ISOLASI ALBUMIN DAN KARAKTERISTIK BERAT MOLEKUL HASIL EKSTRAKSI SECARA PENGUKUSAN IKAN GABUS ( Ophiocephalus striatus )

## Matheus Nugroho
Dosen Program Studi Teknologi Hasil Perikanan Fakultas Pertanian Universitas Yudharta Pasuruan
Abstract
The  objective  of  this  study  for  the  isolation  of  albumin  and  determination  of molecular  weight  of  extraction  by  steaming  of  fish  gabus  (Ophiocephalus  striatus).  The research  method  is  the  extraction  of  a  steaming  waterbath  with  the  temperature  range 40-90 o C,  and  the  long  25-35  minutes,  to  obtain  recovery  and  albumin  levels  of  crude extract  of  fish  gabus  that  optimal.  The  next  stage  is  the  isolation  of  albumin  and  its molecular weight determination of the optimal extraction. Analysis of data of this study is a  descriptive  analysis  to  see  photos  of  electrophoresis.  While  analyzing  the  results  of measurements  for  albumin  isolation  by  gel  filtration  Sephadex  G-75  made  with  split  plot design (RPB). The results showed that there is interaction between the various treatment factors.  The  highest  levels  of  albumin  albumin  isolates  of  1.77  mg  /  g,  the  effect  of steaming  temperature  of  40  °  C  for  30  minutes,  5  ml  fractions  on  the  uptake-2.  SDS- PAGE  electrophoresis  with  the  most  complex  of  the  protein  albumin  is  isolate  the influence of steaming temperature 40 ° C for 30 minutes, located at 5 ml-1 fraction, 5 ml of  fraction-2  and  5  ml  fractions  to-3.  Protein  bands  consist  of  two  major  bands  and  5 minor bands with moleculer weight 14.6 to 133 kD.
Key words: fish gabus (Ophiocephalus striatus), albumin isolation, molecular weight

## Abstrak
Tujuan penelitian ini untuk adalah isolasi albumin dan penentuan berat molekul dari ekstraksi  secara  pengukusan  ikan  gabus  ( Ophiocephalus  striatus ).  Metode  penelitian adalah ekstraksi secara pengukusan waterbath dengan  suhu kisaran 40-90 o C, dan lama 25-35 menit,  untuk mendapatkan rendemen dan kadar albumin ekstrak kasar ikan gabus yang optimal. Tahap selanjutnya adalah isolasi albumin dan penentuan berat molekulnya dari  hasil  ekstraksi  yang  optimal.  Analisa  data  penelitian  ini  adalah  analisa  deskriptif untuk melihat foto hasil elektroforesis. Sementara untuk  hasil analisa pengukuran isolasi albumin  secara  filtrasi  gel  sephadex  G-75  dilakukan  dengan  Rancangan  Petak  terbagi (RPB).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ada  interaksi  antara  berbagai  faktor perlakuan.  Kadar  albumin  isolat  albumin  tertinggi  sebesar  1,77  mg/g,  pengaruh  suhu pengukusan  40 o C  selama  30  menit,  pada  pengambilan  5  ml  fraksi  ke-2.  Elektroforesis SDS-PAGE dengan jumlah protein paling komplek adalah isolat albumin pengaruh suhu pengukusan 40 o C selama 30 menit, terletak pada 5 ml fraksi ke-1, 5 ml fraksi ke-2 dan 5 ml fraksi ke-3. Pita protein terdiri dari 2 pita mayor dan 5 pita minor dengan berat molekul 14,6-133 kD.
Kata kunci :  ikan gabus ( Ophiocephalus striatus ), isolasi albumin, berat molekul

## Pendahuluan
Albumin  merupakan  protein plasma yang paling tinggi jumlahnya sekitar  60%  dan  memiliki  berbagai fungsi  yang  sangat  penting  bagi kesehatan yaitu pembentukan jaringan  sel  baru,  mempercepat pemulihan  jaringan  sel  tubuh  yang rusak serta memelihara keseimbangan cairan di dalam pembuluh  darah  dengan  cairan  di dalam rongga interstitial dalam batas-batas  normal,  kadar  albumin dalam  darah  3,5-5  g/dl.  Kekurangan
albumin dalam serum dapat mempengaruhi pengikatan dan pengangkutan senyawa-senyawa endogen  dan  eksoden,  termasuk obat-obatan, karena seperti diperkirakan distribusi obat keseluruh  tubuh  itu  pengikatannya melalui  fraksi  albumin  (Goldstein et
al .,  1968;  Vallner,  1977;  Tandra et al ., 1988). Pengadaan  albumin  terutama untuk kasus bedah saat ini mencapai 91%, 2/3 albumin tersebut dipakai di bagian bedah dan sisanya 1/3  bagian  dipergunakan  untuk penanganan  penyakit  dalam.  Harga serum albumin untuk infus mencapai kurang  lebih  Rp.  1.500.000,-  per botol  kemasan  100  ml-20%  albumin (Alexander et al ., 1979; Tullis, 1997). Ikan  gabus  merupakan  ikan yang  mempunyai  kandungan  kadar albumin  yang  cukup  tinggi.  Hasil penelitian  Suprayitno  (2003)  pernah diujicobakan  di  instalasi  gizi  serta bagian  bedah  RSU  dr  Saiful  Anwar Malang.  Uji  coba  tersebut  dilakukan pada  pasien  pascaoperasi  dengan kadar  albumin  rendah  (1,8  g/dl). Dengan  perlakuan  2  kg  ikan  gabus masak  per  hari,  telah  meningkatkan kadar albumin darah pasien menjadi normal (3,5-5,5 g/dl). Caranya,
daging  ikan  gabus    dikukus  atau  di- steam sehingga memperoleh filtrate, yang  dijadikan  menu  ekstra  bagi penderita  hipoalbumin  dan  luka. Pemberian  menu  ekstrak  filtrat  ikan gabus  tersebut  berkorelasi  positif dengan peningkatan  kadar  albumin plasma dan penyembuhan luka pascaoperasi. Pengaruh perlakuan suhu tinggi menyebabkan perubahan melemahnya  enzim  proteinase  dan nilai  daya  cerna  protein  (Nielsen, 1998). Menurut Stryer (1968), Slavik
(1982)  dan  Arakawa  et  al.  (1991) dalam Folawiyo and Apenten (1996), menjelaskan bahwa perlakuan panas pada albumin akan menghasilkan  perubahan  struktur yang  tidak  dapat  balik  ( irreversible ),
yang  terlihat  dengan  meningkatnya protein  yang  tidak  larut  dalam  air. Pengaruh  perlakuan  panas  pada struktur albumin juga dapat  albumin, sehingga  diperlukan  panas  yang tepat  pada  struktur  protein  tersebut (Stryer, 1968; Slavik, 1982; Arakawa et  al .,  1991; Wicker et  al .,  1986  dan Arntfield et al ., 1989 dalam Folawiyo and Apenten, 1996).
Berdasarkan  hasil  penelitian pada  ikan  gabus  dan  ikan  tomang didapatkan  kadar  albumin  sebesar 1332,7  mg/100  g  dan  1188,05 mg/100  g  (Carvallo,  1998).  Analisa kadar albumin pada filtrat ikan gabus hasil  pengukusan  suhu  98 o C  adalah 19,4%  (Martini,  1998).  Hasil  analisa sterilisasi  ikan  gabus  pada  suhu 121 o C  selama  25  menit  didapatkan kadar  albumin  filtrat  adalah  116,419 ±  22,660  mg/100 g (Hidayati,  1999). Berdasarkan  data  hasil  penelitian tersebut  diatas  memperkuat  untuk memperoleh  isolat  albumin  dan karakteristik  berat  molekul  hasil ekstraksi  secara  pengukusan  ikan gabus,  sebagai  pengganti  serum albumin  dalam  upaya  membantu mempertahankan  dan  meningkatkan nilai gizi dan kesehatan manusia.

## Materi dan Metode
Peralatan  yang  dipergunakan pembuatan ekstrak kasar ikan gabus antara lain : pisau, gunting, waterbath, thermokopel, thermometer 100 o C, timbangan gelas  ukur,  kain  saring,  plastik  dan press hidrolik. Peralatan untuk analisa  kadar  albumin  antara  lain  : kuvet  diameter  1  cm,  Shimadzu spectrophotometer  UV-100-02  dan spectrophotometer SMA autoanalyzer . Peralatan untuk
pemurnian  ekstrak  kasar  albumin adalah  kolom  filtrasi  gel  ukuran  (2,5 x  60  cm)  dengan  bahan  isian sephadex  G-75  untuk  memurnikan ekstrak kasar albumin. Pendeteksian berat  molekul  albumin,  peralatannya 1  unit  elektroforesis  apparatus  merk Bio-Rad  yang  dihubungkan  dengan
power  supply  berkekuatan  300  volt dan  120  mA,  dan  ditempatkan  pada refrigerator, preparasi sampel meliputi (sampel plate, scapel , pinset, deep  freezer ,  mistar,  pipet, pisau, dan neraca digital), penyiapan gel  (gelas  ukur,  erlenmeyer,  neraca digital, pipet, pemanas, sarung tangan,  kaca,  plastik  tipis,  gel  plate dan vacum pump), pewarnaan (peralatan yang digunakan pemotong, kaca, mika tipis, pemberat,  pipet,  neraca  digital, gel plate dan incubator ),  pembuatan buffer  (peralatan  yang  digunakan gelas ukur, pipet dan erlenmeyer).
Bahan-bahan  yang  digunakan untuk  ekstraksi  adalah  ikan  gabus yang  diperoleh  dari  bendungan
Karangkates  dalam  keadaan  hidup dan  aquadest.    Bahan  untuk  uji kadar albumin menggunakan metode brom  cresol  green adalah
buffer  succinate (7  mmol/l  pH  4,2), brom  cresol  green  0,15  mmol/l,  brij 35  dan  aquadest  dapar  succinate (0,01  M;  pH  4,2),  untuk  kadar albumin  setelah  pemurnian  kolom filtrasi  gel  pengujiannya  dengan  UV, bahannya  antara  lain  BSA  standar 0,5 g/l, buffer phosphat 0,1 M pH 7,1 dan  aquadest.  Sementara  untuk pemurnian  ekstrak  kasar  albumin bahan-bahan  yang  digunakan  terdiri dari  1  g  sephadex  G-7,  buffer phosphat  (0,1  M  pH  7,1), glasswool dan  natrium  azid  0,2%.  Bahan analisa  elektroforesis  meliputi  :  gel pemisah  12,5%  (acrylamid  30% 4,126  ml,  1,5  M  tris  pH  8,8  2,5  ml, 10%  SDS  100  µl,  TEMED  20  µl, 10%  amonium  persulfat  25  µl),  gel penumpuk  4%  (acrylamid  30%  1,03 ml, 0,5  m tris pH 6,8 H 2 O 2,650 ml, 10%  SDS  50  µl,  10%  amonium persulfat  15  µl), running  buffer (glycine  14,4  g,  tris  base  1,0  g,  ad aquadest  100  ml), reducing  sampel buffer (RBS)  (H 2 O  (aqua  bid)  3  ml, 0,5 M tris pH 6,8 1 ml, glycerol 10% 1,6 ml, SDS 10% 1,6 ml, mercaptoetanol 0,4 ml dan bromophenol  blue 0,4  ml),  bahan
pewarnaan  ( stainning )  ( comassie brilliant blue 0,1 g, methanol absolut 40  ml,  asam  asetat  10  ml,  dan  ad aquadest 100 ml), destainning (methanol 20 ml, asam asetat 10 ml dan ad aquadest 100 ml). Tujuan penelitian adalah isolasi  albumin  dan  karakteristik berat  molekul  hasil  ekstraksi  secara pengukusan ikan gabus ( Ophiocephalus  striatus ).  Prosedur penelitian  pada  tahap  I  meliputi  : pemurnian dengan Kromatografi kolom Filtrasi-Gel (Modifikasi kato et al ., 1981); pendeteksian berat molekul albumin (Hames and
Rickwood, 1990).
Analisa  data  yang  digunakan dalam  penelitian  adalah  deskriptif kualitatif  untuk  melihat  foto  hasil elektroforesis. Sedangkan untuk hasil  analisa  pengukuran  pemurnian secara  filtrasi  gel  sephadex  G-75 dilakukan  dengan  Rancangan  Petak Terbagi (RPB).

## Hasil dan Pembahasan
Secara  umum  kadar  albumin isolat  albumin  ikan  gabus  berkisar antara  0,26-1,77  mg/g.  Korelasi antara  suhu  pengukusan  waterbath dengan kadar albumin isolat albumin ikan  gabus  mengikuti  persamaan regresi  Y  =  -0,02x  +  2,7381  dengan nilai  r  =  0,905,  sementara  untuk fraksinasi kadar albumin isolat albumin  ikan  gabus  persamaan regresi  Y  =  -0,0725x 2 +  0,3575x  + 0,9725  dengan  nilai  r  =  0,997. Berdasarkan tingkat korelasinya (R 2 ), maka perlakuan suhu pengukusan dan fraksinasi berpengaruh  besar  terhadap  kadar albumin isolat albumin ikan gabus. Gambar 1. menunjukan bahwa
kadar  albumin  ikan  gabus  tertinggi untuk tiap-tiap perlakuan suhu pengukusan  40-90 o C,  dengan  lama pengukusan 30 menit, terdapat pada 5 ml fraksi ke-2 dan 5 ml fraksi ke-3. Berdasarkan  hasil  tersebut  maka diduga bahwa molekul-molekul- molekul kecil, termasuk dalam hal ini
albumin masuk pori-pori gel, sementara molekul yang lebih besar akan  ditolak,  sehingga  molekul besar akan berada dalam fase mobil dan  melewati  partikel-partikel  gel sephadex G-75. Soemitro et al . (1992), menyatakan  kecepatan  pergerakan
molekul-molekul  besar  ini  sangat tergantung  pada  berat  molekulnya.
Protein yang mempunyai berat molekul besar akan lebih dulu keluar sebagai  eluat,  dan  diikuti  oleh protein  yang  memiliki  berat  molekul lebih rendah.
Gambar  1.     Kadar  albumin  isolat  albumin  ikan gabus  setelah  pemurnian kolom filtrasi gel sephadex G-75
Hasil uji F menunjukkan bahwa pengaruh suhu pengukusan waterbath dan fraksinasi, dan
interaksinya  terhadap kadar  albumin isolat  albumin  berpengaruh  sangat nyata. Hasil analisis lanjut dengan uji BNT (  = 0,01) disajikan pada Tabel 1. Hasil uji BNT menunjukkan bahwa kadar albumin isolat albumin tertinggi oleh pengaruh suhu pengukusan waterbath sebesar 1,74 mg/g,  dengan  suhu waterbath 40 o C (suhu  daging  36 o C).  Diduga  hal  ini berkaitan  dengan  kelarutan  albumin yang  cenderung  belum  turun  dan kerusakannya  relatif  belum  terjadi. Secara visual tampak partikel- partikel  isolat  albumin  tidak  terpisah dan  mengendap  bila  dibiarkan, kekuatan  ketegangan  antar  partikel
masih  kuat,  tetapi  kekentalan  belum terjadi. Karakteristik fisik
memudahkan  fraksinasi  filtrasi  gel, sebab  proses  elusinya  akan  lebih mudah.  Pada  umumnya  kelarutan protein naik pada suhu0-40 o C, tetapi suhu diatas 40 o C kebanyakan protein  menjadi  tidak  stabil,  dan ditandai perubahan sifat fisik protein. Sifat fisik sangat berpengaruh terhadap  sifat  fungsional  protein, karena mempengaruhi interaksi
protein  dengan  pelarut  air,  dan kemampuan mengikat air oleh daging (Wirahadikusuma, 1981; Damodaran,  1996  dalam  Nakai  and Modler, 1996). Kadar albumin isolat albuminikan  gabus  tertinggi  oleh pengaruh  fraksinasi  adalah  1,40
mg/g, terdapat pada 5 ml fraksi ke-3.
Hal  ini  diduga  molekul-molekul  yang lebih  kecil  seperti  albumin  dapat menembus ke dalam pori-pori butiran  dan  tertahan  selama  aliran ke bawah kolom, tetapi ini sebaliknya  moleku-molekul  protein besar  yang  bukan  albumin  tidak dapat  menembus  dalam  butiran  dan melewati  kolom  dengan  lebih  cepat bersama bufer. Protein dengan berat molekul  menengah  akan  mengalir dengan kecepatan antara, tergantung pada tingkat kemampuan menembus  butiran  sephadex  G-75. Kato et  al. (1981),  menyatakan bahwa molekul-molekul protein terlarut akan menembus jaringan gel dalam  jumlah  banyak  atau  sedikit tergantung  dari  bentuk  molekulnya, dan ikatan-ikatan yang terjadi dengan  molekul  gelnya  sendiri, sehingga  besar  dan  bentuk  dari molekul zat terlarut akan menentukan  pembagian  antara  zat yang  masuk  dalam  molekul  gel  dan yang ikut fase mobil.
Tabel  1.  Kadar  albumin  isolat  albumin  ikan  gabus  karena  pengaruh  perlakuan suhu pengukusan waterbath dan proses fraksinasi
Pengaruh suhu pengukusan waterbath ( o C) Kadar albumin (mg/g) 40 50 60 70 80 90 1,74e 1,62d 1,52c 1,37b 1,22b 0,49a BNT (  = 0,01) 0,1758 Pengaruh fraksinasi (5 ml fraksi ke-) Kadar albumin (mg/g) 1 2 3 4 1,26a 1,39bc 1,40c 1,24a BNT (  = 0,01) 0,0465
Keterangan:  angka  kadar  albumin  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama  pada  kolom  yang  sama, menunjukkan hasil tidak berbeda nyata pada uji BNT (  = 0,01)
Tabel  2.  Kadar  albumin  isolat  albumin  ikan  gabus  karena  pengaruh  suhu pengukusan waterbath ( o C) dengan fraksinasi Interaksi suhu pengukusan waterbath dengan fraksinasi Suhu waterbath ( o C) 5 ml fraksi ke- Kadar Albumin (mg/g) 40 1 2 3 4 1,70h 1,77j 1,76ij 1,71h 50 1 2 3 4 1,54fg 1,68h 1,67h 1,57g 60 1 2 3 4 1,40f 1,59g 1,65gh 1,43f
70 1 2 3 4 1,34f 1,40f 1,41f 1,31e 80 1 2 3 4 1,17e 1,27e 1,26e 1,17de 90 1 2 3 4 0,39a 0,63bc 0,66c 0,26a BNT (  = 0,01) 0,2012
Keterangan:  angka  kadar  albumin  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama  pada  kolom  yang  sama, menunjukkan hasil tidak berbeda nyata pada uji BNT (  = 0,01)
Hasil  uji  BNT  (  =  0,01)  Tabel 2.  menunjukkan  interaksi  pengaruh suhu  pengukusan waterbath pada seluruh fraksi dengan kadar albumin isolat  albumin  optimal  sebesar  1,77 mg/g, oleh pengaruh suhu waterbath 40 o C  (suhu  daging  36 o C)  dan terletak  pada  5  ml  fraksi  ke-2. Optimalnya  kadar  albumin  tersebut diduga  pada  suhu  pengukusan waterbath 40 o C belum terjadi perubahan  secara  besar  terhadap sifat  karakteristik  protein  daging ikan,  dan  kelarutan  protein  dalam isolat  albumin  relatif  tinggi.  Hal  ini dibuktikan  dari  karakteristik  fisik isolat  albumin  yang  secara  visual tampak belum terjadi penggumpalan. Kondisi tersebut akan mempermudah fraksinasi kolom  filtrasi  gel,  sebab  partikel- partikel  yang  terlarut  dalam  isolat albumin ukuran dan bentuknya relatif tidak  terlalu  besar  dari  pori-pori  gel, proses  elusi  akan  lancar  dan  tidak tertahan di permukaan gel sephadex G-75. Namun sebaliknya jika partikel-partikel  yang  terlarut  dalam isolat  albumin  lebih  besar,  maka proses  elusi  akan  tertahan,  dan dapat  merusak  gel  sephadex  itu sendiri, sebab partikel-partikel tersebut  mendukung  sekali  untuk pertumbuhan bakteri. Foegeding et al . (1996),
menjelaskan  pemanasan  albumin suhu  <  50 o C  tidak  menurunkan
kelarutannya,  albumin  mulai  turun kelarutannya  pada  suhu  antara  50- 70 o C,  yang  ditandai  terbentuknya gel, kelarutan menurun secara besar pada  suhu  70-80 o C,  ditandai  gel albumin terbentuk secara kuat.
Kecenderungan  kadar  albumin optimal  terdapat  pada  pengambilan 5  ml  fraksi  ke-2,  hal  ini  diduga karena molekul-molekul bukan albumin  u=yang  lebih  besar  dari ukuran  pori-pori  sephadex  G-75 telah  membengkak  sebagai  akibat pengaruh  pemanasan  dan  tidak dapat  masuk  dalam  partikel-partikel gel.
Molekul-molekul
tersebut bersama  cairan  bufer  akan  mengalir melalui  rongga-rongga  antar  partikel sephadex  G-75,  sehingga  moleku- molekul  yang  bukan  albumin  akan lebih  dulu keluar,  dan terdapat  pada pengambilan  5  ml  fraksi  ke-1. Sudarmadji (1996), menjelaskan hasil  penelitiannya  bahwa  molekul- molekul  kecil  akan  masuk  dalam partikel  gel,  dan  akan  ikut  mengalir dengan  cairan  dengan  kecepatan yang  tergantung  pada  ukuran  dan bentuknya.  Kato et  al. (1981), menjelaskan hasil fraksinasi
ovalbumin  putih  telur  pengaruh freeze-dried suhu  50 o C,  dengan rata-rata  konsentrasi  ovalbumin  (%) tertinggi  terdapat  pada  fraksi  II  dan III,  sementara  fraksi  I,  IV  dan  V cenderung menurun konsentrasi ovalbumin.
Pendeteksian Berat Molekul Albumin dengan SDS-PAGE Hasil elektroforesis yang tersaji pada Gambar 2. menunjukkan bahwa  isolat  albumin  perlakuan suhu  pengukusan waterbath 80 o C (suhu  daging  55 o C),  dan  dilanjutkan fraksinasi kolom filtrasi gel sephadex G-75  untuk  pengambilan  5  ml  fraksi ke-2 setelah dielektroforesis menghasilkan  enam  pita  protein, terdiri  dari  dua  pita  mayor  yaitu  pita
5  dan  8  dengan  berat  molekul  66,3 kD  dan  11,2  kD,  dan  empat  pita minor yaitu pita 1, 2, 3 dan 4 dengan berat  molekul  145,3  kD,  115,1  kD, 108,5  kD  dan  81,1  kD;  untuk  5  ml fraksi  ke-3  setelah  dielektroforesis menghasilkan  lima  pita  protein  , yang terdiri dari dua pita mayor yaitu pita  5  dan  8  dengan  berat  molekul 66,3  kD  dan  11,2  kD,  dan  tiga  pita minor  yaitu  pita  2,  3,  dan  4  dengan berat molekul masing-masing sekitar 121,9  kD,  102,4  kD  dan  85,9  kD; sedangkan  untuk  5  ml  fraksi  ke-4 setelah dielektroforesis
menghasilkan  empat  pita  protein, yang terdiri dari dua pita mayor yaitu pita  5  dan  8  dengan  berat  molekul 66,2  kD  dan  11,2  kD,  dan  dua  pita minor  yaitu  pita  2  dan  3  dengan berat  molekul  121,9  kD  dan  108,5 kD.
Hasil  elektroforesis  tersebut menunjukkan  bahwa  dari  3  fraksi pengambilan kolom filtrasi gel sephadex  G-75  setelah  melalui elektroforesis menghasilkan  pita-pita protein pada elektroforegram poliakrilamid SDS adalah pada fraksi ke-2 sampai ke-4, hal tersebut dapat dilihat  pada  lajur  B,  C,  dan  D Gambar  2.  Pada  fraksi  ke-2  sampai ke-4  ketebalan  pita  protein  yang hampir  sama,  maka  diduga  pada  5 ml  fraksi  ke-2,5  ml  fraksi  ke-3dan  5 ml fraksi ke-4 mempunyai kesamaan dalam hal jumlah kandungan
albumin yang terlarut. Isolat  albumin hasil  fraksinasi  kolom  filtrasi  gel dengan  kandungan  albumin  relatif
sama  pada  pengambilan  5  ml  fraksi ke-2 sampai dengan 5 ml fraksi ke-4.
Kato et al . (1981), menjelaskan hasil fraksinasi ovalbumin putih telur, rata-rata  konsentrasi  ovalbumin  (%) tertinggi  terdapat  pada  fraksi  II  dan III,  sementara  fraksi  I,  IV  dan  V cenderung menurun konsentrasi ovalbumin.  Sutiman et  al .  (1996) memaparkan hasil penelitiannya bahwa molekul protein dengan muatan dan ukuran yang sama akan terakumulasi  pada  zona  atau  pita yang berdekatan. Lebih lanjut dijelaskan,  bahwa  pita  yang  lebih banyak menunjukkan bahwa sampel tersusun atas protein komplek. Hasil elektroforesis pada Gambar  2.  isolat  albumin  perlakuan suhu  pengukusan waterbath 60 o C (suhu  daging  45 o C),  selanjutnya dilakukan fraksinasi kolom filtrasi gel sephadex  G-75,  pada  pengambilan 5 ml fraksi ke-1, menghasilkan enam pita protein yang terdiri dari dua pita mayor yaitu pita 5 dan pita 8 dengan berat  molekul  66,3  kD  dan  11,2  kD, dan  empat  pita  minor  yaitu  fraksi  1, 2,  3  dan  4  dengan  berat  molekul sekitar 145,3 kD, 115,1 kD, 102,4 kD dan  85,9  kD;  untuk  5  ml  fraksi  ke-2 setelah
dielektroforesis
menghasilkan  enam  pita  protein yang terdiri dari satu pita mayor yaitu pita 8 dengan berat molekul 11,2 kD, serta  lima  pita  minor  yaitu  pita  1,  2, 3,  4  dan  5  dengan  berat  molekul masing-masing  adalah  154,2  kD, 121,9  kD,  102,4  kD,  85,9  kD  dan 66,3  kD;  untuk  5  ml  fraksi  ke-3 setelah dielektroforesis menghasilkan  enam  pita  protein, terdiri  dari  dua  pita  mayor  yaitu  pita 5  dan  8  dengan  berat  molekul  66,2 kD  dan  13,3  kD,  serta  empat  pita minor  yaitu  1,  2,  3  dan  4  dengan berat molekul masing-masing adalah 154,2  kD,  129,3  kD,  108,5  kD  dan 85,9 kD; sementara untuk 5 ml fraksi ke-4 setelah dielektroforesis menghasilkan  enam  pita  protein yang terdiri dari dua pita mayor yaitu pita  5  dan  8  dengan  berat  molekul
66,3  kD  dan  14,1  kD,  serta  empat pita minor yaitu 1, 2, 3 dan 4 dengan berat  molekul  masing-masing  154,2
kD, 121,9 kD, 108,5 kD dan 81,1 kD.
Berdasarkan hasil elektroforesis  tersebut  menunjukkan bahwa  isolat  albumin  perlakuan suhu  pengukusan waterbath 60 o C (suhu daging 45 o C), jumlah kandungan  protein  terlarut  untuk setiap fraksi dari kolom gel sephadex  G-75  masih  tinggi.  Hal  ini dibuktikan dengan jumlah pita protein  pada  keempat  fraksi  adalah hampir  sama  (lajur  E,  F,  G  dan  H pada  Gambar  2.).  Melihat  hal tersebut, maka diduga isolat albumin hasil  pengukusan  suhu waterbath
60 o C,  di  albumin  plasmanya  belum terjadi denaturasi. Kandungan albumin  tertinggi  terjadi  pada  5  ml fraksi ke-1, 5 ml fraksi ke-3 dan 5 ml fraksi ke-4, hal ini terlihat dari kondisi ketebalan  pita  protein  yang  hampir sama pada pita ketiga fraksi tersebut (lajur  E,  G  dan  H  pada  Gambar  6.), dan  ketebalan  terletak  pada  pita protein 5 dengan berat molekul 66,2- 66,3 kD. Raeker and Johson (1995), menyatakan hasil penelitiannya bahwa terjadinya permulaan denaturasi  albumin  plasma  adalah pada suhu pemanasan 69,1 ± 0,3 o C,
sementara puncak denaturasi plasma terjadi pada suhu pemanasan 78 ± 0,2 o C.
Gambar 2. Hasil Elektroforesis SDS-PAGE Isolat Albumin setelah Fraksinasi Keterangan :
X = kit penciri protein : myosin, β-galactosidase, phosporylase B, bovine serum    albumin,  ovalbumin,  carbonic  anhydrase,  trypsin  inhibitot, lysozyme dan aprotinin
B =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-2  suhu waterbath 80  C  (suhu  daging 55  C)
C =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-3  suhu waterbath 80  C  (suhu  daging 55  C)
D =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-4  suhu waterbath 80  C  (suhu  daging 55  C)
E =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-1  suhu waterbath 60  C  (suhu  daging 45  C)
F =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-2  suhu waterbath 60  C  (suhu  daging
45  C)
G =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-3  suhu waterbath 60  C  (suhu  daging 45  C)
H =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-4  suhu waterbath 60  C  (suhu  daging
45  C) I =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-1  suhu waterbath 90  C  (suhu  daging 66  C) Hasil  Elektroforesis  (Gambar 2.)  isolat  albumin  perlakuan  suhu pengukuran waterbath 90  C  (suhu daging 66  C), dan dilanjutkan
fraksinasi kolom fitrasi gel sephadex G-75  untuk  pengambilan  5  ml  fraksi ke-1  tidak  didapatkan  pita  protein. Hasil  elektroforesis  (Gambar  2.) isolate  albumin  perlakuan  suhu pengukuran waterbath 90  C  (suhu daging 60  C), dan dilanjutkan fraksinasi kolom filtrasi gel sephadex
G-75  untuk  5  ml  fraksi  ke-2,  tidak didapatkan  pita  protein.  Begitu  juga untuk  pengambilan  5  ml  fraksi  ke-3 dan  4  pada  suhu  pemanasan  yang sama  setelah  dielektroforesis  tidak menghasilkan pita protein.
Hasil  elektroforesis  tersebut menunjukan  bahwa  isolate  albumin perlakuan suhu pengukusan waterbath 90  C (suhu daging 66  C), jumlah  kandungan  dan  kualitas protein  yang  terlarut  dalam  isolate albumin adalah rendah, diduga pada suhu  pengukuran waterbath 90  C protein sudah mengalami denaturasi.  Keempat  fraksi  hasil kolom  filtrasi  gel  sephadex  G-75, setelah dielektroforesis tidak satupun  pita  protein  terdeteksi  (lihat lajur  I  Gambar  2.,  lajur  J,  K  dan  L Gambar 3.). Weissler et al . (1981)
menjelaskan  dalam  penelitiannya, bahwa  ketika  BSA  dan  alpha- lactalbumin  dipanaskan  pada  suhu 78  C  selama  15  menit,  maka  akan menurunkan  jumlah  zone  yang terdeteksi.  Foegeding et  al .  (1986) memaparkan juga hasil penelitiannya, bahwa pada
pemanasan  lebih  dari  90  C  albumin mulai  mencapai  gel  maksimum.
Lebih  lanjut  diterangkan  pada  suhu
70  C  kelarutan  albumin  berkisar 81%  sehingga  suhu  pengukusan waterbath 90  C  akan  menurunkan kelarutan  albumin  dalam  isolate albumin ikan gabus.
Hasil  elektroforesis  (  Gambar 3.)  isolate  albumin  perlakuan  suhu pengukusan waterbath 40  C  (suhu daging 36  C), dan dilanjutkan fraksinasi kolom filtrasi gel sephadex G-75, untuk pengambilan 5 ml fraksi ke-1,  didapatkan  tujuh  pita  protein, terdiri  dari  dua  pita  mayor  yaitu  pita 5  dan  8  dengan  berat  molekul  66,2 kD dan 14,6 kD, dan lima pita minor yaitu  1,  2,  3,  4  dan  6  dengan  berat molekul masing-masing berturut- turut  133  kD,  108,8  kD,  103,5  kD, 84,7  kD  dan  37,9  kD;  untuk  5  ml fraksi  ke-2,  setelah  dielektroforesis didapatkan  tujuh  pita  protein,  terdiri dari  dua  pita  mayor  yaitu  pita  5  dan 8 dengan berat molekul 66,2 kD dan 14,6 kD, dan lima pita minor yaitu 1, 2,  3,  4  dan  6  dengan  berat  molekul berturut-turut  adalah  133  kD,  114,4 kD, 103,5 kD, 84,7 kD dan 39,9 kD ; untuk  5  ml  fraksi  ke-3,  setelah dielektroforesis didapatkan tujuh pita protein,  terdiri  dari  dua  pita  mayor yaitu  pita  5  dan  8  dengan  berat molekul  66,2  kD  dan  14,6  kD,  dan lima pita minor yaitu 1, 2, 3, 4 dan 6 dengan  berat  molekul  berturut-turut adalah  133 kD,  114,4 kD,  108,8 kD, 84,7  kD  dan  41,9  kD  ;  sedangkan untuk  5  ml  fraksi  ke-4  setelah dielektroforesis  didapatkan  lima  pita protein,  terdiri  dari  satu  pita  mayor, yaitu  pita  8  dengan  berat  molekul 14,6  kD,  dan  empat  pita  minor  yaitu 3,  4,  5  dan  6  dengan  BM  berturut- turut adalah 103,5 kD, 84,7 kD, 66,5 kD dan 39,9 kD.
Hasil  elektroforesis  tersebut menunjukkan,  bahwa  isolat  albumin perlakuan suhu pengukusan waterbath 40  C (suhu daging 36  C), jenis  dan  kandungan  protein  yang terlarut  dalam  isolat  albumin  masih komplek  dan  tinggi,  hal  tersebut terlihat  dari  banyaknya  jumlah  dan jelasnya  ketebalan  pita  protein  yang terdeteksi  setelah  dielektroforesis,
selain itu tiap-tiap fraksi pengambilan  dari  kolom  filtrasi  gel sephadex G-75, setelah dielektroforesis menghasilkan jumlah pita  protein  yang  lebih  konstan.  Hal tersebut  terlihat  dari  (lajur  M,  N,  O dan  P  Gambar  11.)  keempat  fraksi memiliki  jumlah  pita  protein  sama yaitu  tujuh  pita.  Diduga  keempat fraksi  tersebut  jumlah  kandungan proteinnya hampir sama, sedangkan untuk ketebalan pita terdapat kesamaan  untuk  pengambilan  5  ml fraksi  ke-1  sampai  dengan  5  ml fraksi  ke-3,  masing-masing  terdapat dua  pita mayor.  Diduga ketiga fraksi
awal  ini  muatan  berat  molekul albuminnya  memiliki  kadar  yang hampir sama.
Widowati  dan  Wijaya  (1997)
melaporkan hasil penelitiannya,
bahwa  pita  mayor  itu  memiliki ketebalan dan intensitas warna yang lebih  besar  dibandingkan  pita-pita lainnya, sehingga berkesimpulan bahwa pita mayor itu merupakan pita protein  yang  memiliki  konsentrasi lebih  tinggi  dibandingkan  dengan pita-pita lainnya (pita minor). Foegeding et al . (1986) menunjukan hasil penelitiannya, pada
pemanasan  BSA  (bovine  serum albumin)  40  C  sampai  dengan  70  C didapatkan jumlah zone relatif komplek (7 pita) dan dua diantaranya  tebal  dengan soluble protein berkisar antara 6,5-3,5 mg/ml, tetapi pada pemanasan 80  C keatas jumlah zone berkurang drastis  (1  pita)  dan  tipis  dengan soluble protein berkisar 1-1,5 mg/ml.
Gambar 3. Hasil Elektroforesis SDS-PAGE Isolat Albumin setelah Fraksinasi Keterangan :
X = kit penciri protein : myosin, β-galactosidase, phosporylase B, bovine serum    albumin,  ovalbumin,  carbonic  anhydrase,  trypsin  inhibitot, lysozyme dan aprotinin
J =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-2  suhu waterbath 90  C  (suhu  daging 66  C)
K =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-3  suhu waterbath 90  C  (suhu  daging
66  C) L =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-4  suhu waterbath 90  C  (suhu  daging 66  C)
M =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-1  suhu waterbath 40  C  (suhu  daging 36  C)
N =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-2  suhu waterbath 40  C  (suhu  daging
36  C) O =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-3  suhu waterbath 40  C  (suhu  daging
36  C) P =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-4  suhu waterbath 40  C  (suhu  daging 36  C) Q =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-2  suhu waterbath 90  C  (suhu  daging 66  C) R =  isolat  albumin  5  ml  fraksi  ke-3  suhu waterbath 90  C  (suhu  daging
66  C) Hasil  elektroforesis  (Gambar
3.)  isolate  albumin  perlakuan  suhu pengukusan waterbath 90  C  (suhu daging  66  C),  yang  merupakan konversi dari perlakuan suhu pengukusan waterbath 90  C sebelumnya (lihat lajur I Gambar 10., lajur  J,  K  dan  L  Gambar  3.),  pada pengambilan 5 ml fraksi ke-2 dan ke-
3 tidak dihasilkan pita protein. Hasil elektroforesis tersebut menunjukan bahwa pada suhu pengukusan waterbath 90  C  (suhu daging 66  C), yang merupakan hasil konversi  dari  suhu  pengukusan waterbath 90  C sebelumnya,
ternyata  juga  punya  kecenderungan yang  sama  pita  protein  hilang  dan tidak  terdeteksi  (lajur  Q  dan  R Gambar 3.). Hal ini diduga kelarutan protein  dalam  isolat  albumin  rusak akibat denaturasi panas, dan terjadinya perubahan sifat karakteristik  isolate  albumin,  yaitu terbentuknya  gel.  Soepomo  (1992), dalam uraiannya mengenai pengolahan daging menyatakan, bahwa semakin tinggi suhu pemasakan  dan  atau  lama  waktu pemasakan,  makin  besar  protein yang rusak sampai mencapai tingkat yang  konstan  sehingga  diperoleh hasil sampai cukup rendah. Ilminingtyas dkk. (2000) memaparkan  hasil  penelitiannya,
bahwa  perubahan  pola  protein  hasil SDS-PAGE  menunjukkan  adanya perubahan yang terjadi pada protein, penipisan  dan  hilangnya  pita  protein menunjukkan  terjadinya  perubahan sifat pada protein tersebut.

## Kesimpulan
Kadar  albumin  isolat  albumin tertinggi sebesar 1,77 mg/g,
pengaruh  suhu  pengukusan  40 o C selama 30 menit, pada pengambilan 5 ml fraksi ke-2. Elektroforesis SDS- PAGE  dengan  jumlah  protein  paling komplek adalah isolat albumin pengaruh  suhu  pengukusan  40 o C selama  30  menit,  terletak  pada  5 ml fraksi ke-1, 5 ml fraksi ke-2 dan 5 ml fraksi  ke-3.  Pita  protein  terdiri  dari  2 pita  mayor  dan  5  pita  minor  dengan BM 14,6-133 kD.

## Saran
Berdasarkan hasil terbaik penelitian tersebut diatas, disarankan untuk dilakukan uji kualitas  biologis  ekstrak  albumin kasar  dan  isolat  albumin  pada  tikus Mencit ( Mus musculus L. ).

## Daftar Pustaka
Alexander, M.R.; Ambre, J.J.; Liskon,  B.I.  and  D.C.  Trash, 1979.  Therapeutic  Use  Of
Albumin.  JAMA.,  241  :  2527- 2529. Arntfield, S. D.; Murray, E. D. and M. A.  H.  Ismond,  1986.  Effect  of Salt on the Thermal Stability of Storage Proteins from Fababean (Vice faba). J. Food Sci., 51 : 371-377. Carvallo,  Y.  N.,  1998.  Study  Profit Asam Amino, Albumin, Mineral Zn pada Ikan Gabus (Ophiocephalus  sriatus)  dan Ikan  Tomang  (Ophiocephalus Micropeltus). Fakultas Perikanan. Universitas Brawijaya. Malang. Hal 28-30. Foegeding,  E.  A.;  Allen,  C.  E.  and W.  R.  Dayton,  1986.  Effect  of
Heating  Rate  on  Thermally Formed  Myosin,  Fibrinogen and  Albumin  Gels.  J.  Food Sci., 51 : 104-107.
Folawiyo,  Y.  L.  and  O.  R.  K. Apenten,  1996.  The  Effect  of Heat  Acid  Treatment  on  The Structure of Rapeseed Albumin  (Napin).  J.  Food  Sci., 61 : 237-239. Hames,  B.  D.  and  D.  Rickwood, 1990.  Gel  Electrophoresis  of Protein : A Practical Approach. Second Edition. Oxford University  Press,  New  York. Page. 17 Hidayati,  O.,  1999.  Study  Kadar Albumin,  Zn  dan  TVB  Filtrat Ikan  Gabus  (Ophiocephalus sriatus)  pada  Lama  Sterilisasi dan Penyimpanan yang Berbeda.  Laporan  Penelitian. Fakultas Perikanan. Universitas Brawijaya.  Malang. Hal 36. Kato, Y,; Watanabe, K. and Y. Sato, 1981. Effect of Maillard Reaction  on  Some  Physical Properties  of  Ovalbumin.  J. Food Sci., 62 : 1861-1820. Martini, N. D., 1998. Pengaruh Lama Pengukusan Terhadap Kandungan  Albumin,  Asam Amino  dan  Zn  pada  Ikan Gabus (Ophiocephalus sriatus).  Laporan  Penelitian. Fakultas Perikanan. Universitas Brawijaya.  Malang. Hal. 36. Nakai,  S.  and  H.W.  Modler,  1996. Food  Proteins  Properties  and Characterization. Food Science and Technology (Series Editor). American Food and  Nutrition  Center.  Page. 168-224.
Nielsen,  S.,  1998.  Food  Analysis.
London. Glisers Raeker,  M.O.  and  Johnson,  1985. Thermal and Functional Properties  of  Bovine  Blood Plasma and Egg White Proteins. J. Food Sci., 60:687 Soemitro,  S.;  Marianti,  L.  dan  A. Safari, 1992. Percobaan Biokimia  Penentuan  Struktur Protein. Pusat dan Antar Universitas Bioteknologi. Institut  Teknologi  Bandung. Hal. 23. Soepomo,  1992,  Ilmu  Teknologi Daging. Gadjah Mada University  Press.  Jogjakarta. Hal. 20-40. Sudamadji, S., 1996. Teknik Analisa Biokimiawi. Liberty. Jogjakarta.
Hal. 97-220.
Suprayitno,  E.,  2003.  Penyembuhan
Luka  dengan  Ikan  Gabus. Fakultas Perikanan. Universitas Brawijaya. Malang Sutiman, B. S.; Rahayu, S.; Fatchyah  ;  Widyawati,  S.  dan E.  A,  Laras,  1996.  Teknik Biologi Molekuler. Jurusan Biologi. MIPA Unibraw. Malang. Hal. 25-90.
Weissler,  N.  L.;  Mangino,  M.  E.;
Harper,  W.  J.  and  R.  Raman, 1981.  Identification  of  Serum
Albumin  in  Protein  Complexes to  Dissociation  by  Sodium Dodecyl  Sulfate.  J.  Food  Sci., 46 : 979-978. Widowati, S. dan Wijaya, S.K., 1997. Isolasi dan Karakterisasi Globumin  7S  dan  11S  dari Sepuluh Varietas Kedelai Indonesia. Dalam Budianto, S ; Zakaria,  F  ;  Hariyadi  dan Satiyowiharjo, B (ed). Prosiding  Seminar  Nasional Teknologi Pangan. Denpasar. Wirahadikusuma, M., 1981. Biokimia Proteina,  Enzima  dan  Asam Nukleat. Penerbit ITB. Bandung. Hal 26-38.