Feminisasi sidat, Anguilla bicolor bicolor Mc Clelland, 1844 melalui penyuntikan hormon estradiol dan metil testosteron yang dikombinasi dengan hCG dan anti dopamin
[Feminization of Indonesian short-finned eel ( Anguilla bicolor bicolor Mc Clelland, 1844) through injection of estradiol and methyl testosterone at the combination
with hCG and anti dopamin]
Abdul Zahri 1 , Agus Oman Sudrajat 2 , Muhammad Zairin Junior 2
1 Politeknik Perikanan Negeri Tual, Maluku Tenggara
2 Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor
Diterima: 16 Januari 2015; Disetujui: 05 April 2016

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk menjelaskan pengaruh estradiol (E 2 ) dan metil testosteron (MT) yang dikombinasikan dengan hCG dan anti dopamin (AD) terhadap persentase jenis kelamin betina dan kualitas perkembangan ovari sidat (Anguilla bicolor bicolor ). Sidat dengan bobot 200±15g pada fase yellow diinjeksi dengan larutan estradiol 3 mg mL –1 + hCG, 2 mg mL –1 + AD 10 mg mL –1 (hEA), MT 3 mg mL –1 +  hCG 2 mg mL –1 + AD 10 mg mL –1 (hTA), estradiol 3 mg mL –1 + AD 10 mg mL –1 (EA), MT 3 mg mL –1 + AD 10 mg mL –1 (TA), AD 10 mg mL –1 (A), dan kontrol 9 mg mL –1 NaCl (F). Frekuensi injeksi sebanyak enam kali dengan periode dua minggu sekali. Pemberian hormon kombinasi dengan perlakuan hEA dan hTA ternyata efektif meningkatkan persentase jenis kelamin betina berturut-turut sebesar 72% dan 66% setelah enam minggu. Perkembangan gonad betina terbaik ditemukan pada perlakuan hTA yaitu mencapai fase vitellogenesis akhir dengan nilai GSI 4,80%
Kata penting: hormon, feminisasi, perkembangan gonad, sidat

## Abstract
The  objective  of  the  experiment  was  to  describe  the  influence  of  estradiol  (E 2 )  and  methyltestosterone  (MT)  in combination  with  hCG  and  anti-dopamine  (AD)  on  the  percentage  of  female  and  quality  of  ovary  development  of Indonesian short-finned eel ( Anguilla bicolor bicolor ). Eel with 200±15 g of body weight in the yellow phase injected with a estradiol solution of 3mg mL –1 + hCG 2mg mL –1 + AD 10 mg mL –1 (hEA), MT 3 mg mL –1 + hCG 2 mg mL –1 + AD 10 mg mL –1 (hTA), estradiol 3 mg mL –1 + AD 10 mg mL –1 (EA), MT 3 mg mL –1 + AD 10 mg mL –1 (TA), AD 10 mg mL –1 (A) and 9 mg mL –1 NaCl control (F). Injection frequency was six times with a period of two weeks. After six weeks of experiment,  EA and hTA combination hormone  treatments were effective to increase the female percentage 72%  and  66%,  respectively.  The  best  ovary  development  was  found  in  the  hTA  treatment  i.e.  attain  the  late- vitellogenesis with GSI value of 4.80%.
Keywords: hormone, feminization, gonad growth, Indonesian short-finned eel

## Pendahuluan
Penentuan  jenis  kelamin  secara  morfolo- gis pada sidat masih sulit dilakukan, karena anta- ra  sidat  jantan  dan  betina  memiliki  kemiripan bentuk fisik. Selama ini, penentuan jenis kelamin dilakukan  melalui  pembedahan,  yaitu  memban- dingkan  perbedaan  pada  morfologi  gonad.  Sidat yang telah  mencapai fase silver atau sedang  me- lakukan ruaya pemijahan dapat dibedakan berda- sarkan  ukuran  tubuh  yakni  sidat  betina  cende-
rung lebih besar daripada sidat jantan. Yokouchi et  al. (2009)  menemukan  bahwa Anguilla  japo- nica yang tertangkap pada fase silver dengan usia 8-9 tahun, ukuran panjang betina 659,3±65,6 mm dan  bobot  474,2±164.3  g  lebih  besar  daripada jantan  527,7±47,7  mm  dan  bobot  219,8±61,4  g. Demikian  pula  yang  ditemukan  Sugeha et  al .
(2009)  pada A.  bicolor  bicolor .    Namun  dalam lingkungan  budi  daya,  sidat  yang  matang  secara seksual atau  mencapai fase silver jarang ditemu- kan,  sehingga  penentuan  calon  induk  jantan  dan betina masih sulit dilakukan sejak fase yellow . Penulis korespondensi Surel: zalwie_25@yahoo.co.id
Banyak  penelitian  telah  membuktikan bahwa sidat yang dibudidayakan membentuk po- pulasi  kelamin  tunggal,  yaitu  seluruhnya  jantan. Penelitian  yang  pernah  dilakukan  pada  sidat  Je- pang A.  japonica menemukan  bahwa  sidat  liar yang  ditangkap  dan  dipelihara  100%  menjadi jantan, sedangkan yang tetap hidup liar sebagian besar  adalah  betina  (Chu et  al. 2006).  Selanjut- nya  dijelaskan  pula  bahwa  sidat  yang  dipelihara tersebut bila dilepaskan kembali ke alam liar, se- bagian  diantaranya  dapat  menjadi  betina.  Sidat Jepang yang dikoleksi dari alam pada fase early - silver diketahui memiliki rasio jenis kelamin jan- tan 77%, kemudian setelah  fase late-silver 67% adalah  ikan  betina  (Yokouchi et  al. 2009).  Kon- disi yang sama ditemukan pula pada A. australis (Kearney et  al. 2011)  dan A.  anguilla (Tomkie- wicz et  al. 2011).  Oleh  karena  itu,  dalam  ling- kungan  budi  daya  perlu  rekayasa  melalui  rang- sangan hormon untuk mendapatkan sidat betina.
Pemanfaatan  hormon  untuk  mendapatkan jenis  kelamin  tertentu  dan  kematangan  gonad pada  ikan  sidat  telah  banyak  dilakukan.  Estra- diol-17β (E 2 ) diketahui memiliki kemampuan un- tuk mendorong proses oogenesis, sedangkan tes- tosteron  (T)  merangsang  spermatogenesis.  Se- jumlah penelitian membuktikan bahwa E 2 berpe- ran  merangsang  proses  vitellogenesis,  seperti pada Rhamdia  quelen dengan  konsentrasi  10 . mg kg –1 bobot  tubuh  (Costa et  al .  2010); Heterop- neustes  fossilis dengan  konsentrasi  28 . mg  kg –1 bobot tubuh (Singh et al . 2009); feminisasi pada
Lepomis macrochirus dengan dosis 150  mg kg –1 pakan (Wang et al . 2008). Estradiol juga merang- sang aktifitas sel sertoli untuk menyalurkan ener- gi  pada  gonad  (Miura et  al .  2003)  dan  melin- dungi  sel  germinal  (Higuchi et  al .  2012).  Metil testosteron  (MT)  yang  dikombinasikan  dengan ekstrak  pituitari  salmon  juga  efektif  merangsang oogenesis (Wang & Lou 2007).
Kebutuhan  induk  berkualitas  untuk  me- nunjang pembenihan sidat mutlak diperlukan. Si- dat yang ditangkap dari  alam  umumnya berkela- min jantan sehingga perlu direkayasa untuk men- dapatkan sidat betina. Sidat betina hasil rekayasa memiliki kualitas gonad yang beragam, sehingga feminisasi merupakan salah satu cara untuk men- dapatkan  induk  betina  yang  mampu  menghasil- kan  telur  yang  berkualitas  baik  sebagai  bagian dari kegiatan reproduksi. Mekanisme pengaturan internal  proses  reproduksi  merupakan  kerja fol- licle  stimulating  hormone (FSH)  dan luteinizing hormone (LH) (Cerda-Reverter & Canosa 2009).
Salah satu hormon eksternal  yang  memiliki  kan- dungan  FSH  dan  LH  adalah human  chorionic gonadotropin (hCG).  Aplikasi  hCG  untuk  mem- bantu proses reproduksi dengan merangsang  ste- roidogenesis  (Miura  &  Miura  2011),  seperti  se- kresi  testosteron  dan  E 2 .  Tingginya  konsentrasi testosterone  eksogenous dapat  dikonversi  men- jadi  E 2 oleh  enzim  aromatase  (Uno et  al .  2012), kemudian dengan peningkatan E 2 diharapkan ter- jadi proses feminisasi (Singh et al . 2009, Higuchi et al . 2012).
Penyuntikan  intramuscular  3 . mg  kg –1 MT dikombinasikan dengan 20 . mg kg –1 ekstrak pitui- tari salmon merangsang perkembangan gonad A. japonica (Wang & Lou 2007). Selain itu, aplikasi 10 . ng  mL –1 11-ketotestosteron  (11-KT)  dicampur dengan  5 . mg  mL –1 very  low  density  lipoprotein, efektif  pada  perkembangan  previtellogenik  oosit A. japonica kontras dengan E 2 . Fenomena ini ter- jadi akibat tipe seksualitas sidat yaitu tidak jelas- nya status antara jantan atau betina terutama pada fase elver sampai  fase yellow (Endo et  al . 2011, Lokman et  al .  2007).  Hormon  testosteron  juga berperan selama adaptasi  sidat memasuki perair- an laut (Lokman et al . 2007). Fungsi  gonadotro- pik tidak aktif selama sidat di air tawar meskipun terpapar estrogen tinggi dan aktif saat mendekati
lokasi  pemijahan  (Versonnen et  al .  2004).  Laut merupakan pemicu untuk perubahan kelamin dan vitellogenesis  (Melia et  al .  2006).  Peran  aroma- tase juga menentukan perubahan kelamin (Uno et al . 2012). Kondisi ini membuktikan peran E 2 dan T secara kombinasi dengan hormon lain merang- sang  perubahan  kelamin  dan  perkembangan  go- nad (Ijiri et al. 2011).
Dopamine  pada  banyak  vertebrata  ber- fungsi  sebagai  neurotransmiter  yang  berkontri- busi  pada  fungsi  hipotalamus  dan  hipofisis (O’Connell et  al .  2013),  dan  dapat  menghambat perkembangan gonad (Weltzien et al . 2009). Do- pamin juga berkontribusi menghambat fungsi E 2 , efeknya  terjadi  defeminisasi  dan  menjurus  pada maskulinisasi  serta  mereduksi  tingkah  laku  re- produksi (Wilson & Davies 2007). Dopamin me- megang peran penting dan merupakan faktor pe- nentu pendewasaan seksual pada sidat (Taranger et  al .  2010).  Kebaradaan  dopamin  akan  meng- hambat  rangsangan  terhadap  poros  hipothala- mus-pituitari-gonad  (Rousseau et  al .  2009),  se- hingga  dopamin  perlu  diblokir  dengan  anti  do- pamin (AD).
Berdasarkan  latar  belakang  yang  dikemu- kakan,  feminisasi  sidat  menjadi  penting  dilaku- kan untuk menunjang budi daya sidat, dan pene- litian  ini  dapat  menjadi  awal  yang  baik  untuk mendukung  produksi  sidat  dan  kelestariannya. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menjelaskan  pe- ngaruh E 2 dan MT yang dikombinasikan  dengan hCG  dan  AD  terhadap  persentase  jenis  kelamin betina dan kualitas perkembangan ovari sidat (A. bicolor  bicolor ).  Upaya  menyiapkan  stok  induk betina  matang  gonad  diharapkan  dapat  mendu- kung upaya pembenihan sidat.

## Bahan dan metode
Penelitian  dilakukan  mulai  bulan  Juli sampai September 2014. Spesies sidat A. bicolor
bicolor dari  fase yellow dengan  bobot  200±15  g sebanyak 162 ekor diperoleh dari Balai Layanan Usaha  Pengembangan  Perikanan  Budidaya (BLUPPB)  Karawang.  Sidat  dipelihara  dan  diuji di  kolam  percobaan  Babakan,  FPIK-IPB,  pada bak beton  kapasitas 3400 liter  yang diisi dengan air  laut  salinitas  35  ppt.  Selama  pemeliharaan dan  pengujian,  sidat  diberi  pakan  pellet  dengan kandungan protein 46% yang diberikan secara at satiation sekali sehari pada pukul 18:30.
Sidat ditenangkan dengan metode elektro- anaesthesia dengan tegangan 110V AC dan wak- tu  kontak  25  detik.  Penyuntikan  hormon  dilaku- kan  secara  intramuscular  (IM)  di  pangkal  sirip punggung dengan dosis 1 mL kg –1 . Frekuensi pe- nyuntikan enam kali dengan periode dua minggu, sehingga  diperoleh  waktu  penyuntikan  dan  sam- pling adalah minggu ke-0, ke-2, ke-4, ke-6, ke-8 dan ke-10. Mikroskop cahaya Olympus yang ter- hubung dengan komputer digunakan untuk men- dapatkan  gambar  preparat  histologis  gonad  de- ngan pembesaran 4× dan 10×. Gambar histologis gonad diolah dengan piranti lunak Image Raster.
Penelitian  menggunakan  rancangan  acak lengkap  (RAL).  Perlakuan  berupa  kombinasi hormon dengan enam perlakuan dan tiga ulangan sebagaimana  diuraikan  pada  Tabel  1.  Pada  tabel tersebut  ditampilkan  hormon  yang  digunakan, kombinasi,  dan  dosisnya.  Pemberian  kode  dila- kukan untuk mempermudah pelaporan hasil.
Parameter yang diamati meliputi perubah- an kelamin sidat, perkembangan gonad dan in- deks kematangan gonad (IKG). IKG dihitung menggunakan rumus sebagai berikut:

## IKG = Bg Bt × 100
Keterangan: Bg= bobot gonad (g); Bt= bobot tubuh (g)
Data dianalisis dengan sidik ragam dan beda nilai tengah  perlakuan  diuji  dengan Duncan  Multiple Range Test .

## Hasil

## Komposisi perubahan jenis kelamin sidat
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada sampling  minggu  ke-0  ditemukan  populasi  sam- pel berkelamin jantan  sebesar 100% pada semua perlakuan.  Perubahan  jenis  kelamin  mulai  dite- mukan  pada  pengamatan  minggu  ke-2  hingga akhir  penelitian  dengan  komposisi  sebagaimana tertera pada Tabel 2.

## Perkembangan gonad sidat selama perlakuan hormon
Berdasarkan  gambaran  nilai  IKG  (Gam- bar  1),  terlihat  bahwa  nilai  IKG  pada  perlakuan hTA  menunjukkan  adanya  indikasi  peningkatan perkembangan yang lebih tinggi dibanding perla- kuan lainnya. Secara statistik, pemberian kombi- nasi hormon hCG + MT + AD dengan frekuensi penyuntikan  sebanyak  enam  kali  selama  10
minggu memberikan pengaruh yang sangat nyata (p<0,01) terhadap nilai IKG perlakuan F, A, EA, TA  dan  berpengaruh  nyata  (p<0,05)  terhadap perlakuan hEA.

## Gambaran histologis gonad sidat selama perlakuan hormon
Gambaran  histologis  gonad  pada  minggu ke-0  menunjukkan bahwa  ternyata jenis kelamin sidat  adalah  jantan  dengan  indikator  adanya  tes- tis.  Tingkat  perkembangan  gonad  betina  atau ovarium  telah  mencapai  fase  III  pada  perlakuan hEA dan fase VI pada perlakuan hTA. Meskipun pada  minggu  ke-0  seluruh  sampel  berkelamin jantan, tetapi dari pola perkembangan gonad dari minggu  ke-2,  ke-4,  ke-6,  ke-8  dan  ke-10  (Gam- bar  2)  menunjukkan  adanya  kinerja  yang  tinggi dari  perlakuan  hTA  terhadap  perkembangan  go- nad dibandingkan dengan perlakuan hEA.
Tabel 1. Kombinasi dan dosis perlakuan
No. Perlakuan Dosis (mg mL –1 ) Kode hCG E 2 MT AD NaCl 1. K - - - - 9 F 2. AD - - - 10 - A 3. E 2 +AD - 3 - 10 - EA 4. MT+AD - - 3 10 - TA 5. hCG+E 2 +AD 2 3 - 10 - hEA 6. hCG+MT+AD 2 - 3 10 - hTA
K: kontrol; AD: antidopamin; E 2 + AD: estradiol + antidopamin; MT + AD: metiltestosteron + antidopamin; hCG + E 2 + AD: human chorionic gonadotropin + metiltestosteron + antidopamin; hCG + MT + AD: human chorionic gonadotropin + metiltestosteron + antidopamin.
Tabel 2. Perubahan jenis kelamin sidat akibat rangsangan hormon selama penelitian
No. Perlakuan Minggu ke- 0 2 4 6 8 10 1. F 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 2. A 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 3. EA 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 4. TA 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ 5. hEA 3♂ 3♀ 3♀ 1♂2♀ 1♂2♀ 3♀ 6. hTA 3♂ 3♀ 1♂2♀ 1♂2♀ 1♂2♀ 3♀
F: kontrol; A: antidopamin; EA: estradiol + antidopamin; TA: metil testosterone + antidopamin; hEA: human chorionic gonadotropin + metiltestosteron + antidopamin; hTA: human chorionic gonadotropin + metiltestosteron + antidopamin. ♂: jantan; ♀: betina; n = 18.
Gambar 1. Rata-rata GSI tiap perlakuan selama perlakuan hormon
Huruf yang sama diatas tiap balok data berarti tidak berbeda nyata pada  P<0,05. F = kontrol, A = anti dopamin, EA = E 2 + anti dopamin, TA = metil testosteron + anti dopamin, hEA = human chorionic gonadotropin + E 2 + anti dopamin, hTA = human chorionic gonadotropin + metil testosteron + anti dopamin.

## Pembahasan
Hasil  penelitian  menunjukkan  adanya  si- nergi  yang  kuat  antara  kombinasi  hormon  pada perlakuan  hEA  dan  hTA  terhadap  perubahan  je- nis kelamin dari jantan menjadi betina. Perlakuan hTA  dan  hEA  berpengaruh  terhadap  feminisasi pada  sidat  sebesar  66%  dan  72%  dari  populasi sampel. Pada semua perlakuan yang tidak dikom- binasikan dengan hCG tidak didapatkan sidat be- tina. Kondisi ini sejalan dengan Ijiri et al. (2011) yang menyatakan bahwa hormon E 2 dan T secara kombinasi  dengan  hormon  lain  mampu  merang- sang  perubahan  kelamin  dan  perkembangan  go- nad sidat, namun pada minggu ke-0 dan perlaku- an lainnya 100% adalah ikan jantan. Temuan se- rupa  juga  dilaporkan  oleh  Fernandino et  al . (2013) dan Kearney et al . (2011) yang  menyata- kan  bahwa  sidat  yang  dibudidayakan  lebih  ber- potensi menjadi jantan.
Secara  fungsional,  hormon  E 2 merupakan hormon yang  mengatur sifat-sifat feminisme dan fungsinya  lebih  terekspresi  secara  morfologis pada  betina.  Salah  satu  fungsi  penting  E 2 adalah mengatur proses vitelogenesis. Meskipun banyak penelitian  membuktikan  bahwa  E 2 berperan  da-
lam  merangsang  proses  vitellogenesis  (Costa et al . 2010; Singh et al . 2009) tetapi perlakuan EA tidak  mampu  merangsang  perubahan  kelamin sidat jantan menjadi betina. Pada proses sperma- togenesis  sidat  Jepang A.  japonica, E 2 merang- sang  aktifitas  sel  sertoli  dan  melindungi  sel  ger- minal (Higuchi et al . 2012), tetapi proses vitello- genesis  tidak  terinisiasi  kontras  dengan  sperma- togenesis  (Palstra  &  van  den  Thillart  2010).
Pemberian hCG secara tunggal tidak merangsang terjadinya  proses  feminisasi.  Keadaan  ini  telah dilaporkan  oleh  Kagawa et  al .  (2009)  dan  Tom- kiewicz et al . (2011) yang mengaplikasikan hCG secara tunggal dengan dosis 50 IU hari –1 dan 200 IU  minggu –1 merangsang  spermatogenesis.  Jadi hCG yang diaplikasikan secara tunggal dapat be- kerja pada dua kondisi kelamin, yaitu pada jantan dan atau pada betina.
Anti  dopamin  merupakan  neurohormon yang  berfungsi  pada  poros  otak-hipotalamus- pituitari  untuk  menyintesis  dan  menyekresikan hormon FSH dan LH dengan organ target adalah gonad.  Keberadaan  anti  dopamin,  MT  dan  E 2 yang  diberikan  secara  kombinasi  dengan  hCG berperanan  penting  untuk  dapat  terjadinya  femi-
cd
0,74 cd 0,20 cd 1,00 bc 1,40 ab 2,95 a 4,80 0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 F A EA TA hEA hTA IKG (%) Perlakuan
nisasi  pada A.  bicolor  bicolor .  Sementara  metil- testosteron  dapat  mengalami  transformasi  men-
jadi  E 2 dengan  bantuan  enzim  aromatase  dan merangsang feminisasi (Uno et al . 2012).
Gambar 2. Perbandingan perkembangan gonad sidat Anguilla bicolor bicolor perlakuan hEA dengan perlakuan hTA. a: testis; b–c: oosit fase I; d: oosit fase II; e: oosit fase III awal; f: oosit fase III akhir. A: testis; B: oosit fase II; C: oosit fase III akhir; D: oosit fase IV; E: oosit fase IV; F: oositfase V. N: nucleus; n: nucleolus; Od: butir minyak; Og: oogonium; Sg und : undiferensiasi spermatogonium; Sg: spermatogonium; Ts: jaringan testikuler; YG: gelembung kuning telur; Yg: butir kuning telur. Skala bar: a–f, A–E = 50 μm; F = 100 μm. Penentuan fase perkembangan gonad diidentifikasi menurut Adachi et al . 2003; Chai et al . 2010; Le Mann et al . 2007; Lokman et al . 2007; Palstra et al . 2007
Kondisi  sertupa  juga  pernah  ditemukan pada  penelitian  yang  lain  yang  melakukan  pe- nyuntikan  intramuskular  3  mg  kg –1 MT  dan  di- kombinasikan  dengan  20  mg  kg –1 ekstrak  pitui- tari  salmon  untuk  merangsang  perkembangan oosit A. japonica (Wang & Lou 2007). Selanjut- nya  dengan  dosis  10  ng  mL –1 11-ketotestosteron
(11-KT) yang dikombinasikan dengan 5 mg . mL -1 very low density lipoprotein pada perkembangan previtellogenik oosit A. japonica dan  membukti- kan bahwa keadaan negatif bila dengan E 2 . Feno- mena ini diduga diakibatkan tipe seksualitas sidat bahwa  yuwana  tidak  memiliki  jaringan  gonad yang  jelas  statusnya  antara  jantan  atau  betina (Endo et al . 2011). Hormon testosteron juga ber- peran  selama  aklimasi  memasuki  perairan  laut (Setiawan et  al .  2012).  Fakta  ini  menunjukkan bahwa  testosteron  memiliki  dua  peran  penting pada  sidat,  yaitu  pada  kesiapan  saat  ruaya  pe- mijahan dan perkembangan gonad.
Estradiol  yang  dikombinasikan  dengan anti dopamin tidak mampu merangsang perubah- an jenis kelamin sidat. Keadaan ini terjadi karena sidat  belum  siap  melakukan  pemijahan  dan  ma- sih dalam fase menimbun cadangan energi dalam bentuk  lemak.  Energi  saat  fase  ruaya  akan  digu- nakan  untuk  perkembangan  gonad  dan  sebagian kecil  digunakan  untuk  regenerasi  sel  dan  per- kembangan  somatik  tubuh.  Bagaimanapun,  Ver- sonnen et al . (2004) dan Durif et al . (2009) telah membuktikan  bahwa  fungsi  gonadotropik  tidak aktif  selama  fase yellow ,  meskipun  terpapar  es- trogen  tinggi,  yaitu  saat  berada  di  air  tawar,  dan aktif pada fase silver saat  medekati lokasi pemi- jahan. Laut memberikan kondisi yang baik untuk perubahan kelamin (Melia et al . 2006), serta pro- duksi  sperma  dan  vitellogenin  (Matsubara et  al.
2008).  Aromatase  juga  berfungsi  menentukan perubahan kelamin (Uno et al . 2012), fungsi na-
vigasi,  interaksi  sosial  dan  lingkungan  (Piferrer & Blázquez 2006).
Feminisasi sidat diikuti dengan adanya ki- nerja  perkembangan  gonad.  Perkembangan  go- nad  sejalan  dengan  meningkatnya  persentase IKG  yang  akan  mencapai  maksimal  pada  saat pemijahan.  Persentase  IKG  perlakuan  hTA 4,80%  tertinggi  daripada  perlakuan  lainnya, mengindikasikan  bahwa  rangsangan  perlakuan hTA  yang  diinjeksikan  secara  IM  dua  minggu sekali  mampu  meningkatkan  IKG  1,85%  dari hEA  dan  4,06%  dari  kontrol.  Nilai  IKG  pada sidat  dengan  panjang  61  cm  dan  bobot  490  g lebih tinggi daripada yang ditemukan van Ginne- ken et  al .  (2007)  pada A.  anguilla dengan  pan- jang  74  cm  dan  bobot  1132  g  nilai  IKG  1,40%. Hasil  penelitian  ini  juga  sesuai  dengan  Wang  & Lou (2007)  yang  menginjeksikan 3  mg  kg –1 MT dicampur  dengan  20  mg  kg –1 salmon  pituitary homogenate pada A.  japonica, dengan  bobot 450-550 g menghasilkan IKG 3,55%, kontras ter- hadap perlakuan kombinasi E 2 nilai IKG 1,64%.
Perkembangan  oosit  perlakuan  hEA  pada minggu ke-2 (Gambar 2b) dan ke-4 (Gambar 2c) terindikasi  mencapai  fase  I,  dengan  bentuk  sel kecil  25-40  μm,  sitoplasma  padat.  Minggu  ke-6 (Gambar 2d) oosit fase II, sel membesar dan me- rupakan  tahap  awal  terbentuknya  nucleolus. Minggu  ke-8  (Gambar  2e)  oosit  fase  III  awal, menunjukkan  adanya  perkembangan  dengan  ter- bentuknya beberapa nukleolus dan beberapa butir lipid.  Minggu  ke-10  (Gambar  2f)  oosit  fase  III akhir,  diameter  oosit  semakin  besar  55–65  μm dengan  bertambahnya  butir  lipid  dan  beberapa gelembung  kuning  telur.  Perkembangan  oosit perlakuan  hEA  termasuk  dalam  kelompok  vitel- logenesis  awal  sesuai  dengan  Adachi et  al .
(2003),  Lokman et  al .  (2007),  dan  Palstra  & Thillart. (2007).
Perkembangan  oosit  perlakuan  hTA sampling  minggu  ke-2  (Gambar  2B  fase  II)  dan minggu  ke-4  (Gambar  2C  fase  III  awal),  yaitu fase  vitellogenesis  awal  ( early-vitellogenesis ) yang  ditandai  mulai  terbentuknya  butir  kuning telur. Fase II merupakan tahap perkembangan pe- rinukleolus  seperti  terlihat  pada  Gambar  2B, yang  ditandai  dengan  terbentuknya  nukleolus  di sekitar selubung inti. Fase  ini disebut juga tahap perkembangan cortical alveoli yang ditandai de- ngan pembentukan protein kuning telur dalam si- toplasma. Cortical alveoli kemudian berkembang bentuk,  ukuran  dan  terbentuk  gelembung  lipid atau butir minyak ( oil droplet ),diameter oosit 45– 55μm. Pada Gambar 2C atau minggu ke-4 terda- pat  dua  fase  perkembangan  oosit,  yaitu  fase  III awal dan fase III akhir. Perkembangan oosit fase III akhir merupakan tahapan perkembangan peri- nukleolus yang disertai dengan semakin banyak- nya butir  minyak. Intensitas perkembangan butir minyak  mengisi  sebagian  besar  ooplasma,  aki- batnya diameter oosit semakin besar sampai 100 μm.
Pada minggu ke-6 (Gambar 2D ) dan ke-8 (Gambar 2E) mencapai fase IV atau vitellogene- sis  lanjut( mid-vitellogenesis ).  Gambaran  histolo- gis  menunjukkan  adanya  formasi  protein  kuning telur  ( lipovitellin dan phosvitin )  yang  dihasilkan dari  vitellogenin  (Vtg).  Karakteristik  fase mid- vitellogenesis adalah  bertambahnya  jumlah  dan ukuran kuning telur dan lemak di sebagian besar ooplasma, inti membesar dengan banyak nucleo- lus .  Pembentukan  lapisan  chorion  atau  selubung vitellin di bawah lapisan epithelium follicular se- makin aktif. Perkembangan oosit berlangsung ce- pat  akibat  semakin  padatnya  akumulasi  kuning telur  dalam  ooplasma.  Diameter  oosit  pada  fase mid-vitellogenesis ini sekitar 400–500 μm.
Pada  minggu  ke-10  oosit  telah  mencapai fase V atau vitellogenesis akhir ( late-vitellogene-
sis ) yang diindikasikan dengan  semakin mening- katnya  jumlah  butir  kuning  telur  ( yolk  granule ), selubung  inti  menyusut  dan  nukleolus  melebur ke dalam nukleus. Oosit memperlihatkan adanya penumpukan butir minyak pada salah satu kutub. Sebagian butir minyak melebur menjadi satu dan membentuk  butir  kuning  telur  yang  lebih  besar. Pada  fase  vitellogenesis  akhir  ukuran  oosit  telah mencapai  kisaran 550–650 μm.
Bila  dibandingkan  dengan  diameter  telur A. japonica pada fase ruaya, inti dengan diameter oosit  650–700  μm  (Wang  &  Lou  2007)  dan A. anguilla (Tomkiewicz et al . 2007) diameter oosit 550–650  μm  pada  fase  yang  sama;  ukuran  oosit yang dihasilkan dalam penelitian ini relatif sama. Tetapi ditinjau dari ukuran sidat yang menghasil- kan oosit, maka sidat A. bicolor bicolor yang di- gunakan dalam penelitian ini lebih kecil daripada kedua  jenis  sidat  tersebut.  Sidat  dengan  oosit terbaik  pada  penelitian  ini  memiliki  bobot 364,33±76,59  g  sedangkan A.  japonica berkisar antara  450–550  g  dan A.  anguilla 800-1200  g.
Perbandingan  hasil  penelitian  terdahulu  menun- jukkan  bahwa  ukuran  diameter  oosit  pada  pene- litian  ini  relatif  besar  ditinjau  dari  ukuran  bobot sidat.
Secara  alamiah,  ukuran  dan  jumlah  telur ikan berbeda bergantung kepada spesies, ukuran, dan  asupan  nutrisi.  Sidat  yang  digunakan  pada penelitian ini dengan bobot 200±15 g, yaitu fase yellow . Pakan yang diberikan selama prapeneliti- an mengandung 46% protein. Protein yang tinggi menyediakan nutrisi yang dibutuhkan sidat untuk menimbun  energi  dalam  bentuk  lemak.  Lemak yang  ditimbun  ini  merupakan  cadangan  energi yang  dimanfaatkan  untuk  perkembangan  gonad selama induksi perlakuan hormon.
Tingginya  kinerja  perkembangan  gonad betina pada perlakuan hTA tidak terlepas dari pe- ran  hormon  hCG.    Hormon  hCG  mengandung
bahan aktif hormon gonadotropik, yaitu FSH dan LH.  Dua  hormon  ini  merangsang  gonad  untuk menyintesis  E 2 ,  dan  E 2 melalui  peredaran  darah akan sampai ke hati. Tingginya E 2 direspon oleh hati dengan  memproduksi Vtg. Vitellogenin  me- rupakan  protein  yang  dapat  berikatan  dengan materi  lipid,  komponen  karbohidrat,  kelompok fosfat,  dan  garam-garam  mineral.  Di  dalam  go- nad,  Vtg  dipecah  menjadi  bahan  baku  utama pembentukan  energi  anabolik,  diantaranya lipo- vitellenin , lipovitellin dan phosvitin .
Lipovitellenin merupakan low-density lipoprotein (LDL)  dan  kandungan  dalam  oosit mencapai  65%.  Komposisi lipovitellenin terdiri atas 11–17% protein dan 83–89% lipid, dan lipid tersusun dari 74% lipid netral dan 26% fosfolipid (Anton  2007a). Pada  bagian  lain  dijelaskan  bah-
wa lipovitellin atau high-density  lipoprotein
(HDL)  mencapai  16%  kandungan  dalam  oosit.
HDL tersusun atas 75–80% protein dan 20–25% lipid.  Komponen  lipid  tersusun  dari  65%  fosfo- lipid, 30% trigliserida, dan 5% kolesterol (Anton 2007b). Phosvitin merupakan  fosfoglikoprotein kandungan dalam oosit 4% (Anton et al . 2007).
Dilihat  dari  komposisi  Vtg  tersebut  dapat dipahami  bahwa  ketersediaan  cadangan  energi dalam  bentuk  lemak  berperan  pada  percepatan perkembangan  oosit  yang  dirangsang  oleh  per- lakuan  hormon.  Tanpa  tersedianya  bahan  baku berupa cadangan energi, maka pembentukan Vtg di  hati  akan  terhambat  dan  rangsangan  hormon untuk  memacu  perkembangan  dan  pematangan gonad  tidak  akan  efektif.  Efektifitas  kombinasi antara hormon hCG + E 2 + AD dan hCG + MT + AD  terhadap  feminisasi  sidat A.  bicolor  bicolor menunjukkan  bahwa  aplikasi  hormon  untuk pengkondisian  jenis  kelamin  tertentu  sangat penting,  terutama  membantu  proses  feminisasi sidat  hasil  budi  daya.  Selanjutnya,  untuk  kepen- tingan budi daya, perlakuan hTA merupakan per-
lakuan terbaik dan dapat diterapkan untuk  mem- percepat proses reproduksi ikan sidat dalam ling- kungan terkontrol.

## Simpulan
Perlakuan  hEA  dan  hTA  efektif  diguna- kan  pada  feminisasi  sidat  untuk  menyediakan kebutuhan  stok  induk  betina  dalam  menunjang kegiatan  budi  daya.  Perkembangan  oosit  pada perlakuan hTA telah sampai  pada fase vitelloge- nesis  akhir,  dengan  nilai  IKG  terbaik  perlakuan hTA (hCG 2 mg mL –1 + MT 3 mg mL –1 + AD 10 mg mL –1 ) setelah 10 minggu perlakuan, yang di- suntikkan  secara  intramuskular  setiap  dua  ming- gu selama 10 minggu.

## Persantunan
Keberhasilan  penelitian  ini  tidak  terlepas dari  peran  Kementerian  Pendidikan  Nasional yang  telah  diubah  menjadi  Kementerian  Riset, Teknologi,  dan  Pendidikan  Tinggi  Republik Indonesia melalui Dirjen Pendidikan Tinggi yang telah mendukung dalam bentuk pembiayaan dari program BPPS tahun anggaran 2011.

## Daftar pustaka
Adachi S, Ijiri S, Kazeto Y,  Yamauchi K. 2003. Oogenesis in the Japanese  eel, Anguilla ja- ponica . In :  Aida  K,  Tsukamoto  K,  Yama- uchi  K.  (Eds.). Eel  biology .  Springer-Ver- lag. Tokyo. pp. 301-318.
Anton M. 2007a. Low-density lipoprotein (LDL) or  lipovitellenin  fraction. In :  Huopalahti  R, López-Fandiño  R,  Anton  M,  Schade  R. (Eds.). Bioactive  Egg  Compounds .  Spri- nger-Verlag Berlin. pp. 7-12.
Anton  M.  2007b.  High-density  Lipoprotein (HDL)  or  Lipovitellin  Fraction. In .  Huopa- lahti  R,  López-Fandiño  R,  Anton  M,  Scha- de  R.  (Eds.). Bioactive  egg  compounds . Springer-Verlag Berlin. pp. 13-16.
Anton M, Castellani O, Guérin-Dubiard C. 2007. Phosvitin. In : Huopalahti R, López-Fandiño R,  Anton  M,  Schade  R.  (Eds.). Bioactive Egg  Compounds .  Springer-Verlag  Berlin. pp. 17–24.
Cerda-Reverter  JM,  Canosa  LF.  2009.  Neuroen- docrine  system of the fish brain. In : Farrell AP,  Brauner  CJ  (Eds.). Fish  Physiology, 28:  Fish  Neuroendocrinology .  Academic Press. London. pp. 3-74.
Chai Y, Tosaka R, Abe T, Sago K, Sago Y, Ha- tanaka E, Ijiri S, Adachi S. 2010. The rela- tionship  between  the  development  stage  of oocytes  in  various  seasons  and  the  quality of  the  egg  obtained  by  artificial  maturation in  the  feminized  Japanese  eel Anguilla  ja- ponica . Aquaculture  Science 58(2):  269- 278.
Chu Yu-Wei, Han Yu-San, Wang Chia-Hui, You Chen-Feng,  Tzeng  Wann-Nian.  2006.  The sex-ratio reversal of the Japanese eel Angu- illa  japonica in  the  Kaoping  River  of  Tai- wan: The effect of cultured eels and its im- plication. Aquaculture 261(4): 1230-1238
Costa DDM, Neto FF, Costa MDM, Morais RN, Garcia  JRE,  Esquivel  BM,  Ribeiro  CAO.
2010.  Vitellogenesis  and  other  physiolo- gical responses induced by 17-β-estradiol in males  of  freswater  fish Rhamdia  quelen . Comparative  Biochemistry  and  Physiology
Part C 151(2): 248-257.
Durif  CMF,  van  Ginneken  V,  Dufour  S,  Müller T, Elie P. 2009. Seasonal  evolution and in- dividual  differences  in  silvering  eels  from different  locations. In :  van  den  Thillart  G, Dufour  S,  Rankin  JC  (Eds.). Spawning  mi- gration  of  the  European  eel .  Springer  Sci- ence. pp. 13-38.
Endo  T,  Todo  T,  Lokman  PM,  Kudo  H,  Ijiri  S,
Adachi  S,  Yamauchi  K.  2011.  Androgens and very  low density lipoprotein are essen- tial for the growth of previtellogenic oocyt- es  from  Japanese  Eel, Anguilla  japonica in vitro. Biology  of  Reproduction 84(4):  816- 825.
Fernandino JI, Hattori RS, Acosta ODM, Strüss- mann CA, Somoza GM. 2013. Environmen- tal  stress-induced  testis  differentiation:  an- drogen as a by-product of cortisol inactiva- tion. General  and  Comparative  Endocrino- logy 192(1): 36-44.
Higuchi M, Celino FT, Miura C, Miura T. 2012.
The  synthesis  and  role  of  taurine  in  the  eel spermatogenesis. Amino  Acids 43(2):  773- 781.
Ijiri S, Tsukamoto K, Chow S, Kurogi H, Adachi S, Tanaka H. 2011. Controlled reproduction in the Japanese eel ( Anguilla japonica ), past and present. Aquaculture Europe 36(2): 13- 17.
Kagawa H, Kasuga Y, Adachi J, Nishi A, Hashi- moto H, Imaizumi H, Kaji S. 2009. Effects of continuous administration of human cho- rionic  gonadotropin,  salmon  pituitary  ex- tract,  and  gonadotropin-releasing  hormone using osmotic pumps on induction of sexual maturation  in  male  Japanese  eel, Anguilla japonica . Aquaculture 296(1): 117-122.
Kearney  M,  Jeffs  A,  Lee  P.  2011.  Development and  early  differentiation  of  male  gonads  in farmed  New  Zealand  shortfin  eel, Anguilla australis . New  Zealand  Natural  Sciences
36(1): 33-44.
Le Mann F, Cerda J, Babin PJ. 2007. Ultrastruc- tural  aspects  of  the  ontogeny  and  differen- tiation  of  ray-finned  fish  ovarian  follicles. In :  Babin  PJ,  Cerda  J,  Lubzens  E.  (Eds.). The  fish  oocyte:  from  basic  studies  to  bio- technological
applications . Springer. Dordrecht. pp. 1–37.
Lokman PM, George KAN, Divers SL, Algie M, Young  G.  2007.  11-Ketotestosterone  and IGF-I  increase  the  size  of  previtellogenic oocytes from shortfinned eel, Anguilla aus- tralis ,  in  vitro. Reproduction 133(5):    955- 967.
Matsubara  H,  Tanaka  H,  Nomura  K,  Kobayashi T,  Murashita  K,  Kurokawa  T,  Unuma  T, Kim SK, Lokman MP, Matsubara T, Kaga- wa  H,  Ohta  H.  2008.  Occurrence  of  spon- taneously  spermiating  eels  in  captivity.
Cybium 32(2) suppl.: 174-175.
Melia P, Bavacqua D, Crivelli AJ, Panvilli J, De Leo GA, Gatto M. 2006. Sex differentiation of  the  European  eel  in  brackish  and  fresh- water  environment:  Comparatif  analysis. Journal of Fish Biology 69(4): 1228-1235.
Miura  T,  Miura  C,  Yamauchi  K.  2003.  Sperma- togenesis  in  the  Japanese  eel, Anguilla  ja- ponica . In :  Aida  K,  Tsukamoto  K,  Yama- uchi K. (Eds.). Eel biology . Springer-Verlag Tokyo. pp. 319-330.
Miura  C,  Miura  T.  2011.  Analysis  of  spermato- genesis  using    an  eel  model. Aqua-BioSci- ence Monographs (ABSM) 4(4): 105-129.
O’Connell  LA,  Fontenot  MR,  Hofmann  HA. 2013. Neurochemical profiling of dopamin- ergic  neurons  in  the  forebrain  of  a  cichlid fish, Astatotilapia  burtoni . Journal  of Chemical Neuroanatomy 47(1):106-115
Palstra  A,  Curiel  D,  Fekkes  M,  de  Bakker  M, Székely  C,  van  Ginneken  V,  van  den  Thil- lart  G.  2007.  Swimming  stimulates  oocyte development  in  European  eel. Aquaculture 270(3): 321-332.
Palstra  AP,  Van  den  Thillart  GEEJM.  2010.
Swimming  physiology  of  European  silver eels  ( Anguilla  anguilla L.):  Energetic  costs and effects on sexual maturation and repro- duction. Fish  Physiology  and  Biochemistry 36(3): 297-322.
Piferrer  F,  Blázquez.  2006.  Aromatase  distribu- tion  and  regulation  in  Fish.  Review. Fish Physiology  and  Biochemistry 31(2):215- 226.
Rousseau K, Aroua S, Schmitz M, Elie P, Dufour
S.  2009.  Silvering:  metamorphosis  or  pu- berty? In :  van  den  Thillart  G,  Dufour  S, Rankin  JC  (Eds.). Spawning  migration  of the European eel . Springer Science. pp. 39- 63.
Setiawan  AN,  Wylie  MJ,  Forbes  EL,  Lokman PM.  2012.  The  Effects  11-ketotestosterone on  occupation  of  downstream  location  and seawater  in  the  New  Zealand  shortfinned eel, Anguilla  australis . Zoological  Science 29(1): 1-5.
Singh V, Singh PB, Srivastava S. 2009. Testoste- rone and  estradiol-17β dependent phospoli- pid biosynthesis in ovariectomized cathfish,
Heteropneustes fossilis . Journal of Environ- mental Biology 30(5): 63-640.
Sugeha  HY,  Jatmiko  I,  Muhammad  S.  2009.
Sexual  development  of  the  tropical  short- finned  eel Anguilla  bicolor  bicolor of  the Segara  Anakan Waters,  Central Java, Indo- nesia. Journal  of  Fisheries  Sciences 11(1): 87-99.
Taranger  GL,  Carrillo  M,  Schulz  RW,  Pascal Fontaine  P,  Zanuy  S,  Felip  A,  Weltzien  F- A,  Dufour  S,  Karlsen  O,  Norberg  B,  An- dersson  E,  Hansen  T.  2010.  Control  of  pu- berty  in  farmed  fish. General  and  Compa- rative Endocrinology 165(3): 483-515.
Tomkiewicz J, Kofoed TMN, Pedersen JS. 2011. Assessment  of  testis  development  during induced  spermatogenesis  in  the  European eel Anguilla  anguilla .  Marine  and  Coastal
Fisheries:  Dynamics,  Management,  and Ecosystem. Science 3(1): 106-118.
Uno T, Ishizuka M, Itakura T. 2012. Cytochrome P450 (CYP) in fish. Review. Environmental Toxicology and Pharmacology 34(1):1-13. van  Ginneken  V,  Durif  C,  Dufour  S,  Sbaihi  M,
Boot  R,  Noorlander  K,  Doornbos  J,  Murk AJ,  van  den  Thillart  G.  2007.  Endocrine profiles during silvering of the European eel ( Anguilla  anguilla L.)  living  in  saltwater. Animal Biology 57(4): 453-465.
Versonnen  BJ,  Goemans  G,  Belpaire  C,  Janssen CR. 2004. Vitellogenin content in European eel  ( Anguilla  anguilla )  in  Flanders,  Bel- gium. Environmental  Pollution 128(3):
363-371.
Wang HP, Gao Z, Beres B, Ottobre J, Wallat G, Tiu  L,  Rapp  D,  O'Bryant  P,  Yao  H.  2008. Effects of estradiol-17β on survival, growth performance,  sex  reversal  and  gonadal structure  of  bluegill  sunfish Lepomis  mac- rochirus . Aquaculture 285(2): 216-223.
Wang  YS,  Lou  SW.  2007.  Influence  of  exogen- ous  gonadotropin  sexual  steroids  on  ovary development  in Anguilla  japonica.  Journal of  the  Fisheries  Society  of  Taiwan 34(3): 261-273.
Weltzien  F-A,  Sebert  M-E,  Vidal  B,  Pasqualini C,  Dufour  S.  2009.  Dopamin  inhibition  of eel  reproduction. In :  van  den  Thillart  G, Dufour  S,  Rankin  JC  (Eds.). Spawning migration  of  the  European  eel .  Springer Science. pp. 279-307.
Wilson  CA,  Davies  DC.  2007.  The  Control  of sexual  differentiation  of  the  reproductive system  and  brain.  Review. Reproduction 133(2): 331-359.
Yokouchi  K,  Sudo  R,  Kaifu  K,  Aoyama  J, Tsukamoto K. 2009. Biological characteris- tic  of  silver-phase  Japanese  eels, Anguilla japonica ,  collected  from  Hamana  Lake, Japan. Coastal Marine Science 33(1): 1-10.