## Optimasi Tween dan Propilen Glikol dalam Self-Nanoemulsifying Drug Delivery System VCO-Minyak Daun Kemangi

## (Optimization of Tween and Propilen Gylicol in Self- Nanoemulsifying Drug Delivery System VCO-Kemangi Leaf Oil)
Feny Dhea Camelia 1 , Dwi Nurahmanto 2 , Budipratiwi Wisudiyaningsih 3 1,2,3 Fakultas Farmasi Universitas Jember Jl. Kalimantan 37, Jember 68121 e-mail : dwinurahmanto.farmasi@unej.ac.id

## Abstract
Basil (Ocimum basilica) contains active compounds of essential oils that have volatile properties, so it will affect its antibacterial activity. SNEDDS was chosen as a delivery system to increase essential oil stability. The purpose of this study was to determine the effect of tween 80 concentration, propylene glycol, and their interactions in VCO on SNEDDS of basil leaf oil on response and to determine the antibacterial activity with optimum characteristics. Optimization of tween 80 and propylene glycol was conducted using the VCO oil phase with a factorial design method using design expert software 11 with the response used, namely% transmittance  and  emulsification  time.  Verification  and  characterization  were  carried  out  including organoleptic, pH, particle size, particle distribution, then tested for antibacterial activity. The results showed that  an  increase  of  tween  80  concentration  and  a  decrease  of  propylene  glycol  would  increase  the transmittance value and decrease the emulsification time. There was no interaction effect between the two. Prediction software design expert 11 showed optimum formula with a clear yellow color appearance, the distinctive odor of basil oil, has an average pH of 6.81 ± 0.03, an average particle size of 19.7 ± 0.16 nm, a particle distribution with an average PDI average of 0.163 ± 0.05. The optimum formula with a concentration of 30 μl has activity against S. thypi with an average inhibition zone diameter of 17.21 ± 1.01 mm.
Keywords: Basil leaf oil, SNEDDS, Antibacterial, Factorial Design

## Abstrak
Kemangi  ( Ocimum  bacilicum )  mengandung  senyawa  aktif  minyak  atsiri  yang  bersifat  mudah  menguap sehingga  akan  mempengaruhi  aktivitasnya  sebagai  antibakteri.  SNEDDS  dipilih  sebagai  sistem penghantaran  untuk  meningkatkan  stabilitas  dari  minyak  atsiri.  Tujuan  penelitian  ini  yaitu  mengetahui pengaruh konsentrasi tween 80, propilen glikol dan interaksi keduanya dalam VCO pada SNEDDS minyak daun  kemangi  terhadap  respon  serta  mengetahui  aktivitas  antibakteri  dengan  karakteristik  optimum. Optimasi terhadap tween 80 dan propilen glikol menggunakan fase minyak VCO dengan metode desain faktorial menggunakan software design expert 11 dengan respon yang digunakan yaitu % transmitan dan waktu  emulsifikasi,  selanjutnya  verifikasi  dan  karakterisasi  meliputi  organoleptis,  pH,  ukuran  partikel, distribusi  partikel  kemudian  dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri.  Hasil  menunjukkan  bahwa  peningkatan konsentrasi tween 80 dan penurunan konsentrasi propilen glikol akan meningkatkan nilai transmitan dan menurunkan waktu emulsifikasi, serta tidak terdapat pengaruh interaksi antara keduanya. Prediksi software design expert 11 formula optimum dengan tampilan warna kuning jernih bau khas minyak kemangi, memiliki pH rata-rata 6,81 ± 0,03, rata-rata ukuran partikel sebesar 19,7 ± 0,16 nm, distribusi partikel dengan rata- rata PDI sebesar 0,163 ± 0,05. Formu la optimum dengan konsentrasi 30 μl memiliki aktivitas terhadap S. thypi dengan rata-rata diameter zona hambat sebesar 17.21 ± 1,01 mm.
Kata kunci : Minyak daun kemangi, SNEDDS, Antibakteri, Desain Faktorial

## Pendahuluan
Typhoid  fever (demam  tifoid)  ditandai dengan  demam  selama  satu  minggu  atau  lebih disertai dengan gangguan pada saluran pencernaan  yang  disebabkan  karena  adanya infeksi bakteri Salmonella typhi [1]. Di Indonesia terdapat kasus demam tifoid sebanyak 600.000 – 1,3  juta  kasus  setiap  tahunnya  dengan  angka kematian lebih dari 20.000 orang, dengan angka kejadian pada anak berusia 3-19 tahun sebanyak 91%  dengan  demam  tifoid  [2].  Demam  tifoid dapat  dicegah  dan  dapat  diobati  dengan pemberian  antibiotik  yang  benar  dan  tepat  [3]. Penggunaan  antibiotik  yang  tidak  benar  dapat menyebabkan  resistensi  terhadap  antibiotik tersebut.  Berdasarkan  permasalahan  tersebut, obat  tradisional  dapat  digunakan  sebagai pengobatan alternatif lain.
Kemangi (Ocimum  bacilicum) adalah tanaman  yang  mudah  didapatkan  karena  selain dibudidayakan  juga  dapat  tumbuh  secara  liar. Salah satu senyawa aktif yang terkandung dalam daun  kemangi  diantaranya  minyak  atsiri  yang memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri,  salah satunya yaitu terhadap bakteri S. typhi. Minyak atsiri  memiliki  sifat  mudah  menguap,  mudah terdekomposisi  oleh  panas,  kelembapan  udara, cahaya  maupun  oksigen.  Untuk  mengatasi masalah  di  atas,  SNEDDS  dipilih  karena kemampuannya  untuk  meningkatkan  stabilitas formulasi  berbasis  minyak  atsiri.  Minyak  atsiri dalam  bentuk  nanoemulsi,  akan  terenkapsulasi sehingga  kemampuan  menguapnya  lebih  kecil, sehingga  akan  meningkatkan  stabilitas  dari minyak  atsirinya  [4].  Pembentukan  nanoemulsi yang  spontan  serta  ukuran  tetesan  yang berukuran nano dapat memberikan luas permukaan yang besar sehingga dapat meningkatkan kelarutan, pelepasan, dan penyerapan  obat.  Di  dalam  sistem  SNEDDS, ukuran  tetesan  yang  sangat  kecil  membuat bahan  aktif  dapat  melewati  saluran  pencernaan dengan  cepat  serta  efektif  untuk  obat  dengan target  absorbsi  di  dalam  lambung  dengan  cara melindungi obat yang sensitif terhadap lingkungan lambung.
Beberapa  komponen  penting  dalam sistem SNEDDS yaitu fase minyak, surfaktan dan kosurfaktan.  Fase  minyak  berperan  penting dalam  formulasi  SNEDDS,  karena  dapat berpengaruh  pada  ukuran  tetesan  nanoemulsi, proses  nanoemulsifikasi  yang  terjadi  secara
spontan  dan  kelarutan  obat.  Surfaktan  dan kosurfaktan  berguna  menurunkan  tegangan muka  antara  dua  komponen  yang  tidak  saling campur  antara  minyak  dan  air.  Pada  penelitian ini,  VCO  dipilih  sebagai  fase  minyak  karena minyak  atsiri  daun  kemangi  dapat  larut  dalam VCO.  VCO  mengandung  asam  lemak  rantai sedang  sehingga  lebih  mudah  diemulsikan  dan dapat  menghasilkan  sediaan  dengan  ukuran nanometer.  Surfaktan  yang  dipilih  dalam penelitian ini yaitu Tween 80 karena merupakan surfaktan  non-ionik  yang  bersifat  kurang  toksik serta  dapat  memberikan  ukuran tetesan  emulsi bertipe  o/w  dengan  pengadukan  yang  ringan. Propilen glikol dipilih sebagai kosurfaktan karena dapat  membantu  kelarutan  surfaktan  hidrofilik maupun obat dalam basis minyak.
Dalam  penelitian  ini  akan  dilakukan optimasi untuk mengetahui pengaruh konsentrasi tween 80, propilen glikol dan interaksi keduanya dalam  VCO  pada  SNEDDS  minyak  daun kemangi  menggunakan metode desain faktorial. Tween 80 dan propilen glikol digunakan sebagai faktor serta % transmitan dan waktu emulsifikasi digunakan  sebagai  respon  yang  selanjutnya akan  dilakukan  verifikasi  (%  transmitan  dan waktu  emulsifikasi)  serta  uji  karakterisasi (organoleptis,  pH,  ukuran  partikel,  distribusi ukuran partikel dan aktivitas antibakteri).

## Metode Penelitian
Bahan dan alat Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain minyak daun kemangi (PT. Materia Medika),  Tween  80  (PT  Brataco  Chemika), Propilen  glikol  (PT  Brataco  Chemika),  aquadest (Kualitas  teknis,  Makmur  Sejati),  etanol  95% (Kualitas  teknis,  Makmur  Sejati),  kultur  murni bakteri Salmonella  thypi pada  media  Mueller Hinton Agar (MHA).
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian adalah  spektrofotometer  UV-Vis  (Genesys  10S, Thermo  Scientific), vortex  mixture (Thermo Scientific),  jarum  ose,  inkubator,  autoklaf  (ALP), jangka sorong, pembakar spirtus, spatula, pinset, laminar  air  flow  (Airflow),  sentrifus  (Hermle), hotplate  magnetic  stirrer (Ika  c-mag  HS-7),  pH meter  (Elmetron),  neraca  analitik  (Advanturer Ohaus),  mikropipet  (Socorex), particle  size analyzer (PSA)  tipe  DLS (Dynamic  Light Scattering) , vortex (Brantead), magnetic dan alat alat gelas (Pyrex).
Screening Fase Minyak dan Uji Kejernihan Minyak (zaitun, ricini dan VCO) ditambahkan  dengan  minyak  daun  kemangi, dipipet menggunakan mikropipet masing-masing 0,45  ml  dimasukkan  ke  dalam  vial.  Masing- masing  sampel  ditambahkan  tween  80  dengan memipet  sebanyak  1,5  ml  dan  propilen  glikol sebanyak  0,88  ml.  Sampel  dihomogenkan menggunakan vortex dengan 3200 rpm selama 1 menit  kemudian  diamati  secara  kualitatif  visual dan  melihat  nilai  transmitan  yang  dihasilkan. Minyak yang memiliki tingkat kejernihan tertinggi dengan  melihat  secara  visual  tidak  adanya pemisahan  fase  serta  nilai  transmitan  yang dihasilkan  >90%  menunjukkan  semakin  tinggi kelarutan minyak tersebut yang akan  ditetapkan sebagai  fase  minyak  berdasarkan  orientasi percobaan.
Formula SNEDDS minyak daun kemangi Penelitian Patel dkk (2011), telah melakukan  orientasi  percobaan  menggunakan beberapa  konsentrasi  dari  surfaktan dan kosurfaktan  untuk  menentukan level atas  dan level bawah  surfaktan  dan  kosurfaktan  dengan melihat  nilai  transmitan  dan  waktu  emulsifikasi yang  dihasilkan.  Untuk  nilai  transmitan  yang diharapkan yaitu sebesar >90% yang menggambarkan  ukuran droplet nanoemulsi yang berukuran nano dan waktu emulsifikasi  <2 menit  [5,6].  Berikut  formulasi  minyak  daun kemangi  dengan level atas  dan level bawah surfaktan  dan  kosurfaktan  yang  nantinya  akan direplikasi  sebanyak  tiga  kali  dapat  dilihat  pada tabel 1.
Tabel  1  Formulasi  SNEDDS  minyak  daun kemangi  dengan level atas  dan level bawah surfaktan dan kosurfaktan
Evaluasi SNEDDS minyak daun kemangi
Uji Transmitan Pada penelitian ini dilakukan uji transmitan. Preparasi dilakukan dengan memipet campuran sebanyak 50 μl lalu dimasukkan dalam labu ukur 50 ml kemudian ditambahkan aquadest sampai tanda, lalu dihomogenkan menggunakan vortex dengan  3200  rpm  selama  1  menit.  Uji transmitan dilakukan dengan cara mengisi kuvet dengan sampel kemudian dimasukkan ke dalam alat  spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang gelombang 650 nm. Blanko yang digunakan yaitu aquadest . Nilai transmitan yang diharapkan yaitu >90% [7].
Uji Waktu Emulsifikasi
Pengujian  waktu  emulsifikasi  dilakukan dengan  memasukkan  1  ml  sampel  dari  setiap formula  ke  dalam  500  ml aquadest di  atas hotplate  magnetic  stirrer pada  suhu  37  ±  0,5°C dengan kecepatan 100 rpm. Secara visual, waktu emulsifikasi dapat diamati pada tampilan larutan dan waktu yang dibutuhkan untuk emulsifikasi [8]. Waktu  emulsifikasi  dapat  ditentukan  dengan melihat nanoemulsi yang terbentuk secara visual ditandai  dengan  jernihnya  sediaan.  Nanoemulsi pada  sediaan  SNEDDS diharapkan  terbentuk dalam 2 menit [9].
Penentuan Formula Optimum
Untuk  penentuan  formula  optimum SNEDDS  minyak  daun  kemangi  ditentukan dengan software Design Expert 11 . Software ini digunakan untuk menganalisis nilai % transmitan (>90%  yang  menunjukkan  ukuran  tetesan  telah berukuran nano) dan waktu emulsifikasi <2 menit diharapkan terbentuk SNEDDS yang jernih). Dari analisis tersebut  akan  mendapatkan persamaan desain faktorial 3.1 berikut:
Y= b 0 + b 2 X B = b 12 X A X B …………….......(3.1)
Persamaan  umum  tersebut  dapat  digunakan untuk  mengetahui  b 1 ,  b 2 ,  dan  b 12 sampai didapatkan  efek  faktor  terhadap  respon  dan kombinasi  efek faktor dengan  respon. Hasil  dari perhitungan  tersebut  akan  digunakan  untuk mendapatkan contour plot pada keempat respon dengan  menggunakan software  Design  Expert 11.

## Verifikasi Formula Optimum
Verifikasi  formula  optimum  SNEDDS minyak daun kemangi dilakukan dengan mereplikasi  sebanyak  3  kali  formula  optimum.
Untuk  mendapatkan  nilai  observatif  maka Nama bahan Fungsi bahan Formula SNEDDS (1) (ml) A (ml) B (ml) AB (ml) Minyak daun kemangi Bahan Aktif 0,45 0,45 0,45 0,45 VCO Fase Minyak 0,45 0,45 0,45 0,45 Tween 80 Surfak tan 1,5 2,05 1,5 2,05 Propilen glikol Kosur faktan 0,51 0,51 0,88 0,88
dilakukan  evaluasi  terhadap  nilai  %  transmitan dan waktu emulsifikasi. Hasil analisis menggunakan desain faktorial didapatkan respon prediktif yang akan dibandingkan secara statistik dengan  respon  dari  observatif  menggunakan  uji one sample t-test dengan taraf keakuratan 95%. Hasil  dapat  dikatakan  tidak  berbeda  bermakna apabila nilai signifikansinya lebih dari 0,05% dan hasil  dikatakan  berbeda  bermakna  apabila  nilai signifikansinya kurang dari 0,05% [10].
Karakterisasi SNEDDS minyak daun kemangi Karakterisasi bertujuan
untuk mengetahui karakteristik formula optimum SNEDDS  minyak  daun  kemangi  apakah  telah memenuhi karakteristik yang diharapkan. Beberapa pengujian yang dilakukan yaitu :
Uji Organoleptis
Pengamatan  dilakukan  dengan  cara mengamati  warna,  aroma,  dan  kejernihan sediaan [11]. Hasil yang diharapkan yaitu warna kuning  jernih,  aroma  khas  kemangi  dan kejernihan  sediaan  yaitu  jernih  atau  transparan, serta tidak ada pemisahan fase.
Uji pH
Uji  pH  pada  sediaan  SNEDDS  minyak daun kemangi dilakukan dengan cara memasukkan  elektroda  ke  dalam  larutan SNEDDS  yang  sebelumnya  sudah  dikalibrasi dan  diverifikasi  menggunakan  larutan  dapar dengan  pH  standar.  Uji  pH  dilakukan  dengan menggunakan  alat  pH  meter.  Hasil  yang diharapkan  yaitu  lingkungan  fisiologis  yaitu memiliki  rentang  sekitar  pH  1,2  (pH  dalam lambung) hingga 7,4 (pH darah dan usus) [12].
Uji Ukuran Partikel dan Distribusi Ukuran Partikel Ukuran  partikel  diuji  menggunakan Particle  Size  Analyzer (PSA)  dengan  tipe  DLS (Dynamic  Light  Scattering) .  Preparasi  yang dilakukan yaitu mengambil sampel dan dilarutkan dalam aquadest 1:1000 ke dalam tabung reaksi, lalu  dimasukkan  ke  dalam  kuvet.  Kuvet dimasukkan  ke  dalam holder ,  adanya  grafik hubungan  antara  diameter  globul  (nm)  dengan frekuensi  (%)  kemudian  dianalisis  dengan instrumen  PSA  [13].  Instrumen  PSA  akan menampilkan  hasil  grafik  ukuran  partikel  dan indeks  polidispersisitas  untuk  menunjukkan distribusi partikel. Ukuran partikel yang diharapkan kurang dari 200 nm. Distribusi ukuran partikel  dinyatakan  sebagai  monodispersi  jika
polydispersity index berada pada rentang kurang dari 0,5 [14].
Uji Aktivitas Antibakteri Pembuatan Media dan Sterilisasi Ditimbang serbuk nutrient agar sebanyak 0,46  gram  dan  serbuk muller  hitten  agar (MHA) sebanyak  2,28  gram  lalu  dimasukkan  ke  dalam erlenmeyer yang berisi aquadest sebanyak 20 ml untuk nutrient agar, dan kedalam 60 ml aquadest untuk muller hitten agar (MHA). Media kemudian dipanaskan  di  atas hotplate dan  diaduk  hingga terlarut. Dicuci tabung reaksi, cawan petri, dan tip serta  wadah,  lalu  dikeringkan  dan  dibungkus dengan kertas. Kemudian semua alat dan media disterilisasi  menggunakan autoklaf pada  suhu 121ºC selama 15 menit.
Peremajaan Biakan Bakteri Media nutrient agar  merupakan  media untuk  peremajaan  biakan  bakteri  dalam  tabung reaksi yang dilakukan dengan cara menggoreskan  media nutrient agar  miring. Proses  ini  dilakukan  dengan  cara  mendekatkan mulut  tabung  reaksi  yang  berisi  bakteri  pada nyala  api  pada laminar  air  flow (LAF),  teknik  ini dilakukan secara steril (bebas dari mikroorganisme).  Media  yang  berisi  bakteri ditutup  rapat  menggunakan  kapas  dan plastic wrap, dan diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37ºC selama 24 jam.
Pembuatan Standar Mc Farland 0,5%
Pembuatan  standar  mc  farland  0,5%  ini dibuat dengan 50 μl BaCl 2 1% dicampur ke dalam H 2 SO 4 1%  sebanyak  9,95  ml  kedalam  vial kemudian  dihomogenkan  menggunakan vortex . Standar mc farland 0,5% tersebut setara dengan 1,5 x 10 8 sel bakteri/ml.

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Biakan  bakteri  yang  ada  pada nutrient agar (NA) miring diambil dengan ose, kemudian disuspensikan  dengan  memasukkan  ke  dalam tabung yang berisi NaCl fisiologi 0,9% sebanyak 5  ml,  lalu  di  vortex  hingga  homogen  dan  diatur kekeruhannya dengan standar mc farland 0,5%. Standar mc farland 0,5% setara dengan 1,5 x 10 8 sel bakteri/ml.
Penentuan Daya Hambat Media muller  hitten  agar (MHA)  yang sudah disterilisasi kemudian dituang ke dalam 3 cawan  petri  steril  sebanyak  15  ml  hingga memadat, dipipet suspensi bakteri sebanyak 100
μl  dan  diratakan  sampai  rata  menggunakan cutton  bud .  SNEDDS  minyak  daun  kemangi  di pipet  sebanyak  30  μl  ke  dalam  vial  yang  berisi cakram  dengan  diameter  6  mm  dan  ditunggu selama 24 jam. Kloramfenikol dengan konsentrasi 30 μg digunakan untuk kontrol positif, dan  SNEDDS  tanpa  bahan  aktif  dan aquadest steril  sebanyak  30  μl  sebagai  kontrol  negatif. Cawan  petri  kemudian  diinkubasi  pada  suhu 37ºC selama 24 jam, dan diameter zona hambat yang telah terbentuk diukur menggunakan jangka sorong.  Menurut  Susanto  dan  Ruga  (2012), kategori zona hambat [15]  dapat diketahui pada Tabel 2.
Tabel  2  Hubungan  Diameter  dan  Kategori  Zona
Hambat Diameter Kategori Zona Hambat < 5 mm Lemah 6-10 mm Sedang 11-20 mm Kuat >21 mm Sangat Kuat

## Hasil
S creening fase minyak dan uji kejernihan Hasil  percobaan  pada  penentuan  fase minyak  menunjukkan  bahwa  pada olium  ricini dan olium olive menunjukkan adanya pemisahan fase,  sedangkan  pada  VCO  tidak  terjadi pemisahan fase. Nilai transmitan yang didapatkan  dari  ketiga  minyak  tersebut  yakni untuk  nilai  transmitan  SNEDDS  dengan  fase minyak olium  olive sebesar  54.726%,  untuk SNEDDS  dengan  fase  minyak olium  ricini sebesar  56,667%,  sedangkan  untuk  SNEDDS dengan fase minyak VCO sebesar 95,551%. Hal ini  menunjukkan  bahwa  kelarutan  tertinggi minyak daun kemangi pada VCO, sehingga VCO dipilih sebagai fase minyak pada penelitian ini.
Formula Optimum
Pembuatan  SNEDDS  minyak  daun kemangi  dilakukan  dengan  menghomogenkan minyak daun kemangi dengan VCO sebagai fase minyak,  tween 80 sebagai surfaktan dan propilen glikol  sebagai  kosurfaktan  menggunakan  vortex dengan  kecepatan  3200  rpm  selama  1  menit. Pengadukan  dilakukan  hingga  menghasilkan SNEDDS yang homogen, jernih dan transparan.
Uji Transmitan
Hasil  dari  percobaan  didapatkan  nilai transmitan  dari  empat  formula  dengan  masing- masing formula direplikasi tiga kali menghasilkan nilai transmitan rata-rata lebih dari 90%, dimana
dapat  diperkirakan  bahwa  sediaan  telah  berada pada ukuran nanometer.
Analisis Nilai Transmitan
Hasil  analisis  yang  dihasilkan  oleh Design expert 11 menunjukkan bahwa konsentrasi  tween  80  dengan p-value <0,0001, propilen glikol  dengan nilai p-value 0,0015 serta interaksi  dari  kedua  faktor  antara  konsentrasi tween  80  dan  propilen  glikol  memberikan pengaruh yang signifikan dalam menaikkan nilai transmitan terhadap respon transmitan
(signifikan, p-value <0,0500). Berdasarkan persamaan yang di hasilkan oleh design expert 11 respon transmitan yaitu  konsentrasi  tween  80  dan  interaksi  antara tween  80  dengan  propilen  glikol  dalam  VCO memiliki  koefisien  yang  bernilai  positif  yang menunjukkan  adanya  peningkatan  konsentrasi tween 80 serta  interaksi tween 80 dan propilen glikol  dapat  meningkatkan  nilai  transmitan  dari SNEDDS.    Untuk  konsentrasi  propilen  glikol memiliki nilai negatif yang menunjukkan peningkatan  konsentrasi  propilen  glikol  maka akan menurunkan nilai transmitan yang dihasilkan.

## Uji Waktu Emulsifikasi
Hasil  dari  pengujian  ini  didapatkan  nilai waktu  emulsifikasi  yang  rata-rata  kurang  dari  2 menit, dimana hasil tersebut telah sesuai dengan nilai yang diharapkan.
Analisis Waktu Emulsifikasi Hasil  analisis  yang  dihasilkan  oleh Design expert 11 menunjukkan bahwa konsentrasi  tween  80  dengan  p-value  0.0360 dapat  memberikan  pengaruh  yang  signifikan dalam  menurunkan  nilai  waktu  emulsifikasi sedangkan  propilen  glikol  memiliki  nilai  p-value 0.0822 menunjukkan bahwa propilen glikol tidak memberikan  pengaruh  yang  signifikan  dalam menurunkan  nilai  waktu  emulsifikasi  terhadap respon waktu emulsifikasi signifikan Interaksi dari kedua  faktor  antara  konsentrasi  tween  80  dan propilen  glikol memberikan pengaruh yang tidak signifikan  dalam  menurunkan  nilai  waktu emulsifikasi terhadap respon nilai waktu emulsifikasi  yang  dihasilkan  dengan  p-value 0.0544.
Berdasarkan persamaan yang dihasilkan software  design  expert  11 respon  waktu emulsifikasi  yaitu  konsentrasi  tween  80  dan bahwa interaksi antara tween 80 dengan propilen glikol  dalam  VCO  memberikan  koefisien  yang bernilai  negatif  yang  menunjukkan  adanya
peningkatan  konsentrasi  tween  80  dapat menurunkan waktu emulsifikasi SNEDDS minyak kemangi. Untuk propilen glikol memiliki koefisien yang  bernilai  positif  yang  menunjukkan  adanya peningkatan  konsentrasi  propilen  glikol  maka akan  meningkatkan  waktu  emulsifikasi  yang dihasilkan.

## Optimasi Formula
Berdasarkan  solusi  yang  diberikan  oleh software  design  expert  11,  solusi  formula optimum  yang  terpilih  yaitu  dengan  konsentrasi tween  80  sebesar  2,05  ml  dan  konsentrasi propilen  glikol  sebesar  0,88  ml  dengan  nilai desirability sebesar  0,805.  Formula  tersebut diprediksi  memiliki  nilai  transmitan  sebesar 99,715% dan waktu emulsifikasi sebesar 57,667 detik.
Verifikasi Formula Optimum Hasil  dari  nilai  percobaan  dan  nilai respon  prediksi  design  expert  dianalisis  secara statistik  menggunakan One  Sample  T-test dengan taraf kepercayaan 95%. Nilai signifikansi yang  di  dapatkan  untuk  respon  transmitan sebesar  0,998  dan  untuk  signifikansi  respon waktu emulsifikasi sebesar 0,989. Nilai signifikansi  dari  kedua  respon  tersebut  telah sesuai  yang  diharapkan  yaitu  >0,05  yang menunjukkan  bahwa  tidak  adanya  perbedaan yang bermakna [10].
Karakterisasi Formula Optimum
Formula optimum menghasilkan sediaan berwarna kuning jernih dengan bau khas minyak kemangi.  Dari  hasil  tersebut  dapat  dikatakan bahwa  formula  optimum  SNEDDS  minyak  daun kemangi  telah  stabil  secara  fisik.  Data  yang disajikan  pada  Tabel  3  menunjukkan  bahwa formula optimum yang dihasilkan pada penelitian ini  memenuhi  persyaratan  SNEDDS  minyak kemangi yang baik.
Tabel 3. Hasil Karakterisasi Formula Optimum Karakteristik Rata-rata ± SD pH 6,81 ± 0,03 Ukuran partikel  (nm) 19,7 ± 0,16 Distribusi ukuran partikel 0,163 ± 0,05
Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Hasil  dari  percobaan  didapatkan  nilai diameter zona hambat pada SNEDDS replikasi 1 sebesar 18,22 mm, SNEDDS replikasi 2 sebesar 16,20  mm,  dan  SNEDDS  replikasi  3  sebesar
17,21  mm.  Berdasarkan  penelitian  Zukhruf  dkk (2014) dalam uji aktivitas antibakteri menggunakan  metode  yang  sama  dengan konsentrasi minyak daun kemangi yang digunakan  sebesar  2,5%  memiliki  zona  hambat sebesar  8,67  mm  dan  pada  sediaan  SNEDDS dengan  konsentrasi  minyak  daun  kemangi sebesar 15% memiliki zona hambat dengan rata- rata  17,21  ±  1,01    mm  yang  masuk  dalam kategori zona hambat yang kuat yaitu mempunyai  rentang  11-21  mm  [16].  Hal  ini menunjukkan bahwa minyak kemangi yang telah diformulasikan  ke  dalam  bentuk  SNEDDS  tidak mempengaruhi  aktivitas  antibakteri  secara in vitro .  Hasil  ini  perlu  dibuktikan  kembali  dengan menggunakan  SNEDDS  tanpa  VCO,  karena aktivitas  antibakteri  yang  terbentuk  belum  tentu dari  minyak  daun  kemangi  saja,  tetapi  menurut penelitian Noriko dkk (2014) menunjukkan bahwa VCO  juga  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri [17].

## Pembahasan
Dalam  penelitian  yang  telah  dilakukan dapat  dinyatakan  melalui  hasil  persamaan  dan countour  plot dari software  design  expert  11 bahwa  penambahan  tween,  propilen  glikol  dan interaksi  keduanya  memberikan  pengaruh  yang signifikan  dalam  menaikkan  nilai  transmitan terhadap respon transmitan (signifikansi p-value <0,0500).  Untuk  respon  waktu  emulsifikasi menunjukkan  bahwa  peningkatan  tween  80 memberikan  pengaruh  yang  signifikan  dalam menurunkan nilai waktu emulsifikasi, sedangkan propilen  glikol  serta  interaksi  keduanya  tidak berpengaruh  signifikan  dalam  menurunkan  nilai waktu  emulsifikasi  terhadap  respon  waktu emulsifikasi.
Berdasarkan  hasil  verifikasi,  data  respon yang  dihasilkan  pada  percobaan  formula optimum seperti transmitan dan waktu emulsifikasi  memiliki  nilai  Sig.  (2-tailed)  >0,05, artinya  tidak  ada  perbedaan  yang  signifikan antara  prediksi  respon  oleh design  expert  11 dengan  respon  yang  dihasilkan  percobaan formula  optimum,  sehingga  dapat  dikatakan bahwa  model  dapat  memprediksikan  respon untuk formula optimum dengan baik.
Karakteristik  fisik  formula  optimum SNEDDS  minyak  daun  kemangi  yaitu  memiliki tampilan  warna  kuning  dan  jernih;  memiliki  bau khas minyak kemangi; memiliki pH rata-rata 6,81 ±  0,03;  rata-rata  ukuran  partikel  sebesar  19,7  ± 0,16 nm; distribusi partikel monodispers dengan rata-rata indeks  polidispersitas sebesar  0,163  ± 0,05. Hasil dari uji aktivitas antibakteri SNEDDS
minyak  daun  kemangi  yaitu  terdapat  aktivitas terhadap  bakteri S.  thypii dengan  rata-rata diameter zona hambat sebesar 17.21 ± 1,01 mm dan masuk kedalam kategori zona hambat yang kuat.

## Simpulan dan Saran
Simpulan  dari  penelitian  ini  yaitu penambahan konsentrasi tween 80 dan penurunan konsentrasi propilen glikol berpengaruh dalam meningkatkan respon transmitan  dan  waktu  emulsifikasi.  Berdasarkan hasil verifikasi menunjukkan tidak ada perbedaan yang  signifikan  antara  prediksi  respon  oleh design expert 11 dengan respon yang dihasilkan percobaan  formula  optimum.  Karakterisasi  yang dihasilkan  dari  formula  optimum  memenuhi persyaratan karakteristik SNEDDS minyak daun kemangi yang baik.

## Daftar Pustaka
[1]  Widodo  D.  Demam  Tifoid:  Ilmu  Penyakit Dalam,  Edisi  IV.  Jakarta:    Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia; 2007.
[2]  Saputra  RK,  Majid  R,  Bahar  H.  Hubungan pengetahuan,  sikap  dan  kebiasaan  makan dengan  gejala  demam  thypoid  pada mahasiswa Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas  Halu  oleo  tahun  2017;  Jurnal Ilmiah  Mahasiswa  Kesehatan  Masyarakat. 2(6):1 –7.
[3]  Ochiai RL, Acosta CJ, Holiday MCD, Baiqing D, Bhattacharya SK, Agtini MD, et al. A study of  typhoid  fever  in  five  Asian  countries: disease  burden  and  44  implications  for controls. Bull World Health Organ. 2008; 86: 260-268.
[4]  Liang R, Xu S, Shoemaker CF, Li Y, Zhong F,  Huang  Q.  Physical  and  Antimicrobial Properties of
Peppermint Oil
Nanoemulsions.  Journal  of  Agricultural  and Food Chemistry. 2012; 60(30): 7548 –7555.
[5]  Patel  J,  Patel  A,  Raval  M,  Sheth  N. Formulation  and  development  of  a  self- nanoemulsifying  drug  delivery  system  for telmisartan for oral drug delivery. International  Journal  of  Pharmaceutical Investigation. 2011; 2(1): 9 –16.
[6]  Nasr A, Gardouh A, Ghorab M. Novel solid self-nanoemulsifying  drug  delivery  system (s-snedds)  for  oral  delivery  of  olmesartan medoxomil: design, formulation,
pharmacokinetic and bioavailability evaluation. Pharmaceutics. 2016; 8(3); 2-29.
[7]  Pratiwi L, Fudholi A, Martien R, Pramono S. Self-nanoemulsifying  drug  delivery  system (snedds) for topical delivery  of mangosteen peels  (garcinia  mangostana  l.):  formulation design and in vitro studies. Journal of Young Pharmacists. 2017; 9(3): 341 –346.
[8]  Ujilestari T, Martien R, Ariyadi B, Dono ND, Zuprizal. Self-nanoemulsifying drug delivery system (SNEDDS) of Amomum compactum essential  oil:  Design,  formulation,  and characterization.  J  App  Pharm  Sci,  2018; 8(06): 014-021.
[9]  Savale SK. A review - self nanoemulsifying drug delivery system (snedds). International Journal of Research in Pharmaceutical and Nano Sciences, 2015; 4(6):385 –397.
[10] Sugiyono.  Metode  Penelitian  Pendidikan: Pendekatan Kuantitatif, Kualitatif, Dan R&D. Bandung: Alfabeta; 2016.
[11] Wulandari  E,  Alverina  A,  Martien  R. SNEDDS (selfnanoemulsifying drug delivery system) formulation of β-carotene in olive oil (olea  europaea).  International  Journal  of Advanced  Research.  2016;  4(11):  1031 – 1043.
[12] Date AA, Desai N, Dixit R, Nagarsenker M. Self-nanoemulsifying drug delivery systems: formulation insights, applications and advances.  Nanomedicine.  2010;  5(10): 1595 –1616.
[13] Yuliani SH, Hartini M, Stephanie, Pudyastuti B,  Istyastono  EP.  Perbandingan  stabilitas fisis sediaan nanoemulsi minyak biji delima dengan  fase  minyak  long-chain  triglyceride dan medium-chain triglyceride. Tradit Med J. 2016; 21(2): 93-98.
[14] Patro  SS,  Chua  HJ.  Formulation  and evaluation  of  solid-self  nano  emulsifying drug delivery system (s-snedds) for glibenclamide.  World  Journal  of  Pharmacy and  Pharmaceutical  Sciences.  2019;  8(1): 307 –320.
[15] Susanto  D,  Sudrajat,  Ruga  R.  Studi Kandungan Bahan Aktif  Tumbuhan  Meranti Merah  (Shorea  leprosula  Miq)  Sebagai
Sumber Senyawa
Antibakteri.
Mulawarmnan  Scientifie.  2012;  11(2):  181-
190.
[16] Zukhruf NW. Aktivitas antibakteri kombinasi minyak atsiri kemangi (Ocimum basilicum L) dengan kloramfenikol dan gentamisin terhadap  Salmonella  typhii.  Surakarta:
Universitas Muhammadiyah Surakarta; 2014.
[17] Noriko N, Masduki A, Azhari R, Nufadianti G. Uji  In  Vitro  Daya  Anti  Bakterial  Virgin
Coconut  Oil  (VCO)  pada  Salmonella  typhi. Jurnal  ALAZHAR  Indonesia  Seri  Sains  dan Teknologi. 2014; 2(3): 188-192.