STANDARDISASI SPESIFIK DAN NON SPESIFIK EKSTRAKSI HIDROTROPI ANDROGRAPHOLID DARI SAMBILOTO ( Andrographis paniculata )
Rita Dwi Ratnani 1*) , Indah Hartati 1) , Yance Anas 2) , Devi Endah P. 2) dan Dita Desti D. Khilyati 2)
1) Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Wahid Hasyim, Semarang
2) Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim, Semarang *e-mail: ratnani_unwahas@yahoo.co.id /ritadwiratnani@unwahas.ac.id

## ABSTRACT
Several  active  compounds  has  been  found  in Andrographis  paniculata ,  including andrographolide  (deoxy  andrographolide,  andrographolide,  neo  andrographolide  and  14-deoxy- 11,12-didehydroandrographolide) and kalmeghin. The active compounds properties and its levels in extract medicinal plants cannot be guaranteed to always be in a constant amount. This may be due  to  variations  in  the  quality  of  medicinal  plants,  such  as  seeds,  grow  location,  climate, conditions  (age  and  harvest  method),  as  well  as  post-harvest  process  and  extraction  method. Therefore, standardization of the extract should be performed to ensure the quality of the extract before  it  is  produced  on  an  industrial  scale.  The  purpose  of  this  study  is  to  standardize  the sambiloto  hydrotropic  extract.  Specific  parameters  such  as  the  organoleptic  properties  of  the extract  and  identification  of  andrographolide  compound  as  marker  compounds.  In  contrast,  the non-specific  parameter  includes  drying  shrinkage,  microbiological  contamination  levels,  heavy metal contamination levels, ash levels, the solubility of extracts in water and ethanol. The results showed  that the  organoleptic properties hydrotropic  sambiloto  extract are  in  powder form dense, dry,  dark  green,  characteristic  odor  and  bitter  taste.  Andrographolide  compound  as  a  marker compound in the sambiloto extract was identified by TLC method. The non-specific parameters of sambiloto hydrotropic extract were shrinkage drying of 13.5%, microbiological contamination of (3.1x10 7 )  CFU/g,  heavy  metal  contamination  (Cd  levels  of  0.104  ppm,  and  Pb  levels  of  2.248 ppm), ash levels of 37.5%, and the solubility extracts in water and ethanol are 40.8 % dan 42.0% respectively.
Key words: Andrographis paniculata , extract standardization, specific and non-specific

## PENDAHULUAN
Salah  satu  senyawa  aktif  dari  bahan  alam  yang  memiliki  aktivitas  antimalaria  adalah andrographolide  yang  berasal  dari  tanaman  sambiloto  (WHO,  2001).  Misra  (1992)  melaporkan ekstrak  sambiloto  dapat  menghambat  pertumbuhan Plasmodium  berghei penyebab  malaria  pada manusia.  Andrographolide  juga  bersinergi  baik  dengan  kurkumin  dan  artesunate.  Secara  in  vivo, andrographolide-kurkumin  memiliki  aktivitas  antimalaria  81%  lebih  tinggi  dibandingkan  kontrol dan  mampu  memperpanjang  umur  hingga  2-3  kali  (Mishra  dkk.,  2011). Ekstrak  metanol, kloroform  dan  petroleum  eter  dari  sambiloto  juga  dilaporkan  mempunyai  daya  hambat  terhadap pertumbuhan Plasmodium falciparum secara in vitro pada stadium shizontosida (Widyawaruyanti, 1999).  Sementara  itu,  Widyowati  (2003)  menyatakan  bahwa  beberapa  isolat  sambiloto  mampu menghambat pertumbuhan Plasmodium falciparum pada stadium gametosit in vitro. Potensi  andrographolide  yang  besar  sebagai  senyawa  anti  malaria  harus  terus  digali  dan ditingkatkan. Mutu ekstrak senyawa aktif dari bahan alam seperti andrographolide dari sambiloto dipengaruhi  oleh  mutu  simplisia,  peralatan  pengolahan,  prosedur  ekstraksi  dan  proses pengeringan. Salah satu sisi yang harus terus dikembangkan adalah proses ekstraksi senyawa aktif, mengingat  proses  ekstraksi  merupakan  langkah  pertama  pada  pemprosesan  senyawa  fitokimia (Mangal,  2012).  Teknik  konvensional  yang diterapkan  dalam  proses  ekstraksi senyawa  fitokimia antara  lain  adalah  maserasi,  infusi,  perkolasi,  digesti,  dekoksi,  ekstraksi  soxhlet,  ekstraksi
gelombang  mikro,  ekstraksi  enzimatis,  ekstraksi  ultrasonik  dan  ekstraksi  superkritis  (Sembiring, 2009; Tiwari, 2011).
Meskipun  efektif,  metode  konvensional  tersebut  ternyata  berakibat  negatif  terhadap perolehan  andrographolide  seperti  mengakibatkan  terjadinya  degradasi  thermal  karena  senyawa andrographolide  yang  merupakan  senyawa  yang  sensistif  terhadap  panas  (Lomlin,  2003). Penggunaan  pelarut  alkohol  dalam  ekstraksi  juga  dapat  menyebabkan    terjadinya  degradasi andrographolide  akibat  reaksi  esterifikasi  dengan  alkohol  (Wongkittipong,  2004;  Varma,  2011). Selain  itu,  kelemahan  metode  konvensional  adalah  meninggalkan  residu  pelarut  yang  bersifat toksik (Kumoro and Hasan, 2007; Laddha, 2010).
Alternatif  proses  ekstraksi  andrographolide  yang  tepat  adalah  ekstraksi  dengan  kriteria: tidak  menggunakan  pelarut  seperti  alkohol  dan  bersuasana  basa;  proses  ekstraksi  dengan menggunakan medium air sehingga akan meminimalkan biaya produksi;  proses ekstraksi dengan kondisi operasi tekanan dan suhu yang rendah untuk mencegah degradasi termal andrographolide; proses  ekstraksi  yang  tidak  berbiaya  produksi  tinggi;  menggunakan  pelarut  yang  dapat  di  daur ulang dan digunakan kembali.  Salah satu proses ekstraksi yang memenuhi  kriteria di  atas  adalah ekstraksi  hidrotopik.  Hidrotopi  merujuk  pada  kemampuan  senyawa  hidrotop  yang  sangat  larut dalam  air  dan  memiliki  permukaan  aktif  yang  sedang  dalam  meningkatkan  kelarutan  senyawa yang kurang larut atau bahkan tidak larut dalam air (Dandeekar, 2008).
Pelarut  yang  digunakan  dalam  proses  ekstraksi  hidrotropik  adalah  larutan  senyawa hidrotrop dalam medium air. Dewasa ini, fenomena hidrotropi dalam sejumlah proses ekstraksi di industri  telah  banyak  diteliti.  Salah  satunya  adalah  penggunaan  pelarutan  hidrotropik  untuk ekstraksi (Raman dan Gaikar, 2002; Dandekar dan Gaikar, 2003; Dandeekar dkk., 2008). Raman dan  Gaikar  (2002)  menyatakan  bahwa  kapasitas  pelarutan  yang  tinggi  serta  selektivitas  larutan hidrotrop  dapat  digunakan  dalam  proses  ekstraksi  senyawa  bioaktif  seperti  piperin  dari  matriks yang komplesk. Mengingat andrographolide juga merupakan senyawa yang tidak larut dalam air, maka  ekstraksi  hidrotropi  dapat  diaplikasikan  dalam  proses  ekstraksi  andrographolide  dari sambiloto (Ratnani, 2012).
Kandungan  senyawa  aktif  dan  mutu  ekstrak  dari  tanaman  obat  tidak  dapat  dijamin  akan selalu  berada  dalam  jumlah  yang  konstan  karena  adanya  variabel  bibit,  tempat  tumbuh,  iklim, kondisi (umur dan cara) panen, serta proses pasca panen  dan preparasi akhir. Variasi kandungan senyawa  aktif  dalam  produk  ekstrak  dapat  disebabkan  aspek  sebagai  berikut:    genetik  (bibit), lingkungan  (tempat  tumbuh,  iklim),  rekayasa  agronomi  (fertilizer,    perlakuan  selama  masa tumbuh),  panen  (waktu  dan  pasca  panen).  Oleh  karena  itu,  proses  standarisasi  ekstrak  sangat diperlukan  untuk  menghasilkan  ekstrak  yang  berkualitas  baik  sebelum  diproduksi  dalam  skala industri.  Standardisasi  bahan  baku  obat  dari  bahan  alam  seperti  ekstrak  tanaman  obat  adalah serangkaian  parameter,  prosedur  dan  cara  pengukuran  yang  hasilnya  merupakan  unsur-unsur terkait  paradigma  mutu  kefarmasian.  Mutu  artinya  memenuhi  syarat  standar  (kimia,  biologi,  dan farmasi),  termasuk  jaminan  (batas-batas)  stabilitas  sebagai  produk    kefarmasian  pada  umumnya (Hidayah, 2010).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melakukan  standarisasi  ekstrak  hidrotropi  sambiloto  yang mengandung andrographolid berdasarkan parameter spesifik dan non spesifik. Parameter spesifik meliputi  identitas  simplisia,  sifat  organoleptik  ekstrak  dan  profil  senyawa  marker  andrografolid dengan  menggunakan  teknik  KLT.  Sementara  itu,  parameter  non  spesifik  yang  diamati  adalah susut pengeringan, cemaran mokrobiologi, cemaran logam berat (Cd dan Pb), kadar abu, kadar sari larut air dan kadar sari larut etanol.

## METODE PENELITIAN

## Bahan Penelitian
Bahan yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun  sambiloto  yang  dipanen  dari kecamatan  Gunungpati,  Semarang.  Bahan  yang  digunakan  dalam  pembuatan  ekstrak  hidrotropi seperti akuades, sodium asetat, sodium benzoate, sodium salisilat dibeli dari PT. Bratcho Chemica Tbk.  Semarang.  Berbagai  reagen  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah  kloroform p (Merck), metanol p.a (Merck), adrografolide (Sigma) dan DMSO (Merck).

## Alat Penelitian
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain  sentrifuse,  magnetik  strirer,  beaker  glass, oven,  blender,  neraca  analitis  dan  Kertas  saring  Whatman,  silica  gel  60  F 245 (Merck), chamber KLT (Chamag) Lampu UV 254 nm.

## Pembuatan Ekstrak Hidrotropi Daun Sambiloto
Daun  sambiloto  dipisahkan  dari  bagian  lain  dan  dicuci  bersih  dengan  air  mengalir.  Daun sambilito dikeringkan dalam oven dengan pengaturan suhu 50 °C.  Setelah kering, kadar air daun sambiloto diukur dengan alat moisture balance . Daun sambiloto dengan kadar air kurang dari 10 % dibuat dalam bentuk serbuk simplisia dengan menggunakan blender dan diayak dengan ayakan ukuran 25 Mesh.
Sebanyak 40 gram serbuk daun sambiloto dimasukkan ke dalam 400 mL larutan hidrotrop sodium  asetat  2  mol/L.  Campuran  diaduk  dengan magnetic  strirrer kecepatan  1.100  rpm  selama dua  jam  pada  suhu  30 0 C.  Setelah  selesai,  larutan  dibiarkan  mengendap  selama    satu  jam  dan disaring. Ampas dicuci dengan air dan filtrat ditambah dengan air hingga konsentrasinya dibawah MHC.  Ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto  yang  mengandung  andrographolide  akan  mengkristal setelah larutan dibiarkan selama satu jam. Endapan ekstrak dipisahkan melalui proses sentrifugasi. Ekstrak  hidrotopi  daun  sambiloto  selanjutnya  dikeringkan  dan  disimpan  dalam  wadah  gelap  dan diletakkan pada tempat yang terlidung dari paparan sinar matahari langsung.

## Pengukuran Parameter Spesifik Ekstrak Hidrotropi Daun Sambiloto (Depkes RI., 2000) Determinasi tanaman sambiloto dan penetapan identitas simplisia
Tanaman sambiloto yang digunakan didetermiansi di laboratorium Biologi Fakultas MIPA Universitas  Negeri  Semarang.  Data  yang  diperoleh  adalah  nama  latin  sambiloto.  Identitas simplisia  sambiloto  ditetapkan  berdasarkan  gambaran  ciri-ciri  organoleptik  batang,  bunga  dan buah serta gambaran fragmen simplisia herba sambiloto.

## Penetapan sifat organoleptik ekstrak
Parameter  organoleptik  ekstrak  hidrotropika  daun  sambiloto  ditetapkan  menggunakan  panca indera dalam mendeskripsikan bentuk, warna, bau, rasa.

## Penetapan kandungan andrografolid dan senyawa aktif lain dengan kromatografi lapis tipis
(KLT)
Senyawa marker andrografolid dalam ekstrak hidrotropi daun sambiloto ditetapkan dengan metode  KLT.  Fase  diam  yang  digunakan  adalah  silica  gel  60  F 245 .  Campuran  pelarut  kloroform p dan  methanol  (9:1)  digunakan  sebagai  fase  gerak.  Senyawa  standar  adrografolide  (Sigma) digunakan  sebagai  pembanding  yang  dibuat  dalam  larutan  0,1%  (b/v)  dalam  pelarut  DMSO. Larutan  uji  (sampel)  dibuat  dengan  melarutkan  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto  dalam  etanol 96%.  Sebanyak  20  μL  sampel  uji  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto  dan  2  μL  larutan  standar andrografolid  ditotolkan  pada  lempeng  silica  gel  60  F 245 dan  dikering  anginkan.  Plat  KLT dimasukkan ke dalam chamber KLT (Chamag) yang telah dijenuhi oleh fase gerak. Totolan dielusi sepanjang 8 cm dan selanjutnya dikering anginkan. Bercak dibaca di bawah sinar UV 254 nm dan selanjutnya dilakuan pehitungan nilai retardation factor (Rf).
Pengukuran  Parameter  Non-Spesifik  Ekstrak  Hidrotropi  Daun  Sambiloto  (Depkes  RI., 2000)
Parameter  non  spesifik  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto  ditetapkan  sesuai  dengan  acuan penetapan  parameter  standar  Depkes  R.I  (2000)  dan  hasilnya  dibandingkan  dengan  persyaratan yang  tertera pada buku  Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia (BPOM, 2010). Parameter non spesifik ekstrak hidrotropi daun sambiloto yang ditetapkan adalah susut pengeringan, cemaran mikrobiologi,  kadar  logam  berat  (Cd  dan  Pb),  kadar  abu,  kadar  sari  larut  air  dan  kadar  air  larut etanol.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

## Parameter Spesifik Ekstrak Hidrotropi Daun Sambiloto
Parameter  spesifik  ekstrak  dalam  penelitian  ini  terdiri  dari  hasil  determinasi,  identitas simplisia,  penetapan  sifat  organoleptik  ekstrak,  penetapan  kandungan  andrografolid  sebagai senyawa marker daun sambiloto dan senyawa aktif lain dengan menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT). Hasil determinasi dalam penelitian ini membuktikan bahwa tanaman yang digunakan dalam  penelitian  adalah  tanaman  sambiloto  dengan  nama  latin  yang  digunakan Andrographis paniculata L.  Bagian  dari  tanaman  sambiloto  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun. Daun  sambiloto  telah  diketahui  memiliki  kadar  andrografolid  yang  tinggi  sehingga  sangat  baik digunakan sebagai bahan baku ekstrak sambiloto yang berkhasiat sebagai antimalaria.
Identitas simplisia (gambar 1) berupa campuran daun, batang, bunga dan buah kering. Daun berwarna hijau, tidak berbau, berasa sangat pahit. Daun bersilang berhadapan, umumnya terlepas dari batang, bentuk lanset sampai bentuk lidah tombak, rapuh, tipis, tidak berambut, pangkal daun runcing,  ujung  meruncing,  tepi  daun  rata.  Permukaan  atas  berwarna  hijau  tua  atau  hijau kecokelatan,  permukaan  bawah  berwarna  hijau  pucat.  Tangkai  daun  pendek,  buah  berbentuk jorong, pangkal dan ujung tajam, kadang-kadang pecah secara membujur. Batang tidak berambut dengan tebal 2-6 mm, berbentuk persegi empat. Batang bagian atas seringkali dengan sudut agak berusuk.  Permukaan  kulit  luar  buah  berwarna  hijau  tua  hingga  hijau  kecokelatan.  Permukaan dalam berwarna putih atau putih kelabu. Biji agak keras, permukaaan luar berwarna cokelat muda dengan  tonjolan.  Fragmen  pengenal  simplisia  sambiloto  (gambar  2)  yang  diamati  terdiri  dari morfologi  epidemis  bagian  bawah  dengan  stomata  dan  sisik  kelenjar,  rambut  penutup,  berkas pengangkut dan kelopak bunga dengan tonjolan papilla.
Gambar 1. Simplisia Herba Sambiloto
Epidermis Bawah Dengan
Stomata Dan Sisik Kelenjar
Rambut Penutup
Berkas Pengangkut Kelopak Bunga Dengan Tonjolan Papila Gambar 2. Fragmen Pengenal Simplisia Sambiloto
Parameter  organoleptik  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto  diamati  dengan  menggunakan panca  indera  dalam  mendeskripsikan  bentuk,  warna,  bau  dan  rasa.    Tujuannya  yaitu  pengenalan awal  esktrak  yang  dihasilkan  secara  sederhana  dan  seobyektif  mungkin.  Secara  organoleptik, ekstrak hidrotropi daun sambiloto yang dihasilkan tersaji pada tabel I.
Tabel I. Hasil Analisa Organoleptik Eksrak Hidrotropi Daun Sambiloto. Bentuk Warna Bau Rasa Wujud Padat serbuk kering Hijau tua Tidak berbau Sangat Pahit
Uji  kandungan  kimia  ekstrak  dilakukan  untuk  menetapkan  senyawa  identitas/marker  yang tersari  ke  dalam  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto.  Senyawa  identitas  artinya  senyawa  tertentu yang menjadi petunjuk spesifik dengan metode tertentu. Senyawa identitas ekstrak hidrotropi daun sambiloto  adalah  senyawa  andrografolid  yang  diidentifikasi  dengan  metode  KLT.  Walaupun demikian,  identifikasi  keberadaan  senyawa  aktif  lainnya  juga  akan  terdeteksi.  Hasil  penetapan kandungan andrografolid dan senyawa aktif lainnya tersaji pada gambar 3.
Keterangan S : sampel ekstrak hidrotropi daun sambiloto
P : Pembanding andrographolide
Rf Pembanding Andrographolide : 0,55
Rf1 : 0,55 Rf2 : 0,67 Rf3 : 0,93

## Gambar 3.   Profil  KLT  senyawa  andrografolid  dalam  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto dan senyawa standar andrografolid
Hasil  penelitian  membuktikan  bahwa  senyawa  andrografolid  berhasil  tersari  ke  dalam ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto.  Bercak  senyawa  andrografolid  dalam  penelitian  ini  terdeteksi pada pengamatan di bawah sinar UV 254 nm dengan nilai Rf sebesar 0,55, sama dengan nilai Rf senyawa  pembanding  andrografolid  (0,55).  Hasil  identifikasi  juga  mendapatkan  bahwa  terdapat dua  senyawa  aktif  lainnya  yang  ikut  tersari  ke  dalam  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto  dengan nilai Rf berturut-turut sebesar 0,67 dan 0,93.
Parameter  non  spesifik  yang  ditetapkan  dalam  peneltian  ini  meliputisusut  pengeringan, cemaran mikrobiologi, cemaran  logam berat, kadar abu, penetapan sisa pelarut air dan penetapan kadar  senyawa  larut  etanol.  Hasil  penetapan  parameter  non-spesifik  ekstrak  hidrotropi  daun sambiloto tersaji pada tabel II.
Tabel II. Hasil Analisa Parameter Non Spesifik Ekstrak Hidrotropi Daun Sabiloto
No Parameter Pengujian Hasil analisa Satuan 1 Susut Pengeringan 13,5 % 2 Cemaran Mikrobiologi 3,1 x 10 7 CFU/gr 3 Cemaran Logam Cd 0,104 ppm 4 Cemaran Logam Pb 2,248 ppm 5 Kadar Abu 37,5 % 6 Kadar Sari Larut Air 40,8 % 7 Kasar Sari Larut Ethanol 42,0 %
Parameter susut pengeringan adalah pengukuran sisa ekstrak setelah dilkukan pengeringan pada suhu  105 o C selama 30 menit atau sampai berat konstan yang dinyatakan sebagai nila prosen. Dalam hal khusus (jika bahan tidak mengandung minyak menguap/atsiri dan sisa pelarut organik menguap) identik dengan kadar air. Nilai atau rentang kadar air yang diperbolehkan terkait dengan kemurnian dan kontaminasi (Emilan, dkk , 2011).
Hasil  penelitian  menunjukkan  susut pengeringan  ekstrak hidrotropi daun sambiloto  adalah sebesar  13,5%.  Jika  bahan  yang  menguap  diasumsikan  adalah  air,  maka  dapat  artikan  kadar  air ekstrak  adalah  sebesar  13%  dan  melebihi  standar  yang  diperbolehkan.  Hal  ini  dapat  terjadi  jika proses  penyimpanan  ekstrak  sambiloto  tidak  dilakukan  pada  tempat  yang  tepat  karena  ekstrak dapat menyerap air yang ada di udara. Kadar air dalam sediaan obat tradisional termasuk ekstrak tidak  boleh  melebihi  batas  10  %  (Depkes  RI,  1994).    Kadar  air  yang  melebihi  10%  dapat mengakibatkan ekstrak akan mudah ditumbuhi jamur (Isnawati dan Arifin, 2006). Oleh karena itu, ekstrak  hidrotropika  harus  dikeringkan  kembali  sebelum  digunakan  untuk  uji  aktivitas farmakologinya atau dibuat dalam bentuk sediaan.
Kadar  air  yang  rendah  akan  mencegah pertumbuhan  mikroorganisme  dan  kapang  (jamur). Jamur    Aspergilus  flavus    akan  menghasilkan  aflatoksin  yang    sangat  beracun  dan  dapat menyebabkan kanker hati. Menurut persyaratan obat tradisional tertera bahwa Angka khamir atau kapang  tidak  lebih  dari  10 4 CFU/gr.    Mikroba  patogen  harus  negatif  dan  kandungan  aflatoksin tidak lebih dari 30 bagian per juta (bpj).
Suatu produk obat bahan alam sebaiknya tidak mengandung cemaran mikroorganisme, akan tetapi  kadang hal ini sulit dihindarkan. Adapun batas maksimum cemaran mikroorganisme yang dipersyaratkan tergantung dari bentuk sediaan dan ditentukan dengan penetapan Angka Lempeng Total    dan    Angka  Kapang  Khamir  (BPOM,  2008).  Namun  demikian,  suatu  produk  obat  bahan alam  tidak  diperbolehkan  mengandung  cemaran  mikroorganisme  patogen  seperti Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus  aureus ,  Clostridia  sp.,  Shigella  sp.,  dan  Salmonella  sp.    Nilai  atau rentang  yang  diperbolehkan  terkait  dengan  kemurnian  dan  kontaminasi.  Hasil  penelitian  yang dihasilkan  untuk  pengujian    cemaran    mikroba  adalah  3,1  x  10 7 CFU/gr.  Hal  ini  berarti  produk yang dihasilkan masih belum sesuai dengan standart yaitu tidak lebih dari 10 4 CFU/gr. Tingginya angka  cemaran  mikroba  kemungkinan  besar  disebabkan  karena  kadar  air  ekstrak  yang  masing tinggi (>10%) sehingga dapat memicu pertumbuhan mikroorganisme.
Standardisasi parameter non spesifik ekstrak hidrotropi daun sambiloto juga diarahkan pada penetapan  batas  maksimal  material  berbahaya  yang  diperbolehkan  dalam  ekstrak,  yaitu  cemaran logam  berat  Pb  dan  Cd.  Penetapan  kadar  kedua  logam  berat  ini  dilakukan  dengan Atomic Absorbtion Spectroscopy (AAS). Hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar logam berat Pb dan Cd  dalam  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto  berturut-turut  adalah  2,248  ppm  dan  0,104  ppm. Cemaran logam Pb dan Cd masih dibawah batas maksimal yang diperbolehkan oleh pemerintah, yaitu Pb < 10 ppm dan Cd < 0,30 ppm.
Penentuan kadar abu bertujuan untuk menentukan karakteristik sisa kadar abu non organik setelah  pengabuan.  Ekstrak  dipanaskan  hingga  senyawa  organik  dan  turunannya  terdestruksi  dan menguap  sampai  tinggal  senyawa  anorganik  saja.  Kadar  abu  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto dalam  penelitian  ini  adalah  37,5  %.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  sisa  bahan  anorganik  dalam ekstrak  sambiloto  adalah 37,5  %. Kadar abu hendaknya mempunyai nilai kecil karena parameter ini menunjukkan adanya cemaran logam berat yang tahan pada suhu tinggi (Isnawati dan Arifin, 2006). Berdasarkan  Kepmenkes RI Nomor 261/MENKES/SK/IV/2009 bahwa kadar abu ekstrak tidak boleh lebih dari 10,2 % (Depkes RI., 2009).
Kadar sari larut air dan etanol merupakan indikator kadar senyawa aktif yang dapat tersari, baik oleh pelarut air maupun etanol. Kadar senyawa aktif dalam suatu simplisia dipengaruhi oleh Umur tanaman, waktu panen dan iklim dan tempat tumbuh. Hasil pengujian menunjukkan bahwa kadar  sari  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto  larutan  air  adalah  sebesar  40,8  %    dan  larut  etanol sebesar 42,0 %.  Hasil ini cukup menandakan bahwa senyawa aktifdalam ekstrak hidrotropi daun sambiloto mudah tersari ke dalam air dan etanol.

## KESIMPULAN
Ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto  berupa  ekstrak  padat  dengan  wujud  berupa  serbuk kering,  berwarna  hijau  tua  dengan  bau  khas  sambiloto  dan  memiliki  rasa  yang  pahit.  Senyawa marker  andrografolid  dan  dua  senyawa  aktif  lainnya  berhasil  terdeteksi  dalam  ekstrak  hidrotropi daun  sambiloto  dengan  metode  KLT.  Parameter  non  spesifik  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto ditandai  dengan  susut  pengeringan  13,5  %,  cemaran  mokrobiologi  3,1  x  10  7  CFU/gr,  cemaran logam berat Cd 0,104 ppm, cemaran logam Pb 2,248 ppm, kadar abu 37,5 %, kadar sari larut air 40, 8 % dan kadar sari larut etanol 42,0 %.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Pada  kesemptan  ini  penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Direktorat  Jenderal Pendidikan  tinggi  Departemen  Pendidikan  Nasional  atas  dana  yang  diberikan  dalam  kegiatan Penelitian Hibah Bersaing tahun 2014.

## DAFTAR PUSTAKA
Akbar, S., 2011,” Andrographis paniculata : A Review of Pharmacological Activities and Clinical Effect”, Alternative Medicine Review , 16 (1), 66-77
BPOM  RI,  2008  “  Mutu,  Keamanan  &  Kemanfaatan  Suatu  Produk  Obat  Bahan  Alam”,  Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta
BPOM,  2010, Monografi  Ekstrak  Tumbuhan  Indonesia ,  Direktorat Standardisasi  Obat Trandisional, Kosmetik dan Produk Komplemen BPOM RI, Jakarta.
Dandeekar  D.  and  Gaikar  V.,  2003,  Hydrotropic  Extraction  of  Curcuminoids  from  Turmeric, Separation Science and Technology , 38 , 1185-1215
Dandeekar  D.,  Jayaprakasha  G.K.  and  Patil,  B.,  2008,  Hydrotropic  Extraction  of  Bioactive Limonin from Sour Orange Seed, Food Chemistry , 109 , 515-520
Depkes RI., 1994, Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor: 661/MENKES/SK/VII/1994  tentang  Persyaratan  Obat  Tradisional,  Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta Depkes RI., 2009, Keputusan Mentri Kesehatan Republik Indonesia Nomor:
261/MENKES/SK/IV/2009  tentang  Farmakope  Herbal  Indonesia,Menteri  Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta
Emilan,  T.,  Kurnia  A..,  Utami  Budi.,  Diyani,  LN.,  dan  Maulana  A.,  2011,  Konsep  Herbal Indonesia : Pemastian Mutu Produk Herbal, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Departemen  Farmasi  Progran  Studi  Magister  Ilmu  Herbal,  didownload  dari https://ashfarkurnia.files.wordpress.com/2012/01/khi_dr-abdul-munim.pdf pada  tanggal 20 Agustus 2015
Hidayah  R.N., 2010, Standarisasi Ekstrak Metanol Kulit Kayu Nangka, Skripsi , Fakultas Farmasi Universitas Muhamadiyah Surakarta, Surakarta
Isnawati, A., dan Arifin K.M., 2006, “Karakterisasi Daun Kembang Sungsang ( Gloria superba L) dari aspek Fitokimia” Media Litbang Kesehatan, 16 (4), 8-14
Jain,  P.,  Goel,  A.  and  Parmar,  M.,  2010,  Solubility  Enhancement  Techniques  with  Special Emphasis  on  Hydrotropy”, International  Journal  of  Pharma  Proffessional’s Research , 1 , 34-45
Ladda  K.S.,  Gavit  R.S.  and  Bhandare,  R.R.,  2010,  Effect  of  Enzyme  on  Extraction  of Andrographolide  from Andrographis  paniculata Nees, International  Journal  of  Pharma and Bioscience , 1 , 1-7
Lomlin  L.,  Jirayupong  N.  and  Plubrukan  A.,  2003,  Heat  Accelerated  Degradation  of  Solid  State Andrographolide, Chemical Pharmaceutical Bulletin , 51 , 24-26
Korpinen,  R.,  2010,”  On  the  Potenstial  Utilization  of  Sawdust  and  Woodchip  Screening”, Laboratorium of Fibre and Cellulose, Thesis, Abo Akademi University, Turki
Kumoro  A.C. and Hasan  M.,  2007,  Supercritical Carbon Dioxide Extraction of Andrographolide from Andrographis  paniculata :  Effect  of  the  Solvent  Flow  Rate,  Pressure,  and Temperature‖, China Journal of Chemical Engineering , 15 , 877-883
Mangal A., Bhadoriya S.S., Joshi S., Agrawal G., Gupta A. and Mandoria N., 2011, Extraction of Herbal Drugs by Using Hydrotropy Solubilization Phenomenon, International Journal of Pharmaceutical and Applied Sciences , 2 (1), 63-74
Misra, P., 1992, Antimalarial Activity of Andrographis paniculata (Kalmegh) against Plasmodium berghei NK  65  in  Mastomys  natalensis, International  Journal  of  Pharmacognosy , 30 , 263-274
Misra  K.,  Dash  A.P.  and  Dey,  N.,  2011,  Andrographolide:  A  Novel  Antimalarial  Diterpene Lactone Compound from Andrographis paniculata and Its Interaction with Curcumin and Artesunate, Journal of Tropical Medicine , 2011 , 1-6
Raman  G.  and  Gaikar  V.,  2002,  Extraction  of  Piperine  from Piper  nigrum (Blac  Pepper)  by Hydrotropic Solubilization, Ind. Eng. Chem. Res ., 41 , 2966-2976 Ratnani  D.R.,  Hartati  I.,  Kurniasari  L.,  2012,  Potensi  Produksi  Andrographolide  dari  Sambiloto ( Andrographis  paniculata Ness)  melalui  Proses  Ekstraksi  Hidrotropi, MOMENTUM , 8(1), 12-20 Sembiring B.B., 2009, Status Teknologi Pasca Panen Sambiloto ( Andrographis paniculata Needs), Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik, 134-144
Tiwari  P.,  Kumar  B.,  Kaur  M.,  Kaur  G.  and  Kaur,  H.,  2011,  Phytochemical  Screening  and Extraction: A Review, International Pharmaceutica Sciencia , 1 (1), 99-106
Varma  A.,  Padh  H.  and  Shrivastava  N.,  2011,  Andrographolide:  A  New  Plant  Derived Antineoplastic  Entity  on  Horizon, Evidence  based  Complementary  and  Alternative Medicine , 2011 , 1-9
Widyawaruyanti  A.,  1999,  Aktivitas  Imunomodulator  Senyawa-senyawa  Diterpenoid  dari Andrographis paniculata Nees terhadap Fungsi Sitotoksisitas Limfosit T-Sitotoksik (CD 8+) Mencit, Tesis , Program Pasca Sarjana Universitas Airlangga, Surabaya
Widyowati  R.,  Santa  I.G.P.,  Rahman  A.,  Tantular  I.  dan  Widyawaruyanti  A.,  2003,  Uji  In  Vitro Aktivitas  Antimalaria  Isolat  dari Andrographis  paniculata terhadap Plasmodium falciparum pada Stadium Gametosit, Majalah Farmasi Erlangga , 3 (3), 99-102
Wongkittipong,  R.,  Prat  L.,  Damronglerd  S.  and  Gourdon,  C.,  2004,  Solid  Liquid  Extraction  of Andrographolide  from  Plants-Experimental  Study,  Kinetics  Reaction  and  Model, Separation and Purification Technology , 40 (2), 147-154
Rita Dwi Ratnani