## UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK DARI TUMBUHAN TEMU PUTIH (Curcuma zedoaria) ASAL KABUPATEN OGAN KOMERING ULU
Apria Wilinda Sumantri AKADEMI KEPERAWATAN AL- MA’ARIF BATURAJA
Apria.wilinda@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Latar  belakang: Kanker  adalah  suatu  penyakit  yang  disebabkan  oleh  pertumbuhan  sel-sel jaringan  tubuh  yang  tidak  normal.  Pengobatan  kanker  selain  menggunakan  obat  kimia,  juga dapat  menggunakan  agen phytotherapeutic ,  yaitu  obat  herbal  standar  yang  terdiri  dari  bahan aktif  yang  berasal  dari  bagian  tanaman.  Beberapa  penelitian  mengatakan  bahwa  temu  putih ( Curcuma  zedoaria )  merupakan  salah  satu  tumbuhan  berkhasiat  yang  dapat  diolah  menjadi obat herbal. Kandungan senyawa kimia pada kunyit putih mengandung banyak manfaat seperti antikanker,  antifungal,  antiamebic,    larvasida,    antimikroba,    antioksidan,    antiplasmodial, antialergi,  dan  analgetik. Hasil: Hasil skrining fitokimia terhadap serbuk simplisia dan ekstrak etanol tumbuhan temu putih ( Curcuma zedoaria )   asal  Kabupaten OKU mengandung senyawa aktif  golongan  flavonoid,  tanin    dan    saponin.    Tumbuhan    sarang    semut  ini  memiliki  potensi aktivitas  sitotoksik  yang  tinggi  dengan  nilai  LC50    <  1000  ppm,  yaitu  dengan  nilai  LC50 sebesar  22,86    ppm   terhadap  ekstrak   etanol  temu  putih  ( Curcuma  zedoaria ). Kesimpulan: temu putih  mengandung  senyawa  kimia  kurkuminoid,  RIP  ( Ribosome  Inacting  Protein ), isocurcumenol, demothxycurcumin,  bisdemothxycurcumin, epicurzerenone, curdione , dan ethyl p-  methoxycinnamate yang  berfungsi  menonaktifkan  perkembangan  sel  kanker  dan menghambat  pertumbuhan sel kanker. Selain   itu,   kunyit   putih  juga  mengandung  senyawa kimia  seperti curzerenone,    zedoaron, minyak  atsiri, diferuloylmethan, flavonoid,  kurkumin, trimethoxyflavone,  tetramethoxyflavone, tetrahydrodemethoxycurcumin , dihydrocurcumin ,  dan polifenol yang bermanfaat secara farmakologis.

## Kata kunci: antikanker, antimikroba, Curcuma zedoaria, temu putih

## ABSTRACT
Bagkground:  Cancer  is  a  disease  caused  by  the  growth  of  body  tissue  cells  that  are  not normal.  Treatment  of  cancer  other than  using  chemical  drugs,  also  can  use  phytotherapeutic agent,  that  is  a  standard  herbal  consist  of  active  subtances  derived  from  plant  parts.  Some studies  suggest  that  white  turmeric  (Curcuma  zedoaria)  is  one  of  the  herbs  that  can  be processed  into  herbal  medicine.  Result: The  results  of  phytochemical  screening  for  simplicia powder and ethanol extract of Curcuma zedoaria from OKU Regency contain active compounds of flavonoids, tannins and saponins. This ant nest plant has a high potential for cytotoxic activity with  an  LC50  value  <1000  ppm,  ie  with  an  LC50  value  of  22.86  ppm  for  ethanol  extract  of Curcuma zedoaria. The chemical subtances on white turmeric contains a lot of benefits such as anticancer,  antifungal,  antiamebic,  larvicides,  antimicrobial,  antioxidant,  antiplasmodial,  hypo- allergenic,  and  analgesics.  Conclution:    that  white  turmeric  contains  chemical  subtances  like curcuminoid, RIP (Ribosome Inacting Protein), isocurcumenol, demothxycurcumin, bisdemothxycurcumin, epicurzerenone,  curdione,  and  ethyl  p-methoxycinnamate  which  serves to  disable  the  development  of  cancer  cells  and    inhibits    the  growth    of    cancer    cells.    In addition,  white  turmeric  also  contains  chemical  subtances  such  as curzerenone, zedoaron,
essential  oils,  diferuloylmethan,  flavonoids,  curcumin,  trimethoxyflavone,  tetramethoxyflavone, tetrahydrodemethoxycurcumin, dihydrocurcumin, and polyphenols as pharmacological benefits. Keywords: anticancer, antimicrobial, Curcuma zedoaria, white turmeric

## PENDAHULUAN
Kanker  adalah  suatu  penyakit  yang disebabkan      oleh      pertumbuhan  sel-sel jaringan    tubuh    yang    tidak  normal. Menurut  WHO  jumlah penderita kanker di dunia setiap tahun bertambah sekitar  tujuh juta    orang,  dan  dua  per  tiga  diantaranya berada  di  negara        berkembang 1 . Di Indonesia diperkirakan terdapat 100
penderita kanker baru per 100.000 penduduk  dan  terus  melonjak  setiap tahunnya. Penderita kanker serviks ditemukan  tidak    kurang      dari      15.000 kasus    per  tahun    dan    kanker    payudara tidak  kurang    dari    7.000    kasus    per tahun. 2 Kanker  merupakan  penyebab kematian  nomor  7  (5,7%)  setelah  stroke, TB, hipertensi, cedera, perinatal, dan DM. 3
Pengobatan
kanker selain menggunakan  obat  kimia,  juga  dapat menggunakan agen phytotherapeutic , yaitu obat  herbal  standar  yang  terdiri  dari  satu bahan aktif atau campuran kompleks yang berasal  dari  berbagai  bagian  tanaman. Pengobatan herbal ini sudah dikenal sejak lama dan dibudidayakan secara tradisional di  negara –negara    Asia    seperti  China dan  Jepang.  Selama  dekade  terakhir, minat  penggunaan  obat  herbal  meningkat drastis  di  Indonesia,  mengingat  Indonesia memiliki  banyak  keanekaragaman    hayati yang  kandungan  zat  alaminya  dapat dimanfaatkan. 4,5
Salah  satu  tumbuhan  yang  diduga memiliki  zat  antikanker  adalah temu putih ( Curcuma zedoaria ). Kunyit putih merupakan  tanaman  semusim  dengan karakteristik daun berbentuk bundar berwarna  hijau  muda,  bunga  tumbuh bergerombol  di  atas  batang  semu  setinggi 30 –70 cm,  akarnya berdaging membentuk umbi seukuran telur puyuh, rimpang kunyit putih  tumbuh  pendek,  berwarna  pucat, banyak     serat,     berbau     khas,     dan memiliki rasa pahit. 6
Tanaman    herbal  ini  mengandung senyawa kimia seperti kurkuminoid, minyak atsiri,  astringensia,  flavonoid, sulfur,  gum,  resin,  tepung,  sedikit  lemak. 7
Selain itu Curcuma
zedoaria
mengandung alkaloid,    phenol,    saponin, glikosida, steroid, terpenoid, dan kandungan lain yang diduga dapat digunakan sebagai antimikroba, antifungal, antikanker,  antialergi,  antioksidan,  dan analgesic. 7,8 Di China dan Jepang, tanaman  ini  digunakan        secara tradisional untuk  mengatasi  perut kembung,  batuk,  ganggguan  menstruasi, dispepsia, penghangat tubuh, demam, dan muntah. Sedangkan bagian rimpang dapat digunakan  sebagai  ekspektoran,  penawar rasa sakit, dan diuretic. 7,9
Penelitian yang dilakukan oleh Syu et al menunjukkan  bahwa Curcuma  zedoaria memiliki  banyak  kandungan  senyawa, seperti kurkuminoid, flavonoid, bisdemothxycurcumin , demothxycurcumin , dan ethyl  p-  methoxycinnamate yang diantaranya berfungsi sebagai zat antikanker. 10,11,28
Kandungan senyawa yang dihasilkan pada              ekstrak  ethanol Curcuma zedoaria dapat  menghambat pertumbuhan sel  OVCAR-3  (human  ovarian  cancer) 11 , murine sarcoma 28 , metaplasia sel fibroblas NIH  3T3,  sel  kanker  kolon  HCT-15  dan HT-29 30 ,  keganasan  sel  embrional  ginjal (HEK293) 14 ,  sel  hepatoselular  karsinoma dan sel Hep-2. 11
Selain itu, penelitian lain menyebutkan  bahwa    ekstrak  sederhana dari Curcuma  zedoaria yang  diberikan secara  oral    dan  intraperitoneal  dapat menurunkan jumlah sel tumor, menurunkan  progresifisitas    pertumbuhan tumor,  dan  dapat  digunakan  sebagai immunomodulator pada tikus yang diinduksi  oleh  sel  melanoma  B16F10 murine. 28
Tulisan  ini  merupakan review dari berbagai  sumber  jurnal  dan  penelitian terbaru    yang  relevan,  dengan  tujuan untuk mengetahui manfaat dari kandungan zat  yang  terdapat  dalam  kunyit  putih terutama sebagai zat antikanker.

## METODE PENELITIAN
Bahan yang diperlukan dalam penelitian  ini adalah  tumbuhan  temu putih ( Curcuma  zedoaria )    asal  Kabupaten Merauke.    Hewan     uji     yang digunakan untuk          pengujian          aktivitas  sitotoksik dengan  metode  BSLT  adalah  larva  udang A.  salina, sedangkan  untuk  medium pemeliharaan A.  salina digunakan    air laut.
Hasil  uji  BSLT  sering  digunakan sebagai uji pendahuluan/ praskrining aktivitas  bio-logis  yang      sederhana  untuk menentukan  toksisitas    suatu    senyawa atau  ekstrak dengan menggunakan hewan coba  larva  udang    ( A.    salina ).    Korelasi antara    uji  toksisitas  akut  ini  dengan  uji sitotoksik adalah  jika  mortalitas  terhadap A.    salina yang    ditimbulkan    memiliki harga    LC50        <  1000 μg/mL  (ppm).
Kematian A.  salina digunakan  sebagai parameter  untuk  menunjukkan  adanya kandungan zat aktif tanaman  yang bersifat sitotoksik.
Metode ini juga sering dikorelasikan dengan potensi ekstrak sebagai  antikanker.  Salah  satu  organisme yang  sangat  sesuai  sebagai  hewan  uji untuk  mengetahui  bioaktivitas  senyawa melalui  uji  sitotoksik  adalah brine  shrimp (udang  laut)  dari  jenis A. salina . Beberapa kelebihan  dari  uji bioaktivitas dengan brine shrimp  lethallity  test (BSLT)  menggunakan larva  udang A.  salina adalah  cepat  waktu ujinya, mudah, tidak memerlukan peralatan khusus,  sederhana  (tanpa  teknik  aseptik), murah  (tidak  perlu  serum  hewan),  jumlah organisme  banyak,  memenuhi  kebutuhan validasi  statistik  dengan  sedikit  sampel, hasilnya representatif dan dapat dipercaya. Hasil    uji  BSLT    ( Brine  Shrimp  Lethality Test )  juga  diketahui  merupakan  suatu
metode penapisan untuk penyarian senyawa  antikanker  dari  tanaman.  Artinya adalah,  bahwa  semakin  tinggi  tingkat toksisitas  metabolit  sekunder  tanaman secara  BSLT,  yang  diwakili  dengan  nilai LC50  yang  semakin  kecil,  maka  semakin potensial tanaman tersebut untuk digunakan  dalam  pengobatan  antikanker (Meyer et al ., 1982).
Untuk  pelarut  ekstrak  digunakan DMSO  1%.  Kelarutan  ekstrak  dengan  air laut  sering  menimbulkan  masalah  karena adanya  perbedaan  tingkat  kepolaran, ekstrak  sukar  larut  dengan  air  laut sehingga digunakan DMSO untuk membantu melarutkannya. DMSO
digunakan sebagai surfaktan karena ekstrak  tidak  dapat  larut  dalam
Tumbuhan temu putih         ---- ( Curcuma zedoaria )
Serbuk Simpliasi      ----
Ekstraksi (Maserasi) 3x24 jam
Ekstrak Cair Etanol Diupakan Ekstrak Kental Etanol ---- ( Curcuma zedoaria )
Nilai LC 50
Gambar 1. Diagram alir metode penelitian air laut.
Surfaktan merupakan senyawa yang memiliki  ujung  hidrofilik  dan  hidrofobik sehingga dapat melarutkan ekstrak
Pengamatan makroskopis Skrining Fitokomia, Pengamatan Mikroskopis,
Organoleptoik
Skrining Fitokomia, Uji Aktivitas Sitotoksin (BSLT)
dengan  air  laut  dengan  cara  menurunkan tegangan permukaan. Penggunaan DMSO 1  %  sebanyak  1-2  tetes  (50-10 0  μL) berfungsi  untuk  membantu  kelarutan. Dimetilsulfoksida (DMSO) merupakan cairan  tak  berwarna  yang  memiliki  rumus (CH3)2SO  merupakan  pelarut  yang  dapat melarutkan  senyawa  polar  maupun  non polar.
Larutan  ekstrak  etanol  umbi  sarang semut  dibuat  dengan  konsentrasi  25,  50, 75, dan 100 ppm serta sebagai pengontrolnya  yaitu  0  ppm  yaitu  hanya pelarutnya  tanpa  penambahan  ekstrak. Larutan kontrol berfungsi untuk menghilangkan pengaruh lain diluar ekstrak uji  yang  dapat  menyebabkan  kematian Larva A. salina . Pada kontrol negatif hanya digunakan  pelarut  etanol  untuk  melihat pengaruh  pelarut  terhadap  larva  udang. Larva udang tidak ada yang mati disebabkan  pelarut  etanol  telah  diuapkan seluruhnya  sehingga  dalam  penelitian  ini murni pengaruh dari ekstrak tanpa dipengaruhi  oleh  pelarut.  Sepuluh  ekor larva  udang A.  salina digunakan  sebagai hewan uji sitotoksik dalam setiap konsentrasi masing-masing ekstrak.
Perlakuan  uji  sitotoksik  ini  dilakukan sebanyak  3  kali  pengulangan/replikasi (triplo)  untuk  men-  dapatkan  keakuratan data  dan  data  yang didapat baik, sehingga dapat  dihitung  secara  statistik  dari  data yang  diperoleh.  Jika  dilakukan  simplo mungkin  bisa  terjadi  kesalahan  dan  tidak ada data lain yang dapat dipakai.
Pengujian  aktivitas  sitotoksik  pada penelitian  ini  menggunakan  air  laut  alami sebagai  media  uji.  Air  laut  yang  digunakan adalah  air  laut  yang  berasal  dari  pantai Amay  (Depapre)  dengan  kadar  pH    yang baik  untuk  pertumbuhan  yakni mendekati 8  setelah  diukur  menggunakan  indikator pH.  Penelitian  ini  menggunakan  150 ekor larva uji A. salina . Rata-rata kematian larva udang  untuk  masing-masing  kelompok perlakuan  diperoleh  dengan  menghitung total  jumlah  kematian  setiap  kelompok perlakuan sebanyak  3 replikasi dan kemudian  membaginya  dengan  jumlah replikasi.
Bahan  kimia  yang  digunakan  untuk skrining fitokimia  adalah Amil Alkohol,  Besi (III) Klorida, HCl, H2SO4,  pereaksi Dragendorff,  Mayer,  pereaksi  Steasny, Natrium  Hidroksida,  pereaksi  Lieber  mann- Burchard,   serbuk   Magnesium,   telur A. salina . Hasil skrining fitokimia ekstrak temu putih  ( Curcuma  zedoaria )    dapat  dijadikan acuan  studi  awal    untuk    mencari    dan menemukan lead  compound (senyawa penuntun/senyawa      aktif)  yang  akan dipakai  sebagai  bahan  obat.  Skrining fitokimia dilakukan terhadap serbuk simplisia  dan  ekstrak  untuk  menguji kandungan  senyawa  golongan  alkaloid, triterpenoid/steroid, flavonoid, kuinon, saponin  dan  tanin.  Metode  ekstraksi menggunakan cara maserasi
(perendaman)  dengan  etanol  96%  selama 3x24 jam (Gambar 2).

## PEMBAHASAN
Skrining  fitokimia  serbuk  simplisia temu  putih  ( Curcuma  zedoaria )      dilakukan untuk    mengetahui  kandungan  secara kualitatif  senyawa  metabolit  sekunder  yang terkandung  dalam  sarang  semut.  Data  ini dapat  dijadikan  acuan  studi  awal  untuk mencari  dan  menemukan lead  compound (senyawa  penuntun/senyawa  aktif)  yang akan dipakai sebagai bahan obat.
Skrining   Fitokimia    Serbuk   Simplisia temu putih (Curcuma zedoaria)
Hasil      skrining      fitokimia      serbuk simplisia  temu  putih  ( Curcuma  zedoaria ) menunjukkan bahwa simplisia sarang semut mengandung  senyawa  metabolit    sekunder flavonoid    dalam    jumlah  banyak  dan saponin  serta  tanin  dalam  jumlah  sedang (Tabel 1).
Kandungan    senyawa    metabolit sekunder  yang  lainnya  bukan  berarti  tidak
ada,  karena  bila  dilakukan    isolasi    dan pemurnian   terhadap senyawa  murni  bukan tidak  mungkin  dijumpai  senyawa  dari kelompok  senyawa  lain  yang  tidak  tampak pada  uji  pendahuluan  fitokimia.  Seperti
yang  dilaporkan  oleh  Robinson  (1991), flavonoid  tertentu  mengandung  komponen aktif  untuk  mengobati  gangguan  fungsi  hati dan  kemungkinan  sebagai  antimikroba  dan antivirus.
Tabel 1.
Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia temu putih (Curcuma zedoaria)
Golongan Senyawa Hasil Skrining Keterangan Alkaloid - Flavonoid +++ (+) = Sedikit Saponin ++ (++) = Sedang Kuinon - (+++) = Banyak Tanin ++ (-) = Tidak terdeteksi Steroid/Triterpenoid - Tabel 2. Hasil skrining fitokimia ekstrak simplisia  temu putih (Curcuma zedoaria) Golongan Senyawa Hasil Skrining Keterangan Alkaloid - Flavonoid +++ (+) = Sedikit Saponin ++ (++) = Sedang Kuinon - (+++) = Banyak Tanin ++ (-) = Tidak terdeteksi Steroid/Triterpenoid - Tabel 3. Pengaruh ekstrak etanol temu putih (Curcuma zedoaria) terhadap kematian larva A. salina Perlakuan Konsentrasi Ekstrak (ppm) Ju mlah kematian larva A. salina % Kematian R1 R2 R3 Rerata P1 25 5 5 6 5,33 53,3 P2 50 6 7 7 6,67 66,70 P3 75 7 8 7 7,33 73,30 P4 100 9 8 8 8,33 83,33 K 0 0 0 0 0 0 Tabel 4.
Hasil uji BSLT ekstrak etanol temu putih (Curcuma zedoaria)
Konsentrasi (ppm) Log konsentrasi % kematian Angka probit Persamaan garis LC50 (ppm) 25 1,4 53 5,08 Y=1,328X+3,195 R2  = 0,943 22,86 50 1,7 67 5,44 75 1,9 73 5,61 100 2,0 83 5,95
Ket.:  Y=  Persentase  respon  kematian  dalam  satuan  probit,  X  =  Log-konsentrasi  ekstrak  etanol temu putih ( Curcuma zedoaria ), R2  = Nilai koefisien determinasi
Senyawa saponin menyebabkan
apoptosis  pada  sel-sel  kanker  karena senyawa  ini  memberikan  agen  antikanker (Sharma & Paliwal,2013).  Selain  itu senyawa  aktif  saponin  dapat  menurunkan tegangan permukaan selaput saluran pencernaan  sehingga  dinding  saluran pencernaan  menjadi  rusak  (Sashi  & Ashoke, 1991), sedangkan saponin tertentu dapat  digunakan  sebagai  bahan  baku untuk sintesis hormon steroid (Robinson, 1991).
Skrining  Fitokimia  Ekstrak  temu  putih (Curcuma zedoaria)
Hasil  skrining  fitokimia  ekstrak  temu putih  ( Curcuma  zedoaria )    menunjukkan bahwa ekstrak mengandung senyawa metabolit  sekunder  flavonoid  dalam  jumlah banyak  dan  tanin  dalam  jumlah  sedang, serta  saponin  dalam  jumlah  yang  sedikit (Tabel 2).
Hasil  ini  menunjukkan  ada  sedikit perbedaan  dari  penelitian  (Frengki et  al. , 2014)  terhadap  senyawa  aktif  metabolit sekunder  temu  putih  ( Curcuma  zedoaria ) yang berhasil mengidentifikasi adanya senyawa  aktif  golongan  triterpenoid  dan steroid. Pada temu putih ( Curcuma zedoaria )    tidak  berhasil  diidentifikasi adanya senyawa golongan triterpenoid   dan steroid.      Hal      ini      disebabkan  karena perbedaan  jenis  (spesies)  kedua  tanaman. Letak  tumbuh  dan  perbedaan  iklim  tumbuh akan  sangat  memengaruhi  komposisi  dan kadar senyawa   aktif   yang   dimiliki   oleh tumbuhan dalam marga yang sama.
Hasil  skrining  fitokimia  menunjukkan bahwa  serbuk    simplisia    ataupun    ekstrak temu putih ( Curcuma zedoaria ) mengandung  senyawa  flavonoid  dan  tanin yang    diketahui    berfungsi    sebagai antioksidan,  sehingga  sangat  baik  untuk pen-  cegahan    penyakit    kanker.    Menurut (Middleton, 2000),  efek  konsumsi  flavonoid antara    lain    anti-  inflamasi,  anti-alergi, antimikroba,  hepatoprotek-  tif,  antivirus, antitrombotik, kardioprotektif, penguatan
kapiler,  efek  antidiabetes,  anti  kanker  dan antineoplastik, dan lain-lain.
Robinson    (1991)    menyatakan flavonoid  tertentu  mengandung  komponen aktif  untuk  mengobati  gangguan  fungsi  hati dan ke- mungkinan sebagai antimikroba dan antivirus.  Mekanisme  flavonoid  sebagai antikanker  ada  beberapa    teori.    Pertama, flavonoid    sebagai  oksidan    yakni    melalui mekanisme  pengaktifan jalur  apoptosis  sel kanker.  Mekanisme  apoptosis  sel  pada teori ini merupakan akibat fragmentasi DNA. Fragmentasi  ini  diawali  dengan  dilepasnya rantai      proksimal      DNA      oleh      senyawa oksigen  reaktif  seperti  radikal  hidroksil. Senyawa  ini  terbentuk  dari  reaksi  redoks Cu(II).  Senyawa  tembaga  ini  dimobilisasi oleh  flavonoid  baik  dari  ekstra      sel maupun      intra      sel      terutama      dari kromatin. Kedua, flavonoid sebagai penghambat  proliferasi  tumor/kanker  yang salah  satunya  dengan  menginhibisi  aktivitas protein  kinase  sehingga  menghambat  jalur tranduksi sinyal dari membran sel ke inti sel. Ketiga, dengan menghambat aktivitas reseptor  tirosin  kinase.  Karena  aktivitas reseptor tirosin  kinase yang  meningkat berperan dalam pertumbuhan keganasan.
Pada  penelitian skrining  fitokimia spesies tanaman sarang semut lainnya juga dilaporkan  memiliki    kandungan    senyawa aktif    yang    tidak  jauh  berbeda  yaitu  seperti ekstrak  air  spesies M.  pendens diketahui mengandung  senyawa  golongan  tanin  dan flavonoid (Soeksmanto et al. , 2010) sedangkan  ekstrak  air  spesies M.  tuberosa mengandung  senyawa  golongan  flavonoid dan antosianidin (Hertiani et al. , 2010).
Uji Aktivitas Sitotoksik Metode BSLT Hasil pengamatan menunjukkan bahwa  tingkat  mortalitas/kematian  larva A. salina pada berbagai konsentrasi perlakuan  ekstrak  etanol  temu  putih ( Curcuma  zedoaria )    dan  nilai  LC50  dari hasil  uji  BSLT  mempunyai  nilai  rata-rata jumlah kematian   dan   persen   kematian yang   berbeda (Tabel 3).
Berdasarkan  hasil  pengujian  BSLT (Tabel  3)  dapat  diketahui  bahwa  berbagai konsentrasi  ekstrak  etanol  temu  putih ( Curcuma zedoaria ) memperlihatkan pengaruh yang berbeda terhadap kematian larva A.  salina .  Untuk  mempermudah pengamatan  tentang  pengaruh  berbagai konsentrasi ekstrak etanol terhadap persentase  kematian  larva A.  salina dapat dilihat  pada  grafik  hubungan      antara konsentrasi      ekstrak      sarang  semut dengan tingkat mortalitas A. salina (Gambar 3).
Perlakuan pada konsentrasi 100 ppm menyebabkan  rata-rata  kematian  larva tertinggi,  sedangkan  pada  konsentrasi  25 ppm me- nyebabkan   rata-rata   kematian larva      terendah.  Pada    kelompok    kontrol tidak    didapatkan  kematian  larva.  Hal  ini menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak menyebabkan semakin tinggi   jumlah   kematian   larva.   Metode
BSLT  dilakukan  dengan  cara  pemaparan larutan  ekstrak  senyawa  yang  diuji  kepada larva A. salina . Dengan   kata   lain,   larutan ekstrak      senyawa  tersebut  harus  larut sempurna dalam media hidup larva A. salina yaitu  air  laut,  sehingga  konsentrasi  sampel yang  diperoleh  menggambarkan  konsen- trasi sampel yang sebenarnya.
Total  kematian  diperoleh  dengan menjumlah- kan larva yang mati pada setiap konsentrasi. Kemudian  dihitung  persentase kematian    larva  dari    rata-rata    kematian pada    tiap    konsentrasi.  Data  kemudian dianalisis  dengan menggunakan persamaan regresi linear dengan melakukan transformasi  data  konsentrasi  ke  bentuk logaritma  serta  mengubah  nilai  persen kematian larva kedalam satuan probit (Tabel 4).
Berdasarkan  analisis  regresi  linier antara  log  konsentrasi  dan  nilai  probit  larva udang  akan  diketahui  nilai  LC50  dari ekstrak  temu  putih  ( Curcuma  zedoaria ) (Gambar  4).  Hasil  analisis  yang  dilakukan menunjukkan  bahwa  terdapat  hubungan yang  kuat  antara   log  konsentrasi dengan
nilai    probit  larva    udang.  Nilai  koefisien determinasi  (R²)  dari  persamaan  regresi yang  dihasilkan  adalah  0,943.  Hal  itu menunjukkan  bahwa  lebih  dari  90%  variasi tingkat  nilai  probit  larva  udang  dapat diterangkan  dengan  adanya  perubahan  log konsentrasi.
Pengujian  terhadap  ekstrak  etanol temu  putih  ( Curcuma  zedoaria )  dilakukan dengan  memasukkan  Nilai  log  konsentrasi dan nilai probit pada grafik linear menggunakan program Microsoft excel 2007 sehingga  diperoleh  hasil  pengolahan  data persamaan  regresi    Y    =1,328x+3,195 dengan    R²    =0,943.  Nilai    Y    tersebut digunakan    untuk    mencari  nilai  LC50. Dengan  memasukkan  nilai  Y  =  5,  maka akan  diperoleh  nilai  X  =  1,359.  Untuk menghitung nilai LC50 yaitu didapatkan dari Antilog  X.  Hasil  LC50  yang  diperoleh  yaitu sebesar 22,86 ppm.
Menurut Geran et al. (1972) Suatu zat dikatakan  aktif  atau  toksik  bila  nilai  LC50 kurang dari 20 μg/mL, sedangkan menurut  Doyle et    al. (2000)    suatu ekstrak    dikatakan  aktif  jika  LC50  kurang dari 1000
μg/mL. LC 50 ( Lethal Concentration 50)  merupakan  konsentrasi zat  yang  menyebabkan  terjadinya  kematian pada 50  %  hewan  percobaan  yaitu  larva A. salina .  Berdasarkan nilai LC50  yang diperoleh  dapat  dikatakan  ekstrak  etanol temu  putih  ( Curcuma  zedoaria )    pada percobaan    ini    bersifat    toksik  terhadap A. salina sehingga  memiliki  aktivitas  sitotoksik yang  tinggi  menurut  metode  BSLT  yaitu pada    perlakuan    dengan    hewan    coba larva A.  salina .  Penelitian  Meyer et  al. (1982)  juga  melaporkan  bahwa  suatu ekstrak  menunjukkan  aktivitas      ketoksikan dalam      BSLT      jika      ekstrak  dapat menyebabkan    kematian    50%    hewan    uji pada  konsentrasi  kurang  dari  1000  ppm. Nilai  LC50    dari  ekstrak  etanol  lebih  kecil dari  1000  ppm menunjukkan bahwa ekstrak tersebut mempunyai potensi aktivitas sitotoksik  yang  dapat  di-  kembangkan sebagai antikanker.
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol temu putih ( Curcuma zedoaria )  mempunyai  aktivitas  stotoksik yang  sangat  tinggi.  Hal  tersebut  berkaitan dengan senyawa  yang terdapat  dalam umbi sarang  semut  yaitu  flavonoid,  tanin,  dan saponin dimana pada kadar tertentu memiliki aktivitas sitotoksik yang tinggi serta dapat  menyebabkan  kematian  larva A. salina . Berdasarkan hasil uji golongan senyawa  atau  skrining  fitokimia  terhadap ekstrak kental temu putih ( Curcuma zedoaria ),  bahan  aktif  yang  menjadi pusat perhatian  adalah  senyawa  flavonoid,  tanin dan  saponin  karena  banyak  senyawa tersebut  dari  bahan  alam  memiliki  khasiat sebagai senyawa toksik. Mekanisme kematian  larva  diperkirakan  berhubungan dengan  fungsi  senyawa  flavonoid  yang menghambat  daya  makan  larva  ( anti- feedant pengelak  makanan).  Cara  kerja senyawa-  senyawa    tersebut    adalah dengan bertindak sebagai stomach poisoning atau racun perut. Oleh karena itu, bila  senyawa-senyawa  ini  masuk  ke  dalam tubuh  larva,  alat  pencernaannya  akan terganggu. Selain itu, senyawa ini menghambat  reseptor  perasa  pada  daerah mulut  larva.  Hal  ini  mengakibatkan  larva gagal  mendapatkan  stimulus  rasa  sehingga tidak mampu mengenali makanannya sehingga  larva  mati  kelaparan  (Rita,  2008; Cahyadi, 2009).
Fase  pertumbuhan  larva  udang  yang digunakan   dalam   penelitian   ini   adalah fase nauplius karena  pada  saat  itu Artemia berada  pada  fase  yang  paling  aktif membelah  secara  mitosis  yang  identik dengan  sel  kanker  yang  juga  membelah secara  mitosis.  Hal  ini  menyebabkan  uji BSLT ini sering digunakan sebagai penelitian pendahuluan dari aktivitas antikanker. Aktivitas sitotoksik adalah aktivitas yang dapat menyebab- kan kematian  pada  sel  (Rang et  al .,  2003). Salah satu mekanisme kerja obat antikanker juga  bersifat  sitotoksik  yaitu  dengan  cara
menghambat pertumbuhan sel yang akhirnya menyebabkan kematian pada sel.
Pada  penelitian  uji  aktivitas  sitotoksik ekstrak  temu  putih  ( Curcuma  zedoaria )  ini menggunakan  hewan  uji A.  salina ,  dimana penentuan  nilai  LC50 dilakukan  pada  tahap perkembangan nauplius . Menurut Sorgeloos et al . (1978), pada perkembangan nauplius A.      salina lebih      sensitif      terhadap senyawa  toksik.  Jalur  pemaparan  senyawa toksik ekstrak sarang semut pada hewan uji A.  Salina dimulai  melalui  oral  dan  bagian dermal.  Pada  bagian  mulut  senyawa  toksik ini  diabsorbsi  masuk  ke  dalam  saluran pencernaan, sedangkan pada bagian dermal,  terjadi  proses  absorbsi  melalui membran  sel.  Setelah  proses  absorbsi dilanjutkan dengan proses distribusi senyawa  toksik  ke  dalam  tubuh A.  salina , dan  terjadi  proses  reaksi  metabolisme. Struktur    anatomi    tubuh A.    salina pada tahap nauplius masih  sangat  sederhana, yaitu terdiri dari lapisan kulit, mulut, anthena, saluran  pencernaan    atau    digesti    yang masih    sederhana,  dan  calon  thoracopoda (Raineri et al. , 1981).
Senyawa  toksik  yang  masuk  ke dalam tubuh A.  salina menyebabkan perubahan  konsentrasi  di dalam dan  di  luar sel.  Setelah  senyawa  toksik  ini  masuk secara oral dan dermal, kemudian terabsorbsi masuk ke dalam jaringan  tubuh, dan pada akhirnya menyerang ke dalam sel, terjadi kerusakan fungsional dan metabolisme    sel A.  salina .  Efek  yang ditimbulkan  terjadi  secara  cepat  dalam waktu  24  jam,  hingga  menyebabkan  50% kematian A. salina .
Hasil  uji  BSLT  menunjukkan  bahwa ekstrak tumbuhan bersifat toksik maka dapat dikembangkan  ke  penelitian  lebih  lanjut untuk mengisolasi senyawa sitotoksik tumbuhan  sebagai  usaha  pengembangan obat alternatif antikanker. Pengujian terhadap  ekstrak  etanol  umbi  sarang  semut menunjukkan    harga    LC50        sebesar 22,86  ppm,  sehingga  dapat  dikatakan ekstrak etanol umbi  sarang  semut  memiliki aktivitas    sitotoksik  yang  sangat  tinggi  atau
memliki  potensi  toksisitas  terhadap A. salina. Menurut  metode  BSLT  karena memiliki  LC50    kurang  dari  1000  ppm  dan berkolerasi positif sebagai antikanker. Sesuai penelitian terdahulu yang menyatakan  bahwa  apabila  suatu  ekstrak tanaman  bersifat  toksik  menurut  harga LC50    dengan  metode  BSLT,  maka tanaman  tersebut  dapat  dikembangkan sebagai  obat  anti  kanker  dan  dapat dilanjutkan  penelitiannya    sebagai    obat antikanker  di  masa yang akan datang.
Kandungan  senyawa  yang  berpotensi dalam  ektrak  tanaman  ini  dapat  diketahui berdasarkan hasil uji fitokimia/uji kandungan    senyawa  ekstrak.  Hasil  uji kandungan senyawa ekstrak dengan skrining  fitokimia  atau  dengan  reagen menunjukkan  pada  ekstrak  etanol  temu putih ( Curcuma  zedoaria ) terdapat  senyawa flavonoid,  saponin  dan  tanin  yang  diduga berpotensi  sitotoksik  namun  perlu  dilakukan uji lebih lanjut.
Pengujian   terhadap   ekstrak   etanol temu putih ( Curcuma
zedoaria ) menunjukkan  harga  LC50  sebesar  22,86 ppm,  yang  artinya  pada  konsentrasi  22,86 ppm  ekstrak  etanol  temu  putih  ( Curcuma zedoaria )    sudah    mampu    menyebabkan kematian  50%  larva  udang A. salina Leach, sedangkan  pada penelitian  yang  sudah ada mengenai  uji  BSLT  terhadap  ekstrak  etanol temu  putih  ( Curcuma  zedoaria )    lokal  Aceh menunjukkan harga  LC50    sebesar  61,11 μg/ml  (Frengki,  2014), dan  pada  uji  BSLT ekstrak    etanol  temu  putih  ( Curcuma zedoaria )    asal  Kab  OKU  diperoleh  LC50 sebesar  37,03 μg/ml  (Bustanussalam, 2010).

## KESIMPULAN
Hasil skrining fitokimia terhadap serbuk simplisia dan ekstrak etanol tumbuhan  temu  putih  ( Curcuma  zedoaria ) asal Kabupaten OKU mengandung senyawa aktif golongan flavonoid, tanin  dan  saponin. Tumbuhan    sarang    semut  ini  memiliki potensi  aktivitas  sitotoksik  yang  tinggi
dengan  nilai  LC50    <  1000  ppm,  yaitu dengan  nilai  LC50      sebesar  22,86    ppm terhadap ekstrak    etanol  temu  putih ( Curcuma zedoaria ). Perlu dilakukan penelitian  lebih  lanjut  mengenai  profil metabolit  sekunder  yang  berpotensi  toksik dengan  mengisolasi  dan  mengidentifikasi senyawa aktif yang terdapat dalam tumbuhan  temu  putih  ( Curcuma  zedoaria ) dan  menentukan  struktur  molekul/senyawa aktif  tersebut,  kemudian  dilakukan  uji aktivitas  antikanker    dan    standardisasi untuk    dikembangan  kan      menjadi fitofarmaka sebagai usaha pengembangan obat alternatif antikanker.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  International  Union Against Cancer (UICC). Global  Cancer  Control .  2009.
Tersedia dari http://www.uicc.org (Diakses   tanggal   3 Oktober 2014). 2.  Yayasan    Kanker    Indonesia    (YKI). Kanker. 2012. Tersedia dari http://yayasankankerindonesia.org
(Diakses tanggal 24 Maret 2014).
3.  Badan        Penelitian        dan Pengembangan  Kesehatan.            Riset Kesehatan            Dasar  Kesehatan Republik Indonesia. 2004.
4.  Magdalena      MM.      Kunyit      putih: herbal  pengusir    kanker    dan    tumor.
2014. Tersedia dari http://www.deherba.com (Diakses tanggal 24 Maret 2014). 5.  Hartati      MS,      Mubarika    S,      Bolhuis RLH,  Nooter  K,  Oostrum  RG,  Boersma AWM, Wahyuono S. Sitotoksisitas rimpang temu mangga ( Curcuma mangga )  dan  kunyit  putih  ( Curcuma zedoaria  L) terhadap  beberapa  sel kanker manusia (in vitro) dengan metoda SRB.  Berkala  Ilmu  Kedokteran.  2003; 35(4): 197 –201.
6.  Hutapea      JR.      Inventaris      tanaman obat  Indonesia.  Edisi    ke –2.    Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. 1993.
7.  Lobo    R,    Prabhua    KS,    Shirwaikara
A,  Shirwaikarb  A.  Curcuma  zedoaria rosc.  (white  turmeric):  a  review  of  its chemical, pharmacological and ethnomedicinal  properties.  Journal  of Pharmacy  and  Pharmacology. 2009;  61: 13 –21.
8.  Sumathi   S,   Iswariya   GT,   Sivaprabha
B,  Dharani  B,  Radha  P,  Padma  PR. Comparative study
of radical scavenging activity   and   phytochemical analysis      of  fresh  and  dry  rhizomes  of Curcuma  zedoaria. IJPSR.  2013;  4(3): 1069 –73
9.  Wilson        B.          Antimicrobial        activity of Curcuma  zedoaria and Curcuma malabarica tubers. J Ethnopharmacol . 2005; 99: 147 –51. 10.  Radji, Maksum. Buku ajar mikrobiologi panduan mahasiswa farmasi  dan  kedokteran. Jakarta: EGC. 2010.
11.  Syu  WJ,  Shen  CC,  Don  MJ,  Ou  JC,
Lee  GH,  Sun  CM.  Cytotoxicity  of curcuminoids and some novel compounds  from  Curcuma  zedoaria.  J
Nat Prod. 1998; 61(12):1531 –4.
12.  Seo WG. Suppressive effect of
zedoariae rhizoma on pulmonary metastasis  of  B16  melanoma  cells.  J Ethnopharmacol. 2005; 101: 249 –57. 13.  Hong CH. Evaluation of natural
products  on  inhibition  of  inducible cyclooxygenase  (COX-2)  and  nitric oxide  synthase  (iNOS)  in  cultured mouse macrophage cells.
J Ethnopharmacol. 2002; 83: 153 –9.
14.  Lakshmi        S,        Padmaja        G, Remani        P.  Antitumour  effects  of isocurcumenol  isolated  from Curcuma zedoaria rhizomes  on  human  and murine cancer cells. International
Journal  of  Medicinal  Chemistry.  2011;
11: 9 –11.
15.  Ficker  CE,  Smith  ML,  Susiarti  S, Leaman  DJ,  Irawati  C,  Arnason  JT. Inhibition of human pathogenic fungi by members of Zingiberaceae used by the
Kenyah  (Indonesian    Borneo).    J Ethnopharmacol. 2003; 85: 289 –93. 16.  Ansari  MH,  Ahmad  S.  Screening  of some medicinal plants
for antiamoebic  action.  Fitoterapia.  1991; 62: 171 –175.
17.  Raghuveer  GPS.  Evaluation  of  anti- ulcer effect of root of Curcuma zedoaria in rats. Indian J
Traditional Knowledge.  2004;  2:375 –7.
18.  Uechi  S.  Antibacterial  activity  of essential  oil  derived  from  curcuma  sp. (Zingiberaceae) against foodborne pathogenicbacteria  and    its    heat- stability.  Sci  Bull  Faculty  Agric.  2000; 47: 129 –36.
19. Bugno    A,    Nicoletti    MA,    Adriana    A, Almodóvar  B,  Tatiana  C. Antimicrobial efficacy of curcuma zedoaria extract as assessed by linear regression compared with commercial mouthrinses. Brazilian Journal of
Microbiology. 2007; 38: 440 –5. 20.  Himaja      M,      Ranjhita      A,      Ramana MV, Karigar A. Phytochemical screening  and  antioxidant    activity    of rhizome    part    o f Curcuma  zedoaria . IJRAP. 2010; 1(2): 414 –7.
21.  Mau      JL.      Composition      and antioxidant  activity  of  the  essential  oil from Curcuma  zedoaria .  Food  Chem. 2003; 82: 583 –91.
22.  Navarro  ND.  Phytochemical  analysis and  analgesic  properties  of Curcuma zedoaria grown in Brazil. Phytomedicine.  2004;  9: 427–32. 23.  Matsuda    H.    Anti-allergic    principles from Thai zedoary: structural requirements of curcuminoids for inhibition of degranulation and effect on the  release  of  TNF-a    and    IL-4    in RBL-2H3    cells.    Bioorg  Med  Chem. 2004; 12: 5891 –8.
24.  Prajapati     ND.     Agro ’s     dictionary of  medicinal  plants.  1st    ed.  India: Agrobiosis. 2003.
25.  Khare  CK.  Indian  medicinal  plants:  an illustrated  dictionary.  1st      ed.    New Delhi: Springer Pvt Ltd. 2007.
26.  Christiane  RP.  Seasonal  variation  and analgesic      properties      of      different parts  from Curcuma  zedoaria  Roscoe
(Zingiberaceae)  grown  in  Brazil.  Z Naturforsc. 2006; 61: 6 –10.
27.  Yonzon    M.    Antimicrobial    activities of  essential  oils  of  Nepal.  J  Essential Oil Res. 2005; 17: 107 –11.
28.  Carvalho    FR,    Vassão    RC,    Nicoletti MA,  Maria  DA.  Effect  of  Curcuma zedoaria  crude  extract  against  tumor progression and  immunomodulation.  J Venom    Anim  Toxins  incl  Trop  Dis.
2010; 16(2): 324 –41.
29.  Hanif  R,  Qiao  L,  Shiff  SJ,  Rigas  B. Curcumin, a natural plant phenolic food additive,  inhibits  cell  proliferation  and induces  cell  cycle    changes    in    colon adenocarcinoma cell lines by a prostaglandin-ndependent  pathway.    J Lab  Clin  Med.  1997;  130(6): 576 –84. 30.  Jiang    MC,    Yang-Yen    HF,    Yen    JJ,
Lin   JK. Curcumin induces apoptosis in immortalized  NIH  3T3  and  malignant cancer  cell  lines.  Nutr  Cancer.  1996;
26(1): 111–20.
31.  Kim  KI,  Kim  JW,  Hong  BS,  Shin  DH, Cho HY, Kim HK, Yang HC.  Antitumor, genotoxicity and anticlastogenic activities of polysaccharide from Curcuma  zedoaria.  Molecules  and Cells. 2005; 10(4): 392 –8.
32.  Myoungae  K.  Cytotoxic  activity  of  the extracts  from  Curcuma  zedoaria.  J Toxicol Public Health. 2003; 19: 293 –6