## KARAKTERISASI NANO KITOSAN CANGKANG UDANG VANNAMEI ( Litopenaeus vannamei ) DENGAN METODE GELASI IONIK
Characterization Chitosan Nano from White Shrimp Shells ( Litopenaeus vannamei ) with Ionic Gelation Methods

## Pipih Suptijah*, Agoes M. Jacoeb, Desie Rachmania
Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor.
*Korespondensi: Jalan Lingkar Akademik, Kampus IPB Dramaga, Kabupaten Bogor 16680, telp (0251)8622915, fax (0251) 8622916

## Abstract
Shrimp shells have a potential as raw materials for manufacturing of nanochitosan. The purposes of this study to obtain the highest yield of chitosan treated by HCl immersion time, determine the best ionic gelation process with various treatments sizing, to determine the characteristics of nanoparticles e.g morphology, efficiency, and size of nanoparticles, analyze the characteristics of chitosan particles carried by the ionic gelation method using Fourier Transform InfraRed (FTIR) and Scanning Electron Microscopy (SEM), determine a simple method for making chitosan, that be applied easily in the laboratory. The highest yield of chitosan from shrimp shell obtained by treatment with 1 N HCl soaking time for 72 hours. Magnetic stirrer treatment could obtain high yield of nano chitosan with particle size 400-450 nm. Magnetic Stirrer could distribute the particle size homogeneously and stable than using of ultrasonic and high speed homogenizer. Degree of deacetylation of chitosan nanoparticles was 99%.
Keyword: chitosan nano, FTIR, ionic gelation, SEM, white shrimp shells

## Abstrak
Cangkang udang berpotensi sebagai bahan baku dalam proses pembuatan nanokitosan. Tujuan dari penelitian ini adalah mendapatkan rendemen kitosan tertinggi melalui perlakuan waktu perendaman HCl, menentukan proses gelasi ionik terbaik dengan berbagai perlakuan sizing dan menentukan karakteristik nanopartikel yang meliputi morfologi,  efisiensi,  dan  ukuran  nanopartikel,  menganalisis  karakteristik  gugus  fungsi  partikel  kitosan  hasil gelasi ionik menggunakan Fourier Transform InfraRed (FTIR) dan Scanning Electron Microscopy (SEM), dan menentukan metode pembuatan kitosan yang sederhana yang dapat diterapkan dengan mudah di laboratorium. Rendemen kitosan dari kulit udang yang tertinggi diperoleh dengan perlakuan waktu perendaman HCl 1 N selama 72 jam yaitu sebesar 13,77%. Rendemen kitosan nanopartikel tertinggi terdapat pada kitosan nanopartikel dengan perlakuan  pengecilan  ukuran  menggunakan  alat magnetic  stirrer yaitu  sebesar  81,30%.  Ukuran  partikel  yang diperoleh dengan menggunakan magnetic stirrer sebesar 400-450 nm. Magnetic stirrer dapat mendistribusikan ukuran partikel yang lebih homogen dibandingkan menggunakan homogenizer dan  ultrasonikator. Nilai derajat deasetilasi dari kitosan nanopartikel terkecil yang dihasilkan yaitu sebesar 99%.
Kata kunci: cangkang udang vannamei, FTIR, gelasi ionik, nano kitosan, SEM

## PENDAHULUAN
Udang  merupakan  komoditas  andalan  dan bernilai  ekonomis  sebagai  salah  satu  hasil perikanan utama Indonesia. Sekitar 80-90% ekspor udang dilakukan dalam bentuk udang beku tanpa kepala dan 75% dari berat total udang merupakan bagian kulit dan kepala. Kulit udang atau kepiting
merupakan bahan baku penghasil kitin dan kitosan. Kemampuan  kitosan  yang  diterapkan  dalam berbagai bidang industri modern, misalnya farmasi, biokimia, kosmetika, industri pangan, dan industri tekstil mendorong untuk terus dikembangkannya berbagai  penelitian  yang  menggunakan  kitosan, termasuk  melakukan  modifikasi  kitosan  secara kimia  atau  fisik.  Modifikasi  fisik  pada  kitosan
mencakup perubahan ukuran partikel atau butiran kitosan  menjadi  lebih  kecil  untuk  pemanfaatan yang  lebih  luas,  perkembangan  modifikasi    fisik dan  kimiawi  mengarah  ke  bentuk  nanopartikel (Saleh et al. 1994).
Penelitian  nanopartikel  kitosan  sampai  saat ini  terus  dikembangkan,  baik  dalam  penentuan komposisi  maupun  pencarian  metode  yang sesuai. Pembuatan nano kitosan yang berstabilitas dan  berkualitas  tinggi  biasanya  memerlukan metode yang cukup sulit, maka dilakukan teknik atau  metode  yang  prosesnya  lebih  efisien  dan sederhana untuk memudahkan dalam pembuatan nano  kitosan.  Pengujian  karakteristik  nano kitosan  dilakukan  dengan  proses  gelasi  ionik, serta  perlakuan  pengecilan  ukuran  ( sizing ) dilakukan dengan metode magnetic stirer , metode homogenizer dan metode ultrasonik. Penelitian ini bertujuan menentukan nano kitosan yang terbaik diantara ketiga metode tersebut agar nano kitosan yang  dihasilkan  memiliki  stabilitas  konstan, berukuran partikel terkecil, berkualitas baik, serta menentukan metode yang paling sederhana dalam pembuatannya,  sehingga  dapat  meningkatkan skala produksi.

## MATERIAL DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah cangkang    udang vannamei ( Litopenaeus vannamei ) yang di dapatkan dari PT Adijaya  Guna  Satwatama,  Cirebon,  Jawa  Barat. Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah beaker glass , timbangan digital, gelas ukur, kertas pH,  kompor  listrik,  saringan,  alat  pengaduk, termometer, magnetic  stirer , homogenizer ultrasonik,  Ultrasonics  Processor  (Cole-Parmer 20  kHz  130  watt),  pipet, spray  dryer , Scanning Electron Microscopy (SEM) merek JSM-35C, dan alat uji FTIR.

## Lingkup Penelitian
Komposisi  kimia  cangkang  udang  vannamei diketahui  dengan  analisis  proksimat  (AOAC 1995).  Penelitian  utama  meliputi  tahapan pembentukan  gel  kitosan,  berbentuk  rantai panjang lurus melalui pelarutan dalam asam asetat.
Pembuatan  nanopartikel  kitosan  dengan  gelasi ionik yang diawali dengan  perlakuan pengecilan ukuran  ( sizing )  dengan  metode magnetic  stirer , homogenizer dan ultrasonik dengan penambahan emulsifier  (Tween  80)  dan  tripolifosfat.  Tahap terakhir  dilakukan  pengeringan  semprot  ( spray dryer ), kemudian dilakukan analisis karakteristik nanopartikel  yang  dihasilkan  dengan  SEM  dan FTIR.

## Prosedur Penelitian
Pembuatan  gel  kitosan  dilakuakan  dengan melarutkan kitosan  sebanyak  0,2  g  dalam  100 mL  asam  asetat  0,3%,  disiapkan  dalam  gelas beker masing masing  50 mL. Pengecilan ukuran ( sizing )  dilakukan  melalui  metode  magnetik stirer,  homogenizer dan    ultra  sonikator.  Masing masing 50 mL larutan kitosan dilakukan metode pengecilan  ukuran  selama  30  menit,  sampai terlihat larutan jernih.
Pembentukan nano partikel  dilakukan melalui tahap  emulsifikasi  dengan  penambahan    50 mikroliter  twin  0,1%,  dengan sprayer sambil di sizing terus-menerus sampai 1 jam, selanjutnya dilakukan stabilisasi dengan 7 mL larutan sodium tri poli posfat 0,1%, sambil di mix terus selama 1 jam.  Pengeringan  dilakukan  dengan  cara spray drying , diperoleh kitosan nano partikel dan diuji karakteristiknya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Komposisi Kimia Cangkang Udang Vannamei
Komposisi  kimia  cangkang  udang  vannamei ( Litopenaeus  vannamei )  meliputi  kadar  air,  abu, lemak,  protein,  dan  karbohidrat  pada  cangkang udang  vannamei  ( Litopenaeus  vannamei )  (Tabel 1).  Komposisi  kimia  cangkang  udang  vannamei ditentukan dengan analisis proksimat.
Kadar  air  cangkang  udang  vannamei  yang dihasilkan  dari  penelitian  ini  yaitu  sebesar
Tabel 1 Komposisi kimia cangkang udang vannamei Parameter Nilai (%bb) Kadar air 15,04 Kadar abu 18,02 Kadar protein 34,69 Kadar Lemak 0,57 Kadar Karbohidrat 31,75
15,04%.  Kadar  air  cangkang  udang Penaeus notabilis berdasarkan penelitian Emmanuel et al.
(2008) adalah sebesar 13,3%. Perbedaan kadar air tersebut dipengaruhi oleh perbedaan jenis udang dan  tingkat  kekeringan  sampel  yang  digunakan pada penelitian.
Kulit  udang  vanamei  memiliki  kadar  lemak sebesar  0,57%  (bb),  hal  ini  menunjukan  bahwa kadar  lemak  pada  kulit  udang  tergolong  rendah. Kadar  lemak  pada  kulit  udang  yakni  9,8%  (bk) (Ravichandran et  al. 2009).  Perbedaan  kadar lemak  dipengaruhi  oleh  jenis  udang  dan  fase hidup udang saat panen. Udang pada fase molting mengandung kadar lemak yang lebih tinggi (Kim et al. 2011).
Kadar  protein  kulit  udang  vanamei  sebesar 34,69%  (bb).  Kim et  al. (2011)  menunjukkan kadar  protein  cangkang  udang Litopenaeus vannamei sebesar  40,35%  (bb).  Kadar  abu  pada kulit udang vannamei sebesar 18,02% (bk). Kadar abu ini lebih rendah dibandingkan kadar abu yang diteliti  oleh  Ravichandran et  al. (2009)  sebesar 21,5%  (bk).  Perbedaan  nilai  kadar  abu  diduga dapat  disebabkan  oleh  perbedaan  hábitat  dan lingkungan hidup.
Hasil  perhitungan  kadar  karbohidrat  dengan metode by  difference menunjukkan  bahwa cangkang  udang  vannamei  mengandung karbohidrat    sebesar 31,75%. Hasil perhitungan karbohidrat  dengan  metode by  difference ini merupakan  metode  penentuan  kadar  karbohidrat dalam  bahan  pangan  secara  kasar,  serat  kasar terhitung  sebagai  karbohidrat  (Salamah et  al . 2008), dan karbohidrat dalam kulit udang adalah kitin.

## Rendemen Kitosan
Rendemen kitosan hasil perendaman cangkang udang dengan HCl selama 0 jam, 24 jam, 48 jam dan 72 jam memiliki nilai berturut-turut sebagai berikut  11,57%,  12,00%,  13,20%  dan  13,50% (Gambar 1). Perlakuan dengan perendaman HCl 1 N (72 jam) menghasilkan rendemen tertinggi yakni sebesar  13,50%.  Perlakuan  waktu  perendaman HCl 1 N (0 jam) menghasilkan rendemen terendah yakni sebesar 11,57%.
Perlakuan perendaman dengan HCl 1 N yang berbeda memberikan pengaruh terhadap rendemen kitosan.  Mineral  memiliki  sifat  larut  asam,  oleh karena  itu  perendaman  cangkang  udang  dengan HCl  1  N  menyebabkan  mengembangnya  matrik cangkang  udang  sehingga  memudahkan  pelarut masuk  ke  dalaam  matriks.  Waktu  perendaman ( retention time ) kulit udang di dalam larutan HCl 1 N mempengaruhi penurunan kadar mineral pada proses  pembuatan  kitin.  Semakin  lama  waktu perendaman,  maka  akan  menghasilkan  semakin banyak rendemen dari kitin (Mahmoud et al . 2005).

## Mutu Kitosan
Pembuatan  kitosan  dengan  pengaruh  waktu perendaman  HCl,  dihasilkan  rendemen  kitosan terbanyak dan mutu yang memenuhi persyaratan Protan Biopolimer (Suptijah et al. 1992). Ukuran partikel  pada  kitosan  dari  kulit  udang  berupa serpihan, sesuai dengan penelitian Suptijah et al. (1992) yaitu ukuran partikel pada kitosan berupa serpihan.  Proses  pembuatan  kitosan  dengan ekstraksi  bahan  baku  terlihat  hancur.  Warna larutan kitosan tersebut jernih, yang berarti tidak ada zat pengotor yang menempel pada permukaan kitosan.
Kadar  abu  kitosan  hasil  penelitian  ini  yaitu 0,11%,  menunjukkan  bahwa  kitosan  yang dihasilkan  telah  memenuhi  standar  mutu  yakni sebesar ≤ 2% (Suptijah et al. 1992). Kadar abu ini dipengaruhi  proses  pengadukan  yang  dilakukan selama  proses  pembuatan  kitosan.  Proses pengadukan  dilakukan  cukup  kostan  sehingga kadar  abu  dari  kedua  kitosan  tersebut  cukup rendah.
Tabel 1 Komposisi kimia cangkang udang vannamei Parameter Nilai (%bb) Kadar air 15,04 Kadar abu 18,02 Kadar protein 34,69 Kadar Lemak 0,57 Kadar Karbohidrat by difference
Gambar 1 Pengaruh waktu perendaman HCl terhadap rendemen kitosan (                                                                       ) Gambar 1 Pengaruh waktu perendaman HCl terhadap rendemen kitosan  ( )
Kadar  abu  yang  rendah  menunjukan kandungan mineral yang rendah. Semakin rendah kadar abu yang dihasilkan maka mutu dan tingkat kemurnian  kitosan  akan  semakin  tinggi.  Proses pencucian yang baik dan diperolehnya pH netral, juga  berpengaruh  terhadap  kadar  abu.  Mineral yang  telah  terlepas  dari  bahan  dan  berikatan dengan pelarut dapat terbuang dan larut bersama air (Benjakula dan Sophanodora 1993).
Kadar  air  merupakan  salah  satu  parameter yang  sangat  penting  untuk  menentukan  mutu kitosan. Kadar air kitosan yang dihasilkan sebesar 15%.  Protan  Biopolimer  menetapkan  standar mutu kadar air kitosan adalah ≤ 10%  (Suptijah et al. 1992). Kadar air yang terkandung pada kitosan dipengaruhi  oleh  proses  pengeringan,  lama pengeringan yang dilakukan, jumlah kitosan yang dikeringkan  dan  luas  tempat  permukaan  tempat kitosan yang dikeringkan (Saleh et al. 1994).
Kadar  nitrogen  merupakan  salah  satu parameter  yang  juga  diukur  untuk  menentukan mutu  kitosan.  Kadar  nitrogen  kitosan  yang dihasilkan  yakni  sebesar  4,73%.  Standar  mutu kadar  nitrogen  kitosan  yang  telah  ditetapkan adalah ≤ 5% (Suptijah et al. 1992). Kadar nitrogen menentukan  sifat  kitosan  yang  berinteraksi dengan gugus lainnya. Keberadaan senyawa lain dalam  kitosan  yaitu  bentuk  gugus  amin  (NH 2 ) menyebabkan kitosan memiliki reaktivitas kimia yang cukup tinggi dan mampu mengikat air dan larut dalam asam asetat (Kim dan Cho 2005).
Konsentrasi  NaOH  dan  suhu  deasetilasi yang  semakin  tinggi,  menyebabkan  kadar nitrogen  cenderung  semakin  kecil  (Saleh et  al. 1994).  Semakin  tinggi  konsentrasi  NaOH  yang digunakan dan semakin lama waktu deproteinasi yang  digunkan  maka  reaksi  antara  protein dengan  larutan  pembentuk  ester  (Na-proteinat) akan  semakin  sempurna,  sehingga  protein  yang dihilangkan akan semakin banyak (Silvia 2005).

## Rendemen Kitosan Nanopartikel
Rendemen  kitosan  nanopartikel  ditentukan berdasarkan persentase berat kitosan nanopartikel yang  dihasilkan  terhadap  berat  serbuk  kitosan yang digunakan. Menunjukkan rendemen kitosan nanopartikel  tertinggi  terdapat  pada  perlakuan
metode  pengecilan  ukuran  dengan  alat magnetic stirer yaitu sebesar 81,30%. Rendemen terendah ditunjukkan  oleh  kitosan  nanopartikel  dengan perlakuan  menggunakan  alat  homogenizer  yaitu sebesar  40,00%  (Gambar  2).  Rendemen  yang rendah  ini  dapat  disebabkan  oleh  proses  yang digunakan. Rendemen nano kitosan yang tertinggi diperoleh menggunakan magnetic stirrer , karena magnetic stirrer memiliki kelebihan yaitu proses homogenisasi antara larutan kitosan  dengan bahan gelasi  ionik,  dapat  dikendalikan  secara  merata dengan  kecepatan  yang  tinggi  menghasilkan partikel-partikel  yang  homogen  dan  stabil  tidak terjadi  aglomerasi,  sedangkan  dengan  alat  lain pembentukan  partikel  bisa  lebih  kecil  tetapi masih terjadi aglomerasi partikel bahkan mungkin polimerisasi, sehingga dalam proses pengeringan yang terbentuk partikel nano hanya partikel yang tadinya  sudah  stabil  bukan  yang  aglomerasi. Metode  yang  lebih  efektif  menghasilkan  nano partikel  adalah  metode sizing dengan magnetic stirrer .  Proses  pengeringan  semprot  ( spray drying ) juga mempengaruhi rendemen hasil nano kitosan yang dihasilkan, partikel yang mengalami aglomerasi lebih banyak menempel  pada alat spray.
Analisis SEM ( Scanning Electron Microscopy )
Perlakuan dengan magnetic stirrer dihasilkan ukuran  partikel  terkecil  dan  lebih  stabil  yaitu sebesar 400 nm (H1) dan 450 nm (H2). Perlakuan ultrasonik  dan homogenizer dihasilkan  ukuran pertikel  yang  lebih  besar  dan  tidak  stabil,  yaitu dengan  perlakuan  ultrasonik  didapatkan  ukuran partikel sebesar 1222 nm (H1) dan 1600 nm (H2). Perlakuan  homogenizer  menghasilkan  ukuran
Gambar 2 Rendemen kitosan nanopartikel dengan perbedaan perlakuan metode pengecilan ukuran (
) Gambar  2  Rendemen  kitosan  nanopartikel  dengan perbedaan  perlakuan  metode  pengecilan ukuran ( )
partikel sebesar 1375 nm (H1) dan 2000 nm (H2). Penelitian  BPPT  (2010)  menunjukkan  partikel terkecil  dan  stabil  didapatkan  dengan  perlakuan magnetic  stirrer sebesar  25,9  nm  (H1)  dan  28 nm  (H2).  Partikel  yang  lebih  besar  serta  tidak stabil diperoleh dengan perlakuan ultrasonik dan homogenizer sebesar 1,2 nm (H1) dan 25 nm (H2) (Gambar 3)
Hasil  karakterisasi  SEM  kitosan  nanopartikel yang dibuat dengan berbagai metode yaitu magnetic stirrer , ultrasonik, dan homogenizer menunjukan partikel yang berupa bulatan menyerupai bola dan berkerut.  Nano  partikel  yang  dihasilkan  melalui perlakuan magnetic  stirrer rata-rata  berukuran sekitar 400-450 nm. Nanopartikel adalah butiran atau  partikel  padat  dengan  kisaran  ukuran  10- 1000  nm  (Mohanraj  dan  Chen  2006).  Teori kinetik molekul gas menyatakan bahwa molekul gas sering bertumbukan satu dengan lainnya dan molekul-molekul yang bereaksi. Laju reaksi akan berbanding  lurus  dengan  banyaknya  tumbukan
molekul per detik, atau berbanding lurus dengan frekuensi  tumbukan  molekul.  Semakin  cepat putaran, memperbesar intensitas molekul pelarut untuk  bersentuhan  dengan  kitosan,  sehingga semakin  besarnya  intensitas  kecepatan  putaran pada magnetic  stirrer partikel  yang  dihasilkan semakin kecil (Chang 2005 ).
Penambahan  jumlah  tripolifosfat  akan menurunkan  jumlah  nanopartikel  kitosan  (Shu dan Zhu 2002). Penambahan surfaktan berfungsi untuk menstabilkan emulsi partikel dalam larutan dengan cara mencegah timbulnya penggumpalan (aglomerasi)  antarpartikel  (Keuteur  1996). Partikel-partikel  kitosan  di  dalam  larutan terselimuti  dan  terstabilkan  satu  dengan  yang lain  dengan  adanya  surfaktan,  sehingga  proses pemecahan partikel akan semakin efektif. Partikel yang  telah  terpecah  akan  kembali  terstabilkan dalam  emulsi  larutannya,  sehingga  mencegah terjadinya aglomerasi (Xu dan Du 2003).
A1 ( magnetic stirrer ), H1
A1 ( magnetic stirrer ), H2 A2 (ultrasonik), H1 A2 (ultrasonik), H2 A3 ( homogenizer ), H1 A3 ( homogenizer ), H2
Gambar 3  Morfologi  partikel  kitosan  menggunakan  SEM;  A1  ( magnetic  stirer )  H1  dan  H2,  A2 (ultrasonik) H1 dan   H2, dan A3 ( homogenizer ) H1 dan H2
Gambar 3 Morfologi partikel kitosan menggunakan SEM; A1 ( magnetic stirer ) H1 dan H2, A2 (ultrasonik) H1 dan H2, dan A3 ( homogenizer ) H1 dan H2.

## Hasil Analisis FTIR
Penentuan derajat deasetilasi dilakukan dengan analisis  FTIR,  dalam  analisisnya  FTIR  akan mendeteksi  gugus  gugus  fungsi  yang  terdapat dalam kitosan yaitu gugus fungsi NH, OH, C-C. CH  dan  C=O  untuk  kitin.  Hasil  deteksi  FTIR tergambar  dalam  bentuk  puncak  puncak  gugus fungsi tersebut pada bilangan gelombang masing masing.
Gugus fungsi NH,OH, C-C,CH masing masing pada  bilangan  gelombang  3392,84  nm,  1575,15 nm,  2342,7  nm  dan  1412,31  nm  disajikan  pada Gambar 4. Puncak lainnya adalah finger print dari pendukung gugus fungsi.
4000.0 3000 2000 1500 1000 450.0 -2.0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22.0 cm-1 %T Laboratory T es t Result J (2) 3901.52 3854.88 3839.58 3818.17 3803.28 3751.96 3735.87 3690.79 3672.48 3392.84 2342.47 1575.13 1412.31 1152.06 1076.14 651.62
Gambar 4 Kromatogram FTIR dari kitosan nano partikel hasil metode sizing magnetic stirrer Gambar  4  Kromatogram  FTIR  dari  kitosan  nano partikel  hasil  metode sizing magnetic stirrer.
Hasil analisis FTIR pada kitosan menunjukkan derajat  deasetilasi  sebesar  99%,  sesuai  dengan standar mutu yaitu ≥70%  (Suptijah et al. 1992). Derajat  deasetilasi  menggambarkan/indikator penghilangan  gugus  asetil  (COCH 3 )  yang terdapat pada kitin. Kitin yang mengalami proses deasetilasi  disebut  kitosan.  Derajat  deasetilasi yang tinggi menunjukkan kemurnian dari kitosan yang dihasilkan (Suptijah et al. 1992)

## KESIMPULAN
Rendemen  kitosan  dari  kulit  udang  yang tertinggi  diperoleh  dengan  perlakuan  waktu perendaman HCl 1 N selama 72 jam, yang terendah diperoleh  dengan  perlakuan  waktu  perendaman HCl  1  N  selama  0  jam.  Rendemen  kitosan nanopartikel  tertinggi  terdapat  pada  kitosan nanopartikel dengan perlakuan pengecilan ukuran
menggunakan  alat magnetic  stirrer .  Rendemen terendah  ditunjukkan  oleh  kitosan  nanopartikel dengan  menggunakan  alat homogenizer .  Gelasi ionik  ,surfaktan  dan  TPP,  menghasilkan  partikel sangat  kecil  dan  tidak  berpolimerisasi  dan  tidak menyebabkan partikel membesar (mikro). Ukuran partikel  yang  diperoleh  dengan  menggunakan magnetic stirrer sebesar 400-450 nm. Nilai derajat deasetilasi dari kitosan nanopartikel terkecil yang dihasilkan  yaitu  sebesar  99%  dan  menunjukan bahwa  nano  kitosan  yang  dihasilkan  merupakan kitosan murni.

## DAFTAR PUSTAKA
[AOAC] Association  of  Official Analytical  Chemyst. 1995. Official Method of Analysis of The Association of Official Analytical Chemyst . Arlington, Virginia, USA: Association of Official Analytical Chemyst,
Inc Benjakula S, Sophanodora P. 1993. Chitosan production from  carapace  and  shell  of  black  tiger  shrimp ( Penaeus monodon ). Asean Food Jurnal 8(4): 145- 148 [BPPT].  2010. Pembuatan  Partikel  Nano  Kitosan dengan  Metode  Gelasi  Ionik  Menggunakan Magnetic Stirrer . Tanggerang: Balai Pengkaji dan Penerapan Teknologi.
Chang R. 2005. Kimia Dasar: Konsep-Konsep Inti Jilid 2 . Jakarta: Erlangga. Emmanuel, Adeyeye I, Habibat O, Adubiaro, Awodola OJ. 2008. Comparability of chemical composition and  functional  properties  of  shell  and  flesh  of Penaeus notabili. Journal of Nutrition 7(6):741-747 Keuteur  J.  1996.  Nanoparticles  and  microparticles for  drug  and  vaccine  delivery. Europe  Journal  of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 189: 19-34. Kim TY, Cho SY. 2005. Adsorpsi equilibria of reactife dye onto highly polyaminatid porous chitosan bead. Korean  Journal Chemistry English 22 (5):691- 696 Kim  JD,  Nhut  TM,  Hai  TN,  Ra  CS.  2011.  Effect  of dietary  essential  oils  on  growth,  feed  utilization and meat yields of white leg shrimp L. Vanname . Journal Animal Science 24(8):1136-1141 Mahmoud MS, Ghaly AE, Arab F. 2005. Unconventional apporoach  for  demineralization  of  deproteinized crustacean shells for chitin production. Journal of Biotechnology 3(1):1-9 Mohanraj UJ, Chen Y. 2006. Nanoparticles - A Review. Tropical Journal of Pharmaceutical Research 5(1): 561-573
Ravichandran  S,  Rameshkumar  G,  Prince AR.  2009. Biochemical composition of shell and flesh of the indian  white  shrimp Penaeus  indicus ( H.milne Edwards  1837). Journal  of  Scientific  Research 4(3):191-194
Salamah  E,  Ayuningrat  E,  Purwaningsih  S.  2008.
Penapisan  awal  komponen  bioaktif  dari  kijing taiwan ( Anadonta woodiana Lea.) sebagai senyawa antioksidan. Buletin  Teknologi  Hasil  Perikanan 11(2):119-133
Saleh MR, Abdillah, Suerman E, Basmal J, Indriati N. 1994. Pengaruh suhu, waktu dan konsentrasi pelarut pada  ekstraksi  kitosan  dari  limbah  pengolahan udang  beku  terhadap  beberapa  parameter  mutu kitosan. Jurnal Pasca Panen Perikanan 81:30-43
Shu  XZ,  Zhu  KJ.  2002.  Controlled  drug  release properties of ionically cross-linked chitosan beads:
The  Influence  of  Anion  Structure. International
Journal of Pharmaceutics 233:217-225
Silvia SS. 2005. Physical propertis and biocompatibility of  chitosan/  sury  blendet  membran. Jurnal  of Material Science 16:575- 579 Suptijah  P,  Salamah  E,  Sumaryanto  H,  Purwaningsih S, Santoso J. 1992. Pengaruh berbagai isolasi khitin kulit  udang  terhadap  mutunya. Jurnal  Penelitian Perikanan Indonesia 3(1):1-9 Xu  Y,  Du  Y.  2003.  Effect  of  moleculer  structure of  chitosan  on  protein  delivery  properties  of chitosan  nanoparticles. International  Journal  of Pharmaceutics 250(4):215-226