## POTENSI EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH (Piper betle L.) SEBAGAI PENGGANTI ADP (ADENOSINE DIPHOSPHATE) PADA PEMERIKSAAN AGREGASI TROMBOSIT
Andri Sukeksi, Rizqi Yogania Rahmawati Program Studi D3, Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Semarang

## Email: andri_unimus@yahoo.com

## Artikel info
Artikel history: Received;01-03-2021 Revised:10-03-2021 Accepted; 13-05-2021

## Keyword:
Trombocyte  aggregation, betel  leaf  (piper  betle  L), ADP  reagent  (adenosine diphosphate).
Kata Kunci: Agregasi trombosi, daun  sirih  (Piper  betle  L) reagen  ADP  (adenosine diphosphate).
Abstract. Adenosine diphosphate (ADP) reagent is often used in the examination  of  platelet  aggregation,  yet  has  limitations  in  terms  of price  and  availability.  Natural  source  namely  betel  leaf  (Piper  betle L.) are believed to be used as a substitute for ADP because betel leaf have  the  characteristics  of  styptic  (to  resist  bleeding),  vulnerary  (to heal skin wounds), and anti-inflammatory (to preserve inflammation) (Moeljanto & Mulyono, 2003). The aim of this study was to determine the potential of betel leaf on the examination of platelet aggregation. The  method  used  in  this  research  included  the  betel  leaf  extraction using  ethanol  as  solvent  with  an  evaporator.  The  extract  obtained was used as a substitute for the ADP reagent in platelet examination in  the  form  of  determining  the percentage  of  platelet  aggregation  in 16  human  blood  samples,  with  a  population  of  students  at  the University  of  Muhammadiyah  Semarang.  The  final  results  showed that  the  addition  of  betel  leaf  extraction  to  the  16  blood  samples examined  gave  an  average  value  of  platelet  aggregation  percentage which was higher (65%) than the mean value of platelet aggregation using ADP reagent mixing (57%). Both results fall within the normal value  range,  namely  50-70%.  It  can  be  concluded  that  betel  leaf extract has the potential to be used as a replacement reagent for ADP in  the  process  of  examining  platelets,  especially  in  determining  the percentage value of platelet aggregation.
Abstrak. Reagen adenosine  diphosphate (ADP)  digunakan  untuk pemeriksaan  agregasi  trombosit,  tapi  reagen  ADP  harganya  cukup mahal dan susah pengadaannya.  Bahan alami yaitu daun  sirih ( Piper betle  L )  dapat  digunakan  sebagai  pengganti  ADP  karena  daun  sirih mempunyai  kandungan styptic (menahan  perdarahan), vulnerary (mengobati  luka  pada  kulit),  dan  mengurangi  radang  (Mengatasi inflamasi)  (Moeljanto  &  Mulyono,  2003).  Tujuan  penelitian mengetahui  potensi  daun  sirih  terhadap  pemeriksaan  agregasi trombosit.    Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah  metode ekstraksi  daun  sirih  dengar  pelarut  etanol  menggunakan  evaporator. Ekstrak  yang  diperoleh  digunakan  sebagai  pengganti  reagen  ADP dalam  pemeriksaan  trombosit  berupa  penentuan  persentase  agregasi trombosit  pada  16  sampel  darah  manusia,  dengan  populasi

## Lontara

## Journal of Health Science and Technology
http://jurnal.poltekkesmu.online/lontarariset
Vol 2,  No. 1, Juni 2021, pp 11-17 p-ISSN:0000-0000 dan e-ISSN: 2721-6179
DOI: https://doi.org/
Lontara: Journal of Health Science & Technology, Vol.2 No.1 2021 e-ISSN 2721-6179 12
mahasiswa/i  Universitas  Muhammadiyah  Semarang.  Hasil  akhir penelitian  menunjukkan  bahwa    penambahan  ekstraksi  daun  sirih pada  16  sampel  darah  yang  diperiksa  memberikan  nilai  rerata persentase  agregasi  trombosit  yang  lebih  tinggi  65%)  daripada  nilai rerata  agregasi  trombosit  menggunakan  pencampuran  reagen  ADP (57%). Kedua hasil tersebut masuk dalam  rentang  nilai  normal  yaitu 50-70%.  Dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  sirih  berpotensi ekstrak daun  sirih berpotensi untuk dijadikan reagen pengganti  ADP dalam proses pemeriksaan trombosit khususnya pada penentuan nilai persentase agregasi trombosit.
Coresponden author: Email: andri_unimus@yahoo.com
artikel dengan akses terbuka dibawah lisensi CC BY -4.0

## PENDAHULUAN
Dalam  hemostasis  (penghentian  perdarahan)  tahap  yang  penting  adalah  penggumpalan trombosit. Sistem dalam tubuh yang mengatur supaya darah tetap mencair  dan  berfungsi Penghentian perdarahan  dinamakan Hemostasis. Sumbatan pada pembuluh darah, penyempitan terjadi karena ada gumpalan  darah,  okulasi  yang  terbentuk  pembentukan  gumpalan  darah  menyebabkan  strok  infark akut.  Penyebab  no  1  kematian  di  dunia  setiap  tahunnya  disebabkan  karena  stroke.  Pada  tahun  2013 data  Riskesdas  menunjukkan  12,1  per  mil  adalah  prevalensi  stroke  nasional,  tahun  2018  prevalensi stroke  10,9  per  mil,  tertinggi  provinsi  Kalimantan  timur  14,7  per  mil,  terendah  4,1  per  mil  provinsi Papua  (Kusumawati,  2018).  Mursyid  Bustami  Direktur  Rumah  Sakit  Pusat  Otak  Nasional  (RSPON) mengatakan  bahwa  penyebab  kematian  nomer  satu  di  Indonesia  adalah  stroke.    Tahun  2018    stroke yang  dulu  tahun  90-an  menduduki  rangking  kelima,  sekarang  rangking  kesatu  ini  menurut  riset kementerian.  Untuk    mengetahui  kemampuan  agregasi  trombosit  sangat  perlu  dilakukan  sehingga mengetahui  lebih  awal  terjadinya  penggumpalan  darah  atau  trombosit  mulai  beragregasi  yang selanjutntya membentuk gumpalan. Pemeriksaan untuk mengetahui awal terjadinya agregasi trombosit menggunakan reagen ADP (Bustami, 2018).
Adenosin  diphosphat  (ADP)  membantu  Agregasi  trombosit,  Mekanisme  agregasi  trombosit diluar  tubuh  agregasi  trombosit  tidak  aktif.  Glikoprotein  yang  berada  dalam  permukaan  trombosit mempunyai kandungan asam sialat sehingga mengakibatkan muatan negatif yang berakibat  trombosit tidak  dapat  melekat  bahkan  menjadi  saling  berlawanan  atau  menolak.  Trombosit  dapat  dirangsang dengan  reagen  ADP  untuk  membentuk  agregasi.  Disimpan  dalam  granula  trombosit  kemudian dilepaskan jika trombosit sudah diaktivasi.
ADP  yang  berada  di  dalam  (trombosit    P2Y1,  P2Y12  dan  P2X1)  akan  berinteraksi  dengan reseptor ADP akan diubah menjadi adenosin oleh ecto-ADPase. Obat anti trombosit akan menghambat reseptor P2Y12.
Potensi Ekstrak Etanol Daun Sirih (Piper Betle L .) Sebagai Pengganti ADP (Adenosine Diphosphate) pada Pemeriksaan Agregasi Trombosit (Andri Sukeksi, Rizqi Yogania Rahmawati) 13
Proses koagulasi (proses penggumpalan darah) didalam tubuh diimbangi proses koagulasi. Antikoagulasi  yang  diberikan  pada  penderita  tromboemboli  berfungsi  pembekuan  darah  dengan  cara menghambat  fungsi  beberapa  faktor  pembekuan  darah,  agregasi  trombosit  adalah  salah  satu pemeriksaan  koagulasi  ( Katzung,  2002) .  Pembentukan  sumbatan  trombosit  melibatkan  3  tahapan yaitu:  1.  Adhesi  (proses  pelekatan),  2.  Reaksi  Pelepasan,  3.  Agregasi  Trombosit  (menggumpal). Tahapan  pertama  yaitu  terjadinya  proses  pelekatan  trombosit  pada  permukaan  endotel/permukaan asing,  kemudian  reaksi  pelepasan  yaitu  trombosit  melepas  ADP  &  TXA2  agar  trombosit  saling menempel  dan  membentuk  benang  fibrin  sehingga  dapat  menstabilkan  massa  trombosit  ( Katzung, 2002) .
Sirih  ( Piper  betle  L. )  adalah  Tanaman  obat  di  Indonesia  dapat  dimanfaatkan  sebagai  obat tradisional. Hal ini karena daun sirih mempunyai  kandungan saponin, polifenol, minyak astiri, tannin dan  flavonoid.  Tannin  dan  flafanoid  merupakan  Senyawa  utama    berperan  dalam  proses  pembekuan darah.  Penelitian  sebelumnya  yang  telah  dilakukan  oleh  Tri  Sutopo  (2016)  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  70%  dengan  volume  pemipetan  sebanyak  10µl  daun  sirih  mampu  menghentikan perdarahan  lebih  cepat  dan  lebih  efektif  dibandingkan  yang  hanya  diberi  aquades  dan  eppinefrin sebagai bahan kontrol postif dan negatif.
Alkoloid,  tannin,  hidroksikaficol,  kavicol,  kavibetol,  allyprokatekol,  karvokrol,  eugenol,  P- cymene,  cineole,  coryofelen,  kadimen,  ekstragol,  terpenana,  dan  fenilpropod  adalah  Kandungan senyawa  kimia  lain  yang  terdapat  dalam  daun  sirih.  Tannin  sendiri  memiliki  kemampuan  untuk membentuk  kompleks  dengan  makromolekul  terutama  protein  dinamakan  sifat  astringen.  Kedua kandungan  tersebut  memiliki  kemampuan  dalam  menghambat  dan  membuat  trombosit  yang beragregasi  lebih  banyak  dibanding  yang  memakai  reagen  adenosin  diphosphate  (ADP).  Kedua kandungan  tersebut  mampu  menghambat  metabolisme  asam  arakidonat  oleh  cyclooxygenase,  dapat berpengaruh pada  faktor pembekuan darah (Tri Sutopo, 2016) .
Di  lapangan,  peran  reagen  ADP  sebagai  induktor  dalam  pemeriksaan  trombosit  memiliki kelemahan yaitu harganya yang mahal, dan sulit diperoleh karena kebanyakan masih diimpor dari luar negeri. Tujuan penelitian adalah mencari pengganti ADP pada pemeriksaan agregasi trombosit dengan menggunakan bahan alami  daun sirih ( Piper betle L .) karena ADP sulit didapatkan.

## BAHAN DAN METODE
Jenis  penelitan  yang  dilakukan  adalah  penelitian  deskriptif.  Penelitian  ini  dilaksanakan  di Laboratorium  Hematologi  Universitas  Muhammadiyah  Semarang.  Penelitian  dilakukan  pada  bulan Januari  2020  –  Juni  2020.  Variabel  dari  penelitian  adalah  Ekstraksi  dari  Daun  Sirih  ( Piper  betle  L .) Populasi  dalam  penelitian  adalah  mahasiswa/i  Universitas  Muhammadiyah  Semarang.  Sampel  yang digunakan  dalam  penelitian  adalah  darah  vena  dari  16  mahasiswa/i  Universitas  Muhammadiyah Semarang  Semester  3  akhir  D-III  Analis  Kesehatan  dengan  kriteria  inklusi:  perempuan,  sehat  dan
Lontara: Journal of Health Science & Technology, Vol.2 No.1 2021 e-ISSN 2721-6179 14
tidak sedang mengkonsumsi obat apapun.
Alat  penelitian  yang  diperlukan  antara  lain  seperangkat  alat  maserasi  evaporator  (Labtech) blender (Philips), timbangan analitik (O’hauss), centrifuge (Gemmy PLC03), object glass (Sail brand), mikropipet  (Human),  yellow-tip  dan  white-tip  (Axygen),  kertas  saring  (Whatman),  corong  (Herma), waterbath  (Wina),  mikroskop  (Olympus  CX23),  pipet  pasteur  (Citotes).  Sedangkan  bahan  yang digunakan  dalam  penelitian  adalah  daun  sirih  ( Piper  betle  L .),  reagen  adenosine  diphosphate  (ADP), etanol  70%,  darah  vena,  metanol,  dan  larutan  giemsa.  Sampling  dilakukan  sebanyak  16  kali  dari  16 jumlah  populasi  yang  diperoleh  dari  perhitungan  besaran  sampel  (Supranto,  2011)  diantaranya:  (t-1) (r-1) ≥ 15, (2-1) (r-1) ≥15, 1 (r-1) ≥ 15, R≥16.
Prosedur  pemeriksaan  trombosit  pada  prinsipnya  dilakukan  dengan  reagen  ADP  dan  dengan ekstrak etanol daun sirih. Darah dari spuit tadi dimasukkan ke dalam tabung vacum citras sebanyak 3 ml, kemudian homogenkan. Pada menit ke 0 darah citras dibuat sediaan apus darahtepi.  Sisa yang ada ditambahkan  reagen  ADP  dengan  perbandingan  1  :  10,  digoyang  agar  tercampur  rata.  Ditunggu  3 menit  dan  dengan  pipet  diambil  10  ul,  pada  menit  ke  3  dibuat  lagi  sediaan  darah  tepi.  Sediaan  yang sudah dibuat ditunggu sampai kering dan kemudian difiksasi menggunakan methanol selama 5 menit kemudian  dicat  giemsa  sampai  20  menit,  dengan  air  mengalir  sediaan  dibilas  dan  biarkan  sampai kering.  Sediaan  diperiksa  di  mikroskop  perbesaran  100x  dengan  minyak  imersi.  Pada  daerah  lateral zona IV – VI pengamatan dilakukan.  Hasil yang diperoleh dicatat dan dilaporkan.
Nilai normal Agregasi Trombosit:
50% – 70%
Rumus: koreksi Agregasi   = (presentase agregasi total – pertama) x 100 100 – persentase agregasi pertama
Prosedur  pemeriksaan  dengan  penambahan  ekstrak  etanol  daun  sirih  adalah  sebagai  berikut: Ekstrak etanol daun sirih dipipet sebanyak 10 µl menggunakan mikropipet dan dimasukkan ke dalam tabung serologi.  Sebanyak 100 µl darah citras dipipet dimasukkan ke dalam tabung yang sudah berisi ekstrak  etanol  daun  sirih  tadi.  dihomogenkan,  kemudian  dibuat  sediaan  apus  darah  tepi.  Sediaan ditunggu  sampai  kering  dan  kemudian  difiksasi  menggunakan  methanol. Selama  5  menit  kemudian dicat  giemsa  selama  20  menit,  lalu  dibilas  dengan  air  mengalir  dan  dibiarkan  sampai  kering. Diperiksa  di  mikroskop  perbesaran  100x  dengan  minyak  imersi.  Pada  ekor  daerah  lateral  zona  IV  – VI. Hasil yang diperoleh dicatat.

## HASIL PENELITIAN
Pada  penelitian  ini  ekstrak  daun  sirih  digunakan  sebagai  reagen  pengganti  ADP  dalam penentuan persentase agregasi trombosit sampel darah manusia. Proses ekstraksi daun sirih dilakukan dengan  metode  evaporasi  dan  ekstrak  yang  diperoleh  ditunjukkan  pada  Gambar  1.  Selanjutnya pemeriksaan  trombosit  berupa  penentuan  nilai  persentase  agregasi  dilakukan  pada  16  sampel  darah
Potensi Ekstrak Etanol Daun Sirih (Piper Betle L .) Sebagai Pengganti ADP (Adenosine Diphosphate) pada Pemeriksaan Agregasi Trombosit (Andri Sukeksi, Rizqi Yogania Rahmawati) 15
dari 16 pasien menggunakan ekstrak sirih yang diperoleh. Spesimen yang digunakan dalam penelitian yaitu  darah  vena  mahasiswa/i  Universitas  Muhammadiyah  Semarang  sebanyak  3ml.  Darah  vena ditampung dalam wadah tabung vacum bertutup biru yang berisi natrium sitrat.

## Gambar 1.  Proses ekstraksi daun sirih dengan metode evaporasi dan hasilnya
Hasil  pemeriksaan  trombosit  berupa  persentase  agregasi  menggunakan  perlakuan  yang berbeda  ditunjukkan  pada  Tabel  1  dan  2.  Hasil  yang  diperoleh  berdasarkan  perbedaan  penggunaan reagen, yang menggunakan adenosin diphosphate (ADP) memiliki nilai rerata 57% sedangkan dengan ekstrak daun sirih (Piper betle L.) nilai reratanya 65%. Nilai minimal hasil pemeriksaan dengan reagen adenosin diphosphate (ADP) 44%, dengan ekstrak daun sirih 52%. Nilai maksimal hasil pemeriksaan dengan reagen adenosin diphosphate (ADP) 69%, dengan ekstrak daun sirih  77%.
Tabel 1. Rerata hasil nilai agregasi trombosit antara penambahan reagen adenosine diphosphate (ADP) dan ekstrak daun sirih (Piper betle L.)
Agregasi Trombosit Nilai min. Nilai max. Mean Dengan reagen ADP 44% 69% 57% Dengan ekstrak daun sirih 52% 77% 65%

## Tabel 2. Gambaran pemberian daun sirih terhadap pemeriksaan agregasi trombosit
Responden Dengan Penambahan Daun Sirih Tanpa Penambahan Daun Sirih A 52% 56% B 77% 62% C 66% 57% D 68% 48% E 70% 44% F 65% 62% G 69% 55% H 77% 48% I 68% 53% J 59% 46% K 73% 65% L 57% 51% M 59% 61% N 67% 49% O 63% 58% P 76% 69% Rata-rata 67% 55%
Sumber : Data Primer,  Nilai Normal : 50-70%

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  secara  umum  menunjukkan  bahwa  penggantian  reagen  ADP  dengan  ekstrak daun  sirih  memberikan  nilai  rerata  hasil  pemeriksaan  trombosit  (persentase  agregasi)    yang    lebih tinggi bila dibandingkan nilai presentase agregasi trombosit rerata yang diperoleh dengan penggunaan reagen  adenosine  diphosphate  (ADP).  Hasil  pemeriksaan  (Tabel  1  dan  2)  menunjukkan  bahwa pemeriksaan  agregasi  trombosit  dengan  penambahan  ekstrak  etanol  daun  sirih  memiliki  kemampuan yang  lebih  signifikan  yaitu  trombosit  yang  beragregasi  lebih  banyak  terlihat  yang  menggumpal dibandingkan  tanpa  penambahan  ekstrak  daun  sirih.    Hal  ini  diduga  karena  daun  sirih  memiliki kandungan yaitu flavonoid dan tannin dimana kedua kandungan tersebut memiliki kemampuan dalam menghambat dan membuat trombosit yang beragregasi lebih banyak dibanding yang memakai reagen adenosin  diphosphate  (ADP).  Selain  itu,  flavonoid  dan  tanin  pada  daun  sirih  juga  diketahui  mampu menghambat metabolisme asam arakidonat oleh cyclooxygenase.
Secara  umum,  persentase  agregasi  trombosit  sampel  yang  menggunakan  ekstrak  daun  sirih memiliki  nilai  rata-rata  lebih  tinggi  dibandingkan  nilai  dengan  penambahan  reagen  adenosine diphosphate  (ADP),  dengan  rentang  nilai  normal  50-70%.  Hasil  tersebut  sejalan  dengan  yang dilaporkan oleh  Kusumawati (2018) yang menggunakan getah pelepah pisang sebagai pengganti ADP dalam  pengukuran  persentase  agregasi  trombosit.  Hasil  penelitian  tersebut  menunjukkan  adanya perbedaan kemampuan agregasi trombosit antara reagen ADP dengan getah pelepah pisang raja. Lebih lanjut hasil penelitian menunjukkan bahwa prosentase agregasi trombosit menggunakan getah pelepah pisang raja lebih tinggi dibandingkan dengan ADP.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Pada 16 sampel darah yang diperiksa, nilai rerata persentase agregasi trombosit yang diperoleh menggunakan  ekstrak  daun  sirih  lebih  tinggi  65%)  daripada  nilai  rerata  agregasi  trombosit menggunakan pencampuran reagen adenosin  diphosphate (ADP) (57%).  Kedua hasil tersebut masuk dalam  rentang  nilai  normal  yaitu  50-70%.  Dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  sirih  berpotensi untuk  dijadikan  reagen  pengganti  ADP  dalam  proses  pemeriksaan  trombosit  khususnya  pada penentuan nilai persentase agregasi trombosit.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didanai  oleh  hibah  internal  LP3M  Universitas  Muhammadiyah  Semarang (UNIMUS) Tahun 2021. Penelitian ini sudah mendapatkan izin dari Komite Etik Fakultas Kesehatan Masyarakat, UNIMUS.
Potensi Ekstrak Etanol Daun Sirih (Piper Betle L .) Sebagai Pengganti ADP (Adenosine Diphosphate) pada Pemeriksaan Agregasi Trombosit (Andri Sukeksi, Rizqi Yogania Rahmawati) 17

## DAFTAR PUSTAKA
Anisa Kusumawati. Perbedaan agregasi trombosit antara reagen adenosin difosfat (ADP) dengan getah pelepah  batang  pisang  raja  (Musa  sp.)  [manuscript]:  Universitas  Muhammadiyah  Semarang; 2018
Mursyid  Bustami,  Direktur  rumah  sakit  pusat  otak  nasional  (  RSPON)  riset  kesehatan  kementrian kesehatan pada 2018.
Hoffbrandd  AV,  Petit  JE.  Trombosit,  blood coagulation  and  haemostasis.  In:  Essential  haematology. 3rd ed. Oxford: Blackwell Science, 1993; 299-17.
Katzung, B.G. 2002. Farmakologi Dasar dan Klinik. Jakarta: Salemba Medika. 1103
Thrombocythemia and Thrombocytosis – National Heart, Lung, and Blood Institute. (n.d.). Retrieved August  12,  2020,  from https://www.nhlbi.nih.gov/health-topics/thrombocythemia-and- thrombocytosis#:~:text=Thrombocythemia%20(THROM%2Dbo%2Dsi,other%20kinds%20of %20blood%20cells .
Tri Sutopo. 2016. Uji Ekstrak Etanol 70% Daun Sirih (Piper betle L.) Terhaadap Bleeding Time Pada Mencit  Jantan  Galur  Swiss  Webster,  Skripsi.  Fakultas  Kedokteran  Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
Wirawan-  R.  Uji  ketelitian  dan  nilai  rujukan  agregasi  trombosit  dengan  agonist  ADP  pada  orang dewasa Indonesia penerbit FKUI 2008