## PENENTUAN KANDUNGAN TOTAL FENOLIK, FLAVONOID, DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI KUSO MAFOLA
( Drynaria quercifolia L.)
Theresia Engka 1) , Max R.J. Runtuwene 2) , Jemmy Abidjulu 2)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Jurusan Kimia FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
The aims of this research were to study the antioxidant activity of methanol extracts from the rhizome of kuso mafola (Drynaria quercifolia  L.) and to determine the total phenolic and flavonoid content. The study began with a maceration process using methanol to obtain a concentrated extract. Extraxt  was  tested  against  antioxidant  activity  with  DPPH  assay,  and  then  determined  the  total phenolic and flavonoid contents. The results showed that the methanol extract of kuso mafola rhizome has antioxidant acivity with IC 50 value of 128, 822 µg/mL, total phenolic content 97, 143 mg/kg, and total flavonoid content 4,45 mg/kg.

## Keywords : kuso mafola, methanol extract, antioksidan

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mempelajari  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  metanol  umbi kusomafola  ( Drynaria  quercifolia L. ) serta  menentukan  kandungan  total  fenolik  dan  flavonoidnya. Penelitian  dimulai  dengan  proses  maserasi  menggunakan  pelarut  metanol  hingga  diperoleh  ekstrak pekat.  Ekstrak  pekat  kemudian  diuji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH  dan  ditentukan kandungan total fenolik dan flavonoidnya. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak metanol umbi kuso mafola memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 sebesar 128,822 µg/mL, kandungan total fenolik sebesar 97, 143 mg/kg, dan kandungan total flavonoid sebesar 4,45 mg/kg.
Kata Kunci : Kuso mafola, ekstrak metanol, antioksidan

## PENDAHULUAN
Senyawa antioksidan dapat ditemukan  melimpah  antara  lain  dalam tumbuh-tumbuhan.  Senyawa  antioksidan
alami tumbuhan umumnya adalah senyawa  fenolik  atau  polifenolik.  Dalam beberapa  tahun  terakhir,  identifikasi  dan pengembangan  senyawa  fenolik  atau ekstrak  dari  berbagai  tumbuhan  telah menjadi  cakupan  utama  dalam  penelitian yang  terkait  dengan  kesehatan  dan pengobatan.  Bahkan,  senyawa  polifenol telah  menarik  perhatian  berkaitan  dengan potensi  antioksidan  serta  kemampuannya dalam  pencegahan  berbagai  penyakit yang  disebabkan  oleh  stress  oksidativ, seperti kanker (Windono et al., 2001; Dai dan Mumper, 2010).
Banyak  tumbuhan  yang  telah dimanfaatkan untuk  pengobatan alternatif penyakit  kanker.  Salah  satunya  adalah kuso  mafola  ( Drynaria  quercifolia ).
Masyarakat  di  Pulau  Tidore  Provinsi Maluku Utara telah memanfaatkan bagian umbi  dari  tumbuhan  ini  untuk  mengobati kanker payudara. Hal inilah yang
mendorong dilakukannya penelitian
mengenai  aktivitas  antioksidan  pada tumbuhan  ini.  Sebelumnya,  Abdullah et al. (2014)  telah  melakukan  penapisan fitokimia  dan  uji  aktivitas  antioksidan pada  umbi  kuso  mafola.  Dari  hasil  yang diperoleh  dapat  diketahui  ekstrak  etanol umbi  kuso  mafola  memiliki  aktivitas antioksidan yang cukup baik dengan nilai IC 50 sebesar 37,3 µg/mL.
Berdasarkan  uraian  di  atas,  perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk mempelajari  aktivitas  antioksidan  serta kandungan  total  fenolik  dan  flavonoid dari  ekstrak  dan  fraksi  pelarut  umbi kuso mafola.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  yaitu pisau,  oven,  neraca  analitik, Aluminium foil , blender Philips, vortexer, ayakan  65 mesh ,  desikator,  labu  pemisah,  statif, cawan  porselen,  batang  pengaduk,  sudip, satu  set  alat vacuum  rotatory  evaporator, spektrofotometer  UV-Vis,  cawan  petri, botol vial, pipet  tetes,  mikropipet  (1000 μL, 200 μL, dan 10 μL), rak tabung, gelas arloji,  dan  alat-  alat  gelas  dengan  kualitas pyrex .
Bahan-bahan yang digunakan di antaranya  umbi  kuso  mafola  yang diperoleh  dari  Pulau  Tidore  Provinsi Maluku  Utara,  kertas  saring,  air  distilasi, metanol,  aluminium  klorida  2%,  reagen Folin  Ciocalteau  50%,  natrium  karbonat 2%,  vitamin  C,  dan  1,1-difenil-2- pikrilhidrazil (DPPH).

## Prosedur Kerja

## Preparasi Sampel
Sampel  umbi  kuso  mafola  dikupas dan  diiris  tipis.  Setelah  itu  sampel dikeringkan  selama  3  minggu.  Setelah kering,  sampel  kemudian  dihaluskan dengan  blender  dan  diayak  sehingga diperoleh  serbuk  halus.  Sebanyak  320 gram serbuk umbi kuso mafola dimasukkan  ke  dalam  wadah,  kemudian dimaserasi dengan pelarut metanol sebanyak  1500  mL  selama  3  x  24  jam sambil  sesekali  diaduk.  Filtrate  hasil maserasi  kemudian  disaring  dan  diuapkan untuk memperoleh ekstrak pekat.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak  dilarutkan  dalam  metanol (dibuat  konsentrasi  1000  µg/mL).  Larutan sampel  yang  telah  dibuat  diencerkan dengan  variasi  konsentrasi  100  µg/mL, 150  µg/mL,  200  µg/mL,  dan  250  µg/mL dan  dimasukkan  sebanyak  0,5  mL  ke dalam tabung reaksi sebagai larutan uji.
Ke dalam tabung reaksi ditambahkan  larutan  DPPH  (konsentrasi 93  µM)  sebanyak  1,5  mL  dan  divortex selama 2 menit. Larutan diinkubasi selama 30  menit  dalam  kondisi  gelap.  Setelah  30 menit  diukur  absorbansinya  menggunakan spektrofotometer  UV  –  Vis  pada  panjang gelombang  517  nm.  Pengujian  dilakukan dua  kali,  dan  diambil  nilai  rataan  % inhibisi  untuk  setiap  sampel  dalam berbagai  variasi  konsentrasinya.  Dibuat kurva antara konsentrasi dengan % inhibisi untuk  mendapatkan  persamaan  regresi yang  akan  digunakan  untuk  penentuan nilai IC 50 .

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Sebanyak  0,1  mL  larutan  ekstrak (konsentrasi  1000  µg/mL)  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi.  Ke  dalam  tabung ditambahkan  0,1  mL  reagen  Folin- Ciocalteau  50%  dan  divortex  selama  2 menit.  Selanjutnya  ditambahkan  2  mL larutan natrium karbonat 2% dan diinkubasi dalam ruangan gelap selama 30 menit. Setelah 30 menit absorbansi sampel dibaca  dengan  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gelombang 750 nm. Pengujian  dilakukan  sebanyak  dua  kali, dan  masing  -  masing  nilai  absorbansi dimasukkan  dalam  persamaan  regresi linear  baku  asam  galat.  Dihitung  rataan total  fenolik  dari  setiap  sampel,  dan
dinyatakan  sebagai  ekivalen  asam  galat dalam mg/kg ekstrak.

## Penentuan Kandungan Total Flavonoid
Sebanyak  1  mL  larutan  ekstrak umbi  kuso  mafola  (konsentrasi  1000 µg/mL)  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi. Ke dalam tabung reaksi ditambahkan 2 mL aluminium klorida 2%. Campuran  divortex  selama  1  menit  dan diinkubasi  selama  30  menit.  Setelah  30 menit  dibaca  absorbansinya  pada  panjang gelombang  415  nm.  Pengujian  dilakukan sebanyak  dua  kali,  dan  masing  -  masing nilai absorbansi dimasukkan dalam persamaan  regresi  linear  baku  kuersetin. Dihitung  rataan  total  flavonoid  dari  setiap sampel,  dan  dinyatakan  sebagai  ekivalen kuersetin dalam mg/kg ekstrak.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Preparasi Sampel
Sebelum  diekstraksi,  sampel  umbi kuso  mafola  dikeringkan  terlebih  dahulu. Setelah  kering,  sampel  dihaluskan  dan diayak.  Penghalusan  dan  pengayakan bertujuan  untuk  memperoleh  serbuk  yang homogen  dengan  luas  permukaan  yang besar sehingga senyawa aktif sampel dapat terekstraksi lebih baik.
Proses  ekstraksi  bertujuan  untuk menarik  senyawa  aktif  yang  ada  dalam sampel. Digunakan metanol karena pelarut tersebut  dapat  menarik  senyawa  polar maupun non polar dalam  sampel  (Cordell, 1981), sedangkan waktu ekstraksi tiga hari memungkinkan  terjadinya  kontak  yang baik antara pelarut dengan sampel sehingga  ekstraksi  berlangsung  secara optimal.  Hasil  ekstraksi  berupa  filtrat berwarna  kuning  disaring  dan  diuapkan
untuk  memperoleh  ekstrak.  Hasil  ekstrak yang  didapatkan  dari  proses  ekstraksi adalah  sebanyak  27,  924  g  dengan randemen 8,72 %. Ekstrak pekat berwarna coklat  dengan  konsistensi  seperti  pasta, dan lengket.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  dalam penelitian ini menggunakan metode DPPH. DPPH memiliki warna dasar ungu. Jika direaksikan dengan antioksidan, maka akan  terjadi  penurunan  intensitas  warna DPPH menjadi kuning. DPPH yang tersisa diukur absorbansinya dengan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang  517  nm.  Nilai  absorbansi dimasukkan  dalam  rumus  perhitungan persen inhibisi.
Gambar 1. Persen inhibisi ekstrak metanol umbi kuso mafola berbagai konsentrasi
Dalam  ekstrak    terdapat  lebih banyak  senyawa  fenolik  dan  flavonoid yang  mendonorkan  elektronnya,  sehingga ada kemungkinan senyawa tersebut bekerja secara sinergis dalam penangkalan radikal  bebas.  Peningkatan  konsentrasi sampel juga berpengaruh terhadap aktivitas antioksidan dari ekstrak.
Berdasarkan  hasil,  dapat  terlihat  bahwa semakin  besar  konsentrasi  sampel,  maka daya  hambatnya  terhadap  radikal  DPPH
semakin tinggi. Sebelumnya telah dilakukan  penelitian  oleh  Prasanna  dan Anuradha  (2015)  untuk  menguji  aktivitas antioksidan dari Drynaria quercifolia yang diperoleh  dari  India.  Dengan  konsentrasi ekstrak  dan  DPPH  yang  berbeda,  hasilnya menunjukkan  peningkatan  aktivitas  pada penambahan  konsentrasi  ekstrak,  seperti pada  sampel  umbi  kuso  mafola  yang diperoleh dari Tidore.
Hasil  perhitungan  persen  inhibisi yang diperoleh selanjutnya dimasukkan ke dalam kurva antara persen inhibisi dengan konsentrasi  untuk  menentukan  nilai  IC 50 sampel. Nilai IC 50 menunjukan konsentrasi sampel yang diperlukan untuk menghambat  50%  radikal  bebas  DPPH. Nilai  IC 50 dari ekstrak  metanol  umni kuso mafola  adalah  128,  822.  Dalam  penelitian ini  digunakan  pembanding  vitamin  C.
Nilai  IC 50 dari  vitamin  C  adalah  13,597.
Nilai  IC 50 umbi  kuso  mafola  lebih  rendah dibandingkan dengan vitamin C vitamin C merupakan senyawa murni.
Gambar 2. Kurva persamaan regresi aktivitas antioksidan ekstrak metanol umbi kuso mafola
Sebelumnya telah dilakukan penelitian oleh Prasanna dan Chitra (2014) untuk  menguji  aktivitas  antioksidan  dari Drynaria  quercifolia yang  diperoleh  dari
40, 92 56, 66 72,85 90,7 0 2 4 6 8 100 150 200 250 % In h ib isi Konsentrasi ( µg/mL) y = 0,3311x + 7,347 R² = 0,9991 0 20 40 60 80 100 0 100 200 300 % In h ib isi Konsentrasi (µg/mL)
India.  Dengan  konsentrasi  ekstrak  dan DPPH yang berbeda, hasilnya menunjukkan  peningkatan  aktivitas  pada penambahan konsentrasi ekstrak.

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Polifenol  dalam  ekstrak  tumbuhan dapat  bereaksi  dengan  reagen  Folin- Ciocalteu  membentuk  kompleks  berwarna biru yang dapat dideteksi dengan spektrofotometer  UV-Vis.  Penambahan larutan Na 2 CO 3 dimaksudkan untuk memberikan  suasana  basa  agar  reaksi dapat  berlangsung  lebih  cepat  (Agbor et al., 2014).  Hasil  dari  penelitian  yang dilakukan  menunjukkan  bahwa  semakin pekat  warna  biru  yang  dihasilkan,  maka semakin besar kandungan senyawa fenolik,  sehingga  absorbansinya  juga semakin tinggi.
Nilai  absorbansi  dimasukkan  dalam persamaan  regresi  asam  galat  untuk memperoleh  kandungan  total  fenolik. Hasil  yang  diperoleh  berbanding  lurus dengan hasil pengujian aktivitas
antioksidan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa kandungan fenolik dalam sampel memberikan  kontribusi  terhadap  aktivitas antioksidan.  Semakin  tinggi  kandungan total  fenolik,  semakin  besar  aktivitas antioksidannya.

## Penentuan Kandungan Total Flavonoid
Uji  total  flavonoid  menggunakan larutan  AlCl 3 .  Penambahan  AlCl 3 dapat membentuk  kompleks  asam  yang  stabil pada  flavon  atau  flavonol  (Robinson, 1995).  Flavonoid  mengandung  cincin aromatik  yang terkonjugasi  dan  karena itu menunjukkan  pita  serapan  yang  kuat  pada daerah  spektrum  UV  dan  spektrum tampak.
Kandungan  total  flavonoid  jauh lebih  rendah  dibandingkan  dengan  total fenolik.  Hal  ini  disebabkan  senyawa flavonoid  merupakan  sub  bagian  dari fenolik.  Hasil  penentuan  kandungan  total flavonoid yang diperoleh mendukung hasil pengujian  aktivitas  antioksidan.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  kandungan  flavonoid dalam  sampel  memberikan  kontribusi terhadap  aktivitas  antioksidan.  Semakin tinggi  kandungan  total  flavonoid,  semakin besar aktivitas antioksidannya.

## KESIMPULAN
a. Ekstrak  metanol  dari  umbi  kuso mafola memiliki aktivitas antioksidan  dengan  nilai  IC 50 sebesar 128,822 µg/mL.
b. Kandungan total fenolik umbi kuso mafola  adalah  97,  143  mg/kg,  dan kandungan  total  flavonoid  sebesar 4,45 mg/kg.

## SARAN
Sebaiknya  dilakukan  uji  toksisitas terhadap umbi kuso mafola.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah,  W.,  M.  R.  J.  Runtuwene.,  dan V. S. Kamu. 2014. Uji Fitokimia dan Penentuan  Inhibition  Concentration 50% pada Beberapa Tumbuhan Obat di Pulau Tidore. Jurnal Ilmiah Sains . 14: 95 - 99.
Agbor,  G.  A.,  J.  A.  Vinson.,  dan  P.  E. Donnelly. 2014. Folin-Ciocalteu
Reagen  for  Polyphenolic  Assay.
International Journal of Food Science,  Nutrition,  and  Dietetics. 3: 147 - 156.
Arief,  S.  2006. Radikal  Bebas .  Bagian  / SMF  Ilmu  Kesehatan  Anak  FK UNAIR / RSU Dr.Sutomo, Surabaya.
Cordell,  G.A.  1981. Introduction  to Alkaloid  Biogenetic  Approach .  Jhon Willey and Sons, Inc., New York.
Dai,  J.,  dan  R.  J.  Mumper,  2010.  Plant Phenolics:  Extraction,  Analysis,  and Their  Antioxidant  and  Anticancer
Properties. MDPI  Molecules. 15: 7313 - 7352.
Hartini, S. 2006. Tumbuhan Paku di Cagar Alam  Sago  Malintang,  Sumatra Barat  dan  Aklimatisasinya  di  Kebun Raya  Bogor. Biodeversitas . 3: 230  - 236.
Molyneux, P. 2004. The use of Stable Free Radical Diphenylpicrylhidrazyl (DPPH)  for  Estimating  Antioxidaant
Activity. Journal  of  Science  and Technology . 26: 211-219.
Nejad, B. S. dan S.S. Deokule. 2009. Anti-
Dermatophytic  Activity  of Drynaria quercifoli L.  J.  Smith. Jundishapur Journal of Microbiology . 1: 25 - 30.
Prasanna,  G.,  dan  Anuradha,  R.  2015.
Evaluation  of  in  vitro  Antioxidant Activity  of  Rhizome  Ekstract  of Drynaria  quercifolia.  International Journal  of  Chemical  Technology
Research. 8: 183 – 187.
Prasanna, G., dan M. Chitra, M.
Phytochemical  screening  and  GC- MS Analysis of Drynaria quercifolia Rhizome. American  Journal  of
Advance  Drug  Delivery. 3: 072  - 078.
Robinson,  T.  1995. Kandungan  Organik Tumbuhan  Tingkat  Tinggi .  ITB,
Bandung.
Ross,  J.  A.,  dan  C.  M.  Kasum.  2002.
Dietary  Flavonoids:  Bioavailability, Metabolic Effects, and Savety. Annual Review of Nutrition. 22: 19 - 34.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan . Putra Media Nusantara, Surabaya.
Valko,  M.,  D.  Leibfritz.,  M.  Cronin.,  M. Mazur.,  dan  J.  Telser.  2007.  Free Radicals  and  Antioxidants  in  Normal Physiological  Functions  and  Human Disease. The  International  Journal  of Biochemistry and Cell Biology . 39: 44 - 84.
Waterman,  P.G.,  S.  Mole.  1994. Stucture and Biosynthesis of Phenolic Compounds .  Blackwell  Scientific Publication, London.
Windono,  T.,  S.  Soediman,  U.  Yudawati,
E.  Ermawati,  A.  Srielita,  dan  T.I. Erowati.  2001.  Uji  Peredam  Radikal Bebas  Terhadap  DPPH  dari  Ekstrak Kulit  Buah    dan  Biji  Anggur  ( Vitis vinivera )  Probolinggo  Biru  dan  Bali. Artocarpus,  Surabaya  I . 1: 34-43.