## ANALISIS AKTIVITAS ANTIOKSIDAN PRODUK SIRUP
BUAH MENGKUDU (Morinda citrifolia L.)
DENGAN METODE DPPH

## Rahmawati, A. Muflihunna, LaOde Muhammad Sarif
Fakultas  Farmasi Universitas Muslim Indonesia Makassar Email : rama.umifarmasi@gmail.com

## ABSTRACT
This research is about antioxidant activity analysis of Noni products syrup (Morinda citrifolia L.) using DPPH (1,1- diphenyl-2-picrylhydrazil) method. The research aimed to analysis of antioxidant activity of two different brands of Noni  products  syrup using  spectrophotometer  UV-Vis.  This  analysis  using  quarcetin  as  standard  to  determine antioxidant activity and DPPH reagen as radical sources. Quarcetin and Noni products syrup are made five series concentrations in metanol. One ml of each concentration added 4 ml DPPH 50 µM and then added metanol up to 10 ml  in  flask.  Then  incubated  for  30  minutes  at  room  temperature  and  protected  from  light.  Measurement  of absorbance using spectrophotometer  UV-Vis  at  514  nm.  The  IC 50 values  were 25.7  µg/mL for  brand  A,  and  9.839 µg/mL for brand B.
Keywords: Antioxidant, Noni products syrup, DPPH, spectrophotometer UV-Vis.

## I. PENDAHULUAN

## A. Latar Belakang
Di  era  globalisasi, kehidupan  manusia semakin  dimudahkan  dengan  adanya  teknologi, namun tanpa  disadari, perkembangan  teknologi berbanding  lurus  dengan  perkembangan  penyakit. Hal ini  disebabkan  pola  hidup  masyarakat  yang sering kali membawa dampak negatif pada kebiasaan hidup yang  tidak  sehat,  seperti  mengkonsumsi makanan instant,  merokok  dan  mengkonsumsi minuman beralkohol alkohol. Hal  itu    memicu terbentuknya radikal bebas di dalam tubuh manusia.
Radikal  bebas  merupakan  salah  satu  bentuk senyawa reaktif, yang secara umum diketahui sebagai senyawa  yang  memiliki  elektron  yang  tidak berpasangan  di  kulit  terluarnya  (Winarsi,  2007). Adanya  radikal  bebas  di  dalam  tubuh  manusia  dapat menimbulkan berbagai penyakit degenerative (Prabowo, 2009; Salamah, dkk., 2008). Radikal bebas dapat  ditangkal  atau  diredam  dengan  pemberian antioksidan  atau  dengan  mengkonsumsi  antioksidan (Salimi, 2005; Halliwell, 2007; Kubola &
Siriamornpun, 2008; Mohsen & Ammar, 2009).
Antioksidan  merupakan  senyawa  pemberi elektron  (elektron  donor)  atau  reduktan.Antioksida juga  merupakan  senyawa  yang  dapat  menghambat reaksi  oksidasi  dengan  mengikat  radikal  bebas  dan molekul yang sangat reaktif. Akibatnya kerusakan sel akan dihambat (Sunardi, 2007).
Mengkudu  merupakan  salah  satu  tanaman tropika  yang  cukup  banyak  ditemukan  diberbagai tempat dan sangat  berpotensi  sebagai  antioksidan alami, karena mengandung flavonoid,  triterpen,
triterpenoid, dan saponin (Winarsi, 2007; Wang, dkk., 2002).
Antioksidan  dibagi  menjadi  empat  tipe berdasarkan  fungsinya  (Siagian,  2002; Hariyatmi, 2004), yaitu:
1. Tipe pemutus rantai reaksi pembentuk radikal bebas  dengan  carmenyumbangkan  atom  H, contohnya vitamin E.
2. Tipe pereduksi yang mampu mentransfer atom H atau oksigen dan bersifat pemulung, contohnya vitamin C.
3. Tipe  pengikat  logam  yang mampu  mengikat  zat prooksidan  (Fe 2+ dan Cu 2+ ),  contohnya  flavonoid, asam sitrat dan EDTA.
4. Antioksidan selular yang mampu mendekomposisi  hidrogen  peroksida menjadi bentuk  stabil,  contohnya  pada  manusia  dikenal superoksida dismutase,  katalase  dan  glitation peroksidase.
Hasil penelitian menyebutkan bahwa Morinda  citrifolia mengandung  komponen  bioaktif seperti  flavonoid,  triterpen,  triterpenoid,  dan  saponin dalam  jumlah  yang  signifikan.  Senyawa  flavonoid yang terkandung dalam mengkudu bermanfaat sebagai antioksidan (Nayak, dkk.,2010).
Buah mengkudu mengandung  alkaloid, antrakuinon,  morindin,  asam  malat,  asam  sitrat,  gum, asam  kaprik,  dan  glukosa  (ASEAN  Countries,  1993; Depkes  RI,  1991). Glukosa  berguna  sebagai  nutrisi, baik  bagi  pertumbuhan  tanaman  mengkudu  sendiri, maupun bagi makhluk hidup lain yang mengkomsumsi buahnya.  Asam  kaprik  menghasilkan  bau  yang  tidak sedap  pada  buah  mengkudu  yang  telah  matang. Buah
mengkudu  di  Indonesia  digunakan  untuk  mengobati beri-beri,  asma,  diabetes,  batuk, mengurangi
gangguan  menstruasi  dan  mengobati  beberapa masalah
pernapasan
(Lemmens dan
Banyupraphatsara,  2003).  Manfaat  lain  dari  buah mengkudu  ialah  memperlancar  pengeluaran  urin, membersihkan luka, dan menyembuhkan pembengkakan limpa (Heyne,1987).

## II. METODE PENELITIAN
A. Alat dan bahan
Alat-alat gelas (Pyrex), mikropipet, seperangkat alat sentrifuge, spektrofotometri UV-Vis, timbangan analitik.
Aluminium  foil,  DPPH (1,1-diphenyl-2- picrylhydrazil), kuarsetin, methanol p.a, dan produk sirup buah Mengkudu.

## B. Prosedur penelitian

## 1. Pengambilan dan pengolahan sampel
Sampel  yang  akan  diuji  dalam  penelitian  ini berupa produk  sirup  buah  mengkudu (Morinda citrifolia L.)yang  beredar  di  Kota  Makassar  Provinsi Sulawesi  Selatan.  Sampel  sirup  buah  mengkudu (Morinda  citrifolia L. )didinginkan pada suhu 3-5 0 C selama  24  jam  dan  disentrifugasi  pada  3.000  rpm selama  15  menit  dan  dipisahkan  supernatannya. Supernatant yang diperoleh digunakan sebagai larutan sampel.

## 2. Pembuatan Larutan DPPH
Ditimbang  sebanyak 1,97 mgDPPH  dan dilarutkan dengan  metanol p.a didalam  labu  sampai 100 mLsehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 50 µM (Molyneux, 2004).

## 3. Analisis Kualitatif
Dipipet  sebanyak 1 mL  larutan sampel  ke dalam  tabung  reaksi, kemudian  tambahkan 4 mL larutan  DPPH  50  µM sedikit  demi  sedikit  dan  amati perubahan  warnanya.  Adanya  antioksidan  ditandai dengan  warna  yang  terbentuk  dari  masing-masing sampel uji adalah warna kuning (Molyneux, 2004).
4. Analisis Kuantitatif
a. Pengukuran
Aktivitas
Antioksidan

## Pembanding Kuersetin
Larutan stok dibuat dengan konsentrasi 1000 ppm. Dibuat  dengan  cara  menimbang  10  mg kuarsetin dan  dilarutkan  dengan metanol  absolut sambil  diaduk  dan  dihomogenkan  lalu  cukupkan volumenya  hingga  10  mL.  Selanjutnya  dilakukan pengenceran,  dipipet  1,0  mL  kemudian    dicukupkan dengan metanolabsolut sampai  volume  akhir  10  mL (100  ppm).  Dari  kosentrasi  ini  (100  ppm)  kemudian dilakukan  pengenceran  lagi,  dipipet  1,0  mL kemudian  dilakukan  pengenceran  hingga  10  mL  (10 ppm).  Selanjutnya  dilakukan  pengenceran  lagi
dengan membuat 5 seri konsentrasi (0,02; 0,04; 0,06; 0,08 dan 0,1 ppm).
Untuk  penentuan  aktivitas  antioksidan, masing-masing  konsentrasi  larutan  dipipet  sebanyak 1 mL  dimasukan  kedalam tabung  reaksi,  kemudian tambahkan 4 mL  larutan  DPPH  50  µM. Campuran dihomogenkan  dan  dibiarkan  selama  30  menit ditempat gelap, serapan diukur dengan spektrofotometer UV - Vis pada panjang  gelombang 514 nm.

## b. Penentuan Aktivitas Antioksidan Produk sirup buah Mengkudu
Larutan  stok  dibuat  dengan  menimbang sampel sirup buah  mengkudu (Morinda citrifolia L.) 25 mg  dan  dilarutkan  dengan metanol  absolut, dihomogenkan lalu dicukupkan volumenya hingga 25 mL.  Selanjutnya  dilakukan  pengenceran lagi  dengan membuat  5  seri  konsentrasi  larutan  (100,  150,  200, 250 dan 300 ppm).
Untuk penentuan aktivitas antioksidan masing-masing  konsentrasi  dipipet  sebanyak 1 mL larutan  sampel  dengan  pipet  mikrodan  masukan  ke dalam tabung  reaksi,  kemudian  tambahkan 4 mL larutan DPPH 50 µM. Campuran dihomogenkan dan dibiarkan  selama  30  menit  ditempat  gelap,  serapan diukur  dengan  spektrofotometer  UV - Vis  pada panjang gelombang 514 nm.
Aktivitas  antioksidan  sampel  ditentukan  oleh besarnya  hambatan  serapan radikal  DPPH  melalui perhitungan  persentase (%) inhibisi  serapan  DPPH dengan menggunakan rumus (Molyneux, 2004) :
% Inhibisi= (Absorban blanko – Absorban sampel)
Absorban blanko ×100%

## Keterangan
Absorban blanko : Serapan  radikal  DPPH  50  µM pada panjang gelombang maksimal (514 nm).
Absorban sampel : Serapan  sampel  dalam  radikal DPPH50 µM pada panjang gelombang maksimal (514 nm).
Nilai IC 50 masing-masing konsentrasi sampel  dihitung  dengan  menggunakan  rumus persamaan regresi linier. Konsentrasi sampel sebagai sumbu  x  dan  %  inhibisi  sebagai  sumbu  y.  Dari persamaan: Y = a + bX
Untuk  penentuan  nilai IC 50 dapat dihitung dengan menggunakan rumus: IC 50 = (50-a) b Keterangan : Y = % Inhibisi (50) a = Intercept (perpotongan garis di sumbu Y)
b = Slope (kemiringan)
X = Konsentrasi

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
Tabel 1. Hasil uji kualitatif kandungan antioksidan pada produk sirup buah mengkudu (Morinda citrifolia L.) dengan metode DPPH
Sampel Uji Kualitatif (DPPH 50 µM + sampel) Hasil Pengamatan A Warna kuning (+) B Warna kuning (+)
Keterangan : (+) = kandungan antioksidan
Tabel 2. Hasil uji aktivitas peredam radikal bebas dari kuersetin sebagai pembanding dengan metode DPPH
Absorbansi Blanko DPPH 514 nm (kuarsetin) = 0,560
Tabel 3. Hasil uji aktivitas peredam radikal bebas produk sirup buah mengkudu merk A dan B dengan metode DPPH
Konsentrasi sampel (ppm) Sampel A Sampel B Abs. Rata2 % Inhibisi IC 50 Aktivitas Antioksidan Abs. Rata2 % Inhibisi IC 50 Aktivitas Antioksidan 100 0,320 24,349 25,700 μg/mL Sangat Kuat (IC 50 < 50 μg/mL) 0,287 28,607 9,839 μg/mL Sangat Kuat (IC 50 < 50
μg/mL)
150 0,316
25,295 0,270 32,836 200 0,312 26,241 0,262 34,826 250 0,306 27,659 0,257 36,069 300 0,303 28,369 0,247 38,557
Absorbansi blanko DPPH 514 nm (sampel A) = 0,423 dan (sampel B) = 0,402
Kosentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi IC 50 Aktivitas Antioksidan 0,02 0,323 42,321 2,624 μg/mL Sangat Kuat  (IC 50 < 50 μg/mL) 0,04 0,291 48,036 0,06 0,275 50,893 0,08 0,244 56,428 0,1 0,219 60,893

## B. Pembahasan
Mengkudu  merupakan  suatu  jenis  tanaman yang  merupakan  genus  dari  famili Rubiaceae. Mengkudu telah banyak digunakan untuk pengobatan oleh masyarakat dalam bentuk alami maupun sediaan jadi seperti  sirup  buah  mengkudu  yang  beredar  di pasaran. Buah  mengkudu  banyak  mengandung flavonoid,  triterpenoid,  asam  askorbat  dan zat-zat lain  yang berkhasiat  obat,  sehingga  sangat  baik mencegah berbagai penyakit degeneratif. Berdasarkan kandungan kimia  buah mengkudu  (Morinda citrifoliaL.) antara lain vitamin C dan flavonoid yang merupakan senyawa  yang  dapat  berpotensi  sebagai antioksidan maka perlunya dilakukan analisis aktivitas antioksidan dari sediaan  produk buah mengkudu yang beredar  di  masyarakat    metode  DPPH menggunakan spektrofotometer UV-Vis.
Metode DPPH adalah  metode  yang  dapat digunakan untuk  menentukan  aktivitas  antioksidan dalam  sampel  yang  akan  diujikan  dengan  melihat kemampuannya  dalam  menangkal  radikal  bebas DPPH. Kelebihan metode DPPH ini yaitu metodenya yang sederhana, mudah, cepat, peka, serta memerlukan  sampel dalam  jumalh  kecil. Mudah diterapkan  karena  senyawa  radikal DPPH yang digunakan  bersifat  relatif  stabil  dibanding  metode lainnya. Prinsip dari metode ini adalah adanya donasi atom  hidrogen (H + ) dari  substansi yang  diujikan kepada  radikal  DPPH  menjadi  senyawa  non  radikal difenil  pikril  hidrazin  yang  akan  ditunjukkan  oleh perubahan  warna. Perubahan  warna  yang terjadi adalah perubahan warna dari ungu menjadi kuning, di mana intensitas  perubahan  warna  DPPH  berbanding lurus  dengan  aktivitas  antioksidan  untuk  meredam radikal bebas tersebut.
Pengukuran aktivitas antioksidan menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang  maksimum  514  nm. Pada  penelitian  ini digunakan  pembanding  yaitu senyawa kuarsetin  dan sampel  uji  sirup  buah mengkudu (Morinda  citrifolia L.).  Dimana  untuk kuarsetin dilakukan  pengukuran terhadap 5  seri  konsentrasi  yaitu  0,02;  0,04;  0,06; 0,08  dan  0,1 ppm. Absorban  yang  diperoleh digunakan untuk menghitung % inhibisi menggunakan  rumus  di  atas.  Kemudian  dilakukan regresi  antara  %  inhibisi  dan  konsentrasi  kuarsetin. Hasilnya  diperoleh  kurva  baku  dengan  persamaan  Y = a + bX, di mana Y =  38,05 + 4,553X; R 2 = 0,992. Diperoleh nilai a sebesar 38,05 (intersep) dan nilai b sebesar 4,553 (slope). Selanjutnya dihitung nilai IC 50 menggunakan  rumus  di  atas  dan  diperoleh  nilai sebesar 2,624 μg/mL .
Pengujian  sampel sirup  buah  mengkudu dilakukan  dengan  membuat  5  seri  konsentrasi  yaitu 100, 150, 200, 250 dan  300 ppm, dibuat  3  replikasi.
Lalu  pengujian  dilakukan  seperti  pada  standar kuarsetin.  Untuk  sampel  A,  diperoleh  kurva  regresi, yaitu  Y  =  23,261  +  1,0404X  dan  R 2 =  0,9918. Diperoleh nilai a sebesar 23,261 (intersep) dan nilai b sebesar  1,0404  (slope).  Selanjutnya  dihitung  nilai IC 50 dan diperoleh nilai sebesar 25,700 μg/mL . Untuk sampel B, diperoleh kurva regresi, yaitu Y = 27,239 + 2,3133X  dan  R 2 =  0,955. Diperoleh  nilai  a  sebesar 27,239 (intersep) dan nilai b sebesar 2,3133X (slope). Selanjutnya  dihitung  nilai  IC 50 dan  diperoleh  nilai sebesar 9,839 μg/mL .
Nilai tersebut menunjukkan bahwa sampel A dan  sampel  B  memiliki  aktivitas  antioksidan  sangat kuat, tetapi  lebih  lemah  bila  dibandingkan  dengan senyawa kuersetin.  Sebagaimana  dikatakan  dalam sebuah  penelitian  Phongpaichit  dkk  (2007),  bahwa aktivitas  antioksidan  sangat  kuat  jika  nilai IC 50 <  50 μg/mL, kuat jika nilai IC 50 50- 100 μg/mL, sedang jika IC 50 bernilai  100- 150  μg/mL,  sedangkan  jika  IC 50 bernilai  151 – 200 μg/mL  dikatakan  antioksidannya rendah  dan  jika  IC 50 bernilai  > 200  μg/mL  maka aktivitas antioksidan yang dimiliki sangat rendah.

## IV. KESIMPULAN
Hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa sampel  produk  sirup  buah  Mengkudu  yang  diujikan mengandung dan memiliki aktivitas antioksidan.Dimana  nilai  IC 50 produk  sirup  buah Mengkudu  dari  sampel  A  sebesar25,700 μg/mL  dan sampelB  sebesar 9,839 μg/mL.  Dan  dinyatakan bahwa aktivitas antioksidan kedua sampel sangat kuat karena  masing-masing  memiliki  nilai  IC 50 <  50 μg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
ASEAN,  Countries.,1993.  Morindae  fructus. dalam:
Standart  Of  ASEAN  Herbal  Medicine  (Vol  I, Hal. 294-304). Jakarta: ASEAN Countries.
Halliwell,  B.,  2007.  Dietary  polyphenols:  good,  bad, or indifferent for your health. J. Cardiovascular Research 73:341 – 347.
Hariyatmi.2004.Kemampuan  vitamin  E  sebagai antioksidan  terhadap  radikal bebas pada lanjut usia. MIPA 14(1):52-60.
Heyne,  K.  1987.  Morinda  citrifolia  LINN. dalam  :
Heyne,  K.  Tumbuhan  Berguna  Indonesia  (Jilid III,  hal.  1795-1799).  Jakarta  :  Badan  Litabang Kehutanan.
Kubola,  J.,  Siriamornpun,  S.,2008.  Phenolic  contents and  antioxidant  activities  of  bitter  gourd
(Momordica  charantia L.)  leaf,  stem  and  fruit fraction  extracts  in  vitro. J.Food  Chemistry 110:881 – 890.
Lemmens,  R.H.M.J.,  Bunyapraphatsara,  N.,  2003.
Morinda L. dalam: Lemmens, R.H.J., Bunyapraphatsara,  N.  Plant  Resources  of South-East  Asia  No.  12  (3)  Medicinal  and poisonous  Plants  3  (hal.  302-305).  Bogor:
Prosea foundation.
Mohsen,  S.M.,  Ammar  ASM.  2009.  Total  phenolic contents and antioxidant activity of corn tassel extracts. J.Food Chemistry 112:595 – 598.
Molyneux,  P.,  2004,  The  Use  Of  The  Stable  Free Radical  Diphenyl  Picrylhydrazyl  (DPPH)  For Estimating  Antioxidant  Activity.  New  York  : UJ. Sci. Technol.
Nayak,  B.,  Shivananda,  M.,  Julien  R.,  Isitor,  G.,  dan Adogwa, A., 2010.Hypoglycemic and Hepatoprotektive  Activity  of  Fermented  Fruit Juice  of  Morinda  citrifolia  (Noni)  in  Diabetic Rats.  Evidence-Based  Complementary  and Alternative Medicine, Vol. 2011, No. 875293.
Phongpaichit,  et  al.  2007.Biological  Activities  of Extracts From Endophytic Fungi Isolated From Garcinia  Plants.  Chem  Pharm  Bull    :
Immunology & Medical Mycrobiology.
Prabowo,T.T.,  2009.  Uji  aktivitas  antioksidan  dari keong  matah  merah  (Cerithidea  obtusa) [skripsi].  Bogor:  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu
Kelautan, Institut Pertanian Bogor.
Salamah,  E.,  Ayuningrat,E.,  Purwaningsih,  S.,  2008. Penapisan  awal  komponen  bioaktif  dari  kijing taiwan  (Anadonta  woodiana Lea.)  sebagai senyawa  antioksidan. Buletin  Teknologi  Hasil Perikanan 11(2):119-132.
Salimi,  K.Y.,  2005.  Aktivitas  antioksidan  dan antihiperkolestrolemia ekstrak beta glukan dari Saccharomyces  cerevisiae pada  tikus  putih. [tesis].  Bogor:  Sekolah  Pasca  Sarjana,  Institut
Pertanian Bogor.
Siagian,  A.,  2002.  Bahan  Tambahan  Makanan. Medan: Fakultas KesehatanMasyarakat, Universitas Sumatera Utara.
Sunardi,  K.I.  Uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak belimbing  wuluh (Averrhoa  bilimbi, L.) terhadap 1,1 diphenyl-2- pycrylhidrazil
(DPPH). Makalah Seminar Nasional Teknologi 2007. Yogyakarta, 24 November 2007.
Wang,  M.Y., West,  B.J.,  Jensen,  C.J.,  Nowicki,  D., Chen,  S.,  Palu,  A.K.,  dan  Anderson,  G. 2002.Morinda  citrifolia (Noni):  Aliterature review  and  recent  advances  in  Noni  research, Acta  Pharmacologica  Sinica, 23(13):  1127 – 1141
Winarsi,  H.,  2007.  Antioksidan  Alami  dan Radikal  Bebas;  Potensi  dan  Aplikasi Dalam Kesehatan.Kansius.