ISSN 2354-6565
UJI TERATOGENIK EKSTRAK AIR DAUN KECUBUNG GUNUNG ( Brugmansia suaveolens Bercht & Presl.)
PADA TIKUS WISTAR
Ita Nur Anisa 1 ,Ismi Muslimah 1 , Afifah B. Sutjiatmo 1 , Andreanus A. Soemardji 2
1 Fakultas Farmasi, Universitas Jenderal Achmad Yani
2 Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung ita.nuranisa@gmail.com

## ABSTRAK
Daun  dan  Bunga  Kecubung  gunung  secara  empiris  telah  digunakan  sebagai  anti  asma  atau bronkodilator.  Dari  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  (Ita  Nur  Anisa,dkk)  bahwa  daun kecubung gunung  memiliki efek bronkodilator pada dosis 25 mg/kg bb dan hasil uji toksisitas akut  ekstrak  air  daun  kecubung  gunung  menyebabkan  60%  kematian  pada  hewan  percobaan pada  dosis  5000  mg/kg  bb.  Untuk  memperoleh  informasi  lebih  spesifik,  maka  dilakukan  uji teratogenik  untuk  melihat  abnormalitas  fetus  yang  terjadi  karena  pemberian  zat  selama  fase perkembangan  embrio  atau  organogenesis,  meliputi  abnormalitas  bagian  tubuh  luar,  jaringan lunak  serta  kerangka  fetus.  Pengujian  ini  dilakukan  secara  in  vivo  pada  hewan  percobaan. Ekstrak  air  daun  kecubung  gunung  ( Brugmansia  suaveolens Bercht  &  Presl.)  diberikan  pada tikus  dewasa  betina  hamil  pada  dosis  23,77  mg/kg  bb,  95,0  mg/kg  bb  dan  950,5  mg/kg  bb selama  fase  organogenesis  secara  peroral  pada  hari  ke-6  sampai  hari  ke-15  kehamilan, kemudian  tikus  dibedah  pada  hari  ke-20  kehamilan.  Pemberian  dosis  950,5  mg/kg  bb menyebabkan  penurunan  bobot  rata-rata  induk  pada  H-20  kehamilan  dan  menyebabkan penurunan  jumlah  fetus  serta  pemberian  semua  dosis  uji  menyebabkan  penurunan  bobot  rata- rata  fetus.  Penurunan  tersebut  berbeda  bermakna  secara  statistic  antara  kelompok  kontrol dengan kelompok dosis uji pada (p<0,05). Semua dosis yang digunakan tidak berpengaruh pada fisik fetus dan tidak menyebabkan kelainan pada jaringan lunak dan jumlah kerangka fetus.
Kata kunci :  Kecubung  gunung,  Brugmansia  suaveolens  Bercht  &  Presl.,  Teratogenik,  Fase Organogenesis .

## ABSTRACT
Leaves  and  Flowers  Amethyst  mountain  empirically  has  been  used  as  an  anti-asthma  or bronchodilators. From the research that has been done (Ita Nur Anisa, et al) that the Amethyst mountain leaves has a bronchodilator effect at a dose of 25 mg / kg bw and acute toxicity test results amethyst mountain leaf aqueous extract caused 60% mortality in experimental animals at a  dose  of  5000  mg  /  kg  b.  To  obtain  more  specific information,  then  tested  teratogenic to  see fetal abnormality that occurs due to the provision of substance during embryonic development or  organogenesis  phase,  including  abnormalities  of  the  body  outside,  soft  tissue  and  fetal skeleton.  The  test  is  performed  in  vivo  in  experimental  animals.  Water  extract  of  leaves  of amethyst  mountain  (Brugmansia  suaveolens  Bercht  &  Presl.)  Given  to  pregnant  female  adult rats at a dose 23.77 mg / kg bw, 95.0 mg / kg bw and 950.5 mg / kg bw during organogenesis in the oral phase of the day 6 to day 15 of pregnancy, then dissected rats on day 20 of pregnancy. Giving a dose of 950.5 mg / kg bw caused a decrease in the average weight of the parent on the H-20 pregnancy and cause a decrease in the number of fetuses as well as giving all test doses causes a decrease in the average weight of the fetus. The decrease was statistically significant difference between the control group with the test dose group (p <0.05). All doses used had no effect on the fetus and cause no physical abnormalities in the soft tissues and the number of fetal skeleton.
Key words :  Amethyst  mountain, Brugmansia  suaveolens  Bercht  &  Presl, teratogenic, OrganogenesisPhase.

## PENDAHULUAN
Banyak  ibu  hamil  memiliki  kekhawatiran tersendiri  terhadap  efek  samping  dari  zat kimia obat sehingga memilih untuk mengkonsumsi  obat  tradisional  atau  obat herbal  untuk  mengeliminasi  efek  samping dari  zat  kimia  obat.  Obat  kimia  maupun tradisional  dapat  menyebabkan  efek  yang tidak  dikehendaki  pada  janin  selama  masa kehamilan terutama pada fase embrionik juga fase  organogenesis.  Obat  yang  dikonsumsi oleh  ibu  hamil  dapat  menembus  plasenta mencapai  embiro  atau  janin  sehingga  dapat menimbulkan efek sistemik. Dalam plasenta, obat  mengalami  biotransformasi  dan  dapat membentuk  senyawa  reaktif  yang  bersifat teratogenik (Anastasia Kristiani Ong, 2013).
Penggunaan obat secara tradisional dalam pembuktiannya  dilakukan  secara  empiris, salah  satunya  adalah  tanaman  kecubung. Kecubung  ada  beberapa  jenis,  diantaranya kecubung  gunung  marga Brugmansia serta kecubung  pendek  dan  kecubung  wuluh marga Datura. Ketersediaan kecubung marga Brugmansia lebih  banyak  dan  khasiat  serta efeknya  belum  banyak  terpublikasikan. Kecubung  gunung  secara  empiris  telah digunakan  orang  sebagai  anti  asma  atau bronkodilator. Bagian tanaman yang digunakan  adalah  daun  dan  bunga  dengan cara dihisap (Hutapea, 1993). Dari hasil penelitian yang telah dilakukan
(Ita  Nur  Anisa  dkk,  2013),  ekstrak  air  daun kecubung gunung memberikan efek bronkodilator  pada  dosis  25  mg/kg  bb.Dari hasil uji toksisitas akut yang telah dilakukan, ekstrak air daun kecubung gunung menyebabkan  60%  kematian  pada  hewan percobaan pada dosis 5000 mg/kg bb.
Uji  teratogenik  bertujuan  untuk  melihat adanya  abnormalitas  fetus  yang  terjadi karena pemberian zat selama masa perkembangan  embrio  atau  organogenesis, meliputi  abnormalitas  bagian  tubuh  luar, jaringan lunak serta kerangka fetus.

## BAHAN DAN HEWAN UJI
Bahan. Pengumpulan  bahan  uji  daun kecubung  gunung  diambil  dari  Kebun Tanaman Obat Manoko Lembang. Determinasi tanaman ( Brugmansia suaveolens Bercht  &  Presl.)  dilakukan  di Herbarium  Bandungense ,  Sekolah  Ilmu Teknologi Hayati, Institut Teknologi Bandung. Daun kecubung gunung yang telah dikumpulkan, disortasi, dicuci dan dikeringkan kemudian dilakukan pengolahan menjadi serbuk simplisia selanjutnya diekstraksi dengan air secara perebusan.
Hewan  uji. Hewan  percobaan  yang digunakan  adalah  tikus  betina  dan  tikus jantan galur Wistar dengan berat badan 180- 230 gram dan berumur kurang lebih antara 8- 12  minggu  dalam  kondisi  sehat  dan  normal yang  diperoleh  dari  Pusat  Ilmu  Hayati Institut Teknologi Bandung.

## METODE
Pembuatan Ekstrak Air Daun Kecubung Gunung ( Brugmansia suaveolens Bercht  &  Presl.). Simplisia diekstraksi  dengan  air  secara  perebusan. Serbuk  simplisia  daun  kecubung  gunung yang  digunakan  sebanyak  1,0  kg  dengan pelarut air sebanyak 6 L.
Perebusan  dilakukan  secara  berulang sebanyak  3  kali  pada  suhu  90°C  selama  15- 30  menit  sampai  didapatkan  ekstrak  cair. Ekstrak cair disaring, kemudian di waterbath kemudian  dilakukan  pengeringan  dengan menggunakan freeze  dry .  Rendemen  ekstrak air daun kecubung gunung sebesar 22,68%.
Pengujian  Teratogenik  Ekstrak  Air Daun  Kecubung  Gunung  ( Brugmansia suaveolens Bercht & Presl.). Uji teratogenik ekstrak air daun kecubung gunung ( Brugmansia  suaveolens Bercht  &  Presl.) diuji dengan metode in vivo, dan prosedurnya adalah sebagai berikut : 1. Hewan  percobaan  dibagi  kedalam  5 kelompok  yang  masing-masing  terdiri dari 5 ekor tikus betina  Kelompok  kontrol  diberi  CMC  Na 0,5% secara peroral (p.o)
 Kelompok  pembanding  diberi  5- fluorourasil  dosis  10  mg/kg  bb secara intraperitonial (i.p)
 Kelompok  uji  1  ekstrak  air  daun kecubung gunung dosis 23,77 mg/kg bb secara p.o.
 Kelompok  uji  2  ekstrak  air  daun kecubung  gunung  dosis  95,0  mg/kg bb secara p.o.
 Kelompok  uji  3  ekstrak  air  daun kecubung gunung dosis 950,5 mg/kg bb secara p.o.
2. Penentuan  tahap  siklus  estrus  pada  tikus betina dewasa. Tikus dari masing-masing kandang  diambil,  kemudian  kedalam lubang  vaginanya  dimasukkan  ujung pipet yang berisi larutan NaCl 0,9% lalu disemprotkan  dan  disedot  dengan  pipet beberapa  kali  didalam  vagina  tikus. Cairan  vagina  diambil  sedikit  didalam pipet lalu diteteskan pada kaca objek lalu ditambahkan  sedikit metilen  blue 0,1% sambil  diratakan,  preparat  didiamkan sampai  sedikit  kering,  cairan  vagina diperiksa  dibawah  mikroskop  pada pembesaran  40-100  kali,  dilihat  adanya sel  epitel  berinti,  sel  epitel  bertanduk, leukosit dan lendir.
3. Pembuktian  terjadinya  perkawinan  pada tikus  betina  dan  menentukan  hari pertama  kehamilan.  Tikus  betina  yang telah  disatukan  dengan  tikus  jantan diambil dari masing-masing kandang lalu diamati  vaginanya.  Bila  ditemukan bercak  sumbat  vagina,  tikus  dinyatakan kawin. Bila sumbat vagina tidak ditemukan,  dibuat  apusan  vagina  untuk pembuktian perkawinan. Tikus dinyatakan  kawin  apabila  pada  cairan apusan vagina ditemukan adanya sperma dan  dinyatakan  sebagai  hari  ke-0 kehamilan.
4. Pemberian  sediaan  diberikan  pada  tikus hamil  di  hari  ke-6  sampai  hari  ke-15 kehamilan.
5. Pada  hari  ke-20  kehamilan,  dilakukan anestesi  pada  tikus  untuk  dilakukan pembedahan.
6. Fetus  dibersihkan,  ditimbang  dan  dicatat satu persatu lalu di fiksasi.
7. Pengawetan fetus untuk penilaian kerangka  sebanyak  satu-pertiga  dari
jumlah fetus. Fetus dimasukkan kedalam botol  yang  berisi  larutan  etanol  90% selama  1-2  minggu.  dan  diberi  nomor induk serta nomor fetus.
8. Pengawetan fetus untuk penilaian jaringan lunak sebanyak dua-pertiga dari jumlah fetus. Fetus dimasukkan kedalam botol yang berisi larutan bouin selama 1- 2  minggu  dan  diberi  nomor  induk  serta nomor fetus.
9. Pembuatan preparat kerangka fetus tikus
 Fetus dalam botol fiksasi yang berisi larutan etanol 90% diambil, dikeringkan,  lalu  dikuliti.  Daging dan  organ  bagian  dalam  dibuang setelah  itu  dimasukkan  kembali dalam botol fiksasi.
 Penjernihan fetus dalam botol fiksasi berisi  larutan  KOH  0,5%    selama  1 hari.
 Pemutihan  fetus  dalam  botol  fiksasi berisi larutan H 2 O 2 1% selama 1 hari.
 Pewarnaan  fetus  dalam  botol  fiksasi berisi  larutan alizarin  red 0,1% selama 1 hari.
 Pembersihan akhir fetus dalam botol fiksasi  berisi  larutan  gliserol  5%, gliserol  20%,  gliserol  40%,  dan gliserol  80%  masing-masing  selama 1 minggu.
 Penilaian  kerangka  diamati  bagian belakang  yaitu  tulang  tengkorak, tulang  belakang  dan  tulang  rusuk. Kemudian  diamati  kerangka  rongga mulut,  anggota  bagian  depan  dan belakang.
10. Penilaian jaringan lunak atau organ fetus. Fetus  yang  telah  difiksasi  dalam  larutan bouin dikeluarkan
dari botol,
dikeringkan,  lalu  disayat  dengan  pola tertentu.
 Pertama  penyayatan  pada  bagian kepala  atas  diantara  kedua  rahang dan  disebelah  bawah  telinga  dan permukaan langit-langit mulut diperiksa. Amati lobus, mata, hidung dan mulut.
 Penyayatan  dilanjutkan  ke  rongga dada  fetus  dari  leher  ke  bagian bawah  paru-paru  sampai  diafragma untuk pengamatan jantung dan paru- paru.
 Kemudian  penyayatan  ke  bagian perut untuk mengeluarkan organ dan pengamatan  organ  meliputi  hati, limpa,  pankreas,  lambung,  usus  dan ginjal secara makroskopis. HASIL

## PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Pada  pengujian  teratogenik,  digunakan hewan  percobaan  tikus  betina  dan  tikus jantan  dewasa  galur Wistar berumur  8-12 minggu.  Tikus  digunakan  sebagai  hewan percobaan  karena  memiliki  masa  kehamilan yang  singkat  yaitu  selama  21  hari,  jumlah janin yang dilahirkan banyak, serta pemeliharaan  yang  mudah  juga  murah. Siklus estrus tikus singkat yaitu selama 5 hari dan  masa  estrus  selama  9-15  jam.  Hasil proses  perkawinan  yang  mudah  dikenali dengan  melihat  adanya  sumbat  vagina  atau ditemukan  adanya  sperma  yang  menempel
pada  sel  epitel  bertanduk  pada  apusan vagina.
Ekstrak  air  daun  kecubung  gunung diberikan secara peroral pada fase organogenesis  yang  merupakan  masa  kritis kehamilan  dari  tikus  yaitu  pada  hari  ke-6 sampai  hari  ke-15  kehamilan.  Pada  fase organogenesis ini merupakan tahap pembentukan  organ  dan  sel  mengalami proses diferensiasi.
Pada  hari  ke-20  kehamilan,  tikus  hamil dibedah  lalu  fetus  dikeluarkan  dari  uterus induk dan dilakukan pengamatan pada fetus. Pengamatan terhadap fetus dilakukan dengan pembedahan karena jika tikus yang melahirkan secara spontan cenderung memakan  anaknya  yang  cacat,  yang  mati atau hampir mati sehingga akan mempengaruhi hasil  perhitungan  data,  selain itu  jumlah  resorpsi  dapat  teramati  (Almahdy dkk, 2004). Tabel 1. Bobot Rata-Rata Induk Tikus Pada H-0 dan H-20 Kehamilan Perlakuan Jumlah Tikus Yang Diamati Rata-Rata Bobot Badan (gram) Probabilitas H-0 H-20 H-0 H-20 K 5 221,4±8,473  330,4±13,35 0,659 0,639 P 5 180,8±12,46  212,6±24,89 0,000 a 0,000 a D1 5 228,2±6,38 331,2±6,87 0,190 0,908 D2 5 218,8±3,271 316,2±20,4 0,540 0,229 D3 5 224,6±5,857  307,6±6,066 0,507 0,015 a
Keterangan:
K = Kelompok kontrol CMC Na 0,5% P
= Kelompok pembanding 5-fluorourasil dosis 10 mg/kg bb D1 = Kelompok dosis 23,77 mg/kg bb ekstrak air daun kecubung gunung D2
= Kelompok dosis 95,0 mg/kg bb ekstrak air daun kecubung gunung
D3 = Kelompok dosis 950,5 mg/kg bb ekstrak air daun kecubung gunung
a = Ada perbedaan bermakna dibandingkan dengan kontrol pada uji T-test (p<0,05)
Gambar 1. Diagram batang bobot rata-rata induk tikus H-0 kehamilan
0 50 100 150 200 250 Bobot Rata-Rata Induk Tikus H-0 Kehamilan
Gambar 2. Diagram batang bobot rata-rata induk tikus H-20 kehamilan
Dari hasil penelitian yang telah
dilakukan  menunjukkan  bahwa  ekstrak  air daun kecubung gunung menyebabkan penurunan  bobot  badan  induk  dengan peningkatan dosis. Hasil statistik
menunjukkan  adanya  perbedaan  bermakna bobot  rata-rata  induk  pada  H-20  kehamilan antara  kelompok  kontrol  dengan  kelompok dosis 950,5mg/kg bb(p<0,05). Tabel 2. Bobot Rata-Rata Fetus Perlakuan Jumlah Tikus Yang Diamati Jumlah Fetus Bobot Badan Rata- Rata Fetus Tikus (gram) Probabilitas K 5 76 4,08±0,08 0,021 D1 5 60 3,40±0,05 0,027 a D2 5 57 3,21±0,03 0,004 a D3 5 49 3,25±0,06 0,006 a Keterangan: K   = Fetus kelompok kontrol CMC Na 0,5%
D1 = Fetus kelompok dosis 23,77 mg/kg bb ekstrak air daun kecubung gunung D2 = Fetus kelompok dosis 95,0 mg/kg bb ekstrak air daun kecubung gunung D3 = Fetus kelompok dosis 950,5 mg/kg bb ekstrak air daun kecubung gunung a    = Ada perbedaan bermakna dibandingkan dengan kontrol pada uji T-test (p<0,05) Fetus pada kelompok pembanding tidak teramati karena semua fetus mengalami resorpsi (fetus tidak berkembang)
Gambar 3. Diagram batang bobot rata-rata fetus
0 100 200 300 400 Bobot Rata-Rata Induk Tikus H-20 Kehamilan 0 1 2 3 4 5 K D1 D2 D3 Bobot Rata-Rata Fetus
Dari  hasil  penelitian  juga  menunjukkan bahwa  ekstrak  air  daun  kecubung  gunung memberikan  efek  pengurangan  jumlah  fetus dan  penurunan  bobot  badan  fetus.  Hasil statistik  menunjukkan  adanya  perbedaan bermakna  antara  kelompok  kontrol  dengan kelompok uji dosis 950,5 mg/kg bb (p<0,05) dimana  jumlah  fetus  menurun  pada  dosis tersebut.  Hal  tersebut  karena  semakin  tinggi dosis  akan  mempengaruhi  pembelahan  sel fetus  sehingga  frekuensi  pembelahan  sel menurun,  juga  dapat  menyebabkan  resorpsi dan  kematian  pada  sebagian  fetus.  Jumlah penurunan fetus yang terjadi tidak sama pada setiap  induk  karena  respon  yang  berbeda antara setiap induk terhadap ekstrak (Anastasia Kristiani Ong, 2013). Hasil  statistik  juga  menunjukkan  bahwa adanya perbedaan bermakna antara
kelompok  kontrol  dengan  semua  kelompok dosis  uji (p<0,05)  yang  menunjukkan  terjadi penurunan bobot rata-rata fetus pada pemberian ekstrak air daun kecubung gunung dosis  23,77  mg/kg  bb,  95,0  mg/kg  bb  dan 950,5  mg/kg  bb.  Hal  tersebut  menunjukkan bahwa  ekstrak  air  kecubung  gunung  dapat mengurangi jumlah fetus serta dapat menurunkan bobot badan fetus.
Pada  pengamatan  jaringan  lunak  atau organ,  organ  yang  diamati  meliputi  lobus otak,  mata,  hidung,  mulut,  jantung,  paru- paru,  hati,  limpa,  lambung,  usus,  ginjal, testis,  ovarium,  tangan  dan  kaki.  Hasil pengamatan  pada  bagian  organ  fetus  tidak ditemukan adanya kelainan pada semua dosis uji.
Pada  pengamatan  kerangka,  pengamatan dilakukan terhadap jumlah dan kelainan yang mungkin  terjadi  pada  proses  pembentukkan tulang.  Susunan  dan  jumlah  rangka  normal adalah  7  tulang  serviks,  12  tulang  toraks,  6 tulang  lumbar,  4  tulang  sakral,  2-3  tulang kaudal.  Jumlah  normal  ruas  tulang  anggota depan  adalah  5  ruas  tulang  distal,  4  ruas tulang  proksimal  dan  5  ruas  tulang metakarpal  (tulang  tangan).  Pada  anggota bagian belakang adalah 5 ruas tulang distal, 4 ruas  tulang  proksimal  dan  5  ruas  tulang metatarsal  (tulang  kaki).  Hasil  pengamatan kerangka  fetus  tidak  ditemukan  adanya kelainan pada semua dosis uji.
Pada  dosis  pembanding  digunakan  5- fluorouracil (5-FU) dosis 10 mg/kg bb secara
intraperitonial pada hari ke-6 sampai hari ke- 15  kehamilan.  Induk  tikus  mengalami penurunan  bobot  badan  dan  terjadi  resopsi pada semua fetus dari semua induk tikus. Hal ini  disebabkan  karena  5-FU  menimbulkan gangguan  perkembangan  sel  dan  akhirnya menyebabkan kematian sel.

## KESIMPULAN
Ekstrak  air  daun  kecubung  gunung ( Brugmansia  suaveolens Bercht  &  Presl.) tidak  memiliki  efek  teratogenik.  Ekstrak  air daun kecubung gunung menyebabkan penurunan  bobot  rata-rata  induk  pada  H-20 kehamilan  dan  menyebabkan  penurunan jumlah  fetus  pada  dosis  950,5  mg/kg  bb, serta  penurunan  bobot  rata-rata  fetus  pada semua  kelompok  dosis  uji  yaitu  dosis  23,77 mg/kg  bb,  95,0  mg/kg  bb  dan  950,5  mg/kg bb. Meskipun tidak memiliki efek teratogenik  tetap  harus  berhati-hati  jika diberikan pada wanita hamil.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  penulis  sampaikan  kepada LPPM  UNJANI  yang  telah  mendukung penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Almahdy, dkk, 2004,Uji Aktivitas Teratogenisitas  Ekstrak  Etanol  Daun Inggu  ( Ruta  graveolens Linn)  Pada Mencit  Putih , Jurusan  Farmasi  Fakultas MIPA  Universitas  Andalas. Jurnal  Sains dan Teknologi Farmasi 9(2): 82-87.
Anisa, Ita Nur dan Andreanus A. Soemardji.
2013. Uji Efek Bronkodilator Ekstrak Air Daun  dan  Bunga  Kecubung  Gunung ( Brugmansia suaveolens Bercht & Presl). Laporan  Penelitian ,  Cimahi,  Jurusan Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Jenderal Achmad Yani.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.
2006. Pedoman  Pelayanan  Farmasi Untuk  Ibu  Hamil  dan  Menyusui . Depkes, Jakarta .
Direktorat  Jenderal  Pengawasan  Obat  dan Makanan.  2009. Prosedur  Operasional
Baku UJi Toksisitas . Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Hutapea.J.R.dkk.  1993. Inventaris  Tanaman Obat  Indonesia  jilid  II ,  Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Balitbangkes, Jakarta. Ong, Kristiani Anastasia. 2013. Uji Teratogenik Ekstrak Etanol Daun Alpukat ( Persea  Americana Mill)  Pada  Mencit Betina  ( Mus  Musculus ). Calyptra:  Jurnal Ilmiah  Mahasiswa  Universitas  Surabaya 2(1).