## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 e-ISSN: 2355-7931 Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj Journal E-mail: current.biochemistry@gmail.com
Hepatoprotective Activity of Propolis Trigona spp., Hibiscus sabdariffa , and Myrmeleon sp. in Rats Induced by Paracetamol (Aktivitas Hepatoprotektif dari Propolis Trigona spp., Hibiscus sabdariffa , and Myrmeleon sp. Pada Tikus yang Diinduksi Parasetamol)
Akhmad Endang Zainal Hasan 1 , Agus Setiyono 2 , Miko Afrian 1
1 Department of Biochemistry, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia 2 Division of Veterinary Pathology, School of Veterinary Medicine and Biomedical Science, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia
Received: 18 April 2022 ; Accepted: 2 June 2022
Corresponding author : Akhmad Endang Zainal Hasan ; Departemen Biokimia IPB; e-mail: pakzainalhasan@gmail.com

## ABSTRACT
Negative  effects  on  health  will  occur  in  excessive  use  of  paracetamol.  The  main  objective  of  this study  was  to  determine  the  hepatoprotective  activity  of  Propolis  Trigona  spp.,  Hibiscus  sabdariffa,  and Myrmeleon sp. in rats induced by paracetamol. The study was conducted on 36 Sprague Dawley rats with 6 each  in  each  group.  Group  1  (normal  control),  group  2  (positive  control,  temulawak  42.86  mg/kg  BW), group 3 (negative control), group 4 (infusion of Myrmeleon 10 mg/kg BW), group 5 (propolis extract 0.02 ml/kg  BW),  and  group  6  (Hibiscus  sabdariffa  infusion  0.02  ml/kg  BW).  Aspartate  aminotransferase  (AST) and  alanine  aminotransferase  (ALT)  concentrations  were  determined  spectrophotometrically  and microscopically  for  liver  histopathology.  The  results  showed  that  during  three  weeks  of  treatment  with Propolis  Trigona  spp.,  Hibiscus  sabdariffa,  and  Myrmeleon  sp.  in  rats  showed  that  this  treatment  could decrease ALT and AST activity according to positive control. The ALT activity values of the three materials were 69.26, 51.00, 51.00, 43.67, U/I with AST values of 110.29, 97.33, 91.00, 91.33 U/I. Based on Duncan's test,  there  were  significant  differences  between  all  treatments  with  negative  and  positive  control  groups. Likewise,  with  the  histopathological  scoring  results,  the  negative  control  was  found  to  be  significantly different  from  all  treatments.  Therefore,  treatment  with  propolis  Trigona  spp.,  Hibiscus  sabdariffa,  and Myrmeleon sp. possibly as hepatoprotective.
Keywords: Propolis Trigona spp., Curcuma xanthorrhiza, Hibiscus sabdariffa, Myrmeleon.

## ABSTRAK
Pengaruh  negatif  pada  kesehatan  akan  terjadi  pada  penggunaan  parasetamol  secara  berlebihan. Tujuan  utama  penelitian  ini  adalah  menentukan  aktivitas  hepatoprotektif  dari  Propolis  Trigona  spp., Hibiscus  sabdariffa,  dan  Myrmeleon  sp.  pada  tikus  akibat  induksi  parasetamol.  Penelitian  dilakukan terhadap 36 ekor tikus Sprague Dawley dengan masing-masing 6 ekor tiap kelompok. Kelompok 1 (kontrol normal), kelompok 2 (kontrol posisitif, temulawak 42.86 mg/kg bb), kelompok 3 ( Kontrol negatif), kelompok
4 (infusa undur2 10 mg/kg bb), kelompok 5 (propolis ekstrak 0.02 ml/kg bb), dan kelompok 6 (infusa bunga merah  0.02  ml/kg  bb).  Pengukuran  konsentrasi  aspartate  aminotransferase  (AST)  dan  alanine aminotransferase (ALT) ditentukan secara spektrofotometri dan mikroskopik untuk histopatologi hati. Hasil penelitian menunjukkan bahwa selama tiga minggu pengobatan Propolis Trigona spp., Hibiscus sabdariffa, dan Myrmeleon sp. pada tikus menunjukkan bahwa perlakuan tersebut dapat menurunkan aktivitas ALT dan AST  sesuai  denagn  kontrol  positif.     Nilai  aktivitas  ALT  ketiga  bahan tersebut adalah  69.26,  51.00,  51.00, 43.67, U/I dengan nilai AST adalah 110.29, 97.33, 91.00, 91.33 U/I.   Berdasarkan uji Duncan, dihasilkan perbedaan yang nyata dari semua perlakuan dengan kelompok negatif dan kontrol posisitf. Demikian pula dengan  hasil  skoring  histopatologi,  terhadap  kontrol  negatif  ditemukan  berbeda  nyata  dari  semua perlakuan.  Oleh  karena  itu,  perlakuan  pemberian  propolis  Trigona  spp.,  Hibiscus  sabdariffa,  dan Myrmeleon sp. mungkin sebagai hepatoprotektif.
Kata kunci : Propolis Trigona spp., Curcuma xanthorrhiza, Hibiscus sabdariffa, dan Myrmeleon sp.

## 1. PENDAHULUAN
Derajat  kesehatan  sesorang  ditentukan oleh organ penting yang disebut hati (Kalra & Tuma,  2020).    Faktor  dalam  tubuh  dan lingkungan  berpengaruh  terhadap  kondisi  hati tersebut.  Menurut World Health Organization (2019)  pengaruh  kesehatan  ini  ditentukan dengan  adanya  perkembangan  teknologi  dan gaya  hidup  yang  berkembang  dengan  pesat. Penggunaan    berbagai    zat    kimia  baik    yang ditambahkan  pada    makanan    atau  minuman ( feed  additive )  maupun  berupa  obat-obatan serta  pestisida,  akan  ikut  memperberat  kerja hati.    Hal  ini    disebabkan    hati    merupakan organ    yang  melakukan  proses  detoksifikasi (Chiang,  2014).  Perubahan  pada  semua  bahan asing  atau  toksin  menjadi  bahan  yang  tidak membahayakan  tubuh  merupakan  proses detoksifikasi  dalam  hati.    Kerusakan  dalam hati  akan  terjadi  bila  bahan  yang  berbahaya tersebut  dalam  jumlah  yang  banyak  dan melebihi  kemampuan  hati  dalam  melakukan detoksifikasi  (Islam  et  al.,  2021).    Contoh sumber kerusakan hati tersebut adalah hepatotoksin.    Menurut  Li  et  al.  (2019) golongan  senyawa  yang  bersifat  toksik terhadap  hati  disebut  hipotoksin.    Diantara senyawa  yang  dapat  menyebabkan  adalah parasetamol  (Rotundo  &  Pyrsopoulos,  2020). Keberadaan  senyawa  hepatotoksin  ini  akan merusak  hati  bisa  dosisnya  berlebah  atau
pemakaiannya  berlangsung  lama  (Abou  Seif, 2016).
Penggunaan suatu bahan asal tanaman, dan  hewan  secara  turun  temurun  disebut sebagai  obat  tradisional  (Atanasov  et  al., 2021).      Penggunaan  yang  sudah  berlangsung lama  ini  karena  harga  yang  relatif  murah, tersedia  dan  mudah  disiapkan  serta  mudah digunakan.    Hal  tersebut    memicu    penelitian ilmiah    tentang  fungsi    tanaman    obat diantaranya dalam pencegahan dan pengobatan penyakit  hati  atau  antihepatotoksik.    Aktivitas antihepatotoksik  bahan        tersebut  dapat dilakukan  dengan  pengujian  pada  hewan  coba sehingga pengaruhnya dapat diketahui. Aktivitas  enzim  yang  dapat  dilihat  dalam darah adalah aspartate aminotransferase (AST) dan alanin aminotransferase (ALT). Perubahan  nilai  dari  kedua  enzim  tersebut menandakan  kerusakan  hati  bila  bernilai sebesar  10-150  kali  dan  20-200  kali. Sedangkan  rasio  aktivitas  AST/ALT      dari harga      normal  1.3      turun  menjadi  1.0.    Bila tingkat    keparahan    tinggi  bisa  mencapai  0,3- 0,4  (Bergmeyer  dan  Bernt  1971).  Kenaikkan ini disebabkan oleh adanya radikal bebas yang dapat memicu timbulnya penyakit degeneratif. Salah  satu  bahan  yang  dapat  merusak  hati adalah  parasetamol  dalam  dosis  berlebih  yang digunakan dalam waktu yang lama (Chefirat et al., 2020).
Di  Indonesia  sebagai  negara  dengan flora dan fauna yang melimpah terdapat bahan yang  berfungsi  sebagai  antihepatoprotektor diantaranya  adalah  temulawak  (Syamsudin  et al.,  2019),  undur-undur  darat  (Tara,  2011), propolis  (Prasetyo  et  al.,  2019),  dan  bunga merah  (Liem  &  Levita,  2017).    Bahan-bahan tersebut  memiliki    senyawa    alkaloid, flavonoid,  saponin,  kelompok  terpenoid,  dan asam askorbat yang berfungsi sebagai hepatoprotektor,  tapi  belum    dibuktikan perbandingan kemampuannya secara bersamaan.  Oleh  karena  itu,  penelitian mengenai  potensi  hepatoprotektif    ketiga bahan  tersebut  secara  bersamaan  perlu  untuk dilakukan.
Penelitian  ini  bertujuan  membuktikan adanya  potensi  hepatoprotektif  undur-undur darat,  propolis,  dan  bunga  merah  dalam memperbaiki  kerusakan  yang  terjadi  adalah hati  tikus  yang  diinduksi    parasetamol, melalui  penurunan  aktivitas  ALT  dan  AST serta melihat histopatologi hati.

## 2. METODOLOGI Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  tikus  putih  jantan Sprague-Dawley , undur-undur darat, bunga merah kering, serbuk temulawak,  ekstrak  propolis  Trigona      spp., parsetamol,   kloroform,   kit reagen ALT dan AST  (Labkit),  etanol,  NaCl,  EDTA,  xilol, parafin, pewarna Mayer’s Haemotoxylin, LiCl, pereaksi-pereaksi uji fitokimia, dan eosin.

## Preparasi Undur-undur Darat
Undur-undur    sebanyak  10  mg,  digerus dengan mortar hingga hancur, lalu ditambahkan    akuades  10  ml.  Penyaringan dilakukan  dengan  menggunakan  saringan  120 mesh.    Hal  ini  dilakukan  agar  memperoleh infusa yang berukuran seragam (Tara, 2011).
Preparasi Air Rebusan Bunga merah
Sebanyak  1.1  g  bunga  merah  kering dipotong-potong, dan direbus dalam 20 mL air panas (100 ºC) hingga volume menjadi 10 mL. Setelah  dingin  filtrat  disaring  dengan  saringan kain (Liem & Levita, 2017).

## Hewan coba dan Rancangan Percobaan
Penelitian  menggunakan  hewan  coba  ini dilakukan sesuai dengan penelitian Hasan et al. (2016)  yang  dimodifikasi.    Kelompok  hewan coba  terdiri  dari  6  kelompok  dengan  rincian sebagai  berikut  kontrol  normal  (kelompok  I, tidak ada perlakuan), kontrol positif (kelompok II,  pemberian  temulawak  dengan  dosis  42.86 mg/kg  BB),    kontrol  negatif  (kelompok  III, tikus  diberi  parasetamol  tanpa  pemberian bahan lain), kelompok undur-undur (kelompok IV,  tikus  diberi  parasetamol  dan  diberi  infusa undur-undur  dengan  dosis  10  mg/kg  BB), kelompok  propolis  (kelompok  V,  tikus  diberi parasetamol  dan  diberi  propolis  dengan  dosis 0.02  ml/kg  BB),  kelompok  bunga  merah (kelompok  VI,  tikus  diberi  parasetamol  dan diberi  infusa  (rebusan)  bunga  merah  dengan dosis  6  ml/kg  BB).      Pengamatan  dan pemberian air serta pakan dilakukan hingga 21 hari.        Dosis  parasetamol  yang  diberikan merupakan dosis  toksik  untuk tikus  percobaan yaitu  500  mg/kg  bb  (Islam  et  al.,  2021) sedangkan pemberian dosis untuk setiap bahan hepatoproteksif  berdasarkan  cara-cara  atau kebiasaan umum masyarakat dalam mengkomsumsi bahan tersebut.

## Pengamatan
Pengamatan  fisik  tikus  meliputi  tingkah laku,  bobot  badan  dan  keadaan  fisik  diamati setiap harinya.   Keadaan  fisik   tikus   terdiri dari warna mata, tekstur feses, warna feses, dan mobilitas tikus.

## Pengukuran Enzim ALT dan AST
Darah  dari  vena  ekor  ditampung  dengan vial  steril  hingga  2  mL.    Setelah  didiamkan darah  tersebut  disentrifus  pada  3000  rpm selama  15  menit.      Aktivitas  AST  dan  ALT
diukur  dengan      metode      dari  International Federation      of      Clinical Chemistry (IFCC). Sebelum  dilakukan  pengambilan  darah,  tikus dipuasakan  selama  24  jam  (Das  et  al.,  2019). Kadar  AST  dan  ALT  dihitung  menggunakan rumus sebagai berikut : (dalam satuan U/I):
Kadar ALT atau AST = ΔA/menit x 1768

## Keterangan : ΔA=Absorbansi Sample

## Histopatologi Hati
Sesuai  dengan  yang  dilakukan  oleh Hasan  et  al.  (2016),  hati  yang  sudah  diambil dari  tikus  dilakukan  preparasi,  dilakukan difiksasi  dalam  10%  formalin  selama  12  jam, lalu  ditanam  dalam  parafin  yang  kemudian setelah  siap  dilakukan  pemotongan  dan pewarnaan  menggunakan  hematoxyline  eosin (HE).
Pengamatan  histopatologi  hati  dilakukan terhadap  sirosis,  nekrosis,  degenerasi  butir,
degenerasi  lemak,  oedema,  sirosis,  dan pendarahan.  Kemudian  skoring  dilakukan untuk mengukur tingkat kerusakan mulai dari 0 (normal) hingga 4 (tingkat kerusakan 75-100% dari area pandang).

## 3. HASIL
Perbedaan  kondisi  fisik  hewan  coba terlihat  pada  saat  sebelum  pemberian  dan setelah  pemberian  parasetamol.    Setelah penghentian  pemberian  parasetamol,  terjadi peningkatan  BB    hewan  coba  di  semua kelompok percobaan (Tabel 1). Pada kelompok kelompok positif (pemberian suplemen    temulawak)    terdapat    peningkatan BB  mencapai  10.33%,  0.61%  pada  kelompok undur-undur  darat,  18.28%  pada  kelompok propolis,  13.48%  pada  kelompok  bunga merah,  dan  20.56%  pada  kelompok  normal (Gambar 1).
Tabel 1.  Kondisi fisik hewan coba
Parameter Keterangan Normal Parasetamol Perlakuan Warna Mata Merah Merah Merah Warna Feses Hijau Tua Hijau Pucat Hijau Tua Tesktur Feses Padat Lunak Padat Tingkah Laku Normal Normal Normal
Gambar 1 Perkembangan bobot tikus selama perlakuan
Sifat  hepatotoksik  parasetamol  pada tikus dilihat dari nilai  aktivitas  AST  dan ALT serum  setelah  pemberian  perlakuan.  Selama dua  minggu  pemberian  parasetamol,  terjadi peningkatan  aktivitas  AST  dan  ALT  yang disajikan pada Tabel 2 dan Tabel 3.
Pemberian suplemen setelah pencekokan  parasetamol  dapat  menurunkan aktivitas  AST  dan    ALT.    Gambar  2  dan Gambar 3 menunjukkan hasil penelitian.  Dari Gambar  2  dan  3  tersebut  dapat  dilihat  adanya penurunan  yang  sangat  tajam  setelah  hari  ke-
14 hingga hari ke-35. Berdasarkan uji statistik ( p <0.05), perbandingan nilai tengah kelompok negatif  data  ALT  berbeda  nyata  dengan kelompok  normal,  positif,  undur-undur  darat, propolis, dan bunga merah (Tabel 4). Aktivitas ALT  kelompok  tikus  normal  yang  tidak diberikan  parasetamol  memiliki  aktivitas terendah,  diikuti    kelompok    bunga  merah, undur-undur  darat,  dan  propolis.  Penurunan aktivitas dapat dilihat melalui selisih  aktivitas hari  ke-35  dengan hari ke-14 pada Tabel 2.
Tabel 2. Aktivitas ALT selama pemberian parasetamol (U/I) Kelompok Perlakuan Hari ke- 0 7 14 Normal 23.14 48.45 123 Positif 39.72 72.17 165 Negatif 38.41 38.415 164 Undur Undur Darat 24.44 98.36 213.33 Propolis 50.40 73.33 115.5 Bunga merah 43.63 82.36 117 Tabel 3. Aktivitas AST selama pemberian parasetamol (U/I) Kelompok Perlakuan Hari ke- 0 7 14 Normal 22.67 128.92 298 Positif 37.9 120.25 380.67 Negatif 38.289 206.28 326 Undur Undur Darat 24.195 92.83 275 Propolis 49.555 148.41 295.5 Bunga merah 41.81 87.79 239
Tabel  5  menunjukkan  aktivitas  AST hari  ke-35.    Dari  Tabel    tersebut,    uji    nilai tengah  (P<0.05)  kelompok  negatif  juga berbeda  nyata  dengan  kelompok  normal, undur-undur darat, propolis, dan bunga merah, sama  dengan  kelompok  positif.  Uji  tersebut juga  menunjukkan  bahwa  kelompok  positif sama hasilnya secara statistik dengan
kelompok    normal,  undur-undur  darat, propolis,  dan  bunga  merah.    Penurunan aktivitas  AST  setiap  kelompok dapat dilihat melalui selisih aktivitas hari ke-35 dengan hari ke-14 pada Tabel 3.  Hasil skoring dari Tabel 6 memperlihatkan kisaran nilai dari 0.00 sampai dengan 1.70.
Gambar 2 Aktivitas ALT selama perlakuan
Gambar 3 Aktivitas AST selama perlakuan Tabel 4. Aktivitas AST selama pemberian parasetamol (U/I) Kelompok Perlakuan Hari ke-35 D (hari ke 14-35) Normal 39.84 a 83.16 Positif 69.26 ab 94.74 Negatif 89.50 b 74.50 Undur Undur Darat 51.00 a 162.33 Propolis 51.00 a 64.50 Bunga merah 43.67 a 73.33
Keterangan : perbedaan yang nyata dinyatakan dengan huruf yang berlainan (p<0.05)
Tabel 5. Aktivitas ALT selama pemberian parasetamol (U/I) Kelompok Perlakuan Hari ke-35 D (hari ke 14-35) Normal 88.46 a 209.54 Positif 110.29 ab 270.38 Negatif 138.23 b 187.77 Undur Undur Darat 97.33 a 177.67 Propolis 91.00 a 204.50 Bunga merah 91.33 a 147.67 Keterangan : perbedaan yang nyata dinyatakan dengan huruf yang berlainan ( p <0.05) Tabel 6. Hasil skoring histopatologi hati Kelompok Perlakuan Skoring Normal 0.30 a Positif 0.50 a Negatif 1.70 c Undur Undur Darat 0.70 a Propolis 1.20 b Bunga merah 0.70 a
Keterangan : perbedaan yang nyata dinyatakan dengan huruf yang berlainan (p<0.05)
Pada  Gambar  4a  terlihat  jaringan  hati normal  yang  ditandai  dengan  adanya  sel-sel hepatosit  yang  tersusun  radial  dari  vena sentral,  inti  hepatosit  yang  terlihat  jelas, adanya  sitoplasma  di  dalam  membran  sel. Kondisi  yang sama juga terlihat  pada  Gambar 4b,  yaitu kelompok positif.  Kondisi hepatosit yang cukup baik pada kelompok positif karena pengaruh  pemberian  temulawak.  Senyawa antioksidan pada temulawak  ini  diduga  dapat memperbaiki  sel-sel  hati  dengan  relatif  cepat. Gambar 4c menunjukkan gambaran histopatologi  hati  yang      diinduksi  oleh parasetamol.  Pengaruh  pemberian  bunga merah,  undur-undur  dan  propolis  ditunjukkan dalam Gambar 4 d, e dan f.

## 4. PEMBAHASAN
Pemberian  parasetamol  berdampak  pada feses menjadi lebih berbau, lunak dan warnanya pucat.  Perubahan kondisi tikus tersebut diduga karena melemahnya  fungsi  hati   akibat  dosis toksik  parasetamol  sehingga  mempengaruhi homeostasis  tubuh  yang  kemudian  berdampak pada  konsisi  fisik  hewan  tersebut  (McCrae  et
al.,  2018).  Kondisi  ini  mulai  membaik  seperti keadaan  normal  setelah  diberikannya  bahan hepatoprotektor.
Menurut Chefirat et al. (2020), parasetamol  menimbulkan  toksisitas  dengan berbagai  macam  gejala  seperti  sakit  perut, anoreksia,    mual-mual,    dan  muntah  yang terjadi  dalam  24  jam  pertama,  dan  akan berkelanjutan  hingga  tujuh  hari  atau  lebih. Menurut  Lillehoj  et  al.  (2018),  gejala  tersebut menyebabkan turunnya nafsu makan dan dapat mengurangi bobot badan.
Pemberian  temulawak  selama  penelitian ternyata  dapat  menaikkan  bobot  badan  dan berpengaruh  terhadap  nafsu  makan  tikus. Sesuai  dengan  penelitian  Rahmat  et  al.(2021) bahwa  temulawak  dapat  digunakan  sebagai obat  untuk  mengatasi  gangguan    saluran pencernaan,    diare,  gangguan  aliran  getah empedu,  kurang  nafsu  makan,  mencegah perlemakan sel hati dan menghindari terjadinya  radang  lambung.    Sedangkan komponen  lainnya  berfungsi  memperbaiki mikroflora usus sehingga lebih optimal proses pencernaannya (Zam, 2018).
Gambar 4. Jaringan hati (a) kelompok normal, (b) kelompok positif, (c) kelompok negatif,
(d) kelompok undur-undur darat, (e) kelompok propolis, (f) kelompok bunga merah (VS: vena sentral, anak panah: nekrosis, panah bulat: butir lemak) (Pewarnaan HE, perbesaran obyektif 10x).
Peningkatan bobot badan tikus kelompok undur-undur darat setelah penghentian parasetamol diduga karena adanya  perbaikan  dalam  sistem  pencernaan (Tara, 2011).  Hal  ini telah diyakini juga oleh Sharma  (2018)  bahwa  undur-undur  berperan dalam  kesehatan.  Chounta  et  al.  (2005) menyebutkan  klorpropamida      turunan sulfonilurea   pada undur-undur darat memiliki potensi    sebagai  obat  kolestasis,  yaitu berkurang  atau  terhentinya  aliran  empedu. Pada  penelitian  Harwoko  et  al.  (2021) menyebutkan bahwa undur-undur ini berperan sebagai obat antiglikemik.  Peningkatan bobot badan  tikus  juga  terjadi  pada  kelompok propolis.   Propolis      yang    selain    memiliki
potensi  sebagai  hepatoprotektif (Sahlan et al., 2021),  juga  berfungsi          sebagai    faktor pertumbuhan yang  meningkatkan  proses pencernaan dan penyerapan makanan (Braakhuis, 2019). Hal ini akan memperlancar metabolisme  tubuh yang  mengakibatkan kenaikkan  BB  hewan  tersebut.    Hal  yang hampir  sama  terjadi  pada  kelompok  bunga merah.  Tanaman  ini  mengandung hubiscin yang melancarkan peredaran darah, meningkatkan  kerja  usus  dan  mencegah tekanan  darah  tinggi  (Jalalyazdi  et  al.,  2019), sehingga  meningkatkan  bobot  badan  hewan coba.
Selama  minggu  pertama  pemberian parasetamol,  peningkatan      aktivitas      ALT
A B
C D E F
belum   terlalu besar. Peningkatan yang sangat tajam  baru  terjadi  pada  minggu  kedua.  Hasil tersebut  memperlihatkan  kerusakan  sel-sel hati    yang  cukup  parah  oleh  parasetamol (Rotundo & Pyrsopoulos, 2020) .
Murugesh  et  al.  (2005)  menyatakan bahwa  parasetamol  yang  bila  dikonsumsi secara  berlebihan,  dapat  menstimulir  sistem sitokrom  P450  dan  memicu  radikal  bebas, sehingga  . n-asetil-p-benzokuinonimin akan terbentuk.    Reaksi  yang  berkelanjutan  akan menyebabkan  nekrosis  (Murugesh  et  al., 2005).    Hal  ini  didukung  pula  oleh  penelitian Wang et al. (2021).
Aktivitas  AST  dan  ALT  kelompok normal sebesar 39.84 U/l dan 88.46 U/l    bila dibandingkan  dengan  (Farooq  et  al.,  2022) yang  melaporkan  bahwa  kadar  ALT  dan  AST pada tikus tanpa perlakuan atau normal adalah sebesar  73  U/l  dan  46  U/l,  diperoleh  aktivitas AST  berada  di    atas    normal.  Menurut Kvetnansky et al. (2013) peningkatan aktivitas saraf simpatik perifer akan memacu stress dan meningkatkan  tingginya  AST  dan  ALT. Faktor  lain  yang  ikut  mempengaruhi      adalah keragaman   analisis ALT dan AST.  Pengaruh ini dapat disebabkan oleh hemolisis, makroenzim dan keadaan fisiologis tikus yang berbeda-beda.    Mekanisme  biokimia,  kimia dan  fisik  dapat  juga  memacu  terjadinya hemolisis (Marques-Garcia, 2020).
Data pada kedua Tabel tersebut menunjukkan  bahwa  suplemen  temulawak, undur-undur  darat,  proplis,  dan  bunga  merah dapat  menurunkan  aktivitas  ALT  dan  AST menjadi  kondisi  normal.  Penurunan  aktivitas oleh  temulawak  diduga  karena  kandungan senyawa  antioksidan    pada    temulawak. Senyawa    ini  akan  bereaksi  dengan  NAPQI (radikal bebas hasil biotransformasi
parasetamol  di  hati)  sehingga  mengurangi jumlah radikal bebas NAPQI yang mengakibatkan  perbaikan  regenerasi  sel-sel hati.  Menurut  Masfufatun  et  al.  (2021) kandungan senyawa antioksidan dari
temulawak  merupakan  komponen  menjadikan temulawak mampu sebagai hepatoprotektor.
Kelompok tikus yang diberi undur-undur darat  nilai  aktivitas  ALT  dan  AST  mendekati kondisi normal.  Kandungan  sulfonilurea pada undur-undur  darat  atau  klorpropamida  yang merupakan    kelompok    sulfonilurea    dapat memperbaiki   kerusakan   sel-sel    hati   dan meningkatkan regenerasi sel-sel hati.  Menurut penelitian Chounta et al. (2005) dan (Garzel et al.,  2019)  klorpropamida  memiliki  potensi sebagai obat kolestasis dan hepatoprotektor.
Menurunnya  nilai  ALT  dan  AST  pada perlakuan propolis menunjukkan bahwa propolis  berperan  dalam  menurunkan  nilai2 tersebut.    Kemungkinan  kandungan  senyawa flavonoid  dalam  propolis  ternyata  dapat menurunkan aktivitas ALT dan AST (Braakhuis,  2019).  Selain  flavonoid,  tanin dalam  ekstrak  propolis  juga  diduga  dapat memperbaiki sel-sel hati melalui kemampuannya  dalam  mengeliminasi  radikal bebas (Sahlan et al., 2021). Menurut Yan et al. (2020)  bahwa  tanin  pada  teh  telah  terbukti mampu menghambat proses mutasi, menginduksi  enzim  yang  bersifat  antioksidan, dan membersihkan  radikal  bebas.
Suplemen air rebusan bunga merah yang diujikan juga dapat menurunkan aktivitas ALT dan  AST  ke.  Seperti      dengan  propolis, senyawa  flavonoid        dalam        bunga  merah juga        memiliki  pengaruh  yang  sama  dengan propolis dalam menurunkan aktivitas ALT dan AST  ke  kondisi  normal.  Kandungan  asam lemak  yang  merupakan  kandungan  paling tinggi dalam bunga merah diduga meningkatkan  perbaikan  komposisi  membran sel-sel  hati  sehingga  proses  nekrosis  dapat ditekan.  Akibatnya, kandungan ALT dan AST di dalam darah menurun.
Kerusakan  sel  hati  yang  mengalami nekrosis,  degenerasi  butir  lemak  dan  banyak protein  fibrin  merupakan  kondisi  pada kelompok  negative.    Menurut  (McGill  et  al., 2012)  pemberian  asetaminofen  pada  tikus
dapat  menimbulkan nekrosis.  Dengan adanya penuruna  fungsi  lipolitik  hati  karena  adanya senyawa toksik dapat mengakibatkan degenerasi butir lemak.
Histopatologi  kelompok  undur-undur darat setelah pemberian parasetamol menunjukkan bahwa susunan sel hepatosit dari vena sentral masih terlihat sedikit acak-acakan dengan banyaknya     perenggangan     diantara selhepatosit  dan  banyaknya  ruang-ruang  yang berisi  sitoplasma  diantara  sel  hepatosit. Walaupun  demikian,  sudah  terlihat  perbaikan dibandingkan  dengan  kelompok  negatif,  yaitu sudah  tidak  adanya  terlihat  degenerasi  butir- butir    lemak    seperti    kelompok    negatif. Pembentukan  pembuluh  arteri  juga  terlihat pada  kelompok  undur-undur  darat  (Gambar 4d).    Hal  ini  diduga  untuk  meningkatkan ketersedian    energi    untuk    fungsi    hati    yang makin    menurun  karena              pemberian parasetamol.
Pengaruh  pemberian  propolis  setelah parasetamol   terhadap   sel   hepatosit   dapat dilihat   pada   Gambar   4e.   Pada   Gambar tersebut  masih  terdapat  degenerasi  butir-butir lemak  dan  nekrosis,  namun    sel  hepatosit sudah  terlihat  radial  dari  vena  sentral.  Hal  ini berarti  propolis  belum  dapat  mengembalikan secara  sempurna  fungsi  lipolitik  hati  dan regenerasi  hati.  Pengaruh  berbeda    terlihat pada  kelompok  bunga  merah  (Gambar  4f). Pada  Gambar  4f      terlihat  pembesaran  vena yang  cukup  luas  dan  tidak  wajar.  Hal  ini diduga sebagai bentuk respon dalam meningkatkan  kinerja  dan  fungsi  hati  setelah pemberian air rebusan bunga merah. Selain itu juga  terlihat  pembentukan  pembuluh  arteri seperti kelompok undur-undur darat, sedangkan  butir-  butir  lemak  sudah  tidak terlihat.  Hal  ini  sesuai  dengan  Al-Kennany  & Al-Khafaf  (2010)  yang  menyebutkan  ekstrak air bunga merah dapat menurunkan kadar lipid pada tikus dan kelinci.
Berdasarkan  uji  nilai  tengah  ( p <0.05) hasil  skoring  histopatologi  untuk  semua
kelompok  menunjukan    bahwa    kelompok normal    tidak  berbeda  nyata  dengan  positif, undur-undur  darat  dan  bunga  merah,  tapi berbeda  nyata  dengan  kelompok  propolis  dan negatif  (Tabel  5),  sedangkan    kelompok propolis    juga    berbeda  nyata  dengan kelompok  negatif.  Hasil  ini  mendukung    data uji    nilai    tengah    aktivitas  ALT  dan  AST percobaan  (Tabel  3  dan  Tabel  4).    Aktivitas ALT  dan  AST  kelompok  negatif  berbeda nyata  dengan  kelima  kelompok  lainnya (normal,  positif,  undur-undur  darat,  propolis, dan bunga merah).
Berdasarkan metode skoring nilai  antara 0  hingga  1.20  masih  diatas  nilai  control normal  maupun  kontrol  positif  namun  masih lebih  kecil  dibandingkan  dengan  kontrol negatif  yang  bernilai  1.70.      Hal  ini menunjukkan  bahwa  pengaruh  perlakuan sudah memberikan perbaikan terhadap kerusakan  hati  akibat  pemberian  parasetamol. Nilai  terbaik  dari  perbaikan  jaringan  hati diperoleh oleh pemberian bunga merah dengan nilai  0.70  sama  dengan    kontrol  normal maupun kontrol positif (temulawak).
Pemberian temulawak, undur-undur darat,  propolis,  dan  bunga  merah  selama  tiga minggu  pengkonsumsian  dapat  menurunkan aktivitas  AST  dan  ALT.  Aktivitas  ALT  dan AST  keempat  bahan  tersebut  masing-masing adalah  69.26,  110.29,  51.00,  97.33,  51.00, 91.00,    43.67, 91.33 U/I.  Berdasarkan  hasil analisis    statistik  menggunakan  uji  Duncan ( p <0.05),  aktivitas  tersebut  sama  dengan kelompok  normal  dan  dengan  kelompok negative  berbeda  nyata.      Hasil      skoring histopatologi      juga  menunjukkan  kelompok negatif  berbeda  nyata  dengan  ke-5  kelompok lainnya.    Nilai  terbaik  dari  perbaikan  jaringan hati  diperoleh  oleh  pemberian  bunga  merah dengan  nilai  0.70  atau  sama  dengan  kontrol normal  maupun  kontrol  positif  (temulawak). Dengan  demikian,  perlakuan propolis, undur- undur  dan  bunga  merah  berpotensi  sebagai
hepatoprotektor  pada  tikus  yang  diinduksi parasetamol.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Dekan  FMIPA  yang  telah  memberikan kesempatan penulis dalam melakukan penelitian.    Demikian  juga  kepada  Dekan SKHB  yang telah membantu  dan memberikan fasilitas  untuk  menyelesaikan  penelitian  yang dituangkan dalam artikel ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Abou  Seif,  H.  S.  (2016).  Physiological changes  due  to  hepatotoxicity  and  the protective role of some medicinal plants. Beni-Suef  University  Journal  of  Basic and  Applied  Sciences , 5 (2),  134–146. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.b jbas.2016.03.004
Al-Kennany, E. R., & Al-Khafaf, A. I. (2010). Effect  of rosella extract  on development of  fatty  streaks  lesions  in  female  rats.
Iraqi  Journal  of  Veterinary  Sciences ,
24 (2),
81–85. https://doi.org/10.33899/ijvs.2010.5606
Atanasov,  A.  G.,  Zotchev,  S.  B.,  Dirsch,  V. M., Orhan,  I. E.,  Banach, M.,  Rollinger, J.  M.,  Barreca,  D.,  Weckwerth,  W., Bauer,  R.,  Bayer,  E.  A.,  Majeed,  M., Bishayee, A., Bochkov, V., Bonn, G. K., Braidy,  N.,  Bucar,  F.,  Cifuentes,  A., D’Onofrio, G., Bodkin, M., … Supuran,
C.  T.  (2021).  Natural  products  in  drug discovery:  advances  and  opportunities. Nature  Reviews  Drug  Discovery , 20 (3),
200–216. https://doi.org/10.1038/s41573-020- 00114-z
Braakhuis,  A.  (2019).  Evidence  on  the  health benefits of supplemental propolis. Nutrients ,
11 (11).
https://doi.org/10.3390/nu11112705
Chefirat,  B.,  Zergui,  A.,  Rahmani,  C., Belmessabih,  M.  N.,  &  Rezk-kallah,  H. (2020).  Acute  paracetamol  poisonings received at the Oran University Hospital.
Toxicology Reports , 7 (September),
1172–1177. https://doi.org/10.1016/j.toxrep.2020.08. 025 Chiang, J. (2014). Liver Physiology:
MetaboLism  and  Detoxification.  In
Pathobiology  of  Human  Disease:  A Dynamic Encyclopedia of Disease
Mechanisms (Issue  December).  Elsevier Inc.  https://doi.org/10.1016/B978-0-12- 386456-7.04202-7
Chounta,  A.,  Zouridakis,  S.,  Ellinas,  C.,
Tsiodras,  S.,  Zoumpouli,  C.,  Kopanakis, S., & Giamarellou, H. (2005).
Cholestatic liver injury after  glimepiride therapy. Journal  of  Hepatology , 42 (6), 944–946. https://doi.org/10.1016/j.jhep.2005.02.01 1
Das,  D.  C.,  Alam,  S.,  Noor-E-Alam,  S.  M., Kamal, M., Mollah, F. H., & Mamun-Al- Mahtab,  .  (2019).  Correlation  of  serum aspartate  aminotransferase  level  to platelet  count  ratio  index  with  non- alcoholic  fatty  liver  disease  activity score. Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University Journal , 12 (3), 142– 145.
https://doi.org/10.3329/bsmmuj.v12i3.43 327
Farooq, A., Iqbal, A., Rana, N. F., Fatima, M., Maryam,  T.,  Batool,  F.,  Rehman,  Z., Menaa, F., Azhar, S., Nawaz, A., Amin,
F.,  Mohammedsaleh,  Z.  M.,  &  Alrdahe, S.  S.  (2022).  A  Novel  Sprague-Dawley Rat Model Presents Improved NASH/NAFLD  Symptoms  with  PEG Coated Vitexin Liposomes. International Journal  of  Molecular  Sciences , 23 (6). https://doi.org/10.3390/ijms23063131
Garzel, B., Zhang, L., Huang, S.-M., & Wang, H.  (2019).  A  Change  in  Bile  Flow: Looking  Beyond  Transporter  Inhibition in  the  Development  of  Drug-induced Cholestasis. Current  Drug  Metabolism , 20 (8),
621–632. https://doi.org/10.2174/13892002206661
Harwoko,  H.,  Aryani,  R.  P.,  &  Novita,  S.
(2021). Efek Hipoglikemik Larva Undur-Undur Darat ( Myrmeleon frontalis )  dari  Tes  Toleransi  Glukosa Oral. Majalah Farmasi Dan Farmakologi , 25 (2), 63–65. https://doi.org/10.20956/mff.v25i2.1376
6
Hasan,  A.  E.  Z.,  Mangunwidjaja,  D.,  Sunarti, T.  C.,  Suparno,  O.,  &  Setiyono,  A. (2016).  Antibreast  cancer  activity  of nanopropolis  Indonesia  on  induced mammary  gland  tumor  by  dmba  in virgin  sprague-dawley  rats. Biotropia ,
23 (1),
35–41. https://doi.org/10.11598/btb.2016.23.1.4
73
Islam, M. T., Quispe, C., Islam, M. A., Ali, E. S.,  Saha,  S.,  Asha,  U.  H.,  Mondal,  M., Razis,  A.  F.  A.,  Sunusi,  U.,  Kamal,  R. M.,  Kumar,  M.,  &  Sharifi-Rad,  J. (2021). Effects  of nerol on paracetamol- induced  liver  damage  in  Wistar  albino rats. Biomedicine  &  Pharmacotherapy , 140 ,
111732. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.b iopha.2021.111732
Jalalyazdi,  M.,  Ramezani,  J.,  Izadi-Moud,  A., Madani-Sani,  F., Shahlaei, S., & Ghiasi, S.  (2019).  Effect  of  hibiscus  sabdariffa on  blood  pressure  in  patients  with  stage 1  hypertension. Journal  of  Advanced Pharmaceutical Technology and Research , 10 (3), 107–111. https://doi.org/10.4103/japtr.JAPTR_402 _18 Kalra,  A.,  &  Tuma,  F.  (2020).  Physiology, Liver  -  StatPearls  -  NCBI  Bookshelf.  In Ulster Medical Journal . https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NB
K535438/
Kvetnansky,  R.,  Lu,  X.,  &  Ziegler,  M.  G. (2013).  Stress-triggered  changes  in peripheral  catecholaminergic  systems.
Advances  in  Pharmacology  (San  Diego, Calif.) , 68 , 359–397.
https://doi.org/10.1016/B978-0-12- 411512-5.00017-8
Li, F., Dong, Y.-Z., Zhang, D., Zhang, X.-M., Lin,  Z.-J.,  &  Zhang,  B.  (2019). Molecular mechanisms involved in drug- induced  liver  injury  caused  by  urate- lowering  Chinese  herbs:  A  network pharmacology study and biology experiments. PLOS  ONE , 14 (5),  1–23.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.021 6948 Liem,  S.,  &  Levita,  J.  (2017).  Review Hepatoprotektor rosella (Hibiscus sabdariffa):  Aktivitas,  Mekanisme  Aksi dan Toksisitas: Review of
Hepatoprotector  of  rosella  (Hibiscus sabdariffa) :  Activity,  Mechanism  of Action  and  Toxicity. Jurnal  Farmasi Galenika (Galenika Journal of Pharmacy) , 3 (2), 103–117. https://doi.org/10.22487/j24428744.
Lillehoj,  H.,  Liu,  Y.,  Calsamiglia,  S., Fernandez-Miyakawa,  M.  E.,  Chi,  F., Cravens,  R.  L.,  Oh,  S.,  &  Gay,  C.  G.
(2018).  Phytochemicals  as  antibiotic alternatives  to  promote  growth  and enhance host health. Veterinary Research , 49 (1), 1–18. https://doi.org/10.1186/s13567-018- 0562-6 Marques-Garcia,  F.  (2020).  Methods  for hemolysis interference study in laboratory  medicine  -  a  critical  review. Electronic  Journal  of  the  International Federation  of  Clinical  Chemistry  and Laboratory Medicine , 31 (1), 85–97.
Masfufatun,  M.,  Sari,  M.,  &  Jamilah,  A.
(2021). The Antioxidant and Hepatoprotective Potential of Temulawak (Curcuma xanthorrhiza
Roxb)  Ethanol  Extract  in  Paracetamol- induced  Rats. SSRN  Electronic  Journal . https://doi.org/10.2139/ssrn.3795716
McCrae,  J.  C.,  Morrison,  E.  E.,  MacIntyre,  I.
M.,  Dear,  J.  W.,  &  Webb,  D.  J.  (2018). Long-term adverse effects of paracetamol  –  a  review. British  Journal of Clinical Pharmacology , 84 (10), 2218–2230. https://doi.org/10.1111/bcp.13656
McGill,  M.  R.,  C.  David  Williams,  ,  Yuchao Xie,  Anup  Ramachandran,    and  H.,  &
Jaeschke. (2012). Acetaminophen-
induced  Liver  Injury  in  Rats  and  Mice:
Comparison of Protein Adducts, Mitochondrial Dysfunction, and Oxidative  Stress  in  the  Mechanism  of Toxicity. Toxicol  Appl  Pharmacol ,
264 (3),
387–3. https://doi.org/10.1016/j.taap.2012.08.01
5.Acetaminophen-induced
Murugesh, K. S., Yeligar, V. C., Maiti, B. C.,
&  Maity,  T.  K.  (2005).  Hepato Protective  and  Antioxidant  Role  of Berberis  tinctoria  Lesch  Leaves  on Paracetamol Induced Hepatic Damage in Rats. Iranian  Journal  of  Pharmacology
& Therapeutics , 4 (1), 64–69.
Prasetyo,  D.  H.,  Sarsono,  S.,  Nurwati,  I., Putranto, P. A., Martini, M., & Prasetyo, N.  A.  (2019).  Hepatoprotective  and Antifibrotic Effects of Indonesian Propolis. Majalah  Kedokteran Bandung ,
51 (3), 134–140.
https://doi.org/10.15395/mkb.v51n3.176
8
Rahmat,  E.,  Lee,  J.,  &  Kang,  Y.  (2021). Phytochemistry  ,  Biotechnology  ,  and Pharmacological  Activities. Hindawi Evidence-Based  Complementary  and Alternative Medicine , 2021 , 15. https://doi.org/10.1155/2021/9960813
Rotundo,  L.,  &  Pyrsopoulos,  N. (2020).  Liver injury  induced  by  paracetamol  and challenges  associated  with  intentional and  unintentional  use. World  Journal  of Hepatology , 12 (4), 125–136. https://doi.org/10.4254/wjh.v12.i4.125
Sahlan,  M.,  Rizka  Alia  Hapsari,  N.,  Diah
Pratami,  K.,  Cahya  Khayrani,  A., Lischer, K., Alhazmi, A., Mohammedsaleh,  Z.  M.,  Shater,  A.  F., Saleh,  F.  M.,  Alsanie,  W.  F.,  Sayed,  S.,
& Gaber, A. (2021). Potential
hepatoprotective  effects  of  flavonoids contained  in  propolis  from  South Sulawesi  against  chemotherapy  agents.
Saudi  Journal  of  Biological  Sciences ,
5461–5468.
https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.s jbs.2021.08.022
Sharma,  N.  (2018).  a  Review  on  Chemical Components  and  Therapeutic  Uses  of Ant  Lion  (Myrmelon  Sp). Universal Journal  of  Pharmaceutical  Research ,
2 (6),
80–82.
https://doi.org/10.22270/ujpr.v2i6.rw2
Syamsudin,  R.  A.  M.  R.,  Perdana,  F.,  &
Mutiaz, F. S. (2019). Tanaman Temulawak (Curcuma xanthorrhiza
Roxb)  Sebagai  Obat  Tradisional. Jurnal Ilmiah  Farmako  Bahari , 10 (1),  51. https://doi.org/10.52434/jfb.v10i1.648
Tara, A. Y. (2011). Ekstrak Air  Undur-Undur
( Myrmelon sp .) sebagai Hepatoprotektor Tikus Jantan (Sprague- Dawley)  yang  Diinduksi  Parasetamol . [Skripsi]. Institut Pertanian Bogor.
Wang, K., Tan, W., Liu, X., Deng, L., Huang, L.,  Wang,  X.,  &  Gao,  X.  (2021).  New insight and potential therapy for NAFLD:  CYP2E1 and  flavonoids.
Biomedicine  &  Pharmacotherapy , 137 , 111326.
https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.b iopha.2021.111326
World  Health  Organization.  (2019).  Health  , environment  and  climate  change. Who ,
19 (December 2018), 1–20.
Yan, Z., Zhong, Y., Duan, Y., Chen, Q., & Li, F. (2020). Antioxidant mechanism of tea polyphenols  and  its  impact  on  health benefits. Animal  Nutrition , 6 (2),  115– 123.
https://doi.org/https://doi.org/10.1016/j.a ninu.2020.01.001
Zam,  W.  (2018).  Gut  Microbiota  as  a Prospective  Therapeutic  Target  for Curcumin: A Review of Mutual
Influence. Journal  of  Nutrition  and Metabolism , 2018 (Figure 1). https://doi.org/10.1155/2018/1367984