## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAN FRAKSI DARI EKSTRAK METANOL DAUN MANGGIS (Garcinia mangostana) PADA BAKTERI PENYEBAB ULKUS DIABETIK
Antibacterial Activities Of Extract And Fraction From Methanol Extract From Manggis Leaves (Garcinia mangostana) In Bacteria Causing Diabetic Ulcer
Vivi Rosalina 1*
R. Mahendra 2
* 1 STIKES Bhakti Husada Mulia, Madiun, Jawa Timur, Indonesia
2 STIKES Bhakti Husada Mulia, Madiun, Jawa Timur, Indonesia
*email: newerikania87@gmail.com

## Abstrak
Diabetes  mellitus  (DM)  adalah  penyakit  degeneratif  karena  gangguan  metabolisme dengan  kondisi  hiperglikemik  akut  sampai  kronis.  Komplikasi  penyakit  ini  adalah neuropati perifer yang diperparah dengan infeksi bakteri menyebabkan ulkus (luka) pada kaki,  tangan,  lutut,  punggung  dan  bagian  tubuh  yang  lain.  Tanaman  manggis  (Garcinia mangostana)  dipercaya  secara  empiris  memiliki  khasiat  sebagai  antidiabetes  dan menyembuhkan ulkus diabetik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbandingan aktivitas  antibakteri  ekstrak  dan  fraksi  dari  ekstrak  metanol  daun  manggis  pada konsentrasi 20 %, 40 %, 60 %, 80 % dan 100 % terhadap bakteri penyebab ulkus diabetik secara in vitro. Tahapan penelitian diawali dengan ekstraksi serbuk daun manggis secara maserasi menggunakan pelarut metanol. Fraksi diperoleh dengan metode Kromatografi cair  vakum  (KCV).  Bakteri  penyebab  ulkus  diabetik  diperoleh  dari  specimen  ulkus penderita ulkus diabetik. Aktivitas antibakteri ekstrak dan fraksi pada 5 seri konsentrasi diuji  menggunakan  metode  difusi  cakram  dengan  kontrol  negatif  DMSO  10%  dan kontrol  positif  yaitu  Amoxicillin,  Ampicillin,  Ciprofloxacin,  Cefotaxim,  Gentamycin, Erythromicin  dan  Doxycicline.  Aktivitas  antibakteri  dinyatakan  dengan  besarnya  luas zona hambat pada media yang telah diinokulasikan dengan bakteri ulkus dan diinkubasi selama  24  jam  pada  suhu  370  C.  Hasil  penelitian  diperoleh  bahwa  terdapat  5  bakteri dominan ditemukan dalam specimen ulkus diabetik yaitu Escherichia spp, klebsiella spp, staphylococcus  spp,  salmonella  spp  dan  shigella  spp.  Hasil  uji  sensitivitas  7  antibakteri diperoleh  bahwa  ciprofloxacin  memiliki  luas  zona  hambat  terbesar  dibandingkan Amoxicillin, Ampicillin, Cefotaxim, Gentamycin, Erythromicin dan Doxycicline sehingga Ciprofloxacin  dapat  digunakan  sebagai  kontrol  positif.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri ekstrak  metanol  daun  manggis  konsentrasi  100  %  menghasilkan  zona  hambat  paling besar  yaitu  27,10  mm  ±  0,1  dibandingkan  ekstrak  metanol,  fraksi  A,  B  dan  C  pada semua  seri  konsentrasi.  Akan  tetapi  zona  hambat  ekstrak  metanol  daun  manggis konsentrasi 100 % tersebut lebih kecil dibandingkan dengan kontrol positif ciprofloxacin 5 µg/disk yaitu sebesar 35,01 mm ± 0,1
Kata Kunci: Pengetahuan
Minat Pembalut
Keywords : Knowledge Interests Bandages

## Abstract
Diabetes mellitus (DM) is a degenerative disease due to metabolic disorders with acute to  chronic  hyperglycemic  conditions.  The  complication  of  this  disease  is  peripheral neuropathy exacerbated by bacterial infection causing ulcers (sores) on the feet, hands, knees, back and other parts of the body. The mangosteen plant (Garcinia mangostana) is empirically believed to have antidiabetic and cure diabetic ulcers. This study aims to determine  the  comparison  of  the  antibacterial  activity  of  extracts  and  fractions  of methanol extract of mangosteen leaves at concentrations of 20%, 40%, 60%, 80% and 100% against the bacteria causing diabetic ulcers by in vitro. The research began with maceration  of  mangosteen  leaf  powder  extraction  using  methanol  as  a  solvent.  The fractions  were  obtained  by  the  vacuum  liquid  chromatography  (KCV)  method.  The bacteria that cause diabetic ulcers are obtained from ulcer specimens of diabetic ulcer patients.  Antibacterial  activity  of  extracts  and  fractions  at  5  concentration  series  was tested using the disc diffusion method with 10% DMSO negative control and positive controls  namely  Amoxicillin,  Ampicillin,  Ciprofloxacin,  Cefotaxim,  Gentamycin, Erythromicin and Doxycicline . Antibacterial activity was expressed by the large area of the  inhibition  zone  on  the  media  that  had  been  inoculated  with  ulcer  bacteria  and incubated  for  24  hours  at  370  C.  The  results  showed  that  there  were  5  dominant bacteria found in the diabetic ulcer specimens, namely Escherichia spp, Klebsiella spp, Staphylococcus  spp,  salmonella  spp  and  shigella  spp.  The  results  of  the  antibacterial sensitivity  test  showed  that  ciprofloxacin  had  the  largest  area  of  inhibition  zone compared  to  Amoxicillin,  Ampicillin,  Cefotaxim,  Gentamycin,  Erythromicin  and Doxycicline  so  that  Ciprofloxacin could  be  used  as  a positive  control.  The  results  of the  antibacterial  activity  test  for  the  methanol  extract  of  mangosteen  leaves  with  a concentration  of  100%  produced  the  largest  inhibition  zone, namely  27.10  mm  ± 0.1 compared  to  methanol  extract,  fractions  A,  B  and  C  in  all  concentration  series. However,  the  inhibition  zone  of  the  100%  concentration  of  mangosteen  leaves methanol  extract  was  smaller  than  the  positive  control  of  ciprofloxacin  5  µg  /  disk, which was 35.01 mm ± 0.1
©  year  The  Authors.  Published  by  Institute  for  Research  and  Community  Services  Universitas  Muhammadiyah  Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.vxix.xxx .

## PENDAHULUAN
Diabetes mellitus (DM) merupakan salah satu penyakit degeneratif  yang  disebabkan  metabolisme  kompleks ditandai  dengan  kondisi  hiperglikemik  yang  kronis (Kernel  dan  Bruckel,  2014).  Kondisi  ini  menyebabkan meningkatkan  risiko  komplikasi  seperti  neuropati perifer  yang  diperparah  dengan  infeksi  bakteri menyebabkan ulkus pada kaki, tangan, lutut, punggung dan bagian tubuh yang lain (Supiyanti, 2010). Prevalensi penyakit DM di Indonesia terus tumbuh dan meningkat berdasarkan  pemeriksaan  darah  adalah  10,9  %  dan diagnosis  dokter  sebesar  1,5  %  (Riskesdas,  2018). Angka  kematian  pada  penderita  DM  dengan  ulkus berkisar antara 17-23% dan diamputasi berkisar antara 15-30%  (Syarif,  2013).  Penderita  ulkus  diabetik  di Indonesia  memerlukan  biaya  yang  tinggi  sebesar  1,3 juta  sampai  Rp1,6  juta  perbulan  dan  Rp  43,5  juta  per tahun untuk seorang penderita (Hastuti, 2010). Keberadaan  bakteri  menjadi  penyebab  awal  adanya luka  (ulkus)  yang  terjadi  saat  kondisi  hiperglikemik membuat  bakteri  tumbuh  dan  berkembang.  Bakteri yang terdapat di dalam ulkus diabetik adalah kumpulan bakteri  aerob  dan  anaerob  (Nur  dan  Malisa,  2016). Anggriawan  (2014)  melaporkan  bahwa  bakteri  aerob dan  anaerob  terdapat  dalam  kultur  specimen  (pus) penderita ulkus diabetik, yaitu Enterobacter sp. (48 %), Staphylococcus  aureus  (18,2  %),  Streptococcus  spp (16.8%),  dan  Pseudomonas  sp  (17  %).  Tahir  dan Nurwahidah  (2019)  juga  melaporkan  bahwa  bakteri gram  negatif  golongan  Proteus  mirabilis  memiliki  nilai tertinggi  pertama  yang  menginfeksi  ulkus  diabetik sebesar  20,5  %  dan  kedua  adalah  E.  coli  sebesar  17,6 %.  Perbedaan  jenis  bakteri  pada  ulkus  diabetik dipengaruhi  oleh  trauma,  kelainan  biomekanik, keterbatasan  gerak  sendi,  dan  peningkatan  resiko infeksi.  Pengobatan  ulkus  diabetik  adalah  dengan antibiotik  (Lipsky  BA  et  al,  2012).  Akan  tetapi, pengobatan dengan antibiotik perlu dikaji ulang karena terdapat  bakteri  yang  resisten  terhadap  antibiotik tertentu.
Penggunaan  bahan  alami  sebagai  alternatif  pengobatan ulkus  diabetik  telah  banyak  diteliti  diantaranya perawatan dan penyembuhan ulkus diabetik menggunakan  serat  pelepah  pisang  kombinasi  dengan rumput laut oleh Juwono dan Sudiarto (2017), ekstrak cacing  oleh  Mardianti  dkk  (2011)  dan  ekstrak  kunyit oleh Doddy dkk (2017). Penelitian sebelumnya tentang tanaman  manggis  (Garcinia  mangostana)  diantaranya yaitu ekstrak kulit manggis mampu menurunkan kadar gula  tikus  yang  diinduksi  alloksan  pada  dosis  sebesar 500  mg/kg  BB  (Dyahnugra  dan  Widjanarko,  2015), Pasaribu  dkk  (2012)  melaporkan  ekstrak  etanol  kulit buah  manggis  mampu  menurunkan  kadar  gula  darah mencit  pada  dosisi  100  mg/kg  BB.  Penelitian  tentang perbandingan  aktivitas  antibakteri  ekstrak  dan  fraksi dari  ekstrak  metanol  daun  manggis  terhadap  bakteri penyebab  ulkus  diabetik  belum  pernah  dilakukan, sehingga  penelitian  ini  sangat  diperlukan  untuk menemukan  solusi  alternatif  pengobatan  atau perawatan ulkus diabetik.

## METODOLOGI
Metode  yang  dilakukan  meliputi  pembuatan  ekstrak daun  Manggis  sebanyak  2  kg  Serbuk  Daun  manggis dimaserasi menggunakan pelarut metanol sebanyak 20 liter.  Selanjutnya  maserat  dipekatkan  dengan rotaryevaporator.  Selanjutnya  fraksinasi  diakukan secara  ecc  dimana  ekstrak  kental  dipartisi menggunakan 100 ml pelarut n heksan sebanyak 4 kali menghasilkan  fraksi  metanol  dan  fraksi  n  heksan. Selanjutnya  fraksi  metanol  dipartisi  menggunakan  100 ml pelarut etil asetat sebanyak 3 kali. Fraksi etil asetat yang dihasilkan dipekatkan menggunakan rotaryevaporator.  Fraksi  etil  asetat  yang  telah dimpregnasi  menggunakan  silika  gel  difraksinasi menggunakan  fase  diam  silika  gel  dan  fase  gerak nheksan,  etil  asetat  dan  n  butanol.  Proses  elusi dilakukan  dengan  pelarut  mulai  dari  kepolaran  rendah yaitu  n-heksana  lalu  kepolaran  ditingkatkan  dari  n heksan,  etil  asetat  sampai  n  butanol.  Kolom  dihisap
sampai  kering  pada  setiap  pengumpulan  fraksi.  Tiap fraksi dipekatkan dengan rotaryevaporator.
Ekstrak  dan  fraksi  diidentifikasi  fitokimia  meliputi  Uji steroid/triterpen  dengan  menambah  sampel  ekstrak kental  dengan  asam  asetat  anhidrida  dan  asam  sulfat pekat  (pereaksi  Liebermann  Burchard)  menghasilkan warna  biru  atau  biru  hijau  menunjukkan  adanya steroid,  sedangkan  warna  merah,  merah  muda  atau ungu  menunjukkan  adanya  triterpenoid.  Uji  flavonoid dengan  menambah  sampel  yang  telah  digerus  dalam mortir  dengan  sedikit  air,  pindahkan  dalam  tabung reaksi,  ditambahkan  sedikit  logam  magnesium  dan  5 tetes  HCl  2  N,  seluruh  campuran  dipanaskan  selama 5–10  menit.  Setelah  disaring  panas–  panas  dan  filtrat dibiarkan  dingin,  filtrat  ditambahkan  amil  alkohol,  lalu dikocok kuat–kuat. Reaksi positif dengan terbentuknya warna  merah  pada  lapisan  amil  alkohol  (Depkes  RI, 1989).  Uji  alkaloid  dilakukan  dengan  sampel  dalam mortir,  dibasakan  dengan  amonia  sebanyak  1  mL, kemudian  ditambahkan  kloroform  dan  digerus  kuat. Cairan  kloroform  disaring,  filtrat  ditempatkan  dalam tabung  reaksi  kemudian  ditambahkan  HCl  2  N, campuran  dikocok,  lalu  dibiarkan  hingga  terjadi pemisahan.  Dalam  tabung  reaksi  terpisah  dilakukan reaksi  yang  dapat  menunjukkan  adanya  alkaloid  yaitu filtrat  ditambahkan  1  tetes  larutan  pereaksi Dragendorff  menunjukkan  adanya  endapan  atau kekeruhan  berwarna  hingga  coklat,  dan  sisa  filtrat ditambahkan  1  tetes  larutan  pereaksi  Mayer menunjukkan endapan atau kekeruhan berwarna putih. Uji  saponin  dilakukan  dengan  ekstrak  kental  sebanyak 1  g  ditambahkan  dengan  air  hangat,  dikocok  vertikal selama  10  detik  kemudian  dibiarkan  selama  10  detik. Pembentukan busa setinggi 1–10 cm yang stabil selama tidak  kurang  dari  10  menit,  menunjukkan  adanya saponin. Pada penambahan 1 tetes HCl 2 N, busa tidak hilang (Depkes RI, 1995). Uji Tannin dilakukan dengan Sebanyak 200 mg ekstrak dilarutkan dengan 20  ml air panas  lalu  dikocok  hingga  homogen.  setelah  dingin ditambah  FeCl3  3  %  menunjukkan  hasil  positif  jika
terbentuk  larutan  biru  kehitaman  atau  hijau kecoklatan.
Specimen  ulkus  diabetik  diambil  dengan  metode swabbing  dengan  cotton  swab  steril  sebanyak  3  kali swabbing  kemudian  dibawa  ke  Laboratorium Mikrobiologi  STIKES  Bhakti  Husada  Mulia  Madiun menggunakan  box  sampel  dalam  keadaan  dingin. Specimen  didilusi  pada  effendor  dengan  pengenceran mulai  dari  101  sampai  107  CFU/uL.  Proses  sterilisasi alat  dan  media  uji  menggunakan  autiklaf  pada  suhu 121oC  selama  15  menit.  Media-media  yang  digunakan adalah  media  NA  yang  dibuat  dengan  cara  20  g Nutrient  Agar  (NA)  dilarutkan  dalam  1  liter  akuades, dipanaskan  hingga  mendidih  sampai  larut,  media  Mac conkay cair 20ml dituangkan kedalam cawan petri dan biarkan  memadat.  Media  Tsi  dibuat  dengan  1,5 ditambah aquadest 50 ml, dipanaskan hingga mendidih sampai  larut,  media  SIM  dibuat  dengan  2  gram  media ditambahkan  aquades  50  ml,  dipanaskan  hingga mendidih,  media  Simmon  sitrat  agar  (citrate)  dibuat dengan  1,5  gram  ditambah  aquadest  50  ml.  Semua media  disterilkan  menggunakan  autoklaf  pada  suhu 121oC  selama  15  menit,  kemudian  dituangkan  ke dalam cawan petri dan dibiarkan hingga memadat. Identifikasi  Bakteri  Pada  Specimen  Ulkus  Diabetik dilakukan  berdasarkan  bakteri  yang  tumbuh  pada media  Nutrient  Agar  (NA)  dan  Mac  conkay  yang selanjutnya  dilakukan  pewarnaan  gram.  Identifikasi bakteri  dilanjutkan  dengan  uji  biokimia  dengan inokulasi  bakteri  media  TSI  (Tripple  Sugar  Iron),  SIM (Sulfida  Indole  Motility),  citrate,  MR-VP  dan  LIA (Lactosa  Iron  Agar),  diinkubasi  selama  24  jam  pada suhu  370  C.  Selanjutnya  dilakukan  uji  sensitivitas antibiotik  untuk  menentukan  antibiotik  yang  memiliki sensitivitas  tinggi  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri  hasil  isolasi  ulkus  diabetik.  Antibiotik  yang digunakan  dalam  uji  sensitivitas  yaitu  Amoxicillin  (10 ug), Ampicillin (10 ug), Ciprofloxacin (5 ug), Cefotaxim (30 ug), Gentamycin (10 ug), Erythromicin (15 ug) dan Doxycicline (30 ug) per disk nya. Aktivitas Antibakteri
Jurnal  Surya  Medika  (JSM),  Vol  x  No  x,  Month  Year, Page  x  –  x  p-ISSN:  2460-7266;  e-ISSN:  2655-2051  4 Ekstrak dan Fraksi dari Ekstrak Metanol Daun Manggis menggunakan  metode  difusi  cakram  secara  in  vitro dengan kontrol negatif pelarut dimethyl sulfoxide 10 % (DMSO) dan sampel yang di uji yaitu ekstrak dan fraksi dari ekstrak metanol daun manggis pada masing-masing konsentrasi sebesar 20%, 40%, 60%, 80% dan 100%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Daun  manggis  (Garcinia  mangostana)  diperoleh  dari perkebunan  manggis  di  desa  Dagangan  Kabupaten Madiun.  Daun  manggis  yang  diperoleh  sebessar  20  kg daun  basah.  Daun  manggis  segar  yang  diperoleh menghasilkan  daun  manggis  kering  sebesar  9,3  kg. Simplisia  kering  daun  diserbuk  menggunakan  blender sampai  diperoleh  serbuk  yang  halus.  Serbuk  yang diperoleh  sebesar  4,86  kg.  Ekstraksi  secara  maserasi menggunakan  pelarut  metanol  menghasilkan  ekstrak metanol sebesar 287,2 gram dengan rendemen 14,6 %. Banyaknya  rendemen  bergantung  kepada  sifat kelarutan  komponen  bioaktifnya.  Hal  ini  dikarenakan kelarutan zat pada suatu pelarut sangat ditentukan oleh kemampuan  zat  tersebut  membentuk  ikatan  hidrogen (Khopkar,  1990).  Beberapa  faktor  yang  dapat mempengaruhi hasil rendemen adalah waktu ekstraksi, metode  ekstraksi  yang  digunakan,  ukuran  sampel, penyimpanan, dan perbandingan jumlah sampel dengan jumlah pelarut. Nilai rendemen dapat diartikan dengan banyaknya kandungan senyawa aktif. Tingginya senyawa bioaktif  yang  terdapat  pada  suatu  ekstrak  ditunjukkan dengan besarnya rendemen ekstrak.
Pelarut yang digunakan untuk maserasi adalah metanol. Menurut  ismail  et  al  (2004)  dalam  Ningsih  (2017) metanol  dipilih  sebagai  pelarut  karena  memiliki kepolaran  yang  tinggi  sehingga  mampu  melarutkan sebagian besar senyawa yang ada dalam simplisia dapat terekstrak di dalam metanol. Pelarut dengan kepolaran rendah,  lebih  sedikit  menarik  ekstrak  aktif dibandingkan  dengan  campuran  etanol  dan  metanol
atau  metanol  saja.  Fraksinasi  ekstrak  metanol  daun manggis  secara  ECC  menghasilkan  fraksi  etil  asetat. Fraksi etil asetat difraksinasi secara KCV menggunakan pelarut  n  heksan,  etil  asetat  dan  n  butanol menghasilkan  kelompok  fraksi  yang  dikelompokkan berdasarkan  profil  kromatografi  lempeng  tipis  (KLT). Monitoring  secara  KLT  menggunakan  fase  diam  silika gel 60 F254  dan fase gerak etil asetat : asam format : air (8:0,5:0,5), dipertegas dengan uap ammonia, dilihat dibawah sinar UV 254 nm dan 366 nm.
(a) (b)
Gambar  1  : Gambar  diatas  merupakan  profil  KLT fraksi  hasil  KCV  yang  diamati  dibawah  sinar  UV  254 dan 366. (a)
Profil KLT UV 254, (b) Profil KLT UV 366 Pada profil KLT  diatas  tampak  bercak  yang  tampak  menunjukkan adanya  senyawa  metabolit  sekunder  dalam  fraksi  hasil KCV.  Bercak-bercak  tersebut  selanjutnya  di  hitung nilai  Rf  nya  dan  kelompokkan  berdasarkan  profilnya. Berikut  adalah  data  berat  fraksi  hasil  KCV  dan pengelompokan berdasarkan nilai Rf.
Tabel 1. Data Pengelompokkan Fraksi
Fraksi Nilai Rf I Nilai Rf 2 Kelompok 1 0 0
A 2 0 0 3
0 0 4 0,36 0,68 B 5 0,36 0,64 6 0,41 0,65
7 0, 41 0,64
C
8 0, 41 0,64 9 0, 41 0,65 10 0, 41 0,65 11 0, 42 0,65
Hasil Identifikasi fitokimia diperoleh Berdasarkan tabel diatas,  ekstrak  metanol  mengandung  senyawa metabolit  sekunder  yaitu  alkaloid,  flavonoid,  tannin, saponin  dan  polifenol.  Fraksi  etil  asetat  mengandung
alkaloid,  flavonoid  dan  polifenol.  Sedangkan  fraksi  N heksan mengandung steroid. Hasil identifikasi fitokimia dapat dilihat pada table dibawah ini :
Tabel 2. Hasil Identifikasi Fitokimia
Senyawa Metode EM FEA FNH Alkaloid Dragendroff + + - Flavonoid Serbuk  Mg, HCI pekat + + - Tanin FeCI 3 + - - Saponin Pembentukan Busa + - - Polifenol FeCI 3 5% + + - Steroid/Terpenoid Lieberman Burchard - - +
Keterangan : EM= Ekstrak methanol, FEA=Fraksi etil asetat, FNH=Graksi N heksan
Hasil  Identifikasi  Bakteri  Ulkus  Diabetik  Identifikasi bakteri  dalam  specimen  ulkus  diabetik  dilakukan dengan  isolasi  dimana  specimen  ulkus  yang  telah diencerkan  sebanyak  7  kali  dengan  NaCl,  kemudian diinokulasikan  pada  media  Nutrient  agar  dan  Mac conkay.  Selanjutnya  dilakukan  pewarnaan  gram menghasilkan  bakteri  dengan  morfologi  sebagai berikut.
Gambar  2. Foto  Bakteri  hasil  pewarnaan  gram berbentu batang dan berwarna merah
Berdasarkan  hasil  pewarnaan  gram  diatas  dapat diketahui  bahwa  bakteri  yang  terdapat  pada  specimen ulkus  diabetik  memiliki  bentuk  batang  dan  berwarna merah muda. Hidayat (2011) menyebutkan sel bakteri gram positif yang ditambah pewarna kristal violet akan berwarna  ungu  karena  menyerap  pewarna  tersebut. Ketika ditamba dengan lugol dan dicuci dengan alcohol akan  tetap  berwarna  ungu  karena  sel  bakteri  kuat mengikat  kompleks  Kristal  violet-lugol.  Sedangkan
bakteri  Gram  negatif  akan  menjadi  tidak  berwarna ketika  ditambah  kristal  violet  karena  bakteri  gram negatif memiliki lapisan peptidoglikan yang tipis, ketika ditambah  dengan  safranin  maka  akan  diserap  dan  sel bakteri gram negatif berwarna merah. Hasil identifikasi bakteri secara biokimia sebagai berikut :

## Tabel 3. Hasil Uji Biokimia
No Jenis Uji Isolat I II  III  IV  V 1 Motilitas + + - + - 2 Indol - - - + + 3 MR - - - - + 4 VP + + + - + 5 TSIA - - + Sukrosa - - + + + Laktosa + - + - + Glukosa + - + + +
Gas + - + + +
H 2 S - - - + + 6 Simmon Citrat - + + + + 7 LIA + - + + -
Berdasarkan Uji biokimia diperoleh 5 bakteri dominan yang terdapat pada specimen ulkus diabetik yaitu isolat I adalah Enterobacter spp, isolat II Shigella spp, isolat III Klebsiella spp, isolat IV Pseudomonas spp dan isolat V Salmonella  spp.  Sebelum  dilakukan  uji  aktivitas antibakteri  telah  dilakukan  uji  sensitivitas  antibiotik terhadap  bakteri  penyebab  ulkus  diabetik.  Hasil  uji sensitivitas aantibiotik terhadap bakteri penyebab ulkus diabetik adalah sebagai berikut :
Tabel 4. Hasil Uji Sensitivitas Antibiotik No  Antibiotik Rata-rata Zona Hambat (mm) 1 Amoxicillin 10 ug 7,03 ± 0,06 2 Ampicillin 10 ug 0 ± 0 3 Ciprofloxacin 5 ug 35,1 ± 0,1 4 Cefotaxim 30 ug 25,03 ± 0,05 5 Gentamycin 10 ug 15,0 ± 0 6 Eryithromycin 15 ug 6,07 ± 0,06 7 Doxycicline 30 ug 20,63 ± 0,64
Berdasarkan  hasil  uji  sensitivitas  kelompok  antibiotik yang  paling  sensitif  terhadap  bakteri  penyebab  ulkus
diabetik  yaitu  Ciprofloxacin  5  ug/disk  dan  mammpu menghambat  pertumbuhan  antibakteri  terbesar dibandingkan  yang  lain.  Hasil  Uji  antibakteri  terhadap bakteri penyebab ulkus diabetik adalah sebagai berikut :
Tabel 4. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri No Kelompok Uji Rata-rata Zona Hambat (mm) 1 K (-) DMSO 10% 0 2 K  (+)  Ciprofloxacin  5 µg/disk 35,10 ± 0,1 3 Ekstrak Metanol 20% 5,0 ± 0 4 Ekstrak Metanol 40% 10,13 ± 0,11 5 Ekstrak Metanol 60% 15,07 ± 0,11 6 Ekstrak Metanol 80% 20,07 ± 0,06 7 Ekstrak Metanol 100% 27,01 ± 0,1 8 Fraksi A 20% 0 ± 0 9 Fraksi A 40% 0 ± 0 10 Fraksi A 60% 0 ± 0 11 Fraksi A 80% 0 ± 0 12 Fraksi A 100% 2,1 ± 0,1 13 Fraksi B 20% 5,03 ± 0,06 14 Fraksi B 40% 7,07 ± 0,11 15 Fraksi B 60% 11,10 ± 0,10 16 Fraksi B 80% 13,03 ± 0,06 17 Fraksi B 100% 15,13 ± 0,15 18 Fraksi C 20% 0 ± 0 19 Fraksi C 40% 0 ± 0 20 Fraksi C 60% 0 ± 0 21 Fraksi C 80% 2,9 ± 0,1 22 Fraksi C 100% 3,93 ± 0,06
Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas  antibakteri  diatas diperoleh  bahwa  ekstrak  metanol  daun  manggis memiliki  potensi  menghambat  pertumbuhan  bakteri penyebab ulkus diabetik pada konsentrasi 20 % sebesar 5,0  mm  ±  0  ,  40  %  sebesar  10,13  mm±  0,11  ,  60  % sebesar 15,07 mm ± 0,11, 80 % sebesar 20,07  mm ± 0,06  dan  100  %  sebesar  27,01  mm  ±  0,1.  Pada konsentrasi  100  %  ekstrak  metanol  daun  manggis
mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  penyebab ulkus diabetik dengan luas zona hambat terbesar yaitu sebesar 27,01 mm ± 0,1.
Fraksi  ekstrak  metanol  daun  manggis  (Garcinia mangostana)  hasil  KCV  juga  memiliki  potensi  sebagai antibakteri  pada  konsentrasi  tertentu.  Berdasarkan hasil  fraksinasi  secara  kromatografi  cair  vakum diperoleh  11  fraksi  yang  dikelompokkan  menjadi  3 fraksi besar yaitu fraksi  A, B dan C. Ketiga kelompok besar  fraksi  diuji  aktivitas  antibakterinya  pada konsentrasi 20 %, 40 %, 60 %, 80 % dan 100 %. Pada ketiga  kelompok  besar  fraksi  diperoleh  fraksi  B  pada konsentrasi  100  %  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri penyebab ulkus diabetik terbesar yaitu sebesar 15,13 mm ± 0,15 dibandingan dengan fraksi A, fraksi B dan  fraksi  C  pada  semua  seri  konsentrasi.  Sehingga dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  metanol  memiliki aktivitas  antibakteri  yang  paling  baik  dibanding  ketiga fraksi lainnya.
Berdasarkan  hasil  pengujian  ktivitas  antibakteri  dari ekstrak metanol, fraksi A, fraksi B, dan fraksi C dapat diketahui  bahwa  aktivitas  antibakteri  yang  paling  baik dihasilkan  oleh  konsentrasi  100%.  Hal  ini  dikarenakan semakin  tinggi  konsentrasi  suatu  bahan  antimikroba maka  aktivitas  antimikroba  nya  semakin  besar  pula (Ningsih  dkk, 2017). Mekanisme kerja antibakteri dari senyawa  metabolit  sekunder  yaitu  alkaloid  bekerja dengan  mengganggu  integritas  komponen  penyusun peptidoglikan  pada  sel  bakteri(Rahman  dkk,  2016). Flavonoid  dapat  menghambat  sintesis  asam  nukleat, menghambat  fungsi  membran  sel  dan  menghambat metabolisme  energi  (Rahman  dkk,  2016).  Saponin meningkatkan  permeabilitas  membrane  sel  sehingga membran  menjadi  tidak  stabil  dan  mengakibatkan hemolisis  sel.  Tanin  bekerja  dengan  menonaktifkan adhesin bakteri, menghambat kerja enzim, menghambat  transport  protein  pada  selubung  sel. (Rahman  dkk,  2016).  Polifenol  mendenaturasi  dan koagulasi  protein  menyebabkan  presipitasi  serta denaturasi protein menyebabkan koagulasi protein dan
sel  membran  mengalami  lisis  (Wulandari  ,  2009). Steroid menyebabkan kebocoran pada liposom bakterii dengan  berinteraksi  dengan  membran  fosfolipid menyebabkan  integritas  membran  menurun  serta morfologi  membran  sel  berubah  menyebabkan  sel rapuh dan lisis (Thresia, 2016).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak metanol daun manggis pada konsentrasi 100 % memiliki  aktivitas  antibakteri  terbesar  dengan  zona hambat  27,01  mm  ±  0,1  dibandingan  dengan  ekstrak metanol  pada  konsentrasi  20  %,  40  %,  60  %,  80  %, Fraksi  A,  Fraksi  B  dan  Fraksi  C  pada  semua  seri konsentrasi.  Saran  untuk  penelitian  selanjutnya  adalah isolasi  dan  identifikasi  bakteri  dari  specimen  ulkus diabetik menggunakan Uji biokimia, katalase, dan PCR.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Pertama,  Peneliti  mengucapkan  terima  kasih  kepada Kemenristek (Kementrian Riset dan Teknologi) selaku pemberi  dana  hibah  skema  Penelitian  Dosen  pemula (PDP),  sehingga  peneliti  bisa  menyelesaikan.  sebagai Berisi Informasi ucapan terima kasih serta penghargaan kepada  pihak-pihak  yang  telah  berpartisipasi  dalam kegiatan  penelitian  yang  dilakukan.  Kedua,  Peneliti mengucapkan terimakasih kepada institusi yaitu STIKES Bhakti  Husada  Mulia  Madiun  atas  dukungannya sehingga peneliti mampu menyelesaikan penelitian ini.

## REFERENSI
1. Kerner,  W.,  Bruckel,  J.  (2014).  Definition, Classification  and  Diagnosis  of  Diabetes  Mellitus. Experimental and Clinical Endocrinology Diabetes, 122(7): 384-386
2. Supiyanti W, Wulansari ED, Kusmita L. 2010. Uji Aktvitas  Antioksidan  Dan  Penentuan  Kandungan Antosianin  Total  Kulit  Buah  Manggis  (Garcinia Manggostana  L).  Majalah  Obat  Tradisional  15  (2),
64-70
3. Riset  Kesehatan  Dasar  (Riskesdas)  (2018).  Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementerian RI tahun 2018.
4. Syarif,  H.  (2013).  Kualitas  hidup  pasien  ulkus diabetik  di  poliklinik  endokrin  RSUDZA,  Banda Aceh. Idea Nursing Journal.4(1).
5. Hastuti  RT.  (Tesis).  2008.  Faktor-  Faktor  Risiko Ulkus Diabetika pada Penderita Diabetes Mellitus (Studi  Kasus  di  RSUD  Dr.  Moewardi  Surakarta). Semarang : Universitas Diponegoro
6. Nur,  A.,  Marissa,  N.  2016.  Gambaran  bakteri ulkus diabetikum di Rumah Sakit Zainal Abidin dan Meuraxa tahun 2015. Buletin Penelitian
Kesehatan.44(3):187–96
7. Anggriawan  F.  Endriani  R.  Sembiring  LP.  2014. Identifikasi Bakteri Batang Gram Negatif Penghasil Extended  Spectrum Β Lactamase  Dari  Ulkus Diabetikum  Derajat  I  Dan  II  Waigner  Di  Bangsal Penyakit  Dalam  RSUD  Arifin  Achmad  Provinsi Riau. Riau : Fakultas Kedokteran Universitas Riau
8. Lipsky BA, Berendt AR, Cornia PB, Pile JC, Peters EJG,  Armstrong  DG,  et  al.  2012.  Infection Diseases  Society  of  America  Clinical  Practice Guideline  for  The  Diagnosis  and  Treatment  of Diabetic  Foot  Infections.  Clinical  Infectious Diseases. 2012; 54(12): 132-173
9. Juwono,  WP.,  dan,  Sudiarto,  Ns.  2017.  Inovasi Serat  Pelepah  Pisang  (Musa  Paradisiaca)  Dengan Jurnal  Surya  Medika  (JSM),  Vol  x  No  x,  Month Year,  Page  x  –  x  p-ISSN:  2460-7266;  e-ISSN: 2655-2051  8  Rumput  Laut  (Sargassum  Sp)  Dalam Perawatan  Luka  Diabetik  Pada  Tikus  (Rattus Novergicus). Prosiding Seminar Nasional Publikasi Hasil-Hasil  Penelitian  dan  Pengabdian  Masyarakat. Universitas Muhammadiyah Semarang
10. Mardiati,  NPJ.,  Yunitasari,  AN.,  Sari,  DA., Saraswasta,  IWG.,  Putra,  FN.,  dan  Kristianto,  H. 2011.  Ekstrak  Cacing  Tanah  Sebagai  Inovasi Penyembuhan  Ulkus  Diabetik  Berbasis  Induksi Densitas Akson. Program Studi Ilmu Keperawatan, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya
11. Doddy YP, Muh Mardiyono, Henni Kusuma. 2017. Studi  Kasus  Uji  Pra  Klinik  Perawatan  Ulkus  Kaki Diabetic  Dengan  Topikal  Hidrokoloid  Kunyit. Jurnal Kebidanan dan Keperawatan, Vol. 13, No. 2
12. Dyahnugra,  AA  dan  Widjanarko,  SB.  2015. Pemberian  Ekstrak  Bubuk  Simplisia  Kulit  Manggis (Garcinia  Mangostana  L.)  Menurunkan  Kadar Glukosa  Darah  Pada  Tikus  Putih  (Rattus
Norvegicus)  Strain  Wistar  Jantan  Kondisi Hiperglikemik.  Jurnal  Pangan  dan  Agroindustri. Vol.  3  No  1  p.113-123.  Jurusan  Teknologi  Hasil Pertanian, FTP Universitas Brawijaya Malang
13. Pasaribu,  F.,  Sitorus,  P  dan  Bahri,  S.  2012.  Uji Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah  Manggis  (Garcinia mangostana  L.)  Terhadap  Penurunan  Kadar Glukosa  Darah.  Journal  of  Pharmaceutics  and Pharmacology,  2012  Vol.1  (1):  1-8.  Universitas Sumatera Utara