Potensi Hot Water Extract Rumput Laut Caulerpa sp. dan Sargassum Sebagai Komponen Immunonutrisi Pada Budidaya Udang Vannamei ( Litopenaeus vanamei )

## Subagiyo* dan Dyah Ismi Fatichah
Jurusan Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro. Jl. Prof. Soedarto, SH. Kampus UNDIP Tembalang, Semarang 50275 Email :subagiyo_kelautan@yahoo.co.id

## Abstrak
Immunonutisi  adalah  nutrient  spesifik  yang  mampu  memodulasi  aktivitas  sistem immun.  Ada tiga target untuk immunonutrisi  diantaranya adalah sistem  pertahanan seluler. Pada  udang  sistem  pertahanan  seluler  bertumpu  pada  aktivitas  fagositosis  hemosit.  Pada penelitian  ini  dikaji  potensi hot  water  extract rumput  laut Caulerpa sp  dan Sargassum sp sebagai  immunonutrisi  pada  budidaya  udang  vanamei  berdasarkan  jumlah  total  dan aktivitas  fagositosis  hemosit  udang  vanamei.  Percobaan  telah  dilakukan  dengan  cara memberi  makan  udang  dengan  pakan  udang  yang  diperkaya  dengan hot  water  extract rumput laut Caulerpa sp dan Sargassum sp. Ekstrak rumput laut diberikan pada konsentrasi 1 %  (10  g/kg  pakan).  Udang  diberi  pakan  sebanyak  5  %  berat  badan  sehari  yang  diberikan dalam 3 kali pemberian pakan (pagi  siang dan malam). Darah udang (hemolimfe) diambil setiap  4  hari  sekai  selama  2  minggu.  Setiap  kali  pengambilan  darah  dilanjutkan  dengan penghitungan  jumlah  total  hemosit  dan  pengukuran  aktivitas  fagositosis  hemosit.  Data sekunder  mengenai  kandungan  nutrisi  dan  komponen  fungsional  ekstrak Caulerpa dan Sargassum digunakan  untuk  mendukung  hasil  percobaan  potensi  rumput  laut  sebagai sumber  immunonutrisi.  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa hot  water  extract rumput  laut mempunyai  potensi  untuk  dikembangkan  sebagai  sumber  immunonutrisi  untuk  budidaya udang. Hal ini ditunjukan oleh percobaan pemberian pakan udang yang diperkaya dengan ekstrak Caulerpa sp  dan Sargassum sp  mampu  meningkatkan  jumlah  total  dan  aktivitas fagositosis  hemosit  udang  vanamei.  Data  sekunder  menunjukan  bahwa  Caulerpa  dan Sargassum kaya akan sulphated polysaccharide, asam amino esensial, mineral dan vitamin yang semuanya berperan dalam menstimulasi sistem immunitas.
Kata kunci : immunonutrisi, ekstrak rumput laut, sistem pertahanan seluler, udang vanamei

## PENDAHULUAN
Serangan penyakit merupakan masalah  utama  yang  dihadapi  oleh  para pembudidaya  perikanan.  Salah  satu komponen  pada    konsep  terjadinya penyakit  ,  triangle  diseases,  adalah  faktor hewan  budidaya.  Kharakteristik  hewan budidaya  yang  penting  dalam  terjadinya penyakit  adalah  status  daya  tahan terhadap  penyakit.  yang  dapat  di pengaruhi oleh jenis nutrisi yang dikonsumsinya.  Potensi  untuk  memodulasi aktivitas  sistem  immun  melalui  intervensi nutrien spesifik disebut sebagai immunonutrisi.    Konsep  ini  diterapkan pada  situsai  pengubahan  suplai  nutrien
untuk  memodifikasi  respon  immun  atau inflamatosri.    Ada  tiga  target  potensial immunonutrisi yaitu : fungsi barier mukosal, pertahanan seluler  dan inflmasi  lokal atau sistemik.   Nutrient yang paling sering dikaji untuk  immunonutrisi  adalah arginine, glutamine,  asam  amino  bercabang,    n-3 fatty  acids,  dan    nucleotides  (Calder, 2003). ω-3 PUFAs, minerals (seperti  Zn dan Se) serta bermacam-cama senyawa yang bersifat    antioksidatif  (Wichers,  2009). Selama ini immunonutrisi diterapkan pada bidang  klinis  yaitu  pada  pasien  yang mengalami  sakit  yang  kritis  atau  pasien bedah dengan tujuan to fortify hampered immune  function  Application  routes  can be either parenteral or enteral; the optimal
route may depend on patient and disease characteristics. (Wichers, 2009).
Rumput laut merupakan
sumberdaya  laut  yang  potensial  sebagai sumber fitokimia yang mempunyai aktifitas  biologi  yang  bermanfaat  bagi kesehatan,
seperti
carotenoids,
phycobilins,  fatty  acids,  polysaccharides, vitamins, sterols, tocopherol dan phycocyanins  dan  juga  peptida  bioaktif dengan fungsi
biologis
seperti antihypertension, immunomodulatory, antithrombotic,  antioxidant,  anticancer dan  antimicrobial  activities.  Sampai  saat ini sejumlah oligosakarida dengan aktivitas immunostimulant, antioksidan dan antitumor telah dikarakterisasi.
Salah satu karakteristik nutritif rumput laut  adalah  kandungan  antioksidan  yang tinggi  (Lordan et  al ,  2011)  Lebih  jauh potensi  rumput  laut  sebagai  sumber bahan aktif telah direview oleh  Lee (2008) dan  Lordan et  al (2011).  Pada  kajian potensi  rumput  laut  sebagai  sumber immunonutrisi  pada  budidaya  perikanan dilakukan  berdasarkan  hasil  penelitian menggunakan  rumput  laut Sargassum sp dan Caulerpa sp  serta  berdasarkan  hasil- hasil  penelitian  yang  serupa  yang  telah dipublikasikan di jurnal ilmiah.

## MATERI DAN METODE
Penelitian ini telah dilakukan di Balai Budidaya  Air  Payau  Situbondo  dengan metode  eksperimental.  Rumput  laut Caulerpa sp      diperoleh  dari  perairan pantai Teluk Awur, Jepara dan Sargassum sp diperoleh dari perairan Pantai Rembang.  Sedangkan  udang  Vanamei diperoleh dari tambak komersial di daerah Situbondo, Jawa Timur.

## Ekstraksi rumput laut
Rumput  laut  diekstraksi    dengan teknik hot water extraction . Sebanyak 3 kg rumput  laut  dimasukan  ke  dalam  2  liter pelarut  (akuades)  kemudian  dipanaskan hingga  mendidih.  Filtrasi  dilakukan  untuk memisahkan  ampas  (padatan  yang
tersisa).  Filtrat  yang  diperoleh  selanjutnya dilakukan evaporasi pelarut menggunakan  rotavapor.  Ekstrak  yang diperoleh dalam bentuk pasta selanjutnya di  kering  bekukan  dan  dihancurkan hingga menjadi serbuk.

## Suplementasi  Ekstrak  Rumput  Laut  pada Pakan Udang
Ekstrak Caulerpa  sp. dan Sargassum sp. ditambahkan kedalam pakan buatan komersial udang (produksi Bintang)
dengan dosis 1% (w/w). Prosedur suplementasi  dilakukan  sesuai  dengan prosedur  yang  dikerjakan  di  laboratorium pakan buatan BBAP Situbondo.

## Eksperimen
Percobaan untuk mengetahui potensi  rumput  laut  sebagai  sebagai imunonutrisi  dilakukan    dalam  3  tahap kegiatan yaitu aklimasi udang, percobaan pemberian pakan yang telah disuplementasi  dengan  ekstrak  rumput laut,    dan  pengukuran  parameter immunologi berdasarkan gambaran hematologi  (jumlah  total  hemosit  dan aktivitas fagsitosis).

## Aklimatisasi udang
Udang    vannamei  dengan  berat  + 10  gram  dipelihara  dalam  bak  semen besar  yang  dilengkapi  sistem  aerasi  dan sirkulasi  air.  Aklimatisasi  dilakukan  selama 15  hari.  Selama  proses  aklimatisasi dilakukan
pemberian pakan menggunakan pelet komersial .

## Percobaan
Udang  yang  telah  diaklimatisasi selanjutnya  dibagi  secara  random  ke dalam  akuarium    percobaan  (ukuran 60x30x 40cm ) dengan kepadatan 14 ekor per  akuarium.  Akuarium  di  set  dengan aerasi  (menggunakan  1  batu  aerasi)  dan sistem flow  through dengan  teknik  pipa goyang  (hasil  rekayasa  BBAP-Situbondo). Selama  percobaan  udang  diberi  pakan dengan pakan yang telah disuplementasi dengan  ekstrak  rumput  laut.  Pakan diberikan  sebanyak  5  %  berat  badan udang dalam 3 kali pemberian yaitu pagi, siang dan malam.

## Analisis sistem pertahanan (immun) udang
1. Pengambilan hemolimfe Hemolimfe  udang  sebanyak  0,3  ml diambil  menggunakan  spuit  1  mL yang telah dibasahi dengan antikoagulan (EDTA 10%). Pengambilan  hemolimfe  dilakukan pada bagian thorax antara kaki jalan dan  kaki  renang.  Selanjutnya  sampel hemolimfe ditampung dalam mikrotube  yang  bagian  dalamnya telah dibasahi larutan antikoagulan.
2. Penghitungan Total Haemosit Penghitungan  total  hemosit  dilakukan menggunakan Neubauer  Counting Chamber dan    mikroskop  dengan perbesaran 400X. Jumlah total hematosit  dapat  diketahui  dengan rumus:
4 ( 4) 10 total hemosit sel yang dihitung x x
3. Penghitungan Aktivitas Fagositosis Hemolimfe  sebanyak  100  µl  dari mikrotube     dicampur    dengan   100 µl  bakteri Vibrio  alginolyticus yang telah dimatikan
dengan formalinkemudian  diinkubasi  selama 20  menit.  Sampel  sebanyak  5  µl diteteskan  di  atas  objek  glass  dan dibuat  preparat  apusan  selanjutnya difiksasi  dengan  ethanol  95  %,  dan dilakukan
pewarnaan dengan
Safranin  0.15  %.    Pengamatan dilakukan terhadap 100 sel menggunakan    mikroskop  cahaya pada  perbesaran  400X.    Selanjutnya dihitung  jumlah  sel  dengan  aktifitas fagositosis  dan  sel  yang  tidak beraktifitas  fagositosis,  dihitung  pula jumlah  sel V.  alginolyticus yang difagositosis  tiap  sel.    Aktifitas Fagositosis  (AF)    dihitung  dengan rumus:
(%) ( / ) 100% fagosit yangaktif AF x fagosit yangdiamati . lg V a inoyangdifagosit
IP sel fagosit yangdiamati

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Respon immunologis udang vanamei  (jumlah  total  hemosit  dan aktivitas  fagositosis)  terhadap  aplikasi ekstrak rumput laut ditunjukan Tabel 1.
Berdasarkan hasil penelitian (Tabel 1) menunjukan  bahwa  pemberian  ekstrak rumput laut berpengaruh terhadap parameter  hematologi  udang  vanamei. Perlakuan pemberian ekstrak Caulerpa sp menyebabkan  peningkatan  jumlah  total hemosit.  Pada  kondisi  penelitian  ini  terjadi peningkatan  jumlah  total  hemosit  pada pengamatan  minggu  ke  2  aplikasi, sedangkan  pada  perlakuan  pemberian ekstrak Sargassum sp  terjadi  pada pengamatan  minggu  ke  3.  Pemberian ekstrak Caulerpa sp  dam Sargassum sp juga meningkatan  aktivitas fagositosis.
Pada kondisi penelitian ini peningkatan  terjadi  pada    pengamatan minggu  I.  Jumlah  total  hemosit  dan aktivitas  fagositosis merupakan dua diantara  parameter  hematologi  yang merupakan  indikator  sistem  pertahanan tubuh  seluler.  Beberapa  penelitian  lain juga  menunjukan  hasil  yang  serupa bahwa  aplikasi  rumput  laut  baik  dalam bentuk tepung, ekstrak, maupun senyawa tertentu  yang  merupakan  komponen utama rumput laut menyebabkan peningkatan  parameter  immun  ikan  dan udang  (Tabel  2).    Hal  ini  menunjukan bahwa hot  water  extract rumput  laut Sargassum dan Caulerpa mengandung senyawa nutritif yang meningkatkan status immun  udang  yang  ditunjukan  baik  oleh peningkatan jumlah total hemosit maupun aktivitas fagositosis hemosit udang.
Menurut  Wicher  (2007)  diet  dan nutrisi  dapat  mempengaruhi  berfungsinya bermacam-macam  parameter  immun. Komponen  immunonutrisi  diantaranya meliputi  asam  amino  spesifik  (biasanya glutamin dan arginin), nukleotida, PUFA ω- 3,  mineral  (seperti  Zn  dan  Se)  serta bermacam-macam  senyawa  antioksidan. Penelitian  yang  lain  terkait  dengan penggunaan rumput laut untuk meningkatkan  status  immun  udang  juga ditunjukan oleh banyak peneliti (Tabel 1)

## Tabel 1. Hasil penghitungan parameter hematologi udang vannamei
Parameter Hematologi Perlakuan Kontrol Caulerpa sp. Sargassum sp. Hari ke4 Hari ke8 Hari ke12 Hari ke4 Hari ke8 Hari ke12 Hari ke4 Hari ke8 Hari ke12 Total Haemosit (sel/l) (x 10 7 ) 2,43 ± 1,21 0,568 ± 0,28 1,62 ± 1,28 0,63 ± 0,37 4,69 ± 4,69 1,18 ± 1,18 0,57 ± 0,05 1,298 ± 1,3 4,63 ± 3,92 Fagositosis PI 5,39 ± 2,81 2,55 ± 1,53 5,51 ± 0,61 1,4 ± 0,19 6,09 ± 2,03 5,75 ± 0,18 1,63 ± 0,40 5,15 ± 0,35 7,49 ± 0,68 PA (%) 22,31 ± 10,9 44,80 ± 33,83 19,86 ± 2,38 73,95 ± 8,05 20,82 ± 10,5 20,03 ± 0,66 64,33 ± 16,16 23,27 ± 3,15 13,57 ± 1,12
Keterangan: - nilai adalah rata – rata ± standar deviasi (n=3).
Respon  immunologis  merupakan suatu  proses  yang  kompleks  yang merupakan  interaksi  dari  berbagai  proses fisiologi  yang lain. Menurut Satyaraj  (2011) Nutrisi dan sistem immun berinteraksi pada berbagai tingkatan, yang secara sederhana  dapat  dibedakan  menjadi  4 tingkatan.  Tingkat  I  dan  II  merupakan interaksi  yang  bersifat  pasif  sedangkan tingkat III dan IV merupakan interaksi yang terjadi  melalui  modifikasi  respon  immun menggunakan  agensia  seperti  IRMs  yang memiliki  target  utama  reseptor  PAMP. Pada  tingkat  I  berfokus  pada  energi makanan,  protein,  vitamin  (A,C  dan  E) dan  mineral  seperti  Zn,  Mg,  Fe,  dan  lain- lain.Mineral  Ca  dan  Mg  berperan  pada mekanisme signaling pada  sistem  immun sehingga  penting  untuk  meningkatkan respon immun.
Pada tingkat
II
meliputi pengoptimalan  nutrien  kunci  (baik  makro maupun  mikronutrien  yang  penting  bagi sel-sel
immun. Sistem
immun membutuhkan nutrien tertentu dan penyediaan  dalam  jumlah  yang  lebih besar akan mengoptimalkan fungsi immun. Defisiensi nutrien kunci ini berakibat  negatif  pada  sistem  immun. Protein pada level dan kualitas yang lebih tinggi  dalam  diet  diperlukan  untuk  sistem immun.  Pada  tingkat  molekular  protein merupakan  komponen  struktural  dan memediasi  proses  kunci  sistem  immun.
Reseptor,  Ig,  komponen  komplemen  dan protein  bakterisidal    semuanya  adalah protein.  Pada  tingkat  III  adalah  modulasi aktif  sistem  immun.  Pada  tingkat  ini menekankan  pada  interaksi  dengan sistem imun untuk memodulasi fungsinya.Pada  tingkat  IV  adalah  nutrisi personal.  Interaksi  antara  diet,  lingkungan dan genom menentukan status kesehatan dan  mempengaruhi  penyakit  kronis. Beberapa  hasil  penelitian  yang  merujuk pada  Sargassum  dan  Caulerpa  sebagai sumber nutrisi
yang
mampu membangkitkan  system  imun  ditunjukan oleh  penelitian Handayani, et  al. (2004) mengenai  komposisi  nutrisi  rumput  laut S. crassifolium ,  Ratana-arporn  &  Chirapar (2006)  mengenai  komposisi  nutrisi  rumput laut C.  Lentillifera, Abou-El-Wafa, et  al .
(2011)mengenai  profil  asam  amino S. subrepandum dan  Valerie et  al., 1999 dalam    Ratana-arporn  &  Chirapar  (2006) mengenai profil asam amino C. Lentillifera, Costa, et  al, 2011,  mengenai  aktivitas antioksidan ekstrak S.crassifolia dan Rodrigues et  al. (2013)  mengenai  aktivitas antioksidan ekstrak C. taxifolia

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dan kajian  pustaka  (hasil  penelitian  serupa) menunjukan  bahwa  rumput  laut  sangat potensial untuk  dikembangkan sebagai
Tabel 2 . Hasil-hasil penelitian efek pemberian rumput laut   terhadap sistem pertahanan non spesifik udang
Jenis komponen rumput laut Efek pada sistem pertahanan Referensi Asam alginat Pada ikan karper  ( Cyprinus carpio L.), sodium alginate meningkatkan  aktivitas fagositosis
Fujiki and Yano, (1997)
cit Ahmadifar, et al, (2009)
Asam alginat
Pada Snakehead ( Channa striata )  injeksi asam alginat  meningkatkan  jumlah  neutrofil,  tingkat fagositosis, dan respiratory burst activity
Peddie et al, (2002) cit. Ahmadifar, et al,
(2009)
crude fucoidan (CF) Sargassum polycystum
Menurunkan    dampak  infeksi    White  Spot Syndrome  virus  (WSSV)  pada Penaeus monodon, crude fucoidanmenghambat pertumbuhan Vibrio  harveyi , Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli dengan    minimal inhibition  concentrations  (MIC)    sebesar  12.0, 12.0dan 6.0 mg/ml.
Chotigeat, et al, 2004
Ekstrak butanol Ulva lactuca (T5) dan
Sargassum wightii (T6).
Meningkatkan  survival  rate  (43.32–58.88%)    , laju  pertumbuhan  spesifik      (1.46–2.15%)  dan menurunkan beban V. parahaemolyticus load (1.36–2.03  dan  1.47–2.16×10 5 CFU  g −1 berturut- turut  pada  jaringan  otot  dan  hepatopancreas tissues) Immanuel, et al, 2004 Ekstrak polisakarida Sargassum fusiforme Total  hemosit  count  meningkat  seiring  dengan meningkatnya  dosis  SFPSE  .  Konsnetrasi  protein dan aktivitas PO pada hemolimfe udang pada awalnya meningkat kemudian menurun seiring dengan  meningkatnya  dosis  SFPSE  .  AKtivitas SOD  tidak  terpengaruh  secara  nyata  oleh aplikasi  SFPSE Huang , et al, 2006 hot-water extract brown seaweed
Sargassum duplicatum Meningkatkan    total  haemocyte  count  (THC), phenoloxidase  activity,      respiratory  burst  , aktivitas fagositosis Yeh, et al, 2006
Powder dan hot-water extract Sargassum hemiphyllum var. chinense
Meningkatkab  jumlah  total  hemosit,  aktivitas PO,    respiratory  burst,  dan  aktivitas    lysozyme udang vannamei setelah diperlakukan dengan perendaman
dalam air laut
yang mengandung serbuk atau ekstrak rumput laut.
Huynh, et al , 2011
Ulva lactuca dan Spyridia filamentosa Menurunkan  total  hemocyte  counts  (THC), tidak  ada  efek  yang  diamati  phagocytosis, phenoloxidase pada abalone hemolymph Dang, et al, 2011 hot-water extract
Sargassum glaucescens Meningkatkan    total  haemocyte  count  (THC), differential  haemocyte  count  (DHC),  total plasma  protein  (TPP),  Phagocytic  activity  (PA), bacterial  clearance  efficiency  (BCE)  dan bactericidal activity (BE) pada F. indicus yang direndam    dalam  air  laut  yang  mengnadung hot-water extracts   Sargassum glaucescens at 100, 300 and 500 mg/l. Ghaednia, et al, 2011 Fucoidan dari
Sargassum wightii Meningkatkan  THC,  aktivitas  prophenoloxidase
, aktivitas  respiratory burst  , aktivitas superoxide dismutase    dan  aktivitas  fagositosis    pada udang windu ( Penaeus monodon )
Immanuel, et al, 2012
komponen  immunonutrisi  khususnya  dalam mendukung
strategi
pengendalian penyakit secara terpadu berbasis peningkatan  status  sistem  pertahanan seluler pada budidaya udang.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmadifar, E.,  Gh. A. Takami,  M. Sudagar, 2009,  Growth  Performance,  Survival and  Immunostimulation,  of  Beluga ( Huso huso ) Juvenile Following Dietary Administration of Alginic Acid (Ergosan), Pakistan Journal of Nutrition, 8 : 227-232
Al-Amoudi , O. A., H. H. Mutawie,  A.V. Patel ,  G.  Blunden  ,  2009,Chemical composition and antioxidant activities  of  Jeddah  corniche  algae Saudi  Arabia, Saudi  Journal  of Biological Sciences 16, 23–29 Amna,  T.,  J.  Ara,  V.  Sultana,  S.  E. Ehteshamul-Haque,  M.  Athar,  2011, Antioxidant  potential  of  seaweeds occuring  at  Karachi  coast  of pakistan, J.  of  Applied  Botany  and food Quality 84: 207-212. Calder,  P.  C.,  2003,    Immunonutrition, BMJ 327;117-118
Costa, L. S. , G. P. Fidelis ., C. B. S. Telles , N. Dantas-Santos  ,  R. B. G. Camara,  S. L.  Cordeiro  .,  M.  S.  S.  P.  Costa  ,  J. Almeida-Lima, R. F. Melo-Silveira, R. M. Oliveira  , I. R. L. Albuquerque , G. P.V. Andrade    and  H.  A.O.  Rocha  ,  2011, Antioxidant and Antiproliferative Activities  of  Heterofucans  from  the Seaweed Sargassum filipendula , Mar. Drugs , 9 , 952-966
Ghada  S.  E.  Abou-El-Wafaa,  Khaled  A. Shaabanb,  Mohamed  E.  E.  El- Naggara,  Mohamed  Shaaban,  2011, Bioactive
constituents
and Biochemical  Composition  of  the Egiptian  Brown  Algae  Sargassum subrepandum (Forsk),
Rev. Latinoamer. Quím. 3 9 :62-74 Ghaednia B.,  M. R. Mehrabi,  M. Mirbakhsh, V.  Yeganeh,    P.    Hoseinkhezri,  G. Garibi,    G.  Jabbari  A,  2011,  Effect  of hot-water  extract  of  brown  seaweed Sargassum
glaucescens via immersion route
on immune
responses of Fenneropenaeus indicus,
Iranian  Journal  of  Fisheries  Sciences , 10: 616-630 Handayani,  T.,  Sutarno,  A.D.  Setyawan, 2004, Analisis Komposisi Nutrisi Rumput Laut Sargassum crassifolium J. Agardh., Biofarmasi 2 (2): 45-52
Lee,  B.,  2008,  Seaweed:  Potential  as  a marine vegetable and other opportunities,Rural Industries Research and Development
Corporation. Gymea Australia. Lordan, S., R. P. Ross and C.  Stanton, 2011, Marine Bioactives as Functional Food Ingredients:  Potential  to  Reduce  the Incidence  of  Chronic  Diseases  , Mar. Drugs 9 :1056-1100
Ratana-arporn,  P.,  A.  Chirapart,  2006, Nutritional  Evaluation  of  Tropical Green Seaweeds Caulerpa lentillifera and Ulva reticulata, Kasetsart J. (Nat. Sci.) 40: 75 - 83 Redmond, H.P., P. P. Stapleton,  P. Neary, D. Bouhier-Hayes, 1998, Immunonutrition: The Role of Taurine, Nutrition 14 : 7/8, Robledo,  D.,  Y.F.  Pelegrin,  1997,  Chemical and Mineral Composition of Six Edible Seaweed
Species of Yucatan,
Botanica Marina 40: 301-306 Rodrigues,  J.A.G.,  E.S.O.  Vanderlei,  A. L.G.Quinderé, V. S. Monteiro, S. M. M. Vasconcelos,  N.  M.  B.  Benevides, 2013,  Antinociceptive  activity  and acute  toxicological  study  of  a  novel sulfated  polysaccharide  from  from Caulerpa cupressoides var. Lycopodium    (Chlorophyta)  in  Swiss mice, Acta  Scientiarum.  Technology Maringá , 35:417-425.
Satyaraj,  E,  2011,  Emerging  Paradigms  in Immunonutrition,
Topics in
Companion  Animal  Medicine 26:25-
32
Tariq, A., J.A. Sultana, S.Ehteshamul-Haque, M.  Athar,  2011,  Antioxidant  potential of  seaweed  occuring  at  Karachi coast  of  Pakistan, Jounal  of  applied Botany and Food Quality 84:207-212 Vanderhoof,  J.  A.,  1998,    Immunonutrition: The  Role  of  Carbohydrates, Nutrition 14 : 7/8
Wichers,  H,  2009,    Immunomodulation  by food: promising conceptfor mitigating allergic  disease, Anal  Bioanal  Chem
395:37–45