## Jurnal Akuakultur Sungai dan Danau Vol. 2 No. 2 Tahun 2017  Hal. 83 – 88
ISSN Print 2503-4766
ISSN Online 2597-8837
HISTOPATOLOGI HATI DAN GINJAL IKAN PATIN ( Pangasionodon hypopthalmus) YANG DIINJEKSI BAKTERI Aeromonas hydrophila
Safratilofa
Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Pertanian Universitas Batanghari Jl. Slamet Riyadi, Broni Jambi. 36122. Telp. +62074160103 email : osa.safra@yahoo.com

## Abstract
Aeromonas  hydrophila      is  one  of  the  pathogen  that  cause  Motil  Aeromonad Septicaemia  (MAS)  disease  in  “Patin”  fishery.  This  study  was  conducted    to  see pathological  changes  in  “Patin”  that  injected  by  Aeromonas  hydrophila.  Target  of observed  organs  were  its  liver  and  kidney.    The  Bacterial  infection  was  done  by intramaskular  injection  with  a  concentration  of  108  CFU  /  ml.  Before  the  infection application  it  needed  to  apply    a  bacteria  confirmation  test  first  with  API  20  E    as  a media  to convince that the species of using  bacteria  was really  A. hydrophila.  This research was a descriptive study. The results showed that there had  inflammatory cells infiltration, extensively degenerately  and necrosis. There had been extensively  necrosis in the liver organ.
Keywords: Histology, Aeromonas hydrophila, Pangasionodon hypopthalmus

## Abstrak
Aeromonas  hydrophila merupakan  salah  satu  patogen  penyebab  timbulnya  penyakit Motile  Aeromonad  Septicaemia (MAS)  pada  usaha  budidaya  ikan  patin.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  melihat  perubahan  patologi  pada  ikan  patin  yang  diinjeksi  dengan bakteri Aeromonas  hydrophila. Organ  target  yang  diamati  melalui  histologi  yaitu  hati dan  ginjal.  Infeksi  bakteri  dilakukan  melalui  injeksi  secara  intramaskular  dengan kepadatan  10 8 CFU/ml.  Sebelum  digunakan,  dilakukan  uji  konfirmasi  bakteri  terlebih dahulu  dengan  media  API  20  E  yang  menunjukkan  bahwa  spesies  bakteri  yang digunakan  adalah A.  hydrophila Penelitian  ini  merupakan  penelitian  yang  bersifat deskriptif.    Hasil  penelitian  menunjukkan  pada  organ  ginjal  sudah  terjadi  infiltrasi  sel radang secara ekstensif, degenerasi dan nekrosis. Pada organ hati sudah terjadi nekrosis secara ekstensif.
Kata kunci : Histologi , Aeromonas hydrophila, Pangasionodon hypopthalmus

## PENDAHULUAN
Usaha  budidaya  ikan  Patin  ( Pangasionodon  hypopthalmus) sering  mengalami permasalahan  antara  lain  kegagalan  produksi  akibat  serangan  wabah  penyakit.  Salah  satu patogen  penyebab  timbulnya  penyakit  pada  usaha  budidaya  adalah  bakteri,  di  antaranya bakteri Aeromonas  hydrophila.    A.hydrophila merupakan  penyebab  penyakit Motile Aeromonas Septicaemia (MAS) yang dinamakan juga dengan penyakit bercak merah (Angka et al. 2004).     Menurut Kamiso (2004), bakteri A. hydrophila menyerang semua jenis ikan air tawar di daerah tropis, sehingga sangat berbahaya bagi budidaya ikan air tawar. Bakteri ini sering  menimbulkan  wabah  penyakit  dalam  tingkat  kematian  tinggi  (80-100%)  dan  dalam waktu singkat (1-2 minggu). Yin et al. (2010) juga menambahkan bahwa infeksi bakteri A. hydrophila dapat menimbulkan kematian hingga 80%.
Patologi  merupakan  studi  penyakit  mencakup  fungsional  dan  perubahan morfologi serta reaksi yang berkambang pada organisme akibat adanya infeksi patogen

## Jurnal Akuakultur Sungai dan Danau Vol. 2 No. 2 Tahun 2017  Hal. 83 – 88
ISSN Print 2503-4766
ISSN Online 2597-8837
(Plum.  1994).  Pemeriksaan  histopatologi  pada  ikan  dapat  memberikan  gambaran perobahan jaringan  yang terinfeksi patogen dan untuk mendeteksi adanya komponene- komponen  patogen  yang  bersifat  infektif  melalui  pengamatan  secara  mikro  terhadap perubahan  abnormal  ditingkat  jaringan.  Jaringan  yang  bisa  dijadikan  indikator pengamatan  adalah  ginjal  dan  hati.  Ginjal  merupakan  organ  ekskresi    dengan  fungsi menyaring sisa-sisa metabolisme untuk dibuang dalam entuk urin. Bakteri A. hydrophila yang  masuk  kedalam  darah  dengan  mudah  mencapai  organ-organ  penting  pada  ikan seperti pada sinusoid ginjal. Selanjutnya ginjal akan dimanfaatkan oleh bakteri sebagai tempat memperbanyak diri, serta mengambil nutrisi yang ada disekitarnya untuk proses metabolisme. Hati merupakan pusat metabolisme tubuh, organ hati menghasilkan cairan empedu  sebagai  emulsifikator  lemak  yang  berperan  penting  dalam  proses  pencernaan makanan (Sukenda et al. 2008).  Berdasarkan hal tersebut perlu dilakukan pengamatan perubahan  patologi  melalui  histologi  organ  ginjal  dan  hati  ikan  patin  yang  diinjeksi dengan bakteri A. hydrophila.

## METODOLOGI PENELITIAN
Kegiatan penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kesehatan Ikan (LKI), Departemen Budidaya Perairan (BDP), Fakultas Perikanan dan  Ilmu  Kelautan (FPIK),  Institut Pertanian Bogor (IPB). Penelitian ini dilaksanakan selama satu bulan yaitu bulan Juli 2014.
Ikan  uji  yang  digunakan  adalah  ikan  patin  yang  berasal  dari  pembudidaya  di daerah Parung, Bogor dengan bobot rata-rata 6±0,26 g. Ikan dipelihara dalam akuarium berukuran 60x30x40 cm 3 . Ikan ditebar sebanyak 10 ekor/akuarium. ikan diberi pakan komersial  sebanyak  2  kali  sehari  yaitu  pagi  dan  sore  hari  secara at  satiation. Ikan  uji dipelihara selama 14 hari
Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah A.  hydrophila yang  berasal  dari  koleksi Laboratorium  Kesehatan  Ikan(LKI),  Departemen  Budidaya  Perairan  (BDP),  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  (FPIK),  Institut  Pertanian  Bogor  (IPB).    Sebelum digunakan,  dilakukan  uji  konfirmasi  bakteri  terlebih  dahulu  dengan  media  API  20  E yang menunjukkan bahwa spesies bakteri  yang digunakan adalah A. hydrophila. Hasil bakteri uji seperti pada Gambar Tabel 1. Ikan uji diinjeksi dengan bakteri A. hydrophila sebanyak  0,1  ml/ekor  secara intramuskuler pada  bagian  punggung  di  belakang operkulum ikan dengan konsentrasi bakteri 10 8 CFU/ml.
Tabel 1. Hasil pengujian isolat  bakteri A. hydrophila dengan kit API 20 E Tests Active ingredients Hasil ONPG 2-nitrophenyl ßdgalactopyranoside + ADH L-arginine + ODC L-lysine + CIT L-ornithine - H2S Trisodium citrate - URE Sodium thiosulfate - TDA Urea - IND L-tryptophane - VP Sodium pyruvate + GEL Gelatin (bovine origin) + GLU D-glucose + MAN D-mannitol +

## Jurnal Akuakultur Sungai dan Danau Vol. 2 No. 2 Tahun 2017  Hal. 83 – 88
ISSN Print 2503-4766
ISSN Online 2597-8837
INO Inositol - SOR D-sorbitol - RHA L-rhamnose - SAC D-sucrose + MEL D-melibiose - AMY Amygdalin - ARA Amygdalin - OX (see oxidase test package insert) +
Pembuatan preparat Histologi dilakukan tahapan sebagai berikut :
1. Sampel ginjal  dan hati diambil dari ikan uji, sampel direndam dalam larutan BNF 10 % selama 24 jam.
2. Dehidrasi  dalam  alkohol  70%,  80%,  90%,  95%  dan  100%  (tahap  I)    dan  100% (tahap II) masing-masing selama 2 jam.
3. Clearing dengan alkohol dan xilol (xilol I, xilol II dan xilol III) masing-masing 30 menit.
4. infiltrasi dalam larutan paraffin cair (58° C) dan didiamkan hingga mengeras. Agar lebih  keras  lagi  jaringan  yang  berada  dalam  paraffin  dimasukkan  kedalam refrigerator.
5. Embedding (blocking),  dilakukan  pemotongan  jaringan  (5  μm),  hasil  potongan direndam dalam air hangat dengan suhu ±53° C dan ditata diatas gelas objek.
6. Deparafinisasi dengan  alkohol  100%,  95%,  90%,  80%,  70%  dan  50%,  masing- masing 2 menit dan dicuci dengan air kran selama 2 menit.
7. Pewarnaan  dengan  hematoksilin  selama  10  menit  dan  dicuci  dengan  air  kran selama1  menit,  selanjutnya  pewarnaan  dengan  Eosin  selama  3  menit  dan  dicuci dengan air kran seama 1 menit.
8. Dehidrasi  dengan  alkohol  50%  I,  50%  II,  70%,  85%,  90%,  dan  100%  masing- masing 2 menit selanjutnya dengan Xylol I dan xylol II masing-masing 2 menit.
9. Sediaan  ditetesi  dengan  perekat  Permount  TM  kemudian  ditutup  dengan  cover glass.
10. Setelah  perekat  mengering  jaringan  preparat  diamati  dibawah    mikroskop  untuk melihat kerusakan-kerusakan yang terjadi pada masing-masing organ.

## Jurnal Akuakultur Sungai dan Danau Vol. 2 No. 2 Tahun 2017  Hal. 83 – 88
ISSN Print 2503-4766
ISSN Online 2597-8837
Hasil histologi  dianalisis secara deskriptif mengacu pada metode Adinata et  al. (2012)  yaitu    berdasarkan  jumlah  kerusakan  pada  organ  ikan  pada  beberapa  bagian organ.  Jika  jumlah  kerusakan  organ  hanya  di  satu  bagian  (fokal),  di  beberapa  tempat (multifokal), dan di semua tempat (difus), maka diberi tanda berturut-turut +, ++, +++.
Data yang diproleh selama penelitian dianalisa secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  histopatologi  ginjal  dan  hati  ikan  patin  disajikan  pada  Gambar  1.    Dari Gambar  1  menunjukkan  pada  ikan  yang  diinfeksi  dengan A.hydrophila mengalami kerusakan organ ginjal dan hati paling parah bila dibanding dengan yang tidak diinjeksi dengan A.hydrophila .    Ginjal  yang  diinfeksi A.hydrophila sudah  terjadi  infiltrasi  sel radang  secara  ekstensif,  degenerasi  dan  nekrosis.    Begitupula  pada  organ  hati  sudah terjadi nekrosis secara ekstensif.

## Gambar 1  Histopatologi ginjal dan hati ikan patin
Perlakuan Diagnosa Ginjal Analisis Diagnosa Hati Analisis
Tanpa A.hydrophilla
Diinjeksi A.hydrophilla I (+++)
D (++) N(+++) D (+) V(+) N(+++)
Penyakit  ikan adalah  suatu  bentuk  abnormalitas  dalam  struktur  atau  fungsinya yang  disebabkan  oleh  organisme  hidup  melalui  tanda-tanda  yang  spesifik.  Sedangkan menurut  Sachlan dalam Afrianto  (1992).   Penyakit ikan merupakan salah satu  kendala dalam  usaha  budidaya.  Secara  ekonomis  masalah  penyakit  dapat  merugikan  usaha budidaya  karena  dapat  menurunkan  produksi  dan  kualitas  ikan,  bahkan  dapat menyebabkan  kematian  massal  atau  kegagalan  produksi.  Penyakit  ikan  adalah  segala sesuatu  yang  dapat  menimbulkan  gangguan  pada  ikan,  baik  secara  langsung  maupun tidak langsung. Banyak mikroorganisme yang bersifat patogen pada ikan salah satunya adalah bakteri.  Salah satunya adalah bakteri A. hydrophila.
Patologi  merupakan  studi  penyakit  mencakup  fungsional  dan  perubahan morfologi serta reaksi yang berkambang pada organisme akibat adanya infeksi patogen (Plum.  1994).  Pemeriksaan  histopatologi  pada  ikan  dapat  memberikan  gambaran perobahan jaringan  yang terinfeksi patogen dan untuk mendeteksi adanya komponene- komponen  patogen  yang  bersifat  infektif  melalui  pengamatan  secara  mikro  terhadap perubahan  abnormal  ditingkat  jaringan.  Jaringan  yang  bisa  dijadikan  indikator pengamatan adalah ginjal dan hati.

## Jurnal Akuakultur Sungai dan Danau Vol. 2 No. 2 Tahun 2017  Hal. 83 – 88
ISSN Print 2503-4766
ISSN Online 2597-8837
Ginjal  merupakan  organ  ekskresi  pada  semua  hewan  vertebrata.Ginjal mengesekresi  produk  metabolisme  seperti  ammonia  dan  mempunyai  fungsi  penting dalam  memelihara  homeostatis.  Unit  ginjal  yang  digunakan  sebagai  organ  ekskresi adalah nephron .  Sebuah nephron tersusun  dari  badan malphigi dan  saluran  kemih. Badan malphigi terdiri dari glomerolus dan kapsul bowman . Badan malphigi dihasilkan urin  sederhana.  Waktu  urin  sederhana  melewati  saluran  kemih,  bahan-bahan  penting diserap kembali dan bahan-bahan tidak penting mengalir keluar dari tempat ini. Ginjal mengalami  kerusakan  oleh  substansi  beracun  dan  infeksi  penyakit  glomerolus  yang rusak  tidak  dapat  melakukan  regenerasi  sedangkan  saluran  kemih  dapat  melakukan regenerasi.  Pada  penelitian  ini,hasil  pengamatan  histopatologi  pada  ginjal  ikan  patin kerusakan  yang  ditemukan  berupa  infitrasi  sel  radang,  degenerasi  dan  nekrosis.  Hasil analisis menunjukkan kerusakan berkisar pada multifokal (++) untuk degenerasi hingga difus (+++) untuk infiltrasi sel radang dan nekrosis. Hal ini diduga terjadi karena infeksi dari bakteri A. hydrophila yang masuk kedalam darah dengan mudah mencapai organ- organ  penting  pada  ikan  seperti  ginjal.  Selanjutnya  ginjal  akan  dimanfaatkan  oleh bakteri  sebagai  tempat  memperbanyak  diri,  serta  mengambil  nutrisi  yang  ada disekitarnya untuk proses metabolisme, hal ini mengakibatkan kerusakan jaringan pada ginjal  ikan  patin.    Menurut    Jun et.  al (2010),  pada  ginjal  ikan  korean  cyprinid  loach ( Misgurnus anguillicaudatus ) yang terinfeksi                A. hydrophila terjadi degenerasi pada tubulus distal dan artropi pada jaringan hematopoetik Hati  merupakan  kelenjar  pencernaan  yang  paling  besar  dan  tersusun  dari  sel parenkhim (hepatosit) dan jalinan serabut.Pembuluh darah arteri hati dan vena bermuara kedalam  hati,  sedangkan  saluran  empedu  meninggalkan  hati  menuju  usus.    .  Hasil pengamatan  histopatologi  pada  hati  ikan  patin    kerusakan  yang  ditemukan  berupa degenerasi, vakuolisasi dan nekrosis. Hasil analisis menunjukkan kerusakan lebih parah terjadi pada perlakuan kontrol negatif yaitu berkisar pada fokal (+) untuk degenerasi dan vakuolisasi  hingga    difus  (+++)  untuk  nekrosis.    Hal  ini  diduga  karena A.hydrophila masuk  melalui  metabolisme  proses  pencernaan  ikan  patin,  sehingga  terjadi  kerusakan pada  organ  hati.  Menurut    Sukenda et  al. (2008),    hati  merupakan  pusat  metabolisme tubuh,  organ  hati  menghasilkan  cairan  empedu  sebagai  emulsifikator  dalam  proses pencernaan  makanan.  Hasil  pengamatan    Asniatih et  al .  (2013),    perobahan  patologi pada hati ikan lele dumbo yang diinfeksi A.hydrophila, menunjukkan adanya degenerasi sel  dan  nekrosis.  Salikin et  al. (2014)  menyatakan , hasil  pengamatan  gambaran histopatologi  diperoleh  adanya  kerusakan  berupa  nekrosi,  degenerasi  dan melanomakrofag pada organ hati ikan mas Cyprinus carpio yang diinfeksi Aeromonas caviae.

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Hasil  pengamatan  histopatologi  pada  ginjal  dan  hati  ikan  patin  yang  diinfeksi A.hydrophila . (1) Pada  ginjal    kerusakan  yang  ditemukan  berupa  infitrasi  sel  radang, degenerasi,  dan  nekrosis. (2) Pada  hati  kerusakan  yang  ditemukan  berupa  degenerasi, vakuolisasi dan nekrosis

## Saran
Disarankan  untuk  melakukan  pengamatan  pada  organ,  ikan  dan  bakteri penginfeksi yang berbeda.

## Jurnal Akuakultur Sungai dan Danau Vol. 2 No. 2 Tahun 2017  Hal. 83 – 88
ISSN Print 2503-4766
ISSN Online 2597-8837

## DAFTAR PUSTAKA
Adinata MO, Sudira  IW, Berata  IK. 2012. Efek ekstrak daun  asibata Angelica keisken terhadap  gambaran  histopatologi  ginjal  mencit Mus  musculus . Buletin Veteriner Udayana. 4(2): 55-62. Angka  SL,  Priosoeryanto  BP,  Lay  BW,  Harris  E.  2004.  Penyakit motile  aeromonads septicaemia pada  ikan  lele  dumbo. Prosiding  Forum  Pascasarjana .  Institut Pertanian Bogor. Bogor
Asniatih,  Idris  M  dan  Sabilu  K.  2013.  Studi  Histopatologi  pada  Ikan  Lele  Dumbo ( Clarias  gariepinus )  yang  Terinfeksi  Bakteri Aeromonas  hydrophila. Jurnal Mina Laut Indonesia. 3 (12): 13-21
Plumb JA. 1994. Health Maintenance of Cultured Fishes, Principal Microbial Diseases. CRC press. Amerika. 239 p
Jun  JW,  Kim  JH,  Gomez,  DK,  Choresca  CH,  Han  JE,  Shin  PS  dan  Park  SC    2010. Occurrence  of  Tetracycline-  Resistant Aeromonas  hydrophila in  korean cyprinid loach ( Misgurnus anguillicaudatus ). African Journal of Microbiology Research. 4 (9): 849-855
Kamiso HN. 2004. Status penyakit ikan dan penggendaliaanya. Makalah Seminar Nasional Penyakit ikan dan Udang IV Purwekerto . Pp 18-19
Salikin RQ, Sarjito, Prayitno SB.  2014.  Pengaruh perendaman ekstrak daun binahong Anredera  cordifolia terhadap  mortalitas  dan  histologi  hati  ikan  mas Cyprinus carpio yang  diinfeksi  bakteri Aeromonas  caviae.  Journal  of  Aquaculture Management and Technology . 3 (3): 43-50.
Sukenda  L,  Jamal,  D  Wahjuningrum  dan  A  Hasan.,  2008.  Penggunaan  Kitosan  Untuk Pencegahan  Infeksi Aeromonas  hydrophila pada  Ikan  lele  dumbo Dumbo clarias SP . Jurnal Akuakultur Indonesia 7 (2) : 159-169
Yin  G,  Ardo  L,  Thompson  KD,  Adams  A,  Jeney  Z,.  Jeney  G.  2010.  Chinese  Herbs ( Astragalus  radix and Ganodermalucidum )  Enhance  Immune  Respons  of carps, Cyprinus  carpio and  Protection  Againts Aeromonas  hydrophila. Fish and Shellfish Immunology 26 (1) :140 -145