## EKSTRAKSI LIKOPEN DARI BUAH TOMAT ( LYCOPERSICUM ESCULENTUM MILL. ) DENGAN BERBAGAI KOMPOSISI PELARUT (LYCOPENE EXTRACTION FROM TOMATOES (LYCOPERSICUM ESCULENTUM MILL.) IN VARIOUS OF SOLVENT MIXTURE)
Arifulloh, Ika Oktavianawati,  I Nyoman Adi Winata Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Jember (UNEJ) Jln. Kalimantan 37, Jember 68121 E-mail : oktavianawati @unej.ac.id

## Abstrak
Likopen merupakan pigmen jingga hingga merah pada buah dan sayur. Buah tomat merupakan sumber utama likopen. Likopen   merupakan   salah   satu   antioksidan   yang   paling   penting   diantara   senyawa   karotenoid   lainnya.   Penenelitian   ini bertujuan untuk melakukan optimasi pelarut campuran ekstraksi pada ekstraksi likopen dari buah tomat. Ekstraksi likopen menggunakan metode maserasi dengan beberapa komposisi pelarut campuran, yaitu n-heksana:aseton:metanol (1:2:1; 1:1:1; 2:1:1)   dan   petroleum   eter:aseton   (3:1).   Ekstrak   yang   dihasilkan   dievaporasi   menggunakan rotary   evaporator untuk memperoleh   ekstrak   kasar   likopen.   Ekstrak   kasar   likopen   tersebut   kemudian   dipisahkan   dengan   kromatografi   kolom gravitasi dan di analisis menggunakan spektofotometer visibel. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pelarut campuran n- heksana:aceton:methanol dengan komposisi 1:2:1 mampu mengekstrak likopen paling optimum diantara pelarut campuran lainnya.
Kata Kunci: Ekstraksi, likopen, pelarut campuran, spektrofotometer, tomat.

## Abstract
Lycopene is an orange to red pigment which presents in fruit and vegetable. Lycopene, the predominant carotenoid in tomatoes, is one of the most potent antioxidants among dietary carotenoids. This study has main aims t optimize the solvent mixture extraction of lycopene from tomatoes fruit. Lycopene extraction using maseration methode using solvents mixtures extraction n-hexane:acetone:methanol (1:2:1; 1:1:1; 2:1:1) and petroleum ether:acetone (3:1). The extract obtained were evaporated   using   rotary   evaporator   to   get   crude   extract.   Then   the   crude   extract   was   separated   using   column chromatography gravity and analyzed using spectrophotometer. The result show that the most optimum solvent mixtures extraction is n-heksana:aceton:methanol (1:2:1).
Keywords: Extraction, lycopene, solvent mixture, spectrophotometer, tomatoes.

## PENDAHULUAN
Likopen   merupakan   pigmen   jingga   hingga   merah pada   buah   dan   sayuran.   Likopen   merupakan   suatu hidrokarbon poliena dengan rantai asiklik terbuka tak jenuh, mempunyai   13   ikatan   rangkap,   11   diantaranya   ikatan rangkap   terkonjugasi   yang   tersusun   linier.   Keberadaan ikatan   rangkap   terkonjugasi,   menjadikan   likopen   sebagai antioksidan yang baik [1].
Buah   tomat   mentah   dan   olahan   tomat   merupakan sumber likopen paling banyak. Sehingga banyak penelitian likopen fokus pada buah tomat dan olahannya. Kandungan likopen banyak  terdapat  pada bagian  daging buah tomat. Berdasarkan   biosintesisnya,   likopen   terbentuk   melalui siklus  asam   mevalonat   yang  terjadi  di   dalam   sitosol  dan deoksisilolusa phosfat yang terjadi di dalam kloroplas dan kromoplas[2].
Metode   Ekstraksi   merupakan   metode   yang   cocok untuk   mengambil   likopen   dalam   buah   tomat.   Pelarut
ekstraksi   merupakan   faktor   penting   yang   menentukan keberhasilan proses ektraksi.
Pemilihan   pelarut   ekstraksi   bergantung   pada keadaan   sampel  dan   komposisi   karotenoid.  Karoten   larut pada pelarut nonpolar seperti heksana dan toluen sedangkan xanthofil larut pada pelarut polar seperti etanol dan piridin. Jika   kisaran   kepolaran   karotenoid   dalam   sampel   sangat lebar, maka cara ekstraksinya memerlukan lebih dari satu jenis   pelarut,   sehingga   digunakan   pelarut   campuran, misalnya aseton-metanol [3].
Rujukan [4] m engekstrak likopen dari buah tomat dengan   metoda   ekstraksi   cair–cair   menggunakan   pelarut campuran   n–heksana-aseton-etanol   perbandingan   2:1:1. Pada prosedur isolasi karotenoid di dalam  [3]  buah tomat diekstrak   dengan   aseton   dan   methanol   (7:3).   Metode ekstraksi   yang   digunakan   pada   sampel   tersebut   adalah maserasi.
Berdasarkan   studi   literatur   yang   telah   dilakukan penggunaan   pelarut   campuran   n-heksana-aseton-metanol untuk   mengekstrak   likopen   belum   pernah   diteliti sebelumnya,   melalui   perbandingan   yang   optimum   pada
pelarut campuran tersebut diharapkan partisi akan menjadi lebih   sempurna,   likopen   dan   sebagian   kecil   karotenoid hidrokarbon lainnya akan terekstrak ke dalam pelarut non polar (n-heksana-aseton)  sedangkan  senyawa  xanthin dan senyawa   polar   lainnya   akan   terekstrak   ke   dalam   pelarut polar (metanol).
Penelitian   ini   bertujuan   untuk   menentukan perbandingan   komposisi   pelarut   campuran   optimal   pada ekstraksi   likopen   dari   buah   tomat   ( Lycopersicum esculentum Mill.).

## METODE PENELITIAN
1. Bahan dan Alat Bahan yang digunakan adalah buah tomat, metanol, aseton, n-heksana, petroleum eter (PE), plat KLT silika gel 60 dan aquades.
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah rotary   evaporator,   beaker   glass,   Erlenmeyer,   gelas   ukur, pipet   mohr,   pipet   tetes,   corong   pisah,   pengaduk,   gelas chamber dan spektrofotometer UV-Vis (UV).
2. Ekstraksi Likopen
Sebanyak   1   kg   buah   tomat   di   blender,   kemudian dimasukkan  kedalam   gelas  beaker   500  mL.  ditambahkan 150 mL methanol dan diaduk selama 5 menit. Setelah itu, campuran  disaring,  endapan   dengan  kuantitas  yang   sama dimasukkan ke dalam empat  erlenmeyer 1000 mL bertutup yang   dilapisi   dengan   kertas   karbon   pada   bagian   luar. Ditambahkan   campuran   pelarut   n-heksana,   aseton,   dan metanol   dengan   perbandingan   berturut-turut   2:1:1;   1:2:1; dan 1:1:1 ,serta PE-aseton (3:1) (pelarut:bahan adalah 5:1), kemudian di shaker dengan kecepatan 150 rpm selama 30 menit.   Campuran   dipindahkan   ke   dalam   corong   pisah, ditambahkan 10 mL aquades, dikocok kembali kemudian didiamkan   sampai   terbentuk   dua   fase.   Lapisan   atas   (non polar) diambil dan diuapkan menggunakan rotary rotavapor. Ekstrak pekat hasil rotavapor dimasukkan ke dalam botol kaca dan diukur volumenya. Beberapa mL ekstrak tersebut diuji   dengan   KLT   dan   sisanya   dilewatkan   dalam   kolom kromatografi.
3. Optimasi Eluen dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Ekstrak   kasar   likopen   ditotolkan   pada   plat   KLT silika gel 60 ukuran 3x10 cm yang sudah di plot dengan pensil (dan tangan tidak menyentuh permukaan plat yang mengandung silica gel). Jarak plot sampel satu dengan yang lainnya   adalah   0,5   cm.   Sampel   yang   sudah   ditotolkan dikering   anginkan.   Lalu,   di   masukkan   ke   dalam   wadah pengembang yang berisi eluen petroleum eter-aseton (8:2 v/v).   Dibiarkan   noda   mengembang   sampai   eluen   berada pada batas yang sudah di garisi dengan pensil. Kemudian diambil dan dikering anginkan dan di lihat spotnya dibawah sinar UV dan hitung Rfnya. Dilakukan hal yang sama untuk eluen PE, n-heksana, dan n-heksana-PE (2:1 v/v).
4. Isolasi Likopen
Ekstrak   pekat   likopen   dilewatkan   dalam   kolom kromatografi yang didalamnya terdapat fase diam silica gel 60   dan   eluen   optimum   yaitu   campuran   n-heksana-PE
perbandingan   2:1.   Fraksi   dengan   warna   pita   berbeda ditampung dalam wadah yang berbeda.
5. Analisis Likopen dengan Spektofotometer Visibel Masing-masing  fraksi  dilakukan  scanning  panjang gelombang dari 400-700 nm dengan blangko mengunakan petroleum eter.

## HASIL PENELITIAN

## 1. Hasil analisa KLT Crude Likopen
Crude   likopen   hasil   ekstraksi   sebelum   diisolasi dengan   kromatografi   kolom   gravitasi   dilakukan   analisis menggunakan KLT. Tujuan KLT adalah untuk menentukan eluen   yang   cocok   pada   kromatografi   kolom   pada   isolasi likopen. KLT crude likopen dapat dilihat pada gambar 1.
(a) (b) (c) (d)
Gambar 1. Hasil   KLT   ekstrak   kasar   likopen   dengan beberapa   jenis   eluen   (a)   PE:Aseton(8:2),   (b) PE,   (c)   n-Heksana,   (d)   n-Heksana:PE(2:1)   : pelarut ekstraksi (1) n-heksana-aseton-metanol (2:1:1),   (2)   n-heksana-aseton-metanol   (1:2:1),
(3) n-heksana-aseton-metanol  (1:1:1), (4)  PE- metanol (3:1).
Data Rf crude likopen pada beberapa variasi eluen KLT dapat dilihat pada Tabel 1. Dari data Rf tersebut, eluen n-heksana:PE   (2:1)   merupakan   eluen   optimum.   Hal   ini disebabkan   eluen   tersebut   mampu   menghasilkan   3   spot dengan Rf yang lebih besar.  Sehingga apabila digunakan pada   kromatografi   kolom   maka   proses   keluarnya   fraksi (spot) lebih cepat.
Tabel 1 . Data Rf crude likopen pada beberapa eluen KLT
Eluen Rf 1 Rf 2 Rf 3 PE-Aseton (8:2) 0,34 0,96 - PE 0 0,68 - n-Heksana 0 0,62 0,79 N-Heksana-PE (2:1) 0 0,22 0,53
Rf = 0 menunjukkan bahwa totolan sampel tak bergerak ke atas, tetap pada posisi semula.
Arifulloh et al., Ekstraksi Likopen.....
2. Isolasi Likopen
Eluen optimum hasil KLT digunakan sebagai eluen pada   kromatografi   kolom.   Pemisahan   menggunakan kromatografi  kolom gravitasi  didasarkan pada warna  tiap fraksi yang terpisah di dalam kolom. Warna yang berbeda ditampung   pada   wadah   yang   berbeda.   Dari   hasil kromatografi   kolom   diperoleh   5   fraksi   untuk   masing- masing   variasi   pelarut   ekstraksi.   Warna   masing-masing fraksi disajikan pada Tabel 2.
Hasil   penelitian   [5]   menunjukkan   bahwa   pigmen pada buah tomat mengandung 6 komponen karoten dan 5 komponen   xantofil.   Likopen   memiliki   11   ikatan   rangkap terkonjugasi sehingga berinteraksi dengan silica gel lebih kuat   dibandingkan   β-karoten   dan   karoten   lainnya   yang memiliki tidak lebih dari 10 ikatan rangkap terkonjugasi. Namun interaksi likopen tersebut lebih lemah dibandingkan xanthofil yang memiliki gugus hidroksi sehingga fraksi β- karoten   akan   keluar   kolom   lebih   dahulu   diikuti   fraksi likopen. Sedangkan fraksi xanthofil tetap di dalam kolom sehingga   mengeluarkannya   dengan   penambahan   pelarut yang lebih polar (metanol) ke dalam eluen.
Tabel 2. Warna Fraksi hasil kromatografi kolom
Fraksi ke- Warna larutan 1 Kuning 2 Merah 3 Jingga 4 Jingga 5 Hijau kekuningan
Berdasarkan tabel 2 fraksi yang terpisah terdiri atas tiga macam warna, yaitu kuning, merah dan hijau. Likopen merupakan salah satu pigmen yang berwarna jingga hingga merah. Sehingga fraksi yang diduga mengandung likopen adalah fraksi 2,3 dan 4. Untuk membuktikan hal tersebut, dilakukan   identifikasi   secara   kualitatif   dengan spektrofotometer.
3. Identifikasi Kualitatif Likopen
Fraksi-fraksi yang diperoleh dari pemisahan dengan kromatografi kolom kemudian dianalisa kualitatif. Analisa kualitatif likopen pada penelitian ini dilakukan dengan cara membandingkan spektrum likopen standar dalam  literatur dengan spektrum likopen hasil pengukuran.
Gambar 2. Absorpsi   sinar   tampak   spektrum   likopen standar dalam petroleum eter.
Secara umum serapan maksimum karotenoid berada pada   tiga   panjang   gelombang   yang   dimunculkan   dalam bentuk   tiga   puncak   spektrum.   Senyawa   dengan   jumlah ikatan   rangkap   terkonjugasi   yang   lebih   banyak   memiliki nilai  panjang   gelombang  maksimum  (λmax)  lebih tinggi. Likopen dengan 11 ikatan rangkap terkonjugasi menyerap pada panjang gelombang yang paling tinggi dibandingkan karotenoid   lainnya.   Spektrum   UV-tampak   likopen   khas pada daerah 400-550 nm, dengan 3 puncak utama di sekitar 444, 470, dan 502 nm [6].
Pola   spektrum   menggambarkan   serapan   suatu molekul   dimana   setiap   molekul   dalam   pelarut   tertentu memiliki   serapan   maksimum   pada   panjang   gelombang tertentu dengan pola tertentu pula. Dari lima fraksi yang di scanning diperoleh   3   pola   spektrum   yang   berbeda.   Data spektrum absorpsi fraksi dapat dilihat pada gambar 3.
Gambar 3. Absorpsi   sinar   tampak   spektrum   hasil pengukuran: fraksi 1 (….), fraksi 2(---), dan fraksi 5 ( ▬ ) dalam petroleum eter.
Dari   data   spektrum   tabel   3   spektrum   fraksi   2-4 memiliki pola yang mirip dengan spektrum likopen standar. Selain itu puncak serapan  maksimum fraksi  2 juga sama dengan   serapan   maksimum   likopen   standar.   Sehingga berdasarkan data tersebut fraksi 2 dapat dikatakan sebagai fraksi likopen.

## 4. Hasil Optimasi Komposisi Pelarut Ekstraksi
Penetapan   kadar   likopen   pada   penelitian   ini   tidak dapat dilakukan. Hal ini disebabkan karena tidak terdapat kurva   kalibrasi   yang   diperoleh   dari   pengukuran   larutan standar likopen. Sehingga optimasi komposisi pelarut tidak dapat   dilakukan   menggunakan   kadar   likopen   yang diperoleh. Akan tetapi berdasarkan  hukum Lambert-Beer, dimana peningkatan absorpsi cahaya oleh materi sebanding dengan konsentrasi materi tersebut, seperti pada persamaan Lambert-Beer berikut.
A = abc
Dengan   menggunakan   absorbansi   fraksi   likopen   hasil pengukuran,   optimasi   komposisi   pelarut   dapat   dilakukan. Fraksi likopen yang diperoleh dari masing-masing variasi komposisi   pelarut   pada   penelitian   ini   sebagian   besar terdapat pada fraksi kedua hasil pemisahan menggunakan kromatografi kolom gravitasi. Fraksi tersebut diperlihatkan pada gambar 4.
Gambar 4. Fraksi likopen pada berbagai variasi komposisi pelarut Sesuai gambar 4, secara kualitatif komposisi pelarut dengan   kepolaran   tertinggi   (n-hex-aseton-MeOH   dengan perbandingan  1:2:1) mampu mengekstrak likopen dengan jumlah   lebih   banyak.   Hal   ini   ditunjukkan   oleh   nilai absorbansi yang paling besar. Selain itu, dari tabel tersebut menunjukkan   bahwa   keberadaan   metanol   dan   aseton memiliki peran penting terhadap perolehan ekstrak likopen. Kenaikan   kuantitas   metanol   dan   aseton   menyebabkan likopen   yang   terekstrak   semakin   banyak.   Pada   kuantitas aseton   yang   lebih   banyak   daripada   kuantitas   metanol diperoleh likopen lebih banyak. Berdasarkan nilai konstanta dielektrikum dan indeks polaritas pelarut, secara kualitatif urutan kepolaran pada variasi di atas dari polar ke nonpolar tertera pada tabel 4.
Tabel 4. Urutan   kepolaran   pelarut   ekstraksi   likopen   dari buah tomat
Variasi Komposisi Pelarut
Urutan Kepolaran
PE: Aseton (3:1) Polar
Non polar n-henksana:Aseton:MeOH (2:1:1)
n-henksana:Aseton:MeOH (1:1:1) n-henksana:Aseton:MeOH (1:2:1)
Sumber: diadaptasi dari [7]-[8]
Aseton   secara   teoritis   dapat   larut   sempurna   di   dalam metanol   maupun   n-heksana   sehingga   pada   perbandingan 1:2:1,   aseton   yang   menjadi   jembatan   dalam   menentukan kepolaran   pelarut   campuran   tersebut   mampu mengoptimalkan ekstraksi  likopen dari pelarut polar (air- metanol) ke dalam pelarut nonpolar (n-heksana).

## KESIMPULAN DAN SARAN
Komposisi   campuran   pelarut   yang   optimum   pada ekstraksi   likopen   dari   buah   tomat   ( Lycopersicum esculentum Mill.)   adalah   campuran   pelarut   n- heksana:aseton:methanol dengan perbandingan 1:2:1.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis   A.   mengucapkan   terima   kasih   kepada   penguji penelitian yang telah membantu penelitian hingga selesai.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] V.R.  Preedy,   and   R.W.   Ronald,   “ Lycopene: Nutritional, Medicinal  and  Therapeutic  Properties”, USA : Science Publishers, Enfield, NH (2008).
[2]  P.M.  Dewick,   “Medicinal   natural   products   :   a biosynthetic approach 2nd ed. USA: John Willey and Son ltd (2002) 174-230.
[3]  Britton,   G.,   Jensen,   S.L.,   and   Pfander,   H.,   1995. Carotenoids   Volume   IA:   Isolation   and   Analysis . Berlin: Birkhausen Verlag
[4]  D.  Maulida,   dan   Z.   Naufal,   “ Ekstraksi   Antioksidan (Likopen)   dari   Buah   Tomat   dengan   Menggunakan Solven   Campuran   n-Heksana,   Aseton   dan   Etanol” . Semarang:   Jurusan   Teknik   Kimia   Fakultas   Teknik Universitas Diponegoro (2010) .
[5]  H.  Nurdin,   1996   “Pemisahan   Karotenoid   dalam Tomat”,  Jurnal   Matematika   dan   Ilmu   Pengetahuan Alam Universitas Andalas, Vol. 5  (1996)
[6]  D.B.  Rodrigues-Amaya,   “ A   Guide   to   Carotenoid Analysis in Foods”, Washington:  ILSI  Press (2005) 14-23.
[7]  Khopkar,   S.M,   “ Konsep   Dasar   Kimia   Analitik”, Jakarta : Universitas Indonesia Press (1990).
[8]  S.Sudarmaji,  B.   Haryono,     dan   Suhardi,   “ Analisa Bahan   Makanan   dan   Pertanian”, Yogyakarta: Penerbit Liberty (2007).