Jurnal Pharmascience, Vol 2, No. 2, Oktober 2015, hal: 31 - 37 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 http://jps.ppjpu.unlam.ac.id/

## Research Article

## Aktivitas Pro-Apoptosis Fraksi Air Daun Jawer
Kotok ( Plectranthus Scutellaroides) pada Ekor Larva Katak Rana Catesbeiana Stadium Metamorfosis Klimaks
Moelyono Moektiwardoyo, Putu Dian C.D, dan Ajeng Diantini Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran Email : moelyono110150@gmail.com

## ABSTRAK
Daun  Jawer  kotok  ( Plectranthus  scutellaroides ),  diketahui  banyak  mempunyai manfaat  dalam  pengobatan  tradisional,  salah  satunya    sebagai  antiinflamasi  yang menjadi  langkah  awal  pencarian  anti  kanker  dari  tumbuhan.  Kanker  adalah  suatu penyakit  yang  diakibatkan  terjadinya  mutasi  gen  yang  mengakibatkan  kelainan  pada kromosom.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  pro-apoptosis  fraksi polar  daun  jawer  kotok  ( Plectranthus  scutellaroides )  terhadap  ekor  larva  katak Rana catesbeiana saat  stadium  metamorfosis  klimaks.  Fraksi  polar  daun  jawer  kotok diperoleh melalui fraksinasi ekstrak etanol yang diperoleh dengan cara maserasi  dalam pelarut  non  polar,  semi  polar,  dan  pelarut  polar.  Metode  pengujian  aktivitas  pro- apoptosis adalah dengan menghitung frekuensi  sel  apoptosis diantara sel  nekrosis dan sel normal per seribu sel per ekor larva katak di bawah mikroskop. Jenis kematian sel ditentukan  dengan  pewarnaan  Giemsa.  Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  fraksi polar  daun  jawer  kotok  dengan beberapa  variasi      dosis  mempengaruhi   frekuensi  sel apoptosis jika dibandingkan dengan kontrol (  = 0,05). Frekuensi sel apoptosis tertinggi ditunjukkan oleh dosis 500 mg/kg BB yaitu sebesar 79,51%. Dari hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  fraksi  polar  daun  jawer  kotok    menunjukkan    aktivitas  pro- apoptosis pada ekor larva katak Rana catesbeiana stadium metamorfosis klimaks.
Kata kunci : Plectratus scutellaroides , apoptosis, Rana catesbeiana

## ABSTRACT
Leaves  of  jawer  kotok  (Plectranthus  scutellaroides)  has  many  benefits  in  tusing  of traditional medicine, one among  them is antiinflammation which can be starting point of seeking  and  discovering  of  anticancer  from  plants.  Cancer  is  one  of  disease  due  to  gen mutation  that  effect  anomaly  of  chromosom.  The  purpose  of  this  experiment  was  to identify  the  pro-apoptotic  activity  of  polar  fraction  of  jawer  kotok  leaves  on  Rana
catesbeiana  tadpole  tail  in  climax  metamorphosis  phase.  Polar  fraction  was  obtained through  fractination  of  ethanolic  extract  which  are  made  by  maceration  method  in  non polar, semi polar, and polar solvents.  The method use in this experiment was calculating the  apoptotic  cell  frequency  between  necrotic  cells  and  normal  cells  which  were  counted per  one  thousand  of  tadpole  tails  cells  under  microscope.  The  modes  of  cell  death determined  by  Giemsa  staining.  The  experiment  showed  that  variation  of  dose  of  polar fraction of jawer kotok leaves is affecting  the frequency of apoptotic cell death compared with  control  (  =  0.05).  Dose  of  500  mg/kg  body  weight  of  water  fraction  of  jawer  kotok leaves  gave  the  highest  apoptotic  cell  frequency  (79.51  %)  between  normal  and  necrotic cell. It can be concluded that polar fraction of jawer kotok leaves has pro-apoptotic activity on Rana catesbeiana tadpole tail in climax metamorphosis phase.
Keywords: Plectranthus scutellaroides, apoptosis, Rana catesbeiana
I. LATAR BELAKANG Jawer
kotok (Plectranthus scutellaroides) umumnya  tumbuh  di dataran  rendah  hingga  tempat  dengan ketinggian 1300 m di atas permukaan laut. Tumbuhan  berbatang  basah  ini  tingginya dapat  1,5  m.  Daunnya  yang  berwarna merah  coklat  sangat  berkhasiat.  Bentuk daunnya  bulat  melancip,  berbulu  dan bergerigi  pada  bagian  ujung  dan  tepinya. Batangnya  berbentuk  segi  empat  dan mudah  patah  karena  lunak.    Bunganya berwarna  merah  atau  putih  (de  Padua, 1999).
Daun  jawer  kotok  secara  tradisional digunakan untuk pengobatan wasir, terlambat  haid,  keputihan,  demam  nifas, demam,  dan    kencing  manis.  Penelitian Moelyono  (2010)  menunjukkan  bahwa ekstrak  dan  fraksi  polar  daun  jawer  kotok mempunyai  aktivitas  antiinflamasi  pada tikus percobaan. Dalam daun jawer kotok,
diketahui  bahwa  aktivitas  antiinflamasi fraksi  polar  disebabkan  oleh  kandungan flavonoidnya (Moelyono, 2010)  Aktivitas anti  inflamasi  umumnya  merupakan  cikal bakal aktivitas anti kanker. Untuk mengetahui  adanya  aktivitas  antikanker pada  daun  jawer  kotok,    dilakukan  uji aktivitas  pro-apoptosis  fraksi  pilar  daun jawer  kotok  ( Plectranthus  scutellaroides ) pada  larva katak
Kanker  merupakan  suatu  penyakit yang  menyerang  proses  dasar  kehidupan sel,  dan    mengubah  genom  sel    yang mengakibatkan  pertumbuhan  liar  sel  dan penyebaran sel kanker. Penyebab perubahan  genom  ini  adalah  mutasi  salah satu  gen  atau  lebih;  atau  mutasi  sebagian besar DNA yang mengandung banyak gen; atau  pada  beberapa  keadaan,  penambahan atau pengurangan sebagian besar kromosom (A. Guyton, 1996) .
Proses  kematian  sel  dapat  berjalan melalui  dua  mekanisme,  yaitu  mekanisme nekrosis  dan  apoptosis.  Nekrosis  adalah kematian  sel  dan  autolisis  dari  suatu jaringan  yang  terjadi  dalam  tubuh  yang hidup.  Pelepasan  isi  sel  ini  selanjutnya menginduksi respon inflamasi pada jaringan  (A.  Amin  and  Susanne,  1997), sedangkan  apoptosis  adalah  kematian  sel terprogram, merupakan mekanisme normal kematian  sel  yang  dibutuhkan  untuk homeostasis jaringan yang berbeda dengan nekrosis  (  DiPiro et  al. ,  1997).  Proses kematian  sel  karena  apoptosis  pada makhluk  hidup  dapat  ditemukan  pada pemendekan  ekor  larva  katak  ( Rana catesbeiana )  yang  terjadi  selama  proses metamorfosis (Zug, 1993).

## II. BAHAN DAN METODE

## A. Bahan Penelitian
Bahan  penelitian  berupa  daun  jawer kotok  yang  dikumpulkan  dari  Kebun Tanaman  Obat  Manoko,  Lembang,  yang kepadanya  dilakukan  proses  pendahuluan berupa  pengeringan  hingga  diperoleh bahan kering.

## B. Ekstraksi
Serbuk kering ditimbang sekitar 400 g dan diekstraksi  dengan  etanol  tiga  kali  dua puluh  empat  jam  sebanyak  9  L.  Ekstraksi dilakukan pada suhu kamar. Ekstrak etanol yang diperoleh diuapkan pelarutnya
dengan menggunakan rotary evaporator di bawah  tekanan  vakum  pada  suhu  sekitar 60 0 C  hingga  diperoleh  ekstrak  kental, etanol  dengan  berat  80,95  g.  Rendemen hasil ekstraksinya sebesar 20,24 %.

## C. Fraksinasi
Fraksinasi dilakukan dengan menggunakan  tiga  jenis  pelarut  yaitu n - heksan,  etil  asetat,  dan  air.  Partisi dilakukan  pada  ekstrak  kental  hasil maserasi  dengan  perbandingan n -heksan  : air  =  1:1.  Fraksi n -heksan  ditampung kemudian  ditambahkan  kembali n -heksan ke  dalam  fraksi  air  sejumlah  yang  sama, dilakukan  sebanyak  tiga  kali  pengulangan untuk mendapatkan fraksi n -heksan. Selanjutnya  partisi  dilanjutkan  dengan  etil asetat, sehingga diperoleh tiga fraksi  yaitu fraksi n -heksan,  fraksi  etil  asetat,  dan fraksi  air.  Fraksi  air  sebagai  fraksi  polar digunakan  untuk  pengujian  aktivitas.  Dari 30  g  ekstrak  diperoleh  19,29  g  fraksi  air. Rendemen hasil fraksinasinya sebesar 4,82 %.

## D. Uji  aktivitas  pro-apoptosis  fraksi polar
Dua  puluh  empat    ekor  larva  katak,
dikelompokkan  menjadi  empat  kelompok, masing-masing  kelompok  terdiri  atasi enam ekor larva katak, yaitu :
1. Kelompok  kontrol  negatif  :    diberi suspensi tween 2%
2. Kelompok uji I : diberi suspensi fraksi uji dosis 125 mg/kgBB.
3. Kelompok uji II: diberi suspensi fraksi uji dosis 250 mg/kgBB.
4. Kelompok  uji  III  :  diberi  suspensi fraksi uji dosis 500 mg/kg BB.
Pengujian aktivitas pro-apoptosis menggunakan larva katak Rana catesbeiana stadium metamorfosis klimaks.  Perlakuan dilakukan  secara peroral dengan dosis yang telah ditentukan.  Setelah  24  jam  ekor  larva katak  siap  untuk  dipotong.  Ekor  larva katak  dipotong  sepertiga  bagian  dari posterior,  dicuci  dalam  larutan  MSS ( Modified Steinberg Solution ), lalu dipotong-potong  menjadi  bagian  yang lebih kecil, direndam  selama kurang lebih 10  menit  dalam  larutan  tripsin  0,2  %. Kemudian  dilakukan  pemanasan  dalam inkubator  pada  suhu  31-33 0 C  selama  15 menit  untuk  mengaktifkan  kerja  tripsin hingga  diperoleh  suspensi.    Suspensi dipindahkan  ke  dalam  tabung  sentrifugasi dan ditambahkan larutan MSS sebanyak 1 mL,  dilakukan  agitasi      sekira  15  menit, kemudian  dilanjutkan  dengan  sentrifugasi kecepatan  1000  rpm      hingga  diperoleh supernatant  dan  dekantat.yang  merupakan suspensi  sel  pekat.  Ke  dalam  dekantat ditambahkan 1 mL kalium klorida hipotonik,  didiamkan  selama  lima  menit,
lalu  disentrifuggasi  dengan  kecepatan 1000  rpm.    Supernatan  dibuang  dan dekantat  difiksasi  menggunakan  asam asetat  dan  metanol    (1:3  )  selama  24  jam. Suspensi sel siap untuk dibuat preparat.
Untuk  membuat  preparat,  suspensi  sel diteteskan  di  atas  kaca  objek  dengan menggunakan  pipet  tetes  dan  dikeringkan di  atas heating  plate ,  kemudian  preparat diwarnai dengan Giemsa selama 1-3 menit lalu dibilas di bawah air mengalir. Preparat ditutup  dengan  kaca  penutup  dan  siap untuk diamati di bawah mikroskop.
Jumlah sel apoptosis dihitung per seribu sel per ekor larva katak. Dengan cara yang sama, dihitung juga jumlah sel normal dan sel  nekrosis  untuk  mengetahui  frekuensi sel  apoptosis  diantara  sel  normal  dan  sel nekrosis.        Sel  apoptosis  dikenali  melalui adanya blebbing membran, kondensasi dan marginalisasi kromatin, kondensasi sitoplasma,  volume  sel  yang  menyusut, membran inti hancur, fragmentasi inti, dan adanya  badan  apoptosis.  Sel  nekrosis dikenali  melalui      ukuran  sel  yang bertambah besar, sel dan organel- organelnya  hancur,  serta  sel  mengalami lisis (Ziori et al, 2003; Chen, 2004)

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Setelah  perlakuan  dengan  pemberian fraksi  polar  daun  jawer  kotok  dalam variasi  dosis  yang  digunakan  terhadap larva katak Rana catesbiana , dan
perlakuan  untuk  mengamati  sel  apoptosis, sel normal, dan sel nekrosis, diperoleh data
seperti  tercantum  pada  tabel  berikut  :
Tabel 1. Frekuensi Sel Apoptosis di antara Sel Normal dan Sel Nekrosis
No Dosis mg/kg BB Larva ke JmL Sel Yang Diamati Sel Apoptosis Sel Nekrosis Sel Normal JmL. % JmL. % JmL. % 1 0 (1) 1000 515 51,5 183 18,3 302 30,2 (2) 1000 538 53,3 230 23,0 232 23,2 (3) 1000 509 50,9 291 29,1 200 20,0 (4) 1000 542 54,2 203 20,3 255 25,5 (5) 1000 528 52,8 247 24,7 225 22,5 (6) 1000 511 51,1 223 22,3 266 26,6 Rata-rata ± SD 523,83 14,22 52,38 1,42 229,50 37,40 22,95 3,74 246,66 35,68 24,67 3,57 2 125 (1) 1000 696 69,6 233 23,3 71 7,1 (2) 1000 722 72,2 173 17,3 105 10,5 (3) 1000 715 71,5 188 18,8 97 9,7 (4) 1000 682 68,2 239 23,9 79 7,9 (5) 1000 702 70,2 183 18,3 115 11,5 (6) 1000 725 72,5 137 13,7 138 13,8 Rata-rata ± SD 707,00 16,64 70,70 1,66 192,17 38,40 19,21 3,84 100,83 24,42 10,08 2,44 3 250 (1) 1000 757 75,7 160 16,0 83 8,3 (2) 1000 724 72,4 192 19,2 84 8,4 (3) 1000 765 76,5 158 15,8 77 7,7 (4) 1000 761 76,1 167 16,7 72 7,2 (5) 1000 728 72,8 163 16,3 109 10,9 (6) 1000 743 74,3 182 18,2 75 7,5 Rata-rata ± SD 746,33 17,45 74,63 1,74 170,33 13,63 17,03 1,36 83,33 13,39 8,33 1,33 4 500 (1) 1000 784 78,4 143 14,3 73 7,3 (2) 1000 792 79,2 139 13,9 69 6,9 (3) 1000 779 77,9 143 14,3 78 7,8 (4) 1000 812 81,2 125 12,5 63 6,3 (5) 1000 821 82,1 114 11,4 65 6,5 (6) 1000 783 78,3 126 12,6 91 9,1 Rata-rata ± SD 795,17 17,29 79,51 1,72 131,67 11,83 13,16 1,18 73,17 10,29 7,31 1,02
Sel apoptosis pada kelompok perlakuan  pemberian  fraksi  polar  daun jawer  kotok  menunjukkan  peningkatan frekuensi sesuai dengan peningkatan dosis dibandingkan  kontrol.      Frekuensi  sel nekrosis pada kelompok perlakuan
pemberian  fraksi  polar  daun  jawer  kotok menunjukkan  penurunan  frekuensi  yang lebih  rendah      bila  dibandingkan  dengan kontrol  sebanding  dengan  dosis  yang digunakan.  Hal  itu  menunjukkan  bahwa fraksi  polar  daun  jawer  kotok  mempunyai
aktivitas  proapoptosis  meningkat  sesuai dengan  dosis  yang  diberikan.  Aktivitas
pro-apoptosis  tertinggi  diberikan  oleh fraksi dosis 500 mg/kg BB, yaitu 79,51 %.
Tabel 2 .   Persentase  Frekuensi  Sel  Apoptosis  Diantara  Frekuensi  Sel  Normal  dan  Sel Nekrosis No Dosis mg/kg bb Sel Apoptosis Rata-rata ± SD Sel Nekrosis Rata-rata ± SD Sel Normal Rata-rata ± SD 1. 0 52,38 ± 1,42 22,95 ± 3,74 24,67 ± 3,57 2. 125 70,70 ± 1,66 19,21 ± 3,84 10,08 ± 2,44 3. 250 74,63 ± 1,74 17,03 ± 1,36 8,33 ± 1,33 4. 500 79,51 ± 1,72 13,17 ± 1,18 7,31 ± 1,02
Melalui  Analisis  variansi  pada  taraf kepercayaan  95  %  diperoleh  hasil  bahwa setiap kelompok perlakuan   menunjukkan frekuensi  sel  apoptosis,  nekrosis,  dan  sel normal  berbeda  nyata  untuk  setiap  dosis yang diberikan.
Uji  Newman-Keuls    menunjukkan bahwa  ketiga  kelompok  perlakuan    dosis 125  mg/kg  BB,  250mg/kg  BB,  dan  500 mg/kg BB memberikan efek yang berbeda terhadap  peningkatan  frekuensi  apoptosis dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol negatif . Fraksi  polar  daun  jawer  kotok dengan dosis 500 mg/kg BB, memberikan  pengaruh  signifikan  terhadap jumlah  sel  nekrosis,  bila  dibandingkan dengan  perlakuan  dosis  lain    maupun kontrol negatif.
Ditemukannya  sel  apoptosis  pada kelompok  kontrol  dikarenakan  apoptosis itu  sendiri  merupakan  sebuah  proses normal yaitu kematian sel yang terprogram, sel dapat menjalankan program  kematian  selnya  sendiri  tanpa
adanya  rangsangan  dari  luar  atau  lewat jalur  intrinsik  (Harja  &  Liu,  2004). Terdapatnya  sel  apoptosis  pada  kelompok kontrol juga dikarenakan larva katak  yang digunakan  dalam  percobaan  adalah  yang telah  mencapai  stadium  metamorfosis klimaks,  pada  tahap  ini  kematian  sel  pada ekor  larva  katak  akan  mencapai  jumlah yang  maksimal  (W.  Duellman  and  L. Trueb, 1986).

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  pengujian  aktivitas pro-apoptosis  fraksi  polar  daun  jawer kotok  ( Plectranthus  scutellaroides) pada ekor  larva  katak Rana  catesbeiana saat metamorfosis klimaks dapat diambil simpulan  bahwa  fraksi  polar  daun    jawer kotok  mempunyai  aktivitas  pro-apoptosis Dosis  500mg/kg  BB  mempunyai  aktivitas pro-apoptosis paling optimal sebesar 79,51 %.

## DAFTAR PUSTAKA
Amin,  A.,  Susanne.  1997.  Apoptosis  And Necrosis. Alcohol  Health  &  Research
World . 21(4):325-329.
Bar,  P.R.  1996.  Apoptosis:  The  Cell’s
Silent  Exit. Life  Science .  59(5):369-
378.
Bold  R.J.,  P.M.  Termuhlen  and  D.J.
McConkey.  1997.  Apoptosis,  Cancer and Cancer Therapy. Surgical
Oncology . 6(3):133-142.
Chen, Z. 2004. Neuron Cell Death . USA : Washington  University  School  of Medicine de  Padua,  L.S.  1999. Plant  Resources  of South-East  Asia I. Medicinal  and Poisonous Plants 1. Leiden: Backhuys Publishers. P. 408-409.
DiPiro,  J.T.,  R.L.  Talbert  and  G.C.  Yee,
G.R.  1997. Pharmacotherapy.  A
Phatophysiologic  Approach ,  6 th Ed. Connecticut:  Appleton  and  Lange.
2405 Duellman,  W.E.,  L.  Trueb.  1986. Biology of  Amphibians. New  York  :  Alan  P.
Liss. 99-118.
Freshney,  R.I.  1983. Culture  of  Animal
Cells .  New  York  :  Alan  P.  Liss.  99-
118.
Guyton, A.C. 1996. Fisiologi Manusia dan
Mekanisme Penyakit . Jakarta: Penerbit
Buku Kedokteran EGC. 31
Harja,  K.M.,  J.R.  Liu,  2004.  Apoptosome
Dysfunction in Human Cancer .
Apoptosis . 9: 691-704.
Moelyono  MW,  2010, Etnofarmasi  Daun
Jawer
Kotok (Plectranthus
scutellaroides  (l.)R.Br.  Sebagai  Anti
Radang  Komunitas  Tatar  Sunda ,
Disertasi, Universitas Padjadjaran Ziori,  C.  Ch.,  Th.  Z.  Charilaos  dan  K.  K.
Michael.  2003.  Apoptosis  in  Heart
Failure. Hellenic Journal of Cardiology . 44: 56 – 70. Zug, G.R. 1993. Herpetology. An introductory  Biology  Of  Amphibians And  Reptiles .  London:  Academic Press. P. 38