DOI: http://dx.doi.org/10.29244/jhi.11.2.91-100
Tersedia online di http://journal.ipb.ac.id/index.php/jhi
Proliferasi In Vitro dan Aklimatisasi Pisang Kepok Unti Sayang (ABB) dengan Penambahan Bahan Organik
In Vitro Proliferation and Acclimatization of Kepok Banana Unti Sayang (ABB) with Addition of Organic Materials
Devinawati Rachmi 1 , Samanhudi 2,3* , dan Djoko Purnomo 3
Diterima 14 Januari 2020/Disetujui 08 April 2020

## ABSTRACT
Kepok  banana  (Musa  balbisiana)  contains  genome  B  with  high  browning  potential  and  low proliferation rate in vitro culture. One way to reduce browning and increase levels of vitamins and hormones, is by adding synthetic supplements and natural extracts. This study aimed to determine the proliferation of kepok banana Unti Sayang explants in fruit extract enriched media and its plantlet acclimatization ability. This research consisted of 2 experiments, the first stage was in vitro using a split plot completed randomized design with two factors: main plot (3 levels of temperature of culture room) and subplot (5 levels of fruit extracts). The second stage was the plantlet acclimatization using a split-plot completed randomized design with two factors: main plot (4 levels of acclimatization media) and subplot (4 levels of plantlet vigor). The results showed that the addition of fruit extracts to MS media affected meanwhile the incubation temperature difference did not affect the proliferation of kepok banana Unti Sayang explants. Papaya fruit extract (150 g L -1 )  and  coconut  water (100 ml  L -1 ) gave  the  same  results with  the  addition  of  synthetic vitamins  to  the proliferation and morphogenesis of kepok banana  Unti Sayang. Plantlet vigor in various acclimatization media is not significantly different, with the growth ability up to 92%.
Keywords: acclimatization, explants, fruit extracts, morphogenesis, vitamins

## ABSTRAK
Pisang kepok ( Musa balbisiana ) mengandung genom B dengan potensi pencoklatan tinggi dan tingkat proliferasi  rendah  dalam  kultur in  vitro .  Salah  satu  cara  mengurangi  pencoklatan  dan  meningkatkan kandungan vitamin serta hormon dalam media, yaitu dengan penambahan suplemen sintetik maupun ekstrak bahan  organik  alami.  Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui  proliferasi  eksplan  pisang  kepok  Unti  Sayang dengan media diperkaya ekstrak buah dan kemampuan aklimatisasi planletnya. Penelitian ini terdiri atas 2 percobaan, pertama tahap in vitro menggunakan Rancangan Acak Lengkap s plit plot dengan 2 faktor, yaitu main  plot (3  taraf  suhu  ruang  kultur)  dan subplot (5  taraf  ekstrak  buah).  Kedua,  tahap  aklimatisasi menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  s plit  plot dengan  2  faktor,  yaitu main  plot (4  taraf  media aklimatisasi) dan subplot (4 taraf vigor planlet). Hasil percobaan menunjukkan penambahan ekstrak buah pada  media  MS berpengaruh,  sedangkan  perbedaan suhu  inkubasi  tidak  berpengaruh  terhadap  proliferasi eksplan pisang kepok Unti Sayang. Media MS dengan penambahan ekstrak buah pepaya (150 g L -1 ) dan air kelapa (100 ml L -1 ) memberikan hasil yang tidak berbeda nyata dengan penambahan vitamin sintetik terhadap proliferasi  dan  morfogenesis  eksplan  pisang  kepok  Unti  Sayang.  Vigor  planlet  pada  berbagai  media aklimatisasi tidak berbeda nyata dengan kemampuan hidup mencapai 92%.
Kata kunci: aklimatisasi, eksplan, ekstrak buah, morfogenesis, vitamin
1 Program Studi Agronomi, Pascasarjana, Fakultas Pertanian, Universitas Sebelas Maret Jl. Ir. Sutami 36A, Surakarta 57126
2 Pusat Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Biodiversitas LPPM Universitas Sebelas Maret Jl. Ir. Sutami 36A, Surakarta 57126
3 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Sebelas Maret Jl. Ir. Sutami 36A, Surakarta 57126 E-mail : samanhudi@staff.uns.ac.id (*penulis korespondensi)

## PENDAHULUAN
Pisang kepok (ABB) merupakan kultivar mengandung genom B (Hapsari et al., 2015). Resmi dan Nair (2011) mengemukakan pisang  bergenom  B  memiliki  karakteristik tingginya tingkat pencoklatan ( browning ) pada eksplan  dalam  kultur in  vitro yang  dapat menghambat  pertumbuhan  eksplan,  bahkan menimbulkan  kematian  karena  tingginya senyawa  fenolik.  Ashraff et  al .  (2011) mengungkapkan buah tropis disinyalir mengandung antioksidan
(karotenoid, flavonoid,  fenolik,  vitamin  C,  vitamin  E, vitamin A, dan betalain) cukup tinggi sehingga mengurangi  aktivitas  oksidasi.  Carito et  al.
(2019) menjelaskan untuk mencegah pencoklatan pada eksplan ulin ( Eusideroxylon zwageri ) dengan merendam eskplan selama 24 jam  pada  media  MS  cair  dengan  penambahan asam  askorbat  1  mg  L -1 atau  pada  media  MS padat dengan penambahan arang aktif 4 g L -1 . Vitamin  merupakan  senyawa  organik esensial yang berperan merangsang pertumbuhan  jaringan  tanaman.  Secara  alami tumbuhan  dapat  menghasilkan  vitamin  untuk kebutuhannya sendiri, namun dalam teknik in vitro perlu  ditambahkan  sumber  vitamin eksogen.
Taiz dan Zeiger (2002)
mengemukakan koenzim biasanya vitamin dan bertindak sebagai pembawa (alat transportasi). Semua  reaksi  transaminasi  membutuhkan pyridoxal  phosphate  (vitamin  B6)  sebagai kofaktor.  Dan  (2008)  menjelaskan  aplikasi vitamin  C  sebagai  antioksidan  kuat  dapat mencegah pencoklatan sekaligus menstimulasi terjadinya organogenesis, embriogenesis somatik  dan  pertumbuhan  tunas  dalam mikropropagasi pada beragam spesies tanaman.
Suhu  mempengaruhi  fisiologi  dan morfologi  tanaman  baik  secara in  vitro maupun in  vivo .  Wahid et  al. (2007) mengungkapkan  cekaman  suhu  tinggi  pada tanaman berpengaruh terhadap proses fisiologis, seperti: respirasi, transpirasi, stabilitas  membran  sel,  fotosintesis,  dan kandungan air. Berdasarkan penelitian Talavera et  al. (2005)  planlet  kelapa  yang dipelihara  di  rumah  kaca  memiliki  laju fotosistesis  paling  tinggi,  daun  lebih  banyak, dan  bobot  kering  lebih  tinggi  dibandingkan dengan planlet in vitro yang dipelihara dalam laboratorium.
Kekuatan  vigor  planlet  yang  terlihat pada tahap aklimatisasi menandakan keberhasilan  proliferasi  dan  morfogenesis eksplan.  Faktor  utama  yang  mempengaruhi fisiologi  dan  morfologi  planlet  pada  tahap aklimatisasi, yaitu: suhu, cahaya, media tanam, sterilisasi lingkungan, dan air. Hazarika (2006) menjelaskan  abnormalitas  morfo-fisiologis pada  planlet  berupa:  malfungsi  stomata, efisiensi fotosintetik rendah, dan berkurangnya lapisan epicutivular wax pada daun, berpotensi mengurangi kemampuan adaptasi pada lingkungan ex vitro.
Secara  umum,  nutrisi  dan  lingkungan kultur mempunyai andil besar untuk keberhasilan  proliferasi  dan  morfogenesis eksplan  pisang  kepok  Unti  Sayang  menjadi planlet  dengan  kondisi  fisiologis  optimum. Berdasarkan  gambaran  umum  diatas,  tujuan penelitian  ini  untuk  mengetahui  penambahan ekstrak  buah  dan  perbedaan  suhu  terhadap proliferasi eksplan pisang kepok dan selanjutnya  menguji  vigoritas  planlet  pada tahap  aklimatisasi  untuk  menghasilkan  benih pisang  berkualitas  dalam  rangka  peningkatan produksi pisang nasional bermutu.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian in  vitro dilakukan  di Laboratorium Fisiologi Tumbuhan dan Bioteknologi  Fakutas  Pertanian  Universitas Sebelas  Maret  mulai  bulan  Mei  sampai September  2019.  Penelitian  aklimatisasi dilakukan di Screen House Fakultas Pertanian Universitas  Sebelas  Maret  mulai  bulan Oktober sampai Desember 2019.
Bahan tanam (eksplan) untuk kultur in vitro berupa  tunas  tunggal  (subkultur  ke-6) tanpa  daun  dan  akar  dengan  tinggi  ±  1  cm (dalam keadaan steril). Media  untuk kultur in vitro berupa  formula  Murashige  dan  Skoog (MS),  sukrosa,  ZPT  (BAP  dan  IAA),  ekstrak buah sesuai perlakuan (pepaya varietas Calina, pisang ‘Ambon Kuning’, dan melon hijau, air kelapa  muda),  vitamin  C,  asam  folat,  agar- agar,  dan aquadest .  Bahan  untuk  tahap aklimatisasi,  berupa:  planlet  hasil  percobaan pertama,  media  aklimatisasi  (sekam  bakar, kompos,  limbah  media  jamur  merang, top soil ), sungkup plastik, pupuk NPK (32-10-10), gelas plastik, dan tali rafia.
Alat  untuk  kultur in  vitro, berupa: blender  juicer ,  gelas  kimia,  saringan,  pipet volume,  timbangan  analitik,  pengaduk  gelas, spatula, pH meter, stirer hotplate , botol kultur, plastik wrap , skalpel , pinset , laminar air flow, petridish, rak  kultur, autoclave ,  dan  lampu spiritus.  Alat  untuk  aklimatisasi,  berupa: sprayer , scop ,  timbangan,  ember  besar, paranet 70%.

## Persiapan Media Kultur
Media  perlakuan  merupakan  media dasar MS (terdiri atas hara makro, mikro, dan tanpa  hormon)  ditambahkan  ekstrak  buah (pepaya  varietas  Calina,  pisang  ‘Ambon Kuning’, dan melon hijau) sebanyak 150 g L -1 . Khusus  untuk  air  kelapa  ditambahkan  ke semua media perlakuan sebanyak 100 ml L -1 . Ekstrak  buah  (matang  fisiologis)  disiapkan dengan mengupas dan memotong buah bagian tengah, selanjutnya dibersihkan lalu ditimbang (150  g),  kemudian  diblender  dan  disaring, setelah  itu  ditambahkan  ke  media  dasar  MS.
Gula  (30  g  L -1 )  dan  aquades  ditambahkan  ke dalam  larutan  MS  hingga  larutan  mencapai 1000  ml.  Pengukuran  pH  dilakukan  untuk mencapai  derajat  keasaman  antara  5.7-5.9, apabila  pH  larutan  kurang  dari  5.7  ditambah NaOH  0.1  N  dan  apabila  pH  lebih  dari  5.9 ditambah  HCl  0.1  N.  Setelah  derajat kemasaman  larutan  media  yang  dibutuhkan tercapai agar-agar ditambahkan sebanyak 7  g L -1 media.  Selanjutnya  larutan  media  diaduk dan dipanaskan sampai mendidih menggunakan stirer  hotplate. Larutan  media yang  telah  mendidih,  dituangkan  ke  dalam botol  kultur  masing-masing  sebanyak  25  ml dan segera ditutup rapat kemudian dimasukkan ke dalam autoklaf untuk disterilkan. Sterilisasi media dilakukan pada tekanan 1.5 kg.cm -2 dan suhu 121°C selama 1 jam.

## Kondisi Suhu Ruang Inkubasi
Eksplan  yang  ditanam  di  media perlakuan  diperlihara  pada  ruang  dan/atau kontainer dengan kisaran suhu sesuai perlakuan.  Perlakuan  suhu  inkubasi  terdiri atas: suhu ruangan 25±1°C (menggunakan air conditioner (AC))  dengan  penyinaran  lampu flouresence ; suhu ruangan 28±1°C (tanpa AC) dengan penyinaran lampu LED; dan suhu luar ruangan  31±1°C  dengan  sinar  matahari
ternaungi.  Wadah dan  ruang  inkubasi dipelihara  dalam  keadaan  steril  dengan penyemprotan atau pensterilan dengan alkohol 70%.

## Aklimatisasi
Planlet hasil kultur in vitro , selanjutnya di aklimatisasi pada berbagai media aklimatisasi.  Strerilisasi  media  aklimatisasi menggunakan  oven  selama  40  menit  dengan suhu  120⁰C.  Planlet  hasil kultur in  vitro disungkup  selama  3  minggu  untuk  menjaga kelembapan  iklim  mikro  (dalam  wadah  atau kontainer).  Setelah  3  minggu  disungkup, tanaman diletakkan pada lahan terbuka dengan naungan  paranet  70%.  Pemeliharaan  selama aklimatisasi  meliputi  penyiraman  setiap  hari (membasahi  seluruh  daun  dan  media  tanam menggunakan sprayer )  dan  pemupukan  NPK
(32-10-10)  untuk  daun  seminggu  sekali menggunakan sprayer .

## Analisis Statistik
1. Proliferasi  eksplan  pisang  kepok  pada media MS diperkaya ekstrak buah
Rancangan  penelitian  pada  tahap in vitro disusun  dalam  rancangan  acak  lengkap (RAL) dengan pola split plot . Penelitian terdiri atas  2  faktor,  yaitu: main  plot berupa perbedaan  suhu  ruang  inkubasi  (25±1°C, 28±1°C, dan 31±1°C) dan subplot berupa jenis media  dengan  penambahan  ekstrak  buah (tanpa  ekstrak,  suplemen  sintetik  (vitamin  C dan asam folat), ekstrak pisang, ekstrak melon, dan  ekstrak  pepaya).  Setiap  unit  percobaan berisi  2  eksplan  perbotol  diulang  sebanyak  4 kali.  Data  dianalisis  dengan  analisis  varian (ANOVA)  pada  taraf  α  =  5%,  apabila perlakuan  berpengaruh  nyata  dilanjutkan dengan Duncan Multiple Range Test (DMRT)
pada taraf kepercayaan 95%.
2. Vigor  planlet  pisang  kepok  pada berbagai media aklimatisasi
Rancangan penelitian pada  tahap aklimatisasi  disusun  dalam  rancangan  acak lengkap  (RAL)  dengan  pola split  plot terdiri atas  2  faktor,  yaitu: main  plot berupa  media aklimatisasi  dan subplot berupa  vigor  planlet hasil percobaan I. Setiap kombinasi perlakuan
diulang  sebanyak  3  kali.  Media  aklimatisasi berupa: M1 ( top soil dan limbah media jamur merang (1:1)); M2 ( top soil dan kompos (1:1)); M3  (sekam  bakar  dan  limbah  media  jamur merang  (1:1));  dan  M4  (sekam  bakar  dan kompos  (1:1)).  Vigor  planlet,  berupa:  P1 (planlet dari media MS); P2 (planlet dari media MS dengan penambahan vitamin sintetik); P3 (planlet  dari  media  MS  dengan  penambahan ekstrak melon); dan P4 (planlet dari media MS dengan  penambahan  ekstrak  pepaya).  Data dianalisis  dengan  analisis  varian  (ANOVA) pada  taraf  α  =  5%.Apabila  perlakuan berpengaruh  nyata  maka  dilanjutkan  dengan Duncan Multiple  Range  Test (DMRT)  pada taraf  kepercayaan  95%.  Hubungan  antar variabel dievaluasi analisis Korelasi Pearson.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Proliferasi  eksplan  pisang  kepok  pada media MS yang diperkaya ekstrak buah
Inisiasi  tunas,  daun  dan  akar  dapat distimulasi oleh media MS dengan penambahan  ekstrak  buah.  Ekstrak  pepaya, melon  dan  pisang  berpengaruh  terhadap proliferasi  dan  morfogenesis  eksplan  pisang
kepok  Unti  Sayang.  Jenis  ekstrak  buah  yang cukup  efektif  menggantikan  vitamin  sintetik untuk  proliferasi  dan  morfogenesis  eksplan pisang  kepok  Unti  Sayang  yaitu  ekstrak pepaya. Penambahan ekstrak pepaya (150 g L - 1 ) dan air kelapa (100 ml L -1 ) pada media MS cukup  efektif  menggantikan  vitamin  sintetik, ditunjukkan  oleh  hasil  tidak  berbeda  nyata pada  parameter  jumlah  tunas  (4.1),  jumlah daun  (7.4  helai),  jumlah  akar  (7.3),  panjang akar (6.3 cm) dan menunjukkan hasil tertinggi terhadap  parameter  tinggi  planlet  (8.96  cm) (Tabel 1).
Penambahan ekstrak pepaya menghasilkan  jumlah  tunas  tidak  berbeda nyata  dengan  jumlah  tunas  pada  media  MS dengan  penambahan  vitamin  sintetik,  diduga peran vitamin dan fitohormon (auksin) dalam ekstrak  pepaya  dapat  mencukupi  kebutuhan eksplan.  Sesuai  pernyataan  Taiz  dan  Zeiger (2004),  tunas  merupakan  tempat  sintesis auksin, selain sebagai faktor pendamping atau bertanggung  jawab  untuk  pertumbuhan  akar. Taiz et al . (2015) mengemukakan auksin  dan sitokinin  merupakan  fitohormon  atau  agen pensinyalan  yang  diperlukan  selama  fisiologi tumbuhan  berjalan,  meskipun  aplikasi  auksin eksogen  mungkin  memberi  sinyal  dan merangsang sintesis giberelin.
Tabel 1.   Pengaruh penambahan ekstrak buah pada media MS terhadap rata-rata pertumbuhan planlet pisang kepok Unti Sayang Media Jumlah Tunas Jumlah Daun (helai) Tinggi Planlet (cm) Jumlah Akar Panjang Akar (cm) Bobot Segar Planlet (g) Interaksi MS 3.5 b 7.9 b 6.01 b 9.7 c 10.1 c 2.27 bc (-) MS + Vitamin Sintetik 4.3 b 7.9 b 5.24 b 7.5 c 4.2 b 1.72 b (-) MS + Ekstrak Pepaya 4.1 b 7.4 b 8.96 c 7.3 c 6.3 bc 1.56 ab (-) MS + Ekstrak Melon 2.1 ab 5.3 b 7.02 bc 3.8 b 6.2 b 1.41 ab (-) MS + Ekstrak Pisang 0.7 a 1.3 a 1.17 a 0.9 a 0.4 a 1.01 a (-)
Keterangan :   Angka yang diikuti huruf sama pada setiap kolom menunjukkan tidak berbeda nyata menurut DMRT (α  =  5%).  Tanda (-)  menunjukkan tidak  ada interaksi  nyata  antara  antara ekstrak buah dengan suhu inkubasi.
Berdasarkan  penelitian  Garuda  dan Roadah (2015) penambahan senyawa organik kompleks  berupa  ekstrak  melon  memberikan pertumbuhan  vegetatif  terbaik  pada  anggrek Dendrobium . Planlet anggrek dengan perlakuan ekstrak melon menunjukkan keragaan  tanaman  yang  lebih  kekar,  yang merupakan  ciri  tanaman  dapat  bertahan  pada saat aklimatisasi. Hasil penelitian lainnya oleh Wulansari et  al .  (2017)  menunjukkan  bahwa peningkatan  konsentrasi  vitamin  (tiamin, piridoksin,  niasin, dan glisin) sebanyak 8 kali lipat  pada  media  MS  dapat  meningkatkan panjang petiol (6.01±1.71 cm), jumlah daun (3 helai)  dan  jumlah  akar  (11.47±4.03)  pada eksplan Talas Bentul. Hasil penelitian Bella et al . (2016) menunjukkan pemberian  2 mg L -1
BAP  lebih  efektif  dan  efisien  meningkatkan jumlah tunas dan  tinggi  planlet  dibandingkan menggunakan 4  mg  L -1 2-iP  dan  kinetin atau TDZ sebanyak 0.08  mg L -1 pada  multiplikasi pisang kepok.
Penambahan ekstrak pisang (150 g L -1 ) dan  air  kelapa  (100  ml  L -1 )  pada  media  MS sangat menghambat proliferasi dan morfogenesis  eksplan  pisang  kepok  Unti Sayang,  ditunjukkan  dengan  hasil  terendah terhadap  seluruh  parameter  pertumbuhan (tunas,  daun,  akar,  tinggi,  dan  bobot  segar). Faktor  eksogen  yang  diduga  mempengaruhi keterlambatan proliferasi tersebut yaitu ekstrak  pisang  memiliki  kandungan  gula cukup tinggi  dan asam askorbat yang rendah. Berdasarkan Food Data Central USDA (2019) kandungan gula total per 100 g pepaya, melon, dan pisang masing-masing (g): 7.82, 8.12, dan 12.23. Kandungan asam askorbat total per 100 g  pepaya,  melon,  dan  pisang  masing-masing (g):  60.9,  18,  dan  8.7.  Harahap  (2012) menjelaskan  konsentrasi  gula  tinggi  dapat mengikat senyawa fenolik membentuk
glukosida, dapat menghambat proses pembelahan sel. Hutami (2008) mengutarakan toksisitas  fenolik  bermula  dari  aktivitas senyawa  fenolik  yang  teroksidasi  (dapat disebabkan  pelukaan  dan  lainnya),  berubah menjadi  senyawa  lain  (polimerase)  atau quinon. Ngomuo et al . (2013) mengemukakan pertumbuhan  eksplan  yang  lambat  dalam membentuk  tunas  dapat  dipengaruhi  faktor endogen pada eksplan tersebut.

## Proliferasi  eksplan  pisang  kepok  Unti Sayang pada suhu inkubasi berbeda
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan faktor suhu tidak memberikan pengaruh nyata terhadap proliferasi eksplan pisang kepok Unti Sayang  dan  tidak  terjadi  interaksi  antara perbedaan suhu inkubasi dengan jenis media in vitro . Suhu ruang inkubasi  pada kisaran suhu 24-32°C  tidak  berpengaruh  nyata  terhadap proliferasi (Tabel 2).
Suhu tinggi dapat meningkatkan metabolisme, seperti: respirasi dan perombakan  karbohidrat.  Taiz  dan  Zeiger (2004)  menjelaskan  paparan  suhu  tinggi menghambat  fotosintesis  pada  daun  sebelum respirasi,  akibatnya  fotosintesis  tidak  dapat menggantikan karbon yang dikonsumsi dalam respirasi  dan  terjadi  penurunan  ketersediaan karbohidrat  pada  sel  tumbuhan.  Berdasarkan penelitian Tokoporo et al . (2013) pertumbuhan eksplan  pisang  Cavendish  pada  media  MS pada suhu 22°C lebih cepat membentuk tajuk dan  akar,  namun  lebih  cepat  menurun kemampuan  hidupnya  setelah  5  bulan dibandingkan  pertumbuhan  pada  dengan media  MS pada  suhu  15°C, dengan kemampuan hidupnya dapat bertahan sampai 6
bulan.
Tabel 2.   Pengaruh suhu ruang  inkubasi terhadap rata-rata pertumbuhan  planlet  pisang  kepok  Unti
Sayang Suhu Jumlah Tunas Jumlah Daun (helai) Tinggi Planlet (cm) Jumlah Akar Panjang Akar (cm) Bobot Segar Planlet (g) Interaksi 25±1⁰C 2.2 5.1 5.47 4.9 6.3 1.48 (-) 28±1⁰C 3.6 6.3 5.87 6.2 5.1 1.89 (-) 31±1⁰C 3.1 6.6 5.70 6.5 5.2 1.44 (-)
Keterangan :    Angka yang diikuti huruf sama pada setiap kolom menunjukkan tidak berbeda nyata menurut DMRT (α = 5%). Tanda (-) menunjukkan tidak ada interaksi nyata antara suhu inkubasi dengan ekstrak buah.
Pengaruh  suhu  inkubasi  terhadap pertumbuhan  tunas  diungkapkan  oleh  Padda dan  Picha  (2008)  dan  Albert et  al .  (2009), dimana  terjadi  hubungan  antara  suhu  dan kadar  senyawa  fenolik  dalam  jaringan tanaman, suhu lebih rendah dapat meningkatkan  kadar  senyawa  fenolik  lebih tinggi.  Hal  ini  diduga  terkait  dengan peningkatan aktivitas
fenilalanin ammonialyase (PAL) pada suhu lebih rendah, mengingat  PAL  merupakan  enzim  penting dalam berbagai biogenesis senyawa fenolik.

## Vigor  planlet  pisang  kepok  Unti  Sayang pada tahap aklimatisasi
Vigor planlet pisang kepok Unti Sayang pada  fase  aklimatisasi  tidak  berbeda  nyata pada semua parameter pengamatan. Pertumbuhan  planlet  pisang  kepok  Unti Sayang tampak seragam pada berbagai media aklimatisasi.  Vigor  planlet  asal  media  yang diperkaya  ekstrak  pepaya  menghasilkan jumlah daun (6.2 helai), diameter batang (2.18 cm),  dan  tinggi  tanaman  (21.03  cm)  tidak berbeda nyata dengan vigor planlet diperkaya dengan vitamin sintetik yang memiliki jumlah daun  (5.8  helai),  diameter  batang  (1.95  cm), dan tinggi tanaman (18.66 cm) (Tabel 3). Berdasarkan  hasil  analisis  korelasi Pearson,  hubungan  antara  tinggi  dengan jumlah  daun  dan  diameter  batang  bernilai positif kuat, masing-masing korelasi (r) = 0.88 dan  0.79  (level  0.01)  dapat  diartikan  tinggi tanaman  sangat ditentukan oleh  pertumbuhan
daun  dan  diameter  batang  sehingga  semakin tinggi  tanaman  maka  jumlah  daun  semakin banyak  dan  diameter  batang  semakin  lebar (Gambar 1).

## Pertumbuhan  planlet  pisang  kepok  pada berbagai media aklimatisasi
Semua media aklimatisasi tidak berpengaruh  nyata  terhadap  pertumbuhan planlet pisang kepok Unti Sayang pada seluruh parameter pengamatan. Faktor media aklimatisasi  dan  jenis  planlet  juga  tidak menunjukkan  interaksi  yang  nyata  (Tabel  4). Pertumbuhan  planlet  pisang  kepok  Unti Sayang pada campuran top soil , sekam bakar, limbah  media  jamur  merang,  dan  kompos menunjukkan hasil hampir seragam.
Persentase  keberhasilan  hidup  benih  pisang kepok Unti Sayang sampai 3 BST pada tahap aklimatisasi sebesar 83 – 92%.
Faktor  jenis  media  aklimatisasi  dan jenis  nutrisi  pada  tahap  multiplikasi  tidak berpengaruh  terhadap  pertumbuhan dan perkembangan tanaman selama tahap aklimatisasi,  diduga  karena  proses  fisiologi dan daya adaptasi planlet semakin besar pada tahap aklimatisasi. Planlet pada limbah media jamur  merang  ataupun  kompos  dengan campuran top  soil maupun  sekam  bakar menunjukkan tidak berbeda nyata pertumbuhan  dan  perkembangannya  selama aklimatisasi.
Tabel 3. Rerata vigor planlet pisang kepok Unti Sayang (3 BST)
Vigor Jumlah Daun (helai) Diameter Batang (cm) Tinggi Tanaman (cm) Interaksi Planlet dari Media MS 5.7 2.06 20.01 (-) Planlet dari Media MS + Vitamin Sintetik 5.8 1.95 18.66 (-) Planlet dari Media MS + Ekstrak Melon 5.3 1.99 18.81 (-) Planlet dari Media MS + Ekstrak Pepaya 6.2 2.18 21.03 (-)
Keterangan :   Angka yang diikuti huruf sama pada setiap kolom menunjukkan tidak berbeda nyata menurut DMRT (α  =  5%).  Tanda  (-)  menunjukkan  tidak  ada  interaksi  nyata  antara  vigor  planlet  dengan  media aklimatisasi.
Tabel 4. Pertumbuhan planlet pisang kepok Unti Sayang pada berbagai media aklimatisasi (3 BST)
Media Jumlah Daun (helai) Diameter Batang (cm) Tinggi Tanaman (cm) Interaksi Top soil + limbah media jamur merang (1:1) 5.8 2.08 19.58 (-) Top soil + kompos (1:1) 5.8 2.01 19.25 (-) Sekam bakar + limbah media jamur merang (1:1) 5.4 2.04 19.16 (-) Sekam bakar + kompos (1:1) 5.9 2.07 20.53 (-)
Keterangan :   Angka yang diikuti huruf sama pada setiap kolom menunjukkan tidak berbeda nyata menurut DMRT (α  =  5%).  Tanda  (-)  menunjukkan tidak  ada interaksi  nyata antara  media  aklimatisasi  dengan  vigor planlet.
(a)
(b) Gambar 1. Regresi: (a) tinggi dengan jumlah daun dan (b) tinggi dengan diameter batang T = 3.42JD R² = 0.76 0 5 10 15 20 25 30 0 2 4 6 8 10 T in ggi (c m ) Jumlah Daun (helai) T = 4.79DB R² = 0.63 0 5 10 15 20 25 30 35 0 2 4 6 8 T in ggi (c m ) Diameter Batang (cm)
(a) (b) (c)
Gambar 2.  Pertumbuhan planlet pisang kapok Unti Sayang pada tahap aklimatisasi: (a) 1 bulan, (b) 2 bulan, dan (c) 3 bulan
Hasil  penelitian  Avivi et  al .  (2013) menunjukkan  penggunaan  media  campuran tanah,  kompos,  dan  pasir  (1:1:1)  mampu menghasilkan  90%  planlet  hidup  hingga  3 bulan pengamatan. Secara umum, media jamur merang  mengandung  bahan-bahan,  seperti: jerami padi atau merang, limbah pabrik kertas, dan  limbah  kelapa  sawit.  Kandungan  bahan organik  pada  media  jamur  merang  biasanya ditambahkan kotoran ayam, dedak, kapas, dan kapur (Munawar et al ., 2017). Jerami padi rata- rata mengandung selulosa 36%,  hemiselulosa 24%, lignin 15.6%,  kadar air 24%,  abu 18%, karbon  48%,    hidrogen  6%,  nitrogen  1.05% dan sulfur 0.14% (Agency, 2013). Kandungan kimia  dari  kompos  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  tidak  banyak  berbeda  dengan kandungan  kimia  pada  limbah  media  jamur merang.  Komposisi  kimia  dari  kompos  yang digunakan  sebagai  berikut:  N  total  1.35%, P 2 O 5 1.11%, K 2 O  1.22%,  C  organik  22.61%, kadar air 23.14%, C/N 14.31, dan pH 7.01.

## KESIMPULAN
Proliferasi  eksplan  pisang  kepok  Unti Sayang dipengaruhi oleh penambahan ekstrak buah.  Media MS dengan penambahan ekstrak buah pepaya (150 g L -1 ) dan air kelapa (100 ml L -1 )  tidak  berbeda  nyata  dengan  penambahan vitamin sintetik, terhadap kecepatan proliferasi dan  morfogenesis  pada  parameter  jumlah tunas, jumlah daun, jumlah akar, panjang akar, dan bobot segar planlet dan menunjukkan hasil tertinggi  pada  parameter  tinggi  planlet. Penggantian  vitamin  sintetik  dengan  ekstrak buah  diharapkan  dapat  mengefisienkan  biaya bahan kimia. Proliferasi eksplan pisang kepok Unti  Sayang  tidak  dipengaruhi  suhu  ruang inkubasi.  Hasil  proliferasi  eksplan  pisang kepok  pada  suhu  ruangan  dengan  pendingin
tidak  berbeda  dengan  suhu  ruangan  tanpa pendingin sehingga perawatan eksplan dengan ruangan tanpa pendingin dapat mengefisienkan  biaya  listrik.  Pertumbuhan dan  perkembangan  planlet  pisang kepok Unti Sayang tidak dipengaruhi oleh media aklimatisasi dengan kemampuan hidup mencapai 92%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  Direktorat  Riset  dan  Pengabdian Masyarakat,  Kementerian  Riset,  Teknologi, dan  Pendidikan  Tinggi  Republik  Indonesia, yang  telah  membiayai  penelitian  ini  melalui skema Penelitian Tesis Magister (PTM) tahun anggaran 2019.

## DAFTAR PUSTAKA
Agency,  N.L.  2013.  Rice  Strow  and  Wheat Straw. Netherlands: NL Agency Ministry of Economic Affairs.
Albert,  A.,  V.  Sareedenchai,  W.  Heller,  H.K Seidlitz,  C.  Zidorn.  2009.  Temperature  is the key to altitudinal variation of phenolics in  Arnica  montana  L.  cv.  ARBO. Oecologia. 160: 1-8.
Ashraff,  M.A.,  M.J.  Maah,  I.  Yusoff,  K. Mahmood,  A.  Wajid.  2011.  Study  of antioxidant  potential  of  tropical  fruit. int . Journal of Bioscience, Biochemistry and Bioinformatics. 1(1): 53-57.
Avivi, S., S.H. Soedarmo, P.A. Prasetyo. 2013. Multiplikasi tunas dan aklimatisasi tiga varietas pisang: raja nangka, kepok, dan mas. J. Hort. Indonesia. 4(2): 83-89.
Bella,  D.R.S.,  E.  Suminar,  A.  Nuraini,  A. Ismail.  2016.  Pengujian  efektivitas berbagai jenis dan konsentrasi sitokinin terhadap  multiplikasi  tunas  mikro pisang ( Musa paradisiaca L.) secara in vitro . Jurnal Kultivasi. 15(2): 74-80.
Carito,  T.R.,  Sulistiawati,  R.  Nirmala.  2019. Metode  mengatasi  browning  pada eksplan  ulin  ( Eusideroxylon  zwageri ) untuk inisiasi regenerasi secara in vitro . J.  Agroekoteknologi  Tropika  Lembab. 1(2): 106-117.
Dan,  Y.  2008.  Biological  functions  of antioxidants in plant transformation. in vitro cell. Dev. Biol-Plant. 44: 149-161.
Exportation  of  Food  Data  Central  USDA.
2019. https://fdc.nal.usda.gov.
[17 November 2019]. Garuda,  S.  Raodah.  2015.  Pengaruh  berbagai senyawa  organik  kompleks    terhadap planlet anggrek Dendrobium. J. Pertanian Agros. 17 (1): 121-131.
Hapsari,  L.,  D.A.  Lestari,  A.  Masrum.  2015. Album  Koleksi  Pisang  Kebun  Raya Purwodadi  Seri  1:  2010-2015.  Kebun Raya  Purwodadi:  Unit  Pelaksanan Teknis  Balai  Konservasi  Tumbuhan, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia.
Harahap, F. 2012. Fisiologi Tumbuhan: Suatu Pengantar. Unimed Press, Medan.
Hazarika,  B.N.  2006.  Morpho-physiological disorders  in in  vitro culture  of  plants . Science Hort . 108.
Hutami,  S.  2008.  Masalah  pencoklatan  pada kultur  jaringan.  Jurnal  Agro  Biogen. 4(2): 83-88.
Munawar,  F.R.,  J.G.  Kartika.  2017.  Produksi dan kualitas jamur merang ( Volvariella volvacea )  pada  kelompok  tani  “Mitra Usaha”  Kabupaten  Karawang.  Bul. Agrohorti. 5(2): 264-273.
Ngomuo, M., E. Mneney, P. Ndakidemi. 2013. The  effect  of  auxins  and  cytokinin  on growth and development  of ( Musa sp.) var.  “Yangambi”  explanted  in  tissue culture.  American  J.  Plant  Sciences. 4: 2174-2180.
Padda, M.S., D.H. Picha. 2008. Effect  of low temperature storage on phenolic composition  and  antioxidant  activity  of sweet potatoes. Postharvest Biol. Tech. 47: 176-180.
Resmi, L., A.S. Nair. 2011. Differential effect of  cytokinins  in  micropropagation  of diploid and triploid Musa cultivar Int. J. Integrative Biol. II (1): 35-8.
Taiz,  L.,  E.  Zeiger. 2002.  Plant  Physiology, 3rd edn. Sunderland, MA: Sinauer.
Taiz, L., E.  Zeiger. 2004. Fisiologia  Vegetal.
Artmed, Porto Alegre.719p.
Taiz,  L.,  E.  Zeiger.,  Moller,  I.M.  Murphy  A.
2015. Plant Physiology and Development. 6.ed. New York: Sinauer Associates.761p.
Talavera,  C.,  F.  Contreras,  F.  Espadas,  G. Fuentes, J.M. Santamaria. 2005. Cultivating  in  vitro  coconut  palms ( Coconut  nucifera )  under  glasshouse conditions with natural lights, improves in vitro photosynthesis nursery survival and  growth.  Plant  Cell,  Tissue  and Organ  Culture.  83:  287−292.  DOI 10.1007/s11240-005-7052-2.
Tokoporo,  G.L.,  A.A.  Elhassan,  M.A.  Ali. 2013.  Effect  of  nutrient  medium concentration  and  temperature  on shortterm in vitro conservation of shoot tip  explants  of  banana.  JONARES.  1: 37-40.
Wahid, A, S. Gelani, M. Ashrad, M.R. Foolad. 2007.  Heat  tolerance  in  plant:  an averview.  Environ.  Exp.  Bot . 61:  199- 223.
Wulansari,  A.,  D.R.  Wulandari,  A.F.  Martin,
L.Sari, T.M. Ermayanti. 2017. Pengaruh peningkatan konsentrasi vitamin  terhadap  pertumbuhan  talas bentul  tetraploid  secara in  vitro .  Hal. 445-451. Dalam R.M. Hasby, R.Taufiq (eds.).  Prosiding  Seminar  Nasional
Biologi  (SEMABIO).  Pemanfaatan Biodiversitas  Berbasis  Kearifan  Lokal. Bandung, April 2017.