## Status Heterofil, Limfosit Dan Rasio H/L Berbagai Itik Lokal
Di Provinsi Jawa Tengah (Heterophile Status, Limphocytes And The Ratio H/L Of Local Ducks In The Province Of Central Java)
Enny Yusuf Wachidah Yuniwarti dan Hirawati Muliani Jurusan Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro enny_yusuf@yahoo.co.id

## Abstrak
Derajat  kesehatan  itik  menentukan  daya  tahannya  terhadap  penyakit.  Status  heterofil  dan  limfosit menunjukkan kemampuan tubuh itik untuk menetralisasi agen infeksi sehingga jumlah heterofil dan jumlah limfosit  itik  menunjukkan  derajat kesehatan  itik  tersebut,  sedangkan  rasio  H/L  dapat  digunakan  untuk menentukan adanya stres fisiologis akibat adanya infeksi. Tujuan penelitian ini adalah untuk melihat status heterofil  dan  limfosit  serta  rasio  H/L  pada  itik  Pengging,  itik  Tegal  dan  itik  Magelang,  sehingga  dapat digunakan  sebagai  acuan  dalam  menentukan  tingkat  produktivitasnya.  Design  penelitian  yang  digunakan adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  dengan  tiga  perlakuan  yaitu  tiga  jenis  itik  dengan  enam  ulangan.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa jumlah heterofil dan limfosit serta rasio H/L pada itik Pengging, itik Tegal dan  itik  Magelang  tidak  berbeda  nyata,  sehingga  disimpulkan  derajat  kesehatan  itik  Pengging,  itik  Tegal dan itik Magelang tidak berbeda.
Kata kunci: heterofil, limfosit, rasio heterofil, limfosit, itik.

## Abstract
Health status of ducks determine their resistance to disease. Heterophile status and lymphocytes showed the body's ability to neutralize infectious agents so that the amount of heterophile and lymphocyte showed the degree  of  health,  while  the  ratio  of  H/L  can  be  used  to  determine  the  presence  of  physiological  stress caused by an infection . The purpose of this study is to observe the status of heterophile and lymphocytes as well as the ratio of H/L on Pengging duck, Tegal duck and Magelang duck, so it can be used as a reference in  determining  the  level  of  productivity.  Research  design  used  was  completely  randomized  design  with three  treatments  of  three  kinds  of  duck  with  six  replications.  The  results  show  that  the  number  of lymphocytes  and  heterophile  and  the  ratio  H/L  on  Pengging  duck,  Tegal  duck  and  Magelang  duck  not significantly different, so the degree of health concluded Pengging duck Tegal duck and Magelang  duck, no different .
Keywords : heterophile , lymphocytes , ratio heterophile, lymphocyte , duck.

## Pendahuluan
Pemeliharaan  kesehatan  itik  diperlukan untuk  mencegah  terjadinya  wabah  penyakit  yang berasal  dari  itik,  selain  juga  untuk  meminimalkan kematian.  Biosecurity  yang  terprogram  dapat menghambat  terjadinya  infeksi  sehingga  dapat mengurangi  jumlah  kematian  itik  (Shandu,  S.T., 2014).
Secara  umum,  peternak  itik  di  Indonesia mengenal  tiga  jenis  itik,  yaitu  itik  petelur,  itik ornamental, dan itik pedaging. Itik petelur dipelihara untuk  diperoleh  telurnya,  itik  ornamental  dipelihara sebagai itik hias,  dan itik pedaging dipelihara untuk diambil  dagingnya.  Peternakan  itik  pedaging  belum sepopuler  peternakan  itik  petelur,  karena  itu  pada umumnya  kebutuhan  akan  daging  itik  di  pasaran
dipenuhi  dari  itik  petelur  afkir  atau hasil penggemukan itik jantan (E-petani, 2011).
Jenis  itik  unggulan  di  Jawa  Tengah  antara lain  adalah  itik  Tegal,  itik  Magelang  dan  itik Pengging. Populasi itik Tegal terkonsentrasi dikawasan  utara  pulau  Jawa  terutama  di  Kabupaten Batang,  Pemalang,  Tegal  dan  Brebes.  Itik  Tegal termasuk  tahan  terhadap  penyakit,  serta  merupakan pengembangan  daerah  pantai  karena  didukung dengan  ketersediaan  pakan  berupa  ikan  runcah.  Itik jantan dan betina afkir dimanfaatkan sebagai sumber daging.  Itik  Magelang  merupakan  unggas  air unggulan Jawa Tengah selain Itik Tegal. Perbedaannya  Itik  Tegal  habitatnya  di  dataran rendah, sedangkan Itik Magelang di dataran medium sampai tinggi. Itik  Magelang  mempunyai tetua  yang
sama  dengan  Itik  Tegal  yaitu  bangsa  Itik Indian Runner .  Ciri  khas  Itik  Magelang  adalah  adanya warna putih melingkar seperti kalung pada lehernya, sehingga disebut "itik kalung". Wilayah pengembangan selain di Kabupaten Magelang antara lain  di  Kabupaten  Purworejo,  Semarang,  dan Kabupaten Temanggung. Keunggulan Itik Magelang, sebagai  sumber  produksi  telur  yang  berkisar  antara 48-70  %,  dengan  pemeliharaan  intensif  produksinya dapat  mencapai  80%. Itik jantan  dan betina afkirnya dimanfaatkan  sebagai  sumber  daging,  menjadi  itik potong.Itik  Pengging  juga  merupakan  Itik  unggulan Jawa  Tengah,  penyebaran  Itik  Pengging  di
Kabupaten Boyolali,
Kabupaten
Sukoharjo,
Kabupaten  Klaten  dan  Kabupaten  Sragen.  Itik Pengging  diduga merupakan hasil persilangan antara Itik Magelang dengan Itik Mojosari, warna bulu pada umumnya  didominasi  warna  bulu  Itik  Mojosari. Keunggulan Itik Pengging adalah produksinya tinggi diantara  Itik  Tegal  dan  Itik  Magelang  serta mempunyai  resistensi  yang  cukup  tinggi  terhadap lingkungan (Dinas Peternakan dan Kesehatan Hewan Provinsi Jawa Tengah, 2013).
Produktivitas  itik  tidak  hanya  ditentukan oleh  adanya  peningkatan  bobot  badan  dan  efisiensi pakan  tetapi  juga  ketahanannya  terhadap  penyakit. Keberadaan  stres  fisiologis  dapat  dideteksi  dengan menggunakan ratio heterophil/limfosit (Maxwell and Robertson,  1998),  karena  fungsi  heterofil  dapat diekspresikan  oleh  nitrit  oxide  synthase  (Gudev et al .,  2011)  maka  ratio  heterofil/limfosit  yang meningkat  menunjukkan  stres  yang  meningkat  pula (Cetin et al ., 2011)
Heterofil  merupakan  komponen penting  dari sistem  kekebalan  tubuh  bawaan,  bekerja  cepat mendeteksi dan membunuh patogen serta mengarahkan sinyal menuju mekanisme respon imun yang lain. Heterofil   melakukan  fungsi penting pada awal  infeksi,  dengan  aktivasi  cepat  melalui  proses kemotaksis memungkinkan heterofil untuk membunuh patogen. Deteksi molekul bakteri melalui reseptor yang kemudian menstimulasi heterofil untuk melakukan  fagositosis  serta  menginduksi  ekspresi sitokin.  Heterofil  mengandung  zat  antimikroba  yang dapat dilepaskan melalui degranulasi untuk membunuh  bakteri  melalui  proses  fagositosis ( Redmond et  al .,  2011 ).  Mekanisme  pertahanan heterofil  merupakan  lini  pertahanan  pertama  yang
diaktifkan selama respon inflamasi sehingga memiliki  peranan  penting  pada  ketahanan  unggas terhadap penyakit (Harmon, 1998). Heterofil  mampu merespon patogen dalam waktu 30 menit selama fase inflamasi  awal.  Peningkatan  respon  imun  bawaan tersebut  akan  mengurangi  terjadinya  penyakit sehingga  meningkatkan  produktivitas  (Farnell et  al ., 2006).  Heterofil,  sebagai  sel  pertama yang bermigrasi  ke  tempat  infeksi,  merupakan  komponen selluler  penting  dari  respon  imun  bawaan  karena dapat  menjadi  penanda  yang  lebih  efektif  saat memilih  unggas  yang  lebih  tahan  terhadap  penyakit (Ferro et al ., 2004).
Itik  sebagaimana  pada  unggas  lainnya mengandung  dua  jenis  limfosit  utama  yaitu  limfosit B atau sel B  dan limfosit T atau sel T. Sel B dan sel T  terspesialisasi  bagi  jenis  antigen  yang  berlainan dan  kedua  jenis  sel  tersebut  melakukan  aktivitas pertahanan  yang  berbeda  namun  saling  melengkapi. Beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa  peran limfosit  penting  didalam  perlindungan  tubuh  unggas terhadap  infeksi.  Limfosit  B  berasal  dari  bursa fabricius  yang  akan  membuat  antibodi  sedang limfosit  T  berasal  dari  thymus  dan  berkembang menjadi  sel  T  (Davidson,  2008).  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui apakah  terdapat perbedaan  derajad  kesehatan  pada  itik  Tegal,  itik Pengging  dan  itik  Magelang  melalui  pengamatan status heterofil, limfosit dan rasio heterofil/ limfosit.

## Materi dan Metode
Penelitian  ini  menggunakan  tiga  jenis  itik, yaitu itik Tegal, itik Pengging dan itik Magelang. Itik yang digunakan sebanyak 18 ekor dengan 3 jenis itik sebagai  perlakuan  dan  ulangan  6  kali.  Pemeliharaan dilakukan  di  Balai Pembibitan dan Budidaya Ternak Non Ruminansia, Banyubiru, Ambarawa, Kabupaten Semarang. Kandang yang digunakan adalah kandang kolektif  yang  dilengkapi  dengan  tempat  pakan, tempat air minum  dan kolam penggembalaan. Pakan yang  digunakan  adalah  campuran  dari  jagung, bekatul dan konsentrat, dengan kandungan kabohidrat    41,20%,  serat  kasar  2,85%,    protein 19,86%,  lemak    3,32%  dan  abu  6,17%.  Pakan diberikan secara ad-libitum selama masa pemeliharaan.      Koleksi  darah  dilakukan  pada  akhir penelitian  saat    itik  berumur  6  bulan.  Hasil  yang
didapat  dianalisis  dengan  ANOVA  menggunakan pola Rancangan Acak Lengkap.
Penentuan  jumlah  heterofil  dan  limfosit dihitung  dari  preparat  apus  darah.  Darah  itik dikoleksi  pada  akhir  perlakuan,  diambil  dari  vena sayap  dan  ditampung  pada  tabung  2  ml  untuk pembuatan  preparat  apus  darah.  Pembuatan  preparat apus  darah  (blood  smear)  diawali  dengan  membuat apusan  arah  pada object  glass ,  kemudian  difiksasi dengan  metanol,  diwarnai  dengan  giemsa,  dicuci dengan  air  dan  dibiarkan  kering  pada  suhu  ruang. Setelah  kering  diamati  dibawah  mikroskop  dan dihitung  persentase  heterofil  dan  limfosit  yang didapat  (Bain et  al .,  2005).  Persentase  heterofil  dan limfosit  selanjutnya  dikalikan  dengan  jumlah Leukosit  sehingga  didapatkan  jumlah  heterofil  dan limfosit.  Jumlah  leukosit  dihitung  melalui  bilik hitung  improve  neubeur  setelah  darah  diencerkan dengan  larutan  Turk  (Koen  Praseno et  al .,  2013). Penentuan  rasio  heterofil/  limfosit  didapat  dengan membagi  jumlah  heterofil  dengan  jumlah  limfosit. Design  penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap  dengan  tiga  perlakuan  yaitu  itik  Tegal,  itik Pengging  dan  itik  Magelang  dan  tiap  kelompok perlakuan diulang sebanyak enam ulangan.

## Hasil dan Pembahasan
Hasil  jumlah  heterofil  itik  Pengging,  itik Tegal dan itik Magelang menunjukkan bahwa jumlah heterofil  tertinggi  terdapat  pada  itik  Tegal  diikuti oleh  itik  Magelang  dan  terakhir  yang  paling  sedikit jumlah heterofilnya adalah itik Pengging. Berdasarkan analisis stasistik menggunakan
ANOVA  maka  jumlah  heterofil  dari  ketiga  itik tersebut tidak berbeda nyata (Tabel 1).
Heterofil  didalam  pembuluh  darah  akan berinteraksi  dengan  reseptor  endotel,  beremigrasi
melalui  dinding  pembuluh  darah  mengikuti  gradien chemotactic dan  berakumulasi  pada  sel  yang mengalami peradangan. Faktor chemotactic dihasilkan  dari  percampuran  serum  atau  plasma dengan  bakteri.  Pada  granula  heterofil  ditemukan beta-defensin  yang  merupakan  kelompok  peptida kationik,  lisozim  dan  asam  fosfatase.  Pada  granula tersebut  terjadi  hidrolisis  asam  glukoronidase, cathepsin  dan  glukosidase.  Penemuan  adanya  isi granula tersebut  menunjukkan bahwa  heterofil  dapat melakukan  fagositosis  dengan  melepaskan  isi granula.  Bila  terkena  rangsangan  fagositik,  heterofil akan  mengalami respiratory brust dan  mengoksidasi glukosa.  Defensin  memiliki  aktifitas  berspektrum luas  terhadap  bakteri  gram  positif,  bakteri  gram negatif,  protozoa,  jamur  dan  beberapa enveloped viruses (Harmon, 1998). Peptida kationik merupakan molekul yang paling kuat untuk aktivitas penghancuran  mikrobia  (Bennoune  et  al.,  2009). Status  heterofil  pada  itik  Pengging,  itik  Tegal  dan itik  Magelang  menunjukkan  potensi  dan  derajad kesehatan yang sama pada itik-itik tersebut, sehingga diharapkan  produktivitas  itik  tersebut  juga  tidak bebeda,  meskipun  itik  Pengging  direkomendasikan mempunyai  resistensi  yang  paling  tinggi  terhadap lingkungan  oleh  dinas  Peternakan  dan  Kesehatan Hewan  Provinsi Jawa Tengah.
Jumlah  limfosit  pada  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  itik  Tegal    mempunyai  jumlah  yang  paling tinggi  (Gambar  1).  Setelah  dilakukan  analisis ANOVA    tampak  bahwa  jumlah  limfosit  ketiga  itik yaitu  itik  Tegal,  itik  Pengging  dan  itik  Magelang tidak bebeda nyata (Tabel 1).
Tabel1. Rata-rata Jumlah Heterofil, Limfosit dan Rasio H/L pada Itik Pengging, Itik Tegal dan Itik Magelang
Itik Pengging Itik Tegal Itik Magelang Jumlah Hetrofil (sel/µL) 3261,77 a 4012,37 a 3486,83 a Jumlah Limfosit (sel/µL) 3004,00 a 3832,40 a 2208,48 a Rasio H/L 1,08 a 1,05 a 1,58 a
Keterangan : huruf yang sama pada lajur yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata
Gambar 1. Jumlah limfosit itik Pengging, itik Tegal dan itik Magelang
Status  limfosit  pada  itik  berperan  penting  dalam menentukan  derajad  kesehatan  itik.  Itik  mempunyai dua jenis limfosit utama yaitu limfosit B dan limfosit T.Beberapa  mikroorganismehidup  dan  berkembang biak secara intraseluler sehingga akan sulit dijangkau oleh  antibodi,  untuk  melawan  mikroorganisme intraseluler  tersebut  diperlukan  sel  T.  Sub  populasi limfosit  T  yaitu  T- helper yang  akan  mengenali antigen melalui major histocompatibility
complex (MHC)  kelas  II  yang  terdapat  pada permukaan  sel  makrofag.  Sinyal  ini  menginduksi limfosit  T  untuk  memproduksi  berbagai  jenis limfokin  termasuk  interferon  yang  membantu makrofag  menghancurkan  mikroorgaanisme  tersebut (Kresno,  1996). Major  histocompatibility  complex kelas  II  hanya  terbatas  pada  beberapa  jenis  sel khusus,  yaitu  makrofag,  limfosit  B,  dan  limfosit  T yang  sudah  diaktifkan,  sedangkan  molekul  MHC kelas  I  terdapat  pada  semua  sel  bernukleus (Campbell et al ., 1994).
Major  histocompatibility  complex berperan sebagai  molekul  penyaji  antigen  bagi  sel  T sedangkan  makrofag  bertindak  sebagai  APC.Ketika makrofag  merusak  bakteri,  maka  akan  mengandung fragmen  peptida  bakteri,  selanjutnya  diikat  oleh molekul  MHC  kelas  II  kemudianditransport  ke permukaan sehingga akan memaparkan peptida asing tersebut  ke limfosit T helper (Th). Limfosit Th akan mengenali  antigen  melalui  MHC  kelas  II  yang terdapat  pada  permukaan  sel  makrofag  (Gordon, 2003).  Interaksi  antara  Th  dengan  APC  akan semakin meningkat dengan adanya protein permukaan  sel  T  yang  disebut  CD  4  yang  terdapat pada  sebagian  besar  limfositTh  dan  mempunyai afinitas terhadap sebagian protein MHC kelas II serta berperan  untuk  membantu  mempertahankan  ikatan Th-APC  supaya  tetap  menyatu  saat  aktivasi  antigen
spesifik  berlangsung  (Janeway  and  Travers,  1994). Limfosit  Th  akan  mengaktivasi  makrofag  sebagai respon  imunitas  seluler  terhadap  infeksi  dengan patogen  intraseluler  (Gordon,  2003).  Makrofag merupakan  sel  pertahanan  pertama  dalam  melawan penyakit,  dan  aktivitas  fagositosis  makrofag  akan meningkat  dengan  adanya  antibodi,  karena  antibodi ini  berperan  sebagai  opsonin  (Abbas et  al .,  2007). Fagositosis  merupakan  fase  akhir  pemusnahan mikroorganisme. Mikroorganisme  yang sudah ada di dalam  sel  dibunuh  dan  dipecah  oleh  lisosom (Qureshi, 2003).
Pada unggas, limfosit B yang berasal dari sel asal  multipoten  akan  bermigrasi  dan  berdiferensiasi menjadi  limfosit  B  yang mature dalam  bursa Fabricius, danapabila limfosit B dirangsang maka sel tersebut akan berproliferasi dan berkembang menjadi sel plasma yang dapat membentuk antibodi. Antibodi yang  dilepas  dapat  ditemukan  dalam  serum.  Fungsi utama  antibodi  ini  adalah  pertahanan  terhadap infeksi  ekstraseluler  virus  dan  bakteri  serta menetralisir toksinnya (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Beberapa penelitian menunjukkan bahwa  peran  limfosit  penting  didalam  perlindungan tubuh  unggas  terhadap  infeksi.(Davidson,  2008). Status  limfosit  yang  tidak  berbeda  nyata  pada penelitian ini menunjukkan adanya  kesamaan derajat kesehatan  itik  Pengging,  itik  Tegal  dan  itik Magelang .
Rasio  Heterofil/Limfosit  pada  itik  tampak pada  Gambar  2.  Rasio  H/L  yang  paling  tinggi terdapat  pada  itik  Magelang  selanjutnya  itik Pengging  dan  paling  sedikit  nilai  rasio  H/L  terdapat pada  itik  Peking.  Analisis  ANOVA  menunjukkan bahwa tidak terdapat beda nyata antara rasio H/L itik Pengging, itik Tegal dan itik Magelang (Tabel 1).

## JUMLAH LIMFOSIT
Pengging Tegal Magelang
Gambar 2. Rasio Heterofil/Limfosit itik Pengging, itik Tegal dan itik Magelang
Hasil tersebut menunjukkan bahwa meskipun terjadi peningkatan rasio
heterophil/limfosit    pada  itik  Magelang    tetapi  hasil analisis  yang  tidak  berbeda  nyata  menunjukkan bahwa tidak adanya infeksi yang dapat menyebabkan terjadinya  stres  fisiologis.  Dalam  hal  ini  keberadaan stres  fisiologis dapat dideteksi dengan  menggunakan ratio  heterofil/limfosit  (Maxwell  and  Robertson, 1998),  karena  hormon  yang  meningkatkan  stres disekresikan oleh kelenjar adrenal akan meningkatkan  ratio  H/L  (Gudev et  al., 2011),  maka ratio  heterofil/limfosit  yang  meningkat  merupakan indikasi  stres  yang  meningkat  pula  (Cetin et  al ., 2011).  Pada  penelitian  ini,  ratio  heterophil/limfosit tidak menunjukkan adanya perbedaan antara kelompok  itik  Pengging,  itik  Tegal  dan  itik Magelang.
Kesimpulan
Status heterofil, limfosit serta rasio heterofil/limfosit  pada  itik  Pengging,  itik  Tegal  dan itik  Magelang  tidak  menunjukkan  perbedaan  yang nyata (P>0.05) sehingga dapat disimpulkan jika itik Pengging,  itik  Tegal  dan  itik  Magelang  mempunyai derajat kesehatan yang tidak berbeda.

## Daftar Pustaka
Abbas  AK,  Lichtman  AH,  Pillai  S,.  2007. Cellular and Molecular Immunology . Saunders Elsevier. Philadelpia.
Bain BJ, Path FRC, 2005. Diagnosis from the Blood Smear , N. Engl. J. Med. 353:498-507
Baratawidjaja  KG,  Rengganis  I,.  2010. Imunologi Dasar .  Balai  Penerbit  Fakultas  Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta, Indonesia
Bennoune    O,    Melizi  M,    Khazal  K,    BouroubaR, Ayachi A, 2009. Chicken heterophils: a model for non-oxidative antimicrobial activity . World's Poultry Scie . 65:625-632.
Campbell  NA,  Reece  JB,  Lawrence  G,  Mitcheel,.
1994. Biologi: Concept and Connections .  The Benyamin  Cummings  Publishing  Company, Inc.Canada
Cetin  E,    Guclu  BK,      Cetin  N,  2011. Effect  of Dietary Humate and Organic Acid
Supplementation  on  Social  Stress  Induced  by High  Stocking  Density  in  Laying  Hens. J.
Animal and Vet. Adv. 10 (18 ): 2402-2407
Davidson,  F.  2008. The  Importance  of  the  Avian Immune  System  and  its  Unique  Feature  in Avian Immunology . Academic Press, Elsevier. Dinas  Peternakan  dan  Kesehatan  Hewan  Provinsi Jawa  Tengah.  2013. Potensi  Ternak  di  Jawa Tengah .  Dinas  Peternakan  dan  Kesehatan Hewan Provinsi Jawa Tengah.
E-petani.  2011. Jenis  Itik  Lokal  Indonesia . Deptan.go.id
Farnell  MB,Donoghue  AM,    Solis de los Santos F, Blore  PJ,    Hargis  BM,  Tellez  G,    Donoghue DJ, 2006. Upregulation of Oxidative Burst and Degranulation in Chicken Heterophils
Stimulated  with  Probiotic  Bacteria. Poult. Sci. 85(11):1900-1906.
Ferro  PJ,  Swaggerty  CL,  Kaiser  P,  Pevzner  IY,
Kogut,  2004. Heterophils  Isolated  from Chickens Resistant to Extra-Intestinal Salmonella  Enteritidis  Infection  Express Higher  Levels  of  Pro-Inflammatory  Cytokine mRNA  Following  Infection  than  Heterophils from  Susceptible  Chickens .  Epidemiol.  Infect. 132: 1029–1037.
Gordon S. 2003. Alternative Activation of Macrophage. Nat. Rev. Immunol. 3(1):  23-35 Gudev  D,    Popova-Ralcheva  S,    Ianchev  I,  Moneva P,.  2011 .  Effect  Of  Betaine  And  Air
Ratio H/L
Pengging Tegal Magelang
Ammoniaconcentration On Broiler Performance,  Plasma  Corticosterone  Level, Lymphoid Organ Weights And Some Haematological  Indices. Biotech  in  Animal Husb. 27 (3): 687-70. Harmon BG, 1998. Avian Heterophils in
Inflammation  and  Disease  Resistance .  1998. Poult. Sci. 77:972–977.
Janeway  CA,  Travers  P,.  1994. Immunobiologi. Blackwell Scientific Publikations . Oxford. Koen  Praseno,  E.Y.W.  Yuniwarti,  Kasiyati.  2013. Petunjuk  Praktikum  Fisiologi  Hewan .  Jurusan Biologi,  Fakultas  Sains  dan  Matematika,
Universitas Diponegoro.
Kresno  S.B.,1996. Imunologi:  Diagnosis  dan Prosedur  Laboratorium ,  Fakultas  Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta, Indonesia
Maxwell MH, Robertson GW, 1998. The avian heterophil leucocyte: a review . World's Poult.
Sci. J. 54:155-178.
Mito  dan  Johan.  2011. Usaha  Penetasan  Telur  Itik . Agromedia Pustaka, Jakarta Qureshi  MA, 2003. Avian Macrophage and Immune Response:  An  Overview .  Poult.    Sci.  82:691– 698
Redmond SB,  Chuammitri P,  Andreasen CB,  Palić
D,  Lamont  SJ,  2011. Genetic  control  of chicken  heterophil  function  in  advanced intercross  lines:  associations  with  novel  and with  known  Salmonella  resistance  loci  and  a likely mechanism for cell death in extracellular trap production . Immunogenetics. 63:449–458.
Shandu ST, 2014. Duck Health Care . Duck Research Laboratory,  Cornell  University  of  Veterinary Medicine. Ithaca. New York.