## KETERKAITAN PROTEIN YANG MENGANDUNG THIOESTER (TEP) DENGAN IMUNITAS DARI NYAMUK ANOPHELES TERHADAP PLASMODIUM
Presticilla D. Irawan 1) dan Beivy J. Kolondam 1)
1) Program Studi Biologi FMIPA, Universitas Sam Ratulangi Manado E-mail: presticilla@ymail.com ; beivy.kolondam@unsrat.ac.id

## ABSTRAK
Protein thioester (TEP) merupakan promotor terjadinya fagositosis bakteri Gram positif dan Gram negatif  dalam  sistem  imun  serangga.  Salah  satu  TEP,  yaitu  TEP1  pada  nyamuk Anopheles berfungsi sebagai faktor komplemen yang membunuh Plasmodium . TEP1 nyamuk disintesis pada hemosit dan disekresikan dari hemolimfa. Hubungan TEP1 dengan protein dan enzim lain dapat menghalangi  perkembangan  ookista  dan  ookinet  pada  lambung  nyamuk  betina.  TEP1  nyamuk terdiri  dari  dua  alel  yaitu  alel  R  ( refractory /resisten)  dan  alel  S  ( susceptible /rentan).  Efektivitas kematian ookinet pada nyamuk TEP-S hanya 80% dan pada nyamuk TEP-R terjadi 100%. Respon imun  nyamuk  beralel  R  efektif  mematikan Plasmodium ,  namun  nyamuk  beralel  S  mendominasi populasi.
Kata-kata kunci: TEP, Anopheles, plasmodium, immunitas, malaria

## CONNECTION OF THIOESTER PROTEIN (TEP) AND IMMUNITY OF ANOPHELES MOSQUITO TO PLASMODIUM

## ABSTRACT
Protein  thioester  (TEP)  is  the  promotor  of  phagocytosis  for  Gram  Posistive  and  Gram  negative bacteria in insects immune system. One of the TEPs, the TEP1 are acting as complement factor to eliminate Plasmodium .  TEP1  is  syntetized  in  hemocyte  and  secreted  from  hemolymph.  The connection of TEP1 with other proteins and enzymes are able to inhibit the oocyst and ookinete in the gastric of female mosquitos. The TEP is consist of two alleles; The R  ( refractory ) and the S ( susceptible ).  The  death  of  ookinete  in  TEP-S  and  TEP-R  mosquitos  are  80%  and  100%, respectively. Immune respond of mosquitos with R-allele are effective to kill Plasmodium but the S-allele are dominant in the population.
Kata-kata kunci: TEP, Anopheles , Plasmodium , immunity, malaria

## PENDAHULUAN
Epidemi  penyakit  malaria di  wilayah tropis  dan  subtropis  dipengaruhi  oleh kepadatan  vektor  pembawa  parasit  malaria seperti nyamuk Anopheles . Kepadatan vektor tersebut  dapat  disebabkan  oleh  kelembaban dan  curah  hujan  yang  tinggi  pada  kedua daerah  tersebut  (Epstein et  al., 1998 dalam Suwito et  al .,  2010).  Malaria  merupakan penyebab  kematian  utama  di  75%  di  Afrika dan  25%  di  Asia  Tenggara  (Munif,  2009).
Penyakit malaria disebabkan oleh Plasmodium yang  menyerang  hati  dan  darah
inang  (Sreenivasamurthy et  al. ,  2013;  Arsin, 2012).  Pengendalian  pada  tingkat  vektor  dan parasit hingga saat ini masih ditekankan pada penggunaan  insektisida  maupun  produksi obat-obat  antimalaria.  Di  sisi  lain,  terjadinya resistensi  parasit  terhadap  zat  kimia  dalam insektisida  dan  obat-obatan  yang  disebabkan mutasi gen mengakibatkan peluang berkembangnya  kemampuan  parasit  resisten untuk  tumbuh  dalam  tubuh  inang  sehingga dapat  meningkatkan  jumlah  kasus  malaria (Simamora dan Fitri, 2007).
Penelitian  pada  tingkat  genom  dapat menjadi  salah  satu  cara  untuk  mengontrol
penyakit malaria. Banyak penelitian mengenai genom pada Anopheles
menghasilkan  gen  yang  potensial  yang memiliki fungsi imunitas bagi nyamuk untuk menghilangkan  berbagai  mikrobiota,  salah satunya Plasmodium .  Beberapa  penelitian diantaranya yaitu dikutip dari Li et al. (2013) berupa  gen  reseptor  (pendeteksi)  yang memiliki  kemampuan  untuk  menghalangi pembentukan  oosit Plasmodium seperti leucine-rich-repeats  protein (APL1C  dan LRIM1),  protein  dalam  golongan  fibrinogen (FREPs dan FBNs), protein yang mengandung  thioester  (TEPs),  dan C-type lectins (CTLs).
TEP1  ( Thioester-containing  Protein
1 )  adalah  glikoprotein  yang  dihasilkan  dari hemosit (sel darah nyamuk).  Dalam imunitas nyamuk Anopheles betina,  TEP1  berfungsi melawan  infeksi  mikroorganisme,  termasuk sel Plasmodium .  Protein  TEP1  nyamuk berperan  sebagai  zat  komplemen  (zat  yang dapat  melawan  infeksi)  yang  dapat  membuat sel  bakteri  Gram  positif  dan  bakteri  Gram negatif  mengalami  fagositosis  (Levashina et al .,  2001).  Peran  yang  lain  ialah  interaksi TEP1  dengan  protein  lain  seperti  APL1C (Anopheles  Plasmodium responsive  leucine- rich  repeat  1  C )  dan  LRIM1  (Anopheles gambiae leucine-rich repeat immune protein ), serta  enzim  seperti  HPX2 ( heme  peroxidase ) dan  NOX5  (NADPH oxidase  5 ),  yang  dapat mencegah  perkembangan  sel Plasmodium (Oliveira et al. , 2012; Povelones et al. , 2009). Peran  TEP1  tersebut  berkembang dengan  munculnya  publikasi  mengenai  alel TEP1  yang  bersifat  rentan  (TEP1-S)  dan resisten (TEP1-R) terhadap infeksi Plasmodium .  Selain  pada  nyamuk  betina, TEP1  juga  terdapat  pada  nyamuk  jantan,  di mana  diekspresikan  pada  testis.  TEP1  dan alelnya  dalam  penelitian  Pompon  dan Levashina  (2015)  memiliki  peran  untuk menentukan  fertilitas  nyamuk  jantan.  Peran TEP1  pada  nyamuk  jantan  secara  tidak langsung  berkaitan  dengan  penghasilan keturunan  betina  yang  membawa  kedua  sifat tersebut.  Ini  berpotensi  menjadi  solusi langkah  selanjutnya  untuk  pengendalian penyebaran  penyakit  malaria  pada  tingkat vektor.

## IMUNITAS SERANGGA DAN PROTEIN YANG  MENGANDUNG  THIOESTER (TEP)
Kelas  Insekta  (Invertebrata)  tidak memiliki  respon  imun  adaptif  seperti  hewan Vertebrata, sehingga hewan ini menggunakan kekebalan  bawaan  ( innate  immunity )  untuk imunitasnya  (Christophides et  al .,  2002). Kekebalan  bawaan  Insekta  diperlukan  dalam melawan  mikroorganisme  yang  masuk  ke dalam  tubuhnya  (Levashina et  al. ,  2003). Respon imun pada Insekta terdiri atas respon sel  ( cellular  reactions )  dan  respon  humoral ( humoral  reactions ).  Respon  humoral  terdiri atas  melanisasi,  penggumpalan  hemolimfa, dan sintesis peptida antimikroba. Respon sel, dalam hal ini mikroorganisme parasit atau sel apoptosis,  dapat  mengalami  fagositosis, terperangkap  dalam  formasi  nodul,  dan kapsulasi  oleh  hemosit  (Vilmoz  dan  Kurucz, 1998).
Protein  thioester  (TEP)  terdapat dalam  sel  banyak  spesies  nematoda,  insekta, moluska,  pisces,  aves,  dan  mamalia.  TEP memiliki  karakteristik  sekuens  homolog, termasuk  rantai  intra  β-cysteinyl-γ-glutamyl thioester,  dan  kecenderungan  menghasilkan interaksi  yang  sensitif  terhadap  konformasi ikatan  ganda,  sangat  reaktif,  dan  mudah dihidrolisis  oleh  air  (Blandin  dan  Levashina, 2004; Levashina et al. , 2003).
TEP  pada  insekta  pertama  kali ditemukan  pada  lalat  buah Drosophila melanogaster . Lagueux et al. (2000) membandingkan  sekuens Drosophila dengan sekuens  asam  amino  rantai  α  pada  sekuens komplemen  C3  manusia.  Dari  penelusuran tersebut  dihasilkan  ada  lima  gen  yang memiliki  kesamaan  pada  protein  thioester dengan  gen  pada  kelompok  C3  dan  α2M. Dari  kelima  gen  tersebut  hanya  4  yang termasuk  dalam  TEP,  yang  masing-masing diberi  kode  TEP1,  TEP2,  TEP3,  dan  TEP4. Ekspresi  gen  TEP  larva  dan  lalat  dewasa berada  pada  level  rendah,  namun  ekspresi mengalami peningkatan ketika terjadi imunitas.  Salah  satu  gen,  yaitu  TEP1, diproduksi di lemak tubuh.
Penelitian  imunitas  protein  thioester nyamuk Anopheles  gambiae dilakukan  oleh Levashina et  al. (2001)  terhadap  bakteri.
Eksperimen  dilakukan  dengan  menginkubasi bakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia coli pada medium aTEP1 (protein thioester pada Anopheles ) terkondisi MA dan
tanpa  MA,  kemudian  diikuti  dengan  proses immunobloting pada  ekstrak  dinding  sel bakteri,  menghasilkan  adanya  sinyal  aTEP1 pada  dinding  sel.  Hasil  ini  mengindikasikan adanya ikatan thioester yang terbentuk antara TEP1 dengan sel bakteri.
TEP  yang  berikatan  dengan  sel bakteri  dapat  berperan  sebagai  promotor untuk mendorong terjadinya fagositosis. Dari uji  selanjutnya  yang  dilakukan  dengan menggunakan  sel  nyamuk  5.1*  dan  bakteri (Gram  negatif: Eschericia  coli,  Serratia marcescens,  Salmonella  typhimurium ;  Gram positif: Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, Staphylococcus  aureus )  dengan  penanda fluorescent yang  diinkubasi  pada  medium terkondisi  aTEP1  serta  diikuti  dengan  proses dsRNA knockout pada  TEP1.  Nilai  PI ( phagocytic  index /indeks  fagositosis)  pada bakteri  Gram  negatif  lebih  tinggi  daripada bakteri Gram positif, mengindikasikan fagositosis dengan aTEP1 terjadi pada bakteri Gram  negatif  dibandingkan  dengan  bakteri Gram positif (Levashina et al ., 2001).

## PROTEIN TEP1 PADA NYAMUK BETINA
TEP1 pada nyamuk Anopheles
(aTEP1) memiliki massa molekul sebesar 165 kDa.  Sekuens  TEP1  terdiri  dari  segmen  N- terminal  dengan  signal  peptida  yang  bersifat hidrofobik. Seperti golongan protein thioester lain,  TEP1  disintesis  oleh  hemosit  lalu disekresikan  dari  hemolimfa  (Levashina et al. , 2003).
Fungsi  imunitas  gen  TEP1  pada nyamuk Anopheles  gambiae pada  awalnya dijelaskan  pada  nyamuk  betina.  Menurut Blandin et  al .  (2004),  TEP1  merupakan faktor  yang  terlibat  untuk  membunuh  parasit pada  nyamuk  dan  menentukan  kapasitas vektor  nyamuk.  TEP1  mengikat  permukaan ookinet  setelah  ookinet  melewat  jaringan epitel  lambung.  Ikatan  tersebut  berhubungan dengan  dua  puncak  regulasi  transkripsi. Ikatan langsung TEP1 tersebut
didemonstrasikan  dengan  penggunaan  strain Plasmodium  berghei yang  mengekspresikan GFP  ( Green  fluorescent  protein ).  Ookinet yang berikatan dengan TEP1 kehilangan GFP sebagai  penanda  vital,  kemudian  terjadi perubahan morfologi secara abnormal.
Kematian  parasit  tersebut  dikontrol oleh  protein  lain  selain  TEP1.  Spekulasi menyebutkan  TEP1  berfungsi  sebagai  faktor
komplemen.  Protein  lain  tersebut  dapat membuat  TEP1  berikatan  pada  parasit. Sebuah penelitian lain menyimpulkan pembentukan kompleks untuk aktivasi sistem komplemen pada hemolimfa dengan interaksi TEP1  dengan  protein  APL1C  (Anopheles Plasmodium responsive leucine-rich repeat 1 C ), dan LRIM1 (Anopheles gambiae leucine- rich repeat immune protein ), dapat menghalangi perkembangan ookista Plasmodium pada  lambung.  Kedua  protein tersebut  merupakan  protein  antagonis  yang membentuk  jembatan  disulfida  dengan  berat molekul yang tinggi dalam sirkulasi hemolimfa (Povelones et al. , 2009). Hubungan  enzim  HPX2  ( heme  peroxidase ) dan  NOX5  ( NADPH  oxidase  5 )  sebagai mediator  nitrasi  jaringan  epitel  lambung dengan TEP1 pada Anopheles gambiae dapat menargetkan  ookinet Plasmodium serta membuat  sel  tersebut  terdeteksi  sistem komplemen  dan  mengalami  lisis  (Oliveira et al. , 2012).

## ALEL GEN TEP1 DAN IMUNITAS NYAMUK ANOPHELES TERHADAP PLASMODIUM
Protein  TEP1  nyamuk  dikode  dua alel yang berbeda, yaitu alel R
( refractory /resisten )
dan alel S ( susceptible /rentan).  Perbedaan  peran  kedua alel (S dan R) dalam membunuh parasit diuji dengan menghilangkan ekspresi TEP1
menggunakan eksperimen
dsRNA knockdown ,  menghasilkan  jumlah  oosit dalam  tubuh  nyamuk  betina  yang  rentan mengalami  peningkatan  5  kali  lipat  di  perut, dan  pada  nyamuk  resisten  eksperimen tersebut mencegah melanisasi parasit, sehingga  resistensi  nyamuk  tersebut  hilang (Blandin et al. , 2004).
Parasit  melakukan  kontak  dengan komponen hemolimfa setelah melewati epitel lambung. Salah satu komponen adalah TEP1, mengenal  ookinet  lalu  mengikat  sel  tersebut. Kematian  parasit  tersebut  ditentukan  dengan cara lisis maupun dengan melanisasi. Blandin et  al. (2004)  menjelaskan  dua  model  respon imun  berdasarkan  alel  TEP.  Berdasarkan perbedaan  efektivitas  kematian  ookinet, hanya 80% ookinet yang mati pada nyamuk S dan  100%  pada  nyamuk  R.  Pada  nyamuk  S, kematian  hanya  terjadi  pada  proses  lisis sedangkan pada nyamuk R kematian meliputi
lisis  dan  melanisasi.  Dua  model  tersebut dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Dua model TEP1 pada nyamuk S dan R (Blandin et al., 2004)
Dari  penjelasan  dua  model  tersebut menyebutkan  bahwa  respon  imun  dari nyamuk  beralel  R  efektif  mematikan  parasit Plasmodium ,  namun  nyamuk  dengan  alel  S mendominasi  populasi  dan  menjadi  vektor yang  menyebabkan  epidemi  malaria  di berbagai wilayah. Penelitian terbaru dilakukan  oleh  Pompon  dan  Levashina (2015)  menjawab  fenomena  tersebut.  Alel TEP1  tertentu  memiliki  fungsi  dalam spermatogenesis  jantan,  di  mana  mekanisme yang terjadi adalah TEP1 dapat menandai dan berikatan dengan sel sperma yang rusak.
TEP1  di  dalam  testis  terdeteksi  pada spermatogonium  dan  spermatozoa  (kepala dan  ekor).  Perkembangan  nyamuk  dari  fase larva  hingga  dewasa  mempengaruhi  adanya gen  TEP1  pada  testis.  Berdasarkan  analisis immunofluorescence pada testis jantan pasca- kawin  yang  dibedah,  penurunan  sinyal TEP1 pada testis terjadi satu minggu setelah dewasa diikuti  dengan  fase  terminasi.  Peningkatan spermatogonium  dengan  sinyal  TEP1  terjadi setelah  kawin  (Pompon  dan  Levashina, 2015).
Mekanisme  pengikatan  TEP1  pada sel  sperma  terjadi  dengan  mekanisme  yang sama dengan TEP1 pada ookinet di lambung nyamuk  betina.  Salah  satu  eksperimen dilakukan  dengan  radiasi  untuk  menguji pengaruhnya  terhadap  fertilitas  nyamuk jantan.  Penggunaan  radiasi  menyebabkan adanya penurunan fertilitas nyamuk jantan, di mana  terjadi  peningkatan  jumlah  sel  sperma yang rusak. Hal ini berakibat pada menurunnya  produksi  telur  (ovulasi)  pada nyamuk  betina  dan  tingkat  penetasan
keturunan  ( hatching  progeny )  (Pompon  dan Levashina,  2015).  TEP1  yang  berikatan dengan  sel  sperma  yang  rusak  dibuktikan kembali  dari  hasil  uji  dengan  mengeliminasi protein  LRIM1  dan  HPX2  yang  terdeteksi pada  testis.  Hasil  menunjukkan  hilangnya ikatan  TEP1  dengan  sel  tetapi  tidak berpengaruh  terhadap  ekspresi  gen  TEP1 (Pompon  dan  Levashina,  2015).  Hal  ini membuktikan bahwa TEP1 merupakan faktor komplemen  yang  membutuhkan  interaksi dengan  protein  (Povelones et  al. ,  2009)  dan enzim  lain  (Oliveira et  al. ,  2012)  agar berikatan dengan sel Plasmodium .
Spermatogenesis  berakhir  dengan proses apoptosis, yaitu kematian sel terprogram. Apoptosis terjadi dengan pembentukan sel apoptosis, yaitu sel embrionik mati dengan nukleus dan sitoplasma  yang  telah  terkondensasi.  Setelah itu  sel  tersebut  ditelan  oleh  sel  fagositosis. Uji  TUNEL  ( TdT-mediated  dUTP  nick-end labelling )  dilakukan  pada  testis  kontrol dengan  testis  keturunan  F1  dari  perkawinan nyamuk  DSX  dan  nyamuk  transgenik  7b yang  telah  dimatikan  ekspresi  TEP1-nya. Perbandingan  hasil  uji  TUNEL  antara menunjukkan  bahwa  jumlah  sel  positif apotosis  pada  testis  keturunan  F1  (DSX-7b) lebih  tinggi.  Sehingga  ini  menunjukkan kemampuan komplemen TEP1 dalam berikatan  dengan  sel  sperma  dan  mendorong apoptosis  sel  tersebut  (Abrams et  al. ,  1993; Pompon dan Levashina, 2015).
TEP1  nyamuk  terdiri  dari  dua  alel, yaitu  alel  resisten  (TEP1-R)  dan  alel  rentan (TEP1-S)  yang  memiliki  perbedaan  dari tingkat  imunitas  terhadap  patogen.  Uji TUNEL dilakukan pada masing-masing testis nyamuk  homozygot  beralel  S1/S1  (rentan), S2/S2  (rentan),  dan  R1/R1  (resisten)  yang telah  dipapar  radiasi.  Proporsi  testis  dengan sel-sel  yang  mengalami  apoptosis  pada nyamuk  S2/S2  paling  rendah  di  antara  yang lain  (Gambar  2).  Hasil  ini  mengindikasikan bahwa  TEP1  alel  S2  lebih  efektif  mencegah radiasi yang menyebabkan penurunan kesuburan  nyamuk  jantan.  Ketiga  jenis nyamuk  diuji  kembali  dengan  penanda TUNEL  pada  kondisi  normal  (tanpa  radiasi). Tingkat  penetasan  keturunan  nyamuk  S2/S2 paling  tinggi  (Gambar  3),  menandakan nyamuk  beralel  TEP1  S2  memiliki  tingkat fertilitas yang tinggi (Pompon dan Levashina, 2015).
Gambar 2. Proporsi sel-sel apoptosis pada testis setiap alel TEP1, pada satu titik menunjukkan satu testis (Pompon dan Levashina, 2015)
Dengan  melihat  potensi  alel  TEP1 tertentu  yang  dapat  membunuh  parasit Plasmodium secara  efektif,  serta  hasil penelitian  mengenai  penyebab  keberadaan nyamuk  terinfeksi  parasit  yang  disebabkan oleh  dominasi  alel  rentan,  maka  proyeksi  ke depannya adalah bagaimana mengembangkan metode  yang  efektif  untuk  membuat  alel efektif tersebut masuk dalam populasi alami.
Gambar 3. Tingkat ovulasi dan penetasan larva dari tiga jenis alel (Pompon dan
Levashina, 2015)
Salah  satu  metode  yang  dapat dilakukan  untuk  pengendalian  vektor  yaitu rekayasa genetika untuk menghasilkan nyamuk Anopheles transgenik yang membawa  alel  R.  Serangga  resisten  parasit hasil rekayasa genetika memiliki peran dalam populasi  sebagai  pengganti  serangga  yang rentan, dan selanjutnya dapat menghilangkan penyebaran  penyakit  akibat  transmisi  parasit (Aksoy,  2003).  Keberhasilan  kontrol  genetik dengan  metode  tersebut  tidak  terlepas  dari penelusuran  lebih  lanjut  tentang  struktur populasi secara genetik dan aliran gen vektor tersebut (Collins et al. , 2000).

## KESIMPULAN
Gen  TEP1  berfungsi  sebagai  faktor komplemen dalam imunitas nyamuk Anopheles terhadap  infeksi Plasmodium . Kedua  alel  TEP1  memiliki  tingkat  imunitas yang  berbeda  di  mana  alel  R  (TEP1-R) berpotensi  membunuh  ookinet Plasmodium dan  alel  S  (TEP1-S)  berpotensi  menjadi faktor yang membuat nyamuk rentan terinfeksi Plasmodium .  Melihat  pengaruh
TEP1-S yang menyebabkan nyamuk
Anopheles rentan  terhadap  serangan  parasit, dominasi  TEP1-S  dalam  populasi  nyamuk Anopheles ,  serta  potensi  TEP1-R  dalam membunuh  parasit,  penelitian  di  masa  depan dalam  rekayasa  genetika  alel  TEP1-R  dapat dijadikan  solusi  untuk  mengatasi  penyebaran nyamuk Anopheles yang  membawa  parasit Plasmodium sebagai  penyebab  penyakit malaria.

## DAFTAR PUSTAKA
Abrams,  J.M.,  White,  K.,  Fessler,  L.I., Steller,  H.  1993.  Programmed  cell  death during Drosophila embryogenesis. Development 117(1): 29-43.
Aksoy,  S.  2003.  Control  of  tsetse  flies  and trypasonomes  using  molecular  genetics. Veterinary Parasitology 115(2): 125-145.
Arsin,  A.A.  2012. Malaria  Di  Indonesia: Tinjauan  Aspek  Epidemiologi .  Masagena Press, Makassar
Blandin, S., Levashina, E.A. 2004. Thioester- Containing  Protein  and  Insect  Immunity.
Molecular Immunology 40(12): 903-908.
Blandin,  S.,  Shiao,  S.H.,  Moita,  L.,  Janse, C.J., Waters, A.P., Kafatos, F.C.,
Levashina,  E.  2004.  Complement-Like Protein  TEP1  is  a  Determinant  of Vectorial Capacity in The Malaria Vector Anopheles gambiae. Cell 116(5): 661-670.
Christophides,  G.K.,  Zdobnov,  E.,  Barillas- Mury,  C.,  Birney,  E.,  Blandin,  S.,  Blass, C., Brey, P.T., Collins, F.H., Danielli, A., Dimopoulos,  G.,  Hetru,  C.,  Hoa,  N.T., Hoffmann,  J.A.,  Kanzok,  S.M.,  Letunic, I.,  Levashina,  E.A.,  Loukeris,  T.G., Lycett, G., Meister, S., Michel, K., Moita, L.F.,  Mu¨ller,  H.,  Osta,  M.A.,  Paskewitz, S.M., Reichhart, J., Rzhetsky, A., Troxler, L.,  Vernick,  K.D.,  Vlachou,  D.,  Volz,  J., von  Mering,  C.,  Xu,  J.,  Zheng,  L.,  Bork, P.,  Kafatos,  F.  2002.  Immunity-Related Genes  and  Gene  Families  in Anopheles gambiae . SCIENCE 298(5591): 159-165.
Collins,  F.H.,  Kamau,  L.,  Ranson,  H.A.,
Vulule, J.M. 2000. Molecular entomology and prospects for malaria control. Bulletin of the World Health Organization 78 (12): 1412-1423.
Lagueux,  M.,  Perrodou,  E.,  Levashina,  E.,
Capovilla,  M.,  Hoffman,  J.A.  2000. Constitutive Expression of A Complement-like Protein in Toll and JAK
Gain-of-function  mutants  of  Drosophila.
PNAS 97(21): 11427-11432.
Levashina,  E.A.,  Blandin,  S.,  Moita,  L.F., Lagueux, M., Kafatos, F.C. 2003.
Thioester-Containing of Protostomes. Innate  Immunity .  Humana  Press,  New
Jersey
Levashina,  E.A.,  Moita,  L.F.,  Blandin,  S., Vriend,  G.,  Lagueux,  M.,  Kafatos,  F. 2001.  Conserved  Role  of  a  Complement- like  Protein  in  Phagocytosis  Revealed  by dsRNA  Knockout  in  Cultured  Cells  of The  Mosquito, Anopheles  gambiae . Cell 104(5): 709-718.
Li,  J.,  Wang,  X.,  Zhang,  G.,  Githure,  J.I., Yan,  G.,  James,  A.A.  2013.  Genome-
block expression-assisted association studies  discover  malaria  resistance  genes ini  Anopheles  gambiae. PNAS 110  (51): 20675 – 20680.
Munif, A. 2009. Nyamuk Vektor Malaria dan Hubungannya Dengan Aktivitas Kehidupan Manusia di Indonesia.
Aspirator 1(2): 94 – 102.
Oliveira, D., Lieberman, J., Barillas-Mury, C.
2012. Epithelial Nitration by a Peroxidase/NOX5 System Mediates Mosquito Antiplasmodial Immunity. Science 335 (6070): 856-859.
Pompon,  J.,  Levashina,  E.A.  2015.  A  New Role  of  the  Mosquito  Complement-like Cascade  in  Male  Fertility  in  Anopheles gambiae. PLOS Biology 13(9): e1002255.
Povelones,  M.,  Waterhouse,  R.M.,  Kafatos, F.C.,  Christophides,  G.K.  2009.  Leucine- rich  repeat  preotein  complex  activates mosquito  complement  in  defense  against Plasmodium parasites. Science 324(5924): 258-261.
Simamora,  D.,  Fitri,  L.E.  2007.  Resistensi Obat Malaria: Mekanisme dan Peran Obat
Kombinasi Obat Antimalaria Untuk Mencegah. Jurnal  Kedokteran  Brawijaya 23(2): 82-91.
Sreenivasamurthy,  S.,  Dey,  G.,  Ramu,  M., Kumar, M., Gupta, M.K., Mohanty, A.K., Harsha,  HC.,  Sharma,  P.,  Kumar,  N., Pandey,  A.,  Kumar,  A.,  Prasad,  T.  K. 2013.  A  compendium  of  molecules involved  in  vector-pathogen  interactions pertaining to malaria. Malaria Journal 12: 216.
Suwito, Hadi, U.K., Sigit, S.H., Sukowati, S.
2010. Hubungan Iklim, Kepadatan Nyamuk Anopheles dan Kejadian
Penyakit Malaria. J. Entomol. Indon. 7 (1): 42-53.
Vilmoz,  P.,  Kurucz,  E.  1998.  Insect immunity:  evolutionary  roots  of  the mammalian innate immune system.
Immunology Letters 62(2): 59-66.