## 2, 4, 6-Trihidroksi Benzofenon dari Kulit Batang Garcinia balica Miq
Retno Purbowati dan Taslim Ersam
Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail : paktichem@gmail.com
Abstrak — Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi senyawa  metabolit  sekunder  dari  ekstrak  etil  asetat  kulit batang Garcinia  balica Miq.  Proses  ekstraksi  dengan pelarut  etil  asetat  didapatkan  fraksi  kering,  kemudian difraksinasi  menggunakan  metode  Kromatografi  Kolom Gravitasi (KKG) dan dilanjutkan dengan metode Kromatografi  Eksklusi  Ukuran.  Senyawa  yang  diisolasi berupa padatan amorf berwarna kuning kecoklatan dengan titik  leleh  sebesar  215-216 0 C.  Penentuan  struktur  senyawa dilakukan  dengan  analisis  UV,  IR, 1 H  dan 13 C  NMR. Senyawa yang diisolasi diketahui merupakan senyawa 2, 4, 6-trihidroksi benzofenon (1).
Kata Kunci — Garcinia balica ; benzofenon.

## I. PENDAHULUAN
NDONESIA  memiliki  hutan  tropis  yang  sangat  luas dan  kaya  dengan  aneka  ragam  spesies  tumbuhan  [1]. Keanekaragaman ekosistem dalam hutan tropis mempunyai  hubungan  langsung  dengan  tingginya keanekaragaman  hayati  dan  tingkat  endemik  [2]. Garcinia merupakan  salah  satu  genus  tumbuhan  tropis dari  famili  Clusiaceae.  Tumbuhan  ini  merupakan  salah satu  genus  terbesar  dengan  400  spesiesnya  tersebar  luas di  kawasan  tropis  Asia,  Kaledonia  Baru  dan  Polinesia [3].  Penelitian  mengenai  kandungan  kimia  dari  genus Garcinia telah  banyak  dilakukan,  diantaranya  adalah guttiferones  Q-S  [4],  5’-bromo-2’-hidroksi-4,  4;  6’- trimetoksi  chalkon  [5],  dulcisoflavon  [6].  Genus  ini dilaporkan banyak kandungan senyawa santon teroksigenasi  dan  terprenilasi  [7].  Tetapi  beberapa diantaranya  juga  menghasilkan  senyawa  benzofenon terprenilasi, biflavonoid dan kumarin [8].
Garcinia  balica Miq , salah  satu  spesies  dari  genus Garcinia merupakan  tumbuhan  endemik  yang  dapat ditemukan  di  Taman  Nasional Baluran, Situbondo,  Jawa Timur. Garcinia balica Miq dikenal dengan nama daerah yaitu  mundu  alas.  Tumbuhan  ini  digunakan  secara tradisional  sebagai  obat  kulit,  antibengkak,  antimalaria, dan  antihipertensi  [9].  Hasil  penelitian  sebelumnya mengenai  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  dari tumbuhan ini diantaranya adalah senyawa 5,7-dihidroksi- 8-(1-,2-dihidroksi-3-metilbutenil-3)-4-fenilkumarin  dari ekstrak  etil  asetat  pada  bagian  batang  yang  memiliki aktivitas  antioksidan  tinggi,  5-hidroksi  4-fenilkumarin dan 7-hidroksi 4-fenilkumarin.
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  tumbuhan G.balica Miq mempunyai  banyak  kandungan  senyawa  metabolit
sekunder  aktif.  Bagian-bagian  tertentu  pada  tumbuhan biasanya  berpeluang  untuk  mendapatkan  senyawa  yang sama  atau  bahkan  berbeda  sehingga  dibutuhkan penelitian lebih lanjut terhadap G.balica ini.

## II. METODOLOGI PENELITIAN
Fraksinasi A.
Sebanyak  603.0  mg  fraksi  kering  ekstrak  etil  asetat kulit batang G. balica dilakukan pemisahan menggunakan  metode  kromatografi  kolom  gravitasi. Pemisahan  menggunakan  pelarut  etil  asetat:  n-heksana dengan  peningkatan  kepolaran  sebesar  40%,  50%,  70%, etil asetat 100% dan metanol 100%.
Hasil dari pemisahan ini  ditampung pada vial 100 mL sebanyak  27  vial  dengan  volume  tampungan  sekitar  50 mL. Selanjutnya dilakukan pemantauan noda pada semua vial  dengan  mengelusi  plat  KLT  menggunakan  pelarut etil asetat: n-heksana 80% dengan memilih vial bernomor genap.
Proses  selanjutnya  dilakukan  penggabungan  vial berdasarkan  gabungan  Rf  yang  sama  pada  plat  KLT. Hasilnya didapatkan lima fraksi yaitu A, B, C, D dan E.
Setelah  didapatkan  lima  fraksi,  dilakukan  pemisahan fraksi  B  menggunakan  metode  sephadex  LH-20  dengan eluen  metanol:  diklorometana  1:1  menghasilkan  10 subfraksi yaitu B1-B10. Selanjutnya dilakukan pemantauan  noda  senyawa  menggunakan  KLT.Profil noda  dengan  Rf  yang  sama  digabungkan  menghasilkan BG1(0.7 mg), BG2(2 mg), BG3(.3 mg), BG4(4  mg) dan BG5(10.5  mg).  Dari  hasil  KLT,  BG5  menunjukkan  spot noda  tunggal  yang  mengindikasikan  bahwa  subfraksi tersebut sudah murni.

## Proses Pemurnian dan Uji Kemurnian B.
Pada  proses  uji  kemurnian,  dilakukan  pengujian  3 eluen berbeda dengan menggunakan perbedaan kepolaran  eluen.  Proses  ini  menggunakan  campuran eluen  yaitu  metanol:  diklorometana  20%,  etil  asetat:  n- heksana  80%,  dan  etil  asetat:  klorofom  70%.  Proses  ini untuk  mengetahui  profil  noda  tunggal  pada  posisi  atas, tengah, dan bawah.

## Pengujian Spektrofotometer UV C.
Sebanyak  1  mg  sampel  dilarutkan  dalam  10  mL metanol  p.a.  dan  digunakan  sebagai  larutan  stok  dalam pengujian. Larutan metanol-sampel diukur absorbansinya pada  λ  200-600  nm  dengan  menggunakan  blanko metanol.  Larutan  sampel  yang  sama  ditambah  3  tetes NaOH dan diukur absorbansinya.
Larutan sampel  yang  baru ditambah  6 tetes  AlCl 3 dan diukur  pula  absorbansinya.  Dilakukan  hal  yang  sama untuk  larutan  sampel  yang  telah  ditambah  AlCl 3 dan  3
O OH OH O H 1 2 3 4 5 6 1' 2' 3' 4' 5' I
tetes  HCl.  Kemudian  diambil  larutan  sampel  baru  dan ditambah  ±100  mg  CH 3 COONa  lalu  diukur  pula absorbansinya.  Prosedur  yang  sama  dilakukan  untuk larutan  sampel  yang  telah  ditambah  CH 3 COONa  dan ±100 mg H 3 BO 3 .

## Pengujian Spektrofotometer IR
D.
Senyawa  hasil  isolasi  diambil  ±1  mg  dan  digerus dalam  KBr  sampai  homogen.  Dibuat  pelet  dengan ketebalan  ±1  mm  dan  diukur  serapannya  pada  bilangan gelombang 400-4000 cm -1 .
Pengujian Spektrofotometer NMR E.
Sebanyak  20  mg  senyawa  hasil  isolasi  dilarutkan dalam  aseton-d 6 .  Selanjutnya  sampel  yang  sudah dilarutkan  tersebut  diinjeksikan  ke  dalam  tabung  NMR dan  dianalisis  untuk  mendapatkan  data  spektra 1 H-NMR dan 13 C-NMR.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi dan Fraksinasi
A.
Fraksi kering berbentuk serbuk kasar berwarna kuning dengan massa yaitu 601.0 mg. Sebelum dilakukan proses pemisahan,  terlebih  dahulu  dilakukan  uji  eluen  untuk mengetahui  eluen  yang  tepat  pada  proses  pemisahan. Fraksi  kering  diambil  +  1  mg  dan  diuji  kelarutannya. Dari  hasil  uji  kelarutan,  diketahui  bahwa  fraksi  ini  larut pada  metanol  dan  etil  asetat  dan  tidak  larut  pada diklorometana  dan  n-heksana.  Selanjutnya,  fraksi  yang larut  dipindahkan  ke  dalam  vial  berukuran  10  ml  dan ditambahkan metanol sampai konsentrasinya tidak terlalu pekat.  Dilakukan  pengujian  eluen  dengan  tingkat kepolaran  yang  berbeda  yaitu  etil  asetat-diklorometana 50%, etil asetat-n-heksana 70%, dan metanol- diklorometana  50%.  Pemisahan  yang  bagus  didapat dengan  menggunakan  eluen  etil  asetat-n-  heksana  70%, maka  untuk  proses  pemisahan  selanjutnya  akan digunakan  eluen  tersebut dengan tingkat  kepolaran  yang bervariasi  dimulai  dari  kepolaran  yang  rendah.Hal  ini bertujuan  agar  senyawa-senyawa  di  bagian  atas  dapat terelusi terlebih dahulu.
Proses  pemisahan  menggunakan  metode  kromatografi kolom  gravitasi  untuk  mendapatkan  hasil  pemisahan yang  baik,  karena  senyawa  target  berjarak  sangat  dekat dengan senyawa lainnya. Eluen yang digunakan yaitu etil asetat: n-heksana  40%,  50%, 70%,  etil asetat  100%,  dan metanol  100%.  Pemisahan  ditampung  pada  vial  100  ml dengan  menampung  sekitar  70%  volume.  Setiap peningkatan  kepolaran,  dilakukan  monitoring  terlebih dahulu apakah noda yang muncul sudah mulai berkurang intensitasnya.  Dari  hasil  tersebut,  didapatkan  sebanyak 27  vial.Selanjutnya,  semua  hasil  tampungan  tersebut dilakukan  uji  KLT  untuk  mengetahui  profil  noda. Pengujian dilakukan pada vial bernomor genap.
Profil  noda  yang  sama  kemudian  digabung  dan diperolehtkan  subfraksi  A  (98.3  mg),  B  (110  mg),  C (150.33  mg),  D  (81.5  mg),  E  (98.9  mg)  (Gambar  4.3). Dilakukan  proses  pemisahankembali  menggunakan sephadex LH-20 pada subfraksi B yang menghasilkan B1 (0.2 mg), B2(0.5 mg), B3 (0.99), B4 (1.01 mg), B5 (0.09 mg), B6 (0.21 mg), B7 (1.35 mg), B8 (2.65 mg), B9 (9.5 mg),  B10  (1  mg).  Dari  hasil  pemisahan  menggunakan sephadex  LH-20,  dilakukan  uji  KLT  untuk  mengetahui profil  noda  dengan  Rf  yang  sama.  Berdasarkan  hasil
monitoring KLT, subfraksi B1-B10 digabung menghasilkan subfraksi BG1 (0.7 mg), BG2 (2 mg), BG3 (0.3  mg),  BG4  (4  mg)  dan  BG5  (10.5  mg).nDilakukan pemantauan  kembali  untuk  mengetahui  profil  noda. Hasilnya didapat bahwa profil noda BG5 tunggal. Karena noda  terlihat  tunggal,  maka  dilakukan  uji  tiga  eluen dengan  tingkat  kepolaran  berbeda  untuk  mendapatkan hasil  noda  tunggal  pada  tiga  titik  yaitu  atas,  tengah  dan bawah.

## Proses Pemurnian dan Uji Kemurnian B.
Dari  uji  tiga  eluen,  untuk  noda  tunggal  posisi  atas didapat dengan menggunakan eluen metanol- diklorometana  20%.  Noda  tunggal  pada  posisi  atas menunjukkan bahwa sudah tidak terdapat senyawa lain di posisi  bawah  senyawa  tersebut.  Untuk  noda  tunggal posisi  tengah,  didapat  dengan  eluen  etil  asetat- diklorometana  80%.  Posisi  noda  tunggal  di  tengah menunjukkan bahwa sudah tidak terdapat senyawa lain di posisi atas dan bawah senyawa tersebut. Pada posisi noda tunggal  bawah,  eluen  yang  digunakan  yaitu  etil  asetat- kloroform 70%. Posisi noda tunggal bawah menunjukkan bahwa  tidak  terdapat  senyawa  lain  di  atas  senyawa tersebut.
Setelah dilakukan uji 3 eluen, maka dilakukan uji titik leleh.  Padatan  hasil  isolasi  senyawa  berbentuk  serbuk halus kecoklatan dengan massa sebesar 10.5 mg. Uji titik leleh mendapatkan hasil yaitu sebesar  215-216 O C. Hasil tersebut  sesuai  dengan  indikator  senyawa    murni  yang mulai  meleleh  sampai  meleleh  seluruhnya  dengan rentang + 1 0 C.

## Penentuan Struktur
C.
Spektrum UV-Vis (Gambar 1) menunjukkan spektrum UV-Vis  dengan  dua  puncak  serapan  pada  290  nm  (pita II)  dan  325  nm  (pita  I).  Pada  penelitian  ini,  spektrum pada pita II berada pada panjang gelombang 290 nm. Hal ini mengindikasikan adanya eksitasi elektron dari π → π* yang  merupakan  kromofor  khas  sistem  ikatan  rangkap terkonjugasi  (-C=C-C=C-)  pada  cincin  aromatik.  Pada pita  I  dengan  panjang  gelombang  325  nm  menunjukkan adanya  eksitasi  elektron  dari  n  →  π*  yang  merupakan kromofor khas untuk sistem terkonjugasi dari heteroatom dengan ikatan rangkap terkonjugasi (-C=C=C=O).
Gambar  1.  Spektrum  UV-Vis  senyawa  1  dalam  MeOH  dan MeOH+NaOH
Setelah ditambahkan  NaOH  terjadi  pergeseran batokromik  pada  pita  I  sebesar  15  nm  dari  panjang gelombang  325  nm  menjadi  340  nm.Hal  ini  terjadi karena  pengaruh  auksokrom.  Auksokrom  merupakan gugus  fungsi  yang  tidak  menyerap  energi  cahayanya sendiri  akan  tetapi  dapat  meningkatkan  intensitas  warna yang  diserap  kromofor  karena  terdapat  ikatan  rangkap terkonjugasi,  seperti  gugus  –OH  [10].  Gugus  hidroksi merupakan pendorong elektron yang kemudian
mengalami  kesetimbangan  keto-enol  dengan  gugus karbonil yang terletak pada posisi para (Gambar 1) [11].
Gambar 2. Kesetimbangan keto-enol dengan NaOH
Pada  saat  penambahan  AlCl 3 tidak  terjdi  pergeseran batokromik maupun hipsokromik. Tetapi ketika ditambahkan  HCl  terjadi  pergeseran  batokromik  sebesar 50  nm  pada  pita  I.  Dari  data  tersebut  dapat  diketahui bahwa  senyawa  ini  mempunyai  gugus  OH  khelat  tapi tidak  tersubtitusi  posisi orto. Ketika  ditambahkan CH 3 COONa  tidak  menunjukkan  adanya  pergeseran batokromik  tetapi  pada  saat  ditambahkan  H 3 BO 3 terjadi pergeseran batokromik. Hal ini dapat disimpulkan bahwa senyawa ini tidak memiliki subtituen hidroksi pada posisi orto.

## Gambar 3. Spektrum senyawa 1 dalam plat KBr
Analisis  selanjutnya  adalah  spektrofotometer  IR  pada bilangan  gelombang  400-4000  cm -1 yang  menunjukkan beberapa  pita  khas  dari  suatu  gugus  fungsi.  Pita-pita serapan  yang  khas  diantaranya  adalah  3383  cm -1 ,2926 cm -1 , 2856 cm -1 , 1726 cm -1 dan 1639 cm -1 . Pada bilangan gelombang  3100-3500  cm -1 melebar  menunjukkan adanya gugus hidroksi (-OH). Bilangan gelombang 1639 cm -1 menunjukkan  adanya  gugus  karbonil  terkhelat dengan  didukung  bilangan  gelombang  pada  3383  cm -1 yang  mencirikan  gugus  hidroksi  yang  terikat  [12]. Selanjutnya bilangan gelombang 2926 cm -1 dan 2856 cm - 1 menunjukkan  C-H  alifatik.  Sedangkan  serapan  pada panjang  gelombang  1512  cm -1 merupakan  serapan  khas untuk  ikatan  cincin  aromatik,  dimana  data  ini menguatkan data dari spektrum UV [13].
Analisis  struktur berikutnya menggunakan NMR, baik 1 H-NMR maupun 13 C-NMR. Proses analisis menggunakan  pelarut  aseton-d 6 dan  diukur  pada frekuensi  500  MHz  dan  125  MHz.  Data  yang  diperoleh berupa  pergeseran  (  ) 1 H-NMR  dan 13 C-NMR  yang berisi informasi tentang jenis lingkungan proton maupun karbon,  multiplisitas  dan  jumlah  proton  atau  integritas. Dalam 1 H-NMR  juga  dikenal  data  berupa  konstanta kopling  yang  memberikan  informasi  berupa  jarak  antara 2 pergeseran pada serapan proton yang sama.
Pada  spektrum 1 H-NMR,  diketahui  terdapat  sinyal proton  pada  pergeseran  ( ,  ppm)  12,34  ppm  (1H,  brs) menunjukkan gugus OH yang terkhelat dengan karbonil. Data  ini  menguatkan  analisis  spektrum  UV-Vis  bahwa terdapat  gugus  karbonil  terkhelat.  Sinyal-sinyal  proton pada  7,07  ppm  dan  6,74  ppm  (1H, d , J =7,6  Hz) menunjukkan  sinyal  proton  aromatis.  Pada  12,34  ppm
menunjukkan adanya gugus karbonil terkhelat, sedangkan pada sinyal 6,90 ppm menunjukkan gugus OH bebas.
Tabel 1.
Data perbandingan pergeseran (  ) 1H-NMR dan 13C-NMR senyawa 1 dan senyawa 10 NO δ H (ppm) δ C (ppm) (1) (10) (1) (10) 1 101,96 105,83 2 12,34 ( s ) 10,59 ( s , IH) 161,00 161,71 3 5,92 (s ) 5,83 ( s , 2H) 94,89 95,75 4 164,25 164,37 5 5,98 ( s ) 5,83 ( s , 2H) 96,01 95,75 6 163,33 161,71 1’ 145,59 145,13 2’ 6,74 ( d , J =7,6 Hz)  7,68 ( d , J =8,2 Hz, 2H)  129,02 129,47 3’ 5,71 ( d , J =11,8 Hz)  7,89 ( d , J =8,2 Hz, 2H)  128,71 133,17 4’ 84,12 114,35 5’ 119,89 119,53 6’ 128,71 133,17 C=O 197,76 197,09
Analisis  selanjutnya  yaitu  spectrum  13C-NMR. Terdapat  sinyal-sinyal  pada  pergeseran  kimia  ( C ,  ppm) yaitu  Pergeseran  pada  197,6  ppm  menunjukkan  adanya gugus  karbonil  terkhelat  dari  suatu  benzofenon  [14]. Data  tersebut  menguatkan  data  analisis  spektra  UV-  Vis dan IR pada pembahasan sebelumnya.
Data  spektrum 1 H-NMR  dan 13 C-NMR dari  senyawa 1 kemudian dibandingkan dengan 4-(2,4,6- trihydroxybenzoyl ) benzonitrile (senyawa 10 ).  Dari  data perbandingan  spektrum,  diketahui  bahwa  senyawa pembanding  mempunyai  gugus  CN  dengan  pergeseran 13 C-NMR  pada  114,35  ppm  sedangkan  pada  senyawa 1 tidak  muncul  pada  pergeseran  tersebut  sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  senyawa 1 tidak  mempunyai subtituen  CN.  Perbandingan  kedua  senyawa  tersebut dapat dilihat pada Tabel 1.
Sesudah  membandingkan  data  spektrum 1 H-NMR  dan 13 C-NMR  antara  senyawa 1 dengan  senyawa 10 serta analisis  UV  dan  IR  sehingga  senyawa 1 dapat digambarkan sebagai berikut:

## IV. KESIMPULAN
Dari  isolasi  ekstrak  etil  asetat  batang Garcinia  balica Miq  didapatkan  senyawa  2,  4,  6-trihidroksi  benzofenon ( 1 ).  Senyawa  ini  berupa powder berwarna  kuning kecoklatan dengan titik leleh sebesar 215-216 O C.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  tim penelitian Laboratorium Kimia Bahan Alam dan Sintesis, Jurusan Kimia FMIPA ITS serta semua pihak  yang turut membantu.
OH 2 R OH O O - + NaOH R O R O O - Na + + O OH OH O H 1 2 3 4 5 6 1' 2' 3' 4' 5'

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Steinlin  dkk.  1988. Menuju  Kelestarian  Hutan  Edisi  Pertama . Jakarta: Yayasan Obor Indonesia.
[2] Ersam,  T.  (2001). Senyawa  Kimia  Mikromolekuler  Beberapa Tumbuhan Artocarpus Hutan Tropika Sumatera Barat . Disertasi , PPs,ITB, Bandung.
[3] Merza,  J.  (2004). Prenylated  Xanthon  and  Tocotrienol  from Garcinia virgate . Phytochemistry. 65: 2915-2920.
[4] Nguyen,  Hiep  D.,  Trinh,  Bihn  T.D.,  Nguyen*,  Lien-Hoa  D. (2011). Guttiferones Q-S, cytotoxic polyisoprenylated benzophenones from the pericarp of Garcinia cochinchinensis. Phytochemistry Letters 4. 129-133.
[5] Iilyas a *,  M.,  Perveen a ,  Mehtab,  Shafiullah b ,  Ahmad a ,  Syed  M.
(2002). A  novel  chalcone  from  Garcinia  nervosa .  J.  Chem. Research (S). 231-233.
[6] Deachathai,  S.,  Mahabusakaraman,  W.,  Phongpaichit,  S.,  Taylor, W.C.  (2005). Phenolic  Compounds  from  Garcinia  dulcis . Phytochemistry. 23. 130-137.
[7] Peres,  V.,  Nagem,  T.J.  Oliveira,  F.F.  (2000), Trioxygenated Naturally Occuring Xanthones .Phytocemistry.55.684-710.
[8] Ali,  S.,  Goundar,  R.,  Sotheeswaran,  S.,  Beaulieu,  C.,  Spine,  C.
(2000). Benzophenones of Garcinia pseudoguttifera. Phytochemistry . 53. 281-284.
[9] Sari,  R. dan  Hanan, A.  (2000). Garcinia  (Clussiaceae) di  Kebun Raya  Bogor:  Fisiognomi,  Keanekaragaman  dan  Potensi . Prosiding Seminar  Hari Cinta  Puspa dan  Satwa  Nasional.  Kebun Raya Bogor
[10] Cairns, Donald.  (2008). Intisari Kimia Farmasi,  Edisi 2 . Jakarta: EGC.
[11] Ito, C., Miyamoto, Y., Nakayama, M., Kawai, Y. (1997). A Novel Depsidone  and  Some  New  Xanthones  from Garcinia Spesies. Chemical and Pharmaceutical Bulletin . 45 (9), 1403-1413 .
[12] Nedialkov,  P.T.  Kitanov,  G.M.  (2000). Two  benzophenone0- arabinosides  and  a  Chromone  from  Hypericum  annulatum .
Phytochemistry. 59. 867-871
[13] Chin,  Yi-Ping,  Huang,  Wei-Jan,  Hsu,  Feng-Lin,  Lin,  Yuh-Ling, Ling,  Mei-Hsuang.  (2011). Synthesis  and  Evaluation  of Antibacterial  Activities  of  5,7-Dihidroxycoumarin  Derivatives . Arch. Pharm. Chem. Life Sci. 11. 386-393