## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL ALGA
Ulva lactuca MENGGUNAKAN METODE DPPH ( 1,1 diphenyl-2-picrylhydrazyl )
Gia Aprilia Kartini Ulaan 1) , Adithya Yudistira 1) , Henki Rotinsulu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Ulva  lactuca  Algae  habitat  was  found  in  shallow  marine  waters  and  its  morphology  is  thin  and  flat thallus. Ulva lactuca Algae, known as sea lettuce, contains a lot of chlorophyll in its cells. Chlorophyll has the ability as a free radical scavenger and also has antioxidant activity. Antioxidants are compounds that  could  inhibit  oxidation  reactions  by  binding  to  free  radicals  and  highly  reactive  molecules.  This study  was  conducted  to  determine  the  antioxidant  activity  of  ethanol  extract  of  Algae  Ulva  lactuca obtained from the Lembeh Strait, Bitung City. Ulva lactuca Algae was extracted by maceration method using ethanol solvent. Testing of antioxidant activity was carried out using the DPPH method, which was measured  using  a  UV-VIS  spectrophotometer.  The  results  showed  that  the  ethanol  extracts  of  Ulva lactuca Algae had antioxidant activity with a percentage value of 51.63% at a concentration of 100 mg/L.
Keywords : Ulva lactuca Algae, Antioxidants, Ethanol, DPPH

## ABSTRAK
Habitat  tumbuhan  Alga Ulva  lactuca terdapat  di  air  laut  dan  morfologinya  berupa thallus tipis  dan gepeng.  Alga Ulva  lactuca yang  dikenal  dengan  selada  laut,  banyak  mengandung  klorofil  dalam  sel- selnya.  Klorofil  memiliki  kemampuan  sebagai  penangkap  radikal  bebas  dan  juga  memiliki  aktivitas antioksidan.  Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  dapat  menghambat  reaksi  oksidasi  dengan  cara mengikat  radikal  bebas  dan  molekul  yang  sangat  reaktif.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  etanol  Alga Ulva  lactuca yang  diperoleh  dari  Peraian  Selat  Lembeh, Kota  Bitung.  Alga Ulva  lactuca diekstrak  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol. Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  DPPH  yang  di  ukur  menggunakan Spektrofotometer  UV-VIS.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  Alga Ulva  lactuca memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai presentase sebesar 51,63% pada konsentrasi 100 mg/L.
Kata kunci : Alga Ulva lactuca , Antioksidan, Etanol, DPPH

## PENDAHULUAN
Alga  makro  atau  dikenal  dalam perdagangan sebagai rumput laut merupakan salah  satu  potensi  biota  laut  perairan Indonesia.  Saat  ini  sudah  ditemukan  555 jenis  alga    yang  berdasarkan  kandungan pigmennya dikelompokkan menjadi 4 kelas, yakni  : Rhodophyceae,  Phaeophyceae, Chlorophyceae, Cyanophyceae (Anggadiredja et al ., 2006).
Pada  tahun  1980-an  dan  1990-an, banyak  zat  bioaktif  ditemukan  dari  bakteri laut,  invertebrata,  dan  alga.  Beberapa  zat aktif  yang diisolasi  dari rumput  laut, seperti polisakarida,  asam  lemak,  protein,  fenolik, terpena.  Menunjukkan  signifikan  aktivitas antitumor,  antibakteri,  antivirus,  dan  anti- oksidatif (Li et al ., 2018).
Antioksidan  merupakan  senyawa yang  dapat  menghambat  reaksi  oksidasi dengan  cara  mengikat  radikal  bebas  dan molekul  yang  sangat  reaktif.  Dampak reaktivitas  senyawa  radikal  bebas  dapat menyebabkan  terjadinya  kerusakan  sel  atau jaringan,  penyakit  degeneratif  serta  kanker (Sutrisna, 2013).
Radikal  bebas  dapat  terbentuk  dari proses  metabolisme  dalam  tubuh  serta pengaruh eksternal. Faktor eksternal seperti, kondisi  lingkungan  serta  pola  hidup  yang tidak  sehat  dapat  meningkatkan  jumlah radikal  bebas  dalam  tubuh.  Terdapat beberapa  jenis  antioksidan  enzimatis  yang berfungsi  untuk  menetralisir  radikal  bebas dalam  tubuh.  Paparan  radikal  bebas  yang berlebihan dapat  menimbulkan kondisi  stres oksidatif.  Untuk  mencegah  adanya  stres oksidatif tubuh memerlukan asupan makanan  atau  suplemen  yang  mengandung antioksidan (Trilaksani, 2003).
Habitat tumbuhan Alga Ulva lactuca terdapat di air laut dan morfologinya berupa thallus tipis dan gepeng seperti pedang yang terdiriatas 2 lapis sel. Tidak ada diferensiasi jaringan  dan  seluruh  sel  memiliki  bentuk yang kurang lebih identik, kecuali pada sel- sel basal yang mengalami elongasi membentuk  rhizoid  penempel.  Masing- masing  sel  pada  spesies  ini  terdiri  atas sebuah nukleus, dengan kloroplas berbentukcangkir,  dan  sebuah  pirenoid (Guiry, 2007).
Berbagai  penelitian  menunjukkan bahwa  alga  mengandung  zat  gizi  utama seperti  karbohidrat,  protein  dan  lemak  juga mengandung  zat  gizi  spesifik  seperti mineral.  Karbohidrat  yang  terkandung  pada alga  yaitu  selulosa  dan  hemisolulosa  yang merupakan  gizi  yang  tidak  dapat  dicerna seluruhnya oleh enzim dalam tubuh (Haryanti et al ., 2008).

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Oktober 2018 sampai bulan Februari 2019 di Laboratorium  Farmakognosi  dan  Fitokimia serta Laboratorium Analisis Farmasi Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Bentuk penelitian ini merupakan eksperimental  laboratorium  yang  akan menguji  komponen  ekstrak  dari  etanol  alga Ulva lactuca sebagai antioksidan.

## Alat
Alat-alat  yang  akan  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  cawan  petri,  mikro pipet,  corong,  spatula,  oven,  rak  tabung reaksi,  wadah  botol  air  kemasan  600  mL, vortex (Benchmark), alat-alat pyrex,
timbangan digital (AE ADAM),
spektrofotometer UV-Vis (UV-1800).

## Bahan
Bahan yang akan digunakan dalam penelitian  ini  adalah  alga Ulva  lactuca , aluminium foil, kertas saring, tissue, vitamin C  (p.a),  serbuk  DPPH  ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil ), etanol 96%.

## Pengambilan Sampel
Sampel  alga Ulva  lactuca diambil  dari Perairan  Selat  Lembeh,  Kota  Bitung, Provinsi  Sulawesi  Utara.  Sampel  diambil dibawah ke Laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia  Program  Studi  Farmasi  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Preparasi Sampel
Sampel  alga Ulva  lactuca yang  sudah  di ambil  dibersihkan  dan  dipotong  kecil-kecil lalu  di  masukan  kedalam  wadah  botol, sampel  yang  di  dalam  botol  di  isi  dengan etanol  96%  selanjutnya  sampel  diekstraksi menggunakan metode maserasi.

## Ekstraksi Sampel
Sampel  alga Ulva  lactuca sebanyak  230  gr dimasukkan kedalam wadah botol diekstrasi maserasi  dengan  pelarut  etanol  96%  selama 3 kali 24 jam sambil sesekali dikocok. Hasil maserasi  disaring  menggunakan  kertas saring untuk mendapatkan filtrat. Kemudian
hasil  filtrat  yang  didapatkan  dipekatkan dengan  menggunakan  oven  pada  suhu  40 o C sampai etanol menguap.

## Pembuatan Larutan Stok
Diambil  100  mg  ekstrak  alga Ulva  lactuca dilarutkan  dalam  etanol  96%  sampai  100 mL.  Kemudian  dilakukan  pengenceran dengan  masing-masing  konsentrasi  100,  75, 50  dan  25  mg/L.  Dengan  menggunakan rumus pengenceran, yaitu :
V 1 .M 1 = V 2 .M 2
Hasil  V 1 yang  didapatkan  dari  masing- masing  konsentrasi  dimasukkan  ke  dalam gelas  ukur  kemudian  ditambahkan  dengan etanol 96% hingga mencapai tanda batas 10 mL,  selanjutnya  ditutup  menggunakan aluminium foil .

## Pembuatan Larutan DPPH
Diambil  4  mg  DPPH  dilarutkan  dalam etanol  96%  sampai  100  mL.  Kemudian larutan  stok  DPPH  dilakukan  pengujian kontrol,  di  uji  pada  spektrofotometer  UV- Vis dengan panjang gelombang 517 nm.

## Pembuatan Larutan Vitamin C (p.a)
Diambil  10  mg  vitamin  C  (p.a)  kemudian dilarutkan  dalam  etanol  96%  sebanyak  10 mL. Kemudian buat larutan dengan konsentrasi  100,  75,  50  dan  25  mg/L. Masing-masing  konsentrasi  ditambahkan dengan  etanol  96%  sampai  tanda  batas  10 mL dan dibuat sebanyak 3 kali pengulangan. Setelah  pengujian  sampel  dan  pengujian kontrol  dilanjutkan  pengujian  vitamin  C (p.a) pada masing-masing konsentrasi sampel  vitamin  C  (p.a)  dipipet  sebanyak  2 mL dimasukan kedalam tabung reaksi dan di tambahkan 2 mL larutan DPPH. Selanjutnya
divortex  selama  5  detik  dan  diinkubasi selama  30  menit.  Sampel  diuji  pada
spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang 517 nm.
Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  dengan Metode DPPH
Diambil  2  mL  ekstrak  etanol  alga Ulva lactuca dengan konsentrasi 100, 75, 50, dan 25 mg/L dan ditambahkan 2 mL DPPH pada masing-masing  konsentrasi  lalu  divortex selama  5  detik.  Berubahnya  warna  menjadi kuning  menunjukkan  bahwa  masing-masing konsentrasi menunjukkan efisiensi
penangkal radikal bebas, selanjutnya sampel diinkubasi selama 30 menit.
Absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang  517  nm.  Kemudian  diamati perbandingan  dengan  vitamin  C  (p.a) sebagai  standar.  Aktivitas  penangkapan
radikal  bebas  (persen  inhibisi)  dihitung sebagai  persentase  berkurangnya  warna DPPH dengan menggunakan rumus :

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Pengujian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui aktivitas dari penangkal radikal bebas, di uji pada spektrofotometer UV-Vis. Data persen inhibisi ekstrak etanol alga Ulva lactuca dan Vitamin  C  (p.a)  sebagai  pembanding disajikan pada Tabel 1 berikut ini
Tabel 1. Hasil perbandingan pengujian aktivitas antioksidan ekstrak etanol alga
Ulva lactuca dengan vitamin C (p.a).
Konsentrasi Pengulangan Rata-Rata I
II
III Ekstrak Vit. C Ekstrak Vit.C
Ekstrak Vit. C 25 mg/L 47,10 % 69,50 % 47,00 % 70,10 % 47,00 % 76,80 % 47,03 % 72,13 % 50 mg/L 47,90 % 89,10 % 48,30 % 90,20 % 47,10 % 90,80 % 47,76 % 90,03 % 75 mg/L 49,70 % 91,00 % 47,90 % 90,90 % 47,40 % 91,00 % 48,33 % 90,96 % 100 mg/L 55,90 % 91,00 % 50,30 % 90,40 % 48,70 % 91,00 % 51,63 % 90,80 %

## Pembahasan
Uji aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH karena merupakan  metode  yang  sederhana,  mudah, cepat,  serta  hanya  memerlukan  sedikit sampel.  Mekanisme  kerja  dalam  metode DPPH  yaitu  di  mana  senyawa  antioksidan akan bereaksi dengan radikal DPPH melalui mekanisme  donasi  atom  hidrogen  dan menyebabkan  terjadinya  peluruhan  warna DPPH  dari  warna  ungu  ke  kuning  yang kemudian  diukur  pada  panjang  gelombang 517 nm (Hanani et al ., 2005).
DPPH yang merupakan suatu molekul  radikal  bebas  dengan  warna  ungu dapat  berubah  menjadi  senyawa  yang  stabil dengan  warna  kuning  oleh  reaksi  dengan antioksidan, dimana antioksidan memberikan  satu  elektronnya  pada  DPPH sehingga  terjadi  peredaman  pada  radikal bebas DPPH. Elektron yang tidak berpasangan  pada  DPPH  memberikan  suatu absorbansi  yang  kuat,  maksimum  pada  λ  = 517  nm  dan  berwarna  ungu.  Peredaman radikal bebas oleh antioksidan terjadi ketika electron tidak berpasangan menjadi berpasangan dengan adanya donor hidrogen, sehingga  membentuk  DPPH  yang  stabil (Yuhernita dan Juniarti, 2011).
Radikal  bebas  DPPH  stabil  dengan absorbsi maksimum pada panjang gelombang 517 nm dan dapat direduksi oleh senyawa  antioksidan  (Praptiwi,  2006). Panjang  gelombang  serapan  maksimum  (λ maks)  517  nm  larutan  DPPH  dilakukan dengan  mengukur  absorbansi  pada  panjang gelombang antara 400 sampai 800 nm. Hasil yang  didapatkan  absorbansi  kontrol  adalah 0,822.
Metode ektraksi U. lactuca
menggunakan  maserasi.  Metode  maserasi adalah metode penyarian dengan menggunakan perendaman dan pengadukan. Dasar  pemilihan  metode  ini  adalah  karena metode  ini  tidak  menggunakan  pemanasan sehingga senyawa yang terkandung di dalam ganggang  hijau  yang  akan  diidentifikasi tidak rusak (Harborne, 1996).
Ekstraksi  dengan  cara  maserasi adalah  metode  sederhana  yang  paling banyak  digunakan  dan  sesuai,  baik  untuk skala  kecil  maupun  skala  industri  (Agoes, 2007). Ekstraksi alga Ulva lactuca merupakan  proses  pemisahan  bahan  dari campurannya  dengan  menggunakan  pelarut yang sesuai (Mukhriani, 2014).
Pada  analisis  ini,  sampel  alga diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi. Pelarut yang digunakan adalah etanol karena merupakan  pelarut  yang  dapat  melarutkan hampir  semua  senyawa  organik,  baik senyawa polar maupun non polar. Selain itu etanol  juga  mudah  menguap  sehingga mudah dibebaskan dari ekstrak. Konsentrasi ekstrak  etanol  alga Ulva  lactuca yang digunakan adalah 100, 75, 50, dan 25 mg/L. Masing-masing  konsentrasi  dicampurkan dengan larutan DPPH. Campuran dihomogenkan  dan  diinkubasi  selama  30 menit pada tempat gelap dengan suhu 37 0 C. Setelah sampel diinkubasi, kemudian masing-masing ekstrak dilakukan pengukuran absorbansi dengan
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang  gelombang 517 nm.  Pada tiap konsentrasi  dilakukan  sebanyak  3  kali pengulangan.
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang didapatkan  pada  Tabel  1  menunjukkan bahwa  nilai  persen  inhibisi  pada  ekstrak etanol  alga Ulva  lactuca memiliki  aktivitas antioksidan  penangkal  radikal  bebas  dan mengalami  peningkatan  dari  konsentrasi terendah  25  mg/L  dengan  nilai  47,03% sampai  pada  konsentrasi  tertinggi  100  mg/L mendapatkan  nilai  hasil  rata-rata  51,63%. Untuk  hasil  pengujian  perbandingan  ekstrak etanol  alga Ulva  lactuca dengan  vitamin  C mendapatkan  hasil  aktivitas  antioksidan vitamin  C  lebih  tinggi  dibandingkan  ekstrak etanol alga Ulva lactuca .
Pembanding  yang digunakan sebagai kontrol  positif  adalah  vitamin  C  dimana sebagai pembanding karena berfungsi sebagai antioksidan sekunder yaitu menangkap radikal bebas, mencegah terjadinya reaksi berantai, aktivitas
antioksidannya sangat tinggi, mudah diperoleh  dan  vitamin  C  lebih  polar  dari vitamin  yang  lain.  Vitamin  C  mempunyai gugus hidroksi bebas yang bertindak sebagai penangkap  radikal  bebas  (Isnindar,  2011). Hasil penelitian menunjukkan bahwa dengan bertambahnya  konsentrasi  ekstrak  maka absorbansi sampel akan menurun dan tingkat inhibisi  akan  naik.  Absorbansi  sampel  turun karena  elektron  pada  DPPH  menjadi berpasangan  dengan  elektron  sampel  yang mengakibatkan  warna  larutan  berubah  dari ungu  pekat  menjadi  kuning  bening.  Kondisi ini  sesuai  dengan  pernyataan  Green  (2004) bahwa  nilai  tingkat  inhibisi  meningkat seiring  meningkatnya  konsentrasi  sampel dikarenakan semakin banyak senyawa antioksidan pada sampel yang dapat menangkal radikal bebas.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak alga Ulva lactuca dari Peraian Selat Lembeh Kota  Bitung,  memiliki  aktivitas  antioksidan pada  setiap  konsentrasi  dan  aktivitas antioksidan tertinggi terdapat pada konsentrasi  100  mg/L  dengan  nilai  persen inhibisi rata-rata 51,63%.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut mengenai senyawa aktif yang terkandung  dalam  ekstrak  etanol  alga Ulva lactuca dengan  konsentrasi  lebih  besar  dari 100 mg/L dan pengujian aktivitas antioksidan  metode  lain  seperti  metode FRAP ( Ferric Reducing Antioxidant Power ) kemudian  membandingkan  hasilnya  dengan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anggadiredja,  J,  Irawati,  S,  Kusmiyati.
2006. Rumput Laut : Pembudidayaan,  Pengolahan,  dan Pemasaran  Komoditas  Perikanan
Potensial. Penebar Swadaya, Jakarta.
Agoes,  G.  2007.  Teknologi  Bahan  Alam.
Institut Teknologi Bandung, Bandung.
Green,  R.J.  2004.  Antioxsidan  activity  of peanut  plant  Tissues.  North  caroline state  university  departemen  of  food science, Raleigh.
Guiry,  M.D.  2007.  Seasonal  Growth  and Phenotypic  Variation  in  Poryphyra Linearis  (Rhodophyta)  populations on  The  West  Coast  of  Ireland. Journal  of  Phycology . 43 (3)  :  90- 100.
Hanani  E,  Mun’im  B,  Sekarini  R.  2005. Identifikasi  Senyawa  Antioksidan dalam  spons Callispongia sp.  dari Kepulauan  Seribu. Jurnal  Ilmu Kefarmasian. 2 (3) : 127-133.
Harborne,  J.  1996. Metode  Fitokimia  : Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan .  Institut Teknologi Bandung, Bandung.
Haryanti,  M.A.,  Darmanti,  S.,  Izzati,  M.
2008.  Kapasitas  Penyerapan  dan Penyimpanan  Air  pada  Berbagai Ukuran Potgan Rumput Laut Gracilaria  verrucosa  sebagai  Bahan Dasar Pupuk Organik . Jurnal
BIOMA. Semarang:  Lab.  Biologi Struktur  dan  Fungsi  Tumbuhan
Jurusan  Biologi,  FMIPA  Universitas Diponegoro. 10 (1) : 1-6.
Isnindar.  2011.  Isolasi  dan  Identifikasi
Senyawa Antioksidan Daun Kesemek (Diopyroskaki Thunb) dengan  Metode  DPPH. Majalah
Obat Tradisional . 16 (3) : 157-164.
Mukhriani.  2014.  Ekstraksi,  Pemisahan Senyawa,  dan  Identifikasi  Senyawa Aktif. Jurnal  Kesehatan . 7 (2)  :  361- 367.
Praptiwi, M. Harapini, I. Astuti. 2006. Nilai Peroksida  Blume,  (M.  Roemer)
Merr., Biodiversitas. 7 (3): 242-244.
Sutrisna. 2013. Penyakit Degeneratif .
Universitas Muhammadiyah, Surakarta.
Trilaksani,  W.  2003. Antioksidan  :  Jenis, Sumber,  Mekanisme  Kerja  dan
Peran terhadap Kesehatan . Graduate Program/S3. Institut Pertanian Bogor. Yuhernita,  Juniarti.  2011.  Analisa  Senyawa Metabolit  Sekunder  dari  Ekstrak Metanol Daun Surian yang Berpotensi sebagai Antioksidan.
Makara, Sains . 15 (1): 48-52.
Yong  Li,  Siqi  Sun,  Xiaowei  Pu,  Yuzhe Yang,  Fei  Zhu,  Shouyu  Zhang, Nianjun  Xu.  2018.  Evaluation  of Antimicrobial  Activities  of  Seaweed Resources  from  Zhejiang  Coast, China. Sustainability. 10 (7).