Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol Rumput Laut Gracilaria verrucosa, Greville, 1830 (Florideophyceae : Gracilariaceae) di Balai Besar Perikanan Budidaya Air Payau Jepara

## Radhian Wikanarto Widodo*, Subagiyo, Rini Pramesti
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. H. Soedarto S.H, Tembalang,Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail:radhian.wika@gmail.com
ABSTRAK : Infeksi  bakteri  patogen  menjadi  masalah  kesehatan  dunia.  Antibiotik  untuk penanggulangan  infeksi  menjadikan  bakteri  resisten  karena  pemakaiannya  tidak  sesuai  dosis. Permasalahan  ini  dapat  diatasi  salah  satunya  dengan  pencarian  sumber  antibiotik  baru  termasuk diantaranya pada rumput laut. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas antibakteri ekstrak metanol G.  verrucosa terhadap Escherichia  coli,  Bacillus  cereus,  Staphylococcus  epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio anguillarum, dan Vibrio alginolyticus. Penelitian dilakukan dengan metode  eksperimental  laboratoris.  Sampel  rumput  laut  hasil  budidaya  Balai  Besar  Perikanan Budidaya  Air  Payau  (BBPBAP)  Jepara  dikeringkan  kemudian  dimaserasi  dengan  metanol  selama 2x24  jam.  Aktivitas  antibakteri  ekstrak  diuji  pada  konsentrasi  100  µg/disk,  50  µg/disk,  25  µg/disk, dan  10  µg/disk  kemudian  dilakukan  uji  fitokimia.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  menunjukkan  bahwa ekstrak metanol G.  verrucosa tidak memiliki  aktivitas  antibakteri.  Uji fitokimia  menunjukkan  ekstrak mengandung flavonoid, saponin, steroid, dan triterpenoid.
Kata kunci : Gracilaria verrucosa , Antibakteri, Metanol
Antibacterial Activity of Gracilaria verrucosa Seaweed Methanol Extract, Greville, 1830 (Florideophyceae: Gracilariaceae) at the Brackish Aquaculture Fisheries Center Jepara
ABSTRACT  : Pathogenic  bacterial  infection  become  a  world  health  problem.  Antibiotics  for prevention of infection make bacteria resistant due to the incorrect dosage. One of these problems can  be  overcome  by  finding  a  new  source  of  antibiotics  including  seaweed.  This  study  aims  to determine  the  antibacterial  activity  of  methanol  extract  of  G.  verrucosa  against  Escherichia  coli, Bacillus  cereus,  Staphylococcus  epidermidis,  Pseudomonas  aeruginosa,  Vibrio  anguillarum,  and Vibrio alginolyticus. Laboratory experimental method was used in this study. Seaweed samples from the  cultivation  at  Brackish  Water  Aquaculture  Center  (BBPBAP)  Jepara  were  dried  and  then macerated  with  methanol  for  2x24  hours.  The  antibacterial  activity  of  the  extract  was  tested  at concentration of 100 µg / disk, 50 µg / disk, 25 µg / disk, and 10 µg / disk then phytochemical tests were carried out. The results of antibacterial activity test showed that G. verrucosa methanol extract did  not  have  antibacterial  activity.  The  phytochemical  test  showed  that  seaweed  extract  contained flavonoids, saponins, steroids, and triterpenoids
Keywords: Gracilaria verrucosa, Antibacterial, Methanol

## PENDAHULUAN
Penyakit infeksi menjadi salah satu permasalahan kesehatan dan akuakultur dunia. Sumber utama dari penyakit pada manusia dan organisme akuakultur diantaranya adalah bakteri patogen (Sudheesh et  al .,  2012;  Hessling et  al .,  2017).  Selama  ini  antibiotik  biasa  digunakan  dalam penanggulangan  infeksi  bakteri,  namun  penggunaan  dengan  dosis  yang  tidak  sesuai menyebabkan bakteri menjadi resisten (Ventola, 2015). Perlu dilakukan upaya pencarian antibiotik baru.
Organisme  laut  seperti  rumput  laut  dikenal  sebagai  sumber  berbagai  senyawa  aktif,  oleh karena  itu  banyak  dimanfaatkan  sebagai  bahan  pangan,  kosmetik,  dan  farmasi  (Riyanto et  al ., 2013;  Anis et  al .,  2017).  Hal  ini  karena  senyawa  bioaktifnya  memiliki  aktivitas  antibakteri,
antioksidan,  antivirus,  antikanker,  antikoagulan,  dan  antiinflamasi  (Perez et  al .,  2016).  Senyawa bioaktif  merupakan  hasil  metabolit  sekunder  yang  disintesis  saat  tumbuhan  mengalami  stres lingkungan.  Rumput  laut Gracilaria  verrucosa mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  tannin, steroid, dan fenol yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri (Maftuch et al., 2016). Senyawa ini  diperoleh  dengan  ekstraksi  menggunakan  pelarut  polar.  Metanol  menghasilkan  rendemen ekstrak rumput laut yang lebih tinggi diantara pelarut polar (Rusli et al. , 2016). Hasil penelitian Widowati et al . (2014) dan Maftuch et al. (2016) menunjukkan G. verrucosa hasil budidaya berpotensi sebagai antibakteri. Hal ini membawa kepada pemikiran apakah semua G.  verrucosa hasil  budidaya  memiliki  aktivitas  antibakteri.  Maka  dalam  penelitian  ini  dilakukan pengujian ekstrak metanol G. verrucosa hasil budidaya Balai Besar Perikanan Budidaya Air Payau ( BBPBAP ) Jepara.

## MATERI DAN METODE
Materi  penelitian  adalah  rumput  laut G.  verrucosa hasil  budidaya  tambak  BBPBAP  Jepara yang  berumur  ±  30  hari.  Bakteri  uji B.  cereus,  E.  coli,  P.  aeruginosa,  S.  epidermidis,  V. alginolyticus,  dan  V.  anguillarum diperoleh  dari Laboratorium Tropical  Marine  Biotechnology , Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan,  Universitas  Diponegoro,  Semarang.  Metode  yang digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  eksperimental  laboratoris.  Metode  ini  bertujuan  menyelidiki sebab akibat suatu kejadian dengan menguji kelompok eksperimental terhadap kondisi perlakuan dan membandingkannya dengan kontrol (Suryabrata, 2003).
Rumput  laut  dicuci  dengan  air  mengalir  untuk  menghilangkan  garam  dan  kotoran  yang menempel  kemudian  dikering  anginkan  selama  ±  5  hari,  rumput  laut  kering  dipotong  kecil-kecil. Proses ekstraksi menggunakan teknik maserasi dengan perbandingan pelarut metanol dan sampel sebesar 4:1 selama 2 x 24 jam. Hasil maserasi dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 38 0 C kemudian dikeringkan dengan nitrogen cair. Rendemen ekstrak dihitung dengan rumus (Wijaya et al ., 2018): Rendemen (%) = ×  100%. Keterangan : A = Berat vial + ekstrak; B = Berat vial kosong; C = Berat sampel yang diekstraksi
Suspensi  bakteri  dibuat  dengan  mengambil  satu  koloni  bakteri  uji  dengan  ose  dan dipindahkan ke media cair pada tabung reaksi. Suspensi lalu dihomogenkan menggunakan vortex mixer .  Kepadatan  sel  ditetapkan  dengan  cara  dibandingkan  dengan  reagen  McFarland  0,5  yang setara  dengan  ±  10 8 sel  bakteri  (Kusuma et  al .,  2015).  Uji  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui kandungan  senyawa  bioaktif  rumput  laut.  Ekstrak  diuji  kandungan  senyawa  flavonoid,  alkaloid, saponin, tanin, steroid, dan triterpenoid .
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  menggunakan  metode  difusi paper  disc. Larutan  stok ekstrak  uji  konsentrasi  200  µg/disk  dibuat  dengan  mencampurkan  ekstrak  dengan  DMSO  yang bersifat  polar  (Costa et  al .,  2017).  Larutan  stok  kemudian  diencerkan  menjadi  konsentrasi  uji  10 µg/disk, 25 µg/disk, 50 µg/disk, dan 100 µg/disk (Modifikasi Widowati et al ., 2014). Suspensi bakteri diambil sebanyak 80 µL lalu dituangkan ke atas media padat Nutrient   Agar kemudian  diratakan  dengan spreader .  Larutan  ekstrak  uji  diambil  sebanyak  10  µL  kemudian diteteskan pada paper disc . Paper disc diletakan di permukaan agar secara aseptis dan diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 2 x 24 jam. Diameter zona hambat diukur setiap 24 jam dengan rumus (Kaharap et al ., 2016) :
Diameter = (     ) (     ) Keterangan : Dv = Diameter vertikal; Dh = Diameter horizontal; Dp = Diameter paper disc Dp Dh Dv

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  ekstraksi  metanol  diperoleh  dalam  bentuk  pasta  berwarna  hijau  dengan  rendemen 1,635 % berat kering rumput laut. Warna hijau diduga berasal dari pigmen klorofil a. Menurut Ak & Yucesan  (2012), G.  verrucosa mengandung  pigmen  klorofil  a,  karotenoid,  fikoeritrin,  serta fikosianin. Pigmen ini menyerap cahaya biru dan merah sehingga memantulkan warna hijau.
Hasil  uji  Fitokimia  (Tabel  1)  menunjukkan  ekstrak  metanol G.  verrucosa mengandung senyawa  flavonoid,  saponin,  steroid,  dan  triterpenoid.  Senyawa-senyawa  ini  umumnya  disintesis pada  fase  transisi  pertumbuhan  aktif  menuju  stasioner.  Rumput  laut  dengan  umur ± 30  hari dianggap  mampu  mensintesis  senyawa  bioaktif . Masyahoro  &  Mappiratu  (2010),  rumput  laut mengalami fase pertumbuhan aktif pada umur 1-3 minggu dan fase stasioner  pada minggu ke 4. Penelitian  terdahulu  menunjukkan  senyawa  flavonoid,  saponin,  steroid,  dan  triterpenoid  tidak memiliki aktivitas antibakteri (Arabski et al ., 2012; Mokoka et al ., 2013; Wafa et al ., 2016; Dogan et al ., 2017). Kandungan senyawa serupa dapat memberikan aktivitas bioaktif berbeda. Diachanty et al .  (2017),  rumput  laut  dengan  kandungan  flavonoid,  saponin,  steroid,  dan  triterpenoid  memiliki aktivitas antioksidan tinggi. Kolam budidaya yang dangkal diduga menyebabkan tingginya paparan cahaya terhadap rumput laut. Karimil et al . (2013), peningkatan intensitas cahaya berbanding lurus dengan aktivitas antioksidan.
Uji  aktivitas  antibakteri  (Tabel  2)  menunjukkan  kloramfenikol  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri uji. Menurut Kohanski et al. (2010), kloramfenikol menghambat pertumbuhan bakteri  melalui  mekanisme  pencegahan  sintesis  protein.  Kloramfenikol    merupakan  antibiotik spektrum luas sehingga dapat digunakan terhadap bakteri Gram positif dan negatif (Shukla et al ., 2011) . Zona  hambat  terbesar  yang  dihasilkan  oleh  kloramfenikol  terjadi  pada  bakteri V. anguillarum dan V.  alginolyticus yaitu  28,9  mm  serta  27  mm.  Hal  ini  menunjukkan  kloramfenikol efektif dalam menghambat bakteri Vibrio. Kitiyodom et al . (2010) menyatakan bakteri Vibrio rentan terhadap  kloramfenikol.  Penurunan  zona  hambat  terjadi  pada  semua  bakteri  uji  setelah  24  jam, kecuali V. alginolyticus . Morita et al . (2014), kloramfenikol bersifat bakteriostatik terhadap sebagian besar  bakteri  dan  bakteriosidal  pada  beberapa  spesies.  Zona  hambat  terhadap P.  aeruginosa mengalami penurunan terbesar, yakni 10,6 mm. Hal ini dimungkinkan kloramfenikol sulit menekan pertumbuhan P. aeruginosa karena kemampuannya menghasilkan biofilm (Borriello et al ., 2004). Hasil  uji ekstrak  metanol G.  verrucosa (Tabel  2)  tidak  menunjukkan  aktivitas  antibakteri. Hasil  yang  sama (Oumaskour et  al .,  2013),  ekstrak  metanol G . verrucosa pada  konsentrasi  500 μg/disk  tidak  menghambat B.  cereus. Hal  ini  diduga  mekanisme  pertahanan    bakteri. B.  cereus mampu membentuk spora  dan  mensintesis β-Lactamase  sehingga meningkatkan resistensinya terhadap  antibiotik  (Louie et  al .,  2011; Owusu-Kwarteng et  al .,  2017). Widowati et  al .  (2014), ekstrak  yang  sama  pada  konsentrasi 65  μg/disk  tidak  menunjukkan  zona  hambat  terhadap V. alginolyticus . Penelitian  lain  (Bansemir et  al .,  2006),  ekstrak  metanol  pada  konsentrasi  2000 μg/disk  tidak  menunjukkan  zona  hambat  terhadap V.  anguillarum. Bakteri  Vibrio  diduga membentuk  biofilm  sehingga  zona  hambat  tidak  tampak. Vibrio  alginolyticus dan V.  anguillarum mampu membentuk biofilm sebagai perlindungan terhadap senyawa antibakteri (You et al ., 2007; Ruwandeepika et  al .,  2012) . Hasil  ini  juga  berbeda  dengan  penelitian  yang  ada.  Penelitian Mohanta & Padhi (2016) dengan ekstrak metanol G. verrucosa membentuk zona hambat sebesar 18 mm pada E. coli dan 16,3 mm pada P. aeruginosa dengan konsentrasi 1000 μg/disk. Siregar et
Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak G. Verrucosa No Parameter Uji Hasil 1. Flavonoid +(Positif) 2. Alkaloid -(Negatif) 3. Saponin +(Positif) 4. Tanin -(Negatif) 5. Steroid +(Positif) 6. Triterpenoid +(Positif)
Tabel 2 . Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol G. verrucosa (Diameter Zona Hambat (mm)) Bakteri Uji Konsentrasi Uji (µg/disk) 10 25 50 100 Kontrol +)  Kontrol (-) B. cereus 24 jam - - - - 24,5 - 48 jam - - - - 24 - E. coli 24 jam - - - - 22,5 - 48 jam - - - - 20,5 - P. aeruginosa 24 jam - - - - 23,8 - 48 jam - - - - 13,2 - S. epidermidis 24 jam - - - - 21,5 - 48 jam - - - - 11,8 - V.  alginolyticus 24 jam - - - - 26,9 - 48 jam - - - - 27 - V. anguillarum 24 jam - - - - 28,9 - 48 jam - - - - 26,6 -
al . (2012), ekstrak yang sama dengan konsentrasi 200 μg/disk membentuk zona hambat sebesar 5  mm  terhadap S.  epidermidis .  Hasil  yang  berbeda  pada  penelitian  ini  dapat  disebabkan  oleh konsentrasi  uji  yang  rendah. Chandrasekaran et  al. (2014),  MIC  ekstrak  metanol G.  verrucosa adalah  5  µg/disk. MIC  merupakan  nilai  konsentrasi  minimum  yang  menunjukkan  penghambatan terhadap  bakteri.  Konsentrasi  uji  yang  melebihi  nilai  MIC  dianggap  cukup  untuk  menunjukkan adanya aktivitas antibakteri.
Faktor biotik seperti predasi dan kompetisi spasial berpengaruh pada jenis senyawa bioaktif yang disintesis (Marti et al., 2004). Senyawa ini berfungsi sebagai pertahanan terhadap organisme lain.  Jenis  organisme  tambak  yang  ditemukan  bukan  predator  atau  kompetitor  sehingga  diduga tidak terjadi predasi dan kompetisi spasial. Hal ini sesuai Maftuch et al . (2016), G. verrucosa hasil budidaya kolam polikultur dengan udang, bandeng, dan spesies rumput laut lain memiliki aktivitas antibakteri. Edwards & Connell (2012), kompetisi spasial dapat terjadi karena keterbatasan sumber nutrisi. Nutrisi tambak dianggap terpenuhi dengan adanya pemberian pupuk organik.
Teknik  budidaya broadcast menyebabkan  rumput  laut  berkembang  secara  vegetatif  tanpa ada  variasi  genetik.  Hal  ini  diduga  mempengaruhi  kemampuannya  dalam  mensintesis  senyawa bioaktif. Largo et  al .  (1995),  propagasi  vegetatif  rumput  laut  budidaya  menurunkan  sistem kekebalan  terhadap  infeksi  bakteri  patogen.  Variasi  gen  yang  terbatas  dapat  meningkatkan kerentanannya  terhadap  penyakit  (Loureiro et  al .,  2015).  Ketahanannya  terhadap  infeksi  bakteri patogen dipengaruhi oleh kemampuan dalam mensintesis senyawa antibakteri.

## KESIMPULAN
Ekstrak metanol G. verrucosa tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap B . cereus , E . coli , P . aeruginosa , S . epidermidis , V . alginolyticus ,  dan V . anguillarum . Ekstrak  ini  mengandung senyawa bioaktif berupa flavonoid, saponin, steroid, dan triterpenoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Ak,  I.  &  Yücesan,  M.  2012.  Effect  of  Light  Intensity  on  the  Pigment  Composition  of Gracilaria verrucosa (Rhodophyta). Fresenius Environmental Bulletin , 21(8):2126-2131.
Anis,  M.,  Ahmed,  S.  &  Hasan,  M.M.  2017.  Algae  as  Nutrition,  Medicine  and  Cosmetic:  The Forgotten  History,  Present  Status  and  Future  Trends. World  Journal  of  Pharmacy  and Pharmaceutical Sciences , 6(6):1934-1959.
Arabski, M., Węgierek-Ciuk, A., Czerwonka, G., Lankoff, A. & Kaca, W. 2012. Effects of Saponins against  Clinical E.  coli Strains  and  Eukaryotic  Cell  Line. Journal  of  Biomedicine  and Biotechnology, 12(4):234-242.
Bansemir, A., Blume, M., Schröder, S. & Lindequist, U.,. 2006. Screening of Cultivated Seaweeds for Antibacterial Activity against Fish Pathogenic Bacteria. Aquaculture, 252(1):79 –84. Borriello, G., Werner, E., Roe, F., Kim, A.M., Ehrlich, G.D. & Stewart, P.S. 2004. Oxygen Limitation Contributes  to  Antibiotic  Tolerance  of Pseudomonas  aeruginosa in  Biofilms. Antimicrobial Agents and Chemotherapy , 48(7):2659-2664.
Chandrasekaran, M., Venkatesalu, V.  & Raj, G.A.,  2014. Antibacterial Activity of  Selected Marine Macro  Algae  against  Vancomycin  Resistant Enterococcus  faecalis . Journal  of  Coastal  Life Medicine , 2(12):940-946.
Costa, L. de A., Henrique Fernandes Ottoni, M., dos Santos, M., Meireles, A., Gomes de Almeida, V.,  de  Fátima  Pereira,  W.,  Alves  de  Avelar-Freitas,  B.  &  Eustáquio  Alvim  Brito-Melo,  G.. 2017.  Dimethyl  Sulfoxide  (DMSO)  Decreases  Cell  Proliferation  and  TNF- α, IFN-γ,  and IL-2 Cytokines Production in Cultures of Peripheral Blood Lymphocytes. Molecules , 22(11):78-89. Diachanty, S. & Nurjanah, A.A., 2017. Aktivitas antioksidan berbagai jenis rumput laut cokelat dari Perairan Kepulauan Seribu. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 20(2):305-318.
Doğan,  A.,  Otlu,  S.,  Çelebi,  Ö.,  Aksu,  P.,  Sağlam,  A.G.,  Doğan,  A.N.C.&  Mutlu,  N.,  2017.  An investigation  of  antibacterial  effects  of  steroids. Turkish  Journal  of  Veterinary  and  Animal Sciences , 41(2):302-305.
Edwards,  M.S.  &  Connell,  S.D.  2012.  Competition,  a  Major  Factor  Structuring  Seaweed Communities. Seaweed Biology Ecological Studies , 219(2):35-156.
Hessling,  M.,  Feiertag,  J.  &  Hoenes,  K.  2017.  Pathogens  Provoking  Most  Deaths  Worldwide:  A Review. Biosci Biotech Res Comm ., 10(2):1-7.
Kaharap,  A.D.,  Mambo,  C.  &  Nangoy,  E.  2016.  Uji  Efek  Antibakteri  Ekstrak  Batang  Akar  Kuning ( Arcangelisia  flava Merr.)  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli . Jurnal e-Biomedik , 4(1):13-16.
Karimil,  E.,  Jaafar,  H.Z.E.,  Ghasemzadeh,  A.  &  Ibrahim,  M.H.  2013.  Light  Intensity  Effects  on Production  and  Antioxidant  Activity  of  Flavonoids  and  Phenolic  Compounds  in  Leaves, Stems  and  Roots  of  Three  Varieties  of Labisia  pumila Benth. Australian  Journal  of  Crop Science, 7(7):1016-1023.
Kitiyodom,  S.,  Khemtong,  S.,  Wongtavatchai,  J.  &  Chuanchuen,  R..  2010.  Characterization  of Antibiotic  Resistance  in Vibrio spp.  Isolated  from  Farmed  Marine  Shrimps  ( Penaeus monodon ). FEMS Microbiol Ecol ., 72(2): 219 –227.
Kohanski,  M.A.,  Dwyer,  D.J.  &Collins,  J.J.  2010.  How  Antibiotics  Kill  Bacteria:  From  Targets  to Networks. Nat. Rev. Microbiol ., 8(6):423 –435.
Kusuma,  S.A.F.,  Agung,  M.U.K.  &  Meika,  J.  2015.  Skrining  Antibakteri  Produk  Ekstraseluler Eksosimbion  Bakteri  Laut  pada  Makroalga  Terhadap  Biofilm Staphylococcus  aureus ATC 25923. Jurnal Akuatika 6(2):128-139.
Largo,  D.B.,  Fukami,  K.,  Nishijima,  T.  &  Ohno,  M.  1995.  Laboratory-induced  Development  of  the Ice-ice Disease  of  the  Farmed  Red  Algae Kappaphycus  alvarezii and Eucheuma denticulatum (Solieriaceae,Gigartinales,Rhodophyta). Journal  of  Applied  Phycology, 7(6): 539-543.
Louie, A., VanScoy,  B.D., Brown, D.L., Kulawy, R.W., Heine, H.S. & Drusanoa, G.L. 2011. Impact of  Spores  on  the  Comparative  Efficacies  of  Five  Antibiotics  for  Treatment  of Bacillus anthracis in  An  In  Vitro Hollow  Fiber  Pharmacodynamic  Model. Antimicrobial  Agents  and Chemotherapy , 56(3):1229 –1239.
Loureiro, R., Gachon, C.M.M. & Rebours, C.. 2015. Seaweed Cultivation: Potential and Challenges of Crop Domestication at an Unprecedented Pace. New Phytologist , 206(2):489 –492.
Maftuch, I.K., Adam, A. & Zamzami, I. 2016. Antibacterial Effect of Gracilaria verrucosa Bioactive on Fish Pathogenic Bacteria. Egyptian Journal of Aquatic Research , 42(4):405-410. Martí,  R.,  Uriz,  M.J.  &  Turon,  X..  2004.  Seasonal  and  Spatial  Variation  of  Species  Toxicity  in Mediterranean  Seaweed  Communities:  Correlation  to  Biotic  and  Abiotic  Factors. Marine Ecology Progress Series , 282(1):73 –85.
Masyahoro  &  Mappiratu.  2010.  Respon  Pertumbuhan  pada  Berbagai  Kedalaman  Bibit  dan  Umur Panen  Rumput  Laut Eucheuma  cottonii di  Perairan  Teluk  Palu. Media  Litbang  Sulteng , 3(2):104-111.
Mohanta,  R.K.  &  Padhi,  S.B.  2016.  Antibacterial  Activity  of  Some  Marine  Macro  Algae  from  the Coastal Environments of Southern Odisha. IOSR Journal of Pharmacy , 6(9):14-18. Mokoka,  T.A.,  McGaw,  L.J.,  Mdee,  L.K.,  Bagla,  V.P.,  Iwalewa,  E.O.  &  Eloff,  J.N.  2013. Antimicrobial  Activity  and  Cytotoxicity  of  Triterpenes  Isolated  from  Leaves  of Maytenus undata (Celastraceae). BMC Complementary and Alternative Medicine , 13(1):111-119. Morita,  Y.,  Tomida,  J.  &  Kawamura,  Y.  2014.  Responses  of Pseudomonas  aeruginosa to Antimicrobials. Frontiers in Microbiology , 4(1):422-430.
Oumaskour, K., Boujaber, N., Etahiri, S., & Assobhei, O. 2013. Anti-Inflammatory and Antimicrobial Activities  of  Twenty-Three  Marine  Red  Algae  from  the  Coast  of  Sidi  Bouzid  (El  Jadida- Morocco). International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 5(3):145-149. Owusu-Kwarteng, J., Wuni, A., Akabanda, F., Tano-Debrah, K. & Jespersen, L. 2017. Prevalence, Virulence Factor Genes and Antibiotic Resistance of Bacillus cereus sensu lato Isolated from Dairy Farms and Traditional Dairy Products. BMC Microbiology, 17(65): 98-105. Pérez,  M.J.,  Falqué,  E.  &  Domínguez,  H.  2016.  Antimicrobial  Action  of  Compounds  from  Marine Seaweed. Marine Drugs ., 14(3):52-56.
Riyanto,  E.I.,  Widowati,  I.  &  Sabdono,  A.  2013.  Skrining  Aktivitas  Antibakteri  pada  Ekstrak Sargassum  polycystum Terhadap  Bakteri Vibrio  harveyi dan Micrococcus  luteus di  Pulau Panjang Jepara. Journal of Marine Research , 1(1):115-121.
Rusli, A., MetusalachTahir, M.M., Salangke, & Syamsuar. 2016. Analysis of Bioactive Compounds of Caulerpa  racemosa , Sargassum sp.,  and Gracilaria  verrucosa Using  Different  Solvents. Jurnal Teknologi, 78(2):15-19.
Ruwandeepika,  H.A.D.,  Jayaweera,  T.S.P.,  Bhowmick,  P.P.,  Karunasagar,  I.,  Bossier,  P.  & Defoirdt,  T.  2012.  Pathogenesis,  Virulence  Factors,  and  Virulence  Regulation  of  Vibrios Belonging to the Harveyi Clade. Aquaculture , 4(2):59 –74.
Shukla,  P.,  Bansode,  F.W.  &  Singh,    R.K.  2011.  Chloramphenicol  Toxicity:  A  Review. Journal  of Medicine and Medical Sciences , 2(13):1313-1316.
Siregar,  A.F.,  Sabdono,  A.  &  Pringgenies,  D.  2012.  Potensi  Antibakteri  Ekstrak  Rumput  Laut Terhadap Bakteri Penyakit Kulit Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus epidermidis , dan Micrococcus luteusi . Journal of Marine Research , 1(2):152-160.
Sudheesh, P.S., Al-Ghabshi, A., Al-Mazrooei, N. & Al-Habsi, S. 2012. Comparative Pathogenomics of Bacteria Causing Infectious Diseases in Fish. International journal of evolutionary biology 1(1):34-39.
Suryabrata, S. 2003. Metodologi Penelitian Ed. 2. Raja Grafindo Persada, Jakarta, 166 hlm. Ventola, C.L. 2015. The Antibiotic Resistance Crisis: Part 1: Causes and Threats. PT.,  40(4):277- 283.
Wafa,  N.,  Sofiane,  G.  &  Mouhameda,  K.  2016.  The  Antioxidant  and  Antimicrobial  Activities  of Flavonoids  and  Tannins  Extracted  from Phlomis  bovei De  Noé. European  Journal  of Experimental Biology , 6(3):55-61.
Widowati,  I.,  Lubac,  D.,  Puspita,  M.  &  Bourgougnon,  N..  2014.  Antibacterial  and  Antioxidant Properties  of  the  Red  Alga Gracilaria verrucosa from  the  North  Coast  of  Java,  Semarang, Indonesia. International  Journal  of  Latest  Research  in  Science  and  Technology ,  3(3):179- 185.
Wijaya, H., Novitasari & Jubaidah, S.. 2018. Perbandingan Metode Ekstraksi Terhadap Rendemen Ekstrak  Daun  Rambai  Laut  ( Sonneratia  caseolaris L.  Engl). Jurnal  Ilmiah  Manuntung , 4(1):79-83.
You, J., Xue, X., Cao, L., Lu, X., Wang, J., Zhang, L.  & Zhou, S. 2007. Inhibition of Vibrio Biofilm Formation  by  a  Marine  Actinomycete  Strain  A66. Applied  Microbiology  and  Biotechnology, 76(5):1137-1144.