( · ..
Fraksinasi dan Identifikasi SenyawaAntioksidan pada Eksb-ak Etanol buah Goji beny(Lycium barbarum linn.) secaraKromatografi Kolom
Diga Albrian(8), Sumi Wijaya(a)·,  Henry Kurnia Setiawan(a)
(alFaculty of Pharmacy, Widya  Mandala Catholic University Surabaya,  Indonesia
Buah  Goji  berry (Lyc/um  barbarum L).  Memiliki  kandungan  senyawa  kimia  yang  dimiliki  antara  lain polisakarida,  zeaxanthin  dan  beta-carotene.  Aktivitas dan senyawa  kimia terse but masih tergolong keluarga dari 'senyawa  a ntioksidan,  yang  digunakan  sebagai  terapi  penyembuhan  terhadap  penyakit  akibat  dari adanya  radikal bebas seperti  penyakit atherosclerosis,  cancer, liver cirrhosis, hipertensi dan diabetes.  Pada penelitian  ini  dllakukan  fraksinasi  dan  identifikasi  terhadap  ekstrak  etanol  buah  Goji  berry  untuk mendapatkan  senyawa  atau  golongan  yang  mempunyai  daya  antioksidan  pada  ekstrak  etanol  buah  Goji berry  dengan  metode  kolom  kromatografi  dan  metod,e  DPPH,  Senyawa  yang terisolasi  akan  diidentifikasi dengan  menggunakan  metode  skrinning  fitokimia,  KLT,  Spektrofotometer  UV-Vis  dan  spektrofotometer Inframerah.  Dari  hasil  penelitian  didapatkan  bahwa  buah  Goji  berry  memiliki  senyawa  metabolit sekunder yang berfungsi sebagai antioksidan yaitu senyawa flavonoid (flavon atau flavonol), Aktivitas antioksidan  hasil fraksinasi memberikan aktivitas antioksidan yangtinggi dibandingkan dengan ekstrak etanol buah Goji berry. Golongan  metabolit sekundar dalam  fraksi  etanol  buah  goji  berry yang dapat berfungsi  sebagai  senyawa antioksidan adalah flavonoid  dan fraksi etanol dari  buah  goji  berry memiliki aktivitas antioksidan yang lebih besardibandingkan dengan ekstrak etanolnya.
Kata  kunci: Antioksidan,  Goji berry,  DPPH  dan kolom  kromatografi.
Fractionation and Identification of Antioxidant Compounds in Ethanol Extracts of Goji berry fruit (Lycium barbarum Linn.) in Column Chromatography
Goji  berry  fruit  (Lycium  barbarum),  familia  Solanac'eae,  is a red  berry fruit.  The  chemical compounds  contained  in  this  fruit are  polysaccharides,  zeaxanthin  and beta-carotene.  Activity of the  chemical compounds is  still considered as a family of antioxidant compounds,  which are  used as a medicine to cure the diseases caused by the presence of free radicals such a~ atherosclerosis, cancer,  liver cirrhosis,  hypertension and diabetes.  The  research  will be carried on  fractionation and identification of the  ethanol extract of Goji berry fruit to  obtain  compounds  that have  antioxidant power using chromatographic  column  method and DPPH method.  The  isolated compounds  will be identified  using  methods  phytochemica/s  screening,  TLC,  UV-Vis  spectrophotometer and infrared spectrophotometer.  The  result showed  that secondary metabolites of Goji berry fruit  which  are potential as  antioxidant compound were  flavonoid (flavono/s  or flavones).  The  isolated compound had higher antioxidant activity compare to the ethanol extract of Goji berry fruit  Flavonoids are the major compounds that have antioxidant capacity.  Whereas,  the ethanol fraction of Goji berry fruits has the best antioxidant activity than the ethanol extract
Keywords: Antioxidant, Goji berry,  DPPH and chromatographic column.
*Corresponding  author:  Faculty  of Pharmacy,  Widya  Mandala  Catholic  University  Surabaya, JI. Dinoyo  42-44,
Surabaya, Indonesia, Phone/fax number: (+62-31}5678478/{+62-31}5610818, E-mail: Sumiwijaya@yahoo.com
TABEL 1.  Hasil  Penetapan Standarisasi Ekstrak Etanol  Buah Goji berry Parameter Hasil Keterangan Warna Hitam  kemerahan Organoleptis Bau Tidak berbau Tekstur Semi solid Kadar Air 26,02% Tidak memenuhi persyaratan Kadar Abu 6,09% Tanin Hijau Memenuhi Kecoklatan persyaratan (PositiQ Skrining Flavonoid Kuning Memenuhi muda persyaratan (PositiQ Kualitatif
Tidak ada Tidak memenuhi Alkaloid endapan orange persyaratan (NegatiQ Saeonin Tidak timbul busa
memberikan  spektrum  daya  antioksidan  yang paling luas.

## Kromatografi Kolom
Untuk pemisahan komponen dengan menggunakan kromatografi kolom,  dimasukkan bubur silica gel 70-230 mesh  sambil  diaduk  agar  tidak  terdapat rongga  udara di tengah-tengah kolom. Timbunan bubur silica  gel dalam  kolom  mencapai  tiga perempat  tinggi  kolom  Ekstrak  buah  Goji  berry dimasukkan  kedalam  kolom  kromatografi  yang telah dilarutkan  dengan  sedikit  larutan  pengelusi sambil  kran  kolom  dibuka.  Kemudian  fraksi ditampung  dalam  vial  per  10  ml.  Setiap  fraksi akan  dianalisa  daya  antioksidannya  secara kualitatif  dengan  metode  KLT.  Fraksi-fraksi tersebut  ditotolkan  pad a  fase  diam  silika  gel  60 GF 254, dieluasi dengan fase gerak terpilih dan dis- emprot  dengan  larutan  DPPH  0,2%  b/v.  Fraksi yang memiliki daya antioksidan akan memberikan noda berwama kuning  pada latar belakang ungu. Fraksi  yang  mempunyai  harga  Rf  dan  daya antioksidan yang sarna dikumpulkan menjadi satu dan  selanjutnya  akan  diuji  daya  antioksidannya secara  kuantitatif  dengan  metode  DPPH  yang dibandingkan dengan ekstrak etanolnya (Markham, 1988).

## Identifikasi Golongan Senyawa
Fraksi terpilih dilarutkan dengan etanol kemudian dianalisa dengan spektrofotometri  UV -Vis  pada A. 200-400 nm.  Identifikasi  dilanjutkan  dengan pereaksi  geser AlCI 3 • Dan  diidentifikasi  dengan Spektroskopi  Inframerah  untuk  mengetahui golongan  metabolit  sekunder  dari  ekstrak  etanol buah Goji berry.

## Penetapan Daya Antioksidan
Disiapkan  fraksi  yang  terpilih  dengan  rentang antara  1  mg/ml  - 3.10- 3 mg/ml.  Kuersetin  yang digunakan  sebagai  kontrol  positif juga  disiapkan dalam  tujuh  rentang  konsentrasi  yang  berbeda.
Pipet sampel kedalam 96-well plate sebanyak 20 JlI  kemudian  ditambahkan  dengan  reagen  DPPH sebanyak  180 J.Ll. campuran  didiamkan  dalam suhu  ruang  dengan  kondisi  gelap  selama  30 menit.  Selanjutnya,  campuran sampel dan  DPPH dicek absorbansinya pada A 517  nm  (Cavin et al.,
1998) pada alat Multiskan Go.

## HASIL DAN  PEMBAHASAN
Dari  sebanyak  433,95  gram  ekstrak yang didapat,  diperoleh  nilai  rendemen ekstrak etanol sebesar  48,22%  dari  sekitar  900  gram  serbuk buah  Goji  berry.  Penetapan  standarisari  ekstrak yang  dilakukan  terdiri  dari  organoleptis,  kadar abu,  kadar  air dan  skrining fitokimia  yang  dapat dilihat  pad a Tabel 1. Pad a  hasil  pemeriksaan organoleptis didapatkan warna  hitam kemerahan dengan  bentuk  semisolid.  Pada  pemeriksaan kadar  air  diperoleh  hasil  26,02%,  dimana menyatakan  bahwa  kadar  air  dari  ekstrak  etanol buah Goji berry cukup besar, hal ini kemungkinan disebabkan karena masih terdapat sis a dari etanol atau  adanya  kandungan  senyawa  menguapnya lebih besar.  Dilakukan  pemeriksaan kadar air ini bertujuan untuk mengetahui besarnya kandungan air  dalam  ekstrak  etanol.  Pad a  penetapan  kadar abuekstrak diperoleh hasil  6,09%. Penetapan ini bertujuan untuk mengetahui gambaran kandungan  mineral  yang  berasal  dari  simplisia kering  sampai  terbentuknya  ekstrak.  Dari  hasil skrining  fitokimia  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  positif  mengandung  tanin  dan  flavonoid. Sedangkan untuk alkaloid dan saponin menunjukkan hasil negatif.
Dari  beberapa  variasi  fase  gerak  yang dicobakan, didapatkan hasil  bahwa kloroform:etil asetat  merupakan  fase  gerak  terpilih  yang  dapat memberikan  keterpisahan  noda yang  banyak dan memberikan spektrum daya antioksidan yang pal- ing  luas.  Eluen  yang  terpilih  tersebut  akan digunakan  untuk  fraksinasi  dengan  metode kromatografi  kolom.  Dari  proses  pemisahan didapatkan  fraksi  yang  kemudian  ditotolkan  dan diuji secara kualitatif menggunakan larutan DPPH 0,2%, sehingga didapatkan satu fraksi yang paling aktif sebagai antioksidan.
Berdasarkan  hasil  identifikasi  senyawa dilakukan pada fraksi menggunakan spektrofotometer UV-VlS dan spektroskopi infrared, spektrofotometer UV -Vis  memberikan  serapan  maksimum  pada panjang  gelombang  238  nm  untuk  fraksi  dari ekstrak  etanol  buah  Goji  berry.  Setelah

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2009,  Goji (Lycium  barbarum  and  L.  chinense): Phytochemistry,  Pharmacology  and  Safety  in  the Perspective  of  Traditional  Uses  and  Recent Popularity, Georg Thieme Verlag KG Stuttgart.  New York.
Belmekki Nand Bendimerad, 2012,  Antioxidant activity and phenolic  content  in  methanol  crude  extracts  from  three Lamiaceae grown in southwesternAlgeria, Journal Natural Product Plant Resour, Scholars Research Library, 2, 175-181.
Chao S,  Schreuder M,  Young G,  and  Nakaoka  K, 2004,  Pre Clinical  Study:  Antioxidant  Levels  and  Immunomodulatory Effects of Wolfberry Juice and Other Juice Mixtures in Mice. The Journal of the American Nutraceutical Associa- tlon, 7.
Harvey  D, 2000,  Modern  Analytical  Chemistry.  New York: The McGraw-Hill Companies. Inc.
Hazra  Band Sarkar R, 2010,  Comparative study of the antioxidant and reactive oxygen species scavenging properties in the extracts of the fruits of Terminalia chebula, Terminalia belerica and Emblica officinalis, Biomed Central.
Heinrich M, Barnes J, Gibbons S, and Williamson EM, 2004, Fundamentals of Pharmacognosy and Phytotherapy, Churchill Livingstone, London, 109-115.
Luo  Q,  Yizhong  C,  Jun  Y,  Mei  S,  and  Harold  C, 2004, Hypoglycemic  and  hypolipidemic  effects  and  antioxidant activity  of  fruit  extracts  from  Lycium  barbarum, Ufe Sciences,76, 137-149.
Markham K, 1988,  Cam Identiflkasi Flavonoid, peneIjemah K. Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung, 29-32.
Proctor PH, Reynolds ES, 1984, Free Radicals and Disease in Man, Physiol Chem Phys Med, 16, 175-95.
Tjitrosoepomo  G, 1994,  Taksonomi  Tumbuhan  Obat. Gajah Mada University, Yogyakarta.
Valko M, 2006, Journal Free Radicals and Antioxidant in  Normal  Physiological  Function  and  Human Disease, Elsevier.