Jurnal Pharmascience, Vol. 04 , No.01, Februari 2017, hal: 85 - 93 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 http://jps.unlam.ac.id/

## Research Article

## Aktivitas Antioksidan Fraksi Dietileter Buah Mangga Arumanis ( Mangifera indica L.)

## dengan Metode DPPH
* Dewi Andini Kunti Mulangsri, Aqnes Budiarti, Endah Novia Saputri
Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang.
*Email: dewi.andinie@gmail.com

## ABSTRAK
Sistem  antioksidan  merupakan  bagian  dari  sistem  kekebalan  tubuh  yang mampu  menghambat  reaktifitas  radikal  bebas.  Sumber  alami  antioksidan  salah satunya  adalah  buah  yaitu  buah  mangga  Arumanis.  Proses  fraksinasi  dengan  pelarut dietileter  dilakukan  untuk  menyari  senyawa-senyawa  yang  bersifat  semipolar  yang diharapkan  memiliki  potensi  sebagai  antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  aktivitas  antioksidan  fraksi  dietil  eter  ekstrak  etanol  buah  mangga arumanis  ( Mangifera  indica L.)  dengan  Metode  DPPH.  Ekstraksi  dilakukan  dengan metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  70%,  kemudian  dipartisi  cair-cair menggunakan  pelarut  dietil  eter.  Penentuan  aktivitas  antioksidan  menggunakan metode  DPPH  dengan  membuat seri  konsentrasi  fraksi  dietil eter  ekstrak etanol buah mangga  Arumanis  yaitu  12,5;  25;  50  dan  100ppm.  Vitamin  C  digunakan  sebagai larutan  pembanding  dengan  seri  konsentrasi  0,625;  1,25;  2,5  dan  5  ppm.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi dietil eter ekstrak etanol buah mangga arumanis memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 sebesar 75,22 ppm dan 1,18 ppm untuk Vitamin  C.  Fraksi  dietileter  ekstrak  etanol  buah  mangga  Arumanis  memiliki  potensi lemah sebagai antioksidan jika dibandingkan dengan Vitamin C.
Kata Kunci: antioksidan, fraksi dietileter, buah mangga arumanis, Mangifera indica ,

## DPPH

## ABSTRACT
Antioxidant  systems  are  part  of  the  immune  system  which  is  able  to  inhibit  the reactivity of free radical. Source of natural antioxidants is a fruit that is mango Arumanis. Process  of  fractionation  with  solvent  diethylether  to  extraction  the  compounds  semipolar and  expected  to  have  potential  as  antioxidants.  This  study  aims  to  determine  the antioxidant  activity  of  diethyl  ether  fraction  of  ethanol  extract  Arumanis  mango (Mangifera  indica  L.)  with  DPPH  method.  Extraction  used  ethanol  70%  by  maceration method,  then  partitioned  using  a  liquid-liquid  partition  with  diethylether  as  a  solvent. Determination of antioxidant activity using DPPH method with a series of concentrations of diethyl ether fraction of ethanol extract Arumanis mango ie 12.5; 25; 50 and 100ppm. Vitamin C used as a reference solution with a concentration series of 0,625; 1.25; 2.5 and
5  ppm.  The  results  showed  that  the  diethyl  ether  fraction  of  ethanol  extract  Arumanis mango have antioxidant activity with IC 50 value of 7.22 ppm and 1.18 ppm for Vitamin C. Diethylether  fraction  of  ethanol  extract  Arumanis  mango  has  weak  potential  as  a antioxidant, if compared with Vitamin C.
Keywords:  Antioxidants,  diethylether  fractions,  arumanis  mango  fruit,  Mangifera  indica, DPPH.

## I. PENDAHULUAN
Sistem antioksidan merupakan bagian  sistem  kekebalan  tubuh  yang mampu  menghambat  reaktifitas  raidkal bebas (Winarsi, 2007). Antioksidan adalah molekul  yang  mampu  menghambat  reaksi oksidasi, molekul yang dapat menyumbangkan  satu  atau  lebih  elektron kepada  radikal  bebas  sehingga  radikal bebas  dapat  diredam.  Berdasarkan  sumber perolehannya  ada  2  macam  antioksidan, yaitu  antioksidan  alami  dan  antioksidan sintetik (Soedibyo, 1999).
Antioksidan sintetik dihasilkan dari reaksi kimia, namun penggunaan antioksidan  sintetik  dapat  meningkatkan risiko penyakit karsinogenik.
Kekhawatiran  adanya  kemungkinan  efek samping dari antioksidan sintetik menyebabkan  antioksidan  alami  menjadi alternatif.    Antioksidan  alami  dapat dihasilkan  dari  sayur,  bunga,  buah, rimpang,  batang,  kulit  buah  mampu menghambat terjadinya penyakit degeneratif  serta  mampu  menghambat peroksidasi lipid pada makanan.
Antioksidan  alami  berasal  dari  hasil metabolit sekunder tumbuhan.
Sumber  antioksidan  alami  tersebut dapat  diperoleh  dari  buah  yaitu  buah mangga  Arumanis ( Mangifera  indica L.) . Ekstrak etanol buah mangga memiliki nilai IC 50 3709,197  mg/ml  dan  kemampuan mengkelat logam ferrosus sebesar 48,702%  (Febrianti  dan  Wahyuningsih, 2016).  Di  dalam  ekstrak  etanol  buah mangga arumanis masih banyak mengandung senyawa-senyawa yang kompleks sehingga perlu dipisahkan dengan  proses  fraksinasi.  Fraksinasi  ini menggunakan  pelarut  dietileter  dengan tujuan  mampu  menyari  senyawa-senyawa semi  polar  yang  diharapkan  memiliki potensi  sebagai  antioksidan.  Berdasarkan latar  belakang  di  atas  maka  dilakukan penelitian  untuk  mengetahui  aktivitas antioksidan fraksi dietil eter ekstrak etanol buah  mangga  arumanis  ( Mangifera  indica L.)  dengan  metode  DPPH  (1-1-difenil-2- pikrihidrazil)

## II. METODE PENELITIAN

## A. Alat Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  buah  Mangga Arumanis dari Desa Genuksari RT 02 RW
01,  Kecamatan  Genuk,  Semarang.  Etanol 70%, dietil eter, aquadest. Bahan untuk uji aktivitas  antioksidan  yaitu  DPPH  (2,2- Difenil-1-Pikrilhidrazil)  p.a,  metanol  p.a dan vitamin C (phapros).
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah moisture  balance, blender,  timbangan  elektrik  (Ohaus), seperangkat  alat  maserasi,  ultra  turax, rotary  evaporator ,  oven,  mikropipet, corong  bucher,  strirer,  seperangkat  alat gelas,  statif,  spektrofotometer  UV-Vis (genesys 10).

## B. Jalannya Penelitian
1. Identifikasi Bagian Tanaman
Buah  Mangga  Arumanis  yang akan digunakan untuk penelitian dideterminasi terlebih dahulu. Determinasi bertujuan  untuk  mengidentifikasi  tanaman yang akan diteliti berdasarkan ciri fisiknya,  sehingga  peneliti  yakin  bahwa tanaman  tersebut  benar-benar  tanaman yang dimaksud untuk penelitian.
Determinasi  buah  Mangga  Arumanis ( Mangifera  indica L.)  dilakukan  di
Laboratorium Taksonomi
Tumbuhan,
Fakultas MIPA, Universitas Negeri Semarang.
2. Pembuatan Larutan Uji
a. Pembuatan serbuk buah Mangga
Arumanis ( Mangifera indica L.)
Buah  Mangga  Arumanis  ( Mangifera
indica L.)  disortasi  dan  dikupas
kulitnya, diambil dagingnya, kemudian  dipotong  menjadi  ukuran kecil  setebal  1  cm.  Pengeringan dilakukan  dalam  oven  pada  suhu  40- 50°C.  Simplisia  yang  sudah  kering kemudian  dihaluskan  menggunakan diskmill. Kadar  air  pada  serbuk simplisia  kering  diukur  dengan  alat moisture balance .
b. Pembuatan ekstrak etanol buah Mangga  Arumanis  ( Mangifera  indica L.)
Serbuk  kering  simplisia  masing- masing diekstraksi dengan cara maserasi menggunakan cairan penyari etanol  70%.  Diaduk  selama  30  menit menggunakan ultra turax pada kecepatan 1.000 rpm, kemudian dimaserasi  selama  24  jam.  Setelah  24 jam ampas disaring, ampas ditambahkan  etanol  70%  yang  sama banyak. Saring dengan corong Buchner  maka  diperoleh  filtrat  I, ampas  dilakukan  remaserasi  dengan pelarut etanol 70%. Kemudian disaring dan diperoleh filtrat II. Filtrat I dan II dicampur kemudian dievaporasikan  menggunakan rotary evaporator pada suhu 40°C, kemudian dikentalkan  dengan waterbath pada suhu  50°C.  Ekstrak  kental  dihitung rendemennya dengan rumus:

## Rendemen = Berat Kental Berat kering x 100 %
Ekstrak  kental  ekstrak  etanol  buah mangga  arumanis  dan  kweni  di fraksinasi  bertingkat  (dietil  eter,  etil asetat, dan air).
c. Pembuatan  fraksi  dietil  eter  ekstrak etanol buah Mangga Arumanis
( Mangifera indica L.)
Fraksinasi    bertingkat  di  lakukan dengan  melarutkan  ekstrak  etanol buah  mangga  arumanis  sebanyak 0,275 gram ekstrak kental dimasukkan kedalam container  glass tambahkan dietil  eter,  diaduk  dengan  ultra  turax pada  kecepatan  1.000  rpm  selama  30 menit,  kemudian  filtrat  tuang.  Ulangi sebanyak  dua  kali  dengan  solvent dietil  eter,  di  kumpulkan  filtrat  dietil eter,  dan  di  fraksinasi  menggunakan etil asetat, fraksi dietil eter dipekatkan menggunakan rotary  evaporator pada suhu 45°C.
3. Uji Aktivitas Antioksidan
Uji aktivitas
antioksidan menggunakan  metode  DPPH  (2,2-
difenil-1-pikrilhidrazil) antara lain:
a. Pembuatan larutan stok DPPH Pembuatan larutan stok DPPH dilakukan dengan  menimbang serbuk DPPH  sebanyak  1,576  mg  pada  botol timbang  kemudian  di  tambahkan
etanol  70%  p.a  sampai  tanda  pada labu takar 100 ml. sehingga di peroleh konsentrasi 0.4 mM.
b. Pembuatan larutan stok vitamin C
Pembuatan  larutan  stok  vitamin  C dilakukan  dengan  cara  melarutkan  10 mg vitamin C dilarutkan dalam etanol 70%  p.a  hingga  50  ml,  sehingga diperoleh larutan stok 200 µ g /ml.
c. Pembuatan  deret  konsentrasi  larutan uji
Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan  pada  deret  konsentrasi  12,5 ppm,  25  ppm,  50  ppm  dan  100  ppm. Pembuatan  deret  konsentrasi  larutan uji  fraksi  dietil  eter  ekstrak  etanol buah mangga arumanis dan vitamin C dengan rumus:
F = n-1 √𝐷𝑡 𝐷𝑟

## ⁄
Keterangan: f    = kelipatan seri konsentrasi n    = banyaknya seri konsentrasi Dt  = konsentrasi tertinggi Dr  = konsentrasi terendah
d. Penentuan  panjang  gelombang  DPPH
0.4 mM
Penentuan panjang gelombang
maksimal dilakukan untuk mendapatkan  serapan  yang  maksimal. Pengukuran panjang gelombang maksimal dilakukan dengan mengukur absorbansi  larutan  DPPH  0.4  mM
pada spektrofotometer dengan panjang gelombang  500–525  nm.  Panjang gelombang  maksimal  diperoleh  dari nilai absorbansi yang maksimum.
e. Penentuan Operating Time
Penentuan  operating  time  dilakukan dengan cara mengambil 50 μL larutan uji ditambah 4,0 ml larutan DPPH 0.4 mM  kemudian  divortex  dan  diukur pada menit ke 0,5, 10, 15, 20, 25, dan 30 pada panjang gelombang maksimum  yang  telah  di  peroleh  dari penentuan panjang gelombang sebelumnya. Menit yang
menghasilkan  absorbansi  perendaman radikal  bebas  DPPH  paling  stabil merupakan operating time.
f. Uji aktivitas antioksidan Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan  dengan  mengukur  sampel dengan  konsentrasi  12.5,  25,  50,  dan 100 ppm. kemudian digunakan vitamin  C  sebagai  pembanding  serta blangko yang digunakan adalah etanol 70% p.a.

## C. Analisa Hasil
Data  yang  diperoleh  dari  uji aktivitas  antioksidan  fraksi  dietil  eter ekstrak  etanol  buah  mangga  arumanis  dan mangga kweni dengan metode DPPH serta pembanding  vitamin  C  adalah  nilai absorbansi, kemudian  dihitung presentase
aktivitas antioksidan dengan rumus sebagai berikut:
% aktivitas antioksidan = Abs K−Abs P Abs K x100%
Keterangan:
Abs K = absorbansi DPPH keseluruhan
Abs P = absorbansi DPPH setelah bereaksi dengan sampel
Nilai IC 50 ( Inhibition Concentration ) dapat dihitung menggunakan persamaan regresi linier dari y  =  bx  +  a  antara  konsentrasi  larutan  uji (x) dengan persentasi aktivitas antioksidan (y) dan dianalisis secara deskriptif.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil identifikasi menyatakan bahwa  buah  yang  digunakan  adalah Mangifira  indica L.  (mangga  arumanis). Determinasi  tanaman  dilakukan  untuk memastikan jenis tanaman yang digunakan,  agar  tidak  terjadi  kesalahan pada buah yang akan digunakan.
Simplisia  buah  mangga  Arumanis ( Mangifira  indica L.)  memiliki  kadar  air sebesar  0.8%.  Kadar  air  dalam  simplisia memenuhi  standar  kadar  air  dalam simplisia  maksimum  10%  (Gunawan, 2004).
Ekstrak etanol buah mangga arumanis  dibuat  menggunakan  metode maserasi,  karena  metode  ini  efektif  dan sederhana.  Alat  yang  digunakan  hanya bejana  serta  efektif  untuk  kandungan
senyawa  yang  tidak  tahan  terhadap pemanasan  (ekstraksi  cara  panas).  Pelarut yang digunakan adalah etanol 70% karena etanol  bersifat  polar).    Serbuk    buah mangga  arumanis  kering  sebanyak  1,246 kg  menghasilkan  ekstrak  etanol  kental 48,34 g dengan rendemen 3,88%.
Fraksinasi dilakukan menggunakan metode  partisi  cair-cair  dengan    pelarut dietil  eter.  Pemisahan  dilakukan  untuk memisahkan senyawa berdasarkan polaritasnya. Diharapkan tertarik senyawa- senyawa  bersifat  semi  polar  yang  dapat terlarut  dalam  fraksi  dietil  eter.  Fraksi dietil  eter  diperoleh  sebanyak  0,25  g  dari ekstrak  kental  buah  mangga  arumanis sebanyak  48,34  g  dan  menghasilkan rendemen 0,5%.
Penentuan panjang gelombang maksimum  dilakukan  dengan  mengukur absorbansi senyawa DPPH. Panjang gelombang  maksimum    ditentukan  dari puncak  kurva  karena  pada  puncak  kurva memiliki  sensitivitas  paling  tinggi  yang ditunjukkan  oleh  nilai  absorbansi  yang paling tinggi. Panjang gelombang maksimum untuk DPPH adalah 517 nm.
Penentuan operating  time (OT) dilakukan  dengan  cara  menentukan  waktu reaksi  vitamin  C  yang  dicampurkan dengan  larutan  DPPH  0,4  mM  dan  diukur absorbansi  hingga  didapat  absorbansi konstan.  Absorbansi  konstan    ditunjukkan dengan  tidak  adanya  lagi  penurunan
absorbansi atau sampel bereaksi sempurna yaitu salah satu parameter dalam penentuan  aktivitas  penangkapan  radikal (Molyneux,  2004).  Pengukuran operating time didapat  pada  menit  ke-20  demgan nilai  absorbansi  0,211.  Hasil  penentuan operating time dapat dilihat pada Tabel I.
Tabel I. Penentuan operating time menit ke-20 Waktu (menit) Absorbansi 0 0,210 5 0,210 10 0,211 15 0,211 20 0,211 25 0,211 30 0,210 35 0,210
Penentuan  aktivitas  antioksidan dilakukan  menggunakan  metode  DPPH yang  merupakan  radikal  sintetik  berwarna ungu  (Molyneux,  2004).  Prinsip  dari metode  DPPH  adalah  terjadinya  interaksi antioksidan  dengan  DPPH  secara  transfer elektron atau radikal hidrogen pada DPPH akan  menetralkan  radikal  bebas  dari DPPH.  Jika  semua  elektron  pada  radikal bebas  DPPH  menjadi  berpasangan  maka warna  larutan  berubah  dari  ungu  tua menjadi  kuning  terang  dan  absorbansi yang  diukur  pada  panjang  gelombang  517 nm  (Green,  2004).  Kontrol  positif  yang digunakan  adalah  vitamin  C.  Vitamin  C merupakan  antioksidan  yang  larut  dalam
air.  Penggunaan  kontrol  positif  pada pengujian  aktivitas  antioksidan  untuk mengetahui seberapa kuat potensi antioksidan yang ada pada fraksi dietil eter ekstrak etanol buah mangga  arumanis  jika dibandingkan dengan vitamin C.
Nilai  IC 50 sampel  sama  atau mendekati  nilai  IC 50 kontrol  positif  maka dapat  dikatakan  bahwa  sampel  berpotensi sebagai  salah  satu  alternatif  antioksidan yang  sangat  kuat.  Berdasarkan  hasil
penelitian  nilai  IC 50 kontrol  positif  1,86 ppm,  sedangkan  nilai  IC 50 fraksi  dietileter ekstrak  etanol  buah  mangga  Arumanis sebesar 75,22 ppm. Hasil tersebut menunjukkan  bahwa  fraksi  dietileter memiliki aktivitas antioksidan yang lemah dibandingkan  dengan  vitamin  C.  Hasil  uji aktivitas  antioksidan  ditunjukkan  pada Tabel II.

## Tabel II.   Hasil  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Fraksi  Dietil  Eter  Ekstrak  Etanol  Buah Mangga Arumanis dan Vitamin C
Sampel Seri Konsensentrasi (ppm) Abs. Kontrol Abs. Sampel Rata - rata Aktivitas Antioksidan (%) I II III Fraksi dietil eter ekstrak etnol buah mangga arumanis 12,5 0,625 0,576 0,575 0,575 7,84 25 0,625 0,482 0,480 0,481 22,88 50 0,625 0,410 0,407 0,407 34,72 100 0,625 0,224 0,221 0,220 64,64 Vitamin C 0,625 0,561 0,322 0,320 0,322 42,72 1,25 0,561 0,284 0,284 0,284 49,38 2,5 0,561 0,261 0,261 0,261 53,42 5 0,561 0,209 0,209 0,209 62,75
Suatu zat mempunyai sifat antioksidan kuat apabila nilai IC 50 berkisar antara  50-100  ppm,  dimana  zat  tersebut berpotensi sebagai zat antioksidan (Molyneux,  2004).  Jika  mengikuti  kisaran IC 50 tersebut  sebenarnya  fraksi  dietil  eter ekstrak  etanol  buah  mangga  Arumanis memiliki potensi  yang kuat. Namun untuk meyakini  lagi  bahwa  suatu  sampel
memiliki  potensi  yang  sebenarnya  perlu dibandingkan  dengan  pembanding  yang sudah  jelas  kekuatan  antioksidannya.  Jika nilai  IC 50 sampel  masih  lebih  tinggi dibandingkan  pembandingnya  maka  dapat dinyatakan  sampel  tersebut  masih  lemah aktivitas antioksidannya.
Kurva  regresi  linier  antara  seri konsentrasi  dengan  persentase  aktivitas
antioksidan  pada  vitamin  C  dapat  di  lihat pada Gambar 1.
Kurva  regresi  linier  antara  seri konsentrasi  dengan  persentase  aktivitas
antioksidan  pada  fraksi  dietil  eter  ekstrak etanol  buah  mangga  arumanis  dapat  di lihat pada Gambar 2.
Gambar 1. Kurva regresi linier antara seri konsentrasi dengan persentase aktivitas antioksidan pada vitamin C
Gambar 2.
Kurva  regresi  linier  antara  seri  konsentrasi  dengan persentase  aktivitas  antioksidan  pada  fraksi  dietil  eter ekstrak etanol buah mangga Arumanis

## IV. KESIMPULAN
Fraksi  dietileter  ekstrak  etanol  buah mangga  Arumanis  ( Mangifera  indica L.)
memiliki nilai IC 50 sebesar 75,22 ppm dan Vitamin C 1,18 ppm. Aktivitas antioksidan fraksi  dietileter  ekstrak  etanol  buah
mangga  Arumanis  ( Mangifera  indica L.) masih lemah dibandingkan Vitamin C.

## DAFTAR PUSTAKA
Febrianti, N., dan Wahyuningsih, R., 2016, Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Berbagai  Buah  Tropik
y = 4,2378x + 42,135 R² = 0,9579 0 10 20 30 40 50 60 70 0 1 2 3 4 5 6 % Ak tiv it a s Ant io k sida n Seri konsentrasi y = 0,6172x + 3,5896 R² = 0,9842 0 10 20 30 40 50 60 70 0 20 40 60 80 100 120 % Ak tiv it a s Anrt io k sida n Seri Konsentrasi
Dengan Metode
Ferrous Ion
Chelating , Prosiding Symbion (symposium on Biology Education)
Green,  R.J.,  2004, Antioxidant  Activity  of
Peanut Plant Tissues , thesis, North Carolin State University, Departement  of    Food  Science Raleigh
Gunawan, D., dan Mulyani, S., 2004 , Ilmu Obat  Alam  (Farmakognosi) ,  jilid
I,  Cetakan  I,  Penebar  Swadaya,
Jakarta, 12-13
Molyneux, P., 2004, The Use of the Stable
Free Radical Diphenylpicrylhidrazyl (DPPH) for Estimating  Antioxidant  Activity, Songklanakarin , Jurnal
ScienceTechnology , 26, 211-219
Winarsi,  H.,  2007, Antioksidan  Alami  dan Radikal Bebas, Kanisius, Yogyakarta