PENGARUH KONSENTRASI PUPUK Lemna minor TERHADAP POPULASI Dunaliella salina
EFFECT OF Lemna Minor FERTILIZER CONCENTRATION ON Dunaliella Salina POPULATION
Tjokorde Astrid S., Boedi S. Rahardja dan Endang Dewi Masithah
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Dunaliella salina is a microalgae that have a high nutrient content, ctherefore Dunaliella salina widely used as an effective natural food, because they  have cell walls and is easily digested. Dunaliella salina is  rich  in  phytoplankton  nutrients  such  as  omega  3  and  omega  6  and  essential  amino  acids . Dunaliella salina has  a  large  potential  for  the  amount  of  β-carotene  and  glycerol. Lemna minor in addition  containing  nutrient  n  and  p  high  also  has  a  high  concentration  of  minerals  and  pigment, especially beta carotene and xantofil so either for growth Dunaliella salina . This  research  aimed  to  know  the  effect  of  fertilizers  on  the  growth  of Lemna  minor populations  of Dunaliella  salina and  the  optimal  concentration  of  fertilizer Lemna  minor in Dunaliella  salina culture. Lemna minor doses used  in  this research are  A (0  ml/l), B (0.25 ml/l), C (0.5 ml/l), D (0.75 ml/l), E (1 ml/l) and the use of fertilizers walne (1 ml/l) as with the control for the research. This research method is experimental methods. Research was done at the Faculty of Fisheries and Marine Laboratory, University of Airlangga for 7 days. The main parameter was observed the population Dunaliella salina . Supporting parameter includes water quality.
The results suggest the best dose of fertilizer Lemna minor for the growth of Dunaliella salina is the dose in treatment D (0.75 ml/l) of 36.18x104 cells/ml, the highest growth occurred on the fifth day. Based on measurements of water quality throughout the treatment is still decent and good to support the the growth of Dunaliella salina during the research.
Keywords : Dunaliella salina , Lemna minor , population

## Pendahuluan
Pakan  alami  (plankton)  mempunyai peranan  penting  sebagai  pakan  awal  bagi kehidupan larva ikan dan non ikan.
Pengembangan kultur seperti mikroalga diantaranya Dunaliella  salina merupakan  jenis pakan  alami  yang  efektif,  karena  mempunyai dinding sel dan mudah dicerna (Kurniastuty dan Julinasari, 1992).
Menurut  Muhaemin  dan  Kaswadji,
(2010) Dunaliella salina mempunyai
kandungan  beta-karoten  dan  kandungan  gizi yang  tinggi. D.  salina memiliki  kandungan nutrien  yaitu  kandungan  protein  25,67g, karbonhidrat 40,21g, lemak 18,02g dan memiliki  kandungan  serat  2,10g  pada  analisis proksimat  nutrien  biomassa Dunaliella  salina untuk g/100g berat kering.
Menurut  Isnansetyo  dan  Kurniastuty (1995)  untuk  skala  laboratorium  pemupukan pada Dunaliella  salina dapat  menggunakan pupuk anorganik NPFe.
Menurut  Borowitzka  (1990)  pada  keadaan konsentrasi zat besi yang rendah sangat penting
untuk  pertumbuhan Dunaliella  salina ,  karena pada keadaan salinitas yang tinggi pada air laut Fe  (besi)  dapat  membatasi  pertumbuhan Dunaliella salina . Pupuk organik pada dasarnya memiliki  kelebihan  yang  lebih  unggul  yaitu selain kandungan unsur N, P, K, pupuk organik juga  mengandung  unsur  hara  lain  yang melengkapi  kebutuhan  akan  unsur  hara  juga bebas  dari  residu  bahan  kimia  yang  dapat menjadi racun (Sutanto, 2002).
Lemna  minor memiliki  konsentrasi tinggi  mineral  dan  pigmen,  terutama  beta karoten  dan  xantofil  (Skillicorn, et.,al ,  1991). Menurut  Landolt  and  Kandeler  (1987) Lemna minor mengandung N sebanyak 0,8 - 7,8 % dari total  berat  keringnya,  P  sebanyak  0,03  -  2,8  % dari  total  berat  keringnya,  selain  itu  beberapa kandungan  nutrien  lainnya.  Kandungan  nutrien Lemna  minor yang  tinggi  (N  dan  P)  serta komposisi  nutrien  lain  yang  identik  dengan kebutuhan Dunaliella , maka penggunaan pupuk Lemna  minor diharapkan  dapat  meningkatkan populasi Dunaliella  salina .  sehingga  dapat
memenuhi  kebutuhan  pakan  alami  dalam kegiatan budidaya.
Manfaat penelitian ini adalah agar hasil yang  didapatkan  diharapkan  dapat  memberikan konstribusi  kepada  masyarakat  dan  industri akan  Pertumbuhan  pada  populasi Dunaliella salina tertinggi  yang  telah  diberi  pupuk Lemna minor sebagai  pupuk  alternatif,  sehingga  dapat diaplikasikan oleh pembudidaya untuk memenuhi ketersediaan pakan alami.

## Metodologi
Waktu dan Tempat Penelitian dilaksanakan pada bulan Juli sampai  dengan  Agustus  2012  di  Laboratorium Pendidikan  Perikanan  Fakultas  Perikanan  dan Kelautan Universitas Airlangga Surabaya.
Peralatan yang digunakan dalam penelitian adalah botol/toples kaca, batu aerator, aerator, selang aerator, oven, plastik, gelas ukur, pipet  tetes,  pipet  ukur,  jerigen  5  liter  (2  buah), haemocytometer , handtally counter , autoclave , refraktometer, pH paper , termometer, timbangan digital, lampu TL, kapas, corong air, erlenmeyer,  kasa,  aluminium  foil,  mikroskop binokuler, dan kertas saring.
Bahan  penelitian  yang  digunakan  adalah Dunaliella  salina yang  berasal  dari  BBPBAP Jepara,  pupuk Lemna  minor ,  pupuk  Walne, akuades, alkohol, air tawar, air laut, khlorin dan Na Thiosulfat.
Rancangan  penelitian  yang  digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL), sebab dalam penelitian ini kecuali perlakuan,
semuanya  baik  media  percobaan  maupun keadaan lingkungan lainnya sama (Kusriningrum, 2008).
Perlakuan pada penelitian sebanyak 6 perlakuan dengan 4 kali ulangan.
Penelitian pendahuluan telah dilakukan sebelumnya untuk menentukan dosis yang tepat untuk  digunakan  dalam  penelitian.  Dosis  yang digunakan  pada  saat  penelitian  pendahuluan lima  dosis  dengan  dua  ulangan,  yaitu  dosis  A (0,5  ml/l),  dosis  B  (1  ml/l),  dosis  C  (2  ml/l), dosis D (4 ml/l), dan dosis E (8 ml/l). Dosis  terbaik  yang  didapat  pada  saat  penelitian pendahuluan  adalah  dosis  A  dengan  jumlah pupuk Lemna minor sebesar 0,5 ml/l.
Prosedur Kerja Sterilisasi Alat dan Bahan Penelitian Tahap  awal  kultur  dalam  penelitian  ini  adalah proses  sterilisasi.  Menurut  Rusyani dalam Sari
(2009)  menyatakan,  kultur  skala  laboratorium merupakan kultur yang murni atau monospesies sehingga harus diawali dengan proses sterilisasi. Persiapan Pupuk Lemna minor Lemna  minor yang  akan  digunakan sebagai pupuk untuk penelitian diperoleh di area kampus  C  Universitas  Airlangga  Surabaya. Lemna  minor yang  di  ambil  adalah  seluruh bagiannya,  setelah  itu  di  cuci  dan  di  jemur dibawah  terik  matahari  selama  1-2  minggu.
Proses  penjemuran  berlangsung  cukup  lama karena  penjemuran  dilakukan  dengan  cara manual. Menurut Hutagulung (2008) pembuatan  pupuk  khususnya  pupuk  cair  dapat dilakukan dengan perbandingan 1:4 (1 kg bahan kering dilarutkan dalam 4 liter air) dengan lama perendaman 4 minggu. Lemna minor yang telah kering  kemudian  ditumbuk  atau  di  blender hingga  menjadi  serbuk.  Kemudian,  220  gram Lemna  minor yang  telah  menjadi  serbuk dilarutkan  dengan  880  ml  akuades,  disimpan pada  botol  kaca  steril  dan  ditutup.  Setelah penyimpanan  selama  4  minggu, Lemna  minor disaring dan diperas secara berulang- ulang agar cairan di dalamnya dapat keluar dan ditempatkan pada wadah gelas kaca dan tertutup agar terhindar dari kontaminasi.
Persiapan Pupuk Walne sebagai Kontrol
Pupuk  teknis  skala  laboratorium  yang digunakan  sebagai  media  kultur  dan  kontrol adalah  pupuk  Walne  yang  didapatkan  dari BBPBAP  Jepara.  Menurut  BBPBAP  Jepara (2005) dalam Diahsari (2011), komposisi pupuk Walne  adalah  Na 2 EDTA  45  g,  NaH 2 PO 4 .H 2 O 20 g, FeCl 3 .6H 2 O 1,5 g, H 3 BO 3 33,6 g, MnCl 2 0,36 g, NaNO 3 100 g, trace metal solution 1 ml, vitamin  1  ml  dan  akuades  1000  ml.  Larutan pupuk  yang  telah  siap  disimpan  dalam  wadah yang  tidak  tembus  cahaya.  Larutan  pupuk  ini kemudian  disterilkan  dengan  menggunakan autoclave . Lingkungan dan Media Kultur Dunaliella salina Media  kultur  yang  digunakan  dalam penelitian adalah air laut sebanyak 500 ml yang dimasukkan  dalam  toples  kaca  dimana  di dalamnya  terdapat  pupuk Lemna  minor sesuai dengan konsentrasi yang ditentukan.
Selanjutnya  media  kultur  diletakkan  di  rak kultur  diberi  aerasi  dan  siap  dimasukkan  bibit Dunaliella salina . Lingkungan  kultur Dunaliella  salina yang  diharapkan  dalam  penelitian  adalah  suhu 30°C  sampai  40°C  (Vandamme,1989),  salinitas 45  ppt  dan  pH  6,75  sampai  7,25  (Abu-Resq, 2010).  Intensitas  cahaya  yang  digunakan  1300 lux (Chai, 2004).
Parameter Pengamatan Parameter  utama  dalam  penelitian adalah  populasi Dunaliella  salina .  Parameter pendukung  dalam  penelitian  adalah  suhu,  pH dan  salinitas.  Analisis  data  menggunakan Analisis  Varian  (ANAVA)  dengan  uji  lanjutan menggunakan  uji  jarak  Duncan  dengan  derajat kepercayaan  0,05  untuk  mengetahui  perbedaan diantara semua perlakuan (Kusriningrum, 2008).

## Hasil dan Pembahasan
Hasil  pengamatan  penelitian  berupa  data pertumbuhan  populasi Dunaliella  salina .  Hasil tersebut digunakan untuk mengetahui pengaruh penambahan  pupuk Lemna  minor dan  dosis pupuk Lemna  minor yang  optimal  yang  dapat menghasilkan Pertumbuhan populasi Dunaliella salina yang  optimal.  Kurva  pertumbuhan
kepadatan Dunaliella  salina dapat  dilihat  pada Gambar 1.
Berdasarkan  kurva  pada  Gambar  8.  Populasi tertinggi  pada Dunaliella  salina yang  dikultur pada  pupuk Lemna  minor pada  hari  kelima (puncak kepadatan) diperoleh pada perlakuan D (0,75ml/l) sebanyak 36,18x104 sel/ml sedangkan  populasi  terendah  diperoleh  pada perlakuan A (0ml/l) sebanyak 12,69x104 sel/ml pada hari ketiga. Hasil uji statistik selengkapnya dapat dilihat pada Tabel 1.
Hasil  analisis  varian  (ANAVA)  yang dilakukan  mulai  hari  pertama  hingga  ketujuh menunjukkan  bahwa  setiap  perlakuan  pupuk Lemna  minor memberikan  pengaruh  yang berbeda  nyata  (p<0,05)  terhadap  populasi  dari Dunaliella  salina .  Uji  statistik  dilanjutkan dengan  menggunakan  uji  jarak  berganda Duncan.
Hari Ke
Gambar 1. Kurva Pertumbuhan Populasi Dunaliella salina .
Tabel 1. Data Kepadatan Dunaliella salina (x 104 sel/ml) Setelah Dikultur pada Pupuk Lemna minor dari Hari Pertama hingga Hari Ketujuh
Pertumbuhan Dunaliella salina selain dipengaruhi  oleh  ketersediaan  nutrisi  yang terdapat pada media pemeliharaan juga dipengaruhi  oleh  faktor  lingkungan  yaitu kualitas  air.  Pengukuran  kualitas  air  dilakukan setiap hari selama masa pemeliharaan. Pengukuran  suhu,  pH  dan  salinitas  dilakukan dua  kali  sehari  pada  pukul  06.00  dan  17.00 WIB. Hasil pengukuran suhu air berkisar antara 28-30 o C.  Salinitas  berkisar  antara  30-55  ppt. Sedangkan  pH  air  berkisar  antara  6-8.  Kisaran kualitas  air  selama  masa  pemeliharaan  dapat dilihat pada Tabel 2
Tabel 2.  Kisaran  Kualitas  Air  Selama  Masa Pemeliharaan Parameter pengamatan Hasil Suhu 28-30 O C pH 6-8 Salinitas 30-55 ppt Hasil dari penelitian mengenai
pengaruh pupuk Lemna minor terhadap populasi Dunaliella salina menunjukkan setiap perlakuan pupuk Lemna  minor memberikan  pengaruh yang  berbeda  nyata  terhadap  populasi  dari Dunaliella salina (p<0,05).  (ANAVA).  Hasil tersebut  diduga  disebabkan  karena  adanya pengaruh  dari  nutrien  yang  terkandung  dalam pupuk Lemna minor yang meliputi unsur makro maupun mikro yang mampu memenuhi kebutuhan  nutrien Dunaliella  salina. Unsur yang  paling  penting  dibutuhkan  dalam  kultur Dunaliella salina adalah N, P dan Fe.
Berdasarkan  hasil  uji  di  Laboratorium TAKI,  Jurusan  Teknik  Kimia  FTI  ,Institut Teknologi  Sepuluh  November,  menunjukkan bahwa Lemna  minor mempunyai  kandungan  N (58  mg/l),  P  (176,60  mg/l)  dan  Fe  (210,40 mg/l).  Menurut  Borowitzka  (1990)  kebutuhan optimum nutrien bagi Dunaliella salina yaitu N (16  mg/l),  P  (2,8  mg/l),  Fe  (0,7  mg/l)  sehingga berdasarkan  kandungan  nutrien  diatas Lemna minor dapat  memenuhi  kebutuhan  nutrien  dari Dunaliella salina .
Hasil  penelitian  penambahan  pupuk Lemna  minor menunjukan  bahwa  pertumbuhan populasi Dunaliella salina mengalami lima fase pertumbuhan  yaitu  fase  adaptasi,  eksponensial, penurunan  relatif,  stasioner  dan  kematian.  Fase adaptasi  merupakan  fase  istirahat,  dengan populasi tidak mengalami pertambahan (Isnansetyo  dan  Kurniastuty,  1995).  Fase adaptasi  terjadi  pada  perlakuan  A  setelah penambahan  inokulan  ke  dalam  media  kultur tampak pada grafik hari pertama dan hari kedua karena  terjadi  penurunan  jumlah Dunaliella
salina pada  hari  kedua  menunjukkan  adaptasi yang  dilakukan  pada  pertumbuhan Dunaliella salina belum berhasil dengan baik. (Gambar 7).
Fase  eksponensial  adalah  fase  yang terjadi  setelah  fase  adaptasi  yang  ditandai dengan  pembelahan  sel-sel  baru  dan  laju pertumbuhan tetap (Isnansetyo dan Kurniastuty, 1995). Pertumbuhan Dunaliella salina pada fase eksponensial ditandai dengan adanya
peningkatan  yang  sangat  cepat  dari  jumlah populasi Dunaliella  salina yang  dimulai  pada hari  pertama  pengamatan  sampai  puncak populasi.  Fase  eksponensial  pada Dunaliella salina terjadi  pada  hari  kedua  untuk  perlakuan B,  C,  K  dan  terjadi  pada  hari  ketiga  untuk perlakuan D, E.
Fase  Penurunan  relatif  adalah  fase yang  terjadi  setelah  fase  logaritmik.  Pada  fase ini  jumlah  kematian  lebih  kecil  dibandingkan pertumbuhannya  sehingga  penurunan  grafik tidak  signifikan  (Isnansetyo  dan  Kurniastuty, 1995).  Puncak  populasi  ada  pada fase penurunan  relatif.  Pada  perlakuan  A,  B,  C,  dan K  puncak  populasi  terjadi  pada  hari  ketiga, sedangkan  perlakuan  D  dan  E  puncak  populasi terjadi  pada  hari  kelima.  Puncak  populasi tertinggi pada perlakuan D (36,18x104 sel/ml) dengan konsentrasi pupuk Lemna minor 0,75  ml.  Puncak  populasi  terendah  yaitu  pada perlakuan  A  (12,69  x104  sel/ml)  dengan konsentrasi  pupuk  0  ml,  puncak  populasi terendah  pada  perlakuan  A  dikarenakan  tidak tersedianya tambahan nutrisi sebagai penunjang pertumbuhan Dunaliella salina .
Fase  stasioner  adalah  fase  yang  terjadi setelah  fase  berkurangnya  pertumbuhan  relatif. Fase  ini  ditandai  dengan  pertumbuhan  mulai mengalami  penurunan  dibandingkan  dengan fase  logaritmik.  Pada  fase  ini  laju  reproduksi sama  dengan  laju  kematian  dalam  arti penambahan  dan  pengurangan  plankton  relatif sama  atau  seimbang  sehingga  kepadatan fitoplankton  cenderung  tetap  (Isnansetyo  dan Kurniastuty, 1995). Pada perlakuan A, B, C, D, E,  dan  K  tidak  terjadi  fase  stasioner  karena penurunan  jumlah  populasi  lebih  cepat  dari pertumbuhan  populasi  terjadi  setelah  fase penurunan relatif.
Pada  perlakuan  A,  B,  C,  K,  fase kematian  terjadi  pada  hari  keempat  sedangkan pada  perlakuan  D  dan  E  pada  hari  keenam  dan terjadi  setelah  puncak  populasi.  Fase  kematian terjadi  lebih  awal  pada  perlakuan  A,  C,  K diduga  karena  nutrien  pada  media  yang  telah habis  setelah  puncak  populasi.  Pada  perlakuan B terjadi penurunan populasi pada hari keempat setelah  puncak  populasi  hari  ketiga  kemudian naik  kembali  pada  hari  kelima  hal  ini
disebabkan karena nutrisi masih ada pada media dan  belum  dapat  dimanfaatkan  dengan  baik sehingga  naik  pada  hari  kelima  tetapi  jumlah kepadatan  tidak  lebih  dari  puncak  populasi. Fase  kematian  ditandai  dengan  penurunan jumlah/kepadatan  plankton  yang  lebih  cepat dari laju reproduksi, jumlah sel menurun secara geometrik dipengaruhi oleh ketersediaan nutrien, cahaya, temperatur, dan umur plankton (Isnansetyo dan Kurniastuty, 1995).
Nitrogen  merupakan  nutrien  paling penting  yang  berkontribusi  terhadap  produksi biomassa fitoplankton. Respon tubuh Dunaliella salina untuk  pembatasan  nitrogen  adalah perubahan  warna  dari  sel-sel  (penurunan klorofil dan peningkatan karotenoid). Konsentrasi pupuk Lemna minor sebanyak 0,75 ml/l  dengan  jumlah  populasi Dunaliella  salina sebanyak  36,18x104  sel/ml  yang  berbeda  nyata dengan penggunaan pupuk walne 1 ml/l dengan puncak  populasi  sebesar  33,19  x  104  sel/ml sehingga  pupuk Lemna  minor ini  dapat dikatakan  memiliki  N  dan  P  yang  cukup  tinggi sehigga sesuai untuk meningkatkan pertumbuhan plankton. Hasil  pengukuran  suhu  air  selama
penelitian  berkisar  antara  28-30°C.  Suhu  air dalam media pemeliharaan Dunaliella salina ini masih dalam
kondisi sesuai
untuk pertumbuhannya karena menurut dengan pernyataan  Vandamme  (1989)  menyatakan, suhu optimal untuk Dunaliella salina adalah 30 - 40°C.
Hasil  pengukuran  pH  pada  media
pemeliharaan Dunaliella salina selama
penelitian adalah 6 sampai 8. Abu-Rezq (2010) menyebutkan  bahwa  pH  yang  optimal  untuk pertumbuhan Dunaliella  salina berkisar  antara 6,75  -  7,25.  Hasil  pengukuran  salinitas  pada media  pemeliharaan Dunaliella  salina berkisar antara  30  -  55  ppt.  Salinitas  dalam  media pemeliharaan Dunaliella salina ini masih dalam kondisi  baik  untuk  pertumbuhannya  karena menurut  dengan  pernyataan  Abu-Rezq  (2010) menyatakan bahwa salinitas yang optimal untuk pertumbuhan Dunaliella  salina adalah  pada salinitas  45  ppt  tetapi Dunaliella  salina dapat hidup  pada  salinitas  media  yang  sangat  tinggi hingga mencapai salinitas 160 ppt.

## Kesimpulan
Konsentrasi pupuk Lemna minor memberikan  pengaruh  yang  berbeda  nyata terhadap populasi Dunaliella
salina . Penambahan  pupuk Lemna  minor dengan konsentrasi  0,75  ml/l  dapat  menghasilkan populasi Dunaliella  salina yang  tertinggi  yaitu sebesar 36,18 x 104 sel/ml pada hari kelima.
Pupuk Lemna  minor dapat  digunakan  pada kultur Dunaliella  salina dengan  konsentrasi optimal 0,75 ml/l. Sebaiknya dilakukan penelitian  lebih  lanjut tentang  nutrisi  yang diperlukan  oleh Dunaliella  salina untuk mendapatkan pertumbuhan yang optimal

## Daftar Pustaka
Abu-Rezq,  T.,  S.,  Al-Hooti,  S.,  Jacob,  D.,  A. 2010. Optimum Culture Conditions for The Locally Isolated Dunaliella salina . http://webcache.googleusercontent.co m. 05/07/2012. 22 pp.
Borowitzka,  M.  A.  1990.  The  Mass  Culture  of Dunaliella  salina . http://www.fao.org.
30/05/2012. 16 pp.
Chai,  Y.,  L.  Yumin,  W.  Tianyun,  H.  Weihong
and  X.  Lexun.  2007.  Heterologous Gene  Expression  Driven  by  Carbonic Anhydrase Gene Promoter in Dunaliella salina . http://www. sciencedirect.com . 16/07/2012. 6pp.
Diahsari,  A.  R.  2011.  Teknik  Kultur Chlorella sp.  di  Balai  Besar  Pengembangan Budidaya  Air  Payau  Jepara.  PKL. Program  Studi  Budidaya  Perairan. Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan. Universitas  Airlangga.  Surabaya.  56 hal.
Hutagulung,  I.  2008.  Pembuatan  Pupuk  Cair. Heifer International Indonesia. 2 hal Isnansetyo,  A  dan  Kurniastuty.  1995.  Teknik Kultur Phytoplankton dan Zooplankton.  Kanisius.  Yogyakarta. hal. 34-85. Kusriningrum, R. 2008. Perancangan Percobaan. Universitas Airlangga. Surabaya. hal. 43-51. Landolt, E. and Kandeler, R. 1987. Biosystematic  Investigations  in  The Family  Of  Duckweeds  (Lemnaceae). Veroff. Geobot. Inst. ETH, Zurich. 2, p 42-43.
Muhaemin,  M.,  Kaswadji,  R.F.  2010.  Biomass Nutrient Profiles of Marine Microalgae Dunaliella  salina. http://jpsmipaunsri. files.wordpress.com .21/06/2012. 4 hal. Sari,  L.  A.  2009.  Pengaruh  Penambahan  FeCl3 Terhadap Pertumbuhan Spirulina platensis yang  Dikultur  pada  Media Asal Blotong Kering. Skripsi. Fakultas Perikanan  dan  Kelautan.  Universitas Airlangga. 56 hal. Skillicorn,P.,  Spira,  W.,  Journey,  W.  1991. Duckweed Aquaculture.The World
Bank.  Emena  Technical  Department,
Agriculture  Division.  30/05/2012.  44 pp.
Susanto, R. 2002. Penerapan Pertanian Organik. Kanisius. Yogyakarta. Hal. 3-4. Vandame, E.J. 1989. Biotechnology of Vitamins, Pigments, and Growth
Factor.Elsevier Science Publishing
CO., INC. Americas, New York. p. 18.