© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia

## Ekstrak Daun Moringa oleifera terhadap Jumlah Folikel Tikus Model Sindroma Ovarium Polikistik
Dessy Amelia* 1 , Budi Santoso 2 , Bambang Purwanto 3
1 Mahasiswa Magister Program Studi Ilmu Kesehatan Reproduksi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga; Jalan Mayjen.Prof.Dr.Moestopo no.47 Surabaya, telp. 031-5030251, fax:031-5022472
2 Departemen Obstetri dan Ginekologi Fakultas Kedokteran-Rumah Sakit Dr.Soetomo Universitas Airlangga; Jalan Mayjend Prof. Dr. Moestopo No. 6 – 8 Surabaya, telp. 031-
5501078, fax: 031-5022472
3 Departemen Fisiologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga; Jalan Mayjen.Prof.Dr.Moestopo no.47 Surabaya, telp. 031-5030251, fax:031-5022472
e-mail: 1 dessyamelia99@gmail.com , 2 prof.budisantoso.apji@gmail.com , 3 bpoifo@gmail.com

## Abstrak
Sindroma  Ovarium  Polikistik  (SOPK)  adalah  gangguan  endokrin-metabolik  yang memberi  konsekuensi  berat  untuk  kesehatan  wanita,  termasuk  paling  banyak  menyebabkan infertilitas. Resistensi insulin merupakan kelainan metabolik yang paling umum pada SOPK. Moringa oleifera terbukti dapat meningkatkan ekspresi insulin dan menurunkan derajat pada diabetes  mellitus,  sehingga  hal  ini  memungkinkan  dapat  meningkatkan  jumlah  folikel  pada tikus  betina  model  SOP-resistensi  insulin.  Tujuan  penelitan  untuk  mengetahui  pengaruh ekstrak daun Moringa oleifera dalam berbagai dosis dapat meningkatkan jumlah folikel pada tikus  betina  model  SOPK-resistensi  insulin.  Metode  penelitian  menggunakan  tikus  putih strain  Wistar  (Rattus  norvegicus)  100-130  gram  yang  dibagi  menjadi  lima  kelompok,  yaitu kontrol  normal,  kontrol  SOPK-resistensi  insulin,  SOPK-resistensi  insulin  diberi  metformin, SOPK-resistensi  insulin  diberi  ekstrak  daun  Moringa  oleifera  250  mg/kgBB  dan  500 mg/kgBB.  Model  SPOK-resistensi  insulin  dibuat  dengan  menginjeksi  testoteron  propionat selama  28  hari,  setelah  itu  dilanjutkan  pengobatan  selama  14  hari.  Penelitian  ini menganalisis  jumlah  folikel  pada  ovarium  tikus.  Hasil  penelitian  menunjukkan  kelompok kontrolSOPK-resistensi  insulin  menunjukkan  penurunakan  jumlah  folikel  secara  signifikan dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol  normal  (p<0.05).Kelompok  metfromin  dan  ekstrak daun  Moringa  oleifera  menunjukkan  peningkatan  signifikan  jumlah  folikel  dibandingkan dengan  kelompok  kontrol  SOPK-resistensi  insulin  (p<0.05).  Kesimpulan  penelitian menunjukkan  ekstrak  daun  Moringa  oleifera  meningkatkan  jumlah  folikel  pada  tikus  betina model SOPK-resistensi insulin.
Kata kunci —sindroma ovarium polikistik, Moringa oleifera, jumlah folikel

## Abstract
Polycystic Ovary Syndrome (PCOS) is an endocrine-metabolic disorder that has severe consequences  for  women's  health  that  including  the  most  causing  of  infertility.  Insulin resistance  is  a  frequent  metabolic  disorder  in  PCOS.  Moringa  oleifera  has  been  shown  to increase insulin expression and decrease the degree of insulin in diabetes mellitus, therefore it is expected that Moringa oleifera could increase number of follicle in female PCOS-insulin resistant rats. We aimed to prove the effect of Moringa oleifera leaf extract in various doses might  increase  number  of  follicle  in  female  PCOS-insulin  resistant  rats.  The  Methode  used old  white  rat  of  Wistar  strain  (Rattus  norvegicus)  100-130  grams  were  divided  into  five groups  (n=8)  including  normal  control,  PCOS-insulin  resistance,  PCOS-insulin  resistance given metformin and PCOS-resistance insulin were given Moringa oleifera leaf extract in two doses. Then, the PCOS model-insulin resistance by injection of testosterone propionate for 28 days.  After  14  days  treatment,  we  analyzed  number  of  follicle.  PCOS-  insulin  resistance control group showed that a significant decrease number of follicle (p<0.05) compared with normal  control  group.  Treatment  of  Moringa  oleifera  leaf  extract  and  metformin  group significantly increased number of follicle compared to PCOS-insulin resistance control group (p<0.05). The conclusion showed that Moringa oleifera could inscreased number of follicle in female PCOS-insulin resistance rats.
Keywords — Polycystic ovary syndrome, Moringa oleifera, number of follicle
1. PENDAHULUAN
Polycystic  Ovary  Syndrome (PCOS) atau  Sindroma  Ovarium  Polikistik  (SOPK) adalah  gangguan  endokrin-metabolik  yang memberi konsekuensi berat untuk kesehatan wanita, termasuk paling banyak menyebabkan infertilitas (Rojas et al., 2014). Sindroma  ovarium  polikistik  terjadi  pada wanita usia reproduksi, yaitu 6-10%
berdasarkan  pada  kriteria  US National Institutes  of  Health (NIH)  dan  mencapai setinggi 15% dengan menggunakan
Rotterdam  criteria  2003 (Fauser  et  al., 2012).  Menurut  hasil National  Health  and Medical Research Council (NHMRC) tahun 2015, didapatkan prevalensi SOPK sebanyak 12-21%  wanita  usia  reproduksi  di  Australia berdasarkan  ESHRE/ Rotterdam  criteria
2003 . Sindroma  ovarium  polikistik  (SOPK) merupakan gangguan heterogenesis, multifaktor,  kompleks  genetik  dan  endokrin (Rojas  et  al.,  2014).  SOPK  berdasarkan ESHRE/ Rotterdam Criteria 2003
didiagnosis  jika  terdapat  dua  dari  tiga kriteria berikut ini: ovarium polikistik, oligo- ovulasi/anovulasi  atau  bukti  klinis  atau biokimia  dari  hiperandrogenisme.  Selain kriteria di atas, etiologi lain seperti Cushing Syndrome, androgen producing tumours dan congenital  adrenal  hyperplasia  harus  di singkirkan (Fauser et al., 2012).
Etiologi  dan  patogenesis  secara  pasti dari  kelainan  ini  belum  dapat  dipastikan, namun pada beberapa penelitian selanjutnya disepakati  kelainan  ini  dipengaruhi  secara genetik  melalui autosomal dominal  mode  of inheritance (terutama  dari  paternal  origin) (El-Sharkawy, Abdelmotaleb, Aly, & Kabel, 2014). Patogenesis  SOPK  meliputi  sekresi gonadotropin yang abnormal,
steroidogenesis  yang  abnormal,  resistensi insulin,  disregulasi p450c17 ,  dan  genetik (Rusnasari,  2005).  Resistensi  insulin  (71%) merupakan  kelainan  metabolik  yang  paling umum pada SOPK dengan kejadian sindrom metabolik  (31,5%)  (Zeyneloglu  &  Esinler, 2007).
Resistensi  insulin  didefinisikan  sebagai ketidakmampuan  tubuh  untuk  beradaptasi dengan asupan normal glukosa atau ketidakmampuan  insulin  menghasilkan  efek fisiologis  metabolik  yang  memadai  bagi
tubuh  (Djuwantono,  Tjahyadi,  &  Ritonga, 2010).  Resistensi  insulin  mengarah  pada kompensasi  hiperinsulinemia,  meningkatkan produksi  androgen  di  ovarium  dengan meningkatkan  frekuensi  GnRH  dan  sekresi pulsasi LH. Insulin dan Insulin-Like Growth
Factor-1 (IGF-I) bertanggung jawab mengganggu  ovulasi.  Insulin  dan  IGF-1 secara tidak langsung juga dapat meningkatkan kadar androgen dengan menurunkan  produksi  SHBG  ( Sex  Hormone Binding  Globulin )  di  hati  dan  menekan sintesis  IGFBP-1  ( Insulin  Like  Growth Factor  Binding  Protein-1 )  secara  langsung, cepat, dan lengkap baik di hati dan ovarium sehingga level IGF-I, IGF-II, dan testosteron bebas  meningkat.  Hal  ini  meningkatkan resiko  jangka  panjang  diabetes  mellitus  tipe 2  dan  penyakit  kardiovaskular  (Rojas  et  al., 2014).
Pertumbuhan dan perkembangan folikel dikontrol  oleh  sistem  kompleks  yang melibatkan  sumbu  hipotalamus-hipofisa- ovarium.  hormon  gonadotropin  mempunyai peran  penting  dalam  kontrol  tersebut (Siregar,  Linggi,  Riady,  &  Armansyah, 2006).  Hormon  gonadotropin  yang  terlibat dalam  kontrol  folikulogenesis  adalah  FSH dan LH. Hormon FSH berfungsi menginisiasi pertumbuhan folikel,
sedangkan  LH  berfungsi  menstimulasi pertumbuhan  dan  rupturnya  folikel  (Siregar et al., 2006).
Ovarium  adalah  sumber  utama  dari androstenedion  berlebihan  dan  testosteron pada wanita hiperandrogen. Ovarium memainkan  peran  utama  hiperandrogenisme pada  perempuan  meskipun  tidak  eksklusif. Steroidogenesis  dalam  folikel  ovarium dicapai  melalui  kerjasama  antara  sel  teka dan  granulosa.  Sel  teka  adalah  sumber eksklusif  androstenedion  pada  perempuan. Enzim 17E-hidroksisteroid  dehidrogenase yang  expresinya  didominasi  dalam  sel granulosa, hal itu karenakan banyak testosteron  yang  diproduksi  di  dalam  sel granulosa. Terlepas dari tempat metabolisme androstenedion
untuk testosteron, dimulainya  produksi  androgen  di  ovarium khusus pada sel teka (Magoffin, 2006).
Peningkatan  daya  tanggap  pada  kasus ovarium polikistik terhadap stimulasi gonadotropin  menyiratkan  bahwa  kapasitas steroidogenik  meningkat  di  teka  interna.
Penelitian in  vitro mengkonfirmasi  bahwa sel teka dari ovarium polikistik menghasilkan  lebih  banyak  androgen  baik tidak distimulasi ataupun distimulasi gonadotropin  ( Gilling-Smith et  al ,1994 at.(Magoffin,
2006) , p204). Dengan demikian,  jelas  bahwa  pada  ovarium polikistik  telah  meningkatkan  kapasitas untuk  mensekresi  androgen.  Dua  faktor utama  yang  mempengaruhi  jumlah  total androgen yang disekresi oleh ovarium yaitu, jumlah  sel  teka  di  ovarium  dan  kapasitas steroidogenik  dari  masing-masing  sel  teka (Magoffin, 2006).
Peningkatan  produksi  androgen  telah ditunjukkan oleh studi genomik dan molekul menjadi abnormalitas aktivitas steroidogenesis  intrinsik  di  SOPK  di  sel teka.  Peningkatan  LH  dan  kadar  insulin memperkuat kelainan intrinsik pada steroidogenesis  sel  teka.  Level  FSH  yang relatif  menurun  (berhubungan  dengan  level LH) dan faktor intraovarian juga mempengaruhi abnormalitas aktivitas
steroidogenesis  sel  teka  (Legro et  al ,2013; Nelson et  al, 1999  at.(Diamanti-Kandarakis, 2008), p2).
Penurunan steroidogenesis pada jaringan  ovarium  melalui  insulin  dan  LH bekerja  langsung  meningkatkan  konsentrasi intraseluler Cyclic adenosine monophosphate (cAMP) dengan mengaktifkan Acute steroidogenic regulatory  protein (StAR)  yang  berpotensi
pada  aktivitas  langsung  steroidogenesis melalui
penurunan aktivitas
jalur Phosphoinositide  3-kinase (PI3K).  Insulin dan LH juga bekerja langsung meningkatkan transkripsi  reseptor Low-density  lipoprotein cholesterol (LDL-C)  di  sel  granulosa ovarium  melalui  peningkatan  aktivitas  pada jalur Protein  kinase  A (PKA)  dan Mitogen- activated  protein  kinase (MAPK)  serta penurunan  PI3K.  Selain  itu,  insulin  juga meningkatkan  regulasi  aromatisasi  di  sel granulosa ovarium sehingga produksi androgen  meningkat  di  sel  teka  ovarium (Rojas  et  al.,  2014).  Produksi  androgen berlebih  ini  mengganggu  folikulogenesis sehingga
mengakibatkan gangguan
menstruasi  dan  berkembangnya  beberapa kista  di  ovarium  (Diamanti-Kandarakis, 2008). Gejala  yang  paling  umum  dari  SOPK adalah gangguan menstruasi seperti oligomenore atau amenore, infertilitas, kadar hormon  masculinizing  yang  tinggi  yang dimanifestasikan  melalui  timbulnya  jerawat dan hirsutisme, dan sindrom metabolik yang muncul  sebagai  kecenderungan  obesitas sentral,  serta  gejala  lain  yang  berhubungan dengan  resistensi  insulin.  Serum  insulin, resistensi  insulin  dan  tingkat homocysteine yang lebih tinggi pada wanita dengan SOPK dibandingkan dengan wanita normal (Nafiye et  al ,2010;  Pasquali  &  Gambineri,2006; (Kabel, 2016), p2).
Pengobatan  pada  pasien  SOPK  dengan obesitas memiliki tujuan memperbaiki ovulasi,  menurunkan  kadar  androgen,  dan penurunan  berat  badan  tetap  menjadi prioritas  utama.  Metformin  merupakan pengobatan  line  pertama  SOPK  obese. Metformin  oral  adalah  biguanida  yang terbukti  sebagai  terapi  diabetes  melitus  tipe 2,  antihiperglikemik  yang  bekerja  dengan cara menghambat penyerapan glukosa hepatik,  meningkatkan  penyerapan  glukosa perifer, mengurangi level insulin perifer, dan meningkatkan GLUT-4 sehingga konsentrasi insulin  akan  menurun  dan  diikuti  oleh fenomena  reduksi  dari  androgen  dan  LH serta  peningkatan  SHBG.  Metformin  juga bisa bekerja langsung di sel teka mengurangi produksi androgen (Homburg, 2003); (Santoso,  2010).  Metformin  berguna  dalam kasus  SOPK  pada  remaja  karena  selain menekan nafsu makan dan juga merangsang penurunan berat badan (Santoso, 2010). Efek samping  pada  obat  ini  menimbulkan gangguan  saluran  cerna,  seperti  mual, flatulensi,  dan  diare.  Obat  ini  diekskresikan melalui ginjal dan risiko akumulasi metformin serta asidosis laktat akan meningkat jika terdapat gangguan  ginjal  (Huang  et  al.,  2015). Pengobatan metformin mungkin tidak cocok sebagai pengobatan SOPK jangka panjang. Terapi  herbal  menjadi  salah  satu pengobatan alternatif yang sedang
dikembangkan  di  masyarakat  luas,  salah satunya  adalah Moringa  oleifera . Moringa oleifera merupakan  tanaman  yang  berasal dari  india,  dapat  tumbuh  di  setiap  wilayah tropis dan subtropis dengan suhu sekitar 25- 35 0 C.  Tanaman  ini  juga  banyak  ditemukan di  Indonesia.  Penelitian  terbaru Moringa
oleifera memiliki potensi sebagai
antioksidan, antikanker, antiinflamasi, antidiabetik,  dan  sebagai  agen  antimikroba (Gopalakrishnan,  Doriya,  &  Kumar,  2016). Hasil fitokimiawi terhadap Moringa oleifera adalah  polifenol  besar,  yaitu quercetin glucoside , rutin , kaempferol  glucoside, dan chlorogenic  acid di  dalam  tepung Moringa oleifera melalui analisis HPLC (Gupta et al.,
2012). Flavonol quercetin ditemukan dengan konsentrasi  yang  tinggi  pada  daun Moringa oleifera (Gopalakrishnan  et  al.,  2016). Menurut  penelitian  Rahmat  (2009)  daun Moringa  oleifera pada  sampel  kering memiliki  total  flavonol  dan  flavone  sebesar 473,33  mg/  100g  dengan  kandungan quercetin sebesar  384,61  mg/  100g,  5,29 mg/100  g    luteolin,  dan  83,44  mg/  100  g kaempferol (Rahmat, 2009).
Kandungan terbesar dalam daun
Moringa  oleifera adalah quercetin dikenal dengan
3,3’,4’,5,7-pentahydroxyflavone (nama  kimia:  4H-1-benzopyran-4-one,2- (3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy- flavone;  rumus  kimia:  C 15 H 10 O 7 )  (Wang  et al.,  2017). Quercetin merupakan  salah  satu flavonoid  memiliki  unsur  bioaktif  kuat, dengan  efek  radikal  bebas,  antiinflamasi, antikanker, antihiperlipidemia, dan
antiplatelet  (Juywiak et  al ,2005  at.Wang et al ,2016,  p5).  Penelitian terbaru  menjelaskan quercetin juga  ditemukan  menghasilkan inhibin  PI3K  (Zhai et  al ,2012;  Wang et al ,2016, p2). Inhibin PI3K quercetin bekerja penurunan  ekspresi  gen  CYP17A1  di  sel teka  yang  mungkin  bertanggung  jawab menurunkan  aktivasi  17a-hidroksilase  yang memainkan  peran  penting  pada  SOPK. Quercetin juga  berpotensi  memberikan  efek langsung  pada  target  jalur  steroidogenesis sel teka ovarium (Shah & Patel, 2016).
Penelitian yang dilakukan Shah & Patel (2016)  yang  bertujuan  mengkaji  pengaruh quercetin pada  hewan  coba  model  SOPK. Quercetin yang  digunakan  berasal  dari produk inhibitor PI3K dengan dosis pemberian  150  mg/KgBB.  Pada  penelitian tersebut didapatkan hasil quercetin signifikan  menurunkan  kadar  insulin,  kadar testosteron  dan  LH,  serta  profil  lipid. Quercetin juga  menurunkan  berat  ovarium dan uterus serta meningkatkan angka folikel normal dan korpus luteum pada pada hewan coba model SOPK.
Penelitian  sebelumnya  dengan  tujuan untuk  melihat  pengaruh  pemberian  ekstrak etanol  daun Moringa  oleifera terhadap insulitis  dan  ekspresi  insulin  pankreas menunjukkan  pemberian  dosis  250  dan  500 mg/kgBB  menyebabkan  ekspresi  insulin lebih tinggi dan derajat insulitis lebih rendah dibandingkan kelompok kontrol (Sulistyorini,  Johan,  &  Djamiatun,  2015). Peneliti  ingin  melakukan  penelitian  tentang pengaruh pemberian Moringa oleifera dapat meningkatka jumlah folikel pada tikus betina model    Sindroma  Ovarium  Polikistik  yang sampai saat ini belum dibuktikan.

## 2. METODE PENELITIAN
2.1 Rancangan Penelitian
Rancangan  penelitian true  experiment dengan  menggunakan  rancangan Posttest Only  Control  Group  Design .  Pada  awal penelitian dilakukan penghomogenan sampel penelitian.  Subjek  penelitian  terhadap  tikus dibagi  dalam  5  kelompok  dengan  jumlah  8 ekor tiap kelompok yang dipilih secara acak, yaitu  kelompok  kontrol  normal,  kontrol SOPK-resistensi  insulin,  SOPK-resistensi insulin  dengan  metformin,  dan  SOPK- resistensi  insulin  dengan  ekstrak  daun Moringa oleifera dengan dosis 250 mg/kgBB  dan  500  mg/kgBB.  Hewan  coba yang digunakan pada penelitian ini dilakukan  kriteria  inklusi  yaitu  berjenis kelamin  betina,  berat  badan  100-130  gram, sehat,  beraktivitas  dan  tingkah  laku  normal. Kriteria eksklusi pada penelitian ini dilakukan  bila  ada  kelainan  anatomi  yang tampak dan sedang bunting dan drop out jika tikus tidak mau makan atau mati dalam masa penelitian.

## 2.2 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Biokimia  Fakultas  Kedokteran  Universitas Airlangga.  Penelitian  ini  dilakukan  selama bulan Juni- September 2017.

## 2.3 Variabel Penelitian
Variabel  pada  penelitian  ini  terdiri  dari variabel  bebas,  variabel  terikat,  dan  variabel terkendali. Variabel bebas, yaitu dosis ekstrak Moringa  oleifera 250  mg/kgBB  dan  500
mg/kgBB.  Variabel  terikat,  yaitu  jumlah folikel.  Variabel  terkendali,  yaitu  jenis hewan  coba,  jenis  kelamin  hewan  coba, berat  badan  hewan  coba,  pemeliharaan  dan perawatan  hewan  coba,  dan  perlakuan hewan coba .
2.4 Definisi Operasional Variabel
a. Ekstrak  daun Moringa  oleifera adalah ekstrak  daun Moringa  oleifera yang diberikan  dengan  dosis  berbeda  pada tiap  kelompok  perlakukan,  yaitu:  250 mg/kgBB dan 500 mg/kgBB.
b. Jumlah  folikel  adalah  jumlah  folikel pada  ovarium  yang  ditandai  dengan oosit  yang  dikelilingi  oleh  beberapa lapis sel .

## 2.5 Prosedur Penelitian
Penelitian ini menggunakan tikus wanita ( Rattus norvegicus ) mempunyai berat 100-130  gram  yang diperoleh dari Biokimia Fakultas  Kedokteran  Universitas  Airlangga. Pemeliharaan  tikus  dilakukan  di  dalam kandang  plastik  ukuran  50x30  cm  dengan alas  sekam  kayu  yang  diganti  setiap  4  hari sekali,  makanan  dan  minuman  (nutrisi  tikus betina),  timbangan  untuk  menimbang  berat badan  tikus,  testosteron  propionat,  spuit untuk  injeksi  testosteron  propionat,  sonde untuk memasukkan ekstrak Moringa oleifera , object  glass dan  penutupnya, pewarna giemsa ,  pewarna  asam  pikrat, spidol permanent, alat bedah, papan diseksi, dan  mikroskop  cahaya.  Kandang  kemudian diletakkan  di  ruangan  berventilasi  udara alami  di  Laboratorium  Biokimia  Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga.
Hewan coba sebelum dilakukan penelitian diadaptasi  sekaligus  pemilihan  hewan  coba yang akan dijadikan sampel dengan ditimbang  berat  badannya  dan  diberi  nomer pada  punggungnya  dengan  asam  pikrat  di
Laboratorium  Biokimia  Fakultas  Kedokteran Universitas Airlangga selama 1 minggu.
Penelitian ini menggunakan 5
kelompok  dengan  3  kelompok  sebagai kontrol  dan  2  kelompok  sebagai  perlakuan. Setiap  kelompok  terdiri  atas  8  hewan  coba. Kelompok  kontrol  terdiri  dari  kelompok kontrol negatif dan kelompok kontrol positif.
Kelompok kontrol normal diberikan aquades selama  14  hari.  Kelompok  kontrol  positif  I mendapatkan model SOPK-resistensi insulin dan  aquades  sebagai  terapinya.  Kelompok kontrol  positif  II    yang  mendapat  model SOPK-resistensi diberi terapi dengan metformin  2  mg/100  gramBB  selama  14 hari. Kelompok perlakuan yang mendapatkan model SOPK-resistensi insulin diberi terapi dengan ektrak Moringa oleifera dengan dosis 250mg/kgBB dan 500mg/kgBB selama 14 hari. 2.6 Pembuatan model SOPK-resistensi insulin Testosteron (merk Wonder, PT.Wonderindo Pharmatama, Jakarta, Indonesia) merupakan hormon yang digunakan untuk pembuatan model
Sindroma  Ovarium  Polikistik  (SOPK)  pada penelitian  ini,  hormon  ini  dapat  diberikan secara  intramuskular  atau  subkutan  di  paha kiri  dengan  dosis  1mg/100grBB,  volume yang  dimasukkan  ke  setiap  tikus  adalah  0,1 cc/100grBB, diberikan 1 kali/hari selama 28 hari  hingga  model  SOPK-resistensi  insulin didapatkan.  Swab  vagina  untuk  mengetahui siklus apa yang sedang berlangsung sebelum pemberian  testosteron.  Siklus  estrus  adalah siklus yang diharapkan sebelumnya pemberian testosteron.
2.7 Pemberian  Ekstrak  Daun Moringa oleifera
Ekstrak Moringa  oleifera yang  dipakai dalam penelitian ini didapatkan dari Kelorina,  PT.  Moringa  Organik  Indonesia, semua proses dilakukan sesuai standar untuk mendapatkan ekstrak daun Moringa oleifera . Pemberian  ekstrak  daun Moringa  oleifera dengan  dosis  250  mg/kgBB  dan  500 mg/kgBB selama 14 hari dengan alat sonde. Volume  yang  diberikan  untuk  spesies  rat sebesar  0,1-0,2ml/10g  atau  1-2ml/100gr ( Handout Oral Gavage in Rodents
University  of  Minnesota  Driven  to  Discover Second Edition , 2014).

## 2.8 Pengambilan Spesimen Ovarium
Penghitungan  jumlah  folikel  dilakukan pada tikus yang dibunuh dengan
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
menggunakan teknik dislocatio os cervicalis (dislokasi  pada  leher).  Kemudian  tikus diposisikan pada papan bedah menggunakan pins  dan  dibedah  mulai  dari  bagian  perut atau  uterus  dengan  menggunakan  guntung bengkok.  Organ  ovarium  diambil  dan dipisahkan  menggunakan  gunting  lurus kemudian  dibersihkan  bagian  lemak  yang masih  menempel.  Organ  dicuci  dengan aquades  hingga  bersih  dari  darah  kemudian dicuci  dengan  NaCl  0,9%  berulang-ulang. Organ  diamati  secara  makroskopik  dan dicatat  perubahan  yang  ditemukan.  Organ ditiriskan  di  atas  kertas  saring  setelah  air berkurang  dilakukan  penimbangan  dengan organ  diletakkan  pada  cawan  petri  kering kemudian  dicatat  beratnya  masing-masing pada  kertas  blangko.  Selanjutnya  organ dimasukkan  dalam  pot  berisi  formalin  4- 10% dan buffer formalin.

## 2.9 Penghitungan jumlah folikel
jumlah  folikel  dengan  menggunakan pewarnaan  HE  ( Hematoxylin-Eosin ).  HE adalah  metode  pewarnaan  yang  banyak digunakan dalam pewarnaan jaringan sehingga diperlukan dalam penelitian ini.

## 2.10 Pengolahan dan Analisis Data
Analisis  deskriptif  dilakukan    pada semua  data  variabel  penelitian  untuk memperoleh  rerata  dan  simpang  bakunya. Data  yang  diperoleh  dilakukan  uji  analisis statistik  menggunakan  program  SPSS  versi 18.0 (SPSS,Inc., Chicago,IL). Hasil penelitian  dianalisis  secara  statistik  untuk mengetahui  uji  normalitas  menggunakan  uji Shapiro-wilk .  Jika  data  berdistribusi  normal dilanjutkan dengan analisis ANOVA.
Sedangkan  jika  salah  satu  kelompok  data tidak  homogen  atau  tidak  berdistribusi normal,  maka  digunakan  uji  non-parametrik uji Krukal  Wallis. Nilai  signifikan  dalam penelitian ini apabila variabel yang dianalisis memiliki P<0,05.

## 2.11 Ethical Clearance
Adapun  protokol  penelitian  ini  akan dilakukan oleh komite etik Fakultas
Kedokteran  Hewan  Universitas  Airlangga melalui uji etik.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hewan  coba  pada  penelitian  ini  adalah tikus  betina Rattus  nervegicus berusia  3 bulan  yang  mendapatkan  perawatan  selama penelitian di Laboratorium Biokimia Fakultas  Kedokteran  Universitas  Airlangga Surabaya.  Hasil  swab  vagina  pada  hewan coba sebelum dilakukan penelitian menunjukkan siklus estrus. Ini sesuai dengan siklus  yang  diharapkan  sebelum  dilakukan perlakuan,  dalam  penelitian  ini  perlakuan dengan  memberikan  injeksi  testosteron propionat  untuk  model  SOPK-resistensi insulin.  Selain  itu,  ini  menunjukkan  bahwa hewan coba yang akan dilakukan menelitian menunjukkan  memiliki  reproduksi  yang sehat.  Pemeriksaan  swab  vagina  dilakukan di  Laboratorium Institute  of  Tropical Disease (ITD) Universitas Airlangga Hasil  pengukuran  selisih  berat  badan
tikus  betina Rattus  nervegicus sebelum  dan sesudah  perlakuan  dapat  dilihat  pada  Tabel 1.
Tabel  1. Pengukuran  pertambahan  berat badan tikus betina Rattus nervegicus sebelum dan sesudah perlakuan Kelompok Jumlah folikel K1  Kontrol normal 58.75±14.17 K2 Kontrol SOPK-resistensi insulin 74±18.28 a K3 Kontrol SOPK-resistensi insulin dengan Metformin 77±12.17 a K4 SOPK-resistensi insulin dengan Moringa oleifera 250 mg/kgBB 66.25±8.21 K5 SOPK-resistensi insulin dengan Moringa oleifera 500 mg/kgBB 55.62±6.32 b
a signifikan  berbeda  dari  kontrol  normal (p<0.05) b signifikan  berbeda  dari  kontrol  SOPK- resistensi insulin (p<0.05)
Berdasarkan  tabel  1.  menunjukkan bahwa  berat  badan  tikus  betina Rattus nervegicus sebelum  dan  sesudah  perlakuan pada  kelompok  kontrol  normal  berbeda bermakna  dengan  kelompok  kontrol  SOPK- resistensi  insulin  dan  kelompok  kontrol SOPK-resistensi  insulin  dengan  diberikan metformin.  Kelompok  perlakuan  SOPK-
resistensi  insulin  yang  diberikan  ekstrak daun Moringa  oleifera 500  mg/kgBB  (K5) berbeda bermakna dengan kelompok kontrol
SOPK-resistensi insulin sedangkan kelompok perlakuan lain tidak menunjukkan perbedaan yang bermakna.
Penghitungan  secara  histologi  jumlah folikel  pada  ovarium  kanan  dan  kiri  tikus tikus  betina Rattus  norvrgicus di  bawah mikroskop  menggunakan  mikrometer  dapat dilihat pada tabel 2. di bawah ini.
Tabel  2. Pengaruh  pemberian  ekstrak daun Moringa  oleifera terhadap jumlah folikel pada  tikus  betina  model SOPK-Resistensi Insulin Kelompok Jumlah folikel K1  Kontrol normal 25.12±3.18 K2 Kontrol SOPK-resistensi insulin 12.12±4.82 a K3 Kontrol SOPK-resistensi insulin dengan Metformin 25.37±2.20 b K4 SOPK-resistensi insulin dengan Moringa oleifera 250 mg/kgBB 28.75±3.15 b K5 SOPK-resistensi insulin dengan Moringa oleifera 500 mg/kgBB 27.75±4.17 b
a signifikan  berbeda  dari  kontrol  normal (p<0.05) b signifikan  berbeda  dari  kontrol  SOPK- resistensi insulin (p<0.05)
Berdasarkan  tabel  2.  Menunjukkan bahwa jumlah folikel pada kelompok kontrol SOPK-resistensi  insulin    pada  tikus  betina yang  dilakukan  injeksi  dengan  testosteron propionat  1  mg/100gramBB  selama  28  hari mengalami  penurunan  jumlah  folikel  secara signifikan  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol  normal  (p<0.05).  Ini  sesuai  dengan penelitian  model  SOPK  dapat  dilakukan dengan pemberian testosteron propionat pad tikus  betina,  meliputi  perubahan  morfologi maupun  gangguan  hormonal  sebagaimana SOPK  pada  manusia.  Pemberian  testosteron propionat  dengan  dosis  1  mg/grBB  selama 14 hari akan didapatkan suatu keadaan yang menyerupai  SOPK  dengan  ciri-ciri  tidak didapatkan  korpus  luteum,  adanya  ovarium polikistik,  hipertekosis  pada  stroma  serta penipisan  /  atresia  sel  glukosa.  Pemberian testosteron  propionat  selama  21  hari  mulai didapatkan  keadaan  resistensi  insulin  dan
pemberian  testosteron  propionat  selama  28 hari  memberikan  hasil  lebih  bermakna terhadap keadaan resistensi insulin. Keadaan hiperandrogen  dapat  mempengaruhi  indeks resistensi  insulin  serta  kadar  asam  lemak bebas  di  serum.  Semakin  lama  paparan androgen  yang  diberikan  maka  indeks resistensi  insulin  dan  kadar  asam  lemak bebas  akan  meningkat  (Muttaqin  (2009); (Veterini,  Santoso,  &  Widjiati,  2015)).
Penelitian ini menunjukkan bahwa pembuatan  model  SOPK-resistensi  insulin yang  dilakukan  pada  tikus  betina  yang diinjeksi  testosteron  propionat  sebanyak  1 mg/100gBB secara intra muskular selama 28 hari menunjukkan telah terjadi hiperinsulinemia dan terdapat suatu keadaan yang  menyerupai  SOPK  dengan  ciri-ciri tidak didapatkan korpus luteum. Peningkatan androgen  dan  asam  lemak  bebas  akan menghambat  ekskresi  insulin  di  hepar  dan pengangkutan glukosa di otot, serta akhirnya menyebabkan hiperinsulinemia dan resistensi insulin (Marshall, 2001);
(Mukherjee & Maitra, 2010).
Androgen secara langsung menghambat kerja  insulin  di  perifer  maupun  di  hepar, androgen  secara  tidak  langsung  juga mempengaruhi  sensitifitas  insulin  dengan mengubah komposisi tubuh melalui metabolisme  lemak  (Volpi  et  al.,  2005). Androgen (testosteron) menyebabkan resistensi insulin dengan menurunkan jumlah  dan  efektivitas  protein  pengangkut glukosa, khususnya glucose transporter type 4 (GLUT-4)  yang  bertanggung  jawab terhadap  pengangkutan  glukosa  di  otot  dan lemak.  Testosteron  memfasilitasi  lipolisis dan pemecahan lemak abdomen, menyebabkan  peningkatan  asam  lemak bebas.  Peningkatan  androgen  dan  asam lemak  bebas  akan  menghambat  ekskresi insulin  di  hepar  dan  pengangkutan  glukosa di  otot,  serta  akhirnya  menyebabkan hiperinsulinemia dan  resistensi  insulin (Marshall,  2001);(Mukherjee  &  Maitra, 2010).
Resistensi  insulin  merupakan  suatu kondisi yang berhubungan dengan kegagalan organ  target  yang  secara  normal  merespon aktivitas  hormon  insulin.  Resistensi  insulin mengarah pada kompensasi hiperinsulinemia,  meningkatkan  produksi androgen  di  ovarium  dengan  meningkatkan
frekuensi  GnRH  dan  sekresi  pulsasi  LH (Rojas  et  al.,  2014).  Peningkatan  resistensi insulin  pada  perifer  akan  berakibat  terhadap peningkatan  serum  insulin.  Insulin  dalam kadar  tinggi  ini  akan  berikatan  dengan reseptor  IGF-1,  hal  ini  dikarenakan  struktur dari  reseptor  IGF-1  mirip  dengan  struktur insulin.  Insulin  dan  IGF-1  bertanggung jawab terhadap  gangguan  ovulasi.  IGF-1  ini merangsang  sel  teka  ovarium  serta  bersama dengan  LH  akan  merangsang  produksi androgen  di  ovarium.  Insulin  secara  tidak langsung  juga  dapat  meningkatkan  kadar androgen  dengan  menurunkan  produksi SHBG  ( Sex  Hormone  Binding  Globulin )  di hati  dan  IGFBP-1  ( Insulin  Like  Growth Factor  Binding  Protein-1 )  dan  dengan demikian  meningkatkan  testosteron  bebas dan  level  IGF-1,  IGF-2  (Balen,  Conway, Homburg, & Legro, 2005).
Pada  konsentrasi  tinggi,  insulin  sendiri mengaktivasi reseptor IGF-1 yang kemudian akan  merangsang  dibentuknya  androgen  di dalam ovarium. Peningkatan androstenedion sebagai  akibat  rangsangan  IGF-1  akan meningkatkan produksi estron pada jaringan lemak,  estron  dengan  estradiol  bebas  akan merangsang sekresi estrogen dimana estrogen  memberikan  rangsangan  positif  ke sentral,  sehingga  amplitudo  dan  frekuensi pulsasi  GnRH  meningkatkan  produksi  LH kemudian LH merangsang produksi androgen di ovarium (Balen et al., 2005).
Pada  keadaan  anovulasi  yang  terus menerus  akan  terjadi  perubahan  kadar hormon yang sebelumnya fluktuatif menjadi relatif  menetap  dengan  kadar  LH  yang tinggi.  Hal  ini  disebabkan  oleh  beberapa faktor, antara lain;
a. Meningkatnya  sensitifitas  hipotalamus terhadap stimulasi GnRH.
b. Meningkatkan  frekuensi  sekresi  GnRH akibat  penurunan  tonus  opioid  yang berfungsi  menghambat  sekresi  GnRH akibat  tidak  adanya  progesteron  dalam waktu yang lama.
c. Meningkatkan  kadar  estron  akibat pembentukannya  di  jaringan  perifer, sedangkan  kadar  FSH  tetap  rendah karena  pengaruh  penekanan  oleh  kadar estron yang tinggi (Balen et al., 2005).
Ovarium  adalah  sumber  utama  dari androstenedion  berlebihan  dan  testosteron
pada wanita hiperandrogen. Ovarium memainkan  peran  utama  hiperandrogenisme pada  perempuan  meskipun  tidak  eksklusif. Steroidogenesis  dalam  folikel  ovarium dicapai  melalui  kerjasama  antara  sel  teka dan  granulosa.  Sel  teka  adalah  sumber eksklusif  androstenedion  pada  perempuan. Enzim 17E-hidroksisteroid  dehidrogenase yang  expresinya  didominasi  dalam  sel granulosa, hal itu karenakan banyak testosteron  yang  diproduksi  di  dalam  sel granulosa. Terlepas dari tempat metabolisme androstenedion untuk testosteron, dimulainya  produksi  androgen  di  ovarium khusus pada sel teka (Magoffin, 2006). Peningkatan  daya  tanggap  pada  kasus ovarium polikistik terhadap stimulasi gonadotropin  menyiratkan  bahwa  kapasitas steroidogenik  meningkat  di  teka  interna. Penelitian in  vitro mengkonfirmasi  bahwa sel teka dari ovarium polikistik menghasilkan  lebih  banyak  androgen  baik tidak distimulasi ataupun distimulasi
gonadotropin  ( Gilling-Smith et  al ,1994 at.(Magoffin, 2006) , p204). Dengan demikian,  jelas  bahwa  pada  ovarium polikistik  telah  meningkatkan  kapasitas untuk  mensekresi  androgen.  Dua  faktor utama  yang  mempengaruhi  jumlah  total androgen yang disekresi oleh ovarium yaitu, jumlah  sel  teka  di  ovarium  dan  kapasitas steroidogenik  dari  masing-masing  sel  teka (Magoffin, 2006).
Peningkatan  produksi  androgen  telah ditunjukkan oleh studi genomik dan molekul menjadi abnormalitas aktivitas steroidogenesis  intrinsik  di  SOPK  di  sel teka.  Peningkatan  LH  dan  kadar  insulin memperkuat kelainan intrinsik pada steroidogenesis  sel  teka.  Level  FSH  yang relatif  menurun  (berhubungan  dengan  level LH) dan
faktor intraovarian juga mempengaruhi abnormalitas aktivitas steroidogenesis  sel  teka  (Legro et  al ,2013; Nelson et  al, 1999  at.(Diamanti-Kandarakis, 2008), p2). Penurunan steroidogenesis pada jaringan  ovarium  melalui  insulin  dan  LH bekerja  langsung  meningkatkan  konsentrasi intraseluler Cyclic adenosine monophosphate (cAMP) dengan mengaktifkan Acute steroidogenic regulatory  protein (StAR)  yang  berpotensi pada  aktivitas  langsung  steroidogenesis
melalui penurunan aktivitas
jalur Phosphoinositide  3-kinase (PI3K).  Insulin dan LH juga bekerja langsung meningkatkan transkripsi  reseptor Low-density  lipoprotein cholesterol (LDL-C)  di  sel  granulosa ovarium  melalui  peningkatan  aktivitas  pada jalur Protein  kinase  A (PKA)  dan Mitogen- activated  protein  kinase (MAPK)  serta penurunan  PI3K.  Selain  itu,  insulin  juga meningkatkan  regulasi  aromatisasi  di  sel granulosa ovarium sehingga produksi androgen  meningkat  di  sel  teka  ovarium (Rojas et al., 2014). Kadar LH meningkat akan menyebabkan sel teka yang aktif menghasilkan androgen dalam bentuk androstenedion  dan  testosteron.  Keadaan hiperandrogen ini
mengakibatkan lingkungan  internal  folikel  bersifat  dominan androgen  sehingga  tidak  dapat  berkembang dan  menjadi  atresia.  Atresia  pada  folikel terutama berhubungan dengan degenerasi sel granulosa sementara sel teka masih dipertahankan. Sel teka masih aktif menghasilkan  androgen  akibat  rangsangan LH, FSH, tidak secara total tersupresi (Balen et al., 2005).
Hasil  penelitian  yang  ditunjukkan  tabel 2.  juga  menjelaskan  bahwa  jumlah  folikel antara  kelompok  kontrol  normal  dengan kelompok  kontrol  SOPK-resistensi  yang diberi  metformin  dan  kelompok  perlakukan dengan  ekstrak  daun Moringa  oleifera 250 mg/kgBB  dan  500  mg/kgBB  tidak  terdapat berbedaan  bermakna.  Ini  menunjukkan bahwa  kelompok  perlakuan  dengan  ekstra daun Moringa  oleifera dan  metformin selama  14  hari  secara  umum  dapat meningkatkan  jumlah  folikel  mendekati normal  setelah  diberi  perlakuan  model SOPK-resistensi insulin yang dapat dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol normal.
Hasil  penelitian  ini  juga  menjelaskan bahwa  kelompok  kontrol  SOPK-resistensi yang  diberi  metformin  dan  kelompok perlakukan  dengan  ekstrak  daun Moringa oleifera 250  mg/kgBB  dan  500  mg/kgBB menunjukkan  peningkatan  jumlah  folikel secara  signifikan  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol  SOPK-resistensi  insulin (p<0.05).
Moringa  oleifera atau  yang  lebih dikenal  dengan  kelor  awalnya  banyak
tumbuh  di  India,  namun  kini    banyak ditemukan di daerah beriklim tropis (Grubben,  2004).  Pada  beberapa  negara
Moringa  oleifera dikenal  dengan  sebutan benzolive, drumstick  tree,  kelor,  marango, mlonge,  mulangay,nebeday,  saijhan ,  dan sajna (Fahey, 2005).
Moringaceae  terdiri  dari  satu  marga dengan  beberapa  jenis  yaitu M.  oleifera, M. arabica,  M.  pterygosperma,  M.  peregrine (Roloff et al ,1789 at (Gopalakrishnan et al., 2016)).  Daun  sebesar  ujung  jari  berbentuk bulat  telur,  tersusun  majemuk  dan  gugur  di musim  kemarau,  tinggi  pohon  mencapai  5- 12 meter, bagian ujung membentuk payung, batang lurus (diameter 10-30 cm) menggarpu,  berbunga  sepanjang  tahun berwarna  putih/krem,  buah  berwarna  hijau muda,  tipis  dan  lunak.  Tumbuh  subur  mulai dataran rendah sampai ketinggian 700 meter diatas permukaan laut.
Penelitian  terbaru Moringa  oleifera memiliki potensi sebagai antioksidan, antikanker,  antiinflamasi,  antidiabetik,  dan sebagai  agen  antimikroba  (Gopalakrishnan et  al.,  2016). Moringa  oleifera merupakan polifenol  besar,  yaitu quercetin  glucoside , rutin , kaempferol  glucoside, dan chlorogenic acid di  dalam  tepung Moringa  oleifera melalui  analisis  HPLC  (Gupta  et  al.,  2012). Flavonol quercetin ditemukan dengan konsentrasi yang tinggi pada daun Moringa oleifera (Gopalakrishnan  et  al.,  2016).  Ini dapat  dilihat  pada  kandungan  flavonol  dan flavone  pada  daun Moringa  oleifera dengan perhitungan  menggunakan  eksternal  standar memberikan hasil sebagai berikut :
berdasarkan wet  basis (per  100  g  sampel segar),  yaitu  1,38  mg  luteolin,  101.94  mg quarcetin,  dan  21,05  mg  kaempferol, sehingga  totalnya  adalah  124.37  mg. Konsentrasi  flavonol  dan  flavones  yang diperoleh  berdasarkan dry  basis (per  100  g sampel  kering)  adalah  5,53  mg  luteolin, 409.06  mg  quarcetin,  dan  84,48  mg kaempferol  sehingga  totalnya  adalah 499.07 mg.  Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,  daun Moringa oleifera memiliki kandungan flavonol dan flavones total yang cukup besar sebesar  473,33  mg/  100g  yang  didominasi kandungan quercetin sebesar  384,61  mg/ 100g (Rahmat, 2009).
Quercetin merupakan salah satu
flavonoid  memiliki  unsur  bioaktif  kuat,
dengan  efek  radikal  bebas,  antiinflamasi, antikanker, antihiperlipidemia, dan
antiplatelet  (Juywiak et  al ,2005  at.Wang et al ,2016,  p5).  Selain  itu,  quersetin  dikenal
dengan
3,3’,4’,5,7-pentahydroxyflavone (nama  kimia:  4H-1-benzopyran-4-one,2- (3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy- flavone;  rumus  kimia:  C 15 H 10 O 7 )  (Wang et al ,2016). Quercetin merupakan  salah  satu flavonoid  memiliki  unsur  bioaktif  kuat, dengan  efek  radikal  bebas,  antiinflamasi, antikanker, antihiperlipidemia, dan antiplatelet  (Juywiak et  al ,2005  at.(Wang  et al., 2017), p5). Penelitian terbaru menjelaskan quercetin juga  ditemukan menghasilkan inhibin PI3K (Zhai et al ,2012 at  Wang et  al ,2016,  p2). Quercetin berpotensi  memberikan  efek  langsung  pada target  jalur  steroidogenesis  pada  sel  teka ovarium melalui inhibitor PI3K, menurunkan  ekspresi  gen  CYP17A1  di  sel teka yang bertanggung jawab pada penurunan aktivasi 17a-hidroksilase. Penurunan  aktivasi  17a-hidroksilase  ini berperan  dalam    sintesis  steroid  dengan menurunkan konversi progesteron ke androgen sehingga menurunkan kadar androgen(Rojas  et  al.,  2014).  Selain  itu, melalui  jalur  PI3K  dapat  memfosforilasi protein  Akt  sehingga  ketika  protein  Akt diaktifkan  memainkan  peran  penting  pada molekul  GLUT4  dan fork-head  box  protein O1 (FOXO1) (Li & Albertini, 2013) . Glucose  transporter  type 4  (GLUT-4) adalah  protein  transpor  untuk  glukosa  yang bertujuan  membawa  glukosa  masuk  ke dalam    sel.  Proses  translokasi  GLUT-4  ke permukaan  sel  target  diawali  dengan  ikatan insulin dan reseptor insulin subunit α dimana ikatan  tersebut  menyebabkan  subunit  β  dari reseptor  insulin  dan  subunit  lain  yaitu
Insulin Reseptor Substrate-1 (IRS-1) mengadakan autofosforilasi. IRS-1 selanjutnya  mengaktifkan Phosphoinositide
3-kinase (PI3K) yang memediasi translokasi GLUT-4  ke  permukaan  sel  target  (Shah  &
Patel, 2016). Peningkatan translokasi
GLUT-4  menyebabkan uptake glukosa  dari ekstra sel ke dalam intra sel juga meningkat. Peningkatan uptake glukosa  memperbaiki kondisi resistensi insulin.
Penurunan  kadar  insulin  di  jaringan perifer  akan  mengarah  pada  penurunan produksi  androgen  di  ovarium.  Penurunan
kadar  insulin  dan  IGF-1  secara  tidak langsung  juga  dapat  menurunkan  kadar androgen  dengan  meningkatkan  produksi SHBG  ( Sex  Hormone  Binding  Globulin )  di hati  dan  meningkatkan  sintesis  IGFBP-1 ( Insiline  Like  Growth  Factor  Binding Protein-1 )  secara  langsung,  cepat,  dan lengkap  baik  di  hati  dan  ovarium  sehingga level  IGF-I,  IGF-II,  dan  testosteron  bebas menurun  (Rojas  et  al.,  2014).    Penurunan androgen ini akan mempengaruhi lingkungan ovarium, gangguan sistem aromatisasi androgen menjadi estrogen yang memicu  tidak  terjadinya  atresi  folikel  lebih dini. Penurunan resistensi
insulin menurunkan  frekuensi  GnRH  dan  sekresi pulsasi  LH  sehingga  terjadi  perbaikan  pada folikulogenesis (atresia dini tidak terjadi).

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN
4.1 Kesimpulan Pemberian ekstrak daun Moringa oleifera pada  dosis  250  mg/kgBB  dan  500 mg/kgBB  terbukti  dapat  meningkatkan jumlah  folikel  pada  tikus  betina  model SOPK-resistensi insulin.

## 4.2 Saran
Penelitian  SOPK  dengan  resistensi insulin  melalui  pemberian  ekstrak  daun Moringa oleifera terbukti dapat meningkatkan  jumlah  folikel  pada  tikus betina model SOPK-resistensi insulin. Penelitian  pemberian  ekstrak  daun Moringa oleifera sebagai  salah  satu  polifenol  besar ( quercetin )  yang  dapat  digunakan  untuk pilihan  alternatif  pengobatan  SOPK  perlu dilanjutkan  dengan  melihat duration  of action dari  efektifitas  pemberian  ekstrak daun Moringa  oleifera pada  pengobatan SOPK.  Penelitian  ini  masih  memiliki kekurangan  pada  kelompok  kontrol  negatif, hewan coba tidak diberikan injeksi pengganti  testosteron  propionat  sehingga tingkat  stress  yang  dialami  berbeda  dengan kelompok  hewan  coba  model  SOPK- resistensi  insulin  dan  belum  dilakukan memisahkan  zat  toksik  dengan  mengambil zat  yang  efektif    pada  ekstrak  daun  kelor ( moringa oleifera) bagi pengobatan SOPK .

## DAFTAR PUSTAKA
Balen,  A.  H.,  Conway,  G.  S.,  Homburg,  R.,
&  Legro,  R.  S.  (2005). Polycystic ovary  syndrome:  a  guide  to  clinical management : CRC Press.
Diamanti-Kandarakis,  E.  (2008).  Polycystic
ovarian syndrome: pathophysiology, molecular aspects and clinical implications. Expert  Reviews  in
molecular medicine, 10 .
Djuwantono,  T.,  Tjahyadi,  D.,  &  Ritonga,
M. A. (2010). Isu Terkini Penanganan  Yang  Tepat  Dampak Metabolik Sindroma Polikistik Ovarium. Universitas Padjadjaran .
El-Sharkawy,  A.  A.,  Abdelmotaleb,  G.  S.,
Aly, M. K., & Kabel, A. M. (2014). Effect  of  metformin  on  sleep disorders  in  adolescent  girls  with polycystic ovarian
syndrome.
Journal  of  pediatric  and  adolescent gynecology, 27 (6), 347-352.
Fahey,  J.  W.  (2005).  Moringa  oleifera:  A Review of the Medical Evidence for Its  Nutritional,  Therapeutic,  and Prophylactic  Properties.  Part  1.
Trees for life Journal, 1 (5).
Fauser, B. C., Tarlatzis, B. C., Rebar, R. W., Legro, R. S., Balen, A. H., Lobo, R., .  .  .  Laven,  J.  S.  (2012).  Consensus on  women’s  health  aspects  of polycystic  ovary  syndrome  (PCOS): the Amsterdam ESHRE/ASRM-
Sponsored  3rd  PCOS  Consensus Workshop  Group. Fertility  and sterility, 97 (1), 28-38. e25.
Gopalakrishnan,  L.,  Doriya,  K.,  &  Kumar,
D.  S.  (2016).  Moringa  oleifera:  A review  on  nutritive  importance  and its  medicinal  application. Food Science  and  Human  Wellness,  5 (2), 49-56. Grubben,  G.  J.  (2004). Plant  Resources  of Tropical  Africa  (PROTA) (Vol.  1): Prota.
Gupta,  R.,  Mathur,  M.,  Bajaj,  V.  K., Katariya,  P.,  Yadav,  S.,  Kamal,  R., & Gupta, R. S. (2012). Evaluation of antidiabetic  and  antioxidant  activity of  Moringa  oleifera  in  experimental diabetes. Journal  of  Diabetes,  4 (2), 164-171.
Homburg,  R.  (2003).  The  management  of infertility  associated  with polycystic
ovary syndrome. Reproductive
Biology  and  Endocrinology,  1 (1),
109. Huang,  Y.,  Sun,  J.,  Wang,  X.,  Tao,  X.,
Wang,  H.,  &  Tan,  W.  (2015).
Asymptomatic chronic gastritis decreases  metformin  tolerance  in patients  with  type  2  diabetes. Journal  of  clinical  pharmacy  and therapeutics, 40 (4), 461-465.
Kabel,  A.  M.  (2016).  Polycystic  ovarian syndrome: insights into pathogenesis,  diagnosis,  prognosis, pharmacological and non- pharmacological treatment. Pharmaceutical Bioprocessing, 4 (1). Li, R., & Albertini, D. F. (2013). The road to maturation:  somatic  cell  interaction and self-organization of the mammalian  oocyte. Nature  reviews. Molecular cell biology, 14 (3), 141. Magoffin, D. A. (2006). Ovarian Steroidogenic  Abnormalities  in  the Polycystic Ovary Syndrome Androgen  Excess  Disorders  in Women (pp. 203-211): Springer.
Marshall,  K.  (2001).  Polycystic  ovary syndrome:  clinical  considerations. Alternative  Medicine  Review,  6 (3),
272-272.
Mukherjee,  S.,  &  Maitra,  A.  (2010).
Molecular & genetic factors contributing  to  insulin  resistance  in polycystic ovary syndrome. Rahmat,  H.  (2009). Identifikasi  Senyawa Flavonoid Pada Sayuran Indigenous Jawa Barat. Institut Pertanian
Bogor, Bogor.
Rojas, J., Chávez, M., Olivar, L., Rojas, M., Morillo, J., Mejías, J., Bermúdez, V. (2014).  Polycystic  ovary  syndrome, insulin  resistance,  and  obesity: navigating the pathophysiologic labyrinth. International  journal  of reproductive medicine, 2014 . Rusnasari, V. D. (2005). Hubungan Resistensi Insulin (Homa-Ir) dengan Obesitas  dan  Perubahan  Hormon Androgen  pada  Penderita Sindroma Ovarium  Polikistik. Program  Pasca Sarjana Universitas Diponegoro.
Santoso, B. (2010). Management of
Polycystic  Ovary  Syndrome  in
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Adolescent. Folia Medica Indonesiana, 46 (1), 66-71.
Shah,  K.  N.,  &  Patel,  S.  S.  (2016). Phosphatidylinositide 3-kinase inhibition: A new potential target for the  treatment  of  polycystic  ovarian syndrome. Pharmaceutical  biology, 54 (6), 975-983. Siregar,  T.,  Linggi,  Y.,  Riady,  G.,  &
Armansyah,  T.  (2006).  Profil  titer antiserum-inhibin hasil induksi
inhibin 32 kDa pada kelinci sebagai kandidat vaksin untuk induksi
superovulasi=  Profile  of  antibody titre  against  inhibin  in  rabbit following  induction  of  inhibin  32 KDA. Jurnal Sain Veteriner, 24 (1). Sulistyorini, R., Johan, A., & Djamiatun, K. (2015).  Pengaruh  Ekstrak  Etanol
Daun Kelor (Moringa oleifera) pada Ekspresi  Insulin  dan  Insulitis  Tikus Diabetes Melitus. Majalah Kedokteran Bandung, 47 (2), 69-76. Veterini,  V.,  Santoso,  B.,  &  Widjiati,  W. (2015). Oxygen Hyperbaric Exposure Induces GLUT4 Expression Reduction and No Folliculogenesis  Alterations  in  Rat PCOS  with Insulin Resistance Model. Majalah Obstetri &
Ginekologi, 23 (3), 112-117.
Volpi,  E.,  Lieberman,  S.  A.,  Ferrer,  D.  M.,
Gilkison,  C.  R.,  Rasmussen,  B.  B., Nagamani,  M.,  &  Urban,  R.  J. (2005).  The  relationships  between testosterone,  body  composition,  and insulin  resistance. Diabetes  care,
28 (2), 429-432.
Wang, Z., Zhai, D., Zhang, D., Bai, L., Yao, R.,  Yu,  J.,  .  .  .  Yu,  C.  (2017). Quercetin Decreases Insulin Resistance  in  a  Polycystic  Ovary Syndrome  Rat  Model  by  Improving Inflammatory Microenvironment.
Reproductive  Sciences,  24 (5),  682-
690.
Zeyneloglu,  H.  B.,  &  Esinler,  I.  (2007).
Chronic  complications  of polycystic ovary  syndrome Polycystic  Ovary Syndrome (pp.  102-112):  Anshan, Tunbridge Wells, UK.