## DOI: 10.30644/rik.v8i2.309
Aktivitas  sitotoksik  dan  antiangiogenesis  umbi  mentimun  papasan  ( Coccinia  grandis

## L. Voight) terhadap sel kanker hela yang diinduksi protein bFGF
Julia Megawati Djamal 1 *, Jason Merari P 1 , Rizal Maarif Rukmana 2
1 Program Studi Pascasarjana, Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi, Surakarta, Jawa Tengah, Indonesia, 57127
2 Departemen of Medical Laboratory Technologi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Setia Budi, Surakarta, Jawa Tengah, Indonesia *Email korespondensi: juliamegawatidjamal.08@gmail.com
Accepted: 07 Januari 2020; revision: 28 April 2020; published: 30 Juni 2020

## Abstrak
Latar  Belakang :  Kanker  leher  rahim  merupakan  salah  satu  kanker  yang  paling  sering  terjadi  pada wanita.  Salah  satu  tanaman  yang  berpotensi  untuk  dikembangkan  sebagai  alternatif  pengobatan kanker  adalah  tanaman  umbi  mentimun  papasan  ( C.  grandis (L.)  Voight).  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel  kanker  Hela  dan  antiangiogenesis  terhadap chorioallantoic membrane (CAM). Metode :  Umbi  mentimun  papasan  yang  diekstraksi  dengan  pelarut  etanol  96%.  Ekstrak  etanol kemudian  dilanjutkan  dengan  fraksinasi  dengan  metode  partisi  cair-cair  dilanjutkan  dengan kromatografi  lapis  tipis.  Uji  aktivitas  sitotoksik  dilakukan  dengan  menggunakan  metode Microculture Tetrazolium  Salt (MTT)  dan  uji  antiangiogenesis  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  CAM embrio ayam yang terinduksi dengan protein bFGF.
Hasil :  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak,  fraksi n- heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air memiliki nilai IC 50 berturut-turut 986,604 µg/ml, 208,776 µg/ml, 187,824 µg/ml dan 553,393 µg/ml. Nilai IC 50 dari  fraksi n- heksan kemudian  dilanjutkan  dengan  pengujian  antiangiogenesis.  Dari  analisa  KLT diperoleh hasil bahwa fraksi n- heksan mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, tannin, saponin dan terpen.  Hasil  uji  antiangiogenesis  menunjukkan  bahwa  kemampuan  pengambatan  pada  konsentrasi 104  µg/ml  yaitu  17,56%,  pada  konsentrasi  208  µg/ml  43,23%    dan  pada  konsentrasi  418  µg/ml 56,78%.
Kesimpulan : Fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat memiliki aktivitas sitotoksik yang sedang terhadap sel kanker Hela dan fraksi n-heksan memiliki aktivitas antiangiogenesis.
Kata kunci: angiogenesis , C. grandis (L.) Voight, Chorioallantoic Membrane , hela, sitotoksik

## Abstract
Background : Cancer is one of the most common cancers in women. One of the plants that has the potential  to  be  developed  as  an  alternative  treatment  for  cancer  is  the  papasan  cucumber  tuber  C. grandis (L.) Voight This study aims to determine the  activity of cytotoxic effects on Hela cancer cells and antiangiogenesis against chorioallantoic membrane (CAM).
Method :  In  this  study,  papasan  cucumber  tubers  were  extracted  with  96%  ethanol  solvent.  The ethanol  extract  was  then  continued  with  fractionation  by  ECC  method,  followed  by  KLT.  Cytotoxic activity  tests  were  carried  out  using  the  MTT  method  and  antiangiogenesis  tests  were  carried  out using CAM methods of chicken embryos induced with bFGF protein.
Results :  The  results  showed  that  the  extract,  n-hexane  fraction,  ethyl  acetate  fraction  and  water fraction  had  IC 50 values  986,604  µg/ml,  208,776  µg/ml,  187,824  µg/ml  and  553,393  µg/ml.  The  IC 50 value  of  the  n-hexane  fraction  was  then  continued  with  antiangiogenesis  testing.  The  KLT  analysis showed  that  the  n-hexane  fraction  contained  alkaloids,  flavonoids,  tannins,  saponins,  and  terpenes. Antiangiogenesis test result show that the inhibitory at concentration of 104 µg / ml was 17,56%, at a concentration of 208 µg / ml 43,23% and at a concentration of 418 µg / ml 56,78%.
Conclusion :  n-hexane  fraction  and  ethyl  acetate  fraction  have  moderate  cytotoxic  activity  against Hela cancer cells and n-hexane fraction has antiangiogenesis activity.
Key words : antiangiogenesis, Chorioallantoic Membrane, Coccinia grandis L.Voight, cytotoxic, hela
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana

## PENDAHULUAN
Kanker merupakan salah satu penyebab kematian  terbanyak  pada  manusia  dan kanker  merupakan  penyebab  kematian tertinggi  kedua  diseluruh  di  seluruh  Dunia pada  tahun  2015 1 .  Tingginya  kasus  kanker baru dan angka kematian akibat kanker yang dapat disebabkan oleh faktor resiko perilaku dan  pola  makan.  Faktor-faktor  tersebut adalah  indeks  massa  tubuh  yang  tinggi, kurangnya  konsumsi  sayur  dan  buah, kurangnya  aktivitas  fisik,  merokok  dan konsumsi alkohol yang berlebihan 2 . Menurut American  Cancer  Society pada  tahun  2014 terdapat  4.020  kematian  akibat  kanker serviks, dan 12.360 kasus kanker diharapkan  dapat  diatasi 3 .  Kanker  leher Rahim  atau  serviks  adalah  penyakit  yang disebabkan  oleh  proses  keganasan  yan terjadi  pada  serviks  atau  mulut  Rahim. Human Papilloma Virus (HPV) telah diketahui sebagai penyebab terjadinya kanker serviks, yang dapat ditularkan melalui hubungan  seksual,  infeksi  beberapa  jenis virus,  dan  personal hygiene .  Berbagai strategi  terapi  pengobatan  kanker  serviks telah dilakukan diantaranya dengan menggunakan terapi bedah, radioterapi, dan kemoterapi  maupun  kombinasi  ketiganya, namun hasilnya relatif belum optimal.
Angiogenesis merupakan proses pembentukan  pembuluh  darah  baru  yang terjadi  secara  normal  dan  sangat  penting dalam proses pertumbuhan dan perkembangan. Proses angiogenesis sebagai  indikator  adanya  perubahan  status sel  kanker  dari  jinak  menjadi  ganas.Sel kanker  diketahui  bersifat  maglina  apabila berukuran  lebih  dari  2  mm 3  4 .  Salah  satu pencarian senyawa sitotoksik dan antiangiogenesis yang berasal dari tanaman obat.  Oleh  karena  itu,  sangat  perlu  adanya penemuan  obat  baru  yang  mempunyai  efek sitotoksik  dan  antiangiogenesis  yang  baik pada  sel  kanker  Hela.    Pemanfaatan  bahan alam  sebagai  salah  satu  alternatif  obat kanker  telah  banyak  dieksplorasi,  salah satunya  tanaman  mentimun  papasan  ( C. grandis (L.)  Voight))  merupakan  tanaman keluaga Curcubitacea yang banyak dijumpai di Negara-negara tropis. Tanaman mentimun
papasan ( C. grandis (L.) Voight), merupakan salah  satu  tanaman  dari  Nusa  Tenggara Timur (NTT) yang secara empiris digunakan untuk mengobati demam pada anak, mengobati  gatal-gatal  pada  kulit,  dan  juga untuk  mengobati  atau  menurunkan  gula darah.  Pada  penelitian  sebelumnya  yang dilalukan  oleh 5 ,  Ekstrak  etanolik  umbi mentimun  papasan  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri Shigella  dysenteriae dan Staphylococcus  aureus dan  hasil identifikasi  golongan  senyawa  menunjukkan adanya  golongan  senyawa  flavonoid,  tanin, saponin, alkaloid dan polifenol.
Umbi mentimun papasan ( C. grandis (L.) Voight) bersifat sitotoksik terhadap sel BSLT dengan nilai LC 50 23- 32 μg/mL 6 . Tujuan dari penelitian  ini  adalah  mengetahui  aktivitas sitotoksik  ekstrak, fraksi n-heksan, fraksi  etil asetat dan fraksi air umbi mentimun papasan terhadap  sel  kanker  Hela  dan  mengetahui nilai  IC 50 yang  memiliki  aktivitas  sitotoksik paling  kuat,  serta  mengetahui  aktivitas antiangiogenesis  pada  pembuluh  darah CAM  embrio  ayam  yang  diinduksi  protein bFGF.

## METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Maret-November  2019  di  Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah  Mada  Yogyakarta  dan  dilanjutkan  di Laboraturium  Stuktur  dan  Perkembangan Hewan  Fakultas  Biologi  Universitas  Gadjah Mada.

## Populasi dan Sampel
Populasi yang digunakan dalam penelitian ini adalah umbi mentimun papasan  ( C.  grandis (L.)  Voight)  sel  Hela CAM.  Sampel  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah umbi mentimun papasan  ( C.  grandis (L.)  Voight)  yang diperoleh  dari  Kabupaten  Malaka-  Nusa Tenggara  Timur  (NTT)  pada  bulan  Maret 2019.
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana
Prosedur Penelitian Pembuatan Serbuk Umbi Mentimun

## Papasan
Umbi  mentimun  papasan  kemudian dicuci,  dipotong  kecil-kecil,  dan  dikeringkan dengan  menggunakan  oven  pada  suhu  30- 370C  selama  ±  5  jam.  Umbi  mentimun papasan  dihaluskan  dengan  cara  diblender kering kemudian diayak menggunakan ayakan  mesh  hingga  berbentuk  serbuk kering.
Penentuan kadar air serbuk Umbi Mentimun Papasan
Penentuan  kadar  air  dilakukan  dengan menggunakan  alat  sterling-bidwell.  Umbi mentimun  papasan  ditimbang  sebanyak  20 gram  kemudian  dimasukan  ke  dalam  labu alas bulat pada ditambahkan xylene sebanyak  100  ml  dan  dipanaskan  hingga tidak  ada  tetesan  air  lagi  kemudian  dilihat volume  tetesan  tadi  dan  dihitung  kadarnya dalam satuan persen.
Pembuatan Ekstrak Etanolik Umbi

## Mentimun Papasan
Pembuatan  ekstrak  etanol  dilakukan dengan  metode  maserasi.  Sebanyak  500  g serbuk  dimasukkan  dalam  wadah  berwarna gelap  ditambahkan  2,5  L  etanol  96%. Selanjutnya direndam selama 6 jam pertama sambil sesekali diaduk, kemudian didiamkan selama 18 jam. Maserat kemudian dipisahkan  dengan  cara  disaring,  dekantasi atau  filtrasi.  Proses  penyaringan  diulangi sekurang-kurangnya  satu  kali  dengan  jenis pelarut  yang  sama  dan  jumlah  volume pelarut  sebanyak  setengah  kali  jumlah volume  pelarut  pada  penyaringan  pertama. Ekstrak  yang  diperoleh  dipekatkan  dengan vacum  rotary  evaporator  (suhu  dijaga  pada 500C) sampai diperoleh ekstrak kental yang disebut ekstrak etanol.
Identifikasi Kandungan Golongan Senyawa Ekstrak Etanolik Umbi Mentimun Papasan
a.  Flavonoid
Sebanyak  0,1  g  ekstrak  dimasukan kedalam  gelas  piala  kemudian  ditambahkan 10  ml  aquadest  dipanaskan  selama  5  menit sampai  mendidih.  Setelah  itu  disaring  dan filtratnya digunkan sebagai larutan uji. Filtrat
dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  lalu ditambahkan pita Mg, 1 ml HCL pekat dan 1 ml  alkohol  kemudian  dikocok  dengan  kuat. Uji positif flavonoid ditandai dengan terbentuknya  warna  merah,  kuning  atau jingga pada lapisan amil akohol.
b.  Alkaloid
Sebanyak  0,1  gram  sampel  dilarutkan dalam  10  ml  CHCl3  (kloroform)  dan  4  tetes NH4OH  kemudian  disaring  dan  filtartnya dimasukan  kedalam  tabung  reaksi  tertutup. Ekstrak CHCl3 dalam tabung reaksi kemudian  dikocok  dengan  ditambahkan  10 tetes  H2SO4  2  M,  sampai  terbentuk  2 lapisan.  Lapisan  asam  yang  berada  diatas dipisahkan  kedalam  tabung  reaksi  yang  lain dan  ditambahkan  pereaksi  mayer  yang menghasilkan endapan warna putih sedangkan penambahan peraksi dragendorff yang  akan  menimbulkan  endapan  warna merah jingga.
c.  Fenol
Sejumlah  0,1  gram  sampel  diekstrak dengan  20  ml  metanol  70  %.  larutan dihasilkan  diambil  sebanyak  1  ml  kemudian ditambahkan  2  tetes  larutan  FeCl3  5%. Reaksi positif ditunjukan dengan terbentuknya warna hijau atau hijau kebiruan.
d.  Saponin
Sebanyak  0,1  gram  sampel  dimasukan kedalam  gelas  piala  kemudian  ditambahkan 10  ml  air  panas  dan  didihkan  selama  5 menit.  Setelah  itu  disaring  dan  filtratnya digunakan  sebagai  larutan  uji.  Filtrate dimasukan  kedalam  tabung  reaksi  tertutup kemudian  dikocok  selama  kurang  lebih  10 detik  dan  dibiarkan  selama  10  menit, ditambahkan 1 ml HCL 2M. Adanya saponin ditunjukan  dengan  terbentuknya  buih  yang stabil.
e.  Tanin
Sebanyak  0,1  g  ekstrak  ditambahkan dengan  10  ml  air  panas,  didihkan  selama  5 menit  dan  disaring.  Sebagaian  filtrat  yang diperoleh ditambahkan dengan larutan FeCl3  1%.  Hasil  positif  ditunjukan  oleh terbentuknya warna hijau kehitaman.
f.  Triterpenoid dan Steroid
Sebanyak  0,1  g  sampel  dilarutkan dengan  metanol  kemudian  diuapkan  di  atas
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana
waterbath. Filtrat digerus kemudian dilarutkan  dengan  2  ml  kloroform  dalam tabung  reaksi,  lalu  ditambahkan  dengan asetat anhidrat sebanyak 10 tetes, selanjutnya  larutan  ditetesi  dengan  H2SO4 pekat  3  tetes  melalui  dinding  tabung  reaksi. Jika  hasil  yang  diperoleh  berupa  cincin kecoklatan  atau  violet  pada  perbatasan  dua pelarut menunjukkan adanya triterpen, sedangkan munculnya warna hijau menujukan adanya steroid.

## Fraksinasi Umbi Mentimun Papasan
Fraksinasi  dilakukan  dengan  metode ECC, dengan cara ekstrak pekat etanol umbi mentimun  papasan  dilarutkan  dalam  air, disaring  kemudian  difraksinasi  dengan  n- heksan dalam corong pisah dengan perbandingan  1:1,  dikocok  secukupnya. Dibiarkan  sampai  terbentuk  2  lapisan  yaitu lapisan  n-heksan  dan  lapisan  air.  Perlakuan ini dilakukan 3x pengulangan sampai lapisan n-heksan  terlihat  jernih.  Perlakuan  untuk lapisan  air  ini  dilakukan seperti  perlakuan  di atas,  fraksinasi  menggunakan  pelarut  etil asetat  dengan  perbandingan  1:1.    Hasil fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat  diuapkan dengan  rotary  evaporator  dan  fraksi  air diuapkan di water bath. Sehingga didapatkan fraksi kental. Selanjutnya masiang-masing  fraksi  pekat  ditimbang sampai  diperoleh  berat  konstan  untuk meyakinkan  bahwa  pelarut  telah  menguap dan  didiamkan  selama  ±  2  hari  dengan ditutup aluminium foil yang dilubang.
Identifikasi  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT) Umbi Mentimun Papasan
a.  Flavonoid
Fase  gerak  yang  digunakan  yaitu: heksan:  etil  asetat:  asam  formiat  (6:4:0,2). Pembanding  yang  digunakan  Quersetin 10mg  /  1ml  etanol.  Panempak  noda: sitroborat.  Kemudian  dideteksi  UV  254  dan 366 nm.
b.  Alkaloid .
Fase  gerak  yang  digunakan  yaitu: Toluen:  etil  asetat:  dietil  amin  (7:2:1). Pembanding  :  Quinin  10  mg  /  1  ml  etanol.
Penampak  noda:  pereaksi  dragendroff. Kemudian dideteksi UV 254 dan 366 nm.
c.  Tanin .
Fase  gerak  yang  digunakan:  Etil  asetat: asam  formiat  :  toluene  :  air  (6:1,5:3:0,5). Pembanding:  asam  galat/tanin  10mg/1ml etanol. Penampak noda: pereaksi feCl3 5%. Kemudian dideteksi UV 254 dan 366 nm. d.  Polifenol.
Fase  gerak  yang  digunakan:  kloroform  : etil asetat:asam formiat (0,5:9:0,5). Penampak noda: pereaksi  feCl3 5%. Kemudian dideteksi UV 254 dan 366 nm.
e.  Steroid dan triterpenoid
Fase  gerak  yang  digunakan:  n-heksan  : etil asetat (93:7). Pembanding: tymol 10mg / 1ml  etanol.  Penampak  noda:  anisaldehid asam sulfat. Kemudian dideteksi UV 254 dan 366 nm.

## Uji Aktivitas Sitotoksik
Sel  Hela  dan  Sel  Vero  diperoleh  dari
Laboratorium Parasitologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.  Sel  Hela  dikultur  dalam  media Rosewll  Park  Memorial  Institute  (RMPI)  dan sel  Vero  dikultur  dalam  media  Dulbeccos Modified  Eagle  Medium  (DMEM).  Masing- masing  ekstrak,  dan  fraksi-fraksi  ditimbang 10  mg  kemudian,  dilarutkan  dalam  10  µl dimethyl  sulfoxide    (DMSO)  lalu  divorteks selama  3  menit.  Kemudian  diambil  100  µL dan  dimasukkan  ke  dalam  microplate  96 sumuran  yang  telah  berisi  sel  kanker  Hela dalam  media  RMPI  dengan  pengenceran ekstrak,  1000;  500;  250;  125;  62,5;  31,25 µg/ml,  dan  fraksi  n-heksan,  etil  asetat  dan air, 250;  125; 62,5;  31,25;15,62; 7,81 µg/ml, ditambah  dengan  pembanding  Doxorubicin sebagai  kontrol  pembanding.  Selanjutnya plate  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu 370C.  Setelah  diinkubasi  dimasukkan  MTT sebanyak  100  µL  setelah  itu  ditambahkan dengan  Sodium  Duodecyl  Sulphate  (SDS) sebanyak  100  µL  dan  diinkubasi  selama semalam  pada  suhu  kamar.  Setelah  itu dibaca  serapannya  dengan  Eliza  Reader dan  dihitung  nilai  IC50.  Perlakuan  untuk  sel vero ini dilakukan seperti di atas.
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana

## Uji Angiogenesis
Indikator  angiogenesis  (bFGF)  yang digunakan  sebanyak  25  µg,  dibuat  stok konsentrasi  1  µg/ml  menggunakan  larutan PBS  pH  7,5.  Dosis  bFGF  yang  diberikan untuk  setiap  CAM  embrio  ayam  perlakuan terinduksi  adalah  10  ng.  Fraksi  yag  paling toksik ditimbang 10 mg dan dilarutkan dalam DMSO  0,8%  sterilkan  kemudian  dibuat  seri konsentrasi  perlakuan.  Larutan  PBS  10  nM pH 7.5 + bFGF 10 ng + DMSO  + fraksi yang paling  toksik  ditambahkan  tepat  di  tengah paper  disc  steril.  Paper  disc  yang  telah termuati  larutan  senyawa  uji  diimplantasi  ke CAM.
Telur ayam arab berembrio umur sembilan  hari  diberi  tanda  pada  kerabang telur yang meliputi batas ruang udara, lokasi embrio  dan  daerah  yang  akan  dibuat segiempat  (jendela)  berukuran  1x1  cm  di atas  embrio.  Selanjutnya  kerabang  telur diatas  embrio  diiris  dengam  menggunakan gergaji  (mini  drill)  untuk  membuat  jendela. bFGF  dan  fraksi  diimplantasikan  melalui paper  disc.  Subjek  uji  yang  berupa  telur dibagi  dalam  5  kelompok  dan  setiap kelompok ada tiga ulangan, sebagai berikut: kelompok  I  adalah  kelompok  kontrol  negatif tiga  TAB  dengan  pemberian  paper  disc  dan tiga  TAB  pemberian  paper  disc  +  pelarut DMSO  0,8%.  Kelompok  II  adalah  kelompok positif dengan pemberian paper disc + 10 ng bFGF.  Kelompok  III,  IV  dan  V  merupakan kelompok  telur  yang  digunakan  untuk melihat  efek  penghambatan  fraksi  umbi mentimun papasan dengan variasi konsentrasi  ½  IC50,  1  IC50,  dan  2  IC50 µg/ml.  Setelah  diberi  perlakuan,  kemudian telur  diinkubasi  pada  suhu  390C  dan kelembapan  relatif  60%  selama  72  jam. Setelah  itu  telur  dibuka  dengan  cara mengunting  cangkang  telur  2  bagian, kemudian CAM yang melekat pada cangkang  dicuci  dengan  larutan  isotonis NaCL,  setelah  itu  dilakukan  pengamatan CAM  terdapat  pembuluh  darah  dikoleksi pada buffer formalin.

## HASIL

## 1.  Hasil  perhitungan  rendemen  serbuk umbi mentimun papasan
Hasil  perhitungan  rendemen  serbuk umbi mentimun papasan pada tabel 1.

## 2.  Hasil Pembuatan Ekstrak Etanolik Umbi Mentimun Papasan
Hasil  pembuatan  ekstrak  etanolik umbi  mentimun  papasan  dapat  dilihat pada tabel 2.
3.  Hasil Persentase Kadar Air Hasil  penetapan  kadar  air  ekstrak umbi  mentimun  papasan  dapat  dilihat pada tabel 3.
4.  Hasil  Identifikasi  Golongan  Senyawa Ekstrak Umbi Mentimun Papasan
Hasil  identifikasi  kandungan  senyawa kimia  ekstrak  etanolik  umbi  mentimun papasan dapat dilihat pada tabel 4.
5.  Hasil Fraksinasi Umbi Mentimun Papasan Hasil fraksinasi umbi mentimun papasan dapat dilihat pada tabel 5.
6.  Hasil  Identifikasi  Kromatografi  Lapis Tipis  Ekstrak  dan  Fraksi-Fraksi  Umbi Mentimun Papasan
Setelah  dilakukan  skrining  fitokimia kemudian dilakukan  uji KLT untuk mempertegas  hasil  yang  diperoleh  dari skiring  fitkomia.  identifikasi  kromatografi lapis  tipis  ekstrak  dan  fraksi-fraksi  umbi mentimun  papasan dapat  dilihat  pada tabel 6 dan 7.
7.  Hasil Uji Aktivitas Sitotoksik Hela Dengan Metode MTT Hasil  Hasil  penetapan  IC 50 ekstrak etanol,  fraksi n -heksan,  fraksi  etil  asetat, dan  fraksi  air  terhadap  sel  kanker  Hela dan  sel  Vero  serta  penentuan  indeks selektivitas dapat dilihat pada Tabel 8.
8.  Hasil Uji Aktivitas Antiangiogenesis
Hasil  pembuluh  darah  asal  atau pembuluh  darah  utama  yang  secara makroskopis terlihat secara halus. Gambar 1 merupakan gambar
angiogenesis  pada  CAM  baik  pada kelompok kontrol maupun pada kelompok uji.
Hasil pengamatan rata-rata pertumbuhan angiogenesis, %
pertumbuhan angiogenesis, dan % pengahambatan angiogenesis pada kelompok  kontrol  dan  kelompok  uji  dapat dilihat pada tabel 9.
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana
Tabel 1. Hasil perhitungan rendemen serbuk umbi mentimun papasan Berat Basah (g) Berat Kering (g) Rendemen (%) 2.100 1.000 47,6 Tabel 2. Rendemen Ekstrak Etanolik Umbi Mentimun Papasan Pelarut Serbuk + Pelarut Yang Digunakan Warna Ekstrak Berat Ekstrak Pekat (g) Rendemen (%) Etanol 96 % 500 gr + 2.500 ml Coklat Pekat 97,65 19,53 500 gr + 2.500 ml 99,27 19,85 Total 1.000 + 5.000 ml 196,92 39,38 Tabel 3. Hasil penetapan kadar air ekstrak umbi mentimun papasan No Bobot Ekstrak (g) Skala (ml) Kadar Air (%) 1 20 1,8 9 2 20 1,7 8,5 3 20 1,6 8 Rata-rata 1,7 8,5 Tabel 4. Hasil skrining fitokimia Senyawa Pereaksi Hasil pengamatan Kesimpulan Flavonoid Serbuk Mg dan HCl Pekat Merah kekuningan + Akaloid Wagner, mayer, dragendof Endapan cokelat kehitaman + Tanin FeCl 3 Endapan hijau + Fenol FeCl 3 Jingga endapan hijau + Saponin Air panas Cokelat berbusa + Terpen/ steroid _ Tabel 5. Hasil penetapan % rendemen pembuatan fraksinasi Berat ekstrak (g) Berat fraksi n- heksan (g) Berat fraksi etil asetat (g) Berat fraksi air (g) 40 10,35 6,21 12,37 % rendemen 25,87 15,52 30,92 Tabel 6. Hasil kromatogradi lapis tipis ekstrak umbi mentimun papasan Pengujian Fase diam Fase gerak Pereaksi semprot Deteksi Setelah Disemprot Warna bercak Hasil Flavonoid Silika gel 60 F254 Heksan:etil asetat :asam formiat (6:4:0,2) Sitroborat Kuning + Alkaloid Toluen:etil asetat:dietil amin (7:2:1) Dragendorf UV 254 nm dan 366 nm Orange + Tannin Etil asetat:asam formiat:toluene :air (6:1,5:3:0,5) FeCl 3 Hijau tua kehitaman + Saponin Kloroform: metanol :air (64:50:1) Liberman Bourchat Coklat kehitaman + Terpen Heksan :etil asetat (93:7) Anisaldehid asam sulfat Merah keunguan +
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana

## Tabel 7. Hasil kromatogradi lapis tipis fraksi umbi mentimun papasan
Pengujian Fase diam Fase gerak Pereaksi semprot Deteksi Setelah Disemprot Warna bercak Hasil Fraksi n-heksan Flavonoid Silika gel 60 F254 heksan:etil asetat:asam formiat (6:4:0,2) Sitroborat UV 254 nm dan 366 nm Kuning + Alkaloid Toluen: etil asetat:dietil amin (7:2:1) Dragendorf Orange + Tannin Etil asetat:asam formiat:toluene :air (6:1,5:3:0,5) FeCl3 Hijau tua kehitaman + Saponin Kloroform: metanol :air (64:50:1) Liberman Bourchat Coklat kehitaman + Terpen Heksan :etil asetat (93:7) Anisaldehid asam sulfat Merah keunguan + Fraksi Etil asetat Flavonoid Silika gel 60 F254 heksan:etil asetat:asam formiat (6:4:0,2) Sitroborat UV 254 nm dan 366 nm Kuning + Alkaloid Toluen: etil asetat:dietil amin (7:2:1) Dragendorf Orange + Tannin Etil asetat:asam formiat:toluene :air (6:1,5:3:0,5) FeCl3 Hijau tua kehitaman + Saponin Kloroform: metanol :air (64:50:1) Liberman Bourchat Coklat kehitaman + Terpen Heksan :etil asetat (93:7) Anisaldehid asam sulfat Merah keunguan + Fraksi Air Flavonoid Silika gel 60 F254 heksan:etil asetat:asam formiat (6:4:0,2) Sitroborat UV 254 nm dan 366 nm Kuning + Alkaloid Toluen: etil asetat:dietil amin (7:2:1) Dragendorf Orange + Tannin Etil asetat:asam formiat:toluene :air (6:1,5:3:0,5) FeCl3 Hijau tua kehitaman + Saponin Kloroform: metanol :air (64:50:1) Liberman Bourchat Coklat kehitaman + Terpen Heksan :etil asetat (93:7) Anisaldehid asam sulfat Merah keunguan +
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana
Tabel  8.  Hasil  penetapan  IC 50 ekstrak  etanol,  fraksi n -heksan,  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  air terhadap sel kanker Hela dan sel Vero serta penentuan indeks selektivitas
Sampel Nilai IC 50 (µg/ml) Indeks Selektivitas Interpretasi Hela Vero Ekstrak Etanol 986,604 377,631 0,382 Kurang selektif Fraksi n -Heksan 208,776 426,940 2,044 Kurang selektif Fraksi Etil Asetat 187,824 208,057 1,107 Kurang selektif Fraksi Air 553,392 542,847 0,980 Kurang selektif Doxorubicin 44,808 23,330 0,520 Kurang selektif
Ket:
: pembuluh darah utama : pembuluh dara baru : paper disc
Gambar  1.  Angiogenesis  pada  CAM  pada  kelompok  kontrol  dan  kelompok  uji  fraksi  n-heksan  umbi mentimun papasan
Tabel 9. Hasil pengamatan rata-rata pertumbuhan angiogenesis, % pertumbuhan angiogenesis, dan % pengahambatan angiogenesis pada kelompok kontrol dan kelompok uji.
Kelompok Perlakuan Jumlah Telur Jumlah Pembuluh Darah Baru X ± SD Persen Pertumbu han Pembuluh Darah Baru (%) Persen Penghambata n Angiogenesis (%) Paper disc + Bfgf 3 24,66 ± 2,30 100 0 Kontrol paper disc + pelarut 3 10,66 ± 2,51 100 0 Paper disc 3 13 ± 2 100 0 bFGF + Fraksi n -heksan ½ IC 50 (104 µg/ml) 3 20,33 ± 1,55 82,44 17,56 bFGF + Fraksi n -heksan 1 IC 50 (208 µg/ml) 3 14 ± 2 56,77 43,23 bFGF + Fraksi n -heksan 2 IC 50 (418 µg/ml) 3 10,66 ± 1,15 43,22 56,78
Paper disc + bFGF +
Fraksi n-heksan  ½ IC 50 (104 ug/ml)
Paper disc + bFGF + Fraksi n-heksan 1 IC 50 (208 ug/ml)
Paper disc + bFGF  + Fraksi n-heksan 2 IC 50 (418 ug/ml) Paper disc Paper disc + pelarut Paper disc + bFGF
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana
Aktivitas  sitotoksik  dan  antiangiogenesis  umbi  mentimun papasan ( Coccinia grandis L. Voight) terhadap sel kanker hela yang diinduksi protein bFGF

## PEMBAHASAN
Umbi mentimun papasan dilakukan penyerbukan menggunakan blender.
Perlakuan  ini  bertujuan  untuk  meningkatkan luas  permukaan  sehingga  mudah  pada  saat ekstraksi. Hasil persen berat kering terhadap berat  basah  umbi  mentimun  papasan menunjukan bahwa umbi mentimun papasan dengan berat basah 2.100 gram dikeringkan dan  diperoleh  berat  kering  sebesar  1.000 gram  (Tabel  1).  Pada  tahap  ini  dilakukan ekstraksi,  menggunakan  metode  maserasi, yang mempunyai beberapa kelebihan antara lain  alat  yang  digunakan  sangat  sederhana, mudah  dan  tidak  melibatkan  suhu  tinggi sehingga  zat-zat  yang  tidak  tahan  panas sehingga  tidak  mudah  rusak.  Pada  proses maserasi  dilakukan  dalam  keadaan  wadah tertutup  agar  etanol  tidak  menguap  dan dibiarkan  pada  suhu  kamar  selama  5  hari sesekali  diaduk 7 .  Dari  hasil  rendemen ekstrak  mentimun  papasan  memiliki  hasil yang baik dilihat pada tabel 2.
Penentuan  kadar  air  ekstrak  umbi mentimun  papasan  menggunakan  metode gravimetric.  Hasil  penelitian  kadar  air  bisa dilihat  pada  tabel  3.  Berdasarkan  hasil  yang terlihat  pada  tabel  3,  kadar  air  ekstrak mentimun  papasan  yang  diperoleh  8,5% atau kurang 10% sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak mentimun papasan yang digunakan memenuhi persyaratan standar. Kadar air dalam ekstrak kurang  dari  10%  dapat  meminimalisir tumbuhnya jamur dan kapang serta menghasilkan  daya  tahan  penyimpanan  dan mutu ekstrak mentimun papasan tetap baik 8 . Setelah diperoleh ekstrak pekat kemudian dilakukan proses selanjutnya yaitu fraksinasi.  Proses  fraksinasi  ini  dilakukan dengan  menggunakan  corong  pisah.  Pada proses  fraksinasi  ini  pelarut  memiliki  massa jenis,  dimana  massa  jenis  yang  lebih  tinggi
akan  berada  dilapisan  bawah,  dan  yang memiliki massa jenis lebih kecil akan berada di  lapisan  atas.  Sehingga  senyawa  yang terkandung  didalam  ekstrak  akan  terpisah sesuai  dengan  tingkat  kepolaran  pelarut yang  digunakan.  Pada  perlakukan fraksinasi pertama  adalah  antara  air  ekstrak  etanol dengan  n-heksan  dengan  perbandingan  1:1 dan terbentuk dua lapisan yaitu lapisan atas fraksi n-heksan dan lapisan bawah fraksi air, dimana  terdapat  perbedaan  massa  jenis pelarut  yang  menyebabkan  fraksi  n-heksan berada  diatas  karena  massa  jenis  n-heksan lebih  kecil  dari  pada  massa  jenis  air. Selanjutnya  dilanjutkan  dengan  fraksinasi kedua  antara  fraksi  air  dengan  etil  asetat dengan  perbandingan  yang  sama  yaitu  1:1 setalah  itu  didapatkan  tiap  fraksi  yang diuapkan.
Setelah dilakukan skrining fitokimia kemudian dilakukan uji KLT untuk mempertegas  hasil  yang  diperoleh  dari skring  fitkomia.  Hasil  kromotografi  lapis  tipis ekstrak dapat dilihat pada tabel 6. Dari hasil penelitian  yang  dilakukan  secara  skrining dan  uji  KLT  pada  ekstrak,  fraksi  n-heksan, fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air  dari  umbi mentimun  papasan  diperoleh  hasil  positif mengandung  senyawa  golongan  flavonoid, alkaloid, saponin, tannin dan terpen.
Berdasarkan  nilai  absorbansi  yang  telah diperoleh dilakukan penentuan persen viabilitas  terhadap  sel  Hela.  Selanjutnya dapat  ditentukan  nilai  IC 50 yang  telah diperoleh.  Dimana  menunjukkan  bahwa sampel  dari  fraksi  etil  asetat  memiliki  nilai IC 50 terendah.  IC 50 dari  fraksi  etil  asetat adalah  187,824  µg/mL.  Menurut  USA National  Cancer  Institut rentang  nilai  IC 50 ≤ 20  μg/ml  sangat  toksik,  21-200  μg/ml moderat/ cukup aktif, 201- 500  μg/ml lemah/sedang, dan ≥ 500 μg/ml tidak toksik. Berdasarkan  hasil  tabel  6,  dapat  diketahui bahwa etil asetat memiliki aktivitas sitotoksik yang  cukup  aktif  terhadap  sel  kanker  Hela, sedangkan  untuk  fraksi  n-heksan  dapat
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana
Aktivitas  sitotoksik  dan  antiangiogenesis  umbi  mentimun papasan ( Coccinia grandis L. Voight) terhadap sel kanker hela yang diinduksi protein bFGF
dikategorikan  memiliki  aktivitas  yang  lemah atau  sedang  dengan  nilai  IC 50 208  μg/mL. Sedangkan  untuk  perlakuan  uji  sitotoksik terhadap sel Vero menunjukkan bahwa fraksi air  termaksud  dalam  katagori  tidak  toksik, sedangkan  untuk  ekstrak,  fraksi  n-heksan dan  fraksi  etil  asetat  dapat  dikatakan memiliki aktivitas sitotoksik lemah dan untuk kontrol  positif doxorubicin termaksud  dalam katagori  moderat  atau  cukup  aktif  dalam  sel Vero.  Hal  ini  disebabkan  karena  umbi mentimun  papasan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  belum  dalam  bentuk  senyawa murni. Hasil yang diperoleh dari penelitian ini menyatakan  bahwa  ekstrak  dan  fraksi  n- heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air  umbi mentimun papasan memiliki aktivitas antikanker dengan kategori sedang.
Kriteria dalam pemilihan senyawa antikanker tidak hanya melihat dari sitotoksik saja,  namun  dilihat  juga  dari  selektivitas pada  sel  normal.  Tujuan  dilakukan  analisis selektivitas  indeks  adalah  untuk  mengetahui aman  atau  tidaknya  suatu  ekstrak  yang memiliki  aktivitas  antikanker  terhadap  sel normal. Berdasarkan penelitian ektrak, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi air dari umbi  mentimun  papasan  dikatagorikan  tidak selektif  .  Berdasarkan  penelitian  ektrak, fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi air dari umbi mentimun papasan dikatagorikan tidak selektif.
Analisis  kualitatif  secara  kromatografi lapis  tipis  dilakukan  terhadap  beberapa senyawa  umbi  mentimun  papasan  terdapat senyawa  yang  diduga  memiliki  aktivitas antikanker, yaitu alkaloid, flavonoid, saponin, tannin  dan  terpen,  yang  diduga  memiliki aktivitas yang terkait dengan potensi antikanker.
Berdasarkan penelitian sebelumnya yang dilakukan  oleh 6 dapat  bersifat  sitotoksik
terhadap  sel  BSLT  dengan  LC 50 dalam kisaran  23- 32  μg/mL.  Hasil  penelitian  lain dari  tanaman  yang  mempunyai  Family cucurbitacea yang memiliki aktivitas antikanker  ialah  pare.  Hasil  penelitian menunjukkan fraksi etil asetat dapat membunuh sel kanker Hela dengan nilai IC 50 34,9221  µg/mL 9 .  Dari  hasil  uji  aktivitas antikanker  yang  mempunyai  nilai  IC 50 yang paling  kecil  yaitu  fraksi  etil  asetat  dan n - heksan dengan nilai IC 50 187,824 µg/mL dan 208,776  µg/mL.  Selanjutnya  fraksi n -heksan umbi mentimun papasan dilakukan pengujian  lanjutan  terhadap  angiogenesis dengan  menggunakan  metode  CAM.  Dipilih fraksi  n-heksan  karena  memiliki  nilai  IC50 terendah  kedua  dari  fraksi  etil  asetat  dan memiliki  indeks  selektivitas  yang  hampir mendekati angka tiga.
Berdasarkan hasil pengamatan mikroskopik terhadap CAM kelompok kontrol paper  disc (tabel  9)  menunjukkan  bahwa jumlah  pembuluh  darah di  dalam paper  disc maupun pada daerah di sekeliling merupakan  pertumbuhan  pembuluh  darah secara  normal  dengan  rata-rata  jumlah pembuluh  darah  baru  13  ±  2.  Berdasarkan hasil pengamatan tersebut, paper disc dapat digunakan  sebagai  pembawa  dalam  metode angiogenesis.  Karena  pengamatan paper disc tidak mempengaruhi angiogenesis pada CAM.  Kelompok  kontrol  berikutnya  adalah kelompok  kontrol  pelarut  (tabel  8),  dengan menunjukkan hasil rata-rata jumlah pembuluh darah baru sebesar 10,66 ± 2,51.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  tersebut, dengan  menggunakan  pelarut  DMSO  0,8% untuk  mengetahui  apakah  pelarut  DMSO berpengaruh  terhadap  pengamatan  pada CAM  atau  tidak  dapat  dilihat  pada  tabel  7 bahwa  kelompok  pelarut  dengan  kelompok paper  disc hal  ini  menunjukkan  bahwa
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana
Aktivitas  sitotoksik  dan  antiangiogenesis  umbi  mentimun papasan ( Coccinia grandis L. Voight) terhadap sel kanker hela yang diinduksi protein bFGF
pelarut  yang  digunakan  tidak  memberikan efek  angiogenesis  pada  CAM  yang  berarti pelarut  dapat  digunakan  sebagai  pelarut fraksi.  Selanjutnya  untuk  pengamatan  pada kelompok bFGF dimana terlihat pada tabel 7, menunjukkan  rata-rata  jumlah  pembuluh darah baru adalah 24,66 ± 2,30.
Berdasarkan  hal  ini  berarti  pemberian  bFGF dapat  memicu  pembentukan  pertumbuhan pembuluh darah baru atau memicu terjadinya angiogenesis pada CAM.
Selanjutnya  pada  kelompok  konsentrasi fraksi n -heksan  umbi  mentimun  papasan  ½ IC 50 yaitu  104  µg/ml  dengan  hasil  rata-rata jumlah  pembuluh  darah  baru  yaitu  20,33  ± 1,52  (8),  dan  untuk  konsentrasi  1  IC 50 yaitu 208  µg/ml  dengan  jumlah  pembuluh  darah baru  ±  SD  14  ±  2  sedangkan  untuk kosentrasi  fraksi  n-heksan  umbi  mentimun papasan  2  IC 50 418  µg/ml  dengan  hasil jumlah  pembuluh  darah  baru  yaitu  ±  SD 10,66 ± 1,15 (tabel 8),
Dari  hasil  pengamatan  dapat  dilihat bahwa  persen  penghambatan  angiogenesis menunjukkan bahwa konsentrasi dari ½ IC 50 yaitu  104  µg/ml,  menunjukkan  hambatan angiogenesis yang kecil dibandingkan dengan  konsentrasi  1  IC 50 208  µg/ml dan  2 IC 50 418 µg/ml memiliki persen
penghambatan yang besar, dimana menunjukkan  bahwa  berarti  semakin  besar konsentrasi  yang  digunakan  akan  semakin besar penghambatan angiogenesis.
Angiogenesis dapat membuat sel kanker menjadi lebih besar dengan cara membentuk pembuluh  darah  baru  yang  menyebabkan sel  kanker  mendapatkan  suplai  nutrisi  dan makanan  sehingga  sel  kanker  akan  terus berkembang 9 .  Mekanisme  angiogenesis  ini diatur  oleh  faktor  pro  angiogenik  dan  anti angiogenik. Basic  Fibroblast  Growth  Factor (bFGF) merupakan  salah  satu  faktor  pro
angiogenik.  bFGF  berinteraksi  dengan  sel endothelial  melalui  reseptor  tirosin  kinase dan  reseptor heparin  sulfate  proteoglycan dipermukaan  sel.  Kejadian  tersebut  dapat menyebabkan  terjadinya  pelepasan  matriks pendegradasi membrane basal. Peran bFGF pada  keadaan  patologi  kanker  adalah  untuk perkembangan  sel  kanker  itu  sendiri  dan juga  sebagai  penginduksi  pembuluh  darah baru  untuk  mensuplai  makanan  dan  nutrisi. Selain  bFGF,  terdapat  faktor  pro  angiogenik lainnya  seperti endotel  vascular-derived growth factor (VEGF), angiopoetins , epidermal  growth  factor (EGF), interleukin 8 (IL-8),  dan transforming  growth  factor (TGF- ).  Semua  faktor-faktor  pro  angiogenik  ini akan  menjadi  berbahaya  pada  kondisi patologi kanker. Apabila terjadi pengahambatan  pembentukan  pembuluh darah  baru,  maka  peryumbuhan  sel  tumor maupun kanker akan terhambat karena tidak mendapatkan suplai nutrisi 10 .
Pemberian bFGF sebagai induktor dapat memberikan  sedikit  gambaran  mengenai kemungkinan mekanisme aksi penghambatannya.  Berbagai  senyawa  yang mungkin terkandung didalam fraksi n -heksan umbi mentimun papasan diantaranya tannin, saponin,  alkaloid  dan  flavonoid  diduga berperan  dalam  kemampuan  menghambat angiogenesis.  Tannin  berperan  sebagai antiproliferatif  sel  kanker  yang  bekerja  pada tingkat  sel  dengan  memblokade  fase  S  dari siklus  sel.  Senyawa  saponin  juga  dapat menginduksi apoptosis dan dapat menghambat proses angiogenesis 11 . Adapun senyawa  alkaloid  juga  memiliki  aktivitas antiangiogenesis pterogynidine yang
diisolasi dari Alchornea glandulosa Pterogynidine bekerja  dengan  menghambat aktivitas  endothelial.  Sehingga  terdapat kemungkinan senyawa alkaloid yang
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana
Aktivitas  sitotoksik  dan  antiangiogenesis  umbi  mentimun papasan ( Coccinia grandis L. Voight) terhadap sel kanker hela yang diinduksi protein bFGF
terdapat dalam fraksi n -heksan umbi mentimun  papasan  juga  berperan  terhadap aktivitas antiangiogenesis.
Beberapa  penelitian  mengenai  flavonoid merekomendasikan  kemungkinan  aksinya sebagai  senyawa  aktif  sehingga  mampu menghambat kanker dan diantaranya melalui penghambatan angiogenesis. Flavonoid tersebut, diantaranya resveratrol dan quersetin pada  kadar  100  µM  mampu menghambat aspek-aspek angiogenesis (proliferasi,  migrasi  sel  endothelial  dan pembentukan pipa pembuluh darah) 12 selain itu, resveratrol menghambat  angiogenesis yang  diinduksi  oleh  bFGF  pada  CAM  dan juga  menghambat  pertumbuhan  tumor  pada CAM.  Angiogenesis  dapat  diblok  oleh inhibitor C0X-2 yang diinduksi bFGF. COX-2 berperan dalam proses angiogenesis melalui sintesis prostaglandin. Prostaglandin berperan  penting  di  dalam  induksi  bFGF. Oleh  karena  itu  penghambatan  aktivitas C0X-2  akan  berakibat  pada  penghambatan angiogenesis.  Kandungan  dalam  fraksi  n- heksan  umbi  mentimun  papasan  mungkin bertindak  sebagai  penghambat  COX-2  yang dapat  memblok  prostaglandin.  Senyawa flavonoid  yang  kemungkinan  terkandung dalam  fraksi n -heksan  umbi  mentimun papasan  kemungkinan  mampu  mengambat bFGF,  sehingga  stimulasi  bFGF  tidak sampai  ke  reseptor  di  permukaan  sel. Akibatnya  bFGF  tidak  dapat  ditangkap  oleh reseptor sehingga terjadi ikatan antara bFGF dengan reseptor dan aktivitas proliferasi pun tidak  terjadi.  Pada  penelitian  ini,  terbukti bahwa  fraksi  n-heksan  umbi  mentimun papasan mampu menghambat pembentukan pembuluh darah baru. Penghambatan tersebut  diduga  disebabkan  karena  adanya senyawa-senyawa  yang  terkandung  dalam fraksi n -heksan  umbi  mentimun  papasan,
yang memiliki aktivitas sebagai angiogenesis.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa  fraksi  n-heksan  dan  fraksi  etil  asetat memiliki  aktivitas  sitotoksik  yang  sedang terhadap  sel  Hela,  sedangkan  ekstrak  dan fraksi  air  memiliki  efek  sitotoksik  yang  tidak toksik  terhadap  sel  Hela  dan  memilki  nilai IC 50 yaitu  986,604;  187,776;  208,776;  dan 553,392  µg/ml.  Fraksi  n-heksan  umbi mentimun papasan memiliki aktivitas antiangiogenesis  pada  CAM  embrio  ayam yang  diinduksi  protein  bFGF.  Fraksi  n- heksan  memiliki  aktivitas  antiangiogenesis pada konsentrasi 2 IC 50 yaitu 418 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Wijayanti E. Gambaran Perilaku Berisiko Penyakit Kanker di Desa Pangkalan dan Desa  Rancailat,  Provinsi  Banten.  Yars Med J. 2018;26(1):012.
2.   Emilio Kalonio D, Hendriani R, Elisabeth Barung    dan  N,  Farmasi  J,  Kesehatan Kemenkes Manado P, Raya Bandung J, et  al.  Aktivitas  Antikanker  Tanaman Genus Clerodendrum (Lamiaceae): Sebuah  Kajian  Anticancer  Activity  Of Plant Genus Clerodendrum
(Lamiaceae):  A  Review.  Tradit  Med  J. 2017;22(3):2017.
3.   Colditz  GA.  American  Cancer  Society. SAGE Encycl Cancer Soc. 2015;
4.   Iwan  Sahrial  Hamid,  Dady  Soegianto Nazar HR. Hambatan Ekspresi Vascular Endothelial  Growth  Factor  oleh  Ekstrak Daun  Sambung  Nyawa  pada  Endotel Membran  Korioalantois.  Univ  Airlangga. 2013;14(1):85 –90.
5.   Voigt  L,  Rukmana  RM,  Nugroho  RB, Wisnumurti DA,  Wibawa A. DOI: 10.30644/rik.v8i2.233. 2019;8(2):91 –8. 6.   Farmasains-Uhamka-Vol-1-no-1- Churiyah.www.farmasains.uhamka.ac_ id _.pdf.
Julia Megawati Djamal, Jason Merari P, Rizal Maarif Rukmana
Aktivitas  sitotoksik  dan  antiangiogenesis  umbi  mentimun papasan ( Coccinia grandis L. Voight) terhadap sel kanker hela yang diinduksi protein bFGF
7.   Artikel  I,  Vero  S,  Line  VC.  Aktivitas Sitotoksik  Ekstrak  Dan  Fraksi  Hasil Fermentasi Fungi Endofit Genus Cephalosporium  Sp  .  Diisolasi  Dari Daun  Meniran  (  Phyllantus  Niruri  Linn  .) Cytotoxic Activity Of Fermentation Extract  And  Fraction  Endophytic  Fungi Genus Cephalosporium Sp Isola. 2016;5 –10.
8.   Sulistyani  N.  Penetapan  Parameter Standardisasi Non Spesifik Dan Spesifik Ekstrak  Daun  Pacar  Kuku  (Lawsonia inermis  L.).  Media  Farm  J  Ilmu  Farm. 2016;13(2):212 –26.
9.   Zahrah,  A.,  Sunaryo,  H.  &  K.  Uji sitotoksisitas  buah  pare.  Fak  Farm  dan sains  Univ  muhammadiyah  prof  Dr Hamka. 2010;1 –7.
10.  Pratomo  NA,  Yunita  E,  Widyarini  S,
Anshory  H.  Efek  Anti  Angiogenesis Temu  Kunci  (Boesenbergia  Pandurata, (Roxb.)  Schlecht)  Pada  Membran  Korio Alantois  Embrio  Ayam  Yang  Diinduksi Basic  Fibroblast  Growth  Factor  (bFGF). Khazanah. 2014;6(2):35 –45.
11.  Tong  QY,  Qing  Y,  Shu  D,  He  Y,  Zhao YL,  Li  Y,  et  al.  Deltonin,  a  steroidal saponin,  inhibits  colon  cancer  cell growth  in  vitro  and  tumor growth  in  vivo via induction of apoptosis and antiangiogenesis.  Cell  Physiol  Biochem.
2011;27(3 –4):233–42.
12.  Mustafida RY, Munawir A, Dewi R. Efek Antiangiogenik  Ekstrak  Etanol  Buah Mahkota  Dewa  (Phaleria  macrocarpa (Scheff.)  Boerl.)  pada  Membran  Korio Alantois  (CAM)  Embrio  Ayam.  e-Jurnal Pustaka Kesehat. 2014;2(1):5 –9.