## KOMBINASI PAKAN TWO PHASE PROTEIN DENGAN ASAM SITRAT SEBAGAI ACIDIFIER TERHADAP MASSA KALSIUM DAN PERTUMBUHAN TULANG AYAM BROILER

## COMBINATION OF FEEDING TWO PHASE DIETARY PROTEIN WITH CITRIC ACID AS ACIDIFIER ON BONE CALCIUM MASS AND GROWTH RATE OF BROILER CHICKEN
D.M. Panjaitan, N. Suthama, dan U. Atmomarsono Fakultas Peternakan dan Pertanian Universitas Diponegoro, Semarang email: dameria_panjaitan@yahoo.co.id
Diterima: 29 September 2016, Direvisi: 22 Oktober 2016, Disetujui: 14 Nopember 2016

## ABSTRAK
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan kalsium massa tulang dan tingkat  pertumbuhan  ayam  broiler  dengan  pakan  two  phase  protein  dikombinasikan dengan  asam  sitrat  sebagai  acidifier.  Penelitian  menggunakan  ayam  broiler  strain Lohmann  MB  202  sebanyak  168  ekor  yang  terdiri  dari  84  ekor  jantan  dan  84  ekor betina  umur  7  hari  dengan  bobot  badan  awal  rata  –  rata  186,3  ±  0,68  g  (cv  =  0,36). Penelitian menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) yang terdiri dari 7 perlakuan dan 4 ulangan, masing-masing 6 ekor ayam broiler (3 jantan, 3 betina). Perlakuan yang diamati:  P0  =  pakan  kontrol  (tanpa  phase  proteindan  asam  sitrat);  P1  =  pakan  two phase protein tanpa asam sitrat; P2 = pakan two phase protein + jeruk nipis 0,8%; P3 =  pakan  two  phase  protein  +  asam  sitrat  sintetik  0,4  %;  P4  =  pakan  two  phase protein+ asam sitrat sintetik 0,8 %; P5 = pakan two phase protein+ asam sitrat sintetik 1,2 %; dan P6 = pakan two phase protein + asam sitrat sintetik 1,6 %. Parameter yang diamati  adalah  massa  Ca  tulang  serta  bobot,  panjang,  dan  kekuatan  tulang  tibia  dan metatarsus  ayam  broiler.  Data  dianalisis  menggunakan  analisis  varians  dengan  uji  F dilanjutkan dengan uji Duncan (P <0,05). Hasil penelitian menunjukkan bahwa  pakan two phase protein yang dikombinasikan dengan asam sitrat secara signifikan (P <0,05) meningkat  berat,  panjang,  dan  kekuatan  tibia  dan  metatarsus,  dan  massa  tulang kalsium. Kesimpulannya adalah  bahwa  pakan  two phase  protein  yang dikombinasikan dengan  asam  sitrat  sebagai  acidifier  dengan  tingkat  0,4-1,6%  mampu  meningkatkan laju pertumbuhan (berat dan panjang), massa kalsium, dan kekuatan tulang pada ayam broiler.
Kata kunci: ayam broiler, two phase protein, acidifier

## ABSTRACT
The aim of the research was to determine bone calcium mass and growth rate of broiler chicken fed two phase dietary protein combined with citric acid as acidifier. Experimental  animals  were  168  broilers  (84  males+84  females)  MB  202strains  of  7 days old with an average body weight of 186.23 ± 0.68 g. Research was arranged in a completely  randomized  design  (CRD)  with  7  treatments  and  4  replications  (6  birds each). The treatments were: P0 = control diet (without phase dietary protein and citric acid);  P1  =  two  phase  dietary  protein  without  citric  acid;  P2  =  two  phase  dietary protein + 0.8% citric acid of lime; P3 = two phase dietary protein + 0.4% citric acid synthetic; P4 = two phase dietary protein + 0.8% synthetic citric acid; P5 = two phase
dietary  protein  +  1.2%  synthetic  citric  acid;  and  P6  =  two  phase  dietary  protein  + 1.6% synthetic citric acid. The parameters measured in the present research were bone calcium mass and growth rate (weight, length, and strength) of tibia and metatarsus of broiler chicken. The data  were subjected to  analysis of  variance by F test followed by Duncan test (P<0.05). The results showed that two phase dietary protein combined with citric  acid  significantly  (P<0.05)  increased  weight,  length,  and  strength  of  tibia  and metatarsus,  and  bone  calcium  mass.  The  conclusion  is  that  feeding  two  phase  dietary protein  combined  with  citric  acid  as  acidifier  with  level  of  0.4-1.6%  was  able  to increase growth rate (weight and length), calcium mass, and strength of bone in broiler chicken.
Key words: broiler chicken, two phase dietary protein, acidifier

## PENDAHULUAN
Populasi  ayam  pedaging  di  Indo- nesia  cenderung  stabil  dan  meningkat dari tahun ke tahun, namun  belum dapat memenuhi permintaan konsumen (Direk- torat  Jenderal  Peternakan  dan  Kesehatan Hewan,  2013).  Karakteristik  ayam  broi- ler  secara  genetis  ditujukan  sebagai penghasil  daging  dan  memiliki  pertum- buhan  yang  cepat  sehingga  menarik untuk  dibudidayakan  oleh  peternak  di Indonesia. Asupan pakan dan kandungan nutrient  terutama  protein  tinggi  sangat dibutuhkan.
Penggunaan  sumber  protein  yang tinggi  dapat  menjamin  asupan  protein untuk mempercepat pertumbuhan. Namun,  ransum  dengan  protein  tinggi mengakibatkan  harga  ransum  mahal. Upaya  untuk  meningkatkan  efisisensi dengan  harga  ransum  murah,  satu diantaranya  adalah  dengan  menurunkan kandungan  protein.  Penurunan  kandu- ngan  protein  ini  dikenal  dengan step down atau phase  feeding .  Kamran et  al.
(2008)  menyatakan  bahwa  broiler  yang diberi  pakan  dengan step  down protein dan  energi  meningkatkan  konsumsi pakan  baik  pada  periode starter , grower maupun finisher .  Penurunan  protein ransum dikhawatirkan menyebabkan terjadinya  kekurangan  asupan  protein. Kekhawatiran  akan  kekurangan  asupan protein  dapat  ditanggulangi  dengan pemberian aditif berupa acidifier .
Acidifier merupakan asam organik yang  ditambahkan  ke  dalam  pakan  atau
air  minum  dengan  tujuan  meningkatkan kecernaan  melalui  kontrol  metabolisme dalam  tubuh  dengan  cara  peningkatan kinerja  enzim  pencernaan,  menurunkan pH  dalam  usus  serta  menjaga  keseim- bangan  mikrobia  dalam  saluran  pencer- naan (Hasanuddin et al., 2013). Acidifier dapat  berupa  asam  sitrat,  asam  laktat, asam  propionat,  asam  asetat  atau  cam- puran  asam  organik  (Natsir  dan  Sjofjan, 2008).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui pengaruh penambahan
acidifier asam  sitrat  dalam  pakan two phase ( starter dan finisher )  terhadap massa  kalsium  dan  pertumbuhan  tulang ayam  broiler  khususnya  tulang tibia dan metatarsus .  Hasil  penelitian  diharapkan dapat  memberikan  informasi  dan  wawa- san  tentang  manfaat  pemberian acidifier asam sitrat dalam ransum dengan protein diturunkan ( two phase feeding ) berdasar- kan  kemampuan  deposisi  mineral  (Ca) dengan tulang sebagai penyokong pertumbuhan secara umum.

## MATERI DAN METODE
Penelitian dilaksanakan pada bulan November–Desember 2013 di kan- dang  penelitian  Fakultas  Peternakan Universitas  Darul  Ulum  Islamic  Center Sudirman  GUPPI (UNDARIS)  Ungaran, Kabupaten  Semarang.  Penelitian  meng- gunakan  ayam  broiler  strain Lohmann MB  202  sebanyak  168  ekor  yang  terdiri dari  84  ekor  jantan  dan  84  ekor  betina umur  7  hari  dengan  bobot  badan  awal
rata  –  rata  186,3  ±  0,68  g  (cv  =  0,36). Bahan penyusun pakan penelitian adalah jagung  kuning,  bekatul,  minyak  nabati, bungkil  kedelai,  tepung  ikan,  tepung kulit  kerang,  dan  CaCO 3 .  Jenis acidifier terdiri dari asam sitrat alami yaitu berasal dari  air  jeruk  nipis  dan  asam  sitrat sintetik.  Susunan  pakan  penelitian  dan kandungan nutrien tertera pada Tabel 1.
Penelitian  menggunakan  rancang- an  acak  lengkap  (RAL)  yang  terdiri  dari 7  perlakuan  dan  4  ulangan,  masing- masing  6  ekor  ayam  broiler  (3  jantan,  3 betina).  Perlakuan  yang  diamati:  P0  = pakan  kontrol  (tanpa phase proteindan asam  sitrat);  P1  =  pakan two  phase protein tanpa asam sitrat; P2 = pakan two phase protein  +  jeruk  nipis  0,8%;  P3  = pakan two  phase protein  +  asam  sitrat sintetik  0,4  %;  P4  =  pakan two  phase protein+ asam sitrat sintetik 0,8 %; P5 = pakan two  phase protein+  asam  sitrat sintetik 1,2 %; dan P6 = pakan two phase protein + asam sitrat sintetik 1,6 %.
Parameter  yang  diamati  adalah massa  Ca  tulang  serta  bobot,  panjang, dan kekuatan tulang tibia dan metatarsus ayam  broiler.  Pengukuran  massa  Ca  dan pertumbuhan  tulang  dilakukan  pada  hari ke-35  dengan  memisahkan  daging  dan otot  dari  tulang.  Bobot  tulang  diperoleh dengan  menimbang  tulang tibia dan metatarsus menggunakan timbangan analitik  dengan  ketelitian  1  g.  Panjang tulang  diperoleh  dengan  mengukur tulang  mrnggunakan  jangka  sorong.
Kekuatan tulang diperoleh dengan mengeringkan tulang terlebih dahulu dan menganalisis  di  laboratorium  Kontruksi dan  Bangunan  Tehnik  Sipil,  Universitas Diponegoro. Perhitungan untuk kekuatan tulang dapat menggunakan rumus:
Kekuatan Tulang =
Massa Ca tulang diperoleh dengan  memproses  tulang  menjadi tepung dan menganalisis di laboratorium
Kimia  dan  Kesuburan  Tanah  Fakultas Pertanian,  Universitas  Sebelas  Maret. Perhitungan  massa  Ca  tulang  dapat menggunakan rumus:
Massa Ca = Kandungan Ca x Bobot tulang.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Rerata  bobot,  panjang,  kekuatan tulang tibia dan metatarsus ,  serta  massa Ca  tulang  ayam  broiler  tercantum  pada Tabel  2.  Hasil  penelitian  menunjukkan adanya  pengaruh  nyata  (P<0,05)  terha- dap bobot, panjang, kekuatan tulang tibia dan metatarsus serta  massa  Ca  tulang ayam broiler.
Panjang  dan  Bobot  Tulang Tibia dan

## Metatarsus
Perlakuan  dengan  level  protein 17%  (P1)  memiliki  bobot  tulang tibia dan metatarsus yang  lebih  tinggi  diban- dingkan  dengan  level  protein  19%  (P0). Protein  berperan  penting  dalam  absorbsi kalsium  karena  dapat  mengikat  kalsium yang  disebut Calsium  Binding  Protein (CaBP).  Berdasarkan  asupan  protein menunjukkan semakin tinggi level protein  yang  diberikan,  semakin  tinggi asupan protein yang dihasilkan.
Dawson  dan  Hughes  (2003)
menyatakan  bahwa  asupan  protein  yang tinggi  dapat  meningkatkan  pertumbuhan tulang  apabila  disertai  dengan  konsumsi kalsium  yang  memadai.  Menurut  penda- pat  Gutzwiller et  al. (2014)  bahwa pemberian  protein  yang  rendah  dapat meningkatkan  pertumbuhan  tulang  kare- na adanya pengaruh konsumsi pakan dan fungsi  hormonal  yang  mempe-ngaruhi laju  pertumbuhan,  bentuk  tulang  serta ukuran dari tulang.
Perlakuan penambahan asam sitrat  alami  (P2)  memiliki  hasil  lebih rendah  dibandingkan  dengan  perlakuan penam-bahan  asam  sitrat  sintetik  (P3 sampai  P6).  Fenomena  ini  menunjukkan bahwa  asam  sitrat  alami  kurang  efektif
Tegangan Luas Penampang
dibanding  asam  sitrat  sintetik  dalam mendukung  peningkatan  bobot  tulang. Ca-sitrat  yang  terbentuk  dari  air  jeruk nipis  tidak  seefektif  dari  asam  sitrat sintetik. Oleh sebab itu, bila pada kondisi tertentu,  seperti  pakan  rendah  protein, dapat  diatasi  dengan  meningkatkan konsumsi  Ca-sitrat  (Savira,  2013).  Ca- sitrat adalah komponen utama dari tulang yang  harus  terlibat  dalam  beberapa  pro- ses  penting  terutama  pembentukan  dan pemeliharaan  tulang  (Costello et  al. , 2012).
Hasil  penelitian  panjang  tulang tibia dan metatarsus dengan level protein 17% (P1) lebih tinggi dibandingkan level protein 19%. Ini memberikan arti bahwa meskipun  protein  rendah  dapat  mening- katkan bobot tulang ayam broiler, karena konsumsi  ransum  lebih  tinggi.  Menurut pendapat  Gutzwiller et  al. (2014) bahwa pemberian  pakan  rendah  protein  dapat meningkatkan  pertumbuhan  tulang  kare- na adanya pengaruh konsumsi pakan dan fungsi  hormonal  yang  mengatur  meta- bolisme  Ca  dapat  mempengaruhi  laju pertumbuhan,  bentuk  serta  ukuran  dari tulang.  Secara  umum  apabila  dihubung- kan dengan asupan protein yang biasanya  berkaitan  dengan  kalsium,  P1 yang  asupan  protein  dan  konsumsi kalsium  rendah dibandingkan dengan P0 harusnya  menghasilkan  bobot  tulang yang rendah.
Cashman (2002) menyatakan bahwa  konsumsi  Ca  yang  cukup  dan vitamin  D  dapat  mengurangi  risiko penyakit  pada  tulang  dan  menjaga kesehatan  tulang.  Pemberian  pakan phase  feeding dan acidifier mening- katkan  panjang  tulang.  Semakin  tinggi level asam sitrat yang diberikan, semakin panjang tulang . Perlakuan P2 (asam sitrat alami)  memiliki  hasil  yang  lebih  rendah dibandingkan  penambahan  asam  sitrat sintetik  (P3  sampai  P6).  Penambahan asam sitrat sintetik menunjukkan pengaruh  yang  lebih  efektif  daripada
penambahan  asam  sitrat  alami  (air perasan  jeruk  nipis)  karena  asam  dapat meningkatkan  reasorbsi  tulang  osteoklas dan  osteoblast.  Menurut  penelitian  yang dilakukan  oleh  Kil et  al. (2006)  bahwa pemberian  asam  organik  lebih  efektif daripada  pemberian  asam  alami.  Asam berlebihan  dapat  menurunkan  pertum- buhan tulang. Namun, menurut Haider et al. (2014)  bahwa  pemberian  asam  dapat meningkatkan pertumbuhan tulang
khususnya  pada  osteoblas  dan  osteoklas serta memper-lambat terjadinya penyakit pada  tulang  karena  stimulasi  air  dalam penyerapan dan penggunaan Ca.

## Massa Ca Tulang
Perlakuan  P0  dan  P1  pada  massa Ca tulang menunjukkan hasil  yang sama tinggi.  Hasil  perlakuan  ini  menunjukkan bahwa  semakin  tinggi  protein,  mineral- isasi tulang semakin tinggi juga. Asupan protein  pada  P1  lebih  rendah  dibanding- kan  P0.  Menurut  Stomberg et  al. (2010) bahwa  asupan  protein  yang  tinggi  dapat meningkatkan  Ca  urin.  Namun,  hal tersebut  berlangsung  singkat  karena adanya peningkatan penyerapan pada Ca usus.  Sebaliknya,  asupan  protein  yang rendah  dapat  meningkatkan  penyerapan Ca  dalam  usus  dan  akhirnya  mening- katkan kesehatan tulang.
Menurut  Atkins  (2014),  bahwa asupan  dengan  protein    rendah  tidak mengganggu  proses  mineralisasi  tulang, tetapi  dapat  juga  meningkatkan  keseha- tan  tulang  dan  memperkuat  tulang. Massa Ca pada perlakuan P2 (asam sitrat alami)  memiliki  hasil  lebih  rendah dibandingkan  perlakuan  asam  sitrat sintetik (P3 sampai P6). Ini  memberikan indikasi  bahwa  pemberian  asam  sitrat sintetik (P3 sampai P6) mampu mendistribusikan  Ca  ke  jaringan  target, khususnya tulang, dalam bentuk Ca-sitrat tinggi.    Menurut  Montero et  al. (2012) bahwa  asupan  asam  organik  apalagi dengan suplemen vitamin C dan E dapat
meningkatkan  kepadatan  tulang  dan kandungan  mineral  tulang  serta  mengu- rangi  penyakit  pada  tulang.  Kalsium yang tinggi dapat meningkatkan metabolisme  tubuh  dan  jaringan  lain, termasuk tulang.
Perlakuan P2 merupakan  penambahan  air  perasan jeruk nipis yang menghasilkan massa Ca tulang  paling  rendah.  Kondisi  ini menunjukkan  bahwa  kemampuan  asam sitrat  alami  (air  perasan  jeruk  nipis) kurang  efektif  untuk  mobilisasi  Ca  ke dalam  tulang.  Berdasarkan  penelitian yang  dilakukan  oleh  Agostoni et  al.
(2011) bahwa massa tulang lebih rendah dengan  pemberian  asam  yang  berasal dari  buah-buahan  dibandingkan  asam organik sintesis. Proses tersebut disebabkan terbentuknya Ca-sitrat karena penambahan  asam  sitrat  alami  lebih sedikit  dibandingkan  dengan  ikatan  Ca- sitrat  akibat  penambahan  asam  sitrat sintetik.
Kekuatan Tulang Tibia dan Metatarsus Kekuatan  tulang tibia maupun metatarsus menunjukkan  pola  yang hampir  mirip.  Kekuatan  tulang tibia dan metatarsus pada  perlakuan  P1  meng- hasilkan  kekuatan  tulang  lebih  tinggi dibanding P0. Ini memberikan arti bahwa meskipun  protein  rendah  tidak  meng- hambat mineralisasi tulang, meskipun P1 mempunyai  asupan protein  rendah tetapi kekuatan  tulang  lebih  tinggi.    Menurut Calvez et  al. (2012)  bahwa  protein rendah  tidak  menyebabkan  ekskresi
kalsium yang berlebihan, tetapi penyerapan  kalsium  dapat  memperkuat tulang  dan  menjaga  kesehatan  tulang. Penyerapan Ca dalam bentuk CaBP pada kasus protein rendah tidak menyebabkan ikatan  kalsium  rendah  tetapi  tergantung pada  deposisi  Ca  terhadap  garam  Ca  di dalam  tulang.  Menurut  Kerstetter et  al.
(2003) bahwa CaBP berfungsi membawa Ca  untuk  dideposisikan  dalam  jaringan target  termasuk  tulang  yang  berkaitan dengan  meningkatnya  penyerapan  Ca dalam  usus  meskipun  protein  rendah. Kekuatan  tulang tibia dan metatarsus pada  P3  sampai  P6  menunjukkan  nilai yang  sama  dengan  P0.  Fenomena  ini menunjukkan  bahwa  Ca  yang  dideposi- sikan  ke  dalam  tulang  tidak  padat  tetapi massa  Ca  tinggi  sehingga  kekuatannya sama  dengan  P0.  Frandson  (1993) menyatakan  bahwa  apabila  garam  Ca direndam  pada  larutan  asam,  tulang mengalami  dekalsifikasi  dan  cukup fleksibel bila mendapat tarikan. Menurut Clarke  (2008)  bahwa  semakin  panjang tulang,  dapat  mengubah  bentuk  dan tekanan  pada  tulang  yang  berdampak pada peningkatan kekuatan tulang.

## SIMPULAN
Semakin  tinggi  level  asam  sitrat sintetik  yang  diberikan,  semakin  dapat meningkatkan pertumbuhan tulang
(panjang  dan  bobot  tulang),  mineralisasi dan kekuatan tulang dengan bantuan Ca- sitrat
.

## DAFTAR PUSTAKA
Agostoni,  C.,  J.L.  Bresson,  S.F.  Tait,  A. Flynn,  I.  Golly,  H.  Korhonen,  P. Lagiou, M.  Løvik, R. Marchelli, A. Martin, B. Moseley, M.N. Berthold, H.  Przyrembel,  S.  Salminen,  Y. Sanz,  S.  Strain,  S.  Strobel,  I. Tetens,  D.  Tomé,  H.  Loveren,  and H.  Verhagen.  2011.  Scientific Opinion  on  the  substan-tiation  of health claims related to sodium and potassium  salts  of  citric  acid  and main-tenance  of  normal  bone. EFSA J. 9 (7): 2302-2317
Atkins,  R.  2014.  Calcium  +  Protein  = Strong Bone. http://www.Atkins.com/  (diakses  1 Mei 2014) Calvez  J.,  N.  Poupin,  C.  Chesneau,  C. Lassale and D. Tomé. 2012. Protein intake,  calcium  balance  and  health consequences.Europe. J. Clin. Nutr. 66 : 281-295
Cashman,  K.D.  2002.  Calcium  intake, calcium  bioavailability  and  bone health.  Br.  J.  Nutr. 87 (2):  S169– S177
Clarke,  B.  2008.  Normal  Bone  Anatomy and  Physiology.  Clin.  J.  Am.  Soc. Nephrol. 3 : S131–S139
Costello,  L.C.,  R.B.  Franklin,  M.A. Reynolds,  and  M.  Chellaiah.  2012. The  important  role  of  osteoblasts and  citrate  production  in  bone formation:  ―osteoblast  citration‖  as a new concept for an old relationship.  The  Open  Bone  J. 4 : 27-34
Dawson, B. and Hughes. 2003. Interaction  of  dietary  calcium  and protein in bone health. J. Nutr. 133 : 852S–854S
Direktrorat  Jenderal  Peternakan  dan
Kesehatan  Hewan.  2013.  Populasi Ayam  Ras  Pedaging  Menurut Provinsi.  Kementrian  Pertanian, Jakarta.
Frandson,  R.D.  1996.  Anatomi  dan Fisiologi  Ternak.  Gadjah  Mada Univeristy Press, Yogyakarta Gutzwiller, A.,P. Schlegel, D. Guggisberg,  and  P.  Stoll.  2014. Effects  of  benzoic  acid  and  dietary calcium:phosphorus ratio on performance and
mineral metabolism of weanling pigs.
Asian-Australas J Anim. Sci. 27 (4):
530–536.
Haider,  M.T.,  I.  Holen,  T.N.  Dear,  K. Hunter,  and  H.K.  Brown.  2014. Modifying  the  osteoblastic  niche with  zoledronic  acid  in  vivo— Potential  implications  for  breast cancer  bone  metastasis.  Bone 66 : 240-250 Hartadi, H., S. Reksohadiprodjodan A. D.
Tillman.  1997.  Tabel  Komposisi Pakan  untuk  Indo-nesia.  Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.
Hasanuddin,  S.,  V.D.  Yunianto  dan
Tristiarti. 2013. Lemak dan kolesterol daging pada ayam broiler yang diberi pakan step down protein dengan  penambah-an  air  perasan jeruk  nipis  sebagai acidifier .  Bul. Nutr. Makn. Ternak, 9 (1): 47-53 Kamran,  Z.,  M.  Sarwar,  M.  Nisa,  M.  A. Nadeem, S. Mahmood, M. E. Babar and S. Ahmed. 2008. Effect of low protein diets having constant energy-to-protein
ratio on performance and carcass characteristics  of  broiler  chickens from one to thirty five days of age.
Poultry Sci. 87 : 468-474.
Kerstetter,J.E.,  K.O.  O’Brien,  and  K.L.
Insogna.  2003.  Low  protein  intake: the  impact  on  calcium  and  bone homeostasis.  J.  Nutr. 133 :  855S– 861S
Kil,  D.  Y.,  L.  G.  Piao,  H.  F.  Long,  J.  S.
Lim, M. S. Yun, C. S. Kong, W. S. Ju, H. B. Lee, and Y. Y. Kim. 2006. Effects  of  Organic  or  Inorganic Acid  Supplementation  on  Growth
Performance,  Nutrient  Digestibility and  White  Blood  Cell  Counts  in Weanling Pigs.Asian-Aust. J. Anim. Sci. 19 (2) : 252-261.
Montero,  M.,  M.D.  Curiel,  D.  Guede, J.R.  Caeiro,  M.M.  Fernández,  M. Rubert,  D.  Navarro,  and  C.  Piedra. 2012.  Effects  of  kalsis,  a  dietary supplement,  on  bone  me-tabolism in  the  ovariectomized  rats.  J. Osteoporosis. Hal. 1-7 Murwani, R. 2010. Broiler Modern.
Widya Karya, Semarang. Natsir,  M.  H.  dan  O.  Sjofjan.  2008.
Pengaruh  penggunaan  kombinasi asam sitrat dan asam laktat cair dan
terenkapsulasi  sebagai  aditif  pakan terhadap penampilan produksi ayam pedaging. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. Hal. 636-640 Savira, A.D. 2013. Pengaruh kalium sitrat bagi  tulang.  J.  Ilm.  Teknol.  Hasil Ternak 12 (3): 25-32
Stomberg,  E.G.,  B.  Hua-Sun,  C.E.
Cucchi, C.A. Simpson, C. Gundberg, J.E. Kerstetter, and K.L. Insogna. 2010. The effect of dietary protein on intestinal calcium absorption  in  rats.  Endocrinol.  J.
151 (3): 1071–1078.
Tabel 1. Komposisi dan Kandungan Nutrien Pakan Perlakuan
Bahan Baku Pakan Pakan Perlakuan Starter Finisher Normal Phase Feeding Normal Phase Feeding Jagung 48,00 53,00 53,00 53,50 Bekatul 14,00 16,00 16,00 21,50 Minyak Nabati 2,00 1,00 1,00 0,50 Bungkil Kedelai 28,00 22,00 22,00 16,50 Tepung Ikan 6,50 6,50 6,50 6,50 CaCO 3 0,50 0,50 0,50 0,50 Tepung Kulit Kerang 1,00 1,00 1,00 1,00 100,00 100,00 100,00 100,00 Kandungan Nutrien Energi Metabolis (kkal/kg)* 2856,91 2884,12 2884,12 2882,13 Protein Kasar (%)** 21,41 19,25 19,25 17,37 Serat Kasar (%)** 5,09 5,18 5,18 5,75 Lemak Kasar (%)** 6,04 6,33 6,33 6,37 Lisin (%)*** 1,50 1,34 1,34 1,18 Metionin (%)*** 0,45 0,43 0,43 0,40 Arginin (%)*** 1,60 1,43 1,43 1,26 Ca (%)** 1,00 0,98 0,98 0,95 P (%)** 0,41 0,43 0,43 0,45 Keterangan: Komposisi dan kandungan nutrien starter phase feeding sama dengan finisher normal
* EM (kkal/kg) = 40,81 [0,87 ( PK + 2,25 x LK + BETN) + k] rumus  (Balton, 1967) disitasikan oleh Murwani (2010)
**   Dianalisis  di  Laboratorium  Ilmu  Nutrisi  dan  Pakan,  Fakultas  Peternakan  dan Pertanian, Universitas Diponegoro (2013)
***   Berdasarkan Tabel Komposisi Bahan Pakan (Hartadi et al. , 1997).
Tabel 2. Rerata bobot, panjang, kekuatan tulang tibia dan metatarsus serta massa Ca tulang
Keterangan: Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05).
Parameter Perlakuan P0 P1 P2 P3 P4 P5 P6 Bobot Tulang Tibia (g) 21,35 b 27,65 a 24,23 ab 27,95 a 25,68 ab 24,75 ab 26,93 a Panjang Tulang Tibia (cm) 9,20 bc 9,68 ab 9,05 c 9,45 abc 9,73 a 9,65 ab 9,70 a Bobot Tulang Metatarsus (g) 9,90 c 11,13 bc 10,83 bc 13,63 ab 14,53 a 13,48 ab 14,70 a Panjang Tulang Metatarsus (cm) 5,33 c 5,48 c 6,40 b 7,05 ab 7,25 a 6,73 ab 7,18 a Massa Ca tulang (g) 130,68 a 116,83 ab 89,81 c 116,09 ab 110,79 a
bc 103,81 bc 114,69 abc
Kekuatan Tulang
Tibia (N/cm 2 ) 1051,78 b 1431,77 a 1094,26 b 1288,57 a
b 771,36 b 874,35 b 1146,70 b
Kekuatan
Tulang Metatarsus (N/cm 2 )
1185,87 a b 1328,41 a 724,85 abc 927,07 abc 528,81 c 607,31 bc 554,93 bc