## Optimalisasi Produksi Triterpenoid Dari Sangketan ( Achyranthes aspera ) Dengan Budidaya Organik

## Optimization of Triterpenoid Production from Sangketan (Achyranthes aspera) with Organic Cultivation
Zaenal Fanani*; Umi Farida; Muhammad Bayu Nirwana Universitas Muhammadiyah Kudus *E-mail : zaenalfanani@umkudus.ac.id Paper submit : 10 Desember 2019, Paper publish : Maret 2021
Abstract – The need for medicinal raw materials is increasing, in line with the increasing of traditional medicine utilization. Sangketan (Achyranthes aspera) is one of the potential medicinal plants, considering this plant contains active compounds that are beneficial for health. Triterpenoids are one of the main secondary metabolites of Sangketan. The purpose of this study was to determine the optimal combination of growing media, that could support the extract production from Sangketan. In Sangketan cultivation, given treatment at growing media composition of soil + rice husk charcoal, with comparison 1:1; 1:2 and 2:1. Whereas the fertigation uses goat manure fertilizer, with a concentration of 1 kg per 5 liters of water, dose of 60 ml per plant every two weeks. Sangketan is harvested after 4-5 months, then qualitative analysis is performed of resulting extracts. The research data was applied using simplex lattice design (SLD), to obtain the optimal combination of growing media. Qualitative data of Sangketan extract containing triterpenoid compounds, have been analyzed by chloroform and concentrated H2SO4 reagents, characterized by a reddish brown layer. Sangketan resulting extracts was applied using SLD, obtained the equation Y = 8.94 (Charcoal) + 11.585 (Soil) + 14.26 (Charcoal.Soil). The triterpenoid compound in Sangketan extract was proven using thin layer chromatography, showed marker compounds in form of gray spot under UV light 254 nm at Rf value 0.65.
Keywords: Sangketan, Extract, Qualitative, SLD
Abstrak – Kebutuhan  akan  bahan  baku  obat  semakin  meningkat  sejalan  dengan  pemanfaatan  obat  tradisional  yang  semakin meningkat. Sangketan (Achyranthes aspera) adalah salah satu tanaman obat potensial, mengingat tanaman ini memiliki kandungan senyawa  aktif  yang  bermanfaat  untuk  kesehatan.  Triterpenoid  merupakan  salah  satu  kandungan  metabolit  sekunder  utama  dari Sangketan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui kombinasi dari komposisi media tanam dan aplikasi fertigasi dengan pupuk organik, yang dapat mendukung produksi senyawa triterpenoid dari Sangketan secara optimal. Pada budidaya Sangketan diberikan perlakuan perbandingan komposisi media tanah + arang sekam padi 1:1; 1:2 dan 2:1. Sedangkan aplikasi fertigasi menggunakan pupuk organik kotoran kambing, dengan konsentrasi 1kg pupuk organik per 5 liter air, dosis 60 ml per tanaman dan diaplikasikan setiap dua minggu. Sangketan di panen setelah 4-5 bulan, kemudian dilakukan analisis kualitatif kandungan triterpenoid menggunakan metode  kromatografi  lapis  tipis.  Data  yang  diperoleh  diaplikasikan  menggunakan  metode  simplex  lattice  design  (SLD),  untuk memperoleh  kombinasi  yang  optimal.  Data  kualitatif  ekstrak  Sangketan  yang  mengandungan  senyawa  triterpenoid,  telah  dianalisis dengan pereaksi kloroform dan H2SO4 pekat, ditandai dengan adanya lapisan warna coklat kemerahan. Data kuantitatif rendemen ekstrak Sangketan diaplikasikan menggunakan metode simplex lattice design, diperoleh persamaan Y = 8,94(Arang) + 11,585(Tanah) + 14,26(Arang.Tanah). Kandungan triterpenoid pada ekstrak Sangketan dibuktikan menggunakan kromatografi lapis tipis, berupa bercak warna abu-abu di bawah sinar UV 254 nm dengan nilai Rf 0,65.
Kata kunci: Sangketan, Ekstrak, Kualitatif, SLD

## PENDAHULUAN
Tanaman Sangketan ( Achyranthes aspera )  mudah  tumbuh  liar  di  di  tempat terbuka  dan  biasanya  tumbuh  di  pinggir – pinggir  jalan,  perkarangang  kosong  dan  di ladang.  Tanaman  Sangketan  jarang  sekali orang membudidayakan seperti di tanaman di pot layaknya tanaman lainya, karena tanaman
ini  kelihatan  dari  bentuk  fisiknya  bila tersentuh  kulit  menjadi  gatal  akan  tetapi sebenarnya tidak gatal dan sedikit orang  tahu akan  kemanfaatnya  ini  yang  menjadikan orang  enggan  untuk  merawat  dan membudidayakanya (Kurdi, 2010).
Penelitian  tanaman  Sangketan  yang pernah dilaporkan adalah Skrining Fitokimia Terhadap Tumbuhan yang Mempunyai Daya
Sitotoksik Terbesar Terhadap Artemia salina dari  Beberapa  Tumbuhan  Suku  Labiatae (Muawanah,  2000).  Hasil  skrining  fitokimia yang  dilakukan  terhadap  daun  Sangketan yang mempunyai daya sitotoksik, menunjukkan  adanya  kandungan  minyak atsiri,  senyawa  terpenoid  bebas,  saponin triterpenoid, flavonoid dan polifenol.
Dalam upaya meningkatkan produktivitas,  kualitas,  dan  kontinuitas tanaman  obat,  diperlukan  upaya  perbaikan teknik  budidaya.  Salah  satu  usaha  tersebut adalah dengan menggunakan bahan organik untuk media tanam. Media tanam yang tepat merupakan  salah  satu  syarat  keberhasilan budidaya  tanaman  obat.  Penggunaan  media tanam yang tepat akan memberikan kondisi lingkungan  yang  optimal  bagi  pertumbuhan tanaman.  Media  tanam  yang  baik  memiliki kemampuan menyediakan air dan udara yang optimum (Fitrianah dkk., 2012).
Pupuk kotoran hewan dan arang sekam padi  merupakan  bahan  organik  yang  dapat digunakan  sebagai  campuran  media  tanam. Bahan organik mengandung sejumlah unsur hara yang dapat memperbaiki sifat fisik, kimia dan biologi tanah (Suwahyono, 2011). Dalam budidaya tanaman obat dianjurkan menggunakan bahan organik, karena apabila menggunakan  pupuk  kimia  dikhawatirkan dapat memberikan efek negatif berupa residu kimia.
Hasil  penelitian  Sangketan  di  tingkat hilir  cukup  banyak,  namun  sebaliknya penelitian  di  tingkat  hulu  masih  sangat kurang.  Hal  ini  dikarenakan  tanaman Sangketan  banyak  tumbuh  liar,  sehingga perolehan  bahan  baku  masih  bergantung pada  alam.  Namun  sistem  perolehan  bahan baku tanpa adanya budidaya, pada suatu saat Sangketan  menjadi  langka.  Selain  itu  mutu bahan baku sangat bervariasi, sehingga perlu disiapkan teknologi budidaya yang terstandardisasi.  Dengan  komposisi  media tanam    yang  tepat  dan  penggunaan  pupuk organik,  akan  mendukung  pertumbuhan, produksi  biomassa  dan  bioaktif  pada Sangketan.
METODE PENELITIAN

## 1. Alat dan Bahan
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Kebun Percobaan Farmasi STIKES Muhammadiyah Kudus.  Alat  untuk  budidaya  Sangketan adalah  alat  ukur,  timbangan,  gunting  setek, sprayer,  alat  pertanian,  paranet  dengan naungan, dan alat tulis. Alat yang digunakan untuk analisis kandungan triterpenoid adalah set  alat  KLT,  Labu  ekstraktor,  gelas  ukur, kertas saring dan timbangan digital. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tanah yang diambil dari Kebun Percobaan Farmasi STIKES Muhammadiyah  Kudus,  arang  sekam  padi, kotoran  ayam,  kotoran  kambing,  kotoran sapi,  polybag  ukuran  10x15  untuk pembibitan,  polybag  ukuran  25x30  untuk penanaman.  Bahan  yang  digunakan  untuk analisis  kandungan  triterpenoid  adalah aquades,  etanol    96%,  kloroform,  H2SO4 pekat, petroleum eter, metanol, Silika Gel 60 F 254 dan vanilin.
2. Metode dan Desain Penelitian Tanaman  Sangketan  yang  digunakan sebagai bahan baku dipanen setelah berumur 4-5  bulan,  adapun  komposisi  media  tanam sebagai berikut:
P1 = Komposisi media tanam 1 : 1 ( ½ bagian tanah : ½ arang sekam padi) P2  =  Komposisi  media  tanam  1  :  2  (  1/3 bagian tanah : 2/3 arang sekam padi) P3  =  Komposisi  media  tanam  2  :  1  (  2/3 bagian tanah : 1/3 arang sekam padi) Metode  penelitian  yang  digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap, dilakukan tiga  kali  ulangan  pada  masing-masing komposisi  media  tanam,  dengan  aplikasi fertigasi menggunakan kotoran kambing. Bibit  yang  digunakan  adalah  bibit  hasil persemaian  dari  biji  yang  tingginya  telah mencapai lebih kurang 5-10 cm, segar, tidak terserang  hama  dan  penyakit,  bentuk pertumbuhan normal dan tidak cacat. Cara  penanamannya,  setiap  bibit dipindahkan  dari  polibag  persemaian  ke polybag  baru  yang  telah  diisi  media  sesuai dengan perlakuan masing-masing. Setelah itu, seluruh polybag berisi tanaman diletakkan di dalam  net  house.  Pemeliharaan  selama penelitian yang dilakukan adalah penyiraman,
pemupukan,  penyiangan,  dan  pengendalian organisme  pengganggu  tanaman.  Aplikasi fertigasi  dilakukan  setiap  dua  minggu  sekali dengan  dosis  60  ml.  Pupuk  kandang  untuk fertigasi  menggunakan  konsentrasi  1 kilogram bahan per 5 liter air. Analisis kandungan triterpenoid dilakukan  secara  kualitatif  dan  kuantitatif. Pengujian  kualitatif  triterpenoid,  2  gram serbuk kering Sangketan pada tabung reaksi diekstraksi dengan etanol 96% selama 1 jam kemudian  disaring.  Ekstrak    kemudian dipanaskan  hingga  kering  dan  diletakkan pada  cawan.  Setelah  kering,  ditambahkan  2 ml  kloroform  dan  3ml  H2SO4  pekat.  Uji triterpenoid  positif  ditandai  dengan  adanya lapisan warna coklat kemerahan.
Pengujian kuantitatif triterpenoid, 500 gram  serbuk  kering  Sangketan  pada  tabung reaksi  diekstraksi  dengan  petroleum  eter selama  2  jam  pada  suhu  50 0 C  kemudian disaring.  Ekstrak  kemudian  dipanaskan hingga  kering  dan  diletakkan  pada  cawan. Kemudian  diekstraksi  lagi  dengan  metanol selama  2  jam  pada  suhu  50 0 C  kemudian
disaring.  Ekstrak  kemudian  dipanaskan hingga kering dan diletakkan pada cawan dan siap diaplikasikan pada KLT.
Setelah  didapatkan  ekstrak  metanol yang kering, dilarutkan dengan 1mL metanol.
Sebanyak 6µ ditotolkan dengan menggunakan micropipet di  atas  fase  diam Silika  Gel  60  F 254 dengan  fase  gerak kloroform  -  metanol  (7:3).  Pengelusian sampai  jarak  8  cm,  deteksi  menggunakan sinar UV 254 , UV 366 , pereaksi semprot vanillin asam-sulfat dan sinar tampak (visibel).
3. Analisis Data Data yang didapat berupa berat kering ekstrak metanol yang mengandung triterpenoid, dijadikan acuan tingkat produksi triterpenoid pada Sangketan. Aplikasi dengan simplex  lattice  design ,  dapat  menunjukkan formula  yang  tepat  terkait  komposisi  media tanam  tanah  +  arang  sekam  padi  serta fertigasi pupuk kandang. Sehingga mendukung  produksi  triterpenoid  yang optimal pada budidaya organik Sangketan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Bibit yang digunakan adalah bibit hasil persemaian  dari  biji  yang  tingginya  telah mencapai lebih kurang 5-10 cm, segar, tidak terserang  hama  dan  penyakit,  bentuk pertumbuhan  normal  dan  tidak  cacat.  Cara penanamannya, setiap bibit dipindahkan dari polibag persemaian ke kebun percobaan yang telah  diatur  media  sesuai  dengan  perlakuan masing-masing. Pemeliharaan selama penelitian yang dilakukan adalah penyiraman,
pemupukan,  penyiangan,  dan  pengendalian organisme  pengganggu  tanaman.  Aplikasi fertigasi  dilakukan  setiap  dua  minggu  sekali dengan  dosis  60  ml.  Pupuk  kandang  untuk fertigasi  menggunakan  konsentrasi  1 kilogram  bahan  per  5  liter  air.  Metode penelitian yang digunakan adalah Rancangan Acak  Lengkap,  dilakukan  tiga  kali  ulangan pada masing-masing komposisi media tanam. Tanaman Sangketan yang digunakan sebagai bahan  baku  dipanen  setelah  berumur  2,5 bulan,  berat  hasil  panen  sebagai  berikut (Tabel 1).

## Tabel 1. Berat tanaman Sangketan
Panen\Perlakuan P1 P2 P3 Basah 24,86 Kg 22,90 Kg 27,16 Kg Kering 3,73 Kg 3,44 Kg 4,08 Kg
Data  kualitatif  ekstrak  Sangketan  yang mengandungan  senyawa  triterpenoid,  telah dianalisis  dengan  pereaksi  kloroform  dan H 2 SO4 pekat, ditandai dengan adanya lapisan warna  coklat  kemerahan  (Gambar  1). Salkowski  Test,  sekitar  2  mg  ekstrak  kering
digojog dengan 1 ml kloroform dan beberapa tetes  asam  sulfat  pekat  ditambahkan  di sepanjang  sisi  tabung  reaksi.  Warna  merah coklat  yang  terbentuk  pada  antarmuka menunjukkan  tes  positif  untuk  triterpenoid (ROOPALATHA, 2013).

## Gambar 1. Analisis dengan pereaksi kloroform dan H2SO4 pekat
Data kuantitatif rendemen ekstrak Sangketan diaplikasikan  menggunakan  metode simplex lattice  design, diperoleh  persamaan  Y  = 8,94(Arang) + 11,585(Tanah) +
14,26(Arang.Tanah).
Koefisien dalam persamaan  diperoleh  dari  perhitungan  rata- rata  rendemen  ekstrak  Sangketan  (Tabel  2). Langkah-langkah optimasinya
adalah
penentuan komposisi campuran menggunakan metode simplex lattice design, dilakukan  dengan  total  campuran  tertentu.
Masing-masing bahan harus ditentukan batas minimal  dan  maksimal,  sehingga  dapat diketahui respon pengaruh tiap-tiap campuran bahan (Babaki dkk., 2017).
Tabel 2. Rata-rata rendemen ekstrak Sangketan (prosentase) Replikasi Arang Tanah Arang.Tanah I 8,94 11,59 14,26 II 9,39 11,68 14,36 III 8,49 11,49 14,16 Rata-Rata 8,94 11,585 14,26 Kandungan  triterpenoid  pada  ekstrak Sangketan
dibuktikan menggunakan kromatografi lapis tipis, berupa bercak warna abu-abu di bawah sinar UV 254 nm dengan nilai  Rf  0,65  (Gambar  2).  Skrining  cepat
triterpenoid  telah  diteliti  menggunakan kromatografi  lapis  tipis  (TLC).  Pemisahan yang  baik  dengan  fase  gerak  kloroform  : metanol (9 : 1 v/v) (Tandon, 2011).

## Gambar 2. Kromatogram
Bercak
dapat diidentifikasi setelah penyemprotan  reagen  vanilin  -  asam  sulfat. Bercak  warna  abu-abu  dengan  nilai  Rf  0,53 dikaitkan  sebagai  triterpenoid  untuk  A. aspera  (Ankad  dkk.,  2015).  Analisis  untuk senyawa identitas dari tanaman Sangketan, di mana  telah  didapatkan  profil  TLC berdasarkan nilai Rf. Bercak warna abu-abu di bawah sinar UV 254 nm pada nilai Rf 0,47 dapat  dikaitkan  sebagai  triterpenoid  dari  A. aspera (Rusnoto dkk., 2019).

## SIMPULAN
Data  kualitatif  ekstrak  Sangketan  yang mengandungan  senyawa  triterpenoid,  telah dianalisis  dengan  pereaksi  kloroform  dan H2SO4  pekat,  ditandai  dengan  adanya lapisan  warna  coklat  kemerahan.  Data kuantitatif  rendemen  ekstrak  Sangketan diaplikasikan  menggunakan  metode  simplex lattice  design,  diperoleh  persamaan  Y  = 8,94(Arang)
+ 11,585(Tanah) + 14,26(Arang.Tanah). Kandungan triterpenoid pada ekstrak Sangketan dibuktikan menggunakan kromatografi lapis tipis, berupa bercak warna abu-abu di bawah sinar UV 254 nm dengan nilai Rf 0,65.

## DAFTAR PUSTAKA
Ankad, G.M., Pai, S.R., Upadhya, V., Hurkadale, P.J., dan Hegde, H.V. 2015. Pharmacognostic evaluation  of Achyranthes  coynei :  Leaf.  Egyptian  journal  of  basic  and  applied  sciences. 2(2015):25-31.
Babaki, M. Yousefi, M. Habibi, Z. dan Mohammad, M. 2017. Process Optimization for Biodiesel Production  from  Waste Cooking  Oil  Using  Multi-Enzyme  Systems  Through  Response Surface Methodology. Journal of Renewable Energy.
Fitrianah, L., Fatimah, S., dan Hidayati, Y. 2012. PENGARUH KOMPOSISI MEDIA TANAM TERHADAP  PERTUMBUHAN  DAN  KANDUNGAN  SAPONIN  PADA  DUA VARIETAS TANAMAN GENDOLA ( Basella sp). Agrovigor. 5 (1). Kurdi, A. 2010. Tanaman Herbal Indonesia. https://aseranikurdi.files.wordpress.com/2011/09/tanaman-herbal.pdf.
Muawanah, A. 2000. Skrining Fitokimia Terhadap Tumbuhan yang Mempunyai Daya Sitotoksik Terbesar Terhadap Artemia salina (Leach) dari Beberapa Tumbuhan Suku Labiatae . Tesis. Fakultas Farmasi Universitas Surabaya.
ROOPALATHA,  U.C.,  dan  NAIR,  V.M.  2013.  PHYTOCHEMICAL  ANALYSIS  OF SUCCESSIVE REEXTRACTS OF THE LEAVES OF MORINGA OLEIFERA LAM. Int J Pharm Pharm Sci. 5(3):629-634.
Rusnoto, Fanani, Z., dan Nisak, A.Z. 2019. Thin Layer Chromatographic Identification of the Whole Plant of Sangketan (Achyranthes Aspera). Journal of Physics: Conf. Series. 1179: 012125.
Suwahyono, U. 2011. Petunjuk Praktis Penggunaan Pupuk Organik Secara Efektif Dan Efisien.
Jakarta: Penebar Swadaya.
Tandon, N. 2011. Quality standards of Indian medicinal plants, vol. 9. New Delhi: Indian Council of Medical Research