Jurnal Pharmascience, Vol. 07, No.02, Oktober 2020, hal: 1-11 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Review Article

## Review : Sintesis Turunan Andrografolid pada Gugus Hidroksil C-3 dan C-19
Sri Indrayani*, Sandra Megantara, Febrina Amelia Saputri
Program Studi Sarjana Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran, Jatinangor, Jawa Barat, Indonesia
*Email: sri16005@mail.unpad.ac.id

## ABSTRAK
Andrografolid merupakan senyawa diterpenoid utama dari  tanaman Andrographis paniculata dan  telah  dikenal  memiliki  berbagai  aktivitas  farmakologi.  Andrografolid memiliki  struktur menarik yang terdiri dari  α-alkiliden γ-butirolakton, dua ikatan olefin pada  C-8  and  C-12  dan  tiga  gugus  hidroksil.  Dari  ketiga  gugus  hidroksil  tersebut,  salah satunya adalah gugus hidroksil alilik pada C-14 dan yang lainnya adalah gugus hidroksil sekunder dan primer pada C-3 dan C-19. Gugus hidroksil C-3 dan C-19 merupakan gugus yang  potensial  untuk  dimodifikasi.  Review  ini  menjelaskan  tentang  pentingnya  gugus hidroksil  andrografolid  pada  C-3  dan  C-19  dan  pengaruhnya  terhadap  aktivitas  biologis yang ditimbulkannya. Modifikasi andrografolid pada gugus tersebut dengan menambahkan gugus  hidroksibenzaldehid  dapat  meningkatkan  efek  farmakologis  sebagai  anti-HIV. Esterifikasi  yang  terjadi  pada  C-3  dan  C-19  dapat  meningkatkan  aktivitas  sebagai antitumor. Penambahan ester aromatik baik di C-3 dan C-19 dapat mengurangi aktivitas senyawa  sebagai  antitumor.  Modifikasi  pada  gugus  tersebut  dapat  dilakukan  dengan mekanisme  reaksi  substitusi  nukleofilik  dengan  penambahakn  katalis  dan  pemanasan. Pemanasan  dengan  metode  iradiasi microwave memberikan  hasil  sintesis  dengan  nilai rendemen yang paling tinggi.
Kata Kunci: Andrografolid, Andrographis paniculata , gugus hidroksil

## ABSTRACT
Andrographolide  is  a  diterpenoid  lactone  isolated  from  the  herb  of  Andrographis paniculata  and  known  for  its  multiple  pharmacological  activities.  Andrographolide  has  an interesting architecture consisting of an α-alkylidene γ-butyrolactone moiety, two olefin bond (C-8 and C-12), and three hydroxyls groups. Of the three hydroxyl groups, one is allylic at C- 14, and the others are secondary and primary at C-3 and C-19, respectively. Hydroxyl groups
C-3 and C-19 are the potential groups to be modified. The review describes the importance of the  hydroxyl  groups  of  andrographolide  located  at  C-3  and  C-19  and  its  effect  toward  its biological activity. Modification by adding hydroxyl-benzaldehyde moiety to the hydroxyl groups could increase the activity of the compound as anti-HIV. Esteriﬁcation at C-3 and C-19 could also enhance the activity of the compund as antitumor. The addition of aromatic esters both at C-3 and C-19 could  lose the compound’s activity as antitumor. Modification of the hydroxyl groups of andrographolide located at C-3 and C-19 could be carried out by the mechanism of nucleophilic substitution reactions with the addition of catalysts and heating. Heating by using microwave irradiation method gives the highest synthesis yield.
Keywords: Andrographolide, Andrographis paniculata, hydroxyl groups

## I. PENDAHULUAN
Andrographis  paniculata Ness  dari keluarga Acanthaceae ,  juga  dikenal  sebagai
"sambiloto"  atau  "raja  pahit",  banyak ditemukan dan dibudidayakan di Asia tropis dan  subtropis,  Asia  Tenggara  dan  India dalam  berbagai  penyakit  manusia  (WHO,
2002).  Andrografolid  merupakan  senyawa diterpenoid utama dari tanaman
Andrographis paniculata Nees. yaitu sekitar 4%, 0,8-1,2% dan 0,5-6% masing-masing di herba  kering  serta  batang  dan  ekstrak  daun (Pholphana et al , 2004).
Andrografolid  (C 20 H 30 O 5 )  (Gambar
1)  ditemukan  di  seluruh  tanaman A. paniculata dengan  jumlah  tertinggi  berada pada daun, sedangkan pada biji mengandung jumlah  paling rendah (Sharma et  al ., 1992).
Di dalam daun, kadar senyawa andrografolid sebesar  2,5-4,8%  dari  berat  keringnya (Prapanza dan Marianto, 2003).
Gambar 1. Struktur Molekul Andrografolid
Senyawa ini memiliki banyak
bioaktivitas termasuk anti-inflamasi (Satyanarayana et  al .,  2004;  Wang et  al ., 2004; Xia et al ., 2004; Chandrasekaran et al .,
2010;  Levita et  al .,  2010),  antikanker  dan antitumor (Lee et al ., 2010), hepatoprotektif terhadap  berbagai  induser  (Koul  dan  Kapil, 1994), imunomodulator (Wang et al ., 2010), antioksidan (Lin et al ., 2009; Akowuah et al .,
2008),  antidiabetik  (Zhang et  al .,  2009), antimikroba  (Xu et  al .,  2006)  dan  antivirus (Calabrese et  al .,  2000;  Chen et  al .,  2009).
Andrografolid  juga  mengaktifkan  reseptor
rasa  pahit  manusia  hTAS2R50  (Behrens et al ., 2009).
Andrografolid  larut  dalam  metanol, etanol, piridin, asam asetat, dan aseton, tetapi sedikit larut dalam eter dan air. Titik leburnya adalah 228-230 ° C dan λ maks ultravioletnya dalam  etanol  adalah  223  nm.  Senyawa  ini dapat  diekstraksi  dari  daun Andrographis paniculata Nees . dengan  menggunakan metanol  sebagai  pelarut  menggunakan metode soxhlet standar serta ekstraksi karbon dioksida  superkritis  (Kumoro  dan  Hasan, 2007).
Andrografolid memiliki struktur yang menarik  karena  terdapat  α-alkiliden  γ- butirolakton, dua ikatan olefin pada C-8 dan
C-12 dan tiga gugus hidroksil pada C-3, C-19
dan  C-14  (Nanduri et  al .,  2004).  Gugus hidroksil  andrografolid  pada  posisi  C-3  dan C-19  merupakan  sekunder  dan  primer sedangkan  pada  posisi  C-14  merupakan gugus hidroksil alilik (Uttekar et al ., 2012).
Untuk menentukan pentingnya gugus hidroksil  yang  terletak  di  C-3  dan  C-19 penelitian yang dilakukan oleh Uttekar et al .
(2012),  Poerwono et  al .  (2007)  dan
Megantara et al . (2018) melakukan
modifikasi  ligan  khusus  tersebut  dengan melindungi
farmakofornya dan
menambahkan  hidroksi-benzaldehid  untuk mengisi  ruang  kosong  hidrofobik  di  situs
aktif  reseptor.  Sedangkan  penelitian  yang dilakukan oleh Luo et al . (2015) dan Wei et al .  (2013),  sintesis  turunan  senyawa andrografolid dilakukan dengan penambahan asam aromatik atau asam alifatik.

## II. METODE PENELITIAN
Proses  pencarian  sumber  artikel didapatkan dengan cara pencarian di google dan google  scholar dengan  kata  kunci “ andrographolide  derivatives  at  hydroxyl groups ”, “microwave-assisted  synthesis  of hydroxybenzilidene  andrographolide” ,  dan
“ structure modificafiton of
andrographolide ”. Sumber data primer yang digunakan  ialah  jurnal  yang  diterbitkan selama 15 tahun terakhir.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Andrographis paniculata Nees (Fam.
Acanthaceae ),  umumnya  dikenal  sebagai ‘ king of bitters’ , adalah tanaman herbal yang cukup  terkenal  di  Asia  Tenggara,  India  dan Cina.  Tanaman  yang  memiliki  nama Indonesia  Sambiloto  ini  telah  digunakan untuk pengobatan berbagai macam penyakit seperti  meningitis,  hepatitis  akut,  flu  biasa dan  banyak  kondisi  peradangan  lainnya (Uttekar et al ., 2012).
Sambiloto memiliki komponen
bioaktif utama yaitu andrografolid.
Andrografolid  merupakan  diterpen  lakton
yang  memiliki  beberapa  sifat  farmakologis diantaranya sebagai
antihepatotoksik,
imunostimulan,
antikanker dan
hipoglikemik.
Sintesis turunan senyawa
andrografolid  ini  dapat  dilakukan  dengan metode konvensional seperti yang dilakukan Uttekar et al . (2012), Menon, V dan Bhat, S (2010), Poerwono et al . (2007), dan Luo et al .
(2015)  dan  juga  metode  baru  menggunakan
microwave seperti  yang  dilakukan  oleh Megantara et al . (2018).
Pada penelitian Uttekar et al . (2012) dan  Menon,  V  dan  Bhat,  S  (2010),  telah disintesis  senyawa  turunan  andrografolid dengan menggunakan benzaldehid tersubstitusi  (0.855  mmol)  dan  Amberlyst- 15 ® (10  mg)  di  dalam  1,4-dioksana  (4  ml) yang  telah  direfluks  dibawah  suasana  gas nitrogen selama 5 jam.
Gambar  2. Struktur  (A)  3,19-(3’,4’-metilendioksibenziliden)-andrografolid;  (B)  3,19-(4’- hidroksi-3’-metoksibenziliden)-andrografolid;  (C)  3,19-(4’-hidroksi  benziliden)- andrografolid;  (D)  ,19-(2’,4’-dihidroksi  benziliden)-andrografolid;  (E)  3,19-(3’- nitro benziliden)-andrografolid; dan (F) 3,19-(4’-Klorobenziliden)-andrografolid
Dari  reaksi  tersebut  dihasilkan  enam
senyawa  turunan  3,19-benziliden,  yaitu
senyawa
3,19-(3’,4’-
metilendioksibenziliden)-andrografolid ( Gambar 2A) dengan rendemen sebesar 76%, senyawa 3,19-(4’-Hidroksi-3’-
metoksibenziliden)-andrografolid  (  Gambar 2B) dengan rendemen sebesar 70%, senyawa 3,19-(4’-hidroksibenziliden)-andrografolid  ( Gambar 2C) dengan rendemen sebesar 74%, senyawa  3,19-(2’,4’-dihidroksibenziliden)- andrografolid  (  Gambar  2D)  dengan rendemen  sebesar  79%,  senyawa  3,19-(3’- Nitrobenziliden)-andrografolid ( Gambar 2E) dengan rendemen sebesar 64 %, dan senyawa 3,19-(4’-Klorobenziliden)-andrografolid (
Gambar  2F)  dengan  rendemen  sebesar  56%
(Uttekar, et al , 2012).
Dari keenam senyawa yang dihasilkan tersebut, masing-masing memiliki aktivitas  biologis  sebagai  anti-HIV  dengan nilai IC50 2.75 μM, 6.09 μM, 2.10 μM, 1.09 μM, 0.51 μM, dan 9.94 μM. Dari nilai IC50 masing-masing senyawa, terlihat bahwa nilai IC50 dari senyawa 3,19-(3’-nitrobenziliden)- andrografolid, dengan nilai sebesar 0.51 μM, memiliki  aktivitas  sebagai  anti-HIV  yang lebih  baik  dari  kelima  senyawa  turunan benziliden yang lain. Dilihat dari nilai indeks terapi,  senyawa  3,19-(3’-nitrobenziliden)- andrografolid  memiliki  indeks  terapi  yang lebih  baik  dibandingkan  dengan  kelima senyawa  turunan  benziliden  yang  lain  yaitu sebesar  1460  namun  tidak  lebih  baik  dari andrografolid  yang  memiliki  nilai  indeks terapi  sebesar  2875.  Senyawa  3,19-(3’- nitrobenziliden)-andrografolid memiliki
mekanisme dalam memblokir fusi sel HL2/3 yang  dimediasi  gp-120  dan  sel  TZM-bl (Uttekar et al ., 2012).
Sedangkan  untuk  penelitian  yang dilakukan  oleh  Menon,  V  dan  Bhat,  S. (2010),  dihasilkan  lima  senyawa  turunan andrografolid  diantaranya  yaitu  senyawa 3,19-(3’,4’-metilendioksibenziliden)- andrografolid  (  Gambar  2A)  dengan rendemen  sebesar  76%,  senyawa  3,19-(4’- Hidroksi-3’-metoksibenziliden)- andrografolid ( Gambar  2B)  dengan rendemen  sebesar  70%,  senyawa  3,19-(3’- Nitrobenziliden)-andrografolid ( Gambar 2E) dengan  rendemen  sebesar  64  %,  senyawa 3,19-(4’-Klorobenziliden)-andrografolid (
Gambar  2F)  dengan  rendemen  sebesar  56% dan  senyawa  3,19-(4’-metoksibenziliden)- andrografolid (Gambar 3) dengan rendemen sebesar 50%.
Gambar 3. 3,19-(4’-metoksibenziliden)
andrografolid
Dari kelima senyawa yang dihasilkan tersebut,  masing-masing  memiliki  aktivitas biologis sebagai antitumor terhadap sel A549
(kanker  NSCL)  dengan  nilai  IC50  masing- masing  sebesar  31  µg/mL,  24  µg/mL,  22 µg/mL, 41 µg/mL dan 36 µg/mL. Dari nilai IC50 masing-masing senyawa, terlihat bahwa nilai IC50 dari senyawa 3,19-(3’- nitrobenziliden)-andrografolid,  dengan  nilai sebesar 22 µg/mL, memiliki aktivitas sebagai antitumor  yang  lebih  baik  dari  keempat senyawa turunan benziliden yang lain.
Penelitian  yang  dilakukan  Poerwono
et  al .  (2007),  sintesis  senyawa  turunan andrografolid dilakukan dengan menggunakan benzaldehid (2.83 mmol) dan katalis  yang  digunakan  dalam  reaksi  adalah piridinium p-toluenesulfonat (PPTS) (20 mg) di dalam campuran benzena-dimetil sulfoksida (4.5:0.5).
Dari reaksi tersebut didapat senyawa 3,19-benziliden  andrografolid  dengan  hasil rendemen  sebesar  85%.  Senyawa  3,19- benziliden  andrografolid  memiliki  aktivitas antitumor  terhadap  sel  kanker  payudara (MCF-7)  yang  sama  dengan  andrografolid dengan  nilai  IC50  sebesar  6.25  μM.
Kehadiran gugus alkil atau aril pada posisi C- 3 dan C-19 di andrografolid tidak menunjukkan  perubahan  dalam  aktivitas antitumor. Sedangkan, sintesis yang dilakukan  dengan  menggunakan  reaksi coupling  pada  posisi  C-3  dan  C-19  di andrografolid  dengan  penambahan  alifatik
atau  aldehid  aromatik  memberikan  nilai aktivitas  sitotoksik  yang  lebih  tinggi  yaitu dengan  nilai  IC50  sebesar  3.31  μM (Poerwono et al ., 2007).
Penelitian  oleh  Megantara et  al .
(2018)  menggunakan  pemanasan  dengan metode  iradiasi microwave yang  dilakukan dengan mereaksikan andrografolid (100 mg, 0,28  mmol)  dengan  2-  hidroksibenzaldehid (0.3  gr,  2.83  mmol),  3- hidroksibenzaldehid (0.3 gr, 2.83 mmol) dan 4-
hidroksibenzaldehid  (0.3  gr,  2.83  mmol) serta  penggunaan  katalis  piridinium  p- toluenesulfonat  (PPTS)  (20  mg)  di  dalam campuran benzena-dimetil sulfoksida (4.5:0.5).
Dari reaksi pada Gambar 4
didapatkan  tiga  turunan  hidroksibenziliden andrografolid yaitu 3,19-2- hidroksibenziliden  andrografolid  dengan rendemen sebesar 85%, 3,19-3-
hidroksibenziliden  andrografolid  dengan rendemen sebesar 86% dan 3,19-4-
hidroksibenziliden  andrografolid  dengan rendemen sebesar 86%. Aktivitas penghambatan  terhadap  HIV-1  protease dilakukan  dengan  mengukur  jumlah  produk yang terbentuk dalam reaksi yang dikatalisis oleh  HIV-1  protease,  yang  dinyatakan dengan  nilai  IC50.  Ketiga  senyawa  tersebut memiliki  aktivitas  terhadap  HIV-1  protease
dengan  nilai  IC50  masing-masing  sebesar 10.72 ± 1.39 µM, 9.93 ± 1.24 µM, dan 8.32 ± 1.07  µM.  Dibandingkan  dengan  senyawa induknya yaitu andrografolid yang memiliki nilai  IC50  sebesar  18.14  ±  5.95  µM,  ketiga senyawa  turunan  tersebut  menunjukkan
aktivitas yang lebih baik dan senyawa  3,19- 4- hidroksibenziliden andrografolid memiliki aktivitas  yang  terkuat  dalam  menghambat enzim  HIV-1  protease  (Megantara et  al ., 2018).
Gambar  4. Sintesis  3,19-2-hidroksibenziliden  andrografolid,  3,19-3-  hidroksibenziliden andrografolid  dan  3,19-4-  hidroksibenziliden  andrografolid  (Megantara et  al ., 2018).
Sintesis menggunakan iradiasi
microwave memiliki  berbagai  keuntungan seperti waktu reaksi yang lebih pendek, hasil rendemen  yang  lebih  baik  dan  kemurnian yang lebih tinggi (Nain et al ., 2019), proses yang lebih mudah (Razzaq dan Kappe, 2008) dan  dapat  mengurangi  produk  antara  yang berbahaya  (Megantara et  al .,  2018).  Faktor yang  dapat  menyebabkan  tinggi  rendahnya hasil  rendemen  yaitu  karena  konsentrasi reaktan, suhu, pelarut dan penggunaan katalis dalam  suatu  reaksi.  Energi microwave merupakan alat yang tidak akan mempengaruhi  energi  aktivasi  tetapi  dapat memberikan  momentum  yang  baik  untuk
mempercepat  reaksi  dan  membuat  lebih efisien  dibandingkan  dengan  menggunakan pemanasan  konvensional  (Gangrade et  al ., 2015).
Luo et  al .  (2015)  dan  Wei  et.  Al (2013)  juga  melakukan  modifikasi  pada gugus hidroksil C-3 dan C-19 dengan reaksi esterifikasi.  Didapatkan  hasilnya yaitu berupa senyawa 1, 2, 3, 4, 5, dan 6 dari hasil esterifikasi pada C-3 dan C-19 (Gambar 5).
Senyawa 1 dan 2 mengandung suatu rantai  alifatik.  Senyawa  tersebut  pun  juga diuji  aktivitas  antitumor  secara  in  vitro menggunakan  metode  MTT15  terhadap empat  sel  kanker  yaitu  sel  kanker  kandung
PPTS, Benzene, DMSO 2-OH; 3-OH; 4-OH
Andrografolid 3,19-2- hidroksibenziliden andrografolid 3,19-3- hidroksibenziliden andrografolid 3,19-4- hidroksibenziliden andrografolid +
kemih  NTUB1,  sel  kanker  kandung  kemih cis-platin-resistant NP14, sel kanker payudara  MCF-7  dan  sel  kanker  payudara MDA-MB-231. Dibandingkan dengan senyawa  1,  senyawa  2  memiliki  aktivitas yang  lebih  kuat  yang  secara  signifikan  juga melebihi  andrografolida  dengan  nilai  IC50 sebesar 11.25 µM (terhadap NTUB1), 22.92 µM  (terhadap  MCF-7),  2.64  µM  (terhadap MDA-MB-231)  dan  4.43  µM  (terhadap NP14). Sedangkan untuk senyawa 3, 4, 5, dan 6 mengandung cincin aromatik pada C-3 dan
C-19.  Senyawa  3  memiliki  aktivitas  yang lebih  baik  terhadap  sel  kanker  NP14 dibandingkan  ketiga  senyawa  yang  lain dengan  nilai  IC50  sebesar  18.64  µM.
Senyawa 4 memiliki aktivitas yang lebih baik terhadap  sel  kanker  NTUB1  dibandingkan ketiga senyawa  yang lain dengan nilai  IC50 sebesar  23.82  µM.  Senyawa  6  memiliki aktivitas yang lebih baik terhadap sel kanker MCF-7 dan MDA-MB-231 dibanding ketiga senyawa  yang  lainnya  yaitu  dengan  nilai
IC50  sebesar  25.17  µM  dan  28.55  µM.
Sedangkan untuk senyawa 5, nilai IC50 yang dimiliki tidak lebih baik dari ketiga senyawa tersebut  karena  >100  µM.  Esterifikasi  yang terjadi  pada  C-3  dan  C-19  ternyata  dapat meningkatkan aktivitas. Transformasi gugus hidroksil  pada  C-3  menjadi  gugus  karbonil dapat  mengakibatkan  penurunan  aktivitas
sitotoksik.  Ester  alifatik  yang  menarik elektron  pada  C-3  dan  C-19  dapat  secara signifikan meningkatkan aktivitas.
Sedangkan, penambahan ester aromatik baik di C-3 dan C-19 dapat mengurangi aktivitas senyawa (Luo et al , 2015).
Keterangan: Senyawa
R 1
R 2 1 2 3 H 4 H 5 6 H
Gambar 5. Senyawa 1-6 (Luo et al ., 2015)
Dari penelitian yang telah dilakukan, sintesis dilakukan pada gugus C-3 dan C-19 pada Andrografolid. Andrografolid memiliki struktur menarik yang terdiri dari α-alkiliden γ-butirolakton,  dua  ikatan  olefin  pada  C-8 and C-12 dan tiga gugus hidroksil pada C-3, C-19 dan C-14 (Nanduri et al ., 2004). Gugus hidroksil  andrografolid  pada  posisi  C-3  dan C-19  merupakan  sekunder  dan  primer
(Uttekar et  al .,  2012).  Penggantian  gugus
hidroksil pada C-3 dan C-19 dengan hidroksi benzaldehid  dapat  meningkatkan  aktivitas senyawa (Megantara et al ., 2018).
Sedangkan,  reaksi  esterifikasi  pada  gugus hidroksil  C-3  dan  C-19  andrografolid ternyata  dapat  meningkatkan  aktivitas  dan penambahan ester aromatik baik  di  C-3 dan C-19  dapat  mengurangi  aktivitas  senyawa (Luo et al , 2015).

## IV. KESIMPULAN
Modifikasi  gugus  hidroksil  C-3  dan C-19  pada  andrografolid  dapat  merubah aktivitas  senyawa.  Penggantian  pada  gugus hidroksil C-3 dan C-19 andrografolid dengan gugus hidroksil benzaldehid dan ester alifatik dapat  meningkatkan  aktivitas  senyawa sebagai  anti-HIV  dan  antitumor.  Metode untuk  memodifikasi  andrografolid  pada gugus  hidroksil  C-3  dan  C-19  dapat dilakukan dengan mekanisme reaksi
substitusi  nukleofilik  dengan  penambahan katalis  dan  pemanasan.  Katalis  yang digunakan adalah Amberlyst-15 ® dan piridinium p-toluenesulfonat (PPTS).
Pemanasan dengan metode iradiasi microwave memberikan hasil sintesis dengan nilai kemurnian rendemen yang paling tinggi yaitu  86%  untuk  senyawa  turunan  hidroksi benziliden andrografolid.

## DAFTAR PUSTAKA
Akowuah,  G.A.,  I.  Zharik  dan  A.  Mariam. 2008. Analysis of urinary andrographolides and antioxidant status after oral administration of Andrographis paniculata leaf extract in rats. Food Chem. Toxicol ., 46: 3616- 3620.
Behrens,  M.,  A.  Brockhoff,  C.  Batram,  C. Kuhn, G. Appendino dan W.
Meyerhof.  2009.  The  Human  Bitter Taste  Receptor  Htas2r50  is  Activated by The Two Natural Bitter Terpenoids Andrographolide  and  Amarogentin. J.
Agric. Food Chem ., 57: 9860-9866. Calabrese, C., S.H. Berman, J.G. Babish, X. Ma dan L. Shinto et al . 2000. A phase I trial  of  andrographolide  in  HIV positive patients and normal volunteers. Phytother.  Res .,  14:  333- 338.
Chandrasekaran,  C.V.,  A.  Guptaa  dan  A.
Agarwal. 2010. Effect of an extract of Andrographis  paniculata  leaves  on inflammatory and allergic mediators in vitro . J.  Etnopharmacol .,  129:  203- 207.
Chen,  J.X.,  H.J.  Xue,  W.C.  Ye,  B.H.  Fang dan  Y.H.  Liu et  al .  2009.  Activity  of andrographolide  and  its  derivatives against  influenza  virus in  vivo and in
vitro .  Biol. Pharm.  Bull .,  32:  1385- 1391.
Gangrade,  D.,  Lad,  S.D.  and  Mehta,  A.L.,
2015. Overview on microwave synthesis-Important  tool  for  green Chemistry. International  Journal  of Research in Pharmacy & Science , (2).
Koul,  I.B.  dan  A.  Kapil,  1994.  Effect  of
Diterpenes from
Andrographis
paniculata on  antioxidant  defense system  and  lipid  peroxidation.  Ind. J.
Pharmacol. , 26: 296-300.
Kumoro, A.C. dan M. Hasan.
2007.  Supercritical  carbon  dioxide extraction  of  andrographolide  from Andrographis paniculata : Effect of the solvent  flow  rate,  pressure,  and temperature.  Chin.  J.  Chem.  Eng.,  15: 877-883.
Lee,  Y.C.,  H.H.  Lin,  C.H.  Hsu,  C.J.  Wang, T.A. Chiang dan J.H. Chen. 2010. Inhibitory effects of
andrographolide  on  migration  and invasion in human non-small cell lung cancer A549 cells via down-regulation of PI3K/Akt signaling pathway. Eur. J. Pharmacol ., 632: 23-32.
Levita,  J.,  Nawawi,  A.,  Mutholib,  A.  and Ibrahim,  S.,  2010.  Andrographolide inhibits  COX-2  expression  in  human fibroblast  cells  due  to  its  interaction with arginine and histidine in cyclooxygenase site. J Appl
Sci , 10 (1481), p.4.
Lin,  F.L.,  S.J.  Wu,  S.C.  Lee  dan  L.T.  Ng. 2009.  Antioxidant,  antioedema  and analgesic  activities  of  andrographis paniculata  extracts  and  their  active constituent andrographolide.
Phytother. Res. , 23: 958-964.
Luo, Y., Wang, K., Zhang, M. H., Zhang, D. Y., Wu, Y. C., Wu, X. M., dan Hua, W.
Y. 2015. Synthesis of new ent-labdane diterpene derivatives
from
andrographolide  and  evaluation  on cytotoxic  activities. Bioorganic  &
medicinal  chemistry  letters , 25 (11), 2421-2424.
Megantara  S,  Halimah  H,  Putrianty  A, Tjahjono  DH,  Kartasasmita  RE,  Iwo MI,  Levita  J,  dan  Ibrahim  S.  2018. Microwaveassisted synthesis of hydroxybenzylidene-andrographolides and its inhibitory activity against HIV- 1  protease. J  App  Pharm  Sci, 8(03):
009-013.
Nain,  S.,  Singh,  R  dan  Ravichandran,  S.
2019. Importance  of  Microwave Heating In Organic Synthesis. Advanced Journal of
Chemistry-Section A , 2 (2, pp. 94-183),
94-104.
Nanduri, S., Nyavanandi, V.K., Thunuguntla, S.S.R., Kasu, S., Pallerla, M.K., Ram, P.S.,  Rajagopal,  S.,  Kumar,  R.A., Ramanujam, R., Babu, J.M. dan Vyas, K.,  2004.Synthesis  and  structure– activity relationships of andrographolid analogues as novel cytotoxic agents. Bioorganic & medicinal chemistry  letters , 14 (18),  pp.4711- 4717.
Pholphana, N., Rangkadilok, N., Thongnest,
S., Ruchirawat, S., Ruchirawat, M. dna Satayavivad, J.2004. Determinationmandmvariation of threemactivemditerpenoids in Andrographismpaniculata  (Burm.  f.) Nees. Phytochemical  Analysis:  An International Journal of Plant Chemical and Biochemical Techniques , 15 (6), pp.365-371.
Poerwono,  H.,  Hattori,  Y.,  Kubo,  H.,  dan Higashiyama,  K.  2007.  Structure modification  of  andrographolide  to improve its potency as anticancer. Indonesian Journal of Chemistry , 7 (2), 202-207.
Prapanza, E. & Marianto, L.M. 2003. Khasiat &  Manfaat  Sambiloto:  Raja  Pahit Penakluk Aneka Penyakit . AgroMedia
Razzaq,  T.  and  Kappe,  C.O.,  2008.  On  the energy  efficiency  of  microwave‐ assisted organic reactions. ChemSusChem: Chemistry&Sustainability Energy&Materials , 1 (1‐2),  pp.123- 132.
Satyanarayana, C., Deevi, D.S., Rajagopalan, R.,  Srinivas,  N.  and  Rajagopal,  S., 2004. DRF 3188 a novel semi-synthetic analog  of  andrographolide:  cellular response  to  MCF  7  breast  cancer cells. BMC cancer , 4 (1), p.26.
Tan, Y., Chiow, K.H., Huang, D. and Wong, S.H., 2010. Andrographolide regulates epidermal  growth  factor  receptor  and transferrin  receptor  trafficking  in epidermoid carcinoma (A‐431) cells. British journal of pharmacology , 159 (7), pp.1497-1510. Uttekar,  M.  M.,  Das,  T.,  Pawar,  R.  S., Bhandari, B., Menon, V., Gupta, S. K., dan Bhat, S. V. 2012. Anti-HIV activity of semisynthetic derivatives of andrographolide  1  protease. J  App Pharm Sci , 8(03): 009-013. Wang, W., Wang, J., Dong, S.F., Liu, C.H., Italiani, P., Sun, S.H., Xu, J., Boraschi, D.,  Ma,  S.P.  dan  Qu,  D.,  2010.
Immunomodulatory activity of andrographolid on macrophage activation andspecific antibody response. Acta Pharmacologica Sinica , 31 (2), pp.191-201.
Wei,  S., Tang, Y. B., Hua, H., Ohkoshi,  E., Goto,  M.,  Wang,  L.  T.,  dan  Xiao,  Z.
2013. Discovery of novel andrographolide derivatives as cytotoxic agents. Bioorganic & medicinal  chemistry  letters , 23 (14), 4056-4060.
World  Health  Organization.  2002.  WHO monographs  on  selected  medicinal plants, Vol. 2. WHO Graphics, Malta, pp 12−24. 2.
Xia,  Y.F.,  Ye,  B.Q.,  Li,  Y.D.,  Wang,  J.G., He,  X.J.,  Lin,  X.,  Yao,  X.,  Ma,  D., Slungaard,  A.,  Hebbel,  R.P.  and  Key, N.S., 2004. Andrographolide
attenuates  inflammation  by  inhibition of  NF-κB  activation  through  covalent modification of reduced cysteine 62 of p50. The Journal of Immunology , 173 (6), pp.4207-4217. Xu,  Y.,  Marshall,  R.  L.,  &  Mukkur,  T.  K. 2006. Anminvestigationmon the
antimicrobialmactivitymof
Andrographis  paniculata  extracts  and andrographolide in vitro. Asian j plant sci , 5 (3), 527-30.
Zhang, Z., Jiang, J., Yu, P., Zeng, X., Larrick,
J.W and Wang, Y., 2009.Hypoglycemicand beta cell protective  effects  of  andrographolid analogue for diabetes treatment. Journal of translational medicine , 7 (1), p.62.