Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 49  – 57. ISSN: 2723-4959 (online)
GAMBARAN  HISTOPATOLOGI  GINJAL  MENCIT  ( Mus  musculus )

## TERINFEKSI Plasmodium  berghei SETELAH  DIBERI  EKSTRAK METANOL KULIT BATANG Alstonia scholaris
Abdul M. Ukratalo 1) , Maria Nindatu 2*) , Nasrul A. Tuarita 3) , Nunun A. P. S. B. Kaliky 4) 1,2*,3 Program Studi Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Pattimura, Ambon
4 Program Studi Perikanan Tangkap Universitas Muhammadiyah Maluku
2* Corresponding Author e-mail : marianindatu@yahoo.com
Informasi.
Abstrak. Kata  kunci  : Alstonia scholaris, Flavonoid, Ginjal Plasmodium berghei Alstonia  scholaris merupakan  salah  satu  tanaman  yang  mengandung  antioksidan jenis  flavonoid,  saponin  dan  polifenol,  yang  diduga  dapat  bersifat  sebagai antimalaria,  menetralisir  radikal  bebas  dan  dapat  memperbaiki  kerusakan  ginjal mencit ( Mus musculus ) terinfeksi Plasmodium berghei. Tujuan penelitian ini adalah untuk  mengetahui  perubahan  histolopatologi  ginjal  mencit  ( Mus musculus) terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA  setelah  diberi  ekstrak  metanol  kulit  batang Alstonia scholaris . Mencit dengan berat badan 20 – 30 gram di infeksi Plasmodium berghei sebanyak  0,1  ml  per  ekor  dan  dibiarkan  sampai  persen  parasitemia mencapai  1-5%.  Kemudian  mencit  ( Mus  musculus )  diberi  ekstrak  metanol  kulit batang Alstonia scholaris dengan dosis 1, 10, 100 dan 200 mg/kg BB selama 4 hari berturut-turut.  Setelah  itu  dilakukan  pembedahan  untuk  mengambil  darah  untuk pengukuran  kadar  kreatenin  dan  organ  ginjal  mencit  untuk  dilakukan  preparasi organ.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak  metanol  kulit batang Alstonia  scholaris dosis  100  mg/kg  BB  dan  200  mg/kg  BB  dapat meningkatkan kadar kreatenin serta memperbaiki kerusakan ginjal mencit terinfeksi Plasmodium berghei ANKA seperti endapan protein tubuli, nekrosis tubulus distal, atrofi glomerulus dan degenerasi hidrofis tubulus proksima .
Received: 24 Februari 2023 Accepted: 20 Mei 2023 ©2023 Jurusan Biologi FMIPA Unpatti, IAIFI Cab. Ambon

## A. PENDAHULUAN
Malaria  merupakan  masalah  kesehatan  masyarakat  yang  utama  di  dunia, menyebabkan  sekitar  0,7-1  juta  kematian  per  tahun.  Kira-kira,  setengah  dari  populasi  dunia berisiko  malaria  (World  Health  Organization,  2019).  Menurut  Hermanto et  al., (2022), malaria  dapat  menyebabkan  disfungsi  multi  organ  seperti  gagal  ginjal  yang  dikaitkan  oleh respon  inflamasi  yang  dipicu  salah  satunya  produksi  mediator  inflamasi  yang  dikeluarkan dari eritrosit terinfeksi yang lisis.
Gagal Ginjal adalah suatu penyakit dimana fungsi organ ginjal mengalami penurunan (Nurani dan Mariyati, 2013). Menurut Indryani et al., (2018) dan Apsari (2019), patogenesis berkaitan  dengan  sekuestrasi  eritrosit  yang  mengganggu  mikrosirkulasi  dan  metabolisme pada ginjal. Gangguan fungsi ginjal diduga terjadi karena anoksia yang disebabkan sumbatan kapiler aliran darah ke ginjal. Sebagai akibatnya terjadi penurunan penyaringan (filtrasi) pada glomerulus.  Secara  klinis  terjadi  oligouria  yang  bila  tidak  segera  ditangani  akan  masuk  ke tahap (fase) anuria yang berlanjut ke gagal ginjal akut. Pemeriksaan biokimia berperan dalam memperlihatkan adanya disfungsi  ginjal  antara lain pemeriksaan ureum dan kreatinin serum (Darmawaty et al., 2008 ).
Komplikasi  yang  ditimbulkan  akibat  malaria  jika  tidak  segera  diobati,  maka  akan menyebabkan  gangguan  pada  organ  lainnya.  Berbagai  upaya  telah  dilakukan  dalam
Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 49  – 57. ISSN: 2723-4959 (online)
penanganan malaria salah satunya adalah aktivitas riset untuk penemuan obat baru, termasuk riset  berbasis  pengetahuan  serta  pengobatan  tradisional  yang  menggunakan  bahan  alami (Kaihena dan Samson, 2019).
Masyarakat  Maluku  mengenal  kulit  batang  pohon  pule  ( Alstonia  scholaris ) sebagai obat  antimalarial  secara  turun  temurun.  Hal  ini  juga  dibuktikan  dengan  hasil  penelitian Kakisina  dan  Ukratalo  (2011)  yang  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  kulit  batang Alstonia  scholaris dapat  menurunkan  tingkat  parasitemia  mencit  terinfeksi Plasmodium berghei ANKA.  Kulit  batang Alstonia  scholaris mengandung  senyawa-senyawa  metaboli sekunder  antara  lain  flavonoid,  saponin  dan  polifenol.  Flavonoid  merupakan  golongan senyawa  bahan  alam  dari  senyawa  fenolik  yang  banyak  merupakan  pigmen  tumbuhan. Flavonoid telah diteliti memiliki berbagai aktivitas biologis seperti antikanker dan antiviral.
Meningkatnya  kasus-kasus  malaria  di  Indonesia  dan  munculnya  berbagai  gejala malaria  berat  yang  salah  satunya  terdapat  pada  organ  ginjal,  serta  kandungan  antioksidan yang terdapat pada kulit batang pohon pule, mendorong peneliti untuk melakukan penelitian untuk membuktikan secara konprehensif efek ekstrak kulit batang Alstonia scholaris terhadap ginjal mencit ( Mus musculus ) yang diinfeksi Plasmodium berghei ANKA.

## B. METODE PENELITIAN

## Tipe Penelitian
Penelitian ini bersifat eksperimen laboratorik.

## Alat Dan Bahan Penelitian
Alat-alat yang digunakan  adalah  3  buah  Erlenmeyer  berukuran  1000  ml,  1  buah Erlenmeyer  berukuran  500  ml,  gelas  ukur,    kertas  saring  Whatman  No  2,  seperangkat  alat gelas,  timbangan  elektronik,  pisau,  blender  (alat  penghalus),  rotavapor,  wadah  pengurung mencit, neraca analitik, Alat suntik, wadah kaca objek, slide gores, mikroskop olympus cover 018, sentrifigus tubi, heparing, alat sonde, pipet volum, spatula, tabung reaksi ukuran 25 ml, cawan penguap, spektrofotometer, fotometer, analyzer dan Camera digital.
Bahan-bahan yang digunakan adalah kulit batang Alstonia scholaris , metanol absolut 2  L,  biakan Plasmodium  berghei ( Plasmodium  berghei Strain  ANKA  diperoleh  dari Laboratorium  Farmakologi  Fakultas  Farmasi  UNAIR),  hewan  coba  yaitu  mencit  dengan interval  berat  badan  20-30  gram  dan  umur  ±  2  bulan  sebanyak  30  ekor,  CMC  Na  0,5  % (Carboxy Methyl Cellulose natrium), Alceiver, Aluminium foil, tissue, kapas, dan detergen, Formalin  4  %,  Aquades,  Parafin,  Alkohol  30%,  50%,  70%,  80%,  90%,  100%,  Xylol  dan Hematoxylin Eosin.

## Prosedur Kerja
Ekstraksi. Kulit batang pohon pule diperoleh dari desa Poka dengan lingkaran batang pohon Alstonia  scholaris adalah 45  cm.  Setelah itu  kulit  batang pohon pule dipotong kecil- kecil  dengan  menggunakan  pisau  lalu  diangin-anginkan  di  dalam  ruangan  lab  selama  3 minggu.  Setelah  kering  dihaluskan  dengan  blender  (alat  penghalus)  dan  serbuk  yang  telah halus  tersebut  ditimbang  sehingga  di  peroleh  berat  kering  dari  kulit  batang  pohon  pule sebanyak 348 gram.  Selanjutnya dilakukan ekstraksi dengan menggunakan metode maserasi. Hasil  ekstraksi  kemudian  di  uapkan  menggunakan  penguap  putar  (rotavapor)  selama  3  jam sehingga diperoleh ekstrak pekat metanol (Kakisina dan Ukratalo, 2011).
Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 49  – 57. ISSN: 2723-4959 (online)
Penyiapan  kontrol  negatif .  Dalam  penelitian  ini  digunakan  kontrol  negatif  yaitu mencit  yang  diberikan  infeksi Plasmodium  berghei tapi  tidak  diberikan  ekstrak  (tidak diobati).
Penginfeksian Plasmodium  berghei pada  mencit  donor . Penginfeksian  mencit donor  dengan  simpanan  beku P.  berghei dilakukan secara  intraperitonial. Plasmodium bergehi sebanyak  200  l  ke  dalam  tubuh  mencit  donor.  Selanjutnya  dilakukan  pengamatan parasitemia  setiap  hari  hingga  mencapai  >20%  ,  kemudian  dilakukan  pembedahan  untuk mengambil  darah  dari  jantung  mencit  terinfeksi  dan  di  masukkan  kedalam  tabung  darah (botol  heparing).  Volume  darah  yang  telah  di  ambil  tersebut  dilarutkan  dengan  alceiver sehingga  didapatkan  persentase  parasitemia  sebesar  5%.  Tiap  mencit  coba  diberi  0,1  ml secara intraperitonial.
Pengujian  efektivitas  anti  malaria in  vivo . Mencit coba diinfeksi  sebanyak 200  l darah  dari  mencit  donor.  Pengamatan  tingkat  parasitemia  dilakukan  dengan  cara  sebagai berikut:
1. Darah diambil dari ekor mencit (ekor mencit dipotong ± 1 mm), kemudian diletakkan di atas  kaca  objek.  Namun,  sebelum  dibuat  apusan  darah  tipis,  darah  tersebut  dibiarkan melebar ke kiri dan ke kanan sepanjang tepi gelas objek.
2. Selanjutnya  kaca  objek  digesekkan  kearah  depan  sepanjang  permukaan  sediaan (preparat) lapisan darah tipis.
3. Setelah  dibiarkan  kering,  preparat  darah  tersebut  di  fiksasi  dengan  metanol  absolute selama 3 menit.
4. Preparat  darah  di  warnai  dengan  larutan  giemsa.  Preparat  ditetesi  seluruhnya  dengan larutan tersebut dan dibiarkan selama 45 menit.
5. Preparat  dicuci  dengan  air  mengalir  (sudut  40 o )  dengan  perlahan  –  lahan  dan dikeringkan.
6. Preparat  di  periksa  di  bawah  mikroskop  setelah  ditetesi  dengan  minyak  imersi (pembesaran 10 x 100)
7. Dari  pemeriksaan  preparat  apusan  darah  tipis  tersebut  akan  terlihat  darah  yang  telah terinfeksi parasit malaria.
Setelah diketahui persen parasitemia, maka di lanjutkan dengan pengujian efektifitas malaria dari  ekstrak.  Mencit uji  yang dibagi  dalam  6 perlakuan,  masing-masing perlakuan  I kontrol negatif, perlakuan II Kontrol positif, dosis ekstrak metanol kulit batang pohon pule 1 mg/kg  BB,  kelompok  III  dosis  ekstrak  metanol  kulit  batang  pohon  pule  10  mg/kg  BB, kelompok IV dosis ekstrak metanol kulit batang pohon pule 100 mg/kg BB dan kelompok V dosis ekstrak metanol  kulit  batang pohon pule 200  mg/kg BB. Tiap kelompok terdiri dari 3 ekor (3 replikasi). Kelompok II, III, IV dan V diberikan ekstrak secara oral menggunakan alat sonde  dengan  dosis  yang  ditentukan.  Pemberian  ekstrak  dilakukan  selama  4  hari  berturut- turut.
Pengamatan  Kerusakan  Ginjal  Dengan  Menggunakan  Uji  Kreatinin. Sampel darah  yang  telah  diambil,  disentrifugasi  dan  dipisahkan  plasma-nya.  Kemudian  pengukuran kadar  kreatenin  dengan  metode  kolorimetri  menggunakan  spektrofotometer,  fotometer  atau analyzer kimiawi (Ukratalo dan Sangdji, 2023).
Pembuatan  Preparat  Histologi  Ginjal. Preparasi  jaringan  ginjal  dilakukan  dengan menggunakan pewarnaan Hematoxilyn Eosin (HE).
Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 49  – 57. ISSN: 2723-4959 (online)

## Analisis Data
Data kadar kreatinin akan dianalisis dengan ANOVA dan dilanjutkan dengan uji BNT apabila terdapat pengaruh yang signifikan. Gambaran histologi ginjal mencit akan dianalisis secara deskriptif dengan menampilkan gambar.

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengukuran Kadar Kreatenin
Infeksi Plasmodium  berghei ANKA  pada  mencit  dapat  menurunkan  kadar  kreatenin sebagai indikator kerusakan ginjal. Setelah diberikan ekstrak methanol kulit batang Alstonia scholaris dapat  meningkatkan  kadar  kreatenin  tersebut.  Penurunan  dan  peningkatan  kadar kreatenin dalam penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 1 dibawah ini.
Tabel  1.  Rata-rata  kadar  kreatenin  mencit  yang  terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA  dan diberi ekstrak methanol kulit batang Alstonia scholaris Perlakuan Rata-rata Kadar Kreatenin (mg/dl ) ± SD Kontrol (+) 0,65 ± 0,014 a Kontrol (-) 0,89 ± 0.007 b Dosis 1 mg/kg BB 0,70 ± 0,007 c Dosis 10 mg/kg BB 0,72 ± 0,007 c Dosis 100 mg/kg BB 0,78 ± 0,014 d Dosis 200 mg/kg BB 0,83 ± 0,021 e
Keterangan : Superskrip dengan huruf yang sama tidak berbeda nyata (P > 0,05).
Hasil pengukuran kadar kreatenin pada Tabel 1 menunjukkan bahwa kadar kreatenin pada kelompok mencit yang terinfeksi Plasmodium berghei ANKA (Kontrol positif) sebesar 0,65  ±  0,014,  sedangkan  pada  kelompok  mencit  yang  tidak  terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA  (Kontrol  negatif)  kadar  kreatenin  sebesar  0,89  ±  0.007.  Setelah  terjadi  penurunan kadar  kreatenin,  mencit  kemudian  diberi  ekstrak  methanol  kulit  batang Alstonia  scholaris selama 4 hari. Pemberian ekstrak methanol kulit batang Alstonia scholaris dosis 1 mg/kg BB pada mencit terinfeksi Plasmodium berghei ANKA, kadar kreateninnya sebesar 0,70 ± 0,007. Pemberian ekstrak methanol kulit batang Alstonia scholaris dosis 10 mg/kg BB pada mencit terinfeksi Plasmodium berghei ANKA, kadar kreateninnya sebesar 0,72 ± 0,007. Pemberian ekstrak methanol kulit batang Alstonia scholaris dosis 100 mg/kg BB pada mencit terinfeksi Plasmodium berghei ANKA, kadar kreateninnya sebesar 0,78 ± 0,014 dan pemberian ekstrak methanol  kulit  batang Alstonia  scholaris dosis  200  mg/kg  BB  pada  mencit  terinfeksi Plasmodium berghei ANKA, kadar kreateninnya sebesar 0,83 ± 0,021.
Berdasarkan  hasil Analisis  Of  Varian (ANOVA)  satu  jalur  dengan  menggunakan program  SPSS  16,0  menunjukkan  bahwa  F  hitung  >  F  tabel,  yang  berarti  bahwa  ekstrak metanol  kuli  batang Alstonia  scholaris berpengaruh  nyata  terhadap  kadar  kreatenin  (P  > 0,05).  Hasil  uji  lanjut  dengan  menggunakan  Uji  Beda  Nyata  Terkecil  (BNT)  menunjukkan bahwa antara kelompok kontrol negatif, positif, dosis 100 mg/kg BB dan dosis 200 mg/kg BB salinhg  berbeda  nyata,  akan  tetapi  antara  dosis  1  mg/kg  BB  dan  dosis  10  mg/kg  BB  tidak saling berbeda nyata.
Infeksi Plasmodium  beghei ANKA  pada  mencit  dalam  penelitian  ini  dapat menurunkan  kadar  kreatenin.  Hal  ini  disebabkan  infeksi Plasmodium  berghei ANKA  dapat
Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 49  – 57. ISSN: 2723-4959 (online)
menurunkan laju filtrasi pada glomerulus. Hal ini sesuai dengan pendapat dengan Panjaitan et al. ,  (2007)  yang  menyatakan  bahwa  kadar  kreatenin  menurun  menjadi  indikasi  rusaknya proses filtrasi yang disebabkan oleh gangguan Glomerular Filtartion Rate (GFR). Penurunan kadar  kreatenin  mencit  terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA  berkaitan  dengan  bertambah luas  dan  beratnya  kerusakan  ginjal  sehingga  kemampuan  ginjal  dalam  mensintesis  kreatin terganggu.
Pemberian ekstrak metanol kuli batang Alstonia scholaris dapat meningkatkan kadar kreatenin  mencit  terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA.  Hal  ini  disebabkan  karena  adanya kandungan  metabolit  sekuder  yang  terdapat  pada  ekstrak  metanol  kuli  batang Alstonia scholaris seperti  flavonoid,  saponin  dan  polifenol.  Menurut  Rumondor et  al., (2019), flavonoid termasuk senyawa fenolik alam yang potensial sebagai antioksidan dan mempunyai bioaktifitas  sebagai  obat.  Senyawa  flavonoid  yang  dapat  berfungsi  sebagai  anti  inflamasi adalah toksifolin, biazilin, haematoksilin, gosipin, prosianidin, dan nepritin. Hasil penelitian menyatakan  bahwa  pemberian  flavonoid  dapat  meningkatkan  glomerular  filtration  rate (GFR).  Peningkatan  glomerular  filtration  rate  pada  ginjal  akan  mengakibatkan  ekskresi terhadap ureum dan kreatinin juga meningkat (Jouad et al., 2001).
Histologi Ginjal Mencit ( Mus musculus ) Terinfeksi Plamodium berghei ANKA Hasil analisis histology ginjal mencit dengan menggunakan pewarnaan Hematoxylin- Eosin dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1. Histologi  ginjal  mencit  (Pembesaran  1000x.  (A)  Kelompok  mencit  yang  hanya  diberi  aquades,  (B) Kelompok mencit yang terinfeksi Plasmodium berghei ANKA, (C) Kelompok mencit yang terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA  dan  diberi  ekstrak  methanol  kulit  batang Alstonia  scholaris dosis  1 mg/kg  BB,  (D)  Kelompok  mencit  yang  terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA  dan  diberi  ekstrak methanol  kulit  batang Alstonia  scholaris dosis  10  mg/kg  BB,  (E)  Kelompok  mencit  yang  terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA  dan  diberi  ekstrak  methanol  kulit  batang Alstonia  scholaris dosis  100
Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 49  – 57. ISSN: 2723-4959 (online)
mg/kg BB, dan (F) Kelompok mencit yang terinfeksi Plasmodium berghei ANKA dan diberi ekstrak methanol kulit batang Alstonia scholaris dosis 200 mg/kg BB.
Keterangan  :  (1)  Endapan  protein  tubuli,  (2)  Nekrosis,  (3)  Atrofi  Glomerulus,  (4)  Degenerasi Hidropis
Hasil  analisis  histologi  ginjal  mencit  dengan  menggunakan  pewarnaan  Hematoxylin Eosin  (HE)  menunjukkan  pada  kelompok  mencit  yang  hanya  diberi  aquades  (Gambar  1B), gromerulus  dan  tubulus  ginjal  mencit  dalam  keadaan  normal.  Kelompok  mencit  yang terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA  (Gambar  1B)  menunjukkan  bahwa  terjadi  kerusakan pada  ginjal  mencit.  Hal  ini  dapat  dilihat  dengan  adanya  endapan  protein  tubuli,  nekrosis tubulus distal, atrofi glomerulus dan degenerasi hidrofis pada tubulus proksimal.
Terjadi  kerusakan  pada  glomerulus  menyebabkan  daya  filtrasi  akan  terganggu (Ressang,  1984).  Kerusakan  glomerulus  yang  parah  dapat  mengganggu  sistem  vaskular peritubular dan berpotensi untuk mengalirkan zat racun ke tubuli. Sebaliknya kerusakan yang parah pada tubuli akibat peningkatan tekanan intra glomerulus dapat menyebabkan terjadinya atrofi glomerulus (Cotran et al. 1989).
Menurut  Cotran et  al. (1989)  atrofi  glomerulus  ditandai  dengan  mengecilnya glomerulus dalam ruang Bowman sehingga ruang di antara glomerulus dan kapsula Bowman makin melebar. Hal ini terlihat pada histology mencit terinfeksi Plasmodium berghei ANKA (Gambar 1B) dan Histologi mencit terinfeksi Plasmodium berghei ANKA dan diberi ekstrak methanol kulit batang pohon pule (Gambar 1C). Atrofi glomerulus kemungkinan juga terjadi karena  permeabilitas  kapiler  bertambah.  Menurut  Saleh  (1979)  endotel  kapiler  merupakan suatu  membran  semi  permeabel  yang  dapat  dilalui  oleh  air  dan  elektrolit  secara  bebas, sedangkan  protein  plasma  hanya  dapat  melaluinya  sedikit  atau  terbatas.  Daya  atau kesanggupan  permeabilitas  ini  bergantung  kepada  substansi  yang  mengikat  sel-sel  endotel tersebut. Pada beberapa keadaan tertentu, misalnya akibat pengaruh toksin atau bahan-bahan tertentu  yang  bekerja  terhadap  endotel,  permeabilitas  bertambah,  akibatnya  protein  plasma keluar dari kapiler, sehingga tekanan osmotik koloid darah menurun dan sebaliknya tekanan osmotic  cairan  interstitium  bertambah.  Hal  ini  menyebabkan  makin  banyak  cairan  yang meninggalkan kapiler dan menimbulkan edema.
Glomerulus  sebagai  filter darah pada dasarnya akan menghasilkan filtrat  yang bebas protein. Adanya akumulasi massa protein bewarna eosinofilik di mesangium maupun dalam ruang  Bowman  menunjukkan  adanya  peningkatan  permeabilitas  kapiler  sehingga  molekul protein  yang  berukuran  besar  dapat  menembus  filter.  Kerusakan  glomerulus  cenderung diikuti  oleh  kerusakan  epitel  tubulus  berupa  degenerasi  ataupun  adanya  endapan  protein dalam sitoplasma (Ressang 1984). Kerusakan tubuli yang semakin parah akan mempengaruhi fungsi  tubuli  sebagai  tempat  reabsorbsi.  Hal  ini  mengakibatkan  selektifitas  tubuli  menurun sehingga  akan  mempengaruhi  homeostasis  pada  tubuh.  Kerusakan  tubuli  ginjal  dalam penelitian  ini  disebabkan  oleh  bahan  yang  besifat  nefrotoksik  yang  terkandung  dalam Plasmodium  berghei ANKA  yaitu  toksin  malaria  berupa  GPI  ( Glucose  Phosphate Isomerase ). Derajat perubahan tergantung pada sifat dan jumlah bahan yang masuk ke dalam aliran  darah,  karena  efektifitas  toksin  sangat  bergantung  pada  tiga  faktor  yaitu  jenis  bahan toksin, konsentrasi dan target organ (Hock dan Elstner , 2005).
Ginjal  menerima  darah  sebesar  20%  dari  curah  jantung  melalui  arteri  renalis. Tingginya  aliran  darah  yang  menuju  ginjal  inilah  yang  menyebabkan  berbagai  macam  obat
Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 49  – 57. ISSN: 2723-4959 (online)
dan  bahan  kimia  dalam  sirkulasi  sistemik  dikirim  ke  ginjal  dalam  jumlah  yang  besar.  Jika suatu  zat  kimia  disekresi  secara  aktif  dari  darah  ke  urin,  zat  kimia  terlebih  dahulu diakumulasikan dalam tubulus proksimal atau jika substansi kimia ini direabsorbsi dari urin maka  akan  melalui  sel  epitel  tubulus  dengan  konsentrasi  tinggi.  Sebagai  akibat  dari  proses pemekatan tersebut zat-zat toksik ini akan terakumulasi di ginjal dan menyebabkan kerusakan bagi ginjal (MacSween et al., 1992; Hodgson et al., 2001).
Adanya  endapan  protein  di  lumen  tubulus  dalam  penelitian  ini  dipengaruhi  berbagai faktor diantaranya peningkatan permeabilitas kapiler glomerulus sehingga protein tidak dapat lolos.  Selain itu, menurunnya  kemampuan  absorbsi  tubulus  yang  dikarenakan  epitel  tubulus telah  mengalami  degenerasi  hingga  nekrosis  juga  menjadi  faktor  adanya  endapan  protein (Carlton and McGavine 1995).
Degenerasi  hidropis  merupakan  suatu  keadaan  dimana  sitoplasma  sel  mengandung air.  Secara  mikroskopis  dalam  sitoplasma  sel  terdapat  air  sehingga  terlihat  sitoplasma membengkak dan mengandung ruangan-ruangan jernih mengelilingi inti tetapi tidak sejernih glikogen  dan  lemak.  Degenerasi  hidropis  merupakan  perubahan  yang  bersifat  sementara ditandai  dengan  kehadiran  vakuola-  vakuola  di  sitoplasma.  Infeksi  akut  sel  akan menyebabkan air dan protein tetap berada dalam sitoplasma. Pompa lapisan membrane akan memindahkan  ion  dan  air  ke  dalam  retikulum  endoplasma,  hal  ini  akan  menyebabkan pembengkakan  sel  yang  disebut  degenerasi  hidropis  (Cheville,  1999).  Kondisi  ini  dapat dilihat pada histologi ginjal mencit terinfeksi Plasmodium berghei ANKA (Gambar 5B).
Nekrosis  sebagai  bentuk  lanjutan  dari  degenerasi  terjadi  karena  kurangnya  ATP sebagai  sumber  energi.  Kekurangan  ATP  disebabkan  oleh  perubahan  tekanan,  pH  yang rendah (asidosis), peningkatan laju metabolisme dan hipoksia yang terjadi selama perjalanan dari degenerasi sel (Cheville, 1999). Nekrosa pada tubuli juga merupakan akibat dari keadaan ischemia atau karena zat toksik yang masuk ke epitel tubuli. Wardener (1967) menambahkan bahwa adanya nekrosis tersebut karena adanya kontak langsung antara racun yang diekskresi dalam urin dengan epitel-epitel sel tubulus ginjal. Menurut Price & Wilson (1995), kematian sel  yang  disebabkan  oleh  nekrosis  tubulus  dapat  ditandai  dengan  menyusutnya  inti  sel  atau ketidakaktifan  inti  sel  tubulus.  Inti  sel  tubulus  yang  tidak  aktif  dengan  pewarnaan Hematoksilin  Eosin  akan  terlihat  lebih  padat  dan  gelap  bila  dibandingkan  dengan  inti  sel tubulus yang normal.
Pemberian  ekstrak  methanol  kulit  batang Alstonia  scholaris dosis  1  mg/kg  BB (Gambar  1C)  dan  dosis  10  mg/kg  BB  (Gambar  1D)  pada  kelompok  mencit  yang  terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA  menunjukkan  bahwa    masih  terjadi  kerusakan  pada  ginjal mencit.  Hal  ini  dapat  dilihat  dengan  adanya  nekosis,  atrofi  glomerulus  dan  degenerasi hidrofis. Hal ini disebabkan karena kecilnya dosis yang diberikan sehingga antioksidan yang terdapat  didalam  ekstrak  methanol  kulit  batang Alstonia  scholaris tidak  dapat  menetralisir radikal bebas yang disebabkan oleh Plasmodium beghei ANKA .
Pemberian  ekstrak  methanol  kulit  batang Alstonia  scholaris dosis  100  mg/kg  BB (Gambar  1E)  dan  dosis  200  mg/kg  BB  (Gambar  1F)  menunjukkan  bahwa  mulai  terjadi perbaikan  pada  ginjal  mencit.  Pada  (Gambar  1E)  menunjukkan  masih  terjadi  endapan  pada tubuli,  sedangkan  tidak  terjadi  nekosis,  atrofi  pada  tubuli  dan  degenrasi  hidrofis.  Pada Gambar 1F menunjukkan bahwa ginjal mencit sudah mulai kembali normal. Salah satu toksin utama  yang  terdapat  pada  membrane Plasmodium  berghei adalah  GPI  ( Glucose  Phosphate
Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 49  – 57. ISSN: 2723-4959 (online)
Isomerase ). Glucose Phosphate Isomerase ini akan mengaktifkan makrofag dan endotelium vaskuler,  dalam  merangsang  TNF-α,  IL-1,  NO  dan  ekspresi  ICAM  ( Inter-Cellular  Adheson Molecule ).  Apabila  terjadi  peningkatan  TNF-α  maka  akan  menyebabkan  pelepasan  radikal bebas  dan  NO  serta  meningkatkan  fagositosis  oleh  makrofag  dan  netrofil.  Radikal  oksigen bebas  berupa  superoksida  (O 2 ),  hydrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  dan  radikal  hidroksi  (OH)  akan menghancurkan makromolekul seluler dan lipid. Radikal oksida bersama-sama dengan INOS ( Inducible  Nitric  Oxide  Synthase )  dapat  melakukan  oksidasi  fagosit  yang  dalam  fagosom asidik menghasilkan radikal peroksinitrit yang sangat reaktif dan dapat membunuh parasit.
Penurunan  tingkat  nekrosis  epitel  tubulus  ginjal  dalam  penelitian  ini  terbukti dipengaruhi oleh besarnya dosis pemberian ekstrak methanol kulit batang pohon pule   yang diberikan. Semakin tinggi dosis yang diberikan maka kandungan zat aktif juga akan semakin tinggi.  Zat  aktif  yang  terdapat  dalam  ekstrak  methanol  kulit  batang  pohon  pule  yaitu flavonoid,  saponin  dan  polifenol.  Zat  -  zat  ini  berfungsi  sebagai  antiokasidan  yang  mampu menangkal  radikal  bebas  yang  ditimbulkan  oleh Plasmodium  berghei ANKA.  Pendapat  ini sesuai  dengan  Umniyah  (2007)  yang  menyatakan  bahwa  zat  yang  berfungsi  sebagai antiokasidan adalah flavonoid,saponin dan polifenol.
Flavonoid merupakan golongan senyawa bahan alam dari senyawa fenolik yang akan berfungsi  dalam  tubuh  sebagai  antioksidan.  Manfaat  flavonoid  antara  lain  adalah  untuk melindungi  struktur  sel,  memiliki  hubungan  sinergis  dengan  vitamin  C  (meningkatkan efektivitas  vitamin  C),  antiinflamasi,    antibiotik  dan  induksi  apoptosis.  Menurut  Robbins  & Koemar (1992), sel akan mengalami proliferasi dan regenerasi untuk mengganti sel-sel yang lepas atau mati. Disamping itu sel tubulus ginjal termasuk dalam golongan sel  yang bersifat stabil, artinya sel tersebut mampu beregenerasi secara aktif bila dalam keadaan rusak, tetapi dalam  keadaan  normal  sel  tubulus  ginjal  tidak  bertambah  banyak  secara  aktif  (Robbins  dan Kumar,  1992).  Dengan  demikian  jika  sel-sel  pada  tubulus  (khususnya)  dapat  beregenerasi kembali, maka akan mempengaruhi keoptimalan fungsi dari tubulus tersebut sebagai saluran pembawa toksikan yang akan dikeluarkan bersama urin.

## D. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  telah  diperoleh,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa    pemberian ekstrak  methanol  kulit  batang Alstonia  scholaris dosis  100  mg/kg  BB  dan  200  mg/kg  BB dapat  meningkatkan  kadar  kreatenin  serta  memperbaiki  kerusakan  ginjal  mencit  terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA  seperti  endapan  protein  tubuli,  nekrosis  tubulus  distal,  atrofi glomerulus dan degenerasi hidrofis tubulus proksimal.

## E. DAFTAR PUSTAKA
Apsari P.  I. B. 2019. Aspek Molekuler Malaria Berat. Jurnal Lingkungan  & Pembangunan , 3(1):49-53.
Cheville  N.  F.  1999. Introduction  to  Veterinary  Pathology .  Edisi  2.  Iowa  State  University Press. United States of America.
Cotran  R.  S.,  Kumar  V.,  S.  Robbins.  1989. Pathology  Basis  of  Disease .  Edisi  4.  WB Saunders Company. Philadelphia
Darmawaty,  Fitriani  M.,  Pakasi  R.  D.  N.,  Hardjoeno.  2008.  Gambaran  Fungsi  Hati  Dan Ginjal  Pada  Penderita  Malaria. Indonesian  Journal  of  Clinical  Pathology  and Medical Laboratory . 15(1), 1 - 4
Biofaal Journal; Vol 4, No 1. Juni 2023. Pp 49  – 57. ISSN: 2723-4959 (online)
Hermanto F., Anisa I. N., Wahyuningsih S., Alatas F., Suryani S., Rachmawan R. L., Haq F. A., F. Adhary. 2022. Aktivitas Antiplasmodium dan Pengaruh Resveratrol terhadap Indeks  Organ  Mencit  yang  Terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA. Jurnal Pharmacy . 19(1).
Hock B., E. F. Elstner. 2005. Plant Toxicology. Edisi 4. Marce Dekker. New York. Indrayani I. A. S., Sudira P. G., Samatra D. P. G. P., Laksmidewi A. A. A. P., Adnyana I. M. O., Susilawathi N. M., Witari N. P., K. Widyasyuti.
Jouad H.  M. A. Lacaille-Dubois  B.,  Lyoussi M.,  Eddouks. 2001. Effects  of The Flavonoids Extracted  from  Spergularia  purpurea  Pers.  on  Arterial  Blood  Pressure  and  Renal Function  in  Normal  and  Hypertensive  Rats.  Journal  of  Ethnopharmacology.  72(2), 159-163.
Kaihena  M.,  E.  Samson.  2019.  Efektivitas  Infusa  Daun  Kecipir  ( Psophocarpus tetragonolobus (L.) DC) Terhadap Tikus  Putih ( Rattus norvegicus ) Model Malaria. Rumphius Pattimura Biological Journal . 1(1), 026-033 Kakisina P., A. M. Ukratalo. 2011. Efek Ekstrak Metanol Kulit Batang Pohon Pule ( Alstonia scholaris L.  R.  Br)  Terhadap  Penurunan  Parasitemia  Mencit  ( Mus  musculus ) Terinfeksi Plasmodium  berghei ANKA Secara In Vivo. Molucca  Medica .  4(1),  49- 60.
Nurani V. M., S, Mariyanti. 2013. Gambaran Makna Hidup Pasien Gagal Ginjal Kronik Yang Menjalani Hemodialisa. Jurnal Psikologi . 11(2), 1 - 13.
Panjaitan  P.  G.  R.,  Handharyani  E.,  Chairul,  Masriani,  Zakiah  Z.,  W.  Manalu.  2007. Pengaruh Pemberian Karbon Tetraklorida Terhadap Fungsi Hati Dan Ginjal Tikus. Makara, Kesehatan . 11(1), 11 - 16.
Rumondor  R.,  Komalig  M.  R.,  Kamaluddin.  2019.  Efek  Pemberian  Ekstrak  Etanol  Daun Leilem  ( Clerodendrum  minahasae )  terhadap  Kadar  Kreatinin,  Asam  Urat  dan Ureum pada Tikus Putih ( Rattus novergicus ). JBE 4(3), 108 - 117
Saleh S. 1979. Gangguan Peredaran Cairan Tubuh, Elektrolit dan Darah . Patologi. Bagian Patologi Anatomik. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta.
Ukratalo  A.  M.,  J.  M.  Sangajdi.  2023.  Efek  Ekstrak  Methanol  Kulit  Batang Cinnamomum burmannii Terhadap Penurunan Kadar Kreatenin Sebagai Indikator Perbaikan Ginjal Mencit ( Mus musculus ) Model Diabetes Mellitus. Jurnal Ilmu Kesehatan dan Sains Nusantara . 1(1), 34 - 43
World Health Organization. 2019. World Malaria Report 2019. Geneva