Journal Syifa Sciences and Clinical Research (JSSCR)
Volume 6 Nomor 1, 2024
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v6i1.15926
Standardisasi dan Pengukuran Kadar Flavonoid Daun Ketepeng Kecil  ( Senna tora (L.) Roxb.) Menggunakan Metode Spektrofotometri UV-Vis
Mahdalena Sy. Pakaya 1* , Ishak Isa 2 , Muhammad Taupik 3 , Mohamad Aprianto Paneo 4 , Aldawaty I. Ahyar 5
1,3,4,5 Jurusan Farmasi Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo, Jl. Jenderal Sudirman No. 06 Kota Gorontalo 96128, Indonesia
2 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan IPA, Universitas Negeri Gorontalo, Indonesia
* Penulis Korespondensi. Email: mahdalena@ung.ac.id

## ABSTRAK
Ketepeng  kecil  ( Senna  tora (L.)  Roxb.)  merupakan  tanaman  liar  yang  digunakan  oleh masyarakat  sebagai  obat  tradisional  untuk  mengobati  diare  serta  cacingan.  Dalam pengembangan  tanaman  sebagai  obat  tradisional,  perlu  adanya  standarisasi  mutu  bahan tanaman agar terjamin kualitas, stabilitas dan keamanannya. Penelitian ini bertujuan untuk menetapkan standarisasi ekstrak baik secara spesifik dan non spesifik serta menentukan kadar flavonoid dalam  fraksi  daun  ketepeng kecil ( Senna  tora (L.)  Roxb.) . Metode  penelitian yang digunakan yaitu uji skrining fitokimia, uji parameter spesifik, uji parameter non spesifik, dan penetapan  kadar  flavonoid.  Hasil  skrining  fitokimia,  fraksi  yang  mengandung  senyawa flavonoid  adalah  fraksi  etanol  70%.  Hasil  dari  standarisasi  untuk  parameter  spesifik menunjukan  organoleptik  fraksi  etanol  70% berbentuk  semi  padat/kental, berwarna  hitam, dan berbau khas, dengan kadar sari larut air sebanyak 19,18% dan dalam kadar sari larut etanol sebanyak  23,35%. Hasil  standarisasi  untuk  parameter  non  spesifik  menunjukkan  kadar  abu total 1,76%, dan kadar abu tidak larut asam 2,890%, susut pengeringan 4,96%, kadar air 18,80%. Sedangkan pada cemaran logam dan mikroba menunjukkan tidak adanya cemaran pada fraksi etanol 70%. Adapun hasil untuk analisis kadar flavonoid fraksi etanol 70% daun ketepeng kecil dilakukan  pada  panjang  gelombang  438,36  nm  dengan  nilai  absorbansi  yaitu  0,0154.  Kadar total  flavonoid  dihitung  dengan  persamaan  linear  standar  kuersetin  yaitu  y=  0,0648x  +  (- 0,0232) dengan koifisien korelasi (r 2 ) = 0,9948 dengan kadar flavonoid total sebesar 4,713%. Kata Kunci:
Flavonoid; Ketepeng Kecil (Senna tora (L.) Roxb.); Standarisasi; Spektrofotometri UV-Vis Diterima: 29-10-2023 Disetujui: 08-01-2024 Online: 15-01-2024

## ABSTRACT
Sickle  senna  (Senna  tora  (L.)  Roxb.)  is  a  wild  plant  that  is  used  by  the  community  as  a  traditional medicine to treat diarrhea and intestinal worms. In the development of plants as traditional medicines, it is necessary to standardize the quality of plant materials to ensure their quality, stability, and safety. This study aims to determine the standadization of extracts both specifically and non-specifically and to determine the level of falvonoids in the fraction of sickle senna (Senna tora (L.) Roxb.) leaves. This study applies a phytochemical screening test, specific parameter test, non-specific parameter test, and flavonoid levels determination. The result of phytochemical screening shows that the fraction containing flavonoid compounds  is  70%  ethanol  fraction.  The  results  of  standardization  for  specific  parameter  show  the
organoleptic  ethanol  fraction  of  70%  is  in  the  form  of  semi-solid/viscous,  black  color  and  distinctive smell, with water soluble extract content is 19.08%, and ethanol soluble extract content is 23.35%. the standardization result for non-specific parameter shows that the total ash content is 1.76%, the acid insoluble ash content is 2.890%, drying shrinkage is 4.96%, and water content is 18.80%. meanwhile, metal and microbial contamination show no contamination in the 70% ethanol fraction. The result for the  analysis  of  the  flavonoid  content  of  the  70%  ethanol  fraction.  The  result  for  the  analysis  of  the flavonoid content of the 70% ethanol fraction of sickle senna leaves is carried out at a wavelength of 438.36 nm with an absorbance value of 0.0154. The total flavonoid level is calculated by the standard linear equation of quarcetin, which is y=0.0648x + (-0.0232) with a correlation coefficient (r 2 ) = 0,9948 and a total flavonoid content of 4.713%.
Copyright © 2024 Jsscr. All rights reserved.
Keywords:
Flavonoids; Sickle senna (Senna tora (L.) Roxb.); Standardization; UV-Vis Spectrofotometry
Received: 2023 -10-29 Accepted: 2024-01-08 Online: 2024 -01-15

## 1. Pendahuluan
Indonesia merupakan salah satu negara dengan keanekaragaman hayati terbesar di dunia yang memiliki lebih dari 30.000 spesies tanaman tingkat tinggi. Hingga saat ini tercatat, 7000 spesies tanaman telah diketahui khasiatnya, tetapi hanya kurang dari 300 tanaman  yang  telah  digunakan  sebagai  bahan  baku  industri  farmasi  secara  reguler. Sekitar 1000 jenis tanaman telah diidentifikasi dari aspek botani sistematik tumbuhan dengan baik [1].
Terdapat banyak tanaman yang berkhasiat serta banyak digunakan masyarakat dalam pengobatan tradisional salah satunya adalah tanaman ketepeng kecil ( Senna tora (L.) Roxb.). Ketepeng kecil adalah tanaman perdu yang mudah tumbuh liar sehingga untuk  menemukannya  tidak  sulit.  Sebagian  masyarakat  menggunakan  tanaman  ini sebagai obat tradisional, diantaranya sebagai anti parasit, laktan, anti helminth , kudis, influenza,  bronchitis,  dan  malaria.  Kandungan  kimia  yang  terdapat  dalam  tanaman ketepeng  kecil  ( Senna  tora (L.)  Roxb.),  diantaranya  adalah chryzophanol,  emodin,  aloe- emodin,  rhein,  physcion,  obtusin,  aurantio-obtusin,  robru-busarin,  tora-chryson,  toralactone , vitamin A [2].
Tanaman  ketepeng  kecil  sendiri  diketahui  mengandung  senyawa  flavonoid. Flavonoid adalah senyawa metabolit sekunder yang paling banyak ditemukan di dalam jaringan  tanaman,  dan  memiliki  khasiat  sebagai  antiradang,  antipiretik,  antidiare, antibakteri, antihipertensi, hingga dilatasi pembuluh darah kapiler. Flavonoid sebagai antidiare  mempunyai  mekanisme  kerja  dengan  cara  menghambat  motilitas  usus sehingga dapat mengurangi sekresi cairan dan elektrolit. Selain itu, Flavonoid bekerja sebagai  antihelmintik  dengan  cara  menghambat  kerja  enzim  asetilkolinesterasi  yang akan berpengaruh kepada otot-otot cacing, sehingga menyebabkan kematian. Selain itu, flavonoid yang bersentuhan dengan tubuh cacing akan cepat diserap dan menyebabkan denaturasi protein dalam jaringan tubuh cacing sehingga akan menyebabkan kematian [3]. Hal  ini  tentunya  memiliki  keterkaitan  dengan  penggunaan  empiris  tanaman ketepeng kecil sebagai anti helmint atau obat cacingan dan anti diare.
Kadar flavonoid dalam tanaman dapat ditentukan dengan menggunakan metode spektrofotometri  UV-Vis.  Spketrofotometri  UV-Vis  merupakan  metode  yang  sesuai dalam  analisis  flavonoid  dikarenakan  sistem  aromatik  yang  terkonjugasi  dalam flavonoid dapat menunjukkan pita serapan yang kuat pada daerah spektrum ultraviolet dan cahaya tampak [4].
Berdasarkan latar belakang diatas, penulis tertarik untuk menguji standardisasi serta kadar flavonoid dalam fraksi daun Ketepeng Kecil ( Senna tora (L.) Roxb.). Dalam penelitian ini akan di uji apakah fraksi dari tanaman ketepeng kecil telah memenuhi parameter standardisasi untuk menjamin fraksi dapat digunakan sebagai bahan baku obat  herbal.  Serta  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  dalam fraksi dengan menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis.
2.  Metode

## Desain Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental karena dilakukan beberapa pengujian untuk menetapkan standarisasi melalui uji spesifik dan uji non spesifik, uji kualitatif senyawa metabolit sekunder serta uji kadar flavonoid dengan menggunakan metode Spektrofotometri UV-Vis
Bahan dan Alat penelitian
Bahan  yang  digunakan  yaitu  AlCl 3, asam  asetat  anhidrat,  aquadest,  bubuk magnesium,  dragendrof,  fraksi  simplisia  daun  ketepeng  kecil  ( Senna  tora (L.)  Roxb.), etanol 70% PA, etil asetat PA, FeCl PA 3 , H 2 SO 4 PA, HCl PA, HNO 3 2% PA, inokulum bakteri,  inokulum  jamur,  klorofrom,  larutan  baku  Pb(NO 3 ) 2 ,  larutan  baku  Cd(NO 3 ) 2 , medium  NA,  medium  NB,  medium  PDA,  NaCl,  Silika  gel  Gf 254 ,  spiritus,  plat  KLT, liebermen burchard PA, n-heksan PA, NaOH PA, dan pereaksi mayer PA . Alat yang digunakan  yaitu  autoklaf  (Hirayama ® ),  batang  pengaduk,  blender,  bunsen,  cawan penguap, cawan petri, cawan porselin, chamber , corong pisah, deksikator, gelas kimia, gelas ukur, krus silika, labu bersumbat, labu erlenmeyer, lampu UV 366 nm (Memmert type UN260 ® ), lampu UV 254 nm (Memmert type UN260 ® ), mikropipet, oven (Memmert tipe  UN  260 ® ),  pipa  kapiler,  pipet  tetes,  plat  KLT, rotary  evaporator (RV  8  V  Ika ggermany ® ), shaker incubator (IKA ® ), spatula, Spekrofotometer UV-Vis (Shimadzu UV 1800 ® ),  Spektrofotometer  Serapan  Atom  (Shimadzu  ASC  7000 ® ),    tabung  reaksi, timbangan analitik, toples, dan vial Ekstraksi Daun Ketepeng Kecil ( Senna tora (L.) Roxb.)
Sampel  yang  akan  digunakan  dalam  peniltian  ini  adalah  daun  dari  tanaman ketepeng kecil ( Senna tora (L.) Roxb.) yang masih segar, diambil dari Desa Bongohulawa, Kecamatan  Bongomeme,  Kabupaten  Gorontalo,  Provinsi  Gorontalo.  Daun  ketepeng kecil  yang  telah  dipanen  dicuci  bersih,  dirajang  kemudian  dikeringkan,  pengeringan dilakukan dengan cara diangin-anginkan. Simplisia kering kemudian dihaluskan untuk memperoleh  serbuk  simplisia.  Serbuk  yang  telah  didapatkan  selanjutnya  di  ayak menggunakan ayakan  mesh  No. 40.  Sebanyak  300  g  serbuk  simplisia daun  ketepeng kecil ( Senna tora (L.) Roxb . ) diekstraksi menggunakan metode remaserasi dengan pelarut dengan kepolaran yang makin meningkat yaitu n-heksan, etil asetat, dan etanol 70%. Pertama,  simplisia  dimasukkan  ke  dalam  wadah  yang  telah  berisi  pelarut  n-heksan sebanyak 3000 ml dan direndam selama 24 jam, sambil sesekali dikocok (setiap 8 jam). Setelah  itu,  filtrat  ditampung  dan  residu  dikeringkan.  Residu  kemudian  diekstraksi lebih  lanjut  dengan  cara  yang  sama menggunakan  pelarut  etil asetat  dan  etanol 70% masing-masing sebanyak 3000 ml.
Ketiga  macam  fraksi  dengan  pelarut  yang  berbeda  tersebut  lalu  diuapkan dengan menggunakan rotary  evaporator hingga diperoleh  fraksi kental  dan  kemudian ditimbang bobot fraksi dan dihitung persentase rendamen.

## Penetapan Organolepik
Penetapan ini menggunakan panca indra untuk mengetahui bentuk, warna, bau, dan rasa dari sampel Penetapan Senyawa Larut Dalam Air
Ekstrak  sebanyak  2  g  ekstrak  dimaserasi  selama  24  jam  dengan  40  ml  air- kloroform (1 mL kloroform dalam 39 mL air) menggunakan labu bersumbat, dikocok berkali-kali  selama  6  jam  pertama.  Kemudian  dibiarkan  selama  18  jam.  Setelah  itu disaring. Uapkan 8 mL filtrat. Residu dipanaskan pada suhu 105 o C hingga bobot tetap. Dihitung kadar dalam persen senyawa yang larut dalam air terhadap berat ekstrak awal.

## Penetapan Senyawa Larut Dalam Etanol
Sebanyak  2 gram  ektrak  dimaserasi  selama  24  jam  dengan 40  mL  etanol  95% menggunakan labu bersumbat, dikocok berkali-kali selama 6 jam pertama. Kemudian dibiarkan  selama  18  jam.  Disaring  dengan  cepat  untuk  menghindari  terjadinya penguapan etanol. Kemudian diuapkan 8 mL filtrat hingga kering. Residu dipanaskan pada suhu 105 o C hingga bobot tetap.

## Uji Flavonoid
Masing-masing  ektrak  etanol,  etil  asetat  dan  N-Heksan  sebanyak  1  ml dimasukan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 2 mL HCl pekat kemudian dikocok. Apabila terbentuk larutan berwarn merah, kuning, atau jingga menunjukkan adanya flavonoid [6].

## Uji alkaloid
Sebanyak 5 tetes filtrat dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 2- 3  tetes  HCl  2N  serta  2  tetes  pereaksi  Dragendorf.  Jika  terbentuk  endapan  berwarna coklat kemerahan dari warna jingga, hal ini menunjukkan adanya senyawa alkaloid [7].

## Uji Terpenoid dan Steroid
Masing-masing ektrak etanol, etil asetat dan N-heksan sebanyak 1 ml dimasukan kedalam  tabung  reaksi.  Ditambahkan  0,5  mL  asam  asetat  anhidrat  dan  2  mL  H 2 SO 4 . Dilihat  perubahan  warna  yang  terjadi,  apabila  terbentuk  warna  orange,  merah  atau kuning,  menunjukan  adanya  terpenoid.  Tetapi  apabila  terbentuk  warna  hijau  berarti sampel positif mengandung steroid [1].

## Uji Saponin
Masing-masing ektrak etanol, etil asetat dan n-heksan sebanyak 1 ml dimasukan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 2 mL aquadest kemudian dipanaskan selama 2-3 menit,  tunggu  hingga  dingin  kemudian dikocok  selama  10  detik,  diamati  perubahan yang terjadi. Apabila terbentuk buih selama tidak kurang dari 10 menit serta dengan penambahan HCl 2N buih tidak hilang maka positif mengandung saponin [8].

## Uji Tanin
Masing-masing ektrak etanol, etil asetat dan n-heksan sebanyak 1 ml dimasukan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 1 mL larutan FeCl 3 %. Apabila berubah warna biru tua, biru kehitaman atau hitam kehijauan menunjukkan adanya tanin [7].

## Pemisahan Menggunakan KLT
Hasil ekstrak yang mengandung paling banyak senyawa diidentifikasi kembali menggunakan KLT. Ekstrak ditotolkan pada lempeng silika dan dielusi menggunakan fase gerak yang sesuai berdasarkan literature. Hasil penampakan dilihat menggunakan lampu UV 254 dan 366 lalu dihitung nilai Rf.

## Penetapan Kadar Air
Sebanyak 1 gram fraksi dikeringkan dalam oven selama 2 jam pada suhu 105˚C setelah  itu  ditimbang.  Pengeringan  dilanjutkan  dengan  selang  waktu  1  jam  hingga perbedaan antara 2 penimbangan berturut-turut tidak lebih dari 0,25% [9].

## Penetapan Kadar Abu
Sebanyak 1 gram fraksi ditimbang dan ditempatkan dalam cawan porselin yang telah dimasukkan terlebih dahulu kedalam oven dan ditimbang. Kemudian perlahan- lahan dimasukkan fraksi ke dalam oven sampai arangnya hilang. Setelah didinginkan dengan desikator dan ditimbang sampai mencapai berat tertentu, kemudian dihitung kadar abu total [9].

## Penetapan Kadar Abu tidak larut asam
Setelah  dilakukan  pengukuran  kadar  abu  total,  abu  yang  diperoleh  pada pengukuran kadar abu sebelumnya dilarutkan dalam 25 ml asam sulfat encer selama 5 menit. Bagian yang tidak larut asam kemudian dikumpulkan, disaring melalui kertas saring tanpa abu dan residu dibilas dengan air panas. Abu yang telah disaring dengann kertas  saring  diletakkan  diatas  kaca  arloji,  kemudian  dibakar  secara  perlahan  dalam oven dan ditimbang [9].

## Penetapan Susut Pengeringan
Esktrak  ditimbang  sebanyak  1  gram  dalam  cawan  yang  sebelumnya  telah dipanaskan  pada  suhu 105˚C selama  30  menit  dan  ditimbang.  Fraksi  kemudian dikeringkan  pada  suhu  penetapan  sampai  bobot  tetap.  Kemudian  dibuka  tutupnya, dibiarkan  cawan  dalam  desikator  hingga  suhu  kamar.  Dicatat  bobot  tetap  yang diperoleh [9].

## Pembuatan kurva baku Pd dan Cd
Dari  larutan  baku  Pb(NO 3 )2  dipipet  5  mL  kemudian  dicukupkan  volumenya sampai 50 ml dengan HNO 3 2%, dari larutan ini akan dipipet lagi 1 mL, 2 mL, 3 mL, 4 mL dan 5 mL. Kemudian dimasukan kedalam labu ukur 50 mL dan dicukupkan lagi volumenya sampai batas yang telah diberi tanda. Akan diperoleh larutan baku dengan konsentrasi 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, dan 10 ppm. Dari larutan baku Cd(NO 3 )2 1000 ppm dipipet 5 ml kemudian dicukupkan volumenya sampai 50 ml dengan HNO 3 2% (100  ppm).  Dari  larutan  ini  akan  dipipet  lagi  1  mL,  2  mL,  3  mL,  4  mL  dan  5  mL. Kemudian  dimasukan  kedalam  labu  ukur  100  mL  dan  dicukupkan  lagi  volumenya hngga batas yang telah diberi tanda. Akan diperoleh larutan baku dengan konsentrasi 0,1 ppm, 0, ppm, 0,3 ppm, 0,4 ppm dan 0,5 ppm [10].

## Larutan Uji
Ditimbang 5 g sampel kemudian dimasukan kedalam gelas kimia, ditambahakan 5 mL HNO 3 dan 1 mL HClO 4 lalu didestruksi pada suhu 200˚C sampai diperoleh larutan jernih, didinginkan dan disaring menggunakan kertas whatman No 40-41. Dimasukan dalam labu ukur 50 mL, dan dicukupkan volumenya dengan aquadest [10].

## Pengukuran Kadar Logam
Kadar  Logam  Pb  diukur  menggunakan  spektrofotometer  serapan  atom  pada panjang  gelombang  217  nm,  sedangkan  kadar  logam  Cd  diukur  pada  panjang gelombang 288,8 nm [10].

## Persiapan Sampel
Ditimbang fraksi sebanyak 10 g dan dimasukkan ke dalam labu erlenmeyer 250 mL. Ditambahkan medium NB 90 mL ke dalam sampel dan kocok hingga homogen (10 - 1 ). Disiapkan 6 buah tabung reaksi dan dimasukkan masing-masing 9 mL NaCl ke dalam tabung reaksi dan disimpan pada rak tabung. Diambil sebanyak 1 mL suspensi 10 -1 ke dalam  tabung  reaksi  yang  berisi  9  mL  NaCl  dan  dikocok  hingga  homogen  (10 -2 ). Dilakukan pengenceran bertingkat hingga diperoleh pengenceran 10 -6 [11].

## Metode ALT
Diambil  suspensi  sampel  (pengenceran  10 -1 sampai  10 -6 )  dan  dimasukkan masing-masing 1 mL kedalam cawan petri steril. Ditambahkan 10 mL NA (bakteri) ke dalam masing-masing cawan petri tersebut. Diputar cawan petri sampai suspensi dan medium homogen. Kemudian diinkubasi selama 24 jam (bakteri) dan dihitung mikroba yang  tumbuh  [11].  Diambil  suspensi  sampel  (pengenceran  10 -1 sampai  10 -6 )  dan dimasukkan masing-masing 1 mL kedalam cawan petri steril. Ditambahkan 10 mL PDA (kapang) ke dalam masing-masing cawan petri tersebut. Diputar cawan petri sampai suspensi dan medium homogen. Kemudian diinkubasi 72 jam (kapang) dan dihitung mikroba yang tumbuh [11].

## Penentuan panjang gelombang quersetin
Penentuan  panjang  gelombang  quersetin  dilakukan  dengan  cara  membuat quersetin 100 ppm, kemudian sebanyak 1 mL larutan quersetin reaksikan dengan 1 mL AlCl3 2% dan ditambahkan 8 mL asam asetat 5 % larutan dibiarkan selama 30 menit kemudian lakukan pembacaan pada rentang panjang gelombang 200-600 nm [12].

## Pembuatan kurva standar quersetin
Ditimbang sebanyak 25 mg baku strandar qursetin dan dilarutkan dalam 25 ml etanol 70%. Larutan stok dipipet sebanyak 1 mL dan dicukupkan volumenya sampai 10 mL dengan methanol sehingga diperoleh 100 ppm. Dari larutan standar quersetin 100 ppm kemudian dibuat beberapa  konsetrasi yaitu 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, 20 ppm, dan 25  ppm  dari  masing-masing  konsetrasi  laruttan  standar  quersetin  dipipet  1  mL. Kemudian  ditambahkan  1  mL  AlCl3  2%  dan  ditambahkan  8  mL  asam  asetat  5%. Kemudian sampel diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar. Absorbansi ditentukan menggunakan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang maksimum [12].
Penentuan kadar flavonoid Ketepeng Kecil ( Senna tora (L.) Roxb.)
Ditimbang sebanyak 25 mg ektrak dan dilarutkan dalam 25 mL metanol, larutan stok dipipet sebanyak 1 mL dan dicukupkan volumenya sampai 10 mL dengan metanol. Diambil 1 mL larutan ektrak  kemudian ditambahkan 1 mL AlCl3 2 % dan ditambahalan 8  mL  asam  asetat  5%  dan  sampel  diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu kamar.Absorbansi  ditentukan  menggunakan  metode  spektrofotometri  UV-Vis  pada panjang gelombang maksimum.

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan metode  maserasi  bertingkat  menggunakan tiga pelarut yang memiliki tingkat kepolaran yang berbeda. Maserasi dilakukan selama 3x24  jam  untuk  masing-masing  pelarut  dengan  perbandingan  sampel  dan  pelarut sebanyak 300 gram : 3 Liter. Dari banyak sampel dan pelarut diperoleh hasil rendamen seperti pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Persentase Rendamen Fraksi Berat Sampel (g) Pelarut (mL) Berat Ekstrak Kental (g) Rendemen (%) N-Heksan 300 3000 18 6 Etil Asetat 289 3000 28 9,6 Etanol 70% 273 3000 33 12,08
Hasil  menunjukkan  ekstrak  yang  diperoleh  dari  maserasi  bertingkat menggunakan  pelarut  n-heksan  sebanyak  18  gram dengan  persen  rendamen  6%,  etil asetat sebanyak 28 gram dengan persen rendamen 9,6%, dan etanol 70% sebanyak 33 gram dengan persen rendamen 12,08%. Hasil presentase rendamen fraksi N-Heksan dan etil asetat menunjukan presentase yang lebih kecil dibandingkan dengan fraksi etanol 70%. Tingginya persen rendamen dalam pelarut etanol 70% menunjukan bahwa etanol 70%  mampu  mengekstrak  senyawa-senyawa  aktif  dalam  simplisia  dengan  sifat kepolaran yang mirip dengan pelarut etanol 70%. Dikarenakan kemapuan dari masing- masing pelarut yang memiliki tingkat kepolaran yang berbeda, etanol dengan sifat polar dapat menarik lebih banyak senyawa daripada pelarut non polar dan semi polar sperti n-heksan dan etil asetat [13].
Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui  senyawa  metabolit  apa  saja yang  terkandung  dalam  masing-masing  ekstrak.  Uji  ini  dilakukan  dengan menggunakan  pereaksi  warna  yang  berbeda-beda  unrtuk  tiap  senyawa  metabolit sekunder. Hasil skrining fitokimia ekstrak daun ketepeng kecil ( Senna tora (L.) Roxb.) dapat dilihat pada tabel 2
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Ketepeng Kecil Uji Fitokimia Reagen Fraksi N-Heksan Etil Asetat  Etanol 70% Alkaloid HCl + pereaksi Mayer - - - HCl + pereaksi Dragendorf - - - HCl + pereaksi Lieberman - - - Flavonoid Serbuk Mg+ HCl - - + Saponin Air panas + HCl + + + Tanin FeCl 3 + + + Steroid H 2 SO 4 + asam asetat anhidrat + - - Terpenoid H 2 SO 4 + asam asetat anhidrat - - -
Hasil  menunjukan  bahwa  fraksi  daun  ketepeng  kecil  mengandung  senyawa flavonoid, tanin, steroid dan saponin. Hal ini membuktikan bahwa daun ketepeng kecil mengandung  senyawa  aktif  metabolit  sekunder. Fraksi  etanol  70%  yang  memilki kandungan  senyawa  flavonoid  kemudian  di  lakukan  uji  organoleptik  yang  meliputi bentuk, warna, rasa dan bau. Hasil organoleptik dari ekstrak etanol 70% daun ketepeng kecil dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Hasil Organoleptik Sampel Uji Organaleptik Hasil Fraksi Daun Ketepeng Kecil ( Senna tora (L.) Roxb.) Warna Hitam Bentuk Fraksi Kental Rasa Pahit Bau Khas
Uji organoleptik bertujuan untuk memberikan pengenalan awal ekstrak secara objektif  dan  sederhana  yang  dilakukan  dengan  menggunakan  panca  indra  [10].  Uji organoleptik  meliputi  pemeriksaan  bentuk  ekstrak  yang  kental,  warna  ekstrak  yang hijau kehitaman, bau atau aroma yang khas, dan rasa dari ekstrak yang pahit pekat.
Fraksi etanol 70% selanjutnya diuji parameter sari larut pelarut tertentu. Pelarut yang  dimaksud  adalah  air  dan  etanol.  Pengujian  ini  dilakukan  dengan  melarutkan ekstrak  pada  air  ataupun  etanol  dan  dilihat  banyaknya  kandungan  senyawa  yang terlarut dalam pelarut-pelarut tersebut.
Tabel 4. Hasil Uji Sari Larut Pelarut Sampel Parameter Hasil Daun Ketepeng Kecil Senyawa larut dalam air 19,18% Senyawa larut Etanol 23,35%
Tabel  4  menunjukan  senyawa  dalam  fraksi  daun  ketepeng  kecil  lebih  banyak terlarut dalam air dengan presentase sebesar 19,18% dan senyawa yang terlarut dalam etanol hanya sebanyak 23,35%, hal ini menunjukan bahwa fraksi daun ketepeng kecil lebih banyak terlarut dalam etanol dibandingkan dalam air. Penetapan kadar senyawa larut dalam  air dan  etanol  ini merupakan  dugaan  secara  umum  banyaknya  senyawa yang bersifat polar (yang larut air) maupun bersifat semi polar (terlarut dalam etanol). Penetapan  senyawa  larut  dalam  air  maupun  etanol  ini  tidak  secara  langsung mempengaruhi efek farmakologis senyawa aktif dalam fraksi [1].
Penentuan  Pola  kromatogram  menggunakan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT) dilakukan  dengan  menggunakan  perbandingan  fase  gerak  yang  memilki  tingkat kepolaran  yang  berbeda  dan  hampir  mendekati  kepolaran  senyawa  yang  akan ditentukan dengan melihat jalan noda dan dihitung nilai Rf. Eluen yang digunakan pada kromatografi lapis tipis yaitu berupa perbandingan antara N-Heksan: Etil asetat dengan perbandingan 7:3. Jarak noda dan nilai Rf yang ditempuh fraksi etanol 70% dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5. Hasil Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Eluen N – Heksan : Etil asetat (7:3) Jerak tempuh noda (cm) Jarak tempuh pelarut (cm) Harga Rf Daun Ketepeng Kecil ( Senna tora (L.) Roxb.) 1,1 4 Rf 1 0,275 1,4 4 Rf 2 0,35 1,8 4 Rf 3 0,45 2,4 4 Rf 4 0,6
Berdasarkan  uji  KLT  yang  telah  dilakukan  menunjukan  bahwa  fraksi  etanol daun ketepeng kecil mengandung senyawa flavonoid karena dilihat dari nilai Rf yang didapat yakni 0,275, 0,35, 0,45 dan 0,6. Nilai Rf senyawa flavonoid berkisar antara 0,2 - 0,8  atau  dinyatakan  lain  dapat  dilihat  dari  hasil  fluoresensi  yang  terbentuk  [14]. Parameter  nonspesifik  merupakan  pengujian  yang  meliputi  uji  kadar  air,  kadar  abu, kadar  abu  tidak  larut  asam,  susut  pengeringan,  cemaran  logam  berat,  dan  cemaran mikroba. Hasil dari ke empat parameter ini dapat dilihat pada tabel 6
Tabel 6. Hasil Uji Parameter Nonspesifik Parameter Hasil Syarat Kadar Air 18,80% 5-30% [15] Susut Pengeringan 4,96% <11% [16] Kadar Abu 1,76% <10% [17] Kadar Abu tidak larut asam 2,890% <4,60% [17] Cemaran Logam Berat Pb -5,2053 𝜇 g/L <10 mg/kg [10] Cemaran Mikroba a. Jamur b. Bakteri 7,41 × 10 5 2,04 × 10 6 <5x10 7 koloni/g [18] <5x10 7 koloni/g [18]
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,  pada  pengujian  kadar  air  diperoleh  hasil 18,80%. Pengukuran kadar air dalam suatu bahan diperlukan dalam berbagai bidang, terlebih pada suatu fraksi. Tingginya kadar air dapat mengakibatkan tumbuhnya jamur- jamur  yang  tidak  baik  bagi  kesehatan.  Range  kadar  air  tergantung  dari  jenis  fraksi, untuk fraksi kental sendiri memiliki range kadar air antara 5-30% [15].
Pengujian parameter non spesifik selanjutnya yaitu susut pengeringan. Penetapan susut pengeringan pada fraksi merupakan salah satu syarat yang harus terpenuhi dalam standarisasi  tanaman  yang  berkhasiat  sebagai  obat.  Dengan  mengetahui  susut pengeringan  dapat  memberikan  batas maksimal  (rentang)  tentang  besarnya  senyawa yang hilang pada proses pengeringan. Pada uji susut pengeringan diperoleh hasil 4,96%. Hal ini menunjukan bahwa senyawa yang hilang pada fraksi etanol daun ketepeng kecil sebanyak 4,96%. Hal ini menunjukan bahwa ekstrak yang diperoleh memenuhi syarat yaitu kurang dari 11% [16].
Pengujian selanjutnya adalah kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam. Kadar abu ini penting dilakukan karena kadar abu dapat menunjukkan kelayakan suatu sampel untuk pengolahan selanjutnya. Hasil kadar abu total diperoleh sebesar 1,76% sedangkan kadar abu tidak larut asam sebesar 2,890%. Hasil tersebut memenuhi syarat batas kadar abu tidak larut asam yaitu kurang dari 4,6% [17]. Besarnya kadar abu total
menunjukan  bahwa  fraksi  yang  diperoleh  dari  proses  maserasi  mengandung  banyak mineral sedangkan adanya kadar abu yang tidak larut asam menunjukan adanya pasir atau pengotor lainnya dalam fraksi [19]. Dari hasil penetapan kadar abu dapat diketahui kandungan  mineral  dalam  fraksi  dan  kandungan  mineral  tidak  larut  asam  dimana rentang maksimal berhubungan dengan kemurnian dan kontaminan [15].
Selain  beberapa  pengujian  diatas,  fraksi  etanol  daun  ketepeng  kecil juga dilakukan uji cemaran mikroba dan logam berat. Penentuan cemaran mikroba termasuk salah  satu  uji  untuk  syarat  kemurnian  fraksi.  Uji  ini  mencakup  penentuan  jumlah mikroorganisme  yang  diperbolehkan  serta  menunjukan  ada  tidaknya  bakteri  dalam fraksi. Pengujian cemaran mikroba dilakukan untuk memberikan jaminan bahwa fraksi tidak  mengandung  mikroba  patogen  dan  mikroba  non  patogen  melebihi  batas  yang ditetapkan  karena  dapat  berpengaruh  pada  stabilitas  fraksi  dan  berbahaya  bagi kesehatan [20].
Hasil  uji  cemaran  bakteri dan  jamur  dari  fraksi  etanol  daun ketepeng  kecil di dapatkan hasil jumlah koloni dari masing-masing cawan petri kurang dari 25 koloni. Dari  hasil  tersebut  menunjukan  bahwa  esktrak  etanol  daun  ketepeng  kecil masih  di bawah  batas  maksimum  atau  dapat  dikatakan  tidak  tercemar  dan  memenuhi  syarat untuk dapat digunakan sebagai bahan baku obat, hal ini dapat disebabkan karena fraksi yang  digunakan  merupakan  fraksi  etanol  yang  memang  memiliki  kemampuan menghambat pertumbuhan mikroba atau bakteri yang terdapat dalam fraksi. Menurut peraturan BPOM RI No. 12 tahun 2014, persyaratan angka lempeng total (ALT) yang diperbolehkan pada bahan baku obat herbal adalah 1 × 10 6 cfu/mL. Adapun hasil dari cemaran logam Timbal (Pb) yaitu -5,2053 𝜇 g/L. Hasil tersebut menunjukan bahwa kandungan logam Timbal (Pb) fraksi etanol daun ketepeng kecil masih berada dalam batasan normal bahkan nilainya masih jauh dibawah batas normal. Batasan cemaran logam berat timbal (Pb) dalam esktrak tidak boleh melewati batas yang ditetepkan dalam buku Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia volume II yaitu < 10 mg/kg [21]. Nilai absrobansi yang telah dari pengukuran larutan baku dapat dilihat pada tabel 7.
Tabel 7. Hasil Pembacaan Nilai Absorbansi Konsentrasi (ppm) Absorbansi 5 0,327 10 0,633 15 0,887 20 1,275 25 1,628
Selanjutnya  dimasukan  dalam  persamaan  regresi  untuk  menentukan  panjang gelombang  dari  kuersetin,  dan  nilai  hasil  pengukuran  absorbansi  sampel  digunakan untuk menghitung kadar flavonoid total dari ekstrak sampel ketepeng kecil. Hasil dari panjang gelombang dan kadar total flavonoid dapat dilihat pada tabel 8
Tabel 8. Hasil Pembacaan Panjang Gelombang
Sampel Ekstrak Daun Ketepeng Kecil Hasil Panjang gelombang maksimum 438,36 nm Kadar flavonoid total 47,13 µg/ml
Kadar  flavonoid  ditentukan  melalui  persamaan  regresi  kurva  standar  dengan konsentrasi  larutan quarsetin  adalah  5  ppm,  10  ppm, 15  ppm,  20  ppm,  dan 25  ppm. Semakin  tinggi  konsentrasi  zat  maka  semakin  tinggi  pula  nilai  absorbansi  yang diperoleh,  sehingga  menunjukan  hubungan  lurus  antara  konsentrasi  dan  nilai absorbansi [22]. Berdasarkan hasil regresi di aplikasi excel menunjukan persamaan yaitu y  =  0,0643x – 0,0232   dengan  nilai R 2 0,9948. Pada  pengukuran  kadar  flavonoid  total penambahan  pereaksi  AlCl 3 .  Hal  ini  bertujuan  membuat  koompleks  antara  senyawa flavonoid dan AlCl 3 pada gugus keto pada atom C-4 dan gugus hidroksi pada atom C-3 dan  C-5,  sehingga  terjadi  pergeseran  panjang  gelombang  ke visible (tampak)  yang ditandai dengan terbentuknya larutan berwarna kuning [23]. Berdasarkan pengukuran yang telah dilakukan diperoleh hasil 47,13 µg/mg. Hal ini menunjukan bahwa fraksi etanol daun ketepeng kecil ( Senna tora (L.) Roxb.) mengandung flavonoid sebanyak 47,13 µg/mg.

## 4.  Kesimpulan
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakuan,  dapat  disimpulkan  bahwa berdasarkan  pengujian  standarisasi  meliputi  parameter  spesifik  dan  parameter  non- spesifik fraksi etanol 70% tanaman ketepeng kecil ( Senna tora (L.) Roxb.) telah memenuhi standarisasi mutu bahan baku. Serta kadar flavonoid total sebanyak 47,13 µg/mg pada panjang gelombang maksimum 438,36 nm.

## Referensi
[1]. Sulistyarini, I., Sari, D. A., dan Wicaksono, T. A. (2020). Skrining Fitokimia Senyawa Metabolit Sekunder Batang Buah Naga (Hylocereus polyrhizus) . Jurnal Ilmiah Cendekia Eksakta. 56-62
[2]. Murni., Gunawan., Janitra, B. (2014). Efektivitas Ekstrak Etanol Daun Ketepeng (Cassia alata L.) Dan Ketepeng Kecil (Cassia tora L.) Terhadap Plasmodium Falciparum Secara In Vitro . BALABA. 10 (2) : 83-88
[3]. Sukmawati.,  Hadi,  H.,  Aminah.  (2017). Potensi  Senyawa  Flavonoid  Daun  Afrika (Vernonia amygdalina Del.) Asal Ternate Sebagai Antioksidan . Jurnal As-Syifa. 09 (02) : 195-200
[4]. Aminah., Tomayahu, Nurhayati., Abidin, Zainal. (2017). Penetapan Kadar Flavonoid Total  Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah  Alpukat  (Persea  americana  Mill.)  dengan  Metode Spektrofotometri  UV-Vis .  Jurnal  Fitofarmaka  Indonesia.  4  (2)  :  226-230.  DOI: 10.33096/jffi.v4i2.265
[5]. Handayani,  T.  W.,  Yusuf,  Y.,  Tandi,  J.  (2020). Analisis  Kualitatif  dan  Kuantitatif Metabolit  Sekunder  Ekstrak  Biji  Kelor  (Moringa  oleifera  Lam)  dengan  Metode Spektrofotometri UV-Vis . Jurnal Riset Kimia.Vol 6(3). 230-238
[6]. Mabruroh QE, Mursiti S, Kusumo E. (2019). Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dari daun murbei (Morus alba Linn) . Indonesian journal of Chemical science . 8 (1) [7]. Atmoko,  T., dan  Ma’aruf,  A.  (2009). Uji Toksisitas  Dan  Skrining Fitokimia  Ekstrak Tumbuhan  Sumber  Pakan  Orang  Utan  Terhadap  Larva  Artemia  salina  Leach .  Jurnal penelitian Hutan dan Konservasi Alam VI. (1): 39.
[8]. Wardana,  A.  P.  &  Tukiran.  (2016). Skrining  Fitokimia  dan  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Kloroform  Tumbuhan  Gowok  (Syzygium  polycephalum). Prosiding  Seminar Nasional Kimia Dan Pembelajarannya. 21- 26
[9]. Andrian, Kikik., Rochmah, Nur., Arifah Farida Noor. (2018). Karakterisasi Parameter Spesifik  Dan  Non  Spesifik  Ekstrak  Etanol  Daun  Teratai  (Nelumbium  nelumbo  D.) . Prosiding  Seminar  Nasional  Sains,  Teknologi  dan  Analisis.  Institut  Ilmu Kesehatan Bhakti Wijaya Kediri
[10]. Irsyad, Muchammad. (2013). Standarisasi Ekstrak Etanol Tumbuhan Katumpangan Air (Paperomia  pellucida  L.  Kunth) . Skripsi .  Jakarta  :  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu Kesehatan, Program Studi Farmasi, UIN Syarif Hidayatullah
[11]. Anonymous . (2000) . Parameter Standar Ekstrak Tumbuhan Obat . Jakarta: BPOM [12]. Ipandi, I., Triyasmono, L., dan Prayitno, B. (2016). Penentuan Kadar Flavonoid Total dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Kajajahi (Leucosyke capitellata Wedd) . Pharmascience, 3(1), 93-100.
[13]. Sari,  Meliani.,  Ulfa,  Rani.  Nareza.,  Marpaung,  Mauritz.  Pandapotan.,  Purnama. (2021). Penentuan Aktivitas Antioksidan dan Kandungan Flavonoid Total Ekstrak Daun Papasan (Coccinia grandis L.) Berdasarkan Perbedaan Pelarut Polar . Jurnal Riset Kimia. 7 (1) : 30-41
[14]. Rasyid, R., Nofriyelli, E., Andayani, R. (2018). Validasi Metode Analisis Mangiferin Dalam  Plasma  In  Vitro  Secara  Kromatografi  Lapis  Tipis-Densitometri .  Padang  : Universitas Andalas
[15]. Utami,  Y.  P.,  Sisang,  S.,  Burhan,  A.  (2016). Pengukuran  Parameter  Simplisia  dan Ekstrak  Etanol  Daun  Patikala  (Etlingera  elatior  (Jack)  R.M.  Sm)  Asal  Kabupaten Enrekang Sulawesi Selatan. MFF. 24 (1) : 5-10 [16]. Manarisip,  Geraldin.  Ester.,  Fatmawati,  Rotinsulu,  Henki.  (2020). Standarisasi Ekstrak  Daun  Sirih  Hijau  (Piper  betle  L.)  dan  Uji  Antibakteri  Terhadap  Bakteri Pseudomonas aeruginosa . PHARMACON . 9 (4) : 533-541
[17]. Ulfah,  Maria.,  Kurniawan,  Ricky.  Chandra.,  Erny,  Metalia.  (2020). Standardisasi Parameter Non Spesifik dan Spesifik Ekstrak Etanol Daun Jamblang  (Syzygium cumini (l.) skeels) . Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik. 17 (2): 35-43 [18]. Anonymous .  (2014). Persyaratn  Mutu  Obat  Tradisional .  Jakarta  :  Badan  Pengawas Obat Dan Makanan RI
[19]. Kartikasari,  D.,  Nurkhasanah,  Suwijiyo,  P.  (2014) .  Karakterisasi  Simplisia  Dan Ekstrak Etanol Daun Bertoni (Stevia rebaudiana) Dari Tiga Tempat Tumbuh. Proceeding Seminar Nasional Perkembangan Terbaru Pemanfaatan Herbal Sebagian Agen Preventif Pada Terapi Kanker . Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik. 149- 150.
[20]. Ratnani, R.D., Hartati, I., Anas, Y., Endah, D., Khilyati, D. D. (2015). Standardisasi Spesifik  Dan  Non  Spesifik  Ekstraksi  Hidrotropi  Andrographolid  Dari  Sambiloto (Andrographis Paniculata) . Semarang: Universitas Wahid Hasyim [21]. Solikha,  D.  F.  (2019). Penentuan  Kadar  Tembaga  (Ii)  Pada  Sampel  Menggunakan Spektroskopi Serapan Atom (SSA) Perkin Erlmer Analyst 100 Metode Kurva Kalibrasi . Jurnal Ilmiah Indonesia. Vol. 4 No. 2
[22]. Salmia. (2016). Analisis Kadar Flavonoid Total Ekstrak Kulit Batang Kedondong Bangkok (Spondias Dulcis) Dengan Metode Spektrofotometri Uv-Vis . Skripsi Jurusan Farmasi. Universitas Negeri Alaudin Makassar
[23]. Kumalasari, Eka., Nazir, M. Ahlun., Putra, Aditya. M. P. (2018). Penetapan Kadar Flavonoid  Total  Ekstrak  Etanol  70%  Daun  Bawang  Dayak  (Eleutherine  palmifolia  L.) Dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis . Jurnal Insan Farmasi Indonesia. 1 (2) :201- 209