## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology

## PENDAHULUAN
Streptococcus β hemolisa merupakan salah satu bakteri  patogen  yang  banyak  menginfeksi  manusia. Bakteri ini berada di lapisan superfisial epidermis atau permukaan  kulit  manusia  dan  membran  mukosa, seperti  epitel  mukosa  orofaring,  epitel  nasal,  traktus genital,  dan  daerah  perianal  (Jawetz,  2008).  Carrier Streptococcus β hemolisa  dapat  ditemukan  di  saluran pernafasan, namun kadang tidak menimbulkan penyakit akan  tetapi  dapat  berisiko  untuk  menyebarkan penyakit (Jati, 2012),
Infeksi yang ditimbulkan akibat Streptococcus β hemolisa  ini  terjadi  karena  adanya  interaksi  faktor- faktor virulensi Streptococcus β hemolisa yang berupa
protein  yang  disekresikan  maupun  yang  ada  di permukaan  sel  dengan  sel  host.  Faktor  virulensi  yang disekresikan  antara  lain  streptokinase,  hialuronidase, proteinase dan hemolisin (Brooks, 2008). Streptococcus β hemolisa  dapat  menyebabkan berbagai macam penyakit pada manusia, seperti radang tenggorokan,  faringitis,  impetigo,  erysipelas,  demam nifas,  scarlet  fever,  necrotizing  fasciitis,  toxic  shock syndrome,  septikemia  (Research  Occupational  Health Program Boston University, 2012).
Media  pertumbuhan  adalah  bahan  yang  terdiri dari  nutrisi  yang  diperlukan  mikroorganisme  untuk melakukan pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan  nutrisi  tersebut  untuk  menyusun

## KUALITAS MEDIA AGAR DARAH MANUSIA DAN DOMBA PADA PERTUMBUHAN STREPTOCOCCUS Β HEMOLYTICUS
Quality of Human and Sheep Blood Agar Media on the Growth of Streptococcus β hemolytic
Mochamad Rizal Maulana 1
Maseva Wijayanti 2
1 Poltekkes Kemenkes Semarang
2 Universitas Airlangga Surabaya
*email: mochamadrizalmaulana7@gmail.com

## Abstrak
Agar  darah  domba  (ADD)  merupakan  salah  satu  media  pertumbuhan  untuk mengidentifikasi  bakteri  pathogen  serta  merupakan  media  standart  untuk pemeriksaan  mikrobiologi.  Beberapa  negara  mengalami  beberapa  kesulitan dalam penggandaan ADD karena beberapa faktor, sehingga dibutuhkan alternatif lain  yaitu  penggunaan  agar  darah  manusia  (ADM)  sebagai  pengganti.  Penelitian ini bertujuan untuk  menguji kelayakan  ADM  sebagai  media  alternatif pengganti ADD  dalam  menumbuhkan Streptococcus  Beta  Hemolitycus .  Penelitian  ini menggunakan  media  Agar  Darah  Domba  dan  Agar  Darah  Manusia  yang selanjutnya  diamati  pada  24  dan  48  jam  inkubasi  yang  akan  terlihat  perbedaan hemolisa  dalam ukuran  diameter.  Hasil pada 24  jam,  rerata  diameter hemolisa ADM  belum  menunjukkan  hemolisa  (0,00mm)  dan  berbeda  dengan  ADD (0,40mm),  Sedangkan  pada  48  jam,  rerata  diameter  hemolisa  ADM  belum menunjukkan  hemolisa  (0,52mm)  dan  berbeda  dengan  ADD  (1,10mm). Berdasarkan  hasil  diatas,  kedepannya  perlu  dilakukan  pengontrolan  terhadap variabel  lain  yang  mungkin  mempengaruhi  seperti  Hb  dan  usia  ertrosit, ketebalan  agar,  pH  yang  digunakan,  dan  teknik  menanam  (strict)  agar memperoleh hasil pertumbuhan yang lebih maksimal
Kata Kunci:
Streptococcus beta hemolyticus , ADM, ADD.
Keywords :
Streptococcus beta hemolyticus , ADM,
ADD.

## Abstract
Sheep blood agar (ADD) is a growth medium for identifying pathogenic bacteria and is  a  standard  medium  for  microbiological  examination.  Some  countries  experience some  difficulties  in  multiplying  ADD  due  to  several  factors,  so  another  alternative  is needed, namely the use of human blood agar (ADM) as a substitute. This study aims to  examine  the  feasibility  of  ADM  as  an  alternative  medium  to  replace  ADD  in growing  Streptococcus  Beta  Hemolitycus.  This  study  used  sheep  blood  agar  and human  blood  agar  which  were  then  observed  at  24  and  48  hours  of  incubation  to show  differences  in  hemolysis  in  diameter.  The  results  at  24  hours,  the  average hemolytic diameter of ADM did not show hemolysis (0.00mm) and was different from ADD (0.40mm). ,10mm). Based on the above results, in the future, it is necessary to control other variables that might influence such as Hb and age of erythrocytes, agar thickness, pH used, and planting techniques (strict) to obtain maximum growth results
komponen  sel.  Isolasi  mikroorganisme  menggunakan media  pertumbuhan  dapat  digunakan  sebagai  kultur murni. (Tenny O, 2014)
Agar  darah  domba  adalah  media  standart sebagai  media  pertumbuhan  untuk  mengindentifikasi jenis  bakteri  dan  sebagai  media  untuk  tes  sensitivitas antibiotic  dari  berbagai  bakteri  pathogen.  Namun penggunaan  darah  domba  wol  di  negara  yang berkembang seperti Indonesia susah untuk diwujudkan karena  domba  wol  tidak  dapat  beradaptasi  dengan iklim tropis seperti iklim di Indonesia (Fawzia, 2018)
Negara berkembang seperti Indonesia penggunaan  agar  darah  manusia  untuk  pemeriksaan mikrobiologi rutin dilakukan. Hal ini dikarenakan iklim di  Indonesia  kurang  mendukung  untuk  memelihara domba  sebagai  penyuplai  darah  untuk  dipakai  menjadi salah  satu  salah  bahan  pembuat  agar  darah. Berdasarkan  data  diatas  perlu  dikaukan  penelitian terkait  perbedaan  pertumbuhan  Streptococcus β hemolisa  pada  agar  darah  domba  (ADD)  dengan  agar darah manusia (ADM) (Abdat, 2010)

## METODE PENELITIAN
Ruang  lingkup  keilmuan  dalam  penelitian  ini adalah  bidang  ilmu  Mikrobiologi.  Penelitian  ini merupakan  penelitian  eksperimental  dengan  jenis sampel  yang  digunakan  adalah  darah  domba  dan manusia  yang  dijadikan  media  agar  dan  ditanamkan bakteri  uji  yaitu Streptococcus  Beta  Hemolitycus untuk dibaca  kemampuan  zona  hemolisisnya.  Setelah dilakukan strict bakteri ke media blood agar, dilakukan inkubasi untuk membuat menumbuhkan bakteri dalam media. Setalah 24 jam dilakukan pengamatan diameter zona hemolisa dari pertumbuhan bakteri dalam media agar  tersebut.  Hasil  kemudian  dicatat  dan  media tersebut  diinkubasi  kembali  selama  24  jam  kedua  dan dilakukan  pengamatan  kembali  diameter  zona hemolisa.
Alat  dan  Bahan  yang  digunakan  adalah  sebagai berikut  yaitu  Ose  Steril,  Bunsen,  Tabung  Raksi,  Glass
Beads,  Pipet,  Inkubator,  Petridish,  Laminar  Air  Flow, Vernier Caliper, AutoClave, Darah Domba Defibrinasi, Darah Manusia Citrat, Blood Agar Serbuk Oxoid, dan Aquadest.
Setelah  alat  dan  bahan  telah  disiapkan, dilanjutkan  dengan  membuat  media  kultur  dan penanaman kuman dengan cara sebagai berikut:
1. Encerkan  serbuk  Reagen  Blood  Agar  dengan aquades  sesuai  dengan  perbandingan  pengenceran yang tertera pada instruksi media tersebut.
2. Aduk merata, kemudian didihkan.
3. Setelah itu masukkan kedalam autoclave selama 30 menit.
4. Dinginkan  sampai  kira-kira  45- 55˚ C,  kemudian tambahkan darah domba/darah manusia.
5. Aduk  merata,  dan  tuangkan  pada  petridish  steril 15-20 ml.
6. Biarkan  dingin,  kemudian  lakukan  uji  sterilitas dengan menginkubasi media 37˚ C selama 24 jam
7. Bila  tidak  terdapat  pertumbuhan/kontaminasi, media layak digunakan.
8. Setelah  media  siap  digunakan,  siapkan  alat  dan bahan untuk melakukan penanaman bakteri uji
9. Pijarkan  ose  diatas  Bunsen,  dinginkan  pada  media agar
10. Ambil satu mata ose pada biakan Streptococcus Beta Hemolitycus
11. Buat Strict 4 zona pada lempeng sampel agar darah domba (ADD) dan agar darah manusia (ADM)
12. Inkubasi pada 37C dan amati pada 24 dan 48 jam
Besaran  sampel  yang  digunakan  dihitung menggunakan  rumus  perhitungan  federer  sebagai berikut:
(𝑡 − 1)(𝑛 − 1) ≥ 15
Keterangan:
t : Perlakukan n : Ulangan/Replikasi Berdasarkan  perhitungan  dengan  menggunakan  2 perlakukan sampel yaitu penanaman agar darah domba standard  (defibrinasi)  dan  penanaman  agar  darah manusia  standard  (darah  citrat)  maka  didapatkan
Mochamad Rizal Maulana, Maseva Wijayanti. 2023. Quality of Human and Sheep Blood Agar Media on the Growth of Streptococcus β hemolytic
replikasi  minimal  yang  dibutuhkan  setiap  perlakukan adalah  sebesar  16  kali.  Data  dari  16  sampel dengan  2 perlakuan kemudian dilakukan uji statistik menggunakan Paired Sample T Test.

## HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL
Agar  darah  manusia  yang  digunakan  pada penelitian  ini  berasal  dari  whole  blood  yang  diambil dari UTD PMI Embong Ploso Surabaya yang kemudian dibuat  menjadi  Agar  Darah  Manusia  (ADM)  dengan kadar  hematokrit  sebesar  40-50%.  Sedangkan  Agar Darah  Domba  (ADD)  dibuat  dar  whole  blood  darah domba  yang didefibrinasi.
Perbandingan pertumbuhan bakteri
Streptococcus β hemolyticus pada  kedua  media  (ADD dan  ADM)  pada  pengamatan  setelah  inkubasi  24  jam dapat dilihat pada gambar grafik berikut ini :
Grafik 1. Diameter hemolisa Streptococcus β hemolyticus pada ADD dan ADM setelah inkubasi selama 24 jam. Nilai p=0,000 (Paired Sample T Test)
Grafik  1  menunjukkan  pertumbuhan  dengan diameter  hemolisa  Streptococcus β hemolyticus  pada ADD  yang  di  inkubasi  selama  24  jam  terlihat  sebesar 0,40 mm dan pada ADM belum terjadi hemolisa. Hasil ini  tetap  menunjukkan  perbedaan  bermakna  statistik dengan  nilai  p=0,000  ( Paired  Sample  T  Test ).  Kuman Streptococcus β hemolisa yang  ditanam  pada  ADD dan  ADM  diamati pertumbuhannya setelah 24 dan 48 jam inkubasi yang  mencakup hemolisis Streptococcus β hemolisa.
Pada  pengamatan  24  jam,  pertumbuhan  pada ADM  Streptococcus β hemolisa  tumbuh  lebih  lambat daripada  ADD.  Hal    ini    dikarenakan    komplemen, antibodi,    serta    antikoagulan    sitrat    yang    bersifat bakteriostatik (menghambat pertumbuhan bakteri)yang terdapat  pada  ADM  sehingga  Streptococcus β hemolisa tumbuh kurang optimal (Ravi, 2007).
Grafik 2. Diameter hemolisa Streptococcus β hemolyticus pada ADD dan ADM setelah inkubasi selama 48 jam. Nilai p=0,000 (Paired Sample T Test)
Grafik  2  menunjukkan  pertumbuhan  diameter hemolisa Streptococcus β hemolyticus pada ADD yang di inkubasi selama 24 jam terlihat lebih besar (1,10mm) dari  pada  pertumbuhan  pada  ADM  (0,52mm),  dengan selisih  rerata  0,58mm.  Hasil  ini  menunjukkan perbedaan  bermakna  statistik  dengan  nilai  p=0,000 (Paired Sample T Test).
Pada  48  jam  inkubasi,  ADD  dan  ADM  masih tetap  sama  sama  tumbuh  tetapi  pertumbuhan  ini bersifat lebih rendah daripada 24 jam. Dapat dijelaskan pula bahwa setelah mencapai 18-24jam  masa  kultur, maka  bakteri  memasuki fase stasioner. Dalam fase ini terdapat  akumulasi  limbah,  kekurangan  nutrien, perubahan  pH,  dan  perubahan  faktor  lain  yang  akan mendesak  dan  mengganggu  biakan,  sehingga  bakteri mengalami  penurunan  kecepatan    pertumbuhan. Berbeda  pada  pengamatan  24  jam  dimana  bakteri mengalami fase  lag dan fase eksponensial pada kurang dari  18-24  jam  masa  kultur  dimana  nutrisi    masih tersedia lengkap sehingga pertumbuhan bakteri bersifat cepat pada fase ini.
Jenis Agar ADM ADD Di am et er He m ol isa 24 Jam 0.60 0.50 0.40 0.30 0.20 0.10 0.00 Jenis Agar ADM ADD Di am et er He m ol isa 48 Jam 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25
Rerata diameter hemolisis pada pengamatan 24 jam  pada  ADM  belum  menunjukkan  hemolisis  (0,00 mm)    berbeda    bermakna    dengan    rerata    diameter koloni    pada    ADD  (0,40  mm).  Kecepatan  lisis  ADD dipengaruhi  karena  darah  domba  memiliki  kandungan sphyngomielin  yang  lebih  tinggi  yaitu  51  %  daripada darah manusia yang hanya 26 % (Anand C, et.al, 2000)
Selain  itu  faktor  lain  yang  mempengaruhi mudahnya  aktivitas  lisis  dari  eritrosit  domba  adalah modulasi  permukaan  dari  aktivasi  jalur  klasik  yaitu pembentukan  C2  dan  C3  konvertase.  Pada  penelitian EJ  Brown  menyatakan    bahwa  EAC14  yang  digunakan C2,  sedikitnya  20  kali  lebih  cepat  pada    eritrosit domba  dibanding  eritrosit manusia dan marmut pada perlakuan  yang  sama    dalam  jumlah  molekul  C1  dan C4. (Brown, 2005)
Tetapi pada 48 jam, walaupun ADM sulit di lisis oleh  Streptococcus β hemolisa  tetap  menunjukkan hemolisa  sama  seperti  pada  ADD.  Lisisnya  eritrosit manusia  yang  lebih  lambat  daripada  eritrosit  domba mungkin  dikarenakan  perbedaan  morfologi  dan komposisi  membran  eritrosit.  Secara  substansial, perbedaan    morfologi    serta    komposisi    membran eritrosit  antara  darah  domba  dan  darah  manusia berbeda.  Sel  darah  manusia  lebih  lebar  dibanding dengan    sel    darah    merah    domba    yang  lebih  kecil serta  membran  sel  yang  tipis  sehingga  hal  ini mempengaruhi  kemampuan hemolisis Streptococcus β hemolisa dalam melisis sel darah merah manusia  pada ADM. (David, 1995).
Kemungkinan    yang    lain    yaitu    dikarenakan umur    eritrosit    darah    yangberasal  dari  packed-red- cell  yang  tidak  diketahui  umurnya  kemungkinan menyebabkan  penurunanfragilitas  pada  membran. Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Michael  Föller  et almeyatakan bahwa kematian terprogram dari eritrosit matur    ditandai  denganpenurunan  volume  sel, kebocoran  membran  sel  dan  kerusakan  sel  membran secaraasimetri  karena  paparan  permukaan  sel  oleh phosphatidylserine. (Leboffe, 2012)
Penelitian  lainmeyatakan  terjadi  penurunan aktifitas  glucose-6-phosphate    dehydrogenase(G6PD) dan  membrane-bound  b5R  (b5Rm)  pada  membran eritrosit  matur.  Penurunan  keduanya  meyebabkan penurunan  respon  antioksidan    sehingga  eritrosit menjadi  lebih  mudah  rusak.  Kedua  hal  tersebut kemungkinan  menyebabkan  eritrosit  yang  telah  matur lebih  mudah  dilisis  oleh  hemolisis  dibanding  eritrosit muda  sehingga  hemolisis  tetap  terjadi  walaupun  lebih lambatdan aktifitas hemolisis pada ADM membutuhkan waktu yang lebih lama. (Abdat, 2010)

## KESIMPULAN
Terdapat perbedaan hemolisis Streptococcus β hemolyticus  pada  agar  darah  domba  (ADD)  dengan agar  darah  manusia  (ADM).  Pertumbuhan  hemolisis Streptococcus β hemolisa paling cepat pada agar darah domba  dibandingkan  dengar  agar  darah  manusia.  Bagi laboratorium  yang  memiliki  keterbatasan  dalam mendapatkan darah domba, dapat menggunakan darah manusia  sebagai  media  agar  darah  alternatif  untuk kultur  Streptococcus β hemolisa  dengan  catatan hemolisis  mungkin  baru  tampak  pada  lebih  dari  sama dengan  24  jam  inkubasi.  Pada  penelitian  kedepannya perlu  dilakukan  pengontrolan  terhadap  variabel  lain seperti  kadar  Hb  dan  umur  eritrosit.  Perlu diperhatikan  dalam  permbuatan  media  hendaknya dilakukan sesuai standar tiap reagen, seperti komposisi darah, ketebalan agar, pH agar serta teknik stricht yang benar  sehingga  diharapkan  dapat  terjadi  pertumbuhan kuman Streptococcus β hemolisa yang optimal pada agar darah tersebut.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdat,  Amali.  (2010).  Pertumbuhan  Streptococcus pneumoniae  pada  agar  darah  manusia  dan  agar darah  domba.  Artikel  Ilmiah.  Semarang: Universitas Diponegoro Anand  C,  et  al.  (2000)  Pig  and  goat  blood  as substitutes  for  sheep  blood  in  blood- supplemented agar media. J. Clin Microbiol.;38:591-594.
Mochamad Rizal Maulana, Maseva Wijayanti. 2023. Quality of Human and Sheep Blood Agar Media on the Growth of Streptococcus β hemolytic
Brooks  GF,  et  al.  (2008).  Mikrobiologi  Kedokteran (terjemahan). Edisi ke-23. Jakarta: EGC
Brown,  A.  E.  (2005).  Microbiological  Applications,
Ninth  Edition.  Mc  Graw  Hill.  Auburn University. New York
Fawzia, N.,e et al. (2018). Darah Domba dengan Agar Darah  Manusia  Pengaruh  Preinkubasi  dalam Suplemented  Toddhewitt  Broth  (STHB).  Jurnal Kedokteran  Diponegoro,  volume  7,  ISSN Online: 2540-8844
Greenwood  David,  Richard  Slack,  John  Peutherer, (1995).  Medical  Microbiology  “  A  Guide  to Microbial  Infections,  Pathogenesis,  Imunity, Laboratory  Diagnosis  and  Control”.  Churchill Livingstone : Elsevier Jati, Sumilih (2012). Darah manusia yang dicuci sebagai alternatif meningkatkan kemampuan
menumbuhkan  Streptococcus  pneumoniapada agar  media  agar  .  Artikel  Ilmiah.  Semarang: Universitas Diponegoro Jawetz. (2008). Medical Microbiology. Edisi 23. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Leboffe J. et al. (2012). Brief Microbiology Laboratory Theory  and  Application  Second  Edition. Morton : Englewood Ravi    S.    Kasinathan,  et    al.    (2007).  Enhanced susceptibility    to    suicidal    death    of erythrocytes from
transgenic mice overexpressing  erythropoietin.    Am  J  Physiol
Regul Integr Comp Physiol; 293: R1127-34.
Research  Occupational  Health  Program  Boston University.  (2012).  Streptococcus  pyogenes. America
Tenny, O., Egwuatu. (2014). Effect of Blood Agar from Different  Animal  Blood  on  Growth  Rates  and Morphology  of  Common  Pathogenic  Bacteria. Advances  in  Microbiology,  4,  1237-1241 Published  Online  December  2014  in  SciRes. http://www.scirp.org/journal/aim