## PENENTUAN KANDUNGAN FENOLIK DAN SUN PROTECTION FACTOR (SPF) DARI EKSTRAK ETANOL DARI BEBERAPA

## TONGKOL JAGUNG  ( Zea mays
L.)
Farrah Umainah Sineke 1) , Edi Suryanto 2) , Sri Sudewi 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi
1) Jurusan Kimia FMIPA Universitas Sam Ratulangi

## ABSTRACT
The purpose of these research is to determine sun protection factor (SPF) ethanol extract  on the three types of corn cobs, those are hybrid sweet corn and yellow corn Manado Composite (white  and  red).  The  corn  cobs  was  extracted  by  using  the  method  of  refluxing  with  80% ethanol. In all three types of corn cobs determined using the Folin-Ciocalteu method and the determination  of  sun  protection  factor  (SPF)  values  with  a  spectrophotometer  method.  The results of this research indicate that extracts of red corn cobs have the highest content of total phenolic  is  61,32  µg/mL  followed  by  extracts  of  white  corn  cobs  56,83  µg/mL,  extracts  of sweet corn cobs 46,42 µg/mL. The highest SPF value at the highest concentration 150 µg/mL found in the extracts of red corn cobs 16,542 µg/mL, followed by extracts of white corn cobs 10,128 µg/mL, and then extracts of sweet corn cobs 5,789  µg/mL. Based on this research, it can  be  concluded  that  these  three  corncob  extracts  has  potential  as  a  sunscreen  active ingredients.
Key words : Corn cobs, SPF, Sunscreen, Phenolic content

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  adalah  untuk  menentukan sun  protection  factor (SPF)  ekstrak  etanol  dari tiga  jenis  tongkol  jagung  yaitu Hibrida  sweetcorn ,  Komposit  Manado  Kuning  (putih  dan merah).  Tongkol  jagung  ini  diekstrak  dengan  metode  refluks  menggunakan  pelarut  etanol 80%.  Pada  ketiga  jenis  ekstrak  tongkol  jagung  ditentukan  kandungan  total  fenolik menggunakan metode Folin-Ciocalteu dan penentuan nilai sun protection factor (SPF) dengan metode  spektrofotometer.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  tongkol  jagung merah memiliki kandungan total fenolik tertinggi sebesar 61,32 µg/mL diikuti ekstrak tongkol jagung putih sebesar 56,83 µg/mL, ekstrak tongkol jagung manis sebesar 46,42 µg/mL. Nilai SPF tertinggi pada konsentrasi 150 µg/mL terdapat pada ekstrak tongkol jagung merah 16,542 µg/mL, diikuti ekstrak tongkol jagung putih 10,128 µg/mL dan ekstrak tongkol jagung manis 5,789 µg/mL. Berdasarkan penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol ketiga jenis tongkol jagung ini memiliki potensi sebagai bahan aktif tabir surya.
Kata kunci : Tongkol jagung, SPF, tabir surya, total fenolik

## PENDAHULUAN
Semua  makhluk  hidup  di  alam semesta  ini  pasti  memerlukan  sinar matahari untuk kelangsungan
hidupnya.  Manusiapun  memerlukan sinar matahari dalam kehidupan sehari- hari.  Sinar  matahari  tidak  hanya memberikan manfaat terhadap manusia tetapi  juga  memiliki  dampak  yang buruk  bagi  kesehatan  kulit  manusia. Efek  buruk  sinar  matahari  pada kesehatan  kulit  manusia  bermacam- macam  seperti  bintik  hitam,  kerutan, penuaan dini hingga kanker kulit . Di Indonesia sebagian penduduknya  bekerja  di  luar  ruangan,
tentunya  berpaparan  langsung  dengan sinar  matahari.  Dampak  buruk  sangat memungkinkan  terjadi  pada  kesehatan kulit  manusia,  dikarenakan  negara  kita beriklim  tropis  yang  memiliki  paparan sinar  matahari  di  setiap  musim.  Sinar matahari  mengandung  sinar  ultraviolet (UV)  di  dalamnya.  Sinar  ultraviolet memiliki  efek  yang  tidak  baik  jika terpapar  terus-menerus  pada  kulit manusia.  Dengan  menghindari  paparan sinar  UV  langsung  atau  dengan menggunakan  tabir  surya  maka  dapat mengurangi  kerusakan  yg  terjadi  pada kulit.
Tongkol jagung merupakan limbah  terbesar  dari  jagung,  dari  berat jagung  bertongkol,  diperkirakan  40- 50%  itu  adalah  berat  dari  tongkol jagung, yang besarnya dipengaruhi oleh varietas  jagungnya  (Richana et  al. , 2004).  Berdasarkan  hal  tersebut  perlu adanya  perhatian  dan  penanganan untuk  pemanfaatan  limbah  tongkol
jagung  sehingga  lebih  bermanfaat. Selama  ini  limbah  tongkol  jagung hanya  dibuang,  atau  hanya  digunakan sebagai bahan bakar dapur, pengasapan mengusir  nyamuk,  bahan  tambahan makanan  ternak,  dan  hanya  digunakan sebagai  bahan  bakar  setelah  melalui proses pengeringan.
Senyawa  tabir  surya  adalah senyawa  yang  dapat  melindungi  kulit dari  pengaruh  sinar  ultraviolet  yang dipancarkan oleh matahari. Satuan tabir surya  adalah  SPF  ( Sun  Protection Factor ), lazim digunakan untuk menunjukan  berapa  lama  kita  bisa terpapar oleh sinar matahari tanpa kulit jadi terbakar.
Hasil  penelitian  sebelumnya yang  dilakukan  oleh  Saleh  (2012) menunjukkan  bahwa  ekstrak  tongkol jagung memiliki potensi sebagai antioksidan  karena  didalam  ekstrak terdapat senyawa yang berfungsi sebagai  antioksidan  yaitu  fenolik  yang juga sejalan dengan nilai Sun Protection Factor (Lumempouw et  al .,
2012a,  2012b).  Tujuan  penelitian  ini adalah  untuk  menentukan  kandungan total  fenolik  dan  nilai Sun  Protection Factor (SPF)  pada  beberapa  varietas tongkol jagung.

## BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Sampel  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  tongkol  jagung ( Zea  mays L.)  dari  tiga  varietas  yaitu tongkol  jagung  merah,  tongkol  jagung putih dan tongkol jagung
manis/sweetcorn  yang  berasal  dari daerah tomohon dan bahan kimia  yang digunakan adalah etanol 80%, aquades, larutan  natrium  karbonat  2%,  reagen Folin-Ciocalteu  50%,  larutan  AlCl 3, vanillin  4%,  larutan  Hcl.  Alat  yang digunakan  yaitu  alat-alat  gelas  ( pyrex ), mikropipet,  spatula,  vorteks,  kertas saring,  ayakan,  aluminium  foil, rotary evaporator ,  spektrofotometer  Uv-Vis (Shimadzu  1700),  timbangan  analitik, alat  penggiling,  sentrifuse, waterbath ,
oven, corong pisah.

## Ekstraksi Tongkol Jagung
Ketiga sampel masing – masing  sebanyak  10  g  yang  telah disiapkan kemudian diekstraksi menggunakan  pelarut  etanol  80% sebanyak 60ml. Ekstraksi yang dilakukan menggunakan ekstraksi panas  refluks  selama  2  jam  pada  suhu 78-90ºc. Hasil yang diperoleh
kemudian diuapkan menggunakan rotary  evaporator sampai  diperoleh ekstrak  kental  kemudian  dilanjutkan dengan  dimasukan  ke  dalam  oven untuk  mendapatkan  ekstrak  kasar. Kemudian  ekstrak  kasar  dari  masing  – masing  sampel  disimpan  ke  dalam botol-botol kecil.

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Kandungan total fenolik ekstrak etanol  dari  beberapa  tongkol  jagung ditentukan    menggunakan  metode Folin-Ciocalteu  (Conde et  al .,  1997).
Sebanyak  0,1  mL  ekstrak  konsentrasi
1000  µg/mL  dimasukkan  ke  dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan 0,1 mL reagen Folin Ciocalteu 50%. Campuran tersebut  divortex,  lalu  ditambahkan  2 mL  larutan  natrium  karbonat  2%. Selanjutnya campuran diinkubasi dalam  ruang  gelap  selama  30  menit. Absorbansinya dibaca pada λ 750 nm.
Penentuan Sun  Protection  Factor (SPF)
Penentuan efektifitas tabir surya  dilakukan  dengan  menentukan nilai  SPF  secara In  Vitro dengan menggunakan  spektrofotometri  (Sayre et al., 1979). Tiga jenis tongkol jagung diencerkan  ke  beberapa  konsentrasi.
Kemudian dibaca
pada spektrofotometer.
Dibuat  kurva  serapan  uji  dalam kuvet,  dengan  panjang  gelombang antara  290-360  nm,  gunakan  etanol sebagai  blanko.  Kemudian    serapan rata-ratanya  (Ar)  ditetapkan  dengan interval  5  nm.  Kemudian  dihitung dengan rumus :
SPF  =  CF  x
(λ)  x  I  (λ)  x absorbansi (λ)
Keterangan :
CF : Faktor Koreksi (10) EE : Efisiensi eriternal I : Spektrum simulasi sinar surya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi
Metode ekstraksi tongkol jagung dilakukan dengan metode Refluks.  Digunakan  metode  refluks agar memudahkan isi sel keluar, karena dengan  metode  ekstraksi  panas  ini dinding  sel  mudah  pecah.  Pelarut  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  ialah etanol  80%  karena  senyawa  metabolit sekunder  yang  terdapat  dalam  tongkol jagung dapat tertarik  paling baik  pada konsentrasi  tersebut.  Selain  itu  etanol termasuk jenis pelarut dengan kemampuan  ekstraksi  yang  baik  untuk hampir  semua  senyawa  kimia  yang memiliki  berat  molekul  kecil  seperti golongan  metabolit  sekunder  (Gandjar, 2008).
Prinsip  dari  metode  refluks adalah  pelarut  yang  digunakan  akan menguap pada suhu tinggi, namun akan
didinginkan dengan kondensor
sehingga  pelarut  yang  tadinya  dalam bentuk  uap  akan  mengembun  pada kondensor  dan  turun  lagi  ke  dalam wadah  reaksi  sehingga  pelarut  akan tetap  ada  selama  reaksi  berlangsung. Selanjutnya,  larutan  disaring  dengan menggunakan kain saring. Filtrat diuapkan menggunakan rotary evaporator dan selanjutnya dikeringkan dalam  oven  dengan  suhu  40 o C, sehingga  diperoleh  ekstrak  kering.  Hal ini  dilakukan  agar  pelarut yang digunakan tidak tersisa sehingga pelarut  tidak  mempengaruhi  efektifitas dari  sampel  yang  diuji.  Selanjutnya ekstrak  dikering  didalam  oven  kurang lebih 5 hari untuk mengurangi kadar air yang  terdapat  pada  ekstrak.  Rendemen yang didapatkan berupa ekstrak kering.
Tabel 2. Warna ekstrak pada sampel dengan pelarut etanol 80%
Ekstrak Warna TJM Coklat Kemerahan TJS Coklat Kekuningan TJP Coklat Kekuningan
Ket : TJM (Tongkol jagung merah); TJS (Tongkol jagung sweetcorn); TJP (Tongkol jagung putih)
Suryanto  (2012)  menyatakan keberhasilan  pemisahan  akan  sangat tergantung  pada  perbedaan  kelarutan komponen yang akan dipisahkan dalam pelarut.
Senyawa-senyawa
yang bersifat  polar,  cenderung  larut  dalam pelarut  polar  sedangkan  senyawa-
senyawa yang bersifat non-polar cenderung larut pada pelarut non-polar. Selain  pelarut  ukuran  sampel  juga dapat  mempengaruhi  suatu  rendemen. Bahan  yg  memiliki  luas  permukaan yang  semakin  kecil  akan  memperluas kontak  dan  meningkatkan  interaksi
dengan pelarut, sehingga jumlah ekstrak yg diperoleh optimum. Menurut Sembiring et  al . (2006),  semakin halus bahan  yang    digunakan  semakin  tinggi rendemen  yang  dihasilkan.  Perbesaran luasan  permukaan  bertujuan  untuk mempercepat  pelarutan,  mempercepat reaksi kimia, dan mempertinggi kemampuan penyerapan (Ismail, 2012).
Kandungan Total Fenolik
Pada  penelitian  ini  dilakukan penentuan  kandungan  total  fenolik pada  ketiga  ekstrak  tongkol  jagung. Pengujian  kandungan  total  fenolik dengan  menggunakan  metode  Folin- Ciocalteu (Conde et al ., 1997). Metode ini  adalah  untuk  menentukan  secara kuantitatif  kandungan  total  fenolik dalam ekstrak tanaman dengan konsentrasi  1  µg/mL.  Hasil  penentuan kandungan total fenolik dari ekstrak ini dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Kandungan total fenolik ketiga jenis tongkol jagung
Jenis ekstrak Fenolik (mg/kg) TJM 61,32 TJP 56,83 TJS 46,42
Ket : TJM (Tongkol jagung merah); TJS (Tongkol jagung sweetcorn); TJP (Tongkol jagung putih)
Dari hasil yang diperoleh, dapat dilihat  bahwa  kadar  fenolik  tongkol jagung merah lebih tinggi dibandingkan tongkol jagung putih dan tongkol  jagung  manis/sweetcorn.  Pada saat  direaksikan  dengan  antara  regen Folin-Ciocalteu dengan senyawa
fenolik  akan  terjadi  perubahan  warna dari  kuning  menjadi  biru.  Intensitas warna biru ditentukan dengan banyaknya  kandungan  fenol  dalam larutan sampel. Semakin besar konsentrasi  senyawa  fenolik  dalam sampel maka semakin pekat warna biru yang  terlihat.  Menurut  Singleton  dan Rossi (1965), warna biru yang teramati
berbanding  lurus  dengan  konsentrasi ion  fenolat  yang  terbentuk  sehingga warna  biru  yang  terlihat.  Dalam penelitian ini, total fenol dalam ekstrak diukur  dengan  standar  asam  galat (µg/mL)  (Suryanto,  2009).  Fenolat hanya terdapat  pada larutan basa tetapi pereaksi
Folin-Ciocalteu dan produknya  tidak  stabil  pada  kondisi basa. Nely (2007) mengatakan,
penambahan  Na 2 CO 3 pada  uji  fenolik bertujuan  untuk  membentuk  suasana basa  agar  terjadi  reaksi  reduksi  Folin- Ciocalteu  oleh  gugus  hidroksil  dari fenolik di dalam sampel.
Dari  hasil  yang  didapatkan kandungan  total  fenolik  dari  ekstrak TJM 61,32 µg/mL lebih tinggi dari TJP 56,83  µg/mL  dan  TJS  46,42  µg/mL.
Ekstrak TJM dapat digolongkan
sebagai ekstrak yang memiliki kandungan  total  fenolik  yang  tinggi dibandingkan  TJS  dan  TJP.  Besarnya total  fenolik  pada  ekstrak  TJM  diduga karena  komponen  fenolik  yang  ada pada  ekstrak  TJM  lebih  banyak daripada ekstrak TJP dan TJS.
Hasil  kandungan  total  fenolik, dapat  dipengaruhi dari proses  ekstraksi dengan  refluks.  Dalam  hal  ini  proses ekstraksi  dengan  cara  panas  atau ekstraksi  refluks  dapat  meningkatkan kandungan fenolik yang terdapat dalam ekstrak  tongkol  jagung.  Selain  proses ekstraksi,  pelarut  juga  mempengaruhi total  fenolik  dihasilkan.  Harborne (1987)  menyatakan  bahwa  komponen fenolik  dapat  diekstraksi  dari  bahan tumbuhan dengan menggunakan pelarut polar seperti air, etanol, metanol dan  aseton.  Penggunaan  etanol  sebagai pelarut  membuat  senyawa  fenolik dalam  tongkol  jagung  terekstraksi.  Hal ini  dapat  terjadi  karena  senyawa golongan fenol bersifat polar atau semi polar (Hayati et al ., 2010).

## Nilai SPF Ekstrak Tongkol Jagung
Efektivitas
tabir surya
biasanya  dinyatakan  dengan  faktor proteksi  sinar  matahari  ( sun  protection factor ). SPF adalah pengukuran kuantitatif  dari  efektivitas  formulasi tabir  surya  (Dutra et  al .,  2004).  Tabir
surya  adalah  suatu  sediaan  yang mengandung  senyawa  yang  dapat menyerap, menghamburkan atau memantulkan  sinar  matahari  yang mengenai kulit sehingga dapat digunakan untuk melindungi fungsi dan struktur  kulit  manusia  dari  kerusakan akibat  sinar  surya  (Depkes  RI,  1979). Tabir  surya  dengan  SPF  menyatakan lamanya  kulit  seseorang  berada  di bawah sinar matahari tanpa mengalami luka  bakar,  sedangkan  angka  SPF menyatakan  berapa  kali  daya  tahan alami  kulit  seseorang  dilipatgandakan sehingga aman di bawah sinar matahari tanpa  terkena  luka  bakar  (Wilkinson, 1982).
Sampel  TJM,  TJP,  dan  TJS
etanol  80%  sebanyak  0,2  mg/mL dianalisis menggunakan Spektrofotometri UV-Vis dengan panjang  gelombang  290-360  nm  dan absorbansinya  dibaca  setiap  5  nm.
Berdasarkan  data  yang  di  dapat, absorbansi TJM lebih tinggi dibandingkan  dengan  TJP  dan  TJS. Absorbansi  maksimum  ketiga  varietas tongkol  jagung  ini  semua  berada  pada panjang gelombang yang sama 315 nm, tetapi  memiliki  absorbansi  maksimum yang  berbeda-beda.  TJM  terdapat  pada λ  315  nm  dengan  absorbansi  1,480  A, sedangkan  absorbansi  maksimum  TJP pada  λ  315  nm  1,406  A  dan  pada  TJS absorbansi  maksimum  terdapat  pada  λ 315  nm  0,857  A.  Hasil  perhitungan SPF dari ketiga varietas tongkol jagung etanol  80%  dapat  dilihat  pada  gambar 3.
Gambar 3. Nilai SPF pada sampel tongkol jagung (TJM = Tongkol Jagung Manis ; TJP = Tongkol Jagung Putih ; TJS = Tongkol Jagung Manis) Ket: TJM (Tongkol Jagung Merah) ; TJP (Tongkol Jagung Putih) ; TJS
(Tongkol Jagung Manis) ;
(Pembanding) Hasil penelitian ini menggunakan empat konsentrasi
seperti  yang  tercantum  pada  gambar  . Dalam  tabel  dapat  dilihat  bahwa  pada setiap  konsentrasi  tongkol  jagung merah  memiliki  nilai  SPF  yang  lebih dibandingkan  dengan  nilai  SPF  pada tongkol  jagung  putih  maupun  manis. Angka  SPF  menyatakan  berapa  kali daya  tahan  alami  kulit  seseorang dilipatgandakan  sehingga  aman  di bawah  sinar  matahari  tanpa  terkena luka  bakar.  Berdasarkan  hasil  yang diperoleh  pada  konsentrasi  tertinggi 150,  TJM  memiliki  nilai  SPF  sebesar 16.542,  yang  artinya  dapat  melindungi kulit  seseorang  dari  paparan  sinar matahari  sebanyak  16  kali  lipat  dari ketahanan kulit orang tersebut, sedangkan  pada  TJP  yang  memiliki
nilai  SPF  10.128,  diartikan  bahwa  TJP dapat  melindungi  kulit  sebanyak  10 kali  lipat,  bagitupula  dengan  TJS  yang memiliki nilai  SPF 5.789,  yang artinya mampu  melindungi  kulit  sebanyak  5 kali lipat.
Pada  hasil  penelitian  ini  nilai SPF  pada  TJM  memiliki  kemampuan tabir surya ultra, kemudian dengan TJP yang  memiliki  kemampuan  tabir  surya maksimal  dan  diikuti  TJS yang memiliki  kemampuan  sedang.  Jadi, TJM  termasuk  dalam  potensi  tabir surya  yang  memiliki  kemampuan  yang sangat tinggi.

## KSESIMPULAN
Berdasarkan hasil yang di dapat dari  penelitian  ini,  diperoleh  bahwa ekstrak tongkol jagung merah putih dan sweetcorn menunjukkan
adanya senyawa fenolik, yang berfungsi sebagai  tabir  surya.  Ekstrak  tongkol jagung  merah  mengandung  total  fenol paling  tinggi  dan  memiliki  efektivitas paling  tinggi  sebagai  bahan  aktif  tabir surya  daripada  tongkol  jagung  putih dan tongkol jagung manis.

## DAFTAR PUSTAKA
Conde,  E.E.,  Cadahia,  M.C.,  Vallejo, G.,  Simon,  B.F.D.,  Adradors, J.R.G.  1997.  Low  Molecular
Weight  Polyphenol  In  Cork  of Querceus Suber. Journal Agriculture  Food  Chemistry . 45: 2695-2700.
Dutra,  E.  A.,  Oliveira,  D.,  Kedor- Hackmann,  E.  R.  M.,  dan
0 5 10 15 20 25 50 100 150 N ila i S P F Konsentrasi (mg/L) Pembandi ng TJP
TJS
TJM
Santoro, M. 2004. Determination of Sun Protection  Factor  (SPF)  of Sunscreens by Ultraviolet Spectrophotometry. Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences . 40: 481-485. Gandjar,  I.G.,  Abdul,  R.  2008. Kimia Farmasi Analisis . Pustaka Pelajar, Yogyakarta. Harborne, J.B. 1996. Metode Fitokimia Penentuan Cara Modern Menganalisis Tumbuhan . Terjemahan Kosasih Padmawinata, K., dan I.
Soediro. Bandung: ITB
Hayati, E.K., Fasyah A.G., Sa’adah, L. 2010. Fraksinasi dan Identifikasi Senyawa Tanin pada  Daun  Belimbing  Wuluh ( Averrhoa  bilimbi L.). Jurnal Kimia , 4: 193-200.
Julkenen-Titto, R.1985. Phenolic Constituents  in  the  Leaves  of Northern  Willows:  Methods  for the Analysis of Certain Phenolics. Journal of Agricultural and Food Chemistry . 33: 213-217. Lumempouw, L., Suryanto, E.,
Paendong,  J.  2012. Aktivitas
Anti  UV-B  Ekstrak  Fenolik dari  Tongkol  Jagung ( Zea mays L.).  Jurusan  Kimia,
FMIPA, Unsrat, Manado.
Meda,  A.,  Lamien  C.  E.,  Romito  M., Millogo  J.,  dan  Nacoulma
O.G.  2005.  Determination  of the  Total  Phenolic,  Flavonoid and Proline Contents in Burkina  Fasan  Honey,  as  well as  their  Radical  Scavenging
Activity. Food  Chemistry .  91:
571-577.
Nely,  F.  2007. Aktivitas  Antioksidan Rempah  Pasar  dan  Bubuk Rempah Pabrik dengan Metode  Polifenol  dan  Uji AOM ( Active  Oxygen  Method ) skripsi. Institud Pertanian Bogor: Bogor. Richana, N., Lestina, P., Irawandi, T.T. 2004. Karakterisasi Lignoselulosa  :  Xylan  dari Limbah  Tanaman  Pangan  dan Pemanfaatannya untuk Pertumbuhan Bakteri RXA III- 5  penghasil  xilanase. Jurnal Penelitian  Pertanian .  23:171- 176.
Saleh,  L;  Suryanto,  E;  Yudistira,  A.
2012. Aktivitas  Antioksidan dari  Ekstrak  Tongkol  Jagung
( Zea  mays L.).  Program  Studi Farmasi, FMIPA Unsrat,
Manado.
Suryanto,  E.,  Wehantouw,  F.  2009.
Aktivitas  Penangkal  Radikal Bebas  dari  Ekstrak  Fenolik Daun Sukun ( Artocarpus altilis F .). Chemistry Progress. 2:1-7
Sembiring, B.B., Ma’mun., Ginting, E.
I.  2006.  Pengaruh  Kehalusan Bahan  dan  Lama  Ekstraksi Terhadap Mutu Ekstrak Temulawak ( Curcuma xanthorriza Roxb ). Buletin Littro 17:53-58. Singleton,  V.L.  dan  Rossi,  J.A.  1965. Colorimetry of Total Phenolics with Phosphomolybdicphosphotung stic  Acid  Reagents. American Journal of Enology and Viticulture . 16:144-158