## Potensi Antibakteri Ekstrak Batang Gaharu ( Gyrinops versteegii ) terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus
Mahdalena Sy. Pakaya 1* , Ariani H. Hutuba 2 , Widy Susanti Abdulkadir 3 , Endah Nurrohwinta Djuwarno 4
1,2,3,3,4 Jurusan Farmasi, Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo, Kota Gorontalo, Indonesia. * E-mail: mahdalena@ung.ac.id
Article Info: Received: 12 Februari 2024 in revised form: 24 April 2024 Accepted: 26 Mei 2024 Available Online: 1 Juni 2024

## ABSTRACT
Infection  disease  is  one  of  the  most  common  health  problem  in  many developing countries, including Indonesia where the contamination of microbe is associated with the cause of the infection. The infection can be caused by various microorganisms such as bacteria, virus, fungus, and protozoa.  Fortunately,  Indonesia’s  medicinal  plant  varies  and  one  of which is agarwood ( Gyrinops versteegii ). This study aims at measuring the potential  of  agarwood  ( Gyrinops  versteegii )  stem  extract  towards Escherichia coli and Staphylococcus aureus . In this study, the simplicial of agarwood stem is extracted by applying multilevel maceration method with  n-Hexane  solvent,  ethyl  acetate,  and  methanol.  The  result  of antibacterial  activity  testing  over  three  extracts  reveals  that  the  ethyl acetate extract can inhibit the growth of Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. In  addition,  the  result  of  screening  in  the  ethyl  acetate  extract discovers  that  in  contains  alkaloid,  terpenoid,  and  tannin,  where  the positive  control  used  is  chloramphenicol  and  the  negative  control  is Dimethyl  Sulfoxide  (DMSO).  The  result  of  Minimum  Inhibitory Concentration test in the agarwood stem extract towards Escherichia coli dan Staphylococcus aureus shows that the concentration of 50% is marked with absence of turbidity, whereas 50% in the Lowest Lethal Dose value signifies  absence  of  growth  in  the  bacteria  in  the  Nutrient  Agar  (NA) media. Additionally, the result of potential test of agarwood stem ethyl acetate extract towards Escerichia coli in concentrations of 25%, 50%, and 100%  with  an  inhibition  zone  created  of  7,85  mm where  it includes  in medium  category,  and  10,6  mm  and  13,45  mm  that  include  in  strong category. In the meantime, the result of potential test of agarwood stem ethyl acetate extract towards Staphylococcus  aureus in concentrations of 25%, 50%, and 100% with an inhibition zone created of b,1 mm where it includes in medium category, and 13,2 mm and 16 mm that include in strong category in inhibiting bacteria.
Keywords : Agarwood ( Gyrinops versteegii );
Stem Extract; Escherichia coli ; Staphylococcus aureus ; Minimum Inhibitory Concentration; Lowest Lethal Dose; Antibacterial Potential
Corresponding Author: Mahdalena Sy. Pakaya Jurusan Farmasi Fakultas Olahraga dan Kesehatan Universitas Negeri
Gorontalo
E-mail: mahdalena@ung.ac.id
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal) 2024; 4(2): 262-274 ISSN : 2775- 3670 (electronic) Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/ijpe/index DOI: 10.37311/ijpe.v4i2.26754
Pakaya  et al., 2024; Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal); 4(2): 262 - 274
How to cite (APA 6 th Style): Pakaya,M.S., Hutuba,A.H.,Abdulkadir,W.S., Djuwarno,E.N. (2024) . Potensi Antibakteri Ekstrak Batang Gaharu (Gyrinops versteegii) terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Indonesian Journal of Pharmaceutical (e-Journal), 4 (2), 262-274 .

## ABSTRAK
Penyakit infeksi merupakan salah satu masalah kesehatan yang paling utama di Indonesia maupun di  negara-negara  berkembang  lainnya.  Kontaminasi  mikroba  berkaitan  dengan  penyebab  infeksi tersebut. Infeksi dapat disebabkan oleh berbagai mikroba seperti bakteri, virus, jamur, dan protozoa. Salah satu tumbuhan berkhasiat obat yang berada di Indonesia adalah gaharu ( Gyrinops versteegii ). Penelitian ini bertujuan untuk mengukur potensi ekstrak batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) terhadap bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus .  Dimana  simplisia  batang  gaharu  diekstraksi menggunakan metode maserasi bertingkat dengan pelarut n-Heksan, etil asetat dan metanol. Hasil uji  aktivitas  antibakteri  terhadap  3  ekstrak  tersebut  yaitu  ekstrak  etil  asetat  mampu  menghambat pertumbuhan Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Hasil skrining ekstrak etil asetat mengandung alkaloid,  terpenoid  dan  tanin.  Kontrol  positif  yang  digunakan  yaitu  kloramfenikol  dan  kontrol negatif yaitu Dimetil Sulfoksida (DMSO). Hasil Uji KHM ekstrak batang gaharu terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus yaitu pada konsentrasi 50% ditandai dengan tidak terjadi kekeruhan dan 50% untuk nilai KBM dimana tidak terjadi pertumbuhan bakteri pada media Nutrien Agar (NA). Hasil Uji Potensi ekstrak etil asetat batang gaharu terhadap Escherichia coli pada konsentrasi 25%, 50%, dan 100 % dengan zona hambat yang dihasilkan yaitu 7,85 mm dimana masuk dalam kategori sedang, 10,6 mm dan 13,45 mm dimana masuk dalam kategori kuat. Sedangkan uji potensi ekstrak etil  asetat  batang  gaharu  terhadap Staphylococcus  aureus pada  konsentrasi  25%,  50%,  dan  100  % dengan zona hambat yang dihasilkan yaitu 8,1 mm dimana masuk dalam kategori sedang, 13,2 mm dan 16 mm dimana masuk dalam kategori kuat dalam menghambat bakteri
Kata Kunci: Ekstrak Batang Gaharu ( Gyrinops versteegii); Escherichia coli; Staphylococcus aureus; Kadar Hambat Minimum; Kadar Bunuh Minimum; Potensi Antibakteri

## 1. Pendahuluan
Penyakit infeksi merupakan salah satu masalah kesehatan yang paling utama di Indonesia maupun  di  negara-negara  berkembang  lainnya.  Kontaminasi  mikroba  merupakan  salah  satu masalah yang dihadapi dalam kehidupan manusia yang berkaitan dengan penyebab infeksi tersebut. Kontaminasi dapat terjadi melalui makanan, air, udara, tanah dan lingkungan sekitar. Infeksi dapat disebabkan oleh berbagai mikroba seperti bakteri, virus, jamur, dan protozoa [9]. Mikroba patogen diantaranya  yaitu  bakteri  dan  jamur.  Bakteri  merupakan  salah  satu  golongan  mikroorganisme prokariotik  (bersel  tunggal)  yang  hidup  berkoloni  dan  tidak  mempunyai  selubung  inti  namun mampu hidup dimana saja.
Berbagai obat anti-infeksi seperti antibiotik merupakan salah satu kelompok yang banyak dipilih. Timbulnya resitensi telah menyebabkan salah satu kelompok antibiotik tertentu tidak lagi digunakan dalam terapi, disisi lain harga antibiotik yang mahal menyebabkan masyarakat kalangan ekonomi lemah tidak mampu membelinya [15]. Hal tersebut mendorong penemuan sumber obat- obatan antimikroba lain dari bahan alam yang dapat berperan sebagai antibakteri yang lebih poten dan relatif lebih murah. Bahan alam dapat dimanfaatkan sebagai obat tradisional yang menjadi salah satu upaya dalam penanggulangan masalah kesehatan yang dihadapi. Salah satu jenis tanaman yang berpotensi untuk dikembangkan sebagai obat adalah gaharu ( Gyrinops versteegii ) [2].
Gaharu  ( Gyrinops  versteegii )  merupakan  tanaman  hasil  hutan  Indonesia  yang  memiliki potensi besar sebagai bahan obat. Masyarakat diberbagai daerah telah memanfaatkan bagian dari tumbuhan penghasil gaharu, seperti akar, batang, daun, kulit, dan buah sebagai bahan campuran ramuan obat tradisional (jamu). Bahan tersebut dimanfaatkan untuk pengobatan atau pencegahan penyakit  malaria,  darah  tinggi,  dan  kencing  manis.  Adapun  gaharu  yang  telah  diolah  menjadi minyak  atsiri  (essential  oil)  telah  dikembangkan  sebagai  bahan  obat  herbal  untuk  stress, rematik, gangguan  ginjal,  perut,  asma,  hepatitis,  sirosis  hati,  pembengkakan  liver  dan  limpa,  serta  bahan antibiotic TBC [7].
Penelitian yang dilakukan oleh Shendi dan Riska, bahwa ekstrak akar dan ranting gaharu memiliki  konsentrasi  hambat  minimum  yang  lebih  kuat  terhadap  beberapa  mikroba  seperti Stapylococcus  aureus,  Escherichia  coli,  dan  fungi  Candida  albicansPenghambatan  pertumbuhan bakteri  disebabkan  oleh  senyawa  kimia  yang  terkandung  pada  ekstrak  etanol  akar  dan  ranting gaharu. Akar dan ranting gaharu mengandung zat aktif berupa flavonoid, tanin dan saponin [12]. Penelitian Abdul dan Dzun, mengemukakan bahwa Ekstrak etanol daun gaharu (Aquilaria malea L.) memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus. Ekstrak  etanol  daun  gaharu memiliki aktivitas antibakteri tetapi tidak lebih dari dari Amoksisillin. Peneliti juga mendapatkan hasil identifikasi kimia yang menunjukkan bahwa ekstraksi etanol daun gaharu positif mengandung senyawa  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri  yaitu  flavonoid,  tanin,  alkaloid  dan  saponin  [1]. Berdasarkan uraian diatas, akan dilakukan penelitian yang bertujuan untuk mengetahui uji potensi antibakteri  ekstrak  batang  Gaharu  ( Gyrinops  versteegii )  terhadap  bakteri Escherchia  coli dan Staphylococcus aureus.
2. Metode Penelitian
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah Aluminium Foil, Autoklaf (Hirayama), Batang  pengaduk,  Blender,  Bunsen,  Cawan  Petri  (Duran  Wheaton  Kimble), Chainsaw, Corong (Pyrex), Dispo 1 mL, Dispo 10 mL, Erlenmeyer (Pyrex), Evaporator (IKA Ks 4000), Gelas ukur (Pyrex), Gunting, Inkubator (Limacel), Jarum Ose, Jangka sorong (Digital Calliper), Neraca Analitik, Oven (Shel lab), Pinset, Pipet Mikro (Eppendorf), Pipet tetes, Rak Tabung Reaksi, Saringan, Spatula, dan Tabung Reaksi (Pyrex).
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  Amil  Alkohol,  Aquades, Kloramfenikol, Dimetil Sulfoksida (DMSO) (Merck), Etil Asetat, Ferric Chloride (FeCl 3 ), Hidrochloric acid (HCl), Kertas cakram (Oxoid), Korek api, Metanol, NaCl 0,9%, n-Heksan, Nutrient Agar (NA) (Oxoid), Nutrient Broth (NB) (Merck), Pereaksi Bouchardat, Pereaksi Dragendorff, Reagen Mayer, Serbuk Magnesium (Merck), Sulfuric Acid (H 2 SO 4 ).
Sampel  tumbuhan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  batang  gaharu  ( Gyrinops versteegii ),  Bakteri  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah bakteri  biakan Escherchia  coli dan Staphylococcus  aureus, yang  diperoleh  dari  koleksi  Laboratorium  Mikrobiologi  Farmasi,  Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo.

## Preprasi Sampel
Sampel yang diperoleh dicuci bersih dengan air mengalir, setelah itu dijemur dibawah sinar matahari dengan ditutupi bagian atasnya menggunakan kain hitam. Kemudian dipotong kecil-kecil setelah itu diblender hingga halus menjadi serbuk [8] [10]. Pada penelitian ini dilakukan ekstraksi secara  maserasi  bertingkat,  pelarut  yang  digunakan  adalah  pelarut  dengan  kepolaran  makin meningkat n-heksan, etil asetat dan metanol. Tahapan ekstraksi dibuat dengan merendam 300 gram serbuk batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) ke dalam 1000 ml n-heksan. Maserasi dilakukan selama 3 hari dan diaduk tiap 12 jam, setelah 3 hari residu dipisahkan dari filtrat, hasil maserasi filtrat yang
diperoleh  di  pekatkan  menggunakan  alat  evaporator  hingga  menjadi  ekstrak  kental  dan  residu dikeringkan dengan oven pada suhu 50°C. Setelah residu kering, residu dimaserasi kembali selama 3 hari dengan etil asetat 1000 mL sambil sesekali diaduk tiap 12 jam, setelah 3 hari residu dipisahkan dari filtrat, hasil maserasi filtrat yang diperoleh dipekatkan menggunakan alat evaporator hingga menjadi ekstrak kental dan residu dikeringkan dengan oven pada suhu 50°C. Setelah residu kering, residu dimaserasi kembali selama 3 hari dengan metanol 1000 mL sambil sesekali diaduk tiap 12 jam, setelah  3  hari  residu  dipisahkan  dari  filtrat,  hasil  maserasi  filtrat  yang  diperoleh  dipekatkan menggunakan  alat  evaporator  hingga  menjadi  ekstrak  kental.  Masing-masing  ekstrak  yang  telah dipekatkan kemudian ditimbang.

## Persiapan dan Uji Aktivitas Antibakteri
Persiapan  uji  akitivtas  antibakteri  meliputi  sterilisasi  alat,  pembuatan  media  nutrien  agar (NA),  pembuatan  media  nutrien  broth  (NB),  permbuatan  Mc.Farland  0,5%,  inokuasi  bakteri  uji pembuatan suspensi bakteri,  pembuatan larutan uji, pembuatan larutan kontrol. Uji Aktifitas antibakteri  ekstrak  n-Heksan,  Etil  Asetat  serta  Metanol  batang  gaharu  ( Gyrinops  versteegii ) menggunakan  metode Streak  Plate (gores).  Hal  pertama  yang dilakukan  yaitu  dilarutkan masing- masing  ekstrak  menggunakan  2  mL  DMSO  lalu  diaduk  hingga  larut.  Setelah  larut,  ditambahkan media  nutrient  agar  yang  telah  dicairkan,  dicukupkan  hingga  volume  larutan  menjadi  10  mL. Kemudian  dituang  ke  dalam  cawan  petri,  dihomogenkan  hingga  rata  dan  dibiarkan  memadat. Setelah memadat, diambil 1 ose biakan bakteri yang telah disuspensikan dan digoreskan pada media yang telah memadat. Kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C. Setelah diinkubasi di lihat hasil yang tidak menunjukan adanya pertumbuhan koloni bakteri pada media yang telah dicampur dengan ekstrak dan itulah hasil yang akan dilanjutkan pada uji KHM, KBM, KLT Bioautografi dan dilanjutkan dengan uji potensi antibakteri.

## Skrining Fitokimia
Dilakukan  pengujian  skrining  fitokimia  batang  gaharu  ( Gyrinops  versteegii )  meliputi  uji Alkaloid, Triterpenoid, Steroid, Tanin, Flavonoid,dan Saponin.

## Kadar Hambat Minimum (KHM)
Metode  dilusi  cair  dilakukan  dengan  menyiapkan  beberapa  tabung  reaksi  yang  sudah disterilkan terlebih dulu, kemudian disiapkan tabung reaksi yang sudah disterilkan dan diberi label tabung sesuai dengan varian konsentrasi yaitu 100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,125%, 1,56%, 0,78%, 0,39%,  Kontrol  positif  untuk  kloramfenikol,  dan  Kontrol  Negatif  untuk  DMSO.  Masing-masing tabung  diisi  dengan  media  Nutrient  Broth  sebanyak  5  mL,  untuk  tabung  dengan  label  100% dilarutkan  ekstrak  dengan  konsentrasi  100%,  kemudian  dihomogenkan  dengan  menggunakan vortex. Diambil dari tabung pertama sebanyak 5 mL kemudian dimasukkan ke dalam tabung kedua dengan label 50% lalu divortex, dilakukan dengan cara yang sama untuk konsentrasi 25%, 12,5%, 6,25%,  3,125%,  1,56%,  0,78%,  0,39%,  untuk  tabung  label  0,39%  diambil  5  mL  dan  dibuang.  Pada tabung kontrol positif ditambahkan kloramfenikol, dan untuk tabung kontrol negatif ditambahkan DMSO. Kemudian ditambahkan suspensi bakteri sebanyak 20 μL kedalam masing -masing tabung dan  divortex.  Setelah  itu  diinkubasi  dalam  inkubator  pada  temperatur  37°C  selama  24  jam  dan diamati  apakah  terjadi  kekeruhan,  kemudian  dibandingkan  dengan  kontrol  positif  antibiotik kloramfenikol  dan  kontrol  negatif  DMSO.  Konsentrasi  terendah  yang  menunjukkan  kejernihan adalah KHM [11].
Kadar Bunuh Minimum (KBM)
Pakaya  et al., 2024; Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal); 4(2): 262 - 274
Setelah  didapatkan  Kadar Hambat  Minimum  (KHM),  masing – masing  tabung  uji  tersebut digoreskan pada media padat Nutrient agar, lalu diinkubasi selama 18 – 24 jam pada suhu 37°C di dalam  inkubator.  Kemudian  amati  konsentrasi  paling  rendah  yang  tidak  menunjukan  adanya pertumbuhan koloni bakteri pada media padat itulah hasil dari Kadar Bunuh Minimal (KBM) [11].

## Uji Potensi Antibakteri
Penentuan potensi antibakteri menggunakan salah satu metode difusi yaitu Metode Kirby dan Bauer dengan  menggunakan  kertas  cakram.  Langkah  pertama  yang  dilakukan  yaitu  kertas cakram  yang  berdiameter  0,5  cm  diambil  dengan  cara  aseptis  menggunakan  pinset  yang  telah disterilisasi.  Kertas  cakram  itu  dicelupkan  kedalam  masing-masing  konsentrasi  ekstrak  batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) selama 1 jam, setelah itu diletakkan pada media yang berisi bakteri uji, kontrol  negatif  yang  digunakan  DMSO  dan  Kloramfenikol  sebagai  kontrol  positif.  Perlakuan  ini direplikasi sebanyak 2 kali. Media yang telah diberi perlakuan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C.  Lalu diamati dan diukur diameter zona hambatannya yang terbentuk menggunakan jangka sorong

## Analisis Data
Untuk  mengetahui  perbedaan  yang bermakna  dari  uji  potensi  pada  ekstrak  batang  gaharu ( Gyrinops  versteegii )  yang  dapat  menghambat  bakteri  Escherchia  coli  dan  Staphylococcus  aureus digunakan One Way ANOVA pada α = 0,01, dengan taraf kepercayaan 99%.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Persen  Rendamen  masing-masing  ekstrak  batang  gaharu  ( Gyrinops  versteegii )  yang didapatkan setelah proses maserasi bertingkat untuk ekstrak n-Heksan yaitu 7,13% dimana hasil % Rendamen yang diperoleh dari ekstrak n-Heksan bahwa proses ekstraksi yang dilakukan ini tidak menunjukkan hasil ekstraksi yang sempurna (table 1).
Tabel 1. Hasil Ekstrak si batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) Berat sampel (g) Pelarut Ekstrak (g) %Rendamen 300 n-Heksan 21,4 7,13 253 Etil Asetat 25,6 10,12 234 Metanol 28,3 12,09
Persen rendamen untuk ekstrak Etil asetat batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) adalah 10,12%, dan % Rendamen ekstrak metanol batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) yang diperoleh yaitu 12,09% ini menunjukkan bahwa proses ekstraksi menggunakan kedua pelarut tersebut berlangsung dengan baik. Hal ini memenuhi persyaratan Farmakope Herbal Indonesia, yaitu rendamen tidak kurang dari 7,2% [5].
Tabel 2. Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Etil Asetat Batang Gaharu Golongan Senyawa Pereaksi Perubahan dengan pereaksi Keterangan Alkaloid Pereaksi Dragendorf Endapan merah bata Positif Alkaloid Pereaksi Mayer Endapan kuning Pereaksi Bourcardat Endapan coklat
Pakaya  et al., 2024; Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal); 4(2): 262 - 274
Terpenoid Asetat Anhidrat + H 2 SO 4 Cincin kecoklatan Positif Terpenoid Tanin FeCl 3 1% Hijau kehitaman Positif Tanin Saponin Aquadest Tidak berbuih Negatif saponin Flavonoid HCl pekat + serbuk magnesium + dan amil alkohol Coklat Negatif Flavonoid
Tabel 2 menunjukkan hasil penapisan fitokimia ekstrak etil asetat batang gaharu ( Gyrinops versteegii )  dimana  ekstrak  etil  asetat  positif  mengandung  alkaloid  dengan  adanya  perubahan endapan warna merah bata ketika ditambahkan pereaksi dragendorf, perubahan endapan kuning ketika  ditambahkan  pereaksi  mayer,  perubahan  endapan  coklat  ketika  ditambahkan  pereaksi bourchardat,  ekstrak  etil  asetat  batang  gaharu  juga  positif  mengandung  terpenoid  yang  ditandai dengan adanya perubahan warna kecoklatan dan terbentuknya cincin ketika ditambahkan pereaksi, dan mengandung tanin yang ditandai dengan adanya perubahan warna hijau kehitaman.
Keterangan: Gambar 1 : Hasil Ekstrak Ekstrak n-Heksan Batang Gaharu  terhadap Staphylococcus aureus Gambar 2 : Hasil Ekstrak Etil asetat Batang Gaharu terhadap Staphylococcus aureus Gambar 3 : Hasil Ekstrak Metanol Batang Gaharu terhadap Staphylococcus aureus
Gambar 4 : Hasil Ekstrak n-Heksan Batang Gaharu terhadap Escherichia coli Gambar 5 : Hasil Ekstrak Etil asetat Batang Gaharu terhadap Escherichia coli Gambar 6 : Hasil Ekstrak Metanol Batang Gaharu terhadap Escherichia coli
Gambar 1. Hasil Uji Skrining Antimikroba
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  uji  aktivitas  ekstrak  n-Heksan  dan  Metanol  batang gaharu  ( Gyrinops  versteegii )  pada  media  agar  terjadi  pertumbuhan  bakteri Echerichia  coli dan Staphylococcus  aureus .  Hal  ini  dikarenakan  senyawa-senyawa  yang  ada  pada  ekstrak  n-Heksan kurang efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri Echerichia coli dan Staphylococcus aureus hal
Gambar  1
Gambar  2
Gambar  3
Gambar  4
Gambar  5
Gambar  6
ini  juga  dipengaruhi  oleh  %rendamen  pada  ekstrak  n-Heksan  batang  gaharu  ( Gyrinops  versteegii ) yang tidak menunjukkan hasil ekstraksi yang sempurna sehingga senyawa-senyawa yang ada pada ekstrak n-Heksan tidak terekstraksi dengan sempurna. Pada media yang dicampur dengan ekstrak metanol batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) juga kurang efektif dalam menghambat bakteri Echerichia coli dan Staphylococcus  aureus hal  ini  dikarenakan  senyawa  polar  yang  ada  pada  ekstrak  metanol batang  gaharu  ( Gyrinops  versteegii )  kurang  efektif  dalam  menghambat  pertumbuhan  dari  bakteri Echerichia coli dan Staphylococcus aureus. Sedangkan pada media yang telah dicampur dengan ekstrak Etil  asetat  batang  gaharu  ( Gyrinops  versteegii )  tidak  terjadi  sama  sekali  pertumbuhan  bakteri,  ini disebabkan senyawa-senyawa pada sampel batang gaharu ( Gyrinops versteegii ), aktivitas antibakteri dari ekstrak etil asetat sangat besar.
Tabel 3. Hasil Uji Kadar Hambat Minimum Mikroba Konsentrasi (%) Hasil Staphylococcus aureus 0,39 Keruh 0,78 Keruh 1,56 Keruh 3,125 Keruh 6,25 Keruh 12,5 Keruh 25 Keruh 50 Tidak Keruh 100 Tidak Keruh Kontrol Positif Tidak Keruh Kontrol Negatif Keruh Escherichia coli 0,39 Keruh 0,78 Keruh 1,56 Keruh 3,125 Keruh 6,25 Keruh 12,5 Keruh 25 Keruh 50 Tidak Keruh 100 Tidak Keruh Kontrol Positif Tidak Keruh Kontrol Negatif Keruh
Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ekstrak etil asetat batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli yaitu  pada  konsentrasi  50%  hal  ini ditunjukkan tidak terjadi kekeruhan pada media, sehingga konsentrasi 50% merupakan konsentrasi yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .  Pada konsentrasi 25%; 12,5%; 6,25%; 3,12%; 1,56%; 0,78%; dan 0,39% ekstrak yang digunakan tidak dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli hal  ini  ditunjukkan dengan adanya kekruhan media pada konsentari-konsentrasi tersebut (table 3 dan gambar 2).
Pakaya  et al., 2024; Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal); 4(2): 262 - 274
Gambar 2. Hasil uji konsentrasi hambat minimum terhadap Staphylococcus aureus (atas) dan Escherichia coli (bawah)
Hasil uji kadar hambat minimum (KBM) bisa dilihat pada tabel 4 dan gambar 3Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi 12,5%; 6,25%; 3,12%; 1,56%; 0,78%; dan 0,39% masih terdapat adanya pertumbuhan koloni bakteri Staphylococcus aureus, sedangkan pada konsentrasi 25% masih terdapat juga pertumbuhan bakteri walaupun jumlahnya sedikit dan pada konsentrasi 50% dan 100% menunjukkan mampu menghambat pertumbuhan bakteri dengan tidak adanya lagi koloni bakteri Staphylococcus aureus yang tumbuh.
Tabel 4. Hasil uji konsentrasi bunuh minimum Mikroba Konsentrasi (%) Hasil Staphylococcus aureus 0,39 Tidak Aktif Membunuh 0,78 Tidak Aktif Membunuh 1,56 Tidak Aktif Membunuh 3,125 Tidak Aktif Membunuh 6,25 Tidak Aktif Membunuh 12,5 Tidak Aktif Membunuh 25 Tidak Aktif Membunuh
Pakaya  et al., 2024; Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal); 4(2): 262 - 274
50 Aktif Membunuh 100 Aktif Membunuh Kontrol Positif Aktif Membunuh Kontrol Negatif Tidak Aktif Membunuh Escherichia coli 0,39 Tidak Aktif Membunuh 0,78 Tidak Aktif Membunuh 1,56 Tidak Aktif Membunuh 3,125 Tidak Aktif Membunuh 6,25 Tidak Aktif Membunuh 12,5 Tidak Aktif Membunuh 25 Tidak Aktif Membunuh 50 Aktif Membunuh 100 Aktif Membunuh Kontrol Positif Aktif Membunuh Kontrol Negatif Tidak Aktif Membunuh
Gambar  9
Gambar  10
Gambar  11
Gambar  12
Gambar  13
Keterangan: Gambar 9   : Hasil KBM 1,56%; 0,78%; 0,39% terhadap Staphylococcus aureus Gambar 10 : Hasil KBM 12,5%; 6,25%; 3,12% terhadap Staphylococcus aureus Gambar 11 : Hasil KBM 100%; 50%; 25% terhadap Staphylococcus aureus Gambar 12 : Kontrol Positif dan Negatif terhadap Staphylococcus aureus Gambar 13 : Hasil KBM 1,56%; 0,78%; 0,39% terhadap Escherichia coli Gambar 14 : Hasil KBM 12,5%; 6,25%; 3,12% terhadap Escherichia coli Gambar 15 : Hasil KBM 100%; 50%; 25% terhadap Escherichia coli Gambar 16 : Kontrol Positif dan Negatif terhadap Escherichia coli
Gambar 3. Hasil Uji Kadar Bunuh Minimum (KBM) Hasil  penelitian  juga  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  25%;  12,5%;  6,25%;  3,12%;  1,56%; 0,78%;  dan  0,39%  masih  terdapat  adanya  pertumbuhan  koloni  bakteri  Staphylococcus  aureus, sedangkan pada konsentrasi 50% dan 100% menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat batang gaharu ( Gyrinops  versteegii )  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  ditandai  dengan  tidak adanya lagi koloni bakteri Escherichia coli yang tumbuh. Dengan demikian, nilai KBM ekstrak etil asetat batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli  ditetapkan  pada  konsentrasi  50%.  Hal  ini  sesuai  dengan  literatur  yang  menyatakan  bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka semakin besar kemampuan penghambatan suatu bakteri [14].
Tabel 5. Hasil uji potensi antibakteri ekstrak etil asetat Batang Gaharu ( Gyrinops versteegii ) pada bakteri Staphylococcus aureus Sampel Diameter  Zona  Hambat (mm) Rata-rata (mm) Kategori Ekstrak 25% 7,8 8,4 8,1 Sedang Ekstrak 50% 12,9 13,5 13,2 Kuat Ekstrak 100% 15,8 16,2 16 Kuat Kontrol (+) 26,5 26,8 26,65 Sangat Kuat Kontrol (-) 0 0 0 ± 0 Tidak menghambat
Hasil uji zona hambat Ekstrak Etil asetat batang Gaharu ( Gyrinops versteegii ) terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dapat  dilihat  dari  tabel  6  dan  gambar  4.  Hasil  uji  potensi  hambatan pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus menunjukkan  bahwa  ekstrak  etil  asetat  batang  gaharu ( Gyrinops  versteegii )  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dibuktikan  dengan  terbentuknya zona bening disekitar kertas cakram. Berdasarkan tabel 6 dapat dilihat bahwa rata-rata hambatan yang diperoleh pada konsentrasi 25% sebesar 8,1 mm, konsentrasi 50% sebesar 13,2 mm dan zona
Gambar  15
Gambar  16
hambat terbesar dihasilkan oleh konsentrasi ekstrak 100% yaitu sebesar 16 mm, sedangkan untuk kontrol  positif  kloramfenikol  zona  hambat  yang  dihasilkan  yaitu  26,5mm dan  zona  hambat  yang dihasilkan kontrol negatif Dimeti Sulfoksida (DMSO) yaitu 0 mm. Zona hambat yang terbentuk yang dihasilkan  menggunakan  metode Kirby-Bauer yaitu  berukuran  kurang  dari  5  mm  maka dikategorikan  lemah,  apabila  ukuran  zona  hambat  5-10  mm  dikategorikan  sedang  atau  cukup menghambat, 10-20 mm dikategori kuat dalam menghambat, sedangkan lebih dari 20 mm masuk dalam kategori sangat kuat [6].
Tabel 6. Hasil Uji Potensi Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Batang Gaharu ( Gyrinops versteegii ) pada bakteri Escherichia coli Sampel Diameter Zona Hambat (mm)  Rata-rata (mm) Kategori Ekstrak 25% 7,8 7,9 7,85 Sedang Ekstrak 50% 10,5 10,7 10,6 Kuat Ekstrak 100% 13,3 13,6 13,45 Kuat Kontrol (+) 21,3 21,5 21,4 Sangat kuat Kontrol (-) 0 0 0 ± 0 Tidak menghambat
Gambar 4. Hasil Uji Potensi Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Batang Gaharu ( Gyrinops versteegii ) pada bakteri Escherichia coli
Untuk hasil uji potensi hambatan pertumbuhan bakteri Escherichia coli menunjukkan bahwa ekstrak  etil  asetat  batang  gaharu  ( Gyrinops  versteegii )  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri

## Gambar 17
Hasil Potensi Ekstrak Etil asetat batang Gaharu terhadap Staphylcoccus aureus Gambar 18 Hasil Potensi Kontrol positif dan kontrol negatif terhadap Staphylcoccus aureus Gambar 19 Hasil Potensi Ekstrak Etil asetat batang  Gaharu terhadap Escherichia coli Gambar 20 Hasil Potensi Kontrol positif dan kontrol negatif terhadap Escherichia coli
dibuktikan  dengan  terbentuknya  zona  bening  disekitar kertas  cakram.  Berdasarkan  tabel  7  dapat dilihat bahwa rata-rata hambatan yang diperoleh pada konsentrasi 25% sebesar 7,85 mm, konsentrasi 50%  sebesar  10,6  mm  dan  zona  hambat  terbesar  dihasilkan  oleh  konsentrasi  ekstrak  100%  yaitu sebesar 13,45 mm, sedangkan untuk kontrol positif kloramfenikol zona hambat yang dihasilkan yaitu 21,4 mm dan zona hambat yang dihasilkan kontrol negatif Dimeti Sulfoksida (DMSO) yaitu 0 mm. Zona hambat yang terbentuk yang dihasilkan menggunakan metode Kirby-Bauer yaitu berukuran kurang dari 5 mm maka dikategorikan lemah, apabila ukuran zona hambat 5-10 mm dikategorikan sedang atau cukup menghambat, 10-20 mm dikategori kuat dalam menghambat, sedangkan lebih dari 20 mm masuk dalam kategori sangat kuat [6].
Berdasarkan hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi 25%; 50%; dan 100% ekstrak etil  asetat  batang  gaharu  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  bakteri,  hal  ini  disebabkan  karena semakin banyak agen antibakteri yang terkandung dalam ekstrak batang gaharu maka seakin besar zona  hambat  yang  terbentuk.  Menurut  Literatur  dinyatakan  bahwa  dengan  adanya  peningkatan konsentrasi yang semakin besar maka kadar dari senyawa yang berfungsi sebagai antibakteri juga akan semakin besar [3].
Perbedaan  zona  hambat  yang  terjadi  dalam  hasil  mendefinisikan  perbedaan  kepekaan antara kedua bakteri uji. Perbedaan aktivitas ekstrak etil asetat batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri  yaitu  bakteri Staphylococcus  aureus lebih  peka dibandingkan bakteri Escherichia coli . Karena bakteri Staphylococcu aureus merupakan bakteri gram positif  dengan  sturktur  dinding  sel  yang  lebih  sederhana,  yaitu  memiliki  kandungan  lipid  yang rendah (1-4%) sehingga memudahkan bahan bioaktif yang masuk ke dalam sel  [4].
Penghambat  yang  terjadi  dikarenakan  adanya  aktivitas  senyawa  antibakteri  yang terkandung  dalam  ekstrak  etil  asetat  batang  gaharu  ( Gyrinops  versteegii ).  Senyawa-senyawa antibakteri yang terkandung dalam ekstrak etil asetat batang gaharu antara lain Alkaloid, Terpenoid dan Tanin. Batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) mengandung Alkaloid yang mempunyai mekanisme kerja antibakteri yaitu dengan menghambat pertumbuhan bakteri dengan cara menghambat sintesis dinding  sel,  mengubah  permeabilitas  membrane  melalui  transpor  aktif  dan  menghmbat  sintesis protein bakteri. Senyawa kimia aktif lainnya yang dimiliki batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) yaitu Terpenoid,  mekanisme  terpenoid  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri  yaitu  dengan mengiritasi  dinding  sel  dan  mengumpalkan  protein  dari  bakteri  sehingga  dapat  menyebabkan terjadinya  hidrolisis  dan  perpindahan  cairan  sel  karena  adanya  perbedaan  osmosis  (Suerni  dkk, 2013).  Batang  gaharu  ( Gyrinops  versteegii )  juga  mengandung  Tanin.  Menurut  Suerni  dkk  (2013), senyawa  kimia  tanin  dapat  merusak  membrane  sel  dari  bakteri  dan  mampu  menghambat pertumbuhan bakteri dengan cara mengkoagulasi protoplasma bakteri [13].

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan,  maka  dapat  ditarik  kesimpulan  bahwa ekstrak batang gaharu ( Gyrinops versteegii ) memiliki aktifitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus. Nilai  potensi  ekstrak  batang  gaharu  terhadap Staphylococcus  aureus pada konsentrasi 25%, 50% dan 100% yaitu sebesar 8,1 mm, 13,2 mm, dan 16 mm. sedangkan nilai potensi  ekstrak  batang  gaharu  ( Gyrinops  versteegii )  pada  konsentrasi  25%,  50%,  dan  100%  yaitu sebesar 7,85 mm, 10,6 mm, dan 13,45 mm
Referensi:
[1] Abdul, R.W., Dzun, H.I. 2019. Daya Hambat Bakteri Staphylococcus aureus Ekstrak Daun Gaharu (Aquilaria malea L.) sebagai Antibakteri . Mataram : Univesitas Muhammadiyah Mataram.
[2] Agung,  G.,  Nengah,  I.,  Kerta, dan  Hapsari. 2013. Daya  Hambat  Perasan  Daun  Sirsak  terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli . Denpasar : Universitas Udayana.
[3] Ajizah, A. 2004. Sensitivitas (Salmonella typhymurium) terhadap Ekstrak Daun Psidium guajava L. Bioscientoae Volume 1, Nomor 1 , Halaman 31-38.
[4] Candrasari A., M. Amin Romas, Masna H, Ovi R. A. 2012. Uji daya Antimikroba Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus ATCC 6538,  Escherichia  coli  ATCC  11229  dan  Candida  albican  ATCC  10231  secara  In  Vitro.  Biomedik, Volume 4 Nomor 1 . Surakarta : Universitas Muhammadiyah Surakarta.
[5] Depkes  RI,  2000.  P arameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat  Edisi  I.  Direktorat  Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan . Direktorat Pengawasan Obat Tradisional: Jakarta
[6] Hapsari,  Endah.  2015 .  Uji  Anti  Bakteri  Ekstrak  Herba  Meniran  (Phyllanthus  niruri)  terhadap Pertumbuhan Bakteri Bacillus cereus dan Escherichia coli. Skripsi, Pendidikan Biologi Universitas Sanata Dharma : Yogyakarta
[7] Hesti, D.S., Cahyo, S. 2014. Gaharu . Jakarta : Penebar Swadaya.
[8] Hijrul, F. 2017. Uji Aktivitas Antioksidan Daun dan Kulit Batang Avicennia marina dengan Metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrihidrazil). Malang : Universitas Brawijaya.
[9] Junairiah,  Sukarti,  M.  2013. Identifikasi  Golongan  Senyawa  Antimikroba  pada  Lumut  Hati (Dumortiera hirsuta Nees.) dan Perbanyakannya dengan Kultur Jaringan . Yogyakarta : Universitas Gadjah Mada.
[10] Kawiji M.P., Windi A., Agung A.N. 2010. Kajian Kadar Kurkuminoid, Total Fenol dan Aktivitas Antioksidan Oleoresin Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb) dengan Variasi Teknik Pengeringan dan Warna Kain Penutup. Surakarta : Universitas Sebelas Maret.
[11] Qorisa, Y. and Ningsih, I. 2016. Peran Ekstrak Daun Suren (Toona sureni (Blume) Merr.) sebagai Antibakteri terhadap Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Faskultas Kedokterran UI, pp. 1 – 19.
[12] Shendi S.., Riska P. 2017. Aktivitas Antimikroba dan Antioksidan Ekstrak Etanol Akar dan Ranting Gaharu (Aquilaria moluccensis Oken.) Garut : Fakultas MIPA Universitas Garut.
[13] Suerni E., Alwi, M., M. Guli M. 2013. Uji Daya Hambat Ekstrak Buah Nanas (Ananas comosus L. Merr), Salak (Salacca edulis Reinw.) dan Mangga (Mangifera odorta Griff.) Terhadap Daya Hambat Staphylococcus aureus. ISSN : 1978-6417. Jurnal Biocelebes, Vol 7 No.1, Juni 2013 hal 35-47.
[14] Sulaiman,  A.  Y.,  P.  Astuti,  dan  A.  D.  P.  Shita.  2017. Uji  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Kersen (Muntingia Calabura L .) Terhadap Koloni Streptococcus viridians . Indonesian Journal for Health Sciences. 1(2), pp. 1 – 7.
[15] Wibowo  R.M.,  Haryadi,  Wahyudi,  Agnesia E.T.  2008. Studi Patogenisitas  Eschericia  coli  Isolat Unggas pada Ayam Pedaging Umur 15 Hari . Jurnal Veteriner, Vol.9 No.2, pp. 87-93.