Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)

## INVENTARISASI DAN STRATEGI PENATAAN KOLEKSI PTERIDOPHYTA DI RUMAH KACA KEBUN RAYA PURWODADI
Elga Renjana*, Elok Rifqi Firdiana
Pusat Penelitian Konservasi Tumbuhan dan Kebun Raya – LIPI, Jalan Ir. H. Juanda No. 13 Bogo, Jawa Barat, Indonesia 16122 *E-mail: elgarenjana@gmail.com Paper submit: 5 Agustus 2019, Paper publish: September 2020
Abstrak- Pteridophyta merupakan salah satu koleksi tumbuhan yang dimiliki oleh Kebun Raya Purwodadi. Pemeliharaan koleksi Pteridophyta dilakukan di dalam rumah kaca karena iklim di Kebun Raya Purwodadi panas dan kering. Metode pada penelitian ini adalah inventarisasi yang dilakukan dengan menghimpun data koleksi dari Unit Registrasi Kebun Raya Purwodadi dan dilanjutkan dengan observasi lapangan. Hasil inventarisasi menunjukkan bahwa Kebun Raya Purwodadi memiliki 36 jenis koleksi Pteridophyta yang terdiri atas 20 suku dan 38 marga. Suku yang paling banyak ditemukan adalah Nephrolepidaceae dan terdiri atas Nephrolepis bisserata Sw. Schott, N. cordifolia (L.) C. Presl., N. exaltata (L.) Schott, N. falcata (Cav.) C. Chr., N. hirsutula (G. Forst.) C. Presl., dan N. radicans (Burm.) Kuhn. Selain itu, Psilotum nudum (L.) P. Beauv. merupakan jenis koleksi Pteridophyta yang masuk pada IUCN Red List dengan kategori terancam punah. Untuk mempermudah proses pemeliharaan dan monitoring, dilakukan penataan koleksi Pteridophyta dengan pengelompokan berdasarkan marga dan diurutkan mulai kelompok paling primitif hingga modern. Hasil penataan ini dapat memberikan nilai edukasi kepada pengunjung Kebun Raya Purwodadi, khususnya para pelajar.
Kata kunci: inventarisasi, Kebun Raya Purwodadi, penataan, Pteridophyta

## Pendahuluan
Pteridophyta atau sering dikenal sebagai tumbuhan paku merupakan kelompok tumbuhan yang telah ada sejak 360 juta tahun yang lalu (Bandyopadhyay and Mukherjee, 2014). Habitat tumbuhan paku pada umumnya berada di tanah, menempel pada tumbuhan lain (epifit), dan di air dengan tingkat kelembapan yang relatif tinggi. Namun, tumbuhan paku juga dapat hidup di daerah dengan tingkat kelembapan yang rendah. Pteridophyta adalah suatu divisi tumbuhan yang telah memiliki sistem pembuluh sejati dan sudah dapat dibedakan antara bagian akar, batang, dan daunnya (Kasetsart, 2016). Pteridophyta tidak menghasilkan bunga dan juga tidak bereproduksi menggunakan biji. Menurut Rothfels et al. (2012), kelompok tumbuhan ini menggunakan spora sebagai alat generatifnya.
Oleh sebab itu, kelompok tumbuhan ini juga tergolong sebagai tumbuhan tingkat rendah (Tjitrosoepomo, 1994). Tumbuhan paku dikenal memiliki banyak manfaat. Jenis paku seperti Pteris biaurita , Lygodium flexiusoam , Hemionitis arifolia , dan Actinopteris radiate dilaporkan mengandung senyawa flavonoid yang memiliki kemampuan sebagai obat dan antimikroba (De Britto et al., 2012). Beberapa jenis tumbuhan paku juga dikenal sebagai hiperakumulator logam berat, seperti P. vittata yang diketahui mampu mengakumulasi logam berat arsenik (As) dalam jumlah besar (Natarajan et al., 2011). Selain itu, tumbuhan paku juga memiliki peran ekologi yang sangat penting. Scheffers et al. (2014) melaporkan bahwa jenis tumbuhan paku epifit seperti Asplenium nidus , dapat menciptakan iklim mikro pada lingkungan di bawah naungannya. Kondisi tersebut menyebabkan
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
A. nidus menjadi tempat tinggal bagi beberapa jenis invertebrata.
Kebun Raya Purwodadi merupakan salah satu Balai Konservasi Tumbuhan di bawah Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) yang memiliki tugas untuk melakukan konservasi ex situ tumbuhan dataran rendah kering. Kebun Raya Purwodadi juga dikenal sebagai “Hortus Iklim Kering Purwodadi” karena berada pada daerah beriklim kering bila dibandingkan dengan Kebun Raya Bogor, Kebun Raya Cibodas, dan Kebun Raya Eka Karya Bali. Di samping itu, Kebun Raya Purwodadi memiliki luas lahan sekitar 85 hektar dengan lebih dari 10.000 jenis koleksi tumbuhan. Koleksi tumbuhan tersebut terdiri atas kelompok Spermatophyta, Magnoliophyta, dan Pteridophyta (Lestari et al., 2012). Berdasarkan buku katalog tumbuhan Kebun Raya Purwodadi periode tahun 2007-2012, tercatat sebanyak 22 suku dan 38 marga koleksi tumbuhan paku. Koleksi tersebut disimpan dan dipelihara di dalam rumah kaca. Kondisi iklim kering di Kebun Raya Purwodadi mengakibatkan intensitas cahaya dan suhu udara cenderung tinggi, serta kelembapan udara yang rendah. Cahaya, suhu, dan kelembapan merupakan faktor abiotik yang sangat berperan bagi pertumbuhan dan perkembangan tumbuhan paku, terutama pada proses perkecambahan spora dan fase gametofit (Johnson & Manickam, 2009). Sementara itu, mayoritas tumbuhan paku hidup di lingkungan yang teduh dan lembap. Oleh sebab itu, diperlukan metode pemeliharaan yang tepat
agar koleksi Pteridophyta di Kebun Raya Purwodadi dapat tumbuh dengan baik. Penelitian ini bertujuan untuk menginventarisasi kembali koleksi tumbuhan paku yang terdapat di rumah kaca Kebun Raya Purwodadi. Observasi lapangan juga dilakukan untuk mengetahui kondisi eksisting koleksi tumbuhan paku. Selain itu, perancangan konsep penataan koleksi juga dilakukan agar pemeliharaan koleksi tumbuhan paku dapat berjalan dengan optimal.

## Metode Penelitian

## 1.  Inventarisasi Koleksi Pteridophyta
Penelitian ini dilakukan di rumah kaca Kebun Raya Purwodadi (Gambar 1) pada bulan April – Mei  2019. Proses inventarisasi dilakukan dengan menghimpun data koleksi dari Unit Registrasi Kebun Raya Purwodadi dan dilanjutkan dengan observasi lapangan. Selain itu, setiap koleksi tumbuhan paku diverifikasi kebaruan nama ilmiahnya melalui situs The Plant List (http://www.theplantlist. org/). Status konservasi koleksi tumbuhan juga diverifikasi melalui situs IUCN (https:// www.iucnredlist.org), sehingga dapat diketahui apakah terdapat koleksi yang termasuk dalam kategori punah ( extinct ; EX), punah di alam liar ( extinct in the wild ; EW), kritis atau terancam punah ( critically endangered ; CR), terancam ( endangered ; EN), rentan ( vulnurable ; VU), hampir terancam ( near threatened ; NT), resiko rendah ( least concern ; LC), atau data kurang ( data deficient ; DD).
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795
UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Gambar 1.  Peta Kebun Raya Purwodadi (inset: rumah kaca)
2.  Konsep Penataan Koleksi Pteridophyta Penataan koleksi Pteridophyta dilakukan melalui beberapa kegiatan. Kegiatan pertama adalah melakukan observasi langsung ke lapangan untuk melihat kondisi eksisting lahan dan koleksi Pteridophyta. Selanjutnya, konsep penataan dirancang dan didiskusikan bersama Sub unit Taman dan Rumah Kaca Display Kebun Raya Purwodadi. Rancangan konsep penataan yang telah disepakati kemudian divisualisasikan dalam bentuk desain gambar untuk mempermudah proses realisasi. Perancangan konsep penataan koleksi Pteridophyta juga memperhatikan beberapa aspek nilai, yaitu nilai ilmiah, edukasi, dan estetika.

## Hasil dan Pembahasan

## 1.  Koleksi Pteridophyta di Rumah Kaca
Kebun Raya Purwodadi
Berdasarkan hasil inventarisasi, diperoleh data yang menunjukkan bahwa Kebun Raya Purwodadi memiliki 36 jenis koleksi Pteridophyta yang telah teridentifikasi dan tersimpan di dalam rumah kaca. Koleksi tersebut terdiri atas 20 suku dan 38 marga (Tabel 1). Dibandingkan dengan data sebelumnya pada tahun 2012, diketahui bahwa terdapat pengurangan sebanyak dua
suku, yaitu Adiantaceae dan Sinopteridaceae. Berdasarkan hasil verifikasi melalui situs The Plant List, suku Adiantaceae telah dikelompokkan dalam suku Pteridaceae, sedangkan suku Sinopteridaceae dikelompokkan dalam suku Dryopteridaceae. Hal tersebut menyebabkan koleksi Pteridophyta Kebun Raya Purwodadi menjadi 20 suku.  Dengan demikian, pengurangan suku pada inventarisasi kali ini bukan karena ketiadaan spesimen, melainkan karena perubahan klasifikasi pada Pteridophyta.
Berdasarkan cara hidup dan asalnya, sebagian besar koleksi Pteridophyta Kebun Raya Purwodadi merupakan tumbuhan terestrial dan berasal dari wilayah Jawa Timur (Tabel 1). Dengan demikian, diperlukan penambahan koleksi Pteridophyta epifit dan berasal dari luar wilayah Jawa Timur untuk melengkapi koleksi Pteridophyta di Kebun Raya Purwodadi.
Dari 36 jenis koleksi Pteridophyta yang telah diidentifikasi, lima di antaranya masuk ke dalam daftar IUCN Red List . Empat jenis termasuk ke dalam Least concern , yaitu Diplazium esculentum , Egenolfia appendiculata , Acrostichum aureum , dan Lygodium microphyllum ; sedangkan satu jenis termasuk ke dalam Critically endangered , yaitu Psilotum nudum (Tabel 1). Dengan demikian, jenis-jenis tersebut layak menjadi prioritas untuk dikonservasi.
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Tabel 1. Koleksi Pteridophyta di rumah kaca Kebun Raya Purwodadi Suku Jenis Nama Indonesia Nama Inggris Cara Hidup Asal Status IUCN Aspleniaceae Asplenium nidus L. Pakis sada Sickle spleenwort Epifit Kalimantan Timur - Asplenium polyodon G. Forst. Paku sarang burung Bird’s-nest fern Epifit Jawa Timur - Asplenium sp. Paku sarang Spleenworts Epifit Kalimantan Timur - Athyriaceae Athyrium accedens (Blume) Milde Pakis angkrik Lady fern Terestrial Jawa Timur - Athyrium sp. - - Terestrial Jawa Timur - Diplazium esculentum (Retz.) Sw. Paku sayur Vegetable fern Terestrial Jawa Timur Least concern Diplazium pallidum T.Moore - - Terestrial Jawa Timur - Blechnaceae Blechnum orientale L. Paku lipan Centipede fern Terestrial Jawa Timur - Stenochlaena palustris (Burm.f.) Bedd. Lemidi Swamp vine fern Terestrial Jawa Timur - Cyatheaceae Cyathea sp. Paku pohon Tree fern Terestrial Jawa Timur - Davalliaceae Davallia sp. - Foot fern Epifit Kalimantan Timur - Dryopteridaceae Ctenitis sp. - Lace fern Terestrial Jawa Timur - Dryopteris sp. Pakis kayu Wood fern Terestrial Jawa Timur, NTT - Egenolfia appendiculata (Willd.) J. Sm. - - Terestrial Jawa Timur Least concern Pleocnemia conjugata (Blume) C. Presl - - Terestrial Jawa Timur - Pleocnemia sp. - - Terestrial Jawa Timur - Equisetaceae Equisetum ramossisimum Desf. Paku ekor kuda bercabang Branched horsetail Terestrial Jawa Timur - Lindsaeaceae Lindsaea sp. Paku kalung Necklace fern Terestrial Jawa Timur - Lomariopsidaceae Bolbitis sp. - - Terestrial NTT, Sulawesi Tenggara - Lycopodiaceae Lycopodiella cernua (L.) Pic. Serm. Paku kawat Stag-horn moss Terestrial Sulawesi Selatan - Lygodiaceae Lygodium circinatum (Burm.f.) Sw. Paku hata Red finger fern Terestrial Jawa Timur - Lygodium microphyllum (Cav.) R.Br Paku krokot Old world climbing fern Terestrial Jawa Timur Least concern Lygodium sp. Pakis panjat Climbing fern Terestrial Jawa Timur - Marattiaceae Angiopteris evecta (G.Forst.) Hoffm. Paku gajah Giant fern Terestrial Jawa Timur - Angiopteris sp. - - Terestrial Jawa Timur -
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Suku Jenis Nama Indonesia Nama Inggris Cara Hidup Asal Status IUCN Nephrolepidaceae Nephrolepis biserrata Sw. Schott Paku larat Giant sword fern Terestrial Jawa Timur - Nephrolepis cordifolia (L.) C.Presl. Paku acel Erect sword fern Terestrial Jawa Timur - Nephrolepis exaltata (L.) Schott Pakis pedang Boston fern Terestrial Jawa Barat - Nephrolepis falcata (Cav.) C.Chr. Pakis buntut ikan Fishtail fern Terestrial Jawa Timur - Nephrolepis hirsutula (G.Forst.) C. Presl. Paku kinca Scaly sword fern Terestrial Jawa Timur - Nephrolepis radicans (Burm.) Kuhn. - - Terestrial Jawa Timur - Nephrolepis sp. Paku pedang Sword fern Terestrial Sulawesi Tenggara - Ophioglossaceae Helminthostachys zeylanica (Houtt.) Sledge. Pakis kaler Flowering fern Terestrial Jawa Timur - Polypodiaceae Aglaomorpha sp. - Basket fern Epifit Sulawesi Utara - Loxogrammae sp. - - Epifit Sulawesi Tengah - Microsorum rubidium (J. Sm.) Copel - - Epifit Jawa Timur - Microsorum sp. - Wart fern Epifit Kalimantan Timur - Neocheiropteris zippelii (Blume) Bosman - - Epifit NTT - Phymatosorus membranifolium (R. Br.) S.G. Lu - - Epifit Jawa Timur - Pyrrosia sp. - Felt fern Epifit Kalimantan Timur, NTT - Psilotaceae Psilotum nudum (L.) P. Beauv. Paku kumpai sapu Whisk fern Terestrial Jawa Timur Critically endangered Pteridaceae Acrostichum aureum L. Paku laut Golden leathe fern Terestrial Jawa Timur Least concern Adiantum caudatum L. Suplir berekor Tailed maidenhair Terestrial Jawa Timur - Adiantum hispidulum Sw. - Rough maidenhair Terestrial Jawa Timur - Adiantum sp. Suplir Maidenhair fern Terestrial Jawa Barat - Adiantum tenerum Sw. Suplir rumpun Brittle maidenhair Terestrial Jawa Timur - Adiantum trapeziforme L. Suplir kedondong Diamond maidenhair Terestrial Jawa Barat - Antrophyum sp. - Lineleaf fern Terestrial Jawa Timur - Pteris ensiformis Burm.f. Pakis renda perak Slender brake Terestrial Jawa Timur - Pteris sp. - Brake fern Terestrial Maluku -
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Suku Jenis Nama Indonesia Nama Inggris Cara Hidup Asal Status IUCN Selaginellaceae Selaginella frondosa Warb. - - Terestrial Jawa Timur - Selaginella plana (Desv. ex Poir.) Hieron Paku rane biru Asian spike moss Terestrial Jawa Timur - Selaginella sp. Paku rane Spike moss Terestrial Kalimantan Timur - Tectariaceae Arcypteris sp. - - Terestrial Jawa Timur - Tectaria aurita (Sw.) S.Chandra. - - Terestrial Jawa Timur - Tectaria polymorpha (Wall. ex Hook) Copel. - - Terestrial Jawa Timur - Tectaria sp. - Haldberd fern Terestrial Jawa Timur - Thelypteridaceae Cyclosorus aridus (D. Don) Tagawa - - Terestrial Jawa Timur - Cyclosorus sp. - - Terestrial Sulawesi Tenggara - Sphaerostephanos sp. - - Terestrial Jawa Timur - Thelypteris sp. - Maiden fern Terestrial Sulawesi Tenggara - Hasil inventarisasi menunjukkan bahwa suku dengan jumlah spesimen koleksi terbanyak (> 20 spesimen koleksi) adalah Nephrolepidaceae, Pteridaceae, dan Polypodiaceae (Tabel 2). Di samping itu, marga dengan jumlah spesimen koleksi terbanyak (> 10 spesimen koleksi) adalah Nephrolepis , Adiantum , Angiopteris , dan Selaginella (Tabel 3). Suku Nephrolepidaceae dan marga Nephrolepis merupakan koleksi Pteridophyta yang paling banyak dimiliki oleh Kebun Raya Purwodadi dengan persentase mencapai 19,90%.
Hovenkamp & Miyamoto (2005) menyatakan bahwa Nephrolepis merupakan salah satu marga tumbuhan paku yang banyak dijumpai di daerah tropis dan subtropis. Nephrolepis juga mudah tumbuh bila dibandingkan dengan tumbuhan paku lainnya (Brenzel, 2007). Berdasarkan hal tersebut, banyaknya koleksi Nephrolepis di Kebun Raya Purwodadi dapat diasumsikan karena berada pada kondisi lingkungan yang sesuai (daerah tropis) sehingga dapat tumbuh dengan optimal.
Tabel 2. Suku koleksi Pteridophyta dengan jumlah koleksi terbanyak di rumah kaca Kebun Raya Purwodadi
Suku Jumlah Spesimen Koleksi Persentase (%) Nephrolepidaceae 40 19,90% Pteridaceae 28 13,93% Polypodiaceae 25 12,44% Tectariaceae 14 6,97% Marattiaceae 13 6,47% Selaginellaceae 11 5,47% Aspleniaceae 10 4,98% Thelypteridaceae 10 4,98% Dryopteridaceae 9 4,48% Lomariopsidaceae 8 3,98%
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Tabel 3. Marga koleksi Pteridophyta dengan jumlah spesimen koleksi terbanyak di rumah kaca Kebun Raya
Purwodadi Marga Jumlah Spesimen Koleksi Persentase (%) Nephrolepis 40 19,90% Adiantum 17 8,46% Angiopteris 13 6,47% Selaginella 11 5,47% Asplenium 10 4,98% Microsorum 9 4,48% Tectaria 9 4,48% Bolbitis 8 3,98% Loxogramme 8 3,98% Pteris 7 3,48%
Dari total 40 spesimen koleksi Nephrolepis , sebanyak 29 spesimen koleksi telah diidentifikasi jenisnya. Dari hasil identifikasi tersebut, terdapat 6 jenis Nephrolepis yang ada di rumah kaca Kebun Raya Purwodadi, yaitu N. bisserata, N. cordifolia, N. exaltata, N. falcata, N. hirsutula, dan N. radicans . Koleksi Nephrolepis dengan jumlah terbanyak adalah jenis N . cordifolia. Hal ini karena N . cordifolia memiliki tingkat adaptasi yang baik pada semua jenis tanah, toleran terhadap paparan sinar matahari, dan mampu bertahan hidup selama musim kemarau (Rushing, 2006). Di samping itu, N . cordifolia banyak tersebar di daerah tropis, subtropis, dan Mediterania (Riefner & Smith, 2015).
Nephrolepis cordifolia adalah jenis paku yang dikenal dengan nama lokal paku pedang/ paku sepat/paku tulang ikan. Habitat teresterial di tempat teduh dan lembap (Gambar 2A). Batang berwarna coklat gelap dan berbulu halus berwarna coklat terang. Daun majemuk menyirip genap dengan jumlah anak daun genap dan saling bersilangan (Gambar 2B). Daun yang masih muda menggulung berwarna hijau, permukaan daun halus, tepi daun bergerigi, dan ujung daun runcing. Perakaran berupa rhizoma dan memiliki umbi yang bersisik (Gambar 2C). Sorus berbentuk lunulate (seperti bulan sabit) dan berada di peruratan daun bagian tepi- tengah (Hovenkamp & Miyamoto, 2005).
Psilotum nudum (Gambar 3) yang termasuk dalam tumbuhan terancam punah ( critically endangered ) dikenal dengan sebutan “whisk fern” atau kumpai sapu (Qiu & Palmer, 1999). Tumbuhan ini merupakan paku purba yang sudah ada sejak 400 juta tahun yang lalu (Yamakazi et al., 2001).
Psilotum nudum berkerabat dekat dengan P . complanatum (Margulis & Chapman, 2009; Suhono, 2012). Ciri khas tumbuhan paku ini adalah percabangannya yang menggarpu. Batang berbentuk bulat-segitiga dan berwarna hijau. Kantong spora ( synangium ) berbentuk seperti tiga bulatan yang menyatu dan menempel pada bagian yang menonjol pada batang ( bracts ).
Gambar 2. Koleksi N. cordifolia (L.) C. Presl. di rumah kaca Kebun Raya Purwodadi, habitus (A), daun (B), dan umbi (C)
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Gambar 3. Koleksi P . nudum (L.) P. Beauv. di rumah kaca Kebun Raya Purwodadi ( bracts , b; scaly leaves , sc; synangium , sy)
Synangium berwarna hijau ketika belum matang dan akan berubah warna menjadi kuning cerah seiring matangnya spora di dalamnya. Daun berwarna hijau dengan bentuk seperti sisik ( scaly leaves ), berukuran kecil (mikrofil), dan runcing. Berdasarkan pantauan di lapangan, P . nudum ditanam pada media tanah dan tumbuh dengan baik di rumah kaca Kebun Raya Purwodadi. Hal ini karena P . nudum
merupakan paku epifit di bebatuan, permukaan tanah, atau batang tumbuhan lain dan tersebar di daerah tropis maupun subtropis (Fairley & Moore, 1989; Nazarian et al., 2010). Selain itu, P . nudum dapat dikultivasi dan ditumbuhkan di dalam rumah kaca (Nazarian et al., 2010). Sebagian besar koleksi Pteridophyta di Kebun Raya Purwodadi diperoleh dari kegiatan eksplorasi lapangan di berbagai daerah. Berdasarkan hasil inventarisasi juga didapat informasi mengenai asal setiap koleksi tumbuhan paku. Mayoritas koleksi tumbuhan paku berasal dari Pulau Jawa, sedangkan koleksi dari pulau lainnya jumlahnya jauh lebih sedikit (Tabel 4). Di samping itu, belum terdapat koleksi Pteridophyta yang berasal dari Pulau Sumatera, Bali, dan Papua. Hal ini menunjukkan bahwa koleksi Pteridophyta Kebun Raya Purwodadi masih belum dapat mewakili keanekaragaman Pteridophyta di Indonesia. Oleh sebab itu, Kebun Raya Purwodadi perlu melakukan kegiatan eksplorasi tumbuhan Pteridophyta, khususnya pada daerah-daerah di luar Pulau Jawa.
Tabel 4. Pulau asal koleksi Pteridophyta di rumah kaca Kebun Raya Purwodadi Pulau Asal Koleksi Jumlah Spesimen Koleksi Persentase (%) Jawa 61 62,89% Sulawesi 9 9,28% Nusa Tenggara 8 8,25% Kalimantan 7 7,22% Maluku 2 2,06%

## 2.  Konsep Penataan Koleksi Pteridophyta di Rumah Kaca Kebun Raya Purwodadi
Hasil observasi langsung di lapangan menunjukkan bahwa penataan koleksi Pteridophyta di rumah kaca Kebun Raya Purwodadi lebih menonjolkan nilai estetika. Koleksi tidak dikelompokkan berdasarkan jenis, marga, ataupun suku, bahkan terdapat jenis tertentu yang tersebar di beberapa titik. Penataan tersebut tidak menunjukkan nilai ilmiah yang seharusnya diterapkan oleh Kebun Raya Purwodadi yang salah satu fungsinya adalah sebagai kawasan pendidikan. Di
samping itu, penataan koleksi juga terlalu rapat dan bergerombol, sehingga menyebabkan pemeliharaan koleksi kurang optimal. Berdasarkan hasil pantauan di lapangan, terdapat koleksi dengan kondisi daun yang layu bahkan kering karena kekurangan air. Hal tersebut karena penyiraman dilakukan dengan sprinkle , sehingga air tidak dapat menjangkau media tanam akibat tertahan di permukaan daun yang saling merapat antara koleksi satu dengan yang lain. Penataan yang terlalu rapat juga menyulitkan aktivitas monitoring kondisi label koleksi. Akibatnya terdapat koleksi yang
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
tidak beridentitas karena label terlepas atau rusak.
Sementara itu, koleksi Pteridophyta Kebun Raya Purwodadi dapat dikelompokkan menjadi empat subdivisi. Pada pengelompokan tingkat subdivisi ini, mayoritas koleksi Pteridophyta adalah kelompok Pteropsida (Tabel 5). Pengelompokan tingkat subdivisi juga dapat memberikan informasi mengenai kelompok Pteridophyta primitif hingga modern. Kelompok pertama adalah Psilopsida. Kelompok ini dikenal sebagai paku purba dan telah ada sejak zaman Silurian hingga Devodian. Kelompok kedua adalah Lycopsida yang dikenal sebagai paku kawat dan mulai ada sejak zaman Devodian hingga Karboniferus. Kelompok
ketiga adalah Equisetopsida atau Sphenopsida. Kelompok ini dikenal sebagai paku ekor kuda dan mulai muncul pada zaman Karboniferus. Kelompok keempat adalah Pteropsida yang merupakan paku sejati atau paku modern dengan tingkat keanekaragaman yang paling tinggi (Roux, 2003).
Berdasarkan hasil observasi dan inventarisasi tersebut, perancangan konsep penataan koleksi Pteridophyta harus mempertimbangkan nilai ilmiah dan kemudahan teknis pemeliharaan koleksi. Oleh sebab itu, konsep penataan yang dapat dilakukan adalah dengan mengelompokkan koleksi Pteridophyta berdasarkan kelompok marga dan diurutkan mulai dari Pteridophyta primitif hingga modern.
Tabel 5. Pengelompokan koleksi Pteridophyta Kebun Raya Purwodadi berdasarkan tingkat subdivisi
Subdivisi Jumlah Spesimen Koleksi Persentase (%) Psilopsida 3 1,49% Lycopsida 12 5,97% Equisetopsida 1 0,50% Pteropsida 185 92,04% Pengelompokan berdasarkan kelompok marga bertujuan agar koleksi Pteridophyta tertata lebih rapi, mempermudah proses perawatan dan monitoring. Hal ini juga bertujuan untuk mengantisipasi apabila terdapat label koleksi yang hilang atau rusak, sehingga koleksi dapat dikenali secara langsung karena telah dikelompokkan sesama marganya. Pengelompokan ini juga akan menunjukkan keanekaragaman jenis koleksi Pteridophyta pada masing-masing marga. Sementara itu, konsep penataan dengan mengurutkan koleksi mulai dari Pteridophyta primitif (Psilopsida) hingga modern (Pteropsida) dapat menampilkan tahapan-evolusi dari Pteridophyta. Berdasarkan konsep penataan tersebut nilai ilmiah dapat terlihat, sehingga dapat menjadi media pembelajaran. Setiap pengunjung, khususnya pelajar atau mahasiswa, dapat secara langsung mendapatkan informasi ilmiah mengenai keanekaragaman  Pteridophyta sekaligus tahapan evolusinya saat melakukan
kunjungan ke rumah kaca Kebun Raya Purwodadi.
Selain berdasarkan marga dan urutan evolusinya, konsep penataan juga perlu memperhatikan posisi, jarak, dan habitus dari koleksi Pteridophyta. Koleksi dengan habitus yang lebih besar seperti Angiopteris dan Cyathea , diletakkan pada area yang lebih tinggi agar terlihat lebih menonjol, sedangkan koleksi dengan habitus yang kecil seperti Adiantum , Bolbitis , Tectaria , ditanam di dalam pot dan penataannya diberi jarak kurang lebih 10 cm antara satu dengan yang lainnya. Hal ini dilakukan agar air dapat mencapai media tanam meskipun penyiraman menggunakan sprinkle , sehingga koleksi tersebut tidak kekurangan air. Dengan demikian, penerapan konsep penataan koleksi Pteridophyta ini dapat memberikan manfaat bagi Kebun Raya Purwodadi, yaitu kemudahan dalam merawat koleksi dan menjadikan rumah kaca sebagai
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
media pembelajaran tentang Pteridophyta. Di samping itu, pengunjung juga dapat teredukasi mengenai keanekaragaman jenis Pteridophyta dan urutan tahapan evolusinya. Detail konsep penataan koleksi tumbuhan paku tersebut divisualisasikan pada Gambar 4.
Gambar 4. Konsep penataan koleksi Pteridophyta di rumah kaca Kebun Raya Purwodadi, desain (A) dan denah (B)

## Simpulan
Kebun Raya Purwodadi memiliki koleksi Pteridophyta terdiri atas 20 suku, 38 marga, dan telah teridentifikasi sebanyak 36 jenis. Suku dengan jumlah koleksi terbanyak adalah Nephrolepidaceae yang didominasi oleh jenis N. cordifolia. Selain itu, terdapat koleksi
Pteridophyta yang termasuk dalam IUCN Red List dengan kategori terancam punah, yaitu P . nudum .  Strategi penataan koleksi Pteridophyta di rumah kaca dilakukan dengan konsep pengelompokan berdasarkan marga dan diurutkan mulai dari Pteridophyta paling primitif hingga modern.
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan terima kasih disampaikan kepada Bapak Deden Mudiana, S.Hut., M.Si. selaku Kepala Balai Konservasi Tumbuhan Purwodadi, Bapak Rony Irawanto, S.Si., M.T. selaku Kepala
Unit Seksi Eksplorasi dan Koleksi Tumbuhan Kebun Raya Purwodadi, Tim Registrasi dan Pemelihara Koleksi Rumah Kaca Kebun Raya Purwodadi, serta pihak-pihak terkait yang turut membantu penyelesaian penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Bandyopadhyay, S. & Mukherjee, S. (2014). A Contribution to The Fern Flora of Howrah District in West Bengal, India. International Journal of Pharmacological Screening Methods , 4 (1), 1-3.
Brenzel, K. N. (2007). Western Garden Book (8th ed.). California, U.S.A.: Sunset Publishing Corporation.
De Britto, A. J., Gracelin, D. H. S., and Kumar, P. B. J. R. (2012). Phytochemical Studies on Five Medicinal Ferns Collected from Southern Western Ghats, Tamilnadu. Asian Pasific Journal of Tropical Biomedicine , S536-S538.
Fairley, A. & Moore, P. (1989 ). Native Plants of The Sydney District (1st ed.). Sydney, Australia: Kangaroo Press.
Hovenkamp, P. H. & Miyamoto, F. (2005). A Conspectus of The Native and Naturalized Species of Nephrolepis (Nephrolepidaceae) in The World. Blumea , 50 , 279-322.
Johnson, M. & Manickam, V. S. (2009). Influence of Abiotic and Biotic Factors on Developmental Biology of Four Ferns of Western Ghats, India. BioTechnology An Indian Journal , 3 (4), 242- 250.
Kasetsart, J. (2016). Morphology of Fern Spores from Phu Phan National Park. Natural Science ,
40 , 116-122.
Lestari, W., Matrani, Sulasmi, Trimanto, Fauziah, & Fika, A. P. (2013). An Alphabetical List of Plant Species Cultivated in Purwodadi Botanic Garden . Purwodadi: Purwodadi Botanic Garden. Margulis, L. & Chapman, M. J. (2009). Kingdoms and Domains An Illustrated Guide to the Phyla of Life on Earth (4th ed.). Massachusetts: Academic Press.
Natarajan, S., Stamps, R. H., Ma, L. Q., Sha, U. K., Hernandez, D., Cai, Y., and Zillioux, E. J. (2011). Phytormediation of Arsenic-contaminated Groundwater Using Arsenic Hyperaccumulator Pteris vittata L: Effect of Frond Harvesting Regimes and Arsenic Levels in Refill Water. Journal of Hazardous Materials , 185 , 938-989.
Nazzarian, H., Taghavizad, R., and Khosravi, E. (2010). The First Anatomical Report and Morphological Reexamination of Psilotum nudum L., in Iran. Pakistan Journal of Botany ,
42 (6), 3723-3728.
Qiu, Y. L. & Palmer, J. D. (1999). Phylogeny of Basal Land Plants: Insights from Genes and Genomes. Trends in Plant Science , 4 , 26-30.
Riefner, R. E. & Smith, A. R. (2015). Nephrolepis cordifolia (Nephrolepidaceae) Naturalized in Southern California (U.S.A): with Notes on Unintended Consequences of Escaped Garden Plants. Journal of The Botanical Research Institute of Texas , 9 (1), 201-212.
Rothfels, C., Sundue, M., Kuo, L., Larsson, A., Kato, M., Schuettpelz, E., and Pryer, K. (2012). A Revised Family-Level Classification for Eupolypodii Ferns (Polypodiidae: Polypodiales). Taxon , 61 , 515-533.
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Roux, J. P. (2003). Swaziland Ferns and Ferns Allies . Pretoria: Southern African Botanical Diversity Network.
Rushing, S. (2006). Tough Plants for California Gardens . U.S.A.: Cool Springs Press.
Scheffers, B. R., Phillips, B. L., and Shoo, L. P. (2014). Asplenium Bird’s Nest Ferns in Rainforest Canopies are Climate-contingent Refuges for Frogs. Global Ecology and Conservation , 2 , 37-
46.
Suhono, B. (2012). Ensiklopedia Biologi Dunia Tumbuhan Paku . Jakarta: PT. Lentera Abadi.
Tjitrosoepomo, G. (1994). Taksonomi Tumbuhan Thallophyta, Schizophyta, Pteridophyta . Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
Yamakazi, Y., Suh, D.Y., Sitthithaworn, W., Ishiguro, K., Kobayashi, Y., Shibuya, M., and Sankawa, U. (2001). Diverse Chalcone Synthase Superfamily Enzymes from The Most Primitive Vascular Plant, Psilotum nudum . Planta , 214 (1), 75-84.