Abstrak— Peningkatan  potensi  pulau  Poteran,  Madura  dapat dilakukan melalui perbaikan kualitas pada lahan pertanian yakni dengan  memanfaatkan  khamir  sebagai  agen  biofertilizer Penelitian ini bertujuan untuk menginventarisasi, mengidentifikasi  khamir  dari  pulau  Poteran,  Madura  yang berperan  melarutkan  fosfat  dan  mendegradasi  bahan  organik. Identifikasi khamir hingga tingkat genus berdasarkan karakteristik morfologi mikroskopik dan makroskopik, reproduksi  seksual  serta  uji  fisiologis. Hasil  penelitian  ini didapatkan  9  isolat  khamir  yang  diduga  berasal  dari  genus Candida, Saccharomyces, Filobasidium, Trichosporon, dan Pichia.
Kata  Kunci—khamir,  pulau  Poteran,  khamir  pelarut  fosfat, khamir degradasi bahan organik.

## I. PENDAHULUAN
NDONESIA merupakan  negara  kepulauan  yang  sebagian wilayahnya  merupakan  perairan  dengan  jumlah  pulau 17.508,  dimana  dari  sekian  pulau  yang  ada,  sebagian  masih belum dimanfaatkan  secara optimal sesuai dengan potensinya. Salah  satu  pulau  kecil  di  kabupaten  Sumenep  di  antaranya yaitu pulau Poteran [1]. Pulau Poteran adalah salah satu pulau kecil  dengan  potensi  Sumber  Daya  Alam  (SDA)  yang  belum banyak  diungkap.  Pengembangan  pulau  Poteran  dengan konsep  sustainable  island  pada  sektor  pertanian  dapat dilakukan melalui perbaikan produksi pada lahan pertanian.
Indonesia  termasuk  negara  yang  terletak  di  daerah  tropis dengan  kelimpahan  keanekaragaman  flora,  fauna  dan mikroorganisme.  Keberadaan  mikroorganisme  di  alam  sangat melimpah meliputi daratan atau tanah, perairan dan udara [2]. Salah  satu  kelompok  mikroorganisme  adalah  khamir,  yang dikenal memiliki rentang ekologi cukup luas dan mampu hidup pada  daerah  ekstrim  [3],  dan  biasanya  ditemukan  pada lingkungan  organik  tinggi  [4].  Menurut  Kurtzman  dan  Piskur (2006),  isolasi  dan  identifikasi  dari  total  perkiraan keanekaragaman  khamir  di  dunia  baru  dilakukan  sekitar  1%. Diantara  89  genera  khamir  yang  pernah  terdaftar  dalam monograf khamir, sebanyak 37 genera atau 42% ditemukan di Indonesia  [4].  Penelitian  tentang  yeast  banyak  dilakukan dalam bentuk eksplorasi dari berbagai ekosistem di Indonesia. Hal ini diyakini bahwa jumlah khamir di alam jauh lebih tinggi dibandingkan  khamir  yang  telah  diketahui  selama  ini  [2]. Penelitian  mengenai  keragaman  khamir  tanah  telah  banyak dilakukan  oleh  beberapa  peneliti  sebelumnya  yang  telah mengisolasi khamir dari berbagai variasi tipe ekosistem tanah, seperti  pada  daerah  antartika,  gurun  dan  hutan  subtropika. Akan  tetapi  belum  banyak  peneliti  yang  melaporkan keragaman khamir yang hidup pada tanah di daerah tropis [5].
Hal ini yang mendasari penelitian mengenai keragaman khamir di daerah tropis, salah satunya di Pulau Poteran, Madura.
Penelitian  mengenai  keragaman  khamir  diharapkan  dapat diaplikasikan  dalam  meningkatkan  sektor  pertanian  di  pulau Poteran.  Upaya  peningkatan  pada  sektor  pertanian  adalah dengan menggunakan mikroorganisme sebagai agen biofertilizer. Salah satu peran khamir sebagai agen biofertilizer diantaranya  adalah  sebagai  pelarut  fosfat  dan  pendegradasi bahan organik.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menginventarisasi  dan mengidentifikasi  khamir  dari  pulau  Poteran,  Madura. Penelitian ini diharapkan dapat menambah informasi mengenai peran  ekologi  khamir  serta  kegunaannya  sebagai  agen pembuatan  pupuk  biofertilizer  sehingga  dapat  meningkatkan sektor pertanian di pulau Poteran, Madura.

## II. METODOLOGI

## A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  September  2013  hingga Maret  2014  di  Laboratorium  Mikrobiologi  dan  Bioteknologi Jurusan  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember.

## B. Pengambilan Sampel Tanah
Pengambilan  sampel  dilakukan  secara  acak  pada  lima  titik, yakni  pada  titik  P1  ,  P4,  P5,  P7  dan  P8.  Lokasi  pengambilan sampel  tersebut  didasarkan  pada  keterwakilan  ekosistem  di Pulau  Poteran.  Sampel  khamir  diambil  dari  tanah  rhizosfer  di pulau  Poteran,  Madura.  Sampel  tanah  diambil  dari  top  soil pada kedalaman 0-10 cm dengan menggunakan cetok. Sampel yang  telah  diambil  dimasukkan  ke  dalam  botol  vial  dan disimpan dalam ice box untuk dibawa ke laboratorium. Sampel kemudian  diidentifikasi  dan  dianalisis  kemampuannya  dalam melarutkan fosfat serta mendegradasi bahan organik.

## C. Isolasi dan Purifikasi Khamir
Sampel  tanah  yang  didapat,  ditimbang  seberat  10  gram  dan dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer  yang  berisi  90  ml  air fisiologis  steril  (NaCl).  Selanjutnya,  dihomogenkan  dan diendapkan  selama  ±5  menit.  Sebanyak  10  ml  supernatan dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer  berisi  40  ml  medium perbanyakan  (enrichment)  yaitu  medium  YMB.  Kemudian diinkubasi  di  atas  rotary  shaker  pada  suhu  ruang  selama  3 hari.  Pengenceran  bertingkat dilakukan dengan cara diambil 1 ml suspensi dari erlenmeyer berisi isolat dari YMB, kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi aquades steril sebanyak 9  ml  dan  didapatkan seri pengenceran 10 -1, 10 -2, dan 10 -3 .  Dari  masing-masing  seri  pengenceran  yang  didapatkan,

## Karakterisasi Khamir dari Pulau Poteran Madura
Isna Nur Ashliha dan Nur Hidayatul Alami Jurusan Biologi, Fakultas MIPA, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia e-mail: hidayatulalami@bio.its.ac.id
I
diambil  sebanyak  0,1  ml  suspensi  lalu  ditanam  pada  medium YMEA melalui metode sebar. Kemudian diinkubasi pada suhu 25-30 o C  selama  ±3  hari.  Pengamatan  karakter  makroskopis koloni  yang  tumbuh  pada  media  YMEA  dan  kemudian dilakukan  streak  16.  Selanjutnya  dari  hasil  streak  16  diamati bentuk  sel  secara  mikroskopis.  Jika  sudah  didapatkan  bentuk sel yang seragam sehingga didapatan isolat murni.

## D. Karakterisasi dan Identifikasi Khamir
Isolat  khamir  diidentifikasi  sampai  tingkat  genus  dengan mengacu  pada  buku  panduan  identifikasi  “The  Yeasts  a Taxonomic  Study”  [4],[6].  Uji  fisiologis  khamir  yang dilakukan meliputi :

## Pengamatan Makroskopis dan Mikroskopis
Pengamatan  karakter  makroskopis  dilihat  berdasarkan kenampakan  koloni  yang  tumbuh  pada  media  padat  YMEA, meliputi:  tekstur  koloni,  warna  koloni,  bentuk  tepi/margin koloni,  elevasi,  dan  permukaan  koloni,  serta  pertumbuhan pada  media  cair  YMB,  meliputi:  pembentukan  endapan, cincin, dan pelikel.
Pengamatan  karakter  mikroskopis  dari  isolat  khamir  dari medium YMEA dilakukan dengan pewarnaan lactofenol untuk melihat karakteristik reproduksi generatif melalui pembentukan  askospora,  teliospora,  dan  basidiospora.  Serta pengamatan  reproduksi  vegetatif,  seperti  pembentukan budding  dengan  tipe  multipolar,  bipolar,  unipolar,  dan  fusi. Karakteristik  vegetatif  lainnya  seperti,  pembentukan  spora aseksual meliputi arthrospora, blastospora, dan chlamydospora.  Sedangkan  karakter  mikroskopis  lainnya seperti, bentuk filamen, bentuk sel (bulat, oval, silinder, ovoid, sperikal,  spheroid),  ukuran  sel  dan  memiliki  pseudohifa  atau hifa  sejati  (miselium).  Pengamatan  secara  mikroskopis dilakukan  dengan  cara  membuat  preparat  biakan  di  atas  kaca objek kemudian dilihat karakternya pada mikroskop [4].

## Uji Fermentasi Gula
Uji  fermentasi  gula  dilakukan  dengan  menginokulasi sebanyak  1  ose  isolat  yang  telah  berumur  48  -  78  jam  dan diencerkan  dalam  fermentation  basal  medium  yang  berisi tabung  Durham  [6]  sebanyak  10  ml. Hasil  positif tampak jika terjadi  perubahan  warna  pada  medium  dari  hijau  menjadi kuning.

## Uji Urease
Uji  urease  menggunakan  media  Agar  Base  Urea (Christensen’s  urea  agar).  Isolat  khamir  diinokulasi  pada media  agar  miring  Christensen  secara  aseptis  dan  diinkubasi pada  suhu  25-30 o C.  Pertumbuhan  khamir  diamati  setiap  hari selama 7 hari. Jika khamir positif menghasilkan urease, media akan berubah warna dari kuning menjadi merah keunguan.

## Uji Askospora
Uji  ini  dilakukan  dengan  metode  modifikasi  Schaeffer- Fulton’s.  Suspensi  isolat  khamir  dari  media  Corn  Meal  Agar dari  cover  glass  dan  gelas  obyek  dan  diberi  malachite  green 0.5%.  Kemudian  dipanaskan  dengan  uap  air  (di  atas  air mendidih)  selama  5  menit  dengan  sesekali  ditetesi  malachite
green.  Setelah  gelas  obyek  cukup  dingin,  gelas  obyek dimiringkan  dan  dibilas  dengan  akuades  selama  30  detik dengan  hati-hati.  Selanjutnya,  smear  khamir  diberi  warna tandingan  safranin  0.5%  selama  30  detik.  Preparat  diamati  di bawah  mikroskop  dengan  minyak  imersi.  Askospora  dewasa akan  berwarna  hijau,  sedangkan  sel  vegetatif  akan  tampak merah.

## Uji Pertumbuhan pada Media Cair
Pertumbuhan  khamir  dalam  media  cair  dilakukan  dengan cara menumbuhkan isolat khamir ke dalam 10 ml media YMB. Isolat  khamir  yang  berumur  48-72  jam  diinokulasikan sebanyak  1  ose  dalam  media  YMB  secara  aseptis  dan kemudian divortex. Isolat yang telah diinokulasikan kemudian diinkubasi  pada  suhu  ruang  selama  7  hari.  Hasil  positif  jika terjadi  perubahan  warna  pada  media  menjadi  kekuningan. Selain  itu,  diamati  juga  pertumbuhannya  pada  media  cair, seperti  keberadaan  cincin,  pelikel  pada  permukaan  media, serta endapan pada dasar media (sedimen).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1 Karakterisasi Isolat Khamir
Dari  hasil  isolasi  dari  pulau  Poteran  didapatkan  sembilan isolat  khamir  yaitu  dengan  kode  P1.6, P4.1,  P5.1, P5.2, P5.3, P5.4,  P5.6,  P7.1  dan  P7.1.1.  Secara  berturut-turut  adalah diduga  berasal  dari  genus;  Candida,  Saccharomyces, Saccharomyces, Saccharomyces, Filobasidum, Pichia, Trichosporon,  Filobasidium  dan  Filobasidium.  Karakter  hasil pengamatan secara makroskopis dan mikroskopis pada gambar 1 dan gambar 2 di bawah ini.
Gambar. 2. Hasil Pengamatan Mikroskopis Isolat Khamir

## 1. Karakter Genus Candida
Genus  Candida  merupakan  khamir  tanah  yang  umum ditemukan pada tanah dengan kandungan bahan organik tinggi. Genus ini merupakan khamir yang memiliki diversitas fisiologi cukup  tinggi  dan  mempunyai  jenis  cukup  tinggi  [7]. Berdasarkan hasil pengamatan secara makroskopis, mikroskopis  serta  melalui  beberapa  uji  fisiologis,  didapatkan dua  isolat  yang  diduga  berasal  dari  genus  Candida,  yakni isolat  dengan  kode  P1.6.  Genus  Candida  tidak  memiliki pigmen  karatenoid  sehingga  berwarna  putih  dan  krem.  Genus ini  seringkali  membentuk  pseudohifa  dengan  blastopora  yang muncul  di  persimpangan  sel  pseudohifa  yang  saling berdekatan.  Kebanyakan  spesies  dari  genus  Candida  selalu membentuk  pseudohifa  maupun  hifa  [4],[6].  Karakter  ini sesuai dengan karakter yang dimiliki isolat P1.6 yang memiliki koloni berwarna putih dan membentuk pseudohifa.

## 2. Karakter Genus Saccharomyces
Karakter  ketiga  isolat  yaitu  P4.1,  P5.1  dan  P5.2  memiliki kesamaan  karakter  dengan  genus  Saccharomyces  yang disebutkan  oleh  [4],[6],[8]  juga  menyebutkan  bahwa  genus Saccharomyces  memiliki  tipe  reproduksi  vegetatif  dengan multilateral budding, sel-selnya berbentuk globose, ellips, atau silindris,  bulat dan oval. Koloni genus ini sering kali memliki tekstur  kental  dan  tidak  memiliki  pigem  karotenoid.  Koloni genus  ini  bundar  dengan  elevasi  cembung  [8].  Karakteristik fisiologis  yang  terkenal  dari  jenis  khamir  ini  adalah kemampuannya melakukan fermentasi anaerob atau semianaerob  pada  satu  atau  lebih  jenis  gula  untuk menghasilkan etanol dan CO 2 [9].

## 3. Karakter Genus Trichosporon
Isolat  kode P5.6 diduga berasal dari Genus Trichopsopn. Genus ini merupakan salah satu khamir yang memiliki peranan penting  dalam  rekultivasi  dari  polusi  di  tanah,  bioremediasi logam berat, dan berguna sebagai sensor mikrobiologi. Sejauh
ini,  lebih  dari  30  spesies  dari  genus  Trichosoporon  telah diidentifikasi.  Genus  ini  tersebar  luas  di  lingkungan,  baik  di tumbuhan,  hewan,  udara,  air,  limbah  industri  dan  di  tanah. Beberapa spesies dari genus Trichosoporon dilaporkan mampu memanfaatkan  benzena,  fenol,  dan  senyawa  aromatik  lainnya yang bermolekul rendah, hidrokarbon aromatik polisiklik serta senyawa organik lainnya [10]. Genus ini melakukan reproduksi aseksual dengan multilateral budding disertai dengan bentukan pseudohifa  yang  melimpah  serta  adanya  bentuk  arthospora. Pada  genus  ini  dimungkinkan  adanya  endospora  yang terbentuk. Pada pengujian pertumbuhan pada media cair genus Trichosporon  tumbuh  di  permukaan  (pelikel  tebal)  dan  ada endapan  putih  di  dasar  media.  Sedangkan  pada  pengujian urease menunjukkan hasil positif [8].

## 4. Karakter Genus Pichia
Berdasarkan  hasil  pengamatan  secara  makroskopis, mikroskopis  serta  melalui  beberapa  uji  fisiologis,  didapatkan satu isolat yang diduga berasal dari genus Pichia, yakni isolat dengan  kode  P5.3.  Genus  Pichia  memiliki  bentuk  sel  bulat, elips,  atau  memanjang,  sering  membentuk  true  hifa. Reproduksi  aseksual  dengan  multilateral  budding  dan  secara seksual  dengan  membentuk  askospora  (1-4  askus)  dan umumnya memiliki askus yang kuat, namun demikian kadang- kadang  terdapat  spora  tanpa  askus.  Genus  ini  memiliki  ciri askospora berbentuk hat-shaped, hemispheroidal atau spheroidal.  Genus  ini  mungkin  ada  yang  mampu  melakukan fermentasi gula dan ada yang tidak mampu [4],[6]. Salah satu spesies dari genus ini dari serbuk sari yang dibawa oleh lebah madu. Karakteristik genus Pichia tersebut mirip dengan isolat kode P5.3, dimana isolat kode ini memiliki bentuk koloni bulat dengan  bentuk  sel  bulat  persegi.  Melakukan  reproduksi aseksual  dengan  multilateral  budding  dan  membentuk askospora serta mampu melakukan fermentasi glukosa [4].

## 5. Karakter Genus Filobasidium
Isolat  P5.4,  P7.1  dan  P7.1.1  diduga  berasal  dari  genus Filobasidium.  Genus  Filobasidium  melakukan  reproduksi aseksual  dengan  multilateral  budding,  sel-selnya  berbentuk bulat,  oval,  eliptikal  dan  lonjong.  Koloni  Filobasidium  sering kali  memiliki  tekstur  mucoid  atau  kental  dan  memilik  warna putih  hingga  krem.  Pada  genus  ini  pseudohifa  dan  hifa mungkin  terbentuk  serta  tumbuh  dimedia  cair  dengan membentuk  pelikel  di  permukaan  media  dan  endapan  warna putih  di  dasar  media  [6].  Genus  Filobasidium  berbeda  dari semua  genus  yang  lain  dari  anggota  basidiomycetes  karena genus  ini  membentuk  basidia  dengan sessile  basidiospora  dan tidak  membentuk  basidospora  di  dalam  rantai  serta berkecambah melalui budding [4],[6].

## IV. KESIMPULAN/RINGKASAN
Isolat  khamir  yang  ditemukan  di  rhizospher  tanaman  dari pulau  Poteran,  Madura  diduga  berasal  dari  dari  genus Candida,  Saccharomyces,  Filobasidium,  Trichosporon,  dan Pichia.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  I.N.A  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Alloh SWT  yang  telah  memberikan  rahmat  dan  karunia  sehingga naskah  tugas  akhir  ini  dapat  terselesaikan  dengan  baik  dan lancar.  Kepada  dosen  pembimbing  Ibu  Nur  Hidayatul  Alami, S.Si., M.Si., para dosen penguji Bapak Aunurohim, S.Si., DEA dan  Bapak  Dr.  Nurul  Jadid.,  M.Sc.,  serta  kepada  keluarga, teman-teman  dan  semua  pihak  yang  telah  banyak  membantu dalam penyelesaian naskah tugas akhir ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Romadhon.  “Kajian  Indeks  Kepekaan  Lingkungan  Dalam  Penyusunan Arahan  Pengembangan  Pulau  Kecil  Di  Kabupaten  Sumenep  (Studi Kasus  Pulau  Sapudi,  Poteran,  dan  Girilayang).”  Embryo  Vol.  5  (1) (2008) 1-13.
[2] Jumiyati.,  Bintari,  H.  S.  dan  Mubarok,  I.  “Isolasi  dan  identifikasi khamir  secara  morfologi di tanah  kebun  wisata pendidikan  Universitas Negeri Semarang”. Biosantifika. 4(1) (2012) 27-35.
[3] Spencer,  J.F.T.  Yeast  in  Natural  and  Artificial  Habitats.  Berlin: Springer-Verlag (1997).
[4] Kurtzman C.P. and J.W. Fell. The Yeast A Taxonomy Study. New York: Elvesier (1998).
[5] Kanti,  A.  “Identifikasi  jenis  khamir  yang  diisolasi  dari  tanah  gambut Taman Nasional Bukit Duabelas, Jambi”. BioSmart. 6(1) (2003) 10-14.
[6] Van  Rij,  N.  J.  W.  Kregen.  The  Yeast  A  Taxonomy  Study.  Amsterdam: Elvesier Science Publisher (1987).
[7] Prasad,  G.S.,  S.  Mayilraj.,  N.  Sood.,  V.  S.  K.  Biswas,.  dan  B.  Lal. “Candida  digboiensis  sp.  nov.,  A  Novel  Anamorphic  Yeast  Species from  an  Acidic  Tar  Sludge-Contaminated  Oilfield”.  International Journal  of  Systematics  and  Evolution  Microbiology.  55  (2005)  967- 972 .
[8] Nurihariyati, T., Ni’matuzahroh, dan Surtiningsih, T. “Keanekaragaman khamir pendegradasi minyak hasil isolasi dari pelabuhan Tanjung Perak Surabaya”. Berk. Penel. Hayati. 9 (2004) 87-91 .
[9] Oda, Y., dan K. Ouchi. Saccharomyces. Japan: Academic Press (1999).
[10] Kaszyki,  P.,  K.  Czeschowska.,  P.  Petryszak.,  J.  Miedzobrodzki.,  B. Pawlik  dan  H.  Koloczek.  “Methalotrophic  Extremophilic  Yeast
Trichosporon  Sp;  a  Soil-Derived  Isolate  with  Potential  Applications in Environmental  Biotechnology”.  Acta  Biochimica  Polonica.  53(3) (2006) 463-473 .