## AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK HEKSANA, DIKLOROMETANA
DAN METANOL DAUN KEJI BELING ( Sericocalyx crispus. L) TERHADAP Artemia salina Leach
Musyirna rahmah Nst, Sri Hardianti, Emma Susanti Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau

## ABSTRAK
Tumbuhan  kejibeling (Sericocalyk  crispus L .) merupakan  salah  satu  tanaman yang  berpotensi  untuk  dikembangkan  sebagai  agen  kemopreventif  kanker.  Tujuan penelitian ini untuk mengetahui efek ekstrak n -heksana, diklorometana dan metanol daun keji beling terhadap Artemia Salina Leach. Uji sitotoksik dilakukan dengan metoda Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Hasil  uji  sitotoksik  menunjukkan    bahwa  ekstrak n - heksana, diklorometana dan metanol daun Keji beling mempunyai efek sitotoksik dengan LC 50 33,49 µg/ml, 244,34 µg/ml, 143,88 µg/ml.
Kata kunci: Sitotoksik, Keji beling, Brine Shrimp Lethality Test, LC 50

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  pertumbuhan  dan  perkembangan  sel  yang  tidak  terkontrol yang  terjadi  di  dalam  tubuh.  Usaha  terapi  kanker  hingga  saat  ini  belum  mencapai  hasil yang  memuaskan.  Hal  ini  disebabkan  oleh  rendahnya  selektivitas  obat  antikanker  yang digunakan  ataupun  karena  patogenesis  kanker  itu  sendiri  belum  jelas  (Meiyanto  dan Sugiyanto,  1997).  Pengobatan  kanker dapat  dilakukan  dengan  pembedahan,  kemoterapi, maupun  dengan  radiasi.  Pengobatan  dengan  kemoterapi  dan  radiasi  seringkali  kurang selektif dan tidak dapat menghilangkan sel kanker tersebut. Sedangkan pembedahan tidak efektif untuk kanker yang telah metastasis (Maat, 1999).
Salah  satu  usaha  yang  dapat  ditempuh  untuk  menemukan  obat  kanker  adalah menggali  sumber  obat  nabati  (Anonim,  2003).  Banyak  penelitian  dilakukan  untuk mencari  senyawa  antikanker  baru  dengan  harapan  sifat  yang  lebih  baik.  Salah  satu tumbuhan  yang  dapat  dikembangkan  sebagai  obat  antikanker  adalah  kejibeling (Sericocalyk crispus L .) mengandung saponin, flavonoid, terpenoid dan fenolik (Nasution dkk,  2010).  Tumbuhan  ini  merupakan  tumbuhan  yang  telah  banyak  digunakan masyarakat  sebagai  obat  tradisional.  Penggunaannya  sangat  beragam,  di  antaranya sebagai  menurunkan  kadar  kolesterol,  peluruh  air  seni  (diuretik),  anti  diabetes,  wasir, tumor,  lever,  maag,  menghancurkan  batu  dalam  empedu,  batu  ginjal,  dan  batu  pada kandung kemih (Dalimartha, 2006).
Dari beberapa kandungan tersebut kemungkinan ada senyawa yang memiliki efek antiproliferatif  terhadap  sel  kanker,  seperti  flavonoid  (Ren,  dkk.,  2003).  Penelitian  ini dilakukan  untuk  mengetahui  toksisitas  ekstrak n -heksana,  diklorometana  dan  metanol daun keji beling terhadap Artemia Salina Leach dengan metoda BSLT.

## METODOLOGI

## Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan untuk ekstraksi daun keji beling adalah lanjutan ekstraksi dari  penelitian  Gushelmawita  tahun  2008,  sedangkan  bahan  yang  digunakan  untuk
pengujian  BSLT  adalah  air  laut, n -heksana,  diklorometana,  metanol,  dimetilsulfoksida (DMSO), larva uji yang digunakan untuk pengujian BSLT adalah A. salina .

## Alat Penelitian
Alat  yang  digunakan  untuk  pengerjaan  ekstraksi  berupa  seperangkat  alat maserasi,  seperangkat  alat  destilasi  vakum,  seperangkat  alat rotary  evaporator, dan timbangan. Alat-alat yang digunakan untuk uji BSLT berupa seperangkat alat pembiakan telur udang A. salina (wadah gelap, aerasi, lampu dengan intensitas cahaya rendah), vial, pipet mikro, timbangan analitik, pipet tetes, dan kaca pembesar.

## Jalannya Penelitian
1. Pembuatan Ekstrak Daun Keji Beling
Daun keji beling lebih kurang 1,5 kg dicuci bersih, kemudian dikering anginkan, dirajang/dipotong-potong ± 1 cm, setelah itu diserbuk dan ditimbang. Dilakukan maserasi dengan pelarut n-heksana dengan cara perendaman serbuk dalam wadah maserasi hingga terendam  dengan  sempurna.  Wadah  ditutup  rapat  dan  campuran  disimpan  di  tempat terlindung dari cahaya selama 3 hari sambil diaduk berulang. Selanjutnya filtrat diambil melalui  penyaringan  dan  ditambahkan  kembali  cairan  pengekstrak  ke  dalam  wadah sampel.  Maserat  yang  didapat  dipekatkan  secara rotary  evaporator hingga  diperoleh ekstrak  kental  n-heksana.  Setelah  serbuk  direndam  dengan  n-heksana,  serbuk  direndam lagi dengan pelarut diklorometana dan metanol dengan cara yang sama pada perendaman serbuk  menggunakan  pelarut  n-heksana.  Sehingga  didapat  ekstrak  kental  diklorometana dan metanol daun keji beling ( Sericocalyx crispus L.)
2. Persiapan  sampel  dari  uji  sitotoksik  dengan  metoda Brine  Shrimp Lehthality test (BSLT)
Kista  udang A.    salin a    ditetaskan  dalam  wadah  pembiakan  yang  berisi  air  laut dan  telah  dilengkapi  dengan  aerasi  dan  lampu,  digunakan  setelah  48  jam  setelah membentuk  larva.  Vial  uji  dikalibrasi  sebanyak  5  ml.  Pengujian  dilakukan  dengan konsentrasi  1000,  100,  10  µg/ml.  Sebanyak  40  mg  ekstrak  uji  dilarutkan  dalam  4  ml metanol  maka  didapat  larutan  induk  ekstrak  uji  dengan  konsentrasi  10.000  µg/ml, kemudian larutan induk dengan konsentrasi 10.000 µg/ml tesebut dipipet sebanyak 0,5 ml kedalam  vial  hingga  nantinya  didapat  larutan  induk  konsentrasi  1000  µg/ml  setelah penambahan  metanol  5  ml  kemudian  larutan  dipipet  lagi  0,5  ml  kedalam  vial  setelah penambahan air laut hingga 5 ml untuk mendapatkan larutan uji dengan konsentrasi 1000 ppm.  Pembuatan    konsentrasi  100  µg/ml  dengan  cara  pengenceran  larutan  induk  1000 µg/ml  sebanyak  0,5  ml  ditambahkan  metanol  hingga  5  ml  maka  diperoleh  konsentrasi larutan  induk  100  µg/ml  kemudian  dipipet  sebanyak  0,5  ml  larutan  induk  tersebut kedalam vial uji hingga nantinya didapat konsentrasi 100 µg/ml setelah penambahan air laut  hingga  5  ml.  Dan  untuk  konsentrasi  10  µg/ml  dibuat  dari  larutan  induk  100  µg/ml dengan cara yang sama (masing-masing dibuat dalam 3 vial) (Meyer dkk ., 1982).
3. Media perkembangbiakan hewan percobaan Artemia salina Leach Diperlukan media yang khusus dalam pembiakan udang A. salina untuk uji brine shrimp  lethality  test tersebut,  tetapi  media  yang  digunakan  dapat  dibuat  dalam  bentuk sederhana dan murah. Media dibuat dalam bentuk kaca yang terdiri dari dua bagian yaitu bagian yang gelap dan bagian yang terang. Kista udang diletakan pada bagian yang gelap dan  akan  bergerak  ke  arah  yang  terang  setelah  menetas  menjadi  larva.  Larva  yang digunakan untuk uji dapat dipakai setelah 48 jam dari saat kista udang dimasukan dalam wadah.

## 4. Uji Sitotoksisitas Terhadap Hasil Ekstraksi dengan BSLT
Masing-masing  vial  uji  1000,  100,  10  µg/ml  diambil  sebanyak  0,5ml  dibiarkan pelarutnya  menguap,  kemudian  larutkan  kembali  senyawa  uji  dengan  50  µg/ml  DMSO, selanjutnya  tambahkan  air laut  5  ml.  Dimasukkan  larva  udang  ke  dalam  masing-masing vial  sebanyak  10  ekor.  Ditambahkan  lagi  air  laut  beberapa  tetes  hingga  batas  kalibrasi, kematian  larva  udang  diamati  setelah  24  jam.  Dari  data  yang  dihasilkan  dihitung  LC 50 dengan metode kurva menggunakan tabel probit (Meyer dkk ., 1982). Sebagai  kontrol,  50  µl  DMSO  di  pipet  dengan  pipet    mikro  ke  dalam  vial  uji, kemudian  ditambahkan  air  laut  5  ml.  Dimasukkan  larva A.  salina 10  ekor.  Tambahkan lagi air laut beberapa tetes hingga batas kalibrasi (Meyer dkk., 1982).

## 5. Analisa Data
Untuk  melihat  pengaruh  pemberian  ekstrak n -heksana,  diklorometana,  metanol tumbuhan  keji  beling terhadap  kematian  larva A.  salina dilakukan  perhitungan  statistik dengan  Analisa  Probit.  Perhitungan  ini  dilakukan  dengan  membandingkan  antara  larva yang  mati  terhadap  jumlah  larva  keseluruhan,  sehingga  diperoleh  persen  kematian. Kemudian  dilihat  dalam  tabel  nilai  probit.  Nilai  Probit  versus  log  konsentrasi  yang diketahui  kemudian  dimasukkan  dalam  persamaan  regresi.  Nilai  LC 50. Dihitung berdasarkan persamaan regresi linier yang diperoleh. Persamaan Regresi Linier adalah:
y = a + bx LC 50    = arc log x Keterangan: x    :   Log Konsentrasi,   y :   Nilai Probit,   a :      Intercept
(garis potong) b    : Slope (kemiringan dari garis regresi  linear)

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Ekstrak metanol, diklorometan dan heksan daun keji beling ( Sericocalyc crispus L.)  diujikan  sitotoksisitasnya  dengan  metoda  BSLT.    BSLT  sebagai  uji  awal  skrining perolehan  senyawa  bioaktif  (Carballo  dkk,  2002).  Uji  ini  bertujuan  untuk  mengetahui adanya  sifat  toksik  dari  ketiga  ekstrak  terhadap  larva Artemia  salina Leach.  Parameter ketoksikan yang digunakan dalam uji ini adalah nilai IC 50 .
Hasil uji sitotoksisitas ekstrak metanol, diklorometan dan heksan daun keji beling menghasilkan nilai LC 50 143,88 μg/ml, 244,34 μg/ml, dan 33,496 μg/ml (Tabel 1).
Tabel I. Data Hasil Uji BSLT hasil ekstrak metanol daun kejibeling Konsentrasi (µg/ml) Log konsentrasi Persen kematian Nilai probit LC50 ug/ml A. Ekstrak Metanol 10.000 3 63,3 5,332 Y=0,386X+4,167 143,88 μg/ml 1.000 2 46,6 4,925 100 1 33,3 4,560 B. Ekstrak Diklorometan 10.000 3 63,3 5,332 Y=0,487X+3,837 244,34 μg/ml 1.000 2 40,0 4,747 100 1 26,6 4,357 C. Ekstrak Heksan 10.000 3 70,0 5,524 Y=0,35X+4,666 33,49 μg/ml 1.000 2 56,6 5,151 100 1 43,3 4,824
Ekstrak  n-heksan  daun  keji  beling  relatif  lebih  toksik  dibandingkan  ekstrak metanol  dan  ekstrak  dikolrometan.  Dari  hasil  uji  tersebut  kemungkinan  senyawa flavonoid  yang  bertanggung  jawab  terhadap  efek  toksik  dari  ekstrak  tersebut.  Menurut Ren  dkk  (2003),  flavonoid  mempunyai  efek  penting  pada  pencegahan  kanker  dan kemoterapi kanker. Sedangkan Vrana (2001) mengatakan senyawa golongan alkaloid dan terpenoid merupakan senyawa yang juga bertanggungjawab pada aktivitas sitotoksisitas.
Suatu  senyawa  dikatakan  berpotensi  untuk  dikembangkan  lebih  lanjut  sebagai antikanker apabila diketahui senyawa tersebut mempunyai LC 50 ≤ 30 μg/ml (Meyer, dkk., 1982). Sampel yang diujikan masih dalam bentuk ekstrak atau masih terkandung banyak senyawa  maka  kemungkinan  aktivitas  sitotoksik  senyawa  pada  ketiga  ekstrak  akan meningkat dengan teknik fraksinasi dengan tujuan mengeliminasi senyawa-senyawa yang bersifat menurunkan daya toksisitas senyawa aktif.

## KESIMPULAN
Ekstrak n -heksana, diklorometana dan metanol daun keji beling mempunyai efek sitotoksik dengan LC 50 berturut-turut 33,49 µg/ml, 244,34 µg/ml, 143,88 µg/ml.

## DAFTAR PUSTAKA
Carballo,  J.,  Hernandez-Inda,  Z.L.,Perez,  P.,  and  Garcia-Gravalos,  M.D.,  2002,  A  comparison between  two  brine  shrimp  assays  to  detect  in  vitro  cytotoxicity  in  marine  natural products, BMC Bioechnol, Sep 23:2 (1)7
Dalimartha, S., 2006, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia jilid 4 , Puspa Swara, Jakarta Ma’at, S., 1999. Pengujian Bioaktivitas Tanaman Obat sebagai Antikanker, Program Pasca Sarjana Universitas Indonesia Airlangga, Surabaya.
Meiyanto,  E,  dan  Sugiyanto,  1997.  Uji  Toksisitas  Beberapa  Fraksi  Etanol  Daun Gynura Procumbens (Lour)  Merr  Terhadap  Larva  Udang  (Artemia  Salina  Leach).  Majalah Farmasi Indonesia, 8(1): 42-49
Meyer,  Ferrigni,  Putnam,  Jacobsen,  Nichols,  Mc.  Laughlin,  1982, Brine  Shrimp:  A  Convenient General Bioassay for Active Lant Constituents, Plant Medica, Vol 45
Nasution,  M.R,  Utami,  R  dan  Gushelmawita.  2010.  Penentuan  Total  Fenol  Dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Dari  Ekstrak  Heksana,  Diklorometana  Dan  Metanol  Daun  Keji  Beling ( Sericocalyx  Crispus. L). Prosiding  Seminar  dan  Rapat  Tahunan  BKS-PTN  Wilayah Barat ke-23.Pekanbaru 10-11 Mei 2010 .ISBN 978-979-1222-92-1 (Jilid 1).Pekanbaru. Ren,  W.,  Qiao,  Z.,  Wang,  H.,  Zhu,  L.,  and  Zhang,  L.  2003,  Flavonoid:  Promising  Anticancer agents, med res Review, 2(4): 519-534,
Vrana,  J.A  and  Grant,  S.,  2001.  Syinergistic  induction  of  Apoptosis  in  Human  Leukemia  cells (U937)  eposed  to  Bryostatin  1  and  the  Proteasome  Inhibitor  Lactacystin  Involves Dysregulation of the PKC/MAP Cascade, Blood, 97 (7)