p-ISSN 2550-1232
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308 e - ISSN 2550-0929
Identifikasi Molekuler dan Posisi Filogenetik Ikan Sili

## (Mastacembelidae: Macrognathus) dari Sungai Brantas, Jawa Timur, berdasarkan DNA mitokondria Gen COI
Molecular Identification and Phylogenetic Position of the Spiny Eels (Mastacembelidae: Macrognathus ) from Brantas River, East Java, based on mitochondrial DNA COI Gene
Wahyu Endra Kusuma 1 *, Ifa Sufaichusan 1 , Bela Fatma Hani Ayu Lestari 1 , Yuni Widyawati 1
1 Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya, Jalan Veteran, Ketawangede, Lowokwaru, Kota Malang, 65145, Indonesia *Korespondensi: wahyuendrak@ub.ac.id

## ABSTRAK
Ikan  sili  (famili Mastacembelidae)  adalah  ikan  yang  tersebar  secara  alami  dan terdistribusi  luas  di  Pulau  Jawa,  khususnya  di  Sungai  Brantas  di  Jawa  Timur.  Ikan  ini memiliki nilai ekonomi yang tinggi sebagai sumber protein masyarakat lokal serta akhir- akhir ini menjadi populer sebagai ikan hias di kalangan penghobi. Pemenuhan kebutuhan pasar saat ini masih dipasok dari hasil tangkapan di alam yang menyebabkan populasinya menurun  drastis.  Informasi  ilmiah  dasar  mengenai  identifikasi  spesies  dan  penentuan posisi  filogenetik  suatu  spesies  termasuk  ikan  sili  sangat  penting  untuk  dilakukan  guna mendukung  upaya  budidaya,  domestikasi  serta  menjaga  kelestariannya  di  alam.  Pada penelitian ini, spesimen ikan sili ditangkap dari daerah aliran Sungai Brantas, Jawa Timur pada  dua  lokasi  di  Malang  dan  Kediri.  DNA  mitokondria  daerah cytochrome  c  oxidase sub unit I (COI) kemudian di sekuensing pada beberapa individu yang dipilih secara acak. Hasil  analisis  morfologi  dan  genetik  menggunakan  BLASTn  menunjukkan  bahwa spesimen  yang  diteliti  dapat  terkonfirmasi  sebagai Macrognathus  aculeatus .  Analisis filogenetik  dengan  menggunakan  metode Bayesian  Inference menunjukkan  bahwa spesies M.  aculeatus memiliki  kerabat  terdekat  dengan M.  arai dari  Bangladesh. Rekonstruksi  filogenetik  menunjukkan  bahwa  individu M.  aculeatus dari  Malang  dan Kediri  terkelompok  menjadi  satu  clade  dengan  indvidu  dari  Mojokerto  serta  memiliki divergensi molekuler yang sangat kecil yang mengindikasikan bahwa mereka berasal dari populasi yang sama. Hasil penelitian ini dapat dijadikan informasi awal untuk merancang manajemen domestikasi, budidaya, serta konservasi yang efektif.
Kata kunci :  analisis morfologi; Bayesian Inference; divergensi molekuler; domestikasi; konservasi;

## ABSTRACT
The  spiny  eels  (family  Mastacembelidae)  is  a  fish  that  naturally  and  widely distributed on Java Island, especially in the Brantas River of East Java. This fish has high economic  value,  as  a  source  of  protein  for  local  people  and  has  recently  popular  as  an ornamental fish among hobbyists. To fulfill market needs, fishermen must catch the fish from nature, leading to a severe population decline. Basic scientific information regarding species identification and determining the phylogenetic position fish species including the spiny eels is very important in order to support aquaculture, domestication and maintain its sustainability in nature. Specimens of the spiny eels were collected from Brantas River
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308
basin,  East  Java,  at  two  localities  in  Malang  and  Kediri.  Mitochondrial  DNA  from  the cytochrome  c  oxidase  subunit  I  was  then  sequenced  on  several  randomly  selected specimens. Results of morphological and genetic analysis using BLASTn showed that the specimens  under  study  could  be  confirmed  as Macrognathus  aculeatus .  Phylogenetic analysis using the Bayesian Inference method showed that M. aculeatus in this study has the closest relative to M. arai from Bangladesh. The phylogenetic reconstruction showed that  individuals  of M.  aculeatus from  Malang  and  Kediri  were  clustered  together  with individuals from Mojokerto with very shallow molecular divergence, indicating that they possibly  originated  from  the  same  population.  The  results  of  this  study  can  be  used  as basic  information  to  design  effective  management  of  domestication,  aquaculture,  and conservation in the future.
Keywords : Bayesian  Inference;  conservation;  domestication;  morphological  analysis; molecular divergence;

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu negara  dengan  tingkat  keanekaragaman iktiofauna  terbesar  di  dunia,  menjadi rumah  lebih  dari  4800  spesies  ikan  yang terdistribusi  secara  alami.  Dari  jumlah tersebut, lebih dari 1200 spesies merupakan ikan air tawar dan hampir 150 spesies  diantaranya  adalah  endemik (Direktorat  Jenderal  Konservasi  Sumber Daya Alam dan Ekosistem, 2019; Froese &  Pauli,  2022).  Dengan  tingginya keanekaragaman hayati tersebut,
Indonesia  termasuk  ke  dalam  salah  satu negara  mega-biodiversitas  ( megadiverse countries )  dan  titik  pusat  biodiversitas ( biodiversity hotspot ) (Mittermeier et al ., 1997;  Myers et  al .,  2000).  Sayangnya, biodiversitas  iktiofauna  di  Indonesia berada  dalam  tekanan yang  mengarah  ke kepunahan  (Wibowo et  al .,  2019; Gustiano, Kurniawan, & Haryono, 2021). Tingginya  laju  kehilangan  biodiversitas iktiofauna di Indonesia sering diasosiasikan  dengan  beberapa  faktor terkait kegiatan ekonomi
dan pertumbuhan  jumlah  penduduk.  Faktor- faktor  tersebut  mengarah  pada  aktivitas antropogenik misalnya kerusakan habitat, pencemaran  lingkungan,  penangkapan berlebih  serta  introdukasi  spesies  alien dan  invasif  (Cleary  &  deVantier,  2011; von Rintelen, Arida, & Häuser, 2017)
Ikan sili merupakan sebutan umum untuk  kelompok  ikan  dalam  famili Mastacembelidae.  Di  beberapa  daerah yang  berbeda,  ikan  sili  disebut  juga  ikan
mirik,  ikan  berod  dan  ikan  tilan.  Famili Mastacembelidae  terdiri  dari  tiga  genera yaitu Macrognathus , Mastacembelus dan Sinobdella (Nelson,  Grande,  &  Wilson, 2016;  Fricke,  Eschmeyer,  &  Van  der Laan,  2023).  Sementara  Sinobdella adalah  genus  monotipik  ( monotypic genus ) yang hanya memiliki satu anggota spesies S.  sinensis , Macrognathus dan Mastacembelus memiliki  banyak  spesies dengan jumlah masing-masing 24 dan 64 spesies  (Froese  &  Pauli,  2022;  Fricke et al .,  2023).  Di  Indonesia,  khususnya  di wilayah  bagian  barat,  sampai  saat  ini terdistribusi  sembilan  spesies  dari  famili Mastacembelidae.  Dari  jumlah  tersebut,
lima spesies termasuk genus Macrognathus dan  empat  spesies  dari genus Mastacembelus (Froese  &  Pauli, 2022).  Di  Pulau  Jawa,  tercatat  empat spesies Mastacembelidae yang terdistribusi secara alami yaitu Machrognathus aculeatus , M. maculatus, Mastacembelus  erythrotaenia dan M. unicolor (Kottelat et al ., 1993).
Ikan  sili  merupakan  salah  satu komoditas  dengan  nilai  ekonomi  yang tinggi  (Meijaard et  al .,  2006).  Ikan  ini merupakan  sumber  protein  masyarakat lokal  dan  bahkan  pada  daerah  tertentu, menjadi makanan khas yang  populer dan digemari,  misalnya  di  Lamongan,  Jawa Timur (Rahma, 2021). Selain itu, ikan sili akhir-akhir  ini  menjadi  populer  sebagai ikan  hias  di  kalangan  para  penghobi. Namun  sayangnya,  beberapa  laporan penelitian,  hasil  wawancara  dengan nelayan  maupun  pengamatan  di  lapang
p-ISSN 2550-1232
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308 e - ISSN 2550-0929
menunjukkan bahwa populasi ikan sili di alam  telah  menurun  (Hadiaty,  2011; Andani,  Herawati  &  Zahidah,  2017; pengamatan  pribadi).  Kecenderungan penurunan  populasi  ikan  sili  juga  terjadi di  daerah  aliran  Sungai  Brantas.  Sungai Brantas yang merupakan sungai terpanjang  ke  dua  di  Pulau  Jawa  telah mengalami kemunduran kualitas mutu air akibat  dari  pencemaran  serta  kerusakan lingkungan (Yetti, Soedharma, & Haryadi, 2011; Lusiana & Rahadi, 2018). Selain  itu,  keberadaan  spesies  ikan  alien invasif  juga  mengancam  keberadaan spesies  indigenous  termasuk  ikan  sili (Syafei & Sudinno, 2018).
Upaya  domestikasi  dan  budidaya ikan sili telah dilakukan meskipun belum berhasil pada tingkatan komersial (misalnya  pada  penelitian  Mukti et  al .,
2009),  sehingga  pemenuhan  kebutuhan pasar masih  mengandalkan  hasil  tangkap di  alam.  Upaya  domestikasi  ikan  sili sangat  penting  untuk  dilakukan  baik sebagai upaya konservasi maupun pemenuhan  kebutuhan  penyediaan  benih pada kegiatan budidaya. Untuk
melakukan  kegiatan  domestikasi  dengan efektif  dan  tepat,  informasi  dasar misalnya  mengenai  identifikasi  spesies yang  akurat  serta  posisi  filogenetik diantara  spesies  lain  pada  pada  famili Mastacembelidae adalah sangat penting.
Identifikasi  spesies  yang  akurat menjadi  fundamental  dan  dasar  untuk melakukan domestikasi, monitoring ekologi, mengevaluasi strategi konservasi dan  mengestimasi  dinamika  populasi suatu  spesies  di  alam.  Kesalahan  dalam identifikasi  spesies  dapat  menyebabkan dampak  negatif  yang  parah,  misalnya perancangan  strategi  konservasi  yang tidak  tepat,  mengabaikan  spesies  yang terancam punah dan sebaliknya memberikan  perhatian  kepada  spesies yang  tidak  dilindungi,  sampai  dengan abai terhadap populasi  ikan yang mengalami penurunan populasi (Teletchea,  2009;  Austen et  al .,  2016).
Sementara  itu,  rekonstruksi  filogenetik untuk  menentukan  posisi  filogenetik suatu  spesies  menjadi  penting  untuk mengetahui hubungan kekerabatan,
sejarah  evolusi,  adaptasi  serta  dapat  pula memprediksi  perubahannya  di  masa depan  (Ryder,  1986;  Wiley,  2010; Strecker et al ., 2011).
DNA mitokondrial daerah cytochrome  oxidase  c  subunit  I (COI) merupakan  marka  molekuler  yang  biasa disebut  sebagai barcode  region pada aplikasi DNA barcoding . Fragmen
sekuen  COI  sepanjang  ~  650  bp, digunakan  sebagai  marker  standar  untuk melakukan  identifikasi  spesies  yang cepat  dan  akurat  serta  sering  pula digunakan  pada  analisis  filogenetik (Hebert et al ., 2003a; Hebert, Ratnasingham,  &  DeWaard,  2003b; Dahruddin et al ., 2017; Fadli et al ., 2020; Pandey et  al .,  2020).  Dalam  penelitian ini,  kami  melakukan  koleksi  spesimen ikan  sili  di  daerah  aliran  Sungai  Brantas untuk  melakukan  identifikasi  spesies secara  akurat  dengan  menggunakan analisis  morfologi  dan  genetik  serta menentukan posisi filogenetiknya diantara  spesies  lainnya  dalam  genus Macrognathus .

## METODE PENELITIAN

## Koleksi spesimen di Sungai Brantas
Sampling  di  daerah  aliran  Sungai Brantas,  Jawa  Timur,  dilakukan  selama tujuh  bulan,  dimulai  dari  bulan  Oktober 2021  sampai  dengan  bulan  April  2022. Individu  ikan  sili  dapat  ditangkap  dari
Bendungan Waru Turi Desa Gampengrejo,  Kecamatan  Gampengrejo, Kabupaten Kediri dan Bendungan
Dempok,  Desa  Gampingan,  Kecamatan Pagak,  Kabupaten  Malang,  Jawa  Timur (Gambar  1,  Tabel  1).  Spesimen  ikan  sili ditangkap  dengan  menggunakan  alat tangkap  pancing.  Individu  ikan  sili  yang ditangkap  di  lapang  kemudian  dimatikan dalam kondisi segar dengan cara direndam  di  dalam  air  es.  Identifikasi awal  di  lapang  menunjukkan  bahwa spesimen  yang  ditangkap  merupakan spesies dari genus Macrognathus . Sebagian  kecil  dari  sirip  pektoral  bagian kanan  tubuh  kemudian  dipotong  dan disimpan  dalam  larutan  TNESU-8  buffer untuk  analisis  molekuler  (Asahida et  al .,
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308
1996).  Spesimen  ikan  sili  diawetkan  dan difiksasi  dengan  larutan  formalin  10% untuk  penyimpanan  suhu  ruang  dalam jangka waktu yang lama. Setiap spesimen kemudian disimpan di Depositori Ichthyologicum Brawijaya, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya  dan  masing-masing  individu telah diberi nomor voucher (Tabel 1).
Gambar 1.   Peta  lokasi  sampling  ikan  sili  di  Kediri  dan  Malang,  Jawa  Timur.  Garis berwarna kuning menunjukkan aliran Sungai Brantas yang mengalir ke arah Laut Jawa.
Tabel 1. Lokasi Sampling Ikan Sili di Daerah Aliran Sungai Brantas, Jawa Timur
Lokasi Titik Koordinat Jumlah Sampel Nomor Voucher Spesimen yang disekuensing S E Bendungan Waru Turi Desa Gampengrejo, Kecamatan Gampengrejo, Kabupaten Kediri -8.18768 112.507497 10 UB.1.321.1- UB.1.321.10 UB.1.321.2, UB.1.321.6, UB.1.321.9 Bendungan  Dempok, Desa Gampingan, Kecamatan Pagak, Kabupaten Malang -7.7633013 112.022479 10 UB.1.322.1- UB.1.322.10 UB.1.322.3, UB.1.321.6, UB.1.321.8

## Identifikasi morfologi
Identifikasi secara morfologi
dilakukan dengan mengacu pada  Roberts (1985)  dan  Kottelat et  al .,  (1993).
Analisis  morfologi  dilakukan  dengan mengukur karakter morfometri
menggunakan digital  callipers dengan tingkat akurasi 0.1 mm, misalnya panjang standar,  panjang  kepala,  lebar  badan, panjang snout ,  dan  diameter  mata.
Karakter meristik dihitung dengan
mengamati  misalnya:  jumlah  duri  lunak sirip  punggung,  jumlah  duri  lunak  sirip ekor, jumlah duri lunak sirip anal. Selain itu  pengamatan  pola  warna  tubuh  juga dilakukan pada spesimen yang ditangkap baik  dalam  kondisi  segar  maupun  saat sudah  diawetkan.  Identifikasi  morfologi awal di laboratorium menunjukkan bahwa  spesimen  yang berhasil  ditangkap termasuk dalam genus Macrognathus .
p-ISSN 2550-1232
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308 e - ISSN 2550-0929

## Ekstraksi  DNA,  Polymerase  Chain Reaction dan Sekuensing
Sebanyak total enam individu (dari tiga individu pada masing-masing lokasi) diambil  secara  acak  untuk  analisis genetik. Ekstraksi DNA dilakukan dengan  menggunakan  metode phenol chloroform dengan prosedur yang dijelaskan  oleh  Asahida et  al .,  (1996). Prosedur  singkatnya  adalah  sebagai berikut: proses denaturasi protein dimulai dengan menambahkan 20 μl Proteinase K (20  mg/ml)  di  tube  1,5  ml  yang  berisi sampel  jaringan  sirip  pektoral  sebelah kanan  di  dalam  larutan  TNESU8  buffer. Larutan  ini  kemudian  diinkubasi  pada suhu  37°C  selama  15-20  jam.  Selanjut- nya, ditambahkan larutan phenol: chloroform (perbandingan  1:1).  Proses selanjutnya adalah alkohol dingin
ditambahkan  untuk  proses  presipitasi DNA.  DNA  yang  sudah  terpresipitasi kemudian  dilarutkan  dengan  mengguna- kan  TE-buffer.  Sampel  DNA  kemudian disimpan  pada  suhu  sekitar  -20°C  untuk proses Polymerase Chain Reaction (PCR). Gen  COI  pada  DNA  mitokondria sepanjang  ~  680  bp  diamplifikasi menggunakan PCR dengan primer umum untuk  ikan  (Ward et  al 2005).  Urutan primer  forward  adalah  Fish  F1  5’
TCAACCAACCACAAAGACATTGGC
AC  3’  sedangkan  urutan  untuk  primer reverse adalah Fish R1 5’ TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAAT
CA 3’. Proses PCR dilakukan pada 10 μl larutan  reaksi  dengan  enzim  DNA polymerase  dengan  menggunakan  .  PCR dilakukan  dengan  30  siklus  yang  terdiri dari 98°C selama 5 detik, 55°C selama 15 detik  dan  72°C  selama  20  detik.  Untuk proses sekuensing, produk PCR kemudian  dikirim  ke  Apical  Scientific Sdn Bhd, Malaysia. Sekuensing dilakukan  dengan  menggunakan  metode Sanger.  Sekuen  DNA  yang  didapat kemudian  diedit  dan  disusun  mengguna- kan  perangkat  Chromas  (Technelysium, DNA  Sequencing  Software).  Sekuen kemudian  disejajarkan  dan  diinspeksi secara  manual  dengan  menggunakan
perangkat  Mesquite  v3.11  (Maddison  & Maddison, 2017).

## Analisis BLASTn dan Filogenetik
Sekuen  DNA  mitokondrial  COI ikan  sili  pada  penelitian  ini  dianalisis dengan  menggunakan  metode Basic Local  Alignment  Search  Tool  nucleotide (BLASTn)  untuk  mengetahui  tingkat kemiripan  sekuennya  dengan  sekuen spesies  lain  yang  disimpan  di GenBank .
Identifikasi spesies secara genetik dilakukan  berdasarkan  tingkat  kemiripan 10  sekuen  teratas  dari  hasil  analisis BLASTn.
Berdasarkan hasil pengamatan morfologi  di  laboratorium  serta  hasil analisis  BLASTn,  individu  yang  didapat saat sampling dapat diidentifikasi sebagai spesies  di  dalam  genus Macrognathus . Dengan demikian, pada analisis filogenetik,  sekuen  DNA  mitokondrial region  COI  pada  enam  individu  ikan  sili selanjutnya  digabungkan  dengan  sekuen species Macrognathus yang  disimpan dalam GenBank .  Dari  24  species  valid pada  genus Macrognathus ,  hanya  13 spesies  yang  memiliki  sekuen  COI  yang tersimpan  di GenBank .  Dari  jumlah tersebut,  hanya  10  spesies  yang  sekuen COI nya terpublikasi di jurnal internasional.  Berdasarkan  alasan  ini, dataset  sekuen  COI  untuk  analisis filogenetik  terdiri  dari  18  spesies  yang terdiri  dari  enam  sekuen  pada  penelitian ini, 10 sekuen spesies Macrognathus dari GenBank serta  dua  spesies  ourgroup ( Mastacembelus ellipsifer dan M. taiaensis ). Analisis filogenetik dilakukan dengan  menggunakan  metode  Bayesian Inference pada perangkat lunak MrBayes v3.12  (Ronquist  &  Huelsenbeck,  2003). Karena  keterbatasan  model  substitusi yang  tersedia  dalam  perangkat  lunak  ini, kami  menetapkan  model  evolusi  paling kompleks  yaitu  GTR+I+G  dengan  4 kategori gamma untuk  semua  partisi. Analisis  dimulai  dari  pohon  yang dihasilkan  secara  acak,  proses Markov chain  Monte  Carlo (MCMC)  awalnya ditetapkan  pada  2.000.000  generasi  dan
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308
berlanjut  hingga  nilai Average  Standard Deviation  of  Split  Frequency menjadi kurang dari 0,01. Secara standar, analisis dilakukan melalui dua proses independen dengan  empat  rantai  MCMC  simultan pada  suhu  0,20.  Sebanyak  25%  generasi pertama adalah dibuang sebagai " burnin " setelah  skor  kemungkinan  mencapai stasioneritas.  Pohon  diambil  sampelnya setiap 100 generasi dan pohon konsensus mayoritas 50% dengan Bayesian Posterior  Probabilities (BPP)  pada node dibangun berdasarkan pohon dari generasi yang tersisa.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Sampling  dan  Catatan  Habitat Ikan Sili Sampling lapangan untuk mendapatkan individu ikan sili dilakukan di  lima  lokasi  di  sepanjang  daerah  aliran Sungai Brantas. Namun demikian, spesimen  hanya  berhasil  ditangkap  dari dua  lokasi  yaitu  dari  Kediri  dan  Malang dengan  jumlah  masing-masing  lokasi sebanyak  10  individu.  Meskipun  koleksi sampel  dilakukan  lebih  dari  satu  kali pada  masing-masing  lokasi,  namun  di tiga  lokasi  lain  tetap  tidak  berhasil didapatkan individu ikan sili.
Pengamatan  di  lokasi  sampling menunjukkan  bahwa  ikan  sili  di  Kediri dan  Malang  cenderung  mendiami  daerah sungai  yang  memiliki  banyak  vegetasi
tanaman  di  bagian  pinggirannya,  dengan dasar  substrat  yang  berlumpur  atau berpasir. Beberapa catatan dari penelitian sebelumnya  menunjukkan  bahwa  ikan sili  cenderung  menyukai  habitat  berlum- pur  atau  berpasir  karena  ikan  ini  biasa menenggelamkan diri di substrat tersebut. Selain  itu,  ikan  ini  banyak  juga ditemukan di serasah dedaunan di sungai serta  di  tanaman  air  di  sepanjang  sungai (Kottelat  &  Widjanarti,  2005;  Mukti et al ., 2009; Froese & Pauli, 2022). Gambar lokasi sampling ikan sili dan contoh foto spesimen  yang  ditangkap  dapat  dilihat pada Gambar 2.
Identifikasi  spesies  secara  morfologi dan genetik
Spesies pada famili Mastacembelidae  relatif  sulit  untuk dibedakan  antara  satu  dengan  lainnya.
Klasifikasi serta identifikasi spesies yang akurat  menjadi  tantangan  tersendiri  pada spesies dari famili ini. Hal ini disebabkan karena  beberapa  karakter  morfologi kunci untuk mengidentifikasi antar spesies  dapat  bervariasi  seiring  dengan tahapan  pertumbuhan  ikan  atau  yang biasa  disebut  sebagai  variasi ontogeny . Selain  itu,  karakter  morfologi  kunci tersebut  seringkali  tumpang  tindih  di beberapa spesies (Britz 1996; Tran et al ., 2013; Duong et al ., 2020).
Gambar 2.   Individu  ikan  sili  yang  ditangkap  dari  Kediri  (A)  dan  Malang  (B)  dengan panjang  standar:  17,2  cm  dan  19,4  cm  serta  kode  voucher  UB.1.321.8  dan UB.1.322.9. Foto lokasi sampling ikan sili di Kediri (C) dan Malang (D).
p-ISSN 2550-1232
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308 e - ISSN 2550-0929
Spesies dalam genus Macrognathus dapat  dibedakan  dengan genus Mastacembelus berdasarkan karakter kunci  sebagai berikut:  pinggiran lubang  hidung  depan  memiliki  6  vs.  2 tonjolan halus seperti jari kecil; 14-31 vs. 33-40  duri  keras  sirip  dorsal;  48-70  vs. 68-85  duri  lunak  sirip  dorsal  dan  sirip anal  (Kottelat et  al .,  1993).  Berdasarkan pengamatan morfologi secara lebih teliti, spesimen yang ditangkap dari Kediri dan Malang  dapat  dikategorikan  sebagai spesies  pada  genus Macrognathus sesuai ciri-ciri  di  atas.  Sementara  di  tingkat spesies,  spesimen  dari  kedua  lokasi tersebut  dapat  diidentifikasi  sebagai Macrognathus aculeatus karena memiliki 6  tonjolan  halus  seperti  jari  kecil, tubuhnya terdiri dari 14-17 pita berwarna gelap  berbentuk  lonjong  melintang  di badan  serta  absennya  bercak  warna  pada sirip  ekor.  Ciri-ciri  ini  sesuai  dengan karakter  kunci M.  aculeatus seperti  yang dijelaskan oleh Kottelat et al ., (1993) dan Froese & Pauli (2022). Selain itu, spesies dengan  ciri  morfologi  paling  mirip
dengan M. aculeatus adalah M. siamensis . Namun demikian M. siamensis tidak  terdistribusi  di  Indonesia (Kottelat  &  Widjanarti,  2005).  Beberapa karakter  yang  dapat  digunakan  untuk mengidentifikasi M.  aculeatus dapat dilihat pada Tabel 2.
Enam  individu  yang  disekuensing menghasilkan panjang DNA mitokondria COI  sebesar  655  bp.  Sekuen  masing- masing  individu  tersebut  selanjutnya dianalisis  dengan  menggunakan  metode BLASTn. Analisis BLASTn menunjukkan bahwa, individu dari Kediri dan  Malang  memiliki  tingkat  kemiripan sekuen  DNA  mitokondria  COI  >  99% dari M.  aculeatus yang  terdapat  di GenBank yang  memiliki  lokasi  sampling di  Mojokerto,  Jawa  Timur  (Tabel  3).
Hasil ini mengindikasikan bahwa spesimen yang ditangkap dari Kediri dan
Malang  adalah M.  aculeatus .  Dengan kata  lain,  hasil  analisis  genetik  melauli metode  BLASTn  konsisten  dengan  hasil analisis morfologi.
Tabel 2.   Karakter kunci yang digunakan untuk mengidentifikasi spesies M. aculeatus
Karakter Kunci M. siamensis (Kottelat & Widjanarti 2005; Froese & Pauli 2022) M. aculeatus (Kottelat et al. 1993; Froese & Pauli 2022) M. aculeatus Kediri (n = 10) M. aculeatus Malang (n = 10) Duri keras sirip dorsal 13-19 14-20 15-21 18-19 Tonjolan halus seperti jari kecil di lubang hidung depan 6 6 6 6 Pita berwarna gelap berbentuk lonjong melintang di badan 14-17 14-17 14-16 14-16 Bercak warna pada sirip ekor 3-6 tidak ada tidak ada tidak ada
Tabel 3.   Sepuluh sekuen termirip hasil analisis BLASTn
No Nama Ilmiah Maximum Score Total Score Query Coverage (%) Percent Identity (%) Accession Length (bp) Nomor Akses GenBank Lokasi* Litera tur** 1 M. aculeatus 1199 1199 100 99,69 658 KU692605 1 a 2 M. aculeatus 1199 1199 100 99,54 658 KU692603 1 a 3 M. tapirus 1182 1182 99 99,39 652 KT944620 - - 4 M. tapirus 1166 1166 99 98,93 652 KT944619 - - 5 M. aculeatus 1140 1140 95 99,68 623 KU692602 2 a 6 M. aculeatus 1138 1138 94 99,68 622 KU692604 2 a 7 M. tapirus 904 904 99 91,71 652 KT944618 - - 8 M. tapirus 904 904 99 91,71 652 KT944617 - - 9 M. dorsiocellatus 859 859 99 90,48 652 KT944636 - - 10 M. dorsiocellatus 856 856 100 90,23 657 MN605505 3 b 11 M. aculeatus 1199 1199 100 99,69 658 KU692605 1 a
* 1: Mojokerto, Jawa Timur; 2. Lumajang, Jawa Timur; 3. Myanmar
** a: Dahruddin et al . 2017, b: Bolotov et al . 2020
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308
Hasil analisis BLASTn sebenarnya juga  menunjukkan  tingkat  kemiripan  > 99%  dengan  spesies M.  tapirus ,  namun kami  menganggap M.  tapirus dari GenBank kemungkinan  besar  adalah salah  identifikasi.  Perbandingan  sekuen dengan  besar  kemiripan  genetik  ( genetic similarity )  >  98%  merupakan  ambang batas conspecific atau spesies  yang  sama (Leray et al ., 2019; Dinh et al ., 2019).
Posisi  filogenetik  ikan  sili  dari  Sungai Brantas Data genetik sekuen DNA
mitokondria  COI  yang  disimpan  di GenBank sangat  terbatas  untuk  famili Mastacembelidae.  Hal  ini  menunjukkan belum  banyak  penelitian  genetik  pada ikan sili, khususnya dari genus
Macrognathus dan  spesies M.  aculeatus . Sebagian besar sekuen DNA mitokondrial DNA adalah hasil penelitian  yang  belum  dipublikasikan. Meskipun  sekuen  DNA  yang  ada  pada GenBank dapat  dipercaya  akurasinya (Leray et al ., 2019), namun penggunaannya  tetap  harus  dilakukan dengan hati-hati karena adanya kemungkinan kesalahan identifikasi spesies  yang  dilakukan  oleh  peneliti (Meiklejohn et al ., 2019; Locatelli et al ., 2020).  Dengan  alasan  ini,  kami  hanya menggunakan sekuen dari GenBank yang sudah  terpublikasi  di  jurnal  internasional bereputasi untuk analisis filogenetik.
Rekonstruksi  pohon  filogenetik dilakukan dengan menggunakan sekuensing DNA mitokondria COI sepanjang  655  bp.  Hasil  rekonstruksi pohon  filogenetik  dengan  menggunakan Bayesian  Inference menunjukkan  bahwa individu dari Kediri dan Malang terkelompok  menjadi  satu  dalam  satu clade (grup) dengan spesies M. aculeatus yang ditangkap dari
Kabupaten
Mojokerto,  Jawa  Timur  (kode  akses
GenBank : KU692605) (Gambar 3) dengan  nilai  BPP  yang  sangat  tinggi (dengan  nilai  1  (satu)).  Hal  ini  konsisten dengan  temuan  analisis  morfologi  dan BLASTn  yang  menunjukkan  bahwa individu  dari  Kediri  dan  Malang  dapat diidentifikasi  sebagai M.  aculeatus . Selain itu, M. aculeatus memiliki kerabat terdekat  dengan M.  arai .  Kedekatan posisi  filogenetik  ini  kemungkinan  besar dapat  berubah  jika  analisis  filogenetik melibatkan  lebih  banyak  spesies  pada genus Macrognathus .
Individu M.  aculeatus dari  Kediri, Malang dan Mojokerto memiliki perbedaan  genetik  yang  sangat  rendah. Hal  ini  dapat  dilihat  pada  pohon filogenetik (Gambar 3) yang menunjukkan  bahwa  bahwa  masing- masing  individu  terkelompok  menjadi satu clade dengan  divergensi  genetik yang sangat dangkal. Kecilnya divergensi genetik  ini  dapat  diartikan  bahwa individu  yang  ditangkap  dari  ketiga lokasi  tersebut  kemungkinan  berasal  dari populasi  yang  sama.  Ketiga  lokasi  ini masih  berasal  dari  satu  aliran  yang  sama di daerah aliran Sungai Brantas. Individu pada  masing-masing  lokasi  dapat  secara bebas bertukar gen karena mereka secara mudah  berpindah  tempat. Macrognathus aculeatus memang dikenal mudah bermigrasi ke lokasi lain (Froese & Pauli, 2022).  Tingginya  kemiripan  genetik  di antara populasi yang berbeda menunjukkan bahwa tidak terdapat hambatan  geografis  yang  menghalangi pertukaran gen, sehingga aliran genetiknya  ( gene  flow )  sangat  tinggi diantara  lokasi  geografi  yang  berbeda tersebut  (Sundqvist et  al .,  2016;  Cheng , Kao  &  Dong,  2020).  Aliran  gen  yang tinggi  ini  menyebabkan  tidak  adanya diferensiasi populasi (Wright, 1978; Hartl & Clark, 1997).
p-ISSN 2550-1232
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308 e - ISSN 2550-0929
Gambar 3.   Pohon  Filogenetik Bayesisan  Inference menunjukkan  bahwa  individu  dari Kediri dan Malang memiliki kekerabatan paling dekat dengan M. arai yang ditangkap  dari  Bangladesh.  Tanda  asterik  (*)  pada  titik  percabangan menunjukan nilai BPP sebesar 1 (satu). Setiap singkatan pada nama spesies adalah  sebagai  berikut:  INA:  Indonesia;  BANGLA:  Bangladesh;  MYAN: Myanmar; VIET: Vietnam; IND: India; yang menunjukkan lokasi spesimen. Individu pada penelitian ini diberi tanda warna merah.
Hasil analisis filogenetik menunjukkan bahwa ikan sili dari Kediri, Malang dan Mojokerto memiliki divergensi genetik yang sangat kecil yang dapat diartikan kemungkinan besar berasal  dari  populasi  yang  sama.  Hal memberikan  implikasi  praktis  bahwa pada kegiatan domestikasi, koleksi induk dapat  dilakukan  dari  tiga  lokasi  tersebut (Kediri,  Malang  dan  Mojokerto)  dan perkawinan  silang  diantara  mereka  dapat dilakukan.  Selain  itu,  pelepasan  kembali benih  atau  individu  ( restocking ) M. aculeatus di  masing-masing  lokasi  dapat dilakukan tanpa memperhatikan asal-usul lokasi  induk.  Penelitian  yang  lebih mendalam  di  masa  depan,  misalkan dengan  melibatkan  lebih  banyak  lokasi sampling  dan  individu  serta  melakukan analisis variasi genetik, penting dilakukan  agar  mendapatkan  informasi
yang  komprehensif  demi  merancang strategi domestikasi yang lebih efektif.

## KESIMPULAN
Ikan  sili  merupakan  komoditas yang  memiliki  nilai  ekonomis  tinggi. Upaya  melakukan  domestikasi  sebagai langkah  awal  kegiatan  budidaya  dan konservasi  sangat  penting  dilakukan karena kecenderungan menurunnya jumlah  populasi  ikan  ini  di  alam.
Informasi dasar berupa identifikasi spesies yang akurat serta posisi filogenetik  diantara  spesies  dari  genus Macrognathus yang  lain  sangat  penting untuk  diketahui.  Analisis  morfologi  dan genetik  menunjukkan  bahwa  spesimen yang  ditangkap  dari  Kediri  dan  Malang dapat secara akurat diidentifikasi sebagai M.  aculeatus .  Hasil  rekonstruksi  pohon filogenetik  menunjukkan  bahwa  individu dari  Kediri  dan  Malang  memiliki
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308
kemiripan  genetik  yang  sangat  tinggi yang menunjukkan mereka kemungkinan besar  masih  dalam  satu  populasi  yang sama.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami  mengucapkan  terima  kasih kepada  Akhsan  Fikrillah  Paricahya  yang membantu melakukan koleksi ikan sili di lapang.  Ucapan  terima  kasih  juga ditujukan  kepada  Dr.  Nia  Kurniawan karena  telah  mengijinkan  penggunaan laboratorium molekuler Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas  Brawijaya  pada  analisis genetik.  Apresiasi  juga  kami  sampaikan kepada  Resang  Hanan  Samiaji,  Roofi Cahyaningtyas,  Bekti  Ahmad  Sejati  dan Reni  Octavia  yang  telah  membantu pelaksanaan  penelitian.  Penelitian  ini dibiayai  oleh  dana  Hibah  Penelitian  dan Pengabdian Masyarakat FPIK UB dengan dana PNBP tahun anggaran 2022, nomor 4687/UN10.F06/KS/2022.
Ucapan apresiasi kami sampaikan kepada dua  reviewer  anonymous  yang  telah memberikan  rekomendasi  penyempur- naan versi awal dari manuskrip.

## DAFTAR PUSTAKA
Andani,  A.,  Herawati,  T.,  Zahidah, Hamdani,  H.  (2017).    Identifikasi dan  inventarisasi  ikan  yang  dapat beradaptasi di Waduk Jatigede pada tahap inundasi awal. Jurnal Perikanan  dan  Kelautan ,  8(2):  28- 35). Asahida,  T.,  Kobayashi,  T.,  Saitoh,  K., Nakayama, I., 1996. Tissue preservation and total DNA extraction  from  fish  stored  at ambient  temperature  using  buffer containing  high  concentration  of urea. Fisheries  Science ,  62,  727- 730. Austen, G., Bindemann, M., Griffiths, R. Roberts,  D.  L.  (2016).  Species identification  by  experts  and  non- experts:  comparing  images  from field  guides. Scintific  Reports ,  6,
33634. DOI: https://doi.org/10.1038/srep33634 .
Britz,  R.  (1996).  Ontogeny  of  the ethmoidal  region  and  hyopalatine arch  in Macrognathus  pancalus (Percomorpha,  Mastacembeloidei), with critical remarks on Mastacembeloid inter- and intrarelationships. American Museum Navitates , 3181:1-18. Cheng,  J.,  Kao,  H.,  &  Dong,  S.  (2020). Population  genetic  structure  and gene  flow  of  rare  and  endangered Tetraena mongolica Maxim. revealed  by  reduced  representation sequencing. BMC  Plant  Biology, 20, 391. DOI: https://doi.org/10.1186/s12870-020- 02594-y . Cleary,  L.,  &  DeVantier,  L.  (2011). Indonesia:  Threats  to  the  country’s biodiversity. Encyclopedia of Environmental  Health ,  187-197. DOI: https://doi.org/10.1016/B978-
0-444-52272-6.00504-3 . Dahruddin,  H.,  Hutama,  A.,  Busson,  F., Sauri,  S.,  Hanner,  R.,  Keith,  P.,
Hadiaty,  R.,  Hubert,  N.  (2017). Revisiting  the  ichthyodiversity  of Java  and  Bali  through  DNA barcodes: taxonomic coverage, identification accuracy, cryptic diversity and identification of exotic species. Molecular Ecology Resources ,  17(2):  288-299.  DOI: https://doi.org/10.1111/1755-
0998.12528 .
Dinh, T. D., Ngatia, J. N., Cui, L. Y., Ma,
Y.,  Dhamer,  T.  D.,  Xu,  Y.  C.
(2019). Influence of pairwise genetic  distance  computation  and reference  sample  size  on  the reliability  of  species  identification using  Cyt  b  and  COI  gene fragments  in  a  group  of  native passerines.
Forensic Science International: Genetics , 40, 85–95.
Direktorat  Jenderal  Konservasi  Sumber
Daya  Alam  dan  Ekosistem.  (2019). The  sixth  national  report  to  the convention  on  biological  diversity. Kementerian  Lingkungan  Hidup dan Kehutanan.
Duong, T. Y., Tran, L. V. D., Nguyen, N. T. T., Jamaluddin, J. A. F., Azizah,
p-ISSN 2550-1232
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308 e - ISSN 2550-0929
M.  N.  S.  (2020).  Unravelling taxonomic ambiguity of the Mastacembelidae  in  the  Mekong delta  (Viet  nam)  through  DNA barcoding and morphological approaches. Tropical  Zoology ,  33 (2): 63–76.
Fadli,  N.,  Mohd  Nor  S.  A.,  Othman,  A.
S.,  Sofyan,  H.,  Muchlisin,  Z.  A.
(2020). DNA barcoding of commercially  important  reef  fishes in  Weh  Island,  Aceh,  Indonesia. PeerJ . 5(8): e9641. doi: https://doi.org/10.7717/peerj.9641 . Fricke, R., Eschmeyer, W. N., & Van der
Laan,  R.  (eds)  2023.    Eschmeyer’s catalog  of  fishes:  genera,  species, references. (http://researcharchive.calacademy. org/research/ichthyology/catalog/fis hcatmain.asp).  Electronic  version accessed 29 January 2023. Froese,  R.,  &  Pauly,  D.,  (Eds.).  (2022). FishBase. World Wide Web electronic  publication.  Available from  http://fishbase.org/.  Accessed on December 23, 2022. Gustiano,  R.,  Kurniawan,  K.,  Haryono, H. (2021). Optimizing the utilization  of  genetic  resources  of Indonesian  native  freshwater  fish. Asian  Journal  of  Conservation
Biology ,  10(2):  189-196.  DOI: https://doi.org/10.53562/ajcb.67022 Hadiaty,  R.  K.  (2011).  Diversitas  dan hilangnya jenis-jenis ikan di Sungai Ciliwung  dan  Sungai  Cisadane.
Berita Biologi , 10(4): 491-504.
Hartl,  D.  L.,  &  Clark,  G.  C.  (1997)
Principles  of  Population  Genetics. Sinauer Associates, Sunderland. Hebert,  P.  D.,  Cywinska  A.,  Ball  S.  L., DeWaard  J.  R.  (2003a).  Biological identifications through DNA barcodes. Proceedings  of  the  Royal Society B: Biological Sciences , 270: 313-321. DOI: https://doi.org/10.1098/rspb.2002.2 218 . Hebert, P. D., Ratnasingham S., DeWaard  J.  R.  (2003b).  Barcoding animal  life:  cytochrome  c  oxidase subunit 1 divergence among closely
related  species. Proceedings  of  the Royal Society B: Biological Sciences (Suppl),  270:  S96-S99. DOI:
https://doi.org/10.1098/rsbl.2003.00 25 . Kottelat,  M.,  &  Widjanarti,  E.  (2005).
The  fishes  of  the  Danau  Sentarum National  Park  and  the  Kapuas Lakes  area,  Kalimantan  Barat, Indonesia. Raffles Bulletin of Zoology , Supplement, 13: 139-173. Kottelat,  M.,  Whitten,  A.  J.,  Kartikasari, S.  N.,  Wirjoatmodjo,  S.  (1993). Freshwater fishes of western Indonesia  and  Sulawesi.  Periplus Editions, Hong Kong. 221p.
Leray,  M.,  Knowlton,  N.,  Ho,  S.  L., Machida,  R.  J.  (2019).  GenBank  is a  reliable  resource  for  21st  century biodiversity  research. Proceedings of the National Academy of Sciences  USA ,    116(45):  22651- 22656. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.191171 4116 .
Locatelli,  N.  S.,  McIntyre,  P.  B.,
Therkildsen, N. O., Baetscher D. S. (2020).  GenBank's  reliability  is uncertain for biodiversity researchers  seeking  species-level assignment  for  eDNA. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 117(51):32211- 32212. DOI: htpps://doi.org/10.1073/pnas.20074 21117 .
Lusiana,  N.,  &  Rahadi,  B.  (2018).
Prediksi  distribusi  pencemaran  air sungai  brantas  hulu  kota  batu  pada musim hujan dan kemarau menggunakan metode spasial inverse distance weighted. Ecotrophic , 12(2): 211-224. Maddison,  W.  P.,  &  Maddison,    D.  R. (2017). Mesquite: a modular system for            evolutionary  analysis. Version 3.11 http://mesquiteproject.org Meijaard, E., Sheil, D., Nasi, R., Augeri, D., et  al .  (2006).  Hutan  pasca pemanenan:  Melindungi  satwa  liar dalam  kegiatanhutan  produksi  di
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308
Kalimantan. Bogor: CIFOR, 384p. Meiklejohn, K. A., Damaso, N., Robertson, J. M. (2019) Assessment of  BOLD  and  GenBank  –  Their accuracy  and  reliability  for  the identification of biological materials. PLoS ONE , 14(6): e0217084. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone .0217084 .
Mukti,  A.  T.,  Arief,  M.,  Satyantini,  W. H.,  Mubarak,  A.  S.  (2009).  Kajian penyebaran populasi dan reproduksi serta  upaya  domestikasi  budidaya ikan  sili  ( Macrognathus  aculeatus ) sebagai  komoditas  unggulan  daerah kabupaten Lamongan. Laporan Hibah Penelitian Strategis Nasional ,  Universitas  Airlangga, Surabaya. Myers, N., Mittermeier, R. A., Mittermeier,  C.  G.,  da  Fonseca,  G. A.  B.,  Kent,  J.  (2000).  Biodiversity hotspots  for  conservation  priorities. Nature . 403:853–858. DOI: https://doi.org/10.1038/35002501 .
Nelson,  J.S.,  Grande,  T.  C.,  Wilson,  M.
V.  H.  (2016).  Fishes  of  the  world. Fifth  edition.  John  Wiley  &  Sons,
Inc., New York. 725 p. Pandey,  P.  K.,  Singh, Y.  S.,  Tripathy,  P. S.,  Kumar,  R.,  Abujam,  S.  K.,
Parhi,  J.  (2020).  DNA  barcoding and phylogenetics of freshwater fish fauna of Ranganadi River, Arunachal Pradesh. Gene . 2020 Sep 5;754:144860. doi: https://doi.org/10.1016/j.gene.2020. 144860 .
Rahma,  Y.  A.  (2021).  Kajian  morfologi ikan sili pada nasi boranan makanan khas  daerah  Lamongan  Provinsi
Jawa  Timur. Jurnal  Matematika dan  Sains ,  1(1):  23-30.  DOI: https://doi.org/10.55273/jms.v1i1.7 8 .
Roberts, T. R. (1985). Systematic review of the Mastacembelidae or siny eels of  Burma  and  Thailand,  with description  of  two  news  species  of Macrognathus .  Japanese  Journal  of Ichthtyology, 33(2): 95-109. Ronquist,  F.,  Huelsenbeck,  J.P.,  2003.
MrBayes  3:  Bayesian  phylogenetic inference  under  mixed  models.
Bioinformatics, 19: 1572-1574. Ryder, O. A. (1986). Species conservation  and  systematics:  the dilemma  of  subspecies. Trends  in
Ecology & Evolution , 1(1): 9-10. Sundqvist,  L.,  Keenan,  K.,  Zackrisson, M.,  Prodöhl,  P.,  Kleinhas,  D. (2016). Directional genetic differentiation and relative migration. Ecology  and  Evolution , 6(11): 3461-3475. DOI: https://doi.org/10.1002/ece3.2096 . Strecker, A. L., Olden, J. D., Whittler, J. B.,  Paukert,  C.  P.  (2011).  Defining conservation priorities for freshwater  fishes  according  to taxonomic, functional, and phylogenetic  diversity. Ecological Application , 21(8): 3002-3013. Syafei,  L.  S.,  Sudinno,  D.  (2018).  Ikan asing invasif, tantangan keberlanjutan biodiversitas perairan. Jurnal Penyuluhan Perikanan  dan  Kelautan ,  12(3): 145-161. DOI: https://doi.org/10.33378/jppik.v12i3 .106 . Teletchea, F. (2009). Molecular identification methods in fish species:  reassessment  and  possible applications. Reviews in Fish Biology  and  Fisheries ,  19:265-293.
DOI:
https://doi.org/10.1007/s11160-009-
9107-4 .
Tran,  D.D.,  Shibukawa,  K.,  Nguyen,  T.
P.,  Ha,  P.  H.,  Tran,  X.  L.,  Mai,  V. H., Utsugi, K. (2013). Fishes of the Mekong  Delta,  Viet  Nam.  Viet Nam: Can Tho University Publishing House.174 pp. von  Rintelen,  K.,  Arida,  E.,  Häuser,  C. (2017).  A  review  of  biodiversity- related  issues  and  challanges  in megadiverse  Indonesia  and  other Southeast Asian countries. Research  Ideas  and  Outcomes ,  3: 220860. DOI: https://doi.org/10.3897/rio.3.e20860 Wibowo, A., Atminarso, D., Baumgartner,  L.,  Vasemagi,  A.
p-ISSN 2550-1232
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308 e - ISSN 2550-0929
(2019).  High  prevalance  of  non- native  fish  species  in  a  remote region  of  the  Memberamo  River,
Indonesia. Pacific  Conservation Biology ,  26(3):  293-300.  DOI: https://doi.org/10.1071/PC19004 . Wiley,  E.  O.  (2010).  Why  Trees  Are Important.  Evolution: Education and Outreach , 3: 499–505.
https://doi.org/10.1007/s12052-010- 0279-0 .
Wright,  S.  (1978).  Evolution  and  the genetics  of  population,  variability within
and among natural
populations.  The  University  of
Chicago Press, Chicago. Yetti,  E.,  Soedharma,  D.,  Haryadi,  S. (2011). Evaluasi kualitas air sungai- sungai  di  kawasan  das  brantas  hulu malang  dalam  kaitannya  dengan tata  guna  lahan  dan  aktivitas masyarakat  di  sekitarnya. Jurnal Pengelolaan Sumberdaya Alam dan Lingkungan , 1(1): 10-15.
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2023.Vol.7.No.2.308