Aktivitas  Protease dan  Kadar  Protein  Tubuh  Ikan Lele Dumbo ( Clarias gariepinus ) pada Kondisi Puasa dan Pemberian Pakan Kembali

## Wieka Mahalida Hanum, Untung Susilo, dan Slamet Priyanto
Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto Jl. Dr. Soeparno No. 63 Telp. (0281) 638794, Grendeng Purwokerto 53122 Email korespondensi: susilo.utg@gmail.com
Diterima Nopember 2012 disetujui untuk diterbitkan Januari 2013

## Abstract
Three treatments  and four replications in randomised completely design were conducted to  reveal  the  protease  activity  and  body  protein  content  on  catfish, Clarias  gareipinus ,  under starvation  and  refeeding  conditions.  The  result  showed  that  the  protease  activity  has  no significant  different  (P>.05)  in  first  week,  but  has  significant  different  (P<.05)  in  second  week after treatment.  Body protein content has significant different (P<.05) in first and second weeks after treatment. We concluded that the protease activity  and body protein content  decreased at deprivation, but increased after two weeks refeeding.
Key words : catfish, protease, protein content, refeeding, starvation

## Abstrak
Tiga  perlakuan  dan  empat  ulangan  dalam  rancangan  acak  lengkap  telah diterapkan  untuk  mengetahui  aktivitas  protease  dan  kadar  protein  tubuh  ikan  lele, Clarias  gariepinus ,  dibawah  kondisi  pemuasaan  dan  pemberian  pakan  kembali.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  aktivitas  protease  tidak  memperlihatkan  perbedaan signifikan  (P>.05)  pada  minggu  pertama,  tetapi  memperlihatkan  perbedaan  yang signifikan  (P<.05)  pada  minggu  kedua  setelah  perlakuan.  Kadar  protein  tubuh  juga menunjukkan perbedaan signifikan baik pada minggu pertama maupun  kedua setelah perlakuan. Kesimpulan, aktivitas protease dan kadar protein tubuh ikan lele mengalami penurunan, tetapi meningkat kembali setelah dua minggu pemberian pakan.
Kata kunci : ikan lele, protease, kadar protein, pemberian pakan kembali, pemuasaan

## Pendahuluan
Protein  yang  dikonsumsi  ikan sebelum  dapat  digunakan  oleh  tubuh terlebih dahulu  akan mengalami proses pemecahan  secara  kimiawi  didalam sistem  pencernaannya  agar  terbentuk senyawa-senyawa yang lebih sederhana dan mudah diserap. Pencernaan  protein  di  dalam  saluran digesti dilakukan oleh enzim
pencernaan yang secara umum disebut protease.  Protease  yang  umumnya disekresi oleh pankreas akan memecah protein  menjadi  komponen  yang  lebih sederhana  yaitu    asam  amino.  Asam amino  hasil  proses  digesti  merupakan senyawa  organik  yang  siap  diserap tubuh    dan  digunakan  untuk  berbagai keperluan,  diantaranya  membangun protein tubuh ikan.
Perubahan asupan
protein sebagai  akibat  perubahan  strategi
pemberian  pakan  akan  berefek  pada perubahan  fisiologis  ikan,  diantaranya perubahan aktivitas protease dan kadar protein  tubuh  ikan.  Diantara  strategi pemberian pakan yang seringkali berefek  pada  perubahan  fisiologi  ikan adalah  penerapan  pemuasaan  dan pemberian  pakan  kembali  pada  ikan selama periode tertentu pemeliharaan.
Penelitian terdahulu berkaitan dengan  penerapan  pemuasaan  dan pemberian  pakan  kembali  terhadap beberapa  aspek  fisiologi  ikan,  telah dilakukan
diantaranya terhadap perubahan  status  hormon  tiroid  pada ikan  lele  kanal Ictalurus  punctatus (Gaylord et  al. ,  2001),  perubahan  laju metabolisme dan profil darah pada ikan kerapu  bebek, Cromileptes  altivelis
(Yuwono et  al. ,  2005;  Simanjuntak  & Yuwono,  2006),  dan  ikan  bandeng, Chanos  chanos (Yuwono et  al. ,  2006),
aktivitas  enzim  digesti  pada  ikan sea bream, Sparus aurata (Eroldoğan et al. , 2008).
Studi  pada  ikan  lele  dumbo  dan ikan  nila  juga  telah  menunjukkan adanya  perubahan  aktivitas  enzim digesti  ketika  ikan  mengalami  periode pemuasaan  singkat  dan  pemberian pakan kembali (Cho et al. , 2008; Afiyah et al. , 2009). Namun demikian, apakah terdapat perbedaan perubahan aktivitas protease  dan  kadar  protein  tubuh  ikan lele  dumbo  bila  periode  pemuasaan berbeda  dari  penelitian  sebelumnya, perlu untuk dikaji.
Tujuan penelitian ini adalah mengetahui  aktivitas  protease  dan kadar  protein  tubuh  ikan  lele  dumbo yang dihadapkan pada kondisi pemuasaan  dan  pemberian  pakan kembali.

## Materi dan Metode
Penelitian  dilakukan  lima  bulan (Juli 2011- November 2011) di Laboratorium  Fisiologi  Hewan  Fakultas Biologi dan Laboratorium Riset Unsoed. Ikan  lele  dumbo  dengan  ukuran  berat tubuh rata-rata 7,77  ±1,18 g/ekor, yang diperoleh dari hasil pembenihan Peternak  Ikan  di  Desa  Dukuh  Waluh, Kembaran, Banyumas, telah  digunakan dalam penelitian ini. Sebelum digunakan dalam penelitian, ikan
terlebih  dahulu  diaklimasi  selama  dua minggu di Laboratorium Fisiologi Hewan. Penelitian dilakukan secara
eksperimental  dengan  rancangan  acak lengkap  (RAL)  sebagai  rancangan dasarnya.  Perlakuan  yang  dicobakan terdiri  atas  3  macam  perlakuan  dan setiap  perlakuan  diulang  sebanyak
4(empat) kali. Perlakuan yang
dicobakan  meliputi  :  Ikan  yang  tidak dipuasakan  (Po),  ikan dipuasakan selama  dua  minggu  (P1)  dan  ikan memperoleh  pakan  kembali  selama dua  minggu  (P2).  Aktivitas  protease dan  kadar  protein  tubuh  diukur  pada minggu  pertama  dan  kedua  baik  pada ikan  yang  tidak  dipuasakan  (Po),  ikan yang  dipuasakan  (P1)  maupun  ikan yang  dalam  kondisi  diberi  pakan
kembali (P2). Sejumlah enam akuarium digunakan dalam  penelitian ini dan tiap akuarium berisi 10 ekor ikan. Parameter  yang  dikur  pada  aktivitas protese  adalah  jumlah  tirosin  yang dihasilkan  dari  hidrolisis  substrat  yang berupa  kasein.  Pada  ikan  yang  tidak dipuasakan dan yang berada pada fase pemberian pakan  kembali, diberi pakan sebanyak 3 %  dari berat  biomasa ikan. Pakan  yang  diberikan  berupa  pelet berkadar protein 25,55 % dan diberikan sebanyak dua kali sehari.
Pada minggu pertama  dan  kedua dilakukan  sampling  untuk  memperoleh organ digesti ikan dari semua perlakuan  yang  dicobakan.  Untuk  tiap akuarium  dari  tiap  perlakuan  diambil lima  ekor  ikan  dan  dilakukan pool sample untuk  memperoleh jumlah sampel yang mencukupi. Saluran digesti yang telah
diisolasi  dari  tubuh  ikan,  selanjutnya dihancurkan dengan homogeniser listrik setelah  sebelumnya  sampel  organ digesti  dicampur  dengan  larutan  buffer 50  mM  Tris-HCl  (pH  7-8))  dingin dengan  rasio  1:6.  Homogenat  yang diperoleh lalu
disentrifugasi menggunakan  sentrifuse  bersuhu  4 o C pada  kecepatan 10.000 rpm selama  10 menit,  dan  supernatan  yang  diperoleh disimpan dalam lemari pendingin bersuhu  -20 o C  untuk  analisis  aktivitas protease  pada  hari  berikutnya.  Kadar protein  supernatan  diukur dengan metode  Lowry  (Hidalgo et  al. ,1999) dengan kasein sebagai substrat.
Pengukuran  aktivitas  protease dilakukan  dengan  metode  hidrolisis kasein mengikuti metode Hidalgo et al.
(1999).  Campuran  reaksi  yang  terdiri atas  0,5  mL  kasein  1  %  (w/v),  0,5  mL buffer  0,1  M  Na2HPO4  (pH  8-9)  dan 0,25  mL  ekstrak  enzim  diinkubasikan selama  60  menit  pada  temperatur  37 o C.  Setelah  inkubasi  pada  campuran reaksi  ditambahkan  0,75  mL  TCA  8  % untuk menghentikan reaksi. Pada tabung  kontrol  juga  diisikan  ekstrak enzim  sebanyak  0,25  mL,  buffer  0,1  M Na2HPO4  sebanyak  0,5  mL  dan  TCA sebanyak 0,75 mL, selanjutnya diinkubasikan  pada sahu  37 o C selama
60  menit.  Sedangkan  pada  tabung blanko  diisikan  sebanyak  0,75  mL akuades, 0,5 mL buffer 0,1 M
Na2HPO4  dan  diinkubasi  selama  60 menit  pada  suhu  37 o C.  Pada  tabung standar  diisikan  0,5  mL  tirosin  dengan konsentrasi yang telah diketahui (10 µg -  250µg/mL),  akuades  sebanyak  0,25 mL dan 0,5 mL buffer 0,1 M Na2HPO4. Tabung  standar  lalu  diinkubasi  selama 60  menit  pada  temperatur  37 o C,  dan setelah  inkubasi  pada  tabung  standar ditambahkan  sebanyak  0,75  mL  TCA. Semua  campuran  reaksi  selanjutnya disimpan  dalam  refrigerator  selama minimal  satu  jam.  Semua  campuran reaksi  baik,  sampel,  blanko,  kontrol mapun standar selanjutnya disentrifugasi  pada  kecepatan  6000 rpm selama 10 menit. Campuran reaksi yang  telah  disentrifugasi  selanjutnya diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang  280  nm.  Jumlah  tirosin yang  dihasilkan  dari  hidrolisis  kasein oleh  protease  diperoleh  dengan  cara memplotkan  kurva  standar  tirosin  yang didapatnya. Satu unit aktivitas protease dinyatatan  sebagai  jumlah  enzim  yang diperlukan untuk mengkatalisa
pembentukan  1  µg  tirosin  permenit (Natalia et al. , 2004).
Kadar  protein  tubuh  ikan  lele dumbo  diukur  pada  minggu  pertama dan  kedua pada Po, P1 dan P2. Untuk keperluan ini maka ikan sampel terlebih dahulu dikeringkan dalam oven
(temperatur 60 o C) selama satu minggu. Sampel ikan kering selanjutnya dihaluskan  dengan  blender.  Tepung sampel  lalu  digunakan  untuk  analisis kadar  protein  proksimat.  Pengukuran kadar  protein  dilakukan  menggunakan metode  mikro  Kjeldahl  (AOAC,  1990). Pengukuran  kadar  protein  dilakukan  di Laboratorium Ilmu Nutrisi dan Makanan Ternak  (INMT)  Fakultas  Peternakan Unsoed, Purwokerto.
Hasil pengukuran
aktivitas protease dan  kadar protein tubuh yang diperoleh selama penelitian selanjutnya dilakukan analisis ragam (uji F).

## Hasil dan Pembahasan
1.  Aktivitas Protease
Pengamatan  aktivitas  protease dilakukan  pada  minggu  pertama  dan kedua untuk ikan yang tidak dipuasakan,  ikan  yang  dipuasakan selama  dua  minggu  dan  ikan  yang berada  pada  fase  pemberian  pakan kembali  selama  dua  minggu.  Rerata aktivitas protease pada ikan yang tidak dipuasakan (P0) sebesar 24,28 U/menit (minggu  I)  dan  34,19  U/menit  (minggu II),  aktivitas  protease  pada  ikan  yang dipuasakan  (P1)  adalah  24,55  U/menit (minggu  I)  dan  19,66  U/menit  (minggu II),  sedangkan  aktivitas  protease  pada ikan yang berada pada fase pemberian pakan  kembali  (P2)  adalah  sebesar 23,96  U/menit  (minggu  I)  dan  33,92 U/menit  (minggu  II)  (Gambar  1).  Hasil analisis  ragam  pada  minggu  pertama menunjukkan  tidak  adanya  perbedaan yang  signifikan  diantara  perbedaan strategi  pemberian  pakan  (P>.05), namun  demikian  terdapat  perbedaan yang signifikan diantara aktivitas protease ikan  lele dumbo pada minggu kedua  (P<.05).  Jadi  tampaknya  pada minggu pertama perbedaan keberadaan pakan belum menghasilkan perbedaan aktivitas protease,  dan  hal  ini  berbeda  dengan kondisi  yang  terjadi  pada  minggu kedua,  perbedaan  keberadaan  pakan menyebabkan
perbedaan yang siginifikan  aktivitas  protease.  Pada minggu  pertama  pemberian  pakan kembali ternyata aktivitas protease ikan lele dumbo tidak mengalami peningkatan yang signifikan dibandingkan  ketika  berada  pada  fase ketiadaan pakan (Gambar 1). Fenomena  berbeda  dijumpai  pada minggu kedua, ketiadaan pakan menyebabkan penurunan yang signifikan aktivitas protease dan aktivitas protease mengalami peningkatan  yang  signifikan  ketika berada  pada  fase  pemberian  pakan kembali. Fenomena ini berbeda dengan yang ditemukan oleh Uys et al. ,  (1987) pada ikan yang sama, yaitu pemuasaan tidak  menyebabkan  penurunan  yang signifikan  aktivitas  protease.  Pada  ikan patin  ( Pangasius sp.)  yang  dipuasakan untuk  jangka  waktu  yang  lebih  pendek
juga  tidak  menghasilkan  perubahan
aktivitas protease (Susilo et al. , 2009).
Gambar 1. Aktivitas protease ikan lele dumbo pada perlakuan minggu I dan II
P0 : ikan tidak dipuasakan, P1: ikan dipuasakan dan P1: ikan diberi pakan kembali
Figure  1.    Protease activity of catfish at first and second weeks after treatments P0: control,  P1. Starvation and P2 : refeeding
Perbedaan lama pemuasaan pada  ikan  diduga  menjadi  penyebab perbedaan hasil antara aktivitas protease  minggu  pertama  dan  kedua dan  juga  dengan  hasil  penelitian terdahulu. Penelitian pada ikan sturgeon ( Acipencer  naccarii )  dan  ikan trout ( Oncorhynchus  mykiss )  yang dipuasakan  72  hari  dan  pemberian pakan kembali selama 60 hari menyebabkan perubahan yang signifikan aktivitas protease yaitu mengalami penurunan saat dipuasakan dan mengalami pemulihan  ketika diberi pakan  kembali  (Furne et  al. ,  2008).
Fenomena  ini  juga  selaras  dengan pendapat  Peres et  al. (2004)  bahwa aktivitas  enzim digesti dipengaruhi oleh jenis dan kuantitas pakan, pola pemberian  pakan  serta  nilai  nutrisi pakan. Perbedaan  ketersediaan  pakan pada perbedaan perlakuan yang diterapkan  memiliki  efek  pada  respon fisiologi  ikan  yang  dicerminkan  oleh perubahan aktivitas protease. Umumnya  enzim  disekresi  kaitannya dengan keberadaan pakan pada
saluran  digestinya,  pada  kondisi  puasa atau  tidak  diberi  pakan  maka  akan menjadikan ketiadaan
senyawa
penginduksi sekresi dan aktivitas enzim. Itulah mengapa  pada ikan yang dipuasakan selama dua minggu
aktivitas protease mengalami penurunan yang signifikan. Pada kondisi  pemberian  pakan  kembali, maka pakan yang berada pada saluran digesti akan bertindak sebagai penginduksi  aktivitas  enzim,  sehingga aktivitas protease akan meningkat pada fase  ini,  terutama  terlihat  pada  minggu kedua. Chong et al. ,(2002) mengemukaan bahwa protease merupakan enzim yang akan
meningkat  aktivitasnya  bila  terdapat senyawa  penginduksi,  yaitu  makanan dalam saluran digesti hewan.

## 2.  Kadar Protein Tubuh
Kadar  protein  tubuh  ikan  lele diukur pada minggu pertama dan kedua pada  ikan  yang  tidak  dipuasakan,  ikan yang  dipuasakan  selama  dua  minggu dan  ikan  yang  berada  pada  fase pemberian pakan  kemabali selama  dua minggu. Kadar  protein tubuh ikan yang tidak  dipuasakan  (P0)  adalah  58,46  % (minggu  I)  dan  55,08  %  (minggu  II), kadar  protein  ikan  yang  dipuasakan (P1)  adalah  sebesar  57,23  %  (minggu I)  dan  52,17  %  (minggu  II),  dan  kadar protein  tubuh  ikan  yang  berada  pada fase  pemberian  pakan  kembali  (P2) adalah sebesar 62,23 % (minggu I) dan 61,46 % (minggu II) (Gambar 2).
Gambar 2.  Kadar protein tubuh lele dumbo pada minggu I dan II setelah perlakuan. P0 : ikan tidak dipuasakan, P1: ikan dipuasakan dan P1: ikan diberi pakan kembali
Figure 2.  Body protein content of catfish at first and second weeks after treatments P0 : control, P1 : starvation and P2 : refeeding
Hasil analisis ragam kadar protein tubuh  ikan  lele  dumbo    pada  minggu pertama dan kedua  menunjukkan
adanya  perbedaan  yang  signifikan diantara  perlakuan  (P<.05).  Hal  ini menunjukkan bahwa perbedaan keberadaan pakan dilingkungan hidupnya menyebabkan pula perubahan  kadar  protein  tubuh.    Ikan yang  berada  pada  fase  pemberian pakan  kembali  ternyata  menghasilkan peningkatan kadar protein tubuh,
namun  demikian  pemuasaan  tidak menyebabkan penurunan dibandingkan dengan ikan yang tidak dipuasakan.
Fenomena berbeda dijumpai
pada ikan lele kanal ( Ichtalurus punctatus )  kadar  protein  tubuhnya mengalami  penurunan  pada  ikan  yang dipuasakan  selama  tiga  hari  (Gaylord, 2001), sedang pada penelitian ini kadar protein  tubuh  ikan  yang  dipuasakan tidak  mengalami  penurunan,  namun mengalami  peningkatan  ketika  ikan berada  pada  fase  pemberian  pakan kembali,  baik  pada  minggu  pertama maupun  minggu  kedua.  Pada  ikan Atlantic  cod  ( Godus  morhua )  kadar protein  yang  tinggi  juga  dijumpai  pada ikan yang berada pada fase pemberian pakan  kembali  setelah  sebelumnya mengalami periode pemuasaan (Gildberg, 2004). Fenomena peningkatan  kadar  protein  tubuh    pada
ikan yang berada pada fase pemberian pakan kembali diduga berkaitan dengan pertumbuhan kompensasi yang terjadi  pada  ikan  yang  diberi  pakan kembali setelah periode pemuasaan.
Adanya  pertumbuhan  kompen- satori  pada  ikan  yang  memperoleh pakan kembali setelah periode pemuasaan  telah  banyak  diteliti.  Ikan nila  hasil  persilangan Oreochromis mossambicus x O.  niloticus yang dipuasakan dalam sekali fase
pemuasaan  yaitu  selama  1  minggu, kemudian  diberi  makan  secara  normal menunjukkan  pertumbuhan  kompen- satori  (Wang et  al. ,  2000).  Fenomena yang serupa  juga telah dibuktikan pada ikan  karper  gibel Carassius  auratus gibelio (Xie et  al. ,  2001)  dan  ikan barramundi Lates  calcarifer (Tian  & Qin, 2003, 2004). Kemampuan ikan untuk mendapatkan  kembali pertumbuhannya pada  fase  pemberian  pakan  kembali setelah mengalami periode pemuasaan merupakan fenomena alami yang banyak terjadi pada ikan yang dibudidayakan.  Ikan  yang  berada  pada fase pemberian pakan kembali
mempunyai kemampuan menyerap nutrien lebih tinggi dari pada ikan yang tidak dipuasakan (Yuwono et al. , 2001). Perlu  diketahui  bahwa  pada  saat  ikan dipuasakan,  protein  yang  terdapat
dalam otot digunakan sebagai prekursor dalam  jalur glukoneogenesis, sehingga  ketika  ikan  berada  pada  fase pemberian pakan kembali ikan berusaha untuk mengganti protein yang telah digunakan dan dampaknya adalah berupa  peningkatan kadar protein tubuh, seperti yang terjadi pada penelitian ini.

## Simpulan
Aktivitas protease ikan lele dumbo  tidak  mengalami  perubahan pada minggu pertama, namun mengalami peningkatan  aktivitas  ketika ikan  berada  pada  fase  pemberian pakan  kembali  pada  minggu  kedua. Kadar  protein  tubuh  ikan  lele  dumbo mengalami  peningkatan  ketika  berada pada  fase  pemberian  pakan  kembali baik  pada  minggu  pertama  maupun minggu kedua.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terimakasih  disampaikan kepada direktur I-MHERE Unsoed yang membantu  pendanaan  penelitian  ini melalui proyek kompetitif Student Grant I-MHERE Unsoed tahun 2011.

## Daftar Pustaka
Afiyah,  H.N.,  U.  Susilo  dan  F.  N. Rachmawati, 2012. Aktivitas Enzim Digesti dan Efisiensi Pakan  pada  Ikan  Lele  ( Clarias gariepinus ) yang Diinduksi dengan  Daur  Pemuasaan  dan Pemberian Pakan Kembali. Makalah Seminar Nasional Taksonomi Fauna IV dan Konggres  MZI  I  di  Fakultas Biologi Unsoed Purwokerto, tgl 7- 8 November 2012. Cho, S. H., S. M.Lee; B. H. Park, , S. C. Ji,  J.  Lee,;  J.  Bae,  and  S.  Y.  Oh, 2006.  Compensatory  growth  of Juvenile Olive Flounder, Paralichthys  olivaceus, L.,  and Changes in Proximate Composition  and  Body  Condition Indices  during  Fasting  and  after
Refeeding  in  Summer  Season.
Journal  of  the  World  Aquaculture Society . 37, 2:168-174.
Chong,  A.S.C.,  R.  Hashim,    L.  Cho-
Yang  and  A.B.  Ali,  2002.  Partial Characterization  and  Activities  of Proteases  from  the  Digestive Tract of Discus Fish (Symphysodon aequifasciata). Aquaculture, 203 : 321-333. Eroldoğan, O.T., C. Suzer, O. Taşbozan,  and  S.  Tabakoğlu, 2008.  The  Effects  of  Rate- restricted  Feeding  Regimes  in Cycles  on  Digestive  Enzymes  of Gilthead Sea-bream, Sparus aurata . Turkish Journal of
Fisheries and Aquatic Sciences. 8
: 49 – 54.
Furné, M. , G.M. Gallego, M.C. Hidalgo, A.E.  Morales,  A.  Domezain,  J. Domezaine,  and  A.  Sanz.  2008. Effect of Starvation and Refeeding  on  Digestive  Enzyme Activities  in  Sturgeon  ( Acipenser naccarii ) and Trout ( Oncorhynchus mykiss ). Comparative  Biochemistry  and Physiology, Part A. 149(4); 420 – 425.
Gaylord,  T.G.,  D.S.  MacKenzie,  and D.M.  Gatlin  III,  2001,  Growth performance,  body  composition and  plasma  thyroid  hormone status of channel catfish ( Ictalurus punctatus )  in  response  to  short- term feed deprivation and refeeding, Fish  Physiology  and Biochemistry .  24 (1): 73-79. Gildberg,  A.  2004.  Digestive  Enzyme Activities in Starved Pre-slaughter Farmed and Wild-captured, Atlantic  Cod  (Gadus  morhua).
Aquaculture . 238 : 343 – 353.
Hidalgo,  M.C.,  E.  Urea,  and  A.  Sanz, 1999.  Comparative  Study  of
Digestive  Enzymes  in  Fish  with Different Nutritional Habits. Proteolytic and Amylase Activities. Aquaculture .  170  :  267
– 283.
Natalia,  Y.,  R.  Hashim,  A.  Ali,  dan  A. Chong,  2004.  Characterization  of Digestive Enzymes in a Carnivorous Ornamental Fish, the Asia  Bony  Tongoe, Scleropages formosus (Osteoglossidae). Aquaculture . 233 : 305 – 320. Peres,  H.,  C.  Lim  and  P.H.  Klesius, 2004. Growth, Chemical Composition  and  Resistence  to Streptococus  iniae Challenge  of
Juvenile  Nile  Tilapia  ( Orechromis niloticus )  Fed  Grade  Levels  of Dietary  Inositol.  Aquaculture.  235
: 423-43.
Simanjuntak,  S.B.I.  &  Yuwono,  E.,
2006,  Pengaruh  restriksi  pakan terhadap hematologi dan histologi hati ikan kerapu bebek, Cromileptes altivelis. Ichtyos, Jurnal Penelitian Ilmu-ilmu Perikanan dan Kelautan, 5, 1: 33- 36. Susilo,  U.,  Yuwono,  E.  Dan  F.N. Rachmawati, 2009. Status Fisiologi Pada Pertumbuhan Kompensatori yang Diinduksi dengan Pemuasaan Secara Periodik Untuk Optimasi  Produksi Ikan Patin ( Pangasius sp). Laporan Penelitian. Fakultas Biologi Unsoed, Purwokerto. Tian , X.  and    Qin,  J.G.,  2003.  A  single phase of food deprivation provoked compensatory growth in barramundi Lates
calcarifer,
Aquaculture . 224: 169-179. Tian  X.  and  J.  G.  Qin,  2004.  Effects  of previous  ration  restriction  on compensatory growth in barramundi Lates
calcarifer.
Aquaculture . 235:273-283.
Uys,  W.,  T.  Hecht,  and  M.  Walters, 1987. Changes in Digestive
Enzyme  Activities  of Clarias gariepinus (Pisces  :  Claridae) after  Feeding. Aquaculture .  63(1- 4) : 243 -250.
Wang,  Y.,  Y.  Cui,  Y.  Yang,  &  F.  Cai, 2000.  Compensatory  growth  in Oreochromis  mossambicus x O.
niloticus ,  reared  in  seawater. Aquaculture .189:101-108.
Xie, S., X.  Zhu,  Y. Cui,  R  .J. Wootton, W.  Lei,  &  Y.  Yang,  2001. Compensatory growth in the gibel carp  following  feed  deprivation: temporal  patterns  in  growth, nutrient  deposition,  feed  intake and  body  composition. Journal  of Fish Biology , 58: 999– 1009.
Yuwono,  E.,  Sukardi,  P  &  Sulistyo,  I.,
2005,  Konsumsi  dan  Efisiensi Pakan  pada  Ikan  Kerapu  Bebek ( Cromileptes altivelis ) yang Dipuasakan Secara Periodik. Berkala  Penelitian  Hayati ,  10  (2):
129-132. Yuwono,  E.,  Sukardi,  P  &  Sulistyo,  I., 2006, Efek Daur Deprivasi Pakan Terhadap Ko nsumsi Oksigen  dan Hematologi Ikan Bandeng ( Chanos  chanos ), Aquacultura Indonesiana, 7 (2): 101-105.
Yuwono,  E.  Dan  P.  Sukardi.  2001. Fisiologi  Hewan  Air.  CV  Sagang Sero. Jakarta.