DOI: 10.24198/jit.v20i1.27423
Unpad Press                                                                                                                             Available online at http://jurnal.unpad.ac.id/jurnalilmuternak

## Potensi Disinfektan sebagai Sediaan Kebiri Kimiawi pada Ternak
Lena Indraswari 1 , Siti Sa’diah 2 , Mokhamad Fakhrul Ulum 3, a
1 Program Pendidikan Profesi Dokter Hewan; Fakultas Kedokteran Hewan; Institut Pertanian Bogor
2 Departemen Anatomi, Fisiologi, dan Farmakologi; Fakultas Kedokteran Hewan; Institut Pertanian Bogor
3 Departemen Klinik, Reproduksi, dan Patologi; Fakultas Kedokteran Hewan; Institut Pertanian Bogor Jl. Agatis, Kampus IPB Dramaga, Bogor, Jawa Barat, 16680, Indonesia
a) email: ulum@ipb.ac.id

## Abstrak
Kastrasi kimiawi dapat digunakan sebagai alternatif dari kastrasi terbuka. Tujuan dari penelitian ini untuk menguji  potensi  bahan  kimia  disinfektan  sebagai  sediaan  bahan  kimia  untuk  kastrasi  pada  mencit. Penelitian ini menggunakan zat aktif disinfektan sebagai material kastrasi kimiawi pada mencit. Mencit jantan  sebanyak  27  ekor  berusia  2-7  bulan  dengan  bobot  badan  28-42  g  dibagi  menjadi  7  kelompok: kloroxylenol 4,8% (C4, n=4), povidon iodin 10% (P10, n=4), kloroxylenol 2,4% dan povidon iodin 5% (C2P5, n=4), kloroxylenol 1,2% dan povidon iodin 2,5% (C1P2, n=4), sodium hipoklorit 5,25% (S5, n=4), NaCl  0,9%  (N,  n=4),  dan  akuadestilata  (A,  n=3).  Disinfektan  sebanyak  0,2  mL  diinjeksi  pada  masing- masing testis pada setiap kelompok. Daya hidup mencit setelah kastrasi kimiawi pada kelompok perlakuan C4, C2P5, C1P2, kontrol A, dan kontrol N berada diantara 25-100%. Populasi mencit mati 100% dalam 24 jam pada kelompok perlakuan P10 dan S5. Kastrasi kimiawi menggunakan disinfektan (C4, C2P5, dan C1P2) menyebabkan penurunan ukuran testis; perubahan profil eritsosit, limfosit relatif, neutrofil relatif; dan  menyebabkan  struktur  anekhoik  pada  jaringan  testis  7  hari  setelah  kastrasi  kimiawi  dibandingkan dengan kontrol (A dan N). Kombinasi kloroxylenol 1,2% dan povidon iodin 2,5% dapat digunakan sebagai agen kastrasi kimiawi pada mencit.
Kata kunci: kastrasi kimiawi, mencit, kloroxylenol, povidon iodin, sodium hipoklorit

## Potential of disinfectants as chemical castration agent for livestock

## Abstract
Chemical castration can be used as an alternative of open castration. The purpose of this study was to determine  the  potential  of  disinfectants  as  chemical  agent  forcastration  in  mice.  This  study  was  used disinfectant as an active substance as chemical castration agent in mice. Twenty seven male mice aged 2- 7 months with body weight 28-42 g were divided into 7 groups: chloroxylenol 4.8% (C4, n=4), povidone iodine 10% (P10 n=4), chloroxylenol 2.4% and povidone iodine 5% (C2P5, n=4), chloroxylenol 1.2% and povidone  iodine  2.5%  (C1P2,  n=4),  sodium  hypochlorite  5.25%  (S5,  n=4),  NaCl  0.9%  (N,  n=4),  dan aquadest (A, n=3). A 0.2 mL of the disinfectants were injected in each testis of the groups. The survival rate of mice after chemical castration in groups C4, C2P5, C1P2, control A, and control N were 25-100%. However,  100%  mice  were  death  24  hours  on  the  groups  P10  and  S5.  Chemical  castration  using disinfectants (C4, C2P5, and C1P2) causes the size of testis decrease; changes in erythrocyte count, relative lymphocytes,  relativeneutrophils;  and  causesanechoic  area  in  the  testical  tissue  7  days  after  chemical castration compared to that control (A and N). The combination of 1.2% chloroxylenol disinfectant and 2.5% of povidone iodine solution potentially can be used as a chemical castration agent in mice. Keywords: chemical castration, mice, chloroxylenol, povidone iodine, sodium hypochlorite

## Pendahuluan
Ternak potong umumnya adalah jenis ternak jantan  non  pemacek  yang  dipelihara  untuk menghasilkan  daging  sebagai  produk  utamanya (Susilorini,  et  al.,  2007).  Masalah  yang  sering muncul pada pejantan non pemacek adalah libido dan  kualitas  semen  yang  rendah.  Ternak  jantan yang berkualitas rendah dapat berdampak negatif terhadap  efisiensi  reproduksi  pada  sapi-sapi induk yaitu angka konsepsi rendah (Ratnawati, et al.,  2015).  Ternak  jantan  yang  tidak  layak dijadikan  pemacek  umumnya  dikastrasi  dan dijadikan  sebagai  ternak  potong  (Talib,  dkk., 2011;  Kementan,  2014).  Kastrasi  merupakan salah  satu  cara  yang  dapat  digunakan  untuk meningkatkan  bobot  badan  pada  hewan  ternak jantan dan mengatasi inbreeding (Praharani dan Sianturi,  2018).  Hewan  ternak  yang  dikastrasi akan  cenderung  jinak  sehingga  membantu konversi  pakan  menjadi  daging  lebih  baik (Kuswati, et al., 2015). Inbreeding adalah salah satu  jenis  perkawinan  yang  dilakukan  antara individu  yang  memiliki  hubungan  sedarah  atau kekerabatan  dekat. Inbreeding dapat  terjadi karena beberapa faktor yaitu jumlah populasi atau ukuran populasi efektif yang kecil termasuk rasio pejantan dan betina produktif, perkawinan tidak terarah,  dan  populasi  tertutup  yang  terisolasi (Praharani dan Sianturi, 2018). Dampak ekonomi akibat  pengaruh  tekanan inbreeding adalah penurunan  sifat-sifat  yang  memiliki  nilai ekonomi  tinggi  (Praharani  dan  Sianturi,  2018). Ternak-ternak  muda  yang  tidak  terpilih  sebagai breeding stock harus dilakukan kastrasi sehingga kasus  inbreeding  dapat  diminimalisir  (Botes, dkk., 2007).
Metode  sterilisasi  yang  dilakukan  pada hewan  adalah  kastrasi  untuk  hewan  jantan  dan ovariohisterektomi untuk hewan betina. Kastrasi dengan metode non bedah lebih diminati daripada kastrasi  dengan  prosedur  bedah  (Moldave  dan Rhodes,  2013).  Pendekatan  kastrasi  non  bedah lebih banyak dilakukan di Eropa (Murray, dkk., 2015). Kastrasi dengan prosedur bedah memiliki beberapa  komplikasi  antara  lain  inflamasi  pada skrotum,  hemorrhagi,  dan  infeksi.  Hemorrhagi pasca  kastrasi  dapat  berakibat  serius  dan  dapat menyebabkan hematoma skrotum atau perdarahan  intra-abdominal  (Howe,  2006). Metode  kastrasi  menggunakan  bahan  kimia sebagai  alternatif  lebih  baik  daripada  kastrasi
menggunakan  metode  bedah  (Ibrahim,  dkk., 2016).  Neto,  dkk.  (2014)  telah  menggunakan NaCl hipertonik 20% sebagai agen kastrasi kimia pada  sapi.  Agen  NaCl  20%  berhasil menyebabkan nekrosis pada sel-sel leydig, tubuli seminiferi,  dan  testikular  sehingga  sediaan tersebut  dapat  digunakan  sebagai  alternatif  dari kastrasi  menggunakan  metode  bedah  pada  sapi. Ibrahim,  dkk.  (2016)  telah  melakukan  kastrasi kimia  terhadap  keledai  menggunakan  sediaan kalsium  klorida  20%.  Sediaan  kalsium  klorida 20%  tidak  dapat  menekan  kadar  testosteron setelah  60  hari  injeksi.  Ulum,  dkk.  (2017) melakukan  kastrasi  kimiawi  pada  mencit menggunakan  FeCl 3 5%  dan  agen  tersebut menyebabkan  penurunan  ukuran  testis.  Kastrasi kimia  yang  ideal  adalah  mampu  menekan spermatogenesis  dan  hormon  androgen  yang mempengaruhi  libido  tanpa  ada  efek  samping (Ibrahim, dkk., 2016).
Disinfektan adalah suatu zat yang digunakan untuk mencegah infeksi dengan menghancurkan mikroorganisme  patogen  (Munaf,  2009).  Jenis- jenis disinfektan yang pernah digunakan sebagai sediaan  kastrasi  kimia  adalah  klorheksidin glikonat pada rusa (Mohamed dan James, 2013), etanol  dan  kalsium  klorida  pada  banteng (Canpolat,  dkk.,  2006),  dan  formalin  pada kambing  benggala  (Awal,  dkk.,  2004).  Bahan- bahan  kimia  lainnya  yang  terdapat  dalam disinfektan antara lain kloroxylenol (McDonnell dan Russell, 1999), iodin (Purnawijayanti, 2001), dan sodium hipoklorit (Utami, dkk., 2016). Iodin dan  sodium  hipoklorit  (NaOCl)  bersifat  korosif (Queiros,  dkk.,  2014),  sedangkan  kloroxylenol dapat  menyebabkan  iritasi  kulit  ringan  dan memicu  terjadinya  alergi  terhadap  beberapa individu  (Brahma,  dkk.,  2016).  Bahan-bahan aktif  disinfektan  tersebut  bersifat  korosif  yang dapat merusak sel dan jaringan sehingga mungkin dapat  digunakan  sebagai  bahan  alternatif  dalam tindakan  kastrasi  kimiawi.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  menguji  potensi  disinfektan sebagai  sediaan  bahan  kimia  untuk  kastrasi kimiawi pada mencit sebagai model untuk hewan ternak.

## Materi dan Metode
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Desember  2018  sampai  Maret  2019  di Laboratorium Bedah Reproduksi, Divisi
Reproduksi dan Kebidanan, Departemen Klinik, Reproduksi,  dan  Patologi,  Fakultas  Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  jas  lab, gloves, masker, litter box, botol minum mencit, kain,  sonde  lambung, syringe 1  mL,  alat  bedah minor, tabung Eppendorf, mikrokapiler, coolbox, alat USG SonoDop S-9X (PT Karindo Alkestron, Indonesia), spon cuci piring, pinset, pot plastik, dan laptop. Bahan-bahan yang digunakan adalah pakan  mencit,  serutan  kayu,  obat  cacing (Drontal®), antibiotik (Claneksi®), antiprotozoa (Metrolet®), akudestilata, Dettol® (kloroxylenol 4,8%),  Betadine®  (povidon  iodin  10%), Bayclin®  (sodium  hipoklorit  5,25%),  NaCl 0,9%, ketamin, larutan BNF 10%, label, dan air.
Penelitian ini menggunakan 27 ekor mencit jantan berumur 7 bulan dengan bobot badan ± 42 g (n=16) dan 2 bulan bobot badan ± 28 g (n=11) yang  dilakukan  dalam  2  tahap  setelah aklimatisasi.  Proses  aklimatisasi  pada  mencit dilakukan  selama  10  hari  dan  selama  proses aklimatisasi mencit diberi obat cacing, antibiotik, dan  antiprotozoa.  Mencit  pada  penelitian  tahap Idibagi  menjadi  4  kelompok  perlakuan  yaitu: kloroxylenol 4,8% (C4, n=4), povidon iodin 10% (P10, n=4), kloroxylenol 2,4% dan povidon iodin 5%  (C2P5,  n=4),  dan  kloroxylenol  1,2%  dan povidon  iodin  2,5%  (C1P2,  n=4).  Mencit  pada penelitian  tahap  II  dibagi  dalam  3  kelompok perlakuan  yaitu:  sodium  hipoklorit  (S5,  n=4), kontrol negatif NaCl 0,9% (kontrol N, n=4), dan kontrol  positif  akuadestilata  (kontrol  A,  n=3). Penelitian tahap II menggunakan mencit umur 2 bulan  karena  stok  mencit  dengan  umur  7  bulan tidak  ada  sehingga  yang  akan  dibandingkaan adalah  ukuran  relatif  dari  testis  mencit.  Ukuran relatif testis dapat dihitung dengan membandingan ukuran organ dan berat badan.
Teknik injeksi kastrasi kimia pada dilakukan dengan  mengekang  mencit  menggunakan  kain terlebih  dahulu.  Testis  difiksasi  menggunakan jari  agar  testis  turun  dari  rongga  abdomen sehingga mudah dilakukan injeksi intratestikular dalam  skrotum  (Gambar  1A).  Kastrasi  kimiawi dilakukan  menggunakan syringe 1  mL  dengan needle 27  gauge.  Preparat  kastrasi  kimiawi kemudian  diinjeksikan  melalui  intra-testikular sebanyak  0,2  mL  pada  masing-masing  testis dengan kedalaman tusukan ± 5 mm (Ulum, dkk., 2017).
Daya hidup mencit dihitung dari pengamatan  yang  dilakukan  setiap  hari  selama penelitian  berlangsung  hingga  hari  ke-7  setelah kastrasi  kimiawi.  Perhitungan  daya  hidup dilakukan  dengan  menghitung  jumlah  mencit yang  hidup  setelah  perlakuan  dibagi  jumlah mencit  awal  sebelum  perlakuan  dikali  100% (Ulum, dkk., 2017).
Pemeriksaan profil darah dilakukan dengan mengekang mencit menggunakan kain kemudian dibius  menggunakan  ketamin  5  mg/100  g  BB. Setelah  mencit  terbius,  koleksi  sampel  darah dilakukan  melalui  vena  orbitalis  pada  orbita mata.  Koleksi  sampel  darah  sebanyak  0,5  mL dilakukan  menggunakan  tabung  mikrokapiler. Darah  ditampung  ke  dalam  tabung  Eppendorf yang telah diberi EDTA sebanyak 0,2 μL. Tabung Eppendorf  disimpan  ke  dalam coolbox dan dilakukan  pemeriksaan  darah  yang  meliputi hemoglobin,  hematokrit,  total  eritrosit,  total leukosit, dan differensiasi leukosit.
Kastrasi  terbuka  dilakukan  untuk  menilai perubahan  secara  langsung pada  testikel  setelah kastrasi  kimia.  Alat  bedah  minor  dipersiapkan sebelum  dilakukan  kastrasi  terbuka.  Kastrasi terbuka dilakukan pada hari ke-7 setelah injeksi kastrasi  kimia.  Mencit  jantan  terlebih  dahulu dibius menggunakan sediaan ketamin 5 mg/100 g BB. Mencit kemudian dieuthanasia dengan cara cervical dislocation. Kulit, tunika vaginalis, dan tunika  albuginea  disayat  menggunakan scalpel . Testis  dikeluarkan  dari  lapisan  pembungkusnya serta dipisahkan dari vas deferens dan pembuluh darah.  Testis  yang  telah  diangkat  disimpan  ke dalam pot plastik yang telah diberi BNF 10% dan diberi label (Destri, 2013).
Pengukuran  bobot  testistkel  yang  sudah diawetkan  dalam  BNF  10%  dilakukan menggunakan  timbangan  digital.  Dimensi  testis diukur  pada  panjang  dan  lebar  menggunakan jangka  sorong.  Pengukuran  volume  testis dilakukan  menggunakan  rumus  volume  testis (Sakamoto,  dkk.,  2007).  Ukuran  testis  mencit yang  akan  dibandingkan  diantara  kelompok adalah  ukuran  relatif.  Ukuran  relatif  didapat dengan  membagi  ukuran  aktual  dengan  BB masing-masing mencit.
Citra  ultrasonografi  diambil  untuk  menilai struktur bagian dalam dari testikel setelah kastrasi kimiawi. Perangkat alat ultrasonografi SonoDop S-9X  dipersiapkan  kemudian  transduser  diatur
pada  frekuensi  10  MHz.  Awetan  organ  testis diambil menggunakan pinset dari pot plastik yang berisi larutan BNF 10%. Proses pencitraan organ dilakukan di dalam air sebagai media penghantar. Arah  transduser  terhadap  organ  adalah transversal  dan  longitudinal.  Hasil  gambar sonogram kemudian disimpan ke dalam flash disk untuk dianalisa lebih lanjut (NIH, USA).
Pemeriksaan  patologi  anatomi  dilakukan dengan  membuka  testikel  yang  telah  diawetkan dalam BNF 10%. Testis dipotong menggunakan pisau  mikrotom  menjadi  empat  bagian  dengan arah pemotongan transversal untuk membandingkan  kerusakan  yang  terlihat  secara makroanatomi.  Testis  yang  telah  dipotong kemudian  diwarnai  menggunakan  eosin  giemsa dan  diambil  gambar  menggunakan  mikroskop stereo  yang  telah  dilengkapi  dengan  kamera digital.  Gambar  jaringan  secara plain (tanpa pewarna)  kemudian  dibandingkan  dengan gambar dari jaringan yang telahdiwarnai dengan eosin giemsa.
Data  yang  diperoleh  dianalisis  secara kuantitatif  dan  kualitatif.  Pengujian  data  daya hidup dianalisis menggunakan WPS Spreadsheets  2010  dengan  metode  deskriptif. Data hasil hemogram dan ukuran testis dianalisis secara  statistik  menggunakan  perangkat  lunak SPSS®  v.16  dengan  uji  lanjut  Duncan  pada selang  kepercayaan  95%  (p<0,05).  Data  hasil citra  USG  dan  pewarnaan  jaringan  dianalisis secara deskriptif.

## Hasil dan Pembahasan
Penelitian ini telah berhasil menguji potensi berbagai  bahan  disinfektan  sebagai  zat  aktif kastrasi  kimiawi  pada  mencit.  Kastrasi  kimiawi mudah dilakukan tanpa perlu melakukan kastrasi
terbuka.  Kastrasi  kimia  dilakukan  dengan  cara injeksi senyawa secara intra-testikular (ITI) dapat menginduksi kerusakan sel testis melalui proses kaustik atau osmotik (Oliveira, dkk., 2016).
Tabel  1  menunjukkan  kelompok  perlakuan P10 dan S5 mengalami kematian semua populasi mencit  dalam  waktu  24  jam  setelah  injeksi. Mencit  pada  kelompok  perlakuan  C4,  C2P5, C1P2, A, dan N memiliki daya hidup hingga hari ke-7  setelah  injeksi.  Daya  hidup  100% ditunjukkan  oleh  mencit  pada  kelompok perlakuan  N,  A,  dan  C1P2.  Daya  hidup  25% ditunjukkan oleh mencit pada kelompok C4 dan C2P5.
Konsentrasi  povidon  iodin  10%  (P10)  dan sodium  hipoklorit  5,25%  (S5)  yang  diberikan dengan  rute  intra-testikular  bersifat  toksik. Mencit  pada  kelompok  tersebut  semuanya mengalami  kematian  dalam  24  jam.  Mencit menunjukkan  reaksi  hiperaktif  pada  kelompok P10  dan  S5  setelah  injeksi  intra-testikular senyawa  disinfektan.  Senyawa  aktif  yang digunakan  untuk  kastrasi  kimiawi  dapat terdistribusikan secara sistemik melalui pembuluh  darah  mencit  (Ulum,  dkk.,  2017). Sodium hipoklorit merupakan disinfektan tingkat tinggi  yang  toksisitasnya  dipengaruhi  oleh komposisi  kimia,  konsentrasi,  dan  volume pemberian  (Mehdipour,  dkk.,2007).  Sodium hipoklorit sangat beracun pada jaringan vital dan saraf.  Sodium  hipoklorit  apabila  berkontak dengan  jaringan  vital  dapat  menyebabkan hemolisis,  ulserasi,  penghambatan  reaksi neutrofil,  dan  penghancuran  sel  endotel  serta fibroblast  (Guivarc,  dkk.,  2017).  Povidon  iodin pada  jaringan  vital  juga  dapat  menyebabkan edema  dan  kerusakan  sel  endotel  (Liesegang, 2002).
Tabel 1. Daya hidup mencit setelah dilakukan kastrasi kimiawi menggunakan sediaan disinfektan selama 7 hari
Tahap Penelitian Kelompok Perlakuan n Daya Hidup (%) hari ke- 0 1 2 3 4 5 6 7 I C4 4 100 25 25 25 25 25 25 25 P10 4 100 0 0 0 0 0 0 0 C2P5 4 100 25 25 25 25 25 25 25 C1P2 4 100 100 100 100 100 100 100 100 II A (kontrol) 3 100 100 100 100 100 100 100 100 N (kontrol) 4 100 100 100 100 100 100 100 100 S5 4 100 0 0 0 0 0 0 0
Keterangan:    A=  akuadestilata,  N=  NaCl  0,9  %,  C4=  kloroxylenol  4,8%,  P10=  povidon  iodin  10%,  C2P5= kloroxylenol 2,4% dan povidon iodin 5%, C1P2= kloroxylenol 1,2% dan povidon iodin 2,5%, S5= sodium hipoklorit 5,25%.
Hemogram  merupakan  nilai  komponen- komponen  darah  yang  dapat  digunakan  untuk mengetahui  kondisi  kesehatan  tubuh.  Menurut Opara, dkk. (2010) dan Jasper, dkk. (2012), nilai komponen-komponen  darah  dapat  digunakan sebagai  indikator  uji  toksisitas  suatu  bahan terutama  yang  mempengaruhi  darah  serta  status kesehatan  hewan.  Tabel  2  menunjukkan  hasil pemeriksaan hemogram mencit setelah hari ke-7 kastrasi  kimiawi  menggunakan  disinfektan. Jumlah  eritrosit,  limfosit  relatif,  dan  neutrofil relatif  menunjukkan  hasil  yang  berbeda  nyata diantara  kelompok  (P<0,05)  setelah  dilakukan
kastrasi kimiawi. Kelompok kontrol N memiliki nilai total eritrosit sedikit di bawah rentang nilai normal (5,0 - 9,5x 10 6 /μl). Kelompok perlakuan C4,  C2P5,  dan  C1P2  memiliki  jumlah  eritrosit sedikit  berada  di  atas  nilai  normal  (5,0  -  9,5x 10 6 /μl).  Jumlah  limfosit  relatif  pada  semua kelompok  perlakuan  dan  berada  dalam  rentang nilai normal (36 - 90%). Kelompok perlakuan N, A,  dan  C2P5  memiliki  jumlah  neutrofil  relatif berada  di  atas  rentang  nilai  normal  (6  -  40%). Kelompok  perlakuan  C4  dan  C1P2  memiliki jumlah neutrofil relatif berada pada rentang nilai normal (6 - 40%).
Tabel  2.  Profil  hemogram  mencit  pada  hari  ke-7  setelah  dilakukan  kastrasi  kimiawi  menggunakan disinfektan. Parameter Nilai Normal Kelompok Perlakuan Nilai P Tahap I Tahap II C4 C2P5 C1P2 N A Hemoglobin (g/dL) 10-17*** 11,60±0,00 a 11,20±0,00 a 14,45±1,30 a 14,00±2,10 a 13,73±2,30 a 0,498 Hematokrit (%) 39-49*** 43,50±0,00 a 41,50±0,00 a 38,98±3,70 a 41,75±5,97 a 44,92±2,01 a 0,547 Eritrosit (x 10 6 /μl) 5,0-9,5***  11,56±0,00 a 10,56±0,00 a 10,34±1,50 a 4,60±0,66 b 6,20±2,17 ab 0,003 Leukosit (x 10 3 /μl) 5-12*** 8,30±0,00 a 7,55±0,00 a 3,80±1,20 a 7,50±2,34 a 8,33±3,59 a 0,181 Limfosit Relatif (%) 36-90** 57,00±0,00 a b 43,00±0,00 a b 73,00±14,10 a 41,67±4,16 b 37,50±9,75 b 0,012 Absolut (x 10 3 /μl) 3,22-11,20*  4,73±0,00 a 3,25±0,00 a 2,75±0,90 a 2,77±1,10 a 3,52±1,76 a 0,631 Neutrofil Relatif (%) 6-40** 38,00±0,00 a b 54,00±0,00 a b 24,50±13,70 b 51,67±2,52 a 57,00±9,59 a b 0,017 Absolut (x 10 3 /μl) 0,46-2,20*  3,15±0,00 a 4,08±0,00 a 0,95±0,75 a 4,33 ±1,72 a 4,26±1,65 a 0,055 Monosit Relatif (%) 0,7-14** 2,00±0,00 a 2,00±0,00 a 2,25±1,30 a 4,00±1,73 a 3,00±0,82 a 0,424
Absolut (x 10 3 /μl) 0,40-1,43*  0,17±0,00 a 0,15±0,00 a 0,08±0,04 a 0,24±0,12 a 0,32±0,15 a 0,136 Eosinofil Relatif (%) 0-15** 3,00±0,00 a 1,00±0,00 a 0,25±0,50 a 1,67±1,15 a 0,75±0,50 a 0,052 Absolut (x 10 3 /μl) 0-0,38* 0,25±0,00 a 0,08±0,00 a 0,01±0,03 a 0,60±0,40 a 0,17±0,18 a 0,202 Basofil Relatif (%) 0-3** 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a n.a.
Absolut (x 10 3 /μl) 0-0,09* 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a Rasio N/L Relatif 0,17-0,44**  0,67±0,00  1,26±0,00  0,31±0,13 1,25±0,06  1,56±0,15  n.a. Absolut 0,14-0,20* 0,67±0,00  1,26±0,00  0,29±0,18 1,56±0,00  1,30±0,18  n.a.
Keterangan:  Data disajikan dalam bentuk rataan dengan standar deviasi (x ± SD). Huruf ( superscript ) yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan berbeda nyata (P<0,05). A= akuadestilata, N= NaCl 0,9%, C4= kloroxylenol  4,8%,  C2P5=  kloroxylenol  2,4%  dan  povidon  iodin  5%,  C1P2=  kloroxylenol  1,2%, poviodone  iodine  2,5%  dan  n.a.=tidak  tersedia.  Sumber: * (Suckow,  dkk.,  2001),  **(Malole  dan Pramono, 1989), ***(Liu dan Fan, 2017).
Hemoglobin  merupakan  substansi  utama penyusun  eritrosit  yang  terdiri  dari  protein (globin)  dan  bagian  non-protein  (heme). Hemoglobin  dapat  dijadikan  parameter  untuk mengetahui  terjadinya  anemia  (Widyastuti, 2013).  Jumlah  hemoglobin,  hematokrit,  dan leukosit  mencit  setelah  7  hari  kastrasi  kimiawi diantara  semua  kelompok  tidak  berbeda  nyata (P>0,05).  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa kastrasi  kimiawi  tidak  mempengaruhi  respon hemoglobin,  hematokrit,  dan  leukosit  pada mencit.  Hematokrit  merupakan  presentase eritrosit di dalam 100 mL darah (Astawan, dkk., 2011).  Kastrasi  kimiawi  mempengaruhi  respon eritrosit  pada  mencit.  Jumlah  eritrosit  mencit setelah 7 hari kastrasi kimiawi diantara kelompok menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  nyata (P<0,05).  Jumlah  eritrosit  mencit  pascakastrasi kimiawi  berada  di  atas  rentang  nilai  normal. Menurut Marquardt, dkk. (2010), povidon iodin dan  kloroxylenol  yang  diinokulasi  pada  telur berembrio menyebabkan hemoragi pada pembuluh darah. Peningkatan nilai eritrosit dapat terjadi karena respon dari sumsum tulang untuk memproduksi eritrosit agar nilai eritrosit kembali normal  (Weiss  dan  Wardrop,  2010).  Proses inflamasi  menyebabkan  vasodilatasi  pembuluh darah kemudian meningkatkan sirkulasi darah ke daerah  luka  dan  sekitarnya  untuk  mensuplai nutrisi bagi sel (Abdurrahmat, 2014). Peningkatan  nilai  eritrosit  kelompok  perlakuan C4,  C2P5,  dan  C1P2  lebih  tinggi  dari  kedua kontrol  dan  berada  di  atas  nilai  normal. Peningkatan jumlah eritrosit di atas nilai normal di  dalam  tubuh  dapat  menyebabkan  polisitemia (Weiss dan Wardrop, 2010).
Leukosit  di  dalam  tubuh  berperan  sebagai sistem pertahanan terhadap benda asing (Colville dan  Bassert,  2008).  Limfosit  T  berperan  dalam respon  kekebalan  seluler  melalui  pembentukan sel  yang  reaktif  antigen.  Limfosit  B  berperan dalam kekebalan humoral (D’Hiru, 2013). Akan tetapi,  jumlah  limfosit  relatif  setelah  7  hari kastrasi kimiawi menunjukkan berbeda nyata (P =  0,012).  Jumlah  limfosit  relatif  pada  semua kelompok  perlakuan  berada  dalam  rentang  nilai normal  (36  -  90%),  akan  tetapi  apabila dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol  jumlah limfosit  kelompok  C4,  C2P5,  dan  C1P2  terjadi peningkatan. Limfosit merupakan sel pertahanan
tubuh  yang  berperan  pada  proses  inflamasi setelah neutrofil (Izzaty, dkk., 2014).
Neutrofil  merupakan  garis  pertahanan pertama terhadap invasi mikroorganisme, trauma pada  jaringan,  dan  peradangan  (Weiss  dan Wardrop, 2010). Kastrasi kimiawi mempengaruhi  respon  neutrofil  pada  mencit. Nilai  neutrofil  relatif  pada  kelompok  perlakuan C2P5  berada  di  atas  rentang  nilai  normal  yang disebabkan oleh proses inflamasi setelah injeksi intra-testikular senyawa disinfektan. Hal tersebut sesuai  dengan  Guyton  dan  Hall  (2016)  yang menyatakan bahwa proses inflamasi menyebabkan infiltrasi neutrofil meningkat atau terjadi  neutrofilia  karena  neutrofil  merupakan pertahanan awal terhadap infeksi atau inflamasi. Jumlah neutrofil relatif pada kelompok N dan A berada di atas rentang nilai normal dibandingkan dengan  literatur.  Menurut  Restel,  dkk.  (2014), hewan  yang  masih  muda  memiliki  jumlah neutrofil  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan hewan  yang  umurnya  lebih  tua.  Faktor  faktor yang  mempengaruhi  hasil  hematologi  adalah umur,  jenis  kelamin,  makanan,  kondisi lingkungan,  kondisi  puasa,  cara  pengambilan sampel,  antikoagulan,  penanganan  hewan sebelum  pengambilan  sampel,  dan  analisis (Weiss dan Wardrop, 2010).
Ratio  neutrofil  limfosit  (N/L)  didapatkan dari perhitungan jumlah neutrofil dibagi dengan jumlah  limfosit.  Ratio  N/L  dapat  digunakan sebagai indikator stress yang terjadi pada hewan (Kannan,  dkk.,  2000).  Ratio  N/L  mencit  pada kelompok perlakuan (C4, C1P2, dan C2P5) dan kontrol (N dan A)  setelah 7 hari kastrasi kimiawi cenderung lebih tinggi dari rentang nilai normal rasio  relatif  N/L  referensi  0,17-0,44  (Suckow, dkk., 2001) maupun rasio N/L absolut 0,14-0,20 (Malole  dan  Pramono,  1989).  Hewan  mamalia seperti  kambing  dapat  dikatakan  stress  apabila mempunyai nilai ratio N/L < 1,5 (Kannan, dkk., 2000).  Mencit  setelah  kastrasi  kimiawi  dalam penelitian ini tidak mengalami stress seluler pada semua  kelompok  perlakuan  (C4,  C1P2,  dan C2P5) maupun kelompok kontrol (N dan A).
Monosit  merupakan  bagian  dari  sel  darah putih  yang  dapat  berdiferensiasi  menjadi makrofag dan sel dendritik (Auffray, dkk., 2009). Jumlah monosit mencit dalam penelitian ini tidak dipengaruhi  oleh  kastrasi  kimiawi.  Eosinofil  di dalam  tubuh  berperan  untuk  melawan  parasit.
Eosinofil bersamaan dengan basofil atau sel mast berperan  sebagai  mediator  peradangan  serta berpotensi  merusak  jaringan  (Behm  dan Ovington,  2000).  Basofil  merupakan  komponen leukosit  yang  berperan  dalam  reaksi  terhadap alergi  (Merck,  2007).  Kastrasi  kimiawi  tidak mempengaruhi  respon  monosit,  eosinofil,  dan basofil pada mencit.
Tabel  3  menunjukkan  profil  biologi  testis mencit  setelah  7  hari  kastrasi  kimiawi menggunakan  disinfektan.  Perlakuan  kastrasi kimiawi  menggunakan  disinfektan  memberikan pengaruh  nyata  (P=0,004)  pada  panjang  relatif testis.  Panjang  relatif  testis  paling  kecil  tampak pada  kelompok  perlakuan  C4.  Kelompok perlakuan  C4  memiliki  penurunan  ukuran  testis yang lebih besar dibandingkan dengan kelompok perlakuan  C1P2  dan  C2P5.  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  konsentrasi  dan  jenis disinfektan berpengaruh terhadap proses kerusakan  jaringan  testis.  Kelompok  perlakuan desinfektan tunggal (C4) menyebabkan kerusakan  jaringan  testis  yang  lebih  besar dibandingkan  kelompok  perlakuan  desinfektan kombinasi (C1P2 dan C2P5). Kerusakan jaringan tersebut ditandai dengan penurunan ukuran testis.
Bobot  relatif  testis,  lebar  relatif  testis,  dan volume relatif testis mengalami penurunan pada kelompok  perlakuan  (C4,  C2P5,  dan  C1P2) dibandingkan  dengan  kedua  kontrol  (N  dan  A) tetapi tidak berbeda nyata (P>0,05). Ukuran testis pada semua kelompok perlakuan setelah hari ke- 7  kastrasi  kimiawi  menggunakan  sediaan disinfektan  mengalami  penurunan  ukuran. Kelompok  perlakuan  C4  dan  C2P5  memiliki penurunan ukuran testis paling besar dibandingkan  dengan  kedua  kontrol.  Kelompok perlakuan  C1P2  penurunan  ukuran  testis  paling kecil  dibandingkan  dengan  kedua  kontrol.  Hal tersebut  dipengaruhi  oleh  jenis  dan  konsentrasi disinfektan  yang  diberikan.  Konsentrasi  tinggi pada disinfektan yang diberikan lebih berpengaruh  terhadap  penurunan  ukuran  testis. Meskipun  jenis  disinfektan  kloroksilenol  dan povidon  iodin  dikombinasikan  pada  konsentrasi kloroksilenol  1,2%  dan  povidon  iodine  2,5% (kelompok  C1P2)  serta  kloroksilenol  2,4%  dan povidon  iodine  5%  (C2P5),  namum  dampak kerusakan  jaringan  lebih  besar  diakibatkan  oleh disinfektan  jenis  kloroksilenol  pada  konsentrasi 4,8%  (C4).  Kelompok  perlakuan  C4  memiliki
konsentrasi  disinfektan  yang  lebih  tinggi dibandingkan dengan kelompok perlakuan C2P5 dan  C1P2.  Penurunan  ukuran  testis  disebabkan oleh  potensi  disinfektan  yang  menyebabkan kerusakan  pada  jaringan  testis.  Menurut Marquardt,  dkk.  (2010),  kloroxylenol  dan povidon  iodin  menyebabkan  iritasi  pada pembuluh  darah.  Disinfektan  dalam  testis  akan mengiritasi  pembuluh  darah  sehingga  terjadi kerusakan  dinding  pembuluh  darah.  Kerusakan pembuluh  darah  sekitar  testis  menyebabkan suplai  oksigen  oleh  eritrosit  meunuju  jaringan testis  terganggu  sehingga  terjadi  hipoksia  pada jaringan  sekitar  testis.  Hipoksia  di  sekitar jaringan  testis  menyebabkan  kematian  jaringan testis. Disinfektan yang terdeposit di sel-sel pada tubuli  seminiferus  menyebabkan  kerusakan  sel sehingga produksi spermatozoa menjadi terhambat atau tidak dapat diproduksi.
Gambar 1 merupakan testis mencit setelah 7 hari  kastrasi  kimiawi  menggunakan  disinfektan dibandingkan dengan kontrol. Setelah dilakukan kastrasi kimiawi menggunakan disinfektan testis mengalami  kerusakan  pada  tunika  testis  dan ukuran  menjadi  mengecil.  Menurut  Marquardt, dkk. (2010), kloroxylenol dan povidon iodin yang di inokulasi pada telur berembrio menyebabkan iritasi  pada  pembuluh  darah.  Kloroxylenol memiliki  skor  iritasi  sebesar  17,4  (iritasi  berat) dan  povidon  iodin  memiliki  skor  iritasi  sebesar 5,3  (iritasi  sedang)  (Marquardt,  dkk.,  2010). Injeksi disinfektan intra-testikular menyebabkan inflamasi  pada  testis.  Proses  inflamasi  yang terjadi terus-menerus akan menyebabkan nekrosa pada testis. Disinfektan yang terdeposit di sel-sel pada tubuli seminiferus menyebabkan kerusakan sel  sehingga  produksi  spermatozoa  menjadi terhambat atau tidak dapat diproduksi.
Pengambilan gambar ultrasonografi dilakukan  dengan  arah  transduser  longitudinal dan  transversal  (Gambar  2).  Hasil  pemeriksaan ultrasonografi  menunjukkan  bahwa  jaringan testis yang telah dikastrasi kimiawi menggunakan disinfektan  terjadi  penurunan  ekogenitas.  Garis putus-putus  berwarna  kuning  menunjukkan terjadinya  pengumpulan  cairan  yang  ditandai dengan  struktur  anekhoik.  Struktur  anekhoik paling  besar  pada  sonogram  ditunjukkan  oleh kelompok  perlakuan  C4,  sedangkan  struktur anekhoik paling kecil ditunjukkan oleh kelompok perlakuan C1P2.
Tabel 3. Profil biologis testis mencit pada hari ke - 7 setelah dilakukan kastrasi kimiawi disinfektan.
Parameter Kelompok Perlakuan Nilai P Tahap I Tahap II C4 C2P5 C1P2 A N Bobot badan (g) 39,00±0,00  42,00±0,00  43,25±6,18    33,67±8,09  26,75±1,50  n.a. Bobot testis Absolut (g) 0,13±0,00  0,14±0,00  0,19±0,05 0,13±0,01  0,14±0,03 Relatif (%) 0,33±0,00 a 0,32±0,00 a 0,43±0,11 a 0,40±0,06 a 0,51±0,10 a 0,340 Panjang testis Absolut (mm) 6,25±0,00  6,83±0,00  7,27±0,51 6,84±0,46  7,23±0,75 Relatif (mm/g) 16,03±0,00 b 16,26±0,00 b 17,09±2,92 b 20,83±3,32 ab 26,97±1,40 a 0,004 Lebar testis Absolut (mm) 3,65±0,00  4,08±0,00  4,82±0,46 4,13±0,13  3,90±0,34 Relatif (mm/g) 9,36±0,00 a 9,71±0,00 a 11,36±2,29 a 12,68±2,70 a 14,60±1,22 a 0,144
Volume testis Absolut (cm 3 ) 74,18±0,00  89,03±0,00  126,59±27,46   89,81±12,16 88,22±17,07 Relatif  (cm 3 /g) 1,90±0,00 a 2,12±0,00 a 2,99±0,81 a 2,74±0,57 a 3,28 ±0,49 a 0,323 Keterangan:  Data disajikan dalam bentuk rataan dengan standar deviasi (x±SD). Huruf (superscript) yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan berbeda nyata (P<0,05). A= akuadestilata, N= NaCl 0,9%, C4= kloroxylenol 4,8%, C2P5= kloroxylenol 2,4% : povidon iodin 5%, C1P2= kloroxylenol 1,2% : povidon iodin 2,5% dan n.a.= tidak tersedia.
Gambar 1. Kastrasi kimiawi menggunakan disinfektan pada mencit dan morfologi testis setelah tujuh hari pengamatan.    (A)  prosedur  kastrasi  kimiawi.  (B-F)  organ  testis  pascaskastrasi  kimiawi menggunakan  (B)  kloroxylenol  4,8%,  (C)  kloroxylenol  2,4%  dan  povidon  iodin  5%,  (D) kloroxylenol 1,2% dan povidon iodin 2,5%, (E) NaCl 0,9%, (F) akuades.
Gambar  2.  Tampilan  sonogram  testis  mencit  pada  hari  ke － 7  setelah  dilakukan  kastrasi  kimiawi disinfektan. (A) C4= kloroxylenol 4,8%, (B) C2P5= kloroxylenol 2,4% dan povidon iodin 5%, (C) C1P2= kloroxylenol 1,2% dan povidon iodin 2,5%, (D) A= akuadestilata.
Pencitraan  ultrasonografi  adalah  teknik diagnosis yang cukup sensitif pada jaringan lunak (Noviana,  dkk.,  2012).  Hasil  pencitraan ultrasonografi  terdiri  atas  tiga  bagian  yaitu hiperekhoik  (putih),  hipoekhoik  (abu-abu), anekhoik  (hitam)  (Satria,  dkk.,  2016).  Struktur hiperekhoik  pada  tampilan  sonogram  testis mencit merupakan jaringan ikat testis, sedangkan struktur  hipoekhoik  dicitrakan  oleh  jaringan lunak.  Tampilan  sonogram  testis  mencit  setelah dilakukan kastrasi kimiawi menunjukkan struktur anekhoik.  Ultrasonografi  merupakan  alat diagnostik  yang  berfungsi  untuk  menampilkan perubahan  yang  terjadi  dalam  jaringan  lunak termasuk dalam penelitian ini mampu menampilkan  struktur  jaringan  testikel  setelah kastrasi kimiawi. Konsentrasi larutan disinfektan yang diinjekasi secara intra-testikuler mempengaruhi  luas  struktur  anekhoik.  Semakin
tinggi  konsentrasi  disinfektan  yang  diberikan maka semakin besar struktur anekhoik pada hasil pencitraan ultrasonografi. Hal tersebut ditunjukkan  pada  tampilan  sonogram  kelompok C4 yang memiliki struktur anekhoik lebih besar dibandingkan  kelompok  C2P5  dan  C1P2. Senyawa  disinfektan  yang  terdeposit  dalam jaringan menyebabkan kerusakan jaringan testis. Inflamasi  merupakan  respon  tubuh  terhadap kerusakan jaringan (Abdurrahmat, 2014). Proses inflamasi menyebabkan permeabilitas pembuluh darah meningkat oleh histamin kemudian protein plasma  keluar  menuju  ruang  interstitial  dan terjadi  akumulasi  cairan  sekitar  jaringan (Abdurrahmat, 2014). Menurut Azizah dan Batan (2018),  akumulasi  cairan  pada  hasil  citra ultrasonografi  ditunjukkan  dengan  warna anekhoik.
Gambar 3. Makroanatomi awetan testis kontrol. A) tanpa pewarnaan dan B) menggunakan pewarnaan Eosin Giemsa. EP= Epidisimis, Me= Mediastinum, TT= Tunika testis, TS= Tubulus seminiferus, ST= Septula testis.
Gambar 3 merupakan makroanatomi awetan testis  kontrol  dengan  potongan  transversal. Struktur  internal  jaringan  awetan  testis  tanpa pewarnaan  terlihat  homogen  sehingga  bagian- bagian testis sulit dibedakan, sedangkan struktur internal jaringan awetan testis dengan pewarnaan Eosin  Giemsa  terlihat  jelas.  Mediastium  dan septula testis pada awetan testis tanpa pewarnaan tidak  terlihat,  sedangkan  struktur  internal  lain seperti  tubulus  seminiferus,  epididimis,  dan tunika testis masih terlihat.
Giemsa merupakan pewarnaan polikromatik serbaguna yang cocok untuk pewarnaan beragam spesimen  (Barcia,  2007).  Struktur  internal potongan  testis  tanpa  pewarnaan  terlihat homogen  sehingga  bagian-bagian  testis  sulit untuk dibedakan. Potongan awetan testis mencit yang  dilakukan  pewarnaan  menggunakan  eosin giemsa terlihat bagian-bagian internal testis yaitu mediastinum,  tubuli  seminiferus,  septula  testis, tunika testis dan epididimis. Struktur mediastinum terlihat bewarna biru tua, sedangkan sel-sel  tubuli  seminiferus  terlihat  berwarna  biru pucat.  Menurut  Barcia  (2007),  pencampuran methylene  azure  dan  methylene  blue  dalam giemsa  yang  membentuk  eosin  berfungsi  untuk kestabilan hasil pewarnaan.

## Kesimpulan
Kombinasi larutan disinfektan kloroxylenol 1,2%  dan  povidon  iodin  2,5%  memiliki  daya hidup  yang  tinggi  dan  dapat  merusak  jaringan testis  sehingga  berpotensi  sebagai  bahan  aktif untuk  kastrasi  kimiawi  yang  telah  teruji  pada mencit sebagai model untuk hewan ternak. Jenis larutan  desinfektan  tunggal  dan  konsentrasi
tinggi  yang  digunakan  memiliki  daya  hidup mencit yang rendah meskipun dapat menyebabkan  kerusakan  struktur  testis  yang lebih  baik.  Kerusakan  jaringan  testis  akibat kastrasi  kimiawi  menyebabkan  hewan  menjadi steril atau infertil.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Kementrian  Riset,  Teknologi  dan  Pendidikan Tinggi  melalui  Hibah  Penelitian  Unggulan Perguruan  Tinggi  (3/E1/KP.PTNBH/2019)  atas sebagian pendanaan dalam penelitian ini. Penulis juga  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Rumah Sakit  Hewan  Pendidikan  Fakultas  Kedokteran Hewan  Universitas  IPB  dan  PT  Karindo Alkestron untuk alat ultrasonografi (SonoDop S- 3XV) yang digunakan dalam penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Abdurrahmat, A. S. 2014. Luka, peradangan, dan pemulihan. Jurnal Entropi . 9(1):729-738.
Astawan,  M.,  Wresdiyati,  T.,  Arief,  I.  I.,  dan Suhesti,  E.  2011.  Gambaran  hematologi tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  yang diinfeksi Escherichia  coli enteropatogenik dan diberikan probiotik. Media Peternakan . 34(1):3-17.
Auffray, C., Sieweke, M. H, and Geissmann, F. 2009.  Blood  monocytes:  development, heterogeneity,  and  relationship  with dendritic cells. Annual Review of Immunology . 27(1):669–692.
Awal, A. M., Rahman, M. M., Das, S. K., Siddiki, N.  H.,  Kurohmaru,  M.,  Bibin,  A.  B.,  and Hayashi, Y. 2004. Formalin affects the male
reproduction  of  black  bengal  goats  during prepubertal stage even at low concentration: In vivo study. Journal of Medicine Science . 4(1):84-89.
Azizah,  H.,  dan  Batan,  I.  W.  2018.  Laporan kasus:  Kistik  endometritis  pada  kucing persia. Indonesia  Medicus  Veterinus . 7(2):177-184.
Barcia,  J.  J.  2007.  The  giemsa  stain:  Its  history and  applications. International  Journal Surgical Pathology . 15(3):292-296. Behm, C. A., and Ovington, K. S. 2000. The role of  eosinophils  in  parasitic  helminth infections:  Insights  from  genetically modified  mice. Parasitology  Today . 16(5):202–209.
Botes,  P.,  Mzibuko,  A.,  and  Viljoen,  G.  2007. Animal  Production .  Afrika  Selatan  (RSA): Pearson Education.
Brahma, B., Sarkar, P., and Sarkar, U. 2016. P- chloro  meta  xylenol  (PCMX)  tolerant bacteria and their biodegradation.
International Journal of Advancs in Science Engineering and Technology. 4(2):88-91. Canpolat,  I.,  Gur,  S.,  Gunay,  C.,  Bulut,  S.,  and Eroksuz,  H.  2006.  An  evaluation  of  the outcome of bull castration by intra-testicular injection  of  ethanol  and  calcium  chloride. Revuede Medicine Veteriner . 8(9):420-225.
Colville,  T.,  and  Bassert,  J.  M.  2008. Clinical Anatomy  dan  Phisiology  for  Veterinary Technician . (US): Elsevier. D’Hiru. 2013. Live Blood Analysis . Jakarta (ID): PT Gramdedia Pustaka Utama.
Destri, W. 2013. Studi histopatologi respon organ testis  mencit  ( Mus  musculus )  terhadap potensi radioprotektif tanaman Rosela dalam radiasi  ionisasi  radiodiagnostik  [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor).
Guivarc,  M.,  Ordioni,  U.,  Ahmed,  H.  M.  A., Coben,  S.,  Catherine,  J.  H.,  and  Bukiet,  F. 2017.  Sodium  hypochlorite  accident:  A systematic review. Journal of Endodontics . 43(1):16-24.
Guyton,  A.  C.,  and  Hall,  J.  E.  2016. Fisiologi Kedokteraan .  Edisi  ke-12.  Jakarta  (ID): EGC.
Howe,  L.  M.  2006.  Surgical  methods  of contraception and sterilization.
Theriogenology . 66(3):500-509.
Ibrahim, A., Ali, M. M., Abou-Khalil, N. S., and Ali,  M.  F.  2016.  Evaluation  of  chemical castration  with  calcium  chloride  versus surgical castration in donkeys: Testosterone as  an  endpoint  marker. BioMed  Central Veterinary Research . 12(46):2-9. Izzaty, A., Dewi, N., dan Pratiwi, D. I. N. 2014. Ekstrak  haruan  ( Channa  striata )  secara efektif  menurunkan  jumlah  limfosit  fase inflamasi  dalam  penyembuhan  luka.
Dentofasial . 13(3):176-181.
Jasper,  R.,  Locatelli,  G.  O.,  Pilati,  C.,  and Locatelli, C. 2012. Evaluation of biochemical,  hematological  and  oxidative parameters in mice exposed to the herbicide glyphosate-roundup. Interdiscip  Toxicol . 5(3):133–140.
Kannan, G., Terrill, T. H., Kouakou, B., Gazal, O.  S.,  Gelaye,  S.,  Amoah,  E.  A.,  and Samake,  S.  2000.  Transportation  of  goat: effects on physiological stress responses and live weight loss: Journal of Animal Science . 78(6):1450-1457.
[Kementan]  Kementrian  Pertanian.  2014. Pedoman  Pembibitan  Sapi  Potong  yang Baik . Direktorat Pembibitan Ternak (ID). Kuswati, Ravenska, Hapsari, N., Yekti, A. P. A., dan  Susilawati  T.  2015.  Pengaruh  kastrasi terhadap performan produksi sapi persilangan Wagyu berdasarkan umur yang berbeda. Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan . 26(3):53-58.
Liesegang,  T.  J.  2002.  Corneal  endothelial cytotoxicity  of  diluted  povidone-iodine. American  Journal  of  Ophthalmology . 133(5):737.
Liu,  E.,  and  Fan,  J.  2017. Fundamentals  of Laboratory  Animal  Science .  Boca  Raton (US): CRC Press.
Malole, M. B. M, dan Pramono, C. S. U. 1989. Penggunaan  Hewan-Hewan  Percobaan  di Laboratorium . Bogor (ID): IPB Pr.
Marquardt, C., Matuschek, C., Bolke, E., Gerber, P. A., Peiper, M., Seydlittz-Kurzbach, J. V., Buhren,  B.  A.,  Griensven,  M.  V.,  Budach, W.,  Hassan,  M.,  Kukova,  G.,  Mota,  R., Hofer,  D.,  Orth,  K.,  and  Fleischmann,  W. 2010.  Evaluation  of  the  tissue  toxicity  of antiseptics  by  the  hen’s  egg  test  on  the chorioallantoic  membrane  (HETCAM).
European  Journal  of  Medical  Research . 15(2):204-209. Merck. 2007. The Merck/Merial Manual for Pet Health . Westford (US): Courier Westford. McDonnell,  G.,  and  Russell,  A.  D.  1999. Antiseptics  and  disinfectans:  Activity, action, and resistance.
Clinical Microbiology Reviews . 12(1):147-179.
Mehdipour, O., Kleier, D. J., and Averbach, R. E. 2007.  Anatomy  of  sodium  hypochlorite accidents. Compendium  of  Continuing Education in Dentistry . 28(10):544-550. Mohamed, A., and James, F. O. 2013. Chemical castration by a single bilateral intratesticular injection  of  chlorhexidine  gluconate  and cetrimide  in  bucks. Sokoto  Journal  of Veterinary Science . 11(1):62-65.
Moldave,  K.,  and  Rhodes,  L.  2013. Contraception dan Fertility Control in Dogs and  Cats .  Portland  (US):  Alliance  for
Conception in Cats and Dogs.
Munaf, S. 2009. Kumpulan Kuliah Farmakologi . Jakarta (ID): EGC.
Murray,  J.  K.,  Mosteller,  J.  R.,  Loberg,  J.  M.,
Anderssonn, M., and Benka, V. A. W. 2015. Methods of fertility control in cats. Journal of Feline Medicine and Surgery . 17(9):790- 799.
Neto, O. A., Gasperin, B. G., Rovani, M. T., Ilha, G.  F.,  Nobrega,  J.  E.,  Mondadori,  R.  G., Goncalves, P. B. D., and Antoniazzi, A. Q. 2014.  Intratesticular  hypertonic  sodium chloride  solution  treatment  as  a  method  of chemical castration in
cattle.
Theriogenology . 82(7):1007-1011.
Noviana, D., Aliambar, S. H., Ulum, M. F., dan
Siswandi, R. 2012. Diagnosis
Ultrasonografi  pada  Hewan  Kecil .  Bogor (ID): IPB Pr.
Oliveira,  F.  C.,  Ferreira,  C.  E.  R.,  Haas,  C.  S., Oliveira,  L.  G.,  Mondadori,  R.  G., Schneider, A., Rovani, M. T., Goncalves, P. B.  D.,  Vieira,  A.  D.,  Gasperin,  B.  G.,  and Lucia, T. 2016. Chemical castration in cattle with  intratesticular  injection  of  sodium chloride: Effects on stress and inflammatory markers. Theriogenology . 90(1):114-119. Opara, M. N., Udevi, N., and Okoli, I. C. 2010. Haematological  parameters  and  blood chemistry of apparently healthy west african dwarf (wad) goats in Owerri, South Eastern
Nigeria. New York Science Journal . 3(8):68- 72.
Praharani,  L.,  dan  Sianturi,  R.  S.  G.  2018. Tekanan  inbreeding  dan  alternatif  solusi pada ternak kerbau. Wartazoa . 28(1):1-12. Purnawijayanti, H. A. 2001. Sanitasi Higiene dan Keselamatan  Kerja  dalam  Pengolahan Makanan . Yogyakarta (ID): Kanisius. Queiros, P., Santos, E., Apostolo, J., Cardoso, D., Cunha,  M.,  and  Rodrigues,  M.  2014.  The effectiveness  of  cleansing  solutions  for wound  treatment:  A  systematic  review.
Journal of Biomedical Informatics . 12(10):121-151.
Ratnawati, D., Widyaningrum, Y., dan Sulistya,
T.  A.  2015.  Perlakuan  excercise  pada  sapi jantan  PO  terhadap  peningkatan  kualitas semen. Prosiding  Seminar  Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner . Bogor (ID): Puslitbangnak.
Restel, T. I., Porfirio, L. C., Souza, A. S. D., and Silva, I. S. 2014. Hematology of Swiss mice (Mus  musculus)  of  both  genders  and different  ages. Acta  Cirurgica  Brasileira . 29(5):306-312.
Sakamoto,  H.,  Saito,  K.,  Oohta,  M.,  Inoe,  K., Ogawa, Y., and Yoshida, H. 2007. Testicular volume  measurement:  Comparison  of ultrasonography,  orchidometry,  and  water dispalacement. Urology . 69(1):152-157.
Satria, M., Siregar, T. N., Sayuti, M., Melia, J., Hamdan,  Rosmaidar,  dan  Harris,  A.  2016. Estimasi jumlah anak yang lahir berdasarkan pemeriksaan  ultrasonografi  transcutaneus pada  kambing  kacang  ( Capra sp.). Jurnal Medika Veterinaria . 10(2):77-80. Suckow, M. A., Danneman, P., and Brayton, C.
2001. The  Laboratory  Mouse .  New  York (US): CRC.
Susilorini, T. E., Sawitri, M. E., dan Maharlien. 2007. Budi  Daya  22  Ternak  Potensial . Bogor (ID): Penebar Swadaya.
Talib,  C.,  Matondang,  R.  H.,  dan  Herawati,  T. 2011.  Model  pembibitan  kambing  dan domba  di  Indonesia. Prosiding  Workshop Nasional  Diversifikasi  Pangan  Daging Ruminansia Kecil . 55-63
Ulum,  M.  F.,  Paramitha,  D.,  Sariningrum,  A., Maharani, A. D. K., Tumbelaka, L. I. T. A., dan Noviana, D. 2017. Chemical castration
using iron (III) chloride hexahydrate. Jurnal Veteriner . 18(3):360-368.
Utami, S. P., Mulyawati, E., dan Soebandi, D. H.
2016.  Perbandingan  daya  antibakteri desinfektan instrumen preparasi saluran akar natrium hipoklorit 5.25%, glutaraldehid 2%, dan desinfektan berbahan dasar glutaraldehid  terhadap  Bacillus  subtilis. Jurnal Kedokteran Gigi . 7(2):151-156.
Weiss, D. J., and Wardrop, K. J. 2010. Schalm’s Veteinary Hematology. Ames (US): Wiley- Blackwell.
Widyastuti, D. A. 2013. Profil darah tikus putih wistar  pada  kondisi  subkronis  pemberian natrium  nitrit. Journal  of  Veterinary Science . 31(2):201-215.