## COMPARISON OF EXTRACTION VARIATIONS ON MITRAGYNINE LEVEL OF THREE VARIANTS OF KRATOM LEAVES (MITRAGYNA SPECIOSA
KORTH)
Syarifah Nur Intan Mutiara 1 , Masriani 1* , Rini Muharini 1 , Ajuk Sapar 2 , Rahmat Rasmawan 1 .
1 Program Studi Pendidikan Kimia, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Tanjungpura, Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Bansir Laut, Kec.Pontianak Tenggara, Pontianak, Kalimantan Barat.
2 Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tanjungpura, Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Bansir Laut, Kec.Pontianak Tenggara, Pontianak, Kalimantan Barat.
*Email: masriani@fkip.untan.ac.id
Received: 13 Juli 2023. Accepted: 17 Agusus 2023. Published: 30 Agustus 2023 DOI: 10.30870/educhemia.v8i1.21184
Abstract: Kratom  leaves  are  known  as  traditional  medicine  with  various  benefits,  such  as antibacterial,  antimicrobial,  and  antioxidant  properties.  These  benefits  are  attributed  to  the presence  of  secondary  metabolites,  particularly  mitragynine.  Mitragynine  can  be  obtained through  extraction  methods.  However,  to  date,  no  research  has  compared  the  efficiency  of sonication, reflux, and soxhletation extraction methods on three variants of kratom leaves for obtaining  mitragynine.  This  study  aimed  to  compare  the  effectiveness  of  the  extraction methods by extracting 15 grams of three variants of kratom leaves using the sonication, reflux, and  soxhlet  methods.  Each  extract  obtained  was  quantitatively  analyzed  using  a  UV-  Vis spectrophotometer to determine the amount of alkaloid and HPLC to determine the amount of mitragynine.  The results indicate  that  the  most  efficient method  for  obtaining  total  alkaloid from the green variant (19.125 mg/g) is through sonication and reflux, the red variant (31,625 mg/g) and the white variant (26,125 mg/g) are through sonication. The most efficient method for  obtaining  mitragynine  from  green  (22.21  mg/g)  is  sonication,  from  red  (29.15  mg/g)  is reflux, and  from  white  (24.62  mg/g)  is soxhletation.  Overall,  these  data  show  that  different extraction methods produce different levels of mitragynine in each kratom variant.
Keywords: Mitragyna speciosa ; Extraction; Kratom Leaves; HPLC.
Abstrak: Daun  kratom  dikenal  sebagai  obat  tradisional  dengan  berbagai  manfaat,  seperti antibakteri, antimikroba, dan antioksidan. Hal ini disebabkan keberadaan senyawa metabolit sekunder, terutama mitraginin. Metode ekstraksi dapat digunakan untuk memperoleh senyawa metabolit  sekunder  termasuk  mitraginin.  Hingga  saat  ini,  belum  ada  penelitian  yang membandingkan metode ekstraksi sonikasi, refluks, dan sokletasi pada tiga varian daun kratom dalam  memperoleh  senyawa  mitraginin.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  membandingkan metode  ekstraksi  dengan  mengekstrak  15  gram  dari  tiga  varian  daun  kratom  menggunakan metode  sonikasi,  refluks,  dan  soletasi.  Setiap  ekstrak  yang  diperoleh  dianalisis  secara kuantitatif  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  untuk  menentukan  total  alkaloid  dan
menggunakan HPLC untuk menentukan kadar mitraginin. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa metode ekstraksi  terbaik  untuk  mendapatkan  total  alkaloid  dari  varian  hijau  (19,125 mg/g)  adalah  dengan  menggunakan  sonikasi  dan  refluks,  varian  merah  (31,625  mg/g)  dan varian  putih  (26,125  mg/g)  adalah  dengan  menggunakan  sonikasi.  Sedangkan  metode ekstraksi untuk memperoleh kadar mitraginin tertinggi dari varian hijau (22,21 mg/g) adalah dengan menggunakan sonikasi, dari varian merah (29,15 mg/g) adalah dengan menggunakan refluks,  dan  dari  varian  putih  (24,62  mg/g)  adalah  dengan  menggunakan  sokletasi. Keseluruhan  data  tersebut  menunjukkan  bahwa  perbedaan  metode  ekstraksi  menghasilkan perbedaan kadar mitraginin pada masing-masing varian kratom.
Kata kunci: Mitragyna speciosa , Ekstraksi, Daun Kratom, HPLC

## PENDAHULUAN
Kratom adalah tanaman yang berasal dari  daerah  Asia  Tenggara  seperti Thailand,  Malaysia,  Papua  Nugini,  dan Indonesia. Secara tradisional, masyarakat menggunakan daun kratom dengan berbagai  cara,  seperti  direbus,  dibuat seperti rokok, dikunyah, dan ditempelkan pada  luka  (Warner  et  al.,  2016).    Daun kratom  bersifat  sitotoksik  serta  dapat berfungsi sebagai antidepresan dan antiinflamasi(Wahyono et al., 2019).
Berdasarkan  urat  dan  tulang  daun, kratom dibagi menjadi tiga varian, yaitu kratom  hijau,    putih,  dan  merah (Wahyono  et  al.,  2019).  Kratom  merah cenderung lebih efektif dalam meredakan nyeri,  daun  kratom  hijau  memiliki  efek stimulasi  dan  meningkatkan  mood, sementara daun kratom putih memberikan  energi  yang  lebih  banyak dibandingkan dengan daun kratom hijau. Perbedaan  aktivitas  dari  ketiga  varian kratom  tersebut  diperkirakan  karena
adanya  perbedaan  komponen  utama, yaitu  mitraginin  pada  masing-masing varian daun kratom.
Proses  awal  dalam  memperoleh senyawa  mitraginin  adalah  dengan menggunakan ekstraksi. Ekstraksi sangat penting  dalam  menganalisis  tanaman herbal  (Fonmboh  et  al.,  2020).  Metode ekstraksi sangat mempengaruhi konsentrasi dan hilangnya efek senyawa yang terkandung dalam sampel (Hasnaeni et al., 2019).
Metode ekstraksi yang telah digunakan untuk memperoleh mitraginin umumnya menggunakan maserasi. Beberapa penelitian menggunakan metode  ekstraksi  dengan  sokletasi  dan pencampuran  dengan  bantuan  pengaduk magnetik  selama  24  jam  (Sidik  et  al., 2021).  Namun  penelitian  tersebut  hanya meneliti satu jenis varian daun kratom.
Hingga saat ini, belum ada penelitian yang  membandingkan  metode  ekstraksi sonikasi, refluks, dan sokletasi pada tiga
varian  daun  kratom.  Oleh  karena  itu, perlu  dilakukan  perbandingan  metode ekstraksi  untuk  mengetahui  metode ekstraksi  terbaik  dalam  memperoleh senyawa mitraginin dari tiga varian daun kratom.  Variasi  dalam  metode  ekstraksi adalah sonikasi (ekstraksi dengan bantuan ultrasonik), refluks, dan sokletasi.

## METODE

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah High  Performance
Liquid Chromatography (HPLC)
(Shimadzu), Sonikator (Branson), set alat soklet,  set  alat  refluks, heating  mantle (Barnstead Electrothermal), thermostatic water  bath .  Bahan  yang  digunakan adalah metanol, akuades, reagen Dragendorff,  reagen  Wagner,  reagen Mayer,  natrium  hidroksida  (NaOH), asam  klorida  (HCl),  asam  format (HCOOH), bromocresol  green (BCG), natrium fosfat (NaHPO 4 ), dan asam sitrat (C 6 H 8 O 7 ).  Sampel  yang  digunakan adalah  serbuk  daun  kratom  yang diperoleh dari PT. Kreasi Alam Borneo, yang  terletak  di  Jalan  Karet  No.  15, kelurahan  Sungai  Bangkong,  Kota Pontianak, Kalimantan Barat.

## Prosedur Kerja

## Ekstraksi Sonikasi
Sebanyak  15  gram  serbuk  daun kratom  varian  hijau,  merah,  dan  putih masing-masing direndam dengan pelarut metanol sebanyak 150mL dan disonikasi selama 50 menit pada suhu 50°C (Zakaria et  al.,  2021).  Ekstrak  yang  diperoleh diuapkan  sehingga  didapatkan  ekstrak pekat,  rendemennya  dihitung  dengan persamaan sebagai berikut :
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = 𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑏𝑎ℎ𝑎𝑛 𝑏𝑎𝑘𝑢 × 100%

## Ekstraksi Refluks
Sebanyak  15  gram  serbuk  daun kratom  varian  hijau,  merah,  dan  putih dilarutkan dengan pelarut metanol sebanyak 150 mL dan direfluks selama 2 jam  pada  suhu  60°C  (Susanty  & Bachmid, 2016). Ekstrak yang diperoleh diuapkan  sehingga  didapatkan  ekstrak pekat dan dihitung rendemennya.

## Ekstraksi Sokletasi
Sebanyak  15  gram  serbuk  daun kratom hijau, merah, dan putih dimasukkan ke dalam kertas saring yang telah  dibentuk  menjadi  sebuah thimble dan  selanjutnya  dimasukkan  bersama metanol  sebanyak  100mL  kedalam klonsong soklet dan 50mL pada labu alas bulat. Proses ekstraksi dilakukan selama 2  jam  dengan  suhu  60°C  (Newita
Pratama  et  al.,  2017).  Ekstrak  yang diperoleh  diuapkan  sehingga  didapatkan ekstrak pekat dan dihitung rendemennya.

## Skrining Fitokimia
Pemeriksaan skrining fitokimia alkaloid dilakukan dengan mengacu pada metode  Sofia  et  al  (2022)  dengan beberapa  modifikasi.  Sebanyak  1  gram serbuk  daun  kratom  hijau,  merah,  dan putih masing-masing dilarutkan dengan 5 mL metanol pro analisis dan 2 mL HCl. Larutan  dipanaskan  selama  sekitar  1 menit.  Kemudian,  larutan  disaring  dan diteteskan ke dalam plat tetes.
Selanjutnya  larutan  direaksikan  dengan reagen  mayer,  wagner,  dan  dragendroff sebanyak 1-3 tetes.

## Penentuan Kandungan Alkaloid Total pada Ekstrak Kratom
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian ini untuk menentukan kandungan alkaloid total telah diadaptasi dari penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh (Setyaningrum & Susanti, 2022),  dengan  beberapa  modifikasi. Dalam  penelitian  ini,  Berberin  telah digunakan  sebagai  larutan  standar. Sampel  ekstrak  kratom  sebanyak  15  mg dilarutkan  dalam  5  mL  asam  klorida, kemudian  larutan  tersebut  disaring menggunakan kertas saring. Selanjutnya, diambil 1 mL sampel yang dicampurkan
dengan  larutan  buffer  fosfat  dan  BCG masing-masing  sebanyak  5  mL.  Larutan tersebut kemudian dihomogenkan dengan  5  mL  kloroform  sebanyak  tiga kali  melalui  penggunaan  vortex.  Fase kloroform  pada  campuran  diambil  dan ditransfer ke dalam labu ukur berukuran 10  mL,  kemudian  dilarutkan  dengan kloroform  hingga  mencapai  tanda  batas volumenya.  Absorbansi  sampel  diukur pada panjang gelombang maksimum 352 nm menggunakan spektrofotometer UV- Vis.
Konsentrasi  alkaloid  (x)  dalam satuan  µg/mL  untuk  setiap  ekstrak ditentukan dengan menginterpolasi absorbansi  ke  dalam  persamaan  regresi linear  dari  larutan  standar  berberin. Kandungan alkaloid  total dapat dihitung menggunakan persamaan 𝑦  =  𝑏𝑥  + 𝑐 .
Analisis Kadar Mitraginin Menggunakan HPLC

## Persiapan Kurva Larutan Standar
Kadar mitraginin ditentukan melalui analisis  kuantitatif  menggunakan High Pressure Liquid Chromatography (HPLC).  Sistem  yang  digunakan  pada instrumen HPLC didasarkan pada optimasi yang dilakukan oleh Laboratorium
Terpadu
Universitas Tanjungpura. Fase gerak yang digunakan adalah  metanol  dan  asam  format  pH  8
(60:40)  dengan  laju  aliran  1  mL/menit, sedangkan fase diamnya adalah kolom C 8

## 4,6 × 150mm, 5µm.

## Analisis Sampel
Sebanyak  5  mg  dari  setiap  ekstrak dilarutkan dengan 25 mL metanol HPLC- grade untuk mendapatkan larutan sampel 200  µg/mL.  Kemudian,  1000  µL  dari larutan tersebut diencerkan dengan 5 mL metanol  untuk  mendapatkan  larutan sampel  40  µg/mL.  Semua  pelarut  dan larutan  yang  digunakan  dalam  proses analisis HPLC disonikasi selama 5 menit. Selanjutnya,  20  µL  larutan  sampel diinjeksikan ke dalam sistem HPLC yang dilakukan dengan lima kali pengulangan untuk setiap sampel.

## Pengukuran Kadar Mitraginin
Persamaan kurva kalibrasi digunakan untuk  mengukur  konsentrasi  mitraginin dalam  setiap  sampel.  Kadar  mitraginin (mg/g)  dihitung  dengan  persamaan berikut (Mudge & Brown, 2017):
𝐾𝑀 = ([𝐴] × 𝑉𝑎  × 𝐹𝐷)
(𝐵𝑆 × 1000) × 100
Keterangan:
KM = Kadar Mitraginin [A] = Konsentrasi Mitraginin Va = Volume Akhir Sampel FD = Faktor Dilusi BS = Berat Sampel

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi
Hasil penelitian menunjukkan adanya  pengaruh  metode  ekstraksi terhadap  kadar  mitraginin.  Metode ekstraksi refluks menghasilkan rendemen kratom  tertinggi  dibandingkan  dengan metode sonikasi dan sokletasi. Perolehan rendemen yang melalui metode ekstraksi refluks untuk daun kratom hijau, merah, dan putih masing-masing sebesar 23,59%,  25,53%,  dan  23,76%.  Hal  ini disebabkan  oleh  bantuan  panas  pada metode  refluks,  yang  merusak  dinding sel, sehingga senyawa di dalam sel lebih mudah  larut  dalam  pelarut.  Prinsip metode  refluks  yaitu  pelarut  yang digunakan  diuapkan  pada  suhu  tinggi, kemudian  didinginkan  oleh  kondensor, menyebabkan  pelarut  dalam  bentuk  uap mengembun  di  dalam  kondensor  dan jatuh  ke  dalam  labu  (Kurniawati  et  al., 2022).
Rendemen  kratom  tertinggi  kedua dicapai melalui metode ekstraksi sonikasi,  dengan  perolehan  rendemen secara  berturut-turut  sebesar  22,61%, 22,91%, dan 18,54% untuk kratom hijau, merah,  dan  putih.  Metode  ekstraksi sokletasi menghasilkan rendemen terendah,  dengan  perolehan  rendemen sebesar  14,27%,  22,51%,  dan  14,63%
pada  daun  kratom  hijau,  merah,  dan putih, secara berturut-turut (Tabel 1).
Tabel 1. Hasil Rendemen Daun Kratom
Berdasarkan Metode Ekstraksi Metode Ekstraksi Varian Daun Hijau Merah Putih Rendemen Sonikasi 22,61 22,91 18,54 Refluks 23,59 25,53 23,76 Sokletasi 14,27 22,51 14,63

## Skrining Fitokimia
Tujuan  dari  tahap  ini  adalah  untuk menganalisis keberadaan alkaloid dalam sampel. Alkaloid biasanya berada dalam tumbuhan  dengan  jumlah  kecil,  sekitar 20% (Heinrich et al., 2021). Pada proses identifikasi alkaloid, dilakukan penambahan  asam  klorida  pada  sampel dikarenakan asam klorida dapat menarik senyawa  alkaloid  dari  sel  tanaman  yang diekstraksi dengan mendistribusikan alkaloid  ke  fase  asam  (Wullur  & Schaduw,  2013).  Keberadaan  senyawa alkaloid  ditandai  dengan  hasil  positif ketika direaksikan reagen mayer, wagner, dan  dragendroff,  yang  menghasilkan endapan putih, coklat, dan  jingga secara berturut-turut (Sofia et al., 2022).
Skrining  fitokimia  terhadap  setiap varian  daun  kratom  menunjukkan  hasil positif dengan reagen mayer, wagner dan dragendroff.  Senyawa  alkaloid  dapat diidentifikasi dikarenakan adanya
substitusi  ligan,  di  mana  atom  nitrogen dengan  pasangan  elektron  tunggal  pada alkaloid  dapat  menggantikan  ion  iodin dalam reagen (Kumaradewi et al., 2021). Hasil skrining fitokimia dari setiap varian daun kratom dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Uji Fitokimia Alkaloid pada Setiap
Varian Reagen Varian Daun Kratom Hijau Merah Putih Mayer + + + Wagner + + + Dragendroff + + + A. B. C.
Gambar 1. Reaksi  antara Alkaloid pada  Daun Kratom  Hijau, Merah, Putih dengan reagen Mayer (A), Wagner (B), dan (C) Dragendroff
Gambar  1  menunjukkan  reaksi penambahan
reagen untuk mengidentifikasi senyawa alkaloid. Penambahan reagen Mayer menghasilkan endapan  putih  akibat  reaksi  antara senyawa alkaloid dan ion
Kalium alkaloid- endapan putih
Kalium alkaloid- endapan coklat Kalium alkaloid- endapan jingga
tetraiodomerkurat (II). Penambahan
reagen  Wagner  menghasilkan  sedikit endapan  coklat  dan  larutan  berwarna kecoklatan karena interaksi antara
senyawa  alkaloid  dan  ion  logam  K + . Penambahan reagen Dragendroff mengubah  warna  larutan  menjadi  jingga dan  terdapat  sedikit  endapan  karena interaksi antara senyawa alkaloid dan ion tetraiodobismutat (III).

## Penentuan Total Alkaloid dengan Spektrofotometer UV-Vis
Sejumlah  penelitian  menunjukkan bahwa alkaloid memiliki efek farmakologi yang kuat dan memiliki efek terapi  yang  penting  seperti  antimalaria dan  antikanker  sehingga  penentuan jumlah  alkaloid  sangat  penting  dan berkaitan  dengan  kualitas  tanaman  obat (Setyaningrum & Susanti, 2022).
Hasil dari penelitian ini menunjukkan  bahwa  jumlah  alkaloid pada  daun  kratom  hijau  dengan  metode sonikasi dan refluks adalah sama (19,125 mg/g)  dan  berkurang  ketika  metode sokletasi digunakan (16,375 mg/g). Pada daun  kratom  merah  dan  putih,  total alkaloid menurun seiring dengan penggunaan  metode  sonikasi,  sokletasi dan refluks (Tabel 3). Hal ini menunjukkan  bahwa  metode  ekstraksi
berpengaruh  terhadap  perolehan  total alkaloid.
Tabel 3. Hasil Total Alkaloid Ekstrak Daun
Kratom Hijau, Merah dan Putih Metode Ekstraksi Total Alkaloid (mg/g) Hijau Merah Putih Sonikasi 19,125 31,625 26,125 Refluks 19,125 15,875 17,125 Sokletasi 16,375 17,125 17,875

## Penentuan Kadar Mitraginin dengan HPLC
Daun  kratom  menghasilkan  lebih dari  40  alkaloid  yang  terkait  secara struktural (Todd et al., 2020). Meskipun hanya  empat  yang  diketahui  memiliki aktivitas farmakologi yaitu mitraginin, 7- hidroksimitraginin (7-OH-mitraginin), speciociliatine dan corynantheidin.
Senyawa  yang  paling  umum  adalah mitraginin yang ditunjukkan oleh Gambar  2.  Mitraginin  menyumbang sekitar 2% dari campuran kratom secara massa,  tetapi  mencapai  66%  dari  total kandungan  alkaloid  (Eastlack  et  al., 2019).  Oleh  karena  itu  penentuan  kadar mitraginin pada tiga varian daun kratom menjadi sangat penting.
Pada  penelitian  ini  penentuan  kadar mitraginin dilakukan menggunakan HPLC  dengan  panjang  gelombang  266 nm.  Validasi  metode  dilakukan  dengan seri konsentrasi larutan mitraginin standar  yaitu  2,  5,  8,  11,  14,  17,  dan  20 µg/mL yang menghasilkan regresi linear
dengan persamaan 𝑦 = 16610𝑥 + 3345
dengan 𝑅 2 = 0,9977 .
Gambar 2. StrukturSenyawa (A) Mitraginin,
(B) 7-Hidroksimitraginin, (C) speciociliatine dan (D) Corynantheidin
Pengujian  sampel  dilakukan  analisa secara  kualitatif  dan  kuantitatif.  Analisa kualitatif dilakukan dengan
membandingan kromatogram HPLC dari senyawa mitraginin dengan kromatogram sampel yang diuji (Sundari et al ., 2016). Gambar 3. menunjukkan
kromatogram HPLC senyawa mitraginin memiliki  waktu  retensi  sebesar  22,844 menit.  Hasil  penelitian  ini  berbeda dengan  penelitian  sebelumnya  seperti penelitian  oleh  Mudge  &  Brown  (2017) yang  mengidentifikasi  mitraginin  pada menit  ke-15.  Sedangkan  penelitian  yang dilakukan  oleh    Mohamad  Zuldin  et  al (2013) mengidentifikasi mitraginin pada menit  ke-12.  Hal  ini  disebabkan  oleh perbedaan metode analisis yang dilakukan dalam penelitian.
Gambar 3. Profil Kromatogram HPLC dari Senyawa Mitraginin
A B C D
Kromatogram  ekstrak  daun  kratom hijau,  merah,  dan  putih  yang  diperoleh melalui metode ekstraksi sonikasi menunjukkan  puncak  dengan  jumlah yang  sama.  Perbedaan  yang  diamati terletak  pada  waktu  retensi  senyawa mitraginin  dan  senyawa  lainnya.  Pada ekstrak  daun  kratom  hijau,  senyawa mitraginin  diamati  pada  waktu  retensi sebesar 20,475 menit. Pada ekstrak daun kratom  merah,  waktu  retensi  senyawa mitraginin tercatat sebesar 22,367 menit, sementara  pada  ekstrak  daun  kratom putih,  waktu  retensi  senyawa  mitraginin adalah 21,172 menit (Gambar 4A-C).
Kromatogram  ekstrak  daun  kratom hijau,  merah,  dan  putih  yang  diperoleh melalui metode ekstraksi refluks menunjukkan  perbedaan  jumlah  puncak yang teramati. Pada kromatogram ekstrak daun  kratom  hijau,  terdapat  empat puncak  yang  teridentifikasi,  sementara pada  kromatogram  ekstrak  daun  kratom merah,  terdapat  tiga  puncak,  dan  pada kromatogram ekstrak daun kratom putih, terdapat  lima  puncak.  Secara  spesifik, senyawa mitraginin muncul pada ekstrak daun kratom hijau dengan waktu retensi sebesar 23,801 menit, pada ekstrak daun kratom  merah  dengan  waktu  retensi 21,761  menit,  dan  pada  ekstrak  daun
kratom  putih  dengan  waktu  retensi 25,344 menit (Gambar 5A-C).
Kromatogram  ekstrak  daun  kratom hijau,  merah,  dan  putih  yang  diperoleh melalui metode  ekstraksi  sokletasi menunjukkan perbedaan yang signifikan dalam jumlah puncak yang teramati serta tingkat kompleksitasnya. Secara keseluruhan,  kromatogram  ekstrak  daun kratom  hijau  menunjukkan  adanya  lima puncak  yang  teridentifikasi,  sementara pada  kromatogram  ekstrak  daun  kratom merah  terdapat  enam  puncak,  dan  pada kromatogram ekstrak daun kratom putih terdapat  empat  puncak.  Lebih  spesifik, senyawa mitraginin berhasil diidentifikasi  pada  ekstrak  daun  kratom hijau  dengan  waktu  retensi  sebesar 23,461 menit, pada ekstrak daun kratom merah  dengan  waktu  retensi  23,438 menit,  dan  pada  ekstrak  daun  kratom putih dengan waktu retensi 21,563 menit (Gambar 6A-C).
Dalam konteks perbandingan kromatogram berdasarkan metode sonikasi, refluks, dan sokletasi yang telah dilakukan, hasil penelitian  menunjukkan bahwa kompleksitas senyawa dari ekstrak  daun  kratom  putih  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  ekstrak  daun kratom  merah dan hijau secara berturut- turut.
Gambar 4. Kromatogram HPLC dari Ekstrak Daun Kratom (A) Hijau, (B) Merah, (C) Putih Berdasarkan Metode Ekstraksi Sonikasi
A B C
Gambar 5. Kromatogram HPLC dari Ekstrak Daun Kratom (A) Hijau, (B) Merah, (C) Putih Berdasarkan Metode Ekstraksi Refluks.
A B C
Gambar 6. Kromatogram HPLC dari Ekstrak Daun Kratom (A) Hijau, (B) Merah, (C) Putih Berdasarkan Metode Ekstraksi Sokletasi.
A B C
Jika
dibandingkan dengan kromatogram  yang  dilaporkan  oleh Mudge  &  Brown  (2017)  puncak  yang teramati pada kromatogram sekitar menit ke-10 secara tentatif diidentifikasi sebagai 7-hidroksi mitraginin dan puncak-puncak  yang  muncul  di  sekitar puncak mitraginin kemungkinan merupakan  turunan  mitraginin  lainnya, seperti  ajmalicine,  speciociliatine,  dan paynantheine,  karena  memiliki  polaritas yang  serupa.  Namun,  identifikasi  ini memerlukan  penelitian  tambahan  untuk dikonfirmasi lebih lanjut.
Perbedaan perolehan senyawa mitraginin dari daun kratom dipengaruhi oleh  metode  ekstraksi  dan  faktor  seperti suhu serta durasi ekstraksi yang mempengaruhi efisiensi ekstraksi (Zhang et al., 2018). Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  metode  ekstraksi refluks dan sokletasi mengekstraksi lebih banyak senyawa daripada metode sonikasi. Hal ini dikarenakan pemanasan dalam metode refluks dan sokletasi dapat mengekstraksi  senyawa  yang  tidak  larut pada  suhu  kamar  dan  mengaktifkan subunit molekul polimer berbobot molekul  rendah  dengan  berat  molekul tinggi,  yang  mengarah  pada  ekstraksi senyawa  yang  lebih  efisien  (Septiani  et al., 2021).
Akibat  waktu  ekstraksi  yang  lebih singkat  pada  metode  ekstraksi  sonikasi menghasilkan  jenis  senyawa  yang  lebih sedikit  daripada  metode  refluks  dan sokletasi.  Waktu  ekstraksi  yang  lebih lama dapat menyebabkan degradasi lebih lanjut  pada  permukaan  daun,  yang mengarah pada ekstraksi senyawa tambahan (Zahari et al., 2020).
Tabel 4. Kadar Mitraginin dari Tiga Varian
Daun Kratom Berdasarkan Variasi Metode Ekstraksi Daun Kratom Metode Ekstraksi Rata-Rata Kadar Mitraginin (mg/g)±SD (n=5) Hijau Sonikasi 22,21±0,57 Refluks 15,40±1,23 Sokletasi 19,63±0,62 Merah Sonikasi 26,29±1,68 Refluks 29,15±0,77 Sokletasi 18,76±1,73 Putih Sonikasi 18,07±0,87 Refluks 19,33±1,08 Sokletasi 24,62±0,61
Tabel  4.  menunjukkan  perbedaan kadar mitraginin yang diperoleh melalui metode  ekstraksi  yang  berbeda.  Pada daun  kratom  hijau,  hasil  rendemen mitraginin  tertinggi  diperoleh  melalui metode  sonikasi,  diikuti  oleh  sokletasi dan  refluks  secara  berturut-turut.  Pada daun  kratom  merah,  refluks  adalah metode  terbaik  untuk  memperoleh senyawa  mitraginin  yang  diikuti  oleh sonikasi  dan  sokletasi.  Adapun  pada
daun  kratom  putih,  sokletasi  adalah metode  yang  lebih  efesien  dalam memperoleh  senyawa  mitraginin  yang diikuti oleh refluks dan sonikasi.
Variasi perolehan senyawa mitraginin  pada  setiap  metode  ekstraksi disebabkan oleh stabilitas mitraginin dan senyawa  alkaloid  lainnya  terhadap pengaruh  pH  dan  suhu  (Basiliere  &
Kerrigan,  2020)  Selain  itu,  perbedaan perolehan senyawa mitraginin pada daun kratom disebabkan oleh variasi distribusi senyawa alkaloid pada setiap varian daun kratom  (Boffa  et  al.,  2018).  Faktor lingkungan,  seperti  intensitas  cahaya, kalsium,  pH  tanah,  kelembaban  relatif, dan  kadar  air  volumetrik  tanah,  juga memengaruhi distribusi senyawa alkaloid pada  varian  daun  kratom  yang  berbeda (Leksungnoen et al ., 2022).
Dalam  sebuah  penelitian  yang dilakukan  oleh  (Tanti et  al .,  2021) terhadap  berbagai  varian  daun  kratom yang  diekstraksi  menggunakan  metode sonikasi dan dianalisis menggunakan LC
menemukan  bahwa  kadar  mitraginin tertinggi  terdapat  pada  daun  kratom hijau, diikuti oleh daun kratom putih dan merah.  Namun,  perbedaan  hasil  analisis dapat  disebabkan  oleh  berbagai  faktor seperti  kondisi  alat  LC,  pelarut  yang digunakan, sumber sampel, durasi ekstraksi, dan jenis alat ekstraksi.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa setiap  varian  daun  kratom  memiliki metode ekstraksi terbaik untuk memperoleh  kadar  mitraginin  yang tinggi.  Metode  sonikasi  lebih  efesien diaplikasikan  pada  daun  kratom  hijau, metode refluks pada daun kratom merah, dan  metode  sokletasi  pada  daun  kratom putih.  Pemilihan  metode  ekstraksi  yang tepat dianggap sebagai kunci keberhasilan  untuk  memperoleh  hasil yang  optimal  sesuai  dengan  kebutuhan dan tujuan penggunaannya.

## DAFTAR RUJUKAN
Basiliere,  S.,  Kerrigan,  S.,  (2020). Temperature and pH-Dependent Stability  of  Mitragyna  Alkaloids. J
Anal Toxicol 44, 314–324. https://doi.org/10.1093/jat/bkz103
Boffa,  L.,  Ghè,  C.,  Barge,  A.,  Muccioli, G.,  Cravotto,  G.,  (2018).  Alkaloid Profiles  and  Activity  in  Different Mitragyna  speciosa  Strains. Natural Product  Communication 13,  1111– 1116.
https://doi.org/10.1177/1934578x180 1300904 Eastlack, S.C., Cornett, E.M., Kaye, A.D.,
(2019). Kratom-Pharmacology,
Clinical Implications, and Outlook: A Comprehensive  Review. Pain  Ther. https://doi.org/10.6084/m9.figshare.1 1567916
Fonmboh,  D.J.,  Abah,  E.R.,  Fokunang,
T.E.,  Herve,  B.,  Teke,  G.N.,  Rose, N.M., Borgia, N.N., Fokunang, L.B., Andrew, B.N., Kaba, N., Bathelemy, N.,  Ntungwen,  F.C.,  (2020).  An Overview  of  Methods  of  Extraction, Isolation  and  Characterization  of Natural  Medicinal  Plant  Products  in Improved Traditional
Medicine Research. Asian Journal of Research in  Medical  and  Pharmaceutical Sciences
31–57.
https://doi.org/10.9734/ajrimps/2020 /v9i230152 Hasnaeni, Wisdawati, Usman, S., (2019). Pengaruh Metode Ekstraksi Terhadap
Rendemen Dan Kadar Fenolik
Ekstrak  Tanaman  Kayu  Beta-Beta (Lunasia  amara  Blanco). Jurnal Farmasi Galenika (Galenika Journal of Pharmacy) 5, 175–182. https://doi.org/10.22487/j24428744.2 019.v5.i2.13149
Heinrich,  M.,  Mah,  J.,  Amirkia,  V.,
(2021). Alkaloids Used as Medicines:
Structural Phytochemistry Meets
Biodiversity—An Update and Forward  Look. Molecules 26,  1–18. https://doi.org/10.3390/molecules26 071836
Kumaradewi,  D.A.P.,  Subaidah,  W.A., Andayani,  Y.,  Al-Mokaram,  A., (2021). Phytochemical Screening and Activity Test of Antioxidant Ethanol Extract  of  Buni  Leaves  (Antidesma bunius  L.  Spreng)  Using  DPPH Method.
Jurnal Penelitian Pendidikan IPA 7, 275. https://doi.org/10.29303/jppipa.v7i2. 675 Kurniawati, R.D., Martini, M.,
Wahyuningsih, N.E., Sutiningsih, D.,
(2022). Comparison Analysis of Leaf and  Flower  Extraction  of  Clove Which  Have  the  Potential  as Larvacida. International  Research
Journal of Public and Environmental Health 9, 110–119.
https://doi.org/10.15739/irjpeh.22.01
4
Mohamad Zuldin, N.N., Said, I.M., Mohd Noor,  N.,  Zainal,  Z.,  Jin  Kiat,  C., Ismail,  I.,  (2013).  Induction  and
Analysis of The Alkaloid Mitragynine  Content  of  a  Mitragyna Speciosa Suspension Culture System Upon  Elicitation  and  Precursor Feeding. The Scientific World
Journal 2013. https://doi.org/10.1155/2013/209434 Mudge,  E.M.,  Brown,  P.N.,  (2017).
Determination  of  Mitragynine  in Mitragyna  speciosa  Raw  Materials and  Finished  Products  by  Liquid Chromatography with UV Detection: Single-Laboratory Validation.
Dietary  Supplements 100,  1–7. https://doi.org/10.5740/jaoacint.16- 0220
Newita Pratama, R., Wayan Rai Widarta, I.,  Putu  Trisna  Darmayanti,  L., (2017).  Pengaruh  Jenis  Pelarut  dan Waktu  Ekstraksi  Dengan  Metode
Soxhletasi Terhadap Aktivitas
Antioksidan  Minyak  Biji  Alpukat (Persea  americana  Mill.). Media Ilmiah  Teknologi  Pangan  (Scientific Journal  ofFoodTechnology) 4,  85–
93.
Septiani,  G.,  Susanti,  S.,  Sucitra,  F.,
(2021). Effect of Different Extraction
Method on Total Flavonoid Contents of  Sansevieria  trifasciata  P.  Leaves Extract. Jurnal  Farmasi  Galenika (Galenika  Journal  of  Pharmacy)  (e-
Journal) 7, 143–150.
https://doi.org/10.22487/j24428744.2 021.v7.i2.15573
Setyaningrum, L., Susanti, D.A.,  (2022). Penetapan Kadar Alkaloid Total Pada Ekstrak  N-Heksan  dan  Etanol  Biji
Ketumbar  (Coriandrum  Sativum) Menggunakan  Spektrofotometer  Uv- Vis. Jurnal Riset Kefarmasian Indonesia 4, 353–365. https://doi.org/10.33759/jrki.v4i3.26 8
Sidik,  S.,  Ishak,  O.,  Putra,  N.,  Salsabila, S.,  Al,  L.M.R.,  (2021).  Mitragynine:
A Review of Its Extraction,
Identification, And Purification
Methods. Current  Research  on Biosciences  and  Biotechnology 3, 165–171.
https://doi.org/10.5614/crbb.2021.3.1 /TMPNSA4H
Sofia,  N.,  Yuniarti,  Y.,  Rosidah,  R.,
(2022).  Uji  Fitokimia  Terhadap Tanaman  Obat  Kratom  (Mitragyna Speciosa)  di  KHDTK  ULM. Jurnal Sylva Scienteae 5, 218. https://doi.org/10.20527/jss.v5i2.535 6
Sundari,  S.N.,  Aprilia,  H.,  Sukanta,
Rusdi, B., (2016). Analisis Kuantitatif  Dibutil  Ftalat  dalam Minyak Goreng Curah dan Kemasan Secara  Kromatografi  Cair  Kinerja Tinggi dengan Detektor UV.
Prosiding Farmasi Universitas Islam
Bandung 2, 77–82.
Susanty, Bachmid, F., (2016).
Perbandingan Metode Ekstraksi
Maserasi  dan  Refluks  Terhadap
Kadar  Fenolik  dari  Ekstrak  Tongkol Jagung  (Zea  mays  L.). Jurnal Konversi 5, 87–93.
Todd, D.A., Kellogg, J.J., Wallace, E.D., Khin,  M.,  Flores-Bocanegra,  L., Tanna,  R.S.,  McIntosh,  S.,  Raja,
H.A., Graf, T.N., Hemby, S.E., Paine,
M.F.,  Oberlies,  N.H.,  Cech,  N.B., (2020).  Chemical  Composition  and
Biological Effects of Kratom
(Mitragyna  Speciosa):  In  Vitro Studies with Implications for Efficacy  and  Drug  Interactions. Sci Rep 10. https://doi.org/10.1038/s41598-020- 76119-w
Wahyono,  S.,  Widowati,  L.,  Handayani, L.,  Sampurno,  O.D.,  Haryanti,  S., Fauzi, Ratnawati, G., S, M.B., (2019).
Kratom,  Prospek  Kesehatan  dan
Sosial Ekonomi, Journal of Chemical Information and Modeling.
Warner, M.L., Kaufman, N.C., Grundmann, O., (2016). The
Pharmacology  and  Toxicology  of Kratom:  From  Traditional  Herb  to Drug  of  Abuse. Int  J  Legal  Med.
https://doi.org/10.1007/s00414-015-
1279-y
Wullur, A., Schaduw, J., 2013.
Identifikasi  Alkaloid  pada  Daun
Sirsak  (Annona  muricata  L.). JIF- Jurnal Ilmiah 3, 54–56.
Zahari, N.A.A.R., Chong, G.H.,
Abdullah,  L.C.,  Chua,  B.L.,  (2020).
Ultrasonic-Assisted Extraction (UAE) Process on Thymol Concentration from Plectranthus Amboinicus Leaves: Kinetic Modeling and Optimization. Processes 8. https://doi.org/10.3390/pr8030322
Zakaria,  F.,  Tan,  J.K.,  Mohd  Faudzi,
S.M.,  Abdul  Rahman,  M.B.,  Ashari, S.E.,  (2021). Ultrasound-Assisted
Extraction  Conditions  Optimisation Using Response Surface Methodology from Mitragyna Speciosa  (Korth.)  Havil  Leaves. Ultrasonics Sonochemistry 81,
105851.
https://doi.org/10.1016/j.ultsonch.20
21.105851
Zhang,  Q.W.,  Lin,  L.G.,  Ye,  W.C.,
(2018).  Techniques  For  Extraction and Isolation Of Natural Products : A Comprehensive  Review. Chin  Med 1–26.
https://doi.org/10.1186/s13020-018- 0177-x