PERBANDINGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI ULTRAVIOLET ( UV ) DAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT) PADA PENETAPAN KADAR NATRIUM DIKLOFENAK
, 1 Kiki Rizqi Amalia 2 Sumantri, 1 Maria Ulfah
1 Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
2 Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta

## ABSTRAK
Beberapa  metode  analisis telah  dikembangkan  untuk menentukan  kadar  natrium diklofenak,  diantaranya  dengan  metode  spektrofotometri UV dan  KCKT  (Kromatografi Cair  Kinerja  Tinggi).  Metode  spektrofotometri UV dan  KCKT  masing-masing mempunyai  kelebihan  dan  kekurangan.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  perbandingan  kadar  natrium  diklofenak  secara  spektrofotometri UV dan KCKT dalam hal ketepatan, ketelitian dan sensitivitas.
Penetapan  kadar  natrium  diklofenak  dianalisis  dengan  metode  spektrofotometri UV dengan  melakukan  penentuan  panjang  gelombang  maksimal,  penentuan operating time ,  pembuatan  kurva  baku,  pengukuran  serapan  sampel,  perhitungan  kadar  natrium diklofenak  dalam  sampel.  Sedangkan  metode  KCKT  dengan  melakukan  optimasi instrumen  dan  optimasi  fase  gerak,  identifikasi  natrium  diklofenak  dalam  sampel, pembuatan  kurva  baku,  pengamatan  kromatogram  sampel,  perhitungan  kadar  natrium diklofenak  dalam  sampel.  Pelarut  yang  digunakan  adalah  aquabidestilata  dan fase  gerak yang digunakan adalah campuran asetonitril  dan buffer fosfat 0,01 M pH 3,5. Sedangkan fase diam yang digunakan adalah Oktadesil Silikat (ODS) C18 (4,6x150mm). Data kadar yang  diperoleh  dari  masing-masing  metode  dibandingkan  ketepatan,  ketelitian  dan sensitivitas dari dua metode tersebut.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  kadar  rata-rata  natrium  diklofenak  secara Spektrofotometri UV adalah  17,9  µg/ml.  Sedangkan  secara  KCKT  adalah  17,3  µg/ml. Kadar rata-rata natrium diklofenak dalam sampel secara spektrofotometri UV dan KCKT memenuhi  persyaratan  Farmakope  Indonesia  yaitu  memiliki  nilai  rekoveri  yang  masih dalam  range  90,0  %  -110  %  dan  memiliki  nilai  CV  <  5%.  Akan  tetapi  metode  KCKT memiliki sensitivitas yang lebih tinggi dibandingkan metode Spektrofotometri UV .
Kata  kunci:    Spektrofotometri UV ,  Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi,  Natrium Diklofenak

## PENDAHULUAN
Banyak obat yang beredar di pasaran berada dalam bentuk kombinasi diantaranya adalah  golongan  obat  antiinflamasi  non  steroid  (AINS).  Peredaran  obat  di  masyarakat harus  dilengkapi  dengan  adanya  suatu  kontrol  kualitas  obat,  salah  satunya  dengan pengukuran analitik yang meliputi pengukuran konsentrasi.
Penelitian  yang  dilakukan  sebelumnya  oleh  Sznitowska and Stokrocka  (2007), Lohe et  al (2008),    dan  Khaskheli et  al (2009)  menyebutkan  bahwa  analisis  natrium diklofenak  dengan  metode  spektrofotometri UV memiliki  validitas  yang  tinggi  serta mudah dilakukan. Natrium diklofenak juga dapat dianalisis dengan menggunakan metode KCKT. Shafiee et al (2003), Demircan et al (2005), Hanysova et al (2005), Emami et al (2007), dan Kasperek (2008) mengembangkan metode analisis natrium diklofenak secara KCKT.
Penelitian  terdahulu  juga  telah  dilakukan  untuk  membandingkan  metode  pada penetapan kadar suatu zat secara spektrofotometri ultraviolet ( UV ) dan KCKT. Pada sirup oleh  Wardani  (2011),  dan  pada Soft  drink oleh  Nesya  (2011),  menyebutkan  bahwa analisis penetapan kadar suatu zat dengan metode spektrofotometri UV memiliki validitas yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  metode  KCKT.  Pada  penelitian  ini,  penulis meneliti perbandingan metode Spektrofotometri Ultraviolet ( UV ) dan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) pada penetapan kadar natrium diklofenak.

## METODOLOGI

## Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan untuk uji KCKT  adalah  natrium diklofenak p.a. ( Merck ), Asetonitril  p.a (Merck) ,  KH 2 PO 4 0.01  M,    Asam  ortofosfat  dan  aquabidestilata (Ikapharmindo)  sebagai  fase  gerak,  serta  fase  diam  Oktadesil  Silikat  (ODS)  C18 (4,6x150mm). Sedangkan  untuk uji  Spektrofotometri UV adalah natrium diklofenak p.a. (Merck) , dan aquabidestilata (Ikapharmindo)

## Alat Penelitian
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah instrumen KCKT (Waters ec 2695),  Spektrofotometer  ( Genesys  10w ), vortex  Thermolyne (M  37610-26),  timbangan analitik ( Mettler toledo TE 214 S, kepekaan d = 0,1), Ultrasonic bath ( Branson 5510 ), stopwatch , mikropipet berbagai ukuran serta peralatan gelas yang lazim digunakan.

## Jalannya Penelitian
1. Penetapan kadar natrium diklofenak secara Spektrofotometri UV ( Rohman dan Sumantri, 2006 )
a. Penentuan panjang gelombang maksimal
Natrium diklofenak ditimbang 50,0 mg, dimasukkan dalam labu takar 100,0 ml, kemudian ditambah aquabidestilata sampai batas tanda (kadar 500 µg/ml sebagai larutan stok),  diambil  1,0;  1,25;  1,5;  1,75;  2,0;  2,25;  2,5  ml  kemudian  larutan  dimasukkan  ke dalam labu takar 50,0 ml kemudian ditambah aquabidestilata sampai batas tanda. Serapan dibaca pada panjang gelombang antara 260-290 nm.
b. Penentuan operating time
1) Natrium  diklofenak  ditimbang  50,0  mg,  dimasukan  dalam  labu  takar  100,0  ml, ditambah  aquabidestilata  sampai  batas  tanda  (kadar  500  µg/ml),  diambil  sebanyak 1,0  ml,  larutan  dimasukkan  ke  dalam  labu  takar  50,0  ml,  ditambah  aquabidestilata sampai batas tanda.
2) Serapannya  dibaca  pada  panjang  gelombang  maksimal  pada  menit  ke  0,  5,  10,  15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60.
3) Serapan  yang  tetap  dicatat  dan  digunakan  sebagai  ukuran  waktu  pembacaan absorbansi pada pembuatan kurva baku dan penetapan kadar sampel.
c. Pembuatan kurva baku
1) Pembuatan seri larutan baku Natrium  diklofenak  ditimbang  50,0  mg,  dimasukkan  dalam  labu  takar  100,0  ml, kemudian  ditambah  aquabidestilata  sampai  batas  tanda  (kadar  500  µg/ml  sebagai larutan  stok),  diambil  1,0;  1,25;  1,5;  1,75;  2,0;  2,25;  2,5  ml  kemudian  larutan dimasukkan ke dalam labu takar 50,0 ml kemudian ditambah aquabidestilata sampai batas tanda
2) Kemudian dibuat kurva Y =  bX +  a, dimana Y sebagai nilai dari hasil absorbansi dan X adalah sebagai kadar terukur.
d. Pengukuran serapan sampel
1) Ditimbang dengan saksama natrium diklofenak 50,0 mg dan laktosa sampai 70,0 mg, campur  sampai  homogen,  Campuran  serbuk  dilarutkan  dalam  aquabidest  sampai 100,0  ml  (kadar  500  µg/ml),  Larutan  natrium  diklofenak  500  µg/ml  diambil  1,0; 1,25; 1,5; 1,75; 2,0; 2,25; 2,5 ml kemudian larutan dimasukkan ke dalam labu takar 50,0  ml  kemudian  ditambah  aquabidestilata  sampai  batas  tanda . Larutan  sampel diukur  absorbansinya  pada  spektrofotometer  sesuai  dengan  panjang  gelombang maksimal dan operating time yang sudah ditentukan.
2) Data  absorbansi  yang  didapat  dimasukkan  ke  dalam  persamaan  kurva  baku  untuk mendapatkan kadar natrium diklofenak dalam sampel. Replikasi dilakukan sebanyak 3 kali.
e. Perhitungan kadar natrium diklofenak dalam sampel
Kadar natrium  diklofenak dapat  diketahui  berdasarkan  persamaan  kurva  baku:Y =  bX +  a, dengan Y nilai absorbansi dan X adalah kadar terukur.
2. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
a. Optimasi Instrumen KCKT dan Optimasi fase gerak
Preparasi  instrumen  KCKT  meliputi  pengaturan  sistem  KCKT  yaitu  penetapan panjang gelombang maksimal, waktu alir dan tekanan pompa yang akan digunakan. Fase gerak yang digunakan adalah campuran asetonitril ( for HPLC ) dan buffer fosfat 0,01 M pH  3,5  dengan  perbandingan  70:30.  Untuk  500  ml  fase  gerak  diperlukan  350  ml asetonitril dan 150 ml buffer fosfat.
b. Identifikasi natrium diklofenak dalam sampel
Identifikasi natrium diklofenak dilakukan dengan  menggunakan seri kadar 10,0; 12,5;  15,0;  17,5;  20,0;  22,5  dan  25,0  µg/ml.  Natrium  diklofenak  ditimbang  secara saksama sebanyak 50,0 mg, kemudian dimasukkan dalam labu takar 100,0 ml dilarutkan dengan  aquabidestilata  sampai  batas  tanda  (kadar  500  µg/ml  sebagai  larutan  stok).  Dari larutan  10,0;  12,5;  15,0;  17,5;  20,0;  22,5  dan  25,0  µg/ml,  larutan  tersebut  diinjeksikan sebanyak  10  µl  kemudian  dibaca  absorbansinya  pada  λ  gelombang  maksimum  276  nm. Kadar natrium diklofenak terukur dihitung berdasarkan persamaan kurva baku.
c. Pembuatan kurva baku .
1) Pembuatan seri larutan baku natrium diklofenak Disiapkan seri baku dengan kadar 10,0; 12,5; 15,0; 17,5; 20,0; 22,5 dan 25,0 µg/ml.
Larutan baku dibuat dengan menggunakan natrium diklofenak dan dilarutkan dengan aquabidestilata.
2) Pembuatan kurva baku Sepuluh  mikroliter  larutan  baku  dari  masing-masing  kadar  disuntikkan  ke  dalam kolom.  Kurva  baku  dibuat  dengan  memplotkan  kadar  zat versus rasio  luas  puncak zat. Persamaan kurva baku dicari dengan metode regresi linear.
d. Pengamatan kromatogram sampel
Natrium diklofenak ditimbang 50,0 mg, dimasukkan dalam labu takar 100,0 ml, kemudian ditambah aquabidestilata sampai batas tanda (kadar 500 µg/ml sebagai larutan stok),  diambil  1,0;  1,25;  1,5;  1,75;  2,0;  2,25;  2,5  ml  kemudian  larutan  dimasukkan  ke dalam labu takar 50,0 ml kemudian ditambah aquabidestilata sampai batas tanda (Kadar 10,0; 12,5; 15,0; 17,5; 20,0; 22,5 dan 25,0 µg/ml). Larutan sampel diinjeksikan ke dalam kolom C 18 untuk dielusi. Hasil pemisahan ditetapkan kadarnya dengan cara memasukkan data AUC ke dalam persamaan kurva baku untuk mendapatkan kadar natrium diklofenak dalam  sampel. Dengan  menggunakan  persamaan  garis  regresi  linear  kurva  baku,  kadar natrium diklofenak dalam sampel dapat diketahui. Replikasi dilakukan sebanyak 3 kali.
0 0,1 0,2 0,3 0,4 255 260 265 270
275 280 285 290 295
A b sor b an si Panjang Gelombang (nm)
e. Perhitungan kadar natrium diklofenak dalam sampel
Hasil kromatogram sampel dapat dihitung kadarnya (X) dengan melihat luas area sampel  (Y)  pada  kromatogram  dan  dimasukkan  dalam  persamaan  regresi  linier  kurva baku Y = b X + a.
3. Perbandingan hasil penetapan kadar natrium diklofenak dalam sampel secara spektrofotometri UV dan KCKT dalam hal ketepatan, ketelitian dan kepekaan
a. Hasil  Penetapan  kadar  natrium  diklofenak  secara  Spektrofotometri UV dan KCKT dengan uji T test.
Data  yang  diperoleh  dari  penetapan  kadar  natrium  diklofenak  dalam  sampel dibagi  menjadi  dua  kelompok,  yaitu  kelompok  data  secara  Spektrofotometri UV dan secara KCKT. Dua kelompok data tersebut diuji secara statistika dengan uji Kolmogorov Smirnov untuk mengetahui data terdistribusi normal dan homogen. Kemudian dilanjutkan dengan  test  T  untuk  mengetahui  apakah  ada  perbedaan  yang  bermakna  atau  tidak  dari metode Spektrofotometri UV dan KCKT (Hartono, 2008).
b. Ketepatan
Pengukuran ketepatan dari suatu prosedur analisis mencerminkan kedekatan hasil penetapan  kadar  terukur  dengan  kadar  yang  sebenarnya  (ICH,  2006).  Parameter  ini digambarkan  dengan  nilai  rekoveri.  Menurut  Farmakope  Indonesia  Edisi  IV  (Anonim, 1995) nilai rekoveri yang baik adalah tidak kurang dari 90,0 % dan tidak lebih dari 110 %.
c. Ketelitian ( precision )
Hasil  rata-rata  kadar  perlu  dibandingkan  ketelitiannya  yaitu  dengan  cara menghitung  standar  deviasi  (SD)  dari  masing-masing  sampel  dan  menghitung  nilai simpangan baku relatif (RSD).
d. Kepekaan (sensitivitas)
Kepekaan  dapat  diukur  dengan  nilai  limit  deteksi  dan  limit  kuantitasi.  Limit deteksi  merupakan  batas  minimal  terendah  dari  suatu  analit  yang  masih  bisa  terdeteksi, tetapi  tidak  perlu  terkuantitasi.  Hal  ini  membuat  nilai limit  of  detection (LOD)  perlu diketahui. Untuk menghitung nilai LOD digunakan rumus Y = Y B + 3S B , dimana nilai Y diperoleh  dari  persamaan  kurva  baku  dan  luas  area.  Nilai  LOQ  dapat  dihitung menggunakan rumus Y = Y B + 10S B .

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

## A. Spektrofotometri Ultraviolet

## 1. Penentuan Panjang Gelombang Maksimal
Dalam  analisis  spektrofotometri,  pengukuran  harus  dilakukan  dalam  panjang gelombang  maksimal,  yaitu  panjang  gelombang  yang  memberikan  serapan  optimum. Hasil absorbansi panjang gelombang maksimal dapat dilihat pada Gambar 1 dan Tabel I.
Gambar 1. Panjang Gelombang Maksimal Natrium diklofenak
Tabel I. Penentuan Panjang Gelombang Maksimal No. Panjang gelombang Absorbansi 1. 250 nm 0,157 2. 260 nm 0,231 3. 270 nm 0,297 4. 275 nm 0,306 276 nm 0,307 277 nm 0,307 278 nm 0,306 279 nm 0,305 5. 280 nm 0,302 6. 290 nm 0,217 7. 300 nm 0,132 8. 350 nm 0,003
Panjang  gelombang  maksimal  yang  diperoleh  adalah  276  nm  karena  pada puncak  kurva  tersebut  membentuk  serapan  yang  maksimal.  Khaskheli et  al., (2009) menyebutkan bahwa panjang gelombang maksimal natrium diklofenak adalah 276 nm.

## 2. Penentuan operating time
Penentuan operating  time pada  spektrofotometri UV dilakukan  dengan  cara mengamati  absorbansi  larutan  natrium  diklofenak  pada  waktu-waktu  tertentu.  Hal  ini bertujuan  untuk  menentukan  waktu  sempurnanya  reaksi  dan  stabilnya  reaksi  yang ditunjukkan  dengan  tidak  adanya  penurunan  absorbansi.  Hasil  absorbansi  larutan  baku standar natrium diklofenak pada menit ke 0 sampai 60 seperti Tabel II.
Tabel II. Penentuan Operating Time Menit ke Absorbansi 0 0,154 5 0,160 10 0,307 15 0,307 20 0,307 25 0,310 30 0,320 35 0,320 40 0,320 45 0,340 50 0,350 55 0,350 60 0,370
Dari  hasil  absorbansi  di  atas  dapat  diketahui  bahwa  mulai  menit  ke-10  hingga menit  ke-20  larutan  natrium  diklofenak  tetap  stabil.  Pembacaan  absorbansi  yang  dipilih adalah 10 menit.

## 3. Pembuatan Kurva Baku
Pembuatan  kurva  baku  natrium  diklofenak  dilakukan  untuk  memperoleh persamaan kurva baku yaitu:  Y = 0,029 X + 0,012 dengan koefisien korelasi persamaan r = 0,993 (Gambar 2).

## Gambar 2. Kurva Baku Natrium Diklofenak secara Spektrofotometer UV

## 4. Perhitungan kadar natrium diklofenak dalam sampel.
Kadar  sampel  (X)  diperoleh  dengan  memplotkan  hasil  absorbansi  sampel  (Y) pada  Tabel  III  ke  dalam  persamaan  kurva  baku  Y  =  0,029  X  +  0,012.  Sehingga  dapat diperoleh  kadar  natrium  diklofenak  dalam  sampel.  Perhitungan  tersebut  dilakukan sebanyak 3 kali pada masing-masing sampel, kemudian dari hasil tersebut dibuat rata-rata sehingga didapat kadar rata-rata setiap sampel. Kadar rata-rata natrium diklofenak dalam sampel secara Spektrofotometri UV adalah sampel dengan kadar 10,0 µg/ml (9,4 µg/ml); kadar  12,5  µg/ml  (14,1  µg/ml);  kadar  15,0  µg/ml  (16,7  µg/ml);  kadar  17,5  µg/ml  (17,9 µg/ml);  kadar  20,0  µg/ml  (19,6  µg/ml);  kadar  22,5  µg/ml  (22,6  µg/ml)  dan  kadar  25,0 µg/ml (25,4 µg/ml).

## Tabel III. Hasil Absorbansi Sampel secara Spektrofotometri UV
Konsentrasi Semula (µg/ml) Absorbansi Sampel Replikasi I Replikasi II Replikasi III 10,0 0,147 0,139 0,158 12,5 0,210 0,220 0,221 15,0 0,300 0,218 0,246 17,5 0,262 0,272 0,281 20,0 0,296 0,285 0,31 22,5 0,346 0,342 0,332 25,0 0,383 0,367 0,391 B. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
1. Optimasi Instrumen KCKT dan Optimasi fase gerak
Hasil optimasi alat dan fase gerak diperoleh waktu alir 1,0 ml/menit dengan panjang gelombang 276 nm.

## 2. Identifikasi natrium diklofenak dalam sampel
Identifikasi  adanya  kandungan  natrium  diklofenak  dilakukan  dengan  cara membandingkan waktu retensi (t R ) sampel yang diduga mengandung natrium diklofenak dengan waktu retensi (t R ) larutan baku natrium diklofenak. Hasilnya menunjukkan bahwa tujuh  seri  kadar  yang  dipilih  mengandung  natrium  diklofenak,  hal  ini  dapat  dilihat  dari waktu  retensi  (t R )  sampel  hampir  sama  dengan  waktu  retensi  (t R )  larutan  baku  natrium
diklofenak.  Semua  sampel  mengandung  bahan  natrium  diklofenak.  Hal  ini  dikarenakan waktu  retensi  semua  sampel  mendekati  atau  hampir  sama  dengan  waktu  retensi  larutan baku natrium diklofenak dapat dilihat dalam Tabel IV sebagai berikut:
Tabel IV. Hasil Identifikasi Natrium diklofenak secara KCKT
Kadar (µg/ml) t R Baku Natrium Diklofenak (menit) t R sampel Replikasi\ I (menit) t R sampel Replikasi II (menit) t R sampel Replikasi III (menit) 10,0 3.523 3.483 3.490 3.498 12,5 3.482 3.491 3.495 15,0 3.486 3.492 3.499 17,5 3.484 3.494 3.496 20,0 3.483 3.495 3.498 22,5 3.485 3.494 3.496 25,0 3.484 3.492 3.494

## 3. Pembuatan Kurva Baku
Hasil pembuatan kurva baku diperoleh persamaan kurva baku sebagai berikut: Y =  20332 X – 1566 dengan koefisien korelasi r = 0,999949 terlihat pada Gambar 3.

## Gambar 3. Kurva Baku Natrium Diklofenak Secara KCKT

## 4. Perhitungan kadar natrium diklofenak dalam sampel
Kadar  natrium  diklofenak  (X)  dalam  sampel  secara  KCKT  dihitung  dengan memplotkan  hasil  kromatogram  luas  area  (Y)  pada  Tabel  V  sampel  dalam  persamaan kurva  baku  yang  telah  diperoleh  yaitu  Y  =  20332  X  –  1566.  Kadar  rata-rata  natrium diklofenak dalam sampel secara KCKT adalah : sampel dengan kadar kadar 10,0 µg/ml (9,7 µg/ml);  kadar 12,5 µg/ml (12,3 µg/ml); kadar 15,0 µg/ml (14,7 µg/ml); kadar 17,5 µg/ml (17,3 µg/ml); kadar 20,0 µg/ml (19,8 µg/ml); kadar 22,5 µg/ml (22,3 µg/ml) dan kadar 25,0 µg/ml (24,8 µg/ml).

## Tabel V. Hasil Kurva Baku Natrium Diklofenak Secara KCKT
No Kadar (µg/ml) Luas area t R (menit) 1. 10,0 202075 3.524 2. 12,5 252168 3.523 3. 15,0 303593 3.521 4. 17,5 354554 3.522 5. 20,0 405108 3.524 6. 22,5 454451 3.522 7. 25,0 507805 3.523
0 100000 200000 300000 400000 500000 600000 10 12,5 15 17,5 20 22,5 25 Lu as A re a Kadar ( µg/ml)
C. Perbandingan  Hasil    Penetapan  Kadar  Natrium  Diklofenak  Dalam  Sampel Secara  Spektrofometri UV dan  KCKT  dalam  hal  ketepatan,  ketelitian  dan kepekaan
Data yang didapat baik spektrofotometri Uv maupun KCKT diuji secara statistik dengan  melakukan  uji  pendahuluan  adalah  uji  homogenitas  dan  normalitas  data menggunakan test Kolmogorov Smirnov, dari hasil tersebut diperoleh kesimpulan bahwa data yang diuji normal dan homogen, hal ini dapat dilihat dari nilai Signifikansi 0,000 dan nilai  P  <  0,05.  Kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  T  test  untuk  mengetahui  data  kadar natrium  diklofenak  berbeda  bermakna  atau  tidak  dari  dua  metode  tersebut.  Hasil  T  test menyimpulkan bahwa kadar natrium diklofenak dalam sampel berbeda bermakna secara metode  Spektrofotometri UV dan  KCKT,  hal  ini  dapat  dilihat  dari  nilai  signifikansinya 0,02 < 0,05.

## 1. Ketepatan
Pengukuran ketepatan dari suatu prosedur analisis mencerminkan kedekatan hasil penetapan kadar dengan kadar yang sebenarnya (ICH, 2006). Parameter ini digambarkan dengan nilai rekoveri dan juga kesalahan sistemik metode. Hasil rekoveri yang diperoleh pada  spektrofotometri  UV  adalah  102,8,  sedangkan  pada  KCKT  nilai  rekoveri  adalah 98,6 dan menurut Farmakope Indonesia Edisi IV (Depkes RI, 1995) nilai rekoveri yang baik  adalah  tidak  kurang  dari  90,0  %  dan  tidak  lebih  dari  110  %.  Rata-rata  rekoveri menunjukkan  bahwa  metode  analisis  KCKT  dan  spektrofotometri UV memenuhi peryaratan Farmakope Indonesia dalam hal rekoveri, yaitu adalah tidak kurang dari 90,0 %  dan  tidak  lebih  dari  110  %.  Metode  KCKT  dan  spektrofotometri UV mempunyai ketepatan yang baik dan dapat digunakan untuk analisis kuantitatif natrium diklofenak.

## 2. Ketelitian
Hasil penetapan kadar natrium diklofenak dalam sampel secara Spektrofotometri UV dan KCKT telah didapat hasil kadar natrium diklofenak dalam sampel. Hasil rata-rata kadar  tersebut  perlu  dibandingkan  ketelitiannya  yaitu  dengan  cara  menghitung  standar deviasi (SD) dan simpangan baku relatif (RSD) dari masing-masing sampel.  Pada kadar rata-rata  sampel  secara  spektrofotometri UV diperoleh  nilai  RSD  rata-rata  adalah  2,7%, sedangkan  nilai  RSD  rata-rata  pada  sampel  secara  KCKT  adalah  0,6%.  Suatu  metode dikatakan  memiliki  ketelitian  yang  baik  jika  nilai  simpangan  baku  relative  (RSD)  atau koefisien variasi (CV) lebih kecil dari 5%(Yuwono and Indriyanyo, 2005). Semakin kecil nilai  RSD  dan  SD  maka  semakin  teliti.  Dari  hasil di  atas terdapat  perbedaan  antara UV dan  KCKT,  dimana  hasil  RSD  keduanya  tidak  melebihi  5%  dan  dapat  dikatakan  kedua metode  tersebut  teliti.  Akan  tetapi  nilai  RSD  pada  KCKT  lebih  kecil  daripada  UV.  Ini membuktikan bahwa KCKT lebih teliti daripada UV.

## 3. Sensitivitas (kepekaan)
Pada penelitian ini di dapat nilai batas deteksi (Limit of Detection) secara KCKT sebesar 0,2 µg/ml, sedangkan secara Spektrofotometri UV sebesar 2,9 µg/ml. Nilai LOD ini  diperoleh  dari  perhitungan  persamaan  kurva  baku  dan  luas  area  (Y),  dimana  nilai  Y adalah  hasil  dari  penjumlahan  Y B +  3S B .  Nilai  batas  kuantitasi (Limit  of Quatification ) secara  KCKT  adalah  sebesar  0,2  µg/ml  sedangkan  secara  Spektrofotometri UV sebesar 7,7 µg/ml. Nilai ini diperoleh dari nilai Y B + 10S B .

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
1. Kadar  rata-rata  Natrium  Diklofenak  secara  Spektrofotometri UV adalah  17,977 µg/ml. Sedangkan secara KCKT adalah 17,455 µg/ml.
2. Kadar  rata-rata  Natrium  Diklofenak  dalam  sampel  secara  spektrofotometri UV dan KCKT  memenuhi  persyaratan  Farmakope  Indonesia  yaitu  memiliki  nilai  rekoveri yang  masih dalam range  90,0 % -110 % dan  memiliki nilai CV < 5%. Akan tetapi metode  KCKT  memiliki  sensitivitas  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  metode Spektrofotometri UV, hal  ini  ditunjukkan  dengan  nilai  P  0,02<0,05  sehingga diantara kedua metode terjadi perbedaan secara bermakna.

## Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  penetapan  kadar  terhadap  produk  obat  atau  sediaan obat  seperti  tablet,  sirup,  salep,  ataupun  tetes  mata  yang  mengandung  zat  natrium diklofenak.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV , Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal 368, 459 Demircan, S., Sayin, F., Basci, N.E., Kir, S., and Kocoglan, H., 2005, Determination of Diclofenac in  Subretinal  and  Aqueous  Humor  Fluids  by  HPLC  with  Electrochemical  Detector,
FABAD J. Pharm. Sci. , 30 :33-39
Emami,  J.,  Ghassami  N.,  Talari  R.A.,  2007.  Rapid  and  Sensitive  Modified  HPLC  Method  for Determination  of  Diclofenac  In  Human  Plasma  and  Its  Application  In  Pharmacokinetic Study, DARU , 15 (3):132-138 Hanysova,  L.,  Mokry,  M.,  Kastner,  P., and Klimes,  J.,  2005,  HPLC  Evaluation  of  Diclofenac  In the Farious Form of Therapeutic Preparations, Chemical Papers , 59 (2):103-108 Hartono, 2008, SPSS 16,0 , Pustaka Pelajar, Yogyakarta, hal 147-148
International  Conference  on  Harmonization  (ICH),  2006, Validation  of  Analytical  Procedures; Text and Methodology , European Medicines Agency, London, 1-15
Kasperek,  R.,  2008.  Determination  of  Diclofenac  Sodium  and  Papaverine  Hydrochloride  In Tablets by HPLC Method, Acta Poloniae Pharmaceutica-Drug Research , 65 (4):403-408 Khaskheli,  A.R.,  Sirajuddin,  Abro,  K.,  Sherazi,  S.  T.  H., Afridi,  H.I.,  Mahesar,  S.A.,  and  Saeed, M., 2009. Simpler and Faster Spectrophotometric Determination of Diclofenac Sodium in Tablets, Serum and Urine Samples, Pakistan Journal Anal. Environ. Chem, 10 (1-2):53-58 Lohe,  R.W.,  Suruse,  P.B.,  Kale,  M.K.,  Barethiya,  P.R.,  Kasture,  A.V.,  and  Lohe,  S.W.,  2008,
Spectrophotometric Methods for Simultaneous Estimation of Rabeprazole and Diclofenac from Combined Tablet Dosage Form, Asian J. Research Chem , 1 (1):26-28
Nesya, A., 2011, Perbandingan Penetapan Kadar Natrium Benzoat Pada Lima Produk Soft Drink Secara  Spektrofotometri    UV  Dan  Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi, Skripsi ,  Farmasi Universitas Wahid Hasyim, Semarang Rohman, A., dan Sumantri, 2006, Analisis makanan , Gadjah Mada University Press, Yogyakarta, hal 87
Shafiee,A.,  Amini,  M.,  and  Hajmahmodi,  M.,  2003.  Improved  Chromatographic  Method  for Determination  of  Diclofenac  sodium  In  Injectable  Solution  and  Prediction  of  Chemical Stability, Journal of Sciences , Islamic Republic of Iran, 14 (1):21-25
Sznitowska,  M., and Stokrocka,  M.,  2007,  Determination  of  Diclofenac  Released  From Suppositories  Using  UV  Spectrophotometry,  Spectra  Derivative  Spectrophotometry  and HPLC, Acta Poloniae Pharmaceutica-Drug Research, 63 (5):401-405
Wardani,  A.P.,  2011,  Perbandingan  Penetapan  Kadar  Natrium  Benzoat  Pada  Lima  Produk  Sirup Secara  Spektrofotometri    UV  Dan  Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi, Skripsi ,  Farmasi Universitas Wahid Hasyim, Semarang
Yuwono, M. and Indriyanyo, G., 2005, Validation of Chromatographic Methods  of Analysis, in: (Brittain, H., Ed): Profil of Drugs Substances, Excipients Related Methodology , Volume 32, hal 243-258