IDENTIFIKASI AWAL POTENSI EKSTRAK ETANOL RIMPANG JAHE MERAH ( Zingiber officinale Rosc. var. rubrum) SEBAGAI OBAT

## OSTEOPOROSIS
Aqnes Budiarti 1) , Devi Nisa Hidayati 2) , Nur Aini 3)
1) Departemen Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim
2) Departemen Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hayim
3) Program S1, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim

## INTISARI
Berkurangnya  kepadatan  tulang  merupakan  indikasi  terjadinya  osteoporosis.  Studi osteoporosis  dapat  dilakukan  dengan  mengukur  pengaruh  pemberian  suatu  senyawa  terhadap peningkatan  kepadatan  tulang  tikus  terovariektomi  yaitu  tikus  yang  telah  diangkat  ovariumnya. Ovariektomi  menyebabkan  terjadinya  defisiensi  hormon  estrogen  yang  juga  berfungsi  untuk memelihara  kepadatan  tulang.  Senyawa  yang  dapat  meningkatkan  kepadatan  tulang  berpotensi sebagai obat osteoporosis.
Rimpang  jahe  merah  mengandung  senyawa  flavonoid  yang  berfungsi    sebagai fitoestrogen  yaitu  senyawa  yang  memiliki  efek  estrogenik  sehingga  dapat  menggantikan  fungsi estrogen.  Flavonoid  mudah  larut  dalam  etanol  sehingga  senyawa  ini  diekstraksi  menggunakan etanol.  Tujuan  penelitian  adalah  untuk  mengetahui  adanya  peningkatan  kepadatan  tulang  tikus terovariektomi oleh pemberian ekstrak etanol rimpang jahe merah (EERJM).
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental  terhadap  tikus  betina  galur  Wistar  dengan  desain penelitian posttest  only  controlled  group  design .  Perlakuan  diberikan  selama  30  hari  dan  uji kepadatan  tulang  menggunakan  metode  radiografi Dual  X-Ray. Data  berupa  nilai  kepadatan tulang  dianalisis  secara  statistik  ANOVA  satu  jalan  dilanjutkan  uji Tukey .  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  pemberian  EERJM  dosis  500  dan  1000  mg/kgBB  mampu  meningkatkan densitas tulang tikus terovariektomi.
Kata kunci : kepadatan tulang, tikus terovariektomi, jahe merah, osteoporosis

## ABSTRACT
Reduced  bone  density  is  an  indication  of  osteoporosis.  The  study  of  osteoporosis  is conducted by measure the influence of triggering compound to the enhancement of  bone density of ovariectomized rat that have been lifted ovaries. Ovariectomy caused rats have been deficiency of estrogen  hormone  whose  function  to  maintain  bone  density.Compound  that  can  increase  bone density has the potential as osteoporosis drug.
Red  ginger  rhizome  contains  flavonoid  compound  as  phytoestrogen  whose  estrogenic effect that can replace the function of estrogen. Flavonoid is easy to be solved in ethanol so that was extracted using ethanol. The purpose of this study was to  measure the  enhancement  of bone density of ovariectomized rats due to the trigger of ethanol extract of red ginger (EERJM).
Research  was  conducted  experimentally  to  the  female  Wistar  rats  by  the  post  test  only controlled group design. Treatment was given for 30 days and  the determination of bone density using Dual X-Ray radiography method. Data of bone density values were statistically analyzed by One  Way  ANOVA  followed  by  Tukey  test.  The  results  showed  that  the  administration  of  EERJM dose 500 and 1000 mg/kg BW enhanced bone density of ovariectomized rat. Keywords: bone density, ovariectomized rat, red ginger, osteoporosis

## PENDAHULUAN
Osteoporosis adalah gangguan kesehatan  yang  ditandai  oleh  keroposnya tulang.  Kondisi  ini  sering  dialami  oleh wanita  pada usia  lanjut yang  telah mengalami menopause dimana terjadi penurunan  fungsi  indung  telur  sehingga menyebabkan  defisiensi  hormon  estrogen
yang  juga  berfungsi  untuk  memelihara kepadatan tulang. Osteoporosis membutuhkan  biaya  cukup  besar  apabila terjadi patah tulang sehingga dapat menurunkan  angka  harapan  hidup  (National Osteoporosis Foundation, 2010). Terapi  menggunakan  hormon  estrogen yang biasa disebut HRT ( Hormon Replacement  Therapy )  dilakukan  untuk
mengatasi gangguan akibat defisiensi estrogen.  Namun,  penggunaan  HRT  dapat menimbulkan  pendarahan,  ketergantungan serta  kanker  payudara.  Oleh  karena  itu, diperlukan  suatu  alternatif  yang  aman  dan murah  sebagai  pengganti  HRT,  salah satunya  adalah  obat  osteoporosis  berbahan aktif  fitoestrogen  yang  merupakan  senyawa dari  tumbuhan  yang  memiliki  aktivitas estrogenik (Yildiz, 2005).
Penelitian  tentang  efek  estrogenik rimpang tanaman kencur yang merupakan satu famili  dengan  tanaman  jahe  merah  pernah dilakukan  oleh  Setyaningsih  (2016)  melalui uji in  Silico. Penelitian  ini  menunjukkan adanya  afinitas  yang  baik  pada  reseptor estrogen β. Menurut Benassayag et.al .  (2002) terdapat  4  jenis  senyawa  fitoestrogen  yang terkandung  di  dalam  tanaman  antara  lain flavonoid, coumestan, lignan, dan stilbel.
Rimpang  jahe  merah  mengandung metabolit  sekunder  yaitu  golongan  senyawa flavonoid, polifenol, tanin, monoterpen/seskuiterpen, dan steroid. Berdasarkan  latar  belakang  tersebut  maka ekstrak  etanol  rimpang  jahe  merah  (EERJM) diduga memiliki efek estrogenik.
Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui  adanya  peningkatan  kepadatan tulang  tikus  betina  galur  Wistar  yang terovariektomi  oleh  pemberian  EERJM.  Hasil penelitian  diharapkan  dapat  dijadikan  dasar pengembangan  produk  nutrasetikal  untuk mencegah osteoporosis.

## METODE PENELITIAN A. Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental  dengan rancangan  penelitian posttest  only  controlled group  design. Variabel  bebas  berupa  dosis EERJM  yaitu  500  dan  1000  mg/kgBB. Variabel  tergantung  berupa  nilai  kepadatan tulang  femur  tikus  betina  galur  Wistar  yang diovariektomi.  Variabel  terkendali  adalah makanan,  minuman,  jenis  kelamin,  galur, umur dan berat tikus.

## B. Sampel Penelitian
Sampel  berupa  tikus  betina  galur  Wistar berjumlah  30  ekor,  sehat  dan  berumur  2- 2,5  bulan  dengan  berat  150-200  gram. Hewan  uji  dibagi  dalam  6  kelompok dengan  jumlah  minimal  per  kelompok adalah 5 ekor (Federer,1991).

## C. Bahan dan Alat Penelitian
Bahan  berupa  rimpang  jahe  merah hasil  budidaya  kelompok  tani  Usaha Berkah Gunungpati Semarang. Pakan tikus standar pelet BR-2, etanol 70% (PT.Brataco  Chemika),  CMC-Na  (PT. Brataco  Chemika).  Ketamin  HCl  (PT. Erela), NaCl 0,9% (PT Otsuka), Antibiotik serbuk Enbatic® (PT Erela), Betadin® (PT Mahakam  Beta  Farma)  dan  Estradiol (Sigma).
Alat berupa timbangan elektrik ( OHAUS  Adventurer ),  seperangkat  alat perkolasi, rotary  evaporator (Heidolph), timbangan  tikus,  papan  operasi  yang dilapisi  alumunium  foil,  spuit  1  ml, seperangkat  alat  radiografi,  alat-alat  gelas dan alat-alat bedah.
D. Jalannya Penelitian
1. Determinasi Tanaman Jahe merah
Determinasi  tanaman  dilakukan  di Laboratorium Ekologi dan Biosistematik Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Diponegoro.
2. Pembuatan Ekstrak Etanol Rimpang
Jahe merah Serbuk rimpang jahe merah sebanyak 1 kg  berkadar  air  8,41%  diekstraksi dengan metode perlokasi di Laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi  Universitas  Wahid  Hasyim. Ekstrak  cair  rimpang  jahe  yang diperoleh  dikentalkan  menggunakan mesin rotary evaporator .

## E. Uji Kepadatan Tulang
1. Penentuan Dosis
Penelitian efek estrogenik rimpang jahe merah belum pernah dilakukan sehingga dalam penentuan dosis, penelitian ini  mengacu pada penelitian fitoestrogenik sebelumnya yang berasal
dari  biji  labu  kuning  (Lestari et  al., 2014).  Kelompok kontrol positif diberi estradiol dosis 2µg, sedangkan kelompok  perlakuan  diberi  EERJM dosis 500 dan 1000 mg/kg BB.
2. Perlakuan Ovariektomi
Ovariektomi merupakan proses pemotongan ovarium untuk mengkondisikan tikus terdefisiensi estrogen.  Ovariektomi  dilakukan  pada 25  ekor  tikus  kelompok  K2,  K3,  K4, P1  dan  P2  dengan  cara  membius  tikus menggunakan  ketamin  sebanyak  0,25 ml  secara  intraperitoneal.  Bulu  pada perut  tikus  dicukur.  Daerah  operasi dibersihkan dengan etanol. Satu sayatan  melintang  peritoneal  kecil  0,4- 0,6 cm dibuat dengan pisau bedah pada
bagian  tengah  perut  sedikit  ke  arah kanan.  Setelah  rongga  peritoneum dibuka, jaringan adiposa ditarik menjauhi  tabung  rahim  kanan  dan ovarium yang dikelilingi oleh sejumlah lemak.  Ovarium  dikeluarkan  secara perlahan.  Prosedur  ini  diulang  untuk ovarium  kiri  melalui  sayatan  yang sama. Setelah mengidentifikasi ovarium dan tanduk rahim,
pemotongan dilakukan di sekitar daerah  distal  tanduk  rahim,  lalu ovarium  diambil,  kemudian  tanduk rahim dikembalikan ke rongga peritoneum.  Luka  ditutup  dalam  dua lapisan  (otot  dan  kulit)  menggunakan jahitan steril.
Yodium povidon diaplikasikan  untuk  mensterilkan  kulit setelah  penjahitan.  Prosedur  aseptik tingkat  tinggi  dipertahankan  selama operasi. Setelah operasi, tikus ditempatkan  secara  individual  dalam kotak  poliuretan  selama  satu  minggu untuk pemulihan. Kandang dikondisikan bersih dan kering menggunakan  serutan  kertas  yang lembut  sehingga  tidak  melukai  bekas jahitan.

## 3. Perlakuan Hewan Uji
Kelompok  I  sebagai  kelompok  kontrol normal  tidak  diovariektomi,  kelompok  II sebagai  kontrol  ovariektomi,  kelompok  III sebagai  kontrol  negatif  yang  diberi  CMC- Na  0,5%  sehari  sekali  secara  oral,
kelompok  IV  sebagai  kontrol  positif  yang diberi  estradiol  2µg/hari  secara  oral, kelompok  V  diberi  perlakuan  EERJM dosis  500  mg/kgBB,  kelompok  VI  diberi perlakuan  EERJM  dosis  1000  mg/kgBB. Semua  tikus  selain  kelompok  I  mendapat perlakuan  ovariektomi.  Hewan  uji  diberi perlakuan sesuai kelompok masing-masing selama  30  hari.  Setelah  itu,  semua  tikus dikorbankan  dengan  cara  dislokasi  tulang belakang  karena  diambil  sampel  tulang femur  (paha  atas)  bagian  kiri  maupun kanan.  Sampel  tulang  di  bersihkan  dari daging  yang  menempel  dengan  hati-hati, kemudian  ditempatkan  dalam  pot  plastik yang berisi NaCl fisiologis untuk  menjaga jaringan  tulang  agar  tetap  stabil.  Setelah itu dilakukan uji kepadatan tulang.

## 4. Pengukuran Kepadatan Tulang
Pengukuran  kepadatan  tulang  dilakukan dengan  metode  radiografi  Dual  X  Ray.
Sampel berupa tulang femur atau paha atas karena  termasuk  tulang  penyangga  yang biasanya  lebih  mudah  keropos  dan ukurannya  cukup  besar  sehingga  mudah diisolasi dan dianalisis.
Tulang  femur  diambil  dengan  cara membedah  bagian  paha  lalu  dikupas dagingnya  yang  menempel.  Kemudian sampel  tulang  disimpan  dalam  pot  plastik yang  berisi  cairan  NaCl  fisiologi  untuk menjaga  jaringan  tulang  tetap  stabil.
Pengukuran
kepadatan tulang
menggunaakan alat densitometer.

## F. Analisis Data
Data  berupa  nilai  kepadatan  tulang dianalisis  secara  statistik  dengan  uji parametrik One  Way ANOVA  bertaraf kepercayaan  95%.  Hasil  uji  ANOVA menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan, oleh  karena  itu  dilanjutkan  dengan  uji Tukey menggunakan Software  Statistical and  Service  Solution  (SPSS)16.0  for Windows.

## HASIL DAN PEMBAHASAN A. Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman  menunjukkan bahwa tanaman yang dibudidayakan adalah benar Zingiber officinale Roscoe  Var. rubrum (Jahe Merah). Kunci determinasinya adalah 1b, 2b,3b, 12b, 13b, 14b, 17b, 18b,
19b,  20b,  21b,  22b,  23b,  24b,  25b,  26b,
27a,  28b,  29b,  30b,  31a,  34a,  35b,  37b, 38b,  39b,  41b,  45b,  46e,  50b,  51b,  53b, 54b,  56b,  57b,  58b,  59d,  72b,  73b,  74a, 75b,  76b,  333b,  334b,  335b,  338a,  339b, 340b  ...  Famili  207.  Zingiberaceae  ...1a, 2a, 3b, 4b ... Genus Zingiber ...:
B. Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Rimpang Jahe Merah (EERJM) EERJM dibuat dengan metode perkolasi.  Metode  ini  termasuk  estraksi cara dingin sehingga meminimalkan kerusakan senyawa aktif  yang kerkandung akibat suhu yang tinggi (Depkes RI, 1986). Metode  perkolasi  mudah  dikerjakan  dan hasil ekstrak banyak karena cairan penyari selalu  baru  sehingga  tidak  akan  terjadi penjenuhan  antara  cairan  penyari  dan senyawa  aktif.  Pemilihan  etanol  70% sebagai  cairan  penyari  karena  termasuk pelarut  universal  yang  mampu  menyari senyawa  yang  sifatnya  semi  polar,  polar, dan  non  polar  (Voigt,  1994).  Dengan demikian,  diharapkan  kandungan  senyawa aktif  dalam  rimpang  jahe  merah  yang diduga sebagai senyawa fitoestrogen dapat tersari.
Ekstrak  kental  yang  dihasilkan  dalam penelitian  ini  sebanyak  170  gram  dengan rendemen  sebesar  17%.  Hasil  pengamatan EERJM  secara  organoleptis  antara  lain berwarna  coklat  kehitaman,  konsentrasi pekat,  memiliki  bau  khas  jahe  merah  dan mudah  melekat.  EERJM  disimpan  dalam wadah  tertutup  rapat  dan  terlindung  dari cahaya untuk mencegah terkontaminasinya ekstrak  oleh  mikroorganisme  dari  udara dan  mencegah  reaksi  degradasi  senyawa aktif yang dikatalisis oleh cahaya matahari yang  dapat  merusak  komponen  zat  aktif (Voigt,1994).

## C. Uji Densitas Tulang
Uji  densitas  tulang  dilakukan  untuk mengetahui efek EERJM dalam meningkatkan kepadatan tulang tikus yang mengalami  defisiensi  estrogen.  Semua hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini mempunyai galur yang sama yaitu Rattus  novergicus  strain  wistar. Hal ini bertujuan untuk memperkecil pengaruh variasi  biologis  antara  tikus  terhadap  hasil penelitian.  Tikus  betina  dipilih  karena
digunakan  sebagai  model  untuk  wanita menopause.
Perlakuan  ovariektomi  pada  hewan  uji untuk mengkondisikan hewan uji terdefisiensi  estrogen  akibat  pengangkatan ovarium sebagai organ penghasil hormone estrogen  dan  diharapkan  dapat  mewakili kondisi  menopause  (Agustini,  2007).
Estrogen  sendiri  memiliki  peran  yang sangat penting dalam memodulasi kepadatan tulang (Mc.Dougal et al. , 2002). Rendahnya kadar estrogen dapat mempercepat pengeroposan tulang, sehingga  model  hewan  terovariektomi sangat  tepat  digunakan  dalam  penelitian ini.
Penelitian  ini  menggunakan  empat kelompok  kontrol  dan  dua  kelompok perlakuan.  Kelompok  kontrol  terdiri  dari kontrol  normal  (K1)  untuk  mengetahui densitas  tulang  pada  hewan  uji  yang  tidak mengalami  defisiensi  estrogen.  Kontrol ovariektomi  (K2)  untuk  melihat  adanya penurunan  densitas  tulang  pada  hewan  uji yang mengalami defisiensi estrogen. Kontrol  CMC-Na  (ovariektomi+CMC-Na 0,5%)  (K3)  untuk  membuktikan  bahwa CMC-Na yang digunakan sebagai pensuspensi  ekstrak  tidak  memberikan efek terapi. Kontrol positif (ovariektomi+estradiol 2µg) (K4) estradiol merupakan  obat  hormonal  di  pasaran sebagai pembanding efektivitas obat sintetis  dengan  senyawa  herbal  yang digunakan dalam penelitian ini. Sedangkan kelompok  perlakuan  terdiri  dari  perlakuan EERJM  dosis  500  mg/kgBB  (P1)  dan perlakuan  EERJM  dosis  1000  mg/kgBB (P2).  Perbedaan  dosis  digunakan  untuk melihat dosis  mana  yang lebih baik dalam meningkatkan densitas tulang.
Penentuan nilai densitas tulang menggunakan  alat  densitometer.  Sampel tulang  femur  tikus  ditembak  dengan  sinar X  sehingga  diperoleh  serapan  yang kemudian  diolah  menjadi  data  nilai densitas  tulang.  Semakin  tinggi  nilai densitas  tulang  maka  kepadatan  tulang semakin  baik.  Data  rata-rata  nilai  densitas tulang  dari  masing-masing  kelompok tersaji dalam Gambar 1.
Uji Tukey memberikan  perbedaan bermakna  (p≤0,05)  antara  kelompok perlakuan  EERJM  dosis  500  mg/kgBB terhadap  kelompok  kontrol  ovariektomi
1,527 1,218 1,271 1,423 1,338 1,364
0 0,5 1 1,5 2 K1 K2 K3 K4 P1 P2 R ata -r ata n ilai d e n si tas (g/c m 3) (K2), maupun kelompok perlakuan
EERJM  dosis  1000  mg/kgBB  terhadap kelompok  kontrol  ovariektomi  (K2).  Hasil ini menunjukkan bahwa pemberian
EERJM  terbukti  mampu  meningkatkan densitas tulang tikus terovariektomi karena pada
Uji Tukey juga memberikan  perbedaan bermakna  (p≤0,05)  antara  kelompok kontrol  normal  (K1)  dengan  kelompok kontrol  ovariektomi  (K2)  dengan  rata-rata nilai  densitas  tulang  kelompok  K1  lebih tinggi  daripada  kelompok  K2.  Hasil  ini menunjukkan bahwa perlakuan ovariektomi  terbukti  mampu  menurunkan kadar  estrogen  sehingga  menyebabkan penurunan densitas tulang pada hewan uji.
Hal  ini  membuktikan  bahwa  metode ovariektomi  pada  hewan  uji  sangat  tepat digunakan  untuk  menggambarkan  kondisi menopause pada manusia.
Uji Tukey memberikan  perbedaan yang  tidak  bermakna  (p≥0,05)  antara kelompok kontrol ovariektomi (K2) dengan kelompok kontrol negatif
(ovariektomi+CMC-Na  0,5%)  (K3).  Hasil ini  menunjukkan  bahwa  hewan  uji  yang diovariektomi  tanpa  diberi  perlakuan dengan  hewan  uji  yang  diovariektomi  dan diberi  perlakuan  CMC-Na  0,5%,  nilai densitas  tulangnya  tidak  jauh  berbeda. Artinya  CMC-Na  0,5%  tidak  memiliki efek dalam meningkatkan densitas tulang.
Keterangan : K1: kontrol normal K2: kontrol ovariektomi K3: kontrol negatif (ovariektomi+CMC-Na 0,5%) K4: kontrol positif (ovariektomi+estradiol 2µg) P1 : perlakuan (ovariektomi+EERJM dosis 500 mg/kgBB) P2 : perlakuan (ovariektomi+EERJM dosis 1000 mg/kgBB)
Gambar 1. Perbandingan Rata-rata Nilai Densitas Tulang Femur Tikus.
Perbedaan bermakna (p≤0,05) terlihat antara  kelompok  K2  terhadap  kelompok kontrol  positif  (ovariektomi+estradiol  2µg) (K4).  Hasil  tersebut  membuktikan  bahwa pemberian  estradiol  mampu  mencegah osteoporosis.  Potensi  penggunaan  EERJM dalam meningkatkan densitas tulang dibandingkan  dengan  pemberian  estradiol terlihat  dari  hasil  uji Tukey, kelompok kontrol  positif  (OVX+estradiol  2µg)  (K4) berbeda bermakna (p≤0,05) dengan
kelompok  perlakuan  EERJM  dosis  500 mg/kgBB  (P1).  Hasil  ini  menunjukkan bahwa  pemberian  EERJM  dosis  500 mg/kgBB  tidak  lebih  efektif  dari  pemberian estradiol  2µg  karena  memang  rata-rata  nilai
densitas  tulang  femur  kelompok  perlakuan EERJM  dosis  500  mg/kgBB  (P1)  masih dibawah rata-rata nilai densitas tulang femur kelompok  kontrol  positif  (K4).  Sedangkan antara  kelompok  kontrol  positif  (K4) terhadap  kelompok  perlakuan  EERJM  dosis 1000  mg/kgBB  (P2)  tidak  menunjukkan perbedaan  yang  bermakna  sehingga  dapat dikatakan  bahwa  EERJM  dosis  1000 mg/kgBB  mempunyai  efek    peningkatan densitas tulang yang sama dengan pemberian estradiol 2µg. Kemampuan EERJM dalam meningkatkan densitas tulang diduga berasal dari  kandungan  etil  p-metoksisinamat  yang termasuk
golongan flavonoid dan
merupakan  salah  satu  golongan  senyawa fitoestrogenik. Hasil uji secara in silico yang dilakukan oleh Setianingsih (2016) membuktikan senyawa etil p-
metoksisinamat mampu berikatan dan memiliki  afinitas  yang  baik  dengan  reseptor estrogen  β.  Mekanisme  kerja  fitoestrogen rimpang  jahe  merah  memodulasi  kepadatan tulang  kemungkinan  sama  dengan  estrogen. Estrogen  mempengaruhi  proses remodeling tulang dengan  mengendalikan  aktivitas  sel osteoblas maupun osteoklas, termasuk menjaga  keseimbangan  kerja  dari  kedua  sel tersebut  melalui  pengaturan  produksi  faktor parakrin-parakrin  (Monroe et  al. ,  2003).
Estrogen juga mempengaruhi pembongkaran tulang dengan cara menghambat pematangan osteoklas sehingga bisa menghambat  resorpsi  tulang  (Arjmandi and Khalil, 2003).
Berdasarkan penelitian ini pemberian EERJM pada tikus terovariektomi dosis 500 mg/kgBB  maupun  dosis  1000  mg/kgBB mampu meningkatkan densitas tulang femur. Dengan  demikian  rimpang  jahe  merah memiliki  potensi  untuk  dikembangkan sebagai pencegah maupun  obat osteoporosis akibat    defisiensi  estrogen  yang  biasa dialami oleh wanita menopause.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Pemberian  ekstrak  etanolik  rimpang  jahe merah dosis 500 dan 1000 mg/kgBB mampu meningkatkan  densitas  tulang  tikus  betina galur wistar terovariektomi

## DAFTAR PUSTAKA
Agustini K., Wiryowidagdo S., and Kusmana D., 2007, Pengaruh Pemberian Ekstrak Biji Klabet ( Trigonella foenum-graecum L.) terhadap Perkembangan Uterus Tikus Putih Betina Galur Wistar Prepubertal, Jurnal Sains dan Teknologi Indonesia, 9 : 1
Arjmandi  B.H.,  and  Khalil  D.A.,  2003,  Soy Protein has a Greater Effect on Bone in  Postmenopausal  Women  Not  on
Hormone  Replacement  Therapy,  as Evidenced by Reducing Bone Resorption  and  Urinary  Calcium Excretion, J.Clin.  endrocinol,  Metab ,
88 : 1048-1054. Benassayag,  C.,  Perrot-Applanat,  M.,  and Ferre,  F.,  2002,  Phytoestrogen  as
Modulators  of  Steroid  Action  in Target  Cells .  J.  Chromatogr.  B 777 :
233-248.
Depkes  R.I.,  1986,
Sediaan  Galenik, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, 10.
Federer,  W.,  1991,  Statistic  and  Society
Data  Collection  and  Interpretation,  2
nd edition, Marcel Dekker, New York,
201-209.
Lestari,  B. , Hanif,  N.M.,  Anggarany,  A.D.,
Ziyad,T. Walidah,  Z.,  and  Murwanti, R.,  2014,  Potensi  Biji  Labu  Kuning Sebagai  Agen  Fitoestrogen  pada Wanita  Post  Menstrual ,  Prosiding Elektronik  PIMNAS, Ditjen  Dikti Kemendikbud RI.
Mc.Dougal  K.R.M.,  Peri  M.J.,  Gibson  H.I., Bright  J.M.,Colley  S.M.,  Hodgin J.B.,  Smithies,  O.,  and  Tobias  J.H., 2002,  Estrogen  Induce  Osteogenesis in  Intac  Female  Mice  Lacking  ER Beta,  Am. J  Physiol  Endocrinol Metab, 283 :E 817-823.
Monroe,  D.G.,  Secreto,  F.J.,  and  Spelsberg, T.C.,  2003,  Overview  of  Estrogen Action  in  Osteoblasts:  Role  of  the
Ligand  the  Receptor  and  The Coregulators. J. Musculoskelet Neuron Interact , 4 , 357-362. National  Osteoporosis  Foundation,  2010,
Physician’s Guide  to Prevention and
Treatment  of  Osteoporosis ,  National Osteoporosis Foundation, Washington, 3. Setyaningsih,  F.,  2016,  Pengukuran  Potensi Kandungan Senyawa Kencur ( Kaempferia  galanga L.)  Sebagai Suplemen  Pencegah  Osteoporosis dan  Penurun  Kolesterol  pada  Wanita Menopause  Melalui  Uji In  Silico, Skripsi, Universitas  Wahid  Hasyim, Semarang.
Voigt  R.,  1994, Buku  Pelajaran  Teknologi Farmasi , diterjemahkan oleh Soendani Noerono Soewandhi, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta, 570-571.
Yildiz, F, 2005, Phytoestrogen in Functional
Foot, Taylor  &  Francis  Ltd ., 5 :  210- 211.