## BIOEDUSAINS:Jurnal Pendidikan Biologi dan Sains
Volume 6, No 1, Januari - Juni 2023 e-ISSN : 2598-7453 DOI : https://doi.org/10.31539/bioedusains.v6i1.5801

## PERUBAHAN FITOKIMIA KECAMBAH KEMBANG KOL
( Brassica oleraceae L., var . botrytis ) SEBAGAI

## RESPONS TERHADAP CAHAYA BIRU

## Mohamad Agus Salim
Universitas Islam Negeri Sunan Gunung Djati agus.salim@uinsgd.ac.id

## ABSTRAK
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengamati  penggunaan  cahaya  biru terhadap  perubahan  fitokimia  selama  perkecambahan  kembang  kol  ( Brassica oleraceae L.,  var. botrytis )  dan  korelasi  antar  parameter  yang  diukur. Perlakuannya  berupa  pemberian  cahaya  biru  dan  kondisi  gelap  sebagai  kontrol. Pengukuran  senyawa  fitokimia  yang  meliputi  asam  askorbat,  glukosinolat, isothiosianat  dan  enzim  myrosinase  dilakukan  setiap  hari  selama  5  hari perkecambahan. Metode penelitian ini adalah penelitian eksperimental. Data yang diperoleh  dari  pengukuran  untuk  semua  parameter  disajikan  dalam  bentuk  rata- rata ± standard error . Selanjutnya semua data dianalisis menggunakan analysis of variance (ANOVA).  Untuk  menentukan  perbedaan  antar  kelompok,  digunakan Duncan's  multiple  range  test (DMRT)  pada  tingkat  kepercayaan  95%.  Semua analisis  data  menggunakan software  SPSS  versi  24.0 (IBM,  Chicago,  IL,  USA). Selain  itu,  pengukuran  korelasi  antar  parameter  dilakukan  dengan  menggunakan Pearson  rank  correlation  coefficient .  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa perlakuan cahaya biru secara nyata meningkatkan semua parameter fitokimia yang diukur.  Korelasi  positif  signifikan  terjadi  antara  aktivitas  myrosinase  dan pembentukan isothiosianat. Kandungan glukosinolat kecambah kembang kol tetap tinggi  selama  pengamatan  pada  perlakuan  cahaya  biru  dibandingkan  dengan kondisi gelap. Cahaya biru menginduksi pembentukan isothiosianat dan aktivitas myrosinase lebih tinggi bila dibandingkan kondisi gelap. Simpulan dari penelitian ini  bahwa  cahaya  biru  secara  signifikan  meningkatkan  perubahan  fitokimia kecambah kembang kol.
Kata kunci : Asam Askorbat, Glukosinolat, İsothiosianat, Korelasi, Myrosinase

## ABSTRACT
The  aim  of  this  study  was  to  observe  the  use  of  blue  light  on  phytochemical changes during cauliflower (Brassica oleraceae L., var. botrytis) germination and the correlation between the parameters measured. The treatment was in the form of  giving  blue  light  and  dark  conditions  as  a  control.  Measurement  of phytochemical compounds including ascorbic acid, glucosinolates, isothiocyanates and myrosinase enzymes was carried out every day for 5 days of germination. This research method is experimental research. Data obtained from measurements  for  all  parameters  are  presented  in  the  form  of  mean  ±  standard
error. Furthermore, all data were analyzed using analysis of variance (ANOVA). To  determine  differences  between  groups,  Duncan's  multiple  range  test  (DMRT) was  used  at  the  95%  confidence  level.  All  data  analysis  used  SPSS  software version  24.0  (IBM,  Chicago,  IL,  USA).  In  addition,  the  measurement  of  the correlation between parameters is carried out using the Pearson rank correlation coefficient. The results showed that blue light treatment significantly increased all measured  phytochemical  parameters.  A  significant  positive  correlation  occurred between  myrosinase  activity  and  isothiocyanate  formation.  The  glucosinolate content of cauliflower sprouts remained high during observations in the blue light treatment  compared  to  the  dark  conditions.  Blue  light  induces  isothiocyanate formation and higher myrosinase activity when compared to dark conditions. The conclusion  from  this  study  is  that  blue  light  significantly  increases  the phytochemical changes of cauliflower sprouts.
Keywords: Ascorbic Acid, Glucosinolate, Isothiocyanate, Correlation, Myrosinase

## PENDAHULUAN
Sayuran kelompok kubis kubisan atau Brassica seperti brokoli, kubis, dan kembang  kol  memiliki  manfaat  kesehatan  yang  besar  dalam  mengatasi  gejala penyakit  kronis  seperti  kanker  dan  aterosklerosis  (Idrees  et  al.,  2019).  Manfaat sayuran  ini  terkait  dengan  senyawa  bioaktifnya  seperti  asam  askorbat, glukosinolat,  isothiosianat,  dan  enzim  myrosinase.  Fungsi  glukosinolat  bersama dengan  myrosinase  menghasilkan  zat  terhidrolisis  seperti  thiosianat,  oksazolidin, epithionitril,  nitril  dan  isothiosianat  yang  muncul  saat  terjadi  kerusakan  sel  atau jaringan pada organisme (Wu et al., 2022). Dilaporkan oleh Mastuo et al. (2020) bahwa  isothiocyanat  telah  terbukti  sebagai  senyawa  anti-karsinogenik  alami. Selanjutnya,  baik  penelitian  secara in  vivo maupun in  vitro menunjukkan  bahwa isothiosianat  akan  mengaktifkan  enzim  fase  II  dan  menonaktifkan  enzim  fase  I sehingga proses karsinogenesis dapat dihindari. (Mitsiogianni et al., 2021).
Kecambah  merupakan  sayuran  kecil  yang  semakin  populer  karena memiliki beragam manfaat bagi kesehatan manusia dibandingkan dengan sayuran dewasanya.  Kecambah  mengandung  senyawa  bioaktif  yang  melimpah  dan kualitas nutrisi terbaik yang tersedia dalam suatu tanaman (Wojdyło et al., 2020). Kandungan  glukosinolat  sebagai  senyawa  bioaktif  sangat  melimpah  pada kecambah  kubis  kubisan  (Abellán  et  al.,  2019).  Almuhayawi  et  al.  (2020)  telah melaporkan  bahwa  kecambah  brokoli  mengandung  glukosinolat  20  kali  lebih banyak daripada brokoli dewasa. Selama perkecambahan akan terjadi peningkatan kandungan  asam  askorbat,  sehingga  kecambah  menjadi  sumber  vitamin  C  yang sangat dibutuhkan untuk kesehatan manusia (Fiutak and Michalczyk, 2020).
Hasil  penelitian  sebelumnya  menunjukkan  bahwa  cahaya  dapat meningkatkan  pertumbuhan  dan  perkembangan  tanaman  karena  memberikan energi  yang  tinggi  dan  juga  dapat  mempercepat  pembentukan  senyawa  bioaktif
(Artés-Hernández  et  al. , 2022). Noguchi  et  al.  (2021) melaporkan  bahwa perlakuan  cahaya  biru  meningkatkan  aktivitas  myrosinase  dari  hipokotil  lobak sejak  10  menit  pengamatan  dan  mencapai  puncaknya  pada  30  menit  kemudian. Kecambah  brokoli  yang  diberi  perlakuan  cahaya  biru  dalam  waktu  singkat sebelum dipanen secara signifikan meningkatkan kandungan zat fitokimia seperti β-karoten,  xantofil,  glukosinolat,  glukoraphanin  dan  juga  mikronutrien  esensial (Yang et al., 2021). Xue et al . (2021) menunjukkan bahwa kecambah brokoli yang terkena  cahaya  biru  akan  menghasilkan  senyawa  alifatik-glukosinolat  yang melimpah  dan  meningkatkan  produksi  zat  bioaktif  lain  yang  berharga  bagi kesehatan manusia.
Cahaya  biru  yang  diaplikasikan  pada  kecambah  brokoli  lebih  baik daripada  cahaya  putih,  merah,  kuning,  hijau  dan  ungu  dalam  meningkatkan kualitas  nutrisinya  (Zhuang  et  al.,  2022).  Dengan  demikian,  cahaya  biru  telah terbukti mengatur pertumbuhan dan perkembangan tanaman kubis kubisan secara efektif  dan  juga  merangsang  sintesis  senyawa  bioaktif  seperti  glukosinolat. Penelitian  yang  dilaksanakan  telah  mengamati  pengaruh  cahaya  biru  terhadap perubahan  fitokimia  termasuk  kandungan  asam  askorbat,  glukosinolat, isothiosianat dan aktivitas myrosinase serta korelasi antara parameter yang diukur selama perkecambahan benih kembang kol.

## METODE PENELITIAN Persiapan Bahan
Benih kembang kol diproduksi oleh clause vegetable seeds dan dibeli dari toko pertanian Pusaka Tani (Sumedang, Jawa Barat, Indonesia). Standar Sinigrin, standar sulforaphane dan 1,2-benzenedithiol dipasok oleh Sigma chemical Co . (St Louis,  MO,  USA).  Reagen  dan  bahan  kimia  lain  yang  akan  digunakan  adalah kelas analitik dan dibeli dari Toko Sakura (Bandung, Jawa Barat, Indonesia).

## Perkecambahan
Biji  kembang  kol  disterilkan  dengan  1,5%  natrium  hipoklorit  selama  20 menit  dan  dicuci  dengan  aquades.  Selanjutnya,  benih  direndam  selama  4  jam dalam aquades pada suhu 35⁰C, dan dikultur dalam cawan petri (Ꝋ 15 cm) yang berisi pasir zeolit steril. Benih berkecambah di bawah cahaya biru selama 1, 2, 3, 4, dan 5 hari. Jarak benih dengan sumber cahaya 50 cm dan intensitas cahaya biru (50  µmol  s −1 m −2 ).  Benih  yang  dikecambahkan  pada  kondisi  gelap  digunakan sebagai  kontrol.  Kecambah  setiap  hari  dipanen  kemudian  dicuci  dengan  aquades steril, dikeringkan, dikemas pada kantung plastik, diberi keterangan dan disimpan di dalam lemari es untuk analisis selanjutnya.

## Pengukuran Kandungan Asam Askorbat
Kandungan  asam  askorbat  diukur  mengikuti  prosedur  dari  Volden  et  al. (2009).  Larutan asam oksalat (1%  (b/v) : 10 ml)  sebagai pelarut dalam ekstraksi
kecambah. Setelah tercampur rata, larutan disentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan  9000  rpm.  Supernatan  yang  diperoleh  dipisahkan  menggunakan  filter kertas dengan ukuran pori 0,45 µm. Sampel dimasukkan ke dalam HPLC dengan UV-Diode  Array  Detector pada  229  nm  dan  kolom  C18  fase  terbalik  (4,6x250 mm,  5  µm,  ZORBAX,  Eclipse  ).  Kandungan  asam  askorbat  ditentukan  dengan menggunakan kurva standar dan hasilnya dinyatakan sebagai mg kg -1 berat segar (BS).

## Pengukuran Kandungan Glukosinolat
Kandungan  glukosinolat  diukur  secara  spektrofotometri  menggunakan prosedur Aghajanzadeh et al . (2014). Sampel kering (30 mg) ditambahkan ke 80% metanol  dan  dipanaskan  dalam thermoblock pada  suhu  95°C  selama  tiga  menit untuk  menghentikan  aktivitas  myrosinase.  Setelah  campuran  didinginkan,  30  µL supernatan  dilarutkan  dalam  2  mM disodium  tetrachloropalladate (Na 2 PdC l4 ) (900  µL)  dan  menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS,  absorbansi  ditentukan pada  425  nm.  Kurva  kalibrasi  menggunakan  standar  sinigrin.  Kandungan glukosinolat dinyatakan dalam mg SE g -1 berat kering (BK).

## Pengukuran Pembentukan Isothiosianat
Kandungan  isothiosianat  ditentukan  menurut  Wang  et  al.  (2015)  dengan sedikit  modifikasi.  Kecambah  kembang  kol  segar  (0,4  g)  diencerkan  dengan  air suling (8 ml) dan diinkubasi pada suhu 35°C selama 4 jam. Kemudian diekstraksi dengan  menambahkan  3  ml  metilen  diklorida  selama  30  menit.  Sampel disentrifugasi selama 15 menit pada 10.000 rpm untuk mendapatkan fase organik yang  mengandung  isothiosianat.  Supernatan  dicampur  dengan  metanol  (2  ml),  7 mmol l -1 1,2-benzenedthiol (0,2 ml), 50 mmol l -1 buffer natrium borat (1,8 ml ; pH 8,5)  dan  diinkubasi  pada  60⁰C  selama  50  menit.  Setelah  dingin,  sampel disentrifugasi  dengan  kecepatan  rendah  selama  5  menit.  Supernatan  (20  μl  ) dimuat  ke  kolom  Eclipse  XDB-C18  (Agilent  1200  HPLC).  Kandungan isothiosianat dilaporkan sebagai µmol g -1 BS.

## Pengukuran Aktivitas Myrosinase
Pengukuran  aktivitas  myrosinase  ditentukan  menurut  protokol  Kim  et  al . (2006)  dengan  beberapa  modifikasi.  Kecambah  kembang  kol  (0,2  g)  dicampur dengan 0,1 mol l -1 buffer natrium-fosfat (3 ml; pH 6) dan diinkubasi dalam water bath .  Kemudian  campuran  disentrifugasi  pada  8000  rpm  selama  12  menit. Supernatan (100 μl) dicampur dengan 0,025 mmol l -1 sinigrin hingga volume total 200  μl  dan  diinkubasi  selama  15  menit  pada  suhu  37°C.  Untuk  menghentikan reaksi, sampel diinkubasi selama 5 menit dalam air mendidih. Konsentrasi sinigrin yang  terkandung  dalam  campuran  diukur  secara  spektrofotometri  pada  227  nm. Satu  nm  sinigrin  yang  berubah  per  menit  menunjukkan  satu  unit  myrosinase. Aktivitas myrosinase dinyatakan sebagai unit mg -1 protein.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  pengukuran  untuk  semua  parameter  disajikan dalam  bentuk  rata-rata  ± standard  error .  Selanjutnya  semua  data  dianalisis menggunakan analysis  of  variance (ANOVA).  Untuk  menentukan  perbedaan antar  kelompok,  digunakan Duncan's  multiple  range  test (DMRT)  pada  tingkat kepercayaan  95%.  Semua  analisis  data  menggunakan software  SPSS  versi  24.0
(IBM,  Chicago,  IL,  USA).  Selain  itu,  pengukuran  korelasi  antar  parameter dilakukan dengan menggunakan Pearson rank correlation coefficient .

## HASIL PENELITIAN

## Kandungan Asam Askorbat
Biji  kembang  kol  sebelum  berkecambah  mengandung  asam  askorbat  paling rendah (12,46 mg.kg -1 BS) (Gambar 1). Terlihat, kandungan asam askorbat terus meningkat  seiring  dengan  pertumbuhan  kecambah  dan  mencapai  nilai  tertinggi pada  akhir  pengamatan  masing-masing  sebesar  87,27  dan  64,63  mg  kg-1  BS  di bawah  perlakuan  cahaya  biru  dan  kondisi  gelap.  Perkecambahan  secara  nyata mampu  meningkatkan  kandungan  asam  askorbat  sekitar  5  kali  lipat  pada  akhir pengamatan.  Perlakuan  cahaya  biru  menghasilkan  lebih  banyak  akumulasi  asam askorbat  dalam  kecambah  kembang  kol  dibandingkan  dengan  perlakuan  kondisi gelap.  Kandungan  asam  askorbat  pada  kecambah  kembang  kol  yang  diberi perlakuan  cahaya  biru  pada  umur  1,  2  dan  3  hari  masing-masing  lebih  tinggi 64,78%, 80,10% dan 53,86% dibandingkan dengan yang perlakuan kondisi gelap.
Gambar 1. Perubahan Kandungan Asam Askorbat (Mg Kg -1 BS) pada Kecambah Kembang Kol Selama Lima Hari Perkecambahan
e c bc b ab a e d d c bc bc 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 1 2 3 4 5 A sa m A sk o rb a t (m g /1 0 0 g B S ) Waktu Perkecambahan (hari) cahaya biru gelap

## Kandungan Glukosinolat
Kandungan  glukosinolat  total  kecambah  kembang  kol,  baik  yang  diberi perlakuan  cahaya  biru  maupun  kondisi  gelap,  terus  menurun  seiring  dengan meningkatnya  umur  berkecambah,  meskipun  penurunannya  tidak  signifikan  dari hari  ke-2  sampai  ke-4  (Gambar  2).  Terjadi  penurunan  kandungan  glukosinolat total sekitar 80% pada akhir pengamatan, baik yang diberi perlakuan cahaya biru maupun  kondisi  gelap.  Perlakuan  cahaya  biru  berpengaruh  positif  terhadap kandungan glukosinolat total kecambah kembang kol yang terlihat pada hari ke-1 perkecambahan,  kandungannya  61,90%  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan perlakuan kondisi gelap.
Gambar 2. Perubahan kandungan glukosinolat total (mg SE g -1 BK) pada kecambah kembang kol selama lima hari perkecambahan

## Pembentukan Isothiosianat
Pada  periode  awal  perkecambahan,  baik  perlakuan  cahaya  biru  maupun kondisi gelap mampu meningkatkan kandungan isothiosianat kecambah kembang kol namun menurun drastis setelahnya (Gambar 3). Kandungan isothiosianat pada kecambah yang diberi perlakuan cahaya biru mencapai puncaknya pada hari ke-1 (17,23  μmol  g -1 BS)  dan  pada  kondisi  gelap  hari  ke-2  (13,98  μmol  g -1 BS). Kecambah  kembang  kol  yang  tumbuh  di  bawah  cahaya  biru  akan  menunjukkan pembentukan isothiosianat yang lebih tinggi dibandingkan dengan kondidi gelap.
a b bc bc bc c a cd cd cd cd d 0 10 20 30 40 50 60 0 1 2 3 4 5 G lu k o si n o la t (µ m o l g -1 B K ) Waktu Perkecambahan cahaya biru gelap
Gambar 3. Perubahan pembentukan isothiosianat (µmol g -1 BS) pada kecambah kembang kol selama lima hari perkecambahan

## Aktivitas Myrosinase
Kecambah  kembang  kol  menunjukkan  aktivitas  myrosinase  yang meningkat  hingga  tertinggi  tercapai  pada  hari  ke-1  perkecambahan  baik  pada kecambah yang diberi perlakuan cahaya biru maupun kondisi gelap dan menurun setelahnya  hingga  tetap  stabil  (Gambar  4).  Perlakuan  cahaya  biru  menghasilkan aktivitas  myrosinase  yang  jauh  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  kondisi  gelap. Aktivitas  myrosinase  kecambah  kembang  kol  umur  1  hari  yang  mendapat perlakuan  cahaya  biru  lebih  tinggi  30,18%  dibandingkan  dengan  perlakuan kondisi gelap.
Gambar 4. Perubahan aktivitas myrosinase (U mg -1 protein) pada kecambah kembang kol selama lima hari perkecambahan
d a a b bc c d bc ab bc c c 0 5 10 15 20 25 0 1 2 3 4 5 Is o th io si a n a t (µ m o g -1 B S ) Waktu Perkecambahan (hari) cahaya biru gelap c a ab b bc bc c b bc c c c 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 0 1 2 3 4 5 M y ro si n a se ( U m g -1 p ro te in ) Waktu Perkecambahan (hari) cahaya biru gelap

## Korelasi
Analisis korelasi antara parameter fitokimia kecambah kembang kol yang mendapat  perlakuan  cahaya  biru  (Gambar  5).  Terdapat  korelasi  negatif  yang signifikan  antara  kadar  glukosinolat  dan  asam  askorbat.  Selanjutnya,  hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat hubungan positif yang signifikan dengan nilai  koefisien  korelasi  sebesar  0,993  antara  aktivitas  myrosinase  dan pembentukan  isothiosianat.  Asam  askorbat  berkorelasi  positif  lemah  dengan pembentukan  isothiosianat  dan  aktivitas  myrosinase.  Sedangkan  glukosinolat berkorelasi negatif dengan pembentukan isothiosianat dan aktivitas myrosinase.
ASA GLS ITS AMS ASA 1 GLS -0,932 * 1 ITS 0,194 -0,494 1 AMS 0,134 -0,423 0,993 * 1
Gambar 5. Korelasi antara parameter fitokimia kecambah kembang kol pada perlakuan cahaya biru. Korelasi 1 (biru pekat) menunjukkan korelasi positif sempurna, sedangkan -1 (merah pekat) menggambarkan korelasi negatif sempurna. ASA = asam askorbat; GLS = glukosinolat; ITS=Isothiocyanat; AMS = aktivitas myrosinase; *signifikan pada p≤0,05.

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  Singh  et  al.  (2022)  melaporkan  bahwa  senyawa  asam askorbat  yang  dihasilkan  oleh  kecambah  brokoli  tidak  terdeteksi  atau  sangat rendah. Berbeda dengan penelitian ini yang menunjukkan peningkatan tajam dan konstan  selama  perkecambahan  biji  kembang  kol  (Gambar  1).  Sementara  itu,  da Silva et al. (2021) menunjukkan bahwa sintesis asam askorbat diaktifkan kembali selama  perkecambahan  biji  kubis.  Hasil  penelitian  lain  menyebutkan  bahwa selama perkecambahan biji kubis kandungan asam askorbat akan meningkat tajam kemudian turun kembali ke nilai semula (Mezzetti et al., 2022). Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa waktu perkecambahan sangat mempengaruhi akumulasi asam askorbat dan cahaya biru dapat mempercepat peningkatan kandungan asam askorbat  dibandingkan  dengan  kondisi  gelap.  Menurut  di  Bella  et  al.  (2020) cahaya  biru  akan  menginduksi  kecambah  untuk  melakukan  biosintesis  metabolit sekunder seperti asam askorbat.
Senyawa  glukosinolat  pada  tumbuhan  yang  termasuk  kelompok  kubis kubisan  berasal  dari  dua  proses  yang  berbeda.  Proses  pertama  adalah  adanya penginduksi  eksternal  sehingga  terjadi  biosintesis  glukosinolat,  proses  kedua adalah  reaksi  hidrolisis  yang  dilakukan  dari  dalam  oleh  enzim  myrosinase (Mitreiter and Gigolashvili, 2021). Biasanya pada tanaman kubis kubisan dengan bertambahnya  umur  tanaman  maka  kandungan  glukosinolatnya  akan  semakin
berkurang (Teng et al., 2021). Ada korelasi negatif antara kandungan glukosinolat dan asam askorbat (Gambar 4). Hasil penelitian menunjukkan bahwa kandungan glukosinolat semakin menurun dengan bertambahnya umur kecambah (gambar 2). Sementara  itu,  kandungan  asam  askorbat  meningkat  (Gambar  1).  Banyak penelitian  bertujuan  untuk  meningkatkan  atau  mempertahankan  kandungan glukosinolat.  Aplikasi  cahaya  buatan  (fotoperiode  16  jam  terang/8  jam  gelap) pada kecambah brokoli menghasilkan total senyawa glukosinolat 33% lebih tinggi dibandingkan  pada  saat  gelap  (Castillejo  et  al.,  2021).  Demikian  juga  kecambah lobak yang diberi perlakuan NaCl 100 mM akan memiliki kandungan glukosinolat yang  tinggi  pada  umur  5  dan  7  hari  (Chen  et  al.,  2019) . Perlakuan  sukrosa  dan manitol  pada  kecambah  brokoli  mampu  mengakumulasi  total  glukosinolat. Menurut  Chowdhury  et  al.  (2021)  faktor  lingkungan  seperti  cahaya  dan  suhu dapat  meningkatkan  kandungan  glukosinolat.  Dari  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  cahaya  biru  dapat  mempertahankan  kandungan  glukosinolat  kecambah kembang  kol  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  kondisi  gelap  (Gambar  2). Penelitian Guijarro-Real et al. (2022) melaporkan bahwa penerapan cahaya telah menunjukkan  peningkatan  yang  signifikan  terhadap  pembentukan  glukosinolat pada kecambah sawi. Ada kemungkinan biosintesis glukosinolat didukung dengan adanya  cahaya  biru.  Di  sisi  lain,  cahaya  biru  akan  menghambat  beberapa  proses degradasi yang perlu dibuktikan dalam penelitian lebih lanjut.
Isothiosianat  dalam  kecambah  berasal  dari  glukosinolat  yang  dihidrolisis menggunakan enzim myrosinase. Oleh karena itu, pengamatan isothiosianat tidak lepas  dari  aktivitas  myrosinase  dan  kandungan  glukosinolat.  Kandungan isothiosianat pada kecambah kembang kol meningkat drastis hingga hari pertama dan  menurun  setelahnya  (Gambar  3).  Hal  ini  berkorelasi  dengan  aktivitas myrosinase  yang  mencapai  puncaknya  pada  hari  ke-1  dan  menurun  setelahnya (Gambar  4)  meskipun  sebaliknya  kandungan  glukosinolat  terus  menurun  seiring dengan berjalannya waktu perkecambahan kembang kol. Setelah umur kecambah kembang  kol  lebih  dari  satu  hari,  kandungan  isothiosianat  terus  menurun  akibat penurunan  aktivitas  myrosinase  dan  kandungan  glukosinolat.  Pada  Gambar  5 terlihat jelas bahwa pembentukan isothiosianat berkorelasi positif dengan aktivitas myrosinase  dan  berkorelasi  negatif  dengan  kandungan  glukosinolat.  Kyriakou  et al. (2022) melaporkan bahwa tekanan tinggi akibat perlakuan sukrosa dan manitol dapat  memicu  pembentukan  isothiosianat  yang  lebih  tinggi.  Sedangkan  hasil penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  cahaya  biru  secara  signifikan  meningkatkan pembentukan isothiosianat dibandingkan dengan kondisi gelap (Gambar 3). Salah satu  kemungkinannya  adalah  kandungan  glukosinolat  yang  lebih  tinggi  pada perlakuan  cahaya  biru  (Gambar  2)  karena  tingginya  pembentukan  isothiosianat atau aktivitas myrosinase yang distimulasi oleh cahaya biru (Xie et al., 2022).
Pada  Gambar  4  terlihat  bahwa  kandungan  myrosinase  pada  kecambah kembang kol meningkat hingga hari ke-1, namun kembali menurun hingga akhir pengamatan yang kadarnya hampir sama dengan yang ada di dalam biji. Peristiwa
yang  sama  juga  ditemukan  pada  perkecambahan  brokoli  (Men  et  al.,  2022). Sebenarnya  aktivitas  myrosinase  akan  berbeda  tergantung  pada  organ,  spesies tanaman,  dan  fase  pertumbuhan  (Galádová  et  al.,  2022),  yaitu  selama  2  hari pertama  perkecambahan  aktivitas  akan  meningkat  dan  kemudian  akan  menurun hingga  akhir  pengamatan  (Tomasello  et  al.,  2020).  Beberapa  penelitian menunjukkan  bahwa  perlakuan  glukosa  menghambat  aktivitas  myrosinase  pada kecambah pak choi, tetapi meningkat tajam pada kecambah lobak (Abdalla et al . , 2020).  Begitu  juga  pada  penelitian  lain,  pemberian  sukrosa  176  mM  dapat menghambat  aktivitas  myrosinase  pada  kecambah  kubis  (Beran  et  al.,  2018). Hasil  pengamatan  pada  kecambah  kembang  kol,  perlakuan  cahaya  biru  sangat meningkatkan aktivitas myrosinase dibandingkan pada kondisi gelap (Gambar 4).

## SİMPULAN
Kecambah kembang kol berpotensi sebagai makanan alami dan suplemen makanan  karena  banyak  mengandung  senyawa  bioaktif.  Perlakuan  cahaya  biru pada  perkecambahan  biji  kembang  kol  terbukti  mampu  meningkatkan  asam askorbat,  glukosinolat,  pembentukan  isothiosianat  dan  aktivitas  myrosinase  yang baik untuk kesehatan manusia. Kecambah kembang kol memiliki potensi sebagai makanan  penunjang  kesehatan  dengan  perlakuan  cahaya  biru  yang  dapat dikembangkan baik dalam skala kecil maupun skala industri.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdalla,  M.A.,  Meschede,  C.A.C.  &  Mühling,  K.  H.  (2020).  Selenium  foliar application  alters  patterns  of  glucosinolate  hydrolysis  products  of  pak  choi Brassica  rapa L.  var. chinensis . Scientia  Horticulturae ,  273,  109614.  doi :10.1016/j.scienta. 2020.109614
Abellán,  Á.,  Domínguez-Perles,  R.,  Moreno,  D.A.  &  García-Viguera,  C.  (2019). Sorting  out  the  value  of  cruciferous  sprouts  as  sources  of  bioactive compounds for nutrition and health. Nutrients , 11(2), 429. doi:10.3390/nu11020429
Aghajanzadeh, T., Hawkesford, M.J. & De Kok, L.J. (2014). The significance of glucosinolates  for  sulfur  storage  in  Brassicaceae  seedlings. Frontiers  in Plant Science , 5, 704. doi : 10.3389/fpls.2014.00704
Almuhayawi,  M.S.,  AbdElgawad,  H.,  Al  Jaouni,  S.K.,  Selim,  S.  &  Hassan, A.H.A.  (2020).  Elevated  CO2  improves  glucosinolate  metabolism  and stimulates  anticancer  and  anti-inflammatory  properties  of  broccoli  sprouts. Food Chemistry , 328, 127102. doi:10.1016/j.foodchem.2020.127102 Artés-Hernández,  F.,  Castillejo,  N.  &  Martínez-Zamora,  L.  (2022).  UV  and visible spectrum led lighting as abiotic elicitors of bioactive compounds in sprouts,  microgreens,  and  baby  leaves—a  comprehensive  review  including their mode of action. Foods, 11(3), 265. doi:10.3390/foods11030265
Beran, F., Sporer, T., Paetz, C., Ahn, S.J. & Betzin, F. (2018). One pathway is not enough: the cabbage stem flea beetle Psylliodes chrysocephala uses multiple strategies  to  overcome  the  glucosinolate-myrosinase  defense  in  its  host
plants. Frontiers in Plant Science, 9, 1754. doi:10.3389/fpls.2018.01754
Castillejo,  N.,  Martínez-Zamora,  L.,  Gómez,  P.A.,  Pennisi,  G.  &  Crepaldi,  A. (2021).  Postharvest  yellow  LED  lighting  affects  phenolics  and glucosinolates  biosynthesis  in  broccoli  sprouts. Journal  of  Food Composition and Analysis, 103, 104101. doi:10.1016/j.jfca.2021.104101 Chen,  W.,  Karangwa,  E.,  Yu,  J.,  Xia,  S.  &  Feng,  B.  (2019).  Effect  of  sodium chloride  concentration  on  off-flavor  removal  correlated  to  glucosinolate degradation  and  red  radish  anthocyanin  stability. Journal  of  Food  Science and Technology , 56(2), 937–950. doi:10.1007/s13197-018-03559-8 Chowdhury, M., Kiraga, S., Islam, M.N., Ali, M. & Reza, M.N. (2021). Effects of temperature, relative humidity, and carbon dioxide concentration on growth and  glucosinolate  content  of  kale  grown  in  a  plant  factory. Foods, 10(7), 1524. doi.org/10.3390/foods10071524
da Silva, D.L., de Mello, Prado, R., Tenesaca, L.F.L., da Silva, J.L.F. & Mattiuz, B.H.  (2021).  Silicon  attenuates  calcium  deficiency  by  increasing  ascorbic acid  content,  growth  and  quality  of  cabbage  leaves. Scientific  Reports , 11(1), 1–9. doi:10.1038/s41598-020-80934-6
di  Bella,  M.C.,  Niklas,  A.,  Toscano,  S.,  Picchi,  V.,  &  Romano,  D.  (2020).
Morphometric  characteristics,  polyphenols  and  ascorbic  acid  variation  in Brassica  oleracea  L.  novel  foods:  Sprouts,  microgreens  and  baby  leaves. Agronomy , 10(6), 782. doi:10.3390/agronomy10060782
Fiutak, G. & Michalczyk, M. (2020). Effect of artificial light source on pigments, thiocyanates and ascorbic acid content in kale sprouts ( Brassica oleracea L. var. Sabellica L.). Food Chemistry , 330, 127189. doi:10.1016/j.foodchem.2020.127189 Galádová, H., Polozsányi, Z., Breier, A.  & Šimkovič, M. (2022). Sulphoraphane Affinity-Based  Chromatography  for  the  Purification  of  Myrosinase  from Lepidium sativum Seeds. Biomolecules, 12(3), 406.
doi:10.3390/biom12030406
Guijarro-Real, C., Hernández-Cánovas, L., Abellán-Victorio, Á., Ben-Romdhane, O. & Moreno, D.A. (2022). The Combination of Monochromatic LEDs and Elicitation  with  Stressors  Enhances  the  Accumulation  of  Glucosinolates  in Mustard  Sprouts  with  Species-Dependency. Plants, 11(21),  2961. doi:10.3390/plants11212961
Idrees,  N., Tabassum,  B., Sarah, R. &  Hussain,  M.K. (2019). Natural compound from  genus  brassica  and  their  therapeutic  activities. In  Natural  bio-active compounds (pp. 477–491). Springer. doi:10.1007/978-981-13-7154-7_15 Kim, H.J., Chen, F., Wang, X., & Choi, J.H.( 2006). Effect of methyl jasmonate on  phenolics,  isothiocyanate,  and  metabolic  enzymes  in  radish  sprout ( Raphanus sativus L.). Journal of Agricultural and Food Chemistry, 54(19), 7263–7269. doi:10.1021/jf060568c
Kyriakou,  S.,  Trafalis,  D.T.,  Deligiorgi,  M.V.,  Franco,  R.  &  Pappa,  A.  (2022). Assessment  of  Methodological  Pipelines  for  the  Determination  of Isothiocyanates  Derived  from  Natural  Sources. Antioxidants ,  11(4),  642. doi:10.3390/antiox11040642
Mastuo,  T.,  Miyata,  Y.,  Yuno,  T.,  Mukae,  Y.  &  Otsubo,  A.  (2020).  Molecular mechanisms  of  the  anti-cancer  effects  of  isothiocyanates  from  cruciferous vegetables in bladder cancer. Molecules , 25(3), 575.
https://doi.org/10.3390/molecules25030575 Men, X., Han, X., Lee, S.J., Oh, G. & Park, K.T. (2022). Anti-Obesogenic Effects of Sulforaphane-Rich Broccoli ( Brassica oleracea var. italica ) Sprouts and Myrosinase-Rich  Mustard  (Sinapis  alba  L.)  Seeds  In  Vitro  and  In  Vivo. Nutrients, 14(18), 3814. doi:10.3390/nu14183814
Mezzetti, B., Biondi, F., Balducci, F., Capocasa, F. & Mei, E. (2022). Variation of Nutritional  Quality  Depending  on  Harvested  Plant  Portion  of  Broccoli  and Black Cabbage. Applied Sciences, 12(13), 6668. doi:10.3390/app12136668 Mitreiter, S. & Gigolashvili, T. (2021). Regulation of glucosinolate biosynthesis.
Journal of Experimental Botany, 72(1), 70–91. doi:10.1093/jxb/eraa479
Mitsiogianni,  M.,  Kyriakou,  S.,  Anestopoulos,  I.,  Trafalis,  D.T.  &  Deligiorgi, M.V.  (2021).  An  evaluation  of  the  anti-carcinogenic  response  of  major isothiocyanates  in  non-metastatic  and  metastatic  melanoma  cells. Antioxidants, 10(2), 284. doi:10.3390/antiox10020284
Noguchi,  Y.,  Watanabe,  R.,  Arai,  A.,  Yamada,  K.  &  Hasegawa,  K.  (2021). Synthesis  and  bioactivity  of  4-methylthio-3-butenylisothiocyanate  and raphanusanin,  phototropism-regulating  substances  of  radish  hypocotyls. Tetrahedron Letters, 71, 153025. doi:10.1016/j.tetlet.2021.153025 Singh, S., Kumar, S., Singh, S.P., Yadav, S., Singh, A. & Awasthi, M.K. (2022). Plant spacing and cultivar on quality attributes in sprouting broccoli. South African Journal of Botany, 148, 737–741. doi:10.1016/j.sajb.2022.04.049 Teng,  Z.,  Yu,  Y.,  Zhu,  Z.,  Hong,  S.B.  &  Yang,  B.  (2021).  Melatonin  elevated Sclerotinia sclerotiorum resistance via modulation of ATP and glucosinolate biosynthesis  in  Brassica  rapa  ssp.  pekinensis. Journal  of  Proteomics ,  243, 104264. doi:10.1016/j.jprot.2021.104264
Tomasello, B., Di Mauro, M.D., Malfa, G.A., Acquaviva, R. & Sinatra, F.( 2020). Rapha Myr®, a blend of sulforaphane and myrosinase, exerts antitumor and anoikis-sensitizing  effects  on  human  astrocytoma  cells  modulating  sirtuins and DNA methylation. International Journal of Molecular Sciences, 21(15), 5328. doi:10.3390/ijms21155328
Volden,  J.,  Bengtsson,  G.B.  &  Wicklund,  T.  (2009).  Glucosinolates,  L-ascorbic acid,  total  phenols,  anthocyanins,  antioxidant  capacities  and  colour  in cauliflower ( Brassica oleracea L. ssp. botrytis ); effects of long-term freezer storage. Food Chemistry , 112(4), 967–976.
doi:10.1016/j.foodchem.2008.07.018
Wang,  Z.,  Yang,  R.,  Guo,  L.,  Fang,  M.  &  Zhou,  Y.  (2015).  Effects  of  abscisic acid  on  glucosinolate  content,  isothiocyanate  formation  and  myrosinase activity  in  cabbage  sprouts. International  Journal  of  Food  Science  & Technology, 50(8), 1839–1846. doi:10.1111/ijfs.12848
Wojdyło,  A.,  Nowicka,  P.,  Tkacz,  K.  &  Turkiewicz,  I.P.  (2020).  Sprouts  vs. microgreens  as  novel  functional  foods:  Variation  of  nutritional  and phytochemical  profiles  and  their  in  vitro  bioactive  properties. Molecules, 25(20), 4648. doi:10.3390/molecules 25204648
Wu,  J.,  Cui,  S.,  Liu,  J.,  Tang,  X.  &  Zhao,  J.  (2022).  The  recent  advances  of glucosinolates  and  their  metabolites:  Metabolism,  physiological  functions and  potential  application  strategies. Critical  Reviews  in  Food  Science  and Nutrition , 1–18. doi:10.1080/10408398.2022.2059441
Xie,  C.,  Li,  W.,  Gao,  R.,  Yan,  L.  &  Wang,  P.  (2022).  Determination  of
glucosinolates  in  rapeseed  meal  and  their  degradation  by  myrosinase  from rapeseed  sprouts. Food  Chemistry, 382,  132316.  doi:10.1016/j.foodchem.
2022.132316
Xue,  A.,  Liang,  W.,  Wen,  S.,  Gao,  Y.,  Huang,  X.  (2021).  Metabolomic  analysis based  on  EESI-MS  indicate  blue  LED  light  promotes  aliphatic- glucosinolates  biosynthesis  in  broccoli  sprouts. Journal  of  Food Composition and Analysis, 97, 103777. doi:10.1016/j.jfca.2020.103777 Yang, L., Fanourakis, D., Tsaniklidis, G., Li, K. & Yang, Q. (2021). Contrary to red, blue monochromatic light improves the bioactive compound content in broccoli sprouts. Agronomy, 11(11), 2139. doi:10.3390/agronomy11112139 Zhuang, L., Huang, G., Li, X., Xiao, J. & Guo, L. (2022). Effect of different LED lights on aliphatic glucosinolates metabolism and biochemical characteristics  in  broccoli  sprouts. Food  Research  International, 154, 111015. doi:10.1016/j.foodres. 2022.111015