Aktivitas bakteri pelarut fosfat terhadap peningkatan ketersediaan fosfat pada tanah masam
The activity of phosphate solubilizing bacteria on increasing phosphate available in acid soil
Aisyah Valentini Sonia 1 dan Tri Candra Setiawati 1*
1 Program Studi Ilmu Tanah, Fakultas Pertanian, Universitas Jember
* Email korespondensi: candra.setiawati.faperta@unej.ac.id
Diterima: 24 Januari 2022 / Disetujui: 31 Maret 2022

## ABSTRACT
Acidic  soil  is  soil  with  a  low  pH  value,  generally  a  limited  number  of  microorganism  populations,  and  low  nutrient concentrations,  especially  the  availability  of  phosphate  nutrients.  The  research  aims  to  determine  the  effect  of  phosphate solubilizing  bacteria  in  increasing  phosphorus  availability  in  acid  soils.  This  research  was  conducted  at  the  Soil  Biology Laboratory,  Faculty  of  Agriculture,  Jember  University,  starting  in  August  2020  to  June  2021.  The  research  stages  were  a qualitative test of phosphate solubilize on Pikovskaya agar media, a quantitative test of phosphate solubilizing bacteria activity on Pikovskaya liquid  media  under several  acidic  conditions (pH 4, pH 5, pH 6, and pH 7), as well  as testing the activity of phosphate solubilizing bacteria on acid soils (Inceptisols and Ultisols). The bacteria used were Pseudomonas sp and Bacillus valezensis. Parameters observed were changes in pH, the concentration of P-Available, P-total, respiration, and the number of bacterial populations. The results showed the activity of both BPFs on Pikovskaya solid media in the "medium" category with a Solubility  Index of 2,21 to 2,59. Phosphate solubilizing bacteria activity on liquid media  with several pH conditions showed phosphate dissolving activity up to the 15th day. The pH 6 gave the highest phosphate solubilization activity, which was 21.87 ppm  by  Pseudomonas  sp.  The  activity  of  the  two  BPFs  on  acid  soils  (Inceptisols  and  Ultisols)  affected  the  concentration  of available P compared to the initial  concentration. Inceptisol  with Pseudomonas sp inoculation on day 30 increased by 65%, while in Ultisol, it increased by 162%. The activity of Bacillus valezensis in Inceptisol increased 217% while in Ultisol increased by 243%.
Keywords: acid soil, phosphate solubilizing bacteria, Pseudomonas sp, Bacillus Valezensis.

## ABSTRAK
Tanah masam merupakan tanah dengan nilai pH rendah, umumnya jumlah populasi mikroorganisme yang terbatas dan konsentrasi unsur hara rendah, terutama ketersediaan unsur hara fosfat. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh kemampuan  pemberian  bakteri  pelarut  fosfat  (BPF)  dalam  meningkatkan  ketersediaan  fosfor  tanah  masam.  Penelitian  ini dilaksanakan di  Laboratorium Biologi Tanah Fakultas Pertanian Universitas Jember mulai  bulan Agustus 2020  hingga Juni 2021. Tahapan penelitian yaitu uji kualitatif pelarutan fosfat pada media Pikovskaya agar, uji aktivitas bakteri pelarut fosfat secara kuantitatif pada media Pikovskaya  cair di beberapa kondisi  masam (pH 4, pH 5, pH 6, dan pH 7), serta  uji aktivitas bakteri pelarut fosfat pada dua jenis tanah masam (Inceptisol dan Ultisol). Bakteri yang digunakan yaitu bakteri Pseudomonas sp dan Bacillus valezensis. Parameter yang diamati yaitu perubahan pH, konsentrasi P-tersedia,  respirasi  dan jumlah populasi bakteri. Hasil penelitian menunjukkan adanya aktivitas kedua BPF yang di uji pada media padat Pikovskaya dengan adanya Indeks  pelarutan  sebesar  2,21    hingga  2,59  dalam  kategori  “sedang”.    Pengujian  aktivitas  BPF  pada  media  cair  dengan beberapa  kondisi  pH  menunjukkan  adanya  aktivitas  pelarutan  fosfat  hingga  hari  ke-15.  Kondisi  pH  6  memberikan  aktivitas pelarutan fosfat yang tertinggi yaitu 21,87 ppm oleh bakteri Pseudomonas sp. Aktivitas kedua BPF pada tanah masam (Inceptisol dan  Ultisol)  memberikan  pengaruh  terhadap  peningkatan  konsentrasi  ketersediaan  P  dibandingkan  konsentrasi  awal.  Pada Inceptisol  dengan  inokulasi  Pseudomonas  sp  pada  hari  ke-30  meningkat  65%,  sedangkan  pada  Ultisol  meningkat  162%. Aktivitas Bacillus valezensis pada Inceptisol meningkatkan 217% sedangkan pada Ultisol meningkat sebesar 243%.
Kata kunci: tanah masam, bakteri pelarut fosfat, Pseudomonas sp, Bacillus valezensis

## PENDAHULUAN
Tanah  masam  secara  umum  memiliki  ion  hidrogen yang  tinggi  dan  menyebabkan  tanah  bereaksi  masam  (pH kurang  dari  5,5).  Tanah  masam  di  Indonesia  tersebar  di
beberapa  bagian  yaitu  di  Sumatera,  Kalimantan  dan  Papua dengan  total  luas  108,8  juta  ha  (Mulyani,  2013).  Tanah masam  selain  terbentuk  dari  bahan  induk  masam  juga terbentuk dari faktor lain yaitu tingkat curah hujan yang tinggi yang menyebabkan hilangnya kation-kation basa (Ca 2+ , Mg 2+ ,
DOI: https://doi.org/10.21107/agrovigor.v15i1.13449 Agrovigor : Jurnal Agroekoteknologi http://journal.trunojoyo.ac.id/agrovigor Copyright (c) 2022 Author(s) ISSN: 1979-5777 ( Print ), 2477-0353 ( Online )
K + ,  dan  Na + ),  selain  itu  tanah  yang  memiliki  tingkat pelapukan lanjut juga menyebabkan kation kation asam lebih dominan  seperti  Al  dan  Fe  sehingga  dapat  membuat  tanah bereaksi  masam  (Munawar,  2011).  Tingginya  kandungan unsur  Al  dan  Fe  memiiki  hubungan  dengan  ketersediaan unsur P dalam tanah masam karena  anion P dapat diikat oleh Al dan Fe menjadi AlPO 4 dan FePO 4 .
Fosfor  merupakan  unsur  penting  setelah  Nitrogen untuk  tanaman.  Fosfor  total  pada  tanah  masam  memiliki konsentrasi  yang  tinggi  namun  ketersediaannya  terbatas untuk  diserap  oleh  tanaman  (Sugianto,  2019).  Fosfor  pada tanah  dapat  membantu  tanaman  dengan  menerima  dan mengubah energi sinar matahari menjadi zat yang dapat diurai bagi  tanaman  (Riwat et  al ,  2020).  Unsur  hara  fosfor  pada tanah  terbagi  menjadi  2  bagian  yaitu  fosfor  anorganik  dan fosfor organik yang digunakan sebagai sumber hara penting bagi tanah, tanaman dan mikroorganisme lainnya.
Fosfor  anorganik  merupakan  bentuk  fosfor  yang berasal  dari    mineral  fosfat  (apatit),  jerapan  P  pada  partikel liat  dan  kompleks  fosfat  Al  dan  Fe.  Fosfor  dalam  bentuk organik  merupakan  fosfor  yang  berasal  dari  bahan  organik atau  sisa-sisa  tanaman,  hewan  dan  mikroorganisme.  Secara umum unsur hara fosfor yang bentuknya organik tidak dapat tersedia  bagi  tanaman  serta  dalam  proses  ketersediaannya fosfor  organik  perlu  diubah  melalui  proses  mineralisasi sehingga menjadi fosfor anorganik (Handayanto dkk, 2017). Upaya yang digunakan untuk memenuhi ketersediaan fosfor dalam  tanah  dapat  dilakukan  menggunakan  metode  biologi yaitu dengan adanya pemberian bakteri pelarut fosfat.
Bakteri pelarut fosfat merupakan bakteri yang mampu melarutkan  fosfat  yang  semula  tidak  tersedia  menjadi tersedia.  Menurut  Mindari  dkk  (2018)  Bakteri  yang  dapat menarutkan  fosfat  antara  lain  bakteri Aspergillus  sp, Penicillium  sp,  Pseudomonas  sp,  Bacillus,  Micrococcus,  P. aeruginosa dan  lain-lain.  Aktivitas  bakteri  pelarut  fosfat mampu menghasilkan enzim fosfatase yang dapat memineralisasi  fosfat  organik  yang  ada  di  dalam  tanah. Enzim  fosfatase  juga  berperan  peniting  dalam  proses hidrolisis fosfat organik menjadi fosfat anorganik (Fitriatin et al, 2020).  Bakteri  pelarut  fosfat  juga  menghasilkan  asam- asam  organik  seperti  asam  sitrat,  asam  glutamat  dan  asam suksinat  serta  bereaksi  dengan  unsur  Al 2+ atau  Fe 2+ yang menghasilkan  senyawa  kompleks  yang  stabil  serta melepaskan  ion  fosfat  yang  terikat  menjadi  tersedia  bagi tanaman (Asrul dkk, 2020).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi bakteri  pelarut  fosfat  ( Pseudomonas  sp dan Bacillus valezensis ) dalam  melarutkan fosfat pada media Pikovskaya dan  mempelajari  aktivitas  bakteri Pseudomonas  sp dan Bacillus valezensis pada tanah masam.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Biologi Tanah,  Fakultas  Pertanian  Universitas  Jember  pada  bulan Agustus  2020  hingga  Juni  2021,  yang  dilaksanakan  dalam tiga tahap.

## Uji Pelarutan Fosfat secara Kualitatif
Penelitian  ini  menggunakan  bakteri  pelarut  fosfat Pseudomonas sp dan Bacillus valezensis yang masing-masing berasal  dari  rhizosfer  tanaman  tebu  dan  rumput.  Keduanya merupakan  isolate  koleksi  laboratorium  Biologi  Tanah, Fakultas  pertanian,  Universitas  Jember  serta  media Pikovskaya  dengan  sumber  P  berasal  dari    Ca 3 (PO 4 ) 2 dan AlPO 4 .
Uji  kualitatif  dilaksanakan  menggunakan  media selektif  Pikovskaya  padat  dengan  komposisi  media  sebagai berikut glukosa 10g; NaCl 0,2g; (NH 4 ) 2 SO 4 0,5g; KCl 0,2g; MgSO.7H 2 O  0,1g;  MnSO 4 0,005g;  FeSO 4 0,005g;  Yeast Ekstrak  0,5g;  Agar  20g;  dan  sumber  fosfat  Ca 3 (PO 4 ) 2 atau AlPO 4 sebanyak  5g  (Sharon et  al ,  2016).  Semua  bahan dilarutkan  dalam  1L  aquadest  pada  wadah  Erlenmeyer, dipanaskan  dan  diaduk  hingga  homogen,  kemudian disterilsasi dengan autoclave suhu 121°C dan tekanan 1 atm.
Menuangkan  media Pikovskaya steril ke cawan petri tunggu hingga memadat. Menginokulasikan bakteri Pseudomonas sp dan Bacillus valezensis pada masing-masing cawan  petri  dengan  cara  membagi  3  bagian  cawan  petri, kemudian  disubkultur  atau  metode  gores  secara  perlahan sebanyak 2-3 kali (Zulkifli et al , 2020). Kemudian media di letakkan  di  inkubator  untuk  mengetahui  pelarutan  yang terjadi. Pengamatan dilakukan setiap hari selama 10 hari masa inkubasi kemudian menghitung Indeks Pelarutan (IP) dengan rumus berikut (Mohamed et al , 2018):

## 𝐼𝑃 = (𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝐾𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 + 𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑍𝑜𝑛𝑎 𝐵𝑒𝑛𝑖𝑛𝑔) 𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝐾𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖

## Uji Aktivitas Bakteri Pelarut Fosfat Media Pikovskaya Cair Secara Kuantitatif
Penelitian  tahap  ini  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  faktorial  yaitu:  (1)    faktor  Bakteri  Pelarut Fosfat  (BPF)  yaitu  (BPF1= Pseudomonas  sp dan  BPF2= Bacillus valezensis ) dan (2) faktor pH media yaitu  pH 4, pH 5, pH 6, dan pH 7 dengan tiga ulangan. Uji ini bertujuan untuk mempelajari  viabilitas  dan  aktivitas  BPF  pada  beberapa kondisi  kemasaman,  sehingga  pada  saat  diaplikasikan  ke tanah masam, kemampuan BPF sudah diketahui.
Persiapan  untuk  uji  pelarutan  secara  kuantitatif dilakukan dengan menumbuhkan bakteri pada media Nutrient Broth selama ± 3 hari. Media Pikovskaya cair sebanyak 50 ml dengan  sumber  Ca 3 (PO 4 ) 2 diatur  pH  nya  sesuai  dengan perlakuan yaitu pH (4, 5, 6, 7) dengan menambahkan HCl 0,1 M hingga mencapai pH yang sesuai.
Setelah media steril  diinokulasi bakteri pelarut fosfat ( Pseudomonas sp dan Bacillus valezensis i) sebanyak 2,5 ml dengan  kerapatan  bakteri  masing-masing  ±30,10 8 cfu  dan 32,10 8 cfu.  Pengamatan  dilakukan  setiap  hari  dengan menggojok  pada  orbital  shaker  selama  30  menit  perhari dengan kecepatan 150 rpm. Variabel  yang diamati  yaitu pH H 2 O,  dan  P-Tersedia  ekstrak  aquadest  (P-Air),  setiap  5  hari sekali selama 15 hari masa inkubasi.

## Uji Pelarutan Fosfat pada Tanah Masam
Penelitian  pada  tanah  masam    menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  faktorial  dengan  faktor  1 jenis  bakteri    (B0=  tanpa  inokulasi  bakteri;  B1  = Pseudomonas  sp dan  B2= Bacillus  valezensis )  dan  faktor  2 Jenis  tanah  masam  yaitu  T1  =  Inceptisol  dan  T2  =  Ultisol, dengan tiga kali ulangan.
Tanah  masam  yang  telah  steril  sebanyak  250  gr ditempatkan pada toples kaca dan dikondisikan pada 80-90% kapasitas  lapang  dengan  aquadest  steril.  Menginokulasikan bakteri Pseudomonas sp dan Bacillus valezensis yang telah ditumbuhkan  pada  media  NB  pada  masing-masing  tanah masam  sebanyak  5  ml  dengan  kerapatan  bakteri  masing- masing ±64,10 8 cfu dan 65,10 8 cfu.
Pengamatan aktivitas BPF dengan mengukur respirasi pada hari ke-3, 7, 14, 21, dan 28 dengan metode pengukuran CO 2 dalam  botol  tertutup  (Widati,  2007).  Pengamatan  pH H 2 O  dan  P-tersedia  ekstrak  Bray  setiap  hari  ke-10,  20,  30 setelah  inokulasi  serta  penghitungan    total  populasi  bakteri setelah perlakuan pada hari ke-30.

## Analisis Data
Data  yang  telah  diperoleh  kemudian  di  analisis menggunakan  sidik  ragam  dan  apabila  terdapat  interaksi dilakukan uji lanjut menggunakan duncan multiple range test (DMRT)  dengan  taraf  kepercayaan  5%  menggunakan aplikasi Excel Smartstat dan SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Uji Pelarutan Fosfat secara Kualitatif
Pelarutan  P  pada  media  Pikovskaya  ditandai  dengan terbentuknya  zona  bening  (Halozone)  pada  sekitar  bakteri.
Diameter  halo  zone Bacillus  valenzensis pada  media Pikovskaya padat dengan sumber Ca 3 (PO 4 ) 2 maupun sumber AlPO 4 lebih besar dibanding Pseudomonas sp. Potensi bakteri dalam  melarutkan  P  dapat  dilakukan  dengan  mengetahui indeks kelarutan fosfat (Gambar 1) (Mohamed et al , 2018).
Berdasarkan waktu pelarutannya bakteri
Pseudomonas sp dan Bacillus valezensis mampu melarutkan P pada  media Pikovskaya agar  mulai  hari ke-2 (H+2), serta dikategorikan  “cepat”  dalam  melarutkan  fosfat  anorganik baik pada media Pikovskaya agar dengan sumber Ca 3 (PO 4 ) 2 dan  AlPO 4 yang  ditandai  dengan  adanya  zona  bening  pada media. Kriteria “cepat” apabila dapat melarutkan kurang dari 3 hari setelah inokulasi, pelarutan “lambat” setelah lebih dari 3  hari  serta  “tidak  dapat”  melarutkan  apabila  tidak  ada pelarutan selama 15 hari (Marra et al , 2011).
Berdasarkan  indeks  pelarutan  fosfat  pada  media Pikovskaya  agar,  diketahui  bahwa  indeks  pelarutan  bakteri Pseudomonas  sp lebih  besar  dibanding  bakteri Bacillus valezensis pada  sumber  Ca 3 (PO 4 ) 2 maupun  sumber  AlPO 4 , hal  tersebut  dipengaruhi  oleh  adanya  metabolit  yang disekresikan  oleh  bakteri  berupa  asam-asam  organik  yang berbeda  sehingga  dapat  mengakibatkan  adanya  perbedaan dalam proses pelarutannya (Gambar 1).
Marra et  al, (2012)  mengkategorikan    kemampuan bakteri  dalam  melarutkan  fosfat  berdasarkan  indeks pelarutannya  (IP)  menjadi  3  kategori  yaitu  rendah  (IP<2), sedang  (IP  2-4)  dan  tinggi  (IP>4).  Pada  H+7  hasil  uji pelarutan  pada  media  Pikovskaya  agar  dengan  sumber Ca 3 (PO 4 ) 2 diperoleh  IP  bakteri Pseudomonas  sp sebesar  IP 2,59,  sedangkan    dengan  sumber  AlPO 4 sebesar  IP  2,48. Bakteri Bacillus valezensis menunjukkan IP fosfat yang sama baik dengan sumber Ca3(PO 4 ) 2 maupun  AlPO 4 sebesar 2,21 (Gambar  1).  Berdasarkan  IP  kedua  bakteri  tersebut  baik dengan  sumber  Ca3(PO 4 ) 2 maupun    AlPO 4 kemampuan pelarutannya dalam kategori “sedang”.
Gambar 1. Indeks pelarutan BPF. 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 H+1 H+3 H+5 H+7 H+9 H+10 In d ek s P ela ru tan Hari Pengamatan CaB1 CaB2 AlB1
AlB2
Gambar 2. Pengaruh kombinasi perlakuan BPF dengan pH media Pikovskaya cair terhadap pH larutan.
Tabel 1. Interaksi BPF dengan media cair Pikovskaya terhadap pH pada hari ke-5.
Media Pikovskaya (A) pH Larutan H+5 Jenis Bakteri Pseudomonas sp (BPF 1) Bacillus valezensis (BPF 2) pH 4 4,02 bc A 4,07 b A pH 5
3,77 c B 4,72 a A pH 6
4,24 ab A 4,58 a
A pH 7
4,44 a A 4,69 a
A
Keterangan:  Huruf kapital (horizontal) dan huruf kecil (vertikal). Angka yang diikuti huruf yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata menurut uji DMRT taraf kepercayaan 5%.

## Uji Pelarutan P secara Kuantitatif
Tahap  uji  pada  beberapa  kondisi  kemasaman  (pH) larutan menunjukkan kedua BPF dapat beraktivitas pada pH 4  hingga  pH  7.  Hal  ini  ditunjukkan  oleh  perubahan  pH  dan pelarutan  dari  sumber  P  yang  terjadi  pada  media.  Secara umum  pada  semua  media,  terjadi  penurunan  pH  dengan inokulasi BPF pada rentang waktu 0-15 hari dengan pola yang bervariasi  dari  pengamatan  hari  ke-5,  ke-10  dan  ke-15 (gambar 2).
Penurunan  pH  terjadi  karena  adanya  proses metabolisme  dari  BPF  yang  menghasilkan  asam-asam organik dan mengekskresikan keluar dinding sel hingga dapat membantu  melarutkan  fosfat  yang  terikat  pada  sumber  P dengan  menyumbangkan  proton  pada  media  (Pande et  al, 2017).  Berdasarkan  proses  metabolismenya  bakteri  pelarut fosfat  memanfaatkan  glukosa  yang  ada  pada  media Pikovskaya  dan  mampu  menghasilkan  asam-asam  organik yang  dapat  menurunkan  pH.  Asam  organik  yang  dihasilkan oleh  bakteri  pelarut  fosfat  antara  lain  yaitu  asam  sitrat, glutamat, suksinat, laktat, oksalat, malat, fumarat dan tartarat (Seshachala et al , 2012).
Berdasarkan hasil sidik ragam, interaksi kedua faktor yaitu  pH  media  dan  jenis  bakteri  terhadap  perubahan  pH terjadi pada hari ke-5 (Tabel 1), interaksi BPF dengan kondisi pH  5  nyata  mempengaruhi  penurunan  pH, Pseudomonas  sp menurunkan  pH  menjadi  3,77  sedangkan B.valenzensis menurunkan pH  menjadi 4,72. Adanya  interaksi  yang  nyata pada  hari  ke-5,  disebabkan  kedua  BPF  beraktivitas  lebih tinggi  untuk  beradaptasi  dengan  kondisi  media,  sehingga metabolit yang dihasilkan dari proses metabolism mempengaruhi  pH  media.  Hasil  yang  sama  di  peroleh Suleman et al (2018) juga menunjukkan terjadi penurunan pH pada  media  menjadi  3,7  pada  hari  ke-5  setelah  inokulasi dengan  bakteri Pseudomonas sp MS16 dan Enterobacter sp MS32.
Pada hari ke 10 dan 15 terjadi interaksi berbeda tidak nyata antara factor pH media dengan jenis bakteri. Aktivitas kedua BPF pada kondisi pH yang berbeda, tidak memberikan pengaruh  perubahan  pH  yang  nyata  pada  media.  Semakin lama  aktivitas  BPF  menurun  karena  semakin  terbatasnya sumber  energy  dan  menyebabkan  penurunan  populasi, sehingga proses metabolism sel juga menurun.
3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 H+0 H+5 H+10 H+15 p H L ar u tan pH 4 BPF1 pH 5 BPF1 pH 6 BPF1 pH 7 BPF1 pH 4 BPF2 pH 5 BPF2 pH 6 BPF2
pH 7 BPF2
Aktivitas Pseudomonas  sp pada  semua  perlakuan kondisi  pH  media  menurunkan  pH  media  lebih  besar dibanding Bacillus  valezensis. Perbedaan  penurunan  pH karena  setiap  bakteri  memiliki  kemampuan  masing-masing dalam  memproduksi  asam-asam  organik  (Dewanti  dkk, 2016).  Asam  organik  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  genus Pseudomonas  sp antara  lain  yaitu  asam  laktat,  asam  tartrat dan  asam  malat  (Setiawati  dkk,  2014).  Bakteri Bacillus valezensis juga dapat menghasilkan asam-asam organik yang berbeda  dengan  bakteri Pseudomonas  sp. Secara  spesifik asam organik yang dihasilkan B.valenzensis yang diuji belum teridentifikasi,  namun  umumnya  bakteri Bacillus  sp mengahasilkan  antara  lain    asam  asetat  dan  asam  oksalat (Husna dkk, 2019) , asam malat dan asam glukonat dihasilkan oleh  bakteri  pelarut  fosfat Bacillus  sp  NE4 ( Kaur,  C.,  G. Selvakumar and K. K. Upreti, 2021) glukonat, acetat, tartaric, sitrat, suksinat, format, malat dan oksalat dihasilkan oleh BPF
B.cereus dan B.subtilis (Chawngthu  L.,  R.  Hnamte  and    R. Lalfakzuala,  2020).      Hasil  perubahan  pH  disebabkan  oleh adanya  perbedaan  bakteri  dalam  menghasilkan  konsentrasi dan jenis asam organiknya.
Kondisi pH mempengaruhi secara nyata aktivitas BPF baik Pseudomonas  sp maupun B.  vealezensis dalam melarutkan  P  dari  sumber  Ca 3 PO 4 dari  media  Pikovskaya (Tabel 2).  Hasil sidik ragam menunjukkan adanya interaksi berbeda  nyata  antara  BPF  dengan  kondisi  pH  pada  media Pikovsyaka  cair  hari  ke  15  dan  interaksi  tersebut  mampu mempengaruhi  pelarutan  P  dari  sumber  Ca 3 PO 4 (Tabel  2). Pada kondisi pH Media yang sama, aktivitas Pseudomonas sp berbeda  nyata  dengan  aktivitas Bacillus  valezensis dalam melarutkan  P.  Konsentrasi  P  larutan  terbesar  pada  kondisi media  pH  5  sebesar  22,40  ppm  dan  berbeda  tidak  nyata dengan konsentrasi pada pH 4 sebesar 19,58 ppm, pada saat hari ke-15.
Tabel 2. Interaksi BPF dengan media cair Pikovskaya terhadap P-terlarut ekstrak air H+15.
Media Pikovskaya (A) P-Larut Air (ppm) H+15 Jenis Bakteri Pseudomonas sp (BPF1) Bacillus valezensis (BPF2) pH 4 19,58 a A 15,34 a
B
pH 5 22,40 a A 7,01 b B
pH 6 14,56 b A 5,68 b B pH 7
14,86 b A
4,93 b B
Keterangan:   Huruf kapital (horizontal) dan huruf kecil (vertikal). Angka yang diikuti huruf yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata menurut uji DMRT taraf kepercayaan 5%.
Gambar 3. Pengaruh kombinasi perlakuan BPF dengan media cair Pikovskaya terhadap P-larut air.
0 5 10 15 20 25 30 Hari ke-5 Hari ke-10 Hari ke-15 K on d en tr as i P -l ar u t ai r (p p m )
pH 4 BPF 1 pH 4 BPF 2 pH 5 BPF 1 pH 5 BPF 2 pH 6 BPF 1 pH 6 BPF2 pH 7 BPF 1 pH 7 BPF 2
Pola pelarutan antara bakteri Pseudomonas sp dengan Bacillus  valezensis menunjukkan  perbedaan  mulai  H+5 (Gambar  3).  Pada  semua    kondisi  pH  media,  bakteri Pseudomonas sp meningkatkan pelarutan fosfat pada H+5 ke H+10  dan  kemudian  terjadi  penurunan  aktivitas  pelarutan pada H+10 ke H+15. Sebaliknya  bakteri Bacillus valezensis pelarutan  fosfat menurun  mulai H+5 hingga H+15  (Gambar 3).  Pelarutan  yang  terjadi  diduga  berkaitan  dengan  fase pertumbuhan  bakteri  dan  setiap  bakteri  memiliki  fase  yang berbeda-beda.  Selama  masa  inkubasi  terjadi,  nutrisi  media sebagai  tempat tinggal  bakteri  akan  mulai  habis  yang  dapat berakibat terjadi kompetisi nutrisi yang dapat mengakibatkan beberapa sel mati sehingga dapat terjadi penurunan pelarutan P (Sulistijowati, 2012).
Bakteri  pelarut fosfat  yang  menghasilkan asam-asam organik  mampu  melarutkan  P  sehingga  bakteri  tersebut mampu  mengkhelat  kation  pada  Ca 2+ .    Asam  organik  yang dihasilkan  terdisosiasi  menjadi  gugus  fungsional    karboksil (COO - )  dan  gugus  hidroksil  (OH - )  yang  bermuatan  negatif, sehingga bisa berikatan dengan ion Ca + seperti reaksi berikut (Santosa, 2007):

## Uji Pelarutan Fosfat pada Media Tanah Masam
Pada  tanah-tanah  masam,  dua  masalah  dasar  adalah defisiensi hara, khususnya P dan kehadiran material fitotoksik seperti Al dan Mn (Haynes and Mokolobate, 2001). Dua jenis tanah  masam  yang diuji  berasal dari kabupaten Bogor yaitu Inceptisol  dan  Ultisol  dengan  karakteristik  yaitu:  pH  tanah 5,35 dan 4,62 dengan status pH tanah tergolong masam.
Rendahnya  pH  pada  tanah  masam  disebabkan  oleh tingginya  curah  hujan  pada  suatu  daerah  sehingga mengakibatkan pelarutan mineral lebih cepat. Rendahnya pH tanah diikuti oleh rendahnya kandungan unsur hara didalam tanah  khususnya  unsur  fosfor  (Nurhidayati,  2017). Konsentrasi  fosfor  total  pada  Inceptisol  sebesar  69,31 mg/100g  tanah,  namun  ketersediaan  P  hanya  4.60  ppm dikategorikan  sangat  rendah.  Sedangkan  pada  Ultisol konsentrasi P total sebesar 46,53 mg/100 g tanah termasuk ke dalam  kategori  tinggi,  namun  P  yang  tersedia  bagi  tanah dengan  nilai  6.46  ppm  tergolong  rendah.  .  Rendahnya kandungan  P  di  dalam  tanah  disebabkan  oleh  tingginya kandungan unsur Al dan Fe pada tanah masam sehingga unsur Al  dan  Fe  mampu  menjerap  P  menjadi  ikatan  AlPO 4 dan FePO 4 (Sari dkk, 2017) serta diikuti oleh rendahnya mikroba dalam  tanah  (Habi  dkk,  2018).  Konsentrasi  Al  pada  tanah Inceptisol  sebesar  2,34  cmol/kg  (Halasan,  2018)  sedangkan konsentrasi Fe-Totalnya sebesar 8,16 ppm yang dikategorikan tinggi.
Pola perubahan pH pada tanah  Inceptisol dan Ultisol dengan adanya inokulasi BPF berbeda dari H+0 hingga H+30 setelah  masa  inokulasi  (Gambar  4).  Pada  Inceptisol  terjadi peningkatan pH tanah awal 5,35 menjadi 5,47 dan 5,97 oleh adanya  aktivitas    bakteri Pseudomonas  sp dan Bacillus valezensis. Sebaliknya pada Ultisol terjadi penurunan pH dari pH  awal  4,62  menjadi  4,13  dan  4,12.  Perbedaan  pola perubahan pH dipengaruhi oleh karakteristik masing-masing tanah dan aktivitas BPF. Tanah yang memiliki nilai pH tidak optimal  sebagai  tempat  tinggal  BPF  akan  berpengaruh terhadap mekanisme pelarutan fosfat yang akan menghasilkan  asam  organik  serta  dapat  melarutkan  ikatan yang membentuk senyawa fosfat (Firdausi dkk, 2016).
Menurut  Ulfiyati  dkk  (2015)  penurunan  pH  selama masa  inkubasi  dapat  disebabkan  oleh  bakteri  yang menghasilkan asam organik atau proton  yang  menyebabkan pelarutan  kompleks  mineral  fosfat  melalui  pertukaran  ion mineral yang mengikat fosfat. Asam organik yang dihasilkan oleh  bakteri  genus Bacillus antara  lain asam  asetat,  asam laktat, asam oksalat dan asam malat (Husna dkk, 2019).
Gambar 4. Pengaruh inokulasi BPF dengan tanah masam terhadap nilai pH tanah 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 H+0 H+10 H+20 H+30 p H tan ah T1B0 T1B1 T1B2 T2B0
T2B1 T2B2
Gambar 5. Pengaruh kombinasi perlakuan BPF dengan tanah masam terhadap P-tersedia.
Tabel 3. Interaksi BPF dengan tanah masam terhadap P-tersedia tanah (ekstrak Bray) pada hari ke-10
Jenis Tanah (T) P-Tersedia Tanah (ppm) Hari ke-10 Jenis Bakteri (B) Kontrol (B0) Pseudomonas sp (B1) Bacillus Valezensis (B2) Inceptisol (T1) 15,10 a B 13,20 a B 41,38 a A
Ultisol (T2) 15,40 a A 12,37 a B 13,87 b AB
Keterangan:  Huruf  kapital  (horizontal)  dan  huruf  kecil  (vertikal).  Angka  yang  diikuti  huruf  yang  berbeda  pada  kolom/baris    yang  sama menunjukkan perbedaan yang nyata menurut uji DMRT taraf kepercayaan 5%.
Tabel 4. Total Populasi Bakteri pada tanah Perlakuan Rata-rata Populasi H+30(cfu/g) Inceptisol B1 3,8 × 10 7 Inceptisol B2 3,9 × 10 7 Ultisol B1 7,9 × 10 7 Ultisol B2 6,8 × 10 7
Keterangan: B1 = Pseudomonas sp ; BPF2 = Bacillus valezensis
Peningkatan  ketersediaan  konsentrasi  fosfat  pada tanah  mulai  terjadi  pada  saat  hari  ke-10  setelah  inokulasi, selanjutnya  penurunan  terjadi  pada  H+20  (Gambar  5). Peningkatan  konsentrasi  P-tersedia  dibandingkan  dengan konsentrasi  awal  yaitu    4.60  ppm  pada  Inceptisol  dan  6.46 ppm pada Ultisol, maka terjadi peningkatan  yang signifikan dengan  adanya  inokulasi  BPF.  Pada  Inceptisol  dengan inokulasi Pseudomonas sp pada hari ke-30  meningkat 65%, sedangkan pada Ultisol meningkat 162%. Aktivitas Bacillus valezensis pada  Inceptisol  meningkatkan  217%  sedangkan pada Ultisol meningkat sebesar 243% (Gambar 5).
Interaksi antara faktor BPF dengan jenis tanah berbeda sangat nyata pada variabel pengamatan P-tersedia hari ke-10
(Tabel 3) dan 20, namun berbeda tidak nyata pada hari ke 30. Adanya  inokulasi Bacillus  valezensis pada  tanah  Inceptisol memberikan pengaruh berbeda nyata dibanding control tanpa BPF,  dengan  peningkatan  174%.  Pengaruh Bacillus vaezensis juga  berbeda  nyata terhadap tanah Ultisol, namun terjadi  penurunan  jika  dibanding  control  (Tabel  3). Sebaliknya  inokulasi Pseudomonas  sp tidak  berpengaruh secara nyata terhadap ketersediaan P pada Inceptisol maupun Ultisol.    Penurunan  ketersediaan  P  pada  tanah  juga disebabkan oleh adanya aktivitas bakteri yang memanfaatkan fosfat  sebagai  sumber  energi  dalam  proses  metabolismenya (Respati, 2017).
5 10 15 20 25 30 35 40 45 H+10 H+20 H+30 Ko n sen tra si P -Ter sedi a Ta n a h (ppm ) Inceptisol (B0) Inceptisol (B1) Inceptisol (B2)
Ultisol (B0) Ultisol (B1) Ultisol (B2)
Gambar 6. Laju respirasi tanah masam.
Tanah masam Inceptisol dan Ultisol merupakan salah satu  tanah  yang  memiliki  kandungan  unsur  Fe  tinggi  serta memiliki  kandungan  fosfat  yang  rendah,  karena  unsur  Fe mampu mengikat fosfat (PO 4 ) menjadi FePO 4 sehingga unsur P  menjadi  tidak  tersedia  karena  terbentukya  chelate  dengan Fe seperti reaksi berikut (Santosa, 2007):
Proses  pelepasan  ikatan  FePO 4 untuk  melepaskan unsur  P  sehingga  menjadi  tersedia  di  dalam  tanah  dibantu oleh mikroorganisme pelarut fosfat yang menghasilkan asam organik seperti asam  sitrat,  asam glutamat, asam  laktat,  dan asam suksinat. Bakteri pelarut fosfat juga akan menghasilkan enzim  fosfatase  apabila  pada  media  tumbuhnya  jumlah  P tersedia  rendah.  Enzim  fosfatase  tersebut  dihasilkan  untuk membantu pelarutan fosfat organik menjadi fosfat anorganik melalui  proses  mineralisasi  sehingga  dapat  tersedia  dalam tanah.
Re-isolasi  BPF  dalam  tanah  dilakukan  pada  H+30 dengan  menggunakan  media  selektif  Pikovskaya,  bertujuan untuk  memastikan  keberadaan  BPF,  selain  dilakukan pengukuran  aktivitasnya  dengan  mengukur  respirasi  secara periodik (Gambar 6).
Hingga  H+30,  kedua  BPF  masih  ditemukan  dengan populasi Pseudomonas  sp pada  tanah  Inceptisol  pada  akhir masa inkubasi jumlah populasinya yaitu 3,8 × 10 7 cfu/g, dan bakteri Bacillus valezensis pada akhir masa inkubasi jumlah populasinya 3,9 × 10 7 cfu/g.  Sedangkan  pada  tanah    Ultisol populasi  bakteri Pseudomonas  sp pada  akhir  masa  inkubasi sebesar 7,9 × 10 7 cfu/g, dan jumlah populasi bakteri Bacillus valezensis pada  akhir  masa  inkubasi  sejumlah 6,8 × 10 7 cfu/g. Kedua BPF yang diinokulasikan pada kedua tanah masam  mengalami  penurunan  populasi  pada  H+30  setelah
inokulasi (Tabel 4) dari inokulasi awal ± 64 hingga 650 × 10 8 cfu. Secara umum  penurunan jumlah populasi bakteri dalam tanah  masam  tersebut  karena  terbatasnya  sumber  karbon, sumber energy yang digunakan oleh BPF untuk bermetabolisme. Selain itu, penelitian ini diduga selama masa inkubasi ketercukupan oksigen menurun dan hal ini berkaitan dengan  sifat  aerob  kedua  bakteri  tersebut  (Puspita et  al, 2017).
Respirasi tanah diukur sebanyak lima kali pada H+3, H+7.  H+14,  H+21  dan  H+28  setelah  inokulasi  (Gambar  6). Repirasi  merupakan  salah  satu  metode  untuk  mengetahui aktivitas  mikroorganisme tanah. Dalam aktivitasnya bakteri mengeluarkan CO 2 dan menunjukkan adanya metabolisme sel yang aktif.
Laju  respirasi  selama  masa  inkubasi  mengalami kenaikan  dan  penurunan  secara  fluktuatif.  Besaran  respirasi pada  H+3  pada  kisaran  28,80  hingga  45,47  mgCO 2 /g tanah/hari,  sedangkan  pada  H+28  laju  respirasi  dari  kedua BPF sangat rendah (Gambar 6).
Aktivitas  bakteri optimum terjadi pada hari 3 hingga hari  ke  14  pada  bakteri Pseudomonas  sp sedangkan  pada bakteri Bacillus valezensis terjadi pada hari ke 3 hingga hari ke  7  dan  kedua  bakteri  tersebut  mengalami  penurunan  laju respirasi. Penurunan  laju respirasi pada  kedua tanah  masam tersebut  diduga karena  faktor ketersediaan  bahan organik di dalam tanah yang berkurang serta adanya kandungan liat yang tinggi  menyebabkan  kandungan  O 2 rendah,  karena  dalam prosesnya  oksigen  tanah  diperoleh  dari  ruang  pori  tanah (Utomo  dkk,  2018).  Meningkatnya  laju  respirasi  di  tanah maka  akan  meningkatkan  laju  dekomposisi  bahan  organik pada tanah (Putri dkk, 2017) sehingga ketersediaan  substrat yang tersedia mencukupi pada saat awal hingga H+7. Secara umum  respirasi  mikroorganisme  bergantung  pada  kualitas dan  kuantitas  substrat,  kelembaban  dan  temperature  serta aktivitas  maksimum  enzim  yang  berperan  pada  respirasi (Ryan, M.G and Beverly E. L., 2005).

## KESIMPULAN
Aktivitas  kedua  BPF  yang  di  uji  pada  media  padat Pikovskaya  ditunjukkan  dengan  adanya  Indeks  pelarutan
0 10 20 30 40 50 60 H+3 H+7 H+14 H+21 H+28 La ju R es pi ra si Ta n a h (m g C o 2 /g Ta n a h /h a ri ) Inceptisol (B1)
Inceptisol (B2)
Ultisol (B1)
Ultisol (B2)
kategori “sedang” yaitu sebesar 2,31  hingga 2,48.  Pengujian aktivitas  BPF  pada  media  cair  dengan  beberapa  kondisi  pH menunjukkan  adanya  aktivitas  pelarutan  fosfat  hingga  hari ke-15.  Kondisi  pH  6  memberikan  aktivitas  pelarutan  fosfat yang tertinggi yaitu 21,87 ppm oleh bakteri Pseudomonas sp. Ativitas kedua BPF pada tanah masam (Inceptisol dan Ultisol)  memberikan  pengaruh  terhadap  peningkatan konsentrasi  ketersediaan  P  dibandingkan  konsentrasi  awal. Pada Inceptisol dengan inokulasi Pseudomonas sp pada hari ke-30  meningkat  65%,  sedangkan  pada  Ultisol  meningkat 162%.  Aktivitas Bacillus  valezensis pada  Inceptisol meningkatkan  217%  sedangkan  pada  Ultisol  meningkat sebesar 243%

## DAFTAR PUSTAKA
Asrul.,  dan  I.N.P.  Aryantha.  (2020).  Isolasi  dan  Identifikasi Bakteri  Pelarut  Fosfat  dari  Tanah  Rhizsosfer  Kelapa Sawit. Lumbung. 19(1): 30-39.
Chawngthu,  L.  R.  Hnamte  and    R.  Lalfakzuala.  (2020).
Isolation  and  Characterization  of  Rhizospheric Phosphate Solubilizing Bacteria from Wetland Paddy Field  of  Mizoram,  India. Geomicrobiology  Journal , 37 (4), 366-375.
Dewanti, A.W., E.Pratiwi., dan Y. Nuraini. (2016). Viabilitas dan  Aktivitas  Enzim  Fosfatase  serta  Produksi  Asam Organik  Bakteri  Pelarut  Fosfat  pada  Beberapa  Suhu Simpan. Tanah  dan  Sumberdaya  Lahan .  3(1):  311- 318.
Firdausi,  N.,  W.  Muslihatin  dan  T.  Nurhidayati.  (2016). Pengaruh  Kombinasi  Media  Pembawa  Pupuk  Hayati Bakteri  Pelarut  Fosfat  Terhadap  pH  dan  Unsur  Hara Fosfor dalam Tanah. JTSL. 5(2): 53-56.
Fitriatin,  B.N.,  D.F.  Manurung.,  E.T.  Sofyan.,  and  M.R. Setiawati.  (2020).  Compatibility  Phospahe  Solubility and Phospahatase Activity by Phosphate Solubilizing Bacteria. Haya Saudi J Life Sci . 5(12): 281- 284.
Habi, M.L., J.I. Nendissa., D. Marasabessy., dan A. M. Kalay. (2018). Ketersediaan Fosfat Serapan Fosfat dan Hasil Tanaman  Jagung  (Zea  mays  L.)  Akibat  Pemberian Kompos Granul Ela Sagu dengan Pupuk Fosfat pada Inceptisol. Agrologia . 7(1): 42-52.
Halasan.,  Anandyawati.,  Hasanudin.,  dan  Riwandi.  (2018). Perubahan Sifat Kimia Tanah dan Hasil Jagung pada Inseptisol  dengan  Pemberian  Kompos. J.  Ilmu-Ilmu Pertanian Indonesia . 20(2): 33-39.
Handayanto,  E.,  N.  Muddarisna.,  A.  Fiqri.  (2017). Pengelolaan  Kesuburan  Tanah .  Malang:  Universitas Brawijaya Press.
Haynes, R.J., and M.S Mokolobate. (2001). Amelioration of Al toxicity and P deficiency in acid soils by additions of  organic  residues:  a  critical  review  of  the phenomenon  and  the  mechanisms  involved. Nutrient Cycling in Agroecosystems . 59(1): 47-63.
Husna, M., Sugiyanta., dan E. Pratiwi. (2019). Kemampuan Konsorsium  Bacillus  pada  Pupuk  Hayati  dalam Memfiksasi  N 2 Melarutkan  Fosfat  dan  Mensintesis Fitohormon  Indole  3-Acetic-Acid. Tanah  dan  Iklim . 43(2): 117-125.
Kaur,  C. G.  Selvakumar and  K.  K.  Upreti (2021).  Organic acid profiles of phosphate solubilizing bacterial strains in  the  presence  of  different  insoluble  phosphatic sources under in vitro buffered conditions. Journal of Pure and Applied Microbiology , 15 (2), 1006-1015
Marra,  L.  M.,  C.R.F.S  Soares.,  S.M.D  Oliveira.,  P.A.A Ferreira., B.L Soares., R.D.F. Carvalho., J.M.D Lima., and S. Moreira. (2012). Biological Nitrogen Fixation and Phosphate Solubilization By Bacteria Isolate from Tropical Soils. Plant Soil . 257:289-307.
Marra, L.M., S.M.D Oliveira., C.R.F.S Soares., and F.M.D.S Moreira. (2011). Solubilisation of Inorganic Phosphates  by  Inoculant  Strains  from  Tropical Legumes. Sci Agric . 68(5): 603-609.
Mindari,  W.,  B.W.  Widjajani.,  dan  R.  Priyadarsini.  (2018). Kesuburan  Tanah  dan  Pupuk .  Yogyakarta:  Gosyen Publishing.
Mohamed,  E.A.H.,  A.G.  Farag.,  and  S.A  Youssef.  (2018).
Phosphate  Solubilization  by  Bacillus  Subtilis  and Serratia  Marcescens  Isolated  from  Tomato  Plant Rhizosphere. J.  Environmental  Protection .  9:  266- 277.
Mulyani,  A.,  dan  M.  Sarwani.  (2013).  Karakteristik  dan Potensial  Lahan  Sub  Optimal  untuk  Pengambangan Pertanian  di  Indonesia. Jurnal  Sumberdaya  Lahan . 7(1): 47-55.
Munawar,  A.  (2011). Kesuburan  Tanah  dan  Nutrisi Tanaman . Bogor: IPB Press. Nurhidayati.  (2017). Kesuburan  dan  Kesehatan  Tanah . Malang: Intimedia.
Pande, A., P. Pandey., S. Mehra., M. Singh., and S. Kaushik. (2017). Phenotypic and genotypic Characterization of Phosphate Solubilizing Bacteria and Their Efficiency on  the  Growth  of  Maize. Genetic  Engineering  and Biotechnology. 15 : 379-391.
Puspita,  F.,  Hadiwiyono.,  S.H.  Poromorto  and  D.I.  Roslim. (2017).  Morphology  Physiology  and  Molecular Characteristics  of  Oil  Palm  (Elaeis  guineensis  Jacq) endophytic  Bacillus  sp. International  Journal  of Biosciences and Biotechnology. 5(1):-80-91.
Putri,  N.A.R.,  A.  Niswati.,  S.  Yusnaini  dan  H.  Buchari. (2017).  Pengaruh  Sistem  Olah  Tanah  dan  Aplikasi Mulsa  Bagas  Terhadap  Respirasi  Tanah  pada Pertanaman Tebu (Saccharum Offcinarum L) Ratoon ke-1  Periode  2  di  PT  Gunung  Madu  Plantations. Agrotek Tropika . 5(2):109-112.
Respati,  N.Y.,  E.  Yulianti  dan  A.  Rakhmawati.  (2017).
Kemampuan Pelarutan Fosfat oleh Bakteri Termofilik pada  Variasi  Suhu  dan  pH. Seminar  Nasional Pendidikan Biologi . 1-10.
Riwat,  P.,  S.  Das.,  D.  Shankhdhar.,  and  S.C  Shankhdhar. (2020).  Phospahte  Solubilizing  Microorganisms Mechanism and Their Role in Phosphate Sulubilization and Uptake. Journal of Soil Science and Plant Nutrion .
Ryan,  M.G,  and  B.E.  Law. (2005). Interpreting, measuring, and modeling soil respiration. Biogeochemistry .73: 3– 27.
Santosa, E. (2007). Metode Analisis Biologi Tanah (Mikroba Pelarut  Fosfat).  Bogor:  Balai  Besar  Sumberdaya Lahan Pertanian
Sari,  M.N.,  Sudarsono  dan  Darmawan.  (2017).  Pengaruh Bahan  Organik  Terhadap  Ketersediaan  Fosfor  pada Tanah-tanah  Kaya  Al  dan  Fe. Buletin  Tanah  dan Lahan . 1(1): 65-71.
Seshachala,  U.,  and  P.  Tallapragada.  (2012).  Phosphate Solubilizer from the Rhizosphare of Piper Nigrum L. in Karnataka, India. Chilean Journal of Agricultural . 72(3): 397-403.
Setiawati,  M.R.,  P.  Suryatmana.,  R.  Hindersah.,  B.N. Fitriatin., dan D. Herdiyantoro. (2014). Karakterisasi Isolat  Bakteri  Pelarut  Fosfat  untuk  Meningkatkan Ketersediaan  P  pada  Media  Kultur  Cair  Tanaman Jagung. Bionatura. 16(1): 30-34.
Sharon, J.A., L.T Hathawaik., G.M. Glenn., S.H., Imam., and C.C  Lee.  (2016).  Isolation  of  Efficient  Phosphate Solubilizing  Bacteria  Capable  of  Enhancing  Tomato Plant Growth. Soil Science anda Plant Nutrion . 16(2): 525-536.
Sugianto, S.K., M. Shovitri., dan A. Hidayat. (2019) Potensi Rhizobakteri  Sebagai  Pelarut  Fosfat. Sains  dan  Seni ITS . 7(2): 71-74.
Suleman. M, S.Yasmin,   M. Rasul, M.Yahya, B. M. Atta, and M.S.  Mirza  (2018).  Phosphate  solubilizing  bacteria with  glucose  dehydrogenase  gene  for  phosphorus uptake  and  beneficial  effects  on  wheat.  PLoSONE 13(9):e0204408.
Sulistijowati,  Rieny.  (2012).  Potensi  Filtrat  Lactobacillus Acidophilus ATTC 4796 Sebagai Biopreservastif pada Rebusan Daging Ikan Tongkol. IJAS. 2(2): 58-63. Utomo,  M.,  Sudarsono.,  B.  Rusman.,  T.  Sabrina.,  J. Lumbanraja  dan  Wawan.  (2018). Ilmu  Tanah  dan Dasar Pengelolaan . Jakarta: Prenadamedia Group. Widati, S. (2007). Metode Analisis Biologi Tanah (Respirasi Tanah) .  Bogor:  Balai  Besar  Sumberdaya  Lahan Pertanian. 145-149.
Zulkifli,  L.,  P.  Sedijani.,  D.A.C.  Rasmi.,  and  L.W.Z. Amrullah. (2020). Screening and Molecular Identification of Phosphate-Solubilizing Rhizobacteria  from  Mangrove  Ecosystem  of  the Lombok Island. Biologi Tropis . 20(3): 475-484.