## PENGARUH EKSTRAK KASAR ENZIM PEROKSIDASE DARI KUBIS
( Brassica oleraceae L .) TERHADAP AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK TONGKOL JAGUNG
( Zea mays L.)
Crispa J. Lintjewas 1) , Edi Suryanto 2) , Jemmy Abidjulu 2)
1) Program Studi Farmasi, FMIPA UNSRAT Manado
2) Jurusan Kimia, FMIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
This  study  was  conducted  to  determine  the  effect  of  crude  extract  containing  the  enzyme peroxidase  from  cabbage  to  the  antioxidant  activity  of  the  extract  of  corn  cobs.  Extraction  of corn  cobs  performed  using  ethanol  80%  with  reflux  for  2  hours  while  extracting  the  enzyme from  cabbage  with  solvent  phosphate  buffer  pH  7.  Then  the  content  of  secondary  metabolites tested  before  and  after  the  addition  of  crude  extract  enzyme  peroxidase.  Whereas  to  determine the antioxidant activity was tested by the ability of free-radical scavengers DPPH and hydroxyl radical  scavengers  Then  the  total  antioxidant  extracts  was  measured  with  a  spectrophotometer. Results of the analysis of the highest content of total phenolic fraction obtained from the enzyme at 124.39 mg / kg, followed by P4 81.53; P1 75.41;  P3 67.24 and P2 50.92 mg / kg. Results of the  analysis  of  antioxidant  activity  was  also  obtained  from  the  enzyme  fraction.  The  ability  of hydroxyl  radicals  in  the  highest  rat  tissue  homogenates  were  also  obtained  from  the  enzyme fraction of 90.1%. Results  of this  study concluded that the addition  of crude extract  containing the  enzyme  peroxidase  from  cabbage  provides  enhanced  phenolic  and  flavonoid  content  also increases the antioxidant activity of the extract of corn cobs.
Keyword: Corn cob, cabbage, peroxidase anzyme, antioxidant.

## ABSTRAK
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh  penambahan  ekstrak  kasar  yang mengandung  enzim    peroksidase  dari  kubis  terhadap  aktivitas  antioksidan  ekstrak  tongkol jagung. Ekstraksi tongkol jagung dilakukan menggunakan pelarut etanol 80% dengan metode refluks selama 2 jam sedangkan ekstraksi enzim dari kubis dengan pelarut buffer fosfat pH 7. Kemudian  dilakukan  pengujian  kandungan  metabolit  sekunder  sebelum  dan  setelah penambahan  ekstrak  kasar  enzim  peroksidase.  Sedangkan  untuk  mengetahui  aktivitas antioksidan  diuji  berdasarkan  kemampuan  penangkal  radikal  bebas  DPPH  dan  penangkal radikal  hidroksil  Kemudian  total  antioksidan  ekstrak  diukur  dengan  spektrofotometer.  Hasil analisis  kandungan  total  fenolik  tertinggi  diperoleh  dari  fraksi  enzim  sebesar  124,39  mg/kg, diikuti  oleh  P4  81,53;  P1  75,41;  P3    67,24  dan  P2  50,92  mg/kg.  Hasil  analisis  aktivitas antioksidan  juga diperoleh dari fraksi enzim. Kemampuan menangkal radikal hidroksil dalam homogenat  jaringan  tikus  tertinggi  juga  diperoleh  dari  fraksi  enzim  sebesar  90,1%.  Hasil penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa  penambahan  ekstrak  kasar  yang  mengandung  enzim peroksidase  dari  kubis  memberikan  peningkatan  kandungan  fenolik  dan  flavonoid  juga meningkatkan aktivitas antioksidan terhadap ekstrak tongkol jagung.
Kata Kunci: Tongkol jagung, kubis, enzim peroksidase, antioksidan

## PENDAHULUAN
Reaksi  oksidasi  terjadi  setiap  saat, ketika  manusia  bernapas  terjadi  reaksi oksidasi. Reaksi ini mencetuskan terbentuknya  radikal  bebas  yang  sangat aktif,  yang  dapat  merusak  struktur  serta fungsi  sel.  Namun,  reaktivitas  radikal  bebas itu  dapat  dihambat  oleh  sistem  antioksidan yang  melengkapi  sistem  kekebalan  tubuh (Winarsi, 2007).
Jagung  merupakan  bahan  alam  yang banyak  dimanfaatkan  masyarakat  sebagai tanaman  pangan  dengan  menggunakan  biji yang  menempel  pada  tongkolnya  sehingga menghasilkan  limbah  tongkol  jagung  yang kemudian  dibuang  atau  dibakar.  Padahal tongkol jagung merupakan simpanan makanan  untuk  pertumbuhan  biji  jagung selama  melekat  pada  tongkol , maka  dari  itu tongkol  jagung  diduga  memiliki  senyawa- senyawa aktif yang dapat berpotensi sebagai antioksidan (Saleh et al., 2012).
Pemanfaatan  tongkol  jagung  masih sangat terbatas. Kebanyakan limbah tongkol jagung  hanya  digunakan  untuk  bahan tambahan  makanan  ternak,  atau  hanya digunakan  sebagai  bahan  bakar  setelah melalui proses pengeringan. Berbagai penelitian tentang tongkol jagung yang telah dilakukan,  diantaranya  Suryanto et  al .
(2013) mengemukakan bahwa ekstrak
tongkol  jagung  memiliki  potensi  sebagai fitokimia  dengan  adanya  fenolik  sebagai oksigen  singlet  dan  senyawa  aktif  tabir surya.  Lumempouw et  al .  (2012a,  2012b) dalam penelitian yang dilakukan menunjukan  bahwa  ekstrak  tongkol  jagung memiliki  kandungan  fenolik  yang  sejalan dengan  nilai  SPF.  Selain  itu  Saleh et  al. (2012)  mengungkapkan  bahwa  senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak tongkol jagung  memiliki  kemampuan  yang  baik dalam  menangkal  radikal  bebas  yang bekerja  menghambat  oksidasi  dengan  cara bereaksi  dengan  radikal  bebas  reaktif membentuk  radikal  bebas  tak  reaktif  yang relatif  stabil.  Wungkana et  al. (2013) mengemukakan bahwa fraksi fenolik tongkol  jagung  dapat  berperan  sebagai antioksidan  dan  sekaligus  sebagai  tabir surya.
Kubis  merupakan  salah  satu  tanaman sumber  dari  enzim  peroksidase.  Enzim peroksidase  merupakan  salah  satu  enzim yang  termasuk  ke  dalam  kelas  enzim oksidoreduktase.  Enzim  ini  mengkatalis transfer  atom  H,  atom  O,  atau  elektron  dari satu  substrat  ke  lainnya.  Peroksidase  dapat mengkatalis  reaksi  oksidase  dari  berbagai senyawa organik ataupun senyawa anorganik  dengan  adanya  H 2 O 2 sebagai akseptor elektron (Sutrisno, 2012).
Belum  ditemukan  penelitian  terkait penambahan  enzim  pada  tongkol  jagung. Oleh  karena  itu  penelitian  ini  bertujuan untuk memanfaatkan enzim peroksidase dari kubis  untuk  mempelajari  pengaruh  ekstrak kasar enzim peroksidase dari kubis terhadap aktivitas antioksidan tongkol jagung..

## METODE

## Material Penelitian
Peralatan yang digunakan pada penelitian  ini  antara  lain  :  Alat-alat  gelas, neraca  analitik,  rotari  evaporator,  vial sampel,  kulkas,  penangas  air,  plat  KLT, vortex, mortar, penyemprot, alumunium foil, oven, spektrofotometer ultra violet, gunting, plat tetes, chamber dan waterbath.
Bahan yang digunakan dalam penelitian adalah  tongkol  jagung  dan  kubis.  Bahan kimia  dan  pereaksi  yang  digunakan  etanol, metanol,  etil  asetat,  akuades,  buffer  fosfat pH 7,H 2 O 2 (hidrogen peroksida), petroleum eter,  butanol,  DPPH  (1,1-  diphenyl-2- pikrilhidrazil),  reagen  Folin  Ciocalteu, natrium  karbonat,  TCA  (trikloroasetat)  dan TBA (asam tiobarbiturat). Tikus galur wistar sebanyak 2 ekor untukd diambil organ hati.

## Persiapan dan Ekstraksi Sampel
Sampel  tongkol  jagung  dibersihkan  dan dipotong  kecil-kecil  untuk  digiling  sampai halus  kemudian  dikeringanginkan  selama  1 bulan,  Sebanyak  150  g  serbuk  tongkol jagung  diekstraksi  dengan  cara  direfluks menggunakan  pelarut  etanol  80%  sebanyak 1500 mL, selama 2 jam pada suhu 80-90 °C. Filtrat  hasil  penyaringan  diuapkan  dan dikeringkan  dalam  oven  hingga  diperoleh ekstrak kental tongkol jagung
Ekstraksi  enzim  peroksidase  dari kubis  dilakukan  sesuai  metode  (Thongsook, 2005)  dengan  sedikit  modifikasi.  Enzim peroksidase  diambil  dari  kubis  segar  dan dibuat  dalam  4  perbandingan  yaitu  P1  (1:1) yaitu  250  g  kubis  segar  dengan  250  mL buffer  fosfat  pH  7,  P2  (1:2)  yaitu  250  g kubis segar dengan 500 mL buffer fosfat pH 7,  P3  (1:3)  yaitu  250  g  kubis  segar  dengan 750  mL  buffer  fosfat  pH  7,  dan  P1  (1:4) yaitu  250  g  kubis  segar  dengan  1000  mL buffer  fosfat  pH  7.  Homogenat  yang diperoleh disaring dengan kain  katun,  filtrat yang  diperoleh  kemudian  disentrifugasi dengan  kecepatan  1700  rpm  selama  10 menit  untuk  memisahkan  enzim  kasar  dari serpihan-serpihan. Supenatan yang diperoleh dipisahkan  dari  endapannya,  supenatan  ini mengandung ekstrak enzim kasar.
Selanjutnya  dilakukan  pencampuran  antara
ekstrak  kasar  enzim  dengan  ekstrak  tongkol jagung.
Sebanyak 20 mL ekstrak enzim peroksidase dari kol direaksikan dengan 1 g ekstrak tongkol jagung dan ditambahkan 0,5 mL  hidrogen  peroksida  30%  kemudian direaksikan  selama  60  menit.  Setelah  60 menit ditambahkan 20 mL buffer asetat (pH 3)  dan  20  mL  metanol  10%,  kemudian diekstraksi  dengan  etil  asetat  dan  dilakukan pengujian fitokimia dan antioksidan.

## Penentuan kandungan Total Fenolik
Kandungan  total  fenolik  ditentukan dengan menggunakan metode Folin Ciocalteu (Conde et al ., 1997). Sebanyak 0,1 mL  larutan  ekstrak  1000  ppm  dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  lalu  ditambahkan  0,1 mL  reagen  Folin  Ciocalteu  50%.  Campuran tersebut  divortex,  lalu  ditambahkan  2  mL larutan  natrium  karbonat  2%.  Selanjutnya campuran  diinkubasi  dalam  ruang  gelap selama  30  menit.  Absorbansinya  dibaca pada  λ  750  nm  dengan  spektrofotometer. Kandungan  total  fenol  dinyatakan  sebagai mg ekivalen asam galat/g ekstrak

## Penentuan Aktivitas Antioksidan
Penentuan aktivitas penangkal radikal  bebas  DPPH  dilakukan  menurut Burda  dan  Olezek  (2001)  dengan  sedikit modifikasi.  Sebanyak  0,5  mL  masing- masing  ekstrak  1000  ppm  ditambahkan dengan 2 mL larutan 1,1difenil-2- pikrilhidrazil (DPPH) dan divortex selama 2 menit.  Berubahnya  warna  larutan  dari  ungu ke  kuning  menunjukkan  efisiensi  penangkal radikal bebas. Selanjutnya absorbansi diukur menggunakan  spektrofotometer  pada  λ  517 nm.  Di  amati  selang  waktu  5  menit  selama 30 menit. Aktivitas penangkap radikal bebas dihitung  sebagai  persentasi  berkurangnya warna DPPH dengan menggunakan persamaan:

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi
Dalam penelitian ini Tongkol Jagung yang  telah  dipotong-potong,  dihaluskan dengan  blender  kemudian  di  ekstraksi dengan  pelarut  etanol  80%  sebagai  pelarut yang bersifat polar yang diharapkan mampu menetrasi  sel  dan  menyari  semua  senyawa yang  bersifat  polar  dalam  sel  (Silva,  1998) dengan  metode  refluks  selama  2  jam menghasilkan  ekstrak  yang  berbentuk  pasta dengan  warna  coklat  tua  dengan  rendemen sebesar 3,84 dan 4,13%.
Sebagai  sumber  enzim  peroksidase digunakan  kubis  segar  kemudian  dilarutkan dalam  buffer  fosfat  pH  7  dengan  masing- masing  perbandingan  250  g  kubis  dengan 250  mL  pelarut  (1:1),  250  g  kubis  dengan
500  mL  pelarut  (1:2),  250  g  kubis  dengan 750  mL  pelarut  (1:3)  dan    250  g  kubis dengan  1000  mL  pelarut  (1:4)  kemudian didapatkan  homogenat  berwarna  hijau. Setelah  didapatkan  homogenat  masing- masing perbandingan dilakukan pencampuran dengan ekstrak tongkol jagung.
Ekstrak  kasar  enzim  peroksidase  dari kubis  direaksikan  dengan  ekstrak  tongkol jagung  dimaksudkan  untuk  mengetahui pengaruh  dalam  aktivitas  antioksidannya. Kemudian  diekstraksi  dengan  etil  asetat setelah  itu  dievaporasi  dan  dikeringkan dalam  oven  sehingga  didapatkan  rendemen hasil  ekstraksi  enzim  peroksidase  dan tongkol jagung yang dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Rendemen hasil ekstraksi enzim dan tongkol jagung dari P1 (250 g : 250 mL), P2 (250 g : 500 mL), P3 (250 g : 750 mL) dan P4 (250 g : 1000 mL Ekstrak Rendemen (%) P1 P2 P3 P4 0,82
0,76 0,74 0,90
Berdasarkan  tabel 2. Dapat diketahui rendemen terbesar didapatkan pada P4 (1:4) yaitu  250  g  kubis  dengan  1000  mL  pelarut (0,90%), diikuti dengan P1 (1:1) yaitu 250 g kubis  dengan  250  mL  pelarut  (0,82%), selanjutnya  P2  (1:2)  yaitu  250  g  kubis dengan 500 mL pelarut (0,76%) dan terkecil dihasilkan  oleh  P3  (1:3)  yaitu  250  g  kubis dengan 750 mL pelarut (0,74%).

## Penentukan Kandungan Total Fenolik
Analisis  fitokimia  bertujuan  untuk mengetahui  keberadaan  senyawa  metabolit sekunder  yang  terkandung  dalam  ekstrak. Komponen  fenolik  atau  disebut  juga
polifenol  merupakan  hasil  dari  metabolisme sekunder  tanaman  dan  diketahui  memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi.
Oleh  karena  itu  untuk  mengetahui potensi  senyawa  antioksidan  dalam  sampel yaitu  ekstrak  tongkol  jagung  yang  telah dicampur  dengan  ekstrak  enzim  dari  kubis dilakukan  pengujian  total  fenol  dengan menggunakan metode Folin-Ciocalteu (Thang  dan  Yen,  2002).  Metode  ini  adalah untuk menentukan secara kuantitatif kandungan  fenolik  dalam  ekstrak  tanaman. Hasil  analisis  kandungan  total  fenolik  yang diperoleh dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Kandungan Total Fenolik dan Flavonoid dari Ekstrak
Tongkol  jagung  (ETJ),  Perbandingan  1:1  (P1), Perbandingan  1:2  (P2),  Perbandingan  1:3  (P3),  dan Perbandingan 1:4 (P4). Sampel Fenolik ETJ P1 P2 P3 P4 48,88 75,41 50,92 67,24 81,53
Berdasarkan data pada Tabel 3. dapat dilihat bahwa terjadi peningkatan kandungan total  fenolik  dan  flavonoid  dari  Ekstrak Tongkol  Jagung  (ETJ)  dengan  penambahan ekstrak  enzim.  Kandungan  total  fenol  pada ekstrak  P4  yaitu  perbandingan  (1:4)  250  g
kubis  dengan  1000  mL  buffer  fosfat  (81,53 mg/kg)  memberikan  hasil  tertinggi,  diikuti ekstrak  P1  yaitu  perbandingan  (1:1)  250  g kubis  dengan  250  mL  buffer  fosfat  (75,41 mg/kg),  P2  yaitu  perbandingan  (1:2)  250  g kubis  dengan  500  mL  buffer  fosfat  (50,92
mg/kg) dan P3 yaitu perbandingan (1:3) 250 g kubis dengan 750 mL buffer fosfat (67,24 mg/kg).
Kandungan  total  fenolik  dalam sampel  ditentukan  dengan  menggunakan metode Folin Ciocalteu berdasarkan kemampuan senyawa fenolik dalam ekstrak bereaksi  dengan  asam  fosfomolibdat- fosfotungkstat dalam reagen Folin- ciocalteu  yang  berwarna  kuning  dan  akan berubah  menjadi  warna  biru.  Semakin  tua intensitas  warnanya  menandakan  semakin tinggi  kandungan  total  fenolik  dalam ekstrak (Shahidi dan Nack, 1995).
Hasil  kandungan  total  fenolik  dapat dipengaruhi  oleh  proses  ekstraksi  dengan cara  refluks.  Menurut  Jeong  (2004) ekstraksi  dengan  perlakuan  panas  dapat membebaskan  dan  mengaktifkan  berat molekul  rendah  dari  subunit  molekul polimer  yang  berberat  molekul  tinggu
sehingga efektif untuk meningkatkan kandungan fenolik dalam tanaman.
Menurut  Hardiana  (2012)  Selain proses  ekstraksi, pelarut juga  dapat mempengaruhi total fenolik yang dihasilkan  seperti  pada  fraksi  etanol  dan kloroform.  Hal  ini  disebabkan  senyawa golongan  fenol  bersifat  polar  atau  semi polar (Hayati, 2010).

## Aktivitas Penangkal Radikal DPPH
Metode  DPPH  telah  digunakan  untuk mengevaluasi  aktivitas  antioksidan  dari komponen  yang  disebabkan  prosedurnya sederhana, cepat, sensitive, dan reproduksibel (Fyliano et al , 1999). Aktivitas  penangkapan  radikal  bebas  DPPH dari keempat perbandingan ekstrak menggunakan  metode  Burda  dan  Olezek (2001)  dapat  dilihat  pada  gambar  4
.
Gambar  4.  Aktivitas  Penangkal  Radikal  DPPH  dari  Ekstrak  Tongkol Jagung  (ETJ),  Perbandingan  1:1  (P1),  Perbandingan  1:2 (P2), Perbandingan 1:3 (P3), Perbandingan 1:4 (P4).
Pengukuran  absorbansi  dilakukan pada konsentrasi 1000 ppm. Dari gambar 4. Terlihat  bahwa  terjadi  peningkatan  aktivitas antioksidan  dimulai  dari  P1  (79,5%),  P2 (80,3%),  P3  (82,5%),  P4  (90,5%)  dan  yang tertinggi  FE  (95,8%).  Hal  ini  sebanding dengan  kandungan  total  fenolik  yakni kandungan  terbesar  terdapat  pada  FE.  Hal ini  dikarenakan  menurut  Shahidi  dan  Nack (2004)  antioksidan  senyawa  fenolik  dapat berperan  sebagai  donor  hydrogen  kepada radikal bebas sehingga menghasilkan radikal stabil  yang  berenergi  rendah  yang  berasal dari  senyawa  fenolik  yang  kehilangan  atom hydrogen,  struktur  radikal  baru  ini  menjadi dtabil  karena  terjadinya  resonansi  pada cincin benzenanya (radikal peroksil).
Metode  DPPH  didasarkan  pada penurunan nilai absorbansi akibat perubahan
warna  larutan  yang  mula-mula  berwarna ungu akan berubah menjadi kuning. Perubahan  ini  terjadi  saat  radikal  DPPH ditangkap  oleh  antioksidan  yang  melepas atom  H  untuk  menangkap  DPPH-H  yang stabil. Nilai yang semakin tinggi menujukan bahwa  sampel  yang  digunakan  memang berpotensi  sebagai  antioksidan  (Ridwin, 2008).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian ini ekstrak  kasar  enzim  dengan  perbandingan 1:4  (P4)  memberikan  nilai  tertinggi  diikuti dengan  P1,  P2  dan  P3.  Dapat  disimpulkan bahwa  penambahan  ekstrak  kasar  enzim yang  diperoleh  dari  kubis  pada  ekstrak tongkol  jagung  memberikan  peningkatan
0 20 40 60 80 100 P1 P2 P3 P4 A kt iv itas Pen an gkal r ad ikal D P P H (% ) Jenis ekstrak
kandungan  total  fenolik  dan  aktivitas antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Burda, S., dan W. Oleszek. 2001. Antioxidant and Antiradical  Activities of  Flavonoids. J.  Agric.  Food  Chem . 49: 2774-2779.
Conde, E. E., M. C. Cadahia, G. Vallejo, B. F.  D.  Simon  and  J.  R.  G.  Adrados. 1997. Low Molecular Weight Polyphenol  in  Cork  of  Querceus
Suber. J.  Agric.  Food  Chem . 45 :
2695-2700.
Karyasari. 2002. Materi Pelatihan Profesional  Tanaman  Obat .  Kelas Profesional. Penyakit dan Pengobatannya_ Karyasari, Bogor Lomempuow, L.I., E. Suryanto., J. Paendong.  2012.  Aktivitas  Anti  UVB Ekstrak  Fenolik  dari  Tongko  Jagung ( Zea  mays L.). Jurnal  Mipa Online .
1 :1-4.
Lomempuow,  L.I.,  J.  Paendong.,  L.I. Momuat.,  dan  E.  Suryanto.  2012.
Potensi  Antioksidan  dari  Ekstrak Etanol Tongkol Jagung ( Zea mays L.).
Chem. Prog . 5 :49-56
Miller,  J.M.  1975. Separation  Methods  in
Chemical Analytics . John Wiley Publisher, New York.
Saleh,  L.P.,  E.  Suryanto.,  A.  Yudistira. 2012.  Aktivitas  Antioksidan  dari Ekstrak  Tongkol  Jagung  ( Zea  mays L.). Pharmacon . 1 :20-24.
Shahidi,  F.,  M.  Naczk.  1995. Food Phenolics: Sources, Chemistry, Effects and Application .. Technomic pub. Co.
Inc. Lancester-Basel. Suarni.,  W.  Widiowati.  2007.  Potensi Kandungan Senyawa β-caroten Beberapa  Komoditi  Sebagai  Sumber Vitamin A. Prosiding Seminar Nasional. Puslitbang Tanaman Pangan, Palu. 563-568. Sutrisno,  W. 2012. Sintesis Senyawa Dimer Isoeugenol Menggunakan Enzim Peroksidase dari Kulit Bawang Bombay.    [ Tesis ].  Departemen  Kimia FMIPA UI, Depok.
Suryanto,  E.,  L.  I.  Momuat.,  A.  Yudistira., F.  Wehantouw.  2003.  The  Evaluation Of  Singlet  Oxygen  Quenching  and
Sunscreen Activity Of Corncob Extract. Indonesian  J.  Pharm . 4 :296- 278
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan . CV Putra Media Nusantara, Surabaya.
Thongsook,  T.,  dan  Barrett,  D.M.  2005. Purification  and  Characterization  of Broccoli (Brassica  oleracea Var. italica)  Peroxidases. J.  Agric.  Food Chem ., 53 : 3206-3214
Winarno,  F.G.  1989. Kimia  Pangan  dan Gizi . PT Gramedia, Jakarta.
Winarsi,  H.  2007. Antioksidan  Alami  dan Radikal Bebas. Yogyakarta: Kanisius. 122-204.
Wungkana,  I.,  E.Suryanto.,  L.  Momuat.
2013.  Aktivitas  Antioksidan  dan
Tabir  Surya  Fraksi  Fenolik  dari Limbah  Tongkol  Jagung  ( Zea  mays L.) Pharmacon . 2 : 149-151.