## Livestock and Animal Research
Accredited by Directorate General of Strengthening for Research and Development No. 10/E/KPT/2019
Open Access Livest. Anim. Res. , November 2022, 20(3): 321-329
p-ISSN 2721-5326 e-ISSN 2721-7086 https://doi.org/10.20961/lar.v20i3.63170

## Original Article
Pengaruh lama thawing dengan air dingin pada semen beku sapi Peranakan Ongole terhadap kualitas semen
Nursahida Ramadhani 1 , Achadiah Rachmawati 1 , Ahmad Budi Purnawan 2 , Trinil Susilawati 1 , Aulia Puspita Anugra Yekti 1,* 1 Fakultas Peternakan, Universitas Brawijaya, Malang, 65145
2 Balai Besar Inseminasi Buatan Singosari, Malang, 65153 * Correspondence: auliapay@ub.ac.id
Received: July 11 th , 2022; Accepted: November 24 th , 2022; Published online: November 28 th , 2022

## Abstrak
Tujuan: Tujuan  dari  penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui  pengaruh  lama  proses  pencarian menggunakan ( thawing) air dingin pada semen beku sapi Peranakan Ongole terhadap kualitas semen meliputi motilitas, viabilitas, abnormalitas dan total spermatozoa motil.
Metode: Metode  yang  digunakan  yaitu  ekperimental  laboratorium  dengan  menggunakan  lima perlakuan dan sepuluh kali ulangan pada sampel semen beku sapi Peranakan Ongole. Data dianalisis menggunakan varian RAK dan dilanjutkan dengan DMRT, apabila terdapat perbedaan nyata. Dilakukan uji Chi Square pada motilitas individu dan total spermatozoa motil, untuk membandingkan dengan Standar Nasional Indonesia (SNI) kualitas semen beku. Penelitian ini dilakukan dengan lima perlakuan yaitu  P0  dengan  lama  waktu thawing 30  detik  dengan  suhu  37 o C,  sedangkan  P1,  P2,  P3  dan  P4 masing-masing  menggunakan  lama  waktu thawing secara  berurutan  yaitu  15,  30,  45  dan  60  detik dengan suhu yang sama yaitu 28 o C. Hasil: Hasil thawing terbaik adalah P2 menghasilkan rataan motilitas individu 49,9±6,0 %, viabilitas 65,1±7,2%,  abnormalitas  4,0±1,8%  dan  total  spermatozoa  motil  19,3±4,0  juta/ straw . Hasil thawing terbaik  adalah  P2  menghasilkan  rataan  motilitas  individu  49,9±6,0  %,  viabilitas  65,1±7,2%, abnormalitas 4,0±1,8% dan total spermatozoa motil 19,3±4,0 juta/ straw . Kesimpulan: Terdapat pengaruh lama dan suhu thawing pada kualitas semen beku sapi Peranakan Ongole terhadap kualitas semen.
Kata Kunci: Inseminasi buatan; Semen beku; Thawing

## Abstract
Objective: The purpose of this research was to determine the effect of thawing durations using cold water on Ongole Crossbred Bull frozen semen towards semen quality including motility, viability, abnormality and total motile spermatozoa.
Methods: The method used was experimental in the laboratory using five treatments and ten replications on frozen semen samples of Ongole Crossbred Bull. The data were analyzed using Randomized Block Design variance and continued with DMRT if there was a significant difference. Motility and total motile spermatozoa were tested by Chi Square test to compare with the SNI standard for frozen semen quality. In this research, five treatments were carried out, T0 with a thawing time of 30 seconds with
a temperature of 37 o C, while T1, T2, T3 and T4 each used a thawing time of 15, 30, 45 and 60 seconds with temperature of 28 o C.
Results: The best  thawing  results  were T2 with  individual motility 49,9±6.0%, viability 65,1±7,2%, abnormality 4,0±1,8 %, concentration of 39,1±10,2 million/straw and total motile spermatozoa 19,3±4,0 million/straw.
Conclusions: In conclusion, the duration and temperature of thawing can affected the quality of Ongole Crossbred frozen semen.
Keywords: Artificial insemination; Frozen semen; Thawing

## PENDAHULUAN
Inseminasi  Buatan  (IB)  adalah  teknologi yang telah diterima masyarakat karena terbukti dapat meningkatkan produktivitas ternak. Sapi adalah  salah  satu  jenis  ternak  yang  dapat dilakukan  IB.  Faktor  yang  mempengaruhi keberhasilan IB, salah satunya yaitu penanganan semen  beku.  Penanganan  semen  beku  yaitu berupa proses pencairan ( thawing ) semen beku. Hal yang harus diperhatikan pada proses thawing adalah suhu yang digunakan, sebab perubahan suhu dapat mempengaruhi daya tahan hidup spermatozoa sapi potong [1]. Lama waktu dalam melakukan kegiatan thawing juga dapat mem- pengaruhi kualitas spermatozoa sapi [2].
Pelaksanaan thawing di  lapang,  sering ditemukan masih banyak belum sesuai Standar Nasional Indonesia (SNI) semen beku. Thawing sesuai  SNI  menggunakan  air  dengan  suhu 37-38 o C  selama  30  detik  [3].  Ketidaksesuaian thawing dapat ditemukan dari hasil beberapa survey, salah satunya yaitu di daerah Kabupaten Kerinci, petugas inseminator melakukan thawing dengan  cara  merendam straw di  air  sumur daripada air hangat [4], sedangkan  untuk air sumur belum tentu memiliki suhu yang stabil karena dapat terpengaruh beberapa faktor seperti lingkungan maupun cuaca. Selain itu, terdapat inseminator  yang  melakukan thawing meng- gunakan  lama  waktu  tidak  sesuai  dengan pedoman SNI, seperti di daerah Kota Bangun, Samarinda yaitu banyak peternak melakukan thawing dengan lama waktu 30-60 detik [5]. Ketidaksesuaian thawing yang  tidak  ber dasarkan SNI juga ditemukan pada inseminator yang  melakukan thawing dengan  air  ledeng atau air sumur dengan suhu 28 o C. Air ledeng memiliki  suhu  berkisar  25-30 o C,  alasan  peng gunaan  air  ledeng  sebagai  media thawing karena lebih efektif [6]. Penggunaan air ledeng atau air sumur pada thawing juga digunakan
di  beberapa  tempat,  salah  satunya  di  Unit Lapangan  IB  di  Prafi  SP  1  yaitu  melakukan thawing menggunakan  air  sumur  yang  di masukkan dalam botol dengan lama waktu 10-20 menit [7], sedangkan seharusnya menurut SNI  yaitu thawing menggunakan  suhu  37 o C dengan  waktu  30  detik.  Alasan  inseminator melakukan thawing di  lapang  menggunakan suhu 28 o C karena lebih efektif dan efesien serta inseminator terkadang tidak bisa membawa atau menyediakan  air  dengan  suhu  37 o C.  Oleh sebab itu, penelitian ini perlu dilakukan untuk menentukan  waktu thawing yang  tepat dengan  air  sumur  atau  ledeng  bersuhu  28 o C agar kualitas semen beku sapi Peranakan Ongole sesuai dengan SNI.
Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka dilakukan penelitian untuk menentukan landasan perlakuan thawing menggunakan  air  ledeng. Penelitian  ini  diharapkan  terdapat  pengaruh suhu dan lama thawing terhadap kualitas semen sapi  Peranakan  Ongole  dan  juga  diharapkan hasil dapat me nyelesaikan masalah di dalam implementasi thawing di  lapang  yang dilakukan oleh inseminator.

## MATERI DAN METODE

## Materi
Materi yang digunakan adalah semen beku sapi Peranakan Ongole yang berasal dari Balai Besar Inseminasi Buatan Singosari, Malang dengan kode straw BBIB SINGOSARI SNI PO ALINDO 21431 TT 0430 sebanyak 50 straw .

## Uji kualitas semen beku
Metode  penelitian  yang  dilakukan  adalah metode  eksperimental  di  laboratorium,  yang terdiri atas 5 perlakuan dengan 10 kali ulangan. Perlakuan  penelitian  sebagai  berikut,  P0= thawing dengan  air  bersuhu  37°C  selama  30 detik, P1= thawing dengan air dingin bersuhu
Ramadhani et al. (2022) Livest. Anim. Res. 20(3): 321-329
28°C selama 15 detik, P2= thawing dengan air ledeng bersuhu 28°C selama 30 detik, P3= thawing dengan air ledeng bersuhu 28°C selama 45 detik dan  P4= thawing dengan  air  ledeng  bersuhu 28°C  selama  60  detik.  Setelah  proses thawing dilakukan, maka dilanjutkan uji kualitas semen beku sapi Peranakan Ongole dengan variabel penelitian yaitu motilitas individu, viabilitas, abnormalitas dan total spermatozoa motil.

## Persentase motilitas individu
Motilitas  individu  diamati  dengan  me- nggunakan  mikroskop  yaitu  dengan  cara semen  beku  yang  sudah  dilakukan thawing, diletakkan  pada  objek  glass  dan  ditutup menggunakan cover  glass ,  kemudian  diamati pergerakan  spermatozoa  progresif  dengan perbesaran 400x [8].

## Persentase viabilitas
Uji  viabilitas  dilakukan  dengan  me- letakkan  semen  sapi  Peranakan  Ongole  yang sudah  di thawing ke object  glass dengan menggunakan  ose,  diambil  eosin-negrosin dengan  ose  dan  dicampurkan  keduanya. Langkah  selanjutnya,  diulas  dengan object glass yang  lain,  kemudian  diamati  dengan mikroskop  perbesaran  400x.  Langkah  terakhir dihitung  dengan  perhitungan  sebagai berikut [9].
Viabilitas (%) = ∑ spermatozoa hidup ∑ spermatozoa total x 100%

## Persentase abormalitas
Hasil  uji  viabilitas  dilanjut  dengan  uji abnormalitas  yaitu  dengan  mengamati spermatozoa  yang  normal  dan  yang  tidak normal.  Jumlah  spermatozoa  yang  diamati minimal  sebanyak  200  sepermatozoa  dan dinyatakan  dengan  persen.  Berikut  cara perhitungannya [10].
Abnormalitas (%) = ∑ spermatozoa abnormal ∑ spermatozoa total x 100%

## Total spermatozoa motil
Total spermatozoa motil dapat diperoleh dari mengkalikan persentase motilitas individu dengan konsentrasi  spermatozoa  dalam  juta/  straw. Berikut bentuk perhitungannya [8].
Total spermatozoa motil (%) = KS x MS
KS = Konsentrasi Spermatozoa (juta/ straw) MS = Motilitas Spermatozoa (%)

## Analisis data
Analisis  data  dari  hasil  pengamatan  5 perlakuan, diulang sebanyak 10 kali dianalisis ragam  (ANOVA)  dengan  Rancangan  Acak Kelompok (RAK) dilanjutkan dengan DMRT. Uji Chi Square dilakukan untuk variabel motilitas dan total spermatozoa motil. RAK, uji DMRT dan uji Chi Square dianalisis menggunakan Microsoft Excel . Berikut model matematika dari RAK [11]
Yij = μ + τi + βj + εij
Keterangan: Yij  = nilai pengamatan pada perlakuan ke – i Yij  = kelompok ke – j μ = nilai tengah umum τi = pengaruh perlakuan ke - i βj = pengaruh kelompok ke - j
εij = galat percobaan pada perlakuan ke-i & εij = kelompok ke-j p    = banyaknya perlakuan r    = banyaknya kelompok / ulangan
Selain  dilakukan  analisis  RAK,  pada penelitian ini juga dilakukan uji Chi Square . Uji Chi Square dilakukan untuk membandingkan dengan  Standar  Nasional  Indonesia  (SNI). Berikut rumus untuk Chi Square [11].
𝐶ℎ𝑖 𝑆𝑞𝑢𝑎𝑟𝑒 (X2) = (O – E)2 E x 100%
Keterangan:
O = hasil observasi
E = hasil yang diharapkan

## HASIL
Hasil analisis  statistik  menjelaskan  bahwa pengaruh lama thawing dalam air dengan suhu 28 o C  pada  semen  beku  sapi  PO  memberikan pengaruh nyata (P<0,05) terhadap kualitas semen yaitu  motilitas  individu, viabilitas, abnormalitas dan total spermatozoa motil .

## Motilitas individu
Hasil uji kualitas semen Peranakan Ongole berdasarkan uji statistik diperoleh hasil yaitu
lama dan suhu thawing berpengaruh nyata (P<0,05) terhadap motilitas individu dari semen beku sapi Peranakan Ongole.
Perlakuan kontrol (P0) dan P2 menggunakan lama waktu thawing yang sama yaitu 30 detik dengan suhu berbeda 37 o C dan 28 o C, diperoleh perbandingan yaitu P2 lebih tinggi daripada P0.  P1,  P3  da  P4  dengan  lama  waktu  yang berbeda dan suhu yang sama diperoleh hasil fluktuatif, pada P1 rata- rata motilitas individu spermatozoa mengalami kenaikan sampai pada pada P2 dan P3 dan mengalami penurunan pada P4.
Hasil statistik yang dijelaskan pada Tabel 1 menunjukkan bahwa perlakuan terbaik yaitu P2 dengan lama waktu 30 detik dan suhu 28°C menghasilkan  nilai  rataan  ±  simpangan  baku sebesar 49,90±6,0%. Hasil yang paling rendah pada  P1  sebesar  36,40±3,7%,  menggunakan lama  waktu  15  detik  dan  suhu  28°C.  Hasil perbandingan dengan SNI di setiap perlakuan pada variabel motilitas individu menggunakan uji Chi Square, memperoleh hasil bahwa hanya pada P2, P3, dan P4 (P<0,05) artinya motilitas individu P2, P3, dan P4 diatas standar SNI.

## Viabilitas
Pengaruh  berbagai  perlakuan  terhadap viabilitas, setelah di uji statistik menghasilkan (P<0,05) artinya  lama  dan  suhu thawing ber pengaruh nyata terhadap viabilitas dari semen beku sapi Peranakan Ongole.
Perlakuan dengan suhu thawing yang ber beda yaitu 37 o C dan 28 o C dengan lama waktu yang sama yaitu 30 detik, dihasilkan P0 lebih rendah  daripada  P2.  Pada  P1,  P2,  P3  dan  P4 dengan menggunakan lama waktu thawing yang berbeda  yaitu  15,  30,  45,  60  detik  dan  suhu thawing yang sama yaitu 28°C dihasilkan data yang fluktuatif yaitu P1 diperoleh hasil rata- rata viabilitas  paling  tinggi  kemudian  mengalami penurunan rata- rata viabilitas pada P2. Pada P3
juga mengalami penurunan rata-rata viabilitas serta mengalami kenaikan sedikit pada P4.
Hasil statistik pada Tabel  1 menjelaskan bahwa perlakuan terbaik viabilitas berada pada P1 yaitu dengan lama waktu 15 detik dan suhu 28°C  menghasilkan  nilai  rataan  ±  simpangan baku  sebesar  71,1±5,6%.  Hasil  paling  rendah pada  P0  sebesar  56,01±10,3%  menggunakan lama waktu 30 detik dan suhu 37°C.

## Abnormalitas
Hasil data Abnormalitas setelah di uji statistik dengan RAK menghasilkan (P<0,05) yang berarti lama dan suhu thawing berpengaruh nyata terhadap  abnormalitas  dari  semen  beku  sapi Peranakan Ongole.
Perlakuan kontrol P0 dan P2 yang meng gunakan  lama  waktu thawing yang  sama yaitu  30  detik,  dengan  suhu thawing yang berbeda  secara  berurutan  yaitu  37 o C  dan 28 o C  meng  hasilkan  abnormalitas  P2  lebih rendah dari P0. Perlakuan suhu thawing yang sama  yaitu  28°C  dengan  lama  waktu  yang berbeda pada P1, P2, P3 dan P4 yaitu 15, 30, 45, 60 detik menghasilkan abnormalitas yang fluktuatif, diperoleh hasil yaitu P1 mengalami penurunan  pada  P2,  tetapi  pada  P3 mengalami kenaikan dan mengalami penurunan lagi pada P4 yaitu sebesar 5,8%.
Hasil  dari  perlakuan  abnormalitas  pada Tabel 1 yang paling tinggi berada pada P3 yaitu dengan  lama  waktu  45  detik  dan  suhu  28°C menghasilkan nilai rataan ±  simpangan baku yaitu 8,40±5,6%. Hasil yang paling rendah pada P2  yaitu  4,04±1,8%  yang  menggunakan  lama waktu 30 detik dan suhu 28°C.

## Total spermatozoa motil
Pengaruh perlakuan terhadap total sperma tozoa motil diperoleh dari uji statistik RAK total spermatozoa motil yaitu (P<0,05) yang berarti lama  dan  suhu thawing berpengaruh  nyata
Tabel 1. Hasil rata- rata thawing spermatozoa sapi Peranakan Ongole Perlakuan Motilitas individu (%) Viabilitas (%) Abnormalitas (%) Total spermatzoa motil (juta/straw) P0 43,80±6,6 b 56,01±10,3 a 6,46±1,2 ab 13,77±2,3 b P1 36,40±3,7 a 71,06±6,9 b 6,16±2,2 a 10,45±2,3 a P2 49,90±6,0 c 65,12±7,2 b 4,04±1,8 a 19,28±4,0 d P3 49,90±4,3 c 64,97±8,7 b 8,40±4,9 b 14,53±3,2 bc P4 48,20±5,0 bc 67,06±5,6 b 5,78±1,9 a 14,53±2,2 b
*Superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan pengaruh nyata (P<0,05)
terhadap  total  spermatozoa  motil  dari  semen beku sapi Peranakan Ongole.
Perlakuan kontrol P0 dengan P2 yang menggunakan lama waktu thawing yang sama dengan suhu yang berbeda 37 o C dan 28 o C di hasilkan P0 lebih rendah daripada P2. Pada perlakuan suhu yang sama yaitu 28 o C dengan perbedaan lama waktu thawing P1, P2, P3 dan P4  yaitu  15,  30,  45,  60  detik,  dihasilkan  total spermatozoa motil perlakuan pada P1 mengalami kenaikan pada P2 dan mengalami penurunan pada P3 dan P4.
Perlakuan terbaik total spermatozoa motil yang dijelaskan pada Tabel 1 berada pada P2 yaitu  dengan  lama  waktu  30  detik  dan  suhu 28°C  menghasilkan  nilai  rataan  ±  simpangan baku  sebesar  19,28±4,0  juta/ straw .  Hasil  yang paling  rendah  pada  P1  sebesar  10,45±2,3 juta/ straw menggunakan lama waktu 15 detik dan  suhu  28°C.  Uji Chi  Square pada  setiap perlakuan menghasikan (P<0,05) pada P0, P2, P3  dan  P4  menunjukkan  bahwa  total spermatozoa  motil  dari  semen  beku  Sapi Peranakan  Ongole  diatas  standar  SNI.  Hasil keseluruhan  data  dapat  di  peroleh  perlakuan terbaik yaitu pada P2 dengan waktu perlakuan 30 detik dan suhu 28 o C, menghasilkan rataan motilitas individu 49,9±6,0%, viabilitas 65,1±7,2%,  abnormalitas  4,0±1,8%  dan  total spermatozoa motil 19,3±4,0 juta/ straw .

## PEMBAHASAN
Motilitas individu adalah salah satu uji kualitas  semen  beku  yang  dilakukan  dengan melihat  pergerakan  spermatozoa  yang  maju (progresif). Pergerakan individu spermatozoa menjadi faktor yang mempengaruhi keberhasilan IB. Gerak individu spermatozoa yang normal adalah bergerak secara progresif atau maju agar bisa melakukan fertilisasi. Pergerakan sperma tozoa progresif diperlukan  untuk  transportasi di saluran reproduksi betina, sehingga dapat terjadi fertilisasi [12].
Hasil data penelitian menjelaskan bahwa pengaruh lama dan suhu thawing semen beku sapi Peranakan Ongole berpengaruh pada motilitas individu.  Hasil  penelitian  menjelaskan  dengan suhu thawing yang berbeda dan lama thawing yang  sama,  yaitu  P0  dengan  suhu  37 o C  lama waktu 30 detik dan P2 dengan suhu 28 o C lama waktu 30 detik menghasilkan bahwa P0 lebih
rendah daripada P2, tetapi P0 dan P2 memiliki hasil sesuai dengan standar SNI yaitu minimum 40% [3]. Rendahnya P0 bisa terjadi akibat tingginya suhu thawing dibandingkan suhu lingkungan, sehingga  menyebabkan  motiltas  individu turun, kondisi ini biasa disebut heat shock effect . Heat shock effect bisa terjadi karena perbedaan suhu thawing yang tinggi dibandingkan suhu lingkungannya,  menyebabkan  penurunan motilitas  spermatozoa  [13]. Heat  shock  effect bisa terjadi pada P0 tetapi tidak dengan P2. Hal ini terjadi karena adanya perbedaan waktu dan hari yang berbeda dalam melakukan thawing , sehingga  akan  terdapat  pengaruh  suhu lingkungan yang berbeda. Pada P4 yaitu 28 o C lama  waktu  60  detik  mengalami  penurunan dari perlakuan sebelumnya. Penurunan pada P4,  bisa  terjadi  karena  terlalu  lama  dalam melakukan thawing. Durasi thawing yang terlalu lama  dapat  mengakibatkan  meningkatnya aktivitas metabolisme secara massal, sehingga meningkatkan  produksi  asam  laktat  dan  ber pengaruh  pada  konsentrasinya  yang  bersifat toxic, berakibat  rendahya  daya  gerak  sperma tozoa dan membuat spermatozoa cepat mati [14]
Motilitas yang terbaik pada P2 dengan perlakuan lama waktu 30 detik dengan suhu 28°C, menunjukkan bahwa pada P2 memiliki ketahanan  hidup  yang  lebih  maksimal.  P1 yang menggunakan suhu 28°C dan waktu 15 detik,  memiliki  kualitas  lebih  rendah  dari semua rataan. Penyebab rendahnya motilitas pada perlakuan adalah terlalu cepat dalam melakukan thawing sehingga  menyebabkan spermatozoa masih banyak yang dalam keadaan diam.  Hal  ini  sesuai  dengan  hasil  penelitian sebelumnya bahwa akibat proses thawing yang cepat menyebabkan spermatozoa lebih banyak tidak bergerak maupun bergerak mundur [15].
Uji Chi Square tiap perlakuan menunjukkan bahwa P2, P3, dan P4 dengan perlakuan suhu yang  sama  yaitu  28 o C  dengan  lama  waktu thawing secara  berurutan  yaitu  30,  45  dan  60 detik memiliki hasil motilitas diatas SNI, sehingga P0 dengan suhu 37 o C lama waktu 30 detik dan P1 dengan suhu 28 o C lama waktu 15 detik dari hasil uji Chi  Square memiliki standar kualitas yang belum memenuhi SNI, sesuai SNI motilitas spermatozoa  yaitu  minimum  40%  [3].  Pada rata-rata P0 dijelaskan bahwa motilitas individu sesuai dengan SNI, tetapi ketika dilakukan uji lanjut  yaitu  uji Chi  Square memperoleh  hasil
yang  berbeda.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa terdapat  faktor  yang  membuat  P0  motilitas individu  rendah.  Faktor  rendahnya  motilitas individu spermatozoa pada P0 bisa disebabkan oleh data motilitas individu setiap straw memiliki nilai bervariasi dan terdapat data yang memiliki perbedaan  yang  signifikan,  sehingga  mem- pengaruhi data kelompok yang digunakan untuk uji Chi Square .
Viabilitas adalah uji kualitas yang dilakukan untuk mengetahui persentase spermatozoa hidup atau mati setelah diberi perlakuan. Uji viabilitas untuk  mengetahui  spermatozoa  hidup  atau mati didasarkan pada perbedaan warna men gunakan pewaranaan eosin-negrosin [16]. Sperma tozoa hidup ditandai dengan spermatozoa tidak berwarna  menandakan  spermatozoa  tidak menyerap  pewarna  dan  spermatozoa  tidak hidup  ditandai  dengan  spermatozoa  berwarna artinya  spermatozoa  menyerap  warna.  Hasil pegamatan viabilitas dapat dilihat pada Gambar 1.
Hasil penelitian menjelaskan bahwa lama dan suhu thawing berpengaruh nyata terhadap viabilitas  dari  semen  beku  sapi  Peranakan Ongole.  Pada  penelitian  yang  dilakukan  di jelaskan juga, bahwa perlakuan dengan suhu thawing yang berbeda dan lama waktu thawing yang  sama  yaitu  P0  dengan  perlakuan  suhu 37°C  lama  waktu  30  detik  dan  P2  perlakuan suhu 28°C lama waktu 30 detik dihasilkan P0 lebih menurun dari pada P2. Pada P1, P2, P3 dan  P4  dengan  menggunakan  lama  waktu thawing yang  berbeda  secara  berurutan  yaitu 15, 30, 45 dan 60 detik dengan suhu yang sama yaitu  28°C  memperoleh  hasil  pada  P4 mengalami kenaikan sedikit dibanding perlakuan  sebelumnya.  Terjadinya  kenaikan pada P4 menunjukkan bahwa pada P4 dinding membran  spermatozoa  masih  bekerja  dengan baik, sehingga tidak menyerap warna [17].
Data hasil penelitian setelah dibandingkan, menyatakan bahwa P1 dengan perlakuan lama waktu 15 detik dan suhu 28°C memiliki viabilitas lebih tinggi dibandingkan perlakuan yang lain. Tingginya viabilitas spermatozoa disebabkan karena  dinding  membran  masih  berfungsi dengan baik, sehingga metabolisme spermatozoa tidak  terganggu  membuat  zat  warna  tidak masuk [18].
Perlakuan  yang  menghasilkan  viabilitas rendah yaitu P0 dengan lama waktu 30 detik dengan suhu 37°C. Rendahnya viabilitas pada P0 kemungkinan terjadi karena adanya tekanan panas dan kontak dengan oksigen saat proses thawing dan pengamatan, sehingga membuat membran spermatozoa yang terdiri dari fosfolipid mengalami redukasi dan menimbulkan asam lemak dan proses peroksidasi sel [19].
Uji kualitas semen yang mengamati normal dan tidak normalnya spermatozoa disebut uji kualitas semen abnormalitas. Abnormalitas adalah penyimpangan dari bentuk morfologi normal  spermatozoa  yang  dapat  menyebabkan penurunan  daya  fertilitas  [20].  Hasil  data abnormalitas menjelaskan bahwa lama dan suhu thawing berpengaruh nyata terhadap abnormalitas dari semen beku sapi Peranakan Ongole. Hasil pegamatan abnormalitas dapat dilihat pada Gambar 2.
Hasil  keseluruhan  perlakuan  terhadap abnormalitasnya  masih  sesuai  standar  SNI yaitu dibawah 20% [21]. Perlakuan untuk hasil abnormalitas  yang  terendah  dibandingkan perlakuan lain berada pada P2 dengan perlakuan lama waktu 30 detik dan suhu 28°C. Perlakuan dengan abnormalitas paling tinggi terletak pada P3 yaitu perlakuan lama waktu 45 detik dan suhu 28°C.
Abnormalitas  pada  spermatozoa  yang paling  banyak  dijumpai  pada  penelitian  ini,
Gambar 1. Hasil pengamatan parameter viabilitas
a) Spermatozoa hidup, b) Spermatozoa mati a 50µm a b 50µm
diantaranya  berupa  ekor  atau  kepala  putus, kepala pecah dan ukuran kepala kecil. Kerusakan selaput kepala dapat menyebabkan spermatozoa kehilangan kesuburan dan untuk kerusakan di ekor akan menyebabkan kehilangan kemampuan untuk bergerak [22]. Abnormalitas sekunder dapat terjadi akibat proses distribusi dari penampungan sampai tempat penelitian yang menyebabkan goncangan yang keras pada tabung penyimpanan, cold shock ada proses pembekuan dan pemanasan yang terlalu lama pada saat thawing [23].
Total spermatozoa motil digunakan untuk mengetahui jumlah sperma dalam 1 ml semen. Berdasarkan uji DMRT menghasilkan data yang menunjukkan  bahwa  rataan  total  spermatozoa motil yang paling terbaik adalah P2 dengan lama waktu 30 detik dan suhu 28°C. Tingginya  total spermatozoa motil P2 sejalan dengan tingginya motilitas dari P2. Jumlah spermatozoa dan motilitas individu sangat mempengaruhi total spermatozoa motil [24]. Perlakuan yang menghasilkan kualitas total spermatozoa motil yang rendah daripada lainnya terdapat pada P1 dengan lama waktu dan suhu thawing 15 detik dan 28°C.
Hasil uji Chi Square menjelaskan P0 dengan suhu  37 o C  dan  lama  waktu thawing 30  detik dan P2, P3, P4 dengan suhu yang sama 28 o C, lama waktu thawing berbeda secara berurutan 30, 45, 60 detik menunjukkan bahwa P0, P2, P3 dan  P4  memenuhi  standar  untuk  digunakan karena memiliki total spermatozoa motil diatas 10 juta. Hal ini sesuai Standar Nasional Indonesia bahwa total spermatozoa motil yang baik yaitu minimal  berjumlah  10  juta/ straw .  Hasil  total spermatozoa motil berasal dari hasil kali motilitas yaitu 40% dengan standar jumlah konsentrasi 25 juta/straw [3].
Berdasarkan keseluruhan dari variabel penelitian  uji  kualitas  semen,  perlakuan  terbaik yaitu P2 dengan lama waktu 30 detik dan suhu
28°C.  Hal  ini  didasarkan  pada  SNI  yang menjelaskan  bahwa  standar  kualitas  semen beku didasarkan pada motilitas, konsentrasi dan total  spermatozoa  motil  [3],  selain  itu,  dasar utama semen beku dapat digunakan untuk IB yaitu pada motilitas dari semen tersebut [25]. Viabilitas  dan  abnormalitas  pada  penelitian ini sebagai bahan pendukung data penelitian untuk kualitas semen beku. Hasil data kualitas semen  beku  sapi  PO  yang  tertinggi  terdapat pada  P2  yaitu  motilitas  individu  49,9±6,0%, viabilitas  65,1±7,2%,  abnormalitas  4,0±1,8% dan total spermatozoa motil 19,3±4,0 juta/ straw .

## KESIMPULAN
Hasil pengamatan yang dilakukan pengaruh suhu dan  lama  waktu thawing semen beku Peranakan  Ongole  berpengaruh  nyata  pada kualitas  semen  yaitu  motilitas,  viabilitas, abnormalitas dan total spermatozoa motil. Hasil pengamatan yang telah dilakukan di peroleh perlakuan terbaik yaitu P2 menggunakan lama waktu  30  detik  dan  suhu  28 o C,  dengan  hasil motilitas individu 49,9±6,0%, viabilitas 65,1±7,2%,  abnormalitas  4,0±1,8%  dan  total spermatozoa motil 19,3±4,0 juta/ straw .

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis  menyatakan  tidak  ada  konflik kepentingan dengan pihak manapun terkait materi yang ditulis pada naskah ini

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan terima kasih kepada Hibah Penelitian LPPM  UB  yaitu  Hibah  Peneliti  Pemula  2021 dengan No. Kontrak 536.116. 1/UN10.C10/PN/ 2021 yang telah mendanai penelitian ini.
Gambar 2. Hasil pengamatan parameter abnormalitas a) Spermatozoa abnormalitas, b) Spermatozoa normal
a 50µm a b 50µm

## DAFTAR PUSTAKA
1. Wulandari, I. A., dan S. A. Prihatno. 2014. Pengaruh  berbagai  temperatur thawing semen beku terhadap keberhasilan inseminasi buatan pada sapi potong. Jurnal Sain Veteriner. 32: 40-45.
2. Malinda,  D.,  H.  Santoso,  dan  H. Latuconsina.  2021.  Analisis  viabilitas spermatozoa  sapi  Friesien  Holstein  ( Bos taurus )  post thawing semen  beku  dengan pengaruh  suhu  dan  lama  waktu thawing berbeda.  BIOSAINTROPIS  (Bioscience- Tropic). 6(2): 4-51.
3. Badan Standarisasi Nasional. 2021. Semen beku  sapi.  Badan  Standarisasi  Nasional. SNI 48691:2021. BSN Jakarta.
4. Amidia, L., F. Hoesni, dan B. Rosadi. 2021. Analisis  keberhasilan  inseminasi  buatan (IB)  ternak  sapi  berdasarkan  karakteristik inseminator  di  Kabupaten  Kerinci.  Jurnal Ilmiah  Universitas  Batanghari  Jambi. 21:467-476. Doi: 10.33087/jiubj.v21i2.1481
5. Ardhani,  F.,  Lukman,  dan  F.  Juita.  2021. Peran  faktor  peternak  dan  inseminator terhadap  keberhasilan  inseminasi  buatan pada  sapi  potong  di  Kecamatan  Kota Bangun.  Jurnal  Peternakan  Lingkungan Tropis. 3:15-22. Doi: 10.30872/jpltrop.v3i1.3701
6. Pratiwi,  W.  C.,  L.  Affandhy,  dan  D. Ratnawati.  2009.  Pengaruh  lama thawing tehadap  kualitas  semen  beku  Sapi Limousin  dan  Brahman.  J.  Anim.  Prod. 11:48-52.
7. Sritiasni  dan  E.  Purwono.  2016.  Pengaruh suhu  dan  lama  thawing  semen  beku  Sapi Limousin terhadap motilitas spermatozoa. Jurnal Triton. 7(1):91-96.
8. Susilawati,  T.  2013.  Pedoman  inseminasi buatan pada ternak. Universitas Brawijaya Press, Malang.
9. Susilawati, T. 2011. Spermatology.
Universitas Brawijaya Press, Malang.
10. Susilawati,  T.  dan  A.  P.  A.  Yekti.  2018. Teknologi
inseminasi buatan
menggunakan  semen  cair  (liquid  semen). Universitas Brawijaya Press, Malang.
11. Sudarwati, H., M. H. Natsir, dan V. M. A. Nurgiartiningsih. 2019. Statistik dan ranca ngan  percobaan  penerapan  dalam  bidang peternakan.  Universitas  Brawijaya  Press,
Malang.
12. Yumte, K., B. Wantouw, dan E. D. Queljoe. 2013.  Perbedaan  motilitas  spermatozoa sapi  jantan  (Friesian  Holstein)  setelah pemberian cairan kristaloid - ringer laktat. Jurnal e-Biomedik. 1:184-189. Doi:
10.35790/ebm.v1i1.1614
13. Aprilina,  N.,  S.  Suharyati,  dan  P.  E. Santosa.  2014.  Pengaruh  suhu  dan  lama thawing di  dataran  rendah  terhadap kualitas  semen  beku  Sapi  Simmental. Jurnal  Ilmiah  Peternakan  Terpadu.  2:96- 102. Doi: 10.239 60/jipt.v2i3.p%25p
14. Salim,  M.  A.,  T.  Susilawati,  dan  S. Wahyuningsih.  2012.  Pengaruh  metode thawing terhadap kualitas semen beku sapi Bali,  sapi  Madura  dan  sapi  PO.  Jurnal Agripet. 12:14-19. Doi: 10.17969/agripet.v1 2i2.197
15. Kusumawati, E. D., A. T. N. Krisnaningsih, dan R. R. Romadlon. 2016. Kualitas sperma tozoa  semen  beku  sapi  Simental  dengan suhu  dan  lama thawing yang  berbeda.
Jurnal Ilmu-Ilmu Peternakan (Indonesian J. Anim. Sci.). 26:38-41.
16. Rachmawati, A., Ismaya, B. P. Widyobroto, S. Bintara, and T. Susilawati. 2020. Effect of different  bovine  serum  albumin  (BSA) levels  on  the  sperm  viability  of  Ongole Cross  Bred  Bull  during  5°C  storage.  IOP Conf. Ser. Earth Environ. Sci. 478:1-5. Doi: 10.1088/1755-1315/478/1/012068
17. Pratama,  J.  W.  A.,  D.  A.  K.  Sari,  dan  M. Sigit.  2018.  Pengaruh  beberapa  metode thawing terhadap kualitas semen beku sapi
Simental.  Jurnal  Ilmiah  Fillia  Cendekia.
3:35-38. Doi: 10.32503/fillia.v3i2.254
18. Fauzan, M., M. Hartono, dan P. E. Santosa. 2014. Pengaruh suhu dan lama thawing di dataran  rendah  terhadap  kualitas  semen beku  sapi  Brahman. Jurnal  Ilmiah Peternakan Terpadu. 2:1-7. Doi: 10.23960/jipt.v2i3.p%25p
19. Malinda,  D.,  H.  Santoso,  dan  H. Latuconsina.  2021.  Analisis  viabilitas spermatozoa  sapi  Friesian  Holstein  ( Bos Taurus ) post thawing seemen beku dengan pengaruh  suhu  dan  lama  waktu  thawing berbeda.  BIOSAIN  TROPIS  (Bioscince- Tropic). 6(2): 46-51.
20. Sinurat, L. H., B. Rosadi, dan S. Erina. 2020. Efek  penyimpanan  epididimis  sapi  Bali pada suhu 5°C terhadap kualitas
spermatozoa. Jurnal Peternakan Sriwijaya. 9:27-34. Doi: 10.33230/JPS.9.2.2020.10988 21. Wahyutea, H. R., Sutopo, dan Y. S. Ondho. 2015.  Pengaruh  jarak  dan  waktu  tempuh terhadap post
thawing
motility, abnormalitas  dan  spermatozoa  hidup semen beku. Anim. Agric. J. 4:149-154.
22. Prihantoko,  K.  D.,  A.  Kusumawati,  D.  T. Widayati, and M. Pangestu. 2020. Effects of storage duration on mitochondrial activity and  DNA  fragmentation  of  post-thawed spermatozoa  from  several  Ongole  Grade Bull  in  Indonesia.  Veterinary  Practitioner. 21:264-268.
23. Kusumawati, E. D., S. Rahardi, S. Santoso, D. L. Yulianti. 2019. Pengaruh lama thawing yang  berbeda  pada  suhu  25 o C  terhadap kualitas  semen  beku  sapi  Ongole.  Jurnal Ilmu  Teknologi  Peternakan  Tropis.  6:119- 123.
24. Heriyanta, E., M. N. Ihsan dan N. Isnaini. 2013. Pengaruh Umur Kambing Peranakan Etawa (PE) terhadap Kualitas Semen Segar. Jurnal Ternak Tropika. 14: 1-5.
25. Sonar, B. P., R. P Tiwari, M. R. Poyam, G. K. Mishra, A. K. Pandey, A. K Nair. and S. A. Sahasrabudhe. 2016. Characteristics and freezability  of  Gir  bull  semen.  Indian  J.
Anim. Sci. 86:264-272.