Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Etanol  Buah  Wualae  (Etlingera elatior  (Jack)  R.  M.  Smith)  Terhadap  Gambaran  Histopatologi

## Organ Jantung Tikus Wistar (Rattus norvegicus)
Asriullah Jabbar, Wahyuni, Muhammad Ilyas Yusuf, Wa Ode Nia Helmia, Sahidin *
Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu, Jl. H. E. A. Mokodompit Kendari 93232
E-mail: sahidin02@uho.ac.id

## Abstrak
Buah wualae ( Etlingera elatior (Jack) R. M. Smith) mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, tanin dan terpenoid yang berkhasiat sebagai antioksidan, antibakteri, dan imunomodulator. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui batas keamanan dari ekstrak yang ditinjau dari nilai LD 50 dan pengaruhnya terhadap histopatologi organ jantung, paru-paru dan limpa tikus. Jenis penelitian ini adalah penelitian eksperimental yang dilakukan dengan metode Reed-Munch menggunakan 28 ekor tikus yang dibagi ke dalam 4 kelompok perlakuan. Kelompok kontrol diberi NaCMC 0,5% dan kelompok perlakuan diberi ekstrak dosis 500 mg/kg BB; 5000 mg/kg BB; dan15000 mg/kg BB. Rute pemberian yang digunakan adalah rute oral. Parameter yang  diamati dalam penelitian ini adalah nilai LD 50 , gejala toksik yang timbul sampai tikus mati, dan perubahan bobot tikus, serta pemeriksaan histopatologi organ jantung. Hasil penelitian  ini  menunjukkan  nilai  LD 50 ekstrak  etanol  buah  wualae  adalah  8.649,679  mg/kg  BB  (kategori  praktis  tidak  toksik). Pemeriksaan  histopatologi  organ  jantung  pada  dosis  500  mg/kg  BB,  5000  mg/kg  Bb  dan  15000  mg/kg  BB  menunjukkan  gejala nekrosis.
Kata kunci: Etlingera, wualae, hispatologi, organ, kongesti, nekrosis

## 1. Pendahuluan
Indonesia  merupakan  negara  tropis  dengan  sumber tanaman obat yang berlimpah dan juga merupakan negara dengan  keanekaragaman  hayati  terbesar  kedua  di  dunia, bahkan dapat menjadi posisi pertama jika keanekaragaman hayati  laut  juga  dipertimbangkan  [1].  Indonesia  memiliki sekitar  25.000-30.000  spesies  tanaman.  Jumlah  tanaman yang  digunakan  masyarakat  Indonesia  sebagai  obat berjumlah 7.000 spesies dan sebanyak 283 spesies tanaman telah  terdaftar  di  Badan  Pengawasan  Obat  dan  Makanan (BPOM) Republik Indonesia [2]).
Salah  satu  tanaman  yang  terdapat  di  hutan  tropis Indonesia  adalah wualae ( Etlingera  elatior (Jack.)  R.  M. SM.) yang di Provinsi Sulawesi Tenggara dikenal dengan nama wualae . Wualae merupakan  salah  satu  tanaman rempah-rempah yang sejak lama dikenal dan dimanfaatkan sebagai bahan obat-obatan [3]. Tanaman wualae memiliki potensi untuk mengobati penyakit-penyakit yang tergolong berat  seperti  kanker  dan  tumor  [4].  Buah  wualae  sendiri memiliki aktivitas immunomodulator [5], antioksidan [6, 7, 8, 9], antimikroba [10, 11], dan antipiretik [12].
Suatu  senyawa  dari  suatu  tanaman  dapat  dikatakan aman  apabila  telah  melalui  uji  toksisitas  dengan menggunakan hewan coba dan telah terbukti aman secara klinis  untuk  dikonsumsi,  sehingga  sangatlah  penting mengetahui  potensi  ketoksikannya  melalui  LD 50 dan spektrum  efek  toksiknya  [13].  Uji  toksisitas  adalah  suatu uji  untuk  mendeteksi  efek  toksik  suatu  zat  pada  sistem biologi dan untuk memperoleh data dosis respon yang khas
dari  sediaan  uji.  Data  yang  diperoleh  dapat  digunakan untuk memberi informasi mengenai derajat bahaya sediaan uji tersebut bila terjadi pemaparan pada manusia, sehingga dapat  ditentukan  dosis  penggunaannya  demi  keamanan manusia [14].
Tujuan  uji  toksisitas  akut  adalah  untuk  mendeteksi adanya toksisitas suatu zat, menentukan organ sasaran dan kepekaanya, memperoleh data bahayanya setelah pemberian  suatu  senyawa  secara  akut  dan  untuk memperoleh  informasi  awal  yang  dapat  digunakan  untuk menetapkan  dosis  yang  diperlukan  untuk  uji  toksisitas selanjutnya [15].
Evaluasi  uji  toksisitas  tidak  hanya  mengenai  LD 50 , tetapi  juga  terhadap  kelainan  tingkah  laku,  stimulasi  atau depresi  sistem  syaraf  pusat  aktivitas  motorik  dan pernapasan hewan uji untuk mendapatkan gambaran sebab kematian,  dapat  juga  dilengkapi  dengan  pembuatan preparat  histopatologi  dari  organ  yang  dianggap memperlihatkan kelainan [16].
Histopatologi  sangat  penting  dalam  kaitan  dengan diagnosis penyakit karena salah satu pertimbangan dalam penegakan diagnosis adalah melalui pengamatan terhadap jaringan yang diduga terganggu [17]. Beberapa organ yang dapat  terpengaruh  atau  rusak  akibat  toksisitas  suatu  zat kimia  antara  lain  jantung,  paru-paru  dan  limpa.  Hasil  uji toksisitas  akut   menunjukkan  bahwa  buah,  daun,  batang dan rimpang Wualae bersifat sedikit toksik ( slightly toxic ) dengan nilai LC 50 masing-masing sebesar 1302.31 µg/mL,
1162.84  µg/mL, 1174.52 µg/mL dan 1074.72 µg/mL  [9], sehingga  penelitian  yang  dilakukan  bertujuan  untuk mengetahui  mengetahui  nilai  LD 50, serta  mengetahui gambaran  histopatologi organ  jantung  yang  terpapar ekstrak etanol buah wualae

## 2. Metode

## 2.1 Umum
Sampel  buah wualae ( Etlingera  elatior (Jack)  R.M. Smith),  diperoleh  dan  dikumpulkan  dari  kelurahan Sambeani,  Kecamatan  Abuki,  Kabupaten  Konawe, Provinsi Sulawesi Tenggara. Hewan uji tikus diperoleh dari Laboratorium Fakultas Kedokteran Universitas Halu Oleo.

## 2.2 Preparasi Sampel dan Ekstraksi
Preparasi dilakukan dengan memotong-motong sampel  yang  sebelumnya  telah  dibersihkan,  selanjutnya dikeringkan  dan  dihaluskan  hingga  menjadi  serbuk. Simplisia buah dimaserasi dengan etanol 96% selama 3 x 24 jam, kemudian disaring untuk mendapatkan filtrat dan residu.  Filtrat  yang  diperoleh  kemudian  digabungkan  dan dipekatkan  menggunakan ratory  vacum  evaporator pada suhu  tidak  lebih  dari  60ºC  sehingga  diperoleh  ekstrak kental [18].

## 2.3 Pengelompokan Hewan Uji
Hewan uji dikelompokan menjadi 4 kelompok dimana setiap  kelompok  terdiri  dari  7  hewan  uji.    Kelompok tersebut  terdiri  dari  kelompok  perlakuan  (dosis  500 mg/kgBB,  dosis  5000  mg/kgBB,  dan  dosis  15000 mg/kgBB),  kelompok  kontrol  negatif  (Na.  CMC  0,5%). Kelompok  kontrol  negatif  digunakan  untuk  melihat perbandingan efek toksik yang dihasilkan [14].

## 2.4 Penentuan Nilai LD 50
Penentuan  nilai  LD 50 dilakukan  dengan  membagi tikus  menjadi  4  kelompok  perlakuan.  Setiap  kelompok terdiri  dari  7  ekor  tikus  jantan.  Tikus  sebelumnya diaklimatisasi  terlebih  dahulu  selama  7  hari.  Selama aklimatisasi  tikus  ditimbang  untuk  mendapatkan  bobot konstan.  Pengujian  toksisitas  akut  ini  menggunakan  3 tingkat dosis pada 3 kelompok perlakuan, dan 1 kelompok kontrol negatif.

## 2.5 Pemeriksaan Histopatologi
Organ yang akan diperiksa adalah organ jantung, paru-paru dan  limpa.  Organ  yang  diambil  dicuci  terlebih  dahulu menggunakan NaCl 0,9% kemudian ditimbang berat organ. Organ selanjutnya difiksasi menggunakan larutan formalin 10%. Selanjutnya diamati histopatologinya.

## 2.6 Analisis Data
Data  yang  diperoleh  berupa  data  kuantitatif  dan kualitatif.  Data  kualitatif  berupa  data  berat  badan,  uji
prilaku,  dan  makropatologi  yang  dilakukan  dengan mengamati  organ  jantung.  Data  kuantatif  berupa  jumlah hewan yang mati (dianalisisdengan dilakukan perhitungan LD 50 dengan metode Reed-Munch untuk memperoleh nilai LD 50 ).

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1 Preparasi dan Ekstraksi
Pengambilan  sampel  dilakukan  pada  waktu  pagi  hari dan  dilakukan  preparasi  sampel  yang  diawali  dengan pembersihan  dan  pencucian  sampel  buah wualae ( E. elatior )  dengan  air  yang  mengalir  bertujuan  untuk menghilangkan  sisa  kotoran  yang  melengket  pada  buah wualae .  Kemudian  dilakukan  pengeringan  dengan  cara diangin-anginkan terhindar dari cahaya matahari langsung dan dilapisi kain hitam. Pengeringan bertujuan mengurangi kadar  air  dalam  sampel  sehingga  mencegah  terjadinya kontaminasi mikroorganisme yang dapat merusak sampel.
Maserasi  merupakan  proses  perendaman  sampel dengan pelarut organik yang dilakukan pada suhu ruangan. Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol 96%.  Etanol  bersifat  semipolar  sehingga  memungkinkan senyawa  polar  maupun  non  polar  yang  terdapat  dalam simplisia  dapat  tertarik  dan  mudah  menguap  dengan  titik didih 78 o C sehingga dapat meninggalkan residu yang tinggi [19]. Disamping itu, etanol merupakan pelarut dengan daya ekstraksi terbesar untuk semua bahan dan berbobot molekul rendah seperti alkaloid, saponin dan flavonoid [20].

## 3.2 Uji Toksisitas
Penelitian  sebelumnya  menunjukan  dosis  maksimal ekstrak  yaitu  sebesar  500  mg/KgBB  [21].  Berdasarkan dosis tersebut, kemudian dilakukan pemilihan jumlah dosis yang  didasarkan  pada  kriteria  penggolongan  sediaan  uji toksisitas  dan  didapatkan  dosis  sebesar  500  mg/KgBB, 5000  mg/KgBB  dan  15000  mg/KgBB  yang  merupakan perwakilan dari tiap kategori toksisitas yaitu cukup toksik, sedikit toksik dan praktis tidak toksik [14]. Sebagai kontrol normal digunakan larutan Na-CMC 0,5%.
Tabel 1. Gejala efek toksik
No. Kelompok Tikus Gejala/Efek Toksik yang Timbul 1. Kontrol  (Na-CMC 0,5%) Aktivitas normal 2. 500 mg/KgBB Aktivitas gerak meningkat, perubahan perilaku penjilatan. 3. 5000 mg/KgBB Penurunan aktivitas gerak, perubahan  perilaku  penjilatan, serta pernapasan cepat (trakipnea) 4. 15000 mg/KgBB Penurunan aktivitas gerak, perubahan  perilaku  penjilatan,
pernapasan cepat (trakipnea).
Pengamatan  tingkah  laku  hewan  uji  secara  rutin dilakukan  pada  saat  setelah  pemberian  ekstrak  selama  2 jam. Pengamatan tingkah laku hewan uji meliputi aktivitas gerak  (tremor,  keaktifan  bergerak,  dan  diam),  perubahan
perilaku  (berputar  berlebihan  dan  penjilatan)  dan  laju pernapasan  (bradipnea  dan  trakipnea)  [14].  Tabel  1 telah diketahui  respon  pada  tiap  kelompok  berbeda-beda tergantung  dari  jumlah  dan  dosis  ekstrak  yang  diberikan. Gejala  toksik  yang  terjadi  selama  pengamatan  sangat bervariasi.

## 3.3 Penentuan LD 50
Hasil  pengamatan  terhadap  jumlah  kematian  tikus selama  14  hari  setelah  pemberian  ekstrak  etanol  buah E. elatior menunjukkan  gejala  kematian  mulai  terjadi  pada dosis 5000 mg/KgBB dan 15000 mg/KgBB yaitu masing- masing 1 dan 7 ekor. Gejala kematian tidak ditemukan pada dosis terendah ekstrak yaitu 500 mg/KgBB.

## Tabel 2. Data jumlah kematian hewan uji
No. Dosis Jumlah Hewan Uji Jumlah Hewan Mati % Kematian 1. Kontrol (Na-CMC 0,5 %) 7 0 0 2. Dosis I (500 mg/Kg BB) 7 0 0 3. Dosis II (5000 mg/Kg BB) 7 1 0.14 % 4. Dosis III (15000 mg/Kg BB) 7 7 100 %
Berdasarkan data pada Tabel 2 maka dapat ditentukan nilai  LD 50 dengan  menggunakan  perhitungan  dengan metode Reed-Muench dan didapatkan nilai LD 50 8649,679 mg/KgBB.  Nilai  ini  menggambarkan  bahwa  toksisitas ekstrak  etanol  buah wualae masuk  dalam  kategori  praktis tidak  toksik  [14].  Kategori  toksik  ekstrak  etanol  buah E. elatior ini,  bila  dibandingkan  dengan  uji  toksisitas sebelumnya  terlihat  sesuai,  dengan  menggunakan  metode BSLT yang menyebutkan bahwa bagian buah dari ekstrak etanol tanaman wualae bersifat tidak toksik [7].

## 3.4 Pengamatan Histopatologi  Organ
Selama  pengujian,  hewan  yang  mati  langsung dilakukan  pembedahan  dan  pengambilan  organ  jantung. Pada akhir pengujian hari ke-14, sisa tikus masing-masing kelompok  diambil  beberapa  ekor  untuk  pemeriksaan histopatologi organ jantung.
Tabel 3. Hasil Pemeriksaan histopatologi organ jantung
Kelompok Tikus Hasil Kelompok 1 1 - Kelompok II 1 + Kelompok III 2 3 + + Kelompok IV 2 3 4 + + +
Keterangan:  (+)  =  mengalami  kelainan  pada  organ;  (-)  =  tidak mengalami kelainan organ
Gambar 1. Gambaran histopatologi organ jantung tikus, pembesaran 100x, pewarna HE; (A) kelompok kontrol negatif; (B) jantung tikus I kelompok dosis I yang mati setelah hari ke-14; (C) jantung tikus II kelompok dosis II yang mati pada hari ke-14; (D) organ jantung tikus III kelompok dosis II yang mati pada hari ke-3; (E) organ jantung tikus II kelompok dosis III yang mati pada hari ke- 4; (F) organ jantung tikus III kelompok dosis III yang mati pada hari ke-5; (G) organ jantung tikus IV kelompok dosis III yang mati pada hari ke-6
Hasil  pemeriksaan  histopatologi  organ  jantung,  paru dan limpa disajikan pada Tabel 3 setelah dilakukan 14 hari pemberian  ekstrak  buah wualae, organ  jantung  yang mengalami nekrosis adalah semua tikus pada kelompok II, III  dan  kelompok    IV.  Pada  kelompok  I  tidak  ada  yang mengalami kerusakan (normal).
Hasil histopatologi yang telah dilakukan menunjukkan pada  kelompok  dosis  kontrol  yang  diberi  NaCMC  0,5% (Gambar 1) memiliki struktur jantung yang mempunyai sel- sel  dalam  batas  normal.  Gambar  1  menunjukkan  diskus interkalaris  yang  merupakan  batas  atau  pertemuan  antara dua sel otot. Diskus interkalari ini terlihat seperti garis lurus yang  membentuk  tangga.  Serat  otot  jantung  dibungkus suatu  sarkoplasma  tipis  yang  lebih  banyak  corak  garis memanjang lebih jelas karena miofibril-miofibril terpisah- pisah oleh deretan mitokondria [24].
Kelompok  dosis  I  (Gambar  2),  jaringan  jantung menunjukkan  struktur  jantung  dan  diantaranya  nampak sedikit area nekrotik. Pada kelompok dosis II (Gambar 1c dan 1d) menunjukkan sediaan jaringan jantung menunjukkan struktur jantung dengan sel-sel jantung yang berbeda antara tikus II dan tikus III, pada tikus II struktur jantung  sebagian  masih  normal  diantaranya  nampak  area nekrotik  disekitarnyasedangkan  pada  tikus  III  mengalami nekrosis  yang  menunjukkan  banyaknya  area  nekrosis piknotik (inti tampak lebih padat dan berwarna lebih gelap)
Pada  kelompok  dosis  III  (Gambar  1e,  1f  dan  1g), sediaan  jaringan  jantung  menunjukkan  struktur  jantung dengan  sel-sel  jantung  hampir  semuanya  sudah  nekrotik. Pada  Gambar  1e  menunjukkan  nekrosis  yaitu  piknotik, Gambar  1f  kerusakan  yang  terjadi  adalah  nekrosis  kario ereksi  inti  terbagi  atas  fragmen-fragmen  robek  dan  pada Gambar  1g  menunjukkan  kerusakan  yang  parah  yaitu nekrosis  piknotik  dimana  semua  hampir  semua  inti  sel tampak lebih padat dan berwarna gelap.

## 4. Kesimpulan
Nilai  LD 50 ekstrak  etanol  buah  wualae  8649,679 mg/kg  BB  (kategori  praktis  tidak  toksik),  dan  hasil pemeriksaan  histopatologi  organ  jantung  pada  dosis  500 mg/kg  BB,  5000  mg/kg  Bb  dan  15000  mg/kg  BB menunjukkan gejala nekrosis.

## Ucapan Terima Kasih
Peneliti mengucapkan terima kasih kepada Kementerian  Riset,  Teknologi,  dan  Pendidikan  Tinggi (Kemenristekdikti)  atas  bantuan  dana  yang  diberikan melalui  Hibah  Penelitian  Dasar  Perguruan  Tinggi  Tahun 2019.

## Daftar Pustaka
1. Handa  SS,  Rakesh  DD,  Vasisht  K, Compendium  of Medicinal  and  Aromatic  Plants  Volume  II Triest:  United Nations  Industrial  Development  Organization  (UNIDO)  – International  Center  For  Science  and  High  Technology (ICS), 2006.
2. Dewoto  HR,  Pengembangan  Obat  Tradisional  Indonesia Menjadi Fitofarmaka. Majalah Kedokteran Indonesia , 2007, 57(7) ;205-21.
3. Hidayat S, Hutapea S, Inventaris Tanaman Obat Indonesia . Edisi  I:  440-441,  Jakarta:  Badan  Penelitian  dan Pengembangan Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1991.
4. Chan EWC, Lim YY, Omar M, Antioxidant and antibacterial activity  of  leaves  of etlingera species  (Zingiberaceae)  in Peninsular Malaysia, Food Chemistry, 2007, 104 ;1586-1593
5. Wahyuni,  Malaka  MH,  Fristiohady  A,  Yusuf  MI,  Sahidin, Potensi  imunomodulator  ekstrak  etanol  buah  kecombrang ( Etlingera  elatior (jack)  RM  Smith)  terhadap  aktivitas fagositosis makrofag mencit jantan galur Balb/c, Pharmacon , 2017, 6(3) ;350-355.
6. Jabbar  A,  Wahyuni,  Malaka  MH,  Apriliani,  Aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol buah, daun, batang  dan  rimpang pada tanaman wualae (Etlingera Elatior (Jack) RM Smith), Jurnal Farmasi Galenika , 2019, 5(2) ;189-197
7. Sahidin,  Wahyuni,  Malaka  MH,  Fristiohady  A,  Saleh  A, Manggau MA, Antibacterial and radical scavenger activities of  extract  and  compounds  of  wualae  ( Etlingera  elatior ) stems from Southeast Sulawesi, IOP Conf. Ser.: Mater. Sci. Eng ., 2019, 546 .
8. Sahidin, Salsabila S, Wahyuni, Fristiohady A, Imran, Potensi antibakteri ekstrak metanol dan senyawa aromatik dari buah wualae (Etlingera  elatior) ,  Jurnal  Kimia  VALENSI ,  2019, 5(1) .
9. Leorita M, Mardikasari SA, Wahyuni, Malaka MH, Sartinah A, Sahidin, Aktivitas antioksidan dan toksisitas akut ekstrak etanol  buah,  daun,  batang  dan  rimpang  tanaman wualae
( Etlingera  elatior (Jack)  R.M.  Smith), Pharmauho ,  2018, 4(2).
10. Wahyuni,  Malik  F,  Ningsih  A,  Zubaydah  WOS,  Sahidin, Antimicrobial  activities  of  ethanol  extract  of wualae ( Etlingera elatior (JACK) R.M. Smith), JPMS , 2018, 3(1).
11. Musnina  WOS,  Wahyuni,  Malik  F,  Timung  YO,  Sabandar CW, Aktivitas antimikroba ekstrak etanol dan fraksi organik rimpang wualae ( Etlingera  elatior (Jack)  R.M.  Smith),
Pharmauho , 2019, 5(1) .
12. Malik F, Ningsi A, Bafadal M, Saktiani DN, Wahyuni, Uji Efek  Antipiretik  Ekstrak  Etanol  Buah  Wualae  (Etlingera elatior  (Jack)  R.M.  Smith)  Terhadap  Mencit  Jantan  (Mus musculus L.) Galur Balb/C, Pharmauho, 2018, 4(1) .
13. Wahyono,  Hakim  L,  Nurlaila,  Sulistio  M,  Ilyas  R,  Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanolik Terstandar dari Kulit Akar Senggugu  ( Clerodendum  serratum L.  Moon), Majalah Farmasi Indonesia, 2007, 18(1) ;1-7.
14. Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, Pedoman  Uji Toksisitas  Nonklinik  Secara  In  Vivo ,  Jakarta: Badan Pengawasan Obat dan Makanan, 2014.
15. Soeksmanto  A,  Simanjuntak  P,  dan  Subroto  MA,  Uji toksisitas  akut  ekstrak  sarang  semut  ( Myrmecodi  pendans ) terhadap histologi organ hati mencit. Jurnal Natur Indonesia , 2010, 12(2) ;152-155.
16. Darmansjah  I, Farmakologi  dan  Terapi ,  Jakarta:  Bagian Farmakologi  Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Indonesia, 1995.
17. Sharon N, Syariful A, Yuliet Y, Formulasi krim antioksidan ekstrak  etanol  bawang  hutan  ( Eleutherine  palmifolia L . Merr) , Natural Sciences: Jurnal of Science and Technology,
2013, 2(3) ;111-122.
18. Lestari  WEW,  Pengaruh  Nisbah  Rimpang  dengan  Pelarut dan  Lama  Ekstraksi  terhadap  Mutu  Oleoresin  Jahe  Merah ( Zingiber officinale Var. Rubrum), Skripsi , Institut Pertanian Bogor, 2006.
19. Djamal  R, Prinsip-Prinsip  Dasar  Isolasi  dan  Identifikasi , Padang: Universitas Baiturrahman, 2012.
20. Usman  K,  Uji  potensi  antidiabetik  ekstrak  etanol  buah kecombrang ( Etlingera elatior (Jack) R. M. Smith) terhadap
mencit  jantan  BALB/c  yang  diinduksi  streptozotocin, Skripsi , Universitas Halu Oleo, 2017.
21. Loomis  TA, Toksikologi  Dasar, Edisi  Ke-3,  diterjemahkan oleh Imam Argo Donatos, Semarang: IKIP Semarang Press, 1978.
22. Mescher  AI, Histologi  Dasar  Junqueira ,  Jakarta:  Penerbit EGC, 2011.
23. Widayana  IGE,  The  exposure  effect  of  paraquat  dichloride herbicide  on  human  pulmonary  fibrosis, Jurnal  Majority , 2014, 3(7) .
24. Nurhaini R, Rahmawati F, Sunyoto, Gambaran histopatologik limpa tikus betina galur Sprague dawley yang diberi ekstrak etanol akar pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack)  dan  diinduksi  7,12-dimetil  benz(a)  antrazen. Cerata Journal of Pharmacy Science , 2015, 2(1) .
© 2019 by the authors; This article is an open access article distributed under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution Licens e (http://creativecommons.org/ licenses/by/4.0/)