Ketahanan ikan lele sangkuriang, Clarias gariepinus Burchell 1822 terhadap Aeromonas hydrophila pasca pemberian ekstrak daun kelor ( Moringa oleifera L.) melalui pakan
[The resistance of sangkuriang catfish ( Clarias gariepinus Burchell 1822) against Aeromonas hydrophila bacteria given moringa leaf extracts ( Moringa oleifera L.) through the feed]
Rosidah 1  , Ibnu Dwi Buwono 1 , Walim Lili 1 , Ibnu Bangkit Suryadi 1 , Ade Reza Triandika 2
1 Dosen Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Padjadjaran 2 Alumni Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Padjadjaran Program Studi Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Padjadjaran Jalan Raya Bandung - Sumedang km 21 Jatinangor 40600 Sumedang Jawa Barat
Diterima: 1 Oktober 2018; Disetujui: 8 Januari 2018

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk menentukan konsentrasi yang efektif dari ekstrak daun kelor untuk menginduksi keta- hanan  tubuh  ikan  lele  sangkuriang  terhadap  serangan  bakteri Aeromonas  hydrophila .  Penelitian  ini  menggunakan metode eksperimental Rancangan Acak Lengkap dengan enam perlakuan dan tiga ulangan. Perlakuan penelitian yang digunakan adalah penambahan ekstrak daun kelor ke dalam pakan dengan konsentrasi 0 ppm (A), 100 ppm (B), 125 ppm  (C),  150  ppm  (D),  175  ppm  (E)  dan  200  ppm  (F).  Parameter  yang  diamati  meliputi  jumlah  total  sel  darah, peningkatan jumlah sel darah putih, gejala klinis, dan sintasan. Data peningkatan jumlah sel darah putih dan sintasan dianalisis menggunakan uji F dan uji jarak berganda pada taraf kepercayaan 5%, sedangkan data gejala klinis diana- lisis secara deskriptif. Hasil penelitian menunjukkan ekstrak daun kelor efektif untuk menginduksi ketahanan tubuh lele  sangkuriang.  Konsentrasi  150  ppm  menghasilkan  rata-rata  jumlah  sel  darah  putih  tertinggi  23,46±6,46%  dan setelah  diuji  tantang  tidak  menunjukkan  gejala  klinis,  serta  tingkat  sintasan  yang  tertinggi  sebesar  80,0±5,00%. Berdasarkan analisis regresi konsentrasi ekstrak daun kelor memberikan pengaruh sebesar 95,62%  dengan konsen- trasi optimum sebesar 153,95 ppm terhadap sintasan ikan lele sangkuriang setelah di uji tantang dengan Aeromonas hydrophila.
Kata penting : ekstrak daun kelor, gejala klinis,  ketahanan lele, sintasan, sel darah putih.

## Abstract
This  study  aims  to  reveal  effective  concentration  of  moringa  leaf  extract  which  is  inducing  body  resistance  of sangkuriang  catfish  against Aeromonas  hydrophila .  This  study  used  as  experimental  method  of  completely randomized design (CRD) with six treatments and three replications. The treatment used in this research  were the addition of moringa leaf extract into feed with concentration of 0 ppm (A), 100 ppm (B), 125 ppm (C), 150 ppm (D), 175 ppm (E) and 200 ppm (F) . Observed parameters were total leukocyte count, increase in leukocyte, clinical sign and  survival  rate.    Increase  in  leukocyte  and  survival  rate  data  were  analyzed  using  F  test  and  Duncan  test  with significance  level  0.05,  while  clinical  sign  data  was  analyzed  descriptively.  The  results  showed  that  moringa  leaf extract was effective to induce the immune of sangkuriang catfish. The treatment of 150 ppm has the highest total leukocyte count of 23.46 ± 6.46% and didn’t have clinical symptoms after challenge with Aeromonas hydrophila and the highest survival rate 80.0 ± 5.00%. Based on the regression analysis, 153.95 ppm of Moringa leaf extract is the optimum  concentration  with  95.62%  on  the  survival  of  sangkuriang  catfish  after  challenge  with Aeromonas hydrophila .
Keywords: moringa leaf extract, clinical symptom , catfish resistance, leukocyte cell, survival rate.

## Pendahuluan
Ikan lele   sangkuriang   merupakan salah satu jenis ikan air tawar yang paling banyak di-
budidayakan  oleh  masyarakat  Indonesia  teru- tama di pulau Jawa. Keunggulan ikan lele sang- kuriang antara lain pertumbuhan cepat, fekundi- tas tinggi, mampu hidup dengan kepadatan ting- gi, dan dapat dibudidayakan di lahan yang terba- tas (Hastuti & Subandiyono 2014).
_____________________________
 Penulis korespondensi
Alamat surel: ros_ahdi@yahoo.com
Usaha  budi  daya  ikan  lele  sering  diha- dapkan  dengan  penyakit  yang  menyebabkan kematian  pada  ikan.  Penyakit  pada  ikan  dise- babkan oleh virus, bakteri, dan jamur (Ikeogu et.
al 2010 ). Sistem pemeliharaan ikan dengan ke- padatan tinggi dan kualitas air yang buruk dapat memicu stres pada ikan yang akan memengaruhi kesehatan ikan (Novriadi et al . 2014). Salah satu penyakit  patogen  pada  ikan  lele  sangkuriang adalah  penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri
Aeromonas  hydrophil a,  biasa  disebut  “ Motil
Aeromonas  Septicemia ”  (MAS).  Bakteri A.  hy- drophila menyebabkan  luka  pada  tubuh  ikan, borok,  pendarahan,  dan  kematian  (Anyanwu et al. 2014).
Penanggulangan penyakit MAS pada ikan biasanya  dilakukan  setelah  ikan  terinfeksi  pe- nyakit. Dalam usaha budi daya, penanggulangan seperti ini akan  merugikan petani karena  mem- butuhkan  biaya  yang  tinggi.  Solusi  yang  dapat dilakukan  adalah  melakukan  tindakan  pence- gahan  ( preventif ).  Penanggulangan  penyakit melalui  tindakan  pencegahan  dapat  dilakukan dengan  beberapa  cara  antara lain  menjaga  kua- litas air, pemberian pakan, dan pemberian imu- nostimulan. Menurut Buchmann (2014), imuno- stimulan  merupakan  zat  atau  obat  yang  dapat mengembalikan  ketidakseimbangan  sistem  ke- kebalan tubuh yang terganggu dengan cara me- rangsang  dan  memperbaiki  fungsi sistem  keke- balan  tubuh.  Pemberian  imunostimulan  dapat diberikan  melalui injeksi, pakan (oral), dan pe- rendaman  (Maqsood et.  al. 2011).  Mekanisme pertahanan tubuh ikan terdapat dua bagian yaitu spesifik  dan  non  spesifik.  Pertahanan  spesifik terjadinya respon imun yang menghasilkan anti- bodi  untuk  menangkal  serangan  bakteri,  virus, jamur dan parasit. Pertahanan non spesifik yaitu merupakan  pertahanan  pertama  dalam  tubuh
yang berperan sebagai garis pertahanan pertama sebelum  zat  asing  menimbulkan  infeksi.  Perta- hanan  non  spesifik  adalah  suatu  proses  terjadi- nya pembentukan penghalang ( barrier ) pada ku- lit untuk pelindungan dari patogen yang berasal dari luar  kulit  (Mohapatra et  al. 2012,  Labh  & Shakya 2014, Dhama et.al 2015).
Pencegahan penyakit dengan penggunaan bahan-bahan  yang  bersifat  imunostimulan  baik yang  bersifat  alami  maupun  sintesis  dapat  me- ningkatkan  aktivitas  pertahanan  non  spesifik serta  merangsang  organ  pembentuk  antibodi dalam  tubuh  untuk  bekerja  secara  maksimal. Imunostimulasi biasa dilakukan dengan pembe- rian  komponen  mikrobia  seperti  β-glukan  dan lipopolisakarida (LPS) atau sel bakteri yang te- lah  dimatikan  (Dalmo  &  Bogwald  2008).  Ken- dala  dari  imunostimulan  tersebut  adalah  harga- nya  relatif  mahal,  sehingga  diperlukan  sumber imunostimulan  lain  yang  murah  dan  mudah penanganannya  dengan  menggunakan  tum- buhan.
Beberapa  tumbuhan  dapat  menjadi  sum- ber  imunostimulan,  antara  lain  meniran,  lidah buaya,  mengkudu, teh hijau, jintan hitam, rum- put laut, sirsak, dan lain-lain (Sajid et al. 2011, Bairwa et  al. 2012).  Vitamin  yang  terkandung dalam tumbuhan yang berfungsi sebagai imuno- stimulan adalah vitamin C dan E (Mastan 2015, Bairwa et al . 2012). Senyawa bioaktif pada tum- buhan yang berfungsi sebagai agen imunostimu- lan  adalah  alkaloid,  flavanoid,  fenol  dan  terpe- noid, steroid (Hai 2015).
Salah  satu  tumbuhan  yang  mempunyai kandungan  yang  sama  dengan  beberapa  tum- buhan di atas (meniran, lidah buaya, mengkudu, teh  hijau,  jintan  hitam,  rumput  laut  dan  sirsak) adalah  daun  kelor.  Kandungan  kimiawi  pada daun  kelor adalah vitamin (A, C, E, K, B 1 , B 2 ,
B 3 , B 6 ), flavonoid, alkaloid, saponin, tanin, dan terpenoid (Kasolo et al . 2010, Gopalkrishnan et al . 2016).
Tujuan penelitian ini adalah mendapatkan konsentrasi  ekstrak  daun  kelor  ( M.  oleifera L.) yang  efektif  untuk  menginduksi  ketahanan  lele sangkuriang  terhadap  bakteri A.  hydrophila pascapemberian  ekstrak  daun  kelor  melalui pakan.

## Bahan dan metode
Penelitian dilaksanakan dari bulan Febru- ari sampai Mei 2017 di Laboratorium Fisiologi Hewan Air Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelaut- an Universitas Padjadjaran.

## Bahan dan alat
Bahan  penelitian  yang  digunakan  meli- puti:  lele  sangkuriang  berasal  dari  Balai  Besar Perikanan  Budidaya  Air  Tawar  Sukabumi  se- banyak  500 ekor  berukuran  7±  0,5  cm,  isolat bakteri Aeromonas hydrophila dari Laboratoriun Mikrobiologi Jurusan Biologi Unpad dengan ke- padatan 10 8 cfu mL -1 , daun kelor bagian pucuk sampai daun tua diaduk secara komposit, pakan komersial PF 800 dengan kandungan protein 39- 41%, media agar NA ( Nutrient  Agar ), akuades,
dan khlorin
Alat  penelitian  yang  digunakan  meliputi akuarium berukuran 40cm x 30cm x 30cm seba- nyak  18  buah,  timbangan  digital  UTE,  kertas saring Whatman no. 42, e vaporator , haemocyto- meter , hand  counter , pH meter, DO meter, ma- serator , autoclave , jarum ose, cawan petri , inku- bator , termometer, spektrofotometer, dan pema- nas air.

## Metode penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  metode eksperimental  dengan  Rancangan  Acak  Leng-
kap  yang  terdiri  atas  enam  perlakuan  dan  tiga ulangan. Setiap perlakuan menggunakan 20 ekor ikan lele sangkuriang. Perlakuan yang diberikan adalah  pemberian  ekstrak  daun  kelor  melalui pakan  dengan  konsentrasi berdasarkan  hasil  uji LC 50, yaitu : Perlakuan A : 0 ppm (Kontrol) Perlakuan B : 100 ppm Perlakuan C : 125 ppm Perlakuan D : 150 ppm Perlakuan E : 175 ppm Perlakuan F : 200 ppm

## Pembuatan ekstrak daun kelor
Daun kelor segar dikering anginkan tanpa paparan sinar matahari, setelah kering ditimbang sebanyak 500 g. Selanjutnya dilakukan maserasi dengan  maserator  untuk  memisahkan  kandung- an kimiawi pada daun dengan penambahan eta- nol  96%  sebagai  pelarut.  Perbandingan  daun kering  dengan  pelarut  yang  digunakan  adalah 1:5. Penggunaan perbandingan pelarut mengacu pada Jayaraman et al . (2008) yaitu 1:5, artinya 1 kg  bahan  ekstrak  dilarutkan  dalam  5  L  etanol. Hasil proses maserasi kemudian disaring dengan kertas saring Whatman no. 42. Ekstrak hasil ma- serasi  atau  filtrat  yang  dihasilkan  ditampung menjadi  satu  dan  diuapkan  dengan rotatory vacum evaporator pada suhu 60 o C dengan kece- patan 65 rpm sampai pelarut habis menguap, se- hingga  didapatkan  ekstrak  daun  kelor  pekat ( gel ).
Uji LC 50 ikan lele sangkuriang
Uji LC 50 ( Lethal Concentration 50%) di- lakukan  untuk  mengetahui  batas  maksimum penggunaan  akstrak  daun  kelor  yang  mengaki- batkan  mortalitas  50%  pada  ikan  lele  sangku- riang  setelah  dilakukan  perendaman  selama
24  jam.  Perlakuan  yang  digunakan  dalam  uji
LC 50 adalah  perendaman  ikan  dalam  larutan ekstrak  daun  kelor  dengan  konsentrasi  0  ppm, 10  ppm,  100  ppm,  500  ppm,  1000  ppm  3000 ppm  masing-masing sebanyak dua kali ulangan. Sebelum  dilakukan  uji  LC 50 ikan  lele  diadapta- sikan selama tiga hari dalam akuarium.
Prosedur dalam Uji LC 50 sebagai berikut:
12 buah akuarium diisi air sebanyak 5 liter, lalu dimasukkan  ekstrak  daun  kelor  sesuai  dengan konsentrasi  perlakuan.  Ikan  uji  dimasukkan  se- cara  acak  pada  setiap  akuarium  masing-masing sebanyak 10 ekor. Pengamatan dilakukan setiap 15 menit, 30 menit, 1 jam, 2 jam, 4 jam, 8 jam,
16 jam, sampai 24 jam. Kemudian hasil uji LC 50 dianalisis  dengan  menggunakan  piranti  lunak
EPA Probit Analysis. Hasil EPA Probit Analysis memperlihatkan   konsentrasi ekstrak daun kelor sebesar 577,352 ppm  mematikan ikan uji 50%, konsentrasi  217,053  ppm  mematikan  ikan  uji 15%  sebesar,  konsentrasi  172,205  ppm  mema- tikan  ikan  uji  10%,  dan  konsentrasi  122,234 ppm mematikan ikan uji 5%. Dengan demikian konsentrasi  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  antara  217,053  ppm  sampai  122,234 ppm, dengan kematian antara 5 % sampai 15 %.

## Pencampuran pakan dengan ekstrak daun kelor
Ekstrak daun kelor dimasukkan ke dalam gelas ukur berbeda untuk setiap konsentrasinya, yaitu  100  ppm,  125  ppm,  150  ppm,  175  ppm, 200  ppm.  Kemudian  ekstrak  dicampur  dengan putih  telur  sampai  merata,  untuk  merekatkan ekstrak dengan pakan. Selanjutnya dicampurkan dengan  pakan  yang  telah  ditimbang  sesuai  de- ngan kebutuhan bobot  ikan per minggu. Pakan yang telah mengandung esktrak daun kelor  siap untuk diberikan pada ikan uji.

## Pemberian perlakuan pada ikan uji
Sebanyak  18  akuarium  disiapkan,  setiap akuarium diisi dengan air sebanyak 10 liter, ke- mudian  diaerasi  selama  24  jam.  Sementara  itu seluruh ikan uji sebelum digunakan  diaklimati- sasi dalam bak fiber selama 7 hari untuk meya- kinkan bahwa ikan dalam kondisi sehat, diperli- hatkan dengan respon yang baik terhadap kejut- an  dan  pakan  yang  diberikan,  tidak  cacat  dan tidak ada kerusakan tubuh. Selanjutnya ikan uji dimasukkan  ke  dalam  akuarium  dengan  kepa- datan 20 ekor per akuarium. Setelah diaklimati- sasi ikan uji diberi perlakuan, yaitu diberi pakan yang telah dicampur ekstrak daun kelor, diberi- kan selama 21 hari. Pemberian pakan sebanyak 5% dari biomassa tubuh ikan, diberikan tiga kali per hari pada pukul 08:00, 11:00 dan 16:00.

## Persiapan isolat bakteri Aeromonas hydrophila
Alat  disterilkan  dalam  autoklaf.  Nutrient agar (NA) sebanyak 3 gram ditimbang, kemudi- an  dilarutkan  dalam  100  ml  akuades  dalam erlenmeyer sampai homogen, dipanaskan di atas hot plate, ditutup dengan alumunium foil , selan- jutnya media agar disterilkan. Larutan NA ditu- angkan  pada  cawan  petri  steril  hingga  merata, dan  dibiarkan  hingga  dingin  dan  beku.  Bakteri diinokulasi  dalam  media  agar  (NA)  disebar  se- cara  merata  sebanyak  2  ose,  kemudian  diinku- basi dalam inkubator dengan suhu 27 0 C selama 24  jam.  Isolat  bakteri  hasil  kultur  dipanen  de- ngan menggunakan jarum ose, kemudian dima- sukkan ke dalam tabung falcon yang telah berisi NaCl fisiologi steril, selanjutnya di vortex hing- ga homogen. Setelah homogen kemudian kepa- datan  bakteri dihitung  dengan  spektrofotometer pada panjang gelombang 540 nm dan absorban (OD)  0,235.  Penambahan  NaCl  fisiologis  atau
isolat  bakteri  terus  dilakukan  sampai  diperoleh nilai  absorban  (OD)  0,235,  diasumsikan  OD 0,235 setara dengan kepadatan bakteri 10 8 CFU mL -1 atau larutan Mc Farland no. 1.

## Uji tantang
Ikan uji setelah diberi perlakuan selama 21  hari  kemudian  diuji  tantang  dengan  bakteri
A. hydrophila dengan kepadatan 10 8 CFUvmL -1 . Uji tantang dilakukan dengan cara ikan diinfeksi bakteri A. hydrophila dengan metode imersi, la- rutan bakteri dimasukkan ke dalam setiap akua- rium  sebanyak  10  mL.    Setelah  ikan  diuji  tan- tang  dilakukan  pengamatan  gejala  klinis  dan sintasan sampai hari ke 14.

## Parameter pengamatan

## Jumlah leukosit (sel darah putih)
Pengamatan  jumlah  leukosit  (sel  darah putih) ikan uji diamati sebanyak tiga kali, yaitu sebelum  ikan  diberi  perlakuan,  setelah  ikan  di- beri  perlakuan  dan  setelah  diuji  tantang A. hydrophila .  Prosedur  yang  dilakukan  untuk mengamati jumlah  leukosit adalah  sebagai ber- ikut.  Ikan  uji  disayat  bagian  vena  caudalis-nya sampai  darah  keluar,  kemudian  darah  yang  ke- luar dihisap dengan pipet sahli sampai skala 0,5 dilanjutkan  dengan  menghisap  larutan Turk’s sampai skala 11, kemudian dikocok  hingga ho- mogen. Larutan yang sudah homogen diteteskan pada haemocytometer dengan volume (0,2 x 0,2 x  0,1)  mm 3 ,  lalu  ditutup  dengan  kaca  penutup.
Langkah  selanjutnya haemocytometer diamati dibawah mikroskop dengan pembesaran 10 kali. Sel  darah  putih  yang  teramati  dihitung  dengan menggunakan rumus berikut (Nabib & Pasaribu 1989):
SDP  =
Keterangan: SDP= jumlah sel darah putih, A= jumlah sel darah putih terhitung, N= jumlah kotak haemosi- tometer yang diamati, V= volume kotak hemositome- ter yang diamati, FP= faktor pengenceran

## Gejala klinis ikan terinfeksi bakteri Aeromonas hydrophila
Pengamatan  gejala  klinis  meliputi  per- ubahan  tingkah  laku,  perubahan  morfologi dengan  melihat  kerusakan  di  permukaan  tubuh berupa  bercak  merah  ( hyperamia ), nekrosis , pendarahan  ( hemorrhagic ),  mata  menonjol ( exophthalmia )  dan  perut  membuncit ( dropsy ), perubahan  warna  kulit  ikan  dan  tingkah  laku ikan  (gerak  renang,  respon  terhadap  pakan  dan keseimbangan  tubuh).  Pengamatan  gejala  ikan dilakukan selama 14 hari setelah ikan dilakukan uji tantang dengan bakteri A. hydrophila .

## Sintasan
Pengamatan  sintasan  ikan  lele  sangkuri- ang dilakukan setelah ikan diuji tantang dengan bakteri A. hydrophila . Perhitungannya dilakukan menggunakan  rumus  sebagai  berikut  (Effendie 1997) :
SR = N t x  100 N o Keterangan: SR = laju sintasan (%), N t = jumlah ikan hidup pada akhir pemeliharaan (ekor), N o = jumlah ikan pada awal pemeliharaan (ekor)

## Analisis data
Data jumlah sel darah putih dan sintasan, dianalisis dengan menggunakan uji F (ANOVA) dengan taraf 5 %. Jika terdapat terdapat penga- ruh,  dilanjutkan  dengan  uji  jarak  berganda Duncan (Gasperz 1995). Gejala klinis dianalisis secara deskriptif.

## Hasil
Jumlah sel darah putih (leukosit)
Pengamatan jumlah sel darah putih dila- kukan  untuk  mengetahui  perubahan  jumlah  sel
darah putih ikan lele sangkuriang sebelum diberi perlakuan, setelah diberi perlakuan dengan eks- trak daun kelor, dan setelah diuji tantang dengan bakteri A. hydrophila . Berdasarkan hasil penga- matan sel darah putih sebelum dan setelah diberi perlakuan  (Tabel  1)  dan  setelah  diuji  tantang (Tabel 2) memperlihatkan jumlah sel darah pu- tih yang berbeda.
Berdasarkan  hasil  pengamatan,  ikan  uji pada setiap perlakuan mengalami persentase pe- ningkatan jumlah sel darah putih yang berbeda- beda setelah diberi ekstrak daun kelor. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun kelor yang dibe- rikan,  jumlah  sel  darah  putih  semakin  mening- kat,  namun  peningkatan  jumlah  sel  darah  putih terjadi  sampai  konsentrasi  150  ppm  (perlakuan
D). Di atas konsentrasi 150 ppm  terjadi sedikit penurunan  jumlah  sel  darah  putih,  yaitu  pada konsentrasi 175 ppm (perlakuan E) dan 200 ppm (perlakuan F) (Tabel 1).
Hasil  analisis  sidik  ragam  memperlihat- kan  pemberian  ekstrak  daun  kelor  memberikan pengaruh  yang  berbeda  nyata  terhadap  pening- katan  jumlah  sel  darah  putih  lele  sangkuriang.
Hasil  uji  Duncan  pada  taraf    kepercayaan  5% memperlihatkan  perlakuan  A  (0  ppm)  berbeda nyata  dengan  perlakuan  lainnya,  sedangkan perlakuan  B  (100  ppm),  C  (125  ppm),  D  (150 ppm), E (175 ppm) dan F (200 ppm) tidak mem- berikan  perbedaan  yang  nyata.  Ikan  uji  yang tidak  diberi  ekstrak  daun  kelor  (perlakuan  A) memperlihatkan  peningkatan  sel  darah  putih terkecil,  yaitu  sebesar 9,33±2,48% dan berbeda nyata  dengan  perlakuan  lainnya.  Ikan  uji  yang diberi  ekstrak  daun  kelor  mengalami  pening- katan  jumlah  sel  darah  putih  yang  tidak  mem- berikan perbedaan yang nyata untuk setiap per- lakuan, namun ikan uji pada perlakuan  D (150 ppm)  cenderung  menghasilkan  peningkatan jumlah  sel  darah  putih  dengan  nilai  tertinggi yaitu sebesar 23,16±6,46% (Tabel 1).
Jumlah sel darah putih setelah diberi per- lakuan  ekstrak  daun  kelor,  kemudian  diuji  tan- tang dengan bakteri A. hydrophila menghasilkan jumlah sel darah putih  yang  bervariasi berkisar antara  0,774  x  10 5 sel  mm -3 sampai  1,03  x  10 5
sel mm -3 (Tabel 2).
Tabel  1.  Rata-rata  peningkatan  jumlah  sel  darah  putih  (leukosit)  ikan  lele  sangkuriang  setelah  diberi ekstrak daun kelor
Perlakuan Rata –rata jumlah sel darah putih Sebelum pemberian ekstrak (x10 5 sel mm -3 ) Setelah pemberian ekstrak (x10 5 sel mm -3 ) Persentase peningkatan jumlah sel darah putih (%) A (0 ppm) 0,702 0,774 9,33±2,48 a B (100 ppm) 0,673 0,866 22,33±3,09 b C (125 ppm) 0,685 0,868 21,00±2,03 b D (150 ppm) 0,701 0,914 23,16±6,46 b E (175 ppm) 0,696 0,883 21,13±2,91 b F (200 ppm) 0,684 0,862 20,63±2,57 b
Keterangan : Nilai yang diikuti dengan huruf yang sama tidak berbeda nyata
Tabel 2. Rata-rata peningkatan jumlah sel darah putih (leukosit) ikan lele sangkuriang setelah uji tantang dengan bakteri Aeromonas hydrophila Perlakuan Setelah pemberian ekstrak (x10 5 sel mm -3 ) Setelah uji tantang (x10 5 sel mm -3 ) Persentase peningkatan sel darah putih (%) A (0 ppm) 0,774 1,033 25,09 ± 3,81 a B (100 ppm) 0,867 0,942 8,69 ± 2,93 b C (125 ppm) 0,868 0,945 8,83 ± 2,27 b D (150 ppm) 0,915 0,956 4,51 ± 0,84 b E (175 ppm) 0,883 0,934 5,42 ± 3,11 b F (200 ppm) 0,862 0,929 7,17 ± 1,93 b
Keterangan: nilai yang diikuti dengan huruf sama tidak berbeda nyata
Tabel 2 memperlihatkan ikan uji pada se- mua perlakuan setelah diuji tantang  menghasil- kan jumlah sel darah putih yang lebih tinggi di- bandingkan sebelum diuji tantang. Ikan uji yang tidak diberi ekstrak daun kelor setelah diuji tan- tang  menghasilkan  jumlah  sel  darah  putih  ter- tinggi.  Semua  ikan  uji  yang  diberi  perlakuan mengalami  peningkatan  jumlah  sel  darah  putih sampai batas 150 ppm, diatas 150 ppm menga- lami sedikit penurunan, sehingga yang terendah terjadi pada perlakuan F (200 ppm).
Ikan uji pada perlakuan A mengalami pe- ningkatan jumlah sel darah putih tertinggi, yaitu sebesar 25,09±3,81%. Ikan uji yang diberi perla- kuan  dengan  ekstrak  daun  kelor  setelah  diuji tantang  menghasilkan  peningkatan  persentase jumlah  sel  darah  putih  yang  jauh    jauh  lebih rendah  dibandingkan  perlakuan  A,  yaitu  berki- sar  4,51±0,84%  sampai  8,83±2,27%. Perlakuan D  cenderung  mengalami  peningkatan  terendah dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya,  yaitu sebesar 4,51%±0,84.

## Gejala  klinis  ikan  lele  sangkuriang  yang  terin-
feksi bakteri Aeromonas hydrophila
Pengamatan  gejala  klinis  pada  ikan  lele sangkuriang  sebagai  ikan  uji  setelah  diinfeksi bakteri Aeromonas  hydrophila kepadatan  10 8 cfu mL -1 . Gejala klinis yang diamati yaitu keru- sakan  tubuh  ikan,  respon  terhadap  pakan,  dan kejutan. Kerusakan tubuh ikan meliputi  bercak
merah  ( hyperamia ), nekrosis ,  pendarahan  ( he- morrhagic ), mata menonjol ( exophthalmia ), dan perut membuncit ( dropsy ).

## Kerusakan tubuh
Berdasarkan hasil pengamatan, kerusakan tubuh pada ikan uji mulai terlihat jam ke -24 se- telah dilakukan infeksi dengan bakteri A. hydro- phila . Kerusakan tubuh pada tiap ikan uji tidak timbul merata pada setiap ikan uji (Tabel 3).
Berdasarkan  Tabel  3,  ikan  uji  perlakuan A (0 ppm), B (100 ppm), C (125 ppm), D (150 ppm), E (175 ppm), dan F (200 ppm) pada hari ke-1 setelah diinfeksi bakteri A.  hydrophila be- lum terlihat adanya kerusakan tubuh. Pada hari ke- 2 ikan uji pada perlakuan A (0 ppm) mulai mengalami kerusakan tubuh berupa kulit keme- rahan  atau  bercak  merah  (Gambar  1a),  bere- nang tidak beraturan dan perut ikan membuncit (Gambar 1b).  Pada hari ke- 14 kerusakan tubuh berupa bercak merah semakin parah dan timbul- nya kerusakan pada sirip ikan (Gambar 1c).
Ikan  uji perlakuan  B  (100  ppm),  C  (125 ppm)  dan  D  (150  ppm)  pada  hari  ke-1  sampai dengan  hari  ke-14  tidak  memperlihatkan  tim- bulnya  gejala  klinis  terserang A.  hydrophila . Pada  hari  ke-12  perlakuan  E  (175  ppm)  dan  F (200  ppm)  memperlihatkan  gejala  klinis  ringan berupa bercak merah dan pada hari ke-14 hanya beberapa  ikan  mengalami dropsy (perut  mem- buncit).
Tabel 3. Kerusakan tubuh ikan lele sangkuriang selama uji tantang terhadap bakteri A. hydrophila
Keterangan : (a) : bercak merah (hiperami)      (b) : Perut buncit (dropsy)
(c) : Sirip geripis
(-) : tidak ada gejala klinis
(a) Bercak merah/hiperami
(b) Perut membuncit ( dropsy )
(c) Sirip geripis
Gambar 1. Gejala klinis ikan lele sangkuriang pasca uji tantang
Penga- matan hari ke- Konsentrasi ekstrak daun kelor (ppm) 0 (A) 100 (B) 125 (C) 150(D) 175 (E) 200 (F) Ulangan ke- 1 2 3 1 2 3  1  2  3  1  2  3  1  2 3 1 2  3 1 - - - - - -  - -  -  -  -  -  -  - - - -  - 2 a - - - - -  - -  -  -  -  -  -  - - - -  - 3 ab - a - - -  - -  -  -  -  -  -  - - - -  - 4 ab a a - - -  - -  -  -  -  -  -  - - - -  - 5 ab a ab - - -  - -  -  -  -  -  -  - - - -  - 6 abc  ab ab - - -  - -  -  -  -  -  -  - - - -  - 7 abc  abc  abc - - -  - -  -  -  -  -  -  - - - -  - 8 abc  abc  abc - - -  - -  -  -  -  -  -  - - - -  - 9 abc  abc  abc - - -  - -  -  -  -  -  -  - - - -  - 10 abc  abc  abc - - -  - -  -  -  -  -  -  - - - a  - 11 abc  abc  abc - - -  - -  -  -  -  -  -  - - a a  - 12 abc  abc  abc - - -  - -  -  -  -  -  a  a a a a  - 13 abc  abc  abc - - -  - -  -  -  -  -  a  ab  a a a  a 14 abc  abc  abc - - -  - -  -  -  -  -  a  b ab  ab  a  ab

## Respons lele sangkuriang terhadap pakan
Pengamatan respons ikan terhadap pakan dilakukan  selama  14  hari.  Pengamatan  dilaku- kan dengan cara melihat respons ikan ketika di- beri  pakan  dan  mengamati  sisa  pakan  yang mengendap  di  dasar  akuarium.  Pada  hari  ke-1 setelah penyuntikan semua ikan uji tidak mem- berikan respons terhadap pakan yang diberikan. Ikan  uji  pada  perlakuan  A  tidak  menunjukkan respons  terhadap  pakan  sampai  hari ke-5.  Pada
perlakuan  B  (100  ppm),  C  (125ppm),  D  (150 ppm),  E  (175  ppm),  dan  F  (200  ppm)  respons pakan  mulai  terlihat  pada  hari ke-3  ketika  ikan muncul  ke  permukaan  air  dan  memakan  pakan yang  diberikan.  Pada  perlakuan  E  (175  ppm) dan  F  (200  ppm)  pada  hari  ke-12  mengalami penurunan  respons  terhadap  pakan  (Tabel  4), terlihat  sisa  pakan  yang  mengendap  di  dasar akuarium,  namun  jumlah  lebih  sedikit  diban- dingkan perlakuan A (0 ppm).
Tabel 4. Respons ikan lele sangkuriang terhadap pakan
Keterangan:
(-) Respons terhadap pakan tidak ada
(+) Respons terhadap pakan rendah (ada sisa pakan) (++)   Respons terhadap pakan normal (pakan tidak bersisa) Pengamatan hari ke- Konsentrasi ekstrak daun kelor (ppm) 0 (A) 100 (B) 125 (C) 150(D) 175 (E) 200 (F) Ulangan ke- 1  2  3  1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 -  -  -  - - - - - - - - - - - - - - - 2 -  -  -  - - - - + + - + + - + - - + - 3 -  -  -  + + - - + + + + + + + - + + - 4 -  -  -  + + + ++  +
+ ++  ++  ++  + + + + ++  + 5 -  -  -  + + + ++  ++  ++  ++  ++  ++  + + + + ++  ++ 6 -  +  -  + + + ++  ++  ++  ++  ++  ++  + + + + ++  ++ 7 -  +  +  + ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  + ++  ++ 8 -  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++ 9 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++ 10 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++ 11 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  + + ++ 12 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  + + + + + + 13 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  + + + + + + 14 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  + + + + + +

## Respon ikan lele sangkuriang terhadap kejutan
Uji  terhadap  kejutan  atau  gerak  refleks dilakukan  dengan  menepuk  dinding  akuarium sebanyak  tiga  kali  ketukan.  Pada  hari  ke-1 sampai  hari  ke-3  semua  ikan  uji  tidak  ada refleks  terhadap  kejutan  yang  diberikan.  Pada perlakuan A (0 ppm) dari hari ke-1 sampai hari ke-6  tidak  ada  respons  terhadap  kejutan  yang diberikan.  Ikan  muncul  ke  permukaan  hanya untuk mengambil oksigen dan makan. Pada hari ke-7 hingga akhir masa pemeliharaan ikan mulai menunjukkan  respons  terhadap  kejutan;  yang dapat  terlihat  dari  ketukan  pada  dinding  akua- rium,  namun  respons  yang  diberikan  masih rendah. Berbeda dengan ikan uji pada perlakuan
B  (100  ppm),  C  (125  ppm),  D  (150  ppm),  E (175 ppm) dan F (200 ppm); hanya pada hari ke- 1  sampai  hari  ke-3  tidak  ada  respons  terhadap kejutan.  Pada  perlakuan  B  (100  ppm),  E  (175 ppm),  dan  F  (200  ppm)  pada  hari  ke-4  hingga ke-6  respons  kejutan  masih  rendah,  sedangkan dari  hari  ke-7  hingga  akhir  masa  pemeliharaan ikan  mengalami  peningkatan  dalam  merespons kejutan  yang diberikan. Pada perlakuan C (125 ppm)  dan  D  (150  ppm),  respons  terhadap  ke- jutan yang rendah terjadi pada hari ke-4 dan ke- 5  dan  mengalami  peningkatan  tinggi  pada  hari ke-6  hingga  akhir  pemeliharaan,  terlihat  dari hasil pergerakan yang lincah (Tabel 5).
Tabel 5. Respons ikan lele sangkuriang terhadap kejutan
Pengamatan hari ke- Konsentrasi ekstrak daun kelor (ppm) A (0) B (100) C (125) D (150) E (175) F (200) Ulangan ke- 1  2  3  1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 -  -  -  - - - - - - - - - - - - - - - 2 -  -  -  - - - - - - - - - - - - - - - 3 -  -  -  - - - - - - - - - - - - - - - 4 -  -  -  - - + + + + + + + - + + + + + 5 -  -  -  + + + + + + + + + + + + + + + 6 -  -  -  + + + +
++  ++  ++  ++  ++  ++  +
+ + + ++ 7 +  -  +  + + + ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++ 8 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++ 9 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++ 10 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++ 11 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++ 12 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++ 13 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++ 14 +  +  +  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++  ++ Keterangan :
(-)       Respons terhadap kejutan tidak ada (+)      Respons terhadap kejutan rendah (++)   Respons terhadap kejutan tinggi (gerakan lincah)

## Sintasan ikan lele sangkuriang
Pengamatan sintasan lele sangkuriang di- lakukan setelah penginfeksian dengan bakteri A.
hydrophila selama  14  hari  pemeliharaan.  Hasil pengamatan menunjukkan tingkat sintasan yang bervariasi pada setiap perlakuan (Gambar 2).
Pada  Gambar  2  perlakuan  A  (0  ppm) menghasilkan  sintasan  yang  paling  rendah  di- bandingkan  dengan  perlakuan  B  (100  ppm),  C (125  ppm),  D  (150  ppm),  E  (175  ppm)  dan  F (200  ppm).  Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak daun kelor yang diberikan, sintasan lele semakin meningkat,  namun  peningkatan  terjadi  sampai pada  konsentrasi  150  ppm.  Di  atas  konsentrasi 150  ppm,  sintasan  mengalami  sedikit  penu- runan, yaitu pada konsentrasi 175 ppm dan 200 ppm.  Maka  tingkat  sintasan  tertinggi  terdapat pada perlakuan D (150 ppm). Hasil uji Duncan memperlihatkan  perlakuan  A  (0  ppm)  berbeda nyata  dengan  perlakuan  B  (100  ppm),  C  (125 ppm),  D  (150  ppm),  E  (175  ppm)  dan  F  (200 ppm);  sedangkan  perlakuan  B  (100  ppm),  C
(125  ppm),  D  (150  ppm),  E  (175  ppm)  dan  F (200  ppm)  tidak  memberikan  perbedaan  yang nyata.
Ikan uji pada perlakuan E (175 ppm) dan F  (200  ppm),  walaupun  konsentrasinya  lebih tinggi, namun cenderung memiliki sintasan yang lebih  rendah  dibandingkan  perlakuan  C  (125 ppm) dan D (200 ppm).
Berdasarkan  hasil  analisis  regresi,  hu- bungan  antara  konsentrasi  daun  kelor  dan  sin- tasan  ikan  lele  sangkuriang  yang  terinfeksi A.
hydrophila menunjukkan  hubungan  kuadratik dengan  persamaan  Y  =  -0,002x 2 +  0,6258x  + 28,72 dengan hubungan determinasi (R 2 ) =0,904 (Gambar  3)  sehingga  hubungan  korelasi  (R)  = 0,9508,  artinya  penggunaan  ekstrak  daun  kelor memberikan pengaruh sebesar 95,08% terhadap sintasan  ikan  lele  sangkuriang.  Hasil  nilai optimum  konsentrasi  pem-berian  ekstrak  daun kelor  pada  pakan  untuk  meningkatkan  tingkat sintasan ikan lele sangkuriang yang terinfeksi A.
hydrophila didapatkan sebesar 153,95 ppm.
Gambar  2.  Rata-rata  sintasan  ikan  lele  sangkuriang  setelah  diuji tantang  dengan  bakteri A.  hydrophila . Keterangan: Nilai yang diikuti dengan huruf sama tidak berbeda nyata
Gambar 3. Grafik  hubungan  konsentrasi ekstrak daun  kelor terhadap  tingkat sintasan ikan lele  sangku- riang setelah uji tantang

## Pembahasan

## Jumlah sel darah putih
Jumlah sel darah putih ikan lele sangku- riang  setelah  diberi  perlakuan  dengan  ekstrak daun kelor selama 21 hari yang ditambahkan ke dalam  pakan  mengalami  peningkatan,  namun jumlah tersebut masih ada dalam kisaran normal (77.400  – 91.467  sel  mm -3 ).  Sebagaimana  pen- dapat  Lagler et  al. (1977)  bahwa  jumlah  sel darah  putih  pada  ikan  berkisar  antara  20.000- 150.000  sel  mm -3 . Peningkatan  sel  darah  putih merupakan  respons  untuk  mengatasi  maupun menghancurkan benda asing yang masuk ke da- lam  tubuh  yang  akan  mengganggu  atau  meru- sak fungsi tubuh (Kataranovski et al. 2009).
Peningkatan jumlah sel darah putih pada perlakuan A (0 ppm) terjadi karena bertambah- nya umur dan bobot ikan, ketika ikan dipelihara selama 21 hari. Sebagaimana pendapat Claver & Quaglia  (2009)  bahwa  umur  dan  bobot  ikan memengaruhi  sistem  darah  ikan  salah  satunya dengan bertambahnya sel darah putih.
Ikan  uji  yang  diberi  ekstrak  daun  kelor (perlakuan B, C, D, E dan F) mengalami pening- katan jumlah sel darah putih lebih tinggi diban- dingkan  ikan  uji  yang  tidak  diberi  daun  kelor. Hal ini membuktikan bahwa ekstrak daun kelor mampu  menginduksi  peningkatan  jumlah  sel darah putih, dengan perkataan lain ekstrak daun kelor  memiliki  aktifitas  imunomodulator  yang berperan  membuat  sistem  imun  lebih  aktif  da- lam menjalankan fungsinya, menguatkan sistem imun tubuh. Sebagaimana hasil penelitian  yang telah  dilakukan  oleh  Rhamadhan et  al. (2015) nila ( Oreochromis  niloticus L.) sultana setelah diberi  tanaman  obat  daun  kecubung  ( Datura metel L.)  yang  ditambahkan  ke  dalam  pakan mengalami  peningkatan  jumlah  sel  darah  putih dari kisaran 23.533 – 24.200 sel mm -3 mening- kat menjadi 67.600-78-334 sel mm -3 .
Senyawa  aktif  ekstrak  daun  kelor  yang berperan sebagai imunostimulan yang dapat me- micu  ketahanan  tubuh  adalah  flavonoid,  sapo- nin,  vitamin  A  ,B,  C,  E  dan  alkaloid.  Menurut
Kasolo (2010) kandungan  kimia pada daun ke- lor adalah vitamin (A, C, E, K, B1, B2, B3, B6), senyawa  flavonoid  ,  alkaloid,  saponin,  tanin, dan  terpenoid.  Menurut  Mastan  (2015)  pada tumbuhan herbal senyawa yang berfungsi seba- gai imunostimulan adalah vitamin C dan E. Me- nurut Hai (2015), flavonoid dan vitamin E dapat memicu  imunostimulan.  Menurut  Shahbazi  & Bolhassani (2016), salah satu kemampuan imu- nostimulan  adalah  dapat  meningkatkan  keta- hanan tubuh ikan non spesifik yaitu dengan me- ningkatkan  sel-sel  fagosit.  Sel-sel  ini  berperan melakukan  proses  fagositosis  yaitu  melakukan penghancuran terhadap benda-benda asing yang berasal dari luar tubuh ikan.
Saponin  dalam  jumlah  normal  berperan sebagai imunostimulan, yang akan bereaksi jika antigen masuk kedalam tubuh ikan (Hashemi & Davoodi  2012).  Menurut  Hai  (2015),  senyawa polisakarida,  terpenoid,  alkaloid,  dan  polifenol berperan sebagai agen imunostimulan untuk me- ningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh  ikan.  Seba- gaimana  hasil  penelitian  Kurnianingtyas et  al .
(2013)  pemberian  daun Polycias  obtusa yang mengandung  senyawa  saponin,  flavonoid, tanin dan alkaloid dapat meningkatkan sel darah putih dalam proses fagositosis pada ayam.
Mekanisme  kerja  imunostimulan  pada ikan teleostei adalah terjadinya respons imunitas yang  dibentuk  oleh  jaringan limfoid yang  me- nyatu  dengan mieloid atau  disebut  juga limfo- mieloid .  Jaringan limfomieloid menghasilkan sel-sel  darah  dan  respons  imunitas  baik  seluler maupun  humoral.  Pada  ikan  teleostei  jaringan limfomieloidnya adalah limfa, timus, dan ginjal depan. Pada ikan terdapat populasi sel B dan sel T,  yang  berperan  dalam  respons  imunitas  baik seluler  maupun  humoral  (Levraud  &  Boudinot 2009). Sel T akan memproduksi interferon yang
mampu  membangkitkan  kembali  sel  makrofag, sehingga memfagosit bakteri, virus, dan partikel asing  lainnya  yang  masuk  ke  dalam  tubuh (Takahashi & Urbinati 2014).
Jumlah sel darah putih ikan uji pada per- lakuan  E  (175  ppm)  dan  F  (200  ppm)  terjadi sedikit  penurunan  dibandingkan  dengan  perla- kuan D (150 ppm), mungkin karena adanya sa- ponin  yang  berlebihan  pada  konsentrasi  terse- but. Sebagaimana menurut Hashemi & Davoodi (2012), saponin dalam jumlah yang melebihi ba- tas normal akan berperan sebagai imunospresor, yaitu zat yang dapat menurunkan sistem imun.
Setelah  diuji  tantang  dengan  bakteri A. hydrophila ,  ikan  uji  perlakuan  A  mengalami peningkatan  jumlah  sel  darah  putih  yang  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya. Hal ini menunjukkan bahwa ikan uji masih da- lam kondisi sakit akibat serangan bakteri A. hy- drophila , yang terlihat dari gejala klinis yang le- bih  parah  dibandingkan  dengan  perlakuan  lain- nya (Tabel 3). Sebagaimana pendapat Dwinanti
et  al. (2014),  meningkatnya  jumlah  sel  darah putih menunjukkan ikan dalam kondisi terinfek- si dan tubuh ikan  mengantisipasi kondisi terse- but  dengan  memproduksi  sel  darah  putih  lebih banyak sebagai respons imunitas. Ikan uji pada perlakuan  B  (100  ppm),  C  (125  ppm),  D  (150 ppm),  E  (175  ppm)  dan  F  (200  ppm)  tidak memberikan  perbedaan  yang  nyata  terhadap peningkatan  jumlah  leukosit  setelah  diuji  tan- tang dengan bakteri A. hydrophila . Hal ini mem- perlihatkan  bahwa  bahan  aktif  imunostimulan yang  terkandung  dalam  ekstrak  daun  kelor memberikan  efek  yang  hampir  sama  terhadap jumlah  sel  darah  putih.  Namun  demikian,  jum- lah sel darah putih pada perlakuan D (150 ppm) menghasilkan nilai terendah, yaitu 4,51%, yang menunjukkan  bahwa  bahan  aktif  yang  terkan-
dung  dalam  konsentrasi 150  ppm  bekerja  lebih baik  sebagai  imunostimulan  untuk  melawan serangan bakteri A. hydrophila .
Sel darah putih bekerja melawan serang- an patogen melalui proses fagositosis. Fagosito- sis merupakan suatu proses atau cara memakan bakteri atau benda asing (Owen et al. 2013). Se- telah bakteri melekat pada permukaan makrofag maka  makrofag  membentuk  sitoplasma  kemu- dian  bakteri  terperangkap  di  dalam  sitoplasma, yaitu  pada  vakuola  fagositik  intra  sel.  Dalam vakuola  terdapat  lisozim  yang  berperan  untuk mencerna bakteri.

## Gejala klinis

## Kerusakan tubuh
Ikan uji pada semua perlakuan pada hari ke-1 setelah penginfeksian belum menunjukkan adanya  kerusakan tubuh atau gejala  klinis lain- nya.  Hal  ini  disebabkan  bakteri  pada  tahap  pe- nempelan,  belum  masuk  ke  dalam  peredaran darah.  Pada  hari  ke-2  terjadinya  bercak  merah pada  ikan  uji  perlakuan  A,  memperlihatkan bakteri sudah  mulai  masuk  ke dalam peredaran darah  dan  pertahanan  tubuh  alamiahnya,  yaitu sel  darah  putih  tidak  mampu  untuk  memperta- hankan  serangan  bakteri  tersebut,  diperlihatkan adanya bercak merah di permukaan kulit. Seba- gaimana menurut Pratama et  al . (2017) timbul- nya  warna  kemerahan  pada  permukaan  tubuh ikan diakibatkan oleh aktivitas enzim hemolisin yang  dihasilkan  bakteri Aeromonas  hydrophila dengan target memecah sel-sel darah merah, se- hingga sel keluar dari pembuluh darah dan me- nimbulkan  warna  kemerahan  pada  permukaan kulit.  Ikan  uji  perlakuan  B  (100  ppm),  C  (125 ppm),  dan  D  (150  ppm)  tidak  memperlihatkan timbulnya  gejala  klinis.  Hal  ini  membuktikan bahwa ekstrak daun kelor pada konsentrasi ter-
sebut dapat meningkatkan ketahanan tubuh ikan, yang  tampak  dari  jumlah  leukosit  yang  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  perlakuan  A  (0 ppm) (Tabel 3). Peningkatan  kadar leukosit se- bagai  indikator  peningkatan  ketahanan  tubuh untuk  melawan  serangan  bakteri patogen.  Kan- dungan flavonoid pada daun kelor berfungsi se- bagai    imunostimulan,  mampu  meningkatkan produksi  Interleukin  2  yang  terlibat  dalam aktivasi  dan  proliferasi  sel  limfosit  atau  sel  T (Dewi et al. 2013).
Perlakuan E (175 ppm) dan F (200 ppm) menunjukkan gejala klinis ringan berupa bercak merah dan perut membuncit.  Gejala ini muncul karena  pada  konsentrasi  tersebut  kadar  saponin lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  perlakuan lainnya.  Kondisi  ini  akan  memengaruhi  daya tahan  tubuh  ikan.  Saponin  dalam  jumlah  yang melebihi  batas  normal  akan  berperan  sebagai imunospresor, yaitu zat yang dapat menurunkan sistem imun (Francis et al . 2002).

## Respons terhadap pakan
Ikan  lele  sangkuriang  pada  perlakuan  A (0  ppm)  tidak  menunjukkan  adanya  respons terhadap pakan yang diberikan. Hal ini menun- jukkan  ikan  dalam  kondisi  sakit  akibat  perta- hanan  alami  tubuh  tidak  mampu  melawan serangan A.  hydrophila .  Ikan  yang  terinfeksi bakteri A.  hydrophila akan  menurun  nafsu  ma- kannya (Kabata 1985).
Pada  perlakuan  B  (100  ppm),  C  (125 ppm),  D  (150  ppm),  E  (175  ppm),  dan  F  (200 ppm)  ikan  memiliki  respons  terhadap  pakan yang lebih baik, yang berarti ikan dalam kondisi
sehat tidak terserang oleh bakteri A. hydrophila . Pertahanan  alamiah  tubuh  ikan  meningkat  de- ngan  pemberian  ekstrak  daun  kelor,  sehingga mampu melawan serangan bakteri tersebut.

## Respon terhadap kejutan
Respons  ikan  uji  pada  perlakuan  A  (0 ppm)  terhadap  kejutan  rendah.  Sebagaimana halnya  ikan  yang  tidak  merespons  pakan  yang diberikan,  bahwa  ikan  dalam  kondisi  sakit  aki- bat  serangan  bakteri Aeromonas  hydrophila .
Sistem  kekebalan  tubuh  alamiah  ikan  tidak mampu melawan serangan bakteri tersebut. Ikan uji  yang  sistem  kekebalan  alamiah  mengalami peningkatan  dengan  pemberian  ekstrak  daun kelor respon terhadap kejutan normal, bergerak lincah,  terlihat  jelas  pada  ikan  uji  perlakuan  C (125 ppm) dan D (150 ppm).

## Sintasan
Ikan uji perlakuan A (0 ppm) menunjuk- kan  tingkat  sintasan  yang  rendah  dibandingkan dengan perlakuan B (100 ppm), C (125 ppm), D (150 ppm), E (175 ppm), dan F (200 ppm). Hal ini  disebabkan  oleh  rata-rata  jumlah  sel  darah putih  pada  perlakuan  yang  diberi  ekstrak  daun kelor  lebih  tinggi,  sehingga  pada  saat  diinfeksi dengan bakteri A. hydrophila daya tahan tubuh- nya  lebih  tinggi,  terlihat  dari  gejala  klinisnya yang lebih ringan (Tabel 3). Menurut  Abbas et
al .  (2010)  peningkatan  jumlah  sel  darah  putih atau leukosit  merupakan indikator aktivitas sis- tem immun. Bahan aktif yang terkandung dalam ekstrak  daun  kelor  memiliki  senyawa  yang  da- pat menginduksi sistem imun. Senyawa tersebut antara  lain  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  tanin, dan terpenoid (Kasolo et al . 2010). Harikrishnan
(2011)  menyatakan  bahwa  senyawa  yang  diha- silkan oleh tanaman memberi pengaruh terhadap respons  imun  bawaan  maupun    adaptif  untuk
mencegah  dan  mengendalikan  penyakit  ikan maupun kerang.
Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  daun kelor yang diberikan, maka tingkat sintasan se- makin meningkat; karena bahan aktif yang ber- fungsi  sebagai  immunostimulanpun  semakin tinggi, yang terlihat dari peningkatan jumlah sel darah  putih  yang  semakin  tinggi.  Peningkatan sel  darah  putih  adalah  indikator  peningkatan ketahanan tubuh ikan terhadap serangan bakteri patogen.  Di  atas  konsentrasi  150  ppm  menga- lami  sedikit  penurunan  sintasan,  sehingga  sin- tasan    tertinggi  yaitu  pada  perlakuan  D  (150 ppm)  sebesar  80,0%.  Pada  perlakuan  E  (175 ppm) dan F (200 ppm) walaupun konsentrasinya lebih  tinggi  namun  menghasilkan  sintasan  ikan yang  lebih  rendah  dibandingkan  dengan  perla- kuan C (125 ppm) dan D (150 ppm). Jumlah sel darah putih pada perlakuan E (175 ppm) dan F (200  ppm)  sedikit  lebih  rendah  yang  mengaki- batkan penurunan daya tahan tubuh dan sintasan ikan uji.

## Simpulan
Ekstrak daun kelor yang dicampurkan ke dalam  pakan  efektif  untuk  menginduksi  keta- hanan  tubuh  lele  sangkuriang  terhadap  bakteri
Aeromonas hydrophila. Konsentrasi 153,95 ppm merupakan konsentrasi optimum untuk mening- katkan  ketahanan  tubuh lele  sangkuriang terha- dap serangan bakteri Aeromonas hydrophila.

## Daftar pustaka
Abbas AK, Lichtman AH, Pillai S. 2014. Cellu- lar  and  molecular  immunology .  8th  Ed. Saunders Elsevier Philadelphia. 544 p.
Anyanwu  MU,  Chah  KF,  Shoyinka  VS.  2015. Evaluation  of  pathogenicity  of  motile Aeromonas species  in  African  catfish. International  Journal  of  Fisheries  and Aquatic Studies , 2(3): 93-98.
Bairwa  MK,  Jakhar  JK,  Satyanarayana  Y,
Reddy  AD.  2012.  Animal  and  plant originated  immunostimulants  used  in aquaculture. Journal  of  Natural  Product
and Plant Resources , 2 (3): 397-400.
Buchmann K. 2014. Evolution of innate immu- nity: clues  from  invertebrates via  fish  to mammals. Frontiers  in  Immunology , 23(5): 459.
Claver JA, Quaglia AI. 2009. Comparative mor- phology,  development,  and  function  of blood cells in nonmammalian vertebrates.
Journal  of  Exotic  Pet  Medicine, 18(2): 87-97
Dalmo  RA,    Bogwald  J.  2008.  IB-glucans  as conductors of  immune symphonies. Fish and  Shellfish  Immunology, 25  (4):  384– 396.
Dewi  LK,  Sri  W,  Rifai  M.  2013.  Pemberian ekstrak  etanol  daun  sirsak  ( Annona muricata Linn)  terhadap  peningkatan Jumlah  sel  T  CD 4 dan  CD 8 pada  timus mencit  ( Mus  musculus ). Jurnal  Biotro- pika , 1(1) : 24-26
Dhama  K,  Saminathan  M,  Jacob  SS,  Singh  M, Karthik  K,  Amarpal,  Tiwari  R,  Sunkara LT, Malik YS, Singh RK. 2015. Effect of immunomodulation  and  immunomodula- tory agents on health with some bioactive principles,  modes  of  action  and  potent biomedical  applications. International
Journal of Pharmacology , 11(4): 253-90. Dwinanti  SH,  Sukenda  Yuhana  M,  Lusiastuti AM.  2014.  Toksisitas  dan  imunogenitas produk ekstraseluler Streptococcus agactiae tipe  non  non  hemolitik  pada ikan nila ( Oreochromis niloticus ). Jurnal
Akuakultur  Rawa  Indonesia ,  2(1):  105-
116.
Effendie, M. 1997. Biologi Perikanan . Yayasan Pustaka Nusatama. Yogyakarta .163 hlm.
Francis  G,  Zohar  K,  Harinder  PSN,  Klaus  B.
2002. The Biological action the saponins in  animal  system. British  Journal  of nutrition , 88(6): 587 – 605.
Gaspersz V. 1995. Metode Perancangan Perco- baan  untuk  Ilmu-ilmu  Pertanian  dan Ilmu-ilmu  Teknik  biologi .  Penerbit  CV. Armico Bandung. 472 hlm.
Gopalakrishnan L, Doriya K, Kumar DS. 2016. Moringa oleifera : A review on nutritive
importance and its medicinal application. Food Science and Human Wellness , 3(2): 49–56.
Hai  NV.  2015.  The  use  of  medicinal  plants  as immunostimulants  in  aquaculture: A review. Aquaculture , 446: 88-96.
Harikrishnan R, Balasundaram C, Heo MS.
2011. Impact of plant products on innate and adaptive immune system of cultured finfish and shellfish. Aquaculture , 317: 1-
15.
Hashemi SR, Davoodi H, 2012. Herbal plants as new immuno-stimulator in poultry indus- try:  A  review. . Asian  Journal  of  Animal and Veterinery Advances, 7(2): 105-116.
Hastuti  S,  Subandiyono.  2014.    Performa  pro- duksi  ikan  lele  dumbo  ( Clarias  garie-
pinus ,  burch)  yang  dipelihara  dengan teknologi  biofloc. Jurnal Saintek Perikanan , 10(1): 37-42. Ikeogu  FC,  Nsofor  CI,  Ikpeze  OO.  2010.  A review of risk factors for fish diseases in aquatic environments. Proceedings of the 6th  National  Conference  of  the  Society for  Occupational  Safety  and  Environ- mental  Health  (SOSEH) .  Princess  Alex- andra Auditorium, University of  Nigeria, Nsukka, Enugu State, Nigeria. 199-204.
Jayaraman  S,  Manoharan  MS,  Illanchezian  S. 2008. In-vitro antimicrobial  and  antitu- mor  activities  of Stevia  rebaudiana (Asteraceae)  Leaf  Extracts. Tropical Journal  of    pharmaceutical  Research , 7(4): 1143-1149
Kabata Z.1985. Parasites  and  Diseases  of  Fish Cultured  in  the  Tropics .  Taylor  and Francis London  Philadelphia. 318 p
Kataranovski  MV,  Radovic  DL,  Zolotarevski LD, Popov AD, Kataranovski DS. 2009. Immune-related  health-relevant  changes in  natural  populations  of  Norway  rat ( Rattus  Norvegicus Berkenhout,  1769): White  Blood  Cell  Counts,  Leukocyte Activity,  and  Peripheral  Organ  Infiltra- tion. Archives  of  Biological  Science , 61(2): 213-223.
Kasolo  JN,  Bimenya  GS,  Ojok  L,  Ochieng  J, Ogwal-Okeng JW. 2010. Phytochemicals and  uses  of Moringa  oleifera leaves Ugandan  rural  communities. Journal  of
Medicinal  Plants  Research ,  4(9):  753- 757. Kurnianingtyas  E,  Djati  S,  Rifa’i  M.  2013. Aktivitas  imunomodulator Polyscias obtusa terhadap  sistem  imunitas  pada bone  marrow  broiler  setelah  pemberian
Salmonella  typhimurium . The  Journal  of Experimental Life Science , 3(1) : 24-30.
Labh  SN,  Shakya  SR.  2014.Application  of  im- munostimulants  as  an  alternative  to vaccines  for  health  management  in aquaculture. International  Journal  of Fisheries in Aquatic Study , 2(1): 153-6.
Lagler  KF,  Bardach  JE,  Miller  RR,  Pasino DRM.  1977. Ichthyology. John  Willey and Sons Inc. New York. 506 p.
Levraud JP, Boudinot P. 2009. The immune sys- tem of teleost fish. International  Journal of Medical Sciences, 25(4): 405-411.
Maqsood  S,  Singh  P,  Samoon  M.H.  Munir  K. 2011.  Emerging  role  of  immunostimu- lants in combating the disease outbreak in aquaculture. International Aquatic Research , 3(3): 147–163. Mastan SA. 2015. Use of  immunostimulants in aquaculture  disease  management. Inter- national  Journal  of  Fisheries  and Aquatic Studies, 2(4): 277-280
Mohapatra  S,  Chakraborty  T,  Kumar  V, Deboeck  G,  Mohanta  KN.  2012  Review Article  Aquaculture  and  stress  manage- ment: A review of probiotic intervention.
Journal  of  Animal  Physiology  and Animal Nutrition , 97(3): 405-430
Nabib R, Pasaribu FH. 1989. Patologi  dan  Pe- nyakit  Ikan . Departemen Pendidikan dan Kebudayaan.  Direktorat  Jenderal  Pendi-
dikan  Tinggi.  Pusat  Antar  Universitas Bioteknologi.  Institut  Pertanian  Bogor. Bogor. 158 hlm.
Novriadi R, Agustatik S, Hendrianto R, Pramu- anggit  A.  Wibowo  H.  2014. Penyakit infeksi  pada  budidaya  ikan  laut  di  Indo- nesia. Balai  Perikanan  Budidaya  Laut Batam. Batam. 38 hlm
Owen  JA,  Punt  J,  Stranford    S  A.  2013. Kuby
Immunology . International Edition. W. H.
Freeman and Company. New York. 692 p
Pratama  RC,  Rosidah,  Sriati,  Rustikawati  I. 2017.  Efektivitas  ekstrak  biji  rambutan dalam  mengobati  benih  ikan  mas    yang terinfeksi bakteri Aeromonas  hydrophila . Jurnal  Perikanan  dan  Kelautan, 8(1): 130-138.
Rhamadhan  I,  Rosidah,  Andriani  Y.  2015. Efektivitas  penambahan  ekstrak  daun kecubung  ( Datura  metel L)  pada  pakan untuk  pencegahan  Streptocococcis  pada benih  ikan  nila  sultana ,  Oreochromis niloticus
(Linnaeus,  1758). Jurnal Iktiologi Indonesia , 15(3): 245 -255.
Sajid  M,  Prabjeet S,  Munir HS,  Khusheeba  M.
2011.  Emerging  role  of  immunostimu- lants in combating the disease outbreak in aquaculture. International Aquatic Research , 22(3): 147–163 Shahbazi  S,  Bolhassani  A.  2016.  Mini  review immunostimulants:  Types  and  functions. Journal Medical Microbiology and
Infection Diseases , 4(3-4): 45-51.
Takahashi  JDB,  Urbinati  EC.  2014.  Fish  im- munology.  The  modification  and  mani- pulation  of  the  innate  immune  system: Brazilian Studies. Annals of the Brazilian Academy of Sciences , 86(3): 1483-1495.