Optimalisasi  Fermentasi  Bungkil  Inti  Sawit  (Elaeis guineensis Jacq) oleh Kapang Trichoderma reesei
(Optimizing  of    Palm  Kernel  Cake  Fermentation  by

## Fungi Trichoderma reesei)

## Achmad Jaelani
Staf    Pengajar  Fakultas  Pertanian  Universitas  Islam  Kalimantan  Muhammad  Arsyad  Al Banjary
Jl. Adyaksa No. 2 Kayu Tangi Banjarmasin Tlp. (0511) 3303880 Abstrak
Penelitian  dilakukan  untuk  mempelajari  optimalisasi  fermentasi  bungkil  inti  sawit  oleh kapang Trichoderma  reesei. Eksplolasi  bungkil  inti  sawir  melalui  proses mikrobiologi sekarang ini merupakan salah satu upaya dalam memecahkan masalah produksi limbah pada industri kelapa sawit.  Karakteristik pertumbuhan dari Trichoderma reesei mengikuti suatu rumus regresi untuk jumlah koloni adalah  Y = 0,0652x + 2,29  dengan jumlah koloni yang optimum  2.13  x  10 6 CFU/cc  yang  mana  ditemukan  setelah  60  jam.    Diameter  koloni tertinggi  ditemukan  setelah  30  jam  sebesar  102,89%.    Penelitian  tentang  optimalisasi pengguanan produk permentasi menggunakan Rancangan Acak Lengkap pola factorial 3x3. faktor pertama adalah  ketebalan dari  median bungkil init sawit (1, 2, dan 3 cm) dan faktor kedua  dosis  penggunana Trichoderma  reesei (10 4 ,  10 5 ,  10 6 CFU/cc).    hasil  penelitian menunjukkan adanya  perbedaan yang  nyata antara dosis Trichoderma reesei dan ketebalan medium terhadap pH,  suhu media, dan kandungan protein kasar.  Interkasi antara ketebalan medium  dan  dosis  tidak  terjadi  pada  kandungan  protein  kasar  bungkil  inti  sawit  hasil fermentasi.
Kata kunci: Bungkil inti sawit, fermentasi, Trichoderma reesei.

## ABSTRACT
The  research  was  conducted  to  study  Optimizing  of    Palm  Kernel  Cake fermentation  by Fungi Trichoderma reesei). Exploiting of palm kernel cake (PKC) through by microbiologycal process is represent one of effort in problems solving of waste product of  coconut  palm.    The  growth  characterization  of Trichoderma    reesei, followed  by  the regression  equation  on  the  number  of  colony    was  Y  =  0,0652x  +  2,29    with  optimize number  of  colony  was  2.13  x  10 6 CFU/cc  which  obtained  was  60  hours.    The  highest  of diameter  colony  was  reached  at  30  hours  that  was  102.89%.    The  research  was  about optimize fermentation process using by Completely Randomized Design with 3x3 factorial. The  first  factor  was  the  thickness  of  PKC  medium  (1,  2,  and  3  cm) and  the  second  factor was Trichoderma  reesei doses (10 4 , 10 5 , 10 6 CFU/cc). There was a significantly different ( p<0.05)  of Trichoderma  reesei doses  and  thickness  of  medium  on  pH  and  temperature medium,  crude  protein,  There  was  no  interaction  between  thickness  of  medium  with Trichoderma  reesei doses on crude protein content of PKC fermentation.
Key words :  Palm kernel cake, Fermentation, Trichoderma reesei
Pendahuluan
Indonesia merupakan egara kedua terbesar setelah Malaysia sebagai penghasil kelapa sawit.    Luas  areal  perkebunan  kelapa  sawit  di Indonesia  pada  tahun  2003  diproyeksikan    sekitar 4.045.012 hektar dengan total produksi crude palm oil (CPO)  sekitar 7.919.614 ton  (Jakarta  Future Exchange, 2002).
Bungkil inti sawit (palm kernel cake/meal) merupakan  hasil  ikutan  pada  proses  pemisahan minyak  inti  sawit  yang  diperoleh  secara  kimiawi
(ekstraksi)  atau  dengan  proses  fisik  (expeller). Adapun  rata-rata  produksinya  sekitar  0,3 – 0,6 ton/ha  tanaman/tahun  (Sindu,  1999),  dengan kandungan  protein lebih rendah  bila  dibandingkan dengan  bungkil  kedele  dan  kacang  tanah  yaitu sekitar 15,73 – 17,19% (Chong et al., 1998).
Sampai sekarang pemanfaatan BIS sebagai pakan ternak masih belum optimal karena beberapa kendala diantaranya palatabilitasnya rendah, defisiensi  asam  amino  methionin,    triptophan, sistin    dan  mineral  Zn,  Se.  Selain  itu  daya  cerna yang  rendah  akibat  tingginya  kandungan  serat
kasar  yaitu  berkisar  12,47 – 16,09  %    dan  sekitar 27%  dari  bungkil  inti  sawit  tersusun  atas hemiselulosa  dimana  fraksi polisakarida  mannan adalah  yang  terbanyak.  Komponen  mannan  pada bungkil inti sawit merupakan komponen polisakarida  dengan  formasi  linier  dan  berbentuk kristal yang cukup tinggi karena terdapatnya ikatan  -(1-4)  yang  sulit  untuk  didegradasi.  Karenanya untuk  mampu  dimanfatkan  secara  optimal,  harus mampu memecah ikatan tersebut.
Pada  bahan  pakan  bungkil  kelapa  sawit, kandungan mannan dan galaktomannan merupakan yang  terbesar.  Adapun  lebih  lanjut  dikatakan bahwa enzim yang efektif menguraikan komponen ini  adalah  – mannanase,  -galaktosidase  dan  - xilosidase (Daud and Jarvis, 1993b).
Mannan  merupakan  polisakarida  yang penyerapannya  terbatas  bagi  unggas  khususnya ayam  pedaging  Agar  pemanfaatan  BIS  sebagai pakan  ayam  pedaging  optimal  maka  polisakarida mannannya harus didegradasi menjadi monosakarida  yang  mudah  dicerna  dan  diserap. Salah  satu  caranya  adalah  melalui  pra-hidrolisa mannan  BIS  dengan  menggunakan  mikroba  yang benar-benar mampu mendegradasi mannan.
Mikroba pendegradasi polisakarida mannan  telah  diteliti  oleh  Chen et  al.,  (1987) dengan  menggunakan  bakteri Bacillus M50  yang ditumbuhkan  pada  media  yang  mengandung galaktomannan.  Enzim  yang  dihasilkan  mampu menghidrolisa mannan menjadi mannooligosakarida,  mannobiosa  dan  mannosa. Glenn  dan  Roger  (1988)  mengisolasi  mutan asporogenous  kapang Aspergillus  niger yang mampu menghasilkan enzim yang dapat mendegradasi mannan (mannanase, selulase dan  - glukosidase).
Pemilihan mikroba pendegradasi polisakarida  mannan  harus  didasarkan  pada beberapa  ketentuan  diantaranya tidak  toksik, mudah  dalam  aplikasi,  biaya  murah,  dan produksinya  cukup  baik.  Dari  beberapa  ketentuan tadi,  pemilihan  kapang  merupakan  hal  yang  tepat karena telah memenuhi ketentuan tadi.
Trichoderma  reesei merupakan  salah  satu kapang  yang  mampu  mendegradasi  polisakarida mannan  dengan  menghasilkan  beberapa  enzim, salah  satunya  adalah  mannanase    yang  diperoleh pada  substrat  kopi  (Regalado et  al.,  1995), bean gum (Hagglund et a.l, 2003), dan blue mussel (Xu et  al.,  2002).  Adapun  kelebihan  dari  kapang  ini adalah  mudah  diperoleh  serta  dalam  aplikasinya tidak terlalu sulit (mudah dikembangbiakan).

## Metode
Kapang yang digunakan adalah Trichoderma  reeseii strain  FNCC  6012  yang diperoleh dari Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi  Universitas  Gajah  Mada  Yogjakarta,  PDA (potato  dextrose  agar)  sebagai  bahan  media pertumbuhan  kapang,  aquades  steril,  NH 4 NO 3 , KCl,  FeSO 4 .7H 2 O,  CuSO 4 ,  alkohol  70%,  spirtus. Adapun alat-alat yang digunakan adalah autoclave, laminar,  cawan  petri,  tabung  reaksi,  gelas  ukur, alumunium foil, pengaduk, erlenmeyer, timbangan digital,  spoit,  lampu  spirtus,  osse,  plastik  tahan panas,    thermometer,  higrometer,  incubator,  alat penghitung, spidol transparan, jangka sorong.

## Percobaan Tahap I :  Uji Karakteristik Pertumbuhan Kapang Trichoderma reesei
Percobaan  ini  berlangsung  selama  2 minggu,  menggunakan  Analisis  regresi  (Steel  dan Torrie,  1995)  dengan  umur  pertumbuhan  kapang sebagai  pediktor  dan jumlah  koloni  serta  diameter koloni  sebagai respon. Adapun umur pertumbuhan kapang  yang  diamati  :  24,  30,  36,  42,  48,  54,  60, dan 72 jam.
Model  matematis rancangan penelitian adalah :
Y =  a 1 x 1 + a 2 x 2 Peubah yang diamati dalam percobaan :
1.  Jumlah koloni kapang.
Sebelum  melakukan  perhitungan  koloni terlebih  dahulu  membuat  media  Potatoe  Dextrose Agar  (PDA).  Sebanyak  3.9  gram  PDA  dilarutkan dalam  100  cc  air  aquades  steril  kemudian  diaduk hingga  rata.  Larutan  tersebut  dipanaskan  hingga seluruhnya  larut.  Media  PDA  tersebut  dituangkan pada  tabung  reaksi  sebanyak  3-4  cc  yang  ditutup kapas  kemudian disterilkan  pada  suhu  121 o C selama  15  menit  di  dalam autoclave.  Setelah dingin pada suhu 45 – 50 o C, medium yang masih cair  ditempatkan  dalam  keadan  miring  dengan kemiringan  30 o dan  media  PDA  tidak  mengenai kapas.
Biakan  murni  kapang Trichoderma  reesei ditanam pada media agar miring di dalam laminair, kemudian  disimpan  pada  suhu  kamar  (28 o C), diinkubasi  selama  48 – 72  jam.  Setelah  72  jam Inokulum berupa spora ditambahkan aquades steril sebanyak  10  ml  per  tabung  reaksi,  kemudian memisahkan  spora  dengan  cara  menggores-gores permukan  biakan  yang  berisi  biakan  kapang  pada agar miring dengan menggunakan pengaduk mika, selanjutnya  di vortex agar  suspensi  spora  menjadi homogen  dan  siap  dilakukan  perhitungan  jumlah koloni. Pada perhitungan  jumlah koloni dipersiapkan  Media  PDA  yang  sudah  steril  sama seperti  diatas  hanya  saja  tempatnya  pada  cawan
petri.  Sederetan  tabung  reaksi  yang  berisi  9.9  ml aquades steril dipersiapkan sebanyak 5 tabung dan diberi label mulai dari pengenceran 10 -2 sampai 10 - 6 .  Masukan  0.1  ml  larutan  spora  kedalam  tabung 10 -2 , kemudian dari tabung tersebut diambil 0,1 ml untuk  dituangkan  pada  tabung  10 -3 dan  satu  lagi dimasukan  dalam  cawan  petri  dan  demikian seterusnya.  Sebelum  pengambilan  larutan  spora dalam tabung harus dihomogenkan dengan vortex. Simpan  cawan  petri  pada  suhu  kamar  (28 o C), diinkubasi  selama  48 – 72  jam.  Lakukan pengamatan setiap 6 jam untuk perhitungan jumlah koloni.

## 2. Perubahan diameter koloni kapang.
Persiapan  pengukuran  diameter  koloni kapang  hampir  sama  dengan  perhitungan  jumlah koloni. Media PDA yang sudah steril ditempatkan dalam  cawan  petri.    Bagian  bawah  cawan  petri dibuat  garis  vertikal  dan  horizontal  tepat  ditengah cawan  petri.  Hal  ini  untuk  memudahkan  dalam pengukuran  maupun  penempatan  spora  kapang. Osse  yang  sudah  steril  dicelupkan  pada  larutan spora  dan  ditusukan  pada  media  PDA  tepat dipersilangan  garis  vertical  dan  horizontal. Pengamatan diameter pertumbuhan kapang dilakukan setiap 6 jam.

## Persiapan Penelitian : a. Perbanyakan Kapang Trichoderma reesei
Pertama  membuat  media  agar  dari  200 gram  kentang,  20  gram  gula  pasir  dan  15  gram agar.  Ekstrak  kentang  sebanyak  1  liter  yang  telah disaring  ditambah  gula  dan  agar  (Biotek  agar powder) kemudian diaduk hingga rata. Media agar disterilkan  dalam  autoclave  pada  suhu  120 o C selama 15 menit. Setelah dingin pada suhu 45 – 50 o C,  medium  yang  masih  cair  dituangkan  secara aseptic  ke  sederetan  tabung  reaksi  untuk pembuatan  agar  miring  dan  cawan  petri  yang sudah  steril  di  dalam  laminair  masing-masing sebanyak  10 – 15  ml.  Biakan  murni  dari  kapang Trichoderma  reesei ditanam  pada  media  agar  di dalam  laminar,  kemudian  disimpan  pada  suhu kamar  (28 o C),  diinkubasi  selama  48 – 72  jam. Biakan pada agar miring, disimpan pada suhu 4 o C untuk keperluan selanjutnya.

## b. Pembuatan inokulum
Inokulum  berupa  spora  diperoleh  dengan cara  menambahkan    aquades  sebanyak  10  ml  per tabung  reaksi,  kemudian  memisahkan  spora dengan  cara  menggores-gores  permukaan  biakan beerisi  biakan  kapang  pada  agar  miring  dengan menggunakan  kawat  osse,  selanjutnya  di  blender
agar  suspensi  spora  menjadi  homogen  dan akhirnya  dilakukan  perhitungan  jumlah  spora dengan  menggunakan  haemocytometer  di  bawah mikroskop. Selanjutnya inokulum siap digunakan.
Data  yang  diperoleh  dianalisis    dengan menggunakan  analisis  regresi  sehingga  diperoleh kurva  persamaan  regresinya  (Steel  dan  Torrie, 1995).

## Percobaan Tahap II : Fermentasi Bungkil Inti Sawit pada Berbagai Dosis Kapang dan Ketebalan  Media BIS yang Berbeda
Pada  fermentasi  ini  dicobakan  berbagai dosis kapang yang menghasilkan produk fermentasi  terbaik.  Adapun  dosis  kapang  yang digunakan  berkisar  antara  10 4 hingga  10 6 spora/100  g  substrat.  Adapun  suhu  optimal  dari kapang Trichoderma reesei dilihat dari pertumbuhan  miselium  terbaik  yakni  sekitar  28 – 32 o C.
Inokulum  dalam  bentuk  cair  ditanamkan kedalam bungkil inti sawit secara aseptic di dalam laminair,  kemudian  diaduk  sehingga  semua inokulum  tercampur  merata.  Substrat  yang  telah dicampur  dengan  inokulum  selanjutnya  disimpan dalam  rak  kayu.  Temperatur  incubator  diusahakan tetap pada suhu kamar 28 o C, sesuai suhu optimum Trichoderma  reesei. Sampel  ditimbang  dan diletakan  dalam  alumunium  foil.  Selanjutnya dikeringkan dalam oven dengan suhu 50 o C selama 36 jam.
Kapang yang digunakan adalah Trichoderma  reeseii strain  FNCC 6012  yang diperoleh dari Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi  Universitas  Gajah  Mada  Yogjakarta,  Bungkil inti  sawit  diperoleh  dari  hasil  terbaik  pada percobaan  I,  agar  powder,  gula  pasir,  ekstrak tauge, aquades steril, NH 4 NO 3 , KCl, FeSO 4 .7H 2 O, CuSO 4 , alkohol 70%, spirtus.
Adapun  alat-alat  yang  digunakan  adalah autoclave, laminar,  cawan  petri,  tabung  reaksi, gelas  ukur,  alumunium  foil,  kapas,  pengaduk, erlenmeyer,  timbangan  digital,  spoit,  lampu spirtus,  osse,  plastik  tahan  panas,    karet  tahan panas, pipet,  thermometer,  higrometer,  nampan plastik,  plastik  wrapp,  kertas  koran  steril,  selotip, spidol, oven
Percobaan  Tahap  II  berlangsung  selama  4 minggu,  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  pola  Faktorial  dengan  faktor pertama  dosis kapang,  dan  faktor  kedua  ketebalan  media  BIS, dengan ulangan sebanyak 3 kali.
Perlakuan meliputi : Faktor pertama dosis kapang : D4 = dosis kapang 10 4 CFU/100g media
D5 = dosis kapang 10 5 CFU/100g media D6 = dosis kapang 10 6 CFU/100g media Faktor kedua ketebalan media BIS : S1 = ketebalan media 1 cm S2 = ketebalan media 2 cm S3 = ketebalan media 3 cm Peubah yang diamati dalam percobaan :
1.  Suhu media selama fermentasi. Media BIS yang difermentasi diukur suhunya setiap   24 jam
2.    pH  media  selama  fermentasi. Media  BIS  yang difermentasi  pada  waktu  tertentu  diambil kemudian digerus dengan mortar dan ditambahkan aquades dengan perbandingan 1 :
5. pH diukur saat angka tidak berubah lagi.
3.  Kandungan  Protein  Kasar.  Diukur  dengan menggunakan  metoda  Kjeldahl  (Van  Soest et al. 1968).  Analisis  ini  menggunakan    asam sulfat dengan suatu katalisator dan pemanasan.
Zat  organic  dari  sample  dioksidasi  oleh  asam sulfat dan nitrogen diubahkedalam ammonium sulfat.  Kelebihan  asam  sulfat  dinetralisis dengan  NaOH  sampai  larutan  menjadi  basa. Dari  ammonium  sulfat  lalu  didestilasi  dalam medium  asam  untuk  mendapatkan  nitrogen secara  kuantitatif.  Karena  protein  rata-rata mengandung 16% Nitrogen, maka 100% : 16% =  6.25  harus  dipakai  untuk  mendapatkan  nilai protein  kasar  (Protein  kasar =  N%  x  6.25) (AOAC, 1980).
Data  yang  diperoleh  dianalisis    dengan menggunakan  sidik  ragam  dan  untuk  melihat kecenderungan  dari  pengaruh  masing-masing perlakuan  dilakukan  uji  Berganda  Duncan  (Steel dan Torrie, 1995).
Gambar 1.   Biakan kapang Trichoderma reesei
FNCC 6041
Gambar 2.  Penampang melintang  hypa kapang T. reesei menggunakan Scanning mikroskop elektron
Tabel 1.  Jumlah dan diameter koloni kapang Trichoderma reesei selama pertumbuhan
Umur pertumbuhan (jam) Jumlah koloni (CFU/cc) Diameter koloni (mm) Perubahan diameter koloni (%) 24 Belum terlihat 13.58 - 30 2.06 x 10 5 27.41 102.89 36 2.62 x 10 5 38.10 39.00 42 3.33 x 10 5 48.93 28.42 48 1.75 x 10 6 54.94 12.28 54 2.04 x 10 6 66.19 20.48 60 2.13 x 10 6 73.78 11.47 66 2.13 x 10 6 76.73 4.00 72 2.13 x 10 6 80.05 4.32

## Hasil dan Pembahasan

## Uji Pertumbuhan Kapang Trichoderma reesei
Kultur  murni  kapang Trichoderma  reesei FNCC 6041 diperoleh dari Pusat Antar Universitas (PAU)  Bioteknologi  Universitas  Gajah  Mada Yogjakarta berupa kultur kering dalam tabung vial kecil. Kurtur murni ini dibiakan dalam media PDA pada  beberapa petridish,  untuk  selanjutnya diperbanyak pada media agar miring.
Untuk mengetahui karakteristik dari kapang Trichoderma reesei, dilakukan perhitungan jumlah  dan  diameter  pertumbuhan  koloni  kapang. Adapun rata-rata jumlah koloni kapang Trichoderma reesei diperlihatkan pada Tabel 1.
Diameter  pertumbuhan  kapang  dilakukan pengukuran setiap 6 jam dan dimulai pada 24 jam pertama  karena  sampai  24  jam  pertama  belum terlihat  pertumbuhan  koloni  kapang  yang  berarti (fase  adaptasi  dan  pertumbuhan  awal). Menurut Fardiaz  (1985)  jumlah  awal  sel  yang  tinggi  akan mempercepat fase adaptasi.
Persentase  (%)  perubahan diameter  koloni kapang    paling  besar  dicapai  pada  umur pertumbuhan  30  jam. Disini  pertumbuhan  kapang memasuki  fase  logaritmik  dengan  kecepatan pertumbuhan paling tinggi.  Jumlah koloni kapang mulai konstan (fase stationary), dicapai pada umur 60  jam  yakni  mencapai  jumlah  koloni  2.13  x  10 6 CFU/cc.  Demikian  pula  halnya  dengan  perubahan diameter  koloni  kapang,    pada  umur  60  jam persentase perubahannya sangat kecil.
Berdasarkan  hasil  pengolahan  data  pada Tabel  1 tentang  jumlah  koloni  (ditranformasi
dalam  log)  mengikuti  persamaan  Y  =  2.29  + 0.0652x  dimana  x  sebagai  umur  pertumbuhan. Untuk  diameter  koloni  kapang  dapat  diketahui persaman  regresinya  adalah  Y  = - 9.58  +  1.32x. Adapun  persaman  regresi  untuk  perubahan diameter koloni adalah Y = 74.6 – 1.03x .

## Pengaruh Dosis Kapang Trichoderma reesei dan Ketebalan  Media Bungkil Inti Sawit Terhadap Hasil Fermentasi
Pada  fermentasi  BIS  ini    dicobakan  dosis kapang  dan  ketebalan  substrat  BIS  untuk memperoleh hasil fermentasi yang optimum. Dosis kapang yang dicobakan dari 2.13 x 10 4 hingga 2.13 x 10 6 kolon/cc. Adapun ketebalan media dari mulai dari 1 cm hingga 3 cm.

## 1. Perubahan pH media selama fermentasi
Pada  penelitian  ini  pH  awal  media  BIS  adalah 5,94.  Selama  fermentasi  terjadi  perubahan  pH. dimana hampir seluruh perlakuan menunjukan pola yang sama yakni terjadi penurunan pH pada 24 jam umur  fermentasi    kecuali  perlakuan  S3D4  dan S1D5 berturut-turut pada 48 jam dan 96 jam waktu fermentasi.  Penurunan    pH  terjadi  karena  H + dilepaskan  selama  konsumsi  NH 4 + dan    terjadinya proses metabolisme NO 3 - serta  penggunaan asam amino  sebagai  sumber  karbon  (Rahman,  1992). Setelah waktu tersebut terjadi kenaikan pH  sampai akhir  fermentasi.  Adapun  pH  akhir  fermentasi  di bawah  pH  awal    kecuali  perlakuan    S3D4. Terdapat  interaksi  antara  ketebalan  media  BIS dengan  dosis  kapang  terhadap  pH  media  pada semua umur fermentasi kecuali pada umur 48 jam.
Tabel  2.  Rata-rata perubahan pH selama fermentasi BIS oleh Trichoderma reesei Perlakuan Waktu Fermentasi (jam) 0 24 48 72 96 120 S1D4 5.94 5.59 5.59 5.57 5.37 5.38 S1D5 5.94 5.65 5.61 5.49 5.26 5.38 S1D6 5.94 5.72 5.61 5.51 5.41 5.34 S2D4 5.94 5.47 5.49 5.53 5.53 5.48 S2D5 5.94 5.47 5.91 5.49 5.60 5.49 S2D6 5.94 5.66 5.62 5.71 5.69 5.54 S3D4 5.94 5.59 5.48 5.97 587 5.97 S3D5 5.94 5.61 5.77 5.80 5.89 5.68 S3D6 5.94 5.75 5.65 5.91 5.85 5.84
Keterangan : S1 = ketebalan substrat 1 cm   D4 = dosis kapang 10 4 /100g substrat S2 = ketebalan substrat 2 cm    D5 = dosis kapang 10 5 /100g substrat S3 = ketebalan substrat 3 cm    D6 = dosis kapang 10 6 /100g substrat
Secara keseluruhan dari awal hingga akhir fermentasi    berkisar  antara  5.34 – 5.94.  Menurut Fardiaz (1985), kapang dapat tumbuh pada kisaran 3 - 8.5, namun pH optimumnya  berkisar antara 5 – 7. Nilai  pH  untuk  pertumbuhan  mikroba mempunyai hubungan dengan suhu pertumbuhannya.  Jika  suhu  pertumbuhan  naik, maka  pH  optimum  untuk  untuk  pertumbuhan juga naik (Fardiaz, 1998).

## 2. Perubahan suhu media selama fermentasi
Berdasarkan    Tabel  3 terlihat  bahwa perubahan suhu tertinggi pada waktu fermentasi 24 jam  dicapai  kombinasi  perlakuan  S2D6  yakni 31.67 o C. Namun suhu tertinggi selama fermentasi terjadi  pada  96  jam  waktu  fermentasi  yakni diperoleh  pada  perlakuan  S3D6  yakni  mencapai 35.67 o C.  Perubahan  suhu selama  fermentasi seluruh  perlakuan  menunjukan  pola  yang  sama yakni  terjadi  kenaikan  suhu  hingga  pada  72  jam umur  fermentasi    kecuali  perlakuan  S3D5  dan S3D6  masing-masing  pada  48  jam  waktu fermentasi dan 96 jam waktu fermentasi.
Kenaikan suhu media terjadi karena panas metabolisme  yang  dikeluarkan.  Hal  ini  ditandai dengan  terbentuknya  air    dan  merupakan  masa kritis  dalam  kultur  media  padat  sehingga  akan menimbulkan masalah teknis tentang cara
pemindahan panas (Rahman, 1992). Setelah waktu tersebut  terjadi penurunan  suhu  sampai  akhir fermentasi.  Adapun  suhu  akhir  fermentasi  berada di atas  suhu awal .
Pada  perlakuan  ketebalan  substrat  3  cm ternyata proses fermentasi berjalan cukup lama, hal ini  diperlihatkan  dengan  suhu  menunjukan peningkatan  yang  cukup lama.  Hal  ini  disebabkan jumlah  media  yang  difermentasi  cukup  banyak sehingga  untuk  fermentasi  hingga  sampai  bawah perlu waktu yang agak lama meskipun dosisnyapun  lebih  tingi  dibanding  perlakuan lainnya.
Terdapat  interaksi  antara  ketebalan  media BIS  terhadap  dosis  kapang.  Semakin  tebal  media maka  untuk  fermentasi  optimal  dibutuhkan  dosis kapang  yang  lebih  banyak  dan  suhu  maksimal yang  dicapai  pada  proses  fermentasi  akan  lebih lama.  Suhu  mempengaruhi  efisiensi  konversi substrat  (karbon-energi)  menjadi  massa sel.  Pada umumnya  konversi  maksium  terjadi  pada  suhu yang lebih rendah daripada suhu dimana kecepatan pertumbuhan    maksimum.  Hal  ini  penting  dalam proses  optimasi  dimana  diinginkan  kecepatan pertumbuhan  maksimum,  bukan  pertumbuhan maksimum.
Tabel  3. Rata-rata perubahan suhu selama fermentasi BIS oleh Trichoderma reesei Perlakuan Waktu fermentasi (jam) 0 24 48 72 96 120 S1D4 28.00 29.33 30.17 32.17 30.50 28.67 S1D5 2800 29.83 31.00 32.83 31.50 29.67 S1D6 28.00 30.00 31.67 32.17 31.67 29.50 S2D4 28.00 29.33 31.00 34.33 33.33 30.67 S2D5 28.00 30.00 32.00 35.00 32.83 31.33 S2D6 28.00 31.67 33.17 34.67 33.00 31.00 S3D4 28.00 30.00 31.67 33.80 34.00 30.17 S3D5 28.00 30.67 35.67 33.50 34.50 31.83 S3D6 28.00 31.50 34.00 34.33 35.67 32.67
Tabel  4. Rataan kandungan protein kasar (%) BISF pada dosis kapang yang berbeda
Tebal media (cm) Dosis kapang Rataan 10 4 10 5 10 6 ………………………….%………………………………………….. 1 22.63 ± 0.77 23.16 ± 0.63 23.77 ± 0.67 24.06 ± 0.74 a 2 23.65 ± 0.43 24.25 ± 0.87 25.02 ± 0.13 24.31 ±  0.73 a 3 23.89 ± 0.24 23.95 ± 0.24 24.34 ± 0.44 23.13 ± 0.68 b Rataan 23.39  ± 1.03 b 23.79  ± 0.47 b 24.37 ± 0.79 a
Ket : Nilai rata-rata yang diikuti oleh huruf kecil yang berbeda dalam baris yang sama atau huruf besar yang berbeda pada kolom yang sama menunjukan berbeda nyata (p<0,05)

## 3. Kandungan Protein  BIS Hasil Fermentasi (BISF)
Faktor dosis kapang dan ketebalan substrat berpengaruh  nyata  terhadap  kandungan  protein kasar BISF (p<0.05), namun tidak terjadi interaksi antara dosis  kapang dan  ketebalan  media terhadap kandungan  protein  kasar  (p>0,05).  Disini  terlihat bahwa kandungan protein kasar tertinggi diperoleh pada  dosis  kapang  10 6 CFU/cc.  Hal  ini  dapat dimaklumi  bahwa  semakin  banyak  dosis  kapang maka  kemungkinan  pertumbuhan  kapang  pada media BIS akan lebih besar.
Dilihat dari ketebalan media terlihat bahwa pada  ketebalan  media  1  cm  dan  2  cm  berbeda nyata  (p<0,05)  dengan  ketebalan    media  3  cm. Namun  antara  ketebalan  media  1  dan  2  cm  tidak menunjukan  adanya  perbedaan  kandungan  protein kasar.  Hal  ini  menunjukan  bahwa  kapang Trichoderma  reesei mampu  melakukan  fermentasi BIS hingga ketebalan 2 cm.
Pada  ketebalan  media  2  cm  diperoleh kandungan  protein  kasar  tertinggi  (24.31%). Pada ketebalan  media  3  cm,  kapang  tidak  dapat menjangkau bagian bawah sehingga tidak seluruhnya dapat dirombak dengan sempurna.
Pada  beberapa  literature  dinyatakan  bahwa kandungan protein kasar BIS berkisar 14.5 - 16.5% (Daud et  al. 1993).  Apabila  kita  bandingkan dengan  protein  kasar  BISF  pada  Tabel  6  yang berkisar 23.39 – 24.37%, terjadi peningkatan yang cukup  berarti.  Inilah  sebetulnya  yang  diharapkan setiap proses pengolahan pakan.

## Kesimpulan
Karakteristik  kapang Trichoderma  reesei memiliki pertumbuhan koloni dan diameter kapang tercepat setelah 24 jam pertama dan memasuki fase stationary pada umur pertumbuhan 60 jam dengan jumlah koloni  2.13 x 10 6 CFU/cc, diameter koloni tertinggi  dicapai  pada  umur  30  jam  dengan persentase  perubahan  diameter  koloni  mencapai 102,89%. Jumlah koloni (ditranformasi dalam log) mengikuti  persamaan  Y  =  2,29  +  0,0652x.  Untuk diameter  koloni  kapang  dapat  diketahui  persaman regresinya  adalah      Y  = - 9,58  +  1,32x. Adapun persaman regresi untuk perubahan diameter koloni adalah  Y  =  74,6 – 1,03x . Fermentasi  BIS  oleh Kapang Trichoderma  reesei dapat  menghasilkan protein  kasar  yang  optimum  pada  dosis  kapang 10 6 CFU/cc dan ketebalan media BIS 2 cm

## Daftar Pustaka
A.O.A.C.  1980. Methods  of  Analysis.  13 th Ed. Association  of  Official  Agricultural  Chemist. Washington D.C.
Chen, Y., J. Long , L. Liao , Y. Zhang , J. Yang . 2000. Study on the production of beta-mannanase by Bacillus M50. Wei Sheng Wu Xue Bao ;
40(1):62-8
Chong, C.H, R. Blair, I. Zulkifli and Z.A. Jelan. 1998. Physical and chemical characteristics of Malaysian palm kernel cake (PKC). Proc. 20 th MSAP Conf. 27-28 July. Putrajaya, Malaysia
Daud, M.J., M.C. Jarvis and A. Rasidah. 1993a. Fibre of PKC  and  its  potential  as  poultry  feed. Proceeding.  16 th MSAP  Annual.  Conference, Kuala Lumpur, Malaysia
Daud,  M.J.,  and  M.C.  Jarvis  1993b.  Effect of  driselase on  the  nutritive  value  of  PKC  for  poultry  diets. Proceeding.  16 th MSAP  Annual.  Conference,
Kuala Lumpur, Malaysia
Fardiaz,  S.  1985.  Fisiologi  Fermentasi.  Pusat  antar Universitas  berkerjasama  dengan  Lembaga Swadaya Informasi  IPB, Bogor
Glenn, R.D  and    P.L.  Roger.  1988.  A  Solid  substrate fermentation process for an animal feed product studies  of  fungal  strain  improvement.  Aust.  J. Biotechnol. 2:50-57
Hagglund  P,  Eriksson  T,  Collen  A,  Nerinckx  W, Claeyssens  M,  Stalbrand  H.    2003.  Cellulose- binding  module  of  the Trichoderma  reesei beta- mannanase  Man5A  increases  the  mannan- hydrolysis of complex substrates. Jour Biotechnol 27(1):37-48.
Jakarta Future Exchange. 2002. Perkembangan produksi minyak  goreng  sawit  di  Indonesia.  www.bbj- ifx.com
Rahman, A.  1992.    Teknologi  Fermentasi.  Penerbit Arcan, Jakarta
Regalado,  C.,  L.M.  Barrera,  G.B.E.  Almendárez;  S.
Huerta-Ochoa;  G.  López.1995. Production  and properties  of  -mannanase  by  solid  substrate fermentation  of  soluble  coffee  industry  wastes using Trichoderma  reesei IMI  192656. Dpt.  Of Food  Research  And  Postgraduate  Studies, Facultad  De  Química,  Universidad  Autónoma De  Querétaro.,  C.U.  Cerro  De  Las  Campanas., Querétaro, Qro. 76010., Mexico S.A.S.  Institute,  1997.  Statistics  in  RAY.  5 th Ed.  SAS  Users  Guide.  Cary,  NC,  SAS  Institute, Inc.,United State
Sindu,  A.  1999.  Pemanfaatan  limbah  kelapa  sawit sebagai  pakan  ternak.  Jurnal  Sains  dan Teknologi Indonesia . Vol. 1, No. 3 hal. 82-86.
Steel  RGD,  and Torrie  JH.  1995. Prinsip dan  Prosedur
Statistika  :  Suatu  Pendekatan  Biometrik. Penerjemah  Bambang  S.  Edisi  ke-2.  PT. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta
Van  Soest,  P.J.  and  J.B.  Robertson.  1968.  System  of analysis  for  evaluating  fibrous  feeds.  In: Standarization  of  Analytical  Methodology  for
Feed. W.J.  Pigdem,  C.C.  Balch  dan  M.  Graham (eds). IDRC
Xu  BV,  Hägglund P,  Stålbrand H,  and  Janson JC.
2002.  Endo-beta-1,4-Mannanases from blue
mussel, Mytilus edulis: purification, characterization, and mode of action. Jour Biotechnol 92:267-277.