p-ISSN 2550-1232
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2022.Vol.6.No.2.215 e - ISSN 2550-0929

## Efektivitas Bakteri Bacillus subtilis terhadap Kelulushidupan Ikan Nila (Oreochromis niloticus) yang Diinfeksi Bakteri Pseudomonas fluorescens
Effectiveness of Bacillus subtilis on survival rate of Nile tilapia ( Oreochromis niloticus ) infected with Pseudomonas fluorescens
Budianto*, Ihza Farras Faadhilah, Aprilia Ekawati, Silvia Anggaita, Qurrota A’yunin, Sri Andayani
Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya, Jalan Veteran, Malang, Jawa Timur, 65145, Indonesia
*Korespondensi: budianto.bp@ub.ac.id

## ABSTRAK
Penyakit bakterial yang menginfeksi ikan air tawar terutama ikan nila ( Oreochromis niloticus )  yaitu  penyakit  septikemia  yang  terjadi  akibat  infeksi  oleh Pseudomonas fluorescens. Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  efektivitas  bakteri Bacillus subtilis terhadap kelulushidupan ikan nila yang diinfeksi bakteri P. fluorescens secara in vivo . Dosis B . subtilis yang digunakan berbeda-beda tiap perlakuan yakni A (10 4 CFU/ml), B  (10 6 CFU/ml),  dan  C  (10 8 CFU/ml).  Ikan  dipelihara  selama  7  hari  untuk  dihitung kelulushidupannya. Pemberian dosis bakteri B. subtilis memberikan pengaruh nyata (α < 0,05)  terhadap  kelulushidupan  ikan  nila  yang  terinfeksi  bakteri P.  fluorescens .  Dosis terbaik  bakteri B.  subtilis pada  perlakuan  A  (10 4 CFU/ml)  dapat  meningkatkan kelulushidupan ikan nila yang terinfeksi bakteri P. fluorescens dengan nilai kelulushidupan sebesar 93,33 ±11,55%. Rata-rata kisaran kualitas air pada masa pemeliharaan yakni suhu 25°-30° C, pH 7,2-9, dan oksigen terlarut 5,50-7,00 ppm.
Kata Kunci:  Bacillus  subtilis; Ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus ); Pseudomonas fluorescens

## ABSTRACT
A bacterial disease  that  infects  freshwater  fish,  especially  tilapia  ( Oreochromis niloticus ),  is  a  septicemia  disease  caused  by  Pseudomonas  fluorescens  infection.  The purpose of this study was to determine the effectiveness of Bacillus subtilis on the survival of tilapia infected with P. fluorescens in vivo. The doses of B. subtilis used were different for each treatment, namely A (10 4 CFU/ml), B (10 6 CFU/ml), and C (10 8 CFU/ml). Fish were kept for 7 days to calculate their survival rate. Dosage of B. subtilis bacteria had a significant effect (α > 0,05) on the survival of tilapia infected with P. fluorescens bacteria. The best dose of B. subtilis in treatment A (104 CFU/ml) could increase the survival rate of tilapia infected with P. fluorescens with a survival rate of 93.33 ± 11.55%. The average ranges  of  water  quality  during  the  maintenance  period  are  25°-30°C,  pH  7.2-9,  and dissolved oxygen 5.50-7.00 ppm.
Keywords : Bacillus  subtilis; Nile  Tilapia ( Oreochromis  niloticus ); Pseudomonas fluorescens
Budianto: Efektivitas Bakteri Bacillus subtilis terhadap kelulushidupan ikan nila p-ISSN 2550-1232 https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2022.Vol.6.No.2.215

## PENDAHULUAN
Kerugian  yang  disebabkan  oleh penyakit  seperti  kualitas  air  yang menurun, kematian massal, dan
penurunan  produksi  menjadi  masalah utama dalam usaha budidaya ikan. Salah satu  penyakit  infeksius  yang  dapat menyebabkan  kematian  ikan  secara massal  dan  dalam  waktu  yang  cepat adalah  penyakit  bakteri  (Manurung  dan Susantie,  2017).  Gejala  klinis  pada  ikan yang  terserang  oleh  penyakit  bakteri adalah  pendarahan  pada  insang,  perut membesar  berisi  carian,  lepasnya  ekor sirip, nafsu makan hilang, dan permukaan tubuh terdapat luka. Pembengkakan  dan  kerusakan  pada ginjal,  limpa  dan  hati  akan  terlihat  jika dilakukan  pembedahan  pada  tubuh  ikan
(Napitupulu, 2016).
Penyakit bakterial yang menginfeksi ikan air tawar terutama ikan nila  yaitu  penyakit  septikemia  yang terjadi  akibat  infeksi  oleh Pseudomonas fluorescens .  Bakteri P. fluorescens banyak menginfeksi ikan baik pada ikan budidaya  maupun  perairan  (Nurjannah, et  al .,  2014).    Hardi, et  al .,  (2014) mengatakan  patogenisitas  dari  bakteri Pseudomonas sp  pada  ikan  dapat memberikan  gejala  klinis  yakni  pola renang ikan nila yang diinfeksi menunjukkan adanya abnormalitas yaitu ikan  berenang whirling (miring).  Gejala umum  yang  muncul  saat  pengifeksian pertama  adalah  ikan  berenang  lemah, diam di dasar akuarium, dan mengalami gangguan  pernafasan  sehingga  posisi mulut  ikan  berada  di  bawah  permukaan air ( gasping ) pada saat berenang. Antibiotik komersil sering diberikan  untuk  menanggulangi  ikan yang terserang penyakit bacterial. Namun, antibiotik komersil yang digunakan  dalam  jangka  waktu  yang lama  dimugkinkan  dapat  menimbulkan resistensi  bakteri  (Zaman  dan  Sarbini, 2015).  Pengobatan  penyakit  bakterial pun dapat dilakukan dengan pemanfaatan bakteri  yang  lain  salah  satunya  adalah bakteri Bacillus sp.  Simanjuntak, et  al ., (2016)  menyatakan  bahwa  penggunaan
jenis  bakteri Bacillus sp.  mampu memperbaiki  pertumbuhan,  meningkat- kan  konsentrasi  protease  dalam  saluran pencernaan,  dan  menurunkan  jumlah bakteri  potensi  patogen  dan  intestinum ikan.  Kemudian,  enzim  amylase  dan protease dalam saluran penceraan disekresi oleh bakteri Bacillus sp. Bakteri B. subtilis menghasilkan antibiotik yang dapat  menembus  sel  patogen  dan menghambat  aktivitas  patogen  yang menyebabkan  kerusakan  sel  dan  hifa. Bakteri B. subtilis juga memproduksi dan mensekresikan  siderofor  dan  hidrogen sianida yang beracun bagi patogen.
Pada  penelitian  sebelumnya  oleh Budianto  dan  Suprastyani  (2017)  telah dilakukan  uji  daya  hambat  bakteri B. subtilis terhadap pertumbuhan bakteri P . fluorescens secara In  Vitro yang menunjukkan  hasil  Bakteri B.  subtilis memiliki senyawa yang dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri P. fluorescens .  Hasil  uji  dari  aktivitas antimikrob menggunakan metode cakram.  Penelitian  menggunakan  OD 600 dan  diameter  zona  hambat  terhadap waktu  inkubasi  diameter  zona  hambat terus  meningkat  pada  perlakuan  lama inkubasi  jam  ke-30  (fase  stasioner), dengan  nilai  diameter  zona  hambat terbesar  yaitu  9,29  ±  1,65  mm  sehingga perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui efektivitas dan dosis terbaik bakteri B.  subtilis terhadap  kelulus- hidupan  dan  kualias  air  ikan  nila  yang diinfeksi bakteri P. fluorescens.

## METODE PENELITIAN

## Persiapan Hewan uji
Ikan  uji  yang  digunakan  adalah ikan  nila  ( O . niloticus )  yang  didapatkan dari  Balai  Benih  Ikan  Tlogowaru, Malang.  Ikan  nila  yang  digunakan berukuran  8,33  ±  0,87  cm.  Sebelum dilakukan penelitian, ikan diaklimatisasi selama  5  hari.  Selama  aklimatisasi  ikan nila  diberi  pakan  dengan  FR  ( Feeding rate) sebesar 5% sebanyak 2 kali sehari.
p-ISSN 2550-1232
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2022.Vol.6.No.2.215 e - ISSN 2550-0929
Kultur Bakteri B. subtilis dan Bakteri Patogen
Bakteri B.  subtilis diperoleh  dari Loka  Pemeriksaan  Penyakit  Ikan  dan Laboratorium (LP2IL) Serang. Sedangkan  untuk  bakteri  pathogen diperoleh  dari Balai  Besar  Perikanan
Budidaya  Air  Payau  (BBPBAP)  Jepara.
Kultur  bakteri  pathogen  dilakukan berdasarkan  Ulloa-Urizar et  al .  (2015) dengan  sedikit  modifikasi  bahwa  media kultivasi untuk bakteri Bakteri B. subtilis menggunakan  media Trypticase  Soy Agar  ( TSA) (Merck)  sedangkan  bakteri patogen P.  fluorescens menggunakan Pseudomonas  Selective  Agar (PSA) (Oxoid). Kultur dilakukan selama 24 jam pada suhu 32°C. Untuk uji penginfeksian bakteri  terhadap  ikan,  koloni  bakteri patogen diinokulasi dalam 3 ml Nutrient Broth dan diinkubasi tanpa agitasi selama 24  jam  pada  suhu  32°C.  Hasil  kultur kemudian diencerkan dengan media cair untuk  menghitung  kepadatan  bakteri dengan  0.5  McFarland  standard  yang menunjukkan estimasi
konsentrasi
bakteri.
Penginfeksian Bakteri Pseudomonas fluorescens Penginfeksian bakteri P. fluorescens pada  benih  ikan  nila berdasarkan hasil penelitian pendahuluan didapatkan metode sesuai dengan Amanda  dan  Ayuzar  (2016),  bahwa penginfeksian  dilakukan  dengan  cara perendaman  ikan  nila  selama  15  menit dalam  5  liter  air  menggunakan  suspensi bakteri dengan konsentrasi 10 7 CFU/mL. Proses perendaman ikan diuji pada suhu akuarium  26 o -28 o C  yang  sebelumnya telah dilakukan uji LD 50 .
Uji Aktivitas Antagonis Bakteri Bacillus subtilis Setelah  dilakukan  penginfeksian bakteri pathogen, ikan dipindahkan ke 3 akuarium dengan kepadatan 10 ekor/akuarium  dengan  kapasitas  air  10 liter.  Uji  aktivitas  antagonis  bakteri B. subtilis pada benih ikan nila
menggunakan metode yang sesuai dengan Rusdani, et al. (2016), bakteri B. subtilis diberikan  pada  media  air budidaya  di  setiap  akuarium  sesuai perlakuan dengan dosis 10 4 CFU/ml (A), 10 6 CFU/ml  (B),  dan  10 8 CFU/ml  (C) masing  masing  perlakuan  terdapat  3 ulangan.  Penginfeksian  dilakukan  sekali pada awal pemeliharaan. Setiap akuarium diberi aerasi untuk
meningkatkan suplai oksigen dan ikan uji dipelihara  selama  7  hari.  Selama pemeliharaan,  dilakukan  pengukuran suhu,  pH,  dan  DO  setiap  hari  pada  pagi dan  sore  hari  (pukul  07.30  dan  15.00 WIB), masing-masing menggunakan alat termometer, pH meter, dan DO meter.

## Kelulushidupan
Kelulushidupan ikan merupakan perbandingan jumlah ikan yang hidup di awal  dan  akhir  penelitian.  Rumus  yang digunakan untuk
menghitung kelulushidupan  ikan  berdasarkan  Putra,
et al . (2017), adalah sebagai berikut:
Keterangan  : No = Jumlah ikan pada awal penelitian Nt = Jumlah ikan pada akhir penelitian SR = Tingkat kelulushidupan (%) Analisis Data Data yang diperoleh akan dilakukan analisa secara statistik dengan menggunakan  analisis  keragaman  atau uji  F  (ANOVA)  dan  Uji  Duncan  sesuai dengan  rancangan  yang  dipergunakan yaitu  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) (α = 0,05).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kelulushidupan  ikan  nila  selama pemeliharaan  dalam  penelitian  memiliki
SR = N o - Nt
No x 100%
Budianto: Efektivitas Bakteri Bacillus subtilis terhadap kelulushidupan ikan nila p-ISSN 2550-1232 https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2022.Vol.6.No.2.215
perbedaan pada setiap perlakuan. Tingkat kematian tertinggi terjadi pada perlakuan C (10 8 CFU/ml) dimana dari 10 ekor ikan yang  dipelihara  pada  masing-masing ulangan  terjadi  kematian  sebanyak  7,  5, dan  7 ekor.  Hasil  kematian  ikan  nila  ini menunjukkan bahwa perlakuan C memiliki  kelulushidupan  sebesar  36,67 ±11,55 %. Pada Tabel 1 juga
menunjukkan  bahwa  hasil  yang  berbeda terjadi  pada  Perlakuan  A  (10 4 CFU/ml). Pada perlakuan A terjadi kematian hanya pada 1 ulangan saja sebanyak 2 ekor dari 10 ekor ikan yang dipelihara. Selain itu, pada  Gambar  1  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi  dosis  bakteri B.  subtilis
yang diberikan dapat menurunkan tingkat  kelulushidupan  ikan  Nila  yang terinfeksi bakteri P. fluorescens.
Gambar 1. Tingkat Kelulushidupan Ikan Nila yang terinfeksi bakteri P. fluorescens
Berdasarkan  hasil  uji  F  (Anova) menggunakan  SPSS  menunjukkan  nilai sig.  (0,002)  <  0,05  yang  mengartikan bahwa pemberian dosis bakteri B. subtilis memberikan  pengaruh  nyata  terhadap kelulushidupan  ikan  nila  yang terinfeksi bakteri P.  fluorescens .  Selanjutnya, berdasarkan  hasil  uji  lanjut  Duncan
menunjukkan  bahwa terdapat  perbedaan signifikan antara perlakuan A, B, dan C.
Selain itu, Perlakuan A merupakan dosis yang paling optimum terhadap kelulushidupan  ikan  nila  yang terinfeksi bakteri P.  fluorescens sebesar  93,33 ±11,55%.  Juga  Tingkat  kelangsungan hidup ikan pada pemeliharaan perlakuan A tergolong baik, hal ini dinyatakan oleh Mulyani, et  al .  (2014),  bahwa  tingkat kelangsungan  ≥  50%  tergolong  baik, kelangsungan hidup 30-50% sedang dan kurang dari 30% tidak baik.
Bakteri B.  subtilis merupakan salah satu mikroorganisme yang diketahui dapat mencegah penyakit pada ikan  atau  biasa  disebut  dengan  bakteri antagonis. Pemanfaatan bakteri antagonis sebagai agen hayati pengendali penyakit  pada  ikan  semakin  penting dalam mengurangi dan bahkan menghilangkan  penggunaan  antibiotik pada  budidaya.  Menurut  Verschuere, et al. (2000), mekanisme bakteri antagonis yang digunakan sebagai biokontrol yaitu menghasilkan  senyawa  yang  dapat menghambat pertumbuhan patogen, terjadi  kompetisi  pemafaatan  senyawa tertentu  atau  kompetisi  pemanfaatan energi, kompetisi tempat menempel, dan meningkatkan kekebalan inang. Kemampuan B.  subtilis menjadi mikroba menguntungkan dalam menghambat patogen dikarenakan menurut  Rukmini, et  al. (2015), B. subtilis memiliki  senyawa  antibiotik yaitu  polymyxin,  colistin,  dan  circulin mampu  menghambat  aktivitas  bakteri gram  negatif.  Selain  itu, B.  subtilis juga mempunyai senyawa lain seperti basitrasin.
Tabel 1.   Kelulushidupan (%) Ikan Nila yang terinfeksi bakteri P. fluorescens Perlakuan Ulangan Rerata (%) 1 2 3 A 100 80 100 93,33±11,55 B 70 80 60 70,00 ±10,00 C 30 50 30 36,67 ±11,55
p-ISSN 2550-1232
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2022.Vol.6.No.2.215 e - ISSN 2550-0929
Basitrasin  merupakan  campuran  dari beberapa  polipeptida  yang  berbeda dalam komposisi asam aminonya. Selain itu  basitrasin  mampu  menghambat biosintesis  dinding  sel.  Soesanto  (2008) menambahkan  bahwa  basitrasin  mampu merusak  dinding  sel  mikroba  dengan menghambat sintesis enzim atau inaktivasi enzim, sehingga menghilangkan  viabilitas  dan  sering menyebabkan sel lisis. Basitrasin menghambat sintesis dinding sel terutama  dengan  mengganggu  sintesis peptidoglikan. Menurut  Parameswari, et  al.
(2013), probiotik seperti B. subtilis tidak selalu  memberikan  hasil  yang  positif pada  pengujian  terhadap  spesies  ikan yang  berbeda.  Probiotik  sebanyak  0,001 mg/L  dapat  menyebabkan  penurunan kelangsungan  hidup  pada  benih  patin jambal  ( Pangasius  djambal ).  Selain  itu, probiotik  juga  tidak  berpengaruh  nyata untuk  memperbaiki  jaringan  organ  pada ikan  gabus  ( Channa  striata )  yang  diuji. Jumlah  bakteri  yang  terlalu  banyak menyebabkan  bakteri  cepat  membentuk spora  sehingga  fungsi  dan  aktivitas bakteri probiotik tidak optimal. Setiawati, et  al. (2013)  menerangkan bahwa B.  subtilis merupakan  bakteri yang dapat menguraikan protein menjadi asam amino. Asam amino ini digunakan oleh bakteri tersebut untuk memperbanyak  diri.  Pertumbuhan B. subtilis yang semakin tinggi menimbulkan persaingan dengan patogen dalam pengambilan nutrisi yang pada  akhirnya  menghambat  aktivitas bakteri  probiotik  di  dalam  saluran
pencernaan  ikan  sehingga  sekresi  enzim menurun.
Gejala  klinis  yang  timbul  pada ikan  uji  selama  penelitian  berlangsung adalah  gerakan  ikan  menjadi  lamban, ikan cenderung diam di dasar akuarium, luka/borok,  perdarahan  pada  bagian pangkal  sirip  ekor  dan  sirip  punggung, dan  pada  perut  bagian  bawah  terlihat buncit  dan  terjadi  pembengkakan.  Ikan sebelum  mati  naik  ke  permukaan  air dengan sikap berenang yang labil. Gejala ini  pernah  pula  dilaporkan  oleh  bahwa tanda-tanda  umum  dari  ikan  yang terinfeksi  bakteri P.  fluorescens adalah ikan bergerak lamban, mengambil oksigen  di  permukaan  air  atau  diam  di dasar  perairan,  tidak  mau  makan,  sirip rusak,  luka  pada  kulit  sampai  ke  otot, exopthalamus  (mata  menonjol),  perut membengkak  berisi  cairan  kemerahan, darah  dan  jaringan  yang  terserang menjadi tidak berfungsi. Gejala penyakit tersebut  timbul  48  jam  setelah  ikan terinfeksi.  Gambaran  gejala  klinis  pada ikan uji disajikan pada Gambar 2.

## Kualitas air
Rata-rata  nilai  data  kualitas  air pada  penelitian  ini  telah  disajikan  pada Tabel 2 sebagai berikut:
Tabel 2. Data Kualitas Air
No.  Indikator Kisaran 1. Suhu 25° - 30° C 2. pH 7,20 - 9,00 3. DO 5,50 - 7,00 mg/l
Budianto: Efektivitas Bakteri Bacillus subtilis terhadap kelulushidupan ikan nila p-ISSN 2550-1232 https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2022.Vol.6.No.2.215
Gambar 2. Gejala  Klinis  Infeksi P.  fluorescens pada  Ikan  Nila  ( O.  niloticus );  (a)  Ikan Sehat, (b) Hemoragi 1 , (c) Bercak Merah pada Operkulum dan Sirip 1 , serta Perut Membesar 2 , (d) Bercak Merah pada Operkulum dan Sirip 1 , Luka pada Kulit 2 , serta Sirip Ekor Rusak 3 .
Data hasil penelitian menunjukkan nilai  suhu  berkisar  antara  25-30°C. Menurut  BSNI  (2009),  untuk  produksi ikan pada budidaya air tenang membutuhkan  suhu  kisaran  25°-32°C. Menurut  Kordi  (2009),  suhu  25°-30°C
merupakan suhu optimum untuk pertumbuhan  ikan  nila.  Effendi  (2003), bahwa  masuknya  sinar  matahari  ke perairan  akan  menyebabkan    perubahan energi  panas  dalam  perairan.  Sehingga dapat  dikatakan  bahwa  suhu  pada penelitian  ini  masih  tergolong  dapat ditoleransi  oleh  ikan  nila.  Hal  ini  tidak mempengaruhi metabolism ikan.
Selama  pelaksanaan  penelitian, nilai  pH  pada  air  media  pemeliharaan ikan  nila  berkisar  antara  7,2  -  9,0. Menurut Panggabean, et al. (2016), pH 6- 8,5  merupakan  nilai  pH  yang  cocok dalam  budidaya  ikan  nila,  dan  pH  5-11 dapat  ditoleransi  ikan  nila.  Irianto  dan Triwoko  (2011)  menyatakan  bahwa ondisi  perairan  bersifat  netral  apabila nilai  pH  sama  dengan  7  dan  kondisi perairan  bersifat  asam  bila  pH  kurang dari 7, sedangkan pH lebih dari 7 perairan bersifat  basa.  Sehingga  dapat  dikatakan bahwa nilai pH pada penelitian ini masih tergolong dapat ditoleransi oleh ikan nila. Hal  ini  tidak  mempengaruhi  apa-apa pada ikan.
Data hasil penelitian menunjukkan DO  berkisar  antara  5,50  -  7,00  mg/l.
Menurut  Iskandar  dan  Elrifadah  (2015), selama  pemeliharaan  ikan  pada  air tenang membutuhkan kandungan oksigen  yang  terlarut  (DO)  berkisar antara 3,5-4,1 ppm. Menurut Arie (1999), bahwa  kandungan  oksigen  yang  baik untuk budidaya ikan minimal 4 mg/l air. Menurut  BSNI  (2009),  nilai  oksigen terlarut  yang  layak  digunakan  untuk budidaya  ikan  nila  yakni  >  3  mg/l. Sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  DO pada penelitian ini masih tergolong dapat ditoleransi  oleh  ikan  nila.  Hal  ini  tidak mempengaruhi apa-apa pada ikan.

## KESIMPULAN
Pemberian dosis bakteri B. subtilis memberikan  pengaruh  nyata  terhadap kelulushidupan  ikan  nila  yang terinfeksi bakteri P.  fluorescens .  Dosis  terbaik bakteri B. subtilis pada perlakuan A (10 4 CFU/ml) dalam meningkatkan kelulushidupan  ikan  nila  yang terinfeksi bakteri P.  fluorescens dengan  nilai kelulushidupan  sebesar  93,33  ±11,55%. Rata-rata  kisaran  kualitas  air  pada  masa pemeliharaan yakni suhu 25°-30° C, pH 7,2-9,  dan  oksigen  terlarut  5,50-7,00 ppm.
p-ISSN 2550-1232
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2022.Vol.6.No.2.215 e - ISSN 2550-0929

## DAFTAR PUSTAKA
Arie,  U.  (1999).  Pembenihan  dan
Pembesaran  Nila  Gift.  Cet  1
Penebar Swadaya. Jakarta.
Badan  Standarisasi  Nasional  Indonesia., (2009).  SNI  No.  7550:2009. Produksi  Ikan  Nila  ( Oreochromis niloticus , Bleeker) Kelas Pembesaran di Kolam Air Tenang. Jakarta. Budianto  dan  Suprastyani,  H.  (2017). Aktivitas Antagonis Bacillus subtilis terhadap Streptococcus iniae dan Pseudomonas fluorescens . Jurnal Veteriner, 18 (3), pp. 409-415. Effendi,  H.  (2003).  Telaah  Kualitas  Air bagi  Pengelolaan  Sumber  Daya dan Lingkungan Perairan. Kanisius. Yogyakarta. Ulloa-Urizar,  G.  Aguilar-Luis,  M.A., Lama-Odría, M.D.C.D., Camarena-Lizarzaburu, J. & Mendoza, J.V. (2015). Antibacterial  activity  of  five Peruvian  medicinal  plants  against Pseudomonas  aeruginosa.  Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine 5(11); 928-931 Hardi,  E.H.,  Catur,  A.P.,  &  Gina,  S. (2014). Toksisitas Produk Ekstraseluler dan Intraseluler Bakteri Pseudomona s  sp.  pada
Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ), Jurnal  Veteriner,  15 (3),  pp.  312-
322. Irianto dan Triwoko. (2011). Eutrofikasi Waduk dan Danau: Permasalahan, Pemodelan dan Upaya Pengendalian.  Litbang  Sumber Daya  Air  dan  Pekerjaan  Umum. Bandung. Iskandar,  R.  &  Elrifadah.,  (2015). Pertumbuhan  dan  efisiensi  pakan ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus ) yang diberi pakan buatan berbasis kiambang. Ziraa’ah, 40 (1), pp. 18- 24. Kordi, K. (2009). Budi Daya Perairan. PT Citra Aditya Bakti. Bandung.
Manurung, U.N. & Susantie, D., (2017).
Identifikasi  bakteri  patogen  pada
ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus ) di  lokasi  budidaya  ikan  air  tawar Kabupaten  Kepulauan  Sangihe. Budidaya  Perairan,  5 (3),  pp.  11- 17. Mulyani,  Y.S.,  Yulisman,  &  Mirna,  F., (2014). Pertumbuhan dan efisiensi pakan  ikan  nila  ( Oreochromis niloticus )  yang  dipuasakan  secara periodik. Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia, 2 (1), pp. 1-12.
Napitupulu,  R.A.,  Suryanto,  D.,  & Desrita,  D.,  (2016).  Isolasi  dan identifikasi bakteri potensial patogen pada ikan nila ( Oreochromis niloticus ) di Kolam Budidaya Patumbak. Jurnal Aquacoastmarine, 15 (1), pp. 1-10. Nurjanah,  S.,  Slamet,  B.P.,  dan  Sarjito., (2014). Sensitivitas bakteri Aeromonas sp.  dan Pseudomonas sp.  yang  diisolasi  pada  ikan  mas ( Cyprinus  carpio )  sakit  terhadap berbagai  macam  obat  beredar. Journal of Aquaculture Management  and  Technology, 3 (4), pp. 308-316. Panggabean,  T.K.,  Ade,  D.S.,  & Yulisman.  (2016).  Kualitas  air, kelangsungan hidup, pertumbuhan,  dan  efisiensi  pakan ikan nila yang diberi pupuk hayati cair pada air media pemeliharaan. Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia, 4 (1), pp.67-79.
Parameswari,  W.,  Sasanti,  A.D.,  & Muslim.  (2013).  Populasi  bakteri, histologi, kelangsungan hidup dan pertumbuhan  benih  ikan  gabus ( Channa  striata )  yang  dipelihara dalam media dengan penambahan probiotik. Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia . 1 (1): 76-89.
Putra,  E.M.,  Gunanti,  M.,  &  Luthfiana, A.S.  (2017).  Infestasi  ektoparasit pada  ikan  nila  ( Oreochromis niloticus )  yang  dipelihara  dengan menggunakan  sistem  akuaponik dan  tanpa  akuaponik. Journal  of Aquaculture  and  Fish  Health, 7 (1), pp. 42-49.
Rukmini, M., Sahoo, D., Dalei, J., & Ray,
R. (2015). Production, purification
Budianto: Efektivitas Bakteri Bacillus subtilis terhadap kelulushidupan ikan nila p-ISSN 2550-1232 https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2022.Vol.6.No.2.215
and  characterization  of  bacitracin from Bacillus subtilis . The Pharma  Innovation  Journal . 3 (12): 77-82. Rusdani,  M.M.,  Amir,  S.,  Waspodo,  S., &  Abidin.  Z.  (2016).  Pengaruh pemberian  probiotik Bacillus spp.
melalui pakan terhadap kelangsungan  hidup  dan  laju pertumbuhan ikan nila ( Oreochromis  niloticus ). Jurnal Biologi Tropis . 16 (1): 34-40. Setiawati,  J.E.,  Tarsim,  Adiputra,  Y.T., &  Hudaidah,  S.  (2013).  Pengaruh penambahan probiotik pada pakan dengan  dosis  berbeda  terhadap pertumbuhan, kelulushidupan, efisiensi pakan dan retensi protein ikan patin ( Pangasius hypophthalmus ). Jurnal  Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan . 1 (2): 151-162. Simanjuntak,  I.C.B.H.,  Suminto  & Agung,  S.  (2016).  Pengaruh konsentrasi bakteri probiotik yang berasosiasi  dalam  usus  sebagai bioflok terhadap efisiensi
pemanfaatan  pakan,  pertumbuhan dan  kelulushidupan  lele  dumbo
( Clarias  gariepinus ). Journal  of Aquaculture  Management  and
Technology, 5 (2), pp. 1-8. Soesanto, L. (2008). Pengantar Pengendalian  Hayati  Penyakit
Tanaman,  Suplemen  ke  Gulma dan Nematoda. Rajawali Pers. 573 p. Verschuere, L., Rombout, G., Sorgeloos, P.,  &  Verstraete,  W.  (2000). Probiotics  bacteria  as  biocontrol agents in aquaculture. App. Environ. Microbiol . 64 : 655-671. Zaman, S.A. & Sarbini, R.S. (2015). The
potential  of  resistant  starch  as  a prebiotic. Critical Review Biotechnology.  Early  Online ,  pp.
1–7.