Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Air  Dan  Ekstrak  Etanol  Daun Kacapiring ( Gardenia jasminoides Ellis) Terhadap Larva Artemia Salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Nuralifah 1 , Parawansah 2 , Hasniana Nur 1
1 Jurusan Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Halu Oleo, Kendari, Indonesia.
2 Fakultas Kedokteran, Universitas Halu Oleo, Kendari, Indonesia.
* E-mail: nuralifah@uho.ac.id
Article Info: Received: 25 April 2021 in revised form: 15 Mei 2021 Accepted: 30 Mei 2021 Available Online: 30  Mei 2021

## ABSTRACT
A toxicity test is a test to detect the toxic effect of a substance on a  biological  system  and  to  obtain  typical  dose-response  data from  the  test  preparation.  This  study  aims  to  determine  the content of secondary metabolites from the aqueous extract and ethanolic  extract  of  gardenia  leaves,  characterization  of gardenia leaf extract, and acute toxicity using the BSLT method against Artemia salina Leach shrimp larvae.
Phytochemical  screening  tests  were  carried  out  by  the  color change method which included the alkaloid test, flavonoid test, tannin  test,  saponin  test,  and  terpenoid  test.  Extract characterization  tests  include  determination  of  water-soluble extract, determination of ethanol-soluble extract, determination of  water  content,  and  determination  of  ash  content.  Acute toxicity  test  using  the  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT) method using Artemia salina Leach shrimp larvae. The results of the phytochemical screening test for the aqueous extract of gardenia leaves showed positive results on saponins, while  the  phytochemical  screening  tests  on  ethanol  extracts showed  positive  results  on  alkaloids,  flavonoids,  saponins, tannins, and terpenoids. The results of the characterization test on the aqueous extract of gardenia leaves were that the ethanol- soluble  extract  content  was  20.19%,  the  water-soluble  extract content was 23.17%, the water content was 99.13% and the ash content  was  0.29%.  Meanwhile,  in  the  ethanolic  extract  of gardenia  leaves,  the  ethanol-soluble  extract  content  was 60.80%, the water-soluble extract content was 57.14%, the water content was 7.87% and the ash content was 3.22%. The results show that gardenia leaves are not toxic with the LC50 value of the water extract of the gardenia leaves is 1399.64 g/mL and the
LC50  value  of  the  ethanolic  extract  of  the  gardenia  leaves  is 1080.96 so that it can be used as traditional medicine. Keywords : Gardenia jasminoides Ellis BSLT Artemia salina Leach Acute Toxicity
Corresponding Author:
Nuralifah Jurusan Farmasi
Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo Kendari Indonesia
E-mail: nuralifah@uho.ac.id
Copyright © 2021  IJPE-UNG
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal) 2021; 1 (2): 98 – 106 ISSN : 2775- 3670 (electronic) Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/ijpe/index DOI: 10.37311/ijpe.v1i2.11462
How to cite (APA 6 th Style): Nuralifah.,  dkk.  (2021). Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Air  Dan  Ekstrak  Etanol  Daun  Kacapiring  (Gardenia jasminoides  Ellis) Terhadap Larva  Artemia Salina  Leach  Dengan  Metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT) . Indonesian Journal of Pharmaceutical  (e-Journal), 1 (1), 98-106.

## ABSTRAK
Uji toksisitas adalah suatu uji untuk mendeteksi efek toksik suatu zat pada sistem biologi dan untuk  memperoleh  data  dosis-respon  yang  khas  dari  sediaan  uji. Penelitian  ini  bertujuan untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder dari ekstrak air dan ekstrak etanol daun kacapiring, karakterisasi ekstrak daun kacapiring dan toksisitas akut menggunakan metode BSLT terhadap larva udang Artemia salina Leach.
Pengujian skrining fitokimia dilakukan dengan metode perubahan warna yang meliputi uji alkaloid, uji flavonoid, uji tanin, uji saponin dan uji terpenoid. Pengujian karakterisasi ekstrak meliputi  penetapan  sari  larut  air,  penetapan  sari  larut  etanol,  penetapan  kadar  air  dan penetapan kadar abu. Pengujian toksisitas akut menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan menggunakan larva udang Artemia salina Leach.
Hasil pengujian skrining fitokimia ekstrak air daun kacapiring menunjukkan hasil positif pada saponin, sedangkan uji skrining fitokimia pada ekstrak etanol menunjukkan hasil positif pada alkaloid, flavonoid, saponin, tanin dan terpenoid. Hasil pengujian karakterisasi pada ekstrak air  daun  kacapiring  adalah  pada  kadar  sari  larut  etanol  adalah  20,19%,  kadar  sari  larut  air adalah 23,17%, kadar air 99,13 % dan kadar abu adalah 0,29%. Sedangkan pada ekstrak etanol daun  kacapiring  adalah  kadar  sari  larut  etanol  adalah  60,80%,  kadar  sari  larut  air  adalah 57,14%,  kadar  air  7,87  %  dan  kadar  abu  adalah  3,22%.  Hasil  menunjukan  bahwa  daun kacapiring tidak bersifat toksik dengan nilai LC 50 ekstrak air daun kacapiring adalah 1399,64 µg/mL  dan  nilai  LC 50 ekstrak  etanol  daun  kacapiring    adalah  1080,96  sehingga  dapat dimanfaatkan sebagai obat tradisional.
Kata Kunci: Gardenia jasminoides Ellis, BSLT, Artemia salina Leach, Toksisitas Akut

## 1. Pendahuluan
Uji toksisitas adalah suatu uji untuk mendeteksi efek toksik suatu zat pada sistem biologi dan untuk memperoleh data dosis-respon yang khas dari sediaan uji. Bahan alam yang diduga  berpotensi  sebagai  obat  maupun  secara  empiris  telah  digunakan  masyarakat sebagai  obat,  diawali  dengan  uji  toksisitas  praklinik  untuk  memprediksi  tingkat keamanannya,  kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  farmakologi  lainnya.  Pengujian toksisitas dapat dilakukan secara in vitro maupun in vivo (Frengki, Roslizawaty, 2014) . Manfaat  tanaman  obat  adalah  karena  zat  yang  dikandungnya  menghasilkan  efek fisiologis pada tubuh manusia. Beberapa contoh zat tersebut adalah alkaloid, minyak atsiri,  tanin,  resin,  dan  zat  berkhasiat  lainnya  (Olowa  &  Nuneza,  2013).  Pengujian toksisitas  dapat  dilakukan  dengan  menggunakan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). penggunaan larva udang Artemia salina untuk uji BSLT ini ialah sifatnya yang peka terhadap bahan uji, waktu siklus hidup yang lebih cepat, dan mudah dibiakkan. Sifat  peka Artemia  salina kemungkinan  disebabkan  oleh  keadaan  membran  kulitnya yang sangat tipis sehingga memungkinkan terjadinya difusi zat dan lingkungan yang mempengaruhi metabolisme dalam tubuhnya (Mudjiman, 1988).
Menurut World  Health  Organization (WHO),  saat  ini,  80%  populasi  dunia  bergantung pada  tanaman  untuk  perawatan  kesehatan  utamanya.  Salah  satu  tanaman  yang
digunakan  eleh  masyarakat  secara  empiris  adalah  tanaman  kacapiring  ( Gardenia jasminoides ).  Daun  kacapiring  yang  berwarna  hijau  tua  memiliki  kandungan  klorofil yang  merupakan  pigmen  alami  yang  terdapat  pada  dedaunan.  Selain  klorofil,  daun kacapiring juga mengandung senyawa flavonoid, saponin, tanin, asam galat dan steroid Tanaman  kacapiring  memiliki  banyak  manfaat,  diantaranya  dapat  dijadikan  minyak atsiri yang dihasilkan dari bunga, dan daunnya dapat digunakan sebagai obat demam, sesak  napas,    tekanan  darah  tinggi  (hipertensi)  dan  sariawan  (obat  kumur).  (Mutiah dkk., 2018 ; Dalimartha, 2006).

## 2.  Metode
Penelitian ini  merupakan  penelitian  eksperimental  dengan post test only  control  group design untuk menguji toksisitas dari ekstrak etanol dan ekstrak air Gardenia jasminoides terhadap larva Artemia salina Leach menggunakan metode BSLT.

## 2.1. Bahan
Bahan-bahan yang akan digunakan pada penelitian yaitu ekstrak dan ekstrak air daun tanaman  kacapiring  ( Gardenia  jasminoides Ellis), Artemia  salina Leach,  etanol  96%, aquadest,  air  laut,  kertas  saring,  DMSO  (Dimetilsulfoksida),  tepung  jagung,  telur Artemia  salina L.  (Great Salt  Lake),  pereaksi  Dragendorf,  Pereaksi  Meyer,  HCl,  FeCl 3 , Magnesium, kloroform. , asam sulfat pekat dan asam asetat anhidrat.

## 2..2 Determinasi dan Karakteristik Sampel
Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam,  Universitas  Halu  Oleo.  Karakteristik  sampel  meliputi  penetapan kadar sari larut dalam air, penetapan kadar sari larut dalam etanol, penetapan kadar abu dan penetapan kadar air dilakukan di Laboratorium Fakultas Farmasi UHO

## 2.3 Persiapan Sampel
Pengambilan  sampel  daun  daun  kacapiring  dilakukan  di  Desa  Mowila,  Kecamatan Mowila, Kabupaten Konawe Selatan, Sulawesi Tenggara. Preparasi sampel dilakukan dengan  pengumpulan  dan  pemilahan  daun Gardenia  jasminoides ,  sortasi  basah, pencucian,  perajangan,  pengeringan  dan  sortasi  kering.  Setelah  kering,  sampel kemudian  dihaluskan  dengan  pencacah  elektrik  sehingga  dihasilkan  simplisia  yang berbentuk  haksel  kecil  dan  kemudian  disimpan  dalam  wadah  bersih,  kering  dan terlindung dari cahaya.

## 2.4. Pembuatan Ekstrak Air
Daun  kacapiring  yang  telah  diperoleh  cuci  dengan  air  bersih.  daun  kacapiring ditimbang, ditambahkan pelarut akuades dengan perbandingan 1:1. Larutan stok dibuat dengan cara ditimbang bahan uji sebanyak 100 mg, kemudian dilarutkan dengan air laut sebanyak  25  ml,  hingga  diperoleh  konsentrasi  larutan  stok  4000  ppm.  Konsentrasi larutan uji untuk BSLT adalah 10 ppm, 100 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 750 ppm, 1000 ppm.

## 2.5. Pembuatan Ekstrak Etanol
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  yaitu  dengan  metode  maserasi.  Serbuk  daun kacapiring dimasukkan ke dalam wadah tertutup dan direndam dengan menggunakan
pelarut    etanol.  Pemisahan  residu  dan  filtrat  dilakukan  setiap  3  x  24  jam  diiringi penggantian  pelarut  yang  sama.  Filtrat  dikumpulkan  dan  dipekatkan  dengan rotary vacuum evaporator pada suhu 50 o C hingga diperoleh ekstrak etanol kental daun Gardenia jasminoides Ellis  dan  dihitung  nilai  rendamennya.  Larutan  stok  dibuat  dengan  cara ditimbang bahan uji sebanyak 100 mg, kemudian dilarutkan dengan DMSO beberapa tetes  dan  dicukupkan  dengan  air  laut  sebanyak  25  ml,  hingga  diperoleh  konsentrasi larutan stok 4000 ppm. Konsentrasi larutan uji untuk BSLT adalah 10 ppm, 100 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 750 ppm, 1000 ppm.

## 2.6. Uji Toksisitas Sampel dengan Metode BSLT
Uji  toksisitas  dilakukan dengan  metode  BSLT  dengan  cara  disiapkan  vial  untuk  tiap kelompok  sesuai  tingkat  konsentrasi  dan  dilakukan  replikasi  sebanyak  3  kali.  Uji toksisitas dilakukan dengan memasukkan 10 larva udang berumur 48 jam bersamaan air laut ke dalam vial yang telah berisi 2,5 ml larutan ekstrak. Tabung uji lalu diletakkan di  bawah  penerangan lampu  5  watt  selama  24 jam,  kemudian  dihitung jumlah  larva udang yang mati. Kriteria standar untuk menilai kematian larva udang adalah bila larva udang  tidak  menunjukkan  pergerakan  selama  beberapa  detik  observasi  (Sari,  2006). Tabel kelompok perlakuan hewan uji dapat dilihat pada Tabel 3. Tabel 3. Kelompok perlakuan terhadap hewan uji No.  Kelompok perlakuan Perlakuan 1 K 10 larva udang tanpa pemberian ekstrak tumbuhan 2 P1 10  larva  udang  yang  diberi  ekstrak  tumbuhan  dengan konsentrasi 10 ppm dalam media 3 P2 10  larva  udang  yang  diberi  ekstrak  tumbuhan  dengan konsentrasi 100 ppm dalam media 4 P3 10  larva  udang  yang  diberi  ekstrak  tumbuhan  dengan konsentrasi 250 ppm dalam media 5 P4 10  larva  udang  yang  diberi  ekstrak  tumbuhan  dengan konsentrasi 500 ppm dalam media 6 P5 10  larva  udang  yang  diberi  ekstrak  tumbuhan  dengan konsentrasi 750 ppm dalam media 7 P6 10  larva  udang  yang  diberi  ekstrak  tumbuhan  dengan konsentrasi 1000 ppm dalam media Keterangan :
K = kontrol (2,5 mL DMSO dan 2,5 mL air laut) P = perlakuan P1 ( 10 ppm) P2 (100 ppm) P3(250 ppm), P4 (500 ppm), P5 (750 ppm), P6 (1000 ppm)

## 3.  Hasil dan Pembahasan
3.1.  Determinasi Tanaman
Determinasi  tanaman  kacapiring  ( Gardenia  jasminoides Ellis.)    dilakukan  untuk memastikan  kebenaran  sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian.  Hasil  identifikasi tanaman kacapiring yang dilakukan di Laboratorium Biologi FMIPA Universitas Halu Oleo  menunjukkan  bahwa  tanaman  yang  digunakan  adalah  tanaman  kacapiring ( Gardenia jasminoides Ellis.) dengan kunci determinasi 1b-3b-4a.

## 3.2.  Skrining Fitokimia
Metode skrining fitokimia dilakukan dengan melihat reaksi pengujian warna dengan menggunakan  suatu  pereaksi  warna.  Skrining  fitokimia  meliputi  pemeriksaan kandungan  senyawa  alkaloida,  flavonoida,  terpenoida/  steroida,  tanin  dan  saponin (Minarno, 2015).
Tabel 7. Hasil skrining fitokimia ekstrak air daun kacapiring No. Uji Fiokimia Pereaksi Ekstrak Air Ekstrak Etanol Hasil Ket Hasil Ket 1 Alkaloid Mayer Tidak terbentuk endapan putih ˗ Terbentuk endapan putih + 2 Flavonoid  Serbuk Mg + HCl Tidak terbentuk warna merah, kuning atau jingga ˗ Terbentuk warna merah + 3 Tanin FeCl 3 1 % Tidak terbentuk warna hijau kehitaman ˗ Terbentuk warna hijau kehitaman + 4 Terpenoid Asam asetat anhidrat +
H 2 SO 4
Tidak terbentuk warna merah atau violet ˗ Terbentuk warna merah + 5 Saponin Air panas dan HCl Terbentuk busa yang stabil + Terbentuk busa yang stabil +
Keterangan :
(-) : Tidak mengandung golongan senyawa metabolit sekunder (+): Mengandung golongan senyawa metabolit sekunder

## 3.3 Karakteristik Ekstrak
Karakterisasi  ekstrak  daun  kacapiring  dilakukan  sebagai  upaya  untuk  mendapatkan ekstrak yang aman, memiliki mutu ekstrak yang baik, terstandar dan stabilitasnya teruji (Suharti et al., 2017). Karakterisasi yang dilakukan meliputi parameter spesifik ekstrak yaitu penentuan kadar sari larut air dan sari larut etanol, dan parameter non spesifik meliputi penentuan kadar air dan kadar abu.
Tabel 4 . Hasil Karakterisasi Ekstrak Air dan Ekstrak Etanol
Jenis Karakterisasi Ekstrak Air Ekstrak Etanol Standar Kadar air 99,13% 7,87% ≤ 10% Kadar abu 0,29% 3,22% ≤ 7% Kadar sari larut air 23,17 % 57,14 % ≥ 18,00% Kadar sari larut etanol 20,19% 60,80% ≥ 6,30%
Berdasarkan tabel 4 Hasil pengujian kadar air pada ekstrak air daun kacapiring adalah 99,13%. Kadar air pada ekstrak tidak memenuhi persyaratan yaitu ≤ 10% (Depkes, 2008).
Tingginya  kadar  air  pada  ekstrak  air  ini  dikarenakan  daun  yang  digunakan  untuk ekstraksi  adalah  daun  segar  dengan  pelarut  air  sehingga  kadar  airnya  tinggi.  Tinggi rendahnya  kadar  air  suatu  ekstrak  akan  mempengaruhi  mutu  dari  ekstrak  tersebut, dimana  semakin  sedikit  kadar  air  pada  ekstrak  maka  semakin  sedikit  kemungkinan ekstrak  terkontaminasi  oleh  pertumbuhan  jamur  .  Kadar  air  dalam  sediaan  obat tradisional termasuk ekstrak tidak boleh melebihi batas 10%. Kadar air yang melebihi 10% dapat mengakibatkan ekstrak akan mudah ditumbuhi jamur (Ratnani dkk., 2015).
Penentuan  kadar  abu  bertujuan  untuk  mengukur  jumlah  komponen  anorganik  atau mineral yang tersisa setelah proses pengabuan (Sutomo dkk., 2017). Kadar abu  terkait dengan  kemurnian  dan  kontaminasi  dalam  ekstrak.  Kadar  abu  yang  melebihi  7% menunjukkan  bahwa  ekstrak  tercemar  logam-logam  mineral  yang  akan  menjadikan mutu atau kualitas ekstrak terganggu (Setyorini et al., 2016).
Penentuan kadar sari larut dalam air dan penetapan kadar sari larut etanol  bertujuan untuk menunjukkan jumlah zat atau senyawa yang dapat disari oleh air maupun etanol. Penentuan  kadar  sari  tersebut  sangat  penting,  karena  dapat  memberikan  gambaran mengenai  besarnya  zat  atau  senyawa  terlarut  dan  merupakan  bagian  yang dimanfaatkan sebagai bahan obat (Zulharmita dkk., 2012). Kadar sari larut air dan sari larut etanol ekstrak etanol daun kacapiring yaitu sebesar 57,14% dan 60,80 %. Hal ini menunjukkan  ekstrak  daun  kacapiring  memiliki  kelarutan  yang  lebih  tinggi  dalam etanol dibandingkan dalam air, ini berarti kandungan senyawa kimia yang larut dalam etanol lebih banyak dibandingkan senyawa kimia yang larut air karena sifat semipolar etanol yang dapat menarik senyawa yang bersifat polar maupun non polar, sedangkan air  yang  bersifat  lebih  polar  dibandingkan  etanol  tidak  mampu  menarik  senyawa nonpolar.
3.4.  Uji Toksisitas dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Metode BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test ) sering digunakan untuk praskrining terhadap senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam  ekstrak  tumbuhan  karena  sederhana,  cepat, murah,  mudah,  dapat  dipercaya,  dan  hasilnya  representative  (Made  et  al.,  2013). Penggunaan Artemia salina Leach dalam metode BSLT dikarenakan memiliki kesamaan tanggapan/respon  stress  yang  sama  dengan  manusia,  yaitu  respon  perilaku  dan fisiologis terhadap stressor lingkungan (Ajrina, 2013). Total larva yang digunakan pada seluruh percobaan dengan 3 kali percobaan/replikasi adalah 210 ekor. Total kematian larva diperoleh dengan menjumlahkan kematian larva, dibagi dengan total larva yang digunakan setiap konsentrasi dan dikalikan dengan 100%. Nilai LC 50 dapat dilihat dari analisis probit dengan menggunakan MiniTab 17 for Windows pada tabel 5.
Tabel 5. Hasil pengukuran nilai LC 50 ekstrak air dan etanol daun kacapiring Sampel Konsentrasi (ppm) LC 50 (µg/mL / ppm) Ekstrak air daun Kacapiring 0
1399,64 10
100
250 500
750 1000
Ekstrak etanol daun kacapiring 0 1080,96 10 100 250 500 750 1000
Berdasarkan tabel 5 , ekstrak etanol dan ekstrak air daun kacapiring bersifat tidak  toksik terhadap  larva  udang Artemia  salina Leach.  Menurut  (Alam,  2002)  ekstrak  dikatakan bersifat  toksik  jika  LC 50 <  1000  ppm.  LC 50 ( Lethal  Concentration 50)  merupakan konsentrasi  zat  yang  menyebabkan  terjadinya  kematian  pada  50%  hewan  percobaan yaitu larva Artemia salina Leach. Hasil LC 50 ini sesuai dengan kurva yang ditunjukan pada Gambar 1 di bawah ini :
(a) (b)
Gambar 1. Kurva analisis probit ekstrak daun kacapiring (a) ekstrak air (b) ekstrak etanol
Berdasarkan  kurva  pada Gambar  1 menunjukan  bahwa  setiap  konsentrasi  terjadi kenaikan tingkat mortalitas dari larva udang, hal ini disebabkan karena semakin tinggi konsentrasi suatu zat yang diberikan, semakin besar pula jumlah larva udang yang mati. Tingkat mortalitas yang paling tinggi terjadi pada konsentrasi 1000 μg/mL. Dengan kata lain,  semakin  tinggi  konsentrasi  yang  diberikan  semakin  besar  pula  keracunan  yang ditimbulkan. Gejala keracunan timbul secara perlahan-lahan dalam waktu yang lama sesudah  pemberian  suatu  zat.  Artinya  keracunan  belum  langsung  terjadi  pada  saat pemberian suatu zat, namun zat tersebut diekskresikan dulu sehingga dengan waktu yang lama pengaruhnya baru terlihat. Mekanisme kematian larva Artemia salina Leach
berhubungan  dengan  fungsi  senyawa  alkaloid,  flavonoid  dan  saponin  pada  ekstrak daun kacapiring.
Cara  kerja  senyawa  alkaloid  adalah  dengan  bertindak  sebagai stomach  poisoning atau racun perut. Senyawa ini akan menghambat reseptor perasa pada daerah mulut larva. Hal ini mengakibatkan larva gagal mendapatkan stimulus rasa sehingga tidak mampu mengenali  makanannya  dan  akibatnya  larva  mati  kelaparan  sedangkan  senyawa golongan saponin dapat mengikat oksigen yang terdapat didalam air sehingga kadar oksigen  didalam  air  menurun  dan  larva  Artemia  salina  Leach  dapat  mengalami kematian  karena  kekurangan  oksigen.  Flavonoid  bertindak  sebagai  antioksidan  yang mencegah  terjadinya  fragmentasi  DNA  oksigen reaktif seperti  radikal  hidroksil  yang memicu  kerusakan  sel  yang  mengawali  timbulnya  sel  kanker.  Senyawa  golongan flavonoid juga dapat mempercepat proses apoptosis sel yang mengakibatkan kematian sel.

## 4.  Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulakan  bahwa  Kandungan  metabolit sekunder yang terdapat pada ekstrak etanol daun kacapiring yaitu flavonoid, alkaloid, tanin, terpenoid dan saponin sedangkan pada ekstrak air daun kacapiring yaitu saponin. Hasil uji toksisitas akut ekstrak air daun kacapiring terhadap hewan uji Artemia salina Leach senyawa memiliki nilai LC 50 sebesar 1399,64 ppm dan uji toksisitas akut ekstrak etanol  daun  kacapiring  terhadap  hewan  uji  larva Artmemia  salina Leach  senyawa memiliki nilai LC 50 sebesar 1080,96 ppm dengan interprestasi tidak toksik.

## Referensi
[1]. Ajrina, A., 2013, Uji Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Daun Garcinia benthami Pierre  Terhadap  Larva  Artemia  salina  Leach  Dengan  Metode  Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT), Skripsi, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah.
[2]. Alam,  G.,  2002,  Bhrine  Shrimp  Lethality  Test  (BST)  sebagai  Bioassay  dalam isolasi senyawa bioaktif dari Bahan Alam, Majalah Farmasi dan Farmakolog i, Vol 6(2).
[3]. Braguini,  W.  L.,  Natalia  V.  P.,  Bruno  B.  A.,  2018,  Phytochemical  Analysis, Antioxidant Properties and Brine Shrimp Lethality of Unripe Fruits of Solanum viarum, Journal of Young Pharmacists , Vol. 10.
[4]. Dalimartha, S., 2007, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 3, Puspa Swara, Jakarta.
[5]. Depkes  RI,  2008,  Farmakope  Herbal  Indonesia,  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta
[6]. Frengki,  Roslizawaty,  dan  Desi  P.  2014.  Uji  Toksisitas  Ekstrak  Etanol  Sarang Semut  Lokal  Aceh  ( Mymercodia sp.)  dengan  Metode  BSLT  Terhadap  Larva Udang Artemia salina Leach. Jurnal Medika Veterinaria . Vol. 8 (1) : 60-62.
[7]. Made,  R.,  R.,  James,  S.,  I.,  Made,  D.,  S.,  2013,  Uji  Toksisitas  Dan  Identifikasi Ekstrak Etanol Spons Callyspongia aerizusa Terhadap Larva Artemia salina L. Cakra Kimia (Indonesian E-Journal of Applied Chemistry), Vol 1 No 1.
[8]. Mutiah, Rona J. N., Terip K. K. 2018. Pembuatan Minuman Jeli Daun Kacapiring ( Gardenia Jasminoides Ellis) Dengan Penambahan Karagenan. J. Rekayasa Pangan Dan Pert . Vol.6 (2).
[9]. Nuralifah,  Asriullah  Jabbar  Parawansah,  R.  A.  I.  (2018).  Uji  Tosisitas  Akut Ekstrak  Etanol  Daun  Notika  terhadap  Larva  artemia  salina  leach  Metode BSLT. Pharmauho , 4 (1), 1–5.
[10]. Olowa, L. F. dan Olga M. N., 2013, Brine Shrimp Lethality Assay of the Ethanolic Extracts  of  Three  Selected  Species  of  Medicinal  Plants  from  Iligan  City Philippines, International Research Journal of Biological Sciences , Vol. 2(11).
[11]. Pangow,  M.  E.,  Widdhi  B.,  Edwin  D.  Q.  2018.  Skrining  Fitokimia  Dan  Uji Toksisitas Dari Ekstrak Etanol Daun Manggis ( Garcinia Mangostana L. ) Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Pharmacon-jurnal Ilmiah Farmasi . Vol.
7 (3)
[12]. Ratnani,  R.D.,  Indah  H.,  Yance  A.,  Devi  E.P.,  dan  Dita  D.D.K.,  2015, Standardisasi Spesifik dan Non Spesifik Ekstraksi Hidrotopi Andrographolid dari  Sambiloto  ( Andrographis  paniculata ), Prosiding  Seminar  Nasional  Peluang Herbal Sebagai Alternatif Medicine , ISBN 978-602-19556-2-8.
[13]. Setyorini,  H.  A.,  Arifayu,  A.  K.,  Rosa,  A.,  dan  Winarsih.,  2016,  Karakterisasi Mutu  Ekstrak  Daun  Sirsak  (Annona  murcata  L.)  dari  Tiga  Tempat  Tumbuh, Buletin Penelitian Kesehatan , Vol. 44(4).
[14]. Suharti, N., Yossi G. L., dan Elidahanum H., 2017, Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Etanol Serta Uji Aktivitas Antioksidan Rimpang Jahe Merah ( Zingiber Officinale  Var.  Vubrum  Theilade )  yang  Diinokulasi  Fungi  Mikoriza  Arbuskula (FMA), Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi , Vol. 19 (1) .
[15]. Sutomo, Nadya A., Arnida, dan Fadilaturrahmah, 2017, Studi Farmakognostik dan Uji Parameter Nonspesifik Ekstrak Metanol Kulit Batang Kasturi ( Mangifera casturi Kosterm.), Jurnal Pharmascienc e, Vol. 4 (1).
[16]. Yunus I, Widdhi B Dan  Edwin D.Q, 2018, Skrining Fitokimia Dan Uji Toksisitas Ekstrak  Etanol  Daun  Langsat  ( Lansium  Domesticum Corr)  Terhadap  Larva Artemia  Salina  Leach  Dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT), PHARMACON jurnal Ilmiah Farmasi , Vol 7(3).
[17]. Zulharmita,  Ummil  K.,  dan  Harrizul  R.,  2012,  Pembuatan  dan  Karakterisasi Ekstrak Kering Daun Jambu Biji ( Psidium guajava L.), Jurnal Farmasi Higea , Vol. 4 (2).