UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Aaptos Aaptos TERHADAP PERTUMBUHAN Escherichia coli, Staphylococcus aureus, dan

## Candida albicans
Sitti Nurhaliza Tunggali 1) , Herny E. I. Simbala 1) , Henki Rotinsulu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Sponge  Aaptos  aaptos  is  a  marine  biota  that  has  great  potential,  which  can  be  applied,  in  the pharmaceutical field because of the presence of large compounds in inhibiting microbial growth. This study aims  to  determine  the  inhibitory  activity  of  extracts  and  fractions  of  sponge  Aaptos  aaptos  on  microbial growth  of  Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus,  and  Candida  albicans.  The samples  were  extracted  by maceration  with  96  %  ethanol  and  fractioned  with  n-hexane,  choloroform  and  methanol.  Testing  is  done using the Disc Diffusion Agar method. Crude ethanol extract and fraction of sponge Aaptos aaptos showed the greatest antimicrobial activity against Staphylococcus aureus and categorized as strong, with an average value  of  20.32  mm  for  ethanol  extract  with  strong  categories,  chloroform  fraction  13,28  mm  with  medium category and methanol fractions 18,48 mm strong category.
Keyword : Aaptos aaptos, antimicrobial activity, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida albicans.

## ABSTRAK
Spons Aaptos  aaptos merupakan  biota  laut  yang  memiliki  potensi  sebagai  antimikroba  yang  dapat diterapkan  di  bidang  farmasi  dengan  kandungan  senyawa  yang  besar  dalam  menghambat  pertumbuhan mikroba.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  daya  hambat  dari  ekstrak  dan  fraksi spons Aaptos  aaptos terhadap  pertumbuhan  mikroba Escherichia coli,  Staphylococcus aureus, dan Candida albicans .  Sampel  diekstraksi  secara  maserasi  dengan  etanol  dan  difraksinasi  dengan  pelarut  n–heksan, kloroform  dan  metanol.  Pengujian  dilakukan  dengan  menggunakan  metode Disc  Diffusion Agar .  Ekstrak kasar  etanol  dan  fraksi  dari  Spons Aaptos  aaptos menunjukkan  aktivitas  antimikroba paling  besar terhadap Staphylococcus  aureus dan  dikategorikan  kuat,  dengan  nilai  rata  –  rata 20,32  mm  untuk  ekstrak  etanol dengan  kategori  kuat,  fraksi  kloroform  13,28  mm,  kategori  sedang  dan  fraksi  metanol  18,48  mm  kategori kuat.
Kata  Kunci : Aaptos  aaptos, aktivitas  antimikroba, Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus, Candida albicans

## PENDAHULUAN
Spons adalah hewan metazoa multiseluler  tergolong  ke  dalam  filum Porifera,  yang  memiliki  perbedaan  struktur dengan  metazoan  lainnya.  Spons  mencari makan  dengan  menghisap  dan  menyaring  air melalui  seluruh  permukaan  tubuhnya  secara aktif  (Romimohtarto  dan  Juwana  1999). Spons  terdiri  dari  850  jenis,  terbagi  menjadi tiga kelas besar, yaitu Calcarea,
Demospongiae  dan  Hexactinellida  (Thakur dan Müller 2004).
Demospongiae  merupakan jenis  spons yang memiliki keanekaragaman tinggi sebagai  kelas  spons terbesar  penghasil senyawa  metabolit  sekunder.  Salah  satu senyawa  metabolit  sekunder  yang  banyak diperoleh  dari  spons yaitu  golongan  alkaloid (Kumar dan Pal 2016). Salah satu jenis spons yang  termasuk  dalam  kelas  Demospongiae adalah jenis Spons Aaptos aaptos .
Spons Aaptos  aaptos mempunyai morfologi yang berbentuk seperti spherical/subspherical (bundar/agak  bundar), soliter,  dan  dengan  permukaan  yang  halus atau  berserabut  (Ismet,  2007).  Spons Aaptos aaptos menghasilkan metabolit sekunder yang mengandung  senyawa  bioaktif  potensial. Senyawa-senyawa  tersebut  telah  dibuktikan memiliki aktivitas sebagai antitumor, sehingga  potensial  sebagai  sumber  obat- obatan baru (Pelletier et al ., 1987).
Spons Aaptos aaptos dapat menghasilkan senyawa khusus yaitu Aaptamine yang  dapat  digunakan  dalam bidang  farmasi.  Menurut  hasil  penelitian  dari Yu et al ., (2014) berhasil mengisolasi turunan Aaptamin dari  Spons Aaptos  aaptos yang memiliki aktivitas  sebagai  antifungi  dan  anti- HIV-1.  Penelitian  yang  dilakukan  oleh Kardono  (2006)  dan  Sussana  (2006)  bahwa jenis  spons Aaptos  aaptos memiliki  potensi sebagai senyawa antibakteri.
Berdasarkan latar belakang tersebut di atas  peneliti  akan  melakukan  penelitian terhadap  uji  daya  hambat  ekstrak  dan  fraksi Spons Aaptos  aaptos terhadap  pertumbuhan Escherichia  coli , Staphylococcus  aureus dan Candida abicans .

## METODE PENELITIAN Bentuk Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian dengan  menggunakan  metode  eksperimental laboratorium yang akan menguji daya hambat ekstrak dan fraksi dari Spons Aaptos aaptos.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini di laksanakan pada bulan Oktober  2018  –  Februari  2019.  Tempat pengambilan  sampel  dilakukan  di  Perairan Selat  Lembeh,  Kota  Bitung  dan  untuk preparasi  sampel,  pengamatan  dilakukan  di Laboratorium  Penelitian  Farmasi  Lanjutan (Farmakognosi  Fitokimia  dan  Laboratorium
Mikrobiologi Farmasi) Program Studi Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam
Ratulangi.

## Alat dan Bahan
a. Alat
Alat  yang digunakan dalam penelitian ini  yaitu scuba  diving ,  sarung  tangan, zipper bag , gunting, kamera, wadah kaca, pisau,  Erlenmeyer  (Pyrex),  corong  pisah, timbangan  analitik,  gelas  ukur  (Pyrex), gelas kimia (Pyrex), cawan petri, autoklaf (autoklaf KT-30s), spatula, pinset, pembakar  spritus,  pipet  tetes, mikro tubes , batang  pengaduk, Laminary  air flow (Clean  Bench) , rak  tabung  reaksi, tabung reaksi, lemari pendingin, incubator  incucell (N  –  Biotek),  cakram ( paper  disc) ,  mikropipet, digital  caliper , vial, oven, jarum ose, vortex dan jas lab

## b. Bahan
Bahan  yang  digunakan  yaitu  Spons Aaptos  aaptos ,  bakteri Escherichia  coli ATCC  25922 , bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923, dan jamur Candida albicans ATCC  10231 , etanol  96%, aquadest,  metanol,  n–heksan,  kloroform ,
Pepton, Ekstrak Beef, NaCl, Agar, Paper Disc,  Kloramfenikol  Paper  Disc ,  label, spidol  permanen, tissue , aluminium  foil, kertas saring, dan kapas.

## Prosedur Penelitian

## Ekstraksi
Spons Aaptos aaptos sebanyak 1660 g diekstrak  dengan  cara  maserasi.  Sampel dibersihkan  dari  bahan  pengotor,  dipotong kecil  –  kecil  dimasukkan  ke  dalam  wadah, kemudian  direndam  dengan  pelarut  etanol 96%  sampai  sampel  terendam  semuanya, dikocok-  kocok  lalu  dibiarkan  selama  1x24 jam.  Sampel  yang  sudah  direndam  kemudian disaring  menggunakan  corong  dan  kertas saring dan menghasilkan filtrat 1 dan debris 1. Debris  1  direndam  kembali  dengan  etanol 96%  sampai  terendam  semuanya,  debris dikocok – kocok dan dimaserasi selama 1x24 jam.  Diulangi  cara  yang  sama  sampai memperoleh 3 filtrat dan 3 debris. Campurkan filtrat 1, 2, dan 3 yang diperoleh menjadi satu. Filtrat dievaporasi menggunakan oven dengan suhu  40 o C  hingga  memperoleh  ekstrak  kasar spons Aaptos  aaptos dan  timbang  dengan menggunakan  timbangan  analitik.  Ekstrak kasar  etanol  spons Aaptos  aaptos sebanyak 28,81  g,  selanjutnya  ekstrak  kasar  etanol digunakan  dalam  fraksinasi  dan  pengujian daya hambat antimikroba.

## Fraksinasi
Ekstrak  kasar  etanol  Spons Aaptos aaptos sebanyak  10,00  g  dimasukkan  dalam Erlenmeyer,  dilarutkan  dengan  campuran
metanol : air (MeOH : H 2 O) (80:20) sebanyak 100 mL. Setelah sampel larut, dimasukkan ke dalam  corong  pisah  lalu  ditambahkan  pelarut n-heksan  dengan  jumlah  yang  sama,  setelah itu  dikocok  berulangkali  sampai  homogen. Dibiarkan  sampai  terbentuk  dua  lapisan metanol  :  air  (MeOH  :  H 2 O)  dan  n-  heksan. Masing–masing  lapisan  ditampung  dalam wadah  yang  berbeda.  Lapisan  n-heksan dievaporasi menggunakan oven hingga kering,  lalu  ditimbang  dengan  timbangan analitik dan diperoleh fraksi n-heksan 0,1 g.
Lapisan  MeOH  :  H 2 O  ditambahkan akuades  sebanyak  100  mL  dipartisi  dengan pelarut  kloroform  dengan  perbandingan  1:1 v/v  dalam  corong  pisah,  lalu  dikocok berulangkali  sampai  homogen.  Dibiarkan sampai  terbentuk  dua  lapisan  yaitu  lapisan MeOH  dan  kloroform.  Masing  –  masing lapisan  ditampung  dalam  wadah  yang berbeda.  Lapisan  kloroform  dievaporasi menggunakan  oven  hingga  kering  lalu ditimbang dan diperoleh fraksi  kloroform 8,8 g.  Lapisan  MeOH  yang  ditampung  pada wadah  yang  lain  dievaporasi  menggunakan oven  hingga  kering  lalu  ditimbang  berat sampel,  dan  diperoleh  fraksi  MeOH  9,3  g. Ketiga  fraksi  digunakan  dalam  pengujian aktivitas  antimikroba  dan  dihitung  nilai rendemen dengan persamaan sebagai berikut:

## Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  uji  daya  hambat  ini  disterilkan terlebih  dahulu.  Alat-alat  gelas  disterilkan menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121 o C selama  15  menit,  pinset  dibakar  dengan pembakaran  di  atas  api  langsung  dan  media disterilkan  menggunakan  autoklaf  pada  suhu 121 o C selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair B1
Ditimbang  Pepton  0,5  g,  ekstrak daging  0,3  g  ( meat  extract ),  Natrium  klorida 0,3 g dilarutkan dalam akuades sebanyak 100 mL  menggunakan  Erlenmeyer,  dikocok sampai homogen. Media yang telah homogen kemudian  disterilkan  dengan  menggunakan autoklaf  pada  suhu  121 o C  selama  15  menit. Dipipet  1  mL  media  cair  B1,  kemudian masukkan  dalam  tabung  reaksi  dan  tutup dengan aluminium  foil .    Media  cair  B1  siap digunakan  sebagai  media  kultur  mikroba (Ortez, 2005).

## Kultur Mikroba
Masing  –  masing  mikroba  yang  sudah dikultur  ( Escherichia  coli , Staphylococcus aureus dan Candida  albicans )  ditambahkan media  cair  B1  yang  disiapkan  sebelumnya sebanyak 100 µL kedalam tabung reaksi yang berbeda  –  beda.  Masing  –  masing  tabung reaksi  ditutup  dengan  aluminium  foil  dan dimasukkan  ke  dalam  inkubator  selama  1x24 jam dengan suhu 37 o C (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol (Postitif dan Negatif)
Kontrol  postif  yang  digunakan  yaitu Kloramfenikol Paper  Disc dan  Kontrol negatif  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  menggunakan  metanol,  dengan  cara membuat  larutan  stok  metanol  dengan mengambil sebanyak  200  μl  metanol kemudian ditotolkan pada paper disc.

## Pembuatan Larutan Uji
Sebanyak  1  mg  ekstrak  kasar  spons Aaptos  aaptos dilarutkan  dalam  200  μL metanol  sehingga  menghasilkan  konsentrasi larutan  uji  sebesar  250  μg/50  μL  (Ortez, 2005). Perlakuan yang sama dilakuakan untuk fraksi metanol, fraksi kloroform dan fraksi n- heksan.

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat extract ) 0,3 g, natrium klorida 0,3 g, nutrient agar 1,5  g  dan  dilarutkan  dalam  akuades sebanyak  100  mL  menggunakan  Erlenmeyer, dikocok  sampai  homogen.  Media  yang  telah homogen kemudian disterilkan dengan menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121 o C selama  15  menit.  Media  agar  B1  siap digunakan  untuk  uji  aktivitas  antimikroba (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode  yang digunakan  yaitu Metode Difusi  ( Disc  Diffusion  Kirby  and  Bauer ). Pengujian  aktivitas  antimikroba  ini  cakram ( paper disc ) yang digunakan berukuran 6 mm dengan  daya  serap  50  µL  tiap  cakram. Diinokulasi  suspensi  mikroba  dalam  media dan  dihomogenkan.  Media  yang  sudah diinokulasi mikroba dituangkan dalam  cawan petri  sampai  media  memadat,  kemudian cawan  petri  diberi  label  Sampel  yang  telah ditentukan  kosentrasinya  (250  µg/50  µL) ditotolkan pada masing-masing cakram dengan  menggunakan  mikropipet,  kemudian diletakkan  kertas  cakram  yang  sudah  ditotol ke  dalam  cawan  petri  dan  diinkubasi  1  x  24 jam (Ortez, 2005).
Pengamatan dan Pengukuran Zona

## Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  1x24 jam  masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran cakram  menunjukkan  kepekaan  mikroba terhadap  antibiotik  atau  bahan  antimikroba yang  digunakan  sebagai  bahan  uji  yang dinyatakan dengan diameter zona hambat atau zona  bening.  Diameter  zona  hambat  diukur dalam  satuan  millimeter  (mm)  menggunakan Digital  Caliper dengan  cara  diukur  diameter total zona bening cakram. Kemudian diameter
zona  hambat  tersebut  dikategorikan  kekuatan daya anti bakterinya berdasarkan penggolongan Davis dan Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi dan Fraksinasi
Sampel  spons Aaptos  aaptos yang dikoleksi dari perairan Selat Lembeh dipotong kecil-kecil,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam wadah. Dipotong kecil-kecil untuk memperluas  ukuran  permukaan  sampel, semakin  luas  permukaan  sampel  maka  lebih banyak  senyawa  aktif  akan  tertarik  dari sampel  ke  dalam  pelarut  (Kristanti et  al ., 2008).
Sampel spons Aaptos aaptos selanjutnya diekstraksi dengan metode maserasi.  Metode  maserasi  digunakan  karena cara  pengerjaanya  yang  mudah  dikerjakan dengan menggunakan peralatan yang sederhana,  tidak  menggunakan  pemanasan dan  dapat  menarik  senyawa  –  senyawa  aktif dari  sampel  dengan  maksimal.  Perendaman sampel dalam  maserasi  dapat  membuat dinding  sel  dari  sampel  pecah  dan  membuat senyawa-senyawa  yang  ada  dalam  sampel yang  terdapat  dalam  sitoplasma  akan  tertarik oleh  pelarut.  Dinding  sel  pecah  di  karenakan adanya perbedaan konsentrasi di dalam dan di luar  sel.  Konsentrasi  di  luar  sel  lebih  tinggi dibandingkan  konsentrasi  di  dalam  sel  yang rendah  sehingga  dinding  sel  pecah  karena tidak  bisa  menahan  tekanan  dari  perbedaan konsentrasi (Harborne, 1996).
Pada proses maserasi dilakukan pengocokan  agar  pelarut  dapat  melarut  ke dalam  sampel  dan  akan  masuk  ke  rongga- rongga  sampel  karena  dalam  keadaan  diam selama  maserasi  menyebabkan  turunnya perpindahan bahan aktif. Senyawa aktif dalam sampel  agar  tertarik  semua  ke  dalam  pelarut dilakukan  remaserasi  dengan  penggantian pelarut  sebanyak  tiga  kali  dengan  pelarut etanol.  Maserasi  agar  lebih  efisien  dilakukan berulang  kali  dibandingkan  hanya  dilakukan
sekali  (Mujipradhana,  2018).  Pelarut  yang digunakan  yaitu  etanol,  digunakan  pelarut etanol  96%  karena  didasarkan  pada  tingkat keamanan, kemudahan saat diuapkan, ekonomis, mudah bercampur dengan air serta sifatnya  yang  mampu  melarutkan  hampir semua  zat,  baik  yang  bersifat  polar, semipolar,  dan  nonpolar  (Sulastri et  al ., 2015).
Hasil  ekstrak  Spons Aaptos  aaptos selanjutnya  diuapkan  menggunakan  oven dengan  suhu  40 o C,  penguapan  ekstrak  ini dimaksudkan agar air dan pelarut yang tersisa dalam  ekstrak  akan  menguap. Menggunakan suhu  40 o C  bertujuan  untuk  tetap  menjaga senyawa bioaktif dalam filtrat karena biasanya  senyawa-senyawa  bioaktif  rentan terhadap suhu tinggi (Kowal et al ., 2018).
Hasil  ekstrak  kasar  Spons Aaptos aaptos yang diperoleh selanjutnya di lanjutkan ke tahap fraksinasi. Fraksinasi yang digunakan  yaitu  fraksinasi  cair  –  cair berdasarkan  perbedaan  tingkat  kepolaran yaitu dimulai dari pelarut n-heksan, kloroform dan metanol. Pada proses fraksinasi dilakukan pengocokan  sebelum  memperoleh  2  lapisan hal  ini  bertujuan  agar  kandungan  kimia  yang terdapat  dalam  Spons Aaptos  aaptos secara selektif  dapat  ditarik  oleh  pelarut  yang digunakan  (Wewengkang et  al .,  2014).  Pada saat  penyarian  dengan  pelarut  –  pelarut berdasarkan tingkat  kepolaran  akan  terbentuk 2  lapisan,  pelarut  dengan  massa  jenis  lebih tinggi  berada  di  lapisan  bawah  sedangkan pelarut dengan massa jenis lebih kecil berada di lapisan atas.
Hasil  rendemen  yang  diperoleh  dari ekstrak  dan  fraksi  Spons Aaptos  aaptos menggunakan pelarut Etanol, n-heksan, kloroform  dan  metanol  dapat  dilihat  pada tabel 1 dibawah ini.
Keterangan :
EKE  : Ekstrak Kasar Etanol
FK  : Fraksi Kloroform FM  : Fraksi Metanol FN  : Fraksi n-Heksan
Sampel  ekstrak  etanol  warna  yang dihasilkan  yaitu  warna  coklat  dan  massa ekstrak  yang  diperoleh  28,81  g  dari  massa awal  sampel  1660  g  dengan  nilai  rendemen 1,74  %.  Jumlah  ekstrak  etanol  yang  akan digunakan untuk pengujian aktivitas antimikorba  sebanyak  10,00  g  ekstrak  kasar etanol  spons Aaptos  aaptos di  fraksinasi dengan metanol air kemudian dipartisi dengan pelarut  n  –  heksan  menghasilkan  2  lapisan, yaitu lapisan n – heksan dan lapisan metanol. Warna  yang  dihasilkan  dari  filtrat  fraksi  n  – heksan yaitu kuning terang dan massa ekstrak yang diperoleh 0,1  g dari  massa awal  sampel 10,00 g dengan nilai rendemen yang diperoleh 1,00%.  Lapisan  metanol  dipartisi  kembali dengan pelarut kloroform sampai menghasilkan 2 lapisan yaitu lapisan kloroform  dan  lapisan  metanol.  Warna  dari filtrat  kloroform  yaitu  kuning  kecoklatan  dan massa ekstrak yang diperoleh yaitu 8,8 g dari massa  awal  sampel  10,00  g  dengan  nilai rendemen  88%.  Untuk  lapisan  metanol  filtrat yang  dihasilkan  berwarna  hitam  dan  massa ektrak  yang  diperoleh  yaitu  9,3  g  dari  massa awal  sampel  10,00  g  dengan  nilai  rendemen 93%.
Nilai rendemen yang dihasilkan berbeda  karena  perbedaan  tingkat  kepolaran dari  masing  –  masing  pelarut.  Terlihat  dari hasil  rendemen  yang  dihasilkan  fraksi
metanol  lebih  tinggi  hasil  rendemenya  yaitu 93  %.  Hal  ini  dikarenakan  pelarut  metanol mampu mengekstrak lebih banyak senyawa  – senyawa  aktif  dari  sampel  sehingga  senyawa –  senyawa  aktif  yang  terdapat  pada  spons Aaptos  aaptos lebih  bersifat  polar.  Hal  ini sesuai  yang  dinyatakan  Priyanto  (2012), bahwa  rendemen  ekstrak  hasil  maserasi dengan pelarut yang berbeda akan menghasilkan  rendemen  yang  berbeda  dan nilai  rendemen  yang  dihasilkan  dari  ekstrak metanol  diduga  dipengaruhi  sifat  larutan tersebut yang dapat melarutkan hampir semua komponen bahan aktif.
Uji  Aktivitas  Antimikroba  Spons Aaptos aaptos
Pengujian  aktivitas  antimikroba  dari spons Aaptos  aaptos dilakukan  pada  bakteri Escherichia  coli mewakili  bakteri  Gram negatif,  bakteri Staphylococcus  aureus yang mewakili  bakteri  Gram  positif dan Candida albicans yang  mewakili  Jamur  menggunakan Metode  difusi  agar  (difusi  Kirby-Bauer  yang telah dimodifikasi). Masing  –  masing ekstrak kasar, fraksi n – heksan, fraksi kloroform dan fraksi metanol diujikan pada masing – masing bakteri  dan  jamur.  Metode  difusi  digunakan karena  prosedurnya  yang  sederhana,  mudah dan praktis untuk dikerjakan (Mpila, 2012).
Penggunaan  mikroba  hal  ini  bertujuan melihat  apakah  ekstrak  dan  fraksi  spons Aaptos aaptos memiliki aktivitas antimikroba terhadap  mikroba  patogen  pada  tubuh manusia dan untuk mengetahui spektrum dari aktivitas  antimikroba  spons Aaptos  aaptos memiliki  spektrum  luas  (membunuh  banyak jenis mikroba) atau spektrum sempit (membunuh salah satu mikroba).
Hasil  yang  diperoleh  dalam  uji aktivitas  antimikroba  dilakukan  pengamatan selama 1x24 jam masa inkubasi dengan 3 kali penggulangan  untuk  masing  –  masing mikroba.  Aktivitas  yang  terbentuk  terlihat
dari  adanya  zona  hambat  (zona  bening)  di sekitaran  cakram  dengan  ukuran  cakram ( paper  disc ) 6  mm,  membuktikan  bahwa ekstrak  dan  fraksi  spons Aaptos  aaptos yang diujikan  menunjukkan  kepekaan  terhadap masing – masing mikroba dan antibiotik yang digunakan sebagai kontrol positif.
Konsentrasi  yang  digunakan  250  µg,  dengan daya serap masing- masing paper disc 50 µL. Hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat ekstrak  Kasar,  Fraksi  n  -  heksan  fraksi kloroform  dan  fraksi  metanol  Spons Aaptos aaptos terhadap  bakteri Escherichia  coli , Staphyloccocus aureus , dan Candida albicans disajikan pada tabel 2 dibawah ini.
Kriteria yang digunakan dalam penelitian  ini  untuk  menggolongkan  daya hambat  dari  kontrol  uji  dan  bahan  uji  Spons Aaptos aaptos menggunkana kriteria kekuatan antibakteri  menurut  Davis  dan  Stout  yaitu dapat dilihat pada tabel 3 dibawah ini:
Kontrol  negatif  yang  digunakan  yaitu metanol,  terlihat  dari  hasil  yang  di  peroleh metanol  tidak  menunjukkan  adanya  zona hambat  pada  pengujian  yang  dilakukan  pada masing  –  masing  mikroba  uji.  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Wewengkang et al ., (2014) dan Mujipradhana, (2018) membuktikan  bahwa kontrol negatif metanol yang digunakan tidak berpengaruh  pada  uji  antimikroba,  sehingga daya hambat yang terbentuk tidak dipengaruhi oleh  pelarut  melainkan  karena  aktivitas senyawa  yang  ada  dalam  Spons Aaptos aaptos .
Kontrol  positif  yang  digunakan  yaitu kloramfenikol.  Menggunakan  kloramfenikol dikarenakan kloramfenikol merupakan antibiotik  berspektrum  luas.  Hasil  yang diperoleh bahwa pada bakteri Escherichia coli menghasilkan  daya  hambat  yang  besar ditunjukkan dengan hasil yang diperoleh yaitu 29,07  mm  dibandingkan  dengan  bakteri Staphylococcus aureus dan Candida albicans. Hal  ini  dikarenakan  antibiotik  kloramfenikol lebih  peka  terhadap  bakteri Escherichia  coli (Gram negatif), kloramfenikol hanya
membutuhkan  konsentrasi  0,2-5  μg/mL, sedangkan  pada  kebanyakan  bakteri  gram positif bakteri dihambat pada konsentrasi 1-10 μg/mL (Katzung, 2004).
Hasil  ekstrak  kasar  etanol,  fraksi kloroform  dan  fraksi  metanol  Spons Aaptos aaptos ,  dari  semua  mikroba  uji  yaitu Escherichia  coli , Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans, terlihat  yang  memberikan daya  hambat  yang  paling  besar  terdapat  pada bakteri Staphylococcus aureus dengan jumlah rata  –  rata  ekstrak  kasar  yaitu  20,32  mm dengan  kategori  kuat,  fraksi  kloroform  13,28 mm kategori sedang dan fraksi metanol 18,48 mm dengan kategori kuat. Hal ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  dan  fraksi  dari spons Aaptos  aaptos memiliki  daya  hambat yang  lebih  peka  pada Staphylococcus  aureus
Tabel  3.  Standar  Kekuatan  Daya Antimikroba Diameter Zona Bening (mm) Kategori >20 Sangat Kuat 10 - 20 Kuat 5 - 10 Sedang <5 Lemah
dibandingkan Escherichia  coli dan Candida albicans. Hasil  ini  juga  sesuai  dengan  yang dinyatakan  Murniasih  (2003),  bahwa  spons Aaptos  aaptos memiliki  senyawa  alkaloid yaitu  Aaptamine  dan  Demethylaaptamine yang  mempunyai  keaktifan  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus .
Bakteri  gram  positif  cenderung  lebih  sensitif terhadap antimikroba, karena struktur dinding sel  bakteri  gram  positif  lebih  sederhana dibandingkan  struktur  dinding  sel  bakteri gram negatif sehingga memudahakan senyawa  antimikroba  untuk  masuk  kedalam sel bakteri gram positif.
Pada bakteri Escerichia coli hasil yang diperoleh  paling  efektif  dari  ekstrak  kasar etanol,  fraksi  Kloroform  dan  fraksi  metanol menunjukkan  aktivitas  antimikroba  pada ekstrak  kasar  yaitu  dengan  rata  –  rata  10,09 mm,  fraksi  metanol  dengan  rata  –  rata  8,48 mm,  dan  fraksi  kloroform  dengan  rata  –  rata 9,17  mm.  ketiga  fraksi  termasuk  dalam kategori  lemah.  Perbedaan  sensitifitas  bakteri Gram  positif  dan  bakteri  Gram  negatif  dapat disebabkan  oleh  perbedaan  struktur  dinding sel  yang  dimiliki  oleh  masing-masing  bakteri seperti  peptidoglikan,  jumlah  lipid  dan aktivitas  enzim.  Ini  sesuai  dengan  penelitian Renhoran  (2012)  yang  menyatakan  bahwa Gram  negatif  cenderung  bersifat  sensitif terhadap antimikroba yang bersifat polar.
Fraksi  n–heksan  tidak  menunjukkan adanya  zona  hambat  atau  zona  bening  yang terbentuk  disekitran paper  disc pada  semua mikroba uji yaitu Escherichia coli , Staphylococcus aureus dan Candida albicans . Pada bakteri Candida albicans fraksi kloroform
juga tidak menunjukkan terbentuknya zona hambat hal ini di sebabkan karena  pada  fraksi  n  –  heksan  dan  kloroform pada bakteri Candida albicans tidak memiliki senyawa  spesifik  yang  dapat  menghambat semua mikroba uji.
Hasil  fraksi  ekstrak  kasar  etanol  dan fraksi  metanol  pada  jamur Candida  albicans menunjukkan  memiliki  aktivitas  antimikroba cenderung  sensitif  terhadap  senyawa  yang bersifat  polar,  terlihat  adanya  zona  hambat yang terbentuk yang dikategorikan lemah dan sedang  yaitu  nilai  rata  –  rata  8,00  mm  dan 11,00 mm.
Perbedaan  hasil  aktivitas  dari  ekstrak dan fraksi dari Spons Aaptos aaptos terhadap mikroba  uji  selain  senyawa  yang  terkandung dalam  sampel  dan  kepekaan  dari  masing  – masing Gram positif dan Gram negatif juga di pengaruhi  oleh  faktor  lingkungan  (habitat) dan  lokasi  pengambilan  sampel.  Bell  dan Barnes (2003)  juga  menyatakan  bahwa substrat  tumbuh  spons  dapat  berpengaruh terhadap  morfologi  spons,  yang  dengan demikian juga akan mempengaruhi bioaktivitasnya.

## KESIMPULAN
Hasil penelitian yang diperoleh menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar  dan  fraksi dari  Spons Aaptos  aaptos memiliki  aktivitas antimikroba  karena  mampu  menghambat pertumbuhan mikroba uji Staphylococcus aureus dengan  zona  hambat  yang  dapat dikategorikan  kuat.  Nilai  rata-rata  dari aktivitas  antimikroba  ekstrak  kasar  etanol adalah 20,32 mm dengan kategori kuat, untuk fraksi  kloroform  13,28  mm  dengan  kategori sedang  dan fraksi  metanol  18,48  mm  dengan kategori kuat.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut terhadap Spons Aaptos aaptos ke uji aktivitas lainnya  agar  dapat  mengetahui  manfaat  lain selain aktivitas antimikroba.

## DAFTAR PUSTAKA
Bell  JJ,  DKA  Barnes.  2003.  Effects  of disturbance  on  assemblages:  an example  using  Porifera. Biol  Bull
205: 144-159 .
Davis,  W.W.,  Stout,  T.R.  1971.  Disc  plate method  of  microbiological  assay.
Journal of microbiology .
22 (4):659-665.
Harborne,  J.  B.  1996. Metode  Fitokimia: Penentuan Cara Modern Menganalisis Tumbahan . Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata  dan  Iwang  Soediro.
ITB, Bandung.
Ismet.  2007.  Penapisan  Senyawa  Bioaktif Spons Aaptos  aaptos dan Petrosia sp.  Dari  lokasi  yang  berbeda. [Tesis].  Intitut  Pertanian  Bogor.
Bogor.
Kardono  K.  2006.  Distribusi  dan  Preferensi Habitat Spons Kelas Demospongiae di  Kepulauan  Seribu  Propinsi  DKI Jakarta  [Tesis].  Institut  Pertanian
Bogor, Bogor.
Katzung.,  Betram  G.  2004. Farmakologi dasar  dan  klinik  edisi  4 .  Alih Bahasa:  staf  dosen  farmakolgi fakultas  kedokteran  unviversitas sriwijaya. EGC, Jakarta : 709-719
Kowal,  A., Esther, A.,  Nickson,  K., Kurniati, K.,  Henky,  M.,  Deiske,  H.  2018. Potensi  antibakteri  karang  lunak lobophytum sp. Dari perairan pangalisang pulau bunaken terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus . Jurnal Ilmiah Platax . 6 (2)
Kristanti,  A.  N.,  N.S.  Aminah.,  M.  Tanjung.,
B.  Kurniadi.  2008. Buku  Ajar
Fitokimia . Unair Press, Surabaya.
Kumar,  M.  S.,  Pal,  A.  K.  2016.  A  review  of Bioactive Compounds from Marine Organisms  with  Special  Mention on the Potential of Marine Sponges in Pharmacological Applications. J. Mar. Biol. Ass. India . 58 : 83–91.
Mpila,  D.  A.  2012.  Uji  Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak  Etanol  Daun  Mayana (Coleus atropurpureus benth) Terhadap Staphylococcus  aureus, Escherichia  coli dan Pseudomas aeruginosa Secara Invitro [skripsi]. Program  Studi  Farmasi  FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Mujipradhana,  V.,  Defny,  W.,  Edi,  S. Aktivitas  antimikroba  dari  ekstrak ascidian herdmania  momus pada mikroba  patogen  manusia. Jurnal Ilmiah Farmasi 7 (3).
Murniasih, T. 2003. Metabolit Sekunder Dari Spons  Sebagai  Bahan  Obat  – Obatan. Oseana . 28 (3).
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual of antimicrobial
susceptibility  testing.  Marie  B. Coyle (Coord.  Ed).  American society for Microbiology, America.
Pelletier JC, MP Cava. 1987. Synthesis of the
marine  alkaloids  aaptamine  and demethyloxyaaptamine  and  of  the parent structure didemethoxyaaptamien. J Org
Chem 52 : 616-622. Priyanto,  R.  A.  2012.  Aktivitas  Antioksidan Dan  Komponen  Bioaktif  Pada Buah Bakau (Rhizophora
mucronata Lamk.). [Skrips] Institut Pertanian Bogor.
Renhoran,  W.  2012.  Aktivitas  Antioksidan
dan Mikrobiologi Ekstrak Sargassum  polycystum [skripsi]. Departemen Teknologi Hasil Perairan  Faklutas  Perikanan  dan Ilmu Kelautan IPB, Bogor. Susanna.  2006.  Kajian  Kualitas  Perairan Terhadap Kelimpahan dan Senyawa Bioaktif Antibakteri Spons Demospongiae di Kepulauan
Seribu DKI Jakarta [Tesis]. Institut
Pertanian Bogor, Bogor.
Sulastri, E., Cristadeolia, O., Yusriadi., 2015.
Formulasi  Mikroemulsi  Ekstrak
Bawang  Hutan  dan  uji  Aktivitas Antioksidan. Jurnal Pharmascience . 2 (2):2 Thakur, N.L., Müller W.E.G. 2004. Biotechnological potential of
marine  sponges. Current  Science .
86 (11).
Wewengkang,  D.,  Deiske.  S.,  Hengki.  R.
2014.  Karakterisasi  dan  bioaktif antibakteri
senyawa spons Haliclona sp.  dari  teluk  manado.
Jurnal  LPPM  Bidang  Sains  dan Teknologi . 1 (1).
Yu,  H.  B.,  Yang,  F.,  Sun,  F.,  Li,  J.,  Jiao,  W.
H.,  Gan,  J.  H.,  Hu,  W.  Z.,  Lin,  H.
W.  2014.  Aaptamine  Derivatives with  Antifungal  and  Anti-HIV-1 Activities  from  the  South  China Sea Sponge  Aaptos  aaptos.  Mar.
Drugs. 12 : 6003–6013.