## AKTIVITAS PENGHAMBATAN PERTUMBUHAN MIKROORGANISME
DARI EKSTRAK DAN FRAKSI ALGA Ulva lactuca TERHADAP Escherichia coli, Staphylococcus aureus, DAN Candida albicans
Brigieta Sterrytesa Keintjem 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Fatimawali 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Algae  have  long  been  used  for  the  treatment  of  various  types  of  diseases.  Ulva  lactuca  is  one  of  the algae,  which  contains  bioactive  substances  as  antimicrobial,  antifungal,  and  antioxidant.  This  study  aims  to determine the microorganisms growth inhibitory activity from Ulva lactuca algae obtained from the of Lembeh Strait  waters  in  City  of  Bitung  against  microorganisms  Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus  and  Candida albicans. Ulva lactuca algae was extracted using maceration method with ethanol solvent and fractionated with methanol, n-hexan and chloroform solvents. Testing of antimicrobial activity using agar diffusion method.  The result showed that extracts and fractions of Ulva lactuca algae did not have antimicrobial activity against the microorganisms  Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus  and  Candida  albicans.  The  chemical  composition  of algae is influenced by season, geographical distribution, as well as environmental factors such as temperature, water, salinity, light, nutrition, and mineral availability.
Keywords : Ulva lactuca, Antimicrobials, Maseration, Fractions, Agar Diffusion

## ABSTRAK
Alga  telah  lama  digunakan  untuk  keperluan  pengobatan  berbagai  jenis  penyakit. Ulva  lactuca merupakan salah satu alga yang  memiliki kandungan  zat bioaktif sebagai antimikroba. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  adanya  aktivitas  penghambat  pertumbuhan  mikroorganisme  dari  alga Ulva  lactuca yang diperoleh  dari  perairan  Selat  Lembeh  kota  Bitung  terhadap  mikroba Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus, dan Candida albicans . Alga Ulva lactuca diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol dan difraksinasi  dengan  pelarut  methanol,  n-hexan,  dan  kloroform.  Pengujian  aktivitas  antimikroba  menggunakan metode  difusi  agar.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak  dan  fraksi  dari  alga Ulva lactuca  tidak  memiliki aktivitas antimikroba terhadap Escherichia coli, Staphylococcus aureus, dan Candida albicans . Komposisi kimia alga  dipengaruhi  oleh  musim,  distribusi  geografis,  serta  faktor  lingkungan  seperti  suhu,  air,  salinitasi,  cahaya, nutrisi, dan ketersediaan mineral.
Kata kunci : Alga Ulva lactuca , Antimikroba, Maserasi, Fraksi, Difusi Agar

## PENDAHULUAN
Keanekaragaman  biota  laut  di  perairan Indonesia  yang  sangat  tinggi  merupakan kekayaan  alam  yang  dapat  dimanfaatkan  untuk kehidupan.  Saat  ini,  pemanfaatan  biota  laut bukan hanya untuk konsumtif saja, tetapi sudah mengarah  pada  penelitian  yang  lebih  maju, seperti  penemuan  obat-obatan  dengan  bahan dasar biota laut (Albutana et al, 2011).
Semakin  pesatnya  perkembangan  dunia pengobatan  telah  memunculkan  beragam  jenis obat-obatan  baru.  Penelitian  untuk  menemukan sumber metabolit sekunder yang dapat digunakan  untuk  berbagai  macam  jenis  bahan obat  juga  terus  dilakukan.  Sejak  satu  dekade terakhir  ini,  perhatian  dunia  pengobatan  mulai terarah  pada  organisme  laut  sebagai  sumber daya yang sangat potensial. Penelitian terhadap aktivitas  suatu  senyawa  sebagai  antimikroba merupakan suatu langkah awal untuk mengetahui kegunaan senyawa tersebut.
Adanya  senyawa  aktif  antimikroba  di  bidang kesehatan  merupakan  informasi  penting  untuk penanggulangan suatu penyakit yang disebabkan  oleh  mikroba  (Dwijendra et  al ., 2014).
Salah  satu  penyebab  penyakit  pada manusia  dan  makhluk  hidup  lainnya  adalah mikroba  patogen  (Juariah et  al. ,  2014). Beberapa contoh mikroba yang dapat menyebabkan  infeksi  diantaranya Escherichia coli,  Staphylococcus  aureus, dan Candida albicans.
Pengobatan tradisional  dengan  alga laut telah lama digunakan untuk keperluan berbagai jenis  penyakit.  Beberapa  hasil  penelitian antimikroba telah dilakukan dengan menggunakan  organisme  laut,  beberapa  alga yang berasal dari perairan Indonesia ditemukan memiliki  senyawa  aktif  yang  sifatnya  sebagai
antimikroba terhadap bakteri patogen (Sulistijo, 2002). Alga Ulva lactuca disebut dengan selada laut  yang  banyak  klorofil  dalam  sel-selnya sehingga  memberikan  warna  hijau  pada  laut. Metabolit  sekunder  yang  terkandung  di  dalam alga  adalah  senyawa  kimia  terpenoid  yang mempunyai  zat  bioaktif  sebagai  antimikroba, antifungi,  dan  antioksidan  (Godard et  al ., 2009).

## METODOLOGI PENELITIAN Alat
Alat  yang  digunakan  yaitu  masker,  sarung tangan, gunting, pisau, tabung oksigen, snorkel, fins, zipper  lock  bag ,  botol  600  ml,  talenan, cool  box ,  kamera underwater ,  erlenmeyer (Pyrex),  corong,  oven , timbangan  analitik, spatula,  corong  pisah,  gelas  ukur,  gelas  kimia (Pyrex), cawan petri, autoklaf, pinset, pembakar spritus, vortex  mixer , micro  tubes ,  batang pengaduk, Laminar air flow, rak tabung reaksi, tabung  reaksi,  lemari  pendingin,  inkubator, cakram  ( paper  disc) ,  mikropipet, digital caliper , kertas label, spidol permanen.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  alga Ulva  lactuca ,  mikroba  uji Staphylococcus aureus, Escherichia  coli , Candida  albicans , etanol,  akuades,  n-heksan,  kloroform,  metanol, pepton ,  beef  extract , natrium  klorida,  agar, kloramfenikol paper  disc , tissue, aluminium foil , plastic wrap , kertas saring, es batu

## Prosedur Kerja Pengambilan Sampel
Sampel  alga Ulva  lactuca diambil  dari Selat  Lembeh  kota  Bitung  menggunakan  alat bantu  (masker,  snorkel,  fins  dan  tabung oksigen).  Sampel  yang  diperoleh  dimasukkan ke  dalam zipper  lock  bag dan  diletakkan
didalam cool  box ,  kemudian  langsung  dibawa ke  Laboratorium  Farmakognosi  dan  Fitokimia Program  Studi  Farmasi  Universitas  Sam Ratulangi.  Sampel  difoto  dan  diberi  label  serta nomor sampel, untuk selanjutnya dideterminasi.

## Ekstraksi
Sebanyak    230,0  g  sampel  alga Ulva lactuca dimasukkan ke dalam botol 600 ml dan ditambahkan  pelarut  etanol  sampai  sampel terendam semuanya. Ekstraksi dilakukan dengan  cara  maserasi  selama  3x24  jam  dengan beberapa  kali  pengocokan.  Ekstrak  hasil maserasi kemudian disaring sehingga diperoleh filtrat  dan  residu.  Filtrat  yang  diperoleh kemudian  dievaporasi  pada  suhu  40 o C  sampai diperoleh ekstrak kental.

## Fraksinasi
Sebanyak 2,00 g ekstrak kental dimasukkan ke dalam erlenmeyer dan dilarutkan  dengan  campuran  metanol  :  air (80:20) sebanyak 100 mL. Setelah sampel larut, sampel dimasukkan ke dalam corong pisah dan ditambahkan  pelarut  n-heksan  sebanyak  100 mL.  Sampel  kemudian  dikocok  dalam  corong pisah  hingga  homogen.  Sample  dibiarkan hingga membentuk lapisan metanol dan lapisan n-heksan.  Masing-masing  lapisan  metanol  dan lapisan  n-heksan  ditampung  di  dalam  wadah yang  berbeda.  Lapisan  n-heksan  selanjutnya dievaporasi  menggunakan  oven  hingga  kering, lalu  ditimbang  dengan  timbangan  analitik  dan diperoleh  fraksi  n-heksan.  Selanjutnya  lapisan metanol ditambahkan dengan akuades 100 mL, kemudian  dipartisi  dengan  pelarut  kloroform menggunakan  perbandingan  1:1  v/v  setelah  itu dikocok  dalam  corong  pisah  hingga  homogen. Lapisan  metanol  dibiarkan  hingga  membentuk dua  lapisan  yaitu  lapisan  metanol  dan  lapisan kloroform. Masing-masing lapisan metanol dan lapisan  kloroform  ditampung  ke  dalam  wadah
yang berbeda, kemudian dievaporasi menggunakan oven hingga kering lalu ditimbang  dengan  timbangan  analitik  dan diperoleh fraksi kloroform dan fraksi methanol. Ketiga  fraksi  yang  diperoleh  akan  digunakan dalam pengujian antimikroba.

## Sterilisasi Alat dan Pembuatan Media 1. Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  dalam penelitian aktivitas antimikroba ini disterilkan terlebih dahulu dengan menggunakan autoklaf pada  suhu  121  ºC  selama  15  menit,  pinset dibakar  dengan  pembakaran  di  atas  api langsung  dan  media  disterilkan  di  autoklaf pada  suhu  121  ºC  selama  15  menit  (Mpila, 2012).

## 2.   Pembuatan Media Cair B1
Pepton  0,5  g, beef  extract 0,3  g,  natrium klorida  0,3  g  dan  akuades  sebanyak  100  ml diaduk  sampai  homogen  kemudian  disterilkan dalam  autoklaf  pada  suhu  121˚C  selama  15 menit  dan  setelah  itu  didinginkan.  Setelah dingin,  media  cair  B1  di  tutup  dengan aluminium foil (Dwijendra et al , 2014).

## 3.  Kultur Mikroba
Mikroba  yang  digunakan  yaitu Escherichia coli,  Staphylococcus  aureus dan Candida albicans .  Masing-masing  mikroba  diambil  dari biakan murni menggunakan mikropipet sebanyak  100  μL  dan  dimasukkan  ke  dalam masing-masing tabung reaksi yang sudah berisi media  cair  B1  sebanyak  1  ml  dan  kemudian ditutup  menggunakan aluminium  foil .  Setelah itu, diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 0 C selama 1 x 24 Jam (Dwijendra et al , 2014).

## 4.  Pembuatan Media Uji
Pepton  0,5  g, beef  extract 0,3  g,  natrium klorida 0,3 g, agar 1,5 g dan akuades sebanyak
100  ml  diaduk  sampai  homogen  kemudian disterilkan di autoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit (Dwijendra et al , 2014).

## 5.  Pembuatan Larutan Uji
Larutan uji dibuat dengan cara 1 mg ekstrak kasar  alga Ulva  lactuca dilarutkan  dalam  200 μL  metanol  dan  dikocok  hingga  homogen menggunakan  vortex.  Perlakuan  yang  sama dilakukan pada fraksi n-heksan, fraksi kloroform dan fraksi metanol (Ortez,2005).

## 6.  Pembuatan  Kontrol  Postif  dan  Kontrol Negatif
Kontrol  positif  dalam  pengujian  aktivitas antimikroba  ini  menggunakan  kloramfenikol paper  disc .  Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam penelitian ini yaitu menggunakan pelarut metanol,  dengan  cara  membuat  larutan  stok metanol  dengan  mengambil  sebanyak  200  μL metanol  kemudian  di  totolkan  pada paper  disc (Lalamentik, 2017).

## 7.  Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode yang digunakan dalam penelitian ini yaitu  metode  difusi  agar  ( disc  diffusion  Kirby and  Bauer ).  Sebanyak  100  μL  mikroba  yang telah dikultur, dipipet dan diinokulasi pada 100 ml media agar lalu diaduk hingga homogen dan kemudian dituangkan ke dalam cawan petri dan tunggu sampai media agar mengeras.
Kemudian,  larutan  uji  yang  telah  disiapkan ditotolkan  pada  masing-masing  cakram  dengan menggunakan mikropipet. Setelah agar mengeras,  kertas  cakram  yang  telah  ditotolkan sampel Alga Ulva  lactuca ,  kontrol  positif  dan kontrol negatif diletakkan ke dalam cawan petri dengan  menggunakan  pinset.  Selanjutnya, cawan  petri  diberi  label  dan  diinkubasi  dalam inkubator  pada  suhu  37 0 C  selama  1  x  24  Jam (Ortez,2005).

## 8.    Pengamatan dan Pengukuran Diameter Zona Bening
Pengamatan  dilakukan  setelah  1x24  jam masa  inkubasi.  Zona  bening  merupakan petunjuk  kepekaan  mikroba  terhadap  bahan antimikroba  yang  digunakan  sebagai  bahan  uji yang  dinyatakan  dengan  lebar  diameter  zona hambat  (Vandepite,  2005).  Kemudian  zona bening  yang  telah  diukur  dan  dikategorikan berdasarkan pedoman Davis dan Stoud (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi
Determinasi  alga Ulva  lactuca dilakukan di  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam  Program  Studi  Farmasi  Universitas  Sam Ratulangi Manado. Tujuan dilakukan determinasi  untuk  mengetahui  sampel  yang diambil  dan  diuji  aktivitas  antimikroba  adalah sampel yang sesuai yaitu alga Ulva lactuca .

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Ekstraksi  alga Ulva  lactuca merupakan proses  pemisahan  bahan  dari  campurannya dengan  menggunakan  pelarut  yang  sesuai (Mukhriani,  2014).  Ekstraksi  dengan  cara maserasi  adalah  metode  sederhana  yang  paling banyak digunakan dan sesuai, baik  untuk  skala kecil  maupun  skala  industri  (Agoes,  2007). Pemilihan  pelarut  sangat  penting  dalam menentukan  komponen  yang  ingin  didapatkan. Hal  tersebut  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor antara lain selektivitas, kelarutan, dan titik didih (Suryanto,2012).  Etanol  digunakan  sebagai pelarut  dalam  proses  ekstraksi  karena  sifatnya yang  selektif,  ekonomis,  dan  dapat  menyari hampir  keseluruhan  kandungan  simplisia,  baik non  polar,  semi  polar  maupun  polar  (Iswanti, 2009).
Prosedur pemisahan suatu senyawa berdasarkan perbedaan kepolarannya dilakukan dengan cara fraksinasi. Secara selektif, masing- masing  pelarut  akan  memisahkan  kelompok kandungan  kimia,  diawali    penyarian  dengan pelarut yang non polar, kemudian disari dengan pelarut  yang  kurang  polar  dan  terakhir  dengan pelarut  polar  (Harborne,  1987).  Pengujian antimikroba digunakan 3 fraksi  yaitu n-heksan, kloroform dan methanol.
Pemilihan  pelarut  fraksi  didasarkan  oleh tingkat  kepolarannya,  dmana  pelarut  methanol sebagai  pelarut  yang  paling  polar,  pelarut kloroform  untuk  semi  polar  dan  pelarut  n- heksan  untuk  non  polar  (Manawan,  2014). Adanya  perbedaan  tingkat  kepolaran  pelarut agar  senyawa  aktif  yang  terdapat  pada  ekstrak etanol  dapat  tertarik  atau  dikelompokkan  lebih spesifik menurut tingkat kepolarannya.
Dihitung nilai rendemen dari ekstrak dan fraksi yang diperoleh disajikan pada Tabel 1.
Tabel.1 Rendemen ekstrak dan fraksi alga Ulva lactuca .
No     Fraksi     Rendemen       Warna Sampel 1        EKE           1,40 %           hijau pekat 2         FH             0,015 %         hijau muda 3         FK             0,75 %           kuning keruh
4         FM            1,15 %           kuning cerah
Perbedaan  nilai  rendemen  ini  disebabkan oleh  perbedaan  jenis  pelarut  yang  digunakan. Pelarut yang berbeda akan melarutkan senyawa-senyawa  yang  berbeda  tergantung tingkat  kepolarannya.  Oleh  sebab  itu,  jumlah ekstrak  yang  dihasilkan  pun  juga  tergantung jenis pelarutnya (Mujipradhana, 2018).

## Uji Aktivitas Antimikroba
Uji aktivitas antimikroba ekstrak dan fraksi alga Ulva lactuca terhadap mikroba Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli dan
Candida albicans menggunakan metode difusi agar (difusi Kirby dan Bauer yang dimodifikasi).  Metode  difusi  agar  dipilih karena  kelebihan  dari  metode  tersebut  yaitu jumlah zat yang digunakan dapat diatur, cepat, mudah dan sederhana (Valgas et al, 2007). Mikroba uji yang digunakan yaitu Staphylococcus  aureus mewakili  bakteri gram  positif, Escherichia  coli mewakili bakteri  gram  negative  sedangkan Candida albicans mewakili  jamur.  Beberapa  hasil penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  di Papua  (Melisa,  2018)  dan  India  ( Prasanna, 2016 )  tentang aktivitas antimikroba alga Ulva lactuca terhadap  mikroba Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli dan Candida albicans menunjukkan  adanya  aktivitas  yang menjanjikan  terhadap  bakteri  dan  jamur patogen manusia (Kolanjinathan, 2011).
Hasil  yang  diperoleh  dari  setiap  pengujian aktivitas  antimikroba  yaitu  ekstrak  kasar etanol  (0,00  mm),  fraksi  n-hexan  (0,00  mm), fraksi  kloroform  (0,00  mm)  karena  tidak terdapat  zona  hambat  disekeliling  cakram yang  ditandai  dengan  tidak  terbentuk  area bening  (dapat  dilihat  pada  gambar  pengujian di  lampiran).  Hal  tersebut  menunjukkan  tidak ada  kepekaan  mikroba  terhadap  ekstrak  dan fraksi  alga Ulva  lactuca .  Dilakukan  3  (tiga) kali  pengulangan  pada  pengujian  ini,  yang bertujuan  agar  hasil  yang  diperoleh  lebih akurat.  Adanya  zona  bening  dalam  pengujian antimikroba  menandakan  bahwa  sampel  yang diujikan memiliki potensi menghambat pertumbuhan dari mikroba uji.
Alga Ulva  lactuca yang  diperoleh  dari perairan  Selat  Lembeh  kota  Bitung  tidak mampu menghasilkan senyawa yang menunjukkan bioaktif terhadap mikroorganisme. Komposisi kimia dari makroalga ini ditemukan bervariasi
tergantung pada musim dan distribusi geografis  serta  faktor  lingkungan  utama  yang mempengaruhi  seperti  suhu  air,  salinitas, cahaya,  nutrisi  dan  ketersediaan  mineral (Messyasz and Rybak, 2010)
Kriteria  kekuatan  antimikroba  sebagai berikut  :  diameter  zona  hambat  5  mm  atau kurang  dikategorikan  lemah,  zona  hambat  5- 10  mm  dikategorikan  sedang,  zona  hambat 10-20  mm  dikategorikan  kuat  dan  zona hambat  20  mm  atau  lebih  dikategorikan sangat  kuat.  Kriteria  ini  digunakan  dalam penelitian untuk menggolongkan daya hambat kontrol  dan  bahan  uji  sampel  (Davis  and Stout, 1971)
Digunakan  kontrol  positif  dan  kontrol negatif  sebagai  pembanding.  Kontrol  positif yang  digunakan  dalam  pengujian  ini  yaitu kloramfenikol karena memiliki spektrum kerja luas.  Manfaat  penggunaan  kontrol  positif yaitu  sebagai  kontrol  dari  zat  uji,  dengan membandingkan  diameter  zona  hambat  yang terbentuk (Dwijendra, 2019).
Sedangkan kontrol  negatif  yang digunakan adalah metanol dengan hasil tidak menunjukan  adanya  zona  hambat  terhadap mikroba Staphylococcus  aureus,  Escherichia coli dan Candida  albicans .  Hal  tersebut menunjukan  bahwa  kontrol  yang  digunakan tidak berpengaruh pada uji antimikroba karena tidak  terbentuk  daya  hambat  akibat  pengaruh dari  pelarut.  Tujuan  penggunaan  kontrol negatif  agar  dapat  mengetahui  ada  tidaknya pengaruh pelarut terhadap pertumbuhan mikroba uji, sehingga dapat dipastikan bahwa aktivitas  yang  ditunjukkan  oleh  ekstrak  dan
fraksi  ialah  dari  senyawa  yang  terkandung dalam  sampel  bukan  berasal  dari  pelarut (Djakatara et al, 2019 ) .
Dari  hasil  diameter  zona  hambat  kontrol positif  bakteri S.aureus (21,0  mm)  termasuk dalam  kategori  kuat, E.coli (19,0  mm).  Zona hambat  yang  terbentuk  pada  bakteri S.aureus lebih besar daripada bakteri E.coli disebabkan karena kedua  bakteri  berasal  dari  golongan bakteri  yang  berbeda  yaitu  bakteri S.  aureus sebagai  Gram  positif  dan  bakteri E.  coli sebagai  Gram  negatif.  Jenis  bakteri  Gram positif  memiliki  struktur  dinding  sel  yang lebih  sederhana  dibandingkan  dengan  bakteri Gram  negatif.  Sehingga  dinding  sel  bakteri Gram  positif  mudah  dirusak  oleh  senyawa antimkiroba  dari  pada  bakteri  Gram  negatif (Kartika,  1999).  Sedangkan  pada  jamur C.albicans (15,01  mm)  termasuk  dalam kategori kuat, kloramfenikol mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri  maupun jamur  karena  memiliki  spektrum  kerja  yang luas  (Katzung,  2004).  Tujuan  penggunaan kontrol  positif  sebagai  kontrol  dari  zat  uji, dengan  membandingkan  diameter  hambat yang  terbentuk.  Diameter  zona  hambat  yang diperoleh pada kontrol positif mengindikasikan bahwa tidak terjadi kesalahan  pada  pengujian.  Karena  dalam setiap  pengujian  kontrol  positif  termasuk dalam kategori sangat kuat dan kuat.
Hasil pengukuran zona hambat uji aktivitas antimikroba  ekstrak  dan  fraksi  alga Ulva lactuca terhadap  tiga  mikroba  uji  yaitu Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli dan Candida  albicans disajikan  pada  Tabel  2.

## Tabel.2  Hasil Pengukuran Zona Hambat
Perlakuan Diameter Zona Hambat (mm) Staphylococcus aureus Escherichia coli Candida albicans Ekstrak EtOH Fraksi n-hexan Fraksi CHCL 3 Fraksi MeOH Kontrol Positif Kontrol Negatif 0,00 0,00 0,00 0,00 21,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 19,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 15,01 0,00

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  alga Ulva lactuca yang  diperoleh  dari  perairan  Selat Lembeh  kota  Bitung  tidak  memiliki  aktivitas antimikroba  terhadap  mikroba Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Candida albicans .

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes,  G.  2007. Teknologi  Bahan  Alam . Institut Teknologi Bandung, Bandung.
Albutana, A,.  Yasman.,  Wisnu,  W.  2011.  Uji
Toksisitas Ekstrak Empat Jenis Teripang Suku Holothuriidea dari Pulau
Penjaliran  Timur,  Kepulauan  Seribu, Jakarta  Menggunakan  Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT). Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis. 3: (1); 65-66.
Alexopoulus,  C.  J.,  Mims,  C.  W.  (1979).
Introductory  Mycology .  New  York: John Willey & Sons.
Ali  Alimuddin.  2008. Mikrobiologi  Dasar  1 . UNM Press, Makasar.
Davis,  W.  W.,  Stout,  T.  R.  1971.  Disc  Plate Method  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Applied  Microbiology .  22: (4) ; 659-665.
Dwijendra,  I.,  Defny,  S.W.,  Frenly,  W.  2014. Aktivitas Antimikroba dan Karakterisasi Senyawa Fraksi Spons Lamellodysidea
herbacea  yang  Diperoleh  dari  Teluk Manado. Jurnal  Ilmiah  Farmasi .  3: (4) ; 1-2.
Elfidasari,  D.  2011.  Perbandingan  Kualitas  Es di  Lingkungan  Universitas  Al  Azhar Indonesia dengan Restoran Fast Food di Daerah Senayan dengan Indikator Jumlah Escherichia coli Terlarut. Jurnal Al-Azhar  Indonesia  Seri  Sains  dan Teknologi. 1: (1) ; 18-23.
Frobisher.,  Fuerst’s.  1983. Microbiology  in Health  and  Disease,  15th  edition . Sounders  International  Edition.  Igaku Shoin.
Gandjar.  2006. Mikologi  Dasar  Dan  Terapan . Yayasan Obor Indonesia, Jakarta.
Godard M., Décorde K., Ventura E., Soteras G.,
Baccou  J.C.,  Cristol  J.P.,  Rouanet  J.M. (2009).  Polysaccharides  from  the  green alga Ulva rigida improve the antioxidant status and prevent fatty streak lesions in the  high  cholesterol  fed  hamster,  an animal  model  of  nutritionallyinduced atherosclerosis. Food Chem . :115 (1) :176–180.
Greenwood,  D.,  Slack,  R.,  Peutherer,  J.,  Barer,
M. 2007. Medical Microbiology . Elsevier.China.
Guiry,  M.D.  2007.  Seasonal  Growth  and Phenotypic  Variation  in  Poryphyra
Volume 8 Nomor 2 Mei 2019
Linearis    (Rhodophyta)  populations  on The  West  Coast  of  Ireland. Journal  of Phycology . 43: (3) ;90-100.
Guiry,  M.D.,  A.M.  Guiry.  2015. AlgaeBase .
World-wide electronic publication,
National  University  of  Ireland,  Galway (taxonomic information republished from  AlgaeBase  with  permission  of
M.D.  Guiry).  Accessed  through:  World
Register of Marine Species.
Irianto, K., 2006, Mikrobiologi Menguak Dunia
Mikroorganisme jilid 1. Yrama Widya,Bandung. Juariah,  S.,  Suryanto,  D.,  Jamilah,  I.  2014. Aktivitas  Antibakteri  Spesies  Asterias Forbesii terhadap Beberapa Jenis Bakteri Patogen. Jurnal Berkala Perikanan Terubuk . 42: (2) ;37-50.
Katzung,  B.  G.,  2004.  Farmakologi  Dasar  dan Klinik.  Edisi  XIII.  Buku  3.Translation of  Basic  and  Clinical  Pharmacology Eight  Edition  Alih  bahasa    oleh  Bagian
Farmakologi Fakultas kedokteran Universitas Airlangga. Salemba Medika,Jakarta. Kenneth,  T., 2008. Staphylococcus  Aureus and Staphylococcal disease.
http://textbookofbacteriology.net/staph.h tml [Diakses pada 17 Oktober 2018].
Lalamentik,  G.  J.  2017.  Aktivitas  Antibakteri Ektrak  Karang  Lunak Klyxum  sp. Yang Diperoleh  Dari  Teluk  Manado. Jurnal Ilmiah Farmasi. 3: (6) ;46-56.
Littler,  D.  S.,  Littler,  M.  M.,  Bucher,  K.  E.,
Norris, J. N. 2002. Marine Plants of  The Caribbean,  A   Field  Guide   from Florida to Brazil. SmithsonianInstitution Press, Washington D.C. Manitoba.  2015. Eschericia  coli .  Manitoba Health,  Seniors,  and  Active  Living.
Public  health  Canada  Government. http://www.gov.mb.ca/health/publiche alth/diseases/eschericia_coli.html [Diakses pada 17 Oktober 2018].
Melisa  S.  L.,  Daniel  L.,  Septriyanto  D.  2018. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Alga  Hijau ( Ulva  Sp ) Dari  Pantai  Sorido  Biak Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli . Jurnal Ilmiah Farmasi. 1: (1) ;9-15.
Messyasz  B.,  Rybak  A.  2010.Abiotic  factors affecting the development of Ulva sp. (Ulvophyceae. Chlorophyta) in freshwater  ecosystems. Aquat  Ecol.
45: (1) ;75 87.
Mpila,  D.  A.  2012.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ektrak  Etanol  Daun  Mayana  ( Coleus antropurpureus benth ) Terhadap
Staphylococcus  aureus,  Escherichia coli dan Pseudomas aeruginosa Secara
Invitro. Jurnal Ilmiah Farmasi.
1: (1) ;13-21. Mukhriani. 2014. Ekstraksi, Pemisahan Senyawa,  dan  Identifikasi  Senyawa Aktif. Jurnal  Kesehatan .  7: (2) :  361- 367.
Nielsen,  S.S.  2003. Food  Analysis .  Kluwer academic.  Plenum  Publisher.  New York.
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing .  Marie  B.  Coyle  (Coord.Ed). American  society  for  Microbiology, America.
Pelczar,  M.  2007. Dasar-Dasar  Mikrobiologi .
Universitas Indonsia Press, Jakarta.
Purwoko.  T.  2007. Fisiologi  Mikroba .  Bumi Aksara. Jakarta.
Ridwan, S. D., Defny S.W., Henki R. 2019. Uji Aktivitas  Antimikroba  Dari  Jamur
Laut  Yang  Berasosiasi  Dengan  Alga Halimeda  opuntia.  Jurnal  Ilmiah Farmasi ; 1: (8) : 41-50.
Setiabudy,  R.  2008. Antimikroba  Golongan Tetrasiklin dan Kloramfenikol 1 Farmakologi dan Terapi . Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta. Siregar. 2005. Atlas Berwarna Saripati Penyakit Kulit . EGC, Jakarta.
Sulistijo.    2002.    P erkembangan    Budidaya
Rumput    Laut    di    Indonesia.
Puslitbang Oseanologi -  LIPI, Jakarta.
Suryanto, E. 2012. Fitokimia Antioksidan . Putra
Media Nusantara, Surabaya.
Vidhiya,  N.  M.,  Defny  S.W.,  Edi  S.  2018.
Aktivitas  Antimikroba  Dari  Ekstrak
Ascidian  Herdmania  momus Pada Mikroba  Patogen  Manusia. Jurnal
Ilmiah Farmasi. 3: (7) ; 338-347.
Waluyo,L. 2004. Mikrobiologi Umum .
Universitas  Muhammadiyah  Malang PRESS, Malang.