## PENGHAMBAT α AMILASE: JENIS, SUMBER, DAN POTENSI PEMANFAATANNYA DALAM KESEHATAN
[α Amylase Inhibitors: Types, Sources, and Their Potential Utilization for Health Purposes]

## Budiasih Wahyuntari*
Laboratoria Pengembangan Teknologi Industri Agro-Biomedika (LAPTIAB), Badan Pengkajian dan Penerapan Teknologi, Kawasan Pusat Teknologi dan Ilmu Pengetahuan (PUSPIPTEK) gedung no 610, Serpong, Tangerang 15310
Diterima 09 Desember 2009 / Disetujui 19 Desember 2011

## SUMMARY
Alpha  amylase  inhibitors  affect  carbohydrate  metabolism  in  digestive  system.  The  inhibitors  induce  carbohydrate  tolerance,  fullness  and prolonging gastric emptying that might be used to aid in diabetic and obesity treatment. There are two types of α- amylase inhibitors, proteinaceous and non-proteinaceous ones. Proteinaceous inhibitor is classified into seven classes including legumes, lectin, knottin, cereal, Kunitz,  -thionin and thaumatin  types.  Plant  proteinaceous  inhibitors  are  present  in  cereals  and  legumes.  Some  non-proteinaceous  inhibitors  include  flavonid, polyphenols, organic acid that might be produced by microbes or extracted from plants such as acarbose, saponin dan cardiac glycoside, gallic acid, proto-catechuic acid, caffeic acid, ellagic acid, ferulic acid, quercetin hibiscus acid and α-, β- and γ-cyclodextrin.
Key words: inhibitor amylase, anti obesity, diabetes

## 1 PENDAHULUAN
Berdasarkan  laporan  World  Health  Orgaization  (WHO), lebih  dari  satu  milyar  masyarakat  dunia  menderita  kegemukan (Celleno et al., 2007). Penderita kegemukan tidak hanya terjadi di  negara-negara  berkembang  tetapi  juga  di  negara-negara sedang  berkembang  termasuk  Indonesia.  Kegemukan  terjadi karena  akumulasi  lemak  yang  berlebih  dalam  tubuh  yang disebabkan oleh ketidakseimbangan antara konsumsi makanan dan pengeluaran energi. Kegemukan tidak hanya meyebabkan penampilan  fisik  yang  tidak  menarik  tetapi  juga  akan  menye- babkan  peningkatan  risiko  terkena  beberapa  macam  penyakit antara  lain  tekanan  darah  tinggi,  diabetes  tipe  II, arthritis, peningkatan  sirkulasi  kolesterol,  kanker,  ketidak-seimbangan hormon  pada  wanita  yang  dapat  berakibat  sterilitas  (Celleno, 2007)  juga  penyakit  dementia  dan  Alzheimer  (Kivipelto et  al., 2005).  Usaha  untuk  mengurangi  lemak  tubuh  biasanya merupakan  kombinasi  antara  pembatasan  asupan  kalori  dan peningkatan aktivitas fisik, terapi perilaku, terapi farmaka hingga yang  paling  ekstrim  yaitu  pembedahan  (Celleno et  al., 2007). Akhir-akhir  ini  suplemen  diet  alami  untuk  mengurangi  berat badan makin populer, akan tetapi kebanyakan efektivitas terapi- nya masih diragukan.  Beberapa  produsen cenderung melebih- lebihkan kegunaan produk suplemennya tanpa bukti-bukti yang memadai.  Diantara  suplemen  yang  dipasarkan  terdapat  bebe- rapa  yang  benar-benar  bermanfaat  sebagai  produk  penurun berat  badan  dan  biasanya  mengandung  penghambat  amylase  atau  populer  sebagai ”starch  blocker” .  Konsumsi karbohidrat  yang  sangat  cepat  diserap  tubuh  yang  berlebihan seringkali  berhubungan  dengan  kegemukan.  Secara  teori, starch  blocker dapat  menyebabkan  penurunan  berat  badan
*Korespondensi penulis : Email : budiasih.wahyuntari@bppt.go.id; solichin.budiasih@gmail.com
dengan  cara  mengganggu  atau  memperlambat  pemecahan karbohidrat  kompleks  sehingga  mengurangi  ketersediaan karbohidrat  yang  tercerna  menjadi  kalori  (Hansawasdi et  al. , 2001; Santimone et al. , 2004).
Ulasan ini melaporkan beberapa hasil penelitian yang telah dilakukan  mengenai  pengelompokan  jenis  penghambat  α- amilase,  sumber,  pengaruh  penghambat  terhadap  α-amilase dari mamalia serangga dan mikroba serta penelitian percobaan untuk terapi diabetes tipe 2 dan kegemukan.

## Jenis, sumber dan manfaat penghambat α-amilase
Penghambat  α-amilase  dapat  berupa  protein  atau  non protein  (Franco et  al., 2002).  Pada  tanaman,  penghambat  – amilase  jenis  protein  umumnya  terdapat  pada  biji-bijian (serealea) seperti wheat /gandum- Triticum aesticum (Feng et al., 1996;  Singh  dan  Blundel,  2001), barley - Hordeum  vulgareum (Weselake et  al., 1983;  Abe et  al., 1993,  Pekkarinen,  Jones, 2003) , sorghum - Sorghum bicolor (Bloch dan Richardson, 1991), rye - Secale  cereale (Garcia-Casado et  al., 1994;  Iulek et  al., 2000),  beras- Oryza  sativa (Yamagata et  al., 1998)  dan  juga terdapat dalam kelompok polong-polongan (leguminosa) seperti pigeonpea-Cajanus  cajan (Giri et  al., 1998) ,  cowpea-Vigna unguiculata (Melo et al., 1999) bean-Phaseolus vulgaris (Grossi de  Sa et  al., 1997;  Young et  al., 1999;  Marshall  dan  Lauda, 1975).
Penghambatan  –amilase  oleh  penghambat  jenis  protein dari  sumber  tanaman  menunjukkan  spesifitas  yang  berbeda terhadap  –amilase dari berbagai sumber (Franco et al., 2002). Beberapa  penghambat  -amilase  tersebut  menunjukkan aktivitas  penghambatan  baik  terhadap  –amilase  mamalia maupun  serangga.  Beberapa  penghambat  -amilase  dari beberapa  biji-bijian  dan  polong-polongan  dilaporkan  meng- hambat  –amilase  saliva  manusia  dan  atau  pankreas porcine
seperti biji-bijian gandum– Triticum aesticum (Feng et al., 1996), Secale cereale (Garcia-Casado et al., 1994, Iulek et al., 2000), sorghum– Sorghum bicolor (Kutty dan Pattabiraman, 1986) dan berbagai jenis polong-polongan Phaseolus vulgaris (Nahoum et al., 2000;  Celleno et  al., 2007),  cowpea– Vigna  unguiculata (Melo et  al., 1999), Vigna  sublobata (Kokiladevi et  al., 2005), dan  pigeonpea– Cajanus  cajan (Giri  dan  Kachole,  1998). Menurut  Richardson  (1990)  penghambat  –amilase  jenis protein  diklasifikasi  menjadi  enam  kelas  berdasarkan  struktur tersiernya,  yaitu legume  lectin-type,  knottin-type,  cereal-type, Kunitz-type, γ-thionin-type dan thaumatin-type.
Tipe Legume  lectin terdapat  pada  berbagai  jenis  kacang polong  ( commom  bean ).  Ekstrak  kasar kidney  bean yang mengandung  penghambat  –amilase  tipe lectin telah digunakan  sebagai starch  blocker sejak  tahun  1980 untuk mengontrol diabetes melitus yang tidak tergantung pada insulin dan  obesitas  walaupun  tidak  begitu  berhasil,  tetapi  ekstrak murni  yang  hanya  terdiri  dari  fraksi  -amylase  inhibitor  lebih berhasil  untuk  mengontrol  diabetes  (Franco et  al., 2002). Ekstrak penghambat  -amilase dari kacang polong putih ( white bean, P vugaris diuji klinis oleh Barret dan Udani (2011). Hasil pengujian menunjukkan bahwa dosis sebanyak 300-500mg per hari  mampu  menurunkan  glukosa  postprandial  serta  integrasi ekstrak  kedalam  produk  makanan  dan  minuman  tidak menimbulkan  perubahan  penampilan,  tekstur  maupun  rasa serta tidak ada efek samping yang serius.
Penghambat tipe Knottin terdapat pada tanaman Amaranth yang hanya menunjukkan aktivitas penghambatan terhadap  – amilase  serangga  tetapi  tidak  terhadap  –amilase  mamalia (Carugo et al., 2001).
Penghambat  tipe Cereal terdapat  pada wheat,  barley,  ragi ( Indian  finger  millet). Penghambat  tipe  ini  yang  paling  banyak dipelajari  dan  memiliki  kemampuan  menghambat  –amilase eksogenus.  Demikian  pula  penghambat  dwifungsi  yaitu  yang mampu menghambat  –amilase dan subtilisin atau proteinase yang  lain  banyak  dipelajari.  Beberapa  penghambat  tipe  ini merupakan  glikoprotein  dengan  sifat  alergenisitasnya.  Kontak yang  terlalu  sering  dengan  penghambat  jenis  ini  dapat menyebabkan alergi dermatitis, baker’s ashma (Garcia-Casado et al., 1996). Penghambat yang akan digunakan sebagai bahan anti  obesitas  dan  diabetes  harus  bebas  dari  senyawa  alergen (Mills et al., 2004; Nakase et al., 1996). Penghambat  -amilase yang diekstraksi dari gandum kultivar Iran (T aestivum v zarrin) mampu menghambat 97,7%  -amilase saliva manusia (Heidari et al., 2005).
Penghambat  tipe Kunitz terdapat  pada  serealea  seperti barley,  gandum,  dan  beras.  Penghambat  tipe  ini  yang  telah dikarakterisasi secara lengkap adalah yang berasal dari barley yang  merupakan  penghambat  dwifungsi  yaitu  penghambat  – amilase dan subtilisin. Penghambat ini terlibat dalam pengatur- an degradasi karbohidrat dalam biji untuk mencegah  –amilase endigenus  menghidrolisis  pati  selama  perkecambahan  dini (Svensson et al., 2004).
Penghambat  tipe  -thionin antara  lain  terdapat  dalam  biji sorghum,  gandum,  jagung  dan  barley  (Bloch  dan  Richardson, 1991; Castro et al., 1996; Thevissen et al., 1996; Mendez et al., 1996).  Kelompok  penghambat  ini  terlibat  dalam  pertahanan
tanaman  dengan  berbagai  macam  mekanisme  antara  lain modifikasi  permeabilitas  membran  (Thevissen et  al., 1996), penghambatan  sintesis  protein  (Mendez et  al., 1996)  dan penghambatan protease (Wijaya et al., 2000). Penghambat tipe ini  yang  diisolasi  dari  sorghum  dilaporkan  memiliki  daya penghambatan yang sangat kuat terhadap  -amilase serangga locust dan kecoa tetapi sedikit menghambat  -amylase O sativa dan saliva  manusia,  serta  tidak  menghambat  -amilase pankreas porcine ,  barley  maupun Bacillus sp  (Bloch  dan Richardson, 1991).
Penghambat serupa thaumatin . Thaumatin adalah protein dengan  rasa  manis  yang  diekstraksi  dari  buah Thaumato- coccus  danielli (Kant,  2005) .  Zeamatin yang  diisolasi  dari  biji jagung termasuk kelompok penghambat tipe thaumatin karena memiliki  struktur  homologi  dengan thaumatin . Zeamatin berpotensi  sebagai  anti  fungi  patogen  manusia  dan  tumbuh- tumbuhan  (Svensson et  al., 2004).  Selain  memiliki  aktivitas antifungi  juga  dapat  menghambat  –amilase Tribolium dan tripsin pankreas porcine. Menurut Abad et al. (1996) zeamatin berikatan dengan β-1,3 glukan dan merembes ( permeabilize) ke dalam  sel  fungi sehingga  menyebabkan  kematian  sel. Penghambat non protein terdiri atas berbagai senyawa organik karbohidrat,  polifenol,  flavonoid  seperti  antara  lain acarbose, isocarbose,  acarviosine-glucose ,  asam  hibiscus,  siklodekstrin. Acarbose  dapat  diperoleh  dari  mikroba Actinoplane sp  dan Strepromyces sp  (Hemker et  al., 2001).  -,  β-  dan  γ- siklodekstrin yang diproduksi oleh beberapa bakteri Bacillus sp dilaporkan  sangat  aktif  menghambat  –amilase  pankreas manusia  dan porcine ;  (Qian et  al., 2001).  Asam  hibiscus, isocarbose dan acarviosine-glucose diisolasi  dari  roselle ( Hibiscus sabdariffa) (Hansawasdi et al., 2000 ). Kotowaroo et al. (2006) melaporkan bahwa daun dari tanaman famili Moraceae (Arthocarpus heterophyllus) juga mengandung penghambat  -amilase. Ekstrak daun Arthocarpus heterophyllus mengandung  sikloartenon,  sikloartenol,  β- sitosterol  dan  tannin  tetapi  komponen  mana  yang  berfungsi sebagai  penghambat  –amilase  belum  diketahui.  Daun Arthocarpus  heterophyllus secara  tradisional  selain  digunakan sebagai bahan pangan juga dimanfaatkan sebagai bahan obat tradisional  diabetes  melitus  oleh  masyarakat  Mauritius.  Sistem pengobatan  diabetes  tradisional  mengguna-kan  tanaman  obat telah  lama  dipraktekkan  di  Asia  maupun  Afrika  (Kotowaroo et al., 2006;  Said et  al., 2007;  Ani  dan  Naidu,  2008;  Hui et  al.,
2009; Deguchi dan Miyazaki, 2010; Sudha et al., 2011).
Campuran  ekstrak  kering  daun walnut ( Juglans  regia  L) , zaitun (Olea  europea L), nettle (Urtica  dioica L)  dan salt  bush (Atriplex  halimus L)  secara  tradisional  telah  dimanfaatkan sebagai obat anti diabetes dalam pengobatan herbal tradisional di Arab. Said et al. (2007) mengamati keamanan dan pengaruh campuran  tersebut  dalam  mempertahankan  kadar  gula  darah. Walaupun  telah  sejak  lama  dipakai  sebagai  obat  tradisionil tetapi,  kandungan  senyawa  aktif  dari  masing-masing  daun belum pernah diamati.
Di  China,  daun  “hanliu”  ( Salix  matsudana) telah  berabad- abad  dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional  untuk  mengobati jaundice, hepatitis, rematik, arthritis, eczema. Han et al., (2003) menguji polifenol dari ekstrak daun tersebut untuk dimanfaatkan sebagai  anti  obesitas  pada  hewan  percobaan rodent .  Fraksi
flavonoid  glukosida  dari  daun  tanaman S  matsudana menye- babkan penghambatan adsorpsi karbohidrat dan lipid pada usus kecil  melalui  penghambatan  -amilase  dan  penyerapan  asam palmitat (Han et al., 2003).
Akhir-akhir ini penelitian berbagai tanaman yang digunakan dalam  pengobatan  herbal  untuk  terapi  diabetes  telah  banyak dilakukan. Sudha et al. (2011) menguji kemampuan 126 ekstrak dari  17  jenis  tanaman  obat  yang  digunakan  di  India  sebagai penghambat  -amilase  pankreas  maupun  -glukosidase. Penelitian  tersebut  mendapatkan  bahwa  senyawa  alkaloid, steroid,  saponin  dan  kardiak  glikosida  dari Linum  usitatisunum L, tannin, saponin dan kardiak glikosida dari Morus alba L serta alkaloid, tannin dan flavonoid dari Ocinum tenuiflorum L memiliki kemampuan untuk menghambat  amilase pankreas porcine. Gnidia  glauca and Dioscorea  bulbifera telah  lama dimanfaatkan  untuk  pengobatan  di  India  dan  China.  Ekstrak petroleum  eter,  etil  asetat,  methanol  dan  etanol  dari  daun, batang  dan  bunga G  glauca serta  umbi D  bulbifera mampu menghambat  amilase pankreas porcine. (Ghosh et al., 2011). Komponen  polifenolik/flavonoid  dalam  biji Centratherum anthelminticum L Kuntze terdiri dari gallic acid, proto-catechuic acid,  caffeic  acid,  ellagic  acid,  ferulic  acid,  quercetin dan kaemferol menunjukkan  penghambatan  yang  signifikan terhadap  aktivitas  amilase  saliva  manusia  dan  glukosidase usus serta menurunkan postprandial hyperglycemia pada tikus sehingga memungkinkan ekstrak yang diuji dapat dimanfaatkan untuk terapi diabetes tipe 2 (Ani dan Naidu, 2008).
Ekstrak  etanol  dan  heksan  yang  merupakan  senyawa  non protein  seperti phyllanthin,  hypophyllanthin,  terpenes,  tripenes, flavonoids  (quercetin,  quercetrin,  rutin ),  dan  alkaloids  dari tanaman Phyllanthus  amarus yang  telah  lama  digunakan sebagai  obat  herbal  untuk  terapi  diabetes  berdasarkan penelitian  Tamil et  al. (2010)  menunjukkan  aktivitas  peng- hambatan terhadap  -amilase pankreas porcine. Tanaman herbal, antara lain ginseng ( Panax ginseng), bitter melon  ( Momordica  charantia), huanglian  ( Coptis  chinensis) secara tradisional telah digunakan dalam pengobatan diabetes di Cina (Hui et al., 2009). Pengujian terhadap ekstrak  ginseng menunjukkan bahwa ginseng mengandung 76 komponen yang berupa ginsenosida, polisakarida, peptida, alkohol poliasetilenik. Sedangkan  kandungan  dalam bitter melon  yang  memiliki  efek hidpoglikemik antara lain charantin, vicine dan alkaloid. Berberin adalah  senyawa  aktif  alkaloid  isoquinolin  yang  terkandung dalam  akar,  rhizoma,  batang  dan  kulit  batang  tanaman Coptis chinensis (Hui et  al., 2009).  Sayuran Welsh  onion (bawang daun)  berpotensi  sebagai  bahan  hipoglikemik  yang  efektif terhadap  hewan  uji  tikus,  tetapi  bagian  yang  biasa  dimakan (umbi, stalk -batang  dan  daun)  memiliki  daya  penghambatan lebih  rendah  daripada  serabut  akarnya  (Kang et  al., 2010).  Di Jepang, daun Psidium guajava Linn yang dimanfaatkan sebagai teh  juga  telah  terbukti  memiliki  efek  anti  hoperflikemik  dan hiperlipidemik (Deguchi dan Miyazaki, 2010).

## Mekanisme  penghambatan  metabolisme  karbohidrat dalam sistem pencernaan
Semua  karbohidrat  kompleks  yang  dikonsumsi  manusia, sebelum  dapat  diserap  oleh  sistem  pencernaan  harus dihidrolisis  menjadi  unit-unit  monomernya.  Pati  adalah  salah
satu  bentuk  karbohidrat  kompleks  yang  merupakan  polimer glukosa. Di dalam sistem pencernaan manusia terdapat enzim- enzim yang berperan mencerna  makanan. Enzim  yang terlibat dalam  pemecahan  pati  antara  lain  –amilase  dalam  air  liur ( saliva )  dan  pankreas.  -amilase  mengkatalis  pemecahan  pati menjadi  maltosa  dan  glukosa  yang  merupakan  satu-satunya bentuk  gula  yang  dapat  diserap  tubuh.  Peristiwa  pemecahan pati  tersebut  terjadi  sangat  cepat.  Beberapa  menit  setelah asupan  pati,  akan  terjadi  hiperglikemia  yang  mengarah  ke hiperinsulinaemia.  Kedua  kondisi hiperglikemia dan hiperinsila- emia tidak dikehendaki terjadi pada penderita diabetes mellitus, obesitas  atau  hiperlipoproteinaemia  (Kotowaroo et  al., 2006). Pada  kondisi  normal  monosakarida  yang  tidak  segera digunakan  sebagai  energi  akan  disimpan  sebagai  glikogen  di hati  atau  trigliserida  dalam  jaringan  adiposa,  hati  dan  plasma (Celleno et  al., 2007).  Penghambat  -amilase  berpengaruh terhadap metabolisme didalam saluran pencernaan antara lain mengganggu  atau  memperlambat  pemecahan  karbohidrat sehingga  akan  mengurangi  ketersediaan  kalori  atau  mem- pengaruhi sistem glukosa-insulin. Pengaruh penghambat-an  - amilase  terhadap  absorpsi  karbohidrat  dan  glukosa  plasma setelah  makan  ( postprandial) telah  di  uji  pada  manusia  dan menunjukkan  bahwa  penghambat  tersebut  memperlambat penyerapan dan mengurangi konsentrasi glukosa plasma. Oleh karena  itu  penghambat  -amilase  dapat  dimanfaatkan  bagi penderita diabetes mellitus tipe II (Judge dan Svensson, 2006).

## KESIMPULAN
Terdapat  dua  golongan  penghambat  -amilase  yaitu golongan  protein  dan  non  protein  yang  bisa  diperoleh  dari tumbuhan,  hewan  maupun  mikroba.  Penghambat  -amylase non  protein  berupa  senyawa  organik.  Aktivitas  penghambatan suatu  jenis  penghambat  dari  sumber  yang  berbeda  akan berpengaruh  berbeda  terhadap  -amilase.  Beberapa  peng- hambat  protein  dan  non  protein  telah  diteliti  memiliki kemampuan.  menghambat  -amilase  pankreas  manusia sehingga  dapat  dimanfaatkan  untuk  terapi  kegemukan  dan diabetes tipe II.

## DAFTAR PUSTAKA
Abad LR, D’Urzo MP, Lin D, Narasimhan ML, Renveni M, Zhu JK,  Niu  X,  Singh  NK,  Hasegawa  PM,  Bressan  RA.  1996. Anti  fungal  activity  of  tobacco  osmotin  has  specificity  and involves plasma membrane permeabilization. Plant Sci 118: 11-23.
Abe JI, Sidenius U, Svensson B. 1993. Arginine is essential for the  amylase inhibitory activity of the  amylase/subtilisin inhibitor (BASI) from barley seeds. Biochem J 193: 151-155.
Ani  V,  Naidu  KA.  2008.  Antihyperglycemic  activity  of  poly- phenolic  components  of  black/bitter  cumin Centratherum anthelminticum (L)  Kuntze  seeds.  Eur  Food  Res  Technol 226:897-903. doi 10.1007/s00217-007-0612-1.
Barret  ML,  Udani  JK.  2011.  A  proprietary  alpha-amylase inhibitor from White vean ( Phaseolus vulgaris ): a review of clinical studies on weight loss and glycemic control. Nutr J 10:24 (http:www.nutritionj.com/content/10/1/24).
Blanco-Labra  A,  Iturbe-Chiňas  FA.  1981.  Purification  and characterization  of  glycoprotein  α-amylase  inhibitor  from tepary bean seeds ( Phaseolus acutifolius A. Gray). J Food Biochem 5: 1 – 17.
Bloch  C,  Richardson  M.  1991.  A  new  family  of  small  (5  kD) protein inhibitors of insect α amylase from seeds of sorghum (Sorghum  bicolor (L)  Moench)  have  sequence  homologies with γ-purothionin. FEBS Lett 279: 101-104.
Burgos-Hernandez  A,  Rosas-Burgos  C,  Ramirez-Wong  B, Carbonell-Barrachina  AA,  Cinco-Moroyoqui  FJ.  1999. Identification of  -amylase inhibitors in triticale grain. J Sci Food Agric 79: 1671-1675.
Carugo  O,  Lu  S,  Luo  J,  Gu  X,  Liang  S,  Strobl  S,  Pongor  S. 2001.  Structural  analysis  of  free  and  enzyme-bound amaranth  a-amylase  inhibitor:  classification  within  the knottin  fold  superfamily  and  analysis  of  its  functional flexibility. Protein Eng 14: 639– 646.
Castro  MD,  Fontes  W,  Morhy  L,  Bloch  Jr.  C.  1996.  Complete amino acid sequence from g-thionin from maize ( Zea mays L) seeds. Protein Pept. Lrtt 3: 267-274.
Celleno  L,  Tolaini  MV,  D’Amore  A,  Perricone  NV,  Preuss  HG. 2007.  A  dietary  supplement  containing  standardized Phaseolus  vulgaris extract  influences  body  composition  of overweight men and women. Int. J Med Sci 4: 45-52.
Deguchi  Y,  Miyazaki  K.  2010.  Anti-hyperglycemic  and  anti hyperlipidemic  effects  of  guava  leaf  extract,  Nutrion  metab 79: 9 (http://www.nutritionmetabolism.com/content/7/1/9).
Feng  GH,  Richardson  M,  Chen  MS,  Kramer  KJ,  Morgan  TD, Reeck  GR.  1996.  α-Amylase  inhibitors  from  wheat:  a sequences and pattern of inhibition of insect and human  amylase. Insect. Biochem.Mol. Biol 26: 419-426.
Franco OL, Rigden DJ, Melo FR, Bloch Jr. C, Silva CP, Grossi- de-Sa  MF.  2000.  Activity  of  wheat  α-amylase  inhibitors towards  bruchid  amylase  and  structural  explanation  of observed specificities. Eur. J Biochem 267: 1466 – 1473.
Franco OL, Rigden DJ, Melo FR, Grossi-de-Sa MF. 2002 Plant  -amylase  inhibitors  and  their  interaction  with  insect  - amylases:  for  Structure,  function  and  potential  crop protection. FEBS. Eur. J Biochem 269: 397-412.
Garcia-Casado G, Sanchez-Monge R, Chrispeels MJ, Armentia A, Salcedo G, Gomez L. 1996. Role of complex asparagin- linked  glycans  in  the  allergenecity  of  plant  glycoproteins. Glycobiology 6: 471-477.
Garcia-Casado  G,  Sanchez-Monge  R,  Lopez-Otin  C,  Salcedo G.  1994.  Rey  inhibitors  of  animal  -amylases  shown different  specificities,  aggregative  properties  and  IgE- binding  capacities  than  their  homologues  from  wheat  and barley. Eur.J Biochem 224: 525-531.
Ghosh  S,  Ahire  M,  Patil  S,  Jabgunde,  Dusane  MB,  Joshi  BN, Pardesi  K,  Jachak  S,  Dhavale  DD,  Chopade  BA.  2011.
Antidiabetic  Activity  of Gnidia  glauca and Dioscorea bulbifera:  Potent  Amylase  and  Glucosidase  Inhibitors, Hindawi  Publish  Co.  2012.  article  ID  929051.  10pp (http://www.hindawi.com/journals/ecam/2012/929051).
Giri  AP,  Kachole  MV.  1998.  Amylase  inhibitors  of  pigeonpea (Cajanus cajan ) seeds . Phytochemistry 47: 197-202.
Grossi  de  Sa  MF,  Mirkov  TE,Ishimoto  M,  Colucci  G,  Bateman KS,  Chrispeels  MJ.  1997.  Molecular  characterization  of  a bean α-amylase inhibitor that inhibits the  α amylase of the Mexican  bean  weavil Zabrotes  subfasciatus. Planta  203: 295-303.
Han LK, Sumiyoshi M, Zhang J, Liu MX, Zhang XF, Zheng YN, Okuda  H,  Kimura  Y.  2003.  Anti-obesity  Action  of Salix matsudana Leaves  (Part  1).  Anti-obesity  Action  by Polyphenols  of Salix  matsudana in  High  Fat-diet  Treated Rodent  Animals,  Phytother.  Res 17:  1188–1194/  doi:
10.1002/ptr.1404.
Hansawasdi  C,  Kawabata  J,  Kasai  T.  2000.  Alpha-amylase inhibitors from roselle (Hibiscus sabdariffa Linn) tea. Biosci Biotechnol Biochem 64:1041-1043
Hansawadi C, Kawabata J, Kasai T. 2001. Hibiscus acid as an inhibitor of starch digestion in the caco-2 cell model system. Biosci Biotechnol Biochem 65 (9): 2087-2089
Heidari  R,  Zareae  S,  Heidarizadeh  M.  2005.  Extraction, Purificaton, and Inhibitory Effect of Alpha-Amylase Inhibitor from Wheat (Triticum aestivun var Zarrin). Pakistan J Nutr 4: 101-105.
Hui H, Tang G, Go VLW. 2009. Hypoglycemic herbs and their action  mechanisms,  Chinese  Med  4:11,  doi:10.1186/1749- 8546-4-11 (http://www.cmjournal.org/content/4/1/11).
Iulek J, Franco Ol, Silva M, Slivinski CT, Blocj Jr.C, Rigden DJ,
Grossi  de  Sa  MF.  2000.  Purification,  biochemical characterization  and  primary  structure  of  a  new  α-amylase inhibitor  from Secale  cereale (rey).  Inter.  J  Biochem  Cell Physiol 32: 1195-1204.
Judge,  N,  Svensson,  B.,  2006.  Review  proteinaceous  inhibitor of  carbohydrate  active  enzymes  in  cereals:  implication  in agriculture, cereal processing and nutrition. J Sci Food Agric 0022–5142. doi: 10.1002/jsfa.2454
Kivipelto  M,  Ngandu  T,  Fratiglioni  L,  Vitanen  M,  Kareholt  I,
Winblad B, Helkala EL, Tuomilehto J, Soininen H, Nissinen A.  2005.  Obesity  and  vascular  risk  factors  ant  midlife  and the  risk  of  dementia  and  Alzheimer  desease.  Arch  Neurol 62: 1556-1560.
Kang MJ, Kim JH, Choi HN, Kim MJ, Han JH, Lee JH, Kim JI. 2010.  Hypoglycemic  effects  of  Welsh  onion  in  an  animal model  of  diabetes  mellitus.  Nutr  Res  Pract  4(6):  486-491. doi: 10.4162/nrp.2010.4.6.486.
Kokiladevi  E,  Manickam  A,  Thayumanavan  B.  2005. Characterization of α  amylase inhibitor in Vigna sublobata . Bot Bull Acad Sin 46: 189 – 196.
Kotowaroo MI, Mahomoodally MF, Gurib-Fakim A, Subratty AH. 2006. Screening of Traditional antidiabetic medicinal plants of Mauritius for possible  amylase inhibitory effect in vitro. Phytother Res (20): 228-231.
Kutty  AVM,  Pattabiraman  TN.  1986.  Isolation  and characterization  of  an  α  amylase  inhibitor  from  sorghum seeds, specific for human enzymes. J Agric Food Chem 34: 552 – 557.
Laemmli  UK.  1970.  Cleavage  of  structural  proteins  during  the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227:680- 685.
Marshall  JJ,  Lauda  CM.  1975.  Purification  and  properties  of phaseolamin, an inhibitor of alpha amylase from the kidney bean, Phaseolus vulgaris . J Biol Chem 250: 8030 – 8037.
Melo FR, Sales MP, Pereira LS, Bloch CJ, Franco OL, Ary MB. 1999. α–amylase inhibitors from cowpea seeds. Protein and Peptide Letters 6: 385 – 390.
Mendez E, Rocher A, Calero M, Girbes T, Citores L, Soreano F. 1996.  Primary  structure  of  -hordothionin,  a  member  of  a novel  family  of  thionon  from  barley  endosperm  and  its inhibition of protein synthesis in  eukaryotic and prokaryotic cell-free systems. Eur. J Biochem 239: 67-73.
Mills EN, Jenkins JA, Alcocer MJ, Shewry PR. 2004, Structural, biological,  and  evolutionary  relationship  of  plant  food allergens  sentizing  via  the  gastrointestinal  tract,  Crit  Rev. Food Sci Nutr 44: 379-407.
Mundy J, Rogers JC. 1986. Selective expression of a probable alpha amylase/subtilisin inhibitor. Planta 169: 51 – 63.
Nahoum V, Roux G, Anton V, Rouge P, Puigserver A, Bischoff H,  Hendrissat  B,  Payan  F.  2000.  Crystal  structures  of human pancreatic α amylase in complex with carbohydrate and proteinaceous inhibitors. J Biochem 346: 201-208.
Nakase  M,  Adachi  T,  Urisu  A,  Miyashita  T,  Alvarez  AM, Nagasaka S, 1996, Rice ( Oryza sativa )  amylase inhibitors of  14-16kDa  are  potential  allergens  and  products  if multigene family. J Agr Chem 44: 2624-2628.
Pekkarinen AI, Jones BL. 2003. Purification and identification of barley ( Hordeum vulgare L) proteins that inhibit the alkaline serine  proteinase  of Fusarium culmorum. J  Agric  Food Chem 51: 1710–1717.
Qian M, Nahoum V, Bonicel J, Bishoff H, Henrissat B, Payan, F. (2001)  Enzyme-  catalyzed  condensation  reaction  in  a mammalian  alpha-amylase.  High  resolution  structural analysis  of  an  enzyme  inhibitor  complex.  Biochemistry  40, 7700±7709.
Richardson  M.  1990.  Seed  storage  proteins:  the  enzyme inhibitors. In Methods in Plant Biochemistry (Rogers. L. ed). 5: 261-307. Academic Press. London. UK.
Said O, Fulder S, Khalil K, Azaizeh H, Kassis E, Saad B, 2008, maintaining  A  Physiological  Blood  Glucose  level  with “Glucolevel”  A  Combination  of  Four  Anti-Diabetes  Plants Used in Traditional Arab Herbal medicine, eCAM 5: 421-428 doi;10.103/ecam/nem047.  (http://creativecommens.org/licen -ces /by-nc/2.0/uk).
Selitrennikoff CP,  Wilson  SJ, Clemons KV,  Stevens  DA. 2000. Zeamatin  an  antifungal  protein.  Curr.  Opin.  Anti  Infective drugs 2: 368-374.
Singh  J,  Bblundel  M.  2001.  Albumin  and  globulin  proteins  of wheat  flour:  Immunogical  and  N-terminal  sequence characterisation. J Cereal Sci 34: 85 – 103.
Sudha P, Zinjarde SS, Shobha YB, Kumar AR, 2011, Potent  Amylase  inhibitory  activity  of  Indian  Ayurvedic  medicinal Plants,  BMC  Complementary  Alternative  medicine,  11:5 (http://www.biomedcentral.com/1472-6882/11/5).
Svensson  B,  Fukuda  K,  Nielsen  PK,  Bonsager  BC.  2004.
Proteinaceous  -amylase inhibitors. Biochim. Biophys Acta. 1696: 145-156.
Tamil  IG,  Dineshkumar  B,  Nandhakumar  M,  Senthilkumar  M, Mitra A, 2010, In vitro study on α-amylase inhibitory activity of  an  Indian  medicinal  plant, Phyllanthus  amarus, Indian  J Pharmacol.;  42(5):  280–282.  doi:  10.4103/0253-7613. 70107
Thevissen  K,  Ghazi  A,  De  Samblanx  G,  Brownlee  C,  Osborn RW,  Broekaert  WF.  1996. Fungal  membrane responsesinduced  by  plant  defensines  and  thionin.  J  Biol Chem 271: 15018-15025.
Thornton  DJ,  Carlstedt  I,  Sheehan  JK.  1994.  Identification  of glycoproteins on nitrocellulose membranes and gels dalam Methods in Molecular Biology. 32: Basic protein and peptide protocols. Ed J.M. Walker. Humana Press Inc. Totowa NJ.
Warchalewski  JR.  1977.  Isolation  and  purification  of  native  - amylase inhibitors from winter wheat. Bull. Acad. Polon. Sci. Ser Sci Biol 25: 731–735.
Weselake  RJ,  MacGregor  AW,  Hill  RD,  Duckworth  HW.  1983. Purification  and  characteristics  of  α-amylase  inhibitor  from Barley Kernels. Plant Physiol 73: 1008-1012.
Wijaya  R,  Neuman  GM,  Condron  R,  Hughes  AB,  Polya  GM.
2000. Defense protein from seed of Cassia fistula include a lipid  transfer  protein  homologue  and  a  protease  inhibitory plant defensin. Plant Sci 159: 243-255.
Yamagata H, Kunimatsu K, Kamasaka H, Kuramoto T, Iwasaki T.  1998.  Rice  bifunctional  α-amylase/subtilisin  inhibitor: characterization, localization and changes in developing and germinating seeds. Biosc. Biotechnol Biochem 62: 978-985.
Yamasaki  T,  Deguchi  M,  Fujimoto  T,  Masamura  T,  Uno  T,
Kanamaru  K,  Yamagata  H.  2006.  Rice  Bifunctional  - Amylase/Substilisin  Inhibitor:  Cloning  and  Characterization of  the  Recombinant  Inhibitor  Expressed  in Eschericia  coli . Bioscie Biotechnol Biochem 70(5): 1200-1209.
Young NM, Thibault P, Watson DC, Chrispeels MJ. 1999. Post translational processing of two α-amylase inhibitors and an arcelin  from  the  common  bean Phaseolus  vulgaris. FEBS Lett 446: 203-206.