212 Penetapan Parameter Standardisasi Zainab , dkk

## PENETAPAN PARAMETER STANDARDISASI NON SPESIFIK DAN SPESIFIK EKSTRAK DAUN PACAR KUKU (Lawsonia inermis L.)
DETERMINATION OF NON SPECIFIC AND SPECIFIC STANDARDIZATION PARAMETER OF
HENNA ( Lawsonia inermis L.) LEAVES EXTRACT
Zainab, Nanik Sulistyani, Anisaningrum
Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan Email: zzanisa@gmail.com

## ABSTRAK
Standardisasi  ekstrak  tumbuhan  obat  di  Indonesia  merupakan  salah  satu  tahapan penting  dalam  pengembangan  obat  asli  Indonesia.  Daun  pacar  kuku  ( Lawsonia inermis L.)  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  mengandung  senyawa naftokuinon  dengan  berbagai  aktivitas.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melakukan standardisasi  ekstrak  daun  pacar  kuku  sehingga  diharapkan  dapat  digunakan sebagai  acuan  parameter  standar  mutu  ekstrak  karena  standarisasi  ekstrak  pacar kuku  belum  tercantum  di  MMI  dan  FHI.  Dalam  penelitian  ini  penyarian  ekstrak daun pacar kuku dilakukan menggunakan metode infundasi. Penetapan parameter non  spesifik  meliputi  kadar  air,  kadar  abu  total,  kadar  abu  tidak  larut  asam  dan cemaran  mikroba  dengan  metode  ALT.  Penetapan  parameter  spesifik  yaitu dengan  mengetahui  organoleptis  ekstrak,  profil  KLT  dan  menetapkan  kadar naftokuinon  total  menggunakan  metode  kromatografi  lapis  Tipis  (KLT)  dengan fase  diam  silika  gel  60  F 254 ,  fase  gerak  metanol  :  kloroform  (2:8)  dan  analisis kuantitatif menggunakan densitometri  pada panjang gelombang  maksimal. Hasil standardisasi  untuk  parameter  non  spesifik  menunjukkan  kadar  air  (7,33±0,52% v/b),  kadar  abu  total  (6,43±0,25%),  kadar  abu  tidak  larut  asam  (0,106±0,004%), dan  uji  cemaran  mikroba  (85x10 2 CFU/g).  Hasil  untuk  parameter  spesifik menunjukkan  organoleptis  ekstrak  (kental,  warna  coklat  tua,  rasa  agak  pahit  dan berbau khas daun pacar kuku), dengan kandungan senyawa naftokuinon, kumarin, flavonoid, polifenol, alkaloid, dan kadar naftokuinon total (7,43±0,28%). Ekstrak daun  pacar  kuku  sudah  memenuhi  persyaratan  sesuai  acuan  standar  Farmakope Herbal  Indonesia  tentang  syarat  ekstrak  sebagai  bahan  baku  sediaan  obat tradisional.
Kata kunci :  Ekstrak, pacar kuku ( Lawsonia inermis L. ), parameter non spesifik, parameter spesifik

## ABSTRACT
Standardization  of  extracts  of  medicinal  plants  in  Indonesia  is  one  of  the important stages in the development of original drugs Indonesia. Leaves of henna (Lawsonia  inermis L .)  is  one  of  the  plants  that  contain  of  naphthoquinone
Media Farmasi V ol. 13 No. 2 September 2016 : 212-226
compounds with various activities. In this research, the lack of standardization of the extracts of leaves of henna. Because in this case, the raw material crude drugs and extracts of henna leaves  is not listed in the monograph official publication of the  Ministry  of  Health  (Materia  Medika  Indonesia  and  medicinal  plant  extract Monograph).  Therefore,  it  is  expected  to  do  the  determination  of  standardizing parameters  henna  leaves  extract  can  be  used  as  a  reference  as  a  parameter extracts  quality  standards.    In  this  research  henna  leaf  extract  made  with infundation method.  Determination  of  non-specific parameters includes  moisture content,  total  ash,  acid  insoluble  ash  content  and  microbial  contamination  with ALT method. Determination of specific parameters by organoleptic extract,  TLC profile and naphthoquinone content using thin layer chromatography (TLC) with the stationary phase silica gel 60 F254, the mobile phase of methanol: chloroform (2:8)  and  quantitative  analysis  using  densitometry  which  scan  spectra  at maximum  wavelength.  The  result  of  standardization  for  non-specific  parameter shows  moisture  content  (7.33±0.52%  v/w),  total  ash  content  (6.43±0.25%),  acid insoluble ash content (0.106±0.004%), and microbial contamination test (85x10 2 CFU/g).  Results  for  specific  parameter  showed  organoleptic  extract  (thick,  dark brown color, bitter taste, no smell), with a compound naphthoquinone, coumarin, flavonoids,  polyphenols  and  alkaloids,  and  the  levels  of  total  naphthoquinone (7.43±0.28%).  Henna  leaf  extract  has  met  the  requirements  according  to  the standard reference for Farmakope Herbal Indonesia of the terms extract as a raw material preparation of traditional medicine.
Keywords : Extract,  henna  leaves  (Lawsonia  inermis L .),  non-specific parameter, specific parameter.

## PENDAHULUAN
Di Indonesia terdapat lebih dari 30.000 jenis tumbuhan dan lebih dari 1.000 jenis  tumbuhan  obat  telah  dimanfaatkan  dalam  industri  obat  tradisional  sebagai jamu,  obat  herbal  terstandar,  ataupun  fitofarmaka.  Obat  tradisional  dibuat  dalam bentuk  ekstrak  kental  atau  ekstrak  cair  yang  proses  pembuatannya  disesuaikan dengan  bahan  aktif  yang  terkandung  serta  tujuan  penggunaannya,  dan  ekstrak tersebut  harus  pula  terstandardisasi  untuk  menjamin  mutu  dan  keamanannya (Hariyati, 2005).
Beberapa kandungan golongan senyawa dalam tumbuhan yang dimanfaatkan  sebagai  obat  diantaranya  adalah  flavonoid,  kumarin,  lawson,  tanin dan  saponin.  Senyawa  lawson  sendiri  mempunyai  potensi  tinggi  sebagai antioksidan  dan  secara  simultan  dapat  menghambat  toksisitas  oksidatif  (Guha et al. ,  2013).  Selain  itu,  lawson  juga  memiliki  aktivitas  antimikroba  yang  luas termasuk  di  dalamnya  sebagai  antibakteri,  antiviral,  antimikotik  dan  antiparasit (Babu and Subhasree,  2009).  Salah  satu  tanaman  Indonesia  yang  dapat
214 Penetapan Parameter Standardisasi Zainab , dkk
dimanfaatkan  untuk  tujuan  tersebut  adalah  daun  pacar  kuku  ( Lawsonia  inermis L.).  Daun  pacar  kuku  ( Lawsonia  inermis L.)  memiliki  kandungan  kimia  yang bermanfaat  untuk  pengobatan  antara  lain  yaitu  lawson  ( 2-hydroxy-1,4- naphtoquinone ),  flavonoid  (luteolin,  apigenin  dan  glikosida),  kumarin  (esculetin,
fraxetin,  scopoletin),  tanin  dan  saponin  (Borade et  al .,  2011;  Chaundary et  al .,
2010).  Hasil  penelitian  Zainab  (2013),  ekstrak  air  daun  pacar  kuku  mempunyai potensi  aktivitas  biologi  yang  tinggi,  hal  ini  dikarenakan  salah  satunya  adanya kandungan naftokuinon  dalam ekstrak tersebut. Adapun ekstrak daun pacar kuku dengan  kandungan  naftokuinon  memiliki  potensi  aktivitas  biologi  yang  tinggi, maka  untuk  memperoleh  ekstrak  yang  berkualitas  perlu  adanya  penetapan parameter standardisasi ekstrak meliputi parameter non spesifik dan spesifik yaitu kadar  air,  kadar  abu  total,  kadar  abu  tidak  larut  asam,  uji  cemaran  mikroba, organoleptis  ekstrak,  uji  kualitatif  serta  kuantitatif  kandungan  senyawa  dalam ekstrak  (Anonim,  2000;  Anonim,  2008).  Hasil  penelitian  penetapan  parameter standardisasi  ekstrak  daun  pacar  kuku  ini  diharapkan  dapat  dijadikan  acuan sebagai parameter standar mutu ekstrak dalam menunjang kesehatan karena belum tercantum  dalam  buku  Materia  Medika  Indonesia  dan  Monografi  Ekstrak Tumbuhan Obat.

## METODE PENELITIAN
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  inkubator,  oven, timbangan  analitik  (AND  GR  202),  eksikator,  krus  porselin,  tanur  (Ney  Vulcan D130), aluminium foil, kertas saring, densitometer (Camag TLC Scanner 3), alat infundasi  meliputi  panci  infusa,  penangas  air,  waterbath  (Memmerth), termometer,  corong  buchner  (pyrex-iwaki),  penggaris,  kamera.  Bahan  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun  pacar  kuku  ( Lawsonia  inermis L .) , standar  Lawson  p.a  (Aldrich),  media  MH,  NaCl  0,9%,  methanol  p.a  (E-Merck), kloroform  p.a (E-Merck), akuades, pereaksi  FeCl 3 p.a (E-Merck), pereaksi  AlCl 3
p.a (E-Merck), toluena p.a (E-Merck), asam klorida encer p.a (E-Merck), pereaksi Dragendrof, dan KOH 10% dalam etanol p.a (E-Merck).
Media Farmasi V ol. 13 No. 2 September 2016 : 212-226
Jalannya Penelitian
A. Determinasi Tanaman
Identifikasi  tanaman/determinasi  dilakukan  untuk  memastikan  bahan  yang digunakan  benar-benar  daun  pacar  kuku  ( Lawsonia  inermis L.).  Determinasi dilakukan  di  Laboratorium  Biologi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam (FMIPA) Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta dengan buku acuan Flora of Java karangan Backer and Van (1965).

## B. Pengumpulan Bahan
Daun  pacar  kuku  ( Lawsonia  inermis L.)  diperoleh  dari  Celeban  Baru Yogyakarta, pada bulan Oktober 2015.

## C. Pembuatan Ekstrak Daun Pacar Kuku
Pembuatan ekstrak dilakukan dengan cara infundasi. Serbuk simplisia daun pacar kuku yang telah kering, ditimbang sebanyak 100 g dibasahi dengan akuades sebanyak  200  mL  kemudian  diinfundasi  dengan  menggunakan  900  mL  akuades ke  dalam  panci  selama  15  menit  setelah  mencapai  suhu  90ºC,  diuapkan  di  atas waterbath pada suhu 50ºC hingga diperoleh ekstrak kental.

## D. Parameter Organoleptis
Untuk  mengetahui  organoleptis  dari  ekstrak  daun  pacar  kuku,  digunakan panca indera untuk mendeskripsikan bentuk, bau, rasa dan warna.
E. Penetapan Kadar Air
Penetapan  kadar  air  pada  penelitian  ini  menggunakan  cara  destilasi  toluen, yaitu  ekstrak  ditimbang sebanyak 5 g dan dimasukkan ke dalam labu,  kemudian dimasukkan lebih kurang 200 mL  toluen P  yang sudah dijenuhkan 18-24 jam ke dalam  labu  dan  alat  dihubungkan  dan  dilakukan  destilasi  sampai  adanya pemisahan antara air dan toluen.

## F. Penetapan Kadar Abu Total
Kadar  abu  ekstrak  daun  pacar  kuku  ditetapkan  dengan  metode  gravimetri.
Ditimbang  sebanyak  2  g  ekstrak  daun  pacar  kuku  ke  dalam  krus  yang  telah ditimbang sebelumnya, kemudian dipijarkan bertahap hingga suhu 600±25ºC.

## G. Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
Abu yang diperoleh dididihkan dengan 25 mL asam klorida encer selama 5 menit. Pengumpulan bagian yang tidak larut asam, disaring melalui kertas saring
216 Penetapan Parameter Standardisasi Zainab , dkk
bebas  abu,  dicuci  dengan  air  panas.  Abu  yang  tersaring  dan  kertas  saringnya dimasukkan  kembali  dalam  krus  silikat  yang  sama,  dipijarkan  secara  perlahan- lahan  dalam  krus  (dengan  suhu  dinaikkan  secara  bertahap  hingga  600±25ºC, kemudian ditimbang hingga bobot tetap (Anonim, 2000).
H. Uji Cemaran Mikroba dengan Metode Angka Lempeng Total
Sampel ekstrak 0,5 g dimasukkan ke dalam tabung reaksi  yang telah berisi
4,5 mL NaCl 0,9% steril (pengenceran 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10.000 dengan NaCl
0,9% steril). Dimasukkan ke dalam lemari inkubator suhu 37ºC selama 18-24 jam,
dihitung koloni yang tumbuh.

## I. Optimasi Fase Gerak
Fase  diam  silika  gel  60  F 254 terlebih  dahulu  dipanaskan  pada  suhu  105– 110ºC selama 1 jam. Ekstrak daun pacar kuku dengan konsentrasi 20% ditotolkan sebanyak  5  μL  pada  fase  diam,  kemudian  dielusi  dengan  fase  gerak  kloroform  : metanol  8:2  (Fatmawati,  2015)  dan  komposisi  yang  kedua  kloroform  :  metanol 7:3 (Zainab, 2013).

## J. Penentuan Profil dan Uji Kromatografi Lapis Tipis
Ekstrak daun pacar kuku konsentrasi 20% ditotolkan sebanyak ±5 μL pada fase  diam,  kemudian  dielusi  dengan  fase  gerak  kloroform  :  metanol  (8:2).  Plate KLT  yang  sudah  dielusi  dideteksi  pada  sinar  UV  254  nm  dan  UV  365  nm kemudian  dihitung  Rf  masing-masing.  Bercak  diidentifikasi  dengan  pereaksi semprot KOH 10% dalam etanol (naftokuinon dan kumarin), FeCl 3 (fenol), AlCl 3 (flavonoid),  dan  pereaksi  Dragendrof  untuk  alkaloida  (Harborn,  2006;  Stahl, 1985).
K. Pengukuran Kadar Naftokuinon Total Secara Densitometri
1. Pembuatan Standar Lawson
Ditimbang  serbuk  standar  lawson  sebanyak  20,0  mg,  kemudian  dilarutkan dengan  metanol  p.a  sampai  10,0  mL.  Dibuat  seri  larutan  kurva  baku  dengan pengenceran menggunakan metanol p.a hingga konsentarsi 0,125; 0,25; 0,5; 0,75 dan 1,0 mg/mL.
Media Farmasi V ol. 13 No. 2 September 2016 : 212-226

## 2. Pembuatan Sampel Larutan Uji dengan Konsentrasi 50 mg/mL
Ditimbang ekstrak daun pacar kuku ( Lawsonia inermis L.) sebanyak 250,0
mg  dilarutkan  dengan  akuades  hingga  5  mL.  Pembuatan  sampel  larutan  uji dilakukan sebanyak 5 kali replikasi.
3. Kromatografi Lapis Tipis
Ditotolkan  masing-masing  1  L  larutan  deret  standar  (0,125;  0,25;  0,5; 0,75 dan 1,0 mg/mL) dan larutan uji 5 L (50 mg/mL) dengan 5 kali replikasi pada lempeng  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  silika  gel  60  F 254 ,  kemudian  dielusi dengan fase gerak metanol : kloroform (2:8).
4. Pengukuran Kadar Lawson Secara Densitometri
Bercak  yang  muncul  pada  fase  diam  dari  larutan  standar  Lawson  dan ekstrak  sampel  pada  Rf  yang  sama,  kemudian discanning dengan  densitometer pada  panjang  gelombang  serapan  maksimal  sehingga  dapat  diketahui  harga  Rf sesungguhnya, luas area dan persamaan regresi linier, dihitung kadar (%).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Determinasi Tanaman
Berdasarkan  hasil  determinasi  dapat  dipastikan  bahwa  tumbuhan  yang digunakan adalah benar-benar tumbuhan pacar kuku ( Lawsonia inermis L.).

## B. Pengumpulan dan Pembuatan Simplisia
Bahan utama  yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun pacar kuku yang    tua,    segar,  dan    tidak    terkena    penyakit    yang    diperoleh    dari    Celeban Baru, Umbulharjo, Yogyakarta bulan Oktober 2015.

## C. Hasil Pembuatan Ekstrak Daun Pacar Kuku
Proses ekstraksi pada penelitian ini menggunakan metode infundasi karena beberapa  kandungan  senyawa  kimia  daun  pacar  kuku  bersifat  polar  seperti glikosida  naftokinon,  glikosida  flavonoid  dan  lain-lain  sehingga  kandungan  zat aktif yang larut dalam air tersebut akan tersari dengan baik. Penyarian dengan cara infundasi  ini  mudah  digunakan  oleh  masyarakat  karena  pembuatan    infusa    ini dengan cara direbus saja. Hasil rendemen ekstrak pacar kuku tersaji pada Tabel I.
218 Penetapan Parameter Standardisasi
Zainab , dkk Tabel I. Hasil rendemen ekstrak daun pacar kuku
Bobot serbuk simplisia (g) Bobot ekstrak (g) Rendemen (%) 300,04 65,30 21,76

## D. Hasil Penetapan Parameter Non Spesifik Ekstrak Daun Pacar Kuku
Penetapan Parameter non spesifik ekstrak secara umum dilakukan terhadap kadar air, kadar abu total, kadar abu tidak larut asam, dan cemaran mikroba dalam ekstrak.  Organoleptis  ekstrak  dan  simplisia  bertujuan  sebagai  pengenalan  awal yang  sederhana  seobyektif  mungkin  menggunakan  panca  indera  dengan mendiskripsikan  bentuk,  warna,  bau,  dan  rasa  (Anonim,  2000;  Anonim  2008). Hasil parameter organoleptis ekstrak daun pacar kuku tersaji pada Tabel II.
Tabel  II. Hasil  penetapan  parameter  standarisasi non spesifik ekstrak daun pacar kuku Parameter uji Hasil Kadar air (%v/b) 7,33±0,52 Kadar abu (%) 6,43±0,25 Kadar abu tidak larut asam (%) 0,106±0,004 Cemaran mikroba (CFU/g) 8,5x10 3
Berdasarkan hasil yang terlihat pada Tabel II, kadar air ekstrak daun pacar kuku  yang  diperoleh  7,33±0,52%  v/b  atau  kurang  dari  10%  sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  pacar  kuku  yang  digunakan  memenuhi persyaratan  standar.  Kadar  air  dalam  ekstrak  kurang  dari  10%  dapat meminimalisir  tumbuhnya  jamur  dan  kapang  serta  menghasilkan  daya  tahan penyimpanan dan mutu ekstrak daun pacar kuku tetap baik.
Penetapan kadar abu total  dapat digunakan untuk memberikan  gambaran kandungan mineral  ekstrak, mulai  dari proses awal  sampai  terbentuknya ekstrak, sehingga  parameter  kadar  abu  total  terkait  dengan  kemurnian  dan  kontaminasi suatu ekstrak (Anonim, 2000). Pada hasil penelitian ini diperoleh kadar abu total sebesar 6,43±0,25%, artinya kandungan anorganik di dalam ekstrak masih terlalu tinggi  karena melebihi kadar  abu  ekstrak  yang baik  yaitu 5%. Tetapi hasil kadar abu  ini  masih  lebih  rendah  bila  dibandingkan  dengan  hasil  penelitian  Jain et  al ., 2010  yaitu  sebesar  14,60%.  Kadar  abu  tidak  larut  asam  yang  diperoleh  pada
Media Farmasi V ol. 13 No. 2 September 2016 : 212-226
penelitian  ini  adalah  0,106±0,004%,  dapat  disimpulkan  bahwa  tingkat kontaminasi  mineral  atau  logam  yang  tidak  larut  asam  dalam  suatu  ekstrak maupun simplisia masih rendah.
Hasil uji  cemaran mikroba  diperoleh 8,5x10 3 CFU/g, hasil tersebut  masih tergolong  di  bawah  batas  maksimum  cemaran  mikroba,  yaitu  syarat  cemaran mikroba tidak lebih dari 10 4 koloni/g (BPOM, 2006).
E. Hasil Penetapan Parameter Spesifik Ekstrak Daun Pacar Kuku
Penetapan parameter spesifik ekstrak daun pacar kuku dilakukan terhadap organoleptis,  profil  kromatografi  lapis  tipis  untuk  melihat  golongan  senyawa kimia dan  penetapan kadar naftokinon yang terdapat dalam ekstrak.
F. Hasil Uji Organoleptis Ekstrak
Uji  organoleptis  ekstrak  yang  dilakukan  meliputi  bentuk,  warna,  bau  dan rasa. Uji ini dilakukan agar diperoleh gambaran awal dari esktrak yang dihasilkan. Hasil uji organoleptis ekstrak dapat dilihat pada Tabel III.
Tabel III. Hasil uji organoleptis ekstrak daun pacar kuku
Parameter uji Hasil Organoleptis ekstrak : a. Bentuk b. Warna c. Bau d. Rasa Kental Coklat tua Bau khas daun pacar kuku
Agak pahit

## G. Hasil Penentuan Profil dan Uji Kromatografi Lapis Tipis
Uji  identifikasi  dilakukan  untuk  mengetahui  golongan  senyawa  yang terkandung  dalam  ekstrak  daun  pacar  kuku  ( Lawsonia  inermis L.)  dan  hasil identifikasi  naftokinon,  polifenol,  alkaloid,  kumarin  dan  flavonoid  tersaji  pada Tabel IV, V, VI, VII dan VIII.
Hasil  data  pada  Tabel  IV  dapat  dilihat  bahwa  terdapat  1  bercak  standar lawson  dengan  Rf  0,38,  dan  6  bercak  sampel  dengan  Rf  0,10;  0,21;  0,38;  0,53; 0,69  dan  0,81.  Bercak  sampel  no  1,2,  dan  3  dengan  Rf  0,10;  0,21;  0,38 menunjukkan  ciri  bercak  naftokinon  karena  terjadi  pemadaman  di  bawah  sinar UV 254 nm, berfluoresensi merah kecoklatan pada UV 365 nm dan bila disemprot dengan  KOH  10%  terdapat  bercak  berwarna  orange  atau  coklat  kemerahan
220 Penetapan Parameter Standardisasi Zainab , dkk
(Wagner and Bladt,  1996).    Berdasarkan  hal  tersebut  maka  dapat  disimpulkan bahwa di dalam ekstrak daun pacar kuku memiliki kandungan naftokuinon.

## Tabel IV. Hasil identifikasi naftokuinon secara KLT
Totolan Deteksi Keberadaan naftokuinon Rf UV 254 UV 365 UV 365+KOH 10% Visibel + KOH 10% Ekstrak 0,10 Pemadaman Biru Merah kecoklatan Kuning orange + 0,21 Pemadaman Biru Merah kecoklatan Kuning orange + 0,38 Pemadaman Biru Merah kecoklatan Kuning orange + 0,53 Pemadaman Kuning Biru Kuning - 0,69 Pemadaman Biru Biru Kuning - 0,81 Pemadaman Biru Biru Kuning - Naftokuinon 0,38 Pemadaman Biru Merah kecoklatan Kuning orange + Tabel V. Hasil identifikasi polifenol secara KLT
Totolan Deteksi Keberadaan polifenol Rf UV 254 UV 365 Visibel + FeCl 3 Ekstrak 0,13 Pemadaman Biru Hijau kehitaman + 0,23 Pemadaman Biru Hijau kehitaman + 0,38 Pemadaman Biru Hijau kehitaman + 0,50 Pemadaman Kuning Hijau kehitaman + 0,69 Pemadaman Biru Hijau kehitaman + 0,81 Pemadaman Biru Hijau kehitaman + Quersetin 0,51 Pemadaman Kuning Hijau kehitaman +
Hasil data Tabel V  dapat dilihat bahwa terdapat 1 bercak standar dengan Rf  0,51,  dan  6  bercak  sampel  dengan  Rf  0,13;    0,23;  0,38;  0,50;  0,69  dan  0,81 menunjukkan  pemadaman  di  bawah  sinar  UV  254  nm,  berfluoresensi  biru  pada UV  365  nm,  bila  disemprot  dengan  FeCl 3 terdapat  bercak  berwarna  hijau
Media Farmasi V ol. 13 No. 2 September 2016 : 212-226
kehitaman pada sinar tampak. Berdasarkan hal tersebut dapat disimpulkan bahwa didalam  ekstrak  daun  pacar  kuku  memiliki  kandungan  polifenol.  Harga  Rf menunjukkan bahwa terdapat senyawa polifenol  pada uji KLT. Harga Rf ekstrak yang mendekati standar yaitu 0,50, jadi dapat disimpulkan bahwa di dalam ekstrak daun pacar kuku mengandung polifenol.
Tabel VI. Hasil identifikasi alkaloid secara KLT
Totolan Deteksi Keberadaan alkaloid Rf UV 254 UV 365 Visibel + Dragendrof Ekstrak 0,13 Pemadaman Biru Coklat - 0,24 Pemadaman Biru Coklat - 0,39 Pemadaman Biru Coklat - 0,53 Pemadaman Kuning Coklat - 0,69 Pemadaman Biru Kuning - 0,84 Pemadaman Biru Orange + Piperin 0,84 Pemadaman Biru Orange +
Pada  Tabel  VI  terdapat  1  bercak  standar  piperin  (Rf  0,84)  dan  6  bercak sampel  (Rf  0,13;  0,24;  0,39;  0,53;  0,69;  0,84.  Pada  bercak  sampel  ekstrak  daun pacar  kuku  Rf  0,84  menunjukkan  pemadaman  di  bawah  sinar  UV  254  nm, berwarna  orange  kecoklatan  dan  kuning  muda  pada  sinar  visibel  serta berfluoresensi  biru  di  bawah  sinar    UV  365  nm  yang  karakteristiknya  sama dengan standar piperin. Berdasarkan hal tersebut maka dapat disimpulkan bahwa di dalam ekstrak daun pacar kuku terdapat kandungan alkaloid.
Hasil data Tabel VII bahwa terdapat 1 bercak standar dengan Rf 0,83, dan 6    bercak  sampel  dengan  Rf  0,13;  0,24;  0,39;  0,54;  0,69;  dan  0,81.  Pada  bercak sampel  ekstrak  daun  pacar  kuku  menunjukkan  warna  kuning  kecoklatan  pada sinar tampak dan pemadaman di bawah sinar UV 254 nm dan bercak nomor 6 (Rf 0,81)  menunjukkan  fluoresensi  biru  intensif  setelah  disemprot  KOH  10%  di bawah  sinar  UV  365  nm.  Berdasarkan  hal  tersebut  dapat  disimpulkankan  bahwa di dalam ekstrak daun pacar kuku memiliki kandungan kumarin. Harga Rf ekstrak mendekati  standar  yaitu  0,81,  jadi  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  pacar kuku mengandung kumarin.
222 Penetapan Parameter Standardisasi
Zainab , dkk Tabel VIII. Hasil identifikasi kumarin secara KLT
Totolan Deteksi Keberadaan kumarin Rf UV 254 UV 365 UV 365+FeCl 3 Visibel+ KOH 10% Ekstrak 0,13 Padam Fluoresensi Biru Biru Kuning - 0,24 Padam Fluoresensi Biru Biru Kuning - 0,39 Padam Fluoresensi Biru Biru Kuning - 0,54 Padam Fluoresensi Biru Biru Kuning - 0,69 Padam Fluoresensi Biru Biru Kuning - 0,81 Padam Fluoresensi Biru Fluoresensi biru intensif Kuning + Kumarin 0,83 Padam Fluoresensi Biru Fluoresensi biru intensif Kuning + Tabel VIII. Hasil identifikasi flavonoid secara KLT
Totolan Deteksi Keberadaan flavonoid Rf UV 254 UV 365 Visibel + AlCl 3 Ekstrak 0,13 Pemadaman Biru Kuning orange - 0,23 Pemadaman Biru Kuning orange - 0,39 Pemadaman Biru Kuning orange - 0,51 Pemadaman Kuning Kuning + 0,69 Pemadaman Biru - - 0,81 Pemadaman Biru - - Quersetin 0,51 Pemadaman Kuning Kuning +
Hasil  data  Tabel  VIII  terdapat  1  bercak  standar  dengan  Rf  0,51,  dan  6 bercak sampel dengan Rf 0,13; 0,23; 0,39; 0,51; 0,69; dan 0,81. Bercak no 4 (Rf 0,51) menunjukkan pemadaman di bawah sinar UV 254 nm dengan latar belakang hijau,  di  bawah  sinar  UV  365  nm  berfluoresensi  kuning  dan  setelah  disemprot dengan AlCl 3 berwarna kuning. Berdasarkan hal tersebut maka dapat disimpulkan ekstrak daun pacar kuku memiliki kandungan flavonoid.
Media Farmasi V ol. 13 No. 2 September 2016 : 212-226
Berdasarkan hasil uji KLT menunjukkan bahwa dalam ekstrak daun pacar kuku  mengandung  naftokuinon,  kumarin,  flavonoid,  polifenol,  dan  alkaloid, sedangkan  hasil  penelitian  Jubaidah  (2006)  menyebutkan  pada  hasil  hidrolisis infusa daun pacar kuku mengandung senyawa golongan naftokinon dan flavonoid.

## H. Hasil Pengukuran Kadar Naftokuinon Total secara Densitometri
Data  yang  diperoleh  yaitu  panjang  gelombang  absorbansi  maksimum untuk  standar  lawson  adalah  268  nm  sedangkan  untuk  panjang  gelombang absorbansi maksimum untuk sampel ekstrak daun pacar kuku adalah 285 nm pada Rf  sampel  0,38  dan  Rf  standar  0,39.  Range  panjang  gelombang  absorbansi maksimum  untuk  senyawa  naftokuinon  muncul  pada  264-340  nm  (Rene,  2005). Hal tersebut menunjukkan bahwa bercak sampel dengan Rf 0,38 adalah senyawa lawson. Data luas area kromatogram tersaji pada Tabel IX.

## Tabel IX. Data luas area kromatogram untuk kurva baku
Konsentrasi (mg/mL) Luas Area Kromatogram (V) Persamaan garis 0,125 3,2201 y = bx + a
R = 0,9816 y =12,6657x+14,6296
0,250 4,4792 0,500 8,4343 0,750 9,5271 1,000 14,9016
Gambar 1. Persamaan regresi linier konsentrasi standar dan absorbansi
224 Penetapan Parameter Standardisasi Zainab , dkk
Berdasarkan teori untuk n = 5 dengan taraf kepercayaan 95% maka harga r tabel = 0,8783, karena r hitung 0,9816 > r tabel 0,8783 maka ada korelasi atau hubungan antara  konsentrasi  dengan  absorbansi.  Data  pada  Tabel  X  menunjukkan  bahwa kadar rata-rata naftokuinon ekstrak daun pacar kuku yaitu 7,43%. Pada penelitian pendahuluan  oleh  Zainab  (2010)  diperoleh  kadar  naftokuinon  serbuk  simplisia daun  pacar  kuku  sebesar  1,36%  dengan  metode  maserasi  menggunakan  air. Perbedaan  kadar  naftokuinon  yang  diperoleh  tersebut  dapat  disebabkan  karena metode ekstraksi yang digunakan berbeda, dalam penelitian Zainab (2010) proses ekstraksi yang digunakan menggunakan air dingin, sedangkan dalam penelitian ini digunakan air panas, sehingga naftokuinon lebih banyak terekstrak dengan metode infundasi.
Tabel X. Data luas area kromatogram  sampel dan kadar Replikasi Berat ekstrak (gram) Luas Area Kromatogram (V) Kadar naftokuinon % (b/b) 1 0,250 10,8679 7,43 2 0,250 11,0896 7,60 3 0,250 11,0365 7,56 4 0,250 11,1865 7,68 5 0,250 10,2012 6,90 (%) 7,43 CV (%) 4,20 SD 0,31 LE 0,28

## KESIMPULAN
Parameter  non  spesifik  ekstrak  daun  pacar  kuku  meliputi  kadar  air (7,33±0,52%  v/b),  kadar  abu  total  (6,43±0,25%),  kadar  abu  tidak  larut  asam (0,106±0,004%),  dan  uji  cemaran  mikroba  (8,5x10 3 CFU/g).  Parameter  spesifik ekstrak  daun  pacar  kuku  secara  organoletik  ekstrak  adalah  ekstrak  kental  yang berwarna  coklat  tua,  berasa  agak  pahit  dan  bau  khas  daun  pacar  kuku.  Ekstrak daun  pacar  kuku  mengandung  senyawa  naftokuinon,  kumarin,  flavonoid, polifenol,  dan  alkaloid.  Kadar  naftokuinon  ekstrak  daun  pacar  kuku  sebesar 7,43±0,29%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  banyak  terimakasih  kepada  LPP  UAD  yang  telah memberikan  dukungan  dana  penelitian  ini.  Penulis  juga  mengucapkan  terima kasih kepada pihak-pihak yang memberikan dukungan hingga penelitian ini dapat terselesaikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim,  2000, Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat ,  Edisi  I, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Babu,  D.P.  and  Subhasree  R.S.,  2009,  Antimicrobial  Activities  of Lawsonia inermis , Academic Journal of Plant Sciences , 2 (4): 231-232.
Backer,  C.A.  and  Van  Den  Brink  Jr.,  R.C.B.,  1965, Flora  of  Java ,  Published under The Auspices of The Rijksherbarium, Leyden, 1 : 251-256.
BPOM, 2006, Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat Vol. 2, BPOM, Jakarta.
Borade,  A.S., Babasaheb,  N.,  Kale  and  Shete,  R.R.V.,  2011,  A Phytopharmacological review on Lawsonia inermis (Linn.), International Journal of Pharmacy and Life Scieces , 2 (1): 536-541.
Chaundhary, G., Goyal,  S., and Poonia, P., 2010, Lawsonia inermis Linnaeus: A Phytopharmacological  Review, International Journal of  Pharmaceutical Sciences and Drug Research , 2 (2): 91-98.
Fatmawati A., 2015, Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol dan Fraksi Etil Asetat Daun Pacar Kuku ( Lawsonia inermis L.) dengan Metode Fosfomolibdat, Skripsi , Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta.
Guha, G., Rajkumar, V., and Mathew, L., 2009, Antioxidant Activity of Lawsonia inermis Extract  Inhibits  Cromium  (VI)  Induced  Cellular  and  DNA Toxicity, eCAM .
Harborne,  J.B.,  2006, Metode  Fitokimia  Edisi  ke-2 ,  Terjemahan  Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro, Bandung : Penerbit ITB.
Hariyati,  S.,  2005,  Standardisasi  Ekstrak  Tumbuhan  Obat  Indonesia,  Salah  Satu Tahapan Penting dalam  Pengembangan Obat  Asli  Indonesia, Info POM , 6 (4): 1-5.
226 Penetapan Parameter Standardisasi Zainab , dkk
Jain,  V.C.,  Shah,  D.P.,  Sonani,  N.G.,  Dhakara,  S.  and  Patel,  N.M.,  2010, Pharmacognostical  and  Preliminary  Phytochemical  Investigation  of Lawsonia  inermis L.  Leaf, Rom.J.Biol-Plant  Biol. ,  Bucharest, 55 (2): 127-133.
Jubaidah, S., 2006, Uji Aktivitas Antibakteri Infusa Daun Pacar Kuku ( Lawsonia inermis L.)  terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus dan Escerichia  coli Secara In  Vitro serta  Profil  Kromatogramnya, Skripsi ,  Fakultas  Farmasi Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta.
Rene, 2005, Enviromental Organic Chemistry , Cetakan Kedua, Wiley, 620.
Stahl, E., 1985, Analisis Obat secara Kromatografi dan Mikroskopi , Terjemahan Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro), Bandung: ITB Press.
Wagner,  H.  and  Bladt,  S.,  1996, Plant  Drug  Analysis  A  Thin  Layer Chromatography Atlas , 2 nd ed., Spinger-Verlag Berlin Heidelberg, 6, 54, 126, 196,  275.
Zainab,  2010,  Pengaruh  Konsentrasi  Etanol  sebagai  Pelarut  Pengekstraksi terhadap  Kadar  Naftokinon  dalam  Ekstrak  Daun  Pacar  Kuku  ( Lawsonia inermis L.), Pharmaciana , 3 (2): 63-68.
Zainab,  2013,  TLC  Screening  for  Antioxidant  Activity  of  Henna  ( Lawsonia inermis L.) Leaf Extract, International Proceeding of SMCCR .