https://journal.ipb.ac.id/index.php/jurnalikt
e-ISSN   : 2620-309X

## PENGARUH PAKAN EKSOGEN AWAL TERHADAP AKTIVITAS ENZIM PENCERNAAN DAN PERTUMBUHAN LARVA
Epinephelus fuscoguttatus (Forsskal, 1775)

## THE EFFECTS OF INITIAL EXOGENOUS FEED ON DIGESTIVE ENZYMES ACTIVITY AND GROWTH OF Epinephelus fuscoguttatus (Forsskal, 1775) LARVAE
Regina Melianawati 1* & Rarastoeti Pratiwi 2
1 Balai Besar Riset Budidaya Laut dan Penyuluhan Perikanan, Buleleng, Bali 81155, Indonesia
2 Departemen Biologi Tropika, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta 55281, Indonesia *E-mail: regina.melnawati@yahoo.com

## ABSTRACT
The  initial  exogenous  feeding  is  crucial  in  marine  fish  larviculture,  including  tiger  grouper (Epinephelus  fuscoguttatus).  The  transition  from  endogenous  to  exogenous  feed  is  critical  for  the survival rate of the early stage of larvae. The exogenous feed can influence digestive enzymes activity and larval growth. This study was aimed to determine the role of initial exogenous feed on digestive enzymes  activity  and  growth  in  the  early  stage  of  tiger  grouper  larvae.  Two  treatments  tested  were feeding  larvae  with  exogenous  feed  and  unfed  larvae.  The  initial  exogenous  feed  given  was zooplankton rotifers Brachionus rotundiformis. Parameters observed were digestive enzymes activity, including  protease,  amylase  and  lipase;  absorption  of  endogenous  feed,  and  larval  growth  that consisted  of total  length  and  body  weight.  The  result indicated  that  the  digestive  enzymes  activity  of unfed larvae were higher than those of fed larvae at 3 days old. Endogenous feed completely absorbed at  3  days  old  larvae.  The  total  length  of  larvae  was  almost  similar  between  the  two  treatments.  In contrast,  the  body  weight  of  fed  larvae  tends  to  be  bigger  than  that  of  unfed  larvae.  Based  on  the results of this study, the initial exogenous feeding influenced digestive enzymes activity and growth of tiger grouper larvae in the early stage.
Keywords : digestive enzymes, exogenous feeding, growth, larvae, tiger grouper

## ABSTRAK
Pemberian  pakan  eksogen  awal  merupakan  hal  yang  penting  dilakukan  dalam  kegiatan  pembenihan ikan laut, termasuk ikan  kerapu macan ( Epinephelus fuscoguttatus ). Peralihan dari pakan  endogen  ke pakan  eksogen  merupakan  fase  kritis  bagi  kelangsungan  hidup  larva  ikan  kerapu  macan  pada  stadia awal.  Keberadaan  pakan  eksogen  dapat  berpengaruh  terhadap  aktivitas  enzim  pencernaan  dan pertumbuhan larva. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi peranan pakan eksogen awal terhadap aktivitas  enzim  pencernaan  dan  pertumbuhan  larva  stadia  awal.  Dua  perlakuan  yang  diujicobakan adalah  larva  diberi  pakan  eksogen  dan  larva  tidak  diberi  pakan  eksogen.  Pakan  eksogen  awal  yang diberikan  berupa  zooplankton  rotifer Brachionus  rotundiformis .  Parameter  yang  diamati  adalah aktivitas  enzim  pencernaan  yang  meliputi  protease,  amilase  dan  lipase;  penyerapan  pakan  endogen; dan  pertumbuhan  larva  yang  meliputi  panjang  total  dan  bobot  tubuh.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa aktivitas enzim pencernaan larva umur 3 hari yang tidak diberi pakan awal adalah lebih tinggi dibandingkan dengan larva yang diberi pakan eksogen awal. Pakan endogen habis terserap pada larva umur 3 hari. Panjang total larva pada kedua perlakuan adalah cenderung sama, sedangkan bobot tubuh pada larva yang diberi pakan awal lebih besar dibandingkan yang tidak diberi pakan. Hasil penelitian ini  menunjukkan  bahwa  pemberian  pakan  eksogen  awal  berpengaruh  terhadap  aktivitas  enzim pencernaan dan pertumbuhan larva ikan kerapu macan pada stadia awal.
Kata kunci: enzim pencernaan, kerapu macan, larva, pakan eksogen, pertumbuhan

## I. PENDAHULUAN
Ikan  kerapu  macan  ( Epinephelus fuscoguttatus )  merupakan  salah  satu  jenis komoditas  perikanan  laut  yang  banyak terdapat di wilayah perairan Indo-Pasifik dan bernilai  ekonomis  tinggi  (Made,  2017; Rimmer & Glamuzina, 2017). Tingginya per- mintaan  pasar,  terutama  ekspor,  meng- akibatkan  penangkapan  yang  berlebih  di beberapa  daerah  (Kurnia et  al .,  2011;  Dewa, 2017), sehingga secara global spesies ikan ini berstatus rentan dalam daftar IUCN (Rhodes et  al ., 2018). Oleh karenanya, kegiatan pem- benihan terhadap jenis ikan kerapu macan ini penting untuk dilaksanakan (Novriadi, 2019).
Kendala  yang  umum  dihadapi  dalam kegiatan pembenihan adalah tingginya mortalitas, terutama pada periode kritis  yang terjadi  pada  stadia  awal  larva.  Salah  satu faktor  yang  diduga  menjadi  penyebab mortalitas  tersebut  adalah  masalah  fisiologis larva, terutama  yang berkaitan dengan pakan awal  dan  aktivitas  enzim  pencernaan.  Larva mengalami  perubahan  sumber  pakan,  yaitu dari  pakan  endogen  ke  pakan  eksogen  pada periode  kritis  tersebut.  Pemanfaatan  atau penyerapan pakan endogen pada ikan kerapu umumnya  berlangsung  selama  70  hingga  90 jam  setelah  penetasan  (Kohno et  al .,  1990). Larva selanjutnya memerlukan pakan eksogen berupa pakan alami pada saat pakan endogen  yang  dibawa  telah  habis  (Kohno et al .,  1986;  Sulaeman  &  Fotedar,  2017).  Jenis pakan  alami  yang  umum  digunakan  sebagai pakan  eksogen awal dalam pembenihan  ikan laut  adalah  zooplankton  rotifer Brachionus sp. (Divya et al ., 2011; Hamre, 2016). Masa peralihan sumber pakan merupakan  masa  kritis  bagi  kelangsungan hidup  larva  ikan  (Kohno et  al ,  1986; Sulaeman  &  Fotedar,  2017; Srithongthum et al .,  2020).  Hal  itu  antara  lain  disebabkan karena sistem pencernaan dan fungsi enzimatik  pencernaan  larva  yang  masih sangat  sederhana  dan  belum  berkembang secara sempurna (Kurokawa & Suzuki, 1996; Galaviz et  al .,  2011)  sehingga  kemampuan
larva untuk mencerna pakan eksogen menjadi sangat  terbatas.  Enzim  pencernaan  berperan sebagai  biokatalisator  pada  proses  hidrolisis pakan  yang  dikonsumsi  oleh  larva,  sehingga pakan  tersebut  menjadi  bentuk  monomer yang  dapat  diserap  oleh  sel  tubuh.  Aktivitas enzim pencernaan sendiri antara lain dipengaruhi oleh umur (Rangsin et al ., 2012; Pranata et  al .,  2014)  dan  struktur  sistem pencernaan (Gisbert et al ., 2009).
Keberadaan  enzim  pencernaan  yang meliputi  protease,  amilase  dan  lipase, merupakan indikator biologis terhadap kemampuan  larva  untuk  mencerna  pakan eksogen yang masing-masing berperan untuk pencernaan  protein,  karbohidrat  dan  lemak. Aktivitas enzim yang tinggi dapat mengindikasikan  bahwa  secara  fisiologis larva  telah  mampu  dalam  memproses  pakan eksogen  (Gawlicka et  al .,  2000).  Oleh karenanya,  aktivitas  enzim  pencernaan  dapat menjadi  parameter  yang  penting  untuk mengevaluasi  pemanfaatan  pakan  (Hazman &  Gökçek,  2014)  dan  pertumbuhan  ikan (Lemieux et  al .,  1999; Kamarudin et  al ., 2011).
Sejauh ini, penelitian tentang aktivitas enzim  pencernaan  lebih  banyak  bertujuan untuk mengetahui profil enzim yang dikaitkan dengan perkembangan pertumbuhan  pada  jenis  larva  tertentu,  baik pada  ikan  (Martinez-Lagos et  al .,  2013; Suzer et  al .,  2014;  Teles et  al .,  2019), maupun pada organisme laut lainnya (Johnston et  al .,  2004;  Rotllant et  al .,  2010; Nikhlani  &  Sukarti,  2017).  Akan  tetapi, penelitian  aktivitas  enzim  yang  dikaitkan dengan  pakan  eksogen  awal  masih  sangat terbatas. Bahkan, informasi mengenai aktivitas  enzim  pencernaan  yang  dikaitkan dengan  pemberian  pakan  eksogen  dan pertumbuhan  pada  larva  ikan  kerapu  macan stadia awal belum diperoleh. Oleh karenanya, penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui pengaruh  pemberian  pakan  eksogen  awal terhadap  aktivitas  enzim  pencernaan  dan pertumbuhan  larva  ikan  kerapu  macan  pada stadia awal.

## II. METODE PENELITIAN

## 2.1. Lokasi dan Perlakuan Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  di  Balai Besar  Riset  Budidaya  Laut  dan  Penyuluhan Perikanan  (BBRBLPP),  Bali.  Penelitian dilakukan  pada  larva  umur  1  sampai  dengan 3  hari setelah  menetas.  Perlakuan  yang diujikan  adalah:  larva  diberi  pakan  eksogen (A) dan larva tidak diberi pakan eksogen (B). Pakan  eksogen  yang  diberikan  adalah zooplankton  rotifer B.  rotundiformis yang berasal dari hasil kultur di BBRBLPP.

## 2.2. Pemeliharaan Larva
Pemeliharaan  larva  dilakukan  di hatchery di  BBRBLPP  menggunakan  dua buah  bak  persegi  yang  masing-masing berkapasitas maksimum 10.000 L. Kepadatan awal  larva  sekitar  10  ekor/L.  Setiap  bak dilengkapi  dengan  sistem  aerasi  sebagai sumber pasok oksigen terlarut.
Fitoplankton Nannochloropsis ocullata mulai  ditambahkan  ke  dalam  setiap bak  pemeliharaan  mulai  hari  ke-2  pagi. Pakan eksogen berupa zooplankton rotifer B. rotundiformis , mulai diberikan ke dalam  bak pemeliharaan larva perlakuan A pada hari ke- 2  sore,  dengan  kepadatan  5  individu/ml. Sebaliknya,  pada  bak  perlakuan  B,  tidak diberikan pakan eksogen.
.
2.3. Sampel Larva
Larva  umur  1,  2  dan  3  hari  setelah menetas  digunakan  sebagai  sampel  dalam penelitian  ini.  Sebanyak  500,  300  dan  250 ekor larva pada masing-masing umur tersebut digunakan  untuk  analisis  aktivitas  enzim. Larva  diambil  secara  hati-hati,  kemudian dicuci  dengan plankton  net bermata  jaring 120  µm  untuk  membersihkan  sampel  dari kotoran.  Sampel  kemudian  ditempatkan  ke dalam  tabung  mikro  volume  2  ml  dan ditimbang.  Sampel  disimpan  pada freezer dengan  suhu  -80 o C  hingga  dilaksanakan analisis.  Disamping  itu,  pada  setiap  umur larva  juga  digunakan  10  ekor  larva  untuk pengukuran pakan endogen dan panjang total
larva. Pengukuran  pakan  endogen  yang terdiri  dari  kuning  telur  dan  butir  minyak dilakukan  berdasarkan  Sulaeman  &  Fotedar (2017),  sedangkan  pengukuran  panjang  total larva mengacu pada Kailasam et al . (2007).

## 2.4. Parameter
Parameter yang diamati adalah aktivitas  enzim  pencernaan  yang  meliputi protease,  amilase  dan  lipase;  penyerapan pakan  endogen  serta  pertumbuhan  yang terdiri  dari  panjang  total  dan  bobot  tubuh larva.  Analisis  aktivitas  enzim  pencernaan dilakukan  di  Laboratorium  Biologi  dan Kimia  BBRBLPP,  sedangkan  pengukuran pakan  endogen  dan  pertumbuhan  larva dilakukan di Laboratorium Biologi BBRBLPP.

## 2.5. Aktivitas Enzim Pencernaan
Ekstraksi sampel dilakukan dalam 1,5 ml aquabidest dingin  (4-5 o C),  selanjutnya, disentrifugasi  dengan  kecepatan  8.000  rpm pada  suhu  4 o C  selama  5  menit.  Supernatan hasil sentrifugasi tersebut selanjutnya digunakan untuk analisis. Proses ini mengacu pada  Yamin  &  Palinggi  (2007)  dengan modifikasi  pada  penambahan aquabidest serta  perbedaan  kecepatan,  suhu  dan  lama waktu  sentrifugasi,  yang  didasarkan  pada hasil uji coba pendahuluan.
Aktivitas  protease  dianalisis  dengan kasein  sebagai  substrat  dan  tirosin  sebagai standar,  sedangkan  amilase  menggunakan starch sebagai  substrat  dan  maltosa  sebagai standar  (Bergmeyer et  al .,  1983).  Keduanya dianalisis  secara  spektrofotometri.  Aktivitas lipase  diukur  dengan  menggunakan  minyak nabati  asal  kedelai  sebagai  substrat  dan dianalisis  secara  tirtimetri  (Linfield et  al ., 1984).  Kesemua  analisis  tersebut  dilakukan secara duplo.

## 2.6. Volume Pakan Endogen
Pengukuran  pakan  endogen,  yang meliputi  kuning  telur  dan  butir  minyak, dilakukan secara mikroskopis dengan menggunakan stereoskopis mikroskop
(Olympus  SZH)  pada  pembesaran  30x. Selanjutnya  volume  kuning  telur  dan  butir minyak  dihitung  menurut  Sulaeman  & Fotedar (2017).

## 2.7. Pertumbuhan Larva
Pengukuran panjang total larva dilakukan  dengan  stereoskopis  mikroskop (Olympus  SZH)  pada  pembesaran  30x  yang dilengkapi dengan  mikrometer. Panjang total merupakan  jarak  sepanjang  garis  tengah tubuh  dari  ujung  bibir  ke  ujung  sirip  ekor (Kailasam et  al .,  2007).  Bobot  larva diperoleh  dari  penimbangan  200-500  larva sampel yang juga digunakan untuk pengukuran  aktivitas  enzim.  Penimbangan larva menggunakan timbangan digital (Denver  Instrument  AA  160)  berkapasitas maksimum 10 g dengan ketelitian 10 -4 g.

## 2.8. Analisis Data
Data  yang  ditampilkan  merupakan nilai  rata-rata  ±  standar  deviasi.  Data disajikan dalam bentuk grafik antara parameter  dan  umur  larva.  Data  aktivitas enzim  dan  panjang  total  larva  lebih  lanjut dianalisis  dengan  uji-T  untuk  menentukan ada  tidaknya  perbedaan  di  antara  kedua
perlakuan  yang  diujikan,  pada  tingkat kepercayaan 95%.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Aktivitas Enzim Pencernaan
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa aktivitas  protease  (Gambar  1),  amilase (Gambar 2) dan lipase (Gambar 3) pada larva umur  1  dan  2  hari  setelah  menetas  belum menunjukkan  adanya  perbedaan  pada  kedua perlakuan.  Bahkan  aktivitas  protease  pada larva  umur  1  hari  masih  belum  terdeteksi. Perbedaan  aktivitas  ketiga  enzim  pencernaan mulai  terlihat  pada  larva  umur  3  hari  antara larva yang diberi dan yang tidak diberi pakan eksogen.  Larva  yang  tidak  diberi  pakan eksogen  menunjukkan  aktivitas  enzim  yang cenderung  lebih  tinggi  dibandingkan  larva yang  diberi  pakan  eksogen,  meskipun  secara statistik tidak berbeda nyata (P>0,05).
Aktivitas protease, amilase dan lipase pada larva umur 1 dan 2 hari setelah menetas menunjukkan  kisaran  nilai  antara  0,046- 1,348  unit/larva  (Gambar  1-3).  Larva  pada umur  tersebut  masih  memanfaatkan  pakan endogen  sebagai  sumber  pakannya.  Ter- deteksinya aktivitas enzim pada larva umur
Gambar 1.  Aktivitas protease pada  larva  ikan kerapu macan umur 1-3 hari  yang tidak diberi dan  diberi  pakan  eksogen  berupa Brachionus  rotundiformis .  Nilai  merupakan  rata- rata ± standar deviasi.
Gambar 2.  Aktivitas  amilase  pada  larva  ikan  kerapu  macan  umur  1-3  hari  yang  tidak  diberi dan  diberi  pakan  eksogen  berupa Brachionus  rotundiformis .  Nilai  merupakan  rata- rata ± standar deviasi.
Gambar 3.  Aktivitas lipase pada larva ikan kerapu macan umur 1-3 hari yang tidak diberi dan diberi pakan eksogen berupa Brachionus rotundiformis . Nilai merupakan rata-rata ± standar deviasi.
tersebut  menunjukkan  telah  berlangsung proses hidrolisis pakan,  yaitu pakan endogen yang  berupa  kuning  telur  dan  butir  minyak, seperti  halnya  yang  dinyatakan  oleh  Galaviz et al . (2011). Keduanya diketahui mengandung  komponen  utama  berupa  asam amino  bebas  dan  asam  lemak  (Farhoudi et al .,  2012).  Menurut  Martinez-Lagos et  al . (2013),  aktivitas  lipase  yang  terdeteksi  pada larva  umur  1  hari  biasanya  terkait  dengan katabolisme  lipid  pada  kuning  telur  untuk menyediakan  energi  bagi  pertumbuhan  larva yang  terjadi  sebelum  pemberian  pakan eksogen  dimulai.  Tang et  al .  (2020)  juga
menyebutkan  bahwa  terdeteksinya  aktivitas protease pada larva umur 1 hari adalah terkait dengan  hidrolisis  protein  pada  kuning  telur larva sebagai sumber energinya.
Peningkatan  aktivitas  protease  pada larva  umur  2  hari  sejalan  dengan  tingginya penyerapan  kuning  telur.  Hal  ini  terlihat dengan pesatnya pengurangan volume kuning telur yang terjadi antara larva umur 1 dan 2 hari. Aktivitas protease yang terdeteksi tinggi  menunjukkan  bahwa  pada  saat  itu protease  aktif  menghidrolisis  kuning  telur larva.  Tingginya  aktivitas  protease  juga diduga karena jenis protease pada tubuh larva spesifik  dengan  struktur  pakan  endogen tersebut  sehingga  proses  hidrolisisnya  dapat berlangsung cepat.
Sebaliknya,  aktivitas  amilase  relatif sama  pada  larva  umur  1  dan  2  hari.  Hal  ini disebabkan  karena  pakan  endogen  yang dihidrolisis sedikit atau  tidak banyak mengandung  karbohidrat.  Aktivitas  lipase pada  larva  umur  1  dan  2  hari  juga  terlihat tidak  jauh  berbeda  karena  pemanfaatan  atau proses  hidrolisis  butir  minyak  juga  ber- langsung lambat. Hal ini terlihat dari volume butir  minyak  yang  tidak  jauh  berbeda  di antara kedua umur larva tersebut (Gambar 4).
Perbedaan aktivitas enzim pada kedua perlakuan  yang  diujikan  mulai  terlihat  pada larva  umur  3  hari.  Aktivitas  protease  dan lipase  pada  larva  umur  3  hari  yang  diberi pakan eksogen, cenderung menurun dibandingkan  dengan hari  sebelumnya. Penurunan  aktivitas  ini  diduga  karena  pakan eksogen yang diberikan, dalam hal ini adalah zooplankton  rotifer,  memiliki  jenis  enzim yang  berbeda  dengan  jenis  yang  ada  pada tubuh  larva,  sehingga  proses  hidrolisis berjalan  lambat  dan  mengakibatkan  aktivitas enzim  yang  terdeteksi  rendah.  Protease  dan lipase  terdiri  dari  jenis  enzim  yang  bekerja secara  lebih spesifik pada bagian tubuh  yang spesifik (Perez-Casanova et al ., 2006; Babaei et  al .,  2011;  Khoa et  al .,  2019).  Seluruh tubuh  larva  digunakan  sebagai  sampel  dan dianalisis  protease  dan  lipase  secara  umum sehingga  tidak  dapat  diketahui  secara  pasti
jenis protease dan lipase yang secara spesifik terdapat pada tubuh larva dan rotifer.
Aktivitas  amilase  pada  larva  yang diberi  pakan  eksogen  cenderung  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  aktivitas  protease  dan lipase.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  proses hidrolisis  karbohidrat  lebih  aktif  daripada hidrolisis  protein  dan  lemak.  Struktur molekul  karbohidrat  yang  lebih  sederhana dan  tidak  adanya  struktur  yang  spesifik, memungkinkan proses hidrolisis yang dilakukan  amilase  dapat  berlangsung  cepat. Analisis  terhadap  aktivitas  enzim  pada  dua perlakuan  yang  diujikan,  hanya  dapat dilakukan  hingga  larva  umur  3  hari  saja karena  larva  yang  tidak  diberi  pakan  hanya dapat bertahan hidup hingga umur 3 hari.
Secara  keseluruhan,  aktivitas  ketiga jenis  enzim  pada  larva  yang  tidak  diberi pakan eksogen adalah lebih tinggi dibandingkan dengan aktivitasnya pada larva yang  diberi  pakan  eksogen,  yaitu  sebesar 0,05%  (protease),  12,92%  (amilase)  dan 297,14%  (lipase).  Hasil  pada  penelitian  ini berbeda  dengan  beberapa  penelitian  sejenis sebelumnya,  yang  menunjukkan  penurunan aktivitas  enzim  pencernaan  pada  larva  ikan stadia awal yang dipuasakan (Bolasina et al ., 2006;  O’Brien-MacDonald et  al .,  2006;
Srichanun et al ., 2012).
Larva yang tidak mendapatkan pasokan  pakan  eksogen,  sementara  pakan endogennya  sendiri  sudah  habis,  secara alamiah  akan  berusaha  mempertahankan kelangsungan hidupnya melalui proses katabolisme.  Dalam  hal  ini,  larva  diduga menghidrolisis  komponen  tubuhnya  sendiri, baik  berupa  protein,  karbohidrat  maupun lemak,  untuk  digunakan  sebagai  sumber energi.  Oleh  karena  adanya  proses  hidrolisis tersebut  maka  aktivitas  enzimnya  terdeteksi cukup  tinggi.  Hasil  penelitian  Ching et  al . (2016)  juga  menunjukkan  terjadinya  proses katabolisme pada komponen tubuh larva ikan kerapu  macan  yang  pemberian  pakan eksogennya ditunda.
Adanya kecenderungan bahwa aktivitas  enzim  pada  larva  yang  tidak  diberi
pakan  adalah  lebih  tinggi  dibandingkan aktivitasnya  pada  larva  yang  diberi  pakan, juga  terjadi  pada  beberapa  jenis  larva  yang lain.  Aktivitas  tripsin  yang  tertinggi  pada larva ikan haddock ( Melanogrammus aeglifinus )  justru  terdeteksi  pada  larva  yang tidak  ada  pakan  dalam  pencernaannya (MacKenzie et  al .,  1999),  pada  larva Japanese  eel  ( Anguilla  japonica )  yang saluran pencernaannya kosong ternyata tidak berbeda  dengan  aktivitas  tripsin  pada  larva yang  pencernaannya  berisi  pakan  (Pedersen et al ., 2003). Aktivitas tripsin pada larva ikan Solea  senegalensis umur  3  hari  justru menurun  setelah  larva  melakukan  aktivitas makan pertamanya (Ribeiro et al ., 1999) dan hal yang sama terjadi pada larva ikan herring ( Clupea harengus ) (Pedersen, 1993). Penurunan  aktivitas  enzim  pencernaan  ini diduga karena terjadinya perubahan metabolisme utama yang mengikuti penyerapan  pakan  endogen  kuning  telur (Ribeiro et  al .,  1999).  Srithongthum et  al . (2020) menegaskan bahwa larva memerlukan waktu  untuk  menyesuaikan  diri  dengan pakan  eksogen  yang  diberikan.  Hal  tersebut membuktikan  bahwa  masa  peralihan  sumber pakan,  yaitu  dari  pakan  endogen  ke  pakan eksogen,  adalah  merupakan  masa  yang penting  dan  kritis  bagi  larva.  Disamping  itu
sekaligus juga menunjukkan adanya keterkaitan  antara  masa  peralihan  sumber pakan  tersebut  dengan  aktivitas  enzim pencernaan pada larva.

## 3.2. Penyerapan Pakan Endogen
Hasil  pengukuran  terhadap  volume pakan  endogen  (Gambar  4)  menunjukkan bahwa  kuning  telur  dan  butir  minyak  larva umur 1 hari, masing-masing adalah 0,0150±0,0052  mm 3 dan  0,0030±0,0005 mm 3 .  Besarnya  standar  deviasi  volume kuning telur menunjukkan bahwa setiap larva memiliki  tingkat  kecepatan  penyerapan kuning telur yang berbeda-beda.
Hasil  penelitian  Kohno et  al .  (1990) menunjukkan  bahwa  larva  ikan  kerapu macan  yang  baru  menetas  memiliki  kuning telur  sebesar  1.687,3  x  10 -4 mm 3 dan  butir minyak  35,7  x  10 -4 mm 3 .  Menurutnya, penyerapan kuning telur tersebut berlangsung sangat cepat, yaitu mencapai 90%, selama 24 jam  setelah  menetas,  sedangkan  penyerapan butir  minyaknya  berjalan  lebih  lambat. Mengacu  pada  pendapat  yang  dikemukakan oleh  Kohno et  al .  (1990)  tersebut,  maka volume kuning telur sebesar 0,015 mm 3 pada larva umur 1 hari tersebut adalah  merupakan 10%  dari  volume  kuning  telur  yang  tersisa. Berdasarkan hal tersebut dapat diasumsikan
Gambar 4.   Volume pakan endogen. Nilai merupakan rata-rata ± standar deviasi.
bahwa  larva  yang  baru  menetas  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  membawa kuning telur sebesar 1.500 x 10 -4 mm 3 . Hasil  penelitian  ini  menunjukkan volume  pakan  endogen  yang  semakin mengecil  pada  larva  umur  2  hari  adalah sebagai  bentuk  pemanfaatan  pakan  endogen oleh  larva.  Besarnya  pengurangan  volume kuning  telur  antara  larva  umur  1  dan  2  hari menunjukkan bahwa penyerapan kuning telur terlihat lebih  cepat dibandingkan penyerapan butir  minyak.  Rønnestad et  al .  (1998) mengemukakan  bahwa  penyerapan  asam amino  bebas  yang  terkandung  pada  kuning telur  memang  terjadi  lebih  cepat  karena digunakan sebagai sumber energi, sedangkan penyerapan  butir  minyak  terjadi  setelah penyerapan  kuning  telur  dan  bersamaan dengan katabolisme asam lemak. Penyerapan nutrien  yang  terkandung  dalam  pakan endogen dan pemanfaatannya sebagai sumber  energi  bagi  larva  juga  dinyatakan oleh Naz (2009) dan Subhan et al . (2020).

## 3.3. Pertumbuhan Larva
Hasil  pengukuran  terhadap  panjang tubuh  larva  menunjukkan  peningkatan  dari 2,55±0,11 mm pada larva umur 1 hari setelah menetas  menjadi  2,76±0,10  mm  pada  larva
umur  2  hari  (Gambar  5).  Panjang  total  larva umur  3  hari  yang  tidak  diberi  pakan mencapai  2,72±0,06  mm,  sedangkan  pada larva  yang  diberi  pakan  adalah  2,69±0,04 mm (P>0,05).
Larva  umur  2  hari  pada  kedua perlakuan menunjukkan adanya pertumbuhan panjang total. Namun pada umur 3 hari, tidak terlihat  adanya  peningkatan  pada  ukuran panjang  total  tersebut.  Hal  itu  diduga  karena sumber  energi  yang  ada  pada  larva  lebih banyak  digunakan  untuk  pertumbuhan  bobot tubuhnya.  Disamping  itu  juga  untuk  proses organogenesis  yang umum terjadi pada  larva ikan  kerapu  hingga  umur  3  hari,  seperti mulut  yang  membuka,  pigmentasi  mata, pembentukan melanofore dan saluran pencernaan (Slamet & Tridjoko, 1997). Hasil yang  sama  juga  terjadi  pada  pertumbuhan panjang  total  larva  ikan  kakap  merah Lutjanus  sebae yang  mengalami  pertum- buhan  negatif  setelah  mencapai  titik  belok ( flection  point )  pada  50,29  jam  setelah penetasan  (Imanto  &  Melianawati,  2003). Menurut  Diani et  al. (1990),  terjadinya  hal tersebut disebabkan oleh terserapnya kembali sebagian jaringan tubuh larva karena mengalami  kekurangan  energi  dari  cadangan kuning telur. Diaz et al . (2013) mengemuka-
Gambar 5. Panjang total  larva ikan kerapu macan umur 1-3 hari yang tidak diberi dan diberi pakan  eksogen  berupa Brachionus  rotundiformis . Nilai  merupakan  rata-rata  ± standar deviasi.
kan  adanya  penyusutan  beberapa  bagian tubuh  pada  larva  ikan  red  porgy  ( Pagrus pagrus )  yang  disebabkan  karena  penundaan pemberian pakan eksogen.
Bobot tubuh larva cenderung semakin menurun  dengan  semakin  meningkatnya umur  (Gambar  6),  yaitu  pada  umur  1  dan  2 hari, masing-masing adalah 0,17x10 -3 mg dan 0,13x10 -3 mg. Bobot tubuh larva umur 3 hari meningkat  menjadi  0,14x10 -3 mg  pada perlakuan  yang  diberi  pakan  eksogen, sebaliknya  bobot  larva  yang  tidak  diberikan pakan justru menurun menjadi 0,10x10 -3 mg. Bobot  tubuh  larva  nampaknya  terkait dengan ukuran pakan endogen yang dibawanya.  Larva  yang  baru  menetas membawa  pakan  endogen,  terutama  kuning telur, dengan volume besar. Penyusutan yang terjadi  pada  volume  kuning  telur  tersebut nampaknya  mengakibatkan  penyusutan  pada bobot  tubuh  larva.  Pakan  endogen  yang diserap tersebut tidak hanya digunakan untuk pertumbuhan  larva,  namun  juga  untuk sumber energi gerak bagi larva. Hal ini yang mengakibatkan  ukuran  bobot  tubuh  larva terlihat  mengalami  penurunan  pada  larva umur dua hari.
Disamping  itu,  bobot  tubuh  larva nampaknya  juga  terkait  dengan  keberadaan
pakan  eksogen.  Larva  umur  3  hari  yang diberi  pakan  eksogen,  bobot  tubuhnya meningkat dan menjadi lebih berat dibandingkan dengan  larva  yang tidak diberi pakan.  Peningkatan  ini  disebabkan  karena adanya pasokan pakan eksogen yang kemudian  dihidrolisis  dan  dimanfaatkan untuk  pertumbuhan  bobotnya.  Hal  tersebut didukung  oleh  hasil  penelitian  Kamarudin et al .  (2011)  yang  secara  jelas  menunjukkan bahwa  pemberian  pakan  eksogen  berupa zooplankton  terbukti  berpengaruh  terhadap aktivitas enzim pencernaan  yang  lebih tinggi dan  bobot  tubuh  larva  yang  lebih  besar dibandingkan  pada  larva  yang  tidak  diberi pakan  eksogen.  Sebaliknya,  pada  larva  yang tidak  diberi  pakan  eksogen,  bobot  tubuhnya terus  berkurang.  Hal  ini  disebabkan  karena semua  jaringan  tubuhnya  menyusut  secara volumetrik  karena  bagian  dari  jaringan tersebut  digunakan  sebagai  sumber  energi setelah  pakan  endogen  habis  terserap (Dabrowski,  1984).  Hasil  yang  hampir  sama dilaporkan  oleh  Ching et  al .  (2016),  yaitu adanya  penghentian  perkembangan  pada pembentukan  saluran  pencernaan  larva  dan usus  yang  menjadi  semakin  menipis  pada larva ikan yang aktivitas makannya terlambat karena penundaan pemberian pakan eksogen.
Gambar 6.  Bobot tubuh  larva  ikan kerapu  macan umur 1-3 hari  yang tidak diberi dan diberi pakan eksogen.
Gwak et  al .  (1999)  menjelaskan  pula  secara lebih  mendetail  tentang  adanya  perbedaan morfologi  pada  beberapa  bagian  tubuh  larva ikan Japanese
Flounder ( Paralichthys olivaceus ), antara yang tidak diberi dan yang diberi  pakan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa pakan  eksogen  memiliki  peran  yang  sangat penting dalam proses perkembangan organogenesis  dan  pertumbuhan  larva  pada stadia awal.
Peningkatan  bobot  tubuh  larva  yang diberi  pakan  eksogen  ternyata  tidak  disertai dengan peningkatan aktivitas enzim pencernaannya.  Hal  ini  diduga  karena  pakan eksogen  yang  dikonsumsi  oleh  larva,  dalam hal  ini  adalah  rotifer,  tidak  mengalami hidrolisis  oleh  enzim  pencernaan  pada  larva tetapi  dari  rotifer  itu  sendiri  (Kuz’mina  & Golovanova,  2004).  Enzim  yang  berperan diduga  berasal  dari  luar  tubuh  larva ( exogenous  enzyme )  yaitu  yang  terdapat  di dalam pakan alami rotifer yang dikonsumsinya.  Pedersen  (1984)  menerang- kan  bahwa  enzim  yang  digunakan  larva untuk  mencerna  pakannya  dapat  berasal  dari dua  sumber,  yaitu  dari  pencernaan  larva  itu sendiri  ( endogenous  enzyme )  dan  dari  enzim yang  berasal dari zooplankton sebagai pakan alami  ( exogenous  enzyme ).  Enzim  yang terdapat  di  dalam  rotifer  diduga  berperan dalam  proses  autolisis.  Jadi,  meskipun aktivitas  enzim  pencernaan  pada  larva  yang diberi pakan eksogen terdeteksi lebih rendah, namun  larva  yang  diberi  pakan  eksogen tersebut justru mengalami peningkatan bobot tubuh.  Hal  tersebut  dikarenakan  pakan eksogen yang dikonsumsi memiliki kemampuan untuk autolisis, sehingga nutrien yang  terkandung  di  dalam  pakan  eksogen dapat tercerna  kemudian  diabsorpsi oleh sel- sel  tubuh  dan  digunakan  untuk  pertumbuhan larva. Beberapa hasil penelitian juga menunjukkan  adanya  kontribusi  enzim  yang berasal  dari  autolisis  pakan  eksogen  yang berupa  pakan  alami  seperti  pada  larva  ikan Coregonus sp. (Lauff  &  Hoffer,  1984), Turbot ( Scophthalmus  maximus )  (Munilla-
Moran et  al .,  1990),  dan  green  catfish ( Mystus nemurus ) (Srichanun et al ., 2012).
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan adanya kaitan antara aktivitas enzim pencernaan, pakan endogen dan pertumbuhan larva  ikan  kerapu  macan  pada  stadia  awal. Aktivitas  amilase  dan  lipase  terdeteksi  pada larva  umur  1  hari  dan  menunjukkan  bahwa pada  umur  tersebut  larva  telah  memiliki kemampuan untuk menghidrolisis komponen nutrien.  Hal  yang  sama  juga  terjadi  pada larva  ikan  spotted  rose  snapper  ( Lutjanus guttatus ) (Moguel-Hernández et  al .,  2014), tropical  gar  ( Atractosteus  tropicus )  (Frías- Quintana et  al .,  2015)  dan  American  shad ( Alosa  sapidissima )  (Gao et  al .,  2017),  yang menunjukkan adanya aktivitas beberapa jenis enzim  pencernaan  mulai  dari  saat  menetas hingga penyerapan pakan endogennya. Adanya  aktivitas  enzim  pencernaan  sebelum larva  memakan  pakan  eksogen,  menurut Zhang et  al .  (2015)  hal  tersebut  telah terprogram  secara  genetik.  Aktivitas  enzim yang  berbeda  menunjukkan  bahwa  setiap jenis  ikan  memiliki  perbedaan  yang  spesifik dalam hal fungsi dan kemampuan pencernaan (Lahnsteiner, 2017).

## IV. KESIMPULAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  pemberian  pakan  eksogen  awal memberi  pengaruh  yang  berlawanan  pada aktivitas enzim pencernaan dan pertumbuhan larva  ikan  kerapu  macan  pada  stadia peralihan  dari  sumber  pakan  endogen  ke pakan  eksogen.  Larva  yang  tidak  diberi pakan  eksogen,  memiliki  aktivitas  enzim pencernaan yang lebih tinggi namun pertumbuhan  yang  lebih  kecil.  Sebaliknya, larva  yang  diberi  pakan  eksogen  memiliki aktivitas enzim pencernaan yang lebih rendah namun pertumbuhan lebih besar.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  Mujimin  dan  Made  Miniartini,
litkayasa  BBRBLPP,  atas  peran  sertanya dalam  pelaksanaan  penelitian  ini.  Apresiasi dan penghargaan yang sebesar-besarnya juga disampaikan  kepada  Prof.  Gono  Semiadi yang  telah  memberikan  saran  perbaikan terhadap  makalah  ini  melalui  program pendampingan  penulisan  artikel  ilmiah  yang diselenggarakan  oleh  Direktorat  Pendanaan Riset  dan  Inovasi  Badan  Riset  dan  Inovasi Nasional  (BRIN).  Ucapan  terima  kasih  juga disampaikan  kepada  editor  dan  reviewer Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi  Kelautan  Tropis atas segala koreksi, perbaikan dan saran yang diberikan  kepada  makalah  ini  sehingga menjadikannya  lebih  baik  dan  layak  untuk diterbitkan.

## DAFTAR PUSTAKA
Babaei,  S.S.,  A.A.  Kenari,  R.  Nazari,  &  E.
Gisbert. 2011. Developmental changes  of  digestive  enzymes  in
Persian sturgeon ( Acipenser persicus ) during  larval  ontogeny. Aquaculture , 318: 138-144. https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.
2011.04.032
Bergmeyer, H.U., M. Grossl, & H.E. Walter.
1983. Reagents for enzymatic analysis.  In:  H.U.  Bergmeyer  (ed.)
Methods in enzymatic analysis vol. II.
3 rd eds. Weinheim. 274-275 pp. Bolasina,  S.,  A.  Pérez,  &  Y.  Yamashita. 2006.  Digestive  enzymes  activity during  ontogenetic  development  and effect  of  starvation  in  Japanese flounder, Paralichthys olivaceus . Aquaculture , 252: 503-515.
https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.
2005.07.015
Ching,  F.F.,  Y.  Nakagawa,  K.  Kato,  &  S.
Miyashita.  2016.  Effects  of  delayed first  feeding  on  nutritional  condition of tiger grouper, Epinephelus fuscoguttatus (Forsskål, 1775)  larvae. Aquaculture  Reports ,  3:  225-228. https://doi.org/10.1016/j.aqrep.2016.0
4.001
Dabrowski,  K.  1984.  The  feeding  of  fish larvae:  present  (state  of  the  art)  and perspective. Repro.  Nutri.  Develop ., 24(6):
807-833. https://doi.org/10.1051/rnd:19840701 Dewa.  2017. Tiga  jenis  ikan  ekspor terindikasi ditangkap berlebihan . https://legaleraindonesia.com
Diani,  S.,  B.  Slamet,  P.T.  Imanto,  &  H.
Kohno. 1990.
Resorption of endogenous  nutrition  and  initial feeding  of  the  rabbitfish, Siganus javus . Bull. Pen. Perikanan , 1: 83-88. Diaz,  M.V.,  M.F.  Arano,  M.  Pájaro,  E.O.
Aristizábal, & G.J. Macchi. 2013. The use of morphological and histological features  as  nutritional  condition indices  of Pagrus  pagrus larvae.
Neotropical  Ichthyology ,  11(3):  649- 660. https://doi.org/10.1590/S1679- 62252013000300018
Divya,  S.P.,  T.T.A.  Kumar,  R.  Rajasekaran, &  T.  Balasubramanian.  2011.  Larval rearing of clownfish using Brachionus plicatilis rotifers as starter food. Science  Asia, 37:  179-185. https://doi.org/10.2306/scienceasia15 13-1874.2011.37.179
Farhoudi, A., A.A. Kenari, V. Chamanara, &
A.S. Farsani. 2012. Ontogeny changes  in  fatty  acid  and  amino  acid profiles in yellowfin seabream ( Acanthopagrus  latus )  eggs  and larvae. World  Journal  of  Fish  and Marine  Sciences ,  4(3):  290-296. https://doi.org/10.5829/idosi.wjfms.2 012.04.03.62152
Frías-Quintana, C.A., G. Márquez-Couturier, C.A.  Alvarez-González,  D.  Tovar-
Ramírez,  H.  Nolasco-Soria,  M.A.
Galaviz-Espinosa, R. Martínez- García, S. Camarillo-Coop, R. Martínez-Yañez,  &  E.  Gisbert.  2015. Development  of  digestive  tract  and enzyme  activities  during  the  early ontogeny of the tropical gar Atractosteus  tropicus . Fish  Physiol. Biochem ., 41(5): 1075-91.
https://doi.org/10.1007/s10695-015-
0070-9
Galaviz, M.A., A. García-Gasca, M. Drawbridge,  C.A.  Álvarez-González, & L.M. López. 2011. Ontogeny of the digestive  tract  and  enzymatic  activity in white seabass, Atractoscion nobilis , larvae. Aquaculture ,  318:  162-168. https://doi.org/10.1016/j.aquaculture. 2011.05.014
Gao,  X-O.,  Z-F.  Liu,  C-T.  Guan, B.  Huang, J-L. Lei, J. Li, Z-L. Guo, Y-H. Wang, &  L. Hong.  2017.  Developmental changes  in  digestive  enzyme  activity in  American shad, Alosa sapidissima , during  early  ontogeny . Fish  Physiol. Biochem ., 43(2): 397-409. https://doi.org/10.1007/s10695-016-
0295-2
Gawlicka, A.B. Parent, M.H. Horn, N. Ross, I.  Opstad,  &  O.J.  Torrissen.  2000. Activity  of  digestive  enzyme  in  yolk sac larvae of Atlantic halibut ( Hippoglossus
hippoglossus ): indication  of  readiness  for  first feeding. Aquaculture ,  184:  303-314. https://doi.org/10.1016/S0044- 8486(99)00322-1
Gisbert,  E.,  G.  Giménez,  I.  Fernández,  Y. Kotzamanis,  &  A.  Estévez.  2009. Development of digestive enzymes in common dentex Dentex dentex during early  ontogeny. Aquaculture ,  287: 381–387. https://doi.org/10.1016/j.aquaculture. 2008.10.039
Gwak,  W.S.,  T.  Seikai,  &  M.  Tanaka.  1999. Evaluation  of  starvation  status  of laboratory-reared  Japanese  Flounder Paralichthys  olivaceus larvae  and juveniles based on morphological and histological  characteristics. Fisheries Science , 65(3): 339-346. https://doi.org/10.2331/fishsci.65.339
Hamre, K. 2016. Nutrient profiles of rotifers ( Brachionus sp.)  and  rotifers  diets from  four  different  marine  fish hatcheries. Aquaculture ,  450:  136-
142. https://doi.org/10.1016/j.aquaculture. 2015.07.016
Hazman,  B.  &  K.  Gökçek.  2014.  The  effect of  different  first  feeds  on  proteolytic activity  of  the  Northern  Pike, Esox lucius Linneaus  1758,  Post-Larvae. Turkish  Journal  of  Fisheries  and Aquatic Sciences , 14: 875-878.
https://doi.org/10.4194/1303-2712-
v14_4_04
Imanto,  P.T.  &  R.  Melianawati.  2003. Perkembangan  awal  larva  kakap merah Lutjanus  sebae . J.  Penelitian Perikanan  Indonesia ,  9(1):  11-19. https://doi.org/10.15578/jppi.9.1.2003 .11-19
Johnston,  D.J.,  A.J.  Ritar,  &  C.W.  Thomas.
2004.  Digestive  enzymes  profiles reveal digestive capacity and potential energy  sources  in  fed  and  starved spiny lobster ( Jasus edwardsii ) phyllosoma larvae. Comparative
Biochemistry  and  Physiology B ,  138: 137-144.
https://doi.org/10.1016/j.cbpc.2004.0 2.013
Kailasam,  M.,  A.R.  Thirunavukkarasu,  S. Selvaraj,  &  P.  Stalin.  2007.  Effect  of delayed  initial  feeding on growth and survival  of  Asian  sea  bass Lates calcarifer (Bloch) larvae. Aquaculture , 271(1-4): 298-306. https://doi.org/10.1016/j.aquaculture. 2007.05.005
Kamarudin,  M.S.,  S.  Otoi,  &  C.R.  Saad. 2011.  Changes  in  growth,  survival and  digestive  enzyme  activities  of Asian redtail catfish, Mystus nemurus, larvae  fed  on  different  diets. African Journal  of  Biotechnology ,  10(21): 4484-4493.
https://doi.org/10.5897/AJB09.1895
Khoa,  T.N.D.,  V.  Waqalevu,  A.  Honda,  K.
Shiozaki,  &  T.  Kotani.  2019.  Early ontogenetic  development,  digestive enzymatic activity and gene expression  in  red  sea  bream  ( Pagrus
major ). Aquaculture ,  512:  734283. https://doi.org/10.1016/j.aquaculture. 2019.734283
Kohno,  H.,  S.  Hara,  &  Y.  Taki.  1986.  Early larval  development  of  the  seabass Lates calcarifer with emphasis on the transition  of  energy  sources. Bulletin of  the  Jap.  Soc.  of  Scientific Fisheries , 52(10): 1719-1725.
https://www.jstage.jst.go.jp/article/sui san1932/52/10/52_10_1719/_pdf
Kohno,  H.,  S.  Diani,  P.  Sunyoto,  B.  Slamet,
& P.T Imanto.
1990. Early development  events  associated  with changeover  of  nutrient  sources  in  the grouper, Epinephelus  fuscoguttatus , larvae. Bull.  Pen.  Perikanan,  special eds , 1: 51-64.
Kurnia,  R.,  K.  Suwardi,  I.  Muchsin,  &  M. Boer. 2011. Tangkapan kerapu macan ( Epinephelus fuscoguttatus ) di
Perairan  Semak  Daun,  Kepulauan Seribu. Buletin  PSP ,  19(3):  277-283. https://journal.ipb.ac.id/index.php/bul psp/article/view/4162
Kurokawa, T. & T. Suzuki. 1996. Formation of  the  diffuse  pancreas  and  the development  of  digestive  enzyme synthesis  in  larvae  of  the  Japanese flounder Paralichthys olivaceus . Aquaculture , 141: 267-276. https://doi.org/10.1016/0044-
8486(95)01237-0
Kuz’mina,  V.V.  &  I.  L.  Golovanova.  2004. Contribution  of  prey  proteinases  and carbohydrases in fish digestion. Aquaculture , 234:
347-360. https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.
2003.11.011
Lahnsteiner,  F.  2017.  Digestive  enzyme system of larvae of different freshwater teleosts and its differentiation during the initial phase of exogenous feeding. Czech J. Anim.
Sci ., 62(10): 403-416. https://doi.org/10.17221/25/2016- CJAS
Lauff,  M.  &  R.  Hoffer.  1984.  Proteolytic enzymes  in  fish  development  and  the importance of dietary enzymes.
Aquaculture , 37: 335-346.
https://doi.org/10.1016/0044- 8486(84)90298-9
Lemieux, H., P. Blier, & J.D. Dutil. 1999. Do digestive enzymes set a physiological limit  on  growth  rate  and  food conversion  efficiency  in  the  Atlantic cod  ( Gadus  morhua )? Fish  Physiol. and
Biochem., 20: 293-303. https://doi.org/10.1023/A:100779101
9523
Linfield,  W.M.,  R.A.  Barangkas,  L.  Sivieri,
S.  Serota,  &  R.W.  Stevenson.  1984. Enzymatic  fat  and  synthesis. JAOCS ,
18(2):
78-87.
https://doi.org/10.1007/BF02678767
MacKenzie,  B.,  D.  Ueberschär,  M.  Basford, Heath  &  A.  Gallego.  (1999).  Diel variability  of  feeding  activity  in haddock ( Melanogrammus aeglifinus ) larvae  in  the  East  Shetland  area. North  Sea  Mar.  Biol .,  135:  361-368. https://doi.org/10.1007/s00227005063
5
Made, S., S.
Fakhriyyah, & A.
Darawelalangi.  2017.  Analysis  of grouper  ( Epinephelus  spp )  export contribution  to  own-source  revenue South  Sulawesi  Province. Journal  of economic  and  social  of  fisheries  and marine , 4(2): 126-134. https://doi.org/10.21776/ub.ecsofim.2 017.004.02.02 Martinez-Lagos,  R.,  D.  Tovar-Ramirez,  V.
Gracia-Lopez,  &  J.P.  Lazo.  2013. Changes in digestive enzyme activities  during  larval  development of  leopard  grouper  ( Mycteroperca rosacea ). Fish  Physiol.  Biochem ., 40(3):
773-85.
https://doi.org/10.1007/s10695-013- 9884-5
Moguel-Hernández,  I.,  R.  Peña,  H.  Nolasco- Soria,  S.  Dumas,  &  I.  Zavala-Leal. 2014.  Development  of  digestive
enzyme  activity  in  spotted  rose snapper, Lutjanus guttatus (Steindachner,  1869)  larvae. Fish Physiol.  Biochem .,  40(3):  839-48. https://doi.org/10.1007/s10695-013- 9890-7
Munilla-Moran, R., J.R. Stark, & A. Barbour. 1990. The role of exogenous enzymes in digestion in cultured turbout larvae
( Scophthalmus maximus L.). Aquaculture , 88: 337-350.
https://doi.org/10.1016/0044- 8486(90)90159-K
Naz,  M.  2009.  Ontogeny  of  biochemical phases of fertilized eggs and yolk sac larvae  of  Gilthead  Seabream  ( Sparus aurata L.). Turkish  Journal  of Fisheries  and  Aquatic  Sciences ,  9:
77-83. https://www.trjfas.org/uploads/pdf_73
2.pdf
Nikhlani, A. & K. Sukarti. 2017. Perkembangan aktivitas enzim pencernaan  larva  rajungan Portunus pelagicus . Jurnal  Ilmu dan Teknologi Kelautan  Tropis ,  9(2):  443-452. https://doi.org/10.29244/jitkt.v9i2.192
80 Novriadi,  R.  2019.  Mini  review:  Production and  economics  analysis  of  backyard production
of tiger grouper
Epinephelus  fuscoguttatus fingerlings in Situbondo, Indonesia. Jurnal Fishtech , 8(3): 58-71. https://doi.org/10.36706/fishtech.v8i2 .8802
O’Brien-MacDonald, K., J.A. Brown, & C.C.
Parrish. 2006. Growth, behaviour, and digestive  enzyme  activity  in  larval Atlantic  cod  ( Gadus  morhua )  in relation  to  rotifer  lipid. ICES  Journal of  Marine  Science ,  63:  275-284. https://doi.org/10.1016/j.icesjms.2005 .11.017
Pedersen, B.H. 1984. The intestinal evacuation  rates  of  larval  herring ( Clupea  harengus L.)  predating  on wild plankton. Dana , 3: 21-30.
Pedersen,  B.H.  1993.  Protein  digestion  in herring Clupea  harengus larvae: trypsinogen  secretion  and  effect  of  a transitory food restriction on mortality, growth and digestive enzyme  content.  In  Walter,  B.T.  &
H.J.  Fyhn  (ed.).  Physiological  and biochemical aspect of fish
development. 220-225 pp.
Pedersen,  B.H.,  B.  Ueberschar,  &  T.
Kurokawa.  2003.  Digestive  response and rates of growth in pre- leptocephalus  larvae  of  the  Japanese eel Anguilla  japonica reared  on artificial diets. Aquaculture , 215: 321- 338. https://doi.org/10.1016/S0044- 8486(02)00065-0
Perez-Casanova,  J.C.,  H.M.  Murray,  J.W. Gallant,  N.W.  Ross, S.E.  Douglas,  &
S.C.  Johnson.  2006.  Development  of the  digestive  capacity  in  larvae  of haddock
( Melanogrammus aeglefinus )  and  Atlantic  cod  ( Gadus morhua ). Aquaculture , 251(2-4): 377- 401.
https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.
2005.06.007 Pranata,  A.,  Haryati,  &  M.Y.  Karim.  2014. Perkembangan aktivitas enzim pencernaan  pada  larva  ikan  bawal bintang (Trachinotus blochii,
Lacepede 1801). J. Sains & Teknologi , 14(3): 199-208. http://pasca.unhas.ac.id/jurnal/files/37 8203d62e9834ac8dba77dab322aaf5.p df
Rangsin, W., N. Areechon, & R. Yoonpundh. 2012.  Digestive  enzyme  activities during  larval  development  of  striped catfish, Pangasianodon hypophthalmus (Sauvage, 1878).
Kasetsart  J.  (Nat.  Sci.) ,  46:  217-228. https://www.thaiscience.info/journals/ Article/TKJN/10898172.pdf
Rhodes,  K.,  Y.  Sadovy,  &  M.  Samoilys. 2018. Epinephelus  fuscoguttatus . The IUCN Red List of  Threatened
Species . https://www.iucnredlist.org
Ribeiro,  L.,  J.L.  Zambonino-Infante,  C. Cahu, & M.T. Dinis. 1999.
Development of digestive enzymes in larvae  of Solea  senegalensis ,  Kaup 1858. Aquaculture ,  179:  465-473. https://doi.org/10.1016/S0044- 8486(99)00180-5
Rimmer,  M.A.  &  B.  Glamuzina.  2017.  A
review of grouper (Family Serranidae: Subfamily Epinephelinae) aquaculture  from  a  sustainability science perspective. Reviews in Aquaculture , 11: 58-87. https://doi.org/10.1111/raq.12226
Rønnestad,  I.,  W.  Koven,  A.  Tandler,  M.
Harel,  &  H.J.  Fyhn.  1998.  Utilisation of  yolk  fuels  in  developing  eggs  and larvae of European sea bass ( Dicentrarchus  labrax ). Aquaculture , 162(1-2):
157-170. https://doi.org/10.1016/S0044-
8486(98)00203-8
Rotllant,  G.,  F.J.  Moyano,  M.  Andrés,  A. Estévez, M. Díaz, & E. Gisbert. 2010. Effect  of  delayed  first  feeding  on larval  performance  of  the  spider  crab Maja  brachydactyla assessed  by digestive enzyme activities and
biometric  parameters. Mar.  Biol .,
157:
2215-2227. https://doi.org/10.1007/s00227-010-
1487-4
Slamet,  B.  &  Tridjoko.  1997.  Pengamatan pemijahan alami, perkembangan embrio  dan  larva  ikan  kerapu  batik, Epinephelus  microdon dalam  bak terkontrol. J.  Penelitian  Perikanan Indonesia , 3(4): 40-50. https://doi.org/10.15578/jppi.3.4.1997 .40-50
Srichanun, M., C. Tantikitti, V. Vatanakul, &
P. Musikarune. 2012. Digestive enzyme  activity  during  ontogenetic development and effect of live feed in green  catfish  larvae  ( Mystus  nemurus Cuv. & Val.). Songklanakarin Journal  of  Science  and  Technology ,
34(3):
247-254.
https://www.researchgate.net/publicat ion/261511898
Srithongthum,  S.  H-L.  Au,  T.  Amornsakun, S.  Chesoh,  S.  Jantarat,  N.  Suzuki,  Y. Takeuchi,  A.  Hassan,  G.  Kawamura, & L-S. Lim. 2020. Yolk-sac absorption,  mouth  size  development, and  first exogenous feeding of Sultan fish, Leptobarbus  hoevenii . AACL Bioflux , 13(3): 1320-1327.
http://www.bioflux.com.ro/docs/2020
.1320-1327.pdf Subhan,  U.,  Iskandar,  Zahidah,  &  I.M.  Joni. 2020.  Efficiency  yolk  sac  utilization of  endogenous  feeding  larvae  striped catfish ( Pangasianodon hypophthalmus ) in the environmentally  rich  Fine  Bubbles (FBs).  AIP  Conference  Proceedings 2219, 090003. https://doi.org/10.1063/5.0003079
Sulaeman  &  R.  Fotedar.  2017.  Yolk utilization  and  growth  during  the early  larval  life  of  the  Silver  Perch, Bidyanus  bidyanus (Mitchell,  1838). Int Aquat Res ., 9: 107-116
https://doi.org/10.1007/s40071-017- 0160-7
Suzer,  C.,  D.  Çoban,  S.  Yildirim,  M.
Hekimoğlu, H.O. Kamacı, K. Firat, &
S. Saka. 2014. Stage-specific ontogeny of digestive enzymes  in the cultured  common  dentex  ( Dentex dentex )  larvae. Turkish  Journal  of Fisheries  and  Aquatic  Sciences ,  14: 759-768.
https://doi.org/10.4194/1303-2712- v14_3_18
Tang,  U.M.,  H.  Alawi,  H.  Masjudi,  &  M. Fauzi.  2020.  Development  of  mouth opening and digestive enzyme activities in sheatfish ( Ompok hypopthalmus )  larvae. International
Journal of Oceans and Oceanography , 14(1): 1-8. https://doi.org/10.37622/IJOO/14.1.2 020.1-8
Teles,  A.,  J.  Salas-Leiva,  C.A.  Alvarez- González,  &  D.  Tovar-Ramírez. 2019.  Changes  in  digestive  enzyme activities  during  early  ontogeny  of Seriola rivoliana . Fish Physiol. Biochem ., 45(2): 733-742. https://doi.org/10.1007/s10695-018- 0598-6 Yamin,  M.  &  N.N.  Palingi.  2007.  Aktivitas enzim protease
dan kondisi
pencernaan  di  usus  ikan  kerapu macan  ( Epinephelus  fuscoguttatus ) setelah pemberian pakan. Jurnal Riset Akuakultur, 2(2): 281-288 . https://doi.org/10.15578/jra.2.2.2007. 281-288
Submitted  :   03 February 2022 Reviewed  :   17 March 2022 Accepted  :  20 April 2022

## FIGURE AND TABLE TITLES
Figure 1.  Protease  activity  of  1-3  days  old  tiger  grouper  larvae  that  unfed  and  fed  with Brachionus rotundiformis as exogenous feed. Value is mean ± standard deviation. Figure 2.  Amylase  activity  of  1-3  days  old  tiger  grouper  larvae  that  unfed  and  fed  with Brachionus rotundiformis as exogenous feed. Value is mean ± standard deviation. Figure 3.  Lipase  activity  of  1-3  days  old  tiger  grouper  larvae  that  unfed  and  fed  with Brachionus rotundiformis as exogenous feed. Value is mean ± standard deviation. Figure 4. Volume of endogenous feed. Value is mean ± standard deviation.
Figure 5.  Total  length  of  1-3  days  old  tiger  grouper  larvae  that  unfed  and  fed  with
Brachionus rotundiformis as exogenous feed. Value is mean ± standard deviation.
Figure 6.  Body weight of 1-3 days old tiger grouper larvae that unfed and fed with exogenous feed.