Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, Vol. 8 No.1  Juni 2022 Avaiable online at www.jurnal-pharmaconmw.com/jmpi p -ISSN : 2442-6032 e -ISSN :  2598-9979
Aktivitas  Imunomodulator  Ekstrak . Etanol . Buah . Etlingera  rubroloba A.D.  Poulsen . Terhadap  Fagositosis  Sel  Makrofag  Pada  Tikus  Jantan Galur Wistar
1 Fadhliyah Malik, 3 Mentarry Bafadal, 3 Dian Munasari, 2 Rina Andriani, 1 Muh. Ilyas Yusuf, 3 Sahidin, 1 Wahyuni, 1 Adryan Fristiohady, 1 Wa Ode Nurfinti
1 Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinis, Fakultas Farmasi, Universitas  Halu Oleo
2 Departemen Teknologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas  Halu Oleo
3 Departemen  Sains Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas  Halu Oleo

## ABSTRAK
Fungsi sistem imun adalah untuk melindungi tubuh dari benda-benda  asing,  dimana  sistem . imun  dapat ditingkatkan  dengan  pemberian  imunomodulator. Pendekatan kemotaksonomi . Genus . Etlingera . memungkinkan Etlingera  rubroloba A.D.  Poulsen memiliki  kandungan  metabolit . sekunder  sebagai  agen imunomodulator.  Penelitian  dimaksudkan  untuk mengetahui  aktivitas  imunomodulator  ekstrak . etanol buah Etlingera  rubroloba A.D.  Poulsen  terhadap fagositosis sel makrofag pada tikus jantan galur wistar. Hewan uji tikus sebanyak dua puluh empat ekor dibagi dalam  enam  kelompok  perlakuan  yaitu  kontrol  negatif (Na-CMC  0,5%),  kontrol  positif  (ekstrak  meniran komersial),  kontrol  normal  (tanpa  perlakuan), perlakuan  dosis  1  (200  mg/kgBB),  perlakuan  dosis  2 (300 mg/kgBB)  dan  perlakuan dosis 3  (400 mg/kgBB).
Perlakuan  diberikan  selama  tujuh  hari  berturut-turut secara  per  oral    dan  diberikan  injeksi  bakteri Staphylococcus  aureus 0,5  mL  secara  intraperitonial pada hari kedelapan masing-masing kelompok. Apusan cairan  peritoneum  digunakan  untuk  menentukan aktivitas  sel  makrofag.  Hasil  penelitian  menunjukkan aktivitas fagositosis sel makrofag pada kelompok kontrol negatif,  kontrol  positif,  perlakuan  1,  perlakuan  2, perlakuan  3  berturut-turut  36,75  %,  74,25%,  71.75%, 80,50%,  70,75%.  Hasil  penelitian  menunjukkan pemberian  ekstrak  etanol  buah Etlingera  rubroloba A.D.  Poulsen  memiliki  aktivitas  imunomodulator terhadap fagositosis sel makrofag.
Kata  Kunci  :  Imunomodulator, Etlingera  rubroloba A.D. Poulsen, Makrofag, Fagositosis

## ABSTRACT
The fundamental function of  the . immune system is to protect  the  body  from  foreign  things,  which  can  be improved by using immunomodulators. The chemotaxonomic . technique allows Etlingera rubroloba A.D. Poulsen . to contain secondary . metabolites that. can be  used  as  immunomodulatory  medicines.  The  aim . of this  study  was  to  examine  if  an  ethanolic  extract  of Etlingera rubroloba A.D. Poulsen fruit could aid in the phagocytosis  of  macrophage  cells  in  male  Wistar . rats. The  six  treatment  groups  were:  negative  control  (Na- CMC  0.5%),  positive  control  (commercial  stimulant  of Meniran),  normal  control  (no  therapy),  dose  1  ( . 200 mg/kgBW), dose 2.  (300 mg/kgBW),  and  dose 3  (400
mg/kgBW).  On  the  eighth  day,  the  groups  were  given oral antibiotics for seven days before being injected with 0.5 mL Staphylococcus aureus. Macrophage cell activity was  calculated  from  smears  of  peritoneal  fluid.  The results  showed  phagocytic  activity  of  macrophage  cells on  negative . control, . positive . control,  dose  1,  dose  2, and  dose  3  at  36.75%,74.25%,  71.75,  80.50%,  70.75%. The . result . of this research showed that the third dose . ethanolic extract of the fruit bark . of E. rubroloba holds a  promise  as  an  immunomodulatory  towards macrophage cell phagocytosis.
Keywords  :  Immunomodulator, Etlingera  rubroloba A.D. Poulsen, Macrophages, Phagocytosis
Penulis Korespondensi : Informasi Artikel Fadhliyah Malik Submitted : 22 April 2022 Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinis, Fakultas Farmasi, Universitas Halu Oleo Accepted : 27 Juni 2022 Published : 30 Juni 2022 E-mail : fadhliyah@uho.ac.id

## PENDAHULUAN
Infeksi  merupakan . salah  satu masalah Kesehatan . masyarakat
umumnya di negara maju dan berkembang (Fadila et al., 2019). Adanya replikasi pada  mikroorganisme di dalam . jaringan tubuh menyebabkan . terjadinya Infeksi,  hal  ini  merupakan  proses interaksi . antara patogen ( agent ), pejamu ( host )  dan  lingkungan  ( environment ) (Prahasanti,  2019).  Efek  infeksi  agen penyakit maupun toksin dapat mengakibatkan  perubahan  patologis  dan klinis yang muncul sejalan dengan. proses infeksi.  Sehingga  akan  berakibat  juga munculnya  kekebalan  khusus/  adaptif ( acquired  adaptive  immunity ).  Respons imun  terjadi  dengan  diawali  dengan peningkatan  sel  fagosit  ke  arah  sumber infeksi.  Sel . fagosit  seperti  neutrophil . maupun . makrofag akan bergerak ke arah sumber rangsangan, selanjutnya memfagosit sel yang dianggap benda asing tersebut  (Suwiti  et  al.,  2016).  Sehingga pentingnya  meningkatkan  fungsi  dari  sel makrofag  dalam  melakukan  fagositosis terhadap  agen  infeksi.  Ketika  peran  sel fagosit  makrofag  dalam  respon  alami kurang efektif, maka respon imun spesifik akan  teraktivasi  melalui  persinyalan  oleh sel  makrofag  yang  mempresentingkan antigen (APC) terhadap sel limfosit T.
Imunomodulator  adalah  senyawa yang  berfungsi  dalam  peningkatan kekebalan  atau  pertahanan  tubuh  baik secara spesifik maupun non spesifik. Obat
. sintesis  yang  biasa . digunakan  di  dalam mengembalikan ketidakseimbangan sistem  imun  seperti  obat-obat  golongan antiinflamasi . nonsteroid, imunosupresan,  dan . imunostimulan. Beberapa obat tersebut dalam penggunaannya  memiliki  beberapa  efek samping yang tidak diinginkan. Imunomodulator  tersedia  di  pasaran dalam  bentuk  paten  yang    diimpor  dari luar negeri, dan harganya mahal,  Hal ini menjadi  pertimbangan  perlu  pentingnya imunomodulator  dari  bahan  alam  agar faktor  harga  dapat  ditekan  serta . diharapkan memiliki efek samping . yang . lebih kecil (Rahman et al., 2017).
Zingiberaceae merupakan salah satu kelompok  tumbuhan . yang . memiliki banyak  manfaat  sebagai  bahan  obat. Genus  Etlingera  adalah  salah  satu  yang terbesar  di  Zingiberaceae  (Handayani  et al., 2018).  Tanaman dari genus Etlingera ini  telah  dilaporkan  memiliki  aktivitas sebagai  imunomodulator.  Hal  ini  telah
. dibuktikan,  menurut  penelitian  yang
. dilakukan . oleh Fristiohady et al., (2019)
Etlingera  elatior . (Jack)  R.M  Smith memiliki  aktivitas  imonomodulator  pada dosis  300  mg/kgBB . dan  400  mg/kgBB yang  ditinjau  dari  peningkatan  jumlah aktivitas  fagosist  makrofag  dimana  pada penelitian  tersebut  disebutkan  bahwa kandungan  metabolit  sekunder  yang dikandung  oleh  Etlingera  Elatior  adalah Flavanoid, Saponin, Terpen dan Alkaloid. Flavanoid  diduga  dapat  meningkatkan
imunitas dengan meningkatkan proliferasi  limfokin  yang  dihasilkan  oleh .
Sel . T  sehingga  dapat  merangsang  sel-sel fagosit  untuk  melakukan  fagositosis. Selain  itu,  dalam  penelitian  Fristiohady, Zubaydah,  et  al.,  (2019)  buah E.  elatior (Jack)  R.M  Smith    yang  diformulasikan dalam  granul effervescent dilaporkan memiliki aktivitas imunomodulator dengan    dosis . 300  mg/kgBB . dan  dosis 400 mg/kgBB.
Menurut Ardiyani & Poulsen, (2019) di  Sulawesi  Tenggara  genus  Etlingera (Zingiberaceae)  ditemukan  sebanyak  48 spesies, salah satunya
Etlingera
rubroloba A.D.  Poulsen . Tumbuhan  ini merupakan  spesies  Etlingera  yang  baru diketahui dan belum dilakukan penelitian mengenai  kandungan  metabolit  dan aktivitas farmakologis. Dimana didasarkan pada
pendekatan kemotaksonomi bahwa tumbuhan dengan jenis atau genus yang sama akan memiliki . kandungan  kimia  sejenis  atau  bahkan sama (Fachriyah et al., 2018). Oleh karena itu,  berdasarkan . latar  belakang  diatas, maka  penulis  tertarik . untuk  mengetahui lebih  lanjut  mengenai  uji  aktivitas imunomodulator  ekstrak  etanol  buah Etlingera rubroloba A.D. Poulsen terhadap  fagositosis  sel  makrofag  pada tikus . putih jantan galur wistar.

## METODE PENELITIAN
Determinasi Tanaman
Sampel  pada  penelitian Etlingera rubroloba A.D. Poulsen . dideterminasi  di Pusat Penelitian Biologi . LIPI . Cibinong.

## Penyiapan Sampel
Buah . Etlingera  rubroloba A.D. Poulsen    yang  dikumpulkan  dari  Desa Punggaluku, Kecamatan Laeya, Kabupaten  Konawe  Selatan.  Pengeringan buah dilakuakn dengan cara menjemur di bawah  sinar  matahari  dan  dilapisi . kain . hitam . hasil  pengeringan  selanjutnya dihaluskan  sehingga  diperoleh  serbuk simplisia (Fristiohady et al., 2020). Serbuk kemudian ditimbang dan dihitung bobotnya.

## Ekstraksi
Ekstraski dilakukan dengan maserasi. Serbuk buah Etlingera rubroloba A.D.  Poulsen  sebanyak  2,8  kg dimasukan ke dalam . wadah . tertutup . dan direndam  selama  3  x  24  jam  dengan menggunakan  pelarut  etanol  96%  denga perbandingan  1  :  2  (  jumlah  serbuk tanaman  :  jumlah  pelarut)  (Harborne, 1996).
Penyaringan dan penggantian pelarut  baru  dilakukan  setiap  24  jam sekali. Filtrat dikumpulkann dan dipekatkan  dengan  menggunakan rotary
. vacuum . evaporator pada  suhu  50ºC sehingga didapatkan ekstrak kental. Bobot dihitung  dengan  menimbang  ekstrak (Fristiohady et al., 2020).
Uji  Kandungan Senyawa Metabolit Sekunder dca
1. Senyawa . flavonoid casa
Sebanyak . 1  mL . ekstrak,  diberikan beberapa  tetes  HCl . kuat,  dan  0,2 . mg bubuk ditambahkan ke dalam  campuran. Kehadiran  kandungan  Flavanoid  dalam lapisan  amil  alkohol  ditunjukkan  oleh warna merah atau kuning gelap di lapisan tersebut (Ikalinus et al., 2015).
2. Senyawa alkaloid
Setelah menambahkan 2 tetes reagen Dragendrof  ke  1  mL  ekstrak,  produksi endapan  aglomerasi  coklat  ke  jingga menunjukkan hasil positif yang mengandung  alkaloid  (Ikalinus  et  al., 2015).
3. Senyawa saponin nn Dalam tabung reaksi, 1 0 mL ekstrak ditempatkan. Campuran kemudian . dikocok  selama . 10 .. detik  sebelum disisihkan  selama  10  menit.  Setelah  itu,
. HCl . 2  N  ditambahkan.  Pembentukan busa yang . stabil . berarti ekstrak tersebut . mengandung . saponin  (Ikalinus  et  al., 2015).
4. Senyawa tanin
Dengan . 20 . mL . air,  sampel dipanaskan hingga mendidih dan kemudian  disaring.  Kehadiran  tanin ditunjukkan  dengan  terciptanya  warna coklat  kehijauan  atau  biru-hitam  setelah beberapa tetes FeCl3 1 persen ditambahkan (Ikalinus et al., 2015).
5. Senyawa terpenoid
Ekstrak  dilarutkan  dalam  pelarut etanol,  kemudian  2  mL  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi  dan  reagen Lieberman-Buchard  dimasukkan  melalui dinding tabung, jika menghasilkan . warna . hijau . atau  biru  maka  positif  kandungan steroid  dan  warna  coklat  kemerahan untuk  adanya  kandungan  terpenoid (Setyowati et al., 2014).
Uji Karakteristik Ekstrak ….
Karakteristik . ekstrak meliputi penetapan kadar air, kadar abu, sari larut air, dan sari larut etanol.
1. Penetapan kadar air
Masukkan . lebih  kurang . 1 . gram ekstrak  dan  timbang  saksama  dalam wadah yang telah ditara. Keringkan pada suhu 105ºC . selama . 5 jam dan ditimbang. Lanjutkan  pengeringan  dan . timbang . pada jarak 1 jam sampai perbedaan antara 2 penimbangan berturut-turut tidak lebih dari 0,25 % (Depkes RI, 2000).
2. Penetapan kadar abu ..
Ditimbang  lebih  kurang  2  gram sampai 3 gram ekstrak lalu dimasukan ke dalam  krus  silikat  yang  telah  dipijarkan dan  ditara,  pijarkan  perlahan-lahan . hingga . arang  habis,  dinginkan  dan timbang., tambahkan air panas lalu saring melalui kertas saring bebas abu. Pijarkan sisa kertas dan kertas saring dalam . krus . yang . sama. Masukan filtrat kedalam kru, jika  arang  tidak  dapat  dihilangkan (Depkes RI, 2000).
3. Penetapan sari larut air ..
Ekstrak  dimasukkan  dalam  botol tertutup  sebanyak  5  g  dan  dimaserasi . dengan . 100  mL  air  selama  24  jam.
Campuran  tersebut  kemudian  dikocok selama 6 jam dengan menggunaka shaker kemudian dilakukan penyaringan.
Diambil  20  mL  filtrat . dan . dimasukkan dalam  cawan  yang  telah  ditara  ,  lalu dipanaskan . dengan  suhu . 110 o C  sampai mencapai  berat  konsisten  (Marpaung  et al., 2017).
4. Penetapan sari larut etanol
Ekstrak  ditimbang  lebih  kurang sebanyak  5  gram  kemudian  dimasukkan ke  dalam  botol  bertutup  dan  dimaserasi selama 24 jam dengan 100 mL etanol 95%. Kemudian . dikocok . dengan menggunakan . shaker . selama . 6 . jam kemudian disaring. Hasil saringan diambil 20  mL  filtrat  dan  masukkan  ke  dalam cawan  yang  susah  ditara.  Cawan dipanaskan pada suhu 110°C sampai berat konstan (Marpaung et al., 2017).
Uji Penetapan . Kadar . Total
1. Penetapan kadar fenolik total
Sebanyak 100 mg . ekstrak dilarutkan sampai volume 10 . ml . dengan campuran etanol : air suling (1 : 1). Larutan ekstrak yang  diperoleh  masing-masing  dipipet sebanyak  1  mL  larutan  ekstrak  buah E. rubroloba A.D.  Poulsen , kemudian . sampel . ditambahkan . dengan . 0,4  mL reagen  FolinCiocalteau  dikocok  dan dibiarkan  4-8  menit,  tambahkan  4,0  mL larutan  Na 2 CO 3 7%  kocok  hingga
homogen.  Tambahkan  aquabidestillata . hingga . 10 . mL dan diamkan selama 2 jam pada  suhu  ruangan.  Ukur  serapan  pada panjang  gelombang  serapan  maksimum 744,8 nm. . Lakukan 3 . . kali pengulangan . sehingga . kadar  fenol  yang  diperoleh hasilnya  didapat  sebagai  mg  ekuivalen asam galat/g ekstrak (Ahmad et al., 2015).
2. Penetapan Kadar . Flavonoid . Total Ditimbang 100 mg . ekstrak . metanol buah E.  rubroloba A.D.  Poulsen dilarutkan dalam 10 mL etanol. Diambil 1 mL  l  tambahan  3  mL  metanol, ditambahkan  0,2  mL  AlCl 3 10%, tambahkan  0,2  mL  kalium  asetat,  dan dicukupkan . dengan . aquadestilata sampai  10  mL,  simpan  30  menit . pada tempat gelap dengan suasana suhu kamar, absorbansinya di ukur pada spektrofotometri  UV-Vis  dengan  panjang gelombang  431  nm.  Larutan  sampel . dibuat . dalam . tiga kali replikasi sehingga kadar  flavonoid  yang  diperoleh  sebagai ekuivalen kuersetin (Ahmad et al., 2015).

## Uji Efek Imunomodulator
Hewan . uji . dibagi  menjadi  6 kelompok  uji,  setiap . kelompok . uji minimal  terdiri  dari . 4 . hewan  uji. Kelompok tersebut terdiri . dari . kelompok . normal,  kelompok  perlakuan  (dosis  200 mg/kgBB, dosis 300 mg/kgBB dan . dosis . 400  mg/kgBB),  kelompok  kontrol  positif (ekstrak meniran komersial ® ) dan kelompok kontrol negatif (Na-CMC 0,5%). Perlakuan . hewan . uji  dilakukan  setiap  1
hari  sekali  selama  7  hari  secara  peroral dengan volume pemberian 3 mL per ekor.

## Uji Fagositosis
Pada  hari  kedelapan,  setiap  tikus diinokulasi secara . intraperitoneal . dengan  suspensi  bakteri  staphylococcus aureus 0,5 mL dan dibiarkan selama satu jam.  Perut  tikus  dibedah  menggunakan
. gunting . bedah dan . pinset . steril setelah dianastesi dengan eter. Jika sejumlah kecil cairan  peritoneum  ditemukan  di  perut, larutan  1-2  ml  pH Phosphat Buffered Saline (PBS)  steril  7.8  ditambahkan, dikocok dengan pelan, dan sampel cairan peritoneum  dengan  spoit  1  cc  diambil. Cairan  peritoneum . dipulas . pada  gelas objek, kemudian difiksasi dengan metanol selama . 5  menit,  kemudian . diwarnai dengan pewarnaan Giemsa 10%, dibiarkan selama  20  menit,  dan  akhirnya  dibilas dengan  air  mengalir.  Setelah  sediaan mengering, diperiksa menggunakan minyak emersi di bawah mikroskop pada pembesaran 100x-1000x  (Nugroho et al., 2012).
Aktivitas imunostimulan
ditentukan  dengan  menghitung  aktivitas fagositosis sel makrofag peritonium tikus. Nilai . aktivitas  fagositosis . (SPA) . adalah persentase  sel  makrofag  yang  aktif melakukan  proses  fagositosis  di  antara 100  sel  makrofag  (Fristiohady,  Wahyuni, et al., 2019).
Aktivitas Fagositosis s
= Jumlah Sel Makrofag Aktif Jumlah Sel Makrofag Total . x . 100 %

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi . tanaman . dilakukan untuk  memastikan  atau  menetapkan spesifikasi  suatu  tumbuhan  dengan. membandingkan  terhadap . tumbuhan . lain . yang . telah  dikenal  atau  diketahui sebelumnya  (Rantika  et  al.,  2019). Sehingga  dengan  hal  tersebut  perlu dilakukan determinasi tanaman Etlingera rubroloba A.D.  Poulsen  dilakukan  untuk memastikan  kebenaran  sampel  yang digunakan dalam penelitian ini. Determinasi  sampel  dilakukan  di  Pusat Penelitian  Biologi,  LIPI . Cibinong.  Hasil .
determinasi menunjukkan bahwa tanaman yang diteliti merupakan tanaman Etlingera  rubroloba A.D.
Poulsen.
Sampel  buah E.  rubroloba A.D. Poulsen  yang  digunakan  pada  penelitian ini  diperoleh . dari  Desa  Punggaluku, Kecamatan  Laeya,  Kabupaten . Konawe . Selatan,  Provinsi  Sulawesi  Tenggara.
Buah E.  rubroloba A.D.  Poulsen yang dikumpulkan sebanyak 20 kg merupakan buah  yang  telah  masak  ditandai  dengan warna  buah  yang  kemerahan.  Buah E. rubroloba A.D.  Poulsen dipisahkan  dari tangkai  buah  untuk  kemudian  dilakukan sortasi basah pada buah yang masih segar . terhadap . bagian  buah  yang  telah  rusak. Buah . kemudian . dicuci  dibawah  air sampai  bersih  untuk  menghilangkan kotoran yang menempel. Buah yang telah bersih  dilakukan  peranjangan  dengan
bertujuan  agar  mempermudah  dalam proses pengeringan (Rantika et al., 2019). Setelah  itu,  buah  kemudian  dikeringkan dengan  cara  dijemur  dibawah  sinar matahari dengan ditutupi kain hitam agar sampel  tidak  terkena  secara  langsung sinar  matahari  sehingga  kandungan  zat- zat  aktif  dalam  simplisia  tidak  rusak. Proses . pengeringan . ini . dimaksudkan untuk mengurangi kadar air yang terdapat pada  sampel,  sehingga  dapat  mencegah pembusukan  oleh  bakteri  (Aminah  et  al., 2017). Kemudian dilakukan sortasi kering untuk pemisahan kembali bagian tanaman  atau  kotoran  yang  tidak diinginkan  yang  masih  tertinggal  pada sampel  kering.  Sampel  buah  yang  telah kering  diserbukkan  hingga  mendapatkan partikel yang halus menggunakan blender, yang  bertujuan  untuk  memperkecil ukuran  partikel  sampel  sehingga . luas . permukaan . partikel  menjadi  lebih  besar sehingga  membuat  kontak  permukaan partikel  sampel  dengan  pelarut  semakin besar  dan . memudahkan . penetrasi pelarut ke dalam sampel sehingga pelarut dapat  menarik  lebih  banyak  senyawa- senyawa dari sampel.
Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan metode  maserasi.  Prinsip . metode . maserasi  adalah  cairan.  Penyari.  Akan. menembus  dinding  sel,  zat . aktif . akan terlarut . karena  adanya . perbedaan . konsentrasi . antara  larutan  zat . aktif  di dalam . sel  dan  di  luar  sel,  sehingga . larutan  dengan . konsentrasi  tinggi  akan
. terdesak . ke luar sel (Susanty & Bachmid, 2016).  Etanol  96%  digunakan  sebagai pelarut  karena  tingkat  keamanan  dan sifatnya  yang  dapat  melarutkan  hampir semua  zat  baik  yang . bersifat . polar,
. semipolar  dan  nonpolar  serta  dapat menarik  senyawa  flavonoid  dan  fenolik secara optimum (Ramadhani et al., 2020).
Maserasi  dilakukan  dengan  cara perendaman sampel selama 3 . , x . 24 jam dengan diaduk sesekali, untuk mememaksimalkan  proses  pengambilan senyawa-senyawa  kimia . yang . terdapat pada sampel, sehingga dapat terekstraksi sempurna.  Dalam  proses  maserasi, dilakukan pergantian pelarut setiap 1 x 24 jam  sehingga  diperoleh  maserat  etanol. Selanjutnya sampel disaring . menggunakan . kertas . saring  sehingga diperoleh  maserat/filtrat.  Filtrat  yang diperoleh kemudian dipekatkan menggunakan rotary vacuum evaporator pada tekanan 20 Psi dan suhu 50 ℃ hingga diperoleh  ekstrak  cair.  Ekstrak  cair  yang diperoleh . kemudian . disimpan . dalam cawan porselin/botol selai yang kemudian dipekatkan menggunakan water bath pada suhu . 60°C. . Water . bath . berfungsi menguapkan  pelarut  etanol  pada  ekstrak sehingga  terpisah  dan  diperoleh  ekstrak kental.  Ekstrak  buah E.  rubroloba A.D Poulsen    yang  diperoleh  sebanyak  424,6 gram  dengan  nilai  rendamen  12,8%. Rendaman  dikatakan  baik  jika  lebih  dar 10%.    Nilai  rendamen  ini  sangat diperlukan  karena  untuk  mengetahui
. banyaknya . ekstrak . yang  diperoleh selama  proses  ekstraksi  serta  memiliki hubungan  dengan  kandungan  senyawa bioaktif . sehingga . apabila . jumlah rendamen  semakin  banyak  maka  jumlah senyawa . aktif . yang . terkandung  pada ekstrak  buah E.  rubroloba A.D  Poulsen juga semakin banyak.
Berdasarkan hasil skrining fitokimia dengan tujuan
untuk .
mengetahui . senyawa . metabolit sekunder yang  terkandung  pada    tumbuhan  yang diteliti  diperoleh  senyawa  antara  lain alkaloid,  flavonoid,  saponin,  terpenoid, dan  tannin.  Hasil  yang  diperoleh  dari skrining  fitokimia  untuk  sampel  ekstrak buah E.  rubroloba A.D.  Poulsen . dapat dilihat . pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol buah E. rubroloba A.D. Poulsen
No. Uji Kandungan Senyawa Pereaksi Hasil Kesimpulan 1 Flavonoid Mg + HCl pekat warna merah bata Positif 2 Alkaloid Dragendorf endapan kekuningan Positif 3 Saponin Air + HCl 2N busa stabil Positif 4 Tanin FeCl 3 warna merah kehijauan Positif 5 Terpenoid Liebermann Buchard warna coklat kemerahan Positif
Penentuan  karakteristik  ekstrak  ini meliputi  parameter  spesifik  (kadar  sari larut  etanol  dan  kadar  sari  larut  air)  dan parameter  non  spesifik  (kadar  abu  dan kadar  air).  Karakterisasi . ini . bertujuan
untuk memastikan  bahwa produk ekstrak memiliki  nilai  parameter  tertentu  yang konstan. Hasil karakterisasi ekstrak dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil . Karakterisasi . Ekstrak buah E. rubroloba A.D. Poulsen
No. Jenis Karakterisasi Hasil Pustaka 1 Kadar . Abu . 6 % < 7 % 2 Kadar . Air . 4,26 % < 10 % 3 Kadar . Sari . Larut Etanol 74,13 % - 4 Kadar . Sari . Larut Air 69,61 % - Penentuan  kadar  abu  dimaksudkan untuk
menggambarkan kandungan mineral  internal . dan  eksternal . yang . berasal  dari  proses  awal  sampai terbentuknya  ekstrak.  Selain  itu  juga dapat menunjukkan  jumlah . kandungan .
Logam dalam ekstrak . Prinsipnya
. pemanasan  ekstrak  sehingga . senyawa .
organik . dan turunannya terdestruksi dan menguap  dan  hanya  unsur  mineral  dan anorganik saja yang tertingal. Berdasarkaan  pengujian  yang  dilakukan . maka . diperoleh . hasil kadar abu ekstrak etanol  buah Etlingera  rubroloba A.D. Poulsen sebanyak  6%.  Hasil  ini  telah sesuai  dengan  persyaratan  Depkes  RI,
(2000) bahwa  kadar abu tidak lebih dari 7%.
Penetapan . Kadar . air . . bertujuan untuk . mengetahui . besarnya . kandungan air,  terkait  dengan . kemurnian  dan . kontaminasi yang  mungkin  terjadi sehingga dapat digunakan pada jangka panjang. Kadar air ekstrak  berperan  dalam  pertumbuhan mikroba . sehingga . sangat . menentukan kualitas dan . masa . penyimpanan . ekstrak.
Berdasarkaan  pengujian  yang  dilakukan maka  diperoleh  hasil  kadar  air  ekstrak etanol  buah Etlingera  rubroloba A.D. Poulsen sebanyak  4,26%.  Hasil  ini  telah sesuai  dengan . persyaratan . Depkes  RI,
(2000)  yaitu  kadar  air . tidak . lebih . dari 10%.  Semakin  tinggi  kadar . air . maka . akan  lebih  mudah  ditumbuhi  jamur  dan kapang  sehingga  dapat  menurunkan aktivitas . biologis . ekstrak  dalam  masa penyimpanan  (Fristiohady,  Wahyuni,  et al., 2019).
Penentuan  kadar  sari  larut  air  dan etanol  bertujuan  untuk  menunjukkan jumlah  bahan-bahan . yang . dapat . disari . oleh . air maupun etanol, . sehingga . dapat
. memberikan gambaran . mengenai
. besarnya . bahan-bahan yang terlarut . dan . bagian yang . dimanfaatkan sebagai bahan obat.  Berdasarkaan  pengujian  yang dilakukan maka diperoleh hasil kadar sari larut  etanol  dan  kadar . sari . larut . air ekstrak  etanol  buah Etlingera  rubroloba A.D.  Poulsen yaitu  sebesar  74,13  %  dan 69,61  %.  Hasil  tersebut . menunjukkan
. bahwa jumlah senyawa polar . yang . dapat . terlarut  dalam  air  lebih  kecil  daripada jumlah senyawa kurang polar (semi polar maupun  non  polar)  yang  dapat  terlarut dalam etanol. Kadar sari larut etanol dan air  juga  menunjukkan  senyawa  kimia yang . diduga . berperan . dalam menentukan  efek  farmakologi.  Semakin tinggi persentasi kadar sari maka semakin baik  ekstrak  tersebut  (Fristiohady, Wahyuni, et al., 2019).
Adapun penentuan kadar flavonoid total  dilakukan  dengan  menggunakan metode  chang  dan  sebagai  pembanding digunakan larutan baku standar kuarsetin. Analisis  kuantitatif  senyawa  flavonoid total dengan menggunakan
spektrofotometri UV-Vis dilakukan untuk mengetahui seberapa besar kadar flavonoid  total  yang  terkandung  pada ekstrak  etanol  buah E.  rubroloba A.D Poulsen.  Penggunaaan  Spektrofotometri
UV-Vis dalam analisis tersebut dikarenakan flavonoid mengandung senyawa  aromatik  yang  terkonjugasi sehingga menunjukkan pita serapan kuat pada  daerah  spektrum  sinar  ultraviolet dan spektrum sinar tampak.
Penentapan  kadar  flavonoid  total terlebih  dahulu  dilakukan  pengukuran serapan  panjang  gelombang  maksimum dari rentang panjang gelombang 400-450 nm  yang  digunakan  untuk  mengukur serapan  dari operating  time ,  kurva standar, serta sampel ekstrak etanol buah E. rubroloba A.D Poulsen. Hasil running
menunjukkan panjang gelombang maksimum  dari  standar  baku  kuarsetin yakni  berada  pada  panjang  gelombang 400 nm.
Analisis kadar flavonoid total pada sampel  digunakan  bahan  pembanding yakni  kuarsetin  sebagai  larutan  standar dengan membuat beberapa  variasi konsentrasi  yang  diukur  absorbansinya menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis. Penggunaan  kuarsetin  sebagai  larutan standar  karena  kuarsetin  merupakan flavonoid golongan flavonol yang mempunyai  gugus  keto  pada  C-4  dan memiliki  gugus  hidroksil  pada  atom  C-3 atau C-5 yang bertetangga dari flavon dan flavonol.
Hasil  pengukuran  tersebut,  telah menunjukkan  bahwa  sesuai  dengan hukum Lambert-Beer yaitu  konsentrasi berbanding  lurus  dengan  absorbansi dimana  semakin  tinggi  nilai  absorbansi akan berbanding lurus dengan konsentrasi zat yang terkandung didalam suatu  sampel  (Syamsul  dkk.,  2019)  dan juga  hasil  yang  diperoleh  menunjukan bahwa  kurva  yang  didapatkan  linear dengan  persamaan  yakni  y  =  0.018x  +
0.057  dan  nilai  R²  =  0.993  serta  nilai  r adalah 0,996. Pengujian analisis kuantitatif  dengan  spektrofotometri  UV- Vis  digunakan  larutan  blanko  sebagai kontrol  yang  berfungsi  sebagi  pemblank (mengkali  nol-kan)  senyawa  yang  tidak perlu dianalisis.
Pengukuran senyawa flavonoid total pada sampel dilakukan dengan penambahan  reagen  AlCl 3 yang  dapat membentuk  kompleks  dengan  larutan sampel,  sehingga  terjadi  pergeseran panjang  gelombang  ke  arah  visible (tampak)  yang  ditandai  dengan  larutan menghasilkan  warna  yang  lebih  kuning dan  penambahan  kalium  asetat  yang bertujuan untuk mempertahankan panjang  gelombang  pada  daerah  visible (tampak).  Perlakuan  inkubasi  selama  1 jam  sebelum  dilakukan  pengukuran dimaksudkan agar reaksi berjalan sempurna, sehingga intensitas warna yang dihasilkan  lebih  maksimal.  Setelah  itu dilakukan  pengukuran  dan  diperoleh kadar flavonoid total ekstrak etanol buah E.  rubroloba A.D  Poulsen  sebesar  1,036 mgEQ/g yang dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel  3.  Hasil  kadar  flavonoid  total  ekstrak  etanol  buah Etlingera  rubroloba A.D. Poulsen
Replikasi Absorbansi (Å) Kandungan Flavonoid total awal (mg/L) Kandungan Total Flavonoid (mgEQ/g eks) Rata-rata Kandungan Flavonoid Total (mgEQ/g) 1 0.076 1,055 1,055 1,036 2 0.074 0,944 0,944 3 0.077 1,111 1,111
Berdasarkan  Penetapan  kadar  fenolik ekstrak  etanol  dilakukan  dengan  3  kali pengulangan untuk mendapatkan keakuratan    data      dan    diperoleh    kadar
fenolik  total  ekstrak  etanol  buah E. rubroloba A.D    Poulsen     sebesar    4,759 mgEAG/g yang dapat dilihat pada tabel 4.
Tabel 4. Hasil kadar fenolik total ekstrak etanol buah Etlingera rubroloba A.D. Poulsen
Replikasi Absorbansi (Å) Kandungan Fenolik total awal (mg/L) Kandungan Total Fenolik (mgEAG/g) Rata-rata Kandungan Fenolik Total (mgEAG/g) 1 0.434 4,770 4,770 4,759 2 0.441 4,885 4,885 3 0.425 4,622 4,622 Pengujian aktivitas imunomodulator pada  penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui aktivitas imunodulator ekstrak  etanol  buah Etlingera  rubroloba A.D. Poulsen terhadap aktivitas fagositosis sel  makrofag  pada  tikus  jantan  galur wistras.  Pengujian  efek  imunomodulator ini  dilakukan  dengan  tiga  variasi  dosis yakni dosis 200 mg/kgBB, 300 mg/kgBB dan 400 mg/kgBB. Pemilihan variasi dosis ini didasarkan pada penelitian sebelumnya  yang  telah  dilakukan  oleh Fristiohady  et  al.,  (2020)  menggunakan tumbuhan yang memilki genus yang sama yaitu ektrak etanol buah wualae (Etlingera elatior  (Jack)  R.M  Smith).  Berdasarkan penelitian  tersebut  dosis  400  mg/kgBB menunjukan adanya peningkatan aktivitas fagositosis  makrofag  pada  tikus  jantan galur wistar yang diinfeksi dengan bakteri Staphylococcus aureus.
Hewan uji sebanyak 24 ekor tikus jantan diaklimatisasi  terlebih  dahulu  selama  7 hari  agar  penyesuain  perilaku  dan kemampuan  adaptasi  tikus  terhadap
lingkungan  baru  (Dewi  et  al.,  2017). Kemudian  hewan  coba  dikelompokkan menjadi  6  yang  terdiri  dari  4  ekor  tikus. Kelompok kontrol negatif berupa pemberian  suspensi  Na-CMC  0,5%, kelompok  positif  berupa  pemberian Stimuno®  dosis  50  mg,  kelompok perlakuan  1  berupa  pemberian  ekstrak etanol  buah  E.  rubroloba  A.D  Poulsen dosis 200 mg/kgBB, kelompok perlakuan 2  berupa  pemberian  ekstrak  etanol  buah E.  rubroloba  A.D  Poulsen  dosis  300 mg/kgBB  dan  kelompok  perlakuan  3 berupa pemberian ekstrak etanol buah E. rubroloba  A.D  Poulsen  dosis  400 mg/kgBB.
Pemberian perlakuan ekstrak, stimuno  maupun  Na-CMC  dilakukan selama  7  hari  berturut-turut  dengan pemberian  melalui  rute  oral.  Hal  ini dikarenakan  keamanan  serta  jalur  oral merupakan  metode  pemberian  yang umum (Susanty et al., 2014). Pada hari ke- 8  hewan  coba  diinfeksi  dengan  bakteri Staphylococcus  aureus  (150  x  106
CFU/mL)  sebanyak  0,5  mL  secara intraperitoneal.  Infeksi  dengan  rute  ini lebih  efektif  dalam  menginfeksi  organ bagian  dalam.  Di  daerah  peritoneal  lebih banyak mengandung sel-sel
polimorfonuklear dan
makrofag (Felistiani, 2017).
Penggunaan bakteri S. aureus karena bakteri  ini  merupakan  bakteri  flora normal dan bersifat gram positif. Bakteri gram  positif  mampu  mengikat  warna giemsa dengan jelas sehingga memudahkan  dalam  perhitungan  di bawah mikroskop  (Hariyanti & Sunaryo, 2015).  Setelah  diinjeksikan  dengan bakteri,  seluruh  kelompok  perlakuan didiamkan  selama  1  jam  sebelum dilakukan pembedahan. Hal ini bertujuan untuk membuat sistem imun innate dapat bekerja  karena  sistem  imun  innate  dapat bekerja  sekitar  0-12  jam  setelah  infeksi terjadi (Abbas et al., 2019). Makrofag yang merupakan  sistem  imun  innate  mampu menahan infeksi selama periode sekitar 1 jam  setelah  dilakukan  penginfeksian bakteri  S.  aureus.  Oleh  karena  itu, pengambilan makrofag dilakukan sekitar 1 jam setelah infeksi bakteri, sehingga akan diketahui  sejauh  mana  kemampuan makrofag dalam mengatasi invasi bakteri (Fristiohady, Wahyuni, et al., 2019).
Pengujian  imunomodulator  dengan melihat  aktivitas  fagositosis  makrofag pada  hewan  uji  dilakukan  dengan menggunakan metode pewarnaan giemsa. Setelah  hewan  coba  diinfeksikan  bakteri
S.aureus  dan  didiamkan  selama  1  jam maka dapat dilakukan pembedahan pada bagian  perut  hewan  uji.  Jika  saat pembedahan ditemukan cairan peritoneum pada perut tikus sedikit maka perlu ditambahkan larutan PBS (Phosphat Buffer  Saline)  ke  dalam  selubung peritoneum  tikus  dengan  tujuan  untuk membantu  melarutkan  sel-sel  makrofag yang  ada  pada  jaringan  peritoneum, sehingga mempermudah dalam pengambilan cairan peritoneum tikus.
Cairan peritoneum yang diambil diteteskan pada kaca preparat sebanyak 1 tetes    dibuat  apusan  tipis,  lalu  dilakukan fiksasi  menggunakan  metanol  selama  5 menit.  Selanjutnya  dilakukan  pewarnaan dengan  menggunakan  pewarna  giemsa 10% selama 20 menit dengan tujuan saat proses pengamatan menggunakan mikroskop  dapat  memudahkan  dalam melihat berbagai jenis sel dan juga dalam mengevaluasi  morfologi  dari  sel-sel tersebut.  Pemilihan  pewarna  giemsa karena  merupakan  pewarna  umum  yang sering digunakan, menghasilkan gambaran  inti  yang  jelas  serta  memiliki keunggulan  yakni  lebih  tahan  disimpan walaupun  dalam  iklim  tropis  (Ardina  & Rosalinda,  2018).  Hasil  dari  pewarnaan giemsa  menunjukkan  adanya  pewarnaan pada  inti  sel  makrofag  yang  ditandai dengan  perubahan  warna  menjadi  ungu kebiruan (Rosnizar dkk., 2017). Kemudian,
kaca preparat dibilas menggunakan  aquadest  dan  dikeringkan.
Selanjutnya  kaca  preparat  dapat  diamati dibawah  mikroskop  perbesaran  100- 1000x  yang  sebelumnya  telah  ditetesi minyak  emersi  agar  memperjelas  bentuk makrofag  sehingga  sel  makrofag  dapat terlihat  dengan  jelas.  Makrofag  aktif ditandai  dengan  bentuk  dan  ukuran makrofag yang bertambah besar.
Fagosomnya  muncul  membran  yang menjadi  lebih  berliku-liku,  lisosom menjadi  lebih  banyak,  aparat  golgi
membesar  dan  retikulum  endoplasma kasar  berkembang,  sedangkan  makrofag tidak  aktif  memiliki  bentuk  dan  ukuran yang lebih kecil dibanding makrofag aktif (Fristiohady,  Wahyuni,  et  al.,  2019). Perbedaan  antara  makrofag  aktif  dan tidak  aktif  dapat  dilihat    pada  gambar  1 yang merupakan apusan darah tipis yang diamati  dibawah  mikroskop  dengan perbesaran 1000x.
(a) (b) Gambar 1.   Apusan Darah Tipis Perbesaran 1000x. keterangan  ;  (a)  Makrofag  aktif  ;  (b) Makrofag tidak aktif Pengujian imunomodulator dilakukan  dengan  menghitung  nilai aktivitas fagositosis sel makrofag peritoneum tikus.
Nilai aktivitas fagositosis makrofag peritoneum tikus
dapat  dihitung  dari  makrofag  yang  aktif melakukan  fagositosis  diantara  100 jumlah sel yang dinyatakan dalam bentuk persen (Fristiohady et al., 2020).

## Tabel 5.  Aktivitas Fagositosis Sel Makrofag
No . Kelompok/Perlakuan Jumlah Sel yang Teraktivasi (%) Rata- rata (%) ±SD 1 2 3 4 1 Kontrol negatif (Na-CMC 0,5%) 37 36 39 35 36,75 ±1.71 2 Kontrol positif (Stimuno) 76 79 72 70 74,25 ±4.03 3 Dosis 200 mg/kgBB 78 75 66 68 71,75 ±5.68 4 Dosis 300 mg/kgBB 82 84 81 75 80,5 ±3.87 5 Dosis 400 mg/kgBB 72 76 68 67 70,75 ±4.11
Berdasarkan  tabel  5  diperoleh  nilai rata-rata  persen  aktivitas  fagositosis makrofag  untuk  dosisi  200  mg/kgBB
adalah 71,75 %, dosis 300 mg/kgBB adalah 80,5% dan dosis 400 mg/kgBB. Aktivitas fagositosis  paling  besar  pada  kelompok
A
B
dosis 300 mg/kgBB dibandingkan dengan kelompok  ekstrak  maupun  dengan kelompok  control  positif.  Hal  ini menandakan  adanya  aktivitas  fagositosis dengan pemberian ekstrak .
Data  aktivitas  fagositosis  sel makrofag  yang  diperoleh  pada  masing- masing  kelompok  perlakuan  kemudian dilakukan analisis secara statistik menggunakan  SPSS  ( Statistical  Product and  Service  Solution) dengan  metode analisis varian (ANOVA) one-way. Dalam penggunaan  metode one  way ANOVA terlebih dahulu dilakukan uji pendahuluan  yakni  uji  normalitas  dan homogenitas  yang  menunjukkan  bahwa data  terdistribusi  secara  normal  dengan nilai  sig  >  0,05.  Begitupun  juga  pada  uji homogenitas  menunjukkan  bahwa  nilai sig yang diperoleh > 0,05 sehingga dapat dikatakan  bahwa  data  fagositosis  sel makrofag  pada  tiap  kelompok  perlakuan bervariasi  homogen  (sama).  Pengujian dilanjutkan  dengan  menggunakan one way ANOVA karena data telah memenuhi syarat normalitas dan homogenitas.
Pengujian ANOVA one-way dilakukan  untuk  melihat  perbedaan signifikan  antar  kelompok  perlakuan secara keseluruhan. Berdasarkan hasil uji ANOVA, ditunjukan bahwa data memiliki nilai sig 0,000 < 0,05 yang artinya bahwa hipotesis  H0  (tidak  terdapat  perbedaan) ditolak  dan  hipotesis  H1  (terdapat perbedaan) diterima, yang artinya ekstrak etanol  buah E.  rubroloba A.  D.  Poulsen.
memberikan  perbedaan  yang  bermakna terhadap peningkatan aktivitas fagositosis sel  makrofag.  Untuk  melihat  adanya perbedaan  signifikan  terhadap  antar kelompok  perlakuan,  maka  data  dapat dilanjutkan pada analisis statistik yakni uji post hoc dengan tukey HSD .
Hasil uji Post Hoc Tukey menunjukkan  tidak  adanya  perbedaan bermakna antara kelompok dosis ekstrak terhadap  kontrol  positif  karena  nilai  sig yang  diperoleh  >  0,05  sehingga  dapat dikatakan  bahwa  tidak  ada  perbedaan aktivitas fagositosis sel makrofag kelompok  dosis  ekstrak  200  mg/kgBB, dosis  300  mg/kgBB  dan  dosis  400 mg/kgBB terhadap aktivitas fagositosis sel makrofag  kelompok  kontrol  positif.  Hal tersebut  dapat  dikatakan  bahwa  ekstrak buah E.rubroloba A.D  Poulsen  dapat dijadikan  sebagai  imunmodulator.  Hasil pada  kontrol  negatif yang  dibandingkan dengan  kontrol  positif  menunjukkan bahwa  terdapat  perbedaan  bermakna jumlah makrofag dengan nilai sig = 0,000 (sig < 0,05), hal ini menunjukkan bahwa kontrol  negatif  tidak  memberikan  efek imunomodulator  seperti  halnya  yang diberikan  pada  kontrol  positif.  Hal  ini disebabkan  karena  tikus  pada  kontrol negatif  dilakukan  penginduksian  bakteri tanpa diberikannya perlakuan berupa zat aktif  yang  dapat  meningkatkan  sistem imun  pada  hewan  uji.  Perbedaan  jumlah makrofag  yang  bermakna  juga  terdapat pada  kontrol  negatif  yang  dibandingkan
dengan ekstrak  dosis  200  mg/kgBB,  300 mg/kgBB dan 400 mg/kgBB dengan nilai sig  yaitu  0,000  (sig  <  0,05).  Hal  ini menunjukkan bahwa ketiga dosis ekstrak memiliki potensi sebagai imunomodulator karena  terdapat  perbedaan  jumlah magrofag  dengan  kontrol  negatif  dengan nilai  p  =  0,056  (p  >  0,05)  yang menandakan bahwa efek imunomodilator yang  diberikan  oleh  kedua  dosis  tersebut tidak  jauh  berbeda.  Begitupun  juga dengan  kelompok  ekstrak  200  mg/kgBB dibandingkan dengan ekstrak 400 mg/KgBB  tidak  memiliki  perbedaan jumlah aktivitas.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang dilakukan,  maka  dapat  disimpulkan sebagai berikut:
1. Kandungan  metabolit  sekunder  yang terdapat  dalam  buah Etlingera rubroloba A.D.  Poulsen  adalah alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin, dan terpenoid.
2. Ekstrak  buah Etlingera  rubroloba
A.D.  Poulsen  memiliki  aktivitas sebagai imunomodulator dengan meningkatkan aktivitas fagositosis sel makrofag  pada  tikus  jantan  galur wistar.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas,  A.,  Litchman,  A.  H.,  &  Pillai,  S. (2019). Basic  Immunology  -  6th Edition . 336.
Ahmad,  B.  S.,  Fong,  S.  S.,  &  Mohamad
Ibrahim, M. N. (2015). Spectrophotometric Analysis of Caffeine. International  Journal  of Analytical Chemistry , 2015 .
https://doi.org/10.1155/2015/17023 9
Aminah,  A.,  Tomayahu,  N.,  &  Abidin,  Z. (2017).  Penetapan  Kadar  Flavonoid Total  Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah Alpukat  (Persea  americana  Mill.)
Dengan  Metode  Spektrofotometri Uv-Vis. Jurnal Fitofarmaka Indonesia , 4 (2), 226–230. https://doi.org/10.33096/JFFI.V4I 2.265 Ardina,  R.,  &  Rosalinda,  S.  (2018). Morfologi  Eosinofil  pada  Apusan Darah Tepi Menggunakan Pewarnaan  Giemsa,  Wright,  dan Kombinasi  Wright-Giemsa. Jurnal Surya Medika , 3 (2), 5–12.
Ardiyani, M., & Poulsen, A. D. (2019). An Update  Of  The  Genus  Etlingera (Zingiberaceae) In Sulawesi
Including The Description Of A New Species. REINWARDTIA , 18 (1), 31– 42.
https://doi.org/10.14203/REINWA RDTIA.V18I1.3729
Depkes  RI.  (2000). Parameter  Standar Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat . Direktorat  Jenderal  Pengawasan Obat dan Makanan.
Dewi,  S.  R.  P.,  Marlamsya,  D.  O.,  & Bikarindrasari,  R.  (2017).  Efek antikaries ekstrak gambir pada tikus jantan galur wistar. Majalah Kedokteran  Gigi  Indonesia , 3 (2), 83–92.
https://doi.org/10.22146/MAJKED GIIND.17407
Fachriyah, E., Kusrini, D., & Wibawa, P. J. (2018).  Improvement  of  Bioactivity with Nanoparticle Fabrication: Cytotoxic Test of Ethanol, N-Hexane and  Ethyl  Acetate  Extract  from  Red Galangal Rhizome (Alpinia
purpurata (Vieill.) K. Schum) in Bulk and  Nanoparticle  size  using  BSLT Method. Jurnal  Kimia  Sains  Dan Aplikasi;  Vol  21,  No  1  (2018):
Volume  21  Issue  1  Year  2018DO    -
10.14710/Jksa.21.1.39-43 . https://ejournal.undip.ac.id/index.p hp/ksa/article/view/18556
Fadila,  M.,  Novard,  A.,  Suharti,  N.,  & Rasyid, R. (2019). Gambaran Bakteri Penyebab Infeksi Pada Anak Berdasarkan  Jenis  Spesimen  dan Pola  Resistensinya  di  Laboratorium RSUP  Dr.  M.  Djamil  Padang  Tahun 2014-2016. Jurnal Kesehatan Andalas , 8 (2S),
26–32. https://doi.org/10.25077/JKA.V8I2
S.955 Felistiani, V. (2017). Uji aktivitas ekstrak etanol biji Alpukat (Persea americana Mill.) terhadap gambaran  histopatologi  hepar  dan limpa pada Mencit (Mus musculus) yang diinfeksi Staphylococcus aureus .  Universitas  Islam  Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Fristiohady,  A.,  Wahyuni,  W.,  Malik,  F., Fariane, N., Y., M. I., Bafadal, M., & F., S. (2020). In Vitro Antiinflammatory Activity of
Etlingera  elatior  (Jack)  R.M.  Smith by  Hrbc  Membrane  Stabilization Method. Jurnal  Ilmu  Kefarmasian Indonesia . http://jifi.farmasi.univpancasila.ac.i d/index.php/jifi/article/view/731
Fristiohady,  A.,  Wahyuni,  W.,  Malik,  F., Leorita, M., Yusuf, M. I.,
Febriansyah,  H.,  &  Sahidin,  S.
(2019). Efek Imunomodulator Ekstrak  Etanol  Spons  Xestospongia Sp.  Terhadap  Aktivitas  Fagositosis Makrofag Pada Mencit Jantan Galur Balb/C. Jurnal Mandala Pharmacon  Indonesia , 5 (01  SE- Original Articles), 15–30. https://doi.org/10.35311/jmpi.v5i01 .38
Fristiohady,  A.,  Zubaydah,  W.  O.  S., Wahyuni, W., Mirda, M., Saripuddin, S.,  Andriani,  R.,  Purnama,  L.  O.  M.
J., & Sahidin,
S. (2019). Immunomodulator Activity of Effervescent Granule of Wualae Fruit (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith) Based on Specific Phagocytic
Activity. Borneo Journal of Pharmacy , 2 (2  SE-Pharmacology- Toxicology). https://doi.org/10.33084/bjop.v2i2. 868
Handayani,  N.,  Wahyuono,  S.,  Hertiani, T.,  Murwanti,  R.,  Farmasi,  F., Gadjah, U., & Yogyakarta, M. (2018). Uji  Aktivitas  Fagositosis  Makrofag Ekstrak Etanol Daun Suji (Dracaena angustifolia  (Medik.)Roxb.  )  Secara In Vitro. Jurnal Farmasi Medica/Pharmacy Medical Journal (PMJ) , 1 (1). https://doi.org/10.35799/PMJ.1.1.2 018.19648 Harborne, J. B. (1996). Metode Fitokimia :  Penuntun  Cara  Modern Menganalisis  Tumbuhan  Terbitan ke-2 (Cetakan ke). ITB Press.
Hariyanti,  &  Sunaryo,  H.  (2015).  Efek Imunomodulator Fraksi Etanol Dari Ekstrak  Etanol  70%  Kulit  Buah Manggis  (Garcinia  mangostana  L.) Berdasarkan  Peningkatan  Aktivitas Dan  Kapasitas  Fagositosis  Sel Makrofag Peritoneum Mencit Secara In  Vitro. PHARMACY:  Jurnal Farmasi Indonesia (Pharmaceutical Journal of Indonesia) , 12 (1). http://jurnalnasional.ump.ac.id/ind ex.php/PHARMACY/article/view/8 17
Ikalinus,  R.,  Widyastuti,  S.  K.,  &  Eka Setiasih,  N.  L.  (2015).  Skrining Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Kulit Batang  Kelor  (Moringa  oleifera). Indonesia Medicus Veterinus; Vol 4
(1) 2015 . https://ojs.unud.ac.id/index.php/i mv/article/view/15445 Marpaung, M. P., A., A., & W., W. (2017). Karakterisasi dan Skrining Fitokimia Ekstrak Kering Akar Kuning (Fibraurea chloroleuca Miers). Prosiding  Seminar  Nasional  Kimia Uny .
Nugroho, A. E., Andrie, M., Warditiani, N.
K.,  Siswanto,  E.,  Pramono,  S.,  & Lukitaningsih, E. (2012). Antidiabetic  and  antihiperlipidemic
effect  of  Andrographis  paniculata (Burm. f.) Nees and andrographolide in  high-fructose-fat-fed  rats. Indian Journal  of  Pharmacology , 44 (3), 377–381. https://doi.org/10.4103/0253-
7613.96343
Prahasanti, K. (2019). Gambaran Kejadian Infeksi  Pada  Usia  Lanjut. Qanun Medika - Medical Journal Faculty of
Medicine Muhammadiyah Surabaya , 3 (1), 81. https://doi.org/10.30651/JQM.V3I1 .2300
Rahman, H., Aldi, Y., & Mayanti, E.(2017).
Aktifitas Imunomodulator Dan
Jumlah  Sel  Leukosit  Dari  Ekstrak Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus lemairei  (Hook.)  Britton  &  Rose) Pada  Mencit  Putih  Jantan. Jurnal Farmasi Higea , 8 (1), 44–58.
https://doi.org/10.52689/HIGEA.V
8I1.137
Ramadhani,  M.  A.,  K.H.,  A.,  F.L.,  N.,  & H.J.,  A.  (2020).  Skrining  Fitokimia Dan  Penetapan  Kadar  Flavonoid Total  Serta  Fenolik  Total  Ekstrak Daun  Insulin  (Tithonia  diversifolia) Dengan  Maserasi  Menggunakan Pelarut  Etanol  96  %. Indonesion Journal  of  Pharmacy  and  Natural Product , Vol. 3 (1).
Rantika,  N.,  Framesti  F.S.,  N.  A.,  & Nurhabibah.  (2019).  Formulation And  Physical  Stability  Test  Of  Peel- Off Gel Mask From Black Sticky Rice (Oryza  sativa  L.  glutinosa)  As Antioxidant. Jurnal Ilmiah Farmako Bahari , 10 (1).
Setyowati,  W.  A.  E.,  Ariani,  S.  R.  D., Ashadi, Bakti, M., & Rahmawati, C.P.
(2014). Pemantapan Riset Kimia dan Asesmen Dalam Pembelajaran Berbasis Pendekatan Saintifik. Seminar  Nasional  Kimia  Dan Pendidikan Kimia .
Susanty,  A.,  Fernando,  A.,  &  Adelin,  I. (2014).  Efek  Analgetik  Ekstrak Etanol Daun Tampa Badak (Voacanga  foetida  (Bl.)  K.  Schum) Pada  Mencit  Putih  Jantan. Jurnal Sains  Farmasi  &  Klinis , 1 (1),  1–9. https://doi.org/10.29208/JSFK.201 4.1.1.19
Susanty,
& Bachmid, F. (2016). Perbandingan  Metode  Ekstraksi Maserasi  Dan  Refluks  Terhadap Kadar Fenolik Dari Ekstrak Tongkol Jagung  (Zea  mays  L.). JURNAL KONVERSI ,
5 (2), 87–92. https://doi.org/10.24853/KONVER
SI.5.2.87-92
Suwiti, I. N. K. B., Astawa, I. N. M., Suata, K., & Suwiti, N. K. (2016). Hubungan Antara  Aktivasi  Makrofag  Dengan Kadar  Interleukin-6  Dan  Antibodi Terhadap  Salmonella  typhi  Pada Mencit. Jurnal  Kedokteran  Hewan , 10 .
Syamsul,  E.  K.,  Y.K.,  Y.,  &  K.,  H.  (2019).
Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak Daun Kelakai (Stenochlaena palustris  (Burm.  F.)  Bedd.)  Dengan Metode  Spektrofotometri  Uv-Vis. Jurnal Riset Kefarmasian
Indonesia , Vol. 1 (1).