## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI POLIEUGENOL BERAT MOLEKUL TINGGI DENGAN PENAMBAHAN EKSTRAK DAUN PALA ( Myristica fragrans Houtt)
[Antibacterial Activity Test of High Molecular weight Polyeugenol with an addition of Nutmeg Leaf Extract ( Myristica fragrans Houtt)]
Misba Anggriani 1* , Erwin Abdul Rahim 1 , Syamsuddin 1
1) Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako Jl. Soekarno Hatta, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu, Telp. 0451- 422611
*)Corresponding Author: misbanggriani@gmail.com, hp. 082197243338
Diterima  17 April 2018, Disetujui 8 Agustus 2018

## ABSTRACT
The antibacterial test  of polyeugenol  with  an addition  of nutmeg leaf extract  against Staphylococcus aureus and Escherichia  coli has  been  done.  Polyeugenol  has  been  synthesized  from  eugenol  by using cationic polymerization with the ratio of eugenol concentration to H 2 SO 4 - CH 3 COOH catalyst of 4  :  1. The  result  showed  that  polyeugenol  was  solid,  brown  and  had  molecular  weight  of  2.18  x  10 7 g/mol.  Investigation  of  antibacterial  activity  and  its  combination  with  leaf  nutmeg  extract  was  done using agar well-diffusion method. The concentration of combined both substances were varied to 1% 2%  3%  4%  and  5%  (w/v).  The  result  showed  that  antibacterial  activity  was  observed  in Staphylococcus aureus at concentration of 1% 2% 3% 4% and 5% with inhibition zone of 15.06 mm, 16.93  mm,  18.51  mm,  19.69  mm  and  20.99  mm,  respectively,  whereas  for Escherichia  coli was  at concentration of 1% 2% 3% 4% and 5% with inhibition zone of 17.5 mm, 18.22 mm, 18.90 mm, 19.05 mm  and  19.45  mm,  respectively.  Our  findings  suggested  that  inhibition  effect  of  polyeugenol decreased  in Staphylococcus  aureus after  the  addition  of  nutmeg  leaf  extract,  meanwhile  it insignificantly increased in Escherichia coli
Keywords : Polyeugenol, leaf nutmeg extract, antibacterial

## ABSTRAK
Telah dilakukan uji aktivitas antibakteri polieugenol dengan penambahan ekstrak daun pala terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli .  Polieugenol  disintesis  melalui  metode polimerisasi kationik menggunakan katalis H 2 SO 4 -CH 3 COOH dengan perbandingan 4 : 1. Polieugenol yang  dihasilkan  memiliki  berat  molekul  sebesar  2.18  x  10 7 g/mol,  berbentuk  padat  dan  berwarna coklat.  Pengujian  aktivitas  antibakteri  campuran  polieugenol  dan  ekstrak  daun  pala  menggunakan metode difusi sumur. Konsentrasi campuran polieugenol dan ekstrak daun pala divariasikan: 1% 2% 3%  4%  dan  5%  (b/v).  hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  campuran  polieugenol  dan  ekstrak  daun pala  mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus pada  konsentrasi  1%  2%  3% 4%  dan  5%  berturut-turut  sebesar  15,06  mm,  16,93  mm,  18,51  mm,  19,69  mm,  dan  20,99  mm. sedangkan pada Escherichia coli nilai daya hambat yang dihasilkan berturut-turut sebesar 17,5mm, 18,22 mm, 18,90 mm, 19,05 mm dan 19,45 mm. nilai daya hambat yang dihasilkan polieugenol pada Staphylococcus  aureus setelah  penambahan  ekstrak  daun  pala  mengalami  penurunan,  sedangkan pada Escherichia coli terjadi peningkatan nilai daya hambat yang tidak signifikan.
Kata Kunci : Polieugenol, Ekstrak Daun Pala, Antibakteri

## LATAR BELAKANG
Senyawa antibakteri memiliki manfaat
untuk mengendalikan pertumbuhan bakteri yang merugikan atau patogen    sehingga  dapat  mencegah penyebaran  penyakit  dan  infeksi  dan mencegah timbulnya pembusukan ataupun  kerusakan  bahan  akibat  bakteri (Sulistyo,1971).  Menurut  Pelczar  dan Chan  (1988)  Mekanisme  penghambatan Pertumbuhan bakteri dapat dihambat oleh senyawa antibakteri dengan cara merusak dinding  sel  sehingga  terjadi  perubahan permeabilitas membran sitoplasma bakteri yang menyebabkan keluarnya suatu bahan makanan dari dalam sel, mengubah  bentuk  molekul  protein  dan asam  nukleat,  menghambat  kerja  enzim, dan  menghambat  proses  sintesis  asam nukleat dan protein.
Bakteri  patogen  yang  biasanya menginfeksi  manusia,  yaitu Escherichia coli dan Staphylococcus aureus .
Staphylococcus  aureus merupakan  jenis bakteri  penyebab  infeksi  piogenik  pada manusia  dan  paling  sering  terjadi,  seperti kasus  sepsis  pada  luka  bedah,  mata lengket,  lesi-lesi kulit  pada  bayi  dan  absis payudara . Sementara  itu, Escherichia  coli adalah jenis bakteri yang dapat menyebabkan infeksi pada saluran kencing,  meningitis  pada  bayi,  peritonitis, gastroenteritis,  infeksi  luka,  kolesistitis, dan  syok  bakteremia  (Gibson,  1996). Masyarakat  umum  mengobati  penyakit yang  disebabkan  oleh  bakteri  biasanya menggunakan  antibiotik seperti  tetrasilkin,
ampisilin  yang  keberadaannya  mudah didapatkan,  tetapi  apabila  digunakan dalam  jangka  waktu  panjang  dapat menyebabkan  kegagalan  dalam  proses pengobatan berbagai jenis penyakit infeksi dikarenakan dapat menimbulkan resistensi  terhadap  antibiotik  tersebut, sehingga  diperlukan  bahan  alami  sebagai alternatif pengobatan (Josodiwondo et  al. , 1996).
Salah  satu  bahan  alam  yang  dapat dimanfaatkan  sebagai  antibakteri  adalah ekstrak  daun  pala.  Daun  pala  ( Myristica fragrans Houtt)  diperoleh  dari  tanaman pala  yang  merupakan  tanaman  rempah (Nurdjannah,  2007).  Selain  daunnya, minyak  pala  juga  dapat  dimanfaatkan sebagai inteksida, fungisida dan antibakteri  (Nurdjannah,  2007).  Ginting (2013)  melaporkan  bahwa  tanaman  pala terbukti  mempunyai  aktivitas  antibakteri dimana ekstrak etil asetat yang dihasilkan dari  daun  pala  mempunyai  aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli. Selain  itu pada konsentrasi hambat tumbuh minimum  (KHTM)  minyak  atsiri  daun  pala sebesar 3,125%  menghasilkan zona hambat  sebesar  16,81  mm  terhadap Staphylococcus  aureus ,  sedangkan  pada Escherichia coli dengan konsentrasi minyak  atsiri  daun  pala  sebesar  1% menghasilkan  zona  hambat  sebesar  0,54 mm (Rastuti et al ., 2013).
Selain daun pala bahan alami yang juga dapat digunakan sebagai antibakteri yaitu eugenol (Agusta, 2000).
Eugenol  dapat  diisolasi  dari  minyak cengkeh  karena  merupakan  penyusun utamanya  dengan  kadar  sekitar  80%. Eugenol  yang  memiliki  gugus  fungsi  alil, metoksi,  dan  hidroksi  dapat  ditingkatkan nilai jualnya dengan berbagai modifikasi, seperti diubah menjadi senyawa polieugenol dan
isoeugenol (Sastrohamidjojo,  1981).  Hikmah  (2017) mensintesis eugenol menggunakan katalis
H 2 SO 4 -CH 3 COOH dengan perbandingan  4  :  1  menghasilkan polieugenol dengan berat molekul tinggi. Polieugenol juga memiliki efek
antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus
yang
menghasilkan  diameter  zona  hambat untuk konsentrasi 0,01 g/mL, 0,02 g/mL, dan  0,04  g/mL  berturut-turut  sebesar 15,72;  17,28  dan  20,51  mm,  sedangkan pada Escherichia  coli tidak  ada  efek antibakteri  yang  dihasilkan  (Saputra, 2016).
Berdasarkan  uraian  diatas  efek antibakteri  yang  dihasilkan  polieugenol hanya pada bakteri Staphylococcus aureus ,  tetapi  tidak  terdapat  efek  pada bakteri E.coli, sedangkan untuk daun pala memiliki  efek  antibakteri  yang  baik terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli , sehingga untuk menghasilkan  efek  antibakteri  yang  baik pada  polieugenol,  maka  perlu  dilakukan kombinasi  terhadap  kedua  bahan  alami tersebut.  Pada  penelitian  Indrasti et  al.
(2012)  telah  melakukan  kombinasi  antara kitosan  dan  ekstrak  pala  untuk  menekan
pertumbuhan  bakteri Eschericia  coli dan Salmonella  thypii pada  filet  kakap  merah yang  memiliki  nilai  yang  lebih  besar  dari pada  diameter  penghambatan  kitosan atau  ekstrak  pala  jika  digunakan  secara terpisah.  Sehingga  kombinasi  polieugenol dan  ekstrak  daun  pala  juga  dapat digunakan  sebagai  bahan  anti  bakteri dengan  harapan  agar  dapat  menekan pertumbuhan  bakteri  patogen.  Sehingga diperlukan penelitian lebih lanjut mengenai uji  aktivitas  antibakteri  polieugenol  bobot molekul tinggi dengan penambahan ekstrak  daun  pala  ( Myristica  fragrans Houtt).

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan dasar yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  biakan  bakteri Escherichia coli dan staphylococcus aureus ,  Daun  Pala,  Eugenol  99,9% (Happy  Green),  akuades,  H 2 SO 4 p.a, DMSO  p.a,  CH 3 COOH  4%,  metanol, Media  pada  agar  NA,  aluminium  foil  dan kertas saring.
Peralatan  yang  digunakan  berupa magnetik  stirrer,  blender,  ayakan  60 mesh, hot plat e, inkubator (ESCO Class II BSC),  autoklaf  (Hirayama),  mikropipet, neraca  analitik,  Rotary  vakum  evaporator, Penyaring buchner, Vortex, Bunsen, jangka  sorong,  ose  bulat,  Viskometeer Ostwald, Corong pisah, botol semprot dan alat-alat  gelas lainnya yang umum digunakan dalam laboratorium kimia.

## Prosedur Penelitian
Sintesis  Polieugenol  (Suirta,  2012  dan Sudarlin dan Haryadi, 2015)
Mengambil  10  gram  eugenol,  lalu memasukkan ke dalam gelas kimia 250mL kemudian    menambahkan  2,5  mL  larutan H 2 SO 4 -CH 3 COOH  dengan  perbandingan 4:1  (monomer  :  katalis)  sambil  terus diaduk  menggunakan  magnetik  stirrer. Penambahan  katalis  dilakukan  sedikit demi sedikit. Terbentuknya polimer ditandai  dengan  keluarnya  asap  putih pekat  dan polimer  melekat  pada  dinding gelas kimia. Polimerisasi dihentikan dengan  menambahkan  4  tetes  methanol pada campuran sehingga polimer mengental dan keras. Mendiamkan polimer  pada  suhu  ruang  selama  24  jam hingga  polimer  memadat  dan  kering. Perlakuan dilakukan dengan menggunakan  konsentrasi  asam  asetat 4% dalam campuran katalis.
Pemurnian  Polieugenol (Suirta,  2012 dan Sudarlin dan Haryadi, 2015)
Polieugenol  yang  telah  terbentuk dilarutkan menggunakan dietil eter sebanyak 50 mL dan dikocok hingga larut. Setelah  itu,  dimasukkan  ke  dalam  corong pisah  500  mL  dan  ditambahkan  aquadest 100  mL,  dikocok  kuat  dan  didiamkan selama  1  malam  hingga  terbentuk  dua lapisan.  Lapisan  bagian  bawah  dibuang dan lapisan bagian atas berupa polieugenol  yang  tidak  larut  dalam  air dicuci  sebanyak  3  kali  menggunakan akuades.  Polieugenol  yang  larut  dalam eter  di  pekatkan  menggunakan  rotary
vakum  evaporator  untuk  menghilangkan pelarut  dietil  eter.  Untuk  membebaskan kemungkinan  adanya  air  yang  terdapat pada polieugenol, maka polieugenol disaring menggunakan corong kaca dengan melewatkan pada 1 gram Na 2 SO 4 anhidrat.
Penentuan  Berat  Molekul  Polieugenol (Ngadiwiyana, 2005)
Sebanyak 1 gram polieugenol dilarutkan dalam etanol hingga konsentrasinya  0,02  g/mL  dalam  labu takar  50  mL.  kemudian  dibuat  variasi konsentrasi  polimer  melalui  pengenceran dengan etanol: 0,01500 g/mL; 0,01000g/mL; 0,00500 g/mL; 0,00250g/mL; dan 0,00125 g/mL. dilakukan  pengukuran  waktu  alir  pelarut murni  yaitu  etanol  dan  masing-masing konsentrasi larutan polimer dengan menngunakan viscometer Ostwald, sehingga diperoleh t 0 , t 1 , t 2 , t 3 , t 4 , t 5 dan t 6 . Dengan  persamaan  Poisseuille  diperoleh Ƞsp /C  lawan  C.  dari kurva diekstrapolasi ke  konsentrasi  (C)  sama  dengan  nol diperoleh  [Ƞ].  Dengan  persamaan  Merk- Houwink  dihitung  berat  molekul  dari polimer  dengan  menggunakan  harga  K dan a yang sesuai.

## Tahap Pengolahan Daun Pala
Daun pala dicuci bersih, lalu mengeringkan  daun  pala  dibawah  sinar matahari,  daun  pala  yang  telah  kering kemudian  diblender  hingga  halus,  lalu diayak  dengan  ayakan  60  mesh  untuk mendapatkan tepung daun pala

## Ekstraksi Daun Pala (Lisnawati, 2014)
Ekstraksi  dilakukan  menggunakan metode  maserasi  menggunakan  pelarut akuades.  Menimbang  bubuk  daun  pala sebanyak 100 gram, kemudian memasukkan ke dalam Erlenmeyer 2000mL  lalu  menambahkan  1000  mL aquadest  (perbandingan  sampel dan pelarut  1:10). Menyimpan    campuran selama 1 x 24 jam sambil sesekali diaduk, kemudian menyaring menggunakan penyaring vakum. Memisahkan filtrat yang diperoleh dengan pelarutnya menggunakan  rotary  vakum  evaporator sehingga  didapatkan  ekstrak  kental  daun pala.

## Pembuatan  Campuran  Polieugenol  dan Ekstrak Daun Pala (Indrasti et al., 2012)
Campuran  polieugenol  dan  ekstrak daun  pala  dibuat  dengan  perbandingan 1:1  (b/b)  dengan  cara  menimbang  kedua bahan  tersebut,  lalu  dicampurkan  dan dilarutkan menggunakan pelarut DMSO
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Campuran Polieugenol  Dan  Ekstrak  Daun  Pala dengan
Metode Sumur Difusi
(Darmawati, 2009)
Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri menggunakan metode sumur difusi.
Mencampurkan  Media  Nutrient  Agar  (NA) sebanyak  25  mL  dengan  25  μL  suspensi bakteri  uji  ( Straphylococcus  aureus dan Eschericia coli ), dihomogenkan lalu dituang  dalam  cawan  petri  steril  dan dibiarkan  sampai  memadat.  Setelah  itu membuat  sumur  yang  berdiameter  6  mm menggunakan  alat  pelubang.  Cawan
pertama  berisi  2  lubang  atau  sumur (lubang  pertama  untuk  kontrol  positif berupa  kloramfenikol  1%  dan  lubang kedua  berisi  kontrol  negatif  berupa DMSO).  Cawan  kedua  berisi  3  lubang atau  sumur  (lubang  pertama  dan  kedua berisi  campuran  polieugenol  dan  ekstrak daun  pala  1%  2%,  sedangkan  lubang ketiga  berisi  ekstrak  kental  daun  pala), dan  cawan  ketiga  terdapat  3  lubang  atau sumur  (lubang  pertama  kedua  da  ketiga berisi  campuran  polieugenol  dan  ekstrak daun  pala  3%  4%  dan  5%).  setiap  sumur diisi dengan campuran ekstrak dan kontrol sebanyak  50  μL,  kemudian  diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C, selanjutnya  diamati  dan  diukur  diameter zona  hambatnya  menggunakan  jangka sorong.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Poleugenol Hasil Sintesis
Polieugenol  yang  dihasilkan  dari proses  polimerisasi  berbentuk  padat  dan berwarna  hitam  keunguan.  Hasil  tersebut sesuai  dengan  penelitian  Ainun  (2017) yang  mendapatkan  polieugenol  yang berbentuk padat dan memiliki warna hitam keunguan.  Sintesis  polieugenol  pada penelitian  ini  menggunakan  polimerisasi kationik  antara  eugenol  dan  katalis H 2 SO 4 –CH 3 COOH, proses terjadinya polimerisasi ditandai dengan terbentuknya asap  putih  tebal  yang  diduga  berupa katalis  H 2 SO 4 dan  polimer  melekat  pada dinding gelas kimia berupa padatan.

## Gambar 1 Polieugenol Hasil Pemurnian
Pada  proses  pemurnian,  polieugenol dilarutkan  dalam  dietil  eter  dan  akuades, sehingga  terbentuk  dua  lapisan  larutan, larutan  atas  merupakan  dietil  eter  dan polieugenol  yang  tidak  larut  dalam  air  dan lapisan  bawah  berupa  air  dan  katalis. Menurut Lawrence dan Piel (2004)
Kerapatan  jenis  dietil  eter  lebih  kecil dibandingkan  air,  sehingga  lapisan  eter biasanya berada pada lapisan atas.  Selain itu,  penggunaan  dietil  eter  dikarenakan sifatnya  yang  nonpolar  dan  larutan  tidak akan  tercampur  dengan  air,  sehingga proses  pemurnian  lebih  mudah  dilakukan. Hasil  dari  pemurnian  diperoleh  rendemen polieugenol  72,027%  berbentuk  padat berwarna hitam kecoklatan (Gambar 1)
Berat  molekul  polieugenol  hasil
pemurnian
didapatkan dengan menggunakan metode viskometer sebesar  2.18  x  10 7 g/mol.  Berat  molekul yang  didapatkan  berbeda  dengan  hasil penelitian  sebelumnya.  Pada  Penelitian Hikmah  (2017)  menghasilkan  polieugenol dengan berat molekul sebesar 776.247,12g/mol.  Menurut  Chance et  al.,
(1993)  derajat  polimerisasi  berdasarkan berat molekulnya terdiri dari berat molekul rendah  yang  berkisar  500-5000  g/mol, berat  molekul  sedang  berkisar  5000-
10000g/mol  dan  berat  molekul  tinggi >10000  g/mol.  Sehingga  polimer  yang diperoleh  termasuk  polimer  bermolekul tinggi.  Berat  molekul  suatu  polimer tergantung  pada  jumlah  unit -mer yang berulang dikali dengan berat molekul unit- mer yang  berulang,  berat  molekul  yang dihasilkan  dapat  berkisar  dari  ribuan hingga jutaan unit tergantung pada proses preparasinya (Hikmah, 2017).
Aktivitas Antibakteri Campuran Polieugenol  dan  Ekstrak  Daun  Pala Terhadap  Staphylococcus  aureus  dan Escherichia coli
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri polieugenol  dengan  penambahan  esktrak daun pala menunjukkan bahwa campuran tersebut  memiliki  aktivitas  antibakteri selain  pada  larutan  campuran,  pada ekstrak  daun  pala  juga  memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap S.aureus dan E.Coli yang  ditunjukkan  dengan  terbentuknya zona bening pada medium agar padat NA. Hasil  pengukuran  zona  hambat  esktrak daun pala dan masing-masing konsentrasi campuran  polieugenol  dan  ekstrak  daun pala terhadap bakteri S.aureus dan E.Coli dapat dilihat pada Tabel 1
Tabel  1.  Hasil  Pengukuran  zona  hambat bakteri  gram  positif  ( S.aureus )  dan bakteri gram negatif (E.coli ) Bahan Uji Konsentrasi Zona hambat (mm) S.aureus E.coli Ekstrak daun pala 100% 22,09 35,40 Campuran polieugenol dan ekstrak daun pala 1% 15,06 17,50 2% 16,93 18,22 3% 18,51 18,90 4% 19,69 19,05 5% 20,99 19,45 kontrol (-) 99% 0 0 Kontrol (+) 1% 45,95 45,33
Berdasarkan Tabel 1, diameter zona hambat yang dihasilkan campuran polieugenol  dan  ekstrak  daun  pala semakin tinggi seiring dengan bertambahnya nilai konsentrasi campuran. Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  Kumala (2008)  dalam  Andries et  al. (2014) menyatakan  bahwa  konsentrasi  ekstrak mempengaruhi kecepatan difusi zat berkhasiat, yaitu semakin besar konsentrasi  ekstrak  maka  makin  besar pula  aktifitas  antibakteri  yang  dihasilkan sehingga  menghasilkan  diameter  zona hambat  yang  makin  luas.  Selain  itu, kontrol  positif  yang  digunakan  yaitu kloramfenikol  menghasilkan  zona  hambat sebesar  45,95  mm  terhadap S.aureus , sedangkan E.Coli sebesar 45,33 mm, nilai yang  dihasilkan  termasuk  pada  aktivitas antimikroba yang tergolong kuat, dikarenakan kloramfenikol merupakan golongan antibiotik yang berspektrum luas dengan kekuatan daya hambat yang tinggi dalam menghambat dan membunuh bakteri  (Alviana,  2016).  Levinson  (2004) dalam Alviana (2016) menjelaskan kloramfenikol  mampu  mengikat  subunit ribosom sel mikroba target dan menghalangi aktifitas enzim peptidyltransferase,sehingga menghambat pembentukan  ikatan  peptida  dan  sintesis protein.  Sedangkan  kontrol  negatif  yang digunakan yaitu DMSO yang tidak menunjukkan zona hambat. Hal ini berarti DMSO  merupakan  pelarut  yang  baik, dikarenakan  dapat  melarutkan  tanpa memberikan pengaruh terhadap
pertumbuhan  bakteri  uji,  sehingga  respon kematian bakteri benar-benar berasal dari larutan uji yang digunakan (Marliana et al., 2005).  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri campuran  polieugenol  dan  ekstrak  daun pala  menunjukkan  aktivitas  tertinggi  pada konsentrasi  5%  yaitu  20,99  mm  terhadap S.aureus dan 19,45 terhadap E.coli , hal ini menunjukkan  bahwa  aktivitas  antibakteri campuran  polieugenol  dan  ekstrak  daun pala  lebih  efektif  pada  bakteri S.aureus yang  merupakan  bakteri  gram  positif. Perbandingan  tersebut  dapat  dilihat  pada (Gambar 1).
Pada  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak daun  pala  menghasilkan  daya  hambat sebesar 22,09 mm terhadap S.aureus dan 35,40  mm  terhadap E.coli .  Ekstrak  daun pala  mengandung  senyawa  metabolit sekunder yang berupa flavonoid, triterpenoid,  tanin  dan  alkaloid.  Robinson (1995) menyatakan bahwa alkaloid memiliki  kemampuan  sebagai  antibakteri dengan  cara  mengganguu  komponen penyususn peptidoglikan pada sel bakteri, sehingga  menyebabkan  lapisan  dinding sel  tidak  terbentuk  secara  utuh  dan menyebabkan  kematian  pada  sel  bakteri, terpenoid juga berpotensi sebagai antimikroba yaitu bekerja merusak dinding sel  bakteri  dengan  cara  mengganggu komponen peptidoglikan sel bakteri sehingga  lapisan  dinding  sel  bakteri mengalami kerusakan. Dwidjoseputro (2005)  juga  menyatakan  bahwa  golongan flavonoid  berfungsi  sebagai  antibakteri dengan cara membentuk senyawa
kompleks  terhadap  protein  ekstraseluler yang dapat mengganggu integritas membran  sel  bakteri.  Efek  antibakteri yang  dihasilkan  tanin  antara  lain  melalui reaksi  dengan  membran  sel,  inaktivasi enzim, dan destruksi atau inaktivasi fungsi materi  genetik  (Akiyama, et  al. .,  2001).
Dari  hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa ekstrak  daun  pala  memiliki  daya  hambat tertinggi  terhadap E.Coli dibandingkan S.aureus .
Menurut  Nithiya  dan  Vijayalakshmi (2005)  bakteri  gram  positif  memiliki struktur  dinding  sel  dengan  lebih  banyak peptidoglikan,  sedikit  lipid  dan  dinding  sel mengandung  polisakarida  (asam  teikoat). Asam  teikoat  adalah  jenis  polimer  yang memiliki  kelarutan  tinggi  dalam  air  dan berfungsi  sebagai  transport  ion  positif untuk keluar atau masuk.  Kelarutan asam teikoat  dalam  air  menunjukkan  bahwa dinding  sel  bakteri  gram  positif  bersifat polar.  Sementara  itu,  bakteri  gram  negatif banyak mengandung senyawa lipid, sedikit  peptidoglikan,  dan  membran  luar berupa  bilayer  yang  berfungsi  sebagai pertahanan selektif senyawa-senyawa yang  keluar  masuk  sel  yang  dapat menyebabkan efek toksik. Membran luarnya  terdiri  dari  fosfolipid  pada  lapisan dalam,  dan  lipopolisakarida  pada  lapisan luar  yang  tersusun  atas  lipid  nonpolar. Perbedaan  struktur  dinding  sel  bakteri inilah yang menentukan aktivitas senyawa antibakteri.
Pada  penelitian  Al-Milda  (2018)  uji aktivitas antibakteri polieugenol 5%
terhadap S.aureus sebesar 22,55 mm dan E.coli sebesar  19.21  mm,  hasil  tersebut menunjukkan  nilai  daya  hambat  tertinggi terhadap S.aureus dibandingkan  dengan E.coli. Perbedaan  daya  hambat  yang dihasilkan ekstrak daun pala dan polieugenol  5%  terhadap S.aureus dan E.coli dapat dilihat pada (Gambar 2).
Gambar 2.  Hasil  Pengukuran  Zona  Hambat Polieugenol dengan Penambahan Ekstrak  Daun  Pala  Terhadap bakteri S.aureus dan E.coli
Hasil  penelitian  juga  menunjukkan bahwa  nilai  daya  hambat  yang  dihasilkan campuran  polieugenol  dengan  ekstrak daun  pala  pada  konsentrasi  1%  2%  dan 3%  menghasilkan  nilai  daya  hambat tertinggi pada E.coli , namun pada konsentrasi 4% dan 5% nilai daya hambat terhadap bakteri S.aureus naik dibandingkan  dengan  nilai  daya  hambat terhadap E.coli (Gambar  2).  Polieugenol yang  terbentuk  dari  monomer  eugenol memiliki  aktivitas  antibakteri,  eugenol termasuk  dalam  kelompok  fenilpropen, kelompok  hidroksil  bebas  yang  terdapat pada  eugenol  dapat memberikan aktivitas antimikroba  (Laekeman et  al .,  1990).  Gill
0 5 10 15 20 25 1 2 3 4 5 Zona H a m bat ( m m ) Konsentrasi (%) S.aureus E.coli
dan  Holley  (2006)  menjelaskan  gugus
hidroksil bebas pada eugenol berkontribusi terhadap efek
penghambatan pertumbuhan mikroba karena  mengikat  dan  mempengaruhi  sifat protein  sehingga  dapat  menghambat aktivitas  beberapa  enzim  seperti  ATP yang dapat membunuh sel pada konsentrasi  tinggi,  sehingga  energi  yang
dibutuhkan untuk pemulihan sel
terganggu. Sebuah penelitian yang
dilakukan Oyedemi et al (2009) mengungkapkan  terjadinya  lisis  pada  sel beberapa  bakteri  gram  positif  dan  gram negatif  yang  diinduksi  oleh  eugenol dengan merusak dinding sel dan membran sehingga menyebabkan kebocoran pada sel mikroba.
Berdasarkan  hasil  uji  statistik one way ANOVA  menujukkan  nilai  daya hambat S.aureus yang  dihasilkan  dengan berbagai konsentrasi campuran polieugenol  dan  ekstrak  daun  pala menghasilkan  nilai  signfikan  0,00  <  α (0,05).  Sehingga  dilanjutkan  dengan  uji Duncan  yang  menunjukkan  perbedaan nyata  terhadap  nilai  daya  hambat  yang dihasilkan berbagai konsentrasi campuran polieugenol  dan  ekstrak  daun  pala  yang diujikan.  Sedangkan  hasil  uji  statistik  nilai daya  hambat E.coli yang  dihasilkan dengan  berbagai  konsentrasi  campuran polieugenol  dan  ekstrak  daun  pala menunjukkan  nilai  signifikan  0,53  >  α (0,05). Uji Duncan menunjukkan tidak ada perbedaan  nyata  terhadap  nilai  daya hambat yang dihasilkan berbagai
konsentrasi  campuran  polieugenol  dan ekstrak daun pala yang diujikan.
Gambar 2.  Hasil  Pengukuran  Zona  Hambat ekstrak daun pala dan Polieugenol  5%  (Gilang,  2018)
Terhadap S.aureus dan E.coli
Menurut  Davis  dan  Stouth  (1971) bahwa aktivitas antimikroba yang menghasilkan  penghambantan  20  mm dinyatakan  aktivitas  antimikroba  yang tergolong  sangat  kuat,  sedangkan  pada penghambatan  10-20  mm  bersifat  kuat. Apabila  diameter  penghambatan  yang dihasilkan antara 5-10 mm, maka aktivitas antimikrobanya    tergolong  sedang  dan diameter  penghambatan  5mm  merupakan aktivitas  antimikroba  lemah.  Ekstrak  daun pala dan poliugenol 5% terhadap S.aureus dan E.coli termasuk  antimikroba  kuat.
Sedangkan nilai daya antibakteri campuran  polieugenol  dan  ekstrak  daun pala  terhadap S.aureus pada  konsentrasi 1%  2%  3%  4%  termasuk  aktivitas antibakteri  yang  tergolong kuat,  dan  pada konsentrasi 5% termasuk antibakteri yang sangat  kuat.  Daya  antibakteri  yang dihasilkan  campuran  polieugenol  dan ekstrak  daun  pala  terhadap E.coli pada
0 10 20 30 40 S.aureus E.coli z ona ham bat ( m m ) Bakteri Ekstrak daun pala
polieugenol 5%
konsentrasi  1%  2%  3%  4%  dan  5% tergolong  sebagai  aktivitas  antimikroba yang tergolong kuat.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan, dapat  disimpulkan  bahwa Penambahan  esktrak  daun  pala  terhadap aktivitas antibakteri polieugenol menghasilkan kenaikan nilai daya hambat terhadap  bakteri E.coli ,  namun  kenaikan nilai  yang  dihasilkan  tidak  signifikan terhadap nilai daya hambat yang dihasilkan polieugenol tanpa penambahan ekstrak  daun  pala.  Sedangkan  nilai  daya hambat  yang  dihasilkan  terhadap  bakteri S.aureus mengalami penurunan dibandingkan  penggunaan  polieugenol tanpa penambahan ekstrak daun pala.

## DAFTAR PUSTAKA
Agusta,  A.  2000.  Minyak  Atsiri  Tumuhan Tropika Indonesia. Bandung: ITB.
Akiyama, H., Fujii K, Yamasaki O, Oono T, Iwatsuki  K.  2001.  Antibacterial
Action  of  Several  Tannins  Agains Staphylococcus aureus.  Journal  of Antimicrobia Cahemotherapy .  48 :
487-91.
Alviana. N. 2016. Uji Efektivitas Antibakteri
Ekstrak Etanol Daun Krisan ( Chrysanthemum  morifolium Syn.
Dendrathema grandiflora) Terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli. [ Tesis ].
Yogyakarta: Universitas Atma Jaya Yogyakarta.
Al-Milda, G. 2018.  Uji Aktivitas Antibakteri
Polieugenol  Berat  Molekul  Tinggi Terhadap  Bakteri Staphylococcus
aureus dan Escherichia coli.
[ Skripsi ].  Palu:  Jurusan  Kimia
FMIPA, Untad.
Andries  R.J,  Gunawan  P.N.,  Supit,  A. 2014.  Uji  Efek  Antibakteri  Ekstrak Bunga  Cengkeh  Terhadap  Bakteri Streptococcuc  mutans Secara  In Vitro. Jurna e-GiGi. 2(2).
Darmawati,  S.  2009.  Keanekaragaman Genetik Salmonella  thypii . Journal kesehatan . 2 (1) 28-32.
Davis dan Stout. 1971. Disc Plate method of  microbiological  antibiotic  essay.
Journal Of Microbiology . 22 (4).
Dwidjoseputro. 2005. Dasar-Dasar
Mikrobiologi . Djambaran; Jakarta.
Ginting,  B.,  Barus,  T.,  Marpau,  L.,  dan Smanjuntak,  P.  2013.  Isolasi  Total Flavonoid  Daun  Pala.  Seminar Nasional  Kimia  2013.  Medan: Universitas Sumatera Utara.
Hikmah,  S  A.  2017.  Sintesis  dan
Karakterisitik Polieugenol dari Eugenol Menggunakan Katalis
H 2 SO 4 –  CH 3 COOH.  [ Skripsi ].
Palu: FMIPA UNTAD.
Indrasti,  N.S,  Suprihatin,  dan  Setiawan W.K.  2012.  Kombinasi  kitosan- ekstrak pala sebagai bahan antibakteri  dan  pengawet  alami pada  filet  kakap  merah  ( Lutjanus sp .). Jurnal  Teknologi  Industri
Pertanian . 22 (2):122-130 Josodiwondo, S., U.C. Warsa, Soebiandrio dan Soedarmono. 1996, Perkembangan Kuman
Terhadap  Antimikroba  Saat  Ini , Majalah Kedoktean Indonesia .
46(9); 467. Lisnawati,  2004.  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak Daun Kelor (Moringa Oleifera  L) Dari  Berbagai  Tingkat
Kepolaran  Pelarut.  [ Skripsi] .  Palu: Fakultas  Matematika  Dan  Ilmu

## Pengetahuan  Alam.  Universitas
Tadulako.
Marliana  SD,  Suryanti  V,  dan  Suyono. 2005. Skrining Fitokimia dan Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis Komponen  Kimia  Buah Labu  Siam ( Sechium edule Jacq.  Swartz.) dalam  Ekstrak  Etanol. Biofarmasi .
3(1):26-31.
Nithiya  T,  and  Vijayalakshmi  R.  2015.
Antimicrobial activity of fruit extract of  Annona  squamosa  L. WJPPS.
4(5):1257-67. Nurdjannah, N. 2007. Teknologi Pengolahan  Pala .  Bogor:  Badan
Penelitian dan Pengembangan
Pertanian.
Pelczar,  M.J.  dan  Chan,  E.  C.  S.,  1988, Dasar-dasar  Mikrobiologi  Jilid  1 ,
Jakarta: UI Press.
Rastuti,  U.,  Widyaningsih,  S.,  Kartika,  D.,
dan  Ningsih,  D.R.  2013.  Aktivitas
Antibakteri Minyak Atsiri Daun Pala
Dari Banyumas Terhadap Staphylococcus aureus dan
Escherichia  coli Serta  Identifikasi Senyawa  Penyusunnya. Molekul. 2(2).
Robinson  T.  1995, Kandungan  Organik
Tumbuhan Tingkat Tinggi , Bandung: ITB.
Saputra, D.A. 2016. Uji Aktivitas Antibakteri  Senyawa  Polieugenol
Terhadap Staphylococcus  aureus
dan Escherichia coli . [ Tesis ].
Surakarta: FMIPA Universitas
Sebelas Maret.
Sastrohamidjojo,  H.  1981. A  Study  of Some  Indonesian  Essential  Oils.
Yogyakarta:  FMIPA  Universitas
Gadjah Mada.
Sudarlin
dan Haryadi, W. 2015. Polimerisasi Eugenol Minyak Daun Cengkeh Hasil Redistilasi,
Ekstraksi, dan Fraksinasi Menggunakan  Katalis  Asam  Sulfat Pekat. Jurnal  Kimia  VALENSI: Jurnal Penelitian dan Pengembangan  Ilmu  Kimia ,  3(1):
50-58.
Suirta, I.W., N.L. Rustini, dan T.I. Prakasa.
2012.  Sintesis  Polieugenol  Dari Eugenol  Dengan  Katalis  Asam Nitrat  Pekat  Dan  Media  Natrium Klorida. Jurnal Kimia , 6 (1): 37-46.
Sulistyo,  1971, Farmakologi  dan  Terapi .
Yogyakarta: EKG.