## ABSTRACT
Background: Traumatic  ulcers  are  lesions  of  the  oral  mucosa  caused  by mechanical, chemical, and temperature trauma. Traumatic ulcer treatment aims to reduce inflammation, accelerate the healing process, and reduce pain. Bay leaf has anti-inflammatory pharmacological activities. This study aims to determine the effect of bay leaf extract on the expression of fibroblast growth factor in traumatic ulcer oral mucosa in Wistar rats.
Method: This  is  an  experimental  research  with  a  post-test  only  control  group design, consisting of four groups with 20 sample of male Wistar rats. All animals were  injured  using  a  hot  burnisher  attached  to  the  labial  mucosa  for  1  second. The gel was applied twice daily until the 3rd and 5th day after the ulcer has formed. Rat  mucosal  tissues  were  analyzed  by  immunohistochemical  staining  for  FGF expressions. Statistical analysis using SPSS Mann-Whitney test.
Result: The  results  showed  the  mean  of  cells  expressing  FGF  in  the  bay  gel extract  group  on  the  3rd  and  5th  days  were  8.4  ±  0.8,  and  13.6  ±  0.5.  Mann Whitney test results showed P<0.05  there is a significant differential expression of  FGF  traumatic  ulcer  oral  mucosa  of  experimental  animals  on  days  3  and  5 compared control group.
Conclusion: Bay leaf extract increased FGF expression on days 3 and 5

## PENDAHULUAN
Ulkus rongga mulut adalah peradangan pada bagian  mukosa  yang  disebabkan  kerusakan jaringan  epitel  rongga  mulut dan  terbukanya  ujung saraf. Traumatik berkaitan adanya trauma mekanik, kimia,  dan  suhu.  Gambaran  klinis  dari  ulkus traumatik  merupakan  lesi  sekunder  dengan gambaran  khas  berupa  bentuk  soliter  bulat, berukuran variatif, kedalaman lesi mencapai lamina propia 1,2,3 .
Proses penyembuhan ulkus traumatik dibagi menjadi  3  tahap,  fase  inflamasi,  proliferasi,  dan remodeling .  Fase  inflamasi  dibagi  menjadi  2  yaitu fase  inflamasi  awal  dan  fase  inflamasi  akhir 4 .  Sel yang berperan penting adalah makrofag. Makrofag diklasifikasikan  menjadi  2  yaitu  makrofag  pro- inflamasi  yang  berperan  pada  fase  inflamasi  awal dan  makrofag  antiinflamasi  atau  pro-angiogenik yang berperan pada fase inflamasi akhir.
Keywords: Bay Leaf , Fibroblast
Growth Factor, Traumatic Ulcer, Wound Healing

## EKSTRAK DAUN SALAM DALAM MENINGKATKAN EKSPRESI FIBROBLAST GROWTH FACTOR PADA ULKUS TRAUMATIK RONGGA MULUT
HN. Amrina Rosada*, Rochman Mujayanto**, Adisty Restu Poetri***
*Program Pendidikan Sarjana Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Gigi UNISSULA **Departemen Ilmu Penyakit Mulut Fakultas Kedokteran Gigi UNISSULA ***Departemen Periodonsia Fakultas Kedokteran Gigi UNISSULA
Correspondence Rochman Mujayanto , Departemen Ilmu Penyakit Mulut Fakultas Kedokteran Gigi UNISSULA Email : rochman.mujayanto@unissula.ac.id
Pada  fase  inflamasi  akhir  dimulai  dari  48  jam sampai 72 jam setelah lesi muncul. Fase inflamasi akhir  ditandai  dengan  makrofag  mengeluarkan faktor  pertumbuhan  diantaranya  TGF- β,  TGF-α,
FGF, dan VEGF yang menginisiasi fase selanjutnya, fase proliferasi 5 .
Fase proliferasi berlangsung dalam waktu 48 jam  pertama  sampai  hari  ke-14  dan  berfungsi menutupi luka yang ada dan mengembalikan fungsi dari  jaringan 6 .Karakteristik  dari  fase  ini  ditandai dengan  migrasi  sel  fibroblas  dan  deposisi  sintesis matriks ekstraseluler. Fase remodeling menjadi fase terakhir  dari  proses  penyembuhan  ulkus.  Fase  ini dapat berlangsung hingga 2 tahun lebih. Pada fase ini terjadi diferensiasi fibroblas menjadi myofibroblas yang mengekspresikan α- Smooth  Muscle Actin (α- SMA),  kolagen  tipe  III  di  jaringan  ekstraselular digantikan    oleh  kolagen  tipe  I  yang  memiliki kekuatan tarik lebih besar, dan tingkat angiogenesis menurun 7 .
Pada  proses  penyembuhan  luka,  diperlukan faktor  pertumbuhan,  salah  satunya Fibroblast Growth Factor (FGF)  yang sangat  berperan dalam inisiasi  fase  proliferasi.  FGF  diproduksi  oleh  sel makrofag, sel mast, limfosit T, dan sel endotel pada fase inflamasi akhir atau sekitar 48 jam sampai 72 jam  setelah  luka  muncul 8 .  FGF  berperan  dalam proses penyembuhan ulkus yaitu dengan meregulasi  dari  fungsi  selular  diantaranya  adhesi, proliferisasi, migrasi, dan diferensiasi dari epitelium, fibroblas, jaringan ikat, dan saraf 9 .
Medikasi  ulkus  dapat  menggunakan  obat antiinflamasi yaitu NSAID ( Nonsteroid Anti-
Inﬂammatory  Drugs ) yang bekerja dengan menghambat  pengeluaran  mediator  inflamasi. Peneliti mencoba meneliti mengenai fitofarmakologi yang  memiliki  aktivitas  antiinflamasi  salah  satunya adalah  daun  salam,  selain  itu  daun  salam  dapat mempercepat  proses  penyembuhan  luka  karena bersifat  antibakteri.  Daun  salam  yang  digunakan dalam  sediaan  gel  karena  pengobatan  ulkus  yang efektif untuk mengurangi rasa sakit dan mempercepat  penyembuhan  yaitu  menggunakan obat dengan sediaan gel yang diaplikasikan secara topikal 10 .
Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui pengaruh  gel  ekstrak  daun  salam  ( Syzygium polyanthum ) terhadap  ekspresi  FGF  pada  proses penyembuhan ulkus traumatik rongga mulut hewan coba.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dimulai  dengan  disetujuinya penelitian ini oleh Komisi Etik Fakultas Kedokteran Gigi  Universitas  Islam  Sultan  Agung  Semarang dengan  No.103/B.1-KEPK/SA-FKG/VII/2019.  Jenis penelitian ini adalah laboratorium true experimental desain post-test only control group.
Pembuatan ekstrak dilakukan dengan daun salam  yang  masih  segar  dikeringkan  dalam  oven sekitar 2-3  hari, setelah  itu daun salam  yang telah kering  dihaluskan  menggunakan  blender,  dan
92 EKSTRAK DAUN SALAM DALAM MENINGKATKAN EKSPRESI FIBROBLAST GROWTH

## FACTOR PADA ULKUS TRAUMATIK RONGGA MULUT
didapatkan daun salam yang telah halus dicampurkan dengan etanol 96% dengan perbandingan  1:9  dengan  metode  maserasi didiamkan  selama  3  hari  dan  sesekali  diaduk selama 15 menit agar tercampur merata. Pada hari ke-3 ampas daun salam yang mengendap disaring agar mendapatkan filtrat, setelah itu filtrat diuapkan ke dalam rotary evaporator sampai menjadi ekstrak kental  daun  salam.  Ektrak  daun  salam  yang  telah didapatkan,  dicampur  dengan  larutan  carbomer 1,5% , TEA 1 gram, metil paraben, dan gliserin. Gel ekstrak daun salam dan bahan penambah tersebut diaduk  sampai  homogen  dan  merata  sampai  tidak ada partikel yang berbeda 11 .
Hewan coba yang digunakan pada penelitian ini  adalah  tikus  wistar  jantan  dengan  jumlah  total sampel  penelitian  yaitu  20  tikus  Wistar,  yang mengacu rumus WHO (1993) 12 .  Hewan coba dibagi menjadi 4 kelompok yaitu K1 (Kontrol hari ke-3), K2 (Kontrol hari ke-5), P1 (Perlakuan hari ke-3), dan P2 (Perlakuan  hari  ke-5).  Hewan  coba  diadaptasi terlebih  dahulu  selama  5  hari,  setelah  itu  hewan coba diinjeksi ketamin pada bagian paha.  Ketamin dicampur  akuades  dengan  perbandingan  7:3  dan setiap ekor diinjeksi 0.3 ml campuran ketamin dan aquades.  Aplikasi  anestesi  topikal  menggunakan benzocaine 10%  pada  bagian  labial,  setelah  tikus tenang,  pada  bagian  labial  hewan  coba  dibuat perlukaan  /  pembuatan  ulkus  menggunakan  ujung
burnisher  bulat  berdiameter  2  mm  yang  telah dipanaskan sampai merah menyala, dan diaplikasikan  pada  labial  tikus  selama    1  detik 13 . Semua  hewan  coba  yang  telah  dibuat  perlukaan selanjutnya  dilakukan  randomisasi  kelompok, dengan membagi kelompok menjadi 4.
Pembentukan  ulkus  diamati,  dan  ulkus terbentuk  hari  ke-2  setelah  perlukaan,  selanjutnya setelah pembentukan ulkus, aplikasi bahan dengan gel  carbomer  sebagai  kelompok  kontrol,  dan  gel ekstrak  daun  salam  sebagai  kelompok  perlakuan. Pengaplikasian  gel  dilakukan  pada  pagi  dan  sore hari  sampai  hari  ke-3  dan  ke-5  pasca  terbentuk ulkus.  Pada  hari  ke-3  dan  ke-5  masing-masing kelompok  dikorbankan  dengan  klorofom  peri inhalasi,  dan  jaringan  ulkus  diambil.  Pembuangan limbah diserahkan kepada manajemen Laboratorium  Hewan  Coba  Fakultas  Kedokteran Unissula.
Jaringan  yang  telah  didapatkan  dibuat preparat  sediaan  histopatologi  dan  pewarnaan immunohistokimia anti-FGF. Ekspresi FGF didapatkan  dari  hasil  perhitungan  rata-rata  sel leukosit  yang  mengekspresikan  FGF  dengan mikroskop  perbesaran  400  kali.  Hasil  positif  jika ditemukan  inti  sel  yang  besar  dengan  sitoplasma berwarna  kecoklatan  atau  hitam  keunguan.  Hasil negatif jika ditemukan inti sel yang kecil atau besar dengan  sitoplasma  berwarna  kebiruan  atau  jernih.
Penghitungan  dengan  merata-rata  jumlah  sel leukosit  yang  mengekspresikan  FGF  dalam  5 lapang pandang 14 .

## HASIL PENELITIAN
Hasil penelitian pengaruh gel ekstrak daun salam terhadap ekspresi FGF disajikan dalam tabel
1.  Tabel  1  menunjukkan  jumlah  rerata  ekspresi FGF  kelompok ektrak  daun  salam  lebih  tinggi  jika dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol,  Diketahui kelompok  perlakuan  hari  ke-5  memiliki  rerata ekspresi FGF tertinggi dan kontrol hari ke-3 dengan rerata ekspresi FGF terendah.
Analisis  data  dilanjutkan  dengan  uji normalitas  yang  didapatkan  beberapa  kelompok data  tidak  terdistribusi  normal  dengan  p<0.05  dan uji  homogenitas levene  test didapatkan  data homogen  dengan  p>0.05  maka  analisis  dilakukan menggunakan  uji Mann-Whitney dengan  hasil sebagai berikut.
Hasil  uji Mann  Whitney pada  tabel  2 menunjukkan nilai 0.007 pada  hari ke-3 dan  0.006 pada  hari  ke-5  (P<0.05)  yang  diartikan  terdapat perbedaan  yang  signifikan  pemberian  gel  ekstrak daun  salam  terhadap  ekspresi  FGF  pada  ulkus traumatik pada hewan coba.
Pembacaan preparat hasil penelitian ditemukan  inti  sel  dengan  sitoplasma  berwarna kecoklatan pada     preparat              histologi       yang
menunjukkan  sel  tersebut  mengekspresikan  FGF (Gambar 1).

## DISKUSI
Pada penelitian ini, gel ekstrak daun salam secara signifikan meningkatkan ekspresi FGF pada ulkus mukosa hewan coba. Pada proses penyembuhan luka, fase inflamasi akhir berlangsung  pada  hari  ketiga  pasca  luka,  sel-sel leukosit akan mengekspresikan FGF yang meningkat  sampai  dengan  fase  proliferasi,  dan menurun saat fase remodeling 15 . Aktivitas maksimal dari growth factor rata-rata berlangsung     3-7 hari pasca luka 14 . Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan,  yaitu  terjadi  peningkatan  ekspresi  FGF dari hari ketiga sampai hari kelima pasca luka. Hasil penelitian didapatkan data beberapa kelompok tidak terdistribusi  normal.  Hal  tersebut  dapat  terjadi karena  tingkat  metabolisme  obat  dari  hewan  coba yang berbeda, sehingga dapat mempengaruhi data ekspresi FGF yang tidak normal.
Gambar  1  menunjukkan  ekspresi  FGF  masing- masing kelompok pada hari 3 dan 5. Didapatkan sel yang  mengekspresikan  FGF  lebih  kuat  pada kelompok perlakuan dengan inti sel yang besar dan sitoplasma  berwarna  kecoklatan  atau  hitam keunguan.  Ekspresi  FGF  yang  tinggi  berkorelasi dengan peningkatan proliferasi sel fibroblast dan sel endotel, sedangkan kurangnya ekspresi FGF mengakibatkan penurunan proliferasi fibroblas dan
94 EKSTRAK DAUN SALAM DALAM MENINGKATKAN EKSPRESI FIBROBLAST GROWTH

## FACTOR PADA ULKUS TRAUMATIK RONGGA MULUT
angiogenesis, serta mengakibatkan proses
penyembuhan  luka  yang  lama 9 . Fibroblast  growth factor diproduksi  oleh  sel  makrofag  antiinflamasi (M2),  sel  mast,  limfosit  T,  dan  sel  endotel. Mekanisme  kerja  FGF  yaitu  berikatan  dengan reseptor  FGFRs  dipermukaan  sel  target    (sel endotel,  sel  epitel,  sel  fibroblast,  dan  keratinosit) dan  mengaktifkan  kaskade  biokimia  dengan dimulainya  mengaktifkan  PI3-kinase,  mengaktivasi jalur Rac1, dan Rac1 meregulasi aktivasi jalur JNK sehingga  mempengaruhi  transkripsi  inti  sel  dan menyebabkan  terjadinya  proliferasi,  differensiasi, migrasi sel fibroblast,  dan angiogenesis 9 . Terdapat dua  macam  FGF  yang  diekspresikan,  yaitu  FGF profibrotic dan antifibrotic. FGF profibrotic bekerja dengan  meningkatkan  proliferasi  dan  migrasi fibroblast dan kolagen, sedangkan FGF antifibrotic bekerja  menghambat  dan  mengurangi  proliferasi, migrasi fibroblast dan kolagen dengan mengurangi produksi sel α-SMA cells.  Produksi FGF profibrotic dan antifibrotic sebagai  bentuk  kompensasi  satu sama lain agar diproduksi secara tidak berlebihan, dan  menjaga  kestabilan  proses  penyembuhan luka 16 .
Kandungan  di  daun  salam  yang  dapat mempengaruhi  percepatan  proses  penyembuhan luka  diantaranya  minyak  atsiri,  flavonoid,  tanin, vitamin  A,  vitamin  C,  protein,  zink,  vitamin  B- kompeks,  dan  karbohidrat. Essential  oil memiliki
fungsi  dengan  mengurangi  penyebaran  bakteri pada  bagian  luka [17] .  Flavonoid  memiliki  aktivitas antiinflamasi  yang  dapat  menurunkan  sekresi sitokin  proinflamasi  dan  meningkatkan  sitokin antiinflmasi 18 .  Tanin  sebagai  antibakteri  sehingga proses  penyembuhan  luka  lebih  cepat  karena mengurangi pertumbuhan bakteri penyebab inflamsi 19 .
Vitamin  A  dan  C  berperan  mempercepat proses  inflamasi  ke  proliferasi  dan remodeling dengan meningkatkan jumlah sel yang mengekspresikan FGF sehingga dapat memodulasi aktivitas fibroblas, sel epitel, sel endotel, melanosit, proses  epitelisasi,  dan  sintesis  kolagen 20 .Protein berfungsi  sebagai  biokatalisator  deferensiasi  sel makrofag dan sel mast. Sel makrofag berdiferensiasi  dari  makrofag  proinflamasi  ke makrofag  antiinflamasi  yang  terjadi  pada  fase inflamasi  akhir.  Makrofag  antiinflamasi  akan mengeluarkan  berbagai growth  factor ,  salah satunya FGF untuk menginisisasi fase selanjutnya, yaitu  fase  proliferasi 21 .  Kekurangan  protein  akan menyebabkan  transkipsi  mRNA  dalam  sel  mast terganggu,  proses  penyembuhan  luka  yang  lama, persistensi  makrofag  proinflamasi,  penyembuhan luka buruk, dehiscence luka, dan produksi kolagen yang tidak adekuat 22 .
Zink mempengaruhi RNA polymerase, DNA polymerase, dan DNA transkriptase. Pelepasan ion zink  akan  mempengaruhi  ekspresi  FGF  di makrofag,  sel  mast,  dan  sel  T  yang  akan meningkatkan  proliferasi  fibroblast  dan  migrasi keratosit  pada  fase  proliferasi 23 .  Vitamin  B- kompleks  yang  terkandung  di  daun  salam  (niasin, tiamin, riboflavin, asam folat, dan B12) merupakan kofaktor dalam sintesis DNA.
Vitamin  B-kompleks  memiliki  pengaruh pada  perubahan  morfologi  dan  pembelahan  sel, salah  satunya  sel  pada  mukosa.  Vitamin  B- kompleks berperan dalam metabolisme nukleotida. Nukleotida  mempengaruhi  sintesis  protein  salah satunya faktor pertumbuhan yaitu FGF 24.
Karbohidrat  menstimulasi  makrofag  antiinflamasi, sel mast, dan limfosit T mensekres
Gambar 1 . Gambaran sel yang mengekspresikan FGF berwarna kecoklatan pada kelompok kontrol hari 3 (a);  kelompok  kontrol  hari  5  (b);  kelompok  perlakuan  hari  3  (c);  dan  kelompok  perlakuan  hari  5  (d)  yang diamati dengan mikroskop perbesaran 400x.

## EKSTRAK DAUN SALAM DALAM MENINGKATKAN EKSPRESI FIBROBLAST GROWTH FACTOR PADA ULKUS TRAUMATIK RONGGA MULUT
hormon dan growth factor saat proses penyembuhan luka, salah satunya FGF ,
sehingga  meningkatkan  produksi sel  fibroblast saat fase proliferasi berlangsung 20 .

## KESIMPULAN
Kandungan daun salam mampu meningkatkan jumlah sel yang mengekspresikan FGF  dibanding  dengan  kelompok  kontrol. Banyaknya  jumlah  sel  yang  mengekspresikan FGF  akan  meningkatkan  kadar  FGF  dalam jaringan,  dan  dapat  mempercepat  proses proliferasi, diferensiasi, dan migrasi sel fibroblast, sehingga  fase  proliferasi  berjalan  dengan  baik dan  proses  penyembuhan  luka  menjadi  lebih cepat.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Bakar  A.  Kedokteran  Klinis.  2nd  ed. Jakarta: Quantum Sinergis Media; 2012.
2. Bombeccari  GP,  Guzzi  G,  Pallotti  F, Porrini  M,  Giannì  AB,  Spadari  F.  Large oral  ulcer  of  tongue  related  to  dental trauma.  Stomatol  Balt  Dent  Maxillofac  J. 2017;19(19):51 –4.
3. Harty  F.,  Ogston  R,  Sumawinata  N. Kamus  Kedokteran  Gigi.  Jakarta:  EGC; 2012.
4. Sherwood L. Fisiologi Manusia dari Sel ke Sistem. 8th ed. Jakarta: EGC; 2016.
5. Chakrabarti  S,  Bhattacharya  R,  Deb  K. Cell-based  Wound  Healing:  Mechanisms and  Treatments.  Br  J  Med  Med  Res. 2016;11(4):1 –17.
6. Keast D, Forest- L, Forest-lalande L. Basic Principles of Wound Healing (An understanding  of  the  basic  physiology  of wound healing  provides the clinician  with the framework necessary to implement the
basic  principles  of  chronic  wound  care). 2011;9(2):1 –5.
7. Landén  NX,  Li  D,  Ståhle  M.  Transition from inflammation to proliferation: a critical step  during  wound  healing.  Cell  Mol  Life
Sci. 2016;73(20):3861 –85. 8. Spaccapelo L. Rationale For Basic Fgf In Wound Healing And Review Of. 2016;3(5):51 –9. 9. Yun YR, Won JE, Jeon E, Lee S, Kang W, Jo  H,  et  al.  Fibroblast  growth  factors: Biology,  function,  and  application  for tissue  regeneration.  J  Tissue  Eng. 2010;1(1):1 –18. 10. Westby MJ, Dumville JC, Soares MO,Stubbs N NG. Dressings and Topical Agents  for  Treating  Pressure  Ulcers. London: Wiley; 2017.
11. Megawati, Roosevelt A, Akhir L. Formulasi Dan  Uji  Stabilitas  Fisik  Sediaan  Gel Ekstrak Kulit Buah Rambutan (Nephelium lappaceum  L.)  Sebagai  Obat  Sariawan Menggunakan  Variasi  Konsentrasi  Basis Carbopol.  [JFS]  J  Farm  Sandi  Karsa. 2019;5(1):5 –10. 12. Sastroasmoro  S,  Ismael S.  Dasar
Metodologi  Penelitian  Klinis.  Jakarta: Sagung Seto; 2011.
13. Mujayanto  R.  Pengaruh  Zink  Sulfat  1% Topikal Terhadap Jumlah Makrofag Ulkus Traumatikus Mulut Tikus Wistar Diabetes. Universitas Airlangga; 2016.
14. Destri C, Sudiana IK, Nugraha J.  Potensi Ekstrak  Jatropha  Multifida  Terhadap Ekspresi  Vegf  Aphthous  Ulcer  Rat norvegicus. 2017;1(2):59 –65.
15. Park JW, Hwang SR, Yoon I-S. Advanced Growth Factor Delivery Systems in Wound Management  and  Skin  Regeneration.
Molecules. 2017 Jul;22(8):1259.
16. Dolivo  DM,  Larson  SA,  Dominko  T. Fibroblast  Growth  Factor  2  as  an Antifibrotic:  Antagonism  of  Myofibroblast Differentiation  and  Suppression  of  Pro- Fibrotic Gene Expression. Cytokine Growth  Factor  Rev.  2017/09/23.  2017 Dec;38:49 –58.
17. Muhammad  IR,  Hariandja  EM.  Review : Aktivitas  Farmakologis  ,  Senyawa  Aktif  , dan  Mekanisme  Kerja  Daun  Salam  ( Syzygium polyanthum ). Perkemb Terkini
Rosada/ Mujayanto/ Putri 97
Sains  Farm  dan  Klin.  2015;(November 2015):6 –7.
18. Silalahi M. Syzygium polyanthum (Wight) Walp.  (Botani,  Metabolit  Sekunder  dan Pemanfaatan). J Din Pendidik. 2017;10(1):1 –16.
19. Agustina  R,  Indrawati  DT,  Masruhin  MA. Aktivitas  Ekstrak  Daun  Salam  (Eugenia Polyantha)  Sebagai  Antiinflamasi  Pada
Tikus  Putih  (Rattus  Norvegicus).  Lab Penelit Dan Pengemb Farmaka Trop Fak Farm  Univ  Mulawarman,  Samarinda,
Kalimantan Timur. 2015;120 –3.
20. Barchitta M, Maugeri A, Favara G, San Lio RM, Evola G, Agodi A, et al. Nutrition and wound  healing:  An  overview  focusing  on the beneficial effects of curcumin. Int J Mol Sci. 2019;20(5).
21. Mackay E. The Power of Protein in Wound Healing. Wound Care Canada. 2019;17(1):34 –7.
22. Dewi  S,  Soemardini  S,  Nugroho  FA. Hubungan Tingkat Konsumsi Protein, Zat Besi  (Fe)  dan  Zinc  (Zn)  dengan  Kondisi Penyembuhan  Luka  Perineum  Derajat  II pada  Ibu  Nifas.  Maj  Kesehat.  2016 Sep;3:137 –43.
23. Anggraeni  D,  Adji  D,  Murwanti  R. Kesembuhan  Luka  Setelah  Pemberian Topikal  ZINK  pada  Tikus  dengan  Pakan Lemak Tinggi. J Kedokt Hewa. 2015;105 – 8.
24. George  J,  Shobha  R,  Lazarus  F.  Folic acid:  A  positive  influence  on  periodontal tissues  during  health  and  disease  .  Int  J Heal Allied Sci. 2013 Jul;2(3):145 –52.