## ANALISIS STAPHYLOCOCCUS AUREUS PADA TESTER KOSMETIK SEDIAAN LIPSTIK CAIR DAN PADAT DI GERAI KOSMETIK DAERAH KELAPA GADING DENGAN UJI ANGKA LEMPENG TOTAL
Nanda Agustin Adhila Putri 1) ; Dimas Adrianto 2) ; Krismayadi 3)
1) nanda23agustin@gmail.com , Institut Kesehatan Hermina
2) dimasadrianto.dms@gmail.com , Institut Kesehatan Hermina
3) krismayadikrismayadi199@gmail.com , Universitas Binawan

## Abstract
Introduction:  The  availability  of  product  samples  allows  consumers  to  make  more  informed  choices  when purchasing the desired product, so that in choosing lipstick, consumers can try and test the color of the lipstick before buying it, ensuring that the color and type of lipstick suits their needs. Sometimes consumers do not pay attention  to  proper  use  and  storage  methods,  so  lipstick  is  easily  contaminated  with  bacteria.  The  aim  of  this research was to determine whether or not there was microbial contamination in liquid and solid lipstick testers. Methods: This research was carried out using an experimental method which involved actions or treatments in the laboratory. Results: The results of this research showed that the percentage of Staphylococcus aureus bacteria in liquid and solid lipstick testers ranged from < 1 x 10 4 to 6,2 x 10 4 CFU/ml, the percentage was 40%, for a result range of 1,5 x 10 6 to 4,2 x 10 6 CFU/ml yields a percentage of 60%. Results of gram staining of Staphylococcus aureus bacteria on the tester liquid and solid lipstick in 6 samples, 5 samples were positive and 1 sample negative. Conclusion:  Of  all  the  6  liquid  lipstick  tester  samples  and  the  solid  lipstick  tester,  they  did  not  meet  BPOM requirements, namely no more than 10 3 CFU/ml, whereas for the results of the gram staining of Staphylococcus aureus bacteria on the liquid and solid lipstick tester in 6 samples, 5 samples were positive and 1 sample negative. Keywords: Gram Stain , Staphylococcus aureus, Total Plate Count (TPC)

## Abstrak
Pendahuluan: Ketersediaan sampel produk memungkinkan konsumen untuk membuat pilihan yang lebih tepat ketika membeli produk yang diinginkan, sehingga dalam memilih lipstik, konsumen dapat mencoba dan menguji warna lipstik tersebut sebelum membelinya, memastikan bahwa warna dan tipe lipstik sesuai dengan kebutuhan mereka. Terkadang konsumen tidak memperhatikan cara pemakaian dan penyimpanan yang baik, sehingga lipstik mudah tercemar bakteri. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui ada atau tidaknya cemaran mikroba pada tester lipstik cair dan padat. Metode: Penelitian ini dilakukan dengan metode eksperimen (eksperimental) yang melibatkan tindakan atau perlakuan di laboratorium. Hasil: Hasil dari penelitian ini didapatkan hasil persentase bakteri Staphylococcus aureus pada tester lipstik cair dan padat, yaitu berkisar antara < 1 x 10 4 sampai 6,2 x 10 4 CFU/ml didapatkan persentase sebanyak 40%, untuk kisaran hasil 1,5 x 10 6 sampai 4,2 x 10 6 CFU/ml didapatkan hasil persentase sebanyak 60%. Kesimpulan: Dari semua 6 sampel tester lipstik cair dan tester lipstik padat tidak memenuhi syarat BPOM yaitu tidak lebih dari 10 3 CFU/ml, sedangkan untuk hasil dari pewarnaan gram bakteri Staphylococcus aureus pada tester lipstik cair dan padat pada 6 sampel didapatkan 5 sampel yang positif dan 1 sampel negatif.
Kata Kunci: Angka Lempeng Total (ALT), Pewarnaan Gram, Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Seiring perkembangan ilmu pengetahuan dalam berbagai bidang teknologi yang telah memberikan  dampak  besar  pada  perubahan  dalam  gaya  hidup  individu,  dorongan  terutama untuk  meningkatkan  kecantikan  dan  meningkatkan  penampilan  sehari-hari  menjadi  fokus utama  wanita  saat  ini.  Dalam  konteks  sejarah  kosmetologi  dan  kosmetika,  peran  ilmu kefarmasian telah terlibat sejak zaman kuno. Penggunaan kosmetik bagi wanita telah menjadi bagian  yang  tidak  terpisahkan  dari  rutinitas  sehari-hari,  hampir  semua  wanita  baik  dewasa maupun  remaja  menggunakan  kosmetik  untuk  meningkatkan  penampilan  dan  menjaga kecantikan mereka.
Kosmetik  berasal  dari  bahasa  Yunani  ”kosmetikos”  yang  berarti  keterampilan menghias,  mengatur,  memakai  alat  kecantikan,  memperbaiki  penampilan  serta  memelihara kulit, rambut dan kulit (Fatmawaty, A., Khairi, N., Yusuf, N. A., 2017). Kosmetik merupakan produk atau sediaan yang diaplikasi pada permukaan luar tubuh manusia, seperti kulit, rambut, kuku, bibir, organ genital luar, gigi, dan mukosa mulut, dengan tujuan utama untuk melakukan
berbagai fungsi seperti membersihkan, memberikan aroma, mengubah penampilan, mengatasi masalah bau badan, atau menjaga dan melindungi  kondisi tubuh  agar tetap optimal (BPOM, 2019). Produk kosmetik yang termasuk dalam pengertian tersebut,  yaitu moisturizer , lipstik, eyeshadow , foundation , shampo , pewarna rambut dan deodorant (Fatmawaty, A., Khairi, N., Yusuf, N. A., 2017).
Dengan adanya sampel produk dapat membantu konsumen dalam membuat keputusan yang lebih baik saat memilih produk yang mereka inginkan. Seperti keinginan konsumen dalam mencoba  produk  kosmetik,  seperti  lipstik,  konsumen  berkesempatan  untuk  mencoba  dan menguji warna lipstik sebelum mereka membelinya untuk memastikan bahwa warna dan jenis lipstik  tersebut  cocok  dengan  bibirnya.  Banyak  jenis  lipstik  dengan  berbagai  bentuk  yang dimiliki  oleh  wanita,  seperti  cairan,  krayon,  dan  krim,  dengan  beragam  pilihan  warna. Terkadang konsumen kurang memperhatikan pemakaian dan penyimpanan lipstik yang baik, sehingga  lipstik  mudah  tercemar  bakteri  (Wenas  et  al.,  2020).  Salah  satu  cara  mikroba mencemari  sampel kosmetik seperti  lipstik  yaitu dengan  kontak  secara  langsung  antara  kulit dan  bibir  pengguna  lipstik  secara  bergantian,  yang  menyebabkan  mikroorganisme  dari  flora normal yang mungkin terbawa dari makanan/minuman masuk ke dalam produk sampel lipstik (Rahmah, Jabal et al., 2021).
Berdasarkan  hasil  penelitian  terdahulu  yang  telah  dilakukan  Monica  (2023)  untuk mengidentifikasi  bakteri Staphylococcus  aureus pada  lipstik  cair  tester  di  wilayah  Kota Samarinda, mendapatkan hasil dari 18 sampel lipstik cair yang diuji, terdapat 7 sampel yang menghasilkan  hasil  negatif,  dengan  rentang  waktu  pemakaian  selama  2-12  minggu,  yang merupakan sekitar 39% dari total sampel. Sementara itu, 11 sampel menghasilkan hasil positif dengan adanya bakteri Staphylococcus aureus , dengan jangka waktu pemakaian selama 2- 20 minggu, yang merupakan sekitar 61% dari total sampel. Angka bakteri Staphylococcus aureus yang ditemukan dalam rentang 1,0 x 10 2 hingga 4,2 x 10 3 CFU/0,1 ml melebihi batas cemaran yang  telah  ditetapkan  oleh  BPOM  untuk  kosmetik.  Batas  cemaran  yang  ditetapkan  BPOM adalah  negatif  per  0,1  g  atau  0,1  mL  sampel,  yang  berarti  tidak  boleh  ada  pertumbuhan Staphylococcus  aureus dalam  0  CFU/0,1  ml  sampel  (Monica  et  al.,  2023).  Beberapa mikroorganisme  yang  tidak  diperbolehkan  sama  sekali  terdeteksi  dalam  kosmetik  seperti Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella spp, Candida albicans, Clostridium spp dan Pseudomonas  aeruginosa (Vassoler  et  al.,  2020) .  Staphylococcus  aureus dan Staphylococcus albus adalah penyebab infeksi sekunder karena bakteri ini mudah menginfeksi kulit dengan menembus stratum korneum, menyebabkan ruam dan rasa gatal. Ketika jumlah Staphylococcus aureus pada kulit melebihi batas normal, bakteri ini dapat menghasilkan toksin yang dapat menyebabkan infeksi kulit (Imasari & Emasari, 2021).
Oleh  sebab  itu,  peneliti  tertarik  untuk  melaksanakan  penelitian  tentang  analisis Staphylococcus  aureus pada tester kosmetik sediaan lipstik cair dan padat  di  gerai  kosmetik daerah Kelapa Gading dengan Uji Angka Lempeng Total untuk mengetahui apakah terdapat bakteri Staphylococcus aureus dan berapakah jumlah bakteri tersebut pada makeup tester lipstik cair  dan  padat.    Sehingga  memberikan  Pemahaman  yang  lebih  bagi  masyarakat  agar memperhatikan untuk tidak langsung diaplikasikan ke bagian tubuh tertentu dengan aplikator yang  ada  di  produk  kosmetik  tester.  Tujuan  penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui  ada  atau tidaknya bakteri Staphylococcus aureus pada makeup tester lipstik cair dan padat.

## METODE
Pada penelitian ini menggunakan metode kuantitatif dengan jenis penlitian ekperimen (eksperimental)  yaitu  metode  penelitian  yang  melibatkan  tindakan  atau  perlakuan  di laboratorium,  baik  dalam  situasi  in  vitro  dengan  menggunakan  sel,  enzim,  atau  isolasi  dari sistem tertentu, maupun in vivo dengan melibatkan hewan uji atau manusia, baik dalam setting
klinik maupun praklinik (Istiqomah, R.R., Sukmana, D.J,. Utami, E.F., 2020). Tujuannya untuk mengetahui keberadaan bakteri Staphylococcus aureus yang terdapat pada sediaan lipstik tester cair  dan  padat  di  gerai  kosmetik  dan  mengetahui  jumlah  cemaran  mikroba  dengan menggunakan uji angka lempeng total (ALT). Waktu penelitian berlangsung pada 25 Maret – 06 April 2024. Populasi pada penelitian ini yaitu 3 sediaan tester lipstik cair dan 3 sediaan tester lipstik padat di toko kosmetik yang berada di mal daerah kota Kelapa Gading. Sampel dalam penelitian ini adalah 3 produk tester lipstik cair dan 3 produk tester lipstik padat dengan merek makeup local brand yang berbeda, memiliki volume isi sebanyak 2 ml untuk memadai ketika dilakukan  pengujian.  Proses  pengumpulan  data  melalui  hasil  pengamatan  dan  perhitungan jumlah koloni bakteri  pada sampel yang ditanam  pada media Plate Count Agar (PCA) yang telah  diinkubasi  selama  48  jam  pada  suhu  37°C  dalam  hasil  penelitian  atau  pemeriksaan laboratorium.

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  timbangan  digital  (Sartorius), erlenmeyer 500 ml, erlenmeyer 250 ml, beaker glass 1000 ml, beaker glass 100 ml, gelas ukur 100 ml, gelas ukur 10 ml, tabung reaksi, cawan petri, mikropipet 100 – 1000µl, pipet tips 100 –  1000µl, microscope  slides , Laminar  Flow  Cabinet ,  autoklaf,  inkubator, colony  counter , mikroskop, hot plate , rak tabung reaksi, sendok tanduk, spatel, pipet tetes, jarum ose, bunsen, penjepit kayu.

## Bahan
Bahan yang dipakai dalam penelitian ini adalah tester lipstik cair dan tester lipstik padat, Buffered Pepton Water (BPW), Plate Count Agar (PCA), alkohol 70%, aquadest, kristal violet, lugol iodin, safranin, tween 80 steril, minyak imersi, kapas steril, spidol, koran bekas. Pembuatan Media Agar Pembuatan Media Plate Count Agar (PCA) Siapkan alat dan bahan. Timbang Plate Count Agar (PCA) sebanyak 13,5 g, kemudian masukkan Plate Count Agar ke dalam erlenmeyer. Selanjutnya tambahkan aquadest sebanyak 600 ml ke dalam erlenmeyer yang sudah terdapat Plate Count Agar , aduk hingga homogen dan panaskan  menggunakan  hot  plate  hingga  larut  sempurna.  Lalu  ditutup  dengan  kapas  steril. Setelah Plate  Count  Agar larut  sempurna,  masukkan  ke  dalam  autoklaf  dengan  suhu  121°C selama 15 menit (Jamilatun, 2022).

## Pembuatan Media Buffered Pepton Water (BPW)
Siapkan  alat  dan  bahan.  Timbang Buffered  Pepton  Water (BPW)  sebanyak  3,21  g, kemudian  masukkan Buffered  Pepton  Water ke  dalam  erlenmeyer.  Selanjutnya  tambahkan aquadest sebanyak 160 ml ke dalam erlenmeyer yang sudah terdapat Buffered Pepton Water , aduk  hingga  homogen  dan  panaskan  menggunakan  hot  plate  hingga  larut  sempurna.  Lalu ditutup dengan kapas steril. Setelah Buffered Pepton Water larut sempurna, masukkan ke dalam autoklaf dengan suhu 121°C selama 15 menit.

## Homogenasi dan Pengenceran Sampel Uji ALT Sampel Tester Lipstik Cair
Sterilisasi LAF dan tangan dengan alkohol 70%. Dilakukan proses homogenisasi secara aseptis dengan mengambil 1 ml sampel tester lipstik cair dengan menggunakan mikropipet 100 –  1000µl,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang  berisi  9  ml Buffered  Pepton Water (BPW) dan dihomogenkan sehingga didapatkan pengenceran 10 -1 (Huang et al., 2021). Disiapkan 4 tabung reaksi, masing-masing tabung diisi dengan 9 ml pengencer Buffered Pepton Water (BPW). Pengenceran dilakukan dengan mengambil 1 ml dari hasil pengenceran 10 -1 dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dihomogenkan sehingga diperoleh pengenceran 10 -2 . Selanjutnya, ulangi langkah yang sama hingga mencapai pengenceran 10 -5 .

## Sampel Tester Lipstik Padat
Sterilisasi LAF dan tangan dengan alkohol 70%. Dilakukan proses homogenisasi secara aseptis  dengan  menimbang  1  g  sampel  tester  lipstik  padat,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam tabung reaksi yang berisi 1 ml tween 80 steril, lalu dihomogenkan. Selanjutnya tambahkan 8 ml Buffered  Pepton  Water (BPW)  sehingga  didapatkan  volume  total  menjadi  10  ml  dan memperoleh pengenceran 10 -1 (Huang et al., 2021).  Disiapkan 4 tabung reaksi, masing-masing tabung  diisi  dengan  9  ml  pengencer Buffered  Pepton  Water (BPW).  Pengenceran  dilakukan dengan mengambil 1 ml dari hasil pengenceran 10 -1 dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan  dihomogenkan  sehingga  diperoleh  pengenceran  10 -2 .  Selanjutnya,  ulangi  langkah  yang sama hingga mencapai pengenceran 10 -5 .

## Uji Angka Lempeng Total (ALT)
Dari setiap tingkat pengenceran dari mulai pengenceran 10 -1 sampai 10 -5 , diambil 1 ml suspensi pengenceran dengan menggunakan mikropipet 100 – 1000µl, dan dituang ke dalam cawan petri steril dan dilakukan secara duplo. Setiap cawan petri diisi dengan 15 ml  - 20 ml media Plate Count Agar (PCA), lalu digoyangkan dengan lembut membentuk angka delapan untuk  meratakan  sampel  dan  media.  Setelah  media  membeku,  cawan  petri  diinkubasi  dalam posisi  terbalik  pada  suhu  37°C  selama  48  jam.  Jumlah  koloni  yang  tumbuh  diamati  dan dihitung. Untuk menghitung jumlah total koloni dalam 1 ml sampel, digunakan perkalian antara jumlah  rata-rata  koloni  pada  cawan  petri  dengan  faktor  pengenceran  yang  telah  digunakan. Adapun rumus ALT sebagai berikut (Said et al., 2023):
Jumlah Koloni Setiap Cawan x 1

## 𝐹𝑎𝑘𝑡𝑜𝑟 𝑃𝑒𝑛𝑔𝑒𝑛𝑐𝑒𝑟𝑎𝑛

## Pewarnaan Gram Positif
Untuk langkah pengecatan pertama menggunakan larutan kristal violet digunakan dan preparat dibiarkan berwarna ungu selama 20 detik, diikuti dengan pembilasan menggunakan air  suling.  Selanjutnya,  pada  pengecatan  kedua,  lugol  iodin  didiamkan  selama  satu  menit, kemudian  dilakukan  pembilasan  menggunakan  air  suling.  Selanjutnya,  digunakan  larutan alkohol 70% sebagai pembilas ( decolorizer ) selama 30 detik, lalu diikuti dengan pembilasan lagi  menggunakan  air  suling.  Pada  langkah  pengecatan  terakhir,  safranin  digunakan  dan didiamkan selama 30 detik, kemudian kembali dibersihkan menggunakan air suling. Preparat tersebut kemudian diamati di bawah mikroskop (Septiani, 2022).

## Analisis Data
Analisis  data  menggunakan  analisa  deskriptif  yaitu  dengan  menghitung  hasil  % (persentase)  dari  hasil  Angka  Lempeng  Total  (ALT)  kemudian  dibandingkan  dengan persyaratan  yang  terdapat  dalam  Peraturan  Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan  (BPOM) Nomor 12 Tahun 2019 Tentang Cemaran Produk Kosmetika. Adapun rumus persentase sebagai berikut (Syafril, 2019):
𝑃 = 𝐹 𝑁 𝑋 100%
Keterangan: P = Persentase sampel F = Frekuensi sampel N = Jumlah Sampel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini  dilakukan  analisis  cemaran  bakteri Staphylococcus  aureus pada tester lipstik cair dan padat dengan metode uji Angka Lempeng Total (ALT) untuk mengetahui banyaknya  cemaran  bakteri  yang  terdapat  dalam  tester  lipstik,  sehingga  dapat  menghimbau masyarakat  untuk  tidak  mengaplikasikan  tester  lipstik  langsung  ke  bibir  guna  untuk menghindari kontaminasi bakteri. Tahapan pada penelitian ini meliputi persiapan pengambilan
sampel tester lipstik cair dan padat, sterilisasi alat dan bahan, pembuatan media pertumbuhan bakteri,  homogenasi  dan  pengenceran  untuk  uji  ALT,  perhitungan  jumlah  koloni,  dan pewarnaan gram positif.

## Uji Angka Lempeng Total (ALT)
Sampel dalam penelitian ini yaitu 3 sampel tester lipstik cair dan 3 sampel tester lipstik padat  dengan  melihat  volume  yang  tersisa  ±  2  ml  pada  tester  lipstik.  Pengujian  ALT menerapkan metode pour plate yang dilakukan dengan menanam sampel uji ke dalam cawan petri steril dan selanjutnya ditambahkan media dan reagen ke dalamnya. Sampel uji disiapkan dengan cara dilakukan pengenceran agar memudahkan penghitungan jumlah koloni mikroba yang  tumbuh  di  media  dan  membantu  mencegah  penumpukan  koloni  bakteri  pada  media (Erikania & Rosalina, 2022). Media yang digunakan pada penelitian ini yaitu Buffered Pepton Water (BPW) dan Plate Count Agar (PCA). Hasil jumlah cemaran bakteri pada tester lipstik cair dan tester lipstik padat dapat dilihat pada tabel di bawah ini.
Tabel 1. Hasil Jumlah Cemaran Bakteri Angka Lempeng Total (ALT) Pada Tester
Lipstik Cair. Sampel  Pengenceran Jumlah Koloni (CFU) Angka Lempeng Total (CFU/ml) Ket. Cawan 1  Cawan 2 Rata- rata P 10 -1 0 0 0 < 1 x 10 4 TMS 10 -2 0 0 0 10 -3 0 0 0 10 -4 1 0 0,5 10 -5 1 0 0,5 Q 10 -1 0 0 0 2,2 x 10 5 TMS 10 -2 174 258 216 10 -3 33 21 27 10 -4 84 39 61,5 10 -5 18 20 19 TMS
R 10 -1 10 25 17,5 3,2 x 10 6
10 -2
184 48 116 10 -3 13 23 18 10 -4 9 115 62 10 -5 157 25 91 Sumber: Hasil Olahan Penulis (2024) Keterangan: TMS = Tidak Memenuhi Syarat
Syarat BPOM  = Tidak lebih dari 10 3 CFU/ml = Angka yang masuk dalam perhitungan ALT (30-300 koloni bakteri)
Pada  tabel  1.  hasil  uji  Angka  Lempeng  Total  (ALT)  semua  sampel  tester  lipstik  cair tidak memenuhi syarat BPOM. Pada sampel P didapatkan angka cemaran bakteri terendah yaitu < 1 x 10 4 CFU/ml, tetapi tidak memenuhi syarat BPOM yaitu tidak lebih dari 10 3 CFU/ml. Pada sampel  Q  didapatkan  hasil  cemaran  2,2  x  10 5 CFU/ml.  Pada  sampel  R  didapatkan  angka cemaran yang terbesar yaitu 3,2 x 10 6 CFU/ml.
Tabel 2. Hasil Jumlah Cemaran Bakteri Angka Lempeng Total (ALT) Pada Tester
Lipstik Padat. Sampel  Pengenceran Jumlah Koloni (CFU) Angka Lempeng Total (CFU/ml) Ket. Cawan 1 Cawan 2 Rata-rata X 10 -1 32
480 (TBUD) 256 4,2 x 10 6 TMS 10 -2 372 (TBUD) 186 279 10 -3 124 67 95,5 10 -4 41 312 (TBUD) 176,5 10 -5 334 (TBUD) 47 190,5
Y
10 -1 31
32 31,5 1,5 x 10 6 TMS 10 -2 14 5 9,5 10 -3 305 (TBUD)  338 (TBUD) 321,5 10 -4 82 488 (TBUD) 285 10 -5 24 36 30
Z
10 -1 67 57 62 6,2 x 10 4 TMS 10 -2 118
115 116,5 10 -3 160 189 174,5 10 -4 19 11 15 10 -5 12 3 7,5 Sumber: Hasil Olahan Penulis (2024) Keterangan: TMS = Tidak Memenuhi Syarat TBUD = Terlalu Banyak untuk Dihitung
Syarat BPOM  = Tidak lebih dari 10 3 CFU/ml = Angka yang masuk dalam perhitungan ALT (30-300 koloni bakteri)
Berdasarkan  pada  tabel  2.  hasil  jumlah  cemaran  Angka  Lempeng  Total  (ALT)  yang terendah yaitu pada sampel Z yaitu 6,2 x 10 4 CFU/ml. Pada sampel Y didapatkan hasil yaitu 1,5  x  10 6 CFU/ml.  Pada  sampel  X  didapatkan  hasil  yang  terbesar  yaitu  4,2  x  10 6 CFU/ml. Semua sampel pada tester lipstik padat tidak memenuhi syarat batas cemaran kosmetika yang telah ditetapkan oleh BPOM.
Pada proses homogenasi sampel tester lipstik padat dengan menimbang 1 g sampel, lalu dimasukkan ke tabung reaksi yang berisi tween 80 steril yang berfungsi sebagai emulgator agar lipstik  dapat  bercampur  ketika  ditambahkan  8  ml Buffered  Pepton  Water (BPW),  lalu dihomogenkan  dan  didapatkan  pengenceran10 -1 .  Proses  pengenceran  sampel  dilakukan  pada konsentrasi  10 -1 sampai  10 -5 ,  bertujuan  untuk  mengurangi  populasi  mikroorganisme  agar jumlah  koloni  yang  tumbuh  menjadi  lebih  terukur.  Selanjutnya  tiap-tiap  1  ml  dari  hasil pengenceran dipipet ke dalam cawan petri, lalu dituang media Plate Count Agar (PCA) dengan metode agar tuang ( pour plate method ) sebanyak 15-20 ml dan dibiarkan padat, setelah padat di inkubasi selama 48 jam dengan suhu 37°C. Selanjutnya dimulai proses perhitungan koloni bakteri  yang tumbuh pada tiap-tiap cawan petri, dapat  dihitung  koloni antara 30-300 koloni, karena disebabkan oleh media agar dengan jumlah koloni tinggi (> 300 koloni) yang tidak valid untuk  dihitung,  karena  kemungkinan  besar  terjadi  kesalahan  perhitungan  yang  signifikan.
Sementara itu, jumlah koloni yang rendah (< 30 koloni) juga tidak valid untuk dihitung secara statistik (Sundari & Fadhliani, 2019). Hasil perhitungan cawan menggunakan satuan CFU/ml ( Colony Forming Unit) yaitu dengan menunjukkan jumlah koloni yang tumbuh per gram atau mililiter  sampel,  yang  dihitung  berdasarkan  jumlah  cawan,  faktor  pengenceran,  dan  volume yang digunakan menggunakan colony counter (Azizah & Soesetyaningsih, 2020) . Berdasarkan hasil penelitian, didapatkan hasil bahwa 6 sampel (tester lipstik cair + padat) tidak memenuhi syarat batas cemaran kosmetika yang sudah ditetapkan oleh BPOM yaitu tidak lebih dari 10 3 CFU/ml.

## Pewarnaan Gram Positif
Pada uji pewarnaan gram digunakan larutan kristal violet pada biakan bakteri berfungsi untuk memberikan pewarnaan pada bakteri tersebut, bakteri akan berwarna merah dan ungu. Penuangannya harus merata agar bakteri dapat terwarnai dengan sempurna. Penggunaan lugol iodin  atau  iodium  cair  bertujuan  untuk  memperkuat  pengikatan  warna  oleh  bakteri  yang berperan  sebagai  disinfektan  dan  antiseptik,  serta  berfungsi  untuk  memperkuat  ikatan  pada kompleks  Mg-Ribonucleic  acid,  setelah  itu  bilas kembali  dengan  aquadest,  hal  ini  bertujuan untuk membersihkan sisa yodium pada bakteri (Lainjong, 2024). Penetesan alkohol 70% pada biakan bakteri bertujuan untuk membersihkan lemak pada dinding sel dan melunturkan warna ungu dari kompleks kristal ungu dan iodin. Setelah dibilas dengan air mengalir bertujuan agar warna  dapat  luntur  dengan  sempurna  sehingga  tidak  ada  sisa  larutan  di  obyek  glass.  Pada bakteri gram positif akan tetap mempertahankan warna ungunya karena dinding selnya tersusun peptitidoglikan  yang  terdapat  senyawa  yang  disebut  asam  teikoat.  Selanjurnya,  pewarnaan akhir  menggunakan  safranin  yang  merupakan  pewarna  sekunder  berfungsi  untuk  mewarnai kembali sel-sel yang kehilangan pewarna utama setelah perlakuan alkohol. Safranin masuk ke dalam sel  dan  menyebabkan sel  pada bakteri gram  negatif berwarna merah, sedangkan pada bakteri gram positif tetap mempertahankan warna ungu (Amin et al., 2023). Hasil pewarnaan gram dapat dilihat pada tabel di bawah ini.
Tabel 3. Hasil Pewarnaan Gram Sampel Tester Lipstik Cair Sampel Hasil Pengamatan dengan Perbesaran 100X/1,25 Keterangan
P
1. Bentuk coccus (bulat) 2. Bergerombol membentuk anggur 3. Berwarna ungu
4. Hasil + (positif) adanya bakteri Staphylococcus aureus
Q
1. Berbentuk basil (batang) 2. Membentuk endospora berbentuk oval 3. Hasil – (negatif) tidak menunjukkan adanya bakteri Staphylococcus aureus R 1. Bentuk coccus (bulat) 2. Bergerombol membentuk anggur
3. Berwarna ungu 4. Hasil + (positif) adanya bakteri Staphylococcus aureus Sampel Tester Lipstik Padat
Sampel Hasil Pengamatan dengan Perbesaran 100X/1,25 Keterangan X 1. Bentuk coccus (bulat) 2. Bergerombol membentuk anggur 3. Berwarna ungu 4. Hasil + (positif) adanya bakteri Staphylococcus aureus Y 1. Bentuk coccus (bulat) 2. Bergerombol membentuk anggur 3. Berwarna ungu 4. Hasil + (positif) adanya bakteri Staphylococcus aureus
Z
1. Bentuk coccus (bulat) 2. Bergerombol membentuk anggur
3. Berwarna ungu 4. Hasil + (positif) adanya bakteri Staphylococcus aureus Sampel Hasil Pengamatan dengan Perbesaran 10X/0,25 Keterangan Kontrol 1. Bentuk coccus (bulat) 2. Bergerombol membentuk anggur
3. Berwarna ungu 4. Tidak berspora 5. Tidak berkapsul
Sumber: data diolah
Hasil pengamatan secara mikroskopis pewarnaan gram pada sampel tester lipstik cair dan padat didapatkan 5 sampel yang memiliki karakteristik bakteri Staphylococcus aureus yang menunjukkan  bakteri  berwarna  ungu,  berbentuk  coccus  yang  bergerombol  seperti  anggur, terdapat juga coccus yang tersusun secara tidak teratur, berpasangan atau satu-satu. Sedangkan untuk 1 sampel yaitu Q didapatkan bentuk bakteri basil (batang), membentuk endospore yang berbentuk oval, membentuk rantai panjang. Untuk dapat mengetahui lebih pasti jenis bakteri tersebut diperlukan untuk dilakukan pengujian lebih spesifik jenis bakteri tersebut . Kemudian langkah  terakhir  yaitu  mengamati  dibawah  mikroskop  dengan  perbesaran  100X  dibawah mikroskop yang bertujuan untuk melihat bentuk bakteri yang diamati, hasilnya bakteri tersebut mempunyai  bentuk  coccus,  sedangkan  untuk  kontrol  digunakan  pebesaran  10X  digunakan untuk  melihat  warna  bakteri,  pada  penelitian  pewarnaan  gram  yang  telah  dilakukan menghasilkan warna ungu (Lainjong, 2024).
Analisis Data
Tabel 4. Persentase Hasil Angka Lempeng Total Bakteri Staphylococcus aureus pada
Tester Lipstik Cair dan Padat Angka Lempeng Total Bakteri Staphylococcus aureus (CFU/ml) Jumlah Lipstik Cair dan Padat Tester Persentase (%) < 1 x 10 4 sampai 6,2 x 10 4 2 40% 1,5 x 10 6 sampai 4,2 x 10 6 3 60% Total 5 100%

## Sumber: Hasil Olahan Penulis (2024)
Berdasarkan  tabel  4.  hasil  persentase  dapat  diketahui  bahwa  ditemukan  adanya pertumbuhan koloni bakteri Staphylococcus aureus pada sampel tester lipstik cair dan padat. Persentase dari hasil Angka Lempeng Total (ALT) keseluruhan dari gabungan 5 sampel hasil jumlah  sampel  tester  lipstik  cair  dan  padat,  kecuali  pada  sampel  Q  karena  negatif Staphylococcus  aureus didapatkan hasil berkisar  antara <  1 x 10 4 sampai  6,2 x 10 4 CFU/ml didapatkan  persentase  sebanyak  40  %,  untuk  kisaran  1,5  x  10 6 sampai  4,2  x  10 6 CFU/ml didapatkan hasil persentase sebanyak 60%.

## PENUTUP Simpulan
Dari hasil uji Angka Lempeng Total (ALT) dapat disimpulkan bahwa semua 6 sampel tester lipstik cair dan tester lipstik padat tidak memenuhi syarat BPOM yaitu tidak lebih dari 10 3 CFU/ml, sedangkan untuk hasil dari pewarnaan gram bakteri Staphylococcus aureus pada tester  lipstik  cair  dan  padat  pada  6  sampel  didapatkan  5  sampel  yang  positif  dan  1  sampel negatif.

## Saran
Bagi  peneliti  selanjutnya  diharapkan  untuk  meneliti  lebih  lanjut  tentang  identifikasi jenis mikroorganisme/ Uji Angka Kapang Khamir (AKK) pada sampel kosmetik tester, serta mampu mengidentifikasi secara spesifik mikroorganisme tersebut.

## DAFTAR PUSTAKA
Amin, S. S., Ghozali, T. Z., Rusdiana, M., & Efendi, S. (2023). Identifikasi bakteri dari telapak tangan dengan pewarnaan gram. CHEMVIRO: Jurnal Kimia Dan Ilmu Lingkungan, 1(1), 30–35.
Azizah,  A.,  &  Soesetyaningsih,  E.  (2020).  Akurasi  perhitungan  bakteri  pada  daging  sapi menggunakan metode hitung cawan. Berkala Sainstek, 8(3), 75.
BPOM. (2019). Cemaran dalam kosmetika. Peraturan Badan Pengawas  Obat  Dan Makanan,
88, 2 p.
Erikania, S., & Rosalina, V. (2022). Mikrobiologi farmasi, teori dan praktik. Deepublish.
Fatmawaty, A., Khairi, N., Yusuf, N. A., I. (2017). Sains dan Teknologi Kosmetik. Deepublish. Huang, J., Hitchins, A. D., Tran, T. T., & McCarron, J. E. (2021). BAM chapter 23: methods for cosmetics. Bacteriological Analytical Manual, 1–11.
Imasari, T., & Emasari, F. (2021). Deteksi bakteri Staphylococcus sp. penyebab jerawat dengan tingkat  pengetahuan  perawatan  wajah  pada  siswa  kelas  xi  di  smk  negeri  1  pagerwojo. Jurnal Sintesis: Penelitian Sains, Terapan Dan Analisisnya, 2(2), 58–65.
Istiqomah, R.R., Sukmana, D.J,. Utami, E.F.,  et all. (2020). Buku metode penelitian kualitatif & kuantitatif. In CV. Pustaka Ilmu.
Jamilatun, M.  (2022).  Analisis cemaran mikroba angka lempeng total  (alt) pada kue  jajanan pasar. Jurnal Ilmiah Multidisiplin, 1(5), 1243–1248.
Lainjong, E. (2024). Identification of air bacteria using gram style methods in the integrated laboratory of bina mandiri university gorontalo. West Science Interdisciplinary Studies, 2(02), 485–494.
Monica,  F.,  Qorry  Aina,  G.,  &  Irianti  Rukmana,  D.  (2023).  Gambaran  cemaran  bakteri Staphylococcus  aureus  pada  lipstik  cair  tester.  Jurnal  Kesehatan  Dan  Pembangunan, 13(26), 50–57.
Rahmah, Jabal, C., Pujiyanto,  S., &  Rukmi,  I. (2021). Analisis mikrobiologis produk lipstik cair yang digunakan oleh penata rias. Journal of Biology and Applied Biology, 4(2), 105– 114.
Said, M. A., Utami, R. W., & Khumaira, A. (2023). Uji angka lempeng total (alt) dan angka kapang khamir (akk) simplisia kunyit (curcuma domestica). 1, 231–236.
Septiani, D. (2022). Modul praktikum mikrobiologi dan parasitologi. 1–35. Sundari, S., & Fadhliani. (2019). Uji angka lempeng total ( alt ) pada sediaan kosmetik lotion x di bbpom medan. Jurnal Biologica Samudra, 1(1), 25–28.
Syafril. (2019). Statistik pendidikan (1st ed.). Prenadamedia Group.
Vassoler, M., Tonial, F., Fagundes, S. C., Fagundes, M. A., Zortéa, N. B., Rossato-Grando, L. G.,  &  Bertol,  C.  D.  (2020).  Microbiological  contamination  of  in-store  lipstick  testers available to the consumer. Mundo Da Saude, 55(3), 261–268.
Wenas, D. M.,  Suardi, J., &  Wahidin, W. (2020).  Uji  cemaran mikroba pada sediaan lipstik cair. JUSTE (Journal of Science and Technology), 1(1), 49–60.