## Aktivitas  Antioksidan  Senyawa  Asam  5(E)-Eikosenoat  dari  Batang Tanaman Polygonum pulchrum Bl
Muh. Hajrul Malaka, Agung Wibawa Mahatva Yodha, Azhar, Rini Hamsidi, Sahidin *

## Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu Kendari 93232

## Abstract
Isolation  and  identification  of  secondary  metabolite  stem  bark  of Polygonum  pulchrum and  its  antioxidant  activity  were  done. Extraction was performed by maceration using methanol solvent. The separation and purification obtained by using vacuum liquid chromatography (VLC), radial chromatography (RC) and monitored by thin layer chromatography (TLC). Identification of isolated compounds  determined  by  spectroscopy  method  i.e.  FT-IR,  1D-NMR  ( 1 H, 13 C-NMR  and  DEPT)  and  2-D  NMR  (HMQC  and HMBC). White solid compound was isolated and characterized as 5( E )-eicosenoic acid. Antioxidant was analyzed towards DPPH (1,1-diphenyl-picrilhydrazil). The compound showed that has antioxidant potency with IC 50 value at 348.10 µM.
Keywords: Polygonum pulchrum, 5(E)-eicosenoic acid, antimicrobial, antioxidant

## 1. Pendahuluan
Provinsi  Sulawesi  Tenggara  memiliki  kekayaan hayati  yang  sangat  banyak,  khususnya  tanaman  yang memiliki khasiat obat. Dalam kajian eksplorasi aspek kimia dan  farmakologi  dari  tanaman  obat  tradisional,  beberapa famili  dan  genus  tanaman  obat  telah  diteliti  antara  lain Dipterocarpaceae [1, 2, 3], Jatropha [4, 5, 6], Imperata [7], dan Dillenia [8]. Saat ini, genus Polygonum t elah dijadikan sebagai  salah  satu  topik  riset  yang  berpotensial  dalam pengembangan tanaman obat [9].
Berdasarkan kajian bioaktivitas dari genus Polygonum dengan  berbagai  spesies telah  banyak dilaporkan,  antara  lain P.  multiflorum untuk  pengobatan penyakit  kardiovaskuler,  termasuk  aterosklerosis  dan hipertensi,  kemungkinan  besar  karena  memiliki  aktivitas sebagai  antioksidan  [10]. P.  capitatum memiliki  aktivitas antibakteri dan antioksidan [11]. P. perfoliatum L. memiliki berbagai  efek  farmakologis  termasuk  antiinflamasi, antibakteri,  dan  efek  antitumor  [12]. P.  hydropiper L. sebagai antioksidan dan antitumor [13].
P.  pulcrhum merupakan  salah  satu  spesies  yang berasal dari genus polygonum dimana dari beberapa kajian bioaktivitas yang telah dilakukan menunjukkan aktivitasnya  sebagai  antioksidan  dan  antimikroba,  namun senyawa  metabolit  sekunder  dari  spesies P.  pulchrum sejauh ini belum banyak dilaporkan [9, 14]. Oleh karena itu, perlu dilakukannya isolasi dan identifikasi struktur senyawa
* KBK Farmasi Sains, Fakultas Farmasi UHO Email: sahidin02@yahoo.com
kimia  serta  uji  aktivitas  terhadap  radikal  bebas  1,1- diphenyl-2-picrylhydrazil (DPPH).

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1 Prosedur Umum
Isolasi  dilakukan  dengan  teknik  kromatografi vakum  cair (KCV), kromatografi  radial (KR) menggunakan  fase  diam  Si-gel  60  GF  (Merck),  serta analisis  dengan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dengan fase diam silica gel (Merck Kieselgel 60F 254 , 0.25 mm). Pengukuran  spektra  1D-NMR  ( 1 H  and 13 C-NMR)  dan 2D-NMR  (HMBC,  HMQC,  COSY)  menggunakan spektrometer  JEOL  ECP  500  pada  frekuensi  500  MHz ( 1 H) dan 125 MHz ( 13 C) di Pusat Penelitian Kimia LIPI, Serpong, Indonesia.
Gambar 1. Struktur asam 5( E )-eikosenoat
2.2 Sampel Tanaman
Malaka dkk: Aktivitas Antioksidan Senyawa Asam 5(E)-Eikosenoat dari Batang Tanaman
Polygonum pulchrum Bl
Tanaman P.  pulchrum Bl.  diperoleh  dari  Pusat Koleksi dan Pengembangan Tanaman Obat Tradisional Masyarakat  Sulawesi  Tenggara  Arboretum  Prof. Mahmud Hamundu Universit as Halu Oleo. Identifikasi tanamana  dilakukan  di  Herbarium  Bogoriense,  Bogor, Indonesia.

## 2.3 Isolasi
Sebanyak  2  kg  batang  tanaman P.  pulcrhum Bl dimaserasi  dengan  metanol  selama  3x24  jam  di  dalam wadah  yang  tertutup  dengan  penggantian  pelarut. Setelah  dipekatkan  dengan rotary  vacuum  evaporator (Buchi, Switzerland), diperoleh ekstrak kental berwarna merah  kecokelatan  (75  g).  Ekstrak  dipisahkan  dengan kromatografi cair vakum KCV (25 g, diameter kolom Φ 10 cm, fase diam Si-gel 150 g) dengan fase gerak yang ditingkatkan kepolarannya ( n -heksan, n - heksan:etilasetat, metanol), menghasilkan 18 fraksi yang selanjutnya dikelompokkan ke dalam 5 fraksi gabungan berdasarkan  profil  KLT.  Fraksi  F2  (12  g)  dipisahkan lebih lanjut dengan KCV (diameter kolom Φ 5 cm, fase diam Si-gel 80 g, dan fase gerak etilasetat: n -heksan (10- 100%, MeOH 100%)  menghasilkan 4 fraksi  gabungan. Pemurnian fraksi F21 menggunakan kromatografi radial (KR),  fase  diam  Si-gel  PF 254 ,  fase  gerak  etilasetat: n - heksan (30:70%) menghasilkan padatan putih sebanyak 25 mg.

## 2.4 Identifikasi Isolat
Isolat  diperoleh  sebagai  padatan  putih,  Spektrum IR  (KBr)  ṽ maks (cm -1 )  3431  (OH);  3018  (C sp 2 -H);  2924 (C sp 3 -H); 1709 (C=O); 1327 (C-C); 1052 (C-O). Spektrum ( 1 H-NMR (CDCl 3 , 500 MHz) 5,34 (2H, m ); 2,34 (2H, t , J =7,7  Hz);  2,16  (1H, t , J =6,5  Hz);  2,02  (2H, m );  1,63 (2H, m );  1,31  (2H, m );  1,28  (22H, m );  0,87  (3H, m ). Spektrum 13 C-NMR  (CDCl 3 ,  125  Hz)  179,52;  130,21; 129,92; 34,12; 31,72; 29,95; 29,88; 29,78; 29,71; 29,62; 29,55; 29,50; 29,43; 29,32; 29,25; 29,22; 27,41; 24,81; 22,76; 14,25.

## 2.5 Uji Aktivitas Antioksidan
Secara  kuantitatif,  1  mL  DPPH  ditambah  etanol hingga menjadi 10 mL (blanko). Isolat dibuat dengan 4 seri konsentrasi yaitu 5, 10, 15 dan 20 ppm. Tiap sampel ditakar dengan volume yang sama kemudian ditambahkan berisi 1 ml  DPPH  0,1%  diencerkan  dengan  hingga  etanol volumenya menjadi 10 mL kemudian diinkubasi pada suhu 37°C  selama  30  menit.  Serapan  diukur  pada  panjang gelombang  517  nm.  Persamaan  garis  yang  diperoleh digunakan untuk menghitung IC 50 [14].

## 3. Hasil dan Pembahasan
Isolasi  senyawa  dilakukan  dengan metode pemisahan  meliputi  ekstraksi  dan  kromatografi. Elusidasi  struktur  ditentukan  dengan  membandingkan data  spektrum  ( 1 H  dan 13 C-NMR)  dengan  data spektroskopi dari pustaka.
Spektrum  IR  memperlihatkan  serapan  gugus hidroksil  (OH)  pada  bilangan  gelombang  3431  cm - 1  dan uluran ikatan C sp 2 -H pada bilangan gelombang 3018 cm -1 . Karakteristik  ikatan  C sp 3 -H  ditunjukkan  dengan  adanya serapan pada bilangan gelombang 2924 cm -1 yang diperkuat oleh serapan tekukan C-C pada 1327 cm -1 . Selain itu, gugus karbonil C=O juga terlihat pada 1709 cm -1 dan gugus C-O pada 1052 cm -1 . Sinyal 13 C-NMR  yang  memperlihatkan  geseran kimia  utama  pada  130,21  dan  129,92  ppm  yang mengindikasikan  sepasang  orbital  hibrid sp 2 ,  serta karbon  karbonil  pada  179,5  ppm.  Selain  itu,  terdapat sinyal  karbon  yang  saling  tumpang  tindih  yang menunjukkan kerapatan elektron  identik. Analisis lebih lanjut  menggunakan  teknik  DEPT  ( Distortionless Enhancement  by  Polarization  Transfer )  digunakan untuk  membedakan  jenis  atom  karbon,  yaitu  metil (CH 3 ), metilen (CH 2 ), metin (C H ) dan karbon kuartener (Cq),  dimana  isolat  memiliki  1  metil,  16  metilen,  2 metin, dan 1 karbon kuartener.
Data  spektrum 1 H-NMR  menunjukkan  8  jenis proton  alifatik  yang  mewakili  38  proton.  Salah  satu sinyal proton pada geseran kimia δ H 5,34 ppm memiliki kerapatan  elektron  yang  lebih  rendah  ( deshielding ) dibandikan  proton  lainnya,  karena  terikat  pada  atom karbon yang memiliki ikatan rangkap dua (C5-C). Sinyal lainnya memiliki geseran kimia yang relatif kecil karena terikat  pada  karbon  C sp 3 yang  memiliki  kerapatan elektron  cukup  tinggi.  Hasil  interpretasi  data  IR  dan NMR  memberikan  informasi  rumus  molekul  senyawa isolat  adalah  C 20 H 38 O 2 dengan  DBE  ( Double  Bond Equivalence ) = 2 yang berasal dari 1 ikatan rangkap dan 1 karbon karbonil.
Konfirmasi  struktur  isolat  dilakukan  dengan analisis 2D-NMR menggunakan teknik HMBC ( Hetero Multiple  Bond  Correlation )  menyatakan  korelasi  jarak jauh antara proton dan karbon tetangga. Karbon karbonil pada δ C 179,9 ppm memiliki korelasi jarak jauh dengan proton  pada    δ H 1,63  ppm  (H-2)  dan  2,34  ppm  (H-3), Korelasi jarak jauh juga diperlihatkan oleh H-7 terhadap C-5, C-6, dan C-8.
Gambar 2. Struktur HMBC asam 5( E )-eikosenoat
Malaka dkk: Aktivitas Antioksidan Senyawa Asam 5(E)-Eikosenoat dari Batang Tanaman Polygonum pulchrum Bl
Berdasarkan data 1D dan 2D-NMR, senyawa isolat adalah  asam  5- E -eikosenoat.  Hal  ini  didukung  oleh kemiripan  parameter  pada  sinyal  1H  dan  13C-NMR antara  senyawa  isolat  dan  asam  5- E -eikosenoat  (Tabel 1).
Potensi  penangkalan  radikal  bebas  senyawa  isolat terhadap radikal DPPH mengindikasikan senyawa isolat memiliki kemampuan untuk mendonorkan elektron kepada DPPH.  Hasil  uji  kuantitatif  aktivitas  antioksidan menunjukkan  bahwa  isolat  mempunyai  nilai  IC 50 sebesar 348,10  µM.  Aktivitas  antioksidan  isolat  diperkirakan berasal  dari  delokalisasi  elektron  pada  gugus  karboksilat. Aktivitas antioksidan 5- E -eikosenoat lebih rendah dibandingkan  dengan  kontrol  positif  vitamin  E  yang memiliki nilai IC 50 sebesar 18,79 µM.

## 4. Kesimpulan
Hasil  isolasi  dan  identifikasi  senyawa  dari  batang tanaman P.  pulchrum B1  yaitu  asam  5- E -eikosenoat memiliki  aktivitas  antioksidan  lemah  dengan  nilai  IC 50 sebesar 348,10 µM.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  kepada  Direktorat  Jenderal Pendidikan  Tinggi  Kementerian  Pendidikan  dan Kebudayaan Republik Indonesia sebagai penyedia dana penelitian melalui Hibah Kompetensi 2014.

## Daftar Pustaka
1. Sahidin,  Hakim  EH,  Juliawaty  LD,  Syah  YM,  Din  LB, Ghisalberti  EL,  Latip  J,  Said  IM,  and  Achmad  SA. Cytotoxic  Properties  of  Oligostilbenoids  from  the  Tree Barks of Hopea dryobalanoides . Z. Naturforsch. C. , 2005, 60c ; 718-723.
2. Muhammad N, Din LB, Sahidin I, Hashim SF, Ibrahim N, Zakaria  Z  and  Yaacob  WA,  Acuminatol  and  Other Antioxidative Resveratrol Oligomers from the Stem Bark of Shorea acuminate . Molecules , 2012, 17 ; 9043-9055.
3. Juliawati  LD,  Sahidin,  Hakim  EH,  Achmad  SA,  Syah YM, Latip J and Said IM. A 2-arylbenzofuran derivative from Hopea mengarawan , Nat. Prod. Comm., 2009, 4(7) ; 947-950.
4. Sahidin, Nakazibwe S, Taher M, Saxena AK, Ichwan SJA and  Ardiansyah.  Antiproliferation  of  curcusone  B  from Jatropha curcas on human cancer cell lines. Aust. J. Basic & Appl. Sci. , 2011, 5(8) ; 47-51.
5. Sahidin,  Yamin,  Ginting  S,  Manggau  MA,  Lukman. Cytotoxic potency of diterpenes from Jatropha plants. Int J Pharm Pharm Sci , 2013, 5(3) ; 417-420.
6. Sabandar  CW,  Ahmat  N,  Jaafar  FM  and  Sahidin  I. Medicinal property, phytochemistry and pharmacology of several  Jatropha  species  (Euphorbiaceae):  A  review. Phytochemistry , 2013, 85 ; 7-29.
7. Ruslin,  Zaini  MA,  Rianse  U,  Sahidin  I,  Dianawaty  D, Sumaji  AA  and  Amalia  L:  Anti-hypertensive  activity  of Alang-alang  ( Imperata  cylindrica L.)  roots  methanolic extract on male wistar rat. Int J Res Pharm Sci , 2013, 4(4) ; 537-542
Tabel 1. Perbandingan data 1 H dan 13 C-NMR senyawa isolat dan pustaka No. C δ C 1 (ppm) δH (ΣH, mult., J dalam Hz) δ C 2 (ppm) δ H 2 (ΣH, mult., J dalam Hz) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 179,52 34,12 24,81 31,72 130,21 129,92 27,41 29,95 29,88 29,78 29,71 29,62 29,55 29,50 29,43 29,32 29,25 29,22 22,76 14,25 - 2,34 (2H, t , J =7,7 Hz) 1,63 (2H, m ) 2,16 (2H, t, J=6,5 Hz 5,34 (1H, m ) 5,34 (1H, m ) 2,02 (2H, m ) 1,28 (2H, m ) 1,28 (2H, m ) 1,28 (2H, m ) 1,28 (2H, m ) 1,28 (2H, m ) 1,28 (2H, m ) 1,28 (2H, m ) 1,28 (2H, m ) 1,28 (2H, m ) 1,28 (2H, m ) 1,28 (2H, m ) 1,31 (2H, m ) 0,87 (3H, m ) 179,6 34,03 24,72 31,91 130,92 129,71 27,14 29,06-29,65 29,06-29,65 29,06-29,65 29,06-29,65 29,06-29,65 29,06-29,65 29,06-29,65 29,06-29,65 29,06-29,65 29,06-29,65 29,06-29,65 22,67 14,05 - 2,3 (2H 1,71 (2H) 2,03 (2H) 5,3 (1H) 5,3 (1H) 2,06 (2H) 1,2-1,3 (2H) 1,2-1,3 (2H) 1,2-1,3 (2H) 1,2-1,3 (2H) 1,2-1,3 (2H) 1,2-1,3 (2H) 1,2-1,3 (2H) 1,2-1,3 (2H) 1,2-1,3 (2H) 1,2-1,3 (2H) 1,2-1,3 (2H) 1,2-1,3 (2H) 0,85 (3H)
1) Isolat
2) Pustaka [15]
Malaka dkk: Aktivitas Antioksidan Senyawa Asam 5(E)-Eikosenoat dari Batang Tanaman
Polygonum pulchrum Bl
8. Jalil  J,  Sabandar  CW,  Ahmat  N,  Jamal  JA,  Jantan  I, Aladdin NA, Muhammad K, Buang F, Mohamad HF and Sahidin I: Inhibitory Effect of Triterpenoids from Dillenia serrata (Dilleniaceae)  on  Prostaglandin  E2  Production and  Quantitative  HPLC  Analysis  of  Its  Koetjapic  Acid and Betulinic Acid Contents. Molecules , 2015, 20 ; 3206- 3220.
9. Sahidin,  Nohong,  Sani  A,  Manggau  MA,  Sukohar  A, Widodo H, Baharum SN. Radical scavenging activity of triterpene steroids from stem of Polygonum pulchrum Bl,
Int J Pharm Pharm Sci , 2014, 6(8) ; 350-354.
10. Liu LP, Liao ZP, Yin D, Li WD, Liu D, Li Q, Huang QR, Yang  YF,  He  M.  The  protective  effects  of Polygonum multiflorum stilbeneglycoside  preconditioning  in  an ischemia/reperfusion model of HUVECs. Acta Pharmacol.Sin. , 2010, 31; 405–412
11. Li YM, Gong Y. The research progress on the chemical component  and  the  pharmacology  of Polygonum
capitatum Ham ex D. Don’. J. of Guizhou University (Nat.
Sci.) , 2007. 24 ; 205–207.
12. Dongsheng F, Zhou X, Zhao C, Chen H, Zhao Y, Gong X. Anti-inflammatory, antiviral and quantitative study of quercetin-3-O-β-D-glucuronide in Polygonum perfoliatum L., Fitoterapia, 2011, 82 ; 805–810.
13. Munira  S,  Farzana  S,  Shabnam  M.  Anti-Neoplastic Activities of Polygonum hydropiper Linn. against Ehrlich Ascites  Carcinoma in  Swiss  Albino  Mice, Adv.  in  Bio. Res. , 2013, 7(1) .
14. Sahidin I, Suwandi A, Nohong, Manggau MA. Profile of anticancer  and  radical  scavenging  activities  of  steroids from  stems  of Polygonum  pulchrum Bl., IJPSR ,  2015, 6(5) ; 2178-2184.
15. Viswanadh  GS,  Ramaipah  PA,  Laastch  H,  Maskey  R. Chemical  Constituents  of  The  Heartwood  and  Bark  of Homonoia riparia. J.Top.Med.Plants , 2006, 7(2) .