Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## POTENSI MAKROALGA PADINA AUSTRALIS (HAUCK 1887) DI BARAT SELATAN ACEH  SEBAGAI AGEN INHIBITOR TIROSINASE
Mohamad Gazali 1 , Eri Safutra 2 , Zulfadhli 2
1 Prodi Ilmu Kelautan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Teuku Umar, Meulaboh, Aceh Barat.
2 Prodi Akuakultur Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Teuku Umar, Meulaboh, Aceh Barat.
Korespondensi : mohamadgazali@utu.ac.id

## Abstract
Seaweeds  are  marine  macro  algae  that  can  be  found  attach  to  the  bottom shallow coastal waters. There are three major groups of seaweeds namely  brown algae (Phaeophyta), red (Rhodophyta) and green (Chlorophyta). Padina  australis is  one  of  brown  algae  which  mostly  found  in  the  West-South  of  Aceh  coastal Area.  Seaweed contains bioactive compound which can serve as a defense from ultraviolet  radiation  that  caused  hyperpigmentation  effect  The  purpose  of  this study  is  to  analyse  the  tyrosinase  inhibitory  activity  of P.  australis extract  from West-South  Aceh.  The  results  shown  that  the  methanol  extract  of P.  australis possess  phytochemical  properties  such  as  flavonoids,  tannin  and  saponin. tyrosinase  inhibitory activity of P. australis methanol  extract  is the best extract which  can  be  inhibit  monophenolase  with    IC 50 :  293.520  µg/ml  and  IC 50 = 13.571.067  µg/ml  in  diphenolase  pathway  with  kojic  acid  as  positive  control. Moreover,  chloroform  and n- hexane  extract  have  no  activity  of  tyrosinase inhibitor.  Therefore,  new  finding  of  tyrosinase  inhibitor  agent  from  marine macroalgae P. australis give the  fruitfull  information  for  cosmeceutical  industry. P.  australis parts  could  be  complementary  each  other  in  providing  the  raw material of cosmetic product.
Keywords : Aceh, Macroalgae, Padina australis , tyrosinase inhibitor

## I. Pendahuluan
Indonesia merupakan negara kepulauan terbesar di dunia memiliki 17.508 pulau  dengan  garis  pantai  sepanjang  ±  81.000  km.  Negara  ini  memiliki  potensi sumberdaya pesisir dan laut yang sangat besar (Bengen 2002). Salah satu potensi sumberdaya pesisir dan laut adalah rumput laut.
Rumput  laut  adalah  makroalga  laut  yang  ditemukan  menempel  pada substrat  perairan  dasar  laut.  Makroalga  terdapat  tiga  kelompok  makroalga meliputi  alga  cokelat  (Phaeophyta),  alga  merah  (Rhodophyta)  dan  alga  hijau (Chlorophyta).  Spesies Padina  australis merupakan  salah  satu  alga  cokelat  yang kebanyakan  ditemukan  di  Barat  Selatan  (BARSELA)  Aceh.  Rumput  laut mengandung  senyawa  bioaktif  yang  berperan  sebagai  suatu  pertahanan  dari radiasi  ultraviolet  yang  menyebabkan  terjadinya  hiperpigmentasi  kulit.  Tujuan kajian  ini  adalah  untuk  memperoleh  senyawa  fitokimia  dan  aktivitas  inhibitor tirosinase.
Penemuan inhibitor tirosinase berasal dari tumbuhan mangrove masih terus diselidiki  oleh  para  ilmuwan.    Hal  ini  dapat  memberikan  kontribusi  besar  dalam
Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
bisnis  kosmetik  untuk  menciptakan  produk  alami  ( natural  product ) guna melindungi  kulit  dari  efek  negatif  melanogenesis  (hiperpigmentasi)  yang disebabkan oleh paparan radiasi ultraviolet secara berlebihan.
Melanogenesis merupakan suatu proses produksi melanin oleh melanosit di dalam  kulit  dan  folikel-folikel  rambut  (Spritz  dan  Hearing  1994).  Proses  ini menghasilkan sintesis pigmen-pigmen melanin yang memainkan peranan protektif dalam melawan fotokarsinogenesis kulit (Biessert 2002) dan spesi oksigen reaktif ( reactive  oxygen  species )  (Kim  dan  Uyama  2005).  Namun  demikian,  manusia menyadari  warna  kulitnya  akibat  dari  pewarnaan  yang  tidak  diinginkan  atau hiperpigmentasi (Slominski et al . 2004). Hiperpigmentasi ini tidak hanya menjadi masalah  estetika  namun  juga  masalah  dermatologi  (Lin et  al .  2008).  Stimulus psikologis  melanogenesis  adalah  radiasi  ultraviolet  cahaya  matahari  yang bertindak  secara  langsung  di  dalam  melanosit  dan  secara  tidak  langsung  melalui pelepasan  faktor-faktor  yang  berasal  dari  keratinosit  seperti  MSH  (α- melanocyte stimulating hormone ) (Friedmann dan Gilcrest 1987 ; Libow et al . 1988 ; Hunt et al .  1994).  Salah  satu  agen  penyebab  terbesar  hiperpigmentasi  adalah  cahaya ultraviolet (Gilchrest et  al . 1996). Sebenarnya, radiasi ultraviolet (100  -  290 nm) dapat diserap oleh lapisan ozon dan tidak berpengaruh pada kulit. Namun, radiasi ultraviolet (290 - 320 nm) mempengaruhi lapisan superfisial kulit (epidermis) dan menyebabkan  kulit  terbakar  (Pandel et  al .  2013).  Enzim  kunci  yang  berperan dalam  biosintesis  melanin  adalah  tirosinase  yang  diketahui  sensitif  terhadap radiasi cahaya ultraviolet dengan keberadaan oksigen (Ha et al . 2007). Tirosinase merupakan  enzim  yang  mengandung  tembaga  mengatalisasi  dua  reaksi  yang berbeda  dengan  menggunakan  oksigen  molekuler,  orto  hidroksilasi  tirosinase (mono-fenol 3,4-dihidroksifenilalanin atau  DOPA  (o-difenol)  yang  ditetapkan sebagai  aktivitas  monofenolase  dan  oksidasi  DOPA  menjadi  dopakuinon  (o- kuinon)  ditetapkan  sebagai  aktivitas  difenolase  (Sanchez-Ferrer et  al .  1995; Solano et  al .  2006),  selanjutnya  o-kuinon  berinteraksi  dengan  molekul-molekul lain pada polimerasi non-enzimatik membentuk pigmen-pigmen cokelat dan hitam (Martinez  dan  Whitaker  1995).  Pada  mamalia  termasuk  manusia,  tirosinase bertanggung jawab di dalam proses melanogenesis (hiperpigmentasi) (Chang 2009). Inhibisi aktivitas tirosinase  baik  monofenolase  maupun difenolase akan mengurangi sintesis melanin (Dubey et al . 2006).
Dewasa  ini,  inhibitor  tirosinase  menarik  banyak  perhatian  karena  dapat mencegah  hiperpigmentasi.  Banyak  inhibitor  tirosinase  digunakan  sebagai  agen kosmetik  (Alena et  al .  1990)  untuk  memutihkan  kulit  seperti  asam  askorbat  dan derivatifnya (Kojima et al . 1995), asam azelaic (Schallreuter 1990), asam retinoid (Gilchrest 1998), hidrokuinon (Lin et al . 2008), benzaldehida- O- alkil-oksima (Ley dan Bertram 2001), kortikosteroid (Takiwaki et al . 1994), arbutin (Chakraborty et al . 1998) dan asam kojat (Kahn et al . 1997;  Lim 1999 ;                         Shiino et al .  2003).  Namun  demikian,  senyawa  tersebut  mempunyai  efek  samping berbahaya  terkait  karsinogenesis  dan  mutagenesitas  (Lin et  al .  2008).  Misalnya,
Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
asam  kojat  yang  memiliki  efek  inhibisi  dan  kestabilan  yang  paling  besar  dalam mencegah  hiperpigmentasi.  Menurut  Fujimoto et  al . (1998)  bahwa  asam  kojat bersifat  karsinogenik.  Pemakaian  asam  kojat  pada  konsentrasi  yang  tinggi menyebabkan  iritasi  kulit  dan  dermatitis  kontak  alergi  (Nakagawa et  al .  1995  ; Serra-Baldrich et al . 1998). Oleh karena itu, penyelidikan dan penemuan inhibitor tirosinase  yang  aman,  sumber  bahan  baku  yang  berlimpah  dan  aktivitas  inhibisi yang  tinggi sangat dituntut oleh industri kosmetik.
Sejauh  ini,  sejumlah  senyawa  yang  berasal  dari  sumber  alami  maupun sintetik  sudah  diuji  dapat  menghambat  aktivitas  tirosinase  yang  mengarah  pada overproduksi melanin pada lapisan epidermis kulit (Cabanes et al . 2001). Namun demikian,  hanya  sedikit  dari  senyawa  tersebut  diterapkan  di  dalam  bahan kosmetik  sebagai  aditif  karena  aktivitas  inhibisi  tirosinase  yang  masih  rendah, keterbatasan  sumber  bahan  baku  dan  pertimbangan  keamanan.  Fokus  penelitian ini  adalah  penyelidikan  senyawa  bioaktif  potensial  sebagai  inhibitor  tirosinase yang berasal dari sumber-sumber alami seperti tumbuhan mangrove
Selanjutnya,  eksplorasi  senyawa  bioaktif  yang  bisa  digunakan  perlakuan gangguan  dermatologis  yang  berhubungan  dengan  hiperpigmentasi  kuliy,  stres oksidatif pada makroalga laut P. australis sedang diinvestigasi.

## II. Metode Penelitian

## Waktu dan Lokasi
Penelitian  ini  dilaksanakan  mulai  bulan  Juli    sampai  September  2017. Lokasi  pengambilan  sampel Padina  australis adalah  pesisir  pantai  Lhok  Bubon Kabupaten  Aceh  Barat.  Selanjutnya  dilakukan  penelitian  ekperimental  yang dilaksanakan  di  Pusat  Studi  Biofarmaka  Lembaga  Penelitian  dan  Pengabdian Masyarakat  Institut  Pertanian  Bogor (Gambar 1).
Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## Gambar 1. Lokasi Pengambilan Sampel

## Bahan dan Alat
Sampel  yang  digunakan  adalah Padina  australis .  Bahan  kimia  yang digunakan  yaitu  metanol  p.a, etanol p.a, kloroform p.a, NH 3 , H 2 SO 4 2M, H 2 SO 4
pekat, pelarut dragendorf, mayer, wagner, serbuk Mg. HCl, amil alkohol, FeCl 3 10 %, NaOH 10 %, CH 3 COOH anhidrat, dietil eter, folin ciolcetau 50 %, asam galat, Na 2 CO 3 5  %, n- heksana,  DMSO  ( dimetil sulfoksida ),  akuades,  akuabides,  buffer fosfat  pH  6.5,  L-tirosin,  L-DOPA,  enzim  tirosinase  (Sigma  333  unit/ml  dalam buffer fosfat).
Instrumen  yang  digunakan  adalah  spektrofotometer  UV-Vis, multiplate well  reader (ELISA), multiwell  plates , eppendorf  microcentrifuge  tube ,  oven, tanur  listrik,  vorteks,  sonikator,  inkubator,  eksikator,  corong  buchner , hot  plate, nyala  bunsen,  neraca  analitik  (Sartorius),  rotavapor  putar,  tabung  reaksi,  gelas erlenmeyer,  gelas  piala,  pipet  volumetrik,  pipet  mikro,  pipet  dot,  penjepit  kayu, cawan  petri,  cawan  porselin,  kertas  saring,  corong,  sudip,  labu  takar  dan    rak tabung reaksi.

## Prosedur
Prosedur  penelitian  dimulai  dari  pengambilan  sampel Padina  australis, sampel  kemudian  diidentifikasi  di  Herbarium  Bogoriensis  bidang  Botani  Pusat Penelitian  Biologi  Lembaga  Ilmu  Pengetahuan  Indonesia  (LIPI)  Cibinong    Jawa Barat  dan  Bagian  buah  tersebut  dipisahkan  menjadi  tiga  bagian  yaitu  kulit  buah, kulit  biji  dan  biji  buah.  Setelah  itu,  Padina  australisdiambil  dan  dikeringkan  di oven  dan  digiling  untuk  dijadikan  simplisia  (serbuk)  dan  dilakukan  penentuan kadar  air  dan  kadar  abu.  Sebelumnya  semua  simplisia  diuji  fitokimia,  kemudian simplisia  (serbuk)  diekstraksi  secara  bertingkat  dengan  cara  maserasi  dimulai dengan  pelarut  non  polar  ( n- heksana)  kemudian  diekstraksi  kembali  dengan pelarut  semi-polar  (kloroform).  Selanjutnya,  diekstraksi  kembali    dengan  pelarut polar  (metanol).  Setelah  itu,  dilakukan  uji  aktivitas  inhibitor  tirosinase  dengan menggunakan multi-well plate reader (ELISA). Penentuan kandungan total  fenol
Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
dilakukan  dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  dan  kemudian  dibuat korelasi linear antara kandungan total fenol dan prosentase inhibisi tirosinase.

## Preparasi dan Ekstraksi Sampel
Preparasi  sampel  ekstrak Padina  australis dilakukan  dengan  cara mengeringkan  di  oven  dan  selanjutnya  digiling  menjadi  simplisia  (serbuk). Sampel  kering  berupa  serbuk  kemudian  ditentukan  kadar  air  dan  kadar  abu,  lalu dilakukan  ekstraksi  secara  bertingkat  dengan  metode  maserasi  dimulai  dengan pelarut  non  polar  ( n- heksana),  semi-polar  (kloroform)  dan  polar  (metanol). Ekstrak  tersebut  diperoleh  dengan  menyaring  simplisia  sampel  dengan menggunakan  kertas  saring  biasa  dan  selanjutnya  dipekatkan  dengan  penguap putar  ( rotary  evaporator )  pada  suhu  30 0 C  kemudian  rendemen  tiap  ekstrak dihitung (Batubara et  al. 2010).

## Penentuan Kadar Air
Metode penentuan kadar air mengacu pada metode AOAC (1995). Prinsip penentuan  kadar  air  ialah  untuk  mengetahui  kandungan  kadar  air  dalam  suatu bahan.  Cawan  porselin  dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  105 0 C  selama  30 menit, lalu cawan didinginkan di dalam eksikator selama 30 menit dan ditimbang bobot  kosongnya.  Sampel  ditimbang  sekitar  3  g  dan  dimasukkan  ke  cawan porselin. Sampel beserta cawannya dipanaskan pada suhu 105 0 C selama 3 jam di dalam oven. Setelah didinginkan dalam eksikator selama 30 menit, cawan beserta isinya ditimbang. Penentuan kadar air dilakukan sebanyak 3 kali ulangan (triplo). Kadar Air  (%) : 𝐴−𝐵 𝐵 𝑥 100 %
Dengan  : A  adalah bobot sampel basah (g) B  adalah bobot sampel kering (g)

## Penentuan Kadar Abu
Metode penentuan kadar abu mengacu pada metode AOAC (1995). Cawan porselen dikeringkan pada temperatur 600 0 C selama 30 menit dan didinginkan di dalam  eksikator  kemudian  ditimbang.  Sebanyak  2  g  sampel  ditimbang  dan dimasukkan ke dalam cawan porselen. Cawan dan isinya dipanaskan dengan nyala Bunsen sampai tidak berasap lagi. Kemudian cawan dimasukkan ke  dalam tanur listrik dengan temperatur 600 0 C sampai contoh menjadi abu sama sekali kira-kira 30  menit).  Setelah  didinginkan  dalam  eksikator  kemudian  cawan  ditimbang. Pekerjaan dilakukan secara triplo.
Kadar Abu (%) : 𝑍−𝑋 𝑌 𝑥 100 %
Dengan : X adalah bobot kosong cawan porselen (g)
Y adalah bobot sampel (g)
Z adalah bobot cawan dan bahan setelah diabukan (g)
Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## Uji Fitokimia
Uji  fitokimia  merupakan  uji  pendahuluan  untuk  mengetahui  kandungan senyawa  spesifik  seperti  alkaloid,  triterpenoid,  steroid,  saponin,  flavonoid, hidrokuinon dan tanin secara kualitatif  (Harborne  1987).

## Uji Alkaloid
Ekstrak Padina  australis dengan  bobot  tertentu  dilarutkan  dengan  ml kloroform dan beberapa tetes NH 4 OH kemudian  disaring ke dalam tabung reaksi bertutup. Ekstrak kloroform dalam tabung reaksi  dikocok dengan 10 tetes H 2 SO 4 2M dan lapisan asamnya dipisahkan ke dalam tabung reaksi lain. Lapisan asam ini diteteskan  pada  lempeng  tetes  dan  ditambahkan  pereaksi  Mayer,  Wagner  dan Dragendorf  yang  akan  menimbulkan  endapan  dengan  warna  berturut-turut  putih, coklat dan merah jingga.

## Uji Saponin dan Flavonoid
Ekstrak Padina  australis dengan  bobot  tertentu  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  kemudian  ditambahkan  6  ml  akuades  dan  dipanaskan  selama  5 menit, setelah  itu disaring dan  filtratnya digunakan untuk pengujian. Uji saponin dilakukan dengan pengocokan 2 ml filtrat dalam tabung reaksi tertutup selama  10 detik  kemudian  dibiarkan  selama  10  menit,  adanya  saponin  ditunjukkan  dengan terbentuknya  buih  stabil.  Sebanyak  10  ml  filtrat  yang  lain  ditambahkan  0,5  g serbuk magnesium, 2 ml alkohol klorhidrat (campuran HCl 37% dan EtOH 95 % dengan volume yang sama) dan 3 tetes amil alkohol kemudian dikocok kuat-kuat, terbentuknya  warna  merah,  kuning  dan  jingga  pada  lapisan  amil  akohol menunjukkan adanya flavonoid.

## Uji  Terpenoid  dan  Steroid
Ekstrak Padina  australis dilarutkan  dengan  25  ml  EtOH  panas  (50 0 C)  kemudian disaring  dalam  tabung  reaksi  dan  diuapkan  sampai  kering.  Residu  ditambahkan dietil  eter  dan  ekstrak  eter  dipindahkan  ke  dalam  lempeng,  lalu  ditambahkan  3 tetes  anhidrida  asam  asetat  dan  1  tetes  H 2 SO 4 pekat  (uji  Lieberman-Burchard). Warna  merah  atau  ungu  menunjukkan  adanya  triterpenoid  dan  warna  hijau  atau biru menunjukkan adanya steroid.

## Uji Tanin
Ekstrak Padina australisditambah 100 ml akuades dipanaskan selama  5 menit dan disaring.  Lalu  ke  dalam  sebagian  filtrat  ditambahkan  larutan  FeCl 3 ,  bila  terjadi warna hitam kehijauan menunjukkan adanya tanin.

## Uji  Aktivitas  Inhibisi Tirosinase
Uji  ini  ditunjukkan  dengan  menggunakan  metode-metode  seperti  yang dijelaskan dahulu (Curto et al . 1999 ; Nerya et al . 2003). Ekstrak Padina australis dilarutkan di dalam DMSO ( dimetil sulfoksida ) pada konsentrasi akhir 20 μg ml -1 . Larutan  ekstrak  tersebut  kemudian  didilusi  pada  600  μg  ml -1 di  dalam  50  mM buffer  fosfat  (pH  6.5).  Ekstrak tersebut  diuji  pada  tingkat  konsentrasi  dari  31.25
Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
menjadi  2000  μg  ml -1 .  Asam  kojat  sebagai  kontrol  positif  yang  juga  diuji  pada konsentrasi 7.8125 menjadi 500 μg  ml -1 . Di dalam pelat tetes 96 sumur. Sebanyak 70  μl  dari  masing-masing  ekstrak  pengenceran  ini  ditambahkan  dengan  30  μl enzim  tirosinase  (Sigma  333  unit/ml  dalam  buffer  fosfat  pH  6.5),  setelah  itu dilakukan inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit. Kemudian ditambahkan 110 μl substrat (2 mM L-tirosin atau 12 mM L-DOPA) dalam sumur multi-well plate yang  sudah  ditentukan,  larutan  tersebut  diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu kamar.  Larutan  tersebut  diukur  dengan  menggunakan multi-well  plate  reader (ELISA) dengan panjang gelombang 492 nm, hal ini bertujuan untuk menentukan persen inhibisi dan nilai konsentrasi hambatan 50%  (IC 50 ).

## Penentuan Kandungan Total Fenol
Pengukuran  kandungan  fenolik  total  dilakukan  berdasarkan  metode Andarwulan et  al .  (1999)  yang  sedikit  dimodifikasi.  Pembuatan  standar  asam galat  dilakukan  dengan  melarutkan  5  mg  asam  galat  ke  dalam  akuades menggunakan  labu  takar  25  ml.  Kemudian  dari  larutan  tersebut,  dibuat  standar dengan  konsentrasi  0.5,  1,  5,  10,  15,  dan  25  ppm.  Pengujian  kandungan  fenolik total  dilakukan  dengan  melarutkan  20  mg  ekstrak  air  atau  ekstrak  etanol  dengan aquades  dalam  labu  takar  25  ml  dan  dihomogenisasi  dengan shaker .  Kemudian diambil  0,5  mL  dari  larutan  tersebut  dan  ditambahkan  dengan  pereaksi  Follin Ciocalteu 50% sebanyak 1 ml, dan didiamkan 5 menit. Setelah itu ditambahkan  1 ml  Na 2 CO 3 5%  dan  dihomogenisasi  dalam  gelap  selama  1  jam.  Lalu  nilai absorbansnya  diukur  pada  panjang  gelombang  725  nm  menggunakan  alat spektrofotometer UV-Vis.

## Analisis Data Perhitungan Persentase Aktivitas Inhibisi Tirosinase
Perhitungan  persentase  inhibisi  dihitung  dengan  cara  membandingkan absorbansi  sampel  tanpa  penambahan  ekstrak  dan  sampel  dengan  penambahan ekstrak. Nilai IC 50 diperoleh dari persamaan kurva regresi linear antara % inhibisi (sebagai  sumbu y )  dan  konsentrasi  ekstrak  (sebagai  sumbu x ).  Pengukuran persentase aktivitas inhibisi dapat dirumuskan (Chang et al . 2005) :
% inhibisi  =  [(A - B)/A] x 100 % Keterangan : A    : absorbansi blanko (tanpa sampel) B   : absorbansi sampel (penambahan sampel).

## III. Hasil dan Pembahasan

## Analisis Fitokimia
Analisis  fitokimia  merupakan salah satu cara untuk  mengetahui kandungan metabolit  sekunder  pada  suatu  sampel  (Harborne  1987).  Analisis  ini  sangat berguna  untuk  menentukan  golongan  utama  senyawa  aktif  dari  ekstrak Padina
Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
australis yang  memiliki  potensi  sebagai  inhibitor  enzim  tirosinase.  Uji  yang dilakukan  meliputi  uji  alkaloid,  saponin,  flavonoid,  triterpenoid,  steroid,  dan tanin.
Berdasarkan  hasil  penelitian,  skrining  fitokima  ekstrak P.  Australis memiliki  hasil  positif  pada  senyawa  flavonoid,  tanin  dan  saponin  yang kebanyakan pada pelarut polar. Istilah fitokimia mengacu pada variasi secara luas senyawa  yang  diperoleh  dari  tumbuhan  dan  terutama  digunakan  untuk menjelaskan  kelas-kelas  senyawa  yang  diketahui  mempunyai  pengaruh  pada kesehatan manusia. Senyawa  metabolit sekunder merupakan kelas-kelas senyawa yang  diketahui  menunjukkan  aktivitas  melawan  beberapa  penyakit  ringan  dan oleh karena itu dijelaskan penggunaan obat-obat tradisional (herbal) yang berasal dari tumbuhan untuk perlakuan beberapa penyakit.
Menurut  Harborne  (1984)  bahwa  analisis  fitokimia  merupakan  suatu  cara untuk  mengetahui  metabolit  sekunder  pada  sampel.  Analisis  ini  sangat  berguna untuk  menentukan  kategori  utama  senyawa  aktif  dari P.  australis yang  memiliki aktivitas  inhibitor  tirosinase.  Senyawa  flavonoid  ekstrak  metanol P.  australis sebagai  inhibitor  tirosinase.  Kandungan  flavonoid    dan    tanin  diasumsikan memberikan aktivitas inhibisi tirosinase yang lebih besar.
Tabel 1. Sifat Fitokimia Ekstrak P. australis Solvents Flavonoid Tanin Saponin n- heksan etil asetat Mehanol - - +
- - +
- -
+
Keterangan : + = ada      ; - = tidak ada

## Aktivitas Inhibisi Tirosinase
Aktivitas  inhibisi  tirosinase  dilakukan  untuk  mengetahui  keberadaan  dan ketidakberadaan aktivitas inhibisi tirosinase pada  ekstrak metanol, kloroform dan n-heksan. Aktivitas inhibisi tirosinase menunjukkan bahwa dengan nilai IC 50 yaitu konsentrasi  yang  bisa  menghambat  50%  enzim  tirosinase.  Berdasarkan  hasil bahwa ekstrak P. australis memiliki potensi sebagai  inhibitor tirosinase (Gambar 2).
Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Gambar  2.  Perbandingan  Persentase  inhibisi  (%)    dan  (ppm)  pada  jalur monofenolase
Pada  gambar  2  di  atas  menunjukkan  jika  konsentrasi  (ppm)  tinggi  maka persentase  inhibisi  juga  meningkat dengan  nilai koefisien determinasi  yaitu  y = 9,5123ln(x)  -  69,757  and  R-squared  (R 2 =  0,845).  Ini  menunjukkan  bahwa variabel    persentase  inhibisi  dan  konsentrasi  (ppm)  secara  signifikan mempengaruhi sebanyak 84% pada jalur monofenolase.
Gambar 3. Perbandingan persentase  inhibisi (%) dan konsentrasi (ppm) pada  jalur difenolase
y = 9.5123ln(x) - 69.757 R² = 0.8458 -15.000 -10.000 -5.000 0.000 5.000 10.000 15.000 20.000 25.000 30.000 -2000 0 2000 4000
6000 8000 10000 12000 14000 % In h ib it io n Concentration (ppm) y = 4.0033ln(x) - 15.748 R² = 0.7099 0.000 5.000 10.000 15.000 20.000 25.000 30.000 -2000 0 2000 4000
6000
8000 10000 12000
14000
%I nhi bi ti o n
Concentration (ppm)
Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Perbandingan  antara  persentase  inhibisi  dan  konsentrasi  (ppm)  pada  jalur difenolase menunjukkan bahwa nilai koefisien determinasi yaitu y = 4,0033ln(x) - 15,748  and  R-squared  (R 2 =  0,709).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  variabel persentase inhibisi dan konsentrasi (ppm) secara signifikan mempengaruhi sebesar 70% pada jalur monofenolase. Jadi, kita menyimpulkan bahwa persentase inhibisi dan konsentrasi (ppM) sangat berpengaruh positif dengan tingkat signifikan 95%.
Table 2.  Tyrosinase IC 50 Value of three extracts from P. australis sp
Ekstrak IC 50 (µg/ml) Monophenolase  IC 50 (µg/ml) Diphenolase Metanol 293.520 13.571.067 Kloroform - - n-heksan - - Asam Kojat 48,409 112,947 Keterangan : IC 50 =  konsentrasi ekstrak yang bisa menghambat aktivitas tirosinase sebesar  50%; - : tidak mencapai  50%  inhibisi pada konsentrasi maksimum  5000 µg/ml.
Berdasarkan  hasil  analisis  bahwa  dengan  pelarut  yang  berbeda  meliputi ekstrak  n-heksan,  kloroform,  dan  metanol.  Kami  melakukan  skrining  aktivitas inhibitor  tirosinase  (jalur  monofenolase  dan  difenolase).  Hasil  analisis menunjukkan  bahwa  aktivitas  inhibitor  tirosinase  ekstrak  metanol P.  australis merupakan  hasil  terbaik  yang  mampu  melakukan  inhibisi  aktivitas  enzim tirosinase pada jalur monofenolase dengan nilai IC 50 sebesar : 293.520 µg/ml dan IC 50 = 13.571.067 µg/ml pada jalur difenolase dengan asam kojat sebagai control positif.
Sementara  itu,    pada  ekstrak  kloroform  dan  ekstrak  n-heksan  tidak memiliki aktivitas inhibitor tirosinase. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa non- polar dan semi-polar pada P. australis tidak memiliki kemampuan pada aktivitas inhibisi tirosinase. Oleh karena itu, penemuan baru agen inhibitor tirosinase yang berasal  dari P.  australis memberikan  informasi  yang  bermanfaat  untuk  industri kosmetik.  Perhatian  utama  pada  eksplorasi P.  australis yang  diselidiki  oleh  para ilmu untuk mengatasi masalah yang berkaitan dengan hiperpigmentasi kulit.  Jadi, spesies P.  australis merupakan  salah  satu  makroalga  laut  yang  prospektif  untuk kepentingan  kosmetik.  Hal  ini  masih  dimanfaatkan  secara  tradisional  oleh masyarakat pesisir untuk perawatan kulit.
Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572

## IV. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian bahwa P. australis ternyata memiliki potensi sebagai  agen  inhibitor  tirosinase.  Akan  tetapi  alga  cokelat P.  australis belum dimanfaatkan oleh masyarakat pesisir sebagai bahan pencerah kulit.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  berterima  kasih  kepada  mahasiswa  FPIK  yang  membantu  dalam mengumpulkan  sampel  makroalga  laut.  Penulis  juga  mengucapkan  terima  kasih kepada  laboran  pusat  studi  biofarmaka  LPPM-IPB  yang  sudah  menganalisis aktivitas inhibitor tirosinase. Penelitian ini didanai oleh Kemristek-DIKTI melalui hibah kompetitif nasional.

## Daftar Pustaka
Andarwulan S, Fardiaz, Apriyanto P, Haryadi, Shetty NK. 1999. Mobilization of primary metabolites and phenolics during natural fermentation in seeds of Pangiumedule Reinw. Process Biochem . 35: 197-204.
AOAC.  1995.  Official  methods  of  analysis  of  the  association  of  official’s analitical chemist . Washington DC: Agricultural Chemists.
Aleem,  A.A.  1993.  The  marine  Algae  of  Alexandria.  Egytian  Books  House, Egypt.
Aiyegoro OA, Okoh AI. 2010. Preliminary phytochemical screening and  in  vitro antioxidant  activities  o  the  aqueous  extract  of  Helichrysum  longifolium DC. BMC Complement Altern Med 10: 21.
Batubara  I,  Darusman  LK,  Mitsunaga  T,  Rahmiwati  M,  Djauhari  E.  2010. Potency  of  Indonesian  Medicinal  Plants  a  Tyrosinase  Inhibitor  and Antioxidant Agent. J Biol Scie 10: 138-144.
Bengen  DG. 2002. Sinopsis Ekosistem dan Sumberdaya  Alam Pesisir dan Laut. Pusat  Kajian Sumberdaya Pesisir dan Lautan IPB. Bogor.
Bold,  H.C.    1978.  “Introduction  to  the  algae”  Structure  and  Reproduction. Prentice Hall, Inc., New-Jersey 07632.
Bouck,  G.B.  1965.  Fine  structure  and  organelle  association  in  brown  algae.  J. Cell. Biol. 26, 513 – 537.
Coppejans  E.,  Leilaert  F.,  Dargents  O,  Gunasekara  R,  Clerck  O.  2009.  Srilanka Seaweeds  Methodologies  and  Field    Guide  to  the  dominant  species. University of Ruhuna, Dept. Botany, Matora, Srilanka, pp. 1-265.
Curto  EV,  Kwong  C,  Hermersdosfer  H,  Glatt  H,  Santis  C.  1999.  Inhibitor  of mammalian melanocyte tyrosinase:  in vitro comparisons of alkyl esters of gentisic acid with other putative inhibitor. Biochem Pharm 57: 663-672.
Harborne  JB.  1984.  Phytochemical  Method:  A  guide  to  modern  techhniques  of plant analysis. Second  edition. Chapman  and Hall. New York.
Kim,  Y.-J.;  Uyama,  H.  2005.  Tyrosinase  inhibitors  from  natural  and  synthetic sources:  Structure,  inhibition  mechanism  and  perspective  for  the  future. Cell. Mol. Life Sci. , 62 , 1707–1723.
Volume 5, Nomor 1, 2018 http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564, E-ISSN: 2355-5572
Nasr  A.H.  Aleem  A.A.  1949.  Ecological  studies  of  some  marine  algae  from Alexandria. Hydrobiologia 1, 251 – 281.
Ma  W,  Wlaschek  M,  Tantcheva-Poor  I,  Schneider  LA,  Naderi  L.  2001. Chronological  ageing  and  photoageing  of  the  fibroblasts  and  the  dermal connective tissue. Clin Exp Dermatol 26: 592-599.
Nerya  O,  Vaya  J,  Musa  R,  Izrael  S,  Ben-Arie  R.  2003.  Glabrene  and isoquiritigenin  as  tyrosinase  inhibitor  from  liquorice  roots.  J  Agr  Food Chem 15: 1201-1207.
Nerya  O,  Musa  R,  Khatib  S,  Tamir  S,  Vaya  J.  2004.  Chalcones  as  potent tyrosinase  inhibitors:  the  effect  of  hydroxyl  position  sand  numbers.
Phytochemistry 65: 1389-1395.
Perluigi  M,  De  Marco  F,  Foppoli  C,  Coccia  R,  Blarzino  C.  2003.  Tyrosinase protects  human  melanocytes  from  ROS-generating  compounds.  Biochem Biophys Res Comm 305: 250-256.
Prota  G,  Thomson  RH.  1976.  Melanin  pigmentation  in  mammals.  Endeavor:  35: 32-38.
Shen LR, Guo D, Yu YM, Yin BW, Zhao L, et al. 2009. Chemical constituents of plants from the genus Xylocarpus . Chem Biodivers 6: 1293-1308.
Smith,  G.  1944.  Marine  Algae  of  Monterey  Peninsula.  Reprinted  from  Madrono VII (7), pp. 226 – 231.
Sturm  RA,  Teasdale  RD,  Box  NF.  2001.  Human  Pigmentation  genes: identification, structure and consequences of polymorphic variation. Gene. 227: 49-62.
Vamos-Vigyazo,  L.  1981.  Polyphenol  oxidase  and  peroxidase  in  fruits  and vegetables. Crit. Rev. Food Sci. Nutr. , 15 , 49–127.
Yamakoshi  J,  Otsuka  F,  Sano  A,  Tokutake  S,  Saito  M,  et  al.  2003.  Lightening effect  on  ultraviolet-induced  pigmentation  of  guinea  pig  skin  by  oral administration  of  a  proanthocyanidin-rich  extract  from  grape  seeds. Pigment Cell Res 16: 629-638.
Wu,  B.;  Zhang,  X.;  Wu,  X.  2012.  New  lignan  glucosides  with  tyrosinase inhibitory activity from exocarp of Castanea henryi . Carbohydr. Res. , 355 ,
45–49.