UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL LIMBAH KULIT BUAH APEL (Malus domestica Borkh.) TERHADAP RADIKAL BEBAS DPPH (2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazil)
Submitted : 17 Mei 2016
Edited : 19 Mei 2016 Accepted : 25 Mei 2016
Ratih Dyah Pertiwi 1,3 , Cut Ervinar Yari 2,3 , Nanda Franata Putra 3
1 Jurusan Kesehatan Masyarakat , Fakultas Imu ilmu Kesehatan, Universitas Esa Unggul, Jakarta
2 Jurusan Anafarma, Fakultas Kesehatan Universitas MH Thamrin, Jakarta
3 Akademi Farmasi Hang Tuah, Jakarta Email : rpertiwy@yahoo.com

## ABSTRACT
Recently, many plants have not been utilized properly, one of those is apple plant. There are several types of apples which are widely consumed and used as processed products, among others,  as  candied  apples,  syrup  and  fruit  juice.  The  effluent  from  the  process  in  the  form  of processed peel and pulp is not only used as a substitute for animal feed and fertilizer plants, but also  used  as  a  natural  antioxidant  that  is  needed  by  the  human  body  against  various  free radical. Most of the people who like to consume apples prefer to discard the apple peel without using  it.  Apple  peel  contains  quercetin  substances,  which  needed  to  increase  the  levels  of antioxidants. The preparation of ethanol extract from apple peels waste is used by maceration method using solvent 70% ethanol. To test the antioxidant activity towards free radical DPPH the extract was made into several concentrations, namely 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm and 60  ppm,  and  than  mixed  with  a  solution  of  DPPH  with  concentration  of  100  ppm.  The absorbance  was  measured  using  a  spectrophotometer  UV-Visible.  Based  on  the  result  of  the research, the percentage of reduction obtain from those of extract concentrations were 8.580%, 14.510%,  21.653%,  26.685%  and  34,232%.  From  percentage  reduction  result,  it  was  obtain IC 50 in  the  amount  of  87.795  ppm.  Based  on  the  IC 50 values  can  be  conclud that  the  ethanol extract of apple peel waste has strong antioxidant activity classification.

## K eywords : Antioxidant Activity, Apple Peel Waste, DPPH

## PENDAHULUAN
Banyak  buah ataupun  bagian  dari tanaman  yang  sampai  saat  ini  belum dimanfaatkan dengan baik, termasuk pengolahan  limbah atau  kulit dari  buah tersebut. Tanaman  apel  merupakan  salah satu  jenis  tanaman  buah  yang banyak  dan mudah  tumbuh  di  daerah  tropis  termasuk Indonesia,  diantaranya  di  daerah  Batu
(Malang), Pasuruan, Lumajang dan beberapa dataran  tinggi  yang  tidak  banyak  berkabut. Ada  beberapa  jenis  buah  apel  yang  banyak dikonsumsi,  sedangkan  beberapa  lainnya digunakan  sebagai  produk  olahan,  antara lain  sebagai  buah  kaleng,  "manisan  apel", sirup, jus dan sari buah. Buangan dari proses olahan yang berupa kulit dan ampas, selama
ini hanya digunakan sebagai substitusi pakan ternak dan pemupukan tanaman (1) .
Pada dasarnya limbah kulit buah apel tidak  hanya  digunakan  sebagai  substitusi pakan ternak dan pemupukan tanaman, akan tetapi  limbah  kulit  buah  apel  juga  dapat digunakan  sebagai  bahan  antioksidan  alami yang sangat dibutuhkan oleh tubuh terutama pada  kulit untuk  melawan  berbagai  radikal bebas  dari  luar.  Sebagian  besar  masyarakat yang  gemar  mengkonsumsi  buah  apel  lebih suka  mengupas  kulitnya  dan  membuang kulit buah
apel tersebut
tanpa memanfaatkannya.
Berdasarkan hasil  isolasi  senyawa dalam  kulit  apel,  diperoleh  senyawa  19  dan senyawa 20 yaitu senyawa berbentuk bubuk kuning  pucat  yang  diidentifikasi  sebagai 3,5,7,3 ‘, 4’ pentahydroxy -flavonol-3-0- β -D- galactopyranoside yang identik dengan data yang  dilaporkan  dalam literatur merupakan quercetin-3-0- β -D-galactopyranoside dan quercetin-3-0- β -D-glucapyranoside (2) .
Kulit  apel  mengandung  kuersetin  zat yang  dibutuhkan  guna  meningkatkan  kadar antioksidan guna mencegah berbagai macam penyakit. Hasil penelitian menyatakan bahwa hanya kulit apel, buah yang memiliki kuersetin.  Itu  sama  artinya  apel  mampu menyediakan  antioksidan  setara  1.500  mg vit.  C  dari  ekstrak  apel  segar  dari  apel ukuran medium (3) .
Kuersetin merupakan golongan senyawa  flavonol  yang  paling  banyak terdapat  di alam  dari  pada  jenis  flavonoid yang  lain.  Kuersetin  terdapat  di  buah  apel yang  berfungsi  sebagai  antioksidan  dan  anti aging (4) .
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas, maka diadakan penelitian dengan judul “Uji
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Limbah Kulit  Buah  Apel  (Malus  domestica Borkh.)  Terhadap  Radikal  Bebas  DPPH (2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazil) Secara
Spektrofotometri  UV- Visibel”,  sehingga
dapat diketahui bahwa manfaat limbah kulit
apel  tersebut  dapat  dijadikan  antioksidan alami  yang  dapat  melawan berbagai  radikal bebas.

## BAHAN DAN METODE PENELITIAN Alat
Wadah Maserator, Rotary Evaporator, Spektrofotometer UV-Visibel, Kompor/
Penangas, Labu  ukur, Vial, Mikro  Pipet, saringan, Bola Karet, Aluminium Foil, TLC
Sillica Gel 60 F 254, Bak Kromatografi

## Bahan
Limbah  Kulit  Buah  Apel  (Malus domestica Borkh.),  Etanol  70%,  Metanol p.a,  DPPH  (2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazil), Blanko  Positif  Kuersetin  Standar (Sigma Aldrich),  NaOH  1N,  HCl  2N,  HCl  Pekat, Kloroform

## Metode
Pembuatan  Ekstrak  Limbah  Kulit Buah Apel 1. Siapkan alat dan bahan.
2. Timbang  Limbah  kulit  buah  apel  yang telah  dikeringkan  sebanyak  500  gram masukkan  ke  dalam  wadah  proses ekstraksi.
3. Tambahkan  etanol  70%  ke  dalamnya sampai  semua  simplisia  terendam, kemudian  tutup  dengan  aluminium  foil dan biarkan selama 4 hari.
4. Saring sampai di dapat maserat 1.
5. Ampas  dimasukkan  kembali  kedalam wadah  proses  ekstraksi  dan  tambahkan etanol  70%  sampai  semua  simplisia terendam, kemudian tutup dengan aluminium  foil  dan  biarkan  selama  3 hari.
6. Saring  kembali  sampai  didapat maserat
2.
7. Kumpulkan maserat 1 dan 2 dan uapkan maserat  tersebut  dengan  alat  rotavapor dan  kompor/penangas,  sehingga  di peroleh  hasil  ekstrak  kental  Limbah kulit buah apel.
Identifikasi Senyawa Flavonoid dalam
Ekstrak  Limbah  Kulit  Buah  Apel  Secara Kimia Kualitatif (5) .
1. Timbang  ekstrak  kental  limbah  kulit buah  apel  sebanyak  1  gram,  kemudian masukkan ke dalam erlenmeyer.
Tambahkan  1  mL  sampai  2  mL  etanol (95%) P, kemudian aduk hingga larut.
2. Saring filtrat menggunakan kertas saring.
3. Ukur  filtrat  sebanyak  1  mL, kemudian masukkan ke dalam cawan uap.
4. Tambahkan 0.05 gram serbuk seng p.a.
5. Tambahkan  2  mL  HCl  2N,  kemudian diamkan selama 1 menit.
6. Tambahkan  10  tetes  HCl  pekat  P, kemudian  diamkan  selama  beberapa menit.
7. Jika  dalam  waktu  2  sampai  5  menit terjadi  warna  jingga  sampai  warna merah  intensif,  menunjukkan  adanya flavonoid (glikosida-3-flavonol).
8. Setelah  terjadi  perubahan  warna  jingga sampai warna merah intensif, pindahkan larutan  uji  kedalam  tabung  reaksi  agar warna lebih mudah diamati.
Identifikasi senyawa Flavonol golongan  Flavonoid  dalam  Ekstrak  Limbah
Kulit Buah Apel Secara Kimia Kualitatif (4) .
1. Timbang  ekstrak  kental  limbah  kulit buah  apel  sebanyak  1  gram,  kemudian masukkan ke dalam erlenmeyer.
2. Tambahkan  1  mL  sampai  2  mL  etanol (95%) P, kemudian aduk hingga larut.
3. Saring filtrat menggunakan kertas saring.
4. Ukur  filtrat  sebanyak  1  mL,  kemudian masukkan ke dalam tabung reaksi.
5. Tambahkan  1  mL  sampai  2  mL Amyl alcohol,  kemudian  diamkan  selama  5 menit.
6. Tambahkan 10 tetes NaOH 1N.
7. Terjadi  warna  kuning  intensif  pada lapisan Amyl  alcohol menunjukkan adanya Flavonol.
Identifikasi  senyawa  Kuersetin  dalam ekstrak  Limbah  Kulit  Buah  Apel  Secara Kromatografi Lapis Tipis
1. Timbang  10  mg  Kuersetin  Standar masukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  mL dan  tambahkan  metanol  p.a  hingga tanda  batas,  tandai  sebagai  larutan pembanding kuersetin standar.
2. Timbang  10  mg  ekstrak  kental  limbah kulit  buah  apel  masukkan  ke  dalam labu  ukur  10  mL  dan  tambahkan metanol  p.a  hingga  tanda  batas,  tandai sebagai larutan uji.
3. Jenuhkan bak kromatografi menggunakan metanol p.a sebanyak 10
mL  kemudian  masukkan  kertas  saring ke dalam bak kromatografi lalu tunggu hingga bak kromatografi jenuh yang di tandai  dengan  basahnya  kertas  saring yang  ada  di  dalam  bak  kromatografi tersebut.
4. Pembuatan  eluen  (Fase  gerak)  yaitu Kloroform  :  Metanol  p.a  (9  :  1) masukkan ke dalam bak kromatografi.
5. Siapkan  (Fase  diam)  yaitu  lempeng kromatografi  Sillica  Gel  60  F 254 lalu totolkan larutan pembanding dan
larutan uji, kemudian masukkan lempeng  kromotografi ke  dalam  bak kromotografi.
6. Setelah  terjadinya  rambatan  pada lempeng  kromotografi  lihat  rambatan noda  pada  lampu  UV  pada  panjang gelombang  254  nm,  kemudian  tandai noda  yang  merambat  dan  hitung  nilai Rf dari rambatan noda tersebut.
Uji Aktivitas Antioksidan menggunakan  metode DPPH (2,2-Diphenyl-
1-Picrylhydrazil) (6).

## 1. Pembuatan  Larutan  Induk  DPPH  (2,2-
Diphenyl-1-Picrylhydrazil)
a. Siapkan alat dan bahan.
b. Timbang  dengan  seksama  kurang lebih 10,0 mg DPPH (2,2- Diphenyl-1- Picrylhydrazil).
c. Masukkan ke dalam botol berwarna gelap 100,0 mL. d. Tambahkan  dengan  metanol  p.a
hingga tanda batas sehingga didapatkan  larutan  DPPH  dengan konsentrasi 100 ppm. 2. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum  DPPH  (2,2-Diphenyl-1- Picrylhydrazil)
a. Siapkan alat dan bahan.
b. Dari  larutan  induk  tersebut,  dipipet sebanyak  1  mL  DPPH,  masukkan kedalam  vial  dan  tambahkan  3  mL metanol p.a.
c. Kocok hingga homogen menggunakan vortex selama  10 detik. d. Masukkan  ke  dalam  inkubator
bersuhu 370C selama 30 menit.
e. Tentukan panjang gelombang menggunakan spektrofotometer UV-Visibel pada panjang gelombang  (λ)  400  nm  hingga  800 nm. 3. Pembuatan  Larutan  Induk  Blanko
Positif Kuersetin
a. Siapkan alat dan bahan.
b. Timbang  kuersetin  sebanyak  10,0 mg  dan  masukkan  kedalam  labu ukur  10  mL,  kemudian  tambahkan metanol  p.a  hingga  tanda  batas  10 mL  sehingga  diperoleh  konsentrasi 1000 ppm.
c. Dari  larutan  induk  tersebut,  dibuat konsentrasi 2 ppm, 4 ppm, 10 ppm, 20  ppm,  dan  30  ppm  dengan memipet  masing- masing  10  μL,  20 μL,  50  μL,  dan  150  μL  dan tambahkan  metanol  p.a  hingga tanda batas 5 mL lalu kocok hingga homogen  kemudian  masukkan  ke dalam vial. 4. Pengujian Aktivitas Antioksidan Blanko Positif Kuersetin a. Siapkan alat dan bahan.
b. Ukur  masing – masing  larutan  uji kuersetin  sebanyak  1,0  mL  dan masukkan ke dalam vial.
c. Kemudian masing-masing vial ditambahkan 1,0 mL larutan DPPH (2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazil) dan 2,0 mL metanol p.a.
d. Masukkan  ke  dalam  inkubator bersuhu  370C  selama  30  menit, lakukan sebanyak 3 kali (triplo).
e. Serapan larutan uji diukur menggunakan spektrofotometer UV-Visibel dengan rentang absorban (λ) 400 nm – 800 nm. 5. Pembuatan  Larutan  Sampel  (Ekstrak
Limbah Kulit Buah Apel)
a. Timbang  ekstrak  kulit  buah  apel sebanyak  10,0  mg  dan  masukkan kedalam labu ukur 10 mL,
kemudian  tambahkan  metanol  p.a hingga tanda batas 10 mL sehingga diperoleh konsentrasi 1000 ppm.
b. Siapkan labu terukur 5 mL sebanyak tujuh buah.
c. Sampel  dipipet  dengan  sejumlah volume  tertentu  yaitu  50  μL,  100
μL,  150  μL,  200  μL,  300  μL  dan
masukkan kedalam masing – masing  labu  ukur  5  mL,  kemudian masukkan ke dalam vial. d. Masing-masing sampel
ditambahkan  metanol  p.a  sampai tanda  batas  yaitu  5  mL  sehingga dihasilkan  larutan  sampel  dengan beberapa konsentrasi yaitu 10 ppm,
20 ppm, 30 ppm, 40 ppm, 60 ppm.
6. Pengujian Aktivitas Antioksidan Ekstrak Limbah Kulit Buah Apel
a. Ukur  masing-masing  larutan  uji sebanyak 1,0 mL dan masukkan ke dalam vial.
b. Tambahkan  1,0  mL  larutan  DPPH (2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazil) dan 2,0 mL metanol p.a.
c. Masukkan  ke  dalam  inkubator bersuhu  370C  selama  30  menit,
lakukan sebanyak 3 kali (triplo). d. Serapan larutan uji diukur menggunakan spektrofotometer UV-Visibel dengan rentang absorban (λ) 400 nm – 800 nm.

## Analisa Data
Pengukuran Serapan Sampel
Dari  data  absorbansi  yang  didapat kemudian dihitung persentase inhibisi sampel  dan  Vitamin  C  terhadap  radikal bebas DPPH. Nilai IC 50 dihitung dari masing – masing konsentrasi larutan sampel dengan rumus sebagai berikut (7) :
Persentase Inhibisi =
100%
Setelah  didapatkan  persentasi inhibisi dari masing – masing konsentrasi, kemudian ditentukan  persamaan  y  =  a  +  bx  dengan perhitungan secara regresi linier dimana : x : konsentrasi (µg/ml). y : persentase inhibisi (%).
Aktivitas antioksidan dinyatakan dengan Inhibition Concentration 50% (IC 50 ) yaitu  konsentrasi  sampel  dapat  meredam radikal  DPPH  sebanyak  50%.  Nilai  IC 50 didapatkan dari nilai x setelah mengganti y = 50.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstraksi
Ekstrak  limbah  kulit  buah  apel  didapat melalui  proses  maserasi.  Dari  500  gram limbah kulit buah apel yang telah dikeringkan  kemudian  di  maserasi  dengan etanol  70%  selama  3x24 jam  dan  dilakukan secara  duplo  (2  kali),  sehingga  diperoleh 153.78  gram  ekstrak  kental  limbah  kulit buah  apel,  dengan  warna  cokelat  tua  dan berbau  khas  sebagaimana  tertera  pada  tabel
1. Rendemen yang dihasilkan yaitu 30,74 % (tabel 1)

## Tabel 1. Klasifikasi Ekstrak etanol Limbah

## Kulit Buah Apel
Berat Simplisia Limbah Kulit Buah Apel (gram) Hasil Ekstrak Etanol (gram) Organoleptis Warna Bau 500 153.78 Cokelat Tua Khas Limbah  kulit  buah  apel  (Malus domestica Borkh.) dikeringkan agar kandungan  airnya  berkurang  supaya  tidak mengganggu  proses  ekstraksi,  kemudian  di blender  kasar  agar menstrum atau  cairan penyari  mudah  masuk  kedalam  pori-pori yang  kosong  dan  melarutkan  zat  yang  larut. Simplisia  yang  telah  di  blender  kasar dimaserasi  dengan  menggunakan menstrum atau  cairan  penyari  berupa  campuran  etanol dengan air. Etanol 70% merupakan campuran dari  70%  etanol  96%  dan  30% akuades.  Etanol  70%  digunakan  untuk menarik  kandungan  kimia  yang  terdapat dalam simplisia agar didapatkan bahan aktif yang optimal, dimana hanya terdapat sedikit pengotor yang ikut dalam cairan penyari (8) .
Metode  ekstraksi  yang digunakan yaitu  ekstraksi  dingin  secara  maserasi. Metode ini dipilih karena merupakan metode yang  paling  sederhana,  alatnya  mudah didapatkan,  dan  tidak  merusak  kandungan senyawa  yang  tidak  tahan  panas.  Prinsip maserasi  adalah  dengan  cara  merendam bahan  uji dalam  cairan  penyari  sampai meresap  dan  melunakkan  susunan  sel sehingga zat-zat yang terkandung didalamnya mudah tersari dengan baik (9) .
Pada penelitian ini digunakan cairan penyari  etanol  70%  yaitu  merupakan campuran  dari  70%  etanol  96%  dan  30%
akuades karena ekonomis, mudah
didapatkan,  serta  berfungsi  untuk  mencegah pertumbuhan  kuman  dan  kapang,  karena kapang  sulit  tumbuh  pada  etanol  70%  ke atas,  selain  itu  tidak  beracun,  netral, absorbsinya baik, dan etanol dapat bercampur  baik  dengan  air  pada  segala perbandingan serta tidak memerlukan pemanasan  yang  tinggi.  Etanol  merupakan pelarut  yang  bersifat  polar  dan  flavonoid juga  senyawa  yang  bersifat  polar.  Dengan merendam  simplisia  limbah  kulit  buah  apel dalam  pelarut  ini,  diharapkan  senyawa antioksidan  dari  jenis  flavonoid  dapat  larut dengan baik didalamnya (9) .
Etanol yang ada pada ekstrak dihilangkan dengan menggunakan Rotavapor (Rotary Evaporator). Hasil ekstraksi  dari  500  gram  simplisia  limbah kulit buah apel menghasilkan ekstrak kental sebesar 153.78 gram. Setelah didapat jumlah ekstrak  kental  dilakukan  perhitungan  persen rendemen  ekstrak  dengan  membagi  jumlah ekstrak  dengan  bobot  simplisia.  Dari  hasil perhitungan persen rendemen yang dihasilkan yaitu sebesar 30.74%.
Identifikasi  Senyawa  Kimia  Flavonoid dan  Flavonol  Dalam  Simplisia  Dan Ekstrak Limbah Kulit Buah Apel (Malus domestica Borkh.)

## Secara Kimia Kualitatif
Hasil  Identifikasi  senyawa  kimia flavonoid  dan  flavonol  dalam  simplisia  dan ekstrak  limbah  kulit  buah  apel  yang dilakukan secara kimia kualitatif, menunjukkan  hasil  larutan  berwarna  merah menandakan  adanya  zat  flavonoid  pada simplisia  dan  ekstrak  etanol  limbah  kulit buah apel.
Identifikasi
flavonol menunjukkan  hasil  kuning  pada  lapisan
Amyl  alcohol
menandakan  adanya  zat flavonol  pada  simplisia  dan ekstrak  etanol
limbah  kulit  buah  apel.  Hasil  identifikasi dapat dilihat  pada  tabel.2. Identifikasi senyawa  kimia  flavonoid  dan  senyawa flavonol  golongan  flovonoid  pada  simplisia limbah  kulit  buah  apel  (Malus  domestica Borkh.)    dilakukan  secara identifikasi  kimia kualitatif.  Identifikasi  senyawa  flavonoid digunakan  pereaksi  yaitu Zinc  powder p.a, Asam  Klorida  (HCl)  2N  dan  Asam  Klorida (HCl)  pekat.  Identifikasi  senyawa  flavonol golongan  flavonoid  digunakan  pereaksi yaitu Amyl alcohol, dan Natrium Hidroksida (NaOH) 1N.
Pada  proses  identifikasi  senyawa kimia  simplisia  terlebih  dahulu  diserbukkan hingga  halus  kemudian  di  masukkan  ke dalam  labu  ukur  100  mL  kemudian tambahkan  etanol  96%  lalu  kocok  selama  5 menit. Pengocokan selama 5 menit
dilakukan berdasarkan hasil optimasi dimana  5  menit  adalah  waktu  yang  ideal dalam  melarutkan  simplisia,  pengocokkan selama  5  menit  diharapkan  senyawa  kimia yang akan di identifikasi khususnya senyawa flavonoid  dan  senyawa  flavonol  dapat  larut dalam  etanol    tersebut,  setelah  di  kocok selama 5 menit filtrat disaring menggunakan kertas  saring  supaya  ampas  simplisia  dapat terpisah  dengan  filtrat  sehingga  hanya sedikit  pengotor  yang  dapat  mengganggu proses  identifikasi.  Identifikasi  senyawa flavonoid  pada  simplisia  di  dapatkan  hasil larutan berwarna merah namun warna merah tersebut  tidak  terlalu  terlihat  intensif dikarenakan pada waktu proses pengocokkan yang kurang maksimal sehingga  hanya  sedikit  senyawa  flavonoid yang  larut  dalam  pelarutnya  serta  pada  saat identifikasi  terdapat  pengotor  atau  zat-zat lain yang ikut teridentifikasi saat ditambahkan  pereaksi.  Hasil  identifikasi dapat dilihat pada gambar 1.

## Tabel 2. Hasil Uji Identifikasi Senyawa Flavonoid Dan Flavonol
No. Identifikasi Prosedur Hasil 1. Flavonoid Simplisia  +  Etanol  Saring  +  50  mg  Zinc p.a + 2 mL HCl 2N + 10 tetes HCl Pekat  Diamkan beberapa menit Larutan Warna Merah Flavonol Simplisia  +  Etanol  Saring  +  2  mL Amyl alcohol  diamkan  selama  5  menit  +  10 tetes NaOH 1N Kuning  Pada  Lapisan Amyl alcohol 2. Flavonoid Ekstrak + Etanol  Saring + 50 mg Zinc p.a +  2  mL  HCl  2N  +  10  tetes  HCl  Pekat  Diamkan beberapa menit Larutan Warna Merah Flavonol Ekstrak  +  Etanol  Saring  +  2  mL Amyl alcohol  diamkan  selama  5  menit  +  10 tetes NaOH 1N Kuning  Pada  Lapisan Amyl alcohol Gambar 1. Hasil  Indentifikasi  senyawa flavonoid pada simplisia limbah  kulit  buah  apel (a) sebelum ditambah  pereaksi (b) sesudah ditambah pereaksi Identifikasi senyawa flavonol
golongan  flavonoid  pada  simplisia  setelah filtrat  disaring  dilakukan  penambahan Amyl alcohol dengan  tujuan  agar  senyawa flavonol  dapat  teridentifikasi  yang  ditandai dengan  warna  kuning  pada  lapisan Amyl alcohol,  pada  identifikasi  senyawa  flavonol golongan  flavonoid  ini  didapatkan  hasil warna  kuning  pada  lapisan Amyl  alcohol. Hasil  identifikasi  dapat  dilihat pada  gambar 2.
Gambar 2. Hasil  Indentifikasi  senyawa flavonol pada  simplisia  limbah kulit  buah apel (a)  sebelum
ditambah  pereaksi  (b)  sesudah ditambah pereaksi
Identifikasi  senyawa  flavonoid  dan senyawa  flavonol  golongan  flavonoid  pada ekstrak etanol limbah kulit buah apel (Malus domestica Borkh.)  dilakukan  secara  kimia kualitatif. Identifikasi  senyawa  flavonoid pada  ekstrak  digunakan  pereaksi  yang  sama seperti identifikasi pada simplisia yaitu Zinc powder p.a,  Asam  Klorida  (HCl)  2N  dan Asam Klorida (HCl) pekat. Untuk
identifikasi  senyawa  flavonol  golongan flavonoid  juga  digunakan  pereaksi  yang sama seperti identifikasi pada simplisia yaitu
Amyl  alcohol,  dan  Natrium  Hidroksida (NaOH)  1N.  Untuk  identifikasi  senyawa flavonoid maupun senyawa flavonol
golongan  flavonoid  pada  ekstrak  dilakukan perbedaan  pada  pembuatan  filtrat  dengan identifikasi pada simplisia, untuk pembuatan filtrat  ekstrak  terlebih  dahulu  dilarutkan menggunakan etanol 96% kemudian disaring  menggunakan  kertas  saring  supaya hanya sedikit pengotor atau zat-zat lain yang dapat  mengganggu  proses  identifikasi. Identifikasi  senyawa  flavonoid  pada  ekstrak didapatkan hasil larutan berwarna merah dan larutan  tersebut  terlihat  lebih  intensif dibandingkan hasil identifikasi pada
simplisia,  hal  ini  dikarenakan  senyawa flavonoid  yang  larut  pada  saat  proses maserasi lebih banyak dibandingkan senyawa  flavonoid  yang  larut  saat  proses pengocokan selama 5 menit. Hasil identifikasi dapat dilihat pada gambar 3.
Gambar 3. Hasil  Indentifikasi  senyawa flavonoid  pada  ekstrak    limbah kulit  buah  apel    (a)  sebelum ditambah  pereaksi  (b)  sesudah ditambah pereaksi Identifikasi senyawa flavonol golongan flavonoid pada ekstrak didapatkan hasil  warna  kuning  pada  lapisan Amyl alcohol yang  juga  terlihat  lebih  intensif dibandingkan hasil identifikasi pada simplisia,  hal  ini  juga  dikarenakan  senyawa flavonoid  yang  larut  pada  saat  proses maserasi lebih banyak dibandingkan senyawa  flavonoid  yang  larut  saat  proses
pengocokkan selama 5 menit. Hasil identifikasi dapat dilihat pada gambar 4.
Gambar 4. Hasil  Indentifikasi  senyawa flavonol    pada  ekstrak    limbah kulit  buah  apel    (a)  sebelum ditambah  pereaksi  (b)  sesudah
ditambah pereaksi Secara Kimia Kuantitatif (Kadar Flavonoid) Dari  hasil  penelitian  yang  dilakukan dengan menggunakan metode spektrofotometri didapatkan kadar flavonoid sebesar  0.73  %.  Kadar  tersebut  didapat  dari hasil  pengujian  pada  ekstrak  kental  limbah kulit  buah  apel  sebanyak  1.0088  gram. Pengujian  kadar  flavonoid  dilakukan  di Kementrian  Pertanian,  Laboratorium  Balai Penelitian  Tanaman  Rempah  dan  Obat (BALITRO), Bogor, Jawa Barat.
1. Identifikasi  Senyawa  Kuersetin  Dalam
Ekstrak  Limbah  Kulit  Buah  Apel  Secara Kromatografi Lapis Tipis
Pada  hasil  identifikasi  senyawa
kuersetin  dalam  ekstrak  limbah  kulit buah apel secara kromatografi lapis tipis, dengan pengamatan kromatogram dibawah  sinar  UV  254  nm  terlihat  noda berwarna  kuning  yang  bisa  dipakai sebagai petunjuk positif adanya kuersetin.  Harga  Rf  sampel  sebesar  0.85 sedangkan  harga  Rf  kuersetin  standar sebesar  0.87.  Harga  Rf  yang  saling
mendekati menunjukkan bahwa di dalam ekstrak  limbah  kulit  buah  apel  terdapat kandungan senyawa kuersetin.
Pemeriksaan atau identifikasi senyawa  kuersetin  pada  ekstrak  etanol limbah kulit buah apel (Malus domestica Borkh.)  dilakukan  secara  Kromatografi Lapis Tipis  (KLT).  Pemeriksaan  ini dilakukan    bertujuan  untuk  mengetahui apakah  pada  ekstrak  etanol  limbah  kulit buah  apel  terdapat  senyawa  kuersetin atau  tidak.  Identifikasi  ini  menggunakan TLC  Silica  Gel  60  berflouresensi  pada panjang  gelombang  254  nm  sebagai fase diam  dikarenakan  lempeng  silica  gel tersebut dapat berflouresensi pada panjang  gelombang  254  nm  sehingga noda  akan  terlihat  jelas  pada  panjang gelombang  tersebut.  Eluen  atau  fase gerak  pada  identifikasi  ini  digunakan MeOH  dan  CHCl 3 dengan  perbandingan (9:1),  pemilihan  eluen  ini  dikarenakan mengingat  sifat  kelarutan  dari  senyawa kuersetin  tersebut.  Hasil  identifikasi senyawa  kuersetin  pada  ekstrak  secara Kromatografi  Lapis  Tipis  digunakan kuersetin  murni  sebagai  pembanding sekaligus  sebagai  penentuan  nilai  Rf standar  dari  senyawa  kuersetin  tersebut. Hasil  yang  didapat  yaitu  ditentukan melalui  perbandingan  nilai  Rf  pada kuersetin murni dan nilai Rf pada ekstrak etanol  limbah  kulit  buah  apel,  pada kuersetin  murni  didapatkan  nilai  Rf sebesar  0.87  dan  pada ekstrak  etanol limbah  kulit  buah  apel  didapatkan  nilai Rf  sebesar  0.85.  Perbedaan  nilai  Rf antara  kuersetin  standar  dan  nilai  Rf ekstrak  etanol  limbah  kulit  buah  apel yang tidak jauh berbeda dapat membuktikan  bahwa  pada  ekstrak  etanol limbah  kulit  buah  apel  terdapat  senyawa kuersetin.
2. Spektrum  atau  Panjang  Gelombang Maksimum DPPH
Hasil pengukuran spektrofotometer UV-Visibel  pada  panjang  gelombang maksimum larutan induk DPPH 100 ppm pada  rentang  panjang  gelombang  400- 800  nm,  berdasarkan  optimasi  yang dilakukan didapatkan panjang gelombang maksimal  adalah  515  nm  dengan absorbansi  tertinggi  yaitu  0.742.  Hasil spektrum atau panjang gelombang maksimum  DPPH  dapat  dilihat  pada gambar 5.

## Gambar 5. Hasil spektrum DPPH
3. Pengujian Aktivitas Antioksidan Kuersetin Standar
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan kuersetin  standar  yang  diukur  pada panjang  gelombang  515  nm  dalam berbagai  konsentrasi  dapat  dilihat  pada gambar 6, klasifikasi aktivitas
antioksidan dapat dilihat pada tabel 3.
4. Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Limbah  Kulit  Buah  Apel  (Malus domestica Borkh.)
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan ekstrak  etanol  limbah  kulit  buah  apel yang  diukur  pada  panjang  gelombang 515 nm dalam berbagai konsentrasi dapat dilihat  pada  gambar  6,  klasifikasi aktivitas antioksidan  dapat  dilihat  pada tabel 3.
Gambar 6. Grafik  rata-rata  %  peredaman Kuersetin  Standar  dan  Ekstrak Etanol Limbah Kulit Buah Apel 5. Menentukan Nilai Inhibition Concentration 50% (IC 50 ) Dari  hasil  pengujian  aktivitas antioksidan didapatkan persentase peredaman dari masing-masing bahan uji.
Setelah didapatkan persentase peredaman dari  masing-masing  bahan  uji,  tentukan nilai  IC 50 dari  masing-masing  bahan  uji. Hal  ini  diperoleh  dari  persamaan  regresi linier dari masing-masing bahan uji. Nilai IC 50 didapatkan  dari  nilai  x  setelah mengganti  y  =  50.  Hasil  persamaan regresi linier, nilai IC 50 dapat dilihat pada
tabel 4. Tabel 3. Klasifikasi Antioksidan Bahan Uji (6)
No. Nama Bahan Uji Klasifikasi Antioksidan Sangat Kuat Kuat Sedang Lemah 1. Kuersetin Standar 20.604 - - - 2. Ekstrak  etanol  limbah kulit buah apel - 87.795 - - Sangat kuat < 50 µg/mL Sedang : 100-150 µg/mL Kuat : 50-100 µg/mL Lemah : 151-200 µg/mL
Tabel 4. Persamaan  Linier  dan  IC 50 Kuersetin  standar  dan  Ekstrak  etanol  limbah  kulit  buah apel (Malus domestica Borkh.)
No. Nama Bahan Uji Persamaan Linier R IC 50 (µg/mL) 1. Kuersetin Standar y=1.3968x + 21.221 0.9788 20.604 2. Ekstrak etanol limbah  kulit  buah apel y=0.5174x + 4.5749 0.9902 87.795
0 20 40 60 80 0 100 Ra ta -r a ta % P er ed a m a n Konsentrasi ( μ g/mL) Querseti n Standar Sampel Ekstrak
Pemeriksaan aktivitas antioksidan ekstrak etanol limbah kulit buah apel (Malus domestica Borkh.) dilakukan dengan mengukur masing-masing konsentrasi larutan terhadap radikal bebas DPPH dengan menggunakan  Spektrofotometer  UV-Visibel pada  panjang  gelombang  maksimum  DPPH yang  telah  ditentukan  melalui  optimasi adalah  pada  panjang  gelombang  515  nm. Pengurangan  aktivitas  radikal  bebas  DPPH setelah  diberi  larutan  ekstrak  etanol  limbah kulit buah apel dapat dilihat dari warna yang dihasilkan.  Semakin  tinggi  konsentrasi larutan ekstrak etanol limbah kulit buah apel yang  diberikan,  maka  warna  ungu  yang dimiliki  DPPH  akan  semakin  berkurang hingga  dapat  berubah  warna  menjadi kuning.  Hal  ini  dapat  menentukan  aktivitas antioksidan  yang  terkandung  dalam  ekstrak etanol limbah kulit buah apel.
Pembanding  atau  kontrol  positif digunakan  kuersetin  standar  (PT.  Sigma- Aldrich).  Kuersetin  standar  merupakan antioksidan  alami  yang  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  sangat  kuat.  Konsentrasi dari  larutan kuersetin standar  yang  digunakan adalah 2 ppm, 4 ppm, 10 ppm, 20 ppm, dan 30  ppm,  pemilihan  konsentrasi  tersebut adalah  berdasarkan trial atau  percobaan yang  telah  dilakukan  terlebih  dahulu.    Nilai
Inhibition Concentration
50% (IC 50 ) kuersetin  standar  adalah  sebesar  20.604 μg/mL dengan klasifikasi antioksidan sangat kuat  karena  nilai Inhibition  Concentration 50%  (IC 50 )    kurang  dari  50  μg/mL.  Nilai
Inhibition Concentration 50% (IC 50 ) diperoleh  dari  perhitungan  regresi  linier yaitu  dengan  memasukkan  nilai  konsentrasi x  dan  persen  peredaman  sebagai  y. masukkan  ke  dalam  persamaan  y=  a  +  bx, lalu  faktor  y  diganti  dengan  nilai  50 sehingga diperoleh nilai x yang menunjukkan  nilai Inhibition  Concentration 50% (IC 50 ).
Konsentrasi  pada  larutan  ekstrak etanol  limbah  kulit  buah  apel  yang
digunakan adalah 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40  ppm,  60  ppm,    pemilihan  konsentrasi pada  sampel  juga  berdasarkan trial atau percobaan  yang  telah  dilakukan  terlebih dahulu.  Nilai Inhibition  Concentration 50% (IC 50 )  adalah  sebesar  87.795  μg/mL  dengan klasifikasi  antioksidan  kuat  karena  nilai Inhibition  Concentration 50%  (IC 50 )  berada diantara 50- 100 μg/mL 6 .
Perbedaan pada nilai Inhibition
Concentration 50%  (IC 50 )  antara  kuersetin standar dan ekstrak etanol limbah kulit buah apel dikarenakan pada ekstrak etanol limbah kulit  buah  apel  terdapat  pengotor  atau  zat- zat lain yang dapat mengganggu konsentrasi peredaman  terhadap  radikal  bebas  DPPH karena ekstrak etanol limbah kulit buah apel dibuat melalui proses maserasi dimana tidak hanya  zat-zat  atau  bahan  kimia  yang berkhasiat  sebagai  antioksidan  saja  yang larut  dalam  cairan  penyari,  akan  tetapi banyak  zat-zat atau  bahan  kimia  lain  yang tidak  berkhasiat  sebagai  antioksidan  yang ikut  larut  dalam  cairan  penyari  yang  dapat menggangu konsentrasi peredaman terhadap radikal  bebas  DPPH.  Perbedaan  nilai  IC 50 antara  kontrol  positif  kuersetin  standar  dan ekstrak  etanol  limbah  kulit  buah  apel  dapat diakibatkan oleh kemampuan masing- masing  senyawa  dalam    memberikan elektron  kepada  DPPH,  semakin  banyak elektron  yang  diberikan  kepada  DPPH  akan mengakibatkan penurunan nilai absorbansinya  yang  berarti  meningkatnya persen  inhibisi  dan  menurunnnya  nilai IC 50 (10) .
Antioksidan diharapkan memiliki ciri- ciri sebagai berikut, aman dalam penggunaan, tidak memberikan flavor, odor, warna  pada  produk  dan  efektif  pada konsentrasi  rendah,  serta  tahan  terhadap proses  pengolahan  produk  dan  memiliki kemampuan  antioksidan  yang  baik,  tersedia dengan harga murah (11) .  Limbah Kulit buah apel merupakan limbah yang memenuhi sifat sifat antioksidan tersebut diatas dimana kulit
buah  apel  aman  dalam  penggunaan  tidak memberikan  flavor,  odor,  warna  pada produk  dan  efetif  pada  konsentrasi  rendah yang dibuktikan dari hasil IC 50 yang rendah.

## SIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  uji  aktivitas antioksidan ekstrak etanol limbah kulit buah apel  yang  berdasarkan  pada  nilai Inhibition Concentration 50%  (IC 50 )  yaitu  sebesar 87.795  ppm dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak etanol limbah kulit buah apel (Malus
domestica Borkh.) memilki aktivitas antioksidan  terhadap  radikal  bebas  DPPH (2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazil)
dengan
klasifikasi  kuat Sifat-sifat  Antioksidan (Widjaja, S; 1659-1672)

## DAFTAR PUSTAKA
1. Subagyo,  P.,  dan  Achmad  Z,.  2010. Pemungutan  Pektin  Dari  Kulit  dan Ampas Apel Secara Ekstraksi. Yogyakarta  :  Universitas  Pembangunan
Nasional “Veteran” Yogyakarta.
2. He,  Xiangjiu  and  Hai,  Liu,  R.  2005. Fitokimia  Kulit  Apel  :  Isolasi,  Eludasi
Struktur,  Antiproliferase  Dan  Aktivitas Antioksidan. New York : Department Of Food Science And Institute Of Comparative, Cornell University.
3. Nurcahyati,  Erna.  2014. Khasiat  & Manfaat  Dahsyatnya  Kulit  Apel  Untuk Kesehatan  Dan  Penyembuhan.  Jakarta  : Jendela Sehat.
4. Wasim,  Farhan,  A.  2010. Isolasi  &
Identifikasi  Golongan  Flavonoid  Daun
Dendang Gendis ( Clinacanthus nutans).  Yogyakarta  :  Program  Studi Kimia,  Fakultas  MIPA,  Universitas Negeri Yogyakarta. 5. Anonim. 1995. Materia Medika Indonesia Jilid VI. Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 6. Harahap, P., Purnamasari. 2013. Pembuatan Dan Uji Aktivitas Antioksidan Nanopartikel Emas Menggunakan Gom Arab Sebagai
Penstabil.  Depok  :  Fakultas  Farmasi,
Universitas Indonesia.
7. Pertiwi,  R Dyah,  2014, Pembuatan, Karakterisasi,  Uji  Invitro  Dan    Invivo Nano  Partikel  Emas    Berbasis  Konjugat Gom  Arab-Vinkristin    (Aunp-Ga-Vcr) Sebagai  Obat  Terapi  Kanker  Terarah,
Fakultas  Frmasi, Universitas  Indonesia,
Jakarta
8. Voight,  R.  1984. Buku  Pelajaran Teknologi  Farmasi  Edisi  V.  Yogyakarta
: Media Presindo.
9. Nilza.  2009. Uji  Aktivitas  Antioksidan Fraksi  Etanol  Dan  Kloroform  Ekstrak Etanol  Rimpang  Temulawak  (Curcuma xanthorrhiza  Roxb.)  Terhadap  Radikal
Bebas DPPH (1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazil) Secara Spektrofotometri. Jakarta  :  Program  Studi  Farmasi, Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Muhammadiyah Prof. Dr. Hamka. 10. Ikhlas, Nur. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Herba  Kemangi (Ocimum  americanum  Linn)  Dengan Metode DPPH (2,2-Difenil-1- Pikrilhidrazil). Jakartan : Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran Dan Ilmu
Kesehatan,  Universitas  Islam  Negeri Syarif Hidayatullah
11. Widjaja,  S. Antioksidan  :  Pertahanan Tubuh  Terhadap  Efek  Oksidan  Dan Radikal  Bebas.  Jakarta  :  Fakultas Kedokteran, USAKTI.