## PENGARUH PEMBERIAN KOLAGEN IKAN
TERHADAP PROSES PENYEMBUHAN LUKA INSISI (STUDI EKSPERIMEN PADA TIKUS PUTIH RATTUS NORVEGICUS )
Indah Nur Imamah Jurusan Keperawatan Poltekkes Kemenkes Kaltim Email:st.gendis.aifa@gmail.com
Abstract. Collagen  plays  a  very  important  role  in  the  formation  of  tissues  and organs are involved in various biological functions such as cell division, defense, and  cell  differentiation. Wherefore  the  biological  function  of  the  use  of  collagen in the industry, especially in the medical field, is growing very rapidly. This study aims  to  determine  the  effect  of  fish  collagen  toward  wound healing . This research  used  the  experimen study,  the  samples  were 36  male  rats  of Rattus norvegicus Wistar strain are health about 3 months old, weighing approximately 150-300  grams.  Then,  the  samples  were  divided  into  6  groups  randomly.  The study  design  used  was  Randomised  control  group  pre-post  test  design. Fish collagen is given as 0.09 / 200 kg bb by oral. Measurement of levels of TGF β1, done  day  0  (pre-test)  and    (post-test)  days  3,  7  and  10    with  the  amount  of fibroblasts, collagen thickness. The results of the study obtained   fish collagen work  optimally in groups of rat  intervention  on  third  day  it  is evidenced  by TGF β1 levels increased significantly compared to the control group (p <0.05). There are  differences  in  the  results  of  histopathology  amount  of  fibroblasts  and collagen thickness between the intervention group and the control group.
Keywords: fish collagen, TGF β1, fibroblast, collagen
Abstrak. Kolagen  memainkan  peranan  yang  sangat  penting  di  dalam pembentukan jaringan  dan  organ,  terlibat  di  dalam  berbagai  fungsi  biologis  sel seperti  pembelahan,  pertahanan,  dan  diferensiasi  sel.  Karena  fungsi  biologis tersebut  penggunaan  kolagen  dalam  industri,  khususnya  dalam  bidang  medis, berkembang  sangat pesat. Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh kolagen  ikan  terhadap  proses  penyembuhan  luka.  Jenis  penelitian  ini  adalah eksperimen, dengan sampel  36 ekor tikus putih jantan Rattus novergicus galur wistar yang  diambil  secara Randomised  control  group  pre-post  test  design.
Kolagen  ikan  diberikan  sebanyak  0,09/200    kg  bb    melalui  oral.  Pengukuran kadar TGF β1, dilakukan hari ke 0 (pre test) selanjutnya  dilakukan pengukuran kembali  kadar  TGF  β1dan (post  test hari  ke  3,  7  dan  10 ) serta  pengukuran jumlah fibroblas ,  ketebalan  kolagen.  Hasil  penelitian  didapatkan  kolagen  ikan bekerja  maksimal  pada  kelompok  tikus  intervensi  hari  ke  3,  hal  tersebut dibuktikan  dengan  kadar  TGF  β1  mengalami  peningkatan  yang  signifikan dibandingkan  kelompok  kontrol  (p  <0,05).  Terdapat  perbedaan  hasil pemeriksaan  histopatologi  jumlah  fibroblas  dan  ketebalan  kolagen  antara kelompok intervensi dan kelompok kontrol. ECM dan sintesis kolagen. Kata kunci : kolagen ikan, TGF β1, fibroblas, kolagen

## PENDAHULUAN
Luka  merupakan  suatu  kerusa- kan  yang  abnormal  pada  kulit  yang menghasilkan  kematian  dan  keru-
sakan  sel-sel  kulit. Luka  juga  dapat diartikan  sebagai  interupsi  kontinui- tas  jaringan,  biasanya  akibat  dari suatu trauma atau cedera. Luka da- pat  diklasifikasikan  secara  umum,

## PENELITIAN
yaitu; luka akut dan luka kronis. Luka akut  adalah  luka  yang  sesuai  de- ngan  proses  penyembuhan  yang normal,  yang  dapat  dikategorikan menjadi  luka  pembedahan  (insisi), non  pembedahan  (luka  bakar)  dan atau  trauma.  Sedangkan  luka kronis adalah  suatu  proses  penyembuhan luka yang mengalami keterlambatan, misalnya  luka  dekubitus,  dan  luka diabetik.
Mayoritas  luka  pada  penduduk dunia  adalah  luka  karena  pembe- dahan/trauma  (48%),  ulkus  kaki (28%),  luka  dekubitus  (21%). Yang paling  terpenting  dari  semua  luka adalah  kejadian  infeksi  patologis. Luka bedah tidak terkecuali, memiliki tingkat rata-rata infeksi luka bedah 7 sampai  10  %  tergantung  pada  pro- sedur.
Infeksi  luka  bedah  merupakan salah  satu  komplikasi  pascabedah yang  ditakuti  oleh  dokter  spesialis bedah  dan  merupakan  masalah yang  serius,  karena  dapat  mening- katkan  morbiditas,  mungkin  pula dapat menyebabkan kecacatan bah- kan  kematian.  Infeksi  luka  bedah menempati  urutan  ketiga  terbanyak dalam  infeksi  nosokomial  yang  me- nyebabkan morbiditas dan mortalitas serta  meningkatkan  biaya  rumah sakit.
Kejadian infeksi luka bedah me- nempati  posisi  ke  3,  dengan  angka kejadian  mencapai  14-16%  dari infeksi nosokomial keseluruhan. Ke- jadian infeksi luka operasi di amerika serikat  sekitar  2-5  %  dari  pasien yang menjalani operasi, setiap tahun ada  15  juta  prosedur  operasi    yang dilakukan,  terdapat  sekitar  300.000- 500.000 kejadian infeksi luka operasi
setiap  tahun. Hasil  penelitian  ter- dahulu  menunjukkan  bahwa  angka kejadian  infeksi  luka  bedah  pada rumah  sakit  di  Indonesia  bervariasi antara  2-18%  dari  keseluruhan prosedur pembedahan.
Indonesia  kaya  akan  bahan alam  yang  berkhasiat  sebagai  obat baik  yang  berasal  dari  tumbuhan, ataupun  dari  perairan.  Sebagai  ne- gara  maritim  Indonesia  memiliki potensi sumberdaya  perikanan  yang sangat  besar,  hal  tersebut membuat konsumsi  ikan  per  kapita  masya- rakat  Indonesia  terus  mengalami kenaikan  dari  35  kg/kapita/tahun  di tahun  2013  menjadi  38  kg/kapita/ tahun di tahun 2014.
Ikan nila (Oreochromis niloticus) merupakan  salah  satu  produk  peri- kanan  budidaya  yang  mengalami kenaikan  volume  produksi  setiap tahunnya  dengan  kenaikan  rata-rata sebesar  26,36  %  dari  tahun  2010– 2014 dibandingkan ikan mas 7,00 % dan  ikan  gurame  4,95  %  dalam kurun  waktu  yang  sama. Mening- katnya  produksi  ikan  akan  diiringi pula  peningkatan  limbah  ikan  baik berupa  kulit  dan  sisik  ikan. Kegiatan industri  perikanan  sejak  di  tempat pendaratan  ikan  (TPI)  hingga  ke tempat  pengolahan  ikan  umumnya selalu  menghasilkan  limbah  dalam jumlah  yang  besar,  baik  limbah  cair maupun  limbah  padat.  Limbah  cair biasanya  berupa  darah,  lendir,  drip, dan lemak. Sedangkan limbah padat organik  kebanyakan  berupa  kepala, insang,  isi  perut,  tulang,  sirip,  kulit dan sisik. Adanya kenaikan tersebut membuat  limbah  ikan  sangat  poten- sial sebagai sumber kolagen.
Kolagen  memainkan  peranan yang  sangat  penting  di  dalam  pem- bentukan jaringan dan organ, terlibat di dalam berbagai fungsi biologis sel seperti  pembelahan,  pertahanan, dan  diferensiasi  sel.  Karena  fungsi biologis  tersebut  penggunaan  kola- gen dalam industri, khususnya
dalam  bidang  medis,  berkembang sangat  pesat. Pada  bidang  farmasi, kolagen  ikan  banyak  digunakan  un- tuk  pemulihan  luka,  suplemen,  pe- ngobatan  anti-kanker  dan  sebagai bahan  pembuatan  kapsul.  Kolagen ikan  memiliki bioavailabilitas yang unggul,  yang  merupakan  tingkat  di- mana  suatu  zat  yang  diserap  ke dalam tubuh saat dicerna. Para peneliti menemukan bahwa  kolagen  ikan,  yang  diekstrak dari  kulit  ikan  dan  sisik,  adalah alternatif  non-beracun.  Bahkan  lebih baik,  lebih  mudah  diserap  oleh  kulit manusia  daripada  kolagen  hewan mamalia,  Sifat  ikan  yang  dapat bertahan  hidup  di  berbagai  suhu  air dan tekanan, membuat kolagen ikan tahan  terhadap  kerusakan  fisik  dan kimia.  Selain  itu,  dalam  proses ekstraksi  kolagen,  struktur triple- helix dapat  dipertahankan,  sehingga menjaga  polipeptida  dan  asam amino  tetap  utuh.  Protein  ini  secara alami melengkapi kolagen dan membuat  pengobatan  yang  dihasil- kan lebih efektif.
Penelitian  kolagen  ikan  yang pernah dilakukan masih terbatas dari jenis  ikan  laut.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  kolagen  yang berasal  dari  gabungan  tulang  dua jenis  ikan  laut  sebagai  bahan  ba- lutan  penyembuhan  luka  dapat menyembuhkan  luka  insisi  pada  ti-
kus  wistar. Pemanfaatan  kolagen yang berasal dari kulit ikan nila baru –baru  ini  dilakukan.  Hasil  penelitian menyatakan  bahwa  kolagen  ikan yang  diproses  menjadi  spons  dan serat nano (nanofibres) dapat meningkatkan  viabilitas  keratinosit manusia  (HaCaTs)  dan  fibroblast dermal  manusia  (HDFS).  kolagen juga  dapat  mempercepat  migrasi HaCaTs  dengan  ekspresi  matriks metaloproteinase-9 dan pertum- buhan  transformasi  faktor-β1  (TGF- β1). sehingga memfasilitasi pemben- tukan  serat  kolagen.  Selanjutnya, nanofibers kolagen merangsang regenerasi  kulit  dengan  cepat  dan efektif pada hewan coba tikus.
Berdasarkan  hasil  penelusuran peneliti  di  Indonesia  belum  banyak penelitian  terkait  pemanfaatan  kola- gen  ikan  untuk  penyembuhan  luka, sehingga  peneliti  tertarik  untuk  me- lakukan  penelitian  pengaruh  pem- berian  kolagen  ikan  terhadap  kadar TGF  β1,  jumlah  fibroblas  serta ketebalan  kolagen  dalam  proses penyembuhan  luka  insisi  pada  tikus putih (Rattus norvegicus).

## METODE

## Hewan coba dan pemeliharaan
Sampel  penelitian  mengguna- kan 36 ekor tikus putih jantan Rattus novergicus galur  wistar yang  sehat berusia 3 bulan dengan berat sekitar 150-300 gram. Sampel akan dibagi 6 kelompok  secara  random,  yang  ter- diri dari 3 kelompok intervensi dan 3 kelompok kontrol tiap kelompok ber- isi 6 tikus. Tikus kelompok intervensi dan  kontrol  diberikan  makanan  be- rupa  pelet  ayam  sebanyak  15-20
gr/hari  dan  minum.  Tiap  tikus  akan dibuatkan luka insisi dengan panjang 2  cm  sampai  kedalaman subcutan . Kelompok  intervensi  diberikan  kola- gen  ikan  dengan  dosis 0,09/200  per kg  bb/hari.  Kandang  tikus  dibersih- kan  setiap  hari  oleh  petugas  labora- torium.  Proses  pemeliharaan  dan pengambilan  sampel  dilakukan  di Laboratorium  Biologi  MIPA  UNNES Semarang.  Penelitian  dilakukan  mu- lai  tanggal  11  Juni  sampai  dengan 29 juni 2015

## Pengambilan sampel TGF β1
Tiga  3  jam  setelah  perlukaan, seluruh  tikus  pada  kelompok  inter- vensi  dan  kel.  kontrol  sebanyak  36 ekor  diambil  darahnya  untuk  diukur kadar TGF β1 (pre test). Selanjutnya setiap hari ke 3, 7 dan 10 sebanyak 12  ekor  tikus  dari  kelompok  inter- vensi  dan  kelompok  kontrol  dilaku- kan  pengambilan  darah  kembali untuk  pemeriksaan  kadar  TGF  β1 (post test).
Darah  diambil  sebanyak  1,5  cc dengan  cara  menusukkan  mikrohe- matokrit  dibagian  sinus  orbitalis kemudian darah ditampung kedalam mikrotube.  Sampel  darah  tikus  di- biarkan  selama  1  jam  kemudian dilakukan  sentrifuse  selama  10 menit  lalu  diambil  serumnya  seba- nyak  0,5  cc  menggunakan  micro- pipet  otomatic.  Serum  dimasukkan ke dalam mikrotube kemudian disim- pan  kedalam  frezeer  dan  dibekukan dengan suhu -40 0 C.

## Pengambilan sampel histopatologi
Tikus  pada  setiap  kelompok diterminasi  dengan  metode  inhalasi
overdose.  Setelah  tikus  mati  bulu  di sekitar punggung dicukur bersih dan didesinfeksi  menggunakan  betadin, jaringan  bekas  irisan  diusap  dengan alkohol  70%  lalu  dibuat  eksisi  – biopsi  kurang  lebih  4  cm  persegi dengan melintasi garis irisan dengan kedalaman  sampai  subkutis.  Semua jaringan  eksisi  biopsi  dimasukkan kedalam larutan formalin 10%.

## Pemeriksaan kadar TGF β1
Pemeriksaan ini  menggunakan rat TGF  β1 elisa  kit. Cairan  reagen harus  dihangatkan  terlebih  dahulu
30 menit sebelum digunakan.
Tambahkan sample  diluent  buffer 0.1 ml untuk well kontrol dan 0,1  ml untuk serum tikus. Petunjuk pengen- ceran  sampel  lihat  petunjuk.  Kunci plate yang telah dimasukkan sampel dan  tutup  untuk  diinkubasi  selama 90  menit  pada  suhu  37 0 C.  Buka penutup  plate  dan  letakkan  handuk kertas  atau  kertas  penyerap  agar plate tidak kering. Tambahkan 0.1 ml biotinylated anti  rat  TGF  β1,  cairan akan  bekerja  pada  tiap  well  dan inkubasi  plate  pada  suhu  37 0 C selama  60  menit.  Cuci  plate  seba- nyak 3 kali dengan 0,01 M TBS atau 0,01  M  PBS  dan  tiap  kali  mencuci biarkan  cairan  ada  di  dalam  well selama  1  menit.  Buang  sisa  cairan diatas  handuk  kering.  Rendam  tiap well  paling  sedikit  0,3  ml  PBS  atau TBS  buffer  selama  1-2  menit.  Tam- bahkan  0,1  ml avidin  biotin  per- oxidase  complex pada  tiap  well  dan inkubasi pada suhu 37 0 C selama 30 menit.  Bersihkan  plate  selama  5 menit dengan 0,01 M TBS atau 0,01
M  PBS,  dan  tiap  mencuci  biarkan cairan berada dalam well selama 1-2 menit.  Hilangkan  sisa  cairan  diatas handuk  kering.  Tambahkan  90  ui TBM color developing agen tiap well dan  inkubasi plate pada suhu 37 0 C pada  ruangan  gelap  selama  15-20 menit.  Tambahkan  0,1  ml  TBM  stop solution  pada  tiap  well.  Kemudian akan  terlihat  warna  kuning.  Setelah 30  menit  pemberian stop  solution baca  kosentrasi  penyerapan  di microplate reader
Pemeriksaan  kadar  TGF  β1
dilakukan  di  laboratorium  GAKI Fakultas Kedokteran Universitas
Diponegoro Semarang.

## Pemeriksaan Histopatologi
Dilakukan  pembuatan  preparat terlebih  dahulu  dengan  berbagai proses  seperti  fiksasi,  dehidrasi, impregnasi,  embedding  dan  pewar- naan  dengan  metode Masson’s  tri- chrom. Jaringan histopatologi diamati
dibawah miskroskop
OLYMPUS yang  dilengkapi  dengan  kamera  di- gital  dengan  pembesaran  400x, kemudian  dilakukan  interpretasi  ber- dasarkan  parameter  skoring  histo- patologi.  Jumlah  fibroblas  tidak  ada (0),  sedikit/fokal  (1),  sedang/difus/ jarang  (2),  banyak/masif/difus/padat (3).  Ketebalan  kolagen  dengan  pre- sentase    <  25  (1),  25‒50  (2),  51‒75 (3), > 75 (4).
Pembuatan  preparat  dan  pe- meriksaan  histopatologi  dilakukan  di Laboratorium Patologi Anatomi
Rumah  Sakit  Umum  Pusat  Karyadi Semarang.

## Analisis statistik
Pada penelitian ini meng- gunakan  analisis  univariat  dan  biva- riat.  Analisis  univariat  untuk  meng- hitung  nilai  mean,  terhadap  kadar TGF β1, sedangkan jumlah fibroblast dan  ketebalan  kolagen  dihitung  de- ngan menggunakan nilai median.
Analisis  bivariat  untuk  melihat kesetaraan  atau  homogenitas  sam- pel  penelitian  apakah  layaak  diban- dingkan  atau  melihat  variasi  data dari  kedua  kelompok  tersebut  dan melihat perbandingan kadar TGF β1 sebelum  dan  sesudah  intervensi pada  masing-masing  kelompok  de- ngan  menggunakan  uji  non  para- metrik  wilcoxon.  Serta  melihat  per- bandingan  dua  kelompok  tiap  fase penyembuhan luka dengan uji statsistik  non  parametrik  yaitu  Mann Whitney dengan P value ≤ 0,05

## HASIL

## Skoring Jumlah Fibroblas dan Ketebalan Kolagen
Jumlah fibroblast dan  kete- balan  kolagen  dihitung  dengan menggunakan  nilai  median,  hasil penelitian  menunjukkan  ada  per- bedaan  skor  jumlah  fibroblas  dan ketebalan  kolagen  antara  kelompok yang menggunakan kolagen ikan de- ngan  kelompok  yang  tidak  meng- gunakan kolagen ikan.
Tabel 1. Hasil Skoring Histopatologi Kulit  (n = 6) Hari/sampel Jumlah fibroblas Ketebalan kolagen ≤ 2 > 2 ≤ 3 >3 Hari ke 3 Intervensi kontrol 2 4 4 2 5 6 1 0 ≤ 2 > 2 ≤ 2 > 2 Hari ke 7 Intervensi kontrol 6 3 0 3 2 4 4 2 ≤ 1 > 1 ≤ 3 >3 Hari ke 10 Intervensi kontrol 6 4 0 2 1 5 5 1
Uji Kesetaraan Rata-rata Kadar TGF β1 sebelum Intervensi
Data  hasil  uji  statistik  dengan menggunakan  uji  F  dapat  diketahui kadar  TGF-ß1  baik  pada  kelompok intervensi  dan  kelompok  kontrol dinyatakan  tidak  bermakna  secara statistik, atau lebih dari nilai α (0,05). Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kadar TGF-ß1  sebelum  intervensi  pada tiap  kelompok  tersebut  dalam  kon- disi  sama,  sehingga  tiap  kelompok layak  untuk  dibandingkan  dan  di- analisis lebih lanjut.
Uji perbandingan sebelum dan sesudah intervensi Tiap Kelompok Hasil Uji non parametrik wilcoxon menyatakan kadar  TGF-ß1 pada  hari  ke  3  untuk  kelompok intervensi,  sebelum  dan sesudah  in- tervensi  dinyatakan  berbeda  secara statistik  dengan  nilai  p.value  yaitu (0,028)  lebih  kecil  dari  α  (0,05). Sedangkan  kelompok  kontrol  tidak
Tabel 2. Uji Kesetaraan Rata-rata Kadar TGF β1 sebelum Intervensi
Kelompok n Nilai Uji P. Value Hari ke 3 Intervensi kontrol 6 6 53,18 53,20 F 0,466 Hari ke 7 Intervensi kontrol 6 6 11,71 59,33 1,000 Hari ke 14 Intervensi Kontrol 6 6 466,5 68,96 0,352
ada  perbedaan  secara  statistik  an- tara  sebelum  dan  sesudah  dengan nilai p.value sebesar (0,753).
Kadar  TGF-ß1  hari  ke  7  untuk kelompok  intervensi  dan  kelompok kontrol, pre dan post test dinyatakan berbeda secara statistik dengan nilai p.value  sama  yaitu    (0,028)  lebih kecil  dari  α  (0,05).  Kadar  TGF-ß1 hari  ke  10    untuk    kelompok intervensi, pre dan post  test inter- vensi  dinyatakan  berbeda  secara statistik  dengan  nilai  p.value  yaitu (0,028)  lebih  kecil  dari  α  (0,05). Sedangkan  kelompok  kontrol  tidak menunjukkan perbedaan secara sta- tistik  antara pre dan post  test de- ngan nilai p.value sebesar (0,116).

## Uji perbandingan kelompok kontrol dan kelompok Intervensi
Hasil  uji  Mann  Whitney  dike- tahui  bahwa  ada  perbedaan  sig- nifikan  kadar  TGF-ß1  antara  kelom- pok  kontrol  dan  kelompok  intervensi pada  hari  ke  3,  dengan nilai  p.value sebesar  (0,025)  atau  lebih  kecil  dari nilai  α  (0,05).    Perubahan  kadar TGF-ß1  pada  hari  ke  7  untuk  ke- lompok  kontrol  dan  kelompok  inter- vensi  dinyatakan  tidak  ada  per- bedaan signifikan dengan nilai p.value  sebesar  (0,262)  atau  lebih besar  dari  nilai  α  (0,05).  Perubahan kadar TGF-ß1 pada hari ke 10 untuk kelompok  intervensi  dan  kelompok kontrol  juga  dinyatakan  dengan  uji statistik tidak ada perbedaan signifikan dengan nilai p.value sebesar (0,873) atau lebih besar dari nilai α (0,05).

## PEMBAHASAN
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk  mengetahui  manfaat  kolagen ikan  terhadap  proses  penyembuhan luka  insisi  yang  diukur  dari  kadar TGF-ß1, jumlah fibroblas dan ketebalaan  kolagen.  Penyembuhan luka  adalah  proses  yang  dapat dibagi  menjadi  tiga  fase  yang berbeda  (inflamasi,  proliferasi,  dan remodelling).  Masing-masing  ditan- dai  dengan  peristiwa  tertentu  yang memerlukan komponen spesifik.
Penyembuhan  luka  tidak  selalu  me- rupakan  proses  linear,  dapat  ber- kembang maju dan mundur melewati fase  penyembuhan  tergantung  pada berbagai  faktor  intrinsik  dan  eks- trinsik. oleh  karena  itu  pengobatan yang  efektif  dalam  meningkatkan penyeembuhan  luka  tidak  mungkin hanya  melibatkan  satu  atau  dua komponen.  Sehingga  dalam  rangka untuk menentukan efek kolagen ikan pada  fase  penyembuhan  luka,  kami mengumpulkan sampel dan jaringan berulang di hari ke 3, 7 dan 10.
Hasil  studi  membuktikan  bahwa kolagen  ikan  dapat  meningkatkan kadar  TGF-ß1  secara  signifikan  pa- da  hari  ke  3,  hal  tersebut  dapat berlangsung  karena  kolagen  ikan memiliki  kandungan  asam  amino protein,  salah  satunya  adalah  glisin. Glisin merupakan  asam  amino  yang paling  banyak  terdapat  dalam  ko- lagen  ikan  sebesar  30  %. Glisin bekerja pada sel-sel inflamasi seperti  makrofag  untuk  menekan aktivasi  faktor  transkripsi  dan  pem- bentukan  radikal  bebas  serta  sitokin inflamasi. 22 pemberian  glisin  pada tikus  yang  mengalami  gangguan
neuroinflamatory  seperti amyotro- phic  lateral  sclerosis (ALS)  dan multiple  sclerosis (MS)  dapat  me- modulasi  fungsi  makrofag  sehingga makrofag  dapat  merangsangan  fa- gositosis  myelin  dan  memproduksi mediator  pro  inflamasi  seperti tumor necrosis  factor (TNF-α)  dan nitric oxide (NO).
Peran  TGF  β  sangat  penting dalam  setiap  fase  penyembuhan luka.  TGF  β  dapat  diproduksi  oleh semua  sel.  Terdapat  3  sel  utama pada  luka  yang  berperan  yaitu platelet,  fibroblas  dan  monosit . Se- cara fisiologis, pada hari ke 3 meru- pakan  fase  inflamasi  dimana  diawal fase  tersebut  sebenarnya  tubuh telah memproduksi salah satu faktor pertumbuhan  yaitu  TGF  ß1  yang akan  berkontribusi  terhadap  proli- ferasi  jaringan.  Mekanisme  mole- kuler  terjadinya  pembentukan  TGF ß1  berlangsung  secara  positif  ter- hadap  jumlah  platelet,  monosit  dan fibroblas  artinya  jika  suatu  jaringan mengalami kerusakan maka platelet,
monosit dan fibroblas akan diproduksi  secara  besar-besaran yang kemudian sinyal tersebut dilanjutkan  terhadap  TGF  ß1  untuk segera  merekrut  sel-sel  inflamasi seperti  neutrofil,  makrofag,  dan trombosit  untuk  segera  memfago- sitosis daerah luka. Pemberian kola- gen  ikan  difase  ini  akan  membantu makrofag  mempercepat  fagositosis jaringan yang tidak dibutuhkan didaerah  luka,  dengan  demikian maka  akan  mempercepat  pula  ma- krofag  untuk  segera  memproduksi dan sitokin proinflamasi seperti TGF- β.  TGF-β  akan  ditangkap  ribosom kemudian  dilepaskan  dalam  bentuk
proprotein  lalu  masuk  kedalam aparatus  golgi  dan  berubah  bentuk TGF beta ligan aktif matur yaitu TGF ß1 24 sekresi  TGF  β1  yang  telah matur dalam bentuk laten dan kemu- dian  menjadi  aktif  hanya  karena adanya  reaksi  inflamasi 25 ,  kadar TGF  ß1    yang  berlebihan  dapat menyebabkan  fase  inflamasi  men- jadi  panjang  dan menyebabkan  per- lambatan  penyembuhan  luka. Se- hingga  pada  penelitian  ini  dida- patkan  bahwa  kadar  TGF  ß1  pada hari  ke  7  dan  10  cenderung  meng- alami  penurunan  dibandingkan  hari ke 3.
Dalam  penelitian  ini  hasil  his- topatologi  menunjukkan  perbedaan jumlah  fibroblas  dan  ketebalan  ko- lagen  pada kelompok  intervensi  dan kontrol.  Perbedaan  jumlah  fibroblas dan  ketebalan  pada  penelitian  ini dipengaruhi  oleh  kadar  TGF  ß1. TGF ß1 berperan ditiap fase penyembuhan  luka,  pada  fase  infla- masi  TGF  ß1  berperan  untuk  me- rekrut  sel-sel  inflamasi,  difase  pro- liferasi berperan untuk meningkatkan kebutuhan  angiogenesis  seperti  sel progenitor  endhotelia  untuk  mem- bantu memberikan persediaan darah ke  area  luka dan  menstimulasi kontraksi  dari  fibroblas  untuk  me- mungkinkan  penutupan  luka. Kola- gen  ikan  pada  penelitian  ini  diyakini membantu  angiogenesis,  sintesis extracellular matrix (ECM) dan sintesis  kolagen  terutama  difase proliferasi.  kolagen  ikan  mening- katkan  ekspresi  dari Vascular  endo- thelial  growth  factor (VEGF),  yang merupakan  salah  satu  stimulator penting  untuk  angiogenesis.  VEGF akan meningkatkan neovaskularisasi
diluka  dengan  cara  menstimulasi terjadinya  angiogenesis  di  tempat luka.  Hal  tersebut  dapat  mening- katkan  peningkatan  perbaikan  ja- ringan luka.
TGF-β1  adalah  salah  satu  yang berperan  dalam  stimulasi  kolagen dihari  fase  remodelling,  terutama tipe  1  di  fibroblas,  dan  memiliki peran berbeda dengan matrix metalloproteinases (MMPs)  dimana
meningkatkatkan  kumpulan  serat kolagen. Selain  glycine  kolagen  ikan juga  memiliki  kandungan  prolin  dan hydroxyprolin.  Kedua  jenis    kan- dungan  ini  sangat  penting  dalam pembentukan  kolagen.  Pada  fase remodelling  kolagen  ikan  dapat  me- ningkatkan  ekspresi basic  fibroblast growth factor (bFGF) bFGF berperan untuk menstimulasi migrasi sel epitel dan  proliferasi.  Proses  ini  dimulai dengan  pemecahan  sel-sel,  kontak antar  sel  subratum    yang  kemudian diikuti dengan polarisasi dan migrasi keratinosit  sesuai  ketentuan  dari ECM.

## Kesimpulan
Kolagen  ikan  bermanfaat  untuk meningkatkan  proses  penyembuhan luka melalui peningkatan kadar TGF- β1,  jumlah  fibroblas  dan  ketebalan kolagen.

## DAFTAR PUSTAKA
Andi  Rahmayanti  R.  2014. ekstraksi kolagen  dari  kulit  ikan  gabus (channa  striata)  serta  aplikasi- nya  untuk  skrining  dan  karak- terisasi  kolagenase  bakteri  asal indonesia. Pasca  Tekhnologi
Pangan. IPB. Beldi  et  al.  2009 .  Impact  of intraoperative behavior on surgical site infections . Epub.
Carmans  S.  2006.  The    inhibitory neurotransmitter    glycine    mo- dulates    macrophage    activity by  activation  of  neutral  amino acid transporters. Hasselt University, Biomedical Re- search  Institute  and  Trans- nationale    Universiteit  Limburg, School    of  Life  Sciences, Diepenbeek, Belgium. Carville  K.  2007. Wound  care  : manual. 5 th ed. Osborne Park : Silver Chain Foundation .
Desmouliere  A,  Geinoz  A,  Gabbiani F, and Gabbiani G: 1993 .Trans- forming  growth  factor-beta  1 induces  alpha-smooth  muscle actin  expression  in  granulation tissue  myofibroblasts  and  in quiescent  and  growing  cultured fibroblasts. J Cell Biol.
Evrard  SM,  d’Audigier  C,  Mauge  L, Israel-Biet D, Guerin CL, Bieche I,  Kovacic  JC,  Fischer  AM,
Gaussem  P,  and  Smadja  DM: 2012. The  profibrotic  cytokine transforming growth factor- beta1 increases endothelial progenitor cell angiogenic properties . J Thromb Haemost. Faler, B.J., Macsata, R.A., & Plummer,  D.  Focus  on  basic science:    2010. Transforming growth  factor-ß  and  wound healing. 2006. Dalam Tesis Heri Kristianto, FIK UI. Galiano  RD  et  al,  2004. Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased  angiogenesis  and  by
mobilizing  and  recruiting  bone marrow-derived  cells. Am  J
Pathol.
Grellner  W,  Vieler  S,  Madea  B.
2005. Transforming growth factors  (TGF-alpha  and  TGF- beta1)  in  the  determination  of vitality and wound age: immunohistochemical study  on human  skin  wounds.  Forensic Sci Int.
http://www.wisegeek.com/what-is-
fish-collagen.htm. Diakses  tgl
14 April 2015
Indah hartati. Kajian Produksi Kolagen  dari  Limbah  Sisik  Ikan Secara Ekstraksi Enzimatis.
Momentum, Vol. 6, No. 1. Univ
Junbo  et  al.  2015. Oral  adminis-
tration of marine collagen peptides  prepared  from  chum salmon  (Oncorhynchus  keta) improves wound healing following  cesarean  section  in rats. Food & Nutrition Research.
Kementerian  Kelautan  dan  Peri- kanan  (KKP).  2011. Kelautan dan  Perikanan  dalam  Angka.
Pusat data statistik dan informasi  Sekretariat  Jenderal Kementerian Kelautan dan Perikanan, Jakarta. Li AG,, dalam Mohammadreza Pakyari  et  al, 2013. Critical  Role of  Transforming  Growth  Factor Beta.
N.  S.  Sampath  Kumar,  et  al. 2012. Wound  Healing  Properties  of Collagen  from  the  Bone  of  Two Marine Fishes. Springer Science+Business Media, LLC. Nita  novita,  dkk.  2015. Transforming growth factors (TGF-a and TGF-
b1)  in  the  determination  of vitality and wound age: immunohistochemical  study  on human  skin  wounds. Journal  of Medicine and Health.
Nur, M, Raidatusakinah. 2011. Faktor Risiko Infeksi Luka Operasi  Pasca  Bedah  Sesar  Di RSUD Dr.Sardjito Yogyakarta. P.driscoll. 2013 .Prevalence of surgical,  traumatic,  burn  and chronic wounds medmarket diligence. Worldwide wound management. Rainey  J.  2002. Wound  care:  a handbook for community nurses. Philadelphia: Whurr Publisher. Thian zhou et al. 2015. Development of  Biomimetic  Tilapia  Collagen Nanofibers for Skin Regeneration  through  Inducing Keratinocytes Differentiation and  Collagen  Synthesis  of Dermal  Fibroblasts. ACS  Appl. Mater. Interfaces. Thomas Wild M.D. dkk, 2010. Basics in  nutrition  and  wound  healing. University  Clinic  of  Surgery. Paracelsus  Medical  University. Salzburg, Austria.