## SELEKSI DAN IDENTIFIKASI ENDOFIT PEMACU PERTUMBUHAN DARI LIMA VARIETAS TEBU DI PT GUNUNG MADU PLANTATIONS LAMPUNG
Screening and Identification of Plant Growth Promotion Endophyte from Five Sugarcane Varieties in PT Gunung Madu Plantations Lampung
Remaja Sitepu 1) *, Suryo Wiyono 2) dan Dwi Andreas Santosa 3)
1) Program Studi Bioteknologi Tanah dan Lingkungan, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor, Jl. Meranti Kampus IPB Dramaga, Bogor 16680
2) Departemen Proteksi Tanaman, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Jl. Meranti Kampus IPB Darmaga Bogor 16680
3) Departemen Ilmu Tanah dan Sumberdaya Lahan, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Jl. Meranti Kampus IPB Darmaga Bogor 16680

## ABSTRACT
Endophyte  is  the  bacteria  or  fungi  which  are  associate  and  colonize  of  internal  plant  tissues  naturally  without negatively impacting of their host. A number of endophytes are useful to plants because play a role as plant growth promotion or as biological control agent. The purpose of this study were to select and identify of plant growth promotion endophytes from five sugarcane varieties in PT Gunung Madu Plantations Lampung. A total of 82 isolates that had passed from hypersensitive reaction  and  hemolysis  test  were  screened  in  two  stages.  The  first  stage  was  performed  in  laboratory  by  inoculating  of  the endophytes on the rice seed and evaluating of the sprouts performance after seven days. Isolates that passed in the first stage were continued to the second by inoculating them to the sugarcane seed in semi-field test. Growth of the sugarcane plant test was  evaluated  up  to  six  weeks  after  planting.  A  total  of  9  bacteria  and  9  fungi  isolates  were  indicated  as  plant  growth promotion  in  the  first  stage,  but  only  two  bacterial  and  one  fungal  isolates  were  consistent  in  the  second  stage.  Molecular identification and alignment of the sequences on the BLAST showed that N12 (isolated from GMP3 root) was 100% identical with Bacillus safensis, L16 (isolated from GMP3 leave) was 99% identical with Domibacillus robiginosus, and C78 (isolated from  PS48  stem)  was  99%  identical  with  Cladosporium  cladosporioides.  The  three  isolates  were  able  to  produce  of  auxin, cytokines, and gibberellins, but B. safensis is higher than the other two.
Keywords: Bacillus safensis, Bacteria, hypersensitive reaction test

## ABSTRAK
Endofit  adalah  bakteri  atau  cendawan  yang  secara  alami  berasosiasi  dan  mengolonisasi  jaringan  internal  tumbuhan tanpa  menimbulkan  dampak  negatif  pada  inangnya.    Sejumlah  endofit  bermanfaat  bagi  tanaman  karena  berperan  sebagai pemacu  pertumbuhan    ataupun  sebagai  pengendali  hayati.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  menyeleksi  dan mengidentifikasi  endofit yang berpotensi  sebagai  pemacu pertumbuhan dari  lima varietas tebu PT Gunung Madu Plantations Lampung. Sebanyak 82 isolat yang telah lolos dalam uji reaksi hipersensitif dan hemolisis diskrining dalam dua tahap. Tahap pertama dilakukan di laboratorium dengan menginokulasikan endofit pada benih padi dan mengevaluasi kecambahnya setelah umur tujuh hari. Isolat yang lolos pada tahap pertama dilanjutkan ke tahap kedua dengan menginokulasikannya pada bibit tebu dalam  skala  semi  lapangan.  Pertumbuhannnya  tanaman  tebu  dievaluasi  hingga  6  minggu  setelah  tanam.  Sebanyak  9  isolat bakteri dan 9 isolat cendawan terindikasi sebagai pemacu pertumbuhan pada tahap pertama, tetapi hanya dua isolat bakteri dan satu isolat cendawan yang konsisten pada pengujian tahap kedua. Identifikasi molekuler ketiga isolat tersebut dan pencocokan sekuens  pada BLAST menunjukkan bahwa isolat N12 yang terisolasi  dari  akar GMP3 mirip  dengan Bacillus safensis 100%, L16 yang terisolasi  dari daun GMP3 mirip dengan Domibacillus robiginosus 99%, dan C78 yang terisolasi  dari batang PS48 mirip dengan Cladosporium cladosporioides 99%. Ketiga isolat tersebut mampu menghasilkan auksin, sitokinin, and giberelin dengan kecenderungan B. safensis lebih tinggi dibanding dua lainnya.
Kata kunci: Bacillus safensis, bakteri, uji reaksi hipersensitif

## PENDAHULUAN
Tebu ( Saccharum officinarum L.) adalah tanaman penting  penghasil  gula  yang  ditanam  di  lebih  dari  80 negara  berlintang  di  bawah  35°  LU/LS  di  seluruh  dunia. Tebu menyimpan sukrosa pada batangnya dan diekstrak di pabrik  untuk  menghasilkan  kristal  gula.  Sekitar  75%  gula
dunia  berasal  dari  tebu,  sisanya  diperoleh  dari  bit  gula, aren, kelapa, dan juga kurma (Ming et al., 2006). Pertambahan penduduk dunia, keterbatasan lahan, peningkatan  biaya  oprasional,  serta  dampak  negatif  dari sistem  budidaya  konvensional  telah  mendorong  sistem budidaya  tebu  ke  arah  yang  lebih  produktif,  efisien, berkesinambungan,  serta  bersahabat  dengan  lingkungan. Salah  satu  upaya  yang  bisa  dilakukan  adalah  dengan
*) Penulis Korespondensi: Telp. +6281376303950; Email. remajas@gmail.com
DOI: http://dx.doi.org/10.29244/jitl.20.1.19-24
memanfaatkan  endofit,  yaitu  bakteri  atau  cendawan  yang secara  alami  berasosiasi  dan  mengolonisasi  jaringan internal tanaman tanpa menimbulkan dampak negatif pada inangnya (Hudson et al., 2010).
Sejumlah  endofit  diketahui  bermanfaat  bagi tanaman  karena  mampu  berperan  sebagai  pemacu pertumbuhan  ( plant  growth  promotion )  dan  juga  sebagai pengendali  hayati  ( biological  control  agent ).  Bakteri endofit  tebu,  seperti Gluconacetobacter  diazotrophicus , Herbaspirillum spp.,  dan Pantoea sp.  diketahui  mampu memfiksasi N 2 dari udara sehingga berpotensi mengurangi atau menggantikan penggunaan pupuk sintetik (Bertalan et al., 2009;  Loiret et  al., 2004;  Njoloma et  al., 2006). Bakteri Burkholderia spp.  dan  cendawan Epicoccum nigrum juga  dilaporkan  memiliki  potensi  sebagai  agen pengendali  hayati  pada  tebu  karena  mampu  menghasilkan beberapa  komponen  antimikroba,  seperti: pyrrolnitrin (Mendes et  al., 2007), epicorazines , epirodines , flavipin , epicoccines , epipiridones , dan epicocarines (Favaro et al., 2012).
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  menyekrining endofit yang berpotensi sebagai pemacu pertumbuhan dari lima varietas tebu di PT Gunung Madu Plantations (GMP) Lampung  Tengah.  Hallmann et  al. (1997)  menyebutkan bahwa  struktur  komunitas  endofit  pada  tanaman  sangat tergantung  pada  faktor  biotik  dan  abiotik.  Faktor  biotik, seperti:  genotipe,  taksonomi,  dan  perlakuan  spesifik (pupuk  dan  pestisida)  sangat  memengaruhi  komposisi komunitas  endofit  di  dalam  tanaman  (Balint et  al .,  2013). Oleh  karena  itu,  variasi  endofit  yang  terisolasi  dari  lima varietas  tersebut  mungkin  akan  berbeda-beda.  Hasil  yang diperoleh  diharapkan  dapat  menambah  pengetahuan tentang  endofit  tebu  dan  menjadi  referensi  dalam melakukan penelitian-penelitian selanjutnya.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Mei  2016 hingga  Februari  2017  di  GMP,  sebuah  perkebunan  tebu swasta  yang  berlokasi  di  Kabupaten  Lampung  Tengah, 105°8’  – 105°41’ Bujur Timur dan 4°32’  – 4°45’ Lintang Selatan dengan ketinggian 30-40 m di atas permukaan laut. Endofit yang diseleksi  terdiri dari 47 isolat bakteri  dan 35 isolat cendawan yang diperoleh dari akar, batang, dan daun tebu  varietas  GMP3,  GMP7,  GM24,  PS48,  dan  TC15. Seleksi  dilakukan  dengan  dua  tahap,  yaitu  tahap  I  untuk mendapatkan paling banyak 20 endofit terbaik dan tahap 2 untuk  mendapatkan  paling  banyak  5  endofit  yang  paling potensial  sebagai  pemacu  pertumbuhan  tebu.  Tahap  I dilakukan  di  laboratorium  dengan  padi  sebagai  tanaman uji,  sedangkan  tahap  II  dilakukan  pada  kondisi  semi- lapangan dengan tebu sebagai tanaman uji.

## Seleksi Tahap I pada Tanaman Padi
Pengujian  dilakukan  mengacu  pada  Hidayati (2014)  dengan  menginokulasikan  endofit  pada  benih  padi dan  mengevaluasi  pertumbuhannya  setelah  berumur  satu minggu. Inokulum bakteri dibuat dengan cara menumbuhkan  isolat  pada  media  molases  0.3%  dan  di- shaker selama  5  hari.  Konsentrasi  yang  dicapai  dengan cara  tersebut  adalah  sekitar  2.9-13.1  ×  10 10 CFU  ml -1 . Benih  padi  diinokulasi  dengan  merendamnya  dalam
suspensi  inokulum  selama  24  jam.  Setelah  itu,  disemai secara  aseptik  di  atas  kertas  saring  lembap  sebanyak  25 biji  per  cawan  petri  dan  diinkubasikan  pada  ruangan bersuhu  28 0 C  selama  7  hari.  Setiap  isolat  diulang  3  kali. Sebagai kontrol negatif, benih padi direndam dalam media molases  0.3%  steril  yang  sudah  diinkubasikan  di  atas shaker selama 5 hari.
Untuk  cendawan,  inokulum  murni  dibuat  dengan menumbuhkan isolat pada PDA dalam cawan petri selama tuju  h  hari.  Setelah  itu,  benih  padi  yang  sudah  direndam dalam  air  steril  selama  24  jam  disemai  di  atas  koloni cendawan  sebanyak  25  biji  per  cawan  petri  dan  diulang  3 kali.  Sebagai  kontrol  negatif,  benih  padi  disemai  pada permukaan  media  PDA  umur  tujuh  hari  tanpa  keberadaan cendawan.  Selanjutnya,  benih  yang  sudah  disemai diinkubasikan sebagaimana halnya bakteri.
Setelah  tujuh  hari,  perkecambahan  padi  dihitung dan dipisahkan bagian akar dan trubus ( upper part ) untuk ditimbang.  Untuk  mendapatkan  berat  kering,  akar  dan trubus  dioven  pada  suhu  110 0 C  selama  12  jam  sebelum ditimbang.  Data  yang  diperoleh  digunakan  untuk menyeleksi  paling  banyak  10  endofit  unggulan  dengan syarat  semua  parameter  pertumbuhan  harus  lebih  baik dibanding  kontrol.  Jika  jumlah  isolat  yang  terpilih  kurang dari  10  maka  semua  isolat  diloloskan  untuk  seleksi  tahap II, sedangkan bila lebih maka dibuat syarat tambahan yang ditentukan kemudian sesuai dengan kecenderungan data.

## Seleksi Tahap II pada Bibit Tebu
Inokulum bakteri dibuat dengan cara menumbuhkan  isolat  dalam  molases  0.3%  selama  7  hari pada  mesin  pengocok  ( shaker ).  Inokulasi  bibit  tebu (varietas  GMP4)  dilakukan  dengan  merendam  bibit  satu- mata  dalam  suspensi  bakteri  selama  2  jam.  Setelah  itu, bibit  ditanam  pada pot  yang telah diisi  media top soil dan pasir  yang  telah  dipasteurisasi  dengan  perbandingan volume  3  :  1.  Setiap  pot  ditanami  3  bibit  tebu  dan  setiap isolat  diulang  pada  3  pot.  Sebagai  kontrol  negatif,  bibit tebu  direndam  dalam  molases  steril  0.3%  yang  juga  telah diinkubasikan di  atas shaker selama 7 hari.  Untuk kontrol positif, tebu ditanam pada pot yang diaplikasi pupuk dasar ( basal  fertilizer )  dengan  dosis  standar  (STD)  dan  juga setengah  dari  standard  (½  STD).  Dosis  pupuk  standar adalah urea 150 kg ha -1 , TSP 200 kg ha -1 , dan KCl 150 kg ha -1 (GMP,  2012),  yang  setara  dengan  urea  0.94  gram, TSP1.25 gram, dan KCl 0.94 gram per pot.
Inokulum
cendawan dibuat dengan menumbuhkan  isolat  pada  media  beras  lembap  steril selama  10  hari.  Sebanyak  40  gram  beras  yang  sudah terkoloni  disuspensikan  dalam  700  ml  air  steril, ditambahkan  perata  poli-oksietilen  sorbitan  mono-oleat (C 58 H 114 O 26 )  0.1%,  dan  dihomogenkan  dengan stirer . Suspensi  tersebut  digunakan  untuk  merendam  bibit  tebu selama  2  jam.  Setelah  itu,  tebu  ditanam  pada  pot sebagaimana  halnya  perlakuan  bakteri.  Sebagai  kontrol negatif, bibit tebu direndam dalam air steril selama 2 jam, sedangkan kontrol positif menggunakan STD dan ½ STD.
Pengamatan jumlah tunas ( tillers ) dan juga tinggi tebu  dilakukan  pada  1-6    minggu  setelah  tanam  (MST) dengan interval 1 minggu. Setelah 6 MST, tebu dibongkar, dibersihkan dari tanah, bagian akar dan trubus dimasukkan dalam  amplop  untuk  dioven.  Proses  oven  dilakukan  pada
suhu 110 0 C selama 48 jam dan setelah itu ditimbang. Data yang  diperoleh  digunakan  untuk  memilih  endofit  yang paling  berpotensi  sebagai  pemacu  pertumbuhan  tebu. Endofit  yang  menjadi  target  adalah  endofit  yang  tebunya mampu menyamai kontrol positif atau paling kurang lebih baik dari kontrol negatif.
Data  yang  diperoleh  diolah  dengan  menganalisa keragamannya  dan  bila  ditemukan  perbedaan  yang  nyata maka  dilanjutkan  dengan  uji  Beda  Nyata  Terkecil  pada taraf uji 95%.

## Identifikasi Spesies Pemacu Pertumbuhan Terbaik
Identifikasi  spesies  dilakukan  dengan  sekuensing gen  16S  rRNA  untuk  bakteri  dan  ITS  untuk  cendawan. Untuk  keperluan  tersebut,  sampel  dikirim  ke Indonesian Center for Biodiversity and Biotechnology (ICBB) Bogor. Selain sekuensing, kemampuan endofit dalam menghasilkan hormon pertumbuhan: auksin, sitokinin, dan giberelin  juga  diuji  dengan  metode  HPLC  ( High Performance Liquid Chromatography ) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Seleksi Tahap I pada Tanaman Padi
Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  rata- rata  perkecambahan  padi  dari  47  isolat  bakteri  adalah 72.8%. Angka ini lebih rendah 2.4% dibanding kontrolnya. Rata-rata berat basah kecambah adalah 0.402 g per cawan sedangkan  berat  keringnya  0.0667  g  cawan.  Berat  basah dan  berat  kering  per  cawan  lebih  tinggi  dari  kontrol, masing-masing  0.045  dan  0.0049  gram.  Untuk  cendawan, rata-rata perkecambahan padi  dari 35 isolat adalah 18.8%, lebih  tinggi  2.5%  dibanding  kontrol.  Rata-rata  berat basahnya  adalah  0.021  g  per  cawan  sedangkan  berat keringnya 0.006 g per cawan. Angka tersebut lebih rendah masing-masing  0.001  dan  0.0002  gram  dibanding kontrolnya.  Perkecambahan,  berat  basah,  maupun  berat kering yang lebih rendah dari kontrol diduga terjadi karena ada  di  antara  endofit  yang  memiliki  efek  negatif terhadap pertumbuhan padi.
Endofit  yang  perkecambahan,  berat  basah,  atau berat  kering  padinya  lebih  rendah  dari  kontrol  diskrening.
Hasilnya  terpilih  9  isolat  cendawan  dan  23  isolat  bakteri. Untuk  cendawan,  karena  jumlahnya  hanya  9  isolat  maka semuanya  langsung  terpilih  untuk  pengujian  berikutnya. Untuk bakteri, dibuat ketentuan tambahan yaitu perkecambahan  padinya  paling  sedikit  80%  sehingga hanya terpilih 9 isolat (data tidak ditampilkan).
Kandidat  pemacu  pertumbuhan  dari  golongan bakteri memiliki parameter kecambah padi yang lebih baik dibanding  cendawan.  Walaupun  begitu,  hal  tersebut  tidak bisa  langsung  dibandingkan  karena  media  pertumbuhan yang  digunakan  memang  berbeda.  Kandidat  endofit pemacu pertumbuhan paling banyak diperoleh dari varietas GMP3,  yaitu  11  isolat.  GMP3  adalah  varietas  hasil persilangan dan seleksi mandiri PT GMP dan dirilis secara nasional  pada  tahun  2012.  Rata-rata  produksi  GMP3 adalah  115.13  ton  tebu  ha -1 ,  rendemen  8.10%,  dan  hablur 9.34  ton  ha -1 .  Selain  unggul  dalam  hal  potensi  produksi, GMP3  juga  memiliki  daya  adaptasi  yang  luas  terhadap musim  sehingga  cocok  ditanam  di  awal  hingga  akhir musim tanam (April - Oktober). GMP3 juga memiliki daya keprasan  yang  baik  dan  relatif  tahan  terhadap  serangan hama dan penyakit utama (GMP, 2011).

## Seleksi Tahap II pada Bibit Tebu
Hasil  pengamatan  berat  kering  akar  dan  trubus tebu  dari  18  isolat  endofit  dapat  dilihat  pada  Tabel  1. Secara umum, berat kering akar berkorelasi positif dengan berat  kering  trubus.  Hasil  analisa  regresi  dan  korelasi (Gomez  dan  Gomez,  1984)  menunjukkan  bahwa  berat kering  akar  dan  trubus  membentuk  kurva  linier  dengan korelasi  sebesar  74.1%  untuk  bakteri  dan  93.2%  untuk cendawan.
Pada  bakteri  endofit,  tidak  ada  isolat  yang  berat kering  akar  dan  trubusnya  lebih  tinggi  dari  kontrol  positif ½  STD  maupun  STD.  Oleh  karena  itu,  isolat  yang  dipilih hanya yang lebih baik dari kontrol negatif saja. Terdapat 4 isolat bakteri yang memenuhi kriteria tersebut, yaitu: N12, L16,  N8,  dan  N3.  Hal  yang  sama  juga  ditemukan  pada perlakuan  cendawan.  Isolat  yang  mampu  mengimbangi kontrol  negatif  hanya satu, yaitu  C78. Berat  kering trubus dari  C78  lebih  tinggi  dari  kontrol  sementara  berat  kering akarnya tidak berbeda nyata.
Tabel 1. Berat kering akar dan trubus tebu umur 6 minggu dari 18 kandidat endofit pemacu pertumbuhan.
Bakteri Berat kering (gram) 1) Cendawan Berat kering (gram) 1) Akar Trubus Akar Trubus N12 5.94 bc 10.85 bc P 22 5.04 cd 8.17 bc L6 5.39 bc 9.67 c C 77 1.76 ef 3.72 de L5 4.48 cd 8.25 cd C 61 2.63 ef 4.77 de L16 6.05 bc 10.55 bc C 49 2.70 ef 4.46 de N5 5.25 bc 8.84 c C 78 6.86 bc 10.85 b N17 5.12 bc 8.61 cd P 19 1.05 f 2.53 e N8 6.99 ab 11.10 bc C 64 3.44 de 6.27 cd L12 5.36 bc 8.96 c C 46 1.55 ef 2.90 e N3 5.57 bc 9.72 c C 54 6.33 bc 9.54 b STD 6.86 ab 12.97 b STD 8.91 a 16.69 a ½ STD 8.63 a 16.86 a ½ STD 7.21 ab 14.17 a Kontrol 5.42 bc 8.74 cd Kontrol 7.20 ab 10.02
1) pada kolom yang sama, perbedaan huruf yang menyertai angka-angka menunjukkan bahwa angka yang disertainya berbeda nyata berdasarkan uji Beda Nyata Terkecil dengan taraf uji 95%.
Tabel 2. Pengaruh endofit unggulan terhadap jumlah tunas dan tinggi tebu. Jenis endofit Perlakuan Jumlah tunas (/pot) 1) Tinggi (cm) 1) 4 5 6 3 4 5 6 Minggu setelah tanam
Minggu setelah tanam Bakteri N12 3.8bc 4.0bc 4.0b 9.9a 13.2 ab 15.3 abc 15.6 bc L16 3.8bc 4.3b 3.8bc 9.6a 12.6 ab 14.7bc 15.5 bc N8 3.0cd 4.0bc 3.8bc 8.0b 10.8c 13.3c 14.5c N3 2.0d 2.0c 2.0c 8.7ab 11.7bc 14.8bc 16.5 b STD 4.8ab 7.0a 7.3a 8.0b 11.7bc 15.7ab 17.5ab ½ STD 5.8a 7.8a 7.3a 9.8a 13.7a 17.2a 19.3a Kontrol 2.3cd 2.3c 2.3bc 8.6ab 11.8 bc 15.0bc 16.8b Cendawan C78 4.25b 6.3b 5.8bc 8.7 tn 12.0 tn 14.6 tn 16.1 tn STD 8.50a 10.3a 10.3a 9.0 12.2 15.7 17.3 ½ STD 4.25b 5.5b 6.3b 8.3 11.5 14.9 16.3 Kontrol 3.00b 3.3b 3.5c 8.9 11.7 13.8 15.5
1) Masing-masing   untuk  bakteri  dan   cendawan,  perbedaan  huruf  yang  menyertai  angka-angka  pada  kolom  yang  sama    menunjukkan  bahwa  angka  tersebut berbeda nyata berdasarkan uji Beda Nyata Terkecil dengan taraf uji 95%.
Tabel 3. Kemampuan tiga endofit terpilih dalam menghasilkan hormon pertumbuhan tanaman (ICBB 2016).
Jenis hormon Endofit Bakteri N12 ( B. safensis ) Bakteri L16 ( D. robiginosus ) Cendawan C78 ( C. cladosporioides ) Auksin 98.78 ppm 92.87 ppm 87.52 ppm Sitokinin : Zeatin 56.13 ppm 52.71 ppm 50.82 ppm Kinetin 62.24 ppm 60.34 ppm 65.14 ppm Giberelin 118.23 ppm 106.44 ppm 100.88 ppm
Untuk  mendukung  data  berat  kering,  data pertunasan  dari  kelima  isolat  tersebut  dianalisa.  Hasilnya, tidak  ditemukan  perbedaan  jumlah  tunas  yang  nyata  dari seluruh  perlakuan  dari  umur  1-3  minggu  setelah  tanam (MST).  Hal  ini  terjadi  karena  secara  umum  tebu memang belum  membentuk  tunas  baru  pada  umur-umur  tersebut. Matsuoka  and  Stolf  (2012)  menyebutkan  bahwa  pada kultivar  tebu  NA56-79,  tunas  sekunder  terlihat  pertama sekali  setelah  tunas  primer  berumur  26  hari.  Tunas sekunder berikutnya muncul setelah tunas primer berumur 44-54  hari.  Tunas  tersier  muncul  setelah  tunas  primer berumur 76 - 79 hari.
Perbedaan  jumlah  tunas  yang  nyata  baru  terlihat setelah umur 4 - 6 MST (Tabel 2). Pada saat tersebut tidak ada endofit bakteri yang jumlah tunasnya lebih banyak dari kontrol  positif.  Walaupun  begitu,  3  isolat  (N12,  L16,  dan N8)  yang  diunggulkan  berdasarkan  berat  kering  akar  dan trubus  konsisten  memiliki  populasi  yang  lebih  banyak dibanding  kontrol  negatif.  Satu  isolat,  yaitu  N3  memiliki jumlah  tunas  yang  lebih  sedikit  dibanding  kontrol  negatif di  umur  4-6  MST  sehingga  tidak  terpilih  sebagai  isolat terbaik.  Pada  cendawan,  isolat  unggulan  C78  memiliki jumlah tunas  yang lebih banyak dibanding kontrol negatif di  umur  4-6  MST,  bahkan  secara  nyata  mampu mengimbangi  jumlah  tunas  yang  dicapai  oleh  kontrol positif ½ STD.
Sedikit  berbeda  dengan  pertunasan,  pengaruh nyata  endofit  terhadap  tinggi  tebu  telah  ditemukan  sejak umur  3 hingga 6 MST. Pada umur tersebut, tebu tertinggi pada  kelompok  bakteri  ditemukan  pada  perlakuan  ½ STD tetapi  tidak berbeda nyata dengan beberapa perlakuan lain di umur-umur tertentu. Tinggi tebu pada perlakuan ½ STD tidak  berbeda  nyata  dengan  N12  pada  umur  3-5  MST, tetapi nyata lebih tinggi di umur 6 MST. Terhadap L16, ½ STD  tidak  memiliki  perbedaan  tinggi  tebu  yang  nyata  di umur 3 dan 4 MST tetapi nyata lebih tinggi di umur 5 dan 6  MST.  Walaupun  begitu,  selisih  tinggi  sekitar  1-2  cm  di
umur  tersebut  tidak  banyak  berpengaruh  terhadap  berat kering  tanaman  sehingga  isolat  N12  dan  L16  tetap  dipilih sebagai  isolat  terbaik.  Terhadap  N8,  ½  STD  nyata  lebih tinggi  sejak  umur  3-6  MST.  Tinggi  tebu  pada  N8  bahkan lebih  pendek  dari  kontrol  negatif  di  umur-umur  tersebut. Karena  itu,  isolat  tersebut  tidak  lagi  disertakan  sebagai kandidat  pemacu  pertumbuhan.  Isolat  cendawan  C78 memiliki  tinggi  tebu  yang  tidak  berbeda  nyata  dengan  ½ STD  maupun  STD.  Secara  angka,  tinggi  tebu  pada perlakuan C78 lebih baik dibanding kontrol pada umur 4-6 MST  sehingga  isolat  tersebut  tetap  terpilih  sebagai  salah satu isolat terbaik.
Berdasarkan  data  dan  analisa  ini,  diperoleh  3 isolat terbaik untuk memacu pertumbuhan tebu, yaitu N12 dan  L16  untuk  golongan  bakteri  dan  C78  untuk  golongan cendawan. N12 adalah isolat bakteri yang diisolasi dengan media Nutrient Agar dari akar GMP3 dan tidak ditemukan pada varietas lain  selain dari  akar GMP3.  Karakter koloni dari  N12  berwarna  krem,  berukuran  besar,  karakter  optik translucent ,  tekstur  mengkilat,  berbentuk  sirkuler,  elevasi crateriform , pinggiran entire , serta memiliki pertumbuhan yang cepat. Selnya berbentuk kokus dan berukuran kurang dari 1.0 µm.
L16  adalah  bakteri  yang  diisolasi  dengan  media Luria Bertani dari daun GMP3. Isolat dengan ciri-ciri yang sama  juga  terisolasi  dari  batang  TC15  dengan  media isolasi  PDA.  Karakter  koloni  L16  berwarna  merah  muda tipis,  kecil, translucent ,  mengkilat,  berbentuk  sirkuler, elevasi raised ,  pinggiran entire ,  serta  pertumbuhannya lambat.  Sel  L16  berbentuk  batang  dan  berukuran  sekitar 3.2 × 1.0 µm.
C78  adalah  cendawan  yang  terisolasi  dari  batang PS48  dengan  media Czapex  Solution  Agar dan  tidak ditemukan  sumber  lain  selain  varietas  tersebut.  Karakter koloni  C78  berwarna  abu-abu  kehijauan,  berukuran medium,  tekstur  halus,  tipis  dan  ber- halo ,  berbentuk sirkuler,  dan  pertumbuhanya  lambat.  Memiliki  miselia
bersekat  dan  bercabang  dengan  ukuran  2.6  ×  45.8  µm, membentuk  kolumella  berukuran  31.4 µm,  serta memiliki spora sel tunggal berbentuk ellips dengan ukuran 2.6 × 5.2 µm.

## Identifikasi Species Pemacu Pertumbuhan Terbaik
Berdasarkan  laporan  ICBB  (2016)  diketahui bahwa  gen  16S  rRNA  dari  bakteri  N12  terdiri  dari  1399 bite. Pencocokan pada BLAST menunjukkan bahwa isolat N12  merupakan  bakteri  dari  genus Bacillus dan  paling mirip (100%) dengan Bacillus safensis .  Menurut Lateef et al. (2015), B.  Safensis bisa ditemukan di  berbagai habitat, mampu  bertahan  di  lingkungan  yang  ekstrim,  serta memiliki  rangkaian  gen  pemacu  pertumbuhan.  Bakteri  ini mampu  menghasilkan  berbagai  enzim  dan  metabolit sekunder,  biasa  digunakan  dalam  industri,  dan  dikenal sebagai safe  industrial  microorganism karena  belum pernah dilaporkan sebagai patogen.
Sekuensing  gen  16S  rRNA  dari  bakteri  L16 menunjukkan  bahwa  gen  tersebut  terdiri  dari  1412  bite. Pencocokan pada BLAST menunjukkan bahwa  bakteri  ini termasuk  genus Domibacillus dan  paling  mirip  (99%) dengan Domibacillus  robiginosus strain  ASGS4_1. D. robiginosus dengan  berbagai  strain  pernah  terisolasi  dari berbagai  tempat,  seperti:  ruangan  bersih  ( pharmaceutical clean room ) perusahaan produsen vaksin, sedimen laut, air danau,  dan  juga  dari  udara. Domibacillus adalah  bakteri dengan  pigmen  berwarna  merah,  Gram  positif,  sangat aerob,  dan  termasuk  dalam  famili  Bacillaceae.  Famili  ini memiliki kemampuan membentuk endospora dalam batang sehingga  tahan  terhadap  panas,  radiasi,  bahan  kimia,  dan kekeringan  dalam  waktu  yang  relatif  lama.  Bacillaceae memiliki peran alami yang penting, seperti keterlibatannya dalam  siklus  bahan  organik  dan  juga  menyehatkan  atau merangsang  pertumbuhan  tanaman  melalui  mekanisme penekanan  patogen  atau  melarutkan  fosfat  (Seiler et  al. , 2013; Mandic-Mulec et al. , 2015).
Hasil  ITS  (gen  antara  5.8S  dengan  28S  rRNA) dari  cendawan  C78  menunjukkan  bahwa  gen  tersebut memiliki  panjang  448  bite.  Pencocokan  pada  BLAST menunjukkan bahwa C78 termasuk dalam cendawan genus Cladosporium. Spesies  yang  paling  mirip  (99%)  adalah Cladosporium  cladosporioides . Cladosporium dicirikan dengan  struktur  badan  buah  yang  unik  seperti  mahkota yang  retak  ( coronate  scar ).  Genus  ini  sangat  umum, kosmopolitan, saprofit, dan bisa diisolasi dari udara, tanah, kain,  substrat  lain,  dan  juga  umum  sebagai  endofit.  Dua spesies Cladosporium, yaitu C.  oxysporum dan C. sphaerospermum diisolasi  sebagai  endofit  dari  tanaman pinus  ( Pinus spp.),  sementara, Cladosporium sp.  diisolasi dari  tanaman  mentimun  ( Cucumis  sativus )  yang  diketahui memiliki  potensi  sebagai plant  growth  promotion . Cladosporium sp.  Dari  mentimun  menghasilkan  giberelin yang  jumlahnya  lebih  banyak  dibanding Fusarium fujikuroi tipe  liar  (Bensch et  al .,  2010;  Hamayun et  al. , 2010; Paul dan Yu, 2008).
Hasil  analisa  kemampuan  menghasilkan  hormon pertumbuhan  dari  ketiga  isolat  terpilih  ditampilkan  pada Tabel  4.  Ketiga  isolat  terpilih  mampu  menghasilkan hormon pertumbuhan auksin, sitokinin, dan juga giberelin.
Bakteri  N12  menghasilkan  hormon  yang  cenderung  lebih banyak  dibanding  L16  dan  C78.  Sementara,  L16 menghasilkan auksin, zeatin, dan giberelin yang cenderung lebih banyak dibanding C78.

## SIMPULAN
Sebanyak  3  isolat  endofit  yang  diperoleh  dari lima  varietas  tebu  di  GMP  mampu  meningkatkan pertumbuhan  tebu  sehingga  berpotensi  dikembangkan sebagai  agen  hayati  pemacu  pertumbuhan.  Ketiga  isolat tersebut  adalah  bakteri Bacillus  safensis (N12)  yang diisolasi  dari  akar  varietas  GMP3,  bakteri Domibacillus robiginosus (L16) yang diisolasi dari daun varietas GMP3, serta cendawan Cladosporium cladosporioides (C78) yang diisolasi  dari  batang  varietas  PS48.  Ketiga  isolat  tersebut mampu  memproduksi  hormon  pertumbuhan  auksin, sitokinin,  dan  juga  giberelin  dengan  kecenderungan Bacillus safensis lebih baik dibanding dua spesies lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Balint,  M.,  P.  Tiffin,  B.  Hallstrom,  R.B.  O’Hara,  M.S. Olson,  J.D.  Fankhauser,  M.  Piepenbring  and  I. Schmitt. 2013. Host genotype shapes the foliar fungal microbiome  of  balsam  poplar  ( Populus  balsamifera ).
Plos one, 8:1-9.
Bensch,  K.,  J.Z.  Groenewald,  J.  Dijksterhuis,  M.  Starink- Willemse,  B.  Andersen,  B.A.  Summerell,  H.D.  Shin, F.M. Dugan, H.J. Schroers, U. Braun and P.W. Crous. 2010.  Species  and  ecological  diversity  within  the Cladosporium cladosporioides complex ( Davidiellaceae,  Capnodiales ). Studies  in  Mycology, 67:1-94. Doi:10.3114/sim.2010.67.01.
Bertalan, M., R. Albano, V. de Pádua, L: Rouws, C. Rojas, A.  Hemerly,  K.  Teixeira,  S.  Schwab,  J.  Araujo  and Oliveira.  2009.  Complete  genome  sequence  of  the sugarcane nitrogen-fixing endophyte Gluconacetobacter diazotrophicus Pal5. BMC Genomics, 10:1-17.
Favaro, L.C.L., F.L.S. Sebastianes and W.L. Araujo. 2012. Epicoccum  nigrum P16,  a  sugarcane  endophyte, produces  antifungal  compounds  and  induces  root growth. Plos One, 7:1-10.
Gomez,  K.A.  and  A.A.  Gomez.  1984. Statistical procedures  for  agricultural  research (2 nd Ed.).  John wiley and sons, New York. 680 pp.
[GMP]  PT  Gunung  Madu  Plantations.  2011.  Tim  peneliti GMP: Usulan  pelepasan  varietas  tebu  unggul harapan RGM99-515 dan RGM99-599 spesifik lokasi lahan kering ultisol beriklim tropis basah. PT Gunung Madu Plantations, Lampung. 17 pp.
[GMP]  PT  Gunung  Madu  Plantations.  2012. Buku pedoman  teknis  budidaya  tebu  di  GMP  tahun 2012/2013 .  PT  Gunung  Madu  Plantations,  Lampung. 43 pp.
Hallmann,  J.,  A.  Quadt-Hallmann,  W.F.  Mahaffee  and
J.W.  Kloepper.  1997.  Bacterial  endophytes  in agricultural crops. Can. J. Microbial, 43:895-914.
Hamayun,  M.,  S.A.  Khan,  A.L.  Khan,  G.  Rehman,  Y.H. Kim,  I.  Iqbal,  J.  Hussain,  E.Y.  Sohn  and  I.J.  Lee . 2010.  Gibberellin  production  and  plant  growth promotion  from  pure  cultures  of Cladosporium sp. MH-6  isolated  from  cucumber  ( Cucumis  sativus L.).
Mycologia, 102:989-95. Doi: 10.3852/09-261.
Hidayati,  U.  2014.  Potensi  bakteri  endofit  asal  tanaman karet  sebagai  pemacu  pertumbuhan  bibit  batang bawah  tanaman  karet  ( Hevea  brasiliensis müll.  Arg.) [Disertasi]. IPB. Bogor.
Hudson,  A.O.,  N.H.  Ahmad,  R.  van  Buren  and  M.A.
Savka.  2010.  Sugarcane  and  grapevine  endophytic bacteria:  Isolation,  detection  of  quorum  sensing signals  and  identification  by  16S  v3  rDNA  sequence analysis In A. Mendez-Vilas (Eds.). Current Research, Technology  and  Education  Topic  in  Applied Microbiology and Microbial Biotechnology. Formatex : 801-806.
[ICBB] Indonesian Center for Biodiversity and Biotechnology.  2016.  Laporan  hasil  uji  analisa  No: ICBB.LHP.XII.2016.0996–0999. Bogor.
Lateef,  A.,  I.A.  Adelere  and  E.B.G.  Kana.  2015.  The biology and potential biotechnological  applications of Bacillus safensis . Biologia, 70:411-419. Doi: 10.1515/biolog-2015-0062.
Loiret,  F.G.,  E.  Ortega,  D.  Kleiner,  P.  Ortega-Rodes,  R. Rodes and Z. Dong. 2004. A putative new endophytic nitrogen-fixing bacterium Pantoea sp. from sugarcane. J. Appl. Microb., 97: 504-511.
Mandic-Mulec,  I.,  P.  Stefanic  and  J.D.  van  Elsas.  2015. Ecology  of  Bacillaceae. Microbiol  Spectrum 3:TBS- 0017-2013.  Doi:  10.1128/microbiolspec.TBS-0017- 2013.
Matsuoka,  S.,  and  R.  Stolf.  2012.  Sugarcane  tillering  and ratooning:  key  factor  for  profitable  cropping. In J.F. Goncalves  and  K.D.  Correia  (Eds.).  Sugarcane: Production,  Cultivation  and  Uses.  Nova  Sci.  Publ.  p. 137-157.
Mendes, R., A.A. Pizzirani-Kleiner, W.L. Araujo and J.M. Raaijmakers. 2007. Diversity of cultivated endophytic bacteria  from  sugarcane:  Genetic  and  biochemical characterization  of Burkholderia  cepacia complex isolates. Appl. Environ. Microb., 73:7259-7267.
Ming,  R.,  P.H.  Moore,  K.K.  Wu,  A.  D'Hont,  J.C. Glaszmann and T.L. Tew. 2006. Sugarcane improvement  through  breeding  and  biotechnology. Plant Breeding Reviews, 27:15-118.
Njoloma,  J.P.,  M.  Oota,  K.  Taroura,  Y. Saeki,  and  S. Akao. 2006.  Colonization  ability  of Herbaspirillum spp.  B501gfp1  in  sugarcane,  a  non-host  plant  in  the presence  of  indigenous  diazotrophic  endophytes. Afr. J. Biotech., 5:836-841.
Paul,  N.C.,  and  S.H.  Yu.  2008.  Species  of  endophytic Cladosporium in  pine  trees  in  Korea. Mycobiology, 36:211-216.
Seiler,  H.,  M.  Wenning,  and  S.  Scherer.  2013. Domibacillus robiginosus gen. nov., sp. nov., isolated from  a  pharmaceutical  clean  room. Int.  J.  Syst.  Evol. Microbiol., 63:2054-61. Doi: 10.1099/ij s.0.044396-0.