## IDENTIFIKASI FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL TAUGE ( Phaseolus radiatus L.)
Prilly Jovica Moniharapon 1) , Edwin de Queljoe 1) , Herny Simbala 1)
1) Progam Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
The  purpose  of  this  research  is  to  identify  the  active  compounds  as  well  as  to  know  the antioxidant activity from the ethanol extract of bean sprouts. Extraction was done by maceration method using  95%  ethanol.  Identification  of  phytochemicals  include  identification  of  flavonoids,  saponins, tannins,  and  steroids  /  triterpenoids.  The  antioxidant  activity  was  testing  using  DPPH  (1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl) method. The results of the phytochemical identification showed that the ethanol extract of bean  sprouts  contain  flavonoids,  saponin,  and  triterpenoids.  Antioxidant  activity  of  ethanol  extract  of bean sprouts as shown from IC 50 value was 143.67 ppm.
Keywords : Bean sprouts, Phytochemicals identification, Antioxidant activity.

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  adalah  mengidentifikasi  senyawa  aktif  serta  mengetahui  aktvitas  antioksidan dari ekstrak etanol tauge. Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 95%. Identifikasi  fitokimia  meliputi  identifikasi  flavonoid,  saponin,  tanin,  dan  steroid/triterpenoid.  Pengujian aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ).  Hasil  dari  identifikasi fitokimia  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  tauge  mengandung  senyawa  flavonoid,  saponin,  dan triterpenoid.  Dan  aktivitas  antioksidan  yang  dimiliki  ekstrak  etanol  tauge  yang  dilihat  dari  nilai  IC 50 sebesar 143,67 ppm.
Kata Kunci : Tauge, Identifikasi Fitokimia, Aktivitas Antioksidan.

## PENDAHULUAN
Senyawa metabolit
sekunder merupakan  senyawa  kimia  yang  umumnya mempunyai  kemampuan  bioaktivitas  dan berfungsi  sebagai  pelindung  tumbuhan  dari gangguan  hama  penyakit  untuk  tumbuhan itu sendiri atau lingkungannya. Banyak jenis tumbuh-tumbuhan  yang  digunakan  sebagai obat-obatan dikenal sebagai obat tradisional, sehingga  perlu  dilakukan  penelitian  tentang penggunaan  tumbuh-tumbuhan  berkhasiat dan  mengetahui  senyawa  kimia  yang bermanfaat sebagai obat.
Antioksidan  adalah  senyawa  kimia yang  dapat  digunakan  untuk  melindungi komponen  biologi  seperti  lipida,  protein, vitamin  dan  DNA  melalui  perlambatan kerusakan, ketengikan atau perubahan warna yang  disebabkan  oleh  oksidasi.  Antioksidan merupakan senyawa pemberi electron (electron donor) atau reduktan. Senyawa ini memiliki  berat  molekul  kecil, tetapi  mampu menginaktivasi berkembangnya reaksi oksidasi, dengan cara mencegah
terbentuknya  radikal.  Antioksidan  juga merupakan senyawa yang
dapat menghambat reaksi oksidasi, dengan mengikat  radikal  bebas  dan  molekul  yang sangat reaktif, akibatnya kerusakan sel akan dihambat. Cara yang mudah untuk mencegah  atau  mengurangi  resiko  yang ditimbulkan  oleh  aktivitas  radikal  bebas yaitu  dengan  mengkonsumsi  makanan  atau suplemen  yang  mengandung  antioksidan (Winarsi, 2007).
Radikal  bebas  merupakan  atom  atau molekul  tidak  stabil  dan  reaktif  karena memiliki  elektron  tidak  berpasangan  pada orbital  terluarnya.  Radikal  bebas  bereaksi
dengan molekul di sekitarnya untuk memperoleh  pasangan  electron  sehingga mencapai  kestabilan  (Pietta,  2000).  Radikal bebas  dapat  mengganggu  integitas  sel  dan dapat  bereaksi  dengan  komponen  sel,  baik komponen structural meliputi molekul- molekul penyusun membrane maupun komponen fungsional meliputi protein, enzim-enzim,  dan  DNA.  Reaktifitas  radikal bebas  dapat  dihambat  oleh  antioksidan  yang merupakan  bagian  dari  system  kekebalan tubuh (Winarsi, 2007).
Di Indonesia, kacang hijau merupakan salah  satu  jenis  kacang  yang  cukup  banyak dikonsumsi  masyarakat  sebagai  makanan fungsional. Berdasarkan penelitian sebelumnya mengenai kacang hijau, diketahui mengandung  senyawa  metabolit  sekunder diantaranya, flavonoid, tanin, steroid/triterpenoid,  saponin  yang  berpotensi sebagai  antioksidan,  serta  memiliki  aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 95.08ppm yang tergolong  kuat  menurut  Blois  (2005)  (Ratna et al ., 2009).
Oleh  sebab  itu,  dalam  penelitian  ini dilakukan identifikasi fitokimia untuk mengetahui senyawa metabolit sekunder yang terdapat  dalam  tauge  (kecambah  kacang hijau)  serta  uji  aktivitas  antioksidan  dengan metode DPPH ( 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl) untuk
mengetahui kemampuan  ekstrak  dalam  menghambat radikal  bebas  DPPH.  Dan  diharapkan  dapat menambah pengetahuan baru mengenai tauge sebagai  sumber  antioksidan  alami  yang  baru yang  telah  banyak  dikonsumsi  masyarakat sebagai bahan pangan.

## METODE PENELITIAN
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  tauge  ( phaseolus
radiatus L.) yang diidentifikasi oleh progam studi  Biologi  FMIPA  Unsrat  dengan  nomor specimen  144/UN.12.10.3/PP/2016,  bahan- bahan  kimia  seperti  etanol  95%,  aquadest, asam  klorida  pekat,  serbuk  magnesium, asam  asetat  glasial,  asam  sulfat  pekat, natrium  klorida,  besi  (III)  klorida,  DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl  ) ,  methanol pro analisis.
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu sudip, beaker glass, gelas ukur,  cawan  petri,  corong,  rak  tabung, tabung  reaksi,  kertas  saring  Whatman No.42,  aluminium  foil,  timbangan  analitik, labu ukur, evaporator, oven, vortex, spektrofotometer UV-Vis, hot plate, mikropipet, pot salep.

## Ekstraksi sampel
Sampel  segar  Tauge  dibersihkan, kemudian  dihaluskan  menggunakan  blender hingga  berbentuk  pasta.  Selanjutnya  sampel dimaserasi menggunakan etanol 95% sampai terendam  seluruhnya  kemudian  ditutup menggunakan  aluminium  foil  dan  sesekali diaduk  sampai  sampel  menjadi  jenuh. Ekstrak disaring menggunakan kertas saring no.42. kemudian maserat diuapkan menggunakan rotary evaporator dan dilanjutkan  dalam  oven  40°C  hingga didapatkan  ekstrak  kental  tauge.  Kemudian digunakan  untuk  identifikasi  fitokimia  dan uji aktivitas antioksidan.

## Identifikasi Fitokimia
Identifikasi  fitokimia  merupakan  uji kualitatif  untuk  mengetahui  keberadaan senyawa metabolit sekunder
yang
terkandung dalam ekstrak tauge. Identifikasi
yang dilakukan adalah identifikasi flavonoid,  saponin,  steroid/triterpenoid,  dan tanin.

## Identifikasi Flavonoid
Sebanyak
0.5 gam ekstrak ditambahkan  2  mL  etanol  95%,  kemudian dipanaskan  dalam  penangas  air  sampai mendidih. Dipipet lapisan yang atas kemudian ditambahkan 2-3 tetes HCL pekat dan  0.1  gam  serbuk  Mg.  Selanjutnya diamkan selama 3 menit, bila berubah warna menjadi  merah  atau  kekuning-kuningan berarti menunjukkan ekstrak positif mengandung flavonoid. Identifikasi saponin Sebanyak
0.5 gam ekstrak ditambahkan  5  mL  aquades  sambil  dikocok kuat  selama  1  menit.  Pada  tabung  sampel terdapat  buih  setinggi  3.5  cm  dan  bila  busa yang  terbentuk  tetap  stabil  ±  7 menit,  maka ekstrak positif mengandung banyak saponin.

## Identifikasi steroid/triterpenoid
Sebanyak
0.5 gam ekstrak ditambahkan  CH 3 COOH  glacial  sebanyak 10  tetes  dan  H 2 SO 4 pekat  sebanyak  2  tetes. Larutan  kemudian  dikocok  perlahan  dan dibiarkan  selama  beberapa  menit.  Steroid memberikan warna biru atau hijau, sedangkan  triterpenoid  memberikan  warna merah atau ungu Identifikasi tanin Sebanyak 0.5 gam ekstrak ditambahkan etanol 95%. Kemudian didiamkan  ±  15  menit,  lalu  disaring.  Filtrat yang  didapat  dipipet  dan  ditambahkan  2 tetes  NaCL  10%  dan  3  tetes  FeCL 3 1%. Terbentuknya  warna  biru/hitam  kehijauan menunjukkan  adanya  tanin.  (Harbone, 1987).
Uji Aktivitas Antioksidan
a. Pembuatan  Larutan  DPPH  0.1 mM
Serbuk  DPPH  (BM  394,32)  sebanyak  0.04 mg  dilarutkan  dengan  methanol  p.a  (pro analisa) dan dimasukkan ke dalam labu ukur 50 mL. volume dicukupkan dengan methanol  p.a  hingga  tanda  batas,  kemudian ditempatkan dalam botol gelap.
b. Persiapan larutan uji Ditimbang 10 mg ekstrak tauge kemudian dilarutkan dalam 10 mL methanol hingga  homogen  (konsentrasi  1000  ppm). Larutan  uji  dibuat  beberapa  konsentrasi yaitu 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm, dan 50  ppm.  Untuk  membuat  masing-masing konsentrasi tersebut, dipipet 100 µL, 200 µL 300  µL,  400  µL,  500  µL  dari  larutan  induk ke dalam labu ukur 10 mL.
c. Pengujian aktivitas antioksidan
Untuk masing-masing konsentrasi ditambahkan  1  mL  larutan  DPPH  0.1  mM dan  ditambahkan  dengan  methanol  pro analisis sampai tanda batas, ditutup menggunakan  aluminium  foil,  kemudian dihomogenkan  menggunakan  vortex  dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu ruang 37°C. Hal ini dilakukan untuk mengoptimumkan  aktivitas  DPPH  agar terjadi  reaksi  antara  DPPH  dengan  sampel yang diuji (Hatano et al., 1988). Selanjutnya diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang 517 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Identifikasi Fitokimia
Hasil
identifikasi fitokimia
menunjukkan golongan senyawa aktif metabolit  sekunder  yang  terdapat  dalam ekstrak tauge  adalah  flavonoid,  saponin  dan triterpenoid.
Uji aktivitas antioksidan
Perubahan  warna  DPPH  dari  ungu menjadi  kuning  juga  disebabkan  karena atom  N  yang  memiliki  elektron  tidak berpasangan menyebabkan terjadinya transisi n-σ*. Keadaan dasar pada transisi ini lebih  bersifat  polar  dibandingkan  keadaan tereksitasi.  Hal  ini  menyebabkan  warna DPPH  yang  awalnya  berwarna  ungu menjadi  DPPH-H  yang  berwarna  kuning. Pengujian  potensi  antioksidan  pada  sampel dilakukan pada panjang gelombang 517 nm.
Dari hasil inkubasi selama 30 menit pada suhu ruang 37°C, menunjukkan warna ungu menjadi  warna  ungu  yang  pudar,  sehingga tidak menunjukkan perubahan yang seharusnya dari warna ungu menjadi kuning untuk  hasil  reaksi  DPPH  dengan  sampel yang  diuji.  Hal  ini  berkaitan  dengan konsentrasi  yang  digunakan  kecil,  sehingga kecil  kemampuan  ekstrak  bereaksi  terhadap radikal DPPH.
Dalam  penentuan  absorbansi  dari  tiap konsentrasi  sampel, dilakukan pada panjang gelombang  517  nm.  Menurut  Kaur  dan Kapoor  (2002),  pada  panjang  gelombang 517  nm,  ekstrak  memiliki  kemampuan antioksidan  dalam  menghambat  radikal bebas  DPPH  yang  merupakan  radikal  bebas stabil  dalam  larutan  berair  atau  larutan dalam metanol serta dalam bentuk teroksidasi  dengan  kemampuan  serapan yang kuat. Dari hasil pengukuran, diperoleh absorbansi  yang  kemudian  digunakan  untuk perhitungan  nilai  persen  inhibisi.  Nilai  IC 50 didefinisikan  sebagai  besarnya  konsentrasi senyawa  uji  yang  dapat  meredam  radikal bebas  sebanyak  50%.  Semakin  kecil  nilai IC 50 maka aktivitas peredaman radikal bebas semakin  tinggi  (Molyneux,  2004).  Hasil  uji
aktivitas  antioksidan  yang  diperoleh  dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel  1.  Pengujian  Aktivitas  Antioksidan
Ekstrak Tauge Konsentrasi (ppm) Absorbansi rata-rata % Inhibisi IC 50 (ppm) 10 0.520 1.51% 20 0.513 2.84% 30 0.486 7.95% 143.67 40 0.464 12.12% 50 0.447 15.34%
Berdasarkan hasil yang diperoleh, pengukuran  persen  inhibisi  pada  ekstrak tauge mengalami peningkatan pada konsentrasi  10  sampai  50  ppm,  dan  pada konsentrasi 50 ppm memiliki persen inhibisi yang paling tinggi  yaitu sebesar 15.34 ppm. Peningkatan  persen  inhibisi  pada  ekstrak tauge menandakan bahwa konsentrasi ekstrak  yang  ditambahkan  mempengaruhi kemampuan ekstrak dalam meredam radikal bebas.
Kurva  hubungan  konsentrasi  sampel terhadap  persen  inhibisi  sebagai  persen penghambatan  radikal  bebas  DPPH  dari ekstrak  tauge  dapat  dilihat  pada  gambar berikut.
Gambar  1.  Kurva  Hubungan  Konsentrasi dan Persen Inhibisi Ekstrak Tauge ( Phaseolus radiatus L.)
Kurva  di  atas  diperoleh  dengan menggunakan  regesi  linear  pada  aplikasi pengolah  data  microsoft  excel  2013. Koefisien  y  pada  persamaan  linear  bernilai 50  merupakan  koefisien  IC 50 ,  sedangkan koefisien  x  pada  persamaan  linear  ini merupakan  konsentrasi  ekstrak,  dimana  x yang diperoleh merupakan besarnya konsentrasi  yang  diperlukan  untuk  dapat meredam 50% aktivitas radikal DPPH. Nilai R 2 menggambarkan  linieritas  konsentrasi terhadap  %  inhibisi.  Nilai  R 2 yang mendekati + 1 (bernilai positif) menandakan bahwa dengan semakin meningkatnya konsentrasi ekstrak, semakin meningkat pula aktivitas  antioksidannya.  Hal  ini  berkaitan dengan jumLah senyawa metabolit sekunder yang terlarut di dalam ekstrak dan memiliki aktivitas antioksidan.
Berdasarkan  hasil  perhitungan  IC 50 menunjukkan bahwa ekstrak tauge memiliki aktivitas  antioksidan  dengan  nilai    IC 50 sebesar  143.67  ppm  yang  secara  spesifik menurut klasifikasi Blois (2005) ini tergolong  antioksidan  dengan  kemampuan sedang  karena  bernilai  100-150  ppm. semakin  kecil  nilai  IC 50 berarti  semakin tinggi aktivitas antioksidan.
Hal  ini  berbeda  jika  dibandingkan dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Ratna et al ., (2009) yang dalam pengujiannya terhadap ekstrak etanol kacang hijau  menunjukkan  persen  inhibisi  yang tergolong  kuat  sebesar  95.08  ppm.  Hal  ini tentu  sangat  berpengaruh  oleh  perbedaan konsentrasi yang dilakukan dalam penelitian ini, dimana pada penelitian ini menggunakan konsentrasi  10-50  ppm  sedangkan  pada penelitian  terhadap  kacang  hijau  dilakukan dengan  menggunakan  konsentrasi  25-500
1,51 2,84 7,95 12,12 15,34 y = 0,3694x - 3,13 R² = 0,9776 0 5 10 15 20 0 20 40 60 p ers en in h ib is i
Log Konsentrasi (ppm)
ppm.  Persentase  penghambatan  (persen inhibisi)  terhadap  aktivitas  radikal  bebas akan ikut meningkat seiring dengan meningkatnya konsentrasi.
Pada  penelitian  ini  ekstrak  tauge didapatkan  dengan  menggunakan  metode maserasi.  Dari  sampel  tauge  sebanyak  1,5 kg, dihaluskan dengan menggunakan blender hingga mendapatkan sampel berbentuk pasta dengan berat 517.6 g tauge, dilarutkan  dalam  1  L  pelarut  etanol  95%, dan  dilanjutkan  dengan  proses  evaporasi serta  dioven  hingga  memperoleh  hasil ekstrak kental tauge sebanyak 57,31 g.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  dari  hasil  penelitian, maka  dapat  disimpulkan  ekstrak  tauge memiliki kandungan fitokimia seperti flavonoid,  saponin,  dan  triterpenoid.  Dan untuk  hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan menunjukkan  bahwa  ekstrak  tauge  dengan konsentrasi  50  ppm  memiliki  aktivitas penangkal radikal bebas paling tinggi. Untuk hasil  IC 50 dari  ekstrak  tauge  yaitu  143,67 ppm  yang  tergolong  memiliki  kekuatan sedang karena berkisar 100-150 ppm.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut mengenai pengujian aktivitas antioksidan  dengan  konsentrasi  yang  lebih tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
Blois  MS.  2005.  Antioxidant  determination by the use of stable free radical. Nature 181: 1191-1200Bogor.
Harborne  J.B.  1987.  Metode  Fitokimia Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan.
Diterjemahkan oleh Kosasih  Padmawinata  dan  Iwang Soediro. Bandung: Penerbit ITB.
Kaur  C,  Kapoor  HC.  2002.  Antioxidant Activity and Total Phenolic Content of some  Asian  Vegetables. International Journal  of  Food  and  Technology. 2002.37.153-161.
Molyneux,  P.  2004.  The  use  of  the  stable free  radical  diphenylpicrylhydrazyl (DPPH)  for  estimating  antioxidant activity. Songklanakarin Journal Science Technology. 26: 211-219. Pietta, P.G., 2000. Flavonoids as antioxidants.  J.  Nat.  Prod.  63,  1035–
1042.
Ratna  Djamil,  dkk.  2009. Penapisan Fitokimia, Uji BSLT Dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Beberapa Spesies Papilionaceae.
Jurnal  Ilmu  Kefarmasian  Indonesia.
Jakarta. Hal 65-71.
Winarsi  H.  2007. Antioksidan  Alami  & Radikal  Bebas. Yogyakarta:  Kanisius, pp: 82-77, 105-9, 147-55.