Accredited by Ministry of Education, Culture,                                    DOI: https://doi.org/10.35799/jis.v22i2.42332 Research and Technology No: 105/E/KPT/2022        Available online at https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jis

## Aktivitas Antibakteri Metabolit Sekunder yang Diisolasi dari Daun Mangrove Sonneratia alba
Verly Dotulong 1) , Lena J. Damongilala 1) , Djuhria Wonggo 1) , Lita A.D.Y. Montolalu 1) 1 ) Program Studi Teknologi Hasil Perikanan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Sam Ratulangi Manado, Indonesia Jl.Kampus Unsrat Bahu Manado 95115 Email : verly_dotulong@unsrat.ac.id

## ABSTRAK
Mangrove  termasuk Sonneratia  alba adalah  tumbuhan  yang  tumbuh  pada  daerah  pasang  surut dengan  tekanan  lingkungan  yang  cukup  besar,  keadaan  ini  menyebabkan  tumbuhan  mangrove menyintesis metabolit sekunder yang mempunyai bioaktivitas tertentu untuk melindungi diri dari perusakan. Tujuan dari penelitian ini adalah mengisolasi metabolit sekunder antibakteri  dari daun mangrove S.alba.. Metode yang digunakan adalah mengisolasi metabolit sekunder pada fraksi etil asetat  menggunakan kromatografi  kolom dan  identifikasi  hasil  isolasi  dengan kromatografi  lapis tipis  hingga  didapatkan  isolat  murni.  Isolat  murni  dikarakterisasi  strukturnya  menggunakan spektroskopi  HNMR,  IR  dan  LC-MS.  Isolat  yang  dihasilkan  berupa  minyak  yang  larut  dalam metanol  mempunyai  rumus  molekul  C 24 H 38 O 4 dengan  nama  Di(2-etilhexil)fthalat.  Aktivitas antibakteri dari senyawa ini   sama dengan aktivitas antibakteri amoxicilin sebagai kontrol positif yaitu diameter zona hambat sebesar 7 mm pada konsentrasi sampel 0,21%.
Kata kunci: Aktivitas antibakteri; metabolit sekunder; Sonneratia alba

## Antibacterial Activity of Secondary Metabolits Isolated from Mangrove Leaves

## Sonneratia alba

## ABSTRACT
Mangroves Sonneratia  alb is  a  plants  that  grows  in  tidal  areas  with  considerable  environmental pressure.  This  condition  causes  the  plant  to  synthesize  secondary  metabolites  that  have  certain bioactivity to protect it self from destruction. The purpose of this study was to isolate antibacterial secondary  metabolites from  the  mangrove  leaves  of S.alba .  The  method  applied  was  to  isolate secondary metabolites from the ethyl setate fraction using column chromatography and identified the  results  of  isolation  with  thin  layer  chromatography  until  a  pure  isolate  was  obtained.  Pure isolates were characterized in structure using HNMR, IR and LC-MS spectroscopy. The resulting isolate in the form of methanol-soluble oil had the molecular formula C 24 H 38 O 4 with the name Di(2- ethylhexyl)phthalate. The antibacterial activity of this compound was the same as the antibacterial activity of amoxicillin as a positive control, namely the diameter of the inhibition zone was 7 mm at a sample concentration of 0,21%.
Keywords: antibacterial activity; secondary metabolites; Sonneratia alba
(Article History:  Received 21-07-2022; Accepted 27-09-2022; Published 29-09-2022)

## PENDAHULUAN
Mangrove, Sonneratia  alba adalah tumbuhan  yang  mampu  tumbuh  pada  daerah pasang surut dengan tekanan lingkungan yang cukup besar antara lain salinitas,  radiasi sinar matahari,  kandungan  bahan  organik  dan mineral  yang  tinggi  (Noor et  al. ,  2012). Keadaan ini menyebabkan tumbuhan mangrove S.alba menyintesis  metabolit sekunder yang mempunyai bioaktivitas tertentu untuk melindungi diri dari perusakan (Herawati,  2011)). Hal  ini  ditunjukkan  oleh
kebiasaan masyarakat pesisir yang
menggunakan ekstrak  bahan  mentah tumbuhan  mangrove  untuk  keperluan  obat- obatan  secara  alamiah (Darminto  &  Dini,
2012); (Nurmalasari et al. , 2016). Mangrove S.alba adalah salah satu jenis mangrove  yang  dominan  tumbuh  di  daerah pesisir  pulau  Bunaken    Sulawesi  Utara (Schaduw,  2016).  Komponen  metabolit sekunder  pada  ekstrak  tumbuhan  mangrove S.alba yaitu  fenolik,  flavonoid,  triterpenoid, tanin, alkaloid, saponin (Cahyadi et al., 2018); (Dotulong, et al ., 2020).   Adanya komponen
metabolit  sekunder  ini    membuat  tumbuhan mangrove    mempunyai    bioaktivitas  antara lain  sebagai  antioksidan  (Wonggo et  al. , 2017);  (Dotulong et  al .,  2018),  antikanker (Latief, Nelson, Amanda, Tarigan, & Aisyah, 2020)),  antidiabetes  (Adhikary et  al .,  2018);
(Usman et al ., 2019)  dan antibakteri (Karim, et al ., 2020) . Beberapa isolat yang diisolasi dari  tumbuhan  mangrove  mempunyai  fungsi sebagai  bioaktif  antara  lain:  β-sitosterol danstigmasteol  diisolasi  dari  Kulit  Batang Sonneratia  ovata  Backer mempunyai aktivitas  sebagai  antioksidan  (Karim, et  al .,
2020); (Nurmalasari et al ., 2016), lupan-3b-ol dan  lupeol  yang  disolasi  dari  kulit  batang Sonneratia  alba (Lythraceae)  mempunyai aktivitas  sebagai  antibakteri (Harizon et  al ., 2014)),  Lup-20(29)-en-3 β -ol  dari  ekstrak metanol  daun  mangrove S.  alba berfungsi sebagai  antibakteri  (Musa et  al .,  2018),
Xyloccensin-I  yang  disolasi  dari  ekstrak etanol mangrove Xylocarpus
granatum mempunyai  aktivitas  antidiabetes (Das, et al. , 2019), dan squalen dari mangrove Rhizophora  mucronata mempunyai  aktivitas antikanker  lambung  (Palaniayandi et  al. , 2018). Tujuan penelitian ini yaitu mengisolasi metabolit sekunder dari daun mangrove S.alba dan  menguji  aktivitas  antibakteri  isolat . Beberapa penelitian yang melaporkan tentang isolasi  phthalate  dari  tumbuhan  antara  lain: Bis(-2-etilheksil)ftalat  dari  ekstrak n -heksana batang  brotowali  (Muharni et  al. ,  2015),  di- butyl  phthalate  disolasi  dari  tumbuhan Begonia  malabarica (Shobi  &  Viswathan,
2018).  Daun  mangrove S.alba berpotensi sebagai antibakteri tetapi selama ini belum ada laporan tentang isolasi senyawa bioaktif  dari daun  mangrove S.alba, oleh  karena  itu penelitian tentang isolasi senyawa antibakteri dari  daun  mangrove S.alba ini  penting dilakukan.

## METODE PENELITIAN

## Pengumpulan Sampel dan Determinasi
Pengumpulan  sampel  daun  muda mangrove Sonneratia  alba dilakukan  pada Januari 2020 dari pesisir Desa Wori  Sulawesi Utara
Indonesia. Identifikasi sampel dilakukan di Laboratorium Taksonomi Tumbuhan Jurusan Biologi Fakultas
Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Padjadjaran, Bandung, Indonesia.
Penelitian  ini  dilaksanakan  dari  Januari  – November 2020.
Preparasi  Sampel,  Ekstraksi,  Isolasi  dan Karakterisasi senyawa (Dotulong,  2014) ) Sampel  segar  yang  telah  dibersihkan dikeringkan  dibawah  sinar  matahari,  setelah kering  diblender  menjadi  serbuk,  diekstrak dengan  metanol    ( analytical  grade  -  Merck Millipore-Germany),  ekstrak  cair  dipekatkan dengan rotary vakum  evaporator (Buchi, Zurich,  Switzerland))  hingga  menghasilkan ekstrak kering. Pada ekstrak kering dilakukan fraksinasi  berkesinambungan  dengan  air-n- heksan (analytical grade - Merck  Millipore - Germany) dan air-etilasetat (analytical grade - Merck  Millipore - Germany). Hasil fraksinasi dipisahkan  dan  dipekatkan  dengan rotary vakum evaporator sehingga dihasilkan ekstrak etilasetat.
Tahap  selanjutnya  adalah  isolasi  pada ekstrak etilasetat menggunakan Kromatografi Kolom  (KK)  dengan  fasa  diam  silika  gel 60F 254 dan  fasa  gerak n-heksana-etilasetat serta  fasa  diam  silica  gel  60F 254 -RP-18  dan fasa  gerak  metanol,  dan  deteksi  hasil pemisahan komponen menggunakan Kromatografi  Lapis  Tipis  dengan  fasa  diam dan fasa gerak yang sama, hingga didapatkan isolat  murni,    bagan  prosedur  isolasi  dapat dilihat  pada  Gambar  1.  Isolat  murni dikatrakterisasi  strukturnya  menggunakan spektroskopi  Nuclear  magnetic  resonance (NMR)  merk  JEOL  tipe  ECA  500  dengan medan  magnet  500  MHz  (Akishima,  Tokyo Japan)    untuk  analisis 1 H-NMR,  FTIR-8400 Shimadzu  untuk  analisis  spektrum  IR    dan UPLC  TQD  MS/MS  H-Class  Waters  untuk analisis spektrum MS.

## Pengujian Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan mengikuti prosedur Stephen (Stephen, 2005). Kultur bakteri Escherichia coli ATCC 25922 dan Staphylococcus  aureus ATCC  6538 dengan  konsentrasi  tertentu.  diambil  dengan menggunakan    ujung  lidi  yang  dibungkus dengan  kapas,  selanjutnya  bakteri  tersebut dioleskan pada lapisan agar secara merata dan dibiarkan  beberapa  saat  agar  bakteri  tersebut berada    pada  lempeng  agar,.  selanjutnya dikeluarkan  sampel  agar  yang  meresap  pada disk  paper,  disimpan  pada  lapisan  atas  agar yang telah dioleskan bakteri, diinkubasi pada suhu  37°C  selama  sehari.    Langkah  terakhir
adalah melakukan pengamatan dengan mengukur zona inhibisi yang terbentuk.
Gambar 1. Bagan  prosedur  isolasi

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pemisahan dan Pemurnian
Ekstrak  etilasetat  sebanyak  30  gram ditempatkan pada kolom kromatografi dengan perbandingan ekstrak dengan silika gel 1 : 20, dilakukan  elusi  secara  bergradien  10% menggunakan eluen n -heksana-etilasetat diperoleh  11  fraksi,    selanjutnya  fraksi  no  3 sebanyak  adalah  4,6  gram,  dipisahkan menggunakan fasa diam Silika Gel 60F 254 dan fasa  gerak  n-heksana-etilasetat  9,5:0,5  secara isokratik  dihasilkan  175  sub  fraksi.  Deteksi hasil  pemisahan  menggunakan  kromatografi lapis (KLT) silica gel 60F 254 dengan eluen n- heksana-etilasetat  9,5:0,5    ditemukan  fraksi 160-175  mempunyai  nilai  Rf  yang  sama setelah  KLT  dilihat  dibawah  sinar  ultraviolet pada panjang gelombang 254 dan 365 nm serta menggunakan  reagen  penampak  noda  yaitu H 2 SO 4 dalam  etanol    (Gambar  2)  sehingga fraksi-fraksi ini digabungkan untuk dilakukan isolasi tahap ke 3.
Isolasi tahap ke-3  menggunakan  massa sampel  sebesar  0,33  g  dengan    kromatografi kolom  secara  isokratik    fasa  diam  Silika  Gel 60F 254 Rp-18  dan  fasa  gerak  metanol  air  9:1, dihasilkan  46 sub fraksi. Selanjutnya  Setelah dianalisis  dengan 2 jenis KLT yaitu : 1. Silika gel 60F 254 dan fasa gerak n-heksana-etilasetat 9,5:0,5 (Gambar 3a); 2.  Silica gek 60F 254 RP- 18,  fasa  gerak  metanol  100%  (Gambar  3b) ditemukan  isolat  murni  pada  sub  fraksi  no  5 berbentuk  minyak  dengan  massa  124  mg. Isolat  memiliki  nilai  Rf  0,6  pada  KLT  Silika gel  60F 254 dengan  fasa  gerak n -heksana- etilasetat  (9,5:0,5)    dan  Rf  0,4      pada  KLT Silika  gel  60F 254 –RP-18  dengan  fasa    gerak metanol.
- dipisahkan dengan kromatografi kolom
silica isokratik n -heksana-etil asetat (9:1)
Ekstrak etil asetat  30 gram
- dipisahkan dengan kromatografi kolom silica gradient 10% n -heksana-etil asetat
Fraksi 1-2 Fraksi 3
Fraksi 4-10 Fraksi 11 F3-160 s.d F3-175 - dipisahkan dengan kromatografi kolom
ODS isokratik metanol-H 2 O(9:1)
Isolat (274,7 mg)
Gambar 2. Analisis KLT fraksi 160-175 menggunakan pelarut  n-heksana-etilasetat 9,5:0.5

## Karakterisasi Isolat
Berdasarkan  spektrum  infra  merah (Gambar  4),  isolat memiliki  gugus  CH sp 3 , karbonil (C=O), C=C aromatik, dan gugus eter (C-O).  Serapan  pada  bilangan  gelombang 2943,3  cm -1 menunjukkan  stretching  ikatan tunggal  C-H  sedangkan  gugus  karbonil terlihat pada serapan 1724,3 cm -1 . Selanjutnya,  serapan  1462,0  –  1592,1  cm -1 merupakan serapan khas untuk ikatan karbon- karbon  aromatik.  Serapan  khas  yang  lainnya pada  1132,2  dan  1274,9    adalah  ciri  khas gugus eter.
Isolat diukur  menggunakan  spektros- kopi  NMR  ( nuclear  magnetic  resonance ) untuk mengetahui jumlah, jenis dan lingkungan  proton  dan  untuk  mengetahui
jumlah,  jenis  serta  pemecahan  sinyal  karbon yang  tergantung  dari  jumlah  proton  yang terikat  (metin,  metilen,  metil  dan  karbon kuarterner).    Data  spektrum 1 H-NMR  pada Gambar  5  ,  memperlihatkan  adanya  6  sinyal proton  yang  terdiri  dari  dua  sinyal  proton ikatan rangkap ( sp 2 ) dan yang lainnya adalah proton sp 3 .  Proton sp 2 ditunjukkan  dengan jelas pada Gambar 6.
Ada  dua  sinyal  pada  pergeseran  kimia 7,69  dan  7,59  ppm  dengan  nilai  penjodohan yang  sama  yaitu  3,1  dan  8,8  Hz.  Hal  ini menunjukkan  keduanya  membentuk  posisi meta dan orto. Selanjutnya satu sinyal proton pada  pergeseran  4,17-4,19  ppm  merupakan hidrogen yang terikat pada karbon teroksigenasi,  kemudian  dua  sinyal  yang
Gambar 3a. Analisis KLT fraksi 5,6,12 dan 13 silika G 60 F254 dengan pelarut Heksan-Etil asetat (9,5:0,5)
Gambar 3b. Analisis KLT fraksi 5,6,12 dan
13 silika G 60 Rp-18 F 254S dengan pelarut
Metanol 100%
bertumpuk  pada  rentang  1,64-1,66  dan  1,30- 1,32  adalah  sinyal  metilen  yang  membentuk rantai  hidrokarbon  jenuh  (Gambar  7),  sinyal
yang  terakhir  ini  adalah  sinyal  metil  dengan multiplisitas triplet yang menunjukkan adanya korelasi dengan metilen ( C H 3 -CH 2 -).
Gambar 4. Spektrum IR Isolat (dalam plat KBr)
Gambar 5. Spektrum 1 H-NMR isolat (125 MHz dalam metanol-D4)
C- H sp 3 C=O
C=C
C-O
Gambar 6. Spektrum 1 H-NMR isolat perbesaran ke-1 (500 MHz dalam metanol-D4)
Gambar 7. Spektrum 1 H-NMR isolat perbesaran ke-2 (500 MHz dalam metanol-D4)
Data  spektrum 1 H-NMR  isolat  yang dihasilkan  diduga  adalah  senyawa  Di(2- etilhexil)ftalat  (DEHP)  karena  mempunyai nilai pergeseran kimia yang sama dengan nilai pergeseran kimia pada hasil penelitian (Garg, Bihst,  &  Ling,  2014),  data  ini  ditampilkan pada  Tabel  1.  Pada  Tabel  ini  dapat  terlihat bahwa isolat memiliki struktur seperti DEHP,
hanya  saja jumlah proton yang tampak pada spektrum adalah jumlah proton pada perbandingan  terkecilnya  karena  senyawa DEHP  ini  adalah  senyawa  simetris  sehingga setiap  sinyal  proton  yang  muncul  pada kenyataannya adalah dua kali lipat dari jumlah proton yang tampil pada spektrum.
Tabel 1. Data pergeseran kimia 1 H-NMR isolat  dan DEHP
No  H (Int., mult., J=Hz) 500 MHz (ppm) Isolat DEHP (Di(2-etilhexil) ftalat) * 1 7,69 (dd, 1H, J = 8,8, 3,1 Hz), 7,7 (dd, 2H, J = 8,8, 3,1 Hz), 2 7,59 (dd, 1H, J = 8,8, 3,1 Hz) 7,5 (dd, 2H, J = 8,8, 3,1 Hz) 3 4,17-4,19 (t, 2H, -O-CH2) 4,21-4,23 (t, 4H, -O-CH2) 4 1,64-1,66 (q, 1H, -CH2) 1,61-1,65 (m, 2H, -CH) 5 1,30-1,32 (m, 8H, -CH2) 1,23-1,32 (m, 16H, -CH2) 6 0,90 (t, 6H, -CH3) 0,85 (t, 6H, -CH 3) 0,80 (t, 6H, -CH3) *Sumber: (Garg, Bihst, & Ling, 2014)
Isolat    berupa  minyak  yang  larut  dalam metanol.  Dengan  mengacu  pada  data  NMR yang  telah  diuraikan,  didapat  dugaan  strukur dari  isolat  yang  ditunjukkan  pada  Gambar  8.
Karakterisasi  selanjutnya  adalah  analisis spektroskopi  massa.  Berdasarkan  spektrum LC-MS,  puncak  pada  waktu  retensi  9.86 merupakan Di(2-etilhexil)fthalat (Gambar 9).
O O O O
Gambar 8. Dugaan struktur isolate
Gambar 10. Spektrum massa isolat
Pada  spektrum  massa  lanjutannya (Gambar 10), diketahui bahwa isolat memiliki puncak  391  yang  berarti  massa  molekul relatifnya  adalah  390  karena  spectrum  masa ini ESI+ (ditambah satu elektron sehingga Mr dalam  spectrum  bertambah  1).  Kerangka struktur yang didapat dan data masa molekul
relatif pada spektrum masa sangat mendukung bawa senyawa C 24 H 38 O 4 memiliki Mr 390. Hal ini sesuai dengan dugaan struktur bahwa isolat adalah  Di(2-etilhexil)ftalat  rumus  molekul C24O4H38.    Senyawa  serupa  telah    diisolasi dari  ekstrak  etilasetat  jamur  endofitik tumbuhan  brotowali    ( Tinosporacrispa L)
Gambar 9. Spektrum massa (LC-MS) Isolat
(Elfita, Munawar, & Wahyuni, 2014) dan juga dari  ekstrak n -heksana  batang  brotowali ( Tinosporacrispa L) berbentuk    minyak berwarna  kuning  setelah  dianalisis  dengan KLT  menggunakan  eluen n -heksana  : etilasetat  9,5  :  1,5  diduga  adalah  bis-(2- etilheksil)ftalat  (Muharni,  Elfita,  &  Masyita, 2015).

## Aktivitas  Antibakteri Isolat
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri isolat  yaitu  Di(2-etilhexil)fthalat    dengan menggunakan bakteri uji Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus. Uji  ini  dilakukan untuk mengetahui daya hambat    (mili meter zona  hambat)  isolat  terhadap  pertumbuhan bakteri   dengan menggunakan kontrol positif Amoxilin.  Data  hasil  pengujian  antibakteri dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Hasil  analisis menunjukkan  bahwa  isolat  yaitu  Di(2- etilhexil)fthalat    pada  konsentrasi  0.21% mampu  menghambat    pertumbuhan    bakteri S.aureus dengan  diameter  zona  hambat sebesar  7  mm,  diameter  zona  hambat  ini tergolong kuat karena sama besar dengan daya
hambat  amoxilin  sebagai  kontrol  positif, sebaliknya isolat menunjukkan tidak mempunyai kemampuan menghambat pertumbuhan bakteri E.coli . Hal ini menunjukkan    bahwa  bakteri  gram  positif ( S.aureus )  lebih  sensitif  terhadap  isolat daripada  kelompok  bakteri  gram  negatif. Penelitian  sebelumnya  melaporkan  bawa senyawa golongan ftalat yaitu di-butyl fthalat yang  diisolasi  dari  tumbuhan Begonia malabarica mempunyai  kemampuan  untuk menghambat  bakteri  genus Staphylococcus yaitu  daya  hambat  terhadap  bakteri S. epidermidis, S. pneumonia sebesar 9 mm pada konsentrasi  sampel  100  mg/ml  (Shobi  & Viswathan,  2018). Menurut  mekanisme kerjanya  maka  bioaktif  antibakteri  dapat bekerja  dengan  beberapa    cara,  yaitu  sebagai penghambat pertumbuhan dinding sel, pengubah  permeabilitas  membrane  sel  atau penghambat  transpor  aktif  dalam  membran sel, penghambat sintesis protein, dan antibakteri penghambat sintesis  asam nukleat sel (Damongilala et al. , 2021).
Tabel  2. Aktivitas  antibakteri  isolat  yaitu  Di(2-etilhexil)fthalate  terhadap  bakteri E.coli  dan S.aureus
Jenis Sampel Diameter zona hambat E.coli (mm) S. aureus (mm) Isolat  0.21% - 7 Amoxilin  0,21% 5 7

## KESIMPULAN
Metabolit  sekunder  yang  diisolasi  dari ekstrak  etilasetat  daun  mangrove Sonneratia alba menggunakan  kromatografi  kolom  dan kromatografi lapis tipis berbentuk minyak dan setelah dikarakterisasi dengan spektrofotomoter  H-NMR,  IR  dan  LC-MS adalah senyawa Di(2-etilhexil)ftalat mempunyai rumus molekul C24O4H38. Di(2- etilhexil)ftalat mempunyai
aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri S.aureus sama dengan aktivitas antibakteri amoxilin sebagai kontrol  positif  yaitu  diameter  zona  hambat sebesar 7 mm pada konsentrasi sampel 0.21%.

## DAFTAR PUSTAKA
Adhikary, A., Ray, M., Das, A.K., & Sur, T. K.  2018.  Antidiabetic  and  Antioxidant Activity  of Rhyzophora  mucronata Leaves  (Indian  Sundarban  Mangrove): An  in  Vitro  and  In  Vivo  Study. International  Quarterly  Journal  of Research , 37(1): 76-81.
Cahyadi,  J.,  Satriani,  G.I.,  Gusman,  E.,  & Sabri. 2018. Skrining Fitokimia Ekstrak Buah  mangrove  ( Sonneratia  alba ) Sebagai  Bioenrichment  Pakan  alami Artemia  Salina. Phytochemical  Jurnal Borneo Saintek , 1(3): 33-39. Damongilala, L.J., Losung, F., & Dotulong, V. 2021.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Rumput  Laut Eucheuma  spinosum Segar  dari  Perairan  Pulau  Nain Sulawesi  Utara. Jurnal  Ilmiah  Sains , 21(1): 91-95.
Darminto,  A.,  &  Dini,  I.  2012.  Isolasi Senyawa  Metabolit  Sekunder  Utama Ekstrak Etanol Kulit Batang Tumbuhan Mangrove  ( Avicennia spp). Jurnal Sainsmart , 1(1): 61-67.
Das,  S.K.,  Samantaray,  D.,  Sahoo,  S.K., Pradhan,  S.K.,  Samanta,  Samanta,  L.,
2019.  Bioactivity  Guidet  Isolation  of Antidiabetic and Antioxidant Compount from Xylocarpus granatum J Koenic bark. Biotech , 9(5): 1-9. Dotulong,  A.R.,  Dotulong,  V.,  Wonggo,  D., Montolalu,  L.A.,  Harikedua,  S.D., Mentang, F. 2020. Metabolit Sekunder Ekstrak  air  Mendidih  Daun  Mangrove Sonneratia  alba . Media  Teknologi Hasil Perikanan , 8(2): 66-69.
Dotulong,  V.  2014.  Aktifitas  Antioksidan Alga  Laut  Caulerpa  sertularoides, Laurencia  tronoi,  Padina  australis , Isolasi  dan  Elusidasi  Senyawa  Aktif pada  Fraksi n- Heksana Laurencia tronoi. Disertasi. Universitas Brawijaya, Program Studi Ilmu Pertanian. Universitas Brawijaya, Malang. Dotulong,  V.,  Wonggo,  D.,  &  Montolalu,  L. A. 2018. Phytochemical Content, Total
Phenols  and  Antioxidant  Activity  of Mangrove Sonneratia alba Young Leaf Through  Extraction  Methods  and Solvents. International  Journal  of ChemTech , 11(11): 356-363.
Elfita,  Munawar,  &  Wahyuni,  S.  2014. Isolation  of  Secondary  Metabolite Compounds  of  Phatalate  Derivatives from  Endophytic  Fungi  of  Brotowali Plant ( Tinospora
crisp a L).
Biodevercsity Seminar Proeeiding , (pp. 2(3): 241-244.
Garg,  B.,  Bihst,  T.,  &  Ling,  Y.C.  2014. Sulfonated Graphene as Highly Efficient and Reusable Acid Carbocatalyst  for  The  Synthesis  of Ester Plasticizers Electronic Suplementary  Material  (ESI)  for  RSC Advances  . The  Royal  Society  of
Chemistry , 4(100): 1-15.
Harizon, Pudjiastuti, B., Kurnia, D., Samiarsa, D., & Shiono. 2014. Triterpenoid Lupan dari  Kulit  Batang Sonneratia  alba (Lytraeceae)  . Bionatura-Jurnal  Ilmu-
Ilmu Hayati dan Fisik , 16(1): 25-29.
Herawati,  N.  2011.  Identifikasi  Senyawa
Bioaktif Tumbuhan Mangrove Sonnerati  alba . Jurnal  Chemical , 12 (2): 54-58.
Karim,  M.A.,  Islam,  A.,  Islam,  M.M., Rahman, M. S., Sultana, S., Biswas, S. 2020. Evaluation of Antioxidant , Anti Hemolytic, Cytocxic Effects and Antibacterial  of  Selected  Mangrove Plants  ( Bruguera  gymnorrhiza and Heritiera litoralis in Bangladesh Activity. Clinical Phytiscience , 6(8): 1-
12.
Latief, M., Nelson, Amanda, H., Tarigan, I. L.,
& Aisyah, S. 2020. Potential Trackingof  Citotoxic  Activities  of Mangrove  Perepate  ( Sonneratia  alba ) Root  Extract  as  an  Anti-cancer Candidate. Pharmacology and Clinical Pharmacy Reseach , 6(8): 1-12.
Muharni,  Elfita,  &  Masyita.  2015.  Isolasi Senyawa  Metabolit  Sekunder  dari Ekstrak  n-Heksana  Batang  Tumbuhan Brotowali ( Tinospora crispa ). Molekul , 10(1): 38-44.
Musa,  W.J.,  Duengo,  S.,  &  Situmeang,  B. 2018.  Isolatin  and  Characterization TYriterpenoid  Compound  from  Leaf Mangrove  Plant  ( Sonneratia  alba )  and Antibacterial Activity Tes. Int. Res. J. Pharm , 9(3): 85-89.
Noor, Y.R., Khazali, M., & Suryadipura, I.N. 2012.  Panduan  Pengenalan  Mangrove Indonesia .
Nurmalasari, F., Ersam, T., & Fatimawati, S. 2016.  Isolasi senyawa Antioksidan dari kulit Batang Sonneratia Ovata Backer. Jurnal sains dan seni , 5(2): 149-153. Palaniayandi, T., Sivaji, A., Thiruganasambandam,  R.,  Natarajan,
S., & Hari, R. 2018. In Vitro Antigastric Cancer  Activity  of  Squalene,  a Triterpenoid  Compound  Isolated  from Rhizophora Mucronata Mangrove Plant Leaves  Againts  AGS  Cell  Line. Pharmacognosy Magizine , 14(57):
369-375.
Schaduw,  J.N.  2016.  Kondisi  Ekologi
Mangrove Pulau Bunaken Kota Manado  Provinsi  Sulawesi  Utara.
Jurnal  LPPM  Bidang  Sains  dan
Teknologi , 3(2): 64-74.
Shobi,  T.M.,  &  Viswathan,  M.B.  2018. Anztibacterial  Activity  of  Di-butyl
Phatalate Isolated from Begonia malabaric . Journal of Applied
Biotechnology  dan  Bioengineering ,
5(2): 97-100. Stephen,  J.  (2005).  Manual  of  Antimicrobial Susceptibility Testing . American Society fore Microbiology.
Usman,  Amir,  M.,  Erika,  F.,  Nurdin,  M.,  &
Kuncoro, H. 2019. Antidiabetic Activity  of  Leaf  Extract  from  Three Types  of  Mangrove  Originating  from Sambera  Coastal  Region  Indonesia.
Reseach  Journal  Pharm  and  Tech ,
12(4): 1707-1712.
Wonggo,  D.,  Berhimpon,  S.,  Kurnia,  D.,  & Dotulong, V. 2017. Antioxidan Activity of Sonneratia  alba Fruit  from  Wori Vilage Nort Sulawesi Indonesia. International  Journal of ChemTech Research , 10(12): 284-290.