# Korespondensi:  Jurusan  Akuakultur,  Universitas  Bangka Belitung.  Jl.  Kampus  Terpadu  UBB,  Kel.  Balunijuk,
Kec.  Merawang,  Balun  Ijuk,  Merawang,  Kab.  Bangka,
Kepulauan  Bangka  Belitung  33172 Tel.  +  62  811  7178769 E-mail:  evaintegral@gmail.com
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jra
EFEKTIVITAS EKSTRAK DAUN CIPLUKAN (Physalis angulata L.)

## TERHADAP SISTEM KEKEBALAN TUBUH  IKAN NILA (Oreochromis niloticus)
Yusrika Octarina, Eva Prasetiyono # , Dwi Febrianti, dan Robin
Jurusan Akuakultur, Universitas  Bangka Belitung Jl. Kampus Terpadu UBB, Kel. Balunijuk, Kec. Merawang, Balun Ijuk, Merawang, Kab. Bangka, Kepulauan Bangka Belitung 33172
(Naskah diterima: 11 Mei 2018; Revisi final: 24 Oktober 2018; Disetujui publikasi: 25 Oktober 2018)

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efektivitas  ekstrak  daun  ciplukan  (Physalis  angulata)  sebagai imunostimulan dalam meningkatkan jumlah leukosit dan aktivitas fagositosis pada ikan nila. Ikan nila yang digunakan  berukuran  panjang  10-12  cm  dan  bobot  70-90  g.  Ikan  tersebut  diperoleh  dari  pembudidaya ikan  nila  di  Desa  Riding  Panjang  Kecamatan  Merawang.  Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap tunggal. Rancangan ini terdiri atas lima  perlakuan (P), yaitu P1= kontrol positif (penyuntikkan dengan larutan fisiologis), P2= 4% (v/v) (1 mL ekstrak + 24 mL akuades), P3= 8% (v/v) (2 mL ekstrak + 23 mL akuades), P4= 12% (v/v) (3 mL ekstrak + 22 mL akuades) dan P5= kontrol negatif (tanpa penyuntikan). Ekstrak ciplukan diinjeksikan sebanyak 0,1 mL pada setiap ekor ikan secara intra-muskular. Indikator imun yang diamati adalah jumlah total leukosit dan aktivitas fagositosis. Data dianalisis menggunakan analisis sidik ragam (ANOVA). Hasil yang menunjukkan pengaruh antara perlakuan, selanjutnya dianalis dengan uji wilayah  berganda  duncan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  ciplukan  dapat  meningkatkan jumlah leukosit  dan aktivitas fagositosis.  Dosis terbaik dalam meningkatkan  respon imun adalah   dosis ekstrak P4= 12% (v/v) ekstrak dengan jumlah total leukosit (12,43 x 108 sel/mL) dan aktivitas fagositosis (46,67%).
KATA KUNCI: Physalis angulata; respon imun; aktivitas fagositosis; jumlah leukosit
ABSTRACT: The efectiveness of the extract ciplukan leaves (Physalis angulata L.) on the immune system of  nile tilapia (Oreochromis niloticus). By: Yusrika Octarina, Eva Prasetiyono, Dwi Febrianti, and Robin
The aim of this research was to determined the effectivity of the extract Physalis angulata as immunostimulant on the amount of total leucocyte count and phagocytosis activity of nile tilapia. The tested fishes were nile tilapia with size of, 10-12 cm in total length, and 70-90 g in weight. The fish were obtained from fish farmers in Riding Panjang village Merawang Sub District. The research was designed in single completely randomized design. There were five levels of treatment (P), with P= positive control (injected with physiological solution), P2= 4% (v/v) (1 mL extract + 24 mL aquadest), P3= 8% (v/v) (2 mL extract + 23 mL aquadest), P4= 12% (v/v) (3 mL extract + 22 mL aquadest) and P5= negative control (without injection). The extract Physalis angulata L. was injected intramuscularly at a dose of 0.1 mL per fish. The immune indicators observed were total leucocyte count and phagocytosis activity). Data analyzed by using analysis of variant (Anova). if there were any significant different between the treatment, analysis continued by duncan”s multiple range test. The results of the research showed that the extract could increase the amount of total leucocyte count and phagocytosis activity. The ciplukan leaves at a dose of 12% (v/v) were the most effective dose in enhancing total leucocyte (12.43 x 108 cell/mL) and phagocytosis activity (46.67%).
KEYWORDS: Physalis angulata; immune response; phagocytosis activity; total leucocyte count

## PENDAHULUAN
Ikan  nila  (Oreochromis  niloticus)  merupakan  salah satu ikan budidaya air tawar yang mempunyai prospek yang  baik.  Ikan  nila  memilliki  sifat  yang menguntungkan antara lain mudah berkembang biak dan  pertumbuhannya  relatif  cepat.  Kelebihan  yang dimiliki ikan  nila ini  menyebabkan ikan  nila banyak dibudidayakan  dan  memiliki  permintan  pasar  yang cukup tinggi. Oleh karena itu, banyak pembudidaya menerapkan  sistem  budidaya  secara  intensif  untuk meningkatkan jumlah produksi ikan nila (Pasaribu et al., 2015).
Usaha budidaya secara intensif dapat menyebabkan munculnya  perubahan  lingkungan  budidaya  akibat tingginya  pencemaran  dan  kesalahan  penanganan budidaya,  sehingga  memicu  timbulnya  masalah penyakit. Serangan penyakit pada ikan budidaya akan menyebabkan kerugian ekonomi bagi pembudidaya. Pencegahan penyakit dapat dilakukan dengan beberapa cara  seperti  pemberian  antibiotik,  vaksin,  dan imunostimulan (Payung & Hengky, 2015).
Dewasa  ini,  kontrol  penyakit  banyak  dilakukan dengan menggunakan bahan alami atau tanaman obat sebagai  sumber  imunostimulan.  Tanaman  ciplukan (Physalis  angulata  L.)  merupakan  tanaman  yang berpotensi sebagai imunostimulan. Kandungan kimia yang terdapat dalam daun ciplukan antara lain flavonoid sebanyak  0,33%;  tanin  0,93%;  saponin  0,30%;  dan polifenol  0,23%  (Astuti,  2016).  Penelitian  yang dilakukan oleh Effendi & Harti (2014) menggunakan ekstrak etanol daun ciplukan yang diberikan melalui pakan pada mencit dengan dosis 4%, 8%, 12% v/v dapat meningkatkan  aktivitas  IgM  (imunoglobulin). Kandungan yang terdapat dalam daun ciplukan seperti flavonoid,  saponin,  dan  tanin  memiliki  sifat imunostimulator.  Imunostimulator  merupakan senyawa  yang  dapat  meningkatkan  sistem  imun, seperti  halnya  pada  mencit  yang  ditandai  dengan meningkatkatnya  aktivitas  IgM  (imunoglobulin). Penelitian  ini  perlu  dilakukan  untuk  mengetahui tingkat  efektivitas  ekstrak  daun  ciplukan  terhadap sistem kekebalan tubuh ikan nila secara non spesifik yang diberikan melalui metode injeksi.

## BAHAN DAN METODE

## Ekstrak  Daun  Ciplukan
Daun ciplukan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun keempat dan kelima dari pucuk. Daun yang telah dikumpulkan, dicuci bersih kemudian ditiriskan. Pengeringan daun dilakukan dengan cara dianginkan
selama 5 hari. Daun yang telah dikeringkan selanjutnya dihaluskan menggunakan blender dan disaring sehingga diperoleh serbuk halus (simplisia).
Pembuatan ekstrak daun ciplukan dilakukan secara meserasi dengan merendam simplisia dalam alkohol 96%, selama 3 hari. Simplisia disaring setelah 3 hari. Ekstrak yang diperoleh diuapkan dengan rotary evapo- rator pada tekanan 175 mbar, suhu 60°C dan kecepatan putaran 80 rpm (Arifin et al., 2009). Ekstrak alkohol ciplukan dibuat dalam dosis 4% (v/v), 8% (v/v), dan 12% (v/v) (Effendi & Harti, 2014). Pembuatan dosis 4% (v/v) daun ciplukan adalah dengan melarutkan 1 mL ekstrak cair daun ciplukan ke dalam akuades hingga 25 mL. Pembuatan  ekstrak dengan dosis 8% (v/v) dan 12% (v/ v)  dilakukan  dengan  cara  yang  sama  yaitu  dengan melarutkan 2 mL dan 3 mL ekstrak cair daun ciplukan ke dalam akuades hingga 25 mL.

## Ikan Uji
Hewan uji yang digunakan adalah ikan nila yang sehat dengan panjang 10-12 cm dan bobot 70-90 g. Ikan berasal dari pembudidaya ikan nila di Desa Riding Panjang  Kecamatan  Merawang.  Sebanyak  180  ekor ikan diaklimatisasi dalam akuarium dengan ukuran 90 cm x 60 cm x 50 cm selama 14 hari.

## Uji in vivo
Pengujian in vivo pemberian ekstrak daun ciplukan pada ikan nila dilakukan dengan tiga perlakuan dosis berbeda  dan  dua  perlakuan  kontrol  (P).  Pemberian ekstrak daun ciplukan dilakukan dengan cara  injeksi sebanyak 0,1 mL secara intramuskular (Yuhana et al., 2008; Satyantini et al., 2016). Perlakuan P1 dilakukan dengan menyuntikkan larutan fisiologis sebanyak 0,1 mL/ekor. Perlakuan P2, P3, dan P4 dilakukan dengan penyuntikan ekstrak daun ciplukan dengan dosis 4% (v/v), 8% (v/v), dan 12% (v/v) pada masing-masing ikan nila sebanyak 0,1 mL/ekor. Sedangkan perlakuan P5 tanpa penyuntikan (tanpa perlakuan). Jumlah ikan yang digunakan  pada masing-masing  ulangan terdiri  atas 12  ekor  ikan  nila.  Ikan  dipelihara  dalam  akuarium dengan ukuran  90 cm x  60 cm  x 50 cm,  selama 14 hari.  Pakan  yang  diberikan  berupa  pakan  komersil dengan  kandungan  protein  sebesar  25%.  Pakan diberikan sebanyak 2 kali sehari yaitu pada pukul 07.00 dan 16.00 WIB.
Rancangan yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) tunggal yang terdiri atas 5 perlakuan dengan 3 ulangan. Perlakuan yang diberikan (P) terdiri dari P1= Kontrol positif (penyuntikkan dengan larutan fisiologis), P2= 4% (v/v) (1 mL ekstrak ekstrak + 24
mL  akuades),  P3=  8%  (v/v)  (2  mL  ekstrak  +  23  mL akuades),  P4=  12%  (v/v)  (3  mL  ekstrak  +  22  mL akuades),  dan  P5=  Kontrol  negatif  (tanpa penyuntikan).

## Parameter  Pengamatan
Parameter darah yang diamati dalam penelitian ini adalah  Total  Leucocyte  Count  (TLC)  dan  aktivitas fagositosis. Pengambilan sampel darah dilakukan pada hari ke-0 sebelum ikan diinjeksi dan hari ke-1, 4, 7, dan  14  hari  setelah  diberi  perlakuan.  Pengambilan darah dilakukan menggunakan spuit 1 mL yang sudah diberi antikoagulan natrium sitrat 3,8%. Sampel darah diambil melalui intra-vena (Lengka et al., 2013). TLC dihitung menggunakan haemocytometer. Darah dihisap dengan pipet sampai skala 0,5 dan dtambahkan larutan Turk’s sampai skala 11, pipet diayunkan membentuk angka delapan selama 5 menit hingga darah bercampur rata.  Larutan  tersebut  kemudian  diteteskan  pada hemocytometer  kemudian  ditutup  dengan  gelass penutup (Blaxhall & Deasley, 1973).
Aktivitas fagositosis dilakukan mengikuti prosedur yang telah dilaporkan sebelumnya oleh Utami (2009). Sebelumnya, sebanyak 0,05 mg ragi yang digunakan untuk uji aktivitas fagositosis diaktifkan dulu dengan penambahan 0,10 g gula pasir. Kemudian ditambahkan air yang telah dipanaskan dengan suhu 70°C sebanyak 25  mL.  Ragi  ini  berfungsi  sebagai  mikroorganisme, untuk melihat kemampuan aktivitas fagositosis. Secara ringkas, sebanyak 50 µL darah dimasukkan ke dalam microtube,  ditambahkan  50  ìL  ragi  yang  sudah diaktifkan.  Suspensi  ragi  dihomogenkan  dan diinkubasi  dalam  suhu  ruang  selama  15  menit, kemudian  sebanyak  5  ìL  dibuat  sediaan  ulas dikeringkan di udara. Ulasan difiksasi dengan metanol selama  5  menit  dan  dikeringkan.  Ulasan  direndam dalam  pewarna  giemsa  selama  15  menit,  kemudian dicuci dengan  air mengalir  dan dikeringkan  dengan tissue. Dihitung jumlah sel yang menunjukkan proses fagositosis dari 100 sel fagosit yang teramati.
Pengelolaan  kualitas  air  dilakukan  dengan penyiponan  setiap  2  hari  sekali  dan  pergantian  air dilakukan sebanyak 30%. Parameter kualitas air yang diamati  adalah  suhu,  derajat  keasaman  (pH),  dan oksigen terlarut (DO).
Data  hasil  pengamatan  meliputi  TLC,  aktivitas fagositosis  diolah  menggunakan  Ms.Excel  2010, kemudian  dianalisis  dengan  menggunakan  ANOVA. Hasil tabel sidik ragam yang menunjukkan pengaruh yang berbeda, dilanjutkan dengan uji duncan dengan taraf kepercayaan 95%.

## HASIL DAN BAHASAN

## TLC (Total Leucocyte Count)
Jumlah sel darah putih pada berbagai perlakuan dan rentang pengamatan ditunjukkan pada Gambar 1.
Pengamatan  pada  hari  ke-1  telah  terjadi peningkatan leukosit. Perlakuan P4 (12,60 x 10 8 sel mL - 1 ) berbeda nyata (P<0,05) dengan P1 (3,88x 10 8 sel mL -1 ) dan P5 (5,73 x 10 8 sel mL -1 ), namun tidak berbeda nyata dengan P2 (8,02 x 10 8 sel mL -1 ) dan P3 (8,21 x 10 8 sel mL -1 ). Pengamatan hari ke-4, diketahui bahwa P4 (18,51 x 10 8 sel mL -1 ) berbeda nyata (P<0,05) dengan P1  (6,11  x  10 8 sel  mL -1 ),  P2  (7,68  x  10 8 sel  mL -1 ),  P3 (1,64 x 10 8 sel mL -1 ), dan P5 (3,90 x 10 8 sel mL -1 ).
Pengamatan hari ke-7 setelah diberi perlakuan, P4 (16,18  x 10 8 sel mL -1 ) tidak memberikan respon yang berbeda nyata dengan P1 (17,02 x 10 8 sel mL -1 ) tetapi berbeda nyata (P<0,05) dengan P2 (v/v) (6,56 x 10 8 sel mL -1 ), P3 (7,35 x 10 8 sel mL -1 ), dan P5 (4,75 x 10 8 sel mL - 1 ). Pengamatan pada hari ke-14 setelah diberi perlakuan diketahui bahwa P4 (12,43 x 10 8 sel mL -1 ) berbeda nyata (P<0,05) dengan P1 (4,85 x 10 8 sel mL -1 ), P2 (7,12 x 10 8 sel mL -1 ), P3  (7,90 x  10 8 sel  mL -1 ), dan  P5 (6,72  x 10 8 sel mL -1 ).
Dosis  12%  (v/v)  (P4)  memberikan  respons  yang berbeda nyata (P<0,05) dibandingkan kontrol negatif di semua pengamatan. Respons ini disebabkan adanya bahan aktif berupa flavonoid, saponin, dan tanin dalam ekstrak daun ciplukan (Effendi & Harti, 2014). Bahan aktif yang masuk segera dikenali oleh ikan sehingga pada hari ke-1 ikan langsung memproduksi leukosit. Peningkatan  leukosit  ini  diawali  ketika  masuknya ekstrak daun ciplukan (antigen) ke dalam tubuh ikan. Antigen  adalah  semua  benda  asing  yang  masuk  ke dalam tubuh ikan di luar bagian dari tubuh ikan sendiri. Namun, antigen yang masuk yaitu berupa ekstrak daun ciplukan ini tidak berbahaya bagi tubuh ikan karena tidak bersifat patogen. Metode injeksi yang diberikan juga  diduga  menjadi  penyebab  responsifnya  ikan terhadap  antigen.  Hal  ini  didukung  oleh  Olga  & Fatmawati (2013) yang menyebutkan bahwa metode injeksi  merupakan  metode  yang  efektif  untuk  anti- gen  masuk  ke  dalam  tubuh  secara  sistemik,  yaitu melalui pembuluh darah dan beredar ke seluruh tubuh, sehingga respons yang diberikan akan semakin cepat.
Dosis 12% (v/v) merupakan dosis ekstrak ciplukan yang paling tinggi yang digunakan pada penelitian ini. Dosis  yang  semakin  tinggi  menyebabkan  respons (peningkatan  leukosit)  yang  dibentuk  juga  akan semakin  banyak.  Penelitian  yang  dilakukan  oleh
Satyantini et al. ( 2016) menggunakan ekstrak air panas mikroalga  Spirulina  platensis  yang  diberikan  secara injeksi  juga  memberikan  respons  peningkatan leukosit  tertinggi  pada  perlakuan  20%.  Dosis  20% merupakan  dosis  tertinggi  yang  digunakan  pada penelitian tersebut.
Peningkatan leukosit di semua perlakuan bekerja optimal pada hari ke-4. Hal ini sesuai dengan pendapat Effendi & Harti (2014) yang mengatakan bila antigen pertama kali masuk ke dalam tubuh, terjadilah respons imun  humoral  yang  ditandai  dengan  dihasilkannya antibodi (IgM) 6-7 hari setelah pemaparan. Respons pembentukan antibodi merupakan respons imun hu- moral yang artinya ketika terpapar antigen, ikan lebih dahulu  akan  melalui  respons  imun  secara  selular. Respons  imun  selular  biasa  terjadi  1-5  hari  setelah pemaparan (Effendi & Harti, 2014).
Penurunan jumlah leukosit terjadi pada hari ke-7 dan ke-14. Hal ini berkaitan dengan lama dosis bereaksi di dalam tubuh. Menurut penelitian Anderson & Siwiski (1993), menggunakan glucan dan chitosan dengan cara pemberian  disuntik  atau  direndam  pada  ikan mengalami penurunan kualitas efek obat pada hari ke- 14 dan ke-21. Penurunan ini juga diduga karena ikan tidak terpapar patogen sehinggga ikan akan berhenti memproduksi leukosit secara berlebihan dan kembali menuju keadaan normal.
Jumlah leukosit pada ikan  yang normal menurut Angka et al. (1985) berkisar antara 2-15 (x 10 7 sel mL -1 ) atau pada penelitian ini (3,78 x 10 8 sel mL -1 ).  Pemberian ekstrak daun ciplukan secara injeksi memberikan efek positif  terhadap  peningkatan  total  leukosit. Hakikatnya  ikan  yang  terpapar  patogen  juga  akan mengalami peningkatan jumlah leukosit. Peningkatan ini terjadi untuk mengeliminasi patogen yang masuk, sehingga jumlah leukosit yang diproduksi oleh tubuh ikan  akan  langsung  termanfaatkan.  Berbeda  halnya dengan  peningkatan  leukosit  yang  terjadi  ketika diberikan  ekstrak  daun  ciplukan,  ini  akan menyebabkan  ikan  memproduksi  leukosit  sebelum terjadinya  paparan  penyakit,  sehingga  ikan  lebih tanggap apabila terpapar patogen. Menurut Efendi & Harti (2014), ciplukan mengandung senyawa saponim dan flavonoid yang bersifat imunostimulator yang dapat membangkitkan respons imun.

## Aktivitas  Fagositosis
Aktivitas  fagositosis  (%)  ikan  nila  pada  berbagai perlakuan  dan  berbagai  rentang  pengamatan ditunjukkan pada Gambar 2.
Sistem  pertahanan  alamiah  selain  neutrofil (leukosit granular), yaitu sel-sel fagositik yang terdiri atas  monosit  dan  makrofag.  Makrofag  merupakan monosit  matang  yang  mampu  memfagosit  100
Gambar 1. Total leukosit ikan nila pada berbagai perlakuan ( P1= kontrol positif,
P2=  4  %  (v/v),  P3=  8%  (v/v),  P4=  P3=  8%  (v/v),  dan  P5=  kontrol negatif). Figure 1. Total leucocyte count of nile tilapia in the various treatments (P1= Positive control,  P2=  4%  (v/v),  P3=  8%  (v/v),  P4=  8%  (v/v),  and  P5=  negative control).
a a ab a a a ab ab b a a ab b b a a b c a b a a c b a 0 5 10 15 20 25 30 0 (sebelum diinjeksi) 1 (Setelah diinjeksi) 4 (Setelah diinjeksi) 7 (Setelah diinjeksi) 14 (Setelah diinjeksi) Ju m la h s el d ar ah p u ti h ( x 1 0 8 se l m L -1 ) Hari pengamatan (Observation days) P1 P2 P3 P4 P5
bakteri. Monosit berfungsi sebagai fagosit terhadap benda-benda  asing,  termasuk  antigen.  Aktivitas fagositosis  biasa  dijadikan  parameter  untuk menentukan sistem ketahanan tubuh ikan. Aktivitas fagositosis  pada  pengamatan    hari  ke-0  (16,20%) merupakan kondisi normal ikan pada awal sebelum diberi perlakuan.
Pengamatan  hari  ke-1  P4  (42,17%)  memberikan respon berbeda nyata (P<0,05) dibandingkan dengan P5 (21,50%), P1 (28,67%), dan P2 (28,83%), namun tidak berbeda nyata dengan P3 (40,83%). Pengamatan pada hari  ke-4  berbeda  nyata  (P<0,05)  antar  perlakuan. Aktivitas fagositosis tertinggi pada P4 yaitu sebanyak 67,00%. Pengamatan pada hari ke-7 diketahui bahwa P4  (42,33%)  berbeda  nyata  (P  <  0,05)    dengan  P5 (27,67%), P2 (v/v) (34,00%) dan P1 (37,17%) tetapi tidak berbeda nyata dengan P3 (40,33%). Pengamatan pada hari ke-14 P4 (46%) berbeda nyata (P < 0,05) dengan P5 (38,83%) dan P1 (39,00%), namun tidak berbeda nyata dengan P2 (41,83%) dan P3 (43,17%).
Berdasarkan  data  pengamatan  dapat  diketahui bahwa pemberian ekstrak daun ciplukan secara injeksi ke  tubuh  ikan  nila  dapat  meningkatkan  aktivitas fagositosis. Uji lanjut duncan yang dilakukan diketahui bahwa dosis 12% (v/v) (P4) memberikan respons yang berbeda  nyata  (P>0,05)  dengan  kontrol  negatif. Meningkatnya  aktivitas  fagositosis  merupakan indikator  peningkatan  kekebalan  tubuh.  Alifuddin (1999) menyatakan peningkatan kekebalan tubuh dapat diketahui dari peningkatan aktivitas sel fagosit. Proses
ini memberi perlindungan segera dan efektif terhadap infeksi.
Proses  fagositosis  menurut  Anderson  (1992), apabila  terjadi  kontak  antara  partikel  dengan permukaan  sel  fagositosis.  Membran  sel  kemudian mengalami invaginasi di mana dua lengan sitoplasma menelan  partikel  asing  sehingga  terkurung  dalam sitoplasma sel, terletak dalam  vakuola yang dilapisi membran  (fagolisosom).  Enzim  pencernaan  dan senyawa  antimikroba  yang  terdapat  dalam  lisosom dapat mendegradasi sel mikroba yang tertelan.
Hasil  penelitian  ini  juga  menunjukkan  bahwa ekstrak daun ciplukan dapat meningkatkan aktivitas fagositosis  ikan  nila  terhadap  ragi  secara  in  vitro. Penelitian yang dilakukan oleh Fitrianti et al. (2011) diketahui  bahwa    ekstrak  daun  ciplukan  memiliki efektivitas sebagai antimikroba terhadap bakteri MRSA secara in vitro. Penelitian serupa juga  dilakukan oleh Sudarto (2009) diketahui bahwa ekstak daun ciplukan dengan konsentrasi 30% mampu membunuh bakteri Pseudomonas aeruginosa dengan metode dilusi tabung dan penggoresan media  NAP. Berdasarkan beberapa penelitian  ini  dapat  diketahi  bahwa  ekstrak  daun ciplukan memiliki sifat antimikroba.
Menurut  Fitrianti  et  al.  (2011),  ekstrak  daun ciplukan  mempunyai  sifat  antimikroba.  Sifat antimikroba ini disebabkan oleh adanya zat-zat aktif yang  larut  ketika  daun  ciplukan  diekstrak menggunakan pelarut alkohol. Zat-zat aktif tersebut antara lain flavonoid, alkaloid, dan folifenol.
a a a ab a a a b a ab a b c bc ab a b d c b a c e a a 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 (sebelum diinjeksi) 1 (Setelah diinjeksi) 4 (Setelah diinjeksi) 7 (Setelah diinjeksi) 14 (Setelah diinjeksi) A k ti vi ta s Fa go si to si s (% ) A ct iv it ie s ph ag oc yt os is ( % ) Hari pengamatan ( Observation days ) P1 P2 P3 P4 P5
Gambar 2. Aktivitas fagositosis (%) ikan nila pada pada berbagai perlakuan (P1= kontrol positif, P2= 4% (v/v), P3= 8% (v/v), P4= 12% (v/v), dan P5= kontrol negatif). Figure 2. Activities phagocytosis (%) of tilapia in the various treatments (P1= positive  control,  P2=  4%  (v/v),  P3=  8%  (v/v),  P4=  12%  (v/v),  and P5= negative control).
Gambar 3 Kelangsungan hidup ikan nila yang dipelihara selama
14 hari.
Figure 3. The survival rate of nile tilapia during 14 days rearing

## Sintasan  (SR)
Kelangsungan  hidup  ikan  nila  selama  masa pemeliharaan 14 hari  ditunjukkan pada Gambar 3.
Berdasarkan  Gambar  3,  diketahi  bahwa kelangsungan  hidup  ikan  nila  tidak  memberikan pengaruh yang berbeda nyata (  0,05) antar perlakuan selama masa pemeliharaan 14 hari. Kelangsungan hidup ikan nila pada penelitian ini bisa dikatakan cukup baik karena lebih dari 50%. Kelangsungan hidup yang cukup tinggi ini dikarenakan dosis perlakuan yang diberikan tidak terlalu  tinggi, sehingga  masih bisa  ditoleransi oleh ikan. Ikan dipelihara dalam wadah yang terkontrol yaitu  dalam  ruangan  sehingga  fluktuasi  kualitas  air dapat  ditekan.  Menurut  Taufik  (1984),  kualitas  air sangat  mempengaruhi  kelangsungan  hidup  ikan, karena  perubahan  satu  parameter  kualitas  air  akan mempengaruhi parameter lainya.

## Kualitas  Air
Data  kualitas  air  yang  terukur  selama  masa pemeliharaan pada Tabel 1.
Berdasarkan  data  pada  Tabel  1,  dapat  diketahui bahwa kualitas air yaitu suhu, pH, dan DO selama masa pemeliharaan 14 hari dalam kondisi yang baik. Hal ini dikarenakan parameter yang terukur telah memenuhi Standar Nasional Indonesia (SNI) pemeliharaan ikan nila.  Suhu  yang  terukur  selama  pemeliharaan  antar perlakuan  sama  yaitu  berkisar  antara  26-29°C. Perubahan  suhu  akan  mempengaruhi  kecepatan perkembangan  mekanisme  pertahanan  dan pembentukan antibodi, perubahan suhu dapat menjadi penyebab stres yang mempengaruhi kesehatan ikan (Abdullah, 2008). Oksigen terlalut yang terukur selama masa  pemeliharaan  yaitu  5,1–6,1  mg  L -1 .  Menurut Taufik  (1984),  kadar  oksigen  yang  optimum  untuk menjaga kesehatan ikan  dalam media pemeliharaan harus berada dalam kisaran 6,5-12,5 mg L -1 . pH yang terukur selama penelitian yaitu berkisa 6,9-7,5 yang sesuai dengan standar nasional ikan nila. Kualitas air yang  terukur  selama  penelitian  dalam  kondisi  yang baik untuk mendukung status kesehatan ikan.
Tabel 1. Data kualitas air ikan nila selama 14 hari pemeliharaan Table 1. Water quality of nile tilapia during 14 days rearing
a a a a a 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 120.00 P1 P2 P3 P4 P5 Perlakuan (Treatment) Si n ta sa n (S ur vi va l r at e) Suhu (Temperature ) (°C) pH DO (mg L -1 ) P1 26-29 7.1-7.4 6.1-6.3 P2 26-29 7.1-7.3 5.4-6.1 P3 26-29 6.9-7.3 5.1-5.4 P4 26-29 7.1-7.5 6.0-6.4 P5 26-29 7.3-7.5 5.7-5.8 SNI 25-30 6.5-8.5 ≥5.0 Perlakuan Treatment
Parameter (Parameter )

## KESIMPULAN
Injeksi ekstrak daun ciplukan dengan dosis 4% (v/ v), 8% (v/v), dan 12% (v/v) sebanyak 0,1 mL per ekor secara  intra  muskular  dapat  memberikan  pengaruh yang nyata terhadap sistem kekebalan tubuh ikan nila. Dosis  12%  (v/v)  merupakan  dosis  terbaik  dalam meningkatkan  jumlah  leukosit  dan  aktivitas fagositosis. Jumlah leukosit dan aktivitas fagositosis pada  hari ke-14 masing-masing sebesar 12,43 x 10 8 sel mL -1 dan 46,67%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih disampaikan untuk  Jurusan Akuakultur, Universitas Bangka Belitung dan SMK N 4 Pangkalpinang    atas  fasilitas  yang  telah  diberikan selama proses penelitian yang dilakukan.

## DAFTAR  ACUAN
Abdullah,  Y.  (2008).  Efektivitas  ekstrak  daun  paci-paci
Leucas  lavandulaefolia    untuk  pencegahan  dan pengobatan  penyakit  MAS  Motile  Aeromonad Septicemia.Skripsi.  Institut  Pertanian  Bogor: Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan.
Alifuddin,  M.  (1999).  Imunostimulasi  pada  hewan akuatik. Jurnal Akuakulur Indonesia, 1(2), 87-92. Anderson, D.P. (1992). Immunostimulant,adjuvant and vaccine carrier in fish: Applications to aquaculture. Annual Review of Fish Diseases, 21, 281-307.
Anderson,  D.  P.  &  Siwicki  A.K.  (1993).  Basic haematology  and  serology  for  fish  health  pro- grams. Paper presented in second symposium on diseases in asian aquaculture. Aquatic Animal Health and the Environment. Phuket, Thailand 185-202.
Angka, S.L., Wongkar G.T., & Karwani, W. (1985). Blood picture  and  bacteria  isolated  from  ulcered  and crooked  back  Clarias  bathrachus.  Biotrop  Special Publishing,  (2),  129.
Arifin,  M.F.,  Nurhidayati,  L.,  Syarmalina,  &  Rensy. (2009).  Formulasi  edible  film  ekstrak  daun  sirih (Piper betle L.) sebagai  antihalitosis. Kongres Ilmiah, 17, 7-9.
Astuti,  S.  (2016).  Uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak kloroform  daun  tomat  (Solanum  lycopersicum  l.), daun  cabai  merah  (Capsicum  annum  l.)  dan  daun ciplukan (Physalis angulata l.) dengan metode dpph. skripsi.  Universitas  Sebelas  Maret,  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan.
Blaxall  &  Deasley,  K.W.  (1973).  Dasley:  Routine Haematological Methods for Use With Fish Blood. Journal of Fish Biology, p. 577-581.
Effendi,  N.  &  Harti  W.  (2014).  Identifikasi  aktivitas imunoglobulin  M  (Ig.M)  ekstrak  etanolik  daun ciplukan (Physalis minima linn.)  pada mencit. Jurnal Kesehatan, 7, 353-359.
Fitrianti, D.A.R., Noohamdani, A.S., & Setyawati, S.K. (2011). Efektivitas ekstrak daun ciplukan sebagai antimikroba terhadap methicilli-resistant Staphy- lococcus aureus in vitro. Jurnal Kedokteran Brawijaya, 26(4), 212-214.
Lengka,  K.,  Manopo,  H.,  &  Kolopita,  M.E.F.  (2013). Peningkatan  respon  imun  non  spesik  ikan  mas (Cyprinus carpio L) melalui pemberian  bawang putih (Allium sativum). Budidaya Perairan, 1(2), 21-28. Olga  &  Fatmawati.  (2013).  Efikasi  rute  vaksin Aeromonas  hydrophilaasb-01      pada    ikan  gabus (Ophiocephalus striatus). Fish Scientiae, 4(6), 138-140.
Pasaribu,  W., Sammy,  N.J., Longdong,  & Joppy,  D.M. (2015). Efektivitas ekstrak daun  pacar air (Impa- tiens  balsamina  L.)  untuk  meningkatkan  respon imun non spesifik ikan nila (Oreochromis niloticus). Jurnal Budidaya Perairan,  3(1), 83-82.
Payung, C.N. & Hengky, M. (2015). Peningkatan respon kebal  non-spesifik  dan  pertumbuhan  ikan  nila (Oreochromis  niloticus)  ssmelalui  pemberian  jahe, (Zingiber  officinale).  Jurnal  Budidaya  Perairan, 1(3), 12.
Satyantini,  W.H.,  Agustono,  Arimbi,  Emy,  K.S.,  Budi, M., & Lina, W.A. (2016). Peningkatan respon imun spesifik ikan gurami pasca pemberian ekstrak air panas mikroalga Spirulina platensis. Jurnal Vateriner, 17, 349.
Sudarto.  (2009).  Sensivitas  Ekstrak  Daun  Ceplukan sebagai  Antimikroba  terhadap  Pseudomonas aeruginosa. Skripsi. Universitas Brawijaya: Malang.
Taufik, P. (1984). Faktor kualitas air dapat mempengaruhi timbulnya  suatu  penyakit  pada  ikan.  Majalah Pertanian. Jakarta.
Utami, W.P. (2009). Efektivitas ekstrak paci-paci (Leucas lavandulaefolia) yang  diberikan lewat pakan untuk pencegahan  dan  pengobatan    penyakit  Motile Aeromonas  Septicemia (MAS)  pada  ikan lele  dumbo (Clarias  sp.).Skripsi.  Institut  Pertanian  Bogor, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan.
Yuhana,  M.,  Normalia,  I.,  &  Sukenda.  (2008). Pemanfaatan ekstrak bawang putih (Allium sativum) untuk pencegahan dan pengobatan pada ikan patin (Pangasianodon  hypothalmus)  yang  diinfeksi Aeromonas hydrophila. Jurnal Akuakultur Indonesia, 7(1), 95-97.