## Uji Aktivitas Antimikroba Minyak Atsiri Tanaman Pegagan (Centella asiatica (L.) Urb)
Antimicrobial Activity Test of Essential Oil from Pegagan Plant (Centella asiatica (L.) Urb).
Jasmansyah * , Pipit Fitriyani, Hernandi Sujono, Lilis Siti Aisyah
1 Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Informatika, Universitas Jenderal Achmad Yani Jl. Terusan Jenderal Sudirman, PO BOX 148, Cimahi, Jawa Barat *E-mail: jasmansyah@unjani.ac.id
DOI: https://doi.org/10.26874/jkk.v3i1.54
Received : 31 May 2020, Revised : 31 May 2020, Accepted : 31 May 2020, O nline : 31 May 2020

## Abstrak
Pegagan ( Centella asiatica (L.) Urb) merupakan salah satu tanaman obat yang memiliki khasiat seperti mengatasi demam,  antialergi,  anti inflamasi, dan  stimulan sistem  syaraf    pusat. Kandungan senyawa kimia  yang  terdapat  dalam  minyak  atsiri  tanaman  pegagan (C.  asiatica) diketahui  berperan  sebagai antibakteri.  Penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  antimikroba  dari  minyak  atsiri  tanaman pegagan (C.  asiatica) terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  epidermidis,  Pseudomonas aeruginosa, dan jamur Candida albicans . Metode yang digunakan metode destilasi uap-air, hasil destilat dilakukan  uji Gas  Chromatography  –  Mass  Spectrometry dan  aktivitas  antimikroba  dengan  metode mikrodilusi.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  rendemen  minyak  sebesar  0,01%  dan  dengan  37 komponen  senyawa,  5  komponen  senyawa  utama  dengan  konsentrasi  tertinggi  yaitu  (E)- β -farnesen (17,85%),  Kariofilen  (13,55%),  Germacrene-D  (9,61%), α -Humulene  (9,54%), β -Elemen  (7,80%). Hasil uji aktivitas antimikroba minyak atsiri tanaman pegagan terhadap bakteri S.epidermidis dengan KHM dan KBM ≤ 0,2 %, bakteri P. aeruginosa dengan nilai KHM dan KBM berturut-turut sebesar 50 % dan 100% dan jamur C. albicans dengan nilai KHM dan KBM 100 %. Hasil menunjukkan bahwa minyak  atsiri  tanaman  pegagan  lebih  berpengaruh  dan  berpotensi  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri Gram positif dibandingkan dengan perhambatan terhadap bakteri Gram negatif dan jamur.
Kata Kunci : Centella asiatica (L.) Urb, Minyak Atsiri, Antimikroba

## Abstract
Centella asiatica (L.) Urb is one of the medicinal plants that has properties such as overcoming fever, anti-allergic,  anti-inflammation,  and  central  nervous  system  stimulants.  The  chemical  compounds contained in the essential oil of C. asiatica are known to act as antibacterial. This study was to determine the  antimicrobial  activity  of  C.  asiatica  essential  oil  on  the  growth  of  Staphylococcus  epidermidis, Pseudomonas  aeruginosa,  and  Candida  albicans.  The  method  used  by  the  steam-water  distillation method,  the  distillate  results  were  carried  out  by  Gas  Chromatography  -  Mass  Spectrometry  and antimicrobial activity by microdilution method. The results showed that oil yield was 0,01% and with 37 compound components, 5 components of the main compounds with the highest concentration were (E)-β-farnesene (17,85%), Caryophyllene (13,55%), Germacrene-D (9,61%), α-Humulene (9,54%), β- Elemene (7,80%). The antimicrobial test results of C. asiatica essential oil on S. epidermidis bacteria with MIC and MBC ≤ 0,2%, P. aeruginosa bacteria with MIC and MBC values respectively 50% and 100%, and C. albicans fungi with MIC  and MBC 100%. The results showed that essential oils of C. asiatica  were  more influential  and  had  the  potential  to  inhibit  the  growth of  Gram  positive  bacteria compared to the inhibition of Gram negative bacteria and fungi .
Keywords : Centella asiatica (L.) Urb , Essential Oils, Antimicrobials
1 Pendahuluan
Infeksi  merupakan  salah  satu  masalah penyakit  kesehatan  masyarakat  yang  penting, khususnya negara berkembang. Infeksi disebabkan  oleh  bakteri  atau  jamur  yaitu  suatu penyakit  dengan  prevalensi  tinggi  di  dunia, termasuk di Indonesia [1]. Beberapa jenis bakteri dan  jamur  patogen  mampu  bereproduksi  untuk meninfeksi manusia.
Penggunaan  antibiotik  berlebihan  akan menyebabkan  bakteri  menjadi  resisten  [2].  Oleh karena  itu,  kita  memerlukan  alternatif  lain  untuk mengatasi  masalah  penggunaan  antibiotik  yang berlebihan, salah satunya adalah dengan menggunakan  obat  tradisional  yang  berasal  dari bahan  alam  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri dan antijamur yang memiliki efek samping lebih kecil dan harga yang lebih terjangkau [3].
Tanaman  obat  yang  dapat  dimanfaatkan sebagai obat tradisional adalah pegagan ( Centella asiatica (L.)  Urb).  Pegagan  memiliki  banyak khasiat seperti mengatasi demam, antialergi, anti inflamasi,  dan  stimulan  sistem  syaraf  pusat. Pegagan    mengandung  komponen  kimia  minyak atsiri,  flavonoid,  dan  triterpenoid  saponin  yang berfungsi sebagai antibakteri yang dapat merusak dinding sel bakteri sehingga pertumbuhan bakteri akan terhambat [4].

## 2 Metode Penelitian
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental  untuk mengetahui  adanya  aktivitas  antimikroba  minyak atsiri tanaman pegagan ( C. asiatica (L.) Urb). 2.1 Determinasi Tanaman dan Pembuatan Minyak Atsiri Tanaman Pegagan
Pada penelitian ini sampel tanaman pegagan diperoleh  dari  Perkebunan  Percobaan  Manoko Lembang,  Kab.  Bandung  Barat.  Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Sekolah Ilmu dan  Teknologi  Hayati,  ITB.  Sampel  tanaman pegagan  yang  telah  dibersihkan  dan  dipotong kecil-kecil kemudian dilakukan destilasi menggunakan  metode  destilasi  uap-air.  Minyak atsiri  yang  dihasilkan  kemudian  ditambahkan Na 2 SO 4 anhidrat  untuk  didapatkan  minyak  atsiri murni.
2.2 Uji GC-MS
Penentuan  minyak  atsiri  tanaman  pegagan dilakukan  di  Laboratorium  Terpadu  Politeknik Kesehatan,  Bandung  dengan  menggunakan  alat GC-MS.
Kondisi  analisis  adalah  sebagai  berikut: Minyak atsiri tanaman pegagan dilarutkan dalam n -heksana  dan  dimasukkan  ke  dalam  vial  1  mL. 1μL  di  injeksikan  pada  teknik  injeksi  split  rasio
25:1  dengan  suhu  injektor  250 o C.  Gas  pembawa menggunakan Helium dengan kecepatan aliran 1 mL/menit. Suhu oven di program 50 o C selama 2 menit,  10 o C/menit  untuk  suhu  150 o C  selama  5 menit  dan  10 o C  menit  sampai  250 o C  selama  2 menit dengan waktu injeksi 29 menit.
2.3 Uji Aktivitas Antimikroba

## Pembuatan Biakan Mikroba Uji
Inokulasikan  1  ose  biakan  murni  bakteri  ke dalam  media  NA  dan  biakan  murni  jamur  ke dalam  media  SDA  secara  aseptis.  Kemudian inkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24  jam  untuk bakteri dan pada suhu 25 o C selama 48 jam untuk jamur di dalam inkubator.
Pembuatan  Suspesi  Mikroba  dan  Larutan Pembanding Mc Farland
Pembuatan  suspensi  tersebut  distandarisasi dengan  menggunakan  metode  Mc  Farland  0,5 yang terdiri dari 9,95 mL larutan H 2 SO 4 1% dan 0,05  mL  larutan  BaCl 2 1%  yaitu  setara  dengan kepadatan  bakteri  10 8 CFU/mL  [5].  Satu  tabung berisi  larutan  standar  Mc  Farland  0,5  terlebih dahulu  disiapkan.  Suspensi  mikroba  uji  dibuat dengan  cara  mengambil  koloni  biakan  mikroba kedalam  tabung  yang  berisi  NaCl  0,9%  steril sampai  tercapai  larutan  homogen.  Suspensi mikroba uji tersebut dibandingkan kekeruhannya dengan larutan standar Mc Farland 0,5.
Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Disiapkan mikroplate 96 lubang. Pada kolom 1  dimasukkan  kontrol  positif  sebanyak  50  µL antibiotik  dan  50  µL  mikroba,  sedangkan  pada kolom no. 2 dimasukkan kontrol negatif sebanyak 50 µL media cair dan 50 µL mikroba. Pada kolom no. 3-12 diisi dengan 50 µL campuran media cair dan 50 µL mikroba. Pada kolom no. 3 diisi dengan 100 µL minyak atsiri tanaman pegagan kemudian dihomogenkan. Dari kolom no. 3 diambil 100 µL dimasukkan ke kolom no. 4 kemudian dihomogenkan, dan seterusnya sampai kolom no. 12, dari kolom no. 12 diambil 100 µL kemudian dibuang.  Pengujian  dilakukan  sebanyak  2 perlakuan. Mikroplate diinkubasi pada suhu 37 o C selama  18-24  jam  untuk  bakteri  dan  pada  suhu 25 o C selama 48 jam untuk jamur. Dilihat apakah terdapat  endapan/tidak  atau  dilihat  kekeruhan pada setiap sumur. Bening pertama pada tiap baris menunjukkan nilai KHM.
Penentuan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) Dilakukan pemindahan pengenceran dari masing- masing kolom sampel uji yang tidak memperlihatkan  adanya  pertumbuhan  mikroba pada  uji  KHM  sebanyak  1  ose,  kemudian diinokulasikan  ke  cawan  petri  yang  sudah  berisi media. Diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam
untuk bakteri dan suhu 25 o C selama 48 jam untuk jamur.  Dilihat  apakah  terjadi  pertumbuhan  atau tidak.  Tidak  adanya  pertumbuhan  mikroba menunjukkan nilai KBM.

## 3 Hasil dan Diskusi

## 3.1 Hasil Determinasi Tanaman
Hasil  dari  determinasi  menunjukkan  bahwa tanaman  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah tanaman pegagan ( C. asiatica (L.) Urb). 3.2 Hasil Destilasi
Dari hasil destilasi uap-air tanaman pegagan sebanyak  15  kg  diperoleh  minyak  atsiri  murni sebanyak 1,7 mL dengan  nilai rendemen sebesar 0,01%.

## 3.3 Hasil GC-MS
Hasil  analisis  minyak  atsiri  tanaman  pegagan ditunjukkan pada data kromatogram ( Gambar 1 ). Dari data hasil analisis diperoleh 37 puncak yang menunjukkan  adanya  37  komponen  penyusun minyak  atsiri  tanaman  pegagan,  5  komponen penyusun  yang  memiliki  persentase  tertinggi diantaranya : (E)- β -farnesen (17,85%), Kariofilen
(13,55%), Germacrene -D  (9,61%), α -Humulen (9,54%), dan β -Elemen (7,80%).
Gambar 1 . Kromatogram Minyak Atsiri Tanaman Pegagan ( C. asiatica (L.) Urb)

## 3.4 Hasil Uji Aktivitas Antimikroba
Uji  aktivitas  antimikroba  untuk  konsentrasi hambat minimum (KHM) dan konsentrasi bunuh minimum  (KBM)  dari  minyak  atsiri  tanaman pegagan  terhadap  pertumbuhan  bakteri S. epidermidis, P. aeruginosa dan jamur C. albicans dilihat dari Tabel 1 dan 2 .
Tabel 1 . Hasil Pengamatan Konsentrasi Hambat Minimum Minyak Atsiri  Tanaman Pegagan
Mikroba Uji K (+) K (-) Pengenceran Minyak Atsiri Tanaman Pegagan (%) 100 50 25 12,5 6,3 3,1 1,5 0,8 0,4 0,2 S. epidermidis + - + +
+ + + + + + + + + - + + + + + + + + + +
P. aeruginosa + - + + - - - - - - - - + - + + - - - - - - - - C. albicans + - + - - - - - - - - - + - + - - - - - - - - - Tabel 2 . Hasil Pengamatan Konsentrasi Bunuh Minimum Minyak Atsiri  Tanaman Pegagan
Mikroba Uji K (+) K (-) Pengenceran Minyak Atsiri Tanaman Pegagan (%) 100 50 25 12,5 6,3 3,1 1,5 0,8 0,4 0,2 S. epidermidis + - + +
+ + + + + + + +
+ - + + + + + + + + + + P. aeruginosa + - + - - - - - - - - - + - + - - - - - - - - - C. albicans + - + - - - - - - - - - + - + - - - - - - - - -
Keterangan : (+) membunuh mikroba; (-) tidak membunuh mikroba
Proses  isolasi  minyak  atsiri  tanaman  pegagan menggunakan metode destilasi uap-air. Metode ini dipilih  karena  cocok  untuk  bahan  yang  mudah rusak  apabila  dipanaskan  pada  suhu  tinggi, memiliki  waktu  yang  relatif  lebih  singkat  dan menghasilkan  mutu  yang  lebih  baik  [6].  Minyak atsiri  yang  dihasilkan  kemudian  ditampung  di dalam wadah setelah itu dipisahkan antara minyak dan air dengan cara ditambahkan Na 2 SO 4 anhidrat, hal ini  bertujuan  untuk   menarik molekul air yang terdapat  pada  minyak  atsiri  agar  didapat  minyak atsiri murninya.
Pada pengujian analisis kandungan minyak atsiri tanaman pegagan menggunakan GC-MS diketahui mengandung  senyawa  (E)- β -farnesen  (17,85%), Kariofilen  (13,55%), Germacrene -D  (9,61%), α - Humulen  (9,54%),  dan β -Elemen  (7,80%).  Hasil penelitian sebelumnya oleh Oyedeji dan Afolayan (2005) menunjukan bahwa di dalam minyak atsiri tanaman  pegagan  terdapat  komponen  kimia α - Humulen  (21,06%), β -Kariofilen  (19,08%), bicyclogermacrene (11,22%), germacrene B (6,29%),  dan germacrene D  (4,01%).  Hasil penelitian  Paudel,  P  dkk  (2017)  menunjukkan bahwa  di  dalam  minyak  atsiri  tanaman  pegagan terdapat  (E)- β -farnesen  (26,5%), α -Humulen (20,9%),  dan  (E)-kariofilen  (13,3%).  Perbedaan komposisi  minyak  atsiri  ini  dapat  disebabkan karena berbagai faktor diantaranya kondisi iklim, kondisi  tanah  tempat  tanaman  tumbuh,  umur panen, metode yang digunakan serta penanganan dan  cara  penyimpanan  sangat  berpengaruh terhadap komposisi minyak atsiri [7].
Pada  pengujian  aktivitas  antimikroba  minyak atsiri tanaman pegagan dilakukan terhadap bakteri S.  epidermidis,  P.  aeruginosa dan  jamur C. albicans. Sebelum digunakan uji, semua mikroba uji diidentifikasi terlebih dahulu untuk memastikan  bahwa  mikroba  uji  yang  akan digunakan telah sesuai. Pada bakteri dilakukan uji penegasan  menggunakan  pewarnaan  Gram  dan media  selektif.  Pada  pewarnaan  Gram,  koloni bakteri  Gram  positif  akan  berwarna  ungu  dan koloni  Gram  negatif  akan  berwarna  merah. Perbedaan  warna  ini  disebabkan  oleh  perbedaan struktur dinding sel bakteri. Bakteri Gram positif memiliki  peptidoglikan  yang  tebal  pada  dinding selnya  sehingga  saat  diwarnai  sel akan  berwarna ungu.  Sedangkan  bakteri  Gram  negatif  memiliki lipid  yang  tebal  pada  dinding  selnya  sehingga ketika  diwarnai  dengan  kristal  violet  lalu  dibilas dengan alkohol, lipid akan larut dan ikut terbilas sehingga  bakteri  Gram  negatif  akan  menyerap pewarnaan yang kedua yaitu merah [8]. Pada uji penegasan menggunakan media selektif,
menggunakan  media  MSA  untuk  bakteri S. epidermidis menunjukkan bahwa bakteri tersebut memang benar bakteri S. epidermidis dilihat dari koloni yang terbentuk yaitu berwarna merah dan tidak ada perubahan warna pada media [9]. Pada media  CETA  untuk  bakteri P.  aeruginosa menunjukkan  bahwa  koloni  yang  terbentuk memang  benar  bakteri  tersebut  ditunjukkan  dari koloni  yang  terbentuk  yaitu  berwarna flouresens kehijauan  [10].  Pada  jamur  dilakukan  uji penegasan  menggunakan  media  kultur  yaitu media SDA menunjukkan koloni berbentuk bulat dengan  permukaan  sedikit  cembung  berwarna putih  kekuningan  serta  berbau  asam  seperti  tape yang  menunjukkan  bahwa  koloni  tersebut merupakan jamur C. albicans [11] .
Uji  aktivitas  antimikroba  dilakukan  dengan metode mikrodilusi yaitu dengan cara mengencerkan  minyak  atsiri  tanaman  pegagan hingga konsentrasi terkecil kemudian dicampurkan  dengan  media  cair  dan  mengamati konsentrasi minyak atsiri tanaman pegagan dalam menghambat pertumbuhan mikroba uji dilihat dari kekeruhannya. Pada penentuan nilai KHM minyak atsiri tanaman pegagan memiliki potensi menghambat  pertumbuhan  pada  bakteri S. epidermidis pada  konsentrasi  ≤  0,2%, P. aeruginosa pada  konsentrasi  50%  dan  jamur C. albicans pada  konsentrasi  100%.  Nilai  KBM minyak  atsiri  tanaman  pegagan  memiliki  potensi membunuh pertumbuhan pada bakteri S. epidermidis pada  konsentrasi  ≤  0,2%, P. aeruginosa pada  konsentrasi  50%  dan  jamur C. albicans pada konsentrasi 100%.
Bakteri S.  epidermidis menunjukkan  hasil  yang lebih baik dibandingkan bakteri P. aeruginosa dan jamur C. albicans . Pada umumnya, minyak atsiri terdiri  dari  banyak  penyusun  yang  berupa komponen  aktif.  Aktivitas  antimikroba  dapat disebabkan  karena  peran  dari  komponen  kimia penyusun  minyak  atsiri.  Senyawa  kimia  minyak atsiri  tanaman  pegagan  (C. asiatica (L.)  Urb) yang  dihasilkan  dari  penelitian  ini  memiliki komponen  utama  yang  terdiri  dari  senyawa seskuiterpen yang merupakan golongan terpenoid, senyawa  terpen  ini  diketahui  dapat  menghambat dan membunuh pertumbuhan bakteri yaitu dengan merusak  dinding  sel  bakteri  dan  mengubah komponen  penyusun  sel  bakteri.  Golongan terpenoid dapat berikatan dengan protein dan lipid yang terdapat pada membran sel dan bahkan dapat menimbulkan  lisis  pada  sel,  rusaknya  membran sel  bakteri  akan  mengakibatkan  kekurangan nutrisi yang dibutuhkan dalam proses pertumbuhan [12]. Senyawa monoterpen berperan
aktif  sebagai  antijamur,  yatu  dapat  menghambat proses metabolisme
dan mengganggu pertumbuhan jamur [13].
Berdasarkan  jenis  bakterinya S.  epidermidis merupakan  bakteri  Gram  positif  dan P. aeruginosa merupakan  bakteri  Gram  negatif. Bakteri  Gram  positif  efektif  menghambat pertumbuhan  minyak  atsiri  tanaman  pegagan dibandingkan  dengan  bakteri  Gram  negatif, karena  bakteri  Gram  negatif  memiliki  ketahanan dinding sel yang lebih baik dibandingkan dengan bakteri  Gram  positif.  Bakteri  Gram  negatif mempunyai  struktur  dinding  sel  yang  kompleks tersusun  dari  tiga  lapisan  yaitu  lapisan  luar lipoprotein,  bagian  tengah  lipopolisakarida  yang mampu  menyeleksi  zat-zat  asing  dan  bagian dalam  peptidoglikan.  Bakteri  Gram  positif memiliki  struktur  dinding  sel  yang  sederhana dibandingkan  bakteri  Gram  negatif  sehingga memudahkan senyawa antibakteri masuk.

## 4 Kesimpulan
Hasil  analisis  GC-MS    terhadap  minyak pegagan  memiliki  37  senyawa  penyusun  minyak atsiri,  dengan  5  komponen  senyawa  utama  yaitu (E)- β -farnesen  (17,85%),  Kariofilen  (13,55%), Germacrene -D (9,61%), α -Humulen (9,54%), dan β -Elemen  (7,80%).  Minyak  atsiri  tanaman pegagan ( C. asiatica (L.) Urb) memiliki aktivitas antimikroba  terhadap  bakteri S.  epidermidis dengan  nilai  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ≤  0,2  %.  Minyak  atsiri  tanaman  pegagan  ( C. asiatica (L.) Urb) memiliki aktivitas antimikroba terhadap bakteri P. aeruginosa dengan nilai KHM dan KBM berturut-turut sebesar 50 % dan 100 %. Minyak  atsiri  tanaman  pegagan  ( C.  asiatica (L.) Urb)  memiliki  aktivitas  antimikroba  terhadap jamur C.  albicans dengan  nilai  KHM  dan  KBM 100 %. Uji bioaktivitas antimikroba, menunjukan minyak  atsiri  dari  tanaman  pegagan  berpotensi sebagai antimikroba.

## Daftar Pustaka
[1]   Jawetz  E.  J,  Melnick  L,  Adelberg’s  EA. Mikrobiologi  Kedokteran.  22  ed.  Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC; 2005.
[2]   Fisheri NK, Nuryanti AG, Aziz N. Aktivitas Antibakteri  dan  Antijamur  Ekstrak  Etanol Akar,  Bunga,  dan  Daun  Turi  (Sesbania
grandifloral  Poir). J  Acta  Pharm  Indones . 2017. 42(1).
[3]   Kusuma  WH.  Tanaman  Berkhasiat  Obat  di Indonesia. Jilid IV. Jakarta: Pustaka Kartini; 1993.
[4]   Heseltine  P.  Disinfection,  Sterilization,  and Preservation,  5th  ed.  SS  Block,  ed.; Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins,  2001;  1,504  pages. Infect  Control Hosp Epidemiol . 2002. 23(2):109. http://dx.doi.org/10.1017/s01959417000842
89
[5]   Sutton S. Measurement of Microbial Cells by Optical  Density. J  Valid  Technol .  2011. 17:46–9.
[6]   Guenther E. Minyak Atsiri I. Jilid 1. Jakarta: UI Press; 1987.
[7]   Devkota  A,  Dall  S,  Comail  S,  Innocenti  G, Jha  PK.  Chemical  Composition  of  Essential Oils  of  Centella  asiatica  (L.)  Urban  from Different Habitats of Nepal. Int J Pharm Biol Arch . 2013. 4(2):300–4.
[8]   James  J,  Baker  C,  Swain  H.  Principles  of Science  for  Nurses  [Internet].  Wiley;  2002. http://dx.doi.org/10.1002/9780470774410
[9]   Sari RW. Pengaruh Pemberian Gerusan Daun Sirih  Hitam,  Gerusan  Daun  Sirih  Jawa  dan Oksitetrasiklin  Secara  Topikal  terhadap Lama dan Waktu Kesembuhan Luka Infeksi Staphylococcus  aureus  pada  Tikus  Putih.
Universitas Airlangga; 2003.
[10]  Todar  K.  Textbook  of  Bacteriology: Pseudomonas  aeruginosa.  University  of Winconsin-Madison Department of Bacteriology; 2004.
[11]  Sulaiman SIN. Uji AntiJamur Ekstrak Daun Lidah  Buaya  (Aloe  vera  L.)  terhadap Pertumbuhan  Candida  albicans.  Politeknik Kesehatan Kemenkes Surabaya; 2017.
[12]  Nursal W, Sri, Wilda S. Bioaktifitas ekstrak jahe  (Zingiber  officinale  Roxb.)  dalam menghambat  pertumbuhan  koloni  bakteri Escherichia coli dan Bacillus subtilis. J Biog . 2006. 2(2):64–6.
[13]  Nurmansyah.  Efektivitas  Minyak  Serai Wangi  dan  Fraksi  Sitronellal  Terhadap Pertumbuhan  Jamur  Phytopthora  palmivora Penyebab  Penyakit  Busuk Buah  Kakao. Bul Littro . 2010. 21(1):43–52.