## EFEK ANTIFERTILITAS EKSTRAK AIR BIJI PEPAYA
( Carica papaya L . )TERHADAP JUMLAH DAN DIAMETER FOLIKEL de Graaf MENCIT ( Mus musculus ) BETINA
Muhamad Adnan Jafar Alfian 1) , Agung Janika Sitasiwi 2) , Muhammad Anwar Djaelani 3) 1,2,3) Departemen Biologi FSM UNDIP email: agssiwi@yahoo.co.id

## Abstract
Papaya  seed  (Carica  papaya  L.)  is  known  to  be  used  as  an  herbal  contraceptive.  Papaya  seeds  contain  anti- fertility compounds that can suppress fertility by interfering the ovarian function. The aim of this research was to find  out  the  antifertility  effect  of  papaya  seed  extract  (Carica  papaya  L.)  to  the  number  and  diameter  of  the Graafian  follicle  in  female  mice  (Mus  musculus).  This  research  was  conducted  using  Complete  Randomized Design  (CRD).  Laboratory  animals  were  treated  with  K(-)  (Control  with  solvent);  K(+)  (Control  with  the contraceptive pill); P1, P2, and P3 (Treatment with doses of 1.4 mg, 3.5 mg, and 7 mg papaya seed, respectively, for each individual). The treatment  was conducted for 21 days. The observed parameters were ovarian  weight; body weight; number, diameter, and theca thickness of Graafian follicle. Data processing was performed using ANOVA test and tested further by Duncan test. All analyses were performed with a significance level of 5% (a = 0.05).  Data  were  analyzed  using  SPSS  version  16.0  computer  program.  The  results  showed  that  papaya  seed extract was not significantly different (p> 0,05) on ovarium weight, body weight, Graafian follicle diameter, and theca layer thickness but significantly different (p <0,05) on the number of Graafian follicles in female mice. The conclusion of this research is the papaya seeds extracted by water can decrease the number of Graafian follicle so potentially to be used as an antifertility of female mice.
Keywords : Antifertility, Papaya Seeds, Graafian follicle, Mus musculus

## PENDAHULUAN
Penelitian mengenai kontrasepsi yang  aman  saat  ini  terus  dilakukan.  Salah satu teknik kontrasepsi yang terus dikembangkan  adalah  penggunaan  bahan alami  atau  tanaman  obat  sebagai  bahan baku obat kontrasepsi. Tanaman obat yang digunakan adalah tanaman yang mengandung  senyawa  antifertilitas.  Katno (2008)  menyatakan  bahwa  tanaman  obat memiliki kelebihan yaitu efek sampingnya relatif  kecil,  komponen  dalam  satu  bahan memiliki  efek  saling  mendukung,  satu tanaman  obat  memiliki  beberapa  efek farmakologi,  serta  lebih  sesuai  untuk penyakit-penyakit metabolik generatif.
Antifertilitas merupakan istilah yang digunakan untuk senyawa atau bahan yang
dapat  mengganggu  sistem  reproduksi. Senyawa antifertilitas merupakan senyawa yang  memiliki  kemampuan  mencegah kesuburan  dengan  mengganggu  beberapa mekanisme  reproduksi  normal,  baik  laki- laki  dan  perempuan  (Dabhadkhar et  al ., 2015).  Pengujian  senyawa  antifertilitas dapat  dilakukan  dengan  menggunakan hewan  percobaan,  salah  satunya  mencit ( Mus musculus ).
Hasanah  (2015)  menyatakan  bahwa mencit  memiliki  banyak  keunggulan sebagai  hewan  percobaan  khususnya digunakan  dalam  penelitian  biologi,  yaitu siklus  hidup  yang  relatif  pendek,  jumlah anak  per  kelahiran  banyak,  variasi  sifat- sifatnya tinggi dan mudah dalam penanganannya.
Muhamad  Adnan  J.  A,  dkk:  Efek  Antifertilitas  Ekstrak  Air  Biji  Pepaya  ( Carica  papaya L . )Terhadap  Jumlah  dan  Diameter  Folikel  de  Graaf  Mencit ( Mus musculus ) Betina
Salah  satu  tanaman  yang  dapat digunakan  sebagai  bahan  baku  untuk  obat kontrasepsi  adalah  biji  pepaya  ( Carica papaya L.).  Kandungan    kimia  yang terdapat    pada    biji  pepaya  antara  lain asam  lemak,  protein,  serat  kasar,  minyak pepaya, carpain, benzylglucosinolate, benzylisothiocyanate, glucotropacolin, benzylthiourea, hentriaconate , β- sitosterol,  caricin  dan  enzim  myosin (Krishna et  al. ,  2008).
Senyawa yang terkandung dalam biji pepaya  seperti  golongan  saponin,  tanin, flavonoid,  terpenoid,  alkaloid,  sterol  serta triterpene  dapat  menekan  tingkat  fertilitas dengan  cara  mengganggu  fungsi  ovarium, uterus atau vagina (Setyowati et al ., 2015).
Francis et  al. (2002)  menyatakan  bahwa saponin  mempunyai    pengaruh    negatif terhadap    reproduksi    ternak    seperti aborsi  atau    kematian,    menyebabkan steril dan penghentian proses kebuntingan.  Saponin  berperan    besar dalam    pengeluaran  hormon    luteinizing. Setyowati et al . (2015) menyatakan bahwa saponin  merupakan  senyawa  aktif  pada tumbuhan yang bersifat antiestrogen. Efek antiestrogen menyebabkan ovarium inaktif,  pertumbuhan  folikel,  dan  sekresi estrogen terganggu karena itu ovulasi juga dapat  terganggu.  Hasil  penelitian  yang dilakukan  Puspitasari et  al .  (2014) menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol  biji  pepaya  ( Carica  papaya L.)
pada  tikus  betina  terbukti  menurunkan angka fertilitasi.
Penelitian  yang  dilakukan  Satriyasa dan  Pangkahila  (2010)  menunjukkan bahwa  fraksi  heksan  dan  fraksi  metanol ekstrak biji pepaya muda dapat menurunkan  sel  spermatogonia  A  mencit jantan  secara  signifikan.  Hasil  penelitian Puspitasari et al . (2014) juga menunjukkan bahwa ekstrak ethanol biji pepaya memberikan  berbagai  efek  pada  tikus betina,  diantaranya  adalah  meningkatkan tingkat  infertilitas,  menurunkan  kualitas sel  telur,  mengurangi  jumlahfolikel  tertier dan  folikel  de  Graaf  dan  menurunkan angka fertilisasi.
Salah  satu  proses  reproduksi  yang dapat  diamati  akibat  paparan  senyawa antifertilitas  pada  hewan  uji  betina adalah proses  folikulogenesis.  Hafizuddin et al . (2012) menjelaskan bahwa folikulogenesis  merupakan  suatu  proses yang bertanggung jawab dalam menghasilkan  folikel  yang  besar  dan dominan,  biasa  disebut  dengan  folikel  de Graaf. Perkembangan folikel sangat bergantung pada regulasi hormon reproduksi  (Griffin et  al .,  2006)  sehingga pemberian senyawa antiestrogenik berpotensi  mengganggu  proses  tersebut (Setyowati et al ., 2015).
Berlatar belakang hal tersebut dilakukan penelitian tentang efek antifertilitas  ekstrak  air  biji  pepaya
( Carica  papaya L . )  terhadap  jumlah  dan diameter  folikel  de  Graaf  mencit  ( Mus musculus )  betina.  Hasil  penelitian  ini diharapkan  dapat  memberikan  informasi tentang  potensi  ekstrak  air  biji  pepaya ( Carica  papaya L . )  dalam  menekan tingkat  fertilitas  mamalia,  sehingga  bisa digunakan  sebagai  dasar  pengembangan kontrasepsi  berbahan  herbal  yang  aman bagi manusia.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  mengenai  efek  anti- fertilitas  ekstrak  air  biji  pepaya  ( Carica papaya L . ) pada mencit betina dilaksanakan  selama  2  bulan,  perlakuan diberikan  selama  21  hari  berturut-turut. Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboraturium Biologi  Struktur  dan  Fungsi  Hewan Departemen  Biologi,  Fakultas  Sains  dan Matematika, Universitas Diponegoro,
Semarang.
Bahan  uji  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  berupa  biji C.  papaya L. yang  diperoleh  dari  daerah  Gedawang, Banyumanik, Semarang.
Sediaan
kontrasepsi hormonal sintetis (pil kontrasepsi  merk  “X”  dengan  kandungan ethinylestradiol dan levonorgestrel ) digunakan sebagai kontrol positif..
Rancangan Percobaan
Penelitian ini menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Hewan uji  yang  digunakan  adalah  mecit  betina galur  Swiss  Webster  sebanyak  15  ekor.
Mencit  tersebut  dibagi  dalam  5  kelompok perlakuan  dengan  3  kali  pengulangan.  5 kelompok  tersebut  yaitu  K(-),  kelompok kontrol  negatif,  hewan  uji  hanya  diberi pelarut  (air);  K(+),  kelompok  kontrol dengan  bahan  uji  sediaan  pil  kontrasepsi dengan  dosis  0,2  mg/ekor/hari;  kelompok P1,  P2  dan  P3  yang  diberi  ekstrak  air  biji pepaya,  masing-masing  dengan  dosis bahan  uji  1,4;  3,5;  dan  7  mg/ekor/hari. Penentuan  dosis  ekstrak  biji  pepaya dilakukan berdasar penelitian Lohiya et al . (2006).
Cara  Pembuatan  Ekstrak  Biji  Pepaya ( Carica papaya L.)
Buah  pepaya  yang  diambil  bijinya berasal  dari  satu  pohon.  Biji  pepaya diperoleh  dengan  cara  memisahkan  biji dari buahnya. Setelah itu, biji dicuci bersih dengan  air  mengalir  lalu  dikeringkan dengan  oven  pada  suhu  45-50 0 C  sampai kering.  Biji  yang  kering,  dihancurkan dengan  blender  lalu  diayak  sehingga dihasilkan  bubuk  biji  pepaya.  Bubuk tersebut  ditimbang  sesuai  dengan  dosis yang  diinginkan  lalu  dipanaskan  bersama aquades  pada  suhu  ±50-70  ºC,  sebagai larutan stok.

## Hewan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah mencit ( Mus musculus ) betina virgin, galur Swiss  Webster  yang  berumur  2,5  bulan dengan  bobot  badan  berkisar  25-30  gram, tanpa cacat anatomis. Mencit dipelihara di
Muhamad  Adnan  J.  A,  dkk:  Efek  Antifertilitas  Ekstrak  Air  Biji  Pepaya  ( Carica  papaya L . )Terhadap  Jumlah  dan  Diameter  Folikel  de  Graaf  Mencit ( Mus musculus ) Betina
laboratorium dengan kondisi yang terkontrol,  dalam  kandang  pemeliharaan yang  terbuat  dari  plastik.  Hewan  uji ditempatkan  ke  dalam  kandang  perlakuan secara  acak.  Aklimasi  dilakukan  selama selama  2  minggu.  Pakan  dan  minum diberikan secara ad libitum.

## Pemberian Bahan Uji
Semua  hewan  uji  diberi  perlakuan secara  oral  menggunakan  jarum gavage , selama  21  hari  berturut-turut  pada  sore hari  (Pukul  15.00-16.00  WIB)  dengan volume  0,5  ml/  hewan  uji.  Bobot  badan mencit diukur setiap 7 hari sekali.
Setelah hari ke-21, semua hewan uji dibunuh  dengan  cara  dislokasi  leher, kemudian  dilakukan  pembedahan  dan pengambilan  organ  ovarium  untuk  dibuat preparat histologis dengan metode parafin, ketebalan  sayatan  8  μm  dan  pewarnaan Haematoxylin Eosin (sesuai metode Mardiati  dan  Saraswati,  2014).  Setelah preparat histologi ovarium dibuat, dilakukan pengamatan dibawah mikroskop untuk  menghitung  jumlah  dan  diameter folikel de Graaf.
Penghitungan  jumlah  folikel  de Graaf  dilakukan  menggunakan  mikroskop dengan  perbesaran  10x40  pada  setiap sayatan  organ,  sedangkan  pengukuran diameter  folikel  de  Graaf  dilakukan dengan software komputer DP2-BSW yang terhubung dengan fotomikrograf. Pengukuran  diameter  folikel  de  Graaf
yang  tidak  simetris  ditentukan  dengan menghitung  rata-rata  dua  pengukuran penampang  terluas  folikel  yang  berisi sebuah  nukleolus  oosit  (Griffin et  al., 2006).  Folikel  diukur  dari  lapisan  terluar sel-sel  teka  (jika  ada)  atau  dari  lapisan terluar  sel  granulosa  (jika  tidak  ada  sel teka)  (Songsasen et  al. ,  2009).  Rumus perhitungan  diameter  folikel  de  Graaf adalah sebagai berikut:

## ̅
Keterangan: ̅ :  Rerata  panjang  diameter folikel de Graaf; : Diameter  terpanjang  folikel de  Graaf; :  Diameter
terpendek folikel de Graaf.

## Analisis Data
Data  yang  didapat  diuji  pola distribusi  dan  kehomogenitasannya.  Data yang mengikuti pola distribusi normal dan homogen  diuji  dengan  ANOVA  untuk mengetahui  perbedaan  antar  kelompok perlakuan,  bila  uji  ANOVA  menunjukkan adanya perbedaan antar kelompok perlakuan maka  diuji  lanjut  menggunakan uji  Duncan.  Data  yang  tidak  mengikuti pola distribusi normal dan tidak homogen, dilakukan  uji  non  parametrik  Kruskal Wallis  untuk  mengetahui  perbedaan  antar kelompok  perlakuan  kemudian  dilakukan uji lanjut menggunakan Mann-Whitney U. Semua  analisis  dilakukan  dengan  taraf signifikansi  5%  (α=0.05).  Data  dianalisis menggunakan  program  komputer  SPSS versi 16.0 (Santoso, 2008).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Fungsi  reproduksi  betina  memiliki suatu  siklus  yang  disebut  folikulogenesis (Williams dan Erickson, 2012).
Folikulogenesis  merupakan  proses  yang bertanggung  jawab  untuk  perkembangan folikel  ovulatori    dan  pelepasan  satu  atau lebih  oosit  pada  interval  tertentu  pada keseluruhan  siklus  reproduksi  hewan betina (Hafizuddin et al ., 2012).
Perkembangan  folikel  dimulai  dari  folikel primordial  yang  mengalami  perubahan histologis dan fisiologis menjadi folikel de Graaf.  Proses  ini  bergantung  pada  kerja hormon  yang  memengaruhi  kecepatan folikulogenesis.  Proses  ini  berlangsung pada  korteks  ovarium  (Speroff et  al ., 2010).  Folikel  yang  mudah  diamati  dan mudah  dibedakan  dari  folikel  lainnya adalah folikel de Graaf. Hal ini dikarenakan  folikel  de  Graaf  memiliki ukuran  yang  besar  dibandingkan  folikel lainnya  dan  terdapat  rongga  (antrum) folikel yang besar (Mardhiana, 2001).
Penampang  melintang  folikel  de Graaf  setelah  pemberian  esktrak  air  biji pepaya  selama  21  hari  disajikan  pada Gambar  1.  Struktur  histologis  folikel  de Graaf  memperlihatkan  struktur:  antrum besar  yang  berisi  likuor  folikuli;  kumulus ooforus,  suatu  bukit  kecil  tempat  oosit primer  berada;  korona  radiata,  lapisan  sel
yang  langsung  melekat  pada  oosit  primer; sel  granulosa  yang  mengelilingi  antrum; lapisan  dalam  teka  interna;  dan  lapisan luar teka eksterna (Eroschenko, 2010).
Rerata  jumlah  folikel  de  Graaf ovarium  mencit  yang  paling  rendah berdasarkan  Tabel  1.  ditunjukkan  oleh K(+)  dengan  rerata  2,00±1,00,  kemudian dikuti  dengan  perlakuan  P2  (4,33±2,31), P3  (4,33±0,58),  P1(5,67±1,16)  dan  yang terakhir K(-) dengan rerata 8,00±1,00.Hasil uji lanjut Duncan menunjukkan  bahwa  kelompok  perlakuan P1  tidak  berbeda  nyata  (p>0,05)  dengan K(-),  tetapi  kelompok  perlakuan  P1,  P2, dan  P3  tidak  berbeda  nyata  (p>0,05) dengan  K(+).  Hasil  ini  menunjukkan bahwa kelompok perlakuan P1, P2, dan P3 mempunyai  potensi  yang  sama  dengan K(+).  Jumlah  folikel  de  Graaf  ovarium mencit  mengalami  penurunan  seiring dengan  penambahan  dosis  ektrak  air  biji pepaya  yang  diberikan.  Hal  ini  dapat disimpulkan  semakin  besar  dosis  yang diberikan  maka  semakin  sedikit  jumlah folikel  de  Graaf  ovarium  yang  dihasilkan. Perkembangan  folikel    ovarium    yang tertekan    ini    diduga  disebabkan  karena kandungan  senyawa  antifertilitas  biji pepaya yang mempengaruhi sistem hormon pada mencit.
Muhamad  Adnan  J.  A,  dkk:  Efek  Antifertilitas  Ekstrak  Air  Biji  Pepaya  ( Carica  papaya L . )Terhadap  Jumlah  dan  Diameter  Folikel  de  Graaf  Mencit ( Mus musculus ) Betina
Tabel 1. Rerata jumlah, ukuran diameter dan tebal lapisan teka folikel de Graaf ovarium mencit ( Mus musculus ) betina setelah pemberian ekstrak air biji pepaya ( Caricapapaya L . ) selama 21 hari.
Parameter Perlakuan K(-) ̅ K(+) ̅
P1
̅ P2 ̅ P3 ̅ Jumlah Folikel De Graaf 8,00 b ±1,00 2,00 a ±1,00 5,67 ab ±1,16 4,33 a ±2,31 4,33 a ±0,58 Diameter Folikel De Graaf(µm) 339,61 a ± 16,58 387,61 a ± 4,14 350,16 a ± 42,70 367,82 a ± 14,37 339,09 a ± 13,93 Tebal Lapisan Teka Folikel De Graaf (µm) 18,59 a ± 0,32 18,52 a ±0,31 18,47 a ±0,23 18,61 a ±1,10 18,85 a ±0,44
Keterangan : Angka  yang  diikuti  dengan superskrip  yang  sama  pada  baris  yang  sama perbedaan tidak nyata (p > 0,05). K (-)  : kontrol  dengan  pelarut  (air);  K  (+)  :  kontrol dengan sediaan pil kontrasepsi; P1
:
perlakuan bahan uji konsentrasi 1,4 mg/0,5 ml; P2: perlakuan bahan uji konsentrasi 3,5 mg/0,5 ml; P3  :  perlakuan  bahan  uji  konsentrasi  7 mg/0,5 ml.
Hasil penelitian tersebut juga menunjukkan  bahwa  ukuran  diameter folikel  de  Graaf  tidak  terdapat  berbedaan yang  signifikan  (p>0,05)  antara  kelompok perlakuan  ekstrak  air  biji  pepaya  dan kelompok kontrol. Hal ini dapat dilihat dari ukuran  rerata  diameter  yang  hampir  sama. Rerata  ukuran  diameter  folikel  De  Graaf masing-masing  kelompok  adalah  K(-) (339,61±16,58),  K(+)  (387,61±4,14),  P1 (350,16±42,70),  P2  (367,82±14,37),  dan P3  (339,09±13,93).  Berdasarkan  hasil tersebut, dapat diasumsikan bahwa pemberian  paparan  ekstrak  air  biji  pepaya tidak memengaruhi ukuran diameter folikel de Graaf.
Hasil ANOVA terhadap tebal lapisan teka  folikel  de  Graaf  menunjukkan  hasil
yang  tidak  signifikan  (p>0,05)  antara kelompok perlakuan ekstrak air biji pepaya dengan  kelompok  kontrol.  Rerata  tebal lapisan  teka  folikel  de  Graaf  ovarium mencit  adalah  sebagai  berikut  K(-) (18,59±0,32), K(+) 18,52±0,31, P1 (18,47±0,23),  P2  (18,61±1,10)  dan  P3 (18,85±0,44).  Hasil  tersebut  menunjukkan rerata  tebal  lapisan  teka  antar  kelompok perlakuan  memiliki  angka  yang  hampir sama.  Berdasarkan  hal  tersebut,  dapat diasumsikan  bahwa  pemberian  paparan ekstrak  air  biji  pepaya  tidak  memengaruhi ketebalan lapisan teka folikel de Graaf.
Sukadana  (2008)  menyatakan  bahwa senyawa  yang  terkandung  dalam  biji pepaya adalah senyawa metabolit sekunder golongan  triterpenoid,  flavonoid,  alkaloid, saponin, dan tanin. Zat-zat tersebut berefek
sitotoksik,  anti  androgen  atau  berefek estrogenik  (Lohiya et  al., 2002).  Saponin mempunyai  efek  anti  estrogen  sehingga menganggu  ikatan  estrogen  alami  pada reseptornya (Francis et al., 2002). Koeman (1993) menyatakan bahwa flavonoid merupakan senyawa yang memiliki kesamaan struktur dengan hormon estrogen tetapi tidak menstimulasi reseptor tersebut. Hal tersebut menyebabkan jumlah estrogen  bebas  meningkat  dalam  darah sehingga  akan  menimbulkan  umpan  balik negatif  pada  sekresi  GnRH.  Gangguan sekresi GnRH akan menekan hormon FSH yang merangsang pertumbuhan sel granulosa  pada  folikel  ovarium  sehingga perkembangan  folikel  terganggu.  Modupe (2015)  menyatakan  bahwa  alkaloid  dapat menurunkan konsentrasi FSH dan estradiol dalam  tubuh.  Alkaloid  menyebabkan  FSH tidak dapat berikatan dengan reseptor yang ada  di  sel  granulosa  sehingga  aksi  FSH terganggu.  Hal  ini  menyebabkan  proses folikulogenesis terganggu.
Nurliani  (2005)  menyatakan  bahwa senyawa saponin mempunyai efek sitotoksik  terhadap  sel  yang  sedang mengalami  perkembangan,  dalam  hal  ini adalah  sel  ovum.  Alamsyah  (2014) menyatakan  saponin  memiliki  mekanisme merusak membran sel dengan meningkatkan permeabilitas sehingga terjadi kebocoran sel yang diikuti
keluarnya  material  interaseluler.  Saponin membentuk  ikatan  yang  kompleks  dengan sterol  membran.  Sterol  membran  yang telah  diikat  akan  lepas  dari  membran  sel sehingga  menyebabkan  gangguan  pada transport  ion  dan  permeabilitas  membran sel.  Hal  ini  menyebabkan  sel  pecah (Francis et  al., 2002).  Mekanisme  tersebut diduga  menjadi  penyebab  penurunan jumlah  folikel  de  Graaf  dalam  penelitian ini.
Kandungan  lain  pada  biji  pepaya seperti  tanin  juga  diduga  mempengaruhi perkembangan  folikel  ovarium.  Senyawa anti-fertilitas  diketahui  bekerja  dengan  2 cara,  yaitu  efek  sitotoksik  dan  efek hormonal. Tanin mempunyai efek sitotoksik  terhadap  sel  yang  sedang mengalami  perkembangan  seperti  pada  sel ovum  (Setyowati et  al .,  2015).  Kematian sel-sel granulosa akan menyebabkan proses  folikulogenesis  terganggu,  hal  ini bisa  menyebabkan  folikel  mengalami atresia  (Tilly  dan  Tilly,  1995;  Bender, 2009). Junqueira et al. (2013) menyatakan bahwa  folikel  atresia  dapat  terjadi  pada sembarang  tahap  perkembangan  folikel. Berdasarkan hal tersebut, dapat diasumsikan  bahwa  penurunan  jumlah folikel  yang  matang  diakibatkan  karena kandungan  biji  pepaya  yang  menyebabkan terjadinya  folikel  atresia  pada  tahap perkembangan  folikel,  sehingga  jumlah
Muhamad  Adnan  J.  A,  dkk:  Efek  Antifertilitas  Ekstrak  Air  Biji  Pepaya  ( Carica  papaya L . )Terhadap  Jumlah  dan  Diameter  Folikel  de  Graaf  Mencit ( Mus musculus ) Betina
folikel de Graaf yang dihasilkan berkurang.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian  ekstrak  air  biji  pepaya  dosis rendah  sampai  dengan  dosis  tinggi  pada mencit memiliki potensi yang sama dengan pil kontrasepsi. Pil konrasepsi mengandung ethynil estradiol dan levonorgestrel (Mardiati  dan  Sitasiwi,  2016). Ethynil estradiol merupakan estrogen sintetik yang memiliki  potensi  yang  sama  dengan estrogen sedangkan levonorgestrel merupakan  progesteron  sintetik  yang memiliki efektivitas  yang  tinggi  dan  dapat diteloransi  dengan  baik  oleh  tubuh (Ganong, 2003).
Ukuran  diameter  folikel  de  Graaf yang normal pada mencit berukuran mulai dari  329  µm  (Griffin et  al., 2006).  Hasil penelitian  menunjukkan  rerata  ukuran diameter  folikel  de  Graaf  pada  semua kelompok  perlakuan  berkisar  339,09- 387,61  µm,  diasumsikan  masih  dalam kisaran  normal.  Hasil  penelitian  ini menggambarkan  bahwa  ukuran  diameter folikel  de  Graaf  ovarium  hewan  uji  tidak terpengaruh oleh zat antifertilitas yang ada pada biji pepaya.
Hasil  penelitian  menunjukkan  rerata tebal  lapisan  teka  folikel  de  Graaf  pada semua perlakuan berkisar 18,47-18,85 µm. Muchtaromah et  al. (2015)  menyatakan bahwa  ketebalan  lapisan  teka  yang  tidak
diberi  perlakuan  sekitar  18-21  µm.  Hasil tersebut  menunjukkan  bahwa  ketebalan lapisan  teka  folikel  de  Graaf  masih  dalam kisaran  normal,  dengan  demikian  ekstrak air  biji  pepaya  yang  diberikan  tidak mempengaruhi  ketebalan  lapisan  teka folikel de Graaf ovarium mencit betina.
Tajima et  al. (2007)  menyatakan bahwa  penurunan  ketebalan  lapisan  teka disebabkan oleh asam asiatik. Asam asiatik adalah  bagian  dari  triterpenoid  yang menyebabkan  apoptosis  pada  sel  dengan cara  merusak  mitokondria  sel  sehingga lapisan teka mengalami penipisan. Gangguan  sekresi  FSH  dan  LH  juga menyebabkan penipisan lapisan teka akibat terganggunya perkembangan folikel. Young (2010) menyatakan bahwa proliferasi  dan  diferensiasi  lapisan  teka juga  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor lainnya,  yaitu Insulin,  IGF  (Insulin-like Growth  Factor),  SCF  (Stem  Cell  Factor), GDF9  (Growth  Differentiation  Factor  9) dan KGF  (Keratinocyte  Growth  Factor) . Berdasarkan  hal  tersebut,  diduga  senyawa yang  terkandung  dalam  biji  pepaya  hanya mengganggu  sekresi  FSH  dan  LH,  tetapi tidak  mengganggu  faktor-faktor  lain  yang mempengaruhi perkembangan lapisan teka, sehingga  perlakuan  ekstrak  air  biji  pepaya belum bisa mempengaruhi ketebalan lapisan teka folikel de Graaf.

## KESIMPULAN
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian  ekstrak  air  biji  pepaya  ( Carica papaya L.)    selama    21     hari     mampu
menurunkan  jumlah  folikel  de  Graaf ovarium  mencit  ( Mus  musculus )  betina sehingga  berpotensi  sebagai  antifertilitas pada mencit betina.

## DAFTAR PUSTAKA
Alamsyah  HK.,  I.  Widowati  dan  A. Sabdono.  2014.  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak Rumput Laut Sargassum Cinereum (J.G.  Agardh)  dari  Perairan Pulau  Panjang  Jepara  Terhadap  Bakteri Escherichia  Coli dan Staphylococcus Epidermidis . Journal of Marine Research ,  3(2): 69-78.
Bender  DA.  2009.  Free  Radicals  an Antioxidant  Nutrients.  New  York:  Mc Graw Hill Lange.
Dabhadkhar  DK.,  VG.  Thakare.,  VS. Zade.,  AP.  Charjan.,  MM.  Dhore,  dan
SM.  Deosthale.  2015.  Review  on  Some Ethnobotanical Plants Having Antifertility  Activity  In  Female  Albino
Rats. Int.  Res.  J.  of  Science  and Engineering, 3 (2): 43–46.
Eroschenko  VP.  2010.  Atlas  Histologi diFiore. Jakarta. EGC. Halaman 457.
Francis  G.,  Z.  Kerem.,  HPS.  Makkar  dan K. Becker. 2002. The Biological Action of Saponins In Animal System: Review. British  Journal  of  Nutrition, 88:  587- 605.
Ganong,  WF.  2003.  Review  of  Medical Physiology.  International  Ed.  Boston. Pp. 443- 446
Griffin  J.,  BR.  Emery.,  I.  Huang  CM. Peterson  dan  DT.  Carrell.  2006. Comparative Analysis of Follicle Morphology  and  Oocyte  Diameter  in Four  Mammalian  Species  (Mouse,
Hamster,  Pig  and  Human). Journal  of Experimental dan Clinical  Assisted Reproduction , 3:2.
Hafizuddin  TN.,  Siregardan  M.  Akmal.
2012.  Hormon  dan  Perannya  dalam
Dinamika Folikuler pada Hewan
Domestik. JESBIO, 1(1): 21-24. Hasanah  U.,  Rusny  dan  M.  Masri.  2015. Seminar Nasional Mikrobiologi Kesehatan  dan  Lingkungan:  Analisis Pertumbuhan  Mencit  (Mus  musculus L.) ICR dari Hasil Perkawinan Inbreeding  dengan  Pemberian  Pakan AD1  dan  AD2.  Makassar,  29  Januari
2015. Junqueira LC., J. Carneiro dan RO. Kelley. 2013. Histologi Dasar. Ed ke-13. Jakarta. EGC.
Katno.  2008.  Tingkat  Manfaat,  Keamanan dan Efektifitas Tanaman Obat dan Obat Tradisional. Karanganyar: Badan Penelitian dan Pengembangan
Kesehatan Departemen Kesehatan RI.
Koeman  JH.  1993. Pengantar  Umum Toksokologi. Yogyakarta. Gadjah Mada University Press.
Krishna  KL.,  M.  Paridhavi.,  JA.  Patel. 2008. Review on Nutritional, Medicinal and  Pharmacological  Properties  of Papaya  ( Carica  papaya Linn). Natural Product Radiance, 7(4): 364-373. Lohiya NK., B. Manivannan., PK. Mishra., N.  Pathak.,  S.  Sriram.,  SS.  Bhande  dan S.  Panneerdoss.  2002.  Chloroform Extract of Carica papaya Seeds Induces Long-term  Reversible  Azoospermia  in Langur  Monkey. Asian  Journal  of Andrology , 4(1):  17-26.
Lohiya  NK.,  B.  Manivannan  dan  S.  Garg. 2006.  Toxicological  Investigations  on the  Methanol  Sub-fraction  of  the  Seeds of Carica Papaya as a Male
Muhamad  Adnan  J.  A,  dkk:  Efek  Antifertilitas  Ekstrak  Air  Biji  Pepaya  ( Carica  papaya L . )Terhadap  Jumlah  dan  Diameter  Folikel  de  Graaf  Mencit ( Mus musculus ) Betina
Contraceptive in Albino
Rats.
Reproductive Toxicology, 22: 461–468 Mardhiana D. 2001. Perkembangan Folikel pada  Berbagai  Status  Ovarium  Domba. Skripsi. Bandung. IPB.
Mardiati  SM  dan  TR.  Saraswati.  2014. Buku  Penuntun  Praktikum  Mikroteknik Hewan. Semarang. Undip.
Mardiati SM dan AJ. Sitasiwi.
2016.Pertambahan  Berat  Badan  Mencit ( Mus  musculus L. ) Setelah  Perlakuan Ekstrak Air Biji Pepaya ( Carica papaya Linn.)  Secara  Oral  Selama  21  Hari. Buletin Anatomi dan Fisiologi , 1(1):75- 80.
Modupe  AE.  2015.  Effects  of  Oral Administration  of  a  Decoction  on
Serum  Levels  of  Leutinizing  Hormone,
Follicle Stimulating
Hormone,
Progesterone  and  Estradiol  in  Female Dutch-White Rabbits. Research Journal of Medicinal Plant , 9(3): 141-145.
Muchtaromah B., Romaidi., TP. Griani dan
Y. Hasfi. 2015. Potencial Antifertilty of Centella asiatica Leaf Extract. Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 9(7): 102-105. Nurliani  A.,  Rusmiati  dan  HB.  Santoso. 2005. Perkembangan Sel Spermatogenik Mencit ( Musmusculus L)  setelah  Pemberian Ekstrak  Kulit  Kayu  Durian  ( Durio zibethinus Murr.). Berkala  Penelelitian Hayati , 11: 77-79.
Puspitasari Y., BM. Suhita., P. Srianto, dan Widjiati.  2014.  Pemberian  Ekstrak Ethanol  Biji  Pepaya  ( Carica  papaya) pada  Tikus  Betina  ( Rattus  novergicus ) Sebagai  Alternatif  Bahan  Antifertilitas Folikulogenesis,  Kualitas  Sel  Telur  dan Angka  Fertilisasi. Veterinaria  Medika , 30 (1): 61-66.
Santoso  S.  2008.  Panduan  Lengkap Menguasai  SPSS  16 . Jakarta.  PT  Elex Media Komputindo.
Satriyasa  BK  dan  WI.  Pangkahila    2010.
Fraksi  Heksan  dan  Fraksi  Metanol
Ekstrak  Biji  Pepaya  Muda  dapat Menghambat  Spermatogonia  A  Mencit
Jantan ( Mus musculus ). Jurnal Veteriner Maret, 11(1): 36-40.
Setyowati WAE., SRD.  Ariani, Ashadi, B.
Mulyani dan A. Hidayat. 2015. Seminar Nasional  Kimia  dan  Pendidikan  Kimia VII:Aktivitas  Antifertilitas  Kontrasepsi dari  Kulit  Durian  ( Durio  zibethinus Murr)  Varietas  Petruk.  Surakarta,  18 April 2015.
Songsasen  N.,  A.  Fickes  BS.  Pukazhenthi dan  DE.  Wildt.  2009.  Follicular Morphology,  Oocyte  Diameter  and Localization  of  Fibroblast  Growth Factors  in  the  Domestic  Dog  Ovary.
Reprod Domest Anim, 44(2): 65–70
Speroff  L  dan  Fritz  MA.  2010.  Hormone
Biosynthesis, Metabolism and Mechanism  of  Action.  in  Clinical Gynecologic Endocrinology and
Infertility.  Seven  Ed.  Philadelphia. Lippincot Williams dan Wilkins.
Sukadana  IM.,  SR.  Santi  dan  NK.  Juliarti.
2008.  Aktivitas  Antibakteri  Senyawa Golongan Triterpenoid dari Biji Pepaya ( Carica papaya L.). Jurnal Kimia , 2 (1)
: 15-18.
Tajima  K.,  M.  Orisaka.,  T.  Mori  dan  F. Kotsuji.  2007.  Ovarian  Theca  Cells  In Follicular  Function. Reprod  Biomed Online, 15: 591-609.
Tilly  JL  dan  KI.  Tilly.  1995.  Inhibitors  of Oxidative  Stress  Mimic  the  Ability  of Follicle-Stimulating Hormone to Suppress  Apoptosis  in  Cultured  Rat
Ovarian  Follicles. Endocrinology, 136 (1): 242-252.
Williams  CJ  dan  GF.  Erickson.  2012. Morphology  and  Physiology  of  the Ovary .http://www.endotext.org/chapter/ morphology-and-physiology-of-the- ovary. Diakses pada tanggal 25 Agustus 2017.
Young  JM  dan  AS.  McNeilly.  2010.
Theca:  The  Forgotten  Cell  of  The Ovarian  Follicle. Reproduction ,  140  : 489-504.
Keterangan: Penampang  melintang  folikel  de  Graaf  mencit  ( M.  musculus )  setelah perlakuan ekstrak air biji pepaya selama 21 hari
A.  Kelompok  K(-);  B:  Kelompok  K(+);  C,  D,  E:  Kelompok  perlakuan dengan esktrak air biji pepaya dengan dosis 1,4; 3,5 dan 7 mg/ekor/hari.
A B E D C