PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF SPONGE EXTRACT Aaptos aaptos FROM MANADO BAY
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL SPONS Aaptos aaptos DARI

## TELUK MANADO SULAWESI UTARA
Fitriawati Tongkali 1)* , Adithya Yudistira 1) ,  Elly Suoth 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *fitriawatitongkali@gmail.com

## ABSTRACT
The  Aaptos  aaptos  sponge  is  found  under  the  sea  and  this  sponge  contains  active  compounds  whose percentage of activity is greater than the compounds produced by land plants. This study aimed to examine the antioxidant activity of Aaptos aaptos. This research is a laboratory experiment by testing the ethanolic extract  of  the  sponge  Aaptos  aaptos  using  the  DPPH  (1,1-diphenyl-2-picrihydrazil)  method  to  test  the antioxidant  activity  measured  using  a  UV-Vis  Spectrophotometer  with  various  concentrations  of  10,15,20 and 25. Sponge Aaptos aaptos was obtained by maceration using 95% ethanol as solvent. The results of the average  %  inhibition  value  obtained  were  77.8%  (10mg/L);  81.1%  (15mg/L);  84%  (20mg/L);  and  85.4% (25mg/L).  The  highest  antioxidant  activity  was  found  at  a  concentration  of  25mg/L  with  an  average  % inhibition  value  of  85.4%.  This  indicates  that  the  ethanolic  extract  of  the  Aaptos  aaptos  sponge  has  high antioxidant activity.
Keywords : Antioxidant, DPPH, Sponge Aaptos aapto, Manado Bay.

## ABSTRAK
Spons Aaptos  aaptos terdapat  dibawah  laut  dan  spons  ini  mengandung  senyawa  aktif  yang  persentase keaktifannya lebih besar dibandingkan dengan senyawa yang dihasilkan oleh tumbuhan darat. Penelitian ini bertujuan  untuk  menguji  aktivitas  antioksidan  dari Aaptos  aaptos .  Penelitian  ini  merupakan  ekperimental laboratorium  dengan  pengujian  terhadap  ekstrak  etanol  spons Aaptos  aaptos dengan  metode  DPPH  ( 1,1- diphenil-2-pikrihidrazil )  untuk  menguji  aktivitas  antioksidan  yang  diukur  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  dengan  variasi  konsentrasi  10,15,20  dan  25.  Ekstrak  spons Aaptos  aaptos diperoleh  dengan  cara maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  95%.  Hasil  nilai  %  inhibisi  rata-rata  yang  didapat  yaitu  77,8% (10mg/L);  81,1%  (15mg/L);  84%  (20mg/L);  dan  85,4%  (25mg/L).  Aktivitas  antioksidan  tertinggi  terdapat pada konsentrasi 25mg/L dengan nilai % inhibisi rata-rata 85,4%. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol spons Aaptos aaptos memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi.
Kata kunci : Antioksidan, DPPH, Spons Aaptos aaptos , Teluk Manado.
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Terdapat  berbagai  banyak  zat  bioaktif  yang ditemukan pada bakteri laut, invertebrata, dan alga pada era tahun 1980-an dan 1990-an. Berbagai zat aktif yang diisolasi pada rumput laut, yaitu seperti polisakarida, asam lemak, protein, fenolik, terpena yang  dapat  menunjukkan  signifikan  aktivitas  anti tumor,  anti  bakteri,  anti  virus,  dan  anti  oksidatif (Yong Li et al., 2018).
Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  dapat menetralkan  atau  meredam  radikal  bebas,  serta menghambat  terjadinya  oksidasi  pada  sel  tubuh, sehingga  dapat  mencegah  atau  mengurangi terjadinya  oksidasi  pada  sel  tubuh  dan  terjadinya kerusakan sel (Hanani, 2006).
Spons Aaptos  aaptos mempunyai  nilai ekonomis  karena  spons  dari  genus  yang  dapat menghasilkan  senyawa  khusus  yaitu  aaptamine yang  dapat  digunakan  dalam  bidang  farmasi. Spons laut ini terbagi atas dua bagian yaitu secara eksternal  berwarna  ungu  kemerahan  dan  secara internal  kuning  kecoklatan.  Pada  spesimen intertidal,  permukaannya  berisi  butiran-butiran yang  kecil,  berkutil,  atau  halus  sedangkan spesimen  sublittoral  kelihatan  seperti  bongkahan- bongkahan  yang  tidak  beraturan.  Dimensi tubuhnya mempunyai ukuran tinggi 1,0 – 9,0 cm, lebar  4,2  –  4,8  cm,  ketebalan  dapat  mencapai  1,2 cm. Oskulanya kecil dan melimpah yang terdapat dibagian  tengah  apical  pada  spons  dengan diameter  3,0  –  4,0  mm . Rangkanya tersusun secara  radial  dengan  system  spikula  yang  kuat (Bergquist, 1968).
Metode peredaman radikal bebas DPPH ( 1,1- difenil-2-pikrilhidrazil ) adalah metode uji antioksidan  yang digunakan pada  penelitian  ini. Metode ini memerlukan sedikit sampel, sederhana,  mudah,  cepat  dan  peka  untuk mengevaluasi  aktivitas  antioksidan  dari  senyawa bahan alam (Hanani et al ., 2005)
Berdasarkan  uraian  latar  belakang  tersebut, peneliti  menganggap  bahwa  penelitian  tentang “Uji  Aktivitas  Antioksidan  Spons Aaptos  aaptos Dari Teluk Manado” perlu dilakukan.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Peneliatian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  April 2021  –  Juni  2021  di  Laboratorium  Penelitian Lanjut Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi.
Jenis Penelitian Jenis Penelitian yaitu eksperimental laboratorium  dengan  sampel  penelitian  spons Aaptos  aaptos yang  diambil  dari  Teluk  Manado dan diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan  pelarut  etanol  95%  lalu  dilakukan pengujian  aktivitas  antioksidan  terhadap  DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ).

## Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu scuba  diving , cool  box ,  peralatan  gelas ( Pyrex ), pipet tetes, timbangan digital, evaporator, mikro pipet dan spektrofotometer UV-Vis.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  sampel Aaptos  aaptos ,  etanol  95%,  serbuk  DPPH  ( 1,1- diphenil-2-picrylhydarzyl )  dan  serbuk  Vitamin  C sebagai pembanding.

## Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini diperoleh  dari  teluk  Manado.  Sampel  diambil dengan  menggunakan  alat  bantu (Scuba  diving) . Setelah  diambil  sampel  di  masukan  dalam kantong plastik jepit yang sudah di siapkan dan di simpan  dalam  kotak  pendingin  lalu  dibawah  ke Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program  Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi Manado .

## Preparasi Sampel
Spons Aaptos aaptos yang sudah di ambil di cuci  dengan  air  mengalir  untuk  membersikan kotoran  yang  menempel,lalu  dipotong  kecil-kecil dan  langsung  dimasukkan  kedalam  wadah  botol yang berisi pelarut etanol 95% sebanyak 200 mL.

## Ekstraksi
Sampel Aaptos  aaptos sebanyak  150  g dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  95%  sebanyak 200  mL  dengan  3  kali  pengulangan  selama  24 jam. Kemudian sampel disaring untuk mendapatkan  filtrat.  Hasil  yang  didapatkan kemudian  diuapkan  menggunakan  oven  sehingga menghasilkan ekstrak  kental  dari sampel.  Ekstrak kental  yang  didapatkan  disaring  kembali  dalam oven  pemanas  untuk  mendapatkan  ekstrak  kasar dari sampel tersebut. Penyaringan dilakukan untuk menghilangkan sisa garam pada ekstrak kental .
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## Pembuatan Larutan Stok
Ekstrak Aaptos  aaptos sebanyak 100  mg dilarutkan  kedalam  etanol  95%  sampai  100  mL. Kemudian dilakukan pengenceran dengan masing- masing  konsentrasi  10,15,  20,  dan  25  mg/L, dihitung dengan menggunakan rumus pengenceran, yaitu:
Hasil  V1  yang  didapatkan  dari  masing- masing  konsentrasi  dimasukkan  ke  dalam  gelas ukur  kemudian  ditambahkan  dengan  etanol  95% sehingga mencapai tanda batas 10 mL, selanjutnya ditutup menggunakan aluminium foil .

## Pembuatan Larutan DPPH
DPPH 4  mg dilarutkan  dalam  etanol  95% sampai  100  mL,  kemudian  larutan  stok  DPPH dilakukan  pengujian  kontrol,  di  uji  pada spektrofotmeter UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm.

## Pembuatan Larutan Vitamin C
Vitamin C sebanyak 10 mg dilarutkan dalam etanol  95%  sebanyak  10  mL,  kemudian  dibuat larutan  dengan  konsentrasi  10,  15,  20  dan  25 mg/L.  Masing  masing  konsentrasi  ditambahkan dengan etanol 95% sampai tanda batas 10 mL dan dibuat  sebanyak  3  kali  pengulangan.  Setelah pengujian  sampel  dengan  pengujian  kontrol dilanjutkan  pengujian  vitamin  C  pada  masing masing  konsentrasi  sampel  vitamin  C  dipipet sebanyak  2  mL,  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi  dan  ditambahkan  2  mL  larutan  DPPH. Kemudian di vortex selama 5 detik dan diinkubasi selama 30 menit. Sampel diuji pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm.
Pengujian  Larutan  Kontrol  DPPH  Aktivitas Antioksidan dengan     metode DPPH
Larutan kontrol DPPH diuji pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang
gelombang  517  nm  sebagai  absorbansi kontrol dalam  pengujian  ini.  Sampel  diinkubansi  selama 30  menit  pada  suhu  37ºC.  Untuk  mengetahui aktivitas  dari  penangkal  radikal  bebas  tersebut, diuji  pada  spektrofotometer.  Berubahnya  warna ungu  menjadi  warna  kuning  menunjukkan efisiensi penangkal radikal bebas. Diukur absorbansi pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang  gelombang  517  nm  setelah  diinkubasi
selama  30  menit  berubahnya  warna  menjadi kuning menunjukan bahwa masing-masing konsentrasi  menunjukkan  efisiensi  penangkal radikal  bebas  diuji  dengan  spektrofotometer  UV- Vis  dengan  panjang  gelombang  517  nm. Kemudian  diamati  perbandingan  dengan  vitamin C  p.a  sebagai  standar.  Aktivitas  penangkapan radikal  bebas  (persen  inhibisi)  dihitung  sebagai presentase  berkurangnya  warna  DPPH  dengan menggunakan rumus :

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Pengujian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui aktivitas antioksidan dan diuji pada spektrofotometer UV-Vis. Hasil pengujian disajikan pada tabel 1.

## Pembahasan Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Pada  penelitian  ini  sampel  yang  digunakan adalah  Spons Aaptos  Aaptos yang  diambil  di perairan  Teluk  Manado.  Pada  saat  sampel  akan dibawah  ke  laboratorium,  sampel  dimasukkan kedalam cool  box yang  berisi  es  batu  agar  tidak terkena matahari secara langsung.
Sebelum  dilakukan  proses  ekstraksi,  sampel yang  telah  didapat  langsung  dibersihkan  dari pengotor,  lalu  dipotong  kecil-kecil  kemudian langsung  dimasukkan  ke  dalam  botol  yang  berisi pelarut  etanol  95%.  Sifat  kelarutan  dari  pelarut dan  komponen  yang  akan  dilarutkan  merupakan dasar  dari  penambahan  pelarut  pada  suatu  bahan. Dalam penelitian ini menggunakan pelarut etanol. Pelarut  ini  dipilih  karena  mempunyai  sifat selektif,  dapat  bercampur  dengan  air  dengan segala perbandingan, ekonomis, mampu mengekstrak dan menyari sebagian besar kandungan  senyawa  yang  ada  dalam  simplisia. Sampel dipotong kecil kecil dikarenakan semakin kecil  ukuran  sampel,  interaksi  sampel  dengan pelarut semakin besar.

## Determinasi
Identifikasi  Spons Aaptos  aaptos bertujuan untuk  mengetahui  apakah  sampel  yang  diambil dari  perairan  Teluk  Manado  sudah  selesai. Identifikasi dilakukan di Laboratorium Farmakognosi  Program  Studi  Farmasi  Fakultas
V1. M1 = V2. M2
%inhibisi = 1 − Absorbansi sampel Absorbansi kontrol × 100%
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi Manado.

## Ekstraksi Sampel
Proses ekstraksi Spons Aaptos aaptos dengan menggunakan metode maserasi sedangkan pelarut yang  digunakan  untuk  sampel  tersebut  adalah etanol  95%  karena  pelarut  ini  bisa  melarutkan semua senyawa organik baik polar atau non polar. Remaserasi  atau  pengulangan  dilakukan  agar senyawa  kimia  didalam  sampel  dapat  terekstrak secara  menyeluruh.  Filtrat  1,  2  dan  3  yang diperoleh  dicampurkan  menjadi  satu.  Hasil  filtrat yang diperoleh kemudian dievaporasi menggunakan oven selama 1 x 24 jam. Evaporasi bertujuan  untuk  proses  pengentalan  larutan dengan  cara  mendidihkan  atau  menguapkan pelarut (Poedjiadi,1994). Setelah dioven dihasilkan  ekstrak  kental  sebanyak  16,7  g  yang berwarna  hitam.  Ekstrak  spons Aaptos  aaptos ini akan digunakan dalam uji aktivitas antioksidan.
Pengujian Aktivitas Antioksidan
Uji aktivitas pada penelitian ini menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1-  difenil-2- pikrilhidrazil ) karena metode ini paling sederhana, mudah  digunakan  semua  orang,  serta  hasilnya akurat.  DPPH  yang  merupakan  suatu  molekul radikal  bebas  dengan  warna  ungu  dapat  berubah menjadi  senyawa  yang  stabil  dengan  warna kuning  oleh  reaksi  dengan  antioksidan,  dimana antioksidan  memberikan  satu  elektronnya  pada DPPH  sehingga  terjadi  peredaman  pada  radikal bebas  DPPH . Pada  uji  ini  panjang  gelombang maksimum  pada  DPPH  tersebut  adalah  517  nm, pengukuran  absorbansi  pada  larutan  DPPH menggunakan  panjang  gelombang  400  sampai 600 dan hasil yang didapat pada absorbansi DPPH adalah  0,707.  Konsentrasi  yang  digunakan  yaitu 10,15,20  dan  25  mg/L.  Hasil  dari  ekstrak dilakukan pengukuran absorbansi dengan menggunakan  spektrofomoter  UV-Vis  dilakukan sebanyak 3 kali pada setiap konsentrasi (Yuhernita dan Juniarti, 2011).
Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan  dengan metode  DPPH  dapat  dilihat  pada  tabel  dibawah ini : Tabel 1. Hasil perbandingan pengujian Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Spons Aaptos aaptos Konsentrasi Pengulangan I Pengulangan II Pengulangan III Rata-rata 10 mg/L Ekstrak 78,5% 76,3% 78,7% 77,8% Vit C 95,2 % 95,3% 95,2% 95,2% 15 mg/L Ekstrak 80,6% 82,5% 80,3% 81,1% Vit C 95,3% 95,2% 95% 95,1% 20 mg/L Ekstrak 83% 84% 85,1% 84% Vit C 95,2% 95,5% 95,6% 95,4% 25 mg/L Ekstrak 83,2% 87% 86% 85,4% Vit C 95,1% 95,5% 95,6% 95,4%
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Hasil  penelitian  yang  didapatkan  (Tabel  1) nilai  persen  inhibisi  pada  ekstrak  etanol  Spons Aaptos aaptos memiliki aktivitas antioksidan yang kuat  dan  ekstrak  tersebut mengalami  peningkatan dari  konsentrasi  10  mg/L  dengan  nilai  rata-rata 77,8%,  konsentrasi  15  mg/L  81,1  %,  konsentrasi 20  mg/L  84  %,  konsentrasi  25  mg/L  85,45%. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  dengan bertambahnya konsentrasi ekstrak maka absorbansi  semakin  meningkat  dan  tingkat inhibisinya akan semakin naik. Absorbansi sampel bisa turun karena elektron pada DPPH berpasangan  dengan  elektron  sampel  yang mengakibatkan  warna  larutan  berubah  dari  ungu pekat  jadi  kuning  bening.  Kondisi  diatas menunjukkan  sama  dengan  pernyataan  Green (2004),  bahwa  nilai  tingkat  inhibisi  akan meningkat  seiring  meningkatnya  konsentrasi sampel  dikarenakan  semakin  banyak  senyawa antioksidan  pada  sampel  yang  dapat  menangkal radikal bebas.
Hasil pengujian perbandingan aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  Spons Aaptos  aaptos dan  vitamin  C  menunjukkan  bahwa  kemampuan penangkal radikal bebas pada vitamin C lebih kuat dibandingkan dengan ekstrak etanol spons Aaptos aaptos . Hal itu dikarenakan vitamin C mempunyai gugus  hidroksi  bebas  yang  bertindak  sebagai penangkal  radikal  bebas  dan  jika  mempunyai polihidroksi akan meningkatkan aktivitas antioksidan  (Triyem,  2010).  Vitamin  C  juga merupakan senyawa murni yang jika dibandingkan dengan ekstrak spons Aaptos aaptos yang terdiri dari beberapa campuran senyawa lain (Pratiwi et  al., 2013).  Pada  vitamin  C  aktivitas antioksidannya  sangat  tinggi,  mudah  diperoleh dan  vitamin  C  lebih  polar  dari  vitamin  yang  lain (Isnindar et al ., 2011).
Menurut  Yu et  al., (2014),  kadar  yang terdapat  pada Aaptos  aaptos memiliki  potensi bioaktif,  spesies  ini  memiliki  senyawa  metabolit sekunder  berupa aaptamine yang  memiliki aktivitas sebagai antifungi.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  spons Aaptos  aaptos dari  perairan  Teluk  Manado memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  kuat  pada setiap  konsentrasi  dan  aktivitas  tertinggi  terdapat pada  konsentrasi  25  mg/L  dengan  nilai  rata-rata inhibisi 85,4%.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam ekstrak  etanol  spons Aaptos  aaptos dengan konsentrasi lebih besar dari 25mg/L dan pengujian aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  lain seperti  antimikroba  kemudian  membandingkan hasilnya dengan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Berquist  PR.  1968. The  Marine  Fauna  of  New Zealand :  Porifera, Demospongiae Part  I (Tetractinopmorpha  and  Lithistida) .  New
Zealand  Department  of  Scientifis  and Industrial Research. New Zealand Oceanorgraphic Institute Memoirs No. 37.
Green, R.J. 2004. Antioxidant Activity Of Peanut Plant  Tissues.  North  caroline  state university  departemen  of  food  science, Raleigh.
Hanani  E,  Mun’im  B,  Sekarini  R.  2005 . Identifikasi  senyawa  antioksidan  dalam spons  Callispongia  sp.  dari  Kepulauan Seribu .  Jurnal  Ilmu  Kefarmasian2 (3)  :
127-133.
Hanani,  E,  Mun’im  A,  Sekarini,  R,  dan Wiryowidagdo,  S.  2006.  Uji  aktivitas antioksidan  beberapa  spons  laut  dari kepulauan  Seribu, Jurnal  Bahan  Alam Indonesia . Vol 5 No (1).
Isnindar, Wahyuono, S., & Setyowati, E. P. 2011.
Isolasi dan Identifikasi
Senyawa Antioksidan  Daun  Kesemek  (Diospyros kaki  Thumb)  dengan  metode  DPPH  (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil). Majalah  Obat Tradisional. Vol 16 No (3).
Poedjiadi,  A.  1994.  Dasar-dasar  Biokimia. Universitas Indonesia, Jakarta.
Pratiwi,  D.,  Wahdaningsih,  S.,  &  Isnindar.  2013. Uji  Aktivitas  Antioksidan  Daun  Bawang Mekah  ( Eleutherine  americana Merr) Dengan  Metode  DPPH  ( 2,2-difenil-1- pikrilhidrazil ). Traditional Medicine
Journal. Vol 18 No (1).
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Triyem.  2010.  Aktivitas  Antioksidan  dari  Kulit
Batang  Manggis  Hutan  (Garcina  cf. Bancana Miq.) [Tesis]. Universitas
Indonesia, Jakarta.
Yong Li, Siqi Sun, Xiaowei Pu, Yuzhe Yang, Fei Zhu,  Shouyu  Zhang  and  Nianjun  Xu. 2018. Evaluation of Antimicrobial
Activities  of  Seaweed  Resouerces  from
Zhejiang Coast ,  China. Sustainability. 10 (7).
Yu,  H.  B.,  Yang,  F.,  Sun,  F.,  Li,  J.,  Jiao,  W. H.,  Gan,  J.  H.,  Hu,  W.  Z.,  Lin,  H. W.
2014. Aaptamine Derivatives with Antifungal      and      Anti-HIV-1  Activities from      the      South      China  Sea  Sponge
Aaptos    aaptos. Mar.  Drugs .12  :  6003– 6013.