Pengaruh Penambahan Nitrogen pada Pupuk Cair dan Musim Terhadap Kandungan Bahan Aktif Epigalokatekin Galat (EGCG) Pucuk Teh (Camellia sinensis L.)

## Zakarias Frans Mores Hukom
Program Studi Agroteknologi, Jurusan Budidaya Pertanian, Fakultas Pertanian Universitas Pattimura Jl. Ir. M. Putuhena, Kampus Poka, Ambon 97233
Email: zakariahukom@gmail.com

## ABSTRAK
Epigalokatekin  Galat  (EGCG)  adalah  senyawa  bioaktif  turunan  katekin  pucuk  teh  yang  memiliki  sifat  antioksidan sangat  tinggi.  EGCG  banyak  digunakan  sebagai  bahan  baku  terapi  penyembuhan  berbagai  penyakit  degenerative. Kandungan  EGCG  pada  pucuk  teh  sangat  ditentukan  oleh  faktor  iklim  dan  manajemen  teknik  budidaya  terutama pasokan hara  nitrogen sebagai elemen  kunci pada tahap awal biosintesis prekusor katekin. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan pengaruh penambahan tingkat N pada pupuk cair terhadap kandungan bahan aktif EGCG pucuk teh pada musim hujan dan kemarau. Rancangan percobaan yang digunakan yaitu acak kelompok lengkap yang terdiri dari  5  tingkat  pemupukan  di  musim  hujan  dan  kemarau. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  aplikasi  pupuk  cair tanpa penambahan N di musim kemarau memberikan pengaruh signifikan terhadap kandungan EGCG pucuk dan lebih tinggi 12,53 %. Kandungan EGCG lebih tinggi 97,45 % sampai  98,16 % dari kandungan EGCG pada musim hujan dan 63,73 % lebih tinggi dari tanaman kontrol pada musim kemarau.
Kata Kunci: EGCG, Musim,Penambahan N, Pucuk Teh, Pupuk cair.

## The Effect of Nitrogen Addition in Liquid Fertilizers and Seasons on the Active Content of Epigallocatech in Gallate (EGCG) Tea Shoots (Camellia sinensis L.)

## ABSTRACT
Epigallocatechin  Gallate  (EGCG)  is  a  bioactive  compound  derived  from tea  shoot catechin that  posing very  high antioxidant. EGCG is widely used as raw materials in therapeutic healing of various degenerative diseases. EGCG content  in  tea  shoots  is  largely  determined  by  climatic  factors  and  cultivation  technique  management,  especially nitrogen nutrient supply as a key element in the early stages of catechin precursor biosynthesis. This study aims to determine the effect of adding N levels in liquid and seasonal fertilizers on the active content of EGCG tea shoots. The  experimental  design  used  was  a  complete  randomized  consisting  of  5  levels  of  fertilization  in  rainy  and  dry seasons. The results showed that the application of liquid fertilizer without the addition of N in the dry season has a significant effect on the EGCG content of tea shoots and 12,35% higher than the rainy season. The EGCG content in the dry season is 97.45% to 98.16% higher than the rainy season, and 63.73% is higher than the control plants in the dry season.
Keywords: EGCG, Season, N addition, Tea shoot, Liquid fertilizer.

## PENDAHULUAN
Teh  (Camellia  sinensis (L)  O.  Kuntze) adalah tanaman terpopuler  di dunia  sebagai penghasil  bahan  baku  pembuat minuman, industri  pengolahan  pangan funsional dan
industri farmasi.      Kandungan bahan aktif pucuk teh sangat bermanfaat untuk pemulihan kesehatan  badan  dan  tidak  memberikan dampak negatif [1] .
Pucuk  Teh  Indonesia dikenal  karena memiliki  kandungan  katekin  (antioksidan
Hukom Z.F.M, 2020. Pengaruh Penambahan Nitrogen ...
alami) tertinggi  di dunia [2] . Katekin  adalah salah satu jenis senyawa fitokimia turunan dari poliphenol yang memiliki khasiat antioksidan yang tinggi. Faktor yang mempengaruhi kadar katekin  adalah  jenis kultivar,  ketinggian tempat,  Iklim,  tingkat  kesuburan  tanah,  umur daun dan  jenis  pucuk.    Dipandang  dari  sisi kesehatan,  makin  tinggi kandungan katekin dalam  bahan  baku  pucuk  teh berarti  makin bermanfaat bagi kesehatan. Kandungan katekin pucuk teh berkisar antara 10-30% dari seluruh berat kering daun [3,4] .
Senyawa turunan katekin yang ditemukan  dalam  pucuk  teh  merupakan senyawa kompleks yang terdiri dari epikatekin (EC),  epikatekin  galat  (ECG),  epigalokatekin (EGC),  epigalokatekin  galat  (EGCG)  dan galokatekin  (GC) (Gambar  1). Komponen
yang  mendominasi  dan  mempunyai  sifat akivitas  biologis  sebagai  antioksidan  yang paling  tinggi  adalah ECGC [2] . Kandungan ECGC dan ECG yang tinggi dalam pucuk teh menyebabkan  pucuk teh dijadikan  komoditi pertanian komersial penting [5] . Beberapa hasil penelitian  terdahulu  telah  melaporkan  bahwa EGCG sebagai indikator utama yang menentukan kualitas pucuk teh.   Produksi dan akumulasi  metabolit  tersebut  dalam  pucuk tanaman  teh  merupakan  komponen  kualitas teh yang paling penting manfaatnya [3] . Hasil penelitian di perkebunan teh plasma menunjukkan bahwa klon TRI 2025 memiliki kandungan EGCG yang lebih tinggi dari enam klon unggul yang diuji pada ketinggian 889 - 1346  meter dari permukaan laut pada musim hujan dan kemarau [6,7] .
Gambar 1. Struktur Derivat Senyawa Katekin dalam pucuk teh [3] .
Untuk mendapatkan  pucuk  teh  dengan kandungan EGCG  yang maksimal diperlukan teknik pemupukan seimbang  pada tingkat inisiasi  dan  regenerasi  mata  tunas  setelah
pemetikan pucuk [8] .    Nitrogen  adalah  salah satu  hara  makro  primer  yang  berpengaruh terhadap peningkatan hasil dan kualitas pucuk. Hal  ini  karena  nitrogen  merupakan  bahan
dasar  pembentuk  senyawa  asam  amino  yang berfungsi sebagai prekursor utama pada tahap awal biosintesis  katekin [3,9,10,11,12] . Aplikasi konsentrasi pupuk nitrogen cair sebesar 3.000 ppm per m -2 melalui metode irigasi automatic drip vertigation system di bawah perdu teh di perkebunan teh Tencha Jepang meningkatkan hasil dan  kandungan asam  amino  jaringan daun  masing-masing sebesar  160,00% dan 17,33% terhadap pemupukan N konvensional [10] . Aplikasi konsentrasi nitrogen 1,50 mmol L -1 dalam    nutrisi  lengkap  hidroponik menghasilkan  kandungan  ECGC pucuk  teh yang tertinggi (83,54 mg g ˉ ¹ berat kering) [3] . Dampak  pergeseran  iklim  saat  ini  telah berpengaruh terhadap penurunan produksi dan kualitas  pucuk  teh  sebesar  20-30  %  dari kondisi  normal [13] .    Penelitian  terdahulu melaporkan bahwa akumulasi kadar metabolit sekunder  pucuk  teh sangat  dipengaruhi  oleh faktor  iklim [14,15] . Musim  hujan  dengan intensitas curah hujan yang tinggi berpengaruh terhadap  penurunan  kandungan  senyawa metabolit  sekunder  katekin  dan  metylxantin pucuk  teh  mencapai  50  % dibandingkan dengan musim kemarau [16] .
Proporsi  akumulasi  senyawa katekin terutama  EGCG dalam  pucuk  teh merupakan salah satu indikator penentu kualitas pucuk teh premium. Penerapan teknik  budidaya teh terutama  aplikasi  pupuk  dan  pemberian  air irigasi  dengan  metode yang  tepat  dan berkelanjutan  merupakan  kunci  pengelolaan teh dalam  upaya penyediaan  bahan  baku industri  dengan kandungan senyawa bahan aktif EGCG yang  tinggi. Hipotesis yang dikemukakan  pada penelitian  ini  adalah aplikasi  pupuk  cair  tanpa  penambahan  N  di musim  kemarau  berpengaruh  signifikan  dan lebih tinggi terhadap kandungan EGCG pucuk teh.

## BAHAN DAN METODE
Bahan yang digunakan adalah pucuk teh segar  klon  TRI  2025 sesuai  perlakuan  di perkebunan  teh  rakyat  Samigaluh,  Kulon
Progo,  DIY dari  bulan  Januari 2017  samapi Januari  2018.    Penelitian  menggunakan rancangan  percobaan  antar  musim  5  x  2  x  3 acak kelompok lengkap yang terdiri dari faktor penambahan Nitrogen pada pupuk  cair dan musim.    Perlakuan pemupukan terdiri  dari 5 tingkat  yaitu kontrol atau tanpa pemberian pupuk cair dan tanpa penambahan konsentrasi N  dalam pupuk  cair tetapi  menggunakan rekomendasi pemupukan konvensional sebanyak 60 g urea, 10 g SP-36, dan 20 g KCl perdu ˉ ¹ tahun ˉ ¹, pemberian  pupuk  cair  tanpa penambahan  N  (0  g  N dalam  pupuk  cair); penambahan 2,33 g N; 7,00 g N dan 11,67 g N masing-masing pada  pupuk  cair. Formula pupuk  cair terdiri  dari campuran pupuk organik cair  dan larutan  mineral  hidroponik berkadar hara rendah yang dibuat berdasarkan perhitungan formula Resh [17] . Komposisi hara pupuk organik cair terdiri dari : 21,6 ppm N; 1,31  ppm  P;  7,47  ppm  K;  0,12  ppm  Ca;  0,3 ppm  Mg;  0,3  ppm  Fe;  0,3  ppm  Cu;  0,3  ppm Mn;  0,3  ppm  Zn  dan  1,6  %  asam  amino. Komposisi  larutan  mineral  hidroponik  terdiri dari : 27 ppm KH 2 PO 4 ; 38,81 ppm KNO 3 ; 100 ppm  Ca(NO 3 ) 2 ;  49,97  ppm  MgSO 4 .7H 2 O; 66,66  ppm  S;  2  ppm  Fe  EDTA; 0,5  ppm MnSO 4 .H 2 O;  0,05  ppm  CuSO 4 ;  0,1  ppm ZnSO 4 ;  0,5  ppm  H 3 BO 3 dan  0,02  ppm NaMoO. Aplikasi  penambahan N  dalam pupuk  cair dilakukan  dengan  interval  10  hari sekali setelah pemetikan pucuk secara kontinu selama satu tahun.
Untuk  keperluan  analisis  kandungan EGCG,    pucuk  dari  setiap  perlakuan dipetik pada  bulan  Maret dasarian  kedua  untuk mewakili  musim  hujan  dengan  jumlah curah hujan  dasarian  sebesar  125 mm  dan    curah hujan  bulanan  sebesar  647 mm  sedangkan untuk musim  kemarau  pucuk dipetik  pada bulan  Oktober dasarian  pertama dengan jumlah  curah  hujan  dasarian  sebesar  46  mm dan  jumlah  curah  hujan  bulanan  sebesar  90 mm. Total konsentrasi N dan volume aplikasi dari setiap  perlakuan  penambahan  N  pada pupuk cair tertera pada Tabel 1.
Hukom Z.F.M, 2020. Pengaruh Penambahan Nitrogen ...

## Tabel 1. Dosis Pupuk N-Urea dalam Pupuk Cair dan Volume Larutan Aplikasi dari Setiap Perlakuan.
Keterangan : LA = larutan aplikasi dalam 15 liter air, LS = larutan stok pupuk cair,  luas area  sampel  = 7,5 m²,  jarak tanam 0,6 x 1,2 m dan diulang 3 kali, * = kriteria kisaran konsentrasi nutrisi untuk tanaman hidroponik [18,19, 20], ⁺ = cukup, ⁺⁺ = di atas rata-rata.

## Penetapan Kadar EGCG
Analisis EGCG dilakukan menggunakan metode  kromatografi Lapis  tipis  (KLT). Pengukuran  dilakukan  pada  daun pucuk teh premuim (p+1, p+2, p+3, b+1, b+2, b+3) dari setiap perlakuan dan diambil secara acak pada bidang  petik. Tahapan  penetapan kadar EGCG  sebagai  berikut  : 50 mg  sampel  dari setiap perlakuan dilarutkan dengan 5 ml etanol dan divortex selama 2 menit, sonifikasi selama 30 menit dan maserasi selama 24 jam. Filtrat dievaporasikan kemudian diencerkan dengan 1 ml  etahanol,  spoting  sampel  pada  plate silikagel  F 254 sebanyak  10  µl,  persiapan pembanding menggunakan standar epigalocatechine  gallate (E. Mrk), bahan  uji dimasukan ke dalam chamber jenuh fase gerak dengan  rasio Chloroform-Asam  Asetat-Asam Formiat-Iso  Propanol  (16-2-2-8),  eluasi  dan densito  spot  EGCG  pada  panjang  gelombang 280  nm dengan  winCATS  Chromatography manager CAMAG. Kadar  EGCG  dihitung berdasarkan kurva  regresi  standar  dengan menggunakan rumus :
Kadar EGCG (%) = (
) 100
Data  hasil  analisis  kadar  bahan  aktif EGCG  dari  setiap  perlakuan  konsentrasi  N
dalam  pupuk  cair pada  musim  hujan  dan musim  kemarau diuji dengan  analisis  varians (ANOVA) dengan  program  analisis  statistik SAS  University. Apabila  pada  sidik  ragam menunjukan  pengaruh  nyata dari  perlakuan, maka  dilanjutkan  dengan  uji  Beda  Nyata Tukey  (BNT)  pada  taraf  5  %. Pola  respon variabel  pengamatan  kandungan  bahan  aktif EGCG  pucuk  teh  dari  setiap  perlakuan ditentukan dengan analisis regresi pada tingkat 5  %  dengan  menggunakan  program  exel  for Windows 2010.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Bahan  aktif  adalah  senyawa  bioaktif alamiah  turunan  polyphenol  yang  dihasilkan tanaman teh untuk melindungi dan mempertahankan kehidupannya terhadap berbagai  faktor  eksternal  yang  merugikan. Oleh  karena  itu  kandungan  EGCG  dalam pucuk  teh  merupakan komponen penentu kualitas pucuk teh sebagai bahan baku industri minuman, pangan  funsional,  farmasi,  pupuk organik,  pestisida  dan  herbisida  nabati [21] . Data  kadar EGCG pada  pucuk teh setelah penambahan berbagai tingkat N dalam pupuk cair pada musim hujan dan kemarau disajikan pada Tabael 2.
Penambahan N pada 15 L pupuk cair 3000 ppm Total [N] dalam pupuk cair (ppm)* Dosis N-urea dalam 3000 ppm LS Jumlah urea dan volume LA tanaman ⁻ ¹ Total
urea dan volume
LS tahun ⁻ ¹ Dosis N-urea pada tanaman sampel tahun ⁻ ¹ Dosis N-urea ha ⁻ ¹ tahun ⁻ ¹ Kontrol - - 60 g 2,88 kg 1.325 g 383,3 kg 0 g N 105,00 ⁺ 1,24 g 0,35 L 1,8 Liter 61,60 g 17,8 kg 2,33 g N 260,00 ⁺ 3,57 g 0,35 L 1,8 Liter 177,36 g 51,32 kg 7,00 g N 571,33 ⁺⁺ 8,24 g 0,35 L 1,8 Liter 409,36 g 118,44 kg 11,67 g N 882,67 ⁺⁺ 12,91 g 0,35 L 1,8 Liter 641,37 g 185,57 kg
Tabel 2. Kadar EGCG Pucuk Teh pada Penambahan Berbagai Tingkat N dalam Pupuk Cair pada Musim Hujan dan Kemarau (% mg/g Berat kering).
Penambahan N dalam 3000 ppm pupuk cair (g) Musim Hujan Musim Kemarau Kandungan EGCG (% b/b) Perbedaan terhadap penambahan pupuk cair di musim kemarau (%) Kandungan EGCG (% b/b) Perbedaan terhadap penambahan pupuk cair (%) Kontrol 0 (hanya pupuk cair) 2,33 7,00 11,67 0,23 d 0,32 d 0,29 d 0,27 d 0,25 d 98,16 97,45 97,69 97,85 98,00 1,06 d 12,53 a 11,87 ab 11,06 ab 9,70 c 91,54 - 51,35 53,12 55,15 Rerata 0,27 9,24 +
Keterangan : BNT interaksi α (0,05) = 1,09.
+ = interaksi. Angka yang diikuti dengan huruf yang sama menunjukkan perbedaan yang tidak signifikan sedangkan angka yang diikuti dengan huruf yang berbeda menunjukan adanya perbedaan yang signifikan [22] .
Pada Tabel  2 dapat  diketahui  bahwa Kadar  EGCG  pucuk  teh  musim  hujan  tidak dipengaruhi  oleh pemberian  pupuk  cair  dan atau  tanpa  penambahan  N  tetapi  terpangaruh pada  musim  kemarau.  Pemberian  pupuk  cair tanpa  penambahan  N  memberikan  pengaruh tertinggi  terhadap  peningkatan  kadar  EGCG pucuk  teh.    Kadar  EGCG  pucuk  teh  akibat pemberian  pupuk  cair  tanpa penambahan  N tersebut  memberikan  pengaruh  lebih  tinggi secara  berturut-turut    91,54 %  dan  98,16  % dari tanaman kontrol pada musim kemarau dan musim  hujan  atau  97,45  %  lebih  tinggi  dari kadar EGCG tanaman yang diberi pupuk cair tanpa penambahan N di musim hujan.  Hal ini disebabkan  karena  kandungan  hara  N  dalam pupuk cair berada pada konsentrasi cukup dan seimbang  untuk  kebutuhan  tanaman  (105,00 ppm)  (Tabel  1).    Apablia  pada  pupuk  cair ditambahkan 2,33 g N maka total konsentrasi N  pada  larutan  aplikasi  meningkat  menjadi 260,00 ppm (Tabel 1) sehingga konsentrasi N berada  pada  kisaran  konsentrasi  rata-rata kebutuhan  tanaman [18,19,20] .  Besarnya  total konsentrasi  N  pada  pupuk  cair  tanpa penambahan  N  atau  penambahan 2,33  g  N tersebut  sangat  penting  untuk  sintesis  asam
amino  dan  enzim  PAL  sebagai  prekursor utama  dalam  jalur  biosintesis  metabolit sekunder  EGCG [3,11] (Gambar  2). Tingginya kadar  EGCG  di  musim  kemarau  disebabkan karena  lebih  banyak  cahaya  matahari  yang diserap oleh phytochrom daun untuk mengsintesis kadar klorofil b [22] . Phytochrom dapat  mengontrol  perubahan  struktur  protein klorofil  pada  cahaya  merah  dengan  panjang gelombang  730  nm  untuk  menghasilkan isomerisasi  ikatan  rangkap  yang  dapat diperluas  sampai  batas  tertentu  pada  panjang gelombang 660-700 nm [23] .  Faktor suhu dan intensitas cahaya matahari  tidak  berpengaruh langsung  terhadap    kapasitas  biosintesis katekin,  tetapi  dikendalikan  oleh  kandungan klorofil  daun [24].  Hal  ini  didukung  dengan hasil  analisis  korelasi  yang  menunjukkan bahwa terdapatnya hubungan yang kuat antara kadar  EGCG  pucuk  teh  dengan  sekapan cahaya  (r  =  0,69*),  kadar  klorofil-b  (r  = 0,85**), kandungan N total tanah (r = -0,70*), dan kandungan N daun (0,63*) [22] .
Penambahan  N  yang  tinggi  (11,67 g  N) pada  pupuk  cair  di    musim  kemarau berpengaruh terhadap penurunan kadar EGCG pucuk teh (Tabel 2 dan Gambar 3). Kondisi ini
Hukom Z.F.M, 2020. Pengaruh Penambahan Nitrogen ...
disebabkan  karena  kandungan  total  konsen- trasi ion N dalam formula tersebut berada pada kisaran konsentrasi di atas rata-rata kebutuhan tanaman  (882,67  ppm)  (Tabel  1).  Besarnya konsentrasi  tersebut  cenderung  berpengaruh terhadap  penurunan  kemampuan  penyerapan hara  oleh  akar  sehingga  terjadi  penurunan sintesis enzim-enzim yang berperan langsung pada  jalur  biosintesis  metabolit  sekunder EGCG.
Kadar  EGCG  pucuk  teh  musim  hujan selalu lebih rendah dari musim kemarau.   Hal ini  disebabkan    karena  pada  musim  hujan jumlah  curah  hujan  tinggi  dengan  interval waktu  yang  panjang,  mengakibatkan  banyak hara N yang terlindi (leaching) keluar dari area perakaran tanaman melalui aliran air perkolasi dan    aliran  air  permukaan  (run  off)  sehingga terjadi cekaman N  yang berpengaruh terhadap penurunan biosintesis klorofil b [22] .  Pengaruh tersebut  disebabkan  karena kapasitas  sintesis ANS  (aktivitas anthocyanidin  synthase)  dan LAR  (leucocyanidin  reduktase)  dalam  pucuk teh.  ANS adalah 2-oxoglutarate oxygenase- Fe bebas yang menggunakan molekul oksigen sebagai co-substrate [25] sedangkan  LAR merupakan  suatu  enzim    karakterisasi  yang mempercepat konversi leucocyanidin menjadi (+) - catechin [26] .    Aktivitas  LAR  biasanya
menurun  selama  perkembangan  jaringan pucuk dan daun muda [27] .  Penurunan aktivitas LAR  akan  meningkatkan  aktivitas  ANS  dan bepengaruh  terhadap  akumulasi  klorofil  a yang lebih banyak dari klorofil b [22] .  Proporsi akumulasi  klorofil  a  yang  lebih  tinggi  dari klorofil  b  dalam  pucuk  teh  berpengaruh terhadap  akumulasi  epikatekin  (EC)  dan epigalokatekin  (EGC) [24] dibandingkan dengan  EGCG.    Rendahnya  kadar  klorofil b daun  di  musim  hujan berpengaruh  terhadap penurunan  kadar  EGCG  pucuk  teh  sehingga memiliki  ketahanan  yang  rendah  dan  sangat rentan terhadap kerusakan di lapangan akibat stress oksidatif yang disebabkan oleh cekaman abiotik maupun cekaman biotik [22] .  Cekaman N  berpengaruh  langsung  terhadap  penurunan aktivitas  enzim  NR [22] yang  mengakibatkan penurunan  sintesis  kadar  asam  amino L- phenilalanin.  Asam  amino L-phenilalanin adalah prekursor enzim phenilaline ammonia- lyase  (PAL) yang  terlibat  langsung  dalam biosintesis Katekin melalui  jalur  biosintesis shikimic  acid (Gambar  1).      Selain  itu  unsur nitrogen  merupakan  salah  satu  komponen penting  pembentuk senyawa  L-theanine sebagai  prekursor  biosintesis  katekin  melalui jalur TCA (Tricarboxylic acid).
Gambar  2.  Pengaruh  Nitrogen  terhadap  sistesis  enzim  Nitrate  Reductase (NR)  and Phenylalanine ammonia-lyse (PAL) sebagai enzim kunci pada proses awal biosintesis katekin melalui jalur Shikimic Acid [11].
AGROLOGIA:  Volume 9, Nomor 2, Oktober 2020, halaman 53-61 p-ISSN 2301-7287; e-ISSN 2580-9636
Gambar 3. Grafik kandungan EGCG pucuk teh pada penambahan berbagai tingkat N pada pupuk cair pada musim hujan dan kemarau.

## KESIMPULAN
Hasil penelitian ini menyimpulkan bahwa pemberian pupuk cair tanpa penambahan N di musim kemarau berpengaruh terhadap peningkatan kandungan  bahan  aktif  EGCG pucuk  teh tertinggi  yaitu 12,53  %  (b/b). Penambahan  N  pada  pupuk  cair  cenderung berpotensi  terhadap  penurunan  kandungan EGCG pucuk teh. Semakin tinggi penambahan N  pada  pupuk  cair  (11,67  g  N)  semakin menurunkan biosentesis EGCG pucuk teh.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Towaha, J. 2013.  Kandungan Senyawa Kimia  pada  Daun  Teh  (Camellia sinensis).    Warta  Penelitian  dan Pengembangan Tanaman Industri, Balitri. 19 (3): 12-16.
[2] Anjarsari,  I.R.D.  2016.  Katekin  Teh Indonesia  :  Prospek  dan  Manfaatnya.
Jurnal Kultivasi 15 (2):
[3] Ruan,
J. 2005. Quality-Related
Constituents  in  Tea  (Camellia  sinensis
(L.) O. Kuntze) as Affected by The Form and Concentration of nitrogen. Dissertation zur Erlangung des
Doktorgrades der Agrar- und
Ernährungswissenschaftlichen  Fakultät der  Christian-Albrechts-Universität  zu Kiel and the supply of chloride. 96 p.
[4] Sanyal,  S.  2011.  Tea  Manufacturing
Manual.  Assam  India:  Tea  Research Association Toklai Experimental Station. Page: 207.
[5] Liu M., H-lu. Tian, J-Hua. Wu, R-Rong. Cang, R-Xian. Wang, X-Hua. Qi, Q. Xu and  X-Hao.  Chen. 2015.  Relationship
Between  Gene  Expression  and  The Accumulation  of  Catechin  During Spring  and  Autumn  in  Tea  Plants (Camellia sinensis L.). Citation: Horticulture Research 2, 15011;
doi:10.1038/hortres. Nanjing Agricultural University.
[6] Mitrowihardjo, S., W. Mangoendidjoya, H. Hartiko dan P, Yodono. 2009.  Hasil Pucuk  dan  Kadungan  Katekin  Enam Klon  Teh  (Camellia  sinensis  (L.),  O.
Hukom Z.F.M, 2020. Pengaruh Penambahan Nitrogen ...
Kuntze) di Ketinggian  Berbeda.  Jurnal Penelitian Teh dan Kina 12 (1-2): 14-20.
[7] Mitrowihardjo, S., Woerjono, M. Hartiko, H dan P.  Yudono. 2012.
Kandungan Katekin dan Kualitas (Warna Air Seduhan, Flavor, Kenampakan) Enam Klon Teh
(Camellia  sinensis  (L.)  O.  Kuntze)  Di Ketinggian  yang  Berbeda.  Agritech, Vol. 32, No. 2, Mei 2012.
[8] Mokaya,  B.N. 2016.  Effect  of  varying rates of organic and inorganic fertilizers on  growth,  yield  and  nutrient  use efficiency  of  clonal  tea  (Camellia sinensis [L.]  O.  Kuntze).  M.Sc.  thesis, University of Nairobi, Kenya: 78.
[9] Wang,  Y.  G.,  Q.K.  Cheng,  Y.C.  Ruan and W.H. Liu, 1988.   Discussion on The Chemical  Standards  on  Quality  of Chinese Roasted Green Tea. J. Tea Sci. 8(2): 13-20.
[10] Tsuji M. dan T. Kinoshita 2001.  Effect of Liquid  Fertilizer  Application  Under The  Canopy  of  Tencha  Tea  Garden. Aichi-Ken Agricultural Research Center, Toyohashi Research and Extension  Station,  1148  Takayama Imure-cho, Toyohashi-shi, Aich~, 440- 0833, Japan.
http://www.ocha festival.jp/archive/english/conference/I
COS2001/files/PROC/II-198.pdf.
[11] Li, S. 2005. The Effect of Plant Mineral Nutrition on Yield and Quality of Green Tea  (Camellia  sinensis  L.)  Under  Field Conditions.  Dissertation  zur  Erlangung des  Doktorgrades  der  Agrar- und Ernährungswissenschaftlichen  Fakultät der  Christian-Albrechts-Universität  zu Kiel. 173 p.
[12] Hamid  F.S., Ahmad T, Waheed A, Ahmad N and S. Aslam, 2014.  Effect of Different  Levels  of  Nitrogen  on  the Chemical  Composition  of  Tea  (C. sinensis L.) grown at higher altitude.  J. Mater. Environ. Sci. 5 (1) : 73-80.
[13] Dalimoenthe,  S.L.  dan  Y.  Rachmiati. 2010.  Pengaruh Pemupukan K dan ZPT pada  Tanaman  Teh  untuk  Mengurangi
Resiko Musim Kemarau. Jurnal Penelitian Teh dan Kina 13 (1-2):14-21.
[14] Kumar, R., Singh M and B. Bera. 2015. Influence  of  Organic,  Inorganic  and Combined  Based  Fertilizers  on  Bush Physiology  of  Darjeeling  tea  (Camellia sinensis L.). International  Journal  of Basic  and  Applied  Biology,  Volume 2(4): 265-271.
[15] Yang L., Wen K.S, Ruan X, Zhao Y.X, Wei F, and Q. Wang. 2018. Response of Plant Secondary Metabolites to Environmental  Factors.  Molecules  23, 762; doi:10.3390/molecules23040762.
[16] Ahmed S, Stepp J.R, Orians C, Griffin T, Matyas C,  Robbat A,  Cash S,  Xue D, Long C, Unachukwu U, Buckley  S, Small D, and E. Kennelly. 2014. Effects of  Extreme  Climate  Events  on  Tea (Camellia sinensis L.) Functional Quality  Validate  Indigenous  Farmer Knowledge  and  Sensory  Preferences  in Tropical  China.  Journal  Plos  One  vol 7(10):e109126.
[17] Resh H.M. 1981.  Hydroponic Food Production. Woodbrigde Press Publishing Company, Santha Barbara, California. 335 p.
[18] Douglas J.S.  1985.  Edvanced  Guide  to Hydroponics  (soilless  cultivation)  . Pelham Books LTD. London. p.368.
[19] Sundstrom A.C.
1982. Simple
Hidroponics for  Australian  Home. Gardeners  Thomas  Nelson  Australia. Melbourne. 134 p.
[20] Hukom Z.F.M.  2000.    Pengaruh  Kadar Larutan Landeto dan Gandasil Terhadap
Pertumbuhan  dan  Hasil  Buncis  Tegak (Phaseolus vulgaris L.) yang Dibudidayakan Secara Hidroponik. Tesis  Fakultas  Pertanian  UGM.  Tidak dipublikasikan.
[21] Taulo J.L.  2017.  A  Multi-Objective Optimization  Tool  for  The  Malawian Tea Industry with Sustainability Conciderations. Disseratatiion Presented for The Degree of Doctor of Philosophy in  The  Faculty of  Engineering  of
Stellenbosch University, https://scholar.sun.ac.za. p.202. [22] Hukom Z.F.M. 2020. Pengaruh Penambahan Nitrogen pada Pupuk Cair dan Musim Terhadap Produktivitas dan kadar Epigallocatechine Gallate
(EGCG)  Pucuk  teh.  Disertasi  Program Ilmu  Pertanian.  Program  Pascasarjana Fakultas  Pertanian  Universitas  Gadjah Mada. 168 p.
[23] Goodwin,  T.G. and E.I.  Mercer.  1983. Introduction  to  Plant  Biochemistry Second Edition, Copyright 1983, reprinted  1990.  Pergamon  Press  plc. 645: 4465-479.
[24] Tounekti T, Joubert, E, Hernández I and S.  Munné-Bosch.  2012.  Inproving  the Polyphenol  Content  of  Tea. Critical Reviews  in  Plant  Sciences  Publication details, including instructions for authors and subscription
information:
http://www.tandfonline.com/loi/bpts20. Akses Desember 2018.Towaha, J. 2013.
Kandungan  Senyawa  Kimia  pada  Daun Teh  (Camellia  sinensis).    Warta Penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri  ,  Balitri.  Volume  19  no.3 Desember 2013. p. 12-16.
[25] Cheng L, Xu Y, Grotewold E, Jin Z, Wu F, and C. Fu. 2007. Characterization of anthocyanidin synthase (ANS) gene and anthocyanidin  in  rare  medicinal  plant – Saussureamedusa. Plant Cell TissueOrgan Cult. 89: 63 – 73.
[26] Abrahams S, Tanner G.J, Larkin P.J, and A.R. Ashton.  2002.  Identification  and biochemical  characterization  ofmutants in  the  proanthocyanidin pathway  in Arabidopsis.  Plant  Physiol.  130:  561 – 576.
[27] Skadhauge  B,  Gruber  M.Y,  Thomsen K.K,  and D. Vonwettstein.  1997.
Leucocyanidin  reductase  activity  and accumulation  of  proanthocyanidins  in developin  legume  tissues.  Am.  J.  Bot. 84: 494 – 503.