## Pharmaceutical and Biomedical Sciences Journal
Volume 3(2), 2021, 75 - 82

## Isolasi  dan  Karakterisasi  Bakteri  Endofit  dari  Daun  Sirsak  Annona
Muricata  L.  dan  Aktivitas  Antibakterinya  terhadap  Beberapa  Bakteri Patogen
Isra Janatiningrum 1,2* , Akhmad Endang Zainal Hasan 2 , Eny Ida Riyanti 3
1 Pharmacy Study Program, Faculty of Health Sciences, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta, South Tangerang 15419, Indonesia
2 Department of Biochemistry, Faculty Of Mathematics and Natural Sciences, Bogor Agricultural University. Jl Raya Dramaga Bogor, West Java 16680, Indonesia
3 Center for Biotechnology and Genetic Resources of Agriculture, Agricultural Research Agency, Bogor, West Java 16111, Indonesia

## *correspondingauthor: isra.janatiningrum@uinjkt.ac.id

## Received: 19 January 2022; Accepted: 17 February 2022
Abstract: Soursop ( Annona muricata L.) is a plant with many health benefits. Soursop leaves are widely used as traditional medicine by Indonesian citizens for wound infection healing. The antibacterial activity of soursop leaves cannot be separated from the presence of endophytic microbes that live inside. Endophytic bacteria live in plant tissues and have benefits for their host  plants.  Endophytic  microbes  are  able  to  produce  the  same  secondary  metabolites  as  their  host  such  as  producing antibacterial compounds. Thirty-one bacterial endophytes were isolated from soursop leaves from 3 different regions: Garut, Cianjur,  and  Sukabumi.  Morphologically,  endophytic  bacterial  isolates  from  the  three  regions  had  different  diversity. Bacterial  isolates  were  tested  for  their  activity  against  4  test  pathogenic  bacteria,  such  as Pseudomonas  aeroginosa , Escherichia  coli,  Staphylococcus  mutans ,  and Streptococcus  aureus .  Antibacterial  test  using  disc  diffusion  method  with chloramphenicol 500 m/mL as a positive control. Based on the antibacterial activity test, isolate G42 was able to inhibit all types of test bacteria. G42 isolates form a zone of inhibition up to 17 mm in P. aeroginosa . Based on 16S rRNA, G42 isolates had similarities with Pantoea wallisii up to 93.24%. This study shows that endophytic bacteria isolated from soursop leaves have the potential to be developed into antibacterial agents.
Keywords: Annona muricata L , antibacterial, endophytic bacteria, noni leaf, 16S rRNA
Abstrak: Sirsak ( Annona muricata L .) merupakan tanaman buah yang banyak manfaat untuk kesehatan. Daun sirsak banyak digunakan  sebagai  obat  tradisional  oleh  masyarakat  lokal  seperti  untuk  mempercepat  penyembuhan  luka  infeksi.  Aktivitas antibakteri  pada  daun  sirsak  tidak  terlepas  dari  keberadaan  mikrob  endofit  yang  hidup  didalamnya. Bakteri  endofit  hidup pada  jaringan  tanaman  dan  menguntungkan  untuk  kehidupan  tanaman  inangnya,  Mikrob  endofit  mampu  menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder  yang  sama  dengan  inangnya  bahkan  lebih  baik  seperti  menghasilkan  senyawa  antibakteri. Sebanyak 31  isolat  bakteri  endofit  telah  berhasil  diisolasi  dari 3  daerah  yang  berbeda  yaitu  Garut, Cianjur, dan  Sukabumi. Secara  morfologi  isolat  bakteri  endofit  dari  ketiga  daerah  tersebut  memiliki  keragaman  yang  berbeda.  Isolat  bakteri  yang telah  berhasil  diisolasi  diuji  aktivitasnya  terhadap  4  bakteri  patogen  uji  yaitu, Pseudomonas  aeroginosa,  Escherichia  coli, Staphylococcus mutans , dan Streptococcus aureus . Uji antibakteri menggunakan metode difusi cakran dengan kontrol positif adalah kloramfenikol 500 µm/mL. Berdasarkan uji aktivitas antibakteri isolat G42 mampu menghambat seluruh jenis bakteri uji.  G42  membentuk  zona  bening  hingga  17  mm  pada P.  aeroginosa .  Berdasarkan  identifikasi  16S  rRNA,  isolat  G42 memiliki kemiripan  dengan Pantoea wallisii sebesar 93,24%. Studi ini menunjukkan bahwa bakteri endofit yang diisolasi dari daun sirsak memiliki potensi untuk dikembangkan menjadi agen antibakteri.
Kata Kunci: Annona muricata L , antibakteri , bakteri endofit, daun sirsak, 16S rRNA
DOI : 10.15408/pbsj.v3i2.24321

## 1. PENDAHULUAN
Bakteri  endofit  hidup  pada  jaringan  tanaman  selama siklus  hidupnya  (Mano  dan Morisaki,  2008).  Bakteri endofit  bersimbiosis  mutualisme  dengan  jaringan tanman  dengan  memberikan  beberapa  keuntungan
untuk  tanaman  seperti    memacu  pertumbuhan  dan biokontrol  dari  patogen  tanaman  (Tianxing et  al., 2013).  Beberapa  jenis  bakteri  endofit  diketahui mampu  menghasilkan  senyawa  aktif  yang  sama  atau bahkan  lebih  baik  daripada  inangnya  seperti menghasilkan  antifungi  (Qiao et  al., 2006;  Zhang et
al., 2008),  antioksidan,  aktivitas  sitotoksik,  dan antibiotik  (Xiao et  al., 2014).  Kemampuan  bakteri endofit  tersebut  didasari  oleh  manfaat  endofit  untuk tanaman secara alami adalah meningkatkan kesehatan tanaman  dengan  menghasilkan  antibiotik,  enzim hidrolitik, dan pembatasan nutrisi (Afzal et al., 2019). Bakteri  endofit  dalam  beberapa  tahun  ini  telah menjadi fokus penelitian untuk menemukan  senyawa aktif  baru  (Latupeirisa,  2014).  Pemanfaatan  bakteri endofit  sangatlah  tepat  mengingat  siklus  hidup mikroba  yang  lebih  singkat  dibandingkan  siklus hidup  tanaman  inangnya.  Hal  tersebut  dapat menghemat  waktu  produksi  senyawa  bioaktif  pada skala industri.
Sirsak  ( Annona  muricata L.)  atau  nangka  belanda adalah  tanaman  asli  dari  Kepulauan  Karibia,    daerah bagian di Amerika Tengah dan Selatan. Secara umum sirsak  dimanfaatkan  bagian  buahnya.  Namun,  di Indonesia  penggunaan  air  rebusan  daun  sirsak sebagai obat herbal telah  banyak diketahui. Senyawa bioaktif  yang  terkandung  didalam  daun  sirsak memiliki  beragam  manfaat  untuk  pengobatan.  (Adri dan Wikanastri, 2013). Beberapa penelitian sebelumnya melaporkan bahwa daun sirsak memiliki manfaat  untuk  mengobati  penyakit  kulit,  flu,  batuk, rematik, kanker (Orwa et al., 2009), hipertensi (Lans,
2006),  infeksi  bakteri  (Gajalakshmi et  al., 2012).
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara  tropis penghasil buah sirsak. Menurut Badan Pusat Statistik (BPS) Jawa Barat adalah salah satu sentra buah sirsak di  Indosenisa  dengan  angka  produksi  sebesar  11 188 juta  ton  pada  tahun  2020  (BPS,  2020).  Penyebaran perkebunan buah sirsak tersebar diseluruh Jawa Barat dengan  dengan  penghasil  terbesar  Cianjur  (1.811 ton),  Sukabumi  (706,1  ton),  dan  Garut  (1.784,5  ton) (BPS Jabar, 2018).
Penyakit  infeksi  saat  ini  adalah  salah  satu  masalah besar  untuk  bidang  kesehatan.  Infeksi  dapat
disebabkan  oleh  berbagai  macam  jenis  mikroba seperti,  bakteri,  jamur,  protozoa,  dan  virus. Pengobatan  penyakit  infeksi  yang  disebabkan  oleh bakteri  saat  ini  bergantung  pada  antibiotik.  Namun, bakteri  terus  bermutasi  yang  menyebabkan  resistensi antibiotik  kian  bertambah  sehingga  dibutuhkan penelitian  untuk  menemukan  senyawa  antibiotik baru.  Bakteri , Pseudomonas aeroginosa, Escherichia coli,  Staphylococcus  mutans ,  dan Streptococcus aureus merupakan  bakteri  penyebab  infeksi  yang sangat  sering  dijumpai  pada  kehidupan  sehari-hari. Resistensi bakteri-bakteri tersebut terhadap antibiotik terus meningkat dan sulit dikendalikan (Pachori et al.,
2019; Ng et al., 2018; Guo et al., 2020).
Senyawa  bioaktif  yang  terkandung  pada  daun  sirsak tidak terlepas dari interaksinya dengan bakteri endofit yang  hidup  pada  jaringannya.  Belum  pernah  ada laporan  sebelumnya  tentang  aktivitas  antibakteri dari bakteri  endofit  daun  sirsak  menggunakan  bakteri E. coli,  S.  aureus,  P.  aeruginosa,  S.  mutans sebagai bakteri  ujinya. Berdasarkan  literatur  maka  tujuan penelitian ini adalah mendapatkan bakteri endofit dari daun  sirsak  yang  memiliki  kemampuan  menghambat bakteri patogen uji yang selanjutnya dapat dikembangkan menjadi agen antibakteri.

## 2. METODE

## 2.1 Isolasi Bakteri Endofit
Daun  sirsak  diperoleh  dari  perkebunan  Sirsak  di Garut,  Cianjur,  dan  Sukabumi.  Sampel  kemudian dicuci  dengan  air  mengalir  selanjutnya  dipotong dengan  ukuran  3  x  0,5  cm.  Sampel  daun  sirsak tersebut kemudian disterilisasi bertahap menggunakan etanol 96%, NaOCl, dan akuades steril. Setelah  sterilisasi  daun  sirsak  dikering  anginkan. irisan daun sirsak tersebut kemudian diletakkan diatas media Nutrient  Agar (NA)  secara  horizontal  lalu diinkubasi  selama  48  jam  pada  suhu  ruang  (±28℃)
(Desriani et al., 2013).

## 2.2 Purifikasi Bakteri Endofit
Koloni  bakteri  yang  tumbuh  disekitar  sampel  daun sirsak  dimurnikan  dengan  cara  digores  4  kuadran pada  media  NA  lalu  diinkubasi  selama  24  jam  pada suhu ruang (±28℃). Selanjutnya koloni tunggal yang tumbuh  pada  kuadran  terakhir  diambil  untuk disimpan  pada  agar  miring  dan  disimpan  pada  suhu (±4℃).

## 2.3 Uji Aktivitas Antibakteri
a. Persiapan bakteri uji
Bakteri P.  aeruginosa , E.  coli,  S.  mutans, dan S. aureus yang  telah  diremajakan  ditumbuhkan  pada media Nutrient  Broth (NB).  Kultur  bakteri  tersebut kemudian  diinkubasi  24  jam  pada    suhu  37℃. Selanjutnya,  sebanyak  40  µL  kultur  bakteri dicampurkan  dengan  20  mL  media  NA  bersuhu ±47℃  dan  dihomogenkan  dengan  cara  digoyang. Media NA yang telah diinokulasi bakteri uji tersebut dituang  ke cawan petri dan dibiarkan hingga padat.

## b. Uji aktivitas antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  dua metode. Pertama, pengujian antibakteri menggunakan kultur    bakteri  endofit.  Selanjutnya  bakteri  endofit dengan  aktivitas  tertinggi  diuji  supernatannya terhadap patogen uji.  Kertas cakram steril diletakkan diatas  media  NA  yang  berisi  bakteri  uji  lalu  ditetesi 100 µL kultur dan supernatant bakteri endofit. Kultur kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu ruang ±28℃.  Kloramfenikol  500  µg/ml  dijadikan  kontrol positif  dan  kontrol  negatif  adalah  media  NB  tanpa kultur.  Aktivitas  antibakteri  ditentukan  dengan  zona bening  yang  terbentuk  disekitar  kertas  cakram (Simarmata et al., 2007).

## 2.4  Ekstraksi  DNA  Genom  Isolat  Bakteri  Endofit Terpilih
Bakteri  endofit  yang  memiliki  aktivitas  tertinggi dipilih  untuk  dilakukan  identifikasi  morfologi  dan molekuler.  Identifikasi  molekuler  dimulai  dengan ekstraksi  DNA  genom  bakteri.  Sel  bakteri  dipecah menggunakan  0.65  mL  buffer  lisis  (Tris  HCl,  NaCl, EDTA,  PVP,  SDS)  diinkubasi  pada  suhu  65℃ selama  30  menit.  Suspensi  sel  bakteri  kemudian ditambahkan 100 µL kalium asetat dan disentrifugasi (13000 rpm, 5 menit). Supernatan dimurnikan dengan etanol  95%  sebanyak  2x  volume  supernatan  dan disentrifugasi lagi (10000 rpm, 10 menit). Pelet  yang dihasilkan ditambah dengan 500 µL  etanol 70% lalu disentrifugasi  kembali  (13000  rpm,  10  menit).  Pelet hasil  sentrifugasi  selanjutnya  ditambah  20  µL ddH2O  dan 1 µL  RNAse  dan diinkubasi selama 60 menit pada suhu ruang (±28℃) (Zheng et al. , 1995).

## 2.5 Amplifikasi Gen 16S rRNA
Gen  16S  rRNA  dari  genom  bakteri  endofit diamplifikasi  menggunakan  1  µL  DNA,  12.5  µL enzim  taq  polymerase  (KAPA  Taq  PCR  Kit,  Sigma Aldrich), 0.5 µL MgCl 2, 1.25 µL UFP, 1.25 µL URP, dan 8.5 µL ddH 2 O. Primer forward 27F (5’AGAGTTTGATCMTGGCTCAG’3)  dan  primer reverse 1492R  (5’CGG  TTA  CCT  TGT  TAC  GAC TT’3).  Proses  amplifikasi  dilakukan  selama  129 menit  dengan  27  siklus.  Siklus  amplikasi  dimulai dengan  predenaturasi  (95 o C,  10  s),  denaturasi  (95 o C, 30  s), annealing (55 o C,  60  s),  elongasi  (72 o C,  60  s), pasca elongasi (72 o C, 10 s) (Marchesi et al., 1998).

## 2.6 Sekuensing dan Konstruksi Pohon Filogenetik
DNA  gen  16S  rRNA  hasil  amplifikasi  disekuensing urutan  basa  nitrogennya.  Hasil  sekuensing  diolah dengan Software  Seqtrace kemudian  dibandingkan sekuennya dengan sekuen yang ada pada bank genom menggunakan program BLASTN. Hasil perbandingan  sekuen  dengan  bank  genom  di
alignment dan  dikonstruksi  pohon  filogenetiknya menggunakan  software  MEGA  7  dengan boostrap 1000x  dan  pendekatan  metode Neighbour  Joining
(Janatiningrum et al., 2018).

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Bakteri  endofit  telah  berhasil  diisolasi  dari  daun sirsak  ( A.  muricata  L.) Hasil  isolasi  didapatkan  31 isolat bakteri dengan penyebaran 13 isolat dari Garut, 8  isolat  dari  Cianjur,  dan  10  isolat  dari  Sukabumi (Gambar  1).  Perbedaan  hasil  isolasi  disebabkan  oleh kondisi  lingkungan  di  sekitar  tumbuhnya  pohon sirsak yang berbeda. Endofit merupakan mikroorganisme  yang  awalnya  merupakan  bakteri rhizosfer     yang     kemudian    menginvasi   jaringan tanaman untuk melakukan simbiosis. Tanah yang ada disekitar tanaman mempengaruhi banyaknya mikroba endofit  pada  jaringan  tanaman  (Janatiningrum et  al.,
2018).  Morfologi  isolat  bakteri  endofit  secara keseluruhan memiliki karakter yang bervariasi. Isolat bakteri  endofit  yang  telah  berhasil  dikulturkan menunjukkan  karakteristik  morfologi  yang  berbeda pada warna, bentuk koloni, tepian dan elevasi koloni (Tabel 1).
Tabel 1. Morfologi isolat bakteri endofit daun sirsak
Ket:  C  (  Cianjur),  G  (Garut),  S  (Sukabumi),  Angka  pertama: nomor isolat, angka kedua: ulangan
Write contain here (Times new roman, 10, 1.5 lines,.
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  ditunjukkan dengan  munculnya  zona  bening  di  sekitar  kertas cakram  setelah  inkubasi.  Zona  bening  tersebut  dapat dikatakan  sebagai  zona  hambat  bakteri.  Kemampuan aktivitas  antibakteri  dihitung  berdasarkan  ukuran zona  bening  yang  terbentuk.  Seluruh    isolat  bakteri endofit telah diuji dengan bakteri S. aureus , E. coli , S. mutans , dan P. aeruginosa .
Tabel  2.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  beberapa  isolat bakteri endofit menggunakan kultur bakteri
kode isolat Diameter zona bening (mm) E. coli P. aeroginosa S. aureus S. mutan s C22 - 17 - 7 C23 - 10 - - C41 8 13 8 - C42 - 7 - - C43 8 - - - C51 - 9 7 13 G22 - - - 9 G33 9 13 - - G42 14 10 12 7 G45 08 8 6 - G51 - 8 6 - G52 - - - - G53 - 9 - 9 G54 - 7 - - S41 - 12 - - S42 - 9 8 14 S43 - 12 - - S54 - 13 7 11 Keterangan: Cianjur (C ), Garut (G), Sukabumi (S) Kode isolat Warna Koloni Tepian Elevasi C2.2 Kuning Berlendir Rata Rata C2.3 Putih susu Berlendir Rata Cembung C4.1 Kuning Berlendir Rata Cembung C4.2 Orange Berlendir Rata Cembung C5.2 Putih kekuningan Tidak berlendir Bergerigi Rata G1.2 Kuning Berlendir Rata Cembung G2.1 Putih susu Berlendir Rata Rata G2.2 Putih susu Berlendir Rata Rata G2.4 Kuning Berlendir Rata Cembung G4.2 Kuning Berlendir Rata Cembung G5.1 Orange Berlendir Rata Cembung G5.2 Kuning Berlendir Rata Cembung G5.4 Orange Berlendir Rata Cembung S1.4 Putih susu Tidak berlendir Bergelombang Cembung S4.2 Putih susu Tidak berlendir Bergelombang Cembung S5.1 Putih susu Berlendir Rata Rata S5.5 Putih susu Berlendir Rata Rata
Gambar  1.  Jumlah  isolat  bakteri  endofit  dari  tiga  daerah penghasil sirsak di Jawa Barat
Berdasarkan hasil uji antibakteri didapatkan 18 isolat yang  menunjukkan  aktivitas  antibakteri  (Tabel  2). Isolat  bakteri  endofit  paling  banyak  menghambat bakteri P. aeruginosa dengan adanya 15 isolat yang membentuk zona bening pada biakan bakteri patogen tersebut.  Kemudian  untuk  bakteri S.  mutans terdapat 8  isolat  yang  menghambat  diikuti  bakteri S.  aureus dihambat 7 isolasi dan terakhir bakteri E. coli 5 isolat.
Berdasarkan  hasil  pengujian  dapat  disimpulkan bahwa  isolat  lebih  menghambat  bakteri  gram  positif dibandingkan  gram  negatif.  Hal  ini  terkait  aktivitas senyawa antibakterinya dalam melisis sel bakteri.
Isolat  G42  menunjukkan  aktivitas  paling  tinggi diantara  isolat  bakteri  endofit  lainnya.  Isolat  G42 mampu  menghambat  seluruh  bakteri  patogen  uji (Gambar  2).  Isolat  S52  dan  S54    yang  menunjukkan aktivitas  penghambatan  terhadap S.  aureus , P. aeroginosa ,  dan S.  mutans .  Hasil  uji  antibakteri menunjukkan  bahwa  isolat  bakteri  endofit  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram  negatif  dan gram  positif  sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  isolat tersebut  menghasilkan  senyawa  antibakteri  golongan berspektrum  luas.  Menurut  Rosidah  dan  Afizia (2012),    golongan  senyawa  berspektrum  luas  adalah senyawa  yang  efektif  untuk  menghambat  hingga membunuh  seluruh  jenis  bakteri  baik  gram  negatif maupun  positif.  Senyawa  antibakteri  berspektrum luas  biasanya  digunakan  untuk  mengobati  penyakit infeksi  yang  belum  diketahui  bakteri  penyebabnya. Namun,  penggunaan  golongan  senyawa  antibakteri ini  dapat  menimbulkan  resistensi  bakteri  terhadap antibiotik.
Isolat  G42  sebagai  isolat  terpilih  diuji  supernatan kulturnya.  Hal  ini  dilakukan  unutk  mengetahui senyawa antibakteri yang dihasilkan terdapat didalam kultur  tanpa  sel  atau  tidak.  Hasil  pengujian menunjukkan  bahwa  supernatan  isolat  G42  juga mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji
(Gambar  3). Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas antibakteri  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa senyawa  antibakteri  yang  dihasilkan  oleh  isolat  G42 dikeluarkan secara ekstraseluler dan bertahan didalam kultur  walaupun  tanpa  adanya  sel  bakteri  yang tumbuh.  Hal  ini  menjadi  informasi  awal  senyawa antibakteri dapat diekstraksi agar mendapat konsentrasi  senyawa  yang  lebih  tinggi.  Namun, pengujian  dengan  kultur  bakteri  menghasilkan penghambatan  lebih  besar  dibandingkan  dengan menggunakan supernatannya. Hal ini disebabkan oleh belum  dilakukannya  optimasi  waktu  tumbuh  bakteri endofit dalam menghasilkan senyawa bioaktif.
Hasil penelitian ini sesuai dengan laporan sebelumnya  yang  menyatakan  bahwa  bakteri  endofit memiliki  aktivitas  senyawa  bioaktif  yang  sama dengan  inangnya.  Pada  penelitian  Ghadin et  al .,
(2008),  menemukan  bakteri  endofit  dengan  genus Streptomyces memiliki  aktivitas  antibakteri  dan antifungi. Bakteri endofit yang diisolasi dari tanaman Mentha  longifolia,  Malva  parviflora dan Pulicaria undulata memiliki  aktivitas  penghambatan  terhadap beberapa  bakteri  patogen  pada  susu  sapi  yang  telah resisten terhadap antibiotik (Ameen et al., 2019).
Gambar  2.  Aktivitas  antibakteri  isolat  G42  pada S.  aureus (1), E. coli (2) P. aeroginosa (3), S. mutans (4)
Gambar 3 Aktivitas antibakteri supernatan isolat G42 pada P. aeroginosa (1) S . mutans (2) S. aureus (3) E. coli (4)
Isolat  bakteri  endofit Piper  betle  L .  yang  memiliki kesamaan genus Pseudomonas sp. Mampu menghasilkan senyawa antibkateri 1-metil-2,4-
imidazolidindion  yang  menghambat  pertumbuhan Bacillus  cereus , E.  coli ,  dan S.  aureus (Purwanto, 2014). Bakteri endofit dari daun binahong ( Anredera cordifolia ) memiliki aktivitas penghambatan terhadap
E.  coli dan S.  aureus. Setelah  diidentifikasi  secara molekuler  bakteri  endofit  tersebut  mirip  dengan genus Pseudomonas,  Staphylococcus, dan Bacillus (Nursulistyarini, 2014).
Tabel  3.  Hasil  BLAST  sekuen  isolat  bakteri  endofit  daun sirsak  G42 y ang  dibandingkan  dengan  sekuen  pada genbank menggunakan gen 16S rRNA
No Spesies Similarity (%) Accession number 1 Pantoea wallisii 93.24 NR_118122.1 2 Pantotea dispersa 93.24 NR_116755.1 3 Pantotea eucrina 92.63 NR_116246.1 4 Flavobacterium acidificum 92.08 NR_104962.1 5 Cronobater sakazakii 92.01 NR_118449.1
Gambar  4  Pohon  filogenetik  isolat  bakteri  endofit daun  sirsak  G42  dengan  sekuen  16S  rRNA pembanding (analisis bootstrap 1000 kali)
Berdasarkan identifikasi gen 16S rRNA isolat bakteri endofit daun  sirsak  G42  memiliki  kemiripan  93,24% dengan Pantoea  wallisii . P.  wallisii adalah  bakteri berbentuk batang, Gram-negatif, tidak berkapsul, dan tidak  membentuk  spora.  Genus Pantoea adalah
bakteri  yang  berasosiasi  dengan  tanaman  (Alyssa et al., 2015).  Selain  berasosiasi  dengan  tanaman Pantoea juga  dikenal  membentuk  asosiasi  dengan berbagai inang seperti serangga, dan manusia (Gavini et al. 1989; Walterson et al. 2015).
Pantoea telah  banyak  diisolasi  dari  berbagai  jenis lingkungan  dan  memiliki  banyak  spesies  yang bermanfaat  (Volksch et  al. 2009;  Nadarasah  dan Stavrinides  2014).  Genus  ini  telah  dimanfaatkan untuk  keperluan  industri  termasuk  bioremediasi, degradasi  herbisida  fiksasi  nitrogen,  agen  biokontrol dan   kemampuan lain yang  mendorong pertumbuhan tanaman  (Pileggi et  al. 2012).  Selain  itu, Pantoea sedang  banyak  dieksplorasi  kemampuannya  dalam menghasilkan  antibiotik.  Smiths et  al. (2019) melaporkan bahwa genus ini umumnya menghasilkan satu  atau  lebih  senyawa  antimikroba  dan  beberapa spesies Pantotea menghasilkan  antibiotik  histidin- reversibel.

## 4. KESIMPULAN
Daun sirsak ( A. muricata L .) yang diambil dari daerah penghasil  sirsak  di  Indonesia  (Garut,  Cianjur, Sukabumi)  memiliki  bakteri  endofit  yang  telah berhasil dikulturkan. Sebanyak 31  isolat yang terdiri 13  isolat  dari  Garut,  8  isolat  dari  Cianjur,  dan  10 isolat  dari  Sukabumi.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri menunjukkan  bahwa  17  isolat  bakteri  endofit  dapat menghambat  bakteri  patogen  uji  dengan  aktivitas yang  beragam.    Isolat  G42  memiliki  aktivitas  paling tinggi  diantara  isolat  lainnya.  Hal  ini  ditunjukkan dengan  kemampuannya  yang  dapat  menghambat semua bakteri uji  ( S. aureus , E. coli , dan S. mutans,
P.  aeroginosa .  Berdasarkan  identifikasi  morfologi G42  memiliki  warna  koloni  kuning  dan  berlendir. Identifikasi lebih lanjut menggunakan gen 16S rRNA bakteri  endofit  ini  memiliki  kesamaan  dengan P. wallisi hingga 93,24%.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Adri,  D.  dan  Wikanastri,  H.  (2013)  ‘Aktivitas antioksidan  dan  sifat  organoleptik  teh  daun  sirsak ( Annona  muricata Lin.)  berdasarkan  variasi  lama pengeringan’, J Pangan Gizi.(7):12-17.
Afzal,  I.  et  al.  (2019)  “Plant  beneficial  endophytic bacteria:  Mechanisms,  diversity,  host  range  and genetic  determinants’,  Microbiological  Research, 221:36-49.
Alyssa,  M.  et  al.  (2015)  ‘Pantoea:  insights  into  a highly  versatile  and  diverse  genus  within  the Enterobacteriaceae’,  FEMS  Microbiology  Reviews, 27(39), pp.  968-984.
Ameen,  F.  et  al.  (2019).  ‘Prevalence  of  antibiotic resistant  mastitis  pathogens  in  dairy  cows  in  Egypt and potential biological control agents produced from plant  endophytic  actinobacteria’,  Saudi  Journal  of Biological Sciences, 26(7): 1492-1498.
Badan  Pusat  Statistik  (2020)  Produksi  Tanaman Buah-buahan
2020. Available
at: https://www.bps.go.id/indicator/55/62/1/produksi- tanaman-buah-buahan.html  (Accessed:  pada  17 February 2022)
Badan  Pusat  Statistik  Jawa  Barat  (2018)  Produksi Buah-Buahan  (Salak,  Sawo,  Sirsak,  Belimbing  dan Nangka)  Menurut  Kabupaten/Kota  di  Provinsi  Jawa Barat,
2016.
Available at: https://jabar.bps.go.id/statictable/2018/03/14/326/- produksi-buah-buahan-salak-sawo-sirsak-belimbing- dan-nangka-menurut-kabupaten-kota-di-provinsi- jawa-barat-2016.html (Accessed : 17 February 2022).
Desriani,  et  al.  (2013)  ‘Potential  endophytic  bacteria for increasing paddy var rojolele productivity’, Int. J. on Adv. Sci., Eng. and Information Tech, 3 (1) : 76- 78.
Gajalakshmi,  S.  et  al.  (2012)  ‘Phytochemical  and pharmacological  properties  of Annona  muricata :  A Review’, Inter J. PPS, 4(2): 5.
Gavini,  F.  et  al.  (1989)  ‘Transfer  of  Enterobacter agglomerans  (Beijerinck 1888)  Ewing  and  Fife  1972 to Pantoea gen-nov  as  Pantoea  agglomerans  comb nov and description of Pantoea dispersa sp-nov’, Int J of Syst Bacteriol, 39:337–345.
Ghadin, N. et al. (2008) ‘Isolation  and characterization  of  a  novel  endophytic Streptomyces SUK06  with  antimicrobial  activity  from  Malaysian plant’, Asian J. Plant Sci, 7:2:189-194.
Guo,  Y.  et  al.  (2020)  ‘Prevalence and  therapies  of antibiotic-resistance  in  Staphylococcus aureus’, Front. Cell. Infect. Microbiol, 10:107-118.
Janatiningrum, I. et al. (2018). ‘Comparative study on the diversity of endophytic actinobacteria communities from Ficus deltoidea using metagenomic  and  culture  dependent  approaches  ’, Biodiveristas, 19 (4): 1514-1520.
Lans,  C.A.  (2006)  ‘Ethnomedicines  used  in  Trinidad and  Tobago  for  urinary  problems  and  diabetes mellitus’, J. Ethnobiol  Ethnomed, 2:45-55.
Latupeirisa,  Y.  (2014)  Seleksi  Dan  Identifikasi Bakteri  Bermanfaat  Asal  Tanaman  Pisang  Tongkat Langit (Musa troglodytarum L.) Untuk
Mengendalikan  Penyakit  Darah  Pisang,  Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Mano,  H.  dan  Morisaki,  H.  (2008)  ‘Minireview: Endophytic  bacteria  in  the  rice  plant’,  Microbes  and Environments, 23:109-117.
Marchesi, J.R. et al. (1998) ‘Design and evaluation of useful  bacterium  specific  PCR  primer  that  amplify genes  coding  for  bacterial  16SrRNA’,  Appl  Environ Microbiol, 64:795-799.
Nadarasah, G. dan Stavrinides, J. (2014)
‘Quantitative  evaluation  of  the  hostcolonizing capabilities  of  the  enteric  bacterium Pantoea using plant and insect hosts. Microbiology’, 160:602-615.
Ng, C. et al. (2018) ‘Microbial water quality and the detection of multidrug resistant E. coli and antibiotic resistance  genes  in  aquaculture  sites  of  Singapore’, Marine Pollution Bulletin, 135: 475-480.
Nursulistyarini,  F.  (2014)  ‘Isolasi  dan  Identifikasi Bakteri  Endofit  Penghasil  Antibakteri  dari  Daun Tanaman  Binahong  ( Anredera  ccordifolia (Ten.) steenis)’,  Yogyakarta:  Universitas  Negeri  Sunan Kalijaga
Pachori,  P.  et  al.  (2019)    ‘Emergence  of  antibiotic resistance  Pseudomonas  aeruginosa  in  intensive  care unit; a critical review’, Genes and Diseases, 6(2):109- 119.
Pileggi,  M.  et  al.  (2012)  ‘Isolation  of  mesotrione degrading  bacteria  from  aquatic  environments  in Brazil’, Chemosphere, 86:1127–32.
Purwanto,  U.M.S.  (2014)  ‘Isolasi  Dan  Identifikasi Senyawa  Antibakteri  dari  Bakteri  Endofit  Tanaman Sirih Hijau ( Piper betle L.)’, Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Qiao,  H.  et  al.  (2006)  ‘Endophytic  bacteria  isolated from  wheat  and  their  antifungal  activities  to  soil- borne disease pathogens’, Ying Yong Sheng Tai Xue Bao, 17(4):690-694.
Rosidah,  dan  Afizia,  W.M.  (2012)  ‘Potensi  ekstrak daun jambu biji sebagai antibakterialuntuk menanggulangi serangan bakteri Aeromonas hydrophila pada ikan gurame ( Osprhonemus gouramy lacepede )’, J Akuatika, 3(1): 19-27.
Simarmata, R. et al. (2007) ‘Isolasi mikroba endofitik dati  tanaman  obat  sambung  nyawa  ( Gymura procumbens ) dan analisis potensinya sebagai antimikroba’, Berk Penel Hayati, 13: 85-90.
Smits, T.H.M. (2019) ‘Pantocin A, a peptide-derived antibiotic  involved  in  biological  control  by  plant- associated
Pantoea
species’, Archives of Microbiology’, 201: 713–722.
Tianxing,  L.  et  al.  (2013)  ‘Potential  of  endophytic bacteria isolated from Sophora alopecuroides nodule in  biological  control  against  Verticillium  wilt disease’, AJCS, 7(1):139-146.
Volksch,  B.  et  al.  (1993)  ‘Occurrence  of antimicrobial activities of bacteria from soybean leaf spots’, J Basic Microbiol, 33:349-355.
Walterson,  A.M.  et  al.  (2014)  ‘Identification  of  a Pantoea biosynthetic cluster that directs the synthesis of  an  antimicrobial  natural  product’,  PLoS  One,  39: 968–984
Xiao,  J.1.  et  al.  (2014)  ‘Secondary  metabolites  from the  endophytic Botryosphaeria  dothidea of Melia azedarach and their antifungal, antibacterial, antioxidant,  and  cytotoxic  activities’,  J  Agric  Food Chem, 62(16):3584-3590.
Zhang,  S.M.  et  al.  (2008)  ‘Isolation  and characterization  of  antifungal  endophytic  bacteria from soybean’, J Microbiol, 35(10):1593-1599.
Zheng,  K.  et  al.  (1995)  PCR-based  marker  assisted selection  in  rice  breeding.  IRRI  discussion  paper series  No.  12.  International  Rice  Research  Institute, P. O. Box 933, Manila, Philippines.