Peredaman radikal DPPH oleh ekstrak metanol, Safithri et al.

## PEREDAMAN RADIKAL DPPH OLEH EKSTRAK METANOL Spirulina platensis DAN TERIPANG EMAS (Stichopus hermanii)
Mega Safithri 1,3 *, Kustiariyah Tarman 2,3 , Iriani Setyaningsih 2,3 , Anisa Gianti Zhafira 1 1 Departemen Biokimia, FMIPA IPB University, Jalan Meranti Dramaga, Kabupaten Bogor 16680 Jawa Barat Telepon (0251) 8423267
2 Departemen Teknologi Hasil Perairan, FPIK IPB University, Jalan Agatis Dramaga, Kabupaten Bogor,
16680 Jawa Barat. Telepon (0251) 8622915
3 Divisi Bioteknologi Kelautan, PKSPL, LPPM IPB Diterima: 13 September 2020/Disetujui: 30 Desember 2020
*Korespondensi: safithri@apps.ipb.ac.id
Cara sitasi: Safithri M, Tarman K, Setyaningsih I, Zhafira AG. 2020. Peredaman radikal DPPH oleh ekstrak metanol Spirulina platensis dan teripang emas ( Stichopus hermanii ). Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia. 23(3): 513-522.

## Abstrak
Spirulina platensis dan teripang emas ( Stichopus hermanii ) merupakan biota laut yang memiliki khasiat bagi kesehatan. Salah satu manfaat S. platensis dan S. hermanii adalah sebagai sumber antioksidan. Tujuan penelitian ini adalah menentukan aktivitas antioksidan ekstrak metanol dan mengidentifikasi kandungan golongan senyawa bioaktif S. platensis asal Jepara, teripang emas asal Flores. Pengukuran aktivitas antioksidan menggunakan radikal DPPH sebagai oksidan. Identifikasi kandungan senyawa bioaktif menggunakan uji fitokimia secara kualitatif. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak metanol S. platensis , teripang emas, dan campurannya masing-masing memiliki nilai IC 50 sebesar 324,92±4,06 ppm, 2.696,09±329,28 ppm,  serta 2.445,80±164,18 ppm. Ekstrak metanol S. platensis mengandung flavonoid, alkaloid, dan steroid sedangkan ekstrak metanol S. hermanii mengandung saponin, alkaloid, dan triterpenoid.
Kata kunci : antioksidan, bioaktif, biota laut, fitokimia
DPPH radical scavenging by extract methanol of Spirulina platensis and gold sea cucumber (Stichopus hermanii)

## Abstract
Spirulina platensis and gold sea cucumber ( Sticophus hermanii ) are marine biota that known have many health benefits. One of the benefit is as an antioxidant. The antioxidant activity of S.hermanii dan S. platensis from another country has been studied, but the antioxidant activity of both materials from Indonesia and the mixture haven’t studied yet. The purpose of this study was to test the antioxidant activity and to identify bioactive compounds of methanol extraxt of S. hermanii from Flores , S. platensis from Jepara and the mixture using DPPH method. Measurement of antioxidant activity used DPPH radical as an oxidant. Identification of bioactive compounds used a qualitative phytochemical test. The results showed that methanol extract of S.hermanii , S. platensis and the mixtures have IC 50 value of 2,696.09±329.28 ppm, 324.92±4.06 ppm and 2,445.80±164.18 ppm. The methanol extract of gold sea cucumber contains alkaloids, saponins and triterpenoid, meanwhile S. platensis methanol extract contains alkaloids, flavonoids and steroids. Based on tests, the methanol extract from gold sea cucumber, S. platensis and the mixtures had very weak antioxidant activity with IC 50 values more than 200 ppm.
Keywords: antioxidant activity, bioactive compounds, marine biota, phytochemical
Available online: journal.ipb.ac.id/index.php/jphpi

## PENDAHULUAN
Antioksidan adalah senyawa yang dapat menghambat atau mencegah proses oksidasi dalam tubuh yang disebabkan oleh adanya radikal bebas. Radikal bebas adalah senyawa yang bersifat sangat reaktif karena memiliki elektron tidak berpasangan sebanyak satu atau lebih (Santoso 2016). Radikal bebas dapat dihasilkan di dalam sel tubuh melalui reaksi-reaksi metabolisme. Asap rokok dan polusi udara adalah sumber radikal bebas yang berasal dari luar tubuh. Radikal bebas yang berasal dari luar maupun dalam tubuh dapat menyebabkan proses oksidasi dalam sel sebagai awal terjadinya berbagai macam penyakit degeneratif, yaitu penyakit aterosklerosis, kanker, asam urat dan   lainnya (Werdhasari 2014). Senyawa radikal bebas yang berbahaya tersebut bagi tubuh dapat dihambat oleh senyawa antioksidan dengan cara mendonorkan satu elektronnya kepada senyawa radikal bebas (Sen et al . 2010). Sumber senyawa antioksidan dapat berupa senyawa sintetis maupun senyawa alami. Senyawa antioksidan sintetis merupakan senyawa antioksidan yang dibuat dari zat-zat kimia, contohnya butylated hydroxytoluene
(BHT) dan butylated hydroxyanisole (BHA).
Penggunaan antioksidan sintetis mulai dikurangi karena memiliki efek samping, seperti kerusakan organ hati. Antioksidan alami yang berasal dari tanaman ataupun hewan mulai banyak dikembangkan (Sukmiwati 2012). Salah satu senyawa antioksidan yang mulai banyak dimanfaatkan adalah senyawa antioksidan yang berasal dari biota laut.
Biota laut yang memiliki aktivitas antioksidan adalah Spirulina platensis . Penelitian in vivo pada tikus diabetes yang diinduksi streptozotocin menunjukkan bahwa S.platensis mempunyai aktivitas antioksidan dengan cara menghambat terbentuknya  malondialdehida  pada  hati  tikus (Windari et al . 2019). Kemampuan antioksidasi dari S. platensis lebih baik jika dibandingkan dengan antioksidan kimia seperti tokoferol ataupun BHA dalam menghambat peroksidasi lemak (Karkos et al . 2008). Kandungan bioaktif yang berperan sebagai antioksidan yang dimiliki oleh S.platensis adalah α-tokoferol,
β-karoten, vitamin A, klorofil, flavonoid, dan fikosianin, (Wang et al . 2007). Biota laut yang banyak dimanfaatkan sebagai sumber antioksidan adalah teripang. Penelitian tentang manfat dan komponen biaktif dari teripang telah dilakuakan di antaranya adalah teripang sebagai sumber pangan dan bioaktif (Kustiariyah 2007), senyawa  steroid  dari  teripang  gama (Meydia et al . 20016), kolagen larut asam dari teripang gama (Safithri et al.
2020),  antimikroba  dari  teripang  kasur
(Sukmiwati et al .  2018), potensi kolagen teripang emas sebagai inhibitor tirosinase (Safithri et al. 2018). Hasil penelitian menunujukkan bahwa aktivitas antioksidan kolagen teripang emas dalam meredam radikal DPPH memiliki nilai IC 50 5,84 ppm (Septia 2018). Penelitian in vivo pada tikus diabetes yang diinduksi streptozotosin menunjukkan bahwa teripang emas memiliki aktivitas antioksidan dalam mereduksi  radikal  bebas  malondialdehida (Windari et al. 2019). Ekstrak metanol teripang emas yang berasal dari perairan Lampung Selatan juga merupakan antioksidan kuat karena memiliki nilai IC 50 kurang dari 200 ppm, yaitu sebesar 65,08 ppm (Rasyid 2012).
S. platensis dan teripang emas terbukti memiliki aktivitas antioksidan dengan cara menghambat malondialdehida dan peredaman radikal bebas. Namun demikian, aktivitas antioksidan S. platensis asal Jepara
Jawa Tengah Indonesia dan teripang emas asal Flores Nusa Tenggara Timur, Indonesia, belum diketahui. Tujuan penelitian ini adalah mengidentifikasi kandungan senyawa bioaktif dan mengukur aktivitas antioksidan ekstrak metanol S. platensis asal Jepara, teripang emas asal Flores, serta campuran keduanya menggunakan radikal DPPH.

## BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat S. platensis asal Jepara berupa serbuk dan teripang emas segar asal Flores, Nusa Tenggara Timur, Indonesia. Teripang emas yang didapat dari nelayan, dicuci sampai bersih dari pasir kemudian dibekukan Pengiriman teripang emas dalam kondisi beku, menggunakan jasa transportasi. Teripang emas beku dimasukkan
Peredaman radikal DPPH oleh ekstrak metanol, Safithri et al.
kotak pendingin dari stirofoam dan diberi es, sehingga sampel teripang emas diterima di laboratorium dalam keadaan beku. Bahan kimia yang dignakan untuk pelarut dalam esktrasi adalah metanol (teknis-redestilasi).
Bahan kimia yang digunakan dalam uji senyawa bioaktif adalah ekstrak metanol teripang emas, ekstrak metanol S. platensis ,
akuades, metanol p.a (Merck), kertas saring, serbuk Mg (Merck), HCl pekat (Merck), amil alkohol (Merck), FeCl 3 (Merck), kloroform (Merck), amoniak (Merck), H 2 SO 4 pekat
(Sigma Aldrich). Pereaksi Mayer (HgCl 2 (Merck) dan KI (Merck)). Pereaksi Wagner ((Iodin (Merck) dan kalium iodide (Merck)) Pereaksi Dragendorff (Bismut subnitrat (Merck), asam asetat (Merck), kalium iodide (Merck), asam asetat glasial (Merck), HCl 2 N (Merck) dan asam asetat anhidrat (Merck)). Bahan yang digunakan pada uji kadar total fenolik antara lain larutan asam galat (Sigma Aldrich), reagen Folin-Ciocalteu (Sigma Aldrich) dan natrium karbonat 7,5% (Sigma Aldrich). Bahan yang digunakan dalam pengujian aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH antara lain vitamin C (Sigma Aldrich), etanol p.a (Sigma Aldrich) dan 2,2-difenil-1-pikrihidrazil (DPPH) 250 μM (Sigma Aldrich).
Instrumen yang digunakan adalah freeze dryer ( EYELA FDU 1200), microplate reader (Epoch), micropipet ThermoScientific , sonikator BRANSON B1510, vortex (BI Type 37600 mixer ), dan microplate, dan spektrofotometer UV-Vis (Thermo Scientific- Genesys 20, AS).
Metode Penelitian Ekstraksi S. platensis Ekstraksi S. platensis dilakukan menggunakan metode maserasi merujuk metode Rasyid 2012 dengan modifikasi. Ekstraksi dilakukan dengan merendam serbuk S. platensis yang telah diperoleh dalam  pelarut  metanol.  Perbandingan  serbuk
S. platensis dan pelarut adalah 1:10. Campuran kemudian dimaserasi menggunakan inkubator bergoyang selama 24 jam pada suhu ruang dengan kecepatan 125 rpm. Campuran kemudian disaring, ampas yang diperoleh kembali dilarutkan menggunakan pelarut
metanol. Tahap ini dilakukan sebanyak dua kali pengulangan. Filtrat yang diperoleh kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 40 °C hingga berbentuk pasta. Rendemen ekstrak S. platensis dihitung menggunakan rumus sebagai berikut:

## Preparasi daging teripang segar
Persiapan daging teripang emas yang akan diestrak mengacu pada preparasi daging teripang emas Safithri et al. (2018). Terpang emas dicuci bersih menggunakan air mengalir, sehingga kotoran yang menempel pada kulit teripang emas hilang. Setelah bersih, teripang emas dipotong menggunakan pisau dengan arah memanjang, lalu daging dipisahkan dari jeroan, kulit dan gonad.
Ekstraksi S. hermanii
Ekstraksi
S. hermanii dilakukan menggunakan metode maserasi merujuk metode Rasyid 2012 dengan modifikasi. Daging teripang emas hasil preparasi dikeringkan pada suhu -50 ºC selama 24 jam menggunakan freeze dryer . Sampel yang diperoleh kemudian diekstraksi menggunakan pelarut metanol dengan metode maserasi. Perbandingan teripang emas dan pelarut adalah 1:5 dan dimaserasi menggunakan inkubator bergoyang dengan kecepatan 125 rpm selama 24 jam pada suhu ruang, kemudian campuran disaring, ampas yang diperoleh dilarutkan kembali dengan pelarut metanol. Pelarutan kembali ampas yang diperoleh dilakukan sebanyak lima kali pengulangan. Filtrat yang diperoleh lalu dipekatkan pada suhu 40 °C menggunakan rotary evaporator hingga berbentuk pasta. Rendemen hasil freeze drying dan ekstraksi dihitung menggunakan rumus sebagai berikut:
Pembuatan campuran ekstrak S. platensis dan teripang emas Ekstrak S. platensis dicampurkan dengan ekstrak teripang emas dengan perbandingan
10 :1 . Campuran diaduk rata dan siap untuk diuji. Perbandingan 10 : 1 berdasarkan dosis penggunaan dari produk komersial teripang dan spirulina.

## Analisis Data
Pengujian Kualitatif Golongan Senyawa Bioaktif Pengujian kualitatif golongan senyawa bioaktif S. platensis dan teripang emas memakai metode Harbone (1984). Golongan senyawa bioaktif yang diuji adalah flavonoid, tanin, alkaloid, saponin, steroid dan triterpenoid.
Pengujian flavonoid Ekstrak S. platensis dan teripang emas masing-masing sebanyak 50 mg dimasukkan ke tabung reaksi yang berisi 10 mL akuades dan dihomogenkan menggunakan vorteks. Larutan tersebut dididihkan selama 5 menit pada suhu 100 °C, lalu disaring dan filtratnya diambil untuk ditambahkan dengan 0,5 g serbuk Mg, 5 tetes H 2 SO 4 pekat dan 1 mL amil alkohol. Larutan lalu dikocok dengan kuat.
Adanya golongan senyawa bioaktif flavonoid ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah, kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol.

## Pengujian tanin
Ekstrak S. platensis dan teripang emas masing- masing sebanyak 50 mg dimasukkan ke tabung reaksi yang berisi 10 mL akuades dan dihomogenkan menggunakan vorteks.
Larutan tersebut dididihkan selama 5 menit pada suhu 100 °C, lalu disaring dan filtratnya diambil untuk ditambahkan dengan 3 tetes FeCl 3 . Adanya golongan senyawa bioaktif tanin ditunjukkan dengan terbentuknya warna biru atau hijau kehitaman.

## Pengujian alkaloid
Ekstrak S. platensis dan teripang emas masing-masing sebanyak 50 mg dimasukkan ke tabung reaksi dan ditambahkan dengan 5 mL kloroform dan 3 tetes amoniak lalu dihomogenkan menggunakan vorteks.
Larutan disaring dan diambil filtratnya yang kemudian ditambahkan dengan H 2 SO 4 2M. Fraksi H 2 SO 4 yang diperoleh kemudian
diambil dan diteteskan plat tetes. Sebanyak tiga fraksi H 2 SO 4 pada plat tetes  ditambahkan 2 tetes pereaksi Wagner, Dragendorf, dan Mayer secara masing-masing. Adanya golongan senyawa bioaktif alkoloid ditunjukkan dengan terbentukknya endapan coklat pada pereaksi Wagner, endapan merah pada pereaksi Dragendorff, dan endapan putih pada pereaksi Mayer. Pereaksi Mayer dibuat dengan cara 1,36 gram HgCl 2 ditambahkan 0,5 gram KI, kemudian dilarutkan dengan akuades menjadi 100 mL dengan labu takar. Pereaksi Wagner dibuat dengan cara 2,5 gram iodin dan 2 gram kalium iodida dilarutkan dengan akuades menjadi 200 mL dalam labu takar.
Pereaksi Dragendorff dibuat dengan cara membuat larutan pertama dan kedua. Larutan pertama yaitu 0,8 gram bismut subnitrat ditambahkan dengan 10 mL asam asetat dan 40 mL air. Larutan kedua yaitu 8 gram kalium iodida dalam 20 mL air. Larutan pertama dicampurkan dengan larutan kedua. Selanjutnya, larutan campuran tersebut diencerkan 2-3 kali, dengan larutan ketiga yaitu, 20 ml asam asetat glasial dan 100 mL air.

## Pengujian saponin
Ekstrak S. platensis dan teripang emas masing-masing sebanyak 50 mg dimasukkan ke tabung reaksi yang berisi 10 mL akuades dan dihomogenkan menggunakan vorteks. Larutan tersebut dididihkan selama 5 menit pada suhu 100 °C, lalu disaring dan filtratnya yang diperoleh dikocok secara kuat selama 10 detik. Adanya golongan senyawa bioaktif saponin ditunjukkan dengan terbentuknya busa yang stabil selama 10 menit.
Pengujian steroid dan triterpenoid Ekstrak S. platensis dan teripang emas masing-masing sebanyak 50 mg dimasukkan ke tabung reaksi yang berisi 10 mL etanol dan dihomogenkan menggunakan vorteks. Larutan tersebut dididihkan selama 5 menit pada suhu 100 °C, lalu disaring dan filtrat yang diperoleh diuapkan hingga kering, lalu ditambahkan 1 mL dietil eter. Larutan kemudian diambil sebanyak 5 tetes ke dalam cawan porselen dan ditambahkan dengan 1 tetes asam asetat anhidrat serta 1 tetes asam
Peredaman radikal DPPH oleh ekstrak metanol, Safithri et al.
sulfat pekat. Adanya golongan senyawa bioaktif steroid ditunjukkan dengan terbentuknya warna hijau, sedangkan adanya triterpenoid ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah.

## Pengukuran Kadar Total Senyawa
Fenol
Pengukuran kadar total senyawa fenol merujuk pada metode Kruawan dan
Kangsadalampai (2006). Pengukuran kadar total senyawa fenol menggunakan asam galat sebagai standar.
Pengukuran larutan standar asam galat
Larutan asam galat sebanyak 20 μL dengan konsentrasi 0, 20, 40, 60, 80, 100 dan 125 ppm masing-masing ditambahkan 160 μL akuades, 10 mL reagen Folin-Ciocalteu 10%, dan 10 μL natrium karbonat 7,5%. Larutan lalu diinkubasi pada ruang gelap selama 60 menit.
Setelah itu larutan diukur absorbansinya mengunakan microplate reader pada panjang gelombang 725 nm.
Pengukuran total senyawa fenol larutan ekstrak S. platensis dan teripang emas
Larutan sampel sebanyak 20 μL ditambahkan 160 μL akuades, 10 mL reagen Folin-Ciocalteu 10%, dan 10 μL natrium karbonat 7,5%. Lalu larutan diinkubasi selama 60 menit pada ruang gelap. Larutan lalu diinkubasi pada ruang gelap selama 60 menit.
Setelah itu larutan diukur absorbansinya mengunakan microplate reader pada panjang gelombang 725 nm.
Pengukuran Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Pengukuran aktivitas antioksidan dengan metode DPPH merujuk metode modifikasi Salazar et al. (2011). Pengukuran aktivitas antioksidan menggunakan asam askorbat sebagai standar.
Pengukuran larutan standar asam vitamin C
Sebanyak 100 μL larutan vitamin C dengan konsentrasi 0; 6,5; 1,25; 2,5; 5 dan 10
ppm masing-masing ditambahkan dengan 100 μL larutan DPPH 250 μM, kemudian diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 30 menit pada ruang gelap. Setelah itu larutan diukur absorbansinya menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 517 nm.
Pengukuran aktivitas antioksidan larutan ekstrak S. platensis dan teripang emas Larutan sampel sebanyak 100 μL dimasukkan ke dalam microplate , lalu ditambah 100 μL larutan DPPH 250 μM, kemudian diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 30 menit pada ruang gelap. Setelah itu larutan diukur absorbansinya menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 517 nm. Presentase inhibisi larutan dihitung dengan rumus:

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Rendemen Ekstrak Metanol S. platensis dan teripang emas Rendemen ekstrak metanol teripang emas (26,7%) lebih besar dibandingkan ekstrak metanol S. platensis (10,19%).
Rendemen hasil freeze drying cairan teripang emas adalah sebesar 6,85%. Pemilihan metode maserasi untuk mengekstrak S. platensis dan teripang emas didasarkan proses yang sederhana dan tidak adanya penggunaan suhu tinggi. Penggunaan suhu tinggi dapat merusak komponen bioaktif yang terdapat dalam suatu bahan (Melawati 2006). Pemilihan metanol sebagai pelarut didasarkan pada sifat semi polar, memiliki nonpolar (-CH 3 ) dan gugus polar (-OH), dapat menarik komponen bioaktif yang bersifat non polar dan polar (Mukti 2016). Rendemen ekstrak S. platensis yang diperoleh dalam penelitian ini (10,19%) lebih besar jika dibandingkan ekstrak aseton S. platensis (4,11%) dengan metode soxhletasi (Anam et al . 2014). Rendemen ekstrak teripang emas yang diperoleh dalam penelitian ini (26,87%) lebih besar dibanding ekstrak aseton teripang (9,87%) (Karnila et al . 2011). Hasil yang didapatkan menunjukkan pelarut metanol lebih banyak mengekstrak senyawa bioaktif pada S. platensis dan teripang emas
dibandingkan aseton. Nilai rendemen ekstrak sangat dipengaruhi oleh pemilihan pelarut (Tanaya et al . 2015).
Cairan teripang emas dihilangkan kandungan airnya menggunakan metode kering beku atau freeze dry . Metode kering beku digunakan untuk pengeringan sampel yang mengandung senyawa bioaktif yang rentan terhadap panas, karena suhu yang digunakan merupakan suhu rendah (Hariyadi 2013), sehingga tidak akan merusak senyawa aktif yang terdapat dalam teripang emas.
Golongan Senyawa Bioaktif Ekstrak Metanol S. platensis dan Teripang Emas
Ekstrak metanol S.platensis mengandung golongan senyawa bioaktif alkaloid, flavonoid, dan steroid ( Table 1 ). Simplisia S. platensis mengandung golongan senyawa bioaktif alkaloid, fenol hidrokuinon, saponin, dan steroid. Ekstrak fikosianin S.
platensis mengandung golongan senyawa bioaktif alkaloid, saponin, dan steroid (Surbakti 2013). Kandungan flavonoid yang terkandung pada S. platensis menyebabkan mikroalga  ini  memiliki  aktivitas  antioksidan (Wang et al . 2007). Flavonoid dapat menghambat aktivitas radikal bebas seperti radikal anion superoksida dan radikal bebas hidroksil (Pieta 2000). Ekstrak metanol teripang emas mengandung golongan senyawa bioaktif alkaloid, saponin dan triterpenoid
( Table 1 ). Golongan senyawa bioaktif triterpenoid dan alkaloid tidak ditemukan
pada ekstrak metanol teripang emas asal Lampung, karena hanya mengandung golongan senyawa bioaktif steroid dan saponin (Rasyid 2012).

## Kadar Total Fenolik Ekstrak Metanol
S. platensis dan Teripang Emas Ekstrak metanol S. platensis mengandung total fenolik yang tertinggi jika dibandingkan dengan ekstrak metanol teripang emas dan campuran ekstrak, yaitu sebesar 21,93±1,79
GAE mg/g ( Figure 1 ). Pengukuran dilakukan menggunakan asam galat sebagai standar, dan diperoleh persamaan garis y=0,0049x+0,0681 dengan nilai R 2 sebesar 0,9604. Asam galat merupakan salah satu senyawa golongan fenolik yang memiliki struktur yang sederhana, memiliki peran farmakolgi, dan digunakan sebagai standar untuk menentukan kandungan analit dalam industri farmasi (Nayeem et al. 2016) Ekstrak metanol dalam penelitian ini memiliki kadar total fenol yang lebih tinggi jika dibandingkan dengan ekstrak butanol
S. platensis yang memiliki kadar total fenolik 121,0±3,5 GAE mg/100 g (Gauda et al . 2015). Kadar total fenolik ekstrak metanol teripang emas sebesar 3,63 ±0, 16 GAE mg/g ( Figure 1 ), nilai ini lebih tinggi jika dibandingkan dengan ekstrak metanol H. scabra yang memiliki kadar total fenolik sebesar 1,3 GAE mg/g (Althunibat et al . 2009). Perbedaan nilai kadar total fenol dapat disebabkan perbedaan jenis sampel, perbedaan metode ekstraksi yang digunakan dan perbedaan
Table 1 Bioactive compounds of S. platensis and gold sea cucumber methanol extract Bioactive compounds S. platensis Gold sea cucumber Alkaloids Dragendorff + + Mayer + + Wagner + + Flavonoids + - Saponins - - Tannins - - Steroids + - Triterpenoids - +
Note: +=bioactive compounds; -=no bioactive compounds; n =2
Peredaman radikal DPPH oleh ekstrak metanol, Safithri et al.
lingkungan hidup sampel. Senyawa golongan fenolik merupakan golongan senyawa yang  memiliki  potensi  sebagai  antioksidan (Khanahmadi et al . 2010). Kadar total fenolik campuran ekstrak metanol S. platensis dan teripang emas memiliki kadar total fenolik yang lebih besar dari kadar total fenolik teripang emas, yaitu sebesar 9,31±1,09 GAE mg/g ( Figure 1 ), hal ini menunjukkan bahwa kadar total fenolik campuran ekstrak meningkat karena keberadaan senyawa fenolik pada ekstrak S. platensis .
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol S. platensis dan Teripang Emas
Ekstrak metanol S. platensis mengandung aktivitas antioksidan yang tertinggi dalam
meredam radikal DPPH jika dibandingkan dengan ekstrak metanol teripang emas dan campuran ekstrak, yaitu nilai IC 50 sebesar 324,92±4,06 ppm ( Figure 2 ). Nilai ini tidak berbeda jauh dari ekstrak metanol S. platensis yang sudah diteliti sebelumnya dengan nilai IC 50 sebesar  323,70  ppm
(Setyaningsih et al . 2013). Senyawa bioaktif fikosianin, klorofil, flavonoid, β-karoten, vitamin A serta α-tokoferol yang terkandung dalam S. platensis merupakan senyawa yang  mampu  berperan  sebagai  antioksidan (Wang et al . 2007).
Ekstrak metanol teripang emas memiliki nilai IC 50 sebesar  2.696,09±329,28  ppm ( Figure 2 ). Nilai IC 50 ini lebih besar jika dibandingkan ekstrak metanol teripang
Figure 1 Total phenolics; A= S. hermanii; B= gold sea cucumber; C= Mix of S. platensis and
Figure 2 Antioxidant activity of ; A=ascorbic acid; B=gold sea cucumber; C= S. platensis ; D= Mix
0 5 10 15 20 25 A B C To ta l P he no lic s ( GA E m g/ g) Methanol Extract
0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 A B C D IC 50 (ppm ) Sample
of S. platensis and gold sea cucumber.
gold sea cucumber.
emas asal lampung yang memiliki nilai IC 50 sebesar 65,08 ppm (Rasyid 2012). Perbedaan aktivitas antioksidan dalam meredam radikal DPPH dapat disebabkan karena perbedaan asal teripang emas sehingga senyawa bioaktif yang dikandung juga berbeda. Ekstrak metanol teripang emas asal Lampung, mengandung golongan senyawa bioaktif steroid dan saponin (Rasyid 2012), sedangkan ekstrak metanol teripang emas asal Labuan Bajo, tidak memiliki steroid tetapi memiliki saponin, alkaloid dan triterpenoid ( Table 1 ). Golongan senyawa bioaktif saponin bersifat antioksidan yang dapat menyumbangkan hidrogen pada DPPH (Xiong et al . 2012).
Golongan senyawa bioaktif triterpenoid memiliki kerangka karbon yang berasal dari enam satuan isoprena dan secara biosintesis diturunkan dari skualen. Skualen merupakan antioksidan alami yang dapat mendonorkan hidrogen yang dimilikinya kepada radikal bebas (Amarowicz 2009). Aktivitas antioksidan campuran ekstrak metanol S. platensis dan teripang emas memiliki nilai IC 50 yang lebih rendah dari  ekstrak metanol teripang emas, yaitu sebesar 2.445,80±164,18 GAE mg/g ( Figure 2 ).  Hal ini menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan campuran ekstrak meningkat karena keberadaan senyawa fenolik pada ekstrak S. platensis . Aktivitas antioksidan ekstrak metanol S. platensis, teripang emas,
dan campurannya disebabkan keberadaan senyawa fenolik yang dimiliki ketiga sampel. Aktivitas antioksidan dalam suatu sampel dipengaruhi kandungan total fenolik dalam sampel tersebut. Semakin tinggi kadar total fenolik dalam suatu sampel akan memberikan aktivitas antioksidan yang lebih tinggi (Zheng dan Wang 2003).
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  metanol S. platensis , teripang emas, dan campurannya pada penelitian ini dibandingkan dengan aktivitas antioksidan asam askorbat (vitamin
C). Nilai IC 50 asam askorbat pada penelitian ini sebesar 7,19±0,20 ppm ( Figure 2 ). Asam askorbat digunakan sebagai kontrol positif antioksidan kuat karena dapat mendonorkan atom hidrogen yang selanjutnya akan membentuk radikal bebas askorbil yang relatif stabil (Hart et al . 2003). Aktivitas antioksidan
dapat digolongkan menjadi lima golongan, yaitu yaitu sangat kuat (IC 50 <50 ppm), kuat (50 ppm<IC 50 >100 ppm), sedang (100
ppm<IC 50 >150 ppm), lemah (150 ppm<IC 50 >
200 ppm), dan sangat lemah (IC 50 >200 ppm) (Molyneux 2004). Dengan demikian, ekstrak metanol S. platensis , teripang emas, dan campurannya memiliki aktivitas antioksidan sangat lemah karena memiliki nilai IC 50 di atas 200 ppm. Aktivitas antioksidan S. platesis tergolong sangat lemah diduga karena S. platensis yang digunakan adalah S. platensis serbuk komersial  yang berasal dari Jepara, Jawa Tengah. Hal ini memungkinkan ketika membuat serbuk S. platensis ada perlakuan yang dapat menyebabkan menurunnya bioaktivitas, yaitu proses pengeringan yang dilakukan. Senyawa aktif dalam spirulina juga dapat berubah karena perbedaan metode pembiakan, pemanenan, dan pengeringan yang digunakan (Aouir et al. 2017). Aktivitas antioksidan ekstrak metanol teripang emas sangat lemah disebabkan bioaktif terpenoid sebagai antioksidan lebih larut dalam pelarut organik nonpolar seprti n-heksana, sedangkan radikal senyawa DPPH mudah larut dalam pelarut metanol dan etanol (Elnour et al . 2018). Hal ini menyebabkan biaoktif terpenoid kurang aktif dalam meredam radikal DPPH. Metode DPPH merupakan metode pengujian aktivitas antioksidan yang paling umum digunakan.
Metode ini umum digunakan karena prosedur yang dilakukan lebih sederhana dan waktu analisis yang cenderung lebih cepat dibandingkan dengan metode analisis lainnya (Antolovich et al 2012). Selain itu, metode ini juga sederhana, cepat dan hanya memerlukan sedikit sampel (Hanani et al. 2005). Aktivitas antioksidan dalam peredaman radikal DPPH menunjukkan bahwa tingginya jumlah senyawa fenol dan adanya bioaktif flavonoid pada S.platensis sangat berperan dalam mereduksi radikal DPPH, sehingga nilai IC 50 S.platensis lebih rendah dibandingkan dengan teripang emas.

## KESIMPULAN
Ekstrak metanol S. platensis mengandung golongan senyawa bioaktif flavonoid, alkaloid, dan steroid, sedangkan ekstrak metanol
Peredaman radikal DPPH oleh ekstrak metanol, Safithri et al.
teripang emas mengandung golongan senyawa bioaktif saponin, alkaloid, dan triterpenoid. Ekstrak metanol S. platensis , teripang emas, dan campurannya memiliki aktivitas antioksidan sangat lemah karena memiliki nilai IC 50 diatas 200 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
Althunibat OY, Hashim RB, Taher M, Daud JM, Ikeda MA. 2009. In vitro antioxidant and antipoliverative activities of three malaysian sea cucumber species. European Journal of Scientific Research. 37 (3): 376-387. Amarowicz R. 2009. Squalene: a natural antioxidant. European Journal Lipid
Science Technology. 111 : 411-412. Anam C, Agustini TW, Romadhon. 2014. Pengaruh pelarut yang berbeda pada ekstraksi Spirulina platensis serbuk sebagai antioksidan dengan metode soxhletasi. Jurnal Pengolahan dan Bioteknologi Hasil Perikanan . 3 (4): 106- 112. Antolovich M, Paul D, Susanne M. 2012. Methods for testing antioxidant activity.
Analyst. 127 (5) : 183-198. Aouir A, Amiali M, Bitam A, Benchabane A, Raghavan VG. 2017. Comparison of the biochemical composition of different
Arthrospira platensis strains from Algeria,
Chad and the USA. Journal of Food Measurement and Characterization . 11(2): 913–923. Elnour AAM, Mirghani MES, Musa KH, Kabbashi pengolagan NA, Alam MZ. 2018. Challenge of extraction techniques pf natural antioxidant and their potential application opportunities as anti-cancer agents [review]. Health Science Journal .
12(5): 596.
Gouda KGM, Kavitha MD, Sarada R. 2015.
Antihyperglycemic, antioxidant and antimicrobial activities of the butanol extract from Spirulina platensis. Journal of Food Biochemistry. 39: 594-602. Hanani E, Mun’im A, Sekarini R. 2005. Identifikasi senyawa antioksidan dalam spons Callyspongia sp. dari Kepulauan Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian 2(3):
127-133.
Harbone JB. 1984 . Phytochemical Methods: A Guide to Modern Techniques of Plant Analysis. London (UK): Chapman and Hall.
Hart H, Craine LE, Hart D. 2003. Kimia Organik: Suatu Kuliah Singkat . Achmadi
SS, penerjemah; Safitri A, editor. Jakarta (ID) : Penerbit Erlangga. Terjemahan dari
Organic Chemistry: A Short Course .
Haryadi P. 2013. Freeze drying technology : for better quality & flavor of dried products .
Foodreview Indonesia . 8(2): 52-57. Karkos PD, Leong SC, Karkos CD, Sivaji N,
Assimakopoulos DA. 2008. Spirulina in clinical practice: evidence-based human application . Hindawi Publishing Corporation Karnila R, Astawan M, Sukarno, Wresdiyati T. 2011. Karakteristik konsentrat protein teripang pasir ( Holothurian scabra J.) dengan bahan pengeksrak aseton. Jurnal Perikanan dan Kelauta n. 16 (1):90-102. Khanahmadi M, Rezazadeh SH, Taran M. 2010 In vitro antimicrobial and antioxidant properties of Smyrnium cordifolium boiss (Umbelliferae) Extract. Asian Journal of Plant Sciences. 9 (2): 99-103. Kruawan K, Kangsadalampai K. 2006. Antioxidant activity, phenolic compound and antimutagenic activity of some water extract of herbs. Thai Journal of
Pharmaceutical Sicence. 30 : 28-35.
Kustiariyah. 2007. Teripang sebagai sumber pangan dan bioaktif. Buletin Teknologi Hasil Perikanan . 10 (1):1-8
Melawati. 2006. Optimasi proses maserasi vanili ( Vanilla planifolia A) Hasil modifikasi proses juring. [skripsi]. Bogor
(ID): Insitut Pertanian Bogor. Melia S. 2017. Karakteristik dan aktivitas antioksidan kolagen larut asam dari teripang emas ( Stichopus hermanii )
[skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Meydia, Suwandi R, Suptijah P. 2016. Isolasi senyawa steroid dari teripang gama ( Stichopus variegatus ) dengan berbagai jenis pelarut. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia 19(3): 362-369 Molyneux P. 2004. The use of the stable free radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH)
for estimating antioxidant activity. Songklanakarin Journal of Science and Technology. 26: 211-219. Mukti MJ. 2016. Profil kimia fraksi aktif antioksidan dari ekstrak metanol daun pohon penghasil gaharu Aquilaria microcarpa hasil inokulasi [skripsi].Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Nayeem N, Asdaq SMB, Salem H, AHEl- Alfqy S. 2016. Gallic Acid: A Promising Lead Molecule for Drug Development.
Journal of Applied Pharmacy . 8: 213. doi:10.4172/1920-4159.1000213
Pieta PG. 2000. Flavonoids as antioxidant.
Journal of Natural Product. 63: 1043-1046.
Rasyid A. 2012. Identifikasi senyawa metabolit sekunder serta uji aktivitas antibakteri dan antioksidan ekstrak metanol teripang
Stichopus hermanii . Jurnal Ilmu dan
Teknologi Kelautan Tropis . 4(2): 360-368.
Safithri M, Tarman K, Suptijah P, Sagita SN.
2020. Karakteristik kolagen larut asam teripang gama ( Stichopus variegatus ). Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia . 23(1): 166-177 Safithri M, Setyaningsih I, Tarman K, Suptijah P, Yuhendri VM, Meydia. 2018. Potensi kolagen teripang emas sebagai inhibitor tirosinase. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia . 21(2): 295-303. Salazar R, Perez LA, Lopez J, Alanais BA, Torres NW. 2011. Antimicrobial and antioxidant activities of plants from Northeast of Mexico. Evidence-Based Complementary an Alternative Medicine .
2011:1-6. Santoso U. 2016. Antioksidan pangan . Penerbit Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. Sen S, Chakraborti R, Sridhar C, Reddy YSR, De B. 2010. Free radicals, antioxidants, diseases and phytomedicines: current status and future prospect. International Journal of Pharmaceutical Science Review and Research . 3(1): 91- 100. Setyaningsih I, Tarman K, Satyantini H, Barus DA. 2013. Pengaruh waktu panen dan nutrisi media terhadap biopigmen
Spirulina platensis. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia. 16 (3): 191- 198. Sukmiwati M, Diharmi A, Mora E, Susanti E. 2018. Aktivitas antimikroba teripang kasur ( Stichopus vastus Sluiter) dari Perairan Natuna Kepulauan Riau. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia . 21(2): 328-335 Sukmiwati M. 2012. Uji aktivitas antioksidan pada 16 spesies teripang yang ditemukan pada perairan Natuna Kepulauan Riau. Prosiding Semirata BKS PTN-B MIPA. Medan. Surbakti TR. 2013. Aktivitas antihiperglikemik dan antioksidan dari Spirulina platensis pada umur panen yang berbeda [thesis]. Bogor (ID) : Institut Pertanian Bogor. Tanaya V, Retnowati R, Suratmo. 2015. Fraksi semi polar dari daun mangga kasturi ( Mangifera casturi Konsterm). Kimia Student Journal . 1 (1) :778-784. Wang L, Pan B, Sheng J, Xu J, Hu Q. 2007. Antioxidant activity of Spirulina platensis extracts by supercritical carbon dioxide extraction. Food Chemistry . 105 : 36-41. Wang L, Pan B, Sheng J, Xu J, Hu Q. 2007. Antioxidant activity of Spirulina platensis extracts by supercritical carbon dioxide extraction . Food Chemistry. 105: 36-41 .
Werdhasari A. 2014. Peran antioksidan bagi kesehatan. Jurnal Biotek Medisiana Indonesia . 3 (2): 59-68. Windari HAS, Tarman K, Safithri M, Setyaningsih I. 2019. Antioxidant activity of Spirulina platensis and sea cucumber Stichopus hermanii in streptozotocin- induced diabetic rats. Tropical Life Sciences Research 30(2): 119-129. Xiong Y, Sheen J. 2012. Rapamycin and glucose-target of rapamycin (TOR) protein signaling in plants. The Journal of Biological Chemistry 287(4): 2836–2842. Zheng W, Wang SY. 2003. Oxygen radical absorbing capacity of phenolics in blueberries, cranberries, chokeberries, and lingonberries. Journal of Agricultural and Food Chemistry 51 (2): 502-509.