Laman Jurnal: https://ppnp.e-journal/agrokompleks

## Isolasi bakteri kandidat probiotik  Bacillus sp dan aplikasinya pada  larva udang
windu (Penaeus monodon Fab.)
Isolation of candidate of probiotic Bacteria bacillus sp and its application to larval tiger shrimp (Penaeus monodon Fab.)

## Muhammad Amir
Program Studi Teknologi Budidaya Perikanan Politeknik Pertanian Negeri Pangkajene Kepulauan *Correspondence author: muhamir288@gmail.com
Diterima Tanggal 21 Juni 2022, Disetujui Tanggal 11 Agustus 2022 DOI 10.51978/japp.v22i2.457

## Abstrak
Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengevaluasi  bakteri  kandidat  probiotik Bacillus sp  yang  efektif  menghambat perkembangan  bakteri V.  harveyi ,  perkembangan  dan  sintasan  larva  udang  windu . Penelitian  terdiri  atas  3 tahap, tahap pertama adalah isolasi kateri, tahap kedua karakterisasi bakteri probiotik dan tahap ketiga adalah aplikasi bakteri probiotik pada larva udang fase nauplius-PL 2 .  Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL), uji daya hambat dilakukan pengukuran luas zona hambat bakteri probiotik secara in vivo , uji patogenitas  bakteri  dilakukan  dengan  uji in  vivo tiga  jenis  bakteri  probiotik  terhadap  larva  udang,  dan  uji efektivitas bakteri dilakukan secara in vivo dari tiga jenis bakteri probiotik.  Tiga jenis bakteri untuk uji in vivo terdiri  atas  isolat 𝐼𝑏 12 , 𝐼𝑏 2𝑏 dan 𝐼𝑏 1𝑎 ,  ditambah  kontrol.    Data  dianalisis  secara  statistik,  perlakuan  yang menunjukkan  pengaruh  signifikan  dilanjutkan  dengan  uji  DMRT  ( Duncan  Multiple  Range  Test) .  Parameter yang  diamati  adalah  daya  hambat  bakteri  kandidat  probiotik  terhadap V.  harveyi ,  pathogenisitas  bakteri kandidat probiotik terhadap post larva ( Pl 2 ), perkembangan dan sintasan larva udang windu.  Hasil penelitian diperoleh  37 isolat, 6 diantaranya potensial menghambat perkembangan V. harveyi atau sekitar 16% dari total isolat. Uji pathogenisitas isolat 𝐼𝑏 12 , 𝐼𝑏 2𝑏 dan 𝐼𝑏 1𝑎 , terhadap post larva udang windu menunjukkan tiga jenis isolat kandidat  probiotik  uji tidak patogen terhadap hewan uji. Uji efektifitas isolat 𝐼𝑏 12 konsentrasi berbeda pada  media  pemeliharaan  larva  tidak  berpengaruh  signifikan  terhadap  perkembangan  larva  udang  windu dibanding dengan kontrol, tetapi berpengaruh  pada sintasan larva udang windu (p<0,05). Isolat 𝐼𝑏 12 dengan konsentrasi 10 3 cfu/ml efektif sebagai kandidat probiotik dan dapat meningkatkan sintasan larva udang windu 58,83%.
Kata Kunci: bakteri kandidat probiotik , Vibrio harveyi , udang windu

## Abstract
The  aim  of  this  study  was  to  effectively  inhibit  Bacillus  sp  probiotic  candidate  bacteria  that  inhibited  the development  of  V.  harveyi  bacteria,  and  the  development  and  survival  of  tiger  shrimp  larvae.  The  study consisted  of  3  stages,  the  first  stage  was  the  isolation  of  the  catteries,  the  second  stage  was  the characterization of probiotic bacteria and the third stage was the application of probiotic bacteria to the larvae of the nauplius-PL2 phase. This study used a completely randomized design (CRD), the  inhibition test was carried out by measuring the area of the bacterial inhibition zone in vivo, and the bacterial pathogenicity test was  carried  out  by  in  vivo  testing  three  types  of  probiotic  bacteria  against  shrimp  larvae,  and  the  bacterial effectiveness test was carried out in vivo from three types of bacteria. probiotic bacteria. Three types of bacteria for in vivo test consisted of isolates 𝐼𝑏 12 , 𝐼𝑏 2𝑏 dan 𝐼𝑏 1𝑎 , plus controls. The data were analyzed statistically, and the treatment which showed a significant effect was continued with the DMRT test (Duncan Multiple Range Test).  Parameters  observed  were  the  inhibition  of  probiotic  candidate  bacteria  against  V.  harveyi,  pathos genericity of probiotic candidate bacteria against post larvae (Pl 2 ), and development and survival of tiger shrimp larvae. The results of the study were 37 isolates, 6 of which had the potential to inhibit the development of V. harveyi or about 16% of the total isolates. Pathogenicity test of isolates Ib 12 , Ib 2b, and I b 1a , against tiger shrimp post larvae, showed that three types of probiotic candidate isolates were not pathogenic to test animals. The effectiveness test of isolate Ib12 at different concentrations in larval rearing media did not significantly affect the development of tiger shrimp larvae compared to controls, but had an effect on tiger shrimp larvae survival
(p<0.05). Ib 12 isolate with a concentration  of 10^3  CFU/ml was  effective  as a probiotic candidate  and could increase the survival of tiger prawn larvae by 58.83%.
Keywords: probiotic candidate bacteria, tiger prawn, Vibrio harveyi ,

## PENDAHULUAN
Dampak  negatif  yang  diakibatkan  oleh penggunaan  antibiotik  dalam  mengatasi V. harveyi dipanti pembenihan (hatchery), menyebabkan  banyak  dilakukan  upaya  untuk mencari  metode  yang  lebih  baik.  Beberapa alternatif  yang  telah  dilakukan  dalam  upaya untuk  mendapatkan  agens  biokontrol  antara lain,  penggunaan  spesies  rumput  laut  sebagai anti  bakterial  terhadap  bakteri  pathogen  pada udang  windu  (Izzati,  2007),  pengembangan biofilm V.  alginolyticus untuk  immunostimulan pada udang (Sharma et al. 2010), penggunaan bakteri  genus  Pseudoalteromonas  sebagai biokontrol  terhadap  Vibrio  (Isnansetyo  et  al. 2009).
Dari  berbagai  penelitian  yang  telah dilakukan tersebut diatas, aplikasi probiotik jenis Bacillus  sp  pada  pembenihan  udang  windu, sumber  dan  konsentrasi  probiotik  belum  jelas sehingga  aplikasinya    belum  banyak  dilakukan di panti pembenihan.
Tujuan    penelitian  ini  adalah  mengisolasi isolasi bakteri kandidat probiotik Bacillus sp dari tiga  sumber  yaitu  usus  ikan  bandeng,  usus induk udang windu, cacing laut dan konsentrasinya,  yang  potensial  menghambat perkembangan V.  harveyi dan  efektif diaplikasikan  di  pembenihan  udang  windu (hatchery).

## BAHAN DAN METODE

## Waku dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan April  hingga  Juli  2021  di  Laboratorium Mikrobiologi  dan  Labotorium  Pembenihan Udang  (Hatchery)    Politeknik  Pertanian  Negeri Pangkajene dan Kepulauan  Sulawesi Selatan .

## Materi Penelitian
Hewan dan Bakteri Uji Hewan uji yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  nauplius  dan  post  larva
( 𝑃𝑙 2 )  udang  windu  ( Penaeus  monodon Fab.) yang  diperoleh  dari  panti  pembenihan  udang yang ada di Kabupaten Barru. Bakteri kandidat probiotik  diisolasi  dari  tiga  sumber  yaitu:  usus ikan  bandeng,  usus    induk  udang  windu  dan cacing laut ( Nereis sp).
Bakteri  pathogen  yang    digunakan sebagai  bakteri  penantang  adalah  bakteri V. harveyi  275 diisolasi  dari  udang  sakit, merupakan  koleksi  Balai  Penelitian  dan Pengembangan Perikanan Pantai Maros, Sulawesi  Selatan  dan  telah  diuji  bersifat pathogen pada larva udang windu.

## Rancangan Percobaan
Penelitian  ini    menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL),  yang  terdiri  dari  :    uji pathogenisitas    dan  uij  efektivitas  kandidat probiotik  terhadap  larva  udang  windu,  terdiri atas 4 perlakuan dan masing-masing 3 kontrol.

## Prosedur Penelitian
Isolasi dan Pemurnian Bakteri  Kandidat probiotik
Sampel bakteri kandidat probiotik dikumpulkan  dari tiga sumber yaitu: usus ikan bandeng,  usus  induk  udang  windu,  dan  cacing laut.    Sampel  ditimbang  masing-masing    25  gr dan digerus menggunakan mortar, lalu ditambahkan  225  ml  larutan  fisiologis    BPW Difco  (Buffer  Pepton  Water  +  1,5%  NaCl). Setelah sampel dan larutan fisiologis tercampur rata,  sebanyak  1  ml  dari  campuran  tersebut ditambahkan  ke  dalam  9  ml  larutan  fisiologis dalam  tabung  reaksi  sehingga  diperoleh konsentrasi 10 −1 atau  pengenceran  10  kali. Pengenceran  serupa  dilakukan  terus  sehingga diperoleh konsetrasi 10 −7 dan 10 −8 , sebanyak 1 ml  dari  masing-masing  sampel  disebar  pada media  MRS-Agar  ( de  Mann  Rogosa  Sharpe ) secara merata lalu diinkubasi pada suhu ruang (28-31 ºC) selama 48 jam.

## Karakterisasi  Bakteri Kandidat Probiotik
Karakter spesifik dari bakteri hasil isolat pada  penelitian  dapat  diketahui  dengan
melakukan uji fisiologi dan biokimia. Berdasarkan hasil pengujian dapat diperkirakan genus bakteri melalui identifikasi menggunakan metode Bergey’s  Manual  of  Determintive Bacteriology serta pendekatan spesies berdasarkan  enzim  yang  dimilikinya  ser ta reaksinya  terhadap  berbagai  jenis  karbohidrat (Holt, 1994).
Karakterisasi  secara  morfologi  meliputi bentuk  tepian,  elevasi,  warna  koloni,  dan  sifat gram  dengan  pewarnaan  gram.    Sedangkan karakterisasi  secara  biokimia  meliputi  uji katalase, indol, oksidasi fermentatif, dan sitrat.
Uji  Daya  Hambat  secara  In  Vitro    Bakteri Kandidat Probiotik terhadap V. harveyi 275
Isolat  murni  bakteri  kandidat  probiotik yang  diperoleh  diuji  daya  hambatnya  terhadap V. harveyi 275 secara in vitro (Widanarni et al, 2003).  Isolat  bakteri  kandidat  probiotik  dan V. harveyi 275  yang  berumur  24  jam  sebanyak  1 ose disuspensikan ke dalam 10 ml nutrien broth + 1,5% NaCl steril di dalam tabung reaksi 20 ml dengan menggunakan vortex. Sebanyak 0,1 ml (1,34X 10 5 cfu/mL)  suspensi V.  harveyi 275 disebar pada media NA dengan bantuan batang penyebar  dan  dibiarkan  sampai  agak  kering. Paper  disk  steril  diameter  0,5  mm  diletakkan diatas media NA yang telah diberi V. harveyi 275 secara aseptik, selanjutnya dengan
menggunakan  mikropipet  sebanyak  0,5  ml (1,5x 10 7 cfu/ml  )  suspensi  bakteri  kandidat probiotik  diteteskan  di  atas paper  disk. Uji  ini dilakukan  dengan  3  ulangan  dan  masing- masing  1  kontrol    menggunakan  larutan fisiologis  steril.  Setelah    inkubasi  pada  suhu ruang  (28-31 ℃ )  selama  24  jam,  zona  hambat diukur dan nilainya dirata-ratakan.
Uji Pathogenisitas Kandidat Probiotik terhadap Post Larva (PL ₂ ) Udang Windu Tiga    isolat  yang  memiliki  zona  hambat terluas berdasarkan uji in vitro , diuji patogenesitasnya  pada  post  larva  ( 𝑃𝑙 2 )  udang windu. Pengujian dilakukan dengan menambahkan suspensi bakteri kandidat probiotik  dengan  konsentrasi 10 8 cfu/mL  (Hala 1999 dalam Muliani, 2002) secara perendaman (Hameed 1995 dalam Muliani,  2002). PL udang dipelihara  dalam  toples  kaca  yang  diisi  air  laut bersih 2 L, disusun dalam sebuah bak fibre glass yang  telah  diisi  air  laut  setinggi  permukaan
media  pemeliharaan  serta  diberi  heather  dan aerasi  untuk  menjaga  kestabilan  suhu  dalam wadah  penelitian  ( 28 − 32 𝐶 ).  Kepadatan  post larva  20  ekor/L  dan  diberi  pakan  artemia  2-3 individu/ml. Pemeliharaan larva udang dilakukan  selama  24  jam  dan  pada  akhir penelitian  dihitung  sintasan    larva  udang  dan dibandingkan  dengan  kontrol,  yakni  perlakuan tanpa penambahan bakteri kandidat probiotik.

## Uji  Efektifitas  Bakteri  Kandidat  Probiotik terhadap Larva Udang Windu
Satu  isolat  bakteri  kandidat  probiotik yang menghasilkan sintasan paling tinggi dipilih untuk  diuji  efektifitasnya  dalam  meningkatkan perkembangan dan sintasan larva udang windu dengan konsentrasi berbeda. Setelah kokultivasi  dengan  larva  udang  selama  6  jam, bakteri kandidat probiotik dimasukkan ke dalam wadah  pemeliharaan  larva  udang  dengan masing-masing  konsentrasi  tersebut  diatas. Pengamatan  dilakukan  sejak  fase  nauplius ditebar sampai larva udang memasuki perkembangan fase post larva ( 𝑃𝑙 1 ) selama 11 hari pengamatan, dan selama penelitian diamati perkembangan  dan  dihitung  sintasan  larva udang  diakhir  penelitian.  Selama  percobaan larva udang pada fase zoea diberi pakan alami jenis skeletonema dengan  kepadatan  5.000- 15.000  sel/ml,  sedangkan  pada  fase  mysis diberikan 20.000-40.000 sel/ml.

## Parameter yang Diamati
Daya  Hambat  Bakteri  Kandidat  Probiotik terhadap V. harveyi 275
Pada  uji  daya  hambat  bakteri  kandidat probiotik  terhadap  perkembangan V.  harveyi 275  dengan  metoda  Kirby-Bauer,  pengamatan dilakukan  dengan  melihat  ada  tidaknya  zona hambat disekitar kertas cakram untuk kemudian diukur diameter zona hambatnya.
Pathogenisitas  Bakteri  Kandidat  Probiotik terhadap Post Larva ( 𝑷𝒍 𝟐 ) Udang Windu Uji  pathogenisitas  bakteri  kandidat probiotik  terhadap  post  larva  udang  windu dilakukan secara perendaman, hal ini dimaksudkan untuk mengetahui pengaruh hasil isolat  bakteri  kandidat  probiotik  terhadap sintasan larva udang windu.

## Perkembangan  Larva Udang Windu
Perkembangan  larva  akan  diketahui sampai  sejauh  mana  pengaruh  penambahan bakteri  kandidat  probiotik  dengan  konsentrasi berbeda  terhadap  kecepatan  pergantian    fase larva ke fase berikutnya (dari nauplius ke zoea, zoea ke mysis, dan mysis ke post larva (PL)).

## Sintasan Larva Udang Windu
Sintasan  larva  udang  diamati  pada  uji patogenisitas  dan  aplikasi  bakteri  kandidat probiotik . Sintasan    larva  udang  dihitung dengan rumus menurut Effendie (2003) sebagai berikut :
Keterangan : SR  =  Sintasan (%) N t =  Jumlah  udang  yang  hidup  pada  akhir penebaran (ekor)
N 0 =  Jumlah  udang  yang  hidup  pada  awal penelitian (ekor)

## Analisis Data
Data yang diperoleh berupa sintasan dan perkembangan  larva  udang  windu  dianalisis dengan menggunakan analisis ragam (ANOVA). Perllakuan yang menunjukkan pengaruh signifikan,  dilanjutkan  dengan  uji  DMRT ( Duncan  Multiple  Range  Test) pada  selang kepercayaan 95% ( 𝛼 = 0,05) . Sedangkan daya hambat  bakteri  kandidat  probiotik  dianalisis secara deskriptif.

## HASIL

## Isolasi  dan  Pemurnian  Bakteri  Kandidat Probiotik jenis Bacillus sp
Ditemukan 37 isolat dari 3 sumber yaitu 14 diantaranya diisolasi dari usus ikan bandeng, 10  isolat  dari  usus  induk  udang  windu  dan  13 isolat dari cacing laut. Penampilan koloni isolat- isolat tersebut pada media MRS-agar bermacam-macam.  Warna  koloni  terdiri  dari ungu,  putih,  putih kecoklatan,  putih  susu,  putih berkabut, putih serabut, putih kekuningan, putih buram,  putih  keruh,  coklat  bening,  coklat berlendir,  crem,  crem  bening.  Ukuran  dan bentuk  koloninya  juga  bermacam-macam  ada yang bulat kecil, bulat sedang, bulat besar,coccus,  cekung,  cembung,    batang pendek dan beberapa menyebar ( swarming ).

## Karakterisasi  Bakteri Kandidat Probiotik
Hasil karakterisasi fisiologi dan biokimia ke  37  isolat,  hanya  6  isolat    potensial  sebagai bakteri kandidat probiotik yang memiliki karakter fisiologi  dan  biokimia  jenis  bakteri Bacillus sp berdasarkan  metode Bergey’s  Manual  of Determintive Bacteriology .
Uji    Daya  Hambat  secara  In  Vitro  Bakteri Kandidat Probiotik
Berdasarkan hasil penapisan terhadap 37 isolat,  6  diantaranya  potensial  menghambat V. harveyi 275  (sekitar  16%)  dari  total  isolat adalah:  isolat 𝐼𝑏 1𝑎 (8,0)  mm); 𝐼𝑏 2𝑏 (8,9  mm); 𝐼𝑏 12 (11,0); 𝑈𝑤 1 (7,5  mm); 𝑈𝑤 2 (7,3  mm); 𝐶𝑙 10 (6,7 mm).
Wilayah  jernih  di  sekitar  koloni  atau pertumbuhan V.  harveyi 275 menunjukkan bahwa  senyawa  antimikroba  yang  dihasilkan bakteri  kandidat  probiotik  tersebut  mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri V.  harvey i 275. Kepekaan bakteri V. harveyi 275 terhadap bahan  antimikroba  ditunjukkan  oleh  luasnya wilayah jernih disekitar kertas cakram yang telah ditetesi isolat bakteri kandidat probiotik.
Uji Pathogenisitas Bakteri Kandidat Probiotik  Terhadap  Post  Larva  (PL ₂ )  Udang Windu
Tiga  isolat    yang  menghasilkan  zona hambat  terluas  yaitu 𝐼𝑏 12 , 𝐼𝑏 2𝑏 dan 𝐼𝑏 1𝑎 ,  diuji pathogenisitasnya  terhadap  post  larva  udang windu.  Dari  hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa bakteri kandidat probiotik yang diberikan pada  post  larva  ( 𝑃𝑙 2 )  udang  windu  tidak menyebabkan  udang  sakit  atau  tidak  bersifat pathogen  pada  larva  udang  windu.  Hal  ini terlihat  sintasan  yang  dihasilkan  cukup  tinggi yaitu  antara  89,17 –  97,5%  (Gambar  1).  Hasil analisis ragam menunjukkan perlakuan beberapa  jenis  isolat  kandidat    probiotik  tidak berpengaruh  nyata    terhadap  sintasan  larva udang  windu  (p>0,05)  dengan  kontrol,  dengan demikian  isolat  tersebut  dapat  digunakan sebagai  probiotik  karena  tidak  mengganggu kondisi  fisiologi  hewan  uji.    Bahkan  pada percobaan  dengan  konsentrasi 10 3 cfu/ml menunjukkan bahwa dengan penambahan 𝐼𝑏 12 menghasilkan sintasan larva udang windu yang lebih tinggi dibanding kontrol.
SR = 𝑁 𝑡 𝑁 0 ⁄ X 100%
Keterangan: A. Kontrol B . Isolat 𝐼𝑏 1𝑎 C.  Isolat 𝐼𝑏 2𝑏 D. Isolat 𝐼𝑏 12
Gambar 1. Sintasan larva udang windu pada uji pathogenisitas bakteri kandidat probiotik
Uji  Efektifitas  Bakteri  Kandidat  Probiotik pada Larva Udang
Isolat 𝐼𝑏 12 dengan  sintasan  97,5%, dipilih  untuk  di  uji  efektifitasnya    pada  media pemeliharaan  larva  udang  windu.  Efektifitas penambahan bakteri kandidat probiotik dengan konsetrasi  berbeda    terhadap  kecepatan perkembangan  dari  fase  larva    ke  fase berikutnya (dari nauplius ke  zoea, dan zoea ke mysis  serta  mysis  ke  PL).  Hasil  pengujian menunjukkan  bahwa  pada  perkembangan
nauplius, zoea dan mysis membutuhkan waktu lebih  pendek  pada  semua  perlakuan  bakteri kandidat probiotik dibandingkan kontrol (Gambar  2, 3  dan  4).  Hasil  analisis  ragam menunjukkan bahwa perlakuan bakteri kandidat probiotik konsentrasi berbeda tidak berpengaruh  nyata    terhadap  perkembangan larva  udang  windu  (p>0,05)  dibanding  dengn kontrol.  Hal  ini  diduga  karena  pebedaan  antar perlakuan terlalu dekat serta konsentrasi  yang dicobakan sangat rendah.

## Keterangan:
A. Kontrol     B. 10 3 cfu/ml    C. 10 4 cfu/ml      D. 10 5 cfu/ml
Gambar 2.  Waktu yang dibutuhkan  larva udang windu  dari fase Nauplius ke fase Zoea
Sedangkan  sintasan  larva  udang  windu setelah 11 hari pemeliharaan dengan perlakuan isolat 𝐼𝑏 12 dosis  berbeda  dapat  meningkatkan sintasan  larva  udang  windu  dibanding  kontrol (Gambar 5). Hasil analisis ragam menunjukkan perlakuan konsentrasi berbeda bakteri kandidat probiotik  berpengaruh  nyata  terhadap  sintasan larva udang windu (p<0,05). Hasil yang berbeda
ini  yaitu  sebesar  15,66%,    nilai  tersebut  dapat berperan  dalam  meningkatkan  hasil  produksi benur  di  panti  pembenihan  udang  windu (hatchery), dengan demikian konsentrasi  yang efektif  isolat 𝐼𝑏 12 yang  dapat  diberikan  pada media pemeliharaan larva udang windu adalah 10 3 cfu/ml.
80 85 90 95 100 105 Kontrol Ib1a Ib2b Ib12 S int asa n (% ) Kode Isolat 42,00 44,00 46,00 48,00 50,00 52,00 54,00 A B C D
P erk em b an g an Na u p li u s (jam ) Perlakuan
Keterangan:
A. Kontrol      B. 10 3 cfu/ml  C. 10 4 cfu/ml D. 10 5 cfu/ml
Gambar 3.  Waktu yang dibutuhkan larva udang windu dari fase Zoea ke fase Mysis.
Keterangan:
A. Kontrol B. 10 3 cfu/ml   C. 10 4 cfu/ml D. 10 5 cfu/ml
Gambar 4. Waktu yang dibutuhkan larva udang windu dari fase Mysis ke fase Post Larva.
Keterangan:
A. Kontrol       B. 10 3 cfu/ml      C. 10 4 cfu/ml    D. 10 5 cfu/ml
Gambar 5. Sintasan  larva udang windu pada uji efektifitas bakteri kandidat probiotik konsentrasi berbeda.

## PEMBAHASAN
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa bakteri  kandidat  probiotik    terpilih  diduga merupakan  bakteri  jenis Bacillus sp  sesuai
dengan  uji  karakteristik  biologi    maupun biokimia.  menggunakan  metode Bergey’s Manual  of  Determintive  Bacteriology (Holt, 1994).
0,00 20,00 40,00 60,00 80,00 100,00 120,00 140,00 A B C D Perlakuan Pe rk e m b a n g a n Zo e a ( ja m ) 95,00 100,00 105,00 110,00 115,00 120,00 125,00 130,00 A B C D Perlakuan P er kem bangan My si s (j am ) 0 10 20 30 40 50 60 70 A B C D Perlakuan Sint as an (%)
Uji daya hambat secara in vitro, 6 isolat potensial menghambat V. harveyi 275. Wilayah jernih  di  sekitar  koloni  atau  pertumbuhan V. harveyi 275  menunjukkan  bahwa  senyawa antimikroba  yang  dihasilkan  bakteri  kandidat probiotik tersebut mampu menghambat pertumbuhan bakteri V. harvey i 275. Kepekaan bakteri V.  harveyi 275  terhadap  bahan antimikroba  ditunjukkan  oleh  luasnya  wilayah jernih disekitar kertas cakram yang telah ditetesi isolat bakteri kandidat probiotik.
Verschuere et  al. (2000)  menyatakan bahwa  populasi  mikroba  dapat  melepaskan substansi  kimia  yang  memiliki  kemampuan bakterisidal  atau  bakteriostatis  yang  dapat mempengaruhi  populasi  mikroba  lain.  Secara umum  kemampuan menghambat  pertumbuhan bakteri  lain  dikarenakan  satu  atau  kombinasi beberapa  faktor  seperti  :  produksi  antibiotik bakteriosin, siderophores,  lysozymes, protease dan atau hydrogen peroksida atau mempengaruhi pH media dengan menghasilkan asam organik, dan penghambatan pertumbuhan bakteri tidak selalu dapat diamati dengan  melihat  adanya  zona  bening  pada media agar.
Uji  pathogenisitas  terhadap  3  isolat yang  menghasilkan  daya  hambat  terluas  yaitu 𝐼𝑏 12 , 𝐼𝑏 2𝑏 dan 𝐼𝑏 1𝑎 ,  menunjukkan    bahwa bakteri  kandidat  probiotik  yang  diberikan  pada post  larva  ( 𝑃𝑙 2 )  udang  windu  tidak menyebabkan  udang  sakit  atau  tidak  bersifat pathogen  pada  larva  udang  windu.  Hal  ini terlihat  sintasan  yang  dihasilkan  cukup  tinggi yaitu antara 89,17 – 97,5%. Hasil analisis ragam menunjukkan  perlakuan  ke-3  jenis  isolat kandidat    probiotik  tidak  berpengaruh  nyata terhadap  sintasan  larva  udang  windu  (p>0,05) dibandingkan dengan kontrol.
Hasil penelitian Muliani (2002) menunjukkan bahwa perendaman bakteri kandidat biokontrol yang diisolasi dari sedimen laut  (BL542)  dan  air  laut  (BL546)  dan  (BL548) Pulau  Balang  Lompo  Sulawesi  Selatan  pada kepadatan 10 5 , 10 6 , 10 7 ,  dan 10 8 cfu/ml selama  24  jam  perendaman  tidak  bersifat pathogen pada larva udang windu.
Uji  efektifitasnya  isolat 𝐼𝑏 12 dengan sintasan 97,5%, pada media pemeliharaan larva udang windu konsentrasi berbeda,
menunjukkan bahwa perlakuan bakteri kandidat probiotik
konsentrasi berbeda tidak berpengaruh  nyata    terhadap  perkembangan
larva  udang  windu  (p>0,05)  dibanding  dengn kontrol.  Hal  ini  diduga  karena  pebedaan  antar perlakuan terlalu dekat serta konsentrasi  yang dicobakan sangat rendah. Rata-rata waktu yang dibutuhkan  perkembangan  larva  udang  windu dari  fase  Nauplius  ke  fase  Zoea.  berturut-turut yaitu:  perlakuan  (A)  kontrol  50,00  jam,  (B) 10 3 cfu/ml 48,67 jam, (C) 10 4 cfu/ml 48,33 jam, (D) 10 5 cfu/ml  45,67  jam  dan  perkembangan  larva udang windu dari fase Zoea ke Mysis. berturut- turut yaitu: perlakuan (A) kontrol 114,67 jam, (B) 10 3 cfu/ml  108,67  jam,  (C) 10 4 cfu/ml  109,67 jam,  (D) 10 5 cfu/ml  106,00  jam,  serta perkembangan  larva  udang  windu  dari  fase Mysis  ke  fase  Post  Larva  (PL).  berturut-turut yaitu: perlakuan (A) kontrol 113,33 jam, (B) 10 3 cfu/ml  109,33  jam,  (C) 10 4 cfu/ml  112,00  jam, (D) 10 5 cfu/ml  106,67  jam.  Hasil  ini  tidak berbeda  jauh  apa  yang  telah  dihasilkan  oleh Silas et  al , (1979) yaitu: Fase nauplius ke fase zoea  dijalani  selama  40-55  jam,  Fase  zoea  ke fase  mysis  dijalani  selama  108-144  jam,  Fase mysis ke fase post larva (PL) dijalani selama 72- 144 jam.
Sedangkan  sintasan  larva  udang  windu setelah 11 hari pemeliharaan dengan perlakuan isolat 𝐼𝑏 12 konsentrasi  berbeda,  yaitu:  pada perlakuan  (A)  kontrol  43,17%,  (B) 10 3 cfu/ml 58,83%,  (C) 10 4 cfu/ml  50,17%,  (D) 10 5 cfu/ml 44,17%.    Hasil  analisis  ragam  menunjukkan perlakuan konsentrasi berbeda bakteri kandidat probiotik berpengaruh  nyata terhadap sintasan larva udang windu (p<0,05).
Hasil  yang  berbeda    ini  yaitu  sebesar 15,66%,    nilai  tersebut  dapat    berperan  dalam meningkatkan  hasil  produksi  benur  di  panti pembenihan  udang  windu  (hatchery),  dengan demikian  konsentrasi    yang  efektif  isolat 𝐼𝑏 12 yang dapat diberikan pada media pemeliharaan larva udang windu adalah 10 3 cfu/ml. Konsentrasi  bakteri  kandidat  probiotik  tersebut diduga  mengandung  makro  dan  mikro  nutrient yang  dibutuhkan  larva  udang  dapat  memberi kontribusi  enzim  untuk  pencernaan  yang menyebabkan  udang  dapat  mencerna    pakan lebih  baik,  sehingga  nutrisi  yang  diserap  oleh tubuh larva udang lebih banyak, yang akhirnya akan  memberikan  sintasan  yang  lebih  tinggi (Ayuzar, 2008).

## KESIMPULAN
Terdapat  enam  isolat  bakteri  hasil penapisan yang dapat menghambat perkembangan Vibrio  harveyi secara  in  vitro, yaitu  isolat 𝐼𝑏 1𝑎 , 𝐼𝑏 2𝑏 , 𝐼𝑏 12 , 𝑈𝑤 1 , 𝑈𝑤 2 , 𝐶𝑙 10. Pemberian bakteri kandidat probiotik konsentrasi berbeda pada larva tidak berpengaruh  nyata  terhadap  perkembangan larva udang windu (P>0,05). Pemberian bakteri kandidat  probiotik  konsentrasi  berbeda  pada larva  berpengaruh    nyata  terhadap  sintasan larva  udang  windu  (P<0,05).    Isolat 𝐼𝑏 12 dengan  konsentrasi 10 3 cfu/mL  menghasilkan sintasan tertinggi.
Perlu penelitian lebih lanjut untuk mengevaluasi  sifat  fisiologi  dan  genetik  isolat 𝐼𝑏 12 dan  potensinya  sebagai  bakteri  probiotik dalam menghambat V. harveyi untuk dimanfaatkan pada panti pembenihan udang.

## DAFTAR PUSTAKA
Ayuzar  E.  (2008).  Mekanisme  Penghambatan Bakteri Probiotik Terhadap Vibrio harveyi pada  Larva  Udang  Windu  (Penaeus monodon). Tesis.
Program Pascasarjana IPB. Bogor. 50p. Effendi  R.  (2003).  Telaah  Kualitas  Air  Untuk Pengelolaan Sumberdaya Dan Lingkungan Perairan. Yokyakarta:
Kanisius.
Holt  JG,  Krieg  NR,  Sneath  PHA,  Staley  JT, Williams ST. (1986), Bergey’s Manual of Systematic  Bacteriology  Vol.2.  Williams & Wilkins, Baltimore.pp.1104-1137.
Isnansetyo A, Istiqomah I, Muhtadi, Sinansari S, Hernawan  RK,  Triyanto,  Widada  J.  A. (2009).    Potential  bacterial  biocontrol agent,  strain  S2V2  against  pathogenic marine Vibrio in  aquaculture.  World  J Microbiol Biotechnol.; 25: 1103-13. Izzati,  M.  (2007) Skreening  Potensi  Antibakteri pada  Beberapa  Spesies  Rumput  Laut terhadap  Bakteri  Patogen  pada  Udang Windu. BIOMA,  9  (2).  pp.  62-67.  ISSN 1410-8801
Muliani, A. Suwanto, dan Y. Hala. (2002). Isolasi dan  karakterisasi  bakteri  asal  Sulawesi untuk biokontrol penyakit Vibriosis pada larva udang windu ( Penaeus monodon ). Hayati, 10:6-11.
Sharma  S.  R.  K,  K.  M.  Shankar,  M.  L. Sathyanarayana, Raj Reddy Patil, H. D. Narayana  Swamy  and  Suguna  Rao (2010). Development of biofilm of Vibrio alginolyticus for  oral  immunostimulation of shrimp. Aquaculture International, vol. 19. Number 3, 423-430.
Silas, E G and Muthu, M S and Pillai, N N and
George, K
V. (1979). Larval development-Penaeus
monodon
Fabricius. CMFRI Bulletin, 28 . pp.2-11. Verschuere  L,  Rombaut  G,  Sorgeloos  P,
Verstraete W. (2000). Probiotic  bacteria as biological control agents in aquaculture.  Microbial  Mol  Biol  Rev 65:655-671.
Widanarni,  Suwanto  A,  Sukenda,  Lay  BW.
(2003).  Potency  of  Vibrio  isolates  for biocontrol  of vibriosis in  tiger  shrimp ( Penaeus  monodon )  larvae.  Biotropia 20: 11-23.