Physicochemical Characterization of Simplicia Sambiloto ( Andrographis paniculata ) Powder with Types and Concentrations of Reagents in the Formation of Zn-Chlorophyll Complexes Karakterisasi Fisikokimia Bubuk Simplisia Sambiloto (Andrographis Paniculata) dengan Jenis dan Konsentrasi Reagen Dalam Pembentukan Kompleks Zn-Klorofil
M Rifqi Aziz 1 , Chatarina Lilis Suryani 2 , Ichlasia Ainul Fitri 3* 1,2,3 Prodi Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Agroindustri, Universitas Mercu Buana Yogyakarta *Corresponding author: ichlasia@mercubuana-yogya.ac.id
Article info Abstract Keywords: Sambiloto simplicia powder, heating, ZnCl2, Zn acetate, oven During the process of making sambiloto simplicial which involves heat, it can cause degradation of  chlorophyll.  Increasing  the  stability  of  chlorophyll  can  be  done  by  forming  Zn-chlorophyll complexes with metals which are be able to form complexes where more stable than Mg such as by using Zn. The aim of this research is to determine how the physical and chemical characteristics of the bitter simplicia powder produced are influenced by the type of reagent and the concentration of the reagent when heated in an oven. Simplicia bitter powder is made through a sorting, grinding and  sieving  process.  Next,  the  zinc  chloride  and  zinc  acetate  reagents  were  mixed  with concentrations of 0, 200, 300, 400, and 500 ppm, and then dried. The results showed a real effect (p value <0.05) of the interaction between the types of ZnCl2 and Zn acetate reagents and the reagent concentration on color intensity, color stability, water content, ash content and chlorophyll content. The higher the concentration of ZnCl2 and Zn acetate, the higher the water content, ash content, chlorophyll content, L*, and - a*, while b* and ∆E decrease. At a concentration of 500 ppm ZnCl2 showed  an  increase  in  water,  ash,  chlorophyll,  ∆E,  L*,  and  a*  content  while  b*  decreased. Meanwhile, Zn acetate 500  ppm moisture content, ash content, chl orophyll content, L*, and ∆E decreased,  while  a*  and  b*  increased.  Sambiloto  simplicia  powder  which  has  the  highest chlorophyll content is Zn acetate 400 ppm, with characteristics of water content 6.81% ww, ash content 15.74% ww, total chlorophyll 397.97 mg/100 g ww, green color intensity (-a) - 2.93, and ∆E
5.48.

## Abstrak
Kata kunci: Bubuk simplisia sambiloto,
pemanasan, ZnCl 2 , Zn asetat, oven Selama  proses  pembuatan  simplisia  sambiloto  yang  melibatkan  panas  dapat  mengakibatkan degradasi  klorofil  sehingga  dapat  menurunkan  aktivitas  antioksidan.  Peningkatan  stabilitas klorofil dapat dilakukan dengan pembentukan kompleks Zn-klorofil dengan logam yang mampu membentuk kompleks yang lebih stabil dibanding Mg seperti Zn. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk  mengetahui  bagaimana  karakteristik  fisik  dan  kimia  bubuk  simplisia  sambiloto  yang dihasilkan  dipengaruhi  oleh  jenis  reagen  dan  konsentrasi  reagen  saat  dipanaskan  dalam  oven. Bubuk  simplisia  sambiloto  dibuat  melalui  proses  sortasi,  penggilingan,  dan  pengayakan. Selanjutnya, reagen zinc chloride dan zinc asetat dicampur dengan konsentrasi 0, 200, 300, 400, dan 500  ppm,  dan  kemudian  dikeringkan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  pengaruh  nyata  (p  value <0.05)  dari  interaksi  antara  jenis  reagen  ZnCl2  dan  Zn  asetat  dan  konsentrasi  reagen  terhadap intensitas  warna,  stabilitas  warna,  kadar  air,  kadar  abu,  dan  kadar  klorofil.  Semakin  tinggi konsentrasi ZnCl2 dan Zn asetat, semakin tinggi kadar air, kadar abu, kadar klorofil, L*, dan -a*., sedangkan b* dan ∆E menurun. Pada konsentrasi 500 ppm ZnCl2 menunjukkan peningkatan kadar air, abu, klorofil, ∆E, L*, dan a* sementara b* mengalami penurunan. Sedangkan Zn asetat 500 ppm memiliki kadar air, kadar abu, kadar klorofil, L*, dan ∆E semakin menurun, sedangkan a* dan b* semakin meningkat. Bubuk simplisia sambiloto yang mempunyai kadar klorofil tertinggi adalah Zn asetat 400 ppm, dengan karakteristik kadar air 6,81% (bb), kadar abu 15,74% (bk), klorofil total 397,97 mg/100 g (bk), intesitas warna hijau (-a) - 2,93, dan ∆E 5,48 .

## E-ISSN: 2579-4523

## JURNAL TEKNOLOGI DAN INDUSTRI PANGAN UNISRI
http://ejurnal.unisri.ac.id/index.php/jtpr/index Terakreditasi sinta 4 sesuai dengan SK No. 200/M/KPT/2020 tanggal 23 Desember 2020 https://sinta.ristekbrin.go.id/journals/detail?id=7556

## PENDAHULUAN
Perubahan  pola  makan  masyarakat yang lebih banyak mengandung lemak dan kalori serta pertumbuhan industri meningkatkan paparan radikal bebas dalam tubuh.  Asap  kendaraan,  asap  rokok,  dan paparan  sinar  matahari  yang  berlebihan juga  termasuk  sumber  radikal  bebas. Radikal  bebas  menyebabkan  timbulnya penyakit degeneratif seperti neurodegeneratif, diabetes mellitus, penyakit  kardiovaskular,  penuaan  dini, bahkan kanker. (Phaniendra et al., 2015).
Peningkatan asupan antiokasidan dari luar dapat membantu mencegah akumulasi radikal bebas dengan menetralkan, mengurangi,  dan  mencegah  pembentukan radikal  bebas  baru  di  dalam  tubuh. Simplisia  daun  atau  rempah-rempah,  yang banyak mengandung fenolik dan flavonoid seperti  sambiloto  merupakan  salah  satu sumber  antioksidan  alami.  Sambiloto memiliki  beberapa  manfaat  antara  lain tanaman  obat  yang  memiliki  khasiat antidiabetes,  antidiare,  antibakteri  dan antiinflamasi,  karena  kandungan  utama sambiloto  adalah  terpenoid  dan  flavonoid (Dalimunthe, 2009).
Sambiloto biasanya digunakan dalam bentuk  simplisia  yang  melewati  berbagai proses seperti, sortasi, pencucian, pemotongan,  atau  penghancuran,  dan pengeringan  sebelum  digunakan.  Selama pembuatan kemungkinan terjadi kerusakan sehingga komponen klorofil dapat berkurang.  Selama  proses  pembuatan simplisia  mengakibatkan  terdegradasinya senyawa  klorofil  pada  sambiloto.  Klorofil yang merupakan pigmen utama warna hijau pada  tumbuhan  mempunyai  struktur  yang mirip  dengan  haemoglobin  (pigmen  pada darah  manusia),  dimana  atom  sentral  Fe 2+ pada  haemoglobin  berganti  menjadi  Mg 2+
pada klorofil (Ernaini et al., 2012). Adanya enzim  magnesium  dechelatase  dan  enzim chlorophyllase  menyebabkan  mekanisme reaksi  degradasi  klorofil  pada  tumbuhan. Enzim-enzim ini akan mengkatalisis hidrolisis  ikatan  ester  antara  residu  asam propionat  pada  cincin  makrosiklik  dengan fitol  pada  klorofil, sehingga  menyebabkan hilangnya ion Mg 2+ (Aryanti et al., 2016).
Salah satu cara yang dapat dilakukan untuk meningkatkan stabilitas klorofil yaitu pembentukan  kompleks  antara  klorofil dengan logam, misalnya dengan logam Zn. Logam  Zn  dan  Cu  diketahui  mampu membentuk  kompleks  yang  lebih  kuat dibandingkan  Mg + berdasarkan  tingkat kestabilan  kompleks  yang  terbentuk. kompleks  Zn-klorofil  lebih  banyak  dipilih dibandingkan  kompleks  Cu-klorofil  yang lebih mudah terbentuk. Hal ini disebabkan oleh  sifat  ion  Cu  yang  bersifat  toksik (Humphrey 2004). Nurusholah et al. (2014) menyatakan bahwa konsentrasi Zn, konsentrasi  pigmen,  dan  pH  adalah beberapa faktor yang memengaruhi pembentukan senyawa kompleks. Sebaliknya, Canjura et al. (1999) menyatakan  bahwa  konsentrasi  Zn  yang digunakan  menentukan  pengikatan  kadar Zn  dalam  jaringan  selama  pembentukan senyawa kompleks. Secara umum, semakin tinggi  konsentrasi  reagen  pembentuk senyawa  kompleks  Zn-klorofil,  semakin banyak  senyawa  kompleks  yang  dibentuk, dan  lebih  hijau  warna  buah  atau  daunnya. Namun,  pembentukan  kompleks  Zn- klorofil dibatasi oleh jumlah klorofil dalam bahan  (Bohn  et  al.,  2004),  sehingga  perlu dilakukan  penelitian  konsentrasi  yang tepat.
Selain  dipengaruhi  oleh  jenis  logam, pembentukan komplek klorofil juga dipengaruhi  oleh  jenis  reagen  sumber  Zn
misalnya garam ZnCl 2 dan Zn asetat. ZnCl 2 merupakan garam anorganik dari asam kuat dan  garam  Zn  asetat  merupakan  garam organik  dari  asam  lemah,  sehingga keduanya  mempunyai  reaktivitas  yang berbeda.  Selain  itu  residu  Cl 2 dan  asetat juga akan mempengaruhi stabiliat klorofil. Pada  penelitian  sebelumnya  menunjukkan bahwa  pembentukan  kompleks  klorofil dengan  ion 𝑍𝑛 2+ dapat  mempertahankan aktivitas  antioksidan  klorofil  daun  pandan (Suryani et al., 2020). Menurut Rachmawati  dan  Ramdanawati  (2020) konsentrasi  ZnCl 2 sebesar  3%  dapat menjaga  stabilitas  warna  klorofil.  Udiarta et. al. (2015), menyatakan bahwa penambahan  ZnCl 2 menyebabkan  laju degradasi  yang  lebih  kecil  dari  MgCO 3 . Menurut  Nurusholah  (2014)  stabilitas ekstrak  kasar  pigmen  klorofil  rumput  laut Sargassum  sp.  dipengaruhi  oleh  lama penyimpanan  dan  penambahan  perbedaan konsentrasi  ZnCl 2 .  Rohmat  et.  al.  (2014), menyatakan  bahwa  pemberian  panas  akan mempengaruhi terjadinya penurunan klorofil, mekanismenya dengan mengubah warna hijau pucat dari pheophytin menjadi warna  kecoklatan.  Penggunaan  blanching suhu  100ºC  memberikan  pengaruh  yang sangat nyata terhadap total klorofil ekstrak daun suji (Putri, 2012).
Penelitian sebelumnya menggunakan jenis  reagen  dan  pemanasan  dengan blanching,  namun  sangat  banyak  klorofil yang  terlarut  dalam  media,  sehingga kemampuan mengikat Zn-klorofil terbatas. Maka  dari  itu,  perlu  dilakukan  evaluasi pengaruh  jenis  dan  konsentrasi  reagen pembentuk kompleks metalloklorofil dalam  simplisia  sambiloto  agar  diperoleh bubuk  simplisia  sambiloto  yang  kaya klorofil.

## METODE PENELITIAN

## Alat
Dalam  penelitian  ini  peralatan  yang digunakan  meliputi  tabung  reaksi  (pyrex iwaki),  labu  ukur  (pyrex),  colorimetri  NH 300,  Spektrofotometer  UV  Vis,  Vortex (tipe  37600  mixer),  ayakan,  dan  cabinet dryer.

## Bahan
Dalam  penelitian  ini  bahan  yang digunakan yaitu simplisia sambiloto (Andrographis  paniculata) yang  diperoleh dari  Balai  Penelitian  Tanaman  Obat Tawangmangu.  Pelarut  dan  bahan  kimia yang  digunakan  ZnCl 2 (Merck),  Zn  asetat (Merck), aquadest, kertas saring ( wthaman no  42),  dan aseton (Merck).  Bahan-bahan ini didapat dari Chem-Mix Pratama Sapen.

## Metode
Penelitian  ini  dilakukan  melalui  beberapa langkah yaitu :
1. Perlakuan pendahuluan
Simplisia  sambiloto  disortasi  dengan membuang  tangkai  daun  yang  keras  dan kotoran Selanjutnya dilakukan penggilingan dengan blender kering selama 1 menit, kemudian bubuk simplisia diayak, bahan  yang  tidak  lolos  ayakan  60  mesh digiling kembali, hasil ayakan yang kedua dan  ketiga  dicampur  dan  ditimbang  50  g untuk setiap unit perlakuan.
2. Perlakuan  pembentukan  metaloklorofil Zn-klorofil Tahap  selanjutnya  adalah  proses pencampuran  bubuk  simplisia  dengan konsentrasi reagen 0, 200, 300, 400 dan 500 ppm.  Perbandingan  antara  bahan  dengan reagen adalah 50:15 (b/v). Untuk menjamin homogenitas, pencampuran dilakukan dengan di- spray sambil dilakukan pengadukan hingga merata. Hasil campuran  kemudian  dipanaskan  dalam dengan  oven  selama  10  menit  pada  suhu 110 º C.  Proses  pemanasan  dilakukan  untuk
meningkatkan  efektivitas  pembentukan kompleks metaloklorofil. Proses
selanjutnya dikeringkan Kembali pada suhu 50 º C  selama  3  jam  menggunakan cabinet dryer .  Bubuk  simplisia  sambiloto  yang dihasilkan  disimpan  pada  platik  kedap udata dengan dibungkus dengan aluminium foil sebelum dianalisis.
3. Analisis penelitian Pada penelitian ini dilakukan analisis fisik  dan  kimia.  Analisis  fisik  yaitu pengujian  stabilitas  warna  (Permatasari  & Afifah,  2020),  dan  analisis  kimia  yaitu pengujian  kadar  air  metode  AOAC,  kadar abu  metode  AOAC,  dan  kadar  klorofil dengan metode Vernon.
Pengujian kadar air dilakukan dengan metode AOAC (2012). Cawan dipanaskan dalam  oven  pada  suhu  100 º C  selama  ±  3 jam.  Cawan  ditimbang  sebagai  bobot kosong,  sampel  ditimbang  sebanyak  1g kemudian dimasukkan dalam oven dengan suhu  100°C  selama  ±  3  jam.  Cawan kemudian ditimbang. Jika belum diperoleh berat  konstan,  maka  dilakukan  3  kali pemanasan hingga diperoleh berat konstan.
Stabilitas  warna  Ngamwonglumlert et.  al.  (2017),  dengan  parameter  warna bubuk yang diukur adalah intensitas warna L,  a,  b  dengan  alat colorimeter .  Bubuk simplisia  ditimbang  sebanyak  2  g  dalam petri  dist diratakan,  kemudian  dipanaskan pada inkubator pada suhu 50 º C selama 24 jam.  Kemudian  bubuk  simplisia  diukur kembali tingkat stabilitas warna.
4. Rancangan percobaan dan analisis data Rancangan  yang  digunakan  adalah Rancangan Acak Kelompok (RAK) dengan 2 faktor. Faktor pertama adalah jenis reagen
ZnCl 2 dan Zn Asetat. Faktor kedua adalah konsentrasi reagen ZnCl 2 dan Zn Asetat (0, 200,  300,  400,  dan  500  Ppm).  Data  yang diperoleh dianalisis dengan bantuan software SPSS  dan  jika  terdapat  pengaruh
yang nyata (P<0,05) dilanjutkan dengan uji DMRT.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Kadar Air
Kadar  air  merupakan  banyaknya jumlah  kandungan  air  dalam  suatu  bahan pangan. Nilai aktivitas air yang tinggi atau rendah  memengaruhi  kualitas  dan  waktu penyimpanan  bahan  pangan.  Semakin rendah  nilai  aktivitas  air,  semakin  lama daya  simpan  bahan  pangan  (Wilandika  & Vita,  2017).  Kadar  air  bubuk  simplisia sambiloto  yang  dihasilkan  dapat  dilihat pada Tabel 1. Dari hasil uji statistik kadar air  menunjukkan  bahwa  interaksi  antara jenis  dan  konsentrasi  reagen  berpengaruh nyata  terhadap  kadar  air  bubuk  simplisia sambiloto yang dihasilkan (P<0,05).
Berdasarkan  pada  Tabel  1  diketahui bahwa kadar air bubuk simplisia sambiloto berkisaran  antara  6,23  %  (b/b)  –  7,46  % (b/b).  Kadar  air  tertinggi  reagen  Zn  asetat 300  ppm  sebesar  7,45%(b/b),  sedangkan kadar air terendah diperoleh dari Zn asetat 500  ppm  sebesar  6,23%(b/b).  Kadar  air bubuk  simplisia  sambiloto  meningkat seiring dengan peningkatan jumlah konsentrasi, tetapi pada Zn asetat kadar air menurun  kembali  pada  konsentrasi  500 ppm.
Rendahnya kadar air bubuk simplisia sambiloto menunjukkan bahwa kandungan air terikat yang terdapat dalam bahan telah menguap selama proses pemanasan. Hal ini menunjukkan bahwa  jenis  dan konsentrasi reagen yang bervariasi berpengaruh terhadap  kadar  air  bubuk  simplisia sambiloto  yang  dihasilkan.  Kadar  air reagen  Zn  asetat  yang  dihasilkan  lebih rendah  daripada  reagen  ZnCl 2 .  Hal  ini karena  pada  bubuk  simplisia  sambiloto dengan proses pemanasan oven
menggunakan udara panas sehingga sampel tidak mengalami rehidrasi uap air. Menurut hasil penelitian Az-Zahra (2022), menyatakan  bahwa  kadar  air  bubuk simplisia  sambiloto  dengan  reagen  ZnCl 2 yang dihasilkan lebih rendah dari pada Zn asetat  dengan  perlakuan  autoklaf.  Pada proses pemanasan dengan autoklaf menggunakan  uap  bertekanan  sehingga bubuk  simplisia  sambiloto  mengalami rehidrasi uap air, hal ini dapat meningkatkan  kadar  air  dalam  bubuk simplisia sambiloto pada perlakuan pemanasan  dengan  menggunakan  autoklaf (Putra, 2022).
Penambahan  reagen  pada  bubuk simplisia menyebabkan meningkatnya kadar  air.  Semakin  banyak  bahan  pengisi yang  ditambahkan,  semakin  tinggi  total padatan  bahan  yang  dikeringkan  sehingga akan  berpengaruh  pada  kadar  air  (Fatin, 2017).  Pisal  et.  Al.  (2021),  menyatakan bahwa  ZnCl2  dan  Zn  asetat  mudah  larut dalam air tanpa meninggalkan residu. Pada
ZnCl2  500  ppm  kadar  air  meningkat kembali,  hal  ini  diduga  pada  konsetrasi tinggi  sisa  reagen  akan  menghidrolisis komponen  lain  pada  bubuk  simplisia sambiloto seperti serat (soluble fiber). Serat larut  dalam  larutan  zink  klorida  berasid hidroklorik  (Melwita  &  Kurniadi,  2014). Adanya  serat  (polisakarida)  dalam  bahan juga  memengaruhi  proses  penyerapan  air. Ini karena banyaknya gugus hidroksil bebas yang bersifat polar di dalam  serat  (Usman et  al.,  2022).    Komponen  pada  simplisia sambiloto  banyak  mengandung  gugus hidrofilik yang bersifat polar yang mampu mengikat  molekul  air.  Pada  saat  proses pengeringan dengan pemanasan yang lama menyebabkan terjadinya pelunakan jaringan akibat adanya penyerapan air yang menyebabkan terjadinya peningkatan kadar air  suatu  bahan  (Dewanto  et  al.,  2002). Tabel  1.  Kadar  air  bubuk  simplisia sambiloto  (%bk)  pada  berbagai  jenis  dan konsentrasi  reagen  pembentuk  kompleks Zn-klorofil dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel  1.  Kadar  air  bubuk  simplisia  sambiloto  (%bk)  pada  berbagai  jenis  dan  konsentrasi  reagen pembentuk kompleks Zn-klorofil.
Jenis reagen Konsentrasi (ppm) 0 200 300 400 500 ZnCl 2 6,46±0,09 ab 6,96±0,87 bcde 6,85±0,12 bcd 6,63±0,52 abc 7,17±0,11 de Zn Asestat 6,46±0,09 ab 7,04±0,33 cde 7,45±0,39 e 6,81±0,53 bcd 6,23±0,04 a
Keterangan: Pengujian dilakukan dalam tiga kali pengulangan, Nilai mean ± standar deviasi pada kolom yang sama diikuti dengan huruf kecil yang berbeda (a-e) menunjukan perbedaan yang signifikan (P < 0,05)

## 2. Kadar Abu
Kadar  abu  adalah  zat  organik  sisa pembakaran  suatu  bahan  organik.  Kadar abu  erat  kaitannya  dengan  kandungan mineral  yang  terdapat  dalam  bahan, kemurnian  dan  tingkat  kebersihan  suatu bahan  yang  dihasilkan  (Atmawikarta, 2009). Kadar abu bubuk simplisia
sambiloto  yang  dihasilkan  dapat  dilihat pada Tabel 2. Dari hasil uji statistik kadar
abu  menunjukkan  bahwa  interaksi  antara jenis  dan  konsentrasi  reagen  berpengaruh nyata  terhadap  kadar  abu  bubuk  simplisia sambiloto yang dihasilkan (P <0,05). Tabel 2.  Kadar  abu  bubuk  simplisia  sambiloto (%bk) pada berbagai jenis dan konsentrasi reagen  pembentuk  kompleks  Zn-klorofil dapat dilihat pada tabel berikut.
Berdasarkan  pada  Tabel  2  diketahui bahwa kadar abu bubuk simplisia sambiloto
meningkat  seiring  dengan  meningkatnya konsentrasi  reagen,  sedangkan  pada  Zn asetat  kadar  abu  menurun  kembali  pada konsentrasi  500  ppm.  kadar  abu  bubuk simplisia sambiloto berkisaran antara 15,34
% (bk) – 15,74 % (bk). Kadar abu tertinggi reagen Zn asetat 400 ppm sebesar 15,74 % (bk)  dan  kadar  abu  terendah  reagen  pada perlakuan  kontrol  ZnCl 2 dan  Zn  asetat  0 ppm sebesar 15,34 % (bk).
Tabel  2.  Kadar  abu  bubuk  simplisia  sambiloto  (%bk)  pada  berbagai  jenis  dan  konsentrasi  reagen pembentuk kompleks Zn-klorofil
Jenis reagen Konsentrasi (ppm) 0 200 300 400 500 ZnCl 2 Zn asetat 15,34±0,13 a 15,34±0,13 a 15,51±0,12 abc 15,38±0,32 ab 15,59±0,20 abc 15,64±0,31 bc 15,48±0,14 abc 15,74±0,29 c 15,65±0,23 bc 15,51±0,10 abc
Keterangan: Pengujian dilakukan dalam tiga kali pengulangan, Nilai mean ± standar deviasi pada kolom yang sama diikuti dengan huruf kecil yang berbeda (a-c) menunjukan perbedaan yang signifikan (P < 0,05)
Semakin  tinggi  konsentrasi  reagen yang digunakan, semakin banyak kompleks klorofil Zn yang terbentuk. Akibatnya, ion logam  yang  terikat  semakin  banyak  dan kadar  abu  yang  terdeteksi  semakin  tinggi. Pada  jenis  reagen  ZnCl 2 dan  Zn  Asetat tidak  memberikan  beda  nyata  pada  kadar abu.  Sehingga  kadar  abu  bubuk  simplisia sambiloto  tidak  memenuhi  syarat  (Depkes RI, 2000) yang meyatakan bahwa kadar abu simplisi tidak lebih dari 14,0%. Tingginya
kadar abu menunjukan tingginya kandungan mineral dalam bubuk simplisia sambiloto. Jenis bahan, metode pengabuan, waktu, dan suhu yang digunakan memengaruhi  kadar  abu.  Selain  itu, proporsi  kadar  abu  dalam  suatu  bahan pangan  dapat  dipengaruhi  oleh  sejumlah faktor, termasuk spesies, kondisi unsur hara tanah, kondisi kematangan tanaman, iklim, daerah  tempat  tumbuh,  dan  perlakuan penanaman (Saadilah, 2018).
3. Kadar klorofil
Klorofil merupakan  pigmen berwarna hijau yang banyak terdapat pada daun. Salah satu  tumbuhan  yang  mengandung  klorofil
yaitu  sambiloto.  Pada  penelitian  ini dilakukan analisis kadar klorofil total. Nilai kadar klorofil dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Kadar klorofil
Keterangan: Pengujian dilakukan dalam tiga kali pengulangan, Nilai mean ± standar deviasi pada kolom yang sama diikuti dengan huruf kecil yang berbeda (a-d) menunjukan perbedaan yang signifikan (P < 0,05)
Berdasarkan  hasil  uji  statistik  kadar klorofil menunjukan bahwa interaksi antara jenis  dan  konsentrasi  reagen  berpengaruh nyata  terhadap  kadar  klorofil  bubuk
simplisia  sambiloto  yang  dihasilkan  (P <0,05). Semakin tinggi konsentrasi reagen, semakin banyak kompleks Zn-klorofil yang terbentuk  dan  kadar  klorofil  total  dalam
Jenis
Reagen Konsentrasi Reagen (ppm) 0 200 300 400 500 ZnCl 2 Zn Asetat 282,22±22,05 a 282,22±22,05 a 354,12±16,25 c 390,13±44,37 d 340,58±29,90 bc 323,97±28,75 b 346,92±2,07 bc 397,97±6,46 d 347,88±7,00b c 350,65±12,85 bc
bubuk  simplisia  sambiloto  meningkat. Kadar  klorofil  tertinggi  reagen  Zn  asetat 400 ppm sebesar 397,97 mg/100 g bk  dan kadar  klorofil  terendah  kontrol  ZnCl2  dan Zn asetat  0  ppm  sebesar  282,22  mg/100  g bk.  Penggunaan  jenis  reagen  Zn  asetat menghasilkan  kadar  klorofil  yang  lebih tinggi dibandingkan ZnCl2. Tabel 3. Kadar klorofil  total  bubuk  simplisia  sambiloto (mg/100  g  bk)  pada  berbagai  jenis  dan konsentrasi  reagen  pembentuk  kompleks Zn-klorofil.
Klorofil  bersifat  sangat  labil  dan mudah  terdegradasi  oleh  beberapa  faktor seperti reaksi enzimatis, kondisi asam, dan adanya oksigen (Yilmaz & Gokmen, 2016). Zn asetat dengan 400 ppm yang digunakan dapat  membentuk  kompleks  Zn-  klorofil menggantikan  ion  Mg2+  yang  hilang, sehingga  meningkatkan  stabilitas  krorofil. Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Canjura et.  al.  (1999),  bahwa  tujuan  pengikatan logam oleh klorofil adalah untuk meningkatkan  kestabilan  klorofil  dan mengembalikan  warna  hijau  turunan klorofil ( regreening effect ). ZnCl 2 merupakan  garam  dari  asam  kuat,  akan membentuk  asam  yang  sangat  kuat sehingga semakin tinggi konsentrasi semakin  banyak  klorofil  yang  tergradasi, sedangkan  larutan  Zn  asetat  dalam  air mendekati netral yaitu 6-8 (Suryani, 2021). Selain  itu,  residu  Cl 2 dalam  air  juga membentuk  hipoklorit,  yang  memiliki kemampuan  untuk  mengoksidasi  klorofil, yang  menyebabkan  penurunan  kadar klorofil (Zvezdanovic et al., 2014 1995).
Reagen  ZnCl 2 berfungsi  sebagai fiksator  yang  memiliki  kemampuan  untuk meningkatkan stabilitas kandungan klorofil secara  keseluruhan.  Reaktan  ini  dapat membentuk  senyawa  gabungan  dengan klorofil menjadi Zn-klorofil, yang meningkatkan  stabilitas  klorofil.  Hal  ini
didasarkan  pada  LaBorde  dan  von  Elbe (1990), menyatakan bahwa berbagai faktor, termasuk  konsentrasi  seng,  konsentrasi pigmen, dan pH, memengaruhi pembentukan  senyawa  gabungan.  Selain itu, ditambahkan oleh Canjura et al. (1999), bahwa  penyerapan  seng  dalam  jaringan selama  pembentukan  senyawa  gabungan bergantung pada konsentrasi ion seng yang tersedia.  Perlakuan  dengan  jenis  reagen ZnCl 2 ,  Zn  asetat  dan  konsentrasi  yang berbeda  yang  dihasilkan  melebihi  standar kontrol  klorofil  total  sebesar  282,22 mg/100 g (bk), sehingga dapat membentuk kompleks  Zn-klorofil  dan  meningkatkan stabilitas klorofil bubuk simplisi sambiloto.
4. Tingkat Kecerahan (L*)
Berdasarkan  data  pada  Tabel  4 diketahui  bahwa  tingkat  kecerahan (L) bubuk simplisia sambiloto yang dihasilkan hasil  uji  statistik  bahwa  interaksi  antara jenis  dan  konsentrasi  reagen  berpengaruh nyata  terhadap  warna  L*  bubuk  simplisia sambiloto yang dihasilkan (P <0,05). Hasil penelitian  menunjukan  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  reagen  maka  nilai kecerahan  bubuk  simplisia  sambiloto semakin meningkat. Namun pada Zn asetat nilai  kecerahan  menurun  kembali  pada konsentrasi  500  ppm.  Nilai  kecerahan tertinggi ZnCl 2 500 ppm sebesar 51,06 dan nilai  kecerahan  terendah  ZnCl 2 200  ppm sebesar 49,60.
Nilai  kecerahan  bubuk  simplisia sambiloto  pada  ZnCl 2 lebih  tinggi  dari  Zn asetat. Karena penurunan tersebut berkorelasi  dengan  nilai  intensitas  warna hijau,  yang  juga  semakin  tinggi.  Menurut Yuwono (1998), intensitas warna Lightness ( L)  dinyatakan  dengan  kisaran  0-100 dimana nilai 0 menunjukkan kecendrungan warna hitam  atau  sangat  gelap,  sedangkan nilai  100  menunjukkan  kecendrungan warna putih atau terang. Sehingga dari hasil
analisis, bahwa warna L* dengan perlakuan jenis  dan  konsentrasi  reagen  cendrung berwarna gelap. Warna L* sangat berhubungan dengan kadar klorofil bahan. Semakin  tinggi  kadar  klorofil  bubuk simplisis sambiloto maka warna cenderung gelap. Pemanasan bubuk simplisia
sambiloto juga akan menyebabkan pembentukan pheophytin, yang
menyebabkan warna hijau klorofil menjadi lebih  pucat  atau  pudar.  Akibatnya,  nilai kecerahan  akan  meningkat.  Rohmat  et  al .,
(2014)  menyatakan  bahwa  pemberian panas  akan  mempengaruhi  terjadinya penurunan klorofil, mekanismenya dengan mengubah warna hijau pucat dari pheophytin menjadi warna kecoklatan.
Tabel 4. Intensitas warna Lightness (L*) bubuk simplisia sambiloto pada berbagai jenis dan konsentrasi reagen pembentuk kompleks Zn-klorofil Jenis reagen Konsentrasi (ppm) 0 200 300 400 500 ZnCl 2 Zn Asetat 49,75±0,17 a 49,75±0,17 a 49,60±0,39a 50,02±0,80 ab 50,40±0,87 abc 49,88±0,60 a 50,33±0,98 abc 50,70±0,65 b 51,06±0,01 c 49,76±0,49 a
Keterangan: Pengujian dilakukan dalam tiga kali pengulangan, Nilai mean ± standar deviasi pada kolom yang sama diikuti dengan huruf kecil yang berbeda (a-c) menunjukan perbedaan yang signifikan (P < 0,05)
5. Redness (a*)
Berdasarkan  data  pada  Tabel  5 stabilitas  warna Redness  (a*) bubuk simplisia  sambiloto  yang  dihasilkan  hasil uji  statistik  menunjukan  bahwa  interaksi antara  jenis  dan  konsentrasi  reagen berpengaruh  nyata  terhadap  warna  a* bubuk simplisia sambiloto yang dihasilkan (P  <0,05).  Nilai  a*  menunjukkan  besaran yang menunjukkan warna mulai dari hijau
hingga  merah.  Semakin  rendah  nilai  a* (negatif) maka warna hijau makin pekat dan semakin  tinggi  nilai  a*  (positif)  maka warna  merah  semakin  pekat  (Ulyarti  & Fortuna,  2016).  Intensitas warna Redness (a*) bubuk  simplisia  sambiloto  pada berbagai  jenis  dan  konsentrasi  reagen pembentuk  kompleks  Zn-klorofil  dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5. Intensitas warna Redness (a*) bubuk simplisia sambiloto pada berbagai jenis dan konsentrasi reagen pembentuk kompleks Zn-klorofil
Keterangan: Pengujian dilakukan dalam tiga kali pengulangan, Nilai mean ± standar deviasi pada kolom yang sama diikuti dengan huruf kecil yang berbeda (a-f) menunjukan perbedaan yang signifikan (P < 0,05). Nilai a* menunjukkan besaran yang menunjukkan warna mulai dari hijau hingga merah. Semakin rendah nilai -a* maka warna hijau makin pekat dan semakin tinggi nilai +a* maka warna merah semakin peka.
Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa nilai  a*  negatif  tertinggi  adalah  Zn  asetat 500 ppm sebesar -2,96 dan nilai a* negatif terendah adalah perlakuan kontrol Zn asetat
dan  ZnCl 2 sebesar  0,94.  Nilai  warna  a* negatif  menunjukan  adanya  peningkatan warna  hijau  akibat  perlakuan  jenis  dan konsentrasi reagen. Reagen Zn asetat lebih
Jenis
reagen Konsentrasi (ppm) 0 200 300 400 500 ZnCl 2 Zn Asetat 0,94±0,04 f 0,94±0,04 f -2,66±0,09 e -2,87±0,01 cd -2,84±0,02 d -2,91±0,01 abc -2,90±0,03 bc -2,93±0,00 ab -2,91±0,02 abc
-2,96±0,01 a
meningkatkan  warna  a*negatif  simplisia sambiloto  dibandingkan  dengan  dengan reagen ZnCl 2. Hal ini karena semakin tinggi konsentrasi menyebabkan Zn asetat menggantikan  Mg 2+ yang  hilang  akibat proses  pengoloahan  simplisia  sambiloto, sehingga  kadar  klorofil  bubuk  simplisia sambiloto  juga  meningkat,  nilai  klorofil yang  meningkat  juga  akan  meningkatkan nila warna a* negatif pada bubuk simplisia sambiloto.
6. Yellowness (b*)
Hasil  uji  statistik  menunjukkan bahwa interaksi antara jenis dan konsentrasi reagen berpengaruh nyata pada warna  b*  bubuk  simplisia  sambiloto, seperti  yang  ditunjukkan  oleh  data  pada Tabel 6 (p <0,05). Nilai b* adalah besaran yang  menunjukkan  warna  kuning  hingga kebiruan.  Semakin  tinggi  nilai  warna  b* (positif) maka semakin pekat warna kuning dan  semakin  rendah  nilai  b*  (negatif) menunjukkan  warna  biru  semakin  pekat (Ulyarti & Furtuna, 2016).
Hasil  penelitian  warna  b*  bubuk simplisia  sambiloto  menunjukkan  bahwa nilai  warna  b*  turun  seiring  dengan meningkatnya  konsentrasi  reagen.  Nilai warna b* tertinggi adalah perlakuan kontrol 0 ppm Zn asetat dan ZnCl 2 sebesar 9,00 dan nilai b* terendah adalah Zn asetat 200 ppm sebesar 7,99.
Warna  kuning  pada  bubuk  simplisia sambiloto disebabkan oleh pigmen karotenoid.  Karotenoid  merupakan  zat alami  yang  berasal  dari  tumbuhan  yang memiliki  gugus  hidroksil  yang  memiliki kelompok pigmen berwarna orange, merah atau kuning. Karotenoid bersifat stabil pada pH  netral  dan  alkali,  tetapi  tidak  setabil pada  kondisi  asam,  oksigen,  cahaya  dan panas.  Berdasarkan  uraian,  nilai  warna  b* bubuk  simplisia  sambiloto  pada  Zn  asetat tinggi  dari  ZnCl 2. Hal  ini  disebabkan  oleh ZnCl 2 yang merupakan  garam  dari  asam kuat  akan  membentuk  asam  yang  sangat kuat,sehingga  semakin  tinggi  konsentrasi semakin  menurun  warna  b*,  sedangkan larutan Zn asetat dalam air mendekati netral yaitu  6-8.  Residu  klorin  (Cl 2 )  akan membentuk hipoklorit yang dapat mengoksidasi karotenoid sehingga menurunkan kadar karotenoid. Pada proses pemanasan  menggunakan  oven  dengan udara panas yang tinggi selama waktu yang lama  dapat  mengurangi  kadar  karotenoid, menyebabkan warna kuning bubuk simplisia  sambilotol  menunjukan  semakin kebiruan.  Warna Yellowness  (b*) bubuk simplisia sambiloto pada berbagai jenis dan konsentrasi  reagen  pembentuk  kompleks Zn-klorofil dapat dilihat pada tabel 6.
Tabel 6. Warna Yellowness (b*) bubuk simplisia sambiloto pada berbagai jenis dan konsentrasi reagen pembentuk kompleks Zn-klorofil.
Jenis reagen Konsentrasi (ppm) 0 200 300 400 500 ZnCl 2 Zn Asetat 9,00±0,06 f 9,00±0,06 f 8,46±0,22 cd 7,99±0,12 a 8,18±0,23 ab 8,53±0,16 cd 8,70±0,29 d 8,69±0,12 d 8,34±0,15 bc 8,50±0,25 cd
Keterangan: Pengujian dilakukan dalam tiga kali pengulangan, Nilai mean ± standar deviasi pada kolom yang sama diikuti dengan huruf kecil yang berbeda (a-f) menunjukan perbedaan yang signifikan (P < 0,05).
7. Stabilitas Warna
Stabilitas  warna  bubuk  simplisia sambiloto  diukur  nilai  L*,  a*  dan  b* sebelum dilakukan pemanasan dan sesudah dilakukan pemanasan. Nilai total perubahan warna tersebut merupakan (∆E).
Berdasarkan  data  pada  Tabel  7  hasil  nilai total  perubahan  warna  (∆E)  bubuk simplisia sambiloto yang dihasilkan menunjukan  bahwa  interaksi  antara  jenis dan  konsentrasi  reagen  berpengaruh  nyata terhadap total perubahan warna (∆E) bubuk simplisia  sambiloto  yang  dihasilkan  (P <0,05). Tabel 7. Nilai (∆E) bubuk simplisia sambiloto pada berbagai jenis dan konsentrasi  reagen  pembentuk  kompleks Zn-klorofil dapat dilihat pada tabel berikut.
Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa nilai  Total  Perubahan  Warna  (∆E)  bubuk simplisia sambiloto menurun seiring bertambahnya  konsentrasi,  tetapi  pada
ZnCl 2 dengan  konsentrasi  500  ppm mengalami peningkatan sebesar 6,14. Pada ZnCl 2 semakin tinggi konsentrasi cenderung  menurun,  dengan  nilai  (∆E) tertinggi  500  ppm  sebesar  6,14  dan  nilai (∆E) terendah 200 ppm sebesar 4,23.
Warna  bubuk  simplisia  sambiloto pada  ZnCl2  dengan  konsentrasi  500  ppm cenderung  meningkat  atau  menjadi  lebih pekat  secara  keseluruhan  sebagai  akibat dari  perubahan  klorofil  menjadi  klorofilid seiring  dengan  peningkatan  konsentrasi reagen.  Seafast  (2012)  menyatakan  bahwa klorofilid,  salah  satu  produk  degradasi klorofil, memiliki warna hijau biru sebelum berubah  menjadi  senyawa  tidak  berwarna pada  tahap  degradasi  berikutnya.  Menurut Fajar et al. (2014), degradasi klorofil dapat menghasilkan  senyawa  yang  lebih  terang (kuning atau tidak berwarna) sebagai hasil dari proses enzimatik dan oksidasi.
Tabel 7. Nilai (∆E) bubuk simplisia sambiloto pada berbagai jenis dan konsentrasi reagen pembentuk kompleks Zn-klorofil
Jenis reagen Konsentrasi (ppm) 0 200 300 400 500 ZnCl 2 Zn Asetat 5,61±0,26 cd 5,61±0,26 cd 4,23±0,17 a 5,06±0,81 bc 4,75±0,82 ab 5,22±0,54 bc 5,08±1,03 bc 5,48±0,67 bcd 6,14±0,35 d 4,77±0,51 ab
Keterangan: Pengujian dilakukan dalam tiga kali pengulangan, Nilai mean ± standar deviasi pada kolom yang sama diikuti dengan huruf kecil yang berbeda (a-d) menunjukan perbedaan yang signifikan (P < 0,05).
Nilai  total  perubahan  warna  (∆E) ialah  nilai  keseluruhan  perubahan  warna L*,  a*  dan  b*  sebelum  dan  sesudah dipanakan.  Semakin  tinggi  nilai  ∆E menunjukkan  besarnya  total  perubahan warna  pada  bubuk  simplisia  sambiloto, sedangkan  semakin  kecil  nilai  ∆E menunjukkan  rendahnya  perubahan  warna pada bubuk simplisia sambiloto

## KESIMPULAN
Hasil penelitian menunjukkan bahwa interaksi  jenis  reagen,  Zn  asetat  dan
konsentrasi  reagen  berpengaruh  nyata  (p value < 0,05) terhadap kadar air, kadar abu, kadar  klorofil,  intensitas  warna  dan kestabilan warna. Semakin tinggi konsentrasi  ZnCl 2 dan  Zn  asetat  maka semakin  tinggi  pula  kadar  air,  kadar  abu, kadar  klorofil,  L*,  dan  -a*,  sedangkan  b* dan ∆E mengalami penurunan. Pada ZnCl 2 500 ppm menunjukkan kadar air, kadar abu, kadar klorofil,  ∆E,  L*, dan a* meningkat, sedangkan  b*  menurun.  Sedangkan  Zn asetat  500  ppm  menyebabkan  kadar  air, kadar  abu,  kadar  klorofil,  L*,  dan  ∆E
menurun, sedangkan a* dan b* meningkat. Serbuk simplisia sambiloto yang mempunyai  kandungan  klorofil  tertinggi adalah  Zn  asetat  400  ppm,  dengan karakteristik  kadar  air  6,81%  ww,  kadar abu  15,74%  ww,  klorofil  total  397,97 mg/100 g ww, intensitas warna hijau (-a) - 2,93, dan ∆E 5.48.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami  ucapkan  terimakasih  untuk pendanaan  yang  kami  dapatkan  dari Universitas Mercu Buana Yogyakarta.

## DAFTAR PUSTAKA
AOAC,  (2012). Official  methods  of analysis  of  AOAC  International,  19th Edition . Apforgen.
Aryanti,F., Aininu.N., Fathia M.W. (2016). Ekstraksi  dan  karakterisasi  klorofil dari daun suji ( Pleomele angustifolia ) sebagai pewarna pangan alami. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan, 5, (4) Atmawikarta,  A.  (2009). Kampus  gizi . Kompas. Media Nusantara. Jakarta.
Az-Zahra  E.P.  (2023).  Pengaruh  jenis  dan konsentrasi reagen pembentuk kompleks  metalloklorofil  terhadap karakteristik bubuk simplisia sambiloto  ( Andrographis  paniculata ) dengan  perlakuan  autoklaf.  Skripsi. Universitas Mercu Buana Yogyakarta.
Canjura, F. L., Watkins R. H., and Schwartz S.  J.  (1999).  Color  improvement  and metallochlorophyll complexes in continuous flow aseptically processed peas . Journal  Food  Science,  64 .  987- 990.
Dalimunthe, A. (2009). Interaksi sambiloto ( Andrographis
paniculata ).
Departemen  Farmakologi  Fakultas
Farmasi  Universitas  Sumatera  Utara.
Medan.
Delgado-Vargas, Francisco, Paredes- Lopez,  Octavio.  (2003).  Natural colorants  for  food  and  nutraceutical Uses. USA: CRC Press. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1983). Pemanfaatan tanaman  obat.  Direktorat  Jenderal Pengawasan  Obat  dan  Makanan. Jakarta. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.  (1985).  Cara  pembuatan simplisia. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.  (2000).  Parameter  standar umum ekstrak tumbuhan obat. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.  (2008).  Farmakope  herbal Indonesia (Edisi I). Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Dewanto,  V.,  Wu,  X,.  and  Liu,  R.  H.
(2002).  Processed  sweet  corn  has higher  antoxidat  activity. Jurnal  of agricultural  and  food  chemistry,  50 (17), 4959-4964.
Ernaini,  Y.,  Agus,  S.,  dan  Rinto.  (2012).
Pengaruh jenis pelarut terhadap klorofil  dan  senyawa  fitokimia  daun kiambang  ( Salvinia  molesta Mitchell) dari  perairan  rawa. Jurnal  Fishtech,
1 .1-12.
Fajar  A,  I.  Ratna,  dan  N.D.  Eko.  (2014). Stabilitas  Ekstrak  Kasar  Pigmen Klorofil,  Beta  karoten,  dan  Caulerpin Alga  Hijau  Caulerpa  racemosa  pada Suhu  Penyimpanan  yang  Berbeda . Jurnal  Pengolahan  dan  Bioteknologi Hasil Perikanan , 3 (1). 1-10.
Humphrey  AM.  (2004).  Chlorophyll  as  a color and functional ingredient.
Journal of Food Science. 69 (5): C422- C425.
LaBorde, L. F. and von Elbe J. H. (1990). Zinc  complex  formation  in  heated vegetable purees. Journal  Agriculture Food Chemistry, 42 . 1100-1103.
Melwita, E dan Effan, K. (2014). Pengaruh waktu  hidrolisis  dan  konsentrasi H 2 SO 4 pada  pembuatan  asam  oksalat dari  tongkol  jagung  . Jurnal:  Teknik
Kimia . 20 (2).
Ngamwonglumlert, L., Devahastin, S. and Chiewchan, N., (2017). Natural colorants: pigment stability and extraction  yield  enhancement  via utilization of appropriate pretreatment and  extraction  methods. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 57 (15). 3243–3259.
Nikolaeva, M.K., Maevskaya, S.N., Shugaev,  A.G.,  dan  Bukhov,  N.G., (2010). Effect of drought on
chlorophyll  content  and  antioxidant enzyme  activites  in  leaves  of  three wheat cultivars varying in
productivity. Russian  Journal  Plant Physl. 57: 94-102.
Nurusholah T, F.M. Widodo, dan I. Ratna. (2014). Pengaruh perbedaan penambahan konsentrasi ZnCl 2 dalam ekstrak  kasar  pigmen  klorofil  rumput laut  sargassum  terhadap  stabilitasnya.
Jurnal  Pengolahan  dan  Bioteknologi Hasil Perikanan . 3 (1), 89-97.
Permatasari,N,A  &  Afifah,  Fitri.  (2020). Pembuatan dan  pengujian  stabilitas
bubuk pewarna alami dari daun bayam merah ( Alternanthera amoena voss. ). 8 (1), 409-422.
Phaniendra,  A.,  Jestadi,  D.  B.  and Periyasamy, L., (2015). Free radicals: properties,  sources,  targets,  and  their implication in various diseases. Indian
J Clin Biochem, 30 (1), 11-26.
Putra,  D.  A.  (2023).  Pengaruh  konsentrasi Zncl2  dan  cara  pemanasan  dalam pembentukan komplek metalloklorofil terhadap  sifat  fisik  dan  kimia  bubuk simplisia  sambiloto (Andrographis paniculata). Skripsi. Universitas Mercu Buana Yogyakarta.
Putri, W.D.R., Elok ,Z., dan N. Sholahudin.
(2012). Ekstraksi pewarna alami daun suji,  kajian  pengaruh  blanching  dan jenis bahan  pengekstrak. Jurnal Teknologi Hasil Pertanian . 4 (1) : 13 – 24.
Rachmawati  W.,dan  Liska  R.  (2020).
Potensi daun singkong sebagai pewarna makanan alami . Pharmacoscript , 17 (1).27-32.
Rohmat,  N.,  Ibrahim,  R.,  &  Riyadi,  P.  H. (2014). Pengaruh perbedaan suhu dan lama penyimpanan rumput laut sargassum polycystum terhadap stabilitas ekstrak kasar pigmen klorofil. Jurnal  Pengolahan  Dan Bioteknologi  Hasil  Perikanan.  3 (1). 118–126.
Saadilah M., Rostiati R., dan Syahraeni K.
(2018). Karakteristik kimia tepung biji kelor  ( Moringa  oleifera  iam .)  dari berbagai ketinggian tempat tumbuh . e - J.Agrotekbis. 6 (1). 100 –108. Seafast.  (2012). Pewarna  Alami  Untuk Pangan ; Jakarta.
Suryani.  (2020).  Pengaruh  variasi  jenis pengering terhdap karakter fisik, kimia dan antioksidan tepung pandan wangi. Yogyakarta : UGM.
Udiarta  P.,  Eko  N.D.,  dan  Romadhon.
(2015). Pengaruh penambahan MgCO 3 dan ZnCl 2 terhadap stabilitas kandungan  pigmen  klorofil  pada mikroalga Spirulina  platensis . Jurnal Saintek Perikanan . 10 (2). 114-118.
Usman, Fitri, I,  A.,  Suryani, C, L.  (2022).
Pengaruh  jenis  medium  sumber  Zn 2+
dan lama blanching terhadap aktivitas antioksidan bubuk Simplisia
Sambiloto (Andrographis paniculata).
Prosiding  Seminar  Nasional  Mini
Riset Mahasiswa . 1 (2), 54 – 66.
Wilandika, L., & Vita, P. (2017). Pengaruh suhu  terhadap  kadar  air  dan  aktivitas air dalam bahan pada kunyit ( Curcuma longa ) dengan alat pengering electrical oven. Jurnal Metana. 13 (2). 37-44.
Yilmaz        C,        Gokmen        V.        (2016). Chlorophyll in encyclopedia  of  food and  health. Caballero  B, Finglas  PM,
Toldra  F.  Waltham  (US):  Academic Press.
Zvezdanovic,  J.  B.,  Petrovic,  S.  M.,
Markovic,  D.  Z.,  Andjelkovic,  T.  D., and  Andjejkovic,  D.  H.  (2014). Electrospray ionization mass spectrometry combined with ultra high performance liquid chromatography in the  analysis  of  in  vitro  formation  of chlorophyll  complexes  with  copper and zinc. Journal of Serbian Chemical Society . 79 (6). 689–706.