## Pengembangan Mikrosfer Asiklovir Menggunakan Kitosan dan Natrium Tripolifosfat: Faktor Suhu Inlet
Cynthia Marisca Muntu 1 *, Sadono 1 , Melinda Natalia Suwito 1
1 Departemen Farmasetika, Fakultas Farmasi, Universitas Surabaya, Surabaya-Indonesia * corresponding author:  cynthia_muntu@staff.ubaya.ac.id
Abstract — Acyclovir  is  an  antiviral  used  for  the  treatment  of  herpes  simplex  but  it's  a  short  half-life,  thereby  increasing  the administration  frequency.  To  overcome  this  problem,  the  acyclovir  microsphere  system  was  created  with  chitosan  and  sodium tripolyphosphate  (NTPP).  The  formulation  used  a  spray  drying  method  which  is  influenced  by  the  inlet  temperature.  Three variations  of  the  inlet  temperature  are  given,  i.e.  170 o C  (M1),  180 o C  (M2),  and  190 o C  (M3).  Physicochemical  characterization obtained the same results on the three microspheres. They showed the occurrence of cross-linking between chitosan and NTPP. The average  particle  sizes  of  M1,  M2,  and  M3  microspheres  were  8.52  µm,  8.92  µm,  and  9.83  µm  respectively.  All  microspheres' morphology was spherical with a  rough surface. The  moisture content of  M1, M2,  M3  microspheres were 6.63%, 5.49%, 4.63%, respectively.  The  swelling  index  of  M1,  M2,  and  M3  microspheres  obtained  from  0.5-4  hours  were  143.11-258.86%,  167.26- 239.61%, and 152.49-259.60%. The recovery of M1, M2, and M3 microspheres was 33.93%, 47.26%, and 35.09% respectively. The acyclovir encapsulation efficiency of M1, M2, and M3 microspheres were 115.32%, 117.14%, and 111.16% respectively. Dissolution testing showed all three microspheres  have  the  potential  for controlled drug delivery systems.  The inlet temperature affects the microsphere characteristics and the best inlet temperature was 180 o C.
Keywords: chitosan, inlet temperature , microspheres, sodium tripolyphosphate
Abstrak —Asiklovir merupakan antivirus yang  digunakan  untuk terapi herpes simplex karena tingkat selektivitasnya tinggi tetapi waktu  paruhnya  cepat  sehingga  meningkatkan  frekuensi  pemberiannya.  Untuk  mengatasi  masalah  ini  asiklovir  dibuat  sistem mikrosfer .  Dalam  penelitian  ini  kitosan  digunakan  sebagai  polimer  dan  natrium  tripolifosfat  (NTPP)  sebagai  penyambung  silang. Pembuatannya  menggunakan  metode spray  drying yang  dipengaruhi  oleh  suhu inlet ,  sehingga  diberikan  tiga  variasi  suhu inlet yaitu 170 o C (M1), 180 o C (M2), dan 190 o C (M3). Karakteristisasi fisikokimia meliputi identifikasi gugus fungsi, perubahan melting point , dan energi entalpi memperoleh hasil yang sama pada ketiga mikrosfer yaitu terjadinya ikatan sambung silang antara kitosan dengan  NTPP.  Ukuran partikel rata-rata  mikrosfer M1, M2, M3 berturut-turut adalah 8,52 µm, 8,92 µm dan 9,83 µm.  Morfologi bentuk ketiga mikrosfer adalah sferis dengan permukaan kasar. Kandungan lembap mikrosfer M1, M2, M3 berturut-turut adalah 6,63%, 5,49%, 4,63%.  Indeks pembengkakan mikrosfer  M1,  M2,  M3 yang  diperoleh dari 0,5-4 jam berturut-turut adalah 143,11- 258,86%, 167,26-239,61% dan 152,49-259,60%. Perolehan kembali mikrosfer M1, M2, M3 berturut-turut adalah 33,93%, 47,26% dan 35,09%. Efisiensi enkapsulasi asiklovir M1, M2, M3 berturut-turut adalah 115,32%, 117,14% dan 111,16%. Pengujian disolusi asiklovir menunjukkan ketiga mikrosfer berpotensi untuk sistem penghantaran obat terkendali. Suhu inlet berpengaruh terhadap karakteristik mikrosfer asiklovir dan suhu terbaik adalah 180 o C.
Kata kunci: kitosan, mikrosfer, natrium tripolifosfat, suhu inlet

## PENDAHULUAN
Asiklovir  merupakan  antivirus  yang  digunakan  untuk  terapi herpes simplex karena tingkat  selektivitasnya  tinggi  tetapi  waktu  paruhnya  cepat 1 .  Untuk  mengatasi  masalah  ini, dilakukan  modifikasi  penghantaran  Asiklovir  dalam  bentuk  mikrosfer .  Mikrosfer  merupakan partikel  kecil  yang  sferis  dengan  ukuran  partikel  antara  1-1.000  µm.  Mikrosfer  berfungsi sebagai  sistem  penghantaran  obat  yang  berpotensi  sebagai  sistem  pelepasan  obat  secara terkendali 2 .
Salah satu teknik pembuatan mikrosfer yaitu teknik sambung silang ( cross link ). Dalam pembuatan  mikrosfer  ini  digunakan  kitosan  sebagai polimer  karena  tidak  toksik  dan  bersifat biokompatibel dan biodegradable serta penyambung silang natrium tripolifosfat 3 .
Metode yang sering digunakan dalam pembuatan mikrosfer yaitu spray drying , karena metode  ini  dapat  menghasilkan  mikrosfer  dengan  ukuran  yang  kecil  dan  mudah  di up-scale . Metode ini dipengaruhi oleh beberapa parameter proses seperti suhu inlet , laju aliran gas atau gas  flow  rate ,  laju  pompa  atau pump  feed  rate, diameter nozzle, tekanan  kompresor  dan aspirator 4 .  Optimasi  parameter  ini  biasanya  dilakukan  melalui trial dan error 5 .  Penelitian sebelumnya  yang  menganalisis  pengaruh  laju  alir  umpa  dan  suhu inlet  spray  dryer pada

## Original Research
https://doi.org/10.24123/kesdok.v4i1.5451
karakteristik  mikrokapsul  oleoresin  jahe,  digunakan  variasi  suhu inlet meliputi  160°C,  170°C, 180°C  dan  190°C.  Hasilnya  variasi  ini  memberikan  pengaruh  pada  karakteristik  mikrokapsul dengan  karakteristik  terbaik  dihasilkan  oleh  suhu  inlet  170°C 6 .  Penelitian  lain  juga  meneliti pengaruhu suhu inlet pada karakteristik serbuk xylitol memperoleh suhu terbaik 160°C dengan karakteristik yang paling mirip dengan produk komersil 7 .
Pada  penelitian  ini  diberikan  tiga  variasi  suhu inlet untuk  menganalisis  pengaruhnya terhadap  karakteristik  fisiko  kimia  mikrosfer  Asiklovir  menggunakan  kitosan  dan  natrium tripolifosfat.  Pada  penelitian  ini  terdapat  tiga  sampel  yang  berbeda  pada  suhu inlet 170 o C (M1), 180 o C (M2), dan 190 o C (M3). Ketiga suhu ini dipilih berdasarkan optimasi yang dilakukan pada uji pendahuluan serta titik lebur masing-masing komponen.

## METODE Bahan Penelitian
Bahan-bahan  penelitian  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah:  Asiklovir pharmaceutical  grade,  Chitosan  pharmaceutical  grade , Sodium  tripolyphospate food  grade , asam  asetat  glasial pharmaceutical  grade ,  HCl  37% pro  analysis ,  KBr pro  analysis ,  aqua demineralisata, aqua bidestilata, aluminium foil, kertas saring, kertas perkamen, kertas lensa dan  kertas tisu.

## Alat Penelitian
Alat-alat penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah: Buchi Mini Spray Dryer B-191,  Mikroskop  optik  (Olympus  model  CX23LEDRFS1),  Ametek  Edax Scanning  Electron Microscope Apollo X inspect S50, Multimix Speed Controller tipe 75C1S-7A, Moisture Analyzer Ohaus, Shimadzu UV Spectrophotometer UV-1800, Hansel Research Dissolution Tester 73-100- 104, Cellulose  dialysis  bag modifikasi,  Bransonic Ultrasonic  Cleaner B-1200  E2,  pH  meter SCHOTT SI Analytic Lab 850, Differential Scanning Calorimetric ( Mettler - Toledo ), Jasco Fourier Transform  Infrared (model  FT/IR-4200),  Timbangan  analitik  Ohaus  PA214,  alat-alat  gelas ( beaker glass , gelas ukur, corong gelas, pengaduk kaca, labu ukur, pipet volume, pipet tetes).

## Tahapan Penelitian
Penelitian ini diawali dengan pembuatan  mikrosfer asiklovir dengan mensuspensikan asiklovir-Kitosan-NTPP  dan dilanjutkan dengan  proses spray-drying suspensi  asiklovir-kitosan- NTPP.

## Pembuatan mikrosfer asiklovir
Pembuatan  mikrosfer  diawali  dengan  pembuatan  suspensi  Asiklovir-kitosan.  Kitosan sebanyak  6  gram  didispersikan  dalam  aqua  demineralisata  dan  ditambahkan  asam  asetat glacial 2% sebanyak 25 ml. Asiklovir sebanyak 1 gram dicampurkan ke dalam suspensi kitosan dan  dihomogenkan  dengan multimix pada  kecepatan  kira-kira  1500  rpm.  Pencampuran  dan homogenisasi ini dilakukan selama kurang lebih 20 menit sampai terbentuk suspensi asiklovir- kitosan yang siap untuk dicampurkan dengan senyawa penyambung silang NTPP 8 .
Pada  pembuatan  larutan  senyawa  penyambung  silang,  NTPP  ditimbang  sebanyak  8 gram  kemudian  dilarutkan  dalam  80  ml  aqua  demineralisata.  Sebagian  sisa  aqua demineralisata  disediakan  untuk  ditambahkan  sampai  volume  yang  direncanakan  (800  ml) setelah  semua  bahan  dalam  formula  selesai  dicampurkan 8 .  Suspensi  asiklovir-kitosan dicampurkan dengan larutan NTPP dengan cara larutan NTPP diteteskan menggunakan syringe 27 gauge ke  dalam  suspensi  asiklovir-kitosan  sambil  dihomogenisasi  dengan multimix pada kecepatan  1500  rpm.  Suspensi  tersebut  ditambahkan  air  sampai  volume  yang  direncanakan yaitu 800 ml dan dibiarkan selama 30 menit untuk  terjadinya sambung silang antara kitosan dengan NTPP.
Proses spray-drying suspensi  asiklovir-kitosan-NTPP  dilakukan dengan mengatomisasi suspensi ke dalam feed suspension spray-dryer menjadi mikrosfer. Pada penelitian ini, pump
https://doi.org/10.24123/kesdok.v4i1.5451
rate digunakan sebesar 30%, ukuran nozzle 0,7 µm dan suhu inlet pada spray dryer dibedakan menjadi tiga variasi yaitu 170°C (M1), 180°C (M2), dan 190°C (M3). Setelah proses spray-drying selesai,  maka  hasil  mikrosfer  dapat  dikumpulkan  dari dry  product  collector .  Kemudian, mikrosfer  yang  diperoleh  ditimbang  dengan  seksama,  lalu  dicatat  berat  totalnya  untuk menentukan  rendemen/persen  perolehan  kembali  dari  suatu  proses  dan  dilakukan karakterisasi mikrosfer.

## Karakterisasi mikrosfer
Karakterisasi  yang  dilakukan  pada  mikrosfer  asiklovir  yang  diperoleh  antara  lain identifikasi  gugus  fungsi,  identifikasi melting  point dan  energi  entalpi,  diameter  partikel mikrosfer  dan morfologi  bentuk  dan  permukaan, kandungan  lembap, indeks pembengkakan, perolehan kembali, efisiensi enkapsulasi dan disolusi. Identifikasi gugus fungsi bertujuan untuk mengetahui  adanya  asiklovir,  kitosan,  dan  NTPP  dari  mikrosfer  yang  telah  dihasilkan.  Untuk sampel padat, dibuat pellet KBr dengan alat mini hand press , lalu dianalisis. Karakterisasi dari mikrosfer yang dihasilkan dilakukan dengan menggunakan instrumen
Differential  Scanning  Calorimetric (DSC) . Analisis  termal  pada  mikrosfer  Asiklovir  dilakukan pada suhu 10 o C/menit dengan tekanan atmosfer nitrogen dinamik 9 .
Mikrosfer  diamati  dengan  mikroskop  pada  perbesaran  40  kali.  Partikel  diamati sejumlah  250  partikel  kemudian  dibuat  histogramnya.  Morfologi  permukaan  dan  bentuk mikrosfer  yang  telah  dibuat  diamati  dengan  menggunakan Scanning  Electron  Microscope (SEM) dengan tegangan eksitasi sebesar 20,00 kV dan working distance 10,2 mm. Pengujian  terhadap  kandungan  lembap  mikrosfer  dilakukan  dengan  menggunakan bantuan  alat Mettler  Toledo  Moisture  Analyzer .  Proses  pengeringan  dianggap  sempurna apabila  instrumen  mendeteksi  bahwa  dalam  pemanasan  selama  interval  waktu  tertentu, bahan  uji  (mikrosfer)  tidak  mengalami  perubahan  bobot  yang  signifikan  (sudah  mencapai bobot tetap).
Pengujian  indeks  pembengkakan  mikrosfer  diawali  dengan  tahap  penempatan mikrosfer  dalam  suatu  wadah.  HCl  0,1  N  yang  digunakan  sebagai  media.  Wadah  yang digunakan  ditimbang  terlebih  dahulu  untuk  mendapatkan  bobot  wadah  kosong  (W o ).  HCl diteteskan sejumlah tertentu HCl untuk merendam mikrosfer  dan didiamkan selama interval waktu  tertentu  (0,5  jam;  1  jam;  2  jam;  4  jam).  Setelah  mencapai  interval  waktu  tertentu, kelebihan HCl 0,1 N diserap. Setelah itu, ditimbang mikrosfer basah beserta wadahnya. Bobot total (bobot mikrosfer + wadah kosong = W t ) dikurangkan dengan bobot wadah kosong (W o ) untuk  mengetahui  bobot  mikrosfer  basah.  Setelah  didapatkan  bobot  mikrosfer  basah,  dapat dihitung indeks pembengkakan mikrosfer melalui rumus:
Pengujian  perolehan  kembali  mikrosfer  yang  dihasilkan  dilakukan  dengan  cara menimbang bobot total mikrosfer kering yang dihasilkan, kemudian dibandingkan dengan total bahan  yang  digunakan  saat  membentuk  mikrosfer.    Persen  perolehan  kembali  diperoleh dengan mengalikan rasio yang diperoleh dengan 100%.
Pengujian persen enkapsulasi mikrosfer dapat dilakukan melalui beberapa tahap yaitu penentuan  panjang  gelombang  maksimum  larutan  asiklovir,  pembuatan  kurva  baku  dan penentuan  persentase  asiklovir  yang  terjerap  dalam  mikrosfer.  Larutan  baku  kerja  dibuat dengan kadar sebesar 2, 4, 6, 8,  10 dan 12 bpj. Untuk penentuan persen enkapsulasi diawali dengan penimbangan  mikrosfer  asiklovir  25  mg, kemudian masing-masing dilarutkan dengan 50  ml  aquabides.  Larutan  sampel  tersebut  kemudian  diultrasonik  selama  ±10  menit,  lalu disaring  basah  melewati  kertas  saring  sampai  diperoleh  filtrat  jernih.  Filtrat  jernih  dipipet dengan  pipet  volume  4,0  ml  kemudian  dimasukkan dalam  labu  ukur  25,0  ml,  dan  kemudian ditambahkan dengan aquabides . Pengukuran serapan dilakukan pada panjang gelombang 200-
Ssw = (W t - W o) / W o x 100%
https://doi.org/10.24123/kesdok.v4i1.5451
400  nm  (panjang  gelombang  maksimal  ditentukan  terlebih  dahulu).  Pengamatan  sampel dilakukan sebanyak 3 kali replikasi.
Pengujian  pelepasan  Asiklovir  dari  mikrosfer  (disolusi)  yang  dihasilkan  dilakukan dengan  menggunakan  alat  uji  disolusi  tipe  2  (tipe paddle ).  Prosedur  dilakukan  sesuai monografi yaitu mikrosfer asiklovir ditimbang sebanyak 100 mg kemudian dimasukkan dalam suatu  wadah  semacam  kantung  teh  untuk  menggantikan cellulose  dialysis  bag .  Uji  disolusi dilakukan  selama 60 menit  menggunakan media 900 ml HCl 0,1 N  (pH 1,2)  pada suhu 37 o C, dengan kecepatan 50 rpm. Pengambilan cuplikan diambil pada interval waktu 2; 4; 6; 8; 10; 12; 14;  16;  18;  20;  25;  30;  35;  40;  45;  50;  55  dan  60  menit.  Tiap  cuplikan  kemudian  diukur serapannya pada panjang gelombang 254 nm dengan spektrofotometer UV.

## Analisis data
Analisis data dilakukan dengan tujuan untuk melihat nilai signifikan antara karakterisasi mikrosfer  (ukuran  partikel,  efisiensi  enkapsulasi,  indeks  pembengkakan,  kandungan  lembap, pelepasan  bahan  aktif  dan  perolehan  kembali)  dengan  suhu inlet yang  digunakan  (170 o C, 180 o C dan 190 o C). Data hasil ukuran partikel kandungan lembap, swelling , perolehan kembali ( yield ), efisiensi enkapsulasi, dan pelepasan Asiklovir dari mikrosfer (disolusi) dianalisis dengan metode  statistik  ANOVA  dengan  nilai P =  0,05  untuk  mengetahui  ada  tidaknya  perbedaan ukuran,  kandungan  lembap,  indeks  pembengkakan,  perolehan  kembali  ( yield ),  efisiensi enkapsulasi, dan disolusi hasil mikrosfer dari tiap suhu inlet pada 170 o C, 180 o C dan 190 o C pada spray dryer .  Sebelum dianalisis  dengan one-way ANOVA,  maka tes  statistik  homogenitas dan normalitas dilakukan terlebih dahulu. Jika hasil keduanya memenuhi syarat maka analisisnya dapat dilanjutkan dengan ANOVA. Apabila hasil analisis dengan ANOVA memperoleh hasil yang berbeda  bermakna  maka  dilanjutkan  dengan  pengujian post-hoc untuk  menganalisis  lebih lanjut perbedaan bermakna antara variabelnya.

## HASIL
Mikrosfer  hasil spray  drying dikumpulkan  dan  selanjutnya  dilakukan  karakterisasi fisikokimia.  Karakterisasi  tersebut  antara  lain  identifikasi  gugus  fungsi,  identifikasi melting point dan  energi  entalpi,  diameter  partikel  mikrosfer  dan  morfologi  bentuk  dan  permukaan, kandungan  lembap,  indeks  pembengkakan,  perolehan  kembali,  efisiensi  enkapsulasi  dan disolusi.

## Identifikasi Gugus Fungsi
Hasil dari uji ini berupa puncak yang menunjukkan panjang gelombang khas dari gugus fungsi yang dimiliki oleh bahan masing-masing yang terkandung dalam mikrosfer. Gambar hasil identifikasi gugus fungsi mikrosfer menggunakan spektrofotometer inframerah  (FTIR)  berupa spektra  dapat  dilihat  pada  Gambar  1,  sedangkan  panjang  gelombang  khas  tiap  gugus  fungsi dapat dilihat pada Tabel 1.
Identifikasi Melting Point dan Energi Entalpi Hasil identifikasi melting point dan energi entalpi mikrosfer pada sampel M1, M2, dan M3  menunjukkan  terdapat  perbedaan  nilai peak  endotherm antara  kitosan  dengan  M1,  M2, dan M3. Hal ini dapat dilihat pada Gambar 2 dan Tabel 2.
https://doi.org/10.24123/kesdok.v4i1.5451

## Tabel 1
Gugus Fungsi Kitosan, NaTPP, dan Asiklovir
Gugus fungsi Bilangan Gelombang (cm -1 ) Kitosan NaTPP Asiklovir -OH dan N-H 3851,15-3390,24 3852,11-3446,17 (-OH) 3522,34-3183,9 -NH 2 1696,09 1632,45 -COCH 3 (asetil) 1487,81-1379,82 C-O 1155,15-1082,83 1183,11 C=O 1693,19 C-N 1216,86 C=N 1540,85 P=O 1213,01 P-O 895,773 PO 2 1168,65-1143,58 PO 3 1097,3
Gambar 1. Hasil identifikasi gugus fungsi M1 (a), M2 (b) dan M3 (c) dengan FTIR.
Gambar 2 . Hasil identifikasi melting point dan energi entalpi (a) Sampel M1, (b) Sampel M2, (c) Sampel M3 dengan DSC.

## Distribusi Ukuran Partikel
Hasil  pengamatan  distribusi  ukuran  partikel  diperoleh  rentang  yang  cukup  sempit yaitu  1  µm  sampai  21  µm  seperti  yang  ditampilkan  pada  Gambar  2.  Ukuran  yang  diperoleh antara  M1,  M2  dan  M3  selanjutnya  dianalisis  dengan one-way ANOVA  diperoleh  nilai P = 0,369,  hal  ini  menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  tidak  signifikan  pada  ukuran  partikel mikrosfer antara sampel M1, M2, dan M3.
0 40 10 20 30 4000 400 1000 2000 3000 %T Wavenumber [cm-1] a 0 40 10 20 30 4000 400 1000 2000 3000 %T Wavenumber [cm-1] b 0 40 10 20 30 4000 400 1000 2000 3000 %T Wavenumber [cm-1] c a b c
https://doi.org/10.24123/kesdok.v4i1.5451
Gambar 3. Kurva distribusi ukuran partikel mikrosfer M1, M2, dan M3.

## Morfologi Bentuk dan Permukaan Partikel
Pada  hasil  karakterisasi  mikrosfer  asiklovir  dengan Scanning  Electron  Microscope , mikrosfer  M1,  M2,  dan  M3  menunjukkan  bentuk  yang  sferis  dan  permukaannya yang  kasar. Hasil tersebut dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 4. Morfologi mikrosfer M1 (a), M2 (b) dan M3 (c) dengan SEM pada perbesaran 10000x.

## Kandungan Lembap
Mikrosfer  M1,  M2 dan M3  memberikan kandungan lembap masing-masing sebesar 6,63%, 5,49% dan 4,63% seperti yang dapat dilihat pada Tabel 2. Berdasarkan analisis statistik dengan  metode one-way ANOVA  diperoleh  nilai P =  0,000,  hal  ini  menunjukkan  adanya perbedaan yang signifikan pada kandungan lembap mikrosfer antara sampel M1, M2, dan M3. Kandungan lembap ketiga mikrosfer seluruhnya memiliki perbedaan yang signifikan dibuktikan dengan analisis statistik lanjutan post-hoc yang memperoleh nilai P = 0,000 untuk ketiganya.

## Indeks Pembengkakan
Pembengkakan awal pada M1 terjadi sangat cepat dibandingkan dengan M2 dan M3. Hasil  indeks  pembengkakan  pada  waktu  0,5  jam  dari  mikrosfer  M1,  M2  dan  M3  adalah 175,34%, 173,67% dan 171,19%. Hasil analisis statistik dengan ANOVA juga memperoleh nilai P =  0,000  sehingga  terdapat  perbedaan  signifikan  indeks  pembengkakan  yang  diperoleh mikrosfer sampel M1, M2 dan M3. Analisa statistik lanjutan dengan post-hoc juga memperoleh nilai P =  0,000  untuk  ketiganya  sehingga  antara  keseluruhan  variasi  suhu  menghasilkan perbedaan signifikan.
a b c
https://doi.org/10.24123/kesdok.v4i1.5451

## Tabel 2
Kandungan Lembap Sampel M1, M2, dan M3
Sampel Kandungan lembap (%) Rata-rata kandungan lembap (%) Nilai P M1.1 6,63
6,63 ± 0,01 0,000 M1.2 6,64 M1.3 6,63 M2.1 5,41 5,49 ± 0,23 M2.2 5,46 M2.3 5,83 M3.1 4,38 4,63 ± 0,25 M3.2 4,64 M3.3 4,87

## Perolehan Kembali (yield)
Perolehan  kembali  mikrosfer  M1,  M2  dan  M3  adalah  33,93%,  47,26%  dan  35,09%. Berdasarkan analisis statistik dengan metode one-way ANOVA diperoleh nilai P = 0,000, hal ini menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan pada yield mikrosfer antara sampel M1, M2, dan  M3.  Pada  analisis  statistik  lanjutan  dengan post-hoc ,  hanya  mikrosfer  M2  yang menunjukkan  perbedaan  signifikan,  dikonfirmasi  dengan  nilai P =  0,000  baik  dengan  M1 maupun  M3.  Untuk  mikrosfer  M1  dan  M3  memiliki  perbedaan  yang  tidak  signifikan dkonfirmasi dengan nilai P = 0,078.

## Efisiensi Enkapsulasi
Pengujian  efisiensi  enkapsulasi  mikrosfer  M1,  M2  dan  M3  berturut-turut  adalah 115,325, 117,14% dan 111,16%. Berdasarkan analisis statistik dengan metode one-way ANOVA diperoleh nilai P = 0,000, hal ini menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan pada efisiensi enkapsulasi mikrosfer antara sampel M1, M2, dan M3. Efisiensi enkapsulasi mikrosfer M1, M2, M3 seluruhnya memiliki perbedaan yang signifikan, dikonfirmasi dengan analisis post-hoc yang memperoleh nilai P = 0,000 untuk ketiganya.

## Pelepasan Asiklovir dari Mikrosfer (Disolusi)
Berdasarkan  analisis  statistik  dengan  metode one-way ANOVA  diperoleh  nilai P = 0,000. Hal ini menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan pada disolusi mikrosfer antara sampel M1, M2, dan M3. Analisis lanjutan dengan post-hoc juga memperoleh nilai P = 0,000 untuk  pelepasan  ketiga  mikrosfer  sehingga  antara  keseluruhan  variasi  suhu  menghasilkan perbedaan signifikan pada pelepasannya.

## BAHASAN
Hasil  identifikasi  gugus  fungsi  sampel  M1,  M2,  dan  M3  menunjukkan  bahwa  ikatan sambung silang antara kitosan dengan NTPP sudah terjadi. Hal ini ditandai dengan bergesernya bilangan gelombang gugus NH 2 , P=O, serta terdapat puncak baru dan pada ketiga sampel tetap ditemukan  adanya  puncak  Asiklovir.  Hal ini  sejalan  dengan  penelitian  sebelumnya  yang  juga menggunakan polimer kitosan dan penyambung silang NTPP 10 (Berlianto, 2014). Pada identifikasi melting point dan energi entalpi kita dapat melihat adanya perubahan struktur sampel (terbentuknya  ikatan ion antara kitosan dan NaTPP) berdasarkan perubahan melting point dan energi entalpi. Analisis termal pada mikrosfer Asiklovir dilakukan pada suhu
10 o C/menit  dengan  tekanan  atmosfer  nitrogen  dinamik.    Hasil  identifikasi melting  point dan energi entalpi mikrosfer pada sampel M1, M2, dan M3 menunjukkan terdapat perbedaan nilai peak endotherm antara kitosan dengan sampel M1, M2, dan M3. Hal ini terjadi karena adanya
https://doi.org/10.24123/kesdok.v4i1.5451
ikatan sambung silang antara kitosan dengan NTPP. Di sisi lain tidak terdapat puncak asiklovir karena asiklovir telah diselubungi oleh matriks kitosan dan NTPP. Hasil ini juga sejalan dengan penelitian  terdahulu  yang  menggunakan  kitosan  sebagai  polimer  dan  NTPP  sebagai penyambung silang pada pembuatan mikrokapsul metronidasol 11 .
Hasil pengamatan distribusi ukuran partikel diperoleh rentang yang cukup sempit yaitu 1 µm sampai 21 µm. Hal ini dengan keunggulan dari metode spray drying yaitu menghasilkan distribusi  ukuran  mikrosfer  dengan  rentang  yang  sempit 8,12 .  Berdasarkan  analisis  statistik dengan metode one-way ANOVA diperoleh nilai P > 0,05 yaitu 0,369, hal ini menunjukkan tidak adanya perbedaan yang signifikan pada ukuran mikrosfer antara sampel M1, M2, dan M3. Dari ketiga hasil distribusi ukuran mikrosfer menunjukkan tidak adanya perbedaan yang signifikan dikarenakan  suhu inlet tidak  berpengaruh  banyak  terhadap  ukuran  mikrosfer  yang dihasilkan 13,14 .
Pada  hasil  karakterisasi  mikrosfer  Asiklovir  dengan Scanning  Electron  Microscope , sampel  M2,  dan  M3  menunjukkan  hasil  yang  relatif  sferis  dan  permukaannya  yang  kasar. Meskipun demikian, mikrosfer M2 menunjukkan bentuk yang kurang sferis dibandingkan M1 dan M3.  Mikrosfer  yang kurang sferis dapat disebabkan oleh kurangnya konsentrasi kitosan, pH  yang  kurang  asam  dan  kurang  meratanya  kontak  dengan  udara  panas  sedangkan permukaan yang kasar dapat disebabkan oleh kurangnya konsentrasi NaTPP dan meningkatnya suhu inlet . Hal ini juga ditunjukkan pada penelitian sebelumnya 9 .
Hasil  pengujian  kandungan  lembap  yang  dianalisis  statistik  dengan  metode one-way ANOVA diperoleh nilai P = 0,000. Hal ini menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan pada kandungan  mikrosfer  antara  sampel  M1,  M2,  dan  M3.  Analisis  lanjutan post-hoc juga memperoleh nilai P = 0,000 sehingga keseluruhan perbedaan suhu inlet memberikan pengaruh yang  signifikan  pada  kandungan  lembap.  Kandungan  lembap  mikrosfer  hasil spray  drying dipengaruhi  oleh  suhu inlet dan  konsentrasi  polimer  yang  digunakan  selama  proses spray drying ,  peningkatan  suhu inlet dapat  menurunkan  kandungan  lembap  mikrosfer  sebaliknya peningkatan  kadar  polimer  dapat  meningkatkan  kandungan  lembap  mikrosfer 15 .  Hasil mikrosfer dengan kandungan lembap yang baik ditunjukkan pada sampel M3.
Hasil pengujian indeks pembengkakan yang dianalisis statistik dengan metode one-way ANOVA diperoleh nilai P = 0,000. Hal ini menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan pada swelling mikrosfer  antara  sampel  M1,  M2,  dan  M3.  Analisis  lanjutan post-hoc juga memperoleh nilai P = 0,000 sehingga keseluruhan perbedaan suhu inlet memberikan pengaruh yang signifikan pada indeks pembengkakan mikrosfer.  Pembengkakan awal pada sampel M1 terjadi sangat cepat dibandingkan dengan sampel M2 dan M3 dikarenakan kadar kelembapan M1  yang  tinggi  yaitu  6,63%  dibandingkan  dengan  sampel  M2  dan  M3.  Pada  penelitian  yang dilakukan  hasil swelling yang  diperoleh  sudah  sesuai  pada  waktu  0,5  jam  dari  sampel  M1 diperoleh  175,34%,  sampel  M2  diperoleh  173,67%,  dan  sampel  M3  diperoleh  171,19%. Berdasarkan  hasil  tersebut  dapat  dilihat  pada  jam  yang  sama,  suhu inlet yang  digunakan berbeda,  hasil swelling menurun  terus  hingga  pada  suhu inlet tertinggi  yaitu  190 o C.  Hasil mikrosfer  dengan  pelepasan  obat  secara  terkendali  ditunjukkan  dengan  hasil swelling yang kecil pada sampel M3. Hasil yang sejalan juga ditunjukkan dengan penelitian sebelumnya yang menggunakan metode mikroenkapsulasi 16 .
Perolehan kembali mikrosfer yang dianalisis statistik dengan metode one-way ANOVA diperoleh  nilai P =  0,000.  Hal  ini  menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  signifikan  pada yield mikrosfer  antara  sampel  M1,  M2,  dan  M3.  Analisis  lanjutan  dengan post-hoc menunjukkan hanya  mikrosfer  M2  memiliki  perbedaan  signifikan,  dikonfirmasi  dengan  nilai P =  0,000  baik dengan M1 maupun M3. Mikrosfer M1 dan M3 memperoleh perbedaan yang tidak signifikan dengan nilai P = 0,078. Perbedaan hasil yield juga dapat disebabkan karena perbedaan kondisi penelitian terutama setting parameter pada proses spray drying seperti suhu inlet dan outlet yang  dapat  memengaruhi  proses  pembentukan  dan  pengeringan  mikrosfer.  Meningkatnya suhu inlet juga akan meningkatkan suhu outlet , kondisi ini akan menghasilkan mikrosfer yang lebih  kering  dan  tidak  lengket  sehingga  meningkatkan yield 5 .  Namun,  berdasarkan  hasil
https://doi.org/10.24123/kesdok.v4i1.5451
penelitian  ini,  sampel  M3  dengan  suhu  inlet  190 o C    menghasilkan yield yang  lebih  sedikit dibandingkan yield sampel  M2  dengan  dengan  suhu  inlet  180 o C.  Hal  ini  dapat  disebabkan karena  mikrosfer  yang  dihasilkan  terlalu  kering  sehingga  mudah  tertarik  oleh  pompa  vakum dan  tidak  dapat  tertampung  dalam dry  particle  collector 17 .  Mikrosfer  dengan  perolehan kembali ( yield ) yang baik ditunjukkan pada sampel M2.
Hasil pengujian efisiensi enkapsulasi yang dianalisis statistik dengan metode one-way ANOVA diperoleh nilai P = 0,000. Hal ini menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan pada efisiensi enkapsulasi mikrosfer antara sampel M1, M2, dan M3. Efisiensi enkapsulasi mikrosfer dianalisis  lanjutan  dengan post-hoc juga  memperoleh  nilai P =  0,000  untuk  ketiga  mikrosfer baik M1, M2 dan M3, sehingga keseluruhan perbedaan suhu inlet memberikan pengaruh yang signifikan.  Namun,  pada  penelitian  ini  persentase  efisiensi  enkapsulasi  yang  lebih  dari  100% dapat  disebabkan  karena  perbedaan  metode  analisis  yang  digunakan.  Menurut  Farmakope Indonesia  edisi  V  (metode compendial penetapan    kadar  Asiklovir  dilakukan  dengan  metode Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi  (KCKT) 18 ,  sedangkan  pada  penelitian  ini  digunakan  metode spektrofotometeri  UV  berdasarkan  metode  non compendial .  Metode  spektrofotometri memiliki  sensitivitas  terhadap  bahan  yang  dianalisis  namun  tidak  selektif,  sehingga  apabila terdapat  bahan  lain  yang  memiliki  serapan  pada  panjang  gelombang  yang  sama  maka  akan terhitung  juga  absorbansinya.  Metode  KCKT  memiliki  sensitivitas    dan  selektivitas  terhadap bahan yang dianalisis 19 . Mikrosfer dengan hasil efisiensi enkapsulasi terbaik pada sampel M2. Pengujian pelepasan asiklovir dari mikrosfer menggunakan metode yang dimodifikasi sesuai  dengan  monografi.  Berdasarkan  analisis  statistik  dengan  metode one-way ANOVA diperoleh nilai P = 0,000. Hal ini menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan pada disolusi mikrosfer antara sampel M1, M2, dan M3. Keseluruhan variasi suhu menghasilkan perbedaan signifikan  pada  pelepasannya  yang  dikonfirmasi  dengan  hasil  analisa  lanjutan post-hoc yang juga memperoleh nilai P = 0,000 untuk pelepasan ketiga mikrosfer. Profil disolusi ketiga sampel mikrosfer  menunjukkan  pelepasan  Asiklovir  yang  bertahap  atau  terkendali  apabila dibandingkan dengan profil pelepasan Asiklovir murni. Hal yang sejalan juga ditunjukkan dari penelitian  sebelumnya  yang  memformulasikan  mikropartikel  pirimetamin  menggunakan kitosan  dan  tripolifosfat 20 dan  mikropartikel  obat  antipsikotik  menggunakan  kitosan  dan derivat kitosan untuk penghantaran terkendali 3 .

## SIMPULAN
Perolehan  kembali  ( yield ),  efisiensi  enkapsulasi,  kandungan  lembap,  indeks pembengkakan  dan pelepasan Asiklovir (%Q)  dipengaruhi oleh variasi suhu inlet . Sebaliknya, parameter ukuran partikel mikrosfer M1, M2, dan M3 tidak dipengaruhi oleh suhu inlet . Secara keseluruhan  parameter  karakterisasi  yang  dihasilkan,  suhu  inlet  terbaik  untuk  pembuatan mikrosfer asiklovir menggunakan metode spray drying pada penelitian ini adalah suhu 180 o C .

## PUSTAKA ACUAN
1. Handoko  &  Ronny,  P  2010 ,  Ilmu  Penyakit  Kulit  dan  Kelamin ,  edisi  keenam,  Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, 380-382.
2. Agnihotri,  SA,  Mallikarjuna,  NN  &  Aminabhavi,  TM  2004,  ‘Recent  Advances  on  Chitosan based micro- and nanoparticles in Drug Delivery’, Journal of Controlled Release , Vol. 100, p. 5-28.
3. Khan,  MS,  Vishakante,  GD,  Bathool,  A,  Kumar,  R  2012,  ‘Preparation  and  Evaluation  of Spray  Dried  Microparticles  Using Chitosan  and  Novel  Chitosan  Derivative  for  Controlled Release  of  an  Antipsychotic  Drug ’, International  Journal  of  Biological  &  Pharmaceutical Research .
4. Bhavesh, BP, Jayvadan, KP & Subhashis, C 2015, ‘Revealing facts behind spray dried solid dispersion  technology  used  for  solubility  enhancement’ ,  Saudi  Pharmaceutical  Journal , Vol. 23, p. 352-365.
https://doi.org/10.24123/kesdok.v4i1.5451
5. Amaro,  MI,  Tajber,  L,  Corrigan,  OL  &  Healy,  AM  2011,  ‘Optimisation  of  spray  drying process conditions for sugar nanoporous microparticles (NPMPs) intended for inhalation’, International Journal of Pharmaceutics , Vol. 421, p. 99-109.
6. Yuliani, S 2007 , ‘Pengaruh Laju Alir Umpan dan Suhu Inlet Spray Drying pada Karakteristik Mikrokapsul  Oleoresin  Jahe’ ,  Bogor,  Fakultas  Teknologi  Pertanian,  Institut  Pertanian Bogor.
7. Mardawati,  E,  Rialita,  T,  Anggraini, S 2018,  ‘Kajian Pengaruh Suhu Inlet  dan Konsentrasi Maltodekstrin  terhadap  Kadar  Air  dan  Kelarutan  Serbuk  Xilitol  Hasil  Spray  Dryer’, Prosiding Seminar Nasional Teknologi Pangan, 59-66.
8. Desai,  KG  &  Park,  HJ  2005,  ‘Preparation  and  Characterization  of  Drug  Loaded  Chitosan Tripolyphospate by Spray Drying’, Drug Development Research , p. 6114-128.
9. Bhumkar, DR & Pokharkar, VB 2006, ‘Studies on Effect of ph on Cross-linking of Chitosan With Sodium Tripolyphosphate: A Technical Note’, AAPS PharmSciTech .
10. Berlianto,  AS  2014,  ‘Pengaruh  Konsentrasi  Kitosan  terhadap  Karakteristik  Fisik Mikropartikel  Salbutamol-sulfat  Menggunakan  Penyambung  Silang  Natrium-Tripolifosfat dengan  Metode  Spray  Drying’,  Skripsi  tidak  dipublikasikan,  Surabaya,  Fakultas  Farmasi Universitas Surabaya.
11. Garud,  A  &  Garud,  DN  2010,  ‘Preparation  and  Evaluation  of  Chitosan  Microcapsules  of Metronidazole using Tripolyphosphate Cross-Linking Method’. Dhaka University Journal of Pharmaceutical Science , 9(2), 125-130.
12. Patel  RP,  Patel  MP,  &  Suthar  AM,  2009,  Spray  drying  technology:  an  overview.  Indian Journal of Science and Technology, 2(10), 44-47.
13. He  P,  Davis  SS,  Illum  L,  1999,  Chitosan  Microspheres  Prepared  by  Spray  Drying. International Journal of Pharmaceutics, Vol. 187, p. 53-65.
14. Maas  SG,  Schaldach  G,  Littringer  EM,  Mescher  A,  Griesser  UJ,  Braun  DE,  Walzel  PE, Urbanez, 2011, The impact of spray drying outlet temperature on the particle morphology of mannitol. Powder Technology 213: 27-35.
15. Mishra, M., dan Mishra B., 2011, Formulation Optimization and Characterization of Spray Dried Microparticles for Inhalation Delivery of Doxycycline Hyclate, India: Banaras Hindu University.
16. Kissel,  T,  Maretschek,  S,  Packhauser,  C,    Schnieders,  J  &  Seidel,  N  2006, ‘Microencapsulation  Techniques  for  Parenteral  Depot  Systems  and  Their  Application  in the Pharmaceutical Industry ’ , Microencapsulation Method and Industrial Applications , 2 nd Ed, New York: CRC Press, p. 99-122.
17. Sari  R,  Magda  M,  Lestari  W,  Rijal  MAS,  2015,  Ketoprofen-Carboxymethyl  Chitosan Microparticles  Prepared  By  Spray  Drying:  Optimization  And  Evaluation,  Asian  Journal  of Pharmaceutical and Clinical Research, Vol. 8.
18. Departemen Kesehatan RI, 2014, Farmakope Indonesia, edisi V, Jakarta.
19. Bagdassarian,  C,    Angelov,  T  &  Atanassova,  M  2007,  ‘UV-Spectrometric  And  High Performance  Liquid Chromatographic  Determination Of Pentoxifylline  In Workplace  Air’, Journal of the University of Chemical Technology and Metallurgy .
20. Ibezim,  EC,  Andrade,  CT,    Marcia,  C,  Barretto,  B,  Odimegwu,  DC  &  Lima,  FFD  2011, ‘Ionically  Cross-linked  Chitosan/Tripolyphosphate  Microparticles  for  the  Controlled Delivery of Pyrimethamine’, Department of Pharmaceutics, University of Nigeria, Nsukka, Enugu State, Nigeria.