## AKTIVITAS ANTIMIKROBA EKSTRAK METANOL BAKTERI BERASOSIASI SPONS DARI PULAU LEMUKUTAN, KALIMANTAN BARAT

## ANTIMICROBIAL ACTIVITIES OF METHANOL EXTRACT FROM UNIDENTIFIED SPONGE ASSOCIATED BACTERIA IN LEMUKUTAN ISLAND, KALIMANTAN BARAT
Risa Nofiani 1 , Siti Nurbetty 1 , dan Ajuk Sapar 1
1 Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Tanjungpura, Jl. A. Yani, Pontianak E-mail: rnofiani@yahoo.com

## ABTRACT
The  increase  of  issues  on  the  antibiotics  resistant  pathogenic  bacteria  has    triggered high  exploration  for  new  antimicrobial  compounds.  One  of  the  potential  sources  is sponge-associated bacteria. The aim of this study was to get sponge-associated bacteria extract  containing  antimicrobial  activities.  On  the  basis  screening  of  antimicrobial activity  using  by  streaking  on  agar  medium,  there  were  two  potential  isolates  with antimicrobial activities namely LCS1 and LCS2. The two isolates were cultivated, then secondary  metabolite  product  were  extracted  using  methanol  as  a  solvent.  Minimum inhibitory concentrations (MICs) of extract LCS 1 were 1,000 µg/well for S. aureus, 950 µg/well  for  Salmonella sp. and  800  µg/well  for  Bacillus  subtilis.  Minimum  inhibitory concentrations  of  extract  LCS  2  were  500  µg/well  for  S.  aureus,  1,050  µg/well  for Salmonella  sp.,  750  µg/well  for  Bacillus  subtilis,  350  µg/well    for  P.  aeruginosa,  750 µg/sumur terhadap B. subtilis. Based on the MIC values, the two assay extracts have a relatively low antimicrobial activity.
Keywords : Antimicrobial , Sponges associated bacteria , MICs

## ABSTRAK
Peningkatan jumlah  kasus  resistansi  bakteri  patogen  terhadap  antibiotik  akhir-akhir ini memicu  peningkatan  pencarian  sumber  senyawa  antimikroba  yang  baru.  Salah  satu sumber  potensial  penghasil  senyawa  antimikroba  adalah  bakteri  yang  berasosiasi dengan spons. Tujuan penelitian ini adalah memperoleh ekstrak bakteri yang berasosiasi dengan  spons  yang  memiliki  aktivitas  antimikroba.  Berdasarkan  skrining  aktivitas antimikroba  dengan  metode  goresan  pada  agar  diperoleh  2  isolat  yang  berpotensi menghasilkan senyawa  yang mempunyai  aktivitas antimikroba   yaitu: LCS 1 dan LCS 2. Selanjutnya kedua isolat bakteri di perbanyak dan metabolit sekunder yang dihasilkan di panen dengan cara ekstraksi menggunakan pelarut metanol. Nilai konsentrasi hambat minimum  (KHM)  ekstrak  LCS  1  terhadap S.  aureus , Salmonella sp.  dan Bacillus subtilis berturut-turut  adalah  1.000  µg/sumur,  950  µg/sumur  dan  800  µg/sumur.  Nilai KHM ekstrak LCS 2 adalah 500 µg/sumur terhadap S. aureus , 1.050 µg/sumur terhadap Salmonella sp.,  350  µg/sumur  terhadap P.  aeruginosa dan  750  µg/sumur  terhadap B. subtilis . Berdasarkan nilai KHM tersebut, ekstrak senyawa dari bakteri LCS1 dan LCS 2 menunjukkan aktivitas antimikroba yang lemah
Kata kunci : Antimikroba, bakteri berasosiasi spons, KHM

## I. PENDAHULUAN
Spons  laut  merupakan  inang untuk bermacam-macam mikroba seperti bakteri.  Hal  ini  disebabkan  spons  dapat melindungi mikroba dari predator dengan  cara  menghasilkan  senyawa kimia.  Senyawa  kimia  yang  dihasilkan spons  akan  menginduksi  mikroba  yang hidup di dalam spons untuk
menghasilkan metabolit sekunder spesifik.  Metabolit  sekunder  spesifik terekspresi sebagai bentuk respon mikroba  terhadap  kondisi  lingkungan. Metabolit  sekunder  spesifik  memiliki berbagai aktivitas biologis seperti antimikroba. Beberapa kasus jika mikroba  ditumbuhkan  pada  kondisi berbeda  metabolit  sekunder  spesifik tersebut  tidak  terekspresi,  misalnya Fusarium  solani menghasilkan  warna ketika  dilakukan  kulturisasi  sebanyak  4 kali  tetapi  pada  kulturisasi  kelima F . solani tidak  menghasilkan  warna  (data tidak  dipublikasikan). Hal  ini  diduga disebabkan  karena  metabolit  sekunder terekspresi  karena  adanya  induser  yang berasal  dari  spons.  Beberapa  bakteri berasosiasi  spons  yang  menghasilkan metabolit  sekunder  dengan  aktivitas antimikroba  adalah  bakteri  berasosiasi spons Himeniacidon parleve ,  yaitu NJ6- 3-1    menghasilkan  senyawa  beta karbolin  alkaloid  bersifat  antimikroba terhadap S.  aureus (Zheng et  al., 2005). Genus Bacillus dan Virgibacillus yang diisolasi  dari  spons Pseudoceratina purpurea menunjukkan aktivitas antimikroba terhadap Vibrio alginolyticus dan Vibrio fischeri
(Kanagasabhaphaty et al ., 2005).
Microcccus spp. berasosiasi spons
Tedania  ignis menghasilkan  senyawa diketopiperazin bersifat antibakteri (Schmitz, 1994).
Studi  tentang  bakteri  patogen resistan antibiotik telah banyak
dilakukan. Hasil penelitian menunjukkan
bahwa  terjadi  peningkatan  jumlah  kasus bakteri  patogen resistan  antibiotik. Tahun 2005 lebih 19.000 kasus kematian di  Amerika  dan  Inggris  disebabkan Staphylococcus aureus resistan methicillin  (SARM)  (Kennedy et  al ., 2009). Kasus kematian yang disebabkan SARM  meningkat  tajam  dari  51  kasus pada  tahun  1993  sampai    1.652  tahun 2006  di  Inggris.  Strain Aeromonas hydrophila dan Aeromonas veronii yang diisolasi  dari  air  minum,  pasien  rumah sakit  dan  daging  menunjukkan  resisten terhadap ampisilin, amoksilin, sefasetril, klokasilin,  linkomisin,  spiramisin  dan penisilin  G  (Orozova et  al., 2008). Kondisi  tersebut  memacu  pencarian sumber  antimikroba  baru.  Pencarian mulai  diarahkan  kepada  mikroba  yang berada  di  laut.  Salah  satu  mikroba  yang dapat  dijadikan  sumber  bagi  senyawa antimikroba  adalah  bakteri  berasosiasi dengan spons. Oleh karena itu,
penelitian ini bertujuan untuk memperoleh  ekstrak  bakteri  berasosiasi spons yang memiliki aktivitas antimikroba  dari  Pulau  Lemukutan, Kalimantan Barat.

## II.  BAHAN DAN METODE

## 2.1.  Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah sampel spons, agar,  air  laut, akuades, bacto  yeast extract (Oxoid) , glukosa  (Merck),  kertas saring  Whatman  No.  41,  metanol  teknis, dimetil  sulfooksida  (DMSO),  natrium klorida  (NaCl)  (Merck)  dan  pepton (Oxoid).  Mikroba  uji  yang  digunakan pada  penelitian  ini  adalah Aeromonas hydrophila,  Bacillus  subtilis,  Candida albicans, C.  tropicalis, Citrobacter freundii,  Escherichia  coli,  Klebsiella pneumoniae,  Pseudomonas  aeruginosa, Salmonella sp., Staphylococcus  aureus, Vibrio cholera, V. harveyi dan V. vara .

## 2.2.  Pengambilan Sampel
Sampel  spons  diperoleh  dari Perairan  Pulau  Lemukutan,  Kalimantan Barat.  Sampel  spons  dimasukkan  ke dalam kantong plastik steril yang berisi air laut.
Selanjutnya sampel
spons
dimasukkan  ke  dalan  kotak  es  untuk dibawa ke laboratorium.

## 2.3. Isolasi  Bakteri  yang  Berasosiasi dengan Spons
Sebanyak  10  g  sampel  spons dipotong-potong  kemudian  dibilas  dua kali  dengan    air  laut  steril  sebanyak  25 mL.  Potongan  spons  ditambah  90  mL  air laut steril dan dihaluskan dengan menggunakan  blender.  Suspensi  bakteri yang  diperoleh  dilakukan  inokulasi  ke media  padat  M13  dengan  metode  tuang. Media  padat  M13  terdiri  dari  0,25  g pepton,  0,25  g  ekstrak  ragi,  0,25  g glukosa, 18 g agar dan diencerkan hingga 1  L  (750  mL  akuades  +  250  mL  air  laut) (Elardo et  al., 2003).  Masing-masing cawan  petri  ini  diinkubasi  pada  suhu kamar  selama  4  hari.  Bakteri  diisolasi berdasarkan  perbedaan  diameter,  warna, bentuk,  elevasi,  dan  tepian  koloni  yang tumbuh.
2.4. Penapisan Aktivitas Antimikroba Bakteri yang Berasosiasi dengan
Spons
Penapisan  aktivitas  antimikroba isolat bakteri dilakukan pada media padat M13 menggunakan metode Johnson et al.
(1960)  dengan  modifikasi.  Isolat  bakteri digores  berbentuk  lingkaran  dengan diameter  5-6  mm  pada  media  padat  M13 dan  diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama 48  jam.  Cawan  petri  tersebut  di  sebarkan suspensi  mikroba  uji  (500  μL  kultur mikroba  uji  umur  24  jam  disuspensikan dalam  50  mL  larutan  NaCl  0,9%  steril) dengan menggunakan alat semprot.
Cawan petri diinkubasi kembali pada suhu kamar  selama    24  jam  dan  diamati  zona hambat  di  sekitar  koloni  isolat  bakteri.
Zona  hambat  (zona  bening)  di  sekitar koloni  isolat  bakteri  menunjukkan  bahwa isolat tersebut memiliki aktivitas antimikroba. 2.5. Produksi  Dan  Ekstraksi  Metabolit Bakteri Produksi  dan  ekstraksi  metabolit bakteri yang memiliki aktivitas antimikroba dilakukan berdasarkan metode  Isnansetyo  and  Kamei  (2003). Bakteri yang memiliki aktivitas antimikroba digoreskan pada media padat
M13  dan  diinkubasi  pada  suhu  kamar selama  24  jam.  Koloni  tunggal  yang tumbuh  pada  media  padat  diinokulasikan ke  media  cair  M13  (pepton  0,25  g/L, ekstrak  ragi  0,25  g/L,  glukosa  0,25  g/L, akuades 750 mL dan air laut 250 mL) dan diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  24 jam  sehingga  diperoleh  kultur  starter. Sebanyak 200 μL kultur starter disebarkan pada media padat M13 kemudian diinkubasi pada suhu kamar selama 5 hari. Media  padat  selanjutnya  dipotong  kecil- kecil  dan  direndam  dengan  metanol selama 48 jam. Ekstrak metanol diperoleh dengan  melakukan  penyaringan  dan sentrifugasi  pada  kecepatan  1.000  x  g selama  15  menit.  Supernatan  dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator .
2.6. Uji Aktivitas Antimikroba Eekstrak  Bakteri yang Berasosiasi dengan Spons
Metode  yang  digunakan  untuk  uji aktivitas antimikroba adalah metode difusi agar  (Valgas et  al .,  2005).  Uji  aktivitas antimikroba  di  awali  dengan  pembuatan sumur  (diameter  5  mm)  pada  media  NA. Selanjutnya, pada media tersebut disebarkan  kultur  bakteri  uji.  Akhirnya ekstrak bakteri dengan konsentrasi
tertentu  dimasukkan  ke  sumur  tersebut dan diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 24 jam.  Pengujian  aktivitas  antimikroba ekstrak  bakteri  terhadap  jamur  uji  sama seperti  dilakukan  pada  bakteri  kecuali media  yang  digunakan  adalah potato dextrose agar (PDA).

## 2.7. Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)
Penentuan  KHM  ekstrak  bakteri dilakukan  berdasarkan  metode  Valgas et al .  (2007).  Pengujian  dilakukan  dengan metode  yang  sama  dengan  uji  aktivitas antimikroba ekstrak bakteri hanya konsentrasi ekstrak yang digunakan bervariasi  yaitu:  1.000 μ g,  950 μ g,  900 μ g, 850 μ g, 800 μ g, 750 μ g, dan 700 μ g.

## III.  HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Pengambilan Sampel Spons
Bakteri yang diisolasi pada
penelitian ini adalah bakteri yang berasosiasi  dengan  spons  dari  Pulau
Lemukutan,  Kalimantan  Barat  (Gambar 1).  Pengambilan  sampel  dilakukan  pada
hari  Sabtu  tanggal  31  Mei  2008  pukul 14.00 WIB. Spons diambil pada kedalaman sekitar 6,5 meter dari permukaan  air  laut.  Kondisi  pH,  kadar garam  serta  temperatur  air  laut  berturut- turut adalah 7,94; 36 0 / 00 dan 30 0 C.
Bentuk  spons  yang  diambil  dari Pulau   Lemukutan,  Kalimantan   Barat
memiliki  ciri-ciri  fisik  sebagai  berikut: berwarna  merah  dan  memiliki  bentuk seperti vas bunga (Gambar 1).
(a)
(b)
Gambar 1 Sampel spons: (a). Tampak atas; (b). Tampak samping

## 3.1.  Isolasi  Bakteri  Berasosiasi  dengan Spons
Empat dari 135 isolat bakteri hasil pengenceran  10 -2 telah  berhasil  diisolasi, yaitu:  LCS  1,  LCS  2,  LCS  3  dan  LCS  4 (Tabel  1).  Pemilihan  hasil  pengenceran 10 -2 untuk  isolasi  bakteri  disebabkan jumlah koloni representatif untuk dilakukan isolasi.
Tabel 1. Morfologi Isolat Bakteri Berasosiasi Spons
Kode Bakteri Diameter (mm) Warna Bentuk Elevasi Tepian Koloni Yang Tumbuh LCS 1 4 Putih susu berbenang- benang datar bercabang- cabang LCS 2 2 kuning Bundar cembung licin LCS 3 1 Putih susu Bundar datar licin LCS 4 2 Putih susu Bundar cembung licin
Tabel 2. Aktivitas Antimikroba Isolat Bakteri Berasosiasi dengan Spons
Bakteri uji LCS 1 LCS 2 LCS 3 LCS 4 C. tropicalis - - - - P.aeruginosa + + - - S. aureus + + - -

## 3.2. Penapisan Aktivitas Antimikroba
Penapisan  aktivitas  antimikroba bertujuan  untuk  menyeleksi  isolat-isolat bakteri yang memiliki aktivitas antimikroba  terhadap  bakteri  dan  jamur yang  bersifat patogen,  seperti: P. aeruginosa,  S.  aureus dan C.  tropicalis. Aktivitas antimikroba ditunjukkan dengan  terbentuknya  zona  bening  di sekitar  isolat  bakteri.  Hasil  penapisan aktivitas antimikroba menunjukkan adanya  2  isolat  bakteri  (LCS  1  dan  LCS 2)  yang  membentuk  zona  hambat terhadap P.  aeruginosa dan S.  aureus (Tabel 2).
Senyawa  antimikroba  merupakan salah  satu  produk  metabolit  sekunder. Pembentukan senyawa
metabolit sekunder dikode oleh sejumlah gen  yang terdapat pada DNA kromosom atau DNA plasmid.  Ada  beberapa  kondisi  yang mempengaruhi  metabolit  sekunder  yaitu: keterbatasan  nutrisi  yang  tersedia  di lingkungan tumbuh suatu bakteri, penambahan  senyawa  penginduksi  dan penurunan kecepatan pertumbuhan (Demain,  1998).  Umumnya  metabolit sekunder  tidak  terbentuk  jika  lingkungan tumbuh mengandung cukup nutrisi untuk pertumbuhan  bakteri  karena  senyawa tersebut  bukan  unsur  esensial  bagi pertumbuhan  dan  reproduksi  sel  (Barry and Wainwright, 1997).
Aktivitas antimikroba yang dihasilkan oleh 2 isolat  yaitu LCS 1 dan LCS  2  mengikuti  pola  penurunan kecepatan  pertumbuhan.  Ketika  isolat bakteri tersebut berada pada fase pertumbuhan  (fase  logaritma),  bakteri melakukan  aktivitas  pembelahan  sel
dengan mengonsumsi nutrien yang tersedia  pada  media  tumbuh.  Ketika nutrien  mulai  berkurang  bakteri  akan memasuki  fase  stasioner  dan  pada  fase ini  diduga  terjadi  pembentukan  senyawa metabolit sekunder yang bersifat antimikroba.  Aktivitas  antimikroba  yang terbentuk setelah memasuki fase stasioner dimungkinkan mengikuti mekanisme quorum sensing . Quorum sensing merupakan sistem  komunikasi  antar  sel  untuk merespon perubahan lingkungan. Komunikasi  antar  sel  bakteri  tersebut berperan  penting  dalam  proses  adaptasi terhadap  kondisi  lingkungan  sekitar.
Salah satu bentuk respon yang ditunjukkan  bakteri  adalah  pembentukan senyawa metabolit sebagai bentuk pertahanan  melawan  mikroba  lain  dan menghindari senyawa toksik yang memiliki potensi bahaya terhadap bakteri tersebut.  Salah  satu  contoh  pemanfaatan quorum  sensing adalah  pembentukan antibiotik  phenazine  oleh Pseudomonas aureofaciens (Tinaz,  2003).  Antibiotik phenazine  merupakan  sistem  pertahanan diri  bagi Pseudomonas  aureofaciens dalam  berkompetisi  dengan  organisme lain  untuk  tumbuh  disekitar  rizosfer gandum. Selain itu, phenazine juga dapat mencegah  tumbuhnya  jamur  penyebab penyakit  pada    gandum.  Bakteri  tersebut mengandung  protein  PhzI  dan  PhzR  dan sistem  respon  berupa  HHL  (N-hexanoyl- L-homoserine lactone)  yang bertanggung jawab  pada  pembentukan  phenazine. HHL  yang  terikat  dengan  PhzR  akan mengaktivasi  gen  PhzI  sehingga  terjadi pembentukan phenazine.

## 3.3. Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak Bakteri Berasosiasi Spons
Produksi dan ekstraksi bakteri berasosiasi  spons  dilakukan  untuk semua isolat meskipun hanya dua isolat yang menunjukkan aktivitas antimikroba  pada  saat  penapisan.  Hal ini disebabkan ada kemungkinan bakteri menghasilkan senyawa antimikroba  intraselular  sehingga  sel bakteri perlu dipecah
untuk memperoleh senyawa antimikroba.
Pemecahan  sel  dapat  dilakukan  pada saat  maserasi  bakteri  dengan  media tumbuh.    Penambahan  metanol  pada saat  maserasi  akan  menyebabkan  pH ekstrasel  menjadi  asam  dan  berakibat pada  peningkatan  konsentrasi  proton  di dalam sel (Purwoko, 2007).
Konsekuensi  dari  keadaan  tersebut adalah  sel  akan  menggunakan  energi berupa  ATP  untuk  memompa  proton keluar sel. Jumlah ATP yang digunakan berbanding  lurus  dengan  jumlah  proton yang  dipompa  keluar  sel.  Kondisi  ini menyebabkan terjadinya hambatan pertumbuhan  karena  sel  kekurangan energi.  Ketika sel tidak cukup memiliki ATP untuk memompa proton keluar sel maka terjadi akumulasi proton di dalam sel dan dapat menyebabkan lisis sel dan senyawa  metabolit  berdifusi  ke  pelarut metanol.
Hasil  uji  aktivitas  antimikroba ekstrak bakteri berasosiasi spons terhadap  12  mikroba  uji  menunjukkan bahwa  ekstrak  yang  aktif  sama  dengan hasil  uji  aktivitas  antimikroba  saat penapisan  yaitu:  ekstrak  LCS  1  dan LCS  2  (Tabel  3).    Ekstrak  LCS  1  dan LCS 2 menunjukkan aktivitas
antibakteri spektrum luas karena menunjukkan  aktivitas  terhadap  bakteri gram  negatif  maupun  bakteri  gram positif.  Ekstrak  LCS  1  memiliki daya antibakteri yang paling kuat terhadap B
subtilis dibandingkan dengan aktivitasnya terhadap 2 bakteri uji yang lain yaitu: Salmonella sp. dan S. aureus . Hal ini dapat dilihat bahwa ekstrak LCS 1  dapat  memberikan  zona  hambat sebesar 4,7 mm setiap 1.000 μ g/sumur. Ada  beberapa  dugaan  mengapa LCS  3  dan  LCS  4  tidak  menghasilkan senyawa  antimikroba.  Pertama,  kedua isolat  tersebut  memiliki  gen  yang mengode pembentukan
senyawa metabolit sekunder namun tidak terekspresi  pada  kondisi  normal.  Gen tersebut  baru  akan  terekspresi  ketika diinduksi terlebih dahulu. Proses induksi dapat berupa penambahan suatu senyawa prekursor ataupun penambahan sejumlah tertentu inokulum  bakteri  uji  pada  saat  proses fermentasi  isolat  bakteri.  Senyawa prekursor yang berperan sebagai induser  antara  lain:  fenilalanin  yang menginduksi produksi alkaloid benzodiazapene,  penambahan  etanol yang menginduksi Streptomyces venezuela untuk menghasilkan
jadomycin  B  serta  penambahan  glisin, fenilalanin,  tirosin  dan  arginin  untuk menghasilkan  vancomycin  (Demain, 1998).  Penambahan sel hidup S. aureus pada media tumbuh dapat meningkatkan aktivitas antimikroba dari  strain  Mbbc1121.  Pada  proses produksi S.  aureus dan  strain Mbbc1121  melalui  membran  dialisis semi-permeabel sehingga senyawa yang memiliki aktivitas antimikroba
terekskresi  ke  media  tumbuh  (Mearn- Spragg et  al., 1998).  Kedua,  bakteri tersebut menghasilkan senyawa antimikroba  namun  tidak  bersifat  aktif terhadap  bakteri  uji.  Ketiga,  bakteri menghasilkan senyawa antimikroba secara  intraseluler  sehingga  senyawa yang  dihasilkan  tidak  terekskresi  dan terakumulasi di media tumbuh.

## Tabel 3. Aktivitas Antimikroba Ekstrak Isolat Bakteri
Mikroba uji Zona hambat pertumbuhan (mm) Ekstrak LCS 1 Ekstrak LCS 2 Ekstrak LCS 3 Ekstrak LCS 4 A. hydrophila - - - - B. subtilis 4,7 11,2 - - C. albicans - - - - C. tropicalis - - - - C.  freundii - - - - E.  coli - - - - K. pneumoniae - - - - P. aeruginosa - 15,3 - - Salmonella sp 1,2 1,6  * - - S.  aureus 1,3 14,7 - - V. cholerae - - - - V. harvei - - - - V.  vara - - - -
Keterangan: * konsentrasi ekstrak LCS 2 = 1.050 μ g/sumur, - = tidak aktif
Tabel 4.  Nilai KHM Ekstrak Isolat Bakteri LCS 1 dan LCS 2 terhadap Bakteri Uji
Isolat bakteri Nilai KHM ekstrak isolat terhadap bakteri uji ( μ g/sumur) B. subtilis P. aeruginosa Salmonella sp. S.  aureus LCS 1 800 - * 950 1.000 LCS 2 750 350 1.050 500 Keterangan: * = tidak diuji

## 3.4.  Konsentrasi  Hambatan  Minimum
(KHM) Nilai  KHM  adalah  konsentrasi minimum  dari  suatu  ekstrak  yang  masih mampu menghambat pertumbuhan bakteri  uji.  Penentuan  nilai  KHM  hanya dilakukan  terhadap  ekstrak    LCS  1  dan LCS  2  yang  menunjukkan  aktivitas antimikroba  terhadap  4  bakteri  uji. Aktivitas  antimikroba  ekstrak  LCS  1 terhadap B.  subtilis merupakan  nilai KHM  terbaik  dibandingkan  dengan  3 mikroba  uji  yang  lain,  yaitu  800 μ g/sumur (Tabel 4). Meskipun demikian, berdasarkan  dari  nilai  KHM  tersebut ekstrak  bakteri  LCS  1  menunjukkan lemahnya aktivitas antimikroba.
Aktivitas antimikroba ekstrak LCS2 terhadap P .
aeruginosa
menunjukkan nilai KHM terbaik
dibandingkan  dengan  nilai  KHM  dari  3 mikroba  uji,  yaitu  350 μ g/sumur. Berdasarkan nilai KHM, aktivitas antimikroba ekstrak LCS 2 adalah lemah tetapi  ekstrak ini menarik untuk  diisolasi senyawa  aktifnya  karena P . aeruginosa merupakan mikroba yang resistan terhadap  semua  antibiotik  yang  ada dipasaran.  Selain  itu,  ada  kemungkinan kandungan senyawa antimikroba tersebut memiliki aktivitas antimikroba yang kuat tetapi produksi senyawa antimikroba oleh bakteri sangat kecil.

## IV. KESIMPULAN
Ekstrak bakteri LCS 1 dan LCS 2 menunjukkan aktivitas antimikroba lemah  terhadap B.  subtilis,    Salmonella sp., P.  aeruginosa dan S.  aureus . Nilai konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)
untuk  ekstrak  isolat  LCS  1  adalah  800
μ g/sumur untuk B.subtilis , 950 μ g/sumur untuk Salmonella sp. dan 1.000 μ g/sumur  untuk S.aureus . Nilai  KHM ekstrak  isolat  LCS  2  terhadap B.subtilis , P.aeruginosa , Salmonella sp. dan
S.aureus berturut-turut adalah 750 μ g/sumur, 350 μ g/sumur, 1.050
μ g/sumur dan 500 μ g/sumur.

## DAFTAR PUSTAKA
Barry,  K.J.  and  N.  R.  Wainwright. 1997.  Biosynthetic  Induction  of  a
Secondary Metabolite by a Marine Bacterium under Nutritional  Stress:  Potential  Role of the Incomplete Oxidation of an
Organic  Acid, Biol.  Bull., 193: 274-275.
Demain,  A.L.  1998.  Induction  of Microbial  Secondary  Metabolism, Internationall  Microbio .,    1:259- 264.
Elardo, S.P.,  M.  Wehrl,  A.B.  Friedrich,
P.R.  Jensen,  and  U.  Hentschel. 2003.  Isolation  of Planctomycetes from Aplysina Sponges. Aquat. Microb. Ecol ., 33:239-245.
Isnansetyo,  A.  and  Y.  Kamei.  2003. MC21-A,  A  Bacterial  Antibiotic Produced  by  a    New  Marine Bacterium, Pseudoalteromonas phenolica sp.  nov.  O-BC30 T , against Metchicilin-Resistant Staphylococcus aureus, Antimicrob.  Agen.  Chemother. , 47:480-488. Johnson,  L.  F.,  E.A.  Curl,  J.H.  Bond, and H.A. Fribourg.
1960. Methods and Studying: soil microflora-plants disease relationships,  Burgess  Publishing Company, Minneapolis, USA.
Kanagasabhapathy,  M.,  H.  Sasaki,  K.
Nakajima, K. Nagata, and S. Nagata. 2005. Inhibitory Activities of Surface
Associated  Bacteria  Isolated  from the    Marine  Spons Pseudoceratina purpurea. Microbes and Environmets , 20:178-185. Kennedy,  J.,  P.  Baker,  C.  Piper,  P.  D. Cotter, M. Walsh, M. J. Mooij, M. B.
Bourke, M. C. Rea, M. P. O’Connor, P.  Ross,  C.  Hill,  F.  O’Gara,  J.  R.
Marchesi,  and  A.  D.  W.  Dobson. 2009,  Isolation  and  Analysis  of Bacteria with Antimicrobial Activities  from  the  Marine  Sponge Haliclona  simulans Collected  from
Irish  Waters. Mar.  Biotechnol. 11:384-396.
Mearns-Spragg, A., M. Bregu, K. G. Boyd, and  J.  G.  Burgess.  1998.  Cross- species  Induction  and  Enhancement of  Antimicrobial  Activity  Produced by  Epibiotic  Bacteria  from  Marine
Algae and Invertebrates, after Exposure  to  Terrestrial  Bacteria, Letter. Appl. Microbiol ., 27:142-146. Orozova,  P.,  V.  Chikova,  R.  Nenova,  M. Konovska,  and  H.  Najdenski.  2008.
Antibiotic  Resistance  of  Potentially Pathogenic Aeromonas Strains. Trakia Journal of Sciences , 6:71-77. Purwoko, T. 2007.  Fisiologi Mikroba (1st Ed.). Bumi Aksara, Jakarta.
Schmitz,  F.J.  1994.  Cytotoxic  compounds
from sponges and associated microfauna. In :, Van Soest, R.W.M., T.M.G. Van Kempen, J.C. Braekman  (Eds.).  Sponges  in  Time and  Space.  Biology  Chemistry Paleontology.  Proceedings  of  the  4 th
International Porifera Congress. Amsterdam,  19-23  Apr  1993,  A.A
Balkema, Rotterdam.
Tinaz,  G.B.  2003.  Quorum  Sensing  in Gram-Negative  Bacteria. Turk.  J. Biol. , 27:85-93.
Valgas,  C.  S.M.  Souza,  E.F.A.  Smania, and  A.  Smania.  2007.  Screening Methods to Determine Antibacterial  Activity  of  Natural Products. Braz.  J.  Microbiol. ,
38:369-380.
Woo, J.H., E. Kitamura, H. Myouga, and
Y.  Kamei.  2002.  An  Antifungal Protein from the Marine Bacterium Streptomyces sp.  Strain  AP77  is Specific  for Pythium  porphyrae ,  a Causative  Agent  of  Red  Rot Disease  in Porphyra spp.. Appl. Environ. Microbiol ., 68:2666-2675.
Zheng, L., H. Chen, X. Han, W. Lin, and
X. Yan. 2005. Antimicrobial
screening  and  active  compound isolation  from  marine  Bacterium NJ6-3-1 Associated with the
Sponge Hymeniacidon  parleve. J. Microbiol. Biotech., 21:201-206.