Abstrak —Bawang  hitam  adalah  bawang  putih  segar  yang  telah dipanaskan selama beberapa waktu sehingga berubah warna, bau dan  juga  rasanya.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui apakah  bawang  hitam  sebagai  olahan  bawang  putih  memiliki daya  antibakteri  dengan  melihat  zona  hambat  dan  pertumbuhan bakteri menggunakan metode difusi dan dilusi yang dimodifikasi. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa Eschericia coli (Gram -), Bacillus  subtilis (Gram  +),  dan Staphylococcus  aureus (Gram  +) resisten  terhadap  ekstrak  bawang  putih  dan  bawang  hitam, sedangkan Pseudomonas  aeruginosa (Gram  -)  sensitif  terhadap ekstrak  bawang  putih  dan  ekstrak  bawang  hitam.  Konsentrasi bunuh  minimum  ekstrak  bawang  hitam  terhadap E.  coli adalah 85%, S.  aureus adalah  90%,  dan  pada P.  aeruginosa serta B. subtilis adalah  100%.  Kemudian  konsentrasi  bunuh  minimum ekstrak  bawang  putih  terhadap E.  coli adalah  80%, S.  aureus adalah  95%,  dan  pada P.  aeruginosa serta B.  subtilis adalah 100%.
Kata Kunci — antibakteri, bawang putih, difusi, dilusi.

## I. PENDAHULUAN
ANAMAN bawang  putih  ( Allium  sativum Linn.)  adalah tanaman holtikultura yang memiliki banyak manfaat. Umbi bawang  putih  berguna  sebagai  bumbu  dan  obat  beberapa penyakit  seperti  infeksi  pernafasan  dan  untuk  meningkatkan vitalitas tubuh [1]. Bawang putih salah satunya digunakan pula sebagai  antibakteri  [2].  Ekstrak  bawang  putih  telah  lama diketahui  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  berbagai bakteri  patogen  dalam  tubuh  manusia.  Antibakteri  dari tumbuhan  beberapa  dekade  ini  dikembangkan  sebagai  jalan alternatif  obat-obatan  alami  dengan  efek  samping  minimal karena berkembangnya tingkat resistensi bakteri terhadap obat [3]. Resistensi bakteri terhadap obat terjadi karena penggunaan obat yang tidak sesuai dengan tingkat rasionalitas. Rasionalitas pemakaian  obat  tersebut  meliputi  tepat  indikasi,  tepat penderita,  tepat  obat,  tepat  dosis  dan  waspada  efek  samping obat.  Pemakaian  obat  yang  tidak  rasional  akan  menyebabkan munculnya  banyak  efek  samping  dan  mendorong  munculnya bakteri  resisten  [4].  Aktivitas  antibakteri  dalam  ekstrak bawang  putih  ini  berspektrum  luas,  efektif  terhadap  bakteri Gram  (+)  dan  juga  Gram  (-)  [5].  Komponen  utama  dalam bawang  putih  yang  dipercaya  bertanggung  jawab  atas  potensi antibakteri dan potensi terapeutik lain pada bawang putih ialah kandungan  sulfur  dalam  bawang  putih  [6],  diantaranya  ialah Diallyl  thiosulfinate (allicin)  dan  juga Diallyl  disulfide (ajoene) [7].
Produk  olahan  yang  berasal  dari  bawang  putih  di  beberapa
negara  seperti  Cina  dan  Korea  Selatan  sudah  banyak,  salah satunya  bawang  hitam.  Bawang  hitam  adalah  bawang  putih yang dihangatkan pada suhu dan kelembapan tertentu sehingga menjadi  hitam,  lunak  dan  sedikit  terasa  asam.  Banyak penelitian  yang  membuktikan  bawang  putih  mengandung  zat antibakteri  yaitu  alliin  ( S-allyl-cysteine  sulphoxide )  yang disintesis dari asam amino sistein [8].
Penelitian  tentang  uji  aktivitas  antibakteri  yang  pernah dilakukan secara umum menggunakan uji difusi metode Kirby- Bauer  dan  dilusi  metode  cair  [9].  Uji  difusi  metode  Kirby- Bauer  adalah  metode  uji  aktifitas  antibakteri  menggunakan kertas cakram yang dijenuhkan dengan larutan uji dan hasilnya berupa  zona  hambat  yang  ada  di  sekitar  kertas  cakram.  Uji dilusi  metode  cair  adalah  uji  aktifitas  antibakteri  semi kuantitatif, yaitu dengan larutan uji dilarutkan ke dalam media cair,  kemudian    ditanami    bakteri  uji  [10].  Bakteri  uji  yang dipakai  pada  dua  metode  ini  umumnya  bersifat  patogen  baik bakteri  Gram  (+)  maupun  Gram  (-),  menghasilkan enterotoksin,  ada  yang  berfili  dan  ada  yang  membentuk endospora  yang  menyebabkan  infeksi  dan  keracunan. Beberapa bakteri patogen yang telah dievaluasi sensitivitasnya adalah Salmonella spp, E.  coli , Klebsiella , Micrococcus , Helicobacter , Pseudomonas , Proteus , Staphylococcus  aureus dan Bacillus  subtilis [11].  Bakteri  –  bakteri  tersebut  dapat ditemukan  pada  saluran  pencernaan  atau  berada  di  luar  usus, pada  bagian  hidung  atau  pada  kulit,  ditemukan  di  tanah,  air dan udara, serta dapat mengkontaminasi makanan [12].

## II. METODOLOGI

## A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  dan Bioteknologi  Departemen  Biologi  Institut  Teknologi  Sepuluh Nopember mulai dari bulan Juli hingga September 2017.

## B. Pembuatan Bawang Hitam
Bawang  putih  sebanyak  2  kg  dipilih  yang  berukuran  besar, tidak  busuk,  dan  masih  utuh  menyatu  dengan  siung  yang  lain bukan yang pecah. Bawang putih dibiarkan tanpa dikupas dan dibiarkan  dalam  keadaan  kering  dan  tidak  lembab.  Bawang putih    sebanyak  2  kg  dibagi  menjadi  2  yaitu  masing-masing seberat 1 kg. Satu kilogram bawang putih  pertama dimasukan kedalam rice  cooker dan  ditata  tidak  saling  tindih  untuk mencegah  kerusakan  bentuk  bawang  hitam. Rice  cooker ditutup  dan  diatur  dalam  mode keep  warm (suhu  ±70°-80°C) dan  dibiarkan  selama  12  hari.  Setelah  12  hari,  bawang  putih dikeluarkan  dan  dipilih  bawang  hitam  yang  memiliki  kulit

## Studi Awal Pemanfaatan Bawang Putih yang dihitamkan sebagai Antibakteri
St Qurratul Aini dan  Maya Shovitri Departemen Biologi, Fakultas Ilmu Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
e-mail : maya@bio.its.ac.id
T
JURNAL SAINS DAN SENI ITS Vol. 7, No. 1 (2018), 2337-3520 (2301-928X Print)                                                              E 10
siung  tidak  gosong  dan  bawang  putih  didalamnya  berwarna hitam  dan  kisut  sehingga  didapatkan  bawang  hitam.  Satu kilogram bawang putih yang lain dibiarkan sebagai kontrol.

## C. Pembuatan Ekstrak Bawang Hitam
Ekstrak bawang hitam dibuat dengan menggunakan metode maserasi  atau  perendaman  dengan  beberapa  modifikasi  [13]. Langkah  awal  yang  dilakukan  adalah  kulit  bawang  hitam dikupas  dan  dihaluskan  menggunakan  mesin  penghalus ( blender )  dan  dikeringkan  dalam  suhu  ruang.  Serbuk  bawang hitam  kemudian  direndam  dalam  etanol  70%  dengan perbandingan  1:10  (10g  serbuk  dalam  100ml  etanol)  selama 24  jam  [14],  dan  kemudian  disaring  dengan  menggunakan corong  Buchener  yang  dialasi  dengan  kertas  saring Whatman nomor  42.  Filtrat  kemudian  diuapkan  dengan  menggunakan rotary evaporator . Filtrat dimasukkan kedalam labu alas bulat sampel  pada  rotor  penggerak  dan  labu  destilat  yang  diatur sesuai  titik  didih  air  yaitu  100°C.  Kemudian  penangas  air ( water  bath )  dinyalakan  yang  dilanjutkan  dengan  menyalakan rotavorator  dan  pipa  vakum.  Pada  suhu  78,29°C  etanol  akan menguap dan dilepaskan melalui lubang kondensor, kemudian air dari hasil perendaman akan diuapkan dan dikondensasikan kembali.  Filtrat  hasil  kondensasi  disebut  sebagai  ekstrak bawang hitam dengan konsentrasi 100% [15]. Ekstrak bawang hitam  kemudian  diencerkan  dengan  aquades  steril  sampai diperoleh  konsentrasi  ekstrak  25%,  50%,  75%,  dan  100%. Pembuatan seri konsentrasi ekstrak menggunakan perhitungan seperti yang dilakukan oleh rujukan [16] yaitu sebagai berikut:
(1) Dimana:
V 1 = Volume ekstrak yang dibutuhkan C 1 = Konsentrasi sebelum pengenceran V 2 = Volume yang akan dibuat C 2 = Konsentrasi yang akan dibuat
Setelah  diencerkan,  ekstrak  disimpan  didalam  botol  steril dan  disimpan  didalam  lemari  pendingin  sampai  akan digunakan saat pengujian.

## D. Metode Difusi
Pertama,  kertas  saring Whatman no  42  dipotong  berbentuk cakram  dengan  diameter  0,5cm.  Kertas  cakram  tersebut kemudian  direndam  masing-masing  dalam  larutan  ekstrak 100%,  75%,  50%,  25%,  dan  0%  sampai  jenuh  (5  detik). Starter  bakteri  uji  diinokulasikan  menggunakan swab kapas pada  NA  padat  secara  aseptis.  Kertas  cakram  yang  telah dijenuhkan dengan masing- masing konsentrasi ekstrak (100%, 75%,  50%,  25%,  dan  0%)  diletakkan  pada  bagian  atas  media NA yang sudah mengandung bakteri uji dan diinkubasi selama 24  jam  pada  suhu  37°C.  Perlakuan  ini  dilakukan  sebanyak  2 kali  ulangan.  Area jernih  (zona hambat) di sekeliling cakram yang  terbentuk  setelah  inkubasi  diukur  menggunakan  jangka sorong.

## E. Metode Dilusi
Konsentrasi  ekstrak  yang  menunjukkan  zona  hambat terbesar  pada  uji  difusi  digunakan  sebagai  konsentrasi  awal perlakuan dilusi. Metode dilusi dilakukan dalam 2 tahap  [17].
Tahap pertama yaitu tabung reaksi diisi dengan starter bakteri uji  dengan  kepadatan  10 8 sel/ml  sebanyak  2ml  dan  ditambah 2ml  ekstrak  uji  pada  konsentrasi  terbaik  pada  metode  difusi dengan  beda  konsentrasi  sebesar  5%,  kemudian  diinkubasi selama  24  jam.  Misalkan  konsentrasi  ekstrak  100% menunjukkan  zona  bening  yang  paling  besar,  maka  dibuat interval 5% kebawah hingga 6 tingkat yaitu 100%, 95%, 90%, 85%,  80%  dan  yang  terakhir  75%.  Setelah itu, biakan bakteri uji  diambil  sebanyak  1ose  dan  digoreskan  pada  NA dalam cawan  Petri  dan  diinkubasi  kembali  selama  24  jam.  Apabila tidak  terjadi  pertumbuhan  bakteri  pada  medium,  maka konsentrasi  ekstrak  dengan  nilai  terendah  dianggap  sebagai Minimum  Bactericidal  Concentrate (MBC)  atau  konsentrasi bunuh minimum (KBM).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Zona Hambat yang Dibentuk oleh Ekstrak Bawang Hitam Terdapat dua cara metode uji antibakteri yaitu metode difusi dan  metode  dilusi.  Masing-masing  metode  difusi  dan  dilusi memiliki  beberapa  macam  metode  yang  bisa  dilakukan  [17]. Metode  difusi  Kirby-Bauer  dan  metode  dilusi  padat  yang dimodifikasi  dipilih  sebagai  metode  yang  dipakai  dalam penelitian  ini  karena  lebih  mudah  dan  sederhana  untuk dilakukan. Penelitian ini menggunakan bakteri uji Escherichia coli , dan Pseudomonas aeruginosa, sebagai perwakilan bakteri Gram  (-) , serta Staphylococcus  aureus, dan Bacillus  subtilis sebagai  perwakilan  bakteri  Gram  (+) . Kemampuan  ekstrak bawang  putih  dan  bawang  hitam  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri uji menggunakan uji difusi terdapat pada Gambar 1.
Gambar  1.  Histogram  Rata-Rata  Diameter  Zona  Hambat  Ekstrak  Bawang Putih  dan  Bawang  Hitam  terhadap  Bakteri  Uji  (mm)  Menggunakan  Metode Difusi.
Dari Gambar 1 terlihat perbedaan pengaruh ekstrak terhadap bakteri  uji  dan  nilai  KHM  yang  terbentuk.  Ekstrak  bawang putih  pada  konsentrasi  ekstrak  25%  dapat  menghambat pertumbuhan P.  aeruginosa dan B.  subtilis .  Pada  konsentrasi ekstrak  50%,  ekstrak  bawang  putih  dapat  menghambat pertumbuhan E. coli , dan pada konsentrasi ekstrak 75% dapat menghambat  pertumbuhan S.  aureus .  Peningkatan  nilai konsentrasi  ekstrak  bawang  putih  berbanding  lurus  dengan besarnya  zona  hambat,  seiring  dengan  meningkatnya  nilai konsentrasi  ekstrak  maka  besar  zona  hambat  (Gambar  2.) semakin besar pula.
Gambar 2. Pembentukan Zona Hambat oleh Ekstrak Bawang Hitam dan Bawang Putih.
Kemudian  pada  ekstrak  bawang  hitam  dapat  menghambat pertumbuhan P.  aeruginosa pada  konsentrasi  ekstrak  25%. Pada  konsentrasi  ekstrak  50%,  ekstrak  bawang  hitam  dapat menghambat  pertumbuhan E.  coli , S.  aureus ,  dan B.  subtilis . Peningkatan nilai konsentrasi ekstrak bawang hitam berbanding  lurus  dengan  besarnya  zona  hambat  yang terbentuk,  semakin  meningkat  konsentrasi  ekstrak  maka
semakin  besar  pula  zona  hambat  yang  terbentuk.  Dari  uji tersebut diketahui bahwa nilai KHM pada setiap ekstrak pada bakeri  uji  memiliki  nilai  yang  berbeda.  Ukuran  zona  hambat ini  tergantung  kepada  kecepatan  difusi  antibakteri,  derajat sensitivitas  mikroorganisme,  dan  kecepatan  pertumbuhan bakteri [18].
Dari  uji  difusi  ini  (uji  KHM)  menunjukkan  bahwa konsentrasi ekstrak 75% berpengaruh tinggi pada pertumbuhan bakteri  uji  dengan  besar  diameter  zona  hambat  sebesar  5- 25mm.  Selanjutnya  konsentrasi  ekstrak  75%  -  100% digunakan  sebagai  batasan  interval  untuk  uji  dilusi.  Uji  dilusi dilakukan  untuk  mendapatkan  nilai  konsentrasi  bunuh minimum  (KBM)  dari  ekstrak  bawang  putih  maupun  bawang hitam. Nilai KBM pada penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 1. dibawah ini.
Tabel 1
Nilai Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) dari Ekstrak Bawang Putih dan Bawang Hitam terhadap Bakteri Uji.
Konsentrasi Bunuh Minimum Bawang Putih Bawang Hitam Bakteri Uji 75% 80% 85% 90% 95% 100% 75% 80% 85% 90% 95% 100% E. coli + - - - - - + + - - - - S. aureus + + + + - - + + + - - - P. aeruginosa + + + + + - + + + + + - B. subtilis + + + + + + + + + + + -
Dari Tabel 1 diketahui bahwa ekstrak bawang putih maupun bawang hitam memiliki nilai KBM yang berbeda. Konsentrasi bunuh  minimum  ekstrak  bawang  putih  pada E.  coli adalah konsentrasi  ekstrak  80%, S.  aureus pada  konsentrasi  ekstrak 95%, dan KBM ekstrak bawang putih pada P. aeruginosa dan B.  subtilis adalah 100%. Konsentrasi bunuh minimum ekstrak bawang hitam pada E. coli adalah konsentrasi ekstrak 85%, S. aureus pada konsentrasi ekstrak 90%, dan pada P. aeruginosa serta B. subtilis adalah pada konstrasi ekstrak 100%.
Dari  data  yang  didapat  dari  penelitian  ini  menunjukkan bahwa aktivitas zat antibakteri yang terkandung dalam bawang putih dan bawang hitam tidak memiliki perbedaan bila ditinjau dari parameter zona hambat dan pertumbuhan bakteri uji. Zona hambat  yang  terbentuk dan tidak adanya pertumbuhan bakteri uji  pada  NA  diduga  karena  adanya  allicin.  Menurut  rujukan [19]  yang  melakukan  penelitian  terhadap  bawang  putih menyimpulkan bahwa ekstrak bawang putih dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Hal ini disebabkan oleh zat yang  bernama  allicin.  Allicin  yang  terkandung  dalam  ekstrak bawang  putih  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri  dengan menghambat  sintesis  DNA,  RNA,  dan  protein  yang  penting untuk pertumbuhannya  [20][10][11]. Aliin pada bawang putih mentah  yang  dipotong  atau  dihancurkan  akan  teroksidasi secara spontan menjadi allicin dan akan bertahan beberapa jam setelahnya [4]. Aliin yang diduga sebagai zat antibakteri pada bawang putih dan bawang hitam merupakan organosulfur yang mirip dengan sulfonamida [21]. Sehingga dari uji zona hambat dapat  diketahui  seberapa  besar  respon  bakteri  uji  terhadap ekstrak  bawang  putih  dan  bawang  hitam  yang  diduga  sebagai sulfonamida menurut standar zona hambat yang dilakukan oleh rujukan  [22]  yaitu E. coli (Gram -), B. subtilis (Gram +), dan
S. aureus (Gram +) resisten terhadap ekstrak bawang putih dan bawang  hitam,  sedangkan P.  aeruginosa (Gram  -)  sensitif terhadap ekstrak bawang putih dan ekstrak bawang hitam.

## IV. KESIMPULAN/RINGKASAN
Eschericia  coli (Gram  -), Bacillus  subtilis (Gram  +),  dan Staphylococcus  aureus (Gram  +)  resisten  terhadap  ekstrak bawang  putih  dan  bawang  hitam,  sedangkan Pseudomonas aeruginosa (Gram  -)  sensitif  terhadap  ekstrak  bawang  putih dan  ekstrak  bawang  hitam.  Konsentrasi  bunuh  minimum ekstrak  bawang hitam terhadap E. coli adalah 85%, S. aureus adalah  90%,  dan  pada P.  aeruginosa serta B.  subtilis adalah 100%. Kemudian konsentrasi bunuh minimum ekstrak bawang putih terhadap E. coli adalah 80%, S. aureus adalah 95%, dan pada P.  aeruginosa serta B.  subtilis adalah  100%.  Untuk penelitian  selanjutnya  sebaiknya  dilakukan  analisa  zat antibakteri  yang  terkandung  pada  bawang  hitam,  serta  perlu dilakukan uji biokimia yang lebih mendalam.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  banyak  terima  kasih  kepada  Ibu  Dr. Enny Zulaika, M. P., dan Ibu Wirdhatul Muslihatin, S. Si., M. Si. atas kritik dan sarannya dalam penulisan jurnal ilmiah ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] A. Pratimi, “Perbedaan potensi bakteriostatik antara Bawang Putih Umbi tunggal dengan Bawang Putih umbi banyak terhadap bakteri gram positif dan gram negative,” Universitas Diponegoro, 1995.
[2] J.  .  Barnes, J., Anderson, L.A., and Philips, Herbal Medicines, 3th ed . London: Pharmaceutical Press, 2007.
[3] S.  M.  Gull  I,  Saeed  M,  Shaukat  H,  “Inhibitory  Effect  Of  Allium sativum  And  Zingiber  officinale  Extracts  On  Clinically  Important Drug Resistant Pathogenic Bacteria,”
J Clin Microbiol Antimicrob , vol. 11, pp. 65–73, 2014.
[4]
J.  Salima,  “Antibacterial  Activity  of  Garlic  (Allium  sativum  l.),” University of Lampung, 2015.
[5] M.  M.,  “Allium  sativum :  Facts  and  Myths  Regarding  Human Health,” J Natl Ins Public Heal. , vol. 65, no. 1, pp. 1–8, 2013.
[6] I.  I.  Uzodike  E,  “Efficacy  Of  Garlic  (Allium  sativum)  On
Staphylococcus  aureus Conjunctivitis,” JNOA ,  vol.  12,  pp.  20–22, 2014.
[7]
M.  Z.  Dusica  P,  Vesna  D,  Ljubisa  B,  “Allicin  And  Related Compounds:  Biosynthesis  And  Pharmacological  Activity,” Phys
Chem Tech , p. 920, 2014.
[8] P.  Bongiorno,  Peter, B., Patrick, M.F., LoGiudice, “otential health beneﬁts  of  garlic  (Allium  Sativum):  A  narrative  review,” J. Complement. Integr. Med. , 2008.
[9]
M.  B.  and  M.  P.  Safithri,  M.,  “Antibacterial  Activity  of  Garlic Extract  Against  some  Pathogenic  Animal  Bacteria,” Media Peternakan , pp. 155–158, 2011.
[10] D.  D,  “Antibacterial  Effect  of  Garlic  (Allium  sativum)  on Staphylococcus  aureus:  An  in  vitro  study,” Asian  J  Med  Sci ,  pp. 62–65, 2014.
[11] B.  N,  “Antimicrobial  activityof  essential  oil  extracts  of  various onions  (Allium  cepa)  and  garlic  (Allium  sativum),” Leb.  u.- Technol , vol. 37, pp. 263–268, 2014.
[12] R.  K.J, Staphylococci.  In:  Ryan  KJ,  Ray  CG,  editors.  Sherris Medical  Microbiology:  an  introduction  to  Infectious  Diseases . New York: McGraw-Hill, 2004.
[13] J.  B.  Harbone, Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara  Modern Menganalisis  Tumbuhan .  Bandung:  Institut  Teknologi  Bandung,
1987. [14] L.  Waluyo, Teknik  dan  Metode  Dasar  Dalam  Mikrobiologi . Malang: UMM Press, 2010.
[15] R.  K.  Kumar  K.  P.  Sampath.,  Debjit  Bhowmik,  Chiranjib,  Pankaj Tiwari,  “Allium  sativum  and  its  health  benefits:  An  overview,” J. Chem. Pharm. Res. , vol. 2, no. 1, pp. 135–146, 2010.
[16] Ratnasari,  “Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  diklorometan  dan  etil asetat daun MIMBA (Azadiracnta indica A. Juss). Terhadap bakteri Staphlococcus  aureus  dan  Escherichia  coli,”  Universitas  Islam Negeri Syarifhidayatullah, 2009.
[17] D.  Ankri,  S.,  and  Mirelman,  “Antimicrobial  properties  of  allicin from garlic,” pp. 125–129.
[18] T.  U.  Soleha,  “Uji  Kepekaan  terhadap  Antibiotik,”  Universitas Negeri Lampung, 2015.
[19] P.  R.  Bradley,  “British  Herbal  Compendium :  A  Handbook  of Scientific  Information  on  Widely  Used  Plant  Drugs,” Br.  Herb. Med. Assoc. Prod. by its Sci. Comm. , 1992.
[20] C.  P.  Londhe  V,  Gavasane  A,  Nipate  S,  Bandawane  D,  “Role  of Garlic  (Allium  sativum)  in  Various  Disease:  An  Overview,” J Pharm Res Opin. , pp. 129–134, 2014.
[21] A.  I.  Freeman-Cook  L,  Freeman-cook  KD, Staphylococcus  aureus Infections:  Deadly  Diseases  And  Epidemics .  Infobase  Publishing edition, 2006.
[22] H.  Prescott, Prescott‘s  Principles  of  Microbiology .  Mc  Graw  Hill Companies, 2009.