## ISOLASI Actinomycetes ENDOFIT DARI TANAMAN AKAR WANGI
( Vetiveria zizanioides ) DAN UJI AKTIVITAS SENYAWA ANTIBAKTERI TERHADAP Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli
Elsie, Nofripa Herlina, Ruli Tias Putri
Department of Biology, Faculty of Mathematic and Natural Sciences, Universitas Muhammadiyah Riau elsie@umri.ac.id

## ABSTRACT
Actinomycetes endophytes are bacteria that live in plant tissues and are known as secondary metabolites that have activity as an antibacterial. This study was conducted to isolate Actinomycetes endophytes from vetiver plant tissue (Vetiveria zizanioides) and test for the activity of antibacterial compounds against Staphylococcus aureus and Escherichia coli by using diffusion method. Actinomycetes endophytes successfully isolated were isolates of RTP-1, RTP-2 and RTP-3. The results of antibacterial compound activity test showed that the three Actinomycetes endophytic isolates were able to inhibit the growth of S. aureus and E. coli bacteria. The best inhibitory ability against E. coli bacteria with a drag zone diameter of 20 mm while the largest inhibitory zone diameter against S. aureus bacteria was 9 mm.
Keywords : Actinomycetes endophytes, Vetiveria zizanioides, antibacterials

## 1 PENDAHULUAN
Penyakit  akibat  infeksi  merupakan  salah satu  masalah  dalam  bidang  kesehatan  yang terus  berkembang.  Beberapa  mikroorganisme penyebab  infeksi  diantaranya  virus,  jamur, protozoa  dan  bakteri.  Salah  satu  cara meminimalisir  penyakit  infeksi  yaitu  dengan penggunaan antibiotik. Namun banyak mikroba  yang  mengalami  resistensi  terhadap antibiotik.  Banyaknya  kejadian  resistensi mendorong  dilakukannya  eksplorasi antibiotik baru  sebagai  upaya  mengatasi  masalah resistensi  ini.  Sumber  utama  penghasil antibiotik  berasal  dari  fungi  (Worang,  2003), bakteri  (Suarsana et al. ,  2001)  dan
Actinomycetes (Oskay et al. , 2004).
Actinomycetes merupakan  bakteri  Gram positif berbentuk batang yang umumnya hidup di  tanah  (Waluyo,  2009),  namun  ada  juga ditemukan  pada  jaringan  tanaman  (batang, daun,  akar)  sehat  dan  menghasilkan  sumber senyawa  bioaktif  yang  memberi  lebih  banyak
keuntungan  seperti  produksi  antibiotik, antikanker,  antibakteri,  dan  fitohormon  yang disebut Actinomycete s  endofit  (Bailey et al. , 2006;.Clegg & Murray, 2002).
Beberapa  penelitian  telah  dilakukan sebelumnya untuk mengisolasi Actinomycetes endofit dari jaringan
tanaman.Cao et al. (2004)  telah  menemukan isolat Streptomyces dari  akar  tanaman  tomat diketahui  telah  memberi  manfaat  sebagai pengendali penyakit infeksi dengan kemampuannya  dalam  menghasilkan  senyawa antibakteri. Penelitian yang dilakukan Castillo et al . (2002) menunjukkan bahwa Streptomyces NRRL  30562  dari  tanaman Kennedia nigriscans menghasilkan munumbisin  (antibiotik)  dan  munumbisin  D (antimalaria),  sedangkan  penelitian  Strobel et al. (2004)  menyebutkan  bahwa Serratia marcescens dari  tanaman Rhyncholacis penicillata menghasilkan  oosydin  A  sebagai antifungi  dan  penelitian  Beck et al. (2003)
telah  menemukan  senyawa  fusarisidin  A-D sebagai  antifungi  dari  tanaman Triticum aestivum yang  mewakili  family  poaceae. Tanaman  yang  termasuk  family  poaceae lainnya yaitu akar wangi
Akar wangi ( Vetiveria zizanioides ) adalah tanaman  tropis  sejenis  rumput-rumputan berukuran  besar  yang  memiliki  banyak keistimewaan.  Tanaman  tersebut  banyak dimanfaatkan  sebagai  penghasil  minyak  atsiri yang menghasilkan banyak kandungan bioaktif seperti  antiinflamasi,  antiseptik  dan  obat  luka (Chomchalow, 2000). Penelitian yang dilakukan  Ratha et al. (2012),  menunjukkan bahwa  ekstrak  tanaman Vetiveria zizanioides diketahui  mempunyai  aktivitas  antibakteri terhadap Escherichia coli , Klebseilla pnemoniae, Salmonella typhii, Staphylococcus aureus, dan Vibrio cholera .  Berdasarkan  hal tersebut,  diperkirakan,  pada  tanaman  Akar Wangi ( Vetiveria zizanioides ) terdapat mikroba  aktif  seperti Actinomycetes endofit yang  memproduksi  zat  antibakteri.  Untuk mengukur  seberapa  besar  potensi  senyawa antibakteri  dapat  memberikan  efek  bagi bakteri  patogen,  maka  dilakukan  uji  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri  taget  yaitu  . S. aureus dan E. coli.

## Batasan Masalah
Pada  penelitian  ini  penulis  hanya membatasi  pada  isolasi Actinomycetes endofit dari  akar  dan  daun  tanaman  Akar  Wangi ( Vetiveria zizanioides) dan  melakukan  uji aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  target yaitu Staphylococcus aureus dan Escherichia coli .
Rumusan Masalah Eksplorasi Actinomycetes endofit  sebagai penghasil  antibiotik  baru  dan  kemampuannya dalam  menghasilkan  zat  antibakteri  mulai dikembangkan  untuk  menjawab  kebutuhan obat  di  dunia  kesehatan,  sehingga  mendorong penulis  melakukan  isolasi Actinomycetes
endofit  dari  jaringan  tanaman  Akar  Wangi ( Vetiveria zizanioides )  yang  memiliki  potensi dalam menghasilkan senyawa antibakteri.

## Tujuan Penelitian
Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengisolasi Actinomycetes endofit  dari  akar  dan  daun tanaman  Akar  Wangi  ( Vetiveria zizanioides ) dan  uji  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli .

## Manfaat Penelitian
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan  informasi  mengenai  isolat Actinomycetes endofit yang diisolasi dari akar dan  daun  tanaman  Akar  Wangi  ( Vetiveria zizanioides ) yang potensial dalam menghasilkan  senyawa  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.

## 2 METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan April hingga Juni 2017. Sampel tanaman akar wangi  diambil  di  Kecamatan  Rumbai  Pesisir dan analisis sampel dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  MIPA  dan  Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Riau, Pekanbaru.

## Alat Dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah plastik ziplock , penggaris, Laminar Air Flow (LAF), oven (Memmert ) ,  inkubator (Memmert ) , autoklaf (All American), timbangan  analitik  (Radwag),  kompor  listrik (Maspion), beaker glass (Pyrex),  cawan  petri (Pyrex),  pipet  volume  1  ml,  erlenmeyer, bunsen, cotton swab ,  tabung  reaksi,  spatula, pinset, ose dan pisau.
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah  sampel  akar  dan  daun V. zizanioides , media Starch Casein Agar , Starch Casein Broth ,  media Nutrient Agar , Nutrient Broth , antifungi  (Nistatin),  kertas  saring,  aquades, alkohol 70 %, natrium hipoklorit (NaOCl) 5,25 %,  spiritus,  bakteri  uji S. aureus dan E. coli (diperoleh  dari  Laboratorium  Mikrobiologi

## Fakultas  MIPA,  Universitas  Muhammadiyah
Riau)
Isolasi Actinomycetes Endofit Isolasi Actinomycetes endofit  dari  akar dan daun V. zizanioides dilakukan berdasarkan metode  Coombs  &  Franco  (2003),  dimulai dengan  mengoleksi  tanaman  dari  lapangan selanjutnya  dibersihkan  dari  kotoran  dengan cara  mencucinya  pada  air  mengalir.  Akar  dan daun  tanaman dipotong  secara  aseptik dengan pisau menjadi potongan-potongan berukuran ± 1cm.  Potongan-potongan  tersebut  disterilisasi dengan  cara  direndam  ke  dalam  larutan alkohol  70  %  selama  1  menit,  natrium hipoklorit  (NaOCl)  5,25  %  selama  5  menit, kemudian  direndam  kembali  ke  dalam  larutan alkohol  70  %  selama  1  menit,  potongan- potongan  akar  dan  daun  tersebut  dibilas  tiga kali  dengan  aquades  steril.  Kemudian, potongan  akar  atau  daun  dikeringkan  dengan tisu steril dan dibiarkan selama 2-3 jam.
Sampel  akar  dan  daun V. zizanioides diinokulasi  ke  dalam  cawan  petri.  Setiap cawan  petri  yang  sudah  berisi  media  SCA berisi  2  potong  akar  atau  daun.  Sebagai kontrol,  aquades  bilasan  terakhir  diambil  ±  1 ml dan dituang ke dalam media SCA. Sampel tanaman  yang  sudah  diinokulasi,  selanjutnya diinkubasi  pada  suhu  28  ºC  selama  2  minggu untuk  melihat  pertumbuhan Actinomycetes endofit.
Pemurnian Isolat Actinomycetes Endofit Pemurnian
Actinomycetes
endofit dilakukan  pada  setiap  koloni  yang  dianggap berbeda  berdasarkan  morfologi  makroskopis yang  dapat  dilihat  dari  penampakan  warna meliputi  hifa  aerial,  hifa  substrat  dan  ada tidaknya  pigmen  yang  terdifusi  ke  medium (pigmen  terlarut)  dan  memproduksi  spora seperti serbuk (Susilowati, 2007).
Actinomycetes endofit  tersebut    diambil menggunakan  ose  dan  dipindahkan  ke  media SCA  yang  baru  dengan  metode streak plate
untuk  mendapatkan  isolat  murni.  Isolat diinkubasi  pada  suhu  28  ºC  selama  2  minggu (Sembiring et al., 2000).

## Produksi Senyawa Antibakteri
Isolat  murni Actinomycetes endofit  yang telah  diperoleh  diambil  menggunakan  ose steril  kemudian  diinokulasikan  ke  dalam tabung  reaksi  berisi  9  ml  media  SCB, diinkubasi  pada  suhu  28  ºC  selama  7  hari. Pertumbuhan bakteri ditandai dengan terbentuknya  granul-granul,  serta  terjadi perubahan  warna  pada  media  menjadi  sedikit keruh (Herlina et al., 2010).

## Membuat Suspensi Bakteri Target
Satu  ose  biakan  bakteri  yang  telah diremajakan  di  media  NA  disuspensikan  ke dalam tabung reaksi berisi 5 ml media NB dan diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37 o C. Suspensi bakteri tersebut diencerkan menggunakan aquades steril sampai kekeruhannya  setara  dengan  larutan  standard Mc.Farland  I  (biakan  cair  yang  kekeruhannya setara  dengan  0,5  Mc.Farland  I  mempunyai populasi  1x10 7 CFU/ml-1x10 8 CFU/ml) (Sutton, 2011).

## Uji  Potensi  Isolat  Sebagai  Penghasil Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan menggunakan metode difusi (Susilowati et al ., 2007).  Media  NA  diusap  sampai  merata dengan suspensi bakteri target yang kekeruhannya  setara  dengan  0,5  Mc.Farland  I menggunakan cotton swab ,  kemudian  kertas saring  berdiameter  6  mm  steril  dicelupkan selama  5  detik  ke  dalam  suspensi  isolat Actinomycetes endofit  menggunakan  pinset steril.  Potongan  kertas  saring  tersebut diletakkan di atas media NA yang telah diusap dengan bakteri uji. Selanjutnya seluruh cawan diinkubasi  pada  suhu  28  ºC  selama  24  jam. Setelah itu dilakukan pengamatan zona hambat di  sekitar  kertas  saring  yang  menunjukkan tidak  adanya  pertumbuhan  bakteri.  Diameter
daerah  hambatan  dihitung  dan  ditentukan tingkat hambatannya sesuai dengan pengkategorian  Ambarwati  (2007), yaitu zona bening dengan diameter <5 mm dikategorikan lemah,  5-9  mm  dikategorikan  sedang,  10-20 mm  dikategorikan  kuat,  sedangkan  zona bening dengan diameter >20 mm dikategorikan sangat kuat.
Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  isolasi Actinomycetes endofit  dari  tanaman  Akar Wangi ( V. zizanioides ) disajikan dalam bentuk tabel  dan  gambar,  serta  dijelaskan  secara deskriptif berdasarkan ukuran zona hambat.

## 3 HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  isolasi, Actinomycetes endofit  dari tanaman  akar wangi ( V. zizanioides ) disajikan pada (Tabel 1).
Tabel 1 Hasil isolasi dan karakterisasi morfologi Actinomycetes endofit No Isolat Organ tanaman Karakteristik morfologi Hifa aerial Hifa substrat Pigmen terlarut spora 1 RTP-1 Daun Putih Kuning Kekuningan Serbuk 2 RTP-2 Daun Putih merah muda Merah Tidak ada Serbuk 3 RTP-3 Akar Putih kecoklatan Coklat Tidak ada Serbuk Tabel  1  menunjukkan  bahwa  hasil  isolasi
Actinomycetes endofit  dari  dalam  jaringan tanaman akar wangi ( V. zizanioides ) diperoleh sebanyak  3  isolat,  dua  isolat  berasal  dari jaringan  daun  dan  satu  isolat  dari  jaringan akar. Ketiga isolat tersebut adalah isolat RTP- 1,  RTP-2  dan  RTP-3.  Karakteristik  morfologi makroskopis yang diamati meliputi warna hifa aerial,  warna  hifa  substrat,  warna  pigmen terlarut dan memproduksi spora seperti serbuk.
Hifa aerial merupakan hifa yang menonjol atau terbentuk  dari  permukaan  substrat  yang berfungsi sebagai alat perkembangbiakan. Hifa substrat  adalah  hifa  yang  terbentuk  di  bagian dasar/bawah dari kultur Actinomycetes berfungsi  sebagai  alat  untuk  menyerap  nutrisi sedangkan  pigmen  terlarut adalah warna  yang disekresikan  oleh  kultur  ke  dalam  media tumbuh (Gambar 1).
(a1) (a2) (b1) (b2)
(c1) (c2)
Gambar 1 Keragaman morfologi koloni Actinomycetes endofit pada media SCA (a1) warna hifa aerialisolat  RTP-1, (a2) warna hifa substrat isolat  RTP-1; (b1) warna hifa aerial isolat RTP-2, (b2) warna hifa substrat isolat RTP-2; (c1) warna hifa aerial isolat RTP-3, (c2) warna hifa substrat isolat RTP-3
Karakteristik morfologi ketiga isolat RTP- 1,  RTP-2  dan  RTP-3  masing-masing menunjukkan  warna  hifa  aerial  putih,  putih merah  muda, putih kecoklatan dan warna hifa substrat kuning, merah, coklat dan memproduksi  spora  seperti  serbuk  sedangkan yang memiliki kemampuan dalam menghasilkan  warna  pigmen  terlarut  pada medium yaitu isolat RTP-1 dimana warna awal medium  bening  tidak  berwarna  berubah menjadi  kekuningan.  Perubahan  warna  yang terjadi  pada  medium  ini  disebabkan  adanya senyawa  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan Actinomycetes endofit.  Miyadoh  dan  Otoguro
(2004) mengatakan bahwa spora
Actinomycetes akan  berkembang  menjadi miselium  dan  mampu  mengubah  warna medium (terdifusi) apabila nutrisi, kelembaban udara,  suhu,  serta  kondisi  lainnya  memenuhi untuk  kehidupannya,  sehingga  lebih  dominan menghasilkan metabolit sekunder dan pertumbuhan sel. Berdasarkan penelitian Amal et al. (2011),  menunjukkan  bahwa  pigmen tedifusi Actinomycetes biasanya  terdiri  dari beragam  warna  seperti  gradasi  biru,  ungu, merah, kuning, coklat, dan hitam.
Hasil  pengamatan  menunjukkan  adanya perbedaan  warna  pigmen  yang  dihasilkan diantara  ketiga  isolat,  hal  ini  terjadi  karena
masing-masing  isolat  memiliki  peran  biologis yang  berbeda  seperti  antibiotik,  antitumor, antifungi,  antiinflamasi  dan  vitamin.  Lo et al. (2002)  menyatakan  bahwa  keanekaragaman warna Actinomycetes disebabkan  adanya pigmen rantai spora yang dimiliki Actinomycetes, hifa  akan  berubah  menjadi warna  tertentu  apabila  terjadi  pembentukan spora, sehingga diperoleh warna yang berbeda. Pigmen  yang  dihasilkan  tersebut  memiliki kemampuan  biologis  seperti  antibiotik, antitumor, vitamin dan lain-lain.
Produksi Actinomycetes endofit  dari tanaman  akar  wangi  dilakukan  menggunakan media  SCB  selama  7  hari  bertujuan  untuk menghasilkan  metabolit  sekunder  yang ditandai  dengan  terbentuknya  granul  dan perubahan  media  menjadi  sedikit  keruh (Lampiran 2). Menurut Khamma et al . (2008) waktu  fermentasi  pada  media  cair  paling  baik untuk  pertumbuhan Actinomycetes yaitu  7-14 hari,  sehingga  metabolit  sekunder  yang dihasilkan lebih optimum .
Uji Aktivitas Senyawa Antibakteri Terhadap S. aureus dan E. coli
Hasil  uji  aktivitas  senyawa  antibakteri serta pengukuran zona bening isolat Actinomycetes endofit  terhadap  bakteri  target ( S. aureus dan E. coli ) disajikan pada Tabel 2.

## Tabel 2 Hasil uji aktivitas antibakteri terhadap
S. aureus dan E. Coli
No Isolat Zona Hambat Terhadap Bakteri Uji (mm) S. aureus Kategori E. coli Kategori 1 RTP-1 1 mm Lemah 20 mm Kuat 2 RTP-2 9 mm Sedang 4 mm Lemah 3 RTP-3 7 mm Sedang 9 mm Sedang
Uji  antagonis  antibakteri  ketiga  isolat RTP-1,  RTP-2  dan  RTP-3  masing-masing terhadap S. aureus menghasilkan  zona hambat  sebesar  1  mm,  9  mm  dan  7  mm. sedangkan  terhadap E. coli menghasilkan zona  hambat  sebesar  20  mm,  4  mm,  dan  9
mm  dengan  pengkategorian  kuat,  sedang dan  lemah.  Diameter  zona  hambat  terbesar terhadap S. aureus dihasilkan  oleh  isolat RTP-2 yaitu 9 mm sedangkan diameter zona hambat  terbesar  terhadap E. coli dihasilkan oleh  isolat  RTP-1 yaitu  20  mm  (Gambar  2)
(a) (b) (c)
(d)
(e) (f)
Gambar 2 Uji aktivitas antibakteri pada media NA dengan masa inkubasi 24 jam a. Penghambatan isolat RTP-1 terhadap S. Aureus b. Penghambatan isolat RTP-2 terhadap S. aureus
c. Penghambatan isolat RTP-3 terhadap S. Aureus
d. Penghambatan isolat RTP-1 terhadap E. coli e. Penghambatan isolat RTP-2 terhadap E. coli f. Penghambatan isolat RTP-3 terhadap E. coli
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  isolat
Actinomycetes endofit  dalam  menghambat bakteri  Gram  positif S. aureus lebih  kecil dibandingkan  dengan  bakteri  Gram  negatif E. coli, hal  ini  disebabkan  adanya  perbedaan
struktur  dinding  sel  kedua  jenis  bakteri tersebut.  Bakteri  Gram  negatif  memiliki lapisan  peptidoglikan  tipis  sehingga  lapisan dinding sel akan mudah dirusak oleh senyawa antibakteri  yang  dihasilkan.  Menurut  Radji
(2011), dinding sel bakteri Gram positif terdiri atas  beberapa  lapisan  peptidoglikan  yang membentuk struktur yang tebal dan kaku serta mengandung  substansi  dinding  sel  yang disebut  asam  teikoat,  sedangkan  dinding  sel bakteri Gram negatif terdiri atas satu atau lebih lapisan  peptidoglikan  yang  tipis,  sehingga dinding  sel  bakteri  Gram  negatif  lebih  rentan terhadap  guncangan  fisik  seperti  pemberian antibiotik atau bahan antibakteri lainnya.
Zona hambat yang terbentuk diasumsikan karena  adanya  senyawa  antibakteri  hasil metabolit  sekunder  yang  disekresikan  ke media  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan dan  membunuh  bakteri  patogen.  Susilowati et al. (2007) menyatakan bahwa semakin banyak senyawa  antibakteri  yang  disekresikan  ke media semakin besar zona hambatnya.
Selain menghasilkan senyawa antibakteri, isolat Actinomycetes endofit  diduga  memiliki kandungan  senyawa  lain  seperti  antikanker, antiinflamasi, fitohormon dan antifungi. Das et al . (2003) mengemukakan bahwa
Actinomycetes endofit  yang  diisolasi  dari tanaman  Trengguli  ( Cassia fistula L.)
merupakan
bakteri yang potensial
menghasilkan  berbagai  macam  metabolit sekunder  seperti  alkaloid,  flavonoid,  saponin dan  lain-lain  yang  memiliki  aktifitas  biologis sebagai  antikanker,  dan  antifungi.  Kandungan senyawa  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan kurang  lebih  sama  dengan  yang  dihasilkan oleh V. zizanioides.
V. zizanioides menghasilkan  senyawa metabolit sekunder seperti flavonoid, alkaloid, tanin dan saponin yang berfungsi menghambat atau membunuh pertumbuhan mikroorganisme patogen  (Massardos et al. 2005).  Mekanisme kerja  senyawa  flavonoid  yaitu  dengan  cara mendenaturasi protein sel mikroorganisme dan merusak  membran  sel  tanpa  dapat  diperbaiki lagi.  Senyawa  alkaloid  memiliki  mekanisme penghambatan  dengan  cara  mengganggu komponen  penyusun  peptodoglikan,  sehingga
lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan  menyebabkan  kematian  sel  tersebut (Juliantina et al., 2008). Tanin memiliki peran sebagai  antibakteri  dengan  cara  mengikat protein  sehingga  pembentukkan  dinding  sel akan  terhambat  (Hateet et al., 2014).  Saponin memiliki  peran  mengurangi  permeabilitas membran  sel  yang  mengakibatkan  sel kekurangan  nutrisi,  sehingga  pertumbuhan mikroorganisme  patogen  terhambat  atau  mati (Rahmawati, 2009)

## 4 KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan bahwa:
1. Diperoleh  3  isolat Actinomycetes endofit  dalam  jaringan  tanaman  akar wangi  ( V. zizanioides )  yaitu  isolat RTP-1  dan  RTP-2  dari  jaringan  daun dan RTP-3 dari jaringan akar.
2. Isolat  RTP-1  memiliki  aktivitas antibakteri terhadap S. aureus sebesar 1 mm  (lemah), E. coli sebesar  20  mm (kuat), isolat RTP-2 terhadap S. aureus sebesar 9 mm (sedang), E. coli sebesar 4  mm  (lemah),  dan  isolat  RTP-3 terhadap S. aureus sebesar  7  mm (sedang), E. coli sebesar  9  mm (sedang).

## Saran
Diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk karakterisasi  kondisi  pertumbuhan  (pH,  suhu, media)  optimum  untuk  produksi  senyawa metabolit sekunder.

## DAFTAR PUSTAKA
Akhila,  dan  Rani,  M.  2002.  Chemical
Constituents and Essential Oil
Biogenesis  in Vetiveria zizaniodes . Dalam Massimo Maffei. Vetiveria : The Genus Vetiveria. Taylor and Francs Ind. New York.
Amal,  Abeer,  Samia,  Nadia,  Ahmed,  and
Hennawi  (2011).  Selection  of  pigment (melanin)  production  in Streptomyces and  their  application  in  printing  and dyeing of wool
fabrics.
Res.J.Chem.Sci.1(5):22-28.
Ambarwati,  2007.  Efektifitas  Zat  Antibakteri Biji  Mimba  ( Azadirachta indica )  untuk Menghambat  Pertumbuhan Salmonella typosa dan Staphylococcus aureus .
Biodiversitas Vol 8 No.3.
Bacon  and  Hinton.  Bacterial  endophytes:  the endophytic  niche,  its  occupants,  and  its utility. Netherland: Springer; 2006.
Bailey, Bae, Strem, Roberts, Thomas, Crozier,
Samuels,  Choi,  and  Holmes.  2006. Fungal and plant gene expression during the  colonization  of  cacao  seedlings  by endophytic isolates of four Trichodermaspecies.  Planta  224:1449- 1464.
Beck,  Hansen,  and  Lauritsen.Novel  pyrazine metabolites found in polymyxin biosynthesis  by Paenibacillu spolymyxa . FEMS MicrobiolLett . 2003; (220):67–73.
Bentley, Lonnie, Whitten and Jeffrey L. 2002. Endophytic Actinomycetes Agriculture And  Health.  (7th  edition).  New York:McGrawHill.
Bhore  and  Sathisha.  Screening  of  Endophytic Colonizing  Bacteria  For  Cytokinin  Like Compounds:  Crude  Cell  Free  Broth  of Endophytic  Colonizing  Bacteria  Is
Unsuitable  in  Cucumber  Cotyledon Bioassay. World J. Agric. Sci.2010;6(4):345-52. Brooks,  Geo,  Butel,  Janet,  Morse,  and Stephen. 2005. Mikrobiologi Kedokteran,  1 st ed,  Jakarta.  Salemba Medika, p 364-369.
Cao, Qiu, You, Tan, and Zhou.2004 . Isolation and  characterization  of  endophytic Streptomyces strain from surface sterilized tomato ( Lycopersicones culentum )  root s .  Lett.  Appl. Microbiol . 39:425-430.
Castillo,  Strobel,  and  Ford.  Munumbicins, wide-spectrum  antibiotics  produced  by Streptomyces NRRL  30562,  endophytic on Kennedia nigriscans. Microbiology.
2002; (148): 2675–85.
Chomchalow.  2000.  Production  of  Medicinal and  Aromatic  Plants  Vetivers  Oil  in Southeast Asia. AU J.T ; 4:84-94.
Clegg  C  and  Murray  P.  2002.Soil  microbial ecology  and  plant  root  interaction.  In: Gordon  AJ  (ed)  6th  edn,  IGER Innovations. pp. 36-39.
Coombs  and  Franco.  2003.  Isolation  and Identification  of  Actinobacteria  From Surface  Sterilized  Wheat  Roots. Appl Environ Microbial 69 (9): 5602-5608.
Das,  Rajkumar,  and  Dwivedi.  2003.  Aktivitas
Antimikroba Metabolit Bioaktif Actinomycetes Endofitik Tanaman Trengguli  ( Cassia fistula L.).  3(2):  97-
102.
Guan,  Sattler,  Lin,  Guo,  and  Grabley.p- Aminoacetophenonicacids produced by a mangrove endophyte : Streptomyces griseus subspecie s .  J  Nat  Prod.  2005;
68:1198–200.
Hateet, Muhsin, and Humadi. 2014. Antibacterial activity secondary metabolites  from  endophytic  fungus
Fusarium solani . Journal of basrah researches . 4 (1):94-101.
Herlina,  Rante,  Wahyono,  Yosi,  B.  Murtidan Gemini  Alam.  2010.  Purifikasi  dan Karakterisasi  Senyawa  Antibakteri  dari
Actinomycetes Asosiasi  Spons  Terhadap
Bakteri  Patogen  Resisten.  Majalah Farmasi Indonesia, 21 (3): 158-165.
Hermawan,  A.,  2007, Pengaruh  Ekstrak  Daun Sirih (Piper betle L.) terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan  Metode  Difusi Disk, Artikel Ilmiah, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga Surabaya. Hidayaningtias.  2008 . Perbandingan  Efek Antibakteri  Air  Seduhan  Daun  Sirih
(Piper betle L.) terhadap Streptococcus Mutans  pada  Waktu  Kontak  dan Konsentrasi  yang  Berbeda.  Semarang: Universitas Dipenegoro.
Jawetz,  Melnick,  and  Adelberg.  2005. Mikrobiologi Kedokteran, diterjemahkan oleh  Mudihardi,  Kuntaman,  Wasito, Mertaniasih,  Harsono,  Alimsardjono, Edisi XXII, 205, 209-223, 317-326, 362- 363, Penerbit Salemba Medika, Jakarta.
Juliantina,  Citra,  Nirwani,  Nurmasitoh,  dan Bowo.  2008.  Kandungan  metabolit sekunder  Sirih  Merah  ( Piper crocatum ) sebagai  Agen  Anti  Bakteri  Terhadap Gram  Positif  dan  Gram  Negatif.  Jurnal Kedokteran dan Kesehatan Indonesia.
Khamma,  Yokota,  and  Lumyong.  2009.
Actinomycetes Isolated  from  Medicial Plant  Rhizosphere  Soils:  Diversity  and Screening  of  Antifungal  Compounds, Indole-3-Acetic  Acid  and  Siderophore Production. World J Microbial Biotechnol , 25: 649-655. Lavania.  2003.“Other  Uses  and  Utilization  of Vetiver: Vetiver Oil”, Central Institute of Medicinal and Aromatic Plants, Lucknow-336 015, India. Lestari.  2006.  Bakteri  Endofit  Penghasil Senyawa  Bioaktif.  Fakultas  Pendidikan Matematika Universitas Negeri
Semarang.
Lo,  Lai,  Cheach,  Wong,  and  Ho.  2002.
Actinomycetes isolated  from  sample crokcer  range  sabah.  Asean  review  of biodivercity ang enveromental conversation (ARBEC)
Massardos, Annie, Andre, Didiet, Andre, Jean.
2008. Flavonoids from Vetiveria zizanioides and Vetiveria nigritana (Poaceae),  Biochemical  Systematics  and Ecology, 36, 68-70.
Miyadoh  and  Otoguro.  2004.  Workshop  on Isolation  Methods  and  Classification  Of Actinomycetes . Biotechnology Center LIPI.
Mulyati,  Setiawan,  dan  Rusli.  2009.  Rancang Bangun  Sistem  Manajemen  Rantai Pasokan dan Risiko Minyak Akar Wangi Berbasis  IKM  di  Indonesia.  Bogor  (ID): Institut Pertanian Bogor.
Oskay,  Tamer,  and  Azeri.  2004.  Antibacterial Activity  of  some Actinomycetes Isolated from  Farming  Soil  of  Turkey. African Journal of Biotechnology, 3(9)  :  441- 446.
Radji. 2011. Buku Ajar Mikrobiologi, Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran , 50 . Jakarta, EGC.
Rahmawati, R. 2010. Uji Aktivitas Antibakteri Metanol  Rhizoma  Alang-alang( Imperata cylindrical L.)  terhadap  Pertumbuhan Escherichia coli dan Staphylococcus aureus .
UniversitasTanjungpura,
Pontianak
Ratha, 2012. Screening  of Phytochemical and Antibacterial  Activity  of Hemidesmus indicus L. And Vetiveria zizanoides .
Pelagia  research  library. European
Jurnal of Experimental Biology , 2012, 2
(2): 363-368.
Sembiring,  Ward,  Cand  Goodfellow.  2000.
Selective  Isolation  and  Characterisation of  Members  of  the Sreptomyces violaceus niger clade associated with the roots of Paraserian the sfalcataria. Anton Leuwan Int . 78(3-4): 353-366.
Snigda,  Sharma,  Mohapatra,  and  Chauhan.
2013.An Overview on Vetiveria
zizanioides. Research Journal of
Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences. Department  of pharmacology.  Sunder  Deep  Pharmacy. India. Volume 4-3. No 777
Strobel,  Daisy,  Castillo  and  Harper . Natural products from endophytic microorganisms . J  Nat  Prod.2004;(67):
257–68.
Suarsana, Utama, dan Suartini. 2001. Aktivitas In  vitro  Senyawa  Antimikroba  dari Streptococcus lactis. Jvet  2(1 ) . Jurnal veteriner. Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas Udayana. Bali.
Suliantari.  2009.  Aktivitas  Antibakteri  dan Mekanisme Penghambatan Ekstrak  Sirih Hijau (Piper Betle Linn .)  terhadap
Bakteri  Patogen  Pangan.  Disertasi.
Institut Pertanian Bogor.
Sulistiyaningsih. 2010. Uji Kepekaan Beberapa  Sediaan  Antiseptik  Terhadap
Bakteri Staphylococcus aureus dan Staphylococcus aureus Resisten Metisilin  (MRSA).  Skripsi.  Universitas
Padjadjaran. Susilowati, Hastuti, dan Yuniarti. 2007. Isolasi dan Karakterisasi Actinomycetes
Penghasil  Antibakteri  Enteropatogen
Escherichia coli K1.1, Pseudomonas pseudomallei 0205 dan Lestari
Amonocytogenes  5407. Journal Agro Biogen 3(1): 15-23
Sutton,  S.  2011.  Determination  of  Inuculum for  Microbiological  Testing.  Summer Vol. 15 Number 3.
Tanaka,  Sukiman,  Takebayashi,  Saito,  Suto, Prana  and  Tomita.  isolation,  screening and  phylogenetic  identification  of endophytes  from  plants  in  Hokaido Japan and Java Indonesia. Microbes and Environment . 1999; 14(4):237–41.
Todar.  2002.  Bacteriology.  University  of
Wisconsin-Madison Department Of Bacteriology.
http://www.bact.wisc.edu/bact3330/lectu restaph.html [23-3-2017].
Truong.  Tan  Van  and  Pinners.  2008. Vetiver Systems Application, Technical Reference Manual. TheVetiver  Network
International. pp. 89. Waluyo, Lud. 2009. Mikrobiologi Lingkungan . Malang: UMM Press.
Worang,  R.  L.  2003.  Fungi  Endofit  sebagai Penghasil Antibiotika. Tesis S2 Fakultas Biologi Yogyakarta, UGM.