## PENETAPAN KADAR TOTAL FLAVONOID EKSTRAK ETANOL
KACANG MERAH ( Phaseolus vulgaris L.) DENGAN METODE

## KOMPLEKS KOLORIMETRI SECARA SPEKTROFOTOMETRI VISIBEL
Submitted : 03 Januari 2020 Edited : 15 Juni 2020
Accepted : 25 Juni 2020
Novena Yety Lindawati*, Sabilla Hudzaifah Ma’ruf
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional Surakarta Email: novena_yl@stikesnas.ac.id

## ABSTRACT
Red kidney bean is one of the string beans that contain highest-fiber with a concentration 26.3 gram/100 gram substance. Red kidney bean contains flavonoid tannin steroid/triterpenoid and coumarin. The Flavonoid in red kidney bean has anti-diabetes activity. This research aims to determine total flavonoid content in the red kidney bean extract. Extraction is done using the maceration  method  with  70%  ethanol  solvent.  The  extract  which  is  got  is  used  for  qualitative and  quantitative  analysis.  Quercetin  used  as  a  standard  solution.  The  qualitative  analysis  of flavonoid  using  TLC,  Wilstater  Cyanidin  by  forming  a  red  complex  and  NaOH  by  a  forming yellow complex. The Quantitative analysis was using colorimetry method with reagent AlCl 3 to form  complexes  between AlCl 3 and  keto  groups.  Quantitative  analysis  continued  with  Visible Spectrophotometry  on  a  wavelength  of  430.0  nm  and  operating  time  at  the  27th  minute.  The results  of  the  qualitative  test  showed  that  the  extract  was  positive  flavonoids.  The  average concentrations  of  total  flavonoids  were  0,4733%  extract  with  a  variation  coefficient  value  of 1,2%.
Keywords : red kidney bean, total flavonoid, colorimetry, visible spectrophotometry

## PENDAHULUAN
Kacang  merah  ( Phaseolus  vulgaris
L.)  merupakan  salah  satu  jenis  dari  kacang buncis  yang  memiliki  kandungan  serat paling  tinggi  dengan  kadar  26,3  gram  per 100 gram bahan. Kacang merah mengandung  asam  amino  (arginin,  alanin, leusin),  protein  (faseolin,  faselin,  dan konfaseolin),  alkaloid,  karbohidrat,  lemak, vitamin  A,  vitamin  B1,  vitamin  B2,  niacin, vitamin  C,  kalsium,  fosfor,  besi,  mangan, tembaga, natrium, serat, phytohemagglutinin (PHA), stigmasterol, sitosterol, phytochemical,  campesterol,  glukoprotein, tripsin inhibitor, allantoin dan inositol (1) . Pada  penelitian  penapisan  fitokimia dari  serbuk  kacang  merah  maupun  ekstrak
metanol kacang merah mengandung flavonoid, tanin, saponin,
steroid/triterpenoid,  kumarin  dan  pada pengujian  aktivitas  antioksidannya  memiliki nilai  IC 50 sebesar  47,54  bpj (2) .  Flavonoid merupakan  senyawa  fenol  alam  yang terdapat  dalam  hampir  semua  tumbuhan. Penelitian sebelumnya menunjukkan  adanya flavonoid yang bermanfaat sebagai antioksidan (3) . Antioksidan memiliki manfaat dalam mengurangi kerusakan oksidatif pada penderita diabetes. Pemberian antioksidan dan komponen senyawa polifenol  menunjukkan  dapat  menangkap radikal  bebas,  mengurangi  stress  oksidatif, menurunkan  ekspresi  TNF-α.  Senyawa fitokimia    ternyata    mampu  memanipulasi
dengan  berbagai  mekanisme  sehingga  dapat mengurangi  komplikasi  diabetes  melalui pengurangan stres oksidatif, ROS dan TNF- α (4) . Flavonoid memiliki aktivitas antidiabetes  dengan  mekanisme  menekan tingkat glukosa, mengurangi kadar kolesterol  plasma  dan  trigliserida  secara signifikan dan meningkatkan aktivitas
glukokinase hati yang dimungkinkan dengan meningkatkan pelepasan insulin dari pankreas (5) .  Flavonoid,  kuersetin  dan  asam ferulat  mampu  meningkatkan  produksi insulin  pada  sel  beta-pankreas  sehingga memiliki aktivitas hipoglikemik (6) .
Ekstrak  kacang  merah  dengan  dosis 0,063  g/200  g  berat  badan,  0,126  g/200  g berat  badan,  dan  0,252  g/20  g  berat  badan, mampu  menurunkan  kadar  glukosa  darah tikus  wistar  jantan  yang  diberi  beban glukosa (7) .  Ekstrak  air  kacang  merah  dapat menjadi α-amilase inhibitor pada konsentrasi 2,5 mg/ml dan 5 mg/ml (8) .
Penetapan kadar total flavonoid ekstrak  kacang  merah  menggunakan  pelarut etanol  70%  belum  pernah  dilakukan. Penelitian  keberadaan  kandungan  flavonoid dalam  kacang  merah  sejauh  ini  secara kualitatif melalui skrining fitokimia.
Penelitian ini bertujuan untuk ingin mengetahui  kadar  total  flavonoid  dari ekstrak etanol 70% kacang merah ( Phaseolus  vulgaris L.)  dengan  metode kompleks kolorimetri secara
spektrofotometri  visibel. Hasil penelitian ini dapat  digunakan  sebagai  landasan  untuk memastikan  banyaknya  total  flavonoid dalam  ekstrak  etanol  kacang  merah  yang merupakan  salah  satu  sumber  antioksidan yang dapat digunakan sebagai antidiabetes.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan:  Timbangan analitik  (Ohaus,  EP  214),  timbangan  teknik (Acis  BC  500),  bejana  maserasi, rotatory
evaporator
(IKA HB 10 basic),
spektrofotometer  UV-Vis  (Shimadzu  UV mini-1240), kuvet (HELMA), silika GF 254, chamber,  batang  pengaduk,  gelas  ukur (pyrex),  gelas  beaker  (pyrex),  corong  kaca (pyrex),  cawan  porselin,  labu  ukur  50,0  mL (pyrex),  labu  ukur  25,0  mL  (pyrex),  labu ukur 10,0 mL (pyrex), pipet tetes, pipet ukur (pyrex), pipet volume (pyrex), blender, botol semprot, UV-cabinet, spatel, stopwatch.
Bahan yang digunakan: kacang merah, standar kuersetin (Aldrich
Chemistry),  methanol  (E.  Merck),  etanol 70%  (Medika),  AlCl 3 p.a  (E.  Merck), CH 3 COOK (E. Merck), aquadestilata, serbuk  Mg,  HCl  (E.  Merck),  toluen  p.a  (E. Merck), etanol p.a (E. Merck), etil asetat p.a (E. Merck), NaOH (E. Merck).

## Determinasi Sampel
Tanaman  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah kacang merah ( Phaseolus  vulgaris L.)  yang  dibeli  dari petani di Karanganyar
kemudian diidentifikasi  di  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Tanaman  Obat  dan  Obat
Tradisional (B2P2TOOT).

## Preparasi Sampel
Sebanyak 3 kg kacang merah disortasi,  kemudian  dikeringkan  selama  7 hari  di  bawah  sinar  mtahari  dengan  ditutupi kain hitam lalu diserbukkan.
Pembuatan Ekstrak Etanol Kacang

## Merah
Sebanyak  200  gram  serbuk  kacang merah  dimaserasi  menggunakan  metode maserasi  dengan  pelarut  etanol  70% sebanyak  1500  mL  (1:7.5).  maserasi dilakukan 3 x 24 jam dengan pengadukan beberapa  kali  dan  disaring.  Residu  dari penyaringan  maserasi  dimaserasi  kembali dengan menggunakan etanol 70%
sebanyak  500  mL  (1:2.5)  selama  1  x  24 jam  dan  disaring.  Filtrat  yang  diperoleh
dikumpulkan menjadi satu dan dipekatkan dengan rotary evaporator
hingga diperoleh  ekstrak  kental.  Pembuatan ekstrak direplikasi 3x.
Uji Kualitatif Flavonoid
Kromatografi Lapis Tipis (9)
Ekstrak etanol kacang merah
( Phaseolus  vulgaris L.)  dilarutkan  dalam pelarut  etanol  70%  lalu  digunakan kuersetin  sebagai  pembanding  KLT.  Fase gerak yang digunakan yaitu toluen p.a:etil asetat  p.a:etanol  p.a  (3:3:0,5).  Bercak dilihat  pada  lampu  UV  254  nm,  366  nm, dan dengan penampak bercak AlCl 3 .
Uji  kualitatif  flavonoid  menggunakan pereaksi NaOH encer (10)
Dilakukan dengan mereaksikan larutan  sampel  dengan  pereaksi  NaOH
encer. Terbentuknya warna kuning menunjukkan  sampel  positif  mengandung flavonoid.

## Uji metode Wilstater Cyanidin (11)
Sampel  (100  mg)  dilarutkan  dalam 10  mL pelarut.  Sampel  disaring, filtrat  (2 mL)  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi, ditambahkan  2  tetes  HCl  dan  serbuk logam  Mg  kemudian  diamati  warna  yang terjadi.  Jika  terjadi  perubahan  warna menjadi merah tua berarti positif
mengandung flavonoid. Uji Kuantitatif Flavonoid dengan Metode Kolorimetri secara Spektrofotometri Visibel (12)
Pembuatan reagen Pembuatan larutan AlCl 3 10%
Sebanyak  1  gram  serbuk  AlCl 3 ditimbang  dan  dimasukkan  ke  dalam beaker  glass  kemudian  dilarutkan  dengan sebagian etanol 70% hingga larut sempurna.  Larutan  kemudian  dimasukkan ke  dalam  labu  ukur  10,0  mL  dan
ditambahkan  etanol  70%  hingga  tanda batas.
Pembuatan larutan CH 3 COOK 1M
Sebanyak  0,9814  gram  serbuk kalium  asetat  ditimbang  dan  dimasukkan ke dalam beaker glass kemudian dilarutkan  dengan  sebagian  aquadest hingga larut sempurna. Larutan kemudian dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10,0  mL dan  tambahkan  aquadest  hingga  tanda batas.

## Larutan blangko
Etanol 70% 3 mL; AlCl 3 10% 0,2 mL; CH 3 COOK 1M 0,2 mL; dan aquadest ad 10 mL.

## Pembuatan larutan baku kuersetin Pembuatan larutan baku induk kuersetin
1000 ppm
Ditimbang  50,0  mg  baku  standar kuersetin  dan  dilarutkan  dengan  sebagian metanol  dalam  beaker  glass  kemudian dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  50,0  mL dan  ditambahkan  metanol  hingga  tanda batas.

## Pembuatan  larutan  baku  kerja  kuersetin 5 ppm
Dipipet  dari  larutan  baku  induk sebanyak  0,05  mL,  dimasukkan  ke  dalam labu ukur 10,0 ml, ditambahkan 3 mL etanol 70%, 0,2 mL AlCl 3 10%, 0,2 mL CH 3 COOK 1M, dan ditambahkan aquadest hingga tanda batas.
Penentuan Operating Time (OT)
Diukur  absorbansi  larutan  baku  kerja kuersetin  5  ppm.  Absorbansi  diukur  pada panjang  gelombang  maksimum  teoritis  428 nm dari 0-40 menit dengan interval waktu 1 menit.  Diamati  kurva  hubungan  antara absorbansi,  waktu,  dan  diperoleh  OT  pada menit ke-27.
Penentuan  panjang  gelombang  maksimal larutan kuersetin Larutan baku kerja kuersetin kemudian  dilakukan  scanning  pada  panjang gelombang  400-500  nm  yang  sebelumnya telah  didiamkan  terlebih  dahulu  pada  OT yang  diperoleh  (menit  ke-27)  di  tempat gelap.  Diamati  kurva  hubungan  antara panjang  gelombang  dengan  absorbansi  dan diperoleh  panjang  gelombang  maksimal yaitu 430,0 nm.

## Penentuan seri kurva baku
Dibuat  seri  larutan  baku  4,  5,  6,  7,  8, 9, 10 ppm dari larutan baku induk, kemudian dipipet  0,04  mL,  0,05  mL,  0,06  mL,  0,07 mL, 0,08 mL, 0,09 mL, 0,10 mL dari larutan baku  induk,  masing-masing  dimasukkan  ke dalam labu ukur 10,0 ml. Larutan ditambahkan  3  mL  etanol  70%,  0,2  mL AlCl 3 10%  dan  0,2  ml  CH 3 COOK  1M. Volume  akhir  ditempatkan  dengan  aquadest hingga tanda batas. Larutan siap diukur pada spektrofotometer  setelah  OT  pada  panjang gelombang maksimal. Diukur serapan larutan  baku  pada  panjang  gelombang maksimal, mulai dari yang terkecil.

## Linearitas kurva baku
Dihitung  persamaan  regresi  linier yang merupakan hubungan antara konsentrasi versus absorbansi, serta ditentukan  koefisien  korelasinya  dan  kurva hubungan antara konsentrasi dan absorbansi.

## Penetapan kadar flavonoid ekstrak etanol kacang merah
Ditimbang  250  mg  ekstrak  kental kacang  merah  dilarutkan  dalam  25  mL aquadest. Diambil 1 mL, ditambahkan 3 mL etanol  70%,  0,2  mL  AlCl 3 10%,  0,2  mL CH 3 COOK  1M,  dan  ditambahkan  aquadest sampai  10  mL.  Larutkan  didiamkan  pada tempat  gelap  hingga  OT  yang  diperoleh (menit ke-27), kemudian diukur absorbansinya  pada  Spektrofotometer  UV-
Vis  dengan  panjang  gelombang  maksimum kuersetin  (430,0  nm),  dilakukan  replikasi sebanyak 3 kali.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Determinasi Sampel
Bahan  yang  telah  digunakan  dalam penelitian ini yaitu kacang merah ( Phaseolus vulgaris L.) yang dideterminasi di B2P2TOOT  untuk  menunjukkan  kebenaran sampel yang digunakan. Hasil dari determinasi  menunjukkan  bahwa  sampel yang  digunakan  adalah  kacang  merah
( Phaseolus vulgaris L.).

## Pembuatan Ekstrak Kacang Merah
Kacang  merah  dikeringkan  di  bawah sinar  matahari  dengan  ditutupi  kain  hitam agar  cepat  kering  dan  melindungi  senyawa yang  terkandung  dalam  kacang  merah  yang tidak  tahan  terhadap  panas  yang  tinggi. Pengeringan  dilakukan  selama  7  hari. Sampel  kemudian  diserbukkan  dan  diayak. Tujuan  penghalusan  ini  adalah  untuk meningkatkan  luas  permukaan  sehingga sampel  kontak  dengan  pelarut  semakin  luas dan proses ekstraksi menjadi lebih maksimal.  Hasil  serbuk  simplisia  yang diperoleh  adalah  926,4  gram.  Rendemen serbuk simplisia terhadap berat awal kacang merah  sebesar  30,88%  b/b.  Hasil  serbuk simplisia  ini  diambil  masing-masing  200 gram  sebanyak  tiga  kali  untuk  pembuatan ekstrak etanol kacang merah dengan metode maserasi.
Metode  ekstraksi  yang  digunakan adalah  maserasi  (ekstraksi  dingin).  Metode ini  dipilih  karena  prosesnya  yang  sederhana dan  tidak  melibatkan  pemanasan  sehingga dapat  mencegah  kerusakan  senyawa  kimia yang  tidak  tahan  terhadap  pemanasan, terutama  flavonoid.  Pelarut  yang  digunakan dalam  ekstraksi  adalah  etanol  70%  karena bersifat polar sehingga cocok untuk mengisolasi senyawa-senyawa organik polar seperti flavonoid.
Hasil  dari  maserasi  disaring  setelah  3 hari  dan  residu  yang  didapat  dimaserasi kembali  dengan  tujuan  untuk  melarutkan senyawa-senyawa  yang  tertinggal  pada ampas sekaligus menghilangkan zat pengotor  pada  saat  perendaman  kembali. Filtrat  yang  diperoleh  dari  dua  tahap kemudian  dikumpulkan  dan  dipekatkan dengan rotary  evaporator pada  suhu maksimum  50°C  dan  kecepatan  200  rpm. Suhu  yang  digunakan  kurang  dari  50°C untuk  menghindari  kerusakan  zat  aktif akibat  penguapan  pada  suhu  yang  tinggi. Tujuan  dari  pemekatan  adalah  untuk memisahkan antara pelarut dan ekstrak yang diperoleh.
Proses ekstraksi kacang merah menghasilkan  ekstrak  kental  dengan  hasil rendemen  yang  dapat  dilihat  pada  tabel  1. Rendemen  ekstrak  etanol  kacang  merah replikasi  pertama  sebesar  15,20%  b/b, replikasi  kedua  sebesar  14,60%  b/b,  dan replikasi  ketiga sebesar  15,45%  b/b.
Karakteristik  yang  dihasilkan  dari  ketiga ekstrak yaitu ekstrak kental, berbau khas dan berwarna coklat kemerahan.
Tabel 1. Hasil ekstraksi kacang merah
Sampel Replikasi % Rendemen (b/b) Ekstrak etanol kacang merah 1 15,20% 2 14,60% 3 15,45%

## Analisis Kualitatif Flavonoid
Tujuan dari analisa kualitatif kandungan
flavonoid
yaitu untuk
mengetahui  ada  atau  tidaknya  senyawa flavonoid  dalam  ekstrak  kacang  merah. Senyawa
flavonoid
diuji dengan
menggunakan  KLT,  uji  kualitatif  flavonoid dengan  pereaksi  NaOH  encer,  dan  Metode Wilstater  Cyanidin.  Pada  uji  kandungan
flavonoid  menggunakan  metode  KLT,  fase diam  yang  digunakan  silika  gel  GF254 dengan fase gerak toluen p.a : etil asetat p.a : etanol  p.a  (3:3:0,5).  Bercak  dilihat  pada lampu  UV  254  nm  dan  dengan  penampak bercak  AlCl 3 .  Hasilnya  ditunjukkan  oleh nilai  hRf  dan  warna  bercak  yang  sama  dari ketiga sampel dibandingkan dengan kuersetin  sebagai  pembanding.  Nilai  hRf dalam  sampel  dan  standar  kuersetin  sama yaitu  59.  Perubahan  warna  bercak  dari kuning  tipis  berubah  menjadi  warna  kuning intens  setelah  disemprot  dengan  AlCl 3 . Salah  satu  hasil  uji  kandungan  flavonoid dalam  ekstrak  etanol  kacang  merah  secara KLT dapat dilihat pada gambar 1.
Keterangan: A = sampel
B = standar kuersetin
Gambar 1. Hasil KLT setelah penyemprotan AlCl 3
Gambar 2. Reaksi flavonoid dengan NaOH (13)

## Jarak elusi = 8 cm
Uji  kualitatif  dilakukan  dengan menambahkan  beberapa  tetes  NaOH encer  pada  larutan  sampel  yang  akan membentuk warna kuning apabila mengandung  flavonoid.  Warna  kuning disebabkan karena turunan senyawa flavon/ flavonol akan mengalami penguraian  oleh  basa  menjadi  molekul seperti  asetofenon  yang  berwarna  kuning karena  adanya  pemutusan  ikatan  pada struktur  isoprene (14) (gambar  2).  Hasil yang didapatkan dari uji ini pada replikasi 1,  2,  dan  3  adalah  ekstrak  positif mengandung  flavonoid.  Hasil  uji  pada salah  satu  ekstrak  dapat  dilihat  pada gambar 3.
Gambar 3. Sampel  setelah  penambahan NaOH  menghasilkan  warna yang lebih pekat.
Pengujian flavonoid dengan metode Wilstater  Cyanidin  dilakukan  dengan reagen  HCl  pekat  dan  logam  Mg  yang akan  menimbulkan  warna  merah  apabila terdapat  flavonoid.  Penambahan  logam Mg  dan  HCl  bertujuan  untuk  mereduksi inti  benzopiron  yang  terdapat  dalam struktur flavonoid sehingga terjadi perubahan warna menjadi merah. Penambahan HCl mengakibatkan
terjadinya  reaksi  oksidasi  reduksi  antara logam  Mg  sebagai  pereduksi  dengan senyawa flavonoid (15) . Reaksi yang terjadi dapat  dilihat  pada  gambar  4.  Hasil  uji dapat dilihat pada gambar 5.
Gambar 4. Reaksi  flavonoid  dengan  Mg-
HCl (16)
Gambar 5. Hasil  uji  metode  Wilstater
Cyanidin  menghasilkan  warna kemerahan Pada gambar 5 menunjukkan ekstrak etanol kacang merah positif mengandung flavonoid.

## Analisis Kuantitatif Total Flavonoid
Penentuan  kandungan  senyawa  total flavonoid bertujuan untuk mengetahui kandungan  senyawa  total  flavonoid  yang terkandung  di  dalam  ekstrak  kacang  merah. Penentuan  total  jumlah  flavonoid  dari ekstrak  kacang  merah  dilakukan  dengan kolorimetri.
Larutan sampel yang telah direaksikan dengan  AlCl 3 dan  CH 3 COOK  didiamkan  di tempat yang gelap karena senyawa kompleks  yang  terbentuk  sensitif  terhadap cahaya.  Larutan  AlCl 3 digunakan  untuk membentuk  kompleks  berwarna  dengan flavonoid sehingga terjadi pergeseran panjang gelombang ke arah visibel (tampak) ditandai dengan larutan menghasilkan warna yang  lebih  kuning (12) .  Penambahan  larutan CH 3 COOK untuk menstabilkan dan
mempertahankan  panjang  gelombang  pada daerah visible (tampak). Prinsip yang digunakan dalam analisis  total  flavonoid  menggunakan  AlCl 3 adalah  pembentukan  kompleks  antara  AlCl 3 dengan  gugus  keto  pada  atom  C-4  dan  juga dengan  gugus  hidroksi  pada  atom  C-3  atau C-5  yang  bertetangga  dari  flavon  dan flavonol (gambar 6).
Penggunaan  baku  kuersetin  sebagai larutan  standar  karena  kuersetin  merupakan flavonoid golongan flavonol yang mempunyai  gugus  keto  pada  C-4  dan memiliki  gugus  hidroksil  pada  atom  C-3 atau  C-5  yang  bertetangga  dari  flavon  dan flavonol. Hasil uji kualitatif juga
menunjukkan  ekstrak  etanol  kacang  merah positif mengandung flavonoid kuersetin.
Gambar 6. Reaksi flavonoid dengan AlCl 3 (17) Penentuan operating time (OT)
diperoleh  pada  menit  ke-27  dimana  pada waktu  tersebut  merupakan  waktu  yang dibutuhkan  kuersetin  agar  dapat  bereaksi dengan  AlCl 3 sehingga  akan  diperoleh kompleks kuersetin yang stabil.
Hasil dari pengukuran panjang gelombang  maksimal  adalah  430,0  nm dengan nilai absorbansi 0,3785. Pengukuran serapan  dilakukan  pada  panjang  gelombang maksimum  karena  pada  panjang  gelombang maksimal  perubahan  serapan  yang  disertai dengan  perubahan  konsentrasi  juga  pada
kondisi  maksimal,  pita  serapan  disekitar panjang  gelombang  maksimal  datar,  dan pengukuran  ulang  maka  kesalahan  kecil sehingga hukum Lambert-Beer akan terpenuhi dengan baik maka dapat diperoleh kurva baku yang linier (18) .
Penentuan  kurva  baku  menggunakan larutan  baku  kuersetin  dengan  konsentrasi  4 ppm,  5  ppm,  6  ppm,  7  ppm,  8  ppm,  9  ppm, dan  10  ppm.  Pemilihan  konsentrasi  ini didasarkan  pada  hukum  Lambert-Beer  yang menyatakan  syarat  serapan  adalah  0,2-0,8. Hal  ini  bertujuan  untuk  menghindari terjadinya  kesalahan  fotometrik  sehingga kesalahan  analisis  masih  dalam  batas  yang diterima yaitu 0,5-1% (18) .
Kurva baku diperoleh antara absorbansi  dan  konsentrasi  kuersetin  dapat dilihat pada gambar 7. Gambar 7 menunjukkan  konsentrasi  berbanding  lurus dengan  nilai  absorbansi.  Semakin  besar konsentrasi  larutan  baku  kuersetin  maka semakin  besar  nilai  absorbansi yang dihasilkan. Persamaan regresi yang diperoleh  dari  hasil  pengukuran  adalah y=0,0931x-0,1102.  Nilai  linearitas  yang ditunjukkan  dengan  nilai  koefisien  korelasi (r)  sebesar  0,9990.  Nilai  r  yang  didapatkan mendekati  1  sehingga  dapat  dikatakan bahwa  absorbansi  dan  konsentrasi  memiliki korelasi yang sangat kuat (19) .
Gambar 7. Grafik  linieritas  kurva  baku standar kuersetin
Hasil  penetapan  kadar  total  flavonoid menunjukkan  kadar  total  flavonoid  rata-rata dari  ketiga  replikasi  adalah  0,4733%
dihitung  terhadap  flavonoid  kuersetin  (QE) dengan nilai koefisien variasi adalah 1,22%. Hasil  penetapan  kadar  dapat  dilihat  pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil penetapan kadar total flavonoid Sampel Replikasi Kadar Ekstrak etanol kacang merah 1 0,48% b/b 2 0,47% b/b 3 0,47% b/b Rata-rata kadar 0,4733% Koefisien Variasi 1,22%
Nilai  koefisien  variasi  yang  diperoleh kurang dari 2%. Hal ini menunjukkan bahwa data  pada  penetapan  kadar  total  flavonoid ekstrak  etanol  kacang  merah  diperoleh dengan tingkat ketelitian kerja yang baik (20) . Flavonoid  yang  terkandung  dalam bahan  alam  dilaporkan  memiliki  aktivitas antioksidan,
antibakteri, antivirus,
antiradang, antialergi, dan antikanker (21) .

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  didapatkan  hasil  penetapan kadar  flavonoid  total  dalam  ekstrak  kacang merah  sebesar  0,4733%  b/b  dengan  %KV 1,22%.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Suhaling,  S.,  2010,  Uji  Aktivitas Ekstrak Metanol Kacang Merah ( Phaseolus vulgaris L.) Dengan Metode DPPH, Skripsi , Fakultas Ilmu Kesehatan,  Universitas  Islam  Negeri Alauddin, Makassar. 2. Djamil  dan  Anelia,  2009,  Penapisan Fitokimia, Uji BSLT, dan Uji Antioksidan  Ekstrak  Metanol  beberapa Spesies Papilionaceae, Jurnal Kefarmasian Indonesia , 7(2): 65-71. 3. Nurung,  S.,  2016,  Penentuan  Kadar Total Fenolik, Flavonoid, dan Karotenoid  Ekstrak  Etanol  Kecambah Kacang  Hijau  ( Vigna  radiata L.)
Menggunakan  Spektrofotometri  UV-
Vis, Skripsi ,  Fakultas  Kedokteran  dan Ilmu  Kesehatan,  Universitas  Islam Negeri Alauddin Makassar.
4. Widowati, W., 2008, Potensi Antioksidan sebagai Antidiabetes, JKM , 7(2).
5. Bhushan,  M.S.,  2010,  An  Analytical Review  Of  Plants  For  Anti  Diabetic Activity With Their Phytoconstituent & Mechanism Of Action, IJPSR , 1(1): 29- 46.
6. Kumoro,  A.  C.,  2015, Teknologi
Ekstraksi  Senyawa  Bahan  Aktif  dari Tanaman Obat , Yogyakarta: Plantaxia.
7. Iqbal,  A.,  Pintor,  K.  T.  Lisiswanti,  R., 2015, Manfaat Tanaman Kacang Merah dalam  Menurunkan  Kadar  Glukosa Darah, Jurnal Majority , 4(9): 149-152.
8. Wardani,  N.  A.  K.,  dkk.,  2017,  Enzim α-Amilase  Inhibitor  Pada  Ekstrak  Air
Kacang  Merah  ( Phaseolus  vulgaris L.) Untuk Penanggulangan Diabetes Melitus. Jurnal Ilmu Pangan dan Hasil Pertanian , 1(2): 50-59.
9. Fadlila,  W.N.,Yuliawati,  K.M.,  dan
Syafnir,  L.,  2015,  Identifikasi  Senyawa Aktif Antibakteri dengan Metode Bioautografi  KLT  terhadap  Ekstrak Etanol  Tangkai  Daun  Talas  (Colocasia
EsculentaL)  Schott  , Jurnal  Prosiding Penelitian Universitas Islam Bandung 10. Armin, F., Dewi, YY., dan Mahyuddin, 2011, Penentuan Kadar Senyawa Fenolat  dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan pada Buah Terung Belanda ( Cyaphomandra betacea (Cav.) Sendtn)
secara  Spektrofotometri  Visibel, Jurnal Farmasi Higea
11. Marliana, S.D., Suryanti,V., dan Suyono,  2005,  Skrining  Fitokimia  dan Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis
Komponen  Kimia  Buah  Labu  Siam (Sechium  edule  Jacq.Swartz.)  dalam Ekstrak  Etanol. Jurnal  Biofarmasi .  3 (1): 26-31
12. Chang, C.C., Yang, M.H., Wen, H. M., dan  Chern,  J.C.,  2002,  Estimation  of Total  Flavonoid Content in Propolis by Two Complementary Colorimetric Methods, J Food Drug Anal 10 13. Latifah,  2015,  Identifikasi  Golongan
Senyawa  Flavonoid  dan  Uji  Aktivitas Antioksidan  pada  Ekstrak  Rimpang
Kencur Kaemferia  galangal L.  dengan Metode DPPH (1,1-defenl-2- pirkrilhidrazil), Tesis , Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim 14. Kusnadi  dan  Devi,  2017,  Isolasi  dan Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  pada Ekstrak Daun Seledri ( Apium graveolens L.) dengan Metode Refluks,
Pancasakti  Science  Education  Journal , 2(1)
15. Salmia, 2016, Analisis Kadar Flavonoid
Total  Ekstrak  Kulit  Batang  Kedondong
Bangkok  ( Spondias  dulcis )  dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis, Skripsi ,  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu Kesehatan  Universitas  Islam  Negeri Alauddin Makassar 16. Arum,Y.P., Supartono., Sudarmin., 2012, Isolasi dan Uji Daya Antimikroba Ekstrak Daun kersen, Jurnal MIPA
17. Mabry,  T.J.,  Markham,  K.R.,  and Thomas,  M.B.,  1970, The  Systematic
Identification  of  Flavonoid ,  Springer-
Verlag, Berlin, 50-52
18. Gandjar,  I.  G.,  dan  Rohman,  A.,  2007, Kimia  Farmasi  Analisis ,  Yogyakarta:
Pustaka Pelajar
19. Riyanto,  A.,  1995, Pengolahan  dan
Analisis  Data  Kesehatan ,  Yogyakarta:
Nuha Medika
20. Synder,  l.  R., et  al .,  2010, Introduction to Modern Liquid Chromatography , 3rd ed, Hoboken: John Wiley and Sons Inc
21. Ahmad,  A. R., Juwita, Ratulangi,  S.  A.
D.,  dan  Malik,  A.,  2015,  Penetapan Kadar  Fenolik  dan  Flavanoid  Total Ekstrak  Metanol  Buah  dan  Daun Patikala ( Etlingera elatior (Jack) R.M.SM), Pharm Sci Res , Vol. 2 No. 1, 1-10