p-ISSN         : 2087-9423
e-ISSN         : 2620-309X

## PENGARUH PEMBERIAN HORMON 17β-ESTRADIOL TERHADAP PERKEMBANGAN GONAD SIPUT GONGGONG Laevistrombus turturella
EFFECT OF 17β-ESTRADIOL HORMONE ADMINISTRATION ON THE DOG CONCH’S Laevistrombus turturella GONAD DEVELOPMENT
Muzahar 1 , Muhammad Zairin Jr. 2 *, Fredinan Yulianda 3 , Muhammad Agus Suprayudi 2 , Alimuddin 2 dan Irzal Effendi 2
1 Program Studi Budidaya Perairan, FIKP-UMRAH, Tanjungpinang, 29124, Indonesia
2 Departemen Budidaya Perairan, FPIK-IPB, Bogor, 16680, Indonesia
3 Departemen Manajemen Sumberdaya Perairan, FPIK-IPB, Bogor, 16680, Indonesia *E-mail: zairinmz@live.com

## ABSTRACT
Dog conch Laevistrombus turturella is captured intensively, therefore, their population is decline. The dog conch culture is needed to maintain their population. The technology towards conch reproduction is  still  not  developed  yet  in  Indonesia.  The  17β-estradiol  hormone  in  conch  and  some  mollusks  has been stated by some researcher yet its main role in conch reproduction process has not widely known. The study about the addition of 17β-estradiol hormone in accelerating gonad development has never been  reported.  The  aim  of  this  study  was  to  evaluate  the  impact  of  the  addition  of  17β-estradiol against  dog  conch’s  gonad  development.  This  study  used  three  treatments  for  three  groups  of  dog conch  those  were  without  injection  (P1),  injection  by 30  µL  of  corn  oil  mixed  with  absolute  ethanol (P2), and 30 µL of 17β-estradiol stock solution (P3). After injection, the dog conch was reared in pens culture  in  their  natural  habitat  for  30  days.  This  study  showed  that  the  injection  of  a  17β-estradiol solution  (P3)  stimulated  the  dog  conch’s  gonad  development  as  evidenced  by  greater  oocyte  mean diameter  than  another  treatment.  The  mean  of  gonadal  weight  and  GSI  on  P3  treatment  was  also higher  than  treatments  P1  and  P2.  SDS-PAGE  analysis  showed  that  dog  conch’s  hemolymph  has several  kinds  of  proteins  with  varying  molecular  weights.  Proteins  with  a  molecular  weight  of  54-55 kDa are predicted as dog conch’s vitellogenin.
Keywords: 17β-estradiol hormone, dog conch, gonad development, Laevistrombus turturella

## ABSTRAK
Siput  gonggong Laevistrombus  turturella semakin  intensif  ditangkap  sehingga  populasinya  di  alam menurun.  Upaya  budidaya  gonggong  diperlukan  untuk  menjaga  populasinya.  Teknologi  reproduksi siput  belum  banyak  dikembangkan  di  Indonesia.    Keberadaan  17β-estradiol  pada  siput  dan  moluska lain  telah  dinyatakan  oleh  beberapa  peneliti,  namun  perannya  dalam  proses  reproduksi  siput  belum banyak  diketahui.  Penelitian  tentang  pemberian  17β-estradiol  untuk  memacu  perkembangan  gonad gonggong  belum  pernah  dilaporkan.  Penelitian  ini  bertujuan  mengaji  pengaruh  pemberian  17β- estradiol  terhadap  perkembangan  gonad  gonggong.  Ada  tiga  perlakuan  yang  diberikan  pada  tiga kelompok  gonggong,  yaitu  masing-masing  tanpa  suntikan  (P1),  suntikan  30  µL/ekor  larutan  minyak jagung  dan  etanol  absolut  (P2),  serta  suntikan  30  µL/ekor  larutan  17β-estradiol  (P3).  Pascasuntikan, gonggong  dipelihara  dalam pensculture di  habitat  alaminya  selama  30  hari.  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa perlakuan suntikan larutan 17β-estradiol (P3) menstimulasi perkembangan gonad gonggong  yang  dibuktikan  dengan  nilai  rata-rata  ukuran  diameter  oosit  yang  lebih  besar  daripada perlakuan lain. Nilai rata-rata bobot gonad dan GSI perlakuan P3 juga lebih besar dibanding perlakuan P1  dan P2.  Analisis  SDS-PAGE  menunjukkan  hemolimfa  gonggong  memiliki  beberapa  jenis  protein dengan  berat  molekul  bervariasi.  Protein  dengan  berat  molekul  54-55  kDa  diprediksi  sebagai vitelogenin gonggong.
Kata kunci: gonggong, hormon 17β-estradiol, Laevistrombus turturella , perkembangan gonad

## I. PENDAHULUAN
Gonggong Laevistrombus  turturella merupakan siput laut yang  sangat terkenal di Provinsi  Kepulauan  Riau  (Kepri)  sebagai seafood dengan  rasa  daging  yang  enak. Gonggong mengandung protein hewani yang tinggi,  yaitu  38,91%  pada  bagian  otot,  dan 46,65%  pada  bagian  jeroan,  namun  kadar lemak  dan  kolesterolnya  rendah,  masing- masing  0,78-2,26  mg/100  g  dan  9,89-24,95 mg/100g  (Muzahar  dan  Viruly,  2014). Gonggong  memiliki  nilai  ekonomis  tinggi dan  merupakan  sumber  mata  pencarian  bagi penduduk yang bertempat tinggal di sepanjang pantai Pulau Bintan, Pengujan dan Dompak.  Gonggong  merupakan  ikon  Kota Tanjungpinang-Provinsi  Kepri.  Gonggong semakin intensif ditangkap sehingga populasinya  di  alam  cenderung  menurun ditandai  dengan  ukuran  tangkap  semakin kecil  dan  jumlah  yang  diperoleh  semakin sedikit (Muzahar dan Hakim, 2018). Populasi gonggong  dapat  dilestarikan  dengan  cara dibudidayakan,  namun  teknologi  rekayasa reproduksi  siput  gonggong  belum  ber- kembang.  Informasi  fisiologi  reproduksi  dan pematangan  gonad  gonggong  pun  masih sangat  terbatas.  Namun,  informasi  mengenai waktu  dan  laju  kematangan  gonad  dapat ditetapkan berdasarkan pengamatan makroskopis  warna  gonad  dan  pengamatan mikroskopis  jaringan  gonad  matang  dengan mikroskop seperti  yang telah dilakukan pada siput Strombus canarium (Cob et al ., 2008a). Salah satu cara dalam merangsang kematangan  gonad  dan  reproduksi  pada hewan-hewan  akuatik  adalah  dengan  induksi hormonal (Tarsim et al ., 2007).
Hormon  steroid  seperti  17β-estradiol, testosteron  dan  progesteron  merupakan regulator  penting  pada  reproduksi,  fisiologi, dan  perkembangan  dalam  berbagai  taksa hewan,  termasuk  moluska  (Keay et  al., 2006).  Hormon  tersebut  terlibat  dalam kontrol  reproduksi,  pertumbuhan,  meta- bolisme  energi,  dan  sirkulasi  darah  dan  air pada  moluska  (Pinder et  al., 1999),  dan
terbukti ikut berperan dalam proses pengendalian reproduksi pada golongan siput seperti pada bekicot Achatina fulica (Kruatrachue et  al .,  1996),  kelinci  laut Aplysia  depilans (Di  Prisco et  al., 1973), siput  laut Thais  clavigera (Lu et  al., 2001), serta  pada  golongan  kekerangan  seperti kerang Sinonovacula  constricta (Yan et  al ., 2011), dan tiram Crassostrea gigas (Matsumoto et  al., 1997).  Induksi  hormonal dengan  menggunakan  hormon  17β-estradiol telah dilaporkan dapat menginduksi kematangan gonad berbagai spesies krustasea dan  moluska.  Pemberian  17β-estradiol  pada tahap  perkembangan  gonad  induk  udang putih Litopenaeus  vannamei meningkatkan nilai gonado  somatic  index (GSI)  dan  rerata diameter  oosit  perlakuan  relatif  lebih  tinggi dibandingkan kontrol, masing-masing sebesar  0,453  dan  23,97  µm  (Tarsim et  al ., 2007).  Pemberian  hormon  17β-estradiol berhasil  menginduksi  perkembangan  gonad kerang laut Placopecten magellanicus (Wang and Croll, 2004). Penyuntikkan 17β-estradiol dilaporkan juga secara signifikan meningkatkan  diameter oosit  dan  kandungan vitelin  pada  gonad  betina  tiram C.  gigas , serta  pada  kerang Patinopecten  yessoensis (Li et  al., 1998;  Osada et  al., 2003).  Dari beberapa  laporan  tersebut, diduga pemberian 17β-estradiol  dapat  memicu  perkembangan dan  kematangan  gonad  pada  moluska. Namun,  pemberian  hormon  17β-estradiol terhadap  perkembangan  gonad  gonggong L. turturella belum pernah dilakukan sebelumnya.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk menganalisis  pengaruh  pemberian  hormon 17β-estradiol  terhadap  perkembangan  gonad gonggong L.  turturella sebagai  salah-satu usaha  pengembangan  teknologi  rekayasa reproduksi pada biota ini.

## II. METODE  PENELITIAN

## 2.1. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Mei-Desember  2018  di  laut  Madong- Tanjungpinang  dan  Laboratorium  Program
Studi  Budidaya  Perairan,  Fakultas  Ilmu Kelautan dan Perikanan, Universitas Maritim Raja Ali Haji, Tanjungpinang.

## 2.2. Rancangan Percobaan
Ada  dua  faktor  perlakuan  dalam penelitian  ini,  yaitu  (1)  faktor  disuntik  dan tidak  disuntik,  dan  (2)  faktor  disuntik  dan tanpa disuntik 17β-estradiol.  Perlakuan yang dilakukan  terdiri  atas:  tanpa  suntikan  (P1), diberi  suntikan  30  µL/ekor  larutan  minyak jagung dan etanol absolut tanpa 17β-estradiol (P2),  dan  diberi  suntikan  30  µL/ekor  larutan stok  17β-estradiol  (P3).  Masing-masing perlakuan  dengan  tiga  kali  ulangan.  Volume larutan  yang  disuntikan  mengacu  pada penelitian  Wang  and  Croll  (2004)  pada kerang laut Placopecten magellanicus . Gonggong  disuntik  pada  bagian  otot  kaki. Pasca-suntik, gonggong dipelihara selama 30 hari  dalam  masing-masing  tiga pensculture untuk  setiap  perlakuan  dengan  kepadatan  10 ekor/ pens. Selama  pemeliharaan,  gonggong memperoleh  makanan  hanya  dari  substrat dasar  yang  ada  di  dalam pens .  Detail rancangan penelitian ditampilkan pada Tabel 1.
Tabel 1.   Rancangan penelitian penyuntikan hormon 17β-estradiol pada gonggong L. turturella. Perlakuan
Jumlah sampel (ekor) Rerata panjang cangkang total (mm) Tanpa suntikan (P1) 30 50,89 ± 1,88 Suntikan 30µL/ekor larutan minyak jagung dan etanol absolut (P2) 30 51,82 ± 2,46 Suntikan 30µL/ekor larutan stok 17β-estradiol (P3) 30 51,84 ± 0,85
2.3. Penyiapan Pens Culture
Sebanyak  sembilan  buah pens untuk wadah  budidaya  gonggong  dibuat  di  habitat alaminya di perairan laut Madong-
Tanjungpinang (00°58'55.60" N dan 104°27'01.86"  E)  masing-masing  dengan ukuran  2×1×0,5  m 3 dan  kedalaman  air  0,15- 1,80 m. Tiang pancang pens dibuat dari kayu berdiameter  5-10  cm  dengan  tinggi  3  m  dan ditancapkan  sedalam  75-100  cm  ke  dalam sedimen.  Bagian  dinding  dipasang  jaring nilon  berwarna  hijau  dengan mesh  size 1,0 inci. Tiang pancang dan jaring diberi penguat berupa  batang  kayu  berbentuk-V  yang ditancapkan ke dalam sedimen.
Gambar 1. Pens untuk pemeliharaan gonggong pascasuntikan.

## 2.4. Penyiapan Gonggong dan Hormon
17β-estradiol
Gonggong  yang  digunakan  berada pada stadia muda. Ukuran gonggong ditampilkan  pada  Tabel  1.  Gonggong diperoleh  dari  perairan  laut  Kampong Madong,  Kota  Tanjungpinang.  Gonggong dipilih  berdasarkan  kriteria  Cob et  al . (2008b)  dan  Sanchez et  al .  (2016),  yaitu memiliki  gonad  yang  berwarna  kehitaman, dan  berada  pada  fase  awal  oogenesis  yang dicirikan dengan ukuran oosit kecil.  Hormon yang digunakan adalah 17β-estradiol produksi  Argent  Laboratories  Inc.  (Makaty City,  Philippines).  Larutan  stok  hormon disiapkan mengikuti metode Wang and Croll (2004)  dengan  sedikit  modifikasi:  0,105  g 17β-estradiol  dilarutkan  dalam  5  mL  etanol absolut,  kemudian  dilarutkan  dalam  100  mL minyak  jagung  (pengenceran  1:20).  Etanol
berfungsi sebagai pelarut dan minyak jagung berfungsi sebagai zat pembawa  hormon agar mudah  bergabung  dengan  cairan  tubuh (Wang  and  Croll,  2004).  Konsentrasi  akhir larutan  stok  17β-estradiol  adalah  1000 µg/mL.

## 2.5. Analisis Konsentrasi 17β-estradiol Hemolimfa Gonggong
Hemolimfa gonggong
diambil masing-masing  dari  tiga  ekor  gonggong  dari setiap perlakuan pada hari ke- 0, 4, 7, 10, 13, 16 dan 30 pemeliharaan. Hemolimfa diambil dari  bagian  kaki  gonggong  menggunakan jarum  suntik  berukuran  0,60  ×  32  mm. Hemolimfa  yang  diperoleh  dimasukkan dalam  tabung  mikro  tanpa  diberi  anti- koagulan  dan  sentrifugasi,  kemudian  di- simpan  pada  suhu  -20ºC  (modifikasi  metode Sathyan et al ., 2012).
Analisis konsentrasi hormon estradiol hemolimfa dilakukan dengan metode
enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) mengacu pada metode Setiadi et al . (2014)  di  Laboratorium  Hormon,  Unit Rehabilitasi  Reproduksi  (URR)  Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor. Sampel hemolimfa diencerkan secara bertingkat menggunakan aquabidestilata dengan  perbandingan  mulai  dari  1:0  hingga 1:16.  Sebanyak  25  μL  duplo  larutan  standar dan  masing-masing  sampel  dimasukkan  ke dalam  setiap  sumur  terpilih.  Setelah  itu  200 μL  larutan  enzim  konjugat  dimasukkan  ke dalam setiap sumur kecuali blanko kemudian ditutup dengan cling film dan dihomogenkan dengan  cara  digoyangkan  secara  perlahan selama  10  detik.  Setelah  itu,  dilakukan inkubasi  selama  120  menit  pada  suhu  ruang. Setelah  diinkubasi,  setiap  sumur  dicuci dengan 400 μL washing solution sebanyak 3- 4  kali  pencucian,  kemudian  dihentak- hentakan  secara  perlahan  di  atas  kertas ( absorbent  paper )  untuk  mengeluarkan cairan  dalam  sumur-sumur  secara  tuntas. Sebanyak  200  μL  larutan  substrat  di- masukkan  ke  dalam  setiap sumur  kemudian ditutup  dengan cling  film dan  diinkubasi
selama  15  menit  pada  suhu  ruang.  Reaksi enzimatis  dihentikan  dengan  menambahkan 100  μL stop  solution (0,5  M  H 2 SO 4 )  ke dalam  setiap  sumur.  Pembacaan absorbance menggunakan  ELISA reader selama  10 menit pada panjang gelombang 450 ± 10 nm.

## 2.6. Analisis Pertumbuhan Bobot
Gonad dan GSI Gonggong .
Pada  akhir  pemeliharaan  dilakukan penimbangan  bobot  total  gonad  dan  bobot tubuh  lunak  gonggong  untuk  memperoleh nilai gonado somatic indeks (GSI). Nilai GSI dihitung  dengan  formulasi  di  bawah  ini (Marentette and Corkum, 2008):
……………..………….. (1)
Keterangan:
Bg  =  bobot  gonad  (g);  Bt  =  bobot  tubuh lunak total (g).

## 2.7. Histologi Gonad dan Diameter Oosit
Gonggong  dibedah  untuk  pemeriksa- an  histologi.  Analisis  histologi  gonad mengadopsi  metode  Sanchez et  al. (2016) dengan modifikasi. Gonad gonggong difiksasi  dalam  larutan  Bouin  selama  24-36 jam dan disimpan dalam etanol 70% sebelum dibuat  preparat  histologis.  Gonad  dipotong untuk  dehidrasi  dengan  alkohol, embedding , parafinisasi,  dan clearing dengan  kloroform. Hematoksilin  dan  asam  eosin  digunakan untuk  mewarnai  irisan  sampel.  Preparat dibuat  setebal  8  µm  dan  diamati  me- nggunakan  mikroskop  untuk  mengamati tingkat kematangan gonad gonggong. Ukuran  diameter  oosit  dikuantifikasi  pada tahapan  oogenesis  dengan  mengukur  100 butir  oosit  dari  tiga  individu  dari  masing- masing perlakuan. Rerata dan standar deviasi dihitung  untuk  setiap  ciri-ciri/sifat  untuk masing-masing perlakuan.

## 2.8. Analisis Vitelogenin Hemolimfa
dengan SDS-PAGE
Analisis  vitelogenin  hemolimfa  di-
lakukan  dengan Sodium  Dodecyl  Sulfate Polyacrylamide  Gel  Electroforesis (SDS ‐ PAGE; Bio-Rad ),  yaitu  analisis  jenis  protein berdasarkan  berat  molekul.  Prosedur  analisis yang dilakukan dengan memodifikasi metode Nurilmala  and  Ochiai  (2016).  Persiapan SDS-PAGE menggunakan 12,5% gel pemisah  dan  3%  gel  penahan.  Volume sampel  yang  dianalisis  sebanyak  10  µL  dan marker  (250  KDa)  sebanyak  3  µL.    SDS- PAGE dijalankan pada program 170 Volt, 13 mA selama 2,5 jam.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1. Hasil

## 3.1.1. Analisis Konsentrasi 17β-estradiol Hemolimfa Gonggong
Konsentrasi  17β-estradiol  hemolimfa gonggong  sebelum  dan  sesudah  penyuntikan ditampilkan pada Gambar 2.
Kenaikan  konsentrasi  17β-estradiol hemolimfa  terjadi  pada  semua  perlakuan pada hari ke-4 pascasuntik. Konsentrasi 17β- estradiol  pada  semua  perlakuan  mengalami
penurunan pada hari ke-10 dan  naik kembali sampai  hari  ke-16.  Setelah  itu  perlakuan suntikan  larutan  etanol  absolut  dan  minyak jagung  naik  sampai  pada  hari  ke-30, sedangkan  perlakuan  lainnya  mengalami sedikit penurunan.

## 3.1.2. Analisis Pertumbuhan Bobot
Gonad dan GSI Gonggong .
Hasil  pengukuran  rata-rata  bobot tubuh  lunak,  bobot  gonad  dan  nilai  GSI gonggong  ditampilkan  pada  Tabel  2.    Bobot gonad, bobot tubuh lunak dan GSI gonggong di  akhir  perlakuan,  setelah  pemeliharaan  30 hari  pada  semua  perlakuan  mengalami kenaikan  dibanding  di  awal,  kecuali  nilai GSI perlakuan tanpa suntikan (P1). Perlakuan suntikan larutan stok 17β-estradiol (P3)  memiliki  nilai  lebih  tinggi  pada pertumbuhan  bobot  gonad  dan  bobot  tubuh lunak  gonggong.  Nilai  GSI  antar  perlakuan tidak  berbeda  nyata,  namun  perlakuan  P3 memiliki nilai lebih tinggi dibanding perlakuan lain.
Gambar 2.  Rata-rata  konsentrasi  17β-estradiol  hemolimfa  sebelum  dan  sesudah  diberi suntikan  hormon.  P1=  tanpa  suntikan;  P2=  suntikan  30  µL/ekor  larutan  etanol absolut dan minyak jagung; P3= suntikan 30 µL/ekor larutan stok 17β-estradiol.

## 3.1.3.  Histologi Gonad dan Diameter Oosit
Hasil  pengamatan  histologi  gonad siput  gonggong  30  hari  pascasuntik  hormon ditampilkan  pada  Gambar  3.  Parenkima gonad  pada  ketiga  perlakuan  dan  gonad sebelum  perlakuan  tampak  didominasi  oleh kelenjar  pencernaan  pada  bagian  tengah (tanda  panah  biru),  sedangkan  folikel-folikel oosit  hanya  pada  bagian  tepi  (tanda  panah kuning). Jumlah  oosit  yang  teramati  pada perlakuan suntikan larutan 17β-estradiol (P3) dan tanpa suntikan (P21) sebanyak 100 oosit, lebih  banyak  dibanding  perlakuan  P2  (89 oosit)  dan  gonad  awal  (26  oosit).  Rerata ukuran  diameter  oosit  yang  teramati  juga lebih  besar pada perlakuan P3 dibanding P1, P2  dan  gonad  awal.  Analisis  sebaran diameter  oosit  gonggong  pada  hari  ke-30 pascasuntikan ditampilkan pada Gambar 4.
Setelah  30  hari  pemeliharaan,  ukuran rata-rata  diameter  oosit  gonad  perlakuan suntikan  larutan  17β-estradiol  (P3)  berbeda nyata  (P<0,05)  dibanding  perlakuan  P1  dan P2.  Gonggong  pada  perlakuan  P3  memiliki lebih banyak telur yang berukuran besar.
Gambar 3.  Histologi gonad gonggong betina sebelum, dan pascasuntikan setelah  pemeliharaan  30  hari, masing-masing:  sebelum  per- lakuan (SP), tanpa suntikan (P1),
suntikan  30  µL/ekor  larutan minyak jagung dan etanol absolut (P2),  dan  suntikan  30  µL/ekor larutan 17β-estradiol (P3). Tanda panah kuning menunjukkan oosit, tanda  panah  biru  menunjukkan kelenjar  pencernaan.  Pewarnaan HE dan perbesaran 40 × 10.
Setelah hari kesepuluh, kondisi organ dan  fisiologi  gonggong  normal  kembali sehingga kadar 17β-estradiol hemolimfa naik kembali  menuju  pematangan  gonad.  Kadar 17β-estradiol  hemolimfa  yang  bertahan tinggi  sampai  hari  ke  tiga  puluh  pe- meliharaan  berpengaruh  positif  terhadap perkembangan gonad, GSI, dan pertumbuhan gonggong. Berdasarkan pemeriksaan histologi gonad terbukti bahwa ukuran rerata oosit  pada  perlakuan  suntikan  larutan  17β- estradiol  (P3)  lebih  tinggi  dibanding  per- lakuan  P1,  P2  dan  gonad  awal  sebelum perlakuan  (Gambar  3).  Pemberian  suntikan larutan  17β-estradiol  (P3)  berperan  dalam vitelogenesis  yang  ditunjukkan  oleh  adanya peningkatan kadar vitelogenin (Gambar 5).
Menurut  Okumura et  al. (2004)  pada udang,  kadar  vitelogenin  meningkat  selama akumulasi kuning telur dan secara signifikan berkorelasi  dengan  GSI.  Meskipun  nilai  GSI antar  perlakuan  tidak  berbeda  nyata,  namun pada perlakuan suntikan larutan 17β-estradiol (P3)  nilainya  lebih tinggi  daripada perlakuan P1  dan  P2  (Tabel  2).  Hal  ini  meng- indikasikan  adanya  peran  pemberian  17β- estradiol pada perkembangan gonad
gonggong.
Sintesis  17β-estradiol  dalam  tubuh gonggong  belum  diketahui  secara  pasti sebagaimana  halnya  dengan  kerang  (Yan et al .,  2011)  dan  udang  (Tarsim et  al .,  2007). Namun  pada  bivalvia  dan  avertebrata  lain, sintesis  dan  metabolisme  hormon  dan  jalur pensinyalannya  cukup  banyak  dipelajari. Hormon estrogen mungkin merupakan promoter  primer  untuk  vitelogenin  pada moluska  (Yan et  al .,  2011).  Kadar  17β- estradiol  teridentifikasi  baik  dalam  ovarium
maupun testis bivalvia laut, tiram Crassostrea  gigas ,  dan  kerang Patinopecten yessoensis . Kadar 17β-estradiol  dalam ovarium  secara  konsisten  lebih  tinggi  dari estriol  dan  meningkat  dengan  pematangan seksual,  sehingga  hal  ini  membuktikan bahwa 17β-estradiol berperan dalam reproduksi  tiram  dan  kerang,  dan  dapat disintesis dalam gonad serta diduga memiliki
peran dalam perkembangan gamet (Matsumoto et  al .,  1997,  McClelland-Green, 2008).  Adanya  berbagai  bukti  peran  penting hormon  dalam  kontrol  reproduksi  namun belum  ada  satu  moluska  sebagai  model umum.  Masih  sedikit  pula  yang  diketahui tentang  tingkah  laku  dan  kontrol  hormonal reproduksi pada prosobrancia.
Gambar 4.  Frekuensi  dan  interval  ukuran  diameter  gonad  perlakuan  suntikan  17β-estradiol setelah pemeliharaan 30 hari.
Gambar 5. Protein  hemolimfa gonggong:  M=  marker, K= hemolimfa tanpa  suntik, E4-E30= hemolimfa  suntikan  campuran  17β-estradiol,  minyak  jagung  dan  etanol  absolut yang  disampling  pada  hari  ke-4,  7,  10,  13,  16,  dan  30;  ML=hemolimfa  jantan matang gonad, FM= hemolimfa betina matang gonad.
Rerata P1: 17,94± 4,93 µm Rerata P2: 17,59±4,46 µm Rerata P3: 26,36±7,32 µm
Tabel 2. Pertumbuhan bobot gonad dan GSI gonggong setelah 30 hari pascasuntik.
Perlakuan Bobot tubuh lunak (g) Bobot gonad (g) GSI Tanpa suntikan (P1) 4,18 ± 0,77 b 0,76 ± 0,12 bc 18,09 ± 0,15 a Suntikan 30µL/ekor larutan minyak jagung dan etanol absolut (P2) 3,57 ± 0,77 ab 0,71 ± 0,19 b 19,90 ± 1,96 a Suntikan 30µL/ekor larutan stok 17β-estradiol (P3) 4,49 ± 0,84 b 0,99 ± 0,10 c 22,47 ± 3,91 a Bobot awal 2,49± 0,88 a 0,46 ± 0,18 a 18,81 ± 4,02 a
*Huruf yang berbeda menandakan perbedaan signifikan antar perlakuan (α= 0.05), n=3.
Fluktuasi  konsentrasi  17β-estradiol hemolimfa  gonggong  selama  pemeliharaan diduga  karena  keragaman  sampel  hemolimfa uji.  Variasi  konsentrasi  estradiol  pada moluska berkolerasi dengan siklus reproduksi,  variasi spesies  dan  status perkembangan  gonadnya  (Liu et  al .,  2014; Yan et  al .,  2011).  Fluktuasi  kadar  17β- estradiol  terkait  siklus  reproduksi  moluska mengesankan  bahwa  17β-estradiol  dapat berfungsi  sebagai  modulator  endogen  dari siklus reproduksi. Sebagai contoh, konsentrasi 17β-estradiol  dalam  gurita Octopus  vulgaris meningkat  pada  awal vitelogenesis (Cosmo et al., 2001).
Nilai  rata-rata  bobot  tubuh  lunak, bobot  gonad  dan  GSI  gonggong  pada perlakuan suntikan larutan 17β-estradiol (P3) lebih  tinggi  dari  perlakuan  P1  dan  P2 mengindikasikan  bahwa  pemberian  suntikan larutan  17β-estradiol  dapat  menginduksi perkembangan  gonad  dan  pertumbuhan gonggong.  Hasil  uji  statistik  Kruskal  Wallis (P<0,05)  memperkuat  bahwa  pemberian suntikan  17β-estradiol  berpengaruh  terhadap perkembangan  oosit  gonad.  Hasil  tersebut didukung  oleh  hasil  dari  Wang  and  Kroll (2004)  yang  memberikan  suntikan  17β- estradiol pada kerang Placopecten magellanicus dan terbukti mampu meningkatkan  pertumbuhan  oosit,  serta Kruatrachue et  al .  (1996)  pada  siput  bekicot ( Achatina fulica )  yang  meningkatkan  jumlah oosit  ovotestis.  Korelasi  positif  antara  17β- estradiol  dengan  diameter  rata-rata  oosit
menunjukkan  bahwa  estradiol  terlibat  erat dalam oogenesis dan vitelogenesis (Liu et al ., 2014). Paparan estradiol terhadap gonad akan merangsang  vitelogenesis  pada  oosit  dan memberikan  respon  perkembangan  yang lebih  tinggi.  Sebaliknya  pemakaian  minyak jagung yang relatif kurang efektif sebagaimana  hasil  pada  Tabel  2,  menurut Delgado and Glazer (2008) sebaiknya diganti dengan  dimetil  sulfoksida (DMSO).  DMSO adalah suatu senyawa organo- sulfur dengan rumus  kimia (CH 3 ) 2 SO,  cairan tidak  berwarna  ini  adalah pelarut aprotik polar penting yang larut baik dalam senyawa polar  dan  nonpolar  serta larut pula  dalam berbagai  pelarut  organik  seperti air.  Larutan 17β-estradiol  dalam  DMSO  terbukti  efektif diaplikasikan  pada  siput  ratu  ( Strombus gigas ).
Berat  molekul  vitelogenin gastropoda memiliki  nilai  yang  beragam.  Fosfoprotein utama dalam crude egg yolk (CEY) siput ratu Strombus  gigas memiliki  berat  molekul  98 kDa (Denslow and Kroll, 2008).  Vitelogenin udang Pandalus  hypsinotus memiliki  berat molekul  290-700  kDa.    Kadar  vitelogenin hemolimfa  udang  tersebut  rendah  sebelum akumulasi  kuning  telur,  dan  menjadi  jauh lebih  tinggi  selama  akumulasi  kuning  telur. Kadar vitelogenin secara signifikan berkorelasi  dengan  GSI  selama  akumulasi kuning  telur.  Pada  krustasea,  vitelogenin disintesis dalam hepatopankreas atau ovarium.  Protein  tersebut  diangkut  oleh hemolimfa menuju oosit. Beberapa penelitian
menunjukkan bahwa kadar vitelogenin hemolimfa  berubah  dalam  kaitannya  dengan perkembangan ovarium pada spesies krustasea (Okumura et al ., 2004).
Berdasarkan  hasil  eksperimen  di  atas diperlukan penelitian lanjutan tentang pengaruh  suntikan  larutan  17β-estradiol terhadap  perkembangan  gonad  gonggong dalam  waktu  yang  lebih  lama  dan  variasi dosis  yang  lebih  lebar,  serta  dilakukan  uji koaglutinasi  untuk  deteksi  vitelogenin  yang telah diperoleh dari proses SDS-PAGE.

## IV. KESIMPULAN
Pemberian  suntikan  larutan  17β- estradiol dapat meningkatkan ukuran diameter  oosit  gonggong  perlakuan.  Nilai bobot  gonad  dan  bobot  tubuh  lunak gonggong  perlakuan  suntikan  larutan17β- estradiol (P3) lebih besar dibanding perlakuan  P1,  P2  dan  bobot  awal  gonggong. Nilai  GSI  antar  perlakuan  tidak  berbeda nyata,  namun  nilainya  pada  perlakuan  P3 lebih  tinggi  dibanding  perlakuan  lain. Hemolimfa  gonggong  memiliki  beberapa jenis  protein  dengan  pita  berat  molekul bervariasi.  Protein  dengan  berat  molekul  54- 55  kDa  diprediksi  sebagai  vitelogenin gonggong.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didanai  oleh  Direktorat Riset  Pengabdian  Masyarakat-Kemenristek- dikti  RI  dengan  skim  Penelitian  Disertasi Doktor  (PDD)  dengan  nomor  kontrak 064/SP2H/LT/DRPM/2018.  Terima  kasih disampaikan kepada Direktur DRPM Kemenristekdikti,  Rektor  UMRAH,  Kepala LP3M  UMRAH,  Dekan  FIKP  UMRAH, Kepala Marine  Biology  Laboratory FIKP- UMRAH atas bantuan fasilitas dan dukungannya  dalam  penelitian  ini,  Kepala Laboratorium Biologi Molekuler Hasil Perairan  FPIK-IPB  Dr.  Mala  Nurilmala, Kepala  Laboratorium  Kesehatan  Ikan  FPIK- IPB,  Kepala  Laboratorium  Hormon  URR
FKH-IPB, Kepala Laboratorium Histopatologi FKH-IPB, Kepala
Laboratorium  PSSP-IPB,  Drh.  Dedi  Setiadi, Drh.  Silvia,  Ranta,  Zulpikar,  Hamzah, Rohayati,  Siti  Nurbaya  dan  sahabat  baikku Budi  Primulia,  Hasan  Nasrullah,  Agus Muslim serta semua pihak yang telah banyak membantu Penulis.

## DAFTAR PUSTAKA
Barber, B.J. and N.J Blake. 1991. Reproductive Physiology. In : Shumway S.E. ( ed .). Scallops: Biology,  Ecology  and  Aquaculture. Elsevier  Press.  New  York.  377–428 pp.
Cob,  Z.C.,  A.  Arshad,  M.A  Ghaffar,  and  J.S Bujang.  2008a.  Sexual  maturity  and sex determination in Strombus canarium . J. Biological Science , 8(3): 616-621.
https://doi.org/10.3923/jbs.2008.616.
621
Cob,  Z.C.,  A.  Arshad,  H.M.  Idris,  J.S. Bujang,  and  M.A.  Ghaffar.  2008b. Sexual polymorphism  in a population of Strombus  canarium Linnaeus, 1758  (Mollusca:  Gastropoda)  at
Merambong Shoal, Malaysia. Zoological Studies, 47(3): 318-325.
Cosmo,  A.,  C.  di  Cristo,  and  M.  Paolucci.
2001. Sex steroid hormone fluctuations and morphological changes of the reproductive system of the  female  of Octopus  vulgaris throughout  the  annual  cycle. J. experimental  zoology ,  289:  33-47. https://doi.org/10.1002/1097- 010X(20010101/31)289:1<33::AID- JEZ4>3.0.CO;2-A
Delgado, G. and R. Glazer. 2008. Collections of  conch  tissue,  water,  and  sediment. In: Glazer  R.  ( ed ).  Anthropogenic effects  on  queen  conch  reproductive development  in  South  Florida.  A Final  Report.  Ocean  Springs  Press. Florida. 3-5 pp.
Denslow,  N.  and  K.  Kroll.  2008.  Protein biomarkers. In: Glazer  R.  ( ed ).
Anthropogenic  effects  on  queen conch  reproductive  development  in South Florida. A Final Report.  Ocean Springs Press. Florida. 6-15 pp. Di Cristo, C., Paolucci M., and A. Di Cosmo.
2008. Progesterone
affects
vitellogenesis  in Octopus  vulgaris , J. Zoology , 1: 29-36. http://doi.org/10.2174/187433660080 1010029 Di  Prisco,  C.L.,  F.D.  Fulgheri,  and  M. Tomasucci.  1973.  Identification  and biosynthesis of steroids  in the  marine mollusk Aplysia  depilans . J.  Comp Biochem  Physiol, 45(B):  303-310. https://doi.org/10.1016/0305- 0491(73)90065-5
Keay,  J.,  J.T.  Bridgham,  and  J.W.  Thornton.
2006.  The Octopus  vulgaris estrogen
receptor is a constitutive transcriptional  activator:  evolutionary and functional implications. J. Endocrinology ,  147(8):  3861–3869. https://doi.org/10.1210/en.2006-0363
Kruatrachue,  M.,  K.  Songmuang.,  E.S.
Upatham,  P.  Sretarugsa,  and  J.
Chavadej. 1996. Effects of vertebarate hormones on the reproductive  system  of Achatina fulica (Gastropoda: Stylommatophora). J. Sci.Soc . Thailand , 22: 249-265.
Li,  Q.,  M.  Osada,  T.  Suzuki  and  K.  Mori. 1998.  Changes  in  vitellin  during oogenesis  and  effect  of  estradiol  on vitellogenesis in the Pacific oyster Crassostrea gigas . Invert.
Reprod. Dev , 33: 87–93. https://doi.org/10.1080/07924259.199 8.9652345
Liu, J., Z. Zhang, L. Zhang, X. Liu, D. Yang, and  X.  Ma.  2014.  Variations  of estradiol-17β  and  testosterone  levels correlated  with  gametogenesis  in  the gonad  of  Zhikong  scallop  ( Chlamys
farreri )  during  annual  reproductive cycle. J. Zool , 92: 195-204. https://doi.org/10.1139/cjz-2013-0202 Lu,  M.,  T.  Horiguchi,  H.  Shiraishi,  Y. Shibata,  M.  Abo,  A.  Okubo,  and Yamazaki  S.  2001.  Discrepancy  of analytical  values  of steroid  hormones in marine gastropods between GC/MS and ELISA. Analytical Sciences , 17: 1619-1622. https://doi.org/10.14891/analscisp.17i cas.0.i1619.0
Marentette,  J.R.  and  L.D  Corkum.    2008.
Does  the  reproductive  status  of  male round gobies ( Neogobius melanostomus ) influence their response  to  conspecific  odors? J.
Environmental Biology  of  Fishes , 81: 447-455.
http://doi.org/10.1007/s10641-007-
9240-7
Matsumoto, T., M. Osada, Y. Osawa, and K. Mori.  1997. Gonadal estrogen profile and immunohistochemical localization of steroidogenic enzymes in  the  oyster  and  scallop  during sexual  maturation. J.  Comp  Biochem Physiol , 118B: 811–817. https://doi.org/10.1016/S0305- 0491(97)00233-2
McClellan-Green.  2008.  Analysis  of  queen conch  neuropeptide  expression. In :
Glazer R. ( ed ). Anthropogenic effects on queen conch reproductive development  in  South  Florida.  A Final  Report.  Ocean  Springs  Press. Florida. 71-76 pp.
Muzahar  and  A.A.  Hakim.  2018.  Spawning and  development  of  dog  conch Strombus sp. larvae in the laboratory. J.  Ilmu  dan  Teknologi  Kelautan Tropis , 10(1): 209-216.
http://dx.doi.org/10.29244/jitkt.v10i1.
18607
Muzahar  dan  L.  Viruly.  2014.  Karakterisasi kimia.  sensori  dan  laju  pemijahan gonggong  ( Strombus sp.)  sebagai
ikon  Kepulauan  Riau. J.  Dinamika Maritim , 3(2): 20-29.
Nurilmala, M., and Y. Ochiai. 2016. Molecular characterization of southern  bluefin  tuna  myoglobin ( Thunnus maccoyii ). J. Fish
Physiology  and  Biochemistry ,  42(5): 1407-1416.
https://doi.org/10.1007/s10695-016- 0228-0
Okumura,  T.,  K.  Yoshida,  and  H.  Nikaido. 2004.  Ovarian  development  and hemolymph  vitelogenin  levels  in laboratory-maintained protandric shrimp ( Pandalus hypsinotus) : Measurement  by  a  Newly  Developed Time-resolved Fluoroimmunoassay (TR-FIA). J.  Zoological  Science , 21(10): 1037-1047. https://doi.org/10.2108/zsj.21.1037
Osada,  M.,  T.  Takamura,  H.  Sato  and  K. Mori. 2003. Vitellogenin synthesis  in the  ovary  of  scallop Patinopecten yessoensis :  control  by  estradiol-17β and  the  central  nervous  system. J. Exp Zool , 299A: 172–179. http://doi.org/10.1002/jez.a.10276.
Ranabir,  S.  and  K.  Reetu.  2011.  Stress  and hormones. Indian  J.  Endocrinol Metab , 15(1): 18-22. http://doi.org/10.4103/2230-
8210.77573
Sánchez, F.C., M.E. Díaz, I.M. Morales, and D.A.  Aranda.  2016.  Formulated  feed for Strombus  pugilis (Mollusca, Gastropoda)  allowed  effective  gonad maturity. J.  Aquaculture  Research  &
Development, 7(10): 1-8. https://doi.org/10.4172/2155- 9546.1000453
Sathyan,  N.R.,  Philip,  E.R.  Chaithanya,  and R.R.A.  Kumar.  2012.  Identification and  molecular  characterization  of molluskin,  a  histone-H2A-derived antimicrobial  peptide  from  molluscs.
J. Molecular Biology , 1-6. https://doi.org/10.5402/2012/219656. Setiadi,  D.R.,  I.  Supriatna,  dan  M.  Agil.
2014.  Validasi  kit enzyme-linked immunosorbent assay komersial untuk  analisis  hormon  estradiol  dan progesteron darah kambing kacang. J.
Veteriner, 15(4): 446-453.
Tarsim,  MJr.  Zairin,  dan  E.  Riani.    2007. Rangsangan perkembangan ovari udang  putih,  ( Litopenaeus  vannamei ) dengan  penyuntikan  estradiol-17β. J.
Akuakultur  Indonesia ,  6(1):  17-25. https://doi.org/10.15578/jra.2.3.2007.
349-358
Wang,  C.,  and  R.P.  Croll.  2004.  Effects  of sex  steroids  on  gonadal  development and  gender  determination  in  the  sea scallop Placopecten magellanicus . J.
Aquaculture , 238: 483-498.
https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.
2004.05.024
Yan, H., Q. Li, W. Liu, Q. Ke, R. Yu, and L. Kong.  2011.    Seasonal  changes  of oestradiol-17β and testosterone concentrations  in  the  gonad  of  the razor  clam  ( Sinonovacula  constricta ,
Lamarck, 1818). J. Molluscan
Studies , 0: 1-7. https://doi.org/10.1093/mollus/eyq04
5
Received   : 14 May 2019 Reviewed  : 03 July 2019 Accepted  : 15 September 2019