## AKTIVITAS ANTIMIKROBA DARI EKSTRAK ASCIDIAN Herdmania momus PADA MIKROBA PATOGEN MANUSIA
Vidhiya Nanda Mujipradhana 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Edi Suryanto 2)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Program Studi Kimia FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Ascidian  is  one  of  the  marine  biota  that  has  not  received  serious  attention,  but  has  considerable potentially  in  Indonesian  waters.  Potential  ascidians  serve  a  exploratory  material  for  the  search  for  new bioactive  compounds  as  drug  candidates  for  the  pharmaceutical  world.  This  study  aims  to  determine  the antimicrobial  activity  of  extract  and  ascidian  fraction  of  Herdmania  momus  obtained  from  Manado  bay againts  Staphylococcus  aureus  microbes,  Escherichia  coli,  and  Candida  albicans.  Samples  were  extracted by maceration and fractionation using ethanol, methanol, chloroform, and n-hexane. Antimicrobial activity was  performed  by  agar  diffusion  method  (Kirby  and  Bauer).  The  results  showed  that  rough  extract  of ethanol,  methanol  fraction,  chloroform  fraction,  and  n-hexane  fraction  effectively  inhibited  microbial Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli,  and  Candida  albicans,  extracts  and  fractions  were  categorized medium  except  for  n-hexane  fraction  againts  Candida  albicans  microorganisms  were  very  strong categorized based on the theory of Davis and Stout.
Keywords : Ascidian  Herdmania  momus,  antimicrobial  activity,  inhibitory  zone,    Staphylococcus  aureus, Escherichia coli, Candida albicans.

## ABSTRAK
Ascidian  merupakan  salah  satu  biota  laut  yang  belum  mendapat  perhatian  yang  serius,  namun mempunyai  potensi  yang  cukup  besar  di  perairan  Indonesia.  Ascidian  potensial  dijadikan  sebagai  bahan eksplorasi pencarian senyawa bioaktif baru sebagai calon obat untuk dunia farmasi. Penelitian ini bertujuan untuk  menentukan  adanya  aktivitas  antimikroba  dari  estrak  dan  fraksi  ascidian Herdmania  momus yang diperoleh  dari  teluk  Manado  terhadap  mikroba Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli, dan Candida albicans. Sampel diekstraksi secara maserasi dan fraksinasi menggunakan etanol, metanol, kloroform, dan n- heksana.  Aktivitas  antimikroba  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  (Kirby  dan  Bauer).  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar  etanol,  fraksi  metanol,  fraksi  kloroform,  dan  fraksi  n-heksana  efektif menghambat  mikroba Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli, dan Candida  albicans ,  ekstrak  dan  fraksi dikategorikan  sedang  kecuali  untuk  fraksi  n-heksana  terhadap  mikroba Candida  albicans dikategorikan sangat kuat berdasarkan teori Davis dan Stout.
Kata  Kunci : Ascidian Herdmania  momus, aktivitas  antimikroba,  zona  hambat, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans.

## PENDAHULUAN
Perkembangan dunia pengobatan yang semakin  pesat  telah  memunculkan  beragam jenis  obat-obatan  baru.  Penelitian  untuk menemukan  sumber  metabolit  sekunder  yang dapat  digunakan  untuk  berbagai  macam  jenis bahan  obat  juga  terus  dilakukan.  Sejak  satu dekade terakhir ini, perhatian dunia pengobatan mulai terarah pada organisme laut sebagai  sumber  daya  yang  sangat  potensial. Penelitian  terhadap  aktivitas  suatu  senyawa sebagai antimikroba merupakan suatu langkah awal  untuk  mengetahui  kegunaan  senyawa tersebut.  Adanya  senyawa  aktif  antimikroba di  bidang  kesehatan  merupakan  informasi penting untuk penanggulangan suatu penyakit yang  disebabkan  oleh  mikroba  (Dwijendra et al ., 2014).
Mikroba  patogen  merupakan  salah satu  penyebab  penyakit  pada  manusia  dan makhluk  hidup  lainnya  (Juariah et  al. ,  2014). Berbagai  penelitian  menunjukkan  bahwa organisme  laut  memiliki  potensi  yang  sangat besar  dalam  menghasilkan  senyawa-senyawa aktif  yang  dapat  digunakan  sebagai  bahan baku  obat.  Beberapa  organisme  laut  yang diketahui  dapat  menghasilkan  senyawa  aktif, salah satunya adalah ascidians. Organisme ini diketahui  dapat  menghasilkan  sejumlah  besar produk  laut  yang  bersifat  alami,  juga  mampu menunjukkan  keragaman    senyawa  kimia yang sangat besar (Thakur and Muller, 2004).
Ascidian merupakan salah satu komponen  biota  penyusun  terumbu  karang yang  mempunyai  potensi  bioaktif,  sehingga menjadikan  ascidian  target  yang  sangat menarik  karena  keanekaragamannya  yang tinggi  dan  unik  diantara  invertebrata  laut karena menghasilkan sejumlah besar senyawa yang  mengandung  nitrogen  (Wang  and Namikoshi, 2007). Ascidian merupakan salah satu  biota  laut  yang  belum  mendapat perhatian  yang  serius,  namun  mempunyai potensi  yang  cukup  besar  di  perairan
Indonesia (Rudman, 2000). Ascidian potensial  dijadikan  sebagai  bahan  eksplorasi pencarian  senyawa  bioaktif  baru  sebagai calon obat untuk dunia farmasi (Wewengkang et  al .,  2014).  Ascidian  termasuk  ke  dalam kelompok  hewan  invertebrata  di  ekosistem terumbu  karang  yang  banyak  menghasilkan senyawa  bioaktif.  Senyawa  bioaktif  ascidian berfungsi  sebagai  pertahanan  diri  dan  juga berfungsi  bagi  kehidupan  manusia,  yaitu sebagai antikanker, antiinflamasi, dan antimikroba (Khoeri, 2009).
Berdasarkan  penelusuran  pustaka  di atas,  maka  peneliti  tertarik  untuk  melakukan penelitian  aktivitas  antimikroba  dari  ascidian Herdmania  momus yang  terdapat  di  Teluk Manado.

## METODE PENELITIAN Bentuk Penelitian
Bentuk penelitian ini ialah eksperimen laboratorium  yang  akan  menguji  komponen yang  diekstrak  dari  ascidian Herdmania momus sebagai  antimikroba  yang  diperoleh dari Teluk Manado.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret  2018  sampai  bulan  Juni  2018    di Laboratorium  Farmakognosi  dan  Fitokimia serta  di  Laboratorium  Mikrobiologi  Program Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan
Alam
Universitas Sam Ratulangi. Alat dan Bahan a. Alat Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  masker,  sarung tangan,  pisau,  talenan,  peralatan  diving berupa snorkel , fins, tabung  udara, dan masker,  kantong  plastik,  alat-alat  gelas, rotary  evaporator, timbangan  analitik, cawan  petri,  autoklaf,  pinset,  pembakar spritus, magnetic  steerer ,  pipet  tetes, batang  pengaduk, Laminar  Air  Flow , lemari pendingin, inkubator, kertas
cakram, mikropipet, jangka sorong (kaliper), kamera untuk keperluan dokumentasi.
b. Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu ascidian Herdmania  momus ,  mikroba  uji Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli , dan Candida  albicans, etanol  96%, akuades,  metanol,  n-heksan,  kloroform, nutrient  broth ,  nutrien  agar, potato dextrose  agar ,  siprofloksasin,  kertas cakram,  label,  spidol  permanen, tissue , aluminium foil , kertas saring, kapas.
Pengambilan Sampel
Sampel  ascidian Herdmania  Momus diambil dari perairan pulau Siladen menggunakan  alat  bantu  (masker,  tabung udara, snorkel, dan fins ).  Sampel  dibersihkan dari    kotoran  yang  menempel  di  sekitarnya, difoto  lalu  dimasukkan  ke  dalam  kantong plastik,  kemudian  langsung  dibawa  ke Laboratorium  Fitokimia  dan  Farmakognosi Program  Studi  Farmasi  Universitas  Sam Ratulangi.  Kemudian  sampel  dipotong  kecil- kecil  dengan  ukuran  1  cm²  dan  diekstraksi dengan cara maserasi dengan etanol 96% lalu diberi label serta nomor sampel. Sebagian dari sampel  disimpan  dalam  vial  untuk  diawetkan sebagai voucher untuk selanjutnya dideterminasi.
Prosedur Penelitian Ekstraksi
Ekstrak  ascidian Herdmania  momus sebanyak 665 g diekstraksi dengan menggunakan cara maserasi. Sampel dipotong kecil-kecil  dengan  ukuran  1  cm²  lalu dimasukkan  ke  dalam  botol  dan  direndam dengan  larutan  etanol  96%  sampai  sampel terendam  secara  keseluruhan  dan  dibiarkan selama  24  jam.  Sampel  yang  direndam disaring  dengan  menggunakan  kertas  saring menghasilkan  filtrat  1  dan  debris  1.  Debris  1 direndam  dengan  larutan  etanol  96%  sampai sampel terendam secara keseluruhan
kemudian  dibiarkan  selama  24  jam.  Sampel tersebut  disaring  menggunakan  kertas  saring menghasilkan  filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2 kemudian direndam dalam larutan etanol 96% sampai  sampel  terendam  secara  keseluruhan dan dibiarkan selama 24 jam, sampel tersebut disaring menggunakan kertas saring menghasilkan  filtrat  3  dan  debris  3.  Filtrat  1, 2  dan  3  dicampur  menjadi  satu  kemudian disaring,  lalu  dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator sehingga  didapat  ekstrak kasar  ascidian Herdmania  momus kemudian ditimbang  menggunakan  timbangan  analitik, diperoleh  ekstrak  etanol  sampel  sebanyak 14,298  g.  Selanjutnya  ekstrak  etanol  ascidian Herdmania momus digunakan dalam fraksinasi dan pengujian antimikroba.

## Fraksinasi Pelarut
Sebanyak  10,00  g  ekstrak  etanol Herdmania  momus dimasukkan  ke  dalam Erlenmeyer  dan  dilarutkan  dengan  metanol 80% sebanyak 100 mL.  Setelah sampel larut, sampel  dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah dan  ditambahkan  pelarut  n-heksan  sebanyak 100 mL. Sampel kemudian dikocok berulangkali  dalam  corong  pisah  hingga homogen. Sample dibiarkan hingga membentuk  lapisan  metanol  (MeOH)  dan lapisan  n-heksan.  Masing-masing  lapisan metanol  dan  lapisan  n-heksan  ditampung  di dalam wadah yang berbeda. Lapisan n-heksan selanjutnya  dievaporasi  menggunakan rotary evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang dengan  timbangan  analitik  dan  diperoleh fraksi n-heksan sebanyak 0,1982 g.
Selanjutnya lapisan metanol ditambahkan  dengan  akuades  100  mL, kemudian  dipartisi  dengan  pelarut  kloroform menggunakan  perbandingan  1:1  v/v  setelah itu  dikocok  dalam  corong  pisah  hingga homogen.  Lapisan  metanol  dibiarkan  hingga membentuk dua lapisan yaitu lapisan metanol dan lapisan kloroform. Masing-masing lapisan  metanol  dan  lapisan  kloroform ditampung  ke  dalam  wadah  yang  berbeda.
Lapisan  kloroform  dievaporasi  menggunakan rotary evaporator hingga kering lalu ditimbang  dengan  timbangan  analitik  dan diperoleh  fraksi  kloroform  sebanyak  0,138  g. Lapisan metanol yang ditampung pada wadah lain dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga  kering  lalu  ditimbang dengan  timbangan  analitik  dan  diperoleh fraksi  metanol  sebanyak  2,0085  g.  Ketiga fraksi  yang  diperoleh  akan  digunakan  dalam pengujian  antimikroba.  Rendemen-rendemen ekstrak dan fraksi dihitung dengan persamaan berat  hasil  ekstrak/fraksi  dibagikan  dengan berat  awal  ekstrak/fraksi  kemudian  dikalikan dengan 100%.

## Sterilisasi dan Pembuatan Media Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  dalam penelitian aktivitas antimikroba ini disterilkan terlebih dahulu dengan menggunakan autoklaf pada  suhu  121  ºC  selama  15  menit,  pinset dibakar  dengan  pembakaran  di  atas  api langsung  dan  media  disterilkan  di  autoklaf pada  suhu  121  ºC  selama  15  menit  (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar Miring
Ditimbang Nutrien Agar (NA) sebanyak  0,784  g  dilarutkan  dalam  28  mL akuades  dan  Potato  Dextrose  Agar  (PDA) sebanyak  0,588  g  dilarutkan  dalam  14  mL akuades menggunakan erlenmeyer dan diaduk hingga  homogen.  Media  yang  telah  homogen kemudian  disterilkan  dengan  menggunakan autoklaf  pada  suhu  121˚C  selama  15  menit, dan  dibiarkan  pada  suhu  ruangan  sampai media  memadat  pada  kemiringan  30°.  Media agar  miring  digunakan  untuk  kultur  mikroba uji.

## Pembuatan Media Uji NA
Ditimbang Nutrien Agar (NA)
sebanyak  5,04  g,  dilarutkan  dalam  akuades sebanyak 180 mL (28 g/1.000 mL) menggunakan Erlenmeyer. Kemudian
dihomogenkan  dengan magnetic  steerer . Media  yang  telah  homogen  kemudian
disterilkan  dengan  menggunakan  autoklaf pada  suhu  121˚C  selama  15  menit,  dan dibiarkan  sampai  media  cukup  dingin. Selanjutnya  media  Nutrien  Agar  yang  masih cair  tersebut  dituang  ke  dalam  cawan  petri sebanyak 30 mL (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Uji PDA
Ditimbang  Potato  Dextrose  Agar (PDA)  sebanyak  3,78  g,  dilarutkan  dalam akuades  sebanyak  90  mL  (42  g/1.000  mL) menggunakan Erlenmeyer. Kemudian dihomogenkan  dengan magnetic  steerer . Media  yang  telah  homogen  kemudian disterilkan  dengan  menggunakan  autoklaf pada  suhu  121˚C  selama  15  menit,  dan dibiarkan  sampai  media  cukup  dingin. Selanjutnya  media  Nutrien  Agar  yang  masih cair  tersebut  dituang  ke  dalam  cawan  petri sebanyak 30 mL.

## Kultur Mikroba
Mikroba  yang  akan  digunakan  yaitu Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli, dan Candida  albicans. Media cair B1  yang sudah disiapkan  sebelumnya,  ditambahkan  dengan masing-masing  mikroba  yang  sudah  dikultur sebanyak  100  µL  ke  dalam  enam  tabung reaksi  yang  berbeda.  Tiap  tabung  reaksi ditutup  dengan  menggunakan aluminium  foil untuk menghindari kontaminasi dan diinkubasi  ke  dalam  inkubator  pada  suhu  37º C selama 1x24 jam (Ortez, 2005).
Pengujian Aktivitas Antimikroba Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc diffusion Kirby and Bauer ).
Pembuatan Larutan Mac Farland 0,5
Larutan H 2 SO4 1% sebanyak 9,95 mL dicampurkan  dengan  larutan  BaCl 2 1,175% sebanyak  0,05  mL  dalam  erlenmeyer. Kemudian  dikocok  sampai  terbentuk  larutan yang  keruh.  Kekeruhan  ini  dipakai  sebagai standar  kekeruhan  suspensi  mikroba  uji (Whitman et al. , 2010).
Pembuatan Suspensi Mikroba Uji
Mikroba  uji  yaitu Escherichia  coli , Staphylococcus aureus , dan Candida albicans yang  telah  diinokulasi  diambil  ±  1  ose kemudian  disuspensikan  ke  dalam  tabung yang  berisi  10  mL  larutan  NaCL  0,9% sehingga  diperoleh  kekeruhan  yang  sama dengan  standar  kekeruhan  larutan Mac farland 0,5.
Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontrol Negatif
Kontrol positif dalam pengujian aktivitas antimikroba ini menggunakan ciprofloxacin  paper  disc .  Kontrol  negatif yang digunakan dalam penelitian ini menggunakan  metanol  untuk  menguji  apakah pelarut metanol memberikan pengaruh terhadap  aktivitas  daya  hambat,  dengan  cara membuat  larutan  stok  metanol  dengan mengambil  sebanyak  200  μL  metanol kemudian  ditotolkan  pada  kertas  cakram. Kontrol negatif digunakan sebagai pembanding  dan  pelarut  untuk  pembuatan larutan  kontrol  positif  dan  pembuatan  larutan uji.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara melarutkan  ekstrak  etanol Herdmania  momus sebanyak  1  mg  ke  dalam  200  μL  aquades sehingga menghasilkan konsentrasi larutan uji sebesar  250  μg/50  μL.  Perlakuan  yang  sama dilakukan  untuk  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform dan fraksi metanol (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc diffusion Kirby and Bauer ). Aktivitas penghambatannya diuji terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923,
Escherichia  coli ATCC  25922,  dan Candida albicans ATCC  12321  yang  digunakan sebagai  mikroorganisme  uji.  Pada  pengujian aktivitas antimikroba digunakan kertas cakram  yang  berukuran  6  mm  dengan  daya serap  50  μL  tiap  cakram.  Suspensi  mikroba kemudian diinokulasikan ke dalam media dan
dihomogenkan.  Kemudian  media  yang  telah diinokulasi  mikroba  dituangkan  ke  dalam cawan  petri  sebanyak  30  mL  dan  ditunggu hingga  media  mengeras.  Sampel  yang  telah ditentukan  konsentrasinya  (250  μg/50  μL) ditotolkan pada masing-masing cakram dengan  menggunakan  mikropipet.  Masing- masing  cawan  petri  diberi  label  dan  nomor sampel yang sesuai. Kertas cakram yang telah ditotolkan  sampel  uji  ascidian Herdmania momus diletakkan  ke  dalam  cawan  petri dengan  pinset  lalu  diinkubasi  selama  1  x  24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Bening
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam masa inkubasi. Daerah pada sekitaran cakram menunjukkan  kepekaan  mikroba  terhadap antibiotik  atau  bahan  antimikroba  yang digunakan sebagai bahan uji yang dinyatakan dengan  diameter  zona  bening.  Diameter  zona bening  diukur  dalam  satuan  millimeter  (mm) menggunakkan  jangka  sorong  dengan  cara diukur  diameter  zona  bening  horizontal ditambahkan  dengan  diameter  zona  bening vertikal  lalu  dibagi  dua.  Kemudian  zona bening  yang  telah  diukur,  dibandingkan berdasarkan  pedoman  Davis  dan  Stoud (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan Fraksinasi Pelarut
Sampel  ascidian Herdmania  momus yang  telah  diambil  dari  perairan  Siladen dipotong  kecil-kecil  dengan  ukuran  ±1  cm². Hal  ini  bertujuan  untuk  memperbesar  ukuran permukaan  sampel  sehingga  proses  ekstraksi berjalan optimal karena semakin luas permukaan  sampel  maka  interaksi  antara pelarut  dan  sampel  semakin  besar  (Mardiyah et  al., 2014).  Sampel  kemudian  diekstraksi dengan menggunakan metode maserasi.
Metode maserasi sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam  maupun  bahan  laut,  karena  dengan perendaman  sampel  akan  terjadi  pemecahan
dinding  sel  dan  membran  sel  karena perbedaan  tekanan  antara  di  dalam  dan  luar sel, sehingga metabolit sekunder akan terlarut dalam  pelarut  organik  dan  ekstraksi  senyawa akan sempurna karena dapat diatur perendaman yang dilakukan. Tujuan pemilihan  metode  maserasi  karena  cara pengerjaannya  yang  sederhana  dan  cepat namun  sudah  dapat  menarik  senyawa  kimia dari  sampel  dengan  maksimal.  Keuntungan utama  dari  metode  ini  ialah  tidak  dilakukan pemanasan sehingga dapat mencegah kemungkinan  terjadinya  penguraian  zat  aktif yang  terkandung  di  dalam  sampel  akibat pengaruh suhu dan senyawa  yang tidak tahan pemanasan  (Sa’adah et  al., 2015).  Untuk mendapatkan  penyarian  yang  maksimal,  agar senyawa  kimia  di  dalam  sampel  dapat terekstrak secara menyeluruh maka dilakukan remaserasi atau pengulangan dengan penggantian  pelarut  sebanyak  tiga  kali. Maserasi lebih efisien bila dilakukan berulang kali  dengan  jumlah  pelarut  yang  lebih  kecil dibandingkan  dengan  jumlah  pelarutnya banyak  tetapi  maserasinya  hanya  dilakukan sekali (Khopkar, 2008).
Menurut  Suryanto  (2012),  pemilihan pelarut  pada  umumnya  dipengaruhi  oleh beberapa  faktor  antara  lain  selektivitas, kelarutan,  dan  titik  didih.  Untuk  pelarut maserasi  sendiri  digunakan  etanol  96%. Alasan  pemilihan  etanol  96%  sebagai  pelarut dalam  proses  maserasi  adalah  karena  lebih selektif,  tidak  toksik,  absorbsinya  baik  dan dapat  mencegah  pertumbuhan  bakteri  dan jamur.  Selain  itu,  etanol  mempunyai  sifat universal  sehingga  senyawa  metabolit  polar, semi polar dan non polar dapat tersari dengan sempurna.  Etanol  96%  akan  lebih  mudah masuk  berpenetrasi  ke  dalam  sel  simplisia daripada  pelarut  etanol  dengan  konsentrasi yang  lebih  rendah,  sehingga  ekstrak  yang dihasilkan akan pekat.
Hasil  maserasi  selanjutnya  dipekatkan menggunakan  alat rotary  evaporator. Prinsip
kerja  dari  alat  ini  menggunakan  prinsip vakum destilasi, adanya tekanan mengakibatkan  pelarut  menguap  pada  suhu dibawah  titik  didihnya,  sehingga  kandungan senyawa metabolit sekunder  yang terkandung di  dalam  pelarut  tidak  mengalami  kerusakan oleh  suhu  yang  tinggi  (Hermansah et  al., 2015).
Setelah diperoleh ekstrak kering etanol dari  hasil  maserasi,  tahap  selanjutnya  adalah fraksinasi  menggunakan  variasi  pelarut  yang memiliki  kepolaran  yang  berbeda,  yaitu metanol, kloroform, dan n-heksana, pemilihan pelarut  ini  dimaksudkan  agar  senyawa- senyawa  yang  memiliki  kepolaran  berbeda dapat terekstrak ke dalam pelarut yang sesuai. Tabel  1  .  Rendemen  ekstrak  dan  fraksi ascidian Herdmania momus.
No. Sampel Rendemen (%) Warna sampel 1. EE 2,1 Kuning kecoklatan 2. FH 1,98 Orange 3. FK 1,38 Coklat 4. FM 20,08 Coklat pekat Keterangan : EE = Ekstrak Etanol FH = Fraksi n-heksana FK = Fraksi Kloroform FM = Fraksi Metanol
Tabel  1  menunjukkan  rendemen  dari masing-masing ekstrak. Untuk ekstrak etanol, didapatkan  massa  dari  ekstrak  sejumlah 14,298  g  dari  massa  sampel  yang  dimaserasi sebanyak 665 g, sehingga didapatkan rendemen 2,15 % dengan warna filtrat berupa kuning kecoklatan. Selanjutnya ekstrak etanol difraksinasi  menggunakan  pelarut  n-heksan, kloroform, dan metanol. Tahap awal fraksinasi dilakukan dengan melarutkan 10,00
g  ekstrak  etanol  hasil  maserasi  dengan menggunakan  pelarut  metanol,  lalu  dipartisi dengan menggunakan pelarut n-heksan, didapatkan  filtrat  n-heksan  berwarna  orange dengan  massa  hasil  fraksi  sebanyak  0,1982  g sehingga  didapatkan  rendemen  1,98  %. Metanol  kemudian  dipartisi  kembali  dengan pelarut kloroform, didapatkan filtrat kloroform  berwarna  coklat  dengan  massa hasil  fraksi  0,138  g,  sehingga  didapatkan rendemen  1,38  %  dan  didapatkan  filtrat metanol  berwarna coklat  pekat  dengan massa hasil  ekstrak  sebanyak  2,0085  g,  sehingga didapatkan rendemen 20,08%.
Perbedaan nilai rendemen ini disebabkan oleh perbedaan jenis pelarut  yang digunakan.  Pelarut  yang  berbeda  akan melarutkan  senyawa-senyawa  yang  berbeda tergantung  tingkat  kepolarannya.  Oleh  sebab itu,  jumlah  ekstrak  yang  dihasilkan  pun  juga tergantung jenis pelarutnya.
Jumlah  rendemen  ekstrak  bergantung pada  kondisi  alamiah  senyawa,  metode ekstraksi, ukuran partikel sampel, kondisi dan waktu  ekstraksi,  serta  perbandingan  sampel dengan  pelarut  (Harborne,  1987).  Jumlah rendemen  terbesar  ditunjukkan  oleh  fraksi metanol  dengan  nilai  sebesar  20,08%. Tingginya  rendemen  yang  terdapat  pada pelarut metanol menunjukkan pelarut tersebut mampu  mengesktrak  lebih  banyak  komponen bioaktif  yang  memiliki  sifat  kepolaran  yang lebih tinggi.  Hal  tersebut dapat  terjadi karena metanol memiliki gugus polar yang lebih kuat daripada gugus nonpolar, hal ini dapat terlihat dari struktur kimia metanol yang mengandung gugus  hidroksil  (polar)  dan  gugus  karbon (nonpolar)  (Ukhty,  2011).  Keadaan  inilah yang  diduga  menyebabkan  metanol  mampu mengekstrak lebih banyak komponen bioaktif yang  bersifat  sangat  polar  dan  sedikit  non polar yang terdapat dalam ascidian Herdmania momus.
Uji Aktivitas Antimikroba Ascidian

## Herdmania momus
Pengujian  aktivitas  antimikroba  dari ekstrak  etanol,  fraksi  metanol,  fraksi  n- heksana,  dan  fraksi  kloroform  pada  mikroba uji Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli , dan Candida  albicans menggunakan  metode difusi  agar  (difusi  Kirby  dan  Bauer  yang dimodifikasi).  Metode  ini  menjadi  pilihan karena untuk tujuan klinis dengan mempertimbangkan  kesederhanaan  teknik, ketelitian,  metode  serbaguna  bagi  semua bakteri patogen yang tumbuh cepat dan sering digunakan  dalam  uji  kepekaan  antibiotik dalam program pengendalian mutu.
Mikroba  uji  yang  digunakan  adalah Staphylococcus aureus untuk mewakili bakteri  Gram  positif, Escherichia  coli untuk mewakili  bakteri  Gram  negatif  dan Candida albicans untuk  mewakili  jamur.  Penggunaan mikroba  ini  bertujuan  untuk  mengetahui bahwa  apakah  ekstrak  dan  fraksi  dari Herdmania momus memiliki aktivitas antimikroba serta untuk mengetahui spektrum dari  aktivitas  antimikroba Herdmania  momus apakah  memiliki  spektrum  luas,  yaitu  dapat membunuh  banyak  jenis  mikroba  yaitu bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif,  atau spektrum sempit yaitu hanya membunuh salah satu dari Gram positif atau negatif.
Dalam  pengujian  ini,  hasil  yang didapatkan yaitu  adanya  zona  hambat disekeliling  cakram  yang  berkururan  6  mm ( paper  disc) yang  ditandai  dengan  zona bening,  hal  ini  menunjukan  adanya  kepekaan mikroba  terhadap  ekstrak  atau  fraksi  dari Herdmania  momus dan  antibiotik  yang digunakan sebagai kontrol positif. Pengamatan  dilakukan  setelah  inkubasi  pada suhu  37˚C  selama  1x24  jam  dengan pengulangan  sebanyak  3  kali  pada  masing- masing  mikroba,  pengulangan  dilakukan untuk  lebih  mengakuratkan  hasil  yang  akan diperoleh.
Konsentrasi yang digunakan yaitu 250 μg  dalam  setiap paper  disc yang  memiliki daya  serap  50  μL  dari  sampel  ascidian Herdmania  momus terhadap  mikroba  uji Staphylococcus  aureus , Eschericia  coli ,  dan Candida  albicans. Hasil pengukuran rata-rata diameter daya antimikroba dari ekstrak etanol, fraksi  kloroform,  fraksi  n-heksan,  dan  fraksi metanol ascidian Herdmania momus terhadap mikroba uji Staphylococcus aureus, Escherichia  coli ,  dan Candida  albicans ditunjukan pada Tabel 2.
Tabel  2.  Hasil  rata-rata  pengujian  ekstrak etanol  dan  fraksi  ascidian Herdmania momus terhadap mikroba uji Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli , dan Candida albicans.
Keterangan : EE
= Ekstrak Etanol Fr n-Heksan  = Fraksi n-heksana Fr CHCL 3
= Fraksi Kloroform
Fr MeOH
= Fraksi Metanol
Dalam pengujian ini digunakan kontrol positif dan negatif. Kontrol positifnya yaitu  antibiotik  siprofloksasin.  Siprofloksasin dipilih sebagai kontrol positif yang merupakan  larutan  pembanding  efek  antara obat antimikroba baku dengan larutan ekstrak uji dalam hal ini ascidian Herdmania momus . Pemilihan  antibiotik  siprofloksasin  sebagai kontrol  positif  karena  antibiotik  ini  memiliki spektrum luas, yang biasa digunakan pengobatan  pada  infeksi  yang  disebabkan oleh  bakteri Gram positif  diantaranya
Staphyllococcus aureus , maupun Gram negatif  diantaranya Escherichia  coli, dan bersifat membunuh bakteri (bakterisid) (Sarro,  2001).  Kontrol  negatif  digunakan untuk  mengetahui  ada  tidaknya  pengaruh pelarut  terhadap  pertumbuhan  bakteri  uji, sehingga  dapat  diketahui  bahwa  aktivitas yang  ditunjukan  oleh  ekstrak/fraksi  ialah  zat yang terkandung dalam sampel bukan berasal dari  pelarut  yang  digunakan.  Kontrol  negatif yang digunakan yaitu metanol.
Pada  penelitian  ini  ekstrak  etanol, fraksi kloroform, dan fraksi n-heksan merupakan  ekstrak/fraksi  yang  efektif  untuk menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus (Gram positif) dibandingkan  bakteri Escherichia  coli (Gram negatif).  Respon  yang  berbeda  dari  dua golongan bakteri terhadap senyawa antimikroba  ini  disebabkan  karena  adanya perbedaan  kepekaan  pada  bakteri  Gram positif  dan  bakteri  Gram  negatif  terhadap senyawa  antimikroba  yang  terkandung  dalam ekstrak  dan  fraksi  ascidian Herdmania momus . Bakteri Gram positif cenderung lebih sensitif  terhadap  komponen  antimikroba.  Hal ini  disebabkan  oleh  struktur  dinding  sel bakteri Gram positif lebih sederhana sehingga memudahkan  senyawa  antimikroba  untuk masuk  ke  dalam  sel  dan  menemukan  sasaran untuk bekerja, sedangkan struktur dinding sel bakteri  Gram  negatif  lebih  kompleks  dan berlapis  tiga,  yaitu  lapisan  luar  berupa lipoprotein,  lapisan  tengah  yang  berupa peptidoglikan, dan lapisan dalam lipopolisakarida (Pelczar & Chan, 1986).
Pada  fraksi  metanol,  zona  hambat yang  ditunjukkan  lebih  besar  pada  bakteri Escherichia coli (Gram negatif) dibandingkan dengan  bakteri Staphylococcus  aureus (Gram positif).  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Renhoran  (2012)  yang  menyatakan  bahwa bakteri  Gram  negatif  cenderung  bersifat sensitif  terhadap  antimikroba  yang  bersifat polar.
Rata-rata diameter (mm) EE Fr n- Heksan Fr CHCL 3 Fr MeOH Kontrol Positif Kontrol Negatif S.aureus 7,8 7,7 8 6,7 33,5 0,0 E.coli 7,5 7,5 7,8 7,8 30,5 0,0 C.albicans 8,5 27,9 7,8 6,8 24,5 0,0
Diameter zona hambat yang ditunjukkan  pada  fraksi  metanol  lebih  kecil bila  dibandingkan  dengan  fraksi  n-heksan. Walaupun  pada  fraksi  metanol  jika  dilihat dari perbandingan persen rendemen mengandung  senyawa  metabolit  sekunder yang  lebih  banyak  daripada  fraksi  n-heksan. Menurut  Dwijendra et  al. (2014)  Hal  ini mungkin  disebabkan  karena  adanya  kerja yang  tidak  sinergis  antara  senyawa  metabolit sekunder dalam peranannya sebagai antimikroba.
Diameter zona hambat yang ditunjukkan  pada  fraksi  n-heksan  terhadap mikroba Candida  albicans memiliki  nilai yang  paling  besar  dibandingkan  dengan esktrak  dan  fraksi  lainnya  dalam  mengambat pertumbuhan masing-masing mikroba. Menurut  Roihanah et  al. (2012)  pelarut  n- heksan  adalah  pelarut  yang  paling  efektif dalam  menghambat  pertumbuhan  mikroba, hal  ini  disebabkan  karena  senyawa  bioaktif yang  terkandung  pada  ascidian  mudah  larut dalam pelarut non polar yang dapat berfungsi sebagai bahan antimikroba.
Berbeda dengan bakteri, jamur mempunyai  struktur  dinding  sel  yang  sangat kompleks  dengan  rangka  dasar  yang  terdiri dari polisakarida kristalin, kitin, dan β-glukan,
dan suatu matriks yang terdiri dari polisakarida amorf dan kompleks proteinsakarida. Kitin dan β-glukan
bertanggung  jawab  terhadap  mekanisme dinding sel jamur (Siswandono dan Bambang, 1995).
Menurut Bhorgin (2014), besar kecilnya daerah hambat dipengaruhi oleh laju pertumbuhan  mikroorganisme,  kemampuan dan  laju  difusi  bahan  aktif  pada  medium, kepekaan  mikroorganisme  terhadap  zat  aktif serta ketebalan dan viskositas medium.
Ekstrak kasar etanol, fraksi kloroform, fraksi  metanol  dan  fraksi  n-heksan  dari ascidian Herdmania  momus berdasarkan kriteria  Davis  dan  Stout  (1971)  menunjukan
senyawa yang terkandung didalamnya memiliki  aktivitas  antimikroba  yang  kurang efektif  atau  berdaya  hambat  lemah  kecuali untuk  fraksi  n-heksana  terhadap  jamur Candida  albicans dikategorikan  memiliki daya  hambat  kuat,  namun  ekstrak  dan  fraksi- fraksi  ini  bersifat  spektrum  luas,  artinya kandungan senyawa tersebut memiliki aktivitas  antimikroba  terhadap  bakteri  Gram postitif dan Gram negatif.

## KESIMPULAN
Ekstrak dan fraksi ascidian Herdmania momus memiliki aktivitas antimikroba. Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  untuk fraksi  n-heksan  terhadap  jamur Candida albicans dikategorikan memiliki daya hambat yang  sangat  kuat,  sedangkan  ekstrak  etanol, fraksi metanol, fraksi kloroform dan fraksi n- heksan  dari  ascidian Herdmania  momus memiliki  aktivitas  antimikroba  yang  sedang terhadap  mikroba  uji Staphylococcus  aureus, Escherichia coli , dan Candida albicans .

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  aktif dalam  fraksi  n-heksan  ascidian Herdmania momus .

## DAFTAR PUSTAKA
Bhorgin,  A.  J.  and  Uma,  K.  2014.
Antimicrobial  Activity  of  Earthworm Powder (Lampito mauritii). Int
Jorunal  of  Current  Microbiology  and Applied Science . 3 ( 1 ) : 437-443.
Davis,  W.  W.,  and  Stout,  T.  R.  1971.  Disc Plate  Method  of  Microbiological Assay. Journal  of  Microbiology. 22 : 659-665.
Dwijendra,  I.,  Defny,  S.T.,  dan  Frenly,  W.
2014.  Aktivitas  Antimikroba  dan Karakterisasi  Senyawa  Fraksi  Spons
Lamellodysidea herbacea yang
Diperoleh dari  Teluk Manado.
Jurnal Ilmiah Farmasi . 3( 4 ) : 1-2.
Hermansah, A., Harlia., Zahara, T. A. 2015.
Skrinning Fitokimia dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kulit Batang Laban (Vitex Pubescens Vahl). JKK. 4 ( 2 ) : 69-70.
Juariah,  S.,  Suryanto,  D.,  dan  Jamilah,  I.
2014.  Aktivitas  Antibakteri  Spesies
Asterias  Forbesii  terhadap  Beberapa Jenis  Bakteri  Patogen. Jurnal  Berkala Perikanan Terubuk . 42 ( 2 ) : 37-50.
Khoeri,  M.  M.  2009. Bioprospeksi  Bakteri
Simbion  pada  Tunikata  Didemnum molle dari Perairan Pulau Sambangan Karimunjawa Jepara.
Universitas Dipoengoro, Semarang.
Khopkar,  S.  M.  2008. Konsep  Dasar  Kimia Analitik . UI Press, Jakarta.
Mardiyah, U., Fasya, G. A. Fauziyah, B., dan Amalia,  S.  2014.  Ekstraksi  Uji Aktivitas  Antioksidan  dan  Identifikasi Golongan  Senyawa  Aktif  Alga  Merah Eucheuma  spinosum dari  Perairan Banyuwangi. Jurnal  Achemy .  3  ( 1 )  :
42.
Ortez,  J.H.  2005. Disk  Diffusion  Testing  in Manual of Antimicrobial Susceptibility Testing .  Marie  B.  Coyle  (Coord.  Ed).
American society for Microbiology. Pelczar,  M.  J.,  dan  Chan,  E.  C.  S.  1986.
Dasar-dasar Mikrobiologi 2
Diterjemahkan  oleh  Hadioetomo,  R. S.,  Imas,  T.,  Tjitrosomo,  S.  S.,  dan Angka,  S.  L .  Universitas  Indonesia, Jakarta.
Renhoran,  W.  2012. Aktivitas  Antioksidan dan  Mikrobiologi  Ekstrak  Sargassum polycystum [skripsi]. Departemen
Teknologi  Hasil  Perairan  Faklutas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  IPB,
Bogor.
Roihana  S,  Sukoso,  Andayani  S. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Teripang (Holoturia  Sp)  Terhadap  Bakteri Vibrio Harveyi Secara In-Vitro . [skripsi].  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu Kelautan. Universitas Brawijaya. Malang. 2012. Rudman, W. B. 2000. Ascidians – Sea Squirt, Tunicates Sea Slug Forum . http://www.seaslugforum.net.ascidian.
htm [diakses 12 Oktober 2017].
Sa’adah, H., dan Nurhasnawati, H. 2015.
Perbandingan Pelarut Etanol dan Air Pada Pembuatan Ekstrak Umbi Bawang Tiwai (Eleutherine Americana Merr). Jurnal Ilmiah Manuntung . 1( 2 ) : 149-153.
Siswandono  dan  Bambang,  S.  1995. Kimia Medisina l. Erlangga, Surabaya.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan .
Putra Media Nusantara, Surabaya.
Thakur,  N.  L.,  and  Müller,  W.  E.  G.  2004.
Biotechnological  potential  of  marine sponges. Jurnal  Current  Science. 86 : 1506-1512.
Ukhty,  N.  2011. Kandungan  Senyawa Fitokimia,  Total  Fenol  dan  Aktivitas Antioksidan Lamun (Syringodium
Isoetifolium) .  [skripsi].  Departemen Teknologi  Hasil  Perairan  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Wang,  W.,  and  Namikoshi,  M.  2007.
Bioactive Nitrogenous Metabolites from Ascidians. Heterocycles . 74 : 53- 88
Wewengkang,  D.S.,  Sumilat,  D.A.,  dan Rotinsulu,  H.  2014.  Sitotoksisitas Ekstrak  Kasar  Ascidian  dari  Pulau Bunaken.  Jurnal  LPPM  Bidang  Sains dan Teknologi. 1( 1 ) : 86-89.