PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL KEMBANG SEPATU (Hibiscus rosa-sinensis L. ) TERHADAP JUMLAH SPERMATOZOA, BERAT BADAN, DAN BERAT TESTIS TIKUS JANTAN WISTAR (Rattus norvegicus)
Nabila S. Petta 1) , Edwin de Queljoe 1) , Rooije R.H. Rumende 1)
1) Program Studi Biologi FMIPA Universitas  Sam Ratulangi Manado Email: nabilla.petta@gmail.com; edwin_de_queljoe@yahoo.co.id; rooije.rumende@yahoo.com

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol  kembang  sepatu terhadap jumlah spermatozoa tikus jantan wistar ( Rattus norvegicus ). Penelitian ini menggunakan rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan  menggunakan  24  ekor  tikus  putih  jantan  galur  wistar ( Rattus  norvegicus )  yang  dibagi  atas  beberapa  kelompok  dimana  kelompok  1  sebagai  kelompok kontrol  tanpa  perlakuan,  kelompok  2,  3  dan  4  sebagai  kelompok  perlakuan  dengan  dosis  secara berturut-turut  3,6  mg/ml;  7,2  mg/ml;  dan  14,4  mg/ml.  Perlakuan  diberikan  secara  oral  sekali sehari sebanyak 1  ml selama 50 hari sesuai siklus spermatogenesis. Variabel yang diamati yakni jumlah  sel  spermatozoa,  berat  badan,  dan  berat  testis.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  kembang  sepatu  dapat  menurunkan  jumlah  sel  spermatozoa,  serta  menyebabkan adanya perbedaan berat badan dan berat testis  namun, berdasarkan hasil  analisis  varians, ekstrak etanol  daun  kembang  sepatu  tidak  dapat  menurunkan  jumlah  sel  spermatozoa,  berat  badan  dan berat testis tikus putih jantan galur wistar ( Rattus norvegicus ) secara signifikan.
Kata Kunci: Sel spermatozoa, Kembang sepatu (Hibiscus rosa-sinensis L. ) , Tikus jantan Wistar (Rattus novergicus)
THE INFLUENCE OF THE ETHANOL EXTRACTS  OF GRANTING HIBISCUS ( Hibiscus Rosa-sinensis L.) AGAINST THE NUMBER OF SPERMATOZOA, WEIGHT AND THE WEIGHT OF THE TESTES MALE WISTAR RATS ( Rattus norvegicus )

## ABSTRACT
This research’s objective is to know the influence of injecting ethanol extract from a hibiscus into a number of common male rats (Rattus norvegicus) . This research uses the approach of complete randomized  design  (CRD)  onto  24  common  white  rats (Rattus  norvegicus) that  is  divided  into groups, where  group 1’s approach is control without treatment, groups 2, 3, and 4’s approach is with  treatment,  with  consecutive  doses  being  3.6  mg/ml;  7.2  mg/ml;  and  14.4  mg/ml.    The treatment  is  induced  orally  as  large  as  1cc  per  day  for  a  total  of  50  days  following  the spermatogenesis  cycle.  The  variables  that  are  being  observed  are  the  amount  of  spermatozoon cells,  body  weight, and  testicle  weight. The  results  of  this  research  indicates  that  ethanol  extract from  hibiscuses,  from  a  quantity  perspective,  can  decrease  spermatozoon  cells,  and  it  may  also influence the body weight and testicle weight of the subject, in this  case are common rats (Rattus norvegicus)  but,  from  the  mathematical  results  from  Analysis  Of  Variance,  ethanol  extract  from the  leaves  of  a  hibiscus  cannot  decrease  the  amount  of  spermatozoon,  body  weight,  and  testicle weight  of a common white rat (Rattus norvegicus).
Keywords: Spermatozoon Cells, Hibiscus ( Hibiscus rosa-sinensis L .), Common (white) rat ( Rattus novergicus )

## PENDAHULUAN
Reproduksi adalah kemampuan makhluk hidup untuk menghasilkan keturunan yang baru. Tujuan reproduksi yaitu untuk mempertahankan jenisnya dan melestarikan  jenis  agar  tidak  punah.    Jika
makhluk  hidup  tidak  dapat  bereproduksi maka  kelangsungan  generasi  makhluk  hidup tersebut  terancam  dan  punah  (Priatma et  al ., 2010).
Infertilitas  adalah  gangguan  dari sistem  reproduksi  yang  terjadi  pada  organ reproduksi  atau  sel  spermatozoa  yang
diproduksi  tidak  berkualitas  (WHO,  2016). Apabila  ada  gangguan  pada  sistem  anatomi reproduksi atau sel spermtozoa yang dihasilkan  tidak  berkualitas,  maka  dampak yang  terjadi  pada  pria  dewasa  tidak  akan mendapatkan keturunan, yang ditandai dengan kegagalan kehamilan setelah 12 bulan atau  lebih,  dan  telah  melakukan  hubungan sanggama  atau  hubungan  suami  istri (coitus) tanpa  menggunakan  alat  kontrasepsi  secara teratur,  namun  tetap  mengalami  kegagalan kehamilan  (WHO,  2016;  Cavallini and Beretta,  2015).  Dari  semua  pasangan  yang aktif  secara  seksual,  sekitar  12  –  15  % pasangan  suami  istri  mengalami  gangguan fertilitas  atau  infertilitas  (Parekattil and Agarwal,  2012).  Penyebab  infertilitas  dari pria  diantaranya  spermatogenesis  abnormal, kelainan  anatomi, ejaculation  retrograde , stress,  mengalami  infeksi  menular  pada sistem  reproduksi,  mengonsumsi  alkohol  dan nikotin  secara  berlebihan,  dan  juga  faktor pekerjaan serta ketidakmampuan sel spermatozoa  dalam  melakukan  penetrasi  ke sel telur (Saragih, 2014). Penyebab infertilitas dari  wanita  diantaranya  berupa  masalah  pada vagina yaitu vaginitis, masalah di serviks atau mulut  rahim  yaitu  servisitis,  dan  juga  pada uterus, tuba falopii, dan  masalah pada daerah ovarium  yaitu  kista  ovarium  (Saragih,  2014). Beberapa  tanaman  di  Indonesia  telah  diteliti dan dilaporkan, hasil penelitian menunjukkan beberapa  tanaman  memiliki  kemungkinan untuk  dikembangkan  sebagai  bahan  obat kontrasepsi  diantaranya  biji  saga,  meniran, teh  hitam,  daun  sirih,  dan  pacing  (Muslichah dan  Wiratmo,  2013;  Harlis,  2012;  Delfita,
2014; Mudayatiningsih et al , 2015; Sari et al , 2012).
Berdasarkan penelitian Agoes (2010), tanaman kembang sepatu
mengandung  beberapa  senyawa  metabolit sekunder  antara  lain  senyawa  flavonoid, saponin dan polifenol pada daunnya, sedangkan  bunga  kembang  sepatu  ( H.  rosa- sinensis L.)  mengandung  senyawa  polifenol, dan  akar  kembang  sepatu  ( H.  rosa-sinensis L.)  juga  memiliki  senyawa  kimia  antara  lain tanin,  saponin,  skopoletin,  cleomiscosin  A, dan  cleomiscosin  C.  senyawa  metabolit sekunder  pada  tanaman  kembang  sepatu (H. rosa-sinensis L. ) dapat  dijadikan  sebagai bahan  antifertilitas  yakni  senyawa  flavonoid, saponin,  dan  polifenol  (Agoes,  2010). Penelitian  ini  bertujuan  Mengidentifikasi jumlah  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun kembang  sepatu  ( Hibiscus  rosa-sinensis L.) yang  berpengaruh  terhadap  jumlah  sel spermatozoa  serta  melihat  pengaruhnya terhadap  penurunan  berat  badan  dan  berat testis  tikus  jantan  galur  wistar  ( Rattus novergicus L.).

## METODE PENELITIAN

## Penyiapan Hewan Uji
Penelitian  ini  menggunakan  tikus putih  jantan  galur  wistar (Rattus  norvegicus) sebagai  hewan  uji  yang  dibagi  menjadi  4 kelompok  dimana  setiap  kelompok  terdiri dari 6 ekor tikus putih jantan galur wistar (R. norvegicus )  yang  dipelihara  dalam  kandang berbahan  plastik  dan  ditutup  dengan  kawat kasa dan diberi pakan berupa pelet.
Tabel 1. Pembagian Kelompok Hewan Uji
No Hewan Uji Perlakuan hari ke-1 hingga hari ke-50 1. Kelompok 1 (Kontrol) Tidak diberi perlakuan 2. Kelompok 2 (P Ks 2) Ekstrak etanol daun kembang sepatu 3,6 mg/tikus/hari sebanyak 1 mL
3. Kelompok 3 (P Ks 4)
Ekstrak etanol daun kembang sepatu 7,2 mg/tikus/hari
sebanyak 1 mL
4. Kelompok 4 (P Ks 8) Ekstrak etanol daun kembang sepatu 14,4 mg/tikus/hari sebanyak 1 mL
Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kembang Sepatu
Sebanyak  450  gr  daun  kembang sepatu  yang  sudah  dikering  anginkan  dan sudah  diblender.  Daun  kembang  sepatu  yang sudah  dalam  bentuk  serbuk  kemudian, diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi dengan  cara,  sampel  direndam  dengan  etanol 96%  dengan  perbandingan  1:4  atau  hingga sampel  terendam  sempurna  dan  melewati batas  tinggi  sampel  di  dalam  beaker  gelas. Sampel direndam selama tiga hari dan diaduk setiap  hari  sekali  selama  lima  menit.  Sampel kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring dan filtrat yang didapatkan dipindahkan pada cawan petri dan dimasukkan ke dalam oven dengan suhu 40 ° C.  Setelah  24  jam  ekstrak  dikeluarkan  dari oven dan disimpan di dalam lemari pendingin (Depkes RI, 2014).

## Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Kembang Sepatu
Ekstrak daun kembang sepatu ditimbang dengan menggunakan tiga konsentrasi  yaitu  3,6  mg,  7,2  mg,  dan  14,4 mg.  Setelah  itu,  masing-masing  konsentrasi dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  dan ditambahkan  larutan  CMC  1%,  ditutup dengan  aluminium  foil  dan  disonifikasi selama  30  menit  (hingga  homogen).  Setelah homogen,  suspensi  ekstrak  etanol  daun kembang  sepatu  dipindahkan  ke  dalam  3 botol berwarna gelap, ditutup dan disimpan di dalam lemari es.

## Perlakuan Hewan Uji
Ekstrak etanol  daun Kembang sepatu diberikan  secara  oral  dengan  menggunakan sonde  dengan  dispo  1  mL  yang  dimasukkan melalui  mulut  secara  perlahan-lahan  untuk menghindari  terjadinya  refluks muntah. Sebelum diberi perlakuan, hewan uji dipuasakan  atau  tidak  diberi  makan  dan minum terlebih dahulu selama kurang lebih 6 jam.  Hewan  uji  yang  terdiri  dari  4  kelompok diberikan  perlakuan  yang  berbeda-beda.
Kelompok  2,  3  dan  4  diberikan  perlakuan sesuai  dosis  masing-masing  kelompok  yaitu 3,6  mg/tikus/hari  sebanyak  1  mL,  7,2 mg/tikus/hari sebanyak 1 mL, dan
14,4/tikus/hari sebanyak 1 mL mg setiap hari sebanyak  1  mL,  sedangkan  kelompok  1 hanya  diberikan  pakan  biasa  berupa  pelet atau pakan tikus (Depkes RI, 2014).

## Perhitungan Jumlah Sel Spermatozoa
Perhitungan  jumlah  sel  spermatozoa dilakukan  dengan  cara  memipet  sperma dengan  menggunakan  pipet  khusus  eritrosit sampai skala 0,5. Kemudian sperma diencerkan  dengan  larutan  pengencer  sampai tanda  101  (Pengenceran  200x)  lalu  dikocok sampai  homogen.  Larutan  sperma  di  kocok dan  di  buang  3  tetes,  kemudian  diteteskan pada  kamar  hitung  yang  sudah  ditutup dengan  menggunakan cover  glass .  Sediaan tersebut  dibiarkan  sebentar  agar  sel-sel spermatozoa mengendap, sehingga memudahkan perhitungan. Pemeriksaan dilakukan  dengan  5  lapang  pandang  pada kamar  hitung  di  bawah  mikroskop  dengan pembesaran 400x (WHO, 2015).
Berdasarkan  Soehadi  dan  Winars (1987),  perhitungan  jumlah  spermatozoa dilakukan dengan cara mengalikan jumlah sel spermatozoa  yang  terhitung  dalam  5  kotak dengan  pengenceran  (200x)  dan  dikalikan dengan faktor Neubauer . Konsentrasi spermatozoa = N x 200 x 10.000. Dimana, N adalah jumlah sel spermatozoa yang terhitung dalam  5  kotak,  200  adalah  pengenceran  dan 10.000 adalah  faktor Neubauer (Soehadi  dan Winars, 1987).

## Analisis Data
Analisis  data  yang  digunakan  yaitu menggunakan  perhitungan  ANOVA  atau Analisys  of  Variance dan  dilanjutkan  dengan uji  Duncan  untuk mengetahui  adanya perbedaan antar kelompok perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Kembang sepatu ( Hibiscus rosa- sinensis L.) Terhadap Penurunan Jumlah Sel Spermatozoa Tikus Jantan Galur Wistar ( Rattus novergicus )
Setelah  pemberian  ekstrak  etanol daun  Kembang  sepatu  ( Hibiscus  rosa-
sinensis L.)  dengan  dosis  3,6  mg/mL;  7,2 mg/mL;  dan  14,4  mg/mL  pada  tikus  putih galur  wistar  ( Rattus  novergicus )  selama  50 hari,  terdapat  perbedaan  hasil  perhitungan jumlah sel spermatozoa pada semua kelompok  perlakuan  yang  dibandingkan dengan  kelompok  kontrol.  Menurut  asumsi peneliti,  diakibatkan  oleh  adanya  pengaruh ekstrak daun kembang sepatu yang mengandung  senyawa  metabolit  sekunder yang bersifat menurunkan jumlah sel spermatozoa  pada  tikus  jantan  galur  wistar ( R.  novergicus L.),  hal  tersebut  juga  sesuai dengan apa yang dikemukakan oleh Hyacinth (2012)  dan  Putri  (2015)  bahwa  penurunan jumlah  sel  spermatozoa  diduga  disebabkan karena  adanya  kandungan  zat  aktif  saponin, flavonoid,  dan  fenol,  yang  banyak  berperan sebagai  spermisidal.  Adanya  jumlah  sel spermatozoa  yang  lebih  tinggi  dan  lebih rendah  bila  dibandingkan  dengan  kontrol, penyebab  yang  mungkin  terjadi  adalah  dosis pemberian  yang  masih  rendah,  karena  pada
dosis  yang  paling  tinggi  yakni  14,4  mg/mL terlihat  penurunan  jumlah  spermatozoa,  bila dibandingkan  dengan  dosis  lainnya  yakni dosis  ekstrak  etanol  daun  Kembang  sepatu 3,6 mg/mL yang tidak menunjukkan penurunan  jumlah  sel  spermatozoa  (Gambar 1). Berdasarkan hasil penelitian Kammoun et  al .  (2007)  dan  Putri  (2015), Senyawa saponin memiliki aktivitas spermisidal yang paling baik pada dosis yang rendah  bila  dibandingkan  dengan  agen  atau senyawa  spermisidal  lainnya.  Kebanyakan senyawa  spermisidal  yang  terkandung  di dalam  ekstrak  tanaman  bekerja  dengan  cara menginduksi  disrupsi  membran  plasma, agen atau senyawa tersebut juga mampu menyebabkan  inhibisi  enzim  spesifik  pada membran sel spermatozoa seperti akrosin dan hyaluronidase  yakni  enzim  penting  dalam proses fertilisasi  (Gambar 1).
Gambar 1. Diagram Hasil Perhitungan Sel Spermatozoa  Tikus Jantan Galur Wistar ( Rattus novergicus )
Namun,  hasil  perhitungan  menggunakan The ANOVA  Procedure menunjukkan  hasil  yang berbeda  yaitu,  tidak  terdapat  perbedaan  yang signifikan  antar  kelompok  perlakuan.  Hal tersebut  diketahui  dari  nilai  atau value yang tertera yaitu p > 0.01.
Pengaruh  Konsentrasi  Ekstrak  Etanol Daun  Kembang  sepatu  ( Hibiscus  rosa- sinensis L.)  Terhadap  Penurunan  Berat Badan  Tikus  Jantan  Galur  Wistar  ( Rattus novergicus )
Dari  hasil  perhitungan  berat  badan, menunjukan  adanya  perbedaan  berat  badan pada  kelompok  tikus  kontrol  dan  kelompok
156,3 168.5 157,3 123,3 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 J u m l a h Kontrol P Ks 2
P Ks 4 P Ks 8
tikus  yang  diberi  ekstrak  daun  Kembang sepatu.  Menurut  asumsi  peneliti,  hal  tersebut diakibatkan oleh adanya perbedaan perlakuan pada objek penelitian yakni tikus jantan galur wistar  ( Rattus.  novergicus L.)  Hal  tersebut juga  sesuai  dengan  apa  yang  dikemukakan oleh  Maula  (2014)  dan  Putri  (2015)  bahwa
adanya  perbedaan  perhitungan  berat  badan yang terjadi baik pada tikus kontrol dan tikus yang mendapat perlakuan ekstrak etanol daun Kembang  sepatu  kemungkinan  terjadi  karena adanya perbedaan pemberian konsumsi pakan harian (Gambar 2).
Gambar  2. Diagram Hasil Perhitungan Berat Badan Tikus Jantan Galur Wistar
Namun,  dilihat  dari  hasil  perhitungan The ANOVA Procedure , tidak terdapat perbedaan hasil  yang  signifikan  antar  kelompok perlakuan yaitu p > 0,01.
Pengaruh  Konsentrasi  Ekstrak  Etanol Daun  Kembang  sepatu  ( Hibiscus  rosa- sinensis L.)  Terhadap  Penurunan  Berat Testis  Tikus  Jantan  Galur  Wistar  ( Rattus novergicus L.)
Dari  hasil  perhitungan  berat  testis, menunjukan  adanya  perbedaan  berat  testis pada  kelompok  tikus  kontrol  dan  kelompok tikus  yang  diberi  ekstrak  daun  Kembang sepatu. Menurut asumsi peneliti, hal tersebut diakibatkan oleh adanya perbedaan perlakuan  pada  objek  penelitian  yakni  tikus jantan  galur  wistar  ( Rattus  novergicus L.).
Hal  tersebut  kemungkinan  terjadi  karena adanya senyawa aktif yakni berupa senyawa saponin  yang  terkandung  di  dalam  daun tanaman  kembang  sepatu,  seperti  pada penelitian  yang  dilakukan  oleh (Gupta et al ,
2005;  Putri,  2015)  menyatakan  bahwa dengan  pemberian  senyawa  saponin  yang diisolasi  dari  tanaman Albizia  lebbeck pada tikus  jantan  memberikan  penurunan  berat testis,  yang  kemungkinan  juga  berhubungan dengan  jumlah  sel  spermatid  dan  sel spermatozoa  yang  ada  pada  jaringan. Penurunan  pada  jumlah  sel  germinal terutama  pakiten  dan  spermatosit  sekunder pada  tikus  yang  diberikan  senyawa  saponin dari  tanaman A.  lebbeck mengakibatkan penurunan berat testis (Gambar 3).
184,167 165 178.75 168.75 155 160 165 170 175 180 185 190 B e r
a t B a d
a n
Kontrol P  Ks 2 P Ks 4 P Ks 8
Gambar 3. Diagram Hasil Perhitungan Berat Testis
Namun,  dilihat  dari  hasil  perhitungan The ANOVA Procedure , tidak terdapat perbedaan hasil  yang  signifikan  antar  kelompok perlakuan dengan nilai yaitu, p > 0,01.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  ekstrak etanol daun kembang sepatu yang berpengaruh terhadap  penurunan jumlah sel spermatozoa  tikus  jantan  galur  wistar  yakni pada konsentrasi 7,2 mg/ml dan 14,4 mg/ml. ekstrak  etanol  daun  kembang  sepatu  yang berpengaruh  terhadap    penurunan  berat badan  tikus  jantan  galur  wistar  yakni  pada konsentrasi  3,6  mg/ml  dan  14,4  mg/ml. ekstrak  etanol  daun  kembang  sepatu  yang berpengaruh terhadap  penurunan berat testsi tikus  jantan  galur  wistar  yakni  pada konsentrasi 7,2 mg/ml dan 14,4 mg/ml.

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes,  A.  2010.  Tanaman  Obat  Indonesia, hal 73-76.  Salemba Medika: Jakarta.
Cavallini, G.,  and G. Beretta . 201 5. Clinical Management  of  Male  Infertility . Germany, Publisher: Springer International Publishing .
Delfita,  R.  2014.  Potensi  Antifertilitas Ekstrak Teh Hitam Pada Mencit ( Mus musculus L.)  Jantan. Jurnal  Sainstek 6(2): 181 – 188.
Depkes  RI.  2014.  Farmakope  Indonesia .
Edisi  ke-5.  Depkes:  Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Gupta,  R.S.,  R.  Chaudhary,  R.K.  Yadav, S.K.  Verma  and  M.P.  Dobhai.  2005. Effect  of Saponins  of  Albizia lebbeck (L.)  Benth  bark  on  the  Reproductive System  of  Male  Albino  Rats. Journal of  Ethnopharmacology , 96(1-2): 31– 36.
Harlis,  W.O.  2012.  Uji  Potensi  Ekstrak Meniran ( Phyllanthus niruri L.)
Terhadap Spermatogenesis Tikus ( Rattus norvegicus
L.). WD Harlis//Paradigma , 16(1) : 39 – 46. Hyacinth, A.A. 2012. Evaluation of Spermicidal  Property  of  Aqueous Ethanolic Extract of Lawsonia inermis L.  Leaves .  Annals  of  Biological Research , 3(8) :3846-3848.
Kammoun,  S.,  A.  Saad,  M.  Ajina,  M.M, Trabelsi.  2007.  Spermicidal  Activity of  Extract  from  Cestrum  parqui. Contraception , 75: 152–156.
2,67 2,67 2,24 1,75 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 B e r a t
T e s t i
s
Kontrol P Ks 2 P Ks 4 P Ks 8
Maula,  I.F.  2014.  Uji  Antifertilitas  Ekstrak N-Heksana Biji Jarak Pagar (Jatropha curcas.  L) pada  Tikus  Putih  Jantan (Rattus  novergicus)  Galur  Sprague Dawley  secara  in  vivo .  Jakarta:  UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
Mudayatiningsih,  S.,  S.D.  Endang,  S. Hastuti  dan  D.T.N  Isnaeni.  2015. Ekstrak  Daun  Sirih  ( Piper  Bettle. L) Dan  Kualitas  Spermatozoa  Pada Mencit ( Mus musculus ) . Jurnal Informasi  Kesehatan  Indonesia . 1(2): 127 – 136.
Muslichah,  S.,  D.H.  Wiratmo  dan  A.F. Fifteen.  2014.  Potensi  Biji  Saga ( Abrus precatorius ) Sebagai Kontrasepsi Pria. Pharmacy . 11(2).
Parekattil,  S. and A.  Agarwal.  2012. Male Infertility:  Contemporary  Clinical Approaches,  Andrology,  ART  and Antioxidants . ISBN 978-1-4614-3335-
4. Priatma,  A.,  Dedi,  A.  Mursalin  dan  B.B. Philipus.  2010.  Sistem  Reproduksi pada Manusia dan Hewan. Singkawang, November 2010. Putri,  R.D.  2015.  Uji  Aktivitas  Ekstrak Etanol  70%  Daun  Pacing  (Costus spiralis)  terhadap  Diameter  Tubulus Seminiferus, Motilitas, dan Spermisidal  pada  Tikus  Jantan  Strain Sprague-Dawley  [Skripsi].  Jakarta Institutional  Repository:  UIN  Syarif
Hidayatullah.
Saragih,  C.  F.  2014.  Analisis  Faktor-faktor Penyebab  Infertilitas  di  RS  Jejaring Departemen OBGIN FK USU periode Januari  2012  sampai  Desember  2013. Medan: FK USU.
Sari,  I.P.,  R.  Siti  dan  M.R.  Dicky.  2012.
Infusa Daun Pacing ( Costus speciosus , Koen.) Sebagai Penghambat  Jumlah  dan  Kualitas  Sel Spermatozoa Pada Mencit ( Mus musculus )  Jantan  Balb/C. Trad.  Med. Journal . 18(1 ): 59-66.
Soehadi,  K.,  dan  H.  Winars.  1987.  Arah
Pemeriksaan Laboratorium Andrologi. Universitas  Airlangga, Surabaya.
World  Health  Organization.  2015. WHO Laboratory Manual for The Examination and Processing of Human  Semen.  6th  Edition .  WHO Press, Switzerland.
World  Health  Organization.  2016. Infertility Definitions  and  Terminology . 5th Edition . WHO Press, Switzerland.