Optimalisasi Pemanfaatan Ekstrak Daun Siamih ( Ageratum conyzoides L) sebagai Antioksidan pada Tubuh Manusia Menggunakan Metode DPPH
Optimization of the Utilization of Siamih Leaf Extract (Ageratum conyzoides L) as an Antioxidant in the Human Body using the DPPH Method
Lovera Anggraini 1* , Deri Islami 1
1 Department of Pharmaceutical and Food Analysts, Faculty Medicine and health Sciences of Abdurrab University, Pekanbaru, 28291, Indonesia.

## A B S T R A K
Senyawa antioksidan semakin banyak digunakan dalam bidang pangan ataupun bidang kesehatan. Riset ini bertujuan buat mengenali manfaat ekstrak daun siamih ( Ageratum conyzoides L) selaku antioksidan pada badan manusia, dengan memakai pengujian fitokimia buat mengenali senyawa metabolit sekunder yang tercantum  dalam  ekstrak  daun  Siamih  ( Ageratum  conyzoides L),  dan  memastikan  besarnya  aktifitas antioksidan senyawa metabolit sekunder yang dihasilkan oleh ekstrak daun siamih ( Ageratum conyzoides L) menggunakan prosedur DPPH. Perlengkapan yang digunakan yakni microplate reader dengan panjang gelombang  maksimum  pengukuran  merupakan  520  nm.  Parameter  yang  digunakan  untuk  mengenali aktifitas antioksidan yakni( Inhibition Concentration). Berdasarkan riset ini, ilustrasi ekstrak metanol daun siamih ( Ageratum conyzoides L) mempunyai nilai lebih besar dibanding sampel ekstrak n- heksan daun siamih ( Ageratum conyzoides L).

## A B S T R A C T
Antioxidant compounds are increasingly used in the field of food or the medical field. This research aims to create recognize the benefits of the leaf extract siamih (Ageratum conyzoides L) as an antioxidant in the human  body  using  testing  phytochemicals  for  recognizing  secondary  metabolites  contained  in  the  leaf extract siamih (Ageratum conyzoides L) and make sure the amount of antioxidant activity of secondary metabolites  which  produced  by  leaf  extract  siamih  (Ageratum  conyzoides  L)  using  DPPH  procedure. Supplies used the microplate reader with maximum wavelength is 520 nm measurements. The parameters used to identify the antioxidant activity (Inhibition Concentration). This research illustrates siamih leaf methanol extract (Ageratum conyzoides L) has a greater value than the n-hexane extracts of leaf samples siamih (Ageratum conyzoides L).

## I N F O    A R T I K E L
Received: 06 O ct 202 0 ; Revised: 15 Nov 2020;
Accepted: 20 Nov 2020
* coresponding author: lovera.anggraini@univrab.ac.id DOI: https://doi.org/10.22437/jisic.v12i2.10656

## Vol. 12

## No. 2
DEC 2020
Kata kunci/ Keyword : a ntioksidan ; siamih;  DPPH; antioxidants.

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  merupakan  sesuatu senyawa  ataupun  molekul  yang  mempunyai satu  ataupun  lebih  elektron  yang  tidak memiliki  pasangan  sehingga  menyebabkan senyawa  akan  sangat  reaktif  untuk  mencari pasangan, dengan cara melakukan pengikatan  pada  elektron  molekul  yang terletak di sekitarnya. Pada umumnya radikal bebas dapat bersumber dari dalam tubuh dari hasil  proses  metabolisme  atau  dapat  juga berasal dari lingkungan atau dari luar tubuh. Radikal  bebas  yang  bersumber  dari lingkungan  atau  dari  luar  tubuh  dapat diakibatkan oleh berbagai aspek, seperti asap rokok, kontaminasi pestisida pada makanan, pencemaran udara dan radiasi (Mbaoji et al., 2016).  Senyawa  antioksidan  merupakan senyawa yang populer digunakan baik dalam bidang  pangan  maupun  bidang  kesehatan. Dalam  bidang  pangan,  antioksidan  dapat berfungsi  sebagai  bahan  pengawet  alami. Sedangkan  bidang  kesehatan  kandungan senyawa antioksidan dapat berfungsi sebagai pencegahan  berbagai  penyakit  kronis. Pemanfaatan  senyawa  antioksidan  telah dibuktikan  secara  ilmiah  dapat  mengurangi efek penyakit kronis, seperti jantung koroner dan kanker.
Senyawa  Antioksidan  yang  sering digunakan  sebagai  pencegah  penyakit menahun seperti kanker serta jantung koroner pada umumnya merupakan antioksidan yang bersumber dari bahan kimia. Namun, seperti yang kita ketahui bahwa, bahan kimia yang digunakan  seringkali  memiliki  dampak negatif untuk kesehatan (Purwanto, Bahri, & Ridhay,  2017).  Akhir-akhir  ini  peneliti banyak  tertarik  pada  pemanfaatan  bahan alam sebagai antioksidan, untuk mengurangi penggunaan  bahan  kimia.  Selain  memiliki efek  samping,  antioksidan  yang  dibuat  dari bahan kimia,  juga lebih mahal sehingga tidak bernilai ekonomis (Pangestu, Nurhamidah, & Elvinawati,  2017).  Oleh  karena  itu pemanfaatan  bahan  alam  menjadi  hal  yang menarik  untuk  dijadikan  sebagai  dasar pembuatan  antioksidan,  seperti  halnya pemanfaatan ekstrak daun Siamih ( Ageratum
conyzoides L.)  yang  bisa  dikatakan  belum dijumpai  sebagai  antioksidan  alami  untuk kesehatan pada manusia.
Senyawa antioksidan dapat digunakan untuk  menetralisir  radikal  bebas  (Mariani, Rahman,  &  Supriadi,  2018) . Pada  saat antioksidan  mengikat  radikal  bebas  dengan cara  menerima  maupun  menyumbangkan elektron,  aakn  menyebabkan  radikal  bebas menjadi lebih stabil sehingga tidak berbahaya bagi  kesehatan.  Senyawa  antioksidan  alami banyak  ditemukan  pada  sayur,  buah  dan tumbuhan obat (Zerargui, Baghiani, Khennouf, & Arrar, 2016).
Pemanfaatan  bahan  alami  selaku  obat tradisional hendaknya tidak hanya bersumber pada pengalaman yang telah diwariskan atau diberikan  oleh  masyarakat  secara  turun- temurun,  namun  perlu  adanya  pembuktian secara ilmiah.
Berbagai  tanaman  obat  sudah  dikenal memiliki  senyawa  aktif  yang  bisa  efektif untuk pengobatan penyakit. Bermacam riset sudah  dicoba  untuk  melihat  aktivitas farmakologi  serta  kandungan  kimia  bahan alam.  Salah  satu  bahan  alam  yang  sudah dilaporkan  mempunyai  aktivitas  farma- kologi  yaitu  siamih  ( Ageratum  conyzoides L).
Banyaknya  tumbuhan  yang  memiliki kandungan  obat  menggambarkan  sumber energi  hayati  yang  sangat  besar  untuk dijadikan  sebagai  bahan  baku  obat  herbal (Hermansyah  &  Mucrito,  2017)  dimana terdapat ribuan spesies tanaman yang sudah dimanfaatkan  sebagai  alternatif  bahan  baku obat (Amir, Murcitro, Shamsudin, & Kassim, 2017).  Dapat  dimanfaatkannya  tumbuhan obat  dikarenakan  terdapatnya  kandungan metabolit  sekunder  dengan  bermacam struktur  molekul  serta  tingkatan  aktivitas biologis  sehingga  bisa  mengurangi  serta menyembuhkan
bermacam penyakit
(Hermansyah  &  Mucrito,  2017;  Yati, Sumpono, & Candra, 2018). Sebagai contoh tumbuhan daun siamih ( Ageratum conyzoides L).
Pada  penelitian  ini  dilakukan  ekstrak daun  siamih  ( Ageratum  conyzoides L) sebagai  antioksidan  pada  tubuh  manusia,
dengan  menggunakan  pengujian  fitokimia untuk mengenali senyawa metabolit sekunder yang terdapat di dalam ekstrak daun siamih,  dan  memastikan  besarnya  aktivitas antioksidan  yang  telah  dihasilkan  dari senyawa metabolit sekunder yang ada dalam daun siamih menggunakan metode DPPH.

## METODE PENELITIAN
Pengambilan  Daun  Siamih  ( Ageratum conyzoides L)
Daun  siamih  diambil  di  daerah sekitaran hutan Rumbai Pekanbaru.
Pembuatan ekstrak daun Siamih ( Ageratum conyzoides L)
Daun siamih ( Ageratum conyzoides L)
fresh dikering-anginkan kemudian dihaluskan.  Setelah  itu  ditimbang  400  gram kemudian  diekstrak  dengan  menggunakan 2000  mL  metanol  selama  3  hari  dengan ulangan  sebanyak  3  kali.  Ekstrak  disaring serta diuapkan pelarutnya dengan menggunakan  rotary  evaporator.  Ekstrak pekat  diperoleh  sekitar  5  gram,  kemudian diletakkan  di  beaker  gelas  ukuran  100  mL untuk  dibuat  larutan  penghambat  dengan konsentrasi  yang  berbeda  yakni  1g/L,  2g/L, 4g/L, 6g/L, serta 8g/L.
Uji  fitokimia  daun  Siamih  ( Ageratum conyzoides L)
Tata  cara  pengecekan  kandungan senyawa  flavonoid,  triterpenoid,  steroid, fenolik,  ialah:  1  gram  sampel  fresh dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi, selanjutnya dimaserasi menggunakan pelarut metanol  yang  sudah  dipanaskan  (di  atas penangas  air)  selama  15  menit.  Setelah  itu disaring  dan  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi  lain  serta  dibiarkan  larutan  metanol menguap sampai kering. Kemudian ditambahkan  kloroform  dan  air  dengan perbandingan 1:1 setiap 5 mL, kocok secara baik,  setelah  itu  masukkan  dalam  tabung
reaksi,  biarkan  sejenak  sampai  terbentuk  2 susunan  kloroform-  air.  Susunan  kloroform di  bagian  dasar  digunakan  buat  pengecekan senyawa triterpenoid serta steroid. Sebaliknya  susunan  air  digunakan  buat pengecekan senyawa fenolik serta flavonoid.

## Pengecekan Flavonoid
Sebagian dari larutan air diambil serta dipindahkan dengan memakai pipet tetes ke dalam tabung respon, dan ditambahkan asam klorida  pekat  serta  sebagian  butir  bubuk magnesium,  terjadinya  corak  oranye  hingga merah menampilkan terdapatnya flavonoid

## Pengecekan Fenolik
Sebagian dari larutan air diambil serta dipindahkan  dengan  menggunakan  pipet tetes ke dalam tabung respon kecil, setelah itu tambahkan  FeCl 3 tercipta  corak  biru menunjukkan terdapatnya senyawa fenolik.

## Pengecekan Triterpenoid serta Steroid
Lapisan  kloroform  yang  ada  diambil sedikit serta dimasukkan ke dalam 3 lubang pelat tetes dan didiamkan sampai kering, ke dalam  satu  lubang  pelat  tetes  ditambahkan setetes  anhidrida  asetat  serta  setetes  H 2 SO 4 pekat.  Terjadinya  corak  hijau  ataupun  biru menunjukkan terdapatnya steroid. Sebaliknya terjadinya corak merah menunjukkan terdapatnya triterpenoid.

## Pengecekan Alkaloid
Sampel  sebanyak  2-4  gram  dipotong kecil,  setelah  itu  dihaluskan  pada  lumpang dengan akumulasi sedikit pasir serta 10 mL kloroform-amoniak  0,05  N,  setelah  itu diaduk  ataupun  digerus  sampai  halus. Larutan disaring dengan corong ukuran kecil, di  dalamnya  harus  diletakkan  kapas  selaku penyaring serta hasil saringan dimasukkan ke dalam  suatu  tabung  reaksi,  setelah  itu tambahkan  10  tetes  H 2 SO 4 2  N  serta  kocok secara  lama-lama.  Biarkan  sejenak  hingga tercipta  pemisahan  susunan  asam  serta kloroform.  Susunan  asam  diambil  dengan dorongan  pipet  serta  dipindahkan  ke  dalam suatu tabung. Setelah itu tambahkan pereaksi
Meyer,  reaksi  positif  ditandai  dengan terdapatnya endapan putih.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  dicobakan dengan memanfaatkan mikroplate reader two fold  delution dengan  metoda  DPPH  (1,  1- diphenyl–2–  picryl  hydrazyl)  pada  panjang gelombang  520  nm.  Sampel  sebanyak  2 miligram dalam 2 mL MeOH dalam perihal ini konsentrasi ilustrasi 1000 miligram/ mL. Baris  A  dilakukan  pemasukkan  sampel sebanyak 100 µ L (plate terdiri dari baris A- H tiap-  tiap  berjumlah  12  lubang).  Sebanyak 50 µ L  MeOH  dimasukkan  pada  tiap-  tiap lubang  pada  baris  B-F.  Baris  A  dipipet sebanyak 50 µ L serta dimasukkan ke baris B, baris B dipipet 50 µ L dimasukkan ke baris C serta  dicoba  hingga  baris  F,  baris  F  dipipet 50 µ L kemudian dibuang, sehingga didapatkan  konsentrasi  1000  miligram/mL, 500  miligram/mL,  250  miligram/  mL,  125 miligram/mL, 62, 5 miligram/mL serta 31, 25 miligram/  mL.  Sebaliknya  pada  baris  G-  H diisi dengan MeOH 50 µ L, spesial pada baris H diisi cuma lubang 1- 6.
Baris  A-G  ditambahkan  DPPH sebanyak  80 µ L  dengan  konsentrasi  40 miligram/ mL, setelah itu diinkubasi selama 30  menit.  Radikal  bebas  diukur  melalui penyusutan  absorbansi  DPPH  dengan microplate  reader  serta  olah  informasi. Kontrol  positif  yang  digunakan  sebagai pembanding  ialah  vit  C  dengan  konsentrasi 50  miligram/mL.    Nilai %  inhibisi  dihitung dengan rumus sebagai berikut:
% Hambatan = ( # $%&'(%) *# +,-./) ) # $%&'(%) x 100
Keterangan:
A kontrol =  Absorbansi  tidak  mengandung sampel
A sampel =  Absorbansi sampel

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  Fitokimia  dari  Ekstrak  Daun  Siamih ( Ageratum conyzoides L)
Tabel 1. Hasil uji fitokimia
Senyawa Kimia Hasil Uji Alkaloid Flavonoid Fenolik Triterpenoid Steroid
+ + + + -
Keterangan :  + menyatakan adanya kandun-
gan  senyawa  kimia  tersebut dalam ekstrak daun siamih Uji fitokimia dilakukan untuk mengetahui  ada  atau  tidaknya  senyawa tersebut dalam ekstrak daun siamih. Tabel 1 menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  siamih ( Ageratum  conyzoides L)  mengandung alkaloid, flavonoid, fenolik, dan triterpenoid. Itu  terbukti  dengan  adanya  tanda  (+)  pada Tabel 1.
Uji  Aktivitas  Antioksidan  dari  Ekstrak daun siamih ( Ageratum conyzoides L)
Aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak daun  siamih  yang  di  uji  dengan  memakai prosedur  DPPH  dengan  spektrofotometri UV-  Vis  dengan  panjang  gelombang maksimum  517  nm.  Besarnya  aktivitas antioksidan  ditunjukkan  dengan  nilai  IC 50 , ialah  konsentrasi  larutan  ilustrasi  yang diperlukan  buat  membatasi  50%  radikal leluasa DPPH (Purwanto et al., 2017). Nilai IC 50 pada  masing-masing  ekstrak  dengan pelarut  n-heksan,  serta  metanol  ditetapkan dengan  memakai  persamaan  regresi  linier dari  kurva  ikatan  konsentrasi  ilustrasi terhadap  persen  inhibisi  dengan  persamaan Y=  ax+b,  konsentrasi  ilustrasi  (ppm) bagaikan  sumbu  (X)  serta  nilai  persentase inhibisi  bagaikan  sumbu  (Y)  (Yati  et  al., 2018).  Bersumber  pada  persamaan  regresi linier dari Gambar 1, serta Gambar 2, ikatan antara  konsentrasi  hasil  ekstrak  terhadap persentase  inhibisi,  diperoleh  nilai  IC 50
berturut-  turut  ialah  1133,8964  ppm, 708,8541 ppm.
Gambar 1 .  Grafik  persamaan  regresi  aktivitas antioksidan dengan pelarut n-heksan
Gambar  2 .  Grafik  persamaan  regresi  aktivitas antioksidan dengan pelarut Metanol
Perbandingan  tipe  pelarut  yang  telah digunakan  pada  proses  ekstraksi  pengaruhi aktivitas antioksidan yang didapat.
Bersumber pada pada uji kegiatan antioksidan  menampilkan  kalau  pemakaian pelarut  metanol  membagikan  nilai  IC 50 terkecil  (kegiatan  paling  tinggi)  dibanding pada  pemakaian  pelarut  n-heksan  (Brand- Williams,  Cuvelier,  &  Berset,  1995; Purwanto et al., 2017). Perihal ini diprediksi sebab di dalam ilustrasi daun siamih terdapat banyak senyawa bioaktif bertabiat polar bila dibanding  senyawa  bioaktif  bertabiat  non polar serta semipolar. Sehingga
menyebabkan  pelarut  polar  (metanol)  lebih banyak  mengikat  senyawa  bioaktif  yang terdapat  pada  daun  siamih  (Purwanto  et  al., 2017).  Antioksidan  sangat  kokoh  apabila mempunyai nilai IC50 kurang dari 50 ppm, antioksidan  kokoh  mempunyai  nilai  IC 50 terletak  pada  kisaran  50  ppm  sampai  100 ppm, antioksidan lagi mempunyai nilai IC 50 berada  antara  100  ppm  sampai  150  ppm, antioksidan  lemah  mempunyai  kisaran  150
ppm  sampai  200  ppm  serta  nilai  IC 50 lebih dari 200 ppm ialah antioksidan berifat sangat lemah (Mariani et al., 2018; Yati et al., 2018). Secara  khusus,  sesuatu  senyawa  dikatakan mempunyai  aktifitas  antioksidan  sangat kokoh  apabila  IC 50 ;  50  ppm,  kokoh  apabila IC 50 bernilai  50-100  ppm,  lagi  apabila  IC 50 bernilai  101-250,  serta  lemah  apabila  IC 50 251-  500  ppm  (Sarfina,  Nurhamidah,  & Handayani, 2017; Widyawati, 2016).
Berdasarkan  hasil  pengamatan  yang diperoleh  menunjukkan  bahwa  seluruh ekstrak  daun  siamih  ( Ageratum  conyzoides L)  mempunyai  aktivitas  antioksidan  lebih baik  dengan  menggunakan  pelarut  yang bersifat  polar  dibandingkan  dengan  pelarut yang bersifat non polar. Perbedaan aktivitas yang  diperoleh  dari  ekstrak  daun  siamih ( Ageratum conyzoides L) tersebut kemungkinan diakibatkan terdapatnya
perbedaan kandungan serta jumlah senyawa aktif  yang  terdapat  dalam  ekstrak,  sehingga aktivitas antioksidan yang diperoleh berbeda (Winarsi,  2007).  Ekstrak  dengan  pelarut metanol  memiliki  antioksidan  yang  lebih besar  dibanding  dengan  ekstrak  dengan pelarut  n-heksan,  hal  ini  kemunkinan disebabkan karena senyawa aktif antioksidan lebih banyak yang bersifat polar dibandingkan  dengan  senyawa  aktif  anti oksidan  yang  bersifat  non  polar  (Mariani  et al., 2018).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang diperoleh,  ekstrak  daun  siamih  ( Ageratum conyzoides
L) mengandung alkaloid, flavonoid,  fenolik,  dan  triterpenoid.  Hasil ekstrak  pada  persentase  inhibisi,  diperoleh nilai  IC 50 berturut-  turut  ialah  1133,8964 ppm,  708,8541  ppm.  Hasil  ekstrak  metanol daun  siamih  ( Ageratum  conyzoides L) mempunyai  nilai  lebih  besar  dibanding sampel  ekstrak  n-heksan  daun  siamih ( Ageratum  conyzoides L).  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  siamih mempunyai  aktivitas  antioksidan  lebih  baik pada pelarut yang bersifat polar daripada non polar.
y = 14.894x - 47.759 R ² = 0.9687 0 20 40 60 80 0.000 2.000 4.000 6.000 8.000
y = 13.048x - 41.772 R ² = 0.9957 0 20 40 60 0.000 2.000 4.000 6.000 8.000

## DAFTAR RUJUKAN
Amir, H., Murcitro, B. G., Shamsudin, A., & Kassim,  M.  N. I.  (2017). The  potential use  of  Phaleria  macrocarpa  leaves extract as an alternative drug for breast cancer among women living in poverty. Asian  Journal  For  Poverty  Studies (AJPS) , 3(2).
Brand-Williams,  W.,  Cuvelier,  M.  E.,  & Berset, C. (1995). Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity. LWT  -  Food  Science  and  Technology ,
28 (1), 25–30. https://doi.org/ 10.1016/S0023-6438(95)80008-5
Hermansyah,  A.,  &  Mucrito,  B.  G.  (2017). Uji  microtetrazolium  (MTT)  ekstrak metanol  daun  Phaleria  macrocarpa (Scheff.)  Boerl  terhadap  sel  kaker payudara MCF-7. Alotrop , 1(1).
Mariani,  S.,  Rahman,  N.,  &  Supriadi,  S. (2018).  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Buah  Semangka  (Citrullus lanatus). Jurnal  Akademika  Kimia , 7 ,
107. https://doi.org/10.22487/j247 75185.2018.v7.i3.11905 Mbaoji, F., Ezike, A., Nworu, C., Onyeto, C., Nwabunike,  I.,  OKOLI,  I.,  &  Akah, P. (2016). Antioxidant and hepatoprotective potentials of Stemonocoleus micranthus harms (Fabaceae) stem bark extract.
International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 8 , 47–51.
Pangestu, N. S., Nurhamidah, & Elvinawati. (2017).  Aktivitas  antioksidan  dan entibakteri  ekstrak  daun  Jatropha gossypifolia L. Alotrop , 1 (1).
Purwanto,  D.,  Bahri,  S.,  &  Ridhay,  A. (2017). Uji aktivitas antioksidan ekstrak buah Purnajiwa (Kopsia arborea blume.) dengan berbagai pelarut. Kovalen , 3 (1),
24–32. https://doi.org/ 10.22487/j24775398.2017.v3.i1.8230
Sarfina,  J.,  Nurhamidah,  &  Handayani,  D. (2017).  Uji  aktivitas  antioksidan  dan antibakteri  ekstrak  daun  Ricinus communis  L  (jarak  kepyar). Alotrop , 1(1).
Widyawati,  P.  S.  (2016).  Determination  of antioxidant  capacity  in  Pluchea  indica less  leaves  extract  and  its  fractions. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 8 , 32.
https://doi.org/10.22159/ijpps.2016v8i9
.11410
Winarsi,  H.  (2007). Antioksidan  alami  dan radikal bebas . Yogyakarta: Kanisius.
Yati, S. J., Sumpono, & Candra, I. N. (2018). Potensi  aktivitas  antioksidan  metabolit sekunder dari bakteri endofit pada daun Moringa oleifera L. Alotrop , 2(1).
Zerargui, F., Baghiani, A., Khennouf, S., &
Arrar,  L.  (2016).  Antioxidant  activity assessment  of  Tamus  communis  L.
Roots. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 8 ,  64–71.  https://doi.org/
10.22159/ijpps.2016v8i12.14327