## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI ASAM LEMAK HASIL HIDROLISIS MINYAK MIKROALGA Chlorella sp.

## Diah Kumalasari, A. Ghanaim Fasya, Tri Kustono Adi, Anik Maunatin
Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
The Chlorella  sp. is  a  microscopic  unicellular  microalgae  that  contains  organic  oils  which  can  be hydrolyzed into fatty acids. Fatty acids is one of the active components in microalgae which allegedly acted as an antibacterial. The aim of this study is to determine the antibacterial activity of fatty acids from the hydrolysis process of microalgae Chlorella sp. oil against Escherichia coli and Staphylococcus aureus . Insulating  oil Chlorella  sp. performed  by  the  Soxhlet  method  with  n-hexane. Chlorella  sp. oil  was hydrolyzed with 12% KOH in methanol to obtain fatty acids. The antibacterial activity of these fatty acids was tested against E. coli and S. aureus using the disc diffusion method. The result showed that the yield of oil Soxhlet Chlorella sp. was equal to 6.28 %. Hydrolysis of Chlorella sp. oil  produced  a  yield  of  69.57%.  Fatty  acids  have  antibacterial  activity  against S.  aureus bacteria,  but  not against the bacteria E. coli . Fatty acids inhibition zone  from Chlorella sp . against the bacteria S. aureus at the concentration 0.5; 1; 1.5; 2; and 2.5% respectively are 1.8; 1.9; 3.2; 3.5; and 3 mm.
Keywords :   Microalgae Chlorella sp ., Fatty acids, Soxhlet extraction, antibacterial activity.

## ABSTRAK
Chlorella  sp. merupakan  mikroalga  uniselular  berukuran  mikroskopis  yang  banyak  mengandung minyak organik yang dapat dihidrolisis menjadi asam lemak. Asam lemak merupakan salah satu komponen aktif dalam mikroalga yang diduga berperan sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas antibakteri  asam  lemak  hasil  hidrolisis  minyak  mikroalga Chlorella  sp. terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus . Isolasi  minyak Chlorella  sp. dilakukan  dengan  metode  Soxhletasi  dengan  pelarut  n-heksana.  Minyak Chlorella  sp. dihidrolisis  dengan  KOH  12  %  dalam  pelarut  metanol  untuk  mendapatkan  asam  lemak.  Asam lemak  yang    dihasilkan  diuji  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri E.  coli dan S.  aureus menggunakan  metode difusi cakram.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa rendemen Soxhletasi minyak Chlorella sp. adalah sebesar 6,28 %. Hidrolisis  minyak Chlorella  sp. menghasilkan  rendemen  sebesar  69,57  %.  Asam  lemak  memiliki  aktivitas antibakteri terhadap bakteri S. aureus, tetapi tidak terhadap bakteri E. coli . Zona hambat asam lemak Chlorella sp. terhadap bakteri S. aureus pada konsentrasi 0,5; 1; 1,5; 2; dan 2,5 % secara berturut-turut adalah 1,8; 1,9; 3,2; 3,5; dan 3 mm.
Kata Kunci :  Mikroalga Chlorella sp., asam lemak , ekstraksi Soxhlet, aktivitas antibakteri.

## I. PENDAHULUAN
Allah  SWT  berfirman  dalam  al Qur’an surat asy Syu’ara ayat 7:
            “dan Apakah mereka tidak memperhatikan bumi, berapakah banyaknya Kami
tumbuhkan  di  bumi  itu  pelbagai  macam tumbuh-tumbuhan  yang  baik?”.  (Qs.  asy Syu’ara: 7). QS.  asy  Syu’ara  ayat  7  tersebut menyeru kepada manusia agar memperhatikan  seluruh  isi  bumi  ciptaan Allah,  yang  di  dalamnya  terdapat  tumbuh- tumbuhan yang baik dengan berbagai jenis, bentuk,  dan  warna.  Ayat  tersebut  juga memerintahkan  kepada  manusia  agar  mau mencari  dan  berpikir  tentang  manfaat
tumbuhan yang telah disediakan oleh Allah SWT yang ada di dalamnya berupa rahasia dan  keajaiban,  agar  diambil  manfaatnya dalam  kehidupan  misalnya  sebagai  obat- obatan.
Jenis  tanaman  yang  bermanfaat dalam  bidang  kesehatan  tidak  hanya berasal  dari  tanaman  tingkat  tinggi, tanaman  tingkat  rendah  yang  berukuran mikroskopispun mampu menghasilkan senyawa-senyawa  yang  bermanfaat,  salah satunya yakni mikroalga. Mikroalga merupakan  mikroorganisme  fotosintetik dengan morfologi sel yang bervariasi, baik uniseluler  maupun  multiseluler.  Mikroalga merupakan  produsen  alami  dari  ekosistem perairan  yang  dapat  menghasilkan  energi sehingga keberadaannya sebagai
organisme hidup yang berukuran mikroskopis  sudah  mulai  banyak  diteliti (Damianus, 2011).
Pemanfaatan  mikroalga  terutama di  bidang  kesehatan  adalah  potensinya sebagai  antibakteri.  Kellam  dan  Walker (1989) menyebutkan bahwa ekstrak metanol  dan  heksana  dari  132  jenis mikroalga laut mempunyai aktivitas antibakteri  terhadap  6  bakteri  uji.  Salah satunya  adalah  mikroalga Chlorella  sp.. Chlorella sp. merupakan mikroalga uniselular  berukuran  mikroskopis  yang tergolong  dalam  kelompok  Chlorophyta (Steenblock, 1996).
Chlorella sp. dalam tubuhnya banyak mengandung  lipid  atau  minyak  organik sebesar  28  –  32  %  (Chisti,  2007).  Hal tersebut  juga  didukung  dengan  penelitian Saadudin,  dkk . (2011)  yang  menyebutkan bahwa
Chlorella sp . mempunyai kandungan lipid yang tertinggi dibandingkan dengan spesies lainnya  yaitu Nannochloropsis sp. , Spirulina sp. ,
Dunaliela  sp ., Tetraselmis  sp. . Kandungan minyak nabati yang tinggi mengindikasikan tingginya kandungan
asam lemak (Rachmaniah, dkk., 2010).
Berdasarkan  data  tersebut,  peneliti ingin  memanfaatkan  kelimpahan  minyak
Chlorella  sp. sebagai  suatu  senyawa antibakteri dengan terlebih dahulu dihidrolisis menjadi asam lemak, dikarenakan  asam  lemak  merupakan  salah satu komponen aktif dalam mikroalga yang diduga  berperan  sebagai  antibakteri.  Hasil Kromatografi  Gas  Spektrometri  Massa (KG-SM)  ekstrak  etanol Dunaliella  salina sebagai antibakteri dari penelitian Agustini dan  Kusmiyati  (2010)  diperoleh  senyawa- senyawa  golongan  asam  lemak.  Asam- asam  lemak  tersebut  antara  lain  asam heksadekanoat  (asam  palmitat),  asam heksadekanoat,  asam  8,11-oktadekadieoat, asam 9,12-oktadekadienoat (asam linoleat).
Kusmiyati  dan  Agustini  (2007)  dalam penelitiannya juga menghasilkan kesimpulan bahwa hasil identifikasi senyawa antibakteri dari mikroalga
Porphyridium  cruentum pada  fase  awal stasioner  dengan  KG-SM  menunjukkan senyawa  dominan  yaitu  asam  lemak heksadekanoat (asam palmitat).
Berbagai metode telah diujicobakan agar  minyak  dan  lemak  dalam Chlorella sp. dapat terekstrak dalam jumlah maksimal. Berdasarkan penelitian Rachmaniah  dkk.  (2010)  diperoleh  hasil bahwa metode yang efektif untuk mengekstraksi minyak mikroalga Chlorella sp. kondisi kering adalah metode Soxhletasi dengan pelarut n-heksana.
Minyak  dapat  dihidrolisis  menjadi asam  lemak  dengan  menggunakan  katalis asam,  basa,  maupun  secara  enzimatis. Beberapa  peneliti  memilih  katalis  basa untuk menghidrolisis minyak nabati karena reaksi hidrolisis berlangsung secara irreversible .  Fasya  (2011)  melakukan penelitian  untuk  menghidrolisis  minyak biji selasih
Penelitian  tersebut  menggunakan katalis  KOH  12  %  dalam  metanol  dan menghasilkan  campuran  asam-asam  lemak dengan rendemen sebanyak 77,90 %.
Asam lemak yang dihasilkan diharapkan  mampu  menekan  pertumbuhan bakteri patogen yang keberadaannya
merugikan  manusia.  Bakteri  yang  sering menginfeksi  manusia  diantaranya  bakteri
Escherichia coli ( E. coli ) dan Staphylococcus  aureus ( S.  aureus ) . Gejala penyakit yang disebabkan oleh E. coli pada sebagian  kasus  berupa  kram  dan  diare (Nuriyani,  2011).  Gejala  penyakit  lainnya adalah saluran kemih, pneumonia, bakterernia,  meningitis  neonatal,  dan cholangitis (Putri, 2013). Sedangkan penyakit  infeksi  yang  disebabkan  oleh S. aureus adalah bisul, jerawat, impetigo, dan infeksi  luka. S.  aureus juga  merupakan penyebab utama infeksi nosokomial, keracunan  makanan,  dan  sindroma  syok toksik (Ryan, dkk., 1994).
Perbanyakan  biomassa Chlorella sp. dapat  dilakukan  menggunakan  teknik kultur.  Kultur  mikroalga  membutuhkan faktor  pendukung  hidup  agar  diperoleh biomassa dalam jumlah maksimal sehingga diharapkan  kandungan  minyak  atau  lemak dalam  mikroalga  juga  maksimal.  Salah satu  media  alami  yang  dapat  digunakan untuk  pertumbuhan  mikroalga Chlorella sp . adalah Medium Ekstrak Tauge (MET). Hasil  penelitian  Prihantini  dkk . (2005) memperlihatkan  bahwa Chlorella  sp. yang dikultivasi  dalam  Medium  Ekstrak  Tauge (MET) konsentrasi
4 % dapat menghasilkan  kerapatan  sel  yang  cukup tinggi.

## II.  METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Maret  –  Juli  2014  di  Laboraturium Kimia Organik, Laboratorium Bioteknologi Jurusan Kimia dan Laboratorium  Ekologi  Jurusan  Biologi
Fakultas  Sains  dan  Teknologi  Universitas Islam  Negeri  (UIN)  Maulana  Malik Ibrahim Malang.

## 1. Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  diantaranya  adalah  labu kultur 1000 mL, lampu TL 36 Watt, timer, kuvet, hot plate , sentrifuse, neraca analitik,
seperangkat  alat  gelas, rotary  evaporator vacumm ,  termometer,  penangas  air  dan minyak,  seperangkat  ekstraktor  Soxhlet, seperangkat alat refluks, desikator, pendingin  ( freezer ),  oven,  lemari  asam, magnetic stirrer , tabung gas N 2 , Instrumen Kromatografi  Gas-Spektrometer  Massa (KG-SM), laminar  air  flow ,  pengaduk, gelas  arloji,  cawan  petri,  tabung  reaksi, kertas  whatman  no.  42,  jarum  ose, inkubator,  alumunium  foil,  tissue,  kertas saring,  kapas,  pinset,  autoklaf,  bunsen burner, pipet mikro, dan penggaris. Semua peralatan  gelas  untuk  proses  kultivasi disterilisasi menggunakan air panas.
Bahan  utama  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  isolat  mikroalga Chlorella sp. yang diperoleh dari
Laboratorium Ekologi. Bahan yang digunakan  untuk  kultivasi Chlorella sp . adalah  tauge  kacang  hijau  dan  aquades. Bahan-bahan  kimia  yang  digunakan  untuk ekstrak  minyak Chlorella  sp. adalah  n- heksana. Sedangkan untuk hidrolisis minyak Chlorella  sp. adalah    KOH  12  %, metanol,  H 2 SO 4 1  M,  aquades  dan  n- heksana.
Bahan-bahan yang digunakan untuk uji  aktivitas  antibakteri  diantaranya  adalah aquades,  biakan  murni Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus ,  spirtus,  media Nutrient  Agar (NA), media Nutrient  Broth (NB), penisilin dan streptomisin.
2. Pembuatan Medium Ekstrak Tauge Pembuatan  medium  ekstrak  tauge diawali  dengan  pembuatan  larutan  stok MET  (b/v)  yaitu  100  gram  tauge  direbus dalam  500  mL  aquades  yang  mendidih sampai volume larutan menjadi setengahnya. Medium ekstrak tauge dibuat dengan  cara  melarutkan  ekstrak  tauge  ke dalam  aquades  dengan  konsentrasi  4  % (v/v) yakni 24 mL ekstrak tauge dalam 576 mL aquades (Prihantini, dkk., 2005).
3. Kultivasi Chlorella sp . dalam MET
Sebanyak  100  mL  kultur Chlorella sp. diinokulasikan  ke  dalam  600  mL medium  ekstrak  tauge.  Labu  kultur diletakkan  ke  dalam  rak  kultur  dengan pencahayaan  2  buah  lampu  TL  36  Watt (intensitas  cahaya  1000  –  4000  lux)  dan foto periodisitas 14 jam terang dan 10 jam gelap (Prihantini, dkk., 2005).
4. Perhitungan Jumlah Sel Chlorella sp.
Mikroalga Chlorella  sp. yang  telah dikultivasi diambil menggunakan mikropipet  dan  diteteskan  pada  alat Haemacytometer . Jumlah sel Chlorella sp. yang ada dalam kotak hitung
Haemacytometer dihitung kemudian jumlah  sel  yang  diperoleh  selanjutnya dihitung berdasarkan rumus sebagai berikut (Eaton, dkk., 2005 dalam
Merizawati, 2008): 𝑁 = 𝑛 𝑥 16 ∑ 𝐾𝑏𝑖 16 𝑖=1 𝑥 1 10 −4
Keterangan :
N = Kelimpahan individu (sel/mL) n = Jumlah sel 16 = Jumlah kotak kecil ∑ 𝐾𝑏𝑖 16 𝑖=1 =  Jumlah  kotak  kecil  yang diamati   pada Haemacytometer 10 -4 =  Volume  air  sampel  yang menutupi  1  kotak  besar  pada
Haemacytometer .
5. Pemanenan Chlorella sp .
Mikroalga Chlorella  sp. yang  telah dikultivasi  dan  mencapai  fase  awal stasioner  (hari  ke-8)  dipanen  dengan  cara disentrifuse  selama  15  menit  dengan kecepatan  3000  rpm  sehingga  terpisah antara  biomassa  dengan  filtrat.  Bagian biomassa Chlorella  sp. diambil  untuk selanjutnya  dianalisis  kadar  air  dan diekstraksi secara Soxhletasi.
6. Preparasi Sampel
Biomassa Chlorella sp. ditempatkan pada cawan kemudian dikeringkan dengan oven pada suhu 30 °C
sampai  diperoleh  biomassa Chlorella  sp. kering dengan kadar air kurang dari 10 %.

## 7. Analisa Kadar Air
Cawan  porselen  dipanaskan  dalam oven pada suhu 100 – 105 ˚C  selama ± 15 menit  untuk  menghilangkan  kadar  airnya, kemudian cawan disimpan dalam desikator sekitar 10 menit. Cawan tersebut selanjutnya  ditimbang  dan  dilakukan perlakuan  yang  sama  sampai  diperoleh berat cawan yang konstan. Serbuk mikroalga Chlorella  sp. diambil  5  gram dan dikeringkan dalam oven pada suhu 100 –    105  °C  selama  ±  15  menit  untuk menghilangkan  kadar  air  dalam  sampel mikroalga Chlorella sp. , kemudian sampel disimpan  dalam  desikator  selama  ±  10 menit  dan  ditimbang.  Sampel  tersebut dipanaskan  kembali  dalam  oven  ±  15 menit,  disimpan  dalam  desikator  dan ditimbang  kembali.  Perlakuan  ini  diulangi sampai  berat  konstan.  Kadar  air  dalam mikroalga Chlorella sp.
dihitung menggunakan persamaan (AOAC, 1984):
% Kadar air : 𝑏−𝑐 𝑏−𝑎 x 100 %

## 8. Ekstraksi Minyak Chlorella sp.
28,33  g  biomassa  kering Chlorella sp. diekstraksi  Soxhlet  dengan  n-heksana 227  mL.  Proses  Soxhletasi  dilakukan selama  6  –  8  jam  dengan  suhu  80  ˚C. Kemudian  dilakukan  pemekatan  dengan menggunakan
rotary evaporator, selanjutnya dilakukan pengeringan terhadap  ekstrak  pekat  minyak  mikroalga
Chlorella sp . dengan aliran gas N 2 .
9. Hidrolisis Minyak Chlorella sp . Sebanyak 1,38 g minyak dimasukkan ke dalam erlenmeyer
Ket:   a = berat konstan cawan kosong b  =  berat  cawan  +  sampel  sebelum dikerigkan c  =  berat  konstan  cawan  +  sampel setelah dikeringkan
kemudian  ditambahkan  dengan  5  mL metanol  dan  KOH  12  %.  Direfluks  pada suhu  60  ˚C  selama  90  menit.  Selanjutnya ditambahkan 15 mL aquades dan 15 mL n- heksana,  dikocok  dan  didiamkan  hingga terbentuk  2  lapisan  (fase  organik  dan  fase air).  Fase  air  diambil  dan  ditambahkan dengan H 2 SO 4 1 M hingga pH-nya menjadi 1.  Setelah  itu  ditambahkan  n-heksana sebanyak  15  mL,  kemudian  dilakukan pemisahan  dengan  menggunakan  corong pisah.  Fase  organik  yang  diperoleh dipekatkan menggunakan rotary evaporator . Selanjutnya ekstrak pekat yang diperoleh dialiri gas N 2 .
10. Uji Aktivitas Antibakteri
a) Sterilisasi Alat
Sterilisasi  alat  dilakukan  sebelum semua  peralatan  digunakan,  yaitu  dengan cara  semua  alat  dibungkus  menggunakan kertas  dan  disterilkan  dalam  autoklaf  pada 121 °C dengan tekanan 15 psi ( per square inci ) selama 15 menit (Muhibah, 2013).
b) Uji Aktivitas Antibakteri
Media  padat  10  mL  yang  telah dipanaskan  hingga  mencair,  didinginkan sampai  suhu    40 o C,  dan  dituang  dalam cawan  petri  steril.  Ditambahkan  0,1  mL larutan  biakan  aktif  bakteri E.  coli dan S. aureus dihomogenkan.  Dibiarkan  hingga memadat.  Kertas  cakram  (diameter  5  mm) diresapkan dalam ekstrak Chlorella sp. dan kontrol. Proses peresapan dilakukan dengan  cara  meneteskan  20  μL  kontrol positif (penisilin dan streptomisin), kontrol negatif  (pelarut)  dan  larutan  ekstrak. Kertas  cakram  tersebut  diletakkan  di  atas permukaan  media  bakteri  menggunakan pinset  dan  ditekan  sedikit.  Media  bakteri yang  sudah  diberi  bahan  antibakteri diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam dalam  inkubator.  Diameter  zona  hambatan yang terbentuk diukur menggunakan penggaris  untuk  menentukan  aktivitas antibakteri  (Volk  dan  Wheeler,  1993).  Uji antibakteri dilakukan tiga kali pengulangan
pada  masing-masing  konsentrasi.  Luas zona hambat ditentukan dengan rumus:
Zona hambat = a – b Dimana a merupakan diameter keseluruhan (zona hambat + zona hambat), b merupakan diameter cakram .
11. Analisis  Asam  Lemak Chlorella  sp.

## dengan KG-SM
Analisis  asam  lemak Chlorella  sp. menggunakan
KG-SM QP2010S
SHIMADZU.  Sampel  asam  lemak  yang telah  diesterifikasi  yaitu  asam  lemak  hasil hidrolisis.  Metil  ester Chlorella  sp. yang telah pekat  tersebut  diambil  sebanyak 1µL kemudian  diinjeksikan  dalam  instrument KG-SM  yang  telah  dikondisikan  sebagai berikut: jenis kolom AGILENTJ%W DB-1 panjang kolom 30 meter, ID 0,25 mm, gas pembawa  helium,  sistem  ionisasi  Electron impact  (EI),  energi  ionisasi  70  ev,  suhu kolom   50 o C,  suhu  injector  300 o C, injection mode split, tekanan gas pembawa 12,0  kPa,  kec.  aliran  gas  0,5  mL/menit, suhu detektor  250 o C.
Hasil rekorder berupa kromatogram KG  digunakan  untuk  menentukan  analit komponen  utama  asam  lemak Chlorella sp. .

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Kultivasi Chlorella sp. dalam
Medium Ekstrak Tauge
Selama kultivasi berlangsung warna  kultur  dalam  labu  berubah  secara berangsur-angsur  dari  hijau  muda  menjadi semakin tua disertai  terbentuknya endapan hijau. Hal tersebut mengindikasikan bahwa Chlorella sp. mengalami pertumbuhan dan kepadatan populasi. Pertumbuhan Chlorella  sp. dimulai  pada  hari  ke-0 sampai  hari  ke-10.  Warna  hijau  yang dihasilkan  disebabkan  adanya  pigmen klorofil yang dikandung Chlorella sp . Pemenuhan  nutrisi Chlorella  sp. selama  kultivasi  diperoleh  dari  Medium Ekstrak  Tauge  (MET)  4  %  yaitu  dengan
menginokulasikan  sebanyak  10  mL  isolat ke  dalam  60  mL  medium  ekstrak  tauge  4 %. Di dalam MET terkandung unsur-unsur makronutrien  dan  mikronutrien yang dibutuhkan selama proses fotosintesis.
2. Pemanenan Chlorella sp.
Pada  penelitian  ini,  pemanenan
Chlorella sp. dilakukan pada hari ke-8. Hal
tersebut didasarkan pada penelitian Khamidah  (2013)  yang  menyebutkan bahwa Chlorella  sp. yang  dikultivasi dalam  MET  4  %  mengalami  fase eksponensial  dimulai  pada  hari  ke-0 sampai  hari  ke-8.  Namun,  kelimpahan  sel Chlorella  sp. dalam  MET  4  %  mengalami peningkatan secara signifikan ketika memasuki hari ke-8. Hal tersebut mengindikasikan  bahwa  kandungan  lemak tertinggi  dalam Chlorella  sp. terjadi  pada hari  ke-8  atau  fase  akhir  eksponensial. Tabel  1  memperlihatkan  jumlah  sel Chlorella  sp. ketika  berumur  7,  8,  dan  9 hari.
Tabel 1 Jumlah sel Chlorella sp. hari ke 7, 8, dan 9 Hari Jumlah Sel (sel/mL) Hari ke 7 42.720.000 Hari ke 8 48.160.000 Hari ke 9 48.640.000
Sobari, dkk. (2013) dalam
penelitiannya  juga  menyebutkan  bahwa kandungan lemak mikroalga yang mencapai puncak tertinggi terjadi pada fase eksponensial.  Karbohidrat  berlebih  yang dihasilkan mikroalga saat proses fotosintesis  akan  disimpan  dalam  bentuk lipid. Dalam penelitiannya juga menunjukkan  bahwa  berat  lipid  rata-rata semakin  meningkat  seiring  dengan  massa pertumbuhan.
Bimassa Chlorella sp. yang diperoleh  saat  pemanenan  berupa  pasta berwarna hijau pekat yang masih mengandung  air.  Berat  basah  mikroalga Chlorella sp .  yang  diperoleh  yaitu  sebesar 1.452 g.
3. Preparasi Sampel
Preparasi  sampel  dilakukan  dengan pengeringan biomassa Chlorella sp. menggunakan  oven  pada  suhu  30  °C selama 24 jam. Hasil rendemen pengeringan  biomassa  basah Chlorella  sp. adalah 2,069 %. Artinya, dari ± 1.452,0095 g  biomassa  basah,  setelah  dikeringkan diperoleh  ±  30  g  biomassa  kering  yang telah berbentuk serbuk halus.
4. Analisa Kadar Air Chlorella sp.
Sampel  yang  digunakan  untuk analisis kadar air adalah Chlorella sp. yang sudah  berupa  serbuk  kering.  Penentuan kadar  air  ini  dilakukan  dengan  proses pemanasan  terhadap  sampel  dalam  oven pada  suhu  100  –  105  °C.  Pada  penelitian ini, kadar air yang diperoleh adalah sebesar 8,89 %.

## 5. Ekstraksi Chlorella sp.
Kelebihan  mengekstrak  minyak dari  mikroalga Chlorella  sp. dibandingkan dengan  bahan  alam  lainnya  adalah  serbuk keringnya dapat langsung diekstrak dengan pelarut  nonpolar  tanpa  perlu  proses penggilingan.
Ekstraksi  minyak Chlorella  sp. dilakukan  dengan  mengekstrak  serbuk Chlorella  sp. sebanyak  28,33  g  dengan pelarut  n-heksana  sebanyak  227  mL (1:8).  Dalam  penelitian  ini,  minyak  telah terekstrak  secara  maksimal  terjadi  selama 855  menit  dimana  setiap  satu  sirkulasi berlangsung selama kurang lebih 20 menit.
Pemilihan metode Soxhletasi untuk mengekstrak  minyak  dalam Chlorella  sp. didasari  oleh  sifat  dari  minyak  yang  tahan terhadap proses pemanasan.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa  ekstraksi  minyak Chlorella  sp . umur  panen  hari  ke-8  menggunakan ekstraktor  Soxhlet  dengan  pelarut  n- heksana  diperoleh  rendemen  sebesar  6,28 %.  Artinya,  dari  28,33  g  sampel  serbuk Chlorella  sp. diperoleh  minyak Chlorella sp. 1,78 g.
Minyak  yang  diperoleh  berwarna kuning kecoklatan. Warna  yang dihasilkan diduga  berasal  dari  pigmen  karotenoid yang  terkandung  di  dalam Chlorella  sp.. Menurut Volesky (1970) selain mengandung klorofil a dan b dalam jumlah yang besar, Chlorella sp . juga mengandung karotin dan xantofil. Karotenoid merupakan kelompok pigmen yang berwarna  kuning,  jingga,  merah  jingga serta larut dalam minyak (Winarno, 2004). Menurut  Ranganna  (1979)  karotenoid termasuk  senyawa  lipida  yang  tidak tersabunkan,  larut  dengan  baik  dalam pelarut organik tetapi tidak larut dalam air.
6. Hidrolisis Minyak Chlorella sp.
Asam  lemak  dapat  dipisahkan  dari gliserolnya melalui reaksi hidrolisis.
Dalam  penelitian  ini  sebanyak  1,38  g minyak Chlorella  sp. dihidrolisis  dengan katalis  basa  KOH  12  %  dalam  5  mL pelarut  metanol.  Beberapa  keuntungan apabila  menggunakan  katalis  basa  adalah reaksi berjalan secara irreversible sehingga produk  yang  dihasilkan  lebih  banyak. Dalam hal ini KOH yang digunakan dibuat berlebih supaya proses penyabunan berjalan  secara  sempurna  atau  disebutkan juga dengan hidrolisis total. Darmoyuwono (2006) menerangkan bahwa apabila jumlah KOH  yang  digunakan  lebih  sedikit  dari jumlah  minyak  yang  akan  dihidrolisis maka tidak semua minyak akan tersabunkan  atau  disebut  juga  hidrolisis parsial.
Warna  ekstrak  yang  diperoleh adalah  coklat  kekuningan  kental  berupa campuran-campuran  asam  lemak  dan senyawa  lain  dengan  rendemen  hidrolisis sebesar 69,57 %.
7. Uji Aktivitas Antibakteri Asam Lemak Chlorella sp.
Pengujian  aktivitas  antibakteri  asam lemak Chlorella  sp. dilakukan  secara in vitro terhadap  dua  jenis  bakteri  uji  yaitu bakteri E. coli yang mewakili bakteri gram
negatif  dan S.  aureus yang  mewakili bakteri  gram  positif.  Hasil  uji  aktivitas antibakteri  asam  lemak Chlorella  sp. dengan  variasi  konsentrasi  dapat  dilihat dalam Tabel 2.
Tabel 2. Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  asam  lemak Chlorella sp.
Konsentrasi (% b/v) Zona Hambat (mm) E. coli S. aureus 0,5 - 1,8 1,0 - 1.9 1,5 - 3,2 2,0 - 3,5 2,5 - 3 Kontrol n-Heksana - - Kontrol Media - - Penisilin 0,6 24 Streptomisin 2,5 12 Berdasarkan Tabel 2 dapat dikatakan  bahwa  asam Chlorella  sp .  pada konsentrasi 0,5 –  2,5  %  sudah menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri terhadap  bakteri S.  aureus walaupun tergolong lemah, namun tidak
menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri terhadap bakteri E. coli .
Gambar 1. Zona hambat pada bakteri S. Aureus Keterangan: A. konsentrasi 0,5 %, B. konsentrasi 1 %, C. konsentrasi     1,5 %, D. konsentrasi 2,5 %, E. konsentrasi 2,5 %.
8. Analisis  Asam  Lemak Chlorella  sp. dengan KG-SM
Berdasarkan  hasil  analisis  KG-SM dapat  diketahui  komposisi  asam  lemak dominan yang terkandung dalam Chlorella sp. adalah  asam  9,12-oktadekadienoat (asam linoleat), asam heksadekanoat (asam palmitat),  asam  dodekanoat  (asam  laurat),
asam  7,10-heksadekadienoat,  dan  asam 10,13-oktadakadienoat. Tabel 3
menunjukkan kromatogram KG metil ester asam lemak hasil hidrolisis. Tabel 3 Asam-asam lemak dominan pada Chlorella sp.
No. Puncak Waktu Retensi (menit) Asam Lemak % Area Relatif 1. 3 27,185 asam dodekanoat (asam laurat) 7,43 2. 11 35,685 asam 7,10-heksadekadienoat 6,20 3. 14 36,398 asam heksadekanoat (asam palmitat) 12,74 4. 17 37,908 asam 10,13-oktadakadienoat 5,72 5. 21 39,848 asam 9,12-oktadekadienoat (asam linoleat) 19,95
Asam  9,12-oktadekadienoat  (asam linoleat),  asam  heksanoat  (asam  palmitat), dan  asam  dodekanoat  (asam  laurat)  hasil hidrolisis minyak Chlorella sp. merupakan senyawa yang aktif menghambat bakteri S. aureus .  Hal  tersebut  sesuai  dengan penelitian  Agustini  dan  Kusmiati  (2010) yang  menyebutkan  bahwa  asam  9,12- oktadekadienoat
(asam linoleat) merupakan  senyawa  yang  bersifat  sebagai antibakteri.  Hasil  penelitian  lain  yang dilakukan oleh Kusmiyati (2007)
menghasilkan  kesimpulan  bahwa  hasil identifikasi senyawa antibakteri dari mikroalga Porphyridium  cruentum dengan KG-SM  menunjukkan  senyawa  dominan yaitu  asam  lemak  metil  heksadekanoat (asam  palmitat).  Sementara  itu,  menurut Murhadi  (2009)  asam  lemak  seperti miristoleat,  palmitoleat,  linolenat,  kaprat, laurat,  dan  miristat  juga  terbukti  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri S. aureus.

## IV. PENUTUP Kesimpulan
Asam lemak hasil hidrolisis minyak mikroalga Chlorella  sp. memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri S.  aureus, tetapi tidak terhadap  bakteri E.  coli .  Zona hambat asam lemak Chlorella sp. terhadap bakteri S.  aureus pada  konsentrasi  0,5;  1; 1,5;  2;  dan  2,5  %  secara  berturut-turut adalah 1,8; 1,9; 3,2; 3,5; dan 3 mm.

## Saran
1. Perlu dilakukan pemisahan asam lemak jenuh  dan  tak  jenuh Chlorella  sp. agar diperoleh  keefektifan  antibakteri  yang lebih besar.
2. Perlu  dilakukan  pengujian  asam  lemak sebagai  antibakteri  terhadap  beberapa jenis bakteri gram positif lainnya.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Agustini,  N.  W.  S.  dan  Kusmiati.  2010. Identifikasi  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Senyawa  Aktif  Secara
Maserasi dan Digesti dalam Berbagai  Pelarut  dari  Mikroalga Dulaniella salina . Seminar
Nasional  IX  Pendidikan  Biologi FKIP UNS : 544-551. AOAC. 1984. Official Methods of Analysis of  the  Association  of  Official Analytical  Chemists .  Washington
DC: Association of Official Analytical Chemists. Chisti, Y. 2007. Biodiesel from Microalgae. Biomass , 25, pp. 294-
306. Damianus,  M.  2011.  Aktivitas  Ekstrak Mikroalga sebagai Inhibitor Helikase Virus Japanese Enchephalitis. Skripsi Tidak Diterbitkan. Bogor: Institut Pertanian Bogor. Darmoyuwono,  W.  2006. Gaya  Hidup Sehat dengan Virgin Coconut Oil .
Jakarta: Gramedia.
Fasya,  A.Ghanaim.  2011.  Sintesis  Metil 10,  12,  14-oktadekatrienooat  Dari (Asam  α-linoleat)  Biji  Selasih
( Ocimum  basilicum )  dan  Uji
Bioaktifitasnya. Thesis : Universitas Brawijaya: Malang.
Kellam, S. dan Walker, J. 1989. Antibacterial Activity
from
Marine  Microalgae  in  Laboratory Culture. Br.  Phycol.  J. Volume 24: 191-194.
Khamidah, U. 2013. Uji Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Metanol Mikroalga Chlorella  sp. Hasil
Kultivasi  dalam  Medium  Ekstrak Tauge  terhadap Eschericia  coli dan Staphylococcus aureus . Skripsi Tidak Diterbitkan. Malang:  UIN  Maulana  Malik Ibrahim Malang. Kusmiyati;  Ni  Wayan  S.  A.  2007.  Uji Aktivitas  Senyawa  Antibakteri dari Mikroalga Porphyridium cruentum . Biodiversitas. Volume 8, Nomor 1: 48-53.
Merizawati.  2008.  Analisis  Sinar  Merah,
Hijau  dan  Biru  (RGB)  untuk Mengukur Kelimpahan Fitoplankton ( Chlorella sp .). Skripsi Diterbitkan. Bogor: Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan IPB.
Muhibah,  S.  R.  N.  2013.  Uji  Golongan Senyawa  Aktif  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Alga  Merah Eucheuma  Cottonii dari  Petani Lobuk  Madura. Skripsi Tidak
Diterbitkan. Malang: Jurusan
Kimia  Universitas  Islam  Negeri (UIN)  Maulana  Malik  Ibrahim
Malang. Murhadi.  2009.  Senyawa  dan  Aktivitas Antimikroba Golongan Asam Lemak dan Esternya dari Tanaman. Jurnal Teknologi Industri  dan  Hasil  Pertanian . Volume 14, No. 1: 97-105.
Nuriyani.
2011.
http://nationalgeographic.co.id/for um/topic.php?id=  1135.   (Diakses pada tanggal 15 September 2013). Prihantini,  N.H,  Putri  B.,  dan  Yuliati  R. 2005. Pertumbuhan Chlorella  sp. dalam  Medium  Ekstrak  Tauge (MET) dengan Variasi pH Awal . Makara, Sains , IX (1): 1-6. Putri, A.L. 2013. Waspada Bakteri E. Coli pada  Kolam  Renang .    http:    // www. tempo .co /read/news/2013/05/18/06148129 5/Waspada-Bakteri-E-Coli-pada- Kolam-Renang/1/1. (Diakses pada tanggal 15 September 2013).
Rachmaniah, O.; Setyarini R. D.; Maulida,
L. 2010. Pemilihan Metode Ekstraksi Minyak Alga dari Chlorella  sp. dan  Prediksinya sebagai Biodiesel. Seminar Teknik Kimia Soehadi Reksowardojo . Ranganna, S. 1979. Manual  of  Analysis of Fruit  and  Vegetable  Products . New  York:  Tata  Mc.  Graw  Hill
Publ. Co., Limited.
Ryan, K.J., J.J. Champoux, S. Falkow, J.J.
Plonde, W.L. Drew, F.C. Neidhardt, and C.G. Roy. 1994.
Saadudin, E.; Fitri, S. dan Wargadalam, V. 2011.  Karakteristik  Asam  Lemak Mikroalga untuk Produksi Biodiesel. Ketenagalistrikan  dan Energi  Terbarukan .  Volume  10, Nomor 2: 131-140.
Sobari, R.; A.B. Susanto; Dwi, S.; Delicia,
Y. 2013. Kandungan Lipid
Beberapa Jenis Sianobakteria Laut Sebagai  Bahan  Sumber  Penghasil Biodiesel. Journal  of  Marine Research .  Volume  2,  Nomor  1: 112 – 119.
Steenblock.  1996. Chlorella  Makanan Sehat  Alami .  Jakarta:  Gramedia Pustaka Utama.
Volesky,  G.  1970. Algal  Product .  New Delhi:  In Properties of Algal  (Ed)
Penum Press.
Volk.  W.A  dan  M.F.  Wheeler.  1993. Mikrobiologi Dasar, Alih Bahasa: Markham .  Jakarta:  PT.  Glora Aksara Pratama. Winarno;  Fardias  dan  Fardias.  1973.
Ekstraksi, Kromatografi dan Elektroforesis .  Bogor:  Institut Pertanian Bogor.