Pharmacoscript Volume 4 No. 1 Februari 2021
AKTIVITAS SITOTOKSIK SENYAWA TERPENOID DARI EKSTRAK METANOL DAUN AKAR KAIK-KAIK ( Uncaria cordata (Lour.) Merr)
Noveri Rahmawati 1 , Rahmayati Rusnedy 1 *, Dwiki Septian 1
Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau
* Email: rahmayatikenedy@gmail.com
Received: 29/01/2021, Revised: 24/02/2021, Accepted: 25/02/2021, Published: 28/02/2021

## ABSTRAK
Genus Uncaria kaya  akan  kandungan  metabolit  sekunder.  Pengembangan  sebagai  agen farmakologi dari isolat murni tumbuhan ini perlu untuk diteliti. Tujuan penelitian ini adalah uji sitotoksik senyawa murni ekstrak metanol daun tumbuhan akar kaik-kaik Uncaria cordata (Lour.) Merr. Terlebih  dahulu  dilakukan  tahap  ekstraksi  dengan  metode  maserasi  dan  dilakukan pemisahan dengan kromatografi kolom. Fraksi F1 yang diperoleh dari kromatografi kolom diuji aktivitas sitotoksik memiliki nilai LC 50 sebesar 208,92 µg/mL. Senyawa murni hasil isolasi diberi label UcF1, berupa amorf, berwarna hijau dengan titik leleh 188-190 o C. Berdasarkan analisis data pemeriksaan fitokimia, spektroskopi UV dan IR, senyawa UcF1 diprediksi merupakan senyawa golongan  terpenoid.  Senyawa  UcF1  memiliki  nilai  LC 50 sebesar  69,18  µg/mL  dan  nilai  ini menunjukkan bahwa senyawa ini mempunyai aktivitas sitotoksik yang kuat.
Kata Kunci: Akar Kaik-Kaik; Aktivitas Sitotoksik; Terpenoid

## ABSTRACT
The genus Uncaria is rich in secondary metabolites. The development as a pharmacological agent of pure plant isolates needs to be investigated. The purpose of this study was a cytotoxic test of a pure compound of methanol extract from the leaves of the Kaik-kaik root plant Uncaria cordata (Lour.)  Merr.  First,  the  extraction  stage  is  carried  out  using  the  maceration  method  and  the separation  is  carried  out  using  column  chromatography. Fraction  F1  obtained  from chromatography column tested cytotoxicity assay have LC 50 values of 208.92 µg/mL. Isolated pure compound labeled UcF1, in the form of green amorphous with a melting point 188-190 o C. Based on data analysis phytochemical examination, UV and IR spectroscopy, UcF1 compound suggested group of terpenoids. Compound UcF1 have LC 50 values of 69,18 µg/mL and this value indicated that compound has very strong cytotoxic activity.
Keywords : Uncaria cordata (Lour.) Merr; Cytotoxic Activities ; Terpenoid

## PENDAHULUAN
Sebagai  salah  satu  negara  tropis  yang kaya sumber daya hayati, Indonesia memiliki ± 30.000 spesies tumbuhan dan baru kira-kira
7000  spesies  diantaranya  yang  dikenal sebagai tumbuhan berkhasiat obat (Indrayani et  al ,  2006).  Salah  satu  diantaranya  yang digunakan  ialah  tumbuhan  genus Uncaria .
Rusnedy et al../Pharmacoscript, Volume 4, No, 1, Februari 2021, 78-88
Safitri.,et al./Pharmacoscript, Volume 1, No. 2, Februari 2019, 1-12
Tanaman  dari  genus  Uncaria  (Rubiaceae) yang telah dilaporkan ada sekitar 34 spesies. Genus ini tersebar terutama di daerah tropis, seperti Asia Tenggara, Afrika, dan Amerika Tenggara (Turner, 2018).
Genus Uncaria telah digunakan dalam mengobati  spasmolitik,  gangguan  syaraf, hipertensi, diabetes, arthiritis, dan inflamasi. Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  bahwa alkaloid,  flavonoid  dan  terpenoid  adalah kandungan  metabolit  sekunder  terbanyak yang terisolasi dari genus Uncaria (Sun et al, 2012).
Salah  satu  Genus Uncaria yang terdapat  di  Pulau  Sumatera,  Propinsi  Riau ialah Uncaria  cordata (Lour.)  Merr. Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, spesies ini mempunyai aktivitas diantaranya sebagai  antioksidan,  antiinflamasi,  dan sitotoksik (Putri, 2016). Pada penelitian yang dilakukan  oleh  Rindiana  pada  tahun  2014 telah  dilakukan  pada  daun  tumbuhan  akar kaik-kaik Uncaria  cordata (Lour.)  Merr sebagai antioksidan dari hasil isolasi ekstrak metanol daun Uncaria cordata (Lour.) Merr, dimana  daun Uncaria  cordata (Lour.)  Merr memiliki  aktivitas  antioksidan  dengan  IC 50
sebesar  6,778  µg/mL.  Penelitian  tentang aktivitas  sitotoksik  telah  dilakukan  oleh Azwendah  terhadap  ekstrak n -heksan,  etil asetat, dan metanol. Adapun nilai LC 50 yang
diperoleh dari ekstrak n -heksana sebesar 7,46 µg/mL,  ekstrak  etil  asetat  sebesar  6,66 µg/mL,  dan  ekstrak  metanol  sebesar  7,83 µg/mL.  Penelitian  terdahulu  juga  sudah melakukan isolasi terhadap ekstrak etil asetat dan  diperoleh  senyawa  murni  Uc7  yang merupakan  senyawa  terpenoid,  memiliki aktivitas  sitotoksik  yang  kuat  dengan  nilai LC 50 sebesar 2,75 µg/mL  (Rahmawati et  al , 2016).
Terpenoid merupakan kelompok fitokimia  terbesar  yang  secara  tradisional digunakan untuk tujuan pengobatan dan saat ini  sedang  dieksplorasi  sebagai  agen antikanker  dalam  uji  klinis.  Terpenoid  juga disebut "isoprenoid" adalah metabolit sekunder  yang  terdapat  di  sebagian  besar organisme,  terutama  tumbuhan.  Lebih  dari 40.000  spesies  yang  ada  di  alam,  diketahui mengandung  senyawa  terpenoid. Sejumlah besar  terpenoid  menunjukkan  sitotoksisitas terhadap berbagai sel tumor dan pencegahan kanker  serta  memiliki  kemanjuran  sebagai antikanker  pada  model  hewan  praklinis (Sacchettini  JC  &  Poulter  CD,  1997; Penuelas J & Munne-Bosch S, 2005; Withers ST &Keasling JD, 2007).
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan terhadap Genus uncaria , terutama pada Genus uncaria cordata, belum ada yang meneliti  tentang  uji  sitotoksik  dari  senyawa
murni  ekstrak  metanol,  metanol  digunakan sebagai  pelarut  dalam  ekstraksi  maserasi karena metanol bersifat sebagai pelarut polar mampu  melarutkan  unsur-unsur  bioaktif yang  bersifat  polar  pada  tanaman  herba medisinalis (Santosa, 1995). Tujuan penelitian  ini  adalah  mendapatkan  isolat murni dari ekstrak methanol daun tumbuhan akar kaik-kaik Uncaria cordata (lour.) Merr. dan menggali peran potensial dari terpenoid alami  yang  terkandung  didalamnya  melalui uji sitotoksik.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang digunakan dalam  penelitian ini  adalah  seperangkat  alat  destilasi, rotary evaporator (Buchi Rotavapor R-114), kolom kromatografi, chamber ,  alat  pengukur  titik leleh Stuart  Melting  Point  Apparatus  SMP- 11, spektrofotometer  UV  (Shimadzu  UV- 1800)  dan  spektrofotometer  IR  (Shimadzu Prestige-21).  Bahan-bahan  yang  digunakan adalah daun Uncaria cordata (Lour.) Merr., n -heksana, etil asetat, metanol, silika gel, plat kromatografi lapis tipis (KLT), dan dimetilsulfoksida (DMSO).
Jalannya Penelitian
1. Pengumpulan dan Identifikasi Sampel
Sampel yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  daun Uncaria  cordata (Lour.)  Merr  yang  diambil  di  Hutan Larangan  Adat  Rumbio  Kabupaten  Kampar Provinsi Riau. Tanaman tersebut diidentifikasi  di  Laboratorium  Biologi Jurusan  Biologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam ( FMIPA)
Universitas  Andalas  Padang,  Sumatera Barat.
2. Persiapan dan Ekstraksi Sampel
Simplisia  daun Uncaria  cordata (Lour.) Merr dibuat dengan cara dikeringkan pada suhu kamar. Sampel  yang dikeringkan dibuat  bubuk  dan  dimaserasi  dengan n - heksan,  etil  asetat,  dan  metanol.  Hasil maserasi  kemudian  dipekatkan  dengan menggunakan alat rotary evaporator sehingga  diperoleh  ekstrak  kental n -heksan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol.

## 3. Pemeriksaan  Komponen  Senyawa Kimia Dengan KLT
Menggunakan  eluen  etil  asetat  : metanol  dengan  perbandingan  masing- masing 7:3 dan 1:1 kemudian noda pada plat KLT  dimonitoring  dibawah  lampu  UV dengan panjang gelombang 254 nm dan 366 nm.

## 4. Pemisahan  Dengan  Kromatografi Kolom
Ekstrak sebanyak 10 gram pada kolom diisi  dengan  bubur  silika  dan  dimasukan  ke dalam  kolom  dengan  menggunakan  corong, ditambahkan n- heksan  untuk  meningkatkan kepadatan  dan  kolom  diketuk  perlahan hingga  silika  benar-benar  padat.  Ekstrak dimasukkan  ke  dalam  kolom.  Selanjutnya dilakukan pengelusian menggunakan pelarut berdasarkan  SGP  ( Step  Gradient  Polarity ), dari  pelarut  yang  non  polar,  semi  polar  dan polar.  Hasil  pemisahan  ditampung  dalam vial.
5. Pemeriksaan  Komponen  Senyawa Kimia  Hasil  Fraksi  Kromatografi Kolom Dengan KLT.
Pemeriksaan komponen senyawa kimia  hasil  fraksi  kromatografi  kolom dengan  KLT.  Vial-vial  yang  akan  diuji diambil  secara  acak  setiap  5  vial,  fraksi ditotolkan  pada  plat  KLT  yang  telah  diberi nomor vial dan dielusi dengan eluen hingga garis  batas  atas.  Kemudian  plat  dikeluarkan dan  dikering  anginkan.  Lihat  dibawah  sinar lampu UV 256 dan 354 untuk melihat  noda yang  terbentuk.  Vial  yang  memiliki  bentuk dan  pola  noda  sama  digabungkan  menjadi satu  fraksi  sehingga  diperoleh  13  fraksi gabungan.

## 6. Pemurnian Senyawa Hasil Isolasi
Senyawa  yang  diperoleh  dari  hasil kromatografi  kolom  dicuci  dengan  cara pelarut  metanol  ditambahkan  sedikit  ke dalam vial hingga larut, kemudian tambahkan  pelarut  yang  tidak  melarutkan yaitu n- heksan,  dan  partikel  yang  melayang dibiarkan mengendap beberapa saat. Bagian yang  tidak  larut  dipipet  dan  dipisahkan  ke vial  cucian.  Proses  pencucian  ini  dilakukan berulang-ulang  hingga  diperoleh  senyawa murni.
7. Karakterisasi  Senyawa  Murni  Hasil

## Isolasi
Senyawa murni yang diperoleh, dilakukan  pemeriksaan  organoleptis  berupa warna  dan  bau,  bentuk,  kelarutan  dan karakterisasi menggunakan metode spektroskopi IR dan spektroskopi UV.
8. Uji  Aktivitas  Sitotoksik  Senyawa Kimia  Hasil  Fraksi  Kolom  dengan Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)
Wadah disiapkan terlebih dahulu untuk penetasan larva udang, kemudian diberi sekat dan  sebagian  ditutup  dengan  menggunakan alumunium  foil.  Wadah  yang  sudah  siap, diisi  dengan  air  laut  yang  sudah  disaring. Kista udang dimasukkan pada bagian wadah yang  ditutup  dengan  alumunium  foil  dan diletakkan  di  bawah  pencahayaan  lampu,
biarkan  hingga  48  jam.  Vial  uji  yang dikalibrasi  sebanyak  5mL.  Sampel  uji ditimbang  sebanyak  20  mg,  kemudian dilarutkan  dengan  2  mL  pelarut  yang melarutkannya,  sehingga  diperoleh  larutan induk  10000  µg/mL.  Dari  larutan  induk dipipet  sebanyak  0,5  mL  dan  ditambah pelarut  hingga  5  mL  ke  dalam  vial  yang sebelumnya  telah  dikalibrasi sehingga diperoleh  larutan  dengan  kosentrasi  1000 µg/mL.  larutan  dengan  kosentrasi  1000 µg/mL dipipet sebanyak 0,5 mL ke dalam 4 vial  berbeda,  dimana  larutan  uji  di  3  vial diuapkan dan 1 vial lainnya ditambah dengan pelarut  hingga  5  mL  sehingga  diperoleh larutan  uji  dengan  kosentrasi  100  µg/mL. Perlakuan  yang  sama  dilakukan  hingga didapatkan  larutan  uji  dengan  kosentrasi  10 µg/mL. Masing-masing vial berisi sampel uji yang  telah  diuapkan  ditambahkan  ke dalamnya  dimetil  sulfoksida  sebanyak  50 µg/mL,  lalu  larva  udang  sebanyak  10  ekor dan  ditambah  air  laut  hingga  5  mL. Pengamatan dilakukan setelah 24 jam dengan menghitung jumlah larva yang mati.

## Analisis Data
Analisis data dilakukan dengan Anova satu arah, sedangkan untuk menentukan LC 50 nya dihitung dengan analisa probit.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uncaria cordata (Lour.) Merr dimaserasi  menggunakan n -heksan,  lalu dilanjutkan dengan etil asetat, dan kemudian dengan  metanol.  Pemilihan  pelarut-pelarut yang digunakan berdasarkan tingkat kepolarannya yang dapat melarutkan senyawa  non-polar,  semipolar  dan  polar. Hasil  maserat  yang  diperoleh  dipekatkan menggunakan  alat rotary  evaporator dan dilanjutkan  uji  skirining  fitokimia  dengan hasil ekstrak n- heksan positif steroid, ekstrak etil  asetat  terdapat  saponin  dan  steroid, sedangkan ekstrak metanol terdapat flavonoid, saponin dan terpenoid. Berdasarkan  kandungan  senyawa-senyawa yang  terdapat  pada  ekstrak  metanol    inilah yang kemudian dilanjutkan ketahap berikutnya  yakni  tahap  isolasi  untuk mendapatkan senyawa murni yang memiliki efek farmakologi.
Ekstrak kental metanol daun tumbuhan akar kaik-kaik Uncaria cordata (Lour.) Merr yang  telah  diperoleh  sebanyak  10  gram diisolasi dengan kromatografi kolom. Ekstrak  metanol  yang  dikolom,  dielusi dengan metode SGP ( Step Gradient Polarity) yaitu  tahap tingkat  kepolarannya.  Jumlah hasil  kromatografi  kolom  yang  diperoleh sebanyak 565 vial yang selanutnya dilakukan uji KLT dengan jarak tiap 5 vial, noda yang
timbul  dilihat  dibawah  sinar  UV  pada panjang  gelombang  254  dan  366  nm.  Vial yang  memiliki  pola  dan  bentuk  noda  yang sama  digabungkan  menjadi  satu  fraksi sehingga dari hasil penggabungan didapat 13 fraksi gabungan.  Fraksi hasil gabungan yang telah didapatkan di KLT kembali.
Pada pola noda hasil KLT tiap masing- masing  fraksi  terlihat  adanya  pemisahan senyawa.  Beberapa  dari  13  fraksi  dipilih fraksi F1, F3, F11 dan F12 untuk dilakukan uji  sitotoksik  dikarenakan  memiliki  1  noda pada  hasil  KLT.  F1  dipilih  untuk  dilakukan pencucian  karena  memiliki  daya  sitotoksik yang  lebih  baik  dari  F3,  F11,  dan  F12  dan diberi kode dengan nama UcF1. Pada proses pencucian  dilakukan  berulang  kali  untuk menghilangkan pengotor yang terdapat pada fraksi hingga didapat senyawa murni. Setelah dilakukan  beberapa  kali  pencucian  UcF1 diuji kembali dengan kromatografi lapis tipis (KLT) dengan beberapa eluen yang berbeda, senyawa  UcF1  didapatkan  satu  noda sehingga dapat dikatakan sudah murni.
Berdasarkan  kelarutannya,  senyawa UcF1  larut  dalam  etil  asetat,  metanol  dan sukar larut pada n -heksan. Kemudian uji titik
leleh dilakukan alat penentu titik leleh yaitu StuartMelting  Point  Apparatus  SMP-11 , nilai  titik  leleh  yang  diperoleh  188-190 0 C. Jarak  leleh  yang  diperoleh  dapat  dikatakan senyawa dalam keadaan murni  karena jarak leleh  ≤  2  (Sharp et  al, 1989).  Pemeriksaan organoleptis  berbentuk  amorf  yang  hijau. Berdasarkan  kelarutannya,  senyawa  larut dalam  etil  asetat,  metanol  dan    sukar l arut pada n -heksan. Pemeriksaan dengan pereaksi kimia Liebermann–Burchard terbentuk w arna merah  muda  diduga  terdapat  kandungan terpenoid (Culvenor et al, 1963).
Hasil  pengukuran  spektrofotometer UV  senyawa  UcF1  yang  diukur  dengan pelarut  metanol  pada  rentang  panjang gelombang  200-400  nm  adanya  serapan maksimum pada panjang gelombang 202.00 nm  ( Gambar  1 .).  Adanya  λ maks pada senyawa  UcF1  memiliki  gugus  kromofor tunggal, dimana gugus kromofor merupakan ikatan kovalen tak jenuh atau tidak terhubung dengan  gugus  lain  dan  menyerap  radiasi  di daerah UV (Harborne, 1987).
Gambar 1. Spektrum UV Senyawa UcF1.
Hasil pengukuran analisa
Spektrofotometer FTIR didapatkan spektrum IR pita serapan ada pada bilangan gelombang pada Tabel 1. berikut ini:
Tabel  1. Hasil  Pengukuran  Spektrofotmeter FTIR Senyawa UcF1.
Bilangan gelombang Keterangan 2921,32-2851,88 C-H alifatik 1739,87-1703,22 C=O 1461.14 -CH 2 1376,27 -CH Aktivitas sitotoksik
dilakukan
dengan  metode  BSLT.  Penelitian  ini
merupakan uji pendahuluan sebelum ekstrak tumbuhan diaplikasikan secara in vivo. Hasil persentase  kematian  larva  untuk  masing- masing  konsentrasi  senyawa  fraksi  (F1) Uncaria  cordata (Lour.)  Merr  ditunjukkan pada Tabel 2.
Sedangkan  hasil  persentase  kematian larva  untuk  masing-masing  konsentrasi senyawa  murni  UcF1 Uncaria  cordata (Lour.) Merr ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel 2. Persentase kematian larva untuk setiap konsentrasi senyawa fraksi (F1) Uncaria cordata (Lour.) Merr.
Konsentrasi (µg/mL) Jumlah Larva yang mati Persen kematian Nilai probit Log Konsentrasi 1 2 3 Rata-rata 100 5 5 5 4,6 46,6 4,9147 2 10 5 3 4 4,3 43,3 4,8313 1 1 2 1 2 3,3 33,3 4,5684 0
LC 50 = 208, 92 µg/mL

## Panjang Gelombang
Tabel  3. Persentase  kematian  larva  untuk  setiap  konsentrasi  senyawa  murni  UcF1 Uncaria cordata (Lour.) Merr.
Konsentrasi (µg/mL) Jumlah Larva yang mati Persen kematian Nilai probit Log Konsentrasi 1 2 3 Rata-rata 100 5 5 5 5,0 50,0 5,0000 2 10 5 3 4 4,0 40,0 4,7467 1 1 2 1 2 1,6 16,6 4,0299 0 LC 50 = 69, 18 µg/mL
Senyawa  UcF1  yang  sudah  murni dilakukan  uji  aktivitas  sitotoksik  terhadap larva Artemia  salina Leach  dengan  metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Uji ini menggunakan  Larva  udang Artemia  salina Leach  karena  pertumbuhannya  dianggap sama  dengan  pertumbuhan  sel  pada  tubuh manusia. Konsentrasi yang digunakan adalah 100,  10,  1  µg/mL.  Penunjukan  efek  toksik yang dihasilkan akan memberikan indikasinya proses  pembentukan sel.  Dalam hal ini diasumsikan sebagai sel kanker (Fox, 2004).  Persen  kematian  yang  didapat  dari hasil  BSLT  adalah  50  %,  40%,  dan  16,6%, setelah  dilakukan  perhitungan  LC 50 dari senyawa  murni  UcF1  sebesar  69,18µg/mL ( Tabel  3. ).  Senyawa  dapat  dikategorikan memiliki  aktivitas  sitotoksik  yang  kuat  jika LC 50 <250µg/mL dan hasil uji menunjukkan angka  LC 50 sebesar  69,18µg/mL  sehingga dapat dikategorikan bersifat sitotoksik sangat kuat (Meyer et al , 1982).
Pada  uji  BSLT  terhadap  senyawa murni  yang  dilakukan,  LC 50 yang  diperoleh
69,18  µg/mL.  Dari  hasil  tersebut  senyawa UcF1  memiliki  aktivitas  sitotoksik  yang sangat  kuat  karena  nilai  LC 50 nya  <  250 µg/mL  (Anderson et  al, 1991).  Penelitian yang  telah  dilakukan  (Sun et  al, 2012)  dari tumbuhan Uncaria  macrophylla yang  di  uji terhadap  dua  sel  kanker  yaitu  HepG2  dan MCF-7  dengan  metode  MTT,  menyatakan senyawa golongan triterpenoid memiliki IC 50 sebesar 78,2 µg/mL dan 73,9 µg/mL (Sun et al, 2012).  Aktivitas  sitotoksik  yang  sangat kuat  ini  diduga  karena  adanya  senyawa golongan  terpenoid  yang  terkandung  di dalamnya. Hal ini didukung oleh (Sun et al, 2012)  dari  tumbuhan Uncaria  macrophylla yang  di  uji  terhadap  dua  sel  kanker  yaitu HepG2  dan  MCF-7  dengan  metode  MTT, menyatakan  senyawa  golongan  triterpenoid memiliki IC 50 sebesar 78,2 µg/mL dan 73,9 µg/mL  (Sun et  al, 2012).  Pada  penelitian lainnya (Lee et al , 2000) aktivitas sitotoksik dari terpenoid Uncaria rhynchophylla menghambat phospholipaseCᵧ1 (PLCᵧ1) dan juga  menghambat  pertumbuhan  sel  kanker

## Pharmacoscript Volume 4 No. 1 Februari 2021
dengan IC 50 sebesar 0,5 dan 6,5 µg /ml (Lee et al , 2000).
Terpenoid  merupakan  kelas  terbesar dari  produk  alami  dan  merupakan  reservoir yang  kaya  akan  senyawa  kandidat  untuk penemuan  obat.  Upaya  terbaru  dalam penelitian  dan  pengembangan  obat  anti kanker/  sitotoksik  yang  berasal  dari  produk alami  telah  mengarah  pada  identifikasi berbagai terpenoid yang mampu menghambat  proliferasi  dan  metastasis  sel kanker melalui berbagai mekanisme (Huang M et al , 2012).

## KESIMPULAN
Senyawa murni UcF1 hasil isolasi dari ekstrak metanol daun akar kaik-kaik Uncaria cordata (Lour.) Merr diperoleh sebanyak 33 mg  berupa  amorf  berwarna  hijau,  memiliki titik  leleh  188-190˚C.  Pemeriksaan  kimia senyawa UcF1 menggunakan pereaksi kimia Liebermann-Burchard dan memberikan warna  merah  muda  diduga  senyawa  ini termasuk golongan terpenoid. Hasil Spektrum  UV    menunjukkan  serapan maksimum pada panjang gelombang 202.00 nm  dan  spektrum  IR  menunjukkan  adanya gugus  C-H alifatik, –C=O , -CH 2 , dan -CH . Uji  aktivitas  sitotoksik  dilakukan terhadap  senyawa  fraksi  (F1)  dan  senyawa murni  UcF1  menunjukkan  bahwa  UcF1
memiliki aktivitas sitotoksik yang lebih kuat yaitu  69,18µg/mL,  dibanding  fraksi  (F1) yang memiliki nilai LC 50 sebesar 208,92 µg/ mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson,  J.E.,  Goetz,  C.M.,  dan  Mc Laughlin,  J.L.  (1991).  A  Blind Comparison  of  Simple  Bench-top Biossay  and  Human  Tumor  Cell Cytotoxixities as Antitumor Prescrenss. Phytochemical  Analysis. 2(3), 107-111.
Culvenor,  C.C.,  dan  Fitsgerald,  J.S.  (1963).
A  Field  Method  for  Alkaloid Screening  of  Plant .  J.Pharm,  S.ci. 52(3), 303-304.
Fox,  R.  (2004). Statistic  Acute  Toxicity Bioassay Laboratory Exercise,
Laboratory Ecologi , 306.
Meyer,  B.N.,  Feerigni,  N.R.,  Putnam,  J.E.,
Jacobson,  L.B.,  Nicholas,  D.E.,  dan McLaughlin,  J.L.  (1982).  Brine Shrimp:  A  convenient.  General
Bioasssay For Active Plant constituens .  Planta  Medical .  45(5),
31-34.
Harborne,  J.B.  (1987). Metode  Fitokimia Penuntunan Cara Modern
Menganalisa  Tumbuhan, Edisi  II,
terjemahan  Kosasih  Padmawinata, ITB, Bandung.
Huang, M., Lu, J., Huang, M., Bao, J., Chen, X., & Wang, Y.  (2012). Terpenoids: natural  products  for  cancer  therapy. Expert Opin. Investig. Drugs. 21(12),
1801-18 .
Indrayani, L., Soetjipto, H., dan Sihasale, L.
(2006).  Skrining  Fitokimia  Dan  Uji Toksisitas Ekstrak Daun Pecut Kuda ( Stachytarpheta jamaicensis L. Vahl)
Terhadap  Larva  Udang Artemia salina Leach. Journal  of  Biological Researches. 12(1), 57-61.
Lee, J.S., Kim, J., Kim, B.Y., Lee, H.S., Ahn,
J.S.,  Chang,  Y.S.  (2000).  Inhibition of phospholipase Cᵧ1 and cancer cell proliferation by triterpene esters from Uncaria  rhynchophylla. Journal  of Natural Products . 63(6), 753–756.
Marzuki,  A.,  Rahman,  L.,  Mamada,  S.S.
(2019).  Toxicity  Test  of  Stem  Bark extract  of  Banyuru  (Pterospermum celebicum miq.) Using BSLT (Brine Shrimp  Lethality  Test)  and  Cream Irritation  Test. J.  Phys.  Conf.  Ser. 1341(7), 072018.
Penuelas  J,  Munne-Bosch  S.  (2005).
Isoprenoids: an evolutionary pool for photoprotection. Trends  Plant  Sci . 10(4), 166-169.
Putri, W.N.A. (2016). Uji Aktivitas
Antiinflamasi Ekstrak n -heksan Daun Tumbuhan  Akar  Kaik-Kaik Uncaria cordata (Lour.) Merr Terhadap Tikus Putih ( Ratus novegius ) Jantan. [Skripsi]. Pekanbaru. Sarjana Program  Studi  Farmasi.  STIFAR
Riau.
Rahmawati,  N.,  Utami,  R.,  Azwendah,  A.
(2016).  Isolasi  dan  Uji  Aktivitas Sitotoksik  Senyawa  Murni  Dari Ekstrak  Etil  Asetat  Daun  Tumbuhan Akar  KaikKaik  Uncaria  cordata (Lour.)  Merr.  Sci. J.  Farm.  dan Kesehatan . 6(2), 122–126.
Rindiana,  R.  (2014).  Isolasi  Dan  Uji
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun Akar Kait-Kait
Uncaria  cordata (Lour.)  Merr.
[Skripsi]. Pekanbaru. Sarjana
Program  Studi  Farmasi.  STIFAR Riau.
Sacchettini JC, Poulter CD. (1997). Creating isoprenoid  diversity. Science .  Vol.
277 (5333 ), 1788-1789.
Santosa,  M.H.  (1995). Penyediaan  Bahan Penelitian  Tumbuhan  Obat:  Dalam Rapat  Kerja  Penelitian  Tumbuhan Obat Indonesia, Lembaga Penelitian Universitas Airlangga, Surabaya.
Sharp,  J.T.,  Goesney,  I.,  dan  Bouley,  A.G.
(1989). Practical Organic
Chemistry:  A  Student  Handbook  of
Techniques ,  Chapman  and  Hall,
London.
Sun, G., Zhang, X., Xu, X., Yang, J., Zhong,
M.,  dan  Yuan,  J.  (2012).    A  New
Triterpen From Uncaria macrophylla
and its Antitumor Activity.
Molecules. 17(2), 1883-1889.
Turner,  I.M.,  (2018).  Notes  on  The  Genus Uncaria  (Rubiaceae)  in  Singapore.
Gard. Bull. Singap . 70(1) 9–12.
Withers ST, Keasling JD. (2007).
Biosynthesis  and  engineering  of isoprenoid  small  molecules. Appl
Microbiol Biotechnol . 73(5), 980-99.