## Bioenkapsulasi Naupli Artemia dengan
Spirulina sp. dan Resistensinya terhadap Bakteri Vibrio spp.
Sri Sedjati 1,2 *, Ervia Yudiati 1 , Endang Supriyantini 1 , Nuril Azhar 1 , Chika Velita Anindya Yulian 1
1 Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH. Kampus UNDIP Tembalang, Semarang 50275 Indonesia
2 Marine Science Techno Park, Universitas Diponegoro Jl. Undip, Desa Teluk Awur, Tahunan, Jepara, Jawa Tengah 59427 Indonesia Email: sedjati69@gmail.com
Abstract
Bioencapsulation of Naupli Artemia with Spirulina sp . and its resistance to Vibrio spp . bacteria.
Artemia is usually given as live feed in shrimp and fish hatcheries. Bioencapsulation of Artemia with Spirulina sp . is thought to increase disease resistance. One disease that often harms aquaculture is infection by Vibrio. The study aimed to determine the  significance  of  artemia's  nauplii  biocapsulation  to  increased  resistance  against  infection  by  Vibrio  spp.  The  research method used is experimental laboratories with a non-parametric approach. The resistance variable is measured as the survival rate.  Bioencapsulation  of  Artemia  uses  4  levels  of  Spirulina  sp.  concentration:  0  (control),  300,  600,  900  mg/L,  while  the challenge test uses 8 levels of Vibrio: Non-Vibrio (control), Vibrio vulnificus (Vv), V. harveyi (Vh), V. parahaemolyticus (Vp), a combination of the two: (Vv+Vh), (Vv+Vp), (Vh+Vp), as well as a combination of the three: (Vh+Vp+Vv). Kruskal Wallis test was conducted to find out the difference in artemia survival rates between groups, then the U Mann-Whitney test to find out pairs between groups that have significant differences. Kruskal Wallis analysis showed only spirulina sp concentrations that produce a significant effect (p=0.00) on the survival rate of nauplii Artemia, while Vibrio spp. have no effect (p=0.32). Based on the U Mann-Whitney test, all spirulina sp concentration groups are significantly different from control (p<0.05), and only the group 300 to 600 mg/L is not different (p=0.42). Spirulina sp. 300 mg/L can increase survival rates to 77.92%, 600 mg/L to 77.50%, and 900  mg/L  to  66.67%.  In  conclusion,  it  is  optimal  to  increase  Artemia's  resistance  to  Vibrio  spp.  can  be  done  with bioencapsulation of Spirulina sp. 300 mg/L.
Keyword: diseases, infections, survival rate

## Abstrak
Artemia  biasa  diberikan  sebagai  pakan  hidup  pada  usaha  pembenihan  udang  maupun  ikan.  Bioenkapsulasi  Artemia dengan Spirulina sp. diduga dapat meningkatkan resistensi terhadap penyakit. Salah satu penyakit yang sering merugikan usaha akuakultur adalah infeksi oleh bakteri Vibrio . Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melihat signifikansi bioenkapsulasi naupli Artemia terhadap peningkatan resistensi melawan infeksi oleh Vibrio spp. Metode penelitian yang digunakan adalah eksperimental  laboratoris  dengan  pendekatan  non-parametrik.  Variabel  resistensi  diukur  sebagai  tingkat  kelangsungan hidup. Bioenkapsulasi Artemia menggunakan 4 taraf konsentrasi Spirulina sp.: 0 (kontrol), 300, 600, 900 mg/L, sedangkan uji tantang menggunakan 8 taraf jenis Vibrio : Non -Vibrio (kontrol), Vibrio vulnificus (Vv), V. harveyi (Vh), V. parahaemolyticus (Vp),  kombinasi  dari  dua Vibrio :  (Vv+Vh),  (Vv+Vp),  (Vh+Vp),  serta kombinasi  dari ketiganya:  (Vh+Vp+Vv).  Uji Kruskal  Wallis dilakukan untuk mengetahui perbedaan tingkat kelangsungan hidup Artemia antar kelompok, selanjutnya dilakukan uji U Mann-Whitney untuk mengetahui pasangan antar kelompok yang memiliki perbedaan signifikan. Hasil analisis Kruskal Wallis menunjukkan  bahwa  hanya  konsentrasi Spirulina sp.  yang  menghasilkan  pengaruh  signifikan  (p=0,00)  terhadap  tingkat kelangsungan hidup naupli Artemia, sedangkan jenis Vibrio spp. tidak berpengaruh (p=0,32). Berdasarkan uji U Mann-Whitney, semua  kelompok  konsentrasi Spirulina sp  berbeda  secara  signifikan  terhadap  kontrol  (p<0,05),  dan  hanya  kelompok.  300 terhadap 600 mg/L yang tidak berbeda (p=0,42). Pemberian Spirulina sp. sebanyak 300 mg/L dapat meningkatkan tingkat kelangsungan  hidup  menjadi  77,92%,  600  mg/L menjadi  77,50%,  dan  900  mg/L menjadi  66,67%.  Kesimpulannya,  secara optimum untuk meningkatkan resistensi Artemia terhadap Vibrio spp. dapat dilakukan dengan bioenkapsulasi Spirulina sp. 300 mg/L .
Kata kunci : penyakit, infeksi, tingkap kelangsungan hidup

## PENDAHULUAN
Artemia adalah salah satu pakan alami yang dibutuhkan dalam bidang akuakultur, khususnya pada  usaha  pembenihan  (Kouba et  al .,  2011;  Suyanto et  al .,  2019).  Secara  komersial,  Artemia biasanya dijual dalam bentuk kista kering yang dapat disimpan selama bertahun-tahun. Sebelum
diberikan sebagai pakan hidup, artemia harus ditetaskan terlebih dahulu dan diberi pakan yang berkualitas.  Menurut  Fernández  (200),  Artemia  merupakan  hewan  penyaring  ( filter feeder )  non selektif. Ukuran pakan untuk Artemia berkisar antara 6,8 - 27,5 μm ( optimal sekitar 16,0 μm ).
Selain  bernutrisi  tinggi,  Artemia  dapat  digunakan  sebagai  media  hidup  untuk  sarana enkapsulasi  (bioenkapsulasi)  guna  mentransfer  zat-zat  yang  bermanfaat  bagi  pertumbuhan  ikan dan krustasea, seperti suplemen (Prusińska et al ., 2015), obat-obatan (Roiha et al. , 2010), maupun nutrisi penting dan senyawa bioaktif (Cheban et al ., 2020). Bioenkapsulasi berfungsi sebagai upaya pengkayaan  nutrisi  ( enrichment )  menggunakan  bahan  tambahan  untuk  memperbaiki  mutu (kualitas) dan jumlah (kuantitas) dari Artemia sebelum diberikan sebagai pakan hidup. Salah satu manfaatnya adalah sebagai imunostimulan untuk meningkatkan respon imun terhadap serangan patogen, baik bagi naupli Artemia maupun ikan/krustasea yang memakannya (Immanuel, 2016).
Imunostimulan  terdiri  dari  sekelompok  senyawa  yang  dapat  meningkatkan  mekanisme pertahanan seluler dan humoral bawaan (non-spesifik). Imunostimulan terutama memfasilitasi fungsi sel  fagositik  dan  meningkatkan  aktivitas  bakterisida  (Farooqi  &  Qureshi,  2018).  Beberapa imunostimulan  juga  merangsang  lisozim  dan  respon  antibodi  ikan.  Imunostimulan  telah  diteliti sebagai materi yang sangat bermanfaat untuk memanajemen penyakit dalam bidang akuakultur. Salah satu organisme laut sebagai penyedia agen imunostimulan adalah Spirulina (Cyanobacteria) atau disebut juga alga hijau biru (Satyantini et al ., 2016; Abdelatief et al ., 2018; Suyanto et al. , 2019).
Ikan  yang  diberi  pakan  Spirulina  terbukti  dapat  menaikkan  produksi  lisozim,  aktivitas  nitrat oksida  (NO),  dan  imunoglobin  M  (IgM).  Zat-zat  tersebut  berfungsi  dalam  peningkatan  imunitas terhadap serangan patogen (Roohani et al ., 2020; Abdelatief et al ., 2018). Zat bioaktif dari Spirulina dapat  berperan  sebagai  imunostimulan.  Biomassa  Spirulina  mengandung  pigmen  fikosianobilin terdiri dari fikosianin, allofikosianin, dan fikoeritrin yang terutama bertanggung jawab untuk aktivitas antioksidan dan penangkal radikal bebas. Radikal bebas diketahui dapat merusak sistem kekebalan tubuh yang rentan terhadap kerusakan oksidatif (Ragap et al ., 2012). Berdasarkan hasil penelitian Muchtar et al . (2019), pengaruh fikosianin yang terkandung dalam pakan ikan menjadikan ikan lebih resisten  terhadap  infeksi  bakteri.  Satyantini et  al .  (2016)  menambahkan  bahwa  senyawa  bioaktif fikosianin  dan  juga  polisakarida  larut  air dari Spirulina sp.  terbukti  dapat  meningkatkan  aktivitas pertahanan biologis melawan penyakit akibat infeksi bakteri patogen.
Pemberian  imunostimulan  penting  dilakukan  untuk  meningkatkan  produksi  hasil  perikanan budidaya,  serta  harus  dimulai  dari  usaha  pembenihannya.  Penggunaan  bioenkapsulasi  artemia dinilai  lebih  efektif  serta  dapat  dimanipulasi  dan  ketersediaannya  berkelanjutan  ( sustainable ). Artemia merupakan hewan penyaring ( filter feeder ) non selektif sehingga senyawa organik yang terlarut maupun tersuspensi dalam media hidupnya akan terserap. Zat bioaktif yang terakumulasi dalam sel Artemia dapat memicu peningkatan imunitas sehingga terjadi penurunan infeksi penyakit (Wee et al ., 2021). Penyakit yang sering menyerang usaha akuakultur salah satunya adalah infeksi akibat bakteri Vibrio spp. (Istiqomah et al ., 2020),
Mikroalgae merupakan sumber senyawa bioaktif ramah lingkungan yang telah menunjukkan beberapa  bioaktivitas,  termasuk  sebagai  antimikroba,  anti-inflamasi,  dan  imunomodulator. Sepanjang kurun waktu dekade terakhir, senyawa yang merangsang sistem kekebalan tubuh, baik respon  imun  bawaan  maupun  imun  adaptif  telah  digunakan  untuk  mencegah  dan  melawan berbagai patogen (Riccio & Lauritano, 2020; Roohani et al ., 2020). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk melihat signifikansi dari pemberian Spirulina sp. sebagai pengkaya nutrien ( enrichment ) pada bioenkapsulasi  naupli  Artemia  terhadap  peningkatan  resistensi  melawan patogenitas Vibrio spp.. Respon  bioaktivitas  metabolit Spirulina sp.  terhadap  imunitas  diidentifikasi  berdasarkan  tingkat kelangsungan hidup Artemia setelah diinfeksi dengan bakteri patogen.

## MATERI DAN METODE
Spirulina sp. kering yang digunakan dalam penelitian ini merupakan hasil kultur yang diperoleh dari  Balai  Besar  Perikanan  Budidaya  Air  Payau  (BBPBAP),  Jepara.  Sebelum  proses  bioenkapsulasi, Spirulina sp, dipersiapkan terlebih dahulu dengan melarutkannya dalam  pelarut air. Kista Artemia (Supreme  Plus®,  Golden  West  Artemia)  ditimbang  sebanyak  1  g.  Proses  penetasan  dilakukan menggunakan air yang sudah ditambah dengan NaCl (salinitas 25 g/L) sebanyak 1000 mL. Selama proses penetasan, media diberikan aerasi yang kuat selama sekitar 24 jam (Rudtanatip et al ., 2019). Setelah 24 jam menetas, Artemia sudah memasuki fase Instar II dan naupli dapat dipanen serta siap dignakan untuk bioenkapsulasi.
Media  untuk  proses  bioenkapsulasi  dibuat  dengan  cara  menambahkan  Spirulina  kering  ke dalam  air  sehingga  senyawa-senyawa  polar  dapat  terlarut,  sementara  sisanya  akan  tersuspensi . Spirulina sp.  dipersiapkan  sesuai  konsentrasi  yang  diaplikasikan,  yaitu  300,  600,  dan  900  mg/L menggunakan akuades. Selanjutnya ditambahkan NaCl agar diperoleh  larutan bersalinitas 25  g/L dan dihomogenasi menggunakan magnetic stirrer selama 3 hari pada suhu ruang (Yudiati et al ., 2021). Larutan Spirulina sp. siap digunakan untuk proses bioenkapsulasi Artemia.
Bakteri uji yang digunakan berasal dari koleksi Laboratorium Biologi Laut, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro, Semarang. Bakteri uji Vibrio spp. terdiri dari V. vulnificus, V. harveyi, dan V. parahaemolyticus. Persiapan bakteri uji mengacu ke metode Sedjati et al . (2020). Subkultur isolat bakteri uji dilakukan dengan mengambil 1 ose dari media Nutrient Agar (NA; Merck, USA) ke dalam Nutrient Broth (NB; Merck, USA) dan diinkubasi selama 24 jam (suhu 37 o C) . Suspensi bakteri  selanjutnya  distandarisasi  dengan  larutan  0,5  McFarland  (REMEL  McFarland  Equivalence) untuk memperoleh kepadatan 1,5 x10 8 CFU mg/L.
Semua peralatan gelas dan media disterilkan menggunakan alat autoklaf, sedangkan bahan plastik dilakukan dengan penyemprotan alkohol 70% dan paparan sinar UV. Seluruh rangkaian uji tantang dilakukan di Laminar Air Flow (LAF) (Guridi et al ., 2019). Bioenkapsulasi  Artemia dilakukan menurut  metode  Roiha et  al. (2010),  yaitu  dengan  cara  merendam  Artemia  ke  dalam  larutan Spirulina sesuai taraf perlakuan konsentrasi selama 1 jam.
Bioenkapsulasi Artemia menggunakan 4 taraf konsentrasi Spirulina sp.: 0 (kontrol), 300, 600, 900 mg/L, sedangkan uji tantang menggunakan 8 taraf jenis Vibrio : Non -Vibrio (kontrol), Vibrio vulnificus (Vv), V.  harveyi (Vh), V.  parahaemolyticus (Vp),  kombinasi  dari  dua Vibrio :  (Vv+Vh),  (Vv+Vp), (Vh+Vp), serta kombinasi dari ketiganya: (Vh+Vp+Vv). Penelitian ini dilakukan dengan Rancangan Acak Faktorial (4x8) dengan 3 kali ulangan.
Uji tantang dengan Vibrio spp. dilakukan dalam botol/vial yang berisi larutan NaCl dengan salinitas 25 g/L. Vial diisi 10 ml untuk perlakuan Non- Vibrio , 9 mL untuk 1 jenis Vibrio , 8 mL untuk 2 jenis Vibrio , dan 7 ml untuk 3 jenis Vibrio . Penambahan suspensi biakan Vibrio spp diberikan sebanyak 1 mL  per  jenis/spesies.  Sebanyak  10  ekor  naupli  Artemia  yang  sudah  terenkapsulasi  dimasukkan  ke masing-masing vial. Pengamatan tingkat kelangsungan hidup dilakukan setiap 6 jam sampai terjadi 100% kematian dari Artemia (Immanuel, 2016).
Grafik dibuat menggunakan aplikasi Ecxel 2013, sedangkan analisis data menggunakan SPSS versi  25  dengan  pendekatan  non-parametrik.  Uji  Kruskal  Wallis  dilakukan  untuk  mengetahui perbedaan  tingkat  kelangsungan  hidup  Artemia  antar  kelompok  sebagai  efek  dari  pemberian Spirulina sp. dan infeksi Vibrio spp. Selanjutnya untuk mengetahui pasangan antar kelompok yang memiliki perbedaan signifikan dilakukan uji U Mann-Whitney dengan tingkat signifikansi 0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemberian bubuk Spirulina sp. dengan konsentrasi yang berbeda pada media bioenkapsulasi Artemia menghasilkan tingkat respon imunitas yang berbeda saat terinfeksi oleh Vibrio spp.. Tingkat
respon imunitas terlihat dari profil tingkat kelangsungan hidup setelah beberapa jam terinfeksi seperti terlihat pada Gambar 1.
Naupli  Artemia  pada  perlakuan  kontrol  (non-enkapsulasi)  hanya  mampu  bertahan  hidup selama  24-36  jam,  sedangkan  yang  diberi  perlakuan  enkapsulasi  mampu  bertahan  hidup  lebih lama. Bioenkapsulasi dengan Spirulina sp. 300 mg/L mampu meningkatkan lama hidup menjadi 48- 72 jam, 600 mg/L menjadi 60-84 jam, dan 900 mg/L menjadi 48-72 jam (Gambar 1). Selanjutnya, hasil analisis tingkat kelangsungan hidup Artemia pada saat 24 jam setelah infeksi Vibrio spp. digunakan untuk menentukan efek bioenkapsulasi terhadap peningkatan resistensi melawan Vibrio spp. Hasil analisis  Kruskal  Wallis  menunjukkan  bahwa  hanya  konsentrasi Spirulina sp.  yang  berpengaruh signifikan  (p=0,000)  terhadap  tingkat  kelangsungan  hidup  naupli  Artemia,  sedangkan  jenis Vibrio spp. tidak berpengaruh (p=0,322). Hal ini menunjukkan bahwa Artemia hasil bioenkapsulasi memiliki resistensi  yang  tinggi  terhadap  infeksi Vibrio spp.,  sehingga  tingkat  kelangsungan  hidupnya  tidak berbeda  nyata  dengan  kelompok  yang  tidak  terinfeksi  pada  perlakuan  konsentrasi  yang  sama (Gambar 2).
(a) (b) (c) (d)
Gambar 1. Persentase (%) tingkat kelangsungan hidup Artemia setelah diinfeksi Vibrio spp. sebagai respon bioenkapsulasi dengan Spirulina sp. berbagai konsentrasi (mg/L): (a) 0, (b) 300, (c)  600,  (d)  900  (Keterangan:  V  = Vibrio ,  Vh  = V.  harveyi, Vv  = V.  vulnificus, Vp  = V. parahaemolyticus ) 0 20 40 60 80 100 0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 78 84 Ti ngk a t k e la ng su ng a n hi du p ( %) Jangka waktu terpapar infeksi (jam) 0 20 40 60 80 100 0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 78 84 Ti ng ka t k e la ng su ng a n hi d u p (%) Jangka waktu terpapar infeksi (jam) 0 20 40 60 80 100 0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 78 84 Ti ng ka t k e lang sung an hi dup (%) Jangka waktu terpapar infeksi (jam) 0 20 40 60 80 100 0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 78 84 Ti ngk a t k e la ng su ng a n hi du p (%)
Jangka waktu terpapar infeksi (jam)
Perbedaan  pengaruh  bioenkapsulasi  antar  kelompok  konsentrasi  yang  diuji  coba dapat dilihat berdasarkan hasil analisis uji U Mann-Whitney dalam Tabel 1. Semua kelompok konsentrasi Spirulina sp. berbeda secara signifikan dengan kontrol, dan hanya kelompok 300 terhadap 600 mg/L yang tidak berbeda.
Tingkat  kelangsungan  hidup  paling  rendah  terjadi  pada  kelompok  naupli  Artemia  non- bioenkapsulasi  (kontrol)  baik  yang  diinfeksi Vibrio spp.  maupun  tidak,  rata-rata  hanya bertahan sebesar  3,75%.  Pemberian Spirulina sp.  sebanyak  300  mg/L dapat  meningkatkan  tingkat kelangsungan  hidup  berkisar  70-86,67%  (rerata  77,92%),  600  mg/L berkisar  36,67-93,33%  (rerata 77,50%), dan 900 mg/L berkisar 56,67-73,33% (rerata 66,67%). Berdasarkan  hasil tesebut, konsentrasi optimumnya adalah 300 mg/L (Gambar 2). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa secara ekonomis, proses bioenkapsulasi dengan 300 mg/L Spirulina sp. dapat diaplikasikan untuk menghasilkan pakan hidup Artemia yang tinggi secara kuantitas dan kualitas, karena lebih resisten terhadap infeksi Vibrio spp.
Gambar  2. Pengaruh  bioenkapsulasi  dengan Spirulina sp.  terhadap  persentase  (%)  tingkat kelangsungan hidup Artemia setelah 24 jam diinfeksi Vibrio spp. (Keterangan: V = Vibrio , Vh = V. harveyi, Vv = V. vulnificus, Vp = V. parahaemolyticus )
Tabel 1. Hasil analisis uji U Mann-Whitney
Antar Kelompok Konsentrasi
(mg/L) Mean Rank Nilai signifikansi (p) 0-300 12,50 – 36,50 0,000* 0-600 12,50 – 36,50 0,000* 0-900 12,50 – 36,50 0,000* 300-600 22,92 – 26,08 0,419 300-900 31,04 – 17,96 0,001* 600-900 30,21 – 18,79 0,004*
Keterangan: * menunjukkan pengaruh signifikan ( ᾳ =0,05) 0 20 40 60 80 100 120 0 300 600 900 Ti n gk a t kel a n gsu n ga n h h idu p ( % )
Konsentrasi Spirulina sp.(mg L-1)
Non-V (kontrol) Vh Vv Vp Vh-Vv Vh-Vp Vv-Vp Vh-Vv-Vp
Spirulina merupakan salah satu mikroalga yang kaya nutrisi fungsional. Beberapa di antaranya adalah berbagai komponen pigmen larut air seperti fikosianin, fikoeritrin, dan allofikosianin (Sedjati et  al .,  2012;  Agustini et  al .,  2015).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  dalam  biomassa  kering terdapat  protein  (49,72±0,508%),  karbohidrat  (10,3±0,33%),  kadar  air  (7,5±0,69%),  lipid  (7,2±0,11%), dan mineral (6,9±0,13%), total fenol (51,20±0,25 μg mg/L ), dan flavonoid (97,73±1,86 μg mg/L). Total protein dan fikosianin ditemukan lebih tinggi dalam ekstrak air Spirulina, demikian juga tertinggi untuk aktivitas antioksidan fikosianin (Gabr et al ,, 2020). Ketika Spirulina kering direndam dalam media air, senyawa-senyawa yang relatif polar akan terdistribusi ke dalam media bioenkapsulasi dan terserap masuk ke tubuh Artemia secara filter feeder .
Protein  pigmen  larut  air  yang  sangat  dominan  dalam  Spirulina  dikenal  sebagai  fikosianin. Sebelumnya,  penelitian in  vitro telah  menunjukkan  bahwa  fisikosianin  memiliki  banyak  aktivitas biologis  seperti  antioksidan  dan  anti-inflamasi,  serta  memiliki  aktivitas  imunomodulator  dengan mekanisme kerja yang bergantung dosis. Senyawa fikosianin tidak menyebabkan toksisitas akut dan subakut dan menunjukkan kinerja imunomodulasi  secara in vivo menggunakan biomodel hewan (tikus). Selain itu, ditemukan juga bahwa fikosianin memperkuat imunitas serta memiliki efek yang sangat  kuat  pada  tingkat  antioksidan  serum  (SOD/ superoxide dismutase ,  katalase).  Senyawa- senyawa  tersebut  memiliki  potensi  sebagai  suplemen  penting  untuk  menyingkirkan  berbagai penyakit akibat stres oksidatif yang diinduksi oleh penyakit (Grover et al ., 2021).
Peneliti  lainnya,  Chen et  al .  (2014)  menambahkan  bahwa  keberadaan  fikosianin  dengan cepat  merangsang  fosforilasi  molekul  pensinyalan  terkait  inflamasi  akibat  infeksi  patogen. Bioaktivitas senyawa fikosianin bekerja melalui mekanisme molekuler dengan cara meningkatkan kinerja  imunomodulasi  melalui  makrofag.  Makrofag  adalah  sel  fagosit  terpenting  karena  memiliki fungsi menghancurkan antigen.
Saat  Spirulina  kering  terekspos  dengan  pelarut  air,  maka  senyawa  yang  relatif  polar  yang terkandung di dalamnya akan terlarut dalam media bioenkapsulasi . Fikosianobilin adalah pigmen yang  berpotensi  dapat  larut  air,  dan  senyawa  polar  lainnya  adalah  golongan  polisakarida (karbohidrat).  Spirulina  mengandung  polisakarida  sebesar  8.3  %(berat  kering)  yang  terdiri  dari ramnosa,  glukosa,  galaktosa,  xylosa,  dan  mannosa  (Chaiklahan et  al .,  2013). Secara in  vitro , polisakarida  menunjukkan  efek  imunostimulan  dengan  cara  meningkatkan  produksi  oksida  nitrat (NO)  dan  aktivitas  makrofag  sel  RAW246.7  berupa  protein  sitokin  (IL-6,  IL-10,  TNF- ᾳ )  yang meningkatkan fagositik. Makrofag berperan sebagai pemicu respon imun bawaan dan menginduksi respon imun adaptif dalam menanggapi infeksi mikroorganisme patogen (Riccio & Lauritano, 2020; Wu et al ., 2020).
Resmawati  (2016)  melakukan  penelitian  serupa,  benih  ikan  berukuran  7,5-8,5  cm  direndam dalam  air  steril  yang  diberi  ekstrak  air  panas Spirulina sp.  selama  3  jam.  Air  panas  dapat mengekstraksi  polisakarida.  Ekstrak  dengan  konsentrasi  30  mg/L dapat  meningkatkan  konsentrasi TNF- α pada hari ke -7, serta total leukosit dan indeks fagositosis pada hari ke-14 setelah perendaman. Ekstrak  air  panas  Spirulina  terbukti  mempengaruhi  imun  non-spesifik.  Menurut  Li et  al .  (2021), polisakarida  yang  terkandung  dalam  ekstrak  air  Spirulina  berupa  dekstran,  yaitu  sekelompok polisakarida  yang  memiliki  cabang  dan  tersusun  dari  glukosa  (glukan).  Glukan  dapat  secara signifikan  meningkatkan  kemampuan  fagositik  makrofag,  meningkatkan  produksi  NO,  dan meningkatkan ekspresi IL-6 mRNA, sehingga diduga memiliki aktivitas imunomodulator.
Perendaman  Artemia  dalam  media  yang  diberi  bubuk Spirulina sp.  (selama  1  jam  dengan konsentrasi  300,  600,  dan  900  /L)  dalam  penelitian  ini  terbukti  dapat  meningkatkan  resistensi terhadap serangan Vibrio spp, bahkan saat 2 atau 3 spesies Vibrio menginfeksi secara bersamaan. Fakta  ini  dapat  dijadikan  acuan  untuk  menggunakan Spirulina sp.  sebagai  bahan  tambahan (suplemen)  yang  dapat  diberikan  melalui  bioenkapsulasi  Artemia  sebagai  pakan.  Artemia  akan mentransfer  nutrisi  yang  dikandungnya,  termasuk  metabolit  yang  berperan  dalam  peningkatan imunitas ke dalam ikan/krustasea yang memakannya.

## KESIMPULAN
Konsentrasi Spirulina sp. berpengaruh signifikan (p=0,00) terhadap tingkat kelangsungan hidup naupli  Artemia,  sedangkan  jenis Vibrio spp.  tidak  berpengaruh  (p=0,32).  Secara  optimum, peningkatkan resistensi Artemia terhadap infeksi Vibrio spp. dapat dilakukan dengan bioenkapsulasi menggunakan Spirulina sp.  300  mg/L, sehingga  tercapai  tingkat  kelangsungan  hidup  sebesar 77,92%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini didukung secara finansial oleh dana Hibah Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas  Diponegoro  melalui  Sumber  Dana  selain  APBN  tahun  anggaran  2021  dengan  kontrak Nomor: 75/UN7.5.10. 2/PP/2021.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdellatief, S.A., Rahman, A.N.A., & Abdallah, F.D.M. (2018). Evaluation of Immunostimulant Activity of Spirulina  platensis ( Arthrospira  platensis )  and  Sage  ( Salvia  officinalis) in  Nile  Tilapia ( Oreochromis niloticus ). Zagazig Veterinary Journal , 46(1), 25-36.
Agustini, T. W., Suzery, M., Sutrisnanto, D., Ma’ruf, W. F., & Hadiyanto. (2015). Comparative Study of Bioactive  Substances  Extracted  from  Fresh  and  Dried Spirulina sp. Procedia  Environmental Sciences , 23, 282 – 289. doi: 10.1016/j.proenv.2015.01.042
Chaiklahan, R., Chirasuwan, N., Triratana, P., Loha, V., Tia, S., & Bunnag, B.  (2013). Polysaccharide Extraction  from Spirulina sp.  and  Its  Antioxidant  Capacity. International  Journal  of  Biological Macromolecules , 58, 73 – 78. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2013.03.046 Cheban, L., Khudyi, O., Prusińska, M., Duda, A., Khuda, L., Wiszniewski, G. , Kushniryk, O., & Kapusta, A.
(2020).  Survival,  Proximate  Composition,  and  Proteolytic  Activity  of Artemia  salina Bioencapsulated with Different Algal Monocultures. Archives of Polish Fisheries , 28(4), 205 – 215. doi: 10.2478/aopf-2020-0025
Chen, H.W., Yang, T.S., Chen, M.J., Chang, Y.C., Wang, E.I.C., Ho, C.L., Lai, Y.J., Yu, C.C., Chou, J.C., Chao, L.K.P., & Liao, P.C. (2014). Purification and Immunomodulating Activity of C-Phycocyanin from Spirulina platensis Cultured Using Power Plant Flue Gas. Process Biochemistry , 49(8), 1337 – 1344. doi: 10.1016/j.procbio.2014.05.006
Farooqi, F.S., & Qureshi, W.U. (2018). Immunostimulants for Aquaculture Health Management. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry , 7(6), 1441-1447
Fernández, R.G. (2001). Artemia Bioencapsulation I. Effect of Particle Sizes on The Filtering Behavior of Artemia  franciscana . Journal  of  Crustacean  Biology ,  21(2),  435 – 442.  doi:  10.1163/20021975- 99990144
Gabr, G.A., El-Sayed,  S.M., &  Hikal, M.S.  (2020).  Antioxidant  Activities of  Phycocyanin:  A Bioactive Compound from Spirulina platensis. Journal of Pharmaceutical Research International , March, 73 – 85. doi: 10.9734/jpri/2020/v32i230407
Grover, P., Bhatnagar, A., Kumari, N., Narayan Bhatt, A., Kumar Nishad, D., & Purkayastha, J. (2021). C-Phycocyanin  A  Novel  Protein  from Spirulina  platensis In  Vivo  Toxicity,  Antioxidant  and Immunomodulatory  Studies. Saudi  Journal  of  Biological  Sciences ,  28(3),  1853 – 1859.  doi:
10.1016/j.sjbs. 2020.12.037
Guridi, A., Sevillano, E., De La Fuente, I., Mateo, E., Eraso, E., & Quindós, G. (2019). Disinfectant Activity of  A  Portable  Ultraviolet  C  Equipment.  I nternational  Journal  of  Environmental  Research  and Public Health , 16(23), 4747. doi: 10.3390/ijerph16234747
Immanuel,  G.  (2016).  Bioencapsulation  of  Brine  Shrimp Artemia  nauplii with  Probionts  and  Their Resistance against Vibrio Pathogens. Journal of Fisheries and Aquatic Science , 11(4), 323 – 330. doi: 10.3923/jfas.2016.323.330
Istiqomah, I., Sukardi, Murwantoko, & Isnansetyo, A. (2020). Review Vibriosis Management in Indonesian Marine Fish Farming. E3S Web of Conferences , 147, p.01001. doi: 10.1051/e3sconf/202014701001 Kouba,  A.,  Hamáčková,  J.,  Buřič ,  M.,  Policar,  T.,  &  Kozák,  P.  (2011).  Use  of  Three  Forms  of
Decapsulated  Artemia  Cysts  as  Food  for  Juvenile  Noble  Crayfish  ( Astacus  astacus ). Czech Journal of Animal Science , 56(3), 114 – 118. doi: 10.17221/1301-cjas Li, J., Zhang, Y., Yang, S., Lu, Z., Li, G., Liu, J., Zhou, B., Wu, D., & Wang, L. (2021). Isolation, Purification, Characterization, and Immunomodulatory Activity Analysis of α -Glucans from Spirulina platensis. ACS Omega , 6(33), 21384 – 21394. doi: 10.1021/acsomega.1c02175 Meshkat-Roohani, A., Fallahi Kapoorchali, M., Abedian Kenari, A., Sayyad Borani, M., & Zorriezahra,
M.  J.  (2020).  Hematite-Biochemical  and  Immune  Response  of  Caspian  Brown  Trout  ( Salmo troutta Caspius,  Kessler,  1877)  Juveniles  Fed  Different  Levels  of  Spirulina  ( Spirulina  platensis ). Iranian Journal of Fisheries Sciences , 19(3), 1153 – 1174. doi: 10.22092/ijfs.2019.119703 Muchtar,  M.,  Sukenda,  S.,  Nuryati,  S.,  &  Hidayatullah,  D.  (2019).  The  Use  of  Immunostimulant  from Phycocyanin of Spirulina platensis to Control Motile Aeromonad Septicaemia (MAS) Disease in Common  Carp Cyprinus  carpio . Jurnal  Akuakultur  Indonesia ,  18(1),  101 – 109.  doi: 10.19027/jai.18.1.101-109 Prusińska, M., Kushniryk, O., Khudy i, O., Khuda, L., & Kolman, R. (2015). Impact of Enriching Larval Brine Shrimp ( Artemia sp.) with A Supplement Containing Polyunsaturated Fatty Acids on Their Growth and Mortality. Archives of Polish Fisheries , 23(3), 149 – 154. doi:10.1515/aopf-2015-0017 Ragap, H.M., Khalil, R.H., & Mutawie, H.H. (2012). Immunostimulant Effects of Dietary Spirulina platensis on Tilapia Oreochromis niloticus. Journal of Applied Pharmaceutical Science , 2(2), 26 – 31. Resmawati,  M.B.  (2016).  Pemberian  Ekstrak  Air  Panas Spirulina  platensis melalui  Perendaman Terhadap  Total  Leukosit,  Indeks  Fagositosis  dan  Konsentrasi  TNF- α Osphronemous  gouramy . Jurnal Biosains Pascasarjana , 18(3), 183-190. doi: 0.20473/jbp.v18i3.2016.183-190 Riccio, G., & Lauritano, C. (2020). Microalgae with Immunomodulatory Activities. Marine Drugs , 18(1): doi: 10. 3390/md18010002
Roiha,  I.S.,  Otterlei,  E.,  &  Samuelsen,  O.B.  (2010).  Bioencapsulation  of  Florfenicol  in  Brine  Shrimp, Artemia  franciscana Nauplii. Journal  of  Bioanalysis  and  Biomedicine ,  2(3),  60 – 64.  doi: 10.4172/1948-593X.1000023
Rudtanatip,  T.,  Boonsri,  B.,  Praiboon,  J.,  &  Wongprasert,  K.  (2019).  Bioencapsulation  Efficacy  of Sulfated  Galactans  in  Adult Artemia  salina for  Enhancing  Immunity  in  Shrimp Litopenaeus vannamei . Fish and Shellfish Immunology , 94, 90 – 98. doi: 10.1016/j.fsi.2019.08.065 Satyantini, W., Agustono, A., Arimbi, A., Sabdoningrum, E., Budi, M., & Asmi, L. (2016). Peningkatan Respon Imun Non Spesifik Ikan Gurame Pascapemberian Ekstrak Air Panas Mikroalga Spirulina platensis. Jurnal Veteriner , 17(3): 347 – 354. doi: 10.19087/jveteriner.2016.17.3.347
Sedjati, S., Ambariyanto, A., Trianto, A., Supriyantini, E., Ridlo, A., Bahry, M.S., Wismayanti, G., Radjasa,
O.K., & McCauley, E. (2020). Antibacterial Activities of the Extracts of Sponge-Associated Fungus Trichoderma  longibrachiatum against  Pathogenic  Bacteria. Squalen  Bulletin  of  Marine  and Fisheries Postharvest and Biotechnology , 15(2), 81-90. doi: 10.15578/ squalen.v15i2.438 Sedjati, S., Yudiati, E., & Suryono, S. (2012). Profil Pigmen Polar dan Non Polar Mikroalga Laut Spirulina sp. dan Potensinya sebagai Pewarna Alami. Ilmu Kelautan , 17, 5 – 8. Suyanto, E., Rahman, Y.S., & Murwantoko, M. (2019). Pengaruh Pakan Bioenkapsulasi Artemia salina dengan Spirulina platensis Terhadap Tingkat Kelangsungan Hidup Benih Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ). Biotropika: Journal of Tropical Biology , 7 (2), 75-81.
Wee, S., Loong, S., Ng, N.S.R., & Cabana, F. (2021). Artemia as A Sustainably Cultured Live Feed for Ornamental  Fish  in  Zoological  Institutions  with  Immunostimulant  Properties  when Bioencapsulated  with  Spirulina Arthrospria  platensis. Jzar ,  9(2),  110 – 115.  doi:  10.19227/jzar. v9i2.546
Wu, X., Liu, Z., Liu, Y., Yang, Y., Shi, F., Cheong, K. L., & Teng, B. (2020). Immunostimulatory Effects of Polysaccharides from Spirulina platensis In Vivo and Vitro and Their Activation Mechanism on RAW246.7 Macrophages. Marine Drugs , 18(11), 538. doi: 10.3390/md18110538
Yudiati,  E.,  Sedjati,  S  ,  Azhar,  N.,  Oktarima,  W.A.,  &  Arifin,  Z.  (2021).  Spirulina  Water  Extract  and Lactobacillus  bulgaricus FNCC – 0041, Streptococcus  thermophilus FNCC – 0040 secretion as Immunostimulants  In  Gnotobiotic  Artemia  Challenge  Tests  against  Pathogenic Vibrio parahaemolyticus,  V.  vulnificus, and V.  harveyi . IOP  Conf.  Series:  Earth  and  Environmental Science, 890, 012018. doi: 10.1088/1755-1315/890/1/0120 18