## Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Pepaya Jepang (Cnidoscolus acanitifolius) dengan Metode Frap

## Antioxidant Activity Test Of Japanese Papaya Leaf Extract (Cnidoscolus aconitifolius)
Using FRAP Method
Indah Purnamasari 1*
Rohama 2
Noval 3
Program Studi Sarjana Farmasi, Fakultas Kesehatan, Universitas Sari Mulia, Banjarmasin, Kalimantan Selatan, Indonesia
*email:
indahpurnamasari0706@gmail.com

## Abstrak
Indonesia  merupakan  negara  yang  memiliki  tumbuhan  yang  banyak dimanfaatkan  sebagai  obat.  Salah  satunya  adalah  daun  papaya  jepang (Cnidoscolus  aconitifolius) yang  terbukti  mengandung  antioksidan  dan  secara empiris  dapat  mengobati  demam  berdarah  dan  hipertensi.    Penelitian  ini membandingkan  aktivitas  antioksidan  dari  sampel  daun  pepaya  jepang  yang diekstrak  dengan  pelarut  yang  berbeda. tujuan  dari  penelitian  yaitu untuk Mengetahui  pengaruh  jenis  kepolaran  pelarut  ekstraksi  dalam  aktivitas antioksidan  ekstrak  dari  daun  papaya  jepang  dengan  metode  FRAP.  Pada penelitian ini simplisia daun pepaya jepang  diekstraksi dengan cara maserasi. Skrining fitokimia dan uji aktivitas antioksidan dilakukan pada kedua ekstrak. Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan menggunakan metode FRAP ( Ferric Reducing Antioxidant Power ). Aktivitas antioksidan diuji secara kuantitatif dengan menggunakan spektrofotometri Uv-Vis pada panjang gelombang 695 nm  dengan  baku  pembanding  yang  digunakan  adalah  asam  askorbat.  Hasil analisis  kualitatif  menunjukan  ekstrak  etanol  96%  positif  mengandung flavonoid, tanin, saponin, alkaloid, fenolik, steroid. sedangkan pada ekstrak etil asetat negatif saponin. Kekuatan antioksidan dari nilai FRAP dapat dinyatakan dalam mg ascorbic acid equivalent / gram sampel (mgAAE/g sampel). Sehingga didapat  nilai  mgAAE/g  ekstrak  etanol  daun  pepaya  jepang  sebesar  81,49 mgAAE/g, dan ekstrak etil asetat sebesar 131,33 mgAAE/g.  Dapat disimpulkan bahwa  ekstrak  daun  papaya  jepang  menggunakan  pelarut  etanol  96% mengasilkan  aktivitas  antioksidan  yang  lebih  kuat  dibandingankan  dengan pelarut etil asetata serta menunjukkan perbedaan yang signifikan antara dua pelarut yang digunakan pada uji independent sampel t test.

## Kata Kunci:
Pepaya Jepang Antioksidan Ekstraksi Spektrofotometri UV-Vis Keywords : Japanese Papaya Antioxidante Extract Spektrofotometri UV-Vis

## Abstract
Indonesia  is  a  country  that  has  many  plants  used  as  medicine.  One  of  them  is Japanese  papaya  leaf  (Cnidoscolus  aconitifolius)  which  is  proven  to  contain antioxidants  and  empirically  can  treat  dengue  fever  and  hypertension.  This  study compared the antioxidant activity of Japanese papaya leaf samples extracted with different  solvents.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effect  of  the polarity of the extraction solvent on the antioxidant activity of extracts from Japanese papaya leaves using the FRAP method. In this study, Japanese papaya leaf simplicia was extracted by maceration. Phytochemical screening and antioxidant activity tests were performed on both extracts. Antioxidant activity testing was carried out using the FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power) method. Antioxidant activity was tested quantitatively  using  Uv-Vis  spectrophotometry  at  a  wavelength  of  695  nm  with ascorbic acid as the reference standard. The results of qualitative analysis showed that  the  96%  ethanol  extract  positively  contained  flavonoids,  tannins,  saponins, alkaloids,  phenolics,  steroids.  while  the  ethyl  acetate  extract  was  negative  for saponins.  The  antioxidant  strength  of  the  FRAP  value  can  be  expressed  in  mg ascorbic acid equivalent / gram sample (mgAAE/g sample). So that the mgAAE/g value  of  the  Japanese  papaya  leaf  ethanol  extract was  81.49  mgAAE/g,  and  the ethyl  acetate  extract  was  131.33  mgAAE/g.  It  can  be  concluded  that  Japanese papaya  leaf  extract  using  96%  ethanol  resulted  in  stronger  antioxidant  activity compared to ethyl acetate solvent and showed a significant difference between the two solvents used in the independent sample t test.
©  2024  The  Authors.  Published  by  Institute  for  Research  and  Community  Services  Universitas  Muhammadiyah Palangkaraya. This is Open Access article under the CC-BY-SA License (http://creativecommons.org/licenses/by- sa/4.0/). DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v10i1.7205

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupaka    negara  dengan  keanekaragaman tumbuhan  yang  sangat  banyak.  Kekayaan  ini  banyak dimanfaatkan  dalam  kehidupan  masyarakat,  termasuk sebagai tanaman obat. Salah satu potensi dari tumbuhan obat  tersebut  adalah  sebagai  antioksidan  dan  bisa diarahkan ke dalam produk sediaan farmasi (Noval et al., 2021).  Tumbuhan  dengan  potensi  efek  antioksidan terdapat  pada  banyak  jenis  sayuran,  buah-buahan, rempah-rempah dan tanaman lainnya (Tahir et al., 2016) (Nastiti et al., 2021).
Antioksidan  adalah  senyawa  yang  dapat  menetralkan radikal bebas dengan cara mendonorkan satu atau lebih elektron  pada  senyawa  radikal  bebas  (Rohama  et  al., 2022).  Sekitar  40  penyakit  termasuk  aterosklerosis, hipertensi,  iskemia,  penyakit  Parkinson,  kanker, peradangan  dan  banyak  penyakit  lainnya  telah ditemukan  disebabkan  oleh  radikal  bebas  di  dalam tubuh  (Tahir et al., 2016).
Pada penelitian (Isliana et al., 2022) ekstrak daun papaya jepang  positif  mengandung  alkaloid,  fenolik,  flavonoid, saponin,  tanin  dan  terpenoid.  Menurut  (Puspita  & Susilowati,  2021)  pengukuran  antioksidan  dengan metode FRAP memiliki sensitivitas yang tinggi dibanding dengan metode DPPH dan FIC.
Dengan  metode  FRAP,  kandungan  antioksidan  suatu bahan  dapat  diketahui  dari  kemampuan  senyawa antioksidan tersebut untuk mereduksi ion Fe3+ menjadi Fe2+,  sehingga  kekuatan  antioksidan  suatu  senyawa dianalogikan  dengan  kemampuan  senyawa  tersebut dalam mereduksi (Safitri & Roosdiana, 2020).  Faktor- faktor  yang  mempengaruhi  proses  ekstraksi  yaitu penyimpanan bahan sebelum ekstraksi, ukuran partikel, pelarut, metode yang digunakan dalam ekstraksi, waktu, suhu,  serta  proses  pemisahan  pelarut  dari  hasil ekstraksi.
Pemilihan pelarut yang digunakan untuk ektraksi harus tepat agar mampu menarik senyawa yang dikehendaki.
Suatu senyawa atau komponen dalam sampel akan lebih mudah larut dalam pelarut yang memiliki polaritas yang sama, pelarut polar akan menarik senyawa yang bersifat polar sedangkan pelarut yang non-polar    akan menarik senyawa yang bersifat non-polar (Prasetya et al., 2020).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  dilakukan  penelitian pengaruh jenis pelarut dalam ektraksi pengujian aktivitas antioksidan daun papaya jepang ( Cnidoscolus aconitifolius ) dengan  menggunakan  metode  FRAP  ( Ferric  Reducing Antioxidant Power ).

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
gelas  kimia  ( pyrex ),  toples  kaca,  timbangan  analitik, gunting, rotary evaporator ( shimadzo ), labu ukur ( pyrex ), gelas  ukur  ( pyrex ),  tabung  reaksi  ( pyrex ),  pipet  tetes, pipet ukur ( pyrex ), sentrifuge ( DLAB RE100-PRO ), tabung sentrifuge,  spektrofotometri  UV-Vis  ( Spectroquant Pharo 300 ), batang pengaduk, cawan porselen, pH meter (Lutron  PH-201 ) ,  aluminium  foil,  oven  ( Memmert ), kertas saring.
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  daun papaya  jepang (Cnidoscolus  aconitifolius) ,  etanol  96%, aquades,  asam  askorbat,  NaOH,  KH 2 PO 4 ,  kalium ferrisianida  1%,  FeCl 3 0,1%,  asam  trikoloroasetat (TCA), asam asetat, asam oksalat 1%, etil asetat, dapar fosfat (0,2 M Ph 6,6), serbuk Mg, alkohol, klorida, FeCl 3 1%,  HCl  2N,  pereaksi  dragendroff,  pereaksi  mayer, methanol,  kloroform,  asam  asetat  anhidridat,  asam sulfat pekat.

## Metode Penelitian
Daun papaya jepang ( Cnidoscolus aconitifolius ) yang sudah dipetik dibersihkan dari kotoran atau dari benda–benda asing yang menempel pada  daun dengan menggunakan air  mengalir,  lalu  dipotong  menjadi  kecil-kecil, selanjutnya  dilakukan  proses  pengeringan.  Sampel dikeringkan menggunakan oven pada suhu 50 o C sampai
didapatkan  bobot  tetapnya.  Selanjutnya  dilakukan ekstraksi sampel.
Timbang  simplisia  daun  papaya  jepang  ( Cnidoscolus aconitifolius ) sebanyak 500 gram, bagi menjadi 2 dengan masing-masing  bobotnya  250  gram  untuk  digunakan pelarut  yang  berbeda.  Masing-masing  simplisia dimasukkan ke dalam wadah maserasi atau toples kaca, kemudian  ditambahkan  dengan  etanol  96%  dan  etil asetat pada masing-masing wadah dengan volume yang sama  hingga  semua  simplisia  terendam  dengan sempurna  dan  selanjutnya  ditutup  dengan  rapat. Maserasi  selama  24  jam  dan  terlindung  dari  cahaya matahari  langsung,  sambil  sesekali  dikakukan pengadukan  setelah  1  kali  24  jam.  Setelah  24  jam kemudian  dilakukan  penyaringan  dan  dipisahkan  dari ampas  dan  filtratnya.  Selanjutnya  ampas  dimaserasi kembali  menggunakan  etanol  96%  dan  etil  asetat  yang baru, maserasi dilakukan sebanyak 3 kali. Masing-masing ekstrak  yang  didapatkan  kemudian  dipekatkan  dengan rotary evaporator dengan suhu 50°C hingga diperoleh ekstrak kental.
Rendemen ekstrak= bobot ekstrak (g) bobot serbuk simplisia totatl (g) x 100 %

## Skrining Fitokimia
1. Uji Flavonoid
1 gram   ekstrak   simplisia dalam     100     mL akuades     panas, didihkan selama 5 menit.  5 mL larutan uji kemudian ditambahkan serbuk mg dan 2 ml alcohol:klorida (1:1). Akan terlihat keberadaan flavonoid  jika  terbentuknya  warna  merah,  jingga atau kuning
2. Uji Tanin
10  mL  larutan  uji  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi,  tambahkan      beberapa  tetes  larutan FeCl31%,  terbentuk  warna  biru  tua  atau  hijau kehitaman menunjukkan terdapat senyawa tannin
3. Uji Saponin
10  mL  larutan  uji  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi, dikocok 10 detik.  Terbentuknya busa yang stabil  dalam        tabung        reaksi        menunjukkan adanya senyawa saponin. Pada penambahan 1 tetes HCl  2N,  busa  tidak  hilang  (Isliana  et  al.,  2022). Dengan  penambahan  beberapa  tetes  pereaksi Lieberman  Burchard  (LB)  jika  terbentuk  cincin coklat  atau  violet  maka  menunjukkan  adanya saponin triterpen, sedangkan warna hijau atau biru menunjukkan adanya saponin steroid (Suleman et al., 2022).
4. Uji Alkaloid Larutan uji sebanyak 2 mL diuapkan di atas cawan porselin.  Residu        yang  dihasilkan  kemudian dilarutkan  dengan  5  mL  HCL  2  N.  Larutan  yang diperoleh dibagi   ke   dalam   2   tabung   reaksi. Tabung  pertama  ditambahkan  3  tetes  pereaksi Dragendorff dan tabung kedua    ditambahkan     3 tetes     pereaksi  Mayer.  Terbentuk  endapan  putih pada  tabung  pertama  dan  endapan  kuning  pada tabung   kedua menunjukkan adanya alkaloid
5. Uji Fenolik Ekstrak  sebanyak      1  gram  ditambah      10      mL metanol      kemudian  dikocok  dan  disaring.  Filtrat ditambah  3  tetes  FeCl3  1%  kemudian  diamkan selama 5 menit dan diamati, terjadinya warna hijau, biru kehitaman menunjukkan adanya fenol.
6. Uji Steroid Larutan uji sebanyak 2 mL diuapkan dalam cawan penguap.  Residu  dilarutkan  dengan  0,5  mL kloroform, ditambahkan    0,5    mL    asam    asetat anhidrat dan 2 mL asam sulfat pekat melalui dinding tabung.    Terbentuknya  cincin      kecoklatan      atau violet      pada  perbatasan  larutan  menunjukkan adanya  terpenoid  dan  jika  terbentuk  cincin  biru hijau maka menandakan adanya steroid.

## Analisis Kuantitatif
1. Larutan Dapar Fosfat 0,2 M pH 6,6
Larutkan  2  gram  NaOH  dengan  aquadest  hingga tepat 250 mL dalam labu takar, selanjutnya 6,8 gram KH2PO4  yang  dilarutkan  dengan  aquadest  hingga 250  mL  dalam  labu  takar,  selanjutnya  pipet sebanyak  16,4  mL  NaOH  dimasukkan  dalam  labu takar dan dicampurkan 50 mL KH2PO4, kemudian diukur  sampai  pH  6,6  dan  dicukupkan  dengan aquadest hingga 200 mL.
2. Larutan Kalium Ferrisianida 1% Larutkan 1 gram kalium ferrisianida dalam aquadest dan diencerkan dalam labu takar 100 mL.
3. Larutan FeCl3 0,1%
Larutkan  0,1gram  FeCl3  dalam  aquadest  dan diencerkan dalam labu takar 100 mL.
4. Larutan asam trikloroasetat (TCA) 10% Larutkan  10  gram  TCA  dalam  aquades  dan diencerkan dalam labu takar 100 mL.
5. Pembuatan Larutan Blanko Satu  ml  dapar  fosfat  Ph  6,6  dan  1  ml  kalium ferrisianida dipipet kedalam labu ukur 5ml. Inkubasi selama  20  menit  dengan  suhu  50°C.  Setelah  di Inkubasi larutan ditambahkan 1 ml TCA, Kemudian disentrifuge  selama  10  menit.  dipipet  1  ml  bagian atas kemudian masukan kedalam labu ukur 5ml lalu tambahkan  1  ml  aquadest  dan  0,5  ml  FeCl  0,1% tambahkan etanol Pa sampai tanda batas kemudian diamkan selama 30 menit.
6. Penentuan Panjang Gelombang Maksimal Larutan Asam askorbat konsentrasi 80 ppm dipipet sebanyak 1 ml, tambahkan 1 ml larutan dapar fosfat 0,2  M  (pH  6,6)  dan  1  ml  kalium  ferrisianida  lalu masukan dalam tabung reaksi dan Inkubasi selama 20  menit  dengan  suhu  50°C.  Setelah  diinkubasi larutan ditambahkan 1 ml TCA, larutan disentrifuge pada  kecepatan  3000  rpm  setelah  itu  pipet  1  ml bagian atas lalu dimasukkan dalam labu ukur 10ml. Tambahkan 1 ml Aquadest dan 0,5 ml FeCl3 0,1% lalu  tambahkan  Etanol  Pa  hingga  tanda  batas.
Serapan di ukur dengan Spektrofotometri UV Vis pada panjang gelombang 500-800 nm sehingga akan diperoleh panjang gelombang maksimum.
7. Penetapan Operating Time Asam askorbat Larutan Asam askorbat konsentrasi 80 ppm dipipet 1ml lalu ditambahkan 1 ml larutan dapar fosfat 0,2 M  (pH  6,6)  dan  1  ml  larutan  kalium  ferrisianida kedalam  labu  ukur  10  ml  tambahkan  Etanol  Pa sampai  tanda  batas,  kemudian  Panjang  gelombang serapan di ukur pada menit ke 0 sampai ke 60 menit pada  panjang  gelombang  maksimal  yang  sudah didapatkan sebelumnya.
8. Pengukuran  larutan  asam  askorbat  berbagai konsentrasi dengan metode FRAP
Menimbang  seksama  10  mg  Asam  askorbat dilarutkan dengan etanol p.a. Dalam labu ukur 10 ml  kemudian  tambahkan  etanol  pa  hingga  tanda batas. Larutan induk asam askorbat dipipet masing- masing 0,6ml; 0,7ml; 0,8ml; 0,9ml; 1,0ml pada labu ukur  10ml  hingga  diperoleh  konsentrasi  60ppm, 70ppm,  80ppm,  90ppm,  100ppm  kemudian  dari masing-  masing  konsentrasi  dipipet  1ml  dan ditambahkan 1ml larutan dapar fosfat pH (6,6) dan 1ml larutan kalium ferrisianida 1% dipipet kedalam tabung reaksi kemudian diinkubasi selama 20 menit pada  suhu  50°C.  Setelah  diinkubasi  larutan ditambahkan  1  ml  TCA  lalu  disentrifugasi  pada kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit,  setelah proses  sentrifuge  selesai  lapisan  atas  dipipet sebanyak  1ml  masukan  dalam  labu  ukur  5ml,  lalu diamkan  lagi  selama  50  menit  ditambahkan  1ml aquadest dan 0,5ml FeCl3 setelah itu ditambahkan dengan  etanol  p.a  sampai  tanda  batas,  kemudian diukur  serapanya  pada  panjang  gelombang maksimal.
9. Pengukuran serapan sampel dengan metode FRAP Sebanyak  10  mg  ekstrak  dilarutkan  dalam  10  mL etanol  96%,  lalu  dipipet  1  mL,  tambahkan  1mL dapar   fosfat   0,2   M (pH   6.6)   dan   1   mL K3Fe(CN)61%   setelah   itu,  diinkubasi    selama
20  menit        dengan        suhu        50°C.        Setelah diinkubasi  tambahkan  1  mL  TCA  lalu  disentrifuge dengan kecepatan   3000   rpm   selama   10   menit. Setelah disentifuge   dipipet   1   mL   lapisan   bagian atas kedalam   tabung   reaksi,   dan   ditambahkan 1      mL  aquades  dan  0,5  mL  FeCl3  0,1%.  Larutan didiamkan  selama  50  menit  dan  diukur absorbansinya  pada  695  nm.    Sebagai  blangko digunakan  campuran  larutan  oksalat.  Kurva kalibrasi  dibuat  menggunakan  larutan  asam askorbat dengan berbagai konsentrasi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi dan Maserasi
Metode  ekstraksi  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini adalah  maserasi.  Pelarut  yang  digunakan  adala  etanol 96%  dan  etil  asetat.  Rendemen  ekstrak  kental  daun papaya  jepang  yang  diperoleh  sebesar  10,67  %  pada ekstrak etanol 96% dan 7% pada ekstrak etil asetat.

## Tabel l. Hasil ekstrak dan Rendeman
Pelarut Ekstraksi Bobot ekstrak (gram) Rendeman % Etanol 96% 26,67 gram 10,67 % Etil Asetata 17,52 gram 7 %
Gambar l. Hasil Rendeman Ekstrak
Pembuatan  simplisia  dilakukan  dengan  metode pemanasan  kering  menggunakan  oven  pada  suhu  50 o . dipilihnya  pengeringan  menggunakan  oven  pada  suhu 50 o karena  pengeringan  dengan  suhu  lebih  dari  60°C
dapat mengakibatkan perubahan atau kerusakan dalam tanaman,  termasuk  senyawa  metabolit  sekunder. Menurut  (Warnis  et  al.,  2020)  Semakin  tinggi  suhu pengeringan maka kandungan flavonoid sampel semakin rendah.
Pembuatan ekstraksi yang dipilih yaitu dengan metode maserasi, Pelarut yang digunakan adalah etanol 96% dan etil asetat. Rendemen ekstrak kental yang diperoleh dari proses ekstraksi didapatkan hasil 10,67 % pada ekstrak etanol  96%  dan  7%  pada  ekstrak  etil  asetat.  Nilai rendemen yang tinggi menunjukkan banyaknya senyawa bioaktif yang terkandung dalam tanaman.

## Analisis Kualitatif

## Identifikasi Skrining Fitokimia
Masing-masing  ekstrak  dilakukan  skrining  fitokimia untuk  memberikan  gambaran  mengenai  golongan senyawa yang terkandung dalam ekstrak.
Tabel ll. Hasil Uji Skrining Fitokimia
Hasil  uji  Skrining  fitokimia  pada  penelitian  ini  untuk ekstrak  etanol  96%  adalah  positif  mengandung flavonoid,  tanin,  saponin,  alkaloid,  fenolik  dan  steroid. sedangkan untuk ekstrak etil asetat positif mengandung flavonoid, tanin, alkaloid, fenolik, steroid. Hal ini selaras dengan  penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  oleh
10,67% 7% 0,00% 5,00% 10,00% 15,00% Etanol 96% Etil Asetat Rendemen Ekstrak (%) Skrining fitokimia Etanol 96% Etil Asetat Keterangan Flavonoid + + Terbentuknya warna merah, jingga atau kuning Tanin + + Terbentuk  warna  biru tua atau hijau kehitaman Saponin + + - - 1. Terbentuk busa 2. Cincin  hijau  atau biru  menunjukkan adanya saponin steroid Alkaloid + + Terbentuk endapan putih  pada  mayer  dan endapan  kuning  pada dragendroff Fenolik + + Terjadinya  warna  hijau, biru kehitaman Steroid + + Terbentuk  cincin  biru hijau
(Isliana et al., 2022) yang menunjukkan bahwa senyawa metabolit sekunder dalam ekstrak pelarut etanol lebih banyak dibandingkan pelarut etil asetat.
Pelarut etanol memiliki konstanta dielektrik sebesar 30 sedangkan  etil  asetat  sebesar  6,0.  Dengan  demikian dapat  dikatakan  bahwa  pelarut  etanol  lebih  polar dibanding  etil  asetat.  perinsip  ekstraksi  adalah  pelarut yang  sifatnya  polar  mempunyai  kemampuan  untuk menarik semua komponen senyawa yang bersifat polar (Sandy  Atisanto  et  al.,  2017).  Dari  penelitian  ini didapatkan  hasil  uji  fitokimia  ekstrak  dalam  pelarut etanol lebih banyak dibandingkan pelarut etil asetat hal ini  menunjukkan  bahwa  senyawa  aktif  dalam  daun papaya jepang bersifat polar.

## Uji Aktivitas Antioksidan

## Panjang Gelombang Maksimum Asam Askorbat
Pengujian aktivitas antioksidan  diawali  dengan mencari tahu terlebih dahulu Panjang gelombang maksimal asam askorbat, Pengujian Panjang Gelombang dilakukan untuk menentukan  Panjang  gelombang  senyawa  yang memberikan  absorbansi  maksimal  dan  memiliki  daya serap yang relatif konstan.
Gambar ll. Panjang Gelombang Asam Askorbat
Hasil  penentuan  panjang  gelombang  maksimum  asam askorbat  dilakukan  dengan  cara  membaca  serapan larutan  baku  standar  asam  askorbat  80  ppm  pada rentang  panjang  gelombang  500-800  nm  (Puspita  & Susilowati,  2021).  Hasil  Panjang  gelombang  yang diperoleh yaitu 695 nm.
Hasil Panjang gelombang yang didapatkan tidak berbeda jauh dari penelitian (Rahayu et al., 2021) dengan panjang gelombang  maksimal  698,2  nm  dan  pada  penelitian (Puspita & Susilowati, 2021) dimana panjang gelombang maksimal  676,6  nm.  Adanya  perbedaan  pada  hasil pengukuran  Panjang  gelombang  maksimal  dapat disebabkan  oleh  tingkat  kemurnian  dari  reagen  yang dipakai berbeda serta jenis spektroskopi yang digunakan juga berbeda.
Operating Time Asan Askorbat
penentuan operating  time bertujuan  untuk  mengetahui waktu  pengukuran  yang  stabil  ketika  sampel  bereaksi sempurna dan membentuk senyawa kompleks.
Gambar lll. Operating Time Asam Askorbat
Operating  time dilakukan  dengan  menggunakan  larutan baku  asam  askorbat  80  ppm  dengan  interval  waktu  5 menit dan dilakukan selama 60 menit. Hasil penentuan operating time diperoleh pada menit ke 50.
Konsentrasi Kurva Baku Asam Askorbat
Gambar IV. Kurva Baku Asam Askorbat
0,51 0,52 0,53 0,54 0 20 40 60 80 Ab so rb an si waktu Operating Time y = 0,0024x - 0,1066 R² = 0,9154 0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12 0,14 0 50 100 150 ab so rb an si konsentrasi asam askorbat
Baku  pembanding  yang  digunakan  dalam  pengujian  ini ialah asam askorbat karena asam askorbat merupakan antioksidan  sekunder  yang  memiliki  kemampuan menangkal  rfadikal  bebas  ekstraseluler.  Penentuan kurva baku Asam Askorbat dilakukan dengan mengukur absorbansi pada berbagai konsentrasi. Berdasarkan hasil yang diperoleh yaitu pengukuran dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 695 nm.
Hasil  konsentrasi  menunjukkan  berbanding  lurus dengan nilai  absorbansi yang  didapatkan yaitu semakin tinggi konsentrasi maka semakin tinggi nilai absorbansi yang  didapatkan.  Selanjutnya  persamaan  regresi  linear kurva  baku  Asam  Askorbat  yang  didapat  adalah  y  = 0,0024x - 0,1066 digunakan untuk menghitung kapasitas antioksidan  dalam  masing-masing  sampel  dimana  (y) menyatakan  nilai  absorbansi  dan  (x)  menyatakan kekuatan antioksidan yang dihasilkan. Pada Gambar III. Nilai  (r)  yang  diperoleh  mendekati  angka  1 menunjukkan bahwa persamaan regresi tersebut adalah linier,  sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  absorbansi  dan konsentrasi memiliki korelasi yang baik.

## Penentuan Kekuatan Antioksidan Daun Pepaya
Jepang
Tabel III. Penentuan  Kekuatan  Antioksidan  Daun
Pepaya Jepang Pelarut Ekstraksi Rata-rata Kekuatan Antioksidan (mgAAE/g) Etanol 96% 81,49 Etil Asaetat 131,33
Daya  reduksi  adalah  indikator  potensi  suatu  senyawa antioksidan,  dimana  senyawa  yang  mempunyai  daya reduksi  dapat  berperan  sebagai  antioksidan  karena dapat  menetralkan  radikal  dengan  mendonorkan elektron atau atom hidrogen sehingga senyawa radikal diubah  menjadi  lebih  stabil.    Nilai  FRAP  dinyatakan dalam mg equivalen asam askorbat/g ekstrak (AAE). AAE merupakan  acuan  umum  untuk  mengukur  sejumlah
vitamin C yang terdapat didalam  suatu bahan.Tabel III menunjukan  bahwa  hasil  pengukuran  absorbansi  dan nilai  aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun  papaya  jepang ( Cnidoscolus  aconitifolius )  pada  ekstrak  etanol  96%  dan ekstrak  etil  asetat  bertirut-turut  sebesar  81,49 mgAAE/g dan 131,33 mgAAE/g.
Metode  FRAP  berkerja  dengan  cara  mereduksi  Fe +3 menjadi Fe +2 dan membentuk senyawa kompleks dengan gugus OH seperti flavonoid, fenol dan lain-lain, dimana senyawa  yang  memiliki  kemampuan  penangkap  radikal umumnya  merupakan  pendonor  atom  OH,  sehingga atom OH tersebut dapat ditangkap oleh radikal (Fe +3 ) untuk  berubah  menjadi  (Fe +2 ).  Semakin  banyak  gugus OH  maka  semakin  banyak  pula  membentuk  ikatan kompleks  fero.  Hal  ini  sejalan  dengan  semakin  polar senyawa aktif pada ekstrak papaya jepang maka semakin kuat pula kekuatan aktivitas antioksidan.
Besarnya aktivitas antioksidan pada suatu tanaman dapat dipengaruhi karena perbedaan komponen senyawa aktif pada  bagian  tanaman  yang  digunakan,  letak  geografis tumbuhnya  tanaman,  factor  iklim  seperti  kelembapan, suhu dan udara, factor esensial seperti unsur hara tanah, air dan cahaya, serta metode pengujian dan pelarut yang digunakan mempengaruhi aktivitas antioksidan.
Tabel IV. Uji  independen  sample  t  test  antara ekstrak etanol 96% dan ekstrak etil asetat
Pengaruh  variasi  ekstrak  terhadap  kekuatan  aktivitas antioksidan dapat diketahui dengan menggunakan analisi statistik  menggunakan  uji  independent  sampel  t  test. Hasil uji independent sampel t test diperoleh nilai sig.(2- tailed) sebesar 0,001 yang menunjukan bahwa terdapar perbedaan yang signifikat dari hasil uji kekuatan aktivitas
Hasil Antioksidan Sig. (2-tailed) Keterangan Equal variances assumed 0,001 Memiliki perbedaan yang signifikan Equal variances not assumed 0,005
antioksidan  antara  ekstrak  etanol  96%  dan  ektrak  etil asetat daun papaya jepang ( Cnidoscolus aconitifolius ).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  papaya  jepang ( Cnidoscolus  aconitifolius )  positif  memiliki  senyawa metabolit  sekunder  golongan  flavonoid,  fenolik, saponin, tanin dan steroid. Kekuatan antioksidan  pada masing  masing  ekstrak  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  96%  dan  etil  asetat  berturut-turut  81,49 mgAAE/g  dan  131,33  mgAAE/g.  Pada  uji  independent sampel  t  test  menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan antara dua pelarut yang digunakan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Universitas Sari Mulia dan pihak-pihak yang turut serta membantu mulai  dari  mempersiapkan,  melaksanakan,  dan menyelesaikan penelitian ini.

## REFERENSI
Isliana, S., Elsyana, V., & Ulfa, A. M. 2022. Perbandingan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol dan Etil Asetat  Daun  Pepaya  Jepang  (Cnidoscolus aconitifolius  Johnst). Jurnal  of  Pharmacy Medika  and  Health  Scince , 3 (1),  35–46. https://journal.unsika.ac.id/index.php/pharma c/article/view/7241
Nastiti,  K.,  Noval,  N.,  &  Kurniawati,  D.  2021.  Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Infusa Daun Sirih  (Piper  betle  L),  Ekstrak  Etanolik Tanaman  Bundung  (Actinuscirpus  grossus) dan  Kulit  Jeruk  Nipis  (Citrus  aurantifolia): Antioxidant  Activity  Combination  of  Piper betle  Leaf  Infusion,  Ethanolic  Extract  of Bundung (Actinuscirpus grossus) and Citrus Fruit Peel of Citrus aurantifolia. Jurnal Surya Medika (JSM) , 7 (1), 115-122.
Noval, N., Kuncahyo, I., Pratama, A. F. S., Nabillah, S., & Hatmayana,  R.  2021.  Formulasi  Sediaan Tablet  Effervescent  dari  Ekstrak  Etanol Tanaman Bundung (Actionoscirpus grossus) sebagai Antioksidan: Formulation
Effervescent  Tablets  of  Bundung  Plants (Actinoscirpus grossus) Ethanol Extract as a Antioxidant. Jurnal Surya Medika (JSM) , 7 (1), 128-139.
Prasetya, A. G. ayan I., Putra, G. P. G., & Wrasiati, P. L. 2020.  Pengaruh  Jenis  Pelarut  dan  Waktu Maserasi  terhadap  Ekstrak  Kulit  Biji Kakao    (Theobroma  cacao  L.)  sebagai Sumber  Antioksidan. Jurnal  Rekayasa  Dan Manajemen  Agroindustri , 8 (1),  150–159. https://ojs.unud.ac.id/index.php/jtip/article/vi ew/57990/33905
Puspita,  A.  L.,  &  Susilowati,  S.  2021.  Aktivitas Antioksidan  Fraksi  Daun  Pegagan  (Centella asiatica  (L)  Urb.)  dengan  Metode  FRAP Antioxidant  Activity  of  Centella  asiatica  (L)
Urb. Leaves Fraction Using FRAP Method. In IJMS-Indonesian  Journal  On  Medical  Science (Vol. 8, Issue 2). https://garuda.kemdikbud.go.id/documents/ detail/2255038
Rahayu,  S.,  Vifta,  R.  L.,  &  Susilo,  J.  2021.  Uji  Aktivitas Antioksidan  ekstrak  etanol  bunga  telang (Clitoria  ternatea  L.)  dari  Kabupaten Lombok Utara dan Wonosobo Menggunakan Metode FRAP. Generics : Journal of Research in Pharmacy , 1 (2), 1–9. https://ejournal2.undip.ac.id/index.php/gener ics /article/view/9836
Rohama,  Melvi,  &  Noval.  2022.  Optimasi  Formulasi Sediaan  Tablet  Effervescentdari  Ekstrak Etanol Tanaman Kalangkala (Litsea angulata) Sebagai  Antioksidan  Mengguanakan  Metode SLD(Simplex  Lattice  Design). Jurnal  Surya Medika , 30–39. https://journal.umpr.ac.id/index.php/jsm/artic le/view/4496
Safitri, A., & Roosdiana, A. 2020. Biokimia  Bahan  Alam Analisis  Dan  Fungsi .  Media  Nusa  Creative Malang.
Sandy Atisanto, V., Mulyani, S., & Gst Ayu Lani Triani, I. 2017.  Pengaruh  jenis  pelarut  dan  suhu pengeringan  terhadap  karakteristik  ekstrak pada  buah  kelubi  (Eliodoxa  conferta). Jurnal Rekayasan Manajemen Agroindustri , 5 (3), 35– 44. https://erepo.unud.ac.id/id/eprint/17531/
Suleman,  I.  F.,  Sulistijowati,  R.,  Hamidah  Manteu,  S., Nento,  W.  R.,  Teknologi,  J.,  Perikanan,  H., Perikanan, F., & Kelautan, I. 2022. Identifikasi Senyawa  Saponin  dan  Antioksidan  Ekstrak Daun Lamun (Thalassia hemprichii). Jambura Fish Processing Journal , 4 (2), 94.
https://doi.org/10.37905/jfpj.v4i2.15213
Tahir, M., Cahya, A., & Widiastuti, H. 2016. Uji Aktivitas Antioksidan  Buah  Semangka  (Citrullus lanatus)  Dengan  Metode  FRAP. As-Syifaa ,
08 (01), 31–38.
https://jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php  /as- syifaa/article/view/155
Warnis,  M.,  Adelia  Aprilina,  L.,  &  Maryanti,  L.  2020. Pengaruh  suhu  pengeringan  simplisia  terhadap kadar  flavonoid  total  ekstrak  daun  kelor (Moringa oleifera L.) .
https://repository.poltekkespalembang.ac.id/ items/show/6497