Copyright © 2022 by Authors, published by Journal of Food Technology and Industry This is an open-access article distributed under the CC BY-SA 4.0 License https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/

## Analisis Senyawa Aktif Trigeminal Andaliman dengan Variasi Metode
Pengeringan dengan Pendekatan GC-MS
[Analysis of Trigeminal Active Compounds from Various Dried Andaliman with GC-MS Approach]
Sigit Suharta 1) , Dase Hunaefi 1) , Christofora Hanny Wijaya 1) *, dan Yasuyuki Hashidoko 2)
1) Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pangan, IPB University, Bogor, Indonesia
2) Department of Applied Biosciences, Faculty of Agriculture, Hokkaido University, Japan
Diterima 10 April 2022 / Disetujui 21 Juni 2022

## ABSTRACT
Sanshool  compounds  are  the  trigeminal  active  compounds  in  andaliman  (Zanthoxylum  acantho- podium  DC)  with  a  numbing  and  tingling  sensation.  The  analysis  of  such  compounds  is  usually  done through  HPLC  approach;  however,  limited  studies  have  reported  that  the  analysis  of  such  compounds could  be  conducted  with  Gas  Chromatography-Mass  Spectrometry  (GC-MS ). This  method  could save research time and funding by analyzing both sanshools and volatiles simultaneously, which would describe the complete profile of andaliman flavor compounds. This study aimed to confirm the potency of GC-MS in analyzing  sanshool  compounds  and  to  utilize  this  method  in  studying  the  impact  of  different  drying methods towards andaliman trigeminal active compounds. Andaliman was dried with five drying methods (sun,  sunshade,  air,  oven,  and  freeze-drying)  and  was  macerated  with  chloroform,  concentrated,  and analyzed  with  GC-MS.  The  results  of  this  study  showed  that  GC-MS  was  able  to  analyze  sanshool compounds efficiently. Drying had no statistically significant impact on sanshool quantities extracted from andaliman.  Fresh  andaliman  contained  0.69  %  (dry  weight  basis)  of  α-sanshool,  the  main  sanshool  in andaliman. On the other hand, dried andaliman contained 0.80- 1.08% of α-sanshool (dry weight basis). As oven drying managed to produce andaliman with a similar concentration of α-sanshool at a faster time and more affordable cost than other drying methods, oven drying was suggested as the ideal drying method to extend the shelf life of andaliman.
Keywords: andaliman, drying, GC-MS, sanshool, trigeminal

## ABSTRAK
1
Komponen sanshool merupakan  senyawa  aktif  trigeminal  pada  andaliman  ( Zanthoxylum  acantho- podium DC)  yang  memberikan  sensasi  bergetar  dan  kebas  pada  rongga  mulut.  Selama  ini  analisis keberadaan senyawa umumnya dilakukan dengan pendekatan HPLC. Akhir-akhir ini beberapa penelitian melaporkan  bahwa  analisis  komponen sanshool dapat  dilakukan  dengan Gas  Chromatography  Mass Spectrometry (GC-MS),  suatu  metode  yang  menghemat  waktu  dan  biaya  karena  dapat  menganalisis komponen sanshool dan  volatill  bersamaan  dan  akan  menggambarkan  profil  senyawa  pembentuk  cita rasa andaliman secara utuh. Penelitian bertujuan untuk mengonfirmasi kemungkinan penggunaan GC-MS dalam menganalisis komponen sanshool . Selanjutnya metode ini digunakan untuk mengetahui perubahan konsentrasi komponen aktif trigeminal andaliman kering dengan berbagai pengeringan. Andaliman segar dikeringkan  dengan  lima  metode  pengeringan  (matahari,  paranet,  angin,  oven,  dan freeze  drying ). kemudian  dimaserasi  dengan  kloroform,  dikonsentrasikan,  dan  dianalisis  dengan  GC-MS.  Penelitian  ini menunjukkan  GC-MS  dapat  menganalisis  komponen sanshool dengan  baik.  Pengeringan  tidak memberikan  pengaruh  yang  signifikan  secara  statistik  terhadap  kuantitas  komponen sanshool yang terekstrak  dari  andaliman.  Konsentrasi α-sanshool (komponen  sanshool  yang  utama  pada  andaliman) sebanyak 0,69% (basis kering) ditemukan pada andaliman segar dan sebanyak 0,80-1,08% (basis kering) pada andaliman kering.  Karena pengeringan oven menghasilkan andaliman dengan konsentrasi sanshool yang  serupa  dalam  waktu  yang  lebih  cepat  dan  dengan  biaya  lebih  terjangkau  dibandingkan  dengan pengeringan  lainnya,  maka  pengeringan  oven  disarankan  sebagai  metode  pengeringan  yang  potensial untuk memperpanjang umur simpan andaliman .
Kata kunci: andaliman, GC-MS, pengeringan, sanshool , trigeminal
*Penulis Korespondensi: E-mail: channywijaya@apps.ipb.ac.id

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  banyak  sekali  pangan  lokal yang  memiliki  cita  rasa  yang  unik,  salah  satunya adalah  andaliman  ( Zanthoxylum  acanthopodium DC) yang memiliki aroma sitrus yang kuat serta sen- sasi trigeminal yang unik, yaitu sensasi bergetar dan kebas  pada  rongga  mulut  dan  lidah  ketika dikonsumsi (Wijaya et al., 2018).  Sensasi trigeminal tersebut  diduga  merupakan    alasan  utama  kepopu- leran  andaliman  di  daerah  asalnya,  Sumatra  Utara. Sensasi  trigeminal  andaliman  disebabkan  oleh  kan- dungan  alkilamida  tidak  jenuh  yang  lebih  dikenal sebagai sanshool (Wijaya,  2000).  Selain  memberi- kan sensasi trigeminal  yang unik ketika dikonsumsi, sanshool juga  dilaporkan  dapat  memberikan  efek fisiologis aktif seperti melindungi kulit dari kerusakan oleh radiasi ultraviolet (Hao et al., 2019), mencegah obesitas dan mengurangi lemak (Wang et al., 2019), mencegah  kerusakan  sel  dari  reaksi  oksidatif  (Li et al., 2020),  mencegah  penurunan  fungsi  kognitif (Zhang et  al., 2019),  serta  memiliki  potensial  seba- gai  bahan anti-aging dalam  kosmetik  (Kim et  al., 2021; Zeng et al., 2019) dan terapi penyakit  Alzhei- mer (Li et al., 2022; Liu et al., 2022).
Komponen sanshool memiliki  banyak  isomer yang berhasil teridentifikasi (Jie et al., 2019). Peneli- tian  sebelumnya  melaporkan  bahwa  komponen sanshool yang  utama  pada  andaliman  adalah α- s anshool (2E, 6Z, 8E, 10E-Z- (2’-metilpropil)-dodeka- tetraenamida) dengan berat molekul 247 dan rumus C 16 H 25 ON (Wijaya, 2000).  Lain halnya pada kerabat andaliman  seperti  lada  Jepang  ( Zanthoxylum  pipe- ritum ) atau lada Sichuan ( Zanthoxylum bungeanum ) (Sugai et al., 2005b; Yang, 2008) yang lebih banyak mengandung  senyawa  isomernya  yaitu  hidroksi α- sanshool.
Andaliman  hijau  segar  adalah  bentuk  yang  pa- ling  banyak  beredar  di  pasaran  Indonesia,  akan tetapi,  andaliman  segar  memiliki  umur  simpan  yang sangat  pendek.  Sekitar  10-14  hari  setelah  panen, buah  andaliman  akan  busuk  oleh  kapang,  warna buah  berubah  menjadi  hitam,  dan  kehilangan  cita rasanya  yang  unik  (Wijaya et  al., 2018).  Pengeri- ngan merupakan salah satu teknik sederhana untuk memperpanjang  umur  simpan  produk  pangan  yang memiliki  kadar  air  yang  tinggi  seperti  andaliman. Pengeringan  juga  dapat  memperluas  penyebaran dan  penggunaan  andaliman  di  berbagai  tempat yang  jauh  dari  lokasi  budidaya  dan  mencegah  de- gradasi mutu andaliman selama proses pengiriman.
Penelitian  sebelumnya  telah  melaporkan  peru- bahan  intensitas  sensori  andaliman  dengan  ber- bagai  teknik  pengeringan  (Napitupulu et  al., 2020). Metode  pengeringan  akan  memengaruhi  intensitas aroma dan trigeminal secara keseluruhan. Publikasi sebelumnya  melaporkan  terjadi  perubahan  konsen- trasi  dari  komponen  volatil  dan  profil  aroma  andali-
man  oleh  berbagai  pengeringan  (Suharta et  al., 2021).  Napitupulu et  al. (2020)  melaporkan  bahwa andaliman kering beku memiliki intensitas trigeminal yang paling tinggi diikuti oleh andaliman kering oven dan  kering far  infrared. Pengaruh  pengeringan  ter- hadap  komponen  volatil,  profil  sensori,  dan  karak- teristik  fisik  dari  andaliman  sudah  dilaporkan  sebe- lumnya,  namun  belum  ditemukan  publikasi  yang melaporkan  perubahan  kuantitas  komponen san- shool pada  andaliman  yang  dikeringkan  dengan berbagai teknik pengeringan.
Analisis  komponen sanshool umumnya  dilaku- kan  dengan  cara  ekstraksi  oleh  pelarut  organik, seperti  kloroform,  lalu  dilakukan  pemisahan  dan identifikasi  dengan  kromatografi  kolom  atau  HPLC ( kromatografi cair kinerja tinggi ) (Sugai et al., 2005b, Zhu et al., 2019).  Akan tetapi metode  ini cenderung membutuhkan  waktu  yang  lama  dan  memerlukan pelarut  dalam  jumlah  yang  banyak  serta  fase  diam yang  relatif  mahal.  Penelitian  terdahulu  melaporkan bahwa komponen sanshool dapat  dianalisis dengan GC-MS  atau kromatografi  gas-spektrometri  massa (Reyes-Trejo et  al., 2019).  Analisis  dengan  pende- katan  GC-MS  dapat  menghemat  waktu  dan  biaya penelitian  karena  selain  dapat  memperoleh  profil komponen  rasa  trigeminal,  metode  ini  juga  dapat menghasilkan profil senyawa  volatil  pembentuk aro- ma  andaliman.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  me- ngonfirmasi  penggunaan  dan  menentukan  para- meter  GC-MS  yang  dapat  menganalisis  komponen sanshool yang  merupakan  senyawa  aktif  trigeminal pada  andaliman,  serta  mempelajari  perubahan  kon- sentrasinya  pada  andaliman  kering  yang  dihasilkan dengan  berbagai  cara  pengeringan.  Penelitian  ini diharapkan  memperroleh  data  yang  menunjukkan bahwa  GC-MS  dapat  menganalisis  komponen san- shool dan  ditemukan  perbedaan  yang  signifikan pengaruh  berbagai  metode  pengeringan  pada  pada kandungan sanshool dari  setiap  sampel  andaliman segar dan kering..

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  andaliman  hijau  segar  varietas  Simanuk yang  diperoleh  langsung  dari  petani  di  dusun Gotting  Raya,  Kecamatan  Simalungun,  Sumatra Utara. Buah andaliman hijau dipisahkan dari ranting dan  kotoran  lainnya,  kemudian  dicuci  dengan  air mengalir  dan  dikering-anginkan  selama  dua  jam. Pada  tahap  penentuan  parameter  GC-MS,  andali- man  hijau  segar  yang  digunakan  diperoleh  dari Pasar  Senen  Jakarta,  karena  keterbatasan  sampel andaliman dari petani di Sumatera Utara dan pertim- bangan  kemudahan  memperoleh  sampel.  Bahan kimia  yang  digunakan  adalah  kloroform  (Merck,
Darmstadt,  Jerman),  standar  hidroksi α-sanshool dengan tingkat kemurnian >98% (Chengdu Biopurify Phytochemicals,  Chengdu,  Cina),  standar  internal 1,2,4-triklorobenzen  (Sigma  Aldrich,  St.  Louis, Amerika  Serikat),  kertas  saring  Whatman  No  1, Na 2 SO 4 anhidrat (Merck, Darmstadt, Jerman).

## Pengeringan andaliman
Andaliman Segar (AS) dikeringkan dengan lima metode pengeringan (Suharta et al., 2021). Pengeri- ngan matahari (KM) dilakukan dengan menyebarkan 400  g  andaliman  segar  pada  dua  loyang  aluminium ukuran 25x45 cm secara merata dalam satu lapisan lalu dijemur di bawah sinar matahari langsung sela- ma  54  jam  dengan  rentangan  suhu  25-45°C,  dan kelembapan relatif (RH) sekitar 21 –77% pada bulan Juli –Agustus  2020  di  Jakarta  Barat  (Napitupulu et al., 2020  dengan  modifikasi).  Pengeringan  matahari ini  dilakukan  di  luar  ruangan  pada  pukul  6  pagi hingga  pukul  6  petang  dan  dilanjutkan  di  dalam ruangan  pada  pukul  6  petang  hingga  6  pagi  agar terhindar  dari  serangga,  binatang,  dan  cuaca  yang kurang baik pada malam hari. Pengukuran suhu dan RH  dilakukan  setiap  6  jam  yaitu  pada  pukul  6  pagi, 12 siang, 6 sore, dan 12 malam.
Pengeringan  matahari  dengan  jaring  matahari atau  paranet  (KJM)  yang  dapat  menghalau  sinar sebanyak  55%  dilakukan  dengan  metode,  lokasi, dan  durasi  yang  sama  seperti  pengeringan  mata- hari,  paranet  dibentangkan  sekitar  20  cm  di  atas buah  andaliman  segar  menggunakan  kerangka  dari pipa PVC untuk memberikan sirkulasi udara selama proses pengeringan.
Pengeringan  dengan  angin  (KA)  dilakukan dengan  menyebarkan  400  g  buah  andaliman  pada dua  loyang  serupa  di  dalam  ruangan  redup  yang dilengkapi  dengan  pendingin  udara  untuk  menjaga suhu sekitar 20-25°C dan RH sekitar 42-47% (Chen et  al., 2012).  Pengeringan  dengan  oven  (KO) dilakukan  dengan  oven  konveksi  skala  laboratorium (Thermo  Fisher  Scientific,  Waltham,  Amerika Serikat)  pada  suhu  54°C  selama  8  jam  (Napitupulu et al., 2020).
Pengeringan  beku  (KB)  dilakukan  dengan  pe- ngering  beku  skala  laboratorium  Alpha  1-2  LDplus (Martin  Christ,  Osterode,  Jerman)  pada  suhu  kon- densor  -50°C  dan  tekanan  0,040  mbar  selama  41 jam.  Metode  pengeringan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  sama  seperti  yang  telah  dilaporkan sebelumnya oleh Suharta et al. (2021). Semua sam- pel  hasil  pengeringan  disimpan  dalam  kemasan aluminium  kedap  udara  pada  lemari  es.  Pengeri- ngan  dilakukan  dengan  dua  ulangan  untuk  melihat fluktuasi kandungan sanshool dari dua waktu panen andaliman.

## Ekstraksi
Ekstrak  kloroform  andaliman  diperoleh  dari maserasi  20  g  andaliman  segar  yang  sudah  di- blender  atau  5  g  andaliman  kering  yang  sudah dihaluskan  hingga  40 mesh serta  200 µ L  1,2,4 triklorobenzen (pada konsentrasi 1 g/100 mL) seba- gai  standar  internal  dengan  100  mL  kloroform selama  satu  malam  di  dalam  lemari  pendingin dengan  dua  kali  proses  maserasi  (Sugai et  al., 2005b;  Suharta et  al., 2021).  Ekstrak  andaliman selanjutnya  disaring  dengan  kertas  penyaring.  lalu dikeringkan  dengan  natrium  sulfat  anhidrat  dan dikonsentrasikan hingga 10 mL menggunakan rotary evaporator (Buchi, Flawil, Switzerland) pada tekanan  332  mbar  dan  suhu  40°C  hingga  diperoleh tepat  10  mL  konsentrat  andaliman.  Ekstraksi  setiap ulangan  dilakukan  secara  duplo.  Setiap  konsentrat disimpan di dalam tabung reaksi kaca dengan penu- tup ulir yang dilengkapi dengan lapisan teflon kemu- dian  dibungkus  aluminium foil dan  disimpan  di dalam lemari es.

## Penetapan parameter GC-MS
Konfirmasi  parameter  GC-MS  dilakukan  de- ngan menyuntikan ekstrak kloroform andaliman dari Pasar  Senen  ke  dalam  GC-MS.  Parameter  GC-MS yang  ideal  untuk  memisahkan  seluruh  senyawa pada  ekstrak  andaliman  diperoleh  dengan  menyun- tikan  1 µ L  konsentrat  andaliman  pada  GC-MS 7890A-5975C  (Agilent  Technologies,  Santa  Clara, Amerika  Serikat)  dengan  kolom  HP-5MS  (30  m  x 250  µm  x  0.25  µm,  Agilent  Technologies), split- injection pada  rasio  1:10  dan  suhu  inlet  250°C, helium seba-gai fase gerak (1 mL/menit), suhu oven 40°C  selama  4  menit  dan  dinaikkan  hingga  280°C selama  4  menit  dengan  kecepatan  kenaikan  suhu yaitu 2°C/menit, serta suhu sumber ion 230°C, mode pemindaian  massa  20  pemindaian/detik,  dan rentang massa 45-550 m/z (Suharta et al., 2021) .
Identifikasi senyawa sanshool Identifikasi  senyawa sanshool mengacu  pada Reyes-Trejo et  al. (2019).  Komponen sanshool me- miliki banyak isomer yang  sulit teridentifikasi secara pasti  tanpa  keberadaan  standar  komersial  yang murni. Oleh karena itu, penentuan pengaruh penge- ringan  terhadap  komponen sanshool andaliman diwakilkan  pada  dua  isomer  yang  paling  banyak ditemukan  di  andaliman  dan  spesies  Zanthoxylum lainnya,  yaitu α-sanshool (Wijaya,  2000;  Wijaya et al., 2018)  dan  hidroksi α-sanshool (Sugai et  al., 2005b; Yang, 2008).  Karena tidak tersedianya stan- dar α-sanshool secara  komersial,  maka  identifikasi puncak α-sanshool dilakukan  dengan  mencocokkan spektra  massa  yang  diperoleh  terhadap  spektra massa  yang  telah  dilaporkan  literatur  (Reyes-Trejo et  al., 2019)  serta mass  spectral  library  Wiley
W8N08 (John  Wiley  and  Sons,  Inc.,  Amerika Serikat).
Identifikasi hidroksi α-sanshool dapat dilakukan dengan  mencocokkan  spektra  massa  dan  waktu retensi dari standar hidroksi α-sanshool yang sudah diencerkan  hingga  0,2%  w/v  dan  disuntikan  ke dalam  GC-MS  dengan  parameter  yang  sama. Penyuntikan  standar  hidroksi α-sanshool ini  untuk mengonfirmasi  parameter  GC-MS  yang  digunakan pada  penelitian  ini  dapat  menganalisis  komponen sanshool .  Optimasi  parameter  GC-MS  mengguna- kan andaliman dari Pasar Senen karena terbatasnya sampel  uji  andaliman  yang  diperoleh  dari  petani  di Sumatera  Utara.  Namun  varietas  andaliman  dari Pasar Senen tidak diketahui.
Prediksi  konsentrasi  komponen sanshool dihi- tung  dengan  membandingkan  luas  area  masing- masing komponen dengan luas area standar internal 1%  w/v  (1,2,4-triklorobenzen)  yang  ditambahkan ketika  maserasi,  berdasarkan  persamaan  perhitu- ngan  konsentrasi  komponen  target berikut dan  kon- sentrasi  dilaporkan  dalam  basis  kering  guna  meng- hilangkan  pengaruh  kadar  air  antar  sampel  yang berbeda-beda,  dengan  memasukkan  parameter  A= konsentrasi  komponen  target  (µg/g  material);  B= komponen  target;  C=  volume  standar  internal  (mL); D=  berat  material  (g);  E=  konsentrasi  standar  inter- nal (g/mL) pada rumus berikut:
[ ] l      e l      e m g m  e i l g m ⁄ g g ⁄ (

## Analisis statistik
Hasil  analisis  perhitungan  komponen sanshool dari  setiap  ulangan  pengeringan  dianalisis  secara statistik  menggunakan  analisis  ragam  satu  arah (ANOVA)  dengan  perangkat  lunak  SPSS  Statistics v. 25 (IBM, Armonk, NY, Amerika Serikat).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kromatogram komponen sanshool Kromatogram  hasil  analisis  GC-MS  dengan parameter  yang  telah  dioptimasi  dapat  dilihat  pada Gambar 1. Kromatogram yang diperoleh menunjukkan bahwa metode ini dapat  menganalisis berbagai  komponen  volatil  dan  juga  komponen- komponen  yang  diduga  merupakan  senyawa sanshool beserta  isomernya.  Peningkatan  suhu oven  GC-MS  yang  lambat  (2°C/menit)  perlu dilakukan  untuk  memisah-kan  beberapa  komponen yang  bertumpuk  seperti  geranil  asetat  dan  metil sinamat.  Waktu  analisis  dapat  diperpendek  dengan menurunkan  suhu  mak-simum  oven  hingga  250°C karena  di  atas  suhu  tersebut  tidak  ada  komponen terdeteksi  yang  berpe-ngaruh  secara  sensori. Split ratio yang tinggi (1:10) diperlukan untuk
meningkatkan  ketinggian  puncak-puncak  komponen karena berdasarkan penelitian sebelumnya, penggunaan split ratio  rendah  seperti  1:100 menyebabkan  banyak  komponen  yang  sulit  untuk dideteksi  dengan  akurat  oleh  perangkat  lunak karena puncaknya yang sangat pendek.
Puncak α-sanshool diprediksi berada di puncak yang  tinggi  pada  waktu  retensi  sekitar  84  menit karena  memiliki  spektra  massa  yang  mirip  dengan yang  dilaporkan  sebelumnya  (Reyes-Trejo et  al., 2019)  serta  memiliki  ion  molekul  247  yang  cocok dengan berat molekul dari α-sanshool (rumus mole- kul  C 16 H 25 NO).  Walaupun  ada  beberapa  puncak kecil  lain  yang  memiliki  ion  molekul  yang  sama, puncak  yang  tinggi  pada  menit  ke-84  tersebut diprediksi  sebagai α-sanshool sesuai  dengan  lapo- ran terdahulu bahwa senyawa ini merupakan senya- wa sanshool yang  paling  banyak  ditemukan  pada andaliman  (Wijaya,  2000;  Wijaya et  al., 2018). Selain  itu,  puncak  hidroksi α-sanshool diprediksi berada  pada  waktu  retensi  sekitar  89  menit,  sama dengan  waktu  retensi  puncak  standar  hidroksi α- sanshool seperti  yang  terlihat  pada  Gambar  2. Andaliman  diprediksi  juga  mengandung  isomer- isomer sanshool lainnya  karena  menurut  kromato- gram  GC-MS  yang  diperoleh,  banyak  puncak- puncak  kecil  di  sekitar α-sanshool d n  hid ok i  α- sanshool. Akan tetapi, puncak-puncak ini tidak dapat teridentifikasi  tanpa  menggunakan  standar  murni atau metode analisis lain seperti  Resonansi Magnet Inti  (NMR)  jenis 1 H-NMR  and 13 C-NMR  (Wu et  al. 2020).
Injeksi  standar  hidroksi α-sanshool mengonfir- masi  prediksi  puncak  hidroksi α-sanshool pada waktu  retensi  sekitar  89  menit  seperti  terlihat  pada Gambar  2.  Spektra  massa  dari  puncak  standar hidroksi α-sanshool menunjukkan  ion  molekul  de- ngan  nilai  263  yang  cocok  dengan  berat  molekul dari  komponen  tersebut  karena  memiliki  rumus molekul  C 16 H 25 NO 2 . Puncak  tersebut  memiliki  per- sentase luas area sebesar 96,5%.
Komponen sanshool mungkin  mengalami  iso- merisasi  selama  proses  ekstraksi,  konsentrasi,  dan analisis karena gugus triena terkonjugasi yang dimi- liki  oleh  komponen sanshool tersebut  (Luo et  al. , 2022;  Yang,  2008).  Akan  tetapi,  hasil  analisis (Gambar  2)  terhadap  standar  yang  memiliki  ke- murnian  98%  menunjukkan  walau  metode  GC-MS menggunakan  suhu  tinggi  ketika  injeksi  dan  saat pemisahan,  tidak  ada  fenomena  isomerasi  kom- ponen sanshool secara substansial. Perlu dilakukan validasi lebih lanjut dan dibandingkan dengan meto- de  yang  sudah  banyak  digunakan  seperti  HPLC agar  keakurasian  metode  ini  dalam  menganalisis senyawa sanshool dapat dipastikan.
Selain  komponen sanshool ,  analisis  GC-MS ekstrak kloroform andaliman juga menunjukkan ada- nya 67 puncak pada kromatogram, namun hanya 42
h id o k i α - s a n s h o o l α - s a n s h o o l Ab u n d a n c e Retention Time  (min) h yd ro xy α -s a n s h o o l Ab u n d a n c e
Retention Time  (min)
h yd ro xy α -s a n s h o o l h id o k i α - s a n s h o o l
yang  berhasil  teridentifikasi.  Dua  komponen  volatil utama  pada  andaliman  adalah  limonen dan geranil asetat  seperti  yang  telah  dilaporkan  sebelumnya (Suharta et al., 2021).

## Kandungan sanshool andaliman kering
Semua metode pengeringan berhasil menurun- kan  kadar  air  dan  aktivitas  air  di  bawah  17,9%  dan 0,6 (Suharta et al., 2021). Kadar air 17,9% merupa- kan  batas maksimal  yang  disarankan  untuk  spesies Zanthoxylum (Charoensup et al., 2016) . Aktivitas air
di  bawah  0,6  dapat  mencegah  terjadinya  degradasi mikrobiologis (El Aita et al., 2019).
Hasil  analisis  ekstrak  kloroform  andaliman segar dan kering dengan  GC-MS dapat dilihat pada Gambar  3.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  pendeka- tan analisis dengan GC-MS dapat mendeteksi kebe- radaan  komponen sanshool pada  semua  sampel. Sesuai  prediksi, α-sanshool diikuti oleh  hid ok i  α- sanshool merupakan  dua  isomer sanshool yang paling  banyak  ditemukan  pada  andaliman.  Konsen- trasi α-sanshool yang  terekstrak  pada  penelitian  ini berkisar antara 0,69-1,07%.
Gambar 1.   Kromatogram hasil konfirmasi analisis ekstrak kloroform andaliman segar dengan split ratio 1:10 dan kenaikan suhu oven 2°C/menit
Figure 1.   Chromatogram  of  chloroform  extract  of  fresh  andaliman  as  a  confirmation,  with  split  ratio  1:10 and oven temperature increase at 2°C/min
Gambar 2. K om  og  m injek i    nd   hid ok i α- sanshool Figure 2 . Chromatogram of the standard solution of hydroxy α-sanshool
AS α - s a n s h o o l KM α - s a n s h o o l KJM α - s a n s h o o l KA α - s a n s h o o l KO α - s a n s h o o l KB α - s a n s h o o l
Keterangan: AS= andaliman segar, KM= kering matahari, KJM= kering jaring matahari (paranet), KA= kering angin, KO= kering oven, KB= kering beku
Note: AS= fresh andaliman, KM= sun dried andaliman, KJM= paranet-sun dried andaliman, K = oven dried andaliman, KB= freeze dried andaliman
Gambar 3. Total ion chromatogram (TIC) dari analisis GC-MS pada sampel andaliman Figure 3. Total ion chromatogram (TIC) of andaliman samples, analyzed by GC-MS
Waktu (menit)
Retention Time (min)
Ab u n d a n c e Ke lim p a h a n
6879.7 a 7994.9 a 8531 a 10765.2 a 10464 a 10721.5 a
644.9 b
550.2 b
606.9 b 823.2 b 773 b 798.2 b 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 16000 FA SD SSD SHD OD FD µg/ g ( Ba s is Ke ri n g ) α-sanshool hidroksi α-sanshool
AS                   KM                 KJM                  KA                   KO                   KB
Hasil  ini  lebih  rendah  daripada  kandungan hidroksi α-sanshool pada  perikarp  lada  jepang  ( Z. piperitum )  yang dilaporkan berkisar antara 1,4-3,1% (Sugai et  al., 2005b)  dan  perikarp  lada  Sichuan  (Z. bungeanum dan  Z. schinifolium )  yang  berkisar antara  3 –6% (Yang, 2008). Akan tetapi, kandungan α-sanshool dari  andaliman  jauh  di  atas  kandungan α-sanshool pada  perikarp  lada  jepang  yang  dilapor- kan  berkisar  antara  0,43-0,67%  (Sugai et  al., 2005b). Kandungan sanshool pada lada Jepang dan Sichuan yang dilaporkan sebelumnya, diperoleh dari hasil  analisis bagian perikarp saja, sedangkan pada penelitian  ini,  kandungan sanshool dilaporkan  ber- dasarkan  buah  utuh  andaliman  yang  mengandung biji  dan  perikarp.  Biji  pada  spesies Zanthoxylum dapat  mencapai  43-49%  dari  total  berat  buah  dan tidak  mengandung  komponen  volatil  dan  senyawa aktif  trigeminal  yang  substansial  (Sugai et  al., 2005b).  Selain  itu,  analisis  pada  kedua  laporan tersebut menggunakan metode HPLC yang mungkin dapat  mengakibatkan  perbedaan  konsentrasi san- shool yang dianalisis.
Konsentrasi  ambang  batas  deteksi  ( detection threshold ) α-sanshool secara  sensori  dilaporkan berkisar 1/3 dari konsentrasi ambang batas hidroksi α-sanshool. Selain itu, durasi sensasi trigeminal dari α-sanshool juga  dilaporkan  sekitar  dua  kali  durasi dari  hidroksi α-sanshool (Sugai et  al., 2005a) . Oleh karena  itu,  walaupun  konsentrasi α-sanshool pada andaliman  jauh  di  bawah  konsentrasi  hidroksi α-
sanshool pada lada Jepang dan Sichuan, andaliman diprediksi memiliki intensitas sensasi trigeminal yang serupa  karena α-sanshool yang  banyak  ditemukan pada  andaliman  memiliki  ambang  batas  deteksi yang  jauh  lebih  rendah  dan  durasi  yang  jauh  lebih lama daripada hidroksi α-sanshool . Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa san- shool mudah  mengalami  oksidasi  karena  memiliki gugus triena terkonjugasi dan mengalami degradasi yang  signifikan  ketika  terpapar  oleh  panas  dan radiasi  ultraviolet  yang  berkepanjangan  (Yang, 2008).  Komponen sanshool juga  mudah  mengalami isomerisasi,  hidrolisis,  dan  oksidasi  selama  penyim- panan  yang  mengakibatkan  produk  lada  Sichuan yang  sudah  lama  memiliki  intensitas  aroma  dan trigeminal  yang  lebih  rendah  daripada  produk  yang masih baru (Yang, 2008). Isomerisasi dapat mengu- bah sanshool yang dulunya memiliki sensasi trigemi- nal  menjadi all-trans isomer  yang  tidak  memiliki sensasi  trigeminal  (Bader et  al., 2014) . Pada penelitian  ini,  pengeringan  tidak  menunjukkan  peru- bahan konsentrasi komponen sanshool pada andali- man  secara  signifikan  seperti  yang  terlihat  dari Gambar  4.  Walaupun  pengeringan  cenderung mengakibatkan  kerusakan  komponen-komponen yang  ada  di  dalam  pangan,  hasil  analisis  ragam (ANOVA)  menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  yang signifikan  pada  kandungan α-sanshool dan  hidroksi α-sanshool dari semua sampel andaliman ( p - value > 0,05).
Keterangan:  AS=  andaliman  segar,  KM=  kering  matahari,  KJM=  kering  jaring  matahari,  KA=  kering  angin,  KO=  kering oven, KB= kering beku. Rata-rata ± SD dalam µg/g basis kering dari dua ulangan; a,b huruf yang sama pada masing- masing senyawa menandakan tidak ada perbedaan yang signifikan, p >0,05
Note: AS= fresh andaliman, KM= sun dried andaliman, KJM= paranet-sun dried andaliman, KO= oven dried andaliman, KB= freeze dried andaliman. Mean ± SD in µg/g dry basis from duplicate experiments; a,b the same superscript letter means no significant difference, p>0.05
Gambar 4.   Kuantitas relatif dari komponen aktif trigeminal andaliman Figure 4.   Relative quantity of trigeminal-active compounds of andaliman
µg/ g ( Dry Ba s is ) α-sanshool Hydroxy α-sanshool
J. Teknol. dan Industri Pangan Vol. 33(1): 77-86 Th. 2022
https://doi.org/10.6066/jtip.2022.33.1.77
Beberapa  pemikiran  yang  dapat  menjelaskan fenomena  ini  antara  lain  komponen sanshool ke- mungkinan ada yang terikat dengan matriks pangan atau komponen lain dalam pangan seperti gula yang membentuk  glikosida.  Beberapa  komponen  volatil dari  daun  lada  Jepang  dilaporkan  berikatan  dengan molekul  gula  yang  dapat  dilepaskan  selama  proses pengeringan  melalui  reaksi  hidrolisis  oleh  enzim yang  berada  di  dalam  matriks  pangan  itu  sendiri atau  oleh  asam  yang  ada  di  dalam  sel  (Jiang  dan Kubota,  2001;  de  Torres et  al., 2010).  Pengeringan juga  dapat  merusak  struktur  sel  dan  organel  se- hingga  melepaskan  lebih  banyak  komponen  yang dapat  terekstrak  oleh  pelarut  (de  Torres et  al., 2010).  Selain  itu,  keberadaan  air  dalam  sampel dapat  mengurangi  efisiensi  ekstraksi  oleh  pelarut non  polar  karena  mengurangi  interaksi  antara pelarut  yang  hidrofobik  dengan  komponen  target (Malekzadeh et  al., 2016).  Walaupun  pengeringan dapat  merusak  komponen sanshool, pembebasan komponen  ini  selama  pengeringan  diduga  dapat mengimbangi  laju  kerusakannya.  Oleh  karena  itu, penggunaan  andaliman  yang  sudah  dikeringkan sebagai material perisa andaliman akan lebih efisien karena  ekstraksi  komponen  volatil  dan sanshool dapat  berlangsung  dengan  lebih  baik,  selain ketersediaan bahan baku akan lebih terjamin.
Napitupulu et  al. (2020)  melaporkan  bahwa andaliman  kering  beku  dan  kering  oven  memiliki intensitas  sensasi  trigeminal  paling  tinggi  di  antara beberapa  metode  pengeringan  serta  memiliki  inten- sitas  yang  serupa  dengan  andaliman  segar.  Oleh karena itu, Napitupulu et al. (2020) merekomendasi- kan  pengeringan  oven  pada  suhu  54°C  untuk mengeringkan  andaliman  dengan  mempertimbang- kan  biaya  pengeringan  yang  jauh  lebih  ekonomis dibandingkan  dengan  pengeringan  beku.  Pada  pe- ngeringan  oven,  penentuan  suhu  yang  optimal  sa- ngat  penting  karena  suhu  pengeringan  oven  yang terlalu  tinggi  dapat  berakibat  penurunan  intensitas sensori  dari  bahan  pangan  karena  degradasi  oleh suhu tinggi (Ge et al., 2020). Akan tetapi, suhu yang terlalu  rendah  dapat  memperpanjang  lama  pengeri- ngan yang juga dapat merusak komponen aktif pada pangan  (Chua et  al., 2019).  Tingginya  intensitas sensasi  trigeminal  dari  andaliman  kering  beku  dan oven  disebabkan  oleh  tingginya  kadar α-sanshool (Gambar  4).  Walaupun  andaliman  kering  beku  me- miliki  kadar sanshool yang  tinggi,  besarnya  biaya pengeringan  ini  menjadi  penghalang  untuk  diterap- kan secara luas.
Pengeringan  angin  dilaporkan  sebelumnya memiliki  intensitas  sensasi  trigeminal  yang  paling rendah (Napitupulu et al., 2020), akan tetapi, peneli- tian ini menunjukkan bahwa andaliman kering angin memiliki  kandungan α-sanshool yang  tinggi.  Ren-
dahnya  intensitas  sensasi  trigeminal  dari  andaliman kering  angin  yang  dilaporkan  oleh  Napitupulu et  al. (2020)  dapat  disebabkan  oleh  degradasi sanshool selama  pengeringan  mengingat  andaliman  tersebut dikeringkan di luar ruangan yang tidak berpendingin udara  sehingga  kelembapannya  juga  tinggi.  Kelem- baban  yang  tinggi  tersebut  mencegah  evaporasi  air dari  matriks  andaliman  secara  efektif  dan  cepat yang  dapat  memicu  degradasi  enzimatik,  kimiawi, dan  mikrobiologis  pada  awal  pengeringan  dikarena- kan  aktivitas  dan  kadar  air  yang  masih  tinggi. Pengeringan  angin  memiliki  kelemahan  yaitu  durasi pengeringan  yang  sangat  panjang  sehingga  beresi- ko  mengalami  degradasi  yang  signifikan,  karena proses metabolisme yang terus berlangsung selama pengeringan  (Chua et  al., 2019)  dan  membutuhkan ruangan  berpendingin  udara  untuk  menurunkan kelembapan di sekitar andaliman agar menghasilkan produk stabil selama penyimpanan.
Pengeringan
matahari dilaporkan oleh Napitupulu et  al. (2020)  menghasilkan  intensitas trigeminal  yang  cukup  rendah  ketika  dibandingkan dengan  pengeringan  lain  selain  pengeringan  angin. Hal  yang  serupa  juga  terlihat  pada  penelitian  ini, pengeringan matahari memiliki kandungan sanshool yang  rendah.  Penggunaan  paranet  ini  diharapkan dapat  mengurangi  degradasi  komponen sanshool yang  sensitif  terhadap  radiasi  ultraviolet  (Yang, 2008) serta menghasilkan andaliman dengan warna yang  lebih  baik  (Téllez et  al., 2018).  Akan  tetapi, seperti  yang  terlihat  pada  Gambar  4,  tidak  ada peningkatan kadar sanshool yang signifikan dengan penggunaan  paranet.  Pengeringan  matahari  juga sangat  bergantung  kepada  kondisi  cuaca  ketika pengeringan  dilakukan,  hujan  atau  cuaca  yang berawan  dapat  menggagalkan  proses  pengeringan. Selain  itu,  pengeringan  matahari  dapat  menyebab- kan  andaliman  terkontaminasi  oleh  material  yang berasal  dari  lingkungan seperti serangga, tikus, dan burung (Orphanides et al., 2015).
Dengan  mempertimbangkan  karakteristik  fisik, sensori, dan komponen volatil dari andaliman kering yang  sudah  dilaporkan  sebelumnya  (Suharta et  al., 2021) , kandungan sanshool , dan  durasi  pengeri- ngan,  pengeringan  oven  merupakan  metode  yang disarankan untuk diterapkan dalam memperpanjang umur  simpan  andaliman.  Napitupulu et  al. (2020) juga menyarankan pengeringan oven sebagai meto- de  pengeringan  andaliman  karena  biaya  dan  waktu pengeringan  yang  jauh  lebih  efisien  dibandingkan pengeringan beku. Walaupun andaliman kering tidak memiliki  profil  sensori  yang  serupa  dengan  andali- man segar, namun hasil andaliman kering ini masih dapat  diterima  oleh  para  panelis  (Suharta et  al., 2021).

## KESIMPULAN
GC-MS  dapat  digunakan  untuk  menganalisis komponen sanshool sehingga  dapat  mempercepat proses analisis senyawa pembentuk cita rasa anda- liman  secara  utuh.  Pengeringan  tidak  mengakibat- kan  perubahan  yang  signifikan  terhadap  kuantitas komponen sanshool dari  andaliman.  Pengeringan oven  merupakan  metode  pengeringan  yang  ideal untuk  memperpanjang  umur  simpan  andaliman  ka- rena  menghasilkan  andaliman  kering  dengan  kuan- titas  komponen sanshool yang  serupa  dalam  waktu yang lebih cepat  dibandingkan dengan pengeringan lainnya.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Dana  penelitian  dari  Kementerian  Riset  dan Pendidikan  Tinggi  melalui  program World  Class Research 077/SP2H/LT/DRPM/2021 .

## DAFTAR PUSTAKA
Bader  M, Stark TD,  Dawid  C,  Lösch  S,  Hofmann T. 2014.  All- trans -Configuration  in Zanthoxylum alkylamides  swaps  the  tingling  with  a  numbing sensation  and  diminishes  salivation.  J  Agric Food  Chem  62:  2479-2488. https://doi.org/10. 1021/jf500399w
Charoensup  R,  Duangyod  T,  Phuneerub  P, Singharachai  C.  2016.  Pharmacognostic  speci- fication  of Zanthoxylum  limonella (Dennst.) Alston:  Fruits  and  seeds  in  Thailand.  J  Adv Pharm  Technol  Res  7:  134. https://doi.org/ 10.4103/2231-4040.191421
Chen  K,  Zhang  F,  Kan  J.  2012.  Characterization  of chlorophyll  breakdown  in  green  prickleyashes ( Zanthoxylum  schinifolium Zucc.)  during  slow drying. Eur Food Res Technol 234: 1023 –1031. https://doi.org/10.1007/s00217-012-1718-7
Chua  LYW,  Chong  CH,  Chua  BL,  Figiel  A.  2019.
Influence  of  drying  methods  on  the  antibac- terial, antioxidant and essential oil volatile com- position  of  herbs:  a  Review.  Food  Bioprocess Technol 12: 450-476. https://doi.org/10.1007/s1 1947-018-2227-x
de Torres C, Díaz-Maroto MC, Hermosín-Gutiérrez I, Pérez-Coello  MS.  2010.  Effect  of  freeze-drying and  oven-drying  on  volatiles  and  phenolics composition of grape skin. Anal Chim Acta 660: 177-182. https://doi.org/10.1016/j.aca.2009.10. 005
El  Aita  I,  Breitkreutz  J,  Quodbach  J.  2019.  On- demand  manufacturing  of  immediate  release levetiracetam  tablets  using  pressure-assisted
microsyringe  printing.  Eur  J  Pharm  Biopharm 134:  29-36. https://doi.org/10.1016/j.ejpb.2018. 11.008
Ge S, Chen Y, Ding S, Zhou H, Jiang L, Yi Y, Deng F,  Wang  R.  2020.  Changes  in  volatile  flavor compounds  of  peppers  during  hot  air  drying process  based  on  headspace-gas  chromato- graphy-ion mobility spectrometry (HS-GC-IMS). J Sci Food
Agric 100: 3087-3098.
https://doi.org/10.1002/jsfa.10341
Hao D, Wen X, Liu L, Wang L, Zhou X, Li Y, Zeng X, He G, Jiang X. 2019. Sanshool improves UVB- induced  skin  photodamage  by  targeting  JAK2/ STAT3-dependent  autophagy.  Cell  Death  Dis 10: 1-13. https://doi.org/10.1038/s41419-018-12
61-y
Jiang  L,  Kubota  K.  2001.  Formation  by  mechanical stimulus  of  the  flavor  compounds  in  young leaves of Japanese pepper ( Xanthoxylum pipe- ritum DC.). J Agric Food  Chem 49: 1353-1357. https://doi.org/10.1021/jf001166m
Jie  Y,  Li  S,  Ho  C-T.  2019.  Chemical  composition, sensory properties and  application  of  Sichuan pepper  ( Zanthoxylum  genus ).  Food  Sci  Hum Wellness  8:  115-125. https://doi.org/10.1016/j. fshw.2019.03.008
Kim SC, Moon MY, Lee HY, Kim J, Chang MS, Cha J.  2021.  Skin  care  benefits  of  bioactive  com- pounds  isolated  from Zanthoxylum  piperitum DC.  (Rutaceae).  Trop  J  Pharm  Res  18:  2385- 2390.
Li  R,  Lu  F,  Sun  X,  He  L,  Duan  H,  Peng  W,  Wu  C. 2022.  Development  and  in  vivo  Evaluation  of Hydroxy- α-Sanshool Intranasal Liposomes as a Po en i l  Remedi l  T e  men   fo    lzheime ’ Disease.  Int  J  Nanomedicine  17:  185-201. https://doi.org/10.2147/IJN.S339979
Li  RL,  Zhang  Q,  Liu  J,  Sun  JY,  He  LY,  Duan  HX, Peng  W,  Wu  CJ.  2020.  Hydroxy- α-sanshool possesses  protective  potentials  on  H 2 O 2 -stimu- lated  PC12  cells  by  suppression  of  oxidative stress-induced  apoptosis  through  regulation  of PI3K/Akt  Signal  Pathway.  Oxid  Med  Cell Longev  2020: 3481758. https://doi.org/10.1155/ 2020/3481758
Liu  Y, Meng X,  Sun  L, Pei K,  Chen L, Zhang S, Hu M.  2022.  Protective  effects  of  hydroxy- α- sanshool  from  the  pericarp  of Zanthoxylum bungeanum Maxim.  On  D-galactose/AlCl3- ind ced   lzheime ’   di e  e-like  mice  via Nrf2/HO-1 signaling pathways. Eur J Pharmacol 914:  174691. https://doi.org/10.1016/j.ejphar.20 21.174691
Luo  J,  Ke  J,  Hou  X,  Li  S,  Luo  Q,  Wu  H,  Shen  G, Zhang  Z.  2022.  Composition,  structure  and  fla- vor  mechanism  of  numbing  substances  in Chinese  prickly  ash  in  the  genus Zanthoxylum : A review. Food Chem 373: 131454.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2021.131454
Malekzadeh  M,  Abedini  Najafabadi  H,  Hakim  M, Feilizadeh  M,  Vossoughi  M,  Rashtchian  D. 2016.  Experimental  study  and  thermodynamic modeling for determining the effect of non-polar solvent  (hexane)/polar  solvent  (methanol)  ratio and  moisture  content  on  the  lipid  extraction efficiency  from  Chlorella  vulgaris.  Bioresour Technol 201: 304-311. https://doi.org/10.1016/j. biortech.2015.11.066
Napitupulu FIR, Wijaya CH, Sulistiyani, Prangdimurti E,  Akyla  C,  Yakhin  LA,  Indriyani  S.  2020. Comparison  of  several  processing  methods  in preserving  the  flavor  properties  of  andaliman ( Zanthoxylum  acanthopodium DC.)  fruit.  J  Eng Technol  Sci  52:  399-412. https://doi.org/10.561 4/j.eng.technol.sci.2020.52.3.7
Orphanides  A,  Goulas  V,  Gekas  V.  2015.  Drying Technologies:  Vehicle  to  high-quality  herbs. Food  Eng  Rev 8:  164-180. https://doi.org/10.
1007/s12393-015-9128-9
Reyes-Trejo  B,  Morales-Hernández  MN,  González- Anduaga  GM,  Balderas-López  JL,  Tavares- Carvalho  JC,  Navarrete  A.  2019.  Evidence  for Involvement of TRPV1 receptors and potassium ch nnel   in   he   eiz  e   ind ced  by  α- sanshool.  Planta  Medica  Int  Open  6:  e23-e27. https://doi.org/10.1055/a-0871-2496
Sugai  E,  Morimitsu  Y,  Iwasaki  Y,  Morita  A, Watanabe  T,  Kubota  K.  2005a.  Pungent  qua- lities  of  sanshool-related  compounds  evaluated by  a  sensory  test  and  activation  of  rat  TRPV1. Biosci  Biotechnol  Biochem  69:  1951-1957. https://doi.org/10.1271/bbb.69.1951
Sugai E, Morimitsu Y, Kubota K. 2005b. Quantitative analysis  of  sanshool  compounds  in  Japanese pepper  ( Xanthoxylum  piperitum DC.)  and  their pungent characteristics. Biosci Biotechnol
Biochem  69:  1958-1962. https://doi.org/10.127 1/bbb.69.1958
Suharta S, Hunaefi D, Wijaya CH. 2021. Changes in volatiles  and  aroma  profile  of  andaliman ( Zanthoxylum acanthopodium DC.) upon various  drying  techniques.  Food  Chem  365: 130483. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.202 1.130483
Téllez  MC,  Figueroa  IP,  Téllez  BC,  Vidaña  ECL, Ortiz  AL.  2018.  Solar  drying  of  Stevia  ( Rebau- diana  Berton i)  leaves  using  direct  and  indirect technologies. Sol Energy 159: 898-907. https://doi.org/10.1016/j.solener.2017.11.031
Wang  L, Fan W,  Zhang  M,  Zhang  Q,  Li  L, Wang  J,
Zhu  L,  Wei  D,  Peng  W,  Wu  C.  2019.  Antiobe- sity, regulation of lipid metabolism, and attenua- tion  of  liver  oxidative  stress  effects  of  hydroxy- α-sanshool isolated from Zanthoxylum  bungea- num on  high-fat  diet-induced  hyperlipidemic rats.  Oxid  Med  Cell  Longev  2019:  5852494. https://doi.org/10.1155/2019/5852494
Wijaya  CH,  Napitupulu  FI,  Karnady  V.  2018.  A review of the bioactivity and flavor properties of the  ex o ic   pice  “ nd lim n”  ( Zanthoxylum acanthopodium DC.).  Food  Rev  Int  35:  1-19. https://doi.org/10.1080/87559129.2018.1438470
Wijaya  CH.  2000.  Isolasi  dan  identifikasi  senyawa trigeminal  aktif  buah  andaliman  ( Zanthoxylum acanthopodium DC). Hayati J Biosci 7: 91-95.
Wu Z, Wang W, Sun L, Wei A, Wang D. 2020. Accu- mulation  and  biosynthesis  of  hydroxyl- α- sanshool  in  varieties  of Zanthoxylum  bungea- num Maxim. by HPLC-fingerprint and transcrip- tome  analyses.  Ind  Crops  Prod  145:  111998. https://doi.org/10.1016/j.indcrop.2019.111998
Yang  X.  2008.  Aroma  constituents  and  alkylamides of red and green huajiao ( Zanthoxylum bungea- num and Zanthoxylum  schinifolium ).  J  Agric Food  Chem  56:  1689-1696. https://doi.org/10. 1021/jf0728101
Zeng  X,  Li  X,  Wang  X,  Wen  X,  Jiang  X.  2019.  The effect  of Zanthoxylum  bungeanum maxim ex   c  on c ow’  fee :   do ble-blind, split-face trial.  Dermatol  Ther  32:  e13079. https://doi.org/ 10.1111/dth.13079
Zhang  M,  Xie  M,  Wei  D,  Wang  L,  Hu  M,  Zhang  Q, He  Z,  Peng  W,  Wu  C.  2019.  Hydroxy- α- sanshool  isolated  from Zanthoxylum  bungea- num attenuates  learning  and  memory  impair- ments in scopolamine-treated mice. Food Funct 10:  7315-7324. https://doi.org/10.1039/C9FO00

## 045C
Zhu L, Wang L, Chen X, Peng W, Liu Y, Yu L, Liang F,  Wu  C.  2019.  Comparative  studies  on  flavor substances  of  leaves  and  pericarps  of Zantho- xylum  bungeanum Maxim.  at  different  harvest periods.  Trop  J  Pharm  Res  18:  279-286. https://doi.org/10.4314/tjpr.v18i2.9