## Volume 3 – No. 2 – Oktober 2020
P-ISSN: 2614-5057, E-ISSN: 2614-5065

## Gorontalo

## Journal of Public Health
Pengaruh Beta Glukan terhadap Kualitas Sperma Tikus Putih ( Rattus norvegicus ) yang Diinduksi Kuinin Sulfat
Effect of Beta Glucans on Sperm Quality of White Rats (Rattus norvegicus) Induced by Quinine Sulfate
Mike Susianti*, Achadiyani, Sunardjati Sudigdo Adi Anti-Aging dan Aesthetic Medicine, Universitas Padjadjaran, Bandung, Indonesia *email: myq25_dr@yahoo.com

## Abstract
Infertility  is  the  failure  of  conception  in  couples  who  have  been  married  for  more than  one  year.  One  of  the  causes  of  male  infertility  is  Reactive  Oxygen  Species (ROS). The increase in ROS causes a decrease in the enzymatic reaction of CAT and SOD resulting in damage to the spermatogenesis process and a decrease in sperm quality.  Quinine  Sulfate  (KS)  as  an  induction  of  infertility,  triggers  the  formation  of excess  ROS  in  the  male  reproductive  organs.  The  antioxidant  activity  of  Beta Glucan (BG) is known to have the ability to reduce ROS production so increase CAT and  SOD  enzymatic  reactions.  To  determine  the  effect  of  BG  on  the  number, morphology, viability and motility of KS-induced Wistar rat sperm. An experimental study on 28 adult Wistar rats divided into 4 groups randomly and given treatment for 60 days. The control group (P0) received 0.5 ml aquades, group 1(P1) QS 10 mg / kg bw / day, group 2 (P2) BG 50 mg / kg bw / day, group 3 (P3) QS 10 mg / kg bw/ day and BG 50 mg / kg bw / day. Data were statistically analyzed with one way  Anova  /  Kruskal-Wallis  test  and  LSD  post  hoc  test  /  Mann-Whitney  test. In this study, it  was found that there was a significant difference in the mean with p value <0.05. In the P3 group, the administration of QS and BG at a dose of 50 mg / kg  bw  /  day increased  sperm  count,  improved  the  morphology,  motility    and viability  of    rat  sperm  compared  to  the  P1  group  which  was  only  given  KS.  BG increase  sperm  count,  improve  the  normal  morphology  of  sperm,  increase  sperm viability,  and  increase  sperm  motility  in  QS  induced  adult  wistar  strain  male rats(Rattus norvegicus)
Keywords: beta glucan; quinine sulfate; Rattus norvegicus; ROS; sperm quality

## Abstrak
Infertilitas  merupakan  kegagalan  konsepsi  pada  pasangan  yang  telah  menikah lebih  dari  satu  tahun.  Infertilitas  pada  pria  salah  satunya  disebabkan  oleh Reactive  Oxygen  Species (ROS).  Peningkatan  ROS  menyebabkan  terjadinya penurunan  reaksi  enzimatik  CAT  dan  SOD  sehingga  terjadi  kerusakan  proses spermatogenesis  dan  penurunan    kualitas  sperma.  Kuinin  Sulfat  (KS)  sebagai induksi  infertilitas,  memicu  terbentuknya  ROS    berlebih  pada  alat  reproduksi pria. Aktivitas antioksidan dari Beta Glucan (BG) diketahui memiliki kemampuan untuk menurunkan produksi ROS  sehingga meningkatkan reaksi enzimatik CAT dan  SOD. Mengetahui  efek  BG  terhadap  jumlah,  morfologi,  viabilitas  dan motilitas  sperma  tikus  wistar  yang  diinduksi  KS. Studi  eksperimental  pada  28 tikus  dewasa  galur  Wistar  dibagi  4  kelompok  secara  acak  dan  diberi  perlakuan selama  60  hari. Kelompok  kontrol  (P0)  diberi  akuades  0,5  ml,  kelompok  1  (P1) diberi  Kuinin  Sulfat  10  mg/kg  bb/hari,  kelompok  2  (P2)  diberi  BG  50  mg/kg bb/hari,  serta  kelompok  3  (P3)  diberi  KS  10  mg/kg  bb/hari  dan  BG  50  mg/kg bb/hari.  Analisis  data  menggunakan  uji  statistik one  way anova/ Kruskal-Wallis dan uji post hoc LSD / uji Mann-Whitney . Pada penelitian ini ditemukan adanya
perbedaan  rerata  yang  bermakna  dengan  nilai  p  value<0,05.  Pada  kelompok  P3 pemberian  KS  dan  BG  dosis  50  mg/kg  bb/hari  dapat  meningkatkan    jumlah sperma,  dan  memperbaiki  morfologi,  motilitas  dan  viabilitas  sperma  tikus dibandingkan  kelompok  P1  yang  hanya  diberikan  KS. Pemberian  BG  mampu meningkatkan  jumlah  sperma,  memperbaiki  morfologi  sperma,  meningkatkan viabilitas  dan  motilitas  sperma  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  dewasa  galur wistar yang diinduksi KS.
Kata Kunci : beta glukan; kualitas sperma; kuinin sulfat; Rattus norvegicus; ROS

## PENDAHULUAN
Infertilitas  adalah  kegagalan  konsepsi  pada  pasangan  yang  telah  menikah lebih  dari  satu  tahun  dan  tidak  menghasilkan  keturunan.  Infertilitas  terbagi atas primer dan sekunder. Infertilitas primer terjadi bila pasangan belum pernah memiliki  keturunan,  sedangkan  infertilitas  sekunder  apabila  pasangan  pernah memiliki  keturunan  kemudian  tidak  mengalami  kehamilan  lagi  (Evans,  2017 dan Speroff L, 2010) .
World  Health  Organization (WHO)  sekitar  60-80  juta  pasangan  subur  di seluruh  dunia  memiliki  masalah  infertilitas  dan  meningkat  1  sampai  3  juta setiap tahun (Menkveld R, 2010). Berdasarkan Badan Pusat Statistik (BPS) 2015 dari  total  237  juta  penduduk  Indonesia,  terdapat  39,8  juta  wanita  usia  subur, dan  sebanyak  10-15%  dinyatakan  infertil.  Berdasarkan  data  di  atas,  maka diperkirakan  sebanyak  4  sampai  6  juta  pasangan  di  Indonesia  memerlukan terapi untuk mendapatkan keturunan (Badan Pusat Statistik, 2013).
Infertilitas  sebanyak  40%  disebabkan  oleh  wanita,  20%  oleh  pria  dan  40% lainnya  disebabkan  oleh  faktor  pria  dan  wanita.  Penyebab  infertilitas  wanita disebabkan oleh 27,4% kerusakan pada tuba falopi, 20% gangguan menstruasi, 9,1%  kelainan  pada  endometrium,  2,7%  gangguan  seksual,  dan  45,5%  pada wanita  perokok  (Zoe  R,  2009).  Penelitian  ahli  andrologi  di  Eropa  pada  tahun 2011  menjelaskan  bahwa  penyebab  infertilitas  pria  25%  disebabkan  oleh varikokel,  10%  akibat  infeksi,  5%  karena  faktor  imunologis,  20%  disebabkan oleh  kelainan  endokrin,  iatrogenik  (infeksi  akibat  tindakan  medis  seperti pemasangan  kateter),  trauma,  obat-obatan,  dan  kelainan  sistemik  (Dohle  G.R, 2010). Pada 30-40% kasus, tidak ditemukan kelainan penyebab dari infertilitas pada  pria.  Pada  kasus  ini  pria  tidak  memiliki  riwayat  penyakit  yang mempengaruhi  fertilitas,  tidak  ditemukan  kelainan  pada  pemeriksaan  fisik, serta  pemeriksaan  laboratorium  endokrin,  genetik,  dan  biokimia.  Hal  ini dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor    seperti  gangguan  endokrin  akibat  polusi lingkungan, reactive  oxygen  species (ROS),  atau    gangguan  genetik  ( Wagner,  H, 2017). Tingginya  kadar  ROS  pada  sperma  menyebabkan  40,88%  sampai  80% dari kasus infertilitas  pada pria ( Bui A. D, 2018).
Kerusakan  oksidatif  terjadi  saat  produksi  ROS  mengganggu  mekanisme pertahanan  oksidan  (Izyumov  DS,  2010).  ROS  merupakan  penyebab  sitotoksik pada  spermatozoa  (Makker   K,  2009).  Peningkatan  produksi  ROS  diakibatkan oleh  proses  sintesis protein  uncoupling pada  epididimis,  sehingga  terjadi penurunan  reaksi  enzimatik  CAT  dan  SOD  yang  menyebabkan  terbentuknya H 2 O 2 dan NO yang toksik ( Berry J, 2018). Aktivitas SOD dan CAT yang menurun secara  signifikan  menyebabkan  kerusakan  proses  spermatogenesis  dan menghasilkan penurunan kualitas sperma ( O’Flaherty C, 2014) .
Kualitas  sperma  normal  dinilai  dari  parameter  sperma  yaitu  jumlah, morfologi, motilitas, dan viabilitas sperma. Kualitas sperma normal (normozoosperma)  yaitu  jumlah  volume  semen  1,5  ml  (1,4-1,7),  jumlah  sel sperma  total  39 juta per  ejakulasi  (33-46), konsentrasi  sperma  15  juta  (12-16), spermatozoa  yang  bergerak  cepat  32%  (31-34),  viabilitas  spermatozoa  yang
hidup 58% (55-63), bentuk morfologi normal spermatozoa 4% (3-4), pH 7,2 -7,8 (WHO, 2010).
Penelitian ini, peneliti menggunakan model tikus percobaan sebagai induksi infertilitas  yang  diberikan  Kuinin  sulfat  (Osinubi  AA,  2007). Berdasarkan penelitian  Farombi  dkk  (2012),  dinyatakan  bahwa  pemberian  kuinin  sulfat jangka  pendek  dengan  dosis  10  mg/kg  BB/hr  (dosis  terapetik  normal)  pada tikus percobaan selama 8 minggu menyebabkan toksisitas spermatogenik epitel tubulus  seminiferus  dan  jaringan  interstitium  testis  sehingga  mengganggu steroidogenik fungsi sel Leydig. Populasi sel spermatogonia menurun sekitar 49- 50%.  KS  menyebabkan  kerusakan  pertahanan  antioksidan  testis  yang  ditandai dengan  penurunan  reaksi  enzimatik Catalase (CAT)  dan Superoxide  dismutase (SOD),  sehingga  elektron  keluar  dari  mitokondria  meningkatkan  produksi radikal  bebas.  Kemudian  radikal  bebas  ini  menyerang  sel  germinal  dalam tubulus  seminiferus  yang  mengarah  apoptosis  secara  luas  dan  gangguan spermatogenesis. Pemberian  KS  menyebabkan  abnormalitas  bentuk  sperma, menurunkan jumlah sperma, motilitas dan viabilitas yang merupakan indikator utama dari kualitas sperma (Farombi EO, 2012).
Antioksidan merupakan pertahanan alami melawan kerusakan jaringan yang disebabkan  oleh  radikal  bebas  ( Walczak  JR,  2013) .  Beta  glukan  (BG) merupakan salah satu antioksidan yang bekerja dengan mengikat radikal bebas dan melindungi sel dari kematian yang disebabkan oleh stres oksidatif (Kofuji K, 2012).  Beta  Glukan  (BG)  dapat  menurunkan    produksi  ROS,  sehingga  terjadi peningkatan reaksi enzimatik CAT dan SOD (Hua Zhang, 2017).
Beta  Glukan merupakan  kelompok  heterogen  alami  polisakarida,  terdiri dari monomer  D-glukosa  yang  terhubung  oleh ikatan  glikosidik β,  yang  terdapat pada  dinding  sel  bakteri,  jamur  dan  ragi,  yang  berfungsi  sebagai  tempat penyimpanan energi (Rahar S, 2011). Terdapat dua jenis Beta Glukan yaitu beta 1,3/1,4  D-glukan    dan  beta  1,3/1,6  D-glukan.  Beta  1,3/1,4  D-glukan  terdapat pada sereal dan gandum, sedangkan beta 1,3/1,6 D-glukan terdapat pada jamur dan  ragi  (Feng  MZ,  2015).  Beta  Glukan  tidak  menimbulkan  toksisitas  dan  efek samping,  dan  telah  dibuktikan  sebagai  antiinflamasi,  antikanker,  antimikroba, mengurangi  kadar  kolesterol  darah  dan  meningkatkan  respon  insulin  (Haggard L, 2013).
Penelitian  Aid  dkk(2016)  di  turki  diketahui  bahwa  Beta  Glukan  merupakan antioksidan.  Pada  penelitian  ini,  peneliti  menggunakan  model  tikus  percobaan sebagai induksi hepatotoksik yang diberikan asetaminofen. Pemberian BG pada tikus  dosis  50  mg/kg  BB/hr,  terbukti  dapat  meningkatkan  kadar  enzim  SOD dan  CAT  (Mustafa  SA,  2015). Berdasarkan  penelitian  Hua  zhang  dkk.  di  Cina, tahun 2017 diketahui bahwa pemberian ekstrak beta glukan 1,3/ 1,6 dari jamur Saccharomyces  cereviciae ,  terbukti  dapat  meningkatkan  kadar  enzim  SOD  dan CAT  (Hua  Zhang,  2017).  Saat  ini  belum  ada  penelitian  ilmiah  yang  dilakukan mengenai pengaruh pemberian BG terhadap kualitas sperma.
Tikus  putih  galur  Wistar  memiliki  organ,  fisiologi,  dan  gen  yang  mirip dengan  manusia  sehingga  banyak  digunakan  sebagai  model  patogenesis  suatu penyakit  (Olayaki  L,  2008).  Peneliti  tertarik  untuk  melakukan    penelitian mengenai  efek  BG  terhadap  jumlah,  morfologi,  viabilitas  dan  motilitas  sperma tikus putih ( Rattus novergicus ) dewasa galur wistar yang diinduksi KS.

## METODE Bahan
1. Tikus putih( Rattus norvegicus ) galur wistar
2. Beta  glukan  50  mg/kg  BB/hr,  diproduksi  oleh  Solgar  USA ® merupakan suplemen  nutrisi  yang  terdiri  dari  beta  1,3/1,6  glukan  berasal  dari  dinding sel  jamur Saccharomycescerevisiae dan Glazingagents (hydroxypropylmethyl
cellulose,  vegetable  glycerin) untuk  melindungi  BG  selama  melewati  saluran cerna.
3. Kuinin sulfat 10 mg/kg BB/hr
4. Makanan tikus berupa pellet dan air minum.
5. Aquabides pro-injeksi, PBS ( phospat buffered saline ), zat warna eosin, giemsa 3%, metanol 70-100%.

## Cara Kerja
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium  dengan rancangan  acak  lengkap  dan  menggunakan  hewan  coba  sebagai  subjek penelitian. Subjek penelitian dibagi menjadi 4 kelompok, yaitu kelompok kontrol (P0),  kelompok  perlakuan  1  (P1),  kelompok  perlakuan  2  (P2),  kelompok perlakuan 3 (P3). Penelitian dilakukan di Laboratorium Fisiologi Hewan Fakultas Kedokteran Universitas Padjadjaran Bandung dari bulan November 2018 sampai Januari  2019. Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah 28 ekor tikus wistar  jantan (Rattus  norvegicus) berumur  10  -  12  minggu  dengan  berat  badan 200  -  250  gram,  dibagi  menjadi  empat elompok,  yaitu  kelompok  kontrol  (P0) tanpa  perlakuan,  hanya  diberi  pellet  dengan  aquades  0,5  ml,  kelompok perlakuan  1  (P1)  diberi  KS  10  mg/kg  BB/hr,  kelompok  perlakuan  2  (P2)  diberi BG  50    mg/kg  BB/hr,  kelompok  perlakuan  3  (P3)  diberi    KS  10  mg/kg  BB/hr setelah itu diberi BG 50  mg/kg BB/hr. Semua perlakuan selama 60 hari.  Pada akhir  perlakuan,  tikus  di euthanasia dengan  kloroform  secara  inhalasi kemudian  dibedah  dengan  dissecting  kit  untuk  diambil  cauda  epididimis  dan distal    vas    deferensnya  untuk  mengeluarkan  spermatozoa.  Suspensi  sperma dari  cauda  epididimis  ini  yang  dimasukkan  ke  dalam  gelas  arloji  yang  berisi PBS,  dan  dilakukan  pemotongan  dengan  skapel.  Suspensi  sperma  yang  telah homogen  diambil  dengan  pipet  tetes  (50µL),  dimasukkan/  diteteskan  ke  dalam kotak  hemositometer/ improved Neubauer  dan  ditutup  dengan  gelas  penutup. untuk  pengamatan  kualitas  spermatozoa  hewan  coba  meliputi  jumlah spermatozoa,  morfologi  spermatozoa,  motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa Selanjutnya  dilakukan  pengamatan  masing-masing  perlakuan  (K0,  P1,  P2,P3) pada mikroskop.

## Pengumpulan sampel
Sampel/hewan coba yang digunakan adalah tikus putih ( Rattus  norvegicus ) galur  wistar berjenis kelamin jantan dewasa berusia sekitar 10-12 minggu, dan memiliki  berat  badan  200-250  gram.  Jumlah  hewan  coba  digunakan  sebanyak 28  ekor,  dengan  4  kelompok  perlakuan,  sehingga masing-masing  7  ekor  untuk setiap kelompok perlakuan.

## Analisis statistik
Pada  akhir  penelitian,  antara  kelompok  1,  2,  3  dan  4  yaitu  P0,  P1,  P2,  P3 dilakukan dengan uji Analisa statistik dimulai dengan melakukan uji normalitas menggunakan  uji Sapphiro-Wilk karena  jumlah  sampel  kurang  dari  50,  dan  uji homogenitas  menggunakan  uji Lavene .  Bila  hasil  kedua  uji  tersebut  memiliki nilai  p>0,05  berarti  data  berdistribusi  normal  dan  homogen,  maka  data  akan dianalisa menggunakan uji parametrik one-way ANOVA . Bila salah satu uji atau kedua uji memiliki nilai p<0,05 berarti data tidak berdistrbusi normal dan tidak homogen, maka data akan dianalisa menggunakan uji non-parametrik Kruskal- Wallis .
Bila  hasil  uji  statistik one-way  ANOVA signifikan,  yaitu  nilai  p<0,05  maka dilanjutkan dengan uji lanjut menggunakan uji LSD ( Least Significant Difference test ).  Jika  hasil  uji Kruskal-Wallis bermakna  (nilai  p<0,05),  maka  dilanjutkan dengan  uji  lanjut Mann-Whitney .  Uji  lanjut  LSD  maupun Mann-Whitney
bertujuan untuk mengetahui signifikansi antara dua kelompok perlakuan, yaitu antara  P 0 dengan  P 1 ,  P 0 dengan  P 2 ,  P 0 dengan  P 3 ,  P 1 dengan  P 2 ,  P 1 dengan  P 3 , dan P 2 dengan P 3 . P0= Tikus kelompok kontrol (Pellet+akuades 0,5 ml) P1=  Tikus kelompok I yang diinduksi KS(KS 10 mg/kg bb/hr+akuades 0,5 ml) P2=  Tikus kelompok II yang diberi BG(BG 50 mg/kg bb/hr+akuades 0,5 ml) P3= Tikus kelompok III yang diberi KS dan BG(KS 10 mg/kg bb/hr+akuades 0,5 ml kemudian diberikan BG 50 mg/kg bb/hr+akuades 0,5 ml)

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Analisis perbandingan jumlah sperma pada kelompok perlakuan
Tabel 1. Perbandingan Rerata Jumlah Sperma (juta/ml) Tikus Wistar pada
Kelompok   P0, P1, P2, P3 Variabel Kelompok N Mean±Std Nilai p Jumlah Sperma (Juta) P 0 P 1 P 2 P 3
7 7 7 7 165.0±2.0 90.1±6.1 135.9±2.8 170.7±1.3 0,000*
Keterangan  :  data  berdistribusi    normal  dengan  uji Kruskal  Wallis. Nilaikemaknaan    berdasarkan  nilai p<0.05.Tanda*  menunjukkan  nilai  p<0.05  artinya  signifkan  atau  bermakna  secara  statistik.    P0=  Kontrol  , P1=+Kuinin Sulfat, P2=+Beta Glukan, P3=+Kuinin sulfat dan Beta Glukan
Analisis  ini  dilakukan  menggunakan  uji  Kruskal  Wallis  karena  data  tidak berdistribusi  normal,  uji  ini  untuk  mengetahui  adanya    perbedaan  yang bermakna  dari  setiap  kelompok  perlakuan.  Hasil  pengujian  Kruskal  wallis didapatkan  p=0,00  (p  value<0,05)  yang  menunjukkan  bahwa  secara  statistik terdapat perbedaan yang  bermakna dari setiap kelompok perlakuan( Tabel 1)
Gambar  1. Perbandingan Rerata Jumlah Sperma (juta/ml) Tikus Wistar pada Kelompok P0,P1,P2,P3
Terdapat  perbedaan  rerata  jumlah  sperma  yang  bermakna  dengan  nilai  p value<0,05.  antara  kelompok  yang  hanya  diberikan  KS  saja  dengan  kelompok KS yang ditambahkan BG (Gambar 1). Pada kelompok P3 pemberian KS dan BG dosis 50 mg/kgbb/hari dapat meningkatkan jumlah sperma tikus dibandingkan kelompok  P1  yang  hanya  diberikan  KS.  Hal  ini  disebabkan  antioksidan  BG dapat  mengikat  radikal  bebas,  sehingga  melindungi  sel  sperma  dari  kerusakan oksidatif.  Pemberian  KS  menyebabkan    peningkatan  radikal  bebas  sehingga terjadi  penurunan  jumlah  enzim  SOD  dan  CAT  (Farombi  EO,  2012).  Pada kelompok  KS  yang  diberi  BG  (KS+BG)  terbukti  jumlah  sperma  meningkat, peningkatan  jumlah  sperma  setelah  diberi  BG  disebabkan  mekanisme  kerja
antioksidan BG meningkatkan enzim SOD dan CAT di sel Sertoli dan sel Leydig (Farombi  EO,  2012).  SOD  adalah  enzim  yang  membantu  mengatur  kadar superoksida  dalam  tubuh  dengan  mengubah  superoksida  menjadi  hidrogen peroksida  ( Walczak  JR,  2013). Hidrogen  peroksida  kemudian  dinetralisir  oleh CAT ( Walczak  JR , 2013). Beta Glukan merupakan salah satu antioksidan yang bekerja  dengan  mengikat  radikal  bebas  dan  mempertahankan  membran  sel (Kofuji  K,  2012).  Menurut  penelitian    Mustafa  aid    dkk.  tahun  2016  di  Turki diketahui  bahwa  BG  merupakan  antioksidan.  Pemberian  Beta  Glukan  pada tikus  dosis  50  mg/kg  BB/hr,  terbukti  dapat  meningkatkan  kadar  enzim  SOD dan CAT.

## 2. Analisis perbandingan morfologi sperma pada kelompok perlakuan
Tabel 2. Perbandingan Rerata Morfologi Sperma Tikus Wistar pada Kelompok P0,
P1, P2, P3 Variabel Kelompok N Mean±Std Nilai p Morfologi Normal P 0 P 1 P 2 P 3 7 7 7 7 92.6±1.8 59.0±4.1 73.9±6.2 67.1±5.1 0,000* Morfologi Abnormal P 0 P 1 P 2 P 3 7 7 7 7 7.4±1.9 41.0±4.1 26.1±6.2 32.9±5.1 0,000*
Keterangan  :  data  berdistribusi    normal  dengan  uji  one-way  ANOVA . Nilaikemaknaan    berdasarkan  nilai p<0.05.Tanda*  menunjukkan  nilai  p<0.05  artinya  signifkan  atau  bermakna  secara  statistik.    P0=  Kontrol  , P1=+Kuinin Sulfat, P2=+Beta Glukan, P3=+Kuinin sulfat dan Beta Glukan
Analisis  ini  dilakukan  menggunakan  uji  one-way  ANOVA karena  data berdistribusi  normal,  uji  ini  untuk  mengetahui  adanya  perbedaan  yang bermakna  dari  setiap  kelompok  perlakuan.  Hasil  pengujian  one-way  ANOVA didapatkan  p=0,00  (p  value<0,05)  yang  menunjukkan  bahwa  secara  statistik terdapat perbedaan yang  bermakna dari setiap kelompok perlakuan( Tabel 2)
Gambar 2.  Grafik Perbandingan Rerata Morfologi Sperma Tikus Wistar pada Kelompok P0, P1, P2, dan P3 .
Terdapat perbedaan rerata yang signifikan antara variable morfologi sperma kelompok  yang  hanya  diberikan  KS  saja  dengan  kelompok  KS  yang
ditambahkan BG (Gambar 2). Pada kelompok P3 pemberian KS dan BG dosis 50 mg/kgbb/hari  dapat  memperbaiki      morfologi  sperma  tikus  dibandingkan kelompok  P1  yang  hanya  diberikan  KS.  Hal  ini  disebabkan  antioksidan    Beta Glukan  memberikan  efek  perlindungan  terhadap  morfologi  sperma  dari kerusakan  oksidatif  yang  ditimbulkan  oleh  KS.  Beta  Glukan  meningkatkan enzim  SOD  dan  CAT,  sehingga  mampu  memperbaiki  proses  spermatogenesis dan  steroidogenesis  ( Walczak  JR,  2013). Pemberian  KS  menyebabkan peningkatan stres oksidatif, dan penurunan enzim  SOD dan CAT  pada sperma sehingga menghambat proses spermatogenesis dan steroidogenesis (Osinubi AA, 2007). Meningkatnya  bentuk  spermatozoa  yang  abnormal  dapat  terjadi  karena berbagai macam gangguan dalam proses spermatogenesis terutama pada tahap spermiogenesis  (Osinubi  AA,  2007). Spermatogenesis  dapat  terjadi  melalui beberapa  tahap  pembelahan.  Tahap  awalnya  spermatogonia  akan  mengalami perubahan  menjadi  spermatosit  primer,  kemudian  menjadi  spermatosit sekunder  dan  menjadi  spermatid  (Tortora  GJ,  2014).  Sebelum  spermatid menjadi  spermatozoa  ada  fase  yang  dilewati  spermatid  yang  disebut  fase spermiogenesis  (Tortora  GJ,  2014).  Fase  ini  terdiri  dari  fase  golgi,  tutup, akrosom  dan  pematangan  bertujuan  untuk  membentuk  morfologi  normal spermatozoa yang terdiri dari kepala, leher dan ekor yang normal (Guyton A.C, 2012). Peningkatan abnormalitas morfologi ini dapat disebabkan karena adanya pemberian  KS  yang  mengganggu  jalannya  spermatogenesis  dan  steroidogenesis (Guyton A.C, 2012). Hormon testosteron sangat diperlukan untuk mengawali,mempertahankan  proses  spermatogenesis,  serta  mempertahankan kualitas  spermatozoa  termasuk  morfologi  sperma  (Guyton  A.C,  2012). Hal  ini sesuai dengan  penelitian Hua zhang dkk. di Cina, tahun 2017 diketahui bahwa pemberian  ekstrak  beta  glukan  1,3/  1,6  dari  jamur Saccharomyces  cereviciae , terbukti dapat meningkatkan kadar enzim SOD dan CAT (Hua Zhang, 2017). 3. Analisis perbandingan viabilitas sperma pada kelompok perlakuan
Tabel 3. Perbandingan Rerata Viabilitas Sperma Tikus Wistar pada Kelompok
P0, P1, P2, P3 Variabel Kelompok N Mean±Std Nilai p Viabilitas P 0 P 1 P 2 P 3
7 7 7 7 55,6±1,1 32,0±4,0 60,5±1,9 60,7±1,0 0,001*
Keterangan  :  data  berdistribusi    normal  dengan  uji Kruskal  Wallis. Nilai  kemaknaan    berdasarkan  nilai p<0.05.Tanda*  menunjukkan  nilai  p<0.05  artinya  signifkan  atau  bermakna  secara  statistik.    P0=  Kontrol  , P1=+Kuinin Sulfat, P2=+Beta Glukan, P3=+Kuinin sulfat dan Beta Glukan
Analisis  ini  dilakukan  menggunakan  uji  Kruskal  Wallis  karena  data  tidak berdistribusi  normal,  uji  ini  untuk  mengetahui  adanya    perbedaan  yang bermakna  dari  setiap  kelompok  perlakuan.  Hasil  pengujian  Kruskal  wallis didapatkan  p=0,00  (p  value<0,05)  yang  menunjukkan  bahwa  secara  statistik terdapat perbedaan yang  bermakna dari setiap kelompok perlakuan( Tabel 3)
Gambar 3. Perbandingan Rerata Viabilitas Sperma Tikus Wistar  pada Kelompok P0, P1, P2, dan P3
Terdapat perbedaan rerata yang signifikan antara variable viabilitas sperma kelompok  yang  hanya  diberikan  KS  saja  dengan  kelompok  KS  yang ditambahkan BG (Gambar 3). Pada kelompok P3 pemberian KS dan BG dosis 50 mg/kgbb/hari  dapat  meningkatkan  viabilitas  sperma  tikus  dibandingkan kelompok  P1  yang  hanya  diberikan  KS.  Hal  ini  disebabkan  antioksidan  Beta Glukan meningkatkan  enzim SOD dan CAT,sehingga BG mampu memperbaiki proses  steroidogenesis  (Kofuji  K,  2012).  Dengan  adanya  penurunan  jumlah spermatozoa yang hidup oleh KS, disebabkan terganggunya proses steroidogenesis sehingga mengakibatkan penurunan hormon testosteron oleh sel leydig yang berperan dalam menjaga kelangsungan hidup spermatozoa di dalam epididimis.  Kemampuan  BG  dalam  meningkatkan  enzim  antioksidan  SOD  dan CAT    dapat  memperbaiki  proses  steroidogenesis  sehingga  terjadi  peningkatan hormon testosteron yang menjaga kelangsungan hidup sperma (Kofuji K, 2012). Pada  kelompok  KS  yang  diberi  BG  (KS+BG)  terbukti  viabilitas  sperma meningkat. Hal ini sesuai  penelitian yang dilakukan oleh  Ayumi Aoki dkk pada tahun  2014,  BG  efektif  meningkatkan    aktivitas  enzim    SOD  dan  CAT,  dimana enzim  tersebut  dapat  memperbaiki  proses  steroidogenesis  sehingga  produksi hormon  testosteron  yang  berfungsi  untuk  kelangsungan  hidup  sperma  pun meningkat.

## 4. Analisis perbandingan motilitas sperma pada kelompok perlakuan
Tabel 4. Perbandingan Rerata Motilitas Sperma  Tikus Wistar pada Kelompok P0,
P1, P2, P3 Variabel Kelompok N Mean±Std Nilai p Cepat progresif P 0 P 1 P 2 P 3 7 7 7 7 41,4±1,0 16,9±1,1 36,6±0,9 41,6±0,6 0,000* Tidak progresif P 0 P 1 P 2 P 3
7 7 7 7 23,9±1,1 50,6±0,8 23,4±1,4 24,6±1,3 0,000*
Keterangan  :  data  berdistribusi    normal  dengan  uji  one-way  ANOVA . Nilaikemaknaan    berdasarkan  nilai p<0.05.Tanda*  menunjukkan  nilai  p<0.05  artinya  signifkan  atau  bermakna  secara  statistik.    P0=  Kontrol  , P1=+Kuinin Sulfat, P2=+Beta Glukan, P3=+Kuinin sulfat dan Beta Glukan
Analisis  ini  dilakukan  menggunakan  uji  one-way  ANOVA karena  data berdistribusi  normal,  uji  ini  untuk  mengetahui  adanya    perbedaan  yang bermakna  dari  setiap  kelompok  perlakuan.  Hasil  pengujian  one-way  ANOVA didapatkan  p=0,00  (p  value<0,05)  yang  menunjukkan  bahwa  secara  statistik terdapat perbedaan yang  bermakna dari setiap kelompok perlakuan( Tabel 4.1)
Tabel 5 Perbandingan Rerata Motilitas Lambat Sperma  Tikus Wistar pada Kelompok P0, P1, P2, P3
Variabel Kelompok N Mean±Std Nilai p Motilitas Lambat progresif P 0 P 1 P 2 P 3 7 7 7 7 34.7±1.3 33.7±0.9 38.7±1.3 33.9±1.1 0,059
Keterangan  :  data  berdistribusi    normal  dengan  uji Kruskal  Wallis. Nilaikemaknaan    berdasarkan  nilai p<0.05.Tanda*  menunjukkan  nilai  p>0.05  artinya  tidak  signifkan  atau  tidak  bermakna  secara  statistik.    P0= Kontrol , P1=+Kuinin Sulfat, P2=+Beta Glukan, P3=+Kuinin sulfat dan Beta Glukan
Analisis  ini  dilakukan  menggunakan  uji  Kruskal  Wallis  karena  data  tidak berdistribusi  normal,  uji  ini  untuk  mengetahui  adanya  perbedaan  yang bermakna  dari  setiap  kelompok  perlakuan.  Hasil  pengujian  Kruskal  wallis didapatkan  p=0,059  (p  value>0,05)  yang  menunjukkan  bahwa  secara  statistik tidak terdapat perbedaan yang bermakna dari setiap kelompok perlakuan ( Tabel 5)
Gambar 4. Perbandingan rerata motilitas cepat, motilitas lambat, dan motilitas tidak bergerak sperma tikus wistar pada kelompok P0, P1, P2, dan P3
Terdapat perbedaan rerata yang signifikan antara variable motilitas sperma cepat progresif dan motilitas sperma tidak progresif pada  kelompok yang hanya diberikan  KS  saja  dengan  kelompok  KS  yang  ditambahkan  Beta  Glukan (Gambar  4),  sedangkan  tidak  terdapat  perbedaan  rerata  yang  signifikan  untuk variable motilitas lambat progresif  pada kelompok yang hanya diberikan KS saja dengan kelompok KS yang ditambahkan Beta Glukan (Gambar 4). Sperma yang diperlukan  untuk  fertilisasi  adalah  sperma  motilitas  cepat  progresif.  Dengan kemampuan  Beta  Glukan  meningkatkan  enzim  SOD  dan  CAT  mampu menurunkan ROS pada mitokondria sehingga memperbaiki  fungsi mitokondria untuk menghasilkan ATP  yang  berguna  untuk  motilitas  sperma bergerak  cepat progresif  menembus  ovum  untuk  fertilisasi  (Kofuji  K,  2012).  Pemberian  KS
menyebabkan  penurunan  motilitas  spermatozoa,  hal  ini  diakibatkan    aktivitas KS  meningkatkan  ROS  sehingga  mengganggu  kemampuan  mitokondria  untuk menghasilkan ATP sebagai sumber energi sperma untuk bergerak cepat menuju ovum  untuk  fertilisasi  (Farombi  EO,  2012). Beta  Glukan  mengandung  enzim SOD  dan  CAT  sehingga  mampu  meningkatkan  ROS,  hal  ini  sesuai  dengan penelitian Hua zhang dkk. di Cina, tahun 2017, pemberian ekstrak beta glukan 1,3/ 1,6 dari jamur Saccharomyces  cereviciae , meningkatkan kadar enzim SOD dan  CAT  (Hua  Zhang,  2017)  dan  pada  penelitian  Djanggan  sargowo  dkk  di Malang pada tahun 2017, Beta Glukan banyak mengandung enzim anti oksidan SOD  dan  CAT  (Djanggan  Sargowo,  2017).  Penelitian  ini  masih  memiliki keterbatasan  yaitu  durasi  pemberian  Beta  Glukan  yang  singkat  sehingga peningkatan kualitas sperma tidak maksimal.

## PENUTUP
Kesimpulan dari penelitian ini bahwa pemberian BG terjadi peningkatan secara  signifikan  yaitu  dapat  meningkatkan  jumlah  sperma,  memperbaiki morfologi  normal  sperma,  meningkatkan  viabilitas  sperma,  serta  dapat meningkatkan  motilitas  sperma    pada  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  dewasa galur  wistar  yang  diinduksi  KS. Dari  hasil  penelitian  yang  telah  dilaksanakan, maka  perlu  adanya  penelitian  lebih  lanjut  dengan  durasi  pemberian  Beta Glukan yang lebih lama (6 bulan).

## DAFTAR PUSTAKA
Badan  Pusat  Statistik.  Survei  Demografi  dan  Kesehatan  Indonesia.  2012. Jakarta. 2013; hal. 25-26.
Berry  J,  Trewin  A,  Amitrano  M. Use  the  protonmotive  force:  Mitochondrial uncoupling  and  reactive  oxygen  species. Journal  of  molecular  biology. 2018; 122(4): 236-32.
Bui, A. D., Sharma, R., Henkel, R., & Agarwal, A. Reactive oxygen speciesimpact on  sperm  DNA  and  its  role  in  male  infertility . Andrologia.  2018;  10(2):  47- 52.
Djanggan  Sargowo,  Nadia  Ovianti. The  role  of  polysaccharide  peptide  of ganoderma lucidum as a potent antioxidant against atherosclerosis in high risk and stable angina patients. Indian Heart Journal. 2017; 610-613. Dohle  G.R. Guidelines  on  male  infertility. European  Association  of  Urology (diunduh 14 Desember 2020), tersedia dari:
http://male/infertility/org.uk. 2010; 24(1): 1-17.
Evans,  Timothy  J. Reproductive  anatomy  and  physiology .  Dalam:  Ganjam, Vekataseshu  K,  editor. Reproductive  and  Developmental  Toxicology .  Edisi ke-2. 2017. hlm. 7-37.
Farombi EO, Ekor M, Adedara IA, Tonwe KE, Ojujoh TO, Oyeyemi MO. Quercetin protects  against  testicular  toxicity  induced  by  chronic  administration  of therapeutic  dose  of  quinine  sulfate  in  rats .  Journal  of  basic  and  clinical physiology and pharmacology. 2012; 23(1): 39-44.
Feng  MZ,  Bhin  Du. B  glucans  from  edible  and  medicinal  mushrooms: Characteristics, physicochemical and biological activities . Article in Journal of Food Composition and Analysis. March 2015; 5(3): 54-58.
Guyton  A.C Reproductive  and  hormonal  functions  of  the  male  and  the  pineal gland . Philadelphia: WB. Saunders. 2012; 916-921. Haggard L, Andersson M, Punga AR. B glucans reduce LDL cholesterol in patients with myasthenia gravis . European journal of clinical nutrition.2013; 67(2): 226.
Hua Zhang, Jing Zhang, Ziluan Fan, Xintao Zhou, Lin Geng, Zhenyu Wang, Joe M.  Regenstein,  Zhiqiang  Xia. Chemical  Synthesis  of  Sulfated  Yeast
(Saccharomyces  cerevisiae)  Glucans  and  Their  In  Vivo  Antioxidant  Activity . Int. J. Biol. Macromol. 2017; 44: 70–74.
Izyumov  DS,  Domnina  LV,  Nepryakhina  OK. Mitochondria   as   Source  of reactive  oxygen  species  under  oxidative  stress. Biochemistry.  Moscow. 2010; 75( 2): 123  –  129.
Kofuji K, Aoki A, Tsubaki K, Konishi M, Isobe T, Murata Y. Antioxidant activity of β-glucan. ISRN pharmaceutics. 2012;121(2): 123-200. Makker   K,   Agarwal   A,   Sharma   R. Oxidative   stress   and   male   infertility . Indian  J  Med  Res. 2009; 129(2): 357  –  67. Menkveld  R. Clinical  significance  of  the  low  normal  sperm  morphology  value  as proposed  in  the  fifth  edition  of  the  WHO  Laboratory  Manual  for  the Examination and Processing of Human Semen. Asian journal of andrology. 2010; 12(1): 47.
Mustafa  SA,  Alaaddin  P,  Nigar  V,  M. Protective  effects  of  melatonin  and  β-D- glucan against acetaminophen toxicity in rats. Journal of food composition and analysis. 2015; 14(2): 165-173.
O’Flaherty C. The Enzymatic Antioxidant System of Human Sperma . Basic Clin. Androl . 2014; 24(4): 122-134.
Olayaki  L,  Soladoye A,  Salman  T,  Joraiah  B. Effects  of  photoperiod  on  testicular functions  in  male  sprague-dawley  rats .  Nigerian  Journal  of  Physiological Sciences. 2008;23(10): 1-32.
Osinubi AA, Daramola AO, Noronha CC, Okanlawon AO, Ashiru OA. The effect of quinine and ascorbic acid on rat testes. West Afr J Med. 2007; 26: 217– 21.
Rahar  S,  Swami  G,  Nagpal  N,  Nagpal  MA,  Singh  GS. Preparation, characterization,  and  biological  properties  of  β-glucans .  Journal  of advanced pharmaceutical technology & research. 2011; 2(2): 94-102.
Speroff  L,  Fritz  MA. Couple  infertility .  Dalam:  Baltimore  M,  William& Wilkins,editor. Clinical gynecologic endocrinology and infertility . Edisi ke-8. 2010. hlm. 56-1013.
Tortora  GJ,  Derrickson  BH. Principles  of  anatomy  and  physiology .  14 th edition.
United States of America: Willey.2014;32(3): 2-25.
Wagner,  H.,  Cheng,  J.  W.,  &  Ko,  E.  Y. Role  of  reactive  oxygen  species  in  male infertility :  An  updated  review  of  literature. Arab  Journal  of  Urology .  2017; 15(2): 2-17.
Walczak  JR,  Wolski  JK,  Slowikowska  HJ. The  role  of  oxidative  stress  and antioxidants in male fertility . Cent. Eur. J. Urol. 2013; 66 : 60–67. World Health Organization (WHO). Who Laboratory Manual for the Examination and Processing of Human Semen 5 th E.D. Switzerland. 2010; 120: 22-237. Zoe R. Causes of infertility in women at reproductive age. Health Science Journal. 2009;3(2): 32-45.