.
DOI: https://doi.org/10.36376/bmj.v9i3
Bali Medika Jurnal Vol 9 No 3, 2022: 277-285
Bali Medika Jurnal .
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License. (CC BY 4.0)
Submitted 2 November 2022 Reviewed 2 December 2022 Accepted 29 December 2022

## Pengaruh pemberian pakan rendah besi dan induksi natrium nitrit terhadap potensi anemia defisiensi besi pada tikus
The effect of low iron feeding and sodium nitrite induction on the potential of iron deficiency anemia in rats
Windya Nazmatur Rahmah 1* , Fitria Hariati Ramdhani 1 , Al Hidayani 1
Prodi Analis Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Palangkaraya, Indonesia
windy.nazmatur@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian-penelitian terkait anemia sebenarnya sudah banyak dilakukan, hewan coba yang banyak digunakan untuk meneliti anemia defisiensi besi adalah mencit atau tikus. Namun, saat  ini  mencit  diketahui  telah  berevolusi  untuk  mampu  mempertahankan  besi  di  dalam tubuh  dibandingkan  dengan  tikus.  Mayoritas  pemberian  diet  rendah  besi  membutuhkan waktu  yang  lama  yaitu  sekitar  4-8  minggu.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menemukan model  protokol  laboratorium  terbaru animal  model anemia  defisiensi  besi  dengan menggunakan  tikus  putih  strain wistar dalam  waktu  yang  lebih  cepat.  Tikus  dibagi  ke dalam tiga kelompok, yaitu dengan pemberian pakan rendah besi, induksi NaNO 2 dengan
* How to Cite
Rahmah,  W.  N.,  Ramdhani,  F.  H.  .,  &  Hidayani,  A.  .  Pengaruh  pemberian  pakan  rendah  besi  dan  induksi natrium nitrit terhadap potensi anemia defisiensi besi pada tikus: The effect of low iron feeding and sodium nitrite  induction  on  the  potential  of  iron  deficiency  anemia  in  rats.  Bali  Medika  Jurnal,  9(3),  277–285. https://doi.org/10.36376/bmj.v9i3.293
dosis  25g/200  BB  tikus,  serta  kombinasi  antara  pakan  rendah  besi  dan  induksi  NaNO 2 . Hasil  data  pengukuran  pada  KP1,  KP2  dan  KP3  didapatkan  kadar  hemoglobin  dengan kisaran  12,2-15,7  g/dL;  12,8-13,7  g/dL  dan  12,7-15,4  g/dL,  dimana  kadar  hemoglobin tersebut masih dalam kisaran normal. Uji Kruskal-Wallis pada hasil pengukuran selama 21 hari tampak tidak ada pengaruh yang signifikan dengan nilai berturut-turut 0,051; 0,550 ; 0,051  (p<0,05).  Pemberian  pakan  rendah  besi  maupun  induksi  senyawa  NaNO 2 yang bersifat  karsinogenik  pada  tikus  jantan Wistar yang  telah  diberi  perlakukan  untuk  bisa menjadi animal model anemia defisiensi besi dapat digunakan namun memerlukan waktu pelakuan yang lebih lama agar terjadi kerusakan pada siklus hematopoesis.
Kata kunci : Animal model, anemia defisiensi besi, pakan rendah besi, induksi NaNO 2

## ABSTRACT
Many  types  of  research  related  to  anemia  have  been  carried  out,  and  the  experimental animals that are widely used to study iron deficiency anemia are mice or rats. However, rats are currently known to have evolved to retain iron in the body compared to rats. The majority of low-iron diets require a long time, which is about 4-8 weeks. This study aims to find the latest laboratory protocol model, an animal model of iron deficiency anemia using Wistar strain white rats in a faster time. Rats were divided into three groups: low iron feed, induction of NaNO2 at a dose of 25g/200 BW rats, and a combination of low iron feed and induction of NaNO2. The measurement data results on KP1, KP2, and KP3 obtained hemoglobin levels in the range of 12.2-15.7 g/dL; 12.8-13.7 g/dL, and 12.7-15.4 g/dL, where the hemoglobin levels were still in the normal range. The Kruskal-Wallis test on  the  measurement results  for  21 days  did  not  appear  to  have  a significant  effect  with successive values of 0.051; 0.550; 0.051 (p<0.05). Giving low iron feed or induction of carcinogenic  NaNO 2 compounds  in  male  Wistar  rats  that  have  been  treated  to  become animal models of iron deficiency anemia can be used but require a longer treatment time to damage the hematopoietic cycle.
Keywords : Animal model, iron deficiency anemia, low iron feed, NaNO 2 induction

## PENDAHULUAN
Anemia  hingga  saat  ini  masih  menjadi  permasalahan  global  yang menyebabkan  penurunan  kualitas  hidup  seseorang.  Angka  kejadian  anemia  di Indonesia saja terbilang masih cukup tinggi dengan prevalensi anemia pada remaja sebesar  32%,  artinya  3-4  dari  10  remaja  menderita  anemia.  Selain  itu,  pada  ibu hamil angka kejadian anemia juga mengalami peningkatan yaitu 37,1% pada tahun 2013  menjadi  48,9%  pada  tahun  2018.  Anemia  yang  terjadi  pada  wanita  di Indonesia dipengaruhi oleh asupan gizi yang tidak optimal dan kurangnya aktifitas fisik.  Berbagai  upaya  telah  dilakukan  pemerintah  Indonesia  untuk  menurunkan angka  kejadian  anemia,  mulai  dari  pemberian  tablet  tambah  darah  dan  upaya penanggulangan dengan pemberian edukasi dan promosi gizi seimbang, fortifikasi
zat besi pada bahan makanan serta penerapan hidup bersih dan sehat (Kemenkes RI, 2018).
Penelitian-penelitian terkait anemia sebenarnya sudah banyak dilakukan, baik dengan menggunakan model hewan coba ( animal model ) maupun langsung kepada manusia.  Penggunaan  hewan  coba  memiliki  banyak  keuntungan,  diantaranya membantu  peneliti  dalam  mempelajari  patofisiologi  penyakit  dan  memudahkan peneliti  untuk  menguji  berbagai  jenis  terapi  yang  sulit  diaplikasikan  langsung kepada  manusia.  Hewan  coba  yang  banyak  digunakan  untuk  meneliti  anemia defisiensi besi adalah jenis hewan kecil seperti mencit atau tikus. Namun, saat ini mencit  diketahui  telah  berevolusi  untuk  mampu  mempertahankan  besi  di  dalam tubuh dibandingkan dengan tikus. Tikus putih (secara umum) lebih rentan untuk mengembangkan anemia defisiensi besi dibandingkan dengan beberapa jenis tikus laboratorium lainnya (Wang et al ., 2019).
Mayoritas peneliti menggunakan prosedur berupa pemberian diet rendah besi pada mencit atau tikus untuk memicu terjadinya anemia defisiensi besi. Akan tetapi, prosedur  seperti  ini  membutuhkan  waktu  yang  lama  yaitu  sekitar  4-8  minggu, sehingga  apabila  peneliti  menggunakan  model  hewan  coba  ini  dalam  meneliti anemia  defisiensi  besi  maka  waktu  yang  diperlukan  hingga  penelitian  selesai menjadi lebih lama lagi (Rineau et al ., 2021; Elshemy, 2018; Wang et al ., 2018; Asperti et  al .,  2018).  Pada  penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  Azkiyah pada tahun 2021, diketahui untuk induksi menggunakan natrium nitrit, volume yang diberikan kepada mencit secara oral adalah 20 ml/kg. Jadi, apabila mencit memiliki berat  badan  20  gram  maka  natrium  nitrit  yang  diberikan  adalah  sebanyak  0,4 ml/ekor/hari    selama  14  hari.  Sedangkan  untuk  tikus  jantan (Rattus  norvegicus) strain wistar pemberian  induksi  natrium  nitrit  (NaNO 2 )  diberikan  sebanyak  125 gr/KgBB selama 3 (tiga) minggu (Hermayanti & Syafitri, 2020).
Oleh  sebab  itu,  perlu  dilakukan  suatu  penelitian  untuk  menemukan  model protokol  laboratorium  terbaru  terutama  dengan  menggunakan  tikus  putih  strain wistar dengan harapan animal model anemia defisiensi besi dapat diperoleh dalam waktu lebih cepat dibandingkan dengan menggunakan prosedur yang lama.

## METODE PENELITIAN

## Lokasi Penelitian
Penelitian  telah  dilaksanakan  di  Laboratorium  Fakultas  Ilmu  Kesehatan Universitas Muhammadiyah Palangkaraya

## Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan mulai bulan Juli-September 2022.

## Jenis Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian True  Experimental  Research ,  yang bertujuan  untuk  mempelajari  hubungan  pemberian  perlakuan  (pakan,  induksi natrium nitrit, dan kombinasi) dalam perkembangan anemia defisiensi besi dengan
mengendalikan  lingkungan  hewan  coba,  pakan  dan  induksi  yang  diberikan  dan mengukur parameter hematologi setiap minggunya.

## Desain Penelitian
Penelitian  ini  telah  disetujui  oleh  Komite  Etik,  Fakultas  Kedokteran Universitas  Islam  Sultan  Agung  dengan  Nomor:  373/IX/2022/Komisi  Bioetik. Penelitian  ini  adalah  penelitian Post  Test  Only  Control  Group  Design ,  dimana kelompok  perlakuan  setiap  minggu  dilakukan  evaluasi  terhadap  parameter hematologi hingga didapatkan profil anemia defisiensi besi.

## Populasi dan Sample
Pada penelitian ini objek yang digunakan adalah adalah tikus putih ( Rattus norvegicus )  galur Wistar sebanyak  24  ekor  jenis  kelamin  jantan  dalam  kondisi sehat,  bobot  awal  110-130  gram  dan  umur  rata-rata  adalah  2  (dua)  bulan. Penggelompokan dibagi atas 3 (tiga) perlakuan, yaitu kelompok pemberian pakan rendah  besi  (KP1)  dengan  komposisi  protein  20,3  gram,  karbohidrat  63,9  gram, lemak 7 gram, kasein 200 gram, tepung maizena 397,5 gram, sukrosa 100 gram, minyak keledai 70 gram, mineral mix 35 gram, kelompok perlakuan induksi NaNO 2 sebanyak  25g/200  BB  tikus  yang  dilarutkan  dalam  3  mL  akuades  (KP2),  serta kelompok kombinasi dari pemberian pakan rendah besi dan induksi NaNO 2 (KP3). Ketiga kelompok itu diadaptasikan selama 7 hari dan selanjutnnya pada hari ke-8 diberikan  perlakuan  selama  21  hari.  Pengukuran  kadar  hemoglobin  dilakukan  4 (empat) kali, yaitu pada hari ke-7 untuk pre hasil, ke-14, ke-21, dan ke-28 untuk post hasil perlakuan untuk mengetahui perkembangan penurunan kadar hemoglobin dengan  sampel  yang  digunakan  berupa  darah  vena  latelaris  yang  diukur menggunakan alat meter (POCT).

## Pengumpulan dan Analisa Data
Data-data  hasil  penelitian  yang  terkumpul  selanjutnya  dianalisis menggunakan uji normalitas dengan menggunakan uji Saphiro-Wilk karena jumlah sampel >50. Data dinyatakan normal apabila nilai p > 0,05. Setelah dilakukan uji normalitas  dilanjutkan  dengan  uji  homogenitas  dengan  menggunakan Levene’s Test .  Data  dikatakan  homogen  apabila  nilai  sig  >  0,05.  Dari  data  penelitian didapatkan  data  tidak  berdistribusi  normal  maka  dilanjutkan  dengan  uji  non- parametrik,  yaitu uji Kruskal-Wallis dan dilanjutkan dengan uji Post Hoc Mann- Whitney.

## HASIL DAN DISKUSI

## Hasil Penelitian
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh pemberian pakan rendah besi dan induksi natrium nitrit terhadap potensi anemia defisiensi besi pada animal model tikus  jantan Wistar dengan  perlakuan  selama  21  hari.  Hasil  pengukuran rerata  kadar  hemoglobin  dari  setiap  kelompok  perlakuan  terlihat  pada  Tabel  1 seperti berikut.
Tabel 1.  Hasil pengukuran rerata kadar hemoglobin
Kelompok perlakuan Kadar Hemoglobin Darah (g/dl) Pre Minggu ke-1 Minggu ke-2 Minggu ke-3 KP1 12,9 15,7 15,2 12,2 KP2 13,2 13,7 12,8 13,1 KP3 13,1 14,0 15,4 12,7
Hasil  rerata  kadar  hemoglobin  dari  setiap  perlakuan  diatas  agar  lebih  jelas menggambarkan tingkat pengaruh pemberian pakan rendah besi, induksi NaNO2 dan kombinasi selama 21 hari disajikan dalam bentuk diagram garis seperti Gambar 1 dibawah ini.
Gambar 1 Hasil Pengukuran Kadar Hemoglobin (KP1 : Pemberian pakan rendah  besi,  KP2  :  Induksi  NaNO2,  KP3  :  Kombinasi (pemberian pakan rendah besi dan induksi NaNO2)
Berdasarkan Tabel 1 menunjukkan hasil rerata pengukuran kadar hemoglobin selama  21  hari  dari  3  kelompok  perlakuan,  dengan  hasil  pengukuran  kadar hemoglobin pada KP1 secara berturut-turut dari pre hingga minggu ke-3 perlakuan adalah 12,9 g/dL; 15,7 g/dL; 15,2 g/dL; 12,2 g/dL. Pada KP2 menunjukkan hasil pengukuran  hemoglobin  secara  berturut-turut  adalah  13,2  g/dL;  13,7  g/dL;  12,8 g/dL; 13,1 g/dL, sedangkan hasil pada KP3 menunjukkan kadar hemoglobin secara berturut-turut adalah 13,1 g/dL; 14,0 g/dL; 15,4 g/dL; 12,7 g/dL.
12,9 15,7 15,2 12,2 13,2 13,7 12,8 13,1 13,1 14 15,4 12,7 11 11,5 12 12,5 13 13,5 14 14,5 15 15,5 16 Pre Minggu ke-1 Minggu ke-2 Minggu ke-3 K a d a r H e m o g lo b in ( g /d L) KP1 KP2 KP3

## Diskusi Hasil
Pada penelitian ini terlihat terjadi peningkatan kadar hemoglobin pada KP1, KP2 serta KP3 di minggu pertama perlakuan yang dapat disebabkan oleh adanya kompetisi  antara  O 2 dan  NO  yang  berikatan  dengan  hemoglobin  sehingga kebutuhan  O 2 untuk  metabolisme  tubuh  menjadi  meningkat.  Peningkatan kebutuhan  O 2 disebakan  karena  O 2 yang  dapat  berikatan  dengan  hemoglobin berkurang. Kebutuhan O 2 tersebut direspon oleh tubuh tikus dengan meningkatkan kadar hemoglobin pada kondisi subkornis (Widyastuti, 2013).
Hemoglobin  merupakan  salah  satu  parameter  untuk  mengetahui  adanya keadaan  anemia.  Berdasarkan  hasil  data  penelitian  pada  KP1,  KP2  serta  KP3 selama 21 hari tampak tidak ada pengaruh  yang signifikan dengan nilai berturut- turut  0,051;  0,550  ;  0,051  (p<0,05).  Pada  KP1  dan  KP3  didapatkan  kadar hemoglobin  dengan  kisaran  12,2-15,7  g/dL  dan  12,7-15,4  g/dL,  dimana  kadar hemoglobin  tersebut  masih  dalam  kisaran  normal.  Pada  kelompok  perlakuan tersebut telah dapat menurunkan kadar hemoglobin diminggu ke-3 namun belum dapat dikategorikan sebagai kondisi anemia pada tikus. Hal ini dapat dipengaruhi oleh  sifat  bioavailabilitas  zat  besi  dalam  penyerapan.  Zat  besi  yang  berasal  dari pakan hanya sekitar 10% yang diabsoprsi. Absorpsi besi sendiri merupakan proses kompleks yang terjadi di duodenum dan jejunum bagian proksimal. Pada pH asam di lambung, heme terurai dari hemoprotein, sedangkan besi non-heme stabil dalam bentuk  tereduksi  (Fe2+).  Besi  non-heme  ditangkap,  namun  beberapa  kompleks yang  dapat  mempengaruhi  absopsinya  seperti plant  derived  phytates atau  tannin (Abramowski SW, 2014).
Peningkatan  kadar  hemoglobin  yang  terjadi  pada  minggu  ke-3  pada  KP2 disebabkan oleh mekanisme NaNO 2 bekerja dengan cara menghambat distribusi O 2 yang  menyebabkan  terbentuknya  methemoglobin.  Adanya  reaksi  antara  NO  dari NaNO 2 dengan hemoglobin membentuk nitrosohemoglobin yang mengakibatkkan kadar hemoglobin menjadi berkurang sehingga kemampuan eritrosit tidak adekuat dalam menjalankan fungsinya untuk membawa O 2 ke seluruh tubuh (Widyastuti, 2013).  Pada  keadaan  ketersediaan  O 2 yang  kurang  dapat  menyebabkan  hati mengeluarkan banyak globulin, di sisi lain ginjal juga menghasilkan faktor-faktor eritropoetin  yang  akan  berinteraksi  dengan  globulin.  Interaksi  antara  faktor eritropoetin  dengan  globulin  dapat  merangsang  terjadinya  eritropoesis  sehingga akan ada peningkatan sistesis hemoglobin (Farikhah A, et al , 2019).
Pada penelitian ini pada KP2 didapatkan kadar hemoglobin berkisar antara 12,8-13,7 g/dL, hasil tersebut masih berada pada kisaran normal dengan hasil tidak ada pengaruh yang signifikan dengan nilai p<0,05. Kadar hemoglobin pada tikus putih  dikatakan  normal  jika  berada  pada  kisaran  11,6-16,1  g/dL  (Douglas  dan Wardrop,  2010).  Hasil  ini  sejalan  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Hermayanti, et  al (2020)  yaitu  perlakuan  dengan  induksi  pakan  rendah  zat  besi selama 21 hari belum menunjukkan penurunan kadar hemoglobin pada hewan coba. Secara fisiologis akan terjadi anemia jika cadangan besi yang ada di dalam tubuh tidak cukup untuk digunakan pada proses eritropoesis.
Tikus yang telah diberi perlakuan terlihat menunjukkan hasil perkembangan dengan  adanya  penurunan  kadar  hemoglobin.  Metabolisme  NaNO 2 yang  bersifat
radikal  bebas  sehingga  menyebabkan  keadaan  hipoksia  pada  organ-organ  tikus. Radikal bebas yang terbentuk dapat mempengaruhi membran eritrositik yang dapat menyebabkan  gangguan  pada  proses  hematopoesis  dan  kerusakan  eritorosit. Kerusakan  eritrosit  yang  terjadi  adalah  lisisnya  eritrosit  yang  menyebabkan berkurangnya kadar hemoglobin (Dewi et al ., 2022). Berdasarkan penelitian Sandy, et al (2021) penggunaan NaNO 2 selama 60 hari dapat digunakan untuk mencegah proses pembentukan profil hematologi dengan menyebabkan peningkatan ROS di siklus  hematopoesis  sehingga  terjadi  penurunan  kadar  hemoglobin.  Tapi  hal tersebut tidak berlaku jika masih terdapat cadangan zat besi yang cukup di dalam tubuh hewan coba. Kenaikan maupun penurunan kadar hemoglobin pada kondisi akut maupun subkronis tidak berbeda nyata antar perlakuan.
Berdasarkan uji statistik yang digunakan yaitu uji Post-hoc Mann-Whitney terhadap kadar hemoglobin tikus didapatkan nilai p>0,05 yang menunjukkan bahwa tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  diantara  KP1,  KP2,  serta  KP3.  Kadar hemoglobin tikus yang tidak berbeda secara signifikan menunjukkan bahwa proses hematopoesis  di  dalam  tubuh  tikus  tetap  dalam  kondisi  normal  (Indrianti et  al ., 2015).

## SIMPULAN
Pemberian pakan rendah zat besi dan induksi senyawa NaNO 2 yang bersifat karsinogenik  pada  tikus  jantan Wistar yang  telah  diberi  perlakukan  untuk  bisa menjadi  animal  model  dengan  kondisi  anemia  defisiensi  besi  dapat  digunakan namun memerlukan waktu pelakuan yang lebih lama agar terjadi kerusakan pada siklus  hematopoesis.  Dengan  memperpanjang  waktu  perlakuan  dan  pemberian dosis yang bertingkat dapat mempercepat proses penurunan kadar hemoglobin.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  kepada  Universitas  Muhammadiyah  Palangkaraya  yang  telah memberikan  dukungan  secara  pendanaan  dan  menyediakan  fasilitas  yang  dapat digunakan  seperti  laboratorium  yang  memadai.  Terimakasi  juga  kepada  seluruh pihak peneliti yang terlibat pada penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Abramowski  SW,  Waeber  G,  Gassner  C,  et  al,  2014,  Physiology  of  Iron Metabolism, Transfus Med He mother, Vol.41(3): 213-221. https://doi.org/10.1159/000362888
Asperti, M., Gryzik, M., Brilli, E., Castagna, A., Corbella, M., Gottardo, R., … Poli, M. (2018). Sucrosomial® iron supplementation in mice: Effects on blood parameters,  hepcidin,  and  inflammation. Nutrients , 10 (10),  1–12. https://doi.org/10.3390/nu10101349
Dewi I., Adi A. A., dan Setiasih N. L. E. (2022). Fluktasi Profil Hematologi Tikus
Putih  Hewan  Model  Fibrosarkoma  yang  Diinduksi  Benzo(a)piren. Indonesia Medicus Veterinus , 11(2), 267-281.
https://doi.org/10.19087/imv.2022.11.2.267.
Douglas JW, Wardrop KJ. (2010). Schalm’s Veterinary Hematology. 6th ed. New Jersey, United States. Wiley-Blackwell . 852-887.
El  Shemy,  M.  (2018).  Iron  Oxide  Nanoparticles  Versus  Ferrous  Sulfate  In Treatment  of  Iron  Deficiency  Anemia  In  Rats. Egyptian  Journal  of Veterinary Sciences , 49 (2), 103–109.
https://doi.org/10.21608/ejvs.2018.3855.1039
Farikhak A., Indrini F., Yulianti A., Restuti A.N.S. (2019). Intervensi Bubuk Kakao Terhadap  Kadar  Hemoglobin  Tikus  Putih  Galur  Wistar  Anemia.  Seminar Nasional  INAHCO  (Indonesia  Anemia  &  Healthy  Conference)  2019. https://doi.org/10.14710/jgi.8.2.79-84
Hermayanti,  D.,  &  Syafitri,  F.  (2020).  Efektifitas  Ekstrak  Daun  Kelor  (Moringa oleifera lam) Dalam Memperbaiki Profil Serum  Iron, Saturasi Transferin, dan Total Iron Binding Capacity Tikus Putih Jantan Diet Rendah Zat Besi. Herb-Medicine Journal , 3 (1), 1. https://doi.org/10.30595/hmj.v3i1.6365
Indrianti  M.D.,  Tana,  S.,  dan  Mardiati,  S.M.  (2015).  Hematologi  Kelinci  (Lepus sp.)
setelah  Perlakuan  Implantasi  Material  Stainless  Steel  Aisi  316L  Selama 2,5 Bulan. Buletin Anatomi dan Fisiologi , 23(2): 79-87.
Kemenkes RI.  (2018).  Laporan  Nasional Riskesdas  2018. Badan  Penelitian  Dan Pengembangan Kesehatan , pp. 1–198. Retrieved from http://labdata.litbang.kemkes.go.id/images/download/laporan/RKD/2018/L aporan_Nasional_RKD2018_FINAL.pdf
Rineau, E., Gueguen, N., Procaccio, V., Geneviève, F., Reynier, P., Henrion, D., & Lasocki,  S.  (2021).  Iron  deficiency  without  anemia  decreases  physical endurance  and  mitochondrial  complex  I  activity  of  the  oxidative  skeletal muscle in the mouse. Nutrients , 13 (4). https://doi.org/10.3390/nu13041056 Sandy E. N., liliawanti., Kurnia W.(2021) Pengaruh pemberian ekstrak rumput laut coklat  ( Sargasum  duplicatum )  terhadap  peningkatan  kadar  hemoglobin pada  darah  tikus  jantan  ( Rattus  Norvegicus )  galur  Wistar  anemia  yang diinduksi  NaNO 2. Ocean  Biomedicina  Journal,  Vol.  4  No.  1 https://doi.org/10.30649/obj.v4i1.51
Wang, X., Flores, S. R. L., Ha, J. H., Doguer, C., Woloshun, R. R., Xiang, P., … Collins, J. F. (2018). Intestinal DMT1 is essential for optimal assimilation of  dietary  copper  in  Male  and  female  mice  with  iron-deficiency  anemia. Journal of Nutrition , 148 (8), 1244–1252. https://doi.org/10.1093/jn/nxy111 Wang, X., Garrick, M. D., & Collins, J. F. (2019). Animal model s of Normal and Disturbed  Iron  and  Copper  Metabolism. Journal  of  Nutrition , 149 (12), 2085–2100. https://doi.org/10.1093/jn/nxz172
Widyastuti, D. A. (2013). Profil Darah Tikus Putih Wistar pada Kondisi Subkronis
Pemberian  Natrium  Nitrit. Jurnal  Sain  Veteriner ,  31(2),  0126-0421. https://doi.org/10.22146/jsv.34697