## RESPON TITER ANTIBODI PADA AYAM BROILER YANG DIVAKSINASI ND DAN DIBERI  HERBAL REMPAH
Ni Sri Yuliani, Gerson Y.I. Sakan
Program Studi Kesehatan Hewan, Politeknik Pertanian Negeri Kupang, Jalan Prof. Herman Yohanes Lasiana Kupang.
Email: nisriyuliani@gmail.com

## ABSTRACT
This study aims is to find the response of antibody titers in chickens vaccinated with ND and given herbal remedies. The chickens used which were one day broiler (DOC) strain of CP 707. This extract groups were given to chickens from 7 days until 28 days in three treatment groups and one control group (drinking water). Serum samples were taken from chickens aged 7, 14, and 21 days after ND vaccination,  followed  by  serological  tests.  The  average  that  of  antibody  titers  before  were  given treatmentand 7 days post vaccination showed that the highest titers and the average antibody titers after vaccination at day 14, 21 and 28 days and post were given treatment with herbs and decoction of curry leaves were decrease. ANOVA analysis revealed that all treatments had no significant effect (P> 0.05) toward the number of antibody titers in tested broiler chickens.  In  the treatment of herbal medicine, a combination of herbs and decoction of curry leaves, and decoction of curry leaves which were given to chickens showed that there were the same number of antibody titers as the control of only drinking water. But the platelet values in the treatment group were higher than control (drinking water).
Keywords: titer antibody, vaccine ND, and herbal

## PENDAHULUAN
Infeksi  virus  yang  sering  menyerang  ternak  unggas  adalah  penyakit  ND ( New Castle Disease ). Obat yang efektif untuk mengatasi infeksi virus ND belum ada.  Tindakan  utama  yang  dapat  dikerjakan  adalah  mencegah  munculnya penyakit tersebut dengan melakukan vaksinasi dan didukung dengan perbaikan tatalaksana  pemeliharaan ayam. Upaya  lain yang dilakukan dalam pencegahan timbulnya  infeksi  adalah  dengan  pemberian  ekstrak/jamu  yang  berbahan rempah  dan  herbal  diramu  dalam  air  minum.  Rempah-rempah  dan  herbal bukan  hanya  berpotensi  meningkatkan  citarasa  makanan  atau  minuman, namun  juga  dapat  berfungsi  untuk  kesehatan.  Di  dalam  rempah-rempah  dan herbal  banyak  terkandung  senyawa-senyawa  bioaktif  yang  berfungsi  sebagai antimikrobia,  antioksidan,  antidiabetes,  antitumor,  dan  fungsi  lainnya  yang sangat bermanfaat untuk menjaga kesehatan.
Obat  kimia  yang  diberikan  pada  ternak  unggas  secara  terus  menerus dapat menimbulkan resistensi dan residu dalam produk (daging dan telur). Oleh karena  itu  diperlukan  bahan  sumber  alami  (alternatif)  sebagai  alternatif  obat kimia  atau feed additives baik  di  dalam  pakan  maupun  air  minum.  Ramuan herbal yang terdiri atas bahan-bahan pilihan dapat dibuat jamu melalui proses
fermentasi  yang  telah  diuji  pada  ternak  unggas  (ras  dan  lokal).  Jamu  herbal tersebut  digunakan  sebagai  probiotik  (pengganti  antibiotik  kimia),  sehingga diperoleh  produk  daging  dan  telur  ayam  yang  aman,  bebas  residu  antibiotik. Manfaatnya pada ternak telah diteliti sebagai feed additive, feed suplement , dan growth promoter terhadap  performan  ayam,  akan tetapi  manfaat  lainnya  belum banyak  diteliti  mengenai  respon    daya  protektifitas  jamu  terhadap  ayam divaksinasi virus. Kandungan senyawa  aktif yang terdapat  pada bahan rempah dan  daun  kari  ( Murraya  koenigii )  memiliki  kemampuan  meningkatkan  respon imunitas.  Oleh  karena  itu  rencana  penelitian  yang  akan  dilakukan  dengan mengaplikasikan  ramuan  herbal  dan  rempah  dikombinasi  dengan  daun  kari terhadap tingkat respon imun pada ayam broiler dipandang  perlu untuk diteliti lebih lanjut.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  akan  dilaksanakan  selama  8  bulan,  dimulai  dari  bulan Maret  sampai  Oktober  2018.  Penelitian  ini  bertempat  di  kandang  selama  5 minggu,  dan  dilanjutkan  analisis  laboratorium  di  Laboratorium  Kesehatan Hewan  Politani,  Lab.  Patologi  Anatomi  FKH  Undana    dan  Lab.  Serologi  UPT. Veteriner Provinsi NTT.

## Ternak
Ternak yang digunakan dalam penelitian ini adalah broiler DOC strain CP 707 yang berumur satu hari sebanyak dua boks yang dikelompokkan ke dalam 4 perlakuan,  dengan  masing-masing  perlakuan  terdiri  25  ekor  ayam.  Pakan  dan minum yang diberikan disesuaikan dengan umur ( adlibitum ).

## Bahan dan Peralatan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain,  larutan  jamu yang dibuat dari bawang putih, jahe, kunyit, temulawak, temu ireng, daun kari ( Murraya  koenigii ),  gula,  dan  larutan  Probiotik  EM-4,  aquades.  Peralatan  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain  yaitu  blender,  saringan,  jerigen  5 kapasitas liter, spuit, satu set alat bedah, pot spesimen.
Pembuatan Jamu Ternak
Semua  bahan  jamu  (bawang  putih,  jahe,  kunyit,  temulawak,  dan  daun kari) diambil bentuk segar dan ditimbang  masing-masing 200 gram. Daun kari yang  diambil  pada  bagian  yang  tidak  terlalu  muda  dan  tidak  terlalu  tua.  Lalu dibersihkan  dan  dihaluskan  dengan  blender,  selanjutnya  ditambahkan  gula sebanyak  250  gram  dan  larutan    EM4  sebanyak  250  ml.  Kemudian  campuran jamu    dimasukkan  ke  dalam  jerigen  ditambah  air  bersih  menjadi  10  liter larutan,  dilanjutkan  diinkubasikan  (fermentasi)  selama  satu  minggu  (7  hari) dalam keadaan tertutup. Setelah hari ketujuh, larutan disaring dan ditempatkan dalam botol bersih sampai jamu siap digunakan dalam aplikasi perlakuan.
Perlakuan vaksinasi dan aplikasi jamu rempah
Ayam  berumur    satu  hari  sudah    dilakukan  vaksinasi  ND  diperusahaan Charoen  Pokphand  Jaya  Farm.    Selanjutnya    ayam  telah  berumur  tujuh  hari sebelum  perlakuan  jamu,    diambil  darahnya  untuk  diuji  titer  kekebalan tubuhnya  dan  pada  hari  yang  sama  semua  kelompok  perlakuan  mulai  diberi perlakuan  jamu  rempah  sesuai  dengan  dosis  yang  ditentukan.  Pada  hari  yang ditentukan yakni pada hari ke-14, 21, dan 28 hari setelah pemberian vaksin ND dilakukan pengambilan sampel darah untuk diuji tingkat imunitas. Pengambilan sampel  darah  pada  ayam  diambil  pada  daerah  brachialis.  Darah  ditampung pada  tabung  vacutainer  tanpa  antikoagulan  untuk  diambil  serumnya  lalu dilanjutkan dengan pengujian titer HA/HI.

## Rancangan Percobaan
Rancangan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yakni  rancangan  acak lengkap,  dengan  menggunakan  4  perlakuan.  Setiap  perlakuan  dengan  5 ulangan. Perlakuan yang diberikan dalam penelitian adalah sebagai berikut : P1 : Pemberian ramuan jamu rempah tanpa rebusan daun kari 10 ml jamu/liter air yang dilarutkan ke dalam air minum
P2  :  Pemberian  ramuan  jamu  rempah  10  ml/liter  air  ditambah  dengan  air rebusan  daun  kari  dengan  rebusan  10  ml  jamu/liter  air  yang  dilarutkan  ke dalam air minum
P3  :  Pemberian  air  rebusan  daun  kari  10  ml  jamu/liter  air  yang  dilarutkan  ke dalam air minum
K : Kontrol yang diberi air biasa (tidak diberi jamu maupun air rebusan daun kari)
Jamu  ini  diberikan  selama  21  hari  dengan  waktu  pemberian  satu  kali dalam sehari.
Peubah  yang  diamati  jumlah  titer  respon  imunitas/kekebalan  ayam dengan  cara  mengukur  nilai  titer  pada  uji  HA/HI.  Data  titer  imunitas  akan dianalisis dengan menggunakan analysis of variance (ANOVA) dan untuk melihat perbedaan diantara perlakuan dilanjutkan dengan uji Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  yang  diperoleh  adalah  berupa  data  titer  kekebalan  ayam  broiler yang sebelum perlakuan pada umur 7 hari, dan sesudah perlakuan hari ke-14 hari, dan 21(Tabel 1).
Tabel  1.  Rata-rata  jumlah  titer  antibodi  ayam  broiler  sebelum  dan  setelah perlakuan
Perlakuan Rata-rata Jumlah Titer Antibodi Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21 Hari ke-28 P1 42,67 10,13 2,13 0 P2 58,67 9,34 3,34 0 P3 53,33 13,33 2,8 0 P4 48,00 10,40 3,07 0 Keterangan : P1: Jamu
P2: Jamu dan rebusan daun kari P3: Rebusan daun kari P4: Kontrol
Berdasarkan  tabel  di  atas  rata-rata  jumlah  titer  antibodi  sebelum  diberi perlakuan  dan  7  hari  pasca  vaksinasi  menunjukkan  titer  paling  tinggi. Sedangkan rata-rata titer antibodi setelah vaksinasi hari ke-14, 21 dan 28 hari dan  setelah  diberi  perlakuan  jamu  dan  rebusan  daun  kari  terus  mengalami penurunan. Respon antibodi yang tinggi terjadi pada hari ke -7 pasca vaksinasi. Hasil  ini  sesuai  dengan  kajian  yang  diteliti  oleh  Rahman et  al (2017)  bahwa ayam broiler yang divaksinasi akan menghasilkan titer antibodi yang lebih tinggi pada  hari  ke-7  pasca  vaksinasi,  dan  akan  mengalami  penurunan  jumlah  titer antibodi pada hari ke-14 dan hari ke-21 pasca vaksinasi.
Nilai titer antibodi yang diperoleh sebelum perlakuan jamu menunjukkan nilai yang lebih rendah dari titer antibodi protektif 64 (2 6 ). Menurut OIE (2012) titer antibodi protektif berada pada nilai 64 (2 6 ) dikatakan protektif terhadap ND. Titer antibodi pada perlakuan jamu dan rebusan daun kari, serta kombinasinya
juga  menunjukkan  nilai  yang  lebih  rendah  dari  titer  antibodi  protektif.  Hasil analisis  keragaman  pengaruh  perlakuan  terhadap  jumlah  titer  antibodi  ayam broiler yang diberi jamu dan rebusan daun kari pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil Anova dari pengaruh perlakuan terhadap jumlah titer antibodi ayam broiler yang diberi jamu dan rebusan daun kari.
Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 45,7974 3 15,2658 0,855818 0,48389  3,238872 Within Groups 285,4028 16 17,83768 Total 331,2002 19
Analisis  anova  di  atas  menunjukkan  bahwa  semua  perlakuan berpengaruh  tidak  nyata  (P  >  0,05)  terhadap  jumlah  titer  antibodi  pada  ayam broiler yang diuji. Perlakuan jamu, kombinasi jamu dan rebusan daun kari, dan rebusan daun kari yang diberikan ke ayam uji menunjukkan jumlah titer yang sama  dengan  kontrol  yakni  air  minum  saja.  Hasil  yang  diperoleh  dalam penelitian ini berbeda dengan pendapat Nidaullah et al (2010) pemberian ekstrak air  garlic,  ginger,  neem  dan  berberry  pada  semua  kelompok  perlakuan  yang divaksinasi  IB,  IBD,  dan  ND  menunjukkan  imunitas  yang  lebih  baik  sehingga ekstrak tersebut berperan sebagai immunomodulator.
Titer  antibodi  pada  ayam  yang    divaksinasi  ND  dan  diberi  perlakuan jamu, belum sepenuhnya  mengalami peningkatan, hal ini mungkin disebabkan takaran jumlah masing-masing volume perlakuan yang masih kurang, sehingga senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam  jamu  dan  rebusan  daun  kari  belum mencapai  target  organ  limpoid  sebagai  penghasil  imunitas  yang  tinggi. Rendahnya  titer  antibodi  bisa  disebabkan  adanya  faktor  cekaman  panas  dari lingkungan  yang  berlebih  yang  membuat  situasi  ayam  menjadi  stres  dan kemungkinan  belum  diketahauinya  takaran  jamu  yang  sesuai  untuk  pemacu sel-sel  imunitas  tubuh. Heat  stress merupakan  sebuah  gangguan  stress  yang terjadi  akibat  kondisi  suhu  udara  lingkungan  melebihi  suhu  normal  (>28 o C) sehingga  ayam  tidak  mampu  untuk  menyeimbangkan  antara  produksi  dan pembuangan  panas  tubuhnya.  Suhu  yang  diukur  pada  kondisi  penelitian  ini berkisar 33 O C dengan kelembaban 54%. Suhu tersebut melebihi dari suhu yang ditoleransi unggas pada berumur diatas 21 hari. Di musim kemarau, saat siang suhu  lingkungan  akan  mencapai  titik  tertinggi  dan  kelembaban  udara  akan berada  pada  titik  terendah  (udaranya  kering).  Kondisi  ini  akan  menjadi  tidak nyaman oleh ayam yang membuat ayam mengalami heat stress. Akibatnya ayam akan  mereganggkan  atau  melebarkan  sayapnya  dan  melakukan  panting
(meningkatkan evaporasi/penguapan). Dampak negatif ayam terkena heat stress yakni  salah  satunya  melemahkan  sistem  kekebalan  (Info  medion,  2015).  Lebih lanjut menurut Palupi (2015) menyebutkan apabila ayam mengalami heat stress akan  terjadi  peningkatan  intake  minum  dan  penurunan  intake  pakan,  hal  ini dilakukan  sebagai  kompensasi  dari  kegiatan  panting  ayam.    Sehingga  unggas yang  mengalami heat  stress berdampak  penurunan  produksi  baik  daging  pada broiler  dan  tidak  seragamnya  pertumbuhan  ayam  broiler  yang  dipanen  pada umur  yang  sama,  serta  tingginya  anggka  kematian  pada  ayam  broiler.  Ayam yang  mengalami  heat  stres  menyebabkan  melemahnya  sistem  pertahanan tubuh. Stres dapat mempengaruhi sel limfosit melalui produksi hormon kortisol. Kortisol  akan  memodulasi  sistem  imun  dengan  menghambat  produksi Interleukin-I  (IL-1) dari  makrofag  dan Interleukin-2  (IL-2)  dari sel  T.  Dengan demikian, terjadi penurunan respon sel T, dengan berkurangnya populasi sel T- helper, menyebabkan berkurangnya  sel B maupun sel plasma, sehingga  terjadi penurunan produksi antibodi.
Paul et  al., (2012)  menyatakan  tubuh  membentuk  zat  kebal  akibat vaksinasi, sel darah putih  (leukosit)  akan mengalami proliferasi, sehingga  pada gilirannya akan terbentuk sel plasma yang akan memproduksi zat kebal tubuh. Sturkie  (2005),  menyatakan  bahwa  setelah  zat  kebal  (antibodi)  dalam  tubuh terbentuk,  bursa Fabricious akan  mengurangi  aktivitasnya  membentuk  dan memproduksi  limfosit  sehingga  gambaran  leukosit  akan  kembali  menjadi normal.
Kadar  antibodi  yang  terbentuk  dari  unggas  yang  divaksinasi  ND  dengan vaksin hidup lebih rendah daripada kadar antibodi yang terbentuk dari unggas yang divaksinasi dengan vaksin ND  inaktif. Vaksin ND hidup yang dilemahkan dan vaksin ND inaktif mampu menginduksi respon antibodi terhadap anti-NDV baik  dalam  serum  maupun  dalam  sekresi  jaringan  trakea  dan  saluran pencernaan.  Kombinasi  vaksin  ND live dan  inaktif  mampu  merangsang terbentuknya respon kekebalan humoral. Respon kekebalan seluler dan humoral timbul  setelah  dua  sampai  dengan  tiga  hari  pasca-vaksinasi  ND  tetapi  respon kekebalan seluler hanya berperan kecil pada ayam yang divaksinasi ND. Sistem kekebalan unggas dalam melawan infeksi virus ND terdiri dari sistem kekebalan non-spesifik  dan  spesifik.  Interaksi  yang  terjadi  antara  respon  kekebalan  non- spesifik  dan  spesifik  saling melengkapi  dalam  melawan  invasi  virus  ND  pada unggas  (Hewajuli  dan  Dharmayanti,  2015).  Lebih  lanjut  menurut  Sugaya et  all
(2016)  bahan  aktif  yang  ada  pada  herbal echinacea,  liquorice,  garlic dan cat’s claw yang  kaya  akan  flavonoid,  vitamin  C,  dan  karotenoid  berfungsi  sebagai immunostimulator.  Tanaman  tersebut  memiliki  peran  meningkatkan  aktivitas limfosit,  makrofag,  dan  sel  NK  sehingga  meningkatkan  fagositosis  atau menstimulasi  sintesa  interferon.  Hal  ini  berbeda  dengan  hasil  penelitian  yakni ekstrak  fermentasi  dari  jahe,  bawang  putih,  temulawak  dan  kunyit  maupun rebusan daun kari belum menunjukkan hasil yang optimal dalam meningkatkan kerja sel imunitas ayam.
Hasil pengamatann yang lain yang ditemukan dalam penelitian ini yakni terdapat perbedaan pada nilai komponen platelet yang terkandung dalam darah. Pemberian herbal jamu nilai platelet berjumlah  35,5 x 10 3 /µL, herbal jamu dan rebusan daun kari nilai platelet 33 x 10 3 /µL, rebusan daun kari nilai platelet 30 x  10 3 /µL  sedangkan  pada  kelompok  kontrol  (air  minum)  nilai  platelet  12,5  x 10 3 /µL.    Nilai  platelet  yang  paling  tinggi  terlihat  pada  pemberian  herbal  jamu yang  difermentasi,  sedangkan  nilai  paling  rendah  berada  pada  kontrol  (air minum) jika dibandingkan nilai normal kisaran platelet berada pada 20  – 40  x 10 3 /µL.  Platelet  disebut  juga  trombosit  (keping  darah).  Trombosit  ayam merupakan  sel  leukosit  berinti  dan  mewakili  jenis  sel  darah  putih  yang  paling banyak  dalam  darah  ayam, yang  memiliki  fungsi  sebagai  membantu  proses penutupan  luka,  proses  peradangan,  dan  fagositosis  partikel  asing. Menurut Ferdous et  al (2008)  menyatakan  bahwa  Trombosit  mengekspresikan  TLR  ( Toll- like  Receptor )  seperti TLR2,  TLR3,  TLR4,  TLR5,  and  TLR7,  yang  berpotensi sebagai sel efektor primer. Trombosit adalah sel darah putih yang paling banyak dalam  darah  unggas  dan  ada  hampir  6  kali  lebih  banyak  trombosit  daripada heterofil dalam sirkulasi.  Trombosit dan heterofil keduanya memiliki fungsi sel efektor yang serupa dalam pertahanan bawaan terhadap infeksi bakteri, namun trombosit  tetap    sebagai  respon  imun  bawaan  yang  penting  pada  ayam. Kandungan  senyawa  aktif  yang  ada  dalam  kelompok  perlakuan  ini  diduga berperan  terhadap  peningkatan  sel  trombosit/platelet  dalam  darah  broiler. Adanya  peningkatan  jumlah  trombosit  pada  kelompok  perlakuan  menandakan bahwa herbal tersebut memiliki potensi mengaktifkan respon imun bawaan dan sel  efektor  sehingga  berperan  sebagai  antimikroba.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Zainuddin  dan  Wibawan  (2007)  yang  menyatakan  bahwa  tanaman obat/herbal  mengandung  senyawa  aktif  seperti  alkaloid,  fenolik,  tripenoid, minyak atsiri, glikosida yang bersifat antiviral, antibakteri dan imunomodulator,
komponen  tersebut  untuk  menjaga  kesegaran  tubuh  dan  melancarkan peredaran darah.

## KESIMPULAN
Perlakuan  jamu,  kombinasi  jamu  dan  rebusan  daun  kari,  dan  rebusan daun  kari  yang  diberikan  pada  ayam  broiler  tidak  menunjukkan  peningkatan jumlah titer imunitas pasca pemberian vaksinasi.
Saran
Disarankan  untuk  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai penggunaan dosis ulangan (booster) vaksinasi ND yang dilakukan pada minggu ke-2  periode  pemeliharaan  dan  peranan  jamu  herbal  terhadap  imunitas  yang dihasilkan oleh mikroflora sistem saluran pencernaan.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina, L., M. Hatta dan S. Purwati. 2009. Penggunaan Ramuan Herbal Untuk Meningkatkan  Produktivitas  Dan  Kualitas  Broiler.  1.  Analisis  Zat  Bioaktif dan  Uji  Aktifitas  Antibakteri  Ramuan  Herbal  dalam  Menghambat  Bakteri Gram  Positif  dan  Gram  Negatif.  Cetakan  1.  Pros.  Seminar  Nasional Peternakan Berkelanjutan.
Antara N. S., dan M. Wartini. 2010. Modul Kuliah Senyawa Aroma dan  ( AROMA AND FLAVOR COMPOUNDS ). Tropical Plant Curriculum Project Udayana University.
Baskaram  C.  V.  Ratha  bai.,  and  D.  Kanimozhu.  2011.  Screening  for Antimicrobial Activity and Phytochemical Analisis of Various Leaf Extract of Murraya  koenigii. International  Journal  of  Research  in  Ayurweda  dan Pharmacy. 2 (6) 1807-1810.
Dirjenkeswan,  2014.  Manual  Penyakit  Unggas.  Kementerian  Pertanian. Direktorat Jenderal Peternakan dan Kesehatan Hewan. Jakarta.
Ferdous,  F,      D.  Maurice,  and  T.  Scott1  (2008).  Broiler  Chick  Thrombocyte Response to Lipopolysaccharide. Poultry Science 87:61–63.
Hewajuli  Dyah  A.dan  Dharmayanti  NLPI.  2015.  Peran  Sistem  Kekebalan  Non- spesifik dan Spesifik pada Unggas terhadap Newcastle Disease. WARTAZOA Vol. 25 No. 3 Hlm. 135-146.
Info Medion (2015). Antisipasi Heat Stress di Musim Kemarau (http://info.medion.co.id) diakses 5 Nopember 2018.
Nidom  CA.  2005.  Tangerang  Miniatur  Indonesia.  Jakarta:  Majalah Poultry Indonesia. 305.
Nana,  S.  2006.  Pengamatan  Daya  Proteksi  Ayam  Post  Vaksinasi  Newcastle Disease dengan Uji Tantang. Pusat Penelitian da n Pengembangan Ternak. Hal. 282-286.
Nidaullah  H.,  Durrani  F.  R.,  S.  Ahmad,  I.  U.  Jan and  S.  Gul.  2010.  Aqueous Extract From Different Medicinal Plants As Anticoccidial, Growth Promotive and  Immunostimulant  in  Broiler.  Vol.  5,  No.  1.    ARPN  Journal  of Agricultural and Biological Science.
Nouman  S.  M.,  Shehzad  A.,  Butt  M.  S.,  Khan  M.I.,  and  Tanverr  M.,  2015. Phytochemical  profiling  of  curry  ( Murraya  koenijii )  leaves  and  its  health benefits. Pakistan Journal of Food Sciences. Volume 25: 204-215.
Palupi Riski. 2015. Manajemen Mengatasi Heat Stress pada Ayam Broiler  yang Dipelihara Dilahan Kering. Prosiding Seminar Nasional Lahan Suboptimal.
Suganya,  T.  ,  S.  Senthilkumar,  K.  Deepa,  J.  Muralidharan,  G.  Gomathi  and  S. Gobiraju.  2016.  Herbal  Feed  Additive  in  Poultry.  International  Journal  of Science, Environment and Technology, Vol. 5, No 3, 2016, 1137 – 1145.
Tabbu, C.R. 2000. Penyakit Ayam dan Penanggulangannya.  Penerbit Kanisius. Volume 1. Yogyakarta.
Zainuddin,  D.  dan  I.W.T.  Wibawan.  2007.  Biosekurity  dan  Manajemen Penanganan  Penyakit  Ayam  Lokal  dalam  Keanekaragaman  Sumberdaya Hayati Ayam Lokal Indonesia: Manfaat dan Potensi. Pusat Penelitian Biologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia. hlm. 159 – 182.