p-ISSN 2354-6565 /e-ISSN 2502-3438
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI BEBERAPA MADU ASLI LEBAH ASAL INDONESIA TERHADAP Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
Mira Andam Dewi 1,2 , Rahmana Emran Kartasasmita 1 , Marlia Singgih Wibowo 1
1 Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung , Jl. Ganesha 10 Bandung
2 Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi.
Corresponding author e-mail :miraandamdewi.91@gmail.com

## ABSTRAK
Bakteri  yang  resisten  terhadap  antibiotik  menimbulkan  ancaman  serius,  sehingga  diperlukan  obat alternatif  untuk  mengganti  dengan  beralih  ke  bahan  alam  yang  ketersediaannya  melimpah  di Indonesia,  salah  satunya  adalah  madu.  Madu  “Manuka”  dilaporkan  efektif  mengatasi  infeksi  kulit yang  sudah  resisten  terhadap  antibiotik  serta  efektif  untuk  gangguan  pencernaan,  sehingga  fakta tersebut  telah  mendorong  dilakukannya  penelitian  untuk  menguji  dan  membuktikan  efek  antibakteri madu  jenis  lainnya.  Pada  penelitian  ini,  enam  madu  asli  lebah,  asal  Indonesia  diuji  aktivitas antibakterinya  terhadap  strain Staphylococcus  aureus mewakili  golongan  bakteri  Gram  positif  dan strain Escherichia coli mewakili golongan bakteri Gram negatif. Diawali pengumpulan dan penyiapan enam  sampel  madu  uji,  kemudian  diuji  secara  organoleptik  dan  uji  fisikokimia  untuk  menentukan mutu dari madu, meliputi uji aktivitas enzim diastase, hidroksimetilfurfural (HMF) dan kadar air yang dilakukan  untuk  menguji  apakah  madu  yang  diuji  asli  asal  lebah  dan  dalam  kualitas  yang  baik. Selanjutnya  dilakukan  pengujian  aktivitas  antibakteri  madu  asli  lebah  tersebut  terhadap  bakteri penyebab  infeksi  saluran  pernapasan  yang  diwakili  oleh Staphylococcus  aureus yang  merupakan bakteri Gram positif dan bakteri penyebab infeksi saluran pencernaan yang diwakili oleh Escherichia coli yang  merupakan  bakteri  Gram  negatif,  menggunakan  metode  difusi  agar  perforasi.  Uji organoleptik yang dilakukan terhadap enam sampel madu asli lebah, asal Indonesia (S1, S2, S3, S4, S5, S6) memberikan hasil yang memenuhi persyaratan mutu madu yang baik. Hasil pengujian enzim diastase dan uji kadar air memenuhi persyaratan SNI 3545:2013 tentang madu. Hasil uji HMF tidak memenuhi syarat,  pada sampel S1 dan S6 karena HMF melebihi kadar yang dipersyaratkan. Sampel S1  dan  S6  memberikan  kadar  HMF  berturut-turut  62,22  mg/kg  dan  50,97  mg/kg,  sehingga  tidak memenuhi  persyaratan  kadar  HMF  maksimum  50%  b/b.  Uji  aktivitas  antibakteri  madu  dengan konsentrasi 100% terhadap bakteri Staphylococcus  aureus memberikan diameter hambat 21,33 mm pada  sampel  S4,  menunjukkan  kategori  antibakteri  sangat  kuat,  karena  masuk  dalam  kisaran  20-35 mm,  sedangkan  pengujian  terhadap  bakteri Escherichia  coli pada  sampel  S4  memberikan  diameter hambat 19,67 mm termasuk kategori antibakteri kuat karena masuk dalam kisaran 10-20 mm.
Kata kunci :  Madu, uji aktivitas antibakteri, Staphylococcus aureus , Escherichia coli , metode difusi agar perforasi, HMF

## PENDAHULUAN
Madu  merupakan  senyawa  alami  yang dihasilkan dan disimpan dalam sarang madu oleh lebah  dengan  kandungan  karbohidrat  yang mencapai  95-97%  terhadap  bobot  kering  madu (Namias,  2003  dan  Al-Jabri,  2005).  Beberapa penelitian  menunjukkan  bahwa  madu  memiliki efek  antibakteri  (Mulu,  dkk,  2004),  efek antiinflamasi  (Dunford,  dkk,  2000),  efek antioksidan (Gheldof, dkk, 2003) dan meningkatkan sistem imun (Tonks, dkk, 2007).
Madu  memiliki  tempat  istimewa  dalam pengobatan  tradisional  selama  berabad-abad (Zumla  dan  Lulat,  1989).  Hasil  penelitian menyatakan  bahwa  madu  terbukti  mengandung zat  antimikroba  yang  aktif  melawan  serangan
berbagai  kuman  patogen  penyebab  penyakit (Molan, 1992), namun madu memiliki penggunaan  yang  terbatas  dalam  pengobatan modern karena kurangnya dukungan ilmiah (Ali, dkk,  1991).  Penemuan  yang  paling  luar  biasa adalah aktivitas antibakteri madu telah disebutkan  dalam  berbagai  studi  (Al-Waili  dan Haq,  2004).  Penggunaan  madu  sebagai  obat tradisional  untuk  infeksi  bakteri  telah  diketahui sejak jaman dahulu. Berdasarkan pada, penelitian ilmiah  di  bidang  tersebut  yang  mengarah  pada identifikasi  senyawa  antibakteri  dimulai  dengan perintis  laporan  van  Ketel  tahun  1892, menciptakan istilah “inhibine” untuk zat antibakteri  yang  sensitif  terhadap  cahaya  dan suhu  tanpa  karakterisasi  kimia  lebih  lanjut
(Dustmann,  1979).  Sejak  saat  itu,  banyak investigasi yang sudah dilakukan untuk menjelaskan  aktivitas  antibakteri  dari  masing- masing  sampel  madu  melalui  efek  osmotik  atau penurunan  pH  yang  disebabkan  beberapa  asam organik (Molan, 1992). Sebagian besar, “inhibine” diketahui sebagai hidrogen peroksida, yang  terbentuk  dalam  madu  melalui  oksidase glukosa  (Adcock,  1962).  Hidrogen  peroksida adalah  penyumbang  utama  terhadap  aktivitas antimikroba  dari  madu,  dan  konsentrasi  yang berbeda  dari  senyawa  ini  pada  madu  yang berbeda  menghasilkan  efek  antimikroba  mereka bervariasi (Moussa, dkk, 2011). Namun demikian,  beberapa  kajian  telah  menunjukan bahwa  beberapa  sampel  madu  yang  memiliki aktivitas  antibakteri  bertahan  setelah  mengalami proses  penghilangan  hidrogen  peroksida  melalui katalase  (Adcock,  1962).  Hal  tersebut  telah diobservasi  bahwa  madu  “Manuka”  diperoleh dari  pohon  Manuka  ( Leptospermum  scoparium ) di  New  Zealand,  memiliki  aktivitas  antibakteri “non  peroksida”  tingkat  tinggi  (Allen,  dkk, 2011).  Telah  dinyatakan  bahwa  aktivitas antibakteri  dari  madu  “Manuka”    merupakan property  komersial  yang  penting,  yang  mana dalam istilah pemasaran disebut sebagai “ Unique Manuka  Factor ”  (UMF),  memimpin  klasifikasi produk  premium  yang  berbasis  pada  pengujian mikrobiologi (Mavric, dkk, 2011). Merujuk pada data  pustaka  diatas  dan  hasil  penelitian  madu sebelumnya  yang  menyatakan  ternyata  madu  ini memiliki  banyak  manfaatnya  dan  madu  terbukti mengandung zat antimikroba yang aktif melawan serangan  berbagai  kuman  patogen  penyebab penyakit,  maka  akan  dilakukan  penelitian terhadap beberapa madu yang diperoleh langsung dari  pengepul  madu  dari  daerah  Jawa  Barat  dan Riau,  yang  merupakan  madu  asli  lebah  dari Indonesia dan bukanlah tidak mungkin jika pada madu tersebut mengandung zat antimikroba yang berguna  bagi  kehidupan  manusia.  Keberadaan madu-madu  tersebut  di  Indonesia  memberikan kontribusi  besar  terhadap  keberlangsungan pengobatan  dan  ekonomi  masyarakat  secara berkelanjutan,  namun  masih  belum  dilakukan penelitian  ilmiah  berupa  karakterisasi  fitokimia, terhadap kandungan zat aktif, diantaranya adalah meneliti  senyawa  kimia  yang  memiliki  aktivitas biologinya sebagai antimikroba pada madu-madu tersebut. Penggunaan madu-madu tersebut secara tradisional  untuk  mengobati  demam,  infeksi saluran  pernafasan  atas  (ISPA),  batuk,  infeksi saluran pencernaan, penyakit luka tukak lambung,  penyakit  kulit.    Oleh  karena  itu,  perlu
dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai pengujian  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri penyebab infeksi. Dewasa ini, terjadi peningkatan resistensi bakteri terhadap antibiotik standar menyebabkan peneliti mencari pengobatan  alternatif  yang  alami  dan  hasilnya dievaluasi secara ilmiah.
Resistensi  bakteri  terhadap  madu  belum pernah  dilaporkan  (Dixon,  2003),  sehingga membuat  madu  menjadi  agen  antibakteri  yang sangat  menjanjikan  dalam  melawan  infeksi bakteri,  maka  berdasarkan  data-data  diatas dilakukan penelitian terhadap beberapa madu asli lebah  yang  merupakan  madu  asli  dari  Indonesia untuk  diteliti  secara  ilmiah  untuk  mengetahui aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  penyebab infeksi,  yaitu  : Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli.

## METODE PENELITIAN
Rancangan  penelitian  dilakukan    meliputi beberapa  tahapan  pekerjaan,  meliputi  :  Tahap pekerjaan  pertama  adalah  :  penyiapan  sampel meliputi  pengumpulan  empat  madu  asli  lebah dari daerah Maribaya, kabupaten Bandung Barat, satu  madu  asli  lebah  dari  Gunung  Halu, kabupaten  Bandung  Barat  dan  satu  madu  asli lebah dari kepulauan Riau. Dari madu asli lebah yang  akan  diuji  memiliki  warna  yang  berbeda, yaitu  terdiri  dari    satu  madu  berwarna  kuning, dua  madu  berwarna  coklat,  satu  madu  berwarna merah  dan  dua  madu  berwarna  hitam.  Tahap pekerjaan  kedua  adalah  :  madu  asli  lebah  yang telah  dikumpulkan  diuji  organoleptik  dan  uji fisikokimia.  Tahap  pekerjaan  ketiga  adalah  : dilakukan  pengujian  aktivitas  antibakteri  madu asli  lebah  tersebut  terhadap  bakteri  penyebab infeksi  saluran  pernapasan  yang  diwakili  oleh Staphylococcus  aureus yang  merupakan  bakteri Gram  positif  dan  bakteri  penyebab  infeksi saluran pencernaan yang diwakili oleh Escherichia  coli yang  merupakan  bakteri  Gram negatif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  pemeriksaan  uji  organoleptik, semua  madu  uji  memberikan  hasil  yang memenuhi persyaratan mutu madu mengacu pada SNI  01-3545-201.  Hasil  pengamatan  dapat dilihat pada Tabel 1
Tabel 1. Hasil Uji Organolelptik
Sam- pel Bau  Rasa Warna Keaslian Madu Bentuk (+Air) Hexagonal MS/ TMS S1 Khas madu Khas madu Hitam hexagonal MS S2 Khas madu Khas madu Kuning tua kecoklatan hexagonal MS S3 Khas madu Khas madu Kuning muda hexagonal MS S4 Khas madu Khas madu Kuning tua kecoklatan hexagonal MS S5 Khas madu Khas madu Merah hexagonal MS S6 Khas madu Khas madu Hitam hexagonal MS
Hasil uji fisikokimia telah dilakukan, meliputi uji aktivitas  enzim  diastase,  HMF  dan  kadar air. Hasil  pengujian enzim  diastase  dan uji  kadar air memberikan  hasil  yang  memenuhi  persyaratan SNI  3545:2013  tentang  madu.  Hasil  uji    HMF tidak  memenuhi  syarat  pada  sampel  S1  dan  S6 karena HMF melebihi kadar yang dipersyaratkan.  Sampel  S1  dan  S6  memberikan kadar HMF berturut-turut 62,22 mg/kg dan 50,97 mg/kg  sehingga  tidak  memenuhi  persyaratan karena  kadar  HMF  maksimum  50  %  b/b.  Hasil pengamatan dapat dilihat pada Tabel 2.

## Tabel 2. Hasil Uji Fisikokimia
Sampel  DN HMF (mg/kg) Kadar Air (%) MS/ TMS S1 15 62.22 21,0 TMS S2 50 11.42 19,2 MS S3 50 42,82 17,8 MS S4 50 32,72 19,4 MS S5 50 21,79 20,2 MS S6 50 50,97 20,6 TMS Persyaratan  SNI 01-3545-2013 : HMF = maks. 50 mg/kg DN = min. 3 DN
Kadar air = maks. 22 %b/b
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  madu  dengan konsentrasi 100% terhadap bakteri Staphylococcus    aureus menunjukkan  diameter hambat 21,33 mm pada uji aktivitas sampel  S4, dan berada dalam kisaran 20-35 mm, dimana hal tersebut menunjukkan antibakteri dengan kategori  sangat  kuat.  Sedangkan  pada  uji aktivitas  antibakteri  madu  dengan  konsentrasi 100  %  terhadap    bakteri Escherichia  coli, menun-jukkan  diameter  hambat  19,67  mm  pada uji  aktivitas  sampel  S4  dan  berada  pada  kisaran 10-20  mm,  menunjukkan  antibakteri  dengan kategori  kuat.  Hasil  pengamatan  dapat  dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri
Konsen- trasi Madu Diameter Hambat (mm) S.aureus E. coli 20 % 40% 60% 80%  100% 20 % 40% 60% 80% 100% S1 10,03 10,03 15,5 16,06  16,67 8,56 9,8 12,7 13,6 18,67 S2 - 9,56 11,16  11,53  15,76 9,83 9,96 10,53 12,23 15,46 S3 10,67 10,96  11,16 12,8 16,7 10 10,56 14,3 17,6 18,16 S4 - 11,8 16,26 19,1 21,33 - 11,67 17,46 17,9 19,67 S5 - 10,36 12,4 13,36  13,76 - - 10,93 13,06 14,93 S6 8,8 10,9 15,10  15,13 15,6 - 9,6 14,03 14,96 15,5

## KESIMPULAN
1. Hasil  uji  organoleptik  yang  dilakukan terhadap  enam  sampel  madu  asli  lebah,  asal
Indonesia  (S1,  S2,  S3,  S4,  S5,  S6) memberikan hasil yang memenuhi persyaratan mutu madu yang baik.
2. Hasil  uji  fisikokimia  meliputi  uji  aktivitas enzim  diastase,  HMF  dan  kadar  air.  Hasil pengujian  enzim  diastase  dan  uji  kadar  air mem-berikan hasil yang memenuhi persyaratan  SNI  3545:2013  tentang  madu. Pada  pengujian  HMF  terdapat  2  sampel tidak  memenuhi  persyarat-an,  yaitu  sampel
S1 dan S6 karena kadar HMF yang diperoleh melebihi  kadar  yang  dipersyaratkan,  dimana untuk  S1  dan  S6  hasil  ujinya  berturut-turut 62,22  mg/kg  dan  50,97  mg/kg  (lebih  besar dari  persyaratan  uji  HMF  maksimum  50  % b/b).
3. Semua  sampel  madu  asli  lebah  asal Indonesia  yang  diuji,  memiliki  aktivitas sebagai    antibakteri  ter-hadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
4. Pada  uji  aktivitas  antibakteri  madu  S1,  S2, S3,  S5  ,  S6  dengan  konsentrasi  100  % terhadap    bakteri Staphylococcus    aureus
menunjuk-kan  diameter  zona  hambat  dalam kisaran  10-20  mm,  dimana  hal  tersebut menunjukkan klasifikasi kekuatan antibakteri kategori kuat.
5. Pada  uji  aktivitas  antibakteri  madu  S1,  S2,
S3,  S4,  S5  ,  S6  dengan  konsentrasi  100  % terhadap bakteri Escherichia coli, menunjukkan diameter hambat dalam
kisaran  10-20  mm,  dimana  hal  tersebut menunjukkan antibakteri kategori kuat.
6. Pada  uji  aktivitas  antibakteri  madu    S4 dengan  konsentrasi  100  %  terhadap    bakteri Staphylococcus    aureus menunjukkan diameter  hambat  dalam  kisaran  20-35  mm, dimana hal tersebut menunjukkan antibakteri kategori sangat kuat.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kami  sampaikan  kepada LPPM  UNJANI  yang  telah  mendanai  penelitian ini. Terima kasih banyak kami sampaikan kepada Fahrauk  Faramayuda,  Athina  Mardatillah,  dan Dwi Aryanto yang telah membantu penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Adcock,  D.(1962):  The  effect  of  catalase  on  the on the inhibine and peroxide values of various honeys. J. Apic. Res., 1, 38–40.
Ali  AT,  Chowdhury  M  N,  Al  Humayyd  MS (1991):  Inhibitory  effect  of  natural  honey  on Helicobacter  pylori ,  Trop  Gastroenterol,  12, 139-143.
Al-Jabri  A  (2005):  Honey,  milk  and  antibiotics. Afr J Biotechn, 4, 1580–1587.
Allen, K. L., Molan, P. C., Reid, G. M.(1991): A survey  of  the  antibacterial  activity  of  some New  Zealand  honeys.  J.  Pharm.Pharmacol., 43, 817 –822.
Al-Waili  NS,  Haq  (2004):  Effect  of  honey  on antibody production against thymus- dependent  and  thymus-independent  antigens in primary and secondary immune  responses, J Med Food, 7, 491-494.
Dixon  B  (2003):  Bacteria  can’t  resist  honey.
Lancet Infect Dis, 3, 116.
Dunford  C,  Cooper  RA,  White  RJ,  Molan  PC (2000):  The  use  of  honey  in  wound management. Nurs Stand, 15, 63–68.
Dustmann  JH  (1979):    Antibacterial  effect  of honey. Apiacta, 14.
Gheldof  N,  Wang  X,  Engeseth  N,  Buckwheat (2003):  Honey  increases  serum  antioxidant capacity  in  humans.  J  Agriculture  Food Chem, 51, 1500–1505.
Mavric  E,  Wittmann  S,  Barth  G  dan  Henle  T (2008):  Identification  and  quantification  of methylglyoxal  the  dominant  antibacterial constituent of Manuka ( Leptospermum scoparium )  honeys  from  New  Zealand,  Mol. Nutr. Food Res. 52, 1-5.
Molan, P. C.(1992): The antibacterial activity of honey  1:  The  nature  of  the  antibacterial activity, Bee World, 73, 5–28.
Moussa  A.,  Noureddine  D,  Mohamed  H.S,
Abdelmelek  M,  Saad  A(2011):  Antibacterial activity  of  various  honey  types  of  Algeria against Staphylococcus aureus and
Streptococcus pyogenes , Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 773-776.
Mulu  A,  Tessema  B,  Derbie  F  (2004):  In  vitro assessment  of  the  antimicrobial  potential  of honey  on  common  human  pathogens.  Eur Health Dev., 18, 107–111.
Namias  N  (2003):  Honey  in  the  management  of infections. Surg Infect, 4, 219–226.
Tonks A, Dudley E, Porter N, Parton J, Brazier J, Smith  E,  Tonks  A  (2007):  A  5.8kDa component  of  manuka  honey  stimulates immune  cells  via  TLR4.  J  Leukoc  Biol,  82, 1147–1155.
Zumla  A,  Lulat  A  (1989):  Honey:  a  remedy rediscovered, J R Soc Med, 82, 384-385.