Volume 13 Nomor 1 (2023) 9-16

## JURNAL KEBIDANAN
p-ISSN: 2089-7669 ; e - ISSN: 2621-2870
http://dx.doi.org/10.31983/jkb.v13i1.9494
Effect of Freezing Duration and Thawing Temperature on Fat Content in Expressed Breast Milk
Alexander Theo Yuda Salean 1 , Subandrate 2 , Safyudin 3
1 Medical Education Program, Faculty of Medicine, Sriwijaya University, Palembang, Indonesia
2,3 Department of Biochemistry, Faculty of Medicine, Sriwijaya University, Palembang, Indonesia Jl. Dr. Mohammad Ali Komplek RSMH Palembang KM 3,5, 30126, Indonesia
Corresponding author: Subandrate Email: subandrate@unsri.ac.id
Received: January 22 th , 2023; Revised: February 10 th , 2023; Accepted: February 22 nd , 2023

## ABSTRACT
One of the methods to keep working mothers able to provide breast milk is freezing. However, the processing carried out on breast milk can affect the nutritional content in it. Therefore, this study aims to see the effect of freezing duration and thawing temperature on fat content in expressed breast milk. This research was experimental research with pretest and posttest design. Breast milk from one mother was divided into 45 samples based on freezing duration and thawing temperature. The dependent variable in this study was the fat content  of  expressed  breast  milk,  while  the  independent  variables  were  freezing  duration  and  thawing temperature of expressed breast milk. The fat content test used was the GPO-PAP method. Then the data were analyzed using one-way anova test and paired t-test. The average expressed breast milk fat content from initial levels, freezing 3 days, 7 days and 14 days and thawed at 4 o C, 25 o C and 37 o C respectively were 178.7, 176.6, 175.8, 173.9, 71.7, 67.7, 66.4, 68.3, 66.0, and 66.2 mg/dL. Based on the paired t-test, there was a decrease in fat  content  which  had  implications  for  the  freezing  duration  of  7  days  and  14  days  with  p=0.000  (p<0.05). Meanwhile, based on the results of the one-way anova test, there was no difference in fat content based on variations in thawing temperature (4 o C, 25 o C, and 37 o C) with p>0.05. As a conclusion, there is an effect of freezing duration on fat content in expressed breast milk, whereas there is no effect of thawing temperature on fat content in expressed breast milk.
Keywords:  expressed breast milk; fat content; freezing duration; thawing temperature

## Pendahuluan
Air susu ibu (ASI) adalah adalah cairan yang mengandung berbagai komponen nutrisi yakni lemak, protein,  laktosa,  mineral,  vitamin  dan  beberapa komponen  bioaktif  antara  lain  sel  hidup,  sitokin, antibodi,  enzim,  oligosakarida,  hormon  dan  faktor pertumbuhan.  Air  susu  ibu  disekresikan  oleh  sel kelenjar payudara ibu menyusui [1]–[3].
ASI  memiliki  berbagai  manfaat  sesuai dengan  kandungan  zat  gizi  yang  ada  di  dalamnya.
Komponen nutrisi dalam ASI dibagi atas komponen makronutrien  yang  terdiri  dari  karbohidrat,  lemak, dan protein dan komponen mikronutrien yang terdiri dari  vitamin  dan  mineral.  Berbagai  komponen  yang dikandung  ini  memiliki  fungsi  penting,  terutama untuk  pertumbuhan  dan  perkembangan  bayi, khususnya  komponen  lemak  [3].  Lemak  menjadi sumber energi utama dalam ASI dan berperan penting dalam perkembangan indera penglihatan  dan sistem
neuron, memodulasi sistem imun, pematangan sistem pencernaan, dan proses mielinisasi sistem saraf pusat [3],  [4].  Oleh  karena  pentingnya  manfaat  dari  ASI bagi  pertumbuhan  dan  perkembangan  bayi,  maka WHO  merekomendasikan  pemberian  ASI  eksklusif selama 6 bulan setelah lahir [5].
Masyarakat perkotaan memiliki kecenderungan  penghentian  pemberian  ASI  dini dikarenakan ibu bekerja [6]. Proporsi rata-rata pekerja perempuan  di  Indonesia  pada  tahun  2017  adalah 50,9%, dengan 73% diantaranya adalah ibu menyusui yang memiliki bayi dan anak dengan usia kurang dari dua  tahun  [7].  Kondisi  bayi  prematur,  bayi  yang dirawat di rumah sakit, payudara ibu penuh sehingga harus  segera  diperah  merupakan  beberapa  kondisi yang mana ibu tak dapat memberikan ASI-nya secara langsung  selain  kondisi  ibu  bekerja.  Ibu  menyusui dapat  memberikan  ASI  perah  pada  bayi  untuk mengatasi  beberapa  kondisi  tersebut.  Namun, pemberian  ASI  perah  menimbulkan  permasalahan karena perlu penyimpanan dan pencairan yang baik. Agar  kualitasnya  tetap terjaga,  ASI  perah  sebaiknya disimpan  dalam  lemari  pendingin  atau freezer . Penyimpanan  tersebut  tidak  hanya  menjaga  kualitas ASI, tetapi juga dapat memperlama masa simpan ASI [8].
Rekomendasi  penyimpanan  ASI  menurut Ikatan  Dokter  Anak  Indonesia  (IDAI)  adalah penyimpanan  ASI  pada  suhu  -15 o C  sampai  -20 o C (freezer )  sebaiknya  tidak  melebihi  12  bulan  [8]. Selain  itu,  protokol  penyimpanan  ASI  yang disarankan oleh Academy of Breastfeeding Medicine (ABM)  adalah  dalam freezer (suhu  -4 o C  sampai  - 20 o C)  selama  6–12  bulan  [9].    Selain  itu, penyimpanan,  faktor  yang  penting  untuk  menjaga kualitas ASI adalah suhu pencairan. IDAI dan ABM merekomendasikan beberapa metode pencairan yakni dengan menyimpan ASI beku pada lemari pendingin (suhu  2-8 o C)    selama  semalam  sebelum  digunakan atau meletakkan ASI pada wadah berisi air hangat [8], [9].
Kandungan  dalam  ASI  sensitif  terhadap temperatur, sehingga penyimpanan, pembekuan, dan pencairan  yang  merupakan  bagian  dari  pemrosesan pada  ASI  dapat  memengaruhi  komposisi  ASI  [10]. Terdapat  enzim  pada  ASI  yang  memiliki  fungsi penting khususnya dalam pencernaan komponen ASI. Suhu  penyimpanan  atau  pencairan  sebaiknya  tidak menyebabkan  enzim-enzim  dalam  ASI  mengalami denaturasi.  Enzim-enzim  tersebut  diharapkan  tetap
aktif  dan  dapat  bekerja  walaupun  ada  proses penyimpanan dan pencairan [11].
Selain  itu,  komposisi  ASI  juga  dapat dipengaruhi oleh durasi pembekuan. Terjadi penurunan  signifikan  kadar  lemak  pada  ASI  dan peningkatan  keasaman  pada  ASI  yang  disimpan selama  90  hari  yang  menandakan  terdapatnya aktivitas  enzim  pencerna  lemak  pada  ASI  yang dibekukan tersebut[10].
Penyimpanan ASI selama 3 hari pada freezer ternyata  juga  dapat  menyebabkan  penurunan  kadar lemak. ASI yang dibekukan pada suhu -20 o C selama 30 hari dan kemudian dicairkan dengan variasi suhu pencairan  yang  berbeda-beda  menunjukkan  adanya penurunan  kadar  lemak [6],  [12],  [13].  Namun, penelitian  lain  menyebutkan  tidak  terjadi  penurunan kadar  lemak  pada  ASI  yang  disimpan  pada  suhu  - 20 o C  selama  4  hari  [14].  Hal  serupa  disampaikan bahwa  tidak  terdapat  penurunan  atau  peningkatan kadar  lemak  total  dalam  ASI  yang  dibekukan  pada suhu  -20 o C  selama  7  hari  dan  kemudian  dicairkan dengan  variasi  suhu  pencairan  yang  berbeda-beda [15].  Selain  penurunan  kadar  lemak  akibat pembekuan,  penelitian  lain  membuktikan  bahwa kadar  lemak  pada  ASI  mengalami  peningkatan setelah  penyimpanan  pada freezer selama  3  hari,  1 minggu, dan 2 minggu [16].
Ibu  pekerja  tetap  dapat  memberikan  ASI perah  pada  bayinya.  Faktor  yang  penting  untuk menjaga  kualitas  ASI  perah  terutama  lemak  adalah penyimpanan  dan  pencairan.  Hasil  penelitian menunjukkan data yang berbeda-beda mengenai suhu penyimpanan  dan  suhu  pencairan  yang  baik  untuk ASI  perah.  Oleh  karena  itu,  penelitian  tentang pengaruh  durasi  pembekuan  dan  suhu  pencairan terhadap  kadar  lemak  pada  ASI  perah  perlu dilakukan.
Metode Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium dengan desain penelitian pretest dan posttest. Penelitian dilakukan pada bulan September  sampai  Desember  2022  di  Laboratorium Kimia  Dasar  Kedokteran,  Fakultas  Kedokteran, Universitas Sriwijaya, Palembang. Penelitian dilakukan  di  bawah  supervisi  seorang  Pranata Laboratorium  Pendidikan  (PLP).  Sampel  penelitian ini adalah ASI perah (ASIP) segar yang telah diperah dan  dimasukkan  ke  dalam  kantong  ASI.  Kriteria inklusi  dalam  penelitian  ini  adalah  usia  20-35  tahun dan  memiliki  bayi  berusia  2-6  bulan.  Kriteria
eksklusinya adalah merokok, minum alkohol, minum antibiotik, dan pernah menjalani mastektomi.
Penelitian  ini  hanya  menggunakan  seorang subyek  penelitian.  Sampel  ASI  diperah  oleh  ibu menyusui pada pagi hari sebanyak 100 mL pada jam 06.30 WIB. Sampel ASI tersebut dimasukkan dalam satu  kantong  ASI  berukuran  180  mL.  Sampel  ASI tersebut  langsung  dijemput  oleh  peneliti  dan dimasukkan  dalam cooler  box dengan ice  gel  pack . Kadar lemak awal ASIP diukur menggunakan metode GPO-PAP. Pengukuran kadar lemak dengan metode GPO-PAP  menggunakan  kurang  dari  1  mL  sampel ASIP,  sehingga  kebutuhan  sampel  dalam  penelitian cukup  dari  satu  orang  ibu  menyusui  dengan  jumlah ASIP total 100 mL.  Penelitian ini membagi kelompok durasi pembekuan menjadi 3 kelompok, yaitu: 3 hari, 7  hari,  dan  14  hari  yang  masing-masing  dicairkan dengan  3  variasi  suhu  pencairan,  suhu  lemari pendingin  (4 o C),  suhu  air  ruangan  (25 o C),  dan  suhu air hangat (37 o C) sehingga dalam penelitian ini ada 9 kelompok  perlakuan.  Sesuai  dengan  perhitungan dalam rumus federer untuk 9 kelompok (perlakuan), jumlah masing-masing sampel dalam tiap kelompok adalah  5  sampel.  Dengan  demikian  jumlah  total sampel dalam penelitian ini adalah 45 sampel. ASIP sebanyak 1 mL dimasukkan ke dalam masing-masing microtube yang  telah  diberikan  label  sesuai perlakuan.  Setelah  perlakuan  dalam  masing-masing kelompok  barulah  kadar  lemak  kembali  diukur. Berikut  ini  adalah  kelompok  perlakuan  pada penelitian ini:
A1: ASI perah yang dibekukan 3 hari dan dicairkan pada suhu 4 o C
A2: ASI perah yang dibekukan 3 hari dan dicairkan pada suhu 25 o C
A3: ASI perah yang dibekukan 3 hari dan dicairkan pada suhu 37 o C
B1:  ASI  perah  yang dibekukan  7  hari dan dicairkan pada suhu 4 o C
B2:  ASI  perah  yang dibekukan  7  hari dan dicairkan pada suhu 25 o C
B3:  ASI  perah  yang dibekukan  7  hari dan  dicairkan pada suhu 37 o C
C1: ASI perah yang dibekukan 14 hari dan dicairkan pada suhu 4 o C
C2: ASI perah yang dibekukan 14 hari dan dicairkan pada suhu 25 o C
C3: ASI perah yang dibekukan 14 hari dan dicairkan pada suhu 37 o C

## A. Pembekuan dan Pencairan ASI
Adapun  alat  dan  bahan  yang  digunakan antara  lain:  lemari  pendingin,  wadah  air, air  hangat, air  suhu  ruang,  termometer  ruangan  dan  cairan,  rak microtube.
Sebelum pembekuan ASI dilakukan pengelompokan  ASI  dengan  cara  memasukkan  ASI sebanyak  1  mL  ke  dalam microtube, kemudian melabelinya  dan  disusun  di  rak  berdasarkan kelompok.
Kemudian  suhu  pada freezer diatur  dalam range -15 o C sampai -20 o C dan diukur menggunakan termometer ruangan. Ketika suhu telah sesuai, maka ASI  dimasukkan  ke  dalam freezer .  Kemudian  pintu freezer ditutup rapat.
Setelah dibekukan, maka dilakukan pencairan  ASI  beku.  Pencairan  dilakukan  pada  3 variasi  suhu  pencairan  (4 o C,  25 o C,  dan  37 o C). Pencairan pada suhu 4 o C dilakukan dengan cara ASI beku  dikeluarkan  dari freezer dan  diletakkan  pada lemari pendingin. Kemudian tunggu hingga mencair sempurna. Sedangkan pencairan pada suhu 25 o C dan 37 o C  dilakukan  dengan cara menyiapkan air  dengan suhu  yang  sesuai  pada  wadah  air.  Suhu  pada  air diukur  menggunakan  termometer  cairan.  Jika  suhu sudah  sesuai  maka  ASI  diletakkan  pada  wadah tersebut dan tunggu hingga mencair sempurna.

## B. Pengukuran Kadar Lemak
Pengukuran  kadar  lemak  menggunakan  alat dan  bahan  berupa  spektrofotometer,  mikropipet, penangas  air, microtube,  timer, pereaksi  trigliserida (Komposisi pereaksi: Magnesium salt 10 mM, 4- ATP >0.5mM, Chlorophenol 3.5mM, Glycerol Phosphate Oxidase (microbial) >4500U/L, 4- Aminophenazone 0.3mM,  Glycerol  Kinase  (microbial)  >250  U/L, Lipase  (microbial)  >200,000  U/L,  Peroxidase (horseradish) > 2000 U/L, surfactant, buffer (pH 7.3 ±  0.1),  stabilisator,  dan  bahan  pengawet,  termasuk sodium  azide  0.01%),  trigliserida  standar/kalibrator, dan ASIP yang telah dicairkan.
Pengukuran kadar lemak ASI pada penelitian ini  menggunakan  metode  GPO–PAP  ( Glycerol Phosphate Oxidase-Para Amino Phenazone ).
Sebelum  dilakukan  pemeriksaan  kadar  lemak  pada ASI, maka dilakukan homogenisasi dengan pengocokan.  Setelah  itu  spektrofotometer  diatur dengan panjang gelombang 500 nm, kuvet 1 cm, dan temperatur 37°C.
Dilanjutkan  dengan  melakukan  pengukuran terhadap  blanko  reagen.  Adapun  tahapannya  adalah
memberikan  label  pada microtube blanko,  standar, dan sampel, kemudian memasukkan 1000 µL reagen ke  masing-masing  tabung.  Pada  tabung  standar tambahkan  10  µL  sedangkan  pada  tabung  sampel ditambahkan  10  µL  ASI,  kemudian  homogenisasi. Dilanjutkan  dengan  menginkubasi  seluruh  tabung selama 5 menit pada suhu 37 o C.
Setelah dilakukan inkubasi, serapan spektrofotometer  diatur  menjadi  nol  dengan  kuvet blanko pada panjang gelombang 500 nm. Dilakukan pembacaan  dan  pencatatan  absorbansi  standar  dan sampel.  Warna  stabil  dan  dapat  dibaca  sampai  60
menit. Prosedur ini dirangkumkan pada tabel 1 sesuai dari prosedur kit dari Human ®
Untuk  kalkulasi  kadar  lemak,  absorbansi sampel  dibandingkan  dengan  absorbansi  standar kemudian dikalikan dengan kadar trigliserida standar (200  mg/dL).  Data  diolah  dan  dianalisis  dengan menggunakan uji normalitas, uji one-way anova, uji post hoc, dan uji t berpasangan. Penelitian ini sudah mendapatkan  persetujuan  etik  dari  Komite  Etik Penelitian  Kedokteran  dan  Kesehatan  Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya dengan nomor 153- 2022.
Tabel 1. Prosedur Pengukuran Trigliserida Blanko Sampel/Standar Sampel/Standar - 10µL Reagen TG 1000 µL 1000 µL
Dicampur, inkubasi pada suhu 37°C selama 5 menit. Kemudian absorbansi terhadap blanko sampel dapat dibaca dalam waktu 60 menit.

## Hasil dan Pembahasan
Tabel 2. Kadar Rata-rata Lemak ASIP Berdasarkan Durasi Pembekuan dan Suhu Pencairan
Kadar Rata-rata Lemak Kelompok Perlakuan (mg/dL) Awal A1 A2 A3 B1 B2 B3 C1 C2 C3 178,7 ± 5,0 176,6 ± 5,3 175,8 ± 5,0 173,9 ± 3,1 71,7 ± 6,3 67,7 ± 6,3 66,4 ± 5,8 68,3 ± 4,0 66,0 ± 2,9 66,2 ± 5,0
Tabel 3. Perbedaan Kadar Lemak ASI Perah Sebelum dan Sesudah Perlakuan
Kelompok Perlakuan n Kadar Rata-rata Lemak ± SD (mg/dL) Rerata Penurunan (mg/dL) Nilai p * Awal A1 5 5 178,7 ± 5,0 176,6 ± 5,3 2,1 (1,16%) 0,617 Awal A2 5 5 178,7 ± 5,0 175,8 ± 5,0 2,8 (1,6%) 0,526 Awal A3 5 5 178,7 ± 5,0 173,9 ± 3,2 4,7 (2,6%) 0,242 Awal B1 5 5 178,7 ± 5,0 71,7 ± 6,3 106,9 (59,9%) 0,000 Awal B2 5 5 178,7 ± 5,0 67,7 ± 6,3 110,9 (62,1%) 0,000 Awal B3 5 5 178,7 ± 5,0 66,4 ± 5,8 112,3 (62,8%) 0,000 Awal C1 5 5 178,7 ± 5,0 68,3 ± 4,0 110,4 (61,8%) 0,000 Awal C2 5 5 178,7 ± 5,0 66,0 ± 2,9 112,6 (63,0%) 0,000 Awal C3 5 5 178,7 ± 5,0 66,2 ± 5,0 112,5 (62,9%) 0,000
Keterangan: (*) Paired t-test, CI = 95%
Tabel 4. Uji Perbedaan Kadar Lemak ASIP menurut Durasi Pembekuan dan Suhu Pencairan
Kelompok Perlakuan p value* A1 B1 0,000 C1 0,000 A2 B2 0,000 C2 0,000 A3 B3 0,000 C3 0,000 B1 A1 0,000 C1 0,988 B2 A2 0,000 C2 1,000 B3 A3 0,000 C3 1,000 C1 A1 0,000 B1 0,988 C2 A2 0,000 B2 1,000 C3 A3 0,000 B3 1,000 Keterangan: (*) Uji Post hoc
Uji normalitas seluruh data kadar lemak ASIP dilakukan  untuk  mengetahui  distribusi  data.  Uji normalitas  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah uji Saphiro Wilk . Hasil uji normalitas seluruh data  menunjukkan  nilai  p>0,05  yang  berarti  data berdistribusi normal.
Tabel  2  menyajikan  kadar  rata-rata  lemak ASIP berbagai kelompok durasi pembekuan dan suhu pencairan.  Semua  data  dalam  penelitian  ini berdistribusi  normal  sehingga  penyajian  data menggunakan nilai mean dan standar deviasi.

## Pengaruh  Durasi  Pembekuan  terhadap  Kadar Lemak pada ASI Perah
Pengaruh  durasi  pembekuan  terhadap  kadar lemak pada ASIP dapat diketahui dengan melakukan uji  perbedaan  kadar  rata-rata  lemak  ASIP  setelah perlakuan dan sebelum pembekuan (ASIP segar). Uji yang digunakan adalah uji t berpasangan karena data numerik berdistribusi normal.
Tabel  3  memberikan  informasi  mengenai pengaruh  durasi  pembekuan  terhadap  kadar  lemak ASIP.    Rata-rata  penurunan  kadar  lemak  pada kelompok durasi pembekuan 7 hari (B1, B2, dan B3) dan 14 hari (C1, C2 dan C3) adalah 62%. Uji analisis pada  kedua  kelompok  tersebut  memberikan  nilai p<0,05.  Nilai  p  tersebut  memberikan  makna  bahwa
pada  kedua  kelompok  durasi  pembekuan  tersebut terjadi penurunan kadar rata-rata lemak ASIP. Rata- rata  penurunan  kadar  lemak  pada  kelompok  durasi pembekuan 3 hari (A1, A2 dan A3) adalah 2%. Hasil uji analisis pada kelompok durasi pembekuan 3 hari menunjukkan  nilai  p>0,05.  Tidak  ada  penurunan kadar lemak ASIP pada kelompok durasi pembekuan 3 hari.
Perbedaan  kadar  lemak  ASIP  pada  masing- masing kelompok durasi pembekuan dapat diketahui dengan  melakukan  uji one-way  anova. Uji one-way anova memberikan  nilai  p=0,000  (p<0,05).  Nilai  p tersebut memberikan makna bahwa terdapat perbedaan  antara  kelompok  durasi  pembekuan  yang diuji.  Oleh  karena  itu,  untuk  mengetahui  lebih  jelas perbedaan antara kelompok dilakukanlah uji post hoc (tabel 4).
Tabel  4  memperlihatkan  bahwa  terdapat perbedaan  kadar  rata-rata  lemak  antara  kelompok durasi pembekuan 3 hari (A) dengan kelompok durasi pembekuan 7 hari (B) dan 14 hari (C) dengan masing- masing  nilai  p=0,000  dan  p=0,000  (p<0,05).  Pada Tabel  4  juga  diketahui  bahwa  tidak  terdapat perbedaan  kadar  lemak  antara  kelompok  durasi pembekuan 7 hari dan 14 hari dengan nilai p=0,988 dan  p=1,000  (p>0,05).  Hal  ini  mengimplikasikan
bahwa  pembekuan  selama  7  hari  dan  14  hari memberikan perubahan kadar trigliserida yang sama.
Pengaruh Suhu Pencairan terhadap Kadar Lemak pada ASI Perah
Uji one-way anova dilakukan untuk mengetahui  perbedaan  kadar  lemak  ASIP  pada masing-masing kelompok suhu pencairan. Berdasarkan  uji one-way  anova yang  dilakukan, didapatkan  nilai  p=0,396  (p>0,05).  Dari  nilai  p tersebut  dapat  diketahui  bahwa  tidak  terdapat perbedaan  rata-rata  kadar  lemak  dari  berbagai kelompok  suhu  pencairan  ASIP  beku.  Uji post  hoc tidak  dilakukan  karena  tidak  terdapat  perbedaan bermakna  berdasarkan  uji one-way  anova .  Dengan demikian,  berdasarkan  uji  tersebut,  tidak  terdapat pengaruh  suhu  pencairan  4 o C,  25 o C  dan  37 o C terhadap kadar lemak pada ASIP.
Penelitian  ini  memiliki  hasil  yang  agak berbeda  dengan  penelitian  terdahulu.  Penelitian sebelumnya menyebutkan bahwa terdapat perbedaan kadar  rata-rata  lemak  pada  berbagai  variasi  suhu pencairan.  Perbedaan  nilai  gizi  ibu  menyusui,  usia menyusui,  dan  faktor  penyakit  dapat  berpengaruh terhadap  kandungan  ASI.  Walaupun  begitu,  hasil penelitian ini memiliki hasil yang sama bahwa durasi pembekuan memiliki pengaruh terhadap kadar lemak ASIP yaitu menurunkan kadar lemak [6], [13], [16].
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pada kelompok  durasi  pembekuan  tiga  hari  belum  terjadi perubahan kadar lemak ASI. Perubahan kadar lemak pada ASI tergantung pada aktivitas enzim lipase dan waktu penyimpanan. Aktivitas enzim lipase menyebabkan  penurunan  kadar  trigliserida.  Secara deskriptif,  penurunan  kadar  lemak  pada  kelompok durasi pembekuan tiga hari hanya sekitar 2% (Tabel 3). Nilai penurunan tersebut tidak memberikan makna karena  nilai  p>0,05.  Hal  ini  disebabkan  faktor  lama penyimpanan (3 hari) dan suhu penyimpanan (-20 o C) menyebabkan aktivitas enzim lipase pada ASIP tidak optimal [14].
Proses  lipolisis  yang  terjadi  pada  ASIP berperan menyebabkan penurunan kadar lemak pada ASI  yang  dibekukan.  Lipolisis  merupakan  proses pemecahan  ikatan  ester  oleh  enzim  lipase  pada trigliserida  (lemak)  dengan  menambahkan  molekul air  sehingga  menghasilkan  asam  lemak  bebas  dan gliserol  [6],  [17].  Enzim  lipase  dapat  berasal  dari aktivitas  bakteri  lipolitik,  metabolisme  bakteri  asam laktat,  atau  terdapat  secara  natural  pada  ASI  itu sendiri.  Diketahui  bahwa  suhu  optimal  lipase  untuk
bekerja  dengan  kecepatan  maksimal  adalah  pada rentang suhu 35 o C sampai 40 o C.  Enzim lipase masih tetap dapat beraktivitas pada suhu -20 o C. Bila enzim lipase  aktif  atau  bekerja,  maka  triasilgliserol  atau trigliserida  akan  dihidrolisis  menjadi  asam  lemak bebas  dan  gliserol  sehingga  yang  terjadi  penurunan kadar lemak ASI [18], [19].
Selain dipengaruhi temperatur, proses lipolisis  dipengaruhi  juga  oleh  lama  waktu  paparan terhadap  suhu.  Semakin  lama  penyimpanan  dan semakin  tinggi  suhu  maka  lipolisis  semakin meningkat  yang  ditandai  dengan  akumulasi  asam lemak yang meningkat. Pelepasan asam lemak bebas meningkat seiring lamanya waktu ASI disimpan pada suhu -11 o C selama 48 jam [19].
Suhu  pencairan  berpengaruh  terhadap  kadar lemak  ASI.  ASIP  beku  yang  dicairkan  selama  satu hari dengan suhu lemari pendingin (4 o C) dan selama 30 menit pada suhu air hangat (37 o C) memiliki kadar lemak  yang  lebih  rendah  dibandingkan  kadar  ASIP awal (p=0,001 dan p=0,001). Hasil penelitiannya juga menunjukkan  ada  perbedaan  kadar  ASIP  yang dicairkan pada suhu lemari pendingin (4 o C) dan pada suhu air hangat (37 o C) dengan nilai p=0,02 [12], [13], [20].
Pencairan yang dilakukan pada penelitian ini adalah  sampai  mencair  sempurna  dan  tidak  dibatasi oleh  waktu.  Terdapat  perbedaan  waktu  ASIP  beku mencair  pada  masing-masing  suhu  pencairan.  Jika dibandingkan dengan suhu pencairan 25 o C dan 37 o C, pencairan  ASIP  beku  pada  suhu  lemari  pendingin (4 o C) memerlukan waktu yang lebih lama. Pencairan ASIP beku pada suhu 4 o C mencapai sempurna setelah 2-3  jam.  Pada  penelitian  ini,  masing-masing  sampel hanya berjumlah 1 mL.  Durasi waktu pencairan ASIP beku  dalam  penelitian  ini  lebih  cepat  dibandingkan dengan  penelitian  sebelumnya.  Adanya  perbedaan durasi waktu pencairan menyebabkan perbedaan hasil pada kedua penelitian ini [12], [19], [21].
Hasil  analisis  penelitian  ini  yakni  pengaruh waktu pembekuan dan suhu pencairan terhadap kadar lemak  ASIP  selaras  dengan  beberapa  penelitian sebelumnya.  Selain  itu,  hasil  penelitian  ini  dapat mendukung  landasan  teori  yang  sudah  ada  bahwa suhu dan waktu memiliki pengaruhi terhadap nutrisi yang  dikandung  ASI.    Adanya  sedikit  perbedaan dengan beberapa penelitian terdahulu dapat disebabkan  faktor  nutrisi  ibu  dan  variasi  variabel. Waktu pembekuan pada penelitian ini memengaruhi kadar  lemak  ASIP,  sedangkan  suhu  pencairan  tidak memengaruhi  kadar  lemak  ASIP.  Kandungan lemak
ASIP  tidak  berubah  setelah  tiga  hari  pembekuan. Namun, kandungan lemak ASIP mengalami penurunan  selama  tujuh  dan  empat  belas  hari pembekuan.  Variasi  suhu pencairan  yang  digunakan pada penelitian ini yakni 4°C (lemari es), 25 °C (suhu ruang)  dan  37°C  (air  hangat)  tidak  memengaruhi kandungan lemak ASIP.
Kadar lemak yang diukur dalam penelitian ini adalah  trigliserida.  Padahal  di  dalam  ASI,  kadar trigliserida  hanya  98%.  Hal  ini  mengindikasikan bahwa  ada  jenis  lemak  yang  tidak  diukur  dalam penelitian ini. Selain itu, rentang penyimpan dari tiga hari ke tujuh hari dapat menimbulkan perbedaan hasil yang  berbeda.  Oleh  karena  itu,  optimalisasi  pada kedua  variabel  tersebut  dapat  dilakukan  untuk memberikan  hasil  penelitian  yang  lebih  baik  [10], [11].

## Simpulan
Durasi pembekuan memiliki pengaruh terhadap  kadar  lemak  pada  ASIP.  Pembekuan  ASIP selama 7 dan 14 hari pada suhu -20 o C menyebabkan penurunan kadar lemak ASIP, sedangkan pembekuan ASIP  selama  3  hari  pada  suhu  -20 o C  tidak menyebabkan  perubahan  kadar  lemak  ASIP.  Suhu pencairan 4 o C (lemari pendingin), 25 o C (suhu ruang), dan  37 o C  (air  hangat)  tidak  berpengaruh  terhadap kadar  lemak  pada  ASIP.  Oleh  karena  itu,  untuk mendapatkan  kadar  lemak  ASIP  yang  optimal, sebaiknya  pembekuan  pada  suhu  -20 o C  dilakukan tidak  lebih  dari  3  hari  serta  dapat  digunakan  variasi suhu pencairan (4 o C, 25 o C, dan 37 o C). Rekomendasi penelitian selanjutnya adalah dengan  variabel durasi pembekuan selama 4, 5, 6 hari dan di atas 2 minggu, dan variabel kadar total lemak dalam ASI perah.

## Daftar Pustaka
[1] Kementerian RI., “Peraturan Bersama Menteri Negara  Pemberdayaan  Perempuan,  Menteri
Tenaga Kerja dan Transmigrasi, dan Memberi Kesehatan Nomor 48/Men.PP/XII/2008, Nomor PER.27/MEN/XII/2008, Nomor 1177/Menkes/PB/XII/2008 tentang
Peningkatan  Pemberian  ASI  Selama  Kerja.” Kementerian RI, Jakarta, 2008.
[2] Pemerintah RI., “Peraturan Pemerintah RI No 33  Tahun  2012  Tentang  Pemberian  Air  Susu Ibu Eksklusif,” Pemerintah RI . Pemerintah RI, Jakarta, 2012.
[3] F.  A.  Wijaya,  “Nutrisi  Ideal  untuk  Bayi  0-6 Bulan,” CDK - J. , vol. 46, no. 4, pp. 296–300, 2019.
[4] L. Goran, Breastfeeding and Breast Milk - from Biochemistry  to  Impact .  Switzerland:  Family Larrson-Rosenquist Foundation, 2018.
[5] S.  Y.  Kim  and  D.  Y.  Yi,  “Components  of human  breast  milk:  from  macronutrient  to microbiome  and  microRNA,” Clin.  Exp. Pediatr. ,  vol.  63,  no.  8,  pp.  301–309,  Aug. 2020, doi: 10.3345/CEP.2020.00059.
[6] I.  Putri  Sari,  A.  Ariadi,  and  E.  Yerizel, “Efek Lama  Penyimpanan  Asi  Terhadap  Kadar Protein dan Lemak yang Terkandung Didalam ASI,” J. Kesehat. Andalas , vol. 5, no. 1, pp. 56– 59, 2016, doi: 10.25077/jka.v5i1.444.
[7] Kemenkes  RI, Profil  Kesehatan  Indonesia 2018 , vol. 1227. 2018. [8] IDAI, “Memerah dan Menyimpan Air Susu Ibu (ASI),” Jakarta, No.: 006/Rek/PP
IDAI/V/2014,  2014.  [Online].  Available: https://www.idai.or.id/professional- resources/rekomendasi/memerah-dan- menyimpan-air-susu-ibu-asi.
[9] A. Eglash and L. Simon, “ABM Protocol ABM Clinical  Protocol  #8:  Human  Milk  Storage Information  for  Home  Use  for  Full-Term Infants, Revised 2017,” vol. 12, no. 7, pp. 390– 395, 2017, doi: 10.1089/bfm.2017.29047.aje.
[10]  Q.  Pham,  P.  Patel,  B.  Baban,  J.  Yu,  and  J. Bhatia, “Factors Affecting the Composition of Expressed  Fresh  Human  Milk,” Breastfeed. Med. ,  vol.  15,  no.  9,  pp.  551–558,  2020,  doi: 10.1089/bfm.2020.0195.
[11]  S.  Bransburg-Zabary,  A.  Virozub,  and  F.  B. Mimouni, “Human milk warming temperatures using a simulation of currently available storage and warming methods,” PLoS One , vol. 10, no. 6, pp. 1–13, 2015, doi: 10.1371/journal.pone.0128806.
[12]  M.  H.  Kim et  al. ,  “Macronutrient  Analysis  of Human  Milk  according  to  Storage  and Processing  in  Korean  Mother,” Pediatr. Gastroenterol.  Hepatol.  Nutr. ,  vol.  22,  no.  3, pp. 262–269, Apr. 2019, doi:
10.5223/PGHN.2019.22.3.262.
[13]  C. Gao, J. Miller, P. F. Middleton, Y. C. Huang, A. J. McPhee, and R. A. Gibson, “Changes to breast  milk  fatty  acid  composition  during storage, handling and processing: A systematic review,” Prostaglandins,  Leukot.  Essent.  Fat.
Acids ,  vol.  146,  pp.  1–10,  Jul.  2019,  doi: 10.1016/J.PLEFA.2019.04.008.
[14]  S.  Mane  and  R.  P.  Mahajan,  “The  effect  of Storage  conditions  on  nutritional  quality  of donor human milk in milk bank practice,” no. August 2019, pp. 1–8, 2021, doi: 10.7439/ijbar.v10i8.5169.
[15]  D.  Handa et  al. ,  “Do  thawing  and  warming affect  the  integrity  of  human  milk?,” J. Perinatol. , vol. 34, no. 11, pp. 863–866, 2014, doi: 10.1038/jp.2014.113.
[16]  P.  Arum  and  A.  Widiyawati,  “Breast  Milk Nutrient Content In Different Storage
Temperatur  and  Duration,” Ilm.  Inov. ,  vol.
16:(03), no. October, pp. 0–4, 2019.
[17]  F. C. Mamuaja, Lipida . Manado: Unsrat press,
2017.
[18]  S.  Titin  Aryani,  Fitria  Siswi  Utami,  “Studi Pengaruh  Suhu  Penyimpanan  terhadap  Kadar Asam  Lemak  Omega-3  pada  Air  Susu  Ibu (ASI),” vol. 4, no. 1, pp. 1–10, 2017.
[19]  R.  A.  Lawrence  and  R.  M.  Lawrence, Breastfeeding:  a  guide  for  the  medical professional . Elsevier Health Sciences, 2021.
[20]  S.  Handayani,  D.  Soekmawaty  Riezqy Ariendha,  and  Y.  Suryatim  Pratiwi,  “Lama Penyimpanan Air Susu Ibu (ASI) Memengaruhi Kandungan  Zat  Gizi  Dalam  ASI,” J.  Kesehat. Qamarul Huda , vol. 7, no. 2, pp. 24–28, Dec. 2019, doi: 10.37824/JKQH.V7I2.2019.122.
[21]  K. Sri et al. , “Pengaruh Lama Penyimpanan Asi Di  Freezer  Terhadap  Kadar  Karbohidrat, Protein  Dan  Lemak  Yang  Terkandung  Dalam Asi,” Wal’afiat Hosp. J. , vol. 3, no. 2, pp. 148– 155, Dec. 2022, doi: 10.33096/WHJ.V3I2.87.