POTENSI Azotobacter spp. (DARI  LABAN PASANG SURUT

## KALIMANTAN  SELATAN)  DALAM  MENGHASILKAN Indole Acetic Acid (IAA)
The Potency of Azotobacter spp.Isolated  from  Tidal Land  of South Kalimantan to Produce Indole Acetic Acids (IAA)
Fakhrur Razie 1 dan An as Iswandi 2
1 Jurusan Tanah Fakultas Pertanian Universitas Lambung Mangkurat Jl.  A.  Yani KM.36  Banjarbaru Kalimantan Selatan (70714) Tel./Fax.  0511-772254 Email:  fakhrurrazie@yahoo.com
2 Departemen Ilmu Tanah dan  Sumberdaya Lahan Fakultas Pertanian Institut Pertanian Bogor,  Kampus IPB  Darmaga,  16680 Bogor

## ABSTRACT
Tidal  land area  is  considered as  the  most frigile  ecosystems.  To  open  this  area  as  agricultural land has  to be done carefully.  To  reduce  the  risk  of declining the  environmental quality  of tidal swa,,!p  area due  to  the  agricultural activity,  lhe area  should  be  managed properly  and Wisely  especially  when  using  agrochemicals  such  as fertilizers  and pesticides.  In relation  to  this,  the  use  of biofertilizer  such  as  Azotobacter  spp,  a  nitrogen fIXing  bacterium  and  IAA  producer,  might be important  thingfor this area.
The  aims  of this  experiments  was  to  study  the  ability  of Azotobacter  isolated from  rice'  rhizophere  grown  in  tidal swamp area  of South  Kalimantan,  in producing IAA  to  stimulate the growth  of roots  of rice  cultivar  I R-64.  The  parameters used to  evaluate  the  effect  of Azotobacter  inoculation  were  the  increase  of the  surface  area  of  root,  length  of roots,  total length of roots,  fresh,  dry weight of rice IR-64 roots and the growth of root hairs.
The results showed that Azotobacter produced  less IAA  in the media containing Urea (18.28-35.54 ppm IAA) compared to  Azotobacter grown  in media  without Urea (33.89 - 42.01  ppm IAA).  Azotobacter T.M. UNST.3 produced  the highest IAA (42.01  ppm),  therefore they were able to  increase the surface of roots,  increase the  length and weight of roots of rice cultivar IR-64 compared to other Azotobacter strains.  In  media containing Urea,  Azotobacter RG 3.62 produced  the least IAA  (/8.29 ppm  IAA)  compared to  other Azotobacter strains.  However,  this particular Azotobacter strain was able to increase the surface area  of root,  increased  the  number of root hairs compared to  other  strains.
Key  words:  Azotobacter,  Indole Acetic Acid,  tidal land area

## PENDAHULUAN
Penggunaan  pupuk  anorganik untuk  memenuhi kebutuhan  hara tanaman padi di daerah pasang surut kurang efesien.  Hal  ini  disebabkan  karena  sebagian  besar  unsur hara terbawa  ke  luar  dari  lingkungan  perakaran  padi  akibat air pasang surut. Untuk meningkatl<an efisiensi pemupukkan  di  daerah  pasang  surut  beberapa  cara  telah dilakukan  seperti  melalui  pengaturan  waktu  pember ian pupuk,  penggunaan  pupuk  lambat  tersedia (slow  release fertilizer) dan  perbaikan  cara  penempatan  pupuk  sehingga tanaman mudah mengambil unsur hara.
Kemampuan  padi  dalam  mengambil  unsur  hara tergantung  pada  luas  daerah  jelajah  akar  dan  luas permukaan  akar  yang  dapat  menjerap  unsur  hara.  Untuk lebih  meningkatkan  efektifitas  pemupukan,  usaha  yang dapat  dilakukan  adalah  merangsang  perkembangan  akar dan  memperbanyak  bulu-bulu  akar. Pertumbuhan  akar tanaman  padi  dapat  dirangsang  dengan  pember ian  zat pengatur tumbuh seperti  IAA.
Bakteri  penambaf N2 atmosfer  (seperti Azotobacter spp.)  di  lingkungan  perakaran  tan am an  padi  di  daerah pasang  surut diketahui  memiliki  peranan ganda yaitu  selain membantu  menambat N2 dari  udara, Azotobacter juga menghasilkan  IAA  sehingga  dapat  merangsang  perkem-
bangan  akar tanaman  padi. Azotobacter dari  rizosfer  padi varitas  IR-64  di  lahan  rawa  (gambut)  dilaporkan  dapat meningkatkan  serapan  hara  nitrogen  oleh  padi  varitas  IR- 64  umur  6  minggu  sampai  188%  (Iswandi,  2000). Azotobacter T.B.PDST.2b  dan  T.HM.BPMT.2b  mampu memasok  N  untuk  pertumbuhan  awal  tanaman  padi  IR-64 masing-masing  sebesar  2.34  dan  2.14%. Kemampuan kedua Azotobacter ini  sudah  menyamai  pasokan  N  dari pupuk urea  sebesar 2.2% N (Razie, 2003).
Selain memiliki kemampuan menambat Nz, Azotobacter juga memiliki  kemampuan mensintesis harmon pertumbuhan  tanaman (Fitohormon), seperti indole  acetic acid (IAA)  yang  merupakan  senyawa aktif dari  auxin.  EI- khawas  dan  Adachi  (1999)  menemukan  bahwa  terjadi penambahan  panjang  akar,  luas  permukaan  akar,  hobot kering  dan  basah  akar,  dan  ditemukannya  rambut akar  dan akar  lateral pada  padi varietas  Chiyonishiki  yang diinokulasi  dengan  bakteri  penambat  Nz atmosfer  seperti Azospirillum  brasiliense dan Klebsiella  pneumoniae. Sehubungan  dengan  itu,  dalam  penelitian  ini  dilakukan pengujian apakah Azotobacter yang  diisolasi dari persawahan  pasang surut Kalimantan Selatanjuga memiliki kemampuan  menghasilkan  IAA  sehingga  mendukung pertumbuhan akar padi  IR-64.
Fakhntr  Razie dan  Anas lswandi.  2OOS.  Potensi Azotobacter spp.  (Dari  lahan  pasang SUntt  Kalimantan  Selatan)  dalam menghasilkan  Indole Acetic Acid  (IAA). J. Tanah  Lingk.,  7(1):3S-39

## Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  kemampuan

## Azotobacter  yang  diisolasi  dari  daerah  pasang  surut
Kalimantan  Selatan dalam  meningkatkan  pertumbuhan akar padi  varitas  IR-64  yang  disebabkan  oleh  lAA  yang dihasilkan oleh Azotobacter tersebut.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat
Isolat Azotobacter  spp.  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  berasal  dari  persawahan  daerah  pasang  surut Kalimantan  Selatan,  yaitu Azotobacter  T.B.MGSR.l; T.B.PDST.2b;  T.M.UNST.3;  RG.3.l7;  RG.3.18;  RG.3.35 dan  RG.3.62.  Sebagai  pembanding digunakan Azotobacter 07.1 ffNHIII  merupakan  koleksi  Laboratorium  Biologi Tanah  Departemen  Ilmu  Tanah  dan  Sumberdaya  Lahan, Fakultas  Pertanian  Institut  Pertanian  Bogor.  Padi  varietas IR-64  diperoleh  dari  Dinas  Pertanian  Tanaman  Pangan Kabupaten  Banjar  Kalimantan  Selatan. Media  yang digunakan  untuk memperbanyak Azotobacter  adalah Nitrogen  Free  Media  (NFM)  (Atlas,  1997),  dan  media Nutrient  Broth (NB)  serta  larutan  hara menurut Yoshida et at.  (1976 dalam  IRRI, 2003).
Untuk  mengamati  perkembangan  akar  digunakan  foto stereo  mikroskop  merek "Zeiss"  model  Stemi  2000c  dan menetapkan  IAA  yang  dihasilkan  menggunakan  HPLC merek "Shimadzu  Liquid  Chrimatograph  LC-3A"  dengan Detector  Absorbance  Spectrophotometric  pada  panjang gelombang 254 nm.

## Metodologi
Penelitian  terdiri  dari  dua  percobaan. Percobaan pertama  merupakan  percobaan  penanaman  pada  media Yoshida  yang  tidak  ditambah  urea.  Perlakuan  terdiri  dari inokulasi  media dengan Azotobacter dengan  lima perlakuan yaitu  :  kontrol  (tanpa  inokulasi);  inokulasi  dengan Azotobacter  T.B.MGSR.l;  T.B.PDST.2b;  T.M.UNST.3; 07.1rrNHIII.  Perlakuan  dirancang  dengan  menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  dengan  tiga ulangan.  Uji  lanjut yang  digunakan  adalah  Duncan  Multiple  Range  Test (DMRT).  Pada  percobaan  kedua,  sarna  dengan  percobaan pertama tetapi  menggunakan  larutan  Urea  (40  ppm N) dan inokulan Azotobacter  yang  diuji  adalah  Azotobacter RG.3.17;  RG.3.18;  RG.3.35;  RG.3.62;  T.B.PDST.2b  dan 07.lrrNHIII.  Setiap perlakuan  diu lang  tiga kali.

## Pelaksanaan
Persiapan dan perkecambahan benih IR-64
Benih  padi  IR-64  disterilkan  permukaan  benihnya dengan  merendam  benih  larutan  H 2 0 2 30%  selama  satu menit  dan  dibilas  dengan  aquades  steril  sebanyak  empat kali. Benih  yang  telah  steril  direndam  semalam  dalam aquades  steril  (Iswandi,  1999). Benih  yang  telah  steril dikecambahkan pada kertas merang steril yang dilembabkan  dengan  air  steril  dan  disimpan  ditempat  yang gelap  selama  2-3  hari.  Selama  penyimpanan  kelembaban kertas merang dijaga agar benih dapat tumbuh dengan baik.

## Persiapan media tumbuh
Media  tumbuh  benih  padi  yang  digunakan  adalah tabung reaksi  150 ml  yang diberi  media agar dengan larutan hara  Yoshida  (0.0 I %  agar). Pada  percobaan pertama, larutan  hara  Yoshida  tidak  diberi  pupuk  Urea  sedangkan pada  percobaan  kedua,  larutan  Yoshida  diberi Urea sebanyak  40  ppm  N. Media  tumbuh  tersebut  disteril menggunakan  autoklaf  pada  temperatur  120°C  dan  pada tekanan 0.1  MPa.
Persia pan inokulan dan inokulasi Azotobacter
Isolat Azotobacter murni diperbanyak dengan menggunakan 50 ml  media Nutrient Broth, dikocok  selama tiga hari  dengan  kecepatan  120 rpm pada temperatur ruang. Inokulasi Azotobacter  dilakukan  sebelum  penanaman  padi pada  media  Yoshida.  Setiap  tabung  reaksi  diberikan sebanyak  10 8 sel (I ml) Azotobacter.
Penanaman padi IR-64
Benih Padi IR64 steril yang berkecambah ditumbuhkan  pada  media  Yoshida  yang  telah  diinokulasi dengan Azotobacter dalam tabung reaksi  berukuran  150 ml. Setiap  media  dimasukan  satu  benih  padi  steril  yang  telah dikecambahkan.  Selanjutnya tanaman dibiarkan tumbuh di tempat yang mendapat cahaya selama tiga minggu.

## Pengamatan
Kemampuan Azotobacter dalam  meng-hasilkan Indole Acetic  Acid  pada  media  Yoshida  dilakukan  setelah ditumbuhkan  72  jam  sesuai  dengan  metode  yang dikemukakan  oleh  Pratiwi  (1999). Setelah  tanaman berumur  tiga  minggu  dilakukan  pengamatan  terhadap peubah-peubah:
I. Panjang  dan  total  panjang  akar  diukur  menggunakan metode Scan  menggunakan  SCI-SCAN  Image  Analysis Software versi 2.0 menurut Kirchof dan Pender (1993),
2.  Luas  permukaan  akar  menggunakan  metode Gravimelri menggunakan  larutan  Ca(N0 3)2 (Carley  dan  Watson, 1966),  Akar tanaman  padi  yang telah dikering udarabn dicelupkan pada larutan  Ca(N0 3 h yang diletakan di alas neraca  analitik  selama  beberapa  detik  hingga  seluruh permukaan  akar  terselimuti  larutan. Selanjutnya ditiriskan  dalam  beberapa detik.  Luas  permukaan  akar dihitung berdasarkan  selisih dari  berat larutan Ca(N~h sebelum dan sesudah dicelup oleh akar.
3.  Bobot basah dan bobot kering akar,
4.  Rambut akar sekunder secara mikroskopik.  Satu potong akar sekunder tanaman  pada petridish yang  berisi  10 ml aquadest dan selanjutnya diletakkan di bawah mikroskop  untuk  pengamatan.  Pengambilan  foto  akar dilakukan pada pembesaran 20 hingga 62.5 kali.

## Anatisa data
Untuk mengetahui  pengaruh dari Azotobacterterhadap peubah-peubah  yang  diukur  dilakukan  analjsis  ragam dengan  uji  lanjut  menggunakan  uji  Duncan  Multiple Range Test (DMRT) pada tarafnyata 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari  hasil  analisis  ragam  terhadap  peubah-peubah yang  diamati, Azotobacter yang  diinokulasi  pada  media yang  tidak  diberi  pupuk  urea  berpengaruh  nyata  terhadap peningkatan  luas  permukaan,  panjang dan  bobot  basah  akar padi  IR-64  setelah  tiga  minggu.  Sedangkan Azotobacter yang  diinokulasi  pada  media  yang  diberi  pupuk  Urea berpengaruh  nyata  hanya  terhadap  luas  permukaan  akar padi  IR-64.
Azotobacter spp.  dari  persawahan  daerah  pasang  surut Kalimantan  Selatan  yang diinokulasikan  pada tanaman padi IR-64  baik  pada  media  yang  tidak  diberi  ataupun  diberi pupuk  urea menunjukkan  kemampuannya dalam  menambah luas  permukaan  akar padi  IR-64  dapat dilihat  pada Tabel  I. Jumlah  IAA  yang  dihasilkan  oleh Azotobacter T.B. PDST.2b  yang  tidak  diberi  pupuk  urea  (36,67  ppm  IAA) relatif  lebih  tinggi  dibanding Azotobacter T.B.  PDST.2b yang  diberi  pupuk  urea  (25,57  ppm  fAA),  seeara  umum juga  terlihat  bahwa  Jumlah  fAA  yang  dihasilkan  oleh Azotobacter yang  tidak  diberi  pupuk  urea  (33,89  - 42,01 ppm  IAA)  relatif lebih  tinggi  dibanding  tidak  diberi  pupuk urea  (18,29-35,54  ppm  IAA).  Jumlah  fAA  yang dihasilkan tersebut  relatif sarna  dengan  jumlah  fAA  yang  dihasilkan oleh Azospirillum  brasiliense dan Klebsiella  pnuemoniae (masing-masing 46  ppm  IAA  dan  26  ppm  fAA)  pada  media yang telah diberi  100  ppm triptofan,  seperti yang dilaporkan oleh  (EI-khawas  dan  Adachi,  1999).  Mereka  melaporkan bahwa Azospirillum  brasiliense dan Klebsiella pnuemoniae menghasilkan  berturut-turut  sebanyak  5-46  ppm  IAA  dan 11-35  ppm  fAA
Peningkatkan  luas  permukaan  akar  fR-64  pada  media yang  tidak  diberi  urea  seiring  dengan  peningkatan jumlah IAA  yang  dihasilkan  oleh Azotobacter. Pada  media  yang tidak  diberi  urea, Azotobacter T.M.UNSTJ  menghasilkan IAA  (42.01  ppm  IAA)  dan  penambahan  luas  permukaan akar ( 132.18 mg Ca(N03 )2 per tanaman) tertinggi dibanding dengan,Azotobacter lainnya.  Peningkatan  luas  permukaan akar  IR-64  pad a  media  yang  ditambah  urea  tidak  seiring dengan  jumlah  fAA  yang  dihasilkan  oleh Azotobacter. Azotobacter RGJ.17  pad a  media  yang  ditambah  urea
menghasilkan  35.54  ppm  IAA,  tetapi  hanya  mampu menambah  luas  permukaan  akar  IR-64  sebesar  209%  dan menumbuhkan ram but akar hanya pada bagian  pangkal akar sekunder.  Sebaliknya Azotobacter RG  3.62  pada  media yang  ditambah  urea  memproduksi  IAA  terendah  (18,  29 ppm  IAA)·akan  tetapi  mampu  menambah  luas  permukaan akar  sebesar  249%  dan  menumbuhkan  rambut  akar  dari pangkal  hingga  ke  ujung  akar  sekunder.  Luas  permukaan akar  padi  IR-64  pada media Yoshida yang tidak diinokulasi dengan Azotobacter dan  tidak  diberi  pupuk  urea  lebih  luas dibanding  dengan  luar  permukaan  akar  padi  IR-64  yang ditanam  pada  media  yang  diberi  urea.  Pada  kondisi  tidak diberi  hara  N,  untuk  memenuhi  kebutuhan  haranya,  akar tumbuh  lebih  panjang,  sehingga  terjadi  penambahan  luas permukaan akarnya.
Efektifitas Azotobacter dalam  mendukung  pertum- buhan  akar  padi  IR-64  tidak  dipengaruhi  oleh  pemberian pupuk Urea. Azotobacter. T.B.PDST.2b,  memiliki kemampuan  yang  sarna  dalam  menumbuhkan  rambut  akar sekunder baik ditambah ataupun tidak ditambah urea.
Peningkatan jumlah  IAA  yang  dihasilkan  pada  media yang  tidak  dipupuk  urea  diiringi  dengan  pertumbuhan rambut akar sekunder padi  fR-64.  Pada media yang dipupuk urea,  terjadi  pola  yang  tidak  beraturan  dalam  hal pertumbuhan  rambut  akar  sekunder.  Pertumbuhan  rambut akar  sekunder  fR-64  secara  mikroskopik  pada  media  yang diberi dan tidak dipupuk urea dapat dilihat pada Gambar  I.
Azotobacter dari  persawahan  pasang surut  Kalimantan Selatan  memiliki  kemampuan  menambah  panjang  akar dan bobot  basah  akar  padi  fR-64  pada  media  hara  yang  tidak diberi  pupuk  urea. Pada  Gambar  2  terlihat  bahwa penambahan  panjang  dan  bobot  basah  akar  secara  nyata terlihat pada  inokulasi Azotobacter T.M.UNSTJ  (17.53  em dan  230.3  mg  pori)  dibanding Azotobacter lainnya  (13.49- 15.76  em  dan  117.3  - 112.65  mg  pori).  Hal  ini  berkaitan dengan  kemampuan Azotobacter T.M.UNSTJ  mempro- duksi  IAA  yang  relatif lebih  tinggi.  Kandungan  IAA  yang tinggi  merangsang  pertumbuhan  akar  melalui  pertambahan panjang  ataupun  luas  permukaan  akar,  sehingga  akar memiliki  kemampuan  mengikat  air  dan  menambah  bobot basah akar seeara nyata.
Tabel I. Produksi  IAA dari Azotobacter spp. Setelah Diinkubasi 72 Jam dan  Peranannya terhadap Pertumbuhan Akar Padi  IR-64
Luas  Permukaan Akar Rambut akar Azotobacter IAA * (ppm) mgCa(N03h/tan % penambahan '" KONTROL 0 40.07 100e Tidak ditemukan II) .... :J T.B.MGSR.I 33.89 69.77 174  bc Pangkal - tengah '" 0- T.B.PDST.2b 36.67 76.18 190  b Pangkal - ujung c '" T.M.UNST.3 42.01 132.18 330 a Pangkal - tengah f- KONTROL 0 12.30 100  b Tidak ditemukan '" RG  3.  62 18.29 30.80 249 ab Pangkal - ujung II) .... :J RG  3.  35 19.78 24.80 201  ab Pangkal ..c '" T.B.  PDST.  2b 25.57 15.50 126 ab Pangkal - ujung .0 E 07. I ITNHIlI 28.98 22.30 181  ab Tidak ditemukan ~ i:S RG  3.18 32.41 23.80 193  ab Pangkal - ujung RG  3.17 35.54 25.80 209 ab Pangkal
Keterangan: * Azotobacter ditumbuhkan  pada media eair NFM ** Analisis  Ragam  dan  DMRT  tarafnyata 0.05  tanpa dipupuk dan dipupuk N dilakukan terpisah
Kontrol  (pembesaran 20X)
Kontrol  (pembesaran 32X) Tidak dipupuk urea T.M.UNST.3 (pembesaran 45X) Oi  pupuk Urea
RG  3.62 (pembesaran 32X)
T.B.PDST.2b (pembesaran 62.5X) T.B.PDST.2b (pembesaran 32X)
Gambar  I.  Kenampakan Rambut Akar Sekunder Secara Mikroskopik.
25 250 a 20 200 a ... ab lii -" 1\1 15 150 ~ ~b 1\1 Cl '" c .21 1\1 .~ 10 100 "0 Q. .D .8 5 50 0 0
Gambar  2:  Kemampuan  Azotobacter dalam  Menambah  Panjang  dan  Bobot  Basah  Akar  Padi  IR64  pada  Media yang Tidak Oitambah Urea

## KESIMPULAN
I. Produksi  IAA  yang dihasilkan Azotobacter pada media
yang  dipupuk  urea  (18.28  - 35.54  ppm  IAA)  relatif lebih  rendah  dibanding  yang  dihasilkan  pada  media yang tidak dipupuk  urea (33.89-42.01  ppm  fAA).
2. Pada  media  yang  tidak  ditambah  urea,  penambahan luas permukaan akar fR-64 setrmg dengan peningkatkan  IAA  yang  dihasilkan  oleh Azotobacter sedangkan  pada  media dipupuk  urea,  penambahan  luas permukaan  akar tidak sejalan  dengan  peningkatan  fAA yang dihasilkan oleh Azotobacter.
3. Pad a  media  yang  tidak  ditambah  urea, Azotobacter
T.M.UNST.3  menghasilkan  fAA  tertinggi  (42.01  ppm fAA)  sehingga  memiliki  kemampuan  menambah  luas permukaan,  menambah  panjang  dan  bobot  akar  padi fR-64  lebih  tinggi  dibanding Azotobacter  lainnya  dan menumbuhkan  rambut  akar  sekunder  dari  pangkal hingga ujung akar.
4. Pada media yang ditambah Urea (40 ppm N),  walaupun Azotobacter  RG  3.62  memproduksi  IAA  paling  rendah (18.29  ppm  IAA),  akan  tetapi  memiliki  kemampuan menambah  luas  permukaan  akar  yang  lebih  tinggi dibanding Azotobacter  lainnya  dan  menumbuhkan rambut akar sekunder dari pangkal hingga ujung akar.

## DAFTAR PUSTAKA
Atlas,  R.M. 1997. Handbook  of  Microbiological  Media. Macmillan  Publishing Co.  New  York.
Carley,  H.E.  and  R.D.  Watson.  1966.  A new gravimetric method for  estimating  root-surface  arel;lS.  Soil  Sci.  102  (5)  : 289 - 291.
EI-Khawas, L. and  H.  Adachi. 1999. IdentifICation and quantification of auxins 'in  culture media of Azospirillum and Klebsiella and  their effect on  rice roots.  BioI  Fertil Soils 28  :
377 - 381 IRRI. 2003. Straw and Fertilizer http://www.irri.org/troprice/  depault.hlm. tanggai 6 April  2003. Management. diakses  pada
Iswandi,  A.  1999.  Peningkatan  padi  lahll!l  rawa  (gambut)  satu juta  hektar  di  Kalimantan  Tengah  melaJui  pemanfaatan mikrobe  rizosfer  penambat  nitrogen  dan  pelarut  fosfat. Laporan RUT  1999-2000.  Kantor Menteri Negara Riset dan Teknologi.  Dewan Riset Nasionai.  Jakarta.
Iswandi,  A.  2000.  Kemampuan  bakteri  penambat  nitrogen  dan mikroba  pelarut  fosfat  dalam  meningkatkan  pertumbuhan padi (Oryza saliva) IR64. Comm.Ag. 6(1):18-24.
Kirchhof, G.  and.c.  Pender.  1993.  SCI-SCAN  Image  Analysis Sofware version 2.0.  CSIRO. Australia.
Razie,  F.  2003.  Karakteristik Azotobacter spp. dan Azospirillum spp.  dari  rizosfer  padi  sawah  di  daerah dataran banjir Kalimantan  Selatan dan  pengaruhnya terhadap pertumbuhan awal  tanaman  padi.  Institut  Pertanian  Bogor.  Tesis  S2 Fakultas Pasca Sarjana IPB  (tidak dipublikasikan).
Pratiwi,  E.  1999.  Karakterisasi  Mutan  Biosintesis Asam  Indola Asetat  (IAA)  pada Azospirillum spp  yang  Dihasilkan  dari Mutagenesis  Transposon.  Institut  Pertanim  Bogor.  Tesis S2  Fakultas Pasca Sarjana IPB (tidak dipublikasikan).