## Juni 2017
Isolasi dan uji aktivitas antibakteri isolat bakteri endofit dari daun cendana ( Santalum album linn.)
Maya Listya 1 , Desi Sagita 2 , Nur Antriana 3 1,2 Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Harapan Ibu Jambi 1 Program 3 Studi Keperawatan, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Harapan Ibu Jambi antreemik12@gmail.com

## Abstrak
Latar  Belakang: Bakteri  endofit  merupakan  bakteri  yang  dapat  hidup  di  dalam  jaringan  tanaman tanpa  menimbulkan  bahaya  dan  memiliki  senyawa  aktif  yang  sama  seperti  tanaman  inangnya. Bakteri endofit terdapat hampir pada 300.000 jenis tanaman yang ada di bumi. Bakteri endofit dapat diperoleh dengan cara diisolasi dari tanaman yang permukaannya telah disterilkan atau pun dapat diekstrak  untuk  mendapatkan  bakteri  yang  hidup  didalam  jaringan  tanaman.  Cendana  ( Santalum album Linn.)  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  berkhasiat  obat.  Ekstrak  daun  cendana  telah dilaporkan  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri.  Hal  ini  mendorong  perlu  dilakukannya  isolasi bakteri  endofit  dari  daun  Cendana  ( Santalum  album Linn.)  yang  diharapkan  memberi  aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Metode: Penelitian ini menggunakan metode yang meliputi sterilisasi sampel, isolasi bakteri endofit, pemurnian  isolat  bakteri  endofit,  karakterisasi  secara  makroskopis,  mikroskopis  dan  uji  biokimia serta uji aktivitas antibakteri. Pengujian antibakteri menggunakan metode difusi yaitu metode Kirby Bauer. Hasil: Isolat bakteri endofit yang diperoleh dari daun cendana adalah sebanyak 5 isolat yang diberi  kode  D6I3,  D3I1,  1.1  (1’5’1’),  1.2  (2’10’2),  dan  2.2  (2’10’2).  Berdasarkan  uji  aktivitas antibakteri,  5  isolat  bakteri  endofit  dari  daun  Cendana  tidak  memberikan  daya  hambat  yang ditunjukkan dengan tidak terbentuknya zona bening.
Kesimpulan: Ini  menandakan  tidak  adanya  aktivitas  antibakteri  dari  5  isolat  tersebut  terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli .
Kata Kunci : Antibakteri, bakteri endofit, daun cendana, santalum album.

## Abstract
Background: Endophytic  bacteria  is  a  bacteria  that  can  live  inside  plant  tissues  without  causing harm and have the same active compound as the host plant. The endophytic bacteria found nearly 300.000 species of plants on the earth. The endophytic bacteria can be obtained by isolated from a plant  that  its  surface  has  been  sterilized  or  could  be  extracted  to  get  the  bacteria  that  live  inside plant  tissues.  Sandalwood  (Santalum  album  Linn.)  is  one  of  the  medicinal  plants.  Extract  of Sandalwood  leaves  has  been  reported  have  antibacterial  activity.  This  prompted  need  to  do isolation  of  endophytic  bacteria  from  Sandalwood  leaves  (Santalum  album  Linn.)  was  expected  to provide antibacterial activity against Staphylococcus aureus and Escherichia coli.
Method: This  research  used  method  includes  sterilization  of  samples,  isolation  of  endophytic bacteria, purification of endophytic bacteria isolates, characterization macroscopic, microscopic and biochemical tests and antibacterial activity test. Antibacterial testing using the  diffusion method was the method of Kirby Bauer.
Results: Endophytic  bacteria  isolates  were  obtained  from  the  leaves  of  sandalwood  was as  much as 5 isolates coded D6I3, D3I1, 1.1 (1'5'1 '), 1.2 (2'10'2), and 2.2 (2'10'2). Based on the antibacterial activity  test,  five  isolates  of  endophytic  bacteria  from  Sandalwood  leaves  did  not  give  inhibition which indicated by the formation of a clear zone.
Conclusion: This  indicates  the  absence  of  antibacterial  activity  of  five  isolates  of  the  bacterium Staphylococcus aureus and Escherichia coli.
Key words : Antibacterial, endophytic bacteria, Sandalwood Leaf, Santalum album.

## PENDAHULUAN
Bakteri  endofit  merupakan bakteri  yang dapat  diperoleh  dengan  cara  diisolasi  dari tanaman yang permukaannya telah
disterilkan  ataupun  dapat  diekstrak  untuk mendapatkan  bakteri  yang  hidup  didalam jaringan  tanaman  tersebut.  Bakteri  endofit dapat  bertahan  hidup  pada  periode  tertentu
tanpa menimbulkan bahaya pada tanaman (1) . Hubungan  simbiosis  mutualisme  antara bakteri dan tumbuhan memungkinkan bakteri menghasilkan  senyawa  bioaktif  yang  sama seperti tumbuhan inangnya, sehingga bakteri ini  cocok  sebagai  agensia  pengendalian hayati (2) .
Senyawa bioaktif bakteri endofit bermanfaat  sebagai  antibakteri,  antifungi,
antivirus,
antikanker, antidiabetes, antimalaria, dan
imunosupresif serta berpotensi sebagai pemacu
hormon pertumbuhan  tanaman (3) .  Eksplorasi  bakteri endofit  telah  banyak  dikaji  oleh  peneliti sebelumnya.  Namun,  eksplorasi  bakteri endofit  dari  daun  Cendana  ( Santalum  album Linn.)  masih  belum  dilakukan.  Pengujian ekstrak  alkohol  Cendana  sebagai  antibakteri telah dilakukan dan  menunjukkan hasil yang positif terhadap Bacillus cereus Staphylococcus    aureus, dan Pseudomonas aeruginosa dengan terbentuknya zona hambat  bakteri (4) .  Ekstrak  daun  cendana telah  dilaporkan  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli (5) . Sebelumnya jamur endofit telah  berhasil  diisolasi  dari  akar  Cendana ( Santalum  album Linn.)  dengan  inangnya Kuhnia rosmarinifolia (6) .
Penelitian  kali  ini  bertujuan  untuk mengeksplorasi  isolat  bakteri  endofit  yang diisolasi  dari    daun  Cendana  ( Santalum album Linn.),  melihat  adanya  kemampuan antibakteri    isolat    bakteri    endofit    terhadap bakteri S.    aureus dan E.  coli .  Hal  ini  sangat menguntungkan  karena  siklus  hidup  mikroba endofit  lebih  singkat  dibandingkan  siklus hidup  tumbuhan  inangnya  sehingga  dapat menghemat  waktu  produksi  dan  senyawa antibakteri  yang  diperoleh  lebih  besar jumlahnya  tanpa  menggunakan  lahan  yang luas.  Hal  ini  diharapkan  dapat  menjadi  salah satu solusi sebagai antibiotik dalam menangani  berbagai  penyakit  infeksi  yang banyak berkembang di masyarakat.

## METODE

## Sterilisasi Sampel
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi  Farmasi  STIKES  HI  Jambi, sedangkan  sampel  daun  tanaman  Cendana ( Santalum  album Linn.)  diambil  dari  lahan perkebunan  warga  di  Desa  Meranti,  kec. Renah  Pamenang,  kab.  Merangin,  Bangko.
Sampel  daun  cendana  ( Santalum  album Linn.) terlebih dahulu dicuci menggunakan air mengalir, selanjutnya disterilisasi permukaannya yaitu dengan direndam dalam alkohol  70%  selama  1  menit,  kemudian direndam  dalam  natrium  hipoklorit  (NaOCl) 1% selama 5 menit, dan setelah itu direndam kembali  dalam  alkohol  70%  selama  1  menit. Selanjutnya,  dibilas  sebanyak  3  kali  dengan aquades steril (7) .

## Isolasi Bakteri Endofit
Sampel yang telah disterilkan diletakkan pada media Nutrient Agar . Setelah itu, diinkubasi pada  suhu 37 o C. Koloni bakeri endofit  yang  muncul  pada  media  isolasi kemudian  dilakukan  pemurnian.  Pemurnian dilakukan  dengan  menginokulasikan  isolat pada  media  NA  baru  dan  diinkubasi  selama beberapa  hari  pada  suhu  30 o C.  Uji  kontrol negatif  dilakukan  menggunakan  air aqua destilata sisa  hasil  rendaman  terakhir  ketika proses sterilisasi permukaan selesai sebanyak  0,1 mL dengan  cara menyebarkan ke  atas  media  untuk  membuktikan  bahwa koloni  bakteri  endofit  yang  tumbuh  hanya berasal dari dalam  jaringan daun cendana (7) .

## Karakterisasi Makroskopis
Bakteri hasil isolasi dilakukan karakterisasi secara makroskopis pada media NA.  Karakterisasi  secara  makroskopis  dapat diketahui  dari  warna,  bentuk  (bulat,  seperti akar,  atau  tidak  beraturan),  tepian  (mulus, lobatus, bergelombang, bergerigi, dan filamentus)  dan  elevasi  dari  koloni  (datar, naik,cembung, dan umbonatus (8) .

## Karakterisasi Mikroskopis
Karakterisasi mikroskopis yang dilakukan berupa pewarnaan Gram. Pewarnaan
Gram dilakukan untuk menentukan  isolat  bakteri  endofit  telah tunggal  dan  termasuk  bakteri  Gram  negatif atau Gram positif.

## Uji Biokimia
Uji  biokimia  yang  dilakukan  untuk mengkarakterisasi isolat bakteri endofit meliputi  uji Triple  Sugar  Iron Agar (TSIA),  uji katalase,  uji Methyl  Red-Voges  Proskauer (MR-VP), Uji  sitrat, dan uji Indol.

## Riset Informasi Kesehatan, Vol. 6 No.1

## Juni 2017

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dari  isolat bakteri endofit terhadap pertumbuhan bakteri uji  Gram  negatif  ( E.  coli )  dan  bakteri  Gram positif ( S. aureus ) dilakukan dengan menggunakan  metode  kertas  cakram  ( Kirby Bauer ).  Satu  ose  bakteri  patogen  yang berasal  dari  stok  agar  miring  diambil kemudian  ditumbuhkan  di  dalam  10  mL media    NB  steril.  Selanjutnya    di  inkubasi dengan suhu 37°C selama 24 jam. Sebanyak 100  μL  kultur  bakteri  patogen  yang  berasal dari  media  NB  cair  dimasukkan  ke  dalam cawan petri, kemudian tuang media NA yang bersuhu    35-40°C  sebanyak  ±25  mL  ke dalam  cawan  petri  lalu  didinginkan.  Isolat bakteri  endofit   yang  akan  diuji  diletakkan ke  kertas  cakram  pada  media  yang    telah mengandung  bakteri  patogen menggunakan pipet  mikro  sebanyak  10  μL,  dan  dilakukan tiga  kali  pengulangan.    Kultur    diinkubasi selama    24  jam.  Pengamatan  dilakukan dengan  mengukur  diameter  zona  bening
yang terbentuk disekitar isolat bakteri endofit. Zona  bening  menunjukkan  adanya  daya hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri  uji. Kloramfenikol  digunakan  sebagai  kontrol positif dan media yang disuspensikan dengan bakteri  uji  tanpa  sampel  merupakan  kontrol negatif. Isolat  yang mampu membentuk zona bening dikatakan potensial (7;9) .

## HASIL
Pada  penelitian  ini,  sebanyak  lima isolat  diisolasi  dari  tanaman  daun  cendana ( Santalum  album Linn.).  Kemudian  kelima isolat  dikarakterisasi  secara  mikroskopis, makroskopis  dan  pengamatan  uji  biokimia. Karakterisasi mikroskopis dilakukan pengamatan pewarnaan Gram yang menunjukkan bahwa kelima isolat merupakan bakteri  Gram negatif    (Tabel  1).    Setelah  itu, dilakukan  pengamatan  secara  makroskopis meliputi  warna  dari  isolat  bakteri  endofit, bentuk, sifat permukaan, tepian dan elevasinya  (Tabel  2).  Hasil  pengamatan  uji biokimia  isolat  bakteri  endofit  seperti  yang tertera pada tabel 3.
Tabel 1. Hasil Pewarnaan Gram Isolat Bakteri Endofit Daun Cendana
Isolat Bentuk Gram D6I3 Basil pendek Negatif D3I1 Kokus Negatif 1.1 (1’5’1) Basil pendek Negatif 1.2 (2’10’2) Kokus Negatif 2.2 (2’10’2) Kokus Negatif Tabel 2. Hasil Pemeriksaan Makroskopis Isolat Bakteri Endofit Daun Cendana Isolat Pengamatan Warna Bentuk Sifat Permukaan Tepian Elevasi D6I3 Putih kekuningan Tak beraturan Halus mengkilap Filamentus Umbonatus D3I1 Putih Tak beraturan Halus mengkilap Bergelombang Cembung 1.1 (1’5’1) Putih Sirkuler Halus mengkilap Bergelombang Cembung 1.2 (2’10’2) Putih Tak beraturan Halus mengkilap Lobatus Cembung 2.2 (2’10’2) Putih Tak beraturan Halus mengkilap Bergelombang Naik

## Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Isolat Bakteri Endofit Daun Cendana
Uji Karakterisasi Isolat 1.1 (1’5’1) 1.2 (2’10’2) 2.2 (2’10’2) D6I3 D3I1 TSIA k/k k/a k/a k/k k/k Katalase + + + + + MR + + + + + VP - + + - - SCA + + + + + SIM Sulfit Indol Motil - - + - - + - - + - - + - - + Ket: TSIA k/a =  memfermentasi laktosa dan/atau sukrosa k/k =  memfermentasi glukosa
Katalase (+) =  terbentuknya gelembung (menghasilkan enzim katalase) MR (+)
=  warna medium berubah menjadi merah (bakteri tersebut merupakan peragi asam campuran) VP (+) =  terbentuk warna merah pada media (terjadi pembentukan 2,3-butanadiol)
SCA (+)
=  warna media berubah dari hijau menjadi biru
(menggunakan sitrat sebagai sumber karbon) SIM sulfit (-)  =  tidak ada warna hitam pada media (tidak mereduksi sulfur) indol (-)  =  tidak terbentuk lapisan/ cincin berwarna merah (tidak membentuk indol) motil (+) =  timbul kekeruhan (ada pergerakan)
Isolat bakteri endofit dilakukan pengujian  aktivitas  antibakteri  terhadap  dua bakteri  patogen,  yaitu  bakteri S.   aureus dan E.  coli.  S.  aureus merupakan  bakteri  Gram positif  dan E.  coli dipilih  mewakili    bakteri Gram  negatif,  bakteri  tersebut  merupakan flora    normal    pada    saluran  pencernaan manusia    akan    tetapi    menjadi    patogen apabila    mencapai    jaringan    diluar  saluran
pencernaan.  Pengujian  aktivitas  5  isolat bakteri  endofit  terhadap  kedua  bakteri tersebut  tidak  menunjukkan  adanya  zona bening  yang  menandakan  isolat  bakteri endofit  dari  daun  Cendana  tidak  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap S.  aureus dan E. coli (Tabel 4).
Tabel 4. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Isolat Bakteri Endofit Daun Cendana
Isolat Uji Aktivitas Antibakteri Staphylococcus aureus Escherichia coli D6I3 Negatif (-) Negatif (-) D3I1 Negatif (-) Negatif (-) 1.1 (1’5’1) Negatif (-) Negatif (-) 1.2 (2’10’2) Negatif (-) Negatif (-) 2.2 (2’10’2) Negatif (-) Negatif (-)

## PEMBAHASAN
Sebanyak lima isolat berhasil diisolasi dari  tanaman  daun  cendana.  Kelima  isolat selanjutnya dikarakterisasi secara makroskopis dan mikroskopis serta pengamatan uji biokimia.
Karakterisasi  mikroskopis  dilakukan dengan  menggunakan  pewarnaan  Gram yang  menunjukkan  kelima  isolat  merupakan bakteri  Gram  negatif.      Isolat  bakteri  endofit dilakukan  pengujian  aktivitas  antibakteri terhadap dua bakteri patogen, yaitu bakteri S. aureus dan E.  coli.  S.  aureus merupakan

## Juni 2017
bakteri  Gram  positif  dan E.  coli dipilih mewakili    bakteri    Gram    negatif,    bakteri tersebut    merupakan    flora    normal    pada saluran  pencernaan    manusia    akan    tetapi menjadi    patogen    apabila    mencapai jaringan    diluar  saluran    pencernaan.
Pengujian  aktivitas  5  isolat  bakteri endofit  terhadap kedua bakteri  tersebut  tidak menunjukkan  adanya  zona  bening  yang menandakan  isolat  bakteri  endofit  dari  daun Cendana  tidak  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap S.  aureus dan E.  coli Isolat  bakteri endofit  pada  pengujian  aktivitas  antibakteri yang  dilakukan  di  penelitian  ini,  mungkin mempunyai kandungan senyawa aktif namun dalam  jumlah  yang  lebih  kecil  atau  mungkin juga  mengandung  senyawa  aktif  potensial yang  lain,  sehingga  tidak  menunjukkan adanya  aktivitas  antibakteri (10) .  Berbeda dengan    isolat  bakteri  endofit  dari  tanaman miana
( Coleus scutellariodes [L.]  Benth.),  isolat  tersebut memiliki
kemampuan menghambat pertumbuhan S. aureus dan E. coli .
Diameter  zona  bening  yang  paling besar  yaitu  7  mm  dalam  menghambat pertumbuhan S.  aureus dan  3,3  mm  dalam menghambat pertumbuhan E. coli (11) . Sedangkan hasil penelitian dari Nursanty dan Suhartono  (2012),  3  dari  7  isolat  bakteri endofit  asal  tumbuhan  johar  ( Cassia  siamea Lamk.) hanya mampu menghambat pertumbuhan S.  aureus dari  5  pengujian terhadap 4 bakteri dan 1 cendawan. Desriani et  al., (2014)  juga  melaporkan  bahwa  isolat bakteri  endofit  yang  diperoleh  dari  tanaman binahong dan ketepeng cina memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap Pseudomonas aeruginosa dan S. aureus. Pemilihan pengambilan  sampel  berupa  daun  pada tanaman  cendana  juga  memungkinkan  tidak terlihatnya  aktivitas  antibakteri  pada  isolat bakteri  endofit  yang  diperoleh  dari  daun dikarenakan  pada  bagian  daun  tanaman cendana memiliki sekitar 4 %
Kandungan minyak atsiri yang memiliki peranan sebagai antibakteri.
Berbeda pada bagian kayu dari akar cendana yang merupakan bagian paling tinggi kandungan  minyak  atsirinya  yaitu  sebanyak 10%, sedangkan bagian batangnya mengandung 4-8% minyak atsiri. Diharapkan pada penelitian selanjutnya dapat
mengisolasi  bakteri  endofit  yang  diperoleh dari bagian tanaman cendana lainnya.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian isolasi dan uji aktivitas antibakteri isolat endofit dari daun Cendana  ( Santalum  album  Linn .)  dapat disimpulkan  bahwa  isolat  bakteri  endofit  dari daun  Cendana  tidak  dapat  memberikan aktivitas  antibakteri  terhadap S.  aureus dan E. coli.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Ryan  RP,  Germaine  K,  Franks  A,  Ryan DJ,  Dowling  DN.  Bacterial  endophytes: Recent  developments  and  applications. FEMS Microbiol Lett. 2008;278(1):1 –9. 2.  Kusari  S,  Hertweck  C,  Spiteller  M. Chemical  ecology  of  endophytic  fungi: Origins  of  secondary  metabolites. Chem Biol. 2012;19(7):792 –8.
3.  Saylendra  A,  Firnia  D.  Bacillus  sp.  dan Pseudomonas sp. asal endofit akar jagung ( Zea  mays l.)  yang  berpotensi  sebagai pemacu  pertumbuhan  tanaman.  J  Ilmu Pertan dan Perikan. 2013;2(1):19 –27.
4.  Chaudhary  S,  Negi  A,  Dahiya  V.  The Study  of  in  vitro  Antimicrobial  Activity  and Phytochemical Analysis of Some
Medicinal  Plants  in  Chamoli  Garhwal Region. Pharmacogn J. 2010;2(12):481 –5.
5.  Nursanty R, Suhartono. Isolasi, karakterisasi  dan  uji  antimikroba  bakteri endofit  asal  tumbuhan  johar  (Cassia siamea  Lamk.). J  Ilm  Pendidik  Biol . 2012;4(1):7 –10.
6.  Sun  S,  Chen  X,  Guo  S.  Analysis  of endophytic  fungi  in  roots  of  Santalum album  Linn.  and  its  host  plant  Kuhnia rosmarinifolia Vent. J Zhejiang Univ Sci B . 2014;15(2):109 –15. 7.  Sari WE. Aktivitas antihipertensi aktinomiset endofit asal tanaman pegagan dan  belimbing  wuluh.  [Skripsi].  Bogor; 2011.
8.  Cappuccino  J,  Sherman  N.  Manual laboratorium  mikrobiologi.  Jakarta:  EGC; 2014.
9.  Desriani,  Safira  UM,  Bintang  M,  Rivai  A, Lisdiyanti  P.  Isolasi  dan  karakterisasi bakteri endofit dari tanaman binahong dan katepeng  china. J  Kesehat  Andalas. 2014;3(2):89 –93.
10.   Radu  S,  Kqueen  CY.  Preliminary

## Juni 2017
screening  of  endophytic  fungi  from medicinal plants in malaysia for antimicrobial  and  antitumor  activity. Malays J Med Sci. 2002;9(2):23 –33.
11.   Kusumawati  D,  Pasaribu  F,  Bintang  M.
Aktivitas antibakteri isolat bakteri
endofit  dari  tanaman  miana  ( Coleus scutellariodes [L.]  Benth.)  terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Curr Biochem .
2014;1(1):45 –50.