## Original Article
Uji  Aktivitas  Antioksidan  dan  Penetapan  Kadar  Flavonoid Total  dan  Fenolik  Total  Ekstrak  Sidaguri  (Sida  rhombifolia L.)
Asma 1,2 ,  Abdul  Rohman 2,3 *,  Djoko  Santosa 4 ,  Mohamad  Rafi 5 ,  Nanik  Siti  Aminah 6 ,  Muhamad  Insanu 7 , Irnawati Irnawati 8
1 Master  in  Pharmaceutical  Sciences,  Fakultas  Farmasi,  Universitas  Gadjah  Mada,  Jl.  Sekip  Utara,  Sleman, Yogyakarta 55281, Indonesia; asma@mail.ugm.ac.id
2 Center of Excellence Institute for Halal Industry & System, Universitas Gadjah Mada, Indonesia
3 Departemen  Kimia,  Fakultas  Farmasi,  Universitas  Gadjah  Mada,  Jl.  Sekip  Utara,Sleman,  Yogyakarta  55281, Indonesia; abdulkimfar@gmail.com
4 Departemen Biologi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia
5 Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas IPB, Kampus IPB Dramaga, Bogor, Indonesia
6 Departemen Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Airlangga, Surabaya 60115, Indonesia
7 Kelompok Penelitian Farmasi Biologi, Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung, Indonesia.
8 Fakultas Farmasi, Universitas Halu Oleo, Kendari, Indonesia
*Corresponding author: |Email: abdulkimfar@gmail.com
Received: 29 June 2022; Revised: 17 July 2022; Accepted: 22 July 2022; Published: 31 August 2022

## Abstrak:
Sidaguri  atau  Sida  rhombifolia  L.  telah  digunakan  oleh  masyarakat  sebagai  obat  tradisional,  yaitu: penghilang rasa nyeri, radang, asam urat, penyakit kuning, muntah darah, dan sakit gigi. Sidaguri mengandung metabolit  sekunder  diantaranya  tanin,  flavonoid,  terpenoid,  saponin,  dan  alkaloid.  Senyawa  flavonoid  dan fenolik dalam ekstrak sidaguri memiliki aktivitas antioksidan. Faktor yang mempengaruhi produksi kandungan metabolit sekunder adalah kondisi lingkungan seperti tempat tumbuh, iklim, interaksi intra dan inter-spesifik serta waktu panen. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan serta kadar flavonoid dan fenolik  total  ekstrak  sidaguri  berdasarkan  tempat  tumbuh.  Sampel  diekstraksi  dengan  ultrasonic-assisted extraction (UAE) dan diuji penangkapan radikal bebas menggunakan metode 2,2’-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) dan  2,2’-azino-bis(3-diethyl4benzothiazoline-6-sulfonic  acid)  (ABTS),  serta  penetapan  kadar  flavonoid  total  dan kandungan  fenolik  total.  Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  sidaguri  dari  Cangkringan  dan  Ngemplak memiliki aktivitas antioksidan tertinggi pada metode penangkapan radikal DPPH dengan nilai IC 50 (0,400±0,004 dan 0,403±0,004 mg/mL), maupun metode ABTS dengan nilai TEAC (40,733±0,240 dan 35,598±0,153 mg/g serbuk sidaguri), dan kadar flavonoid total (10,095±0,068 dan 12,066±0,025 mg/g serbuk sidaguri) serta kadar fenolik total  (56,45±0,068  dan  31,502±0,025  mg/g  serbuk  sidaguri).  Hasil  penelitian  ini  dapat  mendukung  untuk pengembangan suplemen makanan yang dapat meningkatkan antioksidan dan mencegah penyakit degeneratif.
Kata Kunci :  Sidaguri (Sida rhombifolia L), antioksidan, flavonoid total, fenolik total

## 1. PENDAHULUAN
Indonesia  sebagai  negara  tropis  memiliki  keanekaragaman  hayati,  baik  berupa  tumbuhan, fungi,  hewan,  dan  mikroba.  Sejumlah  tidak  kurang  30.000  jenis  tumbuhan  diduga  tumbuh  di Indonesia. Sebanyak 3000 jenis tumbuhan telah digunakan secara luar oleh etnis di Indonesia dalam memelihara kesehatan, mengobati penyakit dan merawat kecantikan tubuh. Penggunaan tumbuhan untuk pengobatan dikenal sebagai obat tradisional. Dengan demikian etnis yang ada di Indonesia sudah memanfaatkan bahan tumbuhan sebagai obat secara turun temurun [1].
Sidaguri  atau  sida  rhombifolia  L.,  anggota  suku  Malvaceace  telah  digunakan  sebagai  obat tradisional. Jenis ini termasuk tumbuhan liar yang jarang dibudidayakan. Secara empiris tumbuhan ini  dimanfaatkan  oleh  masyarakat  untuk  menghilangkan  rasa  nyeri,  radang,  asam  urat,  penyakit kuning,  muntah  darah,  kecacingan,  dan  sakit  gigi  [2].  Penelitian  yang  dilakukan  sebelumnya menjelaskan  bahwa  sidaguri  mengandung    metabolit  sekunder  diantaranya  tanin,  flavonoid, terpenoid,  saponin,  dan  alkaloid  [3][4].  Senyawa  flavonoid  dan  fenolik  dalam  ekstrak  sidaguri memiliki  aktivitas  antioksidan  [5][6].  Bagian  tumbuhan  sidaguri  seperti  akar,  batang  dan  daun menunjukkan aktivitas antioksidan [7][8][6][9].
Kemampuan tumbuhan dalam menghasilkan metabolit sekunder dapat dipengaruhi oleh faktor lingkungan  seperti  tempat  tumbuh,  iklim,  interaksi  intra  dan  inter-spesifik  serta  waktu  panen [10],[11][12].  Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan  evaluasi  aktivitas  antioksidan  ekstrak  sidaguri berdasarkan tempat tumbuh yang berbeda. Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak sidaguri dapat dilakukan dengan metode penangkapan radikal bebas DPPH (1,1-diphenyl-2- picryhydrazil) dan ABTS (2,2’-azino-bis(3-ethylbenz-thiazoline-6-sulfonic  acid).  Metode  ini  termasuk  metode  cepat,  singkat  dan bersifat reproducible [13][14]. Uji aktivitas antioksidan terhadap sidaguri dengan metode DPPH dan ABTS  telah  dilakukan  oleh  banyak  peneliti.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas antioksidan serta kadar flavonoid dan fenolik total ekstrak sidaguri berdasarkan tempat tumbuh.

## 2. BAHAN DAN METODE

## 2.1 Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun  sidaguri  yang  diperoleh  dari Cangkringan, Ngemplak, Manisrenggo, Mungkid dan Imogiri.
2.1.1 Ekstraksi Sidaguri
Ekstraksi  simplisia  sidaguri  dilakukan  dengan  metode  Ultrasound  Assisted  Extraction  (UAE). Proses awal ekstraksi, ditimbang sebanyak 1 gram serbuk sidaguri, kemudian dimasukkan ke dalam gelas kimia 100 mL, ditambahkan pelarut metanol 42% hingga 25 mL. Campuran tersebut diekstraksi dengan UAE dengan frekuensi 50 Hz selama 5 menit. Kemudian didiamkan selama 24 jam disertai dengan penggojokan dan sesekali pengadukan. Campuran tersebut disaring dengan kertas saring. Larutan ekstrak yang diperoleh digunakan untuk pengujian aktivitas antioksidan, penetapan kadar flavonoid dan fenolik total.

## 2.2   Identifikasi Kelompok Senyawa dengan Kromatografi Lapis Tipis
Lempeng KLT silika gel 60 F 254 disiapkan dengan diberi garis batas dan jarak 1 cm pada bagian bawah  lempeng  dan  1  cm  dari  tepi  atas  lempeng  KLT  dengan  pensil.  Lempeng  KLT  kemudian diaktifkan  dalam  oven  pada  suhu  100  °C  selama  10  menit.    Fasa  gerak  tiap  kelompok  senyawa dibedakan berdasarkan golongannya, untuk golongan alkaloid digunakan campuran kloroform: etil asetat : metanol : asam format (4:2:3:0,5 v/v), flavonoid dengan campuran  kloroform : etil asetat :
metanol  :  asam  format  (8,5:2:1,5:0,25  v/v),  dan  fenolik  berupa  campuran  n-heksan  :  etil  asetat  : metanol (1:8:1 v/v). Setiap campuran fase gerak dijenuhkan selama 30 menit.
Masing-masing  ekstrak  sidaguri  yang  telah  dilarutkan  dengan  metanol  p.a.,  ditotolkan  pada lempeng  KLT  yang  telah  disiapkan,  kemudian  dielusi  dalam  bejana  yang  telah  dijenuhkan sebelumnya  dengan  masing-masing  fase  gerak.  Kemudian  masing-masing  eluen  dibiarkan bermigrasi hingga 8 cm dari awal penotolan. Selanjutnya lempeng KLT dikeluarkan dari bejana dan dikeringkan pada suhu ruang. Setelah lempeng KLT kering, deteksi  noda kromatogram dilakukan dengan  sinar  tampak,  UV  254  dan  366  nm,  dan  perekasi  penampak  noda  Dragendorff  (alkaloid), sitroborat (flavonoid) dan FeCl 3 untuk fenolik [15].

## 2.3 Uji Aktivitas Antioksidan

## 2.3.1 Uji aktivitas penangkapan radikal DPPH
Sampel  larutan  ekstrak  sidaguri  diambil  sebanyak  20;  40;  60;  80;  100;  120;  140  µL  (range konsentrasi) kemudian ditambahkan 1,0 mL DPPH 0,4 Mm dan metanol sampai 5 mL. Campuran tersebut dihomogenkan dengan vortex dan didiamkan pada suhu ruang dan tempat gelap selama 35 menit.  Disiapkan  larutan  kontrol  yang  terdiri  1,0  ml  DPPH  dan  4,0  mL  metanol.  Larutan  diukur serapannya pada panjang gelombang 515 nm terhadap blanko (sampel dan metanol) [16]. Prosedur yang  sama  dilakukan  pada  trolox  sebagai  kontrol  positif.  Persentase  penangkapan  radikal  bebas dihitung dengan rumus:
% penangkapan radikal bebas = Absorbans kontrol – absorbans  sampel Absorbans kontrol
x 100%

## 2.3.2 Uji aktivitas penangkapan radikal ABTS
Langkah pertama yang dilakukan yaitu pembuatan larutan ABTS 7 mM dengan cara: sebanyak 96,8  mg  ABTS  serbuk  dilarutkan  dengan  akuabides  hingga  25  mL,  selanjutnya  disiapkan  larutan kalium  persulfat  sebanyak  16,57  mg  dilarutkan  dengan  akuabides  hingga  25  mL.  Kedua  larutan tersebut dicampurkan sambil dihomogenkan dan simpan pada ruang gelap selama 16 jam. Disiapkan larutan ekstrak sidaguri dengan memipet sebanyak 100 µL, kemudian ditambahkan 500 µL ABTS (7 mM) dan metanol sampai 5 mL.  Selanjutnya larutan dihomogenisasi dengan vortex selama 1 menit, dan  diinkubasi  selama  7  menit  pada  suhu  ruang  dan  tempat  gelap.  Kemudian  disiapkan  larutan kontrol  yang  terdiri  500  µL  ABTS  (7  mM)  dan  metanol  sampai  5  mL.  Absorbansi  larutan  diukur menggunakan spektrofotometer-Vis pada panjang gelombang 745 nm terhadap blanko (sampel dan metanol) [16]. Kemudian, disiapkan larutan standar Trolox dengan konsentrasi 2,4,6, 8, 10, 12, dan 14 µg/mL dengan prosedur yang sama.

## 2.4 Penetapan Kadar Flavonoid Total
Pengukuran  kadar  flavonoid  total  dilakukan  berdasarkan  metode  Windyaswari,  dkk.  (2021) dengan sedikit modifikasi. Sampel sidaguri dimasukan kedalam labu ukur 10 mL sebanyak 300 µl, selanjutnya ditambahkan 3 mL metanol, 0,2 mL AlCl 3 10 %, 0,2 mL CH 3 COOK 1 M dan dicukupkan dengan aquabidestilata sampai tanda tera. Campuran dihomogenisasi dengan vortex selama 1 menit, kemudian didiamkan selama 30 menit pada suhu ruang.  Larutan diukur pada panjang gelombang maksimum  433  nm  terhadap  blanko  (reagen  dan  aquabidestilata).    Kuarsetin  dibuat  dengan konsentrasi 2, 4, 6, 8, 10, 12, dan 14 µg/mL sebagai kurva kalibrasi standar.

## 2.5 Penetapan Kadar Fenolik Total
Pengukuran  kadar  fenolik  total  mengacu  pada  metode  yang  dilakukan  Ikhtiarini,  dkk.  (2021) dengan  sedikit  modifikasi.  Pengukuran  sampel  sidaguri  dilakukan  dengan  pemipetan  larutan ekstrak sidaguri sebanyak 100 µl, kemudian dimasukkan dalam labu ukur 10 mL. larutan sampel ditambahkan  0,4  mL  reagen  Folin-Ciocalteu.  Campuran  digojok  dan  didiamkan  selama  5  menit. Selanjutnya  larutan  ditambahkan  4  mL  larutan  Na 2 CO 3 7%,  kemudian  digojok  dan  dicukupkan dengan aquabidestilata sampai tanda tera. Larutan tersebut diukur pada panjang gelombang 739 nm terhadap blanko (reagen dan aquabidestilata). Dilakukan pengukuran kurva baku standar asam galat dengan konsentrasi 2, 4, 6, 8, 10, 12, dan 14 µg/mL pada prosedur yang sama.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi  untuk  setiap  sampel  dilakukan  dengan  pelarut  metanol  42%.  Pengerjaan  ekstraksi dibantu dengan Ultrasound Assisted Extraction (UAE) selama 5 menit pada suhu 45,45 °C, kemudian didiamkan selama 24 jam dan sesekali diaduk dan disaring. Metode UAE dipilih karena pelarut yang digunakan  lebih  sedikit,  cepat  dan  biayanya  lebih  murah  dibandingkan  metode  supercritical  fluid extraction  dan  Pressurized  Lliquid  Extraction.  Larutan  ekstrak  yang  diperoleh  berwarna  cokelat digunakan untuk pengujian aktivitas antioksidan, penetapan kadar flavonoid total dan fenolik total.
Metode  KLT  digunakan  untuk  identifikasi  golongan  metabolit  sekunder  ekstrak  sidaguri dengan mengamati warna bercak yang timbul dibandingkan dengan standar.  Eluen dipilih sebagai eluen  terbaik  karena  memiliki  nilai  hRf  yang  baik  daripada  yang  lain.  Pereaksi  penampak  bercak yang  digunakan  adalah  pereaksi  semprot  Dragendorff,  sitroborat  dan  FeCl 3 .  Hasil  identifikasi alkaloid, flavonoid dan fenolik dengan KLT dapat dilihat pada Gambar. 1 berikut.
Gambar 1. Hasil identifikasi senyawa metaboli sekunder A (Alkaloid), B (Flavonoid), C (Fenolik). A (Cangkringan), B (Ngemplak), C (Manisrenggo), D (Mungkid) E (Imogiri), F (Kuersetin)
Tabel  1.  Hasil  Kromatogram  sampel  ekstrak  sidaguri.  A  (Cangkringan),  B  (Ngemplak),  C (Manisrenggo), D (Mungkid), E (Imogiri), P (Kuersetin)
A B
C Sampel Golongan senyawa hRf hRx Ekstrak sidaguri (A, B, C, D, E) Alkaloid 12,5 - Ekstrak sidaguri (A, B, C, D, E,) P Flavonoid 1 : 12,5 2 : 28,8 3 : 71,3 1 : 40,25 2 : 17,5 Ekstrak sidaguri (A, B, C, D, E) Fenolik 27,5 -
12,5 71,3 3 28,8 12,5 27,5
Analisis KLT fase gerak yang digunakan untuk mendeteksi golongan senyawa alkaloid dalam ekstrak  sidaguri  dari  tempat  tumbuh  menggunakan  eluen  kloroform:  etil  asetat:  metanol:  asam format (4:2:3:0,5). Semua ekstrak sidaguri menunjukkan pemisahan yang baik pada plat KLT. Hasil profil  KLT  ekstrak  sidaguri  yang  berasal  dari  tempat  tumbuh  menunjukkan  hasil  yang  mirip. Perbedaan yang terlihat berupa intensitas warna yang dihasilkan dari tiap ekstrak setelah disemprot dengan perekasi Dragendorff. Setelah plat disemprot dengan pereaksi Dragendorff terdapat bercak berwarna  jingga  yang  dapat  dilihat  secara  visual.  Bercak  berwarna  jingga  tersebut  menandakan senyawa  golongan  alkaloid  [17].  Dilihat  dari  bercak  yang  dihasilkan  berbentuk  bulat  dan  bentuk pemisahannya jelas dengan nilai hRf 12,5.
Analisis senyawa flavonoid untuk semua ekstrak sidaguri menggunakan fase gerak kloroform: etil asetat: metanol: asam format (8,5:2:1,5:0,25) dan penampak bercak sitroborat. Hasil pemisahan senyawa flavonoid ditunjukkan pada Gambar 1. Berdasarkan hasil KLT ekstrak sidaguri dan standar kuersetin  setelah  disemprot  dengan  sitroborat  terlihat  adanya  bercak  berwarna  kuning  cokelat, bercak tersebut juga berflouresensi kuning pada UV 366. Adanya warna kuning yang berfuloresensi maka  ekstrak  tersebut  positif  mengandung  flavonoid  [18].  Hasil  analisis  di  bawah  sinar  UV  366 bercak kuersetin memiliki hRf 71,3. Ekstrak sidaguri dari Cangkringan, Ngemplak, Manisrenggo, dan Mungkid mengandung kuersetin. Selain itu, terdapat flavonoid dengan dibuktikan hRx 40,25 (bercak berwarna  kuning  kehijauan),  hRx  17,5  terdapat  pada  sampel  dari  Cangkrimgan,  Ngemplak, Manisrenggo, dan Mungkid.
Identifikasi  senyawa  fenolik  dengan  uji  KLT  menggunakan  fase  gerak  n-heksan:  etil  asetat: metanol  (1:8:1) dan  penampak  bercak  FeCl 3 .  Adanya  senyawa  fenolik  ditunjukkan  dengan  bercak berwarna  hitam [19]. Hasil pemisahan senyawa fenolik ekstrak sidaguri yang  berasal dari tempat tumbuh yang berbeda dapat dilihat pada Gambar 1. Hasil analisis kromatografi lapis tipis ekstrak sidaguri  menunjukan  bercak  hitam  setelah  disemprot  FeCl 3 dengan  nilai  hRf   27,5.  Semua  sampel baik sidaguri mengandung senyawa fenolik. Intensitas warna bercak warna hitam sangat tegas pada sampel dari Cangkringan, Ngemplak dan Manisrenggo.
Uji aktivitas antioksidan ekstrak metanol sidaguri dilakukan dengan metode DPPH atau ABTS. Mekanisme kedua metode tersebut cukup mirip, senyawa antioksidan pada ekstrak sidaguri akan mendonorkan atom hidrogennya kepada radikal DPPH dan ABTS, sehingga radikal tersebut menjadi stabil. Aktivitas antioksidan ekstrak sidaguri dihitung berdasarkan kemampuan sampel yang dapat menghambat 50% radikal bebas DPPH dan ABTS. Larutan pembanding yang digunakan pada uji aktivitas penangkapan radikal DPPH yaitu Trolox, memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan nilai IC 50 0,011±0,001 mg/mL. Hasil pengukuran aktivitas antioksidan ekstrak sidaguri yang berasal dari tempat tumbuh dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Aktivitas antioksidan ekstrak sidaguri yang berasal dari tempat tumbuh
Sampel DPPH IC50 ± SD (mg/ml) ABTS TEAC ± SD (mg/g serbuk sidaguri) Cangkringan 0,400±0,004 40,733±0,240 Ngemplak 0,403±0,004 35,598±0,153 Manisrenggo 0,455±0,001 27,989±0,171 Mungkid 0,474±0,002 27,006±0,106 Imogiri 0,662±0,003 18,172±0,268
Berdasarkan hasil analisis aktivitas penangkapan radikal DPPH ekstrak sidaguri menunjukkan aktivitas penangkapan radikal yang baik ditemukan pada ekstrak tempat tumbuh (Cangkringan dan Ngemplak)  memiliki  IC 50 masing-masing  sebesar  0,400±0,004  dan  403±0,004  mg/mL.  Hal  ini dikarenakan kondisi lingkungan seperti variasi ketinggian tempat tumbuh, suhu lokasi dan interaksi antar  tanaman  atau  bersaing  dengan  tanaman  lain  (alelopati)  yang  mampu  menginduksi pembentukan senyawa tertentu sebagai respon pertahanan tanaman [20].
Penentuan hasil aktivitas penangkapan radikal ABTS adalah sebagai kapasitas ekuivalen trolox (TEAC)  dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Hasil  aktivitas  dalam  penelitian  ini,  ekstrak  sidaguri  dari Cangkirngan menunjukkan tingkat kapasitas antioksidan yang tertinggi dengan nilai TEAC sebesar 40,733±0,240 mg/g serbuk sidaguri. Pada tabel 2 tersebut, juga menunjukkan aktivitas antioksidan berdasarkan metode DPPH berbanding lurus dengan metode ABTS. Hasil uji statistik menggunakan one-way  anova  dan  uji  lanjut  Tukey  pada  taraf  kepercayaan  95%  menunjukkan  bahwa  kapasitas antioksidan  ekuivalen  trolox  (TEAC)  ekstrak  sidaguri  dari  tempat  tumbuh  berbeda  signifikan  (p< 0,05).
Penentuaan  kadar  senyawa  flavonoid  total  pada  sampel  dinyatakan  dalam  satuan  miligram ekuivalen  kuersetin  per-gram  serbuk  simplisia  sidaguri.  Hasil  perhitungan  kandungan  total flavonoid seperti terlihat pada Gambar 2.

## Gambar 2. Kandungan flavonoid total ekstrak sidaguri dari tempat tumbuh dinyatakan sebagai rata-
rata mg/g serbuk simplisia
Berdasarkan Gambar 2, kandungan flavonoid total masing-masing ekstrak sidaguri dari tempat tumbuh memberikan hasil yang berbeda. Kadar flavonoid tertinggi terdapat pada ekstrak sidaguri dari Ngemplak sebesar 12,066±0,025 mg/g serbuk sidaguri. Lokasi tempat tumbuh sidaguri di daerah Ngemplak  demikian  pula  di  daerah  Cangkringan  merupakan  wilayah  terbuka  (bareland).  Dengan demikian kedua wilayah tersebut memiliki suhu rata-rata harian antara 23-34 o C. Sedangkan suhu pada  wilayah  manisrenggo,  mungkid,  dan  imogiri  memiliki  suhu  rata-rata  harian  28-30 o C.  Suhu yang tinggi akan menghasilkan total flavonoid yang lebih tinggi sebagai respon pertahanan terhadap cekaman  pada  lingkungan  [21].  kadar  flavonoid  total  tertinggi  terdapat  pada  lokasi  dengan  suhu yang lebih panas [22] dan sebagian besar produksi senyawa flavonoid pada tumbuhan memerlukan intensitas sinar matahari yang tinggi [23]. Berdasarkan uji statistik menggunakan one-way anova dan uji lanjut Tukey pada taraf kepercayaan 95% ekstrak sidaguri dari tempat tumbuh berbeda seginikan (p< 0,05).
Koefisien  korelasi  untuk  kadar  flavonoid  total  dengan  uji  penangkapan  radikal  ABTS ditunjukkan pada Gambar 3.  Kadar flavonoid total berkorelasi kuat antara kadar flavonoid total dan
10.095 12.066 5.932 9.861 6.093 0 2 4 6 8 10 12 14 Cangkringan Ngemplak Manisrenggo Mungkid Imogiri
aktivitas  pengangkapan  radikal  ABTS  (R 2 0,8937).  Penelitian  lain  menjelaskan  bahwa  terdapat korelasi kuat antara kadar flavonoid total pada produk sampingan (tepung, makanan, dan menir) terhadap aktivitas dalam menangkap radikal ABTS (R 2 0,9477) [24].
Gambar  3.  Grafik hubungan kadar flavonoid total dan aktivitas antioksidan metode ABTS  pada beberapa jenis ekstrak sidaguri dengan nilai R 2 : 0,8937
Penentuan  kandungan  total  fenol  dilakukan  menggunakan  pereaksi  Folin-Ciocalteau.  Larutan standar yang digunakan adalah asam galat yang merupakan salah satu fenolik alami. Asam galat direaksikan dengan reagen Folin-Ciocalteau menghasilkan warna kuning yang menandakan bahwa mengandung  senyawa  fenolik,  kemudian  ditambahkan  dengan  larutan  natrium  karbonat membentuk  senyawa  kompleks  berwarna  biru.  Warna  biru  yang  dihasilkan  menjadi  lebih  pekat seiring  dengan  peningkatan  konsentrasi  senyawa  fenolik  [25].  Kandungan  fenolik  total  ekstrak sidaguri  yang  dihasilkan  dapat  dilihat  pada  Gambar  4.  Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  kadar fenolik  total  tertinggi  terdapat  pada  ekstrak  sidaguri  dari  Cangkringan  dengan  nilai  sebesar 56,450±0,068 mg/g serbuk simplisia sidaguri. Lokasi tempat tumbuh sidaguri di daerah Cangkringan memiliki  suhu  rata-rata  harian  antara  23-33 o C.  Suhu  yang  tinggi  akan  memberikan  produksi metabolit sekunder yang lebih tinggi sebagai respon pertahanan tanaman terhadap lingkungan [26]. Berdasarkan analisis statistik one-way anova kadar fenolik total ekstrak sidaguri dari tempat tumbuh terdapat  perbedaan  yang  signifikan  (<0,05).  Data  aktivitas  antioksidan  dengan  uji  penangkapan radikal ABTS dikorelasikan dengan kadar fenolik total Gambar 5, menunjukkan ada korelasi positif antara  kadar  fenolik  total  ekstrak  sidaguri  dengan  penangkapan  radikal  ABTS,  dengan  nilai  R² sebesar 0,9091.
Gambar 4. Kandungan Fenolik total ekstrak sidaguri dari tempat tumbuh dinyatakan sebagai rata- rata mg/g serbuk simplisia
R² = 0.8937 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 0 5 10 15 A B T S ( T E A C m g /g s er b u k
sid ag u ri)
TFC (mg QE/g serbuk sidaguri)
56.45 31.502 28.628 26.415 14.115 0 10 20 30 40 50 60 Cangkringan Ngemplak Manisrenggo Mungkid Imogiri
Gambar  5.  Grafik  hubungan  kadar  fenolik  total  dan  aktivitas  antioksidan  metode  ABTS  pada beberapa jenis ekstrak sidaguri dengan nilai R 2 : 0,9091

## 4. KESIMPULAN
Ekstrak  sidaguri  dari  wilayah  Cangkringan  dan  Ngemplak  memiliki  aktivitas  antioksidan tertinggi  pada  metode  penangkapan  radikal  DPPH  dengan  nilai  IC 50 masing-masing  sebesar 0,400±0,004  dan  0,403±0,004  mg/mL,  metode  ABTS  dengan  nilai  TEAC  masing-masing  sebesar 40,733±0,240 dan 35,598±0,153 mg/g serbuk sidaguri, memiliki kadar flavonoid total masing-masing sebesar 10,095±0,068 dan 12,066±0,025 mg/g serbuk sidaguri dan kadar fenolik total masing-masing sebesar 56,45±0,068 dan 31,502±0,025 mg/g serbuk sidaguri.  Ekstrak sidaguri memiliki potensi untuk dikembangan  sebagai  suplemen  makanan  yang  dapat  meningkatkan  antioksidan  dan  mencegah penyakit degeneratif yang disebabkan oleh radikal bebas.

## Referensi
[1] L. S. E. Putri dkk., “Ethnobotanical study of herbal medicine in Ranggawulung Urban Forest, Subang  District,  West  Java,  Indonesia,”  Biodiversitas,  vol.  17,  no.  1,  hlm.  172–176,  2016,  doi: 10.13057/biodiv/d170125.
[2] A.  N.  Rohman  A,  Ikhtiarini  AN,  Setyaningsih  W,  Rafi  M  dan  I.  W.  A.  Insanu  M,  “Sida Rhombifolia Linn: Phytochemicals Composition and Biological Activities,” Int J Pharm Res, vol. 12, no. 2950, 2020.
[3] O. S. Chaves dkk., “Alkaloids and phenolic compounds from Sida rhombifolia L. (Malvaceae) and vasorelaxant activity of two indoquinoline alkaloids,” Molecules, vol. 22, no. 1, hlm. 22–94, 2017, doi: 10.3390/molecules22010094.
[4] M.  E.  Bassey,  I.  I.  Johnny,  O.  T.  Umoh,  dan  U.-I.  M.  George,  “Comparative  Phytochemical Analysis  of  the  Leaves  and  Stem  of  Five  Species  of  Sida  L.,”  Journal  of  Complementary  and Alternative Medical Research, vol. 14, no. 3, hlm. 26–31, 2021, doi: 10.9734/jocamr/2021/v14i330247.
[5] S. H. Mah, S. S. Teh, G. Cheng, dan L. Ee, “Anti-inflammatory, anti-cholinergic and cytotoxic effects of Sida rhombifolia,” Pharmaceutical Biology, vol. 55, no. 1388–0209, hlm. 920–928, 2017, doi: 10.1080/13880209.2017.1285322.
[6] D.  M.  Ferro,  S.  Mazzutti,  L.  Vitali,  C.  M.  Oliveira  Müller,  dan  S.  R.  S.  Ferreira,  “Integrated extraction approach to increase the recovery of antioxidant compounds from Sida rhombifolia
R² = 0.9091
0 10 20 30 40 50 0 10 20 30 40 50 60 A B T S ( T E A C m g /g s er b u k
sid ag u ri)
Fenolik total (mg/g serbuk sidaguri)
leaves,” Journal of Supercritical Fluids, vol. 149, hlm. 10–19, 2019, doi: 10.1016/j.supflu.2019.03.013.
[7] K. Dhalwal, Y. S. Deshpande, dan A. P. Purohit, “Evaluation of in vitro antioxidant activity of Sida rhombifolia (L.) Ssp. retusa (L.),” Journal of Medicinal Food, vol. 10, no. 4, hlm. 683–688, 2007, doi: 10.1089/jmf.2006.129.
[8] R. T. Narendhirakannan dan T. P. Limmy, “In vitro antioxidant studies on ethanolic extracts of leaf, stem and root of Sida rhombifolia L.,” International Journal of Pharma and Bio Sciences, vol. 1, no. 2, 2010.
[9] Ikhtiarini  A.N.,  W.  Setyaningsih,  M.  Rafi,  N.  S.  Aminah,  M.  Insanu,  dan  I.  Irnawati, “Optimization of ultrasound-assisted extraction and the antioxidant activities of Sidaguri (Sida rhombifolia),” vol. 11, no. 08, hlm. 70–76, 2021, doi: 10.7324/JAPS.2021.110810.
[10]  H. Naghdi Badi, D. Yazdani, S. M. Ali, dan F. Nazari, “Effects of spacing and harvesting time on herbage yield and quality/quantity of oil in thyme, Thymus vulgaris L.,” Industrial Crops and Products, vol. 19, no. 3, hlm. 231–236, 2004, doi: 10.1016/j.indcrop.2003.10.005.
[11]  F.  Rodrigues,  “Composition  of  the  leaf,  flower  and  fruit  volatile  oils  of  Pittosporum  tobira (Thunb.) WT Aiton grown in three locations in Portugal,” Flavour And Fragrance, vol. 28, hlm. 213–226, 2007, doi: 10.1002/ffj.
[12]  H.  Skálová,  V.  Jarošík,  Š.  Dvořáčková,  dan  P.  Pyšek,  “Effect  of  Intra-  and  Interspecific Competition on the Performance of Native and Invasive Species of Impatiens under Varying Levels of Shade and Moisture,” PLoS One, vol. 8, no. 5, 2013, doi: 10.1371/journal.pone.0062842.
[13]  W. Brand-Williams, M. E. Cuvelier, dan C. Berset, “Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity,” LWT  - Food Science and Technology, vol. 28, no. 1, hlm. 25–30, 1995, doi: 10.1016/S0023-6438(95)80008-5.
[14]  P.  Molyneux,  “The  Use  of  the  Stable  Free  Radical  Diphenylpicryl-hydrazyl  (DPPH)  for Estimating Antioxidant Activity,” Songklanakarin Journal of Science and Technology, vol. 26, no. December 2003, hlm. 211–219, 2004, doi: 10.1287/isre.6.2.144.
[15]  A. S. Windyaswari dkk., “Phytochemical profile of sea grass extract (Enhalus acoroides): A new marine  source  from  Ekas  Bay,  East  Lombok,”  IOP  Conference  Series:  Earth  and  Environmental Science, vol. 278, no. 1, 2019, doi: 10.1088/1755-1315/278/1/012081.
[16]  A. Akbar, N. H. Soekamto, Firdaus, dan Bahrun, “Antioxidant of n-hexane, ethyl acetate and methanol  extracts  of  Padina  sp  with  DPPH  method,”  IOP  Conference  Series:  Earth  and Environmental Science, vol. 800, no. 1, 2020, doi: 10.1088/1755-1315/800/1/012019.
[17]  H.  Kristanti  dan  W.  A.  S.  Tunjung,  “DETECTION  OF  ALKALOID,  FLAVONOID,  AND TERPENOID  COMPOUNDS  IN  BREAD  (Artocarpus  communis  Forst.)  LEAVES  AND PULPS,” KnE Life Sciences, vol. 2, no. 1, hlm. 129, 2015, doi: 10.18502/kls.v2i1.131.
[18]  E. D. Pratiwi dan N. P. Dewi, “Screening of Phytochemical Secondary Metabolites of Muntingia Calabura:  a  Potential  as  Hepatoprotector,”  Journal  of  Fundamental  and  Applied  Pharmaceutical Science, vol. 2, no. 2, hlm. 59–65, 2022, doi: 10.18196/jfaps.v2i2.12364.
[19]  M. Musdalipah, S. A. Tee, K. Karmilah, S. Sahidin, A. Fristiohady, dan A. W. M. Yodha, “Total Phenolic  and  Flavonoid  Content,  Antioxidant,  and  Toxicity  Test  with  BSLT  of  Meistera chinensis Fruit Fraction from Southeast Sulawesi,” Borneo Journal of Pharmacy, vol. 4, no. 1, hlm. 6–15, 2021, doi: 10.33084/bjop.v4i1.1686.
[20]  S.  Darmanti,  “Review :  Interaksi  Alelopati  dan  Senyawa  Alelokimia :  Potensinya  Sebagai Bioherbisida,”  Buletin  Anatomi  dan  Fisiologi,  vol.  3,  no.  2,  hlm.  181–187,  2018,  doi: 10.14710/baf.3.2.2018.181-187.
[21]  M. Shamloo, E. A. Babawale, A. Furtado, R. J. Henry, P. K. Eck, dan P. J. H. Jones, “Effects of genotype and temperature on accumulation of plant secondary metabolites in Canadian and Australian wheat grown under controlled environments,” Scientific Reports, vol. 7, no. 1, hlm. 1–13, 2017, doi: 10.1038/s41598-017-09681-5.
[22]  D. S. Utomo, E. B. E. Kristiani, dan A. Mahardika, “Pengaruh Lokasi Tumbuh Terhadap Kadar Flavonoid,  Fenolik,  Klorofil,  Karotenoid  Dan  Aktivitas  Antioksidan  Pada  Tumbuhan  Pecut Kuda (Stachytarpheta Jamaicensis),” Bioma, vol. 22, no. 2, hlm. 143–149, 2020.
[23]  F.  B.  dan  C.  W.  R.  Salisbury,  Fisiologi  Tumbuhan  jilid  III,  Jilid  3.  Bandung:  Institut  Teknologi Bandung, 1995.
[24]  M. M. I. C. Marinas, I. E. Susman, dan N. B. 1, “Byproducts (Flour, Meals, and Groats) from the Vegetable Oil Industry as a Potential Source of Antioxidants,” Foods, vol. 11, hlm. 253, 2022.
[25]  N. S. M. Razali, B. Wenyin, R. D. Arjunan, H. Hashim, dan A. Abdullah, “Total phenolic content and antioxidant activities of date fruit extracts,” Malaysian Applied Biology, vol. 48, no. 2, hlm. 103–108, 2019.
[26]  A.  M.  Shohael,  M.  B.  Ali,  K.  W.  Yu,  E.  J.  Hahn,  dan  K.  Y.  Paek,  “Effect  of  temperature  on secondary  metabolites  production  and  antioxidant  enzyme  activities  in  Eleutherococcus senticosus somatic embryos,” Plant Cell, Tissue and Organ Culture, vol. 85, no. 2, hlm. 219–228, 2006, doi: 10.1007/s11240-005-9075-x.
© 2022 by the authors. Submitted for possible open access publication under the terms  and  conditions  of  the  Creative  Commons  Attribution  (CC  BY)  license (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).