Hasil Penelitian                                                            J. Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XIX No. 2 Th. 2008

## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN KADAR FENOLIK TOTAL DARI GANGGANG MERAH ( Gracilaria verrucosa L .)
[Antioxidant Activity and Total Phenolic Content of Red Sea Weed (Gracilaria verrucosa L. ) ]
Lydia Ninan Lestario 1) , Stefanli Sugiarto 1) ,  dan  K.H. Timotius 1)
1) Program Studi Kimia, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Kristen Satya Wacana, Jl. Diponegoro 52-60, Salatiga
Diterima  2 Januari 2008 / Disetujui   30 Juni  2008

## ABSTRACT
The  aims  of  this  study  were  to  compare  the  antioxidant  activity  and  the  total  phenolic  content  of  red  sea  weed  (Gracilaria verrucosa L .) from extract of methanol, ethanol, acetone, chloroform and hexane; and the correlation between total phenolic content and the antioxidant activity of each extract; then to determine the chlorophyll a, chlorophyll b, and carotene content of each extract and their correlation with the free radical scavenging activity as well.
The  antioxidant  activity  were  measured  by  free  radical  scavenging  method  with  DPPH  and  by  reducing  power  method  with K 4 Fe(CN) 6 as  standard,  whereas  the  total  phenolic  content  was  measured  by  Folin  Ciocalteu  method  with  gallic  acid  as  standard. Chlorophyll  a,  chlorophyll  b,  and  carotene  were  determined  by  spectrophotometric  method  based  on  Lambert-Beer  law.  The  data  of antioxidant activity and total phenolic content were statistically analyzed by Randomized Completely Block Design (RCBD) with five kinds of  solvents  as  treatments  and  five  replications.  Honestly  Significant  Difference  Test  (HSDT)  was  used  to  compare  the  difference  of treatments; whereas the chlorophyll a, chlorophyll b, and carotene content were not statistically analyzed since they were only supplement data.
The results showed that the highest of the antioxidant activity by free radical scavenging method was found in acetone extract : 43.43% (BHT: 84.15%); whereas by reducing power method was found in chloroform extract : 0.1756 meq K 4 Fe(CN) 6 /g extract (BHT : 6.1767 meq K 4 Fe(CN) 6 /g extract); and the highest of the total phenolic content was also found in acetone extract : 45.29 mg /g extract. There were close correlation between phenolic content and antioxidant activity both by free radical scavenging method and by  reducing power method with r (coefficient correlation) respectivelly 0.89 and 0.91.Chlorophyll a and carotene had also close correlation with the free radical scaveging activity, but not for chlorophyll b.
Key words : antioxidant activity, free radical scavenging activity, reducing power, phenolic content, chlorophyll, carotene

## PENDAHULUAN
Perkembangan  ilmu  pengetahuan  dan teknologi  serta  berubahnya  pola  hidup  masyarakat seperti  mengkonsumsi  makanan  yang  banyak mengandung  minyak  dan  lemak  dapat  mengakibatkan terbentuknya  radikal  bebas  di  dalam  tubuh  yang  dapat menyebabkan  munculnya  penyakit  seperti  kanker, katarak, dan arterosklerosis. Oleh karena itu, kesehatan sangatlah  penting  untuk  dijaga  dengan  gizi  seimbang, termasuk mengkonsumsi makanan berantioksidan.
Radikal  bebas  adalah  senyawa  kimia  yang mempunyai  satu  atau  lebih  elektron  yang  tidak berpasangan.  Senyawa  ini  bersifat  tidak  stabil  dan sangat  reaktif.  Senyawa  ini  harus  mencari  elektron  lain sebagai pasangan untuk mencapai kestabilan. Reaksi ini terjadi  secara  berantai  dan  menyebabkan  terbentuknya radikal  bebas  yang  lebih  banyak  dalam  tubuh.  Reaksi berantai  ini  dapat  diredam  bila  tubuh  memiliki  senyawa penangkap  radikal  bebas.  Senyawa  ini  dapat  diperoleh dari konsumsi makanan yang bergizi seperti sayuran dan buah.
Senyawa  penangkap  radikal  bebas  disebut antioksidan.  Fungsi  utama  antioksidan  pada  lemak  dan minyak untuk memperlambat terjadinya proses oksidasi. Tubuh  manusia  juga  dapat  menghasilkan  senyawa antioksidan,  tetapi  masih  belum  mencukupi  untuk menangkap  radikal  bebas  yang  terbentuk  di  dalam tubuh.  Untuk  mengatasi  kekurangan  senyawa antioksidan dalam tubuh, sebaiknya perlu mengkonsumsi makanan  yang  mengandung  senyawa  antioksidan seperti vitamin, mineral, dan karotenoid (Hernani, 2004). Ganggang  merupakan  salah  satu  sumber makanan yang mengandung senyawa antioksidan. Jenis ganggang di Indonesia yang mempunyai nilai ekonomis dan  yang  sering  digunakan  adalah  ganggang  merah karena  komposisinya  sangat  kompleks,  yaitu  :  agar– agar,  karagenan,  furcelaran,  klorofil,  karoten,  fikobilin yang terdiri dari fikosianin dan  fikoeritrin, protein, lemak, klor,  kalium,  natrium,  magnesium,  belerang,  silikon, fosfor,  kalsium,  besi,  iodium,  dan  brom  (Indriani  dan Sumiarsih, 1991; Soegiarto et al. 1978).
Penelitian  terhadap  kandungan  senyawa antioksidan  dari  beberapa  spesies  ganggang  dengan metode penangkapan radikal bebas oleh 1,1-Diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH)  telah  dilakukan  oleh  Yan et  al.
(1999),  diantaranya  ganggang  hijau  yang  memiliki aktivitas  antioksidan  kurang  dari  20  %  dan  ganggang coklat  dari  spesies Hijikia  fusiformis yang  memiliki aktivitas  antioksidan  sampai  65  %,  namun  aktivitas antioksidan  dari  ganggang  merah,  khususnya  dari spesies Gracilaria verrucosa , belum dilakukan.   Menurut Sreenivasan et al. (2007) ganggang merah mengandung beberapa  macam  senyawa  fenolik,  misalnya  :  asam kafeat, asam ferulat, dan asam vanilat.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk membandingkan  aktivitas  antioksidan  dan  kadar  fenolik total  berbagai  ekstrak G.  verrucosa L . ,  yang  diekstrak dengan  beberapa  jenis  pelarut,  mengetahui  korelasi antara  kadar  fenolik  dan  aktivitas  antioksidan,  sehingga dapat  diketahui  peran  fenolik  terhadap  aktivitas antioksidan.  Tujuan  selanjutnya  adalah  mengetahui adanya  peran  klorofil  a,  klorofil  b,  dan  karoten  dari berbagai ekstrak tersebut terhadap aktivitas penangkapan radikal bebasnya.

## METODOLOGI

## Bahan dan alat
Ganggang  merah  ( G.  verrucosa L. ) diperoleh dari tambak di daerah Brebes. Bahan–bahan kimia yang digunakan  untuk  ekstraksi  adalah  metanol,  etanol, aseton,  kloroform,  heksana,  sedang  untuk  analisis digunakan akuades, DPPH DMSO (Dimethyl Sulfoksida ), buffer  tris-HCl,  asam  galat,  natrium  karbonat,  reagen Folin  Ciocalteu ,  BHT  ( Butil-hidroksitoluen ),  TCA ( Trichloroacetic acid ), K 4 Fe(CN) 6 , K 3 Fe(CN) 6 , FeCl 3 . Alat- alat yang digunakan adalah rotary evaporator (Heidolph 4000),  mikropipet,  spektrofotometer  UV–Vis  (Mini Shimadzu U–1240), neraca analitis, dan peralatan gelas.

## Metode
Ekstraksi  Sampel  (Revilla et  al. 1998  yang  telah dimodifikasi; Duh, 1998 yang telah dimodifikasi) Ganggang  kering  yang  telah  dipotong  kecil- kecil  dimaserasi  selama  4  jam  dengan  5  jenis  pelarut, yaitu  :  metanol,  etanol,  aseton,  kloroform,  dan  heksana dengan  perbandingan  sampel  terhadap  pelarut  1  :  5 (w/v),  kemudian  disaring.  Residu  dimaserasi  2  kali  lagi, masing-masing  selama  12  jam  dan  4  jam,  kemudian disaring.  Filtrat  disatukan  dan  pelarut  diuapkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  30  C,  dilanjutkan  dengan pengeringan dengan gas N 2 .
Pengukuran kadar fenolik total (Jayaprakasha et al.
2002)
Ditimbang  sejumlah  ekstrak  kering,  lalu dilarutkan dengan DMSO dengan volume sesuai dengan
konsentrasi yang dikehendaki (misal 200 ppm, ditimbang 20  mg  ekstrak,  dan  dilarutkan  dalam  100  mL  DMSO, (w/v). Untuk pengukuran fenolik total, diambil 0.2 ml lalu ditambah 0.8 ml natrium karbonat 7.5 % dan 1 ml reagen Folin Ciocalteu 10  %. Selanjutnya diinkubasi pada suhu ruang (27-29  C) dalam keadaan gelap selama 30 menit, kemudian  diukur  absorbansinya  pada  panjang gelombang  765  nm.  Sebagai  blanko  digunakan  DMSO, dan sebagai standar digunakan asam galat.
Pengukuran  aktivitas  antioksidan  dengan  metode penangkapan    radikal  bebas  (Negi et  al. 2004  yang dimodifikasi;  Mokbel  and  Hashinaga,  2005  yang dimodifikasi)
Metode  pengukuran  aktivitas  antioksidan dengan  menggunakan  radikal  bebas  yang  stabil  dari DPPH,  secara  luas  telah  digunakan  untuk  menguji  sifat antioksidatif  suatu  bahan,  khususnya  dalam  bertindak sebagai  ‘pembersih/penangkap’  radikal  bebas.  Molekul DPPH  dikarakterisasikan  sebagai  radikal  bebas  yang stabil,  dan  ketika  DPPH  direaksikan  dengan  senyawa yang  dapat  mendonorkan  atom  hidrogen,  DPPH  akan tereduksi dan kehilangan warna violetnya menjadi warna kuning pucat (Molyneux, 2004).
Ditimbang  sejumlah  ekstrak  kering  dan dilarutkan dengan DMSO dengan volume sesuai dengan konsentrasi yang dikehendaki (misal 200 ppm, ditimbang 20  mg  ekstrak,  dan  dilarutkan  dalam  100  mL  DMSO, (w/v). Diambil 0.2 ml dari larutan tersebut, lalu ditambah 1 ml DPPH 0.4 mM dalam metanol dan 0.8 ml buffer tris –HCl  100  mM  pH  7.4.  Larutan  diinkubasi  pada  suhu ruang (27-29  C) dalam keadaan gelap selama 20 menit, lalu  diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang 517  nm.  Sebagai  blanko  digunakan  1  ml  metanol ditambah  0.2  ml  DMSO  dan  0.8  ml  buffer  tris–HCl. Aktivitas  antioksidan  dinyatakan  dalam  %  penangkapan radikal bebas.
% penangkapan radikal bebas = % 100 Ao A Ao Keterangan : Ao = absorbansi DPPH setelah diinkubasi 20 menit A   = absorbansi sampel + DPPH setelah diinkubasi 20 menit
Penghitungan  nilai  IC 50 dari  aktivitas  penangkapan radikal bebas oleh DPPH
Nilai  IC 50 didefinisikan  sebagai  konsentrasi sampel  yang  dibutuhkan  untuk  menghambat  oksidasi sebesar  50  %,  dalam  hal  ini  untuk  ‘menangkap’  50% DPPH.  Untuk  mengetahui  nilai  IC 50 ( Inhibition Concentration ),    ekstrak  dilarutkan  dalam  DMSO  dalam beberapa konsentrasi, kemudian masing-masing larutan ekstrak diukur aktivitas antioksidannya. Setelah itu dibuat grafik  hubungan  antara  konsentrasi  ekstrak  (mg/mL) dengan aktivitas antioksidan dengan metode penangkapan  radikal  bebas  (%)  sehingga  diperoleh persamaan  garis  linier.    Berdasarkan  persamaan  garis
itu,  dapat  ditentukan  konsentrasi  ekstrak  pada  saat aktivitas antioksidan mencapai 50 %.  Dengan demikian, nilai IC 50 yang rendah menunjukkan aktivitas antioksidan yang  tinggi  dan  nilai  IC 50 yang  tinggi  menunjukkan aktivitas antioksidan yang rendah.  Nilai IC 50 dinyatakan sebagai mg/ mL atau µg/ mL.
Pengukuran  aktivitas  antioksidan  dengan  metode kemampuan mereduksi (Yildirim et al . 2001) Metode  pengukuran  aktivitas  antioksidan dengan  kemampuan  mereduksi  ini didasarkan  pada terbentuknya  senyawa  Fe(CN) 6-4 yang  merupakan  hasil reduksi  dari  senyawa  Fe(CN) 6-3 .  Senyawa  ini  akan membentuk kompleks dengan Fe +3 menjadi
Fe 4 (Fe(CN) 6 ) 3 yang  berwarna  biru  berlin  (Qian et  al. 2004).
Ditimbang  sejumlah  ekstrak  kering  dan dilarutkan dengan DMSO dengan volume sesuai dengan konsentrasi yang dikehendaki (misal 200 ppm, ditimbang 20 mg ekstrak/ 100 mL DMSO, w/v).  Diambil 0.5 ml lalu ditambah dengan 1.25 ml buffer fosfat 0.2 M pH 6.6 dan 1.25 ml K 3 Fe(CN) 6 1 %. Larutan tersebut diinkubasi pada suhu 50 C selama 30 menit, lalu ditambah dengan 1.25 ml TCA 10 % dan disentrifus pada 3000 rpm selama 10 menit.  Diambil  supernatannya  (bagian  atas  larutan) sebanyak 1.25 ml lalu ditambah dengan 1.25 ml DMSO dan  0.25  ml  FeCl 3 0.10  %.  Larutan  tersebut  diinkubasi selama  10  menit  pada  suhu  37  C,  kemudian  diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  700  nm. Sebagai  blanko,  sampel  diganti  dengan  DMSO, sedangkan  sebagai  standar  digunakan  K 4 Fe(CN) 6 . Aktivitas  antioksidan  dinyatakan  sebagai  meq (miliequivalent)  K 4 Fe(CN) 6. Untuk  menghitung  aktivitas antioksidan,  dibuat  kurva  standar  antara  berbagai konsentrasi  K 4 Fe(CN) 6 dalam  miliequivalent  dengan absorban,  kemudian  nilai  absorban  dari  sampel dimasukkan  ke  dalam  persamaan  garis  linier  yang diperoleh.

## Pengukuran  kadar  klorofil  a,  klorofil  b,  dan  karoten (Lichtenthaler, 1987)
Ditimbang  sejumlah  ekstrak  kering  dan dilarutkan  dengan  aseton  80  %  dengan  volume  sesuai dengan  konsentrasi  yang  dikehendaki    (misal  200  ppm, ditimbang 20 mg ekstrak/100 mL DMSO, w/v),  kemudian diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang  663, 646,  dan  470  nm.  Kandungan  klorofil  a,  klorofil  b,  dan karoten dihitung dengan rumus :
Ca     = 12.21 A 663 – 2.81 A 646 Cb     = 20.13 A 663 – 5.03 A 663 Cx+c = 1000 A 470 – 3.27Ca – 104 Cb 229 Keterangan :  Ca = Klorofil a Cb
= Klorofil b Cx+c  = Karoten

## Rancangan percobaan dan analisa data
Data  -  data  aktivitas  antioksidan  dengan metode  penangkapan  radikal  bebas  dan  dengan kemampuan  mereduksi  serta  kadar  fenolik  dianalisis dengan Rancangan Acak  Kelompok (RAK) dengan lima jenis pelarut sebagai perlakuan dan lima ulangan. Untuk mengetahui adanya beda antar perlakuan, digunakan Uji Beda  Nyata  Jujur  (BNJ)  dengan  tingkat  kepercayaan 5  %,  sedangkan  data  kadar  klorofil  a,  klorofil  b,  dan karoten tidak dianalisis secara statistik karena dianggap sebagai pelengkap/data sekunder saja.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kadar fenolik total
Hasil  pengukuran  kadar  fenolik  total  dari ekstrak  rumput  laut  merah    dapat  dilihat  pada  Tabel  1 yang  menunjukkan  bahwa kadar    fenolik    total    dari ekstrak G. verrucosa L . tertinggi  terdapat pada ekstrak aseton dan ekstrak kloroform, yang saling tidak berbeda nyata  secara  statistik.    Hal  ini  berarti  senyawa  fenolik dalam rumput laut merah bersifat semi polar.
Tabel 1 Kadar fenolik total berbagai ekstrak G. verrucosa L .
Ekstrak                          Kadar fenolik (mg/g ekstrak) Metanol                              20.01 ± 1.39  (a) *)
Etanol                                 31.38 ± 5.45  (a) Aseton                                45.29 ± 5.23  (b) Kloroform                            45.25 ± 9.06  (b) Heksana                              30.10 ± 3.40  (a) *) huruf yang sama menunjukkan secara statistik tidak berbeda nyata
Kandungan fenolik total dari G. verrucosa L . ini (45.29  mg/g  ekstrak)  lebih  tinggi  bila  dibandingkan kandungan  fenolik  total  rumput  laut  merah  lain  dari spesies  yang  berbeda,  yaitu G.  edulis 16,26  mg/g ekstrak  (Ganesan et  al. 2008)  maupun G.  changii 5.0 mg/g (Sreenivasan et al. 2007), namun lebih rendah bila dibandingkan  kandungan  fenolik  rumput  laut  coklat Sargassum  siliquastrum 127.4  mg/g  ekstrak  (Cho et  al. 2007).
Bila  dibandingkan  kadar  fenolik  dari  beberapa jenis  sayur  yang  diekstrak  dengan  aseton  70%,  kadar fenolik G. verrucosa L.  ini  jauh  lebih  besar,  misalnya daun ketimun 3.8 mg/g, daun wortel 7.4 mg/g, wortel 0.6 mg/g,  tomat  2.0  mg/g,  kapri  1.6  mg/g  (Kahkonen et  al. 1999).    Beberapa  herba  dan  tanaman  obat  mempunyai kadar  fenolik  total  yang  hampir menyamai  kadar  fenolik G.  verucosa ,  antara  lain:  ‘bog-rosemary’  ( Andromeda polifolia glaucophylla ) 32.8 mg/g, ‘willow herb’ ( Epilobium angustifolium )  32.2  mg/g,  bunga  ‘camomile’  ( Matricaria chamomilla )  9.1  mg/g,  thyme  ( Thymus  vulgaris )  17.1 mg/g (Kahkonen et al. 1999), namun beberapa tanaman obat  lain  kandungan  fenoliknya  lebih  tinggi  daripada G. verucosa , antara lain kulit batang Cassia equisetifolia 72.1  mg/g,  buah Lawsonia  inermis 75.8  mg/g,  buah C. fistula 107.8 mg/g (Prakash et al. 2007).

## Aktivitas  antioksidan  dengan  metode  penang- kapan radikal bebas oleh DPPH
Data  hasil  pengukuran  aktivitas  antioksidan dengan metode penangkapan radikal bebas oleh DPPH dapat dilihat pada  Tabel 2.
Tabel 2 Aktivitas antioksidan berbagai ekstrak G. verrucosa L. dengan  metode  penangkapan radikal bebas
Ekstrak (200 ppm) Penangkapan radikal bebas (%) Metanol Etanol Aseton Kloroform Heksana BHT 19.71 ± 1.63    (a) *) 24.37 ± 6.82    (a) 43.43 ± 7.00    (b) 37.78 ± 11.02  (b) 16.39 ± 4.69    (a)
84.15 ± 3.82     **)
*) huruf yang sama menunjukkan secara statistik tidak berbeda nyata
**) dianalisis bersama dengan sampel, namun tidak dianalisis secara statistik
Data  pada  Tabel  2  menunjukkan  bahwa persentase penangkapan radikal bebas tertinggi terdapat pada  ekstrak  aseton  (43.43  %)  dan  ekstrak  kloroform (37.78  %),  yang  saling  tidak  berbeda  nyata  secara statistik  dan  lebih  tinggi  secara  nyata  jika  dibandingkan dengan  ekstrak  lainnya.  Hal  ini  menunjukkan  pelarut aseton  dan  kloroform  lebih  dapat  digunakan  untuk mengekstraksi  senyawa  –  senyawa  antioksidan  yang terdapat dalam G. verrucosa L . daripada pelarut-pelarut lain  dan  juga  berarti  senyawa-senyawa  antioksidan dalam G. verrucosa L . bersifat semi polar.
Hasil  dalam  penelitian  agak  berbeda  dengan hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Yan et  al. (1999), yang  mendapatkan  aktivitas  antioksidan  tertinggi  dari beberapa  rumput  laut  adalah  dari  ekstrak  metanol, antara lain pada Undaria pinatifida , Sargassum fulvellum , dan Hijkia  fusiformis dengan  aktivitas  antioksidan berturut-turut sebesar 51.1, 36.3, dan  65.0 % .
Nilai  IC 50 dari  aktivitas  penangkapan  radikal bebas oleh DPPH Nilai  IC 50 dari  aktivitas  antioksidan  dengan metode  penangkapan  radikal  bebas  oleh  DPPH  dapat dilihat pada Tabel 3, yang menunjukkan bahwa nilai IC 50 ( Inhibition Concentration ) terkecil – yang berarti aktivitas antioksidan  terbesar -  terdapat  pada  ekstrak  aseton (262.26 µg/ml)  dan  kloroform  (339.02  µg/ml),  yang saling  tidak  berbeda  nyata  secara  statistik.  Nilai  IC 50 eksrak  aseton  tiga  kali  lebih  besar  daripada  BHT,  yang berarti  aktivitas  antioksidan  aseton  lebih  kecil sepertiganya daripada aktivitas antioksidan BHT.
Aktivitas antioksidan ekstrak aseton G.  verrucosa  L. lebih  besar  daripada G.  changii dan setara  dengan  daun  ginseng  jawa,  yang  tercermin  dari nilai IC 50 ekstrak 80 % metanol dari G. changii sebesar 14.70 mg/ml (Sreenivasan et al. 1997), nilai IC 50 ekstrak etanol  dari  daun  ginseng  jawa  ( Talinum  paniculatum ) sebesar 273.13 µg/mL (Lestario et al. 2008).
Tabel 3 Nilai IC 50 dari bebagai ekstrak G. verrucosa L . dengan metode penangkapan   radikal  bebas Ekstrak (200 ppm) Nilai IC 50 (µg/ml) Metanol Etanol Aseton Kloroform Heksana BHT 1680.59 ± 385.15       (b) *) 900.52 ± 188.30       (ab) 262.26 ±   71.68       (a) 339.02 ± 103.84       (a) 1957.81± 669.17       (bc) 80.07±   12.62        **)
*) huruf yang sama menunjukkan secara statistik tidak berbeda nyata **) dianalisis bersama dengan sampel, namun tidak dianalisis secara statistik
Hubungan/korelasi  antara  kadar  fenolik  total dengan  aktivitas  antioksidan  metode  penang- kapan radikal bebas oleh DPPH
Hubungan  antara  kadar  fenolik  total  dengan aktivitas  antioksidan  dengan  metode  penangkapan radikal  bebas  oleh  DPPH  dapat  dilihat  pada  Gambar  1 yang  menunjukkan  nilai  r  (koefisien  korelasi)  sebesar 0.8926.  Hal  ini  berarti  ada  korelasi  yang  erat  antara kadar fenolik total pada G. verrucosa L . dengan aktivitas antioksidannya,  yang  berarti  senyawa  fenolik  yang  ada dalam G. verrucosa L. mempunyai peranan yang cukup besar dalam menyumbangkan aktivitas antioksidan. Korelasi  antara  kadar  fenolik  dengan  aktivitas antioksidan  tidak  selalu  terjadi,  misalnya  pada  ekstrak Sargassum  siliquastrum tidak  menunjukkan  korelasi antara  kadar  fenolik  dengan  aktivitas  antioksidannya (Lim et  al. 2002),  yang  menunjukkan  bahwa  senyawa fenolik  dalam  sampel  tersebut  kurang  berperan  dalam menyumbangkan aktivitas antioksidan. Hal ini berarti ada senyawa  lain  dalam  sampel  tersebut  yang  dapat berperan  dalam  menyumbangkan  aktivitas  antioksidan karena rumput laut juga mengandung senyawa-senyawa lain selain fenolik, seperti agar-agar, porpiran, furcelaran, protein,  lemak,  kalsium,  unsur  mineral,  klorofil  dan karoten (Indriani dan Sumiarsih, 1991).

## Aktivitas  antioksidan  dengan  metode  ke- mampuan mereduksi
Hasil pengukuran aktivitas antioksidan dengan metode kemampuan mereduksi dapat dilihat pada Tabel 4,  yang  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  tertinggi terdapat  pada  ekstrak  kloroform  (0.1756  meq K 4 Fe(CN) 6 /g  ekstrak)  dan  ekstrak  aseton  (0.1473  meq K 4 Fe(CN) 6 /g    ekstrak) . Hal  ini  menunjukkan  ekstrak kloroform  dan  ekstrak  aseton  paling  mudah  mereduksi ion  Fe(CN) 6-3 dibandingkan  ekstrak  lainnya  dan  juga berarti  bahwa  senyawa-senyawa  pereduksi  dalam G. verrucosa L . bersifat semi polar.
Hasil  ini  agak  berbeda  dengan  ‘brown seaweed’  ( Sargassum  siliquastrum ) , di  mana kemampuan  mereduksi  tertinggi  diperoleh  pada  ekstrak etanol, yang menunjukkan bahwa senyawa pereduksinya bersifat  polar  (Cho et  al. 2007),  namun  sejalan  dengan ‘Indian  red  seaweed’  ( Euchema  kappaphycus )  yang kemampuan  mereduksi  tertingginya  terdapat  pada
ekstrak etil asetat yang bersifat semi polar (Prakash et al. 2007).
y = 0.9649x - 4.8742 R = 0.8926 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 0 10 20 30 40 50 Kadar fenolik total (mg /g ekstrak) A k ti v it a s A nt iok s ida n (% )
Gambar  1  Korelasi  antara  kadar  fenolik  total  ekstrak G.  verrucosa L . dengan  aktivitas    antioksidan metode penangkapan radikal bebas oleh DPPH
Tabel  4  Aktivitas    antioksidan    dari  berbagai  ekstrak G.  verrucosa L . dengan  metode  kemampuan mereduksi Ekstrak (200 ppm) Aktivitas antioksidan ( meqK 4 Fe(CN) 6 /g  ekstrak) Metanol Etanol Aseton Kloroform Heksana BHT 0.0647 ± 0.0091    (a) *) 0.1121 ± 0.0347   (ab) 0.1473 ± 0.0478   (bc) 0.1756 ± 0.0435    (c)
0.0619 ± 0.014      (a)
6.1767 ± 0.2505     **)
*) huruf yang sama menunjukkan secara statistik tidak berbeda nyata **) dianalisis bersama dengan sampel, namun tidak dianalisis secara statistik
Kemampuan  mereduksi  dari  ekstrak  kloroform G.  verrucosa L . ini  (0.1756  meqK 4 Fe(CN) 6 /g  ekstrak) sangat  rendah  dibandingkan  dengan  BHT  (6.1767  meq K 4 Fe(CN) 6 /g ekstrak), yaitu kira-kira 35 kali lebih rendah, dan  juga  lebih  rendah  daripada  kemampuan  mereduksi daun Talinum  paniculatum ,  yaitu  sebesar  0.7022  meq K 4 Fe(CN) 6 /g ekstrak (Lestario et al. 2008).

## Hubungan/korelasi  antara  kadar  fenolik  total dengan kemampuan mereduksinya
Pada  Gambar  2  dapat  dilihat  adanya  korelasi yang  positif  antara  kadar  fenolik  total  dari G.  verrucosa L . dengan  kemampuan  mereduksinya,  dengan  nilai  r (koefisien korelasi) yang sangat besar, yaitu 0.9061. Hal ini berarti ada hampir semua senyawa fenolik yang ada dalam G.  verrucosa L . mempunyai  kemampuan mereduksi.
Nilai  r  yang  besar  dari  korelasi  ini  tidak  dapat diartikan  sebagai tingginya kemampuan  mereduksi  dari ekstrak G.  verrucosa L . ,  namun  hanya  menunjukkan bahwa  hampir  semua  senyawa  fenolik  dalam  ekstrak G.  verrucosa L . dapat  berperan  sebagai  senyawa pereduksi.
Di  samping  senyawa-senyawa  fenolik,  ekstrak rumput  laut  mungkin  mengandung  senyawa-senyawa lain yang dapat mempengaruhi aktivitas antioksidannya, seperti  agar-agar,  porpiran,  furcelaran,  protein,  lemak, kalsium, unsur mineral, klorofil dan karoten (Indriani dan Sumiarsih,  1991).  Oleh  sebab  itu  dalam  penelitian  ini diukur  juga  kandungan  klorofil  a,  klorofil  b,  dan  karoten dari berbagai ekstrak G. verrucosa L.
y = 0.0042x - 0.0316 R = 0.9061 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0 10 20 30 40 50 Kadar Fenolik Total  (mg/g) A k ti v ita s A n ti o k s id a n (m e k K 4 F e (C N ) 6 / g e k s tr a k )
Gambar  2    Korelasi  antara  kadar  fenolik  total  ekstrak G. verrucosa L . dengan aktivitas antioksidan dengan metode kemampuan mereduksi
Kadar klorofil a, klorofil b, dan karoten dari berbagai ekstrak G. verrucosa L .
Kadar  Klorofil  a,  klorofil  b,  dan  karoten  dari berbagai ekstrak rumput laut merah dilihat pada Tabel 5, yang  menunjukkan  kandungan  klorofil a dan b yang terbesar  terdapat  pada  ekstrak  etanol,  sedangkan kandungan karoten yang terbesar terdapat pada ekstrak kloroform.  Hasil  tersebut  dapat  dimengerti  mengingat bahwa klorofil lebih bersifat polar karena adanya stuktur tetrapirol  yang  bersifat  polar  disamping  adanya  rantai hidrofobik  yang  panjang  yang  disebut  dengan  fitol, sedangkan  karoten  yang  terutama  tersusun  atas  rantai isoprene  yang  tidak  polar,  menyebabkannya  lebih  larut dalam pelarut yang kurang polar (Gross, 1987).
Klorofil  dapat  mencegah  proses  oksidasi  lipid dengan  mekanisme  pendonoran  atom  hidrogen, sehingga  memutus  rantai  reaksi  pembentukan  radikal. Hidrogen  yang  didonorkan  adalah  yang  terletak  pada gugus metil pada klorofil a atau pada gugus aldehid pada klorofil b (Marquez et al. 2005). Salah satu anggota dari karoten  adalah  beta  karoten  yang  berperan  sebagai provitamin  A  dan  mempunyai  sifat  sebagai  antioksidan dengan mencegah pembentukan hidroperoksida dengan adanya radikal oksigen (Gross, 1987).
Hubungan/korelasi antara kadar klorofil a, klorofil b, dan karoten dengan penangkapan radikal bebas oleh DPPH
Korelasi  antara  kadar  klorofil  a,  klorofil  b,  dan karoten dengan aktivitas antioksidan metode
penangkapan  radikal  bebas  dapat  dilihat  pada  Gambar 3a, b, dan  c, yang menunjukkan adanya korelasi positif dengan  nilai  r  yang  bervariasi,  yaitu  klorofil a (r  =  0.6423),    klorofil b (r  =  0.1334),  dan  karoten (r = 0.8371)
Hasil tersebut menunjukkan klorofil a dan karoten mempunyai  korelasi  yang  cukup  besar  dengan  aktivitas antioksidannya,  yang berarti senyawa-senyawa tersebut cukup berperan dalam menentukan aktivitas antioksidan dari G. verrucosa L ., sedang klorofil b yang memiliki nilai r  yang  kecil  kurang  berperan  dalam  menyumbangkan aktivitas antioksidan.

## KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  hasil  penelitian  ini  adalah  : aktivitas  antioksidan  dengan  metode  penangkapan radikal  bebas  oleh  DPPH  tertinggi  dari G.  verrucosa L . diperoleh  dari  ekstrak  aseton  (43.43%),  sedangkan dengan  metode  kemampuan  mereduksi  tertinggi diperoleh  dari  ekstrak  kloroform  (0.1756  meq K 4 Fe(CN) 6 /g ekstrak).  Kadar fenolik total G. verrucosa L . tertinggi  diperoleh  dari  ekstrak  aseton  (45.29  mg/g ekstrak).
Ekstrak G.  verrucosa L.  dapat  memerangi radikal  bebas  dengan  cukup  baik  (43.43%,  BHT  = 84.15%), namun kurang memiliki kemampuan mereduksi (0.1756  meqK 4 Fe(CN) 6 /g  ekstrak,  BHT=  6.1767  meq K 4 Fe(CN) 6 /g ekstrak).
Tabel 5  Kadar klorofil a , klorofil b , dan karoten dari berbagai ekstrak G.  verrucosa L .
Ekstrak Klorofil a ± SE (µg / ml)
Klorofil b ± SE (µg / ml) Karoten ± SE (µg / ml) Metanol Etanol Aseton Kloroform Heksana 1.29 ± 0.26 2.14 ± 0.93 1.81 ± 0.61 1.91 ± 1.21 0.28 ± 0.19 0.59 ± 0.45 0.79 ± 0.35 0.43 ± 0.20 0.49 ± 0.39 0.11 ± 0.06 0.05 ± 0.05 0.21 ± 0.07 0.28 ± 0.07 0.38 ± 0.26 0.13 ± 0.10
y = 10.135x + 13.271 R = 0.6423 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 0 0.5 1 1.5 2 2.5 Kadar Klorofil a ( µg /m L) A k ti v it a s A n ti o k s id a n ( % ) y = 6.3264x + 25.29 R = 0.1334 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 Kadar Klorofil b ( µg / mL) A k ti v ita s A n ti o k s id a n (% ) y = 78.053x + 11.733 R = 0.8371 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 Kadar Karoten ( µg / m L) A k ti v it a s A n ti o k s id a n ( % )
Gambar 3 Grafik hubungan antara kandungan klorofil a, klorofil b, dan karoten dari ekstrak G.  verrucosa L . dengan aktivitas antioksidan metode penangkapan radikal bebas
Terdapat  korelasi  yang  cukup  besar  antara kadar  fenolik  total G.  verrucosa L . dengan  aktivitas penangkapan radikal bebas maupun dengan kemampuan mereduksinya, yang berarti senyawa fenolik dalam G.  verrucosa L . cukup  berperan  dalam menyumbangkan  aktivitas  antioksidannya.  Di  samping fenolik,  klorofil  a  dan  karoten  juga  mempunyai  korelasi yang  besar  dengan  aktivitas  penangkapan  radikal bebasnya, namun tidak demikian dengan klorofil b.

## KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  hasil  penelitian  ini  adalah  : aktivitas  antioksidan  dengan  metode  penangkapan radikal  bebas  oleh  DPPH  tertinggi  dari G.  verrucosa L . diperoleh  dari  ekstrak  aseton  (43.43%),  sedangkan dengan  metode  kemampuan  mereduksi  tertinggi diperoleh  dari  ekstrak  kloroform  (0.1756  meq K 4 Fe(CN) 6 /g ekstrak).  Kadar fenolik total G. verrucosa L . tertinggi  diperoleh  dari  ekstrak  aseton  (45.29  mg/g ekstrak).
Ekstrak G.  verrucosa L.  dapat  memerangi radikal  bebas  dengan  cukup  baik  (43.43%,  BHT  = 84.15%), namun kurang memiliki kemampuan mereduksi (0.1756  meqK 4 Fe(CN) 6 /g  ekstrak,  BHT=  6.1767  meq K 4 Fe(CN) 6 /g ekstrak).
Terdapat  korelasi  yang  cukup  besar  antara kadar  fenolik  total G.  verrucosa L . dengan  aktivitas penangkapan radikal bebas maupun dengan kemampuan mereduksinya, yang berarti senyawa fenolik dalam G.  verrucosa L . cukup  berperan  dalam menyumbangkan  aktivitas  antioksidannya.  Di  samping fenolik,  klorofil  a  dan  karoten  juga  mempunyai  korelasi yang  besar  dengan  aktivitas  penangkapan  radikal bebasnya, namun tidak demikian dengan klorofil b.

## DAFTAR PUSTAKA
Cho SH et al .2007.  The antioxidant properties of brown seaweed    ( Sargassum  siliquastrum )  extracts . J Med Food 10 (3): 479 – 485.
Duh,  Pin-Der.  1998.  Antioxidant  activity  of  burdock (Arctium lappa Linne) : its scavenging effect on free-radical and active oxygen . JAOCS 75 (4).
Ganesan  P,  Kumar  CS,    Bhaskar  N.  2008.  Antioxidant properties  of  methanol  extract  and  its  solvent fractions  obtained  from  selected  Indian  red  sea weeds. Bioresour Technol 99 (8) : 2717-2723.
Gross  J.  1987. Pigments  in  Fruits .  Toronto:  Academic Press.
Hernani  MR.  2004. Tanaman  Berkhasiat  Antioksidan. Bogor: Penebar Swadaya.
Indriani  H,  dan  Sumiarsih  E.1991. Budidaya, Pengolahan, dan Pemasaran Rumput
Laut. Jakarta: Penebar Swadaya.
Jayaprakasha  GK,  Selvi  T,  Sakariah  KK.  2002. Antibacterial  and  antioxidant  activities  of  grape ( Vitis  vinifera )  seed  extracts . Food  Research International 36: 117-122.
Kahkonen MP, Hopia AI, Vuorela HJ, Rauha J, Pihlaja K, Kujala  TS,    dan  Heinonen  M.1999.    Antioxidant activity  of  plant  extracts  containing  phenolic compounds.    J.  Agric .  Food  Chem 47  :  3954  – 3962.
Lestario  LN,  Christian  AE,    Martono  Y.  2008.  Aktivitas antioksidan  daun  ginseng  jawa  ( Talinum paniculatum ). AGRITECH (submitted).
Lichtenthaler  HK.  1987. Chlorophylls  and  Carotenoids  : Pigments  of  Photosynthetic  Biomembranes. Methods  in  Enzymology .  Weinheim:  Verlag Chemie.
Lim SN, Cheung PC, Ooi VE, Ang PO.2002.  Evaluation of  antioxidative  activity  of  extracts  from  a  brown seaweed,  Sargassum  siliquastrum. J  Agric  Food Chem 50 (13): 3862-3866.
Marquez  UML,  Barros  RMC,    Sinnecher  RP.      2005.
Antioxidant  Activity  of  Chlorophylls  dan  Their Derivates .  Brazil:  Department  of  Food  and Experimental Nutrition.
Mokbel  MS,  dan  Hashinaga  F.  2005.  Antibacterial  and antioxidant  activities  of  banana (Musa, AAA cv. Cavendish) fruits  peel . American  Journal  of Biochemistry and Biotechnology 1 (3): 125-131.
Molyneux  P.  2004.  The  Use  of  stable  free  radical diphenylpycryl-hydrazyl  (DPPH)  for  estimating antioxidant  activity . J  Sci  Technol 26(2)  :  211  – 219.
Negi  PS,  Chauhan  AS,    Sadia  GA,    Rohinishree  YS, Ramteke RS. 2004. Antioxidant and antibacterial activities  of  various  seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L.)  seed  extracts . Food  Chemistry 92:119-124.
Prakash D, Suri S, Upadhyav G, Singh BN.  2007.  Total phenol,  antioxidant,  and  free  radical  scaveging activities of some medicinal plants. Int J Food Sci Nutr 58 (1) : 18-28.
Qian  He,  Nihorimbere,  Venant.2004.  Antioxidant  power of  phytochemichals  from  psidium  guajava  leaf. Journal of Zhejiang University Science 5 (6).
Revilla E, Ryan JM,  and Ortega GM. 1998. Comparison of  several  procedures  used  for  the  extraction  of anthocyanins  from  red  grapes . Food  Chemistry 40: 4592-4597.
Soegiarto  A,  Sulistijo,  Atmadja  WS,    Mubarak  H.  1978. Rumput  Laut  (Algae). Jakarta:  Lembaga Oseanologi Nasional – LIPI.
Sreenivasan  S,  Ibrahim  D,  Kassim  MJN.  2007.  Free radical  scavenging  activity  and  total  phenolic compounds  of  gracilaria  changing. International Journal  of  Natural  and  Engineering  Sciences 1
(3):115-117.
Yan  X,  Chuda  Y,    Suzuki  M,  and  Nagata  T.1999. Fucoxantin  as  the  major  antioxidant  in  hijikia fusiformis,  a  common  edible  seaweed biosci.
Biotechnol Biochem 63 (3), 605-607.
Yildirim,  Ali,  Oktay  M,  and  Bilaloglu  V.  2001.  The antioxidant activity of leaves of Cydonia vulgaris . Journal Medicine Science. hlm. 31, 23-27.