Majalah Farmaseutik Vol. 18 No. 3 : 300-306 ISSN-p : 1410-590x ISSN-e : 2614-0063
Uji  Aktivitas  Penangkapan  Radikal  2,2-  difenil-1-pikrilhidrazil  (DPPH) Ekstrak Kering Meniran ( Phyllanthus niruri
L)
2-2  Diphenyl-1-pycrilhydrazil  (DPPH)  Radical  Scavenger  Activity  of  Meniran  (Phyllanthus  niruri  L) Dried Extract
Andayana  Puspitasari  Gani 1* ,  Retno  Murwanti 2 ,  Dyaningtyas  Dewi  Pamungkas  Putri 2 , Miftahus Sa’adah 3 1 Departemen Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada
2 Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada
3 Departemen Farmasetika, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada
Corresponding author: Andayana Puspitasari Gani; Email: andayana@ugm.ac.id Submitted: 14-06-2021 Revised: 02-02-2022 Accepted: 03-02-2022

## ABSTRAK
Meniran ( Phyllanthus niruri L), adalah salah satu tanaman obat yang telah banyak digunakan dalam sediaan obat tradisional dengan indikasi meningkatkan daya tahan tubuh. Diduga terdapat hubungan yang kuat antara aktivitas antioksidan dan respon imun, terutama respon imun humoral yang diperantarai oleh aktivitas makrofag. Pembuatan ekstrak kering sebagai bahan baku sediaan obat tradisional berpotensi menimbulkan adanya perubahan aktivitas ekstrak dikarenakan adanya pemanasan pada prosesnya. Oleh karena itu, pada penelitian ini dilakukan uji aktivitas penangkapan radikal  DPPH  ekstrak  kering  meniran  dengan  tujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  proses pengeringan  ekstrak  terhadap  kadar  senyawa  aktif  dan  aktivitas  farmakologis,  khusunya antioksidan. Kadar senyawa aktif dinyatakan dengan parameter kadar flavonoid total,  sedangkan uji aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  DPPH,  Hasil  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kering meniran dengan kadar flavonoid total sebesar 0,79 ± 0,06 % EK, memiliki aktivitas penangkapan radikal DPPH dengan IC 50 sebesar 74,28 µg/mL. Proses pengeringan dan penambahan bahan pengisi pada ekstrak dapat berpengaruh pada aktivitas penangkapan radikal DPPH. Kata kunci: Ekstrak, Meniran, Penangkapan radikal, DPPH
ABSTRACT Meniran ( Phyllanthus niruri L) has been widely used in traditional medicine with immunostimulant indications.  It  is  suspected  that  there  is  correlation  between  antioxidant  activity  and  immune response,  especially  the  humoral  immune  response  mediated  by  macrophage  activity.  The manufacture of dry extracts as raw materials for traditional medicine dosage forms has potency to cause changes in extract activity due to heating in the process. Therefore, the aim of this study is to measure the ability of meniran dried extract to scavenge DPPH radical. The results showed that the dry extract of meniran with total flavonoid content of 0.79 ± 0.06% EQ, had DPPH radical scavenging activity with IC 50 of 74.28 µg /mL. The drying process and the addition of fillers to the extract can affect the DPPH radical scavenging activity.
Keywords : Dried extract, Meniran, Radical Scavenge, DPPH

## PENDAHULUAN
Penggunaan  obat  tradisional  untuk menjaga kesehatan kembali meningkat di masa pandemi  virus  SARS  COVID-19.  Hal  ini disebabkan karena salah satu upaya pencegahan  yang  dilakukan  adalah  dengan meningkatkan  sistem  imun  tubuh  dengan mengkonsumsi  suplemen  yang  diantaranya berupa  obat  tradisional.  Salah  satu  jenis tanaman yang banyak terkandung di dalam obat
tradisonal dengan indikasi membantu meningkatkan  daya  tahan  tubuh  adalah  herba meniran ( Phyllanthus niruri L).
Herba  meniran  dapat  berfungsi  sebagai imunstimulan melalui  mekanisme peningkatan respon  imun  seluler,  terutama  dengan mengaktifkan  neutrophil,  makrofag  atau monosit, dan sel B dan T limfosit (Tjandrawinata et  al. ,  2017).    Pada  penelitian  lain  dilaporkan bahwa  pemberian  ektrak  herba  meniran  pada
mencit  dapat  meningkatkan  respon  imun  baik spesifik  maupun  non-spesifik.  Peningkatan respon  imun  non-spesifik  dapat  disebabkan karena  adanya  peningkatan  fagositosis  dan kemotaksis  makrofag,  kemotaksis  neutrophil, sitotoksisitas  sel  NK,  serta  aktivitas  hemolisis komplemen sehingga terjadi peningkatan pada indeks fagositosis makrofag (Maat, 1986). Makrofag merupakan bentuk pertahanan sistem imun pertama kali menghadapi patogen yang  menyerang  melalui  fungsi  fagositosis, mikrobisidal, dan tumorisidal, yang dilanjutkan dengan dilepaskannya beberapa jenis mediator. Salah  satu  jenis  mediator  yang  dilepaskan tersebut  adalah reactive  oxygen  species (ROS). Peningkatan  kadar  ROS  akan  berakibat  pada perubahan  keseimbangan  antara  oksidasi  dan sistem  antioksidan  tubuh,  yang  menyebabkan produksi  lipid  peroksidasi  (LPO)  karena terjadinya kerusakan protein dan deoxy nucleid acid (DNA) akibat oksidasi   (Victor, Rocha and De  la  Fuente,  2004;  Pamok,  Aengwanich  and Komutrin, 2009). Keseimbangan produksi pro- oksidan  dan  pertahanan  antioksidan  adalah penting  untuk  fungsi  sel.    Gangguan  dalam keseimbangan  ini  menyebabkan  timbulnya stres  oksidatif.  Untuk  mengatasi  peningkatan kadar  ROS  berlebih  maka  diperlukan  senyawa antioksidan  yang  dapat  mengurangi  stress oksidatif sehingga terjadi peningkatan  imunitas (Knight,  2000;  Pamok,  Aengwanich  and Komutrin,  2009;  Yuan et  al. ,  2009).  Hal  ini menunjukkan  adanya  kaitan  antara  aktivitas imunostimulan  dan  antioksidan.  Peningkatan aktivitas fagositosis sel makrofag memiliki efek samping berupa terbentuknya senyawa radikal bebas  di  dalam  tubuh,  yang  mana  senyawa tersebut tidak dapat membedakan antara agen asing  dengan  sel  normal  tubuh  (Abbas, Lichtman and Pillai, 2012) Del Rio dkk. (1998), menyebutkan bahwa senyawa  antioksidan  dapat  berpengaruh terhadap tahapan fagositosis oleh sel makrofag. Senyawa  α -tokoferol  dan  asam  askorbat meningkatkan  pelekatan  makrofag  pada substrat, migrasi acak pada kemotaksis, ingesti, dan meningkatkan produksi anion superoksida yang  menggambarkan  peningkatan  aktivitas fagositosis.  Laporan  lain  juga  menyebutkan bahwa  terdapat  korelasi  positif  antara kemampuan  penangkapan  radikal  bebas berkorelasi dengan aktivitas fagositosis makrofag secara in vitro (Gani, 2016).
Berdasarkan  data  yang  didapatkan  dari https://cekbpom.pom.go.id/,  terdapat  lebih dari 40 produk obat tradisional dengan berbagai penandaan  (jamu,  obat  herbal  terstandar  dan fitofarmaka) yang mengandung meniran dalam komposisinya.  Sebagian  besar  produk-produk tersebut  berbentuk  kapsul,  serbuk  dan  pil, dimana bentuk sediaan tersebut menggunakan ekstrak kering sebagai bahan bakunya. Ekstrak kering adalah adalah ekstrak berbentuk kering yang diperoleh dari proses penguapan penyari ekstrak  cair,  dengan  atau  tanpa  bahan tambahan,  hingga  memenuhi  persyaratan yang  ditetapkan  (Departemen  Kesehatan  RI, 1986).  Pada  proses  penguapan  ekstrak dan  penambahan  bahan  pengering  untuk mendapatkan  ekstrak  kering  diperlukan pemanasan  yang  dapat  berpengaruh  terhadap kandungan metabolit sekunder pada ekstrak.
Pada penelitian ini dilakukan uji aktivitas penangkapan  radikal  DPPH  terhadap  ekstrak kering  meniran  untuk  mengetahui  efektivitas ekstrak sebagai antioksidan yang nantinya juga akan berpengaruh terhadap aktivitas imunstimulan ekstrak.

## METODOLOGI

## Bahan
Bahan  utama  berupa  ekstrak  kering meniran  diperoleh  dari  PT.  Jamu  Borobudur, Semarang dengan pelarut ekstraksi etanol 70%, bahan  pengering  yang  digunakan  adalah maltodekstrin  dengan  rasio botanical  extract 10:1  dan  kadar native  extract 90%.  Kadar cemaran  mikroba  dan  logam  berat  telah memenuhi syarat BPOM, sedangkan nilai susut pengeringan sebesar 3,8 %.
Bahan  uji  berupa  pereaksi  2,2-difenil-1- pikril  hidrasil,  aluminium  klorida,  natrium asetat,  (Sigma-Aldrich),  metanol  dan  etanol absolut (Merck).

## Alat
Spektrofotometer Hitachi UH300 double beam,  mikropipet  (transferpette),  seperangkat alat uji waktu alir dan alat gelas lain yang lazim.

## Jalannya Penelitian Karakterisasi ekstrak
Pengamatan organoleptik Serbuk  ekstrak  diletakkan  pada  cawan petri  diatas  alas  berwarna  putih.  Dilakukan pengamatan     organoleptic     meliputi    bentuk,
Andayana Puspitasari Gani, et al
warna, rasa dan konsistensi ekstrak.
Uji sifat alir Kecepatan Alir (Voight, 1994) Massa  ekstrak    sebanyak  100  gram ditimbang,  lalu  dimasukkan  ke  dalam  corong dan  diratakan.  Flowmeter  dinyalakan,  waktu yang  diperlukan  agar  seluruh  massa  mengalir melalui  corong  dicatat.  Kecepatan  alir dinyatakan  sebagai  banyaknya  gram  serbuk yang melewati celah alat per detik.
Sudut Diam (Voight, 1994) Massa  ekstrak  sebanyak  100  gram ditimbang, dimasukkan ke dalam corong hingga penuh,  lalu  diratakan.  Penutup  corong  dibuka, massa  yang  jatuh  akan  membentuk  kerucut. Tinggi  (h)  dan  jari-jari  (r)  kerucut  dicatat, kemudian  dihitung  sudut  diamnya  (angle  of repose, α) dengan persamaan (1).

## tan α = h / r …………………….. (1)
Bulk density dan tapped density (Voight, 1994) Massa  dimasukkan  ke  dalam  gelas  ukur hingga  100  ml,  kemudian  dicatat  sebagai volume awal (Vo). Gelas ukur yang berisi massa tersebut dipasang pada alat tapping device. Alat dipasang  pada  ketukan  sebanyak  100  kali. Dicatat  volume  serbuk  pada  saat  permukaan serbuk  tidak  mengalami  penurunan  kembali setelah  pengetapan  (Vk).  Berat  serbuk ditimbang,  densitas  serbuk  (Do)  dan  densitas serbuk  setelah  mencapai  keseimbangan  (Df) dihitung.  Densitas  adalah  perbandingan  massa dengan volume, selanjutnya indeks pengetapan/  Carr’ s  index  dihitung  dengan persamaan (2).
Carr’s  index  (%)  =  (Do -  Df)  /  Df  x  100% ……………………. (2)
Profil kromatogram Ditimbang  100  mg  ekstrak  kering  dan ditambahkan campuran kloroform dan metanol 1:1 sebanyak 5 mL. Campuran divorteks selama 30 detik dan dilakukan sonikasi kurang lebih 10 menit.  Campuran  didiamkan  beberapa  saat hingga  bagian  yang  tak  larut  mengendap. Diambil 2 ml bagian yang jernih untuk diuapkan. Setelah  kering,  ditambahkan  metanol  p.a sebanyak  100  uL.  Larutan  sampel  ditotolkan pada plat silika gel 60 F254 dengan  system  Fase
gerak  :  Heksan-etil  asetat  (5:5);  Standar  : Kuersetin; Deteksi : sinar UV 254 nm, 365 nm, pereaksi AlCl 3 5% .
Penetapan kadar flavonoid total Kadar  flavonoid  total  dalam  ekstrak ditentukan  dengan  metode  spektrofotometri menggunakan  pereaksi  aluminium  klorida seperti  yang  dilakukan  (Chang et  al. ,  2002). Diambil  0,1  mL  larutan  pembanding  kuersetin atau  ekstrak,  ditambahkan  dengan  1,9  mL etanol, 0,1 mL larutan aluminium klorida 10% dalam air suling, 0,1 mL larutan natrium asetat 1  M  (dibuat  dengan  cara  melarutkan  8,2  g natrium asetat dalam air suling hingga 100 mL) dan  2,8  mL  air  suling.  Larutan  uji  di  vortex selama 10 detik, didiamkan selama 30 menit dan dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 430 nm.

## Uji aktivitas penangkapan radikal
Penetapan Panjang gelombang maksimum penentuan panjang gelombang maksimum larutan DPPH dilakukan dengan cara sebanyak  1,0  mL  DPPH  0,4  mM  ditambah dengan  metanol  hingga  volume  5,0  mL kemudian  digojog  hingga  homogen.  Larutan discan absorbansinya pada panjang gelombang 400-700 nm
Penetapan waktu operasional Sebanyak 100 µL senyawa uji direaksikan dengan campuran 1,0 mL larutan DPPH 0,4 mM. Selanjutnya  ditambahkan  metanol  hingga volume  5,0  mL.  Larutan  dibaca  absorbansinya pada panjang gelombang maksimum diperoleh dari tahap  sebelumnya
Penentuan Inhibition Concentration (IC) 50 Sebanyak  1,0  mL  DPPH  0,4  mM dimasukkan  ke  dalam  labu  takar  5,0  mL, ditambah  100  µL  bahan  uji  dengan  4-5  seri konsentrasi seperti yang dijelaskan pada tahap pembuatan  sampel,  lalu  ditambahkan  metanol hingga  volume  5,0  mL.  Larutan  didiamkan hingga  waktu  operasi  tercapai.  Absorbansi larutan dibaca pada panjang gelombang 495 nm. Dilakukan  pula  pembacaan  absorbansi  larutan blangko dan larutan kontrol warna.  Absorbansi sampel didapatkan dari
pengurangan absorbansi  larutan  uji  dengan  larutan  kontrol. Penangkapan  radikal  ( Radical  Scavenging ) dihitung dengan rumus:
100% X blangko Absorbansi konrol) abs. - sampel abs. ( blangko Abs. radikal n penangkapa % − =
(3)
Perhitungan Inhibition Concentration (IC)50 Hasil  persentase  penangkapan  radikal DPPH untuk masing-masing konsentrasi larutan uji  digunakan  untuk  pembuatan  kurva  plot antara  konsentrasi  versus  %  penangkapan radikal.  Ditentukan  persamaan  regresi  linier masing-masing  larutan  uji.  Sebagai  parameter adanya  hubungan  linier  digunakan  koefisien korelasi  (r)  pada  analisis  regresi  linier Y = bX + a.
Berdasarkan  persamaan  (3)  tersebut  di atas,  ditentukan  nilai  IC50  ekstrak  yaitu konsentrasi  dimana  terjadi  penghambatan radikal DPPH sebanyak 50 %.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakterisasi ekstrak Pengamatan organoleptik Ekstrak  kering  meniran  berupa  granul  kasar berwarna hijau tua, dengan bau pahit.
Uji sifat alir Pada  awal  pengujian,  ekstrak  meniran yang  berbentuk  campuran  butiran  kasar  dan halus tidak dapat mengalir pada alat flowmeter. Untuk meningkatkan homogenitas dan kualitas sifat alir ekstrak meniran, dilakukan pengayakan dengan ayakan mesh 14. Data hasil pengujian sifat alir dapat dilihat pada Tabel I. Berdasarkan  hasil  pengujian  kecepatan alir dan sudut diam, ekstrak meniran tergolong memiliki sifat alir yang baik dengan kecepatan alir lebih dari 10 g/detik dan sudut diam kurang dari 40° (Tabel I). Dari nilai Carr’s index ekstrak meniran  tergolong  dalam  kategori excellen t. Dalam  hal  ini  ekstrak  yang  didapatkan  setelah pengayakan  telah  memenuhi  syarat  untuk formulasi selanjutnya.
Profil kromatogram Hasil  pembuatan  profil  kromatogram  ekstrak meniran gambar 1.
Dari  Gambar  1  dan  Tabel  II,  terlihat bahwa  pada  EMN  tidak  terdapat  bercak  yang memiliki  Rf  yang  sama  dengan  kuersetin. Namun  demikian,  tterdapat  beberapa  bercak yang  memiliki  karakteristik  yang  sama  yaitu meredam  pada  sinar  UV  254  dan  berwarna kuning  setelah  disemprot  dengan  AlCl3,  dan berpendar dengan lebih intensif pada sinar UV 366  setelah  disemprot.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  di  dalam  EMN  terdapat  senyawa golongan flavonoid meskipun bukan kuersetin. Oleh  karena  itu  untuk  karakterisasi  secara kuantitatif,  akan  digunakan  pengukuran  kadar flavonoid  total  bukan  penetapan  kadar kuersetin.
Penetapan kadar flavonoid total Dari  pengukuran  kadar  flavonoid  total didapatkan  hasil  persamaan  kurva  baku  Y  = 0,0033x ± 0,0169.
Hasil  dari  tabel  III  menunjukkan  bahwa kadar  flavonoid  total  pada  ekstran  meniran adalah  sebesar  0,79  ±  0,06  %  EK  (Ekuivalen Kuersetin). Hasil ini sepintas terlihat tidak  sesuai  dengan  yang  dipersyaratkan oleh  Farmakope  Herbal  Indonesia  edisi  II (Kementerian  Kesehatan  RI,  2017),  dimana disebutkan  bahwa  ekstrak  kental  meniran mengandung  flavonoid  total  tidak  kurang  dari 0,90%  dihitung  sebagai  kuersetin.  Hal  ini disebabkan  karena  ekstrak  kering  yang digunakan  pada  penelitian  ini  mengandung bahan  pengisi  kurang  lebih  10  %,  sehingga apabila  kemudian  bahan  pengering  ini diperhitungkan,  maka  dalam native  extract meniran  yang  digunakan  pada  penelitian ini  mengandung  flavonoid  total  sebesar 0,91 %, memenuhi persyaratan yang ditentukan. Tabel I. Hasil Pengujian Sifat Alir Hasil Pengujian Ekstrak kering Meniran Kecepatan Alir (g/detik) 19,96 ± 0,15 Sudut Diam (°) 39,33 ± 1,89 Carr's Index (%) 6,00 ± 0,00

## Andayana Puspitasari Gani, et al
Uji aktivitas penangkapan radikal Penetapan Panjang gelombang maksimum Hasil penentuan Panjang ge,ombang maksimum DPPH ditunjukkan pada gambar 2.
Berdasarkan  gambar  2,  terlihat  bahwa DPPH  yang  digunakan  pada  penelitian  ini
memiliki Panjang gelombang maksimum di 516
nm.  Untuk  selanjutnya  pembacaan  akan dilakukan pada Panjang gelombang ini.
Penetapan waktu operasional Hasil  pembacaan  absorbansi  larutan sampel yang ditambahkan DPPH dari menit ke
Gambar 1. Profil kromatografi lapis tipis EMN sebelum dan sesudah disemprot AlCl 3 pada (A) sinar tampak, (B) sinar UV 254 nm, dan (C) sinar UV 366 nm
Keterangan : P = Pembanding (Kuersetin); S = Sampel ekstrak meniran ; Fase gerak : Heksan-etil asetat (5:5) v/v
Tabel III. Perhitungan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Meniran
Sampel Ekstrak Meniran Bobot sampel (mg) Volume pelarut (mL) Absorbansi Kadar (% b/b) 1 262,5 10 0,434 0,72 2 303,5 10 0,585 0,83 3 303,4 10 0,572 0,82 Rerata =  0,79 ± 0,06 Tabel II. Nilai Rf Ekstrak Meniran Senyawa Rf Sebelum disemprot AlCl 3 Setelah disemprot AlCl 3 Visible UV 254 UV 366 Visible UV 366 Kuersetin 0,51 Kuning  Pemadaman Hijau F. Kuning Kuning Ekstrak Meniran 0,28 Hijau F. Hijau F. 0,51 Kuning 0,54 Merah muda F. Merah muda F. 0,71 Hijau Pemadaman  Merah muda F. Hijau Merah muda F. 0,81 Hijau Pemadaman  Merah muda F. Hijau Merah muda F.
Keterangan:  F = Fluoresensi
30  hingga  menit  ke  60  menunjukkan  tidak adanya  perubahan.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  untuk  selanjutnya  pembacaan  sampel dapat  dilakukan  pada  kurun  waktu  30-60 menit  setelah  pencampuran  sampel  dan reagen.
Penentuan Inhibition Concentration (IC)50 Hasil  pengujian  aktivitas  penangkapan  radikal DPPH  oleh  ekstrak  meniran  tercantum  pada Gambar 3. Berdasarkan  gambar  3,  didapatkan  nilai IC 50 penangkapan  radikal  DPPH  ekstrak meniran  adalah  sebesar  74,28  µg/mL.  Hasil kurang  bersesuaian  dengan  penelitian  yang
dilakukan  oleh  Harish  and  Shivanandappa (2006)  yang  melaporkan  bahwa  ekstrak metanol  daun  meniran  memiliki  kemapuan menangkap  radikal  DPPH  dengan  IC 50 9,1 µg/mL. Hal ini menunjukkan bahwa perbedaan jenis dan konsentrasi pelarut serta keberadaan bahan pengisi pada ekstrak berpengaruh besar terhadap kemapuan penangkapan radikal DPPH oleh ekstrak.

## KESIMPULAN
Ekstrak  kering  meniran  dengan  kadar flavonoid  total  sebesar  0,79  ±  0,06  %  EK, memiliki  aktivitas  penangkapan  radikal  DPPH dengan  IC 50 sebesar  74,28  µg/mL.  Proses
Gambar 2. Penentuan Panjang gelombang maksimum DPPH
Gambar 3. Kurva hasil Uji Penangkapan Radikal DPPH oleh Ekstrak Meniran
y = 0,8898x + 16,091 R² = 0,9426 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 10 20 30
40 50 60 70 80 90

## Penangkapan Radikal DPPH oleh Ekstrak Kering Meniran
Andayana Puspitasari Gani, et al
pengeringan  dan  penambahan  bahan  pengisi pada ekstrak dapat berpengaruh pada aktivitas penangkapan radikal DPPH.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kepada  Program Prioritas Riset Nasional (PRN) 2020 Badan Riset dan  Inovasi  Nasional  (BRIN)  yang  telah mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas, A. K., Lichtman, A. H. and Pillai, S. (2012) Cellular  and  molecular  immunology .  7th ed. Philadelphia: Elsevier/Saunders. Chang,  C.  C. et  al. (2002)  ‘Estimation  of  Total Flavonoid  Content  in  Propolis  by  Two Complementary  Colorimetric  Methods’, Journal of Food and Drug Analysis , 10(3), pp. 178 – 182. Del Rio, M. et al. (1998) ‘Improvement by several antioxidants  of  macrophage  function  in vitro’, Life Sciences , 63(10), pp. 871 – 881. Departemen  Kesehatan  RI  (1986) Sediaan Galenik . Departemen Kesehatan Republik Indonesia Jakarta. Gani,  A.  P.  (2016) Optimasi  Ekstraksi  dan
Penelusuran Fraksi Aktif  Herba Sambiloto (Andrographis  paniculata  Nees.)  dan Patikan Kebo (Euphorbia hirta L.): Studi In Vitro Efek Fagositosis Makrofag. Disertation. Universitas Gadjah Mada. Harish,  R.  and  Shivanandappa,  T.  (2006) ‘Antioxidant activity and hepatoprotective potential of Phyllanthus  niruri’, Food  Chemistry ,
95(2), pp. 180 – 185.
Kementerian  Kesehatan  RI,  D.  J.  K.  dan  A.  K.
(2017) Farmakope  Herbal  Indonesia .  II. Jakarta: Kementerian Kesehatan RI.
Knight,  J.  A.  (2000)  ‘Review:  Free  radicals, antioxidants,  and  the  immune  system’, Annals of Clinical and Laboratory Science ,
30(2), pp. 145 – 158. Maat, S. (1986) Phyllanthus niruri Linn sebagai Imunostimulator pada Mencit .
Disertation. Airlangga. Pamok,  S.,  Aengwanich,  W.  and  Komutrin,  T.
(2009)  ‘Adaptation  to  oxidative  stress and impact of chronic oxidative stress on immunity  in  heat- stressed  broilers’, Journal  of  Thermal  Biology ,  34(7),  pp.
353 – 357. Tjandrawinata,  R.  R. et  al. (2017)  ‘The  use  of
Phyllanthus
niruri L. as an immunomodulator  for  the  treatment  of infectious  diseases  in  clinical  settings’, Asian  Pacific  Journal  of  Tropical  Disease , 7(3), pp. 132 – 140. Victor,  V.  M.,  Rocha,  M.  and  De  la  Fuente,  M.
(2004)  ‘Immune  cells:  free  radicals  and antioxidants  in  sepsis’, International Immunopharmacology ,  4(3),  pp.  327 – 347. Voight,  R.  (1994) Buku  Pelajaran  Teknologi Farmasi .  V.  Universitas  Gadjah  Mada Press. Yuan, C. et al. (2009) ‘Evaluation of antioxidant and  immune  activity  of<  i>  Phellinus ribis</i> glucan in mice’, Food chemistry , 115(2), pp. 581 – 584.