INAKTIVASI ENZIM PROTEASE PADA PUREE EDAMAME ( Glycine max )

## MENGGUNAKAN TEKNIK PULSED ELECTRIC FIELD (PEF)
Inactivation of Edamame (Glycine max) Puree’s Protease Using Pulsed Electric Field (PEF) Technique
Mila Damanik Ariyantini 1) , Mukhammad Fauzi 1) , Jayus Jayus 1) *
1) Jurusan Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Jember Jalan Kalimantan 37, Kampus Tegal Boto Jember 68121
* E-mail: jayus.ftp@unej.ac.id

## ABSTRACT
Edamame  (Glycine  max)  is  easily  damaged  due  to  suspected  enzyme  content  and microbial  activity,  so  the  ingredients  must  be  consumed  directly  after  blanching  process. Selling value of rejected edamame is very low while the nutritional content is still quite good. To  increase  the  edamame  selling  value,  an  alternative  processing  is  needed  which  could maintain the edamame shelf life. The alternative way was creating edamame puree which had a longer shelf life without  damaging the characteristics of edamame puree. Preservation of edamame puree was done by enzyme inactivation using Pulsed Electric Field (PEF) method. The  results  showed  that  PEF  treatment  could  inactivate  protease  enzyme  up  to  88,5%, microbe  80-89%,  antioxidant  activity  44,5%  and  color  2,43%.  The  activity  of  edamame protease  enzymewas  significantly  decreased  at  45  kV  voltage  treatment;  30  seconds  (0.38 mMol/minutes).  Total microbial in puree edamame significantly decreased at  40 kV voltage treatment; 10 second (2,849 log Cfu / ml) and 40 kV voltage  control; 20 second; 40 kV; 30 second;  45  kV;  10  second;  45  kV;  20  second;  And  45  kV;  30  second  (not  growing). Antioxidant activityof edamame puree after PEF treatment was significantly decreased at 45 kV;  30  seconds  (5.43%).  In  addition,  treatment  of  PEF  also  maintains  the  hue  angle  puree edamame color remains in a yellowish greenish marked by a fixed value of susceptible 126 – 162.  The  value  of  hue  angle  edamame  puree  before  and  after  PEF  treatment  ranged  from 153.76 - 150.02.
Keywords : edamame, puree edamame, protease enzyme, PEF technique

## PENDAHULUAN
Edamame  merupakan  kedelai  jenis sayur  ( soybean  vegetable )  yang termasuk spesies Glycine max dan memiliki produktivitas  tinggi  dimana  satu  hektar bisa  menghasilkan  ±10  –  12  ton.  Hal  ini jauh  lebih  tinggi  diatas  rata-rata  jenis kedelai  lainnya  yang  berkisar  1,5  ton  –  3 ton  per  hektar  (Setkab,  2014).  Khusus Kabupaten  Jember,  produksi  kedelai edamame  tahun  2013  tercatat  27.732  ton dengan  kebutuhan  konsumsi  25.473  ton sehingga  mengalami surplus 2.259  ton (Setkab, 2014).
Edamame  memiliki  nilai  gizi  yang cukup tinggi  yakni 582  Kkal, protein 11,4 g; karbohidrat 7,4 g;  lemak 6,6 g;  vitamin A 100 mg; B1 0,27 mg; B2 0,14 mg; B3 1 mg;  dan  vitamin  C  27%;  serta  mineral- mineral seperti fosfor 140 mg; kalsium 70 mg;  besi  1,7  mg;  dan  kalium  140  mg dalam  100  g  edamame  (Johnson, et  al . 1999,  Nguyen,  2001)  dan mengandung sembilan  asam  amino  esensial  yang diperlukan  tubuh,  tidak  mengandung kolesterol  dan  sedikit  lemak  jenuh  serta kaya  serat,  vitamin  C  dan  B,  kalsium,  zat besi  atau  magnesium,  dan  asam  folat (Setkab, 2014).
Pada umumnya
edamame dikonsumsi secara langsung setelah proses blanching ,  karena  edamame  memiliki umur  simpan  yang  rendah.  Oleh  karena itu,  perlu  adanya  diversifikasi  e damame menjadi puree (bubur buah) yang merupakan  produk  setengah  jadi  dari edamame  sebagai  bahan  baku  pembuatan sari  edamame  atau  nektar,  produk  roti, susu, permen, selai dan  jeli (Broto, 2003). Puree edamame memiliki sifat perishable , sehingga  memiliki  umur  simpan  yang rendah. Hal  ini  dapat  diakibatkan  karena adanya  reaksi  enzim  yang  terkandung  di dalam puree edamame  secara  berlebi ha n, selain kontaminasi mikroba.
Enzim yang  terkandung  dalam edamane diantaranya urease, lipoksigenase,  peroksidase  dan  protease yang  berpotensi  merusak  dan  mengurangi mutu  dari h asil  ola han  edamame.Secara umum  proses  pengawetan  melibatkan perlakuan  panas  karena  sangat  efektif dalam  mempertahankan  kualitas  umur simpan.  Kelemahan  proses  pemanasan pada  pengawetan puree edamame  akan berakibat  pada  penurunan  kandungan nutrisi  edamame,  terutama  komponen- komponen yang tidak tahan panas.
PEF  merupakan  salah  satu  teknik pengolahan  pangan non-termal dengan menggunakan  kejutan  listrik  intensitas tinggi  yang  diaplikasikan  pada  bahan pangan berbentuk cair dengan tujuan untuk memperkecil  kerusakan  yang  disebabkan oleh  pemanasan.  Keuntungan  dari  teknik ini  yaitu  dapat  mempertahankan  warna, tekstur,  dan  aroma original serta  nilai nutrisi  pada  saat  proses  pengawetan (Quass, 1997).

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  untuk pembuatan puree edamame meliputi rangkaian alat Pulsed Electric Field (PEF) dan  blender  (Philips). Glassware (Pyrex), magnetic  stirrer (Medline  MS3OOHS, Jerman),  Penangas  (Medline  MS3OOHS,
Jerman), shaker water bath (Model Orbital Shaking  Incubator),  neraca  analitik  (ES 2200C  dan  ES  225SM-DR,  Swiss),  pH meter (F-51), mikropipet, spektrofotometer (Spectrophotometer model U-2900UV type VIS 2JI-0004, Jepang), colour reader (CR-10 Minolta) , lemari pendingin (Sharp), sentrifuse (Centrifudge  Floor Standing  type  CR21GIII,  Jepang)  dan tabung setrifuse .
Bahan yang digunakan dalam pembuatan puree edamame  adalah  polong kedelai  edamame  berasal  dari  PT.  Mitra Tani 27  Kabupaten Jember, etanol 90%; 1 M  buffer  fosfat  pH  7  (KH 2 PO 4 dan K 2 HPO 4 );  0,6%  larutan  kasein;  0,4  M tricholoroacetic  acid (TCA);  0,4  M sodium  karbonat  (Na 2 CO 3 );  dan  0,67  N Folin  ciocalteau , reagen DPPH,  etanol 96%.

## Tahapan Penelitian

## Pembuatan Puree Edamame
Kedelai  edamame  dikupas  kulitnya, kemudian  dilakukan  pembersihan  polong dari  kulit  ari  yang  tersisa.  Langkah selanjutnya  adalah  proses  blansing  selama 3 menit menggunakan suhu 82 o C. Selanjutnya adalah perendaman dengan air es  selama  10  detik  kemudian  dilakukan penghalusan selama 8 menit.

## Rancangan Percobaan
Penelitian ini menggunakan 2 faktor. Faktor  I  terdiri  dari  3  level  dan  faktor  II terdiri  dari  3  level.  Faktor  I  merupakan variasi  tegangan  (A)  yaitu  35  kV,  40  kV, dan 45 kV terhadap 100 ml larutan. Faktor kedua  merupakan  variasi  waktu  (B)  yang terdiri dari 3 level yaitu 10 detik, 20 detik, dan 30 detik.

## Metode Analisis
Uji  yang  dilakukan  pada puree edamame meliputi aktivitas enzim protease (Oh et al ., 2016), total pertumbuhan  mikroba  (Arisusanti,  2010), aktivitas  antioksidan  (Nooman et  al. 2008), hue  angle (Hutching,  1999 ) ;  sifat
organoleptik (Meilgard, 1999), dan pengamatan umur simpan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Aktivitas Enzim Protease
Bahan pangan pada dasarnya mengandung  enzim  yang  disebut  dengan enzim  endogenous,  salah  satu  enzim  yang terkandung  dalam  bahan  pangan  adalah enzim  protease.  Setelah  mengalami  pasca panen  enzim  tersebut  masih  aktif  dan bermetabolisme. Proses ini tidak diinginkan karena dapat mengurangi  mutu suatu  produk  (Chandrasekran,  2016). Aktivitas  tertinggi  yaitu  pada  perlakuan kontrol  16,49  mMol/menit  dan  terendah pada  perlakuan  A 3 B 3 1,89  mMol/menit. Aktivitas  enzim  protease  pada puree edamame dapat dilihat pada Gambar 1 .
Gambar1. Aktivitas  enzim  protease puree edamame dengan variasi tegangan dan waktu PEF
Gambar  1 menunjukkan  inaktivasi enzim  protease  ini  disebabkan  karena adanya  peningkatan  aktivitas  metabolisme yang  terlalu  tinggi  sehingga  menggangu kerja dan fungsi fisiologis enzim. Penurunan  aktivitas  akibat  kejutan  listrik tegangan  tinggi  diduga  dipengaruhi  oleh kerusakan  struktur  sel,  seperti  rusaknya membran  sitoplasma  sel. Meskipun  secara alamiah  membran  sitoplasma  mampu disintesa  kembali  tetapi  dengan  tegangan tinggi,  kerusakan  berbentuk  lubang  pada membran  luar  dari  sel  tidak  mampu diperbaiki  lagi,  sehingga  memungkinkan terjadinya mobilisasi senyawa makromolekul dari sel yang menyebabkan
kehilangan aktivitas  (Alberts et  al ., 1994). Proses kejutan listrik diduga menyebabkan terjadinya  ionisasi  beberapa  garam-garam seperti  Mg 2+ dan  Ca 2+ yang  terikat  pada dinding  sel  ataupun  yang  membentuk bufer  phosphat  dimana  tingkat  sensitivitas terhadap kejutan listrik lebih besarmenurut Speer (1998).

## Total Pertumbuhan Mikroba
Pertumbuhan  bakteri  patogen  di dalam bahan makanan merupakan hal yang perlu  diperhatikan  sebab  beberapa  bakteri patogen  mempunyai  kaitan  erat  dengan keracunan  makanan.  Bakteri  ini  kerap dijumpai dan dapat bertahan selama proses pengolahan. Hasil dari penelitian mengenai  pertumbuhan  mikroba  pada puree edamame  dalam  media  PCA  dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1 menunjukkan  jumlah  total mikroba  tertinggi  yaitu  pada  perlakuan kontrol  (3,447  log  Cfu/ml)  dan  terendah pada  perlakuan  A 2 B 1 (2,849  log  Cfu/ml), sedangkan  pada  perlakuan  A 2 B 2 hingga A 3 B 3 tidak menunjukkan adanya pertumbuhan.  Inaktivasi  mikroba  yang dilakukan dengan PEF berhubungan dengan ketidakstabilan membran sel secara  elektro-mekanik.  Membran  sel melindungi mikroba dari kondisi lingkungan  sekitar  dengan  cara  bekerja sebagai  dinding  semipermeable, jika membran sel mengalami pemecahan, maka terjadi  pengeluaran  cairan  dari  dalam  sel dan  kehilangan  aktivitas  metabolisme  sel. Ada  dua  teori  yang  menjelaskan  tentang proses  pemecahan  membran  sel  yaitu dielectric  rupture dan electroporation (Sale and Hamilton, 1968 dalam Jeyamkon et al. , 2008).
Pengaliran listrik dengan media yang kaya akan nutrisi atau protein menyebabkan  terjadinya  penurunan  nilai efektivitas  kematian  dari  mikroba  yang terkandung yang ditandai dengan terjadinya koagulasi protein pada elektroda dengan  semakin  lama  kejutan  listrik. Semakin  tinggi  tingkat  koagulasi  akan
16,49 13,25 11,05 10,41 9,92 6,97 5,13 4,15 2,81 1,89 0 5 10 15 20 A kt . E n z im pr o te a se (m m o l/ m en it ) Perlakuan
sebanding  dengan  tingkat  kematian  dari mikroba ( Gould et al ., 1995).
Tabel 1. Total Pertumbuhan Mikroba
Perlakuan Jumlah Mikroba (log Cfu/ml) Kontrol 3,447 A 1 B 1 3,094 A 1 B 2 2,931
A 1 B 3 2,931 A 2 B 1 2,849 A 2 B 2 Tidak tumbuh A 2 B 3 Tidak tumbuh A 3 B 1 Tidak tumbuh A 3 B 2 Tidak tumbuh A 3 B 3
Tidak tumbuh
Keterangan : Kontol tanpa menggunakan perlakuan PEF; A 1 B 1 =  35  kV;  10  detik;  A 1 B 2 =  35  kV;  20 detik;  A 1 B 3 =  35  kV;  30  detik;  A 2 B 1 =  40 kV; 10 detik; A 2 B 2 = 40 kV; 20 detik; A 2 B 3 = 40 kV; 30 detik; A 3 B 1 = 45 kV; 10 detik; A 3 B 2 =  45  kV;  20  detik;  A 1 B 2 =  45  kV;  30 detik.

## Aktivitas Antioksidan
Aktivitas  antioksidan  merupakan kemampuan  senyawa  antioksidan  dalam menangkal  radikal  bebas.  Suatu  senyawa dinyatakan  sebagai  senyawa  antioksidan apabila  memiliki  aktivitas  antioksidan. Isoflavon  merupakan  senyawa  aktif  dari kelompok senyawa flavonoid yang berkontribusi sebagai senyawa antioksidan karena memiliki kemampuan untuk menghambat radikal bebas. Hasil penelitian  aktivitas  antioksidan puree edamame dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar  2. Aktivitas  antiosidan puree edamame dengan  variasi  tegangan  dan  waktu PEF
Gambar 2 menunjukkan nilai tertinggi yaitu aktivitas antioksidan kontrol 9,79%  dan  terendah  pada  perlakuan  A 3 B 3 5,42  %.  Penurunan  aktivitas  antioksidan puree edamame  pasca  perlakuan  PEF, namun masih mampu menghambat radikal bebas  pada  uji  perendaman  DPPH. Penurunan ini diakibatkan karena senyawa isoflavon dalam puree edamame terdegradasi  oleh  adanya  tegangan  tinggi yang diberikan saat perlakuan PEF.
Hal ini diakibatkan karena antioksidan  merupakan  senyawa  yang mudah  rusak  akibat  pengaruh  suhu  dan lingkungan  sekitarnya.  Antioksidan  yang berada  pada  suhu  kamar  akan  mengalami penurunan  kualitas  yang  dikarenakan kondisi  lingkungan  yang  tidak  dapat dikendalikan  seperti  adanya  panas  dan oksigen  sehingga  kemungkinan  terjadinya oksidasi  maupun  degradasi  antioksidan cukup besar (Sudarmadji et al ., 2007).
Warna (Nilai Hue Angle )
Nilai hue puree edamame mengalami  penurunan  pasca  perlakuan PEF,  namun  penurunan  yang  terjadi  tidak terlalu  signifikan  jauh  dari  nilai  standart warna  hijau.  Hasil  penelitian  nilai hue puree edamame  yang  diperoleh  dari  tanpa atau  dengan  perlakuan  PEF  terdapat  pada rentan  warna  hijau  kekuningan  yang menunujukkan  warna  dasar  bahan  yaitu edamame,  nilai hue dapat  dilihat  pada Gambar 3.
Gambar  3 .  Nilai hue  angle  puree edamame dengan  variasi  tegangan  dan    waktu
PEF
9,79 9,39 9,10 8,60 8,16 7,91 7,33 6,93 6,08 5,43 0 2 4 6 8 10 12 % P en gh a m b a ta n a n ti o ks ida n Perlakuan 153,76 151,87 151,38 151,37 150,63 150,40 150,47 150,39 150,25 150,02 148 149 150 151 152 153 154 155 H ue angl e Perlakuan
Gambar 3 menunjukkan hasil pengukuran  nilai hue tertinggi  terdapat pada puree edamame tanpa PEF (153,758) dan  nila  i hue terendah  terdapat  pada perlakuan puree edamame  perlakuan  PEF tegangan 45 kV selama 30 detik (150,023).
Pada  penelitian  ini,  digunakan  perlakuan PEF  dengan  kombinasi  variasi  tegangan dan waktu yang ditempatkan pada chamber yang  dilengkapi  dengan  katoda dan  anoda  sehingga puree edamame mngalami  kontak  langsung  dengan  alat tersebutsehingga diduga kandungan klorofil  dalam  edamame  mulai  terdegrasi, karena  klorofil  terdapat  dalam  bentuk ikatan  kompleks  dengan  protein  yang menstabilkan molekul klorofil dengan cara memberikan  ligan  tambahan.  Tegangan tinggi  yang  diberikan  mengakibatkan protein  terdenaturasi  sehingga  klorofil menjadi  tidak  terlindung  lagi  dan  mudah diserang yang berpengaruh terhadap aktivitas klorofilase (Taylor, 1984).

## Karakteristik selama Penyimpanan
Warna (hue angle)
Nilai hue  angle  puree edamame selama  penyimpanan  dua  minggu,  dapat dilihat  pada Tabel  2 .  Nilai hue tertinggi terdapat  pada puree edamame  perlakuan PEF  tegangan  35  kV  selama  10  detik (148,995)  dan  nilai hue terendah  terdapat pada puree edamame tanpa perlakuan PEF (148,264).
Penurunan  ini  disebabkan  selain klorofil b atau pigmen hijau yang terdapat pada  edamame  mengalami  degradasi akibat terdenaturasinya protein, pergantian atom  magnesium  pada  molekul  klorofil oleh  atom  hidrogen  membentuk  feofitin, atau  pembentukan  klorofilid  oleh  enzim klorofilase dan oksidasi selama penyimpanan.  Hal  ini  juga  diakibatkan karena  karotenoid  dan  xantofil  yang semula tertutup menjadi terbuka pada  saat penyimpanan  dengan  adanya  suhu  dingin, dengan  terbukanya  dua  senyawa  tersebut dapat  memudarkan  pigmen  klorofil  yang menyebabkan semakin lama warna
berubah menjadi kuning kecoklatan akibat pigmen  coklat  dari  ke  dua  senyawa  yang keluar (Clydesdale, 1976).
Tabel 2. Nilai hue angle purre edamame Perlakuan Nilai Hue Angle Minggu ke -0 Minggu ke -1 Minggu ke -2 Kontrol 153.758 150.444 148.264 A 1 B 1 151.87 148.99 148.641 A 1 B 2 151.376 148.622 148.595 A 1 B 3 151.374 148.598 148.542 A 2 B 1 150.631 148.51 148.402 A 2 B 2 150.404 148.422 148.382 A 2 B 3 150.468 148.444 148.37 A 3 B 1 150.393 148.385 148.342 A 3 B 2 150.246 148.37 148.335 A 3 B 3 150.023 148.321 148.305
Keterangan  :  Kontol  tanpa  menggunakan  perlakuan PEF;  A 1 B 1 =  35  kV;  10  detik;  A 1 B 2 = 35  kV;  20  detik;  A 1 B 3 =  35  kV;  30 detik; A 2 B 1 = 40 kV; 10 detik; A 2 B 2 = 40  kV;  20  detik;  A 2 B 3 =  40  kV;  30 detik; A 3 B 1 = 45 kV; 10 detik; A 3 B 2 = 45  kV;  20  detik;  A 1 B 2 =  45  kV;  30 detik.
Berdasarkan rumus persamaan linear y  =  1,16x  +  150,39  diperoleh  hasil perkiraan  umur  simpan puree edamame dikatakan  tidak  layak  berdasrkan  warna yaitu  pada  minggu  ke  lima.  Hal  ini dikarenakan  pada  minggu  ke  lima  warna puree edamame tidak menunjukkan kesegaran  warna  hijau  melainkan  warna memudar  menjadi  kuning  kecoklatan berdasarkan dari tabel hue angle.

## Total pertumbuhan mikroba
Hasil total mikroba setelah penyimpanan  selama  dua  minggu  dapat dilihat  pada Tabel  3 .  Hasil  total  mikroba setelah  disimpan  selama  dua  minggu pertumbuhan  mikroba  tertinggi  terdapat pada puree edamame tanpa perlakuan PEF (7,750  log  Cfu/ml)  dan  pertumbuhan mikroba  terendah  terdapat  pada puree perlakuan PEF tegangan  45 kV selama  30
detik (5,195 log Cfu/ml).
Peningkatan  total  mikroba  setelah penyimpanan dapat diakibatkan dari spora mikroba yang dibentuk pada saat pengolahan tumbuh membentuk bakteri sel tunggal.  Pada  dasarnya  beberapa  bakteri pada  kondisi  yang  tidak  menguntungkan dapat  memproduksi  bentuk  pertahanan hidup yang disebut endospora, seperti Bacillus dan Clostridium .  Proses ini dikenal sebagai sporulasi, spora bakteri berbeda  dengan  spora  pada  jamur,  spora bakteri  tidak  mempunyai  fungsi  sebagai alat  reproduksi.  Endospora  ini  tahan terhadap  kondisi lingkungan  ekstrim seperti  suhu  yang  tinggi,  kekeringan, senyawa  kimia  beracun  (desinfektan, antibiotik)  dan  radiasi  UV.  Keadaan  ini merupakan fase tidur dari bakteri, endospora mampu bertahan sampai kondisi lingkungan kembali menguntungkan  kemudian  membentuk proses  germinasi  dan  membentuk  bakteri sel tunggal (Sidhar, 2010).
Tabel 3 Pertumbuhan mikroba puree edamame Perlakuan Total Pertumbuhan Mikroba (log Cfu/ml) Minggu ke - 0 Minggu ke - 1 Minggu ke -2 Kontrol 3,447 7,379 7,750 A 1 B 1 3,094 5,892 6,751 A 1 B 2 2,931 5,762 6,189 A 1 B 3 2,931 5,401 5,694 A 2 B 1 2,849 5,505 5,688
A 2 B 2 Tidak tumbuh 5,226 5,505 A 2 B 3 Tidak tumbuh 5,075 5,489
A 3 B 1 Tidak tumbuh Tidak tumbuh 5,464
A 3 B 2 Tidak tumbuh Tidak tumbuh 5,401
A 3 B 3 Tidak tumbuh Tidak tumbuh 5,195 Keterangan  :  Kontol  tanpa  menggunakan  perlakuan PEF;  A 1 B 1 =  35  kV;  10  detik;  A 1 B 2 = 35  kV;  20  detik;  A 1 B 3 =  35  kV;  30 detik; A 2 B 1 = 40 kV; 10 detik; A 2 B 2 = 40  kV;  20  detik;  A 2 B 3 =  40  kV;  30 detik; A 3 B 1 = 45 kV; 10 detik; A 3 B 2 =
45  kV;  20  detik;  A 1 B 2 =  45  kV;  30 detik.

## KESIMPULAN
Perbedaan  variasi  tegangan  dan waktupenggunaan Pulsed  Electric  Field (PEF)  dapat  menurunkan  aktivitas  enzim protease  hingga  88,5%,  total  mikroba  80- 89%,  aktivitas  antioksidan  44,5%  dan warna 2,43%.
Perlakuan tersebut diperkirakan dapat mempetahankan kualitas  warna puree edamame  hingga lima  minggu  dua  hari  berdasarkan  rumus persamaan  linear  dan  memperlambat pertumbuhan mikroba selama dua minggu.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan banyak terimakasih  kepada  PT.  Indofood  Sukses Makmur  Tbk.  Yang  telah  memberikan dana  peneitian  melalui  beasiswa  progam Indofood Riset Nugraha 2016/2017.

## DAFTAR PUSTAKA
Andriawan,  Veri  dan  Susilo,  Bambang.  2015. “Susu  Listrik”  Alat  pasteurisasi  susu kejut  listrik  tegangan  tinggi  ( pulsed electric
field ) menggunakan
transformator tegangan tinggi dan inverter. Jurnal  Ketenikan  Tropis  dan Biosistem , 3 (2) : 199-210.
Broto, W. 2003. Teknologi Penanganan Pasca Panen  Buah  Untuk  Pasar .  Agromedia Pustaka, Jakarta.
Barbosa-Cánovas,  G.,  M.M.  Gongora-Nieto., U.R.  Pothakamury.  dan  B.G.  Swanson. 1999. Preservation  Of  Foods  With Pulsed  Electric  Fields. Academic  Press Ltd, London.
Chandrasekaran,  Muthusamy.  2015. Enzymes in Food and Beverage Processing. CRC Press  Taylor  and  Francis  Group .  E- book  Online.  https://books.google.co.jp. [Diakses 5 Januari 2017].
Choviya,  La  dan  Ika,  Ratna.  2011 . Penerapan pulsed  electric  field pada  pasteurisai buah  apel  varietas  ana  :  Kajian karakteristik  nilai  gizi,  sifat  fisik,  sifat kimiawi  dan  mikrobia  total. Journal  of Agritech, 31 (4).
Clydesdale,  F.  M.,  dan  F.  J.  Francis.  1976. Pigments  dalam  O.  R.  Fennema.
Principles  of  Food  Science .  Marcel Dekker Inc, New York.
Cuenca, R.A., Suarez, V., Sevilla, R.M.D., dan
Aparicio, M.I. 2006. Chemical compotition  and  dietary  fiber  of  yellow and green commercial soybeans ( glycine max ). Journal  of  Food  Chemistry ,  101 (2).
Cueva,  Olga  A.  2003.    Pulsed  Electric  Field Influences  On  Acid  Tolerance,  Bile
Tolerance, Protease Activity And Growth Characteristics Of Lactobacillus Acidophilus La-K. Escuela Agrícola Panamericana Zamorano, Honduras. Guderjan,  M.,  Elez,  M.,  and  Knorr,  D.  2007.
Application  of  pulsed  electric  fields  at oil  yield  and  content  of  functional  food ingredients at the production of rapeseed oil. Innov Food Sci Emerg , 8: 55-62.
Herdyastuti, N. 2006.
“Isolasi dan Karakterisasi  Ekstrak  Kasar  Enzim
Bromelin  dari  Batang  Nanas  ( Ananas comosus  L.  Merr. )”.  Skripsi.  Fakultas
MIPA Jurusan Kimia Universitas Surabaya.
Hutching,  J.B.  1999. Food  Color  and Appearance .  Aspen  publisher  Inc, Marylan.
Johnson  D.,  Wang,  S.,  and  Suzuki,  A.  1999. Edamame vegetable soybean for Colorado. In Janick, J. (Ed.). Perspectives  on  New  Crops  and  New Uses .  Di  dalam.  Riyanto,  C.,  Maria  L., dan  Pranata  S.  2006.  “Kualitas  Mie Basah  dengan  Kombinasi  Edamame (Glycine  max  (L.)  merril) dan  Bekatul
Beras Merah”. Skripsi. Fakultas
Teknologi Atma Jaya, Jakarta.
Konovsky  J.,  Lumpkin,  T.A.,  dan  Mclary  D. 1994.  Edamame  : The  vegetable soybean.  In  O’Rourke,  A.D.  (Ed.) .  Di dalam Konovsky, J. 2004. Understanding  The  Japanese  Food  and Agrimarket: A Multifaceted Opportunity . Haworth Press, Binghamton
Lee,  J.H.,  Seog,  E.J.,  dan  Choi,  Y.H.  1998.
Color  characteristics  of  soybeans  as influenced  by  freezing  and  cooking conditions. J.  Food  Sci.  Nutr ,  3  (2)  :
105-110.
Lenny,  S.  2006.  “Senyawa  Flavonoida,
Fenilpropanoida dan Alkaloida”.
Skripsi.  Fakultas  MIPA  Universitas Sumatra Utara.
Lingga,  Lanny,  Ph.  D.,  2012. The  Healing Power  of  Antioxidant:  Mengenal  Lebih Jauh  Sumber  Antioksidan  Unggulan .
Gramedia, Jakarta.
Lopez,  N.,  Puertolas,  E.,  Condon,  S.,Alvarez, I.,  dan  Raso,  J.  2008.    Application  of pulsed  electric  fields  for  improving  the maceration  process  during  vinification of red wine : Influence of grape variety.
Eur  Food  Res  Technol ,  227:  1099– 1107.
Meilgard,  M.,  Civille,  G.V.,  dan  Carr,  B.T.
1999. Sensory  Evaluation  Techniques. CRC Press, New York.
Muslim,  C.,  La,  C.  Hawa.  dan  Bambang  D. Argo.  2013.  Pasteurisasi non-thermal pada  susu  sapi  segar  untuk  inaktivasi bakteri Staphylococcus  aureus berbasis Pulsed  Electric  Field (PEF). Jurnal
Ketenikan Pertanian Tropis dan Biosistem , 1 (1): 35-49.
Molyneux, P. 2004. The use  of the stable free radical  diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH) for estimating antioxidant activity songklanakarin. J . Sci. Technol , 26 (2) : 211-219.
Nguyen,  V.Q.  2001. Edamame  (Vegetable Green Soybean). In The Rural Industrial pege  :  49-56.  http://attar.ncut.org/attar- pub/edamame.html/  [Diakses  1  Maret 2016].
Nooman,  A.  K.,  Ashok,  K.  S.,  Atif,  A.  O., Zaha,  E.  A.,  dan  Husni,  F.  2008. Antioxidant  activity  of  some  common plants. Journal Biology , 32 : 51 – 55.
Oh,  D.G.,  Jang,  Y.K.,  Woo,  J.E.,  Kim,  J.S., dan  Lee,  C.H.  2016.  Metabolomic  is reveals the effect of garlic on antioxidant  and  protease  activities during cheonggukjang (fermented soybean  paste)  fermentation. Food Research International , 82: 86-94.
Pujiastuti,  L.  2015.  Kedelai  Jepang Made in Jember Rambah Pasar Eropa dan AS. http://finance.detik.com/read/2015/07/2 1/145003/2972179/4/kedelai-jepang- made-in-jember-rambah-pasar-eropa- dan-as [Diakses 2 Maret 2016].
Pusdatin. 2014. Kedelai Jember Tembus Pasar Internasional. http://setkab.go.id/kedelai-jember- tembus-pasarinternasional/  [Diakses  2 Maret 2016].
Quass,  D.  W.  1997. Pulsed  Electric  Field Processing  In  The  Food  Industry.  A Status Report On Pulsed Electric  Field .
Palo Alto, CA. Electric Power Research Institute. Page 23-35. CR- 109742.
Rahmadi  A.  2009.  “Aplikasi  Bakteri  Asam Laktat  untuk  Meningkatkan  Keamanan Mikrobiologis Terhadap Staphylococcus aureus pada Proses Olah Minimal Buah
Apel  Malang  (Malussylvestris  Mill)”.
Skripsi. Fakultas Pertanian THP
Universitas Mulawarman.
Sale,  A.  J.  H.,  and  Hamilton,  W.  A.,  1967. Effect of High Electricfields on Microorganisms.  I.  Killing  of  Bacteria and  Yeast. Biochim Biophys Acta, 148 : 781-788.
Sridhar.
2010. Anatomy of Bacteria
Cell . http://www.microrao.com.
[Diakses pada tanggal 01Mei 2017].
Sudarmaji,  S.,  B.  Haryono  dan  Suhardi.2007. Analisa Bahan Makanan dan Pertanian .
Liberty, Yogyakarta.
Taylor, A. J. 1984. Natural Colours in Food. In Developments  in  Food  Colours  2.  J. Walford (ed.). Elsevier Applied Science Pub .  London  &  New  York.  page  193  – 196.
Titiek, F., Djafar, S. R. Endang, R. Siti. 2009. Cemaran  Mikroba  pada  Susu  dan Produk Unggas. Balai Pengkajian Teknologi Pertanian. Fakultas Teknologi  Pertanian  Universitas  Gajah
Mada.
Van  Heesch.  B,  G.A.J.M.  Pemen,  Dan  P. Huijbrechts. 2004. A Fast Pulsed Power Source,  Applied  To  Treatment  Of Conducting  Liquids.    IEEE  Transaction on Plasma Science.
Winarno,  F.G.  2004. Kimia  Pangan  dan  Gizi . Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Winarti,  Sri.  2010. Makanan  Fungsional .
Graha Ilmu, Yogyakarta.
Wszelaki,  A.L.,  Delwiche,  J.F.,  Walker,  S.D., Ligget, R.E., Miller, S.A., dan Kleinhenz, M.D. 2005. Consumer liking and  descriptive  analysis  of  six  varieties of  organically  grown  edamame-  type soybean. Journal  Food  Quality  and Preference , 16 (2).
Xu,  Y.,  Sismour,  E.,  Pao,  S.,  Rutto,  L., Grizzard, C., dan Ren, S. 2012. Textural and microbiological qualities of vegetable  soybean  (edamame)  affected by  blancing  and  storage  conditions. Jurnal  of  Food  Process  Technology ,  3 (5).
Yamaguchi  T.,  Takamura  H.,  Matoba  T., Terao  J.  1998.  HPLC  method  for evaluation of the free radical- scavenging  activity  of  foods  by  using 1,1,-diphenyl-2-picrylhydrazyl. Biosci. Biotechnol Bioche, . 62 : 1201-1204.
Ziwei,  L.,  Z.Cheng,  G.S.  Mittal.  2006. Inactivation of spoilage microorganisms in  apple  cider  using  a  continuous  flow pulsed  electric  field  system. Journal  of Food Sciences, 39: 350-356.