## METANA, Vol. 10  No. 01, Juli 2014, Hal. 1-11
EKSTRAKSI FLAVONOID DARI DAUN PARE ( MOMORDICA CHARANTIA L. ) BERBANTU GELOMBANG MIKRO SEBAGAI PENURUN KADAR GLUKOSA SECARA IN VITRO
Erlita Verdia Mutiara 1) , Achmad Wildan 1)
1) Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi “Yayasan Pharmasi”  Semarang Jl. Sarwo Edhie Wibowo Km.1 Plamongansari, Pucanggading, Semarang
Achmadwildan58@gmail.com

## Abstract
One  of  the  traditional  medicinal  plants  are  believed  to  be  lowering  glucose  levels  are  pare (Momordica charantia L.). Plants pare (Momordica charantia L.) is a plant that is familiar to the people of Indonesia, because the fruit is often used as asvegetables.  The  pare leaf chemical  constituents  is alkaloids, flavonoids, saponins, and tannins that can be used as an antioxidant, antimicrobial, antidiabetic, antitumor, and  antilepra.  The  main  advantage  of  microwave-assisted  extraction  compared  to  conventional  extraction using  soxhlet  namely  greater  efficiency  and  a  shorter  operating  time.  Microwave-assisted  extraction  will provide the transfer rate is higher than the conventional extraction.
This  study  aims  to  determine  the  ability  of  a  flavonoid  extract  of  the  leaves  of  pare  (Momordica charantia  L.)  in  lowering  glucose  levels  and  maximum  concentrations  of  the  extract  flavonoids  that  can lower  glucose  levels  as  well  as  the  variation  of  the  variable  microwave  extraction  for  obtaining  extracts optimal  results.  The  process  of  extracting  flavonoids  from  the  leaves  of  pare  (Momordica  charantia  L.)  is done  using  a  microwave  extractor  with  frequency  2450  MHz  with  a  maximum  power  of  900  watts.  The extract obtained was then reacted with glucose with Nellson-Somogyi method. Types of flavonoids that play a role in lowering glucose levels were identified using a sliding reagent with UV-Vis spectrophotometer.
The  results  showed  that  the  optimum  conditions  in  the  extraction  process  of  flavonoids  from  the leaves  of  bitter  melon  (Momordica  charantia  L.)  by  microwave-assisted  was  the  30  minute  with  a  yield  of 20.85%.  The  concentration  of  flavonoids  extract  can  lower  glucose  levels  are  160  ppm  with  a  50.38% decrease. Flavonoid compounds that play a role in lowering glucose levels in the leaves of  pare is 5,3 ', 4'- trihydroxy flavonols.
Keywords : extraction, microwaves, glucose, pare leaves, Nellson Somogyi

## Abstrak
Salah  satu  tanaman  obat  tradisional  yang  dipercaya  sebagai  penurun  kadar  glukosa  adalah  pare (Momordica  charantiaL.).  Tanaman  pare  (Momordica  charantia  L.)  merupakan  tanaman  yang  tidak  asing bagi  masyarakat  Indonesia,  karena  buahnya  sering  digunakan  sebagai  sayuran  atau  lalapan.  Kandungan kimia  daun  pare  yaitu  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  dan  tanin  yang  dapat  digunakan  sebagai  antioksidan, antimikroba,  antidiabetes,  antitumor,  dan  antilepra.Keuntungan  utama  dari  ekstraksi  dengan  bantuan gelombang  mikro  dibandingkan  dengan  ekstraksi  konvensional  menggunakan  sokhlet  yaitu  efisiensi  lebih besar  dan  waktu  operasinya  lebih  singkat.  Ekstraksi  berbantu  gelombang  mikro  akan  memberikan  laju perpindahan masa yang lebih tinggi dibandingkan ekstraksi konvensional.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kemampuan  dari  ekstrak  flavonoid  dari  daun  pare (Momordica  charantia  L.)  dalam  menurunkan  kadar  glukosa  dan  konsentrasi  maksimal  dari  ekstrak flavonoid  yang  dapat  menurunkan  kadar  glukosa  serta  variasi  dari  variabel  ekstraksi  gelombang  mikro untuk  memperoleh  hasil  ekstrak  yang  optimal.  Proses  ekstraksi  flavonoid  dari  daun  pare(Momordica charantia L.)  dilakukan menggunakan alat microwave ekstraktor dengan frekuensi  2450 Mhz dengan daya maksimal  900  watt.  Ekstrak  yang  diperoleh  kemudian  direksikan  dengan  glukosa  dengan  metode  Nellson- Somogyi.  Jenis  flavonoid  yang  berperan  dalam  menurunkan  kadar  glukosa  diidentifikasi  menggunakan pereaksi geser dengan spektrofotometer UV-Vis.
Hasil  penelitian  menunjukkan  kondisi  yang  optimum  dalam  proses  ekstraksi  flavonoid  dari  daun  pare (Momordica charantia L.) dengan berbantu gelombang mikro adalah menit ke-30 dengan rendemen 20,85%. Konsentrasi  ekstrak  flavonoid  yang  dapat  menurunkan  kadar  glukosa  adalah  160  ppm  dengan  penurunan 50,38%.

## EKSTRAKSI FLAVONOID DARI DAUN PARE….
(Erlita dkk)
Senyawa  flavonoid  yang  berperan  dalam  menurunkan  kadar  glukosa  dalam  daun  pare  adalah  5,3’,4’- trihidroksi flavonol.
Kata kunci : Ekstraksi, gelombang mikro,glukosa, daun pare, Nellson Somogyi

## PENDAHULUAN
Diabetes  mellitus  adalah  gangguan metabolik  yang  ditandai  oleh  hilangnya homeostasis  glukosa  akibat  dari  penurunan fungsi  sekresi  insulin,  kerja  insulin  atau keduanya.  Penurunan  fungsi  hormon  insulin ini  mengakibatkan  seluruh  gula  (glukosa) yang  dikonsumsi  tubuh  tidak  dapat  diproses sempurna  sehingga  kadar  glukosa  di  dalam tubuh akan meningkat yang disebut hiperglikemia (Basha dan Kumari, 2012 : 1). Gejala  awal  diabetes  mellitus  dapat  berupa sering  kencing  ( poliuri ),  sering  minum ( polidipsi ),  dan  sering  makan  ( polifagi ).
Apabila  keadaan  tersebut  tidak  diatasi  dapat menimbulkan komplikasi penyakit berbahaya. (Hardiman, 2013). Salah  satu  tanaman  obat  tradisional yang  dipercaya  sebagai  penurun  kadar glukosa adalah
pare ( Momordica charantia L.).  Menurut  Leelaprakash,  dkk. (2011),  kandungan  kimia  daun  pare  yaitu alkaloid,  flavonoid,  saponin,  dan  tanin.
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Ahmad,  dkk.
(2012)  menyatakan  bahwa  isolat  biji  pare dapat  digunakan  untuk  menurunkan  kadar glukosa  secara in  vitro .  Penelitian  ini menggunakan  metode  enzimatis.  Prinsip metode tersebut adalah menghambat aktivitas enzim  α-glukosidase  sehingga  polisakarida tidak diubah menjadi glukosa. Hasil penelitian  diperoleh  bahwa  isolat  biji  pare konsentrasi  2  mg/dL  mampu  menghambat enzim  α-glukosidase  sebesar  79,18%.  Selain metode  enzimatis,  penurunan  kadar  glukosa secara in  vitro dapat  menggunakan  metode Nellson-Somogyi.
Berdasarkan  penelitian  tersebut  diatas, penelitian  ini  mengacu  pada  penelitian Ahmad,  dkk.  (2012),  tetapi  menggunakan daun pare dengan metode Nellson-Somogyi.
Daun pare digunakan karena sejauh ini belum  ada  penelitian  mengenai  daun  pare sebagai antidiabetes. Penelitian
ini
menggunakan metode Nellson-Somogyi karena  faktor  pengganggu  dari  metode
tersebut cenderung lebih mudah dikendalikan dibandingkan  dengan  metode  enzimatis, selain itu bahan yang digunakan lebih mudah didapatkan. Prinsip metode Nellson-Somogyi adalah  mengoksidasi  glukosa  menggunakan pereaksi  Nellson,  kemudian  ditambahkan dengan  larutan  arsenomolibdat  membentuk kompleks  molibdenum  yang  berwarna  biru kehijauan  dan  dapat  diukur  absorbansinya untuk  menentukan  kadar  glukosa  (Razak, 2012).

## METODE PENELITIAN
Objek  penelitian ini  adalah  penurunan kadar  glukosa  fraksi n -heksan,  fraksi  etil asetat, dan fraksi air ekstrak etanol daun pare ( Momordica  charantia L.)  yang  dinyatakan dengan  persentase  (%)  penurunan  kadar glukosa.
Variabel  terikat dalam  penelitian  ini berupa penurunan glukosa setelah pemberian fraksi  ekstrak  etanol  daun  pare  ( Momordica charantia L.).
Bahan  penelitian meliputi  serbuk daun pare  ( Momordica charantia L.), serbuk glukosa  anhidrat,  reagen  Nellson,  reagen arsenomolibdat,  akuades,  metanol,  NaOH, AlCl 3 , serbuk NaOAc, serbuk H 3 BO 3 . Alat  penelitian meliputi  labu  takar, pipet  volume,  corong  kaca,  pipet  tetes, penangas  air,  spektrofotometer  UV-Vis Shimadzu 1700 series.
Maserasi serbuk  daun  pare  sebanyak 50,0 gram ditambah etanol 70% sepuluh kali berat serbuk. Perendaman dilakukan selama 5 hari  pada  suhu  ruang  dan  terlindung  dari cahaya.Setiap hari dilakukan pengadukan,
Kem udian disaring, dan diganti pelarut etanol  70%  baru  dengan  jumlah  yang  sama. Filtrat  yang  dihasilkan  dijadikan  satu kemudian  disaring.  Filtrat  dikumpulkan  dan dipekatkan  di  atas  penangas  air  pada  suhu 70˚C    sampai  diperoleh  ekstrak  kental (Purwatresna, 2012).
METANA, Vol. 10 No.01, Juli 2014, Hal. 1-11
Fraksinasi dilakukan dengan menimbang  5,0  gram  kemudian  dilarutkan dengan  akuades  sebanyak  75  mL  dan dimasukkan  di  dalam  corong  pisah.  Larutan ditambahkan  dengan n -heksan  sebanyak  25 mL  dan  diulang  tiga  kali,  kemudian dipisahkan.  Fase  air  difraksinasi  kembali menggunakan pelarut etil  asetat  sebanyak 25 mL  dan  diulang  tiga  kali,  kemudian dipisahkan.Masing-masing  fraksi  yang  telah terkumpul dikentalkan menggunakan penangas air.
Uji  pendahuluan dilakukan  terhadap ekstrak dan fraksi meliputi alkaloid, senyawa fenol, polifenol, tanin, saponin, dan flavonoid.  Uji  flavonoid  dipertegas  dengan menggunakan  uji  KLT  yang  dielusi  dengan eluen n -butanol : asam asetat glasial : air (4 : 1  :  5).  Setelah  elusi  selesai,  lempeng dikeringkan  kemudian  lempeng  tersebut diuapi  denganmenggunakan  uap  ammonia pekat. Terbentuknya warna kuning menunjukkan  adanya  kandungan  flavonoid dalam daun pare (Robinson, 1995 : 211).
Pembuatan  larutan  glukosa  standar dengan  cara  menimbang  baku  glukosa anhidrat 100,0 mg dan dilarutkan etanol 80% sebanyak  2  kali  masing-masing  5  mL. Larutan tersebut diuapkan kemudian dicukupkan dengan akuades hingga 50,0 mL. Deret  baku  dibuat  sebanyak  5  deret konsentrasi 10, 20, 30, 40, dan 50 ppm serta diukur  absorbansinya  pada operating  time yang stabil dan panjang gelombang maksimal (Sadasivam dan Manickam, 1996).
Pengukuran kadar
glukosa dilakukan  dengan  cara  3,0  mL    larutan  baku glukosa ditambahkan dengan 3,0 mL masing- masing  dari  fraksi.  Campuran  tersebut diambil  sebanyak  1,0  mL  ditambahkan dengan reagen Nellson sebanyak 1,0 mL lalu ditutup  dengan  kapas  dan  dipanaskan  di  atas penangas air dengan suhu 100˚C . Setelah itu didinginkan,
ditambah  reagen  arsenomolibdat  sebanyak 1,0  mL  kemudian  dihomogenkan  dan  diukur pada operating time dengan panjang gelombang  maksimal  pada  spektrofotometer visibel (Ermaiza, 2009).
Analisis data dapat dihitung dengan rumus:
Persentase penurunan kadar  = awal Kadar khir kadar tera - awal Kadar x 100% Penarikan senyawa aktif yang terkandung  di  dalam  daun  pare  dapat dilakukan dengan proses ekstraksi menggunakan pelarut dan cara ekstraksi yang sesuai.  Faktor  yang  mempengaruhi  mutu ekstrak  secara  kimia  salah  satunya  adalah metode  ekstraksi  (Depkes  RI,  2000  :  7). Metode  ekstraksi  yang  digunakan  pada penelitian  ini  Microwave  adalah  alat  yang digunakan  untuk  ekstraksi,  mengandung medan elektromagnetik dalam rentang frekuensi  300  MHz  sampai  300  GHz  atau antara panjang  gelombang dari 1 cm dan 1m (Chen  dkk  ,    2007).  Medan  elektromagnetik memainkan peran penting dalam setiap upaya untuk  menggambarkan  fisik  realitas.Bidang dan  partikel  yang  diekstraksi    harus diletakkan  pada  tempat  sehingga  energi elektro magnetik yang mengandung momentum  dapat  berinteraksi  dan  terjadi penarikan  zat  aktif  Bidang  elektromagnetik berinteraksi  dengan  materi  sehingga  terjadi transfer energi (Hartati, 2010).
Penapisan  fitokimia  senyawa  aktif bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan senyawa  yang  terdapat  dalam  ekstrak  etanol daun  pare.  Penapisan  fitokimia  dapat dilakukan  dengan  uji  pendahuluan.  Uji tersebut  meliputi  uji  flavonoid,  tanin, saponin,  polifenol,  senyawa  fenol,  alkaloid, glikosida-3-flavonol, shinoda, dan taubeck. Uji flavonoid dilakukan menggunakan larutan  NaOH  dengan  cara  masing-masing  1 mL  ekstrak  etanol  daun  pare  ditambah dengan  NaOH  yang  akan  membentuk  warna kuning  stabil  (Leelaprakash,  dkk.  2011). Hasil  perlakuan  menunjukkan  larutan  uji ekstrak mengandung flavonoid (tabel 4).

## EKSTRAKSI FLAVONOID DARI DAUN PARE….
(Erlita dkk) Tabel 4. Hasil Uji Senyawa Flavonoid Larutan Uji Hasil Perlakuan Keterangan Rutin (Kontrol positif) Larutan kuning Mengandung flavonoid Akuades (Kontrol negatif) Larutan jernih Tidak mengandung flavonoid Ekstrak Larutan kuning pekat Mengandung flavonoid Pendahuluan glikosida-3-flavonol menunjukkan  hasil  positif  pada  ekstrak,
Menurut  Depkes  RI  (1995),  uji  glikosida-3- flavonol  menunjukkan  hasil  positif  apabila setelah  penambahan  pereaksi  dalam  waktu  2 sampai  5  menit  tidak  terjadi  warna  kuning (tabel 5).

## Tabel 5.Pendahuluan Glikosida-3-flavonol
Larutan Uji Hasil Perlakuan Keterangan Rutin (kontrol positif) Merah muda Mengandung Glikosida-3- flavonol Akuades (kontrol negatif) Larutan jernih Tidak mengandung Glikosida-3- flavonol Ekstrak Hijau Mengandung Glikosida-3- flavonol Uji  Shinoda  menunjukkan  hasil  negatif  pada ekstrak,.  Menurut  Depkes  RI  (1995),  uji shinoda  menunjukkan  hasil  positif  flavon, khalkon, dan auron apabila setelah penambahan  pereaksi  terjadi  warna  kuning, sehingga di dalam ekstrak tidak mengandung flavonoid  golongan  flavon,  khalkon,  dan auron. (tabel 6).
Tabel 6.Uji Shinoda Larutan Uji Hasil Perlakuan Keterangan Rutin (kontrol positif) Larutan kuning Mengandung shinoda Akuades (kontrol negatif) Larutan jernih Tidak mengandung shinoda Ekstrak Hijau Tidak mengandung flavon, kalkon  dan auron
Uji Taubeck menunjukkan hasil positif pada ekstrak. Menurut Depkes RI (1995), uji taubeck  menunjukkan  hasil  positif  apabila setelah  penambahan  reaksi  larutan  uji berfluoresensi  kuning  intensif  dibawah  sinar UV  254  menunjukkan  adanya  flavonoid (tabel 7).
Tabel 7.Pendahuluan Flavonoid Taubeck Larutan Uji Hasil Perlakuan Keterangan Akuades (kontrol negatif) Tidak berpendar kuning Tidak mengandung flavono Ekstrak Berpendar kuning Mengandung flavonoid Identifikasi tanin dilakukan menggunakan  larutan  FeCl 3 1%  dengan  cara masing-masing  1  mL  ekstrak  etanol  daun pare  ditambah  larutan  FeCl3  1%  akan membentuk  warna  hijau  kehitaman  atau  biru tua (tabel 8) (Depkes RI, 1995).

## METANA, Vol. 10  No.01,  Juli 2014, Hal. 1-11
Tabel 8. Hasil Uji Senyawa Tanin Larutan Uji Hasil perlakuan Keterangan Larutan gambir (kontrol positif) Biru tua Mengandung senyawa tanin Akuades (kontrol negatif) Oranye Tidak mengandung senyawa tanin Ekstrak Hijau Mengandung senyawa tanin Identifikasi saponin dilakukan menggunakan  pemanasan  masing-masing
1mL  ekstrak  dan  fraksi  ekstrak  etanol  daun pare,  kemudian  dikocok  vertikal  akan membentuk  busa.  Busa  yang  terbentuk  akan stabil  setelah  penambahan  HCl  1%  (tabel  9) (Depkes RI, 1995).

## Tabel 9. Hasil Uji Senyawa Saponin
Larutan Uji Hasil Perlakuan Keterangan Larutan lerak (kontrol positif) Berbusa Mengandung senyawa saponin Akuades (kontrol negatif) Tidak berbusa Tidak mengandung senyawa saponin Ekstrak Berbusa Mengandung senyawa saponin Identifikasi polifenol dilakukan dengan cara masing-masing  1 mL ekstrak dan fraksi ekstrak  etanol  daun  pare  ditambah  dengan  1 mL larutan kalium heksasianoferat (III) dan 1 mL larutan besi (III) klorida 1%
menunjukkan  warna  biru  prusian  (tabel  10)
(Depkes RI, 1995).
Tabel 10. Hasil Uji Senyawa Polifenol Larutan Uji Hasil Perlakuan Keterangan Larutan resorcinol (kontrol positif) Biru prusian   Mengandung senyawa polifenol Akuades (kontrol negatif) Biru terang Tidak mengandung senyawa polifenol Ekstrak Biru prusian Mengandung senyawa polifenol
Identifikasi  alkaloid  dilakukan  dengan cara1  mL  ekstrak  etanol  daun  pare  ditambah 1 mL larutan HCl 2N dan akuades, kemudian dipanaskan,  kemudian  didinginkan  dan disaring.  Filtrat  yang  diperoleh  ditambah reagen  dragendrof.  Terbentuknya  warna merah cokelat menunjukkan adanya senyawa alkaloid (tabel 11) (Depkes RI, 1995).
Tabel 11. Hasil Uji Senyawa Alkaloid Larutan Uji Hasil Perlakuan Keterangan Larutan kafein (kontrol positif) Merah cokelat Mengandung senyawa alkaloid Akuades (kontrol negatif) Merah Tidak mengandung senyawa alkaloid Ekstrak Merah cokelat Mengandung senyawa alkaloid
Identifikasi  senyawa  fenol  dilakukan  dengan cara  masing-masing  fraksi n -heksan,  fraksi etil asetat, fraksi air, dan ekstrak etanol daun pare  ( Momordica  charantia L.)  diambil sebanyak 1 mL kemudian ditambah dengan 1 mL larutan besi (III) klorida 1%. Terbentuknya  warna  merah,  ungu,  biru,  dan hitam  menunjukkan  adanya  senyawa  fenol (tabel 12) (Depkes RI, 1995).

## EKSTRAKSI FLAVONOID DARI DAUN PARE….
(Erlita dkk) Tabel 12. Hasil Uji Senyawa Fenol Larutan Uji Hasil Perlakuan Keterangan Larutan phenol (kontrol positif) Ungu Mengandung senyawa fenol Akuades (kontrol negatif) Oranye Tidak mengandung senyawa fenol Ekstrak Hijau kehitaman Mengandung senyawa fenol Uji  pendahuluan  dilakukan  untuk menunjukkan  adanya  senyawa  aktif  yang terkandung  di  dalam  ekstrak  secara  umum. Hasil perlakuan menunjukkan bahwa  ekstrak etanol  positif  mengandung  flavonoid,  tanin, saponin,  senyawa  fenol,  polifenol,  dan alkaloid. Berdasarkan hasil perlakuan tersebut maka daun pare positif mengandung flavonoid,  tanin,  saponin,  fenolik,  polifenol, dan  alkaloid.  Hasil  perlakuan  ini  sesuai dengan  penelitian  yang  pernah  dilakukan oleh Rachmawati, dkk. (2001) dan Leelaprakash,  dkk.  (2011)  yang  menyatakan bahwa  daun  pare  positif  mengandung flavonoid,  tanin,  saponin,  senyawa  fenol, polifenol, dan alkaloid.
Selain uji pendahuluan dengan pereaksi  kimia,  uji  senyawa  flavonoid  juga dilakukan  dengan  metode  kromatografi  lapis tipis  (KLT).Fase  diam  yang  digunakan adalah  silika  gel  GF 254 dan  fase  gerak n - butanol  :  asam  asetat  :  akuades  (4  :  1  :  5), jarak  elusi  8  cm,  dan  penampak  bercak  uap ammonia. Baku pembanding rutin digunakan untuk  melihat  perbandingan  nilai  Rf. Flavonoid  yang  bersifat  polar  terikat  kuat pada  fase  diam.  Dengan  adanya  fase  gerak yang  bersifat  semi  polar  akan  membawa flavonoid  melewati  fase  diam  dan  akan memisah. Adanya uap ammonia akanmenyebabkan  gugus  hidroksi  fenolik pada flavonoid membentuk warna kuning.
Hasil  identifikasi  pada  ekstrak,  fraksi etil  asetat,  dan  fraksi  air  ekstrak  etanol  daun pare  menunjukkan  terjadinya  fluoresensi warna  ungu  saat  dilihat  di  bawahsinar  UV 254 nm dan terbentuk noda berwarna kuning lemah setelah diberi uap ammonia.
Sedangkan fraksi n -heksan tidak menunjukkan adanya fluoresensi warna ungu maupun  noda  kuning  setelah  diberi  uap ammonia.    Harga  Rf  yang  diperoleh  untuk ekstrak yaitu 0,61 dan  baku rutin 0,57 (tabel 13), sehingga dapat disimpulkan bahwa pada ekstrak  etanol  daun  pare  mengandung flavonoid.
Tabel 13.Hasil Identifikasi Flavonoid Secara KLT Larutan Uji Rf Warna tampak dengan amoniak Baku rutin 0,57 Kuning kecoklatan Ekstrak 0,61 Kuning lemah Pengukuran  kadar  glukosa  dilakukan dengan  membuat  larutan  baku  glukosa. Serbuk glukosa anhidrat yang sudah ditimbang  dilarutkan  dengan  etanol  80% panas,  kemudian  diuapkan  terlebih  dahulu sebelum dicukupkan dengan akuades.
Penambahan  etanol  80%  panas  berfungsi untuk  mencegah  pertumbuhan  mikroba karena  glukosa  dapat  menjadi  nutrisi  yang baik  untuk  pertumbuhan  mikroba.  Larutan glukosa selanjutnya diuapkan untuk mengurangi  jumlah  etanol.  Larutan  glukosa dibuat  konsentrasi  2000  ppm,  kemudian diencerkan  menjadi  100  ppm.  Deret  baku glukosa dibuat dengan konsentrasi 10, 20, 30, 40,  dan  50  ppm.  Masing-masing  konsentrasi baku  glukosa  direaksikan  dengan  reagen Nellson,  kemudian  diukur  absorbansinya. Pengukuran  kadar  glukosa  menggunakan spektrofotometri  visibel  karena  senyawa yang  akan  diukur  berupa  larutan  berwarna yang  dapat  diserap  pada  panjang  gelombang 400 nm sampai 750 nm. Pengukuran panjang gelombang  maksimal  dilakukan  setelah didapatkan operating time .
Panjang gelombang maksimal yang diperoleh pada  menit  ke-11  adalah  761  nm,  sehingga pengukuran baku  glukosa anhidrat dilakukan pada menit ke-11 dengan panjang gelombang 761 nm.

## METANA, Vol. 10 No. 01, Juli 2014, Hal. 1-11
Deret  konsentrasi  larutan  baku  glukosa anhidrat  10,  20,  30,  40,  dan  50  ppm ditambahkan dengan reagen Nellson. Penambahan reagen tersebut dapat mereduksi kuprioksida  menjadi  kuprooksida  ekuivalen dengan  jumlah  glukosa  yang  ada.  Adanya sifat  mereduksi  disebabkan  oleh  adanya gugus  aldehid  bebas  yang  terdapat  dalam glukosa.  Selanjutnya  glukosa  mengalami oksidasi oleh pereaksi Nellson menghasilkan asam  glukonat.  Larutan  dipanaskan  dengan ditutup  kapas  agar  reaksi  berlangsung  secara
maksimal.  Dengan  adanya  pemanasan  dapat meningkatkan  energi  kinetik  dari  molekul- molekul sehingga akan meningkatkan kecepatan  reaksi.  Larutan  yang  sudah dipanaskan  selanjutnya  didinginkan  dan ditambah  reagen  arsenomolibdat  didapatkan warna  biru  kehijauan  karena  arsenomolibdat bereaksi  dengan  kuprooksida  membentuk molibdenum.  Pengukuran  dilakukan  pada saat operating time dengan panjang gelombang  761  nm.Kurva  baku  glukosa anhidrat dapat dilihat pada gambar 9.
Gambar 9.Kurva Baku Glukosa Anhidrat
Konsentrasi larutan baku glukosa yang digunakan  dalam  penelitian  ini  50  ppm. Masing-masing konsentrasi ditambahkan dengan baku glukosa, kemudian dari campuran  tersebut  diambil  sebanyak  1,0  mL untuk  direaksikan  dengan  reagen  Nellson. Larutan  dipanaskan  dengan  ditutup  kapas, lalu  didinginkan,  dan  ditambahkan  dengan arsenomolibdat,  kemudian  larutan  diukur pada  saat operating  time dengan  panjang gelombang 761 nm.
Hasil  data  penurunan  kadar  glukosa menunjukkan  rata-rata  persentase  penurunan
yang  terus  meningkat  dari  80  ppm  sampai 160  ppm.  Pada  konsentrasi.  Persentase penurunan paling tinggi pada konsentrasi 160 ppm dengan rata-rata 50,38

## EKSTRAKSI FLAVONOID DARI DAUN PARE….
(Erlita  dkk)
Tabel 16. Hasil Perhitungan PersenPenurunan Glukosa
Konsentrasi (ppm) % penurunan glukosa Rata-rata % penurunan glukosa Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 80 10,81% 11,18% 12,66% 11,55% 100 23,84% 23,96% 24,08% 23,96% 120 36,25% 35,76% 35,39% 35,80% 140 44,85% 45,22% 45,34% 45,14% 160 49,77% 50,63% 50,75% 50,38%
Gambar 10. Kurva Penurunan Kadar Glukosa Pada  grafik  tersebut  dapat  diketahui bahwa  persentase  penurunan  kadar  glukosa
lebih besar pada kadar 160 ppm dibandingkan dengan kadar 80 ppm
(NH 4 ) 6 Mo 7 O 24 .4H 2 O 3H 2 SO 4 7H 2 MoO 4 3(NH 4 ) 2 SO 4
12MoO 4 2- AsO 4 3- [AsMo 12 O 40 ] 12H 2 O
[AsMo 12 V O 40 ] 3-
4Cu + [AsMo 4 V Mo 8 VI O 40 ] 7- 4Cu 2+ CHO CH 2 OH H OH H OH HO H H OH COOH CH 2 OH HO H H OH HO H H OH + 2Cu 2+ + 4OH - Cu 2 O + + 2H 2 O Nellson merah bata glukosa asam glukonat (1). (2). (3). (4).
Gambar 11. Reaksi Pembentukan Senyawa Kompleks Glukosa dengan Arsenomolibdat (Kautsar, 2011)

## METANA, Vol. 10 No. 01, Juli 2014, Hal. 1-11
Kompleks  molibdenum  yang  terukur sebanding  dengan  kadar  glukosa  dalam larutan.  Komponen  warna  dari  pereaksi Nellson-Somogyi  juga  akan  mengabsorbsi cahaya  pada  panjang  gelombang  747  nm, sehingga  dalam  analisis  ini  digunakan blangko  dengan  menambahkan  pereaksi tersebut.
Hal ini bertujuan untuk meminimalkan  adanya peningkatan  absorban yang  terukur  oleh  instrumen  yang  berasal dari  warna  senyawa  yang  tidak  diharapkan, yang  mengakibatkan  penurunan  akurasi pengukuran.
Analisis data penelitian secara statistik dengan  menggunakan  SPSS  ( Statistical Product  and  Service  Solutions )  versi  16 didahului  dengan  uji  normalitas  dengan menggunakan  rumus  dari  Shapiro-Wilk,  dan uji homogenitas dengan menggunakan rumus dari Lavene  Test .  Untuk  uji  normalitas  dan uji homogenitas nilai signifikansi lebih besar dari  0,05.  Uji  normalitas  digunakan  untuk mengetahui apakah data berdistribusi  normal atau  tidak,  sedangkan  uji  homogenitas digunakan  untuk  mengetahui  apakah  ragam antar perlakuan homogen atau tidak.
Berdasarkan perhitungan dari uji Tukey antar  kelompok  glukosa  setelah  penambahan data berbeda signifikan yaitu nilai signifikansinya  kurang  dari  0,05,  sehingga dapat  disimpulkan  masing-masing  kelompok data  terdapat  perbedaan  dalam  menurunkan kadar glukosa.

## Tabel 19. Data Interpretasi Spektrum UV- Vis
Perlakuan Sampel Isolat Flavonoid λ maks (nm) Pergesera n λ (nm) Penafsir an Pita I Pita II Pit a I Pit a II Sampel dalam metanol 366, 4 271,2 - - Flavonol (3-OH bebas) Sampel dalam metanol + NaOH 343, 4 266,2 -23 -5 3,4’-OH, o -diOH pada cicin A, pada cincin B : 3-OH berdampi
ngan Sampel dalam metanol + NaOH (5menit) 332, 6 261,6 - 33,8 -9,6 - Sampel dalam metanol + NaOAc 401, 8 262,6 +35, 4 -8,6 - Sampel dalam metanol + NaOAc + H 3 BO 3 398, 8 - +32, 4 - o - di OH pada cincin B Sampel dalam metanol + AlCl 3 414, 8 248,4 +48, 4 - 5-OH Sampel dalam metanol + AlCl 3 + HCl 331, 4 262,4 -35 -8,8 -
Pada  spektrum  yang  ditunjukkan  pada sampel  yang  dilarutkan  dalam  metanol didapatkan dua pita yaitu pita I pada panjang gelombang  366,4  nm  dan  pita  II    pada panjang  gelombang  271,2  nm.  Interpretasi spektrum  pada  kedua  pita  di  atas  adalah rentang  spektrum  dari  senyawa  flavonoid golongan flavonol.Penambahan pereaksi geser NaOH untuk mendeteksi adanya gugus hidroksil  yanglebih  asam,  yang  pada  hasil diperoleh  gugus hidroksil pada rantai  karbon 4’.Penambahan  kekuatan  spektrum  setelah waktu tertentu menunjukkan bahwa gugus ini tidak peka terhadap basa.Penambahan pereaksi  geser  Na  asetat  digunakan  untuk mendeteksi adanya gugus 7-hidroksil bebas.Pada  hasil  tidak  didapatkan  bahwa terkandung adanya gugus 7-hidroksil bebas.Penambahan H 3 BO 3 untuk menjembatani kedua gugus hidroksil o -diOH, pada  hasil  menunjukkan  adanya  gugus o - diOH  pada  cincin  B.  Penambahan  pereaksi geser  AlCl 3 dan  HCl  untuk  mendeteksi adanya  gugus  5-hidroksil  bebas.  Pada  hasil didapatkan  bahwa  terkandung  adanya  gugus 5-hidroksil bebas.

## EKSTRAKSI FLAVONOID DARI DAUN PARE….
(Erlita dkk)
Hasil  yang  didapat  dari  interpretasi spektrum di atas adalah 5, 3’, 4’ – trihidroksi flavonol.
O O OH OH OH OH Gambar 12.Interpretasi spektrum
flavonoid 5, 3’, 4’-trihidroksi flavonol

## KESIMPULAN
1. Kondisi  yang  optimum  dalam  proses ekstraksi  flavonoid  dari  daun  pare ( Momordica  charantia L.)  dengan berbantu gelombang mikroadalahmenit ke-30 dengan rendemen 20,85%.
2. Konsentrasi  ekstrak  flavonoid  yang dapat  menurunkan  kadar  glukosa adalah  160  ppm  dengan  penurunan 50,38%.
3. Jenis  flavonoid  dalam  daun  pare ( Momordica  charantia L.)  yang dapat menurunkan kadar glukosaadalah  5,  3’,  4’-trihidroksi flavonol

## SARAN
1. Dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai uji aktivitas isolat flavonoid  daun  pare  ( Momordica charantia L.)  dalam  menurunkan kadar glukosa secara in vitro .
2. Dilakukan penentuan kadar flavonoid total pada isolat daun pare ( Momordica  charantia L.)  dalam menurunkan  kadar  glukosa  secara invitro .

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad  Z.,  Khairul  F.Z.,  Azhar  Y.,  Chiong H.S.,  Malarvilis  S.,  Amin  I.,  dan analysis  of  Polipeptide-K  and  Oil Isolated from Seeds of Momordica
charantia  (Bitter  Gourd) . l  Journal Molecules . 17. 9631-9640.
Muhammad N.H. 2012. In Vitro Antidiabetic Activities and Chemical
Basha  S.  K.  dan  Kumari.  2012. In  Vitro Antidiabetic  Activity  of  Psidium Guajava  Leaves  Extracs , Asian
Pasific  Journal  of  Tropical  Disease . 1-3
Departemen  Kesehatan  RI.  1986. “Sediaan Galenik” . Jakarta: Depkes RI
Ermaiza.  2009. Pengaruh  Dua  Jenis Polisakarida  dalam  Biji  Alpukat ( Persea  americana  mill )  Terhadap Kandungan  Sirup  Glukosa  Melalui Proses  Hidrolisis  dengan  HCl  3% . Skripsi .  Medan:  Fakultas  Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatera Utara Hardiman, D. 2013. Diabetes dan Komplikasinya Mengintai Kelengahan  Kita . Tumbuh .  Edisi Januari: 3-5.
Heinrich,  M.,  Joanne  B.,  Simon  G.,  dan Elisabeth M. W. 2009. Farmakognosi dan  Fitoterapi .  Diterjemahkan  oleh Amalia  H.  Hadinata.  Jakarta:  Buku Kedokteran EGC.
Kautsar,  R.  H.  2011. Kajian  Hidrolisis Enzimatis Selulosa dari Alga Merah ( Eucheuma spinosum
dan Eucheuma  cottoni )  Menggunakan Enzim  Selulase  dari Aspergillus niger . Skripsi . Malang: Fakultas Sains dan  Teknologi  Universitas  Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim
Leelaprakash,  G.,  J.  Caroline,  Gowtham B.M.,  Pradeep  K.,  dan  Shivram  P. 2011. In  Vitro  Antimicrobial  and Antioxidant  Activity  of  Momordica charantia  Leaves.  Pharmacophore . 2 . (4) : 242-252
METANA, Vol. 10 No.01, Juli 2014, Hal. 1-11
Purwatresna, E. 2012. Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Air dan Etanol  Daun  Sirsak  Secara  in  vitro melalui inhibisi enzim α- glukosidase . Skripsi .  Bogor:  Institut Pertanian Bogor
Razak  A.  K.,  Ni  Ketut  Sumarni,  Basuki Rahmat.  2012. Optimasi  Hidrolisis Sukrosa        Menggunakan    Resin
Penukar  Kation  Tipe  Sulfonat. Jurnal Natural Science 1 (1):119-131 Robinson,  T.  1995. Kandungan  Organik Tumbuhan Tingkat Tinggi . Terjemahan Padmawinata, K. Bandung: ITB Press. Sadasivam,  S.  dan  Manickam,  A.  1996.
Biochemical  Methods .  New  Delhi: New Age International
Zaini,  R.  2006. Isolasi  Komponen  Bioaktif Flavonoid  dari  Tanaman  Daun Dewa  ( Gynura  pseudochina L.) . Tesis . Bogor: Institut Pertanian Bogor.