## PENDAHULUAN
Radikal bebas merupakan suatu molekul yang memiliki elektron  tidak  berpasangan  pada  orbital  terluarnya sehingga  sangat  reaktif.  Radikal  ini  cenderung menyebabkan reaksi berantai di dalam tubuh dan dapat menimbulkan  kerusakan-kerusakan  yang  berlanjut  dan terus  menerus.  Tubuh  manusia  memiliki  sistem pertahanan  endogen  terhadap  serangan  radikal  bebas terutama  terjadi  melalui  peristiwa  metabolisme  sel normal  dan  peradangan.  Jumlah  radikal  bebas  dapat
mengalami peningkatan yang  diakibatkan faktor stress, radiasi,  asap  rokok  dan  polusi  lingkungan,  yang menyebabkan sistem pertahanan tubuh yang ada  tidak memadai,  sehingga  tubuh  memerlukan  tambahan antioksidan  dari  luar  yang  dapat  melindungi  dari serangan radikal bebas 1 .
Antioksidan  merupakan  senyawa  dengan  kemampuan menghambat oksidasi dan melindungi dari radikal bebas. Tubuh  memerlukan  suatu  substansi  penting  yakni antioksidan  yang  dapat  membantu  melindungi  tubuh
Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 70% Buah Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi L .) Menggunakan Metode DPPH
Antioxidant Activity Test of Ethanol Extract of 70% Star Fruit (Averrhoa bilimbi L.) Using the DPPH Method
M. Herwanda Perdana Kusuma 1*
Aditya Noviadi Rakhmatullah 2
Azmi Yunarti 3
STIKES Borneo Lestari,
Banjarbaru, Kalimantan Selatan, Indonesia
*email: m.herwandapk@gmail.com

## Abstrak
Antioksidan adalah senyawa yang mampu menstabilkan radikal bebas di dalam tubuh. Radikal bebas adalah molekul yang sangat reaktif karena memiliki elektron yang tidak berpasangan  sehingga  dapat  berinteraksi  dengan  molekul  sel  tubuh.  Salah  satu tanaman  yang  memilki  khasiat  sebagai  antioksidan  buah  belimbing  wuluh ( Averrhoa bilimbi L .) Belimbing wuluh merupakan salah satu spesies dalam genus Averrhoa . Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  apa  saja  kandungan  senyawa  aktif  yang terkandung pada ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) dan untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak  etanol  70%  buah  belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L .) yang diekstraksi dengan metode maserasi. Pada penelitian ini  menggunakan  metode  DPPH.  Pemilihan  pengujian  aktivitas  antioksidan menggunakan  metode  peredaman  radikal  DPPH  dikarenakan  pengerjaannya  yang mudah,  sederhana,  cepat  dan  peka  dalam  mengevaluasi  antioksidan  dari  senyawa bahan  alam.  Berdasarkan  hasil  penelitian  secara kualitatif  ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L .) memiliki kandungan senyawa metabolit sekunder flavonoid, alkaloid, saponin, dan terpenoid dan secara kuantitatif memiliki nilai IC 50 sebesar 74,625 ppm yang termasuk kategori antioksidan kuat.

## Kata Kunci:
Belimbing Wuluh Averrhoa bilimbi L.
Antioksidan Ekstrak Etanol 70%
Radikal DPPH
Keywords : Star Fruit Averrhoa bilimbi L. Antioxidant 70% Ethanol Extract DPPH Radical

## Abstract
Antioxidants are compounds that are able to stabilize free radicals in the body. Free radicals are highly reactive molecules because they have unpaired electrons so that they can interact with the molecules of the body's cells. One of the plants that has properties as an antioxidant for star fruit (Averrhoa bilimbi L .) Star fruit is one of the species in the genus Averrhoa. The purpose of this study was to find out what are the active compounds contained in ethanol extract of 70% star fruit (Averrhoa bilimbi L.) and to determine the antioxidant activity in ethanol extract of 70% star fruit (Averrhoa bilimbi L. ) extracted by the maceration method. In this study using the DPPH method. The selection of antioxidant activity testing using the DPPH  radical  suppression  method  is  due  to  its  easy,  simple,  fast  and  sensitive  work  in evaluating  antioxidants  from  natural  ingredient  compounds.  Based  on  the  results  of  the study qualitatively ethanol extract 70% star fruit (Averrhoa bilimbi L .) contains secondary metabolite compounds flavonoids, alkaloids, saponins, and terpenoids and quantitatively has an IC 50 value of 74,625 ppm which is included in the category of strong antioxidants.
© 2023 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v9i1.5130.
dari  serangan  radikal  bebas  maupun  senyawa  radikal, antioksidan dalam kadar tertentu mampu menghambat atau memperlambat kerusakan akibat proses oksidasi 9 . Fungsi  utama  antioksidan  adalah  untuk  menghentikan atau  memutus  reaksi  berantai  dari  radikal  bebas  yang terdapat dalam tubuh serta menetralkan radikal bebas sehingga dapat melindungi sistem biologi tubuh dari efek merugikan yang timbul dari proses maupun reaksi yang menyebabkan oksidasi berlebihan 2 .
Pengujian aktivitas antioksidan dapat dilakukan dengan menggunakan  beberapa  metode  seperti  DPPH  (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil),  ABTS (2,2’-Azinobis  [3- ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid]-diammonium salt), dan FRAP ( ferric reducing antioxidant power ). Pada penelitian  ini  digunakan  metode  DPPH.  Pemilihan pengujian  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode peredaman  radikal  DPPH  dikarenakan  pengerjaannya yang  mudah,  sederhana,  cepat  dan  peka  dalam mengevaluasi antioksidan dari senyawa bahan alam 3 .
Tanaman  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  adalah tanaman yang biasa ditanam di halaman rumah dengan keunggulan  dapat  berbuah  sepanjang  tahun.  Belimbing wuluh  masuk  dalam  golongan  tanaman  obat  keluarga (TOGA)  sehingga  masyarakat  memanfaatkan  tanaman ini sebagai jamu atau obat tradisional 8 . Belimbing wuluh bermanfaat  sebagai  obat  batuk,  mengobati  gusi berdarah, menghilangkan jerawat, menghilangkan panu, dan  menormalkan  tekanan  darah  tinggi.  Pemanfaatan tanaman belimbing wuluh sebagai obat tradisional tidak terlepas  dari  senyawa  aktif  yang  terkandung  di  dalam buahnya yang memiliki khasiat 4 .
Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  bahwa  ekstrak metanol buah belimbing wuluh diantaranya mengandung alkaloid,  saponin,  tanin,  flavonoid,  fenol,  dan triterpenoid.  Selain  itu  juga  diketahui  bahwa  ekstrak metanol  buah  belimbing  wuluh  memiliki  aktivitas antioksidan  sebesar  30.365 μ g/ml 5 .  Pada  penelitian Hasim et al (2019), menemukan bahwa daun belimbing wuluh  yang  dimaserasi  dengan  pelarut    etanol  70%
menghasilkan  nilai  IC 50 sebesar  16,99 µg/  ml  terhadap radikal DPPH (1,1-difenil-2-pikrihidrazil).
Belum  ada  penelitian  yang  meneliti  mengenai antioksidan buah belimbing wuluh menggunakan pelarut etanol  70%.  Hal  ini  menjadikan  peneliti  tertarik  ingin melakukan penelitian terkait uji aktivitas ekstrak etanol 70%  buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.). Penelitian  ini  diharapkan  dapat  menjadi  tambahan informasi  dan  data  mengenai  aktivitas  ekstrak  etanol buah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.).

## METODOLOGI

## Alat dan bahan
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  bejana  maserasi (pyrex®),  lemari  pendingin,  lampu  UV,  neraca  analtik (OHAUS®), spektrofotometer UV-Vis (PG Instrument®),  rotary  evaporator  (pyrex®),  alat-alat kaca  (Iwaki®Pyrex®)  dan  vortex  serta  waterbath. Sampel tumbuhan yang digunakan adalah buah belimbing wuluh.  Bahan  lain  yang  digunakan  antara  lain  etanol, DPPH,  aquadest,  asam  asetat  anhidrat,  FeCl 3 ,  gelatin, HCl, H 2 SO 4 pekat, kertas label, kertas perkamen, kertas saring, kuersetin (kontrol positif), NaCl dan metanol.

## Metode Penelitian
Sampel Penelitian
Sampel  penelitian  yang  digunakan  yaitu  ekstrak  etanol 70%  buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  yang dibuat  dengan  metode  ekstraksi  maserasi  dengan menggunakan  pelarut  etanol  70%.  Sebanyak  400  g simplisia  buah  belimbing  wuluh  yang  telah  dikeringkan dan  dihaluskan  kemudian  dimaserasi  dengan  pelarut etanol  70%  sebanyak  1,2  L  (1:3)  selama  24  jam. Kemudian  dilakukan  remaserasi  sebanyak  2  kali.  Hasil ekstraksi yang diperoleh berupa ekstrak kental.
a. Uji Kualitatif
Skrining  fitokimia  dilakukan  terhadap  ekstrak  etanol 70% buah Belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L. ) dengan beberapa  pereaksi,  yaitu  uji  flavonoid,  uji  steroid- terpenoid, uji tanin, uji saponin, uji alkaloid dan uji fenol.
 Uji Flavonoid
Ekstrak  buah  belimbing  wuluh  sebanyak  0,5  gram dilarutkan  dengan  5  ml  etanol,  kemudian  dipanaskan selama 5 menit pada tabung reaksi. Setelah itu, larutan ditambahkan 10 tetes HCl pekat dan 0,2 gram serbuk Mg dan 1 mL amil alkohol. Terdapat senyawa flavanoid ditandai  dengan  berubahnya  larutan  menjadi  warna merah, kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol 6 .
 Uji Fenol
Masukkan sebanyak 1 ml sampel kemudian ditambahkan dengan  larutan  FeCl 3 5%  sebanyak  1  mL  Adanya senyawa  fenol  ditandai  dengan  warna  hijau  kehitaman atau hijau kebiruan 7 .
 Uji Tanin
Ekstrak  buah  belimbing  wuluh  sebanyak  0,5  gram dilarutkan  terlebih  dahulu  dengan  etanol,  kemudian ditambahkan larutan gelatin 1% (1 gram dalam 100 mL NaCL).  Terdapat  senyawa  tanin  ditandai  terbentuk endapan putih kekuningan 7 .
 Uji Alkaloid
Ekstrak  buah  belimbing  wuluh  sebanyak  0,5  gram dilarutkan dengan etanol secukupnya, ditambahkan HCl 2 N dibagi menjadi 4 bagian dimana salah satunya sebagai pembanding 7 .
1)  Pereaksi  Mayer:  Larutan  dipipet  sebanyak  2,5  mL ditambahkan  pereaksi  Mayer  secukupnya.  Ditandai dengan  larutan  berubah  menjadi  endapan  putih  atau putih kekuningan.
2) Pereaksi Dragendorff: Larutan dipipet sebanyak 2,5 mL  ditambahkan  pereaksi  Dragendorff  secukupnya. Ditandai  dengan  larutan  berubah  menjadi  endapan coklat sampai kuning, jingga.
3) Pereaksi Wagner: Larutan dipipet sebanyak 2,5 mL ditambahkan  pereaksi  Wagner  secukupnya.  Ditandai dengan larutan berubah menjadi endapan coklat.
 Uji Saponin
Ekstrak  buah  belimbing  wuluh  sebanyak  0,5  gram ditambahkan 10 mL aquades kemudian dikocok kuat ± 1 menit dan didiamkan selama 10 menit, amati buih atau busa.  Terdapat  senyawa  saponin  ditandai  dengan
terbentuknya busa/buih dengan tinggi 1-3 cm yang stabil selama  10  menit  .Dilakukan  uji  penegasan  dengan menambahkan  HCl  2  M  adanya  saponin  ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil 6 .
 Uji Steroid/Terpenoid
Ekstrak  buah  belimbing  wuluh  sebanyak  0,5  gram dilarutkan  dengan  etanol,  kemudian  ditambahkan pereaksi  Liebermann-Burchard.  Kemudian  dikocok perlahan  dan  diamkan  beberapa  menit.  Terdapat senyawa  triterpenoid  ditandai  dengan  berubahnya larutan  menjadi  warna  merah  atau  ungu,  sedangkan senyawa  steroid  ditandai  dengan  berubahnya  larutan menjadi warna biru atau hijau 7 .
b. Uji Kuantitatif
 Pembuatan Larutan DPPH
Pembuatan  larutan  DPPH  0,4  mM,  dilakukan  dengan cara  menimbang  DPPH  sebanyak  7,8864  mg,  lalu dilarutkan  dalam  50  ml  metanol  p.a,  sehingga  didapat konsentrasi  larutan  DPPH  0,4  mM  yang  dihitung terhadap  BM  DPPH  sebesar  394,32  g/mol.  kemudian larutan  ditempatkan  dalam  botol  gelap  dan  digojog hingga homogen 8 .
 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum DPPH
Panjang gelombang maksimum ditentukan dengan dibuat larutan pereaksi DPPH 0,4 mM dilakukan dengan cara memasukan 1,0 ml larutan DPPH 0,4 mM ke dalam vial gelap  dan  ditambahkan  4  mL  metanol  p.a  kemudian dibungkus  dengan  aluminium  foil  lalu  dihomogenkan. Selanjutnya dimasukkan ke dalam kuvet dan serapannya diukur  menggunakan  alat  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gelombang 500-600 nm 8 .
 Penentuan Operating Time
Larutan  DPPH  0,4  mM  sebanyak  1  ml  ditambahkan dengan larutan standar kuersetin 3 ppm sebanyak 4 ml. Selanjutnya  larutan  serapannya  diukur  dengan menggunakan  alat  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  maksimum  yang  telah  ditetapkan dengan  interval  waktu  2  menit  sampai  mencapai absorbansi yang stabil 8 .
 Pembuatan Larutan Blanko DPPH
Larutan blanko DPPH 0,4 mM yang telah dibuat diambil 1 ml lalu dimasukkan ke dalam vial gelap. Ditambahkan 4 ml metanol p.a dibungkus dengan aluminium foil lalu dihomogenkan.  Proses  inkubasi  dilakukan  di  ruangan yang gelap terhindar dari cahaya selama operating time yang  telah  ditetapkan  sebelumnya.  Kemudian  larutan blanko  DPPH  dimasukkan  ke  dalam  kuvet.  Diukur Serapannya  menggunakan  alat  spektrofotometer  UV- Vis  pada  panjang  gelombang  maksimum  yang  telah didapatkan sebelumnya 8 .
 Pembuatan Larutan Pembanding Kuersetin
Larutan  seri  kadar  dibuat  dengan  menggunakan kuersetin  100  mg  kemudian  dimasukkan  dalam  labu ukur 100 ml, lalu ditambahkan metanol p.a sampai tanda batas dan gojok sampai homogen. Sehingga konsentrasi kuersetin  menjadi  1000  ppm.  Seri  konsentrasi  dibuat dengan cara mengambil 0,2 ml, 0,4 ml, 0,6 ml, 0,8 ml dan 1  ml,  dilarutkan  dalam  100  ml  pelarut  etanol  70%, didapatkan  konsentrasi  1  ppm,  2  ppm,  3  ppm,  4  ppm dan 5 ppm 9 .
 Pengujian Aktivitas Antioksidan Larutan Pembanding

## Kuersetin
Pengujian larutan kontrol kuersetin pada masing-masing konsentrasi  dipipet  sebanyak  4  ml  kemudian ditambahkan 1 ml larutan DPPH dan divortex selama 15 detik  dalam  ruang  gelap.  Selanjutnya  diinkubasi  pada suhu ruang dan ruang gelap selama 30 menit. Langkah terakhir  dilakukan  uji  larutan  kontrol  kuersetin menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang  maksimum  yang  telah  didapatkan sebelumnya 9 .
 Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Ekstrak Etanol 70% Buah Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi L.)
Larutan uji yang dibuat berupa ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh, 100 mg ekstrak dimasukkan ke dalam labu ukur 100 ml, lalu ditambahkan metanol p.a sampai tanda batas hingga dan gojok sampai homogen, hingga didapatkan konsentrasi larutan induk 500 ppm. Larutan induk dibuat 5 seri konsentrasi dengan cara mengambil
10 ml, 12 ml, 14 ml, 16 ml, dan 18 ml dan dilarutkan dalam  100  ml  pelarut  metanol  p.a,  didapatkan konsentrasi yaitu 50 ppm, 60 ppm, 70 ppm, 80 ppm, dan 90 ppm 9 .
 Pengujian Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 70%
Buah Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi L.)
Disiapkan  larutan  uji  dan  larutan  kuersetin  yang  telah dibuat.  Larutan  kuersetin  digunakan  sebagai  kontrol positif.  Setiap  konsentrasi  larutan  uji  dan  larutan kuersetin dipipet 4,0 ml dimasukkan ke dalam labu ukur 5  ml  selanjutnya  ditambahkan  larutan  DPPH  0,4  mM sebanyak 1 ml dan dihomogenkan. Larutan uji diinkubasi di  ruangan  yang  gelap  terhindar  dan  cahaya  selama operating  time  yang  telah  didapatkan  sebelumnya. Selanjutnya absorbansinya diukur dengan menggunakan alat spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum yang telah ditentukan sebelumnya 9 .
c. Pengolahan Data
Hasil  pengukuran  absorbansi  yang  didapat  dari Spektrofotometer UV-Vis digunakkan untuk menghitung  aktivitas  antioksidan.  Aktivitas  penangkal radikal  diekspresikan  sebagai  persentase  inhibisi  yang dapat dihitung dengan rumus sebagai berikut :
% Inhibisi radikal DPPH

## = Absorbansi blanko – Absorbansi sampel Absorbansi blanko
Setelah  didapatkan  persentasi  peredaman  dari konsentrasi  larutan  uji  dan  kuersetin,  kemudian ditentukan persamaan y = bx + a  dengan perhitungan secara regresi linear dimana x adalah konsentrasi (ppm) dan  y  adalah  presentase  inhibisi  DPPH  (%).  Aktivitas antioksidan dinyatakan dengan Inhibitation concentration 50% (IC 50 ) yaitu jika konsentrasi sampel yang dapat meredam radikal DPPH sebanyak 50%. Nilai IC 50 didapatkan dari nilai x setelah mengganti y dengan 50.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengujian secara kualitatif menunjukkan hasil dari uji  skrining  pada  ekstrak  etanol  70%  buah  Belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  yang  mengandung  senyawa metabolit  sekunder  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  dan terpenoid.
Uji  flavonoid  didapatkan  hasil  positif  buah  Belimbing wuluh  (Averrhoa  bilimbi  L.)  ditunjukkan terbentuknya perubahan  warna  menjadi  kuning  atau  kuning kemerahan  pada  lapisan  amil  alkohol.  Uji  flavonoid dilakukan  penambahan  HCl  pekat  digunakan  untuk menghidrolisis O-glikosil. Glikosil akan tergantikan oleh H  +  dari  asam  karena  sifatnya  yang  elektrofilik. Glikosida  berupa  gula  yang  biasanya  seperti  glukosa, raminosa, dan galaktosa. Reduksi dengan HCl pekat dan Mg  menghasilkan  senyawa  komplek  yang  berwarna merah atau jingga atau kuning terhadap flavon, flavanol, flavanonol, dan xanton 10 .
Ekstrak  etanol  70%  buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi L.)    pada  menggunakan  uji  Dragendorff, terbentuk  endapan  coklat  yang  menandakan  positif mengandung  alkaloid.  Hasil  positif  pada  pereaksi Dragendroff diduga karena terjadinya kompleks kalium alkaloid  (K  dengan  ion tetraiodobismutat. Pembuatan pereaksi  Dragendroff  terdiri  dari  bismuth  nitrat  yang dilarutkan  dalam  HCl  kemudian  direaksikan  dengan kalium  iodide.  Pada saat  ion  Bi 3+ dari bereaksi dengan kalium  iodida  berlebih  maka  akan  membentuk  kalium tetraiodobismutat. Gugus nitrogen  pada  alkaloid  akan bereaksi dengan logam K+ dari kalium tetraiodobismutat membentuk ikatan kovalen koordinat  sehingga  memberikan  endapan  berwarna coklat 11 .
Ekstrak  etanol  70%  buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi L.)  yang  direaksikan  dengan  pereaksi  Mayer menghasilkan  endapan  putih  kekuningan  yang menandakan  positif  mengandung  alkaloid.  Pembuatan pereaksi Mayer terdiri dari larutan merkurium klorida dengan kalium iodida. Produk yang dihasilkan dari reaksi tersebut  yaitu  endapan  merah  merkurium  iodida.
Apabila kalium iodida ditambahkan berlebih maka akan membentuk  kalium  tetraiodomerkurat.  Alkaloid memiliki  atom  nitrogen  yang  mempunyai  pasangan elektron  bebas,  sehingga  dapat  digunakan  untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan ion logam diantaranya yaitu kalium. Gugus nitrogen pada alkaloid diperkirakan  akan  berekasi  dengan  logam  K+  dari kalium    tetraidomerkurat  dan      akan      membentuk kompleks  kalium  alkaloid  yang  memberikan  endapan berwarna putih 11 .
Ekstrak  etanol  70%  Buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi L.)  direaksikan  dengan  pereaksi  Wagner  positif mengandung  alkaloid.  Hasil      positif     pada      pereaksi Wagner  diduga  karena  terjadinya  kompleks  kaliumal kaloid  dan  ion  I 3 .  Pembuatan  pereaksi  Wagner  terdiri dari  iodin  dengan  kalium  iodida.  Iodin  akan  bereaksi dengan  ion  dari  kalium  iodida  menghasilkan  warna coklat 11 .
Ekstrak  etanol  70%  buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi L.)  positif  mengandung  saponin  yang  ditandai terbentuk  busa  dan  tidak  hilang  setelah  ditambahkan HCl 2N. Uji saponin menunjukkan hasil positif karena buih yang terbentuk setelah pengocokan bertahan lama. Saponin memiliki glikosil sebagai gugus polar serta gugus steroid  atau  triterpenoid  sebagai  gugus  nonpolar sehingga bersifat aktif permukaan dan membentuk misel saat dikocok dengan air. Pada struktur misel gugus polar menghadap  ke  luar  sedangkan  gugus  nonpolar menghadap  ke  dalam  dan  keadaan  inilah  yang  tampak seperti busa.
Uji  terpenoid  didapatkan  hasil  positif  pada  ekstrak etanol  70%  buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.) dengan  penambahan  Libermann  Burchard.  Reaksi  ini diawali  proses  asetilasi  gugus  hidroksil  menggunakan asam  asetat  anhidrat,  dengan  lepasnya  gugus  asetil sehingga terbentuk ikatan rangkap, kemudian pelepasan gugus  hidrogen  beserta  elektronnya  sehingga  rangkap berpindah.  Hal  ini  disebut  resonansi  yang  bertindak sebagai elektrofil (karbokation). Karbokation menyebabkan  adisi  elektrofilik  yang  diikuti  pelepasan
hidrogen  beserta  elektronnya,  akibatnya  senyawa mengalami perpanjangan konjungasi sehingga ditunjukkan  warna  cincin  kecoklatan  atau  violet  pada perbatasan  larutan  terbentuk,  ini  menandakan  bahwa sampel mengandung terpenoid.
Sedangkan  pada  uji  metabolit  sekunder  lainnya  tidak didapatkan hasil yang positif seperti uji tanin, fenol, dan steroid.  Hal  ini  dikarenakan  perbedaan  tempat pengambilan  sampel  yang  dipengaruhi  oleh  kesuburan tanah, suhu dan kelembaban tempat tumbuh tanaman, sehingga  dapat  membuat  perbedaan  kandungan  kimia pada tanaman.
Tabel 1. Hasil uji kualitatif terhadap sampel Jenis Uji Hasil Pengujian (+/-) Flavonoid + Alkaloid + Fenol - Tanin - Saponin + Steroid - Terpenoid +
Pada  penentuan  panjang  gelombang  maksimum  yang didapat  pada  penelitian  adalah  515  nm  dengan absorbansi 0,713. Hal ini sesuai dengan rentang panjang gelombang maksimum DPPH yaitu 500-600. Penentuan operating  time untuk  mengetahui  waktu  pengukuran yang dibutuhkan suatu senyawa untuk bereaksi dengan senyawa  lain  hingga  terbentuk  senyawa  produk  yang stabil 12 .  Dapat  diketahui  stabil  dengan  mengamati absorbansi  mulai  dari  saat  direaksikan  hingga  tercapai serapan  yang  stabil.  Hasil  penentuan  operating  time dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis dinyatakan  bahwa  dengan  interval  waktu  2  menit
didapatkan  absorbansi  yang  stabil  pada  waktu  30-34 menit.
Penentuan aktivitas antioksidan Ekstrak Buah Belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  dilakukan  dengan  cara sederhana  yaitu  pengujian  menggunakan  DPPH  (2- 2,diphenyl-1-picrylhydrazyl) dimana hanya memerlukan sedikit  sampel  untuk  pengujian.  Metode  pengujian  ini secara kuantitatif memiliki prinsip yaitu menghitung nilai aktivitas  hambatan  pada  radikal  bebas  DPPH  yang dihambat oleh ekstrak Buah Belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) diukur dengan Spektrofotometri UV-Vis dan dinyatakan sebagai nilai IC 50 (Inhibitory Concentration). Penentuan aktivitas antioksidan dengan cara mereaksikan  sampel  ekstrak  Buah  belimbing  wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) dengan radikal bebas berupa larutan DPPH  yang  kemudian  diinkubasi  diruang  gelap  dalam waktu  30  menit,  hal  ini  dilakukan  agar  bereaksinya larutan  sampel  dan  larutan  DPPH  dapat  berlangsung secara  optimal  sebelum  dilakukan  pengukuran  dengan Spektrofotometri  UV-Vis.  Kontrol  positif  yang digunakan dalam penelitian ini adalah kuersetin karena kuersetin  merupakan  golongan  flavonoid  yang  sering ditemukan  dalam  tumbuhan  dan  terbukti  merupakan senyawa antioksidan kuat dengan cara memotong reaksi oksidasi  berantai  radikal  bebas  atau  dengan  cara menangkapnya.  Parameter  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  IC 50 yang  merupakan  konsentrasi senyawa uji untuk meredam radikal DPPH sebesar 50%. Semakin kecil nilai IC 50 berarti semakin besar aktivitas antioksidan.
Gambar 1. Kurva  regresi  linear  penetapan  IC 50 ekstrak etanol 70% buah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.).
Berdasarkan  hasil  uji  kuantitatif  aktivitas  antioksidan kontrol positif kuersetin memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan nilai IC 50 sebesar 3,02115 ppm.
Pada uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol 70% buah belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  didapatkan  nilai IC 50 sebesar  74,6254  ppm  yang  dapat  dikategorikan sebagai antioksidan kuat.

## KESIMPULAN
Senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam ekstrak  etanol  70%  buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi L.)  adalah  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  dan steroid.  Uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  70% buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  dengan metode  DPPH  didapatkan  nilai  IC 50 yaitu  74,625  ppm yang termasuk kategori antioksidan kuat.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  meyampaikan  ucapan  terimakasih  sebesar- besarnya kepada Bapak apt. Aditya Noviadi R, M.Farm dan Ibu Azmi Yunarti, S.Pi, MPd yang telah memberikan bimbingan  serta  arahan  sehingga  penelitian  ini  dapat selesai dengan baik.

## REFERENSI
Hasim, Y. Y. Arifin, D. Andrianto, D. N. Faridah. 2019. Ekstrak  etanol  daun  Belimbing  wuluh ( Averrhoa  bilimbi )  sebagai  antioksidan  dan antiinflamasi.  Jurnal  Aplikasi  Teknologi Pangan. 8(3):86-93.
Khotimah, K. 2016. Skrining Fitokimia Dan Identifikasi Metabolit  Sekunder  Senyawa  Karpain  Pada Ekstrak Metanol Daun Carica pubescens Lenne & K.Koch Dengan LC/MS (Liquid Chromatograph-tandem Mass Spectrometry).  Skripsi.  Fakultas  Sains  dan Teknologi.  Universitas  Islam  Negeri  (UIN)
Maulana Malik Ibrahim.
Ningsih, A. W., I. Hanifa, A. Hisbiyah. 2020. Pengaruh Perbedaan Metode Ekstraksi Rimpang Kunyit ( Curcuma  domestica )  Terhadap  Rendemen dan Skrining Fitokimia. Journal of Pharmaceutical Care Anwar Medika. 2(2).
Nuari,  R.  A.,  A.  A.  Zuniarto,  R.  P.  Maulida.  2020.  Uji Aktivitas Antioksidan Gel Ekstrak Kulit Jeruk Nipis  ( Citrus  aurantifolia S)  dengan  Metode DPPH dan Metode ABTS. Jurnal Farmasi dan Sains. 4(1).
Nugrahani  R.,  Y.  Andayani,  A.  Hakim.  2016.  Skrining Fitokimia  Dari  Ekstrak  Buah  Buncis ( Phaseolus vulgaris L.) Dalam Sediaan Serbuk. Jurnal Penelitian Pendidikan IPA. 2(1):36-42.
Putri,  A.D.,  I.  Taufiqurrahman,  N.  Dewi.  2019. Antioxidant  Activity  Of  Binjai Leaves (Mangifera  caesia) Ethanol  Extracts.  Jurnal Kedokteran Gigi. 4(1): 55-59.
Saktiawan R.A., Atmiasri. 2017. Pemanfaatan Tanaman Toga  Bagi  Kesehatan  Keluarga  Dan Masyarakat.  Jurnal  Abadimas  Adi  Buana.  1 (2): 57-64.
Sayuti, Kesuma, Rina Yenrina. 2015. Alami dan Sintetik. Andalas University Press: Padang.
Syahadat,  A.,  &  N.  Siregar.  2020.  Skrining  Fitokimia Daun  Katuk  ( Sauropus  androgynus )  Sebagai Pelancar  Asi.  Jurnal  Kesehatan  Ilmiah Indonesia. 5(1) : 85-89.
Wahdaningsih.  Sri,  Erna  Prawita  Setyowati,  Subagus Wahyuono.  2011.  Aktivitas  Penangkap Radikal  Bebas  Dari  Batang  Pakis  ( Alsophila glauca J. Sm). Majalah Obat Tradisional, 16(3): 156 – 160.
y = 1,431x - 56,789 R² = 0,9966 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 20 40 60 80 100 R er at a % inhibisi Konsentrasi (ppm)