## PERBANDINGAN METODE PENETAPAN KADAR SIMETIDIN MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETRI UV DAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI
Aqnes Budiarti 1) , Adina Fitria Kusuma Wardani 1) , Sumantri 1)
1) Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim

## INTISARI
Penetapan kadar obat merupakan salah satu kontrol kualitasdalam menjamin keamanan suatu obat.  Kadar  simetidin  dapat  ditetapkan  secara  spektrofotometri  UV  dan  KCKT.  Tujuan  dari penelitian  ini  adalah  menvalidasi  dan  membandingkan  metode  penetapan  kadar  simetidin menggunakan spektrofotometri UV dan KCKT serta aplikasikannya dalam sediaan tablet.
Penetapan  kadar  simetidin  secara  spektrofotometri  UV  dilakukan  pada  panjang  gelombang 219  nm.  Penetapan  kadar  secara  KCKT  menggunakan  fase  diam  C18  dan  fase  gerak  berupa campuran  metanol  :  air-asam  fosfat  (30:70  v/v)  dengan  laju  alir  1mL/menit  serta  detektor  UV. Parameter  validasi  metode  analisis  meliputi  ketelitian,  ketepatan,  linieritas,  selektivitas  dan sensitivitas. Perbandingan kedua metode dilakukan dengan uji beda.
Hasil  validasi  metode  menggunakan  spektrofotometri  UV  menunjukkan  ketelitian  sebesar 0,94%,  perolehan  kembali  97,50-100,91%,  linieritas  baik,  LOD  sebesar  0,76  µg/mL  dan  LOQ sebesar  2,52  µg/mL.  Validasi  metode  menggunakan  KCKT  menghasilkan  parameter  ketelitian 0,30%, perolehan kembali 98,42-101,83%, linieritas baik,selektif serta LOD sebesar 0,46  µg/mL dan  LOQ  sebesar  0,56  µg/mL.  Kadar  rata-rata  simetidin  dalam  tablet  menggunakan spektrofotometri  UV  sebesar  101,95%,  sedangkan  menggunakan  KCKT  sebesar  99,69%.  Kedua metode  memenuhi  persyaratan  validasi.  Hasil  penetapan  kadar  menggunakan  kedua  metode memenuhi  persyaratan  menurut  Farmakope  Indonesia  Edisi  IV.  Kedua  metode  tidak  memiliki perbedaan nyata berdasarkan uji beda, baik parameter validasi maupun hasil penetapan kadarnya. Kata kunci : validasi metode, simetidin, spektrofotometri UV, KCKT

## ABSTRACT
Determination ofdrug substance is one of the drug quality control to ensure the safetyof drug. Determination  of  cimetidine  could  use  UV  spectrophotometry  and  HPLC.  The  aim  ofthis  study were to validate the methode using two instruments, to compare both of  the method and to apply it intablet dosage forms.
Determination  of  cimetidin  using  UV  spectrophotometry  was  set  on  wave  length  219  nm. Determination  using  HPLC  with  coloumn  C18  and  mobile  phase  mixture  of  methanol:  water- phosphoric acid (30:70, v/v), flow rateat 1mL/min and UV detector. The method was validated in terms  of  accuracy,  precision,  linearity,  selectivity  and  sensivity.  The  method  of  determination  of cimetidine using both instruments were campared by analysis of variant.
Validation  method using UV  spectrophotometry  showed precision of 0.94%,  recovery  from 97.50 to 100.91%, good linearity, LOD 0.76 µg/mL and  LOQ 2.52µg/mL. Validation using HPLC method resulted value of precision 0.30%, recovery from 98.42 to 101.83%, good linearity, LOD and  LOQ  of  0.46  and  0.56 µg/mL .  The  average  concentration  of  cimetidine  in  tablets  by spectrophotometry UV was 101.95%, while in HPLC was 99.69%.The methods accomplied to the requirements  according  The  Indonesian  Pharmacopoeia  Edition  IV.  Both  methods  provided  the same results and did not significantly different.
Keyword : validation method, cimetidine, UV spectrophotometry, HPLC
PENDAHULUAN Simetidin merupakan antasida penghambat reseptor H 2 yang bekerja secara selektif  dan  reversibel.  (Sjamsudin  dan Dewoto,  2009).  Menurut  United  States Pharmacopea  (USP)  Edisi  XXIV  (2008) simetidin dapat ditetapkan kadarnya menggunakan  Kromatografi  Cair  Kinerja Tinggi (KCKT) dengan kolom L1
(oktadesilsilan), fase gerak berupa campuran metanol  :  asam  fosfat  (200ml  :  0,3mL)  dan air    500  ml  dengan  laju  alir  2ml/menit  pada panjang  gelombang  219  nm.  Penelitian  lain yang  dilakukan  oleh  Moreno,  dkk.,  (2009) tentang  penetapan  kadar  simetidin  dalam plasma darah manusia dengan menggunakan KCKT  pada  uji  presisi  menghasilkan  nilai RSD  2,0-2,7%,    akurasi  92,1-103,7%, Koefisien  korelasi  korelasi  yang  dihasilkan 0,997.
Struktur  bangun  simetidin  memiliki gugus  kromofor  sehingga  dapat  ditetapkan kadarnya  menggunakan  spektrofotometri.
Selain  itu,  simetidin  bersifat  polar  sehingga dapat dianalisis menggunakan KCKT dengan  fase  gerak  polar  dan  kolom  C18.
Berdasarkan  latar  belakang  maka  peneliti membandingkan  validasi  metode  penetapan kadar simetidin mengggunakan spektofotometri  UV  dan  KCKT.  Peneliti juga  membandingkan  hasil  penetapan  kadar simetidin dalam sediaan tablet menggunakan kedua  metode.  Penelitian  ini  diharapkan menghasilkan informasi yang dapat digunakan dalam memilih metode penetapan kadar simetidin yang tepat.

## METODE PENELITIAN Bahan
Baku  pembanding  simetidin  p.a.,  metanol (E-merck), asam fosfat (E-merck), aquabidestilata,  tablet  yang  mengandung simetidin 200 mg (Indofarma).

## Alat
KCKT  (isokratik  Jasco  LC  Net  II/ADC), kolom  C18  (Lichosper  100,  Rp-18,  5µM), detektor UV (2070 Plus), dan pengolah data EZ  Chrom  Elite ,  Spektrofotometer  UV-Vis
(1800  Shimadzu),  syringe  (Hamilton),  PH meter  (Handy1ab),  timbangan  analitik  (O Haus),  penyaring  eluen  (Whatman),  Digital ultrasonic
cleaner)
danmikropipet
(Soccorex).
Jalannya Penelitian
1 . Spektrofotometri UV
a. Pembuatan larutan stok baku simetidin.
Simetidin  ditimbang  500  mg  dengan saksama, lalu dimasukkan dalam labu takar  50  mL,  kemudian  dilarutkan dengan  metanol    dan  ditambah aquabidest  hingga  tanda  batas  dan diperoleh kadar 10.000 µg/mL.
b. Penentuan panjang gelombang
maksimal. Larutan  simetidin  200 µg/mL dibaca serapannya  pada  panjang  gelombang antara  200-400  nm  menggunakan spektrofotometri UV. Panjang gelombang maksimal ditentukan pada serapan yang tinggi dan stabil.
c. Penentuan operating time.
Larutan  simetidin  kadar  6  µg/mL. dibaca  serapannya  pada  panjang gelombang maksimum pada menit ke 0,  5,  10,  15,  20,  25,  30,  35,  40,  45, 50,  55,  60.  Kemudian  ditentukan waktu  dimana  larutan  simetidin mempunyai serapan yang stabil.
d. Pembuatan Kurva Baku. Seri kadar larutan simetidin ar 2; 4; 6;
8;  dan  10  µg/mL.  Larutan  ini digunakan  untuk  membuat  kurva baku dan uji linieritas.
e. Validasi
1) Ketelitian (Presisi)
Larutan  simetidin6µg/mL  dibaca serapannya pada panjang gelombang maksimum.Uji dilakukan  replikasi  sebanyak  3 kali, kemudian dihitung persentase koefesien variasinya. 2) Ketepatan Uji akurasi metode analisis
ditentukan dengan parameter persen  perolehan  kembali  dengan metode  penambahan  baku  pada analit ( standard addition method). Uji dilakukan dengan cara :sampel dianalisis, kemudian sejumlah  bahan  baku  (80,  100, dan  120%  dari  kadar  analit target).
3) Linearitas
Larutan  baku  simetidin  dengan konsentrasi  2;  4;  6;  8;  dan  10 µg/mL  dibaca  serapannya  pada panjang  gelombang  maksimal. Serapan  untuk  tiap  konsentrasi
dibuat persamaan linier dan ditentukan koefisiensi korelasinya. Uji linieritas dilakukan  3  kali  pengulangan. Persamaan regresi terbaik digunakan sebagai persamaan kurva  baku  untuk  menentukan kadar sampel.
4) Sensitivitas Uji sensitivitas dinyatakan dengan uji batas deteksi (LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ).  Batas  deteksi dan  batas  kuantifikasi  metode dihitung secara statistic
menggunakan  persamaan  garis regresi  linier  yang  diperoleh  dari uji  linieritas  (Miller  dan  Miller, 1988).
f. Penetapan  kadar  simetidin  dalam sediaan tablet Dua  puluh  tablet  ditimbang, kemudian  digerus  dalam    mortir.
Serbuk  ditimbang  sejumlah  tertentu yang setara dengan 200 mg simetidin. Keseluruhan  serbuk  dimasukkan  ke dalam  labu  takar  1000  ml,  kemudian ditambahkan  methanol  hingga  batas tanda,  selanjutnya  dikocok  mekanis selama  30  menit.  Larutan  disaring dengan  kertas  saring  Whatman  41. Larutan  jernih  diencerkan  hingga diperoleh  konsentrasi  40  µg/mL. Dipipet  1,0  ml  dimasukkan  ke  dalam labu  takar  5,0  mL,  hingga  diperoleh konsentrasi 8µg/mL. Serapannya dibaca  pada  panjang  gelombang maksimum. Penetapan kadar dilakukan sebanyak 5 kali. Absorbansi yang diperoleh digunakan untuk menghitung kadar tablet berdasarkan kurva baku.
2. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi a. Pembuatan Fase Gerak Metanol 350 mL dan campuran asam fosfat dan air dimasukkan dalam labu takar  500  mL  di  tambahkan  air hingga  batas,  lalu  disaring  dengan menggunakan cellulose nitrat membran filter.
b. Pembuatan Kurva Baku Larutan  simetidin  dengan  seri  kadar 2;  4;  6;  8;  dan  10  µg/mL  digunakan untuk  membuat  kurva  baku  dan  uji linieritas. c. Validasi 1) Ketelitian ( Presisi) Larutan simetidin 6µg/mL disaring dengan membran penyaring 0,45 µm, lalu diinjeksikan  sebanyak  20  µL  ke alat KCKT. Uji dilakukan replikasi  sebanyak  3  kali  untuk masing-masing konsentrasi. 2) Ketepatan (Akurasi)
Uji akurasi metode analisis ditentukan dengan parameter persen  perolehan  kembali  dengan metode  penambahan  baku  pada analit ( standard addition method),
masing-masing direplikasi sebanyak 3 kali. 3) Selektivitas Selektivitas  ditentukan  melalui perhitungan  nilai`resolusinya  (R). Resolusi dapat dikatakan memenuhi syarat apabila nilai R ≥ 2,00 (Snyder dkk., 1997). 4) Linieritas Larutan yang mengandung simetidin 2; 4; 6; 8; dan 10 µg/mL dibaca  serapannya  pada  panjang gelombang  maksimum.  Luas  area simetidin  yang  diperoleh  untuk tiap konsentrasi dibuat persamaan linier  dan  ditentukan  koefisien korelasinya. Uji linieritas dilakukan 3 kali pengulangan. 5) Sensitivitas Uji sensitivitas dinyatakan denganuji batas  deteksi (LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ).
d. Penetapan kadar simetidin dalam sediaan tablet Dua  puluh  tablet  ditimbang,  kemudian digerus  dalam  mortir.  Keseluruhan serbuk dimasukkan ke dalam labu takar
1000  mL,  kemudian  ditambahkan methanol hingga batas tanda,
selanjutnya dikocok mekanis selama 30 menit.  Larutan  disaring  dengan  kertas saring  Whatman  41.    Larutan  jernih diencerkan hingga
diperoleh
konsentrasi20  µg/mL.  Larutan  dipipet sebanyak1,0  mL dimasukkan  ke dalam labu 10 mL, hingga diperoleh konsentrasi  2µg/mL.  Larutan  disaring dengan  membrane  penyaring  0,45  µm dan  diinjeksikan  sebanyak  20  µL  ke KCKT..  Luas  puncak  yang  diperoleh
digunakan  untuk  menghitung  kadar tablet berdasarkan kurva baku. Penetapan  kadar  dilakukan  tiga  kali pengulangan.
3. Perbandingan Validasi Metode Spektrofotometri UV Dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT )
Data  validasi  dan  penetapan  kadar simetidin  dalam  sediaan  tablet  dibagi menjadi  dua  kelompok  yaitu  menggunakan spektrofotometri UV dan KCKT. Kelompok data tersebut diuji distribusi datanya dengan uji Kolmogrov  Smirnov untuk  mengetahui data tersebut terdistribusi normal. Kemudian diuji  homogenitasnya,  dilanjutkan  dengan uji  T  test  untuk  mengetahui  apakah  ada perbedaan  bermakna  atau  tidak  dari  kedua metode.

## HASIL PENELITIAN
A. Metode Spektrofotometri UV
1. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Simetidin
Penentuan  panjang  gelombang maksimum  simetidin  dilakukan  pada 200-400 nm. Tujuannya adalah untuk mendapatkan panjang gelombang yang memiliki nilai absorbansi tinggi dan  stabil  pada  serapan  0,2  sampai 0,8. Panjang gelombang yang diperoleh digunakan untuk penetapan kadar  simetidin  dalam  sampel.  Pada penelitian  ini  diperoleh  serapan maksimum  pada  219  nm,    hasil  ini sama  dengan  panjang  gelombang yang  digunakan  pada  prosedur  yang ditetapkan oleh USP XXIV yaitu 219 nm. Hasil penentuan panjang gelombang terlihat pada gambar 1.
Gambar 1. Hasil Scanning Optimasi Panjang Gelombang (λ)
2. Penentuan Operating Time Hasil penelitian menunjukkan bahwa kestabilan tercapai pada menit ke 0 sampai 60.
3. Pembuatan Kurva Baku
Kurva  baku  menghasilkan  persamaan regresi linier terbaik, yaitu Y= 0,055X + 0,096  dengan  koefisien  korelasi    (r)  =
0,998.Grafik tersebut menghasilkan persamaan  regresi  linier  yang  nilai koefisien  relasi  (r)  =  0,998  sehingga memenuhi syarat.
4. Validasi Metode
a. Ketelitian (Presisi) Pada  penelitian  ini  hasil  nilai  RSD yang  diperoleh  sebesar  0,95%  dan memenuhi  syarat  karena  nilai  kurang dari 2%. (Rohman, 2009).
b. Ketepatan (Akurasi) Pada hasil uji akurasi yang dilakukan, hasil perolehan kembali semua memenuhi  range  yaitu  90,0-110,0%.
Hasil  perolehan  kembali  yang  di dapatkan  yaitu  antara  97,0-100,1%, sehingga  pada  penelitian  ini  metode analisis yang digunakan
menghasilkan  data  kadar  simetidin yang mendekati kadar sebenarnya.
c. Linieritas Hasil  persamaan  regresi  linier  yang didapatkan  dari  absorbansi  versus konsentrasi diperoleh kurva baku Y = 0,055X  +    0,096.  Persamaan  garis regresi  linier  menunjukkan  nilai korelasi (r) = 0,998 sehingga memenuhi  syarat  (Miller  dan  Miller, 2005).
d. Sensitivitas Uji sensitivitas dinyatakan dengan uji batas  deteksi (LOD)  dan batas kuantifikasi (LOQ). Dalam penelitian ini  diperoleh  nilai  LOD  0,76  µg/mL dan nilai LOQ 2,52 µg/mL.
5. Penetapan  Kadar  Simetidin  dalam Sediaan Tablet secara Spektrofotometri UV Hasil yang diperoleh dari perhitungan  penetapan  kadar  simetidin dapat dilihat pada Tabel I
. Tabel I. Hasil penetapan kadar Simetidin secara spektrofotometri UV
Pada penelitian ini didapatkan hasil uji  penetapan  kadar  rata-rata  simetidin dalam  sediaan  tablet  sebesar  101,95%.
Hasil yang didapatkan memenuhi
persyaratan  yaitu  tidak  kurang  dari 90,0%  dan  tidak  lebih  dari  110,0%  dari jumlah  yang tertera pada etiket (Depkes, R.I., 1995).
B. Metode  Kromatografi  Cair  Kinerja Tinggi
1. Pembuatan Kurva Baku Simetidin Kurva  baku  menghasilkan  persamaan regresi  linier  Y  =  421492,7  X  + 894780,6  dengan  koefisien  korelasi  r  = 0,999).
2. Uji Validasi
a. Uji Ketelitian (Presisi) Pada  uji  ketelitian  ini  diperolehnilai RSD0,30%  dimana semua  nilai memenuhi  persyaratan  nilai  RSD yaitu lebih kecil dari 2%.
b. Uji Ketepatan (Akurasi) Uji  akurasi  suatu  metode  analisis ditentukan  melalui  uji  perolehan kembali  dengan  metode  penambahan
bahan  baku  pada  analit. Nilai perolehan  kembali  dari  semua  yang dihasilkan pada penelitianini memenuhi  criteria  rentang  nilai  yang dapat diterima yaitu 90-110% (Depkes RI, 1995). Dengan  demikian,  metode  analisis yang  digunakan  dapat  menghasilkan kadar  simetidin  dalam  sediaan  tablet yang dekat dengan kadar sebenarnya.
c. Selektivitas
Semakin  besar  nilai  resolusi  maka pemisahan
komponen-komponen yang  terelusi  dengan  waktu  retensi yang  berdekatan  semakin  efisien. Hasil  kromatogram  simetidin  dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Hasil Kromatogram Simetidin Pada Larutan Baku 6 µg/mL.
Hasil  kromatogram  diatas  dapat diketahui  bahwa  hanya  simetidin
yang terukur sedangkan pada komponen  lain  dalam  matriks  tablet No Berat Sampel Absorbansi Kadar (ppm) Kadar (%) 1 407,8 0,54 7,982 99,77 2 407,1 0,551 8,273 103,41 3 410,6 0,546 8,182 102,27 4 409,0 0,541 8,091 101,14 5 412,8 0,55 8,255 103,18 Rata-rata 8,156 101,95 SD 0,121 1,51 RSD 1,48 1,48
tidak  ada  yang  terukur.  Sehingga metode  analisis  memiliki  selektivitas yang baik.
d. Linieritas Uji  linieritas  dilakukan  pada  lima konsentrasi simetidin yaitu 2, 4, 6, 8, dan  10  µg/mL,  dilakukanreplikasi  3 kali.  Ketiga  garis  regresi  linier menunjukkan  korelasi  yang  baik dengan koefisien korelasi (r)
memenuhi kriteria (Miller dan Miller, 2005). Persamaan garis regresi terbaik berdasarkan
nilai
r
adalah Y=421492,7X+894780; r=0,999.
e. Sensitivitas
Pada  hasil  perhitungan  didapatkan nilai  LOD  sebesar  0,46  µg/mL, sedangkan  hasil  dari  LOQ  sebesar 0,56 µg/mL.
4. Penetapan  kadar  simetidin  dalam sediaan tablet
Kadar  simetidin  dalam  tablet  dapat dilihat  pada  Tabel  II  yang  menunjukkan bahwa hasil penetapan memenuhi persyaratan kadar berdasarkan Farmakope IV. Tabel II. Hasil uji penetapan kadar simetidin secara KCKT Bobot Luas Area Kadar (ppm) Kadar % 407,8 1735549 1,995 99,74 407,1 1722183 1,963 98,15 410,6 1743752 2,014 100,71 409,0 1733107 1,989 99,45 412,8 1740978 2,008 100,38 Rata-rata 1,994 99,69 SD 0,020 0,010 RSD 0,996% 1,00% C. Perbandingan Metode Penetapan Kadar Simetidin Menggunakan Spektrofotometri UV dan KCKT 1. Ketelitian (presisi) Kedua  metode  memiliki  ketelitian yang  baik,  tetapi  metode  KCKT  lebih teliti dibandingkan dengan spektrofotometri  UV,  karena  metode KCKT  mampu  memisahkan  zat-zat yang tercampur dalam tablet simetidin.  Pada  KCKT,  nilai  RSD sebesar  0,30%  yang  hasilnya  lebih kecil  dibandingkan  spektrofotometri UV  yaitu  nilai  RSDnya  sebesar 0,95%.
2. Ketepatan (akurasi)
Pengukuran  ketepatan  dari  suatu metode  analisis  mencerminkan  bahwa kedekatan suatu hasil penetapan kadar dengan kadar yang sebenarnya.
Metode  analisis  spektrofotometri  UV memperoleh  nilai  perolehan  kembali 97,50-100,68%,  sedangkan  KCKT
nilai perolehan kembali 98,42- 101,83%. Hasil  yang  didapatkan  dari  kedua metode tersebut memenuhi persyaratan ketetapan Farmakope Indonesia  dalam  hal  recovery,  yaitu tidak kurang dari 90% dan tidak lebih dari 110%, jadi metode spektrofotometri UV dan KCKT dapat menghasilkan  kadar  simetidin  dalam sediaan  tablet  yang  dekat  dengan kadar sebenarnya.
3. Sensitivitas Hasil  LOD  dan  LOQ  lebih  besar menggunakan  spektrofotometri  UV dibandingkan  KCKT  karena  metode KCKT lebih peka dibandingkan dengan  metode  spektrofotometri  UV. Selain itu metode KCKT juga memiliki kecepatan analisis dan kepekaan yang tinggi.
4. Uji T test
Data  hasil  penetapan  kadar  dari metode  spektrofotometri  UV  dan
KCKT  diuji  secara  statistik.  Uji normalitas  data  menggunakan  tes Kolmogorov Smirnov dan uji homogenitas  data  yang  menggunakan tes Levene  Statistic dan  diperoleh kesimpulan  bahwa  data  yang  diuji normal dan homogen, ini dapat dilihat
dari  hasil  signifikansi  0,268  >  0,05 yang  artinya  data  tersebut  homogen. Data  selanjutnya  dilakukan  uji  T test untuk  mengetahui  perbedaan  kadar simetidin  dalam  sediaan  tabletdari kedua metode
tersebut.  Uji  T test memperoleh  hasil nilai  signifikansi  kadar  simetidin  dari kedua metode yaitu 0,268 yang artinya kedua  metode  tersebut  tidak  berbeda bermakna.  Hasil  penetapan  kadar menggunakan  spektrofotometri  UV ataupun  KCKT  sama-sama  memenuhi persyaratan  dan  mempunyai  kualitas yang baik. Pada Industri obat sebaiknya  disarankan  menggunakan validasi  metode  spektrofotometri  UV karena  spektrofotometri  UV  lebih murah  dibandingkan  metode  KCKT jika dilihat dari segi harga.

## KESIMPULAN
1. Uji  validasi  metode  penetapan  kadar simetidin  menggunakan  spektrofotometri UV  dan  KCKT  memenuhi  syarat.  Pada Spektrofotometri  UV,  uji  presisi  0,94%, akurasi  97,50-100,91%,  linieritas  baik, LOD  dan  LOQ  sebesar  0,76  µg/mL  dan 2,52  µg/mL.  Pada  KCKT,  uji  presisi 0,30%,  akurasi  98,42-101,83%,  linieritas baik,  serta  LOD  dan  LOQ  sebesar  0,46 dan 0,56 µg/mL.
2. Kedua  metode  memberikan  hasil  nilai parameter  validasi  dan  penetapan  kadar yang tidak berbeda bermakna.

## DAFTAR PUSTAKA
Depkes  RI.,  1995, Farmakope  Indonesia , Edisi  IV,  Departemen  Kesehatan Republik  Indonesia,  Jakarta,  4,
223, 1009, 1061.
Miller,  J.C.  and  Miller,  J.N.,  1988, Statistics for Analytical Chemistry , 2 nd Edition,  John  Wiley  &  Sons,
New York, 109-120. Miller,  J.C.  dan  J.N.  Miller,  1991, Statistika Untuk Kimia Analisis. Diterjemahkan  oleh  Suroso,  ITB, Bandung. Moreno,  R.A.,  Costal,  O.,  Junior  L,  B.,  CE, Sverdloff.,  CC,  Domingues.,  DC, Borges.,  RA,  Olivetra.,  and  NC, Borges., 2009, Cimetidine Quantification  in  Human  Plasma  by High-performance Liquid Chromatography Coupled to Electrospray  Ionization  Tandem  Mass Spectrometry. Application to a Comparative  Pharmacokinetics  Study,
Journal of Bioanalysis & Biomedicine , 9-10. Rohman,  A.,  2009, Kromatografi  Untuk Analisis Obat , Edisi pertama, Cetakan Pertama,  Graha  Ilmu,  Yogyakarta,
111.
Sjamsudin,  A.,  dan  Dewoto,  R.H.,  2007,
Farmakologi dan Terapi , Edisi keempat, Universitas Indonesia, Jakarta, 256-258. Snyder, R.L., Kirkland, J.J., and Glajch, J.L., 1997, Practical HPLC Method Developement, 2 nd Edition, John Wiley
& Son, Inc., New York, 686-697 USP  Pharmacopeia.,  2008, The  National Formulary ,  31 th Edition,  The  United
States Pharmacopeial Convention. Page. 1765-1766.