## ISOLASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI PENGHASIL IAA
( INDOLE ACETIC ACID ) DARI RHIZOSFER TANAMAN AKASIA ( Acacia mangium )
Ika Agus Rini 1  , Indah Oktaviani 1 , Muhammad Asril 1 , Revi Agustin 1 , Fina Khaerunissa Frima 2
1 Program Studi Biologi, Jurusan Sains, Institut Teknologi Sumatera
2 Program Studi Kimia, Jurusan Sains, Institut Teknologi Sumatera Jl. Terusan Ryacudu, Way Huwi, Kec. Jati Agung, Kabupaten Lampung Selatan, Lampung 35365
 Email korespondensi: ika.rini@bi.itera.ac.id
Abstract. IAA  is  the  most  common  product  of  L-tryptophan  metabolism  which  can  be  produced  by  some microorganisms.  Some  microorganisms  that  have  the  potential  to  produce  IAA  are  rhizosphere  bacteria  in Leguminosae plants, one of which is acacia. Acacia mangium, also known as acacia, is a fast growing tree. However, acacia is an invasive plant. Acacia plants have nodules which are the result of a symbiosis of plant roots and bacteria. This  symbiosis  can  affect  soil  fertility.  A  lot  of  potential  can  be  extracted  from  soil  bacteria,  especially  in  the rhizosphere. The purpose of this study was to isolate and identify bacteria in the rhizosphere of acacia plants capable of producing IAA as one of the potential candidates for PGPR (Plant Growth Promoting Rhizobacteria). The methods used  include  sampling,  isolation  of  IAA-producing  bacteria,  bacterial  purification,  identification  of  bacteria  and biochemical  tests,  making  of  bacterial  growth  curves,  and  testing  of  phosphate  solubilizing  bacteria  isolates.  The rhizosphere isolates obtained 23 bacterial isolates. Based on the results of bacterial identification based on Gram staining, these bacteria entered the genus Bacillus and there were 5 bacterial isolates that had the ability to produce IAA and dissolve phosphate so that these bacteria had potential as biological fertilizers.
Keywords: Acacia, rhizosfer, bacteria, IAA, biofertilizer.
Abstrak. IAA  adalah  produk  paling  umum  dari  metabolisme  L-triptofan  yang  dapat  diproduksi  oleh  beberapa mikroorganisme. Beberapa mikroorganisme yang memiliki potensi menghasilkan IAA adalah bakteri rhizosfer pada tanaman Leguminosae, salah satunya adalah akasia. Acacia mangium, juga dikenal sebagai akasia, adalah pohon yang tumbuh cepat. Namun, akasia adalah tanaman invasif. Tanaman akasia memiliki bintil yang merupakan hasil simbiosis akar tanaman dan bakteri. Simbiosis ini dapat mempengaruhi kesuburan tanah. Banyak potensi yang dapat digali dari bakteri tanah, khususnya di rhizosfer. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengisolasi dan mengidentifikasi bakteri pada rizosfer tanaman akasia yang mampu menghasilkan IAA sebagai salah satu potensi untuk kandidat PGPR ( Plant Growth Promoting Rhizobacteria ). Metode yang digunakan meliputi pengambilan sampel, isolasi bakteri penghasil IAA, pemurnian bakteri, identifikasi bakteri dan uji biokimia, pembuatan kurva tumbuha bakteri, dan uji isolat bakteri pelarut fosfat. Hasil isolasi bakteri rhizosfer diperoleh sebanyak 10 isolat bakteri yang memiliki karakteristik berbeda secara  morfologi.    Berdasarkan  hasil  identifikasi  bakteri  berdasarkan  pewarnaan  Gram,  bakteri  tersebut  masuk  ke dalam  genus  Bacillus  dan  terdapat  5  isolat  bakteri  yang  memiliki  kemampuan  menghasilkan  IAA  dan  melarutkan fosfat sehingga bakteri tersebut memiliki potensi sebagai pupuk hayati.
Kata kunci: Acacia, rhizosfer, bacteria, IAA, pupuk hayati .

## PENDAHULUAN
Indole Acetic Acid (IAA) merupakan salah satu auksin yang paling aktif secara fisiologis. IAA  adalah  produk  paling  umum  dari metabolisme L-triptofan dari beberapa mikroorganisme.  Produksi  auksin  oleh  bakteri adalah  salah  satu  mekanisme  langsung terpenting yang digunakan oleh bakteri pemacu pertumbuhan tanaman (PGPB) untuk kemajuan tanaman  secara  alami  karena  auksin  adalah metabolit  sekunder  ramah  tanaman  yang disintesis  secara  alami  oleh  bakteri,  dan karenanya meningkatkan pertumbuhan tanaman terkait (Wagi & Ahmed, 2019).  IAA merangsang  pemanjangan  sel  memodifikasi
kondisi  fisiologis  tertentu seperti, peningkatan osmotik sel, meningkatkan permeabilitas air ke dalam  sel,  penurunan  tekanan  dinding  sel, peningkatan sintesis dinding sel dan menginduksi RXA spesifik dan sintesis protein. IAA  juga  memiliki  kemampuan  memicu aktivitas  embial,  menghambat  atau  menunda absisi  daun,  menyebabkan  pembungaan  dan pembuahan (Zhao, 2010). Beberapa mikroorganisme termasuk dari golongan Plant Growth-Promoting Rhizobacteria (PGPR) dapat  memproduksi  IAA.  Produksi  IAA merupakan  kemampuan  utama  dari  bakteri rhizosfer yang dapat merangsang dan memfasilitasi tanaman dalam proses pertumbuhannya (Mohite, 2013). PGPR
mampu menghasilkan zat pengatur tumbuh atau fitohormon. Kemampuan bakteri untuk menghasilkan zat fitohormon yang merupakan mekanisme  penting  pada  PGPR.  Senyawa  ini berperan sebagai sinyal dan regulator pertumbuhan  pada  tanaman  seperti  IAA, giberelin dan sitokinin (Harca et al., 2014).
Beberapa spesies bakteri yang berasal dari perakaran  dan  tanah  dapat  berperan  sebagai pestisida, fungisida, biofertilizer, dan memiliki kemampuan  dalam  memacu  pertumbuhan tanaman  (Madigan  et  al.,  2012).  Selain memproduksi  IAA,  bakteri  rhizosfer  juga mampu  melarutkan  fosfat  dan  sebagai  agen biokontrol  dengan  cara  menginduksi  sistem kekebalan tanaman (Marista et al., 2013).
Akasia mangium ( Acacia mangium ) merupakan tanaman yang dapat tumbuh dengan cepat  dan  merupakan  pohon  yang  tahan terhadap kondisi tanah alkalin dan miskin hara (Hidayati et al., 2015). A. mangium merupakan jenis tanaman pioneer  yang tidak memerlukan persyaratan  tinggi  atau  khusus  untuk  tumbuh. Tanaman  ini  mampu  tumbuh  dan  beradaptasi dengan  baik  pada  kondisi  klimatis  yang berbeda  dengan  habitat  aslinya.  Akan  tetapi banyak faktor lingkungan yang akan mempengaruhi keberhasilan tumbuhnya (Krisnawati  et  al.,  2011). A.  mangium dapat tumbuh  di  lahan  marginal  seperti  bekas pertambangan  dan  termasuk  jenis  tanaman yang  paling  cocok  ditanaman,  hal  ini menjadikan mangium tanaman potensial untuk bioremediasi (Robika & Sari, 2019).
A.  mangium terbukti  bermanfaat  dalam sistem  agroforestri  karena  memulihkan  dan mempertahankan  kesuburan  tanah  karena kemampuannya  dalam  mengikat  nitrogen. A. mangium membentuk simbiosis asosiasi dengan  bakteri  bintil  akar  (Perrineau  et  al., 2012). Terdapat beberapa langkah bakteri bintil akar dapat masuk ke dalam akar, salah satunya melalui  epidermis  akar  dan  ada  beberapa penelitian  yang  menyatakan  infeksi  bakteri yang berhubungan dengan gen nod (Bonaldi et al., 2011).
A. mangium diketahui melakukan simbiosis  dengan  bakteri  tanah  dari  genus Rhizobium. Sehingga selain bioremediasi lahan
marginal,  potensi  mangium  dapat  dijadikan sebagai  sumber  bakteri  rhizosfer  yang  dapat digunakan  sebagai  pupuk  hayati.  Oleh  karena itu  dalam  penelitian  ini  dilakukan  isolasi  dan identifikasi  bakteri  rhizosfer dari perakaran A. mangium. Bakteri rhizosfer yang telah diisolasi dan dikarakterisasi diharapkan memiliki kemampuan  dalam  menghasilkan  IAA  dan melarutkan  fosfat.  Sehingga  dalam  penelitian ini  akan  didapatkan  bakteri  potensial  yang dapat  menjadi  kandidat  pupuk  hayati.  Di Indonesia  belum  banyak  hasil  penelitian  yang melakukan  isolasi  dan  identifikasi  bakteri penghaisl IAA dan pelarut fosfat dari rhizosfer A. mangium . Oleh sebab itu hasil penelitian ini akan  memberikan  gambaran  baru  tentang potensi bakteri rhizosfer perakaran mangium.

## METODE
Penelitian ini dilaksanakan di
Laboratorium Biologi Institut  Teknologi Sumatera  yang  dilaksanakan  dari  bulan  Juli  – September 2020.

## Pengambilan Sampel
Pengambilan  sampel  tanah  Acasisa  dilakukan pada  kedalaman  5-20  cm  (Gagelidze  et  al., 2018) dengan menggunakan spatula yang sudah disterilkan.  Tanah yang sudah  diambil kemudian  dimasukkan  ke  dalam  alumuinium steril  dan  diberi  label  sesuai  dengan  jenis sampel  dan  lokasi  pengambilan.  Lokasi pengambilan  sampel  tanah  berada  di  titik koordinat  5°21ʹ26.4ʺS  105°18  ʹ57.0ʺE  dan 5°21ʹ45.4ʺS  105°18  ʹ39.9ʺE  yang  merupakan lahan penghijauan di kampus ITERA.

## Isolasi Bakteri Penghasil IAA
Isolasi  bakteri  yang  berpotensi  menghasilkan IAA menggunakan media NB ( Nutrient Broth ) dan  ditambah  dengan  L-triptofan  sebanyak 0,1%  (Kumari  et  al.,  2018).  Sebanyak  10  g tanah  dimasukkan  ke  dalam  100  ml  NB  +  L- triptofan  (0,1%)  kemudian  diinkubasi  goyang selama  24  jam  dengan  kecepatan  120  rpm dalam suhu 30 ℃ .
Kultur  pengkayaan  tersebut  diambil  1  ml  lalu dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi akuades  sebanyak  9  ml  (Larosa  et  al.,  2013). Dilakukan  pengenceran  berseri  hingga  tingkat
pengenceran 10 -8 .
Setelah dilakukan pengenceran, diambil 0,1 ml dari pengenceran 10 -4 hingga  10 -8 kemudian  ditumbuhkan  pada media Nutrient  Agar (NA)  yang  sudah ditambahkan L-triptofan sebanyak 0,1%  (Raut et  al.,  2017).  Kemudian  dilakukan  inkubasi selama 24 jam pada suhu 30 ℃ .
Identifikasi dan Karakterisasi Semua koloni yang tumbuh dilakukan peremajaan  untuk  mendapatkan  kultur  murni. Bakteri  yang  diremajakan  adalah  bakteri  yang mempunyai  karakteristik  morfologi  yang berbeda  antar  bakteri  lainnya  seperti  bentuk koloni, warna koloni, tepian koloni, dan elevasi koloni (Cappuchino & Sherman, 2013). Selain itu  dilakukan  uji  biokimia  dan  identifikasi menggunakan  pewarnaan  Gram.  Uji  biokimia yang  dilakukan  antara  lain  uji  sitrat,  katalase, motilitas, TSIA dan hidrolisa pati.

## Uji Kemampuan Penghasil IAA
Satu  lup  koloni  bakteri  dimasukkan  ke  dalam 50 ml media NB+L-triptofan 0,1%. Kemudian diinkubasi goyang  selama  24  jam  dengan kecepatan 120 rpm. Setelah 24 jam, diambil 1 ml inokulum dan dimasukkan ke dalam 100 ml media  NB+L-triptofan  0,1%  lalu  diinkubasi goyang  selama  6  hari  dengan  kecepatan  120 rpm. Uji kemampuan penghasil IAA dilakukan setiap hari dengan mengambil 10 ml inokulum bakteri kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 6000 rpm selama 30 menit.  Setelah disentrifugasi,  diambil  1  ml  supernatan dimasukkan  pada  tabung  reaksi  yang  sudah dilapisi dengan aluminium foil. Ditambahkan 4 ml  larutan Salkovwski (150 ml H 2 SO 4 , 250 ml aquades,  7,5  ml  0,5M  FeCl 3 .6H 2 O)  dan diinkubasi  selama  30  menit  pada  ruang  gelap (Patten & Glick, 2002). Kadar konsentrasi IAA diukur dengan menggunakan spektrofotometer pada  panjang  gelombang  535  nm  (Sharma  & Rai,  2015).  Konsentrasi  IAA  dihitung  melalui perbandingan  nilai  pengukuran  dengan  kurva standar.

## Uji Pelarutan Fosfat
Uji  kemampuan  bakteri  dalam  melarutkan fosfat  dilakukan  dengan  menumbuhkan  isolat bakteri  yang  telah  dimurnikan  pada  media
Pikovskaya padat  yang  mengandung  (10  g C 6 H 12 O 6 , 5 g Ca 3 (PO 4 ) 2 , 0,5 g (NH 4 ) 2 .SO 4 , 0,2 g  KCl,  0,1  g  MgSO4.7H2O,  0.002  g MnSO 4 .7H 2 O,  0,002  g  FeSO 4 .7H 2 O,  0,1  g NaCl,  0,5  g  yeast  extract,  dan  20  g  agar  yang dilarutkan dalam 1000 ml akuades dengan cara ditotolkan  dan  diinkubasi  selama  7  hari  pada suhu 30 ℃ (Asril & Lisafitri, 2020). Pertumbuhan  koloni  bakteri  pelarut  fosfat  (P) ditandai  dengan  pembentukan  zona  bening  di sekitar  koloni  bakteri.  Zona  bening  yang terbentuk di sekitar koloni diukur dan dihitung indeks  kelarutan  fosfat  pada  masing-masing koloni dengan persamaan sebagai berikut:

## 𝐼𝑃: 𝑑𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑧𝑜𝑛𝑎 𝑏𝑒𝑛𝑖𝑛𝑔 − 𝑑𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑘𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 𝑏𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖 𝑑𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑘𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 𝑏𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil isolasi bakteri rhizosfer dari perakran Acasia  mangium didapatkan  10  isolat  bakteri yang  dapat  dikarakterisasi  dan  dimurnikan (Tabel  1).  Sepuluh  isolat  bakteri  tersebut memiliki karakteristik yang berbeda satu sama lain  sehingga  dilakukan  identifikasi  dan    uji lebih lanjut.

## Identifikasi dan Karakterisasi Bakteri
Hasil  karakterisasi  menunjukkan  5  koloni bakteri  memiliki  bentuk  irregular.  Pada pewarnaan  Gram  semua  bakteri  memiliki bentuk  batang  dan  menunjukkan  warna  ungu yang  berarti  Gram  positif.  Selain  pewarnaan Gram, karakterisasi yang juga dilakukan adalah uji biokimia.   Berdasarkan hasil uji sitrat, 8 dari 10  bakteri  dapat  menggunakan  sitrat  sebagai sumber  karbonnya  yaitu  pada  isolat  AM1.4, AM1.5,  AM1.6,  AM1.7b  AM1.7a,  AM1.8b, AM1.6a,  dan  AM2.4c.  sedangkan  pada  isolat AM1.4a  dan  AM1.7a  menunjukkan  hasil negatif  terhadap  metabolisme  sitrat.    Pada  uji motilitas  10  isolat  bakteri  menunjukkan  hasil negatif  yang  artinya  tidak  terdapat  pergerakan bakteri  didalam  media  SIM  ( Sulphide  Indole Motility ).  Berdasarkan  hasil  uji  hidrolisa  pati, terdapat  6  isolat  bakteri  (AM1.4,    AM1.6, AM1.7a,  AM1.8b,  AM1.4a,  dan  AM1.7c) dapat membentuk zona bening setelah diteteskan dengan iodine. Adanya zona bening
di sekeliling isolat yang mengindikasikan isolat bakteri  dapat  memproduksi  enzim  amilase sehingga  di  daerah  tersebut  terjadi  hidrolisis amilum  (Cappucino,  1983).  Berdasarkan  hasil pada  uji  katalase,  sepuluh  isolat  bakteri menghasilkan  gelembung  setelah  diteteskan oleh H 2 O 2 konsentrasi 3%. Hal ini menunjukkan  bahwa  isolat  tersebut  mampu menghasilkan  enzim  katalase  yang  dapat memecah  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  menjadi air  dan  oksigen  (Huda  &  Salni,  2012). Berdasarkan hasil yang diperoleh dari uji TSIA, 10 isolat bakteri dapat memfermentasi glukosa yang digunakan sebagai sumber energi. Media TSIA  mengandung  3  macam  gula  yaitu glukosa, laktosa dan sukrosa, sehingga dengan uji  TSIA  dapat  diketahui  kemampuan  bakteri dalam  memfermentasi  jenis  gula  tersebut. Hampir  semua  organisme  membutuhkan glukosa  sebagai  sumber  energi  utama  dan proses  metabolisme,  adanya  glukosa  dalam media  dapat  meningkatkan  produksi  dan  laju biomassa  pertumbuhan  bakteri    (Arora  et  al., 2018).  Pada  2  isolat  bakteri  (AM1.4  dan AM1.8b)  terdapat  endapan  berwarna  hitam, endapan  tersebut  menunjukkan  bahwa  bakteri mampu menghasilkan Hidrogen Sulfida (H 2 S). H 2 S akan bereaksi dengan fem sitrat  sehingga menghasilkan    fersous  sulfide        yang menyebabkan        warna  hitam  pada  agar.  Tiga isolat  bakteri  (AM1.5,  AM1.7a,  dan  AM1.7b) terdapat  keretakan  pada  media    yang  berarti pada  ketiga  isolat  bakteri  tersebut  memiliki kemampuan dalam menghasilkan gas sehingga menyebabkan media retak dan terangkat (Tabel 2).  Isolat  bakteri  PGPR  dari  rizosfer  kebun karet  rakyat  memiliki  ciri-ciri  biokimia  yaitu oksidase  negatif,  uji  motilitas  positif  dan negatif, serta uji fermentasi glukosa negatif dan positif  (Wagi  &  Ahmed,  2019),  Gram  positif, katalase  positif  (Kumar et  al .,  2014).  Bakteri dari  berbagai  genus  telah  diidentifikasi memiliki  kemampuan  PGPR,  di  antaranya genus  yang  paling  dominan  adalah  adalah Bacillus dan Pseudomonas spp.  (Beneduzi et al ., 2012).

## Kemampuan Rhizobakter Penghasil IAA
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa dari  10  isolat  bakteri  hanya  7  isolat  yang
memiliki  kemampuan  dalam  menghasilkan hormon IAA. IAA yang diperoleh dari sampel penelitian merupakan kalibrasi dari absorbansi yang  diukur  dan  dibandingkan  dengan absorbansi kurva standard IAA. Produksi IAA mulai terlihat pada hari pertama dan mencapai produksi  tertinggi  pada  hari  keempat  kecuali pada  isolat  AM1.7a,  AM1.8b  dan  AM1.7c. Konsentrasi  IAA  tertinggi  mencapai  191,75 (mg/L)  dari  isolat  dengan  kode  AM2.4c (Gambar 1). Isolat AM2.4c memiliki karakteristik  daat  memnfaatkan  sitrat  sebagai sumber  energi,  katalase  positif  dan  mampu memfermentasi  glukosa,  memiliki  bentuk batang  dan  Gram  posistif.  Karakteristik tersebut  merupakan  karakteristik  yang  umum ditemui dalam bakteri yang memiliki kemampuan  PGPR  yaitu  salah  satunya menghasilkan IAA (Kumar et al ., 2014). Pada kurva pertumbuhan bakteri tersebut memasuki fase  stasioner  dimulai  pada  hari  kedua  akan tetapi  produksi  IAA  tertinggi  berada  di  hari keempat  (Gambar  2).    Kemampuan  mikroba dalam  menghasilkan  IAA  dipengaruhi  oleh jenis  spesies  dari  mikroorganisme  tersebut. Mikroorganisme  yang  sama  tidak  dapat menghasilkan kadar IAA yang sama (Wulandari  et  al.,  2020).  Diantara  beberapa genus bakteri, genus Bacillus mampu mensintesis IAA dengan jumlah yang bervariasi dalam medium cair (Kavamura et al., 2013).  Tiga  dari  sepuluh  isolat  bakteri  yang dipilih  tidak  mampu  menghasilkan  IAA  yaitu pada isolat AM1.4a, AM1.6a dan AM1.7b. Hal ini  dikarenakan  dalam  proses  produksi  IAA pada  bakteri  sangat  dipengaruhi  oleh  tingkat pertumbuhan  (Agustian  et  al.,  2010).  Hormon IAA  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  melimpah pada  fase  stasioner  dan  produksi  IAA  akan meningkat  pada  kondisi  pertumbuhan  bakteri yang menurun. Hal ini dikarenakan ketersediaan  karbon  yang  terbatas  di  dalam media pertumbuhan dan kondisi lingkungan pH asam  yang  terjadi  pada  saat  fase  stasioner (Dewi, 2015).
Pada media pertumbuhan bakteri untuk produksi IAA ditambahkan dengan L-triptofan dengan konsentrasi 0,1%. Penambahan triptofan  tersebut  pada  medium  pertumbuhan
Vol. 3 No. 2: 210-219, December 2020                                                               DOI: 10.37637/ab.v3i2.619
merupakan  faktor  penting  bagi  isolat  untuk melakukan biosintesis IAA. Triptofan merupakan  prekursor  biosintesis  IAA  pada bakteri  melalui  jalur  Indole-Pyruvate  Acid (IPA)  (Zhao,  2010;  Mashiguchi  et  al.,  2011). Hormon IAA merupakan zat pengatur tumbuh yang    berperan  dalam  proses  pertumbuhan tanaman.  IAA  yang  dihasilkan  oleh  mikroba yang  berada  di  rizosfer  dapat  meningkatkan jumlah  rambut  akar,  ukuran,  dan  jumlah  akar adventif  tanaman  (Ribeiro  &  Cardoso,  2012). Hormon  IAA  disintesis  sebagai  metabolit sekunder  yang  dihasilkan  dalam  kondisi pertumbuhan  bakteri  suboptimal  atau  saat tersedia  prekursor  asam  amino  triptofan. Biosintesis IAA oleh bakteri, dapat ditingkatkan  dengan  penambahan  L-tryptofan sebagai  prekusor  ke  dalam  media  tumbuh bakteri.  Triptofan  telah  dibuktikan  merupakan prekursor  fisiologis  dalam  biosintesis  auksin baik  pada  tanaman  maupun  mikroorganisme (Li et  al .,  2018;  Nonhebel,  2015).  Jalur biosintesis  IAA  pada  bakteri  dapat  melalui beberapa  jalur,  salah  satunya  dapat  melalui jalur  Indole-3-pyruvate.  Pada  jalur  ini  terjadi pengubahan  triptofan  menjadi  IpyA  oleh aminotransferase.  Kemudian  IpyA  mengalami dekarboksilasi  menjadi  indole-3-acetaldehyde (IAAId) oleh enzim indole-3-pyruvat decarboxyase (IPDC). Fase terakhir pada jalur biosintesis  ini  adalah  oksidasi  IAAId  menjadi IAA (Lin et al., 2018).

## Kemampuan Melarutkan Fosfat
Hasil  penelitian  menunjukkan  terdapat  bakteri yang mampu melarutkan fosfat. Hasil tersebut diperoleh  5  isolat  bakteri  yang  berpotensi melarutkan  fosfat.  Isolat  bakteri  yang  mampu melarutkan fosfat ditandai dengan terbentuknya zona  bening  di  sekitar  koloni  bakteri  ketika ditumbuhkan  pada  medium  Pikovskaya  padat. Uji  kemampuan  bakteri  dalam  melarutkan fosfat  ditandai  dengan  terbentuknya  zona bening  pada  sekitar  koloni  bakteri  yang  diuji pada  media  Pikovskaya  karena  pecahnya Ca 3 (PO 4 ) 2 yang terdapat pada media
Pikovskaya  (Pambudi  et  al.,  2017).  Bakteri memiliki  kemampuan  yang  berbeda  dalam melarutkan  fosfat.  Hal  ini  disebabkan  karena setiap  mikroba  pelarut  fosfat  menghasilkan jenis  dan  jumlah  asam  organik  yang  berbeda. Asam-asam organik yang dihasilkan mikroorganisme  berbeda-beda  kualitas  dan kuantitasnya  dalam  membebaskan  fosfat. Bakteri pelarut fosfat (PSBs) mengubah P yang tidak tersedia (baik Pi dan Po) menjadi P yang tersedia  untuk  memenuhi  kebutuhan  tanaman melalui perombakan dan penyerapan  (Chen & Liu,  2019).  Ukuran  koloni  tidak  selalu berpengaruh  terhadap  terbentuknya  zona bening di sekitar koloni tersebut, karena ukuran diameter  koloni  yang  besar  tidak  selalu menghasilkan  diameter  zona  bening  yang besar. Pada prinsipnya luas zona bening dapat menunjukkan  kemampuan  bakteri  dalam melarutkan  fosfat  akan  tetapi  tidak  dapat menunjukkan  jumlah  konsentrasi  fosfat  yang terlarut  di  dalam  medium.  Isolat  bakteri  yang membentuk  zona  bening  lebih  cepat  dan memiliki  nilai  Indek  Pelarut  (IP)  yang  luas merupakan bakteri pelarut fosfat yang berpotensi  sebagai  “biofertilizer”  dengan  cara melarutkan  unsur  fosfat  yang  terikat  dengan unsur lain seperti Fe, Al, Ca, dan Mg sehingga unsur  fosfat  menjadi  tersedia  (Widawati  & Suliasih,  2006).  Biofertilizer  yang  terdiri  dari konsorsium bakteri yang memiliki kemampuan untuk  melarutkan  fosfat,  melarutkan  potasium dan  menghasilkan  auksin  dapat  memiliki potensi tinggi untuk peningkatan pertumbuhan dan hasil panen (Leaungvutiviroj et al., 2010). Isolat bakteri dengan kode AM1.4 dan AM1.5 merupakan  isolat  bakteri  yang  berpotensi menjadi  pupuk  hayati  karena  kedua  isolat bakteri  tersebut  lebih  cepat  membentuk  zona bening  dibandingkan  dengan  5 isolat  lainnya yaitu AM1.6, AM1.7a , AM1.8b, AM1.7c, AM2.4c.      Meskipun  bakteri  isolat  AM2.4c memiliki  kemampuan  dalam  menghasilkan IAA dengan konsentrasi tertinggi, hal ini perlu dilakukan  uji  lebih  lanjut  utnuk  mengetahui potensi isolat-isolat terpilih.

## Tabel 1. Karakterisasi Morfologi Koloni dan Sel Bakteri
Isolat Karakterisasi Morfologi Koloni Gram Morfologi Sel Bentuk Tepi Elevasi  Warna Bentuk AM1.4 circular curled flat putih kekuningan + basil AM1.4a rhizoid filiform flat putih susu + basil AM2.4c circular entire raised ungu tua + basil AM1.5 irregular  undulate  raised bening kebiruan + basil AM1.6 irregular  entire raised putih susu + basil AM1.6a rhizoid filiform raised putih kekuningan + basil AM1.7a irregular  undulate  raised putih + basil AM1.7b circular entire raised kuning bening + basil
AM1.7c irregular  filiform raised putih susu + basil AM1.8b irregular  undulate  raised putih + basil Tabel 2. Hasil Uji Biokimia Bakteri Isola t S it ra t Moti li tas Hidro li sa P ati Ka tala se Uji TSIA Glukosa S ukrosa La ktosa Enda pa n Ke re tak an AM1.4 + - + + + - - + - AM1.4a - - + + + - - - - AM2.4c + - - + + - - - - AM1.5 + - - + + - - - + AM1.6 + - + + + - - - - AM1.6a + - - + + - - - - AM1.7a - - + + + - - - + AM1.7b + - - + + - - - + AM1.7c + - + + + - - - - AM1.8b + - + + + - - + -
0 50 100 150 200 250 1 2 3 4 5 6 Ra ta -ra ta K o ns ent ra si ( m g /L ) Hari Ke- Kurva Pengukuran Kadar IAA AM1.4 AM1.5 AM1.6
AM1.7a AM1.7b AM1.8b AM1.4a
AM1.6a AM1.7c AM2.4c Gambar 1. Kurva hasil pengukuran hormon IAA Gambar 2. Kurva pertumbuhan bakteri rizosfer perakaran Acacia mangium. 6.2 6.4 6.6 6.8 7 7.2 7.4 7.6 7.8 1 2 3 4 5 6 L o g J um la h sel/m l Hari Ke- Kurva Pertumbuhan Bakteri AM1.4 AM1.5 AM1.6 AM1.7a AM1.8b
AM1.7c
AM2.4c
Gambar 3. Kurva indeks pelarutan fosfat bakteri rizosfer perakaran Acacia mangium.

## SIMPULAN
Hasil  isolasi  bakteri  tanah  yang  menempel pada  perakaran  akasia  diperoleh    10  isolat bakteri  dan  terdapat  7  isolat  yang  mampu menghasilkan IAA. Konsentrasi IAA tertinggi dihasilkan  oleh  isolat  AM2.4c  dengan  waktu produksi tertinggi berapa di hari keempat pada fase  stasioner.  Lima  dari  tujuh  isolat  bakteri memiliki kemampuan dalam melarutkan fosfat meskipun  memiliki  indeks  pelarutan  yang tergolong  rendah.  Dalam  hal  ini  perlu dilakukan  uji  lebih  lanjut  utnuk  mengetahui potensi  dari  bakteri  rhizosfer  perakaran A. mangium .  Aktivitas  terbaik  dari  isolat  bakteri tersebut  perlu  dilakukan  identifikasi  secara molekuler  untuk  mengetahui  spesies  yang potensial.  Dilihat  dari  potensi  bakteri  pada penelitian ini dapat menjadi data pendahuluan dalam  mencari  potensi  bakteri  sebagai Plant Growth  Promoting  Rhizobacteria (PGPR) namun  memerlukan  uji  lanjut  menggunakan tumbuhan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terimakasih kepada hibah RISTEK BRIN skema Penelitian Dosen Pemula (PDP DIKTI).

## DAFTAR PUSTAKA
Agustian, A., Nuriyani, N., Maira, L., & Emalinda, O. (2010). Rhizobakteria Penghasil
Fitohormon  IAA  Pada  Rhizosfir  Tumbuhan Semak  Karamunting,  Titonia,  dan  Tanaman Pangan. Jurnal Solum , 7 (1), 49.
https://doi.org/10.25077/js.7.1.49-60.2010
Arora,  P.,  Shukla,  V.,  &  Singh,  G.  (2018).
Exploring the Role of Glucose in Optimizing In-Vitro  Growth  of  Bacterial  Isolates  under Aluminium
Stressed Conditions. Int.J.Curr.Microbiol.App.Sci , 7 (05),  3219– 3223.
Asril,  M.,  &  Lisafitri,  Y.  (2020).  Isolasi  Bakteri Pelarut  Fosfat  Genus  Pseudomonas  dari Tanah Masam Bekas Areal Perkebunan Karet di  Kawasan  Institut  Teknologi  Sumatera. Jurnal Teknologi Lingkungan , 21 (1), 40–48. https://doi.org/10.29122/jtl.v21i1.3743
Beneduzi, A., Ambrosini, A., & Passaglia, L. M. P.
(2012). Plant Growth-Promoting Rhizobacteria  (PGPR):  Their  potential  as Antagonists  and  Biocontrol  Agents.  In Genetics and Molecular Biology . https://doi.org/10.1590/S1415-
47572012000600020
Bonaldi,  K.,  Gargani,  D.,  Prin,  Y.,  Fardoux,  J., Gully,  D.,  Nouwen,  N.,  Goormachtig,  S.,  &
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1 2 3 4 5 6 7 Ra ta -ra ta I nd ek s P ela rut a n F o sf a t Har i Ke- Indeks Pelarutan Fosfat AM1.4 AM1.5 AM1.6 AM1.7a
AM1.8b AM1.7c
AM2.4c
Giraud, E. (2011). Nodulation of Aeschynomene  afraspera and A.  indica by photosynthetic Bradyrhizobium  sp. strain ORS285:  The  Nod-dependent  versus  the Nod-independent symbiotic interaction.
Molecular Plant-Microbe
Interactions ,
24 (11), 1359–1371. https://doi.org/10.1094/MPMI-04-11-0093
Cappucino, J.G. (1983). Microbiology: A Laboratory Manual. Addison Wesley Publishing Company.
Cappuchino, G. J., & Sherman, N. (2013). Manual Laboratorium Mikrobiologi Edisi 8. In Food Microbiology .
Chen,  Q.,  &  Liu,  S.  (2019).  Identification  and Characterization of the Phosphate- Solubilizing  Bacterium Pantoea  sp. S32  in Reclamation Soil in Shanxi, China. Frontiers in Microbiology , 10 (2171), 1–12. https://doi.org/10.3389/fmicb.2019.02171
Dewi,  T.  K.  (2015).  Karakterisasi  mikroba perakaran  (PGPR)  agen  penting  pendukung pupuk  organik  hayati. Pros  Sem  Nas  Masy Biodiv Indon , 1 (2), 289–295. https://doi.org/10.13057/psnmbi/m010220
Gagelidze, N. A., Amiranashvili, L. L., Sadunishvili,  T.  A.,  Kvesitadze,  G.  I., Urushadze,  T.  F.,  &  Kvrivishvili,  T.  O. (2018).  Bacterial  composition  of  different types of soils of Georgia. Annals of Agrarian
Science , 16 (1), 17–21.
https://doi.org/10.1016/j.aasci.2017.08.006
Harca,  N.  N. ;  Mubarik,  N.  R. ;  Wahyudi,  A.  T. (2014).  Isolation  and  Identification  of Nitrogen  Fixing  and  Indole  Acetic  Acid Producing  Bacteria  from  Oil  Plantation  in Jambi,  Indonesia. Journal  of  International Environmental Application and Science , 9 (4), 546–553. http://www.jieas.com/volumes/vol141- 4/abs14-v9-i4-12.pdf
Hidayati,  N.,  Faridah,  E.,  &  Sumardi,  S.  (2015).
Peran  Mikoriza  Pada  Semai  Beberapa Sumber  Benih  Mangium  ( Acacia  mangium Willd.)  Yang  Tumbuh  Pada  Tanah  Kering. Jurnal Pemuliaan Tanaman Hutan , 9 (1), 13–
29.
https://doi.org/10.20886/jpth.2015.9.1.13-15
Huda, C., & Salni, M. (2012). Penapisan Aktivitas Antibakteri  dari  Bakteri  yang  Berasosiasi dengan  Karang  Lunak Sarcophyton  sp. Maspari Journal , 4 (1), 69–76.
Kavamura,  V.  N.,  Santos,  S.  N.,  Silva,  J.  L.  da, Parma,  M.  M.,  Ávila,  L.  A.,  Visconti,  A., Zucchi, T.  D., Taketani,  R.  G.,  Andreote,  F. D.,  &  Melo,  I.  S.  de.  (2013).  Screening  of Brazilian cacti rhizobacteria for plant growth promotion  under  drought. Microbiological
Research , 168 (4), 183–191. https://doi.org/10.1016/j.micres.2012.12.002
Krisnawati,  M.H.,  K.,  &  M.,  K.  (2011). Acacia mangium Willd.:  ekologi,  silvikultur  dan produktivitas.  In Acacia  mangium  Willd.: ekologi, silvikultur dan produktivitas . https://doi.org/10.17528/cifor/003479
Kumar,  A.,  Maurya,  B.  R.,  &  Raghuwanshi,  R. (2014).  Isolation  and  characterization  of PGPR  and  their  effect  on  growth,  yield  and nutrient content in wheat ( Triticum aestivum L.). Biocatalysis and Agricultural
Biotechnology .
https://doi.org/10.1016/j.bcab.2014.08.003
Kumari, P., Meena, M., & Upadhyay, R. S. (2018).
Characterization  of  Plant Growth  Promoting Rhizobacteria  (PGPR)  Isolated  from  the Rhizosphere  of Vigna  radiata (mung  bean). Biocatalysis and Agricultural Biotechnology ,
16 ,
155–162.
https://doi.org/10.1016/j.bcab.2018.07.029
Larosa,  S.  F.,  Kusdiyantini,  E.,  Raharjo,  B.,  & Sarjiya,  A.  (2013).  Kemampuan  Isolat Bakteri  Penghasil  Indole  Acetic  Acid  (IAA) Dari  Tanah  Gambut  Sampit  Kalimantan Tengah. Jurnal Biologi , 2 (3), 41–54.
Leaungvutiviroj, C., Ruangphisarn, P., Hansanimitkul,  P.,  Shinkawa,  H.,  &  Sasaki, K. (2010). Development of a new biofertilizer with  a  high  capacity  for  N2  fixation, phosphate  and  potassium  solubilization  and auxin production. Bioscience, Biotechnology and Biochemistry , 74 (5), 1098–1101.
https://doi.org/10.1271/bbb.90898
Li, M., Guo, R., Yu, F., Chen, X., Zhao, H., Li, H., &  Wu,  J.  (2018).  Indole-3-acetic  acid biosynthesis pathways in the plant-beneficial bacterium Arthrobacter pascens zz21.
International Journal of Molecular Sciences , 19 (2),
443.
https://doi.org/10.3390/ijms19020443
Lin,  H.  R.,  Shu,  H.  Y.,  &  Lin,  G.  H.  (2018).
Biological  Roles  of  Indole-3-Acetic  Acid  in Acinetobacter  baumannii . Microbiological
Research , 216 , 30–39. https://doi.org/10.1016/j.micres.2018.08.004
Vol. 3 No. 2: 210-219, December 2020                                                               DOI: 10.37637/ab.v3i2.619
Madigan, Michael T.; Martinko, John M.; Bender,
Kelly  S.;  Buckley,  Daniel  H.;  Stahl,  D.  A.
(2012).  Brock  Biology  of  Microorganisms Thirteenth Edition. In Instrumentos Familiares .
Marista,  E.,  Khotimah,  S.,  &  Linda,  R.  (2013). Bakteri Pelarut Fosfat Hasil Isolasi dari Tiga Jenis Tanah Rizosfer Tanaman Pisang Nipah ( Musa  paradisiaca var  .  nipah)  di  Kota Singkawang. Protobiont , 2 (2), 93–101.
Mashiguchi, K., Tanaka, K., Sakai, T., Sugawara, S.,  Kawaide,  H.,  Natsume,  M.,  Hanada,  A., Yaeno, T., Shirasu, K., Yao, H., McSteen, P., Zhao,  Y.,  Hayashi,  K.  I.,  Kamiya,  Y.,  & Kasahara,  H.  (2011).  The  Main  Auxin Biosynthesis Pathway in Arabidopsis. Proceedings  of  the  National  Academy  of Sciences  of  the  United  States  of  America , 108 (45), 18512–18517. https://doi.org/10.1073/pnas.1108434108
Mohite,  B.  (2013).  Isolation  and  Characterization of  Indole  Acetic  Acid  (IAA)  Producing Bacteria  from  Rhizospheric  Soil  and  Its Effect  on  Plant  Growth. Journal  of  Soil Science and Plant Nutrition , 13 (3), 638–649. https://doi.org/10.4067/S0718- 95162013005000051
Nonhebel, H. M. (2015). Tryptophan-Independent Indole-3-Acetic  Acid  Synthesis:  Critical Evaluation of The Evidence. Plant
Physiology , 169 (2), 1001–1005. https://doi.org/10.1104/pp.15.01091
Pambudi,  A.,  Susanti,  S.,  &  Priambodo,  T.  W.
(2017).  Isolasi  Dan  Karakterisasi  Bakteri Tanah  Sawah  Di  Desa  Sukawali  Dan  Desa Belimbing, Kabupaten Tangerang. Al- Kauniyah:  Jurnal  Biologi , 10 (2),  105–113. https://doi.org/10.15408/kauniyah.v10i2.490 7
Patten,  C.  L.,  &  Glick,  B.  R.  (2002).  Role  of Pseudomonas  putida Indoleacetic  Acid  in Development of The Host Plant Root System. Applied  and  Environmental  Microbiology , 68 (8), 3795–3801. https://doi.org/10.1128/AEM.68.8.3795- 3801.2002
Perrineau,  M.  M.,  Galiana,  A.,  De  Faria,  S.  M., Bena, G., Duponnois, R., Reddell, P., & Prin,
Y. (2012). Monoxenic Nodulation Process of Acacia mangium (Mimosoideae, Phyllodineae) by Bradyrhizobium
sp.
Symbiosis , 56 , 87–95.
https://doi.org/10.1007/s13199-012-0163-5 Raut,  V.,  Shaikh,  I.,  Naphade,  B.,  Prashar,  K.,  & Adhapure, N. (2017). Plant Growth Promotion Using Microbial IAA Producers in
Conjunction with Azolla: A Novel Approach. Chemical  and  Biological  Technologies  in Agriculture , 4 (1), 1–11. https://doi.org/10.1186/S40538-016-0083-3
Ribeiro,  C.  M.,  &  Cardoso,  E.  J.  B.  N.  (2012).
Isolation,  Selection  and  Characterization  of Root-Associated Growth Promoting Bacteria in  Brazil  Pine  ( Araucaria  angustifolia ). Microbiological  Research , 167 (2),  69–78. https://doi.org/10.1016/j.micres.2011.03.003
Robika,  R.,  &  Sari,  E.  (2019).  Pertumbuhan  dan Kadar  Klorofil  Daun Acacia  mangium Pada Lahan  Bekas  Tambang  Timah  Di  Pulau Bangka. Ekotonia: Jurnal Penelitian Biologi, Botani,  Zoologi  Dan  Mikrobiologi , 4 (1),  7–
11.
https://doi.org/10.33019/ekotonia.v4i1.1009
Sharma,  T.,  &  Rai,  N.  (2015).  Isolation  of  Plant Hormone  (Indole-3-Acetic  Acid)  Producing Rhizobacteria and Study on Their Effects on Tomato ( Lycopersicum esculentum ) Seedling. International
Journal of
PharmTech Research , 7 (1), 99–107.
Wagi,  S.,  &  Ahmed,  A.  (2019). Bacillus spp.: Potent  Microfactories  of  Bacterial  IAA. PeerJ , 7 , e7258. https://doi.org/10.7717/peerj.7258
Widawati, S., & Suliasih. (2006). Populasi Bakteri Pelarut  Fosfat  (BPF)  di  Cikaniki,  Gunung Botol,  dan  Ciptarasa,  serta  Kemampuannya Melarutkan  P  Terikat  di  Media  Pikovskaya Padat. Biodiversitas , 7 (2), 109–113. https://biodiversitas.mipa.uns.ac.id/D/D0702 /D070203.pdf
Wulandari,  N.,  Irfan,  M.,  &  Saragih,  R.  (2020). Isolasi  dan  Karakterisasi Plant  Growth Promoting  Rhizobacteria dari  Rizosfer Kebun  Karet  Rakyat. Dinamika  Pertanian ,
35 (3),
57–64. https://doi.org/10.25299/dp.2019.vol35(3).45
65
Zhao, Y. (2010). Auxin biosynthesis and its role in plant  development. Annual  Review  of  Plant
Biology , 61 , 49–64.
https://doi.org/10.1146/annurev-arplant- 042809-112308