## ISOLASI METABOLIT SEKUNDER FLAVONOID DARI BATANG RANDU (Ceiba pentandra L.)
Lia Fikayuniar* , Ermi Abriyani, Wahyu Nur Februrohman
Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Buana Perjuangan, Karawang, *Penulis korespondensi: lia.fikayuniar@ubpkarawang.ac.id

## ABSTRAK
Batang  randu  adalah  pohon  tropis  yang  tergolong  ordo  Malvaceae  (sebelumnya Bombacaceae).  Kata  ‘kapuk’  digunakan  untuk  menyebut  serat  yang  dihasilkan  dari bijinya.Pohon  ini  juga  dikenal  sebagai  Kapas  Jawa  atau  Kapok  Jawa.  Selama  ini  batang kapuk randu hanya digunakan sebagai tanaman atau obat herbal tanpa diolah terlebih dahulu. Untuk  memberikan  informasi  mengenai  metabolit  sekunder  yangterkandung  pada  batang randu Ceiba pentandra (L) Gaetrn. Metode yang digunakan yaitu dengan kromatografi lapis tipis  yang  di  lanjut  dengan  kromatografi  kolom.  Analisis  metabolit  sekunder  dengan spektrofotometri UV-Vis dengan panjang gelombang 200-600 nm. Hasil penelitian, dapat disimpulkan bahwa pada batang randu Ceiba pentandra (L) Gaetrn Mengandung senyawa flavonoid dengan jenis Flavon.
Kata  Kunci: Kromatografi  Lapis  Tipis,  Kromatografi  Kolom,  Batang  randu, Spektofotometri UV-Vis

## SECONDARY METABOLITE ISOLATION OF FLAVONOID FROM Ceiba pentandra L.

## ABSTRACT
The  randu  caulis  is  a  tropical  tree  belonging  to  the  order  Malvaceae  (formerly Bombacaceae). The word 'kapok' is used to refer to the fiber produced from the seeds. This tree is also known as Javanese Cotton or Javanese Kapok. During this kapok caulis is only used as a plant or herbal medicine without being processed first. To provide information about secondary metabolites contained in the kapok stem Ceiba pentandra (L) Gaetrn. The method used is thin layer chromatography followed by column chromatography. Analysis of secondary metabolites by UV-Vis spectrophotometry with wavelengths of 200-600 nm. The results of the study, it can be concluded that the kapok stem Ceiba pentandra (L) Gaetrn Contains flavonoid compounds with Flavon types.
Keywords:  Thin  Layer  Chromatography,  Column  Chromatography,  Stems,  Staple Spectrophotometry UV-Vis

## PENDAHULUAN
Penggunaan  bahan  alam  dibidang  kesehatan  maupun  bidang  lain  seperti  kosmetik hingga saat ini mulai meningkat, terlebih dengan adanya isu back to nature serta anggapan masyarakat terkait efektivitas dan keamanan produk herbal yang dianggap lebih menjamin dengan  efek  samping  yang  lebih  ringan  dibanding  dengan  produk  sintetis.  Hal  ini mendorong penilitian tentang efektivitas tanaman obat terus meningkat dari tahun ke tahun (Gunawan dan Mulyani, 2004).
Batang  randu  diduga  berpotensi  memiliki  kemampuan  antibakteri  dan  memiliki kandungan senyawa bioaktif yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri. Pada bagian kulit batangnya juga terdapat kandungan senyawa bioaktif seperti gula pereduksi (Doughari dan Ioryue, 2009), plobatanin, alkaloid, senyawa antrakuinon, saponin, glikosida (Anosike et  al. ,  2012),  tanin,  fenolik,  flavonoid,  karbohidrat,  resin,  protein,  minyak,  steroid,  dan terpenoid (Asare dan Oseni, 2012).
Banyaknya potensi yang dimiliki Batang Randu, dan dilihat dari  latar belakang yang ada,  maka  penyusun  akan  mengangkat  tema  yang  berjudul  “Isolasi  Metabolit  Sekunder Flavonoid Dari  Batang Randu ( Ceiba pentandra( L ) Gaetern.

## BAHAN DAN METODE

## Prosedur Penelitian Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  dilakukan  terhadap  serbuk  simplisia.  Skrinning  fitokimia  yang dilakukan yaitu uji alkaloid, triterpenoid, steroid, tanin, saponin, fenolik, dan flavonoid.

## Ekstraksi
Pada penelitian ini,  langkah awal  yang  dilakukan adalah pembuatan  ekstrak batang randu. Metode yang digunakan adalah  metode cara dingin yaitu meserasi, karena  dengan cara  ini  dapat  mencegah  terurainya  metabolit  sekunder      yang  tidak  tahan  terhadap pemanasan.  Proses  meserasi  di  lakukan  dalam  waktu  24  jam  ,meserasi  yang  dilakukan dengan metode bertingkat dengan pelarut n-heksana, etil asetat dan metanol. Kemudian hasil ekstrak disaring untuk memperoleh filtrat dan simplisia yang telah diekstraksi di lakukan remaserasi, kemudian hasil ekstraksi dipekatkan dengan evaporator.

## Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Uji KLT dilakukan terhadap ekstrak dan fraksi-fraksi yang didapat setelah perlakuan fraksinasi. Uji KLT dilakukan menggunakan sistem campuran eluen menggunakan pelarut n-heksan, etilasetat, metanol dan kloroform.

## Kromatografi Kolom
Pemisahan    dengan  kromatografi  kolom dilakukan  dengan menggunakan  rangkaian alat  kromatografi  kolom  yang  ditegakkan  dengan  statif.  Kemudian  sejumlah  kapas dimasukkan  ke  dalam  bagian  paling  bawah  dari  kolom,  tidak  terlalu  padat  atau  terlalu longgar.  Silika  gel  (fase  diam)  yang  telah  ditimbang  didispersikan  dalam  n-heksan secukupnya. Silika gel yang telah basah atau seperti bubur dimasukkan dengan cara di pipet sedikit demi sedikit agar silika gel tersusun dengan rata di dalam kolom. Ekstrak kental yang sudah  di  campur  dengan  silika  gel  dimasukkan  ke  dalam  kolom,  kemudian  ditambahkan pelarut  pengembang  ke  dalam  kolom  sedikit  demi  sedikit.  Hasil  pemisahan  ditampung dalam botol vial. Kemudian masing-masing fraksi pada vial diuji dengan KLT. Fraksi yang menampakkan  bercak  (dengan  nilai  Rf)  yang  sama  dikumpulkan  dan  di  diamkan  supaya menguap.

## Kromatografi Lapis Tipis Dua Dimensi
Pengujian ini dilakukan dengan menotolkan isolat aktif pada lempeng KLT dengan ukuran 6x6 cm kemudian di elusi pada arah 1 dengan eluen n-heksana - etil asetat (2:8) dan arah 2 dengan eluen yang sama.

## Uji Penampak Bercak
Sitoborat
5 gr asam sitrat ditambahkan 5 gr asam borat dilarutkan dengan 100 ml metanol, setelah itu plat disemprot lalu panaskan selama 5-10 menit.
Sianidin Tes
Serbuk Mg+HCl pekat, terjadinya perubahan warna menunjukan bahwa adanya flavonoid.

## Identifikasi senyawa dengan Spektrofotometri UV-Vis
Isolat yang diperoleh dari hasil KLT preparatif diidentifikasi secara kualitatif dengan spektrofotometri  UV-Vis.  Absorbansi  senyawa  flavonoid  pada  panjang  gelombang maksimal. Pengamatan dilakukan pada panjang gelombang 200-400 nm dan 400- 800 nm

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Skrining Fitokimia
Hasil skrining fitokimia simplisia batang randu ( Ceiba pentandra( L ) Gaetern dapat dilihat pada Tabel 1 bahwa  batang randu positif mengandung metabolit sekunder Flavonoid, saponin, dan steroid.
Tabel 1. Hasil Pengujian Skrining Fitokimia Simplisia ( Ceiba pentandra( L ) Gaetern.
Metabolit Sekunder               Hasil Uji Alkaloid - Flavonoid + Saponin + Steroid + Polifenol - Keterangan :
(+) : mengandung golongan senyawa (-)  : tidak mengandung golongan senyawa

## Kadar Air
Pada  penelitian  ini  air  yang  tersuling  sebanyak  0,4  ml  dan  dilakukan  perhitungan dengan hasil yang di dapat yaitu 1,6 % v/b. Hasil tersebut menunjukan bahwa serbuk daun randu Ceiba pentandra (L) Gaertn baik digunakan penelitian karena memenuhi persyaratan kadar  air  yang  kurang  dari  10%.  Penetapan  kadar  air  ini  bertujuan  untuk  memberikan batasan  maksimum  kandungan  air  di  dalam  sampel.  Kadar  air  yang  tinggi  dapat menyebabkan  pertumbuhan  mikroorganisme  yang  akan  mempengaruhi  senyawa  yang terdapat dalam sampel.

## Pengujian Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Berdasarkan hasil KLT diperoleh beberapa bercak pada masing-masing plat dan dipilih nilai Rf yang baik dari ketiga ekstrak tersebut n-heksana B, Etil Asetat A, Metanol A,Metanol B dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel  2 .  Hasil  Pengujian  KLT  pada  ekstrak  n-heksana  B,  Etil  Asetat  A, Metanol A, Metanol B

## Kromatografi Lapis Tipis Dua Demensi
Gambar 1. Kromatogram pada EM2 hasil pemantauan KLT Dua Dimensi Dengan fase gerak n-heksana - Etil Asetat(2 : 8), Fase diam : silika gel GF 254.
Dilihat dari gambar diatas terdapat satu bercak terang yang dilihat di bawah lampu UV dengan keterangan 366 menandakan bahwa sample EM2 sudah murni dengan RF 0,5.

## Identifikasi senyawadengan Spektrofotometri UV-Vis
Fraksi yang diperoleh dari hasil KLT diidentifikasi dengan spektrofotometri UV-Vis digunakan untuk mengetahui nilai absorbansi senyawa pada panjang gelombang maksimal. Pengukuran  spektrum  dilakukan  pada  panjang  gelombang  00-600  nm.  Spektrum  khas flavonoid terdiri atas dua pada rentang 230-290 (pitaII) dan 300-560 nm (pita I).  Adapun rentang serapan  spektrum  UV-Vis  tampak flavonoid dapat dilihat pada Tabel 3.
Ekstrak
Kode Warna Spot Noda   Nilai Rf 0,6 n -heksana B  2A Biru Etil Asetat A  3A Biru 0,8 Metanol A 4A Biru 0,9 4B Hijau 0,4 4C Merah 0,3 4D Biru 0,1 Metanol B 5A Biru 0,9 5B Hijau 0,3 5C Merah 0,2 5D Biru 0,1
Bercak Yang berwarna
Biru dan berflouresensi
Tabel 3 . Rentang Panjang Gelombang senyawa Flavonoid (Markham,1988) Pita II (nm) Pita I (nm) Jenis Flavonoid 250-280 250-280 250-280 245-275
275-295 230-270 230-270 (kekuatan rendah) 270-280
310-350
330-360 350-385
310-330 bahu kira- kira 320 puncak 300-330 bahu 340-390 380-430 465-560
flavon
Flavonol (3-OH
tersubsitusi)
Flavonol (3-OH bebas)
Isoflavon
Flavanon dan dihidroflavonol
Khalkon
Auron
Antosianidin dan antosianin
Seyawa  flavonoid  golongan  flavonon  menurut  markham  (1988)  “memberikan rentang serapan pada panjang gelombang 275-295nm pada pita II dan 300-330nm (bahu) pada pita I, hasil analisis menggunakan Spektrofotometri UV-Vis yang dilakukan Markham dapat dilihat pada Gambar 2”.
Gambar 2. Perbandingan Spektrum UV-Vis Flavonoid Menurut (Markham,1988) dengan Hasil Spektrofotometri UV-Vis Ekstrak Metanol Batang Randu.
Hasil  analisa  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis  pada  senyawa  EM2 menghasilkan  λmaks pada  daerah  225  (pita  II)  dan  308  (pita  I).  Hasil  spektrum  yang di  peroleh  diduga  batang  pohon  randu  ( Ceiba  pentandra L.)  ini  mengandung  senyawa flavonoid golongan Flavon hal tersebut diperlihatkan dengan bentuk spektrum yang hampir sama  dengan  spektrum  Flavon  yang  terdapat  dalam  pustaka.  Gambar  spektrum  UV-Vis hasil kolom (dalam EM2).
Senyawa metabolit sekunder tersebut juga di perkuat dengan dilakukan uji kualitatif dengan uji skrining fitokimia, sianidin tes, dan penampak bercak. Dimana tujuan dilakukan skrining  fitokimia  ini  adalah  untuk  membuktikan  fraksi  tersebut  merupakan  senyawa flavonoid berdasarkan reagen yang tepat. Fraksi yang digunakan untuk uji spektrofotometri UV-Vis diuji dengan penambahan metanol, serbuk Mg dan 0,5 ml HCL lalu dikocok kuat, adanya  larutan  yang  berubah  warna  menjadi  kuning  merupakan  positif  mengandung senyawa  flavonoid  (Herborne,10978).  Penampak  noda  sitroborat  yang  digunakan  untuk mendeteksi  senyawa  flavonoid  dengan  menunjukan  warna  biru  terang.  Hasil  pada  batang randu ( Ceiba pentandra L.) menunjukan positif mengandung flavonoid.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian, dapat disimpulkan bahwa pada batang randu ( Ceiba pentandra (L) Gaertn di duga Mengandung senyawa golongan flavonoid dengan jenis Flavon.

## DAFTAR PUSTAKA
Shahidi,  F.,  Kadaswarmi,  C.,  Middleton,  E.,  Shukla,  V.K.S.  Natural  Antioxidants: Chemistry, Health Effects, and Applications, AOCS Press, Illionis, 1997.
Khanahmadi,  M.,  Rezazadeh,  S.H.,  Taran,  M.  In  vitro  antimicrobial  and  antioxidant properties of Smyrnium  cordifolium boiss. (Umbelliferae)  extract, Asian Journal of Plant Sciences , 2010; 9 (2), 99-103.
Leong,  L.P.,  and  Shui,  G.  An  investigation  of  antioxidant  capacity  of  fruits  in  Singapore markets. Food Chemistry 2002; 102:732-737.
Mayer, Alejandro, M.S. et al. Marine pharmacology in 2007–8: Marine Compounds with antibacterial, anticoagulant, antifungal, anti-inflammatory, antimalarial, antiprotozoal, antituberculosis, and antiviral activities; affecting the  immune  and  nervous  system,  and  other  miscellaneous  mechanisms  of  action. Elsevier Inc . Part C, 2010. 1191-222.
Molyneux,  P.  The  use  of  the  stable  free  radicals  diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for estimating antioxidant activity. Songklanakarin Journal of Science Technology, 2004; 26(2), 211-219.
Romansyah, Y. Kandungan Senyawa Bioaktif Antioksidan Karang Lunak Sarcophyton  sp Alami  dan  Transplantasi  Di  Perairan  Pulau  Pramuka, Kepulauan Seribu. Bogor: Institut Pertanian Bogor. 2011.
Sunardi,  K.I.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Belimbing  Wuluh  ( Averrhoa  blimbi, L) Terhadap  1,1Diphenyl-2-Picrylhidrazyl  (DPPH), Seminar  Nasional  Teknologi , 2 0 0 7 .   1-9.
Veron,  J.E.N. Corals  in  Space  and  Time .  The  Biogeography  and  Evolution  of  the Scleractinia. UNSW Press. 1995.
Winarsih, H. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas . Yogyakarta: Kanisius. 2007.