## Optimasi  Formula  Gel  Serbuk  Getah Ashitaba ( Angelica keiskei Koidzumi)  dan  Uji  Aktivitas  Terhadap  Lama Penyembuhan Luka Eksisi pada Kelinci

## Dzun Haryadi Ittiqo, Abdul Rahman Wahid
Program Studi Diploma 3 Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Mataram, Jl. K. H. Ahmad Dahlan No. 1, Pagesangan, Mataram 83127
E-mail: dzun.haryadi@gmail.com

## Abstrak
Luka  eksisi  adalah  luka  yang  diakibatkan  terpotongnya  jaringan  oleh  goresan  benda  tajam.  Senyawa  golongan  flavonoid  telah dibuktikan secara pre klinis bisa mempercepat penyembuhan luka. Ashitaba mengandung senyawa golongan flavonoid. Sehingga diperkirakan  memiliki  potensi  sebagai  obat  penyembuh  luka.  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental,  getah  ashitaba dibuat sediaan serbuk kering. Optimasi formula gel serbuk getah ashitaba menggunkan metode D-optimal design dengan Software Design Exspert versi 7.1.5. Komponen yang dioptimasi adalah formula standar gel basis natrium karboksimetil selulosa (Na-CMC) dan propilenglikol, respon yang dinilai adalah daya lekat, daya sebar dan pH. Formula optimum yang didapatkan diuji stabilitas. Selanjutnya dilakukan uji efektivitas formula optimum gel terhadap lama penyembuhan luka eksisi pada kelinci. Hewan uji dibagi dalam  tiga  kelompok  penelitian  yaitu  kelompok  kontrol  negatif  (basis  gel),  kontrol  positif  (betadin  salap  10%)  dan  perlakuan menggunakan formula optimum gel serbuk getah ashitaba. Punggung kelinci dibuat luka eksisi sepanjang 3 cm, luka diolesi sampel uji  sebanyak  tiga  kali  sehari  selama  7  hari. Pengamatan  dilakukan  dengan  mengukur  panjang  luka  selama  perlakuan.  Data  diuji statistik dengan metode ANOVA dilanjutkan dengan uji LSD (Last significant different) . Berdasarkan hasil penelitian, kombinasi CMC-Na  dan  propilenglikol  mempengaruhi  pH,  daya  sebar  dan  daya  lekat.  Hasil  penelitian  menunjukkan  porsentase  formula optimum bahan teroptimasi gel  serbuk getah ashitaba  yang dihasilkan untuk CMC-Na dan Propilenglikol masing-masing adalah 4,617% dan 10,383% dengan parameter nilai mutu fisik untuk pH 6,08, daya sebar 5,85 cm 2 , daya lekat 90,44detik. Gel menunjukkan stabiilitas selama proses penyimpanan serta berpotensi sebagai alternatif obat luka eksisi
Kata kunci: gel, getah ashitaba, luka eksisi, flavonoid

## 1. Pendahuluan
Salah  satu  jenis  luka  adalah  luka  eksisi,  luka  eksisi adalah  luka  yang  diakibatkan  terpotongnya  jaringan  oleh goresan  benda  tajam.  Prevalensi  cedera  luka  terbuka  di Indonesia  tercatat  sebesar  25,4%  dan  paling  banyak  di jumpai  pada  kelompok  umur  25  sampai  34  tahun  sebesar 32  %.  Tujuan  utama  penatalaksanaan  luka  adalah  untuk mencapai  penyembuhan  yang  cepat  dengan  fungsi  yang optimal dan hasil yang bagus. Umumnya penanganan luka dengan mencegah infeksi dan trauma selanjutnya [1].
Bentuk  sediaan  dengan  rute  topikal  sangat  disukai, salah satunya adalah gel. Sediaan gel mempunyai beberapa sifat yang disukai seperti alirannya yang tiksotropik, tidak lengket, mudah menyebar, mudah dibersihkan, kompatibel dengan  beberapa  eksipien  dan  larut  dalam  air  [2].  Obat topikal  sintesis  yang  umum  digunakan  pada  luka  insisi adalah kompres iodium povidon  atau nitras-argenti 0,5 % yang  berperan  sebagai  bakteriostatik  untuk  semua  kuman [3].
Variasi  tanaman  sangat  banyak  di  alam  yang  dapat dimanfaatkan  atau  telah  dimanfaatkan  oleh  masyarakat, baik sebagai bahan makanan maupun sebagai bahan obat- obatan,  salah  satunya  tanaman  Ashitaba.  Ashitaba ( Angelica  keiskei Koidzumi)  mirip  dengan  seledri  hanya
keragaman tanamannya lebih tinggi di bandingkan dengan seledri,  tanaman ashitaba berasal  dari  pulau  Hachijo Jepang,  tumbuh  didaerah  tandus,  berbatu  dan  berpasir. Menurut  sejarah  orang  Jepang,  Ashitaba  merupakan tanaman yang bermanfaat untuk panjang umur yang dulu- dulu dicari oleh kaisar pertama china dari dinasti Chin [4]
Tanaman ini tumbuh baik di Indonesia, salah satunya di  Desa  Sembalun  Kecamatan  Sembalun  Kabupaten Lombok  Timur  Nusa  Tenggara  Barat.  Sembalun  adalah Desa  berada  di  kaki  Gunung  Rinjani  Lombok  yang memiliki  ketinggian 1200  mdpl. Tingkat  kesuburan, suhu dan  kealamian  tanah  di  desa  Sembalun  menyebabkan tanaman ashitaba tumbuh dengan baik dan kasiat tanaman tersebut  tetap  terjaga.  Masyarakat  Sembalun  sudah  lama membudidayakan  tanaman ashitaba sebagai  komoditi pertanian,  yang  dibutuhkan  para  petani  adalah  getahnya untuk  dijual  sebagai  hasil  panen.  Getah ashitaba mengandung  senyawa  kalkon  yang  merupakan  golongan senyawa flavonoid. Senyawa golongan flavonoid, saponin dan  tannin  telah  dibuktikan  secara  pre-klinis  bisa mempercepat penyembuhan luka. Menurut hasil penelitian dari Priandari dkk pada tahun 2015 meneliti tentang getah pohon  jarak  dengan  kandungan  flavonoid  dibuat  sediaan
topikal  ditujukan  untuk  mengetahui  lama  penyembuhan luka  eksisi  pada  mencit.  Disimpulkan  bahwa  rata-rata penyembuhan  luka  setelah  diberi  getah  pohon  jarak  lebih cepat  7  hari  dibandingkan  dengan  perawatan  luka menggunakan NaCl 0,9 % [1]).
Berdasarkan  kandungan  kimia  yang  terkandung dalam  getah  ashitaba  diperkirakan  memiliki  potensi  yang sama dengan zat aktif lainnya yang telah dibuktikan secara pre  klinis  sebagai  obat  penyembuh  luka  terbuka  maupun luka  sayatan,  maka  peneliti  melakukan  penelitian  tentang optimasi formula gel serbuk getah ashitaba dan uji aktivitas terhadap lama penyembuhan luka eksisi pada kelinci.

## 2. Bahan dan Metode
2.1 Pengambilan  dan  Preparasi Sampel  Getah  Tanaman Ashitaba
Tanaman  ashitaba  diperoleh  dari  Desa  Sembalun, Kabupaten  Lombok  Timur,  Nusa  Tenggara  Barat. Penyadapan  getah ashitaba dilakukan  pada  waktu  pagi antara  jam  06.00-08.00  WITA.  Proses  penyadapan dilakukan dengan menorehkan alat sadap yang terbuat dari bahan stainless  steel pada  kulit  batang  tanaman  dengan kedalaman  torehan  antara  1-2  mm.  Getah  yang  keluar segera  ditampung  dalam  wadah stainless  steel [5].  Getah hasil  penyadapan  diolah  lebih  lanjut  dengan  penambahan natrium  metabisulfat  0,7%  sebanyak  4  kali  jumlah  getah, lalu diaduk merata. Campuran emulsi getah berwarna putih susu  selanjutnya  dituang  secara  merata  pada  wadah stainless  steel dengan  ketebalan  ±  1  cm,  lalu  dikeringkan dalam  oven  pada  suhu  ±  55ºC.  Getah  kering  lalu  digerus dan diayak dengan ayakan 40 mesh [6].

## 2.2 Optimasi Formula Gel Serbuk Getah Ashitaba
Formula  standar  yang  digunakan  adalah  formula standar gel basis natrium karboksimetil selulosa (Na-CMC) dengan  komponen  gliserin,  propilenglikol  dan  akuades. Optimasi formula menggunakan design exspert versi 7.1.5. Komponen  yang  dioptimasi  adalah  natrium  karboksimetil selulosa  (Na-CMC)  dan    propilenglikol,  parameter  atau respon yang dinilai  adalah daya lekat, daya sebar dan pH [7].

## 2.3 Pembuatan Gel Serbuk Getah Ashitaba
Pembuatan gel dilakukan dengan  memasukkan basis gel Na-CMC ke dalam mortar lalu ditambahkan 10 mL air panas (suhu 70ºC) kemudian digerus. Sebanyak 2 g serbuk getah ashitaba ditambahkan lalu digerus sampai campuran homogen. Gliserin dan propilenglikol dimasukkan sambal diaduk,  dan  ditambahkan  sisa  air  panas  ad  20  mL. Campuran digerus sampai homogeny dan terbentuk gel [8].

## 2.4 Uji Sifat Fisik Sediaan

## Uji pH
Sebanyak 100 mg formula gel dimasukkan dalam labu ukur 50 mL selanjutnya ditambahkan akuades sampai tanda
tera  (konsentrasi  0,2%).  Nilai  pH  gel  diukur  dengan  pH meter,  yang  diukur  berdasrakan  kontak  sel  elektroda  dan larutan  sediaan  selama  1  menit.  Percobaan  ini  bertujuan untuk  memeriksa  netralitas  gel  antar batch yang  berbeda [9].

## Daya Sebar
Sebanyak 0,5 g formula gel diletakkan di pusat antara 2  lempeng  gelas,  dimana  lempeng  sebelah  atas  beratnya ditimbang terlebih dahulu  kemudian diletakkan diatas  gel dan dibiarkan selama 1 menit. Diatas lempengan kemudian diberikan beban seberat 150 g, lalu dibiarkan 1 menit dan diukur  diameter  sebarnya.  Pengamatan  dilakukan  setiap minggu selama 4 minggu [10].

## Daya Lekat
Gelas objek ditandai 4x2,5 cm, kemudian 0,25 g gel diletakkan dititik tengah luasan tersebut dan ditutup dengan gelas objek lain, lalu diberikan beban 1 kg diberikan selama 5 menit. Kedua gelas objek yang telah saling melekat satu sama lain dipasang pada alat uji yang diberi beban 80 g, dan dicatat  waktu  yang  diperlukan  hingga  terpisahnya  dua objek gelas tersebut. Pengamatan dilakukan setiap minggu selama 4 minggu [10].

## 2.5 Uji  Aktivitas  Lama  Penyembuhan  Luka  Formula  Gel
Optimum.
Punggung  kelinci  terlebih  dahulu  dianestesi  lokal menggunakan  etil  klorida  spray  lalu  dibuat  luka  eksisi menggunakan  pisau  bedah.  Masing-masing  area  dibuat luka dengan ukuran 3 cm dengan kedalaman 0,3 cm [11]. Hewan  uji  selanjutnya  dibagi  menjadi  tiga  kelompok dengan perlakuan sebagai berikut:
- Kelompok 1: Luka di beri formula optimum gel serbuk getah ashitaba
- Kelompok 2: luka diberi Betadine salep 10%
- Kelompok 3: Luka diberi basis gel
- Kelompok 4: Tidak diberikan perlakuan apa-apa. Masing-masing kelompok direplikasi sebanyak 3 kali, area  luka  diolesi  sampel  uji  3  kali  sehari  selama  7  hari. Pengamatan  dilakukan  dengan  mengukur  panjang  luka selama perlakuan.

## 2.6 Uji  Stabilitas  Formula  Optimum  Dengan  Metode Cyling Test
Uji stabilitas dilakukan untuk mengetahui perubahan fisik  yang  menunjang  kualitas  sediaan  gel  serbuk  getah ashitaba. Gel disimpan pada suhu 10ºC selama 24 jam lalu dikeluarkan  dan  ditempatkan  pada  suhu  30ºC  selama  24 jam (1 siklus). Percobaan diulang sebanyak 3 siklus [12].

## 3. Hasil dan Pembahasan
Sampel getah ashitaba setelah diberi perlakuan sesuai prosedur  sampai  dihasilkan  serbuk  getah  yang  halus, selanjutnya  dilakukan  pemeriksaan  fisik  yang  meliputi bentuk dan warna seperti terlihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Karakteristik serbuk getah ashitaba No Parameter Pemeriksaan Hasil Pengamatan 1 Bentuk Serbuk dan agak berbutir-butir 2 Warna Putih
Tahap  berikutnya  pembuatan  gel  dengan  zat  aktif serbuk  getah ashitaba .  Bahan  pembentuk  gel  yang  biasa digunakan  adalah  karbopol,  NA-CMC  dan  HPMC.  Pada penelitian  ini  Na-CMC  digunakan  sebagai  basis  gel. Komponen lain dalam formula gel antara lain gliserin yang berfungsi sebagai humektan dan menjaga stabilitas sediaan, propilen  glikol  untuk  meningkatkan  kelarutan,  akuades digunakan  sebagai  pelarut  sekaligus  fase  air.  Akuades adalah  pelarut  yang  umum  digunakan  dalam  sediaan semisolida  karena  bersifat  netral,  tidak  berwarna,  tidak berbau, kompatibel dengan hampir semua bahan tambahan, dan  dapat  membantu  masuknya  bahan  aktif  dengan  cara menghidrasi  stratum  korneum.  Sedangkan  propilen digunakan  sebagai  humektan  atau  untuk  mempercepat kelarutan dan sebagai pelarut campur sehingga tidak terjadi pengendapan [13].
Sediaan gel dibuat dengan teknik pencampuran, yakni dilarutkan  CMC-Na  dilarutkan  terlebih  dahulu  agar terbentuk  masa  gel  kemudian  diaduk  hingga  homogen, ditambahkan  serbuk,  gliserin,  propilenglikol  dan  sisa  air dengan pengadukan secara kontinyu hingga terbentuk gel. Optimasi formula gel menggunakan Design Expert dengan metode D-Optimal . Sebelumnya ditentukan porsentase aras bawah  dan  aras  atas  komponen  teroptimasi  berdasarkan range penggunaan  sediaan  topikal  yang  terdapat  pada Handbook of Pharmaceutical Excipients . Nilai persentase terendah  sampai  tertinggi  komponen  penyusun  gel  pada penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Persentase aras bawah dan aras atas pembawa gel serbuk getah ashitaba
Presentase Aras Bawah dan Aras Atas Pembawa CMC-Na Propilen Glikol 3% - 6% 9% -12%
Nilai persentase terendah sampai tertinggi dimasukan ke  dalam design dan  didapatkan  sebanyak  13 run . Selanjutnya dibuat dengan respon meliputi pH, daya sebar dan  daya  lekat  (Tabel  3).  Masing-masing  formula  dibuat dengan  bobot  25  g  dengan  komposisi  bahan  teroptimasi Na-CMC  dan  propilenglikol  ditambahkan  serbuk  getah ashitaba  10%,  gliserin  10%  dan  aquadest  hingga  100%. Kemudian dilanjutkan  uji respon  meliputi pH, daya  sebar dan daya lekat.

## 3.1 Hasil Uji pH
Uji  pH  dilakukan  untuk  melihat  tingkat  keasaman sediaan  gel  guna  menjamin  gel  yang  dihasilkan  tidak mengiritasi  kulit.  Nilai  pH  suatu  sediaan  topikal  harus sesuai  dengan  pH  kulit  yaitu  4,5-6,5.  apabila  pH  sediaan <4,5 kulit akan mengiritasi, sedangkan apabila pHnya >6,5 kulit akan jadi kering  (14). Hasil  uji pH pada 13 formula yang  dihasilkan design berada  pada  rentang  yang dipersyaratkan.  Respon  PH  yang  dihasilkan  diuji normalitas nya dengan Design. Analisis kurval normal plot of  residu menunjukan  bahwa  data  terdistribusi  normal seperti tampak pada Gambar 1.
Gambar 1. Kurva Normal Plot of Residuals pH
Tabel 3. Desain dan hasil respon formula percobaan gel serbuk getah ashitaba
Run Presentase (%) Respon Na-CMC Propilenglikol pH Daya sebar (cm 2 ) Daya lekat (detik) 1 4.50 10.50 6.2 9.62 61.30 2 4.50 10.50 6.2 4.81 153.80 3 6.00 9.00 6 4.81 131.20 4 4.10 10.90 6.3 4.15 83.80 5 5.60 9.40 5.9 3.46 170.20 6 3.80 11.20 6.1 5.62 52.67 7 3.00 12.00 6.3 8.55 18.20 8 6.00 9.00 6 4.71 28.50 9 5.20 9.80 5.8 5.41 170.70 10 6.00 9.00 5.9 4.91 163.90 11 3.00 12.00 6 6.83 17.34 12 3.00 12.00 6.1 9.62 10.20 13 3.40 11.60 6.3 5.51 43.30 Rata-rata 6.08 6 85.00
Kurva  dibuat  dengan  mem- plot -kan  data normal  % probability  dengan internally  studentized  residuals yang merupakan nilai simpangan baku antara nilai respon hasil prediksi  dengan  nilai  observasi. Internally  studentized residuals diperoleh  dengan  cara  membagi  antara  nilai selisih  respon  observasi  dan  respon  prediksi  dengan  nilai standar deviation dari  selisih  kedua  respon  tersebut. Berdasarkan  Gambar  1,  terlihat  bahwa  data  menyebar disekitar garis diagonal dan mengikuti arah garis diagonal yang  menandakan  bahwa  data  terdistribusi  normal sehingga  dapat  dilanjutkan  uji  ANOVA  pada Design Expert 7.1.5 . (Tabel 4).
Tabel 4. Hasil analisis ANOVA Design Expert 7.1.5 respon pH Source p-value Kemaknaan Model ( linear mode) <0,0220 Significant Lack of fit test 0,3069 Not Significant
Berdasarkan  hasil  analisis  ANOVA  pada  Tabel  4, diketahui  bahwa  model  yang  tepat  untuk  menerangkan respon pH adalah linear model . Hal ini terlihat dari p-value model linear yaitu 0,0220 (<0,05) menunjukkan hasil yang signifikan. Hasil ini diperkuat dengan nilai lack of fit test (ketepatan  model)  sebesar  0,3069  (>0.05)  yang  berarti tidak ada perbedaan bermakna antara data observasi dengan data  hasil  prediksi  dari  model  yang  dibuat.  Profil  variasi dua komponen terhadap respon pH dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Campuran 2 komponen pH
Persamaan Least  Sygnificant  Different ( pseudo components ) yang diperoleh adalah persamaan linear:
Y 1 = +5,96(A) +6,13 (B) + 0,34(A+B) ...................   (1)
dimana,
Y1   = pH A = komposisi Na-CMC
B = komposisi Propilenglikol
Persamaan  (1)  menunjukkan  bahwa  masing-masing komponen  memberikan pengaruh yang positif yaitu dapat meningkatkan  persentase  pH.  Propilenglikol  memberikan pengaruh  paling  tinggi  meningkatkan  persentase  pH dengan nilai koefisien yaitu +6,13 dan diikutioleh CMC-Na dengan  nilai  koefisien  +5,96,  selain  itu  campuran  kedua dapat mempengaruhi PH dengan nilai koefisien +0,34.

## 3.2 Hasil Uji Daya Sebar
Daya  sebar  merupakan  parameter  penting  dalam penilaian  kemampuan  gel  untuk  menyebar.  Sediaan  gel dapat dikatakan memenuhi sifat mekanik yang optimal, jika sediaan mudah dikeluarkan dari wadah dan memiliki daya sebar  yang  baik  pada  kulit  ketika  sediaan  diaplikasikan sehingga dapat memberikan kenyamanan penggunaan oleh konsumen [15]. Daya sebar gel diperlihatkan oleh diameter dan  luas  sebar  gel  terhadap  beban  yang  ditambahkan. Spesifikasi diameter daya sebar yaitu 5-7 cm [15]. Respon daya  sebar  di  uji  normalitas  mnggunakan Design Expert7.1.5.
Gambar 3. Kurva normal plot of residual respon daya sebar
Berdasarkan  kurva  tersebut,  terlihat  bahwa  data menyebar disekitar garis diagonal dan mengikuti arah garis diagonal yang menandakan bahwa data terdistribusi normal sehingga  dapat  dilanjutkan  uji  ANOVA  pada Design Expert 7.1.5 (Tabel 5).
Tabel 5. Hasil analisis ANOVA Design Expert 7.1.5 respon daya sebar Source p-value Kemaknaan Model ( linear mode) 0,0292 Significant Lack of fit test 0,5759 Not Significant
Berdasarkan  hasil  analisis  ANOVA  pada  tabel  5 diketahui bahwa model Quadratic merupakan model yang dapat  menerangkan  respon  daya  sebar  gel,  hal  ini  terlihat dari nilai p-value yaitu 0,0292 (<0,05) menunjukkan hasil yang signifikan. Hasil lack of fit test sebesar 0,5759 (>0.05) yang  berarti  tidak  ada  perbedaan  bermakna  antara  data observasi  dengan  data  hasil  prediksi  dari  model  yang dibuat.  Hasil  pengujian  daya  sebar  kemudian  dianalisis menggunakan Design Expert 7.1.5 untuk melihat pengaruh masing-masing komponen ataupun interaksi antar komponen  terhadap  daya  sebar  yang  dihasilkan.  Profil variasi  dua  komponen  terhadap  respon  daya  sebar  dapat dilihat pada Gambar 4.
Persamaan Least  Sygnificant  Different ( pseudo components ) yang diperoleh adalah persamaan linear yang dapat dilihat pada persamaan (2).
Y1 = +0,50(A) +0,50 (B)  ..................................... (2)
dimana,
Y1 = daya sebar A = komposisi Na-CMC
B
= komposisi propilenglikol
Gambar 4. Campuran 2 komponen daya sebar
Persamaan (2) menunjukkan bahwa kedua komponen ini memberikan pengaruh yang positif terhadap peningkatan  persentase  daya  sebar  dengan  nilai  koefisien yaitu +0,50.

## 3.3 Hasil Uji Daya Lekat
Daya  lekat  yang  baik  memungkinkan  obat  tidak mudah  terlepas  dan  semakin  lama  melekat  pada  kulit, sehingga  dapat  menghasilkan  efek  yang  diinginkan. Persyaratan  daya  lekat  yang  baik  untuk  sediaan  topikal adalah ≥ 4 detik [16]. Hasil respon daya lekat pada 13 run memenuhi  persyaratan  (Tabel  6).  Berdasarkan  grafik, terlihat bahwa data menyebar disekitar garis diagonal dan mengikuti  arah  garis  diagonal  yang  menandakan  bahwa data  terdistribusi  normal  sehingga  dapat  dilanjutkan  uji ANOVA pada design expert 7.1.5 .
Tabel 6. Hasil analisis ANOVA Design Expert 7.1.5 respon daya lekat Source p-value Kemaknaan Model ( linear mode) 0,0075 Significant Lack of fit test 0,7260 Not Significant
Gambar 5. Kurva normal plot of residual respon daya lekat
Berdasarkan  hasil  analisis  ANOVA  pada  Tabel  6 diketahui  bahwa  model  yang  dapat  menerangkan  respon daya  lekat  gel,  hal  ini  terlihat  dari p-value model  linear yaitu  0,0075  (<0,05)  menunjukkan  hasil  yang  significant. Hasil lack  of  fit  test sebesar  0,7260  (>0.05)  yang  berarti tidak ada perbedaan bermakna antara data observasi dengan data hasil prediksi.
Gambar 6. Campuran 2 komponen daya lekat
Persamaan Least  Sygnificant  Different ( pseudo components )  yang  diperoleh  berupa  persamaan  linear sebagai berikut,
Y1  = +0,50(A) +0,50 (B)  .................................. (3) dimana,
Y1   = daya lekat A = komposisi Na-CMC B = komposisi propilenglikol
Berdasarkan  persamaan  (3)  menunjukkan  bahwa Kedua  komponen  ini  memberikan  pengaruh  yang  positif terhadap  peningkatan  persentase  daya  lekat  dengan  nilai koefisien yaitu +0,50.

## 3.4 Optimasi dan Verifikasi Formula Optimal Gel Serbuk Getah Ashitaba
Proses  optimasi  bertujuan  untuk  mendapatkan rekomendasi beberapa formula baru yang optimal menurut design , formula paling optimal adalah formula dengan nilai desirability maksimum. Desirability yang  semakin mendekati  nilai  1,0  menunjukkan  kemampuan design menghasilkan  formula  yang  mendekati  sempurna(17). Komponen  formula  gel  yang  dioptimasi  adalah  Na-CMC dan Propilen glikol dan respon yang digunakan adalah uji pH, daya sebar dan daya lekat. Setiap komponen dan respon dilakukan  pembobotan  kepentingan  untuk  memperoleh respon optimal yang diinginkan. Pembobotan kepentingan ini disebut juga importance , dimana terdapat pilihan tanda positif satu (+) hingga positif lima (+++++). Semakin tinggi tingkat  kepentingan  dari  komponen  dan  respon  yang diukur,  maka  semakin  besar  bobot  kepentingan  yng diberikan. Bobot kepentingan dan target respon formula gel dapat dilihat pada Tabel 7.
Tabel 7. Optimasi formula gel serbuk getah ashitaba
Nama Target Lower limit Upper limit Importance Na-CMC In range 3 6 3 Propilen glikol In range 9 12 3 pH In range 5,8 6,3 3 Daya sebar Target 346,185 961,625 3 Daya lekat Target 10.2 170.7 3
Komponen  Na-CMC dan propileglikol dioptimalkan dengan  target in  range dan  mempunyai  nilai importance yang  sama  sebesar  tiga  (+++)  artinya  kedua  komponen memiliki  peran  yang  sama  dalam  menentukan  formula yang  optimum.  Formula  yang  disarankan  oleh  program Design Expert 7.1.5 sebanyak satu (1) solusi formula yang terlihat pada Tabel 8. Berdasarkan tabel, nilai desirability yang  diperoleh  melalui  optimasi  ini  adalah  0,88. Desirability adalah  nilai  target  dari  suatu  optimasi  yang ingin  dicapai.  Nilainya  berkisar  antara  0-1.  Apabila  nilai desirability makin  mendekati  satu,  maka  hal  tersebut menunjukan  semakin  tingginya  kesesuian  formula  yang diperoleh  untuk  mencapai  formula  optimum  dengan variabel respon  yang dikehendak.  Titik perpotongan hasil formula  optimal  dapat  dilihat  pada countour  plot dengan nilai desirability sebesar 0,88  pada Gambar 7.
Gambar 7. Campuran 2 komponen formula optimum
Point  prediction pada  program Design  Expert  7.1.5 dapat  memperkirakan  nilai  respon  dan  nilai  observasi dengan  taraf  kepercayaan  95%.  Proses  verifikasi  ini dilakukan dengan melihat nilai hasil observasi berada pada rentang Confidence  Interval (CI)  dan prediction  interval (PI). Makna dari 95% CI adalah rentang nilai rata-rata hasil observasi pada taraf kepercayaan 95%, sedangkan 95% PI ( prediction interval ) adalah rentang nilai prediksi individu hasil observasi pada taraf kepercayaan 95% [18].
Hasil  respon  observasi  pH  sebesar  6,2;  6  dan  6,2 dengan  rata-rata  dan standar  deviation 6,13±0,12.  Hasil masing-masing nilai individu dari tiga kali replikasi masuk pada rentang PI 95% yaitu antara 5,79-6,38. Hasil observasi daya  sebar  sebesar  6,26cm 2 ,  7,30cm 2 ,  6,26  cm 2 dengan rata-rata  dan standar  deviation 6,61±0,60.  Nilai  masing- masing individu dari tiga kali replikasi masuk pada rentan PI  95%  yaitu  antara  1,98-9,73.  Hasil  respon  daya  lekat dengan nilai masing-masing individu dari tiga kali replikasi adalah 99,65 detik, 60,02 detik, 112,14 detik dengan nilai rata-rata  dan standar  deviation yaitu  90,60±27,21.  Nilai masing-masing  individu  dari  tiga  kali  replikasi  masuk dalam rentan PI 95% yaitu -17,56-198,46. Hasil verifikasi nilai  observasi  masuk  pada  rentan  nilai  prediksi  yang berarti mengindikasikan kesesuaian model yang ditentukan oleh Design Expert 7.1.5 .

## 3.5 Uji Stabilitas Fisik dengan Metode Cyling Test
Gel  disimpan  pada  suhu  10ºC  selama  24  jam  lalu dikeluarkan  dan  ditempatkan  pada  suhu  30ºC  selama  24 jam (satu siklus), dengan replikasi 3 siklus. Hasil pengujian menunjukkan  gel  serbuk  getah ashitaba tidak  mengalami sineresis atau suatu kondisi dimana cairan terpisah dari gel. Hal  ini  menunjukan  bahwa  formula  gel  stabil  pada penyimpanan suhu 10ºC dan suhu 30ºC. Penyebab sineresis yaitu sediaan terlalu lama diletakkan atau disimpan di udara terbuka serta terjadinya kenaikan suhu yang mengakibatkan kontraksi di dalam massa gel. Cairan yang terjerat akan keluar dan berada di atas permukaan gel.
Tabel 8. Hasil prediksi formula optimum menurut Design Expert 7.1.5 Komponen Teroptimasi Respon Desirability Na-CMC Propilenglikol pH Daya sebar (cm 2 ) Daya lekat (detik) 4,617 10,383 6,089 5,852 90,449 0,88 Tabel 9. Prediksi dan hasil verifikasi respon formula optimal Respon Prediksi Observasi 95 % CI 95% PI Low High Low High pH 6.089 6.2 5.96 6.22 5.79 6.38 6.0 6.2 Rata-rata ±SD 6.13±0.12 Daya sebar (cm 2 ) 5.852 6.26 4.81 6.89 1.98 9.73 7.30 6.26 Rata-rata ±SD 6.61±0.60 Daya lekat (detik) 90.449 99.65 61.37 119.53 -17.66 198.46 60.02 112.14 Rata-rata ±SD 90.60±27.21
3.6 Uji Aktifitas Terhadap Lama Penyembuhan Luka Eksisi
Pengujian  aktivitas  gel  serbuk  getah ashitaba dilakukan  pada  kulit  punggung  kelinci  yang  disayat  lalu diberikan  perlakuan  berupa  Betadine  (kontrol  positif), formula  optimum  gel  serbuk  getah ashitaba ,  gel  tanpa ekstrak/basis  (kontrol  negatif)  dan  tanpa  perlakuan. Masing-masing  dioleskan  pada  area  luka  dimana pengolesan dilakukan 3 kali sehari dengan 3 kali replikasi pada  setiap  kelompok  perlakuan,  selama  pengolesan diamati  dengan  mengukur  panjang  luka  yang  terbentuk menggunakan  penggaris.  Setelah  dilakukan  pengamatan terhadap panjang luka setiap hari hingga hari ketujuh, data kemudian  diuji  statistik  dengan  metode  anova  maka didapatkan hasil penutupan luka seperti terlihat pada Tabel 11.
Gambar 8. Diagram hari pengamatan dan panjang luka sayat
Pada  masing-masing  kelompok  terdapat  perbedaan yang  signifikan  antara  betadin  dengan  formula  optimum artinya keduanya memiliki kemampuan penyembuhan luka dengan  efektivitas  yang  berbeda,  formula  optimum memberikan  efek  yang  berbeda  signifikan  dalam penyembuhan luka  dibandingkan dengan basis sedangkan tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  antara  basis dengan tanpa perlakuan.
Diagram  pada  Gambar  8  juga  memperlihatkan kemampuan  penutupan  luka  masing-masing  kelompok memiliki  efektivitas  yang  berbeda.  Betadin  memiliki kemampuan  paling  baik,  lalu  diikuti  dengan  formula optimum,  sedangkan  untuk  basis  dan  tanpa  perlakuan kurang  efektif  dalam  proses  penyembuhan  luka. Kemampuan  formula  optimum  dikarenakan  kandungan senyawa  saponin  dan  flavonoid  dalam  serbuk  getah ashitaba,  senyawa  tersebut  telah  dibuktikan  memiliki khasiat  sebagai  pembersih  dan  antiseptik  yang  dapat
menyembuhkan  luka  [19],  selain  itu  diketahui  memiliki efek  antimikroba,  dan  antioksidan  yang  kuat  diduga bertanggung jawab dalam kontraksi luka dan peningkatan kecepatan dari epitelisasi [20].

## 4. Kesimpulan
Gel  serbuk  getah ashitaba berpotensi  sebagai alternatif  obat  luka  eksisi  dengan  presentase  bahan teroptimasi  untuk  Na-CMC  dan  propilenglikol  masing- masing  4,617%  dan  10,383%.  Selain  itu,  parameter  fisik formula  optimum  gel  serbuk  getah ashitaba yang dihasilkan untuk nilai pH 6,08, daya sebar 5,85 cm 2 , daya lekat  90,44  detik,  serta  menunjukkan  stabilitas  yang  baik selama proses penyimpanan.

## Daftar Pustaka
1. Priyandari Y, Maulidah SAT. Getah Pohon Jarak (Jatropha Curcas)  Topical  Mempercepat  Lama  Penyembuhan  Luka Eksisi Mencit (Effect Of Jarak Tree Topical Increase Wound Healing  Excision  Period  Of  Mice).  Journals  Ners
Community. 2015;6(2). 2. Soebagio  B,  Rusdiana  T.  Pembuatan  Gel  Dengan  Aqupec HV-505 dari Ekstrak Umbi Bawang Merah (Allium cepa, L.)
Sebagai Antioksidan. Abstrak. 2007;
3. Sjamsu  hidayat. Buku Ajar Ilmu Bedah,EGC. Jakarta; 2005.
4. Adinata  MO,  Sudira  IW,  Berata  IK.  Efek  Ekstrak  Daun Ashitaba (Angelica keiskei) Terhadap Gambaran Histopatologi Ginjal Mencit (Mus musculus) Jantan. Bul Vet Udayana. 2012;4(2).
5. Muhidin  Dudung.  Agro  Industri  Papain  dan  Pektin. Swadaya, Jakarta; 2004. 58 p.
6. Wardatun S, Miranti M, Farmasi PS, Bogor UP, Pepaya G. Potensi  Serbuk  Getah  Buah  Pepaya  California  (  Carica Papaya  L.)  Sebagai  Antibakteri  Staphylococcus  Aureus Penyebab Jerawat 123. 2007;
7. Aponno J V. Uji Efektivitas Sediaan Gel Ekstrak Etanol daun Jambu Biji (Psidium guajava Linn) Terhadap Penyembuhan Luka  yang  Terinfeksi  Bakteri  Staphylococcus  aureus  pada Kelinci (Orytolagus cuniculus). PHARMACON. 2014;3(3).
8. Maulina  L,  Sugihartini  N.  Formulasi  Gel  Ekstrak  Etanol Kulit  Buah  Manggis  (  Garcinia  Mangostana  L  .)  Dengan Variasi  Gelling  Agent  Sebagai  Sediaan  Luka  Bakar Formulation Gel Ethanolic Extract Of Pericarp Mangosteen ( Garcinia Mangostana L .) With Variation Of Gelling Agent As Wound. 2015;5:43–52.
9. Chaudhary  H,  Kohli  K,  Amin  S,  Rathee  P,  Kumar  V. Optimization and Formulation Design of Gels of Diclofenac and  Curcumin  for  Transdermal  Drug  Delivery  by  Box- Behnken Statistical Design. J Pharm Sci. 2011 Feb;100(2):580–93.
10. Purwanto  P,  Mufrod  M,  NSP  AS.  Antioxidant  Activity  Of Cream  Dosage  Form  Of  Tomato  Extract  (Solanum Lycopersicum L.). Tradit Med J. 2015;18(3):132–140.
Tabel 8. Hasil prediksi formula optimum menurut Design Expert 7.1.5
Kelompok Mean±SD Penutupan Luka Hari 2 Hari 3 Hari 4 Hari 5 Hari 6 Hari 7 Betadine 2.83±.057 a 2.73±.057 a 2.53±.057 a 2.40±.100 a 2.20±.100 a 2.00±.100 a Formula 2.90±.000 b 2.80±.000 b 2.66±.057 b 2.56±.057 b 2.43±.057 b 2.30±.100 b Basis 3.00±.000 c 3.00±.000 c 2.86±.057 c 2.73±.057 c 2.63±.057 c 2.53±.057 c Tanpa perlakuan 3.00±.000 c 3.00±.000 c 3.00±.000 d 2.86±.057 d 2.76±.057 d 2.66±.057 c
Keterangan : Simbol a”b”c”d” yang sama menunjukkan tidak adanya perbedaan signifikan antar kelompok perlakuan (p<0,05)
11. Ramdani NF, Mambo C, Wuisan J. Uji Efek Daun Kemangi (  Ocimum  Basilicum  L  .)  Terhadap  Penyembuhan  Luka Insisi Pada Kelinci ( Oryctolagus Cuniculus ). 2014;3:3.
12. Farmasi J. Formulasi , Uji Stabilitas Fisik , Dan Uji Aktifitas Sediaan Gel Hand Sanitizer Dari Air  Perasan Jeruk Nipis ( Citrus  Aurantifolia  Swingle  )  Berbasis  Karbomer. 2014;2(1):28–34.
13. Rowe,  R.C.,  Sheskey,  P.  J.,  Owen  SC.  Handbook  of Pharmaceutical  Exipiens.  5th  ed.  London:  American Pharmaceutical  Association;  2006.  18,  48,  466,  459  624, 802. p.
14. Tranggono,  R.I.  &  L.  Buku  Pengantar  limu  Kosmetik. Pustaka Utama , Jakarta; 2007. p. 6–8, 11–13, 30–3 1, 129. 15. Garg  A,  Aggarwal  D,  Garg  S,  Singla  AK.  Spreading  of semisolid formulations. Pharm Technol [Internet]. 2002;(September):84–105. Available
from: http://images.alfresco.advanstar.com/alfresco_images/phar ma/2014/08/22/c0e3f115-2d30-47c3-8a80-
c478037fd1cf/article-30365.pdf
16. Mukhlishah NRI, Sugihartini N, Yuwono T. Daya Iritasi Dan Sifat  Fisik  Sediaan  Salep  Minyak  Atsiri  Bunga  Cengkeh  ( Syzigium  Aromaticum  )  Pada  Basis  Hidrokarbon Unguentum  Volatile  Oil  Of  Syzygium  Aromaticum. 2016;12(1):372–6.
17. Nurmiah  S,  Syarief  R,  Peranginangin  R,  Nurtama  B. Aplikasi Response Surface Methodology Pada Optimalisasi Kondisi Proses Pengolahan Alkali Treated Cottonii ( ATC ) Process  Conditions  Of  Alkali  Treated  Cottonii  (  ATC  ) Processing. 2013;9–22.
18. Engelen  A,  Sugiyono,  Budijanto  S.  Optimasi  Proses  Dan Formula Pada Pengolahan Mi Sagu Kering. 2015;35(4).
19. Setiawan Dalimartha. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. 4th ed.  Puspa  Swara,  Jakarta;  2006.  Saroja,  M.,  Santhi.,  R.  A. Wound Healing Activity Of Flavonoid Fraction Of Cynodon Dactylon In Swiss Albino Mice. 2012;3(2):230–1.
20. Kolasani A, Xu H, Millikan M (2011). Evaluation of mineral content  of  Chinese    medicinal    herbs    used    to    improve kidney    function    with  chemometrics.  Food  Chem.,  127: 1465-1471.