Evaluasi In Vitro Penggunaan Daun Teh dalam Ransum Domba Lokal ( In vitro evaluation of Adding Tea Leaves into A Diet of Local Sheep )
Diky Ramdani 1 , Husmy Yurmiaty 1 , Endang Y. Setyowati 1
Laboratorium  Produksi  Ternak  Potong,  Departemen  Produksi  Ternak,  Fakultas  Peternakan, Universitas Padjadjaran, Jl. Raya Bandung Sumedang KM21, Jatinangor Sumedang 45363 email: diky.ramdani@unpad.ac.id

## Abstrak
Penelitian  dilaksanakan  untuk  mengevaluasi  penggunaan  daun  teh  dalam  ransum  domba lokal secara in vitro . Penelitian menggunakan rancangan  acak lengkap membandingkan 7 ransum perlakuan:  T0  =  ransum  kontrol  tanpa  daun  teh,  T1  =  ransum  mengandung  1%  teh  hijau,  T2  = ransum  mengandung  2%  teh  hijau,  T3  =  ransum  mengandung  4%  teh  hijau,  T4  =  ransum mengandung  1%  teh  hitam,  T5  =  ransum  mengandung  2%  teh  hitam,  dan  T6  =  ransum mengandung  4%  teh  hitam.  Setiap  perlakuan  memiliki  4  ulangan  (n=4).  Peubah  yang  diamati adalah  kecernaan  bahan  kering  (BKcBK),  kecernaan  bahan  organik  (KcBO),  produksi  ammonia (N-NH 3 ),  dan  total volatile  fatty  acids (tVFA).  KcBK,  N-NH 3 , dan  tVFA  tertinggi  diperoleh  dari ransum  T2,  T4,  dan  T6  secara  berurutan.  Pemberian  T2  dan  T3  meningkatkan  KcBK  dan  N- NH 3. Tetapi pemberian T2  tidak berpengaruh  nyata  terhadap tVFA,  sedangan pemberian T3 dapat menurunkan  tVFA.Pemberian  T5  meningkatkan  N-NH 3 dan  tVFA  tetapi  menurunkan  KcBK. Sedangkan pemberian T6 tidak berpengaruh nyata terhadap KcBK tetapi menurunkan N-NH 3 dan meningkatkan tVFA.
Kata kunci: in vitro , daun teh, ransum, dan domba lokal

## Abstract
The in vitro research was done to evaluate adding tea leaves into a diet of local sheep. The research  used  completely  randomized  design  to  compare  7  diet  treatments:  T0  =  control  diet without  tea  eaves,  T1  = diet  containing 1%  green  tea,  T2  =  diet  containing  2%  green  tea,  T3  = diet containing 4% green tea, T4 = diet containing 1% black tea, T5 = diet containing 2% black tea, and T6 = diet containing 4% black tea. Every diet treatment had 4 replicates (n=4). Measured parameters  were  dry  matter  digestibility  (DMD),  organic  matter  digestibility  (OMD),  ammonia (N-NH 3 ), and total volatile fatty acids (tVFA). The highest DMD, N-NH 3 , and tVFA were obtained by T2, T4, and T6 respectively. The uses of T2 dan T3 increased DMD and N-NH 3 . However, T2 had  no  effect  on  tVFA  while  T3  decreased  tVFA.  T5  increased  N-NH 3 and  tVFA  but  decreased DMD. Meanwhile, T6 had no effect on DMD but decresed N-NH 3 and increased tVFA. Keywords: in vitro, tea leaves, diets, and local sheep.

## Pendahuluan
Tanaman  fitofarmaka  lokal  seperti daun  teh  dapat  dijadikan  pakan  aditif  untuk meningkatkan  produktivitas  dan  vitalitas domba lokal. Ramdani dkk, (2013)
menyimpulkan bahwa teh hijau dan teh hitam mengandung  protein,  serat,  mineral,  dan  zat bioaktif  yang  cukup  tinggi,  terutama  tannin dan saponin.Tannin dapat menurunkan tingkat solubilitas  dan  degradabilitas  protein  pakan oleh  mikroba  rumen  karena  kemampuannya mengikat  protein.  Konsekuensinya,  produksi N-NH 3 dalam  rumen  akan  menurun  tetapi ketersediaan  suplai by-pass protein  akan meningkat  (Makkar,  2003,  McSweeney  dkk., 2001, Min dkk., 2003,Mueller-Harvey, 2006).
N-NH 3 dapat  bermanfaat  sebagai  sumber nitrogen  (N)  untuk  mikroba  rumen  tetapi kelebihan produksi N-NH 3 melebihi  kapasitas kebutuhan  mikroba  akhirnya  akan  dibuang bersama urine sebagai  N  terbuang  (Attwood dkk., 1998, Szumacher-Strabel and Cieślak,  (2010).  Suplementasi  tannin dalam pakan ternak ruminansia dapat mengurangi  produksi  gas  metana  ternak melalui penurunan aktivitas bakteri metanogen di dalam rumen (Boadi dkk., 2004, Makkar, 2003, Mueller-Harvey, 2006). Di sisi lain, suplementasi saponin dalam pakan dapat menurunkan  produksi  gas  metana  dan  N-NH 3 baik  secara in  vitro (Hu  dkk.,  2005)  maupun in vivo pada domba (Mao dkk., 2010) melalui
penurunan  protozoa  dan  aktifitas  metanogen yang  bersimbiosis  dengan  protozoa  (Guo dkk., 2008, Wina dkk., 2005). Karena banyak energi  yang  terbuang  pada  saat  pembentukan gas metana dan N-NH 3 yang merupakan hasil akhir dari fermentasi rumen, maka penurunan produksi  gas  metana  dan  N-NH 3 diduga berdampak positif untuk peningkatan efisiensi penggunaan  energi  pakan  (Hu  dkk.,  2005). Daun  teh  berpotensi  sebagai  pakan  aditif pengganti growth-promotingantibiotics yang sudah  dilarang  penggunaannya  di  Uni  Eropa sejak  2003  (1831/2003;  EC,2003).  Tujuan penelitian  adalah  mengevaluasi  penggunaan teh  hijau  dan  teh  hitam  dalam  ransum  domba lokal  secara in  vitro dengan  parameter pengukuran:  KcBK  dan  KcBO,  N-NH 3 ,  dan tVFA.

## Materi dan Metode Penelitian Sampel Daun Teh
Teh  hijau  dan  teh  hitam  yang digunakan  dalam  penelitian  dibeli  dari  Pasar Tradisional  Guntur  Kabupaten  Garut.  Kedua teh  tersebut diproduksi oleh industri  rumahan berbahan  bakudaun  tanaman  teh  ( Cammelia Sinensis var.  Asamica)  dari  perkebunan  teh Cikajang Kabupaten Garut.

## Ransum Percobaan
Rancangan  acak  lengkap  digunakan pada  penelitian  ini  guna  membandingkan  7 ransum percobaan
masing-masing mengandung iso-protein dan iso-energi ±12% dan TDN ±65% sebagai berikut:
T0  =  70%  Rumput  +  30%  Konsentrat
(ransum kontrol)
T1  =  70%  Rumput  +  29%  Konsentrat  +  1% Teh Hijau
T2  =  70%  Rumput  +  28%  Konsentrat  +  2% Teh Hijau T3 = 70% Rumput + 26% Konsentrat + 4% Teh Hijau T4 = 70% Rumput + 29% Konsentrat + 1% Teh Hitam T5 = 70% Rumput + 28% Konsentrat + 2% Teh Hitam T6  =  70%  Rumput  +  26%  Konsentrat  +  4%
Teh Hitam Setiap  perlakuan  di  masing  –  masing percobaan  mempunyai  4  ulangan  (n  =  4). Peubah  yang  diukur  adalah  KcBK,  KcBO, produksi N-NH 3 dan tVFA.

## Analisis Kimia Sampel
Seluruh sampel penelitian yang terdiri dari  rumput,  konsentrat,  teh  hijau,  dan  teh hitam  dikeringkan  dengan  oven,  digiling,  dan disaring  pada  ukuran  20  mesh.  Selanjutnya, analisis bahan kering (%BK), abu (%), protein kasar (%PK), lemak kasar (%LK), serat kasar (%SK), bahan ekstrak tanpa nitrogen (BETN), total  digestible  nutrients (%TDN),  energi bruto  (Kkal/kg),  Ca,  dan  P  dilakukan  di Laboratorium  Nutrisi  Ternak  Ruminansia  dan Kimia Pakan, Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran.
Uji in vitro
Percobaan in  vitro dilakukan  di Laboratorium yang sama dengan menggunakan  metode  Tilley  dan  Terry (1963).  Sebanyak  1  g  sampel  perlakuan dimasukkan  ke  dalam  tabung  fermentor, kemudian  ditambahkan  larutan  saliva  buatan McDougall  (1948)  sebanyak  12  mL  pada suhu  39 o C,  pH  6,8-6,9,  dan  cairan  rumen domba  lokal  segar  sebanyak  8  mL  sebagai inokulan. Selama proses fermentasi, ke dalam tabung  fermentor  dialirkan  gas  CO 2 untuk memberikan  suasana anaerob .  Kemudian fermentor  dibagi  dua,  sebagian  diinkubasi selama  12  jam  untuk  analisis  N-NH 3 dan tVFA    dalam shakerbath pada    suhu sedangkan  sisanya  diikubasikan  selama  24 jam.  Setelah  24  jam  cairan  fermentasi disentrifuse  dengan  kecepatan  3000  rpm selama  15  menit.  Supernatan  dipisahkan  dan ke  dalam  endapan  di  dalam  fermentor ditambahkan  20  mL  larutan  pepsin  dalam suasana  asam  dengan  aktivitas  pepsin 1:10.000.  Fermentor  diinkubasikan  kembali ke dalam shakerbath pada suhu 39 o C dengan suasana aerob selama 24 jam. Setelah fermentasi aerob KcBK  dan  KcBO  dianalisa dengan  menyaring  endapan  dengan  kertas saring  Whatman  No.  41,  kemudian  dianalisis kadar  bahan  kering  dan  organiknya.  Sebagai blanko  digunakan  cairan  rumen  domba  lokal tanpa perlakuan.
KCBK (%) = {[BK awal-(BK residu-BK blanko)]/BK awal} x 100% KCBO (%) = {[BO awal-(BO residu-BO blanko)]/BO awal} x 100%
Pengukuran  total  tVFA  dilakukan dengan  metode  destilasi  uap.  Sebanyak  5  ml
supernatan  dimasukkan  ke  dalam  tabung destilasi  uap  yang  dipanaskan  dengan  uap air.Tabung  segera  ditutup  rapat  setelah ditambahkan 1 ml H 2 SO 4 15%. Uap air panas akan membawa asam lemak terbang melewati tabung pendingin, sehingga
akan terkondensasi dan ditampung dengan Erlenmeyer  berisi  5  ml  NaOH  0,5  N  sampai mencapai volume sekitar 3000 ml. Selanjutnya ditambahkan indikator phenolptalein 2 tetes dan dititrasi dengan HCl
0,5  N.  Titrasi  berakhir  pada  saat  titik  awal perubahan  warna  dari  merah  menjadi  bening. Terakhir,  5  ml  NaOH  0,5  N  dititrasi  dan digunakan  sebagai  blanko.  Kadar  total  asam lemak terbang dihitung dengan rumus : Total Asam Lemak Terbang/VFA = (b-s) x N HCl x 1000/s (b = vol. titran blanko, N = normalitas larutan HCl, s = vol. titran sampel)
N-NH 3 diukur  dengan  menggunakan metode  Conway.  Setelah  12  jam  inkubasi invitro , sebanyak 1 mL supernatan diletakkan di  sebelah  kiri  sket  cawan Conway dan  1 mLNa 2 CO 3 jenuh  ditempatkan  dekat  sebelah kanan.  Pada  cawan  kecil  di  bagian  tengah diisi  dengan  asam  borat  berindikator  merah metil  dan  brom  kresol  hijau  sebanyak  1 mL.Kemudian  cawan Conway ditutup  rapat dengan tutup bervaselin lalu digoyang-goyang sehingga supernatan bercampur dengan larutan  Na 2 CO 3 jenuh.  Cawan  dibiarkan selama  24  jam  pada  suhu  kamar.  Amonia yang  terikat  dengan  asam  borat  dititrasi dengan H 2 SO 4 0,005 N sampai warna berubah menjadi  kemerah-merahan.  Kadar  N-NH 3
dihitung dengan rumus sebagai berikut:
N-NH 3 = (mL titrasi x N H 2 SO 4 x 1000) mM

## Analisis Statistika
Data komposisi nutrisi masing- masing sampel penelitian merupakan rata-rata hasil  pengukuran  secara  duplikat.  Sedangkan, One-way  ANOVA  pada  software  MINITAB 16  digunakan  untuk  membandingkan  ke-7 ransum  penelitian  terhadap  KcBK,  KcBO, N- NH 3 ,  dan  tVFA  yang  dihasilkan  dari  uji in vitro . Anderson-Darling normality test dilakukan  untuk  melihat  normalitas  sebaran data pada P > 0,05.

## Hasil dan Pembahasan
Komposisi  nutrisi  teh  hijau,  teh hitam,  konsentrat,  dan  Rumput  Gajah  yang digunakan  dalam  penelitian  dapat  dilihat pada  Tabel  1.Teh  hijau  dan  teh  hitam mempunyai  PK  yang  lebih  tinggi  dari rumput dan konsentrat tetapi mempunyai LK yang  lebih  rendah.  Kedua  daun  teh mempunyai  SK  yang  lebih  rendah  dari Rumput Gajah tetapi mempunyai TDN yang lebih  tinggi  dari  Rumput  Gajah  dan mempunyai  SK  dan  TDN  yang  relatif  sama dengan  konsentrat.  Konsentrat  mempunyai PK,  LK,  dan  TDN  lebih  tinggi  tetapi  SK lebih  rendah  dibanding  Rumput  Gajah. Konsentrat merupakan pakan sumber protein dan  energi  tetapi  memiliki  serat  kasar  yang lebih rendah dari hijauan (Bartle dkk., 1994, Cheng dkk.,1998).
Tabel 1.Komposisi nutrisi (%, BK) daun teh, konsentrat, dan Rumput Gajah.
Komposisi Teh Hijau Teh Hitam Konsentrat Rumput Gajah BK (%) 92,8 91,3 87,8 20,6 Abu (%) 5,16 5,79 14,0 12,8 BO (%) 94,8 94,2 86,0 87,2 PK (%) 22,9 19,8 12,2 10,9 LK (%) 0,53 0,82 7,94 3,22 SK (%) 13,3 17,9 15,4 25,9 BETN (%) 58,1 55,6 50,5 47,2 TDN (%) 74,1 69,0 72,2 62,0 Energi bruto (kkal/kg) 3538 3536 - - Ca (%) 0,65 0,71 0,83 0,19 P (%) 0,23 0,19 0,48 0,11
Keterangan: BK, bahan kering; BO, bahan organik; PK, protein kasar; LK, lemak kasar; SK, seratkasar; BETN, bahan ekstrak tanpa nitrogen; TDN, total digestible nutrients.
Tabel 2. Pengaruh pemberian daun teh dalam ransum domba lokal terhadap KcBK
(%),KcBO (%), N-NH 3 (Mm), dan tVFA (Mm) in vitro . KcBK (%) KcBO (%) N-NH 3 (Mm) tVFA (Mm) T0 62,6 c 58,6 a 3,78 d 124,1 cd T1 57,9 d 45,3 cd 3,74 de 114,1 de T2 67,0 a 57,6 a 4,59 b 136,6 c T3 64,7 b 49,2 c 4,85 b 106,6 e T4 57,2 d 41,5 e 5,79 a 119,5 de T5 58,9 d 47,7 c 4,20 c 163,1 b T6 61,1 c 51,8 b 3,52 e 200,2 a SEM 0,539 0,474 0,216 1,237 P value P<0,001 P<0,001 P<0,001 P<0,001
Keterangan:  T0,  ransum  kontrol;  T1,  ransum  dengan  1%  teh  hijau;  T2,  ransum  dengan  2%  teh hijau; T3, ransum dengan 4% teh hijau; T4, ransum dengan 1% teh hitam; T5, ransum dengan  2%  teh  hitam;  T6,  ransum  dengan  4%  teh  hitam;  KcBK,  kecernaan  bahan kering; KcBO, kecernaan bahan organik; N-NH 3 , ammonia; tVFA, total volatile fatty acids ; SEM, standard error means.
PK  teh  hijau  (22,9%)  dan  teh  hitam (19,8%) dalam penelitian ini lebih rendah dari PK  teh  hijau  (24,0%)  dan  teh  hitam  (24,2%) yang  diteliti  oleh  Ramdani  dkk.  (2013). Ramdani  dkk.  (2013)  juga  melaporkan  LK yang  lebih  tinggi  pada  daun  teh  hijau  (2,1%) dan  teh  hitam  (1,3%)  dibandingkan  LK  pada teh hijau (0,53%) dan teh hitam (0,82%) pada penelitian ini.
Penambahan daun teh dalam ransum domba  lokal  berpengaruh  sangat  nyata (P<0.001)  terhadap  KcBK,  KcBO,  N-NH 3 , dan  tVFA  pada  uji in  vitro .  Pemberian  teh hijau  2%  dan  4%  pada  ransum  dapat meningkatkan  KcBK  sedangkan  pemberian teh hijau sebanyak 1%, teh hitam 1% dan 2% menurunkan  KcBK  dibandingkan  dengan ransum  kontrol.  Pemberian  teh  hitam  4% memiliki  KcBK  yang  sama  dengan  ransum kontrol.  Di  sisi  lain,  pemberian  teh  hijau  2% dalam  ransum  menghasilkan  KcBO  yang sama dengan ransum kontrol, namun pemberian  teh  hijau  1%  dan  4%  serta  teh hitam  1%,  2%,  dan  4%  menurunkan  KcBO ransum.  Ramdani  dkk.(2014)  melaporkan pemberian teh hijau atau teh hitam sebesar 5% dan  10%  dalam  ransum  tidak  mempunyai pengaruh nyata terhadap KcBO.
Pemberian  daun  teh  pada  ransum domba  lokal  pada  berbagai  level  pemberian dapat  meningkatkan  produksi  N-NH 3 kecuali pada  pemberian  teh  hijau  1%  dan  pemberian teh  hitam  4%  dibandingkan  dengan  ransum
kontrol. Peningkatan produksi N-NH 3 tertinggi  diperoleh  dari  pemberian  teh  hitam 1%, teh hijau 2%, teh hijau 4%, dan teh hitam 2%  secara  berurutan.  Sebaliknya,  Ramdani dkk.(2014)  melaporkan  bahwa  pemberian daun  teh,  khususnya  teh  hijau  pada  ransum domba menurunkan produksi N-NH 3 . Penurunan  N-NH 3 diduga  akibat  terikatnya protein  oleh  tannin  daun  teh  sehingga  tidak tercerna  maksimal  oleh  mikroba  rumen  tetapi berpotensi  menjadi by-pass protein  (Makkar, 2003,  McSweeney  dkk.,  2001,  Min  dkk., 2003, Mueller-Harvey, 2006). Perbedaan hasil ini  diduga  karena  perbedaan  sampel  teh  yang digunakan.Ramdani dkk.(2014) menggunakan daun  teh  berkualitas  dengankandungan  tannin tinggi  yang  diperoleh  dari  pabrik  sedangkan penelitian ini menggunakan daun teh berkualitas  sedang  yang  didapat  dari  pasar tradisional  dengan  kandungan  tannin  yang belum teridentifikasi.
Pemberian  daun  teh  pada  ransum domba  lokal  pada  berbagai  level  dapat  juga meningkatkan tVFA kecuali pada pemberian teh hitam 1% dan teh hijau 4% dibandingkan dengan ransum kontrol. Peningkatan produksi  tVFA  tertinggi  diperoleh  dari pemberian  teh  hitam  4%,  teh  hitam  2%,  dan teh  hijau  2%  secara  berurutan.Sedangkan Ramdani  dkk.(2014)  melaporkan  bahwa pemberian  daun  teh  tidak  mempengaruhi produksi tVFA di dalam rumen in vitro.

## Kesimpulan
Daun  teh  hijau  dan  teh  hitam mempunyai  tingkat  protein  dan  TDN  yang tinggi.  KcBK,  N-NH 3 ,  dan  tVFA  tertinggi diperoleh dari ransum domba lokal mengandung  teh  hijau  2%,  teh  hitam  1%, dan  teh  hitam  4%  secara  berurutan.
Pemberian teh hijau 2% dan 4% meningkatkan  KcBK  dan  N-NH 3. Tetapi pemberian  teh  hijau  2%  tidak  berpengaruh nyata  terhadap  tVFA  sedangan  pemberian teh  hijau  4%  dapat  menurunkan  tVFA. Pemberian  teh  hitam  2%  meningkatkan  N- NH 3 dan  tVFA  tetapi  menurunkan  KcBK. Sedangkan  pemberian  teh  hitam  4%  tidak berpengaruh  nyata  terhadap  KcBK  tetapi menurunkan  N-NH 3 dan  meningkatkan tVFA.

## Ucapan Terimakasih
Penelitian ini didanai oleh Universitas Padjadjaran melalui skema Academic Leadership Grant (ALG) tahun 2015.

## Daftar Pustaka
Attwood, G. T., Klieve, A. V., Ouwerkerk, D. dan  Patel,  B.  K.  C.  1998.  Ammonia- Hyperproducing  Bacteria  from  New Zealand Ruminants. Applied and EnvironmentalMicrobiology, vol. 64 , hal.1796-1804.
Bartle,  S.  J.,  Preston,  R.  L.  dan  Miller,  M.  F. 1994,  ‘Dietary  energy  source  and density:  effects  of  roughage  source, roughage equivalent, tallow level, and steer type on feedlot performance and carcass  characteristics’, Journal  of Animal  Science ,  vol  72,  hal.  1943- 1953.
Boadi,  D.,  Benchaar,  C.,  Chiquette,  J.  dan Masse,  D.  2004.  Mitigation  strategies to  reduce  enteric  methane  emissions from  dairy  cows:  Update  review. Canadian  Journal  ofAnimal  Science, vol. 84, hal. 319-335.
Cheng,  K.  J.,  McAllister,  T.  A.,  Popp,  J.  D., Hristov,  A.  N.,  Mir,  Z.  dan  Shin,  H. T. 1998, ‘A review of bloat in feedlot cattle’, Journal  of  Animal  Science, vol. 76, hal. 299-308.
Guo,  Y.-Q.,  Liu,  J.  X.,  Zhu,  W.  Y.,  Denman, S.  E.  dan  McSweeney,  C.  S.  2008.
Effect of tea saponin on
methanogenesis, microbial community  structure  and  expression of mcrA gene,  in  cultures  of  rumen micro-organisms. Letters  in  Applied Microbiology, vol. 47 , hal.421-426. Hu,  W.-L.,  Liu,  J.-X.,  Ye,  J.-A.,  Wu,  Y.- M.dan Guo, Y.-Q. 2005. Effect of tea saponin  on  rumen  fermentation  in vitro. Animal  Feed  Science  and Technology, vol. 120 , hal.333-339. Makkar,  H.  P.  S.,  Siddhuraju,  P.  dan  Becker, K. 2007. Plant secondary metabolites. HumanaPress Inc. , Totowa, New Jersey, 05712. Mao, H.-L., Wang, J.-K., Zhou, Y.-Y.dan Liu,
J.-X.  2010.  Effects  of  addition  of  tea saponins  and  soybean  oil  on  methane production, fermentation and microbial  population  in  the  rumen  of growing  lambs. Livestock  Science,
vol. 129 , hal.56-62.
McSweeney,  C.  S.,  Palmer,  B.,  McNeill,  D. M. dan Krause, D. O. 2001. Microbial interactions  with  tannins:  nutritional consequences  for  ruminants. Animal
FeedScience  and  Technology, vol.
91 , hal.83-93.
Min, B. R., Barry, T. N.,  Attwood, G. T. dan McNabb,  W.  C.  2003.  The  effect  of condensed  tannins  on  the  nutrition and  health  of  ruminants  fed  fresh temperate  forages:  a  review. Animal Feed  Science  and  Technology, vol. 106 , hal.3-19.
Mueller-Harvey,  I.  2006.  Review  unravelling the  conundrum  of  tannins  in  animal nutrition  and  heath. Journal  of  the Science of Food and Agriculture, vol. 86 , hal.2010-2037.
Ramdani, D., Chaudhry,  A. S. dan  Seal, C. J. 2013.Chemical  Composition,  Plant Secondary  Metabolites,  and  Minerals of  Green  and  Black  Teas  and  the Effect  of  Different  Tea-to-Water
Ratios  during  Their  Extraction  on  the Composition of Their Spent Leaves as Potential Additives for Ruminants. Journal  of  Agricultural and  Food  Chemistry, vol.  61 , hal.
4961-4967.
Ramdani, D., Chaudhry,  A. S. dan  Seal, C. J. 2014.  Potential  use  of  tea  leaves  to reduce  rumen  ammonia  and  methane
productions. The  Proceeding  of  the
British  Society  ofAnimal  Science Annual  Conference, Nottingham  UK , 29-30 April 2015, hal. 083. Szumacher-Strabel,  M.  dan  Cieślak,  A.
2010.Potential  of  phytofactors  to mitigate rumen ammonia and methane production. Journal  of  Animal  and
Feed Sciences, vol. 19 , hal.319-337.
Wina,  E.,  Muetzel,  S.  dan  Becker,  K.
2005.The  Impact  of  Saponins  or Saponin-Containing  Plant  Materials on Ruminant Productions A Review. Journal of Agricultural andFood  Chemistry, vol.  53 , hal. 8093-81