## 1. Pendahuluan
Hepar  dan  ginjal  merupakan  organ penting bagi manusia. Hepar berperan dalam proses  metabolisme  dan  pengeluaran  hasil produksi  dari  makanan.  Sel  hepar  menjadi lebih  rentan  terhadap  kerusakan  dan penyakit karena mendapat suplai darah yang kaya  makanan,  tidak  mengandung  oksigen dan  kadang-kadang  toksik  melalui vena portae  hepatis (Wibowo  dan  Paryana,
2009).  Pada  keadaan  terjadinya  kerusakan jaringan  hepar  ditandai  dengan  terjadinya kenaikan aktivitas pada enzim transaminase (alanin  transaminase/ALT  dan  aspartat transaminase/AST)  (Speicher  dan  Smith, 1996)
G i n j a l   b e r p e r a n   m e n j a g a keseimbangan  cairan,  elektrolit  dan mengatur  tekanan  darah  (Junqueira, Carneiro, dan Kelley, 2007). Sebagian besar produk  sisa  buangan  yang  dikeluarkan melalui  urin  diantaranya    kreatinin. Peningkatan  kadar  kreatinin  dalam  darah merupakan  indikasi  rusaknya  fungsi  ginjal (Sacher dan McPherson, 2004).
Arukwe, et  al. (2012)  melaporkan daun,  buah  dan  biji  dari  alpukat ( Persea americana Mill.  atau P.  americana ) mengadung  beberapa  komponen  fitokimia, saponin,  tannin,  flavonoids,  glikosida sianogenik,  alkaloid,  fenol,  dan  steroid. Kandungan  saponin  pada  biji P.americana merupakan  kandungan  tertinggi  dan diketahui juga bahwa kandungan fenol dan flavonoid  cukup  tinggi.  Flavonoid merupakan antioksidan larut air yang sangat kuat  sehingga  flavonoid  dapat  mencegah kerusakan oksidatif sel, mempunyai aktifitas perlindungan  dan  anti  kanker  yang  kuat melawan tahap-tahap dalam karsinogenesis (Salah, Miller, Pangauga, Bolwell, Rice, dan Evans,  1995).  Fenol  memiliki  kemampuan sebagai  antiinflamasi,  antikoagulan, antioksidan,  serta  peningkat  sistem  imun (Arukwe et  al., 2012).  Malangngi,  Meiske dan  Jessy  (2012)  melaporkan  adanya aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  dari ekstrak  air  biji  alpukat  biasa  kering dibandingkan  biji  alpukat  mentega  kering,
JURNAL FARMASI SAINS DAN KOMUNITAS, Mei 2014, hlm. 38-42
ISSN : 1693-5683
PENGARUH WAKTU PROTEKSI INFUSA BIJI Persea americana Mill. TERHADAP HEPAR DAN GINJAL TIKUS TERINDUKSI KARBONTETRAKLORIDA
LYDIA SETIAWAN, INNEKE DEVI PERMATASARI, PHEBE HENDRA
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta Email korespondensi: phebe_hendra@usd.ac.id
Abstract: The aim of this research is to investigate the protective activity of the infusion of seed of Persea  americana  Mill.  (IBPA)  against  carbon  tetrachloride-induced  hepatotoxicity  and nephrotoxicity  in  rats.  Healthy  rats  were  weighed  and  randomly  divided  into  6  groups  of  5 animals in each. Group 1 were treated with olive oil (2ml/kg, i.p) as negative control. Group 2 received carbon tetrachloride (2 ml/kg, i.p.). Group 3 received IBPA 360.7 mg/kg once daily for 6 hours (control of dose IBPA).  Group 4-6 received IBPA at doses 360.7 mg/kg orally once for 1, 4 and 6 hours respectively received treated carbon tetrachloride. Blood sample from all groups was  obtained  by  sinus  orbitalis  for  the  estimation  serum  transaminase  and  creatinine.  The pretreatment 1,4 and 6 hours of infusion of seed of Persea americana Mill. has a potent protective activity upon carbon tetrachloride-induced hepatic and nephron damage in rats.
Keywords : Persea americana Mill., infusion, protective, carbon tetrachloride
biji  alpukat  biasa  segar  dan  biji  alpukat mentega segar.
K a r b o n   t e t r a k l o r i d a   ( C C l 4 ) merupakan  salah  satu  senyawa  model hepatotoksin   dan nefrotoksin yang banyak digunakan.  Karbon  tetraklorida  akan menghasilkan  radikal  bebas  triklorometil dengan katalis enzim sitokrom P-450 yang dapat menimbulkan peroksidasi lipid. Hasil ini dapat menyebabkan kerusakan sel berupa perlemakan hepar ( steatosis ) dan kerusakan pada tubulus proksimal ginjal (Gregus and Klaaseen, 2001; Timbrell, 2008). Oleh sebab itu,  pada  penelitian  ini  dilihat  pengaruh waktu  proteksi  pemberian  infusa  biji P. americana (IBPA) terhadap hepar dan ginjal tikus  jantan  yang  terinduksi  karbon tetraklorida.

## 2. Metode
2.1. Penyiapan infusa biji alpukat
B a h a n   y a n g   d i g u n a k a n   d a l a m penelitian  ini  adalah  biji  alpukat  yang diperoleh  dari  Padang,  Sumatera  Barat. Sebanyak 8,0 g serbuk kering ditimbang dan ditambahkan  16,0  mL  pelarut  akuades, selanjutnya  ditambahkan  lagi  100  mL,
0 selanjutnya  dipanaskan  pada  suhu  90 C selama 10 menit. Campuran disaring dengan menggunakan kain flanel, dan ditambahkan air panas secukupnya melalui ampas hingga 100 mL.
2.2. Hewan coba
Hewan uji yang digunakan yaitu tikus jantan  galur Wistar dengan  berat  badan antara 150-250 g, umur 2-3 bulan dan dalam keadaan sehat. Penelitian ini telah mendapat persetujuan  dari The  Medical  and  Health Research Ethics Committee (MHREC) Fac. of Medicine Gadjah Mada University . 2.3. Penginduksian karbon tetraklorida Karbon  tetraklorida  dilarutkan  dalam olive  oil dengan  perbandingan  1:1. Pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg secara  intra  peritoneal  dilakukan  setelah pemberian senyawa uji.
2.4. Pengelompokan hewan uji Sebanyak 30 ekor tikus dibagi secara acak  ke  dalam  6  kelompok  perlakuan.
Kelompok I (kontrol negatif) diberi olive oil dosis  2  ml/kg  secara  intraperitonial  (i.p). Kelompok  II  (kontrol  hepatotoksin)  diberi larutan karbon tetraklorida 2 ml/kg secara i.p. (Janakat dan Al-Merie, 2002; Panjaitan dkk., 2007).  Kelompok  III  (kontrol  IBPA)  diberi IBPA  360,7  mg/kgBB  selama  6  jam. Kelompok IV-VI berturut-turut diberi IBPA secara oral 360,7 mg/kg selama 1,4 dan 6 jam berturut-turut  kemudian  diberikan  karbon tetraklorida (2 ml/kg secara i.p.).
2.5. Pemeriksaan ALT, AST dan kreatinin Pengambilan  darah  tikus  dilakukan setelah 24 jam pemberian karbon tetraklorida melalui sinus  orbitalis mata,  lalu  diukur aktivitas  transaminase  (ALT  dan  AST), selanjutnya pada jam-48 diambil darah untuk pengukuran  kadar  kreatinin.  Data  aktivitas ALT,  AST  dan  kreatinin  dianalisis  dengan analisis  pola  searah  ( One Way  ANOVA ) dengan  taraf  kepercayaan  95%  dan dilanjutkan dengan uji Scheffe .

## 3. Hasil dan Pembahansan
Aktivitas  enzim  transaminase  dan kadar kreatinin pada perlakuan infusa biji P. americana (IBPA)  serta  kelompok  kontrol negatif olive oil , kontrol IBPA dan kelompok hepatotoksin karbon tetraklorida tersaji pada Tabel 1. Pada kelompok hepatotoksin karbon tetraklorida  terjadi  peningkatan aktivitas ALT yang signifikan (183,2 ± 5,1 U/L) atau hampir 3 kali lipat dibanding kontrol negatif olive oil (47,6 ± 1,9 U/L). Aktivitas AST juga mengalami  peningkatan  5  kali  lipat dibanding  kontrol olive  oil (476,8  ±  14,2 U/L). Hal ini berarti telah terjadi kerusakan pada  hepar  tikus  akibat  pemberian  karbon tetraklorida 2 ml/kg. Adapun pada pemberian k a r b o n   t e t r a k l o r i d a   1   m l / k g B B menunjukkan adanya kerusakan hari berupa perlemakan  hati.  (Panjaitan,  Handharyani, Chairul,  Masriani,  Zakiah,  Manalu,  2007; Yamamoto, Kikkawa, Yamada, Horri, 2006). Panjaitan,  Handharyani,  Chairul,  Masriani, Zakiah,  Manalu  (2007)  melaporkan  pada pemberian  karbon  tetraklorida  1  ml/kgBB telah mengakibatnya terjadinya perlemakan hati.  Hal  yang  sama  juga  dilaporkan  oleh Yamamoto, Kikkawa, Yamada, Horri (2006)
SETIAWAN, PERMATASARI, HENDRA
pada  pemberian  karbon  tetraklorida  1 ml/kgBB  memberikan  gambaran  histologis b e r u p a   p e r u b a h a n   i n f l a m a s i   s e r t a penumpukan  lemak.  Kenaikan  kadar kreatinin  akibat  pemberian  karbon t e t r a k l o r i d a   ( 1 , 0 0   ±   0 , 0 6   m g / d L ) m e m b e r i k a n   p e r b e d a a n   b e r m a k n a dibandingkan kontrol olive oil (0,52 ± 0,02 mg/dL).  Bashandy  dan  AlWasel  (2011) melaporkan  pemberian  karbon  tetraklorida akut  1  ml/kgBB  menimbulkan  efek  toksik pada  ginjal  berupa  peningkatn  kadar kreatinin tikus.
Kelompok  perlakuan  infusa  biji P. americana 360 mg/kgBB dengan tiga variasi waktu pemberian memberikan penurunan aktivitas  ALT  yang  bermakna  terhadap kontrol  hepatotoksin.  Hal  ini  berarti pemberian  infusa  biji P.  americana dengan waktu  1,  4  dan  6  jam  mempunyai  aktivitas penurunan  ALT  akibat  induksi  karbon tetraklorida.  Diantara  ketiga  waktu pemberian tersebut, waktu pemberian 4 dan 6
jam  yang  memberikan  penurunan  aktivitas ALT  hingga  keadaan  normal,  terlihat  dari aktivitas ALT yang berbeda tidak bermakna terhadap  kontrol olive  oil . Penurunan aktivitas AST pada ketiga variasi waktu dari perlakuan  infusa  biji P.  americana menunjukkan  perbedaan  yang  bermakna dibandingkan  kontrol  karbon  tetraklorida. Namun  penurunan AST  yang  terjadi  belum dapat mencapai keadaan normal, terlihar dari perbedaan  yang  bermakna  pada  ketiga variasi  waktu  dengan  kontrol olive  oil . Berdasarkan  hal  tersebut  menunjukkan pemberian 1, 4 dan 6 jam dari infusa biji P. americana telah  mampu  memberikan  efek proteksi pada hepar tikus terinduksi karbon tetraklorida.
Pemberian  infusa  biji P.  americana waktu  1  jam  memberikan  penurunan  kadar kreatinin  yang  bermakna  dibandingkan kontrol karbon tetraklorida. Pada pemberian waktu 4 dan 6 jam menunjukkan penurunan yang  tidak  bermakna  dibandingkan  kontrol

## SETIAWAN, PERMATASARI, HENDRA
40
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas
Tabel 1. Pengaruh Waktu Pemberian Infusa Biji P. americana t erhadap Aktivitas Transaminase Serum Dan Kadar Kreatinin Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida (n=5)
karbon  tetraklorida,  Hal  ini  berarti  hanya pemberian 1 jam dari infusa biji P. americana yang  mampu  memberikan  efek  proteksi terhadap ginjal tikus yang terinduksi karbon tetraklorida.
Hasil  metabolism  dari  karbon tetraklorida  oleh  enzim  sitokrom  P-450  di hepar berupa metabolit reaktif triklorometil dapat  merangsang  terjadinya  peningkatan hidroperoksida  dan  malondialdehid.  Lebih lanjut hal ini dapat menurunkan glutation di dalam  jaringan  hepar  secara  signifikan (Bashandy  dan  Al  Wasel,  2011).  Keadaan tersebut  akan  berlanjut  dengan  terjadi perubahan drastis di hepar seperti perubahan lemak, degenerasi melemak (Nirmala, et al ., 2012)  serta  infiltrasi  sel  inflamasi,  yang berdampak  terjadinya  steatosis  dan pelepasan enzim transaminase (Zimmerman, 1999;  Timbrel,  2008).  Adapun  mekanisme nefrotoksik  pada  bagian  tubulus  proksimal melalui  pembentukan  stres  oksidatif  dari hasil  metabolisme  karbon  tetraklorida, radikal  bebas  triklorometil  (CCl ) , 3 t r i k l o r o m e t i l p e r o k s i   ( O O C C l )   d a n 3 kloroform  (CHCl ).  Stress  oksidatif  dapat 3 memicu  pembentukan  mediator  vasoaktif yang  dapat  mempengaruhi  fungsi  ginjal s e c a r a   l a n g s u n g   m e l a l u i   i n i s i a s i vasokonstriksi  ginjal  atau  penurunan koefisien ultrafiltrasi kapiler glomerulus dan dengan  demikian  mengurangi  laju  filtrasi glomerulus (Garcia , et al . , 2000) .
Nwaoguikpe  dan  Braide  (2011) melaporkan kandungan fitokimia ekstrak air biji P. americana Mill. seperti tanin, saponin, flavonoid, alkaloid, dan glikosida sianogen. Adanya  kandungan  di  atas,  terutama  tanin dan flavonoid merupakan senyawa polifenol yang  bersifat  antioksidan.  Senyawa antioksidan  tersebut  memiliki  mekanisme kerja mendonorkan satu elektronnya kepada radikal  bebas  derivat  karbon  tetraklorida sehingga  proses  oksidasi  dari  radikal  bebas tersebut  dapat  dihambat.  Dengan  demikian kemungkinan mekanisme ketoksikan karbon tetraklorida  di  hepar  dan  ginjal  dapat dihambat sehingga terjadi penurunan enzim
transaminase  dan  kadar  kreatinin  tikus. Penelitian  lanjutan  diperlukan  untuk mengetahui mekanisme hepatoprotektif dan nefroprotektif dari infusa P. americana serta senyawa yang bertanggung jawab.

## 4. Kesimpulan
Pemberian  infusa  biji P.  americana 360,7  mg/kg  dengan  waktu  1,  4  dan  6  jam mampu  memberikan  efek  proteksi  pada hepar  dan  ginjal  tikus  terinduksi  karbon tetraklorida 2 ml/kg.

## Daftar Pustaka
Arukwe,  U., Amadi,  B.A.,  Duru,  M.K.C., Agomuo,
E.N., Adindu, E. A., Odika, P.C., et al, 2012, Chemical  Composition  of Persea  americana leaf, fruit and seed, IJJRAS , 11, 346-348
Bashandy,  S.A.  dan  AlWasel,  S.H.,  2011,  Carbon tetrachloride-induced  hepatotoxicit  and nephrotoxicity  in  rats:  protective  role  of vitamin  C, Journal  of  Pharmacology  and Toxicology , 6(3), 283-292.
Garcia , E.C.,  Marin,  J.,  Diez , L . D.,  Baena,  A . B . , Salaices,  M.,  dan  Rodriguez,  M.A.,  2000, O x i d a t i v e   s t r e s s   i n d u c e d   b y   t e r t - butylhydroperoxide  causes  vasoconstriction in the aorta from hypertensive and aged rats: role  of  cyclooxygenase-2  isoform, J Pharmacol Exp Ther , 293(1), 75-81.
Gregus  and  Klaaseen,  C.D.,  2001,  Mechanism  of Toxicity,  in  Klaaseen,  C.D., Cassarett  and Doull's  Toxicology:  The  Basic  Science
th Poisons, 6  Edition, Mc Graw-Hill, New York, pp 57-64.
Janakat, S., Al-Merie, H., 2002, Optimization of the d o s e   a n d   r o u t e   o f   i n j e c t i o n ,   a n d characterisation  of  the  time  course  of  carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in the rat, Journal of Pharmacological and Toxicological Methods , 48: 41– 44.
Junqueira,  L.C.,  Carneiro,  J.,  Kelly,  I.,  2007, Basic Histology, 11th  Ed.,  McGraw-Hill  Co.,
Medical Publishing Division, NY, Chicago.
Malangngi,  L.,  Meiske,  S.,  and  Jessy,  J.,  2012,
Penentuan Kandungan Tanin dan Uji Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Biji  Buah  Alpukat ( Persea  americana Mill), Jurnal  MIPA UNSRAT , 1 (1) 5-10.
SETIAWAN, PERMATASARI, HENDRA
Nirmala,  M.,  Girija,  K.,  Lakshman,  K.,  Divya,  T.,
2012,  Hepatoprotective  activity  of Musa paradisiacal on experimental animal models,
Asian Pasific Journal of Tropical Biomedicine , 11-15 Nwaoguikpe , R. D. dan Braide , W ., 2011, The effect of aqueous seed extract of persea Americana (avocado pear) on serum lipid and cholesterol levels in rabbits, African Journal of Pharmacy and Pharmacology Research , 1(2),23 - 29.
Sacher , R.A. dan McPherson, R. A., 2004, Tinjauan Klinis  Hasil  Pemeriksaan  Laboratorium ,
EGC, Jakarta, hal. 291 - 293.
Salah,  W.,  Miller,  N.J.,Pangauga,  T.,  Bolwell,G.P.,
Rice, E., and Evans, C., 1995,   Polyphenolic flavonols  as  scavengers  of  aqueous  phase radicals  as  chainbreaking  antioxidant, Arch.
Biochem. Biorh , pp. 2, 339-346.
Speicher, C.E. dan Smith, J.W., 1996, Pemilihan Uji Laboratorium  yang  Efektif ,  Penerbit  Buku
Kedokteran EGC, Jakarta
Panjaitan  RGP,  Handharyani  E,  Chairul,  Masriani,
Zakiah  Z,  Manalu  W.,  2007,  Pengaruh Pemberian  Karbon  Tetraklorida  terhadap Fungsi  Hepar  dan  Ginjal  Tikus, Makara Kesehatan ; 11 (1): 11-16.
Timbrel,  J.  A.  2008, Principles  of  Biochemical Toxicology ,  4th  Edition,  Informa  Healthcare,
New York, pp 308-311.
Wibowo, D.J., dan Paryana, W., 2009, Anatomi Tubuh Manusia , Graha Ilmu, Bandung, pp. 347-352.
Yamamoto, T.,   Kikkawa, R., Yamada, H., Horri, I.,
2006, Investigation of proteomic biomarkers in invivo  hepatotoxicity  study  of  rat  livers: toxicity differentiation in hepatotoxicants, The Journal of Toxicological Sciences , 31 (1), 49- 60.
nd Zimmerman,  H.J.,  1999, Hepatotoxicity 2   edition,
Lippincott Williams and Wilkins, Philadephia, p. 195-210.

## SETIAWAN, PERMATASARI, HENDRA