SKRINING FITOKIMIA EKSTRAK ETANOL MIKROALGA Spirulina platensis YANG BERPOTENSI SEBAGAI ANTIBAKTERI

## Suratno
Program Studi D-3 Analis Kesehatan, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Palangkaraya
e-mail : nono.suratno89@yahoo.com

## ABSTRAK
Pencarian   bahan   alam   yang   mengandung   senyawa   golongan   antibakteri   masih   perlu dilakukan.   Mikroalga   diketahui   memproduksi   metabolit   intraseluler   dan   ekstraseluler   yang memiliki aktivitas biologi seperti antibakteri, misalnya Spirulina platensis . Penelitian ini bertujuan untuk: (1) mengetahui golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak etanol mikroalga Spirulina platensis seperti alkaloid, triterpenoid   dan   steroid, saponin, fenol, flavonoid dan kuinon; dan (2) mengetahui potensi kandungan di dalam ekstrak etanol mikroalga Spirulina   platensis sebagai   antibakteri   dilihat   berdasarkan   kandungan   golongan   senyawa metabolit sekunder yang telah diketahui. Prosedur penelitian ini meliputi: determinasi spesies mikroalga, ekstraksi dengan metode maserasi dengan pelarut etanol, evaporasi pelarut serta analisis deskriptif mengenai potensi antibakteri. Mikroalga yang digunakan dalam penelitian ini adalah Sprulina platensis Geitler. Hasil penelitian menunjukkan bahwa: (1) golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak etanol mikroalga Spirulina platensis adalah golongan senyawa alkaloid, saponin, fenol dan kuinon; dan (2) kandungan golongan senyawa alkaloid,   saponin,   fenol   dan   kuinon   dalam   ekstrak   etanol   mikroalga Spirulina   platensis menunjukkan  adanya   potensi  mikroalga   ini  sebagai  sumber  bahan  alam  yang  mengandung senyawa antibakteri.
Kata kunci: skrining fitokimia, mikroalga, Spirulina platensis , potenti antibakteri

## PENDAHULUAN
Kandungan   senyawa   antibakteri   dapat ditemukan   hampir   di   setiap   organisme baik   yang   berasal   dari   darat   maupun   dari perairan   laut.   Kandungan   golongan senyawa   metabolit   sekunder   diduga menjadi   sumber   senyawa   antibakteri   di alam,   misalnya   mikroalga.   Mikroalga merupakan   organisme   fotosintesis mikroskopik yang ditemukan di lingkungan perairan   dan   laut   (Demirbas   &   Demirbas, 2010).   Mikroalga   diketahui   memproduksi metabolit intraseluler dan ekstraseluler yang
memiliki   aktivitas   biologi   sebagai   antialga, antivirus,   antifungi   dan   antibakteri.   Salah satu   mikroalga   tersebut   adalah   mikroalga Spirulina platensis .
Spirulina platensis merupakan salah satu jenis mikroalga autotrof hijau biru yang termasuk   dalam   kelas cyanobacteria . Secara   mikroskopik, Spirulina   platensis tampak seperti benang tipis (filamen) yang berbentuk spiral  (Vonshak,  2002). Filamen ini   merupakan   koloni   sel   yang   bergerak. Mikroalga   ini   berukuran   panjang   200-300 dan   lebar   5-70   mikron,   berdiameter   1-12

## Suratno
mikrometer,   serta   tidak   memiliki   inti   sel (Oliveira dkk., 1999; Vonshak, 2002).
Spirulina   platensis memiliki   waktu panen   yang   sangat   singkat.  Mikroalga biasanya menggandakan diri dalam 24 jam. Alga ini terpengaruh oleh kondisi lingkungan yang fluktuatif, terutama suhu. Suhu optimal agar Spirulina   platensis dapat   tumbuh berkisar   antara   30   sampai   35   ºC.   Pada suhu   antara   20-40 o C,     kandungan   lipid Spirulina   platensis dapat   mencapai   6-7% lipid   (Oliveira  dkk.,   1999).   Karakteristik kondisi   lingkungan   untuk   tempat   hidup Spirulina platensis tersebut  sesuai  dengan kondisi cuaca di Indonesia.
Fahleny   dkk.,   (2014)   melaporkan hasil   pengujian   antioksidan   pada   ekstrak Spirulina platensis memiliki nilai IC 50 288,68 ppm.   Kandungan   metabolit   sekunder   lain yang   berpotensi   sebagai   antibakteri   juga perlu   dicari   di   dalam   mikroalga Spirulina platensis .   Berdasarkan   uraian   tersebut, maka   penelitian   ini   bertujuan   untuk mengetahui   golongan   senyawa   metabolit sekunder   yang   terkandung   dalam   ekstrak etanol mikroalga Spirulina platensis seperti alkaloid, triterpenoid  dan  steroid, saponin, fenol,   flavonoid   dan   kuinon;   serta mengetahui   potensi   ekstrak   etanol mikroalga Spirulina   platensis sebagai antibakteri   dilihat   berdasarkan   kandungan golongan senyawa metabolit sekunder yang telah diketahui.

## METODE PENELITIAN
Penelitian   ini   dilakukan   di   Laboratorium Kimia, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah   Palangkaraya.   Penelitian ini   meliputi   ekstraksi   dengan   metode maserasi,   evaporasi   pelarut   dan   analisis deskriptif.

## Bahan penelitian
Bahan-bahan   yang   digunakan   dalam penelitian   ini   meliputi:     mikroalga Sprulina platensis Geitler (dibeli dari CV. Blue Green Algae   Biotechnology,   Lamongan,   Jawa Timur), akuades, kertas saring mikrofiber 90 mm   (Fisher   Bioblock),   alumunium   foil, magnesium   (Mg)   dan   bahan-bahan   pro analisis   merk   MERCK   seperti   asam   sulfat (H 2 SO 4 ),   pereaksi   Dragendorff,   pereaksi Meyer,   kloroform,   anhidrat   asetat,   asam klorida   (HCl),   Besi(III)   klorida   (FeCl 3 ), natrium hidroksida (NaOH) dan etanol.

## Alat penelitian
Alat-alat   yang   digunakan   dalam   penelitian ini meliputi: tabung reaksi, gelas beker 500 mL, pipet tetes, labu bundar, corong, neraca analitik,   statif,   pengaduk,   kaca   arloji, termometer,  gelas   ukur,  pipet   volume,   vial kaca dan rotary evaporator .
Ekstraksi mikroalga Spirulina platensis Sampel uji dari serbuk biomassa mikroalga Spirulina   platensis diekstraksi   secara maserasi (perendaman), dengan perbandingan   1:10   yaitu   1   bagian   serbuk sampel   mikroalga Spirulina   platensis direndam   dalam   10   bagian   larutan   etanol Jurnal Surya Medika Volume 1 No. 2 [2016] 27

## Suratno
95%.   Maserasi   dilakukan   selama   5   hari dalam   wadah   berbahan   gelas   yang bermulut   lebar   dan   setiap   hari   dikocok beberapa menit, kemudian disaring dengan kertas   saring   Whatman.   Kemudian dilakukan penguapan/evaporasi dengan alat rotary   evaporator pada   suhu   didih   etanol sampai diperoleh ekstrak pekat.
Skrining   fitokimia   ekstrak   etanol mikroalga Spirulina platensis
Analisis fitokimia yang dilakukan meliputi uji alkaloid, triterpenoid  dan  steroid, saponin, fenol, flavonoid dan kuinon. Metode analisis yang   di   gunakan   berdasarkan   pada Harborne (1987).

## Alkaloid
Uji   alkaloid   dilakukan dengan melarutkan dalam     beberapa   tetes     asam   sulfat   2   N kemudian diuji dengan 2 pereaksi alkaloid yaitu   pereaksi   Dragendorff     dan     pereaksi Meyer.     Hasil     uji     positif   diperoleh     bila terbentuk   endapan   merah     hingga   jingga dengan     pereaksi     Dragendorff     dan endapan     putih   kekuningan   dengan pereaksi Meyer.

## Triterpenoid dan steroid
Sejumlah   sampel   dilarutkan   dalam   2   mL kloroform dalam tabung reaksi  yang kering lalu   ditambahkan   10   tetes   anhidrat   asetat dan   3   tetes   asam   sulfat     pekat.   Reaksi positif   ditunjukkan   dengan   terbentuknya larutan berwarna  merah untuk pertama kali kemudian berubah menjadi biru dan hijau. Saponin
Saponin   dapat   dideteksi   dengan   uji   busa dalam   air   panas.   Busa   yang   stabil   akan terus   terlihat   selama   5   menit   dan   tidak hilang pada penambahan 1 tetes HCl 2 N menunjukkan adanya saponin.

## Fenol
Sejumlah sampel diekstrak dengan 20 mL etanol   70   %.   Larutan   yang   dihasilkan diambil   sebanyak   1   mL   kemudian ditambahkan   2     tetes   larutan   FeCl 3 5%. Reaksi positif   ditunjukkan   dengan terbentuknya  warna hijau  atau hijau biru.

## Flavonoid
Sejumlah   sampel   ditambahkan   serbuk magnesium   0,1     mg   dan     0,4     mL   amil alkohol (campuran asam klorida 37 % dan etanol 95 % dengan    volume yang sama) dan   4   mL   alkohol   kemudian   campuran dikocok. Reaksi  positif ditunjukkan  dengan terbentuknya   warna   merah,  kuning   atau jingga  pada lapisan amil alkohol.

## Kuinon
Sejumlah  sampel  ditambahkan  NaOH  1  N kemudian   diamati   perubahan     warnanya. Reaksi   positif   ditunjukkan   dengan terbentuknya warna kuning .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi mikroalga Spirulina platensis
Ekstraksi   dilakukan   dengan   metode maserasi   dengan   menggunakan   pelarut etanol.   Tujuan   metode   maserasi   agar   zat
Jurnal Surya Medika Volume 1 No. 2 [2016] 28
Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Mikroalga Spirulina platensis yang Berpotensi sebagai Antibakteri aktif   yang   berada   di   dalam   sel Spirulina platensis akan   larut,   sehingga   akan terdesak   keluar   dari   sel.   Hasil   maserasi disaring   dengan   menggunakan   kertas saring dan dihasilkan 300 mL filtrat. Filtrat yang   diperoleh   kemudian   dipekatkan. Ekstrak etanol mikroala Spirulina platensis yang   diperoleh   berupa   ekstrak   pekat berwarna ungu gelap.
Skrining   fitokimia   ekstrak   etanol mikroalga Spirulina platensis
Pada   penelitian   ini,   pengujian   secara kualitatif   dilakukan   untuk  mengetahui   jenis golongan senyawa bioaktif yang terkandung dalam   ekstrak   etanol   kasar   mikroalga Spirulina   platensis ,   yaitu   alkaloid, triterpenoid     dan     steroid,   saponin,   fenol, flavonoid dan kuinon. Hasil skrining fitokimia terhadap   ekstrak   etanol   kasar   mikroalga Spirulina platensis disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1  Hasil skrining fitokimia terhadap ekstrak mikroalga Spirulina platensis No. Golongan Senyawa Hasil 1 Alkaloid + 2 Triterpenoid dan steroid - 3 Saponin + 4 Fenol + 5 Flavonoid - 6 Kuinon + Keterangan: +   = mengandung senyawa yang diuji -    = tidak mengandung senyawa yang diuji
Hasil   skrining   fitokimia   terhadap ekstrak   etanol Spirulina   platensis menunjukkan   bahwa   golongan   senyawa yang   terkandung   dalam   ekstrak   tersebut adalah alkaloid, saponin, fenol dan kuinon.
Pada   pengujian   golongan   senyawa alkaloid   dilakukan   penambahan   asam klorida   sebelum   ditambahkan   pereaksi karena   alkaloid   bersifat   basa   sehingga diekstrak dengan pelarut yang mengandung asam  (Harborne,   1996).   Hasil   positif   pada uji   ini   ditandai   dengan   terbentuknya endapan   dari   penggantian   ligan.   Atom nitrogen   yang   mempunyai   pasangan
elektron bebas pada alkaloid mengganti ion iod dalam pereaksi Dragendorff dan Mayer (Sangi,   dkk.,   2008).   Pengujian   golongan senyawa   alkaloid   pada   ekstrak Spirulina platensis menunjukkan hasil positif pada uji Mayer, namun negatif pada uji Dragendorff. Dengan   pereaksi   Mayer   diperoleh   larutan berwarna putih sesuai reaksi berikut.
Pengujian   golongan   senyawa alkaloid   pada   ekstrak Spirulina   platensis menunjukkan   hasil   negatif   pada   uji Dragendorff.   Pada   uji   Dragendorff   tidak menyebabkan terbentuknya endapan jingga pada   penambahan   pereaksi   Dragendorff dimungkinkan sedikit mengandung alkaloid.
Saponin   merupakan   senyawa   yang mengandung   gugus   hidrofilik   dan   juga gugus   hidrofobik.   Bila   suatu   ekstrak   yang mengandung   golongan   saponin   digojok, maka terbentuk buih/busa yang disebabkan adanya   gugus   hidrofilik   yang   berikatan dengan   air   sedangkan   gugus   hidrofobik akan berikatan dengan udara. Pada struktur misel,   gugus   polar   menghadap   ke   luar sedangkan gugus non-polar menghadap ke dalam.   Penambahan   HCl   2   N   bertujuan untuk   menambah   kepolaran   sehingga gugus   hidrofilik  akan  berikatan   lebih  stabil dan   buih   yang   terbentuk   menjadi   stabil (Kumalasari   dan   Sulistyani,   2011). Berdasarkan hasil penelitian, ekstrak etanol mikroalga Spirulina   platensis menunjukkan hasil positif yang berarti bahwa ekstrak ini mengandung saponin.
Pereaksi   besi(III)   klorida   (FeCl 3 ) digunakan   secara   luas   untuk   identifikasi senyawa   fenol/polifenol/tanin.   Pengujian fenol   menunjukkan   hasil   positif   bila menghasilkan   warna   biru   tua,   biru kehitaman atau hitam kehijauan. Perubahan warna   terjadi   dengan   penambahan   FeCl 3 karena adanya gugus hidroksil (Sangi dkk., 2013;   Artini   dkk.,   2013).   Pada   uji keberadaan   fenol   menunjukkan   bahwa ekstrak etanol mikroalga Spirulina platensis mengandung   golongan   senyawa   fenol. Perkiraan   reaksi   dalam   uji   golongan senyawa fenol sebagai berikut:
Uji   keberadaan   kuinon   dapat dilakukan dengan reaksi warna. Salah satu cara   untuk   mendeteksi   kuinon   dapat digunakan   pereaksi   larutan   natrium hidroksida 1 N. Bila terbentuk wama merah atau   kuning   menunjukkan   adanya   kuinon Harborne   (1987).   Berdasarkan   hasil penelitian,   ekstrak   etanol   mikroalga Spirulina   platensis mengandung   adanya kuinon dengan menunjukkan uji positif.
Potensi Ekstrak Mikroalga Spirulina platensis sebagai antibakteri
Jurnal Surya Medika Volume 1 No. 2 [2016] 30
Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Mikroalga Spirulina platensis yang Berpotensi sebagai Antibakteri Berdasarkan kandungan senyawa metabolit sekunder   tersebut,   dapat   ditelusuri potensinya   sebagai   antibakteri   dengan mengulas   tentang   mekanisme   bagaimana golongan senyawa tersebut bekerja sebagai antibakteri.
Menurut   Darsana   dkk.   (2012), mekanisme   kerja   alkaloid   sebagai antibakteri yaitu dengan cara mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri,   sehingga   lapisan  dinding   sel   tidak terbentuk   secara   utuh   dan   menyebabkan kematian   sel   tersebut.   Mekanisme   lain antibakteri alkaloid yaitu komponen alkaloid diketahui   sebagai   interkelator   DNA   dan menghambat   enzim   topoisomerase   sel bakteri (Karou dkk., 2005).
Mekanisme kerja senyawa golongan saponin   sebagai   antibakteri   yaitu   dapat menyebabkan kebocoran protein dan enzim dari   dalam   sel   (Madduluri   dkk.,   2013). Saponin   dapat   menjadi   antibakteri   karena zat   aktif   permukaannya   mirip   detergen, akibatnya   saponin   akan   menurunkan tegangan   permukaan   dinding   sel   bakteri dan   merusak   permeabialitas   membran. Rusaknya   membran   sel   ini   sangat mengganggu   kelangsungan   hidup   bakteri (Harborne, 1987). Saponin berdifusi melalui membran luar dan dinding sel yang rentan kemudian   mengikat   membran   sitoplasma sehingga   mengganggu   dan   mengurangi kestabilan   membran   sel.   Hal   ini menyebabkan sitoplasma bocor keluar dari
sel yang mengakibatkan kematian sel. Agen antimikroba   yang   mengganggu   membran sitoplasma   bersifat   bakterisida   (Cavalieri dkk., 2005).
Mekanisme   antibakteri   senyawa fenol   dalam   membunuh   mikroorganisme menurut   Palczar   dan   Chan   (1988)   yaitu dengan   mendenaturasi   protein   sel.   Ikatan hidrogen   yang   terbentuk   antara   fenol   dan protein   mengakibatkan   struktur   protein menjadi   rusak.   Ikatan   hidrogen   tersebut akan   mempengaruhi   permeabilitas   dinding sel   dan   membran   sitoplasma   sebab keduanya   tersusun   atas   protein. Permeabilitas   dinding   sel   dan   membran sitoplasma   yang   terganggu   dapat menyebabkan ketidakseimbangan makromolekul dan ion dalam sel, sehingga sel menjadi lisis.
Sementara   senyawa   kuinon   akan berikatan   dengan   protein   dan   membuat rangkaian   kompleks   dengan   asam   amino sehingga   mengganggu   metabolisme   sel bakteri   dan   menyebabkan   protein kehilangan fungsinya (Putra, 2010; Cowan, 1999).

## KESIMPULAN
Berdasarkan   pembahasan   di   atas,   dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut:
1. Golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak etanol mikroalga Spirulina   platensis adalah alkaloid, saponin, fenol dan kuinon.
Jurnal Surya Medika Volume 1 No. 2 [2016] 31

## Suratno
2. Kandungan golongan senyawa alkaloid, saponin,   fenol   dan   kuinon   dalam ekstrak   etanol   mikroalga Spirulina platensis menunjukkan   potensi mikroalga Spirulina   platensis sebagai sumber bahan alam yang mengandung senyawa antibakteri.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Lembaga   Penelitian   dan     Pengabdian kepada   Masyarakat   (LP2M)   Universitas Muhammadiyah   Palangkaraya   yang   telah mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Artini,   P.E.U.D.,   Astuti,     K.W.,     dan Warditiani,    N.K.,    2013.    Uji fitokimia ekstrak   etil   asetat   rimpang   bangle ( Zingiber   purpureum Roxb.), Jurnal Farmasi Udayana .
2. Cavalieri,   S.J.,   I.D.   Rankin.,   R.J. Harbeck., R.S. Sautter., Y.S. McCarter., S.E.   Sharp.,   J.H.   Ortez.,   dan   C.A. Spiegel. 2005. Manual of Antimicrobial Susceptibility   Testing .   USA:   American Society for Microbiology.
3. Cowan, M.M.   1999. Plant Product as Antimicrobial   Agents, Clinical Microbiology Reviews . 12(4): 564-582.
4. Darsana,   I.   Besung,   I.   Mahatmi,   H. 2012.   Potensi   Daun   Binahong (Anredera   Cordifolia   (Tenore)   Steenis) dalam   Menghambat   Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli secara In Vitro. Indonesia Medicus Veterinus .
5. Demirbas,   A.   dan   Demirbas,   M.F., 2010, Algae   Energy:  Algae   as   a   new source   of   biodiesel ,   Springer-Verlag, London.
6. Fahleny,   R.,   Trilaksani,   W.,   dan Setyaningsih,   I.,   2014,   Aktivitas antioksidan pada formula terpilih tablet
hisap Spirulina   platensis berdasarkan karakater   fisik, Jurnal   Ilmu   dan Teknologi  Kelautan Tropis ,  6 (2):  427- 444.
7. Harborne,   J.   B.,   1987, Metode Fitokimia:   Penuntun   Cara   Modern Menganalisis Tumbuhan , Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata   dan   Iwang   Soediro, Institut Teknologi Bandung, Bandung. 8. Karou, Damintoti. Savadogo. Aly. 2005.
Antibacterial   activity   of   alkaloids   from Sida   acuta. African   Journal   of Biotechnology . 4(12): 1452 –1457.
9. Kumalasari, E. dan N. Sulistyani. 2011. Aktivitas   Antifungi   Ekstrak   Etanol Batang   Binahong   ( Anredera   cordifolia (Tenore)   Steen.)   Terhadap Candida albicans serta   Skrining   Fitokimia. Jurnal Ilmiah Kefarmasian, 1 (2): 51 – 62.
10. Lehninger, A.     L.,   1982. Principles   of Biochemistry .   Worth   Publishers.   New York.
11. Madduluri,   Suresh.   Rao,   K.   Babu. Sitaram, B. 2013. In Vitro Evaluation of Antibacterial Activity of Five Indegenous Plants   Extract   Against   Five   Bacterial Pathogens   of   Human. International Journal   of   Pharmacy   and Pharmaceutical   Sciences .   5(4):   679- 684.
12. Oliveira,  M.A.C.L.D.,  Monteiro,   M.P.C., Robbs,   P.G.   dan   Leite,   S.G.F.,  1999, Growth   and   chemical   composition   of Spirulina   maxima and   Spirulina platensisbiomass at different
temperatures, Aquac Int. , 7, 261–275.
13. Palczar, J.M dan Chan, E.C.S. Dasar- dasar Mikrobiologi 2 . Jakarta: Penerbit UI Press. 1988.
14. Putra, I.N.K. 2010. Aktivitas Antibakteri Ekstrak   Kulit   Buah   manggis   (Garcinia Mangostana   L.)   Serta   Kandungan Senyawa   Aktifnya, J   Teknol   Industri Pangan . 21: 1-5.
15. Sangi,   M.S.,   Momuat,     L.I.     dan Kumaunang,   M.,     2013. Uji   toksisitas dan   skrining   fitokimia   tepung   gabah pelepah   aren   (Arange   pinnata) . Manado: Universitas Sam Ratulangi.
Jurnal Surya Medika Volume 1 No. 2 [2016] 32
Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Mikroalga Spirulina platensis yang Berpotensi sebagai Antibakteri 16. Sangi,   M.,   M.R.J.   Runtuwene.,   H.E.I.
Simbala.,   V.M.A.   Makang.   2008. Analisis   Fitokimia   Tumbuhan   Obat   di kabupaten   Minahasa   Utara. Chem. Prog , 1(1):47-53.
17. Vonshak,  A.,  2002, Spirulina  platensis (Arthrospira):   Physiology,   cell-biology and   biotechnology ,   Taylor   &   Francis Ltd., London.