## KARAKTERISASI PEPSIN LAMBUNG IKAN TUNA SIRIP KUNING

## ( Thunnus albacares ) YANG DIKERINGKAN DENGAN METODE BERBEDA
Tati Nurhayati*, Uju, Jessica Shinta Uli Simangunsong Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor, Kampus IPB Darmaga, Jalan Agatis, Bogor Jawa Barat 16680
Diterima: 14 November 2021/Disetujui: 22 April 2022
* Korespondensi: nurhayati7870@yahoo.com
Cara sitasi : Nurhayati T, Uju, Simangunsong JSU. 2022. Karakterisasi pepsin lambung ikan tuna sirip kuning (Thunnus albacares) yang dikeringkan dengan metode berbeda. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia. 25(1): 163-175.
Abstrak
Pepsin merupakan enzim proteolitik yang aktif dalam kondisi asam. Selama ini pepsin dihasilkan dari lambung babi dan sapi.  Bahan baku alternatif penghasil pepsin adalah lambung ikan tuna sirip kuning. Enzim dalam bentuk kering ( powder ) akan lebih mudah dalam penyimpanan dan bersifat stabil. Tujuan penelitian ini menganalisis karakteristik pepsin dari lambung tuna sirip kuning dan pengaruh metode pengeringan terhadap karakteristik  pepsin tersebut. Metode pengeringan yang digunakan yaitu spray drying dan freeze drying . Aktivitas spesifik ekstrak kasar pepsin 19.982,52 U/mg, dengan V maks 50.000 mmol/s dan K m 0,5 mM. Pepsin optimum pada suhu 50°C dan pH 2, serta memiliki bobot molekul 32 kDa. Pepsin hasil spray dryer memiliki aktivitas spesifik 7.693,5 U/mg, serta nilai V maks 833,33 mmol/s dan K m 0,5 mM, sedangkan hasil freeze dryer memiliki aktivitas spesifik 8.606,75 U/mg, serta nilai V maks dan K m berturut-turut 1.666,67 mmol/s dan 0,833 mM. Bobot molekul pepsin hasil pengeringan spray dryer 33 kDa dan freeze dryer 33 kDa. Hasil penelitian menunjukkan aktivitas spesifik pepsin menurun setelah proses pengeringan.
Kata kunci: aktivitas enzim, pengeringan beku, pengeringan semprot, pepsin
Pepsin Characterization of Yellowfin Tuna Stomach ( Thunnus albacares )

## Dryed with Different Methods
Abstract
Pepsin is a proteolytic enzyme that has the ability active in acidic conditions. So far, pepsin is produced from the stomachs of pigs and cows. An alternative raw material for producing pepsin is the stomach of yellowfin tuna. Enzymes in dry form (powder) will be easier to store and are stable. The purpose of this study was to analyze the pepsin characteristics of the yellowfin tuna stomach and the effect of the drying method on the pepsin characteristics.The drying method was used spray drying and freeze drying. The specific activity of pepsin crude extract was 19,982.52 U/mg, with V max 50,000 mmol/s and K m 0.5 mM. The optimum pepsin at 50 o C temperature and pH 2, and has a molecular weight 32 kDa. The dried pepsin with spray drying has a specific activity 7,693.5 U/mg, with V max 833.33 mmol/s and K m 0.5 mM, whereas with freeze drying has a specific activity 8,606.75 U/mg, V max and K m values respectively 1,666.67 mmol/s and 0.833 mM. The molecular weight of pepsin enzyme with spray drying 33 kDa and freeze drying 33 kDa. The results showed the specific activity of pepsin decreased after the drying process.
Keywords: enzyme activity, freeze drying, pepsin, spray drying
Available online: journal.ipb.ac.id/index.php/jphpi
Karakterisasi pepsin lambung ikan tuna sirip kuning , Nurhayati et al.

## PENDAHULUAN
Sumber daya perikanan yang memiliki potensi besar di Indonesia salah satunya dari kelompok ikan pelagis besar, yaitu ikan tuna (Firdaus 2018). Ikan tuna ( Thunnus sp.) merupakan hasil perikanan tangkap yang memiliki nilai ekonomis penting di dunia, sehingga permintaan pasar terhadap ikan tuna terus meningkat setiap tahun. Ekspor ikan tuna berdasarkan BPS (2018) mengalami peningkatan setiap tahunnya, yaitu pada tahun 2010 sebesar 67.682,5 ton menjadi 77.465,3 ton pada tahun 2015. Industri perikanan tuna, terutama di Indonesia sebagian besar hanya memanfaatkan bagian daging saja, sedangkan sisanya merupakan hasil samping, misalnya, kepala, tulang, sirip, dan jeroan yang saat ini kurang dimanfaatkan secara maksimal. Sayana dan Sirajudheen (2017) menyatakan bahwa sebesar 36% dari total keseluruhan ikan tuna merupakan hasil samping meliputi kepala 17%, kulit 8%, jeroan 5%, tulang 4%, sirip 2% dan  sebanyak 3,2% dari total keseluruhan jeroan tuna merupakan lambung (Moniharapon dan Pattipeilohy 2016). Total hasil samping dari industri perikanan sebesar 25-30% atau sekitar 3,6 juta ton per tahun (KKP 2007). Jeroan ikan tuna dapat dimanfaatkan menjadi suatu produk, sehingga dapat meningkatkan nilai tambah, misalnya dalam pembuatan biodiesel (Fauzi 2014), pembuatan pupuk (Giyatmi dan Irianto 2017), pembuatan protein hidrolisat untuk formula pakan ikan lele (Nugroho et al. 2019), sediaan enzim protease (Riyanto et al. 2012), serta dapat diolah menjadi sediaan pepsin (Pasaribu et al. 2018).
Pepsin merupakan salah satu enzim protease yang dapat digunakan untuk mempercepat reaksi hidrolisis protein menjadi asam amino dan peptida yang lebih kecil dalam kondisi asam. Pepsin umumnya digunakan dalam bidang industri, misalnya dalam pembuatan kolagen, obat untuk penyakit lambung, pembuatan keju, serta produksi silase ikan (Zhao et al. 2011). Bahan baku pembuatan enzim, terutama  pepsin banyak yang berasal dari babi, hal tersebut sangat berkaitan dengan kehalalannya di
Indonesia. Bahan baku lain yang dapat digunakan untuk menghasilkan pepsin adalah lambung ikan, salah satunya lambung ikan tuna. Lambung ikan tuna dapat dimanfaatkan untuk menghasilkan pepsin melalui proses ekstraksi. Pasaribu et al. (2018) telah memanfaatkan lambung tuna sirip kuning sebagai bahan baku pepsin karena termasuk salah satu sumber protease, sumber peptida, serta asam amino yang baik, dan memperoleh nilai aktivitas sebesar 0,127 U/mL. Sholeh et al.
(2020) menggunakan lambung dari ikan tuna sirip kuning ( Thunnus albacares ), cakalang
( Katsuwonus pelamis ), hiu cucut ( Hemigaleus balfouri) , dan tongkol ( Euthynnus affinis ) sebagai bahan baku pembuatan pepsin, nilai aktivitas terbesar diperoleh dari lambung hiu cucut dan tuna sirip kuning sebesar 44.582,07 U/mg dan 10.879,99 U/mg. Pepsin disintesis dalam kelenjar mukosa lambung ikan dalam bentuk zimogen sebagai pepsinogen (Haard 1994). Pepsinogen memiliki berat molekul sebesar 40 kDa dan 44 asam amino tambahan, serta stabil  dalam kondisi netral dan alkali lemah (Raufman 2004). Pepsinogen kemudian dapat berubah menjadi pepsin dalam kondisi lingkungan yang asam (Nalinanon et al. 2008).
Pepsin termasuk ke dalam endopeptidase dan aktif dalam kondisi asam (Gildberg 1988). Pepsin yang memiliki aktivitas tinggi berada pada rentang pH berkisar antara 2-4 (Bougatef et al. 2008). Pengeringan merupakan metode untuk menghilangkan atau mengurangi sebagian air yang terdapat pada suatu bahan atau produk (Riansyah et al. 2013). Keuntungan dilakukannya proses pengeringan adalah produk atau bahan yang dikeringkan menjadi awet dan stabil, serta volume produk akan menjadi lebih kecil, sedangkan kekurangannya adalah sifat asli dari produk mengalami perubahan, misalnya perubahan sifat fisik dan kimia, serta dapat terjadi penurunan mutu pada produk (Martunis 2012). Tan et al. (2019) telah melakukan mikroenkapsulasi  pepsin yang dikeringkan menggunakan spray  dryer. Hasilnya  adalah aktivitas  pepsin mengalami penurunan seiring dengan tingginya suhu inlet yang digunakan. Permata et al. (2016) yang melakukan pengeringan enzim papain kasar dari getah buah pepaya menggunakan
metode solar drying , cabinet drying , vacuum drying, dan freeze drying memperoleh nilai aktivitas proteolitik tertinggi pada metode vacuum dryer yaitu ±50 µg/mL. Salleh et al. (2014) melaporkan bahwa nilai aktivitas maksimum dari bromelin rekombinan yang dikeringkan dengan spray dryer 110 o C memiliki aktivitas sebesar 78,08±0,07 U/mL. Penelitian mengenai pengeringan pepsin dari lambung tuna sirip kuning menggunakan metode pengeringan semprot ( spray drying ) dan pengeringan beku ( freeze drying ) belum pernah dilaporkan, sehingga perlu dilakukan untuk mengetahui pengaruhnya  terhadap aktivitas enzim tersebut.

## BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan utama yang digunakan adalah lambung ikan tuna sirip kuning yang diperoleh dari TPI Gorontalo, Kecamatan Hunthalangi,
Kota Gorontalo, Sulawesi Utara. Bahan lain yang digunakan adalah nitrogen cair, es batu, akuades, tris base (Sigma), HCl (Merck), NaHCO 3 (Merck), bovine hemoglobin (Sigma), Trichloroacetic acid (Merck), bovine serum albumin (Sigma), glisin (Merck), asam sitrat (AppliChem), trisodium sitrat (Merck), NaCl
(Merck), β -mercaptoethanol (βME) (Merck), Coomassie Briliant Blue (AppliChem), etanol
(Merck), methanol (Merck), dan asam asetat (Merck).
Alat yang digunakan di antaranya adalah timbangan analitik (Quattro), spektrofotometer (UV-Vis Genesys 10 Thermo), pH meter (Hanna Instruments), sentrifuge (himac CR 21G), mini microcentrifuge (Corning), blender (Phillips),
inkubator, mikropipet 1-10 µL, 20-200 µL, dan 200-1000 µL (Thermo Fisher Scientific), penangas air (Bi One), vorteks, mini spray dryer (BUCHI 190), freeze dryer (Alpha 1-2 LD Plus), dan alat elektroforesis.
Prosedur penelitian
Penelitian terdiri atas tiga tahap. Tahap pertama karakterisasi lambung ikan tuna sirip kuning, tahap kedua ekstraksi dan karakterisasi pepsin, dan tahap ketiga pengeringan pepsin. Setiap tahapan penelitian
dan analisis dilakukan sebanyak dua kali ulangan.

## Karakterisasi lambung ikan tuna sirip kuning
Sampel yang digunakan adalah lambung ikan tuna sirip kuning. Lambung tuna dicuci bersih di bawah air mengalir untuk menghilangkan kotoran dan benda asing, kemudian dikemas menggunakan plastik polietilena dan disimpan dalam freezer dengan suhu -18°C. Lambung tuna yang telah bersih dilakukan pengukuran morfometrik dan analisis proksimat meliputi kadar air, protein, abu, dan lemak (AOAC 2005).
Ekstraksi dan karakterisasi pepsin lambung tuna sirip kuning Ekstraksi pepsinogen (Bougatef et al.
2008) Lambung tuna beku dilelehkan terlebih dahulu sebelum dilakukan ekstraksi.
Lambung tuna dipotong kecil berukuran 1-1,5 cm lalu ditimbang. Potongan lambung tuna dicelupkan ke dalam nitrogen cair hingga mengeras, kemudian dihaluskan. Lambung tuna yang telah halus diekstraksi menggunakan bufer 10 mM tris-HCl pH 7,5 dengan perbandingan 1:2 (b/v). Sampel yang telah tercampur disentrifugasi selama 15 menit pada 10.000 g pada suhu 4°C. Supernatan yang dihasilkan merupakan ekstrak pepsinogen.
Aktivasi pepsin (Jurado et al. 2012) Aktivasi pepsin dilakukan dengan menurunkan pH pepsinogen menjadi 2 dengan menambahkan HCl 3 N dan dibiarkan selama 10 menit, kemudian ditambahkan NaHCO 3 2 N untuk meningkatkan pH menjadi 2,75. Sampel diendapkan selama 6 jam.  Supernatan yang diperoleh berupa larutan pepsin.

## Karakterisasi pepsin
Pepsin dikarakterisasi meliputi suhu optimum, pH optimum, kinetika pepsin, dan bobot molekul. Pengujian suhu dan pH optimum mengacu pada Nalinanon et al. (2010) menggunakan suhu 20, 30, 40, 50, 60, dan 70°C dan pH 1, 2, 3, 4, 5, dan 6. Kinetika pepsin mengacu pada Zhao et al. (2011)
Karakterisasi pepsin lambung ikan tuna sirip kuning , Nurhayati et al.
menggunakan konsentrasi substrat 0; 0,25; 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5; dan 4%. Pengujian bobot molekul dilakukan dengan mengacu pada Laemli (1970).

## Pengeringan pepsin lambung tuna sirip kuning
Ekstrak kasar pepsin  dikeringkan dengan dua metode , yaitu spray drying dan freeze drying. Enzim yang telah dikeringkan dianalisis aktivitas pepsin (Bougatef et al.
(2008); Nalinanon et al. (2010); Jurado et al. (2012)), konsentrasi protein (Bradford 1976), kinetika pepsin (Zhao et al. 2011), dan bobot molekul (Laemli 1970). Metode pertama yang digunakan adalah
spray drying. Sampel yang masih beku dilakukan proses thawing terlebih dahulu menggunakan suhu chilling hingga mencair, kemudian larutan sampel berupa ekstrak kasar pepsin sebanyak 250 mL dikeringkan dengan spray dryer. Pengeringan yang dilakukan menggunakan suhu inlet 160°C dan suhu outlet 60-70°C dengan tekanan 6 bar.  Pepsin yang dihasilkan berbentuk bubuk.
Metode kedua yang digunakan adalah freeze drying. Metode ini mengacu pada
Elavarasan dan Shamasundar (2015). Ekstrak kasar pepsin sebanyak 500 mL sebelum dikeringkan, dibekukan terlebih dahulu menggunakan freezer pada suhu -33°C, kemudian dikeringkan menggunakan freeze dryer dengan tekanan 0,0010 mbar selama 72 jam.   Pepsin yang dihasilkan berbentuk serpihan.
Analisis Data Data dianalisis menggunakan metode rancangan acak lengkap (RAL) satu faktor. Uji normalitas dilakukan menggunakan Shapiro- Wilk kemudian dianalisis dengan ANOVA. Jika hasil yang didapatkan berbeda nyata ( p <0,05), maka dilanjutkan uji lanjut Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik Lambung Tuna Sirip Kuning Morfometrik lambung tuna sirip kuning Lambung ikan tuna yang digunakan masing-masing dilakukan analisis
morfometrik. Analisis morfometrik yang dilakukan meliputi panjang, tebal, diameter, dan bobot lambung. Pengukuran dilakukan menggunakan penggaris dan jangka sorong. Data hasil pengukuran morfometrik lambung ikan tuna sirip kuning dapat dilihat pada Table 1. Lambung yang digunakan dalam penelitian ini tergolong besar. Yunita (2013) menggunakan lambung tuna sirip kuning dengan panjang 14,5-21,2 cm dan bobot lambung 51-184 g. Lambung tuna berwarna pucat kemerahan, memiliki bentuk seperti kerucut, serta permukaan luar dan dalam yang bertekstur. Lambung berfungsi sebagai tempat menampung dan mencerna makanan. Lambung ikan tuna berukuran besar dan bersifat elastis, sehingga dapat memanjang karena menyesuaikan kebiasaan makan dan jenis makanan yang dimakan. Nuraini et al. (2014) menyebutkan bahwa makanan utama ikan tuna yang ditangkap di Perairan Prigi,
Kabupaten Trenggalek, Jawa Timur adalah organisme ikan, namun juga ditemukan dalam lambung tuna berisi udang dan cumi-cumi sebagai makanannya. Bentuk dan ukuran lambung setiap jenis ikan berbeda-beda. German et al. (2004) dalam penelitiannya menyatakan bahwa ikan karnivora dengan spesies. Xerocomellus atropurpureus memiliki bentuk lambung seperti tabung, ikan herbivora Cebidichthys violaceus hanya memiliki lambung semu, dan ikan omnivora Anoplarchus purpurescens memiliki lambung yang berbentuk seperti kantong.

## Komposisi kimia lambung tuna sirip kuning
Lambung tuna merupakan salah satu hasil
Table 1 Stomach morphometric of  yellowfin tuna ( Thunnus albacares ) Parameter Average Length (cm) 35.25±1.79 Thick (cm) 0.31±0.06 Diameter (cm) 7.75±1.11 Weight (g) 213.25±19.05 Note: replicate n=8
samping yang dapat dijadikan sebagai bahan baku pembuatan enzim protease, yaitu pepsin. Analisis komposisi kimia pada lambung tuna meliputi kadar air, abu, lemak, dan protein. Data hasil analisis komposisi kimia lambung tuna sirip kuning dapat dilihat pada Table 2.
Table 2 menunjukkan bahwa lambung tuna sirip kuning yang digunakan mengandung protein yang sangat tinggi yaitu 22,74%.  Kandungan protein lambung tuna yang digunakan dalam penelitian ini lebih tinggi dibandingkan dengan yang digunakan oleh Pasaribu et al. (2018)  yaitu  sebesar 18,96%. Lambung tuna termasuk sebagai salah satu sumber protease karena pada lambung terjadi proses pemecahan protein.
Ekstrak Kasar dan Karakteristik Pepsin Lambung Tuna Sirip Kuning Hasil interaksi antara perlakuan dengan lama waktu penyimpanan isolat
Total Bakteri L. monocytogenes Pepsinogen merupakan hasil dari proses ekstraksi lambung tuna menggunakan bufer Tris-HCl pH 7,5 dalam bentuk supernatan. Pepsinogen yang dihasilkan memiliki warna kuning kecokelatan. Homogenisasi lambung tuna dengan pelarut bufer berfungsi untuk mengganggu sel mukosa dan memastikan protein yang terlepas larut pada bufer secara merata (Doonan 1996). Lambung tuna dan bufer yang telah homogen diekstraksi hingga menghasilkan pepsinogen, kemudian diaktivasi hingga menjadi ekstrak kasar pepsin. Kenampakan ekstrak kasar pepsin dapat dilihat pada Figure 1 .

## Aktivitas pepsin lambung tuna sirip kuning
Pepsin yang diperoleh dari lambung tuna memiliki aktivitas  spesifik pepsin sebesar 22.173,36 U/mg. Nilai aktivitas pepsin dapat dipengaruhi oleh jenis makanan ikan. Ikan tuna sirip kuning merupakan salah satu jenis ikan karnivora atau pemakan daging. Rakhmawati (2019) memperoleh pepsin dari bandeng yang termasuk ke dalam ikan herbivora sebesar 397 U/mL, serta Yuniasih (2019) memperoleh nilai aktivitas pepsin lambung ikan patin yang merupakan ikan omnivora sebesar 526,5 U/mL. Aktivitas pepsin yang diperoleh dari lambung tuna albakor ( Thunnus alalunga ) dengan bufer natrium fosfat pH 7 yang mengandung 1 mM phenylmethylsulfonyl flouride (PMSF) sebesar
1.235 U (Nalinanon et al. 2010). Jatmiko (2018) memperoleh nilai aktivitas pepsin lambung tuna sirip kuning yang diekstraksi dengan akuades sebesar 114,05 U/mL, bufer Tris-HCl 123,5 U/mL, dan koagulasi 78,5 U/ mL. Zhao et al. 2011) menjelaskan bahwa bufer yang paling umum digunakan dalam ekstraksi pepsinogen adalah bufer natrium fosfat, bufer tris-HCl, dan air suling.

## Karakteristik pepsin lambung tuna sirip kuning
Suhu optimum pepsin lambung tuna sirip kuning
Suhu optimum merupakan kondisi di mana aktivitas pepsin mencapai nilai tertinggi dan akan mengalami penurunan ketika pepsin bekerja di luar suhu optimum  tersebut.
Pengukuran suhu optimum dilakukan dengan variasi suhu inkubasi.  Aktivitas pepsin pada suhu inkubasi berbeda disajikan pada Figure 2
Table 2 Chemical composition of yellowfin tuna ( Thunnus albacares ) stomach Parameter Average (%) Moisture 75.36±0.87 Ash 0.41±0.17 Lipid 1.09±0.09 Protein 22.74±1.16 Figure 1 Crude extract of yellowfin tuna stomach  pepsin
Karakterisasi pepsin lambung ikan tuna sirip kuning , Nurhayati et al.
Figure 2 menunjukkan bahwa nilai aktivitas yang dihasilkan pada setiap suhu berbeda. Pepsin lambung tuna sirip kuning optimum pada suhu 50°C. Aktivitas pepsin mengalami peningkatan seiring dengan kenaikan suhu hingga mencapai batas suhu optimum. Hal ini dikarenakan semakin meningkatnya suhu maka akan meningkatkan kecepatan reaksi, sehingga aktivitas enzim akan meningkat. Penurunan nilai aktivitas pepsin terjadi pada suhu 60-70°C karena terjadinya proses denaturasi akibat suhu yang tinggi (Nalinanon et al. 2010). Suhu optimum pepsin ikan umumnya berkisar antara 30- 55°C (Zhao et al. 2011). Suhu optimum pada setiap pepsin tidak selalu sama. Perbedaan suhu optimum pada pepsin berkaitan dengan perbedaan konformasi enzim yang dipengaruhi oleh habitat dan lingkungan (Gildberg 1988). Ikan yang berasal dari perairan dingin akan memiliki aktivitas yang tinggi pada suhu rendah, sehingga cukup rentan terhadap suhu tinggi. Suhu optimum dari ikan capelin ( Mallotus villosus ) adalah 40°C dan mengalami penurunan aktivitas pada suhu 50°C (Gildberg dan Raa 1983). Hasil penelitian Sholeh et al. (2020) dan Pasaribu et al. (2018)  menunjukkan bahwa pepsin dari tuna sirip kuning stabil pada rentang suhu 40- 60°C dan mengalami penurunan pada suhu 70°C. Nalinanon et al. (2008) menyatakan bahwa suhu optimum pada tuna albakora (T hunnus alalunga ), cakalang ( Katsuwonus pelamis ), dan tuna abu-abu ( Thunnus tonggol ) sebesar 50°C
pH optimum pepsin lambung tuna sirip kuning Pepsin merupakan enzim protease yang aktif dalam kondisi asam. Aktivitas pepsin tidak hanya dipengaruhi oleh suhu, tetapi juga dipengaruhi oleh nilai derajat keasaman atau pH. Pengukuran nilai pH optimum pada pepsin lambung tuna sirip kuning ditentukan pada kisaran pH 1,0-6,0. Hasil pengukuran nilai pH optimum pepsin lambung tuna sirip kuning dapat dilihat pada Figure 3. Figure  3 menunjukkan nilai aktivitas pepsin pada setiap pH yang berbeda. Nilai pH optimum pepsin lambung tuna sirip kuning berada pada pH 2, namun mengalami penurunan nilai aktivitas pada pH 3 hingga 6. Hasil tersebut sama seperti jenis ikan lainnya, pepsin dari tuna albakora, cakalang, dan tuna abu-abu optimum pada pH 2 (Nalinanon et al . 2008).  Hasil penelitian Tanji et al. (1988) menunjukkan bahwa pepsin ikan tuna sirip biru Pasifik Utara optimum pada pH 2,5. Aktivitas pepsin akan menurun jika pepsin bekerja  di luar  pH optimum. Pepsin bekerja pada pH rendah karena termasuk ke dalam salah satu protease yang bekerja menghidrolisis protein dalam kondisi asam (protease asam). Sisi aktif enzim pada kondisi pH optimum sesuai dengan substrat yang digunakan, sehingga akan menghasilkan kompleks enzim substrat yang maksimal (Fathimah dan Wardani 2014). Aktivitas pepsin umumnya menurun pada pH yang lebih tinggi. Hal tersebut dapat disebabkan karena terjadi perubahan konformasi enzim sehingga dapat menurunkan aktivitas (Benjakul et al. 2003). Figure 2 Pepsin activity at different temperatures
Figure 3 Pepsin activity at different pH
Kinetika pepsin lambung tuna sirip kuning
Aktivitas pepsin dapat dipengaruhi oleh konsentrasi substrat yang digunakan.
Aktivitas enzim berkaitan dengan kecepatan reaksi enzim, sehingga semakin tinggi konsentrasi substrat yang digunakan maka aktivitas enzim dan kecepatan reaksi juga akan meningkat (Elawati et al. 2018). Kecepatan reaksi enzim dapat diketahui dengan cara menentukan nilai V maks dan K m menggunakan variasi konsentrasi substrat. Hasil pengujian kinetika ekstrak kasar pepsin menggunakan konsentrasi substrat yang berbeda dapat dilihat pada Figure 4 dan Figure  5. Figure 4 menunjukkan hubungan antara konsentrasi substrat dengan aktivitas ekstrak kasar pepsin. Hasil tersebut menyatakan bahwa aktivitas pepsin dipengaruhi oleh konsentrasi substrat yang digunakan. Aktivitas enzim terus meningkat pada konsentrasi substrat 0 hingga 2%, namun mengalami penurunan saat melewati konsentrasi 2%.
Aktivitas ekstrak kasar pepsin tertinggi pada konsentrasi substrat 2%, yaitu 39.526,67 U/ mL. Konsentrasi substrat yang rendah akan menghasilkan kecepatan reaksi yang rendah juga, namun akan meningkat seiring dengan meningkatnya konsentrasi substrat hingga mencapai titik batas atau disebut sebagai kecepatan maksimum (V maks ). Kecepatan maksimum tercapai disebabkan karena seluruh sisi aktif enzim telah berikatan dengan substrat (Lehninger 1982).
Figure 5 menunjukkan persamaan Lineweaver-Burk yang digunakan untuk menentukan nilai kecepatan reaksi maksimal
(V maks ) dan konstanta Michaelis-Menten (K m ). Ekstrak kasar pepsin menghasilkan nilai V maks sebesar 50.000 mmol/s dan nilai K m 0,5 mM. V maks merupakan nilai kecepatan reaksi maksimal yang dapat dicapai oleh pepsin, sedangkan nilai K m merupakan konsentrasi substrat yang diperlukan enzim untuk mencapai setengah kecepatan maksimalnya.
Nilai K m yang diperoleh pada ikan pectoral rattail ( Albatrossia pectoralis ) sebesar 0,152 mM (Klomkao et al. 2007), pada sidat eropa
( Anguila anguila ) sebesar 0,088 mM (Wu et al. 2009), dan ikan gabus ( Channa argus ) sebesar 0,14 mM (Chen et al. 2009).

## Bobot molekul pepsin lambung tuna sirip kuning
Pengujian bobot molekul pepsinogen, ekstrak kasar pepsin, serta pepsin yang dikeringkan dengan spray dryer dan freeze dryer dilakukan dengan menggunakan metode SDS-Page. SDS-Page merupakan metode untuk memisahkan rantai polipeptida protein berdasarkan berat molekul dengan menggunakan arus listrik (Jaziri et al. 2017). Pengujian bobot molekul ditandai dengan terbentuknya pita pada elektrogram. Hasil pengujian bobot molekul pada ekstrak kasar pepsin dan pepsinogen dapat dilihat pada Figure 6. Figure 6 menunjukkan hasil bobot molekul pada sampel pepsinogen dan ekstrak kasar pepsin. Pita yang terbentuk pada sampel pepsinogen sebanyak sepuluh pita, sedangkan pada sampel ekstrak kasar pepsin sebanyak lima pita. Analisis bobot molekul pepsinogen dan ekstrak kasar pepsin diukur menggunakan marker protein yang sudah diketahui bobot molekulnya, yaitu 10-250 kDa.
Figure 5 Kinetic of crude extract of pepsin
Figure 4  Pepsin crude extract activity at different substrate concentrations
Karakterisasi pepsin lambung ikan tuna sirip kuning , Nurhayati et al.
Nilai bobot molekul pada sampel pepsinogen dan ekstrak kasar pepsin lambung tuna sirip kuning. Bobot molekul yang diperoleh pada sampel pepsinogen sebesar 38 kDa, serta pada ekstrak kasar pepsin sebesar 32 kDa. Bobot molekul yang diperoleh dari beberapa peneliti juga berada pada kisaran yang hampir sama. Nalinanon et al. (2010) memperoleh bobot molekul pepsinogen dan pepsin dari ikan tuna albakor ( T. alalunga ) berturut-turut sebesar 39,90 kDa dan 32,70 kDa. Bougatef et al. (2008) memperoleh bobot molekul pepsinogen sebesar 40 kDa dan pepsin sebesar 35 kDa pada sampel ikan hiu smooth hound ( Mustelus mustelus ).

## Pepsin Kering Lambung Tuna Sirip
Kuning
Ekstrak kasar pepsin yang dihasilkan kemudian dilakukan proses pengeringan menggunakan dua metode yang berbeda, yaitu spray drying dan freeze drying . Spray drying dilakukan menggunakan suhu inlet
160°C dan suhu outlet 60-70°C, sedangkan freeze drying menggunakan suhu -33°C.
Kenampakan pepsin hasil pengeringan dapat dilihat pada Figure 7.

## Rendemen pepsin kering
Pepsin kering yang dihasilkan dari proses pengeringan dilakukan pengukuran rendemen. Rendemen yang diperoleh pepsin hasil pengeringan spray dryer sebesar 0,44±0,31%, sedangkan untuk pepsin hasil pengeringan freeze dryer 0,89±0,36%. Hasil tersebut menunjukkan bahwa rendemen pepsin hasil pengeringan freeze dryer lebih tinggi dibandingkan dengan spray dryer.
Wilkowska et al. (2016) menyatakan bahwa rendahnya rendemen yang dihasilkan dari pengeringan semprot dapat disebabkan karena hanya sebagian bubuk yang dikirimkan ke wadah penerima, sementara sebagian bubuk yang lain tertinggal dan menempel pada siklon.

## Perbandingan aktivitas ekstrak kasar epsin dan pepsin kering
Ekstrak kasar pepsin tuna pada produksi kedua dilakukan pengujian aktivitas, kemudian dilakukan tahapan pengeringan menggunakan spray dryer dan freeze dryer.
Tahapan pengeringan yang dilakukan memberikan nilai aktivitas yang berbeda dengan ekstrak kasar pepsin. Hasil pengujian aktivitas pada ekstrak kasar pepsin dan pepsin yang dikeringkan dengan spray dryer dan freeze dryer dapat dilihat pada Figure 8. Hasil ANOVA menunjukkan bahwa aktivitas pepsin setelah pengeringan mengalami penurunan yang sigiifikan (α=0,05).  Penurunan aktivitasnya sebesar 73,2% ( spray dryer ) dan 57,93% ( freeze dryer ).  Penurunan aktivitas pepsin setelah pengeringan disebabkan oleh terjadinya denaturasi akibat penggunaan suhu tinggi
Figure 6  Electrogram SDS PAGE pepsin dan pepsinogen, M: marker, P: pepsin, Pg: pepsinogen
(A)                                   (B) Figure 7 Pepsin powder;  (A) spray drying,
(B) freeze drying
saat pengeringan dengan spray dryer dan juga akibat penanganan yang tidak tepat saat pengeringan dengan freeze dryer. Tan et al. (2019) mengatakan bahwa suhu tinggi yang digunakan saat proses pengeringan dengan spray dryer dapat menurunkan tingkat kelangsungan hidup pepsin. de Jesus dan Filho (2014) mengatakan bahwa suhu inlet dan outlet yang rendah dapat mencegah hilangnya aktivitas enzimatik dari α-amilase. Peningkatan suhu inlet dapat menyebabkan suhu outlet ikut meningkat, karena terjadi peningkatan energi panas. Pada pengeringan beku, pembekuan yang dilakukan dapat menyebabkan perubahan konformasi enzim yang membuat sisi aktif enzim tidak dapat berikatan dengan substrat. Perubahan yang terjadi bersifat irreversible , sehingga menyebabkan terjadinya penurunan nilai aktivitas setelah proses sublimasi (Schwimmer 1981). Pembekuan tersebut menyebabkan ikatan sulfhidril (-SH) yang terdapat pada sisi aktif enzim mengalami perubahan menjadi ikatan disulfide (-S-S-) (Muchtadi dan Sugiyono 2013).  Sholeh et al. (2020)
memperoleh nilai aktivitas spesifik pepsin tuna sirip kuning sebesar 10.879,99 U/mg.

## Kinetika pepsin kering
Ekstrak kasar pepsin yang telah melalui proses pengeringan juga dilakukan pengujian kinetika. Pengujian kinetika dilakukan menggunakan variasi konsentrasi substrat.
Hasil pengujian kinetika pada pepsin yang dikeringkan dengan spray dryer dapat dilihat pada Figure 9 dan 10. Figure 10 menunjukkan hubungan antara aktivitas pepsin kering hasil spray drying dengan konsentrasi substrat yang berbeda Aktivitas tertinggi terdapat pada konsentrasi substrat 2% sebesar 602,53 U/mL. Aktivitas pepsin terus meningkat pada konsentrasi substrat 0-2%.
Kinetika pepsin yang dikeringkan dengan freeze dryer dapat dilihat pada Figure 11 dan 12.   Figure 13 menunjukkan hubungan antara aktivitas pepsin yang dikeringkan menggunakan metode freeze drying d engan konsentrasi substrat. Konsentrasi substrat 2% menghasilkan nilai aktivitas pepsin tertinggi Figure 8 Activity of crude pepsin and  pepsin dried by spray dryer and freeze dryer Figure 9  Activity of pepsin powder  with   spray dryer at different substrat Figure 10  Kinetic of pepsin powder with spray dryer
Karakterisasi pepsin lambung ikan tuna sirip kuning , Nurhayati et al.
yaitu 1.469,87 U/mL. Peningkatan aktivitas pepsin terus terjadi hingga 2%.
Peningkatan nilai aktivitas yang terjadi pada Figure  10 dan Figure 12 menunjukkan adanya peningkatan kecepatan reaksi pada enzim. Nilai V maks dan K m pepsin yang dikeringkan dengan spray dryer sebesar 833,33 mmol/s dan 0,5 mM ( Figure 10 ), sedangkan pada pepsin yang dikeringkan dengan freeze dryer memperoleh nilai V maks dan K m sebesar 1.666,667 mmol/s dan 0,833 mM ( Figure 12 ).
Nilai K m yang dihasilkan ekstrak kasar pepsin dengan pepsin kering hasil pengeringan spray dryer dan freeze dryer tidak berbeda jauh.
Nilai K m pada pepsin berbeda-beda. Semakin kecil nilai K m yang dihasilkan maka afinitas enzim terhadap substrat semakin besar sehingga kompleks enzim-substrat semakin baik (Saropah et al. 2012).

## Bobot molekul pepsin lambung tuna sirip kuning
Ekstrak kasar pepsin yang telah dikeringkan dengan spray dryer dan freeze dryer diuji  bobot molekulnya  menggunakan metode SDS-Page. Hasil pengujian bobot molekul pada pepsin kering dapat dilihat pada
Figure 13. Figure 13 menunjukkan jumlah pita sampel pepsin kering yang terbentuk pada elektrogram. Pepsin yang dikeringkan dengan spray dryer (Psd) dan freeze dryer (Pfd) masing-masing membentuk tiga pita. Pita yang terbentuk pada elektrogram akan semakin tebal jika konsentrasi protein sampel  yang  dielektroforesis  semakin  tinggi (Wibowo et al. 2012). Analisis bobot molekul pepsin kering diukur menggunakan marker protein yang sudah diketahui bobot molekulnya, yaitu 10-250 kDa. Figure 11  Activity of pepsin powder  with freeze dryer at different substrat Figure 12  Kinetic of pepsin powder with freeze dryer Figure 13  Electrogram of pepsin powder (Psd= pepsin powder by spray dryer, Pfd=pepsin powder by freeze dryer) M: Marker, Psd: Pepsin spray dryer, Pfd: Pepsin freeze dryer
Nilai bobot molekul pada pepsin lambung tuna sirip kuning kering hasil pengeringan spray dryer dan freeze dryer. Bobot molekul yang dihasilkan pepsin kering relatif tidak mengalami perubahan yang signifikan bila dibandingkan dengan ekstrak kasar pepsin sebelum dikeringkan. Ini menunjukkan bahwa molekul pepsin tidak mengalami degradasi akibat pengeringan dengan spray dryer maupun freeze dryer. Namun mengalami penurunan terhadap aktivitasnya akibat perubahan konformasi molekul pepsin. Bobot molekul pepsin kering hasil pengeringan spray dryer dan freeze dryer masing-masing sebesar 33 kDa dan 33 kDa. Zhao et al. (2011) menyatakan bahwa pepsin memiliki berat molekul 36 kDa.

## KESIMPULAN
Pepsin dari lambung tuna sirip kuning memiliki aktivitas spesifik 22.173,36 U/ mg. Pepsin optimum pada suhu 50°C dan kondisi lingkungan asam, yaitu pH 2, serta pada konsentrasi substrat 2%. Bobot molekul yang dihasilkan ekstrak kasar pepsin sebesar 32 kDa. Proses pengeringan menggunakan metode spray dryer dan freeze dryer dapat menurunkan nilai aktivitas pepsin sebesar 73,2% ( spray dryer) dan 57,93% ( freeze dryer ). Penurunan yang signifikan terhadap aktivitas pepsin setelah dikeringkan optimasi terhadap operasional kedua alat pengering tersebut dan juga metode mikroenkapsulasi terhadap pepsin yang akan dikeringkan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini didanai oleh Kementerian
Riset, Teknologi, dan Pendidikan Tinggi Republik Indonesia melalui PTUPT tahun 2020 atas nama Prof. Dr. Tati Nurhayati, SPi, MSi.

## DAFTAR PUSTAKA
[AOAC] Assosiation of Analytical Chemist. 2005. Official Method of Analysis of The Assosiation of Official Analitical Chemist. Arlington (US): The Assosiation of Official Analitical Chemist Inc. Benjakul S, Visessanguan W, Tanaka M. 2003. Partial purification and characterization of trimethylamine-N-oxide demethylase
from lizardfish kidney. Comparative biochemistry and physiology part B: biochemistry and molecular biology.
135(2):359-371.
Bougatef A, Balti R, Zaeid SB, Souissi N, Nasri
M. 2008. Pepsinogen and pepsin from the stomach of smooth hound ( Mustelus mustelus ): Purification, characterization, and amino acid terminal sequences. Food
Chemistry. 107:777-784. [BPS] Badan Pusat Statistika. 2018. Statistik Ekspor Tuna menurut Negara Tujuan Utama . Jakarta (ID): Pusat Data, Statistik, dan Informasi Sekretariat Jenderal, Kementerian Kelautan dan Perikanan. Bradford MM. 1976. A rapid and sensitive method for qualification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding. Analytical Biochemistry. 72:234-254. [BSN] Badan Standardisasi Nasional. 1992. Cara Uji Makanan dan Minuman. SNI 1-2891-1992. Jakarta(ID):Badan Standardisasi Nasional. Chen WQ, Cao MJ, Yoshida A, Liu GM, Weng WY, Sun LC, Su WJ. 2009. Study on pepsinogens and pepsins from snakehead ( Channa argus ). Journal Agrucultural
Food Chemistry . 5:10972-10978. De Jesus SS, Filho RM. 2014. Drying of α-amylase by spray drying and freeze drying-a comparative study. Brazilian Journal of Chemical Engineering. 31(3): 625-631. Doonan S. 1996. Preparation of extracts from animal tissues. Methods in Molecular Biology. 59: 17-22. Elavarasan K, Shamasundar BA. 2015. Effect of oven drying and freeze drying on the antioxidant and functional properties of protein hydrolysates derived from freshwater fish ( Cirrhinus mrigala ) using papain enzyme. Journal Food Science Technology. 53(2):1303-1311. Elawati NE, Pujiyanto S, Kusdiyantini E. 2018. Karakteristik dan sifat kinetika enzim kitinase asal jamur entomopatogen Beauveria bassiana. Jurnal Bioteknologi dan Biosains Indonesia. 5(1):1-7.
Fathimah AN, Wardani AK. 2014. Ekstraksi dan karakterisasi enzim protease dari
Karakterisasi pepsin lambung ikan tuna sirip kuning , Nurhayati et al.
daun kelor ( Moringa oleifera Lamk.). Jurnal Teknologi Pertanian.
15(3):191- 200. Fauzi RL. 2014. Pembuatan biodiesel dari jeroan tuna sirip kuning menggunakan katalis CaO dengan metode transesterifikasi bertingkat [Skripsi]. Yogyakarta(ID): Universitas Gadjah Madah.
Firdaus M. 2018. Profil perikanan tuna dan cakalang di Indonesia. Marina. 4(1):23- 32. German DP, Horn MH, Gawlicka A. 2004. Digestive enzyme activities in herbivorous and carnivorous prickleback fishes (Teleostei: Stichaeidae): Ontogenic, dietary, and phylogenetic effects. Physiological and Biochemical Zoology. 77(5): 789-804.
Gildberg A, Raa J. 1983. Purification and characterization of pepsins from the arctic fish capelin ( Mallotus villosus ). comparative biochemistry and physiology part A: Physiology. 75(3):337-342. Gildberg A. 1988. Aspartic proteinases in fishes and aquatic invertebrates. Comparative biochemistry and physiology part B: comparative biochemistry . 91(3):425-435. Giyatmi, Irianto HE. 2017. Enzymes in fermented fish. Advances in Food and
Nutrition Research. 80:199-216. Haard NF. 1994. Protein Hydrolysis In Seafoods. Seafoods: Chemistry, Processing Technology and Quality. Glasgow(UK):
Blackie Academic and Professional. Jatmiko PD. 2018. Karakteristik ekstrak kasar pepsin ikan tuna sirip kuning (T hunnus albacares ) [Skripsi]. Bogor(ID): Institut Pertanian Bogor. Jaziri AA, Sukoso, Firdaus M. 2017. Karakteristik protease dari ekstrak kasar khamir laut dan aktivitasnya dalam menghidrolisis protein ikan rucah. Journal of Fisheries and Marine Science. 1(2): 78-87.
Jurado E, Vicaria JM, Lechuga M, Moya- Ramirez I. 2012. Pepsin extraction process from swine wastes. Procedia Engineering. 42: 1346-1350.
[KKP] Kementerian Kelautan dan Perikanan.
2007. Indonesian Fisheries Statistics Index
2006. Jakarta(ID):Kementerian Kelautan
dan Perikanan.
Klomklao S, Kishimura H, Yabe M, Benjakul S.
2007. Purification and characterization of two pepsins from the stomach of pectoral rattail ( Coryphaenoides pectoralis ). Comparative biochemistry and physiology.
147B(4):682–689.
Laemmli UK. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227(10):
680-685. Lehninger AL. 1982. Dasar-Dasar Biokimia Jilid 1 (Terjemahan Maggy Thenawidjaja). Jakarta(ID): Erlangga. Martunis. 2012. Pengaruh suhu dan lama pengeringan terhadap kuantitas dan kualitas pati kentang varietas Granola. Jurnal Teknologi dan Industri Pertanian
Indonesia. 4(3):26-30.
Mattjik AA, Sumertajaya M. 2002. Rancangan Percobaan dengan Aplikasi SAS dan Minitab Jilid 1 . Ed ke-2. Bogor(ID):IPB Press. Moniharapon T, Pattipeilohy F. 2016. Pemanfaatan daging merah dari limbah tuna loin dalam pengolahan kecap ikan. Majalah Biam. 12(1):27-31. Muchtadi TR, Sugiyono. 2013. Prinsip Proses dan Teknologi Pangan . Bandung(ID):Alfabeta. Nalinanon S, Benjakul S, Kishimura H. 2010. Biochemical properties of pepsinogen and pepsin from the stomach of albacore tuna ( Thunnus alalunga ). Food Chemistry.
121(1):49-55.
Nalinanon S, Benjakul S, Visessanguan
W, Kishimura H. 2008. Tuna pepsin: characteristics and its use for collagen extraction from the skin of threadfin bream ( Nemipterus spp.). Journal of Food Sciences. 73(5): 413-419.
Nugroho GA, Ekawati AW, Kartikaningsih H.
2019. Hydrolyzate protein tuna ( Thunnus sp.) viscera as an alternative material for catfish ( Clarias gariepinus ) feed formula. International Journal of Scientific and Technology Research . 8(12):3836-3839.
Nuraini AF, Santoso A, Redjeki S. 2014.
Morfometrik dan komposisi isi lambung ikan tuna sirip kuning ( Thunnus albacares ) yang didaratkan di Pantai Prigi
Jawa Timur. Journal of Marine Research. 3(2): 86-90.
Permata DA, Ikhwan H, Aisman. 2016.
Aktivitas proteolitik papain kasar getah buah papaya dengan berbagai metode pengeringan. Jurnal Teknologi Pertanian Andalas . 20(2):58-64. Raufman J. 2004. Pepsin. In Encyclopedia of Gastroenterology. Amsterdam(NL): Johnson LR, Ed, Academic Press. Rakhmawati IAI. 2019. Karakteristik ekstrak kasar pepsin dari lambung ikan bandeng ( Chanos chanos ) [Skripsi]. Bogor(ID): Institut Pertanian Bogor. Riansyah A, Supriadi A, Nopianti R. 2013. Pengaruh perbedaan suhu dan waktu pengeringan terhadap karakteristik ikan asin sepat siam ( Trichogaster pectoralis ) dengan menggunakan oven. Fishtech. 2(1):53-68. Riyanto B, Uju, Halimi S. 2012. Recovery enzim protease dari jeroan ikan tuna dengan teknologi ultrafiltrasi dan reverse osmosis. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia . 15(2):110-118. Roberts EOS, Knorr D. 2009. The protective effect of monosodium glutamate on survival of Lactobacillus rhamnosus GG and Lactobacillus rhamnosus E-97800 (E800) strains during spray drying and storage in trehalose-containing powders.
International Dairy Journal. 19:209-214. Salleh HM, Mel M, Jami MS, Amid A, Bala M. 2014. Optimization of spray drying process conditions for recombinant stem bromelain. Advances in Environmental Biology. 8(3):696-703. Saropah DA, Jannah A, Maunatin A. 2012. Kinetika reaksi enzimatis ekstrak kasar enzim selulase bakteri selulolitik hasil isolasi dari bekatul. Alchemy. 2(1):34-45. Sayana KS, Sirajudheen TK. 2017. By-products from tuna processing wastes an economic approach to coastal waste management. Proceedings of the International Seminar on Coastal Biodiversity Assessment. 411- 420. Schwimmer S. 1981. Source Book of Food Enzymology (Quellenbuch der
Lebensmittel-Enzymologie) . Connecticut
(USA): The AVI Publishing Company. Sholeh MM, Ambarsari L, Nurcholis W, Nurhayati T. 2020. Characterization of ammonium sulphate fraction of pepsin from fish stomach. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science. 404. Tan S, Zhong C, Langrish T. 2019. Microencapsulation of pepsin in the spray dried WPI (whey protein isolates) matrices for controlled release. Journal of
Food Engineering. 263:147-154. Tanji M, Kageyama T, Takahashi K. 1988. Tuna pepsinogens and pepsins. Purification, characterization and amino- terminal sequences. European Journal of
Biochemistry. 177(2):251-259. Wibowo AD, Suhartono MT, Siagian PLP. 2012. Fraksionasi dan penentuan profil protein bungkil kelapa dengan SDS-Page. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan. 23(1):69-74. Wilkowska A, Ambroziak W, Czyzowska A, Adamiec J. 2016. Effect of microencapsulation by spray drying and freeze drying technique on the antioxidant properties of blueberry ( Vaccinium myrtillus ) juice polyphenolic compounds. Polish Journal of Food and Nutrition Sciences . 66(1):11-16. Wu T, Sun LC, Du C, Cai QF, Zhang QB, Su WJ, Cao MJ. 2009. Identification of pepsinogens and pepsins from the stomach of European eel ( Anguilla anguilla ). Food Chemistry. 115:137-142.
Yuniasih. 2019. Karakteristik ekstrak kasar pepsinpepsin dari lambung ikan patin ( Pangasius sp.) [Skripsi]. Bogor(ID): Institut Pertanian Bogor. Yunita R. 2013. Analisis isi lambung ikan madidihang ( Thunnus albacares ) yang didaratkan di Pangkalan Pendaratan Ikan (PPI) Ujung Baroh, Meulaboh Aceh Barat [Skripsi]. Aceh(ID): Universitas Teuku Umar. Zhao L, Budge SM, Ghaly AE, Brooks MS, Dave D. 2011. Extraction, purification and characterization of fish pepsin: a critical review. Journal of Food Processing and Technology . 2(6):1-14.