## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol.21, No.1, Juni 2024, Hal. 56-64 ISSN: 1693-7899 e-ISSN: 2716-3814

## PERBANDINGAN STUDI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK METANOL, ETANOL 70%, DAN ETANOL 96% DAUN KAWISTA
( Limonia acidissima L.)
Tri Nur Azizah *) , Nuraini Harmastuti, Tri Wijayanti
Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi, Kota Surakarta, Jawa Tengah *Email: trinur.azizah4@gmail.com
Received: 31-05-2023 Accepted:15-02-2024 Published:30-06-2024

## INTISARI
Antioksidan alami yang berasal dari bahan tanaman dapat dijadikan pilihan alternatif akibat adanya kemungkinan efek samping dari antioksidan sintetik. Salah satu tanaman yang  berpotensi sebagai antioksidan  alami  yaitu  kawista  ( Limonia  acidissima L.).  Tujuan  penelitian  ini  untuk membandingkan aktivitas antioksidan dari daun kawista dengan proses ekstraksi beberapa pelarut yaitu metanol, etanol 70%, dan etanol 96%. Metode penelitian yang dilakukan meliputi maserasi, identifikasi  senyawa,  dan  pengujian  antioksidan  dengan  metode  DPPH.  Pengukuran  antioksidan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dinyatakan dengan nilai IC 50 ( Inhibitory Concentration 50) yang kemudian dikonversikan ke nilai AAI ( Antioxidant Activity Index ). Nilai aktivitas antioksidan yang diperoleh paling tinggi dari ekstrak metanol yaitu nilai rata – rata IC 50 82,2034 ± 0,5733 dan nilai  rata  –  rata  AAI  1,2165  ±  0,00852  artinya  mempunyai  sifat  antioksidan  kuat.  Aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol 70% daun kawista dengan nilai rata – rata IC 50 135,5030 ± 7,2238 dan nilai rata – rata AAI 0,7934 ± 0,0382 mempunyai sifat antioksidan sedang. Sedangkan ekstrak etanol 96%  dengan  nilai  rata  –  rata  IC 50 123,5900  ±  2,9718  dan  nilai  rata  –  rata  AAI  0,8094  ±  0,0195 mempunyai sifat antioksidan sedang. Hasil ekstraksi dengan berbagai pelarut menunjukkan aktivitas antioksidan  yang  berbeda  signifikan.  Antioksidan  tertinggi  terdapat  pada  ekstrak  metanol  dengan nilai IC 50 82,20 ppm dan AAI sebesar 1,22.
Kata kunci : Antioksidan, Daun Kawista, DPPH, ekstraksi

## ABSTRACT
Natural  antioxidants  (plants)  are used  as  an alternative  choice  due to the  possible side  effects of synthetic  antioxidants.  One  of  the  plants  that  has  the  natural  antioxidant  potential  is  kawista (Limonia acidissima L.). The purpose of this study was to compare the antioxidant activity of kawista leaves  with  several  solvent  extraction  processes,  methanol,  70%  ethanol,  and  96%  ethanol.  The research  methods  are  maceration,  compound  identification,  and  antioxidants  using  the  DPPH method.  Antioxidant  measurements  using  a  spectrophotometer  UV  -  Vis  are  expressed  by  IC 50 (Inhibitory  Concentration  50)  which  are  then  converted  to  AAI  (Antioxidant  Activity  Index).  The highest antioxidant activity obtained from the methanol extract, with the average of IC 50 82,2034 ± 0,5733 and the average of AAI 1,2165 ± 0,00852 means that it has strong antioxidant properties. The antioxidant activity of 70% ethanol extract of kawista leaves with an average of IC 50 135.5030 ± 7.2238 and an average of AAI 0.7934 ± 0.0382 has moderate antioxidant properties. Meanwhile, the 96% ethanol extract with an average of IC 50 123.5900 ± 2.9718 and an average of AAI 0.8094 ± 0.0195 has moderate antioxidant properties. In conclusion, the comparison of the extraction results
with various solvents showed significantly different antioxidant activity. The highest antioxidant was found in methanol extract with an IC 50 82.20 ppm and an AAI 1.22.
Keywords : Antioxidant, DPPH, extraction, Kawista Leaves
* corresponding author:
Nama : Tri Nur Azizah Institusi : Universitas Setia Budi Surakarta
Alamat institusi  : Jl. Letjend Sutoyo Mojosongo Solo 57127 E-mail : trinur.azizah4@gmail.com

## PENDAHULUAN
Gaya hidup masyarakat di masa  modern seperti merokok,  makan yang  digoreng, dibakar, dan makanan siap saji, disertai dengan peningkatan polusi udara dari asap kendaraan bermotor dapat meningkatkan jumlah radikal bebas. Radikal bebas atau oksidan di dalam tubuh merupakan bahan yang sangat berbahaya. Bahan radikal bebas tersebut sebenarnya merupakan senyawa atau molekul yang  mengandung  satu  atau  lebih  elektron  yang  tidak  berpasangan  pada  bagian  orbital  luarnya. Adanya elektron yang tidak berpasangan itulah yang mengakibatkan senyawa tersebut sangat reaktif untuk mencari pasangannya. Elektron tidak berpasangan dapat mengikat atau menyerang elektron molekul yang berada di sekitarnya seperti lipid, protein, maupun DNA (pembawa sifat) yang akan mengakibatkan  kerusakan  sel  atau  pertumbuhan  sel  yang  tidak  bisa  dikendalikan  (Sayuti  dan Yenrina,  2015).  Tubuh  memerlukan  tambahan  antioksidan  dari  luar  yang  dapat  melindungi  dari serangan radikal bebas (Wahdaningsih dkk., 2011).
Antioksidan dibagi menjadi dua kelompok yaitu antioksidan alami (berasal dari bahan alami) dan antioksidan sintetik (diperoleh dari hasil sintesis secara kimia), namun adanya kekhawatiran akan kemungkinan  efek  samping  dari  antioksidan  sintetik  menyebabkan  antioksidan  alami  menjadi alternatif. Salah satu tanaman yang berpotensi sebagai antioksidan alami adalah kawista ( Limonia acidissima L.).  Kawista  dikenal  sebagai  tanaman  obat  paling  penting  di  India,  salah  satu  bagian tanaman yaitu daun dapat digunakan sebagai antibakteri (Panda dkk., 2013), diuretika (Parial dkk., 2009)  dan  hipoglikemia  (Joshi  dkk.,  2009).  Daun  kawista  dapat  digunakan  sebagai  antioksidan (Rahmi dan Rahmadewi, 2020).
Pengujian aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH (1,1- diphenyl -2- picrylhydrazyl ) merupakan metode yang mudah dan sederhana untuk pengujian aktivitas antioksidan dan  tidak  memerlukan  pereaksi  dalam  pengukuran  (Koleva  dkk.,  2002).  Penelitian  mengenai aktivitas antioksidan tanaman kawista telah dilakukan dari tahun ke tahun, antioksidan pada buah kawista  telah  dilakukan  Ilango  dan  Chitra  (2010)  dan  Nanasombat  dkk.  (2012)  tentang  ekstrak metanol  buah  kawista  menggunakan  FRAP  dan  DPPH.  Penelitian  Mandade  dan  Jadhav  (2013) menggunakan  metode  DPPH  dan  ABTS.  Berdasarkan  penelitian  Patil  dkk.  (2012)  aktivitas antioksidan juga ditemukan dalam daun, akar, dan kulit buah kawista. Menurut Tjahjandarie dkk.
(2017) senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan merupakan kumarin dalam akar kawista.
Pelarut bersifat polar yang biasa digunakan untuk ekstraksi adalah air, metanol dan etanol. Penelitian Darsini dkk. (2013) menyebutkan bahwa aktivitas antioksidan paling tinggi pada ekstrak metanol  buah  kawista  bersifat  sangat  kuat  karena  nilai  IC 50 yang  diperoleh  <  50  ppm.  Aktivitas antioksidan  yang  diperoleh  dalam  penelitian  (Rahmi  &  Rahmadewi,  2020)  sampel  daun  kawista dengan pelarut aquades nilai IC 50 134,56 ppm dan pelarut etanol 96% nilai IC 50 296,37 ppm. Perlu dilakukan  perbandingan  pelarut  dari  metanol  dan  etanol  dengan  konsentrasi  yang  berbeda  untuk mengetahui perbedaan aktivitas antioksidan bahan alam. Berdasarkan uraian tersebut, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak metanol, ekstrak etanol 70%, dan ekstrak etanol 96% daun kawista dengan menggunakan metode DPPH (1,1- diphenyl -2- picrylhydrazyl ) yang
dinyatakan dengan nilai Inhibitory Concentration 50 (IC 50 ) dan dikonversikan ke nilai Antioxidant Activity Index (AAI) secara in vitro menggunakan spektrofotometer UV-Vis.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah peralatan maserasi yang terdiri dari bejana maserasi, beaker  glass (Herma).  Alat  lain  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  lampu  UV (Recent RCC), seperangkat alat spektrofotometri UV-VIS Shimadzu 1700, neraca analitik (Fujitsu), oven (Binder ED), ayakan mesh 40, blender (Phillips), rotary evaporator (B ONE RE 2000), silica GF 254 nm (Merck).
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah serbuk daun kawista yang diperoleh dari Desa Dresi Kulon, Kecamatan Kaliori, Kabupaten Rembang.  Bahan-bahan kimia yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol p.a 96% (Sigma), DPPH (Sigma), metanol p.a (Sigma), aquadest (Bratachem), n-butanol (Bratachem), vitamin C (Sigma), eter (Bratachem), asam asetat (Bratachem), asam  sulfanilat  (Nitrokimia),  formaldehid  (Bratachem),  uap  ammonia  (Bratachem),  kloroform (Bratachem),  amil  alkohol  (Bratachem),  NaOH  (Sigma),  NaNO 2 (Bratachem),  HCl  (Bratachem), asam  sulfat  (Bratachem),  vanillin  (Bratachem),  anisaldehid  (Bratachem),  pereaksi  dragendorff (Bratachem), pereaksi meyer (Bratachem) dan FeCl 3 (Bratachem).

## Preparasi Daun Kawista Pengambilan bahan
Daun  kawista  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  diambil  dari  Desa  Dresi  Kulon, Kecamatan Kaliori, Kabupaten Rembang, Jawa Tengah sebagai satu – satunya daerah pembudidaya tanaman  kawista  di  Jawa  Tengah,  yang  dilakukan  pada  bulan  Maret  2023.  Langkah  selanjutnya dilakukan  determinasi  tanaman  yang  bertujuan  untuk  menetapkan  kebenaran  sampel  berdasarkan ciri-ciri  morfologi  tanaman.  Determinasi  tanaman  kawista  dilakukan  di  Laboratorium  Biologi Farmasi STIFAR “Yayasan Pharmasi” Semarang.

## Pembuatan serbuk
Daun  kawista  dibersihkan,  dicuci,  dan  dipotong  kecil-kecil  kemudian  dikeringkan  dalam lemari pengering simplisia selama 3-4 hari dengan suhu 40 ͦ C. Daun yang sudah kering kemudian dihaluskan dengan blender sampai menjadi serbuk halus, lalu diayak dengan ayakan mesh 40.

## Prosedur ekstraksi
Serbuk  daun  kawista  dilakukan  ekstraksi  menggunakan  metanol,  etanol  70%,  dan  etanol 96%. Ekstraksi dilakukan dengan cara re-maserasi 30 gram serbuk daun kawista dimasukkan bejana kemudian ditambahkan 300 mL cairan penyari (1:10) (Depkes RI, 1986). Sampel direndam selama 5 hari pada tempat yang terlindung cahaya, sambil sesekali diaduk. Tiap 24 jam filtrat disaring, filtrat yang diperoleh dikumpulkan dan cairan penyari diganti baru dengan jumlah yang sama dengan yang pertama (Saleh dkk., 2012).

## Studi Aktivitas Antioksidan Identifikasi senyawa
Identifikasi  senyawa  yang  dilakukan  terdiri  dari  uji  kualitatif  antioksidan,  uji  KLT Flavonoid, uji KLT Alkaloid, uji KLT Saponin, uji KLT Tanin. Fase diam yang digunakan adalah silika gel GF254. Fase gerak untuk uji flavonoid n-butanol:asam asetat:air (4:1:5), dan pereaksi yang digunakan  adalah  uap  amoniak.  Fase  gerak  untuk  uji  alkaloid  metanol:  kloroform  (0,5:9,5),  dan pereaksi  yang  digunakan  adalah  dragendorff.  Fase  gerak  untuk  uji  saponin  kloroform:metanol:air (6:3:1),  dan  pereaksi  yang  digunakan  adalah  H 2 SO 4 –  anisaldehid.  Fase  gerak  untuk  uji  tanin  etil asetat : metanol : air (100:13,5:10), kromatogram  yang dihasilkan dideteksi dengan sinar tampak, sinar UV254, dan sinar UV 366 kemudian ditandai dan dihitung nilai Rf (Harborne, 1987).

## Pembuatan larutan DPPH
Sebanyak 50 mg serbuk DPPH dilarutkan dengan metanol p.a dimasukkan ke dalam labu ukur  50,0  mL  diperoleh  konsentrasi  1000  ppm,  kemudian  ditambahkan  metanol  p.a  sampai  batas tanda dan dihomogenkan. Diencerkan 10 kali dengan dipipet 5,0 mL larutan kemudian ditambahkan metanol p.a sampai batas labu ukur 50,0 mL diperoleh konsentrasi 100 ppm (Sulistiawati dkk., 2021).

## Pembuatan larutan standar Vitamin C
Pembuatan larutan standar induk Vitamin C 50 mg diencerkan sampai batas labu ukur 50,0 mL diperoleh konsentrasi 1000 ppm, kemudian diencerkan 10 kali dengan dipipet 5,0 mL larutan baku  induk  diencerkan  sampai  batas  labu  ukur  50,0  mL  diperoleh  konsentrasi  100  ppm  sehingga dapat dibuat larutan deret baku Vitamin C 10, 20, 30, 40, 50 ppm. (Sami dan Rahimah, 2015)

## Pembuatan larutan sampel ekstrak
Larutan ekstrak metanol, etanol 70%, dan etanol 96% 100 mg diencerkan sampai batas labu ukur 100,0 mL diperoleh konsentrasi 1000 ppm, dibuat seri konsentrasi yaitu 60, 80, 100, 120, 140 ppm dengan dilarutkan dalam metanol p.a. Larutan sampel direplikasi sebanyak tiga kali.

## Spektrofotometri UV-Vis

## Penentuan panjang gelombang maksimum
Larutan stok DPPH sebanyak 2 mL diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis  dengan  panjang  gelombang  gelombang  400  –  800  nm  kemudian  diamati  serapannya sehingga  ditemukan  panjang  gelombang  maksimum.  Panjang  gelombang  maksimum  digunakan untuk mengukur serapan dari larutan uji (Sulistiawati dkk., 2021).

## Penentuan operating time
Penentuan operating time dilakukan dengan cara diambil 2 mL larutan uji ditambah dengan 2 mL DPPH.  Larutan  tersebut  kemudian  dihomogenkan  dengan  vortex  selama  10  detik  dan  diukur absorbansinya  tiap  menit  pada  spektrofotometer  UV-Vis.  Pencarian operating  time pada spektrofotometer  UV-Vis  dilakukan  pada  masing-masing  ekstrak  serta  baku  vitamin  C  dengan prosedur kerja yang sama.

## Penentuan aktivitas antioksidan
Penentuan  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  cara  2  mL  DPPH  konsentrasi 100  ppm dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  dengan  2  mL  larutan  masing-masing  ekstrak metanol, etanol 70%, dan etanol 96% daun kawista untuk masing - masing konsentrasi yaitu 60, 80, 100,  120,  140  ppm.  Selanjutnya  campuran  dihomogenkan  dengan  vortex  selama  10  detik  dan didiamkan  sesuai operating  time masing-masing  larutan  uji  di  tempat  gelap.  Larutan  diukur absorbansinya  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  maksimal. Dilakukan  pula  pengukuran  absorbansi  larutan  kontrol  (DPPH)  dan  baku  vitamin  C  (Erika  dkk., 2014).  Nilai  absorbansi  dari  daun  kawista  kemudian  digunakan  untuk  menghitung  persentase aktivitas penangkal radikal bebas dengan rumus:
Rumus % inhibisi =  ( (Abs Kontrol-Abs Sampel))/(Abs Kontrol) x 100%
Setelah didapatkan persentase inhibisi dari masing-masing replikasi, dilanjutkan perhitungan regresi linier antara konsentrasi sampel (ppm) (X) dan persen inhibisi DPPH (%) (Y) sehingga didapatkan persamaan : Y= BX + A Nilai IC 50 didapatkan dari nilai x setelah mengganti y dengan 50 dengan memasukkan nilai B dan A. Dihitung juga pada baku vitamin c dengan perhitungan yang sama. Setelah didapatkan nilai IC 50 kemudian dikonversikan menjadi nilai AAI yang digunakan untuk mengetahui indeks aktivitas antioksidan dengan rumus :
Rumus AAI =  ( Konsentrasi DPPH (ppm))/(IC 50 (ppm))

## Analisis Data
Dilakukan  analisis  data  menggunakan  program Statistical  Product  and  Service  Solution (SPSS)  versi  21.0.  Langkah  pertama  setelah  didapatkan  data  IC 50 dan  AAI  dari  masing  –  masing replikasi  nilai  antioksidan,  kemudian  diuji  normalitas  dan  homogenitas.  Data  yang  berdistribusi normal  dan  homogen  dianalisis  menggunakan  uji  Anova,  jika  terdapat  perbedaan  yang  signifikan maka dilakukan uji pasca ( Post Hoc ). Bila tidak homogen dan tidak berdistribusi normal atau tidak keduannya dilakukan analisis statistika non parametrik uji Kruskal Wallis.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  daun  kawista  diambil  dari  ujung  daun sampai  anak  tangkai  ke-3  yang  diperoleh  dari  Desa  Dresi  Kulon,  Kecamatan  Kaliori,  Kabupaten Rembang, Jawa Tengah. Dapat dilihat pada Gambar 1.
(a)
(b)

## Gambar 1. Kawista  (a) Daun Kawista (b)Tanaman Kawista (Dokumentasi Pribadi)
Pemilihan  pelarut  pada  penelitian  ini  didasarkan  pada  indeks  polaritas  dan  kepolaran dari senyawa yang dituju. Berdasarkan indeks  polaritas metanol dan etanol yang cukup tinggi, dimana nilai indeks polaritas metanol 5,1 dan etanol 5,2 sehingga peneliti memilih pelarut metanol dan etanol sebagai perbandingan pelarut untuk ekstraksi. Berdasarkan hasil rendemen paling besar pada ekstrak metanol,  dapat  diartikan  bahwa  dalam  ekstrak  metanol  mengandung  13,54  %  senyawa  aktif. Rendemen ekstrak daun kawista seperti ditunjukkan pada tabel I.
Tabel I. Hasil Rendemen Ekstrak Daun Kawista Sampel Rendemen Ekstrak Metanol 13,51 % Ekstrak Etanol 70% 10,35 % Ekstrak Etanol 96% 11,54 %
Suatu pelarut dengan polaritas yang mirip dengan zat terlarut akan melarutkan zat terlarut dengan  baik  (Holil  &  Griana,  2020).  Senyawa  metabolit  di  dalam  tanaman  ada  pada  dinding  sel, vakuola  dan  inti  sel,  sedangkan  pelarut  dengan  polaritas  yang  rendah  tidak  akan  dapat  mengikat senyawa  metabolit  di  dalam  sel  pada  sampel  kering  (simplisia).  Hasil  pada  Tabel  I  menunjukkan bahwa hasil rendemen ekstrak  metanol lebih besar dibandingkan ekstrak lain, hal ini dikarenakan tingginya senyawa bioaktif yang terdapat pada sampel metanol.
Kemudian dilakukan pengujian KLT (Kromatografi Lapis Tipis) dengan tujuan untuk menegaskan adanya senyawa terkandung dalam daun kawista. Uji KLT menunjukkan bahwa flavonoid, tanin, dan
saponin terkandung pada ekstrak daun kawista. Hasil identifikasi senyawa kimia dapat dilihat pada tabel II.
Tabel II. Hasil Uji KLT Kandungan Kimia Fase Gerak Penampak Bercak Rf (Visual) Keterangan (Pustaka) Ekstrak Metanol Ekstrak Etanol 70% Ekstrak Etanol 96% Baku Antioksidan n-butanol : asam asetat : air (4 : 1 : 5) DPPH 5% 0,66 Noda kuning berlatar belakang ungu 0,68 Noda kuning berlatar belakang ungu 0,68 Noda kuning berlatar belakang ungu 0,68 Noda kuning berlatar belakang ungu (1) (Positif) Kuning (Nurfadillah dkk., 2016) Flavonoid n-butanol : etil asetat : air (4 : 1 : 5) Uap Ammonia 0,36 Noda kuning berlatar belakang putih 0,36 Noda kuning berlatar belakang putih 0,36 Noda kuning berlatar belakang putih 0,36 Noda kuning berlatar belakang putih (2) (Positif) Kuning, jingga, merah (Koeriwa dkk., 2010) Tanin etil asetat : metanol : air (100 : 13,5 : 10) FeCl 3 5% 0,69 Noda biru hitam berlatar belakang putih - - 0,69 Noda biru hitam berlatar belakang putih (3) (Positif) Biru hingga ungu biru, kadang - kadang kekuningan (Hanani, 2015) Alkaloid metanol : kloroform (0,5 : 9,5) Dragendorff - - - 0,74 Noda coklat berlatar belakang oranye (4) (Positif) Coklat, jingga (Harborne, 1987) Saponin kloroform : metanol (9 : 1) Anisaldehyd e – H 2 SO 4 0,88 Noda ungu berlatar belakang putih 0,88 Noda ungu berlatar belakang putih 0,88 Noda ungu berlatar belakang putih 0,88 Noda ungu berlatar belakang putih (5) (Positif) Biru hingga ungu biru, kadang - kadang kekuningan (Hanani, 2015)
Nilai  IC 50 berbanding  terbalik  dengan  kemampuan  senyawa  yang  bersifat  antioksidan. Semakin  kecil  IC 50 maka  semakin  besar  kemampuan  senyawa  tersebut  untuk  meredam  radikal bebas.Nilai IC 50 < 50 ppm menunjukkan kekuatan antioksidan sangat kuat, nilai IC 50 51-100 ppm menunjukkan kekuatan antioksidan kuat, nilai IC 50 101-250 ppm menunjukkan kekuatan antioksidan sedang, nilai IC 50 250-500 ppm menunjukkan kekuatan antioksidan lemah, dan nilai IC 50 > 500 ppm menunjukkan kekuatan antioksidan tidak aktif (Zou dkk., 2004). Data nilai IC 50 dan AAI dapat dilihat pada Tabel III.
Berdasarkan hasil pada Tabel III dapat disimpulkan bahwa aktivitas antioksidan dari ekstrak metanol daun kawista mempunyai sifat antioksidan kuat dengan nilai IC 50 82,2034 (IC 50 51 – 100) dan nilai AAI 1,2165 (1,0 – 2,0). Aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol 70% dan 96% daun kawista mempunyai sifat antioksidan sedang dengan nilai rata – rata IC 50 135,5030 dan 123,5900 (IC 50 101 – 250) dan nilai AAI 0,7934 dan 0,8094 (0,5 – 1,0).
Tabel III. Hasil Nilai IC 50 dan AAI Sampel Replikasi IC 50 Rerata AAI Rerata Ekstrak Metanol I II III 77,2370 82,5658 82,5020 82,2034 ± 0,5733 1,2947 1,2112 1,2121 1,2165 ± 0,00852 Ekstrak Etanol 70% I II III 143,8920 130,9040 131,7750 135,5030 ± 7,2238 0,6953 0,7639 0,7589 0,7934 ± 0,0382 Ekstrak Etanol 96% I II III 123,7700 126,4700 120,5300 123,5900 ± 2,9718 0,8079 0,7907 0,8297 0,8094 ± 0,0195 Vitamin C I II III 15,8709 13,3203 15,2272 14,8061 ± 1,3264 6,3008 7,5073 6,5672 6,7918 ± 0,6338
Aktivitas antioksidan vitamin C sebagai pembanding atau kontrol positif mempunyai sifat antioksidan  sangat  kuat  dengan  nilai  IC 50 14,8061(IC 50 <  50) dan  nilai  AAI  6,7918  (>  2,0).  Nilai tersebut mendekati aktivitas antioksidan dari penelitian Jackie dan Dika (2017) tentang studi efek antioksidan  vitamin  memberikan  hasil  bahwa  vitamin  C  merupakan  senyawa  pembanding  yang paling sering digunakan karena aktivitas antioksidannya yang sangat tinggi dengan mempunyai rata- rata nilai IC 50 yaitu 14,79 μg/mL.
[ 6,7918 ] b,c,d [ 6,7918 ] a,c,d
[ 0,7934 ] a,b [ 0,8094 ] a,b 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Vitamin C Ekstrak Metanol
Ekstrak Etanol 70% Ekstrak etanol 96%
AAI
Gambar 2. Hasil perbandingan uji antioksidan ekstrak daun kawista
Keterangan: a. berbeda signifikan (p < 0,05) terhadap vitamin C b. berbeda signifikan (p < 0,05) terhadap ekstrak metanol c. berbeda signifikan (p < 0,05) terhadap ekstrak etanol 70%
d. berbeda signifikan (p < 0,05) terhadap ekstrak etanol 96%
Berdasarkan  hasil  pengukuran  nilai  aktivitas  antioksidan  ekstrak  metanol  mempunyai aktivitas antioksidan paling tinggi dari ekstrak daun kawista. Hal ini mungkin dikarenakan senyawa yang  terkandung  pada  daun  kawista  yang  berperan  sebagai  antioksidan  yaitu  flavonoid  dan  tanin lebih  banyak  tertarik  pada  pelarut  metanol.  Baik  flavonoid  maupun  tanin  memiliki  potensi antioksidan  karena  memiliki  gugus  hidroksil  yang  dapat  memberikan  atom  hidrogen  pada  radikal bebas.  Sebaliknya,  senyawa  flavonoid  lebih  sering  larut  dalam  pelarut  polar  dan  semipolar (Markham, 1988).
[1,2165] a,c,d
Hasil  aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun  kawista  dianalisis  dengan  SPSS  didapatkan  hasil dari  tabel  Test  of  Normality  nilai  Sig  >  0,05  sehingga  data  antioksidan  dinyatakan  terdistribusi normal.  Sehingga  dilanjutkan  uji  parametrik  yaitu anova  one  way ,  didapatkan  hasil  keseluruhan berbeda signifikan (p < 0,05) dan data tidak homogen (p < 0,05) sehingga dilanjutkan uji post hoc dengan variable not assumed . Hasil uji perbandingan antioksidan ekstrak dapat dilihat pada Gambar 2.
Berdasarkan  hasil  uji  statistika  dapat  disimpulkan  bahwa  kelompok  vitamin  C memiliki  perbedaan  signifikan  terhadap  semua  ekstrak  daun  kawista,  sehingga  aktivitas ekstrak  tidak  memiliki  aktivitas  yang  setara  dengan  kontrol  positif.  Kelompok  ekstrak metanol  dengan  nilai  IC 50 dan  AAI  paling  besar  dan  dilihat  dari  uji  statistika  pada ditunjukkan pada Gambar 2 bahwa ekstrak etanol baik konsentrasi 70% maupun 96% tidak memiliki  perbedaan  signifikan  satu  sama  lain  sehingga  jika  dipilih  salah  satu  konsentrasi saja  yang dilanjutkan ke pemurnian selanjutnya,  besar kemungkinan tidak berbeda secara aktivitas antioksidannya.

## KESIMPULAN
Hasil ekstraksi dengan berbagai pelarut menunjukkan aktivitas antioksidan yang berbeda signifikan. Antioksidan tertinggi terdapat pada ekstrak metanol dengan nilai IC 50 82,2034 ppm dan AAI sebesar 1,2165 mengindikasikan antioksidan yang kuat.

## DAFTAR PUSTAKA
Departemen Kesehatan  RI. 1986 Sediaan Galenik 2 &10. Jakarta :Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Eluru,  J.R.,  Taranalli  A.D.,  Kawatra  S.  2015  ‘Anti-tumour  activity  of  Limonia  acidissima  L. methanolic extract in mice model of dalton’s ascitic lymphoma’, International Journal of Pharmacognosy and Phytochemical Research, 7(6), pp. 1094–1100. Erika B.R., Marita D., Rini S. 2014 ‘Aktivitas Penangkapan Radikal DPPH oleh Fraksi n-Heksan dan Fraksi Etil Asetat Daun Kelor (Moringa oleifera Lamk)’, Media Farmasi , 11(1) , pp. 1- 6. http://dx.doi.org/10.12928/mf.v11i1.1392. Hanani, E. 2015 Analisis Fitokimia , Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC. Harborne J. 1987 Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan , Bandung : Penerbit ITB.
Ilango K., Chitra V. 2010 ‘Wound Healing and Antioxidant Activities of the Fruit Pulp of Limonia Acidissima Linn (Rutaceae) in Rats’, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 9(3), pp. 223–230. https://dx.doi.org/10.4314/tjpr.v9i3.56281 .
Koeriwa, Y.A., Faatimawali, Wiyono W.I. 2010 ‘Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dalam Daun Beluntas (Pluchea indica L.)’, Manado : FMIPA UNSRAT.
Koleva II, Van Beek T.A., Linssen J.P.H., De Groot A., Evstatieva L.N. 2002 ‘Screening of plant extracts  for  antioxidant  activity:  A  comparative  study  on  three  testing  methods’, Phytochemical Analysis, 13(1), pp. 8–17. https://doi.org/10.1002/pca.611.
Mandade  S.,  Jadhav  J.  2013  ‘Antioxidant  and  radical  scavenging  activity  of  Limonia  acidissima (Linn) extract’, Planta Med, 73, pp. 1–3. https://dx.doi.org/10.1055/s-0033-1351925.
Markham  K.R.  (1988) Cara  Mengidentifikasi  Flavonoid  Diterjemahkan  oleh  Padmawinata  K ., Bandung : Penerbit ITB.
Nachimutu S., Kumaravel V. 2014 ‘Phytochemical screening and evaluation of antioxidant potential of  Feronia  limonia  leaves  and  fruit  extracts’, Journal  of  Chemical  and  Pharmaceutical
Sciences , 2, pp. 36-40.
https://www.jchps.com/specialissues/Special%20issue2/jchps%20si2%204%20saraswathi %2036-40.pdf
Nurfadillah, Chadijah S., Rustiah W. 2016 ‘Analisis Antioksidan Ekstrak Etil Asetat Dari Kulit Buah Rambutan (Nephelium lappaceum) Dengan Menggunakan Metode DPPH’, Makassar : UIN Alauddin Makassar.
Panda N., Jagannath Patro V., Kumar Jena B., Panda P. 2013 ‘Evaluation of Phytochemical and Anti- Microbial  Activity  of  Ethanolic  Extract  of  Limonia  Acidissima  L.  Leaves’, International Journal of Herbal Medicine , 1(1), pp. 22–27.
https://www.florajournal.com/archives/2013/vol1issue1/PartA/4.1.pdf
Parial S., Jain D. C., Joshi S. B. 2009 ‘Diuretic Activity Of The Extracts Of Limonia Acidissima In Rats’, 2(1), pp. 53–56.
Patil  S.  P.,  Kalkar  S.  A.,  Kulkarni  A.S.  2012  ‘Phytochemical  Screening,  Antibacterial  and Antioxidant Activity of Limonia Acidissima ( L )’, BIONANO FRONTIER, 5, pp. 2–11. Rahmi  H.,  Rahmadewi  R.  2020  ‘Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun  Dan  Kulit  Buah  Kawista ( Limonia  acidissima L)  Asal  Kabupaten  Karawang’, Jurnal  MIDPRO ,  12(1),  pp.  2086– 2792. https://doi.org/10.30736/md.v12i1.149.
Saleh L.P., Suryanto E., Yudistira A. 2012 ‘Aktivitas Antioksidan Dari Ekstrak Tongkol Jagung ( Zea mays L.)’, Pharmacon , 1(2), pp. 20–24. https://doi.org/10.35799/pha.1.2012.465.
Sami  F.  J.,  Rahimah,  S.  2015  ‘Uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  metanol  bunga  brokoli  (brassica oleracea l. var. italica) dengan metode DPPH (2, 2 diphenyl-1-picrylhydrazyl) dan metode ABTS (2, 2 azinobis (3-etilbenzotiazolin)-6-asam sulfonat)’, Jurnal Fitofarmaka Indonesia , 2(2), pp. 107-110. https://doi.org/10.33096/jffi.v2i2.179. Sayuti K, Yenrina R. 2015 Antioksidan alami dan sintetik , Padang: Andalas University Press. Scherer  R.,  Godoy  H.  T.  2009  ‘Antioxidant  activity  index  (AAI)  by  the  2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl method’,
Food
Chemistry , 112(3), pp. 654–658.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2008.06.026.
Sulistiawati  I.,  Saleh  C.,  Erwin.  2021  ‘Phytochemical  Screening  And  Antioxidant  Activity  Test Using Dpph Method Of Kluwih Seed (Artocarpus camansi Blanco)’, Jurnal Atomik , 6(1), pp. 1-5.
Tjahjandarie T.S., Saputri R.D., Tandjung M. 2017 ‘Aktivitas Antioksidan Senyawa Kumarin Ter- O-Geranilasi  Dari  Akar  Limonia  acidissima  L.’, Journal  Of  Tropical  Pharmacy  And Chemistry, 4(2), pp. 79–88. https://doi.org/10.25026/jtpc.v4i2.143. Wahdaningsih  S.,  Setyowati  P . E.,  Subagus  W.  2011  ‘Aktivitas  Penangkap  Radikal  Bebas  Dari Batang  Pakis  ( Alsophila  glauca J.  Sm)’, Majalah  Obat  Tradisional, 16(3),  pp.  156-160. https://doi.org/10.22146/tradmedj.8053.
Zou  Y.,  Lu  Y.,  and  Wei  D.  2004  ‘Antioxidant  Activity  of  Flavonoid-Rich  Extract  of  Hypericum Perforatum  L.  in  vitro’, Journal  Agric  Food  Chem ,  52,  pp.  5032-5039. https://doi.org/10.1021/jf049571r.