PREDIKSI MODEL PENETAPAN KADAR FLAVONOID TOTAL PADA EKSTRAK Abelmoschus manihot L . MENGGUNAKAN SPEKTROSKOPI IR YANG DIKOMBINASIKAN DENGAN KEMOMETRIK
Juliandro Matsuzaki Fangohoy 1) , Sri Sudewi 1) , Adithya Yudistira 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
This study aims to determine the validation of IR spectroscopy method in determining the total flavonoid level  in  Abelmoschus  manihot  L.,  can  meet  the  requirements  and  can  be  applied.  The  method  for determining the total flavonoid content model using a combination of IR Spectroscopy and Chemometrics Partial  Least  Square  Regression  (PLSR).  The  calorimetrics  method  was  used  to  determine  the  total flavonoid content in the green gedi leaves axtracts onn eight samples of growth where Bitung Was 2.64 mg QE/g extract  ± 0.035, Minahasa Selatan is  1.91 mg QE/g extract ± 0.027, Kotamobagu is  4.84 mg QE/g extract  ± 0.03, Minahasa Utara is  4.40 mg QE/g extract ± 0.091, Manado is 3.45 mg QE/g extract ±  0.012,  Minahasa  Tenggara  is    1.72  mg  QE/g  extract  ±  0.006,  Minahasa  is  3.67  mg  QE/g  extract  ± 0.033,  Tomohon  is  3.40  mg  QE/g  extract  ±  0.003.  This  combination  is  involves  involving  x-variables (FTIR measurement results) and y-variables (data from the results of the calorimetric method analysis). Error value [standard error calibration (SEC=0.003), standard error of prediction (SEP = 0.052)] and cslibration r value 0.999, and r validation 0.975.
Keywords: Flavonoids,  Green  Gedi  Leaves,  FTIR  Spectrofotometry,  UV-VIS  Spectrofotometry, Chemometrics

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  Validasi  Metode  Spektroskopi  IR  Pada  Penetapan  kadar Flavonoid Total   pada Abelmoschus manihot L Dapat Memenuhi Persyaratan dan Dapat di Aplikasikan. Metode  penentuan  model    kandungan  flavonoid  total    menggunakan  kombinasi  Spektroskopi  IR  dan Kemometrik Partial Least Square Regression (PLSR). Metode Kalorimetrik digunakan untuk mengetahui kandungan  Flavonoid  Total  pada  pada  Ekstra  Daun  Gedi  Hijau  pada  8  sampel  tempat  tumbuh  yaitu Bitung sebesar 2.64 mg QE/g ekstrak  ± 0.035, Minahasa Selatan sebesar  1.91 mg QE/g ekstrak ± 0.027, Kotamobagu  sebesar  4.84  mg  QE/g  ekstrak  ±  0.03,  Minahasa  Utara  sebesar    4.40  mg  QE/g  ekstrak  ± 0.091,  Manado  sebesar  3.45  mg  QE/g  ekstrak    ±  0.012,  Minahasa  Tenggara  sebesar    1.72  mg  QE/g ekstrak  ±  0.006,  Minahasa  sebesar  3.67  mg  QE/g  ekstrak  ±  0.033,  Tomohon  sebesar  3.40  mg  QE/g ekstrak ± 0.003. Kombinasi ini melibatkan melibatkan variabel x (hasil pengukuran FTIR) dan variabel y (data  hasil  analisis  metode  Kalorimetrik).  Nilai  kesalahan  ( standar  error  calibration  ( SEC  =  0.003), standard error of prediction ( SEP = 0.052)) dan nilai r kalibrasi 0.999, serta r validasi 0.975.
Kata  Kunci :  Total  Flavonoid,  Daun  Gedi  Hijau,  Spektrofotometri  FTIR,  Spektrofotometri  UV-VIS, Kemometrik.

## PENDAHULUAN
Gedi hijau ( Abelmoschus manihot L. ) merupakan  salah  satu  tumbuhan  dari  suku Malvaceae umum ditanam dan dimanfaatkan oleh masyarakat di Sulawesi Utara khususnya  Manado.  Masyarakat  Manado sendiri  biasa  memanfaatkan  Gedi  hijau (khususnya  bagian  daun)  sebagai  bahan makanan  yang  dikenal  sebagai  Bubur Manado  (Tinutuan),  yang  merupakan  salah satu  makanan  khas  dari  Manado  (Mamahit dan Sukarno, 2010).
Senyawa flavonoid merupakan senyawa polifenol yang mempunyai 15 atom karbon yang tersusun dalam konfigurasi C 6 - C 3 -C 6 ,  yaitu  dua  cincin  aromatik  yang dihubungkan oleh 3 atom karbon yang dapat atau  tidak  dapat  membentuk  cincin  ketiga. Golongan  flavonoid  dapat  digambarkan sebagai  deretan  senyawa  C 6 -C 3 -C 6 ,  artinya kerangka  karbonnya  terdiri  atas  dua  gugus C 6 (cincin benzena tersubstitusi) disambungkan  oleh  rantai  alifatik  tiga karbon (Robinson, 1991).
Analisis kuantitatif senyawa
flavonoid total dengan menggunakan spektrofotometri  UV-Vis  dilakukan  untuk mengetahui  seberapa  besar  kadar  flavonoid total  yang  terkandung  pada  ekstrak  etanol daun  gedi  hijau  ( Abelmoschus  manihot  L. ). Analisis flavonoid dilakukan dengan menggunakan Spektrofotometri UV-Vis karena flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi sehingga menunjukkan  pita  serapan  kuat  pada  daerah spektrum  sinar  ultraviolet  dan  spektrum sinar tampak (Harborne, J.B 1987).
Spektrofometer inframerah
tertransformasi Fourier (Fourier transformed infrared spectrophotometer,
FTIR)
merupakan  suatu  metode  yang  dapat mengukur  secara  cepat  contoh  tanpa merusak dan mampu menganalisis beberapa komponen  secara  serentak.  Akan  tetapi, Penggunaan  FTIR  dalam  analisis  tumbuhan masih terbatas karena matriks dan spektrum yang dihasilkan cukup kompleks. Dukungan kemometrik memperluas potensi spektroskopi FTIR sebagai metode alternatif untuk  menganalisis  komponen  tumbuhan. (Wold et al., 2001).
Berdasarkan  hal-hal  diatas  maka mendorong  penulis  melakukan  penelitian yang  lebih  intensif  untuk  mengetahui  kadar flavonoid  total Abelmoschus  manihot  L. menggunakan  Spektrofometer  inframerah tertransformasi Fourier ( Fourier transformed  infrared  spectrophotometer , FTIR)    karena  metode  ini  merupakan  suatu metode  yang  dapat  mengukur  secara  cepat contoh tanpa merusak dan mampu menganalisis  beberapa  komponen  secara serentak,

## METODELOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  November  2018  sampai  Mei  2019  di Laboratorium  Penelitian  Farmasi  Lanjutan, Program
Studi
Farmasi, Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,
Universitas Sam Ratulangi Manado

## Bentuk Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  dengan menggunakan  metode  eksperimental  yang artinya penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui  akibat  yang  ditimbulkan  dari
suatu  perlakuan  yang  diberikan  secara sengaja oleh peneliti.
Alat dan Bahan a. Alat Alat-alat  ukur  analitis  yang  digunakan untuk penelitian ini adalah Spektrofotometri UV-VIS  (Shimadzu  00780),  Komputer pengolah data (Acer Aspie ES 11), Alat-alat gelas,  Vortex  (Mixer  Hwashin),  toples, Blender  (Phillips),  Water  Bath, rotary shacker.
b. Bahan
Bahan-bahan yang dipakai dalam penelitian  ini  adalah  simplisia  kering  daun Gedi  dari  8  tempat  tumbuh  yang  berbeda yaitu  Minahasa,  Minahasa  Utara,  Minahasa Selatan,  Minahasa  Tenggara,  Tomohon, Manado,  Bitung  dan  Kotamobagu  .  Etanol p.a,  etanol  96%,  almunium  klorida  (AlCl 3 ) (Merck),  asam  asetat  (CH 3 COOH)  (Merck), kuersetin p.a, pelarut n-heksana (Merck), etil asetat (Merck), dan aquadest (Merck).

## Prosedur Penelitian
Pengambilan Sampel Sampel daun Gedi Hijau
( Abelmoschus  manihot L . )  diambil  dari  8 tempat tumbuh yang berbeda yaitu
Minahasa, Minahasa Utara, Minahasa Selatan,  Minahasa  Tenggara,  Tomohon, Manado, Bitung dan Kotamobagu.
Selanjutnya  setiap  sampel  daun  gedi  hijau ( Abelmoschus  manihot L . )  dibuat  menjadi bentuk  simplisia.  Kemudian  setiap  sampel dari  masing-masing  kota  dibuat  ekstrak dengan menggunakan metode maserasi.

## Ekstraksi
Sebanyak  250  gram  serbuk  simplisia dimasukkan  ke  dalam  toples  500  mL  dan kemudian ditambahkan etanol 96%. Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi selama  3  hari  dan  pengadukan  dibantu dengan  alat rotary  shacker .  Ekstrak  hasil maserasi  kemudian  diuapkan  dengan Water Bath hingga terbentuk ekstrak kental.

## Pembuatan Latrutan Baku Kuersetin
Dibuat  larutan  induk  1000  ppm dengan cara menimbang dengan seksama 10 mg  kuersetin  p.a  dan  dilarutkan  dengan etanol  p.a  10  mL.  Kemudian  dibuat  larutan standar kuersetin 10; 20; 30; 40; 50 ppm dari pengenceran  larutan  baku  kuersetin  1000 ppm.
Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Kuersetin Panjang gelombang maksimum ditentukan  dengan  cara  membuat  larutan standar kuersetin 40 ppm kemudian sebanyak  1  mL  larutan  kuersetin  40  ppm tersebut direaksikan dengan 1 mL AlCl 3 2% di dalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan 8 mL asam asetat 5% ke dalam larutan  dan  dilakukan  pembacaan  pada rentang  panjang  gelombang  400-500  nm menggunakan Spektrofotometer UV-Vis.
Penetapan Operating Time Kuersetin Penentuan operating time dilakukan dengan  mengambil  sebanyak  1  mL  larutan kuersetin 20 ppm dimasukkan dalam tabung reaksi,  lalu  direaksikan  dengan  1  mL  AlCl 3 2%, dan ditambahkan 8 mL asam asetat 5% ke dalam larutan. Larutan diukur
absorbansinya  pada  panjang  gelombang
maksimum  yang  telah  diperoleh  dengan interval  waktu  60  menit  sampai  diperoleh absorbansi yang stabil (Sukmawati, 2014).

## Pembuatan Kurva Baku Kuersetin
Pembuatan  kurva  baku  kuersetin dilakukan  dengan  cara  membuat  larutan baku kuersetin 1000ppm, lalu dibuat larutan dengan  seri  konsentrasi  10;  20;  30;  40;  50 ppm  kemudian    dipipet  1  ml  lalu ditambahkan  1  ml  aluminium  (III)    klorida 5%, 1 ml larutan CH 3 COOH 5%, Setelah itu diinkubasi  selama 20 menit,  absorbansi  dari larutan  pembanding  diukur  menggunakan spektrofotometer  UV  Vis  pada  panjang gelombang  maksimum.

## Penentuan  Kandungan  Total  Flavonoid Ekstrak Daun Gedi
Sampel  ekstrak  etanol  daun  gedi  hijau 1000 ppm dipipet sebanyak 1 mL ditambahkan  dengan  volume  aluminium klorida  (AlCl 3 )  hasil  optimasi  dengan konsentrasi  dari  hasil  optimasi  yang  paling optimal.  Tambahkan  volume  hasil  optimasi asam asetat (CH 3 COOH) dengan konsentrasi hasil optimasi yang paling optimal. Campuran  dikocok  homogen  lalu  dibiarkan selama  waktu  inkubasi  yang  paling  optimal dari hasil optimasi waktu inkubasi.
Kemudian  diukur  serapannya  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang  maksimum.  Penentuan  nilai flavonoid  akhir  dilakukan  berdasarkan formula  yang dikembangkan oleh Pan et al . (2012), yaitu:
Flavonoid Total = ( ) =
Keterangan : Y = konsentrasi flavonoid contoh yang dihitung dengan menggunakan persamaan kurva standard (mg g -1 ) N = Faktor pengenceran. V = volume Sampel (mL). W= berat Sampel (g).

## Pembuatan spektrum FTIR
Sebanyak 0.5 mg serbuk daun Gedi dicampurkan dengan 180 mg KBr, dihomogenisasi. Pengukuran spektrum FTIR dilakukan pada daerah IR tengah (4000- 400 )  dengan  melibatkan  pengontrol  kerja berupa  personal  komputer  yang  dilengkapi perangkat  lunak  OPUS  versi  4.2.  Spektrum dihasilkan  dengan  kecepatan  32  detik  dan resolusi  4  cm-1.  Tampilan  data  spektrum akan  menampilkan  jumlah  titik  serapan kemudian  diubah  ke  dalam  format  DPT ( data point table ) untuk keperluan pengolahan  data.  Data  ini  dapat  dibuka dengan program Microsoft
Excel .
Selanjutnya  data  jumlah  titik  serapan  yang ditampilkan (telah dihilangkan serapan - nya  pada  2399-2252
)  diolah  dengan program Mini  Tab yang  dijalankan  dengan sistem operasi Microsoft Windows 10 .

## Analisis Data
Model  kalibrasi  multivariat  dibuat dengan  program  Mini  Tab  menggunakan metode  regresi  PLS.  Pembentukan  model prediksi  flavonoid  total  dilakukan  oleh  PLS dengan melibatkan variabel x (hasil pengukuran FTIR) dan variabel y (data hasil analisis  metode  AlCl3).  Kalibrasi  dan validasi model diolah dengan teknik validasi silang. Keakuratan model dapat dilihat pada nilai korelasi atau koefisien determinasi dan
0.65 0.7 0.75 0.8 400 405 410 415 420 425 430 435 A b sor b an si ( y) Panjang gelombang (nm) λ maksimum Series1
nilai  kesalahan  yang  dihasilkan.  Model dapat digunakan bila memiliki nilai kesalahan  (standar  error  calibration  SEC, standard error of prediction SEP) rendah dan nilai  korelasi  atau  koefisien  determinasinya tinggi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstraksi
Setiap  sampel  sebanyak  250  gram serbuk simplisia daun gedi hijau dimasukkan  ke  dalam  toples  500  ml  dan  di tambahkan  etanol.  Ekstraksi  dilakukan dengan  cara  maserasi  selama  24  jam menggunakan    alat  bantu  pengaduk  ( rotary shacker ). kemudian disaring dan didapatkan filtrat. Filtrat yang diperoleh  akan diuapkan dengan rotary evaporator .
Berdasarkan  hasil  ekstraksi  250 gram daun gedi hijau maka diperoleh jumlah hasil  rendemen  dari  masing-masing  ekstrak adalah kota Bitung sebesar 5,50%, Minahasa Selatan sebesar 5,80%, Kotamobagu sebesar 5,25%,  Minahasa  Utara  sebesar  5,34%, Manado sebesar 6,59%, Minahasa Tenggara sebesar 7,23%, Minahasa sebesar 7,34% dan Kota Tomohon sebesar 5,63%.
Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Kuersetin Pada penelitian ini penentuan panjang  gelombang  maksimum  dilakukan dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis  pada  daerah  panjang  gelombang 400-500  nm  dan  konsentrasi  yang  dipakai adalah  40  ppm  sehingga  diperoleh  panjang gelombang 415 nm.
Tujuan penentuan panjang gelombang  maksimum  agar  mengetahui daerah serapan yang dapat dihasilkan berupa
nilai  absorbansi  dari  larutan  baku  kuersetin yang  diukur  serapannya  menggunakan  alat spektrofotometer  UV-Vis  pada  rentang panjang  gelombang  400-500  nm.  Data  hasil panjang gelombang maksimum dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar  1.  Kurva  Panjang  gelombang Maksimum Kuersetin
Penentuan Operating Time
Dari  hasil  pengukuran  Operating Time,  didapatkan  bahwa  absorbansi  stabil pada menit ke-1 sampai dengan menit ke-20. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  berdasarkan kestabilannya waktu optimal untuk pembacaan  absorbansi  adalah  pada  menit ke-1  sampai  menit  ke-20.    Penentuan operating  time perlu  dilakukan  untuk mengetahui waktu kestabilan optimal. Operating time ditentukan dengan mengukur absorbansi pada panjang gelombang maksimum  dari  data  yang  telah  dihasilkan pada penentuan panjang gelombang maksimum yaitu 415 nm dengan konsentrasi yang  digunakan  adalah  20  ppm  dengan rentang  waktu  1-20  menit  dengan  hasil absorbansi yaitu 0,42.
y = 0.1354x - 0.0152 R² = 0.9885 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0 2 4 6

## KURVA BAKU KUERSETIN

## Kurva Kalibrasi Kuersetin dan Lineritas
Berdasarkan  hasil  pembuatan  kurva kalibrasi  dengan  menggunakan  metode Spektrofotometri yang menghubungkan konsentrasi  dengan  absorbansi,  diperoleh persamaan linear y = 0.135x – 0,015 dengan koefisien korelasi r = 0,988. Hasil koefisien korelasi  diatas  telah  memenuhi  kriteria peneri aan yaitu ≥ 0,98 (Her ita, 2004).

## Gambar 2. Kurva Baku Kuersetin

## Hasil Kandugan Total Flavonoid
Pada  perhitungan  Kadar  Flavonoid Total  Ekstrak  Daun  Gedi  Hijau  ini  dihitung menggunakan  Persamaan  Regresi  Linear Kurva  Baku  y  =  ax  +  b  menghasilkan kandungan  flavonoid  pada  Kota  Bitung sebesar  2,64  mg  QE/g  ekstrak  ±  0,035, Minahasa  Selatan  1,91  mg  QE/g  ekstrak  ± 0,027, Kotamobagu 4,84 mg QE/g ekstrak ± 0,03, Minahasa Utara 4,40 mg QE/g ekstrak ±  0,091,  Manado  3,45  mg  QE/g  ekstrak  ± 0,012,  Minahasa  Tenggara  1,72  mg  QE/g ekstrak  ±  0,006,  Minahasa  3,67  mg  QE/g ekstrak  ±  0,033,  Tomohon  3,40  mg  QE/g ekstrak  ±  0,003.  Dan  dari  data  diatas menunjukkan  bahwa  kandungan  Total Flavonoid  tertinggi  berasal  dari  daerah Kotamobagu (Dataran Tinggi  ) dengan  nilai
kandungan flavonoid  sebesar  4,84  mg QE/g ekstrak. Dataran  tinggi  merupakan  dataran yang luas dan letaknya di daerah tinggi atau pegunungan  yang  tingginya  berkisar  700m di  atas  permukaan  laut.  S ecara  geografis jenis  tanah  di  daerah  ini  merupakan  Tanah Alluvial,  tanah  alluvial  merupakan  jenis tanah  yang  terbentuk  dari  hasil  erosi  dan sedimentasi  sehingga  cukup  mendukung untuk  bercocok  tanam  karena  tanahnya sangat subur (Kasenda, dkk. 2014).

## Pembuatan Spektrum FTIR
Spektrofometer inframerah merupakan  suatu  metode  yang  dapat mengukur  secara  cepat  contoh  tanpa merusak dan mampu menganalisis beberapa komponen  secara  serentak  (Wold et  al ., 2001). Spektrum FT-IR daun gedi memberikan  pola  yang  hampir  mirip  satu sama  lain,  hal  ini  menandakan  bahwa senyawa  kimia  yang  dikandung  hampir sama.
Gambar  3.  Spektra  FTIR  Daun  Gedi  Hijau (a) Bitung, (b) Minahasa Selatan, (c)  Kotamobagu,  (d)  Minahasa Utara,  (e)  Manado,  (f)  Minahasa Tenggara,  (g)  Minahasa,  (h) Tomohon
Berdasarkan  pengujian  dari  ke  8 sampel  menggunakan  instrument  FT-IR, diperoleh  puncak  absorbansi  pada  panjang gelombang  3580,05  cm -1 -3649,76  cm -1 menunjukan  gugus  OH  (alcohol),  pada panjang gelombang 3392,69 cm -1 – 3496.99 cm -1 menunjukan adanya gugus NH ( Amina Sekunder).  Pada  ikatan  C=O  (Aldehid) terlihat  di  panjang  gelombang  1720,43– 1739,99 cm -1 , C=O (keton) pada 1675-1725 cm -1 ,  C=O  (asam  karboksilat)  pada  1700- 1725  cm -1 .  Adanya  ikatan  C=C  (alkena) pada  panjang  gelombang  1620  cm -1 –  1680 cm -1 .  Serapan  di  daerah  1400-1500  cm -1 menunjukan adanhya C-C aromatic.

## Analisis Data
Model  kalibrasi  multivariat  dibuat dengan  program  Mini  Tab  menggunakan metode  regresi  PLS.  Kalibrasi  multivariat dengan  metode Partial  Least  Square Regression (PLS)  secara  otomatis  akan memberikan informasi spektrum yang khusus dan relevan dengan suatu sifat kimia dari model kalibrasi pada bilangan gelombang  tertentu  (Van  der  Vort et  al ., 1992). Pembentukan model prediksi flavonoid  total  dilakukan  oleh  PLS  dengan melibatkan  variabel  x  (hasil  pengukuran FTIR)  dan  variabel  y  (data  hasil  analisis metode AlCl3). Kalibrasi dan validasi model diolah  dengan  teknik  validasi  silang.  Model dapat digunakan bila memiliki nilai
kesalahan  (standar  error  calibration  SEC, standar  error of  cross validation SECV atau standard error of prediction SEP) rendah dan nilai  korelasi  atau  koefisien  determinasinya tinggi (Miller and Miller, 2010).
Gambar  4.  Plot  Regresi  PLS  Daun  Gedi Hijau
Pada  Plot  regresi  memperlihatkan mutu  model  regresi  yang  dihasilkan.  Model data  spektrum  yang  terbentuk  merupakan model yang kurang baik karena menghasilkan  titik  yang  tidak  berdekatan satu  sama  lain,  sehingga  memperoleh  nilai korelasi yang rendah.
Berdasarkan  Hasil  prediksi  PLS menunjukkan  nilai  korelasi  ( r) kalibrasi  = 0.999, nilai korelasi ( r ) validasi = 0. 975 dan nilai  SEP  = 0.052 dan SEC  = 0.003  Hal  ini menunjukkan  bahwa  model  kalibrasi  dapat diterima  dikarenakan  memenuhi  syarat dengan  nilai  koefisian  determinasi  yang tinggi  dan  galat  yang  rendah  (Miller  and Miller, 2010).

## KESIMPULAN
1. Berdasarakan hasil Validasi Spektroskopi IR  yang  telah  didapatkan  menunjukkan bahwa Hasil tersebut memenuhi persyaratan  dengan  nilai  parameter- parameter  ( r )  validasi  =  0.  975  dan  nilai SEP = 0.052. Hal ini menunjukkan bahwa model
Validasi dapat diterima
dikarenakan  memenuhi  syarat  dengan nilai  koefisian  determinasi  yang  tinggi dan galat yang rendah.
2. Berdasarkan  hasil  yamg  di  dapatkan bahwa  hasil  dapat  di  aplikasikan  dalam penentuan  kadar  total  flavonoid  dengan menggunakan metode FTIR.

## SARAN
Disarankan agar dalam penentuan kandungan  total  flavonoid  menggunakan spektrofotomer  FTIR  dapat  menggunakan metode kemometrik yang lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Harbone. 1987. M etode Fitokimia Penuntun Cara  Modern  Menganalisis. ITB press, Bandung.
Kasenda,
Ivanny, M.Sylviah, dan H.Wungouw.  2014.  Perbandingan Denyut  Nadi  antara  Penduduk  yang
Tinggal  di  Dataran  Tinggi  dan Dataran  Rendah. E-Biomedik, 2(2): 1-6.
Mamahit  L.P. &  Soekarno,N.H., 2010. Satu senyawa  organik  yang  diisolasidari daun  gedi  ( Albemoschus  manihot L . Medik )  Asal  Sulawesi  utara . Jurnal
Kimia . Vol.3, No.1, Hal. 45.
Miller, J.N., and Miller, J.C. 2010. Statistics and  Chemometrics  for  Analytical Chemistry  Sixth  edition .  Pearson
Education Limited, England.
Pine,  A.T.D.,  Alam,  G.  dan  Attamim,  F.
2011. Standarisasi mutu ekstrak daun gedi ( Abelmoschus manihot L. Medik)  dan  uji  efek  antioksidan dengan metode DPPH.
http://www.pasca.unhas.ac.id/jurnal.
[21 Agustus 2012]. Robinson, T., 1991. The Organic Constituens  of  Higher  Plants,  6th Ed .,  Diterjemahkan  oleh  Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB,

## Bandung
Rohaeti,  E.,  Heryanto,  R.,  Rafi,  M., Kurniasari,  I.,  and  Darusman,  L.  K., 2006,  Rapid  Analysis  of  Total Flavonoids  from  Medicinal  Herb: Interpretation  of  Chemometrics  on Infrared Spectra of Phyllantus niruri , Prosiding  of  The  2006  Seminar  on Analytical  Chemistry  9  Maret  2006 ,
Departemen Kimia Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
South,  E.,  H.  Kaempe  dan  A.  Tampi.  2013. Evaluasi  Kandungan  Total  Polifenol dan  Isolasi  Senyawa  Flavonoid  Pada Daun  Gedi  Merah  ( Abelmoscus manihot L.). Chemistry Progress . 6 :
86.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan . CV.Putra Media Nusantara, Surabaya.