Menara Perkebunan 2009, 77 (1),  13-22.
Produksi  IAA oleh Rhizobium sp. dalam medium sintetik dan serum lateks dengan suplementasi triptofan
Indole acetic acid production by Rhizobium sp. on synthetic and latex serum media with tryptophan supplementation
SUHARYANTO 1) , TRI-PANJI 1) & GUSNANIAR 2)
1) Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan, Bogor 16151, Indonesia
2 )Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia

## Summary
The utilization of latex effluent to produce bioproduct  like  indole  acetic  acid  (IAA)  will reduce  amount  of  effluent,  as  well  as  effluent processing  cost  and  produce  an  economically profitable  product.  IAA  could  be  produced  by some rhizosphere microbes that could grow on latex  effluent  using  L-tryptophan  (Trp)    as  its precursor.  The  aim  of  this  research  is  to determine  potential  growth  and  capability  of IAA production by Rhizobium spp. R6 and KT on synthetic and latex serum media supplemented  with  pure  Trp  and  with  litter poultry manure as a cheap source of Trp. The research covered examination of IAA producing Rhizobia using  liquid  synthetic media  supplemented  with        0.07  g/L  and 0.14  g/L  Trp.  The  potential Rhizobium sp.  in producing  IAA  was  then  inoculated  into  latex serum  media  supplemented  with  pure  Trp  and Trp  from  litter  poultry  manure.  Result  of  the research  showed  that  the  highest  IAA production  was  reached  as  much  as  51.08 µg/mL  in  synthetic  media  supplemented  with 0.14  g/L  Trp  inoculated  with Rhizobium sp. R6 .  IAA  could  be  produced  as  much  as  6.63 µg/mL  in  pasteurized  undiluted  latex  serum media  supplemented  with  0.14  g/L  Trp.  Using latex serum media supplemented with Trp from litter  poultry  manure  showed  that Rhizobium sp. R6 could produce 11.91 µg/mL. Supplementation  of  pure  synthetic  Trp  in  IAA
production  could  be  replaced  with  litter poultry manure as a cheap source of  Trp.
[ Key word : IAA, Rhizobium sp. , latex effluent, litter- poultry manure ]

## Ringkasan
Pemanfaatan limbah lateks menjadi produk  bio  seperti  asam  indol  asetat  (IAA), dapat  mengurangi  volume  limbah,  menekan biaya  pengolahan  limbah,  serta  menghasilkan produk  yang  bernilai  ekonomis.    IAA  dapat dihasilkan  oleh  beberapa  mikroba  rhizosfer yang  mampu  tumbuh  dalam  limbah  lateks dengan  L-triptofan  (Trp)    sebagai  prekursor- nya.  Penelitian  bertujuan  menetapkan  potensi pertumbuhan dan produksi IAA oleh Rhizobium spp.  R6 dan KT  dalam  medium sintetik dan  serum lateks yang disuplementasi Trp  sintetik  dan  kotoran  ayam  sebagai sumber Trp  murah.  Isolat  potensial  dalam  produksi IAA  kemudian  ditumbuhkan  dalam  medium serum  lateks  pekat  yang  disuplementasi  Trp murni  dan  Trp  dari  kotoran  ayam.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  produksi  IAA tertinggi diperoleh dalam medium sintetik oleh Rhizobium sp. R6, sebesar 51,08 µg/mL.  IAA dapat  diproduksi  sebesar  6,63  µg/mL  dalam medium  serum  lateks  100%  +  Trp  0,14  g/L yang  dipasteurisasi.  Dalam  medium  serum lateks  yang  disuplementasi  Trp  dari  kotoran
Suharyanto et al.
ayam,produksi  IAA Rhizobium sp.  R6  dapat mencapai  11,91  µg/mL.  Suplementasi  Trp murni  dalam  produksi  IAA  dapat  digantikan dengan kotoran ayam sebagai sumber Trp yang murah.

## Pendahuluan
Komoditas lateks pekat akhir-akhir ini makin  diminati  seiring  dengan  mening- katnya penggunaan sarung tangan sebagai pelindung  penyakit  infeksi  (HIV/AIDS, flu  burung  dan  flu  babi)  dan  produk industri  celup  lainnya  (benang  karet, karpet,  lateks  busa).  Pada  harga  normal produk  lateks  pekat  mendapat  premi  150 cent  US$/kg  di  atas  RSS  1.  Meskipun produksi  lateks  pekat  ini  relatif  kecil, limbah  cair  yang  dihasilkan  merupakan pencemar  potensial  dengan  nilai  COD tinggi    yaitu  lebih  dari  25.000  ppm  serta kandungan  N  total  di  atas  4000  ppm (Darussamin et  al .,  1988).  Teknologi pengolahan  limbah  lateks  pekat  di lapangan  saat  ini  umumnya  dirancang pada  akhir  proses  ( end  of  pipe  treatment ) dan  belum  menerapkan  prinsip  4R ( reduce, reuse, recyling & recovery ) untuk mengintegrasikan  pemanfaatannya  secara efektif menghasilkan produk yang bernilai ekonomis.  Limbah  lateks  pekat  kaya protein,  lipid,  karbohidrat  dan  mineral seperti  Mg,  P,  K,  Ca  (Jacob et  al .,  1993). Protein  hidrolisat  dalam  serum  lateks diketahui dapat digunakan sebagai sumber N  organik  pada  medium  tumbuh  mikro- alga Spirulina untuk produksi  asam gamma  linolenat  (Tri-Panji et  al .,  1996) dan  karotenoid  (Tri-Panji  &  Suharyanto, 2000).  Dilihat  dari  komposisi  kimianya, limbah   tersebut   juga  berpotensi  untuk medium tumbuh mikroba rizosfer seperti
Rhizobium sp. yang mampu menghasilkan fitohormon asam indol asetat (IAA).
Prana  (1997)  mengemukakan  bahwa terdapat kelompok
Rhizobium sp. potensial penghasil IAA. Yao et al . (2008) melaporkan bahwa sejumlah isolat Rhizobium sp.  yang  dikoleksi    di  China Barat  Laut  mampu    menghasilkan  IAA sebesar  0,2-5,1  mg/mL  dan  isolat  terbaik mampu  meningkatkan  pertumbuhan  per- akaran  dan  batang  gandum  dan  oat. Pemanfaatan limbah lateks untuk produksi IAA  akan  memiliki  keuntungan  ganda, yaitu  meningkatkan  nilai  tambah  limbah, mengurangi  pencemaran  dan  menekan biaya  pengolahan  limbah  serta  menye- diakan pupuk biorganik.
Prekursor  utama  biosintesis  IAA  oleh Rhizobium adalah  L-triptofan  (Trp)  dan biosintesisnya  dapat  berlangsung  melalui tiga  macam  jalur  yaitu  indol-3-asetamida, triptamin atau indol-3-asam piruvat (Patten  &  Glick,  1996;  Thenius et  al .,
2004).  Menurut  Arkhipchenko et  al.
(2006)  di  dalam  tanah  dan  eksudat  akar tanaman  terdapat  Trp  dalam  konsentrasi kecil  yang  dapat  digunakan  mikro- organisme  membentuk  auksin  tersebut. Oleh  karena itu  penambahan  Trp  eksogen dapat  meningkatkan  biosintesis  IAA dalam  tanah  (Ahmad et  al. ,  2005).  Salah satu  sumber  Trp  eksogen  yang  potensial dan  murah  adalah  pupuk  kandang  dari kotoran  ayam  karena  hewan  tersebut menunjukkan  tingkat  asimilasi  Trp  yang rendah  (Arkhipchenko et  al., 2006). Penelitian  bertujuan  menetapkan  kemam- puan Rhizobium sp.    menghasilkan  IAA dalam  medium  sintetik  dan  serum  lateks yang ditambah Trp murni dan dari kotoran ayam sebagai sumber Trp murah.
Produksi  IAA oleh Rhizobium sp. dalam medium sintetik dan…..

## Bahan dan Metode
Rhizobium sp. dan medium fermentasi
Rhizobium sp. R6 dan Rhizobium sp.
KT  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini merupakan  isolat  asli  Indonesia  koleksi Balai  Penelitian  Bioteknologi  Perkebunan Indonesia    Isolat  KT  diisolasi  dari  bintil kacang  tanah  di  Bogor  sedangkan  isolat R6  dari  bintil Calopogonium  caeruleum asal Sumatera Utara. Isolat dipelihara pada agar  miring Yeast  Extract  Mannitol
(YEM)  dengan  komposisi  K 2 HPO 4 0,5  g; MgSO 4 .7H 2 O  0,2  g;  NaCl  0,1  g;  manitol 10 g; yeast extract 1 g; agar 20 g; akuades 1.000  mL.    Medium  fermentasi  berupa YEM  atau  serum  lateks  yang  disuple- mentasi dengan Trp 0,07 g/L dan 0,14 g/L. Serum  lateks  adalah  hasil  penggumpalan spontan  lateks  skim  yang  diperoleh  dari Kebun  Cikumpay  PTP  Nusantara  VIII, Jawa  Barat.    Serbuk  pupuk  kandang kotoran  ayam  diperoleh  dari  peternakan ayam pedaging di Bogor.

## Persiapan inokulum
Kultur Rhizobium sp. dalam  agar miring YEM umur 5-6 hari disuspensikan dengan  5  mL  aquades  steril  dan  diinoku- lasikan dalam medium cair YEM (25 mL). Kultur  diinkubasikan  pada  suhu  ruang (27-30ºC),  digoyang  dengan shaker pada kecepatan  75 rpm selama dua  hari  hingga diperoleh kepadatan populasi sekitar 2-5 x 10 10 koloni/mL.    Kultur  tersebut  selanjut- nya  digunakan  sebagai  sumber  inokulum yaitu  sebanyak  5%  (v/v)  dari  medium fermentasi.

## Produksi IAA dalam medium sintetik
Pertumbuhan  dan  produksi  IAA  oleh Rhizobium sp.  R6  dan  KT  diuji  dalam medium  fermentasi  YEM  (100  mL). Medium  diinokulasi  dengan  suspensi bakteri  (5  mL),  diinkubasikan  pada  suhu ruang (27-30ºC) sambil diguncang dengan shaker pada kecepatan 75 rpm selama 120 jam.  Percobaan  dilakukan  dengan  tiga ulangan. Kultur lalu diamati pertumbuhan- nya dengan mengukur densitas optik pada panjang  gelombang  660  nm  pada  interval waktu  0,  12,  24,  36,  48,  60,  72,  96, 120  jam.  Pada  saat  bersamaan,  produksi IAA  dari  kultur  tersebut  diperiksa.  Kultur disentrifugasi  pada  kecepatan  4.000  rpm selama  15  menit  kemudian  dipisahkan kultur filtratnya. Penetapan IAA dilakukan dengan  reagen  Salkowski  (Fletcher  & Saul, 1963).    Kultur  filtrat  bakteri  (1 mL) ditambahkan  4  mL  reagen  Salkowski. Selanjutnya divorteks dan didiamkan pada suhu  ruang  selama  20  menit  untuk pengembangan  warna.  Pengukuran  IAA dilakukan  dengan  spektrofotometer  pada panjang  gelombang  535  nm  dan  dihitung dengan larutan standar IAA murni.

## Produksi IAA dalam medium serum lateks dengan suplementasi Trp murni
Pertumbuhan  dan  produksi  IAA  oleh Rhizobium sp.  R6  diuji  dalam  medium serum lateks (100 mL) yang disubstitusi 0, 10,  25,  dan  50%  (v/v)  dengan  medium sintetik  YEM.  Untuk  mengantisipasi kemungkinan kerusakan dan pencokelatan medium  karena  panas  selama  sterilisasi dengan    autoklaf  (121 o C,   1,2    kg/cm 2 )
Suharyanto et al.
selama 15 menit,  medium   serum   lateks juga  disterilisasi  dengan  cara  pasteurisasi (90 o C  selama  30  menit)  dan  bahan  kimia Clorox  (NaOCl)  5  dan  25  ppm.  Untuk menghilangkan  sisa  ion  klorin  medium diaerasi  dengan  udara  steril  selama  satu jam.  Kultur  lalu  diamati  pertumbuhannya pada suhu ruang dan dengan  pengocokan menggunakan shaker kecepatan  75  rpm. Pertumbuhan  diukur  dengan  spektro- fotometer  pada  panjang  gelombang  660 nm pada interval waktu inkubasi 0, 24, 48, 72  jam.  Produksi  IAA  diamati  seperti percobaan dalam medium sintetik.

## Produksi IAA dalam medium serum lateks dengan suplementasi kotoran ayam
Kotoran ayam yang digunakan (180 g) diasumsikan mengandung
sekitar 460 µg/g Trp (Arkhipchenko et al., 2006), diekstraksi  dingin  dengan  serum  lateks pekat  (600  mL)  sampai  mencapai  tingkat batas  kelarutan  penuh,  sehingga diperoleh Trp  mendekati  0,14  g/L.  Untuk  mem- peroleh  Trp  0,07  g/L  kotoran  ayam diekstraksi  separuh  dari  batas  kelarutan penuh.  Medium  diinokulasi dengan  kultur Rhizobium sp. R6 sebanyak 5% inokulum. Untuk  menghilangkan  kekeruhan  filtrat kultur  yang  berasal  dari  kotoran  ayam, filtrat  ditambah  dengan  larutan trichloro acetic acid (TCA) 5% 1:1 (v/v), kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 4000 rpm selama  15  menit.  Filtrat  jernih  digunakan untuk analisis kadar IAA. Kultur diinkubasikan  pada  suhu  ruang  dengan pengocokan menggunakan
shaker kecepatan  75  rpm.  Pengamatan  dilakukan dalam interval 0, 24, 48, dan 72 jam.

## Hasil dan Pembahasan
Uji pertumbuhan dan produksi IAA dalam medium sintetik
Secara  umum,  peningkatan  jumlah Trp  mampu  meningkatkan  pertumbuhan Rhizobium sp. (Gambar  1a  &  1b)  karena Trp  merupakan  sumber  nitrogen  yang mudah  diserap  oleh  mikroorganisme. Triptofan  juga  dapat  digunakan  sebagai sumber  karbon  dan  sumber  energi  yang akan  diurai  menjadi  senyawa  yang  masuk dalam beberapa jalur metabolisme karbohidrat  (Moat  &  John,  1995). Rhizobium sp.  R6  tumbuh  lebih  cepat dibandingkan Rhizobium sp.  KT.  Setelah inkubasi 120 jam, pertumbuhan
Rhizobium sp.  R6  masih  menunjukkan kecenderungan  meningkat  (data  tidak disertakan). Densitas optik tertinggi untuk Rhizobium sp.  R6  0,523  dicapai  pada inkubasi  selama  120  jam  (Trp  0,14  g/L) sedangkan  untuk Rhizobium sp.  KT  yaitu 0,457  pada  inkubasi  selama  72  jam  (Trp 0,14 g/L).
Produksi  IAA  (Gambar  1a  &  1b) cenderung  meningkat  sejalan  dengan pertumbuhan  sel Rhizobium sp.  Produksi IAA  mulai  tampak  pada  fase  lag  dengan konsentrasi  yang  kecil  dan  mencapai puncak  pada  inkubasi  selama  72-96  jam pada  isolat  R6  dengan  suplementasi  Trp 0,14  g/L  dan  0,07  g/L  dan  96  jam  pada isolat  KT  dengan  suplemetasi  Trp 0,14  g/L.  Produksi  IAA  pada  isolat  KT dengan  suplementasi  0,07  g/L  sampai dengan  inkubasi  selama  96  jam  masih belum  mencapai  puncak.    Spaepen et  al . (2007)  mengemukakan  bahwa  produksi tertinggi    IAA  dicapai  pada  akhir   fase
Produksi  IAA oleh Rhizobium sp. dalam medium sintetik dan…..
Gambar 1.  Pertumbuhan dan produksi IAA oleh (a) Rhizobium sp. R6 dan (b) Rhizobium sp. KT pada medium YEM + Trp 0,07 g/L dan 0,14 g/L.
Figure 1.   The growth and IAA production by (a) Rhizobium sp. R6  and (b) Rhizobium sp.KT on YEM medium + Trp 0.07 g/L dan 0.14 g/L.
logaritmik  dan  awal  fase  stasioner.  Pada fase  tersebut,  bakteri  akan  beradaptasi dengan  cekaman  lingkungan  medium berupa  berkurangnya  jumlah  karbon  dan pH  medium  yang  semakin  asam  sehingga pertumbuhan  bakteri  terhambat.  Kondisi tersebut  mengaktifkan  gen-gen  tertentu untuk  mengkatalisis  senyawa  intermediet potensial  menjadi  IAA.  Penambahan prekusor  Trp  yang  lebih  tinggi  mening- katkan  pertumbuhan  dan  produksi    IAA. Suplementasi  Trp  0,14  g/L  menghasilkan IAA  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan suplementasi Trp 0,07 g/L. Hal ini terlihat  dari  laju  pertumbuhan  dan  pro-
duksi IAA yang tinggi pada Rhizobium sp. R6. Rhizobium sp.  R6  menghasilkan  IAA yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan Rhizobium sp.  KT.  Secara  keseluruhan kisaran  konsentrasi  IAA  yang  dihasilkan dengan  suplementasi  Trp  0,07  g/L  adalah 1,36-16,88  µg/mL  sedangkan  suplemen- tasi Trp 0,14 g/L adalah 2,63- 51,08  µg/mL.  Perbedaan  kemampuan produksi  IAA  antara  isolat  R6  dan  KT mungkin  disebabkan  oleh  asal  isolat. Isolat  R6  menghasilkan  IAA  lebih  tinggi (51,08  µg/mL)  dibandingkan  dengan Rhizobium sp. yang diisolasi oleh Basu & Ghosh (2001) dari  bintil  akar Roystonea
Waktu inkubasi (jam) Incubation time (hour) (a) D en si ta s o p ti k ( O p ti ca l d en si ty ) 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 24 48 72 96 120 0 0 10 20 30 40 50 60 IA A µ g /m L

## Densitas optik dengan suplementasi L-Trp 0,07
Optical density with L-Trp 0.07 supplementation
Densitas optik dengan suplementasi L-Trp 0,14 Optical density with L-Trp 0.14 supplementation
Produksi IAA dengan suplementasi L-Trp 0,14 g/L IAA production with L-Trp 0.14 g/L supplementation
Produksi IAA dengan suplementasi L-Trp 0,07 g/L
IAA production with L-Trp 0.07 g/L supplementation D en si ta s o p ti k ( O p ti ca l d en si ty ) (b) Waktu inkubasi (jam) Incubation time (hour) 0 24 48 72 96 120 0 0 IA A µ g /m L 10 20 30 40 50 60 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
Suharyanto et al.
regia yaitu  menghasilkan  IAA  tertinggi 45,6  µg/mL  pada  medium  basal  yang mengandung  3  g/L  Trp.  Isolat  R6 selanjutnya dipilih untuk percobaan produksi  IAA  dengan  medium  fermentasi berupa  serum  lateks  pekat  +  YEM  dan berbagai cara sterilisasi.
Uji pertumbuhan dan produksi IAA dalam medium serum lateks
Rhizobium sp.  R6  tumbuh baik  pada medium  serum  lateks  dengan  perlakuan sterilisasi  menggunakan  autoklaf  dan perlakuan pasteurisasi (Gambar 2), sedangkan disinfeksi menggunakan clorox 5 dan 25 ppm menyebabkan pertumbuhan- nya  tertekan  karena  kemungkinan  di dalam medium masih terdapat sisa ion Cl - yang  toksik. Rhizobium sp.  R6    tumbuh baik  dalam  medium  100%  lateks  pekat baik  yang  disterilisasi  maupun  dipas- teurisasi.  Serum  lateks  yang  disterilisasi dengan    autoklaf   tidak   mengalami pen- cokelatan
( browning ). Hal ini kemungkinan  disebabkan  limbah  lateks
Gambar 2.  Pertumbuhan Rhizobium sp. R6  dalam  medium a) serum lateks 100% + Trp 0,14 g/L ; b) serum lateks 90 % + YEM 10% ; c) serum lateks 75 % + YEM 25 % ; d) serum lateks 50 % + YEM 50 %
Figure 2.  Growth of Rhizobium sp. R6 in media a) latex serum 100% + Trp 0.14 g/L ; b) latex serum
90 % + YEM 10% ; c) latex serum 75 % + YEM 25 % ; d) latex serum 50 % + YEM 50 %. (a) D en si ta s o p ti k O p ti ca l d e n si ty Waktu inkubasi (jam) Incubation time (hour) 0 2 4 7 0 0, 2 0, 4 0, 6 0, 8 (b) 0 2 4 7 0 0, 2 0, 4 0, 6 0, 8 D en si ta s o p ti k O p ti ca l d en si ty Waktu inkubasi (jam) Incubation time (hour) 0 0, 2 0 ,4 0 ,6 0, 8 0 2 4 7 Waktu inkubasi (jam) Incubation time (hour) D en si ta s o p ti k O p ti ca l d en si ty (c) (d) 0 ,2 0, 4 0, 6 0, 8 0 2 4 7 Waktu inkubasi (jam) Incubation time (hour) D en si ta s o p ti k O p ti ca l d en si ty 0 Pasteurisasi ( Pasteurization )
Clorox 25 ppm Sterilisasi ( Sterilization )
Clorox 5 ppm
Produksi  IAA oleh Rhizobium sp. dalam medium sintetik dan…..
yang digunakan adalah limbah lateks yang menggumpal alami dan tidak digumpalkan dengan  asam  sulfat.  Hal  ini  berarti  dalam medium  serum  lateks  cukup  tersedia nutrien  dan  pH  yang  sesuai  untuk menunjang pertumbuhan Rhizobium sp. Rhizobium sp.  R6  mampu  mem- produksi IAA dalam medium serum lateks 100%.  Secara  umum,  produksi  IAA  oleh Rhizobium sp.  R6  lebih  tinggi  dalam medium serum lateks pekat yang disterilisasi  dan  dipasteurisasi  dibanding- kan  dengan  disinfeksi  dengan  pemberian clorox  5 dan 25  ppm  (Gambar 3). Hal  ini sesuai dengan laju pertumbuhan Rhizobium sp.  R6 pada medium  serum lateks.  Dalam  medium  serum  lateks  + clorox  5  dan  25  ppm, Rhizobium sp.  R6
tidak  dapat  tumbuh  dengan  optimal,  yang mungkin  disebabkan  dalam  medium serum  lateks    masih  mengandung  residu ion  Cl - yang  toksik  sehingga  biosintesis IAA  juga  terhambat.  Produksi  IAA tertinggi  dicapai  pada  jam  ke  24    dalam medium  100  %  serum  lateks  +  Trp 0,14  g/L  dengan  perlakuan  pasteurisasi (6,63 µg/mL) dan sterilisasi (3,83 µg/mL). Produksi  IAA  masih  terdeteksi  selama  72 jam  inkubasi.    Produksi  IAA  lebih  stabil dengan  perlakuan  sterilisasi  daripada pasteurisasi.  Hal  ini  dapat  disebabkan karena  pasteurisasi  hanya  mematikan  sel vegetatif  bakteri  sehingga  spora  bakteri lain  masih  bisa  tumbuh  dan  kemungkinan dapat mengganggu pertumbuhan Rhizobium sp. R6 .
Gambar 3.   Produksi  IAA  oleh Rhizobium sp.  R6    yang  ditumbuhkan  dalam    medium  serum  lateks pekat dengan beberapa perlakuan sterilisasi
Figure 3.  The IAA production by Rhizobium sp. R6  in latex serum medium with several sterilization treatments
Waktu inkubasi (jam)  ( Incubation time) ( hour ) 7 6 5 4 3 2 1 0 K o n se n tra si IA A IA A C o n ce n tr a ti o n µ g /m L 24 48 72 Sterilisasi ( Sterilization ) Pateurisasi (Pasteurization ) Clorox 5 ppm
Clorox 25 ppm
Suharyanto et al.

## Produksi IAA dalam medium serum lateks dengan suplementasi Trp kotoran ayam
Rhizobium sp.  R6  mampu  meng- hasilkan IAA dalam medium serum lateks 100%  yang  disuplementasi  kotoran  ayam (Tabel  1).  Namun  produksi  IAA  dalam medium  sintetik  +  Trp  murni  lebih  tinggi dari  pada  dalam  medium  lateks  pekat  + kotoran  ayam.  Hal  tersebut  karena medium  sintetik  memiliki  komposisi nutrisi  yang  lebih  kaya  dan  dalam  bentuk tersedia sehingga menunjang pertumbuhan dan  produksi  IAA. Rhizobium sp.  R6
memproduksi IAA tertinggi pada inkubasi selama 48 jam yaitu mencapai
11,91 µg/mL.
Secara  umum,  produksi  IAA  dalam medium serum lateks yang disuplementasi kotoran  ayam  sebagai  sumber  Trp  pada batas  kelarutan  penuh  (F)  lebih  tinggi dibandingkan dengan suplementasi kotoran  ayam  setengah  batas  kelarutan (1/2F).  Hal  ini  dapat  dimengerti  karena penambahan  Trp  ke  dalam  medium  akan mempertinggi  produksi  IAA.  Kotoran ayam    terbukti  dapat  digunakan  sebagai sumber  Trp  dan  dapat  menggantikan
Tabel 1.    Produksi IAA oleh Rhizobium sp. R6  dalam medium  serum lateks dengan suplementasi Trp dari kotoran ayam.
Table  1.    The  IAA  production  of Rhizobium sp.  R6  on  latex  serum  medium  with  Trp  supplementation from litter poultry manure.
Lama inkubasi  jam ke- Incubation  period  hour Medium lateks yang disuplementasi dengan Latex medium supplemented with Produksi IAA IAA production (µg/mL) 0 PK (F) 0,00 PK (1/2 F) 0,00 3 PK (F) 5,47 ± 1,11 PK (1/2 F) 2,78 ± 0,28 6 PK (F) 9,94 ± 2,73 PK (1/2 F) 7,29 ± 1,08 24 PK (F) 9,92 ± 0,84 PK (1/2 F) 7,42 ± 0,40 48 PK (F) 11,91 ± 1,11 PK (1/2 F 4,34 ± 0,93 72 PK (F) 7,77 ± 0,15 PK (1/2 F) 7,05 ± 1,92 96 PK (F) 5,61 ± 0,31 PK (1/2 F) 1,49 ± 1,73 72 Trp 0,14 g/L 1,51 ± 0,88 Keterangan/ Note : PK  : kotoran ayam ( litter poultry manure)
F : batas kelarutan penuh ( absolute solubility limit) ½ F : setengah batas kelarutan penuh ( half solubility limit)
Produksi  IAA oleh Rhizobium sp. dalam medium sintetik dan…..
Trp sintetik untuk produksi IAA. Produksi IAA  dalam  medium  serum  lateks  yang disuplementasi dengan kotoran ayam lebih tinggi  nilainya  dibandingkan  dengan produksi IAA dalam medium serum lateks +  Trp  0,14  g/L  yaitu  1,51  µg/mL.  Hal tersebut  kemungkinan  dalam  kotoran ayam  terdapat  sisa  nutrisi  dari  makanan ayam yang dapat membantu pertumbuhan. Kandungan  IAA  yang  diproduksi  oleh bakteri  tanah  dalam  jumlah  berlebihan dapat  menghambat  pertumbuhan  paprika ( Capsicum  annuum )  (Husin  &  Saraswati, 2003).  Namun, IAA yang dihasilkan oleh Rhizobium  meliloti dalam  tanah  dapat rusak  oleh aktivitas  mikroba (Mino et  al .,
1975).  Produksi  IAA  oleh Rhizobium merupakan fungsi tambahan  pada formula pupuk  hayati  untuk  tanaman  leguminosa.
Oleh  karena  itu  aplikasi  IAA  dalam formula  pupuk  hayati  dengan  bahan  aktif Rhizobium sp.  perlu  diuji  pada  tanaman leguminosa penutup tanah maupun leguminosa  yang  lain  di  lapang  pada berbagai lokasi.
Prospek  produksi  IAA  dengan  meng- gunakan  limbah  lateks  pekat  cukup  baik mengingat  ketersediaan  bahan  baku  yang melimpah, yaitu sebanding dengan produksi lateks pekat dan pemanfaatannya dapat  langsung  di  kebun  yang  bersang- kutan  sehingga  biaya  transportasi  relatif murah.

## Kesimpulan
Rhizobium sp. R6 memiliki kemampuan  yang  tinggi  (51,08  µg/mL) dalam  memproduksi  IAA  pada  medium sintetik  cair  dengan  penambahan  Trp murni  selama  72  jam.  Isolat  tersebut  juga mampu menghasilkan IAA pada   medium
serum  lateks  100%  yang  disuplementasi kotoran  ayam  sebagai  sumber  Trp  yang murah  yaitu  mencapai  11,91  µg/mL selama 48 jam.

## Daftar Pustaka
Ahmad  F,  I.Ahmad,  &  M.S.  Khan  (2005). Indole  acetic  acid  production  by  the indigenous  isolates  of Azotobacter and Pseudomonas fluorescent in the presence and absence of tryptophan. Turk. J. Biol.,
29, 29-34.
Arkhipchenko,  A,  A.I.  Shaposhnikov  & L.V.  Kravchenko  (2006).  Tryptophan concentration  of  animal  wastes  and organic fertilizer. Appl. Soil Ecology, 34
(1), 62-64.  www.sciencedirect.com
Basu, P.S. & A.C. Ghosh (2001). Production of indole  acetic  acid  in  culture  by  a Rhizobium species from the root nodules of  a  monocotyledonous  tree, Roystonea regia . Acta Biotechnol., 21 (1), 65 – 72.
Darussamin,  A.,  Suharyanto,  A.  M.  Siregar  & R.  Haloho  (1988).  Penggunaan  bakteri untuk  menangani  limbah  pabrik  lateks pekat. Dalam; Pros. Sem. Nas. Pengendalian Limbah Minyak Sawit dan Karet 1988, p. 92-106.
Fletcher  R.  A. &  Z.  Saul  (1963).  Quantitative spectrophotometric determination of indolyl-3-acetic acid. Nature, 199, 903 –
904.
Husin,  E  &  R.  Saraswaati  (2003).  Effect  of IAA-producing bacteria on the growth of hot pepper. J. Mikrobiol. Ind., 8 (1), 22-
26.
Jacob,  J.L.,  J.d’Auzac  &  J.C.  Prevot  (1993). The  composition  of  natural  latex Hevea brasiliensis.  Clin. Rev. Allergy, 11 , 325-
337.

## Suharyanto et al.
Mino,  Y.,  N.  Iriuda  &  T.  Harada  (1975). Tryptophan  and  indole-3-acetic  acid metabolism  by Rhizobium  meliloti.  J. Japan Grassi. Sci ., 21 (2), 86-90.
Moat,  A.G  &  W.F  John  (1995). Microbial Physiology .  Third  Ed.  New  York,  John Wiley & Sons p, 305-306, 452-453.
Prana,  T.K  (1997).  Presuppotion  of  genotype grouping  of  Rhizobium  associated  with two  tropical  leguminous  trees  based  on their  IAA  production  &  antibiotic resistance. Annales  Bogorienses, 5 (1), 39-41.
Patten,  C.L.  &  B.  R.  Glick  (1996).  Bacterial biosynthesis of indole-3-acetic acid. Can J. Microbiol ., 42 , 207-220.
Spaepen  S,  Venderleyden  J.  &  Remans  R. (2007).  Indole-3-acetic  acid  in  microbial and microorganism-plant signaling. FEMS Microbiol. Rev., 31(4), 425-448.
Thenius, M., H. Kobayashi, W. J. Broughton & E.  Prinsen  (2004).    Flavonoids,  NodD1,
NodD2,  and  Nod-Box  NB15  modulate expression  of  the  y4wEFG  locus  that  is required for indole-3-acetic acid synthesis  in Rhizobium sp.  strain NGR234. Mol. Plant-Microbe
Interactions, 17 (10), 1153-1161.
Tri-Panji, S.S. Achmadi & E. Tjahjadarmawan
(1996).  Produksi  asam  γ-linolenat  dari ganggang  mikro Spirulina  platensis menggunakan  limbah  lateks  pekat. Menara Perkebunan, 64 (1), 64-44.
Tri-Panji  &  Suharyanto  (2000).  Optimization media from low-cost nutrient sources for growing Spirulina platensis and carotenoid production. Menara
Perkebunan, 68 (1), 64-44.
Yao,  T.,  S.  Yasmin  &  F.Y.  Hafeez  (2008). Potential  role  of  rhizobacteria  isolated from  Northwestern  China. J.  Agric.  Sci .
146 , 49-56