## Hamdana et al./Galenika Journal of Pharmacy

## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA FLAVONOID DARI EKSTRAK ETANOL
BUAH BELIMBING WULUH ( Averrhoa bilimbi L.) DENGAN METODE

## SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

## ISOLATION AND IDENTIFICATION OF FLAVONOID COMPOUND FROM
ETHANOL EXTRACT OF STARFRUITS ( Averrhoa bilimbi L.) by USING

## SPECTROPHOTOMETRY UV-VIS METHOD
Siti Hamdanah 1* , Syariful Anam 1 , Jamaluddin 1
1 Jurusan Farmasi, Fakultas MIPA, UniversitasTadulako, Palu, Indonesia.
Received 25 Januari 2015, Accepted 26 Februari 2015

## ABSTRAK
Buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L .) dari familia Oxalidaceae merupakan tanaman yang berpotensi sebagai antibakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli. Flavonoid  adalah  senyawa  aktif  dari  ekstrak  buah belimbing wuluh yang berpotensi sebagai antibakteri. Buah belimbing wuluh diekstraksi dengan etanol 96% dengan cara maserasi. Ekstrak yang diperoleh diidentifikasi menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) analitik dengan eluen  n-butanol-  asam  asetat  glasial  –  air  (6;1:3).  Isolasi  secara  KLT  preparative  menghasilkan  3  pita.  Masing- masing  pita  tersebut  disentrifuge  sehingga  diperoleh  isolat.  Isolat  dianalisis  secara  fisika  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  dan  secara  kimia  menggunakan  uji  warna  (perekasi  geser).  Hasil  spektrum  UV-Vis dengan pereaksi geser dari isolat 1 diduga merupakan  senyawa isoflavon dengan gugus OH pada posisi 6,7,4’  dan gugus  o-di  OH  pada  cincin  A,  pada  isolat  2  bukan  merupakan  senyawa  flavonoid  dan  diperkirakan  merupakan senyawa polifenol lain, serta pada isolat 3 diduga senyawa flavon dengan gugus OH pada posisi 5,6,7,4’ dan gugus o-di OH pada cincin A.
Kata kunci : Averrhoa bilimbi L., Flavonoid, Spektrofotometer UV-Vis.

## ABSTRACT
Starfruits  ( Averrhoabilimbi L.)  from  family  ofoxalidaceaeis  a  plant  which  has    potential  as  an antibacterial Staphylococcus  aureus and Escherichia  coli .Flavonoid  are  the  active  compounds  from  the  extract  of starfruit which has potential as an antibacterial. Starfruit were extracting  by ethanol 96 % using maceration. Extract were  identified  using  thin  layer  chromatography  (TLC)  with  eluent  analytic  n-butanol-  glacial  acetic  acid-  water (6:1:3). Preparative isolation using thin layer chromatography resulting three bands. Each band  was centrifuged to obtain  isolates.  Physics  isolates  were  analyzing  using  spectrophotometer  UV  Vis  and  chemically  using  color  test (shift reagent). UV Vis spectrum results with shift reagent from isolates 1, suspected as  isoflavone compound with OH groups in position 6,7,4 and OH groups in O- ring A, in isolates 2 was not flavonoid compound and predicted as other polyphenolic compound and in isolates 3 suspected of flavonecompound with OH groups in position 5,6,7 and OH groups in O-ring A.
Keywords : Averrhoa bilimbi L., Flavonoid, Spectrophotometer  UV-Vis
* Corresponding author : Siti Hamdana, sitihamdana34@yahoo.co.id (ph: +62-852-4114-5288)
GALENIKA Journal of Pharmacy Vol. 1 (1) : 22 - 34

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  banyak  jenis tanaman  yang  dapat  dibudidayakan  karena bermanfaat  dan  kegunaannya  besar  bagi manusia  dalam  hal  pengobatan.  Dalam tanaman  ada  banyak  komponen  kimia  yang dapat digunakan sebagai obat. Pada saat ini, banyak orang kembali menggunakan bahan- bahan  alam  yang  dalam  pelaksanaannya membiasakan  hidup  dengan  menghindari bahan-bahan  kimia  sintesis  dan  lebih mengutamakan bahan-bahan alami. Pengobatan  dengan  bahan  alam  yang  dapat dipilih  sebagai  solusi  mengatasi  penyakit, salah satunya ialah penggunaan ramuan obat berbahan  herbal  (Kardinan  dan  Kusuma, 2004).  Salah  satu  tumbuhan    mengandung senyawa  obat  yaitu  buah  belimbing  wuluh ( Averrhoa bilimbi L.). Hal ini memungkinkan dilakukannya penelitian dan penelusuran senyawa kimia tentang metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam tumbuh-tumbuhan, metode pemisahan, metode analisis, dan uji farmakologinya.
Hasil  isolasi  metabolit  sekunder dapat  memberikan  informasi  kandungan senyawa aktif yang terdapat dalam tumbuhan  sebagai  obat  atau    bahan  baku obat. Bagian tanaman belimbing wuluh yang digunakan  sebagai  bahan  baku  obat  adalah buah, bunga dan daun. Kandungan zat kimia terdapat  dalam  buah  belimbing  wuluh adalah flavonoid. Bunganya sering digunakan  untuk  mengobati  batuk  dan sariawan. Daunnya digunakan untuk menyembuhkan  sakit  perut,  demam,  dan encok.  Sementara  itu,  buahnya  digunakan untuk  mengobati  gusi  berdarah,  meredakan batuk,  membasmi  jerawat  dan  mengatasi tekanan darah tinggi (Adji, 2004).
Berdasarkan penelitian telah dilakukan  oleh  (Zakaria,  dkk,  2007)  dan (Chandra,  dkk,  2011)  menyatakan  bahwa buah  belimbing  wuluh  memiliki  aktivitas antibakteri  pada  bakteri  Gram  positif Staphylococcus epidermidis, Bacillus cereus,  Corynebacterium  diphtheriae  dan Kocuria  rhizophilla  serta  pada  bakteri Gram  negatif  yaitu  Salmonellaparatyphi . Sedangkan  menurut  penelitian  (Qurrotu, 2008)  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar buah  belimbing  wuluh    ( Averrhoa  bilimbi L.)  berpotensi  sebagai  anti  bakteri  terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli. Dimana  diduga  golongan senyawa  aktif  dari  ekstrak  buah  belimbing wuluh  yang  berpotensi  sebagai  antibakteri adalah flavonoid.
Berdasarkan  hal  tersebut  maka  perlu dilakukan  penelitian  ini  dengan  mengisolasi dan  mengidentifikasi  senyawa  flavonoid yang terdapat dalam buah belimbing wuluh. Hal  ini  bertujuan  untuk  dapat  membantu dalam pengembangan ilmu pengetahuan dan studi penelitian selanjutnya.

## METODE PENELITIAN Bahan
Bahan  uji  yang    digunakan  adalah Buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.).
Bahan  penelitian  yang  digunakan berderajat  tekhnis  yaitu  akuades  (H 2 O)  dan etanol  96  %  (C 2 H 5 OH),  yang  berderajat  p.a (Pro.Analysis)  yaitu  metanol  (CH 3 OH), asam  klorida  (HCl),  kloroform  (CHCl 3 ),  n- butanol  (C 4 H 9 OH),  asam  asetat  glasial (CH 3 COOH),  aluminium  klorida  (AlCl 3 ), natrium  asetat  (CH 3 COO.Na),  asam  borat (H 3 BO 3 ),  magnesium  (Mg),  amonia  (NH 4 ) dan silika gel (60 GF 254 ).

## Metode
Pengambilan Sampel.
Sampel buah belimbing wuluh ( Averrhoa  bilimbi L.)  diperoleh  dari  Desa Lolu,  Kecamatan  Sigi,  Kabupaten  Sigi Biromaru,  Sulawesi  Tengah.  Identifikasi sampel  dilakukan  di  UPT  sumber  Daya Hayati, Sulawesi Tengah, Universitas Tadulako.
Ekstraksi sampel (Maserasi).
Sebanyak  587,82  gram  simplisia yang  telah  halus  diekstraksi  dengan  metode maserasi    dengan  menggunakan  pelarut etanol 96 %. Maserasi dilakukan selama 3 x 24  jam  dengan  tiap  1  x  24  jam  dilakukan pengadukan sehingga semua senyawa organik  memungkinkan  akan  tertarik  pada pelarut yang digunakan. Kemudian di saring untuk  mendapatkan  filtrat  atau  ekstrak  cair, lalu  filtrat  yang  diperoleh  di  pekatkan dengan rotary  evaporator pada  suhu  70 0 C dengan kecepatan 100 rpm sampai didapatkan ekstrak kental.

## Isolasi Senyawa Flavonoid.
Pada  tahap  ini  dilakukan  pemisahan senyawa  flavonoid  dengan  KLT  analitik, kromatografi vakum cair dan KLT preparatif.  KLT  analitik  bertujuan  untuk mencari  eluen  terbaik  untuk  pemisahan senyawa  flavonoid  dari  ekstrak  buah belimbing  wuluh( Averrhoa  bilimbi L.)  hasil yang  diperoleh  digunakan  sebagai  eluen untuk KLT preparatif.
1. KLT  Analitik. Menotolkan  ekstrak kental  pada  plat  KLT  menggunakan pipa kapiler yang sebelumnya plat telah
dibuat  garis  batas  atas  1  cm  dan  batas bawah  1  cm  dengan  ukuran  plat  KLT silika gel 60 F 254 yang berukuran 2 x 10 cm. Dalam Markham (1988) disebutkan bahwa  pada  umumnya  eluen  yang digunakan untuk memisahkan komponen-komponen dalam bahan alam yang diduga mengandung flavonoid  adalah  campuran  n-butanol  : asam  asetat  glasial  :  air  (BAA)  (4:1:5), BAA  (6:1:3)  dan  metanol  :  kloroform (7:3),  (6:4),  (5;5),  (4:6),  (3:7),  (2:8), (1:9), (1:19), dan (1:29) masing- masing sebanyak 20 mL. Hasil pemisahan KLT analitik  berupa  Bercak  yang  tampak diperiksa dengan lampu UV 245 nm dan 366 nm kemudian diidentifikasi menggunakan  uap  amonia.  Lempeng KLT  yang  sudah  kering  diletakkan diatas  gelas  kimia  yang  berisi  amonia. Bercak    yang  terbentuk  diperiksa dengan  lampu  UV  pada  panjang gelombang 245 nm dan 366
nmkemudian disemprot dengan pereaksi AlCl 3 lalu  diperiksa  kembali  dengan lampu  UV  254  nm  dan  266  nm.  Eluen yang  memberikan  pemisahan  yang paling  baik  nantinya  akan  digunakan dalam  pemisahan  kromatografi  vakum cair dan KLT preparatif.
2. Kromatografi  Vakum  Cair. Kolom kromatografi  vakum  cair  dibersihkan, kemudian dipasang tegak lurus.
Adsorben (silika gel 60 GF 254 ) dimasukkan dalam kolom lalu ditambah cairan  pengelusi  awal,  sambil  pompa vakum  dijalankan  untuk  memadatkan atau  memampatkan  adsorben  (silika gel)(Rahim dkk, 2012).
Dari  hasil  KLT  analitik  yang membuktikan  bahwa  positif  terdapat senyawa  flavonoid  pada  ekstrak  kental tersebut,  maka  selanjutkan  dilakukan pemisahan dengan metode KVC, dimana  4  gram  sampel  ekstrak  kental dibuatkan dalam bentuk suspensi dengan  cara  melarutkan  dalam  eter secukupnya  dan  ditambahkan  silika  gel secukupnya. Fase diam berupa silikagel dimasukkan kedalam kolom lalu dihisap dengan  cara  menggunakan  pompa vakum  hingga  mampat.  kemudian memasukkan  cairan  pengelusi  yaitu campuran  n-butanol  :  asam  asetat glasial  :  air  dengan  perbandingan berturut-turut (12;1), (8:1), (6:1),
(6:1:1),  (6:1:1),  (6:1:2),  (6:1:4)  dan campuran  metanol  :  air  (1:1)  masing- masing  sebanyak  25  mL.  Dijalankan pompa  vakum  hingga  eluen  turun mengelusi  komponen  kimia  dan  eluat (fraksi ) yang keluar ditampung.
Masing-masing  fraksi  di  totolkan pada  lempeng  KLT  untuk  melihat pemisahan  Bercak  yang  baik  dan menunjukkan adanya senyawa flavonoid.  Kemudian  Bercak  tersebut diambil  untuk  dilanjutkan  ke  tahap isolasi menggunakan KLT preparatif.

## Isolasi  Senyawa    Flavonoid  dengan  KLT Preparatif.
Fraksi-fraksi  yang  didapatkan  dari hasil  KVC  memiliki  warna  dan  spot  yang hampir  sama  atau  mirip,  diambil  untuk  di KLT  preparatif.  Kemudian  fraksi-fraksi ditotolkan  secara  horizontal  sepanjang  plat dengan  menggunakan  pipet  mikro  pada jarak  1  cm  dari  garis  bawah  dan  dari  1  cm
garis  atas  sehingga  membentuk  pita.  Lalu dibiarkan  plat  KLT  terelusi  pada  chamber yang  berisi  eluen  n-butanol:  asam  asetat glasial  :  air  (6:1:3)  sebanyak  20  mL.  Hasil KLT  diangin-anginkan  dan  diamati  di bawah  sinar  UV  pada  panjang  gelombang 245  nm  dan  366  nm.  Bercak  hasil  KLT (pita) dikerok dan dilarutkan dengan pelarut metanol  secukupnya,  kemudian disentrifuge untuk  mengendapkan  silikanya,  sehingga diperoleh  supernatan.  Supernatan  diuapkan hingga  kering  pada  suhu  25 0 C  lalu ditimbang dan didapatkan isolat.
Identifikasi Senyawa Flavonoid.
Isolat dianalisis secara fisika menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan  secara  kimia  menggunakan  uji  warna (pereaksi  geser)  yaitu  aluminium  klorida, natrium  hidroksida,  asam  asetat,  dan  asam borat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pemisahan KLT Analitik menunjukkan  bahwa  eluen  dari  campuran metanol : klorofrom (7:3), (6:4), (5:5), (4:6), (3:7), (2:8) dan (1;9) belum dapat memisahkan  komponen-komponen  senyawa flavonoid  yang  terkandung  dalam  buah belimbing wuluh, dapat dilihat pada gambar 1  dan  2.    Eluen  campuran  n-butanol:  asam asetat glasial : air (BAA) dengan perbandingan  (4:1:5)  dan  (6:1:3)  dapat memisahkan  komponen  senyawa  flavonoid dalam  ekstrak  etanol  buah  belimbing wuluh.,  dapat  dilihat  pada  gambar  3  dan  4. Eluen  campuran  BAA  (4:1:5)  mampu menghasilkan  4  bercak  namun  kurang terpisah  baik  dan  eluen  campuran  BAA
(6:1:3) mampu menghasilkan 3 bercak yang terpisah baik.
Gambar 1. Profil KLT dibawah lampu UV 254 nm menggunakan pelarut metanol : kloroform dengan variasi konsentrasi a(7:3),
b(6:4), c (5:5), d (4:6), e (3:7), dan  f (2:8)
Gambar 2. Profil KLT A dibawah lampu UV 366 nm menggunakan pelarut metanol : kloroform dengan variasi konsentrasi a(7:3), b(6:4), c (5:5), d (4:6), e (3:7), dan  f (2:8)
Gambar 3. Kromatogram ekstrak etanol 96
% buah belimbing wuluh fase diam silika gel, fase gerak BAA (4:1:5 %), Jarak migrasi 7,5 cm, 1(dibawah lampu UV 366
nm), 2 (setelah uap amonia)
Gambar4. Kromatogram ekstrak etanol 96 % buah belimbing wuluh fase diam silika gel, fase gerak BAA (6:1:3 %), Jarak migrasi 7,5
cm, 1(dibawah lampu UV 366 nm), 2 (setelah uap amonia) Pemisahan  senyawa-senyawa  yang terdapat dalam ekstrak etanol buah belimbing wuluh dilakukan dengan kromatografi vakum cair dengan menggunakan silika  gel  60  (GF 254 ) sebagai fase  diam.  Sampel  sebanyak  4  gram dilarutkan  dalam  metanol  secukupnya  lalu ditambahkan  dengan  fase  diam  secukupnya dipreabsorbsi  dengan  silika  gel  60  (GF 254 ) sebanyak  26,68  gram  kemudian  di  elusi dengan  eluen  BAA  dengan  perbandingan (12:10, (8:1), (6:1), (6:1:1) sebanyak 2 kali, (6:1:2),  (6:1:4)  dan  metanol  :  air  (1:1).
Masing-masing  eluat ditampung dalam vial, kemudian diangin-anginkan sehingga didapatkan  eluat  kental.  Pemisahan  ini menghasilkan 8 fraksi. Fraksi 3,4,5
memberikan  indikasi  adanya  bercak  utama pada hasil profil KLT. Dari hasil profil KLT memberikan 3 jenis bercak yang cukup baik pemisahannya  yaitu  bercak  berwarna  biru muda,  hijau-kuning  dan  lembayung  gelap. Pengamatan  profil  KLT  dari  hasil  KVC dengan  gabungan  Fraksi  3,4,  dan  5  dapat dilihat pada gambar 5
b c e f a a b c 2. d 2. d e f
Gambar5. Kromatogram hasil fraksi dengan eluen BAA (12:1), (8:1), (6:1), (6:1:1), (6:1:1), (6:1:2), (6:1:4) dan metanol : Air
(1:1), 1 (sebelum di uap amonia), 2 (setelah di uap amonia), dan 3 (setelah di semprot
AlCl 3 ).
Ket :  a (Bercak berwarna biru muda)
b(Bercak berwarna hijau-kuning)
c (Bercak berwarna lembayung
gelap)
d (Bercak berwarna lembayung gelap)
Hasil  pemisahan  dari  kromatografi vakum  cair  yang  menghasilkan  3  fraksi (Fraksi  3,4,dan  5)  digabung  dan  dilakukan pemisahan  dengan  KLT  preparatif.  Eluen yang digunakan pada KLT preparatif adalah eluen  terbaik  dari  hasil  KLT  analitik  yaitu eluen  BAA  (6:1:3).  Plat  yang  digunakan adalah plat KLT silika gel 60 PF 254 dengan ukuran  20  x  20  cm.  Penggunaan  silika  gel PF 254 memiliki  mekanisme  secara  adsorbsi dan  partisi,  dimana  simbol  ‘P’  artinya lapisan  untuk  preparatif  yang  di  gunakan pada plat Kromatografi Lapis Tipis
Preparatif  (KLTP)  sehingga  pita-pita  yang nampak  pada  plat  dapat  dikeruk.    Setelah dilakukan  proses  elusi  pada  hasil  gabungan fraksi dalam chamber, plat KLTP diamati di bawah  lampu  UV  366  nm.  Pada  plat menghasilkan 3 pita. Pita pertama berfluoresensi  warna  biru  muda,  pita  kedua berfluoresensi  warna  hijau-kuning  dan  pita ketiga  berfluoresensi  warna  lembayung gelap.  Pita-pita  yang  dihasilkan  kemudian dikerok  dan  dilarutkan  dalam  metanol. Kemudian di sentrifuge untuk mengendapkan  silika  gel  atau  memisahkan silika  gel  dan  supernatan  yang  didapatkan sehingga  diperoleh  isolat.  Isolat  yang diperoleh diidentifikasi menggunakan spektrofotometri UV-Vis dengan menggunakan pereaksi geser.
Gambar 6.  KLT Preparatif dibawah366 nm
1 2 3 d 4 c b a E   f1   f2    f3    f4   f5   f6   f7    f8 E   f1     f2    f3    f4   f5    f6     f7    f8 E   f1   f2    f3    f4   f5   f6   f7    f8
1 2 3 a
b c
Ket :
a. Isolat 1 berwarna hijau-biru
b. Isolat 2 berwarna hijau-kuning
c. Isolat 3 berwarna lembayung gelap
Dari  data  spektrum  pada  tabel  1. Didapatkan  senyawa  flavonoid  dari  hasil KLT  preparatif  adalah  isolat  1  dan  3.  Isolat 2  bukan  merupakan  senyawa  flavonoid
karena  setelah  ditambahkan  pereaksi  geser (metanol  dan  AlCl 3 ),  (metanol,  HCl,  dan AlCl 3 ),  (metanol  dan  natrium  asetat),  dan (metanol,  natrium    asetat,  dan  asam  borat) tidak memiliki panjang gelombang maksimum dan panjang gelombang maksimum  pada  penambahan  pereaksi NaOH  tidak  sesuai  dengan  data  literatur. Sehingga  diperkirakan  isolat-isolat  tersebut merupakan senyawa polifenol yang lain.
Tabel 1. Panjang gelombang maksimum dari bercak KLT preparative dibawah sinar UV 245 dan 366 nm serta penambahan pereaksi geser.
Isolat Panjang gelombang maksimum (nm) dengan penambahan pereaksi geser CH 3 OH CH 3 OH + NaOH CH 3 O H + AlCl 3 CH 3 OH + AlCl 3 /HCl CH 3 OH + CH 3 COO. Na CH 3 OH
+
CH 3 COO. Na
+H 3 Bo 3 1 305 212 354 258 311 224 307 226 320 246 315 226 2 328 305 397 396 - - - - - - - - 3 314 249 369 256 316 314 - 278 323 229 323 260
(A) ( B) (C) (D) (E) (F)
Gambar 7. Spektrum  UV hasil senyawa isolat  1 dalam Metanol (A), NaOH (B), AlCl 3 (C), AlCl 3 + HCl (D), Natrium Asetat (E), dan Natrium Asetat + Asam Borat (F).
Tabel  2.  Interpretasi  perubahan  panjang  gelombang  dari  isolat  1  dengan  penambahan  pereaksi geser.
Perlakuan Panjang Gelombang λmaks(nm) Geseran panjang Gelombang λmaks(nm) Dugaan substitusi Pita I Pita II Pita I Pita II Isolat + CH 3 OH 305 212 - - Isolat  +  CH 3 OH  + NaOH 354 258 +49 +46 4’-OH Isolat  +  CH 3 OH  + AlCl 3 311 224 +6 +12 Mungkin o -diOH pada cincin A; 5-OH (isoflavon)
Isolat  +  CH 3 OH  + AlCl 3 + HCl 307 226 +2 +14 Mungkin o -diOH pada cincin A; 5-OH (isoflavon)
Isolat  +  CH 3 OH  + CH 3 COO.Na 320 246 +15 +20 7-OH
Isolat  +  CH 3 OH  + CH 3 COO.Na + H 3 BO 3 315 226 +10 +14 o- diOH  pada  cincin  A  (6,7 atau 7,8) Hasil pemeriksaan pendahuluan terhadap  isolat  1  mengarah  dugaan  pada isolfavon  yang  tak  mengandung  5-OH bebas.  Hal  ini  didasarkan  pada  uji pendahuluan  dengan  mengunakan  KLT menghasilkan  bercak  warna  biru  muda sebelum  diberi  uap  amonia  dan  tetap berwarna  biru  muda  setelah  di  beri  uap amonia.
Pada identifikasi menggunakan spektrofotometer
UV-Vis dengan menggunakan  pereaksi  geser,  interpretasi perubahan  panjang  gelombang  dari  isolat  1 dengan  penambahan  NaOH  menyebabkan pergerseran  panjang  gelombang  batokromik pada pita I sebesar 49 nm dan pita II sebesar 46  nm  yang  menunjukkan  bahwa  adanya gugus 4’-OH , jenis senyawa flavonoid yang diduga adalah flavon dan flavonol.
Penambahan AlCl 3 menyebabkan
pergeseran pada pita I sebesar 6 nm dan
pergeseran  pada  pita  II  sebesar    12  nm, sedangkan penambahan AlCl 3 +HCl menghasilkan  pergeseran    pada  pita  I sebesar  2  nm  dan  pada  pita  II  terjadi pergeseran  sebesar  14  nm.  Hal  ini menunjukkan  kemungkinkan  adanya  gugus o -diOH pada cincin A dan 5-OH (isoflavon). Jenis senyawa yang diduga adalah isoflavon.
Penambahan Natrium Asetat menyebabkan pergeseran panjang
gelombang yang panjang pada pita I sebesar 15  nm  dan  pita  II  sebesar  20  nm,  hal  ini menunjukkan adanya gugus 7-OH. Penambahan  Natrium  Asetat  +  Asam  borat menghasilkan pergeseran panjang gelombang lebih kecil pada pita I sebesar 10 dan pita II sebesar 15. Hal ini menunjukkan adanya  gugus o- diOH  pada  cincin  A  (6,7 atau 7,8). Jenis senyawa yang diduga adalah isoflavon, flavanon dan dihidroflavon.
Dari data di atas dapat diduga bahwa isolat  1  adalah  senyawa  isoflavon  dengan
gugus OH pada posisi  6,7,4’ serta  gugus o- diOH pada cincin A.
(A) (B) (C) (D) (E) (F)
Gambar  8.  Spektrum  UV  hasil  senyawa  isolat  3  dalam  Metanol  (A),  NaOH  (B),  AlCl 3 (C), AlCl 3 +HCl (D), Natrium Asetat (E), dan Natrium Asetat + Asam Borat(F)
Tabel  3.  Interpretasi  perubahan  panjang  gelombang  dari  isolat  3  dengan  penambahan  pereaksi geser.
Perlakuan Panjang Gelombang λmaks(nm) Geseran panjang Gelombang λmaks(nm) Dugaan substitusi Pita I Pita II Pita I Pita II Isolat + CH 3 OH 314 249 - - Isolat + CH 3 OH + NaOH 369 256 +55 +7 4’-OH Isolat + Metanol + AlCl 3 316 314 +2 +58 Mungkin o -diOH pada cincin  A  ;  Mungkin  3-OH (dengan atau tanpa 5-OH)
Isolat + CH 3 OH l + AlCl 3 + HCl - 278 - +29 o -diOH  pada  cincin  A  (6,7 dan 7,8) Isolat + CH 3 OH + CH 3 COO.Na
323 229 +9 -20 7-OH Isolat + CH 3 OH + CH 3 COO.Na + H 3 BO 3 323 260 +9 -11 o- diOH  pada  cincin  A  (6,7 atau 7,8) Hasil pemeriksaan pendahuluan
terhadap  isolat  3  mengarah  dugaan  yang biasanya  flavon  atau  flavonol  tersulih  pada 3- O mempunyai  5-OH  tetapi  tanpa  4’-OH bebas,  beberapa  6-  atau  8-OH  flavon  dan flavonol tersulih pada 3- O serta mengandung 5-OH. Hal ini didasarkan pada uji  pendahuluan  dengan  mengunakan  KLT menghasilkan  bercak  lembayung  gelap sebelum  diberi  uap  amonia  dan  tetap berwarna  lembayung  gelap  setelah  di  beri uap amonia.
Pada identifikasi menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan
menggunakan  pereaksi  geser,  interpretasi perubahan  panjang  gelombang  dari  isolat  3 dengan penambahan NaOH menyebabkan
pergerseran  panjang  gelombang  pada  pita  I sebesar 55 nm dan pita II sebesar 7 nm yang menunjukkan  adanya  gugus  4’-OH.  Jenis senyawa  yang  diduga  adalah  flavon  dan flavonol.
Penambahan AlCl 3 menyebabkan pergeseran  panjang  gelombang  pada  pita  I sebesar  2  nm  (penambahan  lebih  kecil) yang  menunjukkan  kemungkinan  adanya gugus o -di  OH  pada  cincin  A  sedangkan pergeseran  panjang  gelombang  pita  II sebesar 58 nm (pergeseran lebih besar) yang menunjukkan kemungkinan adanya gugus 3- OH  (dengan  atau  tanpa  5-OH).  Jenis senyawa  yang  diduga  adalah  flavon  dan flavonol.
Penambahan Natrium Asetat menyebabkan pergeseran panjang
gelombang pada pita I sebesar 9 nm dan pita II sebesar 20 nm yang menunjukkan adanya gugus 7-OH. Hal yang sama juga ditunjukkan  pada  penambahan  Natrium Asetat  +  Asam  borat.  Pergeseran  panjang gelombang  pada  pita  I  sebesar  9  dan  pita  II sebesar 11 yang menunjukkan adanya gugus o- diOH  pada  cincin  A  (6,7  atau  7,8).  Jenis senyawa  yang  di  duga  adalah  flavon  dan flavonol.
Dari  data  di  atas,  dapat  diduga  bahwa isolat  3  adalah  senyawa  flavon  dengan gugus OH pada posisi 5,6,7,4’ serta gugus o- diOH  pada  cincin  A.Pada  data  isolat  telah didapatkan senyawanya, namun perlu adanya penelitian lebih lanjut untuk penentuan  struktur  flavonoid  dari  buah Belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.) dengan  metode  spektroskopi  lainnya  seperti NMR, FTIR, dan MS.

## DAFTAR PUSTAKA
Adithya,  Yonahes,  Koirewoan,  dkk.  (2010).
Isolasi  Dan  Identifikasi  Senyawa Flavonoid  Dalam  Daun  Beluntas (PlucheaIndicaL.). Program Studi Farmasi  FMIPA  UNSRAT  Manado, 95115.
Chandra,  Sreedam,  das  Shapna,  Sultana., Sumon,  Roy.,  Sheikh,  Sayed,  Hasan.
(2011). Antibacterial  and  cytotoxic
activities of methanolic extracts of leaf and  fruit  parts  of  the  plant  Averrhoa bilimbi  (Oxalidaceae). Department  of Pharmacy. Southeast University, Dhaka,  Bangladesh  Department  of Pharmaceutical Technology,
University  of  Dhaka,  Dhaka,  ISSN:
2152-649X.  Bangladesh. Harsodjo  S.(2003). Isolasi  Dan  Identifikasi Flavonoid Pada Daun Katu (Sauropus androgynous ( L .) Merr). Badan Pengawas Obat dan Makanan, Departemen  Kesehatan  RI.  Jakarta
10560.  Indonesia;  Jurusan  Farmasi,
FMIPA,  Institut  Sains  dan  Teknologi Nasional,  MAKARA  SAINS,  Vol.  7, No. 2, Agustus. Jakarta .
Khoirina,  Dwi,  Nugrahaningtyas.,Sabirin, Matsjeh.,  Tutik,  Dwi,  Wahyuni.  2005. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dalam Rimpang Temu Ireng (Curcuma  aeruginosa  Roxb.). Jurusan Kimia  FMIPA  Universitas  Sebelas
Maret (UNS), Surakarta.
Markham, K.R. (1988). Cara Mengidentifikasi Flavonoid .
Penerjemah  Padmawinata,  K.  Penerbit ITB. Bandung.
Pino,  J.A.,  Marbot,  R.,  &  Bello,  A.  (2004).
Volatile  Components  of Averrhoa bilimbi L.  Fruit  Grown  in  Cuba.
Journal  of  Essential  Oil  Research:
JEOR , (Online),
(http://findarticles.com/p/articles/miqa 4091/is200405/ai  n94520  07,  diakses 15 November 2013).
Qurrotu  A.(2008). Uji  Efektivitas  Ekstrak Kasar  Senyawa  Anti  Bakteri  Pada Buah  Belimbing  Wuluh  (Averrhoa bilimbi  L.)  dengan  Variasi  Pelarut ( Skripsi) , Jurusan  Kimia,  Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam
Negeri (UIN) Malang.
Rahim,  A.,  Alam,  G.,  Agustina,  R.,  dan
Rusydi, M. (2012). Skrining
Toksisitas  Ekstrak  Herba  Bandotan ( Ageratum  conyzoides L)  dengan
Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test.
Majalah  Farmasi  dan  Farmakologi, Vol. 16(2): 99 – 106 .
Rahmawan R. (2008). Isolasi Dan
Identifikasi  Flavonoid  Dari  Daun Dewandaru  (Eugenia  uniflora L .) ( Skripsi) . Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadiyah, Surakarta.
Sastrohamidjojo,  H.(2007) .  Dasar-Dasar Spektrosfotokopi, edisi kedua, cetakan kedua . Penerbit Liberty : Jogjakarta.
Sastrohamidjojo,  H.  (1996). Sintesis  Bahan
Alam . Gadjah Mada University
Press.Yogyakarta.
Yohanes,  Fatimawali,  Weny,  Indayang,
Wiyono. (2013) . Isolasi Dan Identifikasi Senyawa Flavonoid Dalam Daun Beluntas (PlucheaIndica L .).
Program  Studi  Farmasi  Fmipa  Unsrat Manado.
Zakaria,  Z.A,.  H.  Zaiton.,  E.  F.  P.,  Henie.,
A.  M.,  Mat  Jains  &  E.  N.H.  Engka
Zainuddin. (2007). In Vitro Antibacterial  Activity  of Averrhoa
bilimbi L. Leaves and Fruits Extracts. International  Journal  of  Tropical Medicine 293: 96-100.