p-ISSN 2527-6751
Naungan dan Tipe Substrat Berbeda pada Periode Aklimatisasi Ex-vitro Phalaenopsis Hibrid Shade and Different Substrate Types of Phalaenopsis Hybrid Ex-vitro Acclimatization Period
Ade Arisma Fauziah 1 , Nurullita Prahasti 1 , Nintya Setiari 2 , Endang Saptiningsih 2 * 1 Program Studi Biologi, Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro
2 Departemen Biologi Fakultas Sains dan Matematika Universitas Diponegoro
* Email: saptiningsihe@yahoo.co.id
Diterima 11 November 2019 / Disetujui 5 Maret 2020

## ABSTRAK
Produksi  bibit Phalaenopsis Hibrid  umumnya  dilakukan  melalui  teknik  kultur  jaringan.  Tahap  selanjutnya adalah aklimatisasi plantlet di lingkungan ex-vitro. Penggunaan naungan dan tipe substrat berperan terhadap pertumbuhan dan kelangsungan hidup plantlet selama periode awal aklimatisasi. Penelitian ini mengkaji peran naungan dan tipe substrat yang berbeda terhadap pertumbuhan dan kelangsungan hidup plantlet Phalaenopsis Hibrid selama periode awal aklimatisasi di greenhouse . Penelitian menggunakan plantlet Phalaenopsis Hibrid dalam  botol  dan  naungan  paranet. Plantlet diberi  3  tipe  substrat  yaitu  serabut  kelapa,  akar  paku  kadaka, sphagnum serta semua perlakuan dinaungi paranet secara bertahap. Parameter penelitian yang diukur meliputi: jumlah akar, total panjang akar, panjang daun, berat segar dan persentase kematian plantlet . Rancangan Acak Lengkap  dengan  satu  faktor  dan  3  ulangan  digunakan  dalam  penelitian  ini.  Data  dianalisis  menggunakan ANOVA  dan  uji  LSD  pada  taraf  signifikansi  95%  (P  <  0,05).  Penelitian  dilakukan  selama  5  minggu  di greenhouse Jurusan Biologi, Fakultas Sains dan Matemetika, UNDIP. Plantlet tumbuh dan mampu bertahan hidup  pada  semua  substrat  dan  naungan  paranet  secara  bertahap.  Pembentukan  pori  besar  pada  substrat serabut kelapa dan akar kadaka meningkatkan jumlah dan panjang akar. Kemampuan menjerap air tinggi pada spagnum  meningkatkan  berat  segar  plantlet.  Penutupan  paranet  secara  bertahap  dan  penggunaan  substrat serabut kelapa, akar kadaka serta spagnum mempertahankan kelangsungan hidup plantlet selama periode awal aklimatisasi ex-vitro .
Kata kunci:aklimatisasi, Phalaenopsis Hibrid, serabut kelapa, akar kadaka, sphagnum

## ABSTRACT
Production of Phalaenopsis hybrid was carried out generally by tissue culture techniques. The next step was the acclimatization of plantlets in an ex-vitro environment. Used of shade and substrate types contributed to the growth and survival of plantlets during the initial acclimatization period. The research aimed to examine the  role  of  shade  and  different  substrate  types  on  the  growth  and  survival  of Phalaenopsis Hybrid  plantlets during the initial period of ex-vitro acclimatization. The study used plantlets of Phalaenopsis Hybrid in bottles and  paranet  shade.  Plantlets  were treated  by  3  substrate type,  namely  coconut fibers,  kadaka  fern  roots,  and sphagnum. All treatments were gradually shaded with paranet nets.  A Completely Randomized Design with one  factor  and  3  replications  was  used  in  this  study.  Data  were  analyzed  using  ANOVA  and  LSD  test  at  a significance  level  of  95%  (P  <0.05).  The  study  was  conducted  for  5  weeks  in  the  greenhouse  of  the Department of Biology, Faculty of Science and Mathematics, UNDIP. Plantlets grew and were able to survive on  all  substrates  and  shade  gradually.  The  formation  of  large  pores  on  the  substrate  of  coconut  fibers  and kadaka fern roots could increase the number and length of roots. The ability to absorb water that was high in sphagnum could increase the fresh weight of plantlets. Paranet closure gradually and used substrate of coconut fibers,  kadaka  fern  roots  and,  sphagnum  maintain  plantlets  survival  during  the  initial  period  of  ex-vitro acclimatization.
Keywords: acclimatization, Phalaenopsis Hybrid, coconut fiber, kadaka fern root, sphagnum

## PENDAHULUAN
Phalaenopsis  adalah  salah  satu  genus tanaman  anggrek  yang  banyak  diminati  (Cha-um et  al .,  2010).  Terdapat  sekitar  60  spesies  dari genus  Phalaenopsis  yang  tersebar  di  Asia  dan Samudera  Pasifik  meliputi  Sri  Lanka,  India Selatan, Papua Nugini, Cina Selatan, Taiwan, dan Filipina  Utara  (Yuan et  al., 2018).  Phalaenopsis berasal  dari  daerah  beriklim  sedang  yang memiliki  suhu  rendah  (≤  25°C)  sehingga  suhu tinggi  merupakan  kondisi  cekaman  terutama untuk Phalaenopsis Hibrid (Cha-um et al., 2010). Secara konvensional, perbanyakan anggrek dilakukan  dengan  pemisahan  umbi  atau  stek vegetatif  yang  hanya  menghasilkan  beberapa propagul  dalam  satu  tahun  (Venturieri  dan Pickscius, 2013). Produksi tanaman anggrek yang mempunyai kesamaan genetik dalam jumlah besar dan plantlet berkualitas  tinggi  secara  fisiologis dan  fitosanitari  dalam  waktu  singkat  dilakukan dengan  teknik  kultur  jaringan  (da  Silva et  al., 2017).
Salah satu tahapan penting dalam mikropropagasi  dengan  teknik  kultur  jaringan adalah tahapan aklimatisasi (Cha-um et al., 2010). Kondisi lingkungan dalam kultur in-vitro merupakan lingkungan yang aseptik, ketersediaan nutrien tinggi, intensitas cahaya, konsentrasi CO2, perubahan temperatur dan kelembaban udara yang rendah  (da  Silva et  al .,  2017).  Kondisi  tersebut menghasilkan plantlet yang  heterotrof  atau photomixotrophic dengan  karakter  morfologis, anatomis  dan  fisiologis  tertentu.  Sementara kondisi  lingkungan ex-vitro meliputi  lingkungan dengan  intensitas  cahaya,  konsentrasi  CO2, perubahan temperatur dan kelembaban udara yang tinggi  (Shin et  al .,  2014).  Periode  aklimatisasi berperan  penting  dalam  mengkondisikan plantlet untuk  beradaptasi  menuju  lingkungan ex-vitro (Chandra et  al .,  2010).  Tahap  aklimatisasi berhubungan erat dengan persentase
kelangsungan hidup,
pertumbuhan dan perkembangan plantlet.
Perkembangan  perakaran,  pertumbuhan daun  dan  kelangsungan  hidup  merupakan  faktor penting  keberhasilan plantlet selama  aklimatisasi (da  Silva et  al .,  2017).  Perubahan  karakter
heterotrof ke autotrof ditandai dengan keberhasilan plantlet dalam  penyerapan  air  dan hara  oleh  akar  serta  pengaturan  transpirasi  dan fotosintesis  di  daun.  Salah  satu  upaya  dalam mendukung  adaptasi plantlet di  lingkungan ex- vitro adalah  penentuan  tipe  substrat,  pengaturan intensitas  cahaya  serta  temperatur  udara  dengan penggunaan paranet atau naungan (Venturieri dan de  Arbieto,  2011).  Substrat  berperan  dalam ketersediaan air, hara, tingkat keasaman dan udara yang  mendukung  pertumbuhan  sistem  perakaran. Sementara  pengaturan  intensitas  cahaya  dan temperatur udara berhubungan erat dengan proses transpirasi  dan  fotosintesis  untuk  pertumbuhan plantlet.
Penggunaan  campuran  substrat  gambut, pasir  gurun  dan  perlit  dilaporkan  meningkatkan kelangsungan  hidup plantle t Dendrobium  nobile cv. sebesar 100% (Mirani et al ., 2017). Campuran substrat  tersebut  mampu  menyerap  air  tinggi dengan  porositas  dan  aerasi  sedang  serta  tingkat kontaminasi  rendah.  Di  Brazil,  substrat  terbaik untuk  aklimatisasi  anggrek  adalah  xaxim  namun penggunaan  xaxim  telah  dilarang  sejak  tahun 2001  karena  mengakibatkan  kerusakan  hutan (Seidel  Júnior  dan  Venturieri,  2011).  Dilaporkan beberapa  substrat  seperti  gambut,  akar  pakis, kompos  dan  vermikulit  digunakan  untuk  substrat aklimatisasi beberapa anggrek seperti Phalaenopsis  amabilis,  Cattleya  forbesii dan Laelia  purpurata terkait  kemampuannya  dalam mendukung  pertumbuhan plantlet (Seidel  Júnior dan  Venturieri,  2011;  Venturieri  dan  de  Arbieto, 2011).  da  Silva et  al .  (2017)  juga  melaporkan penggunaan  teknik  naungan  dalam  mengatur intensitas  cahaya  dan  kelembaban  udara  selama periode  aklimatisasi  anggrek.  Sorgato et  al. (2015),  menyatakan  bahwa  pengaturan  intensitas cahaya  selama  periode  aklimatisasi  sangat menentukan  tingkat  keberhasilan  hidup plantlet anggrek.  Indonesia  kaya  akan  sumber  daya  alam dengan kemelimpahan substrat untuk pertumbuhan  anggrek  seperti  moss  sphagnum, serabut  kelapa  dan  akar  paku  kadaka  ( Asplenium sp).  Karakteristik  substrat-substrat  tersebut  dan pengaruhnya  terhadap  pertumbuhan plantlet anggrek  belum  banyak  diteliti.  Penelitian  ini bertujuan  mengkaji  tipe  substrat  yaitu  serabut
kelapa,  akar  kadaka  dan  sphagnum  serta penggunaan paranet dalam mendukung pertumbuhan dan ketahanan plantlet Phalaenopsis Hibrid selama periode aklimatisasi ex-vitro .

## METODE PENELITIAN
Bahan penelitian adalah
plantlet Phalaenopsis Hibrid  umur  6  bulan  yang  berasal dari    Kebun  Anggrek  “ Green  Leaves  Orchid ”, Salatiga,  Jawa  Tengah.  Subtrat  pertumbuhan plantlet terdiri  dari  serabut  kelapa,  akar  kadaka dan sphagnum. Pemberian naungan menggunakan paranet  ukuran  60%.  Penelitian  berlangsung selama 5 minggu dan dilaksanakan di greenhouse
Departemen Biologi, Fakultas Sains dan
Matematika, Universitas Diponegoro.
Plantlet dikeluarkan  dari  botol  kultur kemudian  dibersihkan  dari  sisa-sisa  media. Selanjutnya plantlet direndam  dalam  larutan fungisida  dengan  konsentrasi  3  g/L  selama  15 menit.  Plantlet  ditiriskan  di  atas  kertas  merang dan  dilakukan  pengukuran  parameter  penelitian awal  pada  minggu  ke-0.  Parameter  penelitian meliputi jumlah  akar,  total  panjang  akar,  panjang daun  (daun  ke-1,  ke-2  dan  ke-3)  dan  berat  segar plantlet. Jumlah  akar  ditentukan  berdasarkan jumlah  akar  seluruhnya  per  tanaman.  Total panjang  akar  ditentukan  dengan  mengukur panjang  keseluruhan  akar  per  tanaman.  Panjang daun  diukur  dari  pangkal  helaian  daun  sampai ujung  daun  menggunakan  penggaris  dan  berat segar plantlet diukur  menggunakan  timbangan digital merk Camry kapasitas 200 g. Kelangsungan  hidup plantlet ditentukan  secara visual  dan  dihitung  berdasarkan  persentase plantlet mati  yang  diukur  pada  minggu  ke-5. Masing-masing tipe substrat kemudian dibersihkan  dan  direndam  dalam  fungisida. Selanjutnya  substrat  ditempatkan  pada  wadah plastik berongga dengan ukuran 15 x 25 x 8 (p x l x t). Sebanyak 15 plantlet yang besarnya seragam ditanam  pada  masing-masing  tipe  substrat, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  kotak  kaca berukuran  60  x  50  x  40  (p  x  l  x  t)  dan  ditutup dengan  paranet  secara  bertahap.  Penutupan paranet  penuh  dilakukan  pada  minggu  ke-1  dan minggu  ke-2,  paranet  dibuka  sebagian  pada
minggu  ke-3  dan  ke-4  dan  paranet  dibuka seluruhnya atau tanpa naungan pada minggu ke-5. Pengukuran  parameter  penelitian  juga  dilakukan pada minggu ke-4 dan minggu ke-5.
Penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  satu  faktor  yaitu  tipe  substrat. Tipe  substrat  meliputi:  serabut  kelapa,  akar kadaka dan sphagnum.  Data pada masing-masing parameter  dianalisis  dengan  ANOVA,  apabila terdapat  perbedaan  pengaruh  yang  signifikan maka  dilanjutkan  dengan  Uji  LSD  pada  taraf signifikansi  95%    (P  <  0,05).  Seluruh  analisis dilakukan dengan program SPSS 16.0  dan  Excell 2010 for Windows.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pertumbuhan akar meliputi variabel jumlah dan  panjang  akar  mengalami  pola  peningkatan pada  substrat  serabut  kelapa  dan  akar  kadaka, sementara  pada  substrat  spagnum  mengalami penurunan  (Gambar  1).  Jumlah  dan  panjang  akar tertinggi secara signifikan (P< 0,05) terdapat pada substrat  serabut  kelapa  dan  akar  kadaka  selama periode aklimatisasi 5 minggu (Gambar 1).
Perubahan  lingkungan  mikro  terjadi  pada plantlet  dari  kondisi  in-vitro  ke  kondisi  ex-vitro. Plantlet selama kultur in-vitro tumbuh pada media padat  yang  steril  dengan  kelembaban  tinggi, ketersediaan sumber energi (heterotrof), pencahayaan dan temperatur yang optimal (Virag et  al.,  2011).  Di  dalam  lingkungan  ex-vitro, plantlet  terpapar  kondisi  yang  tidak  steril  dengan perubahan ketersediaan hara, kelembaban, cahaya dan  temperatur  (Chandra  et  al.,  2010).  Karakter plantlet  berubah  dari  heterotrof  menjadi  autotrof (Diaz  et  al.,  2010).  Karakter  fotoautotrof membutuhkan  peran  akar  dalam  penyerapan  air dan unsur hara serta organ daun dalam menunjang proses  transpirasi,  difusi  gas  (O 2 dan  CO 2 )  dan fotosintesis  (Diaz et  al .,  2010;  Shin et  al ., 2014). Substrat  pertumbuhan  anggrek  selama  periode aklimatisasi  berperan  penting  dalam  mendukung karakter fotoautotrof. Pertumbuhan akar dipengaruhi  oleh  kondisi  substrat  meliputi  aerasi, permeabilitas,  pH,  kelembaban  dan  ketahanan terhadap pelapukan (Diaz et al ., 2010; da Silva et al .,  2017).  Masing-masing  substrat  yaitu  serabut
kelapa,  akar  kadaka  dan  sphagnum  memiliki karakteristik terkait pembentukan pori, aerasi dan penjerapan  air.  Serabut  kelapa  mempunyai karakter  yang  hampir  sama  dengan  akar  kadaka. Kedua  substrat  tersebut  membentuk  ruang  pori yang  longgar  sehingga  mempunyai  aerasi  dan tingkat  permeabilitas  yang  tinggi  namun  kurang kemampuannya  dalam  menjerap  air  (Trimanto dan  Rahadiantoro,  2017;  Ritzinger et  al .,  2018). Kondisi tersebut mendukung ketersediaan O 2 bagi akar.  Oksigen  dibutuhkan  dalam  proses  respirasi untuk  menghasilkan  ATP,  selanjutnya  ATP digunakan  untuk  pertumbuhan  akar.  Hasil penelitian  ini  didukung  oleh  penelitian-penelitian yang  telah  dilakukan  sebelumnya.  Penggunaan serabut  kelapa  untuk  pertumbuhan  akar  telah dilaporkan  pada  semai Malpighia  emarginata Sessé  &  Moc.  ex  DC  (Ritzinger et  al .,  2018).
Penggunaan  serabut  kelapa  sebagai  campuran media  semai  tersebut  mampu  meningkatkan retensi  air  dan  porositas  sehingga  mendukung pertumbuhan  akar.  Dilaporkan  juga  penggunaan akar kadaka pada aklimatisasi anggrek Dendrobium sp (Trimanto,  2013).  Akar  kadaka mampu  menahan  air  dan  unsur  hara  sehingga meningkatkan  panjang  akar  sebesar  41,  63% (Tirta,  2006;  Trimanto,  2013).  Hal  sebaliknya terjadi  pada  sphagnum,  kemampuan  menjerap  air tinggi  namun  tingkat  aerasi  dan  permeabilitas terhadap  air  rendah  sehingga  mengakibatkan pertumbuhan akar lebih rendah. Seidel Júnior dan Venturieri  (2011),  melaporkan  terjadi  penurunan kelangsungan  hidup  semai Cattleya  forbesii dan Laelia  purpurata dalam  substrat  sphagnum selama aklimatisasi.
Gambar  1.  Pertumbuhan  akar Phalaenopsis Hibrid  pada  tipe  substrat  yang  berbeda  selama  aklimatisasi ex- vitro .  A).  Jumlah  akar  dan  B).  Panjang  akar. Plantlet memasuki  periode  aklimatisasi ex-vitro setelah dikultur in-vitro selama 6 bulan. Garis bar menunjukkan mean ± SD (n=3).
Pertumbuhan  daun  ke-1  menunjukkan pola penurunan pada semua tipe substrat, namun terjadi  pola  peningkatan  panjang  daun  ke-2  pada substrat  sphagnum  (Gambar  2).  Pertumbuhan daun  ke-3  pada  substrat  sphagnum  mengalami peningkatan  selama  penutupan  paranet  penuh hingga  paranet  dibuka  sebagian  (umur  0-4 minggu), sedangkan pembukaan paranet seluruhnya  (umur  4-5  minggu)  mengakibatkan penurunan  panjang  daun  (Gambar  2).  Pola  yang sebaliknya  terjadi  pada  substrat  serabut  kelapa. Panjang daun ke-3 tidak menunjukkan perbedaan yang  signifikan  diantara  ketiga  substrat  di  akhir penelitian.
Terjadi  pola  penurunan  pertumbuhan daun  ke-1  karena  daun  ke-1  merupakan  daun yang berkembang selama kultur in-vitro . Ciri-ciri daun  tersebut  yaitu:  lamina  daun  tipis,  stomata belum  berfungsi  dan  kepadatan  tinggi,  kutikula atau  lapisan  lilin  belum  terbentuk  serta  mesofil belum  terdiferensiasi  (Chandra et  al .,  2010). Daun ke-1 umumnya  mengalami kerusakan pada kondisi ex-vitro dan  digantikan  oleh  daun  lain yang  tumbuh  selama  periode  aklimatisasi  (da Silva et  al .,  2017).  Daun  ke-2  merupakan  daun yang  belum  berkembang  sepenuhnya  selama kultur in-vitro sehingga  terjadi  perkembangan lebih lanjut selama periode aklimatisasi. Nampaknya  karakter  penjerab  air  tinggi  pada

## 0
2 4 6 8 10 0 4 5 J u m la h a k a r umur (minggu) serabut kelapa akar kadaka sphagnum A 0 5 10 15 20 0 4 5 P a n ja n g a k a r (c m ) umur (minggu) serabut kelapa akar kadaka sphagnum B
substrat  sphagnum  mendukung  peningkatan perkembangan daun ke-2 selama periode aklimatisasi (Gambar 2). Perkembangan daun ke- 3 berlangsung sepenuhnya dalam kondisi ex-vitro . Tipe  substrat  serabut  kelapa  yaitu  aerasi  tinggi dan penjerapan air rendah kemungkinan mendukung  adaptasi  perkembangan  awal  daun ke-3. Pembukaan paranet penuh pada minggu ke- 5  tidak  mengakibatkan  cekaman  abiotik  pada pertumbuhan daun sehingga terjadi pola peningkatan  pertumbuhan  daun  ke-3  di  akhir
penelitian.  Pada  substrat  spagnum  dengan karakter  penjerapan  air  tinggi  hanya  mendukung pertumbuhan  daun  ke-3  selama  penutupan paranet.  Pembukaan  paranet  pada  minggu  ke-5 mengakibatkan  cekaman  pada  perkembangan awal  daun  ke-3  sehingga  terjadi  pola  penurunan pertumbuhan.  da  Silva et  al .  (2017),  melaporkan pada Dendrobium bahwa kurang berkembangnya struktur dan fungsi fisiologis daun mengakibatkan  daun  rentan  terhadap  perubahan lingkungan.
Gambar 2. Pertumbuhan daun Phalaenopsis Hibrid selama aklimatisasi ex-vitro 5 minggu. Morfologi daun ke- 1, ke-2 dan ke-3 (A), panjang daun ke-1 (B), panjang ke-2 (C) dan panjang daun ke-3 (D). Bar = 5 cm  (A) dan garis bar menunjukkan mean ± SD (n=3) pada gambar B, C dan D.
Berat  segar plantlet pada  tiap  periode pengamatan  (umur  0,  4  dan  5  minggu) menunjukkan  perbedaan  yang  tidak  signifikan diantara  tipe  substrat,  namun  berat  segar cenderung  meningkat  dibanding  berat  segar  di awal periode aklimatisasi. Sementara kelangsungan  hidup plantlet selama  5  minggu ditunjukkan  oleh  keberhasilan  hidup  100%  pada semua  tipe  substrat.  Berat  segar  plantlet merupakan  akumulasi  fotosintat  dan  kandungan
air (Wu  dan  Lin,  2013).  Peningkatan  berat  segar plantlet pada  semua  tipe  substrat  menunjukkan telah  berfungsinya  peran  akar  dalam  penyerapan air  dan  organ  daun  dalam  proses  transpirasi, difusi  gas  dan  fotosintesis.  Hal  ini  mendukung perkembangan  karakter  fotoautotrof plantlet . Shin et  al .  (2014),  melaporkan  peningkatan kemampuan fotoautotrof pada anggrek Doritaenopsis hibrid mempengaruhi
kelangsungan  hidup plantlet selama  aklimatisasi.
A 0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 4 5 P a n ja n g d a u n k e -1 ( c m ) umur (minggu) serabut kelapa akar kadaka sphagnum B 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 5 P a n ja n g d a u n k e -2 (c m ) umur  (minggu) serabut kelapa akar kadaka sphagnum C 0 1 2 3 4 5 0 4 5 P a n ja n g d a u n k e -3 ( c m ) umur  (minggu) serabut kelapa akar kadaka sphagnum D
Perkembangan  sistem  perakaran,  fungsi  stomata dan  kutikula  pada plantlet Dendrobium juga dilaporkan  meningkatkan  kelangsungan  hidup dalam  kondisi ex-vitro (da  Silva et  al .,  2017).
Pada plantlet Phalaenopsis, peningkatan
konduktivitas  stomata  dan  laju  fotosintesis (efisiensi  dan  kandungan  pigmen  fotosintesis) dilaporkan  dapat  meningkatkan  kemampuan adaptasi plantlet pada  kondisi ex-vitro (Cha-um et al ., 2010).
Gambar  3.  Berat  segar  plantlet  pada  periode  aklimatisasi ex-vitro selama  5  minggu.  Bar  yang  diikuti  oleh huruf yang sama menunjukkan perbedaan yang tidak signifikan (P < 0,05) dengan uji LSD (n=3).

## KESIMPULAN
Substrat  serabut  kelapa  dan  akar  kadaka dapat  meningkatkan  sistem  perakaran plantlet , sementara  sphagnum  mendukung  ketersediaan  air sehingga  berat  segar plantlet dapat  ditingkatkan. Penggunaan  naungan  dan  substrat  serabut  kelapa, akar kadaka dan sphagnum selama aklimatisasi ex- vitro meningkatkan kemampuan fotoautrotof
plantlet Phalaenopsis
Hibrid sehingga kelangsungan hidupnya dapat dipertahankan.

## DAFTAR PUSTAKA
Chandra,  S.,  Bandopadhyay,  R.,  Kumar,  V.  dan Chandra,  R.  2010.  Acclimatization  of  tissue cultured  plantlets:  from  laboratory  to  land. Biotechnology letters 32(9): 1199-1205.
Cha-um,  S.,  Ulziibat,  B.  dan  Kirdmanee,  C.  2010. Effects of Temperature and Relative Humidity  During  in  'vitro'  Acclimatization, on  Physiological  Changes  and  Growth Characters  of'  Phalaenopsis'  Adapted  to in'vivo'. Australian  journal  of  crop  science 4(9): 750.
da  Silva,  J.  A.  T.,  Hossain,  M.  M.,  Sharma,  M., Dobránszki,  J.,  Cardoso  dan  Songjun,  Z.
2017.  Acclimatization  of  in  Vitro-derived Dendrobium. Horticultural  Plant  Journal 3(3): 110-124.
Díaz, L. P., Namur, J. J., Bollati, S. A. dan Arce, O. E.  A.  2010.  Acclimatization  of  Phalaenopsis and  Cattleya  obtained  by  micropropagation. Revista  Colombiana  de  Biotecnología 12(2): 27-40.
Mirani, A. A., Abul-Soad, A. A. dan Markhand, G. S.  2017.  Effect  of  different  substrates  on survival  and  growth  of  transplanted  orchids ( Dendrobium  nobile cv.)  into  net  house. Int.
J. Hortic. Floricult 5(4): 310-317.
Ritzinger,  R.,  Ritzinger,  C.  H.  S.  P.,  Fonseca,  N. dan  Machado,  C.  D.  F.  2018.  Advances  in the propagation of acerola. Revista Brasileira de Fruticultura 40(3): 1-12
Seidel  Júnior,  D.  dan  Venturieri,  G.  A.  2011.  Ex vitro acclimatization of Cattleya forbesii and Laelia  purpurata seedlings  in  a  selection  of substrates. Acta  Scientiarum.  Agronomy 33(1): 97-103.
Shin,  K.  S.,  Park,  S.  Y.  dan  Paek,  K.  Y.  2014. Physiological  and  biochemical  changes during  acclimatization  in  a Doritaenopsis
a b c a b c a b c 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 0 4 5 B e r a t s e g a r p la n tl e t (g ) umur  (minggu) serabut kelapa akar kadaka sphagnum
hybrid cultivated in different
microenvironments  in  vitro. Environmental and Experimental Botany 100: 26-33.
Sorgato,  J.  C.,  Rosa,  Y.  B.  C.  J.,  Soares,  J.  S., Lemes,  C.  S.  R.  dan  Sousa,  G.  G.  D.  2015. Light  in  intermediate  acclimatization  of  in vitro  germinated  seedlings  of  Dendrobium phalaenopsis  Deang  Suree. Ciência  Rural 45(2): 231-237.
Tirta,  I.G.  2006.    Pengaruh  Beberapa  Jenis  Media Tanam dan Pupuk Daun terhadap
Pertumbuhan  Vegetatif  Anggrek  Jamrud (Dendrobium  macrophyllum  A.  Rich.).
Biodiversitas 7(1): 81-84.
Trimanto. 2013. Acclimatization of plant collection from  East  Nusa  Tenggara  exploration  (Egon Forest, Mutis Mount and Camplong Park) at Purwodadi  Botanic  Garden. Journal  of Biological Researches 19: 5-10.
Trimanto,  T.  dan  Rahadiantoro,  A.  2017. Acclimatization  of  plant  collection  from Moyo Island Forest, West Nusa Tenggara, Indonesia  at  Purwodadi  Botanic  Garden. Tropical
Drylands 1(1): 43-49.
Venturieri,  G.  A.  &  Pickscius,  F.  J.  2013.
Propagation of noble dendrobium ( Dendrobium  nobile Lindl.)  by  cutting. Acta Scientiarum. Agronomy 35(4): 501-504.
Venturieri,  G.  A.  dan  Arbieto,  E.  A.  M.  D.  2011. Ex-vitro  establishment  of Phalaenopsis amabilis seedlings  in  different  substrates.
Acta  Scientiarum.  Agronomy,  33(3):  495- 501.
Virág,  E.,  Molnár,  Z.  dan  Ördög,  V.  2011. Application  of  algal  biomass  for  enhanced acclimatization  of  orchids. Acta  Biologica Szegediensis 55(1): 179-181.
Wu,  H.  C.  dan  Lin,  C.  C.  2013.  Carbon  dioxide enrichment during photoautotrophic micropropagation  of Protea  cynaroides L. plantlets  improves  in  vitro  growth,  net photosynthetic  rate,  and  acclimatization.
HortScience 48(10): 1293-1297.
Yuan,  S.  C.,  Chin,  S.  W., Lee,  C.  Y.  dan  Chen,  F. C. 2018. Phalaenopsis pollinia storage at sub- zero  temperature  and  its  pollen  viability assessment. Botanical studies 59(1): 1.