## PENETAPAN PARAMETER NON SPESIFIK DAN SPESIFIK
EKSTRAK DAUN SALAM (Syzgium polyanthum)
Lina Widiyastuti * , Widyasari Putranti Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta
Email : wi dyasari@pharm.uad.ac.id
Artikel diterima: 6 November 2018; Disetujui: 4 Maret 2019

## ABSTRAK
Ekstrak  daun  salam  merupakan  salah  satu  bahan  obat  tradisional  yang berkhasiat  sebagai  antihiperlipida.  Kualitas  ekstrak  merupakan  parameter terjaminnya  efek  terapi  yang  optimal.  Penetapan  parameter  non  spesifik  dan spesifik ekstrak daun salam (EDS) diperlukan untuk menjamin mutu bahan baku yang  digunakan  dalam  terapi  hipelipida.  Ekstrak  kental  daun  salam  didapatkan dari  Bantul,  Yogyakarta  dan  dimaserasi  menggunakan  etanol  70%  .  EDS dilakukan  uji  penetapan  parameter  kadar  abu,  kadar  air,  kadar  sari  larut  etanol, kadar  sari  larut  air,  kadar  abu  tidak  larut  asam,  analisa  kualitatif  kuantitatif, analisis  uji  angka  lempeng  total,  analisis  uji  angka  kapang  khamir,  bobot  jenis, analisa kualitatif. Penelitian ini diperoleh EHS memenuhi standardisasi parameter non spesifik dan spesifik menurut Farmakope Herbal Indonesia.
Kata kunci : ekstrak  daun  salam,  parameter  non  spesifik  dan  spesifik,  ekstrak etanol

## ABSTRACT
Bay  leaf  extract  is  one  of  the  traditional  medicinal  ingredients  which  is efficacious  as  an  antihyperlipid.  The  quality  of  the  extract  is  a  parameter  to guarantee  the  optimal  therapeutic  effect.  Determination  of  non-specific  and specific  parameters  of  bay  leaf  extract  (EDS)  is  needed  to  ensure  the  quality  of raw materials used in hyperlipid therapy. The bay leaf extract was obtained from Bantul, Yogyakarta and macerated using 70% ethanol. EDS tested the parameters of  ash  content,  water  content,  soluble  ethanol  extract  content,  water  soluble extract content, acid insoluble ash content, quantitative qualitative analysis, total plate number analysis, analysis of yeast mold number, specific gravity, qualitative analysis.  This  study  was  obtained  by  EDS  meeting  the  standardization  of non-specific  and  specific  parameters  according  to  Indonesian  Herbal Pharmacopoeia.
Keywords:  Bay  leaf  Extract,  non-specific  and  specific  parameters,  ethanolic extract

## PENDAHULUAN
Daun  salam  merupakan  obat tradisional  yang  berkhasiat  sebagai antihiperlipida.  EDS  terbukti  dapat mengurangi kolesterol serum, trigliserida,  LDL,  dan  meningkatkan kadar  HDL  secara  signifikan  dalam hiperkolesterolemia tikus jantan galur  Wistar(Sutrisna,  Nuswantoro and  Said,  2018).  Skrining  fitokimia dari  EDS  memberikan  info  terkait kandungan  dari  EDS  antara  lain, karbohidrat, tannin, alkaloid, steroid, triterpenoid,  flavonoid  (Kusuma et al. ,  2011).  Analisis  GC-MS  tentang n-heksana,  etil  asetat,  dan  metanol daun  S.  polyanthum  diekstraksi menggunakan  bantuan  ultrasound metode telah mengungkapkan adanya beberapa  senyawa  utama  seperti phytol,  squalene  dan  senyawa  tidak dikenal yang membutuhkan karakterisasi  lebih  lanjut.  Beberapa senyawa  yang  diidentifikasi  dalam ekstrak  daun  S.  Polyanthum  dalam penelitian  ini  diketahui  senyawa
bioaktif dengan kepentingan terapeutik termasuk sebagai
antioksidan  yang  berfungsi  dalam reduksi  asam  lemak  trigliserida  dan LDL(Abd Rahim et al. , 2017).
Dari beberapa penelitian diatas, EDS  merupakan  zat  aktif  yang digunakan untuk efek antihiperlipida, sehingga perlu dilakukan standardisasi  agar  diperoleh  ekstrak yang  terjamin  mutu  dan  kualitas secara konsisten. Standardisasi dilakukan agar dapat diperoleh bahan baku  yang  seragam  yang  dapat menjamin aktivitas farmakologi tanaman tersebut. Standardisasi merupakan proses penjaminan produk  akhir  (simplisia,  ekstrak, produk  atau  produk  herbal)  agar mempunyai  nilai  parameter  tertentu yang  konstan  (Putranti,  Dewi  and Widiyastuti,  2018).  Standardisasi parameter  non  spesifik  dan  spesifik mengacu  pada  Farmakope  Herbal Indonesia  (FHI)  seperti  kadar  abu, kadar  air,  kadar  sari  larut  etanol, kadar  sari  larut  air,  kadar  abu  tidak larut asam, analisa kualitatif kuantitatif, analisis uji angka lempeng  total,  analisis  uji  angka kapang  khamir,  bobot  jenis,  analisa kualitatif (Depkes RI, 2009).

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan  kimia  yang  digunakan meliputi,  etanol  teknis  70  %,  etanol p.a  (E-Merck),  toluen  p.a  (EMerck), aquadest, asam klorida pekat (EMerck),  asam  nitrat  pekat  (E- Merck), asam klorida encer LP.
Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah eksikator, oven,  alat  maserasi, stirrer IKA
Laboratory,  benchtop  muffle  Ney Vulcan D- 130, waterbath Memmert,
rotary evaporator Heidolph,
Halogen  Moisture  Analyzer  HB  3, hotplate,  alat  destilasi  Dean-Stark Apparatus, piknometer Duran Prosedur penelitian

## Identifikasi tanaman
Identifikasi Daun Salam
dilakukan  di  Laboratorium  Ilmu Alam  Fakultas  MIPA  Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta.

## Pembuatan serbuk simplisia
Daun  salam  diperoleh  dari
Bambanglipuro,Kabupaten
Bantul
Yogyakarta kemudian disortasi basah,
dicuci bersih, dipotong sebesar 5 cm, dikeringkan menggunakan oven
dengan  suhu  40 o C  sampai  kering, disortasi kering, kemudian diserbuk. Pembuatan  ekstrak  daun  salam (EDS)
Simplisia  dimaserasi  dengan pelarut alkohol 70% dengan
perbandingan  1:  10  selama  24  jam dilakukan  remaserasi  sebanyak  2x, kemudian disaring untuk mendapatkan maserat, lalu dievaporasi dan
diuapkan menggunakan waterbath hingga diperoleh  ekstrak  kental(Depkes  RI, 2009).
Penetapan  kadar  abu  total  serbuk dan ekstrak
Timbang saksama 2 sampai 3 g bahan  uji  yang  telah  dihaluskan  dan masukkan ke dalam krus silikat yang telah  dipijar  dan  ditara,  pijarkan perlahan-lahan  hingga  arang  habis, dinginkan  dan  timbang.    Jika dengan  cara  ini  arang  tidak  dapat dihilangkan,  tambahkan  air  panas, aduk,  saring  melalui  kertas  saring bebas  abu.    Pijarkan  kertas  saring beserta  sisa  penyaringan  dalam  krus yang  sarna.    Masukkan  filtrat  ke dalam  krus,  uapkan  dan  pijarkan hingga bobot tetap.    Kadar abu total dihitung  terhadap  berat  bahan  uji,
dinyatakan dalam % b/b (Depkes RI,

## 2009).
Penetapan  kadar  abu  tidak  larut asam serbuk dan ekstrak
Didihkan  abu  yang  diperoleh pada  penetapan  kadar  abu  total dengan 25 mL asam klorida encer LP selama  5  menit.  Kumpulkan  bagian yang  tidak  larut  dalam  asam,  saring melalui kertas saring bebas abu, cuci dengan  air  panas,  pijarkan  dalam krus  hingga  bobot  tetap.  Kadar  abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap  berat  bahan  uji,  dinyatakan dalam % b/b(Depkes RI, 2009).

## Penetapan kadar sari larut etanol
Timbang saksama lebih kurang 5  g  serbuk  (4/18)  yang  telah dikeringkan di udara.    Masukkan ke dalam  labu  bersumbat,  tambahkan 100  mL etanol  P, kocok  berkali-kali selama  6  jam  pertama,  biarkan selama  18  jam.  Saring  cepat  untuk menghindarkan  penguapan  etanol, uapkan  20  mLfiltrat  hingga  kering dalam  cawan  dangkal  beralas  datar yang  telah  dipanaskan  l05°  dan ditara,  panaskan  sisa  pada  suhu  l05° hingga  bobot  tetap.  Hitung  kadar dalam  %  sari  larut  etanol.(Depkes RI, 2009)

## Penetapan kadar sari larut air
Timbang saksama lebih kurang 5  g  serbuk  (4/18)  yang  telah dikeringkan  di  udara.  Masukkan  ke dalam  labu  bersumbat,  tambahkan 100  mL  air  jenuh  kloroform,  kocok berkali-kali  selama  6  jam  pertama, biarkan  selama  18  jam.  Saring, uapkan  20  mL  filtrat  hingga  kering dalam  cawan  dangkal  beralas  datar yang  telah  dipanaskan  105°  dan ditara, panaskan sisa pada suhu 105° hingga  bobot  tetap.  Hitung  kadar dalam  %  sari  larut  air.(Depkes  RI, 2009)

## Penetapan kadar air
Bersihkan  tabung  penerima dan pendingin dengan asam pencuci, bilas dengan air, kemudian keringkan dalam  lemari  pengering.  Timbang saksama sejumlah bahan yang diperkirakan mengandung I sampai 4 mL  air,  masukkan  ke  dalam  labu kering. Jika zat berupa pasta timbang dalam sehelai lembaran logam dengan ukuran yang sesuai dengan Ie her  labu.    Untuk  zat  yang  dapat menyebabkan  gejolak  mend  adak saat mendidih, tambahkan batu didih secukupnya.  Masukkan  lebih  kurang 200  mL  toluen  jenuh  air  ke  dalam
labu, pasang rangkaian alat.
Masukkan toluen jenuh  air ke dalam tabung penerima (E) melalui pendingin sampai leher alat penampung  (B).  Panaskan  labu hati-hati  selama  15  menit.(Depkes RI, 2009)
Penetapan bobot jenis
Gunakan  piknometer  bersih, kering  dan  telah  dikaliberasi  dengan menetapkan  bobot  piknometer  dan bobot  air  yang  baru  dididihkan  pada suhu 25°C. Atur hingga suhu ekstrak cair lebih kurang 20°C, masukkan ke dalam piknometer. Atur suhu piknometer  yang  telah  diisi  hingga suhu  25°C,  buang  kelebihan  ekstrak cair dan ditimbang. Kurangkan bobot piknometer kosong dari bobot piknometer  yang  telah  diisi.  Bobot jenis  ekstrak  cair  adalah  hasil  yang diperoleh  dengan  membagi  bobot ekstrak  dengan  bobot  air,  dalam piknometer pada suhu 25°C (Depkes RI, 2009)
Penetapan  kadar  Flavonoid  secara kualitatif dan kuantitatif
Kualitatif  dengan  marker  Kuersitin (Depkes RI, 2010)
Lakukan  Kromatografi  Lapis Tipis  dengan  parameter  dengan  fase
gerak  etil  asetat  P-asam  format P-asam  asetat  P-air(10:0,5:0,5:1). Fase diam silica gel 60 F 254 . Larutan uji  10%  dalam  etanol,  pembanding kuersitin 0,1% dalam etanol dideteksi padaUV 366 .
Kuantitatif (Depkes RI, 2009)
Menimbang secara seksama 20 gram  ekstrak  daun  salam  lalu dimasukkan ke dalam tabung erlenmeyer  250  ml,  ditambahkan  50 ml etanol 96%. Lalu divortex selama 5  menit  dan  disaring.    Filtrat dituang  ke  dalam  cawan  porselin, dipanaskan  diatas  penangas  air hingga  tinggal  kira-kira  1/10  bagian. Disaring  melewati  serbuk  poliamida dan  ditampung  dalam  labu  takar  10 ml.    Lalu  di-ad  hingga  10  ml dengan  etanol  96%  hasil  bilasan cawan.    Filtrat  ditotolkan  sebanyak 1  µl  pada  plat  silika  gel  60F 254 dan dikembangkan secara assending dengan  bejana  kromatografi  yang telah  dijenuhkan  dengan  etil  asetat P-asam format P-asam asetat
P-air(10:0,5:0,5:1)  fase  atas  diambil.
Setela pengembangan selesai
dilakukan scanning dengan
densitometer pada λ366 nm kemudian  dihitung  persamaan  garis
linear untuk digunakan sebagai kurva standar.
Penetapan angka lempeng total
Disiapkan  5  buah  tabung  atau lebih yang masing-mnsing telah diisi dengan  9  ml  pengencer  PDF.  Dari hasil  homogenisasi  pada  penyiapan contoh  dipipet  pengenceran  10·1 sebanyak 1 ml ke dalam tabung yang berisi pengencer PDF pertama hingga  diperoleh  pengenceran  10-2 dan dikocok hingga homogen. Dibuat pengenceran selanjutnya hingga 10-6 atau sesuai dengan yang diperlukan.  Dari  setiap  pengenceran dipipet  1  ml  ke  dalam  cawan  petri dan  dibuat  duplo.  Ke  dalam  tiap cawan  petri  dituangkan  15-20  ml media PCA (45 ± 1°). Segera cawan petri digoyang dan diputar sedemikian  rupa  hingga  suspensi tersebar  merata.  Untuk  mengetahui sterilitas media dan pengencer dibuat uji  kontrol  (blangko).  Pada  satu cawan  hanya  diisi  1  ml  pengencer dan  media  agar,  dan  pada  cawan yang lain diisi pengencer dan media. Setelah media memadat, cawan petri diinkubasi pada suhu 35-37°C selama  24-48  jam  dengan  posisi terbalik. Jumlah koloni yang tumbuh
diamati  dan  dihitung.(Depkes  RI, 2009)

## Penetapan angka kapang khamir
Disiapkan  3  buah  tabung  yang masing-masing telah diisi 9 ml ASA. Dari hasil homogenisasi pada penyiapan  contoh  dipipet  1  ml pengenceran  10-1  ke  dalam  tabung ASA  pertama  hingga  diperoleh pengenceran  10-2,  dan  dikocok sampai homogen. Dibuat pengenceran selanjutnya hingga 10-4. Dari  masing-masing  pengenceran dipipet  0,5  ml,  dituangkan  pada permukaan  PDA,  segera  digoyang sambil diputar agar suspensi tersebar merata  dan  dibuat  duplo.  Untuk mengetahui  sterilitas  media  dan pengencer, dilakukan uji blangko. Ke dalam  satu  cawan  petri  dituangkan media  dan  dibiarkan  memadat.  Ke dalam cawan petri lainnya dituangkan  media  dan  pengencer, kemudian dibiarkan memadat. Seluruh  cawan  petri  diinkubasi  pada suhu  20-  250C  selama  5-7  hari. Sesudah  5  hari  inkubasi,  dicatat jumlah  koloni  jamur  yang  tumbuh, pengamatan terakhir pada inkubasi 7 hari.  Koloni  ragi  dibedakan  karena bentuknya  bulat  kecil-kecil  putih
hampir
menyerupai bakteri.
Lempeng  Agar  yang  diamati  adalah lempeng  dimana  terdapat  40  -  60 koloni  Kapang/Khamir(Depkes  RI, 2009).

## Analisis data
Data dibandingkan dengan data standarisasi penetapan parameter spesifik  dan  no  spesifik  Farmakope Herbal Indonesia.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil identifikasi daun salam
Tanaman Daun Salam diidentifikasi makroskopis mikroskopis  dilaboratorium  MIPA Universitas Ahmad Dahlan. Identifikasi dilakukan untuk
menjamin  kebenaran  daun  salam yang digunakan telah sesuai. Tanaman  daun  salam  merupakan suku  Myrtaceae  dengan  identitas simplisia berupa daun warna kecokelatan,  bau  aromatic  lemah, rasa  kelat.  Daun  tunggal  bertangkai pendek. Helai daun berbentuk jorong memanjang. Sedangkan identitas mikroskopik dengan fragmen pengenal  adalah  epidermis  bawah dengan  stomata  tipe  parasitis.  Untuk hasil  penetapan  parameter  spesifik
dan  non  spesifik  serbuk  simplisia daun salam tersaji pada tabel 1.
Pada  pembuatan  ekstrak  daun salam  menggunakan  etanol  70% dengan  perbandingan  1:10  secara maserasi  sesuai  dengan  standar pembuatan ekstrak
daun salam(Kementrian  Kesehatan  RI,
2011).  Metode  maserasi  merupakan metode dimana prosedur dan peralatan  yang  digunakan  sederhana dan tidak dipanaskan sehingga bahan alam tidak menjadi terurai(Nurhasnawati, Handayani and Samarinda, 2017). Hasil ekstraksi
yang didapatkan  memiliki  organoleptis kental,  hijau  kehitaman,  bau  khas, rasa  agak  pahit  dan  kelat  dengan kadar  air  <  10%,  dimaksudkan  agar mencegah pertumbuhan jamur dengan  adanya  media  air  yang melebihi  10%.  Hasil  uji  pengukuran penetapan  parameter  non  spesifik dan  spesifik  didapatkan  dari  3  kali replikasi.  Hasil  uji  kualitatif  EDS menggunakan marker kuersitin menunjukkan  positif  pada  panjang gelombang  425nm  terlihat  pada gambar 1.
Tabel 1. Hasil Uji penetapan parameter spesifik Serbuk Simplisia Daun Salam
No Parameter Uji Rata-Rata (%) Standar Penerimaan Acuan 1 Kadar Abu 4.20±0.12 <5.5% Supp. I FHI 2 Kadar Abu Tidak Larut Asam 1.20±0.12 <1.8% Supp. I FHI 3 Susut pengeringan 0.52±0.04 <10% Supp. I FHI 4 Kadar Sari Larut Etanol 8.16±0.72 >7.8% Supp. I FHI 5 Kadar Sari Larut Air 8.10±0.11 >7.4% Supp. I FHI 6 Uji Angka Lempeng Total < 2.4 x 10 7 - - 7 Uji Angka Kapang Khamir 4.6 x 10 3 - - 8 Analisa Kuantitatif 1.76±0.08 >0.40% Supp. I FHI Tabel 2. Hasil uji penetapan parameter spesifik EDS No Parameter Uji Rata-Rata (%) Standar Penerimaan Acuan 1 Kadar Abu 5.48±0.15 <10.1% Supp. II FHI 2 Kadar Abu Tidak Larut Asam  0.36±0.51 <0.8% Supp. II FHI 3 Kadar Air 0.48±0.01 <10% Supp. II FHI 4 Kadar Sari Larut Etanol 2.57±0.08 5 Kadar Sari Larut Air 2.47 ± 0.30 6 Uji Angka Lempeng Total
<1 x10 1 7 Uji Angka Kapang Khamir
<1 x10 1 8 Bobot Jenis 1.02 9 Analisa Kuantitatif 26.12±0.59 >1.14% Supp. II FHI 10  rendemen 15.50% >12.2% Supp. II FHI
Gambar 1. Analisa Kualitatif EDS
Proses  ekstraksi  daun  salam menggunakan metode maserasi dapat mengurangi  kadar  abu  total  serbuk, cemaran  lempeng  total  dan  khamir yang menjadi cemaran pada simplisia.
Analisis  parameter  non  spesifik ekstrak daun salam
Berdasarkan hasil tabel 1 dan 2, maka  dapat  EDS  dapat  disimpulkan telah  memenuhi  persyaratan  FHI baik  pada  serbuk  maupun  ekstrak. Pengambilan  simplisia  daun  salam berpengaruh  terhadap  hasil  ekstrak yang  diddapatkan.  Tempat  tumbuh serta  kondisi  alam  mempengaruhi kualitas  dari  EDS.  Simplisia  daun salam didapatkan dari daerah Bambanglipuro  Kabupaten  Bantul yang  merupakan  dataran  rendah dekat  dengan  pantai  dengan  suhu panas (37 derajat Celcius).

## KESIMPULAN
EDS memenuhi persyaratan standardisasi  parameter  non  spesifik dan  spesifik  menurut  Farmakope herbal Indonesia.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Direktorat  Riset  dan  Pengabdian Masyarakat Direktorat
Jenderal Penguatan  Riset  dan  Pengembangan Kementerian  Riset,  Teknologi,  dan Pendidikan  Tinggi  sesuai  dengan kontrak penelitian nomor :
109/SP2H/LT/DRPM/2018

## DAFTAR PUSTAKA
Abd  Rahim,  E.  N.  A. et  al. (2017)
‘GC-MS Analysis of Phytochemical  Compounds  in Syzygium  polyanthum  Leaves Extracted using Ultrasound-Assisted  Method’, Pharmacognosy Journal , 10(1), pp. 110–119. doi: 10.5530/pj.2018.1.20. Depkes RI (2009) Farmakope
Herbal  Indonesia .  Pertama.
Jakarta Indonesia.
Depkes  RI  (2010) Suplemen  I Farmakope  Herbal  Indonesia Jilid  I .  Jakarta  Indonesia:
Departemen Kesehatan RI. Kementrian  Kesehatan  RI  (2011) Suplemen II Farmakope
Herbal Indonesia Edisi 1 . Kusuma,  I.  W. et  al. (2011) ‘Biological Activity and
Phytochemical Analysis of Three  Indonesian  Medicinal Plants, Murraya koenigii,
Syzygium polyanthum and Zingiber  purpurea’, Journal  of Acupuncture and Meridian Studies ,  4(1),  pp.  75–79.  doi: 10.1016/S2005-2901(11)60010
-1.
Nurhasnawati, H., Handayani, F. and Samarinda, A. F. (2017) ‘SOKLETASI TERHADAP AKTIVITAS  ANTIOKSIDAN EKSTRAK  ETANOL  DAUN JAMBU  BOL  (  Syzygium malaccense L .)’, Jurnal Ilmiah Manuntung , 3(1), pp. 91–95. Putranti,  W.,  Dewi,  N.  A.  and Widiyastuti, L. (2018) ‘STANDARDIZATION OF EXTRACT AND CHARACTERIZATION OF EMULGEL  FORMULA  OF LENGKUAS  (Alpinia  galanga (L.) Willd) RHIZOME EXTRACT’, Journal of Pharmaceutical  Sciences  and Community ,  15(2),  pp.  81–91. doi: 10.24071/jpsc.1521612. Sutrisna,  E.,  Nuswantoro,  Y.  and Said, R. F. (2018) ‘Hypolipidemic  of  ethanolic extract of Salam bark ( Syzygium polyanthum (  Wight  )  Walp  .)  from Indonesia ( Preclinical study )’,
Journal of Pharmacy Research , 10(1), pp. 55–59.