## ANALISIS KANDUNGAN FLAVONOID DAN AKTIVITAS ANTIHIPERURISEMIA EKSTRAK ETANOL DAUN SIRSAK (Anona muricata L.) PADA MENCIT JANTAN SECARA IN VIVO
Dwi Rizki Febrianti*, Rakhmadhan Niah Akademi Farmasi ISFI Banjarmasin
Email: dwirizkyfeby@gmail.com

## ABSTRAK
Peneltian  ini  mengukur  kandungan  flavonoid  dan  menguji  aktivitas antihiperursemia terhadap mencit jantan putih galur Balb-C dari ekstrak etanol daun sirsak  asal  Kabupaten  Banjar,  Kalimantan  Selatan.  Pengukuran  flavonoid  dalam ekstrak ditentukan dengan standar kuersetin metode spektrofotometri UV-Visible. Aktivitas  antihiperursemia  dilakukan  dengan  induksi  hati  sapi,  kontrol  positif menggunakan  allupurinol  dan  ditentukan  pengurangan  kadar  asam  urat menggunakan  reagen strip. Hubungan  antara kandungan flavonoid diperoleh  y  = 0,02288x + 0,0209, R = 0,99493 dengan kandungan 2,31±0,144 gram kuersetin/100 gram sampel. Aktivitas  antihiperurisemia menunjukan ekstrak etanol  daun sirsak dosis 100, 200, dan 400 mg/kg BB memiliki efek penurunan kadar yang signifikan berurutan  yaitu  2,03±0,635;  2,07±0,379;  2,23±0,404.  Korelasi  hasil  dari pengukuran flavonoid dan hewan uji dari ekstrak etanol daun sirsak bahwa 100 mg ekstrak terkadung 23,1 mg gram ekivelen kuersetin dan mampu menurunkan kadar asam urat sebanyak 2,03 mg/dL pada hewan uji dosis 100mg/kgBB.
Kata Kunci: daun sirsak, flavonoid, antihiperurisemia

## ABSTRACT
This  study  was  conducted  to  measure  the  flavonoid  content  and  to  test  the antihyperuricemia activity against white male mice Balb-C from the ethanol extract of  soursop  leaf  from  Banjar  district,  South  Kalimantan.  The  measurement  of flavonoids in extract was determined by the  standard of quercetin by UV-Visible spectrophotometric method. Antihyperuricemia activity test was done by cow liver induction,  positive  control  using  allopurinol  and  determined  by  uric  acid  level reduction using strip reagent. The relationship between flavonoid content were y = 0,02288x  +  0,0209,  R  =  0,99493  and  content  2,31  ±  0,144  g  quercetin/100  g sample. Antihiperurisemia activity showed that the ethanol extract of soursop leaf dose 100, 200 and 400 mg/kg BB had effect of significant decrease in sequence that was  2,03±0,635;  2,07±0,379;  2,23±0,404.  Correlation  of  the  results  of  the measurement  of  flavonoids  and  test  animals  from  the  ethanol  extract  of  soursop leaves was that 100 mg extract contained 23,1 mg equivalent quercetin and able to decrease uric acid level as much as 2.03 mg/dL in animal dose 100mg/kg BB.

## Keywords: soursop leaf, flavonoid, antihyperuricemia

## PENDAHULUAN
Sirsak  ( Annona  muricata L.) merupakan  salah  satu  jenis  tanaman dari familia Annonaceae yang mempunyai  manfaat  besar  bagi kehidupan manusia, sebagai tanaman bahan obat tradisional yang memiliki multi khasiat (Jannah, 2010). Analisis fitokimia  menunjukkan  ekstrak  daun sirsak mengandung alkaloid,
flavonoid, terpenoid, kumarin, lakton,
antrakuinon, tanin, kardiak glikosida, fenol, fitosterol, dan saponin (Gajalakshmi dkk.,
2012 ;
Gavamukulya  dkk.,  2014).  Senyawa senyawa  fitokimia  tersebut  dapat ditemukan baik pada ekstraksi etanol maupun  air.  Senyawa  melimpah lainnya yang paling banyak diuji yaitu annonaceous acitogenin. Diantaranya yang  paling  melimpah  komponen bioaktif  di  atas  adalah  senyawa flavonoid (Gajalakshmi dkk., 2012).
Salah  satu  penanganan  non farmakologis  dalam  penyembuhan penyakit  asam  urat  yaitu  dengan pengobatan  tradisional  dengan  terapi herbal  yaitu  dengan  meggunakan sirsak ( Annona Muricata L.). Cara ini dapat  menghilangkan  rasa  nyeri  dan menaikkan sirkulasi darah yang akan
mengurangi inflamasi (Laniyati,
2003). Berdasarkan penggunaan secara empiris selama 10 hari dengan jumlah daun sirsak sekitar 9 – 11 helai daun, tidak menunjukan efek samping pada responden.

## METODE PENELITIAN
Termasuk penelitian eksperimental dengan rancangan Pre Test dan Post  Test  Control  Group Design. Pengukuran  kadar  flavonoid ekstrak etanol daun sirsak menggunakan  spektrofotometri  Uv- Visible dan pengambilan data sebelum  dan  setelah  dilakukannya perlakuan  dengan  membandingkan hasil  pada  kelompok  kontrol  positif dengan  kelompok  perlakuan  dan membandingkan hasil pada kelompok kontrol  negatif  dengan  kelompok perlakuan.
Simplisia daun sirsak dimaserasi dengan etanol 70% selama satu  hari,  remaserasi  dilakukan sebanyak dua kali. Ekstrak dikentalkan  dengan  bantuan  rotary evaporator  dan  waterbath  hingga bobot konstan, yaitu setelah tiga kali penimbangan dan selang 1 jam di atas waterbath bobotnya sama.
Skrining fitokimia mengunakan uji  flavonoid,  saponin  dan  tanin dengan pereaksi Mg, FeCl 3 , Aqudest, NaCl dan Gelatin 1% (Febrianti dkk.,
2018).
Pembuatan larutan standar kuarsetin dengan melarutkan 25 gram kuarsetin  dalam  25  mL  etanol  p.a, pipet 1 mL diencerkan hingga 10 mL etanol p.a didapatkan konsentrasi 100 ppm, diencerkan menjadi seri larutan baku kuersetin dalam pelarut metanol dengan konsentrasi 10; 15; 20; 25; 30 ppm.
Penentuan operating time (OT) dengan  mengambil  10  ppm  larutan baku  ditambahkan  1  mL  AlCl 3 10% dan  1  mL  CH 3 COOH  1  M.  Dibaca pada  panjang  gelombang  teoritis kuersetin (435 nm) selama 15 menit.
Penentuan  panjang  gelombang seri  larutan  baku  ditambahkan  1  mL AlCl 3 10% dan 1 mL CH 3 COOH 1 M, didiamkan  selama  operating  time dibaca  pada  panjang  gelombang  400 - 500 nm.
Penentuan  kurva  baku  dengan membaca  seri  kadar  ditambahkan pereaksi  sama  dengan  OT  dan panjang
gelombang diukur
absorbansi paling tinggi pada panjang
gelombang maksimum dan didapatkan  regresi  linier  hingga  r> 0,95 (Musiam & Alfian, 2017).
Uji  penetapan  kadar  sampel dengan  membaca  kosentrasi  1%, diperlakukan sama dengan OT kemudian dilakukan pembacaan sama dengan kurva baku.
Uji  antihiperurisemia  dengan membagi  5  kelompok  3  ekor  mencit putih  jantan  diadaptasi  siang  malam selama  1  minggu.  Pengukuran  kadar asam urat dilakukan sebelum perlakuan.  Kemudian  mencit  di induksi  hati  sapi  selama  7  hari  p.o. Setelah  kadar  asam  urat  naik  diberi perlakuan  ekstrak  selama  14  hari, setelah selesai dihitung kembali kadar asam  urat.  5  kelompok  terdiri  dari kelompok kontrol positif (allopurinol),  kontrol  negatif  (Na- CMC 0,5%), ekstrak 100 mg/kg BB, ekstrak  200  mg/kg  BB  dan  ekstrak 400 mg/kg BB.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil ekstraksi didapatkan persentase ekstrak 14,5%. Filtrat yang diperoleh dipekatkan dengan evaporator dengan suhu 50°C. Ekstrak cair yang diperoleh
selanjutnya  akan  diuapkan  di  atas
waterbath sampai mendapatkan ekstrak kental dengan suhu 55°C agar tetap  menjaga  kestabilan  senyawa flavonoid. Hasil skrining fitokimia menunjukkan  bahwa  ekstrak  dan simplisia  mengandung  flavonoid, saponin  tapi  tidak  tanin.  Pada  uji flavonoid terjadi perubahan warna ke hijau  pekat.  Uji  saponin  terbentuk busa yang stabil selama 30 menit dan hasil  uji  tanin  tidak  terbentuk endapan/hijau kehitaman.
Penentuan operating time bertujuan  untuk  mengetahui  lama waktu yang dibutuhkan larutan untuk mencapai absorbansi konstan. Selama pengukuran  hendaknya  absorbansi yang  terbaca  pada  spektrofotometer terletak  antara  0,2  sampai  0,8  atau 15% sampai 70% jika dibaca sebagai transmitan.  Hasil  pembacaan  OT menunjukkan  absorbansi  yang  stabil pada menit 10 - 14.
Prinsip penetapan kadar flavonoid adalah terjadinya pembentukan kompleks antara
aluminium klorida dengan gugus keto
Pada  atom  C-4  dan  gugus  hidroksi pada  atom  C-3  atau  C-5  yang
bertetangga dari golongan flavon dan flavonol.  Senyawa  yang  digunakan sebagai standar pada penetapan kadar flavonoid ini adalah kuersetin, karena merupakan flavonoid golongan flavonol  yang  memiliki  gugus  keto pada  atom  C-4  dan  juga  gugus hidroksil pada atom C-3 dan C-5 yang bertetangga  (Azizah  dkk.,  2014). Didapatkan panjang gelombang tertinggi  adalah  418  nm.  Penentuan kurva  baku  masing-masing  seri larutan baku diukur nilai
absorbansinya pada
panjang gelombang  maksimum,  kemudian diplotkan dengan konsentrasi sebagai sumbu x dan nilai absorbansi sebagai sumbu y sehingga didapatkan persamaan  regresi  linier  (y  = 0,02288x  +  0,0209,  r  =  0,99493). Linieritas  dinyatakan  valid  jika  nilai regresi  (r)  yang  didapat  >0,95. Dimana jika nilai regresi mendekati 1 maka antara konsentrasi dengan nilai absorbansi  menunjukkan  hubungan yang  linier  (Gandjar  &  Rohman, 2007).
Penetapan kadar flavonoid ekstrak  daun  sirsak  pada  konsentrasi 1%  diencerkan  mejadi  0,1%  (b/v) dibaca pada OT 10 menit dan panjang
gelombang  418  nm.  Berdasarkan hasil  perhitungan  tabel  1  kadar flavonoid  pada  ekstrak  daun  sirsak diperoleh  dengan  cara  memasukkan nilai  absorbansi  pada  kurva  baku
standar  kuersetin  sehingga  hasil  dari besar kadar rata-rata flavonoid ekstrak  etanol  daun  sirsak  yaitu sebesar 2,3159% (tabel 2).
Tabel 1. Nilai absorbansi dari menit 1 hingga 15 Menit ke- Absorbansi 1 0,235 2 0,234 3 0,233 4 0,233 5 0,233 6 0,232 7 0,232 8 0,231 9 0,231 10 0,230 11 0,230 12 0,230 13 0,230 14 0,230 15 0,229 Tabel 2. Hasil analisis kadar flavonoid Replikasi  Absorbansi Konsentrasi (ppm) Kadar (%) Kadar rata- rata (%) 1 0,5182 21,7341 2,1734 2,3159 ± 0,1444 2 0,5843 24,6219 2,4622 3 0,5499 23,1217 2,3122 Uji  aktivitas  antihiperurisemia ekstrak etanol daun sirsak
menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun sirsak memiliki efek sebagai antihiperurisemia.  Hasil  penurunan kadar pada mencit dapat dilihat pada gambar  1.  Pada  penelitian  ini, menggunakan  15  ekor  mencit  putih jantan  yang  dibagi  menjadi  5
kelompok  yang diadaptasikan selama 2  minggu.  Alasan  dilakukannya adaptasi agar mencit dapat menyesuaikan diri dengan lingkungan dan agar tidak stress jika dilakukan percobaan (Katzung, 2010).  Setelah  pemberian  induksi selama  14  hari  menunjukkan  adanya kenaikan  kadar  asam  urat  diatas  4,5
mg/dL.  Hal  ini  disebabkan  karena pemberian makanan tinggi purin yaitu hati sapi yang mempunyai kandungan purin  nomor  dua  tertinggi  setelah otak,  dimana  mekanisme  kerjanya adalah  mengubah  purin  menjadi adenosin, kemudian adenosin diubah menjadi adenin dan isonine yang oleh enzim adenin deaminase dan phosphorylase keduanya diubah menjadi  hipoxantine  (Sari  dkk.,
2017). Oleh xantin oxidase,
hipoxantin diubah menjadi xantin dan akhirnya xantin diubah menjadi asam urat.  Selain  itu  hati  sapi  sendiri digunakan karena
cara
mendapatkannya  mudah,  harganya murah  dan  tidak  toksik  (Lidinilla, 2014).
Mekanisme  kerja  flavonoid pada daun sirsak dengan menghambat enzim  xanthin  oxidase  yang  dapat merubah  hipoxanthin  menjadi  asam urat  (Vinekswaran  &  Chan,  2005) .
Sebagai pembanding digunakan allopurinol karena allopurinol mempunyai  mekanisme  kerja  yang sama  dan  sudah  terbukti  dapat menurunkan  kadar  asam  urat  dalam darah  (Wilmana,  2001;  Sari  dkk., 2017).
Gambar 2. Grafik hasil penurunan kadar asam urat pada mencit: (K1) Kontrol Positif; (K2) Kontrol Negatif; (K3) Ekstrak Konsentrasi 100 mg/kg BB; (K4) Ekstrak Konsentrasi 200 mg/kg BB; (K5) Ekstrak Konsentrasi 400 mg/kg BB

## KESIMPULAN
Aktivitas antihiperurisemia
menunjukkan  ekstrak  etanol  daun sirsak dosis 100, 200 dan 400 mg/kg BB  memiliki  efek  penurunan  kadar yang signifikan secara berurutan yaitu 2,03±0,635; 2,07±0,379; 2,23±0,404. Korelasi hasil dari pengukuran
-1.7 2.63 2.03 2.07 2.23 -2 -1.5 -1 -0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 K1 K2 E1 E2 E3 KA DA R A SA M URA T
flavonoid dan hewan uji dari ekstrak etanol  daun  sirsak  bahwa  100  mg ekstrak  terkandung  23,1  mg  gram ekivelen kuersetin dan mampu menurunkan kadar asam urat sebanyak 2,03 mg/dL pada hewan uji dosis 100mg/kgBB.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Peneliti Mengucapkan Terimakasih Kepada Institusi Akademi  Farmasi  ISFI  Banjarmasin atas  Dana  Hibah  Penelitian  Dosen Internal Tahun 2017.

## REFERENSI
Azizah Dyah Nur, Endang Kumolowati, Fahrauk Faramayuda,  2014,  Penetapan Kadar Flavonoid Metode AlCl3 Pada  Ekstrak  Metanol  Kulit Buah Kakao ( Theobroma
Cacao L.),  Kartika  Jurnal
Ilmiah Farmasi, 2 (2), 45-49.
Febrianti, Dwi Rizki, Naila Khairina, Praptri  Nur  Alisa,  2018.  Uji Aktivitas Anti Mikroorganisme Ekstrak Jeringau ( Acorus
Calamus L.)  Terhadap  Jamur Candida  Albicans Dan  Bakteri Staphylococcus  Aureus, Jurnal Insan  Farmasi  Indonesia,  1(1), 96-103.
Gajalakshmi  S,  Vijayalakshmi  S, Rajeswari Dv. 2012. Phytochemical And Pharmacologica Lproperties Of Annona  Muricata :  A  Review. International Journal Of Pharmacy  And  Pharmaceutical Sciences. Gandjar,  I.G.,  Rohman,  A,2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta:  Pustaka  Pelajar. Hal. 419, 425. Gavamukulya Y, Elella Fa, Wamunyokoli F, 2014. Phtochemical  Screening, Anti- Oxidant  Activity  And  In  Vitro Anticancer Potential Of Ethanolic  And  Water  Leaves Extracts  Of  Annona  Muricata ( Graviola ).  Asian  Pac  J  Trop
Med.
Jannah  R.N.  2010.  Uji  Efektifitas Ekstrak  Daun  Sirsak  ( Annona
Muricata  L .)  Sebagai  Pestisida
Nabati  Terhadap  Pengendalian
Hama Tanaman Sawi ( Brassica Juncea L.).  Skripsi.  Program Studi Biologi. Fakultas Keguruan Dan Ilmu Pendidikan. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Katzung,  B.G.,  2010.  Farmakologi Dasar Dan Klinik (Terjemahan),  Ed.10,  Penerbit
Buku Kedokteran Egc, Jakarta.
Laniyati, A., 2003. Pengaruh Pemberian  Jus  Buah  Sirsak ( Annona Muricata L) Terhadap Kadar Asam Urat Mencit Jantan Hiperurisemia, Jurnal Perkembangan  Terkini  Sains Farmasi  Dan  Klinis  Stifarm,
12(2):223.
Lidinilla,  N.G.,  2014.  ‘Uji  Aktivitas Ekstrak  Etanol  70%  Daun Binahong ( Anredera Cordifolia (Ten) Steenis) Terhadap Penurunan  Kadar  Asam  Urat
Dalam  Darah  Tikus  Putih Jantan Yang Diinduksi Dengan
Kafeina’,  Skripsi,  Universitas
Syarif Hidayatullah, Jakarta.
Musiam,  Siska,  Riza  Alfian,  2017, Validasi Metode Spektrofotometri Uv Pada Analisis Penetapan Kadar Asam Mefenamat Dalam Sediaan  Tablet  Generik,  Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 2(1), 31-43. Sari,  Ratih  Pratiwi,  Novia  Ariani, Dwi Rizki Febrianti,2017. Efek Ekstrak  Etanol  Semut  Jepang ( Tenebrio Sp) Terhadap Penurunan  Kadar  Asam  Urat Darah  Tikus  Putih  Jantan, Jurnal  Ilmiah  Ibnu  Sina,  2(2) 197-203 Vinekswaran & Chan., 2005. Phytocemical  Screening  And Antibacterial Activity Of Ethanol  Extract  Of  Soursop Leaf,  International  Journal  Of Pharmtech Research, 2(2):1596-1573. Wilmana,  P.F.,  2001.  Analgesik- Antipiretik,Analgesik Anti- Inflamasi  Non  Steroid  Dan Obat  Pirai,  Farmakologi  Dan Terapi,  Edisi  Ke  4,  Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta.