## Analisis Kadar Luteinizing Hormone (Lh) Pada Serum Sapi Friesian Holstein Post Partum Dengan Penambahan Selenium Dan Vitamin E
Ririn Dwi Prasetiani 1) , Sri Rahayu 2) , Aris Soewondo 3) 1),2),3) Laboratorium Biomolekuler dan Seluler, Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya, Malang 65145, Jawa Timur, Indonesia.
E-mail: 1) ririndwi68@yahoo.com , 2) srahayu@ub.ac.id & 3) soewondo@ub.ac.id

## ABSTRAK
Sapi  Friesian  Holstein  (FH)  merupakan  bangsa  sapi  yang  memiliki  produksi  susu  tertinggi dibandingkan  bangsa-bangsa  sapi  perah  lainnya.  Banyak  peternak  yang  menginginkan  peningkatan produktifitas  sapinya  dengan  asumsi  setiap  1  ekor  sapi  setidaknya  melahirkan  1  ekor  anak  sapi  setiap tahun.  Namun  banyak  masalah  yang  ditimbulkan  pada  sapi  postpartum,  salah  satunya  akibat peningkatan  radikal  bebas  pada  tubuh  sapi  postpartum,  sehingga  asumsi  tersebut  tidak  terpenuhi. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  pengaruh  pemberian  selenium  dan  vitamin  E  secara intramuskular terhadap kadar Luteinizing Hormone (LH) serum sapi  FH postpartum. Hewan coba yang digunakan  adalah  6  ekor  sapi  bunting  7  bulan  yang  dibagi  menjadi  2  kelompok,  masing-masing  3  ekor untuk kelompok kontrol (P0/ tidak diinjeksi selenium dan vitamin E) dan perlakuan (P1/di injeksi sodium selenite  1,5  mg/ml  +  vitamin  E  50  mg/ml).  Injeksi  dilakukan  5  kali  yaitu  saat  sapi  bunting  7  bulan,  8 bulan,  saat  2  minggu  sebelum  melahirkan,  7  hari  dan  14  hari  setelah  melahirkan.  Pengambilan  serum untuk pengujian kadar LH dilakukan dua kali dari masing-masing hewan coba, yaitu pada 25 hari dan 45 hari  postpartum.  Pemeriksaan  kadar  LH  dilakukan  dengan  teknik  ELISA  (Enzyme-Linked Immunosorbent  Assay).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pemberian  sodium  selenite  1,5  mg/ml  + vitamin  E  50  mg/ml  cenderung  menyebabkan  peningkatan  LH  serum  sapi  FH  pada  25  dan  45  hari postpartum.
Kata kunci: LH, sapi FH, selenium, vitamin E

## ABSTRACT
Holstein  Friesian  dairy  cows  (FH)  is  a  group  of  cows  that  have  the  highest  milk  production compared  to  other  dairy  cattle  groups.  Many farmers  want  to  increase  the  productivity  of  the  cow with the assumption that  every one cow  give  birth to  at  least 1 cow each year. But  many problems caused in postpartum cows, one of which is due to the increase of free radicals in the postpartum cows body, so the assumptions  are  not  met.  This  study  was  conducted  to  analyze  the  effect  of  selenium  and  vitamin  E intramuscularly  in  LH  levels  serum  of  dairy  cow  FH  postpartum.  There  are  6  cows  divided  into  two groups, 3 cows for each group. First group is control (P0) which no administration of sodium selenite and vitamin E, and second group is treatment (P1) that intramuscularly injected of sodium selenite 1.5 mg/ml + vitamin E 50 mg/ml). Injection of selenium and vitamin E conducted 5 times when 7 months, 8 months cows  gestation,  two  weeks  before  calving,  seven  days  after  calving  and  14  days  after  calving.  Serum sampling for testing levels of LH take in 25 days and 45 days postpartum on each cows. The level of LH was  conducted  by  ELISA  (Enzyme-Linked  Immunosorbent  Assay).  The  results  showed  that administration of sodium selenite 1.5 mg/ml + vitamin E 50 mg/ml causes increased LH levels serum that taken 25 days, 45 days postpartum.
Keywords: dairy cow FH, LH, selenium, vitamin E

## PENDAHULUAN
Kebutuhan  susu  Nasional  dari  tahun  2009 hingga  tahun  2014  terus  meningkat  disebabkan peningkatan  jumlah  penduduk  Indonesia  [1]. Bangsa  sapi  Friesian  Holstein  (FH)  merupakan bangsa sapi  yang memiliki produksi susu tertinggi dibandingkan  bangsa-bangsa  sapi  perah  lainnya [2]. Kebutuhan akan besarnya sapi FH mendorong peternak  untuk  mendapatkan  kontinuitas  ternak sapinya  untuk  setidaknya  melahirkan  setiap  tahun dengan jarak kelahiran 365 hari yang dapat dicapai dengan  cara  mengawinkan  sapi  paling  lambat  83 hari  setelah  melahirkan  dengan  asumsi  lama kebuntingan  276-295  hari  [3].  Namun  banyak kasus yang terjadi pada ternak sapi,  dimana birahi pertama  setelah  melahirkan  (estrus  postpartum) terjadi  melebihi  90  hari  yang  membuat  jarak kelahiran menjadi lebih lambat [4]. Selama periode postpartum,  sapi  perah  mengalami  stres  oksidatif yang  disebabkan  oleh  radikal  bebas  dalam  tubuh sapi  [5],  yang  meningkat  dalam  tubuh  sapi  pada masa  kebuntingan  akhir  hingga  saat  akan melahirkan  [6].  Stres  oksidatif  yang  terjadi  pada sapi  postpartum  dapat  menyebabkan  terjadinya anestrus yang panjang [7].
Peningkatan  salah  satu  jenis  radikal  bebas (nitric oxide) dapat menghambat produksi estradiol dan  sintesis  androstenedion  di  ovarium  [8]. Meningkatnya  kadar  estradiol  mengakibatkan terjadinya  umpan  balik  positif  sehingga  terjadi pelonjakan  LH  (LH  surge)  dan  ovulasi.  Jadi apabila  produksi  estradiol  terhambat  maka  LH tidak  dapat  mengalami  pelonjakan  [9].  Siklus estrus  dipengaruhi  salah  satunya  oleh  Luteinizing Hormone  (LH)  yang  berfungsi  merangsang pertumbuhan folikel (mengaktifkan fungsi ovarium) sehingga terjadi estrus.
Penelitian  yang  telah  banyak  dilakukan terutama  tentang  pemberian  selenium  dan  vitamin E  yang  dapat  meningkatkan  performa  reproduksi sapi  post-partum  [10].  Aktivitas  antioksidan selenium  dan  vitamin  E  dapat  meningkatkan nutrisi  dan  mineral,  serta  memperbaiki  kerja hipotalamus  [11],  sehingga  hormon  reproduksi termasuk  LH  menampilkan  kadar  yang  optimal [12].  Kadar  LH  yang  optimal  dalam  tubuh  dapat meningkatkan performa reproduksi sapi postpartum [13].
Selama  ini  penambahan  selenium  dan vitamin  E  banyak  dilakukan  pada  pakan  untuk
meningkatkan  produktifitas  hewan  betina,  namun hasil  penelitian  tidak  selalu  menunjukkan  respon yang  positif  [14,  15].  Oleh  karena  itu  pada penelitian  ini  dilakukan  pemberian  selenium  dan vitamin  E  melalui  injeksi  secara  intramuskular pada  sapi  FH  dan  menganalisis  pengaruhnya terhadap  Luteinizing  Hormone  (LH)  sapi  yang merupakan salah satu hormon penyebab estrus.

## METODE PENELITIAN

## Pengelompokan Hewan Coba
Ternak  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  sapi  perah  Frisien  Holstein  (FH)  sebanyak enam  ekor  yang  mengalami  kebuntingan  kedua, dengan  usia  kebuntingan  7  bulan.  Enam  ekor  sapi dikelompokkan  menjadi  dua,  yaitu  tiga  ekor kelompok  kontrol  (P0)  atau  yang  tidak  diberi selenium  dan  vitamin  E,  dan  tiga  ekor  kelompok perlakuan  (P1)  atau  kelompok  yang  diinjeksi selenium  dan  vitamin  E  dengan  dosis  sodium selenite 1,5 mg/ml + vitamin E 50 mg/ml [16].
Injeksi Selenium dan Vitamin E
Injeksi selenium-vitamin  E sebanyak 10 ml, dengan dosis Sodium selenite 1,5 mg/ml + vitamin E  50  mg/ml.  Injeksi  dilakukan  sebanyak  5  kali menggunakan  spuit  disposable  10  ml  dengan needle  10  G  secara  intramuscular  pada  daerah musculus  gluteus.  Waktu  pemberian  selenium  dan vitamin  E  adalah  5  kali  yaitu  pada  usia kebuntingan  210  hari,  usia  kebuntingan  240  hari, 14  hari  sebelum  melahirkan,  7  hari  setelah melahirkan dan 14 hari setelah melahirkan [16].

## Pengambilan dan Penyimpanan Serum
Pengambilan  sampel  darah  untuk  uji  kadar LH  serum  dilakukan  dua  kali  dari  masing-masing hewan coba, yaitu saat 25 hari dan 45 hari setelah partus.  Sampel  darah  diambil  melalui  vena jugularis  sebelah  kiri  menggunakan  spuit  20  cc sebanyak  10  cc.  Sampel  darah  dimasukkan  ke dalam tabung serum dan dibiarkan selama 2 hingga 3  jam  pada  suhu  15ºC,  selanjutnya  disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit pada suhu  4ºC  untuk  pengambilan  serumnya.  Serum disimpan  dalam  freezer  dengan  suhu  -20ºC (Prasdini, 2014).
Pengukuran  Kadar  LH  Serum  Sapi  FH Postpartum
Analisa  kadar  LH  menggunakan  metode ELISA  dengan  kit  yang  digunakan  adalah  Bovine
LH ELISA Kit (Bioassay, USA). Kit berisi larutan standar,  enzim  conjugate,  washing  buffer,  substrat A  dan  B,  dan  stop  dilution.  Diambil  50µl  standar, sampel, dan kontrol ke dalam sumuran. Kemudian diambil  100  µl  Enzim  Conjugate  ke  masing- masing  larutan  dan  dimix  selama  30  detik. Suspensi diinkubasi pada suhu 37ºC selama 1 jam. Sumuran  microtiter  dibilas  3  kali  dengan  buffer 100  ml.  Ditambahkan  100  µl  substrat  A  dan  B (substrat A: substrat B = 1:1). Suspensi diinkubasi pada  suhu  37ºC  selama  15  menit,  dalam  kondisi gelap. Reaksi dihentikan dengan menambahkan 50 µl  HCl  sebagai  stop  dilution  pada  masing-masing suspensi.  Optical  Density  dihitung  pada  panjang gelombang  450  nm  dengan  pembaca  mikrotiter. Data  yang  diperoleh  dari  pembacaan  standar dicatat dan dibuat kurva standar, dengan nilai serap diletakkan  pada  sumbu  vertikal  (Y),  dan konsentrasi  LH  pada  sumbu  horizontal  (X). Berdasarkan  kurva  standar  tersebut,  diperoleh rumus  persamaan  linear  yang  digunakan  untuk menghitung konsentrasi LH pada serum.
3.2.1 Analisis Data
Rancangan penelitian ini merupakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Data  kadar  LH dan  kadar  MDA  yang  diperoleh  dianalisis  dengan menggunakan  uji-t  dengan  α  5%.  Uji-t  digunakan untuk  menguji  pengaruh  pemberian  selenium  dan vitamin E terhadap kadar LH dan MDA serum sapi FH  postpartum.  Kemudian  dilakukan  uji  korelasi untuk  mengetahui  hubungan  antara  kadar  MDA dan  LH  serum  sapi  FH  postpartum  yang dihasilkan.  Uji  statistik  tersebut  dilakukan  dengan menggunakan software SPSS 16.0 for Windows  .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar LH pada Serum Sapi FH Postpartum
Hasil pengamatan kadar Luteinizing Hormone  (LH)  serum  sapi  FH  postpartum ditunjukkan  pada  Tabel  1.  Kadar  LH  yang didapatkan  menunjukkan  hasil  yang  cenderung mengalami  peningkatan  dari  serum  kontrol dibandingkan  dengan  kadar  LH  serum  perlakuan. Peningkatan  tersebut  terjadi  pada  serum  yang diambil  pada  hari  ke  25  postpartum  maupun  pada hari  ke  45  postpartum.  Peningkatan  kadar  LH tersebut  tidak  menunjukkan  perbedaan  yang  nyata pada uji statistik yang dilakukan. Kadar LH serum
perlakuan  memiliki  rentang  antara  4-12  pg/ml. Hasil  pada  penelitian  sebelumnya  [17],  bahwa konsentrasi LH plasma pada sapi perah postpartum dengan  kondisi  optimal  adalah  sekitar  7,00-12,00 pg/ml  pada  hari  ke  21  sampai  hari  ke  40 postpartum.
Tabel 1. Kadar LH Serum Sapi FH Postpartum
Perl akuan U langan Kadar LH (pg/ml) H ari ke- 25 H ari ke- 45 P0 1 5 ,12 5 ,05 2 5 ,12 5 ,33 3 5 ,11 5 ,06 P1 1 4 ,94 7 ,49 2 5 ,48 6 ,44 3 1 0,71 1 1,52
Kadar  LH  pada  serum  perlakuan  cenderung lebih tinggi dibandingkan dengan serum perlakuan. Hasil  pada  penelitian  sebelumnya  [18]  bahwa, pemberian suplemen selenium dan vitamin E dapat meningkatkan sekresi LH. Vitamin E menyebabkan pelepasan follicle stimulating hormone  (FSH),  adrenocorticotrophic  hormone (ACTH)  dan  luteinizing  hormone  (LH)  [19]. Pemberian  selenium  dan  vitamin  E  dapat meningkatkan konsentrasi LH sapi secara signifikan pada hari ke 22 percobaan [20].

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  bahwa  injeksi  sodium  selenite 1,5  mg/ml  +  vitamin  E  50  mg/ml  cenderung menyebabkan peningkatan LH serum sapi FH pada 25 dan 45 hari postpartum.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  drh.  Widya  Ayu Prasdini,  M.Si  yang  telah  memberikan  izin melakukan  uji  pada  serum  dan  ibu  Achadiah
Rachwati,  S.Pt.,M.Si.  yang  telah  memberikan  LH Bovine ELISA Kit untuk penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Anonim.  2009.  Roadmap  Industri  Susu. www.kemenperin.go.id.  Diakses  tanggal  15 April 2015.
[2] Webster,  J.  1993.  Understanding  The Dairy  Cow.  2nd  Ed.  Blackwell  Scientific Publications. Oxford.
[3] Rhodes,  F.M.,  S.  McDougall,  C.R.  Burke, G.A.  Verkerk  &  K.  L.  Macmillan.  2003. Invited Review: Treatment of Cows with an Extended  Postpartum  Anestrous  Interval.  J. Dairy Sci. 86(6):1876-1884.
[4] Ciccioli,  N.H.  &  R.P.  Wettemann.  2000. Nutritional  Effects  on  Estrus  dan  Ovarian Activity  of  Spring  Calving  First-Calf Heifers. Anim. Sci. Res. Report:160-163.
[5] Castillo,  C.,  J.  Hernandez,  A.  Bravo,  M. Lopez-Alonso,  V.  Pereira,  &  J.L.  Benedito. 2005. Oxidative Status During Late Pregnancy  and  Early  Lactation  in  Dairy Cows. Vet. J. 169:286–292.
[6] Nayyar, S. & R. Jindal. 2010. Essentiality of Antioxidant  Vitamins  for  Ruminants  in Relation to Stress and Reproduction. Iranian Journal of Veterinary Research 11, 1–9.
[7] Bernabucci,  U.,  B.  Ronchi,  N.  Lacetera,  & A.  Nardone.  2005.  Influence  of  Body Condition  Score  on  Relationships  Between Metabolic  Status  and  Oxidative  Stress  in Periparturient  Dairy  Cows.  J.  Dairy  Sci. 88:2017–2026.
[8] Dunnam,  R.C.,  M.J.  Hill,  D.M.  Lawson  & J.C.  Dunbar.  1999.  Ovarian  Hormone Secretory  Response  to  Gonadotropins  and Nitric  Oxide  Following  Chronic  Nitric Oxide  Deficiency  in  the  Rat.  Biol.  Reprod. 60, 959–963.
[9] Abdel-Sater,  K.A.  2011.  Physiological Positive  Feedback  Mechanisms.  American Journal  of  Biomedical  Sciences,  3(2),  145- 155.
[10]  Djujic,  I.,  M.  Demajo,  O.  Jozanov-Stankov &  L.J.  Markovic.  2005.  Health  Benefits  of Consuming  Selenium  –  Enriched  Quail Eggs. Proceedings 5 th
International Symposium  on  Trace  Elements  in  Human: New Perspectives. Athens, Greece, 622-635.
[11]  Parakkasi, A. 1999. Ilmu Makanan Ternak
Ruminansia. Penerbit Universitas Indonesia. Jakarta.
[12]  Beam,  S.W.  &  W.R.  Butler.  1997.  Energy Balance  and  Ovarian  Follicle  Development Prior  to  the  First  Ovulation  Postpartum  in Dairy  Cows  Receiving  Three  Levels  of Dietary Fat. Biol. Reprod. 56:133-142.
[13]  Schillo,  K.K.  1992.  Effect  Of  Dietary Energy On Control Of Luteinizing Hormone Secretion  in  Cattle  and  Sheep.  J.  Anim.  Sci 70: 1271-1282.
[14]  Chapin,  R.E.,  D.K.  Gulati,  P.A.  Fail,  E. Hop, S.R. Russell, J.J. Heindel, J.D. George, T.B.  Grizzle  &  J.L.  Teague.  2000.  The Effects of Feed Restriction on Reproductive Function  in  Swiss  CD-1  mice.  Fundam. Appl. Toxicol. 20: 15-22.
[15]  Rosenfeld, I. & O.A. Beath. 2004. Effect of Selenium  on  Reproduction  in  Goats.  Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 87: 295-297.
[16]  Prasdini, W.A. 2014. Optimalisasi Reproduksi  Sapi  Perah  Frisien  Holstein (FH)  dengan  Penambahan  Variasi  Dosis Selenium-Vitamin E TM Secara
Intramuskular.  Tesis  Fakultas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas Brawijaya Malang.
[17]  Yavas, Y. & J.S. Walton. 2000. Induction of ovulation in postpartum beef cows. Theriogenology 54: 1-23.
[18]   Suartini,  N.K.,  I.G.N.B.  Trilaksana  & T.G.O. Pemayun. 2013. Kadar Estrogen dan Munculnya Estrus setelah Pemberian Buserelin  (Agonis  GnRH)  pada  Sapi  Bali yang  Mengalami  Anestrus  Postpartum Akibat  Hipofungsi  Ovarium.  Jurnal  Ilmu dan  Kesehatan  Hewan,  Vol  .  1,  No.  2:  40- 44.
[19]  Barnes,  M.M.C.  &  A.J.  Smith.  1975.  The Effects  of  Vitamin  E  Deficiency  on  Some Enzymes  of  Steroid  Hormone  Biosynthesis. International  Journal  of  Vitamin  Nutrition Research 45, 396-403.
[20]  Richards,  J.B.,  D.M.  Hallford  &  G.C.  Duff. 1999. Serum Luteinizing Hormone,
Testosterone,  and  Thyroxine  and  Growth Responses  of  Ram  Lambs  Fed  Locoweed (Oxytropis  Sericea)  and  Treated  With Vitamin E/Selenium. Theriogenology, 52(6):1055-1066.