## APLIKASI ANALISA MORFOLOGI DAN DNA BARCODING PADA PENENTUAN JENIS KEPITING PORCELAIN (PISIDIA Sp.) YANG BERASAL DARI PULAU TUNDA, BANTEN
Application of Morphological  Analysis and DNA Barcode in Determination of The Porcelain Crab Species ( Pisidia sp .) from The Tunda Island, Banten
Teddy Triandiza 1* ,  Hawis Madduppa 2
1) Loka Konservasi Biota Laut Tual, LIPI,  Maluku Tenggara, 97612, Indonesia
2) Departemen ilmu dan Teknologi Kelautan, FPIK IPB, Bogor, 16680, Indonesia
* Korespondensi: teddy.triandiza27@gmail.com; hawis@ipb.ac.id

## ABSTRAK
Fenomena cryptic species (hampir mirip) pada biota akuatik sering ditemukan pada ekosistem yang mengalami perubahan, seperti karang mati.  Karang mati menjadi habitat yang  masih  dapat  dimanfaatkan  biota  laut  salah  satunya  kepiting  decapoda  familia Porcellanidae.. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi dan memastikan jenis dari kepiting  porcelain  yang  berasal  dari  Pulau  Tunda,  Banten  dengan  mengaplikasi  analisa mororfologi  dan  teknik  DNA  barcoding.  Hasil  analisa  morfologi  menunjukkan  bahwa sampel  decapoda  yang  di  analisis  merupakan  kepiting  dari  genus Pisidia familia Porcellanidae  dengan  karekteristik  morfologi  rasio  ukuran  karapas  lebih  panjang  dari pada  lebar,  antena  panjang  dan  bisa  digerakkan,  bagian  rostrum  anterior  bergerigi,  capit agak pipih dan ukuran lengan tidak sama besar. Sedangkan berdasarkan analisis barcode secara  molekuler  menggunakan  COI,  maka  didapatkan  hasil Anomura  sp. dengan persentase  kesamaan  identifikasi  94%. Perbedaan  tersebut  di  duga  karena  pada  genbank belum terdapat data genetik yang sesuai.
Kata kunci : Spesies samar; analisa morfologi; DNA barcoding; Pisidia; Anomura

## ABSTRACT
The  phenomenon  of  marine  cryptic  species  is  frequently  found  in  altered ecosystem such as dead corals habitat. Dead corals as habitat can be used by marine fauna like crustacean from family of porcellanidae. This study was aimed to identify and clarify the  species  of  porcelain  crab  from  Tundai  sland,  Banten  province  by  applying  the morphological  analysis  and  DNA  barcoding  technique.  The  result  of  morphological analysis  showed  that  decapod  samples  were  crabs  of  the  genus Pisidia, family  of Porcellanidae  with  specific  morphological  characteristics  were  the  ratio  of  carapace  size is longer than tbroad, have long antennae which can be moved, serrated anterior rostrum, chelae  rather  flattish  and  unequal  size  of  arms.  While  based  on  molecular  barcode analysis by using COI, samples were identified as Anomura sp . with 94% of similarities. The  difference  of  the  result  was  suspected  due  to  the  lack  of  suitable  genetic  data  on genbank.
Keywords : Cryptik  spesies;  morphological  analysis;  DNA  barcoding ;  Pisidia, Anomura

## PENDAHULUAN
Terumbu karang merupakan ekosistem  yang  memiliki  potensi  ke- anekargaman hayati tinggi. Luas terumbu karang  di  Indonesia  mencapai  51.000 km 2 atau  51%  dari  total  luas  terumbu karang  di  Asia  Tenggara  (Burke, dkk ., 2002),  bahkan  Hutomo  dan  Moosa (2005) mengestimasi luas terumbu karang  Indonesia  mencapai  75.000  km 2 . Ekosistem  terumbu  karang  berperan penting  sebagai  habitat  bagi  kehidupan beranekaragam  biota  laut.  Dahuri  (2003) menyatakan  bahwa  ekositem  terumbu karang  menjadi  tempat  kehidupan  300 jenis  karang,  2000  jenis  ikan  dan  ikan dan berpuluh-puluh jenis moluska, crustacea ,  sponge, alge ,  lamun  serta biota  lainnya.  Namun  terumbu  karang merupakan  ekosistem  yang  paling  peka terhadap  perubahan  lingkungan  baik yang  ditimbulkan  secara  alami  maupun aktivitas antrpogenik. Giyanto dkk . (2017)    menyatakan  status  terumbu karang  Indonesia  hanya  6,39%  dari  yang masih dalam kondisi sangat baik, 22,07% pada  kondisi  baik,  38,74%  pada  kondisi cukup dan sisa nya 35,14% dikategorikan pada  kondisi  jelek.    Terumbu  karang yang  rusak  akibat  tekanan  antrogenik (bom,  racun  sianida,  pencemaran)  dan pemanasan global akan tetap di- manfaatkan sebagai habitat spesies invertebarata  terutama  jenis  krustacea. Perubahan  yang  terjadi  pada  ekosistem terumbu  karang  akan  mengubah  kondisi ekosistem  dan  berpengaruh  terhadap keanekargaman  biota  laut  di  dalamnya salah satunya fenomena cryptic spesies. Cryptik  species adalah  dua  atau lebih  spesies  berbeda  yang  diklasi- fikasikan  sebagai  spesies  tunggal  karena kemiripan  morfologinya.    Fenomena cryptic  species ini dapat  menyebabkan masalah  sinonim  yaitu  terdapat  nama ganda  pada  satu  spesies  yang  sama  atau sebaliknya  (Bickford dkk .,  2006).    Ke- salahan  indentifikasi  pada  biota  kriptik disebabkan    karena  biota  ini  memiliki ukuran  yang  kecil,  berkamuflase  atau mimikri,  dan  hidup  dihabitat  tersem- bunyi.  Fenomena cryptic  species sering
ditemukan  pada  biota  akuatik,  seperti pada  ikan  pari  (Arlyza dkk., 2013), kerang  kima  jenis T.  crocea,  T.  maxima dan T. squamosa (Findra dkk., 2017), dan decapoda  (Knowlton,  1986).  Salah  satu kelompok  decapoda  yang  menunjukkan fenomena cryptic species adalah keluarga Porcellanidae (Werding and Hiller,
2002).
Porcellanidae  merupakan  kelom- pok  kepiting  anomura  yang  masuk kedalam  superfamili  Galatheoidea  dan infraordo  Anomura.  Kepiting  ini  lebih  di kenal  dengan  nama  kepiting  porcelain. Kepiting  porcelain  umumnya  memiliki ukuran  tubuh  yang  kecil  dan  sulit  di- bedakan  di  antara  jenis  dalam  kelompok ini.    Biota  ini  tersebar  di  seluruh  dunia, hidup  pada  zona  intertidal  dan  sublitoral di  daerah  tropis  dan  subtropis,  dengan habitat  pantai  berbatu,  soft  coral,  makro algae dan terumbu karang (Werding dkk ., 2003).  Osawa  dan  McLaughlin  (2010) menyatakan  terdapat  280  jenis  kepiting porcelain  yang  terbagi  ke  dalam  30 genus.  Tingginya  keanekargaman  hayati kepiting Porcellanidae menyebabkan kepiting ini sering bermasalah secara tak- sonomi  karena  secara  literatur  ekologis, taksonomis  dan  filogentik  belum  banyak diketahui  sehingga  me-merlukan  analisa yang  lebih  mendalam  (Werding dkk., 2001; Rodríguez e t al. , 2006; Osawa dan McLaughlin, 2010). Contoh jenis kepiting  porcelain  yang  mengalami kesalahan taksonomi adalah pada Pachycheles chubutensis dan Pachycheles laevidactylus yang dianggap kepiting sejenis atau secara sinonim sama (Booschi,  1963),  namun  ternyata  secara genetik  memiliki  perbedaan  pada  ciri morfologis  chelipeds  (Miranda dkk ., 2014).
Permasalahan  fenomena  cryptik species pada biota laut dapat diselesaikan melalui  pendekatan  komprehensip  de- ngan  mengabungkan  analisis  morfologi dengan  analisis  genetik  (DNA  bar- coding).  DNA  barcoding  merupakan teknik  mengenali  spesies  berdasarkan barkode  biologi  dari  uratan  pendek  basa nukleotida  yang  telah  distandarisasi (Hajibabaei dkk. ,  2006).  Kelompok  gen
yang  sering  digunakan  adalah  gen  yang berasal  dari  mitokondria.  Salah  satu  gen yang  digunakan  dalam  marka  genetik mitokondria adalah gen sitokrom oksidase  subunit  1  yang  dikenal  sebagai COI.    Menurut  Waugh  (2007)  marka genetik  COI  dapat  digunakan  sebagai penanda  variasi  yang  akurat  untuk mengidentifikasi  berbagai  macam  hewan sampai  tingkat  spesies.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengidentifikasi  dan memastikan  jenis  dari  kepiting  porcelain yang  berasal  dari  Pulau  Tunda,  Provinsi banten  dengan  mengaplikasi  analisa mororfologi dan teknik DNA barcoding.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Lokasi Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada bulan Mei  sampai  dengan  Juli  2017.  Pe- ngambilan sampel decapoda dilakukan di Pulau  Tunda,  Serang,  Propinsi  Banten. Sedangkan  untuk  analisa  molekuler dilakukan  di  Laboratorium  Biodiversitas dan  Biosistematika  Kelautan  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  Institut Pertanian Bogor.

## Metode Pengambilan sampel
Pengambilan  sampel  dilakukan  di daerah  terumbu    karang  dengan  me- nggunakan peralatan selam, pahat, martil, plastik  dan    ember.  Sampel  decapoda   di ambil  dari  karang  mati  genus Acropora sp, Pocillopora sp dan Porites sp . Koloni karang  mati  dibungkus  plastik    sebelum dilepaskan  dari  substrat  dengan  tujuan agar  biota  yang  didalamnya  tidak  hilang. Setelah  itu  disimpan  dalam  ember  guna mempermudah pengangkatan sampel.

## Sortir dan Identifikasi Sampel
Sampel disortir dari pecahan karang  mati  kemudian  diidentifikasi dengan  merujuk  Haig  (1992),  Osawa (2007),    Chan  (2010),  dan  Poore  (2004). Sampel  decapoda  kemudian  dicelupan pada  minyak  cengkeh  untuk  membuat biota  tersebut  pingsan  sehingga  doku- mentasi  bisa  diproses  dengan  baik. Dokumentasi fauna kriptik menggunakan Kamera  DSLR  dan  Iphone  6  yang
terpasang  di  Mikroskop  Motic  K-Series 700L.  Kemudia  sampel  dimasukkan  ke dalam  botol  sample  yang  telah  berisi etanol  96%  untuk  di  identifikasi  lebih lanjut di bawah mikroskop dan di analisis molukuler  dengan  teknik  DNA  bar- coding.

## Ekstraksi dan Isolasi DNA
Jaringan    kepiting  porcelain  untuk ekstraksi  DNA  berasal  dari  kaki  jalan (Pereopod)  ke  2  sebelah  kanan.  Sebelum dilakukan  isolasi  dan  ekstraksi,  sampel kima  dicuci  menggunakan  Low    TE. Jaringan  otot  dihancurkan  kemudian  di- lisis  menggunakan  proteinase  K  0,125 mg/ml  dan  sodium  dodesil  sulfat  1%. Pemisahan  dan  pemurnian  DNA  dari bahan organik lain selanjutnya mengikuti petunjuk  kit  ekstraksi  Genomic  DNA mini  kit  for  animal  tissue.  Amplifikasi dan  Visualisasi  Fragmen  DNA  Ruas  gen COI  genom  mitokondria  kemudian  di- amplifikasi  menggunakan  primer  DNA barcoding  untuk  decapod  yaitu  primer LCO1490  dan  HC01298  (Folmer dkk. 1994).  Amplifikasi    dilakukan    me- nggunakan  mesin  PCR  dengan  kondisi predenaturasi  94°C  selama  15  detik, dilanjutkan dengan 38 siklus yang terdiri atas  denaturasi    94°C    selama   30   detik, annealing    (penempelan)    50°C    selama 30  detik  dan  ekstensi  72°C  selama  45 detik serta ekstensi akhir 72°C  selama  3 menit.  Hasil    amplifikasi    selanjutnya diuji    elektroforesis  me-nggunakan  gel agarose 1.2% untuk mengetahui keberhasilan amplifikasi.

## Perunutan Fragmen DNA (Sequensing)
Produk    PCR    yang    baik    berupa pita    tunggal    yang    terlihat    pada    saat elektroforesis    dilanjutkan  ke  tahap sekuensing  untuk  melihat  runutan  basa nukleotida  pada  gen  target.  Metode sekuen yang digunakan adalah sekuensing  dengan  ABI  PRISM  377 sequencer  otomatis  oleh  Fasilitas  UAB DNA Sequencing Core.

## Analisa
Sampel  kepiting  porcelean  di analisa  morfologinya  melalu  foto  yang
telah  diambil  di  mikroskop,  kemudian digambarkan ulang pada sofware incspace.  Sedangkan  hasil  perunutan nukleotida  diedit  secara  manual  ber- dasarkan kromatogram
kemudian dijadikan input dalam pencarian  kesama- an  gen  menggunakan  BLAST  (Basic Local Alignment Search Tool) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).  Runutan nukleotida  semua  sampel  dan  yang homolog hasil BLAST saling di- sejajarkan menggunakan Clustal versi 2.0 yang  terdapat  dalam  program  MEGA versi 7.00 (Kumar dkk .,2016).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Analisa Morfologi
Hasil analisa morfologi menunjuk- kan  bahwa  sampel  decapoda  yang ditemukan  di  pecahan  karang  mati  Pulau Tunda  merupakan  kepiting  dari  genus
Pisidia familia  Porcellanidae.    Hasil analisis morfologi menunjukkan kesamaan  ciri  antara  genus Pisidia dengan genus Lissoporcellana seperti  ke dua  lengan  (cheliped)  yang  tidak  sama besar,  antena  yang  panjang  dan  karapas tidak  merata,  hampir  mulus  (striae)  di permukaan  dorsal.  Namun  berdasarkan kunci  identifikasi  Osawa  dan  Chan (2010)  terdapat  perbedaan  pada  chelae (capid), di mana jika genus Lissoporcellana chelae  (Capit)  me- ngembung  dan  subcilindris,  tidak  me- nunjukkan  perbedaan  morfologi  chelae antara jantan dan betina, di mana median lobe  selalu  dengan  median  notch  yang berbeda  .  Sedangkan  pada  genus Pisidia chelae  (capit)  agak  pipih,  menunjukan perbedaan  morfologi  antara  jantan  dan betina, di mana median lobe tanpa media notch (Gambar 1).
Gambar  1.  morfologi  chelae  pada Lissoporcellana dan Pisidia .  A1,  cheliped Lissoporcellana ;  A2,  bagian  dactylus  dari  chela Lissoporcellana ; B1,  cheliped
Pisidia ;  B2,  bagian  dactylus  dari  chela Lissoporcellana .  (Digambar  ulang  dari Dong and Li, 2014).
Karekteristik morfologi Pisidia sp. Secara  morfologi,  kepiting Pisidia sp. mempunyai  bentuk  rasio  ukuran karapas  lebih  panjang  di  banding  lebar, dengan  kulit  permukaan  dorsal  pada karapas  hampir  mulus  (striae)  (gambar 2a).  Median  Lobe  dari  rostrum  di bagian anterior  bergerigi  (2b).  Memiliki  antena panjang  dan  dapat  digerakkan  (2c). Kedua lengan (cheliped) memiliki ukuran yang    tidak  sama  besar,  ukuran  lengan
sebelah  kanan  lebih  besar  dari  sebelah kiri  (Gambar  3).  Lengan  sebelah  kiri memili  gerigi  seperti  duri  di  bagian carpus dan palm. Pada Carpus berjumlah dua  dan  palm  berjumlah  lima  (2c). Sedangkan  lengan  sebelah  kanan  duri berjumlah  tujuh  di  baian  palm,  di bagian carpus hanya satu (2d). Kaki jalan terdiri dari  merus,  carpus,  propodus,  dan dactylus.  Bagian  akhir  dari  dactylus dengan cakar tunggal (2e).
A1 B1 A2 B2
Gambar 2. Karakter morfologi yang menjadi acuan untuk identifikasi Pisidia sp
Gambar 3. Morofologi Pisidia sp.
Sampel  Jenis Pisidia  sp. yang
ditemukan di pulau tunda secara morfologi  hampir  mirip  dengan  dengan specimen  jenis Pisidia  serratifons ter- utama  yang  ditemukan  di  Pulau  Tikus, Pulau  Pari  (Anggraeni dkk., 2015). Namun bila dibandingkan dengan spesiemen  yang  ditemukan  di  Taiwan
(Osawa dan Chan, 2010) sedikit berbeda, di  mana  pada  bagian  lengan Pisidia serratifons tidak  terlalu  bergerigi  di bandingkan dengan jenis Pisidia sp yang terlihat jelas.

## Analisis DNA Barcoding
Hasil  penelitian  diperoleh  panjang DNA  688bp  (Gambar  4)  dan  komposisi nukleotida  sampel  jenis Pisidia  sp. yaitu
Timin  berjumlah  252  (36,63%),  Citosin 109  (15,84%),  Adenin  210  30,52%)  dan Guanin  117  (17,01%).  Nilai  kandungan basa  nukleotida  Timin  merupakan  yang terbanyak yaitu mencapai 36,63%.
Berdasarkan analisis barcode DNA gen  COI  Pada Pisidia  sp .  setelah dibandingkan  dengan database  GenBank NCBI didapatkan  tingkat  kemiripan  ter- tinggi  dimiliki  oleh  spesies Anomura  sp. dengan Max  score dan total  score yang sama  yaitu  937, query  cover 89%, E- value 0.0  dan Ident 94%.  Sekuen  Bank gen  yang  paling  mirip  dicirikan  dengan nilai Max  Score dan Total  Score sama, Query  Coverage mendekati  100%, E- value mendekati  0,  dan Ident mendekati 100%  pada  setiap  database  (Tabel  1).
bergerigi seperti duri 2a. Karapas
2b. Rostrum bergerigi
2c. Antena yang panjang dan bisa digerakkan
2d. Lengan kiri 2e. Lengan kanan
2e. kaki jalan
bergerigi seperti duri Ant ena bagian akhir dactylus
Gambar 4. Pensejaran  hasil sekuen gen COI  jenis Pisidia sp. asal Perairan Pulau Tunda, Banten.
Berdasarkan analisis barcode DNA gen  COI  Pada Pisidia  sp .  setelah dibandingkan  dengan database  GenBank
NCBI didapatkan  tingkat  kemiripan tertinggi  dimiliki  oleh  spesies Anomura sp. dengan Max  score dan total  score yang  sama  yaitu  937, query  cover 89%, E-value 0.0 dan Ident 94%. Sekuen Bank gen  yang  paling  mirip  dicirikan  dengan nilai Max  Score dan Total  Score sama, Query  Coverage mendekati  100%, E- value mendekati  0,  dan Ident mendekati 100% pada setiap database (Tabel 1).
Hasil  blast  mendapatkan  bahwa specimen kepiting porcelain yang berasal dari  Pulau  Tunda  hanya  terbaca  pada tingkat infraorodo yaitu Anomura.
Meskipun  pada  daftar  yang  ke  tujuh terdapat Psidia serratifrons namun
kesamaan  basa  nukleotida  hanya  88%.
Hasil  tersebut  di  duga  karena  pada genbank  belum  terdapat  data  genetik yang  sesuai  dengan  spesimen  yang didapat  yaitu Pisidia  sp. Anomura merupakan  infraodo  dari  sub  ordo Plocyemeta ordo decapoda yang
memiliki  keanekaragaman  morfologi  ter- tinggi.  Kepiting  Anomura  terdiri  dari kelompok  kepiting    pertapa,  kleompok seperti  udang  dan  kelompok  seperti kepiting.  Menurut  De  Grave dkk. (2009)
terdapat  2470  jenis  anomura  yang  telah teridentifikasi di seluruh dunia.
Tabel 1. Hasil BLAST basa nukleotida pada GenBank
Dekripsi Max score Total Score Query cover E Value ident Accesion Anomura sp. LPdivOTU392 isolate 1 cytochrome oxidase subunit I (COI) gene, partial cds; mitochondrial 937 937 89% 0.0 94% gi|305651 177|HM4 65764.1 Anomura sp. LPdivOTU392 isolate 5 cytochrome oxidase subunit I (COI) gene, partial cds; mitochondrial 920 920 82% 0.0 94% gi|305651 187|HM4 65769.1
TGGTCAACAAATCATAAAGATATTGGAACCTTATATTTTATTTTTGGTGCT TGAGCAGGAATAGTGGGCTCTTCATTAAGTTTAATTATTCGAGCTGAATTA GGACAACCAGGAAAATTAATTGGAGATGATCAAATTTATAATGTAGTAGT TACTGCTCATGCTTTTGTTATAATTTTCTTTATAGTAATACCAATTTTAATT GGAGGATTTGGTAACTGATTAGTTCCCTTAATACTAGGTGCTCCAGATATA GCATTTCCTCGTATAAATAACATAAGATTTTGACTTCTTCCCCCAGCTTTA ACACTTTTACTTATAAGAGGAATAGTTGAAAGAGGTGTAGGAACAGGATG AACTGTGTATCCACCCCTAGCATCAAACATTGCTCACGCAGGAGCTTCAGT AGATATAGGAATTTTTTCTCTTCATTTAGCAGGAGTTTCTTCAATTTTAGG AGCTGTAAACTTTATCTCTACTGTAATTAATATGCGATCAGCCGGAATAAC ATTTGATTGTTTACCTTTATTTGTCTGATCAGTATTTATTACAGCTATTTTA TTACTTTTATCATTACCAGTTTTAGCAGGAGCAATTACAATACTTCTTACA GATCGAAACTTAAATACATCATTTTTTGATCCTGTGATGGAGCTAATGTGA TAAATGCTATGCACAACCGAATTCG
Anomura sp. LPdivOTU392 isolate 3 cytochrome oxidase subunit I (COI) gene, partial cds; mitochondrial 917 917 90% 0.0 93% gi|305651 185|HM4 65768.1 Anomura sp. LPdivOTU392 isolate 2 cytochrome oxidase subunit I (COI) gene, partial cds; mitochondrial 865 865 82% 0.0 94% gi|305651 181|HM4 65766.1 Anomura sp. LPdivOTU392 isolate 2 cytochrome oxidase subunit I (COI) gene, partial cds; mitochondrial 835 835 80% 0.0 94% gi|305651 179|HM4 65765.1 Synuchus cycloderus voucher NSMK:IN-000783 cytochrome oxidase subunit I (COI) gene, partial cds; mitochondrial 728 728 90% 0.0 88% gi|305651 179|HM4 65765.1 Pisidia serratifrons isolate DeB42 cytochrome c oxidase subunit I (COI) gene, partial cds; mitochondrial 717 717 90% 0.0 88% gi|408830 915|JX50 2986.1 Porcellanidae sp. PNG-0129 cytochrome oxidase subunit 1 (COI) gene, partial cds; mitochondrial 695 695 90% 0.0 87% gi|100309 1142|KU2 85883.1

## KESIMPULAN
Hasil analisis morfologi secara ke- seluruhan  menunjukkan  bahwa  specimen kepiting  porcelain  yang  berasal  dari
Pulau  Tunda  Banten  merupakan  jenis Pisidia sp . dari genus Pesidia . Sedangkan berdasarkan  analisis    DNA  Barcoding hanya  terbaca  pada  tingkat  infraorodo yaitu Anomura
dengan persentase kesamaan identifikasi 94%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  rekan-rekan  di  Pascasarjana  Ilmu
Kelautan  IPB  angkatan  2016,  Asisten
Mata  Kuliah  Biodiversitas    dan  bapak
Agus Kusnadi, M.Sc yang telah membantu  dalam  penelitian  dan  pe- nulisan makalah ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anggraeni, P., Elfidasari, D., Pratiwi R., 2015. Sebaran kepiting (Brachyura) di Pulau Tikus, Gugusan  Pulau  Pari,  Kepulauan Seribu,  hal    213-221.  Prosiding Seminar Nasional Masyarakat Biodiversitas Indonesia. Univeristas Sebelas Maret. Surakarta. Arlyza,  I.S.,  Shen,  K.N.,  Solihin,  D.D., Soedharma, D., Berrebi, P., Borsa, P., 2013. Species boundaries in the Himantura uarnak species complex (Myliobatiformes: Dasyatidae). Mol.  Phyl.  Evol .
66:429–435.
Bickford, D.,  Lohman,  D.J.,  Sodhi, N.S.,
Ng, P.K.L., Meier, R., Winkler, K.,
Ingram,  K.K.,  Das,  I.,  2006.
Cryptic  species  as  a  window  on diversity and
conservation.
Ecology  and  Evolution. 22:148- 155.
Bliss,  D.E.,  1982. The  Biology  of Crustacea . Volume 1. Systematics, the Fossil Record, and Biogeography.  Academic  Press. New York .
Bickford, D.,  Lohman,  D.J.,  Sodhi, N.S.,
Ng, P.K.L., Meier, R., Winkler, K., Ingram,  K.K.,  Das,  I.,  2006. Cryptic  species  as  a  window  on diversity and
conservation.
Ecology  and  Evolution. 22:148-
155. Burke, L., Selig, E., Spalding,  M., 2002.
Terumbu  Karang  yang  Terancam di Asia Tenggara . World Resource Institut Washington.
Dahuri,  R.,  2003. Keanekaragaman Hayati  Laut:  Aset  Pembangunan Berkelanjutan Indonesia . Gramedia Pustaka Utama. Jakarta. Dutton,  I.M.,    Bengen,  D.G.,  Tulungan,
J.,  2000.  Oceanographic  Processes of  Coral    Reefs,  hlm  315-330. dalam  E.  Wolanski  (ed.). The Challenges of Coral Reef Management  in  Indonesia .  CRC press LLC. USA.
De  Grave.  S.,  Pentcheff,  N.D.,  Ahyong,
S.T.,  Chan,  T.Y.,  Crandall,  K.A., Dworschak,  P.C.,  Felder,  D.L., Feldmann, R.M., Fransen, C.H.J.M., Goulding, L.Y.D., Lemaitre, R., Low, M.E.Y., Martin, J.W., Ng, P.K.L., Schweitzer, C.E., Tan, S.H., Tshudy,  D.,  Wetzer,  R..  2009.  A classification  of  living  and  fossil generaof decapod Crustaceans. The Raffles Bulletin of Zoology, Supplement . 21:1–109. Findra,  M.N.,  Setyobudiandi,  I.,  Butet,
N.A., Solihin, D.D., 2017. Genetic profile  assessment  of  giant  clam genus Tridacna as  a  basis  for resource  management  at  Wakatobi National Park Waters. Ilmu Kelautan . 22(2):67-74. Folmer,  O.,  Black,  M.,  Hoeh,  W.,  Lutz, R.,  Vrijenhoek,  R.,  1994.  DNA primers for amplification of mitochondrial cytochrome c oxydase  subunitI  from  diverse metazoan  invertebrates. Mol  Mar Biol Biotech. 3(5): 294-299. Giyanto, Abrar, M., Hadi, T.A., Budiyanto, A., Hafizt, M., Salatalohy, A., Iswari, M.Y., 2017. Status  Terumbu  Karang  Indonesia 2017 .  dalam  Suharsono  (ed). Coremap  CTI,  Pusat  Penelitian Oseanografi-LIPI. Jakarta. Haig,  J.,  1992. Hong  Kong's  Porcellanid Crabs .  Hong  Kong  University Press.Hongkong. Hajibabaei, M., Daniel, H.J., John, M.B., Winnie,  H.,  Paul,  D.N.H.,  2009.
Dna barcode distinguish species of tropical  Lepidoptera. PNAS .  103:
968-971. Hutomo,  M.,  Moosa,  M.K.,  2005. Indonesian  Coastal  and  Marine Biodiversity: Present Status. Indian Journal of Marine Sciences . 14(1): 88-97 Knowlton,  N.,  1986.  Cryptic  and  sibling species among the decapod crustacea. Journal  Of  Crustacean Biology 6(3): 356-363. Kumar,  S.,  Stecher,  G.,  Tamura,  K., 2016. MEGA7: Molecular Evolutionary  Genetics  Analysis version  7.0  for  bigger  datasets. Mol Biol Evol. 33(7):1870-4.
Miranda,  I.,  Christoph,  D.S.,  Fernando, L.M.,  2104.  Morphological  and molecular data support the distinctiveness of Pachycheles laevidactylus Ortmann,  1892  and Pachycheles  chubutensis Boschi, 1963  (Anomura,  Porcellanidae).
Zootaxa . 3852 (1): 118–132. Osawa, M., 2007. Porcellanidae (Crustacea:  Decapoda:  Anomura) from  New  Caledonia  and  the Loyalty Islands. Zootaxa. 1548: 1– 49. Osawa,  M.,  McLaughlin,  P.A.,  2010.
Annotated  checklist  of  anomuran decapod  crustacean  (exclusive  of the Kiwaoidea and families Chirostylidae  and  Galatheidae  of Galatheoidea) Part II – Porcellanidae .  The  Raffles  Bulletin of Zoology . 23: 109–129. Osawa, M., Chan, T.Y., 2010. Crustacean fauna  of  Taiwan  :  crab-like anomurans (Hippoidea, Lithodoidea,  Porcellanidae),  hlm. 68-180. dalam T.Y.Chan (ed). Part III. Porcellanidae (Porcelain
Crabs) .    National  Taiwan  Ocean University. Taiwan. Poore,  G.C.B.,  2004. Marine  Decapod Crustacea  of  Southern  Australia  : A  Guide  to  Identification .  Csiro Publishing. Australia. Rodríguez,  I.T.,  Hernández,  G.,  Felder, D.L., 2006. Phylogenetic relationship among western Atlantic  Porcellanidae  (Decapoda: Anomura), based on partial sequences  of  the  mitochondrial 16S  rRNA  gene,  with  comments on morphology. Crustacean Research . 6: 115–130. Werding, B., Hiller, A., Misof,  B., 2001. Evidence  of  paraphyly  in  the neotropical Porcellanid genus Neopisosoma (Crustacea: Anomura:  Porcellanidae)  based  on molecular characters.
Hydrobiologia .  449  (1–3):  105– 110.
Waugh,  J.,  2007.  Dna  barcoding  in animal  species:  progress,  potential and  pitfalls. BioEssays. 29:188- 197. Werding, B., Hiller, A., 2002. Description  of  a  new  species  of Petrolisthes  from  the  western pacific (Decapoda, Anomura, Porcellanidae). Crustaceana .  77
(3), 257–264.
Werding,  B.,  Hiller,  A.,  Lemaitre,  R.,
2003. Geographic and depth distributional  patterns  of  western Atlantic  Porcellanidae  (Crustacea:
Decapoda:  Anomura),  with  an updated list of species. Memoirs of Museum Victoria . 60 (1): 79–85.