentrasi  100  ppm ditambahkan  AlCl 3 10%  1  mL  dan  asam asetat 5% 8 mL. Discanning dengan interval 1 nm  pada  rentang  350-450  nm  untuk mendapatkan panjang gelombang maksimalnya. Untuk o perating time dilakukan dengan dibaca absorbansi larutan menggunakan  panjang  gelombang  yang didapatkan  yaitu  415  nm  selama  0-1  jam dengan  selang  waktu  5  menit  sampai diperoleh nilai serapan yang stabil.
Pengukuran larutan standar kuersetin dan  sampel  dilakukan  dengan  mengambil  1 mL  ditambahkan  AlCl 3 10%  1  mL  dan  asam asetat  5%  8  mL.  Didiamkan  selama  35  menit dan  dibaca  absorbansinya  pada  panjang gelombang 415 nm.

## Uji Aktivitas Antioksidan dengan DPPH
Dibuat  stok  larutan  DPPH  dengan konsentrasi  0,1  mM.  Dilakukan  penetapan panjang  gelombang  maksimal  (nm)  dan operating  time dengan  mereaksikan  larutan DPPH  konsentrasi  0,1  mM  sebanyak  2  mL dan  metanol  p.a  1  mL,  kemudian discanning
menggunakan  rentang  400-600  nm  dengan interval  1  nm  untuk  didapatkan  panjang gelombang  maksimal.  Untuk operating  time diukur dengan dibaca absorbansinya dengan panjang  gelombang  yang  didapatkan  yaitu 516  nm  pada  rentang  waktu  0-40  menit, untuk  memperoleh  waktu  serapan  yang stabil (Purwasari, 2021).
Dibuat  larutan  induk  pembanding dengan  menimbang  vitamin  c  5  mg  dan dilarutkan  dengan  pelarut  metanol  p.a hingga 50 mL. Dibuat seri konsentrasi 2, 4, 6, 8 dan 10 ppm (Hasanah et al ., 2017). Larutan uji  sampel  ditimbang  250  mg dan dilarutkan dengan  metanol  p.a  hingga  25  mL. Diencerkan menjadi beberapa seri konsentrasi hingga diperoleh nilai absorbansi dengan rentang 0,8-0,2 (Hasanah et al ., 2017). Pengukuran    absorbansi  sampel  dan vitamin  c  dilakukan  dengan  dipipet  1  mL ditambahkan  DPPH  0,1  mM  sejumlah  2  mL dan  didiamkan  selama  25  menit  ditempat gelap  atau  terhindar  dari  cahaya.  Dibaca absorbansinya panjang gelombang 516 nm.

## Analisis Data Kadar Senyawa Fenolik dan Flavonoid
Analisis data menggunakan
perhitungan  dari  Hasanah et  al. (2017)  yang dilakukan  dengan  membuat  kurva  baku antara konsentrasi standar dengan absorbansi  sehingga  didapatkan  persamaan regresi linier, ditentukan nilai kadar terhitung dengan persamaan: 𝑦 = 𝑎𝑥 + 𝑏 dan kadar totalnya dengan persamaan:

## Analisis Data Aktivitas Antioksidan
Hasil  yang  didapatkan  dihitung persentase  inhibisinya  dan  kemudian  dibuat persamaan          regresi           linier         yang menggabungkan  antara  persentase  inhibisi dengan  konsentrasi  larutan  sampel  untuk mendapatkan  nilai  IC 50 yang  ditentukan melalui  perhitungan  konsentrasi  larutan sampel  yang  dapat  menghambat  radikal bebas  DPPH  (persentase  inhibisi)  sebesar  50 (Hasanah et al ., 2017). Persentase inhibisi dan
Available @ http://www.jurnal-pharmaconmw.com/jmpi Mahera & Firdausia (a) (b) Gambar 1. Ekstrak Bunga Krisan. Keterangan: (a) Ekstrak Bunga Krisan Var. lamet ,
(b) Ekstrak Bunga Krisan Var. sheena . Tabel 1. Hasil Uji Organoleptik Ekstrak Bunga Krisan Uji Organoleptik Var. lamet Var. sheena Bau Khas Khas Warna Coklat tua Coklat tua Tekstur Kental Kental Rasa Pahit Pahit
nilai  IC 50 dihitung  menggunakan  persamaan rumus berikut:
𝑃𝑒𝑟𝑠𝑒𝑛𝑡𝑎𝑠𝑒 𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 = 𝐴𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙−𝐴𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
𝐴𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑥 100% dan    nilai IC 50 : 𝑦 (50) = 𝑎𝑥 + 𝑏 .

## Analisis Data Statistik
Dianalisis  secara  statistik  dengan  uji normalitas  menggunakan  Shapiro-Wilk  dan diuji  homogenitasnya  menggunakan  uji Levene’s.  Apabila  data  yang  diperoleh terdistribusi  normal  dan  homogen,  maka dapat  dilakukan  uji One-way  ANOVA menggunakan taraf kepercayaan sebesar 95% dan dilanjutkan dengan uji LSD
(Maravirnadita, 2019) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstrak Etanol Bunga Krisan
Serbuk simplisia bunga krisan ditimbang  300  gram  dan  diekstraksi  secara
terpisah  dengan  etanol  70%  sebanyak  3  liter. Dilihat  dari  senyawa  yang  akan  diambil merupakan  senyawa  yang  bersifat  polar sehingga dipilih etanol 70% karena merupakan  pelarut  yang  lebih  polar,  relatif tidak  toksik  dan  tidak  berbahaya.  Maserasi dilakukan  selama  72  jam  sesekali  sambil diaduk  serta  disimpan  pada  suhu  ruang, ditempat  gelap  dan  diremaserasi  satu  kali selama  24  jam.  Hasil  filtrat  dipekatkan  dan diperoleh  ekstrak  kental  varietas lamet sebanyak  48,3  gram  dengan  rendemen sebesar  16%,  sedangkan  pada  varietas sheena sebanyak  82,1  gram  dengan  nilai  rendemen sebesar  27%.    Hasil  uji  organoleptik  dapat dilihat  pada  Tabel  1  serta  penampakan  fisik dari  ekstrak  kental  dilihat  pada  Gambar  1.
Tabel 1. Hasil Uji Organoleptik Ekstrak Bunga Krisan
Uji Organoleptik Var. lamet Var. sheena Bau Khas Khas Warna Coklat tua Coklat tua Tekstur Kental Kental Rasa Pahit Pahit

## Gambar 1. Ekstrak Bunga Krisan
Keterangan: (a) Ekstrak bunga krisan Var. lamet ; (b) Ekstrak bunga krisan Var. sheena.

## Ekstrak Fraksi Air, Etil Asetat dan n-Heksan Bunga Krisan
Ekstrak  kental  sebanyak  10  gram dilarutkan  menggunakan  air  dengan  suhu 60 o C  sebanyak  100  mL.  Difraksinasikan dengan  n-heksan  sebanyak  50  mL  (2:1  v/v) yang  direplikasi  3  kali  dan  dilanjut menggunakan  pelarut  etil  asetat  dengan perlakuan  yang  sama.  Replikasi  dilakukan untuk   mendapatkan   senyawa   yang   lebih optimal. Hasil     filtrate      dipekatkan      dan didapatkan  nilai  rendemen  pada  Tabel  2. Rendemen yang dihasilkan dikatakan mengandung senyawa metabolit yang tinggi
jika  nilai  rendemen  yang  diperoleh  juga tinggi karena semakin tinggi nilai rendemen, maka  semakin  rendah  pengotor  yang  ada dalam  ekstrak  kental.  Hasil  uji  organoleptik dari  ekstrak  kental  hasil  fraksinasi  tersajikan dalam  Tabel  2  dan  tampak  fisik  dari  ekstrak kental hasil fraksi ditunjukan pada Gambar 2.

## Kadar Total Fenolik
Kurva  baku  standar  yang  digunakan untuk  penentuan  fenolik  yaitu  asam  galat dengan  tujuan  untuk  mengetahui  hubungan antara  konsentrasi  asam  galat  dengan absorbansinya.  Asam  galat  sebagai  senyawa
Mahera & Firdausia
Tabel 2. Hasil Rendemen dan Uji Organoleptik Fraksi Bunga Krisan
(a)                       (b)                       (c)
(d)                        (e)                        (f)
Gambar 2. Ekstrak Hasil Fraksi Bunga Krisan
Keterangan: (a) Fraksi Air Bunga Krisan Var. lamet , (b) Fraksi Etil Asetat Bunga Krisan Var. lamet , (c) Fraksi  n-Heksan  Bunga  Krisan  Var. lamet ,  (d)  Fraksi  Air  Bunga  Krisan  Var. sheena ,  (e)  Fraksi  Etil Asetat Bunga Krisan Var. sheena , (f) Fraksi n-Heksan Bunga Krisan Var. sheena .
Bau Warna Tekstur Rasa Var. lamet Fraksi Air 5,99 gram 60% Khas Coklat tua/ Kehitaman Kental Pahit Fraksi Etil Asetat 2,62 gram 26% Khas Coklat tua/ Kehitaman Kental Pahit Fraksi n-Heksan 2,33 gram 23% Khas Coklat tua/ Kehitaman Kental Pahit Var. sheena Fraksi Air 7,61 gram 76% Khas Coklat tua/ Kehitaman Kental Pahit Fraksi Etil Asetat 1,13 gram 11% Khas Coklat kekuningan Kental Pahit getir Fraksi n-Heksan 3,5 gram 35% Khas Coklat tua/ Kehitaman Kental Pahit Uji Organoleptik Ekstrak Kental Rendemen
Sampel
standarnya  karena  termasuk  fenolik  dengan sifat yang stabil pada strukturnya serta sering digunakan  dalam  penetapan  total  kadar fenolik.  Hasil  kurva  standar  yang  diperoleh dapat dilihat pada Gambar 3. Hasil dikatakan linier  apabila  nilai r mendekati  satu menunjukkan  bahwa  terdapat  korelasi  yang baik  antara  konsentrasi  asam  galat  dan absorbansi.  Hasil  persamaan  regresi  linier digunakan  untuk  menghitung  nilai  kadar fenolik  sampel.  Hasil  yang  didapatkan menunjukkan  bahwa  sampel  yang  diteliti
mengandung  senyawa  fenolik  dengan  nilai kadar  yang  disajikan  pada  Tabel  3. Didapatkan  rata-rata  nilai  kadar  yang  paling tinggi pada bunga krisan varietas sheena dari fraksi  etil  asetat.  Sedangkan  bunga  krisan varietas lamet total kadar fenolik paling tinggi terdapat    pada    etil    asetat.   Hal    tersebut menunjukkan  bahwa  etil  asetat  dapat menarik  senyawa  fenolik,  karena  dari kepolarannya, senyawa tersebut dapat tertarik  dengan  menggunakan  pelarut  semi polar (Rondonuwu & Suryanto, 2017).

## Tabel 2. Hasil Rendamen dan Uji Organoleptik Fraksi Bunga Krisan

## Gambar 2. Ekstrak Hasil Fraksi Bunga Krisan
Keterangan:   (a)  Fraksi  air  bunga  Krisan  Var. lamet ;  (b)  Fraksi  etil  asetat  Bunga  Krisan  Var lamet ;  (c)  Fraksi  n- Heksan bunga Krisan Var. lamet ; (d) Fraksi air bunga Krisan Var. sheena ; (e) Fraksi Etil Asetat bunga
Krisan Var. sheena ; (f) Fraksi n-Heksan bunga Krisan Var. sheena .
Hasil  analisis  kadar  fenolik  pada varietas lamet dan sheena didapatkan  hasil yang  terdistribusi  normal  dan  homogen karena  nilai  signifikansinya  lebih  dari  0,05 dengan  hasil  uji  ANOVA  yang  didapatkan signifikansinya  <0,001.  Hasil  menunjukkan terdapat  perbedaan  yang  signifikan  dalam penggunaan  pelarut  antar  sampel  fraksi  air, fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  n-heksan. Sedangkan  dalam  uji  LSD  diperoleh  hasil data sampel yang menunjukkan nilai adanya perbedaan  yang  signifikan  (sig.  <0,05). Sehingga jika dibandingkan antar varietas
dan  juga  fraksi  menunjukkan  terdapat perbedaan yang signifikkan.

## Kadar Total Flavonoid
Kurva baku untuk penentuan flavonoid  menggunakan  standar  kuersetin, tujuannya  untuk  mengetahui  hubungan antara konsentrasi kuersetin dengan absorbansinya. Hasil persamaan regresi linier yang  diperoleh  dapat  dilihat  pada  Gambar 4 yang  digunakan  untuk  menghitung  kadar flavonoid  dari  sampel.  Dari  hasil  yang diperoleh  menunjukkan  bahwa  sampel  yang diteliti mengandung senyawa flavonoid yang
Tabel 2. Hasil Rendemen dan Uji Organoleptik Fraksi Bunga Krisan
(a)                       (b)                       (c)
(d)                        (e)                        (f) Gambar 2. Ekstrak Hasil Fraksi Bunga Krisan Keterangan: (a) Fraksi Air Bunga Krisan Var. lamet , (b) Fraksi Etil Asetat Bunga Krisan Var. lamet , (c) Fraksi  n-Heksan  Bunga  Krisan  Var. lamet ,  (d)  Fraksi  Air  Bunga  Krisan  Var. sheena ,  (e)  Fraksi  Etil Asetat Bunga Krisan Var. sheena , (f) Fraksi n-Heksan Bunga Krisan Var. sheena .
Bau Warna Tekstur Rasa Var. lamet Fraksi Air 5,99 gram 60% Khas Coklat tua/ Kehitaman Kental Pahit Fraksi Etil Asetat 2,62 gram 26% Khas Coklat tua/ Kehitaman Kental Pahit Fraksi n-Heksan 2,33 gram 23% Khas Coklat tua/ Kehitaman Kental Pahit Var. sheena Fraksi Air 7,61 gram 76% Khas Coklat tua/ Kehitaman Kental Pahit Fraksi Etil Asetat 1,13 gram 11% Khas Coklat kekuningan Kental Pahit getir Fraksi n-Heksan 3,5 gram 35% Khas Coklat tua/ Kehitaman Kental Pahit Uji Organoleptik Ekstrak
Kental Rendemen Sampel
Mahera & Firdausia
Fenolik Flavonoid Antioksidan (IC ₅₀ ) Bunga Krisan Var. lamet Fraksi Air 1,275 ± 0,017 0,580 ± 0,003 235,607 ± 1,770 Sangat lemah Fraksi Etil Asetat 2,342 ± 0,004 1,812 ± 0,005 137,589 ± 0,255 Lemah Fraksi n-Heksan 1,640 ± 0,023 3,077 ± 0,015 280,317 ± 0,099 Sangat lemah Bunga Krisan Var. sheena Fraksi Air 2,717 ± 0,020 1,120 ± 0,008 63,446 ± 0,212 Kuat Fraksi Etil Asetat 6,174 ± 0,026 4,824 ± 0,013 21,208 ± 0,078 Sangat Kuat Fraksi n-Heksan 3,165 ± 0,010 2,119 ± 0,004 71,552 ± 0,147 Kuat Vitamin C - - 5,268 ± 0,044
Sangat Kuat Tabel 3 . Hasil Data Seluruh Parameter Uji Nilai disajikan dalam Rata-rata ± SEM (n=3) Sampel Parameter Uji Kapasitas
Antioksidan
disajikan  pada  Tabel  3.  Didapatkan  rata-rata nilai  kadar  yang  paling  tinggi  pada  bunga krisan  varietas sheena dari  fraksi  etil  asetat.
Sedangkan  bunga  krisan  varietas lamet total kadar  flavonoid  paling  tinggi  terdapat  pada fraksi n-heksan.
Gambar 3. Kurva Hubungan Antara Konsentrasi Asam Galat (ppm) dengan Absorbansi
Gambar 4. Kurva Hubungan Antara Konsentrasi Kuersetin (ppm) dengan Absorbansi
Tabel 3. Hasil Data Seluruh Parameter Uji
Keterangan: Nilai disajikan dalam rata-rata
Flavonoid  mempunyai  sifat  polar karena  sejumlah  gugus  hidroksil  yang dimilikinya  terikat  pada  beberapa  jenis glikosida flavonoid, sehingga flavonoid lebih mudah  larut  dalam  pelarut  polar  dan  semi polar  seperti  air  dan  etil  asetat.  Maka penggunaan pelarut polar merupakan
pelarut yang sesuai untuk menarik komponen-komponen  glikosida  flavonoid. Namun,  aglikon-aglikon  flavonoid  yang bersifat kurang polar seperti flavon, isoflavon,  flavonon  dan  flavonol  yang termetoksilasi  akan  menjadi  mudah  larut dalam  pelarut  non  polar  seperti  n-heksan
Gambar 3. Kurva Hubungan Antara Konsentrasi Asam Galat (ppm) Dengan Absorbansi Gambar  4. Kurva  Hubungan  Antara  Konsentrasi Kuersetin (ppm) Dengan Absorbansi
Gambar  3. Kurva Hubungan Antara Konsentrasi Asam Galat (ppm) Dengan Absorbansi
Gambar  4. Kurva  Hubungan  Antara  Konsentrasi Kuersetin (ppm) Dengan Absorbansi
Mahera & Firdausia
(Asriany, 2013). Sehingga pada sampel bunga krisan varietas lamet perlu diteliti lebih dalam terkait  penggunaan  fraksi  n-heksan  sebagai pelarut dalam penetapan senyawa flavonoid.
Analisis kadar flavonoid pada varietas lamet dan sheena didapatkan  hasil yang  terdistribusi  normal  dan  homogen  (sig. >0,05).  Sehingga  pada  hasil  uji  ANOVA diperoleh  hasil  yang  signifikansinya  <0,001. Maka dilanjutkan dengan uji LSD menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan yang  signifikan  dalam  penggunaan  pelarut antar  sampel  fraksi  air,  fraksi  etil  asetat  dan fraksi  n-heksan  serta  terdapat  perbedaan yang  signifikan  antar  varietas lamet dan sheena (sig. <0,05).

## Aktivitas Antioksidan
Penetapan  antioksidan  menggunakan pembanding    vitamin   C.   Nilai   IC 50 pada sampel  dan  vitamin  C  ditunjukkan  pada Tabel  3.  Hasil  menunjukkan  bahwa  senyawa antioksidan  yang  paling  baik  terdapat  pada vitamin  C  sebagai  pembanding  dan  pada varietas lamet ataupun sheena yang  paling baik  yang  difraksinasi  menggunakan  pelarut etil  asetat.  Dari  sampel  bunga  krisan didapatkan  kategori  kapasitas  antioksidan yang  sangat  kuat  hingga  sangat  lemah dengan  rentang  nilai  IC 50 >50  -  <200  ppm.
Sehingga  sampel  yang  diteliti  mengandung nilai IC 50 yang dapat meredam 50% dari total radikal bebas DPPH. Maka hasil menunjukkan  bahwa  seluruh  sampel  dari ekstrak  bunga  krisan  mempunyai  senyawa antioksidan  baik  dari  penggunaan  pelarut semi polar, polar ataupun nonpolar.
Hasil  perolehan  antioksidan  yang ditunjukkan  pada  fraksi  etil  asetat  varietas sheena menunjukkan  tingginya  nilai senyawa fenolik  dan  flavonoid  memiliki  pengaruh terhadap aktivitas antioksidan yang dihasilkan jika dilihat antar fraksi. Sedangkan pada  varietas lamet dilihat  dari  aktivitas antioksidan  yang  dihasilkan  menunjukkan
pengaruh terhadap tinggi rendahnya senyawa  fenolik  atau  flavonoid.  Sehingga dapat  diteliti  lebih  dalam  pengaruh  dari perbedaan  senyawa  fenolik  dan  flavonoid terhadap aktivitas antioksidannya.
Kemungkinan  adanya  senyawa  lain  yang dapat  berperan  dalam  aktivitas  antioksidan tidak  hanya  dari  senyawa  fenolik  dan flavonoid.  Menurut  Han  et  al.,  (2019), senyawa  lain  yang  dapat  berperan  dalam aktivitas  antioksidan  yaitu  kemungkinan adanya  senyawa  antosianin  yang  dimiliki oleh  bunga  krisan.  Maka  perlu  adanya pemeriksaan kadar senyawa antosianin pada bunga krisan.
Hasil  analisis  statistik  didapatkan hasil yang terdistribusi normal dan homogen dengan  nilai  signifikan  >0,05.  Sedangkan dalam  uji  ANOVA  diperoleh  hasil  yang signifikansinya  <0,001.  Dilanjutkan  dengan uji  LSD  untuk  mengetahui  sampel  mana yang berbeda signifikansinya. Hasil menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan yang  signifikan  dalam  penggunaan  pelarut antar  sampel  fraksi  air,  fraksi  etil  asetat  dan fraksi  n-heksan  serta  terdapat  perbedaan yang  signifikan  antar  varietas lamet dan sheena (sig.  <0,05).  Maka  dilihat  antar  fraksi dari  kedua  varietas  menunjukkan  hasil  yang beda  signifikansinya.  Dari  kedua  varietas tersebut  menunjukkan  antioksidan  yang paling baik terdapat pada varietas sheena , hal ini dapat dipengaruhi oleh adanya perbedaan warna  dari  keduanya.  Perbedaan  varietas menunjukkan  adanya  kandungan  senyawa yang  berbeda  juga.  Sehingga  perlu  dipelajari lebih  lanjut  terkait  senyawa  yang  dapat mempengaruhi  aktivitas  antioksidan  yang didasarkan  pada  pigmen  atau  warna  dari mahkota bunga krisan.

## KESIMPULAN
Aktivitas  senyawa  antioksidan  dari sampel bunga krisan varietas lamet dan sheena didapatkan hasil antioksidan dengan kategori  nilai  IC 50 >50  -  <200  ppm  sehingga termasuk  dalam  kapasitas  antioksidan  yang sangat  kuat  hingga  sangat  lemah.  Terdapat perbedaan  yang  signifikan  dari  aktivitas antioksidan  pada  nilai  IC 50 antar  varietas bunga  krisan  dan  juga  terdapat  perbedaan yang signifikan pada tiap fraksi dari masing- masing  varietas.  Aktivitas  antioksidan  yang paling  baik  terdapat  pada  varietas sheena . Sehingga dalam penelitian ini perlu dilakukannya  identifikasi  senyawa  lain  yang memiliki  peran  dalam  aktivitas  antioksidan selain senyawa fenolik dan flavonoid.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  Program  Studi  Farmasi  (S-1), Fakultas  Kesehatan  Universitas  Jenderal Achmad  Yani  Yogyakarta  yang  telah menyediakan sarana dan prasarana serta atas bantuan dan dukungannya dalam menyelesaikan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad, A. R., Sakinah, Wisdawati, & Asrifa, W.  O.  (2014).  Study  of  Antioxidant activity  and  determination  of  Phenol and Flavonoid content of Pepino’s Leaf extract  (Solanum  muricatum  Aiton). International Journal of PharmTech Research , 6 (2), 600–606.
Asriany,  I.  (2013). Kimia  Organik  Bahan  Alam . Alauddin University Press.
Baba,  S.  A.,  &  Malik,  S.  A.  (2015). Determination  of  Total  Phenolic  and Flavonoid  Content,  Antimicrobial  and Antioxidant  Activity  of  a  Root  Extract of  Arisaema  Jacquemontii  Blume. Journal of Taibah University for Science , 9 , 449–454.
https://doi.org/10.1016/j.jtusci.2014.11.0 01
Chang,  C.,  Yang,  M.,  Wen,  H.,  &  Chern,  J. (2002).  Estimation  of  Total  Flavonoid Content in Propolis by Two Complementary  Colorimetric  Methods. Journal of  Food  and Drug  Analysis , 10 (3),
178–182.
Chen,  Y.  H.,  Yan,  S.  L.,  Wu,  J.  Y.,  Hsieh,  C. W.,  Wang,  S.  H.,  &  Tsai,  M.  S.  (2021). Analyses of the compositions, antioxidant  capacities,  and  tyrosinase- inhibitory  activities  of  extracts  from two  new  varieties  of  chrysanthemum morifolium  ramat  using  four  solvents. Applied  Sciences  (Switzerland) , 11 (16),  1– 13. https://doi.org/10.3390/app11167631
Djuleng,  A.  (2021). Identifikasi  Senyawa  Total Fenolik  dan  Total  Flavonoid  Ekstrak  Larut Etanol.  Daun  Kupu-Kupu  (Bauhinia Purpurea)  dengan  Spektrofotometri  UV- Vis .
Gong,  J.,  Chu,  B.,  Gong,  L.,  Fang,  Z.,  Zhang, X., Qiu, S., Wang, J., Xiang, Y., Xiao, G., Yuan,  H.,  &  Zheng,  F.  (2019). Comparison  of  Phenolic  Compounds and  the  Antioxidant  Activities  of Fifteen  Chrysanthemum  morifolium Ramat  cv.  ‘Hangbaiju’  in  China.
Antioxidants , 8 , 325. https://doi.org/10.3390/ANTIOX808032
5.
Han, A. R., Kim, H. Y., So, Y., Nam, B., Lee, I.
S.,  Nam,  J.  W.,  Jo,  Y.  D.,  Kim,  S.  H., Kim,  J.  B.,  Kang,  S.  Y.,  &  Jin,  C.  H. (2017).  Quantification  of  Antioxidant Phenolic  Compounds  in  a  New Chrysanthemum  Cultivar  by  High- Performance  Liquid  Chromatography with  Diode  Array  Detection  and Electrospray Ionization Mass Spectrometry. International  Journal  of Analytical Chemistry . https://doi.org/10.1155/2017/1254721.
Han,  A.  R.,  Nam,  B.,  Kim,  B.  R.,  Lee,  K.  C.,
Song, B. S., Kim, S. H., Kim, J. B., & Jin,
Mahera & Firdausia
C. H. (2019). Phytochemical
composition  and  antioxidant  activities of  two  different  color  chrysanthemum flower  teas. Molecules , 24 (2),  1–14. https://doi.org/10.3390/molecules240203 29.
Hana, P. N., Nurchayati, Y., & Budihastuti, R.
(2020).  Efek  Naungan  dan  Umur
Tanaman  Terhadap  Pertumbuhan  dan Profil Metabolit Bunga Krisan (Chrysanthemum  sp.). Buletin  Anatomi Dan  Fisiologi  (Bulletin  Anatomy  and Physiology) , 5 (1), 8–17. https://doi.org/10.14710/BAF.5.1.2020.8- 17.
Hasanah,  M.,  Maharani,  B.,  &  Munarsih,  E.
(2017).  Daya  Antioksidan  Ekstrak  dan Fraksi  Daun  Kopi  Robusta  (Coffea Robusta) Terhadap Pereaksi DPPH (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil).
Indonesian
Journal  of  Pharmaceutical  Science  and
Technology , 4 (2), 42–50.
https://doi.org/10.15416/ijpst.v4i2.10456.
Hu,  J.,  Ma,  W.,  Li,  N.,  &  Wang,  K.  J.  (2017).
Antioxidant  and  Anti-inflammatory Flavonoids from The Flowers of Chuju, a  Medical  Cultivar  of  Chrysanthemum morifolim  ramat. Journal  of  the  Mexican
Chemical Society , 61 (4), 282–289. https://doi.org/10.29356/jmcs.v61i4.458.
Irianti, T., Purnomo, H., Kuswandi, Nuranto, S.,  Kanistri,  D.  N.,  Murti,  Y.  B.,  & Farida,  S.  (2019).  Uji  Penangkapan Radikal  2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil  oleh Ekstrak  Etanol  Bunga  Kecombrang (Nicolaia  speciosa  (Bl.)  Horan)  dan Buah  Talok  (Muntingia  calabura  L.). Jurnal  Tumbuhan  Obat  Indonesia , 12 (1),
41–53.
Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia.
(2017). Farmakope  Herbal  Indonesia (II).
Kementrian Kesehatan RI.
Maravirnadita,  A.  H.  (2019).  Uji  Aktivitas Antioksidan  Fraksi  n-Heksan,  Etil Asetat,  dan  Air  dari  Buah  Belimbing Manis  (Averrhoa  carambola)  dengan Metode DPPH. Skripsi , 1–14.
Nugroho,  A.  (2015).  Identifikasi  dan  HPLC Kuantifikasi  Senyawa  Flavonoid  pada Bunga Krisan
(Chrysanthemum boreale). Prosiding  Seminar  Nasional Forum  Komunikasi  Perguruan  Tinggi Pertanian Indonesia .
Purnama, L. R., Sulistiyani, & Falah, S. (2015). Kandungan  Total  Fenol,  Flavonoid,
Dan Aktivitas Antioksidan Lima Tanaman  Hutan  Yang  Berpotensi Sebagai Obat Alami. Scientific
Repository . Purwasari,  F.  (2021). Uji  Peredaman  Radikal Bebas DPPH (2,2 diphenyl-1-
pikrilhidrazil)  Ekstrak  Etanol  Daun  Kupu- Kupu (Bauhinia purpurea L.) .
Ramadhan,  H.,  Rezky,  D.  P.,  &  Susiani,  E.  F.
(2021).  Penetapan  Kandungan  Total Fenolik-Flavonoid  pada  Fraksi  Etil Asetat  Kulit  Batang Kasturi  (Mangifera casturi  Kosterman). Jurnal  Farmasi  Dan Ilmu  Kefarmasian  Indonesia , 8 (1),  58–67. https://doi.org/10.20473/JFIKI.V8I12021. 58-67Rondonuwu,  S.  D.  J.,  &  Suryanto, E.  (2017). Kandungan  Total  Fenolik  Dan Aktivitas  Antioksidan  Dari  Fraksi  Pelarut Sagu  Baruk  (Arenga  microcharpa  ) . 10 (1), 2–5.
Shin, K. H., Kang, S. S., Seo, E. A., & Shin, S. W. (1995). Isolation of aldose reductase inhibitors from the flowers of Chrysanthemum  boreale. Archives  of
Pharmacal Research , 18 (2), 65–68. https://doi.org/10.1007/BF02979135