e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan
Volume VIII No 2 Februari 2020 p-ISSN: 2302-3600, e-ISSN: 2597-5315

## THE EFFECT OF IMMERSION OF MANGROVE Avicennia alba
(Tomlinson, 1986) LEAF EXTRACT WITH DIFFERENT
CONCENTRATIONS IN PREVENTING BACTERIAL DISEASE Vibrio harveyi (Johnson & Shunk, 1936) IN VANAME SHRIMP (Litopenaeus vannamei) (Boone, 1931)
Eka Nur Farida* 1 , Rara Diantari, Esti Harpeni, Wardiyanto, Qadar Hasani, Herman Yulianto, Maulid Wahid Yusuf, Oktora Susanti* 2

## ABSTRACT
Vibriosis  is  a  disease  that  often  attack  shrimp  culture,  some  of  the  most dangerous types of Vibrio bacteria are V. harveyi. The use of natural materials is an alternative that can be applied to prevent bacterial disease. One of the mangrove species  that  has  an  antibacterial  compound  is  A.  alba.  A.  alba  has  alkaloid, saponins, and  flavonoids  compounds that can inhibit  the function  of  cytoplasmic membranes  and  energy  metabolism  in  bacteria.  This  study  was  conducted  to determine the effectiveness of A. alba leaf extract A. alba in inhibiting V. harveyi disease in vaname shrimp (Litopenaeus vannamei). This research was conducted in several stages, namely extraction of mangrove leaves, both in vivo and in vitro. The highest SR, RPS and MTD values were obtamed at a concentration of 250 mg/l with each value of  80 %, 60 %, 75 th respectively hour. Mangrove leaf extract A. alba was able to prevent diseases caused by the bacteria V. harveyi, with the best results  at  an  extract  concentration  of  250  mg/l  where  the  concentration  can significantly higher SR, RPS, and MTD compared to other treatments.
Keywords: A. alba leaf extract, V. harveyi, Litopenaeus vannamei

## Pendahuluan
Serangan  penyakit  pada  udang vaname  dapat  terjadi  mulai  dari pembenihan hingga pembesaran.
Penyakit  merupakan  masalah  utama yang  belum  teratasi  hingga  sekarang
(Septiani et al ., 2016). Penyakit yang sering  timbul  pada  budidaya  udang yaitu penyakit Vibriosis .
Penyakit Vibriosis merupakan penyakit  yang  mudah  timbul  pada
1 E-mail: faridaeka94@yahoo.com
2 Jurusan Perikanan dan Kelautan, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung Jl. Prof. S. Brodjonegoro No.1 Gedong Meneng Bandar Lampung, 35145
budidaya  udang.  Penyakit Vibriosis sering  menyebabkan  kerugian  baik pada  fase  pembenihan  maupun pembesaran,  akibat  kematian  yang ditimbulkan  (Kharisma et  al .,  2012). Salah  satu  jenis  bakteri Vibrio ,  yang sering  menyerang  budidaya  udang adalah V. harveyi (Kannapiran et al .,
2009).  Bakteri V.  harveyi adalah bakteri gram negatif dan bakteri yang bersifat oportunistik, yaitu organisme yang  dalam  keadaan  normal  ada  di
lingkungan pemeliharaan, yang berkembang menjadi patogen apabila kondisi  lingkungan  dan  inangnya memburuk (Widanarni et al ., 2012).
Salah satu upaya dalam pencegahan  penyakit  udang  adalah melalui peningkatan sistem pertahanan tubuh udang (Johny et al ., 2005).  Udang  memiliki  daya  tahan tubuh alami yang bersifat non spesifik terhadap  organisme  patogen  berupa pertahanan  fisik  (mekanik),  kimia, seluler,  dan  humoral.  Sistem  imun udang tergantung pada proses pertahanan  non  spesifik  sebagai pertahanan  terhadap  infeksi  (Lee et al ., 2004). Penggunaan bahan alami merupakan  salah  satu  alternatif  yang dapat  digunakan  dalam  peningkatan sistem  imun  dan  juga  sebagai antibakteri  pada udang salah satunya tanaman mangrove. Salah satu spesies mangrove  yang  dapat  meningkatkan sistem  imun  dan  sebagai  senyawa antibakteri  yaitu A.  alba .  diketahui bahwa bagian daun A. alba . memiliki senyawa saponin, tannin, dan steroid (Handayani, 2012).
Oleh  karena  itu  penelitian  ini dilakukan untuk mengetahui efektivitas ekstrak daun mangrove A. alba dalam menghambat penyakit V.
harveyi
pada udang vaname
( Litopenaeus vannamei ).

## Metode

## Ekstraksi Daun Mangrove
Daun  mengrove  diperoleh  dari Pulau  Pasaran,  Kecamatan  Teluk Betung  Barat,  Bandar  Lampung. Proses  ekstraksi  dilakukan  menurut (Cendrianti et al.,  2013)  dengan mencuci daun mangrove A. alba ., lalu dikeringkan,  kemudian  ditimbang
sebanyak  100  gr  dan  dihaluskan.
Selanjutnya daun dimasukkan kedalam  erlenmeyer  dan  dimaserasi menggunakan  metanol  70%  selama 24 jam. Kemudian disaring menggunakan kertas saring. Selanjutnya proses ekstraksi dilanjutkan  dengan  menggunakan Vacuum  Rotary  Evaporatror ( Buchi type ) pada suhu 37 0 C (15,36 g).

## Penyediaan Bakteri V. harveyi
Bakteri V.  harveyi dikultur dengan  menggunakan  media  NB (Merck No, 12000000-KIM- 000061548) dan di shaker selama 24 jam  kemudian  diukur  menggunakan spektrofotometer ( Thermo  scientific Genesys 20) dengan panjang gelombang 625 nm hingga kepadatan bakteri 10 7 CFU/ml.

## Uji In Vitro
Uji  in  vitro  dilakukan  dengan uji  antibakteri  atau  uji  daya  hambat dengan  metode  ( agar  disc  diffusion method ) menurut Davis et al ., (1971). Dosis ekstrak yang digunakan dalam uji  in  vitro  yaitu  150,  200,  250,  300 dan 350 mg/l. Media yang digunakan dalam uji antibakteri yaitu media NA (Merck no. 12000000-KIM- 000061548). Bakteri V.  harveyi dengan kepadatan  10 7 CFU/ml  dimasukkan kedalam  cawan  petri  yang  berisi media  padat  NA  sebanyak  20µl  dan diratakan  menggunakan spreader , kemudian kertas cakram yang sebelumnya  telah  disterilisasi  diberi larutan  metanol  untuk  kontrol  (-), antibiotik Chloramphenicol 250  mg (SANBE-Bandung)  untuk  kontrol (+),  dan  ekstrak  daun  mangrove dengan dosis 150, 200, 250, 300, dan 350  mg/l.  kertas  cakram  diletakkan
kedalam  media  yang  telah  berisi bakteri V.  harveyi dan  diinkubasi selama 24 jam dan 48 jam selanjutnya diukur  zona  hambat  yang  terbentuk menggunkan jangka sorong.

## Percobaan Utama
Percobaan  utama  atau  Uji In Vivo dilakukan  pada  udang  dengan ukuran  10  gr.  Udang  di  budidaya dalam akuarium dengan ukuran 60 x 40 x 50 cm. Penelitian ini menggunakan  5  perlakuan  dengan  3 ulangan,  perlakuan  yang  digunakan yaitu  K+  (tidak  diberi  ekstrak  daun mangrove A.  alba .,  namun  di  uji tantang dengan menggunakan bakteri V.  harveyi ),  K-  (tidak  diberi  ekstrak daun  mangrove A.  alba ,  dan  diuji tantang dengan larutan PBS), serta 3 dosis  terbaik  esktrak  daun  mangrove A.  alba .,  yang  didapat  dari  uji antibakteri  yaitu  150,  250,  dan  350 mg/l.  Udang  uji  terlebih  dahulu  di aklimatisasi selama 7 hari, kemudian direndam dengan menggunkan ekstrak  daun  mangrove A.  alba . dengan konsentrasi yang telah didapat dari  uji  in  vitro  yaitu  150,  250,  dan 350  mg/l  selama  15  menit  kemudian dipelihara selama 7 hari. Selanjutnya udang  diuji  tantang  menggunakan bakteri V.  harveyi dengan  kepadatan 10 7 CFU/ml  melalu  injeksi  secara intramoskular,  kemudian  dipelihara selama 7 hari.
Selama pemeliharaan udang uji, pemberian pakan dilakukan selama 4 kali  sehari  secara ad  satiation pada kisaran pukul 06.30 – 07.00, 11.30 – 12.00,  16.30  –  17.00,  dan  21.30  – 22.00  dan  dilakukan  penyiponan setiap  harinya  untuk  membuang  sisa pakan dan kotoran serta pergantian air dilakukan  setiap  harinya  setelah
penyiponan sebesar 10% dari volume dalam air.

## Parameter Penelitian
Parameter  penelitian  yang  akan diamati  yaitu Survival  Rate (SR) mengacu  pada  (Effendi,  1979), Relative  Percent  Survival (RPS) mengacu pada (Ellis, 1988), Mean To Date (MTD)  mengacu  pada  (OIE, 2004), dan kualitas air.

## Analisis Statistik
Parameter Survival  Rate (SR), Mean  To  Date (MTD)  akan  diamati dengan  menggunakan  uji  ANOVA dengan  selang  kepercayaan  95%, kemudian  diuji  lanjut  menggunakan uji Duncan. Relative Percent Survival
(RPS) akan dianalisis dengan menggunakan uji T. Parameter kualitas air diamati secara deskriptif.

## Hasil dan Pembahasan
SR (Survival Rate) Pada penelitian ini kelangsungan  hidup  udang  vaname pada  konsentrasi  250  mg/l  dan  K- memiliki nilai kelulus hidupan tertinggi  yaitu  80  %,  dan  nilai kelangsungan  hidup  terendah  pada K+  yang  tidak  diberi  perlakuan perendaman  namun  diuji  tantang dengan  menggunakan  bakteri V. harveyi dengan nilai SR sebesar 60% (Gambar, 1).
Dari  hasil  uji  statistik  terhadap nilai  SR  pada  udang  vaname  yaitu berbeda  nyata  (P  <  0,05).  Hasil  uji lanjut  duncan  konsentrasi  150  mg/l, 250  mg/l,  350  mg/l  dan  K-  tidak berbeda  nyata  namun  berbeda  nyata dengan perlakuan K+. Nilai SR udang vaname  pada  perlakuan  K+  lebih rendah dibandingkan dengan
perlakuan  yang  telah  diberi  ekstrak daun  mangrove A.  alba .  Hal  ini dikarenakan pada uji antibakteri yang telah dilakukan terbentuk zona hambat  disekitar  kertas  cakram  yang telah diberikan ekstrak daun mangrove A.  alba .  Artinya  ekstrak tersebut mampu menghambat pertumbuhan bakteri V. harveyi .
Senyawa  aktif  yang  terdapat pada ekstrak daun mangrove A. alba yang  diduga  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri V.  harveyi sehingga  mampu  meningkatkan  nilai SR. Senyawa-senyawa  yang  terdapat pada  daun A.  alba yaitu saponin , steroid dan tannin . Senyawa saponin sebagai antibakteri  yaitu  dapat  menyebabkan kebocoran  protein  pada  enzim  dari dalam  sel  bakteri Porphyromonas gingivalis (Madduluri et  al .,  2011).
Senyawa saponin merupakan zat aktif
yang dapat meningkatkan permeabilitas membran sehingga
terjadi  hemolisis  pada  sel.  Senyawa saponin jika  berinteraksi  dengan  sel bakteri,  bakteri  tersebut  akan  pecah atau lisis (Poeloengan et al , 2012).
Steroid dapat  menyebabkan kebocoran  pada  lisosom  bakteri (Madduluri et al , 2011). Steroid dapat berinteraksi dengan membran fosfolipid sel yang bersifat permeabel terhadap  senyawa-senyawa  lipofilik sehingga  menyebabkan  integritas membran  menurun  serta  morfologi membran  sel  berubah  menyababkan sel rapuh dan lisis.
Senyawa tannin memiliki
mekanisme  kerja  sebagai  antibakteri dengan  cara  menghambat  enzim reverse  transcriptase dan  DNA topoisomerase  sehingga  sel  bakteri tidak  dapat  terbentuk  (Nuria et  al ., 2009).
Gambar 1. Kelangsungan hidup (SR) udang vaname ( Litopenaeus vannamei )

## RPS (Relative Percent Survival)
Nilai RPS tertinggi pada konsentrasi  250  mg/l  yaitu  sebesar 60%,  dimana  konsentrasi  250  mg/l memiliki  mortalitas  udang  terendah, sedangkan  konsentrasi  150  mg/l  dan 350mg/l  memiliki  nilai  RPS  sebesar 40%.  Dari  hasil  uji  statistik  dengan menggunakan  uji  T  nilai  signifikan
konsentrasi  150  mg/l,  250  mg/l  dan 350  mg/l  >  0,05  sehingga  tidak  ada pengaruh  atau  berbeda  nyata  antara perlakuan dengan konsentrasi esktrak yang diberikan.
Penggunaan ekstrak daun mangrove A. alba . dengan konsentrasi 250 mg/l mampu memberikan  perlindungan  lebih  baik
80 + 10 50 + 10 70 + 10 80 + 10 70 + 10 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% K- K+ 150 mg/l 250 mg/l 350 mg/l N ili a S u rv iv a l R a te (% ) Perlakuan a b a a a
sebesar 60% terhadap infeksi  bakteri
V.  harveyi dibandingkan  dengan konsentrasi  150  mg/l  dan  350  mg/l yang  hanya  mampu  melindungi udang  dari  serangan  bakteri V. harveyi (Gambar  2).  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  Parenregi et  al ., (2013)  perlakuan  dianggap  efektif jika nilai RPS > 50%.
Nilai  RPS  dipengaruhi  oleh respon  imun,  semakin  meningkatnya respon  imun  maka  RPS  akan meningkat (Rahmawati, 2017). Semakin  rendah  nilai  RPS  maka semakin  kecil  kemampuan  sinbiotik untuk melindungi udang vaname dari infeksi V. harveyi .
Gambar 2. Relative Percent Survival (RPS) udang vaname ( Litopenaeus vannamei )

## MTD (Mean Time to Death)
Hasil perhitungan MTD (rerata waktu  kematian)  setelah  uji  tantang selama  7  hari  waktu  kematian  pada udang  paling  cepat  pada  perlakuan K+ yaitu jam ke- 34, waktu kematian udang  paling  lama  pada  perlakuan dengan  konsentrasi  250  mg/l  yaitu
jam ke- 75 (Gambar 3). Dari hasil uji statistik  terhadap  nilai  MTD  pada udang vaname ( Litopenaeus vannamei )  berbeda  nyata  (P<0,05). Dari  hasil  uji  lanjut  konsentrasi  150 mg/l,  250  mg/l  dan  350  mg/l  tidak berbeda  nyata  namun  berbeda  nyata dengan perlakuan K+.
Gambar 3. Mean Time to Death (MTD) udang vaname ( Litopenaeus vannamei )
40 + 20 60+ 20 40 + 20 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 150 mg/l 250 mg/l 350 mg/l RPS (% ) Perlakuan 34,33 + 1,52 70 + 2 75 + 3 73 + 6,16 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 K+ 150 mg/l 250 mg/l 350 mg/l M T D (J a m ) Perlakuan b a a a
Ekstrak daun mangrove A. alba efektif  dalam  mencegah  serangan bakteri V.  harveyi pada  udang vaname,  dibuktikan  dengan  waktu kematian udang yang telah diberikan ekstrak daun A. alba 2 kali lipat lebih lama dibandingkan udang yang tidak diberi  ekstrak  daun  mangrove A. Alba .  Waktu  kematian  paling  lama yaitu pada perlakuan 250 mg/l. Sesuai dengan  hasil  RPS  yang  didapat konsentrasi  250  mg/l  paling  efektif dalammencegah  serangan  bakteri V. harveyi , karena menurut Parenregi et al .,  (2013),    perlakuan  dianggap efektif jika nilai RPS > 50%.
Pengolahan kualitas
air dilakukan  dengan  penyiponan  dan pergantian  air  setiap  hari  selama penelitian.  Berdasarkan  hasil  uji kualitas  air  yang  telah  dilakukan sesuai  dengan  SNI  (01-7246-2006) dan  masih  dalam  kisaran  optimum, untuk nilai suhu 28 – 32 °C, pH 7,5 – 8,5, DO minimal 4, dan salinitas 28 – 32  ppt.  Kualitas  air  yang  optimum dalam  budidaya  udang  vaname dengan suhu 28 – 32 °C, pH 7,5 – 8,5 (Haliman et al ., 2008), DO 4 – 6, dan salinitas  28  –  32  ppt  (Rusmiyati, 2012). Dengan  demikian  parameter kualitas  air  selama  pemeliharaan dalam kondisi optimum untuk budidaya udang vaname.
Menurut Haliman et al . (2008), kualitas air yang baik akan
mendukung pertumbuhan dan perkembangan udang vanamei secara optimal.
Sehingga penyebab kematian  udang  bukan  disebabkan faktor  kualitas  air  namun  kematian udang disebabkan oleh faktor penunjang  kelangsungan  hidup  dan ketahanan udang vaname.

## Kesimpulan
Kesimpulan  dari  penelitian  ini yaitu ekstrak daun mangrove Avicenniai  alba mampu  mencegah penyakit  yang  disebabkan  oleh bakteri V.  harveyi ,  dengan  hasil paling  baik  pada  konsentrasi  ekstrak 250 mg/l dimana konsentrasi tersebut dapat  meningkatkan Survival  Rate (SR), Main Time to Date (MTD), dan Relative  Percent  Survival (RPS) paling  tinggi  dibandingkan  dengan perlakuan yang lain.

## Daftar Pustaka
Cendrianti,  F.,  Siti,  M.,  &  Evi,  U.U. 2013.  Uji  Aktivitas  Ekstrak  N- Heksana,  Etil  Asetat,  dan  Etanol 70%  Daun  Tempuyung  ( Sonchus arvensis L.)  pada  Mencit  Jantan Hiperurisemia. Artikel Ilmiah Hasil Penelitian Mahasiswa . Fakultas Farmasi, Universitas Jember, Jember. Davis,  W.,  &  Strout,  T.  1971.  Disc methode of microbiological antibiotic assay. Aplled Microbiology, 22 (4): 59 – 73. Effendie,  M.I.  1979. Metode  Biologi Perikanan . Gramedia Pustaka Utama, Jakarta. Ellis, A.E. (Ed.). 1988. Fish vaccination (No.  4).  Academic Press, London.
Haliman,  R.W.  dan  S.D.  Adijaya. 2008. Udang  vannamei .  Penebar Swadaya, Jakarta, 75 hlm
Handayani,  E.  2012.  Prevalensi
Infeksi Bakteri Patogen pada Ikan Patin  ( Pangasius  hypophthalmus ) di Kawasan Minapolitan Kabupaten  Banjar. Tesis .  Sekolah
Pasca  Sarjana,  Institut  Pertanian
Bogor, Bogor.
Johny,  F.,  Roza,  D.K.,  Mahardika, Zafran,  &  Prijono,  A.  2005. Penggunaan Immunostimulan Untuk  Meningkatkan  Kekebalan Nonspesifik  Benih  Ikan  kerapu Lumpur, Epinephelus coiodes Terhadap  infeksi  Virus  irido. Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia, 11(5): 75 – 83. Kannapiran, E., Ravindran, J.,
Chandrasekar, R., & Kalalarasi, A. 2009.  Studies  on  luminous, V. harveyi Associated  with  Shrimp Culture  System  Rearing Penaeus monodon . J.  Environ.  Biol , 30(5): 791 – 795.
Kharisma,  A.,  &  Manan,  A.  2012.
Kelimpahan  Bakteri Vibrio sp. Pada  Air  Pembesaran  Udang Vannamei ( Litopenaeus vannamei )  sebagai  Deteksi  Dini Serangan Penyakit Vibriosis . Jurnal  Ilmiah  Perikanan  dan
Kelautan , 4(2): 129 – 134.
Lee,  M.H.  &  Shiau,  S.Y.  2004. Vitamin E Requirements of Juvenil Grass Shirmp, P. monodon and effects on Nonspecific
Immune  Responses. Fish  and Shellfish  immunology, 16:  475  – 485.
Madduluri, S., Rao, K.B., & Sitaram,
B.  2013.  In  vitro  evaluation  of antibacterial activity of five indigenous  plants  extract  against five bacterial pathogens of human.
International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science , 5(4):
679 – 684. Nuria, M.C., & Faizatun, A. 2009. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Jarak Pagar ( Jatropha curcas L) Terhadap Bakteri
Staphylococcus  aureus ATCC 25923, Escherichia  coli ATCC 25922,  dan Salmonella  typhi
ATCC  1408. MEDIAGRO , 5(2):
26 – 37.
OIE.  2004. Manual  of  diagnonostic tests  and  vaccines  for  terrestrial animals  5th ed., Chapter  2.  1.  15. Newcastle Disease, Newcastle. Parenrengi,  A.,  Tenriulo,  A.,  &
Tampangallo,  B.R.  2013.  Uji tantang  udang  windu Penaeus monodon trans genis menggunakan  bakteri  patogen V. harveyi . Konferensi  Akuakultur
Indonesia .  Balai  Penelitian  dan Pengembangan Budidaya Air Payau Maros, Sulawesi Selatan. Poeloengan, M., & Praptiwi, P. 2012. Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak kulit  buah  manggis  ( Garcinia mangostana Linn ). Media Litbang Kesehatan , 20(2): 65 – 69. Prasad, R.N., Viswanathan, S., Devi, J.R.,  Nayak,  V.,  Swetha,  V.C., Archana,  B.R.,  &  Rajkumar,  J.
2008.  Preliminary  phytochemical screening and antimicrobial activity of Samanea saman. Journal of Medicinal Plants Research , 2(10): 268 – 270. Rahmawati,  E.  2017.  Ketahanan Udang Vaname ( Litopenaeus vannamei, Boone  1931)  yang Diberi Probiotik Bacillus sp. D2.2 Terhadap infeksi Vibrio alginolyticus . Skripsi .  Universitas Lampung, Bandar Lampung.
Rusmiyati,  S.  2012. Menjala  Rupiah Budidaya Udang Vannamei . Pustaka  Baru,  Yogyakarta,  162 hal.
Septiani, D.R. 2016. Uji kinetika dan aktivitas  antibakteri  dari  bakteri biokontrol Bacillus sp.  D2.2  pada salinitas  dan  pH  yang  berbeda. Skripsi. Universitas  Lampung, Bandar Lampung.

## SNI. 2006. Produksi Udang Vanname
L.  vannamei di  Tambak  dengan Teknologi Intensif. Badan Standarisasi  Nasional:  SNI-01- 7246-2006. Badan Standar Nasional, Jakarta. Widanarni, Noermala, J.I., & Sukenda. 2014. Prebiotik, Probiotik,  dan  Sinbiotik  untuk Mengendalikan  Infeksi V. harveyi
dan IMNV pada Udang Vanname.
Jurnal Akuakultur Indonesia , 13(1): 11 – 20.