Majalah Farmasi, Sains, dan Kesehatan ISSN 2442-9791
Uji Toksisitas Akut Infusa Kulit Batang Ubi Kayu ( Manihot esculenta Crantz) menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Irnawati *1 , La Ode Izzatil Haqqa 2 , Reymon 2 , Karmila 2
1 Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu Kendari 93232
2 Akademi Farmasi Bina Husada, Jl. Sorumba No. 17 Kendari 93117

## Abstrak
Uji toksisitas akut dirancang untuk menentukan efek toksik suatu senyawa yang akan terjadi dengan waktu yang singkat dan dengan pemberian takaran tertentu.  Kulit batang ubi kayu merupakan salah satu jenis tanaman yang berpotensi sebagai obat tradisional yang  berkhasiat  sebagai  obat  cacing.    Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  potensi  toksik  akut  infusa  kulit  batang  ubi  kayu terhadap larva udang yang dinyatakan dalam LC 50. Digunakan hewan uji 210 ekor larva udang ( Artemia salina Leach) yang dibagi dalam 7 kelompok perlakuan. Tiap kelompok terdiri dari 10 ekor dengan 3 kali pengulangan. Konsentrasi infusa dalam media yang berisi larva udang  berturut-turut adalah 2750 µg/mL, 1500 µg/mL, 1000 µg/mL, 750 µg/mL, 500 µg/mL, 250 µg/mL, dan kontrol negatif. Pengamatan dilakukan selama 24 jam terhadap larva yang mati setelah pemberian larutan uji. Nilai LC 50 infusa kulit batang ubi kayu ditentukan dengan analisis probit .  Hasil penelitian menunjukan bahwa persentasi kematian larva udang setelah pemberian infusa kulit batang ubi kayu  secara berturut-turut adalah 90%, 73,3%, 60%, 50%, 40%, 30%, dan presentasi kematian kelompok kontrol 0%. Hasil dari analisis probit menunjukan nilai LC 50 dari infusa kulit batang ubi kayu sebesar 873,775 µg/mL, sehingga infusa kulit batang ubi kayu dikategorikan dalam tingkat toksisitas sedang.
Kata kunci: toksisitas akut, kulit batang, ubi kayu, BSLT, LC 50

## 1. Pendahuluan
Obat  tradisional  telah  diterima  secara  luas  di negara-negara  yang  tergolong  berpenghasilan  rendah sampai sedang, bahkan di beberapa negara berkembang obat  tradisional  telah  dimanfaatkan  dalam  pelayanan kesehatan  terutama  dalam  pelayanan  kesehatan  strata pertama. Penggunaan obat tradisional makin popular di banyak negara maju [1].
Surat  keputusan  kepala  badan  POM  RI  Nomor HK.00.05.4.2411  menggolongkan  obat  tradisional dalam 3 kelompok yaitu jamu, obat herbal terstandar dan fitofarmaka.    Pemakaian  bahan  alam  sebagai  obat tradisional  di  masyarakat  dijamin  keamanannya  oleh pemerintah  dengan  mengimplementasikanya  dalam Permenkes  No.  760/Menkes/Per/IX/1992,  tentang  obat tradisional  dan  fitofarmaka.    Sebelum  menjadi  suatu sediaan  fitofarmaka,  setiap  bahan  alam  harus  melewati beberapa tahapan demi menjamin keamanan masyarakat dalam mengkonsumsinya.
Pengetahuan  tentang  khasiat  dan  keamanan tanaman obat di Indonesia biasanya hanya berdasarkan
* KBK Farmasi Sains, Fakultas Farmasi UHO Email: irnawati.ichang@yahoo.com
pengalaman  empiris  yang  biasanya  diwariskan  secara turun temurun dan belum teruji secara ilmiah.  Untuk itu diperlukan penelitian tentang obat tradisional, sehingga nantinya  obat  tersebut  dapat  aman  digunakan  oleh masyarakat.  Salah  satu  tanaman  yang  digunakan  oleh masyarakat sebagai obat adalah tanaman ubi kayu. Kulit batang  ubi  mengandung  tannin,  enzim  peroksidase, glikosida dan kalsium oksalat [2]. Di sisi lain, tanaman ubi kayu terkenal dengan kandungan metabolit sekunder glikosida  sianogenik  berupa  linamarin  dan  lotaustrain yang dapat berubah menjadi sianida yang bersifat racun [3,  4].    Hidrolisis  linamarin  dengan  linamarase menghasilkan aseton sianohidrin dan glukosa.   Aseton sianohidrin  pada  pH  diatas  5  secara  spontan menghasilkan  asam  sianida  dan  aseton  [5].  Glikosida sianogenik  memberikan efek  yang selektif terhadap sel tumor [6].
Secara empiris, air rebusan kulit batang tanaman ini digunakan  sebagai  obat  cacing.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  infusa  kulit  batang  ubi  kayu
Irnawati, dkk: Infusa Kulit Batang Ubi Kayu (Manihot esculenta Crantz) menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT
memiliki  daya  antelmintik  terhadap  cacing Ascaridia galli Schrank,  dengan  konsentrasi  efektif  10  %  [7]. Selain  khasiat  dan  mutu,  keamanan  obat  tradisional adalah  kriteria  yg  harus  diperhatikan  [8]  ataupun  efek yang tidak diinginkan [6].
Salah  satu  metode  uji  efek  toksik  adalah  uji toksisitas  akut.    Uji  toksisitas  akut  dirancang  untuk menentukan efek toksik suatu senyawa yang akan terjadi dalam masa pemejanan dengan waktu yang singkat atau pemberiannya dengan takaran tertentu. Uji ini dilakukan dengan cara pemberian konsentrasi tunggal senyawa uji pada hewan uji [9].
Metode  awal  yang  sering  digunakan  untuk mengamati  toksisitas  senyawa  dan  merupakan  metode penapisan  untuk  aktifitas  antikanker  senyawa  kimia dalam ekstrak tanaman adalah Brine Shrimp Letahality Test (BSLT).    Metode  ini  ditujukkan  dengan  tingkat mortalitas  larva  udang Artemia  salina Leach  yang disebabkan  ole  ekstrak  uji.    Hasil  yang  diperoleh dihitung  sebagai  nilai  LC 50 ( lethal  concentration ) ekstrak uji yaitu jumlah konsentrasi ekstrak yang dapat menyebabkan  kematian  larva  udang  sejumla  50% selama  masa  inkubasi  24  jam.    Senyawa  dengan  LC 50 <1000  µg/  mL  dapat  dianggap  sebagai  suatu  senyawa aktif [10]. Berdasarkan hal tersebut maka peneliti tertarik untuk  menguji  keamanan  infusa  kulit  batang  ubi  kayu melalui uji toksisitas akut dengan menggunakan metode BSLT

## 2. Bahan dan Metode
Batang ubi kayu siap panen diperoleh dari tanaman hasil budidaya masyarakat di kota Kendari.  Larva udang Artemia  salina Leach  merupakan  koleksi  dari Laboratorium  Farmasi,  Fakultas  Farmasi  Universitas Halu Oleo, Kendari.

## 2.1 Pembuatan Infusa
Batang yang digunakan adalah batang tanaman ubi kayu  siap  panen.    Batang  tanaman  ubi  kayu  dipotong kecil,  dibersihkan,  dikupas,  kemudian  dikeringkan dengan  sinar  matahari  secara  tidak  langsung,  dirajang, dan diserbukan. Sebanyak 10 g serbuk kulit batang ubi kayu ditambah aquadest 100 mL, masukan dalam panci infusa  dan  dipanaskan  pada hot  plate selama  15  menit pada  suhu  90 0 C.  Infusa  dimasukkan  dalam  labu  takar 100 mL dan dicukupkan volumenya hingga tanda batas.

## 2.2 Uji toksistas akut dengam metode BSLT
Larutan uji infusa kulit batang ubi kayu dilarutkan dalam air laut dengan konsentrasi masing-masing  250, 500,  750,  1000,  1500  dan  2750  µg/mL.    Sebanyak  10 ekor larva udang umur 48 jam dimasukkan ke dalam vial
berisi 10 mL larutan uji. Setelah 24 jam, dihitung jumlah larva udang yang mati dan hidup.

## 2.3 Analisis Data
Berdasarkan  perhitungan  jumlah  larva  yang  mati dan  hidup,  tingkat  kematian  diperoleh  dengan membandingkan antara jumlah larva  yang  mati dengan jumlah  total  larva.    Nilai  LC 50 kemudian  diperoleh dengan menggunakan analsis probit sehingga diperoleh persamaan regresi linear y=a+bx .  Harga y menyatakan larva  udang  yang  mengalami  kematian  sebanyak  50% selama masa inkubasi 24 jam.  Nilai a dan b merupakan nilai  slope  dan  intercep  dari  data  keenam  konsentrasi yang  digunakan.    Harga  x  yang  diperoleh  merupakan konsentrasi  larutan  yang  menyebabkan  kematian  larva udang sebanyak 50%.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Uji  toksisitas  akut  adalah  suatu  pengujian  yang dirancang untuk menentukan efek toksis suatu senyawa dalam waktu yang singkat. Uji ini dilakukan dengan cara pemberian konsentrasi tunggal senyawa uji pada hewan uji.  Takaran  konsentrasi  yang  dianjurkan  paling  tidak empat  peringkat  konsentrasi  atau  lebih,  berkisar  dari konsentrasi terendah yang atau hampir tidak mematikan seluruh  atau  hampir  seluruh  hewan  uji.  Biasanya pengamatan dilakukan selama 24 jam. Salah satu metode sederhana  yang  digunakan  untuk  uji  toksisitas  adalah metode  BSLT.    Metode  ini  ditujukkan  dengan  tingkat mortalitas  larva  udang Artemia  salina Leach  yang disebabkan  ole  ekstrak  uji.    Hasil  yang  diperoleh dihitung  sebagai  nilai  LC 50 ( lethal  concentration ) ekstrak uji yaitu jumlah konsentrasi ekstrak yang dapat menyebabkan  kematian  larva  udang  sejumla  50% selama masa inkubasi 24 jam.
Hasil  uji  toksisitas  infusa  kulit  batang  ubi  kayu terhadap  larva  udang  menunjukkan  bahwa  semakin besar  konsentrasi  yang  diberikan  maka  semakin  besar pula persen kematian terhadap larva udang (Tabel 1).
Tabel 1. Data Hasil Uji Toksisitas Infusa Kulit Batang Ubi

## Kayu Terhadap Larva Udang
Konsentrasi Hidup Mati Replikasi Replikasi I II III I II III 2750 ppm 1 1 1 9 9 9 1500 ppm 3 2 3 7 8 7 1000 ppm 4 4 4 6 6 6 750 ppm 5 5 5 5 5 5 500 ppm 6 6 6 4 4 4 250 ppm 7 7 7 3 3 3 Kontrol 10 10 10 0 0 0
12 |
Irnawati, dkk: Infusa Kulit Batang Ubi Kayu (Manihot esculenta Crantz) menggunakan
Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT
Berdasarkan  pengolahan  menggunakan  analisis probit menunjukan  bahwa  nilai  LC 50 dari  infusa  kulit batang ubi kayu sebesar 873,775 µg/mL (Tabel 2).
Suatu  ekstrak  menunjukkan  aktifitas  ketoksikan dalam  uji  toksisitas  jika  ekstrak  dapat  menyebabkan kematian  50%  hewan  uji  pada  konsentrasi  kurang  dari 1000 µg/mL [10].  Berdasarkan hal tersebut maka infusa kulit batang ubi kayu memiliki potensi efek toksis dalam kategori toksik sedang (500-1000 µg/mL).
Tabel 2. Hasil  analisis  doking  senyawa  turunan  2- amidinobenzotiopen. Konsentrasi Larva Udang Total Rasio Angka Kematian % Kematian Hidup  Mati 2750 ppm 3 27 30 27/30 90% 1500 ppm 8 22 30 22/30 73,3% 1000 ppm 12 18 30 18/30 60% 750 ppm 15 15 30 15/30 50% 500 ppm 18 12 30 12/30 40% 250 ppm 21 9 30 9/30 30% Kontrol 30 0 30 0/30 0%
Kemampuan  infusa  kulit  batang  ubi  kayu  dalam membunuh  larva  udang  kemungkinan  disebabkan  oleh kandungan sianida dalam tanaman famili Euphorbiaceae [3, 4, 5, 6].

## 4. Kesimpulan
Presentase kematian larva udang setelah pemberian infusa kulit batang  ubi kayu pada konsentrasi 2750 ppm,
1500  ppm,  1000  ppm,  750  ppm,  500  ppm,  250  ppm secara  berturut-turut  adalah  90%,  73,3%,  60%,  50%, 40%, 30%, dan  kelompok  kontrol persentasi  kematian 0%,  dengan  nilai  LC 50 873,775  µg/mL  atau  memiliki potensi toksisitas kategori sedang.

## Daftar Pustaka
1. Menkes  RI. Kebijakan  Obat  Tradisional  Nasional . Jakarta:  Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia. 2007
2. Segeng  H. Ensiklopedi  Tanaman  Obat  Indonesia. Yogyakarta: Palmall. 2012.
3. Djazuly  M,  Bradbury  M.  Cyanogen  Content  of  Cassava Roots and Flour in Indonesia. J. of Agricultural and Food Chemistry, 1999, 65 .
4. Nambisan B. Cassava latex and Source as Linamarase for Determination of Linamarin. J. of Agricultural and Food Chemistry. 1999, 47 .
5. Mkpong  OE,  Yan  GC,  Sayre  RT.  Purification, Characterization  and  Localization  of  Linamarase  in Cassava. J. Plant Physiol., 1990, 93 .
6. Mills S, Bone K. Principles and Practice of Phytotherapy. Modern Herbal Medicine . Churchill Livingstone. 1990.
7. Irnawati,  Lalo  A,  Violita  V.  Uji  Efektifitas  Antelmintik Infusa Kulit Batang Ubi Kayu ( Manihot esculenta Crantz) Terhadap  Cacing Ascaridia  galli Scrhank. Seminar Nasional Peluang dan Tantangan Pengembangan Produk herbal , 18-19 Oktober 2014 .
8. Depkes RI. Farmakope Herbal Indonesia Edisi I. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2008.
9. Priyanto,  Sunaryo  H. Toksikologi. Jakarta:  Leskonfi. 2009.
10. Meyer  HN.  Brine  Shrimp  Letahality  Test. Med.  Plant Res. , 1982, 45 .