## UJI SITOTOKSIK EKSTRAK TANAMAN GANDARIA (Bouea macrophylla Griff) TERHADAP SEL HeLa

## Asep Roni, Amar Maruf, Lia Marliani
Fakultas Farmasi Universitas Bhakti Kencana JL. Soekarno- Hatta No. 754, Bandung, Jawa Barat, Indonesia asep.roni@bku.ac.id
Received 4 January 2021 Accepted 24 June 2021

## Abstrak
Gandaria  merupakan  tanaman  yang  berasal  dari  indonesia  terutama  maluku  yang  memiliki akitvitas farmakologis, akan tetapi belum banyak dilihat sebagai objek studi penelitian karena kelangkaannya  di  Indonesia.  Gandaria  memiliki  kandungan  flavonoid,  yang  terdapat  dalam berbagai tumbuhan dan memiliki berbagai aktifitas farmakologis. Salah satu contoh senyawa flavonoid yang terdapat dalam gandaria adalah quercetin dimana quercetin memiliki berbagai efek  biologis,  salah  satunya  sebagai  antikanker.  Kanker  adalah  penyebab  utama  kedua kematian menurut WHO pada tahun 2018. Salah satu pengobatan kanker adalah kemoterapi akan  tetapi  memiliki  efek  samping  yang  merugikan  oleh  karena  itu  bahan  alam  berpotensi sebagai salah satu alternatif karena efek sampingnya lebih rendah. Tujuan dari penelitian ini adalah  untuk  menguji  aktivitas  sitotoksik  ekstrak  daun  dan  batang  gandaria  terhadap  sel kanker serviks HeLa. Metode yang digunakan adalah MTT assay yaitu uji kolorimetri untuk menilai  aktivitas  metabolisme  sel  yang  dibaca  oleh  alat  ELISA reader pada  panjang gelombang  550  nm.  Nilai  IC 50 dari  ekstrak  etil  asetat  daun  436,966  μg/mL  dan  ekstrak  n- heksana  batang  292,044  μg/mL.  Dapat  disimpulkan  bahwa  aktivitas  sitototksik  paling  baik ditunjukan oleh sampel ekstrak n-heksana batang dan tergolong lemah.
Kata Kunci : Gandaria, Sel HeLa, MTT assay

## Abstract
Gandaria is a plant originating from indonesia especially Maluku that has the potential to be pharmacological activity, although it has not been widely seen as an object of research study because of its scarcity in Indonesia. Gandaria contains  flavonoids which are found in various plants. One of the flavonoids example is quercetin that has various biological effects, one of which is as an anticancer. Cancer is the second leading cause of death according to WHO in 2018. One of the cancer treatments is chemotherapy, but it has adverse side effects, therefore natural ingredients have the potential as an alternative because of their lower side effects.The aim  of  this  study  was  to  examine  the  cytotoxic  activity  of  leaves  and  stems  of  gandaria extracts  against  HeLa  cervical  cancer  cells.  The  method  used  is  the  MTT  assay  which  is  a colorimetric  test  to  assess  the  metabolic  activity  of  cells  read  by  ELISA  reader  at  a wavelength of 550 nm. IC 50 values of  ethyl acetate leaves extracts 436,966 μg / mL and n- hexane stem extracts 292,044 μg / mL. These results indicate that the cytototoxic activity is best showed by n-hexane stem extracts samples and classified as weak.
Keywords : Gandaria, HeLa cell, MTT assay.

## Pendahuluan
Berdasarkan  data  WHO  kanker  adalah penyebab  utama  kedua  kematian  secara global  dan  diperkirakan  menyumbang  9,6 juta  kematian  pada  tahun  2018.  Kanker paru-paru,  prostat,  kolorektal,  lambung dan  hati  adalah  jenis  kanker  yang  paling umum  pada  pria,  sedangkan  kanker payudara,  kolorektal,  paru-paru,  leher rahim dan kanker tiroid adalah yang paling umum di antara wanita (WHO, 2018).
Salah  satu  pengobatan  kanker  adalah kemoterapi. Kemoterapi digunakan utamanya untuk membunuh sel kanker dan menghambat perkembangannya. Akan tetapi  Efek  samping  kemoterapi  muncul karena obat-obatan tersebut tidak memiliki kemampuan membedakan sel kanker  yang berkembang pesat secara abnormal dengan sel sehat yang secara normal juga memiliki perkembangan  pesat.  Oleh  karena  itu Bahan  alam  berpotensi  sebagai  salah  satu alternatif  untuk  pengobatan  kanker  karena memiliki  efek  samping  yang  lebih  rendah dibandingkan dengan kemoterapi (Prayetni, 1997).
Sejak  dulu  pemanfaatan  tanaman  sebagai bahan  obat  telah  banyak  digunakan. Namun  hingga  sekarang  belum  semua tumbuhan telah diketahui memiliki potensi sebagai  tanaman  obat.  Salah  satu  tanaman yang  sampai  saat  ini  belum  diketahui manfaatnya  sebagai  tanaman  obat  ialah tanaman Gandaria. Gandaria (Bouea macrophylla Griff ) adalah satu spesies dari suku Anacardiaceae ,  yang  di  beberapa daerah  di  Indonesia  disebut  dengan berbagai  nama  yang  berbeda.  Tumbuhan Gandaria (Bouea  macrophylla Griff ) dikenal  dengan  nama  daerah  Gandoriah (Minangkabau),  Barania  (Dayak),  Jatake, Gandaria  (Sunda),  Buwa  melawe  (Bugis), Gondariya  (Jawa)  (  Heyne,  K.,  1987) masih  sangat  terbatas  pemanfaatannya, yaitu  hanya  sebagai  sumber  buah-buahan. Kayu  dari  tumbuhan  Gandaria  ini  banyak digunakan untuk membuat alat-alat pertanian,  daunnya  yang  muda  digunakan
sebagai  lalap,  buahnya  dapat  langsung dimakan,  dibuat  rujak,  asinan,dan  sari buah-buahan,  dipakai  sebagai  pengganti jeruk nipis atau asam ( Vesheji 1992 ).
Gandaria  memiliki  kandungan  quercetin, flavonoid  yang  umumnya  terdapat  dalam berbagai tanaman termasuk bawang, buah- buahan,  dan  sayuran.  quercetin,  pada konsentrasi  kecil  tidak  beracun,  diketahui memiliki banyak efek biologis yang diakui di  mana  banyak  mekanismenya  tetap menjadi  misteri.  Meskipun  sebagian  besar informasi yang diketahui tentang quercetin didasarkan  pada  model  in  vitro  dan murine,  ada  bukti  signifikan  bahwa quercetin adalah molekul dengan beberapa sifat  yang  bermanfaat  secara  biologis. Bukti  ini  mendukung  peran  quercetin sebagai  pengobatan  untuk  kerusakan oksidatif,  kanker,  peradangan,  infeksi bakteri dan virus, penyakit kardiovaskular, dan  diabetes.  Bukti  untuk  masing-masing kategori  ini  bervariasi.  Temuan  konklusif dari manfaat quercetin, belum menyelesaikan  semua  uji  klinis  keras farmasi.  Meskipun  ada  banyak  analog quercetin  dan  flavonoid  dengan  beragam bukti  untuk  mendukung  klaim  mereka (Aaron  J.  Smith,  2016).  Berdasarkan penelitian ekstrak etil dan ekstrak methanol  batang  gandaria  menunjukan penghambatan terhadap bakteri Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia coli,  yang  diduga  berasal  dari  senyawa fenolat (Roni, A. 2019).
Senyawa  kimia  yang  berkaitan  dengan metabolit sekunder seperti alkaloid, terpenoid,  golongan  fenol,  flavonoid, kuinon,  tanin,  saponin  banyak  terdapat  di dalam  tumbuhan  dan  sangat  potensial untuk diteliti dan dikembangkan oleh para peneliti  Indonesia  dalam  rangka  pencarian obat  atau  bahan  baku  obat.  Tumbuhan Gandaria masih sangat terbatas pemanfaatannya.  Kayu  dari  tumbuhan Gandaria  ini  banyak  digunakan  untuk membuat alat-alat pertanian, daunnya yang muda  digunakan  sebagai  lalap,  buahnya dapat  langsung  dimakan,  dibuat  rujak,
asinan, dan sari buah-buahan, serta dipakai sebagai  pengganti  jeruk  nipis  atau  asam jawa (Isnawati,
2012). Tujuan
dilakukannya  penelitian  ini  adalah  untuk memberikan  informasi  apakah Bouea macrophylla Griff  memiliki  aktivitas sitotoksik atau tidak.

## Metode Penelitian
Metodologi  penelitian  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  mepiputi  penyiapan bahan,  karakterisasi  simplisia,  penapisan fitokimia,  ekstraksi,  pengujian  aktivitas antikanker MTT assay ( 3-(4,5-dimetiliazol- 2-il )-2,5- difeniltetrazolium bromid.
Penyiapan  bahan  meliputi  pengumpulan bahan  yang  akan  digunakan,determinasi, pengolahan bahan sampai jadi simplisia.
Karakterisasi simplisia meliputi pemeriksaan  spesifik  dan  non  spesifik antara  lain  kadar  abu  total,  abu  tidak  larut asam, kadar sari larut air, sari larut etanol, kadar air dan susut pengeringan. Penapisan fitokimia  meliputi  pemeriksaan  terhadap beberapa senyawa seperti alkaloid, flavonoid,  tanin,  saponin,kuinon  dan steroid.
Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  refluks bertingkat menggunakan pelarut n-Heksan,
etil asetat dan metanol. Ekstraksi dilakukan  pengulangan  sebanyak  3  kali yang  masing-masing  dilakukan  selama  3 jam. Kemudian ekstrak dipekatkan menggunakan rotary  evaporator hingga didapatkan ekstrak kental.
Pengujian  aktivitas  sitotoksik  dilakukan dengan  metode MTT  assay  (3-(4,5- dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromid.

## Hasil dan pembahasan

## Pembuatan dan Karakterisasi simplisia
Daun  dan  batang  segar  dari  tanaman Bouea  macrophylla Griff  (gandaria)  yang diperoleh dilakukan sortasi  basah  untuk memisahkan  bahan  dari  pengotor  dan bagian  yang  tidak  digunakan  kemudian dicuci  dan  dibersihkan  dari  kotoran  yang masih  menempel  pada  permukaan  daun menggunakan  air  mengalir  lalu  tiriskan. Selanjutnya dikeringkan dengan menggunakan  oven  pada  suhu  45 ℃ , kemudian simplisia yang diperoleh dihaluskan  dan  serbuk  simplisia  disimpan dengan  baik  dalam  wadah  tertutup  dan terlindung  dari  serangga  dan  cahaya matahari.  Hasil  pengolahan  bahan  dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1 Hasil Pembuatan simplisia Daun dan Batang gandaria ( Bouea macrophylla Griff)
Sampel Bobot Sampel (gram) Basah Kering Daun 3000 1000 Batang 150 119,8445 Karakterisasi  simplisia  dilakukan  dengan tujuan untuk mengetahui kualitas dan mutu simplisia  yang digunakan. Parameter  yang bisa digunakan antara lain kadar air, kadar
abu  total,  kadar  abu  larut  air,  kadar  abu tidak larut asam, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol, dan susut pengeringan.

## Tabel 2. Hasil Karakterisasi Simplisia

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia/  penapisan  fitokimia bertujuan  untuk  mengetahui  golongan- golongan  senyawa  yang  terdapat  didalam
simplisia. Pemeriksaan ini meliputi. pemeriksaan alkaloid, flavonoid, steroid/triterpenoid, kuinon, tanin,dan sponin.
Tabel 3. Hasil Penapisan Fitokimia Simplisia
GOLONGAN SENYAWA Hasil Pengamatan %(B/B) Daun gandaria  Batang gandaria Alkaloid - - Flavonid + + Tanin + + Kuinon + + Saponin - + Steroid/triterpenoid + +

## Ekstraksi
Ekstraksi  yang  dilakukan  pada  simplisia
batang  dan  daun  gandaria  sebanyak  750 gram menggunakan metode refluks dengan
cara  ekstraksi  bertingkat    menggunkaan pelarut  nheksana,  etil  asetat  dan  methanol
berdasarkan kepolarannya. Uji Karakterisasi Hasil Pengamatan %(B/B) Daun gandaria Batang Gandaria Kadar Abu Total 8,21% 2,45% Kadar Abu Tidak Larut Asam 2,45% 2,1% Kadar Sari Larut Air 5,5% 3% Kadar Sari Larut Etanol 4,15% 3,21% Kadar Air 5,23%* 9,14% * Susut Pengeringan 9,27 % 10,58%
Tabel 4. Hasil Rendemen Ekstrak Pelarut Daun Batang Ekstrak  Rendemen Ekstrak  Rendemen N-heksan 3,55 g 2,36% 0,2431 g 0,24% Etil Asetat 4,34 g 2,89% 0,5644 g 0,56% Methanol 13,537 g 9,02% 2,7658 g 2,76%

## Uji aktifitas Sitotoksik
Uji  aktivitas  sitotoksik  pada  penelitian  ini dilakukan  untuk  mengetahui  toksisitas bahan  uji  daun  dan  batang  gandaria terhadap sel HeLa. Metode yang digunakan  adalah  MTT  assay,  yaitu  uji kolorimetri  yang  menggunakan  reaksi redoks  yang  terjadi  di  dalam  sel.  Garam tetrazolium berwarna kuning akan direduksi  di  dalam  sel  dengan  bantuan enzim  suksinat dehidrogenease yang kemudian  menghasilkan  kristal  formazan (berwarna ugnu), nantinya kristal formazan  akan  terbaca  absorbansinya
dengan  menggunakan  ELISA reader pada panjang  gelombang  550  nm.  Jumlah formazan  yang terbentuk berbanding lurus dengan  aktifitas  enzimatik.  Jika  intensitas warna  ungu  semakin  pekat,  maka  jumlah sel  hidup  semakin  banyak  (viabilitas  sel tinggi).
Hasil  pengolahan  data  nilai  IC 50 gandaria didapatlah  IC 50 dari  ekstrak  daun  dengan pelarut  n-heksan,  etil  asetat  dan  methanol dapat dilihat pada table 5 berikut ini.
Tabel 5 Nilai IC 50 GANDARIA IC 50 (μg/mL) DAUN N-Heksan* 2880,471 Etil Asetat 436,966 Methanol* 665,806 BATANG N-heksan 292,044 Etil Asetat* 85,692 Methanol 803,029
Berdasarkan  data  IC 50 yang  memenihi syarat  diperoleh  aktivitas  paling  baik ditunjukkan pada sampel ekstrak n-heksan batang  gandaria  dimana  nilai  IC 50 nya paling  rendah,  dimana  semakin  rendah nilai  IC 50 maka  semakin  baik  aktivitas sitotoksik  dari  sampel  hasil  pengujiannya. Ekstrak n-heksan batang gandaria termasuk  kedalam  kategori  lemah  dengan nilai  IC 50 292,044  μg/mL  berdasarkan tabel  5  diatas.  Adapun  ekstrak  etil  asetat daun  termasuk  kedalam  kategori  lemah dengan rentang nilai IC 50 201-500 sedangkan ekstrak methanol batang
termasuk  kedalalm  kategori  tidak  toksik IC 50 >500

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitina  yang  telah dilakukan  dapat  diperoleh  nilai  IC 50 dari ekstrak  etil  asetat  daun  436,966  μg/mL, ekstrak  n-heksan  batang  292,044  μg/mL dan  ekstrak  methanol  batang  803,029 μg/mL. Dapat disimpulkan bahwa aktivitas sitototksik  paling  baik  ditunjukan  oleh sampel  ekstrak  n-heksan  batang  dan tergolong lemah

## Ucapan Terimaksih
Terimakasih  kepada  Fakultas  Farmasi  dan Lembaga Penelitian dan Pengabdian Masyarakat  Universitas  Bhakti  Kencana, atas dukungannya dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Choma.,  Irena,  M.,Edyta,  M.G.  2010. Bioautography  Detection  in  Thin- Layer  Chromatography .  Journal  of Chromatography A Chroma- 351708.
Dirjen  POM. Farmakope  Indonesia ,  Edisi
IV.  Jakarta:  Departemen  Kesehatan
RI, 1995. Hal 7
Harborne,
J.B. Metode Fitokimia. Penuntun Cara modern mengekstraksi  Tumbuhan (Koasish
Padmawinata  dan  Iwang  Soediro, penerjemah).  Bandung:  ITB,  1987. Hal 103-104
Heyne,  K.,  1987,  Tumbuhan  Berguna Indonesia,  Jilid  Ketiga,  Departemen kehutanan  Badan  Penelitian  dan Pengembangan  Kehutanan,Yayasan Sarana Wahana Jaya  (Penterjemah), Jakarta.
Holt, G. J., Krieg, N. R., Sneath, A. H. P.,
Staley,  T.  J.,  Witirams,  T.  S.  1988. Bergey’s  Manual  Od  Determinative Bacteriology .  London  :Wiliam& Wilkins Company. P. 187.
Jawetz,  E.,  Joseph,  M.,  Edward,  A.  A., Geo,  F.  B.,  Janet,  S.  B.,  dan Nicholas,  L.  O.  2001. Mikrobiologi Kedokteran .  Edisi  I  Penerjemah  : Mudihardi,  E.,  Kuntaman.,  Wasito, E. B., Mertamiasih, M., Harsono, S., Alimsardjono,  L.  Jakarta  :  Penerbit Salemba Medika. Hal. 357.
Kurniawan,  M.B.,  &  P.  Bayu.  2010. Mengenal  HewanDan  Flora  Asli Indonesia. Cikal Aksara. Jakarta.
Lee,  C.  Y.,  Simpson,  K.L  &  Gerber,
L.1989.  Vegetables  as  a  major
vitamin  a  source  in  our  diets.Food Life Sci. Bill 126:1-11
Markham  KR. Cara  Mengidentifikasi Flavonoid . Bandung : Penerbit ITB. 1988. Hal 58-60
Mursyidi,  A.,  1990,  Analisis  Metabolit Sekunder,  Gadjah  Mada  University Press, Yogyakarta, 175-180
Parker,  S.  2009. Ensiklo  pedia  Tubuh Manusia ,  diterjemahkanWinardini,
162. Jakarta. Erlangga.
Pratiwi, S. T, 2008. Mikrobiologi Farmasi .
Erlangga . Jakarta.
Prayetni., 2007,  Gambaran Umum  Kanker Leher Rahim,Direktorat Bina Pelayanan  Keperawatan,  Jakarta. dalam Darmawati, D., 2010, Kanker Serviks  Wanita  Usia  Subur,  Ideal Nursing Journal, 1(1), pp.09-13.
Poerwono,  2012.  Kimia  H.,  2012.  Kimia
Organik I. DepartemenKimia Farmasi, Falkutas Farmasi Universitas  Airlangga  Surabaya. Page 15-16. Rehatta,H. 2005. Potensi dan
pengembangan  tanaman  gandaria (Bouea  macro  phylla Griffith )  di desa Soya Kecamatan Sirimau, Kota Ambon .  Laporan  Hasil  Penelitian. Lemlit. Universitas Pattimura. Ambon
Rifai,  M.A.,  1992. Bouea  macrophylla Griffith . In Coronel, R.E. & Verheij, E.W.M.  (Eds.):  Plant  Resources  of South-East Asia. No. 2: Edible fruits and nuts. Prosea Foundation, Bogor, Indonesia. pp. 104-105.
Robinson,  T.  1995  :  Kandungan  Organik
Tumbuhan  Tinggi  diterjemahkan oleh Kosasih
Padmawinata, ITB,Bandung. Roni,  A,  et  al.  2019.  "Uji  Aktivitas Antibakteri  Tumbuhan  Gandaria (Bouea Macrophylla
Griff) Terhadap  Staphylococcus  Aureus Dan  Escherichia  Coli." Jurnal
Farmagazine ,  vol.  6,  no.  1,  pp.  17- 21
Sinay,  H.  2011.  Pengaruh  Giberalin  Dan Temperatur  Terhadap  Pertumbuhan Semai Gandaria ( Bouea macrophylla Griffith). BIOSCIENTIAE 8: 15-22. Tangkuman,  C.  2006.  Identifikasi  Potensi Tanaman Gandaria (Bouea macrophylla Griff) Di Dusun Kusu- Kusu Sereh Desa Urimesing Kecamatan Nusaniwe Kota Ambon. [Skripsi]. Fakultas Pertanian Universitas Pattimura. Ambon
Vesheji  dan  Coronel,  1992,  Edible  fruit and Nuts, Prosea Plant Resources of South  east  Asia  No.2,  Pudoc-DLO, Nederland,Page 104-105
Vogel,  1994,  A  Textbook  of  Quantitative Inorganic Analysis, alih bahasa oleh Pudjaatmaka,  H.  A.,  dan  Setiono, L., EGC, Jakarta, 846-848