## Livestock and Animal Research
Accredited by Directorate General of Strengthening for Research and Development No. 10/E/KPT/2019
Open Access Livest. Anim. Res. , November 2021, 19(3): 247-254 p-ISSN 2721-5326 e-ISSN 2721-7086 https://doi.org/10.20961/lar.v19i3.54921

## Original Article

## Keragaman genotipik entok ( Cairina moschata ) berdasarkan polimorfisme protein darah

## Sutopo, Dela Ayu Lestari, Asep Setiaji *, Edy Kurnianto
Program Studi Peternakan, Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang, 50275 * Correspondence: asepsetiaji93@gmail.com
Received: September 8 th , 2021; Accepted: November 9 th , 2021; Published online: November 17 th , 2021

## Abstrak
Tujuan: Penelitian ini bertujuan  untuk mengidentifikasi keragaman genetik entok di Jawa Tengah berdasarkan polimorfisme protein darah dengan metode elektroforesis.
Metode: Materi  yang  digunakan  yaitu  sampel  darah  dari  60  ekor  entok,  masing-masing  20  ekor dari  Kabupaten  Demak,  Magelang  dan  Pekalongan.  Metode  elektroforesis Polyacrylamid  Gel Electrophoresis – Thin Layer Elecrophoresis (PAGE-TLE) digunakan dalam penelitin ini. Parameter yang diamati  adalah  protein  Albumin  (Alb),  ceruloplasmin  (Cp),  transferin  (Tf)  dan  amylase-I  (Am-I). Frekuensi  gen,  heterozigositas  (Ho)  dan  jarak  genetik  dianalisis  dengan  menggunakan  paket program DISPAN.
Hasil: Hasil  analisis  menunjukkan  bahwa  Alb,  Cp,  Tf  dan  Am-I  pada  tiga  populasi  entok memperlihatkan karakter polimorfik. Frekuensi gen Alb B (0,61) lebih tinggi dibandingkan Alb A (0,39). Frekuensi gen Cp A (0,62) relatif lebih tinggi dibandingkan gen Cp B (0,38). Frekuensi gen Tf A memiliki nilai  sebesar  0,32  dan  gen  Tf B sebesar  0,68  begitu  juga  Nilai  frekuensi  Am-I A menunjukkan  angka yang  lebih  tinggi  (0,82)  dibandingkan  gen  Am-I B (0,18).  Populasi  entok  Demak  memiliki  nilai  Ho tertinggi  pada  lokus  Alb  dan  Am-I  sedangkan  populasi  entok  Magelang  menunjukkan  nilai  Ho tertinggi pada lokus Cp dan Tf. Populasi entok Demak menunjukkan kedekatan jarak genetik dengan populasi Pekalongan dibandingkan dengan populasi Magelang.
Kesimpulan: Lokus protein darah dari tiga populasi entok di Jawa Tengah bersifat polimorfik.
Kata Kunci: darah entok; elektroforesis; frekuensi gen; jarak genetik; polimorfisme

## Abstract
Objective: The aim of this study was to identified genetic diversity of muscovy duck in Central Java through blood protein polymorphisms by using electrophoresis method.
Methods: Blood  sample  was  collected  from  a  total  of  60  muscovy  ducks  from  the  districts of  Demak,  Magelang  and  Pekalongan,  20  samples  each.  The  Electrophoresis  Polyacrylamide Gel  of  Electrophoresis – Thin  Layer  Electrophoresis  (PAGE-TLE)  was  used  in  this  study. Parameters  observed  were  protein  of  albumin  (Alb),  ceruloplasmin  (Cp),  transferrin  (Tf)  and amylase-I (Am-I). Gene frequency, heterozygosity (Ho) and genetic distance were analyzed by using DISPAN program.
Results: The results showed that the Alb, Cp, Tf and Am-I of muscovy duck showing polymorphic characters. Gene frequency of Alb B (0.61) was higher compared to Alb A (0.39). Gene frequency of Cp A (0.62) was higher than the Cp B (0.38). Furthermore, gene frequency of Tf A and Tf B were 0.32 and 0.68, respectively as well as gene frequency of Am-I A (0.82) was higher than Am-I B (0.18). Muscovy duck
population of Demak showed higher Ho value for Alb and Am-I, whereas Magelang showed higher value  for  Cp  and  Tf.  Population  of  muscovy  duck  of  Demak  showed  closer  genetic  distance  to Pekalongan than Magelang.
Conclusions: The protein blood locus of three population of muscovy duck in Central Jawa showed polymorphic characters.
Keywords: blood; electrophoresis; gene frequency; genetic distance; polymorphism

## PENDAHULUAN
Entok  ( Cairina  moschata )  merupakan salah  satu  jenis  ternak  unggas  yang  telah lama  dikembangkan  oleh  peternak  rakyat di  Indonesia.  Data  statistik  Kementerian Pertanian  Republik  Indonesia  mencatat bahwa  produksi  daging  entok  pada  tahun 2017 mencapai angka 5,6 ton [1]. Penyebaran entok  lokal  di  Jawa  Tengah  merata  disemua wilayah Jawa Tengah dengan jumlah populasi yang  beragam  berdasar  kondisi  geografis dan sosial ekonomi masyarakat [2].
Pengembangan  entok  sebagai  penghasil daging mempunyai prospek yang sangat baik, karena  entok  mempunyai  laju  pertumbuhan dan bobot karkas yang lebih baik dibandingkan dengan jenis itik yang lain [3,4]. Entok  juga  mampu  beradaptasi  dengan  baik pada  berbagai  kondisi  lingkungan  dan  lebih tahan  terhadap  penyakit  dibandingkan unggas  lain  [5].  Disisi  lain,  entok  belum banyak  mendapatkan  proses  pemuliaan seperti  halnya  komuditas  unggas  yang  lain. Informasi  keanekaragaman  genetik  sangat dibutuhkan  sebagai  informasi  awal  untuk proses pemuliaan.
Keanekaragaman  adalah  hasil  interaksi antara pengaruh genetik dan lingkungan pada diferensiasi  sifat  morfologis,  fisiologis  dan produktif  yang  penting  untuk  semua  sistem produksi  [6].  Polimorfisme  protein  darah masih sangat diperlukan di negara berkembang, meskipun karakterisasi
keragaman  genetik  ternak  menggunakan penanda mikrosatelit dan prosedur teknologi yang lebih tinggi telah dilakukan. Keunggulan analisis  ini  adalah  kegunaannya  dalam mengetahui  informasi  genetik,  biaya  yang murah, dan interpretasi data yang sederhana [7].  Polimorfisme  protein  darah  telah  banyak digunakan  untuk  studi  karakterisasi  genetik dan  filogenetik  ternak  lokal  di  Indonesia  [8] pada kambing, [9] pada ayam Kedu, [10] pada
itik  Pegagan,  [11]  pada  domba,  [12,13]  pada sapi.
Penelitian  karakterisasi  keragaman  dan estimasi  jarak  genetik  pada  entok  masih sangat  terbatas.  Tujuan  penelitian  ini  adalah untuk  mengetahui  dan  mengidentifikasi keragaman  genetik  melalui  polimorfisme protein  darah  dengan  metode  elektroforesis pada  entok  di  Jawa  Tengah.  Manfaat  dari penelitian ini diharapkan mampu memberikan  informasi  keragaman  genetik yang dapat digunakan dalam program seleksi.

## MATERI DAN METODE

## Materi
Pengambilan  data  dilakukan  di  tiga Kabupaten  di  Jawa  Tengah,  bagian  timur (Kabupaten Demak), bagian tengah (Kabupaten  Magelang)  dan  bagian  timur
(Kabupaten Pekalongan). Materi yang digunakan dalam penelitian ini adalah 60 ekor entok lokal. Sampel darah diambil dari 20 ekor entok  masing-masing  di  setiap  populasi terdiri  dari  10  ekor  entok  jantan  dan  10  ekor entok betina.

## Pengambilan sampel darah
Pengambilan  sampel  darah  dilakukan dengan menggunakan spuit sebanyak 2-3  ml  pada  bagian vena  brachialis di  bagian sayap  [14]  kemudian  darah  ditampung dalam vaccutube .  Pemisahan  serum  darah dilakukan dengan di centrifuge pada kecepatan  3500  rpm  selama  7  menit. Serum  darah  dipindahkan  dalam microtube lalu  dimasukkan  dalam  refrigerator  pada suhu 5 0 C.

## Proses elektroforesis
Analisis protein darah dilakukan dengan mengunakan elektroforesis Polyacrylamid Gel  Electrophoresis – Thin  Layer  Eletrophoresis (PAGE-TLE)  sesuai  metode  [15]  dengan
beberapa modifikasi. Serum darah diencerkan menggunakan aquades dengan perbandingan 1 μL :13 μL dan  dicampur  dengan  blue  juice dengan  perbandingan  4:1.  Sampel  kemudian dipanaskan  diatas  waterbath  dengan  suhu 100 o C  selama  3  menit  dan  kemudian didinginkan  diatas  air  es.  Sebanyak  10 μL serum darah yang sudah diencerkan dimasukkan  kedalam  gel  dan  dilakukan running electrophoresis dengan voltase 125 V selama  3  jam.  Gel  kemudian  diwarnai menggunakan staining solution (20 ml Glacial Acetic Acid, 80 ml Methanol, 100 ml Aquadest,
0.2  g Coomassie  Blue )  selama  1  jam menggunakan shaker dan dilakukan destaining  menggunakan  destaining  solution (20  ml  Glacial  Acetic  Acid,  80  ml  Methanol, 100  ml  Aquadest)  selama  2  x  45  menit.  Pita protein  darah  yang  terlihat  dari  hasil  proses elektroforesis  digunakan  untuk  menghitung frekuensi  gen,  heterosigositas  pengamatan dan jarak genetik. Pita-pita hasil elektroforesis yang diamati adalah albumin (Alb), ceruloplasmin  (Cp),  transferin  (Tf)  dan amylase-I (Am-I).

## Analisis data
Frekuensi gen, merupakan perbandingan suatu  alel  pada  lokus  yang  sama  pada  satu populasi [16], dapat dihitung dengan rumus:
F An = ∑ lokus An ∑ lokus A1 + ∑ lokus A2 + ∑ lokus An
Keterangan: F An = frekuensi gen A pada lokus ke-n Heterosigositas,  dalam  hal  ini  Ho merupakan  salah  satu  parameter  yang  dapat digunakan untuk mengukur tingkat keragaman genetik dalam suatu populasi [17], dapat  ditentukan  dengan  menggunakan rumus:
Ho = 1 – ∑ 𝑞 𝑖 2
H ̅ = ∑ h r
Keterangan:
Ho   = heterosigositas individual
r    = jumlah lokus yang diamati H    = rerata heterosigositas
Jarak genetik, digunakan untuk memperkirakan  waktu  terjadinya  pemisahan antar populasi dan  untuk membentuk pohon filogenetik.  Jarak  genetik  antar  populasi  (D) dihitung berdasarkan rumus [18]:
D = -log e I dan I = √ ∑ X ij Y ij (∑ X ij 2 )(∑ Y ij 2 )
Keterangan: X ij = frekuensi  alel  ke  i  pada  lokus  j  dari ppppp populasi X Y ij = frekuensi  alel  ke  i  pada  lokus  j  dari ppppp populasi Y.

## HASIL
Pengamatan  terhadap  empat  pita  hasil elektroforesis;  Alb,  Cp,  Tf  dan  Am-I  dipilih berdasarkan  hasil identifikasi terhadap enam lokus.  Dari  hasil  identifikasi,  hanya  empat lokus  tersebut  yang  terlihat  dengan  jelas seperti  yang  ditampilkan  pada  Gambar  1. Berdasarkan hasil elektroforesis, dapat diketahui bahwa masing-masing lokus memiliki sifat polimorfik karena memiliki dua alel  atau  lebih  dalam  populasi  yang  sama. Distribusi  frekuensi  genotip  protein  darah pada entok di tiga kabupaten di Jawa Tengah dapat  dilihat  masing-masing  pada  Tabel  1. Hasil  heterosigositas  pengamatan  dapat dilihat pada Tabel 2. Ho lokus Alb, Cp, Tf dan Am-I  pada  entok  tergolong  rendah  berkisar antara 0,402-0,454.
Peta pengelompokkan pada entok di tiga kabupaten berbeda di Jawa Tengah menunjukkan  bahwa  penyebaran  entok berdasarkan sebaran genotip berada di dalam garis  pemisah  yang  tidak  jauh  berbeda (Gambar  2).  Penyebaran  populasi  entok  di Kabupaten Pekalongan,
Demak, dan
Magelang  menunjukkan  penyebaran  yang merata dan tidak jauh berbeda. Hasil analisis kekerabatan  pada  Gambar  3.  Menunjukkan bahwa  populasi  entok  Demak  memiliki kedekatan dengan populasi entok Pekalongan dan  sedikit  berbeda  dengan  populasi  entok Magelang.

## PEMBAHASAN

## Identifikasi lokus albumin
Berdasarkan  pembacaan  pita  protein yang  telah  dilakukan,  didapatkan  hasil bahwa  pada  lokus  Alb  memiliki  2  alel  yaitu alel A dan alel B. Hasil perhitungan frekuensi gen  lokus  Alb  diketahui  pada  genotip  Alb A sebesar  0,39  dan  Alb B sebesar  0,61.  Hasil penelitian  berbeda  dengan  [19]  pada  entok lokal  Nigeria  yaitu  terdapat  empat  alel  pada lokus  Alb  yaitu  alel  A,  B,  C,  dan  D  dengan frekuensi  gen  masing-masing  0.231;  0.294; 0.438 dan 0.038.
Pada  populasi  entok  Demak  dan Pekalongan ditemukan dua alel yaitu A dan B yang membentuk karakter homosigot AA dan BB  serta  karakter  heterosigot  AB,  sedangkan pada  populasi  entok  Magelang  hanya membentuk  satu  karakter  homosigot  BB  dan karakter  heterosigot  AB.  Penelitian  [20] ditemukan  karakter  heterosigot  dari  tiga  alel yaitu AB, AC, dan BC pada Itik Talang Benih. Penelitian  pada  ayam  kedu  ditemukan karakter homosigot BB dan CC serta karakter heterosigot BC [9].

## Identifikasi lokus ceruloplasmin
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan, menunjukkan bahwa lokus Cp terletak setelah lokus  Alb.  Berdasarkan  pembacaan  pita protein, diketahui bahwa lokus Cp pada entok bersifat  polimorfik  yaitu  memiliki  alel  Cp A dan  Cp B .  Pita  protein  mampu  membentuk karakter homosigot yaitu AA di tiga populasi dan  BB  di  populasi  Demak  dan  Magelang, serta  karakter  heterosigot  yaitu  AB  di  semua populasi.  [21]  pada  melaporkan  penemuan  5 macam  genotip  lokus  Cp  pada  kelinci  yaitu AA,  BB,  CC,  AB  dan  BC.  Hasil  perhitungan frekuensi  gen  entok  menunjukkan  gen  Cp A memiliki  nilai  yang  lebih  besar  (0,62) dibandingkan dengan gen Cp B (0,38). Hasil ini sesuai  dengan  penelitian  [22]  bahwa  pada entok Cp A menunjukkan  nilai  yang  paling besar yaitu 0,50 dibandingkan Cp B dan Cp C .

## Identifikasi lokus transferin
Berdasarkan  hasil  identifikasi  lokus  Tf pada  populasi  entok  Demak,  Magelang  dan Pekalongan memiliki dua alel yaitu A dan B. Hasil ini sesuai dengan [23] bahwa ditemukan dua alel pada lokus Tf pada itik Kerinci yaitu
Tabel 1. Frekuensi genotip protein darah pada entok di tiga kabupaten di Jawa Tengah
Lokus 1 Genotip Kabupaten Total Frekuensi gen Demak (20) Magelang (20) Pekalongan (20) Alb AA 0,15 (3) 0 - 0,10 (2) 0 0,08 (5) 0 A: 0,39 AB 0,70 (14) 0,50 (10) 0,65 (13) 0,62 (37) B: 0,61 BB 0,15 (3) 0 0,50 (10) 0,25 (5) 0 0,30 (18) Cp AA 0,35 (7) 0 0,20 (4) 0 0,55 (11) 0,37 (22)        A: 0,62 AB 0,55 (11) 0,50 (10) 0,45 (9) 0 0,50 (30) B: 0,38 BB 0,10 (2) 0 0,30 (6) 0 - 0,13 (8) 0 Tf AA - 0,10 (2) 0 0,10 (2) 0 0,07 (4) 0 A: 0,32 B: 0,68 AB 0,45 (9) 0 0,65 (13) 0,40 (8) 0 0,50 (30) BB 0,55 (11) 0,25 (5) 0 0,50 (10) 0,43 (26) Amy-I AA 0,25 (5) 0 0,30 (6) 0 13 (0,65) 0,40 (24) A: 0,59 AB 0,55 (11) 0,35 (7) 0 0 5 (0,25) 0,38 (23) B: 0,41 BB 0,20 (4) 0 0,35 (7) 0 0 2 (0,10) 0,22 (13)
1 Alb = albumin; Cp=ceruloplasmin; Tf=transferin dan Am-I=amylase-I
Tabel 2. Heterosigositas Protein Darah Entok di Jawa Tengah
Kabupaten Lokus Alb Cp Tf Am-I Demak 0,500 0,469 0,349 0,499 Magelang 0,375 0,495 0,489 0,499 Pekalongan 0,489 0,349 0,420 0,349
alel  A  dan  B.  Populasi  entok  Magelang  dan Pekalongan memiliki kedua alel yang mampu membentuk  karakter  homosigot,  sedangkan pada populasi Demak hanya membentuk satu karakter  homosigot  yaitu  BB.  Namun,  entok dari  ketiga  kabupaten  mampu  membentuk karakter  heterosigot  AB.  [24]  melaporkan variasi  homosigot  yang  dibentuk  adalah BB  dan  heterosigot  adalah  BC  pada  itik talang benih.
Hasil perhitungan frekuensi gen menunjukkan  bahwa  gen  Tf A A  memiliki nilai  sebesar  0,32  dan  gen  Tf B sebesar  0,68.
[10] melaporkan hasil frekuensi gen tertinggi  ditunjukkan  pada  gen  C  sebesar 0,50  bahwa  pada  itik  Pegagan,  sedangkan [24]  melaporkan  frekuensi  tiga  alel  lokus Tf  pada  itik  Tegal  dengan  frekuensi  gen paling  tinggi  pada  B  (0,65).  Frekuensi  gen A  pada  itik  Kerinci  sebesar  0,8  dan  gen  B sebesar 0,2 [23].

## Identifikasi lokus amylase I
Populasi  Entok  Demak,  Magelang,  dan Pekalongan mampu membentuk alel A dan B menjadi karakter homosigot AA dan BB, serta karakter  heterosigot  AB.  Hasil  frekuensi  gen Am-I pada entok yaitu gen A sebesar 0,59 dan gen  B  sebesar  0,41.  Banyaknya  keragaman pada  protein  darah  menunjukkan  bahwa karakter  entok  pada  setiap  populasi  sangat bervariasi.  Hasil  ini  sesuai  penelitian  [25] bahwa  lokus  Am-I  mampu  membentuk karakter homosigot AA dan BB, serta karakter heterosigot  yaitu  AB  pada  ayam  kampung. Nilai  frekuensi  Am-I A menunjukkan  angka yang  lebih  tinggi  (0,82)  dibandingkan  gen Am-I B (0,18).

## Heterosigositas pada entok
Nilai Ho lokus Alb, Cp, Tf dan Am-I pada entok  lebih  tinggi  dari  penetian  [20]  yang melaporkan rata-rata nilai Ho pada Itik Talang
Zona ceruloplasmin Zona transferrin Zona amylase I Zona albumin Albumin Amylase I Transferin Ceruloplasmin Gambar 1. Contoh pita protein hasil elektroforesis dan skater serum darah entok
Benih  sebesar  0,281.  Nilai  Ho  yang  rendah menunjukan  bahwa  sering  terjadinya  silang dalam  suatu  populasinya.  Pemeliharaan keanekaragaman  genetik  dan  heterosigositas akan  menambah  lebih  banyak  kesulitan sebagian populasi yang kecil.
Tinggi  rendahnya  nilai  Ho  merupakan acuan yang dapat digunakan untuk mengetahui  hubungan  kekerabatan  suatu populasi.  Sesuai  dengan  [26]  bahwa  nilai heterosigositas yang tinggi sangat
menguntungkan karena semakin jauh hubungan
kekerabatan
kemungkinan terjadinya  perkawinan  silang  dalam  makin kecil  dan  kemunculan  alel  resesif  menjadi rendah.
Peta pengelompokkan dan jarak genetik
Populasi entok di Kabupaten
Pekalongan, Demak, dan Magelang
menujukkan  penyebaran  yang  merata.  Hal
ini  mengindikasikan  bahwa  banyaknya kesamaan pada entok di tiga kabupaten yang dilihat berdasarkan sebaran genotip.
Populasi entok Demak memiliki kedekatan  jarak  genetik  dengan  populasi entok  Pekalongan  dibandingkan  dengan populasi  Magelang.  Kedekatan  jarak  genetik dapat  disebabkan  kedekatan  lokasi  sehingga mengakibatkan  terjadinya  migrasi  ternak dari  daerah  ke  daerah  lain  [27].  Demak  dan Pekalongan  berada  utara  Jawa  Tengah, sehingga  memungkinkan  terjadinya  migrasi lebih mudah dibandingkan dengan kabupaten  Magelang  yang  berada  di  selatan Jawa  Tengah.  Semakin  dekat  jarak  genetik yang diperoleh menunjukkan adanya hubungan kekerabatan yang lebih dekat. [28] melaporkan  bahwa  kedekatan  hubungan kekerabatan  yang  terjadi  dapat  dikarenakan adanya  komposisi  genetik  yang  spesifik dengan interaksi pada kondisi lingkungan.
Gambar 2. Peta pengelompokkan entok berdasarkan polimorfisme darah
Gambar 3. Hasil analisis kekerabatan entok di Jawa Tengah
P rin t 2 Print 1 Demak Pekalongan Magelang Keterangan:
d = Kabupaten Demak
m    = Kabupaten Magelang; p = Kabupaten Pekalongan

## KESIMPULAN
Lokus albumin, ceruloplasmin, transferin dan  amylase-I,  pada  tiga  populasi  entok bersifat  polimorfik.  Populasi  entok  di  Jawa Tengah  menunjukkan  keragaman  yang rendah  berdasarkan  hasil  polimorfisme protein darah dan rendahnya nilai heterosigositas.  Entok  di  kabupaten  Demak menunjukkan  hubungan  kekerabatan  yang lebih dekat dengan kabupaten Pekalongan.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis  mendeklarasikan  bahwa  tidak ada  konflik  kepentingan  dengan  pihak  lain mengenai pendanaan dan obyek penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Kementan.  2017.  Data  statistik  produksi daging  nasional.  Jakarta  (Indonesia): Kementerian Pertanian.
2. Fatmarischa,  N.,  S.  Sutopo,  and  S.  Johari. 2013.  Ukuran  tubuh  entok  di  tiga kabupaten  provinsi  Jawa  Tengah.  Sains Peternakan.  11(2):106-112.  Doi:  10.20961/ sainspet.v11i2.4858.
3. Steklenev  EP.  1990.  Genetic  variability  of amylase  isozymes  of  hybrids  between Muscovy  duck  ( Cairina  moschata )  and domestic  Pekin  duck  ( Anas  platyrhynchos ) in  comparison  with  the  initial  species. Steppe  Region  (Ukrainian):  Ukrainian Research Institute of Animal Husbandry of Steppe Region.
4. Solomon  JKQ,  Austin  R,  Cumberbatch RN,  Gonsalves  J,  Seaforth  E.  2006.  A comparison  of  live  weight  and  carcass gain  of  Pekin,  Kunshan,  and  Muscovy ducks on a commercial ration. Livest. Res. Rural Dev. 18:154.
5. Dikken,  G.D.  and  S.J.  van  der  Meulen. 2004. Duck  keeping  in  the  tropics. Agromisa/ Technical
Centre
for
Agricultural  and  Rural  Cooperation. FAO.
6. Ceriotti,  G.,  A.  Caroli,  R.  Rizzi,  and  C. Crimella.  2003.  Genetic  relationships among taurine (Bos taurus) and Zebu (Bos indicus) populations as revealed by blood groups and blood proteins. J. Anim. Breed.
Genet.  120:57-67.  Doi:  10.1046/j.1439- 0388.2003.00379.x 7. Rege,  J.E.O.,  and  A.M.  Okeyo.  2011. Improving  our  knowledge  of  tropical indigenous animal genetic resources. Proc. Animal genetics training resource, version 3, Uppsala, Sweden.
8. Astuti,  M.  1997.  Estimasi  jarak  genetik antar populasi  kambing Kacang, kambing
Peranakan  Etawah  dan  kambing  lokal berdasarkan  polimorfisme  protein  darah. Buletin Peternakan. 21(1):1-9. Doi: 10.21059/buletinpeternak.v21i1.1668
9. Johari,  S.,  S.  Sutopo,  E.  Kurnianto, and  E.  Hasviara.  2008.  Blood  protein polymorphism  of  Kedu  Chicken.  J. Indones. Trop. Anim. Agric. 33(4):313-318.
10. Sari,  M.L.,  R.R.  Noor,  P.S.  Hardjosworo, and  C.  Nisa.  2011.  Polimorfisme  protein darah itik pegagan dengan metode PAGE.
J.  Agripet.  11(2):58-62.  Doi:  10.17969/ agripet.v11i2.376
11. Noviani,  F.,  S.  Sutopo,  dan  E.  Kurnianto. 2013.  Hubungan  genetik  antara  domba Wonosobo  (Dombos),  domba  Ekor  Tipis (DET) dan domba Batur (Dombat) melalui analisis polimorfisme protein darah. Sains Peternakan.  11(1):1-9.  Doi:  10.20961/ sainspet.v11i1.4798 12. Yuwono,  T.,  I.  Sumeidiana,  Y.S.  Ondho, and  E.  Kurnianto.  2016.  Polimorfisme protein  serum  darah  induk  sapi  beranak kembar  dan  tunggal  pada  sapi  Peranakan Ongole  dan  Keturunan  Simental.  Jurnal Veteriner.  17(4):510-516.  Doi:  10.19087/ jveteriner.2016.17.4.510 13. Sutiyono,  S.,  S.  Sutopo,  Y.S.  Ondho,  E.T. Setiatin,  D.  Samsudewa,  A.  Suryawijaya,
D.A.  Lestari,  and  E.  Kurnianto.  2018. Genetic diversity of Ongole Grade cattle of Rembang District, Central Java, Indonesia, based  on  blood  protein  polymorphism. Biodiversitas. 19(4):1429-1433. Doi: 10.13057/biodiv/d190432
14. Martoenus,  A.  dan  T.  F.  Djatmikowati. 2015.  Teknik  pengambilan  darah  pada beberapa  hewan.  Diagnosa  veteriner. 14(1):6-12.
15. Ogita,  Z.I.  and  C.L.  Markert.  1968.  A Miniaturizedsystem for electrophoresis on polyacrilamide  gels.  Anal.  Biochem. 99:233-241.
16. Warwick,  E.J.,  J.M.  Astuti,  and  W. Hardjosoebroto.  1995.  Pemuliaan  ternak. Edisi ke-5. Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.
17. Nei.  M.  1987.  Molecular  evolutionary genetics. Colombia University Press, New York.
18. Nei,  M.  1972.  Genetics  distance  between populations. Am. Naturalist. 106:283-292.
19. Oguntunji,  O.  dan  K.  L.  Ayorinde.  2015. Blood  protein  polymorphism  and  genetic diversity in locally adapted Muscovy duck (Cairina  moschata)  in  Nigeria.  Anim. Genet. Resour. 56:9-18.
20. Azmi,  A.,  G.  Gunawan  dan  E.  Suharnas. 2006. Karakteristik Morfologis dan Genetik Itik  Talang  Benih  di  Bengkulu.  Prosiding:
Seminar  Nasional  Teknologi  Peternakan dan Veteriner. 2006:716-722.
21. Bezova,  K.,  J.  Rafay,  J.  Mojto,  and  A. Trakovicka.  2007.  Analysis  of  genetic polymorphism  of  blood  proteins  and selected  meat  quality  traits  in  rabbits.
Slovak J. Anim. Sci. 40(2):57-62.
22. Sutiyono,  B.  2012.  Performan  genetik dan  bioreproduksi  hasil  persilangan itik  ( Anas  Platyrhynchos )  dengan  entok ( Cairina Moschata ) sebagai dasar
perkembangbiakan. Disertasi Doktor. Universitas Diponegoro, Semarang.
23. Nur,  H.,  Y.  Yusrizal,  and  F.  Manin.  2012. Study  of  blood  polymorphism  of  Kerinci duck. Int. J. Poult. Sci. 11(10): 641-643. Doi: 10.3923/ijps.2012.641.643
24. Ismoyowati. 2008. Kajian deteksi produksi telur  itik  Tegal  melalui  polimorfisme protein darah. Anim. Prod. 10(2): 122-128.
25. Hashiguchi, T., T. Nishida, Y. Hayashi, Y. Maeda,  and  S.S.  Mansjoer.  1993.  Blood protein  polymorphisms  of  native  and jungle fowls in Indonesia. Asian Australas. J.  Anim.  Sci.  6(1):27-35.  Doi:  10.5713/ ajas.1993.27
26. Noor, R.R. 1996. Genetika  ternak. Penebar Swadaya, Jakarta.
27. Johari,  S.,  S.  Ekasari  and  E.  Kurnianto. Genetic  variation  in  three  breeds  of Indonesian local ducks based on blood and egg  white  protein  polymorphisme.  J. Indones.  Trop.  Anim.  Agric.  38(1):20-26.
Doi: 10.14710/jitaa.38.1.20-26
28. El-Gendy, E. A., M. A. Helal, N. H. Goher, and  A.  Mostageer.  2005.  Molecular characterization  of  genetic  biodiversity  in ducks,  using  RAPD-PCR  analysis.  Arab  J. Biotech. 8 (2): 253-264.