## PENGARUH METODE EKSTRAKSI TERHADAP AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN KADAR FLAVONOID DAUN KAREHO (Callicarpa Longifolia Lam)
Fadlilaturrahmah*, Nashrul Wathan, Akhmad Rezeki Firdaus, Saufy Arishandi
Universitas Lambung Mangkurat, Kota Banjarbaru, Kalimantan Selatan, Indonesia.
*Penulis korespondensi: fadlilaturrahmah@ulm.ac.id

## ABSTRAK
Tumbuhan  Kareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.  merupakan  salah  satu  tanaman  herbal  yang mengandung  senyawa  flavonoid.  Penelitian  sebelumnya  telah  dilakukan  untuk  menilai  kadar flavonoid  tertinggi  berdasarkan  variasi  pelarut,  tetapi  belum  ada  penelitian  mengenai  metode ekstraksi  yang  optimal  untuk  penentuan  aktivitas  antioksidan  dan    kadar  flavonoid.  Tujuan  dari penelitian  ini  pada  dasarnya  adalah  untuk  mengevaluasi  metode  ekstraksi  terbaik  jika  dilihat  dari aktivitas antioksidan kadar flavonoid dan dari daun C.longifolia . Metode ekstraksi yang dilakukan dalam penelitian ini adalah maserasi, soxhlet dan perkolasi. Total kandungan flavonoid ditentukan dengan  menggunakan  metode  aluminium  klorida  dan  dihitung  sebagai  setara  kuersetin  (EK).  Uji aktivitas  antioksidan dilakukan  secara in vitro dengan metode DPPH. Hasil menunjukkan bahwa semua ekstrak yang diperoleh dari metode ekstraksi yang berbeda menunjukkan antioksidan kuat, di mana aktivitas antioksidan tertinggi diperoleh dari metode ekstraksi perkolasi (IC 50 = 20,82 ppm). Total  kandungan  flavonoid  tertinggi  diperoleh  dari  metode  soxhlet  (12,37  ±  0,03%  b/b).  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  perbedaan  metode  ekstraksi  menghasilkan  perbedaan  yang signifikan (sig <0,05) pada aktivitas antioksidan dan kadar flavonoid dari  daun C. longifolia .
Kata kunci : Callicarpa longifolia Lam, Ekstraksi, Antioksidan,  Flavononid

## THE EFFECT OF EXTRACTION METHOD ON ANTIOXIDANT ACTIVITY AND FLAVONOID LEVELS OF KAREHO LEAVES (Callicarpa Longifolia Lam)

## ABSTRACT
Kareho (Callicarpa longifolia) Lam. plants is one of the herbs contain flavonoid compounds. Previous research has been conducted to assess  the highest levels of flavonoids based on solvent variations, but there has been no study examining the optimal extraction methods for determination of  antioxidant  activities  and  flavonoids  content.  The  purpose  of  the  research  was  essentially  to evaluate  the  best  technique  for    extraction  flavonoid  and  antioxidant  activities  from  C.longifolia leaves.  Extraction  method  carried  out  in  the  study  are  maceration,  soxhletation  and  percolation. Total  flavonoid  content  determined  using  the  aluminium  chloride  method  and  calculated  as quercetin equivalents (QE). The antioxidant activity was performed following in vitro technique by DPPH assay. Results showed that all extracts obtained from different extraction methods exhibited a  potent  antioxidant,  where  the  highest  antioxidant  activities  was  recorded  for  the  percolation method extraction (IC 50 = 20.82 ppm). The highest of total flavonoid contents was recorded for the soxhletation  method  (12.37  ±  0.03  %b/b). The  result  showed  that  the  treatment  effect  of  different extraction  was    significant  (sig  <0.05)  on  flavonoid  total  and  antioxidant  activities  from  C. longifolia.
Keywords: Callicarpa longifolia Lam., Extraction, Antioxidant, Flavonoid

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara kepulauan yang berada di daerah tropis dengan potensi tanaman  obat  terbesar  kedua  setelah  Brazil.  Sebanyak  40.000  spesies  tumbuhan  yang ditemukan  dan  tumbuh  di  seluruh  dunia,  30.000  spesies  di  antaranya  hidup  di  Indonesia (Salim dan Munadi, 2017). Sekitar 9.600 spesies tumbuhan berkhasiat sebagai obat dan 300 spesies telah digunakan sebagai bahan obat tradisional. Banyaknya ragam spesies tumbuhan tersebut  menjadi  suatu  potensi  bagi  Indonesia  sebagai  produsen  tanaman  obat  di  dunia (Najib et al., 2017). Tumbuhan Callicarpa longifolia Lam. adalah salah satu tumbuhan yang mengandung senyawa ﬂavonoid. Tumbuhan ini berasal dari famili Lamiaceae dan dikenal dengan nama Kareho. Tumbuhan ini dimanfaatkan sebagai pupur, obat masuk angin, dan bengkak  oleh  suku  Dayak  Tunjung  Kaltim.  Tumbuhan C.  longifolia juga  dimanfaatkan sebagai  obat  sakit  perut  dan  diare  pada  bagian  akarnya,  sedangkan  pada  bagian  daunnya digunakan  sebagai  bedak  pembersih  wajah  dan  obat  malaria  (Pasaribu et  al ,  2014; Setyowati,  2010).  Penelitian  sebelumnya  menyebutkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  daun C. longifolia memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 sebesar 38,94 ppm (Erwin dan Daniel,  2015).  Berdasarkan  penelitian  lain  menyebutkan  bahwa  telah  dilakukan  isolasi flavonoid dari fraksi etil asetat daun C . longifolia (Pasaribu et al. , 2014; Novadiana et al. , 2013).
Flavonoid  merupakan  suatu  kelompok  senyawa  fenol  terbanyak  yang  ditemukan  di alam.  Flavonoid  termasuk  dalam  golongan  senyawa  fenolik.  Berdasarkan  hasil-hasil penelitian  yang  telah  dilakukan  sebelumnya,  diyakini  bahwa  flavonoid  adalah  salah  satu kelompok senyawa fenolik yang  memiliki sifat antioksidatif serta berperan dalam mencegah kerusakan sel dan komponen selularnya oleh radikal bebas reaktif (Redha, 2010). Flavonoid diketahui juga dapat  menunjukkan aktivitas biokimia misalnya antioksidan, anti virus, anti bakteri,  dan  anti  kanker  (Fowler et  al. ,  2009).  Penelitian  ini  menggunakan  DPPH  yang berperan sebagai radikal bebas yang akan diredam radikal bebasnya oleh sampel. Aktivitas peredaman  radikal  bebas  oleh  sampel  biasanya  disebutkan  sebagai  persen  penghambatan atau persen inhibisi, dan dapat dinyatakan sebagai konsentrasi sampel yang menyebabkan hilangnya  50%  aktivitas  DPPH  (Yuhernita  dan  Juniarti,  2011).  Hasil  pengukuran dengan spektrofotometer cahaya tampak berupa data absorbansi digunakan untuk penentuan nilai persen  penghambatan  sampel  terhadap  DPPH.  Nilai  persen  penghambatan  dapat menunjukkan respon dari masing-masing konsentrasi uji (Daud et al., 2011). Penelitian ini menggunakan  konsentrasi  sampel  sebesar  10  ppm.  Berdasarkan  penelitian  Yuhernita  dan
Juniarti  (2011)  konsentrasi  10  ppm  merupakan  konsentrasi  dimana  terjadi  penghambatan DPPH sebesar 50% oleh asam askorbat yang sudah diketahui aktivitas antioksidannya.
Optimalisasi ekstraksi bertujuan mencari atau menemukan nilai perubah dalam proses yang  menghasilkan  nilai  terbaik  dari  syarat-syarat  kondisiiyang  digunakan.  Penyelesaian optimalisasi  terfokus  pada  pemilihan  secara  tepat  dan  biaya  yang  hemat  diantara keseluruhan  dan  proses  metode  kuantitatif  yang  efisien  (Febrina et  al. ,  2015).  Flavonoid diketahui  merupakan  senyawaayang  bersifat  stabil  terhadap  pemanasan  dengan  suhu tertentu. Meningkatnya suhuumenyebabkan peningkatan kadar flavonoid sampai pada suhu tertentu kemudian menurun seiring dengan peningkatan suhu yang lebih tinggi (Riadini et al. , 2015).
Penelitian sebelumnya telah dilakukan untuk menentukan pelarut yang paling optimal dari etanol 70%, etanol 96% dan metanol berdasarkan parameter kadar flavonoid total ekstrak daun C.  longifolia .  Pelarut  yang  menghasilkan  kadar  flavonoid  tertinggi  pada  daun C. longifolia adalah pelarut metanol (Maulida, 2018). Berdasarkan hal yang telah diuraikan di atas maka dilakukan penelitian pengaruh metode ekstraksi  terhadap aktivititas antioksidan dan kadar flavonoid  kareho ( Calicarfa longifolia L).

## BAHAN DAN METODE

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  pada  penelitian  kali  ini  adalah  alat  gelas,  maserator, seperangkat  alat  sokhlet,  perkolator,  neraca  analitik  (Ohauss),  plat  KLT,  vortex, spektrofotometer  UV-Vis  (Spectronic  Genesys  10  uv), waterbath (SMIC)  dan rotary evaporator (Heidolph).
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun C.  longifolia ,  aquadest, natrium  hidroksida  10%,  aluminium  foil,  kertas  saring,  metanol  p.a,  etanol  p.a,  metanol teknis,  aluminium  klorida  10%,  standar  kuersetin  (Sigma),  etil  asetat  p.a,  n-heksan  p.a, aquadest, asam asetat 5% dan pereaksi DPPH.

## Preparasi Sampel dan Ekstraksi Daun C. longifolia
Tumbuhan yang digunakan pada penelitian ini adalah daun C. longifolia segar yang diambil  pada  bulan  Februari  2019  di  Kelurahan  Beriwit,  Kecamatan  Murung,  Kabupaten Murung  Raya,  Provinsi  Kalimantan  Tengah.  Preparasi  sampel  dilakukan  dengan  sortasi basah,  pencucian,  pengeringan,  sortasi  kering.  Pengolahan  serbuk  dilakukan  dengan
menggunakan  blender  hingga  menjadi  serbuk  (Puspitasari  &  Proyogo,  2017).  Serbuk simplisia daun C. longifolia ditimbang sebanyak 20 gram yang masing-masing digunakan untuk ekstraksi dengan metode yang berbeda yaitu maserasi, soxhlet, dan perkolasi. Filtrat hasil  ekstraksi  diuapkan  dengan rotary  evaporator kemudian  dipekatkan  di waterbath hingga diperoleh ekstrak kental. Ekstrak ditimbang dan dihitung persentase rendemennya.

## Penetapan kadar flavonoid dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis Pembuatan kurva baku standar
Sebanyak 10 mg kuarsetin ditimbang dan dimasukan ke dalam labu ukur 10 mL. Lalu ditambahkan etanol p.a sampai tanda batas. Dari larutan induk kuarsetin diambil 0,4; 0,6; 0,8;  1,0;  1,2  mL  dan  masing-masing  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  mL  lalu ditambahkan etanol p.a sampai tanda batas. Larutan standar dengan konsentrasi 40; 60; 80; 100  dan  120  ppm  tersebut  lalu  diambil  0,5  mL  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi. Larutan tersebut lalu ditambahkan dengan 0,1 mL AlCl 3 10%, 0,1 mL asam asetat 5% dan 2,8 mL aquades kemudian didiamkan pada suhu ruang selama operating time (28 menit)  dan  diukur  pada  panjang  gelombang  maksimum  (416nm).  Dilakukan  replikasi sebanyak 3 kali.

## Penetapan Kadar Flavonoid
Penetapan  kadar  flavonoid  ekstrak  metanol  daun C.  longifolia dari  3  metode  yaitu maserasi, soxhlet, dan perkolasi masing-masing dibuat pada konsentrasi sebesar 1000 ppm, dengan menimbang 10 mg ekstrak dan dilarutkan dengan etanol p.a dalam labu ukur 10 mL sampai  tanda  batas.  Sebanyak  0,5  mL  larutan  tersebut  diambil  lalu  masing-masing ditambahkan dengan 1,5 mL etanol p.a kemudian direaksikan dengan 0,1 mL AlCl 3 10%, 0,1  mL  asam  asetat  5%  dan  2,8  mL    aquadest.  Larutan  dikocok  dan  didiamkan  selama operating  time (28  menit).  Lalu  dilakukan  replikasi  sebanyak  3  kali.  Absorbansi  larutan dibaca pada panjang gelombang maksimum (416nm). Blanko yang digunakan yaitu etanol p.a yang direaksikan dengan AlCl 3 10%, asam asetat 5% dan aquadest.

## Penentuan aktivitas antioksidan ekstrak metanol daun C. longifolia
Sebanyak  10  mg  sampel  dari  ekstrak  metode  maserasi  (CLM),  soxhlet  (CLS)  dan perkolasi  (CLP)  masing-masing  dilarutkan  dalam  10  mL  metanol  p.a.  Kemudian  larutan tersebut dibuat dengan konsentrasi 100 ppm dengan mengambil sebanyak 1 mL, selanjutnya dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL dan ditambah dengan metanol p.a hingga tanda batas.
Kemudian  dibuat  larutan  dengan  konsentrasi  10  ppm  dengan  diambil  masing-masing konsentrasi  sampel  sebanyak  1  mL  dan  di  masukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  mL  dan ditambah metanol p.a hingga tanda batas. Larutan tersebut masing-masing diambil sebanyak 4 mL dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Kemudian sebanyak 1 mL larutan DPPH 0,4 mMol  ditambahkan.  Kemudian  dilakukan  pembacaan  absorbansi  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  direntang  panjang  gelombang  maksimum  (516nm).  Dilakukan replikasi  sebanyak  3  kali.  Nilai  IC 50 merupakan  konsentrasi  dimana  sampel  dapar menghambat radikal bebas sebesar 50% yang diperoleh dengan memakai persamaan regresi linear y = bx + a.
% inhibisi = Absorbansi Blanko-Absorbansi Sampel
Absorbansi Blanko x 100%

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Preparasi Sampel dan Ekstraksi Daun C. longifolia
Sampel  daun  segar  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  sebanyak  2  kg.  Bagian tumbuhan yang dijadikan sampel adalah daun dari tumbuhan kareho ( Callicarpa longifolia Lam.)  yang  diambil  pada  bulan  Februari  di  Kelurahan  Beriwit,  Kecamatan  Murung, Kabupaten Murung Raya, Provinsi Kalimantan Tengah. Pembuatan serbuk simplisia daun C. longifolia diawali dengan sortasi basah. Sortasi basah bertujuan untuk memisahkan daun yang rusak, kotoran, dan benda asing setelah proses pengambilan sampel di lapangan. Proses pengeringan  menggunakan  oven  bertujuan  untuk  mengurangi  kandungan n air,  sehingga dapat menghambat pertumbuhan mikroba . Selain itu untuk mencegah h tumbuhnya kapang dan jamur sehingga diperoleh simplisia a yang awet dan dapat disimpan dalam jangka waktu yang lama. Proses sortasi kering kemudian dilakukan untuk memisahkan sampel yang telah rusak  akibat  proses  sebelumnya.  Proses  penghalusan  sampel  dilakukan  dengan menggunakan blender hingga didapat serbuk yang kasar agar proses ekstraksi dapat berjalan dengan baik.
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  ekstraksi  dengan  cara  dingin dengan  metode  maserasi  dan  perkolasi  serta  cara  panas  dengan  soxhlet.  Pada  proses maserasi dilakukan proses pengadukan bertujuan agar terjadinya kesetimbangan konsentrasi bahan  yang  diekstraksi lebih cepat  didalam  cairan  penyari.  Pada  proses  ini,setiap 24  jam pelarut  diganti  dengan  pelarut  yang  baru  yang  bertujuan  untuk  mencegah  terjadinya penjenuhan  pelarut  sehingga  senyawa  yang  tertarik  pada  saat  ekstraksi  lebih  maksimal (Mukhriani, 2014). Metode  ekstraksi dengan soxhlet dilakukan sebanyak 15 siklus untuk
mendapatkan  parameter  berupa  ekstrak  yang  bening  pelarutnya.  Suhu  yang  digunakan dalam  proses  ini    adalah  64 o C  karena  merupakan  titik  didih  dari  pelarut  yang  digunakan yaitu metanol. Diketahui senyawa flavonoid dapat stabil pada suhu 70 o C sehingga suhu pada proses  ini  terus  dijaga  hingga  tidak  melebihi  70 o C  karena  suhu  yang  terlalu  tinggi  dapat merusakksenyawa flavonoid (Puspitasari dan Proyogo, 2017).
Metode  ekstraksi  dengan  perkolasi  dilakukan  dengan  proses  perendaman  terhadap serbuk simplisia agar rongga simplisia membengkak sehingga mempermudah pelarut masuk ke dalam sel. Hasil dari rata-rata persen rendemen ekstrak CLM, CLS, dan CLP berturut- turut sebesar 14,35 ± 0,726%, 17,5 ± 0,35% dan 15 ± 1,153%. Persen rendemen daun C. longifolia paling  besar  dihasilkan  pada  metode  soxhlet  dibandingkan  dengan  metode maserasi  dan  perkolasi.  Berdasarkan  penelitian  Mukhriani  (2014)  kelebihan  dari  metode soxhlet adalah proses ekstraksi yang kontinyu dan sampel terekstraksi oleh pelarut murni hasil  kondensasi  sehingga  rendemen  yang  dihasilkan  lebih  banyak.  Pemanasan  dapat meningkatkan kemampuan untuk mengekstraksi senyawa-senyawa yang tidak laruttdalam suhu kamar, sehingga aktivitas penarikan senyawa lebih maksimal.
Analisis Kualitatif Daun C. longifolia
Identifikasi  golongan  senyawa a dapat  dilakukan  dengan  metode  kromatografi  lapis tipis berdasarkan nilai Rf (Mukhriani, 2014). Pengujian dilakukan dengan cara menguapkan plat KLT yang sudah ditotolkan dan dielusi di atas uap ammonia. Bercak noda berwarna kuning pada plat KLT menunjukkan hasil positif mengandung flavonoid (Nuari, 2017).
Gambar 1. Hasil KLT fase gerak n-heksan - etil asetat (7 : 3) pada lampu uv 254 dan setelah ditambah pereaksi uap ammonia. Keterangan : A. CLP; B. CLS; C. CLM.
A B C B A
C
Noda yang berwarna kuning pada plat yaitu pada maserasi dengan nilai Rf 0,32 dan 0,46, soxhlet dengan nilai Rf 0,30 dan 0,46 dan perkolasi dengan nilai Rf 0,29 dan 0,44. Disimpulkan  ada  kemungkinan  terkandung  senyawa  flavonoid  berdasarkan  bercak  noda berwarna  kuning  tersebut.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  Rahayu et  al (2015)  dengan menggunakan perbandingan fase gerak n-heksan-etil asetat (6:4) menyebutkan noda dengan nilai Rf antara 0,2-0,75 menunjukkan noda yang mengandung flavonoid. Penetapan kadar flavonoid  total  dilakukan  menggunakan 3  jenis  metode  ekstraksi  yaitu  maserasi,  soxhlet, dan perkolasi daun C. longifolia . Nilai absorbansi dari masing-masing ekstrak dimasukkan dalam persamaan kurva baku kuersetin yang telah didapat sebelumnya yaitu y = 0, 003x  - 0,0052.
Gambar 2. Grafik kurva baku kuersetin
Berdasarkan grafik di atas, diperoleh persamaan regresi yaitu y = 0, 003x  - 0,0052. Nilai linieritas (r) yang diperoleh adalah 0,999. Keakuratan yang didapatkan 99,9 % dengan tingkat kesalahan yang terjadi hanya 0,1 %. Linieritas menyatakan adanya hubungan yang linier antara konsentrasi dan absorbansi larutan seri kadar yang didapat. Semakin mendekati 1  maka  hasil  yang  didapatkan  semakin  linier.  Hal  ini  telah  sesuai  dengan  literatur  yang menyatakan liniearitas baik apabila nilai i koefesien korelasi (r) mendekati 1. Hasil analisis Post  Hoct  Test  menunjukkan  bahwa  antara  metode  maserasi  dengan  soxhlet,  maserasi dengan  perkolasi  ataupun  soxhlet  dengan  perkolasi  terdapat  perbedaan  yang  bermakna terhadap  kadar  flavonoid  total  yang  ditandai  dengan  nilai  (sig  <0,05).  Berdasarkan  hasil perhitungan  kadar  flavonoid  total  di  atas  didapat  metode  yang  paling  optimal  menarik senyawa flavonoid adalah metode soxhlet.
y = 0.0033x - 0.0052 r = 0.999 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0 50 100 150 A b so rb an si Konsentrasi (ppm)
Tabel 1 . Hasil perhitungan kadar flavonoid total
Metode Ekstraksi RSD (%) Kadar flavonoid total (%b/b EK) Rata-rata Kadar flavonoid total (%b/b EK) ± SD RSD (%) Maserasi 0,650 8,04 8 7,94 7,995 ± 0,050 0,635 Soxhlet 0,273 12,34 12,37 12,4 12,37 ± 0,03 0,242 Perkolasi 0,948 9,106 9,006 8,94 9,017 ± 0,083 0,926
Flavonoid  yang  terdapat  dalam  daun C.  longifolia stabil  terhadap  pemanasan. Berubahnya a suhu selama a proses ekstraksi i mempengaruhi kelarutan n suatu senyawa karena adanya  pengaruh  massa a jenis  (massa  jenis  sangat  sensitif  terhadap  perubahan  suhu), semakin  tinggi i suhu u pada  proses  ekstraksi  maka  dapat  mempercepat  perpindahan n massa dan meningkatkan hasil ekstraksi. Pada metode maserasi dan perkolasi tidak ada pemanasan sehingga hasil ekstraksi juga tidak meningkat. Penelitian yang dilakukan oleh Puspitasari dan  Proyogo  (2017)  kadar  flavonoid  total  tertinggi  daun  kersen  ( Muntingia  calabura ) dihasilkan  pada  ekstrak  etanol  metode  soxhlet  dibanding  dengan  ekstrak  etanol  metode maserasi.  Berdasarkan  penelitian  Verawati et  al (2016)  nilai  kadar  fenol  total  tertinggi ekstrak daun piladang ( Solenostemon scutellarioides (L.) Codd) yang juga tergolong dalam family Lamiaceae sama seperti sampel penelitian ini yaitu daun C. longifolia terdapat pada metode soxhlet.
Tabel 2. Hasil perhitungan aktivitas antioksidan Metode Ekstraksi Konsentrasi (ppm) Inhibisi (%) IC 50 (ppm) Maserasi 10 15 20 25 30 33,26 36.32 39,99 44,08 45,72 35,39 Perkolasi 10 15 20 25 30 32,09 45,28 49,79 51,30 64,95 20,82 Soxhlet 10 15 20 25 30 39,39 39,58 45,72 48,89 51,97 26,58 Kuersetin 2 3 4 5 6
21,5 28,34 36,01 45,12 52,24 5,8
Nilai  aktivitas  antioksidan  yang  paling  aktif  pada  penelitian  ini  adalah  metode perkolasi  karena  memiliki  nilai  IC 50 paling  rendah  dibandingkan  dibandingkan  metode maserasi dan soxhlet. Aktivitas antioksidan ini tidak lepas dari peranan senyawa metabolit sekunder  golongan  flavonoid.  Nilai  flavonoid  tertinggi  pada  penelitian  ini  didapat  dari soxhlet,  tetapi  pada  aktivitas  antioksidan  soxhlet  lebih  rendah  dibandingkan  dengan perkolasi.  Menurut  penelitian  Jing et  al., (2015)  peningkatan  suhu  dapat  mengakibatkan pergerakan molekular yang mempercepat disolusi sehingga meningkatkan kadar flavonoid. Namun,  peningkatan  suhu  yang  terlalu  tinggi  akan  menyebabkan  denaturasi  antioksidan termo-sensitif yang mungkin lebih stabil pada suhu yang lebih rendah. Oleh karena itu kadar flavonoid tertinggi pada metode soxhlet tidak memiliki aktivitas penghambat radikal bebas yang tinggi. Suhu yang direkomendasikan untuk menghindari denaturasi antioksidan termo- sensitif  adalah  60 o C.  Berdasarkan  hal  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  kadar  flavonoid total tidak berbanding lurus dengan aktivitas antioksidan. Selain itu juga bisa disebabkan kandungan  kimia  yang  berefek  terhadap  antioksidan  tidak  hanya  flavonoid,  bisa  juga dipengaruhi  oleh  kandungan  senyawa  fitokimia lainnya  seperti  golongan  fenolik ataupun tanin.

## KESIMPULAN
Kadar flavonoid ekstrak metanol daun C. longifolia dengan metode maserasi sebesar 7,995 ± 0,050 %b/b EK, soxhlet sebesar 12,37 ± 0,03 %b/b EK dan perkolasi sebesar 9,017 ±  0,083  %b/b  EK.  Metode  ekstraksi  yang  paling  optimal  untuk  menghasilkan  kadar flavonoid  total  tertinggi  dari  ekstrak  metanol  daun C.  longifolia adalah  metode  soxhlet. Aktivitas  antioksidan  yang  paling  aktif  diperoleh  dari  ekstrak  metanol  metode  perkolasi dengan nilai IC 50 sebesar 20,82 ppm

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penelitian ini dapat terlaksana karena dana DIPA PNBP FMIPA Universitas Lambung Mangkurat.

## DAFTAR PUSTAKA
Daud, M.F., Sadiyah, E.R., Rismawati, E. Pengaruh Perbedaan Metode Ekstraksi Terhadap Aktivitas  Ekstrak  Etanol  Daun  Jambu  Biji  ( Psidium  guajava L.)  Berdaging  Buah Putih. Prossiding Seminar Nasional dan PKM Sains, Teknologi, dan Kesehatan . 2011; 2: 55-6.
Erwin,  R.A.  Nisa  and  Daniel.  Phytochemical  Test,  Tokxicity  and  Antioxidant  Activity Leaves Sangkareho ( Callicarpa  longifolia Lam.)  With  DPPH  Method. Indonesia Chimica Acta . 2015; 8: 52-59.
Febrina,  L.,  Rusli,  R.,  Muflihah  F.  Optimalisasi  Ekstraksi  Dan  Uji  Metabolit  Sekunder Tumbuhan Libo ( Ficus Variegate Blume). J. Trop. Pharm. Chem . 2015; 3: 74-81.
Fowler,  L.Z.,  Mattheos,  A.,  Koffas.  Biosynthesis  and  biotechnological  production  of flavanones: current state and perspectives. Appl Microbiol Biotechnol . 2009; 83: 799- 808.
Jing,  C.L.,  Dong,  X.F.,  Tong,  J.M.  Optimization  of  Ultrasonic-Assisted  Extraction  of Flavonoid  Compounds  and  Antioxidants  from  Alfalfa  Using  Response  Surface Method. Molecules . 2015; 20: 15550-15571.
Maulida, S.M. Penetapan Kadar Flavonoid Total dari Ekstrak Etanol 70%, Etanol 96% dan Metanol Daun Kareho ( Callicarpa longifolia Lam.). Skrips i. Program Studi Farmasi, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru. 2018.
Mukhriani.  Ekstraksi,  Pemisahan  Senyawa,  dan  Identifikasi  Senyawa  Aktif. Jurnal Kesehatan. 2014; 7 : 361-367.
Mulyani, S. dan Laksana, T. Analisis Flavonoid dan Tannin Dengan Metoda Mikroskopi- mikrokimiawi. Majalah Obat Tradisional. 2011; 16: 109-114.
Najib,  A.,  Malik,  A.,  Ahmad,  A.R.,  Handayani,  V.,  Syarif,  R.A.,  Waris,  R.  Standarisasi Ekstrak Air Daun Jati Belanda dan Teh Hijau. Jurnal Fitofarmaka Indonesia. 2017; 2: 241-245.
Novadiana, A.,  Erwin, Pasaribu, S.P. Uji Toksisitas  ( Brine Shrimp Lethality  Test )  Ekstrak dan  Isolat  Fraksi  Kloroform  dari  daun  Karehau  ( Callicarpa  longifolia Lamk.). Prosiding Seminar Nasional Kimia Kalimantan Timur . 2013. Hal. 134 –140.
Nuari,  S.,  Anam,  S.,  Khumaidi,  A.  Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  Ekstrak Etanol  Buah  Naga  Merah  ( Hylocereus  polyrhizus (F.A.C  Weber)  Briton  dan  Rose. Jurnal Farmasi Galenika. 2017; 2: 118-125.
Pasaribu,  S.P.,  Erwin,  Istianti,  P.  Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  dari  Daun Tumbuhan  Sangkareho  ( Callicarpa  longifolia  Lam. ). Jurnal  Kimia  Mulawarman . 2014; 11: 80-83.
Puspitasari,  A.D.,  dan  Proyogo,  L.S.  Perbandingan  Metode  Ekstraksi  Maserasi  dan Sokhletasi Terhadap Kadar Flavonoid Total Ekstrak Etanol Daun Kersen ( Muntingia calabura ). Program studi S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang . 2017; 2: 16-23.
Rahayu, S., Kurniasih, N., Amalia, V. 2015. Ekstraksi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dari Limbah Kulit Bawang Merah Sebagai Antioksidan Alami. Al kimiya . 2015; 2: 1- 8.
Redha,  A.  2010.  Flavonoid:  Struktur,  Sifat  Antioksidatif  dan  Peranannya  dalam  Sistem Biologis. Jurnal Belian . 2010; 9: 196-202.
Riadini,  R.K.,  Sidharta,  B.B.R.,  Pranata,  F.S.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun Sambung Nyawa ( Gynurapro cumbens (Lour.) Merr) Berdasarkan Perbedaan Metode Ekstraksi dan Umur Panen. e-journal . 2015. Hal: 11.
Salim, Z. dan Munadi, E. Info Komoditi Tanaman Obat. Kementrian Perdagangan Republik Indonesia, Jakarta. 2017.
Setyowati,  F.M.  Artikel  Etnofarmakologi  dan  Pemakaian  Tanaman  Obat  Suku  Dayak Tunjung Kalimantan Timur. Media Litbang Kesehatan 2010; 20 (3).
Simaremare,  E.S.  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Daun  Gatal  ( Laportea  decumana (Roxb.) Wedd). Pharmacy. 2014; 11. 98-107.
Yuhernita dan Juniarti. Analisis Senyawa Metabolit Sekunder Dari Ekstrak Metanol Daun Surian Yang Berpotensi Sebagai Antioksidan. Makara, Sains . 2011; 15: 48-52.