## UJI DAYA ANTIBAKTERI DAN IDENTIFIKASI
ISOLAT SENYAWA KATEKIN  DARI DAUN TEH ( Camellia sinensi sL. var Assamica)

## Christina Astutiningsih, Wahyuning Setyani, Himawan Hindratna

## Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi, “YAYASAN PHARMASI’’
Jl. LetJen Sarwo Edhi Wibowo Km-1 Pucanggading Semarang
Abstract: Antibacterial  is  a  substance  that  can  interfere  with  the  growth  and  metabolism  of  bacteria,  so that  these  substances  can  inhibit  growth  or  even  kill  bacteria.  This  research  aimed  to  utilize  natural materials as a natural antibacterial. This study investigated the ability of isolates catechins of tea leaves to inhibit  Staphylococcus  aureus  and  spectral  identification  of  these  catechins.  Catechin  compounds  was extracted  by  water,  and  then  fractionated  with  CHCl 3 and  ethyl  acetate.  Ethyl  acetate  phase  was concentrated  fractionation  results  using  a  rotary  evaporator  for  further  separation  using  thin  layer chromatography with various mobile. The results of the study showed that the concentration of isolates of demonstrated to be effective as antibacterial, with MIC 12.5%. UV spectrum measurement showed that the isolates had a maximum absorption at a wavelength of 279 nm while the FTIR spectrophotometer showed that  isolates  catechin-containing  functional  groups  C  =  C  aromatic  absorption  1500-1600  nm -1 and  OH groups, a broad band between 2000 and 3600 nm -1 .
Key words: isolates catechins, Staphylococcus aureus, tea leaves, antibacterial

## 1. Pendahuluan
Saat ini, penyakit infeksi merupakan penyebab utama dalam menimbulkan morbiditas dan mortalitas di negara-negara berkembang dan negara maju  maka  perlu  untuk  dicari  antibakteri  alamiah yang potensial. Penyakit infeksi sendiri mempunyai kemampuan  menular  pada  orang  lain  yang  sehat sehingga  populasi  penderita  dapat  meluas  (Jawetz et  al., 2001  ).Salah  satu  jenis  mikroorganisme golongan  bakteri  yang  dapat  menimbulkan  infeksi adalah Staphylococcus aureus .Bakteri Stapylococcus  aureus merupakan  flora  normal yang  terdapat  di  kulit,  hidung,  dan  saluran pernafasan. Staphylococcus  aureus dapat  berubah dari  flora  normal  menjadi  bakteri  patogen  pada manusia  jika  manusia  itu  sendiri  mengalami penurunan  sistem  imun. Staphylococcus  aureus merupakan  salah  satu  bakteri  penyebab  penyakit seperti  jerawat,  bisul,  borok  luka,  dan  pneumonia (Madigan et  al., 2002).Salah  satu  zat  aktif pembunuh bakteri yang terkandung dalam tanaman adalah  senyawa  katekin  yang  terdapat  pada  daun teh.
Salah  satu  zat  aktif  pembunuh  bakteri  yang terkandung dalam tanaman adalah senyawa katekin
yang  terdapat  pada  daun  teh.Indonesia  merupakan negara dengan perkebunan teh yang cukup luas.Teh menunjukkan  kemampuan  merusak    sel    dari sebagian mikroorganisme  dan menunjukkan  sifat- sifat    antibakterial,    melalui    katekin    dan theaflavin    dan    bentuk-bentuk    gallatnya.  Teh memiliki aktivitas bakterisidal terhadap Stapyloccoci,  Yersinia  enterocolitica,  Eschericia coli,  Pseudomonas  fluorescens,  dan  Salmonella  sp (Jambang, 2004).
Katekin merupakan
kerabat tanin terkondensasi  yang  juga  sering  disebut polifenol karena  banyaknya  gugus  fungsi  hidroksil  yang dimilikinya.Katekin  teh  hijau    tersusun    sebagian besar atas senyawa-senyawa katekin (C), epikatekin (EC), galokatekin  (GC),  epigalokatekin (EGC), epikatekin  galat  (ECG), galokatekin  galat (GCG), dan epigalokatekin galat (EGCG), perbedaan  dari beberapa  jenis  katekin dilihat  dari jumlah gugus hidroksilnya. Gambar 1 menunjukkan  struktur  kimia  dari  beberapa  jenis senyawa  katekin. Berdasarkan  latar  belakang
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas
diatas, maka dilakukan penelitian untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  dan  identifikasi senyawa  katekin  dari  tanaman  teh  varietas Assamica.Uji  daya  antibakteri  dilakukan  terhadap bakteri uji Staphylococcus aureus dengan menggunakan metode dilusi cair, dalam metode ini
terdapat  dua  indikator  ukur  untuk  menentukan aktivitas  antibakteri  yaitu  nilai  KBM  (Konsentrasi Hambat  Minimal)  dan  KHM  (Konsentrasi  Bunuh Minimal).  Identifikasi    isolat  katekin  dilakukan dengan metode KLT, spektrofotometer UV-Vis dan FT-IR.
Gambar 1. Struktur senyawa katekin (Hartoyo, 2003)

## 2. Metode Penelitian
Alat  yang  digunakan  untuk  proses  isolasi  dan identifikasi  dalam  penelitian  ini    adalah    kertas saring,    neraca    analitik,    seperangkat    alat    gelas, corong    pisah,  rotary    evaporator,    sentrifuge, seperangkat    alat  KLT,    seperangkat  alat  KLTP, oven,  lampu  UV.  Alat  yang  digunakan  untuk  uji antibakteri  adalah  LAF,  Erlenmeyer,  pipet  volum, pipet  ukur,  gelas  ukur,batang  pengaduk,  bunsen, cawan  petri,  tabung    reaksi,  kapas,  kertas,    jarum
ose,    inkubator,      pinset,  autoklaf,  bunsen,  dan penggaris, spektrofotometer UV-Vis dan FT-IR.
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian    ini  adalah  pucuk  daun  teh  segar  yang diambil  dari  perkebunan  teh  Medini,  Ungaran, Kabupaten Semarang.
Bahan-bahan  kimia  yang  digunakan  dalam penelitian  ini,  antara  lain:plat  silika  gel  GF 254 , akuades  (H 2 O),  kloroform  (CHCl 3 )  p.a, metanol (CH 3 OH)    p.a,    etil    asetat  (CH 3 COOC 2 H 5 )    p.a,
asam  format  (CH 2 O 2 )  p.a,  aseton  (C 3 H 6 O)  p.a, toluena  (C 6 H 5 CH 3 )  p.a, amoniak  (NH 3 )  dan  larutan FeCl 3 .  Uji  antibakteri  menggunakan  bahan-bahan sebagai    berikut:    akuades    steril,  alkohol    90  %, kapas,  MSA  (Manitol  Salt  Agar),Nutrient  Borth (NB),  Amoksisilin,  biakan  murni Staphylococcus aureus ATCC 25923 .

## 2.1. Preparasi Sampel
Daun  teh  yang  masih  segar  dicuci  terlebih dahulu, dan dikeringkan dalam oven pada suhu 30- 37 0 C  sampai  diperoleh  berat  konstan.  Kemudian dihaluskan  menjadi  serbuk,  hasil  yang  diperoleh disebut sebagai sampel serbuk daun teh.

## 2.2.  Ekstraksi  Senyawa  Katekin  dengan  Metode Maserasi
Masing-masing  sampel  ditimbang  50  gram kemudian direndam dalam pelarut aquades sebanyak 200 ml dalam gelas beaker selama 2,5 jam sambil sesekali di aduk (Hukmah, 2007). Kemudian larutan  ekstrak  daun  teh  disaring  dengan  kertas saring.Filtrat  ekstrak  daun  teh  dimasukkan  dalam corong pisah.Ditambahkan kloroform sebanyak 100 ml  dalam  corong  pisah  yang  berisi  fase  air  sambil dikocok-kocok  kemudian  diambil  fase  airnya, diulang  3  kali.Fase  air  yang  diperoleh  dimasukkan dalam  corong  pisah  dan  ditambahkan  100  ml  etil asetat  kemudian  dipisahkan  dan  diambil  fase  etil asetatnya,  di  ulang  3  kali.Fase  etil  asetat  yang diperoleh  dipekatkan  dengan rotary  evaporator . Fraksi  pekat  yang  diperoleh  digunakan  untuk  uji KLT dan KLTP.

## 2.3. Pemisahan Ekstrak Katekin dengan
Kromatografi Pada pemisahan dengan KLT analitik digunakan  plat  silika  gel  GF 254 yang  sudah diaktifkan  dengan  pemanasan  dalam  oven  pada suhu  30  –  40°C  selama  10  menit.  Masing-masing plat dengan ukuran 2 cm x 10 cm. Ekstrak daun teh ditotolkan  pada  jarak  1  cm  dari  tepi  bawah  plat dengan  pipa  kapiler  kemudian  dikeringkan  dan dielusi dengan fase gerak etil asetat:air:asam format (18:1:1),  toluen:aseton:asam  format  (3:3:1),  dan kloroform:methanol:air  (6,5:3,5:1)  (Amarowicz, 2005). Setelah gerakan larutan pengembang sampai
pada garis batas, elusi dihentikan. Noda-noda pada permukaan  plat  diuapkan  dengan  uap  amoniak sambil  diperiksa di  bawah sinar UV pada panjang gelombang  maksimum  254  nm  warna  biru  pucat menunjukkan  adanya  katekin  dan  diuji  kimia dengan menyemprotkan larutan FeCl 3 warna hitam kebiruan  menunjukkan  adanya  katekin  (Robinson, 1995).  Selanjutnya  dengan  memperhatikan  bentuk noda pada berbagai larutan pengembang ditentukan perbandingan larutan pengembang yang paling baik untuk keperluan preparatif.

## 2.4. KLT Preparatif
Pada  pemisahan  dengan  KLT  preparatif digunakan  plat  silika  gel  GF 254 dengan  ukuran  10 cm  x  20  cm.  Fraksi  yang  diperoleh  ditotolkan sepanjang  plat  pada  jarak  1  cm  dari  garis  bawah dan  1  cm  dari  garis  tepi.  Selanjutnya  dielusi dengan  menggunakan  eluen  yang  memberikan pemisahan  terbaik  pada  KLT  analitik.  Noda-noda pada  permukaan  plat  dites  dengan  cara  diuapkan dengan  uap  amoniak  sambil  diperiksa  di  bawah sinar UV pada panjang gelombang maksimum 254 nm warna biru pucat menunjukkan adanya katekin dan  diuji  kimia  dengan  menyemprotkan  larutan FeCl 3 warna  hitam  kebiruan  menunjukkan  adanya katekin  (Robinson,  1995).  Kemudian  dilakukan KLTP  lagi  untuk  mengumpulkan  noda  berbentuk pita,  noda  yang  diperoleh  dikerok  kemudian dilarutkan  dalam  sedikit  air  dan    di sentrifuge untuk    mengendapkan    silikanya.  Cairan  diatas endapan dipipet dan dikumpulkan yang merupakan isolat katekin, ambil sedikit isolat cair kemudian di tes  dengan  cara  mereaksikan  dengan  FeCl 3 warna hitam  kebiruan  menunjukkan  adanya  katekin, isolat  siap  digunakan  untuk  uji  selanjutnya  yaitu untuk uji antibakteri dan identifikasi menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan FT-IR.

## 2.5.  Uji  Antibakteri  /  Penentuan  Konsentrasi Hambat  Minimal  dan  Konsentrasi  Bunuh Minimal
Enam  tabung  reaksi  steril  disiapkan,  dibuat deret  konsentrasi  dengan  konsentrasi  100%,  50%, 25%,  12,5%,  6,25%,  3,125%.  Semua  tahap  harus seaseptis mungkin, tabung pertama diisi 2 ml isolat murni  dengan  konsentrasi  100%,  kemudian  ambil

## 53   ASTUTININGSIH, SETYANI, HINDRATNA
1 ml isolat dari tabung pertama masukkan ke dalam tabung  dua  dan  ditambah  1  ml  DMSO  untuk mendapatkan konsentrasi 50%, Kemudian dipipet 1 ml  isolat  dari  tabung  dua  masukkan  dalam  tabung tiga dan tambahkan 1 ml DMSO untuk mendapatkan  konsentrasi  25%,  perlakuan  yang sama  dilakukan  untuk  mendapatkan  konsentrasi 3,125% pada tabung ke enam. Kemudian ditambahkan  1  ml  suspensi  bakteri  pada  masing- masing  tabung  konsentrasi.  Sementara  itu  dibuat  5 macam  kontrol  dengan  cara  menyiapkan  5  tabung reaksi  steril  kemudian  tiap  tabung  diisi  sebagai berikut :
Kontrol  1 : DMSO 0,5 ml + Aquadest steril 0,5 ml (kontrol pelarut)
Kontrol  2 :   DMSO 0,5 ml + isolat 100% (kontrol
isolat) Kontrol  3 :     1 ml NB (kontrol media) Kontrol 4  : 0,5 ml larutan amoksisilin + 0,5 ml suspensi bakteri (kontrol positif)
Kontrol  5 :    1 ml suspensi bakteri Staphylococcus aureus (kontrol bakteri)
Sebelum  diinkubasi,  setiap  tabung  dilusi diamati  seksama  dan  diukur  absorbansi  pada spektrofotometer  UV-VIS  panjang  gelombang  600 nm. Kemudian seluruh tabung diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam.Setelah inkubasi, setiap tabung dilusi  diamati  seksama  dan  diukur  absorbansi kembali  pada  spektrofotometer  UV-VIS  pada panjang  gelombang  600  nm.  Dibandingkan  hasil pengamatan kekeruhan antara sebelum dan sesudah inkubasi  serta  dibandingkan  nilai  absorbansi sebelum  dan  sesudah  inkubasi,  bertambahnya  nilai absorbansi  setelah  inkubasi  menunjukan  adanya pertumbuhan  sel  bakteri  yang  hidup,  sedangkan konstan  dan  berkurangnya  nilai  absorbansi  setelah inkubasi menunjukan tidak adanya pertumbuhan sel bakteri yang hidup sehingga dapat disimpulkan titik konsentrasi  ini  adalah  KHM  (Konsentrasi  Hambat Minimal) yang dapat menghambat pertumbuhan.
Selanjutnya  untuk  membuktikan  apakah  isolat memiliki  kemampuan  membunuh,  maka  dilakukan penentuan  KBM  (Konsentrasi  Bunuh  Minimal) yaitu  dengan  mengambil  1  ose  dari  masing-masing tabung kemudian diinokulasi pada media agar MSA
( Manitol  salt  agar )  dalam  cawan  petri  dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0 C. Setelah 24 jam diamati adanya pertumbuhan bakteri berarti isolat  bersifat  bakteriostatik,  sedangkan  apabila tidak  ada  pertumbuhan  bakteri  berarti  isolat bersifat bakterisidal.

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Dalam  penelitian  ini  sampel  yang  digunakan adalah  pucuk  daun  teh  segarkarena  pada  pucuk daun teh banyak mengandung senyawa katekin.Sampel  serbuk  daun  teh  yang  didapat sebelumnya  ditimbang  masing-masing  50  g kemudian direndam dalam 200 mL pelarut selama 2,5  jam.Filtrat  hasil  penyaringan  kemudian difraksinasi  dengan  menggunakan  corong  pisah, filtrat  ditambahkan  kloroform  untuk  mengambil senyawa-senyawa yang bersifat nonpolar, diantaranya  lemak,  klorofil,  kafein  dan  lain- lain.Karena  katekin  mempunyai  kepolaran  yang lebih  tinggi  maka  akan  tetap  terlarut  dalam  fase air,  fase  air  kemudian  diambil  untuk  dilakukan tahap  fraksinasi  selanjutnya  menggunakan  etil asetat.  Pendugaan  secara  kualitatif  senyawa katekin  dari  sampel  dilakukan  dengan  metode KLT  (Kromatografi  Lapis  Tipis).  Pemisahan katekin dari ekstrak pekat dilakukan menggunakan plat  silika  gel  dengan  eluen  etil  asetat:air:asam format (18:1:1), toluen:aseton:asam format (3:3:1), dan kloroform:methanol:air (6,5:3,5:1).
Hasil  KLT  selanjutnya  diuji  identifikasi senyawa  katekin  dengan  pereaksi  FeCl 3 .  Pereaksi ini telah digunakan secara luas untuk mengidentifikasi  senyawa  fenol  terutama  katekin, yang  akan  menghasilkan  warna  hitam  kebiruan (Robinson,  1995).  Plat  yang  telah  disemprot dengan  pereaksi  FeCl 3 diangin-anginkan  sampai kering  kemudian  diidentifikasi  plat  tersebut dibawah sinar lampu UV pada panjang gelombang 254 nm  (untuk memperjelas spot  yang terbentuk). Berdasarkan  hasil  dari  KLT  analitik  maka  eluen etil  asetat:air:asam  format  (18:1:1)  memberikan elusi terbaik, karena mampu memisahkan
sebanyak  5  noda  dengan  jelas.  Selanjutnya  eluen tersebutdipilih  untuk  digunakan  pada  tahap  KLT preparatif.    Sebelumnya  telah  dilakukan  penelitian oleh  (Amarowicz,  2005)  tentang  pemisahan senyawa  katekin  golongan  Methylated  EGCG  dan EGCG,  keduanya  dilakukan  uji  KLT  dengan  eluen
etil asetat:air:asam format (18:1:1) dan menghasilkan  nilai  Rf  sebesar  Methylated  EGCG (0,92)  dan  EGCG  (0,88).  Dari  hasil  penelitian tersebutdapat  dijadikan  acuan  dalam  penelitian kali ini.
Gambar 1. Hasil KLT fraksi etil asetat dengan variasi eluen
Keterangan :
A. Hasil KLT setelah direaksikan dengan uap amoniak B. Hasil KLT setelah disemprot dengan larutan FeCl 3 C. Hasil KLT di bawah sinar UV
1. Hasil KLT dengan eluen etil asetat : air : asam format (18:1:1)
2. Hasil KLT dengan eluen toluen : aseton : asam format (3:3:1)
3. Hasil KLT dengan eluen kloroform : methanol : air (6,5:3,5:1)
Untuk lebih meyakinkan dilakukan identifikasi lebih lanjut dengan  spektrofotometer Uv-Vis  dan  FT-IR.  Dari  hasil  uji  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  diperoleh  serapan maksimal  pada  panjang  gelombang  279  nm. Pada identifikasi menggunakan spektroskopi FT- IR  sampel  dibuat  pellet  sebelum  dilakukan pengukuran.  Analisa  dengan  spektrofotometer FT-IR ini memberikan spektrum berupa pita-pita serapan  yang  karakteristik  untuk  gugus-gugus fungsional  tertentu  pada  sampel  yang  diukur,
dimana  isolat  katekin  mengandung  gugus fungsional  C=C  aromatik  dengan  serapan  1500- 1600  nm -1 ,  gugus  O-H  pada  serapan  2000-3600 (lebar).
Isolat  yang  didapat  kemudian  dilakukan  uji antibakteri  dengan  menggunakan  metode  dilusi cair.  Metode  ini  mulai  banyak  digunakan  untuk menguji daya antibakteri suatu senyawa terhadap bakteri  tertentu.  Dalam  penelitian  ini  dipilih metode  dilusi  cair  karena  memiliki  sensitivitas yang lebih tinggi dibanding dengan teknik difusi
agar, metode dilusi cair juga sangat berguna jika senyawa  uji  yang  didapatkan  sangat  terbatas, kelebihan lainnya dengan metode ini yaitu dapat membedakan  efek  bakteriostatik  dan  bakterisid senyawa  uji.  Namun  demikian  metode  dilusi  ini memerlukan  ketelitian  dalam  pengerjaannya.Hal yang  diamati  dalam  metode  ini  adalah  efek bakteriostatik  yang  digambarkan  sebagai  nilai Konsentrasi  Hambat  Minimal  (KHM)  dan  efek bakterisid  yang  digambarkan  sebagai  nilai Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM).
Bakteri uji yang digunakan dalam penelitian ini  adalah Staphylococcus  aureus  ATCC  25923 yang  merupakan  jenis  bakteri  gram  positif  dan banyak  menyebar  dinegara  tropis  seperti Indonesia  dan  menyebabkan  berbagai  penyakit
infeksi. Langkah  selanjutnya  diambil  isolat  cair katekin  kemudian  dibuat  variasi  kadar  secara menurun yaitu 100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,125%,  hal  ini  dilakukan  untuk  mengetahui pada  konsentrasi  berapa  nantinya  isolat  katekin tersebut  menunjukan  kemampuan  menghambat pertumbuhan  bakteri.  Setelah  seri  pengenceran kadar  siap,  ditambahkan  suspensi  bakteri  secara aseptis  dengan  tujuan  menghindari  kontaminasi dengan  masuknya  bakteri  lain  kedalam  tabung lewat  udara  bebas.  Perlakuan  selanjutnya kesemua  tabung  seri  pengenceran  kadar  dan tabung  kontrol  diukur  serapannya  menggunakan instrumen spektrofotometri pada panjang gelombang 600 nm.
Tabel 1. Hasil Uji KHM Senyawa Katekin terhadap Bakteri S.aureus No. Larutan Uji Rep I Rep II Rep III Rata-rata Ket. Sebelum  Sesudah  Sebelum  Sesudah  Sebelum  Sesudah  Sebelum Sesudah 1 100% 0,964 0,952 0,884 0,875 0,919 0,897 0,922 0,908 Turun 2 50% 0,535 0,528 0,514 0,508 0,677 0,666 0,575 0,567 Turun 3 25% 0,338 0,330 0,289 0,276 0,299 0,290 0,309 0,299 Turun 4 12,5% 0,134 0,130 0,110 0,101 0,132 0,128 0,125 0,120 Turun 5 6,25% 0,072 0,083 0,065 0,062 0,077 0,073 0,071 0,073 Naik 6 3,125% 0,037 0,048 0,028 0,035 0,043 0,050 0,036 0,044 Naik 7 Kontrol 1 0,008 0,009 0,007 0,007 0,008 0,008 0,008 0,008 Tetap 8 Kontrol 2 0,775 0,776 0,765 0,765    0,812 0,811 0,784 0,784 Tetap 9 Kontrol 3 0,037 0,037 0,037 0,037 0,037 0,038 0,037 0,037 Tetap 10 Kontrol 4 0,344 0,219 0,389 0,300 0,371 0,211 0,368 0,243 Turun 11 Kontrol 5 0,113 0,132 0,115 0,142 0,115 0,139 0,114 0,138 Naik
Sebenarnya  dalam  metode  dilusi  cukup digunakan  pengamatan  secara  visual  saja  untuk mengamati  ada  tidaknya  pertumbuhan  bakteri, namun  hal  ini  cenderung  bersifat  subjektif  dari masing-masing  penglihatan  orang  sehingga  resiko terjadinya  kesalahan  relatif    lebih  besar.Karena larutan uji berwarna kecoklatan sehingga
mempersulit  dalam  pengamatan,  maka  digunakan nilai  absorbansi  sebelum  dan  sesudah  inkubasi guna  membantu  mengetahui  ada  atau  tidaknya pertumbuhan  bakteri.  Panjang  gelombang  yang dipakai  untuk  mengukur Optical  Density dari jumlah  mikroba  yaitu  600  nm,  menurut  (APHA 1998  dalam  Setya  dan  Putra  2011)  pada  dasarnya
600  nm  digunakan  karena  sel-sel  menyerap  pada panjang  gelombang  ini.  Setelah  diukur  serapannya kemudian  tabung  diinkubasi  dalam  inkubator dengan  suhu  37 o C  selama  24  jam,  hal  ini  berguna untuk memaksimalkan pertumbuhan bakteri dengan cara  menyamakan  dengan  habitat  aslinya  yaitu dalam tubuh manusia.
Setelah  proses  inkubasi  selesai  selajutnya semua  tabung  diukur  absorbansinya  pada  panjang gelombang 600 nm, kemudian dibandingkan dengan nilai  absorbansi  sebelum  inkubasi.  Dan  ke  enam tabung uji diamati secara seksama dan dibandingkan kekeruhannya dengan sebelum inkubasi, jika larutan uji setelah inkubasi bertambah keruh dan nilai absorbansinya bertambah besar dari sebelum  inkubasi,  maka  dapat  disimpulkan  terjadi pertumbuhan  bakteri.  Namun  sebaliknya  jika  tidak terdapat  perubahan  nilai  absorbansi  dan  perubahan tingkat  kekeruhan  maka  dapat  disimpulkan  tidak terjadi pertumbuhan bakteri.
Setelah  semua  tabung  melalui  proses  inkubasi selanjutnya  ditetapkan  nilai  KHM.  Hasil  uji  KHM isolat  katekin  dengan  berbagai  konsentrasi  dengan tiga  kali  replikasi  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 ditunjukkan pada tabel 1 .
Dilihat  dari  tabel  1  pada  konsentrasi  100% sampai  12,5%  terjadi  penurunan  absorbansi,  yang menunjukkan bahwa jumlah sel  bakteri  yang hidup berkurang  dan  tidak  terjadi  pertumbuhan  bakteri akibat  sifat  antibakteri  dari  senyawa  katekin.
Namun  pada  konsentrasi  yang  lebih  kecil  terjadi kenaikan  nilai  absorbansi,  hal  ini  dikarenakan kemampuan  senyawa  katekin  pada  konsentrasi  ini tidak lagi mampu  untuk membunuh dan menghambat pertumbuhan bakteri. Dari data diatas dapat disimpulkan bahwa konsentrasi terkecil yang masih  terjadi  penurunan  absorbansi    merupakan nilai  KHM  (Konsentrasi  Hambat  Minimal)  dari senyawa katekin, atau dengan kata lain konsentrasi 12,5% senyawa katekin hanya bersifat menghambat (bakteriostatik).
Dapat  diamati  pada  tabel  2  konsentrasi  25% adalah  KBM  (Konsentrasi  Bunuh  Minimal)  dari isolat  katekin  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus, karena  merupakan  konsentrasi  terkecil dimana  senyawa  katekin  masih  memberikan  efek membunuh (bakterisid),  hal  ini dibuktikan dengan tidak  adanya  pertumbuhan  koloni  bakteri  pada cawan  petri.  Pada  penelitian  ini  digunakan  lima kontrol  uji  sebagai  pembanding.  Fungsi  kontrol pelarut,  kontrol  isolat,  dan  kontrol  media  adalah untuk  mengetahui  bahwa  hasil  dari  penelitian  ini terbebas  dari  faktor  kontaminasi  dari  luar.  Fungsi dari  kontrol  bakteri  adalah  untuk  membuktikan bahwa  bakteri  uji  dapat  tetap  hidup  setelah perlakuan,  sehingga  membuktikan  bahwa  cara kerja  sudah  tepat.  Dan  yang  terahir  digunakan kontrol  positif  berupa  campuran  bakteri  uji  dan amoxisilin  untuk  membuktikan  bakteri  uji  masih bisa dibunuh menggunakan antibakteri sintetis.
Tabel 2. Data Hasil Uji KBM Senyawa Katekin terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus No. Konsentarsi % Pertumbuhan Bakteri I II III 1 100 - - - 2 50 - - - 3 25 - - - 4 12,5 + + + 5 6,25 + + + 6 3,125 + + + 7 Kontorl 1 - - - 8 Kontrol 2 - - - 9 Kontrol 3 - - - 10 Kontrol 4 - - - 11 Kontrol 5 + + +
Keterangan : (+) : ada pertumbuhan (-) : tidak ada pertumbuhan
4. Kesimpulan dan Saran
Hasil identifikasi pengukuran spektrum spektrofotometer  UV  menunjukkan  bahwa  isolat katekin memiliki serapan maksimum pada panjang gelombang 279 nm sedangkan dengan spektrofotometer  FTIR    menunjukkan  bahwa  isolat katekin  mengandung  gugus  fungsional  C=C aromatik dengan serapan 1500-1600 nm -1 , gugus O- H  pada  serapan  2000-3600  (lebar).  KHM  isolat katekindaun  teh  ( Camellia  sinensis Linn.)  varietas Assamica  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923  adalah  12,5%.KBM  isolat  katekin daun  teh  ( Camellia  sinensis Linn.)  varietas Assamica  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC 25923 adalah 25%.
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  tentang pembuatan  sediaan  farmasi  senyawa  katekin  agar lebih  mudah  diaplikasikan  sebagai  anti  bakteri alami.  Perlu  adanya  penelitian  lebih  lanjut  tentang daya  antibakteri  senyawa  katekin  terhadap  bakteri lainnya.

## Daftar Pustaka
Amarowicz,  R.,  Maryniak,  A.,  and  Shahidi,  F.  2005.    TLC Separation  of  Methylated  (-)  Epigallocatechin-3-Gallate. Czech J. Food Sci. 23. (1) : 36 39.
Clesceri, L.S., Greenberg,  A.E.,  &  Eaton,  A.D.,  (Eds.). 1998. Standard methods for the
examination  of water  and  wastewater.  20th    Ed.Washington  DC  : APHA Hartoyo,  A.  2003. Teh  dan  Khasiatnya  Bagi  Kesehatan . Yogyakarta : Penerbit Kanisius.
Jambang,  N.  2004.    Studi  Aktivitas  Antibakteri  dan Antioksidan  Pada  Beberapa  Merk  Teh  Hitam  yang Beredar  Di  Pasaran  Kota  Malang. Skripsi .  Malang  : Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Brawijaya. Jawetz, E., Melnick, J.L., dan Adelberg’s.2001. Mikrobiologi Kedokteran .  Diterjemahkan  oleh  Bagian  Mikrobiologi Fakultas  Kedokteran  Universitas  Airlangga.  Jakarta  : Salemba Medika.
Madigan,  T.M.,  J.M.  Martinko,  and  J.  Parker,  2002. Brock Biology  of  Microorganisms .  9 th Ed.  Prentice  Hall, Upper Saddle River, New Jersey.
McEvoy,  G.K.  2002. AHFS  Drug  Information .  Bethesda: The  American  Society  of  Health-System  Pharmacist, Inc. P. 384-388
Sastrohamidjojo.  2005. Kromatografi .  Yogyakarta  :  UGM Press.
Setya, R. A., dan S. R. Putra. 2011. Identifikasi Biohidrogen secara Fermentatis dengan Kultur Campuran menggunakan  Glukosa  sebagai  Substrat.  Prosiding Skripsi.  Surabaya  :  Institut  Teknologi  Sepuluh Nopember.