## Optimasi formula obat kumur ekstrak herba ashitaba
( Angelica keiskei ) sebagai antibakteri karies gigi

## Yohanes Juliantoni, Dyke Gita Wirasisya
Program Studi Farmasi Universitas Mataram Corresponding author e-mail: juliantoni7753@gmail.com

## Abstrak
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  melihat  aktifitas  antibakteri  pada  ashitaba  ( Angelica  keiskei ) dan  formulasinya  dalam  bentuk  obat  kumur.  Metode  maserasi  digunakan  untuk mengekstraksi  ashitaba  dengan  larutan  penyari  etanol  96%.  Ekstrak  etanolik  ashitaba  diuji efektivitas  antibakteri Streptococcus  mutan dengan  metode  kultur  untuk  memperoleh  nilai KBM (Kadar Bunuh Minimum). Nilai KBM digunakan untuk menentukan dosis sediaan obat kumur. Uji formula obat kumur meliputi tanggap rasa yang dilakukan terhadap 20 responden berdasarkan  rasa,  aroma,  kejernihan  dan  kekentalan.  Rendemen  ekstrak  etanol  ashitaba diperoleh sebesar 17,52% dengan Nilai KBM sebesar 0,500 mg/mL. Hasil uji sifat fisik tujuh sediaan  obat  kumur  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  ashitaba  dapat  dibuat  sediaan  obat kumur  ( mouthwash ),  dengan  formula  optimal  menggunakan  gliserin  100%  didapatkan  nilai desirability sebesar 0,853.
Kata Kunci : ashitaba, antibakteri, Streptococcus mutan , Obat kumur.

## Optimation formula of mouthwash extract herba ashitaba (Angelica keiskei) as antibactery of dental caries

## Abstract
This study was conducted to see the antibacterial activity in ashitaba (Angelica keiskei) and its  formulation  in  the  form  of  mouthwash.  The  maceration  method  was  used  to  extract ashitaba  with  96%  ethanol.  The  ashitaba  ethanolic  extract  tested  the  antibacterial effectiveness of mutant streptococcus by culture method to get the value of  MBC  (Minimum Bactericidal  Concentration).  MBC  values  are  used  to  determine  dosage  of  mouthwash preparation. The test of mouthwash formula includes taste response done to 20 respondents based on taste, aroma, clarity and viscosity. The yield of the ashitaba ethanolic extract was obtained  at  17.52%  with  MBC  value  of  0,500  mg  /  mL.  Result  of  examination  of  physical properties  of  seven  mouthwash  preparation  showed  that  ashitaba  ethanol  extract  can  be made  mouthwash,  with  optimal  formula  using  100%  glycerin  obtained  desirability  value  of 0.853.
Keywords :  ashitaba, antibacterial, mutant Streptococcus, Mouthwash.

## Pendahuluan
Rongga  mulut  merupakan  salah  satu tempat  dalam  tubuh  yang  mengandung mikroorganisme  dengan  keanekaragaman paling tinggi dibanding tempat lain. Mikroorganisme  yang  paling  banyak  di rongga  mulut  yaitu Streptococcus  sp yang berperan  terhadap  awal  terjadinya  proses
karies gigi (Brotosoetarno, 1997). Selain itu, koloni  bakteri  yang  ditemukan  pada  awal pembentukan plak adalah bakteri Streptococcus mutans yang memiliki peranan penting dalam perkembangan karies gigi pada hewan dan manusia (Buchanan dan Gibbons,  1974).  Obat  kumur  digunakan untuk mencegah karies gigi karena
kemampuannya  sangat  efektif  menjangkau tempat  yang  sulit  dibersihkan  dengan  sikat gigi  dan  dapat  mencegah  pembentukan  plak (Widodo dan Lambri, 1980).
Masyarakat  yang  jauh  dari  pelayanan kesehatan  pada  umumnya  memanfaatkan tanaman  obat,  salah  satunya  adalah  ashitaba yang  berfungsi  sebagai  obat  luka.  Beberapa peneliti  telah  berhasil  mengisolasi  beberapa jenis  chalcone  dari  ashitaba  dan  mengetahui efektifitasnya,  misalnya  saja  xantoangelol dan  isobavachalcone  mempunyai  aktivitas antioksidan,  anti  tumorgenesis,  antibakteri serta dapat menginduksi apoptosis neuroblastoma  dan  sel  leukemia  (Nishimura dkk.,  2007).  Efek  daya  antibakteri  ashitaba diharapkan  dapat  digunakan  sebagai  obat kumur ( mouthwash ).
Pada  sediaan mouthwash ,  bahan  yang berperan  penting  adalah  humektan  dan surfaktan. Humektan berfungsi menjaga agar zat  aktif  dalam  sediaan  obat  kumur  tidak menguap  sehingga  membantu  memperlama kontak zat aktif pada gigi serta memperbaiki stabilitas  suatu  bahan  dalam  jangka  lama (Jackson,  1995).  Humektan  yang  sering digunakan  adalah  gliserin  yang  juga  dapat berperan  sebagai  bahan  pelarut  dan  bahan pengatur kekentalan (Fauzi, 2002).
Surfaktan  berperan  untuk  mencampurkan air dan minyak dengan menurunkan tegangan  antarmuka,  sehingga  mengatasi sukar  bergabungnya  dua  bahan  (Hartomo and  Widyatmoko,  1993).  Surfaktan  yang digunakan  pada mouthwash adalah  sodium lauril  sulfat  (SLS)  yang  juga  mempunyai fungsi  sebagai  agen  pembusa.  Oleh  karena itu dibutuhkan humektan dan surfaktan yang tepat, agar menghasilkan sediaan mouthwash yang baik dan stabil.
Metode Bahan. Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  adalah  herba  kering  ashitaba, etanol  96%  teknis,  etanol  70%  teknis, heksan,  Gliserin,  Peppermint  oil,  Na- benzoat,  Na-sakarin,  Pewarna  hijau,  DMSO, nutrient broth, 0,5 McFarland, Saline, etanol 70% dan spiritus.
Alat. Alat yang digunakan dalam penelitian adalah lampu spiritus, ose, tabung reaksi, pipet tetes, mikropipet, white tip, blue tip,  yellow  tip,  eppendorf,  viskosimeter Ostwald,  piknometer,  inkubator,  botol  kaca sampel dan peralatan gelas pada umumnya.
Pengumpulan dan Pengeringan Tanaman. Tanaman ashitaba diambil di desa sembalun kabupaten Lombok Timur Provinsi Nusa  Tenggara  Barat  pada  bulan  juli. Ashitaba  sebelum  digunakan  terlebih  dahulu dibersihkan  dari  pengotor  menggunakan  air mengalir  dan  dikeringkan  dengan  sinar matahari secara tidak langsung menggunakan penutup kain hitam.
Penyerbukan  dan  Ekstraksi. Simplisia kering ashitaba diserbuk dengan menggunakan  alat  penyerbuk.  Ekstraksi serbuk  dilakukan  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  etanol  96%  teknis. Sebanyak  400  gram  serbuk  ashitaba  di ekstraksi  dengan  2000  mL  pelarut  dalam bejana  selama  3  hari.  Remaserasi  dilakukan sebanyak  2  kali  sehingga  didapat  3  ekstrak cair.  Ekstrak  cair  tersebut  dikentalkan dengan  menggunakan  rotary  evaporator sampai menjadi ekstrak kental.
Penentuan  KBM. Bakteri Streptoccus mutan  biakan  semalam  distandarkan  dengan menggunakan standar 0,5 McFarland 1,5x10 8 CFU/mL)  dengan  bantuan  media NB.    Hasil  biakan  digunakan  tidak  boleh lebih dari 30 menit dari proses standardisasi. Kadar hambat minimun dari ekstrak etanolik bebas  klorofil  dan  formula  ditentukan dengan  metode  makrodilusi  pada  volume  2 mL  dengan  menggunakan  7  tabung  reaksi. Sebanyak 1 mL media NB dimasukkan pada tabung  reaksi  2-7  kemudian  sampel  uji sebanyak  1  mL  dimasukkan  pada  tabung nomor  1  dan  2.  Dilakukan  pengenceran dengan mengambil  1 mL pada tabung 2 dan dimasukkan  pada  tabung  3  dan  seterusnya sampai tabung 7 dimana 1 mL dari tabung 7 dibuang.  Kemudian  di  tambahkan  1  mL suspensi  bakteri  dalam  media  NB  (1,5x10 6 CFU/mL) pada tabung 1-7.
Tabung  diinkubasi  pada  suhu  ±  37 0 C dalam  inkubator  selama  18-24  jam.  KHM ditetapkan  sebagai  konsentrasi  terkecil  yang
dapat  menghambat  mikroba  yang  ditandai dengan jernihnya media pertumbuhan. KBM ditentukan dengan tidak adanya pertumbuhan bakteri pada media NA setelah penggoresan  suspensi uji dan inkubasi pada suhu ± 37 0 C dalam  inkubator selama 18-24 jam.
Kontrol  pada  uji  yang  digunakan  adalah kontrol  positif  (bakteri  +  media)  merupakan kontrol  dimana  pertumbuhan  bakteri  tidak diganggu, kontrol negatif (bakteri + media + Listerin  6%  v/v)  merupakan  kontrol  dimana tidak  terjadi  pertumbuhan  bakteri,  kontrol pelarut (bakteri + DMSO 2,5% dalam media) dan kontrol media sebagai kontrol sterilitas.
Optimasi  Formula  Obat  Kumur. Obat Kumur ekstrak etanolik daun ashitaba dibuat sesuai  dengan  formula  pada  tabel  2. Selanjutnya  tujuh  formula  yang  dihasilkan tersebut diuji secara fisik  yang meliputi : uji organoleptis  (rasa,  aroma,  kejernihan,  dan kekentalan).

## Hasil dan Pembahasan
Parameter  Ekstrak. Pada  penelitian  ini dilakukan  penetapan  pada  2  parameter  yaitu organoleptis dan rendemen ekstraksi. Pengujian  organoleptis  ekstrak  (bentuk, warna dan bau) dilakukan menurut cara yang tertera  pada  Farmakope  Herbal  Indonesia  I tahun 2009, yaitu dengan cara wadah tempat berisi  sampel  dibuka  dan  biarkan  sampel terkena  udara  selama  15  menit  kemudian data  organoleptis  dapat  ditentukan.  Namun harus  diingat  bahwa  data  organoeptis  hanya merupakan  data  deskriptis  dan  bukan parameter penentu standar kemurnian ekstrak bersangkutan (Depkes RI, 2009).
Penetapan rendemen ekstraksi adalah cara paling mudah untuk menjamin reprodusibilitas  hasil  apabila  akan  dilakukan
penelitian  bekelanjutan (Saifudin dkk., 2011).  Ekstrak  dapat  dihitung  rendemennya yaitu dengan mencari presentase bobot  (b/b) ekstrak  akhir  dan  serbuk  simplisia  kering untuk  maserasi.  Nilai  rendemen  ekstrak sebesar 17,52%.

## Tabel 1.  Data  Organoleptis  Ekstrak  Etanolik Herba Ashitaba
Organoleptis Keterangan Rasa Khelat Warna Hijau Bau Khas Ada  beberapa  hal  yang  diketahui  dapat mempengaruhi mutu ekstrak, yaitu kebenaran  tanaman,  genetik,  lingkungan tempat tumbuh, penambahan bahan pendukung  pertumbuhan,  waktu  panen, penanganan pasca panen, teknologi ekstraksi, teknologi pengentalan dan pengeringan  ekstrak  serta  cara  menyimpan ekstrak (Saifudin dkk., 2011).
Aktivitas  Antibakteri. KBM  ditentukan dengan  mengkulturkan  kembali  suspensi setiap  tabung  dimulai  dari  tabung  yang menunjukkan  kejernihan  hingga  tabung pertama  dengan  konsentrasi  sampel  paling tinggi  pada  media  nutrient  agar.  Pada penelitian  ini,  semua  seri  kadar  sampel dikultur  pada  media  agar  dan  diinkubasi selama 24 jam.
Hasil  kultur  larutan  sampel  seri  kadar  4 menunjukkan adanya koloni bakteri S. mutan pada  media.  Hasil  kultur  pada  sampel  seri kadar  3  sampai  1  menunjukkan  tidak  ada koloni  bakteri.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa larutan  dengan  kadar  0,500  mg/mL  (tabung 3)  merupakan  kadar  terkecil  yang  tidak memiliki  pertumbuhan  bakteri  sehingga sampel 3 merupakan KBM.
Tabel 2. Formula Obat Kumur (Mouthwash) Ekstrak Etanolik Herba Ashitaba Bahan I II III IV V VI VII Ekstrak Ashitaba Gliserin (mL) Menthol (gram) Na-benzoat (mL) Diabetasol (gram) Ethanol 70% (mL) Aquadest (mL) 0,075 5 0,05 0,2 1 0 150 0,075 0 0,05 0,2 3 0 150 0,075 0 0,05 0,2 1 10 150 0,075 2,5 0,05 0,2 2 0 150 0,075 2,5 0,05 0,2 1 5 150 0,075 0 0,05 0,2 2 5 150 0,075 1,6 0,05 0,2 1,68 3,33 150
DOI: 10.26874/kjif.v6i1.136
Optimasi Formula Sediaan Mouthwash Ekstrak Etanol
Ashitaba. Evaluasi organoleptis  yang  dilakukan  terhadap  20 responden  menunjukkan  perbedaan  respon untuk  tiap  formula.  Digunakan  metode simplex lattice design dalam pengolahan data organoleptis tujuh formula obat kumur untuk menentukan besarnya respon parameter yang diberikan tiap formula. Karakteristik organoleptis yang digunakan adalah
parameter  rasa,  aroma,  kejernihan  dan kekentalan
Prediksi  formula  optimum mouthwash ekstrak  etanolik  herba  ashitaba  diperoleh dengan menjalankan software Design Expert ® .  Dari  analisis  tersebut  dihasilkan nilai desirability tertinggi yang menunjukkan formula  optimum  dari contour  plot respon rasa,  aroma,  kejernihan,  dan  kekentalan mouthwash ekstrak  etanolik  herba  ashitaba seperti  yang  terlihat  pada  gambar  1. Desirability yang semakin tinggi ditunjukkan dengan  area  yang  berwarna  merah.  Respon tanggap rasa yang semakin rendah ditunjukkan  dengan  area  yang  berwarna kuning,  diikuti  dengan  area  yang  berwarna hijau.  Desirability  yang  paling  rendah ditunjukkan dengan area yang berwarna biru Komposisi formula optimum yang diperoleh dari analisis menggunakan software  Design  Expert ® adalah  gliserin sebesar  100%  dengan  nilai desirability sebesar 0,853.
Dari  hasil  penelitian  disimpulkan  bahwa ekstrak  etanolik  herba  ashitaba  dapat  dibuat kedalam  bentuk  sediaan  obat  kumur  dilihat dari  nilai  respon  pada  tabel  4  dimana didapatkan  nilai  lebih  besar  dari  3  untuk formula  1  yaitu  formula  optimum  yang menyatakan  formula  dapat  diterima  oleh responden.
Tabel 3.   Respon  Tanggap  Rasa  Lima  Formula
Ekstrak Etanolik Herba Ashitaba Form ula Rasa Aroma Kejer nihan Keken talan I 3,25 3,25 3,5 3,7 II 3,15 2,65 4,5 3,85 III 2,6 2,75 3,55 3,45 IV 3 2,35 2,75 3,1 V 2,7 2,15 2,5 2,85 VI 2,65 3,15 3,1 3,2 VII 2,4 2,65 2,05 3,1
Gambar 1. Desirability dari contour plot Respon  Rasa,  Aroma,  Kejernihan, dan Kekentalan Mouthwash Ekstrak Etanolik Herba Ashitaba

## Kesimpulan
Rendemen ekstrak etanol ashitaba diperoleh  sebesar  17,52%.  Nilai  KBM sebesar 0,500 mg/mL. Nilai ini menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  ashitaba  memiliki efektivitas  yang  baik  sebagai  antibakteri Streptococcus mutan . Hasil uji tanggap rasa, aroma,  kejernihan,  dan  kekentalan  tujuh sediaan  obat  kumur  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol  ashitaba dapat dibuat sediaan obat  kumur  ( mouthwash ).  Formula  optimum menggunakan  100%  gliserin  dengan  nilai respon  rasa  3,25  ;  aroma  3,25  ;  kejernihan 3,5 dan kekentalan 3,7.

## Ucapan Terimakasih
Ucapan  terimakasih  diberikan  untuk Universitas  Mataram  yang  telah  membiayai penelitian.

## Daftar Pustaka
Akihisa,  T.,  Tokuda,  H.,  Ukiya,  M.,  Iizuka, M.,  Schneider,  S.,  Ogasawara,  K  & Nishino,  H  2003,  ‘Chalcones,  coumarins, and  flavanones  from  the  exudate  of Angelica keiskei and
their chemopreventive  effects’, Cancer  letters, vol. 201, no. 2, pp. 133-137.
Brotosoetarno,  S  1997,  ‘Peran  serta mikroorganisme  dalam  proses  terjadinya karies  gigi’, Jurnal  Kedokteran  Gigi  UI , vol. 4, pp. 728-739.
Nishimura, R., Tabata, K., Arakawa, M., Ito, Y.,  Kimura,  Y.,  Akihisa,  T  &  Suzuki,  T 2007,  ‘Isobavachalcone,  a  chalcone constituent  of  Angelica  keiskei,  induces apoptosis  in  neuroblastoma’, Biological and Pharmaceutical  Bulletin , vol.  30, no. 10, pp. 1878-1883.
Buchanan,  R  &  Gibbons,  N  1974,  Bergey's manual  of  determinative  bac-teriology , The Williams & Wilkins Co., Baltimore.
Depkes., 1995, Farmakope Indonesia, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Depkes.,  2000,  Parameter  Standar  Umum Ekstrak  Tumbuhan  Obat,  Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Fauzi,  Y.  dkk  2002,  Kelapa  Sawit,  Penebar Swadaya, Jakarta.
Hartomo,  A.J  &  Widyatmoko,  M.C  1993, Emulsi  dan  Pangan  Instan  Ber-Lesitin, Andi Offset, Yogyakarta.
Jackson,  EP  1995,  Sugar  Confectionery Manufacture.  Blackie  Academy  and Professional, An Imprint of Chapman and Hall, New York.
Pratiwi,  S  2008,  Mikrobiologi  Farmasi, Penerbit Erlangga, Jakarta.
Sembiring,  BB.,  &  Manoi,  F  2011, ‘Identifikasi  Mutu  Tanaman  Ashitaba’, Buletin Penelitian Tanaman Rempah Dan Obat , vol. 22, no. 2.
Voigt,  T  1994,  Buku  Pelajaran  Teknologi Farmasi  Edisi  V,  Universitas  Gadjah Mada Press, Yogyakarta.