## Aktivitas  Antiinflamasi  Infusa  Bunga  Pukul Empat (Mirabilis jalapa L.) Secara In Vitro
In Vitro Anti-Inflammatory Activity Of Mirabilis jalapa L. Infusion

## Hidayatul Ihsan, Iman Surya Pratama*, Nisa Isneni Hanifa
Program  Studi  Farmasi,  Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Mataram,  Jl  Majapahit  No.  62, Kota Mataram, NTB 83115, Indonesia
*E-mail: imanespe@unram.ac.id 2018

## Abstrak
Rebusan  bunga  pukul  empat  (Mirabilis  jalapa  L.)  telah  digunakan  sebagai antiradang  secara  tradisional.  Skrining  fitokimia  bunga  Mirabilis  jalapa  L. menunjukkan  kandungan  flavonoid  yang  diketahui  memiliki  aktivitas antiinflamasi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  aktivitas antiinflamasi  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  menggunakan  metode stabilisasi  membran  sel  darah  merah  dengan  induksi  hipotonisitas  dan panas.  Kelompok  uji  terdiri  atas  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  dengan konsentrasi  2,5%;  5%;  dan  10%  b/v,  kontrol  positif  (natrium  diklofenak 0,01%  b/v  dan  aspirin  0,01%  b/v),  dan  kontrol  negatif  (akuades).  Aktivitas antiinflamasi infusa bunga Mirabilis jalapa L. ditentukan melalui persentase stabilisasi  membran  dan  inhibisi  hemolisis  sel  darah  merah.  Data  hasil  uji dianalisis  secara  statistik  baik  parametrik  maupun  nonparametrik  dengan SPSS.  Infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  mengandung  senyawa  flavonoid, tanin  dan  terpenoid.  Hasil  uji  menunjukkan  bahwa  infusa  bunga  Mirabilis jalapa L. konsentrasi 10% memiliki persentase proteksi hemolisis sel darah merah  terbesar  pada  induksi  hipotonisitas  yakni  99,50%  (p>0,05)  dan persentase  inhibisi  hemolisis  terbesar  pada  induksi  panas  yakni  50,27% (p≤0,05).  Dari  hasil  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  infusa  bunga Mirabilis  jalapa  L.  memiliki potensi  sebagai  antiinflamasi  dengan  stabilisasi membran sel darah merah.
Kata kunci: Bunga Mirabilis jalapa L., antiinflamasi, stabilisasi membran.

## Abstract
The stew of Mirabilis jalapa L. flower has been used traditionally as an anti- inflammatory. Phytochemical screening of Mirabilis jalapa L. flower showed flavonoid  content  which  is  known  to  have  anti-inflammatory  activity.  This study  aims  to  determine  the  anti-inflammatory  activity  of  Mirabilis  jalapa  L. flower  infusion  using  the  red  blood  cell  membrane  stabilization  method  by inducing  hypotonicity and  heat. The test group consisted of Mirabilis jalapa L. flower infusion with a concentration of 2.5%; 5%; and 10% w / v, positive control (diclofenac sodium 0.01% w/v and aspirin 0.01% w/v), and negative control (aquadest). The anti-inflammatory activity of Mirabilis jalapa L. flower infusion  was  determined  by  the  percentage  of  membrane  stabilization  and inhibition  of  red  blood  cell  hemolysis.  Data  were  statistically  analyzed  both parametric and nonparametric with SPSS. Mirabilis jalapa L. flower infusion

## Artikel Penelitian
contains  flavonoids,  tannins  and  terpenoids.  The  test  results  showed  that the  10%  concentration  of  Mirabilis  jalapa  L.  flower  infusion  had  the  largest percentage of red blood cell hemolysis protection on hypotonicity induction, that  is  99.50%  (p>0.05)  and  the  largest  percentage  of  hemolysis  inhibition on  heat  induction,  that  is  50.27%  (p≤0.05). From  these  results,  it  can  be concluded that the Mirabilis jalapa L. flower infusion has potential as an anti- inflammatory by stabilizing the red blood cell membrane.
Keywords: Mirabilis jalapa L. flower, anti-inflammatory, membrane stabilization.

## PENDAHULUAN
Inflamasi  merupakan  respon  fisiologi  tubuh  dalam  melindungi  jaringan terhadap trauma fisik, zat kimia berbahaya atau agen mikrobiologik. Respon ini  bertujuan  untuk  menghilangkan  agen  inflamasi  serta  mempersiapkan kondisi  perbaikan  jaringan  (Mycek  et  al.,  2001;  Cross,  2013).  Prevalensi penyakit  yang  melibatkan  proses  inflamasi  cukup  tinggi  di  Indonesia, beberapa  diantaranya  meliputi  penyakit  sendi  sebesar  24,7%  dan  infeksi saluran  pernafasan  akut  sebesar  25,5%  (Kementerian  Kesehatan  Republik Indonesia, 2013).
Jaringan  akan  mengeluarkan  mediator-mediator  inflamasi  seperti  sitokin, leukotrien  dan  prostaglandin  sebagai  respon  terhadap  agen  inflamasi (Grosser et al., 2017). Mediator inflamasi  tersebut  menyebabkan pelebaran pembuluh darah dan edema di sekitar jaringan, sehingga memberikan tanda utama  meliputi  rubor  (kemerahan),  kalor  (rasa  panas  akibat  peningkatan aliran  darah  lokal),  dolor  (nyeri),  tumor  (pembengkakan  sekunder  akibat ekstravasasi plasma lokal) dan laesa function (kehilangan fungsi) (Kumar et al., 2017). Ketika tubuh tidak dapat mengendalikan respon inflamasi, hal ini dapat mengarah pada penyakit berbahaya seperti pertumbuhan sel abnormal yang bertransformasi menjadi sel kanker (Warisno & Dahana, 2012).
Penanganan  inflamasi  secara  farmakologi  umumnya  menggunakan  obat golongan  antiinflamasi  nonsteroid  (AINS)  dan  antiinflamasi  steroid.  Obat golongan AINS seperti aspirin, ibuprofen, asam mefenamat dan indometasin dapat menghambat enzim siklooksigenase (COX-1 dan COX-2). Diklofenak meskipun  dinyatakan  dalam  banyak  pustaka  sebagai  AINS  tradisional, namun  terdapat  publikasi  yang  menyatakan  bahwa  diklofenak  memiliki selektivitas  yang  lebih  tinggi  pada  COX-2  dibandingkan  COX-1  dan sebanding  dengan  celecoxib  (Woodfork  &  Dyke,  2004;  Tripathi,  2013; Altman et al., 2015).  Antiinflamasi steroid menghambat enzim fosfolipase A2  sehingga  semua  jalur  pembentukan  mediator-mediator  inflamasi  juga terhambat.  Antiinflamasi  steroid  mengaktivasi  reseptor  glukokortikoid dalam keadaan hiperfosforilasi, terdisosiasi dari kompleks multi-protein dan bertranslokasi kedalam inti yang mengatur ekspresi gen. Efek antiinflamasi diperoleh  dari  mekanisme  transrepresi  berupa  pengikatan  pada  faktor transkripsi  seperti  AP1  atau  NF-kB  (Mitre-Aguilar  et  al.,  2015). Antiinflamasi  steroid  juga  dapat  memobilisasi  kalsium  intraseluler  dasar (Panettieri et al., 2019). Contoh obat golongan ini antara lain deksametason, prednison, dan betametason.
AINS  dengan  penghambatan  sintesis  prostaglandin  dapat  meningkatkan sekresi  asam  lambung  sehingga  tidak  dapat  diberikan  pada  pasien  dengan
riwayat  ulkus  (Brophy  et  al.,  2010).  Obat  golongan  AINS  dengan  efek samping  minimal  sampai  saat  ini  masih  dikembangkan  (Fajriani,  2008). Sebagai  alternatif  dapat  digunakan  pengobatan  tradisional  yang memanfaatkan  sumber  daya  alam  berupa  tanaman  (Mahatma  &  Mulyono, 2005).  Mirabilis  jalapa  L.  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  berpotensi sebagai antiinflamasi (Wijayakusuma, 2000).
Rebusan  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  5%  b/v  telah  digunakan  secara tradisional  untuk  mengobati  radang  sendi  akut  (Wijayakusuma,  2000). Skrining  fitokimia  ekstrak  air  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  menunjukkan adanya kandungan flavonoid yang diketahui memiliki aktivitas antiinflamasi sebagai penghambat enzim siklooksigenase (Sumithra et al., 2012; Hidayati et al., 2008).
Ekstrak hidroetanol 50% bunga Mirabilis jalapa L. konsentrasi 1000 µg/mL menunjukkan persentase inhibisi hemolisis lebih kecil dibandingkan natrium diklofenak  pada  metode  stabilisasi  membran  (Kanakamani  et  al.,  2018). Secara  ilmiah,  publikasi  aktivitas  antiinflamasi  infusa  bunga  Mirabilis jalapa  L.  masih  terbatas.  Hal  ini  mendorong  kami  untuk  mengevaluasi penggunaan  tradisional  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  sebagai  antiinflamasi secara in vitro.

## BAHAN DAN METODE
Ekstraksi bunga Mirabilis jalapa L.
Sampel  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  berwarna  putih  diperoleh  dari Kabupaten  Lombok  Timur  dan  dideterminasi  di  Laboratorium  Biologi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Mataram. Sampel  dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan.  Sejumlah  60  gram simplisia  diinfundasi  (direbus)  dengan  600  mL  akuades  hingga  diperoleh infusa bunga Mirabilis jalapa L.

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  dilakukan  dengan metode  tabung  yang  meliputi  uji  alkaloid,  flavonoid,  tannin,  saponin, steroid  dan  triterpenoid  (Mukherjee,  2019;  Novitasari,  2015;  Raaman, 2006).
Penyiapan sampel uji darah dan suspensi sel darah merah 10% v/v
Sampel  darah  vena  diperoleh  dari  subyek  manusia  sejumlah  6  mL  dan ditampung  dalam  tabung  EDTA  (Vaculab).  Subyek  dalam  kondisi  sehat, tidak memiliki riwayat penyakit perdarahan dan tidak mengonsumsi AINS selama  2  minggu  sebelum  percobaan.  Sampel  darah  disentrifugasi  (3000 rpm,  10  menit)  dan  dicuci  dengan  normal  salin  (MJB  Pharma)  sampai cairan supernatan jernih (Leelaprakash & Dass, 2011). Sejumlah 1 mL sel darah  merah  ditambahkan  dengan  isosalin  hingga  volumenya  10  mL kemudian dihomogenkan.

## Uji aktivitas antiinflamasi
Uji  aktivitas  antiinflamasi  dilakukan  dengan  induksi  hipotonisitas  dan induksi  panas  yang  mengikuti  metode  oleh  Leelaprakash  &  Dass  (2011) yang  dimodifikasi.  Kelompok  uji  terdiri  dari  lima  kelompok  perlakuan yaitu  kelompok  kontrol  positif,  kelompok  kontrol  negatif,  kelompok dengan perlakuan infusa 2,5%; 5% dan 10% b/v.
Pada induksi hipotonisitas, masing-masing kelompok terdiri dari campuran 0,5  mL  suspensi  sel  darah  merah,  0,5  mL  infusa  (larutan  natrium diklofenak (Aarti Drugs Limited) 0,01% b/v pada kontrol positif, akuades pada  kontrol  negatif),  1  mL  dapar  fosfat  dan  2  mL  larutan  hiposalin. Campuran  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  30  menit.  Campuran kemudian  disentrifugasi  pada  3000  rpm  selama  10  menit,  supernatan dipisahkan  dan  dibaca  absorbansinya  pada  panjang  gelombang  560  nm menggunakan  spektrofotometer  ( ). Thermo Scientific™ GENESYS  20
Persentase  proteksi  hemolisis  sel  darah  merah  dari  masing-masing kelompok  dihitung  menggunakan  persamaan  (i)  (Leelaprakash  &  Dass, 2011).
% proteksi hemolisis = 100 – [(  ) x 100] ……………..….. Persamaan (i) Keterangan : A1  : Absorbansi larutan kontrol negatif A2  : Absorbansi larutan uji / standar
Pada induksi panas, masing-masing kelompok terdiri dari campuran 1 mL suspensi  sel  darah  merah,  1  mL  infusa  (larutan  aspirin  (FLUKA Analytical) 0,01% b/v pada kontrol positif, akuades pada kontrol negatif). Campuran  diinkubasi  dalam  penangas  air  (WINA  Instrumen)  pada  suhu 56°C selama 30 menit. Campuran kemudian disentrifugasi pada 2500 rpm selama 5 menit, supernatan dipisahkan dan dibaca absorbansinya pada 560 nm ( ). Persentase inhibisi hemolisis sel
Thermo Scientific™ GENESYS 20
darah  merah  dari  masing-masing  kelompok  dihitung  menggunakan persamaan (ii) (Umeti et al., 2019). % inhibisi hemolisis = ( ) x 100 ………...………..….. Persamaan (ii) Keterangan : A1  : Absorbansi larutan kontrol negatif A2  : Absorbansi larutan uji / standar

## Analisis data
Hasil diekspresikan sebagai rerata absorbansi ± standar deviasi (SD). Data semua  kelompok  perlakuan  dianalisis  statistik  nonparametrik  dengan  uji Kruskal-Wallis  yang  kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  Mann-Whitney. Hasil uji dianggap berbeda signifikan apabila p≤0,05 (SPSS for Windows versi 25, IBM).

## HASIL
Ekstraksi dan skrining fitokimia infusa bunga Mirabilis jalapa L.
Simplisia  bunga  Mirabilis jalapa  L  yang  dihasilkan  berwarna  kecoklatan. Proses  infundasi  menghasilkan  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L. konsentrasi  10%.  Secara  organoleptis  Mirabilis  jalapa  L.  berupa  ekstrak cair,  berbau  aromatik,  berwarna  cokelat  dan  terasa  pahit.  Senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam  infusa bunga  Mirabilis  jalapa L. yaitu senyawa flavonoid (Gambar 1), tannin (Gambar 2), dan terpenoid (Gambar 3).
Gambar  1.  Hasil  uji  senyawa  flavonoid  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna jingga pada campuran sampel uji (tabung kanan)
Gambar  2.  Hasil  uji  senyawa  tanin  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna  hitam kehijauan pada campuran sampel uji (tabung kiri)
Gambar  3.  Hasil  uji  senyawa  terpenoid  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  lapisan cokelat diantara dua pelarut (tabung kanan)

## Uji aktivitas antiinflamasi
Aktivitas  antiinflamasi  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  dilihat  dari persentase  proteksi  hemolisis  sel  darah  merah  terhadap  induksi hipotonisitas  dan  persentase  inhibisi  hemolisis  sel  darah  merah  terhadap induksi  panas.  Nilai  absorbansi  kelompok  kontrol  negatif  pada  kedua model  induksi  memiliki  nilai  yang  paling  besar  dan  menunjukkan  hasil yang  berbeda  signifikan  jika  dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol positif  dan  kelompok  perlakuan  (Tabel  1  dan  Tabel  2).  Hal  ini membuktikan  bahwa  induksi  hipotonisitas  dan  induksi  panas  mampu menyebabkan lisis pada sel darah merah sehingga hemogblobin terlepas ke larutan uji.
Nilai  persentase  proteksi  hemolisis  dan  persentase  inhibisi  hemolisis menunjukkan  kemampuan  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  dan  kontrol positif  untuk  mencegah  hemolisis  yang  disebabkan  oleh  induksi hipotonisitas  dan  induksi  panas.  Kemampuan  infusa  bunga  Mirabilis jalapa L. dalam  menghambat hemolisis sel darah merah  berbanding lurus dengan peningkatan konsentrasi infusa bunga Mirabilis jalapa L.
Tabel  1.  Nilai  Absorbansi  Dan  Persentase  Proteksi  Hemolisis  Sel  Darah  Merah
Dengan Induksi Hipotonisitas Kelompok Perlakuan Absorbansi ± SD % Proteksi Hemolisis Kontrol Positif 0,014 ± 0,001 97,70 Kontrol Negatif 0,611 ± 0,172 0 IBMJ 10% 0,003 ± 0,065* 99,50 IBMJ 5% 0,034 ± 0,008** 94,43 IBMJ 2,5% 0,406 ± 0,007 33,55 Keterangan:   *p>0,05 dibandingkan dengan kontrol positif **p>0,05 dibandingkan dengan IBMJ 10% Tabel 2. Nilai Absorbansi Dan Persentase Inhibisi Hemolisis Sel Darah Merah Dengan Induksi Panas Kelompok Perlakuan Absorbansi ± SD % Inhibisi Hemolisis Kontrol Positif 0,014 ± 0,002 98,08 Kontrol Negatif 0,730 ± 0,008* 0 IBMJ 10% 0,363 ± 0,008* 50,27 IBMJ 5% 0,438 ± 0,007* 40 IBMJ 2,5% 0,596 ± 0,031* 18,35
Keterangan: *p≤0,05 dibandingkan dengan kontrol positif

## PEMBAHASAN
Hasil  skrining  fitokimia  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  menunjukkan hasil positif pada uji flavonoid, tanin dan terpenoid. Adapun hasil  pada uji steroid  menunjukkan  hasil  negatif  dan  pada  uji  alkaloid  dua  dari  tiga pereaksi tidak terbentuk endapan, endapan hanya terbentuk pada uji dengan pereaksi  wagner  sehingga  disimpulkan  negatif.  Hasil  tersebut  berbeda dengan  penelitian  Kalaivani  dan  Prasanna  (2016)  yang  menunjukkan  hasil positif  untuk  alkaloid  dan  steroid.  Hal  ini  dapat  dipengaruhi  oleh  metode ekstraksi,  jenis  pelarut,  dan  faktor  lingkungan  tempat  tumbuh  tanaman. Metode  ekstraksi  dengan  cara  panas  dapat  mempengaruhi  senyawa  yang bersifat  termolabil  (Julianto,  2019).  Jenis  pelarut  akan  menentukan kelarutan senyawa dalam pelarut, suatu senyawa akan terlarut pada pelarut dengan  kepolaran  yang  sama  (Verdiana  et  al.,  2018).  Faktor  lingkungan tempat  tumbuh  seperti  suhu,  intensitas  cahaya  dan  tinggi  tempat  tumbuh akan mempengaruhi biosintesis metabolit tertentu (Ghorbanpour dan Varma, 2017).
Pada  penelitian  Kalaivani  dan  Prasanna  (2016)  ekstraksi  dilakukan  dengan cara  dingin  yaitu  maserasi  dengan  pelarut  akuades,  sedangkan  pada penelitian  ini  menggunakan  cara  panas  yaitu  infundasi.  Selain  itu,  pada penelitian Kalaivani dan Prasanna (2016), warna bunga Mirabilis jalapa L. yang  digunakan  juga  tidak  dipaparkan  secara  spesifik.  Sampel  bunga
Mirabilis  jalapa  L.  pada  penelitian  ini  diperoleh  pada  tempat  dengan ketinggian  sekitar  111-482  mdpl,  sedangkan pada penelitian  Kalaivani  dan Prasanna (2016) sampel diperoleh pada tempat dengan ketinggian sekitar 3 mdpl.  Menurut  Tarakanita  et  al.,  (2020),  pada  tempat  tumbuh  tinggi  dan sedang  keberadaan  alkaloid  lemah, sedangkan  pada  tempat  tumbuh  rendah keberadaan alkaloid kuat. Adapun menurut Ulfa et al. (2017), pada tempat tumbuh  tinggi  keberadaan  steroid  kuat,  sedangkan  pada  tempat  tumbuh rendah keberadaan steroid lemah.
Uji antiinflamasi pada penelitian ini dilakukan secara in  vitro yaitu dengan metode  stabilisasi  membran  sel  darah  merah.  Membran  sel  darah  merah merupakan  analog  membran  lisosom,  sehingga  stabilisasi  membran  sel darah  merah  dapat  menggambarkan  stabilisasi  pada  membran  lisosom. Stabilisasi  membran  lisosom  penting  dalam  membatasi  respon  inflamasi dengan  mencegah  pelepasan  kandungan  lisosom  seperti  enzim  protease yang  menyebabkan  peradangan  pada  jaringan  dan  cairan  ekstraseluler (Kumar et al., 2012). Kerusakan pada membran lisosom juga akan memicu pelepasan  fosfolipase  A2  yang  menyebabkan  hidrolisis  fosfolipid  untuk memproduksi mediator inflamasi. Oleh karena itu, senyawa dengan aktivitas penstabil  membran  dapat  memberikan  perlindungan  secara  signifikan  pada membran  sel  sehingga  dapat  mencegah  pelepasan  zat-zat  penyebab  radang (Karunanithi et al, 2012; Simonaro, 2016).
Mekanisme  stabilisasi  membran  sel  darah  merah  suatu  senyawa  dapat dilihat  dari  kemampuannya  untuk  mencegah  pelepasan  hemoglobin  (Hb) dari  sel  darah  merah  ketika  diberikan  stres  hipotonik  dan  stres  oksidatif, salah  satu  penyebab  stres  oksidatif  adalah  induksi  panas  (Hillman  et  al., 2011).  Hemoglobin  pada  larutan  uji  diukur  nilai  absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 560 nm, karena  struktur  hemoglobin  memiliki  kromofor  yang  dapat  terbaca  pada panjang gelombang tersebut.
Pada penelitian ini, penetapan konsentrasi uji infusa sebesar 2,5%, 5% dan 10%  b/v merupakan  modifikasi dari penggunaan tradisional rebusan bunga Mirabilis  jalapa  L.  di  masyarakat  untuk  pengobatan  radang  sendi,  yaitu konsentrasi  5%  b/v.  Kontrol  positif  pada  penelitian  ini  yaitu  natrium diklofenak  pada  induksi  hipotonisitas  dan  aspirin  pada  induksi  panas. Natrium diklofenak 0,01% b/v memiliki kemampuan penghambatan lisis sel darah  merah  sekitar  51-92,13%  pada  induksi  hipotonisitas,  sedangkan aspirin  0,01%  b/v  sekitar  53-71%  pada  induksi  panas  (Leelaprakash  dan Dass, 2011; Lutfiana, 2013; Umeti, 2019; Rani et al., 2014).
Berdasarkan  hasil  uji,  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  menunjukkan adanya aktivitas antiinflamasi berdasarkan persentase proteksi hemolisis sel darah  merah  baik  pada  induksi  larutan  hipotonisitas  maupun  pada  induksi panas.  Natrium  diklofenak  yang  digunakan  sebagai  kontrol  positif  pada induksi hipotonisitas merupakan obat AINS non selektif yang menghambat enzim  COX-1  dan  COX-2,  namun  dengan  selektivitas  lebih  tinggi  pada COX-2  (Altman  et  al.,  2015).  Persentase  proteksi  hemolisis  natrium diklofenak tidak berbeda signifikan dengan infusa bunga Mirabilis jalapa L. 10%  b/v  (p>0.05),  sehingga  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  konsentrasi 10%  b/v  berpotensi  dalam  menghambat  enzim  COX.  Pada  pengobatan radang  sendi,  pilihan  obat  antiinflamasi  yang  umum  digunakan  yaitu  obat golongan AINS dan kortikosteroid (Kalim, et al., 2019). Hal ini mendukung
saintifikasi  penggunaan  empiris  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  sebagai alternatif pengobatan radang sendi.
Data  persentase  proteksi  hemolisis  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L. terhadap induksi  panas menunjukkan nilai  yang lebih rendah dibandingkan dengan  induksi  hipotonisitas. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pengaruh pemanasan suhu 56ºC lebih siginifikan terhadap pecahnya sel darah merah dibandingkan  dengan  pengaruh  tonisitas,  sehingga  nilai  absorbansi hemoglobin yang terbaca akan lebih besar dan persentase inhibisi hemolisis yang didapatkan akan lebih rendah.
Proses  pemanasan  juga  dapat  mempengaruhi  senyawa  metabolit  sekunder pada  infusa.  Infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  memiliki  kandungan flavonoid  yang  diketahui  memiliki  aktivitas  antiinflamasi  sebagai penghambat enzim COX (Ramadhani dan Sumiwi, 2016). Menurut Chaaban, et  al.  (2016),  suhu  berpengaruh  terhadap  stabilitas  senyawa  flavonoid, semakin  tinggi  suhu  maka  degradasi  senyawa  flavonoid  akan  meningkat. Degradasi  senyawa flavonoid  juga  dipengaruhi  oleh  strukturnya,  flavonoid terglikolisasi  lebih  resisten  terhadap  panas  dibandingkan  dengan  flavonoid aglikon.  Berdasarkan  hal  tersebut  dapat  disimpulkan  kemampuan  proteksi hemolisis  sel  darah  merah  dari  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  menurun pada induksi panas.

## SIMPULAN
Infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  dengan  dosis  2,5%,  5%  dan  10%  b/v memiliki  aktivitas  antiinflamasi  yang  dilihat  dari  persentase  proteksi hemolisis sel darah merah baik pada induksi larutan hipotonis dan induksi panas.  Konsentrasi  optimum  infusa  bunga  Mirabilis  jalapa  L.  dengan persentase proteksi hemolisis terbesar terdapat pada konsentrasi 10% b/v.

## REFERENSI
Altman,  R.,  Bosch,  B.,  Brune,  K.,  Patrignani,  P.,  &  Young,  C.,  2015.  Advances  in  NSAID development:  Evolution  of  diclofenac  products  using  pharmaceutical  technology. Drugs, 75: 859-877. https://doi.org/10.1007/s40265-015-0392-z
Brophy,  K.M.,  Ferguson,  H.S.,  Webber,  K.S.,  Abrams,  A.C.  &  Lammon,  C.B.,  2010.
Clinical  Drug  Therapy  for  Canadian  Practice,  2 nd Ed,  Philadelphia,  Lippincott Williams and Wilkins, 110.
Chaaban, H., Ioannou, I., Chebil, L., Slimane, M., Gérardin, C., Paris, C., & Ghoul, M., 2017. Effect  of  heat  processing  on  thermal  stability  and  antioxidant  activity  of  six flavonoids.  Journal  of  Food  Processing  and  Preservation,  41(5):  1-12. https://doi.org/10.1111/jfpp.13203
Cross,  S.S.,  2013.  Underwood’s  Pathology  A  Clinical  Approach,  9 th Ed,  Philadelphia,
Elsevier, 22.
Fajriani,  2008.  Pemberian  obat-obatan  Antiinflamasi  Nonsteroid  (AINS)  pada  anak.
Indonesian Journal of Dentistry, 15(3): 200-204. https://doi.org/10.14693/jdi.v15i3.27
Ghorbanpour,  M.  &  Varma  A.,  2017.  Medical  Plant  and  Environmental  Challenges.
Switzerland: Springer, hal. 269. https://doi.org/10.1007/978-3-319-68717-9
Grosser, T., Smyth, E.M., & FitzGerald G.A., 2017, Pharmacotherapy of Inflammation, fever, pain and gout. Dalam: Brunton, L.L., Randa, H., dan Bjorn, C.K., (Eds.). Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basic of Therapeutics, 13 th Ed, New York, The McGraw Hill Education, 687-94.
Hidayati,  N.A.,  Listyawati,  S.,  &  Setyawan,  A.D.,  2008,  Kandungan  kimia  dan  uji antiinflamasi ekstrak etanol Lantana camara L. pada tikus putih (Rattus norvegicus L.) jantan, Bioteknologi, 5(1): 10-17. https://doi.org/10.13057/biotek/c050102 Hillman,  A.R.,  Vince,  R.V.,  Taylor,  L.,  McNaughton,  L.,  Mitchell,  N.,  &  Siegler,  J.,  2011.
Exercise-induced dehydration with and without environmental heat stress results in increased  oxidative  stress.  Applied  Physiology,  Nutrition,  and  Metabolism,  36(5): 698-706. https://doi.org/10.1139/h11-080
Ikawati, Z. 2006, Farmakologi Molekuler: Target Aksi Obat dan Mekanisme Molekulernya, Yogyakarta, Gadjah Mada University Press, 131.
Julianto,  T.  S.,  2019.  Fitokimia:  Tinjauan  Metabolit  Sekunder  dan  Skrining  Fitokimia. Yogyakarta: Universitas Islam Indonesia, hal. 20
Kalaivani,  K.,  &  Prasanna,  G.,  2016.  HPTLC  fingerprint  profile  and  evaluation  of  in  vitro antimicrobial  activity  of  Mirabilis  jalapa  L.  flowers.  International  Journal  of Current Microbiology and Applied Sciences, 5(6): 642-54. https://doi.org/10.20546/ijcmas.2016.506.070 Kalim, H., Wahono, C. S., Rahman, P. A., Najikhah, N. R., Santoso, A. A., Winoto, E. S., & Jayanto, G. D., 2019. Reumatologi Klinik. Malang: UB Press, hal. 28.
Kanakamani,  S.  &  Saraswati,  U.,  &  Malathi,  M.,  2018,  In  vitro  screening  of  anti- inflammatory  potential  of  Mirabilis  jalapa  Linn  flowers  and  Abelmoschus esculentus leaves, International Journal of Current Research, 10(3): 67257-67260. Karunanithi,  M.,  Raj,  C.  D.,  Jegadeesan,  M.,  &  Kavimani,  S.,  2012,  Comparative  GCMS analysis  and  in  vitro  screening  of  four  species  of  Mucuna,  Asian  Journal  of Pharmaceutical and Clinical Research, 5(4): 239-243.
Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia.  2013,  Riset  Kesehatan  Dasar  2013,  Badan Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan  Kementerian  Kesehatan  Republik Indonesia.
Kumar,  V.,  Abbas,  A.K.,  Aster,  J.C.,  &  Perkins,  J.A.,  2017,  Robbins  Basic  Pathology,  10 th Ed, Philadelphia, Elsevier, 57.
Kumar, V., Bhat, Z. A., Kumar, D., Khan, N. A., & Chashoo, I. A., 2012, Evaluation of anti- inflammatory  potential  of  leaf  extracts  of  Skimmia  anquetilia,  Asian  Pacific Journal  of  Tropical  Biomedicine,  2(8):  627-630.  https://doi.org/10.1016/S2221- 1691(12)60109-9
Leelaprakash, G., &Dass, S.M., 2011, In vitro antiinflamatory activity of methanol extract of Enicostemma  axillare,  International  Journal  of  Drug  Development  and  Research, 3(3): 189-196.
Lutfiana.  2013.  Uji  aktivitas  Antiinflamasi  Ekstrak  Daun  Kelor  (Moringa  oleifera  Lam.) dengan  Metode  Stabilisasi  Membran  Sel  Darah  Merah  Secara  In  Vitro.  Skripsi. Program  Studi  Farmasi.  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Islam  Negeri  Syarif Hidayatullah Jakarta.
Mahatma,  A.B.  &  Mulyono,  N.,  2005,  Pengembangan  Bahan  Alam  Dalam  Industri  Obat Beserta Permasalahannya. Simposium Nasional: Pameran Produk Bahan Alam, 41. Mitre-Aguilar, I.B., Cabrera-Quintero, A.J., & Zentella-Dehesa, A., 2015. Genomic and non-
genomic  effects  of  glucocorticoids:  implications  for  breast  cancer.  International
Journal of Clinical & Experimental Pathology, 8(1): 1-10.
Mukherjee,  P.  K.,  2019,  Quality  Control  and  Evaluation  of  Herbal  Drugs:  Evaluating Natural Product and Medicine, Netherlands, Elsevier, 245. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-813374-3.00016-8 Mycek,  M.J.,  Harvey,  R.A.,  &  Champe,  P.C.  eds.,  2001,  Farmakologi  Ulasan  Bergambar.
Edisi ke-2. Diterjemahkan oleh Agoes, A., Jakarta, Widya Medika, 275.
Novitasari,  I.W.,  2015,  Uji  aktivitas  antibakteri  infusa  daun  mangga  bacang  (Mangifera foetida  L.)  terhadap  pertumbuhan  Salmonella  typhi,  Jurnal  Mahasiswa  Fakultas Kedokteran Untan, 3(1).
Panettieri, R.A., Schaafsma, D., Amrani, Y., Koziol-White, C., Ostrom, R., & Tliba, O., 2019.
Non-genomic  effects  of  glucocorticoids:  An  updated  view.  Trends  in Pharmacological Sciences, 40(1): 38-49. https://doi.org/10.1016/j.tips.2018.11.002 Raaman,  N.,  2006,  Phytochemical  Techniques,  New  Delhi,  New  India  Publishing  Agency, 19-22.
Ramadhani,  N.,  &Sumiwi,  S.A.,  2016.  Aktivitas  antiinflamasi  berbagai  tanaman  diduga berasal dari flavonoid. Farmaka, 14(2): 111-23.
Rani, A.A., Punitha, S.M.J., & Rema, M., 2014. Anti-inflammatory activity of flower extract of  Cassia  auriculata  –  an  in-vitro  study.  International  Research  Journal  of
Pharmaceutical and Applied Sciences, 4(1): 57-60.
Simonaro,  C. M., 2016,  Lysosomes,  lysosomal  storage  diseases,  and  inflammation,  Journal of Inborn Errors
of Metabolism and Screening, 4:1-8. https://doi.org/10.1177/2326409816650465
Sumithra,  P.,  Varalakshmi,  S.,  &  Devasena,  K.,  2012,  Phytochemical  analysis  and antibacterial activity of Mirabilis  jalapa flower against  gastrointestinal pathogens, International Journal of Science and Research, 3(12):1167-1170.
Tarakanita,  D.  N.  S.,  Satriadi,  T.,  &  Jauhari,  A.,  2019.  Potensi  keberadaan  fitokimia kamalaka (Phyllanthus emblica) berdasarkan perbedaan ketinggian tempat tumbuh. Jurnal Sylva Scienteae, 2(4): 645-54.
Tripathi,  K.D.,  2013,  Essentials  of  Medical  Pharmacology,  7 th Ed,  New  Delhi,  Jaypee Brothers Medical Pubhlishers (P) Ltd, 192-193.
Ulfa,  M.,  Suhartono  &  Setiawan,  E.,  2017.  Kandungan  alkaloid  dan  steroid  pada  tanaman kolesom  (Talinum  triangulare  (Jacq.)  Willd.)  akibat  perbedaan  daerah  asal tanaman. Agrovigor: Jurnal Agroekoteknologi, 10(1): 56-63.
Umeti,  C.C.,  Funmilayo,  D.O.,  Efere,  M.O.,  God’swill,  N.A.  &  Edward,  B.E.,  2019.  Anti- inflamatory  properties  and  gas  chromatography-mass  spectrometry  analysis  of ethyl  acetat  fraction  of  Crateva  adansonii  DC  leaves.  American  Journal  of Physiology, Biochemistry and Pharmacology, 9(1): 9-20. https://doi.org/10.5455/ajpbp.20181226090820 Verdiana, M., Widarta, I. W. R. & Permana, I. D. G. M., 2018. Pengaruh jenis pelarut pada ekstraksi  menggunakan  gelombang  ultrasonik  terhadap  aktivitas  antioksidan ekstrak  kulit  buah  lemon  (Citrus  limon  (Linn.)  Burm  F.).  Jurnal  Ilmu  dan Teknologi Pangan, 7(4): 213-22. https://doi.org/10.24843/itepa.2018.v07.i04.p08
Warisno,  S.  &  Dahana,  K.,  2012,  Kulit  Manggis  Hidup  Sehat  Berkat  Sang  Ratu  Yang Berkhasiat, Jakarta, Gramedia Pustaka Utama, 27.
Wijayakusuma,  H.,  2000,  Ensiklopedia  Milenium:  Tumbuhan  Berkhasiat  Obat  Indonesia, Jilid I, Jakarta, Gema Insani, 92.
Woodfork,  K.A  &  Dyke,  K.V.,  2004,  Antiinflammatory  and  Antidiuretic  Drugs,  Dalam  : Craig, C.R. dan Stizel, R.E., Modern Pharmacology With Clinical Applications, 6 th Ed., Philadelphia, Lippincott William & Wilkins, 430.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  kami  sampaikan  kepada  Program  Studi  Farmasi Fakultas  Kedokteran  UNRAM  yang  telah  memfasilitasi  sarana  prasarana penelitian ini.

## KONTRIBUSI PENULIS
HI  berperan  dalam  mengumpulkan  data,  membuat  naskah  dan  analisis statistik.  HI,  ISP  dan  NIH  berkontribusi  dalam  merancang  penelitian, interpretasi data dan menyetujui versi akhir naskah.
Akses Terbuka Artikel ini dilisensikan di bawah Creative Commons  Lisensi  Internasional  Attribution  4.0,  yang  memungkinkan penggunaan, berbagi, adaptasi, distribusi, dan reproduksi dalam media atau format apa pun, selama Anda memberikan kredit yang sesuai kepada penulis asli  dan sumbernya,  memberikan  tautan  ke lisensi  Creative  Commons,  dan menerangkan  jika  perubahan  telah  dilakukan.  Gambar  atau  materi  pihak ketiga lainnya  dalam  artikel ini termasuk  dalam  lisensi  Creative Commons artikel,  kecuali  dinyatakan  sebaliknya  dalam  batas  kredit  untuk  materi tersebut. Jika materi tidak termasuk dalam lisensi Creative Commons artikel dan  penggunaan  yang  Anda  maksudkan  tidak  diizinkan  oleh  peraturan perundang-undangan atau melebihi penggunaan yang diizinkan, Anda harus mendapatkan izin langsung dari pemegang hak cipta. Untuk melihat salinan lisensi ini, kunjungi https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/deed.id .
.
© The Author(s) 2021