## Jurnal Pendidikan Biologi Undiksha
p-ISSN : 2599-1450 e-ISSN : 2599-1485 Volume 6 Nomor  2 Tahun 2019 Open Acces : https://ejournal.undiksha.ac.id/index.php/JJPB/index
AKTIVITAS ANTIFUNGI KOMBINASI EKSTRAK DAUN SIRIH ( Piper betle ) DAN EKSTRAK KULIT BUAH JERUK ( Citrus reticulata ) UNTUK MENGHAMBAT PERTUMBUHAN Candida albicans
Ni Made Nita Setiari; Ni Putu Ristiati; I Wayan Sukra Warpala
Jurusan Biologi
Program Studi Pendidikan Biologi Universitas Pendidikan Ganesha Singaraja, Indonesia
email: {made.nita.setiari, putu.ristiati, wayan.sukra.warpala}@undiksha.ac.id

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui:  (1)  Perbedaan  diameter  daerah  hambat (DDH)  pertumbuhan Candida  albicans dengan  variasi  kombinasi  ekstrak  daun Piper  betle dan kulit buah Citrus reticulata , (2) Variasi kombinasi ekstrak Piper betle dan kulit buah Citrus reticulata yang  paling  efektif  dalam menghambat  pertumbuhan Candida  albicans .  Penelitian ini  adalah  penelitian  eksperimen  sungguhan  dengan  rancangan  penelitian randomized  post test  only  control  group  design .  Variasi  kombinasi  ekstrak  daun Piper  betle dan  kulit  buah Citrus reticulata yang digunakan dalam penelitian ini adalah 10%:10%; 10%:20%; 10%:30%; 10%:40%  dan  10%:50%.  Metode  uji  aktivitas  antifungi  menggunakan  uji  sumur  difusi.  Efek perlakuan  ini  adalah dengan adanya diameter  daerah  hambat (DDH) pertumbuhan Candida albicans . Populasi dalam penelitian ini adalah seluruh Candida albicans dari stok kultur yang dibiakkan  kembali  pada  media  SDA  ( Sabouraud  Dextrose  Agar ),  sedangkan  sampelnya adalah Candida  albicans yang  diberi  perlakuan  variasi  kombinasi  ekstrak  daun Piper  betle dan  kulit  buah Citrus  reticulata pada  konsentrasi  yang  berbeda.  Hasil  penelitian  ini  adalah:
(1)  Ada  perbedaan  diameter  daerah  hambat  pertumbuhan Candida  albicans akibat pemberian variasi kombinasi ekstrak daun Piper betle dan kulit buah Citrus reticulata . Hal ini diperoleh dari hasil  uji hipotesis bahwa nilai signifikansi 0,0001  <  0,05.  2) Variasi kombinasi ekstrak  daun Piper  betle dan  kulit  buah Citrus  reticulata yang  paling  efektif  dalam menghambat  pertumbuhan  jamur Candida  albicans dalam  penelitian  ini  adalah  variasi kombinasi 10%:50%.
Kata Kunci: Antifungi, Kombinasi Ekstrak Daun Piper betle dan Kulit Buah Citrus reticulata , Diameter Daerah Hambat, Candida albicans

## Abstract
This research aims to find out: (1) The difference of the inhibit area diameter (DDH) of Candida  albicans growth  with  the  combination  variations  of Piper  betle leaf  and Citrus reticulata peels  extracts,  (2)  The  effective  combination  variations  of  the Piper  betle leaf  and Citrus reticulata peels extract in inhibiting the Candida albicans growth. This research is true experimental research with randomized post test only control group design . The combination variations of Piper betle leaf and Citrus reticulata peels extracts in this research is 10%:10%; 10%:20%;  10%:30%;  10%:40%  and  10%:50%.  Antifungal  activity  assay  use  well  diffusion method.  The  treatment  effects  is  there  are  inhibit  area  diameter  (DDH)  of Candida  albicans growth. Population in this research is all Candida albicans from culture stock that bred again
in  SDA  ( Sabouraud  Dextrose  Agar ),  while  the  sample  in  this  research  is Candida  albicans that  given  combination  variations  of Piper  betle leaf  and Citrus  reticulata peels  extracts  in different concentration. The results is: (1) There are  differences inhibit area  diameter (DDH) of Candida  albicans growth  among  the  combination  variations  of Piper  betle leaf  and Citrus reticulata peels  extracts.  This  is  obtained  from  the  hypothesis  testing  results  that  the significance value is 0.0001 <0.05. 2). 10%:50% is the effective combination variations of the Piper betle leaf and Citrus reticulata peels extract in inhibiting the Candida albicans growth.
Key  Word: Antifungal,  Combination  of Piper  betle leaf  and Citrus  reticulata peels  extracts, Inhibit Area Diameter, Candida albicans

## PENDAHULUAN
Kemajuan  farmakologi  berkembang seiring perkembangan zaman. Seiring dengan  perkembangan  zaman  penggunaan obat  tradisional  mulai  ditinggalkan.  Terjadi pergeseran  penggunaan  obat  tradisional menjadi  obat  sintetis  dengan  kemasan  yang lebih  praktis  dan  modern.  Sementara  ini banyak orang beranggapan bahwa penggunaan  tanaman  obat  atau  obat tradisional  relatif  lebih  aman  dibandingkan obat sintetis. Menurut Katno (2002), dibandingkan obat-obat modern, obat tradisional  memiliki  beberapa  kelebihan antara  lain:  efek  sampingnya  relatif  rendah, dalam  suatu  ramuan  dengan  komponen berbeda  memiliki  efek  saling  mendukung, pada  satu  tanaman  memiliki  lebih  dari  satu efek  farmakologi  serta  lebih  sesuai  untuk penyakit-penyakit metabolik dan degeneratif.
Penggunaan  obat  tradisional  juga kerap  digunakan  untuk  mengatasi  masalah kesehatan  reproduksi.  Salah  satu  masalah kesehatan  reproduksi  adalah  keputihan (leukorea)  yang  dialami  oleh  wanita.  Data penelitian  tentang  kesehatan  reproduksi wanita  menunjukkan  75%  wanita  di  dunia pasti menderita keputihan paling tidak sekali seumur  hidup  dan  45%  diantaranya  bisa mengalaminya sebanyak dua kali atau lebih. Keputihan  bisa  menjadi  tanda  awal  dari penyakit  yang  lebih  berat,  dari  vaginal candidiasis, gonorrhea, Chlamydia, kemandulan hingga kanker (Pribakti, 2012).
Faktor  penyebab  keputihan  paling umum  yaitu,  infeksi  yang  disebabkan  oleh jamur Candida albicans ( candidiasis ). Kemampuan Candida albicans untuk melekat  pada  sel  inang  merupakan  faktor penting  pada  tahap  permulaan  kolonisasi dan  infeksi.  Perubahan  fenotip  menjadi bentuk  filamen  memungkinkan Candida albicans untuk  melakukan  penetrasi  ke
epithelium dan berperanan dalam infeksi dan penyebaran Candida  albicans pada  sel inang. Candida albicans juga dapat membentuk  biofilm  yang  dipercaya  terlibat dalam penyerangan sel inang dan berhubungan  dengan  resistansi  terhadap antifungi (Ksumaningtyas, 2015).
Upaya  yang  telah  dilakukan  oleh sebagian  besar  kaum  perempuan  untuk mencegah  hal  tersebut  adalah  dengan menggunakan obat keputihan, sabun pembersih  organ  kewanitaan,  pelembab vagina,  krim  anti-gatal,  tisu  kewanitaan, semprotan,  bedak,  atau  krim  cukur  rambut kemaluan bahkan antibiotik. Pada kenyataannya,
penggunaan sabun
pembersih  organ  kewanitaan  cenderung dapat menyebabkan alergi dalam penggunaannya. Crann, et al .  (2018) meneliti dampak penggunaan produk pembersih kewanitaan pada 1435 responden di  Kanada.  Hasilnya,  lebih  dari  95  persen responden pernah menggunakan setidaknya satu  produk  kewanitaan  yang  digunakan  di vagina.  Crann  menyebutkan,  dampak  buruk dari  penggunaan  zat  pembersih  kewanitaan itu  diantaranya  gatal  (74,5%),  terbakar (50,2%), kemerahan (34,9%), iritasi (21,3%), pembengkakan (17,9%), dan luka (10,7%).
Daun  sirih  secara  tradisional  sudah digunakan  untuk  mengobati  sariawan  dan keputihan,  bahkan  sering  digunakan  untuk obat kumur, atau antiseptik sebagai penyembuh  luka  bakar  karena  mengandung senyawa  saponin  dan  juga  sebagai  zat antimikroba  (Zuraidah,  2015).  Minyak  atsiri daun  sirih  mengandung  minyak  terbang (betlephenol),  seskuiterpen,  pati,  diatase, gula,  zat  samak  dan  kavikol  yang  memiliki daya  mematikan  kuman,  antioksidasi  dan fungisida (antijamur) (Daherlin, 2011).
Sundari dan Winarno (2001)
melaporkan  bahwa  daun  sirih  merupakan
salah  satu  bahan  alami  yang  mengandung 13  zat  yang  dapat  mengobati  keputihan. Daun  sirih  mengandung  minyak  atsiri  yang komponen penyusunnya merupakan senyawa fenol yang mampu menjadi senyawa anti bakterisidal, fungisidal, maupun germisidal. Minyak atsiri dan ekstrak etanol  daun  sirih  dilaporkan  mempunyai aktivitas  anti  cendawan  terhadap Candida albicans. Dengan demikian, maka daun sirih dapat  dijadikan  alternatif  dalam  pengobatan untuk  penyakit  yang  disebabkan  oleh Candida albicans.
Banyaknya  kebutuhan  buah  jeruk untuk dikonsumsi, menjadikan prospek bisnis yang menjanjikan. Dikawasan pariwisata  buah  jeruk  diolah  menjadi  aneka hidangan  dan  minuman.  Pengolahan  ini meninggalkan  limbah  berupa  kulit  jeruk, salah  satunya  kulit  buah  jeruk  keprok  yang terbuang  sia-sia.  Kulit  buah  jeruk  keprok ( Citrus  reticulata) mengandung  alkaloid, flavonoid,  polisakarida,  saponin  dan  minyak atsiri (Hutapea dalam Widyarto, 2009).
Berdasarkan  senyawa  bioaktif  yang terkandung  dalam  daun  sirih  hijau  dan  kulit buah  jeruk  keprok,  maka  perlu  dilakukan penelitian  tentang  kombinasi  kedua  ekstrak tersebut  dalam  menghambat  pertumbuhan jamur Candida  albicans .  Pemanfaatan  daun sirih  hijau  dan  kulit  buah  jeruk  keprok dilakukan  dengan  proses  ekstraksi.  Uji pendahuluan  yang  telah  dilakukan  ternyata pada kombinasi  ekstrak daun  sirih  hijau  dan ekstrak  kulit  buah  jeruk  keprok  dengan perbandingan 1:1 dengan konsentrasi ekstrak  masing-masing  50%  menunjukkan aktivitas  penghambatan  pertumbuhan  jamur Candida  albicans sebesar  23  mm.  Peneliti menguji  daya  hambat  kombinasi  ekstrak daun  sirih  hijau  dengan  kulit  buah  jeruk keprok  dalam  menghambat  pertumbuhan jamur Candida  albicans .  Penelitian  ini diharapkan  dapat  memberikan  informasi mengenai potensi antifungi kombinasi kedua ekstrak tersebut sebagai alternatif pengobatan alami pada infeksi jamur Candida albicans .
METODE
Penelitian ini adalah penelitian eksperimental
sungguhan ( true experimental )  dengan  rancangan  penelitian randomized  post  test  only  control  group design .  Populasi  dari  penelitian  ini  adalah seluruh  jamur Candida  albicans ATCC 10231 dari stok kultur yang dibiakan kembali pada  media  SDA  ( Sabouraud  Dextrose Agar ).  Sampel  penelitian  ini  adalah  jamur Candida  albicans yang  diberikan  variasi kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau  dengan kulit buah jeruk keprok. Jumlah sampel yang digunakan  dalam  penelitian  adalah  25 sampel yang dipilih  dengan teknik purposive sampling .
Variabel  bebas  pada  penelitian  ini adalah variasi konsentrasi kombinasi ekstrak daun sirih hijau ( Piper betle ) dengan ekstrak kulit  buah  jeruk  keprok  ( Citrus  reticulata ) dengan  variasi  kombinasi  yaitu:  10%:10%; 10%:20%;
10%:30%; 10%:40% dan 10%:50%. Variabel  dependen  (variabel terikat)  pada  penelitian  ini  adalah  diameter daerah  hambat  (DDH)  pertumbuhan  jamur Candida  albicans (dalam  mm). Variabel kontrol  pada  penelitian  ini  adalah  variabel yang  dikendalikan  atau  dibuat  konstan sehingga  pengaruh  variabel  independen terhadap  variabel  dependen  tidak  dapat dipengaruhi  oleh  faktor  luar  yang  tidak diteliti.  Variabel  kontrol  dalam  penelitian  ini adalah  lingkungan  tempat  inkubasi  meliputi suhu,  lama  inkubasi,  media,  intensitas cahaya, pH dan kelembaban.
Data yang diperoleh pada penelitian ini dianalisis  secara  deskriptif  dan  statistik. Analisis deskriptif dilakukan dengan  mencari rerata  dan  simpangan  baku  dari  data  yang diperoleh  dari  setiap  kelompok  perlakuan. Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan  uji One  Way  Anova dengan taraf signifikansi (α) 0.05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Penelitian
Data  Rerata  Diameter  Daerah  Hambat Pertumbuhan  Jamur Candida  albicans pada masa  inkubasi  1x24  jam disajikan  pada Tabel  01.  dan  dokumentasi  DDH  disajikan pada Gambar 01.
Tabel 01.
Rerata Diameter Daerah Hambat Pertumbuhan Jamur Candida albicans pada masa inkubasi 1x24 jam
Replikasi DDH (mm), (d sumur = 5 mm) (+ 1 ) (+ 2 ) p1 p2 p3 p4 p5 1 34,2 7,0 9,1 10,8 11,1 11,6 12,3 2 31,7 7,0 9,0 9,5 10,9 11,7 11,9 3 33,9 7,0 8,5 9,5 9,8 11,0 11,2 4 34,9 7,0 9,0 10,0 10,9 11,0 13,5 5 34,5 7,0 8,2 10,3 10,5 11,2 11,4 SubTotal  169,2  35,0  43,8 50,1 53,2 56,5 60,3 Rerata 33,84  7,00  8,76  10,02  10,64  11,30  12,06
Keterangan: (+ 1 ) : Perlakukan dengan ketoconazole 2%
(+ 2 ) : Perlakukan dengan ekstrak kulit buah jeruk keprok konsentrasi  10%
(p1) : Kombinasi ekstrak daun sirih dengan ekstrak kulit buah jeruk keprok (10% : 10%) (p2) : Kombinasi ekstrak daun sirih dengan ekstrak kulit buah jeruk keprok (10%  : 20%) (p3) : Kombinasi ekstrak daun sirih dengan ekstrak kulit buah jeruk keprok (10%  : 30%) (p4) : Kombinasi ekstrak daun sirih dengan ekstrak kulit buah jeruk keprok (10% : 40%) (p5) : Kombinasi ekstrak daun sirih dengan ekstrak kulit buah jeruk keprok (10% : 50%)
(a)
(b) (c)
Gambar 01.
Zona Hambat Pertumbuhan Jamur Candida albicans pada masa inkubasi 1x24 jam (a) Variasi kombinasi ekstrak, (b) Kontrol positif ketoconazole 2%, (c) Kontrol positif ekstrak kulit buah jeruk keprok konsentrasi 10%
Pembahasan
Perbedaan  Diameter  Daerah  Hambat (DDH)  Pertumbuhan  Jamur Candida albicans dengan  Variasi  Kombinasi Ekstrak  Daun  Sirih  Hijau  ( Piper  betle ) dan  Ekstrak  Kulit  Buah  Jeruk  Keprok ( Citrus reticulata )
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah dilakukan, pemberian kombinasi ekstrak  daun  sirih  hijau  dan  ekstrak  kulit buah  jeruk  keprok  mampu  menghambat pertumbuhan  jamur Candida  albicans pada masa  inkubasi  1x24  jam  pada  variasi kombinasi  10%:10%;  10%:20%;  10%:30%; 10%:40%; dan 10%:50%
dengan membentuk  rerata  DDH  secara  berturut- turut  8,76  mm;  10,02  mm,  10,64  mm;  11,3
mm;  dan  12,06  mm. Berdasarkan  uji hipotesis yang dilakukan dengan uji statistik One  Way  Anova menunjukkan  bahwa terdapat perbedaan diameter daerah hambat variasi kombinasi ekstrak daun sirih hijau  ( Piper  betle )  dan  ekstrak  kulit  buah jeruk  keprok  ( Citrus  reticulata )  terhadap pertumbuhan jamur Candida albicans.
Ekstrak  daun  sirih  hijau  dan  ekstrak kulit  buah  jeruk  keprok  dalam  penelitian  ini adalah  ekstrak  kasar  ( crude  extract )  yang dibuat dengan metode maserasi menggunakan  alkohol  96  %.  Menurut  Aziz (2009)  alkohol  96%  bersifat miscible terhadap  air  dan  dengan  kebanyakan larutan  organik,  termasuk  larutan  non-polar seperti aliphatic  hydrocarbons .  Bila  bahan non-polar  dilarutkan  dalam  alkohol,  dapat ditambahkan  air  untuk  membuat  larutan
1.1 1.2 1.3 1.4 1.5
yang  kebanyakan  air.  Gugus  OH  dalam alkohol  membantu  melarutkan  molekul polar  dan  ion-ion  serta  gugus  alkilnya CH 3 CH 2- dapat  mengikat  bahan  non-polar, sehingga  alkohol  96%  dapat  melarutkan baik  zat  yang  bersifat  non  maupun  polar dalam  simplisia  daun  sirih  hijau  dan  kulit buah  jeruk  keprok.  Pengenceran  ekstrak dilakukan  dengan  menggunakan  aquades sehingga akan membentuk campuran koloid.  Pengenceran  ekstrak  dilakukan tanpa penambahan surfaktan seperti tween karena dapat mengurangi kekuatan ekstrak dalam  menghambat  pertumbuhan  fungi. Berdasarkan  penelitian  Okunowo  (2013), campuran  minyak  esensial Citrus  paradisi dengan tween 80  menunjukkan  tidak adanya  zona  hambat  pertumbuhan  jamur Candida albicans .
Konsentrasi  ekstrak  daun  sirih  hijau dalam  penelitian  kombinasi  ekstrak  daun sirih  hijau  dan  kulit  buah  jeruk  keprok  ini dibuat  konstan  karena  pada  penelitian sebelumnya,  Chairunnisa et  al .,  (2015) dalam  penelitian Inhibition  of  Betel  Leaf
Extract
Against Candida albicans menyatakan  bahwa  kadar  hambat  minimal ekstrak daun sirih hijau dalam penelitiannya adalah  pada  konsentrasi  10%  dengan rerata  diameter  daerah  hambat  sebesar 13,62 mm. Sedangkan pada uji pendahuluan yang telah dilakukan diperoleh  rerata  diameter  daerah  hambat pertumbuhan jamur Candida albicans akibat pemberian konsentrasi 10 % ekstrak daun  sirih  hijau  sebesar  16,50  mm. Perbedaan kemampuan daya hambat ekstrak daun sirih hijau ini disebabkan oleh perbedaan  faktor  geografi,  musim,  kondisi iklim  dan  ekologi  dari  tanaman  sirih  hijau yang  digunakan.  Menurut  Suprapta  (2014), jenis  dan  jumlah  bahan  aktif  dari  suatu tanaman  sering  dipengaruhi  oleh  faktor geografi,  musim,  perbedaan  tanaman, kondisi  iklim  dan  ekologi.  Tumbuhan  jenis yang sama bila tumbuh pada geografi yang berbeda  berpotensi  memiliki  kandungan bahan aktif yang berbeda.
Diameter  daerah  hambat  kombinasi ekstrak  daun  sirih  hijau  dan  ekstrak  kulit buah  jeruk  keprok  pada  variasi  konsentrasi 10%:10%;  10%:20%;  10%:30%;  10%:40%; dan  10%:50%  mengalami  peningkatan seiring  dengan  pertambahan  konsentrasi
ekstrak  kulit  buah  jeruk  keprok.  Ini menunjukkan bahwa semakin tinggi penambahan konsentrasi ekstrak kulit buah jeruk  keprok  maka  semakin  besar  DDH pertumbuhan  jamur Candida  albicans yang terbentuk.  Dari  hasil  penelitian,  variasi kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau  dan ekstrak  kulit  buah  jeruk  keprok  10%:50% menghasilkan  rata-rata  DDH  yang  paling luas  pada  masa  inkubasi  1x24  jam dibandingkan  dengan  variasi  kombinasi ekstrak  lainnya  pada  penelitian  ini,  yaitu sebesar  12,06  mm.  Jika  dibandingkan dengan  kemampuan  daya  hambat  ekstrak daun sirih hijau konsentrasi 10%, kombinasi ekstrak daun sirih hijau dan kulit buah jeruk keprok  konsentrasi  10%:50%  lebih  rendah dalam  menghambat  pertumbuhan  jamur Candida  albicans .  Hal  ini  dikarenakan terjadi penurunan konsentrasi ekstrak daun sirih  hijau  dan  ekstrak  kulit  buah  jeruk keprok  ketika  dikombinasikan,  sehingga kemampuan daya hambat kombinasi ekstrak menjadi berkurang.
Kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau dan ekstrak kulit buah jeruk keprok bersifat fungistatik  yaitu  hanya  dapat  menghambat pertumbuhan  jamur  tanpa  mematikannya (Radji  2010).  Fungsi  kerja  fungistatik  dari kombinasi  ekstrak  ini  ditunjukkan  dari  hasil pengamatan pada masa inkubasi 2x24 dan 3x24  jam  bahwa  terjadi  penurunan  DDH yang terbentuk dari hasil pengamatan pada masa inkubasi 1x24 jam.
Sebagai  perbandingan  dari  rata-rata diameter  daerah  hambat  pertumbuhan jamur Candida  albicans akibat  pemberian variasi  kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau dan  kulit  buah  jeruk  keprok  digunakan kontrol positif ketoconazole 2%. Ketoconazole  adalah  obat  antijamur  yang digunakan  terutama  untuk  terapi  lokal kandidiasis  vagina  dan  untuk  infeksi dermatofit/infeksi jamur pada kulit. Ketoconazole  adalah  obat  yang  termasuk golongan  imidazole  sintetik.  Seperti  semua agen antijamur azole, ketoconazole bekerja terutama dengan menghambat enzim sitokrom P-450, C-14- α-demethylase (P45014DM).  Enzim  ini  berperan  dalam jalur
biosintesis sterol yang
bertanggungjawab merubah lanosterol menjadi ergosterol. Hal ini akan mengakibatkan  dinding  sel  jamur  menjadi
permeable  dan terjadi  penghancuran  jamur (Chairunnisa et  al .,  2015).  Pada  pengujian kontrol  positif  (+ 1 )  yaitu  ketoconazole  2% diperoleh rata-rata DDH sebesar 33,84 mm. Jika  dibandingkan  dengan  ketoconazole 2%,  maka  potensi  antifungi  kombinasi ekstrak daun sirih hijau dan kulit buah jeruk keprok  variasi  konsentrasi  10%:50%  yang memiliki  rata-rata  DDH  sebesar  12,06  mm adalah  35,64%.  Sedangkan,  pada  ekstrak kulit  buah  jeruk  keprok  konsentrasi  10% yang  digunakan  sebagai  kontrol  postif  (+ 2 ) diperoleh  DDH  sebesar  7  mm.  Jika dibandingkan  dengan  variasi  kombinasi ekstrak  10%:10%  dihasilkan  DDH  sebesar 8,76  mm,  sehingga  dapat  diketahui  bahwa dengan  penambahan  ekstrak  daun  sirih hijau sebanyak 10% pada variasi kombinasi tersebut  terjadi  peningkatan  DDH  sebesar 1,76 mm.
Kategori  daya  hambat  jamur  dapat ditentukan  dengan  melihat  rerata  diameter daerah hambat dari setiap variasi kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau  dan ekstrak  kulit  buah  jeruk  keprok.  Menurut Davis  dan  Stout  (1971)  berdasarkan  zona jernihnya,  daya  hambat  dibagi  atas  empat kategori,  yaitu:  sangat  kuat  >  20  mm,  kuat 11-20 mm, sedang 6- 10 mm dan lemah ≤ 5 mm. Diameter daerah hambat yang dimaksud  adalah  zona  jernih  disekitar sumur difusi sehingga dilakukan pengurangan  DDH  sebesar  -5  mm.  Kontrol positif  (ketoconazole  2%)  tergolong  dalam sediaan  yang  memberikan  daya  hambat sangat  kuat  yaitu  28,84  mm.  Kontrol  positif (ekstrak kulit buah jeruk keprok konsentrasi 10%)  tergolong  dalam  sediaan  yang memberikan daya hambat yang lemah yaitu 2  mm.  Kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau dan  kulit  buah  jeruk  keprok  dengan  variasi kombinasi 10%:10% dan 10%:20% tergolong dalam sediaan yang memberikan daya  hambat  lemah  yaitu  3,76  dan  5,02. Untuk  kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau dan  kulit  buah  jeruk  keprok  dengan  variasi kombinasi  10%:30%  ;  10%:40%  dan 10%:50%  tergolong  dalam  sediaan  yang memberikan  daya  hambat  sedang  yaitu 5,64 mm, 6,30 mm dan 7,06 mm.
Berdasarkan penelitian Zuraidah, (2015)  pemberian  ekstrak  daun  sirih  hijau konsentrasi  80%  membentuk  zona  bening 28,71  mm  terhadap  pertumbuhan  jamur
Candida  albicans .  DDH  tersebut  hampir sama  dengan  DDH  akibat  pemberian kontrol  positif  ketoconazole  2%  yaitu sebesar  28,84  mm  (setelah  dikurangi diameter sumur).
Variasi  Kombinasi  Ekstrak  Daun  Sirih Hijau  ( Piper  betle )  dan  Ekstrak  Kulit Buah  Jeruk  Keprok  ( Citrus  reticulata ) yang  Paling  Efektif  dalam  Menghambat Pertumbuhan Jamur Candida albicans
Besarnya DDH yang terbentuk menunjukkan  efektivitas  kombinasi  ekstrak daun sirih hijau dan kulit buah jeruk keprok dalam  menghambat  pertumbuhan  jamur Candida  albicans .  Semakin  besar  DDH yang  terbentuk  maka  semakin  efektif kombinasi ekstrak daun sirih hijau dan kulit buah  jeruk  keprok  tersebut.  Berdasarkan hasil  penelitian,  kombinasi  ekstrak  daun sirih hijau dan kulit buah jeruk keprok yang paling  efektif  dalam  penelitian  ini  adalah kombinasi ekstrak dengan variasi kombinasi 10%:50%. Terbentuknya diameter daerah
hambat akibat pemberian kombinasi ekstrak daun sirih hijau dan kulit buah jeruk keprok menunjukkan bahwa terdapat senyawa  bioaktif  yang  bersifat  antifungi pada masing-masing ekstrak. Suatu antifungi  dapat  bereaksi  dengan  cara merusak dinding sel (menghambat biosintesis kitin dan menghambat biosintesis  glukan),  merusak  membran  sel (merusak fungsi mannoprotein dan interaksi dengan  ergosterol)  serta  antifungi  polien (Franklin & Snow, 2005).
Daun sirih hijau mengandung senyawa  saponin,  flavonoid,  polifenol  dan minyak  atsiri  (Departemen  Kesehatan  RI, 2000). Dalam daun sirih hijau juga diketahui mengandung senyawa Piperol-A, Piperol-B, metil  piper  betlol,  terpinen4-ol,  safrole, allyl pyrocathechol monoacetate , eugenol, eugenyl  acetate , hydroxyl  chavicol ,  piper betol, carvacrol,  allyl  cathecol,  chavicol,  p- cymene, caryophyllene, chavibetol, cineole , estragol.  Analisis  fitokimia  daun  sirih  hijau menunjukkan  adanya  senyawa  alkaloid, tanin, karbohidrat, asam amino dan steroid. Komponen  utama  pada  daun  sirih  hijau yaitu  minyak  atsiri  yang  mengandung  2 senyawa fenol yaitu chavibetol dan chavicol
(Dwivedi  &  Tripathi,  2014).  Menurut  Aznita (2011), kandungan senyawa yang diketahui memiliki  aktivitas  sebagai  antifungi  yaitu senyawa  terpen  seperti  eugenol,  carvacrol, dan linalool.
Eugenol  merupakan  golongan  fenol dengan  rumus  kimia  C 10 H 12 O 2 .  Satu  gugus OH fenolik bebas pada lingkar aromatiknya dan  satu  gugus  OH  termetilasi  berperan penting dalam menghambat koloni Candida albicans .  Aktivitas  antifungi  oleh  golongan fenol  juga  tergantung  pada  besar  gugusan alkil  yang  ditambahkan,  yaitu  semakin besar gugusan alkil tersebut maka aktivitas antifunginya  akan  semakin  besar.  Di samping  itu,  sistem  kerja  dari  eugenol sebagai  agen  antifungi  yaitu  menghambat kolonisasi Candida  albicans dalam  proses pembelahan  sel  (Khatima et  al .,  2017). Selain  itu,  penelitian  yang  dilakukan  oleh Jian  Hua  dan  Wen  Hai  dalam  Khatima et al.,  (2017)  mendeskripsikan  mekanisme antifungi  oleh  bahan  herbal  Cina,  salah satunya adalah eugenol, dalam menghambat  kolonisasi  Candida  sebagai berikut: 1). Sebelum terjadi proses pembelahan  sel,  terlebih  dahulu  terjadi proses  sintesis  DNA,  yang  di  dalamnya termasuk  fase  S  (sintesis).  Setelah  terjadi sintesis  DNA,  sel  akan mengalami fase  G2 dan  fase  M  DNA  jamur.  Pada  jamur  yang dihambat pertumbuhannya, terjadi penurunan  pada  proporsi  fase  S-G2-M. Pada  hasil  uji  FCM  ( Flow  Cytometri ), ditunjukkan bahwa semakin besar konsentrasi  agen  antifungi,  semakin  turun proporsi  fase  S-G2-M,  sehingga  pada akhirnya  juga  berpengaruh  pada  indeks proliferasinya; 2). Sel C. albicans mengalami perubahan yang signifikan pada saat terpapar agen antifungi, terjadi penyusutan  yang  nyata  pada  membran selular,  hilangnya  organel  sel,  dan  nukleus serta  sitoplasma  yang  ditutupi  oleh  area elektron yang tebal. Berdasarkan hasil yang didapat  dari  FCM,  di  bawah  pengaruh antifungi pada penelitian ini, terjadi penurunan  volume  sel  jamur  dan  nukleus mengalami  kerusakan;  3).  Sel  jamur mengalami  kematian  setelah  terpengaruh oleh  antifungi  yang  efektif.  Hal  ini  ditandai dengan  hilangnya  transportasi  membran dan  integritas  struktur  membran.  Ketika  sel mati, kromosom DNA mengalami
segmentasi, permeabilitas membran meningkat,  serta  konten  selular dan segmen DNA menghilang.
Carvacrol  adalah  senyawa  fenol  yaitu monoterpene alami derivat cymene
( National Center for Biotechnology Information ). Carvacrol merupakan
komponen    dari    minyak    esensial  suatu tumbuhan yang mempunyai aktivitas antijamur  yang  kuat  terhadap  berbagai patogen,  termasuk C.    albicans ,    dengan mekanisme  kerja  membuat  lesi  membran non  spesifik  pada    dinding  sel C.albicans (Siddik et al., 2016).
Senyawa bioaktif lainnya yang terdapat  pada  daun  sirih  ( Piper  betle) adalah  linalool. Linalool adalah  alkohol tersier dan merupakan senyawa monoterpenoid.  Senyawa  ini  merupakan metabolit  tanaman,  komponen  minyak atsiri, sebagai agen antimikroba dan aroma ( National Center for Biotechnology Information ).  Dalam  penelitian  Dias et  al ., (2017)  linalool  memiliki  aktivitas  antifungi yang  baik  untuk  jenis C.  tropicalis ,  dan aktivitas  moderat  terhadap  spesies C. albicans .  Menurut  Pierce et  al .,  (2013)  & Sookto et  al .,  (2013)  linalool  sebagai  agen antifungi  dapat  mengganggu  biosintesis dinding  sel  dan  dapat  meningkatkan permeabilitas  ion  membran  sel  jamur, sehingga  pertahanan  dinding  sel  jamur menurun.
Selain  kandungan  senyawa  bioaktif yang bersifat antifungi pada daun sirih hijau ( Piper betle), aktivitas antifungi  juga dipengaruhi  oleh  kandungan  senyawa bioaktif  pada  kulit  buah  jeruk  keprok.  Kulit buah  jeruk  keprok  ( Citrus reticulata) mengandung alkaloid, flavonoid, polisakarida,  saponin  dan  minyak  atsiri (Hutapea dalam Widyarto, 2009). Berdasarkan penelitian Hasija, (2015) kandungan  minyak  atsiri  pada  jeruk  ( Citrus spp.)  menunjukkan  efek  penghambatan terhadap  semua  organisme  yang  diuji ( Escherichia  coli , Staphylococcus  aureus , Salmonella  typhi , Shigella sp.  dan Candida albicans ) dan menunjukkan spektrum aktivitas  yang  luas.  Kandungan  minyak atsiri  kulit  buah  jeruk  keprok  berasal  dari golongan  limonena  (94%),  mirsen  (2%), linalol  (0,5%),  decanal  (0,4%),  sitronelal (0,1%),  neral  (0,1%),  geranial  (0,1%),
valensen (0,05%), sinnsial (0,02%), sinensial  (0,01%)  (Wagenaar  dalam  AAK, 1994).
Limonen  adalah  komponen  minyak atsiri  terbanyak  dalam  kulit  buah  jeruk keprok. Menurut Thakre et al ., (2017) dalam penelitiannya  yang  berjudul Limonene inhibits Candida albicans growth by inducing  apoptosis menyatakan  bahwa limonen  menghambat  pertumbuhan C. albicans dengan  merusak  dinding  sel. Kerusakan  diinduksi  oleh  stres  oksidatif yang mengarah pada kerusakan DNA yang dihasilkan ke dalam modulasi dari siklus sel dan induksi melalui stres nukleolus. Limonene  menghambat  siklus  sel  di  fase G1 dan menginduksi apoptosis Candida sp. Flavonoid    merupakan    senyawa golongan  fenol    yang  aktif.  Flavonoid  yang terkandung  dalam  buah  Jeruk  Keprok termasuk  jenis  flavon  yaitu,  hespiritin, naringenin  dan  yang  terbanyak  adalah nobiletin  (Robinson,  1995).  Senyawa  fenol dan derivatnya dapat menimbulkan denaturasi  protein  yang    terdapat    pada dinding  sel  sehingga  dapat  merusak susunan dan merubah mekanisme permeabilitas  dari  mikrosom, lisosom, dan dinding sel (Siddik et al., 2016).
Senyawa  bioaktif  dari  kulit  buah  jeruk keprok yang diketahui juga bersifat antifungi adalah saponin. Saponin memiliki kemampuan sebagai pembersih dan antiseptik  yang  berfungsi  membunuh  atau mencegah  pertumbuhan  mikroorganisme (Robinson,  1995).  Mekanisme    kerja saponin  sebagai    antijamur    dengan menurunkan    tegangan permukaan membran  sterol  yang  berperan  dalam sintesis    dinding    sel Candida  albicans (Siddik et al., 2016).
Terdapat  beberapa  faktor  yang  dapat mempengaruhi  efektivitas  penghambatan pertumbuhan  jamur,  salah  satunya  adalah konsentrasi  senyawa  aktif  bahan  antifungi. Semakin banyak bahan antifungi (konsentrasi  atau  volume)  yang  diberikan semakin  cepat  kontak  yang  terjadi  antara sel  jamur  dengan  bahan  antifungi  tersebut.
Faktor  lain  yang  juga  berpengaruh  adalah jumlah  mikroorganisme,  suhu,  spesies bakteri,  adanya  bahan  lain  dan  pH  (Putra, 2017). Faktor-faktor tersebut dalam penelitian  ini  telah  dibuat  sama  dan  sudah dikondisikan  sehingga  hanya  faktor  variasi kombinasi ekstrak yang berpengaruh.

## SIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan hasil analisis dan pembahasan  maka  dapat  disimpulkan sebagai berikut. (a) Ada perbedaan diameter  daerah  hambat  pertumbuhan jamur Candida  albicans akibat  pemberian variasi  kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau ( Piper  betle )  dan  ekstrak  kulit  buah  jeruk keprok  ( Citrus  reticulata ).  Hal  ini  diperoleh dari hasil uji hipotesis bahwa nilai signifikansi  0,0001  <  0,05;  (b)  Variasi kombinasi  ekstrak  daun  sirih  hijau  ( Piper betle )  dan  ekstrak  kulit  buah  jeruk  keprok ( Citrus  reticulata )  yang  paling  efektif  dalam menghambat  pertumbuhan  jamur Candida albicans dalam  penelitian  ini  adalah  variasi kombinasi 10%:50%.
Berdasarkan  simpulan  di  atas,  saran yang  disampaikan  dalam  penelitian  ini adalah:    (a)  Perlu  adanya  penelitian lanjutan  mengenai  pemanfaatan  kombinasi ekstrak  daun  sirih  hijau  dan  ekstrak  kulit buah jeruk keprok untuk mengetahui variasi kombinasi  ekstrak  yang  bersifat  fungisidal, sehingga dapat bermanfaat bagi masyarakat  luas;  (b)  Hasil  penelitian  ini diharapkan dapat digunakan oleh masyarakat dalam menanggulangi masalah kesehatan, utamanya permasalahan keputihan  ( leukorea )  yang  disebabkan  oleh jamur Candida albicans.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terimakasih dan penghargaan  setinggi-tingginya  diberikan kepada  pihak  pengelola    Laboratorium Kimia  Organik  dan  Laboratorium  Biologi, Universitas  Pendidikan  Ganesha    atas dukungan  fasilitas  selama  penelitian  ini berlangsung.
DAFTAR RUJUKAN
AAK.  1994. Budidaya  Tanaman  Jeruk.
Yogyakarta: Kanisius
Aliyu,  M.  S.,  B.  Musa,  I.  M.  Hussaini,  dan  A.
S. Charanchi. 2016. “Effects  of
Feminine  Wash  (Soap)  on  Some Pathogenic  Bacteria  Causing  Urinary Tract  Infections  (UTIS) ”. International Journal  of  Innovative  Research  & Development, Vol. 5 (1).
Aziz,  T.,  R.  K.  N.  Cindo,  A.  Fresca.  2009. Pengaruh  Pelarut  Heksana  dan  Etanol, Volume  Pelarut,  dan  Waktu  Ekstraksi terhadap  Hasil  Ekstraksi  Minyak  Kopi. Skripsi.  Sumatera  Selatan:  Universitas Sriwijaya.
Aznita,  H.W.H.,  N.  Mohd-Al-Faisal,  A.R. Fathilah.  2011. “Determination  of  The Percentage Inhibition of Diameter Growth  (PIDG)  of Piper  betle Crude Aqueous  Extract  Against  Oral  Candida species ”. Journal  of  Medicinal  Plant Research, Vol. 5 (6):878-884.
Begum,  N.,  B.  Sharma.,  S.P.  Ravi.    2013. “ Calotropis procera and Annona squamosa :  Potential  Alternatives  to Chemical  Pesticides”. British  Journal  of Applied  Science  &  Technology, Vol.  3 (2) : 254-267.
Berkhout, C. M. 1923. De
Schimmelgeslachten  Monilia,  Oidium, Oospora  en  Torula .  Tesis . Utrecht: University of Utrecht.
Chairunnisa,  S.,  T.  Setyawati,  &  Nursyamsi. 2015. Inhibition  of  Betel  Leaf  Extract (Piper  betle  Linn)  Against  Candida albicans .  Tesis . Sulawesi  Tengah: Medical  Student,  Faculty  of  Medicine and Health Science, Tadulako University.
Crann, S. E., S. Cunningham, A. Albert, D. M. Money  dan  K.  C.  O’Doherty.  2018. “Vaginal  Health  and  Hygiene  Practices and Product Use in Canada: A National Crosssectional
Survey”. Research Article . Canada: Department of
Psychology, University of Guelph.
Daherlin.  2011. Kandungan  dan  Manfaat Daun  Sirih .  Tersedia  pada  laman: https://daherlin.wordpress.com/tag/zat- yang-terkandung-dalam-daun-sirih/.
Diakses pada tanggal 28 Oktober 2018. Davis,  W.  W.  dan  T.  R.  Stout.  1971.  “Disc Plate Method of Micribiological Antibiotic  Assay”. Journal Applied
Microbiology, Vol.  22  No.  4,  page  659- 665
Deshpande,  S.  N.  dan  D.  G.  Kadam.  2013. “GCMS  Analysis  and  Antibacterial Activity  of Piper  Betle (Linn)  Leaves Against Streptococcus  mutans ”. Asian Journal  of  Pharmaceutical  and  Clinical Research , Vol 6, Suppl 5, pp. 99101. Departemen  Kesehatan RI.  2002. Parameter Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan Obat .  Jakarta:  Departemen  Kesehatan RI, 9-12.
Dias, I. J., E. R. I. S. Trajano, R. D. Castro, G. L. S. Ferreira, H. C. M. Medeiros, D. Q. C. Gomes.  2017.  “Antifungal  activity  of linalool  in  cases  of Candida spp. isolated  from  individuals  with  oral candidiasis ”. Brazilian Journal of Biology ,  Vol.78 No.2.  Tersedia  pada laman:  http://dx.doi.org/10.1590/1519- 6984.171054
Dwivedi,  V.  dan  S.  Tripathi.  2014.  “Review Study  on  Potential  Activity  of Piper betle”.  Journal  of  Pharmacognosy  and Phytochemistry, Vol. 3 (4): 93-98. Franklin,  T.  J.  dan  G.  A.  Snow  2005.
Biochemistry  and  Molecular  Biology  of Antimicrobial  Drug  Action .  Springer Science & Business Media Gultom,  M.  2013. Analisis  Dampak  CAFTA terhadap Perdagangan Jeruk Sumatera Utara . Skripsi. Sumatera Utara: Fakultas Pertanian, Universitas Sumatera Utara.
Hasija,  S.  2015.  “Antimicrobial  Activity  of Citrus  sinensis (Orange) ,  Citrus  limetta (Sweet Lime) and Citrus limon (Lemon) Peel  Oil  on  Selected  Food  Borne Pathogens”. Research Report , Mumbai: Department  of  Food,  Nutrition  and Dietetics,  College  of  Home  Science, Nirmala Niketan.
Istianto,  M.,  Muryati.  2014. Minyak  Atsiri Jeruk: Manfaat dan Potensi Peningkatan Nilai Ekonomi Limbah Kulit Jeruk. From:
http://balitbu.litbang.pertanian.go.id/ind/i ndex.php/component/content/article/16- penelitianpengkajian2/593-minyak- atsiri-jeruk-manfaat-dan-potensi- peningkatan-nilai-ekonomi-limbah-kulit- jeruk.  Diakses  pada  tanggal  11  Maret 2018.
Jawetz,  Melnick,  dan  Adelberg.  2005.
Mikrobiologi Kedokteran . Jilid 2, Jakarta:  Salemba  Medika,  hal  343 –
345.
Katno,  S.  P.  2002. Tingkat  Manfaat  dan Keamanan  Tanaman  Obat  dan  Obat Tradisional .  Tersedia  pada  laman: cintaialam.tripod.com/keamanan- _obat%-20tradisional.pdf. Diakses pada tanggal 8 Desember 2018.
Khatima,  R.  K.,  C.  Chotimah,  A.  F.  Z.  Eva.
2017. Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  Kayu Manis (Cinnamomum burmannii) terhadap Pertumbuhan Candida albicans  pada  Gigi  Tiruan  Akrilik . Skripsi.  Makasar:  Universitas  Muslim Indonesia.
Kusumaningtyas, E. 2015. Mekanisme Infeksi Candida albicans pada Permukaan Sel,
Veteriner  Lokakarya  Nasional  Penyakit Zoonosis, Bogor: Balai Penelitian. Tersedia pada laman: peternakan.litbang.pertanian.go.id/fullte ks/lokakarya/lkzo05-48.pdf.
Diakses pada tanggal 9 November 2018.
Magaldi, S., S. Mata-Essayag, C. Hartung de Capriles,  C.  Perez,  M.T.  Colella,  C. Olaizola, & Y. Ontiveros. “Well diffusion for  antifungal  susceptibility  testing”.
International Journal of Infectious Diseases , Vol. 8, page: 39-45
Maharani,  S.  2012. Pengaruh  Pemberian Larutan  Ekstrak  Siwak    (Salvadora persica)  Pada  Berbagai  Konsentrasi Terhadap Pertumbuhan Candida
albicans . Karya Tulis Ilmiah. Semarang: Universitas  Diponegoro.  Tersedia  pada laman: https://id.123dok.com/document/zp2ln8r y-setiawati-maharani-g2a007-162- laporan-akhir-kti.html.  Diakses pada tanggal 11 Desember 2018. National Center for Biotechnology Information. PubChem Compound . Tersedia pada laman: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/comp ound/  10364.  Diakses  pada  tanggal  16
Januari 2019.
Okunowo, W. O., O. Oyedeji, L. O. Afolabi, E. Matanmi.  2013.  “Essential  Oil  of  Grape Fruit  ( Citrus  paradisi )  Peels  and  Its Antimicrobial Activities”. American Journal of Plant Sciences, Vol 4:1-9.
Parwata,  I  M.  A.  O.,  S.  R.  Santi,  I  M. Sulaksana,  &  I  A.  A.  Widiarthini.  2011. “Aktivitas  Larvasida  Minyak  Atsiri  pada Daun  Sirih  ( Piper  betle linn)  terhadap Larva  Nyamuk Aaedes  aegypti ”. Jurnal kimia 5 (1): 88-93.
Pierce, C.G., A. Srinivasan, P. Uppuluri, A.K.
Ramasubramanian,  &  J.L.  López-Ribot. 2013. “Antifungal  Therapy  with  an Emphasis on Biofilms ”. Current Opinion in  Pharmacology ,  Vol.  13,  No.  5,  pp. 726-730.
PMid:24011516. http://dx.doi.org/10.1016/j.coph.2013.08
.008.
Pribakti, B. 2012. Resep “Rahasia Kesehatan Wanita” .  Banjarmasin:  CV.  Sagung Seto Putra,  I  P.  A.  2017. Efektivitas  Ekstrak  Biji Srikaya  (Annona  squamosal)  pada
Konsentrasi Berbeda terhadap Pertumbuhan  Bakteri  Escherichia  coli. Skripsi. Singaraja: Universitas Pendidikan Ganesha.
Radji,  M.  2010. Mikrobiologi  Panduan Mahasiswa  Farmasi  &  Kedokteran. Jakarta: EGC Rahardi,  Y.  H.  I.,  Haryono.  1999. Agribisnis Tanaman Buah. Jakarta: Penebar Swadaya
Robinson,  T.  1995. Kandungan  Organik Tumbuhan Tinggi. Bandung: ITB. Rozi,  2017. Metode  Perhitungan  Bakteri Standard  McFarland .  Tersedia  pada laman: rozi-fpk.web.unair.ac.id. Diakses pada tanggal 11 Desember 2018.
Sari,  L.  O.  R.  K.  2006. “Pemanfaatan  Obat Tradisional Dengan Pertimbangan
Manfaat  dan  Keamanannya ”. Review Artikel  Majalah  Ilmu  Kefarmasian ,  Vol. III,  No.1,  April  2006,  01 –  07,  ISSN  : 1693-9883.
Sastroasmoro, S. 2008. Dasar –Dasar
Metodologi  Penelitian  Klinis .  Jakarta: CV. Sagung Seto
Siddik,  M.  B.,  L.  B.  Yulia  &  Edyson.  2016.
“Perbandingan Efektivitas Antifungi antara  Ekstrak  Metanol  Kulit  Batang Kasturi dengan Ketoconazole 2% Terhadap Candida  albican In  Vitro”. Berkala  Kedokteran, Vol.  12,  No.2, halaman: 271-278.
Simatumpang, M. M. 2009. Candida albicans . Departemen Mikrobiologi: Fakultas Kedokteran USU.
Siregar,  R.  S.  2002. Penyakit  Jamur  Kulit . Jakarta: 2 th EGC.
Sookto,  T.,  T.  Srithavaj,  S.  Thaweboon,  B. Thaweboon  &  B.  Shrestha.  2013. “In vitro  effects  of  Salvia  officinalis  L. essential  oil  on Candida  albicans ”. Asian  Pacific  Journal  of  Tropical Biomedicine , Vol. 3, No. 5, pp. 376-380. PMid:23646301.
http://dx.doi.org/10.1016/S2221-
1691(13)60080-5.
Sugumaran, M., M. S. Gandhi, K. Sankarnarayanan, M. Yokesh, M. Poornima,  &  R.  S.  Rama.  2011. “Chemical  Composition  and  Anti- microbial Activity of Vellaikodi Variety of Piper betle Linn Leaf Oil against Dental Pathogens”. International  Journal  of PharmTech  Research, Vol.3,  No.4,  pp 2135-2139.
Sundari,  D.  dan  M.W.  Winarno.  2001. Informasi  Tumbuhan  Sebagai  Anti Jamur . Tersedia
pada laman: http://www.kalbe.co.id/files-
/cdk/files/cdk_130_kulit_dan_kelamin.p df. Diakses tanggal 11 Desember 2018.
Suprapta,  D.  N.  2014.  Pestisida  Nabati,
Potensi  dan  Prospek  Pengembangan.
Denpasar: Pelawasari
Thakre,  A.,  G.  Zore,  S.  Kodgire,  R.  Kazi,  S. Mulange,  R.  Patil,  A.  Shelar,  B. Santhakumari, M. Kulkarni, K. Kharat & S.  M.  Karuppayil.  2018.  “Limonene Inhibits Candida  albicans Growth  by Inducing Apoptosis”. Medical Mycology, Vol. 56, No. 5, page 565-578. Utami,  T.  C.  2012 Makalah  Kesehatan Reproduksi  Keputihan. Sekolah  Tinggi Ilmu  Kesehatan  ‘Aisyiyah  Surakarta Program Studi DIII Kebidanan.
Widyarto, A. N. 2009. Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Daun Jeruk Keprok (Citrus nobilis Lour.) Terhadap Staphylococcus aureus  dan  Escherichia  coli. Skripsi. Surakarta:  Universitas  Muhammadiyah Surakarta.
Zuraidah,  2015.  “Pengujian  Ekstrak  Daun Sirih  ( Piper sp . )  yang  Digunakan  Oleh Para  Wanita  di  Gampong  Dayah Bubue, Pidie dalam Mengatasi
Kandidiasis  Akibat  Cendawan Candida albican”. International  Journal  of  Child and  Gender  Studies, Vol.  1,  No.  2,
September  2015,  109-117,  Banda Aceh: UIN Ar-Raniry