## Research Article
Karakterisasi Virus Penyebab Penyakit Belang pada Tanaman Lada ( Piper nigrum L.)
Characterization of Virus Causes of Mottle Disease on Pepper ( Piper nigrum L.)
Trisnani Alif 1) * , Sedyo Hartono 1) , & Sri Sulandari 1)
1) Departemen Hama dan Penyakit Tumbuhan, Fakultas Pertanian, Universitas Gadjah Mada Jln. Flora No. 1, Bulaksumur, Sleman, Yogyakarta 55281
*Penulis untuk korespondensi. E-mail: trisnanialif@gmail.com

## ABSTRACT
Mottle disease is an important disease in pepper plants caused by Piper yellow mottle virus (PYMoV). This study aims to determine the characterization of PYMoV biologically and molecularly. The pepper plant samples were obtained from pepper farmland in Kleben, Putat (Yogyakarta), and Air Buluh (Bangka). Virus particles are measured by electron microscopy. Virus transmission studies include mechanical transmission, vector, cuttings, grafting, and seeds. The molecular detection was done by using Polymerase chain reaction (PCR) method with PYMoV-F and PYMoV-R specific primers. The result, virus particles were found to be ± 30 × 130 nm in shape. Virus transmission studies indicate that PYMoV can be transmitted by Ferrisia virgata vectors, cuttings, grafts and seeds but cannot be transmitted through mechanical inoculation. Molecular test results showed that samples of Kleben, Putat and Air Buluh pepper plants were positively detected to contain PYMoV and amplified at 400 bp. The result of nucleotide base sequence analysis showed the isolates of Putat and Air Buluh had the highest homology with PYMoV of India 2 about 95% while Kleben isolate had 96% homology with PYMoV of India 1.
Keywords: characteristic, mottle disease, pepper, PYMoV

## INTISARI
Penyakit belang merupakan salah satu penyakit penting pada tanaman lada yang disebabkan oleh Piper yellow mottle virus (PYMoV). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui karakterisasi PYMoV secara biologi dan molekuler. Sampel tanaman lada  diperoleh dari lahan petani lada di Desa Kleben, Putat (Yogyakarta), dan Air Buluh (Bangka). Partikel virus diukur dengan mikroskop elektron. Kajian penularan virus meliputi penularan mekanik, vektor, stek, penyambungan, dan biji. Deteksi secara molekuler dengan metode Polymerase chain reaction (PCR) dengan pasangan primer spesifik PYMoV-F dan PYMoV-R. Partikel virus yang ditemukan berukuran ± 30×130 nm berbentuk batang. Kajian penularan virus menunjukkan bahwa PYMoV dapat ditularkan melalui vektor Ferrisia virgata , stek, penyambungan dan biji namun tidak dapat ditularkan melalui inokulasi mekanik . Hasil uji molekuler menunjukkan bahwa sampel tanaman lada Kleben, Putat dan Air Buluh positif terdeteksi PYMoV dan teramplifikasi pada 400 bp . Hasil analisis sekuen basa nukleotida menunjukkan isolat Putat dan Air Buluh memiliki homologi tertinggi dengan PYMoV India 2 sekitar 95% sedangkan isolat Kleben memiliki homologi 96%  dengan PYMoV India 1.
Kata kunci: karakteristik, penyakit belang, tanaman lada, PYMoV
Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia, Vol. 22, No. 1, 2018: 115–123 DOI: 10.22146/jpti.30354

## PENDAHULUAN
Tanaman lada ( Piper nigrum L.) merupakan salah satu tanaman penting pada daerah tropis maupun subtropis di dunia. Tanaman lada merupakan tanaman rempah yang memiliki nilai ekonomi yang tinggi baik di dalam negeri maupun di luar negeri. Tanaman lada ( Piper nigrum L.) banyak dibudidayakan di Indonesia oleh masyarakat, khususnya di wilayah Yogyakarta.
Data produktivitas tanaman lada Indonesia sangat fluktuatif dalam 5 tahun terakhir. Produksi tertinggi
lada nasional mencapai 91.039 ton pada tahun 2013, dan produksi terendah terjadi pada tahun 2014 yaitu ton 81.501 ton (Anonim, 2016). Adapun ekspor lada cenderung menurun. Dari data statistik menunjukkan bahwa ekspor lada terendah terjadi pada tahun 2016 dengan jumlah volume ekspor sebesar 33.645 ton dan nilai 319.829 US$ sedangkan ekspor tertinggi lada terjadi pada tahun 2012 dengan jumlah 62.605 ton dan nilai 423.460 US$ (Anonim, 2016).
Rendahnya nilai ekspor lada disebabkan oleh beberapa faktor di antaranya rendahnya kualitas lada serta terjadinya penurunan produktivitas lada.
Diterima 17 November 2017; diterima untuk diterbitkan 8 Juni 2018
Hal-hal yang berpengaruh terhadap penurunan produktivitas dan kualitas lada di antaranya kurangnya penerapan  teknik  budidaya  yang  baik  dan  benar serta  adanya  serangan  dari  organisme  penggangu tanaman  (OPT).  Beberapa  OPT  penting  yang menyerang pada tanaman lada diantaranya patogen jamur  dan  nematoda  yaitu Phytophthora  capsici , Fusarium solani , dan Meloidogyne incognita (Suryanti et al. , 2015) serta patogen virus.  Patogen virus yang menginfeksi tanaman lada salah satunya yaitu Piper yellow mottle virus (PYMoV) dari genus Badnavirus . Penyakit yang disebabkan oleh virus ini dikenal dengan beberapa nama diantaranya penyakit kuning lada, penyakit kerdil dan penyakit belang (Lakani, 2006). Telah banyak dilaporkan infeksi virus ini diberbagai negara penghasil lada seperti India, Sri Lanka, Malaysia, Vietnam, Thailand, Filipina, dan Brazil (Lockhart et al ., 1997; Sarma et al ., 2001; de Silva et al, 2002; Duarte et al., 2002; Eng, 2002; Bhat et al. , 2003; Oliveira et al. , 2010). Terdapat 33 provinsi di Indonesia yang mengem- bangkan  budidaya  tanaman  lada  salah  satunya Provinsi D.I. Yogyakarta yang tersebar di Kabupaten Gunungkidul dan Kabupaten Sleman. Karakteristik gejala, cara penularan, informasi sebaran dan molekuler diperlukan untuk sebuah perencanaan dalam usaha pengendalian. Analisis nukleotida dapat mengungkap- kan variasi dan hubungan kekerabatan pada level genetik antar isolat PYMoV, serta gambaran dan sebaran dari infeksi virus PYMoV. Penelitian ini bertujuan untuk mengkarakterisasi PYMoV pada tanaman lada secara biologi mapun molekuler.

## BAHAN DAN METODE
Pengamatan Gejala di Lapangan
Pengamatan dilakukan dengan cara survei di lapang untuk mengetahui tingkat kejadian dan intensitas penyakit di lahan. Adapun wilayah pengamatan yang dipilih adalah perkebunan lada di DIY yaitu Desa Kleben, Kecamatan  Seyegan, Kabupaten Sleman, Desa Putat, Kecamatan Patuk, Kabupaten Gunung Kidul,  dan  Desa  Air  Buluh,  Kecamatan  Mendo Barat, Kabupaten Bangka. Kejadian penyakit (KP) dilakukan dengan menghitung jumlah tanaman sakit per jumlah tanaman total dengan rumus:
Pengamatan intensitas penyakit (IP) dihitung dengan melakukan skoring terhadap gejala penyakit berdasar- kan kriteria tertentu (Tabel 1); adapun rumus intensitas penyakit sebagai berikut:
Keterangan:

## Pengamatan  Partikel  Virus  dengan  Mikroskop Elektron
Pengamatan  morfologi  virus  dilakukan  di Laboratorium Jurusan Kimia FMIPA UGM meng- gunakan  mikroskop  elektron  (TEM  JEOL  JEM 1400) dengan tahapan sebagai berikut: Siapan virus yang berasal dari 1×1 cm daun bergejala belang parah yang digerus dengan menggunakan ddH 2 O kemudian dilarutkan dalam 2% Phosphotungstic acid (PTA) pH 6,5 selama ± 15 detik. Kemudian diteteskan pada grid berukuran 400 mesh, selanjutnya dikeringkan dengan kertas filter. Siapan virus yang menempel pada grid diamati di bawah mikroskop elektron yang dioperasikan pada 100KV.

## Uji Penularan Virus
Uji penularan PYMoV dengan cara mekanik . Tanaman uji yaitu Nicotiana tabacum, Chenopodium amaranticolor , dan Piper nigrum L. ditaruh di tempat yang gelap selama satu malam, kemudian sebanyak 0,1 g daun bergejala digerus menggunakan buffer phosphat pH 7 sebanyak 1 ml (1:10). Hasil gerusan disaring  menggunakan  kapas  steril.  Cairan  yang diperoleh  ditambahkan carborundum kemudian diinokulasikan  pada  tanaman  uji  masing-masing perlakuan menggunakan 5 ulangan. Kemudian dibiarkan beberapa saat dan disemprot menggunakan air steril. Pengamatan dilakukan setiap hari dan dicatat waktu awal munculnya gejala. Hasil pengamatan berupa data masa inkubasi virus serta perkembangan gejala penyakit
Uji penularan PYMoV dengan serangga vektor. Uji penularan virus melalui vektor berdasarkan metode Balfas et al. (2007) dengan modifikasi jumlah penularan serangga vektor. Sumber inokulum virus berasal dari tanaman lada yang terserang penyakit belang
IP : intensitas penyakit n : jumlah tanaman terserang dengan kategori tertentu v : nilai skala setiap kategori serangan Z : nilai skala tertinggi N : jumlah tanaman yang diamati
Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia                                                                Vol. 22 No. 1 116
berasal dari perkebunan lada di Desa Putat, Patuk, Yogyakarta. Serangga vektor yaitu Ferrisia virgata (sebelumnya  dilakukan  identifikasi  vektor  oleh Laboratorium  Entomologi  UGM)  diperoleh  dari tanaman lada di kebun petani di Desa Putat, Patuk, Yogyakarta, kemudian dipelihara pada bibit lada sehat  di  rumah  kaca  Fakultas  Pertanian,  UGM. Nimfa instar awal dipindahkan ke sumber inokulum (lada bergejala belang) selama 24 jam. Setelah itu dipindahkan ke lada sehat (tanaman uji) selama 36 jam. Setiap tanaman ditulari dengan serangga sebanyak kontrol, 1, 5, dan 10 ekor serangga untuk setiap tanaman dengan ulangan sebanyak lima kali. Gejala yang yang muncul diamati dan dikonfirmasi dengan deteksi molekuler melalui PCR.
Uji Penularan PYMoV menggunakan stek. Uji penularan pada stek dilakukan dengan mengambil sulur panjat dari inang tanaman sakit. Pada peng- ujian ini digunakan 20 sulur panjat dari 20 tanaman bergejala yang memiliki minimal 1 ruas. Sulur kemudian ditanam pada polybag yang mengandung tanah steril dan kompos dengan perbandingan 1:2. Pengamatan gejala dilakukan pada tunas-tunas daun yang muncul dan mencatat variasi gejala. Kemudian dikonfirmasi dengan deteksi molekuler melalui PCR.
Uji penularan PYMoV melalui biji. Uji penularan virus pada biji dilakukan dengan menyemai biji lada yang diperoleh dari tanaman yang terinfeksi  sebanyak 20 biji. Kemudian diamati gejala yang muncul dan dideteksi dengan metode  PCR.
Deteksi Molekuler dengan PCR (Polymerase chain reaction)
Sampel tanaman lada bergejala terinfeksi PYMoV diambil dari Air Buluh Bangka, Putat, dan Seyegan. Isolasi total DNA tanaman dilakukan menggunakan ATP Genomic DNA mini kit (Plant) (Vogelstein & Gillespie, 1979). Amplifikasi DNA menggunakan primer PYMoV-F: CTATATGAATGGCTAGTGATG dan PYMoV-R: TTCCTAGGTTTGGTATGTATG
(Bhat et al. , 2009). Tahap PCR digunakan PureTaq Ready To Go PCR Beads yang terdiri dari: free water (dH 2 O) sebanyak 20 µl, Primer PYMoV-R dan PYMoV-F masing-masing 1 µl, DNA template 3 µl. Program PCR mengacu pada penelitian Bhat et al . (2009)  dengan  modifikasi  suhu  anealing,  yaitu denaturasi awal pada suhu 94ºC selama 1 menit dilanjutkan dengan 35 siklus yang terdiri dari: suhu denaturasi 94ºC selama 20 detik, suhu anealing 53ºC selama 1 menit, suhu ekstensi 72ºC selama 1 menit, ekstensi akhir pada suhu 72ºC selama 3 menit. Hasil PCR dielektroforesis pada  agarose 1% (0,15 g agarose dalam 15 ml TBE 1X) pada tegangan 50 V selama 45 menit. Selanjutnya, hasil elektroforesis divisualisasi di bawah transilluminator ultraviolet dan didokumen- tasi. Fragmen  DNA  hasil  amplifikasi  PCR  yang positif  terdeteksi  PYMoV  kemudian  dikirim  ke 1stBASE untuk dilakukan analisis sekuensing. Data sekuensing berupa kromatogram dianalisis dengan menggunakan software program MEGA 6.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengamatan Gejala  di Lapangan
Pengamatan  variasi  gejala  infeksi  PYMoV dilakukan  di  Desa  Kleben  Kecamatan  Sayegan Kabupaten Sleman dan di Desa Putat Kecamatan Patuk Kabupaten Gunungkidul. Pengamatan gejala pada  daun  menunjukkan  gejala  berupa  belang kekuningan pada daun, klorotik disertai penebalan daun, dan vein banding (Gambar 1). Pengamatan pada  fase  generatif,  gejala  berupa  ukuran  malai lebih pendek, ukuran buah lebih kecil, serta jumlah buah  dalam  dompolan  lebih  sedikit  atau  tidak terbentuk dengan sempurna (Gambar 2).  Pengamatan variasi gejala penyakit belang pada dua lokasi areal pertanaman lada di Yogyakarta menunjukkan variasi gejala yang sama. Variasi gejala yang diamati mirip dengan gejala yang telah dilaporkan sebagai infeksi dari PYMoV (Bhat et al. , 2003; Lakani, 2006).
Tabel 1. Skor penilaian gejala infeksi PYMoV
Skor Gejala 0 Tanaman tidak bergejala 1 Daun belang ringan dan persentasi sulur yang bergejala 5−10% 2
Daun belang jelas dan persentasi sulur yang bergejala 11−25%
3 Daun belang jelas, menyempit dengan persentasi sulur yang bergejala 26−50% 4
Daun belang jelas, menyempit dengan persentasi sulur yang bergejala 50−75%
5 Daun belang jelas, menyempit dan kerdil dengan persentasi sulur yang bergejala >75%
Alif et al. : Karakterisasi Virus Penyebab Penyakit Belang pada Tanaman Lada ( Piper nigrum L.) 117
Hasil  pengamatan  di  lapangan  menunjukkan kejadian dan intensitas penyakit belang yang berbeda- beda. Pengamatan di Desa Kleben, dengan ketinggian tempat 137 mdpl kejadian penyakit paling tinggi yaitu 93,75% dan intensitas penyakit 86%, intensitas penyakit di Desa Putat, Patuk, Gunungkidul dengan ketinggian tempat 155 mdpl, sebesar 62,54% dan kejadian penyakit sebesar 85%. Sedangkan tingkat intensitas dan kejadian penyakit terendah pada Desa Air buluh, Mendo, Bangka pada ketinggian tempat 48 mdpl yaitu sebesar sebesar 15% dan kejadian penyakit yaitu 25%. Perbedaan ketinggian tempat akan memengaruhi faktor lingkungan seperti suhu, kelembapan dan curah hujan; faktor lingkungan akan memengaruhi adaptasi tanaman terhadap lingkungan, perkembangan dan penyebaran vektor virus. Namun pada  penelitian  ini  diketahui  bahwa  tidak  ada pengaruh antara ketinggian tempat dengan kejadian maupun intensitas penyakit.
Pengamatan  Partikel  Virus  dengan  Mikroskop Elektron
Metode pengamatan quick deeping dengan larutan 2% Phosphotungstic acid (PTA) pH 6,5 selama ± 15 detik. Partikel virus yang teramati berbentuk batang  dengan  ukuran  30×130  nm  (Gambar  3). Penelitian terdahulu melaporkan bahwa PYMoV berbentuk batang dengan ukuran 30×130 nm (de Silva et al. , 2002). Hal ini sesuai dengan morfologi pararetrovirus, famili Caulimovirus, genus Badnavirus yang memiliki bentuk batang, genom berupa dsDNA (Lockhart et al. , 1997).
Uji Penularan Virus Penularan PYMoV dengan cara mekanik. Hasil penularan  penyakit  belang  secara  mekanik  me- nunjukkan dari masing-masing perlakuan tidak ada kenampakan gejala. Uji konfirmasi menggunakan PCR diperoleh hasil yang negatif. Penularan PYMoV
Gambar 1. Variasi gejala pada daun lada di lapangan; (a) klorotik, (b) belang disertai penebalan daun, (c) vein banding
Gambar 2. Variasi gejala pada malai; (a) ukuran malai lebih pendek, (b) ukuran buah lebih kecil, (c) jumlah buah dalam dompolan sedikit
Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia                                                                Vol. 22 No. 1
secara mekanik yang dilakukan oleh de Silva et al. (2002) dengan  menggunakan tanaman indikator tembakau ( Nicotiana spp.) dan Ch. amaranticolor menunjukkan hasil yang negatif. Bhat et al. (2003) melaporkan bahwa PYMoV dapat ditularkan secara mekanik namun konsentrasi virus pada saat ditular- kan sangat  rendah. Hal  ini  membuktikan  bahwa penularan PYMoV sangat sulit ditularkan melalui penularan  mekanik,  diduga  adanya  pengaruh kandungan fenol yang tinggi pada daun lada sebagai inhibitor virus. Hal inilah yang menyebabkan virus tidak dapat ditularkan secara mekanik.
Uji penularan PYMoV melalui vektor. Hasil penularan melalui vektor Ferrisia virgata menun- jukkan  hasil  yang  positif.  Penularan  dengan  10 maupun 5 ekor vektor diperoleh hasil 80% tanaman terinfeksi virus namun pada penularan dengan 1 ekor vektor tidak ditemukan adanya gejala pada
tanaman  uji.  Hal  ini  diduga  adanya  perbedaan konsentrasi awal virus yang terbawa oleh setiap vektor, sehingga baik 5 maupun 10 ekor diperoleh hasil yang sama. Daya tular vektor tergantung pada karakter virus dan dapat bertahan selama virus masih terdapat dalam serangga dan sangat bergantung pada jumlah virus yang masuk ke dalam tubuh serangga (Bos, 1983; Omura et al. , 1983). Salah satu karakteristik BSV genus Badnavirus yang merupakan satu genus dengan  PYMoV  yaitu  virus  semipersisten  yang tidak ditularkan secara transovarial dan tidak pula sirkulatif  di dalam  tubuh  vektor  (Daniells et  al ., 1995; Bhat et al. , 2016). Gejala yang muncul terlihat pada daun muda berupa belang, klorotik ringan dan daun sedikit mengeras (Gambar 4). Gejala muncul pada minggu ke-7 setelah penularan. Penelitian sebelum- nya melaporkan bahwa PYMoV di Indonesia dapat ditularkan dengan vektor Ferrisia virgata dengan hasil penularan sampai 100% (Balfas et al. , 2007).
Gambar 4. Hasil uji penularan melalui vektor; daun muda klorotik ringan, sedikit mengeras dan sedikit bergelombang (tanda panah menunjukkan daun bergejala dengan masa inkubasi 7 minggu)
Gambar 3. Partikel Piper yellow mottle virus pada tanaman lada, metode quick deeping electron microscope dengan cat Phosphotungstic acid (PTA) 2%; partikel berbentuk bacilliform , bar = 50nm
50,0 nm
Alif et al. : Karakterisasi Virus Penyebab Penyakit Belang pada Tanaman Lada ( Piper nigrum L.) 119
Uji penularan PYMoV melalui stek . Tanaman lada  umumnya  diperbanyak  melalui  bahan  per- banyakan vegetatif berupa stek yang diambil dari lahan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa stek tanaman lada yang berasal dari inang yang telah terinfeksi PYMoV positif menunjukkan gejala khas PYMoV pada minggu ke-7, dari total tanaman hasil stek yaitu 20 tanaman yang menunjukkan gejala khas sebesar 95%. Hal ini sesuai dengan penelitian Bhat et al. (2003) yang menyatakan bahwa kemunculan gejala khas PYMoV yang ditularkan melalui stek sekitar 2−3 bulan atau 6−12 minggu. Gejala awal daun menjadi transparan dan belang-belang ringan terlihat pada daun muda (Gambar 5).
Uji penularan PYMoV melalui biji . Penularan melalui biji merupakan penularan untuk mengetahui keterbawaan PYMoV melalui biji lada. Dari peng- ujian ini diketahui bahwa dari 20 biji lada yang ditumbuhkan  menunjukkan  gejala  khas  PYMoV dengan insidensi 5%. Adapun gejala yang muncul meliputi daun mengalami klorotik ringan, klorotik berat atau belang, namun tidak mengurangi ukuran daun  (Gambar  6).  Munculnya  gejala  yaitu  pada minggu ke-18 setelah tanam. Setelah dikonfirmasi dengan deteksi melalui PCR dapat diketahui bahwa sampel yang bergejala positif terinfeksi PYMoV.
Gambar 5. Hasil uji penularan PYMoV melalui stek dengan masa inkubasi 3 minggu; daun muda klorotik (belang)
Gambar 6. Gejala khas PYMoV pada daun berupa belang/
klorotik ringan hasil uji penularan melalui biji dengan masa inkubasi 18 minggu
Hal ini sebagai laporan pertama yang menginformasi- kan bahwa PYMoV di Indonesia dapat ditularkan melalui biji, meskipun insidensi penyakitnya tergolong rendah.
Penularan PYMoV melalui biji telah dilaporkan oleh de Silva et al. (2002) bahwa bibit lada yang berasal dari biji terdeteksi terinfeksi PYMoV namu sangat rendah insidensi penyakitnya, dari 600 biji yang diuji hanya 3 biji yang terdeteksi terinfeksi oleh PYMoV. Hal ini diperkuat dengan laporan dari Haresh  dan  Bhat  (2010)  bahwa  PYMoV  dapat ditularkan melalui biji dengan insidensi berkisar 22−30%. Deeshma dan Bhat (2014) melaporkan bahwa PYMoV merupakan virus yang dapat terbawa melalui biji, adapun bagian-bagian biji yang telah diuji dan positif mengandung PYMoV adalah anthers, embrio, endosperm , dan perisperm .
Deteksi Molekuler melalui PCR
Hasil isolasi DNA pada 3 daun yang bergejala dari 3 lokasi yang berbeda-beda yaitu Desa Kleben, Kecamatan Seyegan, Kabupaten Sleman; Desa Putat, Kecamatan  Patuk,  Kabupaten  Gunungkidul;  dan Desa Air Buluh, Kecamatan Mendo Barat, Kabupaten Bangka menunjukkan kualitas DNA total (tanaman dan virus) yang bagus.
Hasil  deteksi  PCR  target  teramplifikasi  pada suhu anealing 53ºC dengan Primer PYMoV-R dan PYMoV-F dengan adanya pita DNA pada panjang basa ± 400 bp (Gambar 7). Ukuran pita DNA yang didapatkan sesuai dengan penelitian Bhat et al . (2009) dengan menggunakan primer spesifik PYMoV-R dan PYMoV-F PYMoV teramplifikasi pada panjang basa 400 bp. Pada penelitian ini diketahui bahwa virus
Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia                                                                Vol. 22 No. 1 120
Ta be l 2 . P er se nt as e k es am aa n b as a n uk leo tid a P YM oV is ol at Pu tat , K leb en , d an A ir Bu lu h d en ga n i so lat P YM oV ya ng tel ah d ip ub lik as ik an d i da ta ba se NC BI
No . Iso lat Ko de ak se si 1 2 3 4 5 6 7 8 9
1. Iso lat P ut at ID 2. Iso lat K leb en 93 ID 3. Iso lat A ir Bu lu h 96 92 ID 4. PY M oV In di a 1 KJ 19 54 81 .1 96 92 95 ID 5. PY M oV In di a 2 DQ 83 62 37 .1 91 96 90 91 ID 6. PY M oV C hi na 1 KT 31 57 27 .1 95 93 93 94 93 ID 7. PY M oV In di a 3 KJ 19 54 77 .1 91 95 91 90 95 92 ID 8. PY M oV In di a 4 KJ 19 54 69 .1 93 94 92 92 92 93 91 ID 9. PY M oV C hi na 2 KT 31 57 25 .1 94 92 92 94 90 94 89 91 ID
belang yang disebabkan oleh PYMoV ditemukan pada perkebunanan petani lada baik di Yogyakarta maupun Bangka.
Berdasarkan  hasil  BLAST  terhadap  runutan sekuen nukleotida dari ketiga sampel, rata-rata sampel dari Indonesia memiliki kemiripan yang tinggi dengan isolat-isolat yang ada di database GeneBank yaitu sebesar 89−96%, selain itu kemiripan antar sampel uji  juga  tergolong  tinggi  yaitu  sampel  asal  Putat memiliki kemiripan 96% terhadap sampel asal Air Buluh  dan  sebesar  92%  terhadap  sampel  Kleben sedangkan  sampel  asal  Putat  memiliki  kemiripan 91%  terhadap  sampel  asal  Air  Buluh  dan  96% terhadap PYMoV India 2 (Tabel 2).
Kekerabatan sekuen ketiga sampel uji dengan PYMoV isolat lain yang ada di database Genebank kemudian dibuat rekonstruksi pohon filogenetiknya menggunakan  progam MEGA  6 dengan  metode Neighbor Joining (NJ). Hasil rekonstruksi pohon filogenetik menunjukkan bahwa terdapat dua grup besar. Grup pertama dikelompokkan lagi menjadi dua subgrup yaitu subgrup satu terdiri dari PYMoV India 2 (DQ836237.1), PYMoV India 3 (KJ195477.1),
isolat Kleben, dan PYMoV India 4 (KJ195469.1), sedangkan subgrup dua yaitu PYMoV China 1 (KT31527.1) dan PYMoV China 2 (KT315727.1). Adapun grup kedua yaitu isolat Putat, isolat Air Buluh dan PYMoV India 1 (KJ195481.1) (Gambar 8). Hal ini menunjukkan bahwa isolat PYMoV asal Indonesia membentuk kelompok yang berkerabat dekat dengan beberapa isolat PYMoV dari beberapa negara lain. Sekuen PYMoV asal Kleben diketahui berkerabat dekat dengan PYMoV India 2, 3, dan 4 sedangkan isolat  Putat  dan Air  Buluh  diketahui  berkerabat paling dekat dengan isolat PYMoV India 1.
Gambar 7. Hasil amplifikasi PCR menggunakan Primer spesifik PYMoV-R dan PYMoV-F pada tanaman lada dari tiga lokasi; (M) Marker 1kb, (1) kontrol negatif, (2) kontrol positif, (3) sampel Putat, (4) sampel Kleben, (5) sampel Air Buluh
Alif et al. : Karakterisasi Virus Penyebab Penyakit Belang pada Tanaman Lada ( Piper nigrum L.) 121
Gambar 8. Pohon filogenetik sampel uji dibandingkan dengan beberapa isolat PYMoV lain yang telah dipublikasi di database Genebank NCBI

## KESIMPULAN
Penyebab penyakit belang pada perkebunan lada di Putat, Kleben, dan Bangka adalah PYMoV. Gejala khas yang ditimbukan berupa belang parah pada daun. PYMoV memiliki ukuran 30×130 nm berbentuk batang. PYMoV dapat ditularkan melalui vektor Ferrisia virgata , stek dan melalui biji, serta tidak dapat ditularkan secara mekanik. DNA virus teramplifikasi pada 400 bp, isolat Putat dan Air Buluh memiliki homologi tertinggi dengan PYMoV India 2 sekitar 95%, sedangkan isolat Kleben memiliki homologi 96% dengan PYMoV India 1.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Artikel ini disusun berdasarkan sebagian data dari tesis penulis pertama dalam rangka pencapaian derajat M.Sc. pada Program Studi Fitopatologi, Universitas Gadjah Mada. Ucapan terima kasih penulis sampaikan kepada tim peneliti lada kerja sama Pemerintah Provinsi Bangka Belitung dan Universitas Gadjah Mada.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim (Dirjenbun). 2016. Statistik Perkebunan Indonesia Lada 2015 − 2017 . Direktorat Jenderal Perkebunan, Jakarta. 36 hlm.
Balfas, R., I. Lakani, Samsudin, & Sukamto. 2007. Penularan Penyakit Kerdil pada Tanaman Lada oleh Tiga Jenis Serangga Vektor. Jurnal Littri 13:136−141.
Bhat, A.I., A. Sijo, M.V. Jiby, C.K. Thankamni, & P.A. Mathew. 2009. Polymerase Chain Reaction (PCR) Based Indexing of Black Pepper ( Piper nigrum L.) against Piper yellow mottle virus . Journal of Spices and Aromatic Crops 18: 28−32.
Bhat,  A.I.,  H.  Thomas,  &  R.  Selvarajan.  2016. Badnaviruses:  The  Current  Global  Scenario. Viruses 177: 1−29.
Bhat, A.I., S. Devasahayam, Y.R. Sarma, & R.P. Pant. 2003. Association of a Badnavirus in Black Pepper ( Piper nigrum L.) Transmitted by Mealybug ( Ferrisia virgata ) in India. Current Science 84: 1547−1550.
Bos, L. 1983. Pengantar Virologi Tumbuhan , (diterjemahkan  oleh  Triharso).  Gadjah  Mada Press, Yogyakarta. 389 hlm.
Daniels, B.A. & H.D. Skipper. 1982. Methods for Recovery  and  Quantitative  Estimation  of Propagules from Soil. American Phytopathological Society 29: 29−35. Daniells, J., J. E. Thomas, & M. Smith. 1995. Seed and Transmission of Banana streak virus Confirmed. Infomusa 4: 1−7. Deeshma, K.P. & A.I. Bhat. 2014. Futher Evidence of  True  Seed  Transmission  of  Piper  Yellow Mottle Virus in Black Pepper ( Piper nigrum L.). Journal of Plantation Crops 42: 289−293. de  Silva,  D.P.P.,  P.  Jones,  &  M.W.  Shaw.  2002. Identification and Transmission of Piper yellow mottle virus and Cucumber mosaic virus Infecting Black Pepper ( Piper nigrum ) in Sri Lanka. Plant Phatology 51: 537−545. Duarte, M.L.R., P.C. Filho, & M.S.F. Dantas. 2002. Pest and Diseases of Black Pepper in Brazil. International Pepper News Bulletin. The Journal for the Pepper Industry . July−December 2002: 24−34.
Eng, L. 2002. Viral Disease and Root-Knot Nematode Problems of Black Pepper ( Piper nigrum L.) in Sarawak, Malaysia. International Pepper News Bulletin . The Journal for the Pepper News Bulletin. July−December 2002: 39−45.
Haresh, P.S. & A.I. Bhat. 2010. Seed Transmission of Piper yellow mottle virus in Black Pepper ( Piper nigrum L.). Journal of Plantation Crops 38: 62−65.
Lakani, I. 2006. Deteksi dan Identifikasi Penyebab Penyakit Belang (Mottle) pada Tanaman Lada
( Piper nigrum L.) di Indonesia. Tesis. Institut Pertanian Bogor, Bogor. 38 hlm.
Lockhart, B.E.L., K.K. Anggul, P. Jones, L. Eng, D.P.P. de Silva, N.E. Olszewski, N. Lockhart, N. Deema, & J. Sangalang. 1997. Identification of Piper yellow mottle virus , a Mealybug-Transmitted Badnavirus  Infecting Piper spp.  in  Southeast Asia. European Journal of Plant Pathology 103: 303−311.
Oliveira, A.C.S., A.J. Boari, C.M. de Sousa, K.F.C. Pantoja, & C.D.A. Souza. 2010. Identification of Piper yellow mottle virus on Black Pepper ( Piper nigrum) in the States of Minas Gerais, Espirito Santo and Amazonas, Brazil. Horticultura Brasileira 28: S952−S956.
Omura T, Y. Saito, T. Usugi, & H. Hibino. 1983. Purification and Serology of Rice tungro spherical and Rice tungro bacilliform virus . Annals of the Phytopathologycal Society of Japan 49: 73−76.
Sarma,  Y.R.,  G.  Kiranmai,  P.  Sreenivasulu,  M. Anandaraj, M. Hema, M. Venkatramana, A.K. Murthy,  &  D.V.R.  Reddy.  2001.  Partial Characteritation  and  Identification  of  a Virus Associated with Stunt Disease of Black Pepper ( Piper nigrum ) in South India. Current Science 80: 459−462.
Suryanti, B. Hadisutrisno, Mulyadi, & J. Widada. 2015.  Identifikasi  Fusarium  dan  Nematoda Parasitik  yang  Berasosiasi  dengan  Penyakit Kuning  Lada  di  Kalimantan  Barat. Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia 19: 19−26. Vogelstein, B. & D. Gillespie. 1979. Preparative and Analytical Purification of DNA from Agarose. Proceedings of the National Academy of Sciences 76: 615−619.
Alif et al. : Karakterisasi Virus Penyebab Penyakit Belang pada Tanaman Lada ( Piper nigrum L.) 123