## ANALISIS PEWARNA RHODAMIN B PADA SAOS BAKSO TUSUK YANG BEREDAR DIBEBERAPA SEKOLAH DASAR DI KOTA MANADO
Balqis Muzdhalifah 1) , Sri Sudewi 1) , Gayatri Citraningtyas 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Rhodamin  B  is  a  red  synthetic  dye  commonly  used  as  paper  dyes,  textiles  or  inks.  Food  products  that  are often added by Rhodamin B by irresponsible producers is sauce. The purpose of this study was to determine the  presence  and  levels  of  Rhodamin  B  found  in  skewers  meatballs  sold  in  several  elementary  schools  in Manado  City  using  Thin  Layer  Chromatography  and  UV-Vis  Spectrophotometer.  The  results  of  the  study obtained  that  the  results  of  the  qualitative  analysis  using  TLC  obtained  5  sampels  identified  based  on  Rf value  parameters  and  color  visualization.  Quantitative  analysis  of  UV-Vis  spectrophotometer  produced Rhodamin  B  level  values  for  each  sample  which  was  calculated  using  regression  formula  y  =  0,0726  x  + 0,0432 and R 2 = 0,9957. The sample code A1 was 3,443  0,080 μg/mL, B1 was 3,057  0,150 μg/mL, B2 was 5,881  0,170 μg/mL, C1 was 3,884  0,130 μg/mL, and C2 was 4,517  0,140 μg/mL. The conclusion in this  study  is  that  skewer  meatballs  circulating  in  several  elementary  schools  in  Manado  City  contains Rhodamin B.
Keywords : Rhodamin B, Skewer Meatballs Sauce, Thin Layer Chromatography, UV-Vis Spectrophotometer.

## ABSTRAK
Rhodamin  B  merupakan  pewarna  sintetik  berwarna  merah  yang  umum  digunakan  sebagai  pewarna  kertas, tekstil  atau  tinta.  Produk  pangan  yang  sering  di  tambahkan  Rhodamin  B  oleh  produsen  yang  tidak bertanggung  jawab  adalah  saos.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  keberadaan  dan  kadar Rhodamin  B  yang  terdapat  pada  saos  bakso  tusuk  yang  dijajakan  pada  beberapa  Sekolah  Dasar  di  Kota Manado  menggunakan  metode  Kromatografi  Lapis  Tipis  dan  Spektrofotometer  UV-Vis.  Hasil  penelitian yang diperoleh bahwa hasil analisis secara  kualitatif menggunakan KLT diperoleh  5 sampel teridentifikasi berdasarkan  parameter  nilai  Rf  dan  visualisasi  warna.  Analisis  kuantitatif  spektrofotometer  UV-Vis menghasilkan  nilai  kadar  Rhodamin  B  tiap  sampel  masing-masing  yang  dihitung  dengan  menggunakan rumus regresi y= 0,0726 x + 0,0432 dan nilai R 2 = 0,9957.  Sampel kode A1 sebesar 3,443  0,080 μg/mL , B1 sebesar 3,057  0,150 μg/mL, B2 sebesar 5,881  0,170 μg/mL, C1 sebesar 3,884  0,130 μg/mL, dan C2 sebesar  4,517  0,140  μg/mL.  Kesimpulan  dalam  penelitian  ini  yaitu  saos  bakso  tusuk  yang  beredar  di beberapa sekolah dasar di Kota Manado mengandung Rhodamin B.
Kata  Kunci :  Rhodamin  B,  Saos  Bakso  Tusuk,  Kromatografi  Lapis  Tipis,  Spektrofotometer  UV-Vis .

## PENDAHULUAN
Makanan merupakan salah satu kebutuhan utama dalam kehidupan sehari-hari untuk memenuhi kebutuhan tubuh.
Perkembangan  zaman  saat  ini  dan  pengaruh ilmu  pengetahuan  dalam  bidang  pangan, makanan banyak mengandung mikroorganisme  dan    ditambahkan  dengan bahan  kimia  yang  dapat  menyebabkan keracunan penyakit (Yulianti, 2007). Menurut BPOM.RI/NO.37/2013, bahan tambahan pangan ditambahkan pada makanan bertujuan untuk mempengaruhi sifat pangan, membentuk  pangan,  memberikan  warna  serta cita rasa dan stabilitas pangan.
Penambahan  bahan  pangan  ke  dalam makanan  perlu  untuk  meningkatkan  mutu suatu  produk  sehingga  mampu  bersaing  di pasaran.  Pewarna  dari  suatu  produk  makanan ataupun  minuman  merupakan  salah  satu  ciri yang  penting  untuk    menentukan  kualitas makanan (Deman, 1997).
Penggunaan  zat  warna  bertujuan  untuk membuat  penampilan  makanan  dan  minuman menjadi  lebih  menarik.  Makanan  yang diwarnai dengan zat warna alami yang berasal dari  tumbuhan,  hewan,  atau  mineral,  untuk memperoleh  zat  warna  alami  makanan harganya  relatif  mahal  dan  umumnya  tidak stabil  terhadap  pengaruh  cahaya  dan  panas. Produsen lebih menyukai warna sintetik yang relatif  lebih  murah  dan  stabil  pada  berbagai kondisi  lingkungan  dan  dapat  mengurangi kerugian  dari  produsen  (Yulianti,  2007). Penelitian sebelumnya telah dilakukan di kota Manado  yaitu  saos  bakso  tusuk  yang  beredar di sekitar Universitas Sam Ratulangi.
Hasilnya  makanan  yang  diteliti  mengandung Rhodamin B  (Longdong dkk, 2017).
Pemerintah  Indonesia  melalui  peraturan Menteri Kesehatan (Permenkes) No. 239/MenKes/Per/V/85 menetapkan Rhodamin
B  termasuk  salah  satu  zat  berbahaya  dan dilarang  digunakan  pada  produk  pangan. Rhodamin  B  merupakan  warna  sintetik  yang umum  digunakan  sebagai  pewarna  kertas, tekstil  atau  tinta  dan  penggunaannya  dalam produk-produk  pangan,  dapat  menyebabkan berbagai  gangguan  pada  kesehatan.  Zat tersebut  dapat  menyebabkan iritasi  pada kulit dan saluran pernafasan serta bersifat karsinogenik yang dapat menyebabkan kanker. Rhodamin B dalam konsentrasi tinggi dapat  menyebabkan  kerusakan  pada  hati (Yulianti, 2008).
Dari hasil survei lapangan pada tanggal 2 Oktober  2018  dijumpai  jajanan  bakso  tusuk yang  beredar  di  Sekolah  Dasar  kota  Manado. Umumnya  jajanan  bakso  tusuk  tidak  nikmat tanpa  adanya  saos.  Saos  adalah  bahan pelengkap  yang  terbuat  dari  tomat.  Saos merupakan  salah  satu  bahan  penyedap  dan penambah  rasa  pada  makanan.  Saos  yang beredar  mempunyai  warna  yang  mencolok yaitu berwarna merah yang menarik perhatian terutama kalangan anak-anak. Banyak penemuan kandungan Rhodamin B pada saos yang  berwarna  merah  digunakan  oleh produsen  makanan  dan  peredarannya  meluas pada  kebanyakan  produsen  yang  ditemukan (Longdong dkk, 2017).
Berdasarkan  uraian  diatas  maka  perlu dilakukan  penelitian  mengenai  analisis  zat warna  Rhodamin  B  pada  saos  bakso  tusuk yang  dijual  pada  beberapa  Sekolah  Dasar  di Kota Manado.

## METODE PENELITIAN

## Alat
Alat-alat gelas (pyrex), hot plate (NESCO LAB),  kertas whatman ukuran  15  x  15  cm, timbangan  analitik  (KERN  AC  22  –  4M),
chamber  ( pyrex ),  waterbath  (Julabo  TW12), centrifuge (CLEMENTS GS 150), plat  KLT  F-254,  spektrofotometer  Uv-Vis (Shimadzu 00780), Komputer pengolah data.

## Bahan
HCl  0,1  N,  Rhodamin  B,  etil  asetat, metanol  p.a,  natrium  sulfat  anhidrat,  amonia p.a, sampel saos bakso tusuk.

## Prosedur Kerja

## 1. Pengambilan Sampel
Sampel  saos  bakso  tusuk  diambil  dari empat  Sekolah  Dasar  yang  berbeda  yang berada  tepatnya  di  Kota  Manado.  Dimana setiap  Sekolah  Dasar  diambil  pada  tiga penjual  berbeda  pula.  Selanjutnya  setiap sampel  saos  bakso  tusuk  yang  telah  diambil dikemas.  Kemudian  setiap  sampel  dari masing-masing pedagang akan diteliti apakah mengandung  Rhodamin  B  dan  berapa  kadar yang terkandung didalamnya.

## 2. Analisis Kualitatif Rhodamin B
a. Pembuatan larutan uji Sampel saus tomat ditimbang sebanyak  5  gram,  ditambahkan  4  tetes HCl  0,1  N  dan  5-10  mL  metanol. Dipanaskan  di  atas  penangas  air  ±  5 menit,  disaring  dengan  kertas  saring yang  berisi  natrium  sulfat  anhidrat. Diambil  filtrat  dan  dimasukkan  ke dalam botol vial 5 mL.

## b. Pembuatan larutan baku
Ditimbang  sebanyak  ±  5  mg  pewarna Rhodamin  B  baku  (pembanding), dilarutkan  dalam  10  mL  metanol, dikocok  hingga  larut.  Uji  Identifikasi sampel  Disiapkan  plat  KLT,  dilakukan penotolan  larutan  A  dan  B  secara terpisah,  kemudian  dimasukkan  ke dalam  chamber  yang  telah  dijenuhkan
dengan  etil  asetat:  metanol:  amonia (4:1:1).  Setelah  proses  elusi  selesai, amati  noda  dibawah  UV  254  nm  dan 366  nm,  noda  merah  berfluoresensi kuning menunjukkan adanya Rhodamin B. 3. Analisis Kuantitatif  Rhodamin B
a. Pembuatan larutan Rhodamin B 100 μg/mL
Ditimbang 1 mg pewarna Rhodamin B dimasukkan  kedalam  labu  terukur  10  mL didalam labu terukur ditambahkan HCl 0,1 N secukupnya  dan  dikocok  hingga homogen.  Kemudian  larutan  dicukupkan dengan  HCl  0,1  N  hingga  garis  tanda kemudian dihomogenkan.
b. Penentuan panjang gelombang maksimum larutan Rhodamin B
Dipipet  0,2  mL  larutan  Rhodamin  B dengan  menggunakan  pipet  volum  dan dimasukkan  kedalam  labu  terukur  10  mL (konsentrasi  2  μg/mL),  lalu  ditambahkan HCl  0,1  N  sampai  garis  tanda  dan dihomogenkan. Diukur serapan maksimum pada  panjang  gelombang  400-800  nm dengan  menggunakan  blangko.  Blangko yang digunakan adalah HCl 0,1 N.
c. Penentuan operating time
Dipipet 0,2 mL larutan kerja Rhodamin  B  100  μg/mL  dan  dimasukkan kedalam  labu  terukur  10  mL    (konsentrasi 2  μg/mL),  lalu  ditambahkan  HCl  0,1  N sampai  kegaris  tanda  dan  dihomogenkan. Diukur pada panjang gelombang maksimum  yang  diperoleh  sampai  30 menit.

## d. Pembuatan Kurva Baku Rhodamin B
Dibuat  larutan  baku  Rhodamin  B dengan  konsentrasi  100  μg/mL,  Dari
larutan  tersebut  dibuat  larutan  baku  10 μg/mL,  Selanjutnya  dubuat  satu  seri larutan  baku  dengan  konsentrasi  masing- masing  2,  4,  6,  8,  dan  10  μg/mL,  sebagai pelarut  digunakan  HCl  0.1  N.  Dilakukan 3x  pengulangan  pada  masing-masing konsentrasi.

## 4. Uji Kuantitatif Sampel
Ditimbang 1 gr sampel lalu dimasukkan ke dalam  cawan  penguap  lalu  ditambahkan  7 tetes  HCl  0,1  N  dan  ditambahkan  15  mL metanol.  Dipanaskan diatas waterbath  selama 15 menit. Disentrifugasi selama 4 menit. Lalu ditambahkan  Na-sulfat  anhidrat  secukupnya kemudian  disaring  dan  diamati  dengan spektrofotometer UV-Vis. Pengukuran dilakukan sebanyak 3x pengulangan.

## 5. Analisis  Data  Rhodamin  B  Untuk

## Sampel
Analisis  data  kadar  Rhodamin  B  dalam sampel  dengan  menggunakan  kurva  kalibrasi dengan persamaan regresi : y = ax + b.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Pengambilan Sampel
Sampel  saos  bakso  tusuk  diambil  dari empat  Sekolah  Dasar  yang  berbeda  yang berada tepatnya di Kota Manado. Pengambilan  Sampel  berdasarkan  pembagian wilayah  utara,  selatan,  timur  dan  barat  Kota Manado. Diantaranya
Sekolah Dasar Cokroaminoto  01  (A),  Sekolah  Dasar  Negeri 11  (B),  Sekolah  Dasar  Negeri  54  (C)  dan Sekolah  Dasar  GMIM  Nafiri  (D),  dimana setiap  Sekolah  Dasar  diambil  pada  tiga pedagang yang berbeda.

## 2. Analisis Kualitatif KLT
Berdasarkan hasil pengukuran sampel saos bakso  tusuk  menggunakan  kromatografi  lapis tipis  diperoleh  data.  Data  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1. Data analisis kualitatif
Kode Sampel Paramet er Hasil KLT UV
254/3 66 Jara k
Nod a
(cm) Nilai Rf Keterang an A1 Kuning Fluore sensi Orang e 6,9 0,8625 Positif A2 Kuning - 6,2 0,775 Negatif A3 Kuning - 5,9 0,7375 Negatif B1 Merah Fluore sensi Orang e 7,1 0,8875 Positif B2 Merah Fluore sensi Orang e 7,5 0,9375 Positif B3 Kuning - 4,7 0,5875 Negatif C1 Kuning Fluore sensi Orang e 6,9 0,8625 Positif C2 Kuning Fluore sensi Orang e 7,6 0,95 Positif C3 Kuning - 1,8 0,225 Negatif D1 Merah - 3,9 0,4875 Negatif D2 Kuning - 5,7 0,7125 Negatif D3 Kuning - 2,7 0,3375 Negatif Rhodamin B Merah Terang Fluore sensi Orang e 7,1 0,8875 Positif
Hasil penelitian diperoleh bahwa ada satu sampel  yang  teridentifikasi  mengandung Rhodamin  B  dari  12  sampel  yang  diteliti, yaitu  pada  sampel  B1  hal  ini  dibuktikan dengan  perhitungan  nilai  Rf  ke  -12  sampel. Sampel B1 menyamai nilai Rf dari Rhodamin B  dengan  jarak  noda  pada  plat  sebesar  7,1. Menurut  Lipsy  (2010),  nilai  Rf  dapat dijadikan bukti dalam mengindentifikasi suatu senyawa,  yang  mana  jika  hasil  identifikasi nilai  Rf  memiliki  nilai  yang  sama  maka senyawa  tersebut  dapat  dikatakan  memiliki karakteristik yang sama atau mirip, sedangkan jika  nilai  Rf-nya  berbeda  maka  senyawa
tersebut dapat dikatakan bukan senyawa yang sama.
Berdasarkan identifikasi parameter warna sinar UV terdapat 5 sampel yang memeperlihatkan  warna  orange  pada  lampu UV dengan panjang  gelombang 254/366.  Hal ini  sejalan  dengan  pendapat  Ditjen  POM (2001)  menyatakan  bahwa  sampel  makanan yang  mengandung  Rhodamin  B  akan  mudah diamati, jika secara visual akan memperlihatkan  warna  merah  muda  dan  jika dilihat  dengan  sinar  UV  akan  berfluoresensi orange atau kuning.
Hasil yang diperoleh dari analisis kualitatif untuk  memastikan  keberadaan  Rhodamin  B dalam  sampel  dibuktikan  dengan  melakukan analisis kuantitatif menggunakan spektrofotometer  bertujuan  mengetahui  kadar Rhodamin  B  yang  terdapat  pada  sampel. Analisis  kuantitatif  dilakukan  pada  5  sampel yakni  A1,  B1,  B2,  C1  dan  C2  sampel  ini diambil  berdasarkan  nilai  Rf  dan  identifikasi parameter  warna    yang  ditunjukkan  hasil analisis kualitatif menggunakan Kromatografi Lapis  Tipis.  Hal  ini  dilakukan  untuk membuktikan  2  parameter  yang  berbeda dalam pengidentifikasian menggunakan KLT.
3. Analisis Kuantitatif Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Penentuan  panjang  gelombang  maksimum dilakukan dengan menggunakan
spektrofotometer UV-Vis pada daerah paanjang  gelombang  400-800  nm  dan konsentrasi  yang  dipakai  2  μg/mL  sehingga diperoleh  panjang  gelombang  495  nm  pada panjang gelombang ini menghasilkan absorbansi  0,211.  Hasil  penentuan  dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar  1.  Kurva  absorbansi  Rhodamin  B dalam  konsentrasi  2  μg/mL dengan pelarut HCl 0,1 N
Penentuan Operating Time Pada  penelitian  ini  penentuan operating time ditentukan  dengan  mengukur  absorbansi pada  panjang  gelombang  maksimum  yang diperoleh  dari  data  panjang  gelombang maksimum  yaitu  495  nm  dengan  konsentrasi yang  digunakan  2  μg/mL  dengan  rentang waktu  1-30  menit  dengan  hasil  absorbansi 0,21 Hal ini menunjukkan bahwa berdasarkan kestabilannya waktu optimal untuk pembacaan absorbansi adalah pada menit ke-1 sampai menit ke-30.

## Kurva  Kalibrasi  Larutan  Baku  Rhodamin B
Kurva  kalibrasi  larutan  baku  Rhodamin  B yang  dibuat  degan  konsentrasi  10  μg/mL. Selanjutnya  dibuat  satu  seri  larutan  baku dengan konsentrasi masing-masing  2, 4, 6, 8, 10 μg/mL  dan  diukur  pada  panjang gelombang  495  nm  menggunakan  HCl  0,1  N sebagai pelarut atau blanko.
Berdasarkan hasil pembuatan kurva dengan menggunakan metode Spektrofotometer yang menghubungkan konsentrasi  dengan  absorbansi,  diperoleh persamaan  linear  y  =  0,0726  x  +  0,0432 dengan  koefisien  korelasi  r  =  0,9957.  Hasil koefisien  korelasi  diatas  telah  memenuhi kriteria  penerimaan  yaitu  ≥  0,98  (Harmita, 2004).
4. Hasil Pengujian Sampel
Sampel yang teridentifikasi dengan analisis kualitatif  KLT  secara  nilai  Rf  maupun parameter warna dilakukan pengujian menggunakan spektrofotometer untuk mengetahui kadar Rhodamin B yang ada pada sampel.  Data  hasil  pengujian  sampel  dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Data absorbansi pada tiap sampel.
Sampel Absorbansi Absorbansi Rata-Rata Kadar Rhodamin B (μg/mL) ± SD
1 2 A1 0,245 0,344 0,294 2,876 ± 0,08 B1 0,32 0,212 0,266 4,212 ± 0,15 B2 0,463 0,479 0,471 7,269 ± 0,17
C1 0,365 0,287 0,326 4,914 ± 0,13
C2 0,468 0,277 0,372 3,661 ± 0,14
Dari  tabel  tersebut  nilai  kadar  yang didapat  dengan  menggunakan  rumus  regresi y=  0,0726  x  +  0,0432  dan  nilai  R 2 =  0,9957. Hasil  perhitungan  pada  sampel  A1  sebesar 3,443  0,080  μg/mL  ,  B1  sebesar  3,057  0,150  μg/mL,  B2  sebesar  5,881  0,170 μg/mL, C1 sebesar 3,884  0,130 μg/mL, dan C2 sebesar 4,517  0,140  μg/mL. Nilai kadar menunjukkan  keberadaan  dan  banyaknya Rhodamin  B  yang  ada  dalam  sampel  yang telah  dianalisa.  Sampel  yang  teridentifikasi berdasarkan  nilai  kadar  berada  pada  sampel yang  dijual  di  3  Sekolah  Dasar  menurut pembagian  wilayah  yaitu  sampel  A  Sekolah Dasar  Cokroaminoto  01    1  pedagang,  B Sekolah  Dasar  Negeri  11  2  pedagang  serta sampel  C  Sekolah  Dasar  Negeri  54  2 pedagang,  ini  menunjukkan  bahan  tambahan pangan  terutama  pewarna  yang  dilarang penyebarannya  masih  luas  di  beberapa pedagang.
Rhodamin  B  adalah  salah  satu pewarna sintetis yang digunakan pada industri tekstil  zat  pewarna  ini  ditetapkan  sebagai  zat
yang  dilarang  penggunaanya  pada  makanan. Rhodamin  B  bersifat  karsinogenik  sehingga dalam  penggunaan  jangka  panjang  akan menyebabkan kanker. Penelitian telah dilakukan  untuk  uji  toksistas  Rhodamin  B terhadap  mencit  dan  tikus  dengan  injeksi subkutan  dan  secara  oral.  Rhodamin  B  dapat menyebabkan  karsinogenik  pada  tikus  ketika diinjeksi  subkutan,  yaitu  timbul  sarcoma lokal.  Sedangkan  secara  IV  didapatkan  LD 50 89,5  mg/kg  yang  ditandai  dengan  gejala adanya  pembesaran  hati,  ginjal,  dan  limfa diikuti perubahan anatomi berupa pembesaran organnya (MerckIndex, 2006).

## KESIMPULAN
1. Dari  hasil  penellitian  analisis  kualitatif menggunakan  Kromatografi  Lapis  Tipis menunjukkan  adanya  5  sampel  yang teridentifikasi  mengandung  Rhodamin  B yaitu sampel A1, B1, B2, C1, dan C2 yang tersebar pada beberapa pedagang.
2. Hasil  perhitungan  kadar  pada  analisis kuantitatif  terdapat  5  sampel  dengan  nilai masing-masing    A1  sebesar  3,443  0,080 μg/mL , B1 sebesar 3,057  0,150 μg/mL, B2  sebesar  5,881  0,170  μg/mL,  C1 sebesar  3,884  0,130  μg/mL,  dan  C2 sebesar  4,517  0,140  μg/mL.  Nilai  kadar ini menunjukkan berapa banyak kandungan Rhodamin B dalam sampel.

## SARAN
Perlu  dilakukan  pengawasan  rutin  oleh instansi  terkait  terhadap  makanan  dan minuman yang beredar di masyarakat.

## DAFTAR PUSTAKA
Badan  POM  RI.  2013.  Peraturan  Kepala
Badan  POM  RI  No.  37  Tahun  201. Tentang Batas Maksimum Penggunaan Bahan Tambahan Pangan  Pewarna .  Badan  POM  RI,
Jakarta.
Deman,  J.M.  1997. Kimia  Makanan .  Penerbit ITB, Bandung.
Ditjen  POM  RI.  2001. Metode  Analisis
PPOMN . Ditjen POM, Jakarta.
Harmita, 2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian [ serial  on internet ].  Vol
1 (3). [Dikutip 23 maret 2018].
Lipsy,  P.  2010. Thin  Layer  Chromatography
Characterization of the Active Ingredients  In  Excerdrin  And  Anacin . Departement of Chemistry and
Chemical  Biology.  Steven  Intitute  of
Technology, USA.
Longdong,  G,  Jemmy,  A,  Novel,  K.  2017.
Analisis  zat  pewarna  Rhodamin  B pada saos bakso tusuk yang beredar di sekitar kampus Universitas Sam Ratulangi. Jurnal  ilmiah  farmasi. Vol
6  (4).  Universitas  Sam  Ratulangi,
Manado.
MerckIndex. 2006. Chemistry Constant
Companion . Now with a New
Addition.  Ed  14 th .  Merck  &  Co.  Inc. White house station.NJ, USA.
Yulianti,  N.  2007. Awas  Bahaya  dibalik
Lezatnya Makanan. CV. ANDY
Offset, Yogyakarta.
Yulianti,  N.  2008. Racun  di  Sekitar  Kita . Edisi  Pertama.  CV.    ANDY  Offset, Yogyakarta.