## AKTIVITAS ANTIBAKTERI Dan ANALISIS KLT-BIOAUTOGRAFI  DARI
FRAKSI DAUN MANGGIS  ( Garcinia mangostana L.)
Ayu Natasya Paputungan 1) , Widya Astuty Lolo 1) , Imam Jayanto 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Mangosteen  leaves  have  flavonoid  compounds,  tannins,  and  saponins that  can  be  efficacious  as  antibacterial. The  aim  of  this  study  was  to  determine  the  fraction  of  mangosteen  leaves  having  an  antibacterial  effect  and knowing the class of compounds identified as having antibacterial activity after TLC- Bioautography testing was carried  out.  The  samples  were  extracted  using  96%  maceratarion  method  and  fractioned  using  liquid-liquid fractionation  method  with  methanol,  n-hexane  and  ethyl  acetate  solvents,  antibacterial  activity  using  agar diffusion  method  (Kirby  and  Bauer)  with  3  concetrations  namely  10%,  20%  and  30%.  Thin  Layer Chromatography (TLC) uses n-hexane and chloroform solvens. TLC-Bioautography uses contact bioautography methods.  The  resultd showed  that  mangosteen  leaves in  methanol fraction  with a  concentration  of  30%  had  a very  large  inhibitory  activity  again  Staphylococcus  aureus  and  ethyl  acetate  fraction  with  a  concentration  of 30%  had  the  gratest  antibacterial  activity  against    Escherichia  coli.  The  results  of  the  TLC-  Bioautography study showed that the flavonoids compounds after spraying with AlCl 3 and the mangosteen leaf Biosutography test had inhibitory zone activity against the bacteria Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
Keywords: Mangosteen Leaves. Antibacterial, TLC Bioautography.

## ABSTRAK
Daun  manggis  mempunyai  senyawa  flavonoid,  tanin,  dan  saponin  yang  dapat  berkhasiat  sebagai  antibakteri. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  fraksi  daun  manggis  memiliki  efek  antibakteri  dan  mengetahui golongan  senyawa  yang  teridentifikasi  memiliki  aktivitas  antibakteri  setelah  dilakukan  pengujian  KLT Bioautografi.  Sampel  diektrak  dengan  metode  maserasi  dengan  pelarut  96%  dan  difraksinasi  dengan  metode fraksinasi cair-cair dengan pelarut metanol, n-heksan dan etil asetat, aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi agar ( Kirby and Bauer) dengan 3 kosentrasi yaitu 10%, 20% dan 30% . Kromatografi Lapis Tipis (KLT) menggunakan  pelarut  n-heksan  dan  klorofom.  KLT-Bioautografi  menggunakan  metode  bioautografi  kontak. Hasil penelitian menunjukan daun manggis pada fraksi metanol  dengan kosentrasi 30% memiliki aktivitas zona hambat  ppaling  besar  terhadapat  bakteri Staphylococcus  aureus dan  fraksi  etil  asetat  dengan  kosentrasi  30% memiliki  aktivitas  antibakteri  paling  besar  terhadap Escherichia  coli. Hasil  penelitian  KLT-Bioautografi menunjukan golongan senyawa flavonoid setelah disemprotkan dengan AlCl 3 dan uji Bioautografi daun manggis memiliki aktivitas zona hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
Kata kunci : Daun Manggis , Antibakteri, KLT- Bioautografi.

## PENDAHULUAN
Saat  ini  penyakit  infeksi  masih menjadi masalah serius di Indonesia. Infeksi merupakan  penyakit  yang  dapat  ditularkan dari satu orang ke orang lain atau dari hewan pada  kemanusia.  Penyebab  infeksi  berbagai mikroorganisme seperti virus, bakteri, jamur,  dan  protozoa.  (Soekardjo  dan Siswandono, 2000).
Bakteri Staphyloccoccus aureus berasal  dari  makanan  dan  bakteri  ini menghasilkan racun yang dapat menimbulkan  penyakit. B akteri Escherichia coli adalah  bakteri  h    idup  di  dalam  usus manusia dan hewan. Beberapa jenis tertentu seperti E.coli dapat  menyebabkan  infeksi usus  serius  yang mengakibatkan diare, sakit perut, dan demam (Mustapa, dkk., 2011).
Daun manggis ( Garcinia mangostana  Linn). Mengandung  senyawa tanin, flavonoid, dan saponin . Yang mempunyai keaktifan menghambatan pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus (Sari,  2018).  Ekstrak  etanol  daun  manggis ( Garcinia  mangostana  Linn )  memiliki senyawa  aktif  sebagai  antibakteri  pada konsentrasi 20% ( Julianti, 2017) .

## METODOLOGI PENELITIAN
Waktu dan Tempat

## Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Februari  sampai  April  2019.  Tempat pengambilan  sampel  dilakukan  di  desa Pontodon,  Kec.  Kotamobagu  Utara,  Kota Kotamobagu. Preparasi sampel dilakukan di Laboratorium  Penelitian  Farmasi  Lanjutan,
Program Studi Farmasi,
Fakultas
Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Sam Ratulangi, Manado.

## Bentuk Penelitian
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental yaitu penelitian dilakukan untuk mengetahui sebab  akibat  yang  ditimbulkan  dari  suatu perlakuan  yang  diberikan  secara  sengaja oleh peneliti.

## Alat dan Bahan
a. Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  jas  lab,    masker,  sarung  tangan, gunting,  autoklaf,  cawan  petri  ( Normax ), cawan  porselin,  chamber,  gelas  Erlenmeyer ( pyrex ),  gelas  kimia  ( pyrex ),  gelas  ukur ( pyrex ),  tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi, corong  pisah,  pinset,  pembakar  spritus, inkubator, lemari pendingin, blender, batang  pengaduk,  oven,  lampu  spiritus, lampu  UV  254  nm  dan  366  nm, Laminary Air  Flow (N  Biotek ),  aluminium  foil, micropipet,  pipet  tetes,  spatula,  penangas air, oven, vial,  jangka  sorong,  jarum  ose, lempeng KLT,  pipa kapiler, toples.
b. Bahan Bahan  yang  digunakan  adalah  sampel ekstrak daun manggis ( Garcinia mangostana L ), akudes, bakteri uji Escherchia coli (gram negatif) dan
Staphylococcus aureus (gram positif), Medium Nutrient Agar (NA), Kloramfenikol paper  disk ,  cakram  ( paper disk ), n-heksan,  etil asetat,  metanol,  label, tissue , aluminium  foil ,  kertas  saring,  kapas, larutan  H 2 S0 4 1%  ,  Larutan  BaCl 2 +    2H 2 O 1,75% , pereaksi AlCl 3

## Prosedur Penelitian Ekstraksi
Sampel diekstrasi dengan menggunakan metode  maserasi,  sebanyak  500  gr  sampel dan  dimasukan  kedalam  wadah  maserasi, kemudian  ditambahkan  pelarut  etanol  96% sebanyak  2  L  sampai  sampel  terendam secara  keseluruhan.  Lalu  ditutup  dengan menggunakan aluminium  foil dan  biarkan selama  3  hari  sambil  sesekali  diaduk. Selanjutnya  sampel  yang  telah  direndam disaring  dengan  menggunakan  kertas  saring dan  menghasilkan  filtrat  1  dan  debris  1. dilakukan  proses  remaserasi  selama  2  hari dengan merendam debris 1 dengan pelarut e tanol 96% sebanyak 1 L. Selanjutnya sampel disaring menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 2 dan debris 2. Filtrat 1 dan  2  dicampur  menjadi  satu  kemudian dimasukam keoven dengan suhu 40 0 C .

## Fraksinasi
Fraksinasi  sampel  dilakukan  dengan metode  fraksinasi  cair-cair  menggunakan corong  pisah . Dengan  menggunakan  tiga pelarut  yaitu  n-heksan,  etil  asetat,  dan metanol.  Sebanyak  10,00  g  ekstrak  kental dimasukkan  kedalam  Erlenmeyer  dan  di larutkan  dengan  metanol  sebanyak  100  mL. Setelah sampel larut, sampel dimasukkan ke dalam corong pisah dan ditambahkan pelarut n-heksan  sebanyak  100  mL.  kemudian dikocok  berulang  kali  dalam  corong  pisah hingga  homogen.  Sampel  dibiarkan  hingga membentuk  dua  lapisan  yaitu    lapisan metanol  dan  n-heksan.  Masing-masing kedua  lapisan  metanol  dan  n-heksan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan  n-heksan  selanjutnya  dipekatkan menggunakan oven hingga  kering  lalu ditimbang  dengan  timbangan  analitik  dan
diperoleh  fraksinat.    Selanjutnya  lapisan metanol  dimasukkan  kedalam  corong  pisah dan ditambahkan pelarut etil asetat sebanyak 100  mL.  Sampel  dibiarkan  membentuk  dua lapisan yaitu lapisan metanol dan lapisan etil asetat. Masing-masing kedua lapisan metanol  dan  etil  asetat  ditampung  dalam wadah  yang  berbeda.  Lapisan  etil  asetat selanjutnya  dipekatkan  menggunakan oven hingga  kering  lalu  ditimbang  dengan timbangan  analitik  dan  diperoleh  fraksinat. Lapisan  metanol  yang  telah  ditampung dipekatkan  menggunakan oven hingga kering  lalu  ditimbang  dengan  timbangan analitik dan diperoleh fraksinat.

## Sterilisasi dan Pembuatan Media Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  dan  media  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  disterilkan terlebih dahulu dengan menggunakan autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit. Pinset,  jarum  ose,  dan L  glass dipijarkan diatas api bunsen.
Pembuatan Media Nutrient Agar Ditimbang sebanyak 10,08 g nutrient agar kemudian  dilarutkan  dengan  aquades sampai  360  mL,  diaduk  sampai  homogen. Kmudian  disterilkan  dengan  menggunakan autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit dan  dibiarkan  media  sampai  cukup  dingin. Selanjutmya capet yang digunakan sebanyak 18  capet  dan    masing-masing  capet dituangkan  20  mL  media  agar,  kemudian dibiarkan sampai memadat.

## Pembuatan Media Agar Miring
Pembuatan  agar  miring  dilakukan dengan ditimbang 0,56 gr Nutrient Agar dan masukkan  20  ml  aquades  dan  disterilkan
menggunakan  autoklaf  selama  15  menit, media  yang  telah  disterilkan  dimasukan dalam tabung reaksi sebanyak 10 mL dalam 2  tabung  disumbat  dengan  kapas  steril  dan dimiringkan  sekitar  45 0 dan  didiamkan memadat,  tujuan  pembuatan  agar  miring untuk peremajaan bakteri.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pembuatan  Larutan  standar  Mc  Farland 0,5
Larutan  H 2 S04  1%  sebanyak  9,95 mL  dicampurkan  dengan  larutan  BaCl 2. 2H 2 O  1,75%  sebanyak  0,05%  mL  dalam Erlenmeyer.  Kemudian  dikocok  sampai terbentuk larutan yang keruh sebagai standar kekeruhan suspense mikroba uji.

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji  yaitu Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli yang  telah diinokulasi  diambil  ±1  ose  kemudian disuspensikan  ke  dalam  tabung  yang  berisi 10  mL  larutan  NaCL  0,9%.  Selanjutnya dibandingkan  dengan  standar  kekeruhan larutan Mc Farland 0,5.

## Kontrol Positif dan Kontrol Negatif
Kontrol  Positif  untuk  pengujian  ini menggunakan Kloramfenikol paper disc dan untuk kontrol negatif menggunakan aquades.

## Pembuatan Larutan Uji
Dibuat larutan stok dengan konsentrasi 100% dengan cara ditimbang 1 g fraksi metanol, fraksi etil asetat dan fraksi n- heksan  kemudian  masing-masing  dilarutkan dengan  akuades  hingga  1  mL.  Larutan  uji fraksi  metanol,  fraksi  etil  asetat,  fraksi  n-
heksan    10%,  20%  dan  30%  dibuat  dengan cara  mengambil  masing-masing  sebanyak 0,1  mL,  0,2  mL,  0,3  mL  untuk  setiap konsentrasinya  dan  dicukupkan  volumenya dengan akuades hingga 1 mL.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  akan  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  metode  difusi  agar. Aktivitas  untuk  penghambatannya  diuji terhadap  bakteri Escherichia  coli ATCC 25922  dan Staphylococcus  aureus ATCC 25923.  Untuk  diuji  aktivitas  antibakteri digunakan  kertas  cakram  berukuran  6  mm. Disiapkan larutan uji fraksi  n-heksan, fraksi etil  asetat  dan  fraksi  metanol  dengan berbagai  konsentrasi  10%,  20%  dan  30% selanjutnya  media  NA  dituang  masing- masing  20  mL  kedalam  cawan  dalam  18 cawan  petri  hingga  memadat.  kemudian masukan  suspensi  bakteri  uji  dan  diratakan menggunakan batang L. Sampel yang sudah ditentukan  kosentrasinya  ditotolkan  pada masing-masing cakram dengan menggunakan  mikropipet  sebanyak  50  µL. Kemudian  dari  masing-masing  cawan  petri diberi  tanda  dengan  label  sesuai  dengan komponen  pengujian.  Kertas  cakram  yang sudah  ditotolkan  sampel  uji  serta  kontrol positif  dan  kontrol  negtif Diletakkan  ke dalam  cawan  petri  dengan  menggunakan pinset  dengan  diatur  jarak  masing-masing cakram lalu diinkubasi selama 1 x 24 jam.
Pengamatan dan Pengukuran Zona Bening
Pengamatan dilakukan setelah 1 x 24 jam  masa  inkubasi.  Zona  bening  yang terbentuk  sekitaran  cakram  menunjukkan kepekaan  bakteri  terhadap  antibiotik  dan
larutan  uji  antibakteri  sebagai  bahan  uji. Diameter  zona  bening  diukur  dalam  satuan milimeter (mm) menggunakan jangka sorong.  Kemudian  zona  bening  yang  telah diukur dibandingkan berdasarkan pedoman.

## Pengujian Fraksi Teraktif dengan Metode KLT-Bioautografi
Fraksi  yang  memiliki  zona  hambat yang paling besar dilanjutkan pada pemantauan  KLT,  fraksi  yang  tinggi  yaitu fraksi  metanol  dan  fraksi  etil  asetat. Kemudian hasil pemantauan KLT dilakukan pengujian aktivitas antibakteri dengan metode KLT-Bioautografi

## Persiapan Plat KLT
Pemisahan senyawa dilakukan dengan  menggunakan  plat  silika  dengan ukuran  1cm  x  10  cm.  Selanjutnya  diberi penanda  garis  pada  tepi  bawah  plat  pada jarak  1  cm  untuk  menunjukan  posisi  awal totolan  dan  1  cm  dari  tepi  atas  plat  untuk menunjukan batas dari proses elusi. Selanjutnya  plat  diaktifkan  dengan  cara dipanaskan  pada  suhu  105 0 C  selama  10 menit.

## Persiapan Fase Gerak (Eluen)
Eluen  yang  digunakan  untuk  fraksi metanol yaitu  eluen n-heksan dan klorofom dengan  perbandingan  1:2  dan  fraksi  etil asetat  menggunakan  eluen  n-heksan  dan klorofom  dengan  perbandingan  1:1.  Eluen yang  berada  di  dalam  bejana  dijenuhkan terlebih  dahulu  selama  10  menit  untuk menyamakan  tekanan  uap  pada  seluruh bagian bejana.

## Penotolan Sampel Fraksi
Fraksi  metanol  dilarutkan  dengan aquades. Selanjutnya fraksi dengan kosentrasi  30%  ditotolkan  sebanyak  3x totolan  (pada  tempat  yang  sama)  pada  3 lempeng yang berbeda. Dengan menggunakan  pipa  kapiler.  Setelah  eluen sampai  garis  dilakukan  pengamatan  pada lempeng  pertama  dibawah  lampu  UV  254 nm  dan  UV  366  nm,  lempeng  kedua disemprotkan  reagen AlCl 3 untuk  melihat senyawa  flavonoid,  lempeng  ketiga  dipakai untuk uji bioautografi. Selanjutnya pengerjaan yang sama dilakukan pada fraksi etil asetat.

## Uji Bioautografi
Sebanyak 20 μL  bakteri  uji ditambahkan 25 ml medium NA. dituangkan ke  dalam  cawan  petri  secara  aseptis  dengan menggunakan  batang  L  agar  merata  dan dibiarkan  memadat . Kromatogram  hasil pemisahan  senyawa  secara  KLT  kemudian diletakkan  di  atas  permukaan  medium  yang memadat.  Didiamkan  selama  30  menit dilemari  pendingin.  Kemudian  lempeng (kromatogram)  diangkat  dan  dikeluarkan dari medium. Selanjutnya diinkubasi selama 1 x 24 jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan Fraksinasi
Sampel  daun  manggis  dibersihkan dengan air mengalir. Kemudian dikeringkan dengan cara diangin-anginkan selama 8 hari pada  ruangan  yang  terhindar  dari  sinar matahari  langsung,  hal  ini  bertujuan  untuk menghindari  terjadinya  kerusakan  senyawa yang  terkandung  dalam  sampel  (Suryanto 2012).
Proses ektraksi menggunakan metode maserasi yang  bertujuan untuk memisahkan senyawa  aktif  yang  ada  didalam  sampel. Pelarut  yang  digunakan  adalah  pelarut etanol  96%.  Sampel  direndam  selama  3 hari pada temperatur kamar dan terlindung dari  cahaya  matahari  kemudian  sampel dilakukan remaserasi selama 2 hari dengan menggunakan pelarut etanol agar penyaringan  sempurna. Hasil  ekstrak  daun manggis selanjutnya diuapkan menggunakan oven pada suhu 40ºC . Penguapan ekstrak ini dimaksudkan  agar  air  dan  pelarut  yang tersisa  dalam  ekstrak  akan  menguap. (Kowal, 2018).
Pada penelitian ini fraksinasi dilakukan  dengan  metode  Fraksinasi  Cair- Cair.  Tujuan  dilakukan  proses  fraksinasi yaitu  untuk  memisahkan  golongan  senyawa yang  satu  dengan  golongan  senyawa  lainya berdasarkan  tingkat  kepolaran.  Pelarut  yang digunakan metanol, etil asetat dan n-heksan. Pada proses fraksinasi dilakukan pengocokan terlebih dahulu terhadap corong pisah  sebelum  memperoleh  2  lapisan. Masing  –  masing  dari  pelarut  akan memisahkan  kelompok  kandungan  senyawa berdasarkan
tingkat kepolaran,
(Wewengkang, 2014). Fraksi yang dihasilkan diuapkan menggunakan oven dan digunakan pada pengujian antibakteri.
Hasil  rendemen  bertujuan  untuk melihat  perbandingan  jumlah  ekstrak  yang didapat dari proses ekstraksi, rendemen yang diperoleh  dari  ekstrak  dan  fraksi  daun manggis  menggunakan  pelarut  Etanol, metanol,  etil  asetat  dan  n-heksan  dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1.  Rendemen  ektrak  dan  fraksi  Daun Manggis
Rendemen dari masing-masing ektrak  untuk  ekstrak  etanol  didapatkan massa  dari  ektrak  63,83  g  dari  massa  awal sampel  500  g,  dan  didapatkan  rendemen 12,76  %  dengan  warna  filtrat  hijau kehitaman,  filtrat  n-heksan  berwarna  hijau kehitaman dengan massa hasil ektrak 1,55 g, dan didapatkan rendemen 15,5 %, filtrat etil asetat  berwarna  hijau  kehitaman  dengan massa  hasil  ekstrak  sebanyak  2,79  g  dan didapatkan  rendemen  27,9  %.  Dan  filtrat metanol berwarna hijau keruh dengan massa hasil  ektrak  sebanyak  2,91  g,  sehingga didapatkan rendemen 29,1 %. Hasil rendemen  dari  ketiga  fraksi  di  dapatkan bahwa  senyawa  daun  manggis  paling banyak  ditarik  oleh  pelarut  yang  bersifat polar  yaitu  fraksi  metanol  dengan  nilai rendemen  29,1  %.  Hal  ini  dikarenakan pelarut  metanol  mampu  menarik  lebih banyak  senyawa  –  senyawa  aktif  dari sampel.  Oleh  karena  itu  dapat  dikatakan bahwa sebagian senyawa aktif yang terdapat pada daun manggis bersifat polar.
Uji Aktivitas Antibakteri Daun Manggis ( Garcinia mangostana L)
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dari fraksi methanol, fraksi etil asetat, dan fraksi n-heksan pada bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli .  Dengan menggunakan metode difusi agar (Kriby and
Bauer )  dan  menggunakan  kertas  cakram. Penghambatan  pertumbuhan  bakteri  yang ditandai dengan terbentuknya daerah bening di sekeliling kertas cakram (Brooks,  2005). Penggunaan bakteri bertujuan untuk melihat apakah  fraksi  dari  daun  manggis    ini memiliki  aktivitas  antibakteri  serta  apakah mempunyai  spektrum.  Dalam  pengujian  ini, dilakukan  pengamatan    selama  1x24  jam dengan 3 kali penggulangan.
Hasil  pengujian  yang  didapat  dari antibakteri  fraksi  metanol,  fraksi  etil  asetat, fraksi  n-heksan,  kontrol  positif  dan  kontrol negatif terhadap  bakteri  uji Staphylococcus aureus dan Eschericia  coli. dapat  dilihat pada Tabel 2.

## Tabel 2. Hasil rata-rata diameter zona hambat
terhadap bakteri uji Staphylococcus aureus.
Hasil yang diperoleh untuk aktivitas antibakteri  fraksi  metanol,  etil  asetat  dan  n- heksan  terhadap  bakteri  uji Staphylococcus aureus menunjukan  nilai  rata-rata    yang berbeda-beda.  Pada  fraksi  metanol  dengan kosentrasi 10%, 20% dan 30% dikategorikan kuat,  fraksi  etil  asetat  dengan  kosentrasi 10%, 20% dan 30% dikategorikan kuat. Dan untuk  fraksi  n-heksan  pada  kosentrasi  10%, 20% dan 30% dikategorikan sedang. Hal ini sesuai  dengan  yang  dinyatakan  Sari  (2018) bahwa  daun  manggis Garcinia  mangostana Linn . Mengandung senyawa tannin,
flavonoid  dan  saponin  yang  mempunyai keaktifan  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus.
Tabel 3. Hasil rata-rata diameter zona hambat terhadap bakteri uji Escheciria coli.
Hasil yang diperoleh untuk aktivitas antibakteri  fraksi  metanol,  etil  asetat  dan  n- heksan  terhadapat  bakteri  uji Escherichia coli menunjukan  nilai  rata-rata    yang berbeda-beda.  Pada  fraksi  metanol  dengan kosentrasi 10%, 20% dan 30% dikategorikan kuat,  fraksi  etil  asetat  dengan  kosentrasi 10%, 20% dan 30% dikategorikan kuat. Dan untuk  fraksi  n-heksan  pada  kosentrasi  10%, 20% dan 30% dikategorikan sedang. Hal ini sesuai  dengan  yang  dinyatakan  Julianti (2017)  bahwa  ekstrak  daun  manggis memiliki aktivitas antibakteri dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli.
Dalam  pengujian  ini  digunakan kontrol  positif  yang  berfungsi  sebagai pembanding  antara  antibakteri  yang  sudah terstandarisasi dengan larutan fraksi. Kontrol  positif  yang  digunakan  yaitu antibiotik kloramfenikol. Menggunakan kloramfenikol  dikarenakan  kloramfenikol merupakan  antibiotik  berspektrum  luas  dan antibiotik ini bersifat menghambat pertumbuhan  bakteri  (bakteriostatik).  Hasil yang  diperoleh    kloramfenikol  pada  bakteri Escherichia coli pada kosentrasi  30 % hasil
yang diperoleh yaitu 18,25 mm dikategorikan  kuat,  dibandingkan  dengan bakteri Staphylococcus aureus pada kosentrasi 30 % diperoleh daya hambat rata- rata  17,5  mm.  Hal  ini  di  karenakan antibiotik kloramfenikol lebih peka terhadap bakteri Escherichia  coli (Gram  negatif) (Katzung, 2004).
Kontrol negatif yang digunakan yaitu aquades,  Fungsi  dari  kontrol  negatif  ini untuk  mengetahui  ada  tidaknya  pengaruh pelarut terhadap pertumbuhan bakteri. Aquades  menunjukkan  tidak  adanya  zona hambat  pada  pengujian  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus maupun  bakteri Escherichia  coli .  sehingga  dapat  diketahui bahwa  aktivitas  antibakteri  yang  dihasilkan bukan berasal dari pelarut melainkan berasal dari aktivitas senyawa  yang terdapat   dalam sampel daun manggis.
Pengujian Fraksi
Teraktif Dengan

## Metode KLT-Bioautografi
Hasil fraksi dari uji antibakteri dipilih kosentrasi  yang memiliki zona hambat yang paling  besar,  dan  zona  hambat  yang  besar yaitu  fraksi  metanol  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan fraksi etil asetat terhadap  bakteri Escherichia  coli. Analisis kualitatif  menggunakan  Kromatografi  Lapis Tipis  (KLT)  untuk  memisahkan  dan memurnikan  komponen-komponen  kimia yang  terdapat  dalam  sampel.  Pemisahan komponen terjadi atas dasar distribusi 2 fase yaitu  fase  diam  dan  fase  gerak.  Fase  gerak mengalir  kedalam  fase  diam  dan  membawa komponen-komponen yang berbeda bergerak  pada  laju  yang  berbeda  (Astriani, 2011).
KLT  dilakukan  dengan  menggunakan plat  silica  gel  dengan  ukuran  2  cm  x  10  cm, eluen  yang  digunakan  pada  fraksi  metanol yaitu  n-heksan  dan  klorofom  1:2,  dan  pada fraksi  etil  asetat    menggunakan  eluen  n- heksan dan klorofom 1:1, pemilihan eluen ini didasarkan  pada  hasil  optimasi  eluen  yang telah  dilakukan,  dimana  pada  eluen  ini menghasilkan  pemisahan  terbaik  dengan jumlah  noda  terbanyak  seteleh  dilihat dibawah sinar UV 254 nm dan 366 nm,
Pengujian  KLT-Bioautografi  dilakukan untuk  mengetahui  komponen  senyawa  apa yang  memberikan  aktivitas  antibakteri  dari fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  metanol  daun manggis Garcinia  mangostana L.  Metode yang  digunakan  dalam  KLT-Bioautografi ialah  metode  kontak.  Fraksinat  metanol  di uji dengan bakteri uji Staphylococcus aureus dan fraksinat etil asetat diuji dengan bakteri uji Escherichia  coli .  Didiamkan  selama  30 menit  kemudian  lempeng  kromatografi tersebut  diangkat  dari  permukaan  medium. Senyawa  antibakteri  yang  telah  berdifusi dari  lempeng  kromatogram  ke  dalam  media agar akan menghambat pertumbuhan bakteri setelah  diinkubasi  pada  waktu  1x24  jam sampai noda  yang mengambat pertumbuhan bakteri uji tampak pada permukaan medium membentuk zona daya hambat.
Berdasarkan  hasil  KLT-Bioautografi bahwa fraksinat metanol menunjukan bercak pada nilai rf 0,00 yang memberikan aktivitas antibakteri kepada bakteri uji Staphylococcus  aureus yang  menunjukan adanya  zona  bening  dan  pada  fraksinat  etil asetat menunjukan bercak pada nilai  rf 0,00 yang memberikan antibakteri kepada bakteri uji Escherichia  coli. Bakteri  yang  dihambat pada  setiap  nilai  Rf  satu  dengan  nilai  Rf
yang  lain  terkadang  sama  dan  terkadang pula  berbeda.  Hal  ini  diakibatkan  oleh bercak  pada  setiap  nilai  Rf  menunjukkan senyawa  yang  berbeda  satu  dengan  yang lainnya, sehingga kemampuan penghambatannya  pun  berbeda  (Astriani, 2011).

## Identifikasi Senyawa Aktif
Hasil  uji  kualitatif    identifikasi senyawa fraksi metanol dan fraksi etil asetat daun manggis Gracinia mangostana L . Diuji kandungan
senyawa flavonoidnya menggunakan  pereaksi  Aluminium  Klorida (AlCl 3 ) dilihat pada perubahan warna bercak menjadi warna kuning,  pada fraksi metanol terdapat  nilai  Rf  0,00,  0,18,  0,36  dan  0,62 dan  pada  fraksi  etil  asetat  nilai  Rf  terdapat pada 0,00 dan 0,56. Munurut Ahmad (2015) penyemprotan  dengan  menggunakan  AlCl 3 untuk  mengidentifikasi  senyawa  flavonoid akan menimbulkan bercak menjadi berwarna kuning.  Flavonoid  yang  berupa  glikosida merupakan  senyawa  polar  sehingga  dapat larut dalam pelarut polar (Harborne, 1996).
Menurut Rustama dan Lingga (2005) bahwa aktivitas senyawa flavonoid terhadap bakteri  dilakukan  dengan  merusak  dinding sel  bakteri  yang  terdiri  atas  lipid  dan  asam amino.  Lipid dan asam  amino tersebut  akan bereaksi  dengan  gugus  alkohol  pada senyawa  flavonoid  sehingga  dinding  sel akan  rusak  dan  flavonoid  masuk  kedalam inti  sel  bakteri.  Di  dalam  inti  sel,  flavonoid akanbereaksi  berkontak  dengan  DNA  dan menyebabkan  rusaknya  struktur  lipid  DNA sehingga  bakteri  akan  lisis  dan  sel  akan mati.  Reaksi  pengrusakan  struktur  lipid DNA  disebabkan  perbedaan  kepolaran
antara  lipid  penyusun  DNA  dengan  gugus alkohol flavonoid

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian, dapat disimpulkan bahwa  pengaruh  ekstrak  daun  manggis sebagai berikut:
1. Fraksinat  daun  manggis memiliki aktivitas antibakteri dalam menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia  coli. Dan aktivitas  zona  hambat  terbesar  terdapat pada kosentrasi 30%.
2. Diduga  salah  satu  senyawa  yang teridentifikasi  yaitu  flavonoid  setelah dilakukan uji KLT-Bioautografi.

## SARAN
Disaran kan perlu dilakukan penelitian  lebih  lanjut  tentang  uji  aktivitas antibakteri  dengan  menggunakan  metode dilusi.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad,  R.A.  Juwita.  Ratulangi,  D.A.S. Malik,  A.  2015.  Penetapan  Kadar Fenolik dan Flavonoid Total Ekstrak Metanol  Buah  dan  Daun  Patikala ( Etlingera  elatior (Jack)  R.M.SM). Original article , 2( 1 ) : 2457-2354.
Brooks,  G.  L.,  J.S.  Butel,  S.A  Morse.  2005. Mikrobiologi Kedokteran, Salemba Medika, Jakarta.
Harborne  J.B.  1996  Metode  Fitokimia, Penuntun  Cara  Modern  Meanganalisis Tumbuhan,  Terbitan  ke-2.  ITB  Press, Bandung.
Julianti,  R.  2017.  Pengaruh  Ekstrak  Daun
Manggis ( Garcinia mangostana Linn.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia  coli sebagai
Pengayaan  Bahan  Ajar  Praktikum Mikrobologi, Artikel Ilmiah , Fakultas Keguruan  dan  Ilmu  Pendidikan, Universitas Jambi, Jambi.
Katzung.  2004. Farmakologi  Dasar  dan Klinik .Penerbit EGC, Jakarta.
Kowal,  A.,  Esther,  A.,  Nickson,  K., Kurniati,  K.,  Henky,  M.,  Deiske, H.  2018.  Potensi  Antibakteri Karang  Lunak Lobophytum sp. Dari  Perairan  Pangalisang  Pulau Bunaken Terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus  aureus . Platax .
6 (2) 54-57.
Lingga,  M.E.,  Rustama,  M.M.  2005.  Uji Aktivitas  Antibakteri  dari  Ekstrak Air dan Etanol Bawang Putih ( Allium sativum  L .)  terhadap  Bakteri  Gram
Negatif  dan  Gram  Positif  yang Diisolasi dari Udang Dogol
( Metapenaeus  monoceros ),  Udang Lobster  ( Panulirus sp)  dan  Udang Rebon  ( Mysis  dan  Acetes ). Jurnal Biotika . 5 (2).
Mustapa, S. 2011.  Uji Aktivitas Antibakteri
Ekstrak Etanol daun Manggis
Kuning  ( Garcinia  dulcis )  Terhadap Bakteri, Skripsi, Fakultas  Ilmu-Ilmu
Kesehatan dan Keolahragaan, Universitas Negeri Gorontalo, Gorontalo.
Sari,  F.N.G.  Turahman,  T.  2018.  Aktivitas Antibakteri Esktrak dan Fraksi Daun
Manggis ( Garcinia mangostana) Terhadap Staphylococcus aureus dan
Pseudomonas  aeruginosa,  Prosiding Seminar  Nasional  Unimus, 1( 4 )  : 255-260 .
Soekardjo,  B.,  Siswandono,  2000. Kimia Medisinal , Surabaya, UNAIR Press.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan. Putra Media Nusantara, Surabaya.
Wewengkang,  D.,  Deiske.  S.,  Hengki.  R.
2014.   Karakterisasi dan Bioaktif
Antibakteri Senyawa Spons haliclona sp.  dari  Teluk  Manado.
Jurnal  LPPM  Bidang  Sains  dan Teknologi . 1 (1).