Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Tempuyung (Sonchus arvensis L.) terhadap Salmonella typhi secara In Vitro
Antibacterial Activity of Ethanolic Extract from Tempuyung Leaf (Sonchus arvensis L.) againts Salmonella typhi by In Vitro Study
1 Rinda Yanuarisa, 2 Dini Agustina, 3,4 Ali Santosa
1 Mahasiswa Fakultas Kedokteran, Universitas Jember
2 Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran, Universitas Jember Jalan Kalimantan No. 37 Kampus Tegalboto Jember  Kode Pos 68121
3 SMF Ilmu Penyakit Dalam, RSD dr.Soebandi Jember
4 Fakultas Kedokteran Universitas Jember Jl. dr.Soebandi No. 124, Jember 68111, Indonesia. Telp.: (+62331) 487441. Fax: (+62331) 487564 e-mail korespondensi : ichayint@gmail.com

## Abstrak
Demam tifoid yang disebabkan oleh  Salmonella typhi (S. typhi) merupakan penyakit endemik di Indonesia.  S. typhi mulai resisten terhadap kloramfenikol, sehingga diperlukan penelitian tentang bahan alam sebagai obat tradisional, seperti tempuyung. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri dan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ekstrak etanol daun tempuyung (Sonchus arvensis L.) terhadap pertumbuhan S. typhi. Penelitian ini adalah penelitian eksperimental semu dengan rancangan penelitian yang digunakan adalah  post test  only  control  group  design.  Perlakuan  terdiri  dari  8  konsentrasi  ekstrak  daun  tempuyung  dengan  4  kali pengulangan yaitu 2,5 µg/disk, 5 µg/disk, 10 µg/disk, 20 µg/disk, 30 µg/disk, 40 µg/disk, 60 µg/disk, dan 80 µg/disk.  Tiap  konsentrasi  ekstrak  diteteskan  ke  disk  sebanyak  10  µl  dan  disk  diletakkan  pada  Mueller  Hinton Agar.  Setelah  itu  diinkubasi  selama  18  jam  pada  suhu  37 o C.  Pengamatan  diameter  zona  hambat  dilakukan dengan  jangka  sorong.  Hasil  penelitian  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak  daun tempuyung pada konsentrasi 10 µg/disk, 20 µg/disk, 30 µg/disk, 40 µg/disk, 60 µg/disk, dan 80 µg/disk dapat menghambat  pertumbuhan  Salmonella  typhi.  Kadar  Hambat  Minimal  ekstrak  daun  tempuyung  adalah  10 µg/disk secara kualitatif dan 4,43 µg/disk secara kuantitatif.
Kata kunci: Sonchus arvensis L., Salmonella typhi, antibakteri

## Abstract
Tifoid  fever  caused  by  Salmonella  typhi  (S.  typhi)  is  endemic  disease  in  Indonesia.  S.  typhi  begin  to  resist  to chloramphenicol, so it is necessary to study about natural material as traditional medicine  such as tempuyung. The  aim  of  this  research  was  to  study  antibacterial  activity  and  Minimum  Inhibitory  Concentration  (MIC)  of ethanolic  extract  from  tempuyung  leaf  (Sonchus  arvensis  L.)  againts  growth  of    S.  typhi.  This  research  used quasy experimental methods with post test only control group design. Treatment consisted of  8 concentrations with 5 replications was 2,5 µg/disc, 5 µg/disc, 10 µg/disc, 20 µg/disc, 30 µg/disc, 40 µg/disc, 60 µg/disc, and 80 µg/disc. As much as 10 µl from each concentration was dropped into disc and placed in Mueller Hinton Agar. Then incubated for 18 hours to 37 o C. Observation of bacterial inhibition zone by using a caliper. Result of this research that the leaf  extract at a concentration 10 µg/disc, 20 µg/disc, 30 µg/disc, 40 µg/disc, 60 µg/disc, and 80 µg/disc can inhibit the growth of  Salmonella typhi. Minimum Inhibitory Concentration of ethanolic extract from tempuyung leaf  was 10 µg/disc qualitatively and 4,43 µg/disc quantitatively.
Key words: Sonchus arvensis L., Salmonella typhi, antibacterial

## Pendahuluan
Indonesia merupakan salah satu negara yang sedang berkembang. Sebagai negara yang sedang berkembang,  Indonesia  memiliki  berbagai  masalah kesehatan, terutama penyakit infeksi. Indonesia yang termasuk  negara  tropis  ini  mempunyai  berbagai penyakit  infeksi  endemik,  salah  satu  penyakit tersebut  adalah  demam  tifoid  (Widodo,  2009). Menurut  data  World  Health  Organization  (WHO) tahun  2003,  terdapat  17  juta  kasus  demam  tifoid  di seluruh  dunia  dengan  angka  kematian  mencapai 600.000  kasus  per  tahun.  Pada  tahun  2000, diperkirakan  bahwa  lebih  dari  2,16  juta  episode tifoid  terjadi  di  seluruh  dunia  dan  terjadi  216.000 kematian.
Lebih  dari  90%  dari  morbiditas  dan  mortalitas  ini terjadi  di  Asia.  Di  Indonesia,  ada  sekitar  900.000 kasus  per  tahun  dengan  angka  kematian  mencapai 20.000  kasus.  Menurut  laporan  WHO,  91%  kasus demam  tifoid  terjadi  pada  usia  3-19  tahun  (WHO, 2003).  Hasil  Riset  Kesehatan  Dasar  tahun  2007 menunjukkan  bahwa  persentase  penduduk  yang terjangkit  demam  tifoid  dibandingkan  dengan seluruh  penduduk  di  Indonesia  sebesar  1,6% (Riskesdas,  2007).  Insidensi  demam  tifoid  bervariasi di setiap daerah dan biasanya terkait dengan sanitasi lingkungan.  Di  daerah  rural  seperti  Jawa  Barat ditemukan  157  kasus  per  100.000  penduduk, sedangkan  di  daerah  urban  ditemukan  760-810  per 100.000 penduduk (Widodo. 2009).
Saat  ini  banyak  bakteri  yang  resisten  terhadap berbagai  antibiotik,  salah  satunya  adalah  S.  typhi. Selama  10  tahun  terakhir,  S.  typhi  dengan  plasmid- encoded  resisten  terhadap  kloramfenikol  yang sebelumnya  adalah  drug  of  choice  untuk  demam tifoid.  Resistensi  ini  terjadi  di  negara  Indian subcontinent, Asia Tenggara, dan Afrika (Gama, 2012). Banyaknya  kejadian  resistensi  terhadap  antibiotik menyebabkan  berkembangnya  penelitian  mengenai obat-obat tradisional dalam bidang kesehatan. Salah satu  tanaman  yang  bermanfaat  dalam  bidang kesehatan adalah daun tempuyung (Sonchus arvensis L).
Daun  tempuyung  memiliki  banyak  manfaat,  antara lain  sebagai  diuretik,  pereda  batuk,  dan  penurun kadar  kolesterol.  Selain  itu  daun  tempuyung  juga
dapat  mengatasi  berbagai  penyakit,  seperti  batu ginjal  dan  batu  empedu  (Cendrianti  et  al,  2013). Secara  umum  daun  tempuyung  mangandung triterpenoid, flavonoid, inositol, manitol, dan  kalium (Sulaksana  et  al,  2004).  Triterpenoid  banyak ditemukan  dalam  famili  Asteraceae.  Senyawa triterpenoid  dan  turunannya  dilaporkan  mempunyai aktivitas  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri  E.  coli dan S. aureus (Sukadana dan Santi, 2011). Penelitian tentang  aktivitas  antibakteri  daun  tempuyung terhadap  bakteri  E.  coli  dan  S.  aureus  juga  pernah dilakukan  oleh  Rumondang  et  al.,  (2013).  Penelitian tersebut menunjukkan bahwa ekstrak daun tempuyung  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri E. coli dan S. aureus (Rumondang et al, 2013).
Tujuan  penelitian  adalah  membuktikan  adanya aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun tempuyung (Sonchus  arvensis  L.)  terhadap  pertumbuhan Salmonella typhi dan untuk menentukan konsentrasi minimum  ekstrak  etanol  daun  tempuyung  (Sonchus arvensis L.) yang mampu menghambat pertumbuhan S. typhi.

## Subyek dan Metode

## Jenis  penelitian  yang  digunakan  adalah  Quasi
Experimental  Design  dengan  rancangan  penelitian Post  test  only  Control  Group  Design.  Sampel  yang digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  koloni  bakteri Salmonella  typhi  dari  stock  culture  milik  Fakultas Kedokteran  Universitas  Jember  yang  disesuaikan dengan standar 0,5 Mc Farland  (1-1,5x10 8 CFU/ml).
Tanaman  tempuyung  diperoleh  dari  Kebun  Raya Purwodadi  yang  telah  diidentifikasi.  Pembuatan Ekstrak  dilakukan  di  Laboratorium  Biologi  Fakultas Farmasi  Universitas  Jember.  Uji  aktivitas  antibakteri dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran Universitas Jember.
Daun tempuyung dicuci bersih kemudian dikeringkan dengan mengangi-anginkan selama 3 hari. Kemudian daun  tempuyung  dihaluskan  menggunakan  blender kemudian  diayak.  Selanjutnya  direndam  dalam etanol  96%  selama  kurang  lebih  3  hari  lalu  disaring menggunakan  kertas  saring.  Setelah  itu  dipekatkan menggunakan rotary evaporator.

## Analisis Data
Rancangan  penelitian  ini,  sampel  dibagi  menjadi kelompok kontrol dan kelompok perlakuan. Kelompok  kontrol  adalah  kontrol  positif  yaitu kloramfenikol  dan  kelompok  kontrol  negatif  yaitu DMSO.  Perlakuan  terdiri  dari  8  konsentrasi  ekstrak daun  tempuyung  dengan  4  kali  pengulangan  yaitu 2,5  µg/disk,  5  µg/disk,  10  µg/disk,  20  µg/disk,  30 µg/disk, 40 µg/disk, 60 µg/disk, dan 80 µg/disk. Tiap konsentrasi ekstrak diteteskan ke disk sebanyak 10 µl dan  disk  diletakkan  pada  Mueller  Hinton  Agar. Setelah itu diinkubasi selama 18 jam pada suhu 37 o C. Diameter  zona  hambat  diukur  menggunakan  jangka sorong. Data  selanjutnya  dianalisis  menggunakan uji Shapiro  Wilk,  uji  korelasi  Spearman,  dan  uji  regresi logaritmik.

## Hasil
Hasil  penelitian  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol daun tempuyung terhadap pertumbuhan Salmonella typhi dapat dilihat pada Tabel 1.

## Tabel 1. Rata-rata diameter zona hambat pertumbuhan
Salmonella typhi Konsentrasi (µg/disk) Diameter rata-rata (mm) Keterangan K (-) 6,0 Resisten 2,5 6,0 Resisten 5 6,0 Resisten 10 7,1 Sensitif 20 8,2 Sensitif 30 8,9 Sensitif 40 14,3 Sensitif 60 10,8 Sensitif 80 8,9 Sensitif K (+) 28,5 Sensitif
Berdasarkan  Tabel  1.,  zona  hambat  mulai  terbentuk pada  konsentrasi  10  µg/disk.  Mulai  konsentrasi  10 µg/disk  hingga  40  µg/disk  rata-rata  mengalami peningkatan  diameter  zona  hambat.  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak,  maka  semakin  lebar  diameter  zona  hambat yang terbentuk. Setelah konsentrasi 40 µg/disk, yaitu
konsentrasi 60 µg/disk dan 80 µg/disk diameter zona hambat  yang  terbentuk  mulai  menurun.  Hal  ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun tempuyung (Sonchus arvensis L.) mempunyai aktivitas antibakteri  dalam  menghambat  pertumbuhan  S. typhi secara in vitro.
Gambar 1. Diameter zona hambat pertumbuhan S. typhi
Analisis  data  yang  pertama  kali  dilakukan  adalah  uji normalitas  data  menggunakan  uji  Shapiro  Wilk.  Uji ini dipilih karena jumlah sampel yang digunakan ≤ 50. Hasil uji Shapiro Wilk didapatkan nilai p = 0,000 dan nilai α = 0,05. Nilai p < α (p<0,05) menunjukkan data tidak  terdistribusi  secara  normal.  Kemudian  data ditransformasi  dan  didapatkan  nilai  signifikansi kurang  dari  0,05  sehingga  dapat  ditarik  kesimpulan bahwa  data  tidak  terdistribusi  normal.  Setelah  diuji normalitas  dilanjutkan  uji  korelasi  Spearman  karena data  tidak  terdistribusi  normal.  Hasil  uji  korelasi Spearman  didapatkan  nilai  p  =  0,000.  Nilai  p  <  0,05 membuktikan  bahwa  terdapat  korelasi  yang signifikan antara variabel bebas dan variabel terikat. Hasil  uji  korelasi  Spearman  juga  didapatkan  nilai koefisien  korelasi  antara  konsentrasi  ekstrak  dan diameter zona hambat sebesar 0,881. Nilai koefisien yang  mendekati  1  maka  dapat  disimpulkan  bahwa hubungan  antara  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun tempuyung  dengan  diameter  zona  hambat  sangat kuat.
Selanjutnya  dilakukan  uji  regresi  logaritmik  untuk menentukkan  KHM  secara  kuantitatif.  Gambar  2 menunjukkan  grafik  dari  hasil  uji  regresi  logaritmik. Hasil  uji  regresi  logaritmik  didapatkan  persamaan y=2,333+2,461lnX,  didapatkan  nilai  lnX  =  1,49, sehingga  didapatkan  nilai  X  sebesar  4,43.  Jadi, didapatkan KHM secara kualitatif sebesar 10 µg/disk dan secara kuantitatif sebesar 4,43 µg/disk.

## Gambar   2. Grafik hasil uji regresi logaritmik

## Diskusi
Hasil  dari  penelitian  ini  adalah  ekstrak  etanol  daun tempuyung  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri terhadap  pertumbuhan  S.  typhi  secara  in  vitro.  Hal tersebut dapat dibuktikan dengan terbentuknya zona bening  di  sekitar  dan  di  bawah  disk  setelah  ditetesi ekstrak  etanol  daun  tempuyung  dalam  berbagai konsentrasi.  Zona  bening  tersebut  menandakan penghambatan pertumbuhan S. typhi secara in vitro.
Disk  yang  ditetesi  DMSO  sebagai  kontrol  negatif, terlihat pada Gambar 1  di sekitar dan di bawah disk tidak  terbentuk  zona  hambat.  Kontrol  negatif  yang tidak  membentuk  zona  hambat  ini  membuktikan DMSO yang digunakan sebagai pelarut ekstrak, tidak memiliki  aktivitas  untuk  menghambat  pertumbuhan S.  typhi  secara  in  vitro.  Selain  itu,  dengan  adanya kontrol  negatif  membuktikan  bahwa  ekstrak  yang diuji  mempunyai  efek  terhadap  pertumbuhan  S. typhi (Emrizal et al, 2012).
Kontrol  positif  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  kloramfenikol.  Di  sekitar  ataupun  di  bawah disk  yang  telah  ditetesi  suspensi  kloramfenikol, terlihat  adanya  zona  bening  yang  menunjukkan penghambatan  pertumbuhan  terhadap  S.  typhi. Hasil  kontrol  positif  menunjukkan  adanya  zona hambat rata-rata sebesar 28,5 mm. Bakteri dianggap masih  sensitif  terhadap  kloramfenikol  apabila diameter zona  hambat yang terbentuk  lebih dari 18 mm  (WHO,  2003).  Jadi,  pada  penelitian  ini  S.  typhi sensitif terhadap kloramfenikol.
Data  hasil  penelitian  dapat  dilihat  pada  Tabel  1. Berdasarkan tabel tersebut dapat dilihat bahwa pada konsentrasi  ekstrak  2,5  µg/disk  dan  5  µg/disk  tidak terdapat zona  hambat di sekitar disk. Hal ini berarti pada  konsentrasi  tersebut,  ekstrak  belum  dapat menghambat pertumbuhan bakteri karena
konsentrasi  ekstrak  daun  tempuyung  masih  sangat rendah sehingga tidak mampu merusak membran sel dan mengganggu proses fisiologi sel bakteri (Cowan, 1999).  Sementara  itu  mulai  konsentrasi  10  µg/disk sampai konsentrasi 40 µg/disk mengalami peningkatan  diameter  zona  hambat.  Diameter  zona hambat  yang  semakin  besar  pada  konsentrasi  10 µg/disk sampai konsentrasi 40 µg/disk menunjukkan bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  etanol daun  tempuyung  maka  semakin  besar  efek antibakteri  yang  ditunjukkan  dengan  semakin besarnya  zona  hambat.  Penurunan  diameter  zona hambat  pada  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun tempuyung  disebabkan  pada  saat  pengenceran secara bertingkat, terjadi pengurangan zat aktif dari ekstrak  etanol  daun  tempuyung  sehingga  efek antibakterinya  pun  berkurang  (Sari  dan  Suryani, 2014).
Berbeda  dengan  konsentrasi  10  µg/disk  hingga konsentrasi  40  µg/disk,  pada  konsentrasi  60  µg/disk dan  80  µg/disk  zona  hambat    yang  terbentuk semakin  kecil.  Kondisi  ini  memperlihatkan  efek hormesis bahan kimia, yaitu fenomena  menurunnya presentase  hambatan  saat  konsentrasi  ekstrak tertinggi.  Efek  hormesis  ditunjukkan  dengan  adanya peningkatan  efek  ekstrak  pada  konsentrasi  rendah dan  penurunan  efek  ekstrak  pada  titik  tertentu  saat ekstrak  mencapai  konsentrasi  yang  tinggi  (Calabrese dan Baldwin, 1998). Faktor-faktor yang berpengaruh terhadap  diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan pada metode difusi antara lain kecepatan difusi, sifat media  agar  yang  digunakan,  jumlah  organisme  yang diinokulasi,  serta  konsentrasi  bahan  kimia  (Ariyanti et al, 2012).
Sifat antibakteri dari ekstrak etanol daun tempuyung didapat  dari  senyawa  flavonoid  dan  triterpenoid. Flavonoid memiliki mekanisme kerja dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  cara inaktivasi  protein  pada  membran  sel  (Singh  et  al, 2005).  Flavonoid  berikatan  dengan  protein  melalui ikatan  hidrogen  sehingga  mengakibatkan  struktur
protein  menjadi  rusak.  Sebagian  besar  struktur dinding  sel  dan  membran  sitoplasma  bakteri mengandung protein dan lemak, sehingga mengakibatkan ketidakstabilan pada dinding sel dan membran  sitoplasma.  Ketidakstabilan  tersebut mengakibatkan  fungsi  permeabilitas  selektif,  fungsi pengangkutan  aktif,  pengendalian  susunan  protein dari  sel  bakteri  menjadi  terganggu,  yang  akan berakibat pada hilangnya makromolekul dan ion dari sel,  sehingga  sel  bakteri  menjadi  kehilangan  bentuk dan terjadi lisis (Susanti, 2008).
Mekanisme  triterpenoid  sebagai  antibakteri  dengan cara  bereaksi  dengan  porin  (protein  transmembran) yang terdapat pada membran luar dinding sel bakteri. Kemudian  akan  terbentuk  ikatan  polimer  yang  kuat sehingga  mengakibatkan  rusaknya  porin.  Rusaknya porin  yang  merupakan  pintu  keluar  masuknya senyawa  akan  mengurangi  permeabilitas  dinding  sel bakteri  dan  mengakibatkan  sel  bakteri  kekurangan nutrisi  sehingga  pertumbuhan  bakteri  terhambat atau mati (Cowan, 1999).

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  tempuyung (Sonchus  arvensis  L.)  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap pertumbuhan Salmonella typhi.
Konsentrasi  terkecil  dari  ekstrak  daun  tempuyung yang mampu menghambat pertumbuhan Salmonella typhi    adalah  10  µg/disk  secara  kualitatif    dan  4,43 µg/disk secara kuantitatif.
Saran  dari  penelitian  ini  adalah  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  untuk  mengetahui  Kadar Bunuh Minimal ekstrak etanol daun tempuyung dan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui kandungan, jumlah, dan proporsi bahan aktif dari ekstrak etanol daun  tempuyung,  serta  penelitian  tentang  ekstrak daun  tempuyung  menggunakan  pelarut  lain  seperti etanol 70% dan air.

## Daftar Pustaka

## Ariyanti NK, Darmayasa IBG, Sudirga SK. 2012. Daya
Hambat  Ekstrak  Kulit  Daun  Lidah  Buaya  (Aloe barbadensis  Miller)  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan
Escherichia  coli  ATCC  25922.  Jurnal  Biologi. 2012; 16(1): 1-4.
Badan Peneliti dan Pengembangan Kesehatan. 2007. Laporan Hasil Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas)
Nasional. Jakarta: Badan Peneliti dan Pengembangan Kesehatan; 2007.
Calabrese  EJ,  Baldwin  LA.  1998.  Hormesis  as  a Biological  Hypothesis.  Enviromental  Health Perspective. 1998; 106(1): 357-362.
Cendrianti  F,  Siti  M,  Evi  UU.  2013.  Uji  Aktivitas Ekstrak  N-Heksana,  Etil  Asetat,  dan  Etanol  70% Daun  Tempuyung  (Sonchus  arvensis  L.)  pada Mencit Jantan Hiperurisemia. Artikel Ilmiah Hasil Penelitian Mahasiswa. 2013.
Cowan  MM.  1999.  Plant  Product  as  Antimicrobial Agents.  Clinical  Microbiology  Review.  1999; 12(4): 564-582.
Emrizal,  Fernando,  Suryani,  Ahmad,  Sirat,    Arbain. 2012.  Isolasi  Senyawa  dan  Uji  Aktivitas  Anti- inflammasi  Ekstrak  Metanol  Daun  Puwar Kincung  (Nicolaia  speciosa  Horan).  Jurnal Penelitian Farmasi Indonesia. 2012; 1(1):1-5.
Garna H. 2012.  Buku Ajar Divisi Infeksi dan Penyakit
Tropis. Jakarta: Sagung Seto; 2012.

## Rumondang M, Kusrini D,  Fachriyah E. 2013. Isolasi,
Identifikasi,  dan  Uji  Antibakteri  Senyawa Triterpenoid  dari  Ekstrak  N-Heksana  Daun Temupuyung  (Sonchus  arvensis  L.).  Chem  Info.
2013; 1 (1): 56-164.
Sari  M,  Suryani  C.  2014.  Pengaruh  Ekstrak  Daun Belimbing  Wuluh  (Averrhoa  bilimbi  L.)  dalam Menghambat  Pertumbuhan  Jamur  Candida albican  Secara  In  Vitro.  Prosiding  Seminar Nasional Biologi dan Pembelajarannya. 2014.

## Singh  IP,  Bharate  SB,  Bhutani  KK.  2005.  Anti-HIV
Natural  Product.  Jurnal  Current  Science.  2005; 89(2): 269-290.
Sukadana  IM,  Santi  SR.  2011.  Senyawa  Antibakteri
Bis  (2-Etilheksil)  Ester  dan  Triterpenoid  dalam Ekstrak n-Heksana Daun Tempuyung
(SonchusArvensis  L.).  Majalah  Obat  Tradisional. 2011; 16(1): 1–6.
Sulaksana  J,  Santoso  B,  Jayusman  DI.  2004.
Tempuyung: Budi Daya dan Pemanfaatan untuk Obat.  Cetakan  Pertama.  Jakarta:  Penebar Swadaya; 2004.
Susanti  A.  2008.  Daya  Antibakteri  Ekstrak  Etanol
Daun  Beluntas  (Pluchea  indica  Less)  terhadap
Escherichia  coli  secara  In  Vitro.  Jurnal
Universitas Airlangga. 2008; 1(1).
Widodo  D.  Demam  Tifoid.  2009.  In:  Sudoyo  AW, editor.  Buku    Ajar  Ilmu  Penyakit  Dalam  Jilid  III.
Jakarta: Interna Publishing; 2009. p 2797-2806
World  Health  Organization.  2003.  Background document:  The  diagnosis,  Treatment  and Prevention  of  Typhoid  Fever.  Geneva:  World
Health Organization; 2003.
World  Health  Organization.  2003.  Manual  for  the
Laboratory  Identification  and  Antimicrobial
Susceptibility  Testing  of  Bacterial  Pathogens  of Public  Health  Importance  in  the  Developing World.  Geneva:  World  Health  Organization; 2003.