## Studi Recovery Dutasteride dalam Pelarut Organik terhadap Dutasteride Terlarut dalam Plasma Darah Manusia

## Study of Recovery of Dutasteride in Organic Solvents against Dutasteride Dissolved in Human Blood Plasma
Marius Agung Sasmita Jati 1 , Heni Febriani 2* , Eva Runi Khristiani 3 1 Program Studi D3 Teknologi Bank Darah STIKES Wira Husada | agungsj85@gmail.com 2 Program Studi Kesehatan Masyarakat S1 STIKES Wira Husada | febrianiheni1987@gmail.com 3 Program Studi D3 Teknologi Bank Darah STIKES Wira Husada | khristianieva@gmail.com *Korespondensi Penulis : febrianiheni1987@gmail.com
Abstrak
Latar belakang: Obat Dutasteride tergolong dalam obat golongan keras, yang merupakan obat yang tidak boleh diberikan pada wanita dan wanita hamil memberikan cacat pada bayi laki-laki, merupakan salah satu obat yang dilarang dikonsumsi saat donor darah dan jika seseorang ingin mendonorkan darah harus menghentikan minimal 6 bulan sebelum donor. Belum ada penelitian yang menggunakan Spektrofotometer UV-Vis untuk menganalisis residu obat Dutasteride dalam plasma darah. Pengujian secara kualitatif dan kuantitatif obat Dutasteride dalam plasma darah manusia menggunakan Spektrofotometer UV-Vis dan mencari recovery kadar dari ekstraksi 2 tahap.
Tujuan: Melakukan studi recovery kadar Dutasteride dalam plasma darah dengan metode yang diusulkan, menggunakan Spektrofotometer UV-Vis Metode: Penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimental  (bioanalisis)  yaitu  dengan  menggunakan  instrumen  Spektrofotometer  UV-Vis untuk menguji kadar obat Dutasteride secara kualitatif terdapat dalam plasma darah Hasil: Didapat yaitu recovery t otal sebesar 64,992%. Ekstraksi dan penambahan reagen BTB dapat menyeleksi senyawa yang tidak dianalisis dalam penelitian ini Kesimpulan: Studi  Kualitatif  dan  Kuantitatif  yang  dilakukan  menunjukkan  bahwa  Spektrofotometer  UV-Vis  dapat  digunakan  untuk memeriksa kadar 0,006 ppm Dutasteride dan penggunaan reagen BTB dapat berfungsi untuk menyeleksi puncak yang tidak dianalsis.
Kata Kunci: Dutasteride ; Spektrofotometer UV-Vis; Recovery

## Abstract
Introduction: Breastfeeding is a natural thing experienced after the birth process. Types of industrial workplaces have different characteristics in terms of the kind of work and lactation infrastructure for workers. Labour is one type of female worker at risk of stopping breastfeeding due to the many inhibiting factors in the workplace. These barriers will affect their decision to continue breastfeeding exclusively or not. Objective: Conducted a recovery study of Dutasteride levels in blood plasma with the proposed method, using a UV-Vis Spectrophotometer. Method: This study uses a quantitative approach and a cross-sectional design. Sixty-eight of the research respondents were female workers in the manufacturing industry who filled out a questionnaire distributed online. The study was conducted from July – September 2022. The analysis was performed using the chi-square test to examine the significant relationship between work shift variables, time flexibility, and lactation space on exclusive breastfeeding variables.
Result: The results of the study found that breastfeeding breaks (p-value 0.001, OR = 9.211), and lactation rooms (p-value 0.0004, OR = 6.067) had a significant relationship with the continuation of exclusive breastfeeding to female workers in the industry.
Conclusion:  The  qualitative  and  quantitative  studies  conducted  showed  that  the  UV-Vis  Spectrophotometer  could  be  used  to  measure Dutasteride 0.006 ppm levels and the use of the BTB reagent could serve to select peaks that were not analyzed.
Keywords: Dutasteride; Spectrophotometer UV-Vis; Recovery

## ISSN 2597– 6052
DOI: https://doi.org/10.56338/mppki.v6i8.3502

## MPPKI Media Publikasi Promosi Kesehatan Indonesia The Indonesian Journal of Health Promotion
Research Articles
Open Access

## PENDAHULUAN
Obat Dutasteride merupakan  obat  yang  sering  digunakan  untuk  untuk  pengobatan,  pencegahan  terapi perkembangan  Benign  Prostatic  Hyperplasia  (BPH)  dengan mengurangi  gejala  yang  muncul, mengurangi  ukuran prostat  (volume),  meningkatkan  kecepatan  aliran  urin,  mengurangi  risiko  retensi  urin  akut  dan  mengurangi pembedahan  akibat  BPH.  Dalam  kombinasi  dengan  alfa  bloker  tamsulosin,  diindikasikan  untuk  pengobatan simtomatik BPH moderat sampai berat pada pria dengan pembesaran prostat (1). Pada beberapa kasus untuk pasien yang mengalami kerontokan rambut juga menggunakannya (2), pada beberapa kasus juga diujikan kepada pasien pria dengan gejala Androgenetic Alopecia yang terbukti efektif (3). Dutasteride merupakan obat golongan keras yang penggunaanya dalam pengawasan dokter. Efek samping yang ditimbulkan dari obat ini secara umum yaitu impotensi, terganggunya ejakulasi, potensi kanker  payudara, pasien mengalami  hipersensitivitas, gangguan psikologis. Pada tahun  2020  permasalahan  mengenai  obat  ini  timbul  kembali,  yaitu  pada  saat  terjadinya  pandemi  COVID-19  dan tingginya permintaan untuk donor plasma darah ( Donor Plasma Konvalesen) dari penyintas COVID-19 (4). Inilah yang  menjadi  perhatian  utama  dalam  penelitian  ini.  Konfirmasi  mengenai  studi  recovery  atau  studi  mengenai kandungan Dutasteride setelah perlakuan ekstraksi dalam plasma darah belum pernah dikaji. Hal ini juga menjadi perhatian  utama  selama  kurun  waktu  hingga  tahun  2022,  karena  Dutasteride  mempunyai  efek  yang  berbahaya tertutama untuk janin laki-laki dan mempunyai kemampuan retensi serum yang akan diberikan untuk pasien (5).
Penggunaan  Obat  Dutasteride  biasanya  bersamaan  dengan  Tamsulosin  atau  Alfuzosin.  Pada  penggunaan Dutasteride dengan Tamsulosin (6) yang berfungsi antagonis selektif pada adrenoseptor α-1A dan α-1B di prostat, kapsul prostat, uretra prostat, dan leher kandung kemih. Sedangkan untuk Dutasteride dan Alfuzosin (7) merupakan alfa-adrenergik  blocker  [1,2]  yang  berfungsi  melemaskan  otot-otot  di  prostat  dan  leher  kandung  kemih,  sehingga lebih mudah untuk buang air kecil. Ini digunakan untuk meningkatkan buang air kecil pada pria dengan hiperplasia prostat jinak.
Dutasteride dijadikan  pilihan  yang  rasional  untuk  monoterapi  yaitu  pengobatan  gejala  Benign  Prostatic Hyperplasia  (BPH)  pada  pria  dengan  pembesaran  prostat.  Diterapkan  juga  untuk  Terapi  kombinasi  dengan  alpha blocker ,  tamsulosin,  diindikasikan  untuk  pengobatan  BPH  simtomatik  sedang  hingga  berat  pada  pria  dengan pembesaran  prostat.  Dapat  juga  diberikan  sendiri  atau  dalam  kombinasi  dengan  alpha  blocker,  tamsulosin,  telah terbukti mengurangi ukuran prostat, meningkatkan aliran urin dan gejala BPH. Dutasteride yang diberikan sebagai monoterapi  telah  terbukti  mengurangi  risiko  retensi  urin  akut  (AUR)  dan  kebutuhan  untuk  operasi  BPH.  Terapi kombinasi juga telah terbukti secara signifikan terhadap monoterapi tamsulosin tetapi bukan monoterapi dutasteride dalam mengurangi risiko relatif operasi terkait AUR atau BPH (8).
Penggunaan  obat  Dutasteride  hanya  untuk  pria.  Paparan  Risiko  terjadi  pada  Wanita  dan  pada  Janin  Pria. Dutasteride  diserap  melalui  kulit,  sehingga  wanita  yang  sedang  hamil  tidak  boleh  terpapar  Dutasteride  dalam darahnya.  Hal  ini  mengakibatkan  tidak  bolehnya  pasien  yang  mempunyai  terapi  Dutasteride  untuk  mendonorkan darahnya (2). Apabila terdonorkan maka penerima donor (wanita hamil) akan mempunyai anak laki-laki yang cacat.
Secara teori Dutasteride mengalami metabolisme secara ekstensif di hati oleh isoenzim sitokrom P450 (CYP) CYP3A4  dan  CYP3A5.  Dua  metabolit  minor  (6,4′-dihydroxydutasteride  dan  15-hydroxydutasteride)  dan  tiga metabolit  utama  (4′-hydroxydutasteride,  1,2-dihydrodutasteride,  dan  6-hydroxydutasteride)  diidentifikasi  ada  di dalam  serum  manusia.  Dari  metabolit  ini,  hanya  6-beta-hydroxydutasteride  yang  mempertahankan  aktivitas  yang sebanding dengan dutasteride. Dutasteride dan metabolitnya terutama diekskresikan dalam tinja (5% tidak berubah dan 40% sebagai metabolit). Kurang dari 1% dutasteride ditemukan tidak berubah dalam urin dan 55% dari dosis tidak terhitung. Pada kondisi mapan, waktu paruh eliminasi terminal dutasteride kira-kira lima minggu. Konsentrasi serum mencapai 65% keadaan stabil setelah pemberian dosis harian selama satu bulan dan 90% setelah tiga bulan dan tetap dapat dideteksi hingga empat hingga enam bulan setelah penghentian pengobatan (9).
Penelitian mengenai metode bioanalisis ini terutama kandungan zat obat pada plasma darah sudah banyak dilakukan.  Alat  yang  digunakan  berupa  Spektrofotometer  UV-Vis.  Penelitian  mengenai  Dutasteride  yang  terlarut dalam pelarut organik menyerupai fisiologis manusia juga telah dilakukan (10), menggunakan alat spektrofotometer dan memvalidasinya. Disimpulkan bahwa hasil yang didapatkan akurat, cepat, tepat, dapat diualang, ekonomis serta nilai  korelasi  dapat  diterima  untuk  co-efesien,  akurasi  dan  ketahanan.  Kelebihan  dari  penelitiannya  adalah kemudahan dari preparasi sampel dan penggunaan reagen yang sangat selektif. Dari penelitiannya tersebut menjadi suatu solusi dalam penentuan Dutasteride dalam plasma darah.
Penelitian mengenai Dutasteride dengan dimodifikasi metode Vierordt juga dikaji (6) menggunakan suatu alat yaitu Spektrofotometer UV-Vis. Penelitiannya juga dapat dikuatkan (7) yaitu Pengembangan metode dan validasi Alfuzosin HCl dan Dutasteride dalam bentuk sediaan farmasi oleh RP-HPLC. Hasil dari penelitiannya adalah terbukti efektif untuk penentuan Dutasteride dari tablet yang larut dalam pelarut fisiologis.
Saat ini belum terdapat penelitian mengenai Dutasteride yang dianalisis kandungannya dalam plasma darah menggunakan spektrofotometer UV-Vis, dalam penelitian ini akan mengkaji recovery kadar obat Dutasteride dalam plasma  darah  menggunakan  Spektrofotometer  UV-Vis  yang  pernah  dilakukan  (11)  secara  teori  Dutasteride  ini
merupakan senyawa dengan gugus kromofor yang dapat mengabsorsi warna. Struktur molekul dari obat Dutasteride ditunjukkan oleh Gambar 1.

## Gambar 1. Struktur kimia Dutasteride
Dalam penelitian ini menggunakan metode eksperimental (bioanalisis) yaitu dengan menggunakan instrumen Spektrofotometer UV-Vis untuk menguji kadar obat Dutasteride yang terdapat dalam plasma darah serta memberikan suatu bukti bahwa Spektrofotometer UV-Vis juga dapat digunakan dalam menganalisis secara kualitatif untuk kadar Dutasteride yang dalam plasma darah. Diperlukan juga reagen BTB (Bromotimol Biru) untuk memperkuat serapan secara selektif. Mengingat jika masih terdapat sisa obat Dutasteride maka donor darah tidak bisa dilakukan. Kadar yang didapatkan dalam setiap variasi uji dipelajari sebagai studi recovery.
Penggunaan Spektrofotometri UV-Vis merupakan solusi dalam bioanalisis suatu sample darah manusia. Jika penggunaan  spektrofotometer  UV-Vis  dapat  menguji secara  kualitatif  suatu  larutan  berwarna  atau  suatu senyawa yang  mempunyai  gugus  kromofor,  dan  Spektrofotometer  UV-Vis  mempunyai  ketelitian  dan  keakuratannya  yang dapat  dibandingkan  atau  diuji  komparasi  dengan menggunakan  data  instrumen    maka apakah  dapat  menganalisis secara kualitatif kandungan Obat Dutasteride dalam plasma darah manusia.

## METODE
Jenis  penelitian  ini  termasuk  dalam  eksperimental  quasi.    Eksperimen  kuasi  adalah  eksperimen  yang memiliki perlakuan (treatments), pengukuran-pengukuran dampak ( outcome measures ), dan unit-unit eksperiment ( experimental  units )  serta  tidak  menggunakan  penempatan  secara  acak  (12).  Quasi  Experimental  Design  juga merupakan pengembangan dari True Experimental Design, Desain ini memiliki kelompok kontrol, namun tidak bisa berfungsi  secara  penuh  untuk  mengontrol  varibel-variabel  eksternal  yang  mempengaruhi  pelaksanaan eksperimen/percobaan. Desain tidak memberikan batasan yang ketat terhadap cara random, dan pada saat yang sama dapat juga mengontrol hal yang mengurangi validitas.
Lokasi penelitian ini terletak di Laboratorium Kimia Instrumentasi Organik FMIPA UGM dan Laboratorium terpadu STIKES Wira Husada Yogyakarta. Waktu penelitian akan dilakukan pada bulan Februari - Desember 2022. Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  :  Spektrofotometer  UV-Vis  Shimadzu  UV-1800  240V, Frezzer, Sentrifuse,  tabung  EDTA,  Syringe  3  cc,  tabung  sentrifuse,  mortar  penggerus,  pH  meter,  Shaker,  Labu  ukur, Mikropipet, Botol Reagen
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  :    Kloroform  (p.a.)  E-Merck, methanol-0.1%  (p.a.)  E-Merck, Buffer fisiologis (phosfat) pH 5.3, Akuatridestilata, Kantong Plasma Darah dengan Golongan Darah AB, Tablet obat Dutasteride, Standar Internal Dutasteride, Tissu atau kapas pembersih, Alkohol 99% teknis.
Membuat  larutan  induk  sample  dilakukan  dengan  cara  menimbang  dengan  seksama  2  tablet  dutasteride seberat 1,21 gram selanjutnya melarutkan 2 isi soft tablet dutasteride (0,5 mg) berupa cairan ke dalam 100 ml metanol 10%,  Kemudian  diaduk  dengan  menggunakan  stirer  magnet  sampai  larut  sempurna.  Dihasilkan  larutan  10  ppm dutasteride dalam 100 mL. Ditutup rapat dan disimpan dalam lemari es bersuhu konstan 4ᵒC. Untuk pengambilan dari larutan induk sample terlebih dahulu harus diaduk dengan magnet stirer selama 1 jam.
Membuat larutan induk standar dilakukan dengan cara melarutkan 20 mg Material Standar Dutasteride ke dalam 100 ml metanol 10%, kemudian diaduk dengan menggunakan stirer magne sampai larut sempurna. Dihasilkan larutan Dutasteride 200 ppm dalam 100 mL. Ditutup rapat dan disimpan dalam lemari es bersuhu konstan 4ᵒC. Untuk pengambilan dari larutan induk standar juga terlebih dahulu harus diaduk dengan magnet stirer selama 1 jam.
Pemilihan plasma darah dilakukan dengan cara : memilih plasma darah dari pasien dengan golongan darah AB  dari  PMI  yang  sudah  dilakukan  pemeriksaan  bebas  penyakit  menular  dan  telah  dilakukan  pengolahan  yang berkualitas berdasar prosedur di PMI.
Ekstraksi pelarut dalam plasma dilakukan dengan cara mengambil 2 mL plasma dari blood bag yang sudah dilumerkan  dengan  kondisi  suhu  ruang  sampai  mencair  kemudian  diambil  dan  ditempatkan  dalam  tabung  reaksi,
selanjutnya      ditetesi  dengan  2x100  uL  dari  larutan  induk  sampel  Dutasterde  dan  divortex  selama  5  menit. Ditambahkan  kloroform  sebanyak  4  ml  dengan  cara  mengalirkannya  lewat  dinding  tabung  rekasi,  selanjutnya divortex selama 10 menit atau sampai bercampur homogen. Ditambahkan buffer pH Fisiologis kedalamnya kemudian divortex hingga homogen. Campuran yang sudah homogen tersebut kemudian ditutup rapat menggunakan hipafix dan ditempatkan dalam wadah tertutup dari udara luar kemudian didiamkan di kulkas pada suhu 0 C sampai memisah. Setelah  memisah  ditambahkan  4  mL  metanol  10%  menggunakan  syringe  dialirkan  melalui  dinding  dilanjutkan dengan vortex selama 10 menit sampai homogen dan ditutup lapis kedua dengan hipafix. Didiamkan di kulkas pada suhu 0 C sampai memisah. Dilanjutkan dengan sentrifuse 4000 rpm selama 10 menit, supernatan di ambil dan dilabeli sebagai A.
Scanning panjang gelombang maksimum dilakukan dengan cara membuat 4 sampel perbandingan serapan dari larutan yang dibuat didalam langkah ekstraksi pelarut dalam plasma, yaitu Supernatan yang berada diatas diambil sebanyak 2 ml dan dibagi 2 selanjutnya diencerkan masing-masing hingga 5 ml menggunakan larutan metanol 10%, salah satu larutan tersebut diberi label A1  dan yang satu ditambahkan 3x100 uL BTB dan diberi label A1-BTB. Larutan bening yang mengendap dibawah tabung diambil sebanyak 1 ml dan dibagi 2 kemudian diencerkan masing- masing hingga 5 mL. Salah satu larutan tersebut diberi label B1 dan yang satunya ditambahkan 3x100 uL BTB dan diberi label B1-BTB. Masing-masing larutan A1, B1, A1-BTB, B1-BTB kemudian discanning untuk dicari panjang gelombang maksimum.
Kurva  Standar  Kalibrasi  dilakukan  dengan  cara  mengambil  dari  larutan  induk  standar  dibuat  5  variasi konsentrasi yaitu 0,2 ppm; 0,06 ppm; 0,04 ppm; 0,02 ppm; 0,008 ppm; 0,006 ppm dalam 5 ml dengan pelarut metanol 10%  dalam  pH  buffer  7.  Ditambahkan  masing-masing  3x100  uL  BTB  selanjutnya  digojok  dan  dilakukan pemeriksaan absorbansi lalu dibuat kurva kalibrasi.
Dari larutan induk sample dibuat 5 variasi konsentrasi yaitu 0,2 ppm; 0,06 ppm; 0,04 ppm; 0,02 ppm; 0,008 ppm;  0,006  ppm  dalam  5  ml  dengan  pelarut  metanol  10%  dalam  pH  buffer  7.  Dari  variasi  yang  dilakukan  pada langkah 1 maka dimasukkan ke tabung reaksi secara terpisah dan masing masing dilarutkan 2 mL plasma dari blood bag yang sudah dilumerkan dengan kondisi suhu ruang sampai mencair kemudian diambil dan ditempatkan dalam tabung reaksi, divortex selama 5 menit. Ditambahkan kloroform sebanyak 4 ml dengan cara mengalirkannya lewat dinding tabung rekasi, selanjutnya divortex selama 10 menit atau sampai bercampur homogen. Ditambahkan buffer pH Fisiologis kedalamnya kemudian divortex hingga homogen. Campuran yang sudah homogen tersebut kemudian ditutup rapat menggunakan hipafix dan ditempatkan dalam wadah tertutup dari udara luar kemudian didiamkan di kulkas pada suhu 0 C sampai memisah. Setelah memisah ditambahkan 4 mL metanol 10% menggunakan syringe dialirkan  melalui  dinding  dilanjutkan  dengan  vortex  selama  10  menit  sampai  homogen  dan  ditutup  lapis  kedua dengan hipafix. Didiamkan di kulkas pada suhu 0 C sampai memisah. Dilanjutkan dengan sentrifuse 4000 rpm selama 10 menit, supernatan di ambil sebanyak 2 ml dan dilabeli sesuai dengan variasi konsentrasi yang diberikan. Masing- masing supernatan yang dihasilkan dispiking dengan 0,2 ppm larutan standar dutasteride 2 mL dan dilarutkan hingga 4 mL. Ditambahkan masing-masing 3x100 uL BTB selanjutnya digojok dan dilakukan pemeriksaan absorbansi lalu dibuat data absorbansi. Menggunakan rumus recovery untuk mencari persen (%) dilakukan dengan menggunakan rumus dibawah ini :
%𝑟𝑒𝑐𝑜𝑣𝑒𝑟𝑦 = 100 ∗ (𝐶𝑝 − 𝐶𝑡)

## 𝐶𝑠
Dengan  Cp  adalah  larutan  yang  telah  terspike,  Ct  adalah  konsentrasi  spiking  dan  Cs  adalah  Larutan Konsentrasi awal sebelum recovery. Data yang dihasilkan dari langkah kerja Pembuatan Kurva Standar dan Standar Internal disajikan dalam bentuk Tabel, dilakukan pula pengulangan hasil sebanyak minimal 3 kali, begitu juga untuk data yang dihasilkan dari langkah Metode Komparasi. Data primer dari spektra yang dihasilkan akan diderivatifkan sehingga menemukan ketelitian yang seksama. Semua eksperimen ini dilakukan pada waktu yang sama dan teknisi yang sama serta alat dan musim yang sama. Dalam penelitian ini semua proses yang menggunakan metode statistik diolah menggunakan Fitur Data Analisis pada Microsoft Excel 2019.

## HASIL
Tabel 1. Prosentase recovery pada tiap variasi yang diuji Variasi konsentrasi (ppm) Spike (ppm) Konsentrasi (ppm) Recovery  (%) 0,006 0,1 0,004 63,697 0,008 0,1 0,005 62,427 0,02 0,1 0,017 84,760
0,04 0,1 0,025 63,482 0,06 0,1 0,035 58,343
Dari  Tabel  1  dapat  ditunjukkan  bahwa  setiap  variasi  memiliki  hasil  recovery  yang  berbeda-beda  namun recovery yang terbaik ditemukan pada variasi konsentrasi 0,02 ppm. Rerata recovery yaitu 64,992%.

## PEMBAHASAN
Dalam penelitian ini Dutasteride dilarutkan ke dalam sample plasma darah segar FFP (Fresh Frozen Plasma) dari  seseorang  pendonor  dengan  golongan  darah  AB.  Penelitian  ini  dilakukan  secara  eksperimental  diluar  tubuh manusia dengan mengambil sampel plasma segar sebagai pelarut kemudian melakukan recovery Dutasteride dari yang terlarut dalam plasma menggunakan pelarut efektif dari metanol 10% (13,14).
Penimbangan sample obat Dutasteride dilakukan secara seksama dan ditera pada 1,21 gram kemudian diambil cairan  obat dengan cara dibelah dan langsung dimasukan ke dalam beaker glass yang telah berisi 50 mL metanol 10% dan diaduk. Setelah dutasteride larut kapsul obat diambil kemudian larutan sample dimasukkan ke dalam labu ukur 100 ml dan diencerkan sampai 100 mL dengan menggunakan pelarut metanol 10%. Dari langkah ini dihasilkan larutan  induk  sample    10  ppm.  Dasar  pemilihan  pelarut  metonol  ini  menurut  (15–17).  Pembuatan  larutan  juga dilakukan  serupa  dengan  pembuatan  larutan  induk  sample  namun  berbahan  baku  Dutasteride CRM  (Certified Reference Material) dengan seberat 20 mg yang dilarutkan dalam 100 ml metanol 10%. Dihasilkan larutan induk standar 200 ppm. Larutan yang dihasilkan berupa larutan putih keruh yang harus dihomogenkan 10 menit sebelum dan pada saat diambil cuplikannya. Larutan tersebut disimpan sebagai larutan induk dalam labu alas bulat 100 mL yang ditutup rapat sehingga tidak ada udara yang masuk dan harus steril.
Dalam  penelitian  ini  dilakukan scanning Panjang  Gelombang  Dutasteride  dalam  berbagai  pelarut.  Pelarut yang  digunakan  antara  lain  :  Kloroform  dan  pelarut  metanol  10%,  yang  kemudian  diberikan  perlakuan  dengan menambahi  BTB  dan  tidak.  Hasil  perlakuan  ini  dapat  dilihat  pada  spektra  UV-Visible  yang  ditunjukkan  pada Gambar 1,2,3 dan 4, sedangkan untuk spektra UV-Visible untuk Dutasteride CRM ditunjukkan pada Gambar 2
Gambar 2. Spektra UV-Vis Dutasteride dalam Kloroform dan penambahan reagen BTB pada sample obat, sampel larutan berwarna kebiruan
Gambar 3. Spektra UV-Vis Dutasteride dalam Metanol 10 % tanpa BTB pada sampel obat, sampel berwana bening kekuningan
-0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 200 220 240 260 280 300 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 190 210 230 250
270 290 310
Gambar 4. Spektra UV-Vis Dutasteride dalam Metanol 10 % dengan reagen BTB pada sampel obat, sampel berupa larutan berwarna biru
Gambar 5. Spektra UV-Vis Dutasteride dalam kloroform tanpa BTB pada sampel obat, sampel berwarna bening agak kekuningan.
Gambar 6. Spektra UV-Vis Dutasteride CRM dalam pelarut 10% metanol dengan smoothing tanpa BTB, sampel larutan berwarna bening.
Pada Gambar 2,3,4 dan 5 spektra yang dihasilkan masih bersifat random karena adanya komposisi obat lain selain  Dutasteride  dan  terdapat  interferensi.  Dari  Gambar  2,3,4  dan  5  tersebut  dapat  disimpulkan  juga  bahwa penggunaan  reagen  BTB  ( Bromo  Thymol  Blue )  mempunyai  manfaat  yang  signifikan  dalam  memperkuat  daya serapan sinar UV-Vis oleh molekul obat Dutasteride yang ditunjukan pada Gambar 4 yang memiliki satu puncak tajam dan base yang melebar pada panjang gelombang yang semakin tinggi. Pada langkah ini dihasilkan panjang gelombang yang digunakan untuk penentuan Dutasteride dengan bantuan reagen BTB yaitu di 213 nm.
Pada Gambar 6 menunjukkan bahwa serapan panjang gelombang maksimal pada 213 nm dan 240 nm untuk Dutasteride murni tanpa penambahan BTB ( Bromo Thymol Blue) (18–20). Hal ini sesuai dengan yang dikaji oleh (21).  Dalam  penelitiannya  menggunakan  reagen  Chloranil  yang  menunjukkan  reagen  yang  paling  efektif  dalam analisis Dutasteride hingga saat ini (22).
-0,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 190 210 230 250 270 290 310 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 190 210 230 250 270 290 310 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 200 220 240 260 280
300
Penggunaan reagen BTB ( Bromo Thymol Blue) pernah dikaji oleh (10) namun dalam penelitiannya justru tidak  memberikan  hasil  yang  signifikan  dibandingkan  dengan  penggunaan  reagen  MTBH  (3-metil-2- benzothazolinon hidrazon-hidroklorida). Reagen BTB ( Bromo Thymol Blue) ini mempunyai efektivitas yang rendah dan dalam penelitian ini bekerja pada 2 kali konsentrasi LOD ( Low of Detection ) yang disarankan yaitu pada 0,006 ppm sedangkan dalam penelitiannya batas LOD pada 0,0033 ppm. Penggunaan 2 kali konsentrasi yang disarankan ini karena dalam penelitian ini menggunakan buffer pH 7 dalam melakukan recovery berbeda dengan penelitiannya yang menggunakan HCl 0,1 N sebagai katalisator untuk terjadi ikatan antara molekul obat Dutasteride dengan reagen BTB ( Bromo Thymol Blue ). Hal ini dapat ditunjukkan pada Gambar 8 menurut penelitian sebelumnya. Dalam penelitian ini mekanisme kompleksasi yang disarankan oleh (10) tidak terjadi karena menggunakan buffer  pH  7.  Penggunaan  buffer  pH  7  tersebut  untuk  menjamin  transfer  Dutasteride  pada  antar  medium  yang digunakan diperlakukan sama seperti kondisi fisiologis dalam tubuh manusia. Penggunaan BTB di dalam penelitian ini tidak memberikan efek kompleksasi namun membantu untuk menyeleksi puncak serapan yang dianalisis yaitu mempertajam puncak 213 nm, dalam penelitian ini menunjukkan juga bahwa BTB mampu membentuk endapan dari senyawa  yang    tidak  dianalisis  dalam  penelitian  ini.  Hal  ini  dapat  ditunjukkan  pada  Gambar  7.  Pada  Gambar  7 menunjukkan bahwa hasil ekstraksi bertahap menggunakan kloroform dan metanol 10% setelah pengunaan reagen BTB ( Bromo Thymol Blue) memberikan puncak yang terseleksi dengan pola sama seperti Gambar 6.
Gambar 7. Spektra UV-Vis hasil ekstraksi dengan penambahan BTB, sampel berupa larutan berwarna kebiruan
Dari Gambar 7 juga membuktikan bahwa tidak terjadi reaksi kompleksasi antara Dutasteride dan BTB ( Bromo Thymol Blue ) yang seharusnya timbul serapan pada 425 nm dan membuktikan juga bahwa BTB ( Bromo Thymol Blue) membantu mengendapkan senyawa yang tidak dianalisis dalam penelitian ini. Dalam hal ini BTB ( Bromo Thymol Blue) membantu dalam seleksi serapan UV-Vis.
Gambar 8. Mekanisme Reaksi Kimia antara Dutasteride dengan Reagen BTB (8)
Langkah selanjutnya dalam penelitian yang dilakukan ini adalah menguji recovery dari ekstraksi 2 tahap yang dilakukan. Dalam langkah ini dibuat kurva kalibrasi dari Dutasteride CRM dengan menggunakan variasi konsentrasi
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 190 290 390 490 590 690 790
0,006 ppm; 0,008 ppm; 0,02 ppm; 0,04 ppm; 0,06 ppm; 0,2 ppm. Dihasilkan persamaan garis yaitu y = 4,265x + 0,1452 dengan R² = 0,9674. Selanjutnya dibuat variasi larutan yang sama namun berasal dari larutan induk sampel dalam 5 ml dengan pelarut metanol 10% dalam pH buffer 7. Dari variasi yang dilakukan pada langkah diatas maka dimasukkan ke tabung reaksi secara terpisah dan masing masing dilarutkan 2 mL plasma dari blood bag yang sudah dilumerkan  dengan  kondisi  suhu  ruang  sampai  mencair  kemudian  diambil  dan  ditempatkan  dalam  tabung  reaksi, divortex selama 5 menit, tujuan menggunakan vortex adalah untuk mendapatkan hasil yang homogen. Selanjutnya ditambahkan  kloroform  sebanyak  4  ml  dengan  cara  mengalirkannya  lewat  dinding  tabung  rekasi,  selanjutnya divortex  selama  10  menit  atau  sampai  bercampur  homogen.  Campuran  yang  sudah  homogen  tersebut  kemudian ditutup rapat menggunakan hipafix dan ditempatkan dalam wadah tertutup dari udara luar kemudian didiamkan di kulkas  pada  suhu  0ᵒ  C  sampai  memisah,    hal  ini  dimaksudkan  agar  biomolekul  yang  ada  dalam  plasma  agar mengendap.  Setelah  memisah  ditambahkan  4  mL  metanol  10%  menggunakan  syringe  dialirkan  melalui  dinding dilanjutkan  dengan  vortex  selama  10  menit  sampai  homogen  dan  ditutup  lapis  kedua  dengan  hipafix.  Tujuan menggunakan hipafix ini untuk mengeluarkan gas yang timbul selama proses ekstraksi. didiamkan di kulkas pada suhu 0ᵒC sampai memisah. Dilanjutkan dengan sentrifuse 4000 rpm selama 10 menit, supernatan di ambil sebanyak 2  ml  dan  dilabeli  sesuai  dengan  variasi  konsentrasi  yang  diberikan.  Masing-masing  supernatan  yang  dihasilkan dispiking dengan 0,2 ppm larutan standar dutasteride 2 mL dan dilarutkan hingga 4 mL. Kemudian ditambahkan masing-masing  3x100  uL  BTB  selanjutnya  digojok  dan  dilakukan  pemeriksaan  absorbansi  lalu  dibuat  data absorbansi. Tujuan spike ini adalah untuk Data Recovery dapat dilihat pada Tabel 1.
Dari Tabel 1 dapat dilihat bahwa untuk hasil recovery dengan efisiensi terbaik yaitu pada konsentrasi 0,02 ppm  Dutasteride  yang  dilarutkan  dalam    plasma  darah.  Untuk  rerata recovery yang  dihasilkan  yaitu  64,992%. Tingginya kandungan dari hasil recovery inilah yang menjadi perhatian utama  bahwa Dutasteride mampu melakukan ikut dalam metabolisme dalam tubuh serta kemampuannya terserap melalui kulit dan masuk ke tubuh seseorang (23– 27) .  Pada  konsentrasi  0,006  ppm  Dutasteride  yang  dilarutkan  dalam  plasma  darah  masih  tetap  terdeteksi  jika menggunakan reagen BTB dan juga memberikan nilai recovery namun tidak terlampau tinggi. Tidak berlaku semakin sedikit kadar yang diberikan maka semakin tinggi recovery yang didapat, hasil ekstraksi yang didapat berupa larutan bening  agak  kekuningan  yang  merupakan  warna  asli  sebelum  diberikan  reagen  BTB.  Semua  perlakuan  dalam eksperimen yang dilakukan dalam kondisi suhu kamar dan menggunakan ruangan yang sudah disterilkan.

## KESIMPULAN
Penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa  studi  kualitatif  dan  kuantitatif  yang  dilakukan  menjunjukkan  bahwa Spektrofotometer UV-Vis dapat digunakan untuk memeriksa kadar 0,006 ppm Dutasteride dan penggunaan reagen BTB dapat berfungsi untuk menyeleksi puncak yang tidak dianalsis. Kemudian hasil recovery yang dihasilkan yaitu 64,992%.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Klikdokter.com. Dutasteride [Internet]. klikdokter. 2020. Available from:
https://www.klikdokter.com/obat/obat-saluran-kemih-dan-prostat/dutasteride
2. My Canadian Pharmacy. Obat-obatan yang Mencegah Anda Mendonorkan Darah Obat Jerawat [Internet]. Csmedcenter.com. 2022. Available from: https://www.csmedcenter.com/medications-preventing-you-from- donating-blood.aspx
3. Ushirobira CY, Afiune LAF, Pereira MN, Cunha-Filho M, Gelfuso GM, Gratieri T. Dutasteride nanocapsules for  hair  follicle  targeting:  Effect  of  chitosan-coating  and  physical  stimulus.  Int  J  Biol  Macromol. 2020;151:56–61.
4. Hu X, Hu C, Jiang D, Zuo Q, Li Y, Wang Y, et al. Effectiveness of Convalescent Plasma Therapy for COVID- 19 Patients in Hunan, China. Vol. 18, Dose-Response. 2020.
5. Jeong  JH,  Hyun  GH,  Park  YJ,  Kwon  SW,  Lee  AY. Clinical  Factors  Affecting the  Serum  Retention  of a Teratogenic Etretinate after the Acitretin Administration. Biomol Ther. 2022;30(6):562–9.
6. Giriraj  P,  Sivakkumar  T.  Simultaneous  estimation  of  dutasteride  and  tamsulosin  hydrochloride  in  tablet dosage form by vierordt’s method. Vol. 10, Arabian Journal of Chemistry. 2017. p. S1862–7.
7. Madhusudhan  P,  Reddy  MR,  Devanna  N.  Method  development  and  validation  of  Alfuzosin  HCl  and Dutasteride in pharmaceutical dosage form by RP-HPLC. Indian J Chem Technol. 2017;24(4):441–6.
8. Limited TC. TEVA-DUTASTERIDE. Monograph. 2016. p. 1–55.
9. Pohlman GD, Pohlman EA, David Crawford E. Dutasteride: A review of its use in the management of prostate disorders. Clin Med Insights Ther. 2011;3:171–7.
10. Kumar A, Saradhi S, Sekaran C, Reddy T. Spectrophotometric Analysis of Dutasteride in Pure and Tablet Dosage Forms. Chem Sci J. 2012;CSJ-47:1–20.
11. Chaudhari  R,  Mohanraj  K,  Shirsat  V.  MS/MS  AND  HPLC  CHARACTERIZATION  OF  FORCED
DEGRADATION PRODUCTS OF DUTASTERIDE  AND TAMSULOSIN HYDROCHLORIDE. IJPSR. 2014;5(7):1–9.
12. Dwi  I,  Dan  P,  Probandari  A.  Rancangan  Penelitian  Eksperimental  Murni  Dan  Kuasi-Eksperimental. 2003;164–8.  Available  from:  https://id.scribd.com/document/395605433/Materi-21a-Penelitian-Kuasi- Eksperimental-dan-Eksperimental-pdf
13. Abbas A. a Validated Tlc- Densitometry for the Simultaneous Determination of Tamsulosin and Dutasteride in Their Combined Pharmaceutical Formulation. Al-Azhar J Pharm Sci. 2021;64(2):93–108.
14. Deshmukh  AV,  Shirode  AR,  Kadam  VJ.  ANALYTICAL  method  development  and  validation  for  the quantitative  estimation  of  Nimbin  in  bulk  and  solid  dosage  form  by  RP-HPLC.  Int  J  Pharma  Bio  Sci. 2021;9(6):120–33.
15. Patel DB, Patel NJ, Patel SK, Prajapati AM, Patel SA. RP-HPLC Method for the Estimation of Dutasteride in Tablet Dosage Form. Indian J Pharm Sci. 2010;1–6.
16. Patel DB, Patel NJ, Patel S., Prajapati AM, Patel SA. RP-HPLC method for the estimation of tamsulosin hydrochloride in tablet dosage form. Indian J Pharm Sci. 2010;72(6):785–7.
17. Prasanna  LI,  Naidu  GT,  Fathima  N,  Chakravathy  I.,  Huq  GA.  Spectrophotometric  Determination  of Tamsulosin in the Presence of Dutasteride By Charge Transfer Complex Method By Using 2, 3-Dichloro-5, 6-Dicyano-1,  4-Benzoquinone  (Ddq).  Int  J  Res  Trends  Innov  [Internet].  2018;3(9):6.  Available  from: www.ijrti.org
18. Chandrasekhar K, Manikandan A. Novel RP-HPLC method development and validation of Tamsulosin hcl and dutasteride in tablets by ratio’s method. Rasayan J Chem. 2021;14(2):665–71.
19. Diyya K. Novel stability indicating rp-hplc method development and validation for simultaneous estimation of alfuzosin and dutasteride in pharmaceutical dosage form. Indian J Pharm Educ Res. 2020;54(4):1144–52.
20. Rames G. T, Prasad YR. Determination of Dutasteride for Analytical Method Development and Validation in Bulk as well as in Pharmaceutical Dosage Form by using RP-HPLC. World J Pharm Sci. 2022;10(9):61– 9.
21. Al-Bayatie YK, Muhamad YH, Kareem ZM, Khathi MT. Determination of dutasteride in pure and tablet by flow injection system. Int J Health Sci (Qassim). 2022;6(March):201–8.
22. Jati MAS, Febriani H, Kristiani ER. Komparasi Uji Kualitatif Dutasteride Dalam Pelarut Organik terhadap Dutasteride  terlarut  Dalam  Plasma  Darah  Manusia  Menggunakan  Spektrofotometri  UV-Vis  dan  HPLC (Literature Review). In: Basic and Applied medical Science Conference (BAMS-C0). 2022. p. 49–56.
23. Da Silva MHA, Medeiros JL, Costa WS, Sampaio FJB, De Souza DB. Effects of the dutasteride and sildenafil association in the penis of a benign prostatic hyperplasia animal model. Aging Male. 2021;23(5):1009–15.
24. Afiune LAF, Ushirobira CY, Barbosa DPP, de Souza PEN, Leles MIG, Cunha-Filho M, et al. Novel iron oxide  nanocarriers  loading  finasteride  or  dutasteride:  Enhanced  skin  penetration  for  topical  treatment  of alopecia. Int J Pharm. 2020;587(May).
25. Noor  NM,  Umar  S,  Abdul-Aziz  A,  Sheikh  K,  Somavarapu  S.  Engineered  Dutasteride-Lipid  Based Nanoparticle  (DST-LNP)  System  Using  Oleic  and  Stearic  Acid  for  Topical  Delivery.  Bioengineering. 2022;9(1).
26. Seo SW, Park JW, Han DG, Kim JM, Kim S, Park T, et al. In vitro and in vivo assessment of metabolic drug interaction potential of dutasteride with ketoconazole. Pharmaceutics. 2019;11(12).
27. Najafizade E, Jamali AK, Zahraei SAH. Clinical Images and Medical Case Reports Unusual presentation of an intracochlear schwannoma. JCIMCR. 2021;2.