Uji Antibakteri Ekstrak Daun Kedondong Hutan ( Spondias pinnata ) Terhadap Salmonella typhi
Antibacterial Test of Kedondong Hutan Leaf ( Spondias pinnata ) Against Salmonella typhi
Febby Alvanda Rangga *) , Charis Amarantini, Tri Yahya Budiarso Fakultas Bioteknologi, Universitas Kristen Duta Wacana Yogyakarta *E-mail: febby.rangga@students.ukdw.ac.id

## ABSTRACT
Kedondong hutan ( Spondias pinnata ) is a plant belonging to the Anacardiaceae family, plant that grows a lot in the Sulawesi area, one of which is in the Poso area, Central Sulawesi. The surrounding community uses this plant as a traditional food preparation which is often called the "Arogo Onco" by  the  community.  Kedondong  hutan  contains  active  compounds  that  have  the  potential  as antibacterial, namely flavonoids, saponins and tannins. The purpose of this study was to determine the potential of forest kedondong leaves in inhibiting the growth of Salmonella typhi bacteria. The extraction process was done the decoctation method using aquadest and while the antibacterial test was done using the diffusion method against three bacterial strains namely Salmonella typhi BPE 127.1 MC, BPE 122.4 CCA and NCTC 786. The results showed that the leaf extract of kedondong hutan ( Spondias pinnata ) contained flavonoids, saponins and tannins with the results of the analysis of total flavonoids 1514,9 mgQE/g, saponins 0.613% and tannins 8,94 mgTA/g. The results of the antibacterial test showed the greatest inhibitory power at a concentration of 100%. Salmonella typhi BPE 127.1 MC, BPE 122.4 CCA, NCTC 786, was the inhibition zone 17.67±0.58 mm, 15.67±0.58 mm and 20.33±0.58 mm were included in the category of strong inhibition zone.
Keywords: Kedondong  hutan  leaf  ( Spondias  pinnata ), salmonella  typhi ,  antibacterial,  typhoid fever.

## PENDAHULUAN
Kedondong hutan ( Spondias pinnata ) termasuk dalam family Anacardiaceae merupakan tanaman  yang  banyak  tumbuh  di  daerah Sulawesi salah satunya di daerah Poso, Sulawesi Tengah.  Masyarakat  sekitar  memanfaatkan tanaman ini sebagai olahan makanan tradisional yang sering disebut masyarakat “Arogo Onco” . Selain dikonsumsi
sebagai makanan, kedondong hutan ini juga dimanfaatkan sebagai pengobatan tradisional.
Pemanfaatannya sebagai  tanaman  obat  tradisional  yaitu  untuk menyembuhkan  gatal-gatal,  sakit  tenggorokan, radang kulit, kulit perih, luka bakar, dan disentri (Syafira,  2020).  Bagian  kulit  batangnya memiliki  sifat  aromatik,  mengobati  diare, rematik  otot,  sedangkan  bagian  buahnya  dapat dimanfaatkan untuk mengobati dispepsia empedu  dan  diare  (Jain et  al .,  2014).  Ekstrak daun kedondong hutan menggunakan pelarut n- heksana telah diteliti daya hambatnya terhadap isolat Mycobacterium tuberculosis strain MDR. Hasil  uji  antituberkulosis  menunjukkan  bahwa daya  hambat  dari  kombinasi  ekstrak  tersebut pada  konsentrasi  10  dan  50  mg/mL  dengan rimfamisin  40  µg/mL  sebesar  93,18%  dan 96,87% (Ramayanti et al ., 2013).
Salmonella typhi merupakan bakteri penyebab tifoid yang menyebabkan infeksi akut pada  usus  halus  dan  menyebabkan  gangguan sistem pencernaan (Ardiaria 2019).  Saputra & Majid (2017) menyatakan bahwa 91% penderita penyakit demam tifoid adalah anak-anak berusia 3  hingga  19  tahun  dengan  angka  kematian 20.000 anak per tahunnya. Menurut Saputra & Majid (2017) WHO menyatakan ada terdapat 17 juta  kasus  kematian  yang  diakibatkan  oleh penyakit  demam  tifoid.  Di  Sulawesi  Tengah, kasus  demam  tifoid  menempati  peringkat  ke  4 penyakit  terbanyak  menginfeksi  manusia  di salah  satu  rumah  sakit  pada  tahun  2016. Berdasarkan riwayat catatan rumah sakit kasus demam  tifoid  terus  naik  dari  tahun  ke  tahun (Sunaryani et al ., 2019).
Beberapa  penelitian m enunjukkan  bahwa pada  ekstrak  daun  kendondong  terkandung senyawa aktif flavonoid, polifenol, saponin, dan steroid.  Hasil  uji  fitokimia  ekstrak  daun kedondong  hutan  melalui  proses  ekstraksi etanol  70%  diketahui  memiliki  kandungan flavonoid,  tanin,  terpenoid/steroid  dan  saponin dengan rendemen sebesar 5,1%. (Azizah et al ., 2019).  Ekstrak  daun  kedondong  hutan  yang diperoleh  dengan  metode    maserasi  dengan  n- heksana  dan  ekstraksi  dengan  etanol  80%
diketahui memiliki daya hambat secara in vitro terhadap C. albicans pada konsentrasi minimal 20%  (Wijayanti et  al .,  2020).  Flavonoid  dan saponin  diketahui  berperan  sebagai  antibakteri melalui  mekanisme  penghambatan  terhadap fungsi  membran  sel.  Demikian  pula  dengan saponin  dan  tanin.  Selain  menyebabkan ketidakstabilan  permeabilitas  membran  sel, saponin dapat menyebabkan gangguan pertumbuhan bakteri (Gayatri et al., 2021). Berdasarkan terdapatnya kandungan senyawa aktif yang berperan sebagai antibakteri dan adanya kearifan masyarakat lokal di daerah Sulawesi yang memanfaatkan daun kedondong dalam  pengobatan  tradisional,  maka  uji antibakteri  ekstrak  daun  kedondong  hutan ( Spondias  pinnata )  terhadap Salmonella  typhi penting  untuk  dikaji.  Dengan  demikian,  tujuan dari  peneliti  ini  adalah  mengetahui  apakah ekstrak  daun  kedondong  hutan  memiliki antibakteri  terhadap Salmonella  typhi strain BPE  127.1  MC,  BPE  122.4  CCA dan NCTC 786 penyebab tifoid.

## METODE
Bahan Simplisia  kedondong  hutan  ( Spondias  pinnata ) diperoleh  dari  Poso,  Sulawesi  Tengah.  Bakteri  uji ( Salmonella  typhi )  dengan  strain  BPE  127.1  MC, BPE 122.4 CCA dan NCTC 786 diperoleh dari hasil penelitian  sebelumnya  (Amarantini  dkk.,  2011). Bahan  lainnya  yang  digunakan  pada  penelitian  ini yaitu  HCl  Pekat,  Pita  Mg,  FeCl  6%,  Etanol  75%, Tanin  Acid,  Folin  Ciocalteu,  Na 2 CO 3 jenuh, Kuersetin, Etanol 96%, AlCl 3 2%, Kalium Asetat 120 mM, Ciprofloxacin, Akuades, Media MHA ( Mueller Hinton  Agar ),  Alkohol  70%,  Agar,  dan  Media  BHI ( Brain Heart Infusion ).

## Simplisia
Sortasi serta pembuatan simplisia dilakukan di Poso, Sulawesi  Tengah.  sampel  daun  kedondong  hutan ( Spondias  pinnata )  yang  digunakan  adalah  daun muda  yang  masih  hijau.  Selanjutnya  daun  yag diambil dicuci bersih dan dikeringkan di bawah sinar matahari  hingga  kering.  Setelah  kering,  dilakukan sortasi dan dihaluskan hingga menjadi halus. Setelah itu  dilakukan  penyaringan  menggunakan  alat penyaring  berukuran  200  mesh  untuk  mendapatkan serbuk simplisia.

## Ekstraksi Daun Kedondong Hutan
Ekstrak daun kedondong hutan menggunakan metode dekoktasi  dengan  perbandingan  1:10.  Metode ekstraksi  ini  menggunakan  300  ml  akuades  sebagai pelarut yang telah dipanaskan hingga mencapai suhu 90℃, selanjutnya dimasukkan 30 gr serbuk simplisia dan  direbus  selama  30  menit  dalam  suhu  90℃  dan sesekali  diaduk  (Santoso,  2019).  Ekstrak  daun
kedondong  yang  dihasilkan  dari  metode  dekoktasi kemudian  disaring  menggunakan  kertas  saring  agar partikel-partikel halus dapat tertahan di kertas saring (Hayu,  2016).  Ekstrak  lalu  disimpan  pada  botol  jar steril.

## Uji kualitatif flavonoid, saponin dan tanin
Uji  flavonoid  menggunakan  metode  Wilstater. Sebanyak  3  ml  sampel  ekstrak  daun  kedondong dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi.  Kemudian ditambahkan  0,5  ml  HCl  pekat  dan  logam  Mg dimodifikasi  menjadi  1  cm  pita  Mg.  Hasil  yang menunjukkan  adanya  senyawa  flavonoid  ditandai dengan  perubahan  warna  menjadi  merah  hingga jingga (Marliana et al ., 2005).
Uji  saponin  menggunakan  metode  Forth. Sebanyak  2  ml  sampel  ekstrak  daun  kedondong dimasukkan ke dalam tabung rekasi lalu ditambahkan 10  ml  akuades  dimodifikasi  menjadi  5  ml  akuades kemudian dikocok selama 30 detik. Adanya senyawa saponin ditandai dengan terbentuk busa dan busanya tidak hilang selama 30 detik (Marliana et al ., 2005). Uji tanin menggunakan  metode Ferric Chloride. Sebanyak 0,1 ml dimodifikasi menjadi 0,5 ml sampel ekstrak  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi, ditambahkan  3  tetes  FeCl 3 6%.  Adanya  senyawa tannin yaitu apabila terbentuk warna hijau kehitaman hasilnya  menyatakan  adanya  tanin  (Roy  & Bharadvaja, 2017).

## Penentuan  kadar  flavonoid  total  ekstrak  daun kedondong
Kandungan  flavonoid  dikonversi  sebagai  jumlah quercetin dalam  mgQE  per  gram  ekstrak  daun kedondong yang dihitung melalui persamaan regresi linier kurva standar quercetin (Aminah et al ., 2017).
Uji kurva standar quercetin Quercetin sebanyak 10 mg ditambahkan ke dalam 1 ml  etanol  96%,  kemudian  ditambahkan  akuades hingga  volume  mencapai  10  ml.  Diambil  1  ml  dari larutan  stok  dan  kembali  ditambahkan  akuades hinggal  volume  10  ml.  Selanjutnya  dibuat  beberapa kosentrasi  6  ppm,  8  ppm,  10  ppm,  12  ppm  dan  14 ppm.  Diambil  1  ml  dari  masing-masing  kosentrasi dicampurkan  1  ml  AlCl 3 2%,  ditambahkan  1  ml kalium asetat 120 mM, kemudian diinkubasi selama 1  jam.  Nilai  OD quercetin dibaca  menggunakan spektrofotometer  pada  panjang  gelombang  435  nm (Aminah et al ., 2017).

## Uji kadar flavonoid
Pada uji ini digunakan Blanko yaitu akuades. Blanko merupakan bahan pengeceran suatu larutan.Sebanyak 1 gr ekstrak dilarutkan dengan akuades hingga 10 ml. Larutan  ini  berfungsi  sebagai  larutan  stok. Selanjutnya dilakukan pengenceran terhadap larutan stok  sampai  dengan  pengenceran  10 -2 .  Kedalam larutan  ini  ditambahkan  1  ml  AlCl 3 2%  dan  1  ml kalium  asetat  120  mM  dan  dilanjutkan  dengan inkubasi  selama  1  jam.    Nilai  OD  dibaca menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 435 nm (Aminah et al ., 2017).

## Penentuan kadar total saponin
Kadar  total  saponin  dihitung  berdasarkan  metode (Harbone,  1987).  Sebanyak  5  gr  ekstrak  dilarutkan dalam  100  ml  akuades,  selanjutnya  ditambahkan etanol  75%  sebanyak  25  ml  lalu  digojok  hingga homogen,  setelah  itu  didiamkan  selama  30  menit hingga  suspensi  mengendap.  Larutan  dipisahkan dengan endapannya dan dimasukkan ke dalam botol untuk  dikeringkan  dalam  oven  hingga  konstan  dan ditimbang  berat  akhir.  Kadar  saponin  dihitung menggunakan rumus seperti berikut:
% Kadar Saponin : 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑘𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛−𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑘𝑟𝑢𝑠  .  100% 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙(𝑔𝑟) (Pangestuti, et al . 2017)

## Penentuan kadar total tanin
Tanin  ditentukan  berdasarkan  kadar  tanin  yang dihitung  melalui  persamaan  regresi  linier  kurva standar tannic  acid (asam  tanat).  Nilai  OD  yang diperoleh,  selanjutnya  dikonversikan  sebagai  kadar tanin dalam persen melalui rumus sebagai berikut:
% Kadar Tanin : 𝑁𝑖𝑙𝑎𝑖 𝑂𝐷.𝑓𝑝
𝐵𝑆(𝑚𝑔) x 100%
fp  adalah  faktor  pengenceran  dan  BS  adalah  berat ekstrak (Pangestuti et al ., 2017)
Uji kurva standar tannic acid Larutan  standard  dipersiapkan  dengan  membuat larutan  induk tannic  acid 1000  ppm  sesuai  dengan prosedur  yang  telah  digunakan  oleh  Pratama et  al .,
(2019).  Kemudian  dari  larutan  induk  diambil  1  ml dan kembali ditambahkan akuades hingga volume 10 ml. Selanjutnya dibuat beberapa kosentrasi 10 ppm, 15 ppm, 20 ppm, 25 ppm dan 30 ppm. Dari masing- masing  konsentrasi  larutan  standar tannin  acid , diambil 1 mL dan dicampurkan 0,5 ml Folin ciocalteu dan 1 ml Na 2 CO 3 jenuh. Setelah itu didiamkan selama 10 menit dan ditambahkan akuades hingga volume 10 ml dan dilanjutkan pembacaan nilai OD pada panjang gelombang 730 nm (Pangestuti et al ., 2017).

## Uji kadar total tanin
Kadar  tanin  total  dalam  ektrak  daun  kedondong diukur  berdasarkan  Pangestuti,  dkk.  (2017)  dengan modifikasi  1  gr  ekstrak  dilarutkan  dengan  akuades hingga  10  ml.  Diambil  1  ml    larutan  ditambahkan akuades  hingga  volumenya  10  ml.    Diambil  1  ml dimasukkan  ke  dalam  tiga  tabung.  Masing-masing tabung  ditambahkan 1 ml Folin ciocalteu dan 1 ml Na 2 CO 3 jenuh.  Dilanjutkan  dengan  inkubasi  selama 10  menit,  kemudian  ditambahkan  akuades  hingga volume  10  ml.  Tahap  selanjutnya  ditentukan konsentrasinya menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 730 nm.

## Suspensi bakteri
Suspensi  bakteri  dipersiapkan  dengan  mengambil Salmonella  typhi dari  agar  stock  menggunakan  ose, dipindahkan  ke  tabung  reaksi  yang  berisikan  5  ml media Brain  Heart  Infusion  Broth ,  kemudian diinkubasi pada suhu 37℃ selama 24 jam. Endapan sel  dipanen  secara  sentrifugasi  dengan  kecepatan
6000  rpm  selama  15  menit  dan  disuspensikan kembali  dalam  larutan  NaCl  0,9%  hingga  sesuai dengan Mc Farland 0,5 (Moja, 2015).

## Uji antibakteri
Uji antibakteri dilakukan menggunakan metode Well Diffusion  Agar (Difusi  Agar).  Suspensi  bakteri Salmonella  typhi (strain  BPE  127.1MC  dan  strain BPE  122.4CCA)  (Amarantini,  dkk.  2019)  diambil menggunakan cotton swab steril kemudian dilakukan swab pada  permukaan  media  MHA  secara  merata. Sumur difusi dibuat pada media MHA dengan ukuran 8 mm. Pada setiap sumur dimasukkan masing-masing konsentrasi  ekstrak  kedondong  hutan  (100%,  80%, 60%,  40%,  20%)  sebanyak  150  µl  diikuti  kontrol positif  ( Ciprofloxacin 200mg/100mL)  dan  kontrol negatif  (akuades  steril).  Kemudian  diinkubasi  pada suhu  37˚C  selama  24  jam.  Setelah  itu,  dilakukan pengukuran  diameter  zona  hambat  menggunakan penggaris.  Daya  hambat  ekstrak  daun  kedondong diklasifikasikan  sebagai  daya  hambat  kuat,  sedang, dan lemah (Suheri et al ., 2015).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ektraksi  daun  kedondong  hutan  ( Spondias pinnata ) Ekstrak  yang  dihasilkan  sebanyak  150  ml memiliki  warna  coklat  dan  bertekstur  cair. (Gambar 1). Warna coklat yang terbentuk pada ekstrak  menandakan  adanya  reaksi  enzimatis yaitu oksidasi senyawa fenolik yang dikatalisis oleh enzim polifenol oksidase (PPO). Semakin lama  proses  pengeringan  yang  terjadi,  maka semakin lama pula air berada di dalam simplisia sehingga  memungkinkan  terjadinya  reaksi degragadi  klorofil  menjadi  feofitin  akan semakin besar (Demasta et al ., 2020; Purwanti et al ., 2018).
Gambar 1. Rendemen ekstrak daun kedondong ( Spondias  pinnata ) menggunakan metode dekoktasi dengan
perbandingan  serbuk  simplisia  dan akuades sebesar 1:10.

## Skrining fitokimia secara kualitatif
Uji  kualitatif  merupakan  uji  yang  dilakukan melalui  reaksi  warna  menggunakan  suatu pereaksi  warna  (Vifta  &  Advistasari,  2018). Setelah  dilakukan  uji  fitokimia,  ekstrak  daun kedondong  hutan  diketahui  memiliki  senyawa
aktif flavonoid dan tanin (Tabel 1). Hasil  skrining  uji  flavonoid  menggunakan metode Wilstater ditandai dengan terbentuknya warna  merah  tua/jingga.  Hal  ini  menandakan adanya  senyawa  flavonoid  pada  ekstrak  daun kedondong  hutan.  Pada  uji  ini  menggunakan penambahan  kedua pereaksi  yaitu pita Mg dan HCl  untuk  menghasilkan  senyawa  kompleks yang  berupa  warna  merah.  Ion  magnesium  ini akan berikatan dengan flavonoid yang  terdapat dalam esktrak daun kedondong sehingga timbul warna  merah.  Sedangkan  HCl  berfungsi  untuk menghidrolisis  flavonoid  menjadi  aglikon flavonoid dengan cara menghidrolisis o-glikosil yang akan digantikan dengan atom H + dari asam yang  mempunyai  sifat keelektronegatifan  yang kuat (Al Ridho, 2013).
Tabel  1. Hasil  Uji  Fitokimia  Ekstrak  Daun Kedondong Hutan ( Spondias pinnata ) secara Kualitatif No. Senyawa Aktif Hasil 1. Flavonoid + 2. Saponin - 3. Tanin +
Keterangan: (+) hasil positif, (-) hasil negatif
Hasil  uji  saponin  menunjukkan  tidak dihasilkan busa yang menandakan tidak adanya senyawa saponin pada ekstrak daun kedondong hutan  menggunakan  metode  dekoktasi  dengan pelarut  akudes.  Senyawa  saponin  diduga mengalami  penurunan  pada  perebusan  wadah tertutup (Hayu, 2016). Saponin dapat dideteksi melalui  ekstraksi  menggunakan  pelarut  etanol 70%  (Azizah et  al .,  2019).  Dengan  demikian, selain  faktor  perebusan,  tidak  terdeteksinya saponin dapat dimungkinkan karena ketidaksesuaian pelarut yang digunakan. Pada  uji  tanin  secara  kualitatif  ditandai dengan  terbentuknya  warna  hijau  kehitaman. Tanin  merupakan  senyawa  polifenol  sehingga warna  hijau  kehitaman  yang  terbentuk  dengan penambahan  FeCl 3 menandakan  terbentuknya senyawa kompleks antara fenol dalam tanin dan Fe 3+ (Ergina et al ., 2014).

## Skrining fitokimia secara kuantitatif
Berdasarkan  hasil  penelitian  diperoleh  kadar total  senyawa  kimia  aktif  dalam  ekstrak  daun
kedondong  hutan  sebagaimana  dapat  dilihat pada Tabel 2.
Tabel  2. Hasil  Uji  Kadar  Senyawa  Aktif Flavonoid,  Saponin,  dan  Tanin Ekstrak  Daun  Kedondong  Hutan
( Spondias pinnata ) Senyawa Aktif Kadar Total Flavonoid 1514,9 mgQE/g Saponin 0,613% Tanin 8,94 mgTA/g
Hasil  uji  fitokimia  secara  kuantitatif menunjukkan  bahwa  flavonoid  merupakan senyawa  kimia  yang  terdapat  dalam  ekstrak daun  kedondong  dalam  jumlah  lebih  banyak (1514,9  mgQE/g)  dibandingkan  saponin  dan tanin.  Saponin  yang  tidak  terdeteksi  pada  uji kualitatif,  berhasil  terdeteksi  meskipun  dalam jumlah yang relatif sedikit (0,613%).
Seperti  hasil  perhitungan  yang  telah diperoleh  pada  (Tabel  2)  dapat  dilihat  bahwa kadar  saponin  sebesar  0,613%  dalam  ekstrak daun  kedondong  hutan  sangat  kecil.  Hal  ini disebabkan  oleh  ekstraksi  yang  dilakukan menggunakan metode dekoktasi dengan pelarut akudes  pada  kondisi  suhu  90°C.  Metanol ataupun  etanol  merupakan  pelarut  yang  akan menghasilkan  ekstrak  saponin  lebih  banyak dibandingkan dengan pelarut lainnya (Pangestuti et  al ., 2017).  Kadar  tanin  dalam ekstrak  daun  kedondong  diukur  setara  dengan tannin  acid  sebesar  8,94  mgTA/g.  Uji  ini menggunakan  reagen  folin  ciocalteu  sebagai pereaksinya.  Folin  ciocalteu  digunakan  karena senyawa  fenolik  yang  dapat  bereaksi  dengan folin  ciocalteu  yang  akan  membentuk  larutan dan dapat dihitung hasil absorbansinya. Reaksi yang  terjadi  dalam  pembentukannya  yaitu reduksi  oksidasi.  Tanin  berperan  sebagai reduktor  dan  folin  ciocalteu  sebagai  oksidator. Hasil  oksidasi  ini  akan  ditandai  dengan terbentuknya  warna  biru.  Prinsip  kerja  folin ciocalteu  yaitu  membentuk  senyawa  kompleks yang  nanti dapat diukur pada spektrofotometer pada  panjang  gelombang  765  nm  (Ryanata et al .,  2015).
Gambar  2.  Hasil  uji  antibakteri  daun  kedondong  hutan  ( Spondias  pinnata )  terhadap Salmonella typhi . Keterangan P1=Ulangan 1; P2=Ulangan 2; P3=Ulangan 3; K(-)= kontrol negatif (akuades); K(+)= kontrol positif (ciprofloxacin 200mg/100mL)
Aktivitas antibakteri daun kedondong hutan ( Spondias pinnata ) Hasil  uji  antibakteri  ekstrak  daun  kedondong terhadap Salmonella  typhi dapat  dilihat  pada Gambar  2  dan  Tabel  3.  Pada  Gambar  2 ditunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  kedondong memiliki  daya  hambat  terhadap  tiga  isolat Salmonella  typhi yaitu  BPE  127.1MC,  BPE 122.4CCA dan NCTC 786. Zona hambat yang ditunjukkan dikategorikan sebagai daya hambat kuat, sedang dan lemah (Tabel 3).
Zona  hambat  kuat  ( strong )  memiliki  zona hambat  rata-rata  (11-20  mm),  zona  hambat sedang ( moderate ) memiliki zona hambat rata- rata (6-10 mm) dan zona hambat lemah ( weak ) memiliki zona hambat (≤ 5 mm) (Suheri, et al . 2015).  Kosentrasi  ekstrak  100%  diketahui menghambat Salmonella  typhi BPE  127,1  MC dengan  diameter  rata-rata  17,67±0,58  mm, Salmonella  typhi BPE  122,4  CCA  dengan diameter  rata-rata  15,67±0,58  mm,  dan Salmonella  typhi NCTC  786  dengan  diameter rata-rata 20,33±0,58 mm. Zona hambat tersebut termasuk  dalam  kategori  kuat  (Suheri et  al ., 2015).
Zona  hambat  yang  terbentuk  diakibatkan oleh  senyawa  aktif  yang  berperan  sebagai antibakteri  Senyawa aktif  yang terdeteksi pada daun  kedondong  hutan  sesuai  dengan  hasil
skrining  menunjukkan  bahwa  daun  kedondong hutan  mengandung senyawa antibakteri  seperti flavonoid, saponin dan tanin. Selain itu bakteri yang  dihambat  termasuk  dalam  bakteri  gram negatif  yang  memiliki  lapisan  peptidoglikan tipis sehingga dinding sel menjadi mudah rusak yang  dimana  hal  ini  sangat  membuat  dinding bakteri semakin rentan ketika diberi antibakteri (Sudarmi et al .,  2017).
Diameter  zona  hambat  dari  ketiga  strain pada kosentrasi 80% dan 60% termasuk dalam kategori  zona  hambat  kuat  karena  memiliki zona hambat rata-rata 11  - 20 (mm) (Tabel 3). Zona  hambat  yang  terbentuk  pada  konsentrasi 80% dan 60% dapat disebabkan kadar senyawa kimia  yang  masih  cukup  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri.  Senyawa-senyawa  kimia ini  menyebabkan  bakteri  tidak  mampu  untuk berkembang  atau  mati.  Menurut  Wijayanti, et al. (2020) sistem kerja senyawa flavonoid dalam menghambat pertumbuhan bakteri yaitu dengan mendenaturasikan ikatan protein yang ada pada membran sel sehingga mengakibatkan membran sel  menjadi  rusak  atau  lisis  sehingga  bakteri tidak  mampu  lagi  berkembang.  Sistem  kerja senyawa  saponin  yaitu  medenaturasi  protein sehingga permeabilitas membran bakteri menjadi rusak. Zat aktif dari saponin yang mirip deterjen,  sehingga  setelah  membran  sel  rusak
senyawa  saponin  akan  berdifusi  masuk  dan mengganggu  kestabilan  dari  sitoplasma  dan mengakibatkan kebocoran dan terjadi kematian sel (Sudarmi et al .,  2017). Senyawa tanin dapat menghambat  bahkan  membunuh  bakteri  pada konsentrasi  tinggi,  dengan  cara  senyawa  tanin akan mengikat protein bakteri sehingga sintesis protein  dan  permeabilitas  sel  bakteri  akan terganggu (Kholidha et al ., 2016).
Konsentrasi  40%  dan  20%  tak  ada  lagi  zona hambat  yang  terbentuk  dari  ketiga  strain  atau bisa disebut kategori zona hambat  masuk pada kategori lemah ( weak ). Hal ini disebabkan kadar senyawa kimia pada konsentrasi ini sudah tidak sefektif  atau  tidak  seaktif  konsentrasi  100%, 80%  dan  60%.  sehingga  tidak  membuat terjadinya zona hambat atau zona hambat yang terbentuk masuk dalam kategori lemah. Hal ini menunjukan  bahwa  konsentrasi  dari  ekstrak daun
Spondias pinnata
mempengaruhi penghambatan  terhadap  bakteri Salmonella
typhi , yaitu semakin besar konsentrasinya maka akan semakin besar daya hambat yang diberikan (Sudarmi et al ., 2017 ; Putrayasa et al ., 2020). Penelitian  yang  dilakukan Asnani ,  et  al.
(2017) menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun kedondong  hutan  mampu  menghambat  bakteri S. typhi dengan  diameter  zona  hambat  rata-rata 6,72±0,18. Sedangkan pada penelitian ini  hasil penghambatan pada tiga strain S. typhi berturut- turut  17,67±0,58,  15,67±0,58  dan  20,33±0,58. Dari data tersebut menunjukkan bahwa ekstrak daun  kedondong  hutan  memberikan  zona hambat yang lebih kuat dari penelitian Asnani, et  al. (2017).  Perbedaan  ini  mungkin disebabkan perbedaan metode pengeringan dan metode  ekstraksi.  Asnani, et  al. (2017) melakukan  pengeringan  sampel  menggunakan oven  selama  3-4  hari  dan  metode  ekstraksi menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut etanol
Tabel  3.  Diameter  zona  hambat  ekstrak  daun  kedondong  hutan  ( Spondias  pinnata )  terhadap
Salmonella typhi Strain Kontrol positif (mm) Kontrol negatif (mm) Diameter zona hambat ekstrak kedondong hutan ( Spondias pinnata ) (mm) 20% 40% 60% 80% 100% BPE 127.1 MC 49,67±0,58 0,00±0,00 0,00±0,00 0,00±0,00 15,67±0,58* 16,67±0,58* 17,67±0,58* BPE 122.4 CCA 52,33±2,08 0,00±0,00 0,00±0,00 0,00±0,00 13,67±0,58* 15,67±0,58* 15,67±0,58* NCTC 786 43,00±1,00 0,00±0,00 0,00±0,00 11,33±0,58* 16,00±0,00* 17,00±0,00* 20,33±0,58*
Keterangan  kategori  zona  hambat:  *  kategori  zona  hambat  kuat  ekstrak  daun  kedondong  hutan  ( Spondias pinnata ) terhadap Salmonella typhi
Pada Tabel 3 dapat dilihat hasil penghambatan  kontrol  positif  terhadap  ketiga strain  bakteri  uji.  Dapat  dilihat  zona  hambat yang dihasilkan oleh antibiotik (kontrol positif) termasuk dalam kategori zona hambat susceptible (sensitif)  dengan  daya  hambat sebesar  49,67±0,58  mm  terhadap Salmonella typhi BPE  127,1  MC,  daya  hambat  sebesar 52,33±2,08 mm terhadap Salmonella typhi BPE 122.4  CCA  dan  daya  hambat  sebesar 43,00±1,00  mm  terhadap Salmonella  typhi NCTC 786. Berdasarkan CLSI (2020) kategori zona  hambat  antibiotik  terhadap  suatu  bakteri yaitu:  kategori susceptible (sensitif)  diameter zona hambat (mm) ≥ 20, kategori intermediate (menengah)  diameter  zona  hambat  15  –  19 (mm),  kategori  resistant  diameter  zona  hambat ≤ 14 (mm). Kontrol positif pada uji antibakteri ini menggunakan antibiotik Ciprofloxacin infus
200  mg/100  mL. Ciprofloxacin merupakan antibiotik  yang  termasuk  dalam  golongan kuinolon  dengan  spektrum  luas  yang  mampu berinteraksi  dengan  bakteri  gram  postif  dan negatif.  Antibiotik Ciprofloxacin ini  dapat bereaksi  sebagai  antimikroba  memiliki  sifat bakterisida  dan  bekerja  dengan  menghambat subunit  A  DNA  gyrase  (topoisomerase)  yang penting  dalam  reproduksi  DNA  bakteri. Spektrum  aktivitasnya  terhadap  bakteri  gram negative yang bersifat aerob seperti Enterobacter, Klebsiella, Proteus, Providencia, Salmonella,  Serratia,  Shigella (Hayati  & Widiastuti,  2011).  Berdasarkan  daya  hambat Ciprofloxacin tersebut,  maka  diketahui  bahwa daya  hambat  ekstrak  daun  kedondong  dengan metode  dekoktasi  sebesar  35%  terhadap Salmonella typhi BPE 127,1 MC, daya hambat sebesar  29%  terhadap Salmonella  typhi BPE
122,4  CCA  dan  daya  hambat  sebesar  47% terhadap Salmonella  typhi NCTC.  Sehingga dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun kedondong  hutan  ( Spondias  pinnata )  bisa dijadikan alternatif untuk mencegah tifoid.

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  kedondong  hutan  ( Spondias pinnata ) terbukti memiliki kemampuan sebagai antibakteri. Senyawa aktif pada daun kedondong hutan yakni flavonoid, saponin dan tanin.  Zona  hambat  terbesar  dihasilkan  pada kosentrasi  ekstrak  100%  tergolong  dalam kategori  kuat  11-20  mm  ( strong ).  Atas  dasar penemuan  ini  maka  daun  kedondong  dapat dijadikan alternatif pencegah demam tifoid yang disebabkan oleh Salmonella typhi .

## DAFTAR PUSTAKA
Al  Ridho  E.  2014.  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Metanol  Buah  Lakum  ( Cayratia trifolia ) dengan metode DPPH (2, 2-Difenil- 1-Pikrilhidrazil ). Jurnal Mahasiswa
Farmasi  Fakultas  Kedokteran  UNTAN .
1 (1): 1-10.
Amarantini  C,  Sembiring  L,  Kushadiwijaya  H &  Asmara  W.  2011.  Identification  and characterization of Salmonella typhi isolates from  Southwest  Sumba  District,  East  Nusa Tenggara  based  on  16S  rRNA  gene sequences. Biodiversitas Journal of
Biological Diversity . 12 (1): 1-6. Amarantini C, Satwika D, Budiarso TY, Yunita ER,  &  Laheba  EA.  2019.  Screening  of antimicrobial-producing lactic acid bacteria Isolated from Traditional Fish Fermentation against  Pathogenic  Bacteria. Journal  of Physics: Conference Series . 1397 (1): 012045. IOP Publishing.
Aminah  A,  Tomayahu  N  &  Abidin  Z.  2017. Penetapan  Kadar  Flavonoid  Total  Ekstrak
Etanol  Kulit  Buah Alpukat  ( Persea americana Mill.) dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis. Jurnal Fitofarmaka Indonesia . 4 (2): 226-230. Ardiaria  M.  2019.  Epidemiologi,  Manifestasi Klinis, dan Penatalaksanaan Demam Tifoid. Journal  of  Nutrition  and  Health . 7 (2):  32- 38. Asnani A, Rahayu WP, Jenie BSL & Yuliana N. D.  2017.  Aktivitas Antibakteri  Dan Sitotoksisitas  Ekstrak  Daun  Kedondong Hutan. Jurnal  Teknologi  dan  Industri
Pangan. 28 (2): 169-179.
Azizah  S,  Nursamsiar  &  Syamsu  N.  2019.  Uji
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Kedondong  Hutan  ( Spondias  pinnata (LF) Kurz.) dengan Berbagai Metode Uji. Jurnal Ilmiah  Manuntung  Sains  Farmasi  dan Kesehatan . 5 (1).
Clinical  and  Laboratory  Standards  Institute.
2020. Performance standards for antimicrobial  susceptibility  testing,  30th  ed CLSI  supplement  M100  Clinical  and Laboratory Standards Institute, Wayne, PA.
Demasta  EK, Al-Baarri ANM & Legowo AM. 2020.  Studi  Perubahan  Warna  pada  Buah Apel  ( Malus  domestica  Borkh .)  dengan Perlakuan  Asam  Hipoiodous  (HIO). Jurnal Teknologi Pangan . 4 (2): 149-152.
Ergina E, Nuryanti S & Pursitasari ID. 2014. Uji
Kualitatif  Senyawa  Metabolit  Sekunder pada Daun Palado ( Agave angustifolia ) yang Diekstraksi  dengan  Pelarut  Air  dan  Etanol. Jurnal Akademika Kimia . 3 (3): 165-172. Gayatri  DAAM,  Ernawati  DK  &  Widhiartini IAA.  Uji  Efektivitas  Ekstrak  Etanol  Daun Beluntas  ( Pluchea  indica  L. )  terhadap Pertumbuhan Bakteri Streptococcus
Pyogenes ATCC 19615 Secara In Vitro. E- Jurnal Medika Udayana. 10 (1): 7-12
Hayati  F  &  Widiastuti  ID.  2011.  Tinjauan Farmakokinetik Pemberian Berulang
Siprofloksasin  Pada  Pasien  Infeksi  Saluran
Kemih Rawat Inap di RS. X Periode Januari-
Juni 2010.
Lestari  JHS.  2016.  Dekok  Daun  Kersen ( Muntingia calabura ) sebagai Cairan Sanitasi  Tangan  dan  Buah  Apel  Manalagi ( Malus sylvestris ).
Jain  P,  Hossain  KR,  Mishu  TR  &  Reza  HM. 2014. Antioxidant and Antibacterial
Activities  of Spondias  pinnata Kurz. Leaves. European  Journal  of  Medicinal Plants . 183-195.
Kholidha  AN,  Suherman    IPWP  &  Hartati  H.
Uji  Aktivitas  Ekstrak  Etanol  Daun  Dadap Serep  ( Erythrina  lithosperma Miq)  sebagai Antibakteri  terhadap  Bakteri Salmonella typhi . Medula:  Jurnal  Ilmiah  Fakultas Kedokteran  Universitas  Halu  Oleo . 4 (1):
152701.
Marliana  SD,  Venty  S  &  Suyono.  2005. Skrining Fitokimia dan Analisis
Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Buah  Labu  Siam  ( Sechium  edule Jacq. Swartz.)  dalam  Ekstrak  Etanol.  Surakarta. Biofarmasi. 3 (1): 26-31.
Moja  FK.  2015.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Metanol  Daun  Mangga  Bacang
( Mangifera foetida L.) Terhadap Salmonella typhi Secara  In  Vitro. Jurnal  Mahasiswa PSPD FK Universitas Tanjungpura . 3 (1). Pangestuti  IE,  Sumardianto  S  &  Amalia  U. 2017. Skrining Senyawa Fitokimia Rumput
Laut Sargassum  sp .  Dan  Aktivitasnya sebagai Antibakteri Terhadap Staphylococcus  aureus  dan  Eschericia  coli (Phytochemical  Compound  Screening  of Sargassum sp.  and  It’s  Activity  as Antibacterial Against Staphylococcus aureus and Escherichia  coli ). Saintek Perikanan: Indonesian Journal of Fisheries Science and Technology . 12 (2): 98-102. Pratama  M,  Razak  R  &  Rosalina  VS.  2019. Analisis  Kadar  Tanin  Total  Ekstrak  Etanol Bunga  Cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.) Menggunakan  Metode  Spektrofotometri UV-Vis. Jurnal  Fitofarmaka  Indonesia.
6 (2): 368-373. Purwanti  NU,  Yuliana  S  &  Sari  N.  2018. Pengaruh Cara Pengeringan Simplisia Daun Pandan ( Pandanus amaryllifolius ) terhadap
Aktivitas Penangkal. Jurnal Farmasi Medica/Pharmacy  Medical  Journal  (PMJ). 1 (2).
Ariantari N, Kusuma P, Purwani S & Kardena,, I.  2015  Pemberian  Ekstrak  Etanol  Daun Kedondong  Hutan  Meningkatkan  Berat Ginjal  Mencit  Jantan  Galur  Balb/C. Jurnal Farmasi Udayana . 4 (1).
Ramayati  NPA,  Ariantari  NP,  &  Dwija  IBNP.
2013. Aktivitas Antituberkulosis Kombinasi Ekstrak N-heksana Daun Kedondong Hutan dengan Rifampisin Terhadap Isolat Mycobacterium  tuberculosis Strain  Mdr.
Jurnal Farmasi Udayana , 2 (3): 279886. Roy  A  &  Bharadvaja  N.  2017.  Qualitative Analysis of Phytocompounds and Synthesis of  Silver  Nanoparticles  from Centella asiatica . Innovative Techniques in
Agriculture . 1 (2): 88-95.
Ryanata  E,  Palupi  S  &  Azminah,  A.  2015. Penentuan Jenis Tanin dan Penetapan Kadar Tanin dari Kulit Buah Pisang Masak ( Musa paradisiaca L.) secara Spektrofotometri dan Permanganometri. Calyptra , 4 (1):1-16.
Santoso  I.  2019.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  dari Dekokta  dan  Ekstrak  Kloroform  Alga Cladophora Sp.  pada  Bakteri  Gram  Positif dan  Negatif. Jurnal  Bio  Komplementer Medicine . 6 (1).
Saputra  RK  &  Majid  R.  2017. Hubungan pengetahuan,  sikap  dan  kebiasaan  makan dengan  gejala  demam  thypoid  pada mahasiswa Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas Halu oleo tahun 2017 (Doctoral dissertation, Haluoleo University).
Sudarmi  K,  Darmayasa,  IBG  &  Muksin,  IK.
2017. Uji fitokimia dan daya hambat ekstrak daun  juwet  ( Syzygium  cumini )  terhadap pertumbuhan Escherichia coli dan
Staphylococcus  aureus ATCC. Simbiosis .
5 (2): 47-51.
Suheri  FL,  Agus  Z  &  Fitria  I.  2015. Perbandingan Uji Resistensi Bakteri Staphylococcus  aureus  Terhadap  Obat Antibiotik Ampisilin dan Tetrasiklin.
Andalas Dental Journal . 3 (1): 25-33. Sunaryani R, Mukaddas A & Tandah MR. 2019.
Perbandingan Efektivitas Antibiotik Golongan  Sefalosporin  Generasi  Ketiga Pada Pasien Demam Tifoid Di Rumah Sakit
Daerah  Madani  Provinsi  Sulawesi  Tengah Periode  2017. Jurnal  Ilmiah  Medicamento.
5 (1): 58-62.
Syafira,  AA.  2020. Isolasi  dan  karakterisasi senyawa  metabolit  sekuder  dari  ekstrak metanol daun tumbuhan pegagan (Centella asiatica  (Linn)  Urban)  dan  uji  toksisitas (Doctoral dissertation, Universitas Andalas). Vifta  RL  &  Advistasari  YD.  2018.  Skrining Fitokimia,  Karakterisasi,  dan  Penentuan Kadar  Flavonoid  Total  Ekstrak  dan  Fraksi- Fraksi  Buah  Parijoto  (Medinilla  speciosa B.). In Prosiding Seminar Nasional Unimus (vol. 1).
Wijayanti  DMH,  Hendrayana  MA  &  Pertiwi NKFR.  2020.  Ekstrak  Daun  Kedondong Hutan  ( Spondias  pinnata )  Menghambat Pertumbuhan Candida albicans dari Penderita Oral Thrush secara In Vitro. Bali Dental Journal . 4 (1): 8-12.