## Uji Efektivitas Ekstrak Daun Binahong ( Anredera cordifolia (TEN)

## Steenis) terhadap Jumlah Fibroblas dan Ketebalan Kolagen pada Luka Infeksi Tikus Wistar
Maria T H Ratu (a)* , Iwan Syahrial (b) , Liliek Hermanu (a)
(a) Fakultas Farmasi Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya, Indonesia.
(b) Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya, Indonesia.
Binahong ( Anredera cordifolia ) merupakan salah satu tanaman obat yang dapat digunakan untuk mempercepat proses penyembuhan luka infeksi. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efek ekstrak etanol daun binahong  ( Anredera  cordifolia )  pada  proses  penyembuhan  luka  insisi  yang  diinfeksi Staphylococcus  aureus . Ekstrak  etanol  daun  binahong  dibuat  dalam  bentuk  sediaan  salep  untuk  memudahkan  pengaplikasian  dan lepasnya obat ke dalam lapisan kulit. Penelitian menggunakan 24 ekor tikus wistar jantan yang dibagi menjadi 4 kelompok  perlakuan  yakni  kelompok  tanpa  pengobatan,  kelompok  dengan  pemberian  salep  asam  fusidat, kelompok dengan pemberian ekstrak etanol daun binahong 20% dan kelompok dengan pemberian ekstrak etanol daun binahong 40%. Tikus yang telah diinfeksi diberi perlakuan kemudian diamati jumlah fibroblas dan ketebalan kolagen pada hari ke-3 dan hari ke-7. Analisis data menggunakan One Way Anova yang dilanjutkan dengan uji Duncan  Test .  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  binahong  40%  dapat  meningkatkan jumlah fibroblas pada hari ke-3 (43,33 ± 8,08) dan hari ke-7 (61,67 ± 7,02), ekstrak etanol daun binahong 20% pada hari ke-3 (31,67 ± 5,50) dan hari ke-7 (57,00 ± 7,55). Ekstrak etanol daun binahong 40% meningkatkan ketebalan kolagen  pada  hari  ke-3  (10,37  ±  2,69)  dan  hari  ke-7  (16,55  ±  0,32),  ekstrak  etanol daun  binahong 20% pada hari ke-3 (8,87 ± 0,71) dan hari ke-7 (12,09 ± 1,26). Berdasarkan hasil penelitian, dapat disimpulkan bahwa  ekstrak  etanol  daun  binahong  40%  dapat  mempercepat  proses  penyembuhan  luka  infeksi  dengan meningkatkan jumlah fibroblas dan ketebalan kolagen yang lebih baik dibanding pemberian ekstrak etanol daun binahong 20%.
Kata Kunci: Ekstrak etanol daun binahong, jumlah fibroblas, ketebalan kolagen, luka infeksi.
Effectiveness Test of Madeira Vine ( Anredera cordifolia (TEN)

## Steenis) Leaves Extract on The Number of Fibroblast and Collagen Density of The Wistar Rat Infected Wound
Binahong ( Anredera cordifolia ) is a medicinal plant that can be used to accelerate the healing process of wound infections.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effect  of  the  ethanol  extract  of  binahong  leaves ( Anredera cordifolia ) on the healing process of incision wounds infected by Staphylococcus aureus . The ethanol extract of binahong leaves is made in the form of ointments to facilitate the application and release of the drug into the skin layer. The study used 24 male Wistar rats which were divided into 4 treatment groups namely the group without treatment, the group with fusidic acid ointment, the group with 20% extract of binahong leaf ethanol extract and the group with 40% extract of binahong leaf ethanol. Infected mice were treated and then observed the number of fibroblasts and collagen thickness on day 3 and day 7. Data was analyzed using One Way Anova followed by Duncan Test. The results showed that the ethanol extract of binahong leaves 40% could increase the number of fibroblasts on the 3rd day (43.33 ± 8.08) and the 7th day (61.67 ± 7.02), the ethanol extract of the binahong leaf 20% on 3rd day (31.67 ± 5.50) and 7th day (57.00 ± 7.55). The ethanol extract of binahong leaves 40%  increased  the  thickness  of  collagen  on  the  3rd  day  (10.37  ±  2.69)  and  the  7th  day  (16.55  ±  0.32),  the ethanol extract of the binahong leaf 20% on the 3rd day ( 8.87 ± 0.71) and 7th day (12.09 ± 1.26). Based on the results  of  the  study,  it  can  be  concluded  that  the  ethanol  extract  of  binahong  leaves  40%  can  accelerate  the healing process of wound infections by increasing the number of fibroblasts and collagen thickness better than the administration of ethanol extracts of binahong leaves 20%.
Keywords: Madeira vine leaves ethanol extract, number of fibroblast, collagen density, infected wound.
*Corresponding author: Fakultas Farmasi Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya, Jl. Raya Kalisari Selatan No. 1 Surabaya, e-mail : elynratu28@gmail.com

## PENDAHULUAN
Luka  pada  kulit  merupakan  hilangnya integritas  kulit  yang  dapat  disebabkan  oleh adanya  trauma  dan  berbagai  penyakit  (Morison, 2004).  Pada  luka  terbuka,  infeksi  sangat  rawan untuk  terjadi  dan  biasanya  penyebab  infeksi adalah bakteri patogen. Pada keadaan infeksi luka terbuka  sering  disebabkan  oleh  organisme  dari sekitar  kulit  termasuk  diantaranya  adalah
Staphylococcus
aureus (Fitra, 2008). Kontaminasi  langsung Staphylococcus  aureus pada luka terbuka (seperti luka paska bedah) atau infeksi  setelah  trauma  (seperti  osteomielitis kronis  setelah  fraktur  terbuka)  dan  meningitis setelah  fraktur  tengkorak,  merupakan  penyebab infeksi  nosokomial  (Jawetz,  Melnick  dan Adelberg, 2005).
Proses  penyembuhan  luka  menjadi  salah satu hal yang penting untuk meminimalisir resiko terjadinya  infeksi  pada  luka  terbuka.  Sel-sel jaringan  ikat  yang  berperan  penting  dalam remodeling dan penyembuhan dari jaringan yang rusak  di  antaranya  adalah  fibroblas  dan  kolagen. Fibroblas  merupakan  elemen  utama  pada  proses perbaikan  untuk  pembentukan  protein  struktural yang  berperan  dalam  pembentukan  jaringan. Fibroblas  memproduksi  kolagen  dalam  jumlah besar,  kolagen  ini  berupa  glikoprotein  berantai tripel,  unsur  utama  matriks  luka  ekstraseluler yang berguna membentuk kekuatan pada jaringan parut  (Ike,  2001).  Kolagen  terusun  oleh  asam amino, hidroksiprolin yang merupakan biomarkernya (Kumar, Ramzi dan Stanley, 2007). Binahong  merupakan  tanaman  yang mengandung senyawa kimia yang dapat meningkatkan  jumlah  fibroblas  dan  ketebalan kolagen.  Daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (TEN)  Steenis)  memiliki  khasiat  diantaranya untuk mempercepat pemulihan kesehatan setelah operasi,  penyembuhan  bermacam  luka  dalam, luka  luar,  radang  usus,  melancarkan  peredaran darah,  mencegah  stroke,  maag,  asam  urat, mengembalikan  vitalitas  daya  tahan  tubuh, melancarkan  buang  air  kecil,  serta  diabetes (Susetya,  2010).  Ekstrak  daun  binahong  juga dapat mengurangi peradangan sel dan meningkatkan  jumlah  fibroblas  pada  cidera (Sumartiningsih, 2012).
Pada  penelitian  ini  digunakan  ekstrak etanol  konsentrasi  20%  dan  40%  untuk  melihat pengaruh  dan  efektifitas  ekstrak  daun  binahong terhadap  proses  penyembuhan  luka  terutama pada  jumlah  fibroblas  dan  ketebalan  kolagen. Ekstrak dibuat dalam bentuk sediaan salep karena sifat  salep  dapat  meresap  ke  bagian  permukaan kulit,  dapat  menutup  dan  melindungi  luka terbuka dari lingkungan sekitar, serta memudahkan  dalam  pengaplikasian  ekstrak  ke kulit yang terluka.

## METODE PENELITIAN
Alat Alat  –  alat  yang  akan  digunakan  dalam penelitian  diantaranya  adalah:  bejana  maserasi,
water bath , timbangan tikus (ks-1 kitchen scale 2 kg,  Indonesia),  pisau  steril,  kassa,  pisau  cukur, pot  salep,  mortir  dan  stamper,  spatula, stopwatch, gunting bedah, pinset, kandang hewan coba, beaker glass, timbangan analitik (Shimadzu Electronic  Balance  Ex-200A,  Japan),  gelas  ukur (Pyrex,  USA),  beaker  glass  (Pyrex,  USA),  batang pengaduk,  kerta  saring,  sendok  tanduk,  sendok porselen, botol coklat, lemari es (Hitachi R-528H, Japan),  penangas  air,  oven  (Memmert,  Jerman), mikroskop  monokuler  dan  perlengkapannya (Carlton,  Jerman),  lemari  asam,  mikropipet (Eppendorf  pipette  20  μl  &  Socorex,  No.381.05, Switzerland), termometer, jangka sorong, bunsen, alat-alat gelas.

## Bahan
Bahan – bahan yang akan digunakan dalam penelitian  diantaranya  adalah:  Simplisia  kering daun  binahong,  etanol  96%,  serbuk  Mg,  amil alkohol,  FeCl 3 ,  larutan  gelatin,  eter,  asam  asetat anhidrat, asam sulfat pekat, NaOH 1 N, Na asetat, etanol 70%, kloroform, aquades, kuersetin, adeps lanae,  vaseline  album,  formaldehide  10%, hematoksilin-eosin, n-butanol, asam asetat, silika gel 60 F 254 , salep Asam Fusidat, hewan percobaan tikus  putih  jantan  galur  wistar  ( Rattus norvegicus ) yang berusia 2-3 bulan dengan berat rata-rata  100-150  gram,  sehat,  memiliki  aktivitas normal  dan  tidak  tampak  kelainan  atau  cacat tubuh.

## Tahapan Penelitian
Simplisia  daun  binahong  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  diperoleh  dari  Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat (Balittro), Bogor  dan  penelitian  dilakukan  pada  bulan September-November  2017  di  Fakultas  Farmasi Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya.
Determinasi Tanaman dan Standarisasi

## Simplisia dan Ekstrak
Tanaman diperoleh dan dideterminasi oleh Balai  Penelitian  Tanaman  Rempah  dan  Obat (Balittro),  Bogor.  Standarisasi  simplisia  yang dilakukan  meliputi  organoleptis  dan  pengamatan mikroskopik,  kadar  air  dan  kadar  abu.  Untuk standarisasi  ekstrak  meliputi  organoleptis,  kadar air,  kadar  abu,  skrining  fitokimia  dan  penetapan profil kromatogram secara KLT.

## Pembuatan Ekstrak Daun Binahong
Simplisia  kering  daun  binahong  yang diperoleh,  dimaserasi  dengan  menggunakan pelarut  etanol  96%.  Maserasi  dilakukan  dengan cara  serbuk  simplisia  daun  binahong  ditimbang sebanyak  500  gram  lalu  dimasukkan  ke  dalam wadah  dan  dimaserasi  selama  satu  hari menggunakan pelarut etanol 96% sebanyak 2500 ml, kemudian disaring sehingga didapat maserat. Ampas diremaserasi dengan etanol 96% menggunakan  prosedur  yang  sama.  Maserasi dilakukan  sampai  diperoleh  maserat  yang  jernih. Semua maserat etanol digabungkan dan diuapkan
dengan  menggunakan  penangas  air  sampai diperoleh  ekstrak  etanol  kental  daun  binahong lalu dihitung rendemennya (Voigt, 1995).

## Pembuatan Salep Esktrak Daun Binahong
Ekstrak  daun  binahong  yang  diperoleh kemudian  dicampur  dengan  basis  salep.  Basis yang  akan  digunakan  merupakan  basis  berlemak yaitu  adeps  lanae  dan  vaseline  album  dengan formula  standar  basis  salep  yang  digunakan menurut Paju et al . (2013) ialah adeps lanae 15 g dan  vaseline  album  85  g . Sebelum  dibuat  basis salep,  mortir  dan  stamper  dipanaskan  di  dalam oven  dengan  suhu  50 ˚ C  hingga  panas,  kemudian mortir dan stamper yang telah panas dikeluarkan dari  oven.  Adeps  lanae  dimasukkan  terlebih dahulu  ke  dalam  mortir  dan  diaduk  hingga melebur kemudian dilanjutkan dengan memasukkan  vaselin  album  dan  diaduk  dengan kecepatan  konstan  hingga  homogen  sampai membentuk  basis  salep  kemudian  ditambahkan dengan  ekstrak  daun  binahong  yang  disesuaikan dengan  masing  –  masing  konsentrasi  (Tabel  1) dan diaduk hingga homogen.
Tabel 1. Formula salep ekstrak daun Binahong ( Anredera cordifolia (TEN) Steenis) Bahan FI (20%) FII (40%) Ekstrak Daun Binahong Basis Salep 6 g 24 g 12 g 18 g

## Perlakuan Hewan Percobaan
Hewan percobaan terlebih dahulu diadaptasi  selama  1  minggu.  Setelah  masa adaptasi, hewan coba dibagi menjadi 4 kelompok besar  yaitu  :  Kelompok  Kontrol  (-)  tanpa pengobatan,  Kelompok  Kontrol  (+)  diberikan salep  Asam  Fusidat,  Kelompok  Perlakuan  1 diberikan  salep  ekstrak  etanol  daun  binahong 20%  dan  Kelompok  Perlakuan  2  diberikan  salep ekstrak  etanol  daun  binahong  40%.  Kemudian dibuat  luka  insisi  dengan  panjang  2  cm  pada bagian  dorsal  menggunakan  pisau  steril.  Tikus diberikan  perlakuan  selama  7  hari.  Pengamatan dilakukan  pada  hari  ke-3  dan  ke-7  yakni
dilakukan  perhitungan  jumlah  fibroblas  dan pengukuran ketebalan kolagen secara mikroskopis.

## Pengamatan Jumlah Fibroblas
Pada  hari  ke-12  dan  hari  ke-16,  dilakukan pengamatan terhadap preparat dengan mikroskop cahaya  pada  pembesaran  1000x  pada  5  lapang pandang. Perhitungan sel fibroblas dilakukan dan diambil  data  rata-rata  dari  perhitungan.  Analisis data  untuk  melihat  perbandingan  sel  fibroblas kelompok kontrol dan kelompok perlakuan.

## Pengamatan Kepadatan Kolagen
Pengamatan  kepadatan  deposit  kolagen dilakukan  pada  hari  ke-12  dan  hari  ke-16. Preparat jaringan diletakkan di bawah mikroskop cahaya pembesaran 1000x dan difoto menggunakan  kamera  mikroskopis  fotografi kemudian  kepadatan  deposit  kolagen  diukur menggunakan program komputer Adobe Photoshop 6.0.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan menggunakan  statistik  parametik  analisis  varian anova satu arah. Jika ada perbedaan bermakna (p <  0,05)  diantara  kelompok  perlakuan,  maka dilanjutkan  uji  perbandingan  jarak  berganda. Analisa  statistik  dilakukan  dengan  menggunakan bantuan  perangkat  lunak  SPSS  versi  17.0  pada signifikansi 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Serbuk  simplisia  dari  daun  Binahong  yang digunakan  pada  proses  ekstraksi  merupakan serbuk simplisia yang telah terstandarisasi (Tabel 2  dan  Gambar  1).  Ekstrak  etanol  daun  Binahong diperoleh dengan metode maserasi menggunakan pelarut  etanol.  Ekstrak  yang  dihasilkan  akan distandarisasi.  Tujuan  dilakukan  standarisasi adalah  guna    menjamin    mutu  bahan    obat  yang kemudian akan dijadikan   sebagai   sediaan obat yang diberikan   secara topikal. Hasil standarisasi dapat dilihat tabel 3.
Gambar 1. Hasil pengamatan serbuk simplisia daun Binahong ( Anredera cordifolia ) Keterangan:  1  =Kristal  Ca-Oksalat  berbentuk  roset;  2  =  Berkas  pembuluh;  3  =Stomata  tipe  parasitic;  4 =Rambut penutup
Tabel 2. Hasil uji standarisasi simplisia daun
Binahong ( Anredera cordifolia) Parameter Standarisasi Hasil Pustaka (Paskartini, 2017) Organoleptis  Bentuk Serbuk Serbuk  Warna Coklat Coklat  Bau Aromatik Aromatik Kadar air (%) 10,22 < 11 Kadar abu (%) 13,86 < 19
Tabel 3. Hasil standarisasi ekstrak etanol daun Binahong ( Anredera cordifolia ) Parameter Standarisasi Hasil Pustaka (Paskartini, 2017) Organoleptis  Bentuk Ekstrak kental Ekstrak kental  Warna Coklat kehitaman Coklat kehitaman  Bau Aromatis Aromatis Skrinning fitokimia Alkaloid + + Flavonoid + + Saponin + + Tanin + + Steroid + + Triterpenoid + + Kadar air (%) 7,44 < 8 Kadar abu (%) 12,87 < 14
Tujuan  dilakukan    profil  kromatogram dengan menggunakan metode Kromatografi lapis Tipis  adalah    untuk  mengamati    profil kromatogram    dari  ekstrak  daun  binahong  dan mengidentifikasi kandungan senyawa flavonoid di dalam  ekstrak.  Pengujian  KLT  dilakukan  dengan menggunakan  fase  diam  silika    gel    F254  dan campuran  beberapa  fase  gerak  yakni n-butanol :  asam asetat  :  air  (4:1:5)  yang  memiliki  indeks polaritas    sebesar    7,26.    Semakin  besar    indeks polaritas  suatu  pelarut  maka  makin  besar  juga polaritas    dari  pelarut    tersebut.    Hal    ini menjelaskan  bahwa  fase  gerak  yang  digunakan untuk  pengujian  KLT  bersifat  polar.  Dipilihnya fase  gerak  bersifat  polar didasarkan  pada  sifat senyawa    flavonoid    yang    larut  dalam    pelarut yang  lebih  polar.  Ekstrak      daun      binahong dibuat   dalam konsentrasi  1%  (1g/  100  ml)  dan ditotolkan    sebanyak    10  μl    sedangkan pembanding  yakni  kuersetin  (golongan  senyawa flavonoid)    dibuat    dalam  konsentrasi  0,5%    (0,5 g/  100  ml)  dan  ditotolkan  sebanyak  2 μl.  Hasil menunjukkan    bahwa    terdapat    4    noda    pada pengamatan    di    bawah    sinar    UV  254    dan    6 noda  di  bawah  UV  366.  Pengamatan  dilakukan sebelum    dan  setelah  disemprotkan  penampak bercak  AlCl 3 dimana  setelah  disemprotkan  ada beberapa  noda  yang  menunjukkan    fluoresensi
menjadi    kuning    yang    menunjukkan    adanya kandungan senyawa flavonoid (Gambar 2).
Gambar  2. Hasil  KLT  ekstrak  etanol  daun binahong  ( Anredera  cordifolia )    dengan  fase gerak  n-butanol  :  asam  asetat  :  air  (4:1:5)  dan penampak noda AlCl 3 .
Evaluasi  sediaan  salep  ekstrak  etanol  daun binahong  antara  lain  uji  organoleptis,  uji homogenitas  dan  uji  pH.  Hasil  yang  didapatkan dari evaluasi yang dilakukan adalah sediaan salep ekstrak  etanol  daun  binahong  telah  memenuhi persyaratan  (Tabel  4).  Sediaan  salep  yang  telah jadi  kemudian  diaplikasikan  pada  hewan  coba sesuai  masing-masing  perlakuan  kemudian  pada hari ke-3 dan hari ke-7, hewan coba dikorbankan dan diambil preparat jaringan kulit untuk diamati jumlah fibroblas dan ketebalan kolagen.
Tabel 4. Hasil evaluasi sediaan salep Karakteristik Persyaratan Salep Ekstrak Etanol Daun Binahong Organoleptis  Warna Hijau tua Hijau tua  Bentuk Salep Salep  Bau Khas Khas pH 4,5 – 6,5 (pH kulit) 5,41 Homogenitas Homogen Homogen
Hasil  pengamatan  mikroskopis  terhadap jumlah  sel  fibroblas  dengan  perhitungan  pada lima  lapang  pandang  dan  perbesaran  1000  kali menunjukkan hasil analisis statistik. Pada hari ke- 3,  kelompok  tanpa  pengobatan  (kontrol  (-))  dan kelompok  salep  asam  fusidat  (kontrol  (+)) berbeda  bermakna  dengan  kelompok  salep ekstrak  etanol  daun  binahong  konsentrasi  20% dan juga berbeda bermakna dengan salep ekstrak etanol  daun  binahong  konsentrasi  40%.  Pada pengamatan hari ke-7, kelompok tanpa pengobatan  (kontrol  (-))  berbeda  bermakna
dengan kelompok salep asam fusidat (kontrol (+)) dan  juga  berbeda  bermakna  dengan  kelompok salep  ekstrak  etanol  daun  binahong  konsentrasi
20%  dan  40%.  Hasil  analisis  rerata  jumlah  sel fibroblas dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil Rerata Perhitungan Jumlah Fibroblas dan Ketebalan Kolagen (± SD)  pada Hari ke-3 dan Hari ke-7 (α = 0,05 ; n = 4) Perlakuan Jumlah Fibroblas Ketebalan Kolagen Hari ke-3 Hari ke-7 Hari ke-3 Hari ke-7 Kontrol (-) 8,00 a* ± 3,46 21,33 a* ± 10,12 4,09 a* ± 0,65 6,87 a* ± 1,73 Kontrol (+) 19,67 a,b* ± 8,08 41,67 b* ± 5,77 6,46 a,b* ± 2,54 11,92 b* ± 1,69 P1 31,67 b,c* ± 5,50 57,00 c* ± 7,55 8,87 b,c* ± 0,71 12,09 b* ± 1,26 P2 43,33 c* ± 8,08 61,67 c* ± 7,02 10,37 c* ± 2,69 16,55 c* ± 0,32 Keterangan: Kontrol (-)  = Tanpa pengobatan Kontrol (+) = Salep asam fusidat P1 = Salep ekstrak etanol daun binahong 20% P2 = Salep ekstrak etanol daun binahong 40% * = Superskrip  pada  kolom  yang sama  menunjukkan  perbedaan  signifikan antar kelompok perlakuan
Pengamatan  terhadap  ketebalan  kolagen dilakukan  dengan  menghitung  rerata  ketebalan kolagen  pada  lima  lapang  pandang  dengan pengamatan  mikroskopis  perbesaran  1000  kali (Gambar 3). Hasil analisis data ketebalan kolagen pada  hari  ke-3  dan  hari  ke-7  dapat  dilihat  pada Tabel  7.  Pada  hari  ke-3  didapatkan  hasil  analisis data  untuk  kelompok  tanpa  pengobatan  (kontrol
(-)) dan kelompok salep asam fusidat (kontrol (+)) berbeda  bermakna  dengan  kelompok  salep ekstrak  etanol  daun  binahong  konsentrasi  20% dan juga berbeda bermakna dengan salep ekstrak etanol  daun  binahong  konsentrasi  40%.  Berbeda bermakna  diartikan  dengan  hasil  analisis  antara kelompok menunjukkan signifikan p < 0,05.
Gambar 3. Hasil pengamatan mikroskopis sel fibroblas dengan pewarnaan Hematoxyllin-Eosin perbesaran 1000 kali.
Keterangan: A = Kelompok tanpa pengobatan (kontrol (-)) pengamatan hari ke-3 B = Kelompok tanpa pengobatan (kontrol (-)) pengamatan hari  ke-7 C = Kelompok salep asam fusidat (kontrol (+)) pengamatan  hari ke-3 D = Kelompok salep asam fusidat (kontrol (+)) pengamatan  hari ke-7 E = Kelompok salep ekstrak etanol daun binahong 20% pengamatan hari ke-3 F = Kelompok salep ekstrak etanol daun binahong 20% pengamatan hari ke-7 G = Kelompok salep ekstrak etanol daun binahong 40% pengamatan hari ke-3 H = Kelompok salep ekstrak etanol daun binahong 40% pengamatan hari ke-7
Pengamatan mikroskopis preparat
histopatologi  jaringan  pada  masing-masing kelompok menunjukkan bahwa terdapat perbedaan jumlah sel fibroblas pada hari ke-3 dan hari  ke-7.  Jumlah  sel  fibroblas  pada  hari  ke-7 lebih  banyak  dari  jumlah  sel  pada  hari  ke-3.  Hal
ini juga menyebabkan pembentukan kolagen lebih banyak pada hari ke-7. Kelompok perlakuan yang paling banyak meningkatkan jumlah fibroblas dan ketebalan kolagen adalah kelompok ekstrak etanol daun  binahong  40%  diikuti  kelompok  ekstrak etanol daun binahong 20%, kelompok salep asam
fusidat  dan  yang  terakhir  kelompok  tanpa
pengobatan (Gambar4).
Gambar 4. Hasil pengamatan mikroskopis ketebalan kolagen dengan pewarnaan Hematoxyllin-Eosin perbesaran 1000 kali
Keterangan: A = Kelompok tanpa pengobatan (kontrol (-)) pengamatan hari ke-3
B = Kelompok tanpa pengobatan (kontrol (-)) pengamatan hari  ke-7
C = Kelompok salep asam fusidat (kontrol (+)) pengamatan  hari ke-3 D = Kelompok salep asam fusidat (kontrol (+)) pengamatan  hari ke-7 E = Kelompok salep ekstrak etanol daun binahong 20% pengamatan hari ke-3 F = Kelompok salep ekstrak etanol daun binahong 20% pengamatan hari ke-7 G = Kelompok salep ekstrak etanol daun binahong 40% pengamatan hari ke-3 H = Kelompok salep ekstrak etanol daun binahong 40% pengamatan hari ke-7
Terjadinya  peningkatan  jumlah  fibroblas dan  ketebalan  kolagen  pada  kelompok  perlakuan salep  ekstrak  etanol  daun  binahong  konsentrasi 20%  dan  40%  dibandingkan  dengan  kelompok tanpa  pengobatan  dan  kelompok  salep  asam fusidat  disebabkan  karena  salep  ekstrak  etanol daun  binahong  mengandung  senyawa-senyawa kimia  seperti  flavonoid,  saponin  dan  tanin  yang berperan  penting  dalam  proses  penyembuhan luka  terutama  dalam  pembentukan  sel  fibroblas. Flavonoid berfungsi sebagai antioksidan yang bisa meningkatkan  aktivasi  dan  proliferasi  fibroblas, sehingga  memicu  pembentukan  kolagen  dan mempercepat proses penyembuhan luka. Flavonoid juga berfungsi sebagai antibakteri yang menyebabkan  infeksi  pada  luka  lebih  cepat terobati (Barbul, 2005).
Saponin akan mengaktifkan  fungsi  dari  TGF-β, vascular endothelial  growth  factor (VEGF), epidermal growth factor (EGF) dan fibroblast growth factor (FGF).  TGF-β  dan  FGF  akan  menstimulasi migrasi  dan  proliferasi  fibroblas  (Robbin,  2007; Kimura et  al. ,  2006).  Semakin  banyak  fibroblas yang  terbentuk  maka  akan  mempercepat
kontraksi luka dan akan mempercepat penyembuhan  luka.  Tanin  merupakan  polifenol yang  memiliki  kemampuan  untuk  menginduksi TGF-β  (Khan et  al. ,  2012).  Tanin  merupakan antioksidan  yang  juga  menginduksi  TGF-β  untuk proliferasi  fibroblas  dan  juga  menginduksi limfokin  untuk  meningkatkan  migrasi  makrofag. Makrofag merangsang sekresi faktor pertumbuhan  sehingga  meningkatkan  proliferasi fibroblas (Gurib-Fakim, 2006).

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  uji  efektivitas  ekstrak daun  Binahong  ( Anredera  cordifolia (TEN) Steenis) terhadap jumlah fibroblas dan ketebalan kolagen  pada  luka  insisi  tikus  wistar  jantan  yang diinfeksi Staphylococcus aureus dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun Binahong 40%  yang  diberikan  dalam  bentuk  sediaan  salep secara  topikal  memberikan  efek  mempercepat proses  penyembuhan  luka  infeksi  dengan meningkatkan  jumlah  fibroblas  dan  ketebalan kolagen yang lebih baik bila dibandingkan dengan pemberian ekstrak etanol daun Binahong 20%.

## DAFTAR PUSTAKA
Barbul,  A.  2005, Wound  Healing in  Brunicardi,  C.  F., Andersen,  D.  K,  Billiar,  R.  T.,  Dunn,  L.  D.,  Hunter,  G.  J., Matthews,  B.  J.,  Pollock,  R.  E., Schwartz’s  principles  of surgery ,  8 th ed.,  McGraw-Hill  Companies,  New  York,  pp  46- 223.
Fitra, N. 2008,  Pola kuman   aerob dan sensitifitas   pada gan-
gren diabetic, Tesis , Sarjana Kedokteran, Universitas Sumatera Utara, Medan.
Gurib-Fakim,  A.  2008,  Medicinal  plants:  traditions  of yesterday  and  drugs  of  tomorrow. Mol  Aspects  Med .  27(1):  1- 93.
Ike, S. M. R. 2001, Pengelolaan Nyeri Pasca Bedah I , National Congress Indonesian Pain Society, Jakarta, pp 58-62.
Jawetz,  E.,  Melnick,  J.  L.  dan  Adelberg  E.  A.  2005, Mikrobiologi Kedokteran , Edisi 23, EGC, Jakarta.
Khan,  I.,  Kumar,  N.,  Pant,  I.,  Narra,  S.,  Kondaiah,  P.  2012, Activation  of  TGF-β  pathway  by  areca  nut  constituents:  a possible  cause  of  oral  submucous  fibrosis, Plos  One ,  7(12):  1- 12.
Kimura, Y., Sumiyoshi, M., Kawahira, K., Sakanaka, M. 2006, Effects of ginseng saponins isolated from red ginseng roots on burn  wound  healing  in  mice, Br.  J.  Pharmacol ,  148(6):  860- 870.
Kumar,  V.,  Ramzi,  S.  C.  dan  Stanley  L.  R.  2007, Buku  Ajar Patologi Robbins , Edisi 7, EGC, Jakarta.
Morison,  M.  J.  2004, Manajemen  Luka ,  Penerbit  Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Paju, N.,   Paulina V. Y.,   Yamleon   dan    Kojong,  N. 2013, Uji
efektivitas  salep  ekstrak  daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten)  Steenis)  pada  kelinci  ( Oryctolagus  cuniculus )  yang terinfeksi  bakteri Staphylococcus  aureus , Jurnal  Ilmiah Farmasi, 2(1): 52-63.
Paskartini, T. G. 2017, ‘Parameter standarisasi tanaman segar, simplisia  dan  ekstrak  etanol  daun  binahong  ( Anredera cordifolia ) dari tiga daerah berbeda’, Skripsi , Sarjana Farmasi, Universitas Katholik Widya Mandala, Surabaya.
Robbin, 2007, Buku Ajar Patologi , Volume 1, EGC, Jakarta.
Sumartiningsih, S. 2012, The benefit of topically administered binahong for treatment of sport injury (hematoma). Research and  Application  on  Traditional  Complementary  and Alternative Medicine in Health Care (TCAM) , 22(1): 28-31.
Susetya, D. 2010, Khasiat daun Binahong , Pustaka Baru Press, Yokyakarta.
Voigt,  R.,  1995, Buku  Pelajaran  Teknologi  Farmasi ,  Edisi  5, Diterjemahkan dari Bahasa Inggris oleh Soendani N. S., Gajah Mada  University  Press,  Yogyakarta.  pp  564,  568,  577-578.