Potensi Pemaparan Light Emitting Diode (LED) Inframerah Untuk Fotoinaktivasi Bakteri Bacillus subtilis
Suryani Dyah Astuti 1, , Rania Basalamah 1 , Moh. Yasin 1
1 Program Studi Fisika Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga
Email : suryanidyah@gmail.com

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemaparan cahaya LED inframerah pada fotoinaktivasi  bakteri Bacillus  subtilis dengan  cara  melakukan  uji  potensi  untuk  mengetahui panjang gelombang yang sesuai dengan spektrum serap fotosensitiser bakteri Bacillus subtilis. Selain itu dilakukan uji optimasi untuk menentukan jarak dan waktu pemaparan yang efektif pada proses fotoinaktivasi bakteri Bacillus subtilis dengan variasi jarak 1,5 cm, 2cm, dan 3cm serta  variasi  waktu  5  menit,  10  menit,  15  menit  dan  20  menit.  Penelitian  ini  menggunakan metode  TPC  ( Total  Plate  Count) untuk  menghitung  jumlah  kematian  koloni  bakteri  akibat pemaparan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  LED  inframerah  dengan  panjang gelombang  950  nm  berpotensi  untuk  fotoinaktivasi  bakteri Bacillus  subtilis. Dan  efek pemaparan  yang  paling  efektif  adalah  pada  jarak  1,5  cm  pada  waktu  15  menit  dengan prosentase kematian sebesar 53%.
Kata kunci : Bacillus subtilis , Fotoinaktivasi, Fotosensitiser, LED ( Light Emitting Diode) , TPC ( Total Plate Count)

## PENDAHULUAN
Salah  satu  tujuan  utama  institusi pelayanan kesehatan adalah berupaya untuk mencegah  terjadinya  infeksi  bagi  pasien dan  petugas  kesehatan.  Keberadaan  bakteri kontaminan  sebagai penyebab  infeksi sangat berpengaruh pada area yang seharusnya  terjaga  kesterilannnya,  seperti ruang  operasi  dan  laboratorium  serta peralatan medis yang ada. Bakteri kontaminan  yang  sering  ditemukan  pada peralatan  medis  salah  satunya  adalah Bacillus  subtilis (Pusdiknakes,  1989). Adanya  pusat  sterilisasi  dalam  unit  rumah sakit  sangat  diperlukan  sebagai  upaya mengendalikan  terjadinya  infeksi  yang disebabkan oleh mikroorganisme (Departemen Kesehatan RI, 2009).
Sterilisasi  merupakan  suatu  proses yang  dengan  metode  tertentu  baik  secara kimia  atau  fisika,  dapat  menghancurkan mikroba  patogen  termasuk  endospora bakteri (Darmadi, 2008). Sterilisasi peralatan  medis  dapat  dilakukan  dengan
berbagai  cara  yaitu  berdasarkan  metode kimia  meliputi  teknik  desinfeksi,  serta metode fisika meliputi, teknik penyaringan, pemanasan dan radiasi  ( Hollander A, 1995 dalam  Ariyadi  dan  Dewi,  2009).  Proses desinfeksi  menggunakan  bahan  kimia seperti  Chlorine  atau  alkohol  70%  hanya mampu  membunuh  sel  vegetatif  saja  dan tidak  mampu  membunuh  spora  bakteri. Sehingga  tidak  efektif  untuk  proses sterilisasi  (Dhirgo,2007).  Sedangkan  pada metode fisika, proses penyaringan menggunakan  filter  hanya  terbatas  untuk bakteri  dengan  ukuran  tertentu  saja  dan sejatinya tidak membunuh bakteri melainkan  hanya  memisahkan  bakteri tersebut  dari  suatu  bahan,  sehingga  bakteri akan tetap hidup (Gabriel, 1988). Penggunaan autoklaf untuk teknik pemanasan  yang  kerap  kali  digunakan, seringkali terjadi masih adanya udara dalam autoklaf,  sehingga  suhu  didalam  ruang tersebut  akan  turun,  akibatnya  proses sterilisasi  menjadi  tidak  sempuma.  Selain itu,  terjadinya  kegagalan  kontak  akibat
tidak  meratanya  uap  ke  seluruh  permukaan bahan  menyebabkan  kegagalan  sterilisasi (Dhirgo,2007).  Serta  tidak  semua  peralatan medis dapat disterilkan dengan metode ini.
Teknik  radiasi  ionisasi  yang  biasa digunakan  untuk  sterilisasi  adalah  radiasi sinar gamma. Sinar gamma memiliki energi sangat  tinggi  yang  dapat  mengionisasi molekul  bahan,  sehingga  dapat  juga merusak bahan tersebut serta dapat menimbulkan  mutasi  pada  organisme  baik secara  langsung  maupun  tidak  langsung (Kappke et  al .,  2005).  Sedangkan  radiasi non  ionisasi  yang  selama  ini  digunakan adalah radiasi ultraviolet. Namun kelemahan dari sinar ultraviolet adalah daya penetrasinya  yang  lemah  (Ariyadi  dan Dewi,2009).  Dengan  demikian,  diperlukan metode  alternatif  yang  efektif  untuk inaktivasi bakteri kontaminan, yaitu dengan menggunakan teknik fotodinamik.
Secara  alamiah,  beberapa  bakteri menghasilkan endogen porfirin, yaitu molekul  pengasorbsi  cahaya  yang  bersifat fotosensitizier  (peka  terhadap  cahaya). Setiap molekul porfirin memiliki kemampuan  mengabsorbsi  cahaya  yang bergantung pada panjang gelombang tertentu  (Papageorgiou et  al., 2000). Kombinasi cahaya  dan  fotosensitizier dengan spektrum yang sesuai akan menyebabkan  fotoinaktivasi  sel  bakteri. Proses fotoinaktivasi diawali dengan mekanisme  fotosensitasi  yaitu  penyerapan cahaya  oleh  porfirin  yang  selanjutnya mengaktivasi reaksi dalam substrat.
Fotosensitasi  ini bergantung pada jenis  dan kuantitas  dari  porfirin  sebagai  molekul penyerap cahaya (Nitzan et al., 2004).
Kerusakan  sel  bakteri  pada  proses fotoinaktivasi didasarkan pada dua mekanisme,  yaitu  kerusakan  DNA  dan kerusakan membran sitoplasma. Penyinaran cahaya  yang  diserap  oleh  fotosensitizier akan  memecah  struktur  DNA  menjadi double-strained  DNA,  sehingga  dapat menimbulkan kerusakan. Selain itu, fotoinaktivasi  juga  dapat  mengakibatkan kebocoran  sel  atau  inaktivasi  sistem
transport  membran  dan  sistem  enzim membran  pada  bakteri  tersebut    (Hamblin dan  Hasan,  2003).  Fenomena  fisis  yang terjadi pada proses fotoinaktivasi meliputi 3 tiga  tahap,  yaitu  tahap  fotofisika,  berupa interaksi  cahaya  dengan  molekul  porfirin pada  proses  absorbsi  foton  dan  diikuti dengan  eksitasi  elektron.  Pada  tahap fotokimia,  terjadi  perubahan  energi  dan struktur elektron sebagai akibat dari eksitasi elektron.  Sedangkan  tahap  fotobiologi, melibatkan  perubahan  sel  organisme  akibat interaksi cahaya (Grossweiner,2005). Menurut  Nicorescu et  al., (2012),  efek pemaparan cahaya pulsed light pada bakteri Bacillus  Subtilis yang  ditunjukkan  oleh SEM,  menyebabkan  rusaknya  struktur parietal bakteri tersebut. Salah satu penggunaan  cahaya  pulsed  light  adalah Light Emitting Diode (LED). LED merupakan semikonduktor kompleks  yang  dapat  mengkonversi  energi listrik  menjadi  cahaya.  LED  termasuk sumber  cahaya  dengan  rentang  spektrum absorbsi porfirin tipe fotosensitizier. Kelebihan  LED  dibandingkan  dengan sumber  cahaya  lain  untuk  fotoinaktivasi adalah karena hanya menghasilkan sejumlah  kecil  panas  dalam  cahaya  yang ditimbulkan.  LED  menghasilkan  cahaya dengan berbagai warna. Warna cahaya yang diemisikan  oleh  LED  bergantung  pada komposisi  material  semikonduktor  yang digunakan, baik inframerah, cahaya tampak maupun ultraviolet (Schubert, 2006).
Cahaya    inframerah  (700  nm  –  10 -6 nm)  memiliki  karakteristik  mudah  diserap oleh bahan organik. Material organik dalam bakteri  akan  cepat  menyerap  cahaya inframerah  saat  terjadi  proses  penyinaran, sehingga kenaikan temperatur dalam bakteri  akan  terjadi  semakin  cepat  pula (Hamanaka,  2005).  Absorbsi  energi  radiasi oleh  sel  bakteri  secara  garis  besar mempunyai  dua  hasil  yaitu  kematian  sel yang  diindikasikan  oleh  tidak  adanya kemampuan untuk  membentuk  koloni, atau mutasi  yaitu  perubahan  pola  genetik.  Oleh karena  itu,  dapat  diperkirakan  bahwa
mekanisme utama dari fotoinaktivasi bakteri  dengan  cahaya  inframerah  adalah pemanasan  langsung  ke  mikroorganisme oleh penyinaran termal (Dhirgo,2007).
Penelitian  fotodinamik  yang  telah dilakukan sebelumnya membuktikan bahwa keberhasilan  fotoinaktivasi  pada  bakteri ditentukan oleh kesesuaian panjang gelombang  cahaya  dengan  spektrum  serap porfirin.  Berdasarkan  penelitian  Dhirgo et al., (2007) menunjukkan bahwa penyinaran cahaya  inframerah  selama  15  menit,  dapat menimbulkan  inaktivasi  bakteri Bacillus subtilis . Begitu juga dengan penelitian yang dilakukan Hamanaka et al., (2005) menyimpulkan bahwa penyinaran
inframerah
950 nm berpotensi fotoinaktivasi pada bakteri Bacillus subtilis. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi pemaparan LED inframerah  pada  inaktivasi  bakteri Bacillus subtilis sebagai  upaya  alternatif  dan  efektif untuk sterilisasi peralatan medis.

## MATERIAL DAN METODE PENELITIAN

## Persiapan Kultur Bakteri
Penelitian  ini  menggunakan  isolat bakteri Bacillus subtilis yang diperoleh dari Laboratorium  mikrobiologi,  Departemen Biologi,  Fakultas  Sains  dan  Teknologi, Universitas Airlangga. Alat dan bahan yang digunakan  adalah  Cawan  petri  (diameter  6 cm),  tabung  reaksi,  Erlenmeyer  250  ml, Micropipette , lidi sapu (ose), lampu bunsen, neraca, Microwave oven ,
Spektrophotometer, Dry  oven , Autoclave bersih, Autoclave kotor, Incubator ,  colony counter,  Aluminium  foil,  plastik  wrap,  dan kapas.media  Nutrient  Agar,  Aquades  ,  air Garfis  (campuran  Aquades  dan  NaCl  ), Alkohol 70%.
Peralatan  Perlakuan
Peralatan  yang  digunakan  untuk perlakukan  pada  penelitian  ini  adalah Seperangkat LED (terdiri  dari  LED inframerah  940  nm  dan  950  nm  serta  LED merah  626  nm)  yang  dilengkapi  dengan mikrokontroler  AVR  8535,  motor  servo, sensor suhu tipe LM 35, plat holder sampel, keypad  sebagai  pemberi  masukan  daya (PWM% ), waktu (menit), dan suhu ( 0 C)

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimen  laboratoris  dengan  rancangan acak  lengkap  pola  faktorial pre  test-post test  control  group  design ,  yaitu  dengan menyediakan kelompok kontrol dan kelompok  perlakuan.  Metode  pemaparan bakteri  dilakukan  dengan  dua  tahap  uji. Tahap uji potensi bertujuan untuk mengetahui panjang gelombang (dari lampu LED  Inframerah  940  nm  dan  950  nm  serta LED  merah)  yang  paling  berpotensi  untuk fotoinaktivasi  bakteri Bacillus  subtilis . Sedangkan  tahap  uji  optimasi  bertujuan untuk mengetahui jarak dan waktu pemaparan  yang  paling  optimal  untuk fotoinaktivasi bakteri Bacillus subtilis .

## Karakterisasi Alat
Sebelum dilakukan pemaparan, terlebih  dahulu  dilakukan  karakterisasi  alat penyinaran  yang  terdiri  dari  3  tahap  yaitu tahap karakterisasi temperatur menggunakan  Thermo-Hygrometer  digital, karakterisasi
waktu
pemaparan menggunakan stopwatch digital ,dan karakterisasi  intensitas  pemaparan  LED menggunakan Silicon  detector 818  SL dengan  Output  yang  disambungkan  pada voltmeter.

## Pengkulturan Bakteri
Isolat Bacillus  subtilis dari  media agar  diambil  menggunakan  ose  dan dimasukkan  ke  dalam  larutan  Nutrient
Broth.  Kemudian  campuran  dihomogenkan dengan  vortex  dan  diinkubasi  selama  24 jam  dengan  inkubator  37 0 C.  Selanjutnya dilakukan pengenceran dengan cara mengambil  kultur 1 ml dan dimasukkan ke dalam  tabung  reaksi  yang  berisi  air fisiologis  9  ml  (10 -1 )  hingga  pengenceran ke  10 -10 .  Tiap  pengenceran  bakteri  dituang ke  dalam  cawan  petri  sebanyak  0,05  ml. Media Nutrient Agar yang telah dipanaskan dengan  suhu  45 o ditambahkan  ke  dalam cawan  bakteri,  kemudian  cawan  tersebut digoyangkan  dengan  pola  angka  delapan hingga  media  yang  berisi  bakteri  di  dalam cawan  menjadi  padat.  Cawan-cawan  petri yang  telah  berisi  bakteri  diletakkan  dalam posisi  terbalik  dan  diinkubasi  selama  24 jam  pada  temperatur  37 0 C.  Setelah  itu dilakukan  pengamatan  pada  jumlah  bakteri masing-masing pengenceran.
Jika
memenuhi  syarat  sekitar  30-300  koloni, maka pengenceran itu yang dapat digunakan untuk perlakuan.

## Uji Pemaparan LED
Setelah  diperoleh  sampel  bakteri, dilakukan uji potensi pemaparan menggunakan LED inframerah 940 nm dan 950  nm  serta  LED  merah,  masing-masing dengan  jarak  3  cm  dan  waktu  pemaparan konstan 15 menit. Pada tahap ini dilakukan replikasi  sebanyak  10  kali  untuk  masing- masing  LED,  sehingga  terdapat  10x3  =  30 satuan  percobaan  yang  dilaksanakan  secara acak.
Kemudian  hasil  penyinaran  tersebut diamati  dan  jenis  LED  yang  lebih berpotensi  untuk  fotoinaktivasi  bakteri dipilih  untuk  uji  optimasi  jarak  dan  waktu pemaparan. Digunakan variasi jarak 1,5 cm, 2  cm,  3  cm  dan  variasi  waktu  5  menit,  10 menit,  15  menit,  20  menit.  Pada  tahap  ini dilakukan  replikasi  sebanyak  4  kali, sehingga  terdapat  3  x  4  =  12  kombinasi perlakuan  yang  dilaksanakan  secara  acak. Kemudian  dilakukan  pengamatan  pada hasil pemaparan LED.

## Penghitungan Jumlah Koloni Bakteri
Penghitungan  jumlah  koloni  bakteri yang  tumbuh  dilakukan  dengan  metode pencawanan ( Total Plate count ). Prosentase penurunan  jumlah  koloni  bakteri  yang tumbuh dapat dihitung dengan :
|(Σ  koloni  perlakuan  -  Σ  koloni kontrol)/Σ koloni kontrol | × 100

## Analisis Data
Analisis  data  menggunakan  analisis statistik  SPSS  ( Statistical  Package  For Social  Science )  berupa  uji one  way  anova dan  uji  Anova  Faktorial  untuk  mengetahui pengaruh antar kelompok perlakuan
Gambar  1.1  Diagram  alir  langkah- langkah penelitian

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada penelitian tahap pertama yaitu uji potensi pemaparan LED inframerah 940 nm dan 950 nm serta LED merah 626 nm
untuk fotoinaktivasi bakteri Bacillus subtilis ini menggunakan jarak 3 cm dan waktu konstan 15 menit
Gambar 1.2 Diagram batang prosentase penurunan bakteri Bacillus subtilis terhadap variasi panjang gelombang
Data  hasil  uji  potensi  dianalisis menggunakan  uji  statistik One  Way  Anova yang menunjukkan  bahwa  signifikan  atau nilai probabilitas (p) 0,000 < 0,05. Nilai ini mengandung makna ada perbedaan antara 3 perlakuan  pada  penelitian  ini.  Sedangkan berdasarkan  hasil  yang  ditunjukkan  pada Gambar  1.2  menyatakan  bahwa  LED inframerah dengan panjang gelombang 950 nm  termasuk  yang  paling  berpotensi  pada fotoinaktivasi  bakteri Bacillus  subtilis dengan prosentase penurunan jumlah koloni bakteri  sebesar  34%.  Sehingga  dapat diketahui  pula  bahwa  sumber  cahaya inframerah 950 nm sesuai dengan spektrum serap  bakteri Bacillus  subtilis .  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  yang  dilakukan oleh  Hamanaka et  al., (2005)  yang menunjukkan bahwa sumber cahaya inframerah 950 nm memiliki pengaruh yang besar  pada  inaktivasi  bakteri  berspora, seperti Bacillus subtilis .
Pada  tahap  kedua  yaitu  uji optimasi jarak dan waktu untuk fotoinaktivasi  bakteri Bacillus  subtilis , dilakukan  dengan  menggunakan  variasi jarak  1,5  cm,  2  cm,  dan  3  cm  serta  variasi waktu  5 menit,  10 menit, 15 menit,  dan 20 menit.  Sumber  cahaya  yang  digunakan adalah  sesuai  dengan  hasil  yang  diperoleh pada  tahap  uji  potensi,  yaitu  LED inframerah 950 nm.  Data hasil uji optimasi kemudian  dianalisis  menggunakan  uji
Anova  faktorial  dengan  2  faktor  uji  yaitu jarak  dan  waktu.  Sehingga  dapat  diketahui apakah  ada  pengaruh  pada  masing-masing faktor  dan  interaksi  antar  faktor  atau  tidak ada pengaruh. Uji Anova Faktorial menunjukkan  nilai  signifikan  (p)  untuk faktor jarak dan waktu adalah 0,000 < 0,05.
Sehingga  berdasarkan  uji  statistik  Anova Faktorial  dapat  disimpulkan  bahwa  ada pengaruh  yang  bermakna  pada  pemaparan LED  inframerah  950  nm  dengan  variasi jarak  dan  waktu.  Data  hasil  uji  optimasi jarak  dan  waktu  dapat  dipaparkan  dalam grafik berikut :
Gambar  1.3.  Grafik  persentase penurunan  jumlah  koloni  bakteri Bacillus subtilis pada  pemaparan  LED  inframerah 950 nm  dengan variasi  jarak 1,5 cm,  2 cm, dan 3 cm.
Berdasarkan  Gambar  1.3  dapat disimpulkan bahwa pemaparan LED inframerah  950  nm  untuk  fotoinaktivasi bakteri Bacillus  subtilis adalah  optimal pada jarak 1,5 cm dan waktu pemaparan 15 menit  serta  dengan  energi  1,39  Joule mampu menghasilkan prosentase penurunan  jumlah  koloni  bakteri  sebesar 53%.
Fotodinamik  merupakan  teknologi inaktivasi  yang  ditentukan  oleh  panjang gelombang spesifik dari cahaya yang sesuai dengan spektrum fotosensitizer untuk dapat menghasilkan  molekul  aktif  yang  bersifat racun pada sel bakteri (Zhou, 2012). Proses absorbsi  cahaya  menyebabkan  terjadinya eksitasi  elektron  ke  tingkat  energi  yang
lebih tinggi dan kemudian akan menstabilkan diri kembali ke keadaan dasar melalui  transisi  radiatif  fluorosensi  dan fosforensi. Proses fluorosensi diawali dengan transisi non-radiatif berupa internal conversion .  Sedangkan  radiasi  fosforensi diawali  dengan  adanya  transisi  non-radiatif yaitu intersystem crossing yang berlangsung  pada  keadaan  triplet  dalam jangka  waktu  yang  cukup  lama.  Akibatnya terjadi  reaksi  fotokimia  antara  molekul fotosensitiser  dengan  molekul  lainnya secara  langsung  (Tipe  1)  maupun  tak langsung  (Tipe  2).  Sehingga  dihasilkan radikal  bebas  dan  singlet  oksigen  yang bersifat  toksik  dan  merusak  membran  sel bakteri (Alves et al., 2014).
Efek  fotodinamik  bergantung  pada beberapa  parameter,  diantaranya  adalah medium absorbsi cahaya atau fotosensitiser dan  karakteristik  sumber  cahaya  yang meliputi  :  panjang  gelombang  dan  dosis energi  (Costa et  al., 2012).  Parameter fotosensitiser  sebagai  medium  absorbsi cahaya,  akan  memperngaruhi  keberhasilan fotoinaktivasi  melalui  kesesuaian  spektrum serap fotosensitiser dengan panjang gelombang sumber cahaya.
Parameter dosis energi yang digunakan  pada  pemaparan  sumber  cahaya ditentukan oleh faktor intensitas  dan waktu penyinaran.  Menurut  Alves et  al., (2014), fotoinaktivasi  pada  mikroorganisme  akan lebih  berpengaruh    ketika  intensitas penyinaran  tinggi dan  durasi waktu penyinaran  lebih  lama.  Namun  hasil penyinaran yang  lebih  efektif  dapat dilakukan  dengan  menggunakan  intensitas penyinaran  yang  tinggi  pada  waktu  singkat atau intensitas penyinaran yang rendah pada waktu yang lama.
Penelitian  optimasi  jarak  dan  waktu untuk fotoinaktivasi bakteri Bacillus subtilis ,  akan  berpengaruh  pula  terhadap intensitas  penyinaran  yang  diterima  oleh sampel  bakteri.  Semakin  besar  jarak penyinaran, maka semakin rendah intensitas penyinaran  yang  akan  diabsorbsi  oleh bakteri.  Sehingga  pemaparan  yang  efektif
dapat  terjadi  dengan  meminimalkan  jarak penyinaran yang akan menghasilkan intensitas tinggi. Maka dalam penelitian ini diperoleh hasil pemaparan LED inframerah 950  nm  yang  paling  efektif  adalah  pada jarak terendah yaitu 1,5 cm.
Kematian  yang  ditimbulkan  pada fotoinaktivasi  bakteri  memiliki  mekanisme yang  berbeda-beda,  bergantung  pada  jenis bakteri  tersebut,  yaitu    gram-positif  atau gram-negatif.  Titik  lemah  antara  bakteri gram  positif  dan  gram  negatif,  dapat dijelaskan  berdasarkan  struktur  pembentuk dinding  selnya (Alves et al., 2014). Bakteri Bacillus  subtilis sebagai  jenis  bakteri  gram positif  mempunyai  dinding  sel  yang mengandung lipoteichoic dan asam teichoic yang tersusun pada lapisan ganda peptidoglican    yang  akan  berperan  penting pada daya serap bakteri sebagai jalur masuk molekul  fotosensitiser  ke  dalam  sel  untuk merusak  sel  melalui  oksidasi  singlet oksigen.  Sedangkan  Bakteri  gram-negatif mempunyai  membran  luar  yang  kompleks pada  dinding  sel  nya,  yaitu  terdiri  dari fosfolipid, lipopolysakarida, asam lipoteichoic  dan  lipoprotein.  Interaksi antara  kation  fotosensitiser    dan  unsur- unsur  penyusun  pada  dinding  sel  gram negatif menghasilkan interaksi elektrostatik yang    akan  menstabilkan  dinding  sel, termasuk  ikatan  kimia  dan  akhirnya molekul fotosensitiser  masuk ke dalam sel hingga singlet oksigen menimbulkan kerusakan  pada  dinding  sel  (Alves et  al., 2014).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian, diperoleh bahwa Pemaparan Light Emitting Diode (LED)  inframerah  dengan  panjang gelombang  950  nm  berpotensi  untuk fotoinaktivasi  bakteri Bacillus  subtilis . Serta  efek  fotoinaktivasi  paling  optimal diperoleh  pada  jarak  pemaparan  1,5cm  dan durasi  waktu  pemaparan  15  menit,  dengan energi sebesar 1,39 Joule mampu
menghasilkan  efek  fotoinaktivasi  bakteri sebesar 53%.

## Ucapan Terima Kasih
Terima  kasih  disampaikan  kepada Kementrian  Direktorat  Pendidikan  Tinggi RI,  yang  telah  membiayai  biaya  penelitian. Dan  para  pembimbing  penelitian  Serta kepada Laboratorium
Gastroentritis,
Institute  Tropical  Disease,  Universitas Airlangga.

## DAFTAR PUSTAKA
Alves, Eliana et al . 2014. Potential applications of porphyrins in photodynamic inactivation beyond the medical scope . Journal of
Photochemistry and Photobiology
C: Photochemistry
Ariyadi, T dan S Sinto Dewi. 2009.
Pengaruh Sinar Ultraviolet
Terhadap Pertumbuhan Bakteri
Bacillus Sp. Sebagai Bakteri
Kontaminan. Semarang: Universitas
Muhammadiyah
Astuti, Suryani Dyah. 2010. Potensi Light
Emitting Diode (LED) Biru Untuk Fotoinaktivasi Bakteri
Staphylococcus aureus dengan Porfirin Endogen. Surabaya:
Universitas Airlangga
Astuti, Suryani Dyah dkk. 2011. Potensi
Photodinamik inaktivasi Staphylococcus aureus dan Vibrio cholerae dengan Endogen
Photosensitizer pada Penyinaran
LED Biru (430 ± 4) nm dan Merah (629 ± 6) nm. Surabaya: Universitas
Airlangga
Block, Seymour S. 1977. Disinfection, sterilization, and  preservation (ed 2th). Philadelphia : Lea & Febiger.
Block, Seymour S. 2001. Disinfection,
sterilization, and preservation (ed 5th). USA : Lippincot williams &
wilkins.
Cavalcante, R.S et al . 2008. A Combination of  Techniques to Evaluate Photodynamic Efficiency of Photosensitizers . Wiley-VCH
Verlag GmbH & Co. KGaA.
Costa, Liliana et al . 2012. Photodynamic
Inactivation of Mammalian Viruses and Bacteriophages. Open Access
Viruses.
Csele, Mark. 2004. Fundamentals Of Light
Sources And Lasers. New Jersey :
John Wiley & Sons, Inc.
Darmadi. 2008. Infeksi Nosokomial
Problematika dan Pengendalianyya .
Jakarta : Penerbit salemba medika.
Departemen Kesehatan RI. 2009. Pedoman
Instalasi Pusat Sterilisasi di Rumah Sakit. Jakarta : Direktorat Jendral
Bina Pelayanan Medik.
De Rosa, Maria C dan Robert J Crutchley.
2002. Photosensitized singlet oxygen and its applications .
Coordination Chemistry Reviews :
Elsevier
Dhirgo, Adji ,. 2013. Perbandingan
Efektivitas Sterilisasi Alkohol 70%,Inframerah,Otoklaf, dan Ozon Terhadap Pertumbuhan Bakteri
Bacillus subtilis. Yogyakarta:
Universitas Gajah Mada
Gabriel, J.F. 1996. Fisika Kedokteran .
Jakarta : EGC
Gardner, Joan F and Margaret M Peel.
1986. Introduction to Sterilization
and Disinfection. Melbourne:
Longman Group.
Giancoli, 2001. Physics fifth edition . Alih bahasa : Yuhilza Hanum dan Irwan Arifin. Jakarta : Erlangga.
Grossweiner LI, 2005. The Science of
Phototherapy: An Introduction , USA : Springer
Hamanaka, Daisuke. 2005. Effect Of  The
Wavelength Of Infrared Heaters On
The Inactivation Of  Bacterial
Spores At Various Water Activities .
International Journal of  Food Microbiology : Elsevier
Hamblin dan Hasan T, 2003. Photodynamic therapy: a new antimicrobial
approach to infectious disease . PPS
(http://www.rsc.org/pps)
Hamblin dan Hasan T, 2004. Photodynamic
therapy: a new antimicrobial approach to infectious disease ,
Journal of Photochem & Photobiol,
Science.
Harwood, C.R and S.M.Cutting. 1990.
Molecular Biological Methods for Bacillus . England : John Wiley &
Sons Ltd.
Hatmanti, Ariyani. 2000. Pengenalan
Bacillus Spp. Jakarta : Oseana
Held, Gilbert. 2009. Introduction to Light
Emitting Diode Technology and Applications . Boca Raton : Taylor
& Francis Group
Juzenas, Petras et al . 2008. Quantum dots and nanoparticles for photodynamic and radiation therapies of cancer.
Advance Drug Delivery Review :
Elsevier
Kranovsky, A.A. 2007. Luminescence and photochemical studies of singlet oxygen photonics. Journal of
Photochemistry and Photobiology :
Elsevier
Mamone, L et al . 2014. Photodynamic inactivation of Gram-positive bacteria employing natural resources . Journal of
Photochemistry and Photobiology :
Elsevier
Merchant, LA and Parker, R.A. 1961.
Laboratry Manual for Veterinary Bacteriology . Baltimore : Burgess
Publishing Company.
Naim, R. 2003. Endospora, Aspek
Kesehatan Industri Pangan . Bogor :
FKH-IPB (diakses di http//www. kompas. com/kompascetak/03 0 1
127 lipteU9T 493 .htm)
Niemz, Markolf H. 2007. Laser-Tissue
Interactions Third enlarged edition .
New York :Springer Berlin
Heidelberg
Nicoresu, I et al . 2012. Pulsed Light
Inactivation Of  Bacillus Subtilis Vegetative Cells In Suspensions and Spices . Food Control Journal :
Elsevier
Nitzan, Divon MS, Shporen E, Malik Z,
2004. ALA Induced Photodynamic
Effect on Gram Positive and
Negative bacteria . Journal of
Photochemistry & Photobiology.
Papageorgiu, Katsambas, Chu. 2000.
Phototherapy with Blue (415nm) and Red (660nm) Light in The
Treatment of Acne Vulgaris . British
Journal of Dermatology .
Schubert  E.F.,  2006,  Light  Emitting
Diodes, 2 nd ed., Cambridge
University Press, USA.
Senior, John. 1985. Optical Fiber Communications . London : Prentice-Hall International. Tamimah,  Ni’matut.  2013.  Skripsi Potensi
Pemaparan  Light  Emitting  Diode (LED)  untuk  Fotoinaktivasi  Bakteri Streptococcus  Mutans  secara  In
Vitro .
Departemen
Fisika
Universitas Airlangga.
Wainwright, Mark. 2009. Photosensitizers in Biomedicine .Wiley-
Blackwell:UK
Zhou, Li Sheng et al . 2012. Novel fluorescent risedronates: Synthesis, photodynamic inactivation and imaging of Bacillus subtilis.
Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters : Elsevier