EVALUATION OF THE TOXICITY OF HERBAL MEDICINES WITH THE COMBINATION OF BOVINE SERUM ALBUMIN NANOPARTICLES AND FOLIC ACID AS A CANCER TREATMENT CANDIDATES
Ersalina Nidianti, Wieke Sri Wulan, Rizka Amalia
Program Studi D-IV Analis Kesehatan, Fakultas Kesehatan, Universitas Nahdlatul Ulama Surabaya, Jl. Raya Jemursari No.57, Surabaya
Corresponding author: Ersalina Nidianti ( ersalinanidianti@unusa.ac.id )

## ARTICLE HISTORY
Received: 10 November 2020                    Revised: 28 December 2020          Accepted: 4 January 2021

## Abstract
Cancer is a non-communicable disease that causes morbidity and mortality in  all regions of the world. Cancer mortality  which continues to increase every year  is one of the biggest challenges for the world of health. There were 18.1 million new cases of cancer in Indonesia in 2018 with a death rate of 9.6 million cases of cancer deaths. One of the cancer treatments is to use herbal medicine. However, these drugs have toxic side effects if consumed in certain doses and times. In order to minimize the resulting toxic effects and optimize the drug delivery system, in this study  a  cancer  treatment  from  herbal  plants  was  developed  in  combination  with bovine  serum  albumin  (BSA)  nanoparticles  and  folic  acid  to  increase  solubility, bioavailability and hopefully reduce the toxicity effect in cancer therapy and as a alternative combination of cancer treatment in the future. The herbal cancer drug in combination with the nanoparticles Bovine Serum Albumin and Folic Acid has a low toxicity range. The results of the LC 50 probit analysis showed that NP-BSA-Oh had a higher concentration  (69.23 ppm) compared to As-NP-BSA-Oh (56.56 ppm). Folic  acid  is  able  to  reduce  the  toxicity  of  cancer  drugs  and  can  be  used  as  a candidiate drug in cancer therapy.
Key words: BSA Nanoparticles, Drug Toxicity

## EVALUASI TOKSISITAS OBAT HERBAL DENGAN KOMBINASI NANOPARTIKEL BOVINE SERUM ALBUMIN DAN ASAM FOLAT SEBAGAI KANDIDAT PENGOBATAN KANKER

## Abstrak
Kanker  adalah  penyakit  tidak  menular  yang  menyebabkan  mordibitas  dan mortalitas  di  seluruh  wilayah  dunia.  Mortalitas  penyakit  kanker  yang  terus meningkat setiap tahunnya menjadi satu tantangan terbesar bagi dunia kesehatan. Kasus penyakit kanker di Indonesia pada tahun 2018 terdapat 18,1 juta kasus baru dengan angka kematian sebesar 9,6 juta kasus kematian karena penyakit kanker. Salah satu pengobatan kanker adalah dengan menggunakan obat herbal. Akan tetapi  obat  tersebut  memiliki  efek  samping  yang  bersifat  toksik  jika  dikonsumsi dalam dosis dan waktu tertentu. Untuk meminimalisir efek toksik yang dihasilkan dan  mengoptimalkan  sistem  pengiriman  obat  maka  dalam  penelitian  ini
dikembangkan pengobatan kanker dari tanaman herbal yang dikombinasi dengan nanopartikel  bovine  serum  albumin  (BSA)  dan  asam  folat  untuk  meningkatkan kelarutan,  bioavailibilitas  dan  diharapkan  mampu  menurunkan  efek  toksisitas dalam terapi kanker dan sebagai alternative kombinasi pengobatan kanker dimasa depan. Obat herbal kanker yang dikombinasi dengan nanopartikel Bovine Serum Albumin dan Asam Folat memiliki range toksisitas rendah. Hasil analisis probit LC 50 diperoleh  NP-BSA-Oh  memiliki  konsentrasi  yang  lebih  tinggi  (69.23  ppm) dibandingkan  dengan  As-NP-BSA-Oh  (56.56  ppm).  Asam  folat  mampu menurunkan  toksisitas  obat  kanker  dan dapat  digunakan sebagai  kandidat  obat dalam terapi kanker.
Kata kunci: Nanopartikel BSA, Toksisitas obat.

## Pendahuluan
Kanker  adalah  penyakit  tidak  menular  yang  paling  mengerikan  di  seluruh  dunia dalam hal morbiditas dan mortalitas. 1 Mortalitas penyakit kanker yang terus meningkat setiap  tahunnya  menjadi  satu  tantangan  terbesar  bagi  dunia  kesehatan  di  seluruh dunia. 2 Berdasarkan  data  Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia  di  tahun  2018 terdapat 18,1 juta kasus baru dengan angka kematian sebesar 9,6 juta kasus kematian karena penyakit kanker. 3
Penyebab  kanker  tidak  sepenuhnya  diketahui  secara  pasti.  Tetapi  kanker  terjadi karena adanya perubahan genetik/mutasi genetik dari sel normal menjadi sel kanker. 1 Pengobatan terhadap kanker telah dilakukan secara intensif yaitu dengan pembedahan, kemoterapi,  radioterapi  maupun  imunoterapi.  Pengobatan  tersebut  efektif  untuk membunuh sel kanker akan tetapi memiliki kelemahan yaitu menimbulkan target obat yang  tidak  spesifik,  meningkatkan  multi  drug  resisten  (MDR)  bagi  pasien  penderita kanker, serta dapat mempengaruhi sel normal bagi pasien. 4
Penelitian  mengenai  pengobatan  kanker  dari  tanaman  herbal  terus  mengalami kemajuan dalam bidang klinis. Pengobatan herbal sebagai solusi alternatif penurunan toksisitas dan kerusakan sel normal bagi pasien kanker. Pengobatan kanker yang efektif berdasarkan  pendekatan  kombinasi  terapi  yaitu  dengan  menggunakan  obat-obatan herbal maupun kombinasi obat-obatan kimia untuk meminimalisir terjadinya komplikasi. 5 Tanaman  herbal  memiliki  kelarutan  dan  bioavailabilitas  dalam  bidang  farmasi  yang rendah.  Sistem  nanopartikel  sebagai  solusi  alternatif  untuk  pengiriman  obat/ drug delivery serta bioavailabilitas dalam bidang biomedis dan farmasi. 6
Nanopartikel  pada  penelitian  ini  berbasis  BSA  (Bovine  Serum  Albumin)  yaitu nanopartikel yang berasal dari protein albumin yang memiliki sifat antara lain selektifitas dalam drug delivery , biodegradasi, tidak beracun, aman, mudah dimurnikan serta dapat larut  dalam  air.  Akhir-akhir  ini  peneliti  melakukan  penelitian  jalur  target  makromolekul pada sel kanker dengan reseptor asam folat. Nanopartikel Bovine Serum Albumin (BSA) dikombinasi dengan asam folat. Asam folat merupakan ligan alami dalam vitamin (B9) yang  penting  untuk  poliferasi  sel,  biosintesis  DNA  dan  metabolisme,  untuk  lebih detailnya dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1. Nanopartikel Bovine Serum Albumin (BSA) dan Asam Folat 6
Beberapa  laporan  telah  menunjukkan  bahwa  makromolekul  asam  folat  telah berhasil sebagai agen terapi antikanker yang menunjukkan adanya peningkatan dalam pengiriman  obat. 6 Pada penelitian  ini  dilakukan evaluasi  toksisitas  obat  herbal  kanker yang  dijual  secara  umum  kemudian  dikombinasi  dengan  menggunakan  nanopartikel Bovine  Serum  Albumin  (BSA)  dan  asam  folat  sebagai  pengobatan  kanker.  Tujuan penelitian  yaitu:  Untuk  mengetahui  tingkat  toksisitas  obat  herbal  kanker  yang dikombinasi  dengan  menggunakan  nanopartikel  Bovine  Serum  Albumin  (BSA)  dan asam  folat.  Uji  toksisitas  dilakukan dengan menggunakan  larva udang Artemia  salina leach dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Serta untuk mengetahui sifat fisiko kimia obat herbal kanker dengan nanopartikel Bovine Serum Albumin (BSA) dan asam  folat  meliputi:  karakteristik  Spektrofotometer  UV-Vis,  Spektrofotometer  FT-IR, Defraktometer Sinar X (XRD).

## Metode

## Alat
Alat – alat yang digunakan dalam penelitian: alat-alat gelas (pyrex), neraca analitik (Ohaus  Spx422  Scout  Portable  Balance),  magnetik  stirer,  alat  untuk  karakterisasi meliputi  Spektrofotometer  UV-Vis  (Shimadzu),  FT-IR  (Shimadzu  IR  Prestige-21), Defraktometer Sinar X (XRD) (PANalytical, X’Pert Pro).

## Bahan
Bahan-bahan  yang digunakan  dalam  penelitian:  Obat  herbal  kanker  (Cancer  Fit), larutan Bovine Serum Albumin (BSA), larutan Phosphat Buffer Saline (PBS), Aquabidest, Aseton, larutan asam askorbat NaCl, larva A.Salina, Etanol dan pelarut lainnya.

## Prosedur

## 1.  Sintesis Nanopartikel Bovine Serum Albumin (BSA) dengan Obat herbal kanker
Metode pembuatan nanopartikel BSA dengan Obat herbal kanker dilakukan melalui penambahan  0,2  gram  BSA  kedalam  aquabidest  3,2  ml  dilakukan  pengadukan  pada suhu kamar selama 15 menit. Kemudian ditambahkan 6,4 ml larutan obat herbal (12 mg obat herbal dalam 1 ml aseton). Ditambahakn secara tetes demi tetes pada suhu kamar dan dalam keadaan gelap. Ditambahkan 4 mg asam askorbat dan diaduk selama 2 jam. Kemudian dilakukan sentrifuse 18.000 rpm selama 15 menit sebanyak 3 kali dan dicuci dengan menggunakan  aquabidest  kemudian  dikeringkan  semalam.  Nanopartikel  BSA disintesis dengan prosedur yang sama tanpa penambahan obat herbal kanker.

## 2.  Preparasi Asam folat dengan Nanopartikel BSA – Obat herbal
Nanopartikel  BSA-Obat  herbal  dari  prosedur  sebelumnya.  Kemudian  di  konjugasi dengan asam folat pada permukaan nanopartikel BSA dilakukan dengan penambahan asam  folat  (27  mg),  asam  askorbat  (58,6  mg)  dan  larutan  asam  askorbat  (35,2  mg) ditambahkan  DMSO  sebagai  pelarut.  Larutan  direaksikan  dengan  cara  pengadukan (stirrer) selama 30 menit dan dilindungi menggunakan aluminium foil. Larutan asam folat ditambahkan dengan cara penambahan tetes demi tetes ke dalam larutan nanopartikel BSA – Obat herbal hingga pH 8,5. Untuk mereaksikan disimpan selama semalam dan dilakukan pengadukan (stirrer) pada suhu kamar. Pemurnian dilakukan menggunakan sentrifugasi 20.000 rpm selama 10 menit, untuk menghilangkan asam folat yang tidak terkonjugasi. Kemudian dilakukan proses pengeringan pada produk tersebut.

## 3.  Karakterisasi dengan menggunakan XRD
Sampel yang akan dianalisis dimasukkan kedalam plat aluminium ukuran 2x2 cm, plat aluminium yang berisi sampel dikarakterisasi menggunakan XRD dengan sumber Cu- Ka1 mengatur panjang gelombang serta sudut difraksi 2θ. Untuk interpretasi grafik menggunakan bantuan software Match .
4. Karakterisasi dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis Spektrofotometer  UV-Vis  dilakukan  untuk  karakterisasi  dan  penentuan  kuantitatif nanopartikel BSA – Obat herbal. Analisis Spektrofotometri UV-Vis dilakukan pada suhu 25 o C dengan kisaran 200-400 nm.

## 5.  Karakterisasi dengan menggunakan Spektrofotometer FT-IR
Struktur  kimia  sampel  diketahui  melalui  Spektroskopi  Fourier  Transformasi Inframerah  (FT-IR)  (Bruker,  Tensor  27).  Disk  standar  adalah  dikumpulkan  dengan mencampur 2 mg sampel dengan 200 mg medium KBr dan penggiling menjadi bubuk halus dan kemudian mengompres hasilnya bubuk menjadi pelet transparan (tekanan, 12 Ton). Spektra FT-IR  direkam menggunakan panjang gelombang 400 hingga 4000 cm - 1.

## 6.  Uji Toksisitas Metode BSLT
A. Telur Artemia 0.5 g ditetaskan dalam media air laut (35% kadar garam), bersirkulasi udara yang baik dan pencahayaan yang terang dan suhu 24-26 o C. Setelah 12- 48 jam telur menetas, salinitas dikurangi hingga 5%, untuk uji BSLT, tidak boleh umur 7 hari dan tidak boleh kurang dari 3 hari. untuk senyawa murni dibuat konsentrasi 1, 10 dan 100 ppm
B.  Siapkan 10 vial (tabung reaksi) yang masing-masing diisi dengan 5 ml air laut dan 5  ml  larutan  sampel  dengan  konsentrasi  yang  divariasi  serta  10  ekor A.  salina . Lakukan  juga  untuk  kontrol  dengan  pelarut  (etanol  atau  DMSO).  Waktu  kontak dilihat  ½  jam  hingga  6  jam,  selanjutnya  perjam  atau  6  jam,  12  jam  dan  24  jam. Replikasi sebaiknya 10 X, supaya deviasinya lebih baik, hitung LC 50 dengan SPSS.
C.  Karena Artemia langsung  kontak  dengan  sampel,  maka  dapat  diketahui  jumlah Artemia yang hidup dan jumlah yang mati,
Evaluasi: % kematian = [A-B/C] x 100%, dimana
A = jumlah Artemia salina yang mati akibat kontak dengan sampel B = jumlah Artemia salina yang mati pada kontrol C = jumlah Artemia salina awal

## Hasil
Gambar 2. Hasil Sintesis A.) NP-BSA-Oh B.) As- NP-BSA-Oh
Gambar 3. Spektrum pola difraksi A) Hasil XRD NP-BSA-Oh B.) As- NP-BSA-Oh
Tabel 1. Hasil Analisis Spektrofotometer UV-Vis pada NP-BSA-Oh dan As-NP-BSA-Oh Panjang Gelombang (nm) Absorbansi NP- BSA-Oh Absorbansi As- NP-BSA-Oh 200 1.382 3.131 210 0.752 3.376 220 0.475 3.461 230 0.597 4.009 240 1.125 3.739 250 1.816 3.701 260 2.314 3.738 270 2.261 3.441 280 1.719 3.326 290 0.908 1.847 300 0.338 0.779 310 0.118 0.412 320 0.072 0.290 330 0.064 0.232 340 0.060 0.209 350 0.055 0.191 360 0.047 0.175 370 0.039 0.163 380 0.032 0.147 390 0.027 0.131 A
B A B 22.77 22.27
P-ISSN: 2087-0337 E-ISSN: 2715-9949
Gambar 3. Hasil Analisis FT-IR NP-BSA-Oh B.) As- NP-BSA-Oh
Tabel 2. Kategori toksisitas
Kategori LC 50 (ppm) Sangat Toksik < 30 Toksik 30-1000 Tidak Toksik > 1000 A
B

## Tabel 3. Data hasil uji toksisitas metode BSLT
Sampel Konsentrasi Jumlah Larva Mati (Ekor) Mortalitas (%) Replikasi Rata 1 2 3 Kontrol Etanol 0 0 0 0 0 NP-BSA-Oh 1 1 1 2 1,3 13 10 2 1 3 2,0 20 100 3 1 3 2,3 23 As-NP-BSA-Oh 1 3 2 3 2,7 27 10 3 3 4 3,3 33 100 4 3 4 3,7 37

## Pembahasan
Hasil Sintesis Nanopartikel Bovine Serum Albumin – Obat herbal kanker (NP-BSA- Oh), Asam folat dengan Nanopartikel BSA – Obat herbal (As- NP-BSA-Oh)
Nanopartikel  yang  terdapat  pada  obat  kanker  bertujuan  untuk  meningkatkan bioavailibilitas,  sistem  pengiriman  obat  ( drug  delivery ),  memperbaiki  target  obat  dan release  obat  ke  sel  kanker.  Sehingga  diharapkan  dapat  meningkatkan  efikasi  dan mengurangi efek samping. 7 Bovine Serum Albumin (BSA) memiliki berat molekul 69,323 Da  dan  pH  isoelektrik  4,7  dalam  air  pada  suhu  25 o C.    Secara  luas  Bovine  Serum Albumin  (BSA)  digunakan  untuk  pengiriman  obat  ( drug  delivery )  karena  status medisnya, biaya murah, mudah untuk dimurnikan dan sifat yang dimiliki dapat diterima dalam industri biomedis. 6
Preparasi  nanopartikel  Bovine  Serum  Albumin  (BSA)  dan  obat  herbal  kanker dilakukan dengan metode desolvasi (yaitu teknik pembuatan nanopartikel berdasarkan perbedaan  kelarutan  antara desolvating  agent dengan  pelarut  air  yang  bercampur dengan  BSA).  Kelarutan  BSA  dalam  air  tinggi  bila  ditambahkan desolvating agent /pelarut  pendesolvasi  seperti  (etanol,  aseton,  dan  DMSO)  dalam  penelitian  ini digunakan  agen  desolvasi  yaitu  aseton  sehingga  membentuk  agregat  dari  BSA. Preparasi  asam  folat  nanopartikel  BSA  Obat  herbal  dilakukan  dengan  melanjutkan prosedur  nanopartikel  BSA  Obat  herbal  yang  terbentuk  dan  dilakukan  penambahan crosslinker yaitu asam folat yang didasarkan pada karakteristik fisiko kimia. 8

## Hasil Analisis XRD
Analisis  XRD  bertujuan  untuk  mengetahui  karakteristik  kristal  nanopartikel  yang telah disintesis. Analisis XRD dilakukan untuk menganalisis indeks kristalin. Pengindeks diartikan sebagai penentuan dimensi sel unit melalui posisi peak yang dihasilkan. Dalam analisis XRD penelitian ini menggunakan 2 θ dengan sudut 10°-90° untuk semua jenis sampel. 9

## Hasil Analisis Spektrofotometer UV-Vis
Spektrofotometri  UV-Vis  melibatkan  energi  elektronik  yang  cukup  besar  pada molekul yang dianalisis, sehingga Spektrofotometri UV-Vis lebih banyak dipakai untuk analisis  kuantitatif  dibandingkan  analisis  kualitatif. 10 Spektra  UV-Vis  diukur  dengan menggunakan  spektrofotometer genesys UV-Vis.  Diperoleh  hasil  pengukuran  dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dari Panjang gelombang 200-400 nm diperoleh absorbansi maksimum sebesar 4.009 pada panjang gelombang 230 nm untuk As-NP- BSA-Oh dan diperoleh absorbansi maksimum sebesar 2.314 pada panjang gelombang 260 nm untuk NP-BSA-Oh.

## Hasil Analisis FT-IR
Analisis FT-IR dilakukan untuk mengetahui gugus fungsi yang terdapat dalam hasil sintesis nanopartikel antara Bovine Serum Albumin (BSA), Asam folat dan obat herbal kanker. Profil analisis Spektra FT-IR dapat dilihat pada gambar 3.
Uji  toksisitas  terhadap  larva  udang Artemia  salina  leach dengan  metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Toksisitas ( toxicity ) merupakan ukuran relatif derajat racun antara satu bahan kimia terhadap bahan kimia lainnya pada organisme yang sama kemampuan racun (molekul) untuk  menimbulkan  kerusakan  apabila  masuk  kedalam  tubuh  dan  lokasi  organ  yang rentan  terhadapnya.  Toksisitas  dapat  diartikan  sebagai  kemampuan  suatu  zat  untuk menimbulkan  kerusakan  pada  organisme  hidup.  Uji  toksisitas  terhadap  larva  udang Artemia  salina  leach dapat  digunakan  uji  pendahuluan  pada  penelitian  uji  sitotoksik. Korelasi antara uji toksisitas akut ini dengan uji sitotoksik adalah jika mortalitas terhadap Artemia  salina  leach yang  ditimbulkan  memiliki  nilai  LC 50 ≤  1000  µg/ml.  Prosedur  uji toksisitas  telur Artemia  Salina ( A.  salina )  0.5  g  ditetaskan  dalam  media  air  laut  (35% kadar garam), bersirkulasi udara yang baik dan pencahayaan yang terang dan suhu 24- 26 o C. Setelah 12-48 jam telur menetas, salinitas dikurangi hingga 5% untuk uji BSLT, tidak boleh umur 7 hari dan tidak boleh kurang dari 3 hari. untuk senyawa murni dibuat konsentrasi 1, 10 dan 100 ppm. 11
Disiapkan beberapa vial (tabung reaksi) yang masing-masing diisi dengan 5 ml air laut dan 5 ml larutan sampel dengan konsentrasi (1, 10, 100 ppm) serta 10 ekor A. salina . Lakukan hal yang sama untuk kontrol dengan pelarut (etanol atau DMSO). Waktu kontak dilihat 1 jam hingga 6 jam. Replikasi dilakukan sebanyak 3X, hitung nilai LC 50 dengan SPSS. Karena A. salina langsung kontak dengan sampel, maka dapat diketahui jumlah A. salina yang hidup dan jumlah yang mati, berdasarkan rumus Evaluasi:
%Kematian= Total kematian A.salina - Kontrol Total larva hewan coba x100
Berdasarkan  tabel  3  uji  toksisitas  dengan  metode  BSLT  dilakukan  analisis  probit dengan  menggunakan  SPSS  diperoleh  informasi  nilai  LC 50 dari  NP-BSA-Oh  adalah 69.23 ppm. Sedangkan hasil analisis probit dengan menggunakan SPSS nilai LC50 dari As-NP-BSA-Oh  yaitu  56.56  ppm.  Menurut  meyer 11 ,  bahwa  suatu  zat  menunjukkan aktivitas toksik dalam uji toksisitas jika zat tersebut dapat menyebabkan kematian 50% hewan uji pada konsentrasi < 1.000 ppm. Dari data LC 50 diperoleh bahwa NP-BSA-Oh memiliki konsentrasi yang lebih tinggi (69.23 ppm) dibandingkan dengan  As-NP-BSA- Oh (56.56 ppm). Asam folat mampu menurunkan toksisitas obat kanker.

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa obat herbal kanker yang dikombinasi dengan nanopartikel Bovine Serum Albumin dan Asam Folat  memiliki  range  toksisitas  rendah  dan  dapat  digunakan  sebagai  kandidiat  obat dalam terapi kanker.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  kepada  Lembaga  Penelitian  dan  Pengabdian  Masyarakat (LPPM) Universitas Nahdlatul Ulama Surabaya yang sudah mendanai penelitian ini.

## Daftar Pustaka
1.   Rahmani AH, Al Zohairy MA, Aly SM, Khan MA. Curcumin: A Potential Candidate in Prevention  of  Cancer  via  Modulation  of  Molecular  Pathways.  Biomed  Res  Int. 2014;2014(Figure 1).
2.   Kashyap  D,  Tuli  HS,  Yerer  MB,  Sharma  A,  Sak  K,  Srivastava  S,  et  al.  Natural product-based nanoformulations for cancer therapy: Opportunities and challenges.
Semin Cancer Biol [Internet]. 2019;(June):1 –19. Available from:
https://doi.org/10.1016/j.semcancer.2019.08.014
3.   Kementerian  Kesehatan  RI  Badan  Penelitian  dan  Pengembangan.  Hasil  Utama Riset Kesehatan Dasar. Kementrian Kesehat Republik Indones [Internet]. 2018;1 – 100. Available from: http://www.depkes.go.id/resources/download/info-terkini/hasil- riskesdas-2018.pdf
4.   Mutiah R,  Suryadinata A, Nurani PS. Uji Sitotoksitas Kombinasi Cisplatin Dengan Ekstrak Etanol Benalu Aalpukat (Dendrophthoe pentandra (L) Miq.) Pada Sel Hela. Maj Kesehat. 2018;5(3):133 –43.
5.   Parhi P, Mohanty C, Sahoo SK. Nanotechnology-based combinational drug delivery: An  emerging  approach  for  cancer  therapy.  Drug  Discov  Today  [Internet]. 2012;17(17 –18):1044–52. Available from:
http://dx.doi.org/10.1016/j.drudis.2012.05.010
6.   Nosrati H, Abbasi R, Charmi J, Rakhshbahar A, Aliakbarzadeh F, Danafar H, et al. Folic acid conjugated bovine serum albumin: An efficient smart and tumor targeted biomacromolecule  for  inhibition  folate  receptor  positive  cancer  cells.  Int  J  Biol Macromol [Internet]. 2018;117:1125 –32. Available from:
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2018.06.026
7.   Maukar  MA,  Runtuwene  MRJ,  Pontoh  J.  Analisis  Kandungan  Fitokimia  Dari  Uji Toksisitas  Ekstrak  Metanol  Daun  Soyogik  (Sauraula  bracteosa  DC)  Dengan Menggunakan Metode Maserasi. J Ilm Sains. 2013;13(2):98.
8.   Ambarwati  R.  Pembuatan Nanopartikel  Albumin  Menggunakan  Metode  Desolvasi Sebagai Alternatif Sistem Pembawa. FITOFARMAKA J Ilm Farm. 2019;9(1):35 –9. 9.   Abdullah  AM,  Khalil  KA.  Properties  of  Novel  Double  Layer  Nanocomposite Electrospun  Fibers  for  Wound  Dressing  Applications.  Int  J  Nanomedicine. 2017;12:2205 –13.
10.  Kartika  GF.  Analisis  Spektroskopi  UV-Vis  Penentuan  Konsentrasi  Permanganat. 2020;(June).
11.  Meyer BN, Ferrigni NR, Putnam JE, Jacobsen LB, Nichols DE, McLaughlin JL. Brine shrimp:  A  convenient  general  bioassay  for  active  plant  constituents.  Planta  Med. 1982;45(1):31 –4.