## FORMULASI NANOPARTIKEL KITOSAN EKSTRAK METANOL ALGA LAUT COKLAT (Sargassum hystrix) DENGAN METODE GELASI IONIK
Submitted : 9 Januari 2021 Edited : 22 Mei 2020 Accepted : 29 Mei 2021
Agung Giri Samudra 1 , Nurfijrin Ramadhani 1 , Fathnur Sani K 2 , Gina Lestari 3 , Bambang Hernawan Nugroho 4
1 S1 Farmasi Universitas Bengkulu, 2 S1 Farmasi Universitas Jambi,
3 D3 Farmasi Sekolah Tinggi Kesehatan Al-Fatah, 4 S1 Farmasi Universitas Islam Indonesia Email : agunggirisamudra@unib.ac.id

## ABSTRACT
The  content  of  marine  algae  Sargassum hystrix includes  polysaccharides  (alginates), polyphenols, proteins, peptides, amino acids, lipids, minerals, and several vitamins. However, the use of natural ingredients has limitations, namely that it often fails in the clinical phase due to low  bioavailability.  One  effort  that  can  be  done  to  overcome  this  problem  is  to  formulate nanoparticles using chitosan polymer and sodium tri-polyphosphate. This study aims to formulate nanoparticles  from  the  methanol  extract  of Sargassum hystrix with  various  chitosan concentration ratios. The methanol extract of Sargassum hystrix was obtained by extraction using the maceration method with 50%  methanol as a solvent. The results of the extract were made colloidal nanoparticles using ionic gelation techniques using a variation of the methanol extract of Sargassum hystrix: chitosan: NaTPP: Tween 80, Formulation 1 (0.75 gram: 0.1% 18 mL: 0.1% 9 mL: 0.5% 3 mL); Formulation 2 (0.75 gram: 0.2% 18 mL: 0.2% 9 mL: 0.5% 3 mL); Formulation 3 (0.75 gram: 0.1% 18 mL: 0.2% 9 mL: 0.5% 3 mL); Formulation 4 (0.75 gram: 0.2% 18 mL: 0.1% 9 mL: 0.5% 3 mL). The nanoparticle colloids formed were characterized by particle size (nm), and the zeta potential (mV), Formula 1 (212.65 ± 45.32; -11.4 ± 5.65), Formula 2 (514.55 ± 56.35; -8.85 ± 1.34), Formula 3 (219.35 ± 43.76; -14.5 ± 1.83), Formula 4 (326.5 ± 3.39; -1.25 ± 17.88). All formulas show that they can form nanoparticle formulas between 1-1000 nm., But the preparation that will be more stable is formula 3 because it has a zeta potential that is close to +/- 30 mV.
Keywords : methanol extract, sargassum hystrix, nanoparticles, zeta potential
PENDAHULUAN Saat ini masyarakat mulai
beralihnya  ke  obat  tradisional  didukung dengan  banyaknya  jenis  tanaman  obat berkhasiat di Indonesia baik itu di daratan maupun  di  lautan.  Indonesia  merupakan Negara  kepulauan  yang  memiliki  lebih kurang  70%  laut  yang  kaya  dengan berbagai  jenis  sumber  tanaman  yang memiliki  khasiat  sebagai  obat.  Namun penggunaan bahan alam memiliki keterbatasan,  yaitu  sering  mengalami
kegagalan  pada  fase  klinik  disebabkan rendahnya bioavailabilitas (1) .
Aplikasi nanoteknologi untuk pangan  dan  obat  obatan  menunjukkan kecenderungan  yang  terus  meningkat. Teknologi  ini  menawarkan  keunggulan dalam meningkatkan bioavailabilitas bahan aktif, pengendalian pelepasan bahan aktif serta  memperbaiki  sifat  sensoris. Dalam ukuran nano (50-500 nm), partikel bahan  aktif  lebih  mudah  diserap  oleh dinding usus halus, sehingga
meningkatkan bioavailabilitasnya. Penyerapan bahan aktif meningkat karena kelarutan  partikel  meningkat  dan  luas permukaan partikel yang besar (2,3) .
Nanoteknologi  merupakan  salah satu  teknologi  yang  melibatkan  molekul dengan ukuran kurang dari 1000
nanometer (4) .  Aplikasi  nanoteknologi dalam  berbagai  bidang  seperti  kimia, biologi,  fisika,  dan  rekayasa  genetika menjadi sangat menarik di beberapa tahun terakhir (5) .  Beberapa  jenis  pengembangan nanoteknologi  yang  sangat  pesat  yaitu nano-medicine, nanoemulsi dan nanopartikel.  Penelitian  tentang  nano menjadi  perhatian  penting  bagi  peneliti dunia  dikarenakan  penelitian  ini  dapat diaplikasikan  dengan  sangat  luas  seperti dalam  bidang biomedis,  elektronik  dan optik (6) .
Polimer  yang  digunakan  untuk membentuk  nanopartikel  dapat  berupa polimer  sintetik  dan  alami.  Salah  satu polimer  yang  dapat  diaplikasikan  dalam formulasi  nanopartikel  salah  satunya adalah  kitosan  dengan  agen  ikatan  silang natrium  tri-poli-fosfat  (NaTPP) (7) .  Gelasi ionik  merupakan  metode  populer  pilihan dalam  sintesis  ikatan  sambung  silang senyawa  enkapsulator (8) .  Gelasi  ionik dapat  dimanfaatkan  untuk  pembentukan nanopartikel,  metode  ini  mempunyai kelebihan yaitu prosesnya yang sederhana atau mudah, pelarut yang digunakan bukan berasal dari pelarut organik serta
prosesnya dapat dikontrol dengan mudah (9) . Kitosan  merupakan  suatu  senyawa poli (Namino-2-deoksi- β -D-
glukopiranosa)  atau  glukosamin  hasil deasetilasi  kitin/poli  (N-asetil2-amino-2- deoksi- β -D-glukopiranosa). Kitosan mempunyai  sifat  spesifik  yaitu  adanya sifat  bioaktif,  biokompatibel,  pengkelat, antibakteri  dan  dan  dapat  terbiodegrasi (5) .
Salah  satu  pemanfaatan  kitosan  dalam
sistem biomedis atau biologis adalah pada sistem  penghantaran  obat  dan  pelepasan obat.  Pada  sistem  ini  pelepasan  obat dengan  kitosan  memiliki  keterbatasan karena  kitosan  cepat  sekali  menyerap  air dan memiliki derajat swelling yang tinggi dalam lingkungan berair, hal tersebut akan menyebabkan pelepasan obat terjadi lebih cepat (10) .
Pada  penelitian  Nugroho  dkk  2020, berfokus  pada  efek  mekanik  yang  perlu dipertimbangkan pemilihannya dalam sintesis  suatu crosslinker bahwa  efek mekanik  pada  proses  homogenisasi  dapat menimbulkan percepatan partikel, getaran, tekanan  pancaran  dan  gaya  gesek  yang dimanfaatkan  untuk  mengecilkan  ukuran suatu  partikel  dan  menjaga  partikel  tetap kecil  terhadap  pengaruh  pertumbuhan partikel  dan  aglomerasinya (8) .  Selain  itu, penelitian  yang  dilakukan  Bhumkar  dan Varsha  2006,  mempelajari  pembuatan partikel kitosan ikatan silang dengan TPP dengan  metode ionotrophic  gelation (11) . Kitosan  yang  diikat  silang  secara  ionik menunjukkan derajat swelling yang rendah. Kitosan yang terikat silang ini juga mudah  diatur sesuai  dengan  fungsi  yang diinginkan seperti hidrofilisitas, kerapatan, dan kristalinitas. Berdasarkan penjelasan diatas, manfaat  yang  ada  dalam  Sargassum hystrix dapat ditingkatkan dengan memformulasikan
menjadi bentuk nanopartikel.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengkarakterisasi  pengaruh  variasi kitosan  dan  mendapatkan  perbandingan ekstrak  metanol  Sargassum hystrix :
kitosan:
NaTPP yang optimal menggunakan metode gelasi ionik.

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan
Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  alat-alat  gelas
(Pyrex),  bejana  maserasi,  blender,  cawan penguap,  hot  plate,  waterbath,  magnetik stirrer, particle  sizeanalyzer (Horiba Scientific,  Nano Particle  Analyzer  SZ- 100).

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  alga  laut  jenis Sargassumhystrix kering,
metanol (E.Merck), aquadest. kitosan, Na- TPP,asetat, tween 80.

## Ekstraksi Metanol
Alga  laut  kering  Sargassum hystrix direndam dalam  air  selama  12  jam.  Alga dipotong  kecil  kemudian  dihaluskan dengan  blender  dan  dikeringkan  dalam oven  suhu  40 o C  selama  24  jam.  Serbuk alga  laut  yang  telah  kering  ditimbang  50 gram  dan  diekstrak  dalam  metanol  50% sebanyak  1  L.  Ekstraksi  dilakukan menggunakan  metode  maserasi  selama  3 hari  pada  suhu  kamar,  menggunakan shaker dengan  kecepatan  150  rpm. Metanol  diuapkan dengan  menggunakan waterbath (13,14,15) .

## Pembuatan Nanopartikel
Pembuatan  larutan  kitosan  dengan cara timbang kitosan sebanyak 0,1 dan 0,2
gram  dilarutkan  dalam  100  mL  larutan asam  asetat  1%  dengan  menggunakan pengaduk  magnetic.  Pembuatan  larutan natrium tripolifosfat dengan cara menimbang natrium tripolifosfat sebanyak
0,1  dan  0,2  mg  dilarutkan  dalam  100  mL aqua  bidestilata  dengan  menggunakan pengaduk  magnetik.  Pembuatan  larutan tween 80 yaitu dengan ambil larutan tween 80  ambil  sebanyak  0,5  mL  dilarutkan dalam 100 mL aqua bidestilata. Pembuatan suspensi  nanopartikel kitosan  ekstrak metanol Sargassum  hystrix  yaitu Ekstrak metanol Sargassum  hystrix 0,75  gram dicampurkan  dengan  larutan  kitosan (variasi  konsentrasi  0,1 – 0,2%)  18  mL menggunakan  pengaduk  magnetik  pada kecepatan 1500 selama 30 menit. Kemudian  tambahkan  larutan  Na-TPP
(variasi  konsentrasi  0,1 – 0,2%)  9mL secara  tetes  demi  tetes  menggunakan pengaduk  magnetik  pada  kecepatan  1500 Rpm selama 30 menit. Kemudian tambahkan  larutan  tween  (konsentrasi 0,5%)  3  mL  secara  tetes  demi  tetes menggunakan  pengaduk  magnetik  pada kecepatan  1500  selama  30  menit  hingga terbentuk  suspensi  nanopartikel (15,16,17) . Formula  sediaan  nanopartikel  ekstrak metanol Sargassum  hystrix dapat  dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Formula sediaan nanopartikel ekstrak metanol Sargassum hystrix.
Ekstrak Kitosan Na TPP Tween 80 Formula 1 0,75 gram 0.1%; 18 mL 0,1%; 9 mL 0,5%; 3 mL Formula 2 0,75 gram 0,2%; 18 mL 0,2%; 9 mL 0,5%; 3 mL Formula 3 0,75 gram 0,1%; 18 mL 0,2%; 9 mL 0,5%; 3 mL Formula 4 0,75 gram 0,2%; 18 mL 0,1%; 9 mL 0,5%; 3 mL

## Karakterisasi Nanopartikel
Nanopartikel yang terbentuk kemudian dikarakterisasi,  meliputi  ukuran  partikel, potential zeta dan morfologi
nanopartikel.Analisis  ukuran  dan  morfologi partikel  Sediaan  diambil  1  mL  kemudian diencerkan  ke  dalam  5  mL  aquabides kemudian diaduk perlahan hingga
membentuk  dispersi.  Selanjutnya,  diameter partikel  dan  zeta  potensial  diukur  untuk masing-masing  formula  menggunakan alat Particle  Size  Analyzer dengan  metode Dynamic Light Scattering (8,18,19) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi Metanol
Ekstraksi  metanol  dari  alga  laut Sargassum sp diekstrak menggunakan metode  maserasi.  Pelarut  ekstraksi  yang digunakan yaitu metanol karena mempunyai kemampuan  yang  paling  baik  mengekstrak polifenol. Maserasi merupakan proses
pengambilan komponen target yang dilakukan  dengan  cara  merendam  serbuk simplisia ke dalam pelarut yang sesuai dalam jangka  waktu  tertentu.  Isi  sel  akan  larut karena  adanya  perbedaan  konsentrasi  antara larutan  didalam  sel  dan  diluar  sel.  Larutan dengan  konsentrasi  tinggi  akan  terdesak keluar  dan  diganti  oleh  pelarut  dengan konsentrasi  rendah  (proses  difusi).  Pelarut ekstraksi  yang  digunakan  yaitu  metanol, karena mempunyai kemampuan yang paling baik mengekstrak polifenol.
Hal ini telah dibuktikan oleh penelitian Aryudhani  (2007)  mengekstrak  polifenol alga  laut Caulerpa  racemosa menggunakan pelarut  metanol  sebagai  pelarut  polar menunjukan nilai rendemen tertinggi sebesar 40,47%  dibandingkan  pelarut  etil  asetat sebagai pelarut semipolar sebesar 2,74% dan n-heksan  sebagai  pelarut  nonpolar  sebesar 1,07% (20) .  Pelarut  metanol  terbukti  dapat mengekstrak  kandungan  fenol  total  alga S. swartzii dengan  hasil  yang  paling  baik sebesar  12,00  mg  asam  galat/  100  g  sampel
kering dibandingkan pelarut etanol;
kloroform;  n-heksan  berturut-turut  sebesar 0,81;  11,05;  6,41  (mg  asam  galat/  100  g sampel kering) (21) . Menurut Penelitian Samudra.,  dkk  2018,  Rendemen  ekstrak metanol Sargassum sp.  sebesar  11,12%. Hasil rendemen dari ekstraksi pada penelitian ini yaitu 9% (14) .
(a) (b)
Gambar 1. (a)Penyaringan
ekstraksi
metanol;  (b)Hasil  pemekatan ekstrak metanol

## Formula Nanopartikel
Penelitian  ini  menggunakan  variasi konsentrasi  kombinasi  polimer  kitosan  dan tri-polifosfat. Pencampuran polimer tersebut akan  menghasilkan  interaksi  antara  polimer yang  bermuatan positif  pada  gugus  amino kitosan  dengan  polimer  yang  bermuatan negatif dari tri-poli-fosfat.Pembentukan kitosan  nanopartikel – ekstrak Sargassum hystrix dilakukan dengan metode gelasi ionik yaitu  dengan  cara  mereaksikan  campuran
kitosan-ekstrak Sargassum hystrix dengan natrium  tripolifosfat  (Na-TPP).  Dengan mengatur  konsentrasi  kitosan  dan  Na-TPP serta perbandingan komposisi antara kitosan dengan  ekstrak  maka  ukuran  partikel  dari nanopartikel  kitosan  Sargassum hystrix. dapat  dibuat  pada  skala  nano  ataupun mikrometer. Konsentrasi  antara  polimer kitosan  dan  tri-poli-fosfat  yang  digunakan dapat  mempengaruhi  karakteristik fisik  dari nanopartikel (22) .Penggunaan  kitosan  pada penelitian  ini  karena  kitosan  yang  memiliki sifat antibakteri, biokompatibel, pengelat dan bioaktif, serta dapat terbiodegrasi. Selain itu kitosan  sangat  cepat  menyerap  air  dan memiliki derajat swelling yang tinggi dalam lingkungan air, sehingga pada aplikasi medis dan aplikasi biologis sebagai sistem penghantaran  dan  pelepasan  obat  kurang menguntungkan. Sehingga penambahan
NaTPP perlu dilakukan untuk menghasilkan turunan kitosan dengan peningkatan biokompatibilitas swelling dan  menurunkan derajat swelling yang sangat tinggi (23) .
Pada  metode  gelasi  ionik  dengan menggunakan pasangan polimer kitosan dan
NaTPP, mekanisme
terbentuknya nanopartikel  kitosan  terbentuk  berdasarkan
interaksi elektostatic antara gugus amina dari kitosan  dan  gugus  negatif  dari  polianion seperti  tripolifosfat. Metode  gelasi  ionik merupakan  metode  yang  mudah  dilakukan dibandingkan  dengan  metode-metode  yang lainnya.  Kitosan  yang  terlarut  dalam  asam asetat kemudian ditambahkan dengan polianion  atau  anionik  polimer,  secara spontan  akan terbentuk  nanopartikel  dengan pengadukan  menggunakan magnetic  stirrer pada temperatur ruangan (5) . Hasil nilai ukuran nano partikel dan zeta potensial dapat dilihat pada tabel 2.
Hasil ekstrak
dibuat koloid nanopartikel  menggunakan  teknik  gelasi ionic menggunakan  variasi  ekstrak  metanol Sargassum hystrix: kitosan: NaTPP : Tween 80.  Koloid  nanopartikel  yang  terbentuk dikarakterisasi ukuran partikel (nm), dan nilai zeta potensial (mV) yaitu formula 1 (212.65± 45.32; -11.4  ±  5.65),  formula  2  (514.55  ± 56.35; -8.85  ±  1.34),  formula  3  (219.35  ± 43.76; -14.5 ± 1.83), formula 4 (326.5 ± 3.39; -1.25  ±  17.88). Semua  formula  menunjukan dapat  membentuk  formula  nanopartikel diantara  1-1000  nm,  namun  sediaan  akan lebih  stabil  yaitu  formula  3  memiliki  zeta potensial yang mendekati +/- 30 mV.
Tabel 2. Hasil Nilai Ukuran Nano Partikel dan Zeta Potensial
Ukuran Nano Partikel (nm) Zeta Potensial (mV) Formula 1 212.65± 45.32 -11.4 ± 5.65 Formula 2 514.55 ± 56.35 -8.85 ± 1.34 Formula 3 219.35 ± 43.76 -14.5 ± 1.83 Formula 4 326.5 ± 3.39 -1.25 ± 17.88
Keterangan: Nilai rata-rata ± SD (3 replikasi)
Keterangan: F1= Formula 1; F2= Formula 2; F3= Formula 3; F4= Formula 4 Gambar 2. Formula Nanopartikel Ekstrak Metanol Sargassum hystrix.
Pada  penelitian  ini  hasil  dapat  dilihat pada  gambar  2  menunjukan  bahwa  semua formula  jernih,  dan  memiliki  kepekatan
warna coklat yang berbeda-beda,
Meningkatnya  rasio  kitosan  dalam  sistem meningkatkan  kejernihan  dari  dispersi  yang terbentuk. Adanya variasi komposisi kitosan tersebut  berpengaruh  pada  ukuran  partikel dan nilai zeta potensial pada masing-masing variasi.  Peningkatan  rasio  kitosan  dalam sistem  meningkatkan  ukuran  partikel  dari nanopartikel  ekstrak  metanol Sargassum hystrix.  Jumlah  kitosan  yang berlebih kemudian di kompleks melalui tautan silang dengan  counter  ion,  natrium  tri-poli-fosfat (NaTPP), jumlah kitosan akan meningkatkan ukuran partikel karena struktur folding rantai polimer  yang  terdispersi  semakin  besar  dan semakin  banyak.  Nilai  zeta  potensial  yang positif  disebabkan  karena  kontribusi  dari muatan  parsial  pada  permukaan  yang didominasi  oleh  kitosan  (bermuatan  positif) sehingga  beda  potensial  antara  electrical double  layer  dan  medium  bernilai  positif. Nilai  zeta  potensial  yang  >30  menunjukkan repulsion  force lebih  besar  dari  pada attractive force sehingga mampu meningkatkan stabilitas sistem dispersi. Nilai zeta  potensial  pada  seluruh  formula  belum
melebihi  (+/-)  30  mV  berarti  bahwa  larutan nanopartikel seluruh formula tersebut merupakan larutan koloid yang belum cukup
stabil dengan muatan negatif
Teknik  gelasi  ionik  memanfaatkan NaTPP  yang  digunakan  sebagai  agen crosslinker dengan konsentrasi rendah dilakukan  supaya  tidak  terbentuk  ikatan tautan  silang  antara  polianion  pada  TPP dengan gugus amino pada polikation kitosan. Counter  charge tersebut  akan  berinteraksi dan  menyebabkan  rantai  polimer  kitosan menggulung (24) . Senyawa- senyawa polifenol dalam  ekstrak  akan  berikatan  dengan  gugus kation  pada  kitosan,  sedangkan  sisa  kation akan  bereaksi dengan  NaTPP  sehingga menyebabkan rantai molekul kitosan membentuk partikel-partikel berbentuk nano. Metode  ini  merupakan  metode  yang  paling mudah  dilakukan  jika  dibandingkan  dengan metode-metode  yang  lainnya (25) .  Kitosan yang  terprotonasi  pada  asam  kemudian ditambahkan  dengan  counter  charge,  secara spontan akan terbentuk nanopartikel. Ukuran dan  struktur  permukaan  pada  partikel  dapat dimodifikasi  dengan  memvariasikan  rasio atau komposisi kitosan dan NaTPP (5) .

## SIMPULAN
Semua  formula  menunjukan  dapat membentuk formula nanopartikel diantara 1- 1000  nm.,  namun  sediaan  lebih  stabil  yaitu Formula  3  karena  memiliki  zeta  potensial yang mendekati +/- 30 mV.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih kepada Lembaga Penelitian dan Pengabdian kepada
Masyarakat Universitas Bengkulu yang telah memberikan  bantuan  terhadap  Penelitian Pembinaan Universitas Bengkulu.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Alam,  S.,  Khan,  Z.  I.,  Mustafa,  G.,
Kumar, M., Islam, F., Bhatnagar, A., &
Ahmad,  F. J. (2012).  Development  and evaluation of thymoquinone- encapsulated  chitosan  nanoparticles  for nose-to-brain targeting: a pharmacoscintigraphic study. International journal of nanomedicine, 7, 5705. 2. Kammona,  O.,  &  Kiparissides,  C. (2012). Recent advances in nanocarrier- based mucosal delivery of
biomolecules. Journal  of  controlled release, 161(3), 781-794.
3. Kiparissides,  C.,  &  Kammona,  O.
(2013).  Nanoscale  carriers  for  targeted delivery  of  drugs  and  therapeutic biomolecules. The Canadian Journal of
Chemical Engineering, 91(4), 638-651. 4. Ayumi, D., Sumaiyah, S., & Masfria, M.
(2018,  December).  Pembuatan  Dan
Karaterisasi Nanopartikel Ekstrak Etanol Daun Ekor Naga (Rhaphidophora pinnata  (Lf)  Schott)  Menggunakan Metode Gelasi Ionik. In Talenta Conference  Series:  Tropical  Medicine
(TM) (Vol. 1, No. 3, pp. 029-033).
5. Kurniasari,  D., &  Atun,  S.  (2017).
Pembuatan dan karakterisasi
nanopartikel  ekstrak  etanol  temu  kunci
(boesenbergia pandurata) pada berbagai
variasi  komposisi  kitosan. Jurnal  Sains Dasar, 6(1), 31-35.
6. Duncan, G. A., & Bevan, M. A. (2015). Computational  design  of nanoparticle drug  delivery  systems  for  selective targeting. Nanoscale, 7(37), 15332- 15340. 7. Fitri,  D.,  Kiromah,  N.  Z.  W.,  & Widiastuti, T. C. (2019), Formulasi Dan Karakterisasi Nanopartikel Ekstrak Etanol Daun Salam (Syzygium polyanthum)  Pada  Berbagai  Variasi Komposisi  Kitosan  Dengan  Metode Gelasi Ionik. JPSCR: Journal of Pharmaceutical  Science  and  Clinical Research, 5(1), 61-69. 8. Nugroho,  B.H.,  Wardhani,  M.T.  dan Suparmi, S., (2020).Perbandingan Teknik Aerasi dan Ultrasonikasi Gelasi Ionik Nanopartikel Deksametason Natrium  Fosfat. Jurnal  Kefarmasian
Indonesia, pp.102-109.
9. Mardliyati,  E.,  Muttaqien,  S.  E.,  & Setyawati,  D.  R.  (2012).  Sintesis nanopartikel  kitosan-trypoly  phosphate dengan  metode  gelasi  ionik:  pengaruh konsentrasi  dan  rasio  volume  terhadap karakteristik
partikel. Prosiding
Pertemuan  Ilmiah  Ilmu  Pengetahuan dan Teknologi Bahan, 90, 93.
10. Juliantoni, Y., Hajrin, W., & Subaidah, W.  A.  (2020).  Nanoparticle  Formula Optimization  of  Juwet  Seeds  Extract (Syzygium  cumini)  using  Simplex Lattice  Design Method. Jurnal  Biologi
Tropis, 20(3), 416-422.
11. Bhumkar,  D.  R.,  &  Pokharkar,  V.  B.
(2006). Studies on effect of pH on cross- linking  of  chitosan  with  sodium tripolyphosphate: a technical note. Aaps Pharmscitech, 7(2), E138-E143.
12. Samudra, A. G., Dewi, B., Nugroho, A.
E., Husni, A., Perikanan, M., Gajah, U.,
&  Yogyakarta,  M.  (2015).  Aktivitas inhibisi  α -Amilase  ekstrak  alginat  dan senyawa  polifenol  dari  Sargassum hystrix.  In Prosiding  Seminar  Nasional and  Workshop"  Perkembangan  Terkini Sains Farmasi Dan Klinik 5 (pp. 6-7).
13. Husni, A., Pratiwi, T., Samudra, A. G., &  Nugroho,  A.  E.  (2018).  In  vitro antidiabetic  activity  of  Sargassum hystrix  and  Eucheuma  denticulatum from Yogyakarta Beach of Indonesia. Proceedings  of  the  Pakistan Academy  of  Sciences:  B.  Life  and
Environmental Sciences, 55(3), 1-8.
14. Samudra,  A.  G.,  Sani,  F.,  &  Chintama,
M. (2018). Uji Perbandingan Efektivitas
Antidiabetes  Ekstrak  Polisakarida  Dan Senyawa Polifenol Alga Coklat (Sargassum  Sp.)  Pada  Mencit  Yang Diinduksi Aloksan. Jurnal Ilmiah Manuntung, 4(1), 48-52. 15. Iswandana,  R.,  Anwar,  E.,  &  Jufri,  M.
(2013). Formulasi Nanopartikel Verapamil  Hidroklorida  dari  Kitosan dan  Natrium  Tripolifosfat  dengan Metode  Gelasi  Ionik. Jurnal  Farmasi
Indonesia. Vol, 6(4), 202.
16. Wu, Y., Yang, W., Wang, C., Hu, J. and Fu, S., (2005). Chitosan nanoparticles as a novel delivery system for ammonium glycyrrhizinate. International journal of pharmaceutics, 295(1-2), pp.235-245.
17. Gredi,  J.,  Taurina,  W.  and  Andrie,  M.,
(2017). Analgesic Effectivty Of Nanoparticles  Chitosan-Ethanol Leaf Extract  Papaya  (Carica  Papaya  L.)  In White Male Mice (Mus Mucculus). Jurnal  Ilmu  Kefarmasian Indonesia, 15(2), pp.228-235.
18. Saberi, A.H., Fang, Y. and McClements, D.J.,  (2013).  Effect  of  glycerol  on formation,  stability,  and  properties  of
vitamin-E enriched nanoemulsions produced using spontaneous emulsification. Journal  of  colloid  and
interface science, 411, pp.105-113. 19. Bhatia, S., (2016). Nanoparticles types,
classification, characterization,
fabrication  methods  and  drug  delivery applications.  In Natural  polymer  drug delivery  systems (pp.  33-93).  Springer,
Cham
20. Aryudhani,  N.  (2007).  Kandungan senyawa  fenol  rumput  laut  Caulerpa racemosa  dan  aktivitas  antioksidannya. [Skripsi]. Bogor: Program Studi Teknologi  Hasil  Perikanan.  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu Kelautan.  Institut Pertanian Bogor 21. Sadati,  N.,  Khanavi,  M.,  Mahrokh,  A., Nabavi, SMB., Sohrabipour, J., Hadjiakhoondi,  A.  (2011),  Comparison Of  Antioxidant  Activity  And  Total
Phenolic Contents Of Some Persian Gulf Marine  Algae,  Journal  of  Medicinal Plants. 10 (37) :73-79 22. Marhamah,  M.,  Nizar,  N.,  Bunga,  O.,
Kusumaningrum,  S.,  &  Rismana,  E.
(2014).  Pengujian  Aktivitas  Antiacne Nanopartikel  Kitosan  Ekstrak  Kulit Buah Manggis (Garcinia Mangostana). Media  Penelitian  dan Pengembangan Kesehatan, 24(1), 20691. 23. Pakki,  E.,  Sumarheni,  S.,  Aisyah,  F., Ismail,  I.,  &  Safirahidzni,  S.  (2016). Formulasi Nanopartikel Ekstrak Bawang Dayak (Eleutherine Americana (Aubl) Merr) Dengan Variasi Konsentrasi Kitosan-Tripolifosfat (Tpp). Journal  of  Tropical  Pharmacy
and Chemistry, 3(4), 251-263.
24. Abdassah,  M.  (2017).  Nanopartikel dengan  gelasi  ionik. Farmaka, 15(1), 45-52.
25. Mohanraj,  V.  J.,  &  Chen,  Y.  (2006).
Nanoparticles-a review. Tropical journal of pharmaceutical research, 5(1), 561-573.