UJI DAYAHAMBAT EUGENOL DARI DAUN CENGKEH HASIL FRAKSINASI TERHADAP PERTUMBUHAN JAMUR PATOGEN Fusarium oxysporum f.sp. Cubense Eugenol Inhibitory Test From Clove Leaf Fractionation Of Fungal Patogen Growth Fusarium oxysporum f.sp. c ubense
Juniawan 1)
1) Balai Besar Pelatihan Pertanian Ketindan Jl. Ketindan No. 1 Lawang, Malang, Jawa Timur,
Indonesia
Korespondensi 082330779978, juniawanwi@gmail.com
Diterima : 05/08/2019 Disetujui : 03/09/2019

## ABSTRACT
This study aims to determine the inhibition of eugenol derived from fractionation clove leaf essential oils (CLEO) on the growth of pathogenic fungus Fusarium oxysporum f. sp. cubense ( Foc ) and LC 50 ( Lethal Concentration 50). This research was in vitro, started with purification of clove leaf essential oil, fractionation  by  vacuum  distillation  and  bioassay.  In  vitro  tests include exploration of  minimum inhibition  and  preventability  tests.  Data  were  analyzed  with  Microsoft  Excel  2010  program.  The results of minimum inhibition showed  at 218,75 ppm concentration of each level was able to inhibit the growth of Foc fungi. The minimum inhibition exploration was carried out at 218,75 ppm, 109,38 ppm, 54,69 ppm and 27,34 ppm . Exploration results showed that fractionated CLEO has been able to inhibit the growth of Foc fungi at 27,34 ppm in the amount of 15,60%. This concentration is used as the lowest concentration in the inhibitory test. Furthermore, the inhibitory test was carried out starting at  the  highest  concentration  of 218,75  ppm , 109,38  ppm , 54,69  ppm and 27,34  ppm .  Observations were  made  for  7  days  after  inoculation  (DAI).  The  results  showed  the  best  inhibition  was  at  a concentration of 218,75 ppm at 90,70% and LC 50 at 11.17 µL.
Keywords: CLEO, fractionation, Foc , in vitro test and LC 50

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  dayahambat  dari  eugenol  yang  berasal  dari  minyak  atsiri daun cengkeh (MADC) hasil fraksinasi terhadap pertumbuhan jamur patogen Fusarium oxysporum f. sp. cubense ( Foc )  dan  LC 50 ( Lethal  Concentration 50)-nya.  Penelitian  ini  bersifat in  vitro ,  dimulai dengan  pemurnian  minyak  daun  cengkeh,  fraksinasi  dengan  distilasi  vakum  lalu  bioassay  secara in vitro .  Uji in  vitro meliputi  eksplorasi  daya  hambat  minimum  dan  uji  daya  cegah.  Data  dianalisis dengan  program  microsoft  excel  2010.  Hasil  eksplorasi  dayahambat  minimum  menunjukkan  bahwa pada  konsentrasi  218,75  ppm  setiap  aras  sudah  mampu  menghambat  pertumbuhan  jamur Foc . Eksplorasi  dayahambat  minimum  dilakukan  pada  konsentrasi  218,75  ppm,  109,38  ppm,  54,69  ppm dan  27,34  ppm . Hasil  eksplorasi  menunjukkan  bahwa  MADC  hasil  fraksinasi  sudah  mampu menghambat pertumbuhan jamur Foc pada konsentrasi 27,34 ppm yaitu sebesar 15,60%. Konsentrasi tersebut  digunakan  sebagai  konsentrasi  terendah  dalam  uji  dayahambat.  Selanjutnya  uji  dayahambat dilakukan mulai pada konsentrasi tertinggi yaitu 218,75 ppm, 109,38 ppm, 54,69 ppm dan 27,34 ppm. Pengamatan  dilakukan  selama  7  hari  setelah  inokulasi  (HSI).  Hasil  penelitian  menunjukkan dayahambat terbaik adalah pada konsentrasi 218,75 ppm yaitu sebesar 90,70% dan LC 50 sebesar 11,17 µL.
Kata kunci: MADC, fraksinasi, Foc , uji in vitro dan LC 50 .

## PENDAHULUAN
Minyak  atsiri  daun  cengkeh  dikenal mempunyai  kemampuan  sebagai  pestisida organik,  baik  sebagai  insektisida,  bakterisida dan  fungisida.  Sebagai  fungisida,  ia  mampu mengendalikan  beberapa  jenis  jamur  patogen tular  tanah  ( soil  born  pathogen )  dan  jamur patogen  lainnya  seperti: Sclerotium  rolfsii; Sclerotium oryzae; Pyricularia oryzae; Rhizoctonia  solani;  Fusarium  oxysporum; Fusarium  batatis;  Phytopthora  palmivora dan Phytium sp. (Sunarto, et al .,  1999, Tombe,  M., A.  Nurawan  dan  Sukamto,  1994,  Juniawan, 2008,  Harni, et  al .,  2013).  Patogen  tersebut sangat  berbahaya  bagi  tanaman  karena  dapat bertahan dalam tempo yang lama (10-40 tahun) dengan  atau  tanpa  tanaman  inang,  daya rusaknya  yang  tinggi  seperti  gejala dumping  of (rebah  kecambah),  busuk  buah  dan  busuk batang (Sastrahidayat, 2013).
Dayahambat  minyak  atsiri  daun cengkeh  terhadap  jamur Fusarium  oxysporum (Layu Panama/ Panama desease ) sangat prospektif dalam rangka mengendalikan serangan  berat  dan  kronis  pada  jutaan  hektar pertanaman  pisang  kepok  di  seluruh  dunia, seperti  dilaporkan  di  Asia  Tenggara  dan Australia  pada  tahun  1876,  Panama  dan beberapa  negara  Pasifik  Utara  tahun  1950, bahkan  telah  menghentikan  eksport  pisang  dari Panama  (Wikipedia,  2016).  Pada  tahun  1940- 1960,  patogen  ini  juga  menyerang  perkebunan pisang seluas 30.000 ha di Honduras dan 4.000 ha di Suriname.
Patogen  ini  tercatat  juga  menyerang ribuan  hektar  pisang  kepok  dan  cavendish  di Indonesia.  Tahun  2007  di  Kalimantan  Timur, patogen ini dilaporkan telah menyerang 10.000 hektar  pertanaman  pisang,  dan  di  Kalimantan Selatan, Foc menghancurkan  ribuan  hektar tanaman pisang sejak beberapa tahun yang lalu dan hingga sekarang terus menyebar. Penyebarannya  begitu  cepat  mencapai  100 kilometer pertahun (Nasrunsyah, 2008). Basyah (2010)  menyebutkan  bahwa  penyakit  ini  telah menghancurkan  163  hektar  pertanaman  pisang di  Aceh.  Di  Sumatera  Barat  pada  tahun  2002, Foc telah  menyerang  sedikitnya  1  juta  rumpun pisang  dan  pada  2010  telah  membunuh  5  juta rumpun  pisang  kepok,  sehingga  merugikan petani  sekitar  10  milyar  rupiah  (Djoni,  2004).
PT.  Nusantara  Tropical  Fruit  mengebunkan pisang  Cavendish  seluas  2.000  hektar  di Lampung  dan  saat  ini  tersisa  ratusan  hektar saja.  PT.  Global  Agronusa  menanam  3.000 hektar  pisang  dan  seluruhnya  hancur  oleh serangan  penyakit  ini.  Maftuh  (2010),  Ketua Kelompok  tani  Bina  Tani,  memperkirakan tanaman  pisang  yang  terserang  layu  Fusarium di  Lebak  Banten  mencapai  luasan  sekitar  20 ribu hektar. Di Bali, produksi pisang anjlok dari 134.000  ton  buah  segar  tahun  1997  menjadi 58.000 ton pada tahun 2002 (Suprapta, 2010).
Ada  dua  kelompok  senyawa  yang dikandung  oleh  minyak  atsiri  daun  cengkeh, kelompok  pertama  adalah  senyawa  fenolat dengan  eugenol  sebagai  komponen  terbanyak dan  kelompok  kedua  yaitu  senyawa  nonfenolat yaitu  ß-Caryophyllene,  α-kububen,  α-kopaen, humulen,  δ-kadien,  dan  kadina  1,3,5-trien (Sastrohamidjojo,  2002).  Kandungan  eugenol dalam minyak cengkeh adalah bunga (90-95%), gagang (83-95%) dan daun (82-87%) (Guenther, 1990). Senyawa eugenol (C 10 H 12 O 2 ) diketahui bersifat antimikroba dan menyebabkan malformasi pada morfologi jamur serta  kerusakan  dinding  sel,  konidia  dan  hifa (Giordani et  al .,  2008).  Aktivitas  antimikroba dari  eugenol  dipengaruhi  oleh  gugus  alkil sekunder  dan  gugus  OH  dari  fenolik  yang sangat  reaktif  membentuk  ikatan  hidrogen dengan  enzim  (Utama et  al ,  2002.,  Velluti et al .,  2004  dan  Neri et  al .,  2006 dalam Harni et al ., 2013).
Informasi  yang  telah  ada,  sebagai contoh,  mengenai  kemampuan  eugenol  yang terdapat  dalam  daun  cengkeh  dalam  merusak sel  cendawan  sehingga  dapat  mengganggu pertumbuhan  dan  perkembangan  cendawan patogen  (Novita,  2007).  Eugenol  memiliki aktivitas  antibiotik  melawan  jamur  dan  bakteri (Ueda et  al .  1982).  Penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  senyawa  apa  yang  berfungsi sebagai  penghambat  daya  tumbuh  jamur Foc , apakah  seluruh  senyawa  ataukah  sebagian  atau salah  satu  dari  seluruh  senyawa  yang terkandung di dalamnya.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  dayahambat  dari  eugenol  yang berasal  dari  minyak  atsiri  daun  cengkeh (MADC) hasil fraksinasi terhadap pertumbuhan jamur  patogen Fusarium  oxysporum f.  sp.
cubense ( Foc )  dan  LC 50 ( Lethal  Concentration 50)-nya.

## BAHAN DAN METODE
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  minyak  atsiri  daun cengkeh diperoleh dari Laboratorium Pascapanen  Balai  Besar  Pascapanen,  isolat jamur Foc , media PDAS ( Potato Dextrose Agar Streptomisin) ,  alkohol  (70%),  Tween  20, GCMS, dan aquades. Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan  4  (empat)  aras  dan  5  (lima)  ulangan serta  kontrol.  Parameter  yang  diamati  adalah dayahambat dan LC 50 dari fraksi F2. Konsentrasi larutan pada berbagai aras dihitung dengan menggunakan rumus berikut:
V1.M1 = V2.M2, dimana: V1 : Volume awal
M1 : Molaritas awal
V2 : Volume akhir
M2 : Molaritas akhir Dayahambat dihitung dengan
menggunakan rumus berikut ini:
Dayahambat (P) = D1 – D2/ D1 x 100%, dimana:
P :  Persentase penghambatan D1   :  Diameter koloni jamur pada kontrol D2   : Diameter koloni jamur pada perlakuan LC 50 : diperoleh dengan menggunakan program microsoft excel 2010.

## Persiapan Penelitian
Pembuatan  media  PDAS,  p rosedur kerjanya  adalah  sebagai  berikut:  (a)  kentang dicuci  hingga  bersih,  dipotong  sebesar  dadu kecil  dan  dimasukkan  ke  dalam  gelas  piala masing-masing yang  berskala  1.000  ml kemudian  ditambah  aquades  hingga  penuh  dan direbus  hingga  masak,  (b)  kentang  yang  sudah masak  disaring,  (c)  air  rebusan  kentang dimasukkan  ke  dalam  gelas  piala,  ditambah aquades  hingga  1.000  ml  lalu  dipanaskan kembali,  (d)  ke  dalam  tabung  ditambahkan dextrose  1,5  g  dan  bubuk  agar  1,5  g  dalam volume  media  10  ml.  (Apakah  media  PDA yang  digunakan  dlm  bentuk  cair  atau  padat kalau  dengan  penambahan  1,5  g  bubuk  agar.
Dalam bentuk padat (bubuk ). Campuran diaduk merata  dan  dipindahkan  ke  dalam  Erlenmeyer dan  ditutup  rapat.  Erlenmeyer  berisi  PDA tersebut  disterilkan  ke  dalam autoclave selama 4  jam,  (e)  pada  saat  akan  digunakan,  media PDA  ditambahkan  antibiotik  streptomycin sehingga menjadi media PDAS dengan konsentrasi 200 ppm.
Sterilisasi,  s emua  alat  yang  akan digunakan  disterilisasi  dalam autoclave selama 30  menit  pada  suhu  121 O C  dan tekanan  1  atm untuk menghindari kontaminasi dari mikroorganisme yang tidak diinginkan.
Isolasi  Jamur Foc .,  jamur Foc . diperoleh  dari  tanaman  pisang  yang  terserang penyakit  Layu  Fusarium  di  dusun  Gondang, Kelurahan  Tegal  Gondo  Kecamatan  Karang Ploso,  Kabupaten  Malang  Jawa  Timur.  Bagian dari  pelepah  pisang  yang  bergejala  disayat  dan ditumbuhkan  pada  media  PDA  dalam  cawan petri,  diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  satu minggu, kemudian dimurnikan untuk dipergunakan sebagai isolat bahan penelitian.
Distilasi  fraksinasi  minyak  atsiri cengkeh,  p roduksi  eugenol menggunakan metode  Sumangat  (2003).  Analisis crude eugenol  meliputi  kemurnian  dan  sifat  fisik eugenol  yaitu  bobot  jenis  dan  indeks  bias. Pemurnian crude eugenol    menggunakan  cara destilasi  fraksinasi  vakum.  Setting  unit  destilasi fraksinasi  vakum  adalah  sebagai  berikut:  1) pengisian  pecahan  es  pada  bagian trapping sistem  pemvakuman  tekanan  udara  untuk mencegah tersedotnya fase gas ke dalam pompa vakum,  2)  pengisian  labu  berleher  tiga  dengan crude eugenol sebanyak 1.250 ml, 3) pengaliran air pada sistem kondensor untuk mengkondensasikan  fase  gas  ke  fase  cair,  4) setting program  pada  komputer  sesuai  dengan kondisi operasi distilasi yang meliputi suhu labu 250oC  (titik  didih  eugenol  pada  tekanan  1 atmosfir)  dengan  rasio  refluks  10:10  dan tekanan  vakum  sesuai  dengan  perlakuan  yang dikaji,  dan  5)  penyalaan  pemanas  dan  tekanan vakum  untuk  memulai  proses  pemurnian. Sistem destilasi ini secara otomatis akan bekerja sesuai dengan setting program (Hidayat dan Edy , 2010).
GC-MS, uji GCMS dilakukan terhadap  minyak  atsiri  hasil  fraksinasi  untuk mengetahui  jenis  dan  jumlah  senyawa  yang
dikandung  minyak  atsiri  daun  cengkeh  dan persentasenya.
Pelaksanaan Uji Antijamur ( Bioassay ) Isolat  jamur Foc ditumbuhkan  pada media  PDA  seminggu  sebelum  digunakan.  Hal ini  dilakukan  untuk  memperoleh  kondisi  isolat jamur Foc segar.  Jamur  yang  tumbuh  lalu diidentifikasi secara morfologi (pustaka rujukan ?  Groenewald,2005).  Selanjutnya  isolat  segar disimpan  pada suhu kamar.
Pengujian  anti-jamur  secara in  vitro , yaitu  dengan  cara:  media  PDAS  ditambahkan fraksi  minyak  atsiri  yang  akan  diuji  dengan konsentrasi:  27,34  ppm;  54,69  ppm;  109,38 ppm;  dan  218,75  ppm.    Isolat  jamur  diambil sebanyak  satu  potongan myselium  plug dengan pelubang  gabus  berdiameter  6  mm,  lalu dipindahkan dengan jarum ent ke bagian tengah cawan  petri  dengan  posisi  terbalik.  Jamur diinkubasi  pada  suhu  kamar  di  laboratorium. Data  diperoleh  melalui  pengamatan  setiap  hari mulai 24 jam sejak inokulasi sampai pertumbuhan maksimal pada kontrol.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Fraksinasi  senyawa  dalam  MADC ., d istilasi  fraksinasi  vakum  pada  pemurnian eugenol menghasilkan tiga fraksi (F) yaitu fraksi dengan  titik  didih  kurang  dari  eugenol  (F1= 250 o C),  fraksi  eugenol  (F2),  dan  fraksi  dengan titik  didih  lebih  dari  eugenol  atau  residu  (F3). Fraksi  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini hanya fraksi F2. Distilat disimpan dalam wadah
botol  gelap  untuk  menghindari  kerusakan  oleh sinar matahari. Senyawa-senyawa yang diperoleh  pada  kegiatan  ini  ditampilkan  pada Tabel  1.  Ada  duat  jenis  bahan  aktif  yang diperoleh  Fraksi  F2,  yaitu Eugenol, dan Naphthalene .
Hasil  Uji  GC-MS.,  pemeriksaan dengan  mesin  GC-MS  terhadap  MADC memperlihatkan  jenis senyawa atau bahan aktif dan  konsentrasi  dari  setiap  bahan  aktif  yang terkandung di dalam minyak. Konsentrasi yang dominan dapat diduga sebagai bahan aktif yang mempunyai  peran  utama  dalam  penghambatan pertumbuhan  jamur.  Persentase  dari  masing- masing senyawa dapat dilihat pada Gambar 1.
Konsentrasi  eugenol  pada  fraksi  F2 sangat tinggi yaitu 98,59%. Sedangkan senyawa lain  jumlahnya  sangat  sedikit  yaitu  1,41%. Sesuai  hasil  pegamatan  dayahambat  dari  fraksi F2  keberadaan  eugenol  pada  fraksi  F2 berpengaruh terhadap dayahambat pertumbuhan jamur. Konsentrasi yang tinggi akan memberikan  dayahambat  yang  tinggi  pula. Giordani et  al .  (2008)  menemukan  korelasi positif  antara  antara  aktivitas  antijamur  dan kandungan fenol.
Tabel 1.   Fraksi  minyak  atsiri  berdasarkan
titik didih dan persentasenya Fraksi senyawa Formula Nama senyawa Persentase (%) F2 C 10 H 12 O 2 Eugenol 98,59 C 20 H 32 Naphthalene 1,41
Gambar 1. Hasil Uji GCMS Terhadap Minyak Atsiri Daun Cengkeh
Uji Konsentrasi Minimal Dayahambat, u ji dayahambat minimal bertujuan  untuk  mendapatkan  konsentrasi  yang menunjukkan  adanya  dinamika  penghambatan. Teknis  pelaksanaannya  sama  dengan Bioassay dengan  konsentrasi  yang  kisarannya  luas  dan diperkirakan mampu menghambat pertumbuhan jamur. Konsentrasi fraksi F2 dimulai dari 27,34 ppm; 54,69 ppm; 109,38 ppm; dan 218,75 ppm. Angka  dayahambat  tertinggi  pada  konsentrasi yang  terrendah  digunakan  sebagai  konsentrasi tertinggi untuk uji tahap berikutnya.
Dayahambat    fraksi  F2  terhadap jamur Foc.,  f raksi  F2  menunjukkan  angka dayahambatnya  jauh  lebih  tinggi  yaitu  90,70% pada  konsentrasi  218,75  ppm.  Hal  yang  sama berlaku pada konsentrasi di bawahnya, menunjukkan daya hambat yang lebih baik. Hal ini disebabkan oleh kekuatan daya hambat yang dipengaruhi  oleh  konsentrasi  bahan  aktif eugenol.  Secara  umum,  banyaknya  jenis  bahan aktif    dan  peningkatan  konsentrasi  yang dimiliki setiap fraksi berkorelasi positif dengan persentase  penghambatan  pertumbuhan  jamur (Sunarto et al ., 1999).
Fraksi  F2  MADC  menunjukkan kekuatan  yang  sesuai  dengan  kandungan senyawa  eugenol.  Fakta  ini  membuktikan bahwa  bahan  aktif  eugenol  mempunyai konstribusi yang sangat tegas dalam penghambatan  pertumbuhan  jamur Foc .  Ini sesuai  dengan  hasil  penelitian  dan  pernyataan dari  Kardinan  (2002),  Nurjanah  (2004),  Novita
(2007),  Juniawan  (2008)  dan  Harni, et  al . (2013)
Senyawa eugenol merupakan antimikroba dan menyebabkan malformasi pada morfologi  jamur  serta  kerusakan  pada  dinding sel,  kanidia  dan  hifa.  Eugenol  mengakibatkan aktivitas  fungistatik  (Giordani et al .,  2008). Eugenol  memiliki  kemampuan  melarutkan lemak  yang  terdapat  pada  dinding  sel  jamur sehingga  dinding  sel  menjadi  rusak  dan mengganggu  permeabilitas  sel  jamur.  Sebagai akibatnya,  dinding  sel  menjadi  tidak  selektif sehingga  terjadi  penekanan  pertumbuhan  dan perkembangan  jamur  patogen  (Novita,  2008). Bevilacqua et  al .  (2008) dalam Harni et  al. (2013)  lebih  lanjut  menjelaskan  aktivitas antimikroba dari eugenol dipengaruhi kandungan  senyawa  fenolik  berupa  gugus  alkil sekunder  dan  gugus  OH  yang  sangat  reaktif membentuk ikatan hidrogen dengan enzim.
Salah  satu  enzim  yang  berperan  dalam merusak  dinding  sel  jamur  adalah  enzim kitinase.  Schoffelmeer et  al. (1999) dalam Harni et  al .  (2013)  menyatakan  bahwa pengujian kemampuan antijamur enzim kitinase pada  jenis  jamur  yang  berbeda  memberikan hasil yang berbeda. Jamur Fusarium oxysporum ( Fo )  lebih  tahan  terhadap  kitinase  karena komposisi  dari  dinding  selnya.  Komposisi dinding  sel  dari  jamur Fo pada  lapisan  luar adalah  senyawa  glikoprotein  sebanyak  50-60% yang  mampu  melindungi  permukaan  miselium dan di dalam selnya terdapat kitin dan glukan.
Enzim kitinase dalam aktivitasnya menghambat pertumbuhan  jamur  membutuhkan  enzim  lain dan  bekerja  secara  simultan.  Pada  percobaan dengan  menggunakan  potongan  miselium Foc ternyata  enzim  kitinase  mampu  melisiskan dinding  sel  jamur Foc .  Miselium  jamur  yang terpapar  kitinase  akan  menunjukkan  perubahan bentuk.  Kitinase  melisiskan  dinding  sel miselium  karena  kitin  yang  terdapat  pada dinding  sel  dapat  dirombak.  Protein  dan  lemak tidak menghalangi masuknya enzim ke dinding sel  miselium  yang  mengandung  kitin.  Eugenol mampu  melarutkan  lemak  pada  dinding  sel jamur  sehingga  dinding  sel  rusak  dan  bersifat aselektif (Novita, 2008). Kerusakan dinding sel menyebabkan  fungsi  fisiologis  terhenti  dan jamur  akan  mati.  Kasus  ini  disebut  dengan fungitoksisitas.

## KESIMPULAN
berdasarkan hasil analisis data peneltian yang  telah  dilakukan,  maka  dapat  ditarik kesimpulan,  bahwa  dayahambat  tertinggi  dari eugenol  mencapai  90,70%  pada  konsentrasi 218,75  ppm  dan  LC 50 terrendah  adalah 11,7  µl dimiliki oleh bahan aktif MADC yang terdapat pada  fraksi  F2  dengan  kandungan  eugenol tertinggi (98,59%).

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.    2007.  Penyakit  Layu  Fusarium  di Kalimantan  Timur.  Progdeny`s  Weblog. [17 Januari 2016]
Basyah,  A.  2010.  163  hektar  Tanaman  Pisang diserang penyakit. m.serambinews.com. [16 September 2010].
Djoni. 2004. Serangan Penyakit Layu Fusarium di  Sumatra  Barat.  Balai  Perlindungan Tanaman Sumatra Barat. Situshijau.co.id. [17 Januari 2016]. Giordani, R., Y. Hadef, and J. Kaloustian. 2008. Compositions  and  antifungal  activities of  essential  oils  of  some  Algerian aromatic  plants.  Fitoterapia  79:  199- 203.
Guenther,  E.,  penerjemah:  S.  Ketaren.  1990. Minyak  Atsiri.  Jilid  IVB.  Penerbit Universitas Indonesia. Jakarta.
Harni,  R.,  Widi  Amaria,  dan  Supriadi.    2013. Keefektifan Beberapa Formula Fungisida Nabati Eugenol dan Sitronella terhadap Phytophthora
palmivora  asal  Kakao.  Buletin  RISTI 4(1):  11-18.  Balai  Penelitian  Tanaman Industri dan Penyegar. Bogor.
Hidayat,  T. dan Edy Mulyono, 2010. Pemurnian  Eugenol  dari  Minyak  Daun Cengkeh dengan Cara Distilasi Fraksinasi  Vakum.  Prosiding  Seminar Nasional Teknologi Pascapanen
Pertanian.  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Pascapanen  Pertanian. Bogor.
Juniawan.  2008.  Uji  Efektivitas  Beberapa
Tumbuhan Lokal Pulau Lombok Sebagai Bahan Fungisida Nabati Untuk Pengendalian Jamur Tular Tanah ( Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani dan Sclerotium  rolfsii ).  Tesis. Program Pascasarjana Universitas Mataram. Mataram. Kardinan,  A.  2002.  Ramuan  dan  Aplikasi Pestisida  Nabati.  Penebar  Swadaya.
Jakarta.
Nasrunsyah. 2008. Penyakit Layu Pisang Dapat
Musnahkan Pisang Kalsel. Radar
Banjarmasin, 27 Desember 2008. Diakses 16 September 2010. Noveriza,  R.  dan  Tombe,  M..    2006.  Uji In Vitro Limbah  Pabrik  Rokok,  Balai
Penelitian  Tanaman  Rempah  dan  Obat (Balitro). Bogor.
Novita, T. 2007. Uji efektivitas Gliocladium sp dan daun cengkeh terhadap pengendalian layu Fusarium dan pengaruhnya  terhadap  pertumbuhan tanaman  tomat.  Laporan  penelitian. Fakultas  Pertanian  Universitas  Jambi.
Jambi.
Novita,  T.  2008.  Peran  Daun  Cengkeh Terhadap  Pengendalian  Layu  Fusarium Pada Tanaman Tomat. Jurnal Agronomi Vol.  12  No.  2,  Juli-Desember  2008. Jambi.
Nurjannah,  N.  2004.  Diversifikasi  Penggunaan Cengkeh.  Perspektif  Vol.  3  No.  2 Desember 2004.
Sastrahidayat,  I.R.  2013.  Fitopatologi.  UB Press. Malang.
Sastrohamidjojo  H.,  2002.  Kimia  Minyak Atsiri.  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu
Pengetahuan  Alam.  Universitas  Gadjah
Mada. Yogyakarta
Sunarto,  Solichatun,  Shanti  Listyawati,  Nita
Etikawati, Ari Susilowati. 1999. Aktivitas  Antifungal  Ekstrak  Kasar Daun  dan  Bunga  Cengkeh  ( Syzigium aromaticum L.)  Pada  Pertumbuhan Cendawan Perusak Kayu. Jurnal BioSMART OL. 1 Nomer 2, Hal 2027. Jur.  Biologi  FMIPA  UNS  Surakarta.
Solo.
Wikipedia,  2016.  Fusarium  oxysporum.  The free encyclopedia. [16 Januari 2016]