BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 2, Nomor 1 (2020):  67 - 73 E-ISSN: 2714-8564
Aktivitas Lakase Isolat Jamur Auricularia sp., Trametes sp., dan Pholiota sp. pada Pewarna Remazol Brilliant Blue R

## dengan Variasi pH
Agung Wiriat Putra Pratama Hadi 1 , Ratna Stia Dewi 1 , Ajeng Arum Sari 2
1 Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman
2 Pusat Penelitian Kimia, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) *email : agungwiriat44@gmail.com
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  :  28/08/2019 Disetujui  :  05/03/2020

## Abstract
Synthetic  dyes  Remazol  Brilliant  Blue  R  (RBBR)  waste  from  thextile  industries  can  cause environmental  pollution  due  to  the  toxicous  compound  content  and  difficult  to  decompose  . Isolate Auricularia sp., Trametes sp., and Pholiota sp. have enzymes that are able to decolorize the  RBBR  compound.  Lignolytic  enzyme  activity  such  as  laccase  produced  by  fungi  can oxidize  textile  dyes.  Laccase  enzyme  activity  is  influenced  by  the  type  of  fungus  ,  pH, temperature,  and  incubation  time.  This  research  has  a  purpose  to  determine  the  activity  of laccase  enzymes  from  fungi    Auricularia  sp.,  Trametes  sp.,  and  Pholiota  sp.  in  RBBR  at different pH values, and to know isolates at optimum pH which have laccase enzyme activity in  RBBR.  The  research  method  used  a  Completely  Randomized  Design  (CRD).  The independent  variables observed  were isolate type and pH  conditions (4, 8, and  12),  while the dependent  variable  was  the  ability  of  isolates  to  produce  enzymes.  The  main  parameter observed  was  laccase  enzyme  activity.  Supporting  parameters  consist  of  the  mycelium  dry weight value. The results showed that the three isolates had laccase enzyme activity in RBBR with different pH. The highest activity was found in Trametes sp. in RBBR with pH 4 which is 101.9 U / mL. The lowest activity was found in Aricularia sp. in RBBR with pH 4 of 48.6 U / mL.
Keyword s : Laccase enzyme, Fungus Remazol Brilliant Blue R.

## Abstrak
Limbah dari industri tekstil berupa zat warna sintetik seperti Remazol Brilliant Blue R (RBBR) dapat menimbulkan pencemaran lingkungan akibat sifat zat warna RBBR yang toksik dan sulit terurai.  Isolat Auricularia sp., Trametes sp.,  dan Pholiota sp.  memiliki  enzim  yang  mampu mendekolorisasi  komponen  pewarna  RBBR.  Aktivitas  enzim  lignolitik  seperti  lakase  yang dimiliki jamur mampu mengoksidasi pewarna tekstil. Aktivitas enzim lakase dipengaruhi oleh jenis  jamur  yang  digunakan,  pH,  suhu,  dan  waktu  inkubasi.  Penelitian  bertujuan  untuk mengetahui aktivitas enzim lakase dari isolat jamur Auricularia sp ., Trametes sp., dan Pholiota sp.  dalam  pewarna  RBBR  pada  nilai  pH  berbeda,  serta  mengetahui  isolat  pada  pH  optimum yang  memiliki  aktivitas  enzim  lakase  dalam  pewarna  RBBR.  Penelitian  menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Variabel bebas yang diamati adalah jenis isolat dan kondisi pH  (4,  8,  dan  12),  sedangkan  variabel  tergantungnya  adalah  kemampuan  isolat  dalam menghasilkan enzim. Parameter utama yang diamati adalah aktivitas enzim Lakase. Parameter pendukung  terdiri  atas  nilai  bobot  kering  miselium.  Hasil  menunjukan  ketiga  isolat  memiliki aktivitas  enzim  lakase  dalam  RBBR  dengan  pH  berbeda.  Aktivitas  tertinggi  terdapat  pada Trametes sp. dalam RBBR dengan pH 4 yaitu sebesar 101,9 U/mL. Aktivitas terendah terdapat pada Aricularia sp. dalam RBBR dengan pH 4 sebesar 48,6 U/mL. Kata kunci : Enzim lakase, Jamur, Remazol Brilliant Blue R.

## PENDAHULUAN
Penggunaan  pewarna  sintetik  pada  produksi tekstil di Indonesia dapat menimbulkan pencemaran lingkungan (Muslimah & Kuswytasari, 2013). Salah satu pewarna  sintetik  yang umum  digunakan dalam industri  tekstil  adalah Remazol  Brilliant  Blue  R (RBBR)  (Legerska et  al .,  2016).  Zat  warna  ini digunakan  karena  dapat  memberikan  warna  cerah dan tidak  mudah  luntur (Pelegrini et  al .,  1999).  Zat warna  RBBR  merupakan  senyawa  heterosiklis,
terdiri  dari  cincin  benzene  dengan  gugus  hidroksil yang  disebut  fenol  (Murugesan et  al., 2007).  Sisa pewarna  sintetik  seperti  RBBR  yang  digunakan dalam  industri  tekstil  menghasilkan  air  limbah pewarna  yang  sulit  terurai  sehingga  menganggu lingkungan.
Pengolahan  limbah  pewarna  dalam  industri tekstil telah banyak dilakukan menggunakan metode fisika misalnya filtrasi membran, adsorbsi, pertukaran ion, dan ozonasi, maupun dengan metode kimia  misalnya  flokulasi-koagulasi,  dan  oksidasi
(Ngieng et al ., 2013). Metode ini memerlukan biaya yang  mahal  dan  dapat  menimbulkan  limbah  baru karena  menggunakan  bahan-bahan  kimia  dalam prosesnya (Turhan et al ., 2012). Pengolahan limbah yang  aman  dan  murah  bagi  lingkungan  salah satunya  adalah  dengan  menggunakan  metode biologi.  Metode  biologi  yang  efektif  dalam mendekolorisasi pewarna yaitu menggunakan jamur (Jarosz et al ., 2002).
Jamur  Pelapuk  Putih  (JPP)  merupakan kelompok jamur penghasil enzim lignolitik ekstraseluler yang mampu digunakan untuk merombak  berbagai  macam  senyawa  hidrokarbon poliaromatik  dan  mendekolorisasi  zat  warna (Hakala, 2007). Jamur Auricularia sp ., Trametes sp., dan Pholiota sp. merupakan jenis jamur Basidiomycota  yang  termasuk  golongan  Jamur Pelapuk  Putih  (JPP),  hidup  pada  substrat  kayu  dan dapat  mendegradasi  komponen  lignin  pada  kayu menjadi  selulosa  (Jarosz et  al., 2002;  Mfombep et al., 2013). Auricularia sp . memiliki  tubuh  buah menyerupai  telinga,  dan  memiliki  tekstur  seperti jeli. Trametes sp.  memiliki  ciri  tidak  bertangkai, permukaan berbulu dan terlihat zonasi pertumbuhan. Pholiota sp.  memiliki  tubuh  buah  seperti  payung, bertangkai dan permukaan basah dan licin berwarna cokelat (Cummins & Hiratsuka,2001).
JPP  menghasilkan  enzim  lignolitik  salah satunya adalah  lakase (Lac). Enzim  ini  bersifat non spesifik  sehingga  mampu  bekerja  pada  spektrum luas  sehingga  dapat  digunakan  dalam  dekolorisasi zat  warna.  Dekolorisasi  zat  warna  oleh  enzim lignolitik diawali dari oksidasi enzim lignolitik oleh oksigen  dan  selanjutnya  enzim  lignolitik  dalam keadaan    teroksidasi  tersebut  mengoksidasi  zat warna tekstil (Yesilada et al., 2006). Pewarna dapat terdegradasi  oleh  enzim  ligninolitik,  termasuk lakase.   Dengan aktivitas Lakase dari JPP Pleurotus ostreatus sebesar 200,43 U/l, enzim lignolitik dapat digunakan  untuk  mendekolorisasi  pewarna  RBBR hingga  75,88%  pada  kondisi  statis,  dan  sebesar 68,09% pada kondisi agitasi (Dewi et al ., 2019a). Husna & Ummas (2017) menyatakan, dekolorisasi  limbah  tekstil  menggunakan    JPP dipengaruhi oleh  jenis jamur  yang digunakan serta kondisi  lingkungan  seperti  pH,  suhu,  dan  waktu inkubasi.  Derajat  keasaman  sangat  penting  dalam mengatur  metabolisme  dan  sistem-sistem  enzim, bila  terjadi  penyimpangan  pH  yang  ideal  bagi pertumbuhan jamur maka proses metabolisme jamur dapat terhenti (Supriyanto, 2009).  Sun et  al. (2011) menyatakan  bahwa  enzim    memiliki  pH  optimum yang  khas,  yaitu  pH  yang  menyebabkan  aktivitas maksimal. Setiap  spesies  jamur  dapat  ditemukan tumbuh  pada  kayu  mati  yang  berbeda  dan  pada berbagai  kondisi  lingkungan  yang  beragam  sebagai dekomposer (Sari et al ., 2015).
Sari  &  Dewi  (2019),  meneliti  isolat  jamur Auricularia sp., Trametes sp.,    dan Pholiota sp. yang diketahui merupakan agen biologi yang efektif
untuk    mendekolorisasi  pewarna  RBBR.  Pada penelitian  tersebut  belum  dilakukan  pengujian  pH optimum dengan aktivitas enzim lignolitik tertinggi. Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan  penelitian  aktivitas enzim  lignolitik  dengan  variasi  pH  (4,  8,  dan  12) yang  dihasilkan  ketiga  jamur  tersebut  dalam mendekolorisasi pewarna RBBR.
Berdasarkan    uraian    latar  belakang,  maka permasalahan  yang  muncul  adalah  apakah  isolat Auricularia sp .,  Trametes sp ., dan Pholiota sp. memiliki aktivitas enzimatis pada  zat warna RBBR dalam    konsentrasi    pH  berbeda,  isolat  pada  pH optimum  manakah  yang  memiliki  aktivitas  enzim tertinggi dalam mendekolorisasi zat warna RBBR.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Kimia  Pusat  Penelitian  Kimia  LIPI,  Serpong. Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  Juni-Agustus 2019.  Obyek  yang  diteliti  adalah  isolat Auricularia sp ., Trametes sp ., dan Pholiota sp.
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  medium Pottato  Dextrose  Agar (PDA)
OXOID.  medium Malt  Ekstract  Broth (MEB) OXOID, crude  enzyme ,  larutan  buffer  NaH 2 PO 4 , syringaldazin ,  Pewarna Remazol  Brilliant  Blue  R (RBBR),  air  destilasi, alumunium  foil , spiritus, alkohol 70%, kapas.
Penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL).  Variabel  bebas  yang  diamati adalah  jenis  isolat  dan  kondisi  pH  (4,  8,  dan  12), sedangkan variabel tergantungnya adalah kemampuan  isolat  dalam  menghasilkan  enzim. Parameter  utama  yang  diamati  adalah  aktivitas enzim  Lakase.  Parameter  pendukung  terdiri  atas nilai bobot kering miselium.

## Pembuatan Medium Pertumbuhan dan
Sterilisasi Alat (Wuryanti, 2008)
Pembuatan  medium  pertumbuhan  dilakukan dengan  melarutkan  medium malt  ekstrak  broth instan  dengan  air  destilasi.  Larutan  medium kemudian  dihomogenkan  dan  dimasukan  kedalam labu  Erlenmeyer.  Alat-alat  gelas  dan  medium pertumbuhan (PDA dan MEB) disterilisasi menggunakan  autoklaf  dengan  suhu  121 o C  pada tekanan  2  atm  selama  15  menit  untuk  medium  dan 20 menit untuk alat.
Peremajaan  Isolat Auricularia sp .,  Trametes sp ., dan Pholiota sp. pada PDA
Isolat Auricularia sp .,  Trametes sp ., dan Pholiota sp.  dalam  medium  tabung  miring dilakukan  peremajaan  pada  medium  PDA  cawan. Isolat  diambil  sebanyak  satu  ose  dan  diletakan ditengah medium. Isolat diinkubasi selama 7 hari.
Kultivasi Isolat Auricularia sp ., Trametes sp ., dan Pholiota sp. pada MEB (Sari et al. , 2012)
Medium  MEB  disiapkan  90  mL  pada  labu Erlenmeyer.  Sebanyak  6  plug  dengan  diameter sebesar  5  mm  dari    koloni  miselium  isolat  jamur Auricularia sp .,  Trametes sp ., dan Pholiota sp. diinokulasikan    kedalam    medium    MEB.  Medium yang telah diinokulasikan diinkubasi dengan kondisi agitasi  pada shaker dengan  kecepatan  100  rpm selama 7 hari.
Uji Aktivitas Enzimatis (Muslimah &
Kusywitasari, 2013)
Isolat jamur yang telah diinkubasi pada medium MEB  ditambahkan  pewarna  RBBR  1000ppm sebanyak  10  ml  sampai  dengan  konsentrasi    100 ppm.  Kontrol  dibuat  dengan  menambahkan  10  ml akuades tanpa  RBBR. kemudian diatur  kondisi pH 4,  8,  dan  12  menggunakan  NaOH  0,1  M  dan  HCl
0,1  M,  kemudian  diinkubasi  dengan  kondisi  agitasi pada shaker orbital  dengan  kecepatan  100  rpm selama  24  jam.  Larutan  yang  sudah  diinkubasi diambil 1000 µ l sebagai crude enzim.
Uji  Aktivitas  Enzim  Lakase  (Lac) (Zavarzina et al ., 2006; Zahra, 2017)
Aktivitas enzim lakase diukur dengan mencampurkan  shiringal  arudajin  100  µl,  buffer sodium asetat  0,1 M 750 µl, dan crude enzim 1000 µl ke  dalam  kuvet  kemudian  ditunggu  sampai  60 detik  dan  diukur  absorbansinya  menggunakan  UV- vis spektrofotometri. Air destilasi digunakan sebagai blanko.  Preparasi  shiringal  arudajin  dan  buffer
sodium  asetat  0,1  M.  Kemudian  hasil  absorbansi dimasukkan dalam rumus.
𝐴𝑘𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚 = (Abs/6500) x (V campuran /10 6 ) x 10 6 x (60 / t) (V enzim/10 3 )
Pengukuran  Bobot  Kering  Miselium  Isolat Auricularia sp .,  Trametes sp ., dan Pholiota sp.
(Sulistyaningtyas & Suprihadi, 2017)
Miselium  jamur  disaring  menggunakan  kertas saring yang sudah ditimbang. Miselium dikeringkan menggunakan  oven  dengan  suhu  60 o C  hingga mencapai  bobot  konstan.  Bobot  kering  miselium diperoleh  dari  selisih  bobot  kering  miselium  dalam kertas saring dengan berat kertas saring.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengukuran  aktivitas  enzimatik  isolat  jamur Auricularia sp .,  Trametes sp ., dan Pholiota sp. dalam pewarna Remazol Brilliant Blue R (RBBR) dengan variasi pH menggunakan metode spektrofotometer.  Aktivitas  enzim  lakase  dapat diukur  dengan  mengamati  oksidasi  syringalarudajin menjadi quinone dalam larutan buffer sodium asetat 0.1  M  dan crude enzim pada  panjang  gelombang 525  nm.  Hasil  pengukuran  aktivitas  enzimatik ketiga  isolat  tersebut  disajikan  dengan  histogram pada Gambar 1.
Gambar 1. Histogram  Aktivitas  Enzimatik  Isolat  Jamur Auricularia sp .,  Trametes sp ., dan Pholiota sp. dalam RBBR dengan Variasi pH.
Berdasarkan  histogram  pada  Gambar  1. diketahui  bahwa  rata-rata  aktivitas  enzim  isolat Auricularia sp.  pada  pH  4,  8,  dan  12  berturut-turut adalah 90,3; 70,7; 48,6, isolat Trametes sp. pada pH 4, 8, dan 12 berturut-turut  adalah 101,9; 82,1; 51,7. isolat Pholiota sp.  pada  pH  4,  8,  dan  12  berturut- turut    adalah  89,8;  79,1;  62,4,  sedangkan  untuk
kontrol  pada  pH  4,  8,  dan  12  berturut-turut  yaitu 22,3; 20,3, 17,7.
Hasil  menunjukkan  bahwa ada pengaruh  yang signifikan  terhadap  aktivitas  enzim  pada  perlakuan isolat  jamur Auricularia sp .,  Trametes sp ., dan Pholiota sp.  dalam  pewarna Remazol  Brilliant Blue  R (RBBR) dengan  variasi  pH.  Perbedaan
15.0 35.0 55.0 75.0 95.0 115.0 4 8 12 A k ti v it a s E n zi m ( U /m l) pH Kontrol Auricularia sp. Trametes sp. Pholiota sp.
antar perlakuan diperoleh menggunakan uji lanjut Beda  Nyata  Jujur  (BNJ).  Data  Uji  BNJ  disajikan dalam Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Uji BNJ Aktivitas Enzim Perlakuan Rerata Aktivitas Enzim (U/mL) K4 22,33 b K8 20,27 ab K12 17,74 a A4R 90,34 f A8R 70,69 d A12R 48,56 c T4R 101,91 g T8R 82,06 e T12R 51,65 c P4R 89,84 f P8R 79,57 e P12R 72,39 d
Keterangan: angka yang diikuti notasi huruf yang sama tidak berbeda nyata terhadap aktivitas enzim
Berdasarkan  Tabel  2.  aktivitas  enzim  untuk isolat  tertinggi  dalam  RBBR  dengan  variasi  pH adalah  T4R  dengan  nilai  101,9  U/mL,  sedangkan aktivitas  terendah  adalah  A12R  dengan  nilai  48,6 U/mL.  Hasil  tersebut  membuktikan  bahwa  T4R merupakan  perlakuan  yang    paling  efektif  untuk aktivitas  enzim  lakase  jamur  dalam  RBBR.  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  Nyanhongo et  al. (2002) bahwa  enzim  lakase  yang  dihasilkan Trametes sp. memiliki  aktivitas  optimum  pada  pH  4  dan  akan terhambat  pada  pH  3  dan  diatas  pH  5.  Hal  ini didukung  pernyataan    Madzak et  al. (2005),  bahwa aktivitas enzim lakase optimum pada pH 4 dan akan mengalami  penurunan  aktivitas  pada  pH  lebih  dari 4,5.  Pada  penelitian  Yang et  al .  (2009),  enzim lakase yang dihasilkan Trametes sp. mampu bekerja optimum  pada  pH  4,5  yang  dibuktikan  dengan peningkatan dekolorisasi zat warna RBBR. Persentase  dekolorisasi  yang  awalnya  80%,  setelah diatur  pH  menjadi  4  kemudian  dekolorisasinya meningkat menjadi 85%.
Trametes sp.  merupakan  jamur  yang  sering digunakan  dalam  dekolorisasi  zat  warna.  Jarosz et al .  (2002)  menyatakan  bahwa Trametes sp. menghasilkan  enzim-enzim  lignolitik  diantaranya adalah  Lakase  (Lac).  Enzim  lakase  yang  dihasilkan Trametes sp. dapat digunakan untuk mendekolorisasi  berbagai  zat  warna  dengan  waktu yang lebih cepat dibanding jamur lainnya.
Pada  kontrol  maupun  perlakuan  pemberian RBBR menunjukkan bahwa  aktivitas  enzim cenderung  optimum  berada  pada  pH  4  dan mengalami  penurunan  seiring  dengan  peningkatan
nilai  pH.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  Asih (2016) bahwa aktivitas enzim  lakase optimum pada pH 4. Hasil ini didukung pernyataan Dinatha (2013) bahwa enzim  lignolitik akan  bekerja optimum pada pH 3-4 dan terus  menurun seiring dengan kenaikan nilai pH. Penelitian Dewi et al . (2019b) mendukung hasil  penelitian  ini  yaitu  pH  optimal  untuk dekolorisasi  pewarna  Indigosol  Blue  04B  yang sangat  dipengaruhi  aktivitas  enzim  lignolitik  oleh fungi adalah pada kondisi asam.
Enzim  dapat  bekerja  dengan  baik  pada  pH yang  sesuai.  Menurut  Poedjiadi  (2012)  penurunan aktivitas  enzim  pada  pH  tinggi  dapat  terjadi  karena peningkatan konsentrasi
OH - kemudian menyebabkan
aktivator terganggu dan mempengaruhi  aktivitas  katalitik  sisi  aktif  enzim, sehingga enzim tidak dapat mendegradasi zat warna dengan  sempurna.  Kondisi  pH  yang  terlalu  rendah atau  terlalu  tinggi  juga  dapat  menyebabkan denaturasi  enzim  dan  mengakibatkan  penurunan aktivitas enzim.
Enzim sangat rentan terhadap kondisi lingkungan.  Perubahan  pH lingkungan  akan mengakibatkan aktivitas enzim mengalami perubahan.  Setiap  enzim  yang  mempunyai  pH tertentu  sehingga  aktivitasnya  mencapai  keadaan optimum.  Kondisi  pH  optimum  akan  mendukung enzim  dalam  melakukan  katalisis  suatu  reaksi dengan  baik,  sedangkan  kondisi  lingkungan  yang kurang  sesuai  mengakibatkan  kerusakan  atau  tidak aktifnya  protein  dalam  suatu  enzim  sehingga menyebabkan  fungsi  dan  aktivitas  dari  enzim tersebut berkurang (Albar, 2009).
Pada  kontrol  tanpa  penambahan    RBBR menunjukkan aktivitas enzim lebih rendah dibandingkan perlakuan penambahan RBBR.
Perbedaan  aktivitas  enzim  lakase  dengan  dan  tanpa adanya  penambahan  RBBR  dikarenakan  adanya induser. Menurut  Nyanhongo et al. (2002) aktivitas enzim lakase dapat distimulasi dengan menambahkan  induser. Diketahui  bahwa  induser paling  efektif  untuk  meningkatkan  aktivitas  lakase adalah  senyawa  aromatik  seperti  asam,  alkohol  dan aldehid.  Menurut Bertrand et al . (2013) lakase yang dihasilkan  secara  induktif  memerlukan  induser seperti  senyawa  aromatik  atau  senyawa  yang memiliki  struktur  yang  mirip  dengan  lignin. Murugesan et  al. (2007)  menyatakan  bahwa  RBBR memiliki  kesamaan  struktur  dengan  beberapa senyawa  aromatik.  Hal  ini  menjelaskan  bahwa penambahan  zat  warna  RBBR  dapat  meningkatkan aktivitas enzim lakase.
Miselium hasil perlakuan dan kontrol kemudian dikeringkan  menggunakan  oven  dan  ditimbang  lalu dikurangi  bobot  kertas  saring  untuk  memperoleh data  bobot  kering  miselium.  Data  bobot  miselium disajikan pada Gambar 2.
Gambar 2. Bobot Kering Miselium Pada Pengukuran Aktivitas Enzim
Berdasarkan  data  bobot  miselium  diketahui bahwa  bobot  tertinggi  adalah  T4R  dan  bobot terendah adalah A12R. Pada kontrol bobot miselium lebih  rendah  dibandingkan  perlakuan.  Bobot miselium  perlakuan  tiap  isolat  jamur  maupun kontrol  tertinggi  pada  pH  4  dan  mengalami penurunan seiring dengan peningkatan nilai pH.
Aktivitas  enzim  tertinggi  diketahui  terdapat pada  perlakuan  T4R.  Hal  ini  didukung  oleh  bobot kering  miselium  yang  diperoleh  T4R  menunjukan hasil  terbesar.  Perlakuan  A12R  yang  memiliki aktivitas  enzim  terendah  didukung  oleh  hasil  bobot kering  miselium  A12R  yang  memiliki  bobot terendah.  Seluruh  perlakuan  menunjukkan  hasil bobot  kering  miselium  terbesar  pada  pH  4  dan terkecil  pada  pH  12.  Perbedaan  bobot  kering miselium  diakibatkan  oleh  perbedaan  pertumbuhan jamur  pada  pH  yang  berbeda.  Hal  ini  didukung dengan  pernyataan  Supriyanto  (2009)  bahwa  pH berperan  dalam  metabolisme  dan  sistem  kerja enzim,  apabila  kondisi  pH  tidak  sesuai  maka pertumbuhan jamur terhambat.
Hasil degradasi pewarna oleh enzim merupakan  nutrisi  bagi  pertumbuhan  jamur.  Jamur mampu  menggunakan  zat  warna  sebagai  sumber karbon  yang  menyebabkan  zat  warna  berkurang (Amiruddin et  al., 2018). Pertumbuhan  miselium jamur  dapat  mempengaruhi  penyerapan  zat  warna, semakin  luas  permukaan  miselium  maka  semakin efisien.
Proses  degradasi  RBBR  oleh  enzim  lakase disajikan  pada  Gambar  3.  Lakase  akan  memecah struktur  RBBR  menjadi  dua  sub  produk  dan merusak  kromofor  (Osma et  al., 2010).  Menurut Hatakka  (2001)  reaksi  pemecahan  zat  warna  oleh lakase merupakan reaksi oksidasi.
Astina et  al. (2017)  menyatakan  lakase mengkonversi senyawa fenol menjadi quinin radikal kemudian  merubahnya  menjadi  quinon  dengan bantuan  oksigen.  Lakase  menggunakan  oksigen sebagai  elektron  untuk  menghapus  proton  dari gugus  hidroksil  fenolik.  Reaksi  ini  menghasilkan radikal secara spontan kemudian dapat menyebabkan  fisi  ikatan  C-C  atau  C-O  rantai samping alkil atau pemutusan cincin aromatik.
0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 4 8 12 B o b o t K er in g M is el iu m ( g) pH Kontrol Auricularia Trametes Pholiota
Gambar 3. Mekanisme Pemecahan RBBR Menggunakan Enzim Lakase

## SIMPULAN
Isolat jamur Auricularia sp ., Trametes sp ., dan Pholiota sp.  memiliki  aktivitas  enzim  lakase  dalam pewarna  RBBR  pada  nilai  pH  berbeda,  dengan aktivitas  48,6  -  101,9  U/mL  .  Isolat Trametes sp dalam  RBBR  dengan  pH  4  merupakan  perlakuan dengan Aktivitas enzim lakase tertinggi.

## DAFTAR REFERENSI
Albar,  Budiman,  2009.  Pengaruh  Konsentrasi Substrat,  Lama  Inkubasi  dan  pH  dalam Proses  Isolasi  Enzim  Xylanase  dengan Menggunakan  Media  Jerami  Padi. Skripsi. Teknik Kimia Universitas Diponegoro, Semarang.
Amiruddin,  A.,  Hasri,  H.  and  Sudding,  S.,  2018.
Biodegradasi  Zat  Warna  Acid  Orange  7 Menggunakan  Enzim  Jamur  Tiram  Putih ( Pleurotus Ostreatus ). Jurnal Kimia
Riset , 3(1), pp. 47-51.
Astina,  D.,  Nugroho,  T.T.,  Linggawati,  A.,  2017.
Penentuan  Aktivitas  Enzim  Laccase Rhus Vernicifera Menggunakan  Guaiacol  Sebagai Substrat. Jurnal Penelitian Farmasi
Indonesia , 5(2), pp. 55-62.
Bertrand,  B.,  Martínez-Morales,  F.  and  Trejo- Hernandez,  M.R.,  2013.  Fungal  laccases: induction  and  production. Revista  Mexicana de Ingeniería Química , 12(3), pp. 473-488.
Cummins,  G.B.  &  Hiratsuka,  Y.,  2003. Illustrated genera of rust fungi . American Phytopathological Society: APS Press.
Dewi,  R.S.,  Ilyas,  M.  and  Sari,  A.A.,  2019a. Ligninolitic  Enzyme  Immobilization  from Pleurotus  ostreatus  for  Dye  and  Batik Wastewater Decolorization. Jurnal Pendidikan IPA Indonesia , 8(2), pp.220-229.
Dewi,  R.S.,  Kasiamdari,  R.S.,  Martani,  E.  and Purwestri,  Y.A.,  2019b.  Optimization  of  the conditions  for  the  decolorization  of  batik wastewater  by  Aspergillus  sp.  3.  In AIP Conference Proceedings (Vol. 2094, No. 1, p. 020036). AIP Publishing LLC..
Dinatha,  Ngurah  Mahendra.,  James  Sibarani.,  I.  G. Mahardika.  2013.  Degradasi  Limbah  Tekstil
Menggunakan Jamur Lapuk Putih
Daedaleopsis  eff.  Confragosa. Jurnal  Bumi Lestari . 1(2), pp. 124–131
Hakala,  T.,  2007.  Characterization  of  lignin- modifying enzymes of the selective white-rot fungus  Physisporinus  rivulosus. Thesis . Finlandia: University of Helsinki
Husna,  N.R.  &  Ummas,  H.,  2017.  Pengaruh  pH terhadap  Degradasi  Pewarna  Direct  Blue
menggunakan Jamur Pelapuk Kayu Pleurotus flabellatus . Jurnal Kimia Riset , 2(2), pp. 140- 146.
Jarosz-Wilkołazka,  A.,  Kochmańska-Rdest,  J.,
Malarcz̄yk, E., Wardas, W. & Leonowicz, A., 2002.  Fungi  and  their  ability  to  decolourize azo  and  anthraquinonic  dyes. Enzyme  and Microbial Technology , 30(4), pp. 566-572.
Madzak,  C.,  Mimmi,  M.C.,  Caminade,  E.,  Brault, A.,  Baumberger,  S.,  Briozzo,  P.,  Mougin,  C. and  Jolivalt,  C.,  2005.  Shifting  the  optimal pH  of  activity  for  a  laccase  from  the  fungus Trametes versicolor by structure-based mutagenesis. Protein  Engineering  Design and Selection , 19(2), pp.77-84.
Mfombep, P.M., Senwo, Z.N. & Isikhuemhen, O.S., 2013.  Enzymatic  activities  and  kinetic properties  of  β-glucosidase  from  selected white  rot  fungi. Advances  in  Biological Chemistry , 3(02), pp. 198-203
Murugesan, K., Nam, I.H., Kim, Y.M., Chang, Y.S., 2007.  Decolorization  of  reactive  dyes  by  a thermostable laccase produced by Ganoderma lucidum in solid state culture. Enzyme and Microbial Technology , 40(7), pp. 1662-1672.
Muslimah,  S.  &  Kuswytasari,  N.D.,  2013.  Potensi Basidiomycota  Koleksi  Biologi  ITS  sebagai Agen  Biodekolorisasi  Zat  Warna  RBBR. Jurnal  sains  dan  senipomits ,  2(1),  pp.  235- 238.
Ngieng,  N.S.,  Zulkharnain,  A.,  Roslan,  H.A., Husaini,  A.,  2013.  Decolourisation  of Synthetic  Dyes  by  Endophytic  Fungal FloraIsolated from Senduduk Plant ( Melastoma malabathricum ). ISRN
Biotechnology , 3(7), pp. 1-7.
Nyanhongo,  G.S.,  Gomes,  J.,  Gübitz,  G.,  Zvauya, R.,  Read,  J.S.  and  Steiner,  W.,  2002. Production  of  laccase  by  a  newly  isolated strain  of  Trametes  modesta. Bioresource Technology , 84(3), pp. 259-263.
Osma,  J.F.,  Toca-Herrera,  J.L.  and  Rodríguez- Couto,  S.,  2010.  Transformation  pathway  of Remazol  Brilliant  Blue  R  by  immobilised laccase. Bioresource technology , 101 (22), pp. 8509-8514.
Pelegrini, R., Peralta-Zamora, P., de Andrade, A.R., Reyes, J. and Duran, N., 1999.
Electrochemically assisted photocatalytic degradation of reactive dyes. Applied Catalysis B, Environmental , 22 (2), pp. 83-90. Poedjiadi,  Anna.  2012. Dasar-Dasar  Biokimia . Jakarta: Universitas Indonesia Press.
Sari,  A.A.  &  Dewi,  R.S.,  2019.  The  Study  of Basidiomycota and Glomeromycota
Biodiversity in Baturraden Botanical Garden, Indonesia. Report  Research .  Research  Grant Programme, NEF.
Sari,  A.A.,  Tachibana,  S.,  &  Muryanto.,  2012.
Correlation of Ligninolytic Enzymes from the Newly-Found  Species Trametes  versicolor U97  with  RBBR  Decolorization  and  DDT Degradation. Water  Air  Soil  Pollution ,  223, pp. 5781-5792.
Sulistyaningtyas,  A.R.  &  Suprihadi,  A.,  2017.
Produksi Miselium Jamur Ling Zhi ( Ganoderma  lucidum )  dalam  Medium  Air Kelapa Tua dan Tauge Extract Broth dengan Metode  Kultur  Terendam  Teragitasi. Bioma , 19(1), pp.58-81.
Sun, F.H., Li, J., Yuan, Y.X., Yan, Z.Y., Liu, X.F., 2011.  Effect  of  biological  pretreatment  with Trametes hirsuta yj9 on enzymatic hydrolysis of corn stover. International Biodeterioration & Biodegradation , 65(7), pp.931-938.
Supriyanto, A.G.U.S., 2009. Manfaat Jamur Pelapuk Putih Phanerochaete Chrysosporium L1 Dan Pleurotus sp.  Eb9  Untuk  Biobleaching  Pulp Kardus  Bekas. Skripsi, Institut  Pertanian Bogor: Bogor.
Turhan, K., Durukan, I., Ozturkcan, S.A., & Turgut, Z., 2012. Decolorization of Textile Basic Dye
in  Aqueous  Solution  by  Ozone. Dyes Pigments , 92(3), pp.897-901.
Wuryanti,  W.,  Pengaruh  Penambahan  Biotin  Pada Media  Pertumbuhan  Terhadap  Produksi  Sel Aspergillus  niger . Bioma:  Berkala  Ilmiah Biologi , 10(2), pp.46-50.
Yang,  X.Q.,  Zhao,  X.X.,  Liu,  C.Y.,  Zheng,  Y.  and Qian,  S.J.,  2009.  Decolorization  of  azo, triphenylmethane  and  anthraquinone  dyes  by a  newly  isolated Trametes sp.  SQ01  and  its laccase. Process  Biochemistry , 44 (10),  pp. 1185-1189.
Yesilada,  S.K.,  Pekin,  G.,  Bermek,  H.,  Arslan- Alaton,  I.,  Orhon,  D.,  Tamerler,  C.,  2006. Bioremediation  of  textile  azo  dyes  by
Trichophyton rubrum LSK-27. World Journal of Microbiology and Biotechnology , 22 (10), pp.1027-1031.
Zahra. 2017. Studi Dekolorisasi Lindi Hitam dengan Teknik  Ramah  Lingkungan  Menggunakan Jamur Trametes  versicolor F200  dan  Isolat Enzimnya yang Diimobilisasikan pada Natrium  Alginat. Thesis .  Depok:  Universitas Indonesia.
Zavarzina,  A.G.,  &  Zavarzin,  A.A.,  2006.  Laccase and  Tyrosinase  Activities  in  Lichens. Microbiology , 75(5), pp.546-552