UJI TOKSISITAS EKSTRAK KULIT JERUK LEMON (Citrus limon (L.) Osbeck) TERHADAP LARVA UDANG ( Artemia salina Leach)
Nur Hasanah, Ika Yulianti Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Kharisma Persada Tangerang Selatan, 15417
E-mail : nurhasanah@masda.ac.id

## ABSTRAK
Salah satu tanaman di Indonesia yang sangat terkenal yaitu jeruk lemon ( Citrus limon (L.) Osbeck ). Kulit  jeruk  lemon  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  flavonoid,  tanin,  steroid,  dan  triterpenoid. Senyawa  flavonoid  dan  triterpenoid  diduga  dapat  bersifat  toksik  pada  kadar  tertentu.  Untuk  itu  perlu dilakukannya uji toksisitas, salah satu pengujian toksisitas dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethaly Test (BSLT).  Aktivitas  toksik  diketahui  dari  jumlah  kematian  larva  udang  karena  pengaruh  ekstrak  pada konsentrasi yang diberikan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi toksik pada ekstrak etanol, fase n-heksana dan fase etil asetat dan mengetahui nilai LC 50 tertinggi pada ekstrak etanol, fase n-heksana dan fase etil  asetat. Penelitian  ini  menggunakan  jenis  penelitian true  eksperimental .  Sampel  yang  digunakan  adalah ekstrak  etanol  kulit  jeruk  lemon  sebagai  zat  aktif,  kemudian  di  partisi  dengan  n-heksan  dan  etil  asetat.  Lalu dibuat larutan uji 1000 ppm, 600 ppm,, 400 ppm, 200 ppm, 100 ppm, 50 ppm, 35 ppm, 15 ppm, 5 ppm dan kontrol  negatif  tanpa  larutan  ekstrak  (0  ppm).  Hasil  penelitian  ini menunjukkan  bahwa  setiap  pelarut berpotensi  sangat toksik  dengan  LC 50 =  12,88  ppm  pada  pelarut  etanol,  fase  n-heksana  memiliki  LC 50 =  1,77 ppm dan fase etil asetat memiliki LC 50 = 19,95 ppm. LC 50 tertinggi ada pada fase n-heksana dengan LC 50 = 1,77 ppm.
Kata Kunci : Kulit jeruk lemon, Artemia salina , Citrus limon, Toksisitas, BSLT

## ABSTRACT
One of the most famous plants in Indonesia is lemon (Citrus limon (L.) Osbeck). Lemon fruit is one source of vitamin C and antioxidants, lemon juice ethanol extract contains  secondary metabolite compounds flavonoids, glycosides, tannins, steroids, and triterpenoids. Flavonoids and triterpenoids may be toxic to some degree. For that it is necessary to do toxicity test, one of toxicity test by using method of Brine Shrimp Lethaly Test (BSLT). Toxic activity is known from the number of deaths of shrimp larvae (Artemia Salina Leach) due to  the  influence  of  extracts  or  natural  material  compounds  at  concentrations  given.  To  determine  the  toxic potential  of  ethanol  extract,  n-hexane  phase  and  ethyl  acetate  phase  and  to  know  the  highest  LC 50 value  in ethanol extract, n-hexane phase and ethyl acetate phase. This research use experimental research  type  with true experimental approach. The sample used was lemon peel ethanol extract as an active substance, then in partition  with n-hexane and ethyl acetate. The test  solution  is 1000 ppm, 600 ppm, 400 ppm, 200  ppm, 100 ppm, 50 ppm, 35 ppm, 15 ppm, 5 ppm and negative control  without  extract  solution  (0 ppm). Indicates that each solvent is potentially very toxic with LC 50 = 12.88 ppm in ethanol solvent, the n-hexane phase has LC 50 = 1.77 ppm and the ethyl acetate phase has LC 50 = 19.95 ppm. The highest LC 50 is in the n-hexane phase with LC 50 = 1.77 ppm.
Keywords : Lemon peel, Artemia salina, Citrus limon, Toxicity, BSLT

## PENDAHULUAN
Di Negara Asia terutama Cina, Korea dan India untuk penduduk pedesaan, obat herbal  menjadi  pilihan  pertama  untuk pengobatan.  Di  Negara  maju  seperti Australia,  Canada  (59-60%),  Amerika Serikat  (62%),  Singapura  (76%)  dan Jepang  (50%)  pun  saat  ini  cenderung beralih ke pengobatan tradisional terutama  obat  herbal  menunjukkan  gejala peningkatan yang sangat signifikan (Kurdi,  2010).  Di  Indonesia  sendiri pemanfaatan  tanaman  sebagai  bahan  obat sudah sejak lama dilakukan oleh masyarakat. Dengan keanekaragaman etnis  yang  ada,  maka  pemanfaatan tanaman  sebagai  obat  juga  semakin beranekaragam (Handayani, 2015).
Kekayaan alam Indonesia, menyimpan  berbagai  tumbuhan  yang berkhasiat  obat  dari  40  ribu  jenis tumbuhan  yang  tumbuh  di  dunia,  30  ribu diantaranya tumbuh di Indonesia.
Sebanyak  26%  yang  telah  dibudidayakan dan 74% masih tumbuh liar di hutan. Dari 26%  yang  telah  dibudidayakan,  sebanyak 940  jenis  tanaman  telah  digunakan sebagai obat tradisional, sedangkan menurut  WHO,  lebih  dari  20.000  spesies tumbuhan berkhasiat obat digunakan oleh penduduk  di  seluruh  dunia  (Arsyah, 2014).
Salah satu tanaman di Indonesia yang sangat  terkenal  yaitu  jeruk  lemon  ( Citrus limon (L.) Osbeck ). Jeruk lemon merupakan  salah  satu  bahan  alami  yang dapat  dimanfaatkan  buah  dan  kulitnya. Buah  lemon  mengandung  asam-asam yang  berperan  pada  pembentukan  rasa asam buah. Buah lemon merupakan salah satu  sumber  vitamin  C  dan  antioksidan yang  berkhasiat  bagi  kesehatan  manusia, tetapi sebenarnya buah ini juga mengandung  zat  gizi  esensial  lainnya, seperti  karbohidrat,  potassium,  folat, kalsium,  thiamin,  niacin,  vitamin  B 6 , fosfor,  magnesium,  tembaga,  riboflavin, asam pantotenant, dan senyawa fitokimia. (Nizhar,  2012).  Kulit  lemon  terdiri  dari dua  lapisan  yaitu  lapisan luar  dan lapisan dalam.    Lapisan  luar, mengandung minyak  esensial yang  terdiri  dari citral (5%) dan  limonen , α-terpineol,  geranil asetat dan linali. Lapisan dalam, mengandung  kumarin,  glikosida  dan flavonoid  (Dev,  2016).  Menurut  Chitra (2012),  ekstrak  etanol  kulit  jeruk  lemon mengandung senyawa metabolit sekunder flavonoid,  glikosida,  tanin,  steroid,  dan triterpenoid.
Senyawa  flavonoid  dan  triterpenoid diduga  dapat  bersifat  toksik  pada  kadar tertentu  (Cahyadi,  2009).  Untuk  itu  perlu dilakukannya  uji  toksisitas,  salah  satu
pengujian toksisitas dengan menggunakan metode Brine  Shrimp  Lethaly  Test (BSLT). Beberapa keuntungan
menggunakan  metode  BSLT  adalah metode yang telah teruji untuk mengamati toksisitas suatu senyawa di dalam ekstrak kasar tumbuhan dengan tingkat kepercayaan  95%,  metode  penapisan farmakologi  awal  yang  mudah,  cepat  dan murah, metode ini sering digunakan untuk pencarian  senyawa  antikanker  dan  tahap awal  isolasi    senyawa  toksik  yang terkandung dalam suatu ekstrak (Lindawati, 2006). Aktivitas toksik diketahui  dari  jumlah  kematian  larva udang  ( Artemia  Salina  Leach )  karena pengaruh  ekstrak  atau  senyawa  bahan
alam  pada  konsentrasi  yang  diberikan (Silva, 2007). Suatu ekstrak atau senyawa bahan  alam  yang  diketahui  memiliki aktivitas  toksik  melalui  metode  BSLT (nilai LC 50 < 1000 ppm) dapat dikembangkan  lebih  lanjut  sebagai  obat antikanker (Meyer,1982).
Berdasarkan  uraian  di  atas  dapat diketahui  masalah  dalam  penelitian  ini adalah masih banyak tanaman yang belum diketahui  kadar  toksisitasnya  sehingga perlu diteliti lebih lanjut. Oleh karena itu, peneliti  bermaksud  untuk  melakukan penelitian  yang  berjudul  “Uji  toksisitas ekstrak  kulit  jeruk  lemon  ( Citrus  limon (L.)  Osbeck )  Terhadap  Larva  Udang
( Artemia salina Leach )”.

## METODE
Bahan
Ekstrak  kulit  jeruk  lemon  ( Citrus limon  (L.)  Osbeck ),  Etanol  70% , telur udang  ( Artemia  salina  Leach ) , Aquadest , N-Heksan dan Etil Asetat.

## Pembuatan ekstrak etanol
400  mg  serbuk  kulit  jeruk  lemon di  maserasi  dalam  3  liter etanol  selama  3 hari. Ekstrak dievaporasi sampai diperoleh ekstrak kental.

## Pembuatan partisi ekstrak
4  gram  ekstrak  dilarutkan  dengan n-heksan  kemudian  dilarutkan  dengan  20
ml  aquadest,  setelah  larut  masukkan  ke dalam  corong  pisah  dan  tambahkan  n- heksan 30 ml, 20 ml dan 15 ml dilakukan pengocokan  sebanyak  3  kali.  Kocok hingga  rata,  sekali  –kali  buka  penutup corong  pisah  kemudian  diamkan  sampai terjadi pemisahan dari fase air dan fase n- heksan. Kemudian hasil fase air di partisi lagi dengan etil asetat sebanyak 30 ml, 20 ml  dan  15  ml  dilakukan  3  kali pengocokan.  Fase  n-heksan  dan  fase  etil etil  asetat  dievaporasi  sampai  diperoleh ekstrak kental.

## Penetasan larva udang
Untuk  penetasan  larva  udang dengan  menggunakan  botol  air  mineral yang  dibagi  menjadi  dua  bagian.  Bagian atas  penutup  botol  dimasukan  ke  bagian bawah lalu dilubangi untuk jalan masuknya  selang  yang  terhubung  dengan aerator, lalu dihidupkan aerator.
Kemudian  dituangkan  air  laut  ke  dalam botol,  selanjutnya  dituangkan  1  sendok teh telur udang, lalu didiamkan selama 48 jam.  Dipisahkan  cangkang  telur  dengan larva  yang  sehat  dan  bergerak  aktif  ke dalam wadah yang berbeda.

## Pembuatan  konsentrasi  ekstrak  yang akan diuji
Ekstrak  kental  kulit  jeruk  lemon ( Citrus  limon  (L.)  Osbeck )  ditimbang sebanyak  200  mg,  dilarutkan  dengan  air laut  sebanyak  100  mL.  larutan  tersebut
digunakan  sebagai  larutan  induk  dengan konsentrasi  2000  ppm.  Konsentrasi  yang digunakan untuk pengujian yang dilakukan secara dua kali (duplo) ini yaitu 1000 ppm, 600 ppm, 400 ppm, 200 ppm, 100 ppm, 50 ppm, 35 ppm, 15 ppm dan 5 ppm.

## Uji toksisitas dengan metode BSLT
Pada  uji  BSLT  akan  digunakan tabung  reaksi.  Langkah  pertama  yang dilakukan  adalah  membagi  9  kelompok tabung  untuk  masing-masing  konsentrasi dan  1  kelompok  untuk  kontrol  negatif. Percobaan  ini  dilakukan  pengulangan  2 (duplo).  10  ekor  larva  udang  dimasukkan kedalam  tabung  reaksi  yang  berisi masing-masing  10  ml  pada  setiap konsentrasi.  Kemudian  tabung  dibiarkan di  udara  terbuka  selama  24  jam.  Lalu lakukan  perhitungan  larva  yang  mati.

## HASIL
Uji Toksisitas Ekstrak Kulit Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
a. Ekstrak Etanol Kulit Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
Tabel 1.  Hasil Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Kulit Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck) dengan Nilai LC 50. Konsentrasi (ppm) %Kematian Probit Nilai LC 50 (ppm) 0 0 0 0,0
5 40
4,7467
12,88 15 45
4,8743 35 90 6,2816 50 100 8,719 100 100 8,719 200 100 8,719 400 100 8,719 600 100 8,719 1000 100 8,719
Gambar 1. Grafik Analisis Regresi Linier Ekstrak Etanol Kulit Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
Berdasarkan  tabel  1.  hasil  uji toksisitas  ekstrak  etanol  kulit  jeruk lemon (Citrus  limon  (L.)  Osbeck) dengan  nilai  LC 50 ,  terdapat  berbagai macam konsentrasi sehingga menghasilkan  persen  kematian  dan probit  yang  berbeda  pula.  Pada konsentrasi  0  ppm  yang  digunakan sebagai  kontrol  negatif,  menghasilkan persen kematian sebanyak 0%, probitnya  yaitu  0  dan  nilai  LC 50 yaitu
0,0  ppm  karena  pada  konsentrasi  0 ppm tidak menggunakan ekstrak. Pada konsentrasi  5  ppm,  menghasilkan persen  kematian  sebanyak  40%  dan probitnya yaitu 4,7467.
Pada
konsentrasi    15  ppm,  menghasilkan persen  kematian  sebanyak  45%  dan
probitnya yaitu 4,8743. Pada
konsentrasi  35  ppm,  menghasilkan persen  kematian  sebanyak  90%  dan probitnya yaitu 6,2816. Pada
konsentrasi  50  ppm,  100  ppm,  200 ppm,  400  ppm,  600  ppm  dan  1000 ppm,  menghasilkan  persen  kematian 100%  dan  probitnya  8,719.  Pada konsentrasi  5  ppm,  15  ppm,  35  ppm, 50 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 400 ppm, 600  ppm  dan  1000  ppm  menghasilkan nilai LC 50 sebesar 12,88 ppm.
Berdasarkan  gambar  1.  grafik analisis  regresi  linier  ekstrak  etanol kulit  jeruk  lemon (Citrus  limon  (L.) Osbeck) ,  diperoleh  persamaan  regresi linier dengan nilai persamaan yaitu y = 2,750x +  1,936  dan  nilai  R 2 =  0,816.
b. Fase n-Heksana Ekstrak Kulit Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
Tabel 2. Hasil Uji Toksisitas Fase n-Heksana Ekstrak Kulit Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck) dengan Nilai LC 50
Gambar 2. Grafik Analisis Regresi Linier Fase n-Heksana Ekstrak Kulit Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
Berdasarkan  tabel  2.  hasil  uji toksisitas  fase  n-heksana  ekstrak  kulit jeruk lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
dengan  nilai  LC 50 ,  terdapat  berbagai macam konsentrasi sehingga menghasilkan  persen  kematian  dan probit  yang  berbeda  pula.  Pada konsentrasi  0  ppm  yang  digunakan sebagai  kontrol  negatif,  menghasilkan persen kematian sebanyak 0%,
probitnya  yaitu  0  dan  nilai  LC 50 yaitu 0,0  ppm  karena  pada  konsentrasi  0 ppm tidak menggunakan ekstrak. Pada konsentrasi  5  ppm,  15  ppm,  35  ppm, 50 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 400 ppm, 600 ppm dan 1000 ppm, menghasilkan persen  kematian  100%,  probitnya 8,719 dan nilai LC 50 sebesar 1,77 ppm. Berdasarkan  gambar  2  grafik analisis  regresi  linier  fase  n-heksana
Konsentrasi (ppm) % Kematian Probit Nilai LC 50 (ppm) 0 0 0 0,0
5
100 8,719 1,77 15
100 8,719 35 100 8,719 50 100 8,719 100 100 8,719 200 100 8,719 400 100 8,719 600 100 8,719 1000 100 8,719
ekstrak kulit jeruk lemon (Citrus limon (L.)  Osbeck ,  diperoleh  persamaan
regresi  linier dengan  nilai  persamaan
yaitu  y = 1,876x + 4,515 dan nilai R 2 = 0,424.
c. Fase Etil Asetat Ekstrak Kulit Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
Tabel 3. Hasil Uji Toksisitas Fase Etil Asetat Kulit Jeruk Lemon ( Citrus limon (L.) Osbeck ) dengan Nilai LC 50 Konsentrasi (ppm) %Kematian Probit Nilai LC 50 (ppm) 0 0 0 0,0
5 15
3,9636
19,95 15
15 3,9636 35 15 3,9636 50 100 8,719 100 100 8,719 200 100 8,719 400 100 8,719 600 100 8,719 1000 100 8,719
Gambar 3. Grafik Analisis Regresi Linier Fase Etil Asetat Ekstrak Kulit Jeruk Lemon ( Citrus limon (L.) Osbec
Berdasarkan  tabel  3.  hasil  uji toksisitas  fase  etil  asetat  ekstrak  kulit jeruk lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
dengan  nilai  LC 50 ,  terdapat  berbagai macam konsentrasi sehingga menghasilkan  persen  kematian  dan probit  yang  berbeda  pula.  Pada konsentrasi  0  ppm  yang  digunakan
sebagai  kontrol  negatif,  menghasilkan persen kematian sebanyak 0%, probitnya  yaitu  0  dan  nilai  LC 50 yaitu 0,0  ppm  karena  pada  konsentrasi  0 ppm tidak menggunakan ekstrak. Pada konsentrasi  5  ppm,  15  ppm  dan  35 ppm  menghasilkan  persen  kematian sebanyak  15%  dan  probitnya  3,9636.
Pada  konsentrasi  50  ppm,  100  ppm, 200 ppm, 400 ppm, 600 ppm dan 1000 ppm,  menghasilkan  persen  kematian 100%  dan  probitnya  8,719.  Pada konsentrasi  5  ppm,  15  ppm,  35  ppm, 50 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 400 ppm, 600  ppm  dan  1000  ppm  menghasilkan nilai LC 50 sebesar 19,95 ppm.
Berdasarkan  gambar  3.  grafik analisis  regresi  linier  fase  etil  asetat ekstrak kulit jeruk lemon (Citrus limon (L.)  Osbeck) diperoleh  persamaan regresi  linier  dengan  nilai  persamaan yaitu  y = 2,986x + 1,115 dan nilai R 2 = 0,808.

## DISKUSI
Uji Toksisitas Ekstrak Kulit Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
Uji  toksisitas  pada  penelitian  ini menggunakan  metode  BSLT (Brine
Shrimp  Lethality  Test) .  Metode  ini menggunakan  hewan  coba  berupa  larva udang  ( Artemia  salina  Leach )  karena spesies  ini  memiliki  kesamaan  tipe  DNA dan  RNA  dengan  mamalia.  Dimana  tipe DNA- dependent RNA polymerase yang dimiliki  oleh Artemia  salina  Leach sama dengan mamalia.
Adapun  fungsi  yang  dimiliki  oleh DNA- dependent RNA polymerase yaitu untuk  pembentukan  protein  dan  protein merupakan  komponen  utama  semua  sel.
Jadi ketika DNA- dependent RNA
polymerase dihambat  maka  tidak  akan terjadi  pembukaan  pilinan  DNA  menjadi RNA,  lalu  tidak  terjadi  juga  penerjemah kodon  pada  tiap-tiap  kodon  yang  ada  di RNA  tersebut  sehingga  tidak  dapat terbentuk  protein  baru.  Penghentian pembentukan protein ini akan menyebabkan gangguan metabolisme dan
akhirnya  menyebabkan  kematian  sel (Reskianigsih, 2014).
Uji toksisitas dilakukan untuk mengetahui  LC 50 pada  suatu  bahan  alam. Kategori  LC 50 adalah  LC 50 ≥  1000  ppm termasuk  dalam  kategori  tidak  toksik, LC 50 30-1000  ppm  termasuk  dalam kategori  toksik  dan  LC 50 ≤  30  ppm termasuk  dalam  kategori  sangat  toksik (McLauughlin, 1998).
Sampel yang digunakan yaitu ekstrak kulit  jeruk  lemon  ( Citrus  limon  (L.) Osbeck )  yang  diperoleh  menggunakan metode  ekstraksi.  Metode  ekstraksi  yang digunakan adalah maserasi dengan pelarut etanol. Serbuk simplisia kulit jeruk lemon sebanyak  400  gram  direndam  dengan etanol  selama  3  hari  kemudian  disaring, lalu filtrat dikentalkan dengan water bath hingga  menjadi  ekstrak  kental  kemudian ekstrak kental di partisi dengan n-heksana dan  etil  asetat.  Adapun  penggunaan pelarut  berdasarkan  tingkat  polaritas.
Pelarut polar menggunakan etanol, pelarut semi polar yang digunakan etil asetat dan pelarut  non  polar  yang  digunakan  n- heksan.  Pemilihan  pelarut  yang  berbeda ini  dimaksudkan  agar  senyawa-senyawa yang  memiliki  kepolaran  berbeda  dapat larut  ke dalam pelarut yang sesuai.
Pemilihan  Etanol  sebagai  perlarut karena  lebih  efektif,  kapang  dan  bakteri sulit  tumbuh  dalam  etanol  diatas  20%, tidak  beracun,  netral,  absorbsinya  baik, etanol  dapat  bercampur  dengan  air  pada segala perbandingan, panas yang diperlukan untuk pemekatan lebih sedikit.
Etanol  dapat  melarutkan  alkaloid, kurkumin,  kumarin,  glikosida,  flavonoid, steroid,  lemak,  tanin  dan  saponin  hanya sedikit  larut  (Sa’adah,  2015).  Pemilihan n-heksana  sebagai  pelarut  karena  mudah diuapkan, relatif aman dan murah. Pelarut n-heksan dapat digunakan untuk melarutkan  senyawa  metabolit  sekunder seperti  steroid,  lemak,  sterol,  kumarin, dan terpenoid (Tanaya, 2015).
Adapun  pemilihan  etil  asetat  sebagai pelarut  karena  mudah  menguap  (bersifat volatil),  berwujud  cairan  yang  tidak beracun,  tidak  berwarna  dan  memiliki aroma khas (Ocktaviandini, 2015). Pelarut etil asetat dapat digunakan untuk melarutkan  senyawa  metabolit  sekunder seperti  flavonoid,  triterpenoid  dan  tanin (Tanaya, 2015).
Pada  penelitian  ini  menggunakan berbagai konsentrasi yaitu 1000 ppm, 600 ppm,  400  ppm,  200  ppm,  100  ppm,  50 ppm, 35 ppm, 15 ppm, 5 ppm dan 0 ppm (kontrol  negatif)  untuk  mengetahui  pada konsentrasi  mana  yang  memiliki  LC 50 ( Lethal  Concentration 50).  Penelitian  ini sudah  sesuai  dengan  teori  karena  untuk mendapat  ekstrak  yang  dinyatakan  toksik menggunakan  konsentrasi  dibawah  1000 ppm.
a. Ekstrak  Etanol  Kulit  Jeruk  Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
Hasil skrining fitokimia menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol kulit jeruk lemon mengandung flavonoid,  triterpenoid,  steroid  dan tanin.  Berdasarkan  penelitian  yang dilakukan oleh Chitra (2012), senyawa metabolit sekunder pada ekstrak etanol kulit  jeruk  lemon  adalah  flavonoid, glikosida, tanin, steroid/ triterpenoid.
Berdasarkan    tabel  1.  hasil  uji toksisitas  ekstrak  etanol  kulit  jeruk lemon (Citrus  limon  (L.)  Osbeck) dengan  nilai  LC 50 ,  terdapat  berbagai macam konsentrasi sehingga menghasilkan  persen  kematian  dan probit  yang  berbeda  pula.  Pada konsentrasi  0  ppm  yang  digunakan sebagai  kontrol  negatif,  menghasilkan persen kematian sebanyak 0%, probitnya  yaitu  0  dan  nilai  LC 50 yaitu
0,0  ppm  karena  pada  konsentrasi  0 ppm tidak menggunakan ekstrak.
Pada konsentrasi 5 ppm, menghasilkan persen kematian sebanyak  40%  dan  probitnya  yaitu 4,7467.  Pada  konsentrasi  15  ppm, menghasilkan persen kematian sebanyak  45%  dan  probitnya  yaitu 4,8743.  Pada  konsentrasi  35  ppm, menghasilkan persen kematian sebanyak  90%  dan  probitnya  yaitu 6,2816.  Pada  konsentrasi  50  ppm,  100 ppm, 200 ppm, 400 ppm, 600 ppm dan 1000 ppm, menghasilkan persen kematian 100% dan probitnya 8,719.
Pada konsentrasi 5 ppm, 15 ppm,
35  ppm,  50  ppm,  100  ppm,  200  ppm,
400  ppm,  600  ppm  dan  1000  ppm menghasilkan nilai  LC 50 sebesar 12,88 ppm,  termasuk  kategori  sangat  toksik. Hal  ini  sesuai  dengan  McLauughlin (1998) yang menyatakan bahwa LC 50 ≤
30  ppm  termasuk  dalam  kategori sangat  toksik.  Perhitungan  LC 50 dapat dilihat pada lampiran 18.
Berdasarkan  gambar  1  grafik analisis  regresi  linier  ekstrak  etanol kulit  jeruk  lemon (Citrus  limon  (L.) Osbeck) ,  diperoleh  persamaan  regresi linier dengan nilai persamaan yaitu y = 2,750x + 1,936 dan nilai R 2 = 0,816.
Pada  penelitian  ini  didapatkan bahwa  ekstrak  kulit  jeruk  lemon mempunyai  potensi  toksisitas.  Hal
tersebut  berkaitan  dengan  senyawa yang  terdapat  dalam  kulit  jeruk  lemon yang  dapat  menyebabkan  kematian larva. Mekanisme kematian pada larva disebabkan  oleh  adanya  flavonoid yang berperan sebagai stomach poisoning (racun  perut).  Proses  ini menyebabkan larva mengalami gangguan pada saluran cernanya.
Selain itu, senyawa ini menghambat reseptor rasa yang berada di  permukaan  mulut  larva  sehingga larva  tidak  bisa  mendeteksi  makanan dan  akhirnya  mati  karena  kelaparan (Reskianingsih,  2014).  Berdasarkan dari pernyataan tersebut maka senyawa yang  terdapat  pada  ekstrak  kulit  jeruk lemon  yang  berperan  sebagai  racun perut  pada  larva  udang  sehingga menyebabkan  kematian  larva  adalah flavonoid.
b. Fase n-Heksana Ekstrak Kulit Jeruk Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
Berdasarkan    tabel  2  hasil  uji toksisitas  fase  n-heksana  ekstrak  kulit jeruk lemon (Citrus limon (L.) Osbeck) dengan  nilai  LC 50 ,  terdapat  berbagai macam konsentrasi sehingga menghasilkan  persen  kematian  dan probit yang berbeda pula.
Pada  konsentrasi  0  ppm  yang digunakan  sebagai  kontrol  negatif, menghasilkan persen kematian
sebanyak  0%,  probitnya  yaitu  0  dan nilai  LC 50 yaitu  0,0  ppm  karena  pada konsentrasi  0  ppm tidak  menggunakan ekstrak.  Pada  konsentrasi  5  ppm,  15 ppm,  35  ppm,  50  ppm,  100  ppm,  200 ppm,  400  ppm,  600  ppm  dan  1000 ppm,  menghasilkan  persen  kematian 100%, probitnya  8,719 dan nilai  LC 50 sebesar  1,77  ppm  termasuk  ke  dalam kategori  sangat  toksik.  Hal  ini  sesuai dengan  McLauughlin  (1998)  bahwa LC 50 ≤  30  ppm  termasuk  dalam kategori  sangat  toksik.  Perhitungan LC 50 dapat dilihat pada lampiran 18.
Pada  fase  n-heksana  didapatkan bahwa  kematian larva  mencapai  100% hal  ini  diduga  bahwa  senyawa  non polar  dapat  larut  sempurna.  Senyawa non polar pada kulit jeruk lemon yang penyebabkan  kematian  larva  adalah triterpenoid. Tritepenoid berperan sebagai stomach  poisoning atau  racun perut (Nguyen, 1999).
Senyawa  toksik  yang  ada  pada ekstrak  dapat  masuk  melalui    bagian mulut  larva  dan  diabsorbsi  masuk  ke dalam  saluran  pencernaan  terjadi proses  absorbsi  melalui  membran  sel. Setelah  proses  absorbsi  dilanjutkan dengan  distribusi  senyawa  toksik  ke dalam tubuh larva. Perubahan gradient konsentrasi  yang  drastic  antara  di dalam dan diluar sel yang menyebabkan  senyawa  toksik  mampu
meyebar  dengan  baik  ke  dalam  tubuh larva.  Efek  kerusakan  metabolisme yang  ditimbulkan  terjadi  secara  cepat dapat  dideteksi  dalam  waktu  24  jam hingga  menyebabkan  50%  kematian larva (Ningsyah, et al, 2015).
c. Fase Etil Asetat Ekstrak Kulit Jeruk
Lemon (Citrus limon (L.) Osbeck)
Berdasarkan  tabel  4.3  hasil  uji toksisitas  fase  etil  asetat  ekstrak  kulit jeruk lemon (Citrus limon (L.) Osbeck) dengan  nilai  LC 50 ,  terdapat  berbagai macam konsentrasi sehingga menghasilkan  persen  kematian  dan probit yang berbeda pula.
Pada  konsentrasi  0  ppm  yang digunakan  sebagai  kontrol  negatif, menghasilkan persen kematian sebanyak  0%,  probitnya  yaitu  0  dan nilai  LC 50 yaitu  0,0  ppm  karena  pada konsentrasi  0  ppm tidak  menggunakan ekstrak.  Pada  konsentrasi  5  ppm,  15 ppm dan 35 ppm menghasilkan persen kematian sebanyak 15% dan probitnya 3,9636.  Pada  konsentrasi  50  ppm,  100 ppm, 200 ppm, 400 ppm, 600 ppm dan 1000 ppm, menghasilkan persen kematian 100% dan probitnya 8,719.
Pada konsentrasi 5 ppm, 15 ppm,
35  ppm,  50  ppm,  100  ppm,  200  ppm, 400  ppm,  600  ppm  dan  1000  ppm menghasilkan nilai  LC 50 sebesar 19,95 ppm  termasuk  kategori  sangat  toksik.
Hal  ini  sesuai  dengan  McLauughlin (1998) bahwa LC 50 ≤ 30 ppm termasuk dalam kategori sangat toksik.
Pada  fase  etil  asetat  terdapat senyawa  semi  polar  yang  bersifat toksik  di  duga  dapat  menyebabkan kematian adalah  tanin.  Tanin  pada umumnya menghambat aktivitas enzim dengan jalan membentuk ikatan kompleks  dengan  protein  pada  enzim substrat  yang  dapat  menyebabkan gangguan  pencernaan  dan  merusak dinding sel, sehingga mekanisme kerja tanin  sebagai  racun  perut  (Sumilih, 2010).
Setiap  pelarut  berpotensi  sangat toksik  tetapi  LC 50 tertinggi  ada  pada pelarut  n-heksan  dengan  LC 50 =  1,77 ppm dapat  dilihat  pada  tabel  4.3  hasil uji  toksisitas  fase  n-heksana  ekstrak kulit  jeruk  lemon (Citrus  limon  (L.) Osbeck) dengan  nilai  LC 50 .  Alasan ekstrak  kulit  jeruk  lemon  memiliki tingkat toksisitas tertinggi pada pelarut non polar karena senyawa ekstrak kulit jeruk lemon yang menyebabkan toksik dapat  larut  dengan  baik  pada  pelarut non polar.
Berdasarkan  hasil  uji  toksisitas ekstrak kulit jeruk lemon ( Citrus limon (L.)  Osbeck )  menunjukkan  hasil  yang sangat  toksik  sehingga  perlu  adanya perhatian  mengenai  penggunaan  kulit jeruk  lemon  sebagai  obat  tradisional. Selain itu, perlu dilakukan uji keamanan  dosis  penggunaan  kulit jeruk  lemon  sehingga  dapat  dijadikan obat tradisional.
Menurut PERMENKES No.760/MENKES/PER/IX/ 1992 tentang Fitofarmaka, menyatakan bahwa obat tradisional yang didaftarkan sebagai jamu harus melengkapi  uji  toksisitas  dan  uji farmakologi eksperimental untuk memastikan  keamanan  bahan  alam tersebut.  Hal  ini  sesuai  dengan  meyer (1982)  yang  menyatakan  bahwa  suatu ekstrak atau senyawa bahan alam yang diketahui  memiliki  toksik  melalui metode  BSLT  (nilai  LC 50 <1000  ppm) dapat dikembangkan lebih lanjut sebagai obat antikanker.
Berdasarkan  pernyataan  tersebut maka,  ekstrak  kulit  jeruk  lemon  ini dapat  di  kembangkan  sebagai  obat antikanker di masa yang akan datang.

## SIMPULAN
Dari  penelitian  yang  telah  dilakukan terhadap  ekstrak  kulit  jeruk  lemon  ini, dapat  diambil  kesimpulan  bahwa  pada
ekstrak  kulit  jeruk  lemon  ( Citrus  limon (L.)  Osbeck )  memiliki  toksisitas  terhadap larva  udang  ( Artemia  salina  Leach ),
sedangkan  pada  ekstrak  etanol,  fase  n- heksan  dan  fase  etil  asetat  memiliki sangat  toksik  dengan  nilai  LC 50 12,88 ppm, LC 50 1,77 ppm dan LC 50 19,95 ppm,
dan pada fase n-heksan memiliki toksisitas  paling  tinggi  dengan  nilai  LC 50 sebesar 1,77 ppm yang termasuk kategori sangat toksik.
.

## DAFTAR PUSTAKA
Arsyah  CD.  2014. Kajian  Etnobotani Tanaman Obat Herbal Dan Pemanfaatannya  Dalam  Usaha
Menunjang  Kesehatan  Keluarga Di  Dusun  Turgo,  Purwobinangun, Pake,  Sleman. [Skripsi].  Fakultas Sains  dan  Teknologi.  Universitas Islam  Negeri  Sunan  Kalijaga.
Yogyakarta.
Cahyadi  R.  2009. Uji  Toksisitas  Akut Ekstrak Etanol Buah Pare (Momordica Charantia L) Terhadap  Larva  Artemia  Salina Leach  Dengan  Metode  Brine Shrimp  Lethality  Test  (BST) . [Skripsi].  Fakultas  Kedokteran. Universitas Diponegoro. Semarang Chitra, D BR Ginting. 2012. Karakteristik Simplisia  Dan  Skrining  Fitokimia Serta  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Etanol  Dari  Beberapa
Jenis Kulit Jeruk . [Skripsi]. Fakultas Farmasi. Universitas
Sumatera Utara. Medan. Dev  C,  Rishi  Shrivastava  RN.  2016. Basketful Benefit Of Citrus Limon. J.  Pharm  Journal .  7  (6). Hal 1-6
Handayani A. 2015. Pemanfaatan
Tumbuhan  Berkhasiat  Obat  Oleh Masyarakat  Sekitar  Cagar  Alam Gunug Simpang, Jawa Barat. Pros Sem  Nas  Masy  Biodiv  Indon Journal . Vol.1 (6). Hal.1425-1432
Lisdawati  V,  Wiryowidagdo  S  dan Kardono  LB.  2006.  Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT) Dari
Berbagai  Fraksi  Ekstrak  Daging Buah  Dan  Kulit  Biji  Mahkota
Dewa  ( Phaleri  macrocarpa ). Bul. Penelitian  Kesehatan .  Vol.34  (3). Hal.111-118.
McLauughlin  JL,  Rogers  LL.  1998.  The Use  Of  Biological  Assays  To Evaluate  Botanicals.  USA. Drug Information  Journal .  Vol.32.  Hal 512-524.
Meyer,  B.N.,  Ferrigni,N.R.,  Putnam,J.E., Jacobsen,L.B,  Nichols,D.E.,  dan McLaughlin,J.L.1982. Brine Shrimp:A Convenient General Bioassay for Active Plant Constituents. Planta Medica Journal Vol 45 (5). Hal. 31-34 Ningdyah A R., Alimuddin A H., jayuska A.  Uji  Toksisitas  Dengan  Metode BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality Test )  Terhadap  Hasil  Fraksinasi Ekstrak Kulit Buah Tampoi ( Baccaurea  macrocarpa ). JKK Journal . Vol. 4 (1). Hal/75-83. Nizhar  M  Ullyl.  2012. Level  Optimum Sari  Buah  Lemon  (Citrus  limon) sebagai  bahan  penggumpal  pada pembentukan  curd  keju  cottage . [Skripsi].  Fakultas  Peternakan.
Universitas Hasanuddin. Makasar.
Ocktaviandini M. 2015. Kajian Perbedaan  Konsentrasi  Pelarut Etil Asetat Terhadap Karakteristik Ekstrak  Zat  Warna  Dari  Sabut
Kelapa (Cocos nucifera L) .
[Skripsi]. Fakultas Teknik. Universitas Pasundan. Bandung
Permenkes RI. 1992. Fitofarmaka .
Menteri Kesehatan Republik
Indonesia. Jakarta Reskianingsih  A.  2014. Uji  Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Buah
Phaleria macrocarpa (scheef) Boerl  Terhadap  Larva  Artemia salina  Leach  Dengan  Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) . [Skripsi]. Fakultas
Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan.
Jakarta.
Sa’adah  H,  Nurhasnawati  H.  2015.
Perbandingan  Pelarut  Etanol  dan Air  Pada  Pembuatan  Ekstrak Umbi  Bawang  Tiwai  (Eleutherine Americana  Merr)  Menggunakan Metode  Maserasi. Jurnal  Ilmiah Manuntung .  Vol  1  (2).  Hal.149-
153.
Silva,T.M., Nascimento,R.J., Batista,
M.B.,Agra,M.F.,dan  Camara,C.A. 2007.  Brine  Shrimp  Bioassay  Of Some  Species  Of  Solanum  From Northeastern Brazil. Revista Brasileirade Farmacognosia . 17(1). Hal.35-38 Sumilih S., Ambarwati, dan Dwi A. 2010. Efektivitas  Ekstrak  Lempuyang
Wangi ( Zingiber aromaticum
Val.)  dalam  Membunuh  Larva
Aedes  aegypti . Jurnal  Kesehatan . Vol 3(10). Hal. 78-88.
Tanaya  V,  Retnowati  R,  Suratno.  2015.
Fraksi  Semi  Polar  Dari  Daun Mangga Kasturi ( Mangifera
casturi  Kosterm ). Kimia  Student Journal .  Vol  1  (1).  Hal.  778-784