Journal Syifa Sciences and Clinical Research
Volume 5 Nomor 1, 2023
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v5i1.7157

## Analisis Kandungan Flavanoid Daun Sambang Darah ( Excoecaria cochinchinensis L)
Ariani H. Hutuba 1* , A. Mu'thi Andy Suryadi 2 , Faramita Hiola 3
1,2,3 Jurusan Farmasi, Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo,
Jl. Jenderal Sudirman No. 06 Kota Gorontalo 96128, Indonesia
* Penulis Korespondensi. Email: ariani.hutuba@ung.ac.id

## ABSTRAK
Flavonoid  adalah  salah  satu  senyawa  kimia  yang  berasal  dari  tumbuhan  yang merupakan  kelompok  metabolit  sekunder.  Flavonoid  Senyawa  flavonoid  adalah senyawa polifenol yang mempunyai 15 atom karbon yang tersusun dalam konfigurasi C 6 -C 3 -C 6 , yaitu dua cincin aromatik yang dihubungkan oleh 3 atom karbon yang dapat  atau  tidak  dapat  membentuk  cincin  ketiga.  Flavonoid  tersebar  luas  pada tumbuhan angiospermae, gymnospermae, dan pteridopita. Flavonoid ini memberikan efek  fisiologis  dan  farmakologis  terhadap  makhluk  hidup.  Tujuan  dari  penelitian  ini adalah  Untuk  mengidentifikasi  senyawa  flavonoid  yang  ada  dalam  ekstrak  daun tanaman  sambang darah  ( Excoecaria  cochinchinensis  L ).  pada  peneletian  ini digunakan ekstraksi  maserasi  bertingkat  dengan  menggunakan  pelarut  n-heksan,  etil  asetat  dan methanol  yang  kemudian  filtratnya  diuapkan  menggunakan  alat  evaporator.  Hasil skrining  fitokimia  positif  menandakan  adanya  senyawa  flavonoid  pada  ekstrak methanol  dan  negatif  pada  ekstrak  n-heksan  dan  etil  asetat.  Dari  ekstrak  methanol dilakukan  KLT  dengan  perbandingan  eluen  methanol  etil  asetat  (8:2)  didapatkan pemisahan dua noda dimana salah satu noda memiliki nilai Rf yang sama dengan nilai Rf flavonoid, kemudian dilakukan analisis spetrofotometri UV-Vis menghasilkan tiga serapan  panjang  gelombang,  yaitu  pita  I  (350  nm)  dan  pita  II  (255  nm  dan  267  nm). spektrum yang diperoleh merupakan golongan senyawa flavon.
Kata Kunci:
Favonoid; Daun sambang darah; spektrofotometri UV-Vis Diterima: 21-12-2022 Disetujui: 28-02-2023 Online: 01-03-2023

## ABSTRACT
Flavonoids  are  chemical  compounds  derived  from  plants  which  are  a  group  of  secondary metabolites. Flavonoids Flavonoid compounds are polyphenolic compounds that have 15 carbon atoms arranged in a C 6  -C 3 -C 6 configuration, namely two aromatic rings connected by 3 carbon  atoms  that  can  or  cannot  form  a  third  ring.  Flavonoids  are  widely  distributed  in angiosperms,  gymnosperms,  and  pteridopites.  These  flavonoids  provide  physiological  and pharmacological effects on living things. The purpose of this study was to identify the flavonoid compounds present in the leaf extract of the blood sambang plant (Excoecaria cochinchinensis L). In  this  study,  a  multilevel  maceration  extraction  was  used  using  n-hexane,  ethyl  acetate  and methanol  solvents  and  then  the  filtrate  was  evaporated  using  an  evaporator.  Positive phytochemical  screening  results  indicated  the  presence  of  flavonoids  in  methanol  extract  and negative in n-hexane and ethyl acetate extracts. From the methanol extract, TLC was carried out with an eluent ratio of methanol ethyl acetate (8: 2), it was obtained the separation of two stains
where one of the stains had the same Rf value as the Rf value of flavonoids, then performed a UV- Vis spectrophotometric analysis resulting in three absorption wavelengths, namely band I (350 nm) and band II (255 nm and 267 nm). the spectrum obtained is a class of flavone compounds.
Copyright © 2023 Jsscr. All rights reserved.
Keywords:
Flavonoids; Blood sambang leaves; UV-Vis spectrophotometry Received: 2022-12-21 Accepted: 2023-02-28 Online: 2023 -03-01

## 1.  Pendahuluan
Indonesia  sering  disebut  sebagai  negara  kepulauan  dengan  tingkat keberagaman dan kehidupannya yang sangat tinggi. Tercatat bahwa diperkirakan terdapat  25%  dari  spesies  tumbuhan  berbunga  yang  ada  di  dunia  berasal  dari indonesia dan merupakan urutan ketujuh negara terbesar yang memiliki jumlah spesies  mencapai  20.000  spesies,  sekitar  40%  tumbuhan  endemik  asli  dari Indonesia    Indonesia.  Orchidaceae  (anggrek-anggrekan)  merupakan  family tumbuhan  yang  memiliki anggota  spesies  terbanyak yang  dikisarkan  mencapai 4.000  spesies.  Untuk  jenis  tumbuhan  berkayu,  386  spesies  dari  famili Dipterocarpaceae,  500  spesies  dari  anggota  famili  Myrtaceae  (Eugenia)  dan Moraceae  (Ficus)    dan  sebanyak  737  spesies  dari  anggota  famili  Ericaceae, termasuk  Rhododendrom  sebanyak  287  spesies  dan  Naccinium  sebanyak  239 spesies [16].
Obat  tradisional  merupakan  bahan  atau  ramuan  bahan  yang  berasal  dari bahan  tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan galenik atau campuran dan  bahan-bahan  tersebut,  yang  secara  traditional  dapaat  digunakan  sebagai pengobatan  berdasarkan  pengalaman    menurut  PERMENKES  mengenai  Izin Usaha  Industri  Obat  Tradisional  dan  Pendaftaran  Obat  Tradisional. Perkembangan obat tradisional lebih banyak berupa campuran yang asalnya dari tumbuh-tumbuhan sehingga dikenal dengan  obat herbal. Contoh  khusus untuk Obat herbal antara Jamu, obat herbal terstandarisasi dan fitofarmaka. Salah satu jenis  tanaman  yang  memiliki  potensi  untuk  dapat  dijadikan  sebagai  obat tradisional adalah sambang darah [11].
Sambang darah menurut Dalimartha dalam buku atlas tumbuhan Indonesia, tanaman yang  memiliki nama latin Excoecaria cochinchinensis ini adalah tumbuhan berkhasiat  obat  bersifat  beracun  dan  berasal  dari China dan Asia  Tenggara. sambang darah memiliki daun yang berkhasiat dapat menghilangkan gatal-gatal (anti  pruritik),  penghenti  perdarahan  (hemostatis),  mengobati  disentri  dan muntah  darah    [1].  Sambang  darah  adalah  tanaman  yang  dipakai  untuk memecahkan gangguan yang ada hubunganya dengan permasalahan kewanitaan yang berlebihan, batuk berdarah, muntah berdarah, dan penyakit penyerta seperti batuk berlendir. Topikal untuk eksim, badan gatal, sisik pada kulit [14]  .
Biasanya  daun-daun  yang  dipakai  masyarakat  Vietnam  dalam  pengobatan beberapa gejala, salah satunya diare berkelanjutan [2].
Salah  satu  senyawa  kimia  yang  asalnya  dari  tumbuhan  yang  merupakan kelompok metabolit sekunder adalah flavanoid. Senyawa flavonoid merupakan senyawa polifenol dengan 15 atom karbon yang tersusun dalam konfigurasi C 6 - C 3 -C 6 , yaitu dua cincin aromatik yang dihubungkan oleh 3 atom karbon yang dapat ataupun tidak dapat membentuk cincin ketiga. Flavonoid sering terdapat
dalam  semua  tumbuhan  hijau  sehingga  mudah  ditemukan  pada  tiap  ekstrak tumbuhan [8].
Dengan  adanya  tanaman  sambang  darah  yang  bisa  digunakan  sebagai obat dan pentingnya tanaman tersebut yang dapat digunakan sebagai alternatif bahan  dasar  pembuatan  obat,  identifikasi  suatu  senyawa  metabolit  sekunder terhadap tanaman tersebut dengan menggunakan salah satu metode analisis perlu digunakan.  Spektroskopi  serapan  UV  merupakan  cara  tunggal  yang  dapat dimanfaatkan  untuk  membantu  menentukan  pola  oksigenasi  dan mengidentifikasi jenis flavonoid. Di samping itu, dengan penambahan pereaksi geser  dalam  larutan  yang  disevut  cuplikan  dan  mengamati  pergeseran  puncak serapan yang terjadi kedudukan gugus hidroksil fenol bebas pada inti flavonoid dapat ditentukan [3].
Berdasarkan  uraian  diatas,  maka  perlu  dilakukan  pengujian  mengenai keberadaan  senyawa  kimia  pada  tumbuhan  sambang  darah  ( Excoecaria cochinchinensis  L ).  dengan  menggunakan  metode  spektrofotometri  UV-Vis. metode  spektrofotometri  UV-Vis  adalah  suatu  instrumen  analisis  spektroskopi dengan dasar gelombang elektromagnetik pada panjang gelombang 190-400 (UV) dan  400-780  (Visible/  tampak)  yang  berdasarkan  pada  absorpsi  gelombang elektromagnetik  yang  dapat  menghasilkan  perubahan  transisi  elektrtronik  dari keadaan  dasar  ke  keadaan  yang  tereksitasi,  sehingga  pembacaan  senyawa golongan flavanoid yang di analisis bisa disesuaikan dengan panjang gelembang dari senyawa tersebut dengan hasil akhir berupa grafik dengan pita serapan.

## 2.  Metode
Rancangan penelitian yaitu eksperimental yang dilakukan di Laboratorium Farmasi  Bahan  Alam  Jurusan  Farmasi,  Fakultas  Olahraga  dan  Kesehatan Universitas  Negeri  Gorontalo,  pada  waktu  desember  2019-januari  2020. Pengambilan sampel pada penelitian diambil di daearah Kabupaten Bone Bolango, Kecamatan Suwawa

## Ekstraksi Tanaman
Simplisia  daun  sambang  darah  didapat  dari  daerah  kecamatan  Suwawa, kabupaten  Bone  Bolango  Gorontalo.  Simplisia  daun  dibuat  dengan  cara mengeringkan  terlebih  dahulu  daun  sambang  darah  kemudian  dirajang selanjutnya dikeringkan. simplisia  diekstrak dengan tiga pelarut yang berbeda yaitu n-heksan, etil asetat dan methanol

## Uji Warna Flavanoid
Skrining dilakukan pada masing-masing fraksi untuk mengetahui senyawa flavonoid yang terkandung.  Dilakukan dengan cara sampel dipanaskan selama 5 menit  dalam  tabung  reaksi.  kemudian  ditambahkan  sedikit  serbuk  magnesium beberapa  tetes  asam  klorida  pekat.  Bila  terjadi  perubahan  warna  menjadi merah/pink atau kuning menunjukkan sampel mengandung flavonoid.

## Uji KLT
Fraksi  yang  menunjukan  kandungan  flavonoid  di  evaporasi  sampai mendapat ekstrak kental. Kemudian ekstrak kental tersebut diambil sedikit dan
dilarutkan dengan pelarut yang sesuai kemudian sampel di totolkan ke lempeng KLT  yang  telah  disediakan  kemudian  dielusi  dengan  perbandingan  pelarut tertentu dan dilihat penampakan noda dengan menggunakan lampu UV, terakhir dihitung nilai Rf.

## Uji Spektrofotometri UV-Vis
Silika pada KLT dikerok dan dilarutkan dengan menggunakan pelarut yang sesuai dan disentrifuse untuk memisahkan silika dari sampel kemudian disaring. Filtrat  kemudian  dituangkan  kedalam  kuvet  danmasukkan  kedalam spektrofotometri  UV-Vis  yang  telah  terkalibrasi  kemudian  dilihat  penjang gelombangnya apakah sampel tersebut masuk dalam golongan flavonoid

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Hasil  ekstraksi  haksel  daun  sambang  darah ( Excoecaria  Cochinchinensis L) dengan  menggunakan  pelarut  n-heksan  menghasilkan  ekstrak  sebanyak  1,6  gr dengan persen rendamen 1,6  %, ettil asetat menghasilkan ekstrak sebanyak 1,24 gr  dengan  persen  rendamen  1,37  %,  dan  methanol  mendapatkan  eksttrak sebanyak  13,2 gr dan persen rendamen 16,5 % (Tabel 1).
Tabel 1. Hasil analisis perhitungan persen rendamen Berat sampel (haksel daun sambang darah) (gram) Pelarut (mL) Berat Ekstrak (gram) Rendamen (%) 100 n-heksan (1000) 1,6 1,6 90 Etil asetat (1000) 1,24 1,37 80 Metanol (1000) 13,2 16,5 Dalam  penelitian  ini  simplisisa  daun  sambang  darah  ditimbang  sebanyak 100  gram  diekstrak  dengan  tiga  pelarut  yang  berbeda  kepolarannya  masing- masing 1000 mL,tiap pelarut tidak diekstrak sekalian melainkan dibagi dalam tiga kali ekstraksi (500 mL, 250 mL, 250 mL) untuk tiap pelarut dalam 3 kali 24 jam, yang  pertama  dimulai  dari  dimana  dimulai  dari  pelarut  n-heksan  dilanjutkan dengan pelarut etil asetat dan diakhri dengan pelarut methanol, hasil filtrasi dari masing-masing pelarut kemudian difiltrasi dan devaporasi untuk mendapatkan ekstrak kental, selanjutnya dihitung persen rendamen dari masing-masing ekstrak kental  sehingga  hasil  perhitungan  rendamen  yang  didapat  adalah  1,6  %  (n- heksan), 1,37 % (e-asetat),dan  16,5 % (methanol).
Tabel 2. Hasil Uji Skrining Fitokimia
Jenis Pengujian Ekstrak Pereaksi Hasil Kesimpilan Flavanoid n-heksan HCl-Mg  Hijau – hijau keruh Negatif Flavanoid Etil asetat HCl-Mg Coklat- hijau Negatif Flavanoid metanol HCl-Mg Coklat-merah Positif
Hasil  uji  skrinning  senyawa  flavanoid  ekstrak kental  daun  sambang  darah ( Excoecaria  Cochinchinensis L)  terjadi  perubahan  warna  pada  ekstrak  kental methanol  dari  yang  semula  coklat  menjadi  merah  yang  menandakan  positif flavanoid, sedangkan untuk ekstrak kental n-heksan dan etil asetat tidak terjadi perubahan  warna  yang  menandakan  positif  flavanoid,  hal  ini  bias  dilihat  pada tabel  2.  Setelah  didapati  ekstrak  kental  dari  masing-masing  pelarut  yang diinginkan kemudian dilakukan uji warna flavanoid dengan melarutkan sampel dengan  methanol  kemudian  ditambahkan  beberapa  tetes  HCl  dan  serbuk magnesium,  dari  ketiga  ekstrak  kental  tersebut  didapati  bahwa  hanya  ekstrak kental dari pelarut methanol yang positif mengandung flavonoid karena terjadi perubahan warna menjadi merah, hal ini sesuai dengan skrining fitokimia yang dilakukan  oleh  Oktariza  dimana  sampel  berubah  menjadi  merah  setelah penambahan beberapa tetes HCl dan serbuk magnesium [10].

## Gambar 1. Hasil skrining fitokimia daun sambang darah
Pada  ekstrak  kental  n-heksan dan  etil  asatat menunjukan  negatif  flavanoid karena tidak ada perubahan warna, karena serbuk magnesium tidak memberikan reaksi  reduksi  senyawa  flavonoid  sehingga  larutan  uji  tidak  memberikan perubahan  warna  sebagaimana  yang  dijelaskan  oleh  Robinson  penambahan serbuk  magnesium  dan  asam  klorida  pada  pengujian  flavonoid  akan menyebabkan tereduksinya senyawa flavonoid yang ada sehingga menimbulkan reaksi  warna  merah  yang  merupakan  ciri  adanya  flavonoid  [12].  Selanjutnya sampel ekstrak kental methanol dilanjutkan dengan prose KLT. Hal ini bias dilihat pada gambar 1.
Gambar 2. Hasil uji KLT UV 366nm dengan fase gerak Methanol : etil asetat 8:2
Kromatografi  lapis  tipis  merupakan  suatu  metode  pemisahan  suatu senyawa  berdasarkan  distribusi  dua  fase  yaitu  fasediam  dan  fase  gerak  [13]. Ekstrak  kental  methanol  di  uji  dilakukan  uji  KLT  dengan  menggunakan perbandingan methanol : etil asetat ( 9:1, 8:2, 1:9), yang harus dijenuhkan terlebih dahulu  dengan  menggunakan  kertas  saring.  Tujuan  dari  penjenuhan  eluen dimaksudkan untuk mempercepat proses elusi. Selanjutnya larutan ekstrak kental metanol  ditotolkan pada lempeng KLT dan dimasukan ke dalam gelas yang berisi beberapa  perbandinganpelarut.  Hasil  pengamatan  dengan  menggunakan  sinar UV  366  nm  pada  perbandingan  eluen  maka  noda  yang  terbaik  yang  mampu memberikan  pemisahan  terbaik  dengan perbandingan  methanol:etil  asetat  (8:2) Hasil KLT yang didapatkan yaitu satu noda yang berpendar memiliki nilai Rf 0.7, hal  ini  dikarenakan  adanya  reduksi  senyawa  pada  fraksi  sebelunya  yang menggunakan n-heksan dan etil asetat sehingga hanya didapatkan satu noda yang berflourosensi  pada  lampu  uv  366  nm.  Sesuai  dengan  penelitian  Mursyidi senyawa  flavonoid  memiliki  Rf  antara  0,2 – 0,75  [9].  Hal  ini  bisa  dilihat  pada gambar 2.
(a) (b)
Gambar 3. (a) Spektrum UV-Vis standar flavon  [6]. (b) Spektrum UV-Vis ekstrak methanol daun sambang darah Pita I (350 nm) dan Pita II (255 nm)
Rf 0.7
Selanjutnya  noda  lempeng  KLT  dilarutkan  dengan  pelarut  methanol, kemudian  di  analisis  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis  dengan  spectrum diukur  pada  panjang  gelombang  200-500  nm.  Hasil    analisis  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  menghasilkan  tiga  serapan  panjang  gelombang,  yaitu pita I (350 nm) dan pita II (255 nm).  Spektrum pada panjang gelombang memiliki kemiripan dengan panjang gelombang standar dari flavon yaitu  luteolin [6].  Hal ini bsa dilihat pada gambar 3. Menurut Markham (1982) spektrum yang diperoleh merupakan golongan senyawa flavon [8], karena flavon memiliki rentang serapan pita I (310-350 nm) dan pita II (255-280 nm).

## 4. Kesimpulan
Pada tanaman sambang darah terdapat senyawa flavonoid berdasarkan uji skrining yang dilakukan, serta uji lebih lanjut yaitu uji Kromatografi lapis tipis dan uji  spektrofotometri  UV-Vis.  Pada  tanaman  sambang  darah  berdasarkan  hasil spektrofotometri UV-Vis  dimana menghasilkan tiga serapan panjang gelombang, yaitu  pita  I  (350  nm)  dan  pita  II  (255  nm  dan  267  nm)  yang  termasuk  dalam golongan flavon. Penelitian lebih lanjut dibutuhkan untuk identifikasi golongan flavanoid  ekstrak    daun sambang  darah ( Excoecaria  Cochinchinensis L)  secara spektrofotometri  uv-vis,  perlu  dilakukannya  isolasi  pada  daun  sambang  darah agar didapatkan hasil yang lebih relevan.

## Referensi
[1]  Dalimartha, S. 2003. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia . Jilid 3. Cetakan Pertama. Jakarta: Pustaka Bunda
[2]  Do T. L. 1991. Vietnamese Medicinal Plants and Herbal Remedies . pp 555-556. Hanoi: Science and Technology
[3]  Fessenden, R. J & Fessenden, J.S. 1982. Kimia Organik. Jilid 1. Edisi Kedua. Terjemahan Aloysius Pudjaatmaka. Jakarta: Erlangga
[4]  Hadzovic, S  (1997). "Pharmacy and the great contribution of Arab-Islamic science to its development". Medicinski Arhiv (in Croatian). 51 (1 – 2): 47 – 50
[5]  Hahlbrock  K.  1981. Flavonoids .  dalam The  Biochemistry  of  Plants,  Vol.  7: Secondary Plant Products. New York: Academic Press. Hal:425-456.
[6]  Jucélia  Barbosa  da  Silva.  2013. Vernonia  condensata  Baker  (Asteraceae):  A Promising Source of Antioxidant. Oxidative Medicine and Cellular Longevity : Hindawi Publishing Corporation
[7]   Manitto,  P.  1992. Biosintesis  Produk  Alami .  Cetakan  Pertama.  Terjemahan Koensoemardiyah. Semarang: Penerbit IKIP Press
[8]  Markham,  K.R.,  1988, Cara  Mengidentifikasi  Flavonoid ,  diterjemahkan  oleh Kosasih Padmawinata, 15, Penerbit ITB, Bandung.
[9]  Mursyidi, A. 1990. Analisis Metabolit Sekunder . Pusat Antar Universitas UGM.
[10]  Oktariza dkk., 2013. Isolasi dan Karakterisasi Flavonoid dari daun sambang darah (Excoecaria cochinchinensis L . padang: Universitas Negeri Padang
[11]  Permenkes  R.I.  No.  246/Menkes/Per/V/1990. Tentang  Izin  Usaha  Industri Obat Tradisional dan Pendaftaran Obat Tradisional . Jakarta: Depkes R.I.
[12]  Robinson,  T.  1995. Kandungan  Organik  Tumbuhan  Tinggi .  Terjemahan Padmawinata. Bandung: Penerbit  ITB
[13]  Sastrohamidjojo, Hardjono. 2007. Spektroskopi . Yogyakarta: Liberty
[14]  Trubus.  2010. Trubus  Herbal  Indonesia  Berkhasiat .  Vol  08.  Depok:  Redaksi Trubus Yogyakarta, hal : 1-4.
[15]  Thomas  D.2018. Clinical  Pharmacy  Education,  Practice  and  Research . ISBN 9780128142769.
[16]  Whitemore TC, Sidiyasa K. 1986. Composition and structure of a lowland rain forest at Toraut, Northern Sulawesi . Kew Bull 41: 747-756.