130 Jurnal Agrotek Tropika 3(1):130-133, 2015 J.  Agrotek    Tropika.    ISSN  2337-4993 Vol.  3,   No.  1: 130  –  133,    Januari  2015

## KEMAMPUAN Trichoderma sp. DAN FILTRATNYA DALAM MENEKAN PERTUMBUHAN Sclerotium  rolfsii  SECARA  IN  VITRO
Indah Puspita Dewi, Tri Maryono,  Titik Nur Aeny & Suskandini Ratih
Jurusan Agroteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Lampung Jl. Prof. Dr. Soemantri Brodjonegoro no. 1 Bandar Lampung 35145 Email : indah09may@yahoo.com

## ABSTRAK
Salah  satu  penyebab  rendahnya  produksi  kedelai  nasional  adalah  adanya  serangan  penyebab  penyakit  rebah  kecambah. Pengendalian  yang  dapat  dilakukan  adalah  dengan  menggunakan  agen  antagonis.  Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui kemampuan Trichoderma sp. dan filtratnya dalam menekan pertumbuhan Sclerotium rolfsii secara in vitro. Pengujian terdiri atas uji antagonisme dengan metode kultur ganda dan uji filtrat Trichoderma sp. terhadap pertumbuhan S. rolfsii. Percobaan disusun dalam Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan lima ulangan. Data yang diperoleh dianalisis dengan sidik ragam dan dilanjutkan dengan uji BNT pada taraf nyata 5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa Trichoderma sp. dan filtratnya mampu menekan pertumbuhan S. rolfsii secara in  vitro. Isolat Trichoderma sp.  yang kemampuan penghambatannya paling tinggi adalah isolat Trichoderma harzianum .
Kata kunci : Rebah kecambah, Sclerotium rolfsii, Trichoderma sp.

## PENDAHULUAN
Kedelai merupakan komoditas tanaman pangan yang penting di Indonesia. Produksi kedelai di Indonesia mencapai  angka  0,8  juta  ton  per  tahun,  sedangkan kebutuhan kedelai di Indonesia mencapai 2,5 juta ton per tahunnya (Kementan, 2013). Untuk itu perlu adanya upaya dalam meningkatkan produksi kedelai.
Upaya  meningkatkan  produksi  kedelai  masih mengalami banyak kendala, di  antaranya: lahan  yang kurang tersedia bagi petani kedelai dan serangan hama dan penyebab penyakit. Serangan hama dan penyebab penyakit  dapat  mengakibatkan  penurunan  produksi tanaman  kedelai.  Salah  satu  penyakit  yang  sering ditemukan  dalam  budidaya  tanaman  kedelai  adalah penyakit  rebah  kecambah  ( damping-  off )  yang disebabkan oleh Sclerotium rolfsii .
Patogen S. rolfsii relatif sulit dikendalikan karena mampu bertahan selama bertahun-tahun di dalam tanah dalam bentuk sklerotia dan mempunyai kisaran inang yang  luas  (Semangun,  1993).  Pengendalian menggunakan fungisida belum memberikan hasil yang baik, justru memberikan dampak negatif. Oleh karena itu diperlukan cara pengendalian lain yang lebih ramah lingkungan  (Soesanto,  2008)  misalnya  pengendalian hayati dengan agen antagonis.
Salah satu jamur antagonis yang sering digunakan adalah Trichoderma sp. Trichoderma sp.  merupakan salah satu jamur antagonis yang banyak digunakan untuk mengendalikan jamur patogen tumbuhan. Mekanisme antagonis  jamur Trichoderma sp.  adalah  parasitisme, lisis, antibiosis, dan kompetisi ruang (Soesanto, 2008). Selain dapat digunakan langsung untuk mengendalikan patogen, filtrat Trichoderma sp. juga dilaporkan dapat mengendalikan patogen tumbuhan (Radder, 2005).

## BAHAN  DAN  METODE
Sebanyak  4  isolat Trichoderma sp.  yaitu T. koningii , T. koningii , T. harzianum , dan Trichoderma sp. yang digunakan dalam percobaan ini didapatkan dari koleksi  Laboratorium  Penyakit  Tanaman,  Bidang Proteksi  Tanaman,  Jurusan Agroteknologi,  Fakultas Pertanian Universitas Lampung. Keempat isolat tersebut diperoleh dari hasil isolasi tanah rizosfer tanaman cabai.
Keempat isolat Trichoderma sp. yang digunakan berasal dari pengelompokkan 11 isolat yang dibedakan dari warna dan pola koloni jamur. Biakan Trichoderma sp.  terlebih  dahulu  diremajakan  pada  media  PDA sebelum  digunakan  dalam  pengujian.  Peremajaan dilakukan dengan cara meletakkan potongan berbentuk cakram Trichoderma berukuran 4 mm ke dalam  me-
dia PDA baru dan kemudian diinkubasi selama 7 hari. Setelah  tumbuh, Trichoderma sp.  diperbanyak  pada media  PDA  baru  dan  selanjutnya  digunakan  untuk pengujian.
Untuk mendapatkan filtrat Trichoderma , jamur ini  terlebih dahulu dibiakkan pada media cair potato dextrose  broth (PDB).  Komposisi  media  cair  yang digunakan sama dengan komposisi media PDA, tetapi tanpa menggunakan agar. Sebanyak 5 potongan cakram Trichoderma sp. dimasukkan dalam  500 ml media cair yang  sudah  disiapkan  dalam  tabung  Erlenmeyer, kemudian  diinkubasi  selama  7  hari  pada  suhu  ruang dengan  pencahayaan  matahari.  Setelah  7  hari,  media cair tesebut disaring untuk memisahkan struktur jamur dengan cairannya. Filtrat tersebut selanjutnya digunakan dalam pengujian.
Pengujian dengan metode kultur ganda dilakukan untuk mengetahui kemampuan Trichoderma sp. dalam kemampuan parasitisme, persaingan ruang dan nutrisi, serta antibiosis dan lisis. Biakan Trichoderma sp. yang telah diinkubasi selama 4 hari kemudian dipindahkan ke dalam media PDA yang baru dengan menggunakan cork borer berdiameter  4  mm.  Isolat  patogen  yang  telah diinkubasi selama 4 hari kemudian dipindahkan ke me- dia PDA yang sama dengan Trichoderma sp. Potongan cakram Trichoderma sp.  diletakkan  3  cm  dari  tepi cawan,  sedangkan  potongan  cakram    isolat  patogen diletakkan 3 cm dari tepi cawan pada bagian sisi depan cuplikan Trichoderma sp, kemudian diinkubasi (Gambar 1). Peubah yang diamati adalah jari-jari pertumbuhan koloni patogen. Pengukuran jari-jari pertumbuhan koloni
patogen  dilakukan  dengan  cara  mengukur  jari-jari pertumbuhan koloni yang tumbuh ke arah biakan Tri- choderma sp. sebagai data perlakuan dan ke arah tepi cawan  sebagai  data  kontrol.  Pengukuran  jari-jari dilakukan setiap hari sampai pertumbuhan koloni pada kontrol  mencapai  tepi  cawan.  Untuk mengetahui  ada tidaknya lisis dan antibiosis dilakukan pengamatan pada titik  pertemuan  patogen  dan Trichoderma sp.  yang ditunjukkan  adanya  batas  yang  jelas  antara  koloni patogen dan Trichoderma sp. atau adanya warna kuning atau coklat yang dilihat dari bagian bawah cawan.
Pada pengujian ini, media yang digunakan adalah campuran filtrat Trichoderma dan media PDA dengan perbandingan 1:1. Sebanyak 25 ml filtrat Trichoderma dicampur dengan 25 ml media PDA yang belum jadi, lalu diotoklaf pada suhu 121 o C selama 10 menit. Untuk perlakuan kontrol, media yang digunakan hanya media PDA tanpa filtrat Trichoderma. Setelah selesai diotoklaf dan cukup dingin, media uji tersebut dituang dalam cawan petri dan dibiarkan membeku. Setelah beku, sebanyak 1 sklerotia S. rolfsii diletakkan tepat ditengah cawan lalu diinkubasi  pada  suhu  ruang  dengan  pencahayaan matahari.
Peubah yang diamati adalah pertumbuhan koloni jamur S.  rolfsii .  Pengamatan  dilakukan  setiap  hari dengan  mengukur  pertumbuhan  koloni S.rolfsii . Pengukuran  dihentikan apabila pada perlakuan kontrol pertumbuhan koloni S.rolfsii telah mencapai tepi cawan petri. Perlakuan pada percobaan ini adalah filtrat dari 4 isolat Trichoderma sp.  ditambah  dengan  1  perlakuan kontrol. Masing-masing perlakuan diulang sebanyak 5 kali.  Setelah  data  jari-jari  dan  diameter  didapatkan kemudian  dihitung  persentase  penghambatan Tricho- derma sp. terhadap pertumbuhan koloni patogen dengan rumus (Nduagu et al ., 2008)  :
P adalah persentase penghambatan, K 0 = jari-jari koloni patogen ke arah tepi cawan petri (kontrol), dan K 1 = jari-jari koloni patogen ke arah biakan Trichoderma sp.

## HASIL  DAN  PEMBAHASAN
Hasil pengujian antagonisme dengan metode kultur ganda menunjukkan bahwa semua isolat Trichoderma yang diuji mampu menghambat pertumbuhan S. rolfsii (Tabel 1). Keempat isolat Trichoderma sp. pada 1 hsi dan 2 hsi tidak berbeda nyata, namun pada 3 hsi, isolat T. koningii 1 berbeda nyata dibandingkan dengan ketiga
% 100 0 1 0    K K K P
Gambar  1.  Tata  letak  jamur Trichoderma sp.  dan S. rolfsii pada uji antagonisme dalam cawan petri.(P = biakan S. rolfsii , T = biakan Tri- choderma sp.).
isolat Trichoderma sp.  yang  lain  ( T.  koningii 2, T. harzianum dan Trichoderma sp.).  Lalu,  setelah dilakukan  uji  lanjut  dengan  BNT,  terlihat  adanya perbedaan persentase penghambatan isolat T. koningii 1 dibandingkan dengan isolat lainnya.Isolat Trichoderma yang  tingkat  penghambatannya  paling  rendah  adalah isolat T. koningii 1 pada 3 hsi.
Hasil pengujian filtrat Trichoderma sp. terhadap pertumbuhan S. rolfsii menunjukkan bahwa semua filtrat isolat Trichoderma yang  diuji  mampu  menghambat pertumbuhan S.  rolfsii .  Filtrat  isolat Trichoderma dengan persentase penghambatan paling rendah adalah filtrat dari isolat T. koningii 1 (Tabel 2). Bila dilihat dari laju  pertambahan  pertumbuhan S.  rolfsii setiap  hari, terlihat bahwa filtrat dari isolat T. koningii 1  memiliki laju pertambahan pertumbuhan tertinggi. Hasil analisis statistik laju pertambahan pertumbuhan S. rolfsii dan diameter koloni S. rolfsii pada 4 hsi menunjukkan bahwa kemampuan Trichoderma isolat T.  harzinum berbeda nyata  dengan  isolat T.  koningii 1, T.  koningii 2  dan Trichoderma sp.  dalam  kemampuan  menghambat pertumbuhan koloni S. rolfsii .
Hasil penelitian menunjukkan bahwa penggunaan Trichoderma sp.  atau  filtratnya   mampu  menekan pertumbuhan S. rolfsii . Hal ini terlihat dari terhambatnya pertumbuhan S.  rofsii saat  terpapar  dengan Tricho- derma sp. atau filtratnya. Pada pengujian dengan metode kultur  ganda,  mekanisme  penghambatan  yang  terjadi adalah kompetisi ruang dan antibiosis. Kompetisi ruang yaitu  pertumbuhan Trichoderma sp.  lebih  cepat dibandingkan  pertumbuhan S.  rolfsii yang  kemudian menyebabkan Trichoderma sp. dapat memenuhi ruang lebih cepat di dalam cawan petri, sehingga pertumbuhan S.  rolfsii menjadi  berkurang.   Selain  itu,  mekanisme antibiosis juga terjadi pada pengujian ini yang dapat dilihat dengan  adanya  batas  berwarna  kuning  kecoklatan  di antara Trichoderma sp.  dan S.  rolfsii .  Pertumbuhan
S.  rolfsii terhenti  pada  batas  berwarna  kecoklatan tersebut. Hal ini diduga karena adanya suatu senyawa yang  menghalangi S.  rolfsii tumbuh  ke  arah Tricho- derma sp.
Pada pengujian menggunakan filtrat Trichoderma sp., diduga kemampuan menghambat disebabkan oleh kandungan enzim dan toksin. Enzim dan toksin yang dihasilkan Trichoderma mampu menghambat patogen dengan  merusak  dinding  sel  patogen  (Pietro et  al ., 1993). Menurut El-Katatny et al . (2000), filtrat Tricho- derma sp.  mengandung  enzim  kitinase  dan  -1,3- glukanase,  sedangkan  Mukherjee et  al .  (2012) melaporkan bahwa filtrat Trichoderma sp. mengandung toksin  harzianic  acid,  tricholin,  peptaibols,  gliotoxin, viridian,  T22azaphilone,  1  hydroxy-3-methyl-an- thraquinone,  1,8-dihydroxy-3-methyl-anthraquinone, T39butenolide,  harzianolide,  dan  harzianopyridone. Gveroska dan Ziberoski (2012) melaporkan bahwa filtrat Trichoderma sp.  efektif  menghambat Alternaria alternata dan mengakibatkan abnormalitas  morfologi patogen. Sementara itu, menurut Radder (2005) filtrat dari Trichoderma sp. mampu menghambat pertumbuhan miselia  dan  pembentukan  sklerotia  dari S.  rolfsii penyebab penyakit layu pada kacang tanah.
Pada penelitian ini, meskipun filtrat Trichoderma diotoklaf,  namun  masih  menunjukkan  kemampuan menghambat  pertumbuhan  koloni S.  rolfsii .  Hal  ini mengindikasikan bahwa metabolit sekunder (enzim dan toksin) Trichoderma yang terkandung dalam filtrat tidak mengalami  kerusakan  setelah  dilakukan  pemanasan pada  otoklaf  dengan suhu  121 o C  dan  tekanan  1  atm selama 10 menit. Xiao-Yan (2006) melaporkan bahwa enzim  trikokonin  tidak  mengalami  kerusakan  setelah dilakukan pemanasan pada suhu 121 o C selama 15 menit. Sedangkan menurut Radder (2005), filtrat Trichoderma masih  efektif  menghambat  pertumbuhan  S .  rolfsii meskipun telah disterilisasi dengan cara diotoklaf.
Tabel 1. Persentase penghambatan Trichoderma sp. terhadap pertumbuhan koloni S. Rolfsii.
Keterangan:  Angka-angka yang diikuti huruf  yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata berdasarkan  uji  BNT 5%. hsi = hari setelah inokulasi.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa Trichoderma sp.dan  filtratnya  mampu menghambat  pertumbuhan Sclerotium  rofsii .  Isolat Trichoderma sp. yang memiliki memiliki kemampuan tertinggi dalam menghambat S. rofsii adalah isolat Tri- choderma  harzianum .

## DAFTAR  PUSTAKA
Di Pietro, A., M. Lorito, C. K. Hayes, R. M. Broadway, and  G.  E.  Harman.  1993.  Endochitinase  from Gliocladium virens: isolation, characterization, and synergistic antifungal activity in combination with gliotoxin. Phytopathology. 83: 308-313.
El-katatny,  M.H.,  Somitsch,  W.,  Robra,  K.H.,  El-
Katatny., and Gubitz, G.M. 2000. Production of chitinase and  -1,3-glucanase by T. harzianum, Food  technol.  Biotechnol. 38(3):  173-180.
Gveroska,  B.,  and  Ziberoski,  J.  2012. Trichoderma harzianum as  a  biocontrol  agent  against Alter- naria  alternata on  tobacco. J.  Appl.  Technol.
& Innov. 7(2): 67-76.
Kementan.  2013. Produksi  Tanaman  Pangan . http:// aplikasi.pertanian.go.id/bdsp/  hasil  kom.asp .
Diakses pada tanggal : 5 Maret 2014.
Tabel  2.  Rata-rata  pertumbuhan  koloni S.  rolfsii yang  ditumbuhkan  pada  media  yang  mengandung  fitrat Trichoderma sp.
Keterangan : Angka-angka yang diikuti huruf  yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata berdasarkan  uji  BNT 5%. hsi = hari setelah inokulasi.
Mukherjee,  P.K.,  Horwitz,  B.A.,  dan  Kenerly,  C.M. 2012. Secondary metabolism in Trichoderma – a genomic perspective. Microbiol . 158:35-45.
Nduagu C., Ekefan E.J., and Nwankiti A. O. 2008. Ef- fect of Some Crude Plant Extracts on Growth of Colletotrichum  capsici (Synd)  &Bisby,  Causal Agent  of Pepper  Antracnose.  J.  of  Applied Biosci. 6(2): 184-190.
Radder,  Siddanagoudar  R.,  2005. Effect  of  bioagents and their metabolites on sclerotium rolfsii Sacc of  groundnut .  Thesis  Master  of  Science.  Uni- versity of Agricultural Sciences. Dharward.
Semangun,  H.  1993. Penyakit  Tanaman  Pangan  di Indonesia .  Universitas  Gadjah  Mada.
Yogyakarta.
Soesanto, L. 2008. Pengantar Pengendalian Penyakit Tanaman .  Rajawali  Pers.  PT.  Raja  Grafindo Persada.  Jakarta.
Xiao-Yan. S, Shen Qing-Tao, Xie Shu-Tao, Chen Xiu- Lan,  Sun  Cai-Yun  &  Zhang  Yu-Zhong.2006. Broad-spectrum  antimicrobial activityand high stability  of  Trichokonins  fromTrichoderma koningii  SMF2  against  plant  pathogens .  State Key  Laboratory  of  Microbial  Technology, Shandong University. China.