UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN ALPUKAT ( Persea americana Mill.) TERHADAP PENYEMBUHAN LUKA BAKAR PADA PUNGGUNG MENCIT PUTIH JANTAN ( Mus musculus )
Submitted : 10 Nov 2015
Edited : 15 Des 2015
Accepted : 21 Des 2015
Triswanto Sentat, Rizki Permatasari
Akademi Farmasi Samarinda Email : acuan3s@gmail.com

## ABSTRACT
Activity Assay of avocado leaf (Persea americana Mill.) ethanol extract on burn healing at back skin of white male mice (Mus musculus) aims to determine the best concentration of avocado leaf ethanol extract to healing burn on back skin of mice. Extract of avocado leaf obtained by maceration method using ethanol 70%. Burn made by soldering iron modified with square plate (size 1 x 1 cm 2 ) , during 2 seconds contact at the  skin  and  make  the  skin  formed  blister.  Observation  of  the  burn  area  was  doing  daily  for  14  days,  and also  the  treatment  with  the  3  concentrations  extract  variation  (20%,35%,  and  50%),  negative  control  and positive control. Result of research show that all avocado leaf ethanol extract in concentrations 20%, 35% and  50%  have  good  activity  in  burn  healing,  from  first  day  until  14 th day  they showed  percentage  of  burn recovering successively equal to 86%, 88% and 90%. Negative control showed that process healing of burn was very tardy, only has percentage of burn recovering equal to 32,67% on 14 th day, while positive control showed 100% burn healing on 11 st day. The best concentration of  avocado leaf ethanol extract on healing burn is 50% with 90% burn healing.
Keywords : Persea americana Mill, burn healing, back skin of mice

## PENDAHULUAN
Luka  bakar  pada  dasarnya  merupakan peristiwa  perpindahan  panas,  yang  sumber panasnya  dapat  bervariasi  seperti  kontak  langsung atau  tidak  langsung  dengan  api,  listrik,  bahan kimia,  gesekan  atau  radiasi.  Anak  kecil  dan  orang tua  merupakan  populasi  yang  paling  beresiko tinggi untuk mengalami luka bakar. Sebagian besar luka  bakar  terjadi  di  rumah  pada  saat  memasak, memanaskan  atau  menggunakan  alat-alat  listrik. Akibat  akhir  yang  ditimbulkan  berupa  kerusakan jaringan  kulit,  bahkan  pada  keadaan  cedera multisistemik  dapat  menyebabkan  gangguan  yang serius.  Efek  sistemik  dan  mortalitas  yang disebabkan  karena  luka  bakar  sangat  ditentukan oleh luas dan dalamnya kulit yang terkena luka (1) .
Kecepatan  dari  penyembuhan  luka  dapat dipengaruhi  dari  zat-zat  yang  terdapat  dalam  obat yang  diberikan,  jika  obat  tersebut  mempunyai kemampuan  untuk  meningkatkan  penyembuhan dengan  cara  merangsang  lebih  cepat  pertumbuhan
sel-sel  baru  pada  kulit  maka  proses  penyembuhan lukanya  pun  akan  cepat (2) .  Sejumlah  studi menunjukkan bahwa tanaman tradisional potensial sebagai  agen  penyembuhan  luka  di  samping pengobatan    medis      untuk      luka  bakar  ringan sampai sedang.
Penanganan  luka  bakar  secara  alami  dapat dilakukan dengan membasuhnya menggunakan air yang  mengalir,  karena  air  yang  mengalir  sangat membantu  untuk  menghilangkan  panas  dari  luka bakar. Masyarakat masih banyak yang mengoleskan  pasta  gigi  pada  penanganan  pertama luka  bakar,  padahal  penggunaan  bahan  kimia seperti  pasta  gigi  akan  membuat  panas  menjadi lebih  tahan  lama  sehingga  akan  menimbulkan semakin  banyak  jaringan  yang  rusak  akibat  panas dan dapat menimbulkan infeksi yang memperparah luka bakar.
Prinsip  tujuan  dalam  pengobatan  luka  bakar adalah  untuk  mencegah  atau  mengurangi  invasi bakteri  ke  dalam  sirkulasi  dan  ke  jaringan  sekitar
seminimal mungkin, melindungi jaringan granulasi dan  epitel  yang  baru  terbentuk,  dan  memperkuat jaringan yang terbentuk agar terhindar dari infeksi serta membantu mempercepat penyembuhan luka (3) .
Sebagian  pengobatan  tradisional  disukai masyarakat  karena  ketersediaan  yang  luas  dan tidak  ada  efek  samping.  Salah  satu  tanaman  yang diduga  berkhasiat  dalam  penyembuhan  luka  bakar adalah  daun  alpukat  ( Persea  Americana Mill). Hasil skrining fitokimia dari penelitian sebelumnya menyatakan bahwa daun alpukat memiliki kandungan  senyawa  kimia  berupa  saponin,  tanin, glikosida  dan  flavonoid  berupa  kuersetin  yang dapat digunakan sebagai sumber alami antioksidan dengan  aktivitas  antiradikal (4) .  Ekstrak  daun alpukat  juga  memiliki  aktivitas anti-ulcer yaitu untuk menetralisir atau mengikat  asam lambung atau mengurangi produksi asam lambung yang dapat menyebabkan timbulnya tukak lambung  yang  dapat  disebabkan  oleh  penyakit berat atau luka (5) .
Informasi tersebut mendorong peneliti untuk melakukan  penelitian  dengan  memanfaatkan  daun alpukat  untuk  mengetahui  aktivitasnya  dalam mempercepat  penyembuhan  luka  bakar  pada  kulit punggung  mencit  yang  diinduksi  logam.  Hasil penelitian  diharapkan  akan  memberi  informasi ilmiah  untuk  menjadikan  daun  alpukat  sebagai salah satu alternatif pengobatan luka bakar.

## METODE PENELITIAN Objek Penelitian
Objek  yang  diteliti  adalah  aktivitas  ekstrak etanol  daun  alpukat  yang  dibuat  dalam  3  variasi konsentrasi  yaitu  dengan  konsentrasi  20%,  35% dan  50%  yang  ditentukan  dengan  orientasi  dosis. Pengujian  dilakukan  dengan  dibuat  luka  bakar pada punggung mencit.

## Bahan dan Alat yang digunakan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  daun  alpukat,  etanol  70%,  amil  alkohol, serbuk  Mg,  HCl  pekat,  HCl  2N,    FeCl 3 1%, aluminium foil , kertas saring, dan vaselin.
Alat yang digunakan adalah botol kaca, gelas beker,  erlenmeyer,  kandang  mencit,  cawan porselen,  gelas  ukur,  batang  pengaduk,  tabung reaksi,  rak  tabung  reaksi,  solder  dengan  ujung lempeng stainless persegi  (1  x  1  cm 2 ),  jangka
sorong,  timbangan  analitik,  ayakan  mesh  40, gunting,  alat  pencukur  bulu,  penangas  air,  lampu spiritus, lumpang dan alu.

## Prosedur Penelitian
Pembuatan  ekstrak  etanol  simplisia  daun alpukat
Daun  alpukat  yang  telah  dikumpulkan kemudian  dicuci,  disortasi  basah  dan  ditimbang. Daun  alpukat  dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan  sampai  kering  dan  terlindung  dari  sinar matahari  langsung.  Simplisia  yang  telah  kering ditimbang dan diblender sampai halus, lalu diayak dengan  ayakan  mesh  40.  Ekstraksi  simplisia  daun alpukat dilakukan dengan metode maserasi dengan cara  menimbang  simplisia  kering  daun  alpukat sebanyak 400 g yang dimasukkan ke dalam toples kaca  kemudian  ditambahkan  pelarut  etanol  70% sebanyak  2  L.  Simplisia  direndam  selama  3  hari dan  dilakukan  pengadukan  sesering  mungkin  dan hasil ekstrak cair yang disaring dengan menggunakan kertas saring serta ditampung dalam sebuah  wadah  kaca.  Kemudian  sisa  ampasnya dilakukan  remaserasi  sebanyak  2  kali  dengan masing-masing  pelarut  sebanyak  1  L.  Setelah semua  ekstrak  cair  yang  didapat  kemudian diuapkan  di  penangas  air  dan  diperoleh  ekstrak kental.
Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Daun Alpukat
Identifikasi golongan senyawa kimia dilakukan prosedur cara sebagai berikut:
1. Uji alkaloid
Serbuk  simplisia  ditimbang  0,5  g kemudian  ditambahkan  1  ml  HCl  2  N  dan  9 ml air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit, dinginkan dan disaring. Filtrat yang  didapat  digunakan  untuk  pengujian. Diambil  10  tetes  ekstrak  daun  alpukat dimasukkan ke dalam tabung reaksi ditambahkan  2  tetes  pereaksi  Mayer  dan terbentuk  endapan  putih/kuning.  Selanjutnya, diambil  10  tetes  ekstrak  daun  alpukat dimasukkan ke dalam tabung reaksi ditambahkan  2  tetes  pereaksi  Bouchardat sehingga  terbentuk  endapan  coklat  sampai hitam.  Kemudian  10  tetes  ekstrak  daun alpukat  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi ditambahkan  2  tetes  pereaksi  Dragendrof  dan
terbentuk  endapan  jingga  sampai  merah coklat.  Bila  sedikitnya  2  dari  3  pereaksi menghasilkan  endapan  yang  sama  maka positif mengandung alkaloid.
2. Uji Flavonoid
10 tetes ekstrak daun alpukat
dimasukkan ke dalam tabung reaksi ditambahkan  2  tetes  HCl  pekat,  serbuk  Mg, dan 2 tetes amil alkohol. Bila terbentuk warna kuning,  jingga,  atau  merah  pada  lapisan  amil alkohol memberikan indikasi adanya flavonoid.
3. Uji Saponin
10 tetes ekstrak daun alpukat dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Ditambahkan  air  panas  secukupnya,  dikocok selama  15  menit  dan  2  tetes  HCl  2  N  bila terbentuk buih permanen selama kurang lebih 10  menit  maka  memberikan  indikasi  adanya saponin.
4. Uji Tanin Sepuluh  tetes  ekstrak  daun  alpukat
ditambah  dengan  10  mL  air  suling,  disaring. Filtrat  diencerkan  dengan  air  suling  sampai tidak  berwarna.  Diambil  2  mL  filtrat  lalu ditambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi FeCl 3 . Bila  terbentuk  warna  biru  tua  atau  hijau kehitaman memberikan indikasi adanya tanin (6) .

## Penyiapan hewan uji
Mencit  putih  berjenis  kelamin  jantan  yang memiliki  berat  badan  rata-rata  antara  20-30  g dikelompokkan  menjadi 5 kelompok yang masing- masing  kelompok  terdiri  dari  3  ekor.  Selanjutnya hewan  uji  yang  digunakan  dikondisikan  selama  1 minggu  dengan  dilakukan  penimbangan  berat badan mencit sekali setiap hari sebelum pengujian.

## Pengujian aktivitas penyembuhan luka bakar
Luka  bakar  pada  mencit  dibuat  dengan  cara menempelkan solder panas yang ujungnya terdapat lempeng stainless berdiameter 1 x 1 cm 2 yang telah dipanaskan.  Pada  bagian  punggung  mencit  yang bulunya  telah  dicukur  dan  ditempelkan  dengan solder selama 2 detik sehingga terbentuk kulit yang melepuh  atau  mengalami  luka  bakar,  kemudian kelompok perlakuan P1 (kontrol negatif) dioleskan vaselin kuning, P2 (kontrol positif) dioleskan salep bermerk  X  serta  dioleskan  3  variasi  konsentrasi
ekstrak  etanol  daun  alpukat  yaitu  P3  (20%  + vaselin kuning), P4 (35% + vaselin kuning) dan P5 (50%  +  vaselin  kuning).  Pengolesan  semua kelompok perlakuan dilakukan secara merata 1 kali setiap pagi sebanyak 0,1 g untuk sekali oles.

## Perhitungan penyembuhan luka bakar
Pengamatan proses penyembuhan luka bakar dilakukan  sehari  setelah  hewan  uji  diberi perlakuan,  pengamatan  dilakukan  selama  14  hari berturut-turut dengan mengamati secara makroskopik  perkembangan  penyembuhan  luka pada  punggung  mencit  dan  pengukuran  luas permukaan  luka  dengan  menggunakan  jangka sorong  berskala  0,01  cm.  Luka  bakar  dirawat hingga  sembuh  yang  ditandai  dengan  merapat  dan tertutupnya luka.
Perhitungan  persentase  penyembuhan  luka bakar dilakukan dengan rumus sebagai berikut:
x 100 %  … (1)
Keterangan:  L 1 = Luas luka bakar hari pertama Ln = Luas luka bakar hari ke-n

## Analisis Data
Data hasil penelitian yang diperoleh dianalisis    menggunakan  uji  statistik  dengan metode  analisis One  Way  Anova (uji  F)  pada tingkat signifikansi α = 5% atau 0,05 dan jika data terdistribusi  normal  maka  dilanjutkan  ke  uji  LSD. Apabila  data  tidak  terdistribusi  normal  maka dilanjutkan dengan uji Kruskal Wallis yang dibantu dengan  aplikasi  SPSS  ( Statistical  Product  and Service Solutions ) 20.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi Daun Alpukat
Simplisia  daun  alpukat  yang  telah  halus sebanyak  400  g  direndam  dengan  menggunakan etanol 70% sebanyak 4 L. Ekstraksi menggunakan metode  maserasi  yang  merupakan  ekstraksi  cara dingin  yang  cocok  untuk  daun  alpukat  agar mempertahankan  kandungan  dalam  daun  alpukat yang  mudah  rusak  oleh  panas  dan  memungkinkan semua  simplisia  kontak  dengan  cairan  penyari. Etanol  70%  digunakan  sebagai  cairan  penyari karena  dapat  melarutkan  hampir  semua  zat  baik
yang bersifat polar, semipolar dan non polar seperti flavonoid, alkaloid tanin serta saponin.

## Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Alpukat
Berdasarkan  dari  hasil  identifikasi  golongan senyawa kimia dapat dilihat pada tabel berikut:
Tabel 1. Hasil skrining fitokimia
Uji Hasil Keterangan Alkaloid 1. Endapan merah coklat
2. Endapan putih 3. Endapan coklat (+) (+) (+) Flavonoid Warna merah pada lapisan amil alkohol (+) Saponin Busa permanen (+) Tanin Warna hijau kehitaman (+)
Dari  tabel  tersebut  dapat  diketahui  bahwa ekstrak daun alpukat memiliki kandungan senyawa kimia  alkaloid,  flavonoid,  saponin  dan  tanin. Berdasarkan  pustaka  uji  alkaloid  dikatakan  positif bila  terbentuk  endapan  paling  sedikit  2    dari  uji yang  dilakukan  dan  dari  pengujiannya  didapatkan hasil  ketiga  pereaksi  membentuk  endapan  yang sesuai  dengan  pustaka.  Jadi  dari  hasil  tersebut menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  alpukat  positif mengandung  alkaloid.  Pada  uji  flavonoid  menurut pustaka  dikatakan  positif  bila  membentuk  warna kuning,  jingga  dan  merah  pada  lapisan  amil alkohol  dan  hasil  pengujian  terbentuknya  warna merah pada lapisan amil alkohol yang menunjukkan ekstrak daun alpukat positif mengandung  flavonoid.  Untuk  uji  saponin  dari hasil  pengujian  diketahui  ekstrak  daun  alpukat positif  mengandung  saponin  karena  sesuai  dengan pustaka  yaitu  terbentuk  busa  yang  permanen. Pengujian  tanin  juga  menunjukkan  hasil  yang positif karena hasil pengujian ekstrak daun alpukat terbentuk  warna  hijau  kehitaman  sesuai  dengan pustaka.
Uji  Akrivitas  Ekstrak  Etanol  Daun  Alpukat Terhadap  Luka  Bakar  pada  Punggung  Mencit Putih Jantan
Pengujian dilakukan dengan membagi mencit putih jantan menjadi 5 kelompok perlakuan yang  kemudian  diadaptasikan  dengan  lingkungan laboratorium selama 1 minggu dengan menimbang bobot  mencit  setiap  hari.  Hal  ini  dilakukan  agar mencit  menyesuaikan  diri  dengan  lingkungan tempat  pengujian,  menjaga  bobot  mencit  sesuai dengan klasifikasi untuk penelitian dan mengetahui kesehatan mencit.
Seluruh  mencit  putih  jantan  yang  telah diadaptasikan,  dilakukan  pencukuran  bulu  pada daerah punggung bagian belakang dengan menggunakan  gunting  dan  alat  pencukur  bulu. Pencukuran  ini  dilakukan  sehari  sebelum  mencit dilukai  agar  mengetahui  apa  ada  kulit  yang teriritasi pada saat pencukuran. Pengujian dilakukan  secara  bersamaan  terhadap  5  kelompok perlakuan  yaitu  kelompok  P1  (kontrol  negatif) dioleskan  vaselin  kuning,  P2  (kontrol  positif) dioleskan salep bermerk X serta dioleskan 3 variasi konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  alpukat  yaitu  P3 (konsentrasi  20%),  P4  (konsentrasi  35%)  dan  P5 (konsentrasi 50%) yang masing-masing konsentrasi  ekstrak  dibuat  dalam  1  g  stok  salep untuk 2 hari.
Vaselin  kuning  digunakan  karena  umum digunakan sebagai basis dalam sediaan salep yang bersifat  hidrokarbon  (dasar  salep  berlemak) sehingga  tidak  mudah  hilang  jika  terkena  air  dan akan  memperpanjang  kontak  bahan  obat  dengan kulit.  Basis  hidrokarbon  juga  bertindak  sebagai pembalut penutup yang akan menghambat penguapan  air  pada  lapisan  kulit  (emollient)  dan bersifat melunakkan lapisan kulit.
Semua  mencit  yang  telah  dicukur  bulunya maka  dibuat  luka  bakar  dengan  menggunakan solder  listrik  yang  ujungnya  terdapat  lempeng stainless berukuran 1 x 1 cm 2 yang dipanaskan lalu ditempelkan  pada  punggung  mencit  yang  telah dicukur  selama  2  detik.  Mencit  yang  telah  dilukai diolesi salep sehari 1 kali setiap pagi sesuai dengan kelompok kontrolnya masing-masing sebanyak 0,1 g    dan  dilakukan  pengamatan  penyembuhan  luka bakar  dengan  cara  mengukur  luas  kesembuhan luka dengan menggunakan jangka sorong.
Gambar 1. Pengukuran Luas Luka Bakar

## Hasil penelitian
Pada penelitian aktivitas ekstrak etanol daun alpukat  terhadap  penyembuhan  pada  luka  bakar pada punggung mencit putih jantan diperoleh hasil persentase penyembuhan luka pada gambar 2.
Grafik  tersebut  menunjukkan  bahwa  kontrol negatif  yang  hanya  dioles  dengan  vaselin  kuning menunjukkan  penyembuhan  luka  yang  lambat, pada  hari  ke-5  baru  terlihat  adanya  proses penyembuhan dan pada hari ke-14 hanya memiliki persentase  kesembuhan  sebesar  32,67%  karena vaselin  kuning  sebagai  basis  dalam  sediaan  salep bertindak sebagai pembalut luka yang menghambat penguapan  air  pada  lapisan  kulit.  Kontrol  positif yang  dioles  dengan  salep  bermerk  X  mengalami penyembuhan  luka  yang  cepat  dimana  pada  hari ke-3  telah  terlihat  proses  penyembuhan  dan  pada
hari  ke-11  luka  bakar  telah  memiliki  persentase kesembuhan  sebesar  100%.  Hal  ini  karena komposisi  kontrol  positif  yang  berupa  salep bermerk X tidak hanya memiliki 1 zat aktif dalam sediaan  salepnya  yang  dapat  membantu  proses penyembuhan luka bakar dengan cepat. Kandungan  bahan  aktif  salep  bermerk  X  adalah radix  scutellariae , phellodendri  cortex dan rhizoma  coptidis yang  memiliki  senyawa  aktif berupa  alkaloid  yaitu  berberine (7) yang  berkhasiat sebagai agen anti inflamasi serta memiliki aktivitas sebagai antibakteri yang tidak menyebabkan iritasi pada kulit (3) . Data untuk konsentrasi ekstrak 20% menunjukkan  bahwa  pada  hari  ke-3  terdapat perubahan pada luka namun kecil dan pada hari ke- 14  memiliki  persentase  kesembuhan  sebesar 86,00%.  Konsentrasi  ekstrak  35%  mulai  terlihat perubahannya  pada  hari  ke-4  dan  dengan persentase  kesembuhan  88,00%  dihari  ke-13. Konsentrasi ekstrak 50% terlihat adanya perubahan pada  hari  ke-4  dengan  persentase  kesembuhan sebesar  90,00%  pada  hari  ke-14.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  alpukat memiliki aktivitas dalam penyembuhan luka bakar.
Gambar 2. Persentase Kesembuhan Luka
0.00% 20.00% 40.00% 60.00% 80.00% 100.00% 120.00% 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10  11  12  13  14 Per sen tase K e sem b u h an Hari ke- Kontrol Negatif Kontrol Positif Konsentrasi 20%
Konsentrasi 35%
Konsentrasi 50%
a b c d e
Gambar  3. Hasil  penyembuhan  luka  bakar  pada hari ke-14
Keterangan :  a = kontrol negatif b = kontrol positif c = konsentrasi 20% d = konsentrasi 35% e = konsentrasi 50%
Data  hasil  penelitian  kemudian  dianalisis menggunakan  uji  statistik,  pertama  data  di  uji terlebih  dahulu  normalitasnya  jika  diperoleh p > 0,05 maka data dinyatakan terdistribusi normal dan hasil  yang  diperoleh  adalah p =0,148  ( p >  0,05) sehingga  menunjukkan  data  terdistribusi  normal, kemudian  dapat  dilanjutkan  pada  uji  ANOVA. Hasil  yang  diperoleh  dari  uji  ANOVA  adalah p = 0,000 ( p < 0,05) yang menunjukkan bahwa adanya perbedaan bermakna pada tiap kelompok perlakuan. Untuk mengetahui perbedaan bermakna pada  masing-masing  kelompok  perlakuan  maka dilanjutkan  dengan  uji  LSD (Least  significant different) .  Hasil  uji  LSD  menunjukkan  setiap kelompok  memiliki  perbedaan  bermakna  kecuali
untuk  konsentrasi  20%  dan  35%  tidak  terdapat perbedaan  yang  bermakna  yang  artinya  efek penyembuhan kedua konsentrasi tersebut sama.
Saat terjadi luka bakar, tubuh akan merespon melalui  proses  peradangan  yang  ditandai  dengan bengkak  dan  kulit  kemerahan  disebabkan  oleh peningkatan  aliran  darah  secara  mendadak  karena adanya  pelepasan  mediator-mediator  kimia  dalam tubuh  (histamine,  kinin,  serotin,  prostaglandin) yang membuat pembuluh darah melebar (vasodilatasi).  Pelebaran  pembuluh  darah  ini menyebabkan  peningkatan  permeabilitas  kapiler sehingga  volume  cairan  yang  ada  di  dalam pembuluh  darah  keluar  dan  memenuhi  sela-sela jaringan  yang  ada  di  kulit  sehingga  kulit  menjadi bengkak.  Volume  cairan  yang  berlebihan  ini menekan  jaringan-jaringan  kulit  sehingga  terjadi nyeri.
Proses  penyembuhan  lukanya  mencakup beberapa fase  yaitu  fase inflamasi, fase  proliferasi dan  fase  maturasi.  Aktivitas  penyembuhan  luka bakar dengan ekstrak etanol daun alpukat berkaitan dengan  adanya  senyawa  aktif  yang  terkandung dalam ekstrak yang membantu dalam penyembuhan  luka,  diawali  dengan  fase  inflamasi terjadi  segera  setelah  luka  dan  berakhir  3–4  hari dimana terjadi permeabilitas membran sel sehingga pada fase ini akan terdapat peradangan, kemerahan,  nyeri  disertai  dengan  adanya  bula. Maka  zat  aktif  yang  berperan  sebagai  anti inflamasi untuk mengurangi peradangan pada luka- luka  bakar  adalah  senyawa  alkaloid (8) .Sel  pertama yang  membantu  dalam  proses  penyembuhan  luka adalah  neutrofil  yaitu  sel  darah  putih  yang berfungsi  mempertahankan  tubuh  terhadap  infeksi bakteri.  Pada  fase  inflamasi  ini  terjadi  peristiwa hemostasis (penghentian perdarahan), dibantu oleh benang-benang  fibrin  yang  saling  bertautan sehingga  sel-sel  darah  merah  beserta  plasma (platelet) akan terjaring dan membentuk gumpalan. Gumpalan  ini  akan  membentuk scab (keropeng) dan senyawa aktif yang berperan dalam prosen ini adalah tanin sebagai adstringen yang menyebabkan penciutan  pori-pori  kulit,  memperkeras  kulit,  dan menghentikan pendarahan.
Scab (keropeng)  yang  terbentuk  pada permukaan luka akan membantu proses hemostasis dan mencegah kontaminasi luka oleh mikroorganisme.  Pencegahan  agar  luka  tidak terkontaminasi dilakukan oleh makrofag (sel darah
putih)  yang  bekerja  membersihkan  luka  dari partikel mikroskopik yang tidak diinginkan seperti bakteri  dan  sel-sel  mati.  Senyawa  flavonoid berkhasiat sebagai antibakteri yang bekerja melalui penghambatan sintesis dinding sel bakteri (9) .
Saponin  juga  merupakan  zat  yang  dapat berinteraksi  dengan  sel  bakteri  dimana  dinding bakteri  menjadi  lisis  (pecah).  Adanya  zat-zat tersebut  sebagai  antibakteri  dapat  mencegah terjadinya  infeksi  pada luka  sehingga  kesembuhan luka  dapat  dipercepat.  Di  bawah scab ,  sel  epitel berpindah dari luka ke tepi. Kecepatan terbentuknya scab di  kelima  kelompok  perlakuan menandakan  kecepatan  dari  penyembuhan  luka. Terbentuknya  keropeng  merupakan  proses  awal fase inflamasi pada proses penyembuhan luka.
Tahap  awal  fase  proliferasi  dibantu  oleh fibroblas  yaitu  sel  yang  menghasilkan  kolagen. Pada fase ini kolagen akan bekerja menghubungkan jaringan-jaringan pada luka bakar untuk membantu mengembalikan kekuatan jaringan kulit dan mempercepat penyembuhan luka bakar.  Pada  hari  ke-7 scab mulai  terlepas  kecuali untuk kelompok kontrol negatif. Proses terlepasnya scab ini bersamaan dengan proses keringnya luka. Hal ini menandakan sudah terjadinya pertumbuhan sel-sel  baru  pada  kulit  sehingga  membantu mempercepat  lepasnya scab dan  merapatnya  tepi luka (10) .
Tahap  terakhir  pada  proses  penyembuhan luka  bakar  adalah  fase  maturasi  ( remodeling ), terjadi  pada  saat  terlepasnya scab dan  terlihat jaringan  kulit  yang  baru.  Pada  fase  ini  sel  yang masih  berperan  aktif  adalah  fibroblas  dan  kolagen yang  akan  membantu  memberikan  elastisitas, kelenturan dan kelembaban kulit.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  maka  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  alpukat konsentrasi 20%, 35% dan 50% memiliki aktivitas terhadap  penyembuhan  luka  bakar  pada  mencit jantan,  dilihat  dari  pengamatan  hari  ke-1  sampai hari  ke-14  menunjukkan  persentase  kesembuhan luka  bakar  berturut-turut  sebesar  86%,  88%  dan 90%. Serta ekstrak etanol daun alpukat yang paling baik  dalam  penyembuhan  luka  bakar  adalah konsentrasi  50%  dengan  persentase  kesembuhan luka sebesar 90%.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Suwiti, N.K. 2010. Deteksi Histologik Kesembuhan Luka Pada Kulit Pasca Pemberian Daun Mengkudu ( Morinda citrofilia Linn).  Buletin  Veteriner  Udayana Vol  2.  Denpasar:  Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas Udayana.
2. Prasetyo, B.F.I., Wientarsih, dan B.P. Priosoeryanto.  2010.  Aktivitas  Sediaan  Gel Ekstrak  Batang  Pohon  Pisang  Ambon  Dalam Proses  Penyembuhan  Luka  Pada  Mencit. Jurnal  Veteriner . Bogor:  Fakultas  Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
3. Widagdo, T.D. 2004. Perbandingan Pemakaian Aloe  Vera  30%,  40%  dan  Silver  Sulfaniazine 1%  Topikal  Pada  Penyembuhan  Luka  Bakar Derajat  II.  Laporan  Penelitian.  Semarang: Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro.
4. Edewor,  Ibibia  K.T.  2013.  Spectroscopic Determination of Total Phenolic And Flavonoid Contents, And Antioxidant Activity, of  The  Leaves  of Persea  americana . International  Journal  of  Pharmacy  And Pharmaceutical  Sciences . Nigeria:  Ladoke Akintola University of Technology.
5. Owoyele  .B,  Adebayo  I.S,  dan  Soladoye  A.O. 2010.  Anti-Ulcer  Effects  of  Aqueous  Extract of Persea  americana Mill  (Avocado)  Leaves in  Rats.  Nigeria:  Department  of  Physiology, Faculty  of  Basic  Medical  Sciences  College  of Health Sciences, University of Ilorin.
6. Harborne,  J.B.  1987.  Metode  Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata. Bandung: Penerbit ITB.
7. Uchiyama,  T.,  Kamikawa,  H.  Ogita,  Z.  1989 Anti-ulcer  effect  of  extract  from  Phellodendri cortex. Research Institute for Oriental Medicines.  Japan:  Toyama  Medical  and Pharmaceutical University.
8. Robinson,  T.  1991.  Kandungan  Organik Tumbuhan Tingkat  Tinggi.  Bandung:  Penerbit
ITB.
9. Dwidjoseputro D. 1994. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.
10. Aponno  ,J.V.,  Paulina  V.Y.Y,  dan  Hamidah S.S. 2014. Uji Efektivitas Sediaan Gel Ekstrak Etanol  Daun  Jambu  Biji  ( Psidium  guajava Linn)  Terhadap  Penyembuhan  Luka  Yang Terinfeksi Bakteri Staphylococcus aureus Pada Kelinci  ( Orytolagus  cuniculus ).  Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi. Manado: Program Studi Farmasi FMIPA UNSRA