## Jurnal Pendidikan Biologi Undiksha
p-ISSN : 2599-1450 e-ISSN : 2599-1485 Volume 10 Nomor  3 Tahun  2023 Open Acces : https://ejournal.undiksha.ac.id/index.php/JJPB/index
Pengaruh  Tinta  Cumi-Cumi  (Loligo  sp.)  Terhadap  Kualitas  dan Kuantitas Spermatozoa Mencit (Mus musculus L.) yang Diinduksi D-Galaktosa
Dewi Restika Ayu Safitri 1,* , Sutyarso 2 , Hendri Busman 3 , Nuning Nurcahyani 4
1 Jurusan Biologi Universitas Lampung, Jalan Prof. Dr. Soemantri Brodjonegoro, Bandarlampung, Indonesia
2 Jurusan Biologi Universitas Lampung, Jalan Prof. Dr. Soemantri Brodjonegoro, Bandarlampung, Indonesia
3 Jurusan Biologi Universitas Lampung, Jalan Prof. Dr. Soemantri Brodjonegoro, Bandarlampung, Indonesia
4 Jurusan Biologi Universitas Lampung, Jalan Prof. Dr. Soemantri Brodjonegoro, Bandarlampung, Indonesia *restikasafitririsman@gmail.com

## Abstract
Increased levels of free radicals in the body are thought to trigger oxidative stress and cause aging. Biologists state that aging is one of the causes of infertility in men. Squid ink is known to have high antioxidant activity so that it can be used as an alternative treatment. Therefore, this study was conducted with the aim of knowing the effect of inking squid on the quality and quantity of male individual spermatozoa, which included sperm count, motility, and viability of the spermatozoa of mice experiencing oxidative stress due to D-Galactose induction. This research was conducted experimentally in December 2022 – March 2023 where 24 male mice were divided into 4 groups, namely K, K- (D-Gal 150 mg/kgBB), P1 (D-Gal 150 mg/kgBB + squid ink 40 mL/kgBB), and P2 (D-Gal 150 mg/kgBB + squid ink 100 mL/kgBB). The results showed that squid ink was able  to  increase  the  quality  and  quantity  (sperm  count,  motility,  and  viability)  of  mice  spermatozoa  which  had  previously decreased due to D-Galactose induction, where the best results for each parameter were shown by P2.
Keywords: Squid ink, D-galactose, infertility, mice, aging

## Abstrak
Peningkatan kadar radikal bebas di dalam tubuh diduga dapat memicu terjadinya stress oksidatif dan menyebabkan penuaan. Para ahli Biologi menyatakan bahwa penuaan merupakan salah satu penyebab terjadinya infertilitas pada pria. Tinta cumi- cumi diketahui memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi sehingga dapat dimanfaatkan sebagai alternatif pengobatan. Oleh sebab  itu,  penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan  mengetahui  pengaruh  pemberian  tinta  cumi-cumi  terhadap  kualitas  dan kuantitas spermatozoa individu jantan, yang meliputi jumlah, motilitas, dan viabilitas spermatozoa mencit yang mengalami stress  oksidatif  akibat  penginduksian  D-Galaktosa.  Penelitian  ini  dilakukan  secara  eksperimental  pada  Desember  2022  – Maret 2023 dimana 24 ekor mencit jantan dibagi menjadi 4 kelompok, yaitu K, K- (D-Gal 150 mg/kgBB), P1 (D-Gal 150 mg/kgBB + tinta cumi-cumi 40 mL/kgBB), dan P2 (D-Gal 150 mg/kgBB + tinta cumi-cumi 100 mL/kgBB). Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  tinta  cumi-cumi  mampu  meningkatkan  kualitas  dan  kuantitas  (jumlah,  motilitas,  dan  viabilitas) spermatozoa mencit yang sebelumnya mengalami penurunan akibat penginduksian D-Galaktosa, dimana hasil terbaik pada masing-masing parameter ditunjukkan oleh P2.
Kata kunci : Tinta cumi-cumi, D-galaktosa, infertilitas, mencit, penuaan

## PENDAHULUAN
Penuaan  ( aging )  merupakan  suatu  peristiwa  alamiah  yang  pasti  dialami  oleh  setiap makhluk  hidup.  Menurut  para  ahli  Biologi,  penuaan  pada  makhluk  hidup  terjadi  akibat peningkatan  kadar  radikal  bebas  yang  memicu  terjadinya  stress  oksidatif  dan  menyebabkan kerusakan  sel-sel  tubuh  serta  menghambat  proses  perbaikan  terhadap  kerusakan-kerusakan tersebut  [1].  Stress  oksidatif  merupakan  kondisi  dimana  radikal  bebas  di  dalam  tubuh mengalami peningkatan, sedangkan antioksidan mengalami penurunan jumlah dibandingkan radikal bebas, sehingga sel-sel normal akan mengalami oksidasi dan mengakibatkan kerusakan sel  maupun  jaringan  [2].  Banyak  faktor  yang  dapat  menyebabkan  stress  oksidatif  dan mengakibatkan terjadinya penuaan, diantaranya penurunan daya tahan tubuh akibat serangan penyakit  tertentu,  perubahan  hormon,  dan  stress,  radiasi  sinar  matahari,  polusi,  dan  induksi senyawa-senyawa  yang  mengadung  radikal  bebas  [3].  Menurut  López-Otín et  al .  (2013), peristiwa  penuaan  pada  mahluk  hidup  ditandai  oleh  beberapa  hal,  diantaranya  kemunduran kualitas fenotip, hilangnya kemampuan tubuh dalam meregulasi proses penginderaan nutrisi, epigenetik  tubuh  mengalami  perubahan,  kemampuan  sistem  komunikasi  interseluler mengalami gangguan, dan lain sebagainya [4].
Peristiwa  penuaan  yang  dialami  oleh  makhluk  hidup  dapat  mengakibatkan  berbagai macam  penyakit  degeneratif,  termasuk  infertilitas.  Infertilitas  atau  kemandulan  merupakan ketidakmampuan pasangan yang telah menikah untuk memperoleh keturunan meskipun telah melakukan hubungan seksual secara teratur tanpa melibatkan alat kontrasepsi [5]. Tidak hanya terjadi pada wanita, infertilitas juga dapat terjadi pada pria. Pada pria, kasus-kasus infertilitas didominasi  oleh  menurunnya  kualitas  dan  kuantitas  spermatozoa  yang  mampu  dihasilkan, termasuk  konsentrasi,  jumlah,  motilitas,  viabilitas,  dan  morfologi  spermatozoa  [6].  D- Galaktosa  merupakan  senyawa  yang  telah  banyak  digunakan  dalam  bidang  kesehatan  dan farmasi  untuk  mendemostrasikan  proses  stress  oksidatif  yang  memicu  berbagai  penyakit degeneratif,  termasuk  penuaan  pada  makhluk  hidup.  Senyawa  ini  diketahui  sebagai  bahan dasar  penyusun  susu  dalam  bentuk  oligosakarida  dan  termasuk  golongan  gula  aldoheksosa yang  kaya  akan  radikal  bebas.  Senyawa  ini  bekerja  dengan  cara  merusak  rangkaian  proses metabolisme  karbohidrat  sehingga  mengakibatkan  terjadinya  stress  oksidatif  [7].  Namun, tingkat  stress  oksidatif  makhluk  hidup  akibat  penginduksian  D-Galaktosa  dapat  dinetralisir dengan memanfaatkan antioksidan. Menurut Parwata (2016), antioksidan merupakan senyawa- senyawa yang memiliki kemampuan untuk menetralisir sifat toksik radikal bebas dengan cara mendonorkan  elektron  yang  dimiliki  tanpa  kehilangan  kestabilannya,  sehingga  senyawa tersebut tidak lagi bersifat toksik di dalam tubuh [8].
Affandi et al . (2019) mengemukakan bahwa tinta cumi-cumi merupakan salah satu bahan alam yang memiliki aktivitas antioksidan dengan jumlah tinggi dan berpotensi dikembangkan dalam bidang kesehatan  dan farmakologi. Tinta  cumi-cumi diketahui  mengandung melanin, asam  sinamat, betaine , choline ,  DHI,  DHICA,  protein,  senyawa  fenolik,  dan  karbohidrat. Senyawa-senyawa  tersebut  bekerja  dengan  cara  berikatan  dengan  molekul-molekul  radikal bebas  mengubahnya  menjadi  molekul-molekul  non-toksik  dan  sifatnya  stabil.  Selain  itu, senyawa-senyawa  tersebut  juga  mampu  meningkatkan  antioksidan  bersifat  enzimatik, misalnya SOD, CAT, dan GPx yang berperan dalam memproduksi antioksidan secara alami di dalam tubuh [9]. Oleh sebab itu, penelitian ini dilakukan guna membuktikan potensi tinta cumi- cumi dalam meningkatkan antioksidan di dalam tubuh dan mencegah terjadinya stress oksidatif yang memicu infertilitas melalui pengujian terhadap kualitas dan kuantitas spermatozoa yang mampu dihasilkan.

## METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  Desember  2022  –  Maret  2023  di  Jurusan  Biologi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Lampung.  Penelitian  ini bersifat eksperimental menggunakan tipe Rancangan Acak Lengkap (RAL). Sebanyak 24 ekor mencit jantan dibagi menjadi  4 kelompok secara acak, yaitu Kontrol (Mencit diberi  makan dan  minum  tanpa  diberikan  D-Galaktosa  maupun  tinta  cumi-cumi), Kontrol  Negatif (D- galaktosa  150  mg/kgBB), Perlakuan  1 (D-Galaktosa  150  mg/kgBB  +  tinta  cumi-cumi  40 mL/kgBB), dan Perlakuan 2 (D-Galaktosa 150 mg/kgBB + tinta cumi-cumi 100 mL/kgBB). Keempat  kelompok  tersebut  kemudian  dipelihara  35  hari  atau  mengikuti  satu  kali  siklus spermatozoa. Penginduksian D-Galaktosa dilakukan secara intraperitoneal menggunakan spuit syringe 1  mL,  sedangkan  pemberian  tinta  cumi-cumi  dilakukan  secara  oral  menggunakan sonde lambung.
Terdapat  tiga  parameter  yang  diamati  dalam  penelitian  ini,  yaitu  jumlah  (juta/mL), viabilitas  (%),  dan  motilitas  (%).  Pengamatan  pada  masing-masing  parameter  penelitian dilakukan  menggunakan  mikroskop  dengan  perbesaran  400x.  Jumlah  spermatozoa  dihitung dengan cara diencerkan sebanyak 20x, kemudian dihitung menggunakan hemositometer dan hasilnya  dikalikan  dengan  200.000/mL.  Motilitas  spermatozoa  dihitung  dengan  cara  rumus berikut (Fatmawati dkk., 2016) [10].
Motilitas Spermatozoa (%) = 𝑎 𝑎+𝑏 x 100%
a merupakan spermatozoa motil, sedangkan b adalah spermatozoa imotil.
Sementara itu, persentase viabilitas spermatozoa dihitung menggunakan rumus berikut.
Viabilitas Spermatozoa (%) = 𝑎 𝑎+𝑏 x 100%
a merupakan spermatozoa yang kepalannya tidak terwarnai, sedangkan b adalah spermatozoa yang kepalanya terwarnai.
Analisis  data  dilakukan  menggunakan Analysis  of  Variance (ANOVA)  pada  taraf  5% untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan pada masing-masing kelompok, lalu analisis data  dilanjutkan  menggunakan  uji  BNT  untuk  melihat  perbedaan  pada  masing-masing kelompok.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. HASIL

## 1. Jumlah Spermatozoa Mencit
Penelitian  yang  telah  dilakukan  menunjukkan  bahwa  secara  statistik,  jumlah spermatozoa  mencit  pada  kelompok  Kontrol  berbeda  nyata  dengan  kelompok  Kontrol Negatif,  Perlakuan  1,  dan  Perlakuan  2.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  terjadi penurunan jumlah spermatozoa yang semula 94,67 juta/mL (K) menjadi 44,86 juta/mL (K-) setelah diinduksi D-Galaktosa sebanyak 150 mg/kgBB. Jumlah tersebut kemudian kembali mengalami peningkatan menjadi 54,300 juta/mL setelah diberi tinta cumi-cumi sebanyak 40 mL (P1) dan 64,767 juta/mL setelah diberi tinta cumi-cumi sebanyak 100 mL/kgBB (P2). Hasil uji ANOVA pada taraf 5% yang dilanjutkan menggunakan uji BNT terhadap rata-rata jumlah spermatozoa disajikan pada Gambar 1.

## Gambar 1. Jumlah Spermatozoa Mencit
Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan bahwa hasil analisis menggunakan ANOVA 5% berbeda nyata.

## 2. Motilitas Spermatozoa Mencit
Hasil penelitian yang telah dilakukan menunjukkan bahwa motilitas spermatozoa mencit yang diinduksi D-Galaktosa (K-) mengalami penurunan menjadi  40,395% jika
94.67 d 44.87 a 54.30 b 64.77 c 0 20 40 60 80 100 Kontrol Kontrol Negatif Perlakuan 1 Perlakuan 2 Jumlah spermatozoa (juta/mL)
dibandingkan dengan yang tidak mendapat perlakuan apapun (K), yaitu 78,763%. Jika dibandingkan  dengan  kelompok  Perlakuan  (P1  dan  P2),  terlihat  bahwa  terjadi peningkatan  persentase  motilitas  spermatozoa  setelah  pemberian  tinta  cumi-cumi. Meskipun kelompok perlakuan sama-sama mampu menaikkan persentase spermatozoa motil, namun hasil terbaik dimiliki oleh P2, yakni dengan persentase spermatozoa motil mencapai  64,767%, sedangkan P1 hanya mampu meningkatkan motilitas spermatozoa hingga  53,572%  saja.  Hasil  analisis  ANOVA  5%  dan  uji  BNT  pada  motilitas spermatozoa mencit yang diinduksi D-Galaktosa dan diberi tinta cumi-cumi ditunjukkan pada Gambar 2.

## Gambar 2. Motilitas Spermatozoa Mencit
Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan bahwa hasil analisis menggunakan ANOVA 5% berbeda nyata.

## 3. Viabilitas Spermatozoa Mencit
Viabilitas spermatozoa mencit setelah dianalisis menggunakan ANOVA pada taraf
5% dan dilanjutkan dengan uji BNT ditunjukkan pada Gambar 3.

## Gambar 3. Viabilitas Spermatozoa Mencit
Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan bahwa hasil analisis menggunakan ANOVA 5% berbeda nyata.
Hasil  pada Gambar  3. menunjukkan  bahwa  masing-masing  kelompok  berbeda  nyata secara  statistik,  dimana  kelompok  yang  diinduksi  D-Galaktosa  memiliki  viabilitas spermatozoa paling buruk, yakni hanya 40,500%. Viabilitas spermatozoa kelompok yang
78.763 d
40.395 a 53.777 b 64.740 c 0 20 40 60 80 100 Kontrol Kontrol Negatif Perlakuan 1 Perlakuan 2 Motilitas spermatozoa (%) 78.232 d 40.500 a 53.572 b 70.482 c 0 20 40 60 80 100 Kontrol Kontrol Negatif Perlakuan 1 Perlakuan 2 Viabilitas spermatozoa (%)
diinduksi  D-Galaktosa  sebanyak  150  mg/kgBB  kemudian  mengalami  peningkatan setelah  diberi  tinta  cumi-cumi  sebanyak  40  mL/kgBB  dan  100  mL/kgBB.  Dari  kedua jenis dosis tersebut, Perlakuan 2 menunjukkan hasil paling baik, yakni dengan viabilitas sebesar  70,482%,  sedangkan  Perlakuan  1  hanya  mampu  meningkatkan  viabilitas spermatozoa  hinga  53,572%  saja.  Meskipun  terjadi  peningkatan,  namun  jumlahnya belum  melebihi  viabilitas  spermatozoa  mencit  yang  tidak  mendapat  perlakuan  apapun (Kontrol).  Diduga,  dosis  tinta  cumi-cumi  yang  digunakan  belum  sepenuhnya  mampu memperbaiki  kerusakan  yang  diakibatkan  oleh  invasi  molekul  dan  senyawa  radikal bebas.

## PEMBAHASAN

## 1. Jumlah Spermatozoa
Keberhasilan  proses  spermatogenesis  sangat  berpengaruh  dalam  menentukan jumlah spermatozoa yang dihasilkan dalam satu kali ejakulasi, sehingga gangguan yang terjadi  pada  proses  tersebut  dapat  menyebabkan  penurunan  jumlah  yang  mampu dihasilkan.  Menurut  Zhang et  al .  (2021),  kadar  FSH  dan  LH  sangat  berperan  dalam menentukan  keberhasilan  proses  spermatogenesis.  Apabila  aktivitas  kedua  hornon tersebut  mengalami  gangguan,  maka  pembentukan  hormon  testosteron  dan  ABP  yang mengatur keberlangsungan proses spermatogenesis juga akan ikut terganggu [11]. Pada penelitian ini, D-Galaktosa yang diketahui bersifat toksik diinduksikan kepada hewan uji guna  mengetahui  pengaruhnya  dalam  menurunkan  jumlah  spermatozoa.  Hasil  yang didapatkan  menujukkan  bahwa  terjadi  degradasi  jumlah  spermatozoa  yang  dihasilkan oleh hewan uji. Hasil ini sesuai dengan Salman et al. (2016) yang menunjukkan bahwa jumlah  spermatozoa  hewan  uji  mengalami  penurunan  setelah  diinduksi  dengan  D- Galaktosa dalam dosis tertentu. Penurunan ini terjadi akibat meningkatnya kadar radikal bebas  yang  memicu  tingginya  aktivitas Malonaldehyde (MDA)  dan Lactate Dehydrogenase (LDH),  sementara  aktivitas  enzim  kaya  akan  antioksidan,  yaitu Superoxide Dismutase (SOD) dan katalase (CAT) mengalami penurunan [12]. Selain itu,
Liao et  al .  (2020)  menyatakan  bahwa  D-Galaktosa  yang  dinduksikan  ke  dalam  tubuh hewan  uji  akan  menyebabkan  disfungsi  gen-gen  pengatur  proses  spermatogenesis, misalnya Cycl2, Hkt1, Pltp, Utp3, Zpbp, dan Cabyr. Kondisi ini terjadi akibat peroksidasi asam lemak yang meningkat, sedangkan senyawa yang menetralisir toksisitasnya (dalam hal ini antioksidan enzimatik, misalnya ROS) mengalami penurunan [13].
Antioksidan  yang terkandung dalam  tinta cumi-cumi telah banyak dimanfaatkan dalam  bidang  pengobatan  berbagai  macam  penyakit.  Pemberian  tinta  cumi-cumi terhadap  mencit  yang  mengalami  stress  oksidatif  diharapkan  mampu  memperbaiki kerusakan  yang  diakibatkan  oleh  proses  penginduksian  D-Galaktosa.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  pemberian  tinta  cumi-cumi  mampu  meningkatkan  jumlah spermatozoa mencit yang sebelumnya mengalami penurunan. Hasil ini sesuai dengan Gu et  al .  (2020)  yang  menjelaskan  bahwa  tinta  cumi-cumi  mampu  melindungi  fungsi reproduksi testis dan meningkatkan aktivitas antioksidan di dalamnya, sehingga aktivitas gen-gen yang mengatur proses spermatogenesis tidak terganggu dan kerusakan struktur akibat stress oksidatif dapat dicegah ataupun diperbaiki [14]. Kadar SOD dan CAT yang ikut  meningkat  mengindikasikan  terjadinya  perbaikan  kerusakan  struktur  kimiawi penyusun tubuh dan produksi homon-hormon reproduksi juga berjalan normal, sehingga kerusakan stress oksidatif yang dialami mencit akibat penginduksian D-Galaktosa dapat diperbaiki. Pernyataan ini sesuai dengan penelitian Liu et al . (2011) yang menunjukkan bahwa  aktivitas  antioksidan  pada  tinta  cumi-cumi  mampu  memperbaiki  kerusakan  sel dan  jaringan  yang  memicu  peningkatan  aktivitas Superoxide  Dismutase (SOD)  dan menekan jumlah Malonaldehyde (MDA) [15].

## 2. Motilitas Spermatozoa
Kemampuan  spermatozoa  untuk  bergerak  secara  efisien  dalam  mendukung keberhasilan proses fertilisasi di dalam tuba falopi disebut dengan motilitas. Pergerakan spermatozoa sangat dipengaruhi oleh energi yang dimiliki. Apabila energi yang dimiliki oleh  spermatozoa  telah  digunakan  seluruhnya  dan  tidak  ada  aktivitas  pembentukan kembali, maka spermatozoa akan kehilangan kemampuan untuk bergerak (imotil) [16]. Mitokondria  merupakan  bagian  sel  yang  sangat  penting  dalam  proses  pembentukan energi  pada  spermatozoa.  Pada  saat  D-Galaktosa  diinduksikan  ke  dalam  tubuh,  maka akan  terjadi  kerusakan  pada  mitokondria  akibat  sifat  toksik  molekul-molekul  radikal bebas  yang  terkandung  dalam  D-Galaktosa.  Molekul-molekul  tersebut  tidak  hanya merusak  struktur  sel  dan  fungsi  mitokondria,  tetapi  juga  gugus  fungsi  dan  struktur senyawa-senyawa  yang  mitokondria  untuk  menghasilkan  energi.  Akibatnya,  proses pembentukan  energi  tidak  dapat  terjadi  dan  spermatozoa  kehilangan  kemampuannya untuk  bergerak [17]. Oleh sebab itu, antioksidan tinggi  digunakan untuk memperbaiki kerusakan-kerusakan tersebut.
Tinta  cumi-cumi  diketahui  mengandung  senyawa-senyawa  antioksidan  dalam jumlah yang tinggi dan dapat dimanfaatkan dalam pengobatan pada penurunan parameter spermatozoa, khususnya motilitas. Hasil penelitin ini membuktikan teori-teori tersebut, dimana  kelompok  mencit  yang  diinduksi  D-Galaktosa  dan  diberi  tinta  cumi-cumi mengalami peningkatan motilitas jika dibandingkan dengan kelompok yang diinduksi D- Galaktosa saja. Hasil penelitian ini sesuai dengan David et al . (2022) yang menunjukkan bahwa  terjadi  penginduksian  D-Galaktosa  menyebabkan  terjadinya  stress  oksidatif akibat menurunnya kadar antioksidan alami tubuh, sehingga progresivitas spermatozoa mencit  juga  ikut  terganggu  [18].  Nasution  (2017)  menyatakan  bahwa  kandungan antioksidan  tinta  cumi-cumi  dapat  menghambat  regenerasi Reactive  Oxygen  Species (ROS)  di  dalam  tubuh  dan  menyusun  ulang  tatanan  stuktur  senyawa-senyawa superoksida  agar  bersifat  stabil  dan  kehilangan  toksisitasnya.  Dengan  demikian, kerusakan  struktur  mitokondria  maupun  bahan-bahan  produksi  energi  dapat diminimalisir  dan  diperbaiki,  sehingga  proses  pembentukan  energi  bagi  spermatozoa dapat berjalan seperti keadaan normal [19].

## 3. Viabilitas Spermatozoa
Viabilitas diartikan sebagai kemampuan spermatozoa untuk bertahan hidup dalam kondisi tertentu di luar tubuh. Sama seperti motilitas, viabilitas juga sangat bergantung pada  energi  yang  dimiliki.  Spermatozoa  yang  tidak  memiliki  energi  akan  kehilangan kemampuan hidupnya [20]. Tinta cumi-cumi merupakan bahan alam yang mengandung berbagai  macam  antioksidan  seperti  flavonoid,  fenolik,  dan  mineral.  Pernyataan  ini sesuai  dengan  Riyad et  al .  (2020)  menyatakan  bahwa  senyawa-senyawa  fenolik  dan flavonoid merupakan antioksidan yang mampu memperbaiki kerusakan membran akibat peroksidasi  lemak.  D-Galaktosa  diketahui  mampu  meningkatkan  kadar  MDA  melalui peroksidasi lemak, sehingga akumulasi Reactive Oxygen Species (ROS) di dalam tubuh tidak hanya bertambah, tetapi membran plasma juga tidak dapat melakukan fungsinya dengan  makimal  [21].  Kandungan  mineral  yang  dimiliki  oleh  tinta  cumi-cumi  dapat berikatan  dengan  antioksidan  enzimatik  dan  mendukung  aktivitasnya  dalam memodifikasi  susunan  stuktur  molekul  dan  senyawa  yang  bersifat  racun  [22].  Hal  ini sesuai  dengan  Zaharah  and  Rabeta  (2018)  yang  menyatakan  bahwa  tinta  cumi-cumi memiliki  aktivitas  antioksidan  hingga  94,87%  dan  dapat  meningkatkan  viabilitas spermatozoa yang mengalami penurunan akibat aktivitas radikal bebas dari D-Galaktosa [23].

## PENUTUP
Penelitian  yang  telah  dilaksanakan  menunjukkan  bahwa  tinta  cumi-cumi  mampu memperbaiki kerusakan pada proses spermatogenesis akibat aktivitas D-Galaktosa, sehingga jumlah, motilitas, dan viabilitas spermatozoa mencit mengalami peningkatan. Sehingga dapat disimpulkan bahwa tinta cumi-cumi dapat dikembangkan dalam bidang famakologi dan medis sebagai metode pengobatan alternatif terhadap infertilitas.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Jin, K. 2010. Modern Biological Theories of Aging. Aging and Disease . 1(2): 72-74.
2. Walczak-Jedrzejowska, R., Wolski J. K., and Slowikowska-Hilczer J. 2013. The Role of Oxidative  Stress  and  Antioxidant  in  Male  Fertility. Central  European  Journal  of Urology . 66(1): 60-67.
3. Swastika,  A.,  Mufrod,  dan  Purwanto.  2013.  Aktivitas  Antioksidan  Krim  Ekstrak  Sari Tomat ( Solanum lycopersicum L.). Traditional Medicine Journal . 18(3): 132-140.
4. López-Otín,  C.,  Blasco  M.  A.,  Partridge  L.,  Serrano  M.,  and  Kroemer  G.  2013.  The Hallmarks of Aging. Cell . 153(6):1194-1217.
5. Dillasamola,  D.  2021. Infertilitas:  Kumpulan  Jurnal  Penelitian  Mengenai  Infertilitas . Padang: LPPM Universitas Andalas.
6. Stone, B. A., Alex A., Werlin L. B., and Marrs R. P. 2013. Age Thresholds for Changes in Semen Parameters in Men. Fertility and Sterility . 100(4): 952-958.
7. Mohammadi, E., Mehri S., Bostan H. B., and Hosseinzadeh H. 2018. Protective Effect of  Crocin  Against  D-Galactose  Induced  Aging  in  Mice. Avicenna Journal  of Phytomedicine . 8(1): 14-23.
8. Parwata, M. O. A. 2016. Antioksidan . Bali: Program Pascasarjana Universitas Udayana.
9. Affandi, R. I., Fadjar M., and Ekawati A. W. 2019. Active Compounds on Squid ( Loligo sp.)  Ink  Extract  Powder  as  Immunostimulants  Candidate  to  Against  Shrimp  Disease. Research Journal of Life Sciences . 6(3); 150-161.
10. Fatmawati,  D.,  Israhnanto  I.,  Iwang  Y.,  dan  Suparmi.  2016.  Kualitas  Spermatozoa Mencit  Balb/C  Jantan  Setelah  Pemberian  Ekstrak  Buah  Kepel  (Stelechocarpus burahol). MKB . 48(3); 155-159.
11. Zhang, Q., Yang C., Zhang M., Lu X., Cao W., Xie C., Li X., Wu J., Zhong C., and Geng S.  2021.  Protective  Effects  of  Ginseng  Stem-Leaf  Saponins  on  D-Galactose  Induced Reproductive Injury in Male Mice. Aging . 13(6): 8916-8928.
12. Salman, M. T., Olayaki A. L., Alagbonsi A. I., and Oyewopo O. A. 2016. Spermatotoxic Effects of Galactose and Possible Mechanisms of Action. Middle East Fertility Society Journal . 21: 82-90.
13. Liao, H. C., Chen H. B., Chiang S. H., Chen W. C., Chen F. M., Ke C. C., Wang Y. Y., Lin N. W., Wang C. C., and Lin H. Y. 2016. Optimilizing a Male Reproductive Aging Mouse Model  by D-Galactose  Injection. International Journal of  Molecular  Sciences . 17(1): 98-108.
14. Gu, Y. P., Yang X. M., Duan Z. H., Shang J. H., Luo P., Xiao W., Zhang D. Y. and Liu H. Z. 2017. Squid Ink Polysaccharide Prevents Autophagy and Oxidative Stress Affected by Cyclophosphamide in Leydig Cells of Mice: a Pilot Study. Iranian Journal of Basic Medical Sciences . 20(11); 1194-1199.
15. Liu,  H.,  Luo  P.,  Chen  S.,  amd  Shang  J.  2011.  Effects  of  Squid  Ink  on  Growth Performance, Antioxidant Functions, and Immunity in Growing Broiler Chickens. Asian Australasian Journal of Animal Sciences . 24(12): 1752-1756.
16. Unitly,  A.  J.  A.,  Eddy  L.,  Nindatu  M.,  dan  Reasoa.  2022.  Peningkatan  Motilitas  dan Viabilitas  Spermatozoa Rattus  novergicus Terpapar  Asap  Rokok  Pasca  Diterapi  Sirup Cengkeh. Jurnal Biologi Edukasi . 14(1): 14-20.
17. Piomboni, P., Focarelli R., Stendardi A., Ferramosca, and Zara aV. 2012. The Role of Mtochondria in Energy Production for Human Sperm Motility. International Journal of Andrology . 35: 109-124.
18. David, B. K., Isaac T. A., Ajayi F. A., Adebola O. A., Isaac A. J., Peter B. A., Grace A., Kayode T. O., and Oyekunle S. O. 2022. Effect of Vernonia amygdalina Leaves Extract on Testicular Functions of D-Galactose Induced Ageing Male Albino Rats. Journal of Pharmacology and Toxicology . 17(1): 1-13.
19. Nasution, F. M., Mardia R. s., Azri A., Hutabarat R. R., Al-izza F. dan Asfur R. 2017. Pengaruh Pemberian Ekstrak Tinta Cumi (Squid Ink) terhadap Aterosklerosis. Jurnal e- Biomedik . 5(2).
20. Putra, L. M. dan Nur D. 2019. Viabilitas Spermatozoa Kambing Boer Pasca Pembekuan dalam Pengencer Tris Dasar Soya dengan Kombinasi Gula yang Berbeda. LenteraBio . 8(1): 31-35.
21. Riyad, M. Y., Rizki E. A., and Mohammed E. S. N. 2020. Active Components of Squid Ink and Food Applications. Egyptian Journal of Food Science . 48(1): 123-133.
22. Zulaikhah, S. T. 2017. The Role of Antioxidant to Prevent Free Radicals in the Body. Jurnal Sains Medika . 8(1): 39.45.
23. Zaharah,  F.  and  Rabeta.  2018.  Antioxidant  and  Antimicrobial  Activities  of  Squid  Ink Powder. Journal of Food Research . 2(1): 82-88.