## PENENTUAN DOSIS TANIN DAN SAPONIN UNTUK DEFAUNASI DAN PENINGKATAN FERMENTABILITAS PAKAN
(Determination of tannin and saponin dosage for defaunation improvement feed fermentability)

## I. M. D. Wahyuni, A. Muktiani dan M. Christianto
Fakultas Peternakan dan Pertanian Universitas Diponegoro Semarang Jln Prof Sudarto, Semarang 50270, Jawa Tengah E-mail : idhairawan05@gmail.com

## ABSTRACT
The research was conducted to evaluate the effect of addition of tannin, saponin or combination of tannin and saponin to the concentrate of the ration on the microbial population and fermentability of  feed  in  vitro  and  to  assess  the  best  dosage  of  uses.    The  research  was  arranged  according  to completely randomized design with four treatments and 3 replications. The treatments were ration without tannin and saponin (T0), ration with 1.2% saponin (T1), ration with 0.5% tannin and 0.9% saponin (T2), ration with 1% tannin and 0.6% saponin, (T3), ration with 1.5% tannin and saponin 0.3% (T4) and ration with 2% tannin and 0% saponin. the results of the experiment showed that the addition of the tannin, saponin or their combination altered microbial population in the rumen. Protozoas  population  decreased  significantly  whereas  bacterial  population  was  increased.  NH3 production increased while ratio of acetaic to propionic acid tended to decrease. Total gas production increased 62.59-69.35 ml/200 mg of dry matter. The addition of 1% tannin and 0.6 % saponin shows the best effect to control protozoa population and feed fermentability in the rumen.
Kata kunci : Tannin, Saponin, Microbial population, Feed fermentability

## ABSTRAK
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengkaji  pengaruh  penambahan  tanin,  saponin  atau kombinasinya pada konsentrat dalam ransum terhadap daya defaunasi dan fermentabilitas pakan secara in  vitro serta  mencari  dosis  terbaiknya.  Penelitian  menggunakan  metode  eksperimental dengan  rancangan  acak  lengkap.    Perlakuan  yang  diberikan  adalah  T0:  pakan  tanpa  tanin  dan saponin; T1: pakan dengan saponin 1,2%; T2 : pakan dengan tanin 0,5% dan saponin 0,9% dan T3 : pakan dengan tanin 1% dan saponin 0,6%; T4 : pakan dengan tanin 1,5% dan saponin 0,3% dan T5 : pakan dengan tanin 2% tanpa saponin. Hasil penelitian menunjukkan dengan adanya perlakuan penambahan tanin, saponin maupun kombinasinya terjadi penurunan populasi protozoa (P<0,05) pada  semua  perlakuan,  sebaliknya  terjadi  peningkatan  populasi  bakteri.    Produksi  NH 3 juga mengalami peningkatan (P<0,05) sementara imbangan asetat dengan propionat menurun. Produksi gas  total  mengalami  peningkatan  dengan  rata-rata  berkisar  antara  62,59-69,35  ml/200mgBK. Penambahan  tanin,  saponin  dan  kombinasinya  memberikan  pengaruh  yang  terbaik  pada  pakan dengan penambahan tanin 1% dan saponin 0,6% terhadap protozoa dan NH 3 (P<0,05) akan tetapi tidak berpengaruh nyata pada produksi gas dan propionat. Dapat disimpulkan bahwa penambahan kombinasi ekstrak tanin dan saponin dalam pakan pada dosis tanin 1% dan saponin 0,6% terbukti mampu memberikan efek defaunasi dan fermentabilitas pakan yang terbaik.
Kata kunci : Tanin, Saponin, Defaunasi, Fermentabilitas pakan

## PENDAHULUAN
Mikroorganisme yang terdapat pada rumen ruminansia terdiri atas protozoa, bakteri, fungi dan virus bakteri.  Keberadaan mikroba rumen ini  bermanfaat  karena  mampu  memanfaatkan
nitrogen bukan protein, mencerna pakan berserat kasar dalam jumlah banyak dan menghasilkan produk fermentasi rumen yang mudah diserap dalam usus ruminansia.  Mikroorganisme rumen juga dapat menimbulkan kerugian karena pakan dengan protein tinggi akan didegradasi di dalam

## I. M. D. Wahyuni, dkk.
rumen  dan  sebagian  energi  pakan  terbuang sebagai panas fermentasi dan gas metan. Protozoa terutama jenis entodinomorphid memiliki  potensi  enzimatik  untuk  mencerna selulosa  secara  efisien,  dan  secara  simultan juga bersifat hemiselulolitik (Jouany,1991). Sifat predator protozoa terhadap bakteri merupakan kerugian  dalam  sistem  pencernaan  dalam rumen.    Protozoa  memangsa  bakteri  untuk memenuhi kebutuhan asam amino dalam sintesis protein  selnya.    Protozoa  cenderung  tertahan di  dalam  rumen  dan  kurang  memberikan kontribusi  terhadap  protein  mikroba  di  usus halus.    Protozoa  juga  merupakan  inang  bagi sebagian bakteri metanogen.  Bakteri metanogen memanfaatkan  gas  H 2 yang  diproduksi protozoa  untuk  dikonversi  menjadi  CH 4 dengan  bantuan  CO 2 .  Pengendalian  populasi protozoa  diharapkan  dapat  mengoptimalkan pertumbuhan  bakteri  rumen  sehingga  dapat meningkatkan aktivitas fermentasi pakan dalam menyediakan  suplai  protein  yang  berasal  dari protein  mikroba.    Penekanan  jumlah  protozoa rumen akan menyebabkan peningkatan jumlah bakteri amilolitik (Kurihara et al., 1978).  Bakteri amilolitik  ini  akan  meningkatkan  pencernaan pati  dalam  menghasilkan  propionat  sebagai bagian  dari  VFA.    Dalam  pembentukan  asam propionat bakteri amilolitik membutuhkan H 2 . Hal ini akan merubah profil VFA karena adanya kompetitor  pengguna  H 2 .  Penekanan  populasi protozoa diharapkan mampu menekan produksi gas metan.
Tanin  merupakan  senyawa  antinutrisi yang memiliki gugus fenol dan bersifat koloid. Tanin  membentuk  ikatan  kompleks  dengan protein,  karbohidrat  (selulosa,  hemiselulosa, dan  pektin),    mineral,  vitamin    dan    enzim mikroba    di  dalam    rumen  (Widyobroto et  al. , 2007).    Kompleks  ikatan  tanin  dengan  protein dapat  terlepas  pada  pH  rendah  di  dalam abomasum sehingga protein dapat didegradasi oleh  enzim  pepsin  dan  asam-asam  amino yang  dikandungnya  dapat  dimanfaatkan  oleh ternak  (Jayanegara et  al .,  2008).    Tanin  dapat digunakan sebagai agen defaunasi yang dapat menurunkan  populasi  protozoa  sehingga mampu menekan emisi metan di dalam rumen (Makkar,  2003).    Pakan  yang  mengandung tanin  terkondensasi  sebesar  25,9  g/kg    bahan kering (BK) dalam Lotus corniculatus dilaporkan mampu menurunkan emisi metan pada ternak sapi (Woodward et al ., 2001).  Tanin pada ampas teh mampu menurunkan degradabilitas protein dalam  rumen  dan  menekan  emisi  gas  metan (Makkar, 2003). Gambir ( Uncaria gambir Roxb)
merupakan komoditas perkebunan rakyat yang mengandung katekin sebagai komponen utama serta  beberapa  komponen  lain  seperti  asam kateku  tanat,  kuersetin,  kateku  merah,  gambir flouresin,  lemak  dan  lilin.    Katekin  termasuk kelompok tanin terkondensasi.
Saponin  adalah  detergen  alami  yang merupakan  glikosida  non  nitrogen,  glikosida kompleks  atau  metabolit  sekunder.  Saponin mampu melisiskan protozoa dengan membentuk  ikatan  yang  kompleks  dengan sterol yang terdapat pada permukaan membran protozoa.  Saponin  dapat  menghambat  proses metanogenesis  disamping  mampu  membuat produktivitas  ternak  menjadi  lebih  efisien (Wang et al. , 2011).  Menurut Wina et al. (2005) penambahan  0,4-1,2%  saponin  dari  ampas  teh secara in  vitro mampu  menurunkan  jumlah protozoa dan meningkatkan proporsi propionat. Apabila populasi protozoa yang ada di dalam rumen  ditekan  jumlahnya,  maka  akan  terjadi perubahan  keragaman/komposisi  mikroba rumen  dan  diharapkan  terjadi  modifikasi fermentasi  rumen  (Suharti  dkk.,  2009). Penambahan  8  mg  saponin  dari  ampas  teh dalam pakan juga dapat menurunkan gas metan sampai 26% (Wei et al ., 2005).  Lerak merupakan jenis  tanaman  tropis  yang  mengandung senyawa  saponin.    Saponin  dari  esktrak  buah lerak ( Sapindus rarak ) dapat digunakan sebagai agen  defaunasi  untuk  menekan  pertumbuhan protozoa.
Saponin  dan  tanin  merupakan  agen defaunasi  yang  banyak  digunakan  dalam beberapa penelitian.  Pemberian saponin pada level  2,5%  dalam  pakan  dapat  menurunkan palatabilitas karena rasanya yang pahit (Suharti dkk.,  2009).    Tanin  selain  berfungsi  sebagai agen  defaunasi  juga  berfungsi  memproteksi protein  pakan.  Tanin  mempunyai  kelemahan dalam fungsinya sebagai agen defaunasi karena gugus  fenol  pada  tanin  juga  mempunyai sifat  antibakteri.    Bakteri  gram  positif  sensitif terhadap  polifenol  tertentu  (Smith et  al .,  2003) padahal beberapa bakteri pencerna serat adalah termasuk bakteri gram positif.  Pemberian tanin dalam  dosis  yang  tinggi  akan  menurunkan kecernaan  serat  didalam  rumen.    Kombinasi tanin dan saponin diharapkan mampu berperan sebagai  agen  defaunasi  dimana  potensial menekan  pertumbuhan  protozoa  akan  tetapi tidak  menurunkan  palatabilitas  dan  menekan bakteri selulolitik.
Penelitian  ini  berupaya  mengevaluasi potensi  ekstrak  gambir  dan  ekstrak  lerak sebagai  senyawa  aditif  sumber  tanin  dan
saponin  di  dalam  pakan  dilihat  pengaruhnya terhadap  populasi  protozoa,  bakteri  dan aktifitas  fermentasi.  Melalui  hasil  penelitian ini,  diharapkan  dapat  menganalisis  potensi tanin, saponin maupun  kombinasinya sebagai agen  defaunasi  yang  mampu  memodifikasi keragaman  mikroba  rumen  sehingga  dapat mengubah  aktivitas  fermentasi  rumen  dan meningkatkan produktivitas ternak.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan September 2013 – Februari 2014.  Ransum yang digunakan  adalah  konsentrat  dan  hijauan. Komposisi konsentrat terdiri dari dedak, onggok, jagung,  kulit  kopi,  bungkil  kelapa,  bungkil sawit, molases, urea dan garam.  Hijauan yang diberikan  adalah  rumput  raja.  Sumber  tanin berasal dari ekstrak gambir dan sumber saponin berasal  dari  ekstrak  buah  lerak.  Digunakan dua  ekor  sapi  peranakan  ongole  betina  yang dipasang fistula pada bagian rumennya dengan bobot  badan  ±300  kg.  Inokulum  adalah  cairan rumen yang diperoleh dari komposit 2 ekor sapi tersebut.
Perlakuan  yang  diterapkan  adalah  T0: pakan  tanpa  tanin  dan  saponin;  T1:  pakan dengan saponin 1,2%; T2 : pakan dengan tanin 0,5% dan saponin 0,9% dan T3 : pakan dengan tanin 1% dan saponin 0,6%; T4 : pakan dengan tanin  1,5%  dan  saponin  0,3%  dan  T5  :  pakan dengan tanin 2% tanpa saponin.
Penelitian  dibagi  menjadi  3  tahap  yaitu tahap persiapan, tahap pelaksanaan dan tahap analisis data.  Tahap persiapan meliputi ekstraksi tanin, ekstraksi saponin dan penyiapan pakan.
Ektraksi  tanin. Sediaan  gambir  digiling halus  sebelum  dilakukan  ekstraksi.  Tahap pertama dilakukan penghilangan lemak dengan menggunakan  pelarut  heksan.  Prepurifikasi dilakukan  dengan  cara  melarutkan  tepung gambir  dalam  aquades  dan  dipanaskan  pada suhu  80 0 C,  kemudian  disaring  dengan  kain halus. Tahap selanjutnya adalah pemisahan tanin dari senyawa yang lain dengan menggunakan pelarut etil asetat.  Filtrat kemudian dipisahkan dari  pelarutnya  dengan  menggunakan rotary evaporator (Pambayun et  al., 2007).    Bubuk ekstrak gambir dianalisis kadar tanin kondens secara kuantitatif dengan menggunakan metode Singleton dan Rossi (1965).
Tabel 1 . Komposisi konsentrat dan kandungan nutrisi ransum Kandungan pakan Persentase Bahan Pakan Bungkil sawit 5 Jagung kuning 40 onggok 4 dedak 9 kulit kopi 5,5 bungkil kelapa 32,5 tetes 3 urea 0,85 Bahan Kering 89,61 Abu 7,84 Protein Kasar 12,32 Lemak Kasar 1,91 Serat Kasar 31,19 Neutral Detergent Fiber 48,57 Acid Detergent Fiber 34,95 BETN 41,37 TDN 61,87
Ekstraksi  saponin .  Saponin  diambil  dari ekstraksi  daging  buah  lerak.  Buah  lerak dihilangkan  bijinya  kemudian  dikeringkan menggunakan oven dengan suhu 50 0 C sampai kering, kemudian digiling halus.  Tepung buah lerak  diturunkan  kandungan  lemak  dengan sochlet menggunakan pelarut heksan.  Tepung lerak  yang  telah  disochlet  diekstrak  dengan menggunakan  pelarut  metanol.  Selanjutnya ekstrak metanol dipisahkan dengan pelarutnya menggunakan rotary evaporator. Pengujian kadar kuantitatif saponin diuji menggunakan metode kolorimetri (Hiai et al. , 1976). Penyiapan pakan .  Sampel pakan konsentrat digiling  dan  disaring  dengan  saringan  2  mm. Penyiapan pakan dilakukan dengan cara tanin dan  saponin  dicampurkan  pada  konsentrat dengan  level  sesuai  dengan  perlakuan  pada percobaan.  Sebelumnya  ekstrak  tanin  dan saponin dilarutkan terlebih dahulu dengan air secukupnya kemudian disemprotkan ke bahan pakan sampai merata.  Rumput raja dikeringkan kemudian  digiling  dan  dicampurkan  dengan konsentrat yang sudah disuplementasi.
Tahap  pelaksanaan .    Pakan  yang  diberikan disesuaikan  dengan  kebutuhan  bahan  kering (BK)  ternak  yang  dihitung  3%  dari  masing- masing  bobot  badan  sapi.  Ransum  yang diberikan adalah konsentrat dan hijauan dengan perbandingan 40:60.  Kandungan protein kasar ransum sebesar 12,32% dan TDN 61,87%. Ransum diberikan dua kali dalam sehari dengan jumlah total  pemberian  dibatasi  sebanyak  3%  dari bobot badan.  Cairan rumen diambil setelah sapi melewati  masa  pendahuluan  dengan  adaptasi pakan,  diambil.pada  pagi  hari  kemudian disaring  dan  dimasukkan  termos  yang  sudah diberi  air  hangat  sebelumnya  sampai  suhu 39 0 C  ditutup  untuk  menjaga  suasana anaerob dan  dibawa  ke  laboratorium  untuk  dilakukan penelitian.    Komposisi  kimia  pakan  perlakuan tersaji pada Tabel 1.
Cairan  rumen  diambil  setelah  melewati masa pendahuluan untuk dilakukan pengujian secara in vitro (Tilley dan Terry, 1963) . Cairan rumen  diambil  dari  sapi  berfistula,  kemudian diperas  dengan  menggunakan  kain  kasa  dan dimasukkan  kedalam  termos  hangat.    Termos yang akan dipakai untuk tempat cairan rumen sebelumnya  sudah  diisi  dengan  air  panas sehingga  suhunya  mencapai  39 o C.  Tabung fermentor diisi dengan 0,5 gram sampel ransum perlakuan kemudian ditambahkan 10 ml cairan rumen  dan  40  ml  larutan  McDougal.    Tabung fermentor  dikocok  kemudian  dialiri  gas  CO 2 selama 30 detik (pH 6,5-6,9) dan ditutup dengan
karet berventilasi.  Tabung dimasukkan kedalam shaker  water  bath dengan  suhu  39 0 C  kemudian dilakuan  inkubasi.  Cairan  rumen  yang  telah diinkubasi  kemudian  dilakukan  pengujian kadar NH 3 dan VFA parsial. Teknik  pengukuran  kadar  NH3  dibaca menggunakan  spektronik  yang  didasarkan pada reaksi indophenols yang dikatalis sehingga menghasilkan  senyawa  biru  yang  stabil. Pembacaan spektronik dilakukan pada panjang gelombang 630 nm.
Analisis konsentrasi VFA parsial (asetat,  propionat,  butirat)  dilakukan  dengan menggunakan  Gas  Chromatography  (GC). Dari hasil konsentrasi VFA individual, efisiensi konversi energi dari heksosa menjadi VFA dapat dihitung berdasarkan stoikiometri reaksi-reaksi fermentasi karbohidrat (heksosa) menjadi asetat, propionat dan butirat (Orskov dan Ryle, 1990). Energi  metan  dihitung  melalui  pendugaan berdasarkan pada Orskov dan Ryle (1990).
Perhitungan populasi protozoa dilakukan dengan  menggunakan  metode  Ogimoto  dan Imai  (1981)  yaitu  dengan  mencampur  cairan rumen dengan larutan Methil Formalin Saline. Campuran  diteteskan  pada  counting  chamber kemudian  dilakuan  penghitungan  total protozoa.
Metode yang digunakan untuk menghitung populasi  bakteri,  adalah  metode  pencacahan koloni  dimana  yang  diperhitungkan  hanya bakteri  yang  hidup.    Prinsip  perhitungannya adalah cairan rumen hasil inkubasi diencerkan secara  serial  kemudian  dilakukan  pembiakan bakteri  dalam  sungkup  dengan  suhu  tertentu dalam suasana anaerob selama 3 hari.
Data yang diperoleh diolah dengan analisis ragam.  Apabila terdapat pengaruh yang berbeda (P<0,05)  akibat  perlakuan,  dilanjutkan  dengan uji  wilayah  ganda  Duncan  untuk  mengetahui perbedaan antar perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Respon  penambahan  tanin,  saponin  dan kombinasinya  pada  pakan  terhadap  populasi protozoa  dan  bakteri  dalam  cairan  rumen dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Populasi  protozoa pada  media  inkubasi  menurun  secara  nyata (P<0,05) akibat suplementasi tanin, saponin dan kombinasinya.  Menurut  Wiseman  dan  Cole (1990) penggunaan saponin yang ditambahkan ke  dalam  ransum  dapat  menurunkan populasi  protozoa  rumen  secara  parsial  atau keseluruhan.
Populasi  protozoa  berkurang  karena terjadi  gangguan  pertumbuhan  protozoa akibat  adanya  ikatan  antara  saponin  dengan sterol  pada  dinding  sel  permukaan  protozoa. Ikatan ini mempengaruhi tegangan permukaan membran sel protozoa (Wallace et al ., 2002), yang mengakibatkan  meningkatnya  permeabilitas dinding sel dan masuknya cairan dari luar sel ke  dalam  sel  protozoa.    Masuknya  cairan  dari luar  sel  mengakibatkan  pecahnya  dinding sel  sehingga  protozoa  mengalami  kematian. Bakteri  mampu  bertahan  terhadap  saponin karena  dinding  membran  sel  bakteri  tersusun oleh  peptidoglikan.  Hu  et  al.  (2005)  dalam penelitiannya  membuktikan  bahwa  efek penambahan  ekstrak  saponin  dari  teh  (0,2-0,4 mg/ml) dapat menurunkan populasi protozoa cairan  rumen.    Menurut  Makkar  (2003)  tanin juga  dapat  digunakan  sebagai  agen  defaunasi yang  akan  menurunkan  populasi  protozoa. Penurunan populasi protozoa ini berpengaruh terhadap  peningkatan  populasi  bakteri karena  protozoa  merupakan  predator  yang memangsa bakteri dalam memenuhi kebutuhan proteinnya.
Tabel  2.  menyajikan  penurunan  populasi protozoa  terendah  terjadi  pada  pakan  dengan penambahan kombinasi tanin 1% dan saponin 0,6%.  Kemudian  diikuti  pakan  dengan penambahan kombinasi tanin 0,5% dan saponin 0,9% dan pakan dengan penambahan kombinasi tanin  1,5%  dan  saponin  0,3%.  Penurunan jumlah  populasi  protozoa  ini  jauh  lebih  besar dibanding  pada  pakan  dengan  penambahan tanin atau saponin saja.  Hal ini membuktikan bahwa  penambahan  kombinasi  saponin  dan tanin mampu memperkuat fungsi sebagai agen defaunasi.
Populasi  bakteri  meningkat  pada  pakan dengan  perlakuan  penambahan  tanin  dan saponin.  Proses  defaunasi  menyebabkan peningkatan  total  bakteri  didalam  rumen, karena pengurangan populasi protozoa berarti mengurangi predator bakteri.  Menurut Kurihara
et al. (1978), eliminasi sebagian protozoa dalam rumen  menyebabkan  peningkatan  jumlah bakteri  amilolitik.    Sebagian  besar  protozoa memakan  bakteri  untuk  memperoleh  sumber nitrogen dan mengubah protein bakteri menjadi protein protozoa.  Diaz et al. (1993) melaporkan bahwa  tepung  buah  Sapindus  saponaria yang  mengandung  saponin  mampu  berperan sebagai  agen  defaunasi  yang  secara  signifikan menurunkan populasi protozoa sampai 84% serta meningkatkan  total  bakteri,  bakteri  selulolitik, kapang,  dan  tingkat  kecernaan  bahan  kering. Peningkatan  populasi  bakteri  mengakibatkan terjadinya peningkatan fermentabilitas pakan. Fermentabilitas  pakan  mengalami  pe– ningkatan dengan adanya peningkatan popula- si bakteri. Hal ini dapat dilihat dari peningkatan konsentrasi NH3 dan VFA seperti tersaji pada data dalam Tabel 3.
NH3  merupakan  hasil  biofermentasi  di dalam  rumen,  yang  akan  digunakan  untuk membentuk protein mikroba.  Konsentrasi NH3 dalam  rumen  merupakan  indikator  adanya perombakan protein yang masuk dalam rumen dan proses sintesis protein oleh mikroba rumen. Produk  NH3  akan  dimanfaatkan  kembali oleh  mikroba  rumen  untuk  pertumbuhannya, sehingga  pertumbuhan  dan  pertambahan mikroba rumen bergantung pada ketersediaan NH3 dalam rumen.  Arora (1995) menyatakan bahwa  mikroba  rumen  akan  memanfaatkan kembali NH3 yang terbentuk untuk membangun sel tubuhnya.
Pada  Tabel  3  memperlihatkan  bahwa penambahan  tanin  dan  saponin  pada  pakan konsentrat    mampu    memberikan    pengaruh nyata terhadap  peningkatan produksi N-NH3 cairan rumen (P<0,05).  Kadar N-NH3 tertinggi diperoleh  pada  pakan  dengan  penambahan kombinasi tanin 1,5% dan saponin 0,3%,  diikuti oleh  pakan  dengan  penambahan  tanin  2% dan  pakan  dengan  kombinasi  tanin  1%  dan saponin  0,6%  yaitu  berturut  turut  21,74;  21,03 dan  20,86  mg/100  ml.    Menurut  Widyobroto
Tabel 2 . Pengaruh penambahan tanin, saponin dan kombinasi tanin saponin terhadap populasi protozoa dan bakteri Peubah T0 T1 T2 T3 T4 T5 Protozoa(103) 2,76±0,23 a 1,93±0,23 b 0,96±0,18 c 0,78±0,05 c 0,99±0,13 c 1,04±0,14 c Bakteri (109) 0,94 1,50 1,32 2,50 1,12 0,90
Keterangan : T0=pakan tanpa tanin dan saponin; T1=pakan dengan saponin 1,2%; T2=pakan dengan tanin 0,5% dan saponin
0,9% dan T3=pakan dengan tanin 1% dan saponin 0,6%; T4=pakan dengan tanin 1,5% dan saponin 0,3% dan
T5=pakan dengan tanin 2% tanpa saponin. Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbe- daan yang nyata (P<0,05).
(1995)  biosintesis  protein  mikroba  berkisar antara 1 – 34 mg/100 ml, untuk pertumbuhan maksimal  sedangkan  untuk  aktivitas  mikroba diperlukan  konsentrasi  N-NH3  dalam  cairan rumen antara 5,0 – 23,5 mg/100 ml.  Defaunasi dapat meningkatkan pemanfaatan nitrogen oleh ruminansia  (Wina,  2005).  Penurunan  populasi protozoa akan meningkatkan ketersediaan N di dalam saluran pencernaan (Herdian et al ., 2011). Bakteri  pada  rumen  mampu  menggunakan protein  dan  NPN  baik  yang  berasal  dari pakan  maupun  saliva  sebagai  sumber  NH3. Ketersediaan  NH3  ini  menyebabkan  bakteri mampu  berkembang  dengan  baik  dalam memfermentasi  pakan.    Kadar  N-NH3  dalam cairan  rumen  merupakan  petunjuk  adanya proses  degradasi  protein  yang  masuk  dalam rumen dan proses sintesis protein oleh mikroba rumen.  Hidrolisis protein menjadi asam amino tersebut  diikuti  oleh  proses  deaminasi  untuk membebaskan  NH3.    Selain  protein,  sumber NH3 yang lain adalah dari hidrolisis urea atau garam-garam amonium yang dapat berasal dari saliva  maupun  pakan  (Arora,  1995).    Menurut Santoso dan Hariadi (2007) pada P. purpureum yang  disuplementasi  dengan  Acacia  magnium yang  mengandung  saponin  pada  level  15-45% memperlihatkan  profil  kuadratik  terhadap konsentrasi N-NH3 secara in vitro.  Defaunasi tidak  memberikan  pengaruh  yang  konstan terhadap  aktifitas  deaminasi  mikroba  rumen (Hsu et al., 1991).
Konsentrasi  VFA  parsial  dipengaruhi komposisi  pakan  dalam  ransum.    Produksi asam  asetat,  propionat  dan  butirat  tergantung pada  fermentasi  karbohidrat  dan  sebagian
kecil dari hasil fermentasi protein pakan.  Pada perlakuan  pakan  dengan  penambahan  tanin saponin  menunjukkan  adanya  peningkatan produksi  propionat  dibandingkan  pada  pakan kontrol akan tetapi secara statistik tidak berbeda nyata (P>0,05).  Proporsi asam propionat yang rendah  dapat  disebabkan  karena  substrat memiliki kandungan pati dan gula yang rendah disamping  spesies  bakteri  yang  berkembang didalam  rumen  (Russel  dan  Rychlik,  2001). Pada  penelitian  ini  proporsi  asam  asetat  lebih tinggi  dibanding  standar  diduga  disebabkan bakteri  yang  menghasilkan  asam  asetat  lebih berkembang baik dengan komposisi pakan yang diberikan.    Banyak  hal  yang  mempengaruhi komposisi VFA, salah satunya adalah komposisi populasi mikroba rumen.
Proporsi  asam  propionat  cenderung meningkat pada pakan yang diberi penambahan tanin  dan  saponin  dibandingkan  dengan kontrol.  Hal ini dibuktikan dengan menurunnya rasio  asam  asetat  :  asam  propionat.    Akan tetapi  peningkatan  proporsi  asam  propionat tersebut  belum  cukup  signifikan  (P>0,05), sehingga belum mampu secara nyata menekan produksi gas metan.  Wina (2005) mengatakan pengaruh utama dari pemberian saponin pada pakan  terhadap  fermentasi  rumen  adalah perubahan  pola  asam  lemak  rantai  pendek yaitu  meningkatnya  proporsi  propionat  dan menurunnya rasio asetat dibanding propionat.
Efisiensi  konversi  heksosa  menjadi  VFA pada  pakan  dengan  perlakuan  mengalami peningkatan akan tetapi belum cukup signifikan (P>0,05).  Hal ini disebabkan karena perubahan proporsi  molar  VFA  yang  tidak  cukup
Tabel 3 . Pengaruh penambahan tanin, saponin dan kombinasi tanin saponin terhadap populasi protozoa dan bakteri Peubah T0 T1 T2 T3 T4 T5 NH3 (mg/100ml) 19,67±0,26 c 20,59±0,18 b 20,73±0,07 b 20,86±0,26 b 21,74±0,07 a 21,03±0,27 b Asetat (%mM) 77,55±0,33 74,39±1,88 78,83±1,53 76,61±0,54 72,53±1,98 77,45±1,96 Propionat (%mM) 13,30±0,59 16,13±1,20 16,35±1,10 17,19±0,74 15,98±1,51 14,80±0,59 Butirat (%mM) 9,15±0,41 ab 9,48±0,68 ab 4,82±1,34 c 6,19±0,38 c 11,49±0,51 a 7,75±1,46 bc Rasio asetat/propionat 5,83±0,27 4,61±0,46 4,82±0,39 4,46±0,23 4,54±0,55 5,23±0,32 Efisiensi konversi heksosa-VFA (%) 70,55±0,19 71,82±0,65 70,96±0,51 71,63±0,27 72,15±0,72 70,89±0,54 Metan (mM) 40,02±0,44 37,90±0,90 37,73±0,83 37,11±0,55 38,01±1,13 38,90±0,44
Keterangan :   T0=pakan tanpa tanin dan saponin; T1=pakan dengan saponin 1,2%; T2=pakan dengan tanin 0,5% dan saponin
0,9% dan T3=pakan dengan tanin 1% dan saponin 0,6%; T4=pakan dengan tanin 1,5% dan saponin 0,3% dan T5=pakan dengan tanin 2% tanpa saponin; Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
nyata.  Nilai VFA secara in vitro lebih rendah dibandingkan  produksi  VFA  rumen.    Sistem fermentasi  rumen  bersifat  continuous,  yang memungkinkan  mikroba  rumen  beradaptasi terhadap  pakan  sehingga  lebih  mampu  dalam mendegradasi  pakan  (Owens  dan  Goetsch, 1988). Proses  pembentukan  asam  asetat  dan asam  butirat  menghasilkan  gas  H2  dan  CO2. Gas-gas ini yang kemudian dimanfaatkan oleh bakteri  metanogenik  dalam  pembentukan  gas metan.    Semakin  tinggi  asam  asetat  dan  asam butirat  yang  dihasilkan  maka  semakin  tinggi pula  gas  metan  yang  dihasilkan  begitu  juga sebaliknya.  Pada percobaan ini  produksi gas metan cenderung menurun pada pakan dengan perlakuan, akibat menurunnya asam asetat pad pakan perlakuan akan tetapi secara statistik tidak berbeda  nyata  (P>0,05).    Menurut  Jayanegara et  al.  (2009)  efek  tanin  terkondensasi  terhadap produksi  gas  metan  masih  belum  konsisten. Hal ini tergantung pada tanaman sumber tanin terkondensasi tersebut, karena struktur senyawa tanin  terkondensasi  sangat  bervariasi  antara satu tanaman dengan tanaman lainnya.

## KE SIMPULAN DAN SARAN
Tanin    dan    saponin  yang  diberikan pada  dosis  yang  tepat  mampu  memberikan keuntungan  dengan  mengatur  populasi protozoa  sehingga  fermetasi  pakan  lebih optimal. Berdasarkan hasil penelitian disimpulkan bahwa suplementasi tanin saponin pada  taraf    1%  tanin  dan  0,6%  saponin  pada pakan  mampu  memberikan  efek  yang  terbaik pada  defaunasi  dan  fermentabilitas  pakan, akan tetapi belum signifikan menekan produksi metan.    Pada  kombinasi  tersebut,  fungsi  tanin dan  saponin  saling  memperkuat  sehingga diperoleh  hasil  yang  lebih  baik  dibandingkan dengan  suplementasi  senyawa  tunggal  tanin atau saponin.
Pada penelitian ini suplementasi kombinasi tanin  sebesar  1%  dan  saponin  sebesar  0,60% mampu menghasilkan pengaruh optimal untuk parameter      defaunasi  dan  fermentabilitas. Perlu  dilakukan  penelitian  secara in  vivo untuk  mengetahui  pengaruhnya  terhadap produktivitas ternak.

## DAFTAR PUSTAKA
Arora, S. P. 1995. Pencernaan Mikroba pada Ruminansia. Diterjemahkan  oleh  R.  Murwani.  Gadjah  Mada University Press, Yogyakarta.
Diaz A., M. Avendano and A. Escobar. 1993. Evaluation of Sapindus saponaria as a defaunating agent and its effects on different ruminal digestion parameters. Livest. Res. Rural Dev., 5: 1-6.
Herdian  H.,  L.  Istiqomah.  A.  Febrisiantosa.,  dan  D. Setiabudi.  2011  Pengaruh  penambahan  daun Morinda citrifolia sebagai sumber saponin terhadap karakteristik  fermentasi,  defaunasi  protozoa, produksi gas dan metana cairan rumen secara in vitro . JITV, 16: 99-104
Hiai, S., Oura, H., Nakajima, T., 1976. Color reaction of some sapogenins and saponins with vanillin and sulfuric acid. Planta Medica, 29: 116–122.
Hsu, J. T., G. C. Fahey Jr., N. R. Merchen and R. I. Mackie. 1991. Effects of defaunation and various nitrogen supplementation  regimens  on  microbial  number numbers  and  activity  in  t  he  rumen  of  sheep.  J. Anim. Sci., 69: 1279-1289.
Hu, W. L., W. Yue-Ming, L. Jian-Xin, G. Yan-Qiu and Y.  Jun-An.  2005.  Tea  saponins  affect in  vitro fermentation and metanaogenesis in faunated and defaunated rumen fluid. J. Zhejiang Univ. Sci ., 6: 787-792.
Jayanegara, A., N. Togtokhbayar, H. P. S. Makkar and K.  Becker.  2008.  Tannins  determined  by  various methods  as  predictors  of  methane  production reduction potential of plants by an in vitro rumen vermentation system. Anim. Feed Sci. and Tech., 150: 230-237.
Jayanegara,  A.,  A.  Sofyan,  H.  P.  S.  Makkar  dan  K. Becker.  2009.  Kinetika  produksi  gas,  kecernaan bahan organik dan produksi gas metana in vitro pada hay dan jerami yang disuplementasi hijauan mengandung  tanin.  Media  Peternakan,  32:  120- 129.
Jouany, J. P. 1991. Defaunation of the rumen. In : The Rumen  Microbial  Metabolism  and  Ruminant Digestion. J. P. Jouany (editor). Institute Nationale de  La  Recherché  Agronomique.  INRA,  Saint- Genes Champanelle.
Kurihara, Y., T. Takechi and F. Shibata. 1978. Relationship between bacteria and ciliate protozoa in the rumen of sheep fed on purified diet. J. Agric. Sci., 90: 373- 381.
Makkar,  H.  P.  S.,  2003.  Effect  and  fate  of  tannins  in ruminant  animals,  adaptation  to  tannins,  and strategies  to  overcome  detrimental  effects  of feeding  tannin-rich  feeds.  Small  Ruminant Research, 49: 241–256.
Ogimoto,  K.  and  S.  Imai.  1981.  Atlas  of  Rumen
Microbiology. Japan Scientific Societies Press,Tokyo. l-231 pp.
Ørskov,  E.  R.  and  M.  Ryle.  1990.  Energy  Nutrition in  Ruminants.  Elsevier  Science  Publishers  Ltd. London.
Owens,  F.  N.  and  A.  L.  Goetsch.  1988.  Ruminal fermentation. In The Ruminant Animal Digestive Physiology and Nutrition. D.C. Church Ed.Prentice Hall, Englewood Cliffs, New Jersey.
Pambayun,  R.,  M.  Gardjito,  S.  Sudarmadji    dan  K.  R. Kuswanto.  2007.  Kandungan  fenol  dan  sifat antibakteri  dari  berbagai  jenis  ekstrak  produk gambir  ( Uncaria  gambir Roxb).  Majalah  Farmasi Indonesia. 18: 141-146.
Russell,  J.  B.,  and  Rychlik,  J.L.  2001.  Factors  that  alter rumen microbial ecology. Science 292: 1119–1122.
Santoso, B. dan B.Tj. Hariadi. 2007. Pengaruh suplementasi
Acacia mangium Willd pada Pennisetum purpureum terhadap  karakteristik  fermentasi  dan  produksi gas metana in vitro . Med. Peternakan , 30: 106-113.
Smith, A. H., J.A. Imlay, and R.I. Mackie. 2003. Increasing the oxidative stress response allows Escherichia coli to overcome inhibitory effect of condensed tannins. Appl. and Environ. Microb ., 69: 3406-3411.
Suharti,  S.,  D.A.  Astuti  dan  E.  Wina.  2009.  Kecernaan nutrien  dan  performa  produksi  sapi  potong Peranakan Ongole (PO) yang diberi tepung lerak ( Sapindus rarak ) dalam ransum. JITV, 14: 200-207.
Tilley,  J.  M.  A,  and  R.  A.  Terry.  1963.  A  two  stage technique  for  the in  vitro digestion  of  forage . J. British Grassland Soc ., 18: 104–111.
Wallace,  R.  J.,  N.  R.  McEwan,  F.  M.  McIntosh,  B. Teferedegne,  and  C.  New  Bold.  2002.  Natural product as manipulators of rumen fermentation. Asian-Aus. J. Anim. Feed Sci. and Tech., 15: 1458- 1468.
Wang,  J.  K.,  J-A.  Ye.  and  Jian-Xin  Liu.  2011.  Effects of  tea  saponins  on  rumen  microbiota,  rumen fermentation,  methane  production  and  growth performance—a  review.  Trop.  Anim.  Health Prod., 44: 697–706.
Wei, L. H., L. Jian-Xin, Y. Jun-An, W. Yue-Min, and G. Yan-Qiu.  2005.  Effect  of  tea  saponin  on  rumen fermentation in vitro. Anim. Feed Sci. and Tech., 120: 333-339.
Widyobroto  B.  P.,  S.  P.  S.  Budhi  dan  A.  Agus.  2007. Pengaruh  aras undegraded  protein dan  energi terhadap  kinetik  fermentasi  rumen  dan  sintesis protein mikroba pada sapi. J. Indon. Trop. Anim. Agric., 32: 194-200.
Widyobroto,  B.  P.  1995.  Degradasi  protein  dalam rumen dan kecernaan protein dalam intestinum. Dalam  :  Kursus  Singkat  Teknik  Evaluasi  Pakan Ruminansia, Fak. Peternakan UGM, Yogyakarta .
Wina, E., S.Muetzel and K. Becker. 2005. The Impact of Saponin-Containing Plant Materials on Ruminant Production-A review: 1-13.
Wiseman, J. and W. J. A. Cole. 1990. Feedstuff Evaluation.
Butterworth, London.
Woodward, S. L., G. C. Waghorn, M. J. Ulyatt, and K. R. Lassey. 2001. Early indications that feeding lotus will  reduce  methane  emissions  from  ruminants. In: Proceedings of the The New Zealand Society of Animal Production. ACIAR, Adelaide,  pp. 23–26.