## PENAPISAN FITOKIMIA DAN SKRINING TOKSISITAS EKSTRAK ETANOL KULIT BANWANG MERAH
Vida Elsyana 1 , Tutik 1

## ABSTRACT
Shallot  was  used  traditionally  for  cancer  treatment.  Nevertheless,  they  are peeled  off  and  discarded.  In  the  present  study,  we  identified  phytochemical components  of  ethanol  shallot  peel  extract  and  examined  its  cytotoxicity against  brine  shrimps.  Shallot  peel  were  extracted  by  ethanol  96%  using maceration method. Phytochemical screening showed the  ethanol shallot peel extract contained flavonoids, saponins, and tannins. ethanol extract exhibited cytotoxic activity against brine shrimps. the  ethanol shallot peel extract could kill  50%  brine  shrimps  at  concentration  less  than  1000  μg/mL  with  LC 50 248,86 μg/mL. Therefore, it was suggested that shallot peel had potential for natural anticancer.
Keywords :Shallot peel, phytochemical screening, BSLT

## ABSTRAK
Bawang merah telah digunakan secara tradisional untuk pengobatan penyakit kanker.  Namun  demikian,  penggunaan  bawang  merah  hanya  terbatas  pada umbinya,  sedangkan  kulit  luarnya  dibuang.  Penelitian  ini  bertujuan mengidentifikasi  komponen  fitokimia  dalam  ekstrak  kulit  bawang  merah  dan menguji  toksisitasnya  terhadap  larva  udang Artemia  salina Leach.  Kulit bawang  merah  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut etanol  96%.  Skrining  toksisitas  ekstrak  bawang  merah  dilakukan  dengan metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Hasil  penapisan  fitokimia menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  kulit  bawang  merah  mengandung komponen  flavonoid,  saponin,  dan  tanin.  Ekstrak  etanol  kulit  bawang  merah mampu  mematikan  setengah  populasi  larva  udang  (LC 50 )  pada  konsentrasi 248,86 μg/mL. Hasil ini mengindikasikan potensi ekstrak kulit bawang merah untuk  menghambat  pertumbuhan  sel  kanker  secara in  vitro .  kulit  bawang merah memiliki potensi sebagai antikanker alami.
Kata Kunci : Kulit bawang merah, penapisan fitokimia, BSLT

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  salah satu  penyakit  paling  mematikan  di dunia. Tahun 2012, terdapat sekitar 8.2  juta  kematian  terkait  kanker  di seluruh dunia (WHO, 2015). Pengobatan kanker secara
konvensional dilakukan dengan
pembedahan,  radiasi,  kemoterapi, dan  terapi  hormon  (Dashora et  al.,
2011). Namun, pengobatan konvensional  memiliki  beberapa kelemahan. Pembedahan tidak dapat  dilakukan  untuk  sel  yang
telah
bermetastasis, radiasi seringkali  berbahaya  bagi  sel-sel normal,  dan  kemoterapi  belum memberi  hasil  optimal  karena ketidakspesifikan  kerja  obat  serta relatif mahal (Dashora et al., 2011;
Fadhli et  al., 2012;  Gamal  & Septananda,  2013;  Wicaksono  dan Permana, 2013).
Penggunaan  herbal  untuk pengobatan  alternatif  kanker  terus meningkat. Hal ini dikarenakan obat herbal memiliki efek samping  kecil, aman,  dan  tidak  ketergantungan (Olaku  &  White,  2011).  Selain bermanfaat untuk pengubatan kanker,  herbal  juga  dijadikan  titik awal  penemuan  senyawa  aktif untuk  pengembangan  obat  baru (Wahyuni et
al., 2009). Keanekaragaman hayati di Indonesia, khususnya tanaman obat tradisional berpotensi
sebagai sumber  antikanker  baru  (Artanti et al., 2012).
Bawang  merah  ( Allium  cepa L )  merupakan  salah  satu  anggota famili Amaryllidaceae yang  telah lama digunakan sebagai obat tradisional karena mampu menurunkan resiko penyakit
kardiovaskuler,  diabetes,  kanker, dan  aterosklerosis  (Cazzola et  al., 2011; Suleria et al., 2013). Saat ini bawang  merah  menjadi  tanaman obat dan produk hortikultura terbesar  kedua  setelah  tomat
(Arshad et  al., 2017).  Namun demikian,  bawang  merah  biasanya digunakan    dengan  cara  mengupas kulit  paling  luarnya  dan  hanya diambil    bagian  umbi.  Karena  itu, kulit  bawang  merah  seringkali dibuang  tanpa  termanfaatkan  dan berakhir sebagai limbah.
Penggunaan  kulit  bawang  merah masih  terbatas  untuk  pewarna makanan,  khususnya  dalam  suku jawa  (Arung et  al., 2011).  Hal  ini
disebabkan oleh kurangnya pengetahuan  dan  informasi  akan kandungan dan khasiat kulit bawang merah. Kulit bawang merah berpotensi  dikembangkan  untuk pengobatan sebagai antikanker karena kandungan senyawa fitokimianya.  Ringo  (2013)  telah melaporkan  bahwa  kulit  bawang merah mengandung senyawa flavonoid  golongan  flavonol.  Selain itu,  hasil  uji  skrining  fitokimia ekstrak  kulit  bawang  merah  fraksi air
menunjukkan
adanya kandungan flavonoid, polifenol,
saponin,  terpenoid  dan  alkaloid (Rahayu et  al., 2015).  Kandungan flavonoid  yang  tinggi  pada  kulit bawang  merah  berkontribusi  pada efek antioksidan, peningkatan imun, dan  sifat  antikanker  (Elberry et  al.,
2014).
Beberapa  penelitian  telah melaporkan  bioaktivitas  dari  kulit
bawang  merah.  Senyawa  kuersetin yang  diekstrak  dari  kulit  bawang merah memiliki aktivitas penghambatan terhadap fosfodiesterase  5A  (AbouZid  & Elsherbeiny,  2008).  Ekstrak  kulit bawang merah memiliki kemampuan  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri Bacillus cereus (Kim et
al.,
2011) dan
Staphylococcus  aureus (Misna et al., 2016).  Kandungan  kuersetin dalam  kulit  bawang  merah  juga menunjukkan
adanya aktivitas antiinflamasi  pada  mencit  putih jantan  yang  diinduksi  dengan karagenin 1%  (Soemarie, 2016).
Salah  satu  potensi  kulit bawang  merah  yang  belum  banyak diungkap ialah kemampuannya
sebagai  antikanker.  Penelitian  ini bertujuan  menguji  secara  kualitatif komponen  fitokimia  pada  ekstrak kulit
bawang merah dan
menentukan  aktivitas  toksisitasnya terhadap larva udang Artemia salina Leach.  Ekstrak  kulit  bawang  merah diharapkan  bersifat  toksik  terhadap larva  udang Artemia  salina Leach sehingga  berpotensi  menghambat pertumbuhan  sel  kanker  secara in vitro .

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah grinder ,
oven,  evaporator  vakum,  corong pisah,  vorteks,  lampu  TL  14  watt, plat  BSLT,  aerator.  Bahan-bahan yang  dipakai  dalam  pengujian antara  lain  etanol  96%,    akuades, kista Artemia salina Leach, air laut, Dimetilsulfoksida (DMSO).

## Cara Kerja

## Pembuatan Simplisia
Bagian  bawang  merah  yang digunakan  ialah  lapisan  paling  luar (kulit).  Kulit  bawang  merah  yang diambil ialah lapisan terluar pertama  dan  kedua.  Kulit  bawang merah  disortasi  basah  dan  dicuci dengan  air  mengalir.  Kulit  bawang merah kemudian dikeringkan dengan  oven  pada  suhu  40-45 o C. Selanjutnya  kulit  bawang  merah disortasi  kering  untuk  memisahkan kulit  bawang  merah  yang  rusak akibat pengeringan.

## Ekstraksi Sampel
Ekstrak etanol dibuat dengan cara  merendam  500  g  simplisia dengan 2,5 L etanol 96% selama 24 jam  dan  sesekali  diaduk.  Ekstraksi sampel  dilakukan  pengulangan  tiga kali  dengan  pelarut  baru.  Ekstrak yang  dihasilkan  dipisahkan  dari residunya  kertas  saring.  Ekstrak selanjutnya  diuapkan  pelarutnya menggunakan  evaporator  vakum pada suhu 60 o C.

## Penapisan Komponen Fitokimia
Analisis  kualitatif  fitokimia
kulit  bawang  merah  mencakup penapisan golongan alkaloid, flavonoid,  saponin,tanon,  steroid, triterpenoid,  dan  kuinon.  Metode yang  digunakan  menurut  pada teknik  yang  dikembangkan  oleh Harborne (2005).
Skrining Toksisitas dengan
Metode Brine  Shrimp  Lethality Test (BSLT).
Skrining  toksisitas  ekstrak dilakukan berdasarkan metode
McLaughlin et  al. (1998)  yang dimodifikasi. Penyiapan larva udang dilakukan dengan merendam 10 mg kista  udang.  Penetasan  dilakukan dengan  penerangan  sinar  lampu  TL 14 watt dan diaerasi selama 24 jam pada  suhu  kamar.  Larva  udang digunakan untuk uji setelah berusia 48 jam.
Pengujian ekstrak
dilakukan dengan konsentrasi 1000, 500, 100, dan 10 μg/mL.
Pengujian toksisitas dilakukan  dengan  memasukkan  1 mL air laut yang berisi 10 ekor larva udang  ke  dalam  mikroplat  12 sumuran  dan  ditambahkan  1000, 500,  100,  dan  10  μL  larutan  stok ekstrak  (2000  μg/mL).  Volume setiap  sumuran  dicukupkan  hingga 2  mL  dengan  penambahan  air  laut. Setiap  konsentrasi  ekstrak  diuji sebanyak tiga kali ulangan.
Inkubasi  dilakukan  pada  suhu kamar  di  bawah  sinar  lampu  TL  14 watt  selama  24  jam  kemudian dihitung  jumlah  larva  yang  hidup. Larva  dianggap  mati  apabila  tidak menunjukan adanya gerakan
selama  pengamatan  10  detik. Perlakuan kontrol dilakukan dengan prosedur yang sama tanpa penambahan ekstrak. Sampel
dianggap  toksik  terhadap  larva udang jika memiliki nilai LC 50 ( lethal concentration 50%  lebih  kecil  dari 1000 μg/mL.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berbagai  bioaktivitas  yang dimiliki oleh suatu tumbuhan sangat dipengaruhi
oleh komponen-
komponen
fitokimia
yang dikandungnya.  Hasil  uji  kualitatif kandungan  fitokimia  ekstrak  etanol kulit  bawang  merah  dapat  dilihat pada  Tabel  1.  Hasil  penelitian  ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol kulit  bawang  merah  menunjukkan adanya kandungan flavonoid, saponin,  dan  tanin,  namun  negatif terhadap  alkaloid,  kuinon,  steroid dan  terpenoid.  Penapisan  fitokimia terhadap ekstrak etanol kulit
bawang merah asal Sumatera Utara oleh Manullang (2010) juga melaporkan adanya flavonoid,
saponin, dan tanin serta glikosida.
Tabel 1. Hasil penapisan fitokimia ekstrak kulit bawang merah No. Kandungan fitokimia Hasil Uji 1. Alkaloid Dragendrof Negatif Meyer Negatif Wagner Negatif 2. Flavonoid Positif 3. Saponin Positif 4. Tanin Positif 5. Kuinon Negatif 6. Steroid Negatif 7. Triterpenoid Negatif Hasil penelitian yang dilaporkan oleh Ringo (2013) menunjukkan bahwa ekstrak metanol kulit bawang merah
mengandung  senyawa  flavonoid golongan flavonol. Selain itu,
ekstrak  kulit  bawang  merah  fraksi air positif terhadap adanya
kandungan flavonoid, polifenol, saponin,  terpenoid  dan  alkaloid (Rahayu et  al. 2015).  Hal  ini menunjukan bahwa komponen
fitokimia  yang  terkandung  dalam ekstrak  bergantung  pada  kepolaran pelarut yang digunakan.
Tingkat toksisitas suatu
senyawa  atau  ekstrak  mampu menunjukkan  potensi  aktivitasnya sebagai  antikanker. Brine  Shrimp Lethality  Test (BSLT)  merupakan salah  satu  metode  yang  sering digunakan  untuk  skrining  sifat sitotoksik  suatu  senyawa  atau ekstrak sebelum diuji menggunakan sel lestari kanker ( cell line ). Metode
BSLT  telah  teruji  memiliki  korelasi yang baik dengan aktivitas
sitotoksik  menggunakan  sel  lestari kanker  (McLaughlin et  al. 1998).
Sitotoksisitas  suatu  senyawa  atau ekstrak  ditentukan  berdasarkan respon  kematian    populasi  larva udang sebanyak 50% (LC 50 ). Apabila  suatu  ekstrak  tumbuhan memiliki  nilai  LC 50 lebih  kecil  dari 1000  μg/mL,  maka  dianggap  toksik terhadap  larva  udang  (Meyer et  al.
1982).
Toksisitas ekstrak kulit bawang  merah  terhadap  larva udang disajikan pada Tabel 2. Hasil penelitian  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  kulit  bawang  merah mampu  membunuh  sebanyak  50% populasi larva udang pada konsentrasi  lebih  kecil  dari  1000 μg/mL.  Hal  ini  mengindikasikan adanya  toksisitas  ekstrak  etanol kulit  bawang  merah  terhadap  larva udang.  Karena  itu,  ekstrak  etanol kulit bawang merah diduga
berpotensi
memiliki aktivitas
antikanker  dan  dilanjutkan  ke pengujian  menggunakan  sel  lestari kanker.
Hasil  penelitian  ini  sejalan dengan  Manullang  (2010)  yang menunjukkan  bahwa  kulit  bawang merah mampu mematikan setengah populasi larva udang pada konsentrasi  lebih  kecil  dari  1000 μg/mL.  Namun  demikian,  nilai  LC 50
penelitian ini lebih besar
dibandingkan  dengan  hasil  yang dilaporkan  oleh  Manullang  (2010). Hal  ini  diduga  disebabkan  oleh perbedaan kandungan fitokimia yang  diakibatkan  oleh  perbedaan asal  kulit  bawang  merah  dan metode ekstraksi yang digunakan.
Tabel 2. Nilai LC 50 Ekstrak Kulit Bawang Merah No. Konsentrasi ekstrak (μg/mL) Larva udang mati (%) Nilai LC 50 (μg/mL)
1. 0 (kontrol) 0 246,86 2.
10 16.6
3.
100 46.6 4. 500 70.0 5. 1000 100.0 Kematian larva udang karena  perlakuan  ekstrak  etanol kulit
bawang merah diduga berhubungan  dengan  kandungan fitokimianya.  Hal  ini  dipastikan dengan  tidak  adanya  larva  udang yang  mati  pada  kelompok  kontrol (tanpa penambahan ekstrak).
Karena  itu,  kematian  larva  udang dipastikan bukan disebabkan kelaparan  atau  faktor  lainnya. Flavonoid,  tanin  dan  saponin  pada konsentrasi  tertentu  bersifat  toksik sehingga  diduga  menjadi  penyebab kematian larva udang.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  kulit  bawang merah
mengadung komponen fitokimia  flavonoid,  tanin,  dan saponin. Ekstrak
etanol kulit bawang  merah  juga  menunjukan adanya  toksisitas  terhadap  larva udang Artemia salina Leach dengan nilai  LC 50 sebesar  248,86  μg/mL. Kulit  bawang  merah  berpotensi memiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker secara in vitro . Pengujian  aktivitas  sitotoksik  pada sel  normal  dan  sel  lestari  kanker akan memperkaya informasi bioaktivitas kulit bawang merah.

## DAFTAR PUSTAKA
AbouZid  SF,  Elsherbeiny  GM.  2008. Increase  in  flavonoids  content in red onion peel by mechanical  shredding  . JMPR . 2(9) : 258-260. Arshad  MS,  Sohaib  M,  Nadeem  M, Saeed  F,  Imran  A,  Javed  A, Amjad  Z,  Batool  SM.  2017.
Status and
trends of nutraceuticals  from  onion  and onion  by-products:  A  critical review. Cogent Food & Agriculture. 3: 1-14. Doi:10.1080/23311932.2017. 1280254. Artanti N, Firmansyah T, Darmawan A. 2012. Bioactivities evaluation of indonesian mistletoes ( Dendrophthoe pentandra
(L.)  Miq.)  leaves extracts. JAPS . 2(1) : 24-27. Arung  TE,  Kusuma  IW,  Shimizu  K, Kondo  R.  2011.  Tyrosinase inhibitory  effect  of  quercetin 4′-O-β-D-glucopyranoside from  dried  skin  of  red  onion ( Allium  cepa ).Natural  Product
Research. 25(3) : 256-263.
Cazzola  R, Camerotto C, Cestaro B. 2011.    Anti-oxidant,  anti- glycant, and inhibitory activity against  α-amylase  and  α- glucosidase  of  selected  spices and culinary herbs. International  Journal  of  Food Sciences and Nutrition. 62:175–184. Doi:10.3109/09637486.2010. 529068.
Dashora  N,  Sodde  V,  Bhagat  J,
Prabhu  KS  dan  Lobo  R.  2011. Antitumor activity of Dendrophthoe  falcata against Ehrlich  Ascites  carcinoma  In Swiss albino mice. Pharmaceut Crops .  2 : 1-7 Elberry  AA,  Mufti  S,  Al-Maghrabi  J, Sattar  EA,  Ghareib  AS,  Mosli HA, Gabr SA. 2014. Immunomodulatory  Effect  of Red  Onion  ( Allium  cepa Linn) Scale Extract on Experimentally Induced Atypical  Prostatic  Hyperplasia in  Wistar  Rats. Mediators  of Inflammation .  2014  (640746) : 1-13. Doi : 10.1155/2014/640746. Fadhli  H,  Teruna  HY,  Jose  C.  2012.
Uji  toksisitas  ekstrak  kulit batang  pulai  basung  ( Alstonia spatulata BL)  dengan  metode brine  shrimp  lethality  test.  J
Ind Che Acta . 3 (1) :10-15. Gamal, Septananda E. 2013. Potential analysis of cottonwood parasite ( Dendropthoe pentandra ) stem  extract  in  decreasing  of mutant P53 protein expression on  cervical  cancer  cell  (HeLa Cells) in  vitro . JIMKI .  1(2): 11-15. Harborne,  JB.  2013. Phytochemical methods  –  a  guide  to  modern techniques  of  plant  analysis 3rd  edition .  New  Delhi  :
Springer Pvt. Ltd. Kim WJ, Lee KA, Kim KT, Chung MS, Cho  SW,  Paik  HD.  2011. Antimicrobial  Effects  of  Onion ( Allium  cepa L.)  Peel  Extracts Produced via Subcritical Water
Extraction  against Bacillus cereus Strains  as  Compared with  Ethanolic  and  Hot  Water Extraction. Food Sci. Biotechnol . 20(4): 1101-1106. DOI 10.1007/s10068-011- 0149-8 Manullang,  L.  2010.  Karakterisasi
Simplisia,  Skrining  Fitokimia Dan  Uji  Toksisitas  Ekstrak Kulit  Umbi  Bawang  Merah ( Allii cepae var. ascalonicum ) Dengan  Metode  Uji Brine Shrimp (BST). [skripsi]. Medan (ID): USU.
McLaughlin JL, Rogers LL, Anderson JE. 1998. The use of biological assays  to  evaluate  botanicals. Drug Inform Jl . 32 : 513-524 Meyer  BN,  Ferrigni  NR,  Putnam  JE, Jacobsen  LB,  Nichols  DE, McLaughlin  JL.  1982.  Brine shrimp :  a convenient general bioassay  for  active  plant constituens. J  Med  Plant  Res .
45:31-34.
Misna,  Diana  K.  2016.  Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Kulit Bawang  Merah  ( Allium  cepa L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus. GALENIKA Journal of Pharmacy Vol.  2  (2)  :  138  –
144.
Olaku  O,  White  JD.  2011.  Herbal therapy  use  by  cancer  patient :  a  literature  review  on  case report. Eur  J  Cancer .  47(4)  : 508-514.  doi:10.1016/j.ejca. 2010.11.018.
Rahayu  S,  Kurniasih  N,  Amalia V.2015. Ekstraksi Dan Identifikasi Senyawa Flavonoid Dari  Limbah  Kulit  Bawang
Merah  Sebagai  Antioksidan Alami. al Kimiya . 2(1):1-8. Ringo  CM.  2013.    Isolasi  Senyawa Flavonoida  Dari  Kulit  Bawang
Merah ( Allium cepa L.).
[skripsi]. Medan (ID) : USU. Soemarie  YB.  2016.    Uji  Aktivitas Antiinflamasi  Kuersetin  Kulit Bawang  Merah  ( Allium  cepa L.)  Pada  Mencit  Putih  Jantan
( Mus musculus ). Jurnal Ilmiah Ibnu Sina. 1(2):163-172. Suleria  HAR,  Butt  MS,  Anjum  FM, Saeed  F,  Khalid  N.  2013. Onion:
Nature protection against  physiological  threats. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 1: 1–17. [WHO]  World  Health  Organization.
2015.  Prevalence  of  cancer worldwide.
[Internet]. [diunduh 03 Juli 2017].Tersedia pada http://www.who.int/mediacen tre/ factsheets/fs297/en/.
Wahyuni  FS,  Lusianti  M,  Almahdy, Dachriyanus.  2009.  Isolasi
senyawa  sitotoksik  terhadap sel  kanker  payudara  dari  kulit batang
Garcinia  griffithii T. Daners. Jurnal Farmasi Indonesia . 4(4) : 177 -187. Wicaksono  MH,  Permana  S.  2013. Potensi  fraksi  etanol  benalu mangga ( Dendrophthoe pentandra
)  sebagai  agen  anti kanker  kolon  pada  mencit ( Mus musculus Balb/c) setelah induksi  Dextran  Sulvat  (DSS) dan  Azoxymethane  (AOM). Jurnal  Biotropika .  1(2)  :  75- 79.