EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr
Kandungan Senyawa Bioaktif dan Aktivitas Biologis Daun Mangrove Lumnitzera racemosa di Pantai Teluk Awur dan Pantai Blebak Jepara
Melati Sukma Dewi 1,2 , Ria Azizah Tri Nuraini 1 *, Bambang Yulianto 1 , Mada Triandala Sibero 1,2 1 Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Jacub Rais, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia
2 Laboratorium Natural Product, UPT Laboratorium Terpadu, Universitas Diponegoro Jl. Prof. H. Soedarto S.H, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail: riaazizahtn@gmail.com
ABSTRAK : Lumnitzera racemosa tumbuh luas di hutan bakau di daerah tropis, menjanjikan potensi sumber  daya  untuk  digunakan  manusia  sebagai  bahan  farmakalogi  dari  senyawa  bioaktif  yang terkandung  di  dalamnya.  Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  ekstrak L.  racemosa berpotensi sebagai antimikroba, antihipertensi, anti diare, dan antioksidan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui karakteristik senyawa bioaktif dan juga mengetahui aktivitas antibakteri dan antioksidan pada ekstrak daun mangrove L. racemosa asal Pantai Teluk Awur dan Pantai Blebak, Jepara, Jawa Tengah.  Metode  ekstraksi  menggunakan  maserasi  bertingkat  dengan  tiga  pelarut  berbeda berdasarkan kepolarannya. Uji fitokimia dan Analisa Metabolite Finger Printing dengan TLC ( Thin Layer Chromatography) dilakukan untuk mengetahui senyawa bioaktif yang terkandung dalam daun mangrove L.  racemosa, untuk  mengetahui  aktivitas  biologis  yaitu  aktivitas  antibakteri  digunakan metode agar well dengan menggunakan empat bakteri MDR ( Multi Drug Resistance), sedangkan uji aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  DPPH  (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil).  Hasil  uji  fitokimia menujukkan  senyawa  bioaktif  ekstrak  daun L.  racemosa yang  meliputi  alkaloid,  flavonoid,  fenol hidrokuinon, dan steroid. Analisa Metabolite Finger Printing dengan uji TLC menunjukkan senyawa bioaktif yang terkandung antara lain: terpenoid, fenol, dan alkaloid dan positif menunjukkan aktivitas antioskidan. Aktivitas antibakteri, menunjukkan hasil negatif yaitu tidak terbentuknya zona hambat pada ke empat bakteri. Aktivitas antioksidan dilihat dari nilai IC 50 daun L. racemosa Pantai Teluk Awur menujukkan nilai IC 50 paling baik adalah ekstrak metanol  161,606 ppm (lemah) sedangkan pada lokasi Pantai Blebak menunjukkan nilai IC 50 yang berpotensial pada ekstrak etil asetat 17,441 ppm  (sangat  kuat).  Daun  mangrove L.  racemosa Pantai  Teluk  Awur  dan  Pantai  Blebak  memiliki potensi untuk bidang farmakologi dilihat dari hasil aktivitas senyawa bioaktif yang terkandung dalam daun L. racemosa.
Kata kunci: Antioksidan; Fitokimia; Farmakologi
Evaluation of Bioactive Compounds and Biological Activity of Mangrove Leaf Lumnitzera racemosa from Teluk Awur Beach and Blebak Beach, Jepara
ABSTRACT: Lumnitzera  racemosa  grows  widely  in  mangrove  forests  in  the  tropics,  promising potential  resources  for  pharmaceutical  ingredients  from  the  bioactive  compounds  contained  in  it. Previous  studies  have  shown  the  extract  may  have  biological  activities  such  as  antimicrobial, antihypertensive,  antidiarrheal,  and  antioxidant.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the bioactive antibacterial compounds and also to determine the activity and antioxidants in the extract of the mangrove leaves of L. racemosa from Teluk Awur Beach and Blebak Beach, Jepara, Central Java. The extraction method uses graded maceration with three different solvents based on their polarity.  Phytochemical  tests  and  Metabolite  Finger  Printing  Analysis  with  Thin  Layer Chromatography (TLC) tests were carried out to determine the bioactive compounds contained in the mangrove leaves of L. racemosa, to determine the biological activity, namely the antibacterial activity used by the agar method using four MDR (Multi-Drug Resistance) bacteria, while the activity test  antioxidant  using  the  DPPH  method  (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl).  The  results  of  the phytochemical  test  showed  that  the  bioactive  compounds  of  L.  racemosa  leaf  extract  included: alkaloids, flavonoids, phenol hydroquinone, and steroids.  Metabolite Finger Printing Analysis with
Thin  Layer  Chromatography  (TLC)  test  showed  that  the  bioactive  compounds  contained  include terpenoids, phenols, and alkaloids and positively indicated antioxidant activity. Antibacterial activity showed negative results, namely no inhibition zone was formed on bacterial empathy. Antioxidant activity seen from the IC 50 value of L. racemosa leaves showed the best IC 50 value was methanol extract  161,606  ppm  (weak)  while  at  Blebak  Beach  location  showed  possible  IC 50 value  in  ethyl acetate extract 17,441 ppm (very strong). The mangrove leaves of L. racemosa Teluk Awur Beach and Blebak Beach have potential in the field of pharmacology seen from the results of the activity of bioactive compounds contained in the leaves of L. racemosa leaves.
Keywords: Antioxidant; Phytochemical; Pharmacology.

## PENDAHULUAN
Ekosistem mangrove merupakan salah satu diantara ketiga penyusun ekosistem yang ada di perairan, memiliki peranan yang penting bagi daerah pesisir sebagai daerah pelindung dari berbagai macam  gangguan  seperti  abrasi  pantai  dan  juga  menjadi  habitat  dari  berbagai  spesies  hewan. Masyarakat  sekitar  pesisir  juga  memanfaatkan  keberadaan  ekosistem  ini  sebagai  jasa  ekonomi yaitu bagian kayu mangrove yang digunakan untuk bahan bangunan, daun mangrove yang dapat menghasilkan pewarna alami, juga digunakan sebagai obat obatan yang diambil dari ekstrak daun mangrove (Eddy et al., 2017). Mangrove kaya akan kandungan bioaktif seperti steroid, flavonoid, tannin  dan  juga  saponin.  Mangrove Lumnizera  racemosa mengandung  bioaktif  tannin  dan  juga flavonoid  juga  memiliki  aktivitas  antioksidan  dan  aktivitas  antimikrobial  (Ravikumar  dan Gnanadesigan, 2011).
Lumnitzera racemosa termasuk ke dalam famili Combretaceae memiliki nama daerah bakau putih, bakau duduk, bakau api-api, dan knias. Tanaman ini banyak tumbuh di daerah dengan pasang tertinggi, pada substrat berlumpur atau berpasir padat. L. racemosa , tumbuh luas di hutan bakau di daerah tropis, memiliki  biomassa besar  yang menjanjikan  potensi  sumber  daya untuk digunakan manusia.    Menurut  Thao et  al. (2015), L.  racemose dari  Taiwan  mengandung  senyawa  biokatif berupa tannin. Ekstraknya menunjukkan beberapa bioaktivitas misalnya antimikroba, antihipertensi, anti  diare,  anti  plasmodial  (Darwish et  al., 2016).  Beberapa  ekstrak  daun L.  racemosa telah digunakan pada masyarakyat untuk sebagai obat asma, kencing manis, gigitan ular (Phuong et al., 2017).
Berdasarkan  hal  tersebut  dapat  dikatakan  bahwa  tanaman  mangrove  ini  tersebar  pada beberapa daerah dengan kondisi lingkungan yang berbeda dan memiliki potensi senyawa bioaktif. Namun, belum adanya penelitian komprehensif yang mengkaji tentang kandungan aktivitas biologis daun L. racemosa pada perairan Teluk Awur dan Perairan Pantai Blebak Jepara. Karena itu, L. racemosa memiliki    potensi  untuk  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  pada  bidang  farmakologi  dan kimia. Studi kimiawi sebelumnya pada L. racemosa menunjukkan bahwa sifat utamanya komponen fitokimia adalah flavonoid, triterpenoid, steroid, galloyl glycosides, asam lemak (Thao et al., 2015).

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Natural  Product ,  Laboratorium  Terpadu Universitas  Diponegoro  pada  bulan  Maret  hingga  bulan  November  2021.  Daun  mangrove Lumnitzera  racemosa diperoleh  dari  Pantai  Teluk  Awur  dan  Pantai  Blebak,  Jepara.  Kemudian dibersihkan dari serangga atau kotoran yang ada di sampel. Selanjutnya sampel dikeringkan dengan oven selama 3x24 jam dengan suhu 40 0 C, setelah sampel kering lalu dipotong kecil-kecil hingga halus menggunakan gunting (Puspitasari et al., 2018). Ekstraksi  dilakukan  dengan  memasukkan  daun  ke  dalam  labu erlenmeyer dan  diekstraksi dengan  cara  maserasi  bertingkat  berdasarkan  kepolarannya.  Pelarut  yang  digunakan  adalah  n- Heksana, etil asetat dan metanol sebanyak 1000 ml untuk sampel daun Lumnitzera racemosa Pantai Teluk Awur dan 500 ml untuk sampel daun Lumnitzera racemosa Pantai Blebak. Proses maserasi
Journal of Marine Research Vol 12, No. 3 Agustus 2023, pp. 391-402
dilakukan selama 1 x 24 jam, selama proses maserasi, labu erlenmeyer diletakkan di atas shaker. Kecepatan  pengadukan  yang  digunakan  yaitu  sebesar  100  rpm.  Hasil  dari  ekstraksi  maserasi bertingkat  yang  sudah  dilakukan  selama  3x24  jam  selanjutnya  dilakukan  pemekatan  sampel menggunakan rotary vacuum evaporator setiap masing-masing ekstrak dengan suhu 30 0 C selama 10  menit  untuk  setiap  200ml  pelarut.  Pemekatan sampel  dapat  dikatakan selesai  apabila pelarut sudah mulai menguap dan akan terbentuk ekstrak kasar dari masing-masing pelarut. Hasil ekstrak kasar  yang  didapatkan  lalu  disimpan  di  pada  suhu  -20 0 C  dengan  menutup  wadah  dengan alumunium  foil  yang  selanjutnya  akan  digunakan  untuk  uji  analisis  fitokimia,  analisis metabolite finger printing dengan uji TLC ( Thin Layer Chromatograph ), uji antibakteri dan uji antioksidan (Sibero et al., 2019).
Uji  fitokimia  dilakukan  dengan  metode  Harborne  (1987)  dengan  beberapa  modifikasi.  Uji alkaloid dilakukan dengan mencampurkan ekstrak daun (2mg) dan ditambahkan 1 mL asam sulfat (H 2 SO 4 ) 2N lalu disaring menggunakan kerta saring whatmann 0,45 um, lalu ditambahkan beberapa tetes  pereaksi Dragendroff ,  adanya  alkaloid  ditandai  dengan  terbentuknya  endapan  coklat kemerahan (Sibero et al., 2019). Uji saponin dilakukan dengan menambahkan ekstrak daun (2 mg) dengan  aquadest  (5  ml),  dipanaskan  hingga  mendidih.  Setelah  mendidih  tabung  reaksi  tersebut dikocok vertikal hingga terbentuk busa. Diamati selama 15 menit, setelah itu ditambahkan beberapa tetes HCL 2N adanya busa yang stabil menunjukkan hasil yang posititif saponin (Sibero et al., 2019). Uji  flavonoid  dilakukan  dengan  mencampurkan  ekstrak  daun  (2  mg)  dan  ditambahkan  beberapa tetes  HCL  2N  lalu  dipanaskan.  Diamkan  selama  15  menit.  Adanya  senyawa  flavonoid  ditandai dengan warna merah, oranye dan hijau tergantung struktur flavonoid yang terkandung dalam sampel tersebut (Desrita, 2018). Uji steroid dan triterpenoid dilakukan dengan mencampurkan ekstrak daun (2  mg)  dengan  beberapa  tetes  anhidrida  asetat,  kemudian  dipanaskan  hingga  mendidih  dan didingingkan pada suhu ruangan. Selanjutnya ditambahkan satu tetes asam sulfat (H 2 SO 4 ) pekat. Adanya senyawa golongan triterpenoid akan ditandai dengan timbulnya warna merah sedangkan adanya senyawa golongan steroid ditandai dengan munculnya warna hijau (Sibero et al., 2019). Uji fenolik dilakukan dengan mencampurkan ekstrak daun (2 mg) ditambahkan beberapa tetes larutan FeCl 3 ( ferric  chloride )  1%.  Adanya  kandungan  senyawa fenolik  ditandai dengan timbulnya  warna hijau, merah, biru, ungu atau hitam (Erwin et al., 2020). Analisis metabolite  finger  printing dilakukan  dengan  uji Thin  Layer  Chromatography (TLC) menggunakan  metode  beberapa  eluen  dengan  tingkat  kepolaran  yang berbeda,  eluen  yang digunakan adalah n-Heksana dan etil asetat dengan perbandingan 7 : 3. Ekstrak daun yang telah dipekatkan sebanyak 2 mg dilarutkan pada 100 uL sesuai pelarut yang digunakan untuk melakukan ekstraksi yaitu n-Heksana, etil asetat dan metanol, ditotolkan pada pelat TLC silica gel PF 254 20x20 cm  (Merck)  untuk  mendeteksi  bercak  lalu  diamati  di  bawah  sinar  UV  366  nm  dan  dilakukan penyemrotan regaen FeCl 3 ( ferric chloride) , DPPH, vanillin dan juga dragendorff untuk mendeteksi adanya  kandungan  senyawa  yang  terdapat  pada  ekstrak.  Nilai  Rf  dihitung  menggunakan  rumus menurut Rafael (2021):

## Nilai Rf = Jarak yang ditempuh komponen Jarak yang ditempuh pelarut
Uji  aktivitas  antibakteri  menggunakan  metode  sumuran  atau  yang  lebih  dikenal  dengan metode agar  well menurut  (CLSI,  2020)  atau  yang  lebih  dikenal  dengan  sumuran  yaitu  dengan memberi  lubang  pada  media  tumbuh  bakteri,  menggunakan  bakteri  uji  yang  termasuk  bakteri patogen  manusia  gram  positif  yaitu Bacillus  cereus,  Bacillus  subtilis,  Escherichia  coli dan Pseudomonas aeruginosa (Nurhayati et al ., 2020). Bakteri tersebut diinokulasi pada media Nutrient Agar selama  24  jam  sebelum  dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri.  Setelah  bakteri  berumur  24  jam kemudian  koloni  bakteri  diambil  menggunakan  jarum  ose  lalu  disuspensi  menggunakan  media Mueller  Hinton Broth hingga  mencapai  kekeruhan  setera  dengan  0, 5  McFarland .  Lalu  bakteri ditumbuhkan  pada  seluruh  permukaan  media Mueller  Hilton  Agar dengan  menggunakan cotton swab .  Kontrol  positif  yang  digunakan  dalam  uji  antibakteri  adalah  antibiotik  amoksilin  dengan konsentrasi  30 μg/ml  dengan kontrol  negatif  DMSO  (Supari et  al., 2016).  Untuk  memberi  lubang

## Journal of Marine Research
Vol 12, No. 3 Agustus 2023, pp. 391-402
sumur dapat menggunakan alat pembuat lubang sumur dengan ukuran 5 mm. Ekstrak daun yang telah  dipekatkan  diencerkan  menggunakan  DMSO  hingga  konsentrasinya  menjadi  2000  ug/mL, 1000  Hg/mL,  500  ug/mL  dan  250  g/mL  (Sibero et  al., 2019).  Ekstrak  yang  sudah  diencerkan dimasukkan  ke  dalam  lubang  sumur  menggunakan  mikropipet  sebanyak  5  uL/sumur.  Dilakukan inkubasi selama 3x24 jam pada suhu 32 o C dan dilakukan pengamatan selama 24 jam, 48 jam dan 72 jam untuk melihat adakah zona hambat aktivitas antibakteri, jika terdapat zona hambar diukur menggunakan jangka sorong.
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  DPPH  ( 2,2-difenil-1- pikrilhidrazil) menurut (Blois,1958) dengan sedikit modifikasi. Sebanyak 10 mg dari masing-masing sampel ditambahkan metanol p.a sebanyak 1 ml, sehingga diperoleh larutan stock sebesar 10.000 ppm, setelah itu dilakukan serial dilution dengan konsentrasi 1000, 500, 250, 250, 125, 62,5, 31,25, 15,625  dan  7,8125  ppm.  DPPH  125  µm  dibuat  dalam  metanol  p.a.  Masing-masing  sampel  dari berbagai macam konsentrasi ditambahkan DPPH dengan perbandingan 1:1 dan diikubasi selama 30 menit dengan suhu ruang dan dalam keadaan gelap. Setelah diinkubasi sampel dimasukkan ke dalam  kuvet  (v  =  1,5  ml)  dan  dimasukkan  ke  dalam  Spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang  517  nm.  Masing-masing  sampel  dibuat  sebanyak triplikat. Nilai  absorbansi  dihitung berdasarkan nilai IC 50 ( The half maximal inhibitory concentration ) menggunakan persamaan:
%RSA  = Abs kontrol negatif −   Abs sampel Abs kontrol negatif ×  100%
Metanol  digunakan  sebagai  kontrol  positif.  Kontrol  negatif  dibuat  dengan  menambahkan metanol p.a dengan DPPH. Vitamin C digunakan sebagai kontrol positif dengan konsentrasi 100, 50, 25, 10, dan 5 ppm. Dari data nilai absorbansi, data diolah menggunakan Microsoft Excel (Nisa et al., 2020) dengan persamaan regresi dengan hasil persamaan sebagai berikut:
Y = aX + b
Dimana Y merupakan % RSA, a merupakan gradien, X merupakan konsentrasi (µ/mL) dan b adalah konstanta. Kemudian nilai IC 50 dihitung dengan mengubah persamaan menjadi 50 = aX+b, dimana nilai X adalah IC 50 dengan satuan ppm. Nilai IC 50 adalah konsentrasi sampel yang dapat menangkap 50% radikal bebas DPPH (Ridlo et al., 2017).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Profil Metabolit Ekstrak Daun Lumnitzera racemosa
Hasil uji fitokimia menunjukkan adanya senyawa alkaloid fenolik dan triterpenoid pada ekstrak daun Lumnitzera  racemosa dari  kedua  lokasi  sedangkan  keberadaan  flavonoid  hanya  terdeteksi pada ekstrak daun L. racemosa asal Pantai Blebak yang dapat dilihat pada Tabel 1. Hasil ini sesuai dengan peneliat yang sudah dilakukan (Thao et al ., 2015)
Senyawa  fitokimia  pada  ekstrak  daun Lumnitzera  racemosa pada  dua  lokasi  menunjukkan adanya potensi  kandungan  senyawa:  alkaloid menunjukkan  aktivitas  antimikroba,  antikanker  dan analgesik.  Alkaloid  digunakan  untuk  berbagai  pengobatan,  seperti  alzheimer,  parkinson,  stroke, skizofrenia  dan  epilepsi  (Hussein  dan  El-Anssary,  2019).  Flavanoid  merupakan  senyawa  fenolik yang  memiliki  aktivitas  antioksidan,  antiinflamasi,  antialergi  dan  antikanker.  Kandungan  saponin dapat  digunakan  sebagai antifeedant yang berfungsi  membunuh serangga (Ogbiko et  al .,  2020). Fenol  digunakan  sebagai  antiseptik,  fenol  banyak  digunakan  juga  sebagai  antioksidan  dan  anti inflamasi.    Adanya  steroid  menunjukkan  adanya  aktivitas  anti  inflamasi,  antimikroba  dapat  juga digunakan sebagai obat pereda nyeri (Truong et al ., 2019), sedangkan senyawa triterpenoid juga dapat  berpotensi  sebagai  antimikroba.  Potensi  penggunaan  terpenoid  termasuk  aditif  makanan, obat-obatan  dan  biofuel  (Masyita et  al .,  2022).  Alkaloid,  fenol  dan  terpenoid  merupakan  tiga metabolit  sekunder  utama  yang  dihasilkan  oleh  tanaman.  Semua  kandungan  senyawa  yang
dihasilkan  dari  uji  fitokimia  kedua  lokasi  menunjukkan  potensi  yang  dapat  digunakan  sebagai sumber senyawa baru dalam bidang farmakologi (Hussein dan El-Anssary, 2019).
Analisa Metabolite Finger Printing dengan Uji TLC ( Thin Layer Chromatography ) Pereaksi FeCl 3 ( ferric chloride) digunakan untuk analisa lebih lanjut kandungan senyawa fenol, dimana  ditandai  dengan  adanya  bercak  noda  berwarna  hitam  kebiruan  setelah  disemprotkan dengan  FeCl 3 ( ferric  chloride) . Ekstrak  daun L.  racemosa asal  Pantai  Teluk  Awur pada  plat  silika yang  disemprotkan  dengan  pereaksi  FeCl 3 ( ferric chloride ) terlihat  penyebaran  bercak  berwarna kehitam pada pelarut n-Heksana terdapat 3 spot bercak (0,22; 0,62; 0,7), 1 spot bercak pada pelarut etil asetat (0,75) dan 2 spot bercak pada pelarut metanol (0,37 dan 0,78). Hasil uji TLC ekstrak daun L. racemosa Pantai Blebak setelah dilakukan penyemprotan menggunakan FeCl 3 pada pelarut n- Heksana terdapat 3 spot bercak (0,22; 0,7 dan 0,82), 2 spot bercak pada pelarut etil asetat (0,13 dan  0,83)  dan  2  spot  bercak  pada  pelarut  metanol  (0,28  dan  0,83).  Senyawa  fenolik  banyak ditemukan pada tanaman dan dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan, sebagian besar senyawa fenolik  sensitif  terhadap  lingkungan  habitat  tempat  hidup  dari  tanaman  terutama  dengan  kondisi suhu, cahaya dan kelembapan yang akan berpengaruh terhadap kandungan fenolik dari tumbuhan tersebut (Darmadi et al., 2021).
Tabel 1 . Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Daun L. racemosa Pantai Teluk Awur dan Pantai Blebak
Lokasi Uji Fitokimia Indikator Pelarut n-Heksana  Etil asetat Metanol Pantai Teluk Awur Alkaloid Endapan berwarna coklat + + + Flavonoid Merah, oren, hijau - - - Fenolik Hijau, merah, biru, ungu atau hitam + + + Saponin Busa yang stabil - - - Steroid /Triterpenoid Steroid: warna hijau lapisan atas Triterpenoid: warna merah lapisan bawah + + - Pantai Blebak Alkaloid Endapan berwarna coklat + + + Flavonoid Merah, oren, hijau + + - Fenolik Hijau, merah, biru, ungu atau hitam + + + Saponin Busa yang stabil - - - Steroid /Triterpenoid Steroid: warna hijau lapisan atas Triterpenoid: warna merah lapisan bawah + + -
Keterangan: (+) hasil positif, (-) hasil negatif
(A) (B)
Gambar 1. Visualisasi TLC dengan FeCl 3 (ferric chloride) (A) Pantai Teluk Awur (B) Pantai Blebak
Journal of Marine Research Vol 12, No. 3 Agustus 2023, pp. 391-402
Pereaksi  vanilin  asam  sulfat  digunakan  untuk  mendeteksi  adanya  senyawa  terpenoid.  Plat silika disemprot  dengan pereaksi  vanillin asam  sulfat  dan  dipanaskan terdapat  perubahan  warna pada spot bercak menjadi warna ungu yang menandakan adanya aktivitas terpenoid (Kristanti dan Tunjung,  2015).  Pada  ekstrak  daun L.  racemosa asal  Pantai  Teluk  Awur  setelah  dilakukan penyemprotan menggunakan vanilin terdapat perubahan warna pada spot bercak plat silika menjadi ungu yang menandakan terdapat kandungan senyawa metabolit terpenoid, pada pelarut n-Heksana terdapat 4 spot bercak (0,30; 0,37; 0,57; 0,69; 0,59), 2 spot bercak pada pelarut etil asetat (0,59 dan 0,74) dan 1 spot bercak pada pelarut metanol (0,63). Ekstrak daun L. racemosa asal Pantai Blebak setelah  disemprot  vanillin  asam  sulfat  juga  terdapat  perubahan  warna  pada  pelarut  n-Heksana terdapat  2  spot  bercak  (0,43  dan  0,89),  1  spot  bercak  pada  pelarut  etil  asetat  (0,89)  dan  1  spot bercak pada pelarut metanol (0,84). Terpenoid telah terbukti sebagai salah satu metabolit sekunder yang dihasilkan oleh tanaman yang telah dilaporkan memiliki aktivitas antimikroba terhadap bakteri yang rentan antibiotik dan resisten terhadap antibiotik (Masyita et al ., 2022). Pereaksi dragendorff disemprotkan ke plat silika untuk melihat adanya kandungan senyawa alkaloid, plat silika akan menunjukkan spot berwana kuning hingga kecoklatan (Ahmad et al ., 2017). Pada lokasi Pantai Teluk Awur terdapat perubahan warna bercak menjadi kecoklatan pada pelarut n-Heksana terdapat 1 spot bercak (0,8), 1 spot bercak pada pelarut etil asetat (0,8) dan 1 spot bercak pada pelarut metanol (0,81) dengan nilai R f 0,8; 0,8; 0,814. Pada ekstrak daun Lumnitzera racemosa Pantai  Blebak  plat  silika  yang  sudah  disemprotkan  dengan  pereaksi dragendorff juga terdapat perubahan warna kuning kecoklatan yang mengindikasikan adanya senyawa alkaloid dengan nilai R f pada pelarut n-Heksana terdapat 1 spot bercak (0,5), 1 spot bercak pada pelarut etil asetat (0,68) dan 1 spot bercak pada pelarut metanol (0,78). Alkaloid merupakan salah satu metabolit sekunder tanaman  yang  mengandung  karbon,  hidrogen,  nitrogen,  dan  biasanya  oksigen  dan  terutama ditemukan  pada  tumbuhan,  terutama  pada  tumbuhan  berbunga,  sekitar  20%  spesies  tumbuhan terdiri dari alkaloid (Hussein dan El-Anssary, 2019).
(A) (B)
Gambar 2. Visualisasi TLC dengan Vanillin H 2 SO 4 (A) Pantai Teluk Awur (B) Pantai Blebak
(A)
(B)
Gambar 3 . Visualisasi TLC dengan Dragendorff (A) Pantai Teluk Awur (B) Pantai Blebak
(A) (B)
Gambar 4 . Visualisasi TLC dengan DPPH (A) Pantai Teluk Awur (B) Pantai Blebak
Pereaksi  DPPH  (2,2-diphenyl-  1-picrylhydrazyl)  digunakan  untuk  mendeteksi  senyawa antioksidan  yang  terkandung  dalam  tumbuhan.  Apabila  terdeteksi  aktivitas  antioksidan  akan terbentuk bercak kuning dengan latar belakang ungu pada plat silika (Mazlan dan Nadirah, 2016). Pada  ekstrak  daun L.  racemosa asal  Pantai  Teluk  Awur  dengan  plat  silika  yang  disemprotkan dengan DPPH terdapat perubahan warna bercak pada pelarut n-Heksana terdapat 1 spot bercak (0,32), 1 spot bercak pada pelarut metanol (0,37) dan 3 spot bercak pada pelarut etil asetat (0,3; 0,33  dan  0,77).  Ekstrak  daun L.  racemosa asal  Pantai  Blebak  juga  terdapat  perubahan  warna menjadi kekuningan pada pelarut n-Heksana terdapat 2 spot bercak (0,18 dan 0,6), 2 spot bercak pada  pelarut  etil  asetat  (0,2  dan  0,93)  dan  2  spot  bercak  pada  pelarut  metanol  (0,2  dan  0,48 Atioksidan yang terdapat pada tumbuhan merupakan pertahanan pertama terhadap kerusakan yang disebabkan oleh radikal bebas dan sangat penting untuk sel tanaman yang optimal (Rajput et al ., 2021).

## Hasil Uji Aktivitas Antibakteri
Hasil uji aktivitas antibakteri yang dapat dilihat pada Gambar 5 menunjukkan bahwa semua ekstrak  daun L.  racemosa pada  kedua  lokasi  tidak  menujukkan  adanya  daya  penghambatan terhadap bakteri uji. Pada kontrol negatif menggunakan amoksilin dengan konsentrasi 3 0 μg (CLSI, 2020),  semua  sampel  di  kedua  lokasi  terbentuk  zona  bening,  hal  ini  menandakan  fungsi  dari amoksilin  sebagai  antibiotik bekerja  karena  terbentuknya  zona  bening  pada  semua  ekstrak  daun L.racemosa di dua lokasi. Pada kontrol positif digunakan DMSO (dimetil sulfoksida) (Sibero et al., 2019) semua sampel di kedua lokasi tidak ditemukan adanya zona hambat, hal ini seleras dengan sifat  DMSO  yaitu  memiliki  toksisitas  yang  sangat  kuat  sehingga  tidak  memiliki  potensi  sebagai antibakteri. Pada uji fitokimia dan uji Thin Layer Chromatography menandakan bahwa ekstrak daun Lumnitzera  racemosa memiliki  potensi  sebagai  antibakteri  karena  adanya  kandungan  senyawa metabolit  sekunder  yaitu:  alkaloid,  flavonoid  dan  steroid  namun  pada  hasil  uji  antibakteri  tidak dihasilkan  zona  hambat  yang  menandakan  tidak  ditemukannya  aktivitas  antibakteri  pada  setiap ekstrak daun mangrove Lumnitzera racemosa, hal ini dapat disebabkan oleh beberapa faktor antara lain penggunaan bakteri MDR ( Multi Drug Resistence ), bakteri MDR memiliki resistensi yang lebih kuat  terhadap  terhadap  agen  antimikroba,  sehingga  senyawa  metabolit  pada  ekstrak  daun mangrove Lumnitzera racemosa yang berpotensi menjadi agen antimikroba tidak bisa membentuk zona hambat atau menunjukkan aktivitas antibakteri hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh  Sibero et  al. (2020),  bahwa  patogen  MDR  diketahui  lebih  resisten  terhadap  berbagai  agen antimikroba. Faktor lain yang dapat mempengaruhi zona hambat adalah konsentrasi dari senyawa yang digunakan tidak mencukupi untuk membentuk aktivitas antibakteri.
Bakteri penguji yang digunakan adalah gram positif yaitu: Bacillus cereus dan Bacillus aureus dan  bakteri  gram  negatif  yaitu: Escherchia  coli dan Pseudomanas  aeruginosa dimana  bakteri tersebut termasuk ke dalam bakteri MDR ( Multri Drug Resistence), suatu bakteri dapat dikatakan ke dalam kategori MDR apabila bakteri tersebut sudah resisten terhadap satu dari 3 macam golongan antibiotik yang ada (Estiningsih et al., 2016).  Keempat bakteri yang digunakan juga termasuk ke
Journal of Marine Research Vol 12, No. 3 Agustus 2023, pp. 391-402
dalam foodborne patogen atau yang lebih dikenal sebagai patogen bawaan makanan (dapat berupa bakteri,  parasit  dan  virus)  yang  menyebabkan  penyakit  bawaan  dari  makanan  tersebut  (Bintsis, 2017). Tujuan penggunaan Foodborne pathogen dalam penelitian ini adalah karena keempat bakteri tersebut  berpengaruh  terhadap  kesehatan  manusia. Bacillus  cereus dan Bacillus  subtilis banyak dilaporkan  berbahaya  karena  dapat  menyebabkan  diare  (Logan,  2012),  bakteri Pseudomonas aeruginosa menyebabkan infeksi nosokomial pada pasien dengan imun rendah di rumah sakit dan juga diare (Hoff et al., 2020), dan bakteri Escherchia coli yang dapat menyebabkan diare, sementara jenis E. coli yang lain dapat hingga menyebabkan sindrom hemolitik uremik (Werber dan Scheutz 2019).
Penelitian  yang  dillakukan  oleh  Abeysinghe  (2010),  melaporkan  bahwa  ekstrak  daun mangrove Lumnitzera racemosa dapat menekan pertumbuhan strain bakteri lebih banyak daripada dengan ekstrak yang dikeringkan hal ini dapat terjadi karena sampel daun segar mungkin memiliki lebih  banyak  senyawa  antimikroba  daripada  jaringan  kering  dan  mungkin  selama  kekeringan senyawa antibakteri dapat terdegradasi karena suhu.

## Hasil Uji Aktivitas Antioksidan
Hasil aktivitas antioksidan dapat dilihat pada tabel 2, dimana setiap ekstrak daun Lumnitzera racemosa dari ketiga pelarut pada Pantai Teluk Awur dan Pantai Blebak menunjukkan hasil aktivitas antioksidan dari tingkat kuat sampai sangat lemah dilihat dari nilai IC 50 . Nilai IC 50 memiliki tingkatan dari kuat hingga sangat lemah, hal ini sesuai dengan klasifikasi Blois (1958) dalam Sarjono et al., (2019), dimana senyawa yang sangat kuat memiliki nilai IC 50 <50 ppm, kategori kuat memiliki nilai IC 50 50-100  ppm,  kategori  sedang  jika  memiliki  nilai  IC 50 100-150  ppm,  dan  kategori  lemah  jika memiliki IC 50 151-200 ppm sedangkan berdasarkan Molyneux (2004) dalam Sarjono et al., (2019), nilai IC 50 200-1000 ppm memiliki nilai antioksidan yang sangat lemah namun masih memiliki aktivitas antioksidan.
Ekstrak daun L. racemosa asal Pantai Teluk Awur menunjukkan nilai IC 50 pada ekstrak daun mangrove Lumnitzera  racemosa untuk  ekstrak  n-Heksana  sebesar  327,878  ppm  dimana  nilai tersebut  dikatakan  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  sangat  lemah,  ekstrak  etil  asetat menunjukkan  nilai  IC 50 sebesar  187,627  ppm  dimana  nilai  tersebut  dikatakan  memiliki  aktivitas antioksidan yang sangat lemah dan yang terakhir adalah ekstrak metanol yang menunjukkan nilai IC 50 sebesar 161,606 ppm dimana nilai tersebut menujukkan aktivitas antioksidan yang sedang, nilai tersebut lebih baik dalam menangkan radikal bebas DPPH diantara kedua ekstrak lainnya yaitu n- Heksana dan etil asetat. Aktivitas antioksidan paling tinggi ditemukan pada ekstrak metanol dimana hal ini dapat terjadi karena senyawa metanol bersifat polar. Pelarut polar sangat baik untuk menarik senyawa  fenolik  dan  hasilnya  adalah  aktivitas  antioksidan  yang  cukup  baik  diantara  pelarut  n- Heksana dan etil asetat.
Ekstrak  daun L.  racemosa asal  Pantai  Blebak  menunjukkan  nilai  IC 50 yang  cukup  baik dibandingkan dengan Pantai Teluk Awur. Ekstrak n-Heksana menujukkan nilai IC 50 sebesar 489,808 dimana nilai tersebut termasuk ke dalam kategori sangat lemah, ekstrak etil asetat menujukkan nilai IC 50 sebesar 17,441 ppm dimana dapat dikatakan bahwa aktivitas antioksidan dari ekstrak etil asetat sangat kuat untuk menangkal radikal bebas dari DPPH, dan untuk ekstrak metanol menujukkan nilai
Bacillus cereus
Bacillus subtilis
Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa
Gambar 5 . Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak daun Lumnitzera racemosa
Tabel 2. Nilai IC 50 daun Lumnitzera racemosa di Pantai Teluk Awur dan Pantai Blebak
Ekstrak Nilai IC 50 Pantai Teluk Awur (ppm) Nilai IC 50 Pantai Blebak (ppm) n-Heksana 327,878 489,808 Etil asetat 187,627 17,441 Metanol 161,606 116,630
IC 50 sebesar  116,630  dapat  dikatakan  bahwa  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  metanol  sedang. Adanya  aktivitas  antioksidan  dalam  suatu  tanaman  diketahui  dengan  adanya  senyawa  metabolit yaitu fenolik dan flavonoid, hal ini sesuai dengan pernyataan Dirar et al., (2019), senyawa fenolik dan flavonoid terkenal dengan aktivitasnya sebagai penangkal radikal bebas (antioksidan).
Aktivitas  antioksidan  dari  kedua  lokasi  menujukkan  nilai  IC 50 yang  berbeda-beda,  hal  ini disebabkan  oleh  perbedaan  lokasi  pengambilan  sampel,  dimana  stress  lingkungan  habitat  dari mangrove Lumnitzera racemosa pasti juga berbeda. Tekanan lingkungan seperti intensitas cahaya tinggi, suhu ekstrem, kekeringan, salinitas tinggi, oksigen rendah menginduksi stres oksidatif pada tumbuhan  mangrove.  Kerusakan  sel  dan  penghambatan  fotosintesis  disebabkan  oleh  spesies oksigen  reaktif  (ROS)  seperti  H 2 O 2 ,  OH  dan  O 2 yang  dihasilkan  selama  stres  oksidatif.  Enzim antioksidan  seperti  superoksida  dismutase  katalase  (CAT), Glutathione  S-transferase (GST ), superoksida  dismutase (SOD)  dan peroksidase (POD)  adalah  beberapa  sistem  pertahanan antioksidan  yang  digunakan  oleh  tanaman,  termasuk  mangrove,  untuk  mengais  kelebihan  ROS yang dihasilkan dalam kondisi stress (Kodikara et al., 2020). Enzim-enzim ini akan dihasilkan sesuai dengan  kondisi  dari  lingkungan  masing-masing.  Pantai  Blebak  menghasilkan  nilai  IC 50 yang cenderung  lebih  berpotensial  dibandingkan  dengan  ekstrak  daun Lumnitzera  racemosa yang berasal dari Pantai Teluk Awur.
Stress  lingkungan  memiliki  peran  penting  atas  penurunan  produksi  dan hasil  dari metabolit sekunder.  Selama  pertumbuhan  dan  perkembangan,  tanaman  berinteraksi  dengan  lingkungan sekitarnya,  di  mana  mangrove  berinteraksi  langsung  dengan  komponen  lingkungan  abiotik  yang berbeda  seperti  air,  cahaya,  suhu,  tanah,  dan  bahan  kimia.  Faktor  lingkungan  abiotik,  seperti kekeringan atau banjir, cahaya dan suhu yang ekstrem, dan keberadaan substrat dimana mangrove. Pelarut  yang  digunakan  selama  proses  ekstraksi  diduga  memiliki  pengaruh  terhadap  sifat  dan jumlah  metabolit  sekunder  yang  diekstraksi  dari  tanaman  (Dirar et  al., 2019).  Selain  itu,  teknik ekstraksi juga berpengaruh efisiensi ekstraksi senyawa fitokimia. Pada penelitian digunakan teknik maserasi bertingkat yang menggunakan tiga pelarut yang berbedai yaitu perlarut polar hingga non polar. Penggunaan pelarut yang berbeda ini dikarenakan senyawa bioaktif yang terkandung dalam bahan  tanaman  dan  sifat  kelarutannya  yang  berbeda  dalam  pelarut  yang  berbeda,  pelarut  yang optimal  untuk  ekstraksi  tergantung  pada  bahan  tanaman  tertentu.  Selain  itu,  karakteristik  yang berbeda mulai dari aspek biotik hingga abiotik yang mempengaruhi kedua lokasi menjadi salah satu faktor yang menyebabkan perbedaan nilai pada sampel L. racemosa . Tingginya tekanan lingkungan, seperti kegiatan budidaya pertambakan dan pembukaan lahan yang pernah terjadi di Pantai Teluk Awur  juga  diduga  menjadi  penyebab  potensial  aktivitas  antioksidan  pada  mangrove  dari  Pantai Teluk Awur lebih rendah dibandingkan dari Pantai Blebak.

## KESIMPULAN
Senyawa bioaktif yang terkandung dalam daun mangrove Lumnitzera racemosa Pantai Teluk Awur antara lain: alkaloid, fenol hidrokuinon, saponin, steroid dan terpenoid sedangkan dalam daun mangrove Lumnitzera racemosa Pantai Blebak mengandung senyawa bioaktif antara lain: alkaloid, flavonoid, fenol, steroid dan triterpenoid. Aktivitas antibakteri daun mangrove Lumnitzera racemosa tidak  ditemukan  pada  kedua  lokasi,  sedangkan  aktivitas  antioksidan  daun  mangrove Lumnitzera racemosa Pantai Teluk Awur menunjukkan nilai IC 50 paling baik pada ekstrak metanol 161,606 ppm (lemah) dan aktivitas antioksidan daun mangrove Lumnitzera racemosa Pantai Blebak menunjukkan aktivitas antioksidan paling baik pada ekstrak etil asetat dengan nilai IC 50 17,441 ppm (sangat kuat)

## DAFTAR PUSTAKA
Abeysinghe,  P.D.,  2010.  Antibacterial  Activity  of  Some  Medicinal  Mangroves  Against  Antibiotic- Resistant Pathogenic Bacteria . Indian Journal of Pharmaceutical Sciences , 72(2):167-172. DOI: 10.41032F0250-474X.65019.
Ahmad, F., Soekamto, N.H., & Firdaus, F., 2017. Uji Fitokimia dan Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Kulit Batang Melochia umbellata (Houtt) Stapf. var. Visenia dengan Metode Brine Shirmp Lethality Test  (BSLT). Indonesian  Journal  of  Chemical  Research ,  4(2):378-381.  DOI:  10.30598//ijcr. 2017.4-fau.
Bintsis, T., 2017. Foodborne Pathogens. AIMS Microbiology , 3(3):529-563. DOI: 10.3934/microbiol. 2017.3.529.
Blois, M.S., 1958. Antioxidant determinations by the use of a stable free radical. Nature , 181:1199- 1200. DOI: 10.1038/1811199a0
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)., 2010. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing, 20:1-5.
Darmadi, J., Batubara, R.R., Himawan, S., Azizah, N.N., Audah, H.K., Arsianti, A., & Audah, K.A., 2021. Evaluation of Indonesian Mangrove Xylocarpus granatum Leaves Ethyl Acetate Extract as a Potential Anticancer Drug. Scientific reports , 11:p.6080. DOI: 10.1038/s41598-021-85383-3. Darwish, A.G.G., Samy, M.N., Sugimoto, S., Otsuka, H., Abdel-Salam, H., Issa, M.I., Shaker, I.S., & Matsunami, K., 2016. Bioactive compounds from the leaves of Lumnitzera racemosa against acetaminophen-induced liver damage in vitro. Journal of Arid Land Studies , 26(3):183-186. Desrita,  D.P.,  2018.  Pengaruh  Metode  Perebusan  Terhadap  Uji  Fitokimia  Daun  Mangrove Excoecaria Agallocha . Jurnal Penelitian Pendidikan Sosial Humaniora , 3(2):424-428. Dirar,  A.I.,  Alsaadi,  D.H.M.,  Wada,  M.,  Mohamed,  M.A.,  Watanabe,  T.,  &  Devkota,  H.P.,  2019.
Effects of Extraction Solvents on Total Phenolic and Flavonoid Contents and Biological Activities of Extracts from Sudanese medicinal plants. South African Journal of Botany , 120(1016):261- 267. DOI: 10.1016/j.sajb.2018.07.003.
Eddy, S., Maulana, A., Ridho, M.R., & Iskandar, I., 2017. Dampak aktivitas antropogenik terhadap degradasi hutan mangrove di indonesia . Jurnal Lingkungan dan Pembangunan , 1(3): 240-254. DOI: 10.31219/osf.io/xd9cb.
Erwin, E., Nuryadi, D., & Usman, U., 2020. Skrining Fitokimia dan Bioaktivitas Tumbuhan Bakau Api- Api  Putih  ( Avicennia  alba  Blume ). Jurnal  Sains  dan  Kesehatan , 2(4):311-315.  DOI: 10.25026/jsk.v2i4.152.
Estiningsih,  D.,  Puspitasari,  I.,  &  Nuryastuti,  T.,  2016.  Identifikasi  Infeksi  Multidrug-Resistant Organisms (MDRO) Pada Pasien yang Dirawat di Bangsal Neonatal Intensive Care Unit (NICU) Rumah Sakit. Journal of Management and Pharmacy Practice , 6(3):243-248.
Harborne, J.B., 1987. Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Bandung: Penerbit ITB , 78. Hoff,  R.T.,  Patel,  A.,  &  Shapiro,  A.,  2020. Pseudomonas  aeruginosa :  An  Uncommon  Cause  of Antibiotic-Associated  Diarrhea  in  an  Immunocompetent  Ambulatory  Adult. Hindawi:  Case Report in Gastrointestinal Medicine , 6261748: 1-3. DOI: 10.1155/2020/6261748.
Hussein,  R.A.,  &  El-Anssary,  A.A.  2019.  Plants  secondary  metabolites:  the  key  drivers  of  the pharmacological  actions  of  medicinal  plants. Herbal medicine,  76139:  11-30.  DOI: 10.5772/intechopen.76139.
Kodikara, K.A.S., Pathmasiri, R., Irfan, A., Loku Pullukuttige, J., Madarasinghe, S.K., Farid, D.G., & Nico, K., 2020. Oxidative stress, leaf photosynthetic capacity and dry matter content in young mangrove  plant Rhizophora  mucronata Lam.  under  prolonged  submergence  and  soil  water stress. Physiology  and  Molecular  Biology  of  Plants , 26(8):1609-1622.  DOI:  10.1007/s12298- 020-00843-w.
Kristanti, H., & Tunjung, W.A.S., 2015. Detection of Alkaloid, Flavonoid, and Terpenoid Compounds in Bread ( Artocarpus communis Frost.) Leaves and Pulps. KnE Life Science , 2(1):129-133. DOI: 10.18502/kls.v2i1.131.
Logan, B.E., 2012. Environtmental Transport Processes. Second Edition. John Willey & Sons Inc.
Masyita,  A.,  Sari,  R.M.,  Astuti,  A.D.,  Yasir,  B.,  Rumata,  N.R.,  Emran,  T.B.,  &  Simal-Gandara,  J., 2022.  Terpenes and terpenoids as main bioactive compounds of  essential  oils,  their roles in human health and potential application as natural food preservatives. Food Chemistry X , 13(19):
p.100217. DOI: 10.1016/j.fochx.2022.100217.
Mazlan,  A.G.,  &  Nadirah,  M.,  2016.  Phytochemical  Composition  and  in  Vitro  Antimicrobial, Antioxidant  Activites  of  Methanolic  Leaf  Extracts  from Excoecaria agallocha . Biosciences Biotechnology Research Asia , 13(1):599-608. DOI: 10.13005/bbra/2070. Nisa, A.A., Sedjati, S., & Yudiati, E., 2020. Quantitative fucoxanthin extract of tropical Padina sp. and Sargassum  sp. (Ocrophyta)  and its’  radical scavenging  activity. IOP  Conference Series: Earth and Environmental Science, 584: 1-7. DOI: 10.1088/1755-1315/584/1/012044.
Nurhayati,  L.  S.,  Yahdiyani,  N.,  &  Hidayatulloh,  A.,  2020.  Perbandingan  pengujian  aktivitas antibakteri  starter  yogurt  dengan  metode  difusi  sumuran  dan  metode  difusi  cakram. Jurnal Teknologi Hasil Peternakan , 1(2):41-46. DOI: 10.24198/jthp.v1i2.27537.
Ogbiko., Okoh, E.V.C., & Abubakar, H., 2020. Phytochemical Screening, In vitroAntioxidant Activity and  Polyphenolic  Content  of  the  Leaves  of  Nigerian Ziziphus  spina – Christi  (L.)
Willd. International Journal of Science for Global Sustainability, 6(4):1-10.
Phuong, N.H., Thuy, N. T., Duc, N.T., Tuyet, N.T., Mai, N.T., & Phung, N.K. 2017. A New Glycoside and  In  Vitro  Evalution  of  α -Glucosidase  Inhibitory  Activity  of  Constituents  of  the  Mangrove Lumnitzera  racemosa . Natural  Product  Communications ,  12(11):  1751-1754.  DOI: 10.1177/1934578X1701201125.
Puspitasari, E., & Rozirwan, M.H., 2018. Uji toksisitas dengan menggunakan metode brine shrimp lethality  test  (BSLT)  pada  ekstrak  mangrove  ( Avicennia  marina,  Rhizophora  mucronata, Sonneratia  alba dan Xylocarpus  granatum )  yang  berasal  dari  Banyuasin,  Sumatera Selatan. Jurnal Biologi Tropis , 18(1):91-103. DOI: 10.29303/jbt.v18i1.733.
Rafael,  A.,  2021.  Phtytochemical  screening  and  thin  layer  choromatography  (TLC)  profiling  of mangrove family Rhizophoraceae and Avicenniaceae . Aquatic Science Journal: Acta Aquatica , 8(1):1-7. DOI: 10.29103/aa.v8i1.2461.
Rajput,  V.D.,  Singh,  R.K.,  Verma,  K.K.,  Sharma,  L.,  Quiroz-Figueroa,  F.R.,  Meena,  M.,  & Mandzhieva, S., 2021. Recent developments in enzymatic antioxidant defence mechanism in plants  with  special  reference  to  abiotic  stress. Biology , 10(4):p.267.  DOI:  10.3390/biology 10040267.
Ravikumar, S., & Gnanadesigan, M., 2011. Hepatoprotective and Antioxidant Activity of a Mangrove Plant Lumnitzera racemosa . Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine , 5(1):348-352. DOI: 10.1016FS2221-1691(11)60078-6.
Ridlo,  A.,  Pramesti,  R.,  Koesoemadji,  S.E.,  &  Soenardjo,  N.,  2017.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Daun  Mangrove Rhizopora  mucronata . Buletin  Oseanografi  Marina ,  6(2):110-116.  DOI: 10.14710/buloma.v6i2.16555.
Sarjono,  P.R.,  Putri,  L.D.,  Budiarti,  C.E.,  Mulyani,  N.S.,  Kusrini,  D.,  &  Prasetya,  N.B.A.,  2019. Antioxidant and antibacterial activities of secondary metabolite endophytic bacteria from papaya leaf ( Carica papaya L.). IOP Conference Series: Materials Science and Engineering , 509(1):2- 13. DOI: 10.1088/1757-899X/509/1/012112.
Sibero, M.T., Bachtiarini, T.U., Trianto, A., Lupita, A.H., Sari, D.P., Igarashi, Y., Harunari, E., Sharma, A.R.,  Radjasa,  O.K.,  &  Sabdono,  A.,  2019.  Characterization  of  a  yellow  pigmented  coral- associated  bacterium  exhibiting  anti-Bacterial  Activity  Against  Multidrug  Resistant  (MDR) Organism. The Egyptian Journal of Aquatic Research , 45(1):81-87. DOI: 10.1016/j.ejar.2018. 11.007.
Sibero, M.T.,  Sabdono, A.,  Pribadi,  R.,  Frederick,  E.H.,  Wijaya,  A.P.,  Haryanti,  D.,  &  Igarashi, Y. 2020. Study of Biomedical Properties of Rhizophora mucronata Fruit from Rembang, Central Java. Earth and Environmental Science , 584(1):1-7. DOI: 10.1088/1755-1315/584/1/012001. Supari,  I.H.,  Leman,  M.A,  &  Zuliari,  K.,  2016.  Efektivitas  Antibakteri  Ekstrak  Biji  Bengkuang ( Pachyrrhizus  erosus )  Terhadap  Pertumbuhan Streptococcus mutans Secara  In Vitro. Pharmacon, 5(3): 33 – 39.
Thao, N.P., Luyen, B.T.T., Diep, C.N., Tai, B.H., Kim, E.J., Kang, H.K., & Kim, Y.H.,  2015. In Vitro Evaluation  of  The  Antioxidant  and  Cytotoxic  Activities  of  Constituents  of  The  Mangrove Lumnitzera racemosa Willd. Archives  of  pharmacal  research ,  38(4):446-455.  DOI: 10.1007/s12272-014-0429-y.
Truong, D.H., Nguyen, D.H., Ta, N.T.A., Bui, A.V., Do, T.H., & Nguyen, H.C., 2019. Evaluation of the Use of Different Solvents for Phytochemical Constituents, Antioxidants, and In Vitro Anti- Inflammatory  Activities  of Severinia  buxifolia . Journal  of  Food  Quality ,  DOI:  10.1155/2019/ 8178294.
Werber,  D.,  &  Scheutz,  F.,  2019.  The  Importance  of  Integrating  Genetic  Strain  Information  for Managing Cases of Shiga Toxin-Producing E. coli Infection. Epidemology & Infection , 147:e264. DOI: 10.1017/S0950268819001602.