## PENGARUH LARUTAN FLUORIDE TERHADAP AKTIVITAS AMILASE SALIVA
Enny Willianti Bagian Ilmu Penyakit Gigi Dan Mulut Fakultas Kedokteran Universitas Wijaya Kusuma Surabaya email : ennywillianti@yahoo.com

## Abstrak
Fluoride  mempunyai  pengaruh  menguntungkan  yang  sistemik  pada  gigi  terhadap  karies,  yaitu dalam  menghambat karies dihubungkan dengan pembentukan  fluorapatite selama pembentukan enamel. Fluoride juga digunakan secara lokal, misalnya pada obat kumur dan pasta gigi.
Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  menguji  apakah  larutan  fluoride  menghambat  aktivitas amilase saliva dan mengetahui berapa konsentrasi fluoride dalam saliva yang dapat menghambat aktivitas amilase saliva.
Metode penelitian ini adalah penelitian eksperimental dengan desain “the post test only control group design” . Sampel diambil dari pasien dengan kriteria : pria atau wanita, usia 13-20 tahun, keadaan  umum  sehat,  tidak  menderita  kelainan  kelenjar  ludah,  tidak  terdapat  karies,  tidak  ada gingivitis.  Penelitian  dilakukan  dengan  mengumpulkan  saliva  dari  sampel  yang  berpuasa  pada malam harinya dilanjutkan dengan menggosok gigi tanpa pasta gigi pada pagi harinya, kemudian saliva  direaksikan  dengan  amilum.  Penelitian  dilakukan  dengan  menggunakan  reaksi  warna dengan  pemberian  iodium.  Penelitian  yang  sama  dilakukan  dengan  pemberian  NaF  beberapa konsentrasi.
Hasil penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  hampir  pada  semua  kelompok  terdapat  perbedaan aktivitas amylase saliva yang bermakna (p<0,05), kecuali antara kelompok tanpa NaF dengan 1 mM NaF dan 2 mM NaF, 1 mM NaF dengan 2 mM NaF, 2 mM NaF dengan 5 mM NaF, dan 5 mM NaF dengan 10 mM NaF (p>0,05).
Kesimpulan  p ada  penelitian  ditemukan  adanya  pengaruh  fluoride  terhadap  aktivitas  amilase saliva . NaF pada konsentrasi 5 mM atau lebih berpengaruh dalam menghambat aktivitas amilase saliva.
Kata kunci :  amilase saliva, efek fluoride, larutan fluoride.

## EFFECT OF FLUORIDE SOLUTION ON SALIVARY AMYLASE ACTIVITY

## Abstract
Fluoride  has  the  benefit  on  the  tooth  to  inhibit  caries.  Fluoride  is  systemically incorporated  into  the  crystal  lattice  of  enamel  by  exchanging  positions  with  the hydroxyl ion to result in formation of fluorapatite. Fluoride  used locally may inhibit tooth demineralization,  one  of  the  mechanism  is  that  fluoride  is  suspected  to  inhibit  salivary amylase activity.
The  aim  of  this  research  is  to  exam  whether  fluoride  inhibits  salivary  amylase  activity and at what concentration.
Method  of  this  research  was  experimental  research  and  the  design  was  "The  posttest  only control group design". The samples were taken from patients with criteria: man or woman, 13- 20  years  old,  in  fit  condition,  no  salivary  gland  disorder,  no  caries,  no  gingivitis.  Saliva  was collected  from  samples  fasted  in  the  night,  and  asked  to  brush  their  teeth  without  using toothpaste.  This  experiment  used  iodium  to  detect  the  color  reaction.  The  method  also used NaF with several concentrations in saliva.
The  result  of  this  experiment  indicated  that  almost  all  groups  have  a  statistically significant  differences  salivary  amylase  activity  (p<0,05),  except  between  the  group without  NaF  and  with  1  mM  NaF  and  2  mM  NaF,  betweenl  mM  NaF  and  2  mM  NaF, between 2 mM NaF dan 5 mM NaF, between 5 mM NaF and 10 mM NaF (p>0,05).
Conclusion  of  this  research  found  that  NaF  was  found  to  inhibit  the  salivary  amylase activity when the fluoride concentration was at and above 5 mM.
Keywords: Salivary amylase, Fluoride effects, Fluoride solution.

## PENDAHULUAN
Sebagian besar zat makanan dimakan dalam  bentuk  yang  tidak  dapat  langsung dipakai oleh organisme, karena zat makanan tidak dapat diabsorpsi dari saluran pencernaan  sebelum  zat  makanan  tersebut dipecah  menjadi  molekul  yang  lebih  kecil. Pemecahan  zat  makanan  alamiah  ini menjadi  bentuk  yang  dapat  diserap  disebut proses pencernaan.
Perubahan    kimia      pada    proses pencernaan        dilakukan      dengan  bantuan
enzim  hidrolase  pada    saluran    pencernaan. Enzim  ini    mengkatalisis  hidrolisis  protein menjadi  asam          amino,  polisakarida menjadi  monosakarida  dan  triasilgliserol menjadi  2-monoasilgliserol,        gliserol  dan asam  lemak.
Di  dalam  rongga  mulut,  makanan akan  bercampur  dengan  saliva.  Saliva disekresi  oleh  3  pasang  kelenjar  saliva, yaitu: kelenjar parotis, kelenjar submaksilaris,  dan  kelenjar  sublingualis 1 .
Saliva  terdiri  dari  kira-kira  99,5% air,  komponen  anorganik  terutama  adalah elektrolit dalam bentuk ion (Na, K, Ca, Mg, Cl, HCO 3 dan fosfat), komponen (bio)organik  terutama  adalah  protein  dan musin dan sejumlah kecil asam amino, urea, asam  uric,  dan  kolesterol 2 .  Saliva  berperan sebagai pelicin rongga mulut dan membantu dalam  proses  menelan.  Saliva  mengandung enzim amilase, yang umum disebut ptyalin ,      yang        akan        menghidrolisis polisakarida      menjadi  molekul  yang  lebih kecil,  hasil  akhirnya  terutama  berupa disakarida,  yaitu  maltosa.  Amilase  saliva berperan  penting  dalam  kolonisasi  dan metabolisme streptococcus , yang mengarah    pada  pembentukan  plak  dan karies, karena amilase saliva telah diidentifikasi  membentuk aquired  pellicle pada  permukaan  gigi 3 ,  sehingga  dapat bertindak  sebagai  reseptor  untuk  adesi mikroorganisme  pada  permukaan  gigi 4 .
Keistimewaan  amilase  menghidrolisis  zat tepung sehingga meningkatkan produk  yang dapat diubah menjadi asam 5 .
Amilase  saliva  dianggap  penting untuk  kesehatan  dalam  hal  aktivitas  intra oral.  Amilase  saliva  merupakan  enzim pencernaan  penting  yang  dihasilkan  oleh kelenjar  ludah.  Pencernaan  saliva  untuk menghidrolisis  zat  tepung  seringkali  tidak
selesai, karena waktunya yang singkat untuk dapat  bekerja  terhadap  makanan.  Hal  ini tergantung  apakah  makanan  ditelan  dalam bentuk gumpalan atau mengunyahnya secara fisiologis dalam waktu yang lama. Pencernaan polisakarida disempurnakan oleh  amilase  pankreas,  dengan  kerja enzimatik dan kespesifikan serupa. Kemudian,  maltase  akan  menghidrolisis maltosa  untuk  memproduksi  unit  glukosa yang  akan  diserap  ke  dalam  aliran  darah 6 .
Aktivitas  amilase  telah  menjadi  fokus berbagai  penelitian  tentang    perkembangan karies.  Beberapa  diantaranya  menunjukkan hubungan yang positif dan negatif, sedangkan  yang  lain  tidak  menunjukkan korelasi 7 .
Sampai  saat  ini  proses  karies  masih merupakan suatu masalah yang besar  dalam kesehatan    gigi.    Karies    terjadi    karena keadaan    yang      tidak    seimbang  antara proses demineralisasi dan proses remineralisasi 8 . Proses   demineralisasi  dan remineralisasi  dapat  berubah  sepanjang  hari dengan berbagai tingkat intensitas tergantung  pada  sifat  saliva,  kebersihan mulut  dan  kebiasaan  makan.  Teori  Larsen menjelaskan bahwa peningkatan konsentrasi fluoride  sebesar  0,5  –  1,0  ppm  pada  air minum  sudah dapat  merubah demineralisasi menjadi remineralisasi 9 .
Ada  empat  faktor  dasar  pada perkembangan  karies,  yaitu:  bakteri,  gigi, gula, dan waktu. Tetapi sekarang didapatkan bahwa faktor antibodi merupakan salah satu faktor dalam mencegah terjadinya karies 10 .
Karies  dapat  terjadi  bila  ada  bakteri kariogenik yang memproduksi asam sehingga  mengakibatkan  pH  kritis  (4,5  – 5,5) dan kemudian akan melarutkan enamel. Selain  itu,  gula  pada  makanan  akan  dicerna oleh  bakteri  yang  berkolonisasi  sehingga memproduksi  asam.  Tetapi  karies  tidak dapat  terjadi  bila  ada  respon  imun  yang efektif. Sudah  menjadi  fakta  umum bahwa  konsumsi  jumlah  fluoride  yang optimum mempunyai pengaruh yang menguntungkan  pada  gigi  terhadap  karies. Pengaruh  fluoride  yang  menghambat  karies dihubungkan dengan pembentukan fluorapatite  selama  pembentukan  enamel, sehingga  menghasilkan  permukaan  yang lebih  tahan  terhadap  asam.  Secara  alamiah, saliva mempunyai potensi untuk remineralisasi  gigi  karies  yang  dini  bila faktor penyebab lokal dikurangi 11 .
Konsentrasi   fluoride  dalam  saliva berkisar    antara    0,005  –  0,026  ppm  tidak memberi efek remineralisasi yang bermakna    pada  gigi 12 ,        karena      itu diperlukan    peningkatan    kadar   fluoride dalam        saliva 13 .  Jika  kadar  fluoride
berlebihan,  maka  gigi  berwarna  kecoklatan yang  biasa  disebut mottled  enamel dan permukaan  gigi  menjadi  kasar.  Untuk  itu perlu dianjurkan penggunaan bahan fluoride dengan kadar serendah mungkin tetapi dapat menghasilkan efek pencegahan yang optimal serta aman dipakai anak-anak.
Untuk menaikkan konsentrasi fluoride dalam saliva dapat digunakan bahan yang  menurut  penggunaannya  tidak  untuk diminum  tetapi  akan  tinggal  cukup  lama  di dalam  mulut,  kontak  dengan  permukaan gigi, misalnya: pasta gigi, obat kumur,larutan untuk aplikasi topikal 14 . Fluoride sangat efektif dalam pencegahan  karies  ketika  tingkat  fluoride rendah  yang  konstan  di  dalam  mulut. Fluoride dapat digunakan dengan  cara  lokal dan sistemik. Cara lokal diantaranya dengan menggunakan  obat  kumur.  Pemakaian fluoride  dalam  bentuk  larutan  merupakan salah  satu  tindakan  perlindungan  khusus yang  paling  baik.  Zat  yang  paling  sering digunakan  adalah  sodium  fluoride  (NaF) karena  dapat  disimpan  untuk  waktu  yang agak lama dan menjadikan enamel gigi lebih tahan terhadap asam, meningkatkan remineralisasi  atau  mengurangi  produksi asam  yang  dihasilkan  oleh  mikroorganisme 15 .
Dari beberapa bahan aplikasi fluoride  secara  topikal,  persenyawaan  yang efektif  untuk  mencegah  karies  gigi  adalah sodium  fluoride.  NaF  dapat  ditambahkan pada pasta gigi dan obat kumur. Tetapi  NaF mempunyai  sifat  beracun.  Bila  kadar fluoride berlebihan bisa menyebabkan hypersalivasi,  nausea,  vomiting,  epigastric pain,  diare .  Pada  dosis  yang  lebih  besar dapat  menyebabkan paralysis ,  kelelahan otot, chronic convulsion , awal dari gangguan pernafasan dan jantung, gangguan ginjal, dan meninggal 4-5 jam kemudian 15 .
Maka  dalam  penelitian  ini  dilakukan  secara in  vitro,  dengan  mengambil  saliva  yang kemudian  diberi  larutan  NaF  dengan konsentrasi tertentu.
Sifat  fluoride  yang  penting  adalah mengurangi kelarutan enamel oleh asam dan mempunyai  efek  menghambat  beberapa enzim,  seperti  enzim  enolase    dan  enzim yang berperan dalam metabolisme karbohidrat.  Fluoride  selain  mempengaruhi mekanisme enzim enolase juga mempengaruhi  pembentukan  glukosa 16 .
Ada  3  mekanisme  dari  fluoride  dalam menghambat terjadinya karies :
1. Meningkatkan    daya      tahan enamel   terhadap   kelarutan   asam oleh      karena  konsentrasi  fluoride
yang tinggi pada permukaan enamel.
2. Kemampuan      dari    fluoride    untuk meremineralisasi      gigi      yang mengalami demineralisasi dan hiporemineralisasi enamel.
3. Efek      anti      bakteri      dari      fluor yang      diberikan      dengan konsentrasi      tinggi  secara    lokal atau topikal.
Wefel  (1982)  mengatakan  lebih terperinci bahwa fluoride dapat mempengaruhi  struktur  anorganik  gigi  dan metabolisme  bakteri  pada  plak,  beberapa mekanismenya yaitu : mengurangi kelarutan enamel, memperbaiki kristalisasi gigi, meningkatkan daya remineralisasi, menurunkan  energi  pada  permukaan  gigi, mengurangi  jumlah  bakteri,  mengurangi flora mulut yang kariogenik dan menghambat  glikolisis.  Mekanisme  ini berjalan sesuai dengan konsentrasi fluor 16 .
Untuk dapat bereaksi secara optimal, enzim  memerlukan  kondisi  tertentu  selain pH  dan  suhu  yang  sesuai.  Ada  senyawa tertentu yang menghambat reaksi enzimatik, senyawa ini berfungsi menghambat (inhibitor).  Sifat  fluoride  yang  dapat menghambat  enzim  mempunyai  peranan penting pada proses terjadinya karies, tetapi hal ini tergantung pada konsentrasi
fluoride.  Enzim  yang  sensitif  terhadap fluoride  yaitu  enzim  yang  berperan  dalam metabolisme karbohidrat.
Berdasarkan  pada  uraian  bahwa fluoride  dapat  menghambat  enzim  yang berperan  dalam  metabolisme  karbohidrat, pengaruh  fluoride  secara  sistemik  dalam menghambat  karies  dihubungkan  dengan pembentukan fluorapatite selama pembentukan enamel. Jika di dalam  mulut, fluoride  diduga  dapat  menghambat  karies dengan  cara  antara  lain  menghambat  kerja enzim amilase dalam saliva.
Pada    penelitian  menurut      Hara (1995),      sodium      fluoride  menghambat aktivitas    enzim      amilase    pada konsentrasi   fluoride   5 x 10 -2 M (50mM) atau    lebih.  Tetapi  menurut  penelitian Nicolau  dkk.  (2001),  sebanyak  tujuh sukarelawan diambil salivanya yang sebelumnya berkumur dengan air,
kemudian  diberi  larutan  NaF  dengan konsentrasi  0  mM,  10  mM,  50  mM,  75 mM, 100 mM, 500 mM, ternyata tidak ada perbedaan  yang  signifikan  dalam  aktivitas amilase saliva. Sedangkan secara  in  vivo, dengan  menggunakan  0,05%  NaF  (=  11,9 mM)  yang  dipakai  untuk  berkumur,  saliva dikumpulkan  dari  waktu  yang  berbeda  (5 menit,  10  menit,  15  menit,  30  menit,  60
menit)  ternyata  tidak  ada  perbedaan  yang signifikan dalam aktivitas amilase dibandingkan dengan yang berkumur dengan air 17 . Jadi dalam hal ini belum ada kesepakatan  pendapat  mengenai  hasil penelitian mengenai masalah ini.
Tujuan      penelitian    ini      adalah untuk   menguji   apakah   larutan   fluoride menghambat    aktivitas    amilase  saliva  dan mengetahui  berapa  konsentrasi  fluoride dalam  saliva  yang  dapat  menghambat aktivitas amilase saliva. Hasil dari penelitian  ini  diharapkan  dapat  menjadi sumbangsih bagi ilmu pengetahuan, pengembangan  teori  bagi  yang  ingin melakukan penelitian sejenis tentang fluoride  yang  dapat  menghambat  aktivitas enzim  amilase  saliva,  sehingga  bermanfaat dalam  mencegah  terjadinya  demineralisasi enamel pada gigi.

## METODE
Tujuh  orang  dipilih  selama  periode penelitian  yang  memenuhi  kriteria  sampel disertai informed  consent .  Sampel  dipilih dengan  kriteria:  pria  atau  wanita  berusia 13-20  tahun,  keadaan  umum  sehat,  tidak menderita  kelainan  kelenjar  ludah,  tidak terdapat karies, tidak ada gingivitis.
Metode  yang  digunakan  adalah the post  test  only  control  group  design . Sebelum  dimulai  percobaan,  sukarelawan berpuasa  pada  malam  hari,  dan  pada  pagi hari  menggosok  gigi  tanpa  pasta  gigi. Percobaan  dilakukan  mulai  jam  09.00 sampai jam 12.00 dalam suhu kamar 37 o C.
Persiapan    pembuatan  reagen: starch solution  (soluble  starch) 0,5%;  500  mg starch ditambahkan  aquabidest  destilata sampai 100  ml.(blanko)  :  0,1 ml  aqua;  4 ml  HCl 0,05 N;  0,4 ml  KI-KIO3.
Subyek    berkumur    dengan    air, saliva  dikumpulkan      selama  3  menit tanpa    distimulasi  ,    tiap  1  menit    saliva dikeluarkan      dan    ditampung        di    gelas kimia.    Saliva    sebanyak    3  ml    ditambah aquabidest   9  ml  (1 : 3)  dimasukkan  ke dalam      tabung,      kemudian      ditutup dengan      parafilm  lalu  dibolak-balik perlahan.    Percobaan  ini  terdiri  dari  8 kelompok:      tanpa  NaF  (sebagai  kontrol), NaF 1 mM,  NaF 2 mM,  NaF 5 mM,  NaF 10  mM,  NaF 20  mM,  NaF 50  mM,  NaF 100 mM.
Kelompok  I  (tanpa  NaF)  :    4  ml amilum  0,5%;    0,4  ml  saliva  encer  (1:3); 0,2  ml  aqua.    Dari      campuran      tersebut
diambil   0,1  ml   tiap    15   detik     dan dipindahkan  ke  dalam      masing-masing tabung  (sebanyak  15  tabung)  yang  telah berisi  4  ml  HCl  0,05  N.  Kemudian ditambahkan  0,4  ml  KI-KIO3.  Warna akan      berubah      dari    warna    biru keunguan,    lalu    merah        keunguan, kemudian      merah      kecoklatan,    dan terakhir   warna  kuning.   Setelah   timbul warna      kuning,      catat      waktunya,    dan dibaca  dengan    spektrofotometer    λ  520 nM.  Maka akan diketahui   berapa substrat yang dicerna.
Percobaan    juga  dilakukan  dengan cara  yang  sama  pada  kelompok  perlakuan tetapi  sebelumnya  telah  ditambahkan  NaF dengan kadar  1 mM,  2 mM,   5 mM,  10 mM,    20  mM,        50mM,  100mM  dalam saliva.      Kemudian    dibaca    pada      waktu yang  sama   dengan   terbentuknya   warna kuning      pada      percobaan      kelompok  I (kelompok kontrol). Catat   berapa  substrat yang  dicerna  pada masing-masing tabung, bandingkan  antara      yang    tanpa  NaF dengan  yang  ditambah  NaF.  Bila  hasilnya yang  dengan  NaF  lebih  sedikit  substrat yang  dicerna,  maka  bisa  dikatakan  bahwa NaF menghambat aktivitas enzim.
Untuk        menghasilkan    data      yang      dapat    diolah    secara    statistik,  maka  hasilnya dimasukkan dalam rumus :
Jumlah substrat                          Abs. t 1 -  Abs. blanko yang dicerna     =  200 mg -                                            x 200 mg Abs. to  -  Abs. blanko
Sehingga  dapat  diketahui  aktivitas enzim  amilase  saliva  per  menit.  Aktivitas amilase  saliva  dinyatakan  dalam  mg substrat yang dicerna/ ml saliva/ menit pada kondisi percobaan.
Hasilnya  selanjutnya  diuji  dengan paired  t  test (p  <  0,05)  untuk  mengetahui adanya  pengaruh  larutan  fluoride  terhadap aktivitas amilase saliva.

## HASIL
Dari hasil penelitian mengenai pengaruh larutan fluoride terhadap aktivitas amilase saliva didapatkan hasil seperti pada Tabel 1. di bawah ini.
Pada  Tabel  1.  di  atas  menunjukkan semua  kelompok  pengukuran  aktivitas amilase  saliva  mempunyai  besar  sampel masing-masing  7.  Kelompok  tanpa  NaF mempunyai  rerata  aktivitas  amilase  saliva terbesar  yaitu  51,5486  mM.  Sedangkan kelompok NaF 100  mM  mempunyai rerata aktivitas  amilase  saliva  terkecil  yaitu 42,4093 mM.
Tabel 1. Rerata aktivitas amilase saliva
Kelompok N X sd Tanpa NaF 7 51,5486 7,7253 NaF 1 mM 7 51,0014 7,4732 NaF 2 mM 7 49,3671 7,7436 NaF 5 mM 7 47,6371 6,6268 NaF 10 mM 7 46,8093 7,2147 NaF 20 mM 7 44,9371 6,4227 NaF 50 mM 7 43,6729 6,2045 NaF 100 mM 7 42,4093 6,1634
Keterangan : N  = Besar sampel
X  =  Rerata  (mg  soluble  starch  dicerna/ml saliva/menit)
Sd =  Standart deviasi
Nilai  rerata  aktivitas  amylase  saliva pada  semua  kelompok  dapat  dilihat  pada Gambar 1.
51,5486 51,0014 49,3671 47,6371 46,8093 44,9371 43,6729 42,4093 0 10 20 30 40 50 60 Tanpa NaF NaF 1 mM NaF 2 mM NaF 5 mM NaF 10 mM NaF 20 mM NaF 50 mM NaF 100 mM A k tiv it a s a m ila s e s a liv a
Gambar  1.  Nilai  rerata  aktivitas  amilase saliva pada semua kelompok.
Sebelum  dilakukan  uji  beda  antar kelompok  pengukuran  aktivitas  amilase saliva, terlebih dahulu masing-masing kelompok  pengukuran  aktivitas  amilase saliva  diuji  distribusi  datanya    terlebih dahulu    dengan    uji    statistik Kolmogorov Smirnov  Test ,  dan  didapatkan  hasil    pada semua      kelompok    pengukuran    aktivitas amilase  saliva   mempunyai   nilai p > 0,05. Hal ini menunjukkan bahwa semua kelompok  pengukuran  aktivitas  amilase
saliva  tersebut  mempunyai  distribusi  data yang normal.
Untuk mengetahui perbedaan aktivitas  amilase  saliva  antar  kelompok pengukuran  dilakukan  dengan  uji Paired  T Test .  Hal  ini  disebabkan  karena  kedelapan kelompok data tersebut mempunyai distribusi data yang normal dan sampel yang berpasangan.  Dari  hasil  uji Paired  T  Test didapatkan  hasil  seperti  pada  Tabel  2.  di bawah ini.
Tabel 2. Hasil Uji Paired T Test pengukuran aktivitas amilase saliva.
1 mM NaF 2 mM NaF 5 mM NaF 10 mM NaF 20 mM NaF 50 mM NaF 100 mM NaF Tanpa NaF 0,172 0,065 0,014 0,005 0,001 0,001 0,001 1 mM NaF 0,051 0,014 0,003 0,001 0,001 0,001 2 mM NaF 0,062 0,013 0,001 0,001 0,001 5 mM NaF 0,069 0,007 0,004 0,001 10 mM NaF 0,004 0,017 0,004 20 mM NaF 0,011 0,001 50 mM NaF 0,001 100 mM

## NaF
Dari  hasil  uji Paired  T  Test pada Tabel  2.  dapat  kita  ketahui  hampir  secara keseluruhan  mempunyai  nilai  p  <  0,05.  Hal ini  menunjukkan  bahwa  ada  perbedaan aktivitas amilase saliva yang bermakna pada kelompok tersebut. Kecuali antara kelompok tanpa  NaF  dengan  1  mM  Naf  dan  2  mM
NaF,  1  mM  Naf  dengan  2  mM  NaF,  2  mM NaF  dengan  5  mM  NaF  dan  5  mM  NaF dengan  10  mM  NaF  mempunyai  nilai  p  > 0,05. Hal  ini  menunjukkan  bahwa tidak  ada perbedaan    aktivitas  amilase  saliva  yang bermakna pada kelompok tersebut.

## PEMBAHASAN
Pada penelitian sebelumnya (Nicolau,  2001)  menyatakan  tidak  ada perbedaan  yang  signifikan  dalam  aktivitas amilase  saliva  antara  subyek  pria  dan wanita 18 ,  sehingga  dalam  penelitian  ini jenis kelamin tidak dibedakan .
Metode  sampling  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  dengan  cara selective sampling, dimana  sampel  didapat  selama periode penelitian yang ditetapkan selama 2 bulan  dan  memenuhi  kriteria  sampel. Sampel  diperoleh  dari    pasien  yang  datang ke tempat praktek kami,  lalu kami periksa. Dari pemeriksaan tersebut, kami memperoleh sampel sebanyak 7 orang yang memenuhi kriteria sampel.
Pengaruh  NaF  dalam  menghambat aktivitas  amilase  saliva  diamati  dengan adanya penurunan substrat yang dicerna 16 .
Berarti  semakin  sedikit  substrat  yang dicerna,  semakin  sedikit  pula  maltosa  dan glukosa yang dihasilkan.
Pada  Gambar  1.  dapat  kita  ketahui secara  keseluruhan  nilai  aktivitas  amilase saliva.  Tampak  terjadi  penurunan  nilai rerata  aktivitas  amilase  saliva  pada  semua kelompok.  Dari  kelompok  NaF  1  mM menurun bertahap sampai dengan kelompok NaF 100 mM.
Dalam penelitian ini untuk melakukan  uji  beda  antar  kelompok, terlebih  dahulu  masing-masing  kelompok diuji  distribusi  datanya  dengan  uji  statistik Kolmogorov Smirnov Tes t  dan  didapatkan nilai  p > 0,05 pada semua kelompok.
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  semua kelompok  tersebut  mempunyai  distribusi data  yang  normal.  Dan  untuk  mengetahui perbedaan  aktivitas  amilase  saliva  antar kelompok dilakukan uji Paired T Test .
Pada  Tabel    2.  dapat  kita  ketahui hampir  secara    keseluruhan    mempunyai  P <  0,05.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ada perbedaan  aktivitas  amilase  saliva  yang bermakna  pada  kelompok  tersebut,  kecuali antara  kelompok  tanpa  NaF  dengan  1  mM NaF dan 2  mM NaF, 1  mM NaF dengan 2 mM NaF, 2 mM NaF dengan 5 mM, dan 5 mM  NaF  dengan  10  mM  NaF  (p  >  0,05). Bila  dibandingkan  kelompok  tanpa  NaF dengan  kelompok  yang  lain  (kelompok dengan  NaF)  maka  pada  kelompok  5mM NaF,  10  mM  NaF,  20  mM  NaF,  50  mM NaF,  100  mM  NaF  mempunyai  p  <  0,05. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kelompok tersebut terdapat perbedaan yang bermakna dalam  aktivitas  amilase  saliva.  Sedangkan kelompok 1 mM NaF dan kelompok 2 mM NaF mempunyai p > 0,05. Ini menunjukkan
bahwa  kelompok  tersebut  tidak  terdapat perbedaan  yang  bermakna  dalam  aktivitas amilase saliva.
Hasil tersebut sesuai dengan pernyataan  Wefel (1982)  yang  mengatakan bahwa sifat fluoride yang dapat menghambat enzim tergantung pada konsentrasi ion  fluoride. Pada   konsentrasi yang   rendah    maka   tidak    mempunyai sifat  menghambat  enzim,  tetapi  pada konsentrasi  yang  tinggi  dapat  mempunyai sifat  menghambat 16 .  Dari    uraian  di    atas, maka    dapat      disimpulkan      bahwa      pada konsentrasi  NaF  5  mM  sudah  berpengaruh dalam menghambat aktivitas amilase saliva.
Dalam  penelitian  Hara  (1995) membuktikan  bahwa  NaF  menghambat aktivitas amilase saliva pada konsentrasi 50 mM atau lebih. Sedangkan hasil  penelitian Nicolau  (2001)  pada    konsentrasi    NaF  10 mM    sampai  500  mM  tidak  ada  perbedaan yang bermakna dalam menghambat aktivitas amilase saliva 17 .
Sehingga hasil penelitian ini menunjukkan  adanya  perbedaan  pendapat antara  hasil  penelitian  sebelumnya 17,18 dengan  hasil  penelitian  kami.  Perbedaan tersebut  mungkin  disebabkan  karena:  (1). Metode yang dipakai menggunakan metode modifikasi dengan melihat reaksi
perubahan  warna  biru  menjadi  kuning, yaitu  mengukur  jumlah  substrat    (amilum) yang telah dicerna, bukan mengukur jumlah maltosa  atau  glukosa.  Dalam  penelitian sebelumnya yang dilakukan Nicolau (2001) menghitung  aktivitas  amilase  per  miligram protein 18 .  Sedangkan  dalam  penelitian  ini, kami tidak menghitung jumlah protein; (2). Perbedaan pengenceran saliva; (3). Perbedaan  individu  yang  diperiksa  (ras, pola makan dan minum). Penentuan metode yang  tepat  dalam  menghitung  aktivitas amilase sulit ditentukan dalam menyiapkan substrat  dan  konsentrasinya 19 .  Dari  hasil penelitian  kami  menunjukkan  bahwa  NaF menghambat  aktivitas  amilase  saliva  pada konsentrasi  5  mM  atau  lebih,  sedangkan pada konsentrasi  yang  lebih rendah (1  mM dan  2  mM)  tidak  menghambat  aktivitas amilase saliva.
Dari  uraian  di  atas  dapat  ditarik kesimpulan bahwa adanya pengaruh larutan fluoride (NaF) dalam menghambat aktivitas amilase  saliva,  sehingga  dapat  mencegah terjadinya demineralisasi enamel pada gigi. NaF  pada  konsentrasi  5  mM      atau      lebih berpengaruh      dalam      menghambat aktivitas   amilase   saliva, sedangkan   NaF dengan   konsentrasi  1  mM   dan  2  mM tidak  menghambat aktivitas  amilase.
Dalam  penelitian  ini,  untuk  melihat aktivitas  amilase  kami  menghitung  sisa substrat  yang  dicerna,  bukan  menghitung maltosa  yang  terbentuk.  Selain  itu  belum diketahui  jenis  hambatan  NaF  terhadap aktivitas  amilase.  Untuk  penelitian  lebih lanjut dapat dikembangkan dengan mencari jenis  hambatan  dan  mekanisme  kerjanya. Penelitian  kami  dilakukan  secara  in  vitro, bisa  dikembangkan  dengan  penelitian secara in vivo.

## SIMPULAN
Dari  hasil  analisa  dan  diskusi  data,  dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut :
1. Dalam  penelitian  ini  ditemukan adanya  pengaruh  larutan  fluoride (NaF)  dalam  menghambat  aktivitas amilase  saliva,  sehingga  dapat mencegah  terjadinya  demineralisasi enamel pada gigi.
2. NaF  pada  konsentrasi  5  mM  atau
lebih berpengaruh dalam menghambat aktivitas amilase saliva,  sedangkan  NaF  dengan konsentrasi  1  mM  dan  2  mM  tidak menghambat aktivitas amylase.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Amerongen,  AVN.,  1991.    Ludah    dan kelenjar    ludah:    arti    bagi    kesehatan gigi,    Gajah  Mada  University  Press,
Yogyakarta.Arglebe, C., 1981. Biochemistry    of    human  saliva.
Advances    in  Oto-Rhino-Lar.  26:  97-
234.
2. Orstavik  D.,  Kraus  FW.  The  acquired pellicle immunofluorescent demonstration  Of  spesific  proteins.  J. Oral Pathol, 2:68-76.
3. Scanniepo  FA.,  1995.  Salivary  amylase promotes    adhesion  of  oral  streptococci to Hydroxyapatite. J. Dent Res, 74:1360- 6.
4. Scanniepo  FA.,    1990.      Structural relationship    between   the   enzymatic and  Streptococcal    binding    sites    of human    salivary    alpha      amylase.
Biochem Biophys Res Commun, 173:1109-15.
5. Jansen  BG.,  1995.  Pencernaan/absorpsi dari traktus gastrointestinal. Oral Biology. 691-692.
6. Turner NC., A biochemical pattern basic to tooth decay. J. Dent. Res, 61: 20-31.
7. Reintsema  H.,  1986.      In    vivo  fluoride uptake  from   fluoridated    toothpastes, in  “factors  relating  to  demineralization and remineralization of the  teeth”,  IRL Press Ltd. (oxford). p. 175-180.
8. Larsen  MJ.,  1989.  Patterns  of  dental fluorosis  in  a  European  country  in relation  to  Fluoride  concentrations  in dringking water. J.Dent Res, 66:10-2.
9. Oetomo  B.,  2002.  Imunologi  oral. Kelainan di dalam rongga mulut. FK UI.
10. Thaddeus  G.,  1982.  Remineralization  of human  enamel  in  vivo,  Netherland dental Journal Suppl. 22, 90: 53-56.
11. Featherstone JDB, O’Reilly MM., Shariati M., Brugler S., 1986. Enhancement    of  Remineralization        in vitro   and    in     vivo,   in    “Factors relating        to    Demineralization  of  the teeth”. IRL Press Ltd, oxford. p. 23-34.
12. Silverstone LM., 1977. Remineralization phenomena. Caries Res.(suppl. 1):59-84.
13. British  patent,  1962.  The  patent  office, London. Patent specification No.
896.257  :  Solutions,    tinctures    and compositions of  matter  for  the  care of teeth  and mouth which contain fluorides of organic bases or amphoteric
compounds.
14. Tarigan R., 1993. Karies gigi, edisi ke 3, Jakarta.
15. Wefel,  JS.,  1982.    Mechanisms      of action    of      fluoride.      In      Pediatric dentistry,    Scientific  foundations  and clinical  practice.  Edited    by  Stewart,
RE.,  The  CV.  Mosby  Co.,  St.  Louis  – London – Toronto: 760-779.
16. Hara  K.,  Yu  MH.,  1995.  Effect    of fluoride    on    human    salivary  amylase activity. Fluoride, 28 (2): 71-74.
17. Nicolau  J.,2001.  In  vivo  effect  of fluoride  on  human  salivary  amylase. Fluoride vol. 34 no. 1:55-60.
18. Tietz      Norbert,  1982.      Fundamentals of      clinical      chemistry.      W  .  B. Saunders   Company: 625-633.
Reviewer Prof. Dr. dr. Prihatini, Sp. PK.(K)