## MODIFIKASI ZAT PENGATUR TUMBUH DALAM BUDIDAYA
JARINGAN UNTUK PERBANYAKAN BIBIT TEBU ( Saccharum officinarum )

## Supalal
SMA Negeri 1 Pemalang, Jalan Jendral Gatot Subroto Pemalang 52319 supalal_ns@yahoo.com

## GROWTH REGULATOR MODIFICATION IN TISSUE CULTURE FOR
SUGARCANE ( Saccharum officinarum ) MULTIPLICATION

## ABSTRACT
The  aim  was  to  obtained  growth  regulator  effect  in  sugarcane multiplication’s  method.  This  research  was  expected  to  support particular  sugarcane  seedlings  progam.  The  sugarcane’s  clone  used VMC as explan for this research. The explan used medium MS0, MS + 0,5 mg/l  BAP,  MS +  1 mg/l  BAP  + 0,5 mg/l  IBA, MS + 1,5 mg/l BAP  + 0,5 mg/l  IBA.  It’s repetead 3 times and consisted 3 samples. Research’s  parameters  observed  percentage  and  growing  shoot’s speed, bud’s number, and shoots. MS + 1,5 mg/l BAP + 0,5 mg/l IBA had  the  best  growthed  and  shoot’s  number  among  the  other concetration; which was showed 66,67%.
Keywords: tissue culture, growth regulator, sugarcane shoot

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari peran zat pengatur tumbuh auksin  dan  sitokinin  untuk  perbanyakan  bibit  tebu  dalam  budidaya jaringan.  Penelitian  ini  diharapkan  dapat  mendukung  program swasembada gula, khususnya dalam hal penyediaan bibit tebu. Waktu penelitian  sejak  Juli  2012-Januari  2013,  yang  dilakukan  di laboratorium kultur jaringan Fakultas Pertanian UGM Yogyakarta dan Laboratorium  Biologi  SMAN  1  Pemalang.  Tunas  pucuk  klon  tebu yaitu  VMC  digunakan  sebagai  eksplan.  Eksplan  ditanam  pada  media MS0;  MS  dengan  tambahan  0,5  mg/l  BAP;  MS  dengan  tambahan  1 mg/l BAP dan 0,5 mg/l IBA; dan MS dengan tambahan 1,5 mg/l BAP dan  0,5  mg/l  IBA.  Setiap  perlakuan  media  diulang  tiga  kali  dan masing-masing  ulangan  terdiri  dari  tiga  tanaman  contoh.  Parameter yang diamati meliputi persentase dan kecepatan tumbuh tunas, jumlah tunas dan tinggi tunas  yang terbentuk. Media MS+1,5 mg/l BAP+0,5 mg/l IBA menghasilkan pertumbuhan eksplan dan jumlah tunas yang paling  baik  jika  dibandingkan  dengan  media  lainnya.  Tingkat keberhasilan  aklimatisasi  planlet  tebu  dengan  media  MS+1,5  mg/l BAP+0,5 mg/l IBA mencapai 66,67%
Kata kunci: budidaya jaringan, zat pengatur tumbuh, tunas tebu

## PENDAHULUAN
Tanaman tebu ( Saccharum officinarum L.) merupakan salah satu komoditas pertanian yang mempunyai nilai ekonomis cukup tinggi, yaitu sebagai bahan baku perindustrian  gula.  Produksi  gula  tebu  nasional  sejak  beberapa  tahun  terakhir meningkat.  Kontribusi  gula  tebu  pada  tahun  2003  yang  semula  hanya  51,7% meningkat  menjadi  61,3%  pada  tahun  2004  dan  63,0%  pada  tahun  2008.  Akan tetapi, data Dewan Gula Indonesia menunjukkan bahwa produksi gula tebu tidak mampu mengimbangi peningkatan laju konsumsi gula nasional. Pada tahun 2004, impor gula hanya 1,29 juta ton, tetapi pada tahun 2008 impor gula mencapai 1,61 juta ton (Prabowo, 2009).
Tebu  di  masa  mendatang  mempunyai  nilai  ekonomi  yang  sangat  penting, bukan  hanya  sebagai  bahan  dasar  industri  gula  kristal  putih,  tetapi  juga  sebagai bahan dasar pengembangan bahan bakar nabati bio-ethanol. Hasil samping dalam industri  gula  kristal  putih  yang  berupa  tetes  dan  bagas  merupakan  bahan  baku murah untuk memproduksi energi. Tetes merupakan bahan baku bio-ethanol yang paling  murah,  sedangkan  bagas  terbukti  mempunyai  nilai  ekonomi  yang  tinggi sebagai bahan bakar ketel dan listrik pabrik. Dengan berbagai pertimbangan nilai ekonomi  tebu,  di  masa  mendatang  pengembangan  lahan  tebu  tidak  dapat dihindarkan.
Pemerintah  mencanangkan  swasembada  gula  pada  tahun  2014.  Kebutuhan gula  nasional  tahun  2014  diperkirakan  mencapai  5,7  juta  ton.  Untuk  mencapai swasembada  gula,  hal  yang  harus  dilakukan  adalah  melakukan  peningkatan produksi  melalui  intensifikasi  dan  ekstensifikasi.  Kedua  faktor  tersebut  sangat dipengaruhi  oleh  pengadaan  bibit  dari  varietas  unggul.  Pengadaan  bibit  dalam skala  besar,  waktu  cepat,  jenis  yang  seragam,  dan  bebas  dari  Organisme Pengganggu Tanaman (OPT) sangat sulit dipenuhi melalui teknologi perbanyakan tebu  secara  konvensional.  Solusi  untuk  menangani  masalah  tersebut  adalah dengan  teknologi  kultur in  vitro dan  keberhasilan  regenerasi  untuk  pengadaan bibit tebu unggul.
Kultur  jaringan  tanaman  didasarkan  pada  pendapat  bahwa  tanaman  dapat diisolasi bagian tanaman seperti organ, jaringan, atau sel yang dapat dimanipulasi secara in  vitro Media  tumbuh  tanaman  terdiri  dari  95%  air,  nutrisi  mikro  dan nutrisi  makro,  vitamin,  dan  gula.Hendaryono et  al .(1994)  mengemukakan  secara alami  dalam  tanaman  terdapat  hormon  yang  merupakan  senyawa  organik  yang dapat  merangsang  atau  menghambat  proses  fisiologis  tanaman.  Hormon  yang ditambahkan  dari  luar  tubuh  tanaman  disebut  zat  pengatur  tumbuh.  Media budidaya jaringan biasanya dilengkapi oleh zat pengatur tumbuh terutama auksin dan  sitokinin.  Auksin  terdiri  dari  IAA,  IBA,  NAA,  dan  2,4  D.  Sitokinin  terdiri dari kinetin, zeatin, ribosil, benzilaminopurin (BAP) dan 6- Benzyl Adenin (BA).
Menurut  Suryowinoto  (1990),  dalam  budidaya  tanaman  dengan menggunakan  teknik  kultur  jaringan,  pemberian  zat  pengatur  tumbuh  dalam media  juga  perlu  diperhatikan  karena  mempengaruhi  pertumbuhan  dan perkembangan  eksplan  tersebut  menjadi  bibit  yang  baru.  Dalam  kultur  jaringan zat  pengatur  tumbuh  auksin  dan  sitokinin  sangat  berpengaruh.  Auksin  dan sitokinin  adalah  zat  pengatur  tumbuh  yang  sering  ditambahkan  dalam  media tanam  karena  mempengaruhi  pertumbuhan  dan  organogenesis  dalam  kultur jaringan  dan  organ.Hendaryono et  al .(1994)  mengungkapkan  auksin  dalam budidaya  jaringan  berperandalam  perkembangan  dan  pembesaran  sel,  sehingga tekanan  dinding  sel  terhadap  protoplasma  berkurang.  Hal  ini  mengakibatkan protoplast  dapatmengabsorbsi  air  di  sekitar  sel,  sehingga  sel  menjadipanjang terutama  sel-sel  di  bagian  maristem.  Di  sisi  lain,  auksin  dapat  juga  mendorong terbentuknya  sejumlah  selyang  cukup  banyak  tetapi  tidak  membelah, kumpulandari sel ini yang disebut kalus. Sitokinin merupakan turunan dari adenin, golongan  ini  berperan  penting  dalam  pengaturan  pembelahan  sel  dan morfogenesis.  Interaksi  dan  perimbangan  antara  auxin  dan  sitokinin  yang diberikan  dalam  medium  dan  yang  diproduksi  secara  endogen  oleh  tanaman, menentukan  arah  perkembangan  suatu  kultur  yang  ditanam.  Sitokinin  digunakan untuk  merangsang  pembelahan  sel,  terutama  bila  ditambahkan  bersama-sama dengan auksin.
Morfogenesis  eksplan  tergantung  pada  keseimbangan  auksin  dan  sitokinin di  dalam  media  dan  interaksi  antara  zat  pengatur  tumbuh  endogen  di  dalam tanaman  dan  zat  pengatur  tumbuh  eksogen  yang  diserap  dari  media  tumbuh (Wattimena et al. , 1992). Tujuan penelitian ini adalah mendapatkan kombinasi zat pengatur  tumbuh  untuk  perbanyakan  bibit  tebu  secara in  vitro .  Kombinasi konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh,  dalam  hal  ini  auksin  dan  sitokinin,  terbukti dapat menghasilkan pertumbuhan eksplan tebu yang maksimal. Selanjutnya, bibit tebu diaklimatisasi agar mampu hidup di lingkungan luar laboratorium.

## MATERIAL DAN METODE

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  sejak  Juli  2012  –  Januari  2013.  Adapun penelitian dibagi menjadi dua tempat penelitian, yaitu tahap pembuatan media dan penanaman  dilakukan  di  Laboratorium  kultur  jaringan,  Fakultas  Pertanian, Universitas  Gadjah  Mada  Yogyakarta  serta  tahap  pengamatan  dan  analisis  data dilakukan di Laboratorium Biologi, SMA Negeri 1 Pemalang.

## Alat dan Bahan
Penelitian  ini  menggunakan  alat  yang  terdiri  dari  gelas  beker,  gelas  ukur, erlenmeyer, cawan petri, pinset,  skalpel,  botol kaca, mikro pipet,  alas pemotong, autoklaf, magnetic  stirer , hot  plate ,  kertas  pH,  timbangan  elektrik,  timbangan analitik, lampu spirtus, Laminar Air Flow dan kamera digital (Canon Power Shoot 7,1  mega  pixel).  Bahan  yang  digunakan  terdiri  dari alumunium  foil , cling  warp , stok  makro  MS,  stok  mikro  MS,  stok  Fe-EDTA,  stok  myoinositol,  stok  vitamin MS,  stok  vitamin  MS1,  larutan  NaOH/KOH,  larutan  HCI,  2,4-D,  aquades,  agar, sukrosa,  tunas  pucuk  tebu,  kloroks,  alkohol,  spirtus,  detergen,  bakterisida  dan fungisida.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  penelitian eksprimental  ( experimental  research). Menurut  Arikunto  (2006)  metode penelitian  eksperimental yaitu,  suatu  cara  untuk  mencari  hubungan  sebab-akibat (hubungan  kasual)  antara  dua  faktor  yang  sengaja  ditimbulkan  oleh  peneliti dengan mengeliminasi atau mengurangi atau menyisihkan faktor-faktor lain yang menganggu.  Pada  penelitian  ini  dilakukan  pengamatan  untuk  mengetahui pengaruh  media  dengan  empat  kombinasi  perlakuan  media  pada  kultur  jaringan tebu  (MS0,  MS  dengan  tambahan  0,5  mg/l  BAP;  MS  dengan  tambahan  1  mg/l BAP  dan  0,5  mg/l  IBA;  dan  MS  dengan  tambahan  1,5  mg/l  dan  0,5  mg/l  IBA) terhadap  pertumbuhan  eksplan,  yang  diamati  melalui  beberapa  parameter pengamatan (persentase eksplan bertunas, kecepatan tumbuh tunas, jumlah tunas, tinggi tunas dan persentase keberhasila aklimatisasi).
Penelitian  ini  menggunakan  bahan  tunas  pucuk  tebu  klon  VMC.  Eksplan ditanam pada perlakuan (1) media MS0, (2) media MS dengan tambahan 0,5 mg/l BAP,  (3)  media  MS  dengan  tambahan  1  mg/l  BAP  dan  0,5  mg/l  IBA,  dan  (4) media MS dengan tambahan 1,5 mg/l dan 0,5 mg/l  IBA.  Setiap perlakuan media diulang tiga kali dan masing-masing ulangan terdiri dari tiga tanaman contoh.
Parameter  penelitian  yang  diamati  adalah  (a)  Persentase  eksplan  yang membentuk  tunas  yaitu  banyaknya  tunas  yang  terbentuk  dari  eksplan  yang ditanam;  (b)  Kecepatan  pembentukan  tunas  (hari);  (c)  Kecepatan  pembentukan tunas  dihitung  sejak  eksplan  yang  ditanam  sampai  muncul  tunas  untuk  pertama kalinya,  dinyatakan  dalam  hari;  (d)  Jumlah  tunas  yaitu  banyaknya  tunas  yang terbentuk  dari  setiap  eksplan  yang  ditanam;  dan  (e)  Tinggi  tunas  (cm)  yaitu pengukuran tinggi  tunas  yang diamati setiap 10 hari;  (e) Persentase keberhasilan aklimatisasi  (%)  dihitung  dengan  pembagian  jumlah  tananam  (planlet)  hidup setelah aklimatisasi setelah 14 hari sejak tanam dengan jumlah total tanaman yang diaklimatisasi dan dinyatakan dalam persen.

## Alur Penelitian

## 1. Sterilisasi Alat
Pada  tahap  ini  semua  alat  gelas  dan  logam  dicuci  dengan  sabun  sampai bersih,dikeringkan,  dan  dibungkus  kertas.  Alat-alat  yang  perlu  disterilisasi dalam autoklaf seperti pinset, skalpel, cawan petri, dan botol berisi air aquades untuk  air  steril.  Selain  itu,  botol-botol  yang  akan  digunakan  sebagai  wadah media,  kertas  filter,  dan aluminium  foil sebaiknya  juga  disterilkan  terlebih dahulu. Sterilisasi dilakukan pada temperatur 121 o C selama 30 menit.
2. Pembuatan dan Sterilisasi Media Budidaya
Media dasar yang digunakan adalah media MS  dengan penambahan ZPT sesuai perlakuan. Sebelum dilakukan pembuatan media, terlebih dahulu dibuat stok  media  yang  terdiri  dari  unsur  hara  makro,  hara  mikro,  dan  vitamin  yang kemudian  disimpan  dalam  lemari  es  untuk  menjaga  keawetannya.  Langkah selanjutnya yaitu melakukan pemipetan dari larutan stok-stok dan bahan-bahan lainnya  sesuai  urutannya.  Setelah  semua  stok  dimasukkan  kemudian ditambahkan akuades. Campuran bahan-bahan tersebut diletakkan di atas stirer hot plate agar semua bahan merata. Khusus untuk pembuatan media tahap tiga, ditambahkan  ZPT  dengan  konsentrasi  tertentu  sesuai  perlakuan.  Sambil pengadukan berjalan, dilakukan pengukuran pH sampai didapatkan pH optimal yaitu 5.5 – 5.8.
Setelah  pengukuran  pH  selesai,  ditambahkan  gula  dan  agar  kedalam media  secara  perlahan-lahan,  kemudian  media  dipanaskan.  Bila  sudah  larut, media  dimasak  sampai  mendidih.  Media  yang  telah  matang/mendidih  tadi dituang kedalam botol sebanyak 10 ml tiap botol. Selanjutnya media yang telah terisi  dalam  botol  tersebut  disterilisasi  dalam autoklaf selama  20  menit  pada temperatur 121 0 C. Setelah dingin, media disimpan pada suhu ruang 24-26 0 C selama tiga hari sebelum digunakan.
3. Pengambilan dan Sterilisasi Eksplan
Eksplan dipilih dari tanaman yang sehat, tidak terserang hama penyakit, jelas  klonnya  dan  cukup  umur  (±  berumur  3-6  bulan).  Bahan  tanam  diambil dari  bagian  tunas  pucuk,  sedangkan  tahapan  selanjutnya  meliputi  pencucian
dari kotoran, dan Sterilisasi bahan tanam di dalam Laminar Air Flow Cabinet (LAF).
Untuk  pencucian  kotoran,  tunas  pucuk  ditempatkan  di  dalam  baki  yang selanjutnya  dibawa  ke  ruang  pencucian  dan  dibersihkan  dari  kotoran  yang melekat dengan cara disiram air mengalir dan disikat dengan spon dan sedikit sabun. Tunas tersebut kemudian dimasukkan ke dalam baki bersih, dan dibawa ke  dalam  LAF.  Dalam  LAF,  tunas  pucuk  disemprot  alkohol  96%  kemudian dibakar  di  atas  api  bunsen,  setelah  itu  dibuka  pelepah  daunnya.  Perlakuan  ini diulang sampai 3 kali.
4. Penanaman Eksplan
Sebelum  penanaman  eksplan,  sebaiknya  LAF  telah  disterilkan  dengan alkohol  dan  sinar  UV  minimal  selama  ±  30  menit.  Selanjutnya,  eksplan  yang telah steril, diambil dengan pinset kemudian dipotong-potong titik tumbuhnya menjadi ukuran 3 – 5mm. Selanjutnya potongan tersebut dimasukkan ke dalam botol media. Setelah penanaman selesai, botol-botol tersebut disusun di dalam almari gelap.
5. Aklimatisasi Planlet
Media  tumbuh  yang  digunakan  adalah  arang  sekam,  cocopeat  dan kompos  dibungkus  rapi  dengan  plastik  untuk  disterilkan  terlebih  dahulu  di dalam autoklaf pada suhu 121 o C selama 60 menit. Selanjutnya membersihkan planlet dari botol kultur dengan aquades steril dengan maksud menghilangkan agar  bekas  media  kultur.  Daun  dan  akar  dipotong  terlebih  dahulu  sebelum disterilkan.  Planlet  disterilkan  dengan  direndam  di  dalam  larutan  fungisida Dithane  M-45  sebanyak  2  cc/L  air  selama  5  menit.  Lalu  diletakkan  di  atas kertas koran dan dikering-anginkan.
Penanaman dilakukan dengan memindahkan planlet hasil kultur ke dalam media  aklimatisasi  yang  telah  disiapkan.  Setelah  planlet  ditanam,  planlet disungkup  dengan  plastik  transparan  untuk  menjaga  kelembabannya.  Setiap dua hari sekali selama 1 minggu, sungkup dibuka untuk  membiasakan planlet dengan kondisi autotrop. Untuk pemeliharaan tanaman, penyiraman dilakukan menggunakan  handsprayer  setiap  pagi  atau  sore  hari.  Pemupukan  dilakukan
dengan  penyemprotan  pupuk  daun  Bayfolan  0,5  cc/L  air  setiap  seminggu sekali.  Pengendalian  hama  dan  penyakit  dilakukan  dengan  penyemprotan Dithane M-45 jika diperlukan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dalam  kultur  jaringan,  penggunaan  zat  pengatur  tumbuh  lazim  digunakan untuk  menentukan  arah  budidaya  atau  penelitian.  Media  Murashige  and  Skoog (MS) sering  digunakan  media dasar budidaya jaringan untuk  regenerasi  tanaman dari  jaringan  dan  kalus.  Dalam  penelitian  ini  dilakukan  penanaman  eksplan  tebu VMC  pada  media  tanpa  penambahan  zat  pengatur  tumbuh  (MS0);  media  hanya dengan sitokinin saja untuk mengetahui peran sitokinin dalam kemunculan tunas pada  eksplan  tebu;  dan  media  dengan  dua  kombinasi  konsentrasi  auksin  dan sitokinin untuk mempelajari dan menghasilkan planlet tebu yang mampu tumbuh secara  maksimal  ketika  ditumbuhkan  pada  media in  vitro .  Dalam  penelitian  ini, jenis sitokinin yang digunakan adalah BAP ( Benzil Amino Purin ) dan auksin yang digunakan adalah IBA ( Indole Butiric Acid ).
Penggunaan BAP sering digunakan dalam kultur jaringan. BAP merupakan salah satu golongan sitokinin, dengan fungsi utama menstimulasi pembelahan sel. BAP  dapat  mempengaruhi  proses  fisiologi  tanaman,  khususnya  dalam pembentukan  tunas.  Sedangkan  IBA  berperan  dalam  perpanjangan  sel, diferensiensi  jaringan  xilem  dan  floem,  pembentukan  akar  adventif.  Gunawan (1987) cit Kartina et  al. (2011)  menyatakan  bahwa  pemberian  IBA  akan mendorong pembentukan akar adventif. Media yang diperuntukkan untuk inisiasi akar  juga  mampu  menghasilkan  tunas  yang  baik.  Hal  ini  karena  IBA  yang diberikan dalam media akan berinteraksi dengan sitokinin (endogen dan eksogen) untuk regenerasi tunas.

## Respon Pertumbuhan
Gambar  1.  Respon  eksplan  pada  berbagai  media  pada  hari  ketiga  setelah tanam;  media  MS0  (a),  media  MS+0,5  mg/l  BAP  (b);  media MS+1  mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA  (c)  dan  media  MS+1,5  mg/l BAP+0,5 mg/l IBA (d).
Gambar 1 menunjukkan respon eksplan tebu pada hari ketiga setelah tanam. Eksplan  tebu  diambil  dari  tunas  pucuk  tebu  yang  masih  muda.  Pemilihan  tunas pucuk  ini  didasarkan  pada  banyaknya  jaringan  meristem  pada  tunas  pucuk,  di mana jaringan meristem ini merupakan jaringan muda yang memiliki banyak sel- sel  yang  aktif  membelah  yang  melakukan  pertumbuhan  sehingga  diharapkan eksplan tebu mampu tumbuh ketika ditanam secara in vitro . Respon eksplan tebu pada  hari  ketiga  setelah  tanam  berbeda-beda  tergantung  media  tanam  yang digunakan.  Media  MS0,  tanpa  penambahan  zat  pengatur  tumbuh  belum menunjukkan  adanya  gejala  (respon)  pertumbuhan.  Media  dengan  penambahan zat  pengatur  tumbuh,  baik  sitokinin  jenis  BAP  saja  maupun  kombinasi  antara auksin (IBA) dan sitokinin (BAP) telah menunjukkan respon pertumbuhan.
Respon  pertumbuhan  pada  eksplan  menunjukkan  bahwa  eksplan  mampu menyerap  nutrisi  yang  terdapat  di  dalam  media  tanam.  Adanya  zat  pengatur tumbuh  mampu  merangsang  gejala  pertumbuhan  pada  eksplan,  dengan merangsang  pembelahan  pembesaran  sel.  Selanjutnya,  pertumbuhan  masing- masing  eksplan  bergantung  dari  keadaan  eksplan  saat  tanam,  kandungan  media tanam dan faktor lingkungan.
Gambar  2.  Respon  eksplan  pada  berbagai  media  pada  hari  ke  30  setelah tanam;  media  MS+0,5  mg/l  BAP  (a);  media  MS+1  mg/l BAP+0,5 mg/l IBA (b) dan media MS+1,5 mg/l BAP+0,5 mg/l IBA (c).
Dalam  penelitian  ini,  kombinasi  auksin  dan  sitokinin  ditujukan  untuk regenerasi  eksplan  melalui  organogenesis  secara  langsung.  Organogenesis  ini membentuk  organ  tanaman  tanpa  melalui  kalus.  Pada  proses  organogenesis, eksplan  akan  menghasilkan  tunas  dan  akar,  namun  keduanya  tidak  akan  muncul bersamaan, biasanya tunas  akan terbentuk terlebih dahulu.  Gambar 2 merupakan proses  pertumbuhan  eksplan  tebu  pada  hari  ke  30  setelah  tanam  pada  berbagai perlakuan  media  tanam.  Massa  eksplan  bertambah  besar  menunjukkan  proses pertumbuhan  berlangsung  dengan  baik  karena  nutrisi  yang  terdapat  pada  media tanam  dapat  diserap  oleh  eksplan.  Eksplan  mulai  berwarna  hijau  menunjukkan klorofil mulai terbentuk akibat rangsangan cahaya. Klorofil ini mutlak diperlukan oleh  eksplan  untuk  berfotosintesis.  Hanifa  (2007)  menyatakan  pada  penambahan sitokinin  dengan  konsentrasi  yang  semakin  meningkat,  cenderung  menunjukkan warna hijau pada eksplan (atau kalus) lebih lama. Warna hijau ini merupakan efek sitokinin dalam pembentukan klorofil.

## Pertumbuhan Eksplan Tebu
Gunawan (1987) menyatakan interaksi dan perimbangan antara auksin dan sitokinin, yang diberikan dalam media tanam dan yang diproduksi secara endogen oleh  tanaman,  menentukan  arah  perkembangan  budidaya  yang  ditanam.  Hasil penelitian kombinasi auksin dan sitokinin dalam kultur jaringan tebu ditunjukkan pada tabel 1.
Tabel 1. Besarnya rata-rata per parameter masing-masing media
JENIS MEDIA % EKSPLAN BERTUNAS HARI MUNCUL TUNAS TINGGI TUNAS 60 HARI TINGGI TUNAS 90 HARI JUMLAH TUNAS MS0 0,00 - - - - MS+0,5 mg/l BAP 44,44 23,67 3,80 7,92 24,17 MS+1 mg/l BAP+0,5 mg/l IBA 88,89 14,00 3,51 10,33 25,28 MS+1,5 mg/l BAP+0,5 mg/lIBA 88,89 12,67 7,61 16,99 112,83

## Persentase Eksplan Bertunas
Besarnya  persentase  eksplan  bertunas  ditunjukkan  pada  Tabel  1,  yang menunjukkan  bahwa  media  MS0  tidak  mampu  memunculkan  tunas  tebu  (0  %). Media  dengan  penambahan  BAP  saja  ( MS+0,5  mg/l  BAP) mampu  menghasilkan tunas tetapi persentase eksplan yang bertunas rendah, yaitu hanya mencapai 44,44 %;  sedangkan media dengan kombinasi  BAP  dan  IBA  ( MS+1  mg/l  BAP+0,5  mg/l IBA dan MS+1,5  mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA) mampu  menghasilkan  tunas  dengan persentase  eksplan  bertunas  tinggi,  mampu  mencapai  88,89%.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  aktivitas  zat  pengatur  tumbuh  sitokinin  jika  ditambahkan auksin ke dalam media tanam mampu merangsang kemunculan jumlah tunas pada eksplan tebu.
Gambar 3.  Diagram persentase eksplan bertunas pada berbagai media tanam eksplan tebu
Gambar  3  menunjukkan  besarnya  persentase  eksplan  bertunas;  pada  media MS0  tidak  menunjukkan  adanya  tunas  pada  eksplan  tebu.  Tunas  tebu  muncul
dengan  penambahan  sitokinin  saja,  dan  besarnya  kemunculan  tunas  hampir mencapai  dua  kali  penambahan  sitokinin  dan  auksin  pada  media  kultur in  vitro. Hal  ini  menunjukkan  peranan  zat  pengatur  tumbuh  terhadap  kemunculan tunaspada media kultur in vitro . Persentase eksplan bertunas dipengaruhi oleh zat pengatur  tumbuh  yang  diberikan.  Lizawati et  al. (2012)  menyatakan  tingginya persentase eksplan berkalus diduga diperoleh saat komposisi zat pengatur tumbuh tepat; karena pembentukan tunas sangat dipengaruhi oleh jenis dan keseimbangan antara auksin dan sitokinin yang diberikan ke dalam media tanam. Konsentrasi zat pengatur  tumbuh  tersebut  mampu  menginduksi  sel-sel  yang  berpotensi  untuk melakukan  pembelahan  secara  terus-menerus  dalam  waktu  yang  lebih  cepat dibandingkan dengan perlakuan lainnya.

## Hari Kemunculan Tunas
Tabel 1 menunjukkan hari kemunculan tunas pada eksplan tebu. Media MS0 tidak  mampu  memunculkan  tunas  pada  eksplan  sampai  hari  ke  30  sejak penanaman  eksplan,  yang  selanjutnya  eksplan  tebu  pada  media  MS0  mengalami kematian. Media dengan penambahan BAP saja ( MS+0,5 mg/l BAP ) memunculkan tunas tetapi  pada hari ke 23,67. Media dengan kombinasi  BAP  dan  IBA  mampu mempercepat  kemunculan  tunas  pada  eksplan  tebu,  yaitu  pada  hari  ke-14  pada MS+1  mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA  dan  hari  ke-12  pada  MS+1,5  mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  aktivitas  zat  pengatur  tumbuh  sitokinin  jika ditambahkan  auksin  ke  dalam  media  tanam  mampu  mempercepat  kemunculan tunas pada eksplan tebu.
Gambar 4.  Diagram hari munculnya tunas pada berbagai media tanam eksplan tebu
Gambar 4 menunjukkan hari munculnya tunas pada eksplan tebu. Eksplan tebu pada media MS0 tidak mampu memunculkan tunas pada eksplan tebu. Media MS0  tanpa  penambahan  zat  pengatur  tumbuh  menunjukkan  tidak  ada  respon pertumbuhan  pada  eksplan,  yang  pada  akhirnya  eksplan  mengalami  kematian. Penambahan  sitokinin  (BAP)  saja  menunjukkan  respon  yang  lebih  lama  untuk parameter  hari  munculnya  tunas,  jika  dibandingkan  dengan  media  tanam  yang ditambahkan sitokinin dan auksin. Dan dengan penambahan konsentrasi sitokinin pada  media  MS+1,5  mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA  mampu  memunculkan  tunas  lebih cepat  dua  hari  jika  dibandingkan  media  MS+1  mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA.Sejalan dengan  George  dan  Sherrington  (1984) cit Sari et  al. (2011)  menyatakan  bahwa kemampuan  suatu  eksplan  untuk  berdiferensiensi  tidak  hanya  tergantung  pada hormon endogen  yang terdapat pada tumbuhan itu sendiri tetapi juga bergantung pada penambahan hormon eksogen pada media pertumbuhan. Sitokinin jenis BAP dan  kinetin  sangat  efektif  untuk  pembentukan  tunas  aksilar  dan  menghambat dominasi tunas apikal. Oleh karena itu, kedua jenis sitokinin ini efektif digunakan untuk perbanyakan tunas.

## Jumlah Tunas
Parameter  banyaknya  jumlah  tunas  dapat  diketahui  melalui  tabel  1. Banyaknya  jumlah  tunas  yang  muncul  pada  media  MS+0,5  mg/l  BAP  sebanyak 24,  17  buah.  Adanya  penambahan  auksin  jenis  IBA  pada  media  MS+1  mg/l BAP+0,5  mg/l  IBA  tidak  menunjukkan  jumlah  yang  signifikan,  yaitu  hanya sekitar  25,28  buah.  Namun  penambahan  konsentrasi  sitokinin  dan  auksin  pada media MS+1 mg/l,5 BAP+0,5 mg/l IBA menunjukkan hasil yang signifikan, yaitu mampu mencapai 112,83 buah jumlah tunas. Hal ini menunjukkan bahwa dengan kombinasi  konsentrasi  yang  tepat  antara  sitokinin  dan  auksin  pada  media  tanam mampu menghasilkan jumlah tunas yang maksimal pada eksplan tebu.

## Gambar 5. Diagram jumlah tunas pada berbagai media tanam eksplan tebu
Gambar 5 menunjukkan histogram banyaknya jumlah tunas pada berbagai media  tanam  tebu.  Banyaknya  jumlah  tunas  yang  dihasilkan  oleh  eksplan  tebu untuk  masing-masing  perlakuan  media  menunjukkan  kemampuan  eksplan berdifirensiasi.  Penambahan  sitokinin  saja  mampu  memunculkan  tunas  pada eksplan  tebu,  tetapi  dengan  kombinasi  konsentrasi  antara  auksin  dan  sitokinin yang  tepat  yang  mampu  memunculkan  jumlah  tunas  yang  paling  banyak.  Media kombinasi  auksin  dan  sitokinin  dengan  konsentrasi  BAP  yang  besar  (MS+1,5 mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA)  mampu  menghasilkan  tunas  paling  banyak,  mencapai kisaran  110  buah.  Jumlah  tersebut  berbeda  secara  signifikan  jika  dibandingkan dengan media tanam lainnya, yaitu dengan penambahan sitokinin saja (jenis BAP) dan  kombinasi  auksin  dan  sitokinin  dengan  konsentrasi  BAP  kecil  (MS+1  mg/l
BAP+0,5  mg/l  IBA),  yaitu  hanya  sekitar  24  –  25  buah  tunas  saja.  Hal  ini menunjukkan  aktivitas  zat  pengatur  tumbuh  mampu  merangsang  perkembangan eksplan.
Banyaknya  tunas  yang  dihasilkan  pada  perlakuan  media  MS+1,5  mg/l BAP+0,5  mg/l  IBA  sangat  menguntungkan  dalam  perbanyakan  tebu  dengan metode  kuktur  jaringan.  Dalam  hal  ini,  tahapan  multiplikasi  yang  merupakan menggandakan propagul atau calon tanaman, berupa tunas ataupun embrio Tunas- tunas  ini  dapat  dipotong  dan  ditanam  kembali  dalam  botol  kultur  jaringan  baru sehingga  dalam  perkembangannya  nanti  dapat  menghasilkan  bibit  tebu  dalam jumlah yang sangat banyak. Untuk penelitian tertentu, tahapan multiplikasi dapat dihentikan  sesuai  dengan  tujuan  penelitian.  Setelah  munculnya  tunas,  biasanya masuk  tahapan  pengakaran  yang  selanjutnya  planlet  diaklimatisasi  untuk penyesuaian dengan lingkungan luar.

## Tinggi Tanaman
Pengamatan  tinggi  tunas  pada  hari  ke  60  dan  hari  ke  90  setelah  tanam dapat  dilihat  pada  tabel  1.  Pengamatan  tinggi  tunas  pada  hari  ke  60,  media kombinasi  auksin  dan  sitokinin  dengan  konsentrasi  BAP  yang  besar  (MS+1,5 mg/l BAP+0,5 mg/l IBA) mampu menghasilkan tunas dengan tinggi tunas paling tinggi,  yaitu  mencapai  7,61  cm;  jika  dibandingkan  dengan  dua  jenis  media lainnya.  Media  dengan  penambahan  BAP  saja,  yaitu  MS+0,5  mg/l  BAP  dan kombinasi  auksin  dan  sitokinin  dengan  konsentrasi  BAP  kecil  (MS+1  mg/l BAP+0,5  mg/l  IBA)  hanya  mencapai  tinggi  tanaman  sebesar  3,80  cm  dan  3,51 cm.
Namun,  pada  pengamatan  tinggi  tunas  pada  hari  ke  90  setelah  tanam menunjukkan  peningkatan  tinggi  tunas  yang  cukup  signifikan  pada  kombinasi auksin  dan  sitokinin  dengan  konsentrasi  BAP  kecil  (MS+1  mg/l  BAP+0,5  mg/l IBA)  mencapai  kisaran  10,33  cm  jika  dibandingkan  dengan  media  dengan penambahan  BAP  saja  (MS+0,5  mg/l  BAP),  yaitu  hanya  sekitar  7,92  cm.Media kombinasi  auksin  dan  sitokinin  dengan  konsentrasi  BAP  yang  besar  (MS+1,5
mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA)  tetap  mampu  menghasilkan  tunas  dengan  tinggi  tunas paling tinggi, yaitu mencapai kisaran 16,99 cm.
Gambar 6. Pengamatan tinggi tunas tebu hari ke 60 setelah tanam pada media MS+0,5  mg/l  BAP  (a);  media  MS+1  mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA  (b) dan media MS+1,5 mg/l BAP+0,5 mg/l IBA (c).
Gambar  7.  Pengamatan  tinggi  tunas  tebu  hari  ke  90  setelah  tanam  pada  media MS+0,5  mg/l  BAP  (a);  media  MS+1  mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA  (b) dan media MS+1,5 mg/l BAP+0,5 mg/l IBA (c).
Gambar 8 menunjukkan pertumbuhan tunas tebu pada hari ke 60 dan hari ke 90  setelah  tanampada  berbagai  media  tanam.  Secara  umum,  pengamatan  tinggi tunsas  paling  tinggi  dicapai  media  kombinasi  auksin  dan  sitokinin  dengan konsentrasi  BAP  yang  besar  (MS+1,5  mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA),  yaitu  mampu menghasilkan tinggi tunas sekitar 7,6 cm pada hari ke-60 dan sekitar 17 cm pada hari  ke-90.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kombinasi  auksin  dan  sitokinin  dengan konsenrasi yang tepat mampu menghasilkan pertumbuhan tunas yang maksimal.
Gambar 8. Grafik tinggi tunas pada hari ke-60 dan hari ke-90 setelah tanam pada berbagai media tanam tebu
Pertumbuhan  merupakam  proses  penambahan  massa  tanaman,  meliputi ukuran  dan  volume  yang irreversible (tidak  dapat  balik  kembali).  Penambahan tinggi  tunas  tebu  dapat  digunakan  untuk  menggambarkan  pola  pertumbuhan tanaman selama kultur in vitro . Pertambahan tinggi tunas ditunjukkan oleh semua perlakuan  media  tanam,  yang  artinya  eksplan  mampu  menyerap  nutrisi  secara optimal sehingga dapat terus tumbuh. Penggunaan  zat pengatur tumbuh berperan postif  terhadap  pertumbuhan  eksplan.  Peranan  auksin  dan  sitokinin  mampu menghasilkan  pola  pertumbuhan  maksimal  jika  berada  dalam  konsentrasi  yang tepat.  Kombinasi  konsentrasi  pada  media  MS+1,5  mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA menghasilkan  pertumbuhan  tunas  yang  paling  baik  jika  dibandingkan  dengan perlakuan media lainnya.

## Aklimatisasi Planlet
Tabel 2. Hasil aklimatisasi planlet tebu
MEDIA TANAM Jumlah planlet yang dipindahkan jumlah planlet yang hidup Persentase hidup (%) MS0 - - - MS+0,5 mg/l BAP 9 4 44,44 MS+1 mg/l BAP+0,5 mg/l IBA 9 6 66,67 MS+1,5 mg/l BAP+0,5 mg/l IBA 9 6 66,67
Berdasarkan  tabel  2,  diketahui  bahwa  persentase  hidup  planlet  yang diaklimatisasi mencapai 66,67% pada media MS+1 mg/l BAP+0,5 mg/l IBA dan
MS+1,5 mg/l BAP+0,5 mg/l IBAdan terendah 44,44% untuk media MS+0,5 mg/l BAP.  Hal  ini  berkaitan  erat  dengan  kondisi  planlet  yang  akan  diaklimatisasi. Kelengkapan  organ  planlet  sangat  mendukung  keberhasilan  aklimatisasi  untuk keberlangsungan hidup planlet, antara lain planlet telah memiliki daun, perakaran yang kuat dan tegar (tidak mudah patah).
Aklimatisasi merupakan suatu kegiatan pemindahan planlet dari lingkungan terkendali  (kultur in  vitro )  ke  lingkungan  mandiri  ( eks  vitro ).  Planlet  yang pertumbuhannya  telah  optimal  dan  memiliki  perakaran  yang  sempurna  dapat dilakukan  aklimatisasi.  Ukuran  planlet  akan  menentukan  keberhasilan  proses aklimatisasi.  Biasanya  ketika  planlet  mencapai  ukuran  8  –  10  cm  selanjutnya diaklimatisasi di rumah kaca. Daun berperan sebagai tempat fotosintesis sehingga mutlak  diperlukan  ketika  planlet  anggrek  akan  diaklimatisasi.  Semakin  banyak jumlah  daun  planlet,  semakin  besar  pula  planlet  mampu  menyediakan  makanan sendiri, artinya semakin besar pula keberhasilan aklimatisasi. Begitu juga dengan akar,  yang  berfungsi  sebagai  alat  mencari  unsur  hara  dan  air.  Semakin  panjang dan  kompak  perakaran  planlet  anggrek,  semakin  luas  jangkauan  bidang penyerapan unsur hara dan air, yang artinya mendukung keberhasilan aklimatisasi anggrek hasil kultur jaringan.
Zulkarnain  (2009)  menyebutkan  masa  aklimatisasi  merupakan  masa  kritis karena  bibithasil  kultur  jaringan  menunjukan  beberapa  sifat kurang menguntungkan, seperti lapisan lilin (kutikula tidak berkembang baik, kurangnya lignifikasi batang, jaringan pembuluh dari akar ke pucuk kurang berkembang dan stomata  sering  kali  tidak  berfungsi  (tidak  menutup  ketika  penguapan  tinggi). Keadaan  itu  menyebabkan  bibithasil  kultur  jaringan  sangat  peka  terhadap transpirasi,  serangan  cendawan  dan  bakteri,  cahaya  dengan  intensitas  tinggi  dan suhu  tinggi.  Oleh  karena  itu,  aklimatisasi  bibithasil  kultur  jaringanmemerlukan penanganan  khusus  terhadap  kondisi  lingkungan  terutama  dalam  kaitannya dengan suhu, kelembaban dan intensitas cahaya.

## KESIMPULAN
Adanya  pengaruh  zat  pengatur  tumbuh,  baik  sitokinin  saja  maupun kombinasi  auksin  dan  sitokinin,  terhadap  pertumbuhan  eksplan  tebu.Kombinasi auksin  dan  sitokinin  yang  tepat  akan  menghasilkan  pertumbuhan  eksplan  yang maksimal.Media  MS+1,5  mg/l  BAP+0,5  mg/l  IBA  menghasilkan  pertumbuhan eksplan  yang  paling  baik  jika  dibandingkan  dengan  media  lainnya.Tingkat keberhasilan aklimatisasi planlet tebu dengan media MS+1,5 mg/l BAP+0,5 mg/l IBA mencapai 66,67%.

## DAFTAR PUSTAKA
Arikunto, S. 2006. Prosedur Penelitian Suatu Pendekatan Praktk . Rhineka Cipta. Jakarta.
Gunawan,  L.W.  1987. Teknik  Budidaya  Jaringan  Tumbuhan .  PAU  Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Hanifa.  2007.  Pengaruh  Konsentrasi  NAA  dan  BAP  terhadap  Pertumbuhan Eksplan  Jarak  Pagar  ( Jatropha  curcas L.)  secara In  Vitro .  Skripsi Diterbitkan. Universitas Negeri Sebelas Maret. Surakarta.
Hendaryono,  D.P.S.  dan  Wijayanti,  A.  1994. Teknik  Budidaya  Jaringan, Pengenalan  dan  Petunjuk  Perbanyakan  Tanaman  Secara  Vegetatif Modern . Penerbit Kanisius. Yogyakarta.
Kartina,  A.M.,  Nurmayunis  dan  Susiyanti.  2011.  Pengaruh  IBA  terhadap Pembentukan Akar pada Tanaman Areen. Jurnal Agrivigor 10 (2) : 208 – 218.
Lizawati,  Neliyati  dan  R.  Desfira.  2012.  Induksi  Kalus  Eksplan  Daun  Durian ( Durio zibethinus Murr. Cv. Selat Jambi) pada Beberapa Kombinasi 2,4- D dan BAP. Fakultas Pertanian UniversitasJambi 1 (1) : 1 – 7.
Prabowo, H. E. 2009. Gula: Dulu Eksportir, Kini Importir . Kompas edisi Kamis, 23 Juli 2009.
Sari, Y.P., H. Manurung dan V. Novita. 2011. Mikropropagansi Tanaman Angrek Tebu  ( Grammatophyllum  speciosum BL.)  secara In  Vitro dari  Sumber Eksplan  Tunas  Pucuk  pada  Media  MS  ( Murashige  Skoog )  dengan Penambahan Madu. Mulawarman Science 10 (1) : 1-12.
Suryowinoto,  M.  1990. Pemuliaan  Tanaman  Secara  Invitro .  PPS-Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta.
Wattimena, G.A., L.W. Gunawan, N.A. Maatjik, Sjamsudin, N.M.A. Wiendi, dan A. Ernawati. 1992. Bioteknologi Tanaman . PAU Institut Pertanian Bogor.
Bogor.
Zulkarnain, H. 2009. Kultur Jaringan Tanaman. Bumi Aksara. Jakarta.