JPHPI 2013, Volume 16 Nomor 3
Aktivitas antibakteri ekstrak daun bakau, Tarman K, et al.

## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN BAKAU HITAM
( Rhizophora mucronata ) TERHADAP BAKTERI PENYEBAB DIARE

## Antibacterial Activity of Rhizophora mucronata Against Diarrhea Causing Bacteria
Kustiariyah Tarman*, Sri Purwaningsih, dan Anak Agung Ayu Putu Puspita Negara
Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor, Jln. Agatis, Bogor, Jawa Barat - 16680 Telp. +622518622915, Fax. +622518622916 *Korespondensi: e-mail: kustya@gmail.com; puspitanegara@gmail.com Diterima 1 Agustus 2013/Disetujui 15 Februari 2014

## Abstract
Leaves of Rhizophora mucronata have been widely used by coastal people as traditional medicine for treating diarrhea. Th e aim of this study was to obtain Rhizophora mucronata leaf extracts and determine their antibacterial activity  against diarrhea-causing bacteria. Th e antibacterial activity was determined by agar well diff usion method. Th e highest yield was obtained aft er methanol extraction. Bioactive compounds found on methanol and aqueous extracts consisted of tannin, saponin, fl avonoid, phenol hydroquinone, and triterpenoid, while alkaloid was only found in methanol extract. Methanol extract had the highest antibacterial activity with inhibition zone of 3-12 mm. Minimum inhibitory concentrations of the methanol extract were 0.4 mg/mL (against Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa ), 0.2 mg/mL (against Staphylococcus aureus). Bioautography of leaves extract against E. coli showed the active fractions were found on Rf values of 0.11 and 0.72. Preliminary identifi cation using Dragendorff  spray reagent detected that the active compound was alkaloid.
Keywords: active compound, antibacterial, diarrhea, MIC, R. mucronata leaf extract

## Abstrak
Daun Rhizophora mucronata dimanfaatkan masyarakat pesisir sebagai obat tradisional untuk mengobati diare. Tujuan penelitian ini adalah mendapatkan ekstrak daun R. mucronata dan potensinya untuk dijadikan sediaan obat baru yang alami, khususnya untuk mengobati diare. Metode penelitian yang dilakukan menggunakan uji sensitivitas antibakteri dengan metode sumur agar. Ekstrak metanol daun bakau hitam memiliki rendemen tertinggi sebesar 21,47%. Komponen aktif yang terkandung dalam ekstrak metanol dan air daun R. mucronata meliputi tanin, saponin, fl avonoid, fenol hidrokuinon, dan triterpenoid, sementara alkaloid hanya terdapat pada ekstrak metanol. Ekstrak metanol memiliki aktivitas antibakteri terbesar dengan zona hambat berkisar 3-12 mm. Konsentrasi hambat minimum (KHM) ekstrak metanol daun R. mucronata sebesar 0,4 mg/mL (terhadap Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa ), 0,2 mg/mL (terhadap Staphylococcus aureus). Bioautografi  aktivitas antibakteri terhadap bakteri uji E. coli menghasilkan fraksi aktif pada nilai Rf 0,11 dan 0,72. Hasil identifi kasi dengan pereaksi Dragendorff  menunjukkan senyawa tersebut termasuk senyawa alkaloid.
Kata kunci: antibakteri, diare, ekstrak daun R. mucronata , KHM, komponen aktif

## PENDAHULUAN
Diare masih merupakan masalah kesehatan utama di Indonesia. Penyakit ini tidak dapat dianggap sepele karena sering menimbulkan kematian khususnya pada bayi dan balita, serta seringnya menimbulkan kejadian luar biasa (KLB). Tahun 2010 terjadi
KLB diare di 33 kecamatan dengan jumlah penderita 4.204 dengan kematian 73 orang (KKRI 2011). Wabah diare dapat terjangkit dengan cepat dalam waktu yang relatif singkat sehingga sulit untuk diatasi.
Adyana et al. (2004) menyatakan bahwa diare adalah defekasi yang sering dalam
Perlu dilakukan suatu kajian farmakologi terhadap tanaman bakau khususnya daun bakau hitam. Tujuan dari penelitian ini adalah mendapatkan ekstrak daun R. mucronata dan  menentukan potensinya untuk dijadikan sediaan obat baru yang alami, khususnya untuk mengobati diare.

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan utama yang digunakan untuk penelitian ini adalah daun R. mucronata yang diperoleh dari kawasan hutan bakau Angke Kapuk, Pantai Indah Kapuk, Jakarta Utara.  Pelarut yang digunakan untuk proses ekstraksi adalah larutan metanol p.a dan air. Bahan-bahan yang digunakan untuk analisis kimia dan biologi meliputi H 2 SO 4 2 N, pereaksi Wagner, pereaksi Meyer, pereaksi Dragendorff , larutan FeCl 3 1%, CHCl 3 , larutan anhidra asam asetat, larutan H 2 SO 4 , serbuk Mg, larutan amil alkohol, HCl 2 N, etanol, larutan FeCl 3 5%, media nutrient agar (NA), nutrient broth (NB), media mueller hinton agar (MHA), akuades, bakteri uji berupa bakteri E. coli , EPEC , S. aureus, P. aeruginosa, dan Salmonella typhimurium , silika G 60 F 254 , dan eluen kloroform dan metanol (6:4).
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi timbangan analitik (Max 410 g and HF400), blender , Soxhlet, vacuum rotary evaporator (Heidolph VV 2000), vortex , oven (Yamato DV 41), autoklaf (Yamato SM 52 Autoclave), spektrofotometer (UV Vis RS 2500), laminar air fl ow (Th ermo Scientifi c 1300 Series A2), inkubator (Th ermolyne type 42000 Incubator), dan sterilisasi kering (Yamato SH 62).

## Metode Penelitian
Penelitian ini dilakukan melalui beberapa tahap, yaitu koleksi dan preparasi bahan baku, ekstraksi senyawa aktif, uji komponen aktif, pengujian aktivitas antibakteri, penentuan konsentrasi hambat minimum (KHM), dan penentuan fraksi aktif melalui uji KLT dan bioautografi . Eksperimen dilakukan dengan
sehari dengan feses yang lembek atau cair, terjadi karena chymus yang melewati usus kecil dengan cepat, kemudian feses melewati usus besar dengan cepat sehingga tidak cukup waktu untuk absorpsi, hal ini menyebabkan dehidrasi dan ketidakseimbangan elektrolit. Kosala (2010) menyatakan bahwa diare dapat disebabkan oleh infeksi mikroorganisme, antara lain bakteri, virus, dan parasit lainnya, yaitu jamur, cacing, dan protozoa, namun penyebab utamanya adalah infeksi bakteri. Bakteri penyebab diare, yaitu Enteropathogenic Escherichia coli ( EPEC ), Campylobacter , Shigella sp., Salmonella sp., dan Pseudomonas aeruginosa .
Penanganan secara medis untuk mengobati diare adalah dengan menggunakan sejumlah antibiotik β -laktam. Antibiotik ini diketahui dapat membunuh agen penyebab diare dari kelompok bakteri EPEC. Doran et al. (1990) diacu dalam Kang et al. (2000) menyatakan bahwa penggunaan β -laktam secara rutin menyebabkan terjadinya efek samping berupa resistensi EPEC terhadap antibiotik tersebut. Resistensi bakteri yang cenderung meningkat mengakibatkan infeksi bakteri menjadi lebih sulit untuk diobati.
Parthasarathy et al. (2009) menyatakan bahwa produk bahan alam misalnya metabolit sekunder, baik senyawa murni maupun dalam bentuk ekstrak, memiliki peluang untuk dikembangkan dalam dunia pengobatan. Senyawa bahan alam tersebut memiliki efek terapis yang signifi kan terhadap bakteri, jamur, maupun virus yang bersifat patogen terhadap hewan dan manusia. Masyarakat pesisir menggunakan tanaman bakau sebagai obat tradisional untuk mengatasi diare. Salah satu tanaman bakau yang dimanfaatkan adalah tanaman bakau hitam. Bandaranayake (2002) menyatakan bahwa pengobatan secara tradisional dengan menggunakan tanaman ini telah banyak digunakan, misalnya untuk penyembuhan hematuria, diabetes, diare, dan infl amasi. Potensi bakau sebagai bahan obat sangat besar, akan tetapi masih sedikit dimanfaatkan, khususnya di Indonesia.
Aktivitas antibakteri ekstrak daun bakau, Tarman K, et al.
dua kali ulangan dan dianalisis secara deskriptif.
Bahan baku yang digunakan berupa daun R. mucronata segar.  Preparasi sampel dilakukan dengan cara mengeringkan sampel daun R. mucronata pada suhu ruang selama ±10 hari, kemudian dihaluskan dengan blender hingga berbentuk serbuk.
Serbuk daun R. mucronata diekstraksi dengan metode Soxhlet dengan dua jenis pelarut yaitu metanol p.a dan air. Ekstraksi senyawa aktif dilakukan dengan mengacu pada penelitian Rahman et al.
(2011), sebanyak 25 g daun bakau hitam dimasukkan ke dalam selongsong. Proses ekstraksi dilakukan dalam Soxhlet hingga larutan menjadi jernih, yang menandakan simplisia telah terekstrak sempurna. Ekstrak metanol dan air yang diperoleh disaring dengan menggunakan kertas saring. Pelarut dievaporasi menggunakan vacuum rotary evaporator pada suhu 40oC. Ekstrak yang diperoleh kemudian ditimbang bobotnya.
Penapisan komponen aktif dilakukan melalui uji fi tokimia (Harborne 1987) yang meliputi pemeriksaan senyawa alkaloid, fl avonoid, saponin, tanin, fenol hidrokuinon, dan steroid/triterpenoid pada ekstrak kasar daun bakau hitam ( R. mucronata ).
Uji aktivitas antibakteri dilakukan melalui uji sensitivitas antibakteri dengan metode sumur agar ( agar well diff usion ) yang mengacu pada penelitian Moorty et al. (2007). Diameter zona hambat pada uji ini adalah tanpa diameter sumur agar. Sampel yang digunakan berupa ekstrak metanol dan ekstrak air dari daun bakau. Kontrol positif yang digunakan adalah kloramfenikol (150 μg/sumur) dan kontrol negatif berupa pelarut yang digunakan dalam ekstraksi, yaitu metanol dan air. Bakteri uji yang digunakan meliputi lima bakteri yang dapat menyebabkan diare, yaitu E. coli , EPEC , S. aureus, P. aeruginosa , dan S. typhimurium . Penentuan konsentrasi hambat minimum dilakukan dengan menggunakan ekstrak daun bakau hitam yang memiliki aktivitas antibakteri terbaik. Metode yang digunakan
adalah metode dilusi cair ( broth dilution ) yang mengacu pada penelitian Mazolla et al. (2009) dengan penambahan suspensi bakteri dan konsentrasi ekstrak yang berbeda. Pengamatan dilakukan selama 24 jam untuk menentukan sifat dari senyawa antibakteri.
Fraksinasi dilakukan dengan uji kromatografi lapis tipis dan bioautografi mengacu pada penelitian Zheng et al. (2005). Ekstrak yang digunakan pada uji KLT dan bioautografi  adalah ekstrak yang memiliki aktivitas antibakteri terbaik. Elusi dilakukan menggunakan kloroform dan metanol (6:4). Noda yang dihasilkan diamati di bawah sinar UV pada λ 254 nm dan 366 nm. Bioautografi dilakukan untuk menentukan fraksi aktif antibakteri menggunakan KLT. Kromatogram diletakkan dalam cawan petri yang telah berisi biakan bakteri E. coli kemudian diinkubasi selama 24 jam lalu dilihat bercak atau zona bening yang menunjukkan lokasi senyawa aktif berada.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Rendemen Ekstrak Daun R. mucronata Ekstrak daun bakau hitam ( R. mucronata ) dengan kedua jenis pelarut menghasilkan karakteristik yang berbeda-beda. Ekstrak metanol berwarna hijau kehitaman dan berbentuk pasta, sedangkan ekstrak air berwarna coklat kehitaman dan menggumpal. Perbedaan warna pada ekstrak yang dihasilkan dipengaruhi oleh jenis pelarut yang digunakan. Pelarut dari golongan alkohol yaitu metanol, selain menarik komponen aktif tetapi juga menarik klorofi l yang ada pada bahan sehingga ekstrak yang dihasilkan cenderung berwarna hijau. Air sebagai pelarut cenderung melarutkan senyawa-senyawa pengotor sehingga ekstrak yang dihasilkan cenderung berwarna pekat (Harborne 1987).
Ekstraksi terhadap daun R. mucronata menghasilkan ekstrak kasar metanol dan ekstrak air dengan bobot yang berbeda. Berat kedua ekstrak tersebut digunakan untuk menentukan nilai rendemen. Rendemen ekstrak merupakan perbandingan antara
bobot ekstrak yang dihasilkan dengan bobot sampel awal yang diekstrak. Rata-rata rendemen yang diperoleh dari ekstrak metanol dan air daun bakau hitam berurut sebesar (21,47±3,81)% dan (19,24±3,65)%. Hasil ini mengindikasikan bahwa senyawa-senyawa aktif pada daun bakau hitam cenderung larut pada pelarut metanol.
Metanol dikenal sebagai pelarut universal dan termasuk dalam golongan alkohol. Alkohol adalah pelarut serbaguna yang baik untuk ekstraksi pendahuluan untuk mengekstraksi habis senyawa bioaktif. Pelarut metanol mampu mengekstrak senyawa alkaloid, komponen fenolik, karotenoid, tanin, gula, asam amino, dan glikosida (Harborne 1987).
Komponen Aktif Ekstrak Daun R. mucronata Ekstrak metanol daun R. mucronata lebih banyak mengandung komponen aktif dibandingkan dengan ekstrak air daun R. mucronata (Tabel 1). Produksi metabolit sekunder merupakan kompensasi akibat interaksi dengan lingkungan biotik dan
abiotik. Kelman et al. (2000) menambahkan bahwa senyawa metabolit sekunder berfungsi untuk mencegah infeksi bakteri patogen. Komponen aktif yang terdeteksi pada ekstrak metanol daun R. mucronata sesuai dengan Nurdiani et al. (2012) yaitu ekstrak kasar metanol daun Rhizophora mucronata mengandung komponen aktif berupa alkaloid, tanin, saponin, fenol, fl avonoid, dan triterpenoid.
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun R. mucronata Ekstrak air daun R. mucronata memiliki aktivitas antibakteri yang sangat rendah yang ditunjukkan dengan adanya zona hambat terhadap bakteri E. coli, P. aeruginosa , dan S. aureus pada jumlah ekstrak 2 mg, sedangkan pada jumlah yang lebih kecil tidak terbentuk zona hambat. Ekstrak air daun R. mucronata tidak mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri EPEC dan S. typhimurium (Gambar 1). Kontrol negatif tidak menunjukkan adanya zona hambat di sekitar sumur. Masika dan Afolayan (2002) melaporkan bahwa ekstrak
Tabel 1 Hasil uji komponen aktif ekstrak kasar daun bakau hitam Uji Ekstrak metanol Parameter Ekstrak air Parameter Alkaloid a. Dragendorff + Terbentuk endapan jingga - Tidak terbentuk endapan jingga b. Meyer - Tidak terbentuk endapan putih - Tidak terbentuk endapan putih c. Wagner + Terbentuk endapan coklat - Tidak terbentuk endapan coklat Tanin + Warna hijau kehitaman + Warna hijau kehitaman Saponin + Busa stabil + Busa stabil Fenol hidrokuinon + Warna hijau biru + Warna hijau biru Flavonoid + Warna kuning + Warna merah Steroid - Tidak terjadi perubahan warna - Tidak terjadi perubahan warna Triterpenoid + Lapisan permukaan berwarna merah kecoklatan + Lapisan permukaan berwarna merah kecoklatan
Keterangan: (+) = terdeteksi; (-) = tidak terdeteksi
Aktivitas antibakteri ekstrak daun bakau, Tarman K, et al.
air tidak mempunyai aktivitas antibakteri karena ekstrak air berbeda dari pelarut lainnya yang mempunyai banyak komponen yang dapat berinteraksi secara antagonistik dalam mengikat bahan aktif. Ekstrak air daun R. mucronata diduga memiliki mekanisme lain dalam menghambat diare seperti menekan peristaltik usus ataupun astrigensia. Hasil penelitian Das et al.
(2009) menunjukkan bahwa ekstrak air kulit batang R. mucronata tidak menunjukkan adanya aktivitas antidiare pada tikus yang diinduksikan dengan minyak jarak.
Ekstrak metanol daun R. mucronata memiliki aktivitas antibakteri yang ditunjukkan dengan adanya zona hambat terhadap kelima bakteri penyebab diare dengan aktivitas antibakteri tertinggi terhadap bakteri S. aureus.
Zona hambat yang terbentuk berkisar antara 9-12 mm. Aktivitas antibakteri terendah ekstrak metanol ditunjukkan oleh penghambatan terhadap bakteri S. typhimurium . Zona hambat yang terbentuk berkisar antara 1-5 mm (Gambar 2). Kontrol negatif tidak menunjukkan adanya zona hambat di sekitar sumur.
Aktivitas penghambatan bakteri ekstrak metanol daun bakau hitam memiliki hasil yang tidak jauh berbeda dengan ekstrak metanol daun bakau hitam yang diteliti oleh Nurdiani et al. (2012). Hasil penelitian Nurdiani et al. (2012) menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun bakau hitam dapat
menghambat bakteri E. coli sebesar 6,4 mm dan S. aureus sebesar 6,1 mm. Penelitian Kusuma et al. (2011) juga menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun bakau hitam dapat menghambat bakteri P. aeruginosa sebesar 14 mm dan S. aureus sebesar 16 mm. Pengujian aktivitas antibakteri terhadap bakteri S. aureus menunjukkan zona hambat yang lebih besar pada kedua ekstrak dibandingkan dengan bakteri penyebab diare lainnya. Bakteri S. aureus termasuk dalam golongan bakteri Gram-positif. Bakteri Gram-positif cenderung lebih sensitif terhadap senyawa antibakteri. Struktur dinding sel bakteri Gram-positif berlapis tunggal yang relatif lebih sederhana sehingga memudahkan senyawa untuk masuk ke dalam sel dan menemukan sasaran (Pelczar dan Chan 2010).
Zona hambat yang ditunjukkan oleh ekstrak air dari daun R. mucronata yaitu (3- 4) mm. Hasil ini menunjukkan kekuatan senyawa antibakteri yang lemah terhadap bakteri-bakteri penyebab diare. Kekuatan ekstrak metanol daun R. mucronata tergolong sedang dengan diameter 3-12 mm terhadap bakteri-bakteri penyebab diare. Kloramfenikol sebagai kontrol positif menunjukkan aktivitas antibakteri yang sangat kuat karena memiliki zona hambat lebih dari 20 mm. Davis dan Stout (1971) menyatakan bahwa ketentuan kekuatan antibiotik antibakteri yaitu sangat kuat untuk zona hambat 20 mm atau lebih, kuat untuk zona hambat 10-20 mm, sedang
Gambar 1 Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak air daun bakau hitam terhadap bakteri penyebab diare: ( ..... ) 0,5 mg/sumur; ( ..... ) 1,0 mg/sumur; ( ..... ) 2,0 mg/sumur; ( ..... ) kloramfenikol.
untuk zona hambat 5-10 mm, dan lemah untuk daerah hambat kurang dari 5 mm.
Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan terhadap lima bakteri uji penyebab diare yang memiliki tingkat sensitivitas berbeda- beda. Ekstrak air dan ekstrak metanol menunjukkan aktivitas antibakteri yang lemah terhadap bakteri EPEC dan S. typhimurium yang ditunjukkan dengan diameter zona hambat yang relatif kecil yaitu zona hambat terhadap bakteri EPEC berkisar 4-6 mm dan S. typhimurium berkisar 1-5 mm. Hasil penelitian Adnyana et al. (2004) pada ekstrak etanol jambu biji daging putih dan merah juga menunjukkan aktivitas antidiare yang rendah terhadap bakteri S. typhi.
Bakteri E. coli dan EPEC merupakan bakteri yang berasal dari spesies yang sama, namun EPEC cenderung banyak menimbulkan penyakit pada manusia bila dibandingkan dengan E. coli . Aktivitas antibakteri yang lemah terhadap kedua bakteri tersebut disebabkan karena EPEC dan S. typhimurium merupakan bakteri-bakteri yang bersifat patogen di dalam tubuh manusia. Sejauh ini pengobatan yang dilakukan adalah dengan menggunakan antibiotik. Doran et al. (1990) dalam Kang et al. (2000) menyatakan bahwa penggunaan antibiotik secara kontinu menyebabkan terjadinya efek samping berupa resistensi terhadap antibiotik.
Kloramfenikol sebagai kontrol positif menghasilkan diameter zona hambat lebih
besar daripada diameter zona hambat masing- masing ekstrak. Kloramfenikol merupakan zat antibakteri murni sedangkan ekstrak daun R. mucronata masih berupa ekstrak kasar ( crude extract ) yang mengandung bahan organik lain selain antibakteri. Senyawa organik lain dapat menurunkan aktivitas zat antibakteri dengan cara menginaktivasi dan mengganggu kontak antara zat antibakteri dengan sel bakteri sehingga dapat melindungi bakteri dari zat antibakteri tersebut. Kloramfenikol bekerja dengan cara menghambat sintesis protein sel bakteri yang berlangsung di ribosom (Pelczar dan Chan 2008).
Hasil terbaik pada pengujian aktivitas antibakteri terhadap bakteri penyebab diare ditunjukkan oleh ekstrak metanol daun R. mucronata . Ekstrak tersebut menghasilkan zona hambat terbesar dibandingkan ekstrak air. Ekstrak metanol selanjutnya digunakan untuk analisis berikutnya yaitu penentuan konsentrasi hambat minimum.

## Konsentrasi Hambat Minimum Ekstrak
Daun R. mucronata
Ekstrak metanol daun R. mucronata memiliki nilai KHM yang berbeda-beda. Nilai KHM bakteri E. coli dan P. aeruginosa adalah sebesar 0,4 mg/mL.  Bakteri S. aureus memiliki KHM 0,2 mg/mL, sedangkan untuk bakteri EPEC dan S. typhimurium memiliki KHM lebih besar dari 0,4 mg/mL. Hasil ini ditunjukkan dengan tidak adanya aktivitas penghambatan terhadap pertumbuhan EPEC
Gambar 2 Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak metanol daun bakau hitam terhadap bakteri penyebab diare: ( ..... ) 0,5 mg/sumur; ( ..... ) 1,0 mg/sumur; ( ..... ) 2,0 mg/sumur; ( ..... ) kloramfenikol.
JPHPI 2013, Volume 16 Nomor 3
Aktivitas antibakteri ekstrak daun bakau, Tarman K, et al.
dan S. typhimurium setelah inkubasi selama 24 jam (Tabel 2). Perbedaan nilai KHM diduga karena setiap bakteri uji mempunyai kerentanan yang berbeda-beda terhadap suatu senyawa antibakteri. Pengamatan setiap jam menunjukkan ekstrak metanol daun R. mucronata memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri penyebab diare yang bersifat bateriostatik. Hasil pengujian KHM juga menunjukkan bahwa bakteri S. aureus merupakan bakteri yang paling rentan terhadap ekstrak metanol daun R. mucronata . Penelitian Pimpliskar et al. (2012), menunjukkan bahwa nilai KHM dari ekstrak etanol batang R. mucronata terhadap bakteri E. coli, S. aureus , dan S. typhi sebesar 0,5 mg/mL.
KHM ekstrak R. apiculata terhadap bakteri S. aureus sebesar 1 mg/mL.  Penelitian Fitrial et al.
(2008) menunjukkan KHM dari ekstrak etil asetat biji teratai untuk bakteri EPEC dan S. typhimurium sebesar 0,89 mg/mL dan 1,11 mg/mL. Penelitian Adyana et al. (2004), menunjukkan KHM dari ekstrak etanol daun jambu biji daging buah putih untuk bakteri E. coli, Salmonella dysenteriae, Salmonella fl exneri, dan S. typhi berurut sebesar 60 mg/mL, 30 mg/mL, dan 40 mg/mL. Konsentrasi hambat minimum tidak selalu konstan terhadap setiap senyawa antibakteri yang diberikan. Nilai KHM dipengaruhi oleh beberapa hal, yaitu organisme uji, ukuran inokulum, komposisi media kultur, waktu inkubasi, serta kondisi inkubasi itu sendiri. Kondisi inkubasi yang mempengaruhi yakni suhu, aerasi, dan pH (Pelczar dan Chan 2008).

## Fraksinasi Ekstrak dan Uji Aktivitas Fraksi
Sudirman (2005) menyatakan bahwa kromatografi  merupakan salah satu metode yang digunakan untuk memisahkan komponen-komponen aktif yang terdapat dalam suatu ekstrak. Hasil pengujian terhadap fraksi tersebut diduga bahwa masing-masing fraksi telah menunjukkan adanya 1 bercak dengan Rf yang berbeda. Fraksinasi ekstrak metanol daun bakau hitam dengan menggunakan sinar UV λ 254 nm diidentifi kasi memiliki 5 bercak dengan nilai Rf 0,11; 0,17; 0,47; 0,60 dan 0,72 serta pengujian dengan menggunakan sinar UV λ 366 nm menghasilkan 2 bercak dengan nilai
Rf 0,72 dan 0,88 (Gambar 3). Hasil KLT dari ekstrak metanol daun R. mucronata lalu disemprot dengan pereaksi Dragendorff .
Hasil penyemprotan menunjukkan kelima fraksi positif mengandung senyawa golongan alkaloid karena menghasilkan warna orange (Gambar 4), hal ini sesuai dengan pernyataan Robinson (1995) bahwa hasil positif adanya alkaloid menggunakan pereaksi Dragendorff ditunjukkan dengan munculnya warna orange. Pereaksi Dragendorff   mengandung K(BiI) yang umumnya dengan basa N pada alkaloid memunculkan warna orange.
Bioautografi  ekstrak metanol daun R. mucronata memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri E. coli yang ditunjukkan dengan adanya bercak hambatan pada media agar yang telah diinokulasi dengan bakteri tersebut. Senyawa pada Rf 0,11 dan 0,72 memberikan daerah hambatan pada media agar yang telah diinokulasi suspensi bakteri
Tabel 2 Hasil uji KHM ekstrak metanol daun R. mucronata Konsentrasi ekstrak (mg/mL) E. coli EPEC S. aureus P. aeruginosa S. typhimurium 0,4 − + − − + 0,3 + + − + + 0,2 + + − + + 0,1 + + + + + 0,05 + + + + +
Keterangan: (-) = jernih (tidak ada pertumbuhan); (+) = keruh (ada pertumbuhan)
E. coli (Gambar 5). Berdasarkan pengujian KLT dan bioautografi   mengindikasikan bahwa senyawa antibakteri yang berperan adalah alkaloid. Mekanisme penghambatan bakteri oleh senyawa ini diduga dengan cara mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel tersebut (Robinson 1995).

## KESIMPULAN
Ekstrak metanol daun R. mucronata mampu menghambat pertumbuhan bakteri E. coli, EPEC, S. aureus, P. aeruginosa , dan S. typhimurium . Nilai KHM ekstrak metanol terhadap bakteri E. coli dan P. aeruginosa sebesar 0,4 mg/mL, S. aureus sebesar 0,2 mg/mL. Bioautografi  aktivitas antibakteri terhadap bakteri uji E. coli menghasilkan fraksi aktif pada nilai Rf 0,11 dan 0,72 yang keduanya
diduga senyawa alkaloid. Ekstrak metanol daun R. mucronata berpotensi sebagai sediaan obat untuk mengobati penyakit diare.

## DAFTAR PUSTAKA
Adyana IK, Yulinah E, Sigit JI, Fisheri N, Insanu M. 2004. Efek ekstrak daun jambu biji daging buah putih dan jambu biji daging buah merah sebagai antidiare. Acta Pharmaceutica Indonesia 29(1): 19-27.
Bandaranayake WM. 2002. Bioactivities, bioactive compounds and chemical constituents of mangrove plants. Wetlands Ecology Manage 10: 421-452.
Das AK, Rohini RM, Hema A. 2009. Evaluation of anti-diarrhea activity of Rhizophora mucronata bark extracts. Th e Internet Journal of Alternative Medicine 7(1). doi:10.5580/1f9. Davis WW, Stout TR. 1971. Disc plate method of microbiological antibiotic assay. Applied Microbiology 22(4): 659-665.
Fitrial Y, Astawan M, Soekarto SS, Wiryawan KG, Wresdiyati T, Khairina R. 2008. Aktivitas
Gambar 3 Profi l pemisahan ekstrak metanol dengan KLT
eluen kloroform:metanol (6:4).
Gambar 4 Profi l penyemprotan dengan pereaksi Dragendorff .
Gambar 5 Profi l bioautografi .
JPHPI 2013, Volume 16 Nomor 3
Aktivitas antibakteri ekstrak daun bakau, Tarman K, et al.
antibakteri ekstrak biji teratai ( Nymphaea pubescens Willd) terhadap bakteri patogen penyebab diare. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan 19(2): 158-164. Harborne. 1987. Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan . Terjemahan: K. Padmawinata dan I. Sudiro. Bandung (ID): Institut Teknologi Bandung. hlm: 4-234.
Hasler CM. 1998. Functional foods: their role in disease prevention and health promotion.
Journal Food Technology 52(11): 63-70.
Kang SG, Park HU, Lee HS, Kim HT, Lee KJ. 2000. New β-lactamase inhibitory protein (BLIP-1) from Streptomyces exfoliatus SMF 19 and its roles on the morphological diff erentiation. Journal Biology Chemistry
275(22): 16851-16856.
Kelman D, Benayahu Y, Kahman Y. 2000. Variation in secondary metabolite concentrations in yellow and grey morphs of the Red Sea soft  coral Parerythropodium fulvum fulvum : possible ecological implication. Journal Chemical Ecology 26(1): 1123-1134.
[KKRI] Kementrian Kesehatan Republik Indonesia (ID). 2011. Situasi diare di Indonesia. Buletin Jendela Data dan Informasi Kesehatan [20 September 2012]. http://depkes.go.id.
Kosala K. 2010. Uji aktivitas antibakteri beberapa bakteri penyebab diare pada ekstrak etanol daun Vitex pinnata dengan disk diff usion  method . Fakultas
Kedokteran Universitas Mulawarman Samarinda 190-198.
Kumaran NS, Bragadeeswaran S, Th angaraj. 2011. Antimicrobial activities in star fi shes Protoreaster lincki (Blainville, 1830) and Pentaceraster regulus (Muller & Troschel, 1842) against isolated human, fi sh pathogenic and biofi lm  microorganisms. Journal of Applied Sciences Research 7(6): 818-825. Kusuma S, Kumar PA, Boopalan K. 2011. Potent antimicrobial activity of Rhizophora mucronata . Journal of Ecobiotechnology 3(11): 40-41.
Masika PJ, Afolayan AJ. 2002. Antimicrobial activity of some plantsused for the treatment of livestockdisease in the Eastern Cape, South Africa. Journal Ethnopharmacol 83(1-2): 129-134.
Mazolla PG, Jozala AF, Novaes LCL, Moriel P, Penna TCV. 2009. Minimal inhibitory concentration (MIC) determination of disinfectant and/ or sterilizing agents. Brazillian Journal of Pharmaceutical Sciences 45(2): 241-248.
Moorthy K, Srinivasan K, Subramanian, Palaniswamy M, Mohanasundari C. 2007. Phytochemical screening and antibacterial evaluation of stem bark of Mallotus philippinensis var. Tomentosus. African Journal of Biotechnology 6(13): 1521-1523. Nurdiani R, Firdaus M, Prihanto AA. 2012. Phytochemical screening and antibacterial activity of methanol extract of mangrove plant ( Rhizophora mucronata ) from Porong River Estuary. Journal Basic Science and Technology 1(2): 27-29.
Parthasarathy S, Azizi JB, Ramanathan S, Ismail S, Mansor SM, Sasidharan S, Said MIM. 2009. Evaluation of antioxidant and antibacterial activities of aqueous, methanolic, and alkaloid from Mitragyna speciosa (rubiaceae family) leaves. Molecules 14:3 964-3974.
Pelczar MJ, Chan ECS.  2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi 2 . Hadioetomo et al. , penerjemah. Jakarta (ID): UI-Press. Terjemahan dari: Elements of Microbiology . hlm: 452-539.
Pelczar MJ, Chan ECS. 2010. Dasar- Dasar Mikrobiologi 1 . Hadioetomo et al., penerjemah. Jakarta (ID): UI- Press. Terjemahan dari: Elements of Microbiology. hlm: 99-157.
Pimpliskar MR, Jadhav RN, Jadhav BI. 2012.
Evaluation of antimicrobial principles of Rhizophora species along Mumbai Coast. Journal of Advanced Scientifi c  Research 3(3): 30-33.
Rahman MA, Hasan SN, Sampad KS, Das AK.
2011. Antinociceptive, antidiarrhoeal and
cytotoxic activity of Rhizophora mucronata
Lamk. Pharmacologyonline 1: 921-929. Robinson T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi . Edisi keenam. Padmawinata K, penerjemah. Bandung (ID): ITB. Terjemahan dari: Th e Organic Constituents of Higher Plant . hlm: 281-286. Sudirman LI. 2005. Deteksi senyawa antimikrob yang diisolasi dari beberapa
Lentinus tropis dengan metode bioautografi . Hayati 12(2): 67-72.
Zheng L, Chen H, Han X, Lin W, Yan X. 2005. Antimicrobial screening and active compound isolation from marine bacterium NJ6-3-1 associated with the sponge Hymeniacidon perleve . World Journal of Microorganism and Biotechnology 21: 201-206.