Identifikasi dan Karakteristik Staphylococcus Sp. dan Streptococcus Sp. dari Infeksi Ovarium Pada Ayam Petelur Komersial
(Identification and Characteristics of Staphylococcus Sp. and Streptococcus Sp. Infection of Ovary in Commercial Layers)
1 Novianti Neliyani Toelle; 2 Viktor Lenda
1 Laboratorium Mikrobiologi, Program Studi Kesehatan Hewan, Politeknik Pertanian Negeri Kupang
2 Laboratorium Patologi dan Anatomi, Program Studi Kesehatan Hewan, Politeknik Pertanian Negeri Kupang Jl. Adisucipto Penfui Kupang, Kampus Politeknik Pertanian Negeri Kupang, E-mail: nelly_toelle@yahoo.com

## Abstrak
Infeksi  ovarium  merupakan  salah  satu  penyakit  yang  paling  sering  ditemukan  pada  ayam  petelur  menjelang periode  betelur  maupun  selama  masa  produksi.  Gangguan  produksi  telur  dapat  terjadi  karena  gangguan perkembangan  ovarium  akibat  gangguan  pertumbuhan  pada  ayam,  kerusakan  ovarium  atau  akibat  penyakit. Penelitian ini dirancang untuk mengisolasi, mengidentifikasi, dan karakteristik bakteri penyebab infeksi ovarium pada ayam petelur komersial. Sejumlah 19 sampel ayam petelur komersial yang diperoleh dari tiga peternakan di wilayah  Yogyakarta.  Ovarium  yang  mengalami  infeksi  dikultur  pada  plat  agar  darah  (PAD),  kemudian diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  18-24  jam.  Setelah  pengelompokkan  koloni  dilanjutkan  pengecatan  Gram. Gram  positif  bentuk  kokus  dilakukan  uji  katalase.  Selanjutnya  bakteri  dengan  katalase  positif  dilakukan  uji koagulase, kultur pada mannitol salt agar (MSA), Voges Proskauer (VP) dan uji oksidase. Hasil identifikasi dan karakteristik  bakteri  dari  infeksi  ovarium  adalah Staphylococcus  aureus (46%), Staphylococcus  intermedius (27%), Staphylococcus epidermidis (20%), dan Streptococcus sp . (7%). Kata kunci : Ovarium, ayam petelur, Staphylococcus sp., Streptococcus sp.

## Abstract
Ovary  infection  is  among  the most  common  diseases  found  in  layers  between  the  start  of  egg  production  and during  the  laying  phase.  Egg  production  disruptions  can  be  occur  because  of  impaired  ovary  development  in chickens  due  to  growth  disturbance,  damage  ovary,  or  due  to  the  disease.  This  experiment  was  designed  to isolate, identify, and characterize the bacteria causing ovary infection in commercial layers. Nineteen samples of commercial layers  that were obtained from three farms in the region of Yogyakarta. Samples of infected ovaries were  cultured  on  blood  agar  plates  (PAD),  then  incubated  at  37 0 C  for  18-24 hours.  After the  grouping  of  the colony continued Gram staining. Catalase test for Gram-positive coccus. Furthermore, catalase-positive bacteria with coagulase test, cultured on mannitol salt agar (MSA), Voges Proskauer (VP) and oxidase test. Bacteria that can  be  identified  and  characterized  from  infected  ovary  were Staphylococcus  aureus (46%), Staphylococcus intermedius (27%), Staphylococcus epidermidis (20%), dan Streptococcus sp . (7%). Kata kunci : Ovary, layers, Staphylococcus sp., Streptococcus sp.

## Pendahuluan
Infeksi ovarium merupakan salah satu penyakit yang  paling  sering  ditemukan  pada  ayam  petelur  dan mempunyai  dampak  ekonomik  pada  awal  produksi atau  selama  masa  produksi  telur.  Dampak  ekonomik yang  diakibatkan  oleh  infeksi  ovarium,  terutama infeksi ooforitis , meliputi produksi telur yang tertunda, puncak  produksi  yang  tidak  tercapai,  ketahanan produksi  telur  yang  rendah,  peningkatan  jumlah  ayam yang  diafkir,  dan  peningkatan  mortalitas  (Tabbu, 2000).
Identifikasi
untuk membedakan Staphylococcus  sp .  dengan Streptococcus  sp .  adalah berdasarkan  uji  katalase  (Todar,  2005),  sedangkan
untuk  membedakan Staphylococcus  aureus dengan Staphylococcus lainnya  didasarkan  pada  kriteria fenotipik  (Boerlin et  al .,  2003),  meliputi  morfologi pertumbuhan  koloni,  uji  katalase,  koagulase  serta adanya  fermentasi  mannitol  pada mannitol  salt  agar (MSA)  (Andreasen,  2008;  Yurdakul et  al .,  2013). Faktor patogenitas
Staphylococcus
aureus berhubungan  dengan  ada  atau  tidak  adanya  produksi enzim  koagulase,  (Levinson  dan  Jawetz,  2003; Andreasen,  2008),  selain  itu Staphylococcus  aureus dibedakan  dengan  adanya  fermentasi  mannitol  pada MSA  (Fox,  2000).  Menurut  Kloos  dan  Lambe.  (1991) serta  Quinn et  al .  (2002) Staphylococcus  aureus juga
dapat dibedakan dengan adanya produksi asetoin  yang dapat diketahui melalui uji Voges-Proskauer (VP).
Berdasarkan  hasil  penelitian  tentang  isolasi bakteri  dari  infeksi  ovarium  pada  peternakan  ayam petelur  komersial  belum  banyak  dilaporkan  di Indonesia.  Penelitian  yang  dilakukan  di  Indonesia hanya terbatas pada satu jenis bakteri,  yaitu Ulupi dkk (2012) berhasil mengisolasi Salmonella enteritidis dari ovarium  ayam  petelur.  Beberapa  peneliti  dari  luar negeri  yaitu  Amer  dan  Ghany  (2006)  berhasil mengisolasi Staphylococcus dari  ovarium  ayam petelur. Gundogan et al ., (2005); Thayer dan Waltman, (2008)  berhasil  mengidentifikasi Staphylococcus yang tergolong patogen pada  unggas adalah Staphylococcus aureus , Staphylococcus intermedius , dan Staphylococcus  hyicus .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengisolasi, mengidentifikasi, dan karakteristik bakteri yang di isolasi dari infeksi ovarium di Wilayah Sleman Yogyakarta.

## Materi dan Metode Pengambilan  Sampel
Pengambilan  sampel  dilakukan  berdasarkan
metode
sampling non probabilitas dengan menggunakan  metode  konvein  yang  didasarkan  pada kemudahan  akses  yang  dimiliki  oleh  peneliti  (Israel, 2012).  Dalam  hal  ini  sampel  yang  memiliki  kriteria adalah  sampel  ayam  petelur  yang  mengalami penurunan  produksi  telur  dan  adanya  infeksi  ovarium yang  diperoleh  dari  tiga  peternakan  ayam  petelur komersial di wilayah Yogyakarta.
Isolasi  dan  Identifikasi  Staphylococcus  sp.  dan Streptococcus sp.
Identifikasi  pertama  yaitu  ovarium  yang mengalami perubahan  dikultur langsung secara  aseptis pada  PAD  pada  suhu  37°C  selama  18-24  jam, pertumbuhan koloni diamati dengan melihat morfologi
koloni.  Morfologi  koloni  yang  tumbuh  kemudian dikelompokkan  dan  dilanjutkan  pengecatan  Gram (Pommerville,  2011).  Gram  positif  bentuk  kokus dilakukan uji katalase.
Identifikasi kedua adalah uji katalase dilakukan dengan mengambil sedikit koloni dari kultur murni  PAD  dan  koloni  diletakkan  pada  obyek  glass yang  telah  ditetesi  H 2 O 2 .  Hasil  positif  ditandai  adanya gelembung  udara  untuk  membedakan Staphylococcus sp . dengan Streptococcus sp . (Todar, 2005). Identifikasi ketiga yaitu uji koagulase dilakukan dengan plasma darah kelinci (Bruckler et al ., 1994)  dan  dilanjutkan  penanaman  koloni  pada mannitol salt agar (MSA). Uji MSA dilakukan dengan cara sebagai berikut,  koloni  yang terdapat  dalam PAD diambil  dengan  ose  dan  dikultur  pada  media  MSA, kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  18-24 jam. Hasil pertumbuhan  koloni Staphylococcus aureus ditandai  dengan  perubahan  warna  dari  merah  menjadi kuning.  Uji Voges  Proskauer (VP)  digunakan  untuk mengetahui  pembentukan  acetilmetikarbinol  deteksi produksi  asetoin,  kemudian  dilanjutkan  uji  oksidase (Todar, 2005; MacWilliams, 2012).

## Hasil dan pembahasan
Hasil  isolasi  bakteri  dari  19  ayam  petelur komersial yang diisolasi dari infeksi ovarium diperoleh 15  koloni  bakteri  yang  terdiri  dari Staphylococcus aureus , Staphylococcus  intermedius , Staphylococcus epidermidis ,  dan Streptococcus  sp .  (Tabel  1).  Gambar sel bakteri Staphylococcus sp . (Gambar 1), Gambar sel bakteri Streptococcus sp . (Gambar 2). Gambar hasil uji katalase  (Gambar  3).  Gambar  hasil  uji mannitol  salt agar (MSA)  (Gambar  4).  Gambar  hasil  uji Voges Proskauer (VP) (Gambar 5). Gambar hasil uji oksidase (Gambar 6).
Tabel 1. Hasil isolasi dan identifikasi bakteri pada ayam petelur komersial.
No Peternakan / kode sampel PAD Gram Uji Keterangan Morfologi koloni Bentuk Katalase  Koagulase  MSA VP  O 1. F1/A1O Putih kokus + + - FM + - S. aureus 2. F1/A2O abu-abu kokus + + - FM + - S  aureus 3. FR/A3O 4. FR/A4O 5. FR/A5O Kuning kokus + + - FM + - S. aureus 6. FR/A60 Kuning kokus + + - NFM - - S. intermedius 7. FR/A7O Putih kokus + + - FM + - S. aureus 8. FR/A8O 9. FR/A9O Putih kokus + + - NFM - - S. intermedius 10. F1/A10O Putih kokus + + - FM + - S. aureus 11. F1/B1O Putih kokus + + - FM + - S. aureus 12. FI/B2O Putih kokus + + - FM + - S. aureus 13. FI/B3O Putih kokus + + - NFM - - S. intermedius 14. FI/B4O Putih kokus + + - NFM - - S. intermedius 15. FV/B5O 16. FV/C1O Putih kokus + + - NFM + - S. epidermidis 17. FV/C2O Abu-abu kokus + - * * * + Streptococcus sp. 18. FV/C3O Kuning kokus + + - NFM + - S. epidermidis 19. FV/C4O Kuning kokus + + - NFM + - S. epidermidis Total  15 bakteri Keterangan : FI : Farm Inti FR        : Farm Komersial layer FV: Farm Verawati MSA  : Mannitol Salt Agar O          : oksidase FM      : memfermentasi mannitol NFM    : tidak memfermentasi mannitol :tidak ditemukan bakteri *           : tidak dilakukan.
Gambar 1. Fotomikroskopik Staphylococcus sp .    Gambar 2. Fotomikroskopik Streptococcus sp .
Gambar 3. Uji Katalase
Gambar 4. Hasil uji fermentasi mannitol (MSA)         Gambar 5. Hasil uji VP

## Gambar 6. Hasil uji oksidase
Uji  katalase,  merupakan  uji  yang  digunakan untuk  membedakan  spesies Staphylococcus  sp .dan Streptococcussp .  Katalase  positif  ditunjukkan  adanya gelembung  gas  (O 2 )yang  diproduksi  oleh  genus Staphylococcus .  Hasil  uji  katalase  menunjukkan  hasil positif  pada  semua  isolat Staphylococcus  aureus sejumlah  7/15  (46%), Staphylococcus  intermedius sejumlah  4/15  (27%),  dan Staphylococcus  epidermidis sejumlah  3/15  (20%),  karena  menghasilkan  enzim katalase  mampu  menghidrolisis  hidrogen  peroksida (H 2 O 2 )  menjadi  air  (H 2 O)  dan  gelembung  gas  (O 2 ). Hasil  uji  katalase  negatif  adalah Streptococcus sp .sejumlah  1/15  (7%).  Hal  ini  sangat  sesuai  dengan yang  dilaporkan oleh Kita et al . (2005); Todar (2005); Yurdakul et al . (2013).
Uji  koagulase  merupakan  uji  yang  digunakan untuk  mengetahui  ada  tidaknya  enzim  koagulase  yang dihasilkan  oleh Staphylococcussp .  Hasil  positif ditunjukkan  terbentuk  gumpalan  pada  tabung.  Hasil yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  menunjukkan  hasil negatif  terhadap  semua  isolat Staphylococcusaureus sejumlah  7/15  (46%), Staphylococcus  intermedius sejumlah  4/15  (27%),  dan Staphylococcus  epidermidis sejumlah  3/15  (20%).  Koagulase  positif  umumnya dihasilkan  oleh Staphylococcus  aureus ,  namun ditemukan  juga Staphylococcus  aureus koagulase
negatif (Andreasen, 2008). Staphylococcus sp . Koagulase negatif, bertindak sebagai patogen oportunistik (Yurdakul et al ., 2013).
Uji mannitol  salt  agar (MSA),  merupakan  uji yang dilakukan  untuk mengetahui  kemampuan memfermentasi mannitol pada Staphylococcussp . Hasil positif ditunjukkan perubahan warna pada medium dari warna merah menjadi kuning karena adanya fenol acid dan  hasil  negatif  tidak  ada  perubahan  warna.  Hasil penelitian  yang  diperoleh  menunjukkan  hasil  positif MSA  adalah Staphylococcus  aureus sejumlah  7/15 (46%)  dan Staphylococcus  intermedius sejumlah  4/15 (27%) sedangkan Staphylococcus epidermidis sejumlah  3/15  (20%)  menunjukkan  hasil  negatif.  Hal ini  sesuai  dengan  yang  dilaporkan  (Seo  and  Bohach, 2005).
Uji Voges  Proskauer ,  merupakan  uji  yang digunakan untuk mengetahui pembentukan acetilmetilkarbinol  (asetoin),  sebagai  hasil  fermentasi glukosa  pada Staphylococcus .  Hasil  positif  terjadi perubahan warna dari kuning menjadi merah da n hasil negatif  ditandai dengan tidak adanya perubahan  warna merah  pada  tabung  (Todar,  2005).  Hasil  penelitian  ini menunjukkan  hasil  VP  positif  adalah Staphylococcus aureus sejumlah  7/15  (46%)  dan Staphylococcus epidermidis sejumlah 3/15 (20%) serta hasil VP negatif
yaitu Staphylococcus  intermedius sejumlah  4/15 (27%).  Penelitian  ini  didukung  penelitian  sebelumnya (Andreasen, 2008).
Pada  penelitian  ini,  jumlah  keseluruhan Staphylococcus  sp .  yang  berhasil  di  isolasi  sebesar 93%,  meliputi Staphylococcus  aureus sejumlah  46% (7/15), Staphylococcus  intermedius sejumlah  27% (4/15),  dan Staphylococcus  epidermidis sebesar  20% (3/15).  Beberapa  peneliti  melaporkan Staphylococcus yang  berhasil  di  isolasi  dari  ovarium  ayam  petelur adalah 25% (3/12) (Amer dan Ghany, 2006).
Hasil  penelitian  menunjukkan  persentase Streptococcus sp . sebanyak 7% (1/15). Streptococcus sp .  tersebar  luas  di  alam  dan  dapat  ditemukan  pada berbagai  lingkungan  peternakan  dengan  jumlah populasi  ayam  tinggi  (banyak),  sering  bersifat sekunder  terhadap  penyakit  lainnya,  dapat  bersifat septisemia  akut  dan  merupakan  flora  normal  pada saluran  pencernaan.  Infeksi Streptococcus  sp .  dapat terjadi  melalui  pakan  atau  air  minum  yang  tercemar, kontaminasi  dapat  melalui  feses pada permukaan telur dengan  penetrasi  pada  kulit  telur  atau  pembentukan telur  selama  di  ovarium  atau  oviduk.  Kejadian Streptococcus pada  ovarium  ayam  petelur,  belum banyak dilaporkan.

## Kesimpulan
Sebagian  bakteri  patogen  yang  berhasil diisolasi  dan  diidentifikasi  dari  infeksi  ovarium  pada ayam petelur komersial adalah Staphylococcus aureus , Staphylococcus intermedius , Staphylococccus epidermidis ,  dan Streptocuccus  sp .  Karakteristik Staphylococcus  aureus , Staphylococcus  intermedius , dan Staphylococcus  epidermidis adalah  koagulase negatif,  katalase  positif,  dan  oksidasi  negatif. Karakteristik Staphylococcus aureus dengan Staphylococcus lainnya  adalah  hasil  MSA  positif  dan uji  VP  positif. Staphylococcus  intermedius hasil  MSA negatif  dan  VP  negatif,  sedangkan Staphylococcus epidermidis MSA  negatif  dan  uji  VP  positif. Streptococcus  sp .  adalah  hasil  uji  katalase  negatif  dan oksidase positif.
Daftar Pustaka Andreasen,  C.B.  2008. Staphylococcosis  dalam Diseases  of  Poultry .  12 th ed.  Diedit  oleh  Saif Y.M,  Fadly,  A.M.,  McDougald,  Nolan,  L.K., Swayne,  D.E,  USA:  Blackwell  publishing,  hal. 892-896.
Amer,  M.M  dan  Ghany,  W.A.A.  2006. Bacterial Causes  of  Decrease  in  Performance  of  the
Breeder  Chicken  Flocks .Veterinary  Medical Journal. Vol. 16, No. 1, hal 61-69.
Boerlin,  P.,  P.  Kuhnert,  D.  Hussy  and  M. Schaellibaum.  2003. Methods  for  Identification of  Staphylococcus  aureus  Isolates  in  Cases  of Bovine Mastitis.
Journal of Clinical
Microbiology, Vol. 41. No. 2, hal 767 - 769. Fox,  M.  T.  2000. Identification  of  Gram-Positive Bacteria:  Normal  Flora  Staphylococci. Journal Microbiology, Vol. 56, hal. 423-429.
Gundogan,  N.,  Citak,  S.,  Yucel,  N.,  and  Devren,  A. 2005. “A Note On The Indicende and Antibiotic Resistance  of  Staphylococcus  aureus  Isolated From Meat and Chicken Samples . Meat Science , Vol. 69, hal. 807-810.
Israel,  G.D.  2012. Sampling  the  Evidence  of  Extension
Program Impact. Diakses melalui http://edi.ifas.ufl.edu/pd005 [8/4/2014].
Kitai,  S.,  Shimizu,  A.,  kawano,  J.,  Sato,  E.,  Nakano, C.,  Kitagawa,  H.,  Fujio,  K.,  Matsumura,  K., Yasuda,  R.,  dan  Inamoto,  T.  2005. Prevalense and  characterization  of  Staphylococcus  aureus and  Enterotoxigenic  Staphylococcus  aureus  in Retail  raw  chicken  Meat  Throughout  Japan. J. Vet Med Sci. Vol. 67, No. 3, hal. 269-74. Kloos, W. E. and D. W. Lambe. 1991. Staphylococcus. In:  A.  Balows,  W.  J.  Hausler,  Jr.,  K.  L. Herrmann,  H.  D.  Isenberg,  H.  J.  Shadomy (Eds.), Manual  of  Clinical  Microbiology ,  5th ed.  American  Society  for  Microbiology, Washington, DC. USA,hal. 222 - 232.
Levinson, W., E. Jawetz. 2003. Medical Microbiology &  Immunology:  Examination  &  Board  Review.
7th ed. McGraw-Hill Companies Inc.
Singapore,hal. 91 - 95, 437.
Macwilliams,  M.P.  2012. Indole  Test  Protocol .
Diakses melalui http://www.microbelibelibrary.org/component/r esource/laboratory-test/ 3202-indole-test-
protocol [8/4/2014].
Morishita,  T.Y.  2012.  Overview  of  Streptococcosis  in Poultry.  dalam The  Merk  Veterinary  Manual , diedit  oleh  Aiello,  S.  E.,  Moses,  M.A.,  Lane, K.A.G.,  Schindler,  S.  T.,  and  short,  S.C,  USA, hal. 114-120.
Pommerville, J.C. 2011. Alcano’s Laboratory Fundamentals  of  Microbiology .  Jones  and Bartlett Learning, LLC.
Quinn,  P.j.,  Markey,  B.K.,  carter,  M.E.,  Donnelly, W.J.C.,  and  Leonard,  F.C.    2002. Veterinary
Microbiology and Microbial Disease .
Blackwell Publishing, UK, hal. 119. Seo,  K.S.  and  Bohach,  G.A.  2005. Staphylococcus aureus dalam Food Microbiology Fundamentals  and  Frontiers .  Diedit  oleh Doyle,  M.P.  and  Beuchat,  L.R,  Washington: ASM Press, hal. 493-996.
Tabbu. 2000. Penyakit Ayam dan Penanggulangannya.
Volume I . Penerbit Kanisius. Yogyakarta.
Thayer,
S.D, and Waltman, W.D. 2008. Staphylococcosis dalam Isolation,
Identification,  and  Characterization  Of  Avian Pathogens .  Diedit  oleh  Zavala,  L.D;  Swayne, D.E;  Glisson,  J.R;  Pearson,  J.E.,  Reed,  W.M, Jackwood,  M.W.,  and  Woolcock,  P.R,  United States  America,  5th  ed,  American  Association of Avian Pathologists.
Todar,  K.  2005. Todar’s  Online  Textbook  of Bacteriology,  Staphylococcus. Diakses  melalui http://textbookbacteriology.net/stap_2.html [20/4/2014].
Ulupi,  N.,  Arief,  I.I.,  Brahmantiyo,  B.,  and  Riwayati, K.E.  2012. International  Seminar  on  animal Industry: Effectiveness of Lactobacillus acidophilus  2B4  as  Biocontrol  to  Prevent Salmonella  enteritidis  Infection  on  Laying Hens. Proceeding  of  the  2 nd International Seminar on animal Industry, Jakarta.
Yurdakul,  N.E.,  Erginkaya,  Z.,  and  Unal,  E. 2013. Antibiotic  Resistance  of  Enterococci,
Coagulase Negative Staphylococci and Staphylococcus  aureusIsolated  from  Chicken Meat . Czech J. Food Sci . Vol. 31, No.1, hal. 14- 19.