Isolasi dan Identifikasi Bakteri Probiotik pada Rastrelliger sp.
Isolation and Identification of Probiotic Bacteria in Rastrelliger sp.
Cut YULVIZAR 1 )
1) Biology Department, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Syiah Kuala University, Indonesia Email: Yunda_mnz@yahoo.com
Abstract. Probiotics  are  beneficial  microbes  to  improve  microbial  balance  in  the  digestive  tract. Isolation of probiotic bacteria aims to obtain the potential probiotic bacteria in mackerel ( Rastrelliger sp.).  This  research  used  descriptive  methods.  The  results  showed  that there were  five  potential isolates  of  probiotic  bacteria. Physiological  test  for  identification indicates three bacteria genera (Micrococcus,  Staphylococcus  and  Bacillus)  and  one  species  ( Hafnia  alvei ) which  are potential probiotic bacteria isolated from mackerel.
Key words: Probiotics, Rastrelliger sp., isolation and identification
Abstract. Probiotik  merupakan  mikroba  menguntungkan  yang  bermanfaat  untuk  memperbaiki keseimbangan  mikroba  di  dalam  saluran  pencernaan. Isolasi  bakteri  probotik  dilakukan  dengan tujuan  untuk  mendapatkan  bakteri  yang  berpotensi  sebagai  probiotik  pada  ikan  kembung ( Rastrelliger sp.).  Penelitian  ini  menggunakan  metode  deskriptif.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  terdapat  lima  isolat  bakteri  yang  berpotensi  sebagai  probiotik. Hasil uji  fisiologis  untuk identifikasi  bakteri  menunjukkan adanya tiga  genera  (Micrococcus,  Staphylococcus  dan  Bacillus) dan  satu  spesies  bakteri  ( Hafnia  alvei )  yang berpotensi  sebagai  probiotik  pada  ikan  kembung ( Rastrelliger sp.).
Kata kunci: Probiotik , Rastrelliger sp., isolasi, dan identifikasi.

## PENDAHULUAN
Negara  Indonesia  dikenal  sebagai  negara bahari  dengan  wilayah  lautnya  mencakup  tiga perempat  luas  Indonesia  atau  5,8  juta  km 2 dengan  garis  pantai  sepanjang  81.000  km, sedangkan  luas  daratannya  hanya  1,9  km 2 . Wilayah  laut  yang  sangat luas  tersebut mengandung  sumberdaya  alam  (perikanan) yang  sangat  berlimpah  dan  memiliki  banyak sekali jenis ikan (sekitar 3.000 jenis ikan), salah satunya adalah ikan kembung (Bahar, 2006).
Ikan  kembung  ( Rastrelliger sp.)  merupakan salah  satu  jenis  ikan  laut  yang  mudah didapatkan  dan  banyak  dikonsumsi  masyarakat karena  memiliki  harga  yang  relatif  ekonomis (Santoso et al ., 1997). Kandungan protein pada daging  ikan  kembung cukup tinggi  (18,5%),
sedangkan  kandungan  lemaknya  jauh  lebih rendah (2,1%) (Zamroni et al ., 2008).
Bakteri  pada  ikan  dapat  dijumpai  pada permukaan tubuh eksternal dan saluran pencernaan.  Sebagian  bakteri  bersifat  patogen, sedangkan sejumlah bakteri lainnya menguntungkan  bagi  ikan  karena  membantu pencernaan,  mensintesa  vitamin-vitamin  serta mendekomposisi  materi  organik  di  perairan (Irianto,  2005).  Hal  ini  diduga karena adanya peran  bakteri  probiotik.  Prinsip  dasar  kerja probiotik adalah dengan memanfaatkan kemampuan  mikroba  untuk  mempermudah penyerapan  oleh  saluran  pencernaan  ikan (Feliatra dan Suryadi, 2004).
Probiotik adalah mikroba hidup menguntungkan pada  makhluk  hidup,  yang  bermanfaat  untuk memperbaiki  keseimbangan  mikroba  di  dalam
saluran  pencernaan  (Afrianto  dan  Liviawaty, 2005) dan memberikan pengaruh positif terhadap  fisiologi  dan  kesehatan  inangnya. Senyawa-senyawa  racun  yang  dihasilkan  pada metabolisme  bakteri  probiotik  seperti  asam laktat,  hidrogen  peroksida,  bakteriosin  yang bersifat  antimikroba  dan  antibiotik  mampu menekan pertumbuhan bakteri patogen (Yulinery et  al .,  2006).  Menurut  Kanmani et  al . (2010),  salah  satu  karakteristik  bakteri  probiotik yaitu  memiliki  ketahanan  yang  tinggi  terhadap asam.
Mengingat informasi mengenai identifikasi morfologi  dan  fisiologi  dari  bakteri  yang berpotensi sebagai probiotik pada ikan kembung ( Rastrelliger sp.)  masih  sangat  terbatas,  maka perlu  dilakukan  isolasi  bakteri  probiotik  yang terdapat pada lambung dan usus ikan tersebut.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi  Jurusan  Biologi  Fakultas  MIPA Universitas  Syiah  Kuala,  dari  bulan  April- Agustus  2012.    Alat  yang  digunakan adalah inkubator, autoklaf, erlenmeyer, hotplate , alumunium  foil,  lampu    bunsen,  cawan  petri, timbangan  digital,  mortar  porselen,  gelas  ukur, tabung  reaksi,  pipet  tetes,  mikroskop,  kaca objek, jarum ose, kamera digital dan alat tulis.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  ikan  kembung  segar, media  TSA ( Tryptone Soya Agar ), media TSIA ( Triple Sugar Iron Agar),  media  SIM  ( Sulfid  Indol  Motility ), media  MR-VP  ( Methyl  Red dan Voges Proskaurt ),  media Simmons  Citrate ,  reagen Kovac,  indikator methyl  red (merah  metil), bahan  untuk  uji  pewarnaan  Gram  (kristal  violet, lugol  iodine,  safranin,  alkohol  95%  dan akuades),  NaCl,  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 ), kapas,  MICROBACT TM 24E Gram-Negative Identification  System (OXOID), reagent  indole , VP  I,  VP  II, Nitrate  A , Nitrate  B ,  TDA  dan mineral oil .

## Prosedur Penelitian
Sterilisasi  alat  dan  bahan.    Semua  alat  dan bahan  yang  akan  digunakan  disterilkan  dengan autoklaf  pada  temperatur  121ºC  pada  tekanan uap 15 lb/in2 selama 15 menit (Marlina, 2008).
Pengambilan sampel.  Bakteri probiotik diisolasi pada  organ  pencernaan  berupa  lambung dan usus  ikan  kembung  segar. Ikan  dibedah  untuk diambil  bagian  lambung  dan  usus,  lalu dimasukkan  ke  dalam  larutan  fisiologis  NaCl 0,9%  pada  pH  2  (Feliatra  dan  Suryadi, 2004). Selanjutnya,  lambung  dan  usus  dihancurkan atau  dihaluskan  dengan  menggunakan  mortar porselen.
Isolasi  bakteri.    Sampel  yang  telah  dihaluskan, kemudian  dilakukan  seri  pengenceran. Metode seri  pengenceran  yang  dilakukan  dengan mengambil  sebanyak  1  g  sampel,  dimasukkan ke  dalam  tabung  reaksi  yang  berisi  9  ml akuades  sehingga  didapat  pengenceran  10 -1 , untuk mendapatkan pengenceran 10 -2 dilakukan dengan  mengambil  1  ml  dari  pengenceran  10 -1 dimasukkan ke dalam tabung reaksi  yang berisi 9  ml  akuades,  demikian  seterusnya  dilakukan seri pengenceran hingga 10 -5 . Pengenceran 10 -4 dan  10 -5 diambil  1  ml  kemudian  dimasukkan  ke dalam cawan  petri  yang  telah  berisi  media  TSA dan  diratakan,  lalu  diinkubasi  dengan  posisi cawan  terbalik  selama  24-48  jam  pada temperatur 30ºC (Darmayasa, 2008).
Identifikasi bakteri.  Setelah inkubasi selama 48 jam,  dilakukan  isolasi  bakteri  dengan  metode goresan  kuadran  beberapa  tahap  hingga diperoleh  1  isolat  yang  murni.  Isolat-isolat  yang diperoleh kemudian diidentifikasi dengan berpedoman  pada  buku Mikrobiologi  Dasar dalam  Praktek  Teknik  dan  Prosedur  Dasar Laboratorium (Hadioetomo,  1993), Bergey’s Manual  of  Determinative  Bacteriology (Holt et al., 1994)  dan  menggunakan  MICROBACT TM 24E Gram-Negative Identification System (OXOID)  (Oxoid,  2005).  Pengamatan  morfologi sel  yang  meliputi  uji  pewarnaan  Gram,  bentuk sel dan uji motilitas, serta uji sifat fisiologis yaitu uji  katalase,  uji  indol,  uji  MR-VP,  uji Simmons Citrate , dan uji TSIA.

## Morfologi Sel
a.  Pewarnaan  Gram.    Kaca  objek  dibersihkan dengan  alkohol  dan  dilewatkan  beberapa  kali pada nyala api bunsen, kemudian diambil isolat bakteri  dengan  jarum  ose  secara  aseptik  dan dioleskan  pada  kaca  objek.  Isolat  bakteri kemudian  ditetesi  ungu  violet  dan  dibiarkan selama  1  menit,  selanjutnya  dicuci  dengan  air mengalir  dan  dianginkan  hingga  kering.  Isolat
bakteri  kemudian  ditetesi  lagi  dengan  larutan iodine  dan  dibiarkan  selama  1  menit,  kemudian dicuci  dengan  air  mengalir  dan  dianginkan hingga kering.  Selanjutnya isolat  bakteri ditetesi alkohol  95%  selama  30  detik,  kemudian  dialiri air  dan  dianginkan  hingga  kering.  Isolat  bakteri kemudian  ditetesi  safranin  selama  30  detik  dan dicuci  dengan  air  mengalir,  dikeringkan  dengan kertas  penghisap  dan  dikering  anginkan, kemudian dilakukan pengamatan dengan menggunakan  mikroskop.  Bakteri  gram  positif ditandai dengan warna ungu yang menunjukkan bahwa  bakteri  tersebut  mampu mengikat  warna kristal  violet,  sedangkan  bakteri  gram  negatif ditandai  dengan  warna  merah  muda  yang menunjukkan  bahwa  bakteri  tersebut  tidak mampu mengikat warna kristal violet dan hanya terwarnai  oleh  safranin  (pewarna  tandingan) (Hadioetomo, 1993).
b.  Bentuk  sel.    Bakteri  yang  tumbuh  kemudian diamati  bentuk  selnya  secara  mikroskopik  pada kaca preparat sehingga dapat diketahui bentuknya (kokus, batang atau spiral).
Sifat fisiologi
a.  Uji  katalase. Diletakkan  2  tetes  H 2 O 2 pada kaca  objek  yang  bersih. Isolat  bakteri  diambil menggunakan jarum ose, kemudian dipindahkan ke atas kaca objek dan dicampurkan. Uji positif ditandai dengan terbentuknya  gelembung-gelembung  oksigen yang  menunjukkan  bahwa  organisme  yang bersangkutan  menghasilkan  enzim  katalase yang mengubah  hidrogen peroksida menjadi air dan oksigen (Hadioetomo, 1993).
b.  Uji  motilitas.    Isolat  bakteri  ditusukkan  ke dalam  media  SIM  semi  padat  pada  tabung reaksi  menggunakan  jarum  ose  tusuk  steril. Kemudian  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu 37ºC.  Uji  positif  ditandai  dengan  pertumbuhan bakteri  yang  menyebar,  maka  bakteri  tersebut bergerak  (motil)  dan  bila  pertumbuhan  bakteri tidak  menyebar  hanya  berupa  satu  garis,  maka bakteri  tersebut  tidak  bergerak  (non  motil) (Sudarsono, 2008).
c. Uji Indol.  Diambil satu koloni terpisah dengan menggunakan  jarum  ose,  kemudian  diinokulasi ke  dalam  media  SIM  dan  diinkubasi  selama  24 jam pada suhu 37ºC. Setelah inkubasi ditambahkan  10-12  tetes  reagen  Kovac.  Uji
positif  ditandai  dengan  terbentuknya  lapisan berwarna  merah  di  bagian  atas  biakan (Hadioetomo, 1993).
d.  Uji  MR.    Diambil  satu  koloni  terpisah  dengan menggunakan  jarum  ose,  kemudian  diinokulasi ke  dalam  media  MR-VP  dan  diinkubasi  selama 24  jam  pada  suhu  37ºC.  Pada  uji  MR, ditambahkan 3-4 tetes indikator merah metil. Uji positif  ditandai  dengan  perubahan  warna medium menjadi merah, artinya terbentuk asam (Hadioetomo, 1993).
e.  Uji Simmons  Citrate. Diambil  satu  koloni terpisah  dengan  menggunakan  jarum  ose  dan diinokulasikan pada media Simmons Citrate lalu diinkubasi  pada  temperatur  37ºC  selama  24 jam.  Diamati  adanya  perubahan  warna  pada medium  biakan  (Hadioetomo,  1993).  Uji  positif ditandai  dengan  berubahnya  warna  medium menjadi biru (Sudarsono, 2008).
f. Uji TSIA. Diambil sebagian kecil koloni bakteri dengan  menggunakan  ose  dan  diinokulasikan pada  media  TSIA,  kemudian  dilakukan  dengan cara  menusuk  tegak  lurus  pada  bagian butt (tusuk)  dan  cara  zig  zag  pada  bagian slant (miring).  Diinkubasi  pada  temperatur  37ºC selama  24  jam.  Diamati  perubahan  warna medium  yang  terjadi.    Apabila  bagian slant berwarna  merah  dan butt berwarna  kuning maka  bakteri  mampu  memfermentasi  glukosa, sedangkan  apabila  bagian slant dan butt keduanya  berwarna  kuning  maka  bakteri mampu  memfermentasi  sukrosa  dan  laktosa (Yusuf, 2009).

## Parameter penelitian
Adapun  parameter  dari  penelitian  ini  meliputi  (i) jumlah  isolat;  (ii)  morfologi  sel  yaitu  sifat pewarnaan  Gram,  bentuk  dan  motilitas  dari isolat  bakteri;  dan  (iii)  sifat  fisiologis  dari  isolat bakteri yang berpotensi sebagai bakteri probiotik pada ikan kembung ( Rastrelliger sp.).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Uji fisiologis
Uji  fisiologis  merupakan  tahapan  lanjutan  yang diperlukan  untuk  mengidentifikasi  suatu  bakteri (Darmayasa et  al .,  2008).  Uji  fisiologis  yang
dilakukan  dalam  penelitian  ini  meliputi  uji katalase,  uji  indol,  uji  MR,  uji Simmons  Citrate dan uji TSIA.
Berdasarkan  Tabel  3.1,  isolat  LUI-01,  LUI-02, LUI-03  dan  LUI-04  menunjukkan  katalase  yang positif  (80%)  dan  isolat  LUI-05  menunjukkan katalase  yang  negatif  (20%). Dari data  tersebut hanya  empat  isolat  bakteri  yang  menghasilkan enzim katalase. Menurut Lay (1994), uji katalase digunakan  untuk  mengetahui  adanya  enzim katalase pada isolat bakteri. Katalase merupakan  enzim  yang  dapat  mengkatalisis penguraian  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  menjadi air  dan  O 2. Hidrogen  peroksida  bersifat  toksis terhadap  sel  bakteri  karena  bahan  ini  mampu menonaktifkan  enzim  dalam  sel  dan  sangat berbahaya  bagi  sel  bakteri  itu  sendiri.  Uji  ini sangat penting dilakukan untuk mengetahui sifat dari suatu bakteri terhadap kebutuhan oksigen.
Hasil  uji  indol  menunjukkan  bahwa  lima  isolat bakteri  memberikan  nilai  negatif  (100%)  yang berarti  tidak  ada  isolat  bakteri  yang  dapat membentuk  indol.  Indol  merupakan  senyawa yang  mengandung  nitrogen  yang  terbentuk sebagai  hasil  pemecahan  amino  tryphosphat. Pentingnya  uji  indol  ini  adalah  karena  hanya beberapa  jenis  bakteri  saja  yang  dapat membentuk  indol  dan  produk  ini  dapat  diuji sehingga dapat digunakan sebagai identifikasi.
Berdasarkan  Tabel  3.1,  hasil  pengamatan  dari uji methyl  red (MR)  ini  menunjukkan  bahwa semua  isolat  bakteri  tidak  dapat  mengoksidasi glukosa  yang  berarti  menunjukkan  hasil  negatif (100%).  Menurut  Sudarsono  (2008),  uji  merah metil ( methyl red test ) bertujuan untuk mengetahui kemampuan bakteri untuk mengoksidasi  glukosa  dengan  memproduksi asam  dengan  konsentrasi  tinggi  sebagai  hasil akhirnya.  Jika  media  MR-VP  akan  menjadi merah setelah ditambahkan  merah  metil menunjukkan bahwa hasil  uji positif, sedangkan jika  media  tetap  berwarna  kuning  menunjukkan hasil uji negatif.
Selanjutnya  pada Tabel  3.1  juga  dapat  dilihat bahwa hanya  isolat  LUI-03  yang  mampu menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber  karbon  pada  uji  Simmons  Citrate  dan mengubah  warna  medium  menjadi  biru  yang berarti  positif  (20%)  dan    isolat  LUI-01,  LUI-02, LUI-04  dan  LUI-05  menunjukkan  hasil  yang
negatif  (80%).  Menurut  Hadioetomo  (1993), media sitrat  simmons  merupakan  salah  satu medium yang digunakan untuk menguji kemampuan  bakteri  dalam  menggunakan  sitrat sebagai  satu-satunya  sumber  karbon  yang digunakan.  Bila  bakteri  mampu  tumbuh  dengan menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber  karbon  maka  akan  terlihat  perubahan warna  pada  media  tumbuh  bakteri  pada permukaan  agar  miring  akan  menjadi  warna biru.

## Tabel 3.1 Uji fisiologis lima isolat bakteri yang berpotensi sebagai probiotik
Isolat No Jenis Uji LUI- 01 LUI- 02 LUI- 03 LUI- 04 LUI- 05 1 Uji Katalase + + + + - 2 Uji Indol - - - - - 3 Uji MR - - - - - 4 Uji Simmons Citrate - - + - - 5 Uji TSIA m/k k/k k/k k/k m/k Keterangan: + : Terjadi reaksi - : Tidak terjadi reaksi m/k : Slant merah/ butt kuning k/k : Slant kuning/ butt kuning
Tabel  3.1.  menunjukkan  bahwa  isolat  LUI-01 dan  LUI-05  mampu  memfermentasikan  glukosa (40%),  sedangkan  isolat  LUI-02,  LUI-03  dan LUI-04  mampu  memfermentasikan  laktosa  dan sukrosa (60%).  Berdasarkan pengamatan, tidak terdapat  isolat  yang  memiliki  enzim  desulfurase yang  berfungsi  untuk  memecah  sistein  dan menghasilkan  gas yang  ditandai  dengan terbentuknya  endapan  berwarna  hitam  pada dasar media. Menurut Sudarsono (2008), media TSIA  mengandung  tiga  macam  gula  yaitu glukosa,  laktosa,  atau  sukrosa.  Uji  TSIA  ini bertujuan  untuk  mengetahui  kemampuan  dari suatu  bakteri  dalam  memfermentasi  gula  untuk menghasilkan  asam  atau  gas.  Warna  merah pada agar menunjukkan reaksi basa, sedangkan  warna  kuning  menunjukkan  reaksi asam. Warna merah pada permukaan agar dan kuning  di bagian  bawah  agar  menunjukkan bahwa  terjadinya  fermentasi  glukosa.  Warna kuning  pada  bagian  permukaan  dan  bawah tabung  menunjukkan  terjadinya  fermentasi laktosa dan sukrosa.

## Identifikasi isolat
Identifikasi genus dari suatu bakteri memerlukan karakter-karakter  utama  dari  bakteri  yaitu morfologi  sel  (bentuk  sel  dan  susunan  sel),  uji biokimia  dan  tipe  fermentasi  (Suryani et  al ., 2010).  Isolat  yang  berpotensi  sebagai  probiotik pada  hasil  penelitian  ini  diperoleh  lima  isolat bakteri  dengan  tiga  jenis  genera  dan  satu spesies  bakteri  yang  memilki  kesamaan  genus pada  penelitian-penelitian  sebelumnya. Pada penelitian  ikan  laut  diperoleh  isolat-isolat  yang berpotensi  sebagai  probiotik  yaitu gram  positif ( Bacillus, Lactococcus, Micrococcus, Carnobacterium,  Enterococcus, Lactobacillus, Streptococcus,  Weisslla )  dan  gram  negatif ( Aeromonas, Alteromonas, Photorhodobac- terium,  Pseudomonas,  Vibrio )  (Marzouk et  al ., 2008). Empat  jenis  genus  yang  didapat  dari penelitian  Feliatra  dan  Suryadi  (2004)  yaitu genus
Lactococcus ,
Carnoacterium , Staphylococcus , Bacillus , Eubacterium , Pseudomonas , Lactobacillus , Micrococcus ,  dan Bifidobacterium . Penelitian  Ghosh et  al .  (2007) mendapatkan empat jenis genus yaitu Pseudomonas , Aeromonas , Edwardsiella dan Bacillus . Berikut  tiga  genus  dan  satu  spesies isolat  yang  ditemukan  pada  lambung  dan  usus ikan kembung ( Rastrelliger sp.) adalah:
1. LUI-01 dan LUI-02 (Genus Micrococcus )
Bakteri  yang  mendekati  genus  ini  memiliki  ciri- ciri morfologi yaitu gram positif, bentuk sel bulat dan  non  motil.  Bentuk  koloni  bundar,  tepian koloni licin, elevasi koloni pada LUI-01 cembung dan  LUI-02  timbul,  warna  koloni  pada  LUI-01 coklat  kemerahan  dan  LUI-02  krem.  Katalase positif,  indol  negatif,  uji  MR  negatif,  uji  sitrat negatif  dan  TSIA  pada  LUI-01  memiliki  warna permukaan merah dan bawah kuning, sedangkan  LUI-02  memiliki  warna  permukaan dan  bawah  kuning.  Menurut  Holt et  al .  (1994) bakteri Micrococcus sp.  gram positif,    jarang motil  dan  kebanyakan  non  motil,  koloni berwarna  kekuningan  sampai  merah,  tumbuh pada  media  yang  sederhana,  katalase  positif, indol  negatif,  pada  uji  TSIA  ada  yang  mampu memfermentasi  glukosa  dan  ada  yang  mampu memfermentasi  laktosa  dan  sukrosa,  tumbuh optimum pada suhu 25ºC-37ºC.
2. LUI-03 (Genus Staphylococcus )
Bakteri  yang  mendekati  genus  ini  memiliki  ciri- ciri morfologi yaitu gram positif, bentuk sel bulat dan    motil. Bentuk  koloni  bundar,  tepian  koloni licin, elevasi koloni timbul dan warna koloni putih susu.  Katalase  positif,  indol  negatif,  uji  MR negatif, uji sitrat positif dan TSIA memiliki warna permukaan  dan  bawah  kuning.  Menurut  Holt et al .  (1994)  bakteri Staphylococcus sp.  gram positif,  motilitas  berubah-ubah,  kebanyakan motil, koloni biasanya buram, warna koloni putih susu  atau  krem.  Bakteri  ini  memiliki  katalase positif  dan  oksidase  negatif,  sering  mengubah nitrit  menjadi  nitrat,  mampu  memfermentasi laktosa  dan  sukrosa,  tumbuh  optimum  pada temperatur  37ºC.  Beberapa  spesies  ada yang patogen pada manusia dan hewan.
3. LUI-04 (Genus Bacillus )
Bakteri  yang  mendekati  genus  ini  memilki  ciri- ciri morfologi yaitu gram positif, bentuk sel bulat, batang  dan  motil.  Bentuk  koloni  bundar,  tepian koloni  berombak,  elevasi  koloni  cembung  dan warna koloni kuning atau krem. Katalase positif, indol negatif, uji MR negatif, uji sitrat negatif dan TSIA  memiliki  warna  permukaan  dan  bawah kuning. Menurut  Holt et  al .  (1994)  bakteri Bacillus sp.  gram  positif,  motil  dengan  flagel peritrik. Endospora oval, kadang-kadang bundar atau  silinder  dan  sangat  resisten  pada  kondisi yang  tidak  menguntungkan.  Warna  koloni  putih susu sampai kekuningan dengan tepian berombak.  Bakteri  ini  bersifat  aerobik.  Katalase dan  oksidase  positif.  Indol  negatif  dan  mampu memfermentasi  glukosa  serta  laktosa  dan sukrosa. Tersebar luas pada bermacam-macam habitat  dan  sedikit  spesies  yang  patogen. Suhu tumbuh optimum pada 28ºC-35ºC.
4. LUI-05 (Spesies Hafnia alvei )
Bakteri  ini  memiliki  ciri-ciri  morfologi  yaitu  gram negatif,  bentuk  sel bulat  dan  non  motil. Bentuk koloni  bundar,  tepian  koloni  licin,  elevasi  koloni timbul dan  warna koloni krem. Katalase negatif, indol negatif, uji MR negatif, uji sitrat negatif dan TSIA  memiliki  warna  permukaan  merah  dan bawah  kuning.  Proses  identifikasi  pada  bakteri ini  menggunakan MICROBACT TM 24E Gram- Negative Identification System (OXOID).
Berdasarkan pengujian menggunakan kit microbact ,  didapatkan  bahwa  isolat  LUI-05 merupakan  spesies Hafnia  alvei dengan  tingkat kebenaran  82,76%  ( percent  probability )  (Oxoid, 2005). Hafnia  alvei merupakan  salah  satu  jenis bakteri  yang  diidentifikasi  sebagai  pembentuk Histamin  yang  lemah  (Indriati et  al .,  2006). Menurut Rodriguez et al., (1998)  bahwa bakteri ini dianggap sebagai bakteri patogen oportunistik  yang  secara  alami  terdapat  pada saluran  pencernaan Identifikasi  isolat  LUI-05 menggunakan kit microbact 24E.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian, dapat disimpulkan terdapat  lima  isolat  yang  berpotensi  sebagai probiotik  dari  lambung  dan  usus  ikan  kembung ( Rastrelliger sp.).  Kelima  isolat tersebut terdiri dari  tiga  genera  bakteri yaitu Micrococcus , Staphylococcus dan Bacillus serta satu  spesies bakteri yaitu Hafnia alvei .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  merupakan  bagian  dari proyek penelitian  magister penulis  yang  dibiayai  oleh DAAD. Penulis mengucapkan terima kasih dan pengharagaan yang tinggi kepada Dr. Ronald F. Kuehne  dan  Prof.  Dr.  med.  Uwe  Gross  atas segala  dukungan,  bimbingan,  dan  perhatianya selama penulis melakukan penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Afrianto E dan Liviawaty E . 2005. Pakan Ikan . Kanisius, Yogyakarta.
Bahar  B. 2006. Panduan  Praktik  Memilih  dan Menangani Produk Perikanan .
Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Darmayasa IBG. 2008.  Isolasi  dan  Identifikasi Bakteri  Pendegradasi  Lipid  (Lemak) pada  Beberapa  Tempat  Pembuangan Limbah  dan  Estuari  DAM  Denpasar. Jurnal Bumi Lestari 8:122-127.
Feliatra  E  dan  Suryadi  E. 2004. Isolasi  dan Identifikasi  Bakteri  Probiotik  dari  Ikan Kerapu
Macan ( Ephinephelus fuscogatus )  dalam  Upaya  Efisiensi
Pakan  Ikan. Jurnal  Natur  Indonesia. 6(2): 75-80.
Ghosh S, Sinha A, and Sahu C . 2007. Isolation of Putative Probionts From the Intestines  of  Indian  Major  Carps. The Israeli  Journal  of  Aquaculture .  59(3):
127-132.
Hadioetomo  RS. 1993. Mikrobiologi  Dasar
Dalam  Praktek  Teknik  dan  Prosedur Dasar
Laboratorium . Penerbit Gramedia, Jakarta.
Holt JG,  Krieg NR,  Sneath  PHA,  Staley JT, dan    William ST. 1994. Bergey’s Manual  of  Determinative  Bacteriology .
Lippicolt William and Wilkins, New York.
Indriati N, Rispayeni, dan Heruwati ES. 2006. Studi Bakteri Pembentuk Histamin pada Ikan  Kembung  Peda  Selama  Proses Pengolahan. Jurnal  Pascapanen  dan Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan . 1(2): 117-123.
Irianto A. 2005. Patologi Ikan Teleostei . Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.
Kanmani P,  Kumar  RS,  Yuvaraj N,  Paari  KA, Pattukumar V, dan  Arul V. 2010.
Comparison  of  Antimicrobial  Activity  of Probiotic Bacterium Streptococcus phocae P180, Enterococcus  faecium MC13  and Carnobacterium  divergens Against Fish Pathogen. World Journal of Dairy and Food Sciences . 5(2):145-151.
Lay BW . 1994.
Analisis Mikroba di
Laboratorium . PT. Raja Grafindo Persada, Jakarta.
Marlina . 2008. Identifikasi Bakteri Vibrio
parahaemolitycus dengan Metode BIOLOG dan  Deteksi  Gen ToxR nya Secara PCR. Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi . 13(1):11-17.
Marzouk  MS,  Moustafa  MM,  Nermeen,  and Mohamed  M .  2008.  The  Influence  of Some Probiotic on The Growth Performance  and  Intestinal  Microbial Flora  of  O.  NILOTICUS. International
Symposium  on  Tilapia  in  Aquaculture . 1059-1071
Oxoid . 2005. Microbact TM Gram Negatif Identification System . Oxoid Ltd, London.
Rodriguez  LA,  Gallardo CS,  Acosta F,  Nieto TP,  Acosta B, dan Real F. 1998. Hafnia alvei as an Opportunistic Pathogen  Causing  Mortality  in  Brown Trout, Salmo  trutta L.. Journal  of  Fish Diseases . 21: 365-369.
Santoso  J,  Setyaningsih  I,  dan  Herlijoso  C. 1997. Perubahan  Kandungan  Asam Lemak  Omega-3  pada  Pindang  Ikan Kembung  ( Rastrelliger sp.)  Selama Penyimpanan. Buletin  Teknologi  Hasil Perikanan . 3.
Sudarsono A. 2008.  Isolasi  dan  Karakterisasi Bakteri  pada  Ikan  Laut  dalam  Spesies
Ikan Gindara ( Lepidocibium flavobronneum ). Skripsi .  Bogor:  Institut Pertanian Bogor.
Suryani Y, Astuti, Oktavia B, dan Umniyati S . 2010.  Isolasi  dan  Karakterisasi  Bakteri Asam Laktat dari Limbah Kotoran Ayam
Sebagai  Agensi  Probiotik  dan  Enzim Kolesterol
Reduktase.
Prosiding
Seminar Nasional Biologi . 138-147
Yulinery T,  Yulianto E,  dan  Nurhidayat N.
2006.
Uji Fisiologis
Probiotik Lactobacillus sp.  Mar  8  Yang  Telah Dienkapsulasi  dengan  Menggunakan Spray Dryer
Untuk
Menurunkan
Kolesterol. Jurnal  Biodiversitas .  7(2):
118-122.
Yusuf RW. 2009. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Gram  Negatif  pada  Luka  Ikan  Maskoki ( Carassius auratus ) Akibat Infeksi
Ektoparasit
Argulus
sp.. Skripsi . Surabaya: Unversitas Erlangga.
Zamroni  A,  Suwarso,  dan  Mukhlis  NA. 2008. Biologi Reproduksi dan
Genetik
Populasi  Ikan  Kembung  ( Rastrelliger brachysoma ,  Famili  Scombridae)  Di Pantai  Utara  Jawa. Jurnal  Perikanan Indonesia . 14: 215-226.