DAYA ANTIBAKTERI FRAKSI ETANOL TEMU KUNCI ( Boesenbergia pandurata ) TERHADAP Salmonella typhi DAN Streptococcus hemolytic α non pneumoniae
ANTIBACTERICAL ACTIVITY OF ETHANOL FRACTION OF TEMU KUNCI ( Boesenbergia pandurata ) TO Salmonella typhi AND Streptococcus hemolytic α non pneumoniae
Mariska Sri Harlianti 1* , Kuswandi 2 , Susi Iravati 3
1 Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta
2 Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada
3 Fakultas Kedokteran, Universitas Gadjah Mada mariska.setyawan@yahoo.com

## ABSTRAK
Salah  satu tanaman  asli  Indonesia  yang  berkhasiat obat  adalah  temu  kunci  ( Boesenbergia pandurata ),  antara  lain  sebagai  batuk  kering  dan  diare.  Salmonella  typhi  merupakan  salah  satu kuman  penyebab  diare  yang  bersifat  Gram  negatif. Streptococcus  hemolytic α  non  pneumoniae merupakan  salah  satu  kuman  yang  bersifat  Gram  positif  dan  secara  normal  terdapat  di  daerah tenggorokan dan mulut yang dapat menyebabkan infeksi jika kondisi tubuh melemah. Oleh karena itu,  penelitian  ini  bertujuan  untuk  membandingkan  daya  antibakteri  fraksi  etanol  temu  kunci terhadap kedua kuman tersebut. Uji aktivitas antibakteri temu kunci yang dilakukan menggunakan metode  dilusi  padat  menunjukkan  bahwa  fraksi  etanol  temu  kunci  sedikit  lebih  poten  terhadap Salmonella  typhi  (dengan  KBM  2%)  dibandingkan  Streptococcus  hemolytic α  non  pneumoniae (dengan KBM 3%).
Kata  Kunci :  antibakteri,  KBM,  fraksi  etanol  temu  kunci  ( Boesenbergia  pandurata ), Salmonella typhi , Streptococcus hemolytic α non pneumoniae

## ABSTRACT
Temu  kunci  ( Boesenbergia  pandurata )  is  a  herritage  Indonesian  plant  to  cure  cough  and diarrhea. Salmonella typhi , a germ cause diarrhea, is a negative Gram. Streptococcus hemolytic α non pneumoniae is a positive Gram, normally found in throat and mouth can cause infection if the body  get  weak.  The  purpose  of  this  experiment  is  to  compare  the  antibacterial  effect  of  ethanol fraction  of  temu  kunci  on  both  germs.  The  activity  of  antibacterial  effect  of  temu  kunci  was evaluated  by  solid  dilution  method.  The  result  shows  that  ethanol  fraction  of  temu  kunci  is  little more potent to Salmonella typhi (KBM 2%) than Streptococcus hemolytic α non pneumoniae (KBM 3%).
Keywords :  antibacterial  effect,  KBM,  ethanol  fraction  of  temu  kunci  ( Boesenbergia  pandurata ), Salmonella typhi , Streptococcus hemolytic α non pneumonia

## LATAR BELAKANG
Penyakit diare masih menduduki rangking atas sebagai penyebab utama kesakitan  dan  kematian  pada  bayi  dan  anak kecil, terutama di negara berkembang. Menurut Sommers,  1994,  sekitar  750  orang  sakit  dan  5 juta  kematian  terjadi  karena  diare  setiap tahunnya,  terutama  pada  anak-anak.  Diare dapat  bersifat  akut  atau  kronik.  Diare  akibat infeksi  biasanya  akut  dan  disebabkan  oleh mikroorganisme yang menginvasi mukosa usus atau  organisme  non  invasif  yang  menimbulkan diare  dengan  cara  merangsang  sekreasi intestinal  atau  dengan  cara  mengganggu absorbsi  normal.  Mikroorganisme  penyebab diare  antara  lain  : Campylobacter  fetus  jejuni , Salmonella, Clostridium  difficile , Escherichia coli ,  Vibrio,  dan Giardia  lambia (Walsh,  1997).
Selain diare, infeksi saluran pernapasan bawah menggambarkan  penyebab  morbiditas  dan mortalitas  yang  terus  bertambah.  Penderita infeksi  saluran  pernapasan  bawah  biasanya datang  dengan  gejala  demam  dan  batuk. Penyebab  infeksi  saluran  pernapasan  bawah yang lazim meliputi : Streptococcus pneumoniae , Mycoplasma  pneumoniae dan Legionella spesies (Phair, 1994).
Adanya kecenderungan untuk kembali ke alam  ( back  to  nature ),  termasuk  juga  dalam bidang  pengobatan,  menuntut  kita  untuk melakukan  pengkajian  dan  penelitian  terhadap tanaman obat.
Salah  satu  tanaman  asli  Indonesia  yang berkhasiat obat adalah temu kunci ( Boesenbergia  pandurata ).  Kandungan  yang ada  dalam  rimpang  temu  kunci  antara  lain
adalah  minyak  atsiri  (sineol,  kamfer,  d-borneol, zingiberin,  d-pinen,  sesquiterpen),  kurkumin, zedoarin,  zat  pati  (Oswald,  1981),  damar (Sukarto, 1977), saponin dan flavonoid (Hutapea,  1991),  pinostrobin  dan  pinocembrin (Hertiani,  2007).  Rimpang  temu  kunci  juga memiliki  khasiat  sebagai  obat  batuk  kering, sariawan,  kurap,  cacingan  (Heyne,  1987)  dan antidiare (Sukarto, 1977).
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Hertiani (2007)  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol temu  kunci  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang lebih  besar  jika  dibandingkan  pinostrobin, pinocembrin  dan  minyak  atsirinya.  Ekstrak etanol  temu  kunci  juga  dapat  menghambat pertumbuhan
Streptococcus
mutans , Lactobacillus sp, Aggregatibacter ( Actinobacillus )
actinomycetemcomitans,
Candida  albicans (Taweechaisupapong,  2010) dan Saccharomyces  cerevisiae yang  diinduksi CaCl 2 (Boonkerd et  al .,  2011).  Aktivitas penghambatan sinyal Ca 2+ tersebut dimiliki oleh pinostrobin (Wangkangwan et al ., 2009).

## METODE
Alat: Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  seperangkat  alat  soxhelatasi,  neraca analitik,  ose,  inkubator,  mikroskop,  otoklaf, oven,  mikropipet,  dan  alat –  alat  gelas  yang lazim digunakan dalam penelitian Bahan: Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah temu kunci  yang diperoleh dari perkebunan BPTO Tawangmangu, kloroform, etanol 96%, media agar mac conkey dan  media  agar  darah,  suspensi  kuman Salmonella typhi dan Streptococcus hemolytic α non  pneumoniae 10 6 CFU/mL  dalam  media brain  heart  infusion (BHI)  dan  media mueller hinton (MH),  CMC  Na,  cat  gram  A,  gram  B, gram  C  dan  gram  D,  minyak  imersi  dan akuades.
Jalannya Penelitian

## Determinasi tanaman
Determinasi temu kunci dilakukan di laboratorium  farmakognosi  Fakultas  Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.

## Sterilisasi alat dan bahan
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  dalam  uji aktivitas  antibakteri  disterilkan  dengan  oven (pemanasan kering) pada suhu 170 ⁰ C selama 2 jam.  Media,  akuades,  CMC  Na,  blue  tip  dan yellow tip disterilkan dengan otoklaf (pemanasan  basah)  pada  suhu  121 ⁰ C  selama 15 menit.
Pembuatan fraksi etanol temu kunci 200  gram  serbuk  temu  kunci  dimasukkan  ke dalam  soxhlet  dan  disari  dengan  kloroform
hingga  warna  penyari  bening.  Ampas  serbuk diangin-anginkan  hingga  kering  dan  bau kloroform hilang. Serbuk disari kembali dengan etanol 96% hingga warna penyari bening. Hasil penyarian diuapkan hingga kental dan selanjutnya disebut dengan fraksi etanol.

## Pembuatan media
Media  BHI  dan  media  MH  dibuat  sesuai instruksi  yang  ada  di  kemasan,  yaitu  masing- masing  37  gram  dan  38  gram  untuk  tiap liternya.

## Pembuatan suspensi kuman
Satu mata ose kuman dari biakan media padat disuspensikan  dalam  media  BHI  kemudian diinkubasi  37 ⁰ C  selama  24  jam.  Diambil beberapa  μL  kemudian  disuspensikan  dalam media  BHI  hingga  didapatkan  kekeruhan  yang sama  dengan  standar  Brown  III  (konsentrasi kuman  10 8 CFU/mL).  Untuk  mendapatkan konsentrasi  kuman  10 6 CFU/mL,  100  μL suspensi  kuman  10 8 CFU/mL  disuspensikan dalam 10 mL media BHI.
Pembuatan  fraksi  etanol  temu  kunci  dalam berbagai konsentrasi
2,8  gram  fraksi  etanol  temu  kunci  dilarutkan dalam  20  mL  CMC  Na  1,25%  sehingga konsentrasi  yang  didapatkan  adalah  14% (sebagai  stok).  Seri  konsentrasi  yang  lain dibuat sesuai tabel 1.
Tabel  1- Pembuatan  fraksi  etanol  temu  kunci  dalam berbagai konsentrasi
Komposisi Seri Konsentrasi 1 2 3 4 5 Ekstrak (μL) 1000 750 500 250 125 Akuades (μL) - 250 500 750 875 Media MH (mL) 2,50 2,50 2,50 2,50 2,50 Konsentrasi  akhir (%) 4% 3% 2% 1% 0,5%

## Uji Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  adalah  dilusi  padat menggunakan  media  MH.  Komposisi  bahan dalam tabel 1 dimasukkan dalam tabung reaksi dan dipadatkan dengan keadaan miring hingga mengeras kemudian ditambahkan kuman dengan  konsentrasi  10 6 CFU/mL  sebanyak  25 μL  dan  diratakan  dengan  ose.  Setelah diinkubasi  pada  suhu  37 ⁰ C  selama  24  jam, diamati  ada  tidaknya  pertumbuhan  kuman. Pada  konsentrasi  fraksi  etanol  2%  tidak ditemukan pertumbuhan Salmonella typhi sehingga  KBM-nya  adalah  2%.  Sedangkan Streptococcus  hemolytic α  non  pneumoniae tidak tampak pertumbuhannya pada konsentrasi fraksi etanol 3% sehingga KBM-nya adalah 3%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  fraksi  etanol temu kunci ( Boesenbergia pandurata ) terhadap Salmonella typhi dan Streptococcus hemolytic α non pneumonia dapat dilihat pada table 2
Tabel  2- Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  fraksi  etanol  temu kunci  ( Boesenbergia pandurata )  terhadap Salmonella  typhi dan Streptococcus hemolytic α non pneumoniae
Seri Konsentrasi Ekstrak Pertumbuhan Kuman Salmonella typhi Streptococcus hemolytic α non pneumoniae 4% - - 3% - - 2% - + 1% + ++ 0,5% ++ +++
Kontrol (K) Pertumbuhan Kuman Salmonella typhi Streptococcus hemolytic α non pneumoniae K1 - - K2 - - K3 - - K4 +++++ +++++ K5 +++++ +++++ Ket : (-)   :   tidak ada pertumbuhan kuman (+)   :   ada pertumbuhan kuman K1  :  sisa pengenceran obat + media MH K2  :  akuades + media MH
K3  :  CMC Na 1,25% + media MH K4  :  akuades + media MH + kuman K5  :  CMC Na 1,25% + media MH + kuman

## PEMBAHASAN
Pertumbuhan  kuman  yang  terjadi  pada penelitian  ini  dapat  dipastikan  tidak  terjadi kontaminasi  karena  koloni  kuman  pada  kontrol (K4  dan  K5)  sama  dengan  koloni  kuman  pada tabung uji dengan  berbagai konsentrasi. Selain itu,  bahan  yang  digunakan  juga  terbebas  dari kontaminasi  karena  tidak  ada  pertumbuhan kuman  pada  kontrol  (K1,  K2  dan  K3).  Tidak adanya  pertumbuhan  kuman  pada  tabung  uji memang  disebabkan  oleh  fraksi  etanol  dengan konsentrasi tertentu.
Berdasarkan  tabel  2,  dapat  kita  ketahui bahwa  fraksi  etanol  temu  kunci  sedikit  lebih poten  terhadap Salmonella  typhi daripada Streptococcus hemolytic α  non  pneumoniae . Perbedaan  sifat  dari  kedua  kuman  tersebut diduga mempengaruhi penetrasi obat ke dalam sel kuman. Salmonella typhi yang bersifat Gram negatif  mempunyai  dinding  sel  dengan  lapisan
peptidoglikan  yang  lebih  tipis  dan  kadar  lipid yang  lebih  besar  dibandingkan Streptococcus hemolytic α  non  pneumoniae yang  bersifat Gram  positif.  Fraksi  etanol  temu  kunci  yang bersifat  semi  polar  lebih  mudah  menembus dinding sel
Salmonella typhi daripada Streptococcus hemolytic α  non  pneumoniae pada konsentrasi yang sama.
Kandungan  kimia  dalam  fraksi  etanol temu  kunci  belum  diketahui  secara  pasti sehingga mekanisme terjadinya aktivitas antibakteri  juga  belum  diketahui  secara  pasti. Menurut  Hutapea  (1991),  kandungan  kimia dalam  rimpang  temu  kunci  antara  lain  adalah saponin  dan  flavonoid.  Flavonoid  merupakan fenol  monosiklik  sederhana  terbesar  yang  ada dalam  tumbuhan  (Harborne,  1987).  Turunan fenol  berinteraksi  dengan  sel  bakteri  melalui mekanisme  adsorbsi,  yang  melibatkan  ikatan hidrogen  dengan  gugus  fenol.  Pada  kadar rendah  dapat  menyebabkan  presipitasi  serta denaturasi  protein  plasma  sedangkan  pada kadar  tinggi  dapat  menyebabkan  kebocoran dan kehilangan senyawa intraseluler (Siswandono dan Soekardjo, 1995).
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  fraksi etanol temu kunci mempunyai aktivitas antibakteri  terhadap Salmonella  typhi dan Streptococcus hemolytic α  non  pneumoniae tetapi  belum  diketahui  keamanannya  sehingga dapat  digunakan  sebagai  alternatif  pengobatan tradisional.

## KESIMPULAN
Daya  antibakteri  fraksi  etanol  temu  kunci  lebih besar  terhadap Salmonella  typhi dibandingkan Streptococcus hemolitik α non pneumoniae.

## SARAN
1.  Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  kandungan  kimia  dalam  fraksi etanol  temu  kunci  dan  mekanisme  aktivitas antibakterinya
2.  Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  uji  toksisitas  fraksi  etanol  temu kunci agar dapat dilanjutkan dengan formulasi
bentuk sediaannya jika memungkinkan

## DAFTAR PUSTAKA
Boonkerd,  S.,  Yompakdee,  C.,  Miyakawa,  T.,  2011,  Screening  of  Thai  Medicinal  Plants  for Inhibitors  of  Ca2+  Signaling  Using  A  Yeast  Cell  Growth-based  Assay, Research  Journal  of Pharmaceutical, Biological and Chemical Science , 2(2) : 549 – 557
Harborne,  J.B.,  1987, Metode  Fitokimia ,  Terbitan  Kedua,  diterjemahkan  oleh  Dr.  Kosasih Padmawinata dan Dr. Iwang Soediro, Penerbit ITB, Bandung, Hal : 70
Hertiani, T., Nihlati, I. A  dan Rohman,  A.,  2007, Daya Antioksidan  Ekstrak Etanol Rimpang Temu Kunci  [Boesenbergia  pandurata  (Roxb.)  Schlecth]  dengan  Metode  Penangkapan  Radikal  DPPH
(1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil), Skripsi ,  Bagian  Biologi  Farmasi  Fakultas  Farmasi  Universitas  Gadjah Mada, Yogyakarta
Heyne.  K.,  1987, Tumbuhan  Berguna  Indonesia ,  diterjemahkan  oleh  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, Hal : 594
Hutapea,  J.R.,  1991, Inventaris  Tanaman  Obat  Indonesia  I ,  Balitbangkes  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, Hal : 92 – 93
Oswald, T.T, 1981, Tumbuhan Obat Bagi Pecinta Alam , Penerbit Bhratara Karya Aksara, Jakarta, Hal : 115
Phair,  J.P.,  1994, Infeksi  Saluran  Pernapasan  Bawah  :  Pandangan  Umum dalam  Dasar  Biologis dan Klinik Penyakit Infeksi Edisi IV, diterjemahkan oleh A. Samik Wahab, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta, Hal : 174, 176
Siswandono dan Soekardjo, B., 1995, Kimia Medisinal , Airlangga University Press, Surabaya, Hal : 257
Sommers,  H.M  dan  Shulman,  S.T,  M.D.,  1994, Diare  Infeksiosa dalam  Dasar  Biologis  dan  Klinik Penyakit  Infeksi  Edisi  IV,  diterjemahkan  oleh  Prof.  Dr.  A.  Samik Wahab,  Gadjah  Mada  University Press, Yogyakarta, Hal : 298, 300
Sukarto,  1977, Materia  Medika  Indonesia ,  Jilid  I,  Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia, Jakarta, Hal : 18 – 23
Taweechaisupapong,  S.,  Singhara.  S.,  Lertsatitthanakorn.  P., et  al ,  2010,  Antimicrobial  Effects  of Boesenbergia Pandurata and Piper sarmentosum Leaf Extracts on Planktonic Cells and Biofilm of Oral Pathogens, Pak. J. Pharm. Sci ., Vol.23(2) : 224 – 231
Walsh,  D  dan  O’Shaughnessy,  C.,  1997, Diare dalam  Kapita  Selekta  Penyakit  dan  Terapi, diterjemahkan oleh dr. Caroline Wijaya, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, Hal : 99 – 101
Wangkangwan,  W.,  Boonkerd,  S.,  Chavasiri,  W., et  al ,  2009,  Pinostrobin  from  Boesenbergia pandurata  Is  An  Inhibitor  of  Ca2+  Signal-mediated  Cell-cycle  Regulation  in  The  Yeast Saccharomyces cerevisiae, Biosci. Biotechnol. Biochem , 73 (7) : 1679 - 1682