## Efek antioksidan dan antikanker ekstrak batang murbei

## ( Morus alba L.) secara in vitro
Asril Burhan 1 , Andi Nur Aisyah 1 , Akbar Awaluddin 2 ,Zulham 1 , Burhanuddin Taebe 2 , Abdul Gafur 1
1 Akademi Farmasi Kebangsaan Makassar
2 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar Corresponding author email: asrilburhan@gmail.com

## Abstrak
Murbei merupakan salah satu obat yang penting didalam pengobatan tradisional Cina. Murbei mengandung  berbagai  macam  senyawa  diantaranya  fenol  dan  flavanoid  yang  umunya berfungsi  sebagai  antioksidan  alami  dan  juga  memiliki  fungsi  antikanker.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  kadar  fenolik,  aktivitas  antioksidan  dan  antikanker  ekstrak batang  murbei  ( Morus  alba L.).  Pembuatan  ekstrak  dilakukan  dengan  cara  maserasi menggunakan pelarut etanol. Penetapan kadar fenolik menggunakan reagen Folin-Ciocalteu, pengujian  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  ABTS  dan  pengujian  aktivitas antikanker  menggunakan  metode  MTT  terhadap  sel  kanker  WIDR  dan  sel  vero.  Hasil pengujian  menunjukkan  kadar  total  fenolik  ekstrak  batang  murbei  sebesar  35,9%.  Nilai aktivitas antioksidan ekstrak batang murbei adalah  83,18 µg/mL. Aktivitas antikanker pada sel WIDR menunjukkan nilai IC 50 71,24 µg/ml dan pada sel vero memiliki nilai IC 50 154,241 µg/ml.  Dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  batang  murbei  ( Morus  alba L.)  memilki aktivitas antioksidan yang kuat dan berpotensi sebagai antikanker alami yang bekerja selektif terhadap sel kanker.
Kata kunci : Murbei ( Morus alba L.), batang, IC 50 , antioksidan, antikanker

## Antioxydant and anticancer effect of murberry (Morus alba L.)
stem extract in vitro

## Abstract
Mulberry  is  one  of  the  important  medicines  in  traditional  Chinese  medicine.  Mulberry contains a variety of compounds including phenols and flavonoids which generally function as  natural  antioxidants  and  also  have  anticancer  functions.  This  study  aims  to  determine phenolic levels, antioxidant activity and anticancer of mulberry stem extract (Morus alba L.). Extracts  were  made  by  maceration  using  ethanol  as  a  solvent.  Determination  of  phenolic levels  using  the  Folin-Ciocalteu  reagent,  testing  of  antioxidant  activity  using  the  ABTS method and testing of anticancer activity using the MTT method against WIDR cancer cells and  vero  cells.  The  test  results  showed  total  phenolic  levels  of  mulberry  stem  extract amounted to 35.9%. The antioxidant activity value of mulberry stem extract was 83.18 µg / mL. Anticancer activity in WIDR cells showed IC50 values 71.24 µg / ml and vero cells had IC50 values 154.224 µg / ml. It can be concluded that  the ethanol extract of mulberry stem (Morus  alba  L.)  has  a  strong  antioxidant  activity  and  has  the  potential  as  a  natural anticancer that works selectively against cancer cells.
Keywords: Mulberry (Morus alba L.), stem extract, IC 50 , antioxidant, anticancer

## Pendahuluan
Kanker  merupakan  salah  satu  penyakit penyebab  kematian  utama  di  seluruh  dunia. Angka  penderita  kanker  diperkirakan  akan mengalami peningkatan tiap tahun dan pada tahun  2030  akan  mencapai  23,6  juta  kasus baru (Kemenkes RI, 2016).
Salah  satu  senyawa  yang  umumnya dimiliki  tumbuhan  adalah  senyawa  fenolik. Beberapa  golongan  senyawa  fenolik  antara lain adalah flavonoid, turunan asam sinamat, kumarin, dan tokoferol (Gupita dan Rahayuni,  2012).  Beberapa  efek  senyawa fenolik diantaranya adalah sebagai antioksidan dan antikanker. Senyawa- senyawa  yang  yang  berperan  sebagai antioksidan di antaranya flavonoid, alkaloid, tanin, dan juga fenolik. Kuntorini dan Astuti (2010) menyebutkan bahwa efek antioksidan dari vitamin C, vitamin E, karoten, golongan senyawa  fenolat  (terutama  polifenol  dan flavonoid)  berpotensi  mengurangi  resiko penyakit degenerative (Kuntorini dan Astuti, 2010).  Antioksidan  juga  diduga  dapat menghambat pertumbuhan sel kanker, karena  kesamaan  mekanisme  hambatan dalam  tingkat  seluler  (Anam,  dkk.,  2014). Kandungan  yang  diduga  memiliki  aktivitas antikanker  seperti  senyawa  flavonoid  yang bekerja  dengan  penghambatan  inaktivasi karsinogenesis, inhibisi siklus sel, penghambatan  angiogenesis,  proliferasi  sel dan  mekanisme  apoptosis  (Ahmad,  dkk., 2014; Meiyanto, dkk., 2008).
Salah  satu  tanaman  yang  digunakan masyarakat  sebagai  obat  adalah  murbei ( Morus  Alba L.)  Murbei  adalah  salah  satu tanaman  yang  berpotensi  untuk  mengobati kolesterol  darah,  kencing  manis,  dan hipertensi  (Mallaleng  et  al.,  2011).  Hasil penelitian  dilakukan  oleh  Burhan  dan Aisyah  (2018)  mengenai  uji  toksisitas ekstrak  batang  murbei  dengan  berbagai pelarut  dengan  nilai  IC 50 untuk  ekstrak etanol  sebesar  2,8045  μg/mL,  menunjukan potensi  batang  murbei  sebagai  anti  kanker. Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  bertujuan untuk  menguji  aktivitas  antioksidan  ekstrak batang  murbei  dengan  metode  ABTS  dan menguji  aktivitas  anti  kanker  dengan
menggunakan sel WIDR dan sel vero.

## Metode Penelitian
Tahapan  pada  penelitian  ini  adalah penyiapan bahan, ekstraksi, skrining fitokimia,  pengujian  total  fenol,  pengujian antioksidan  dengan  ABTS  dan  pengujian antikanker terhadap sel WIDR dan sel vero.
Penyiapan  bahan. Penyiapan  bahan dimulai  dengan  pengambilan  batang  murbei ( Morus  alba L.),  dan  pengolahan  bahan. Ektraksi dilakukan secara maserasi menggunakan  pelarut  etanol,  kemudian ekstrak  cair  di rotary  evaporator hingga mendapatkan ekstrak kental.
Skrining  Fitokimia. Skrining  fitokimia meliputi  pemeriksaan  alkaloid,  flavanoid, tanin, fenol dan saponin.
Pengujian  kadar  total  fenol. Pengujian total  fenol  dilakukan  dengan  menggunakan metode  spektrofotometer  UV-Vis  dengan pereaksi  Follin-Cioucalteu  dengan  panjang gelombang  714  nm  dengan  pembanding asam galat
Pengujian Aktivitas antioksidan secara kuantitatif  dengan  metode  peredaman ABTS. Sampel  dibuat  seri  konsentrasi  40, 80,  120  dan  160  ppm.  Sampel  kemudian dicampurkan dengan ABTS  dan  di  diamkan selama  12  jam.  Pengukuran  dilakukan menggunakan spektrofotometri UV-Vis dengan  panjang  gelombang  750  nm. Pembanding yang digunakan dalam percobaan ini ialah vitamin C.
Pemeriksaan aktivitas antikanker. Pengujian  aktivitas  antikanker  dilakukan secara in  vitro menggunakan  sel  WIDR  dan sel  vero.  Sel  dimasukan  ke  dalam  sumuran dan  untuk  melihat  distribusi  sel  dilakukan pengamatan  di  bawah  mikroskop inverted . Sel diinkubasi minimal 4 jam dan setelah sel telah  siap, well  plate diambil  dari  inkubator dan kemudian media sel dibuang. Selanjutnya  dilakukan  pencucian  sel  dengan memasukan  100  μL  PBS  ke  dalam  sumuran yang telah terisi sel, lalu dibuang. Kemudian sampel  dimasukan  dalam  sumuran  ( triplo ) dan  diinkubasi  dalam  inkubator  CO 2 5% selama 24 jam pada suhu 37ºC. Reagen MTT 100  μL  ditambahkan  ke  dalam  sumuran.
Suspensi  sel  diinkubasikan  kembali  selama 2-4  jam  dalam  inkubator  CO 2 .  SDS  100  μL ditambahkan  saat formazan telah  jelas terbentuk  dan  dibungkus  kertas.  Kemudian disimpan  selama  semalam  pada  suhu  kamar di  tempat  yang  gelap.  Setelah  inkubasi, dilakukan pembacaan serapan dengan ELISA reader pada panjang  gelombang 595 nm.

## Hasil dan Pembahasan
Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan  cara maserasi dengan  menggunakan  pelarut etanol  dengan  nilai  rendemen  4,91  %.  Pada percobaan  yang  dilakukan  oleh  Burhan  dan Aisyah (2018), menunjukkan hasil rendamen yang diperoleh pada ekstraksi batang murbei pada 3 pelarut yakni n-Hesan, Etil Asetat dan Etanol  70%,  yakni  0,34%,  0,859%  dan 1,51%.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pelarut polar  lebih  besar  menghasilkan  rendamen, tetapi  banyaknya  rendamen  yang  didapatkan belum  tentu  berbanding  lurus  dengan kualitas  ekstrak  yang  diperoleh,  sehingga perlu dilakukan penentuan lebih lanjut.
Skrining  senyawa  fitokimia  bertujuan untuk  mengetahui  golongan  senyawa  yang terkandung  didalam  ekstrak  batang  murbei ( Morus  alba L.).  Skrining  fitokimia  untuk ekstrak batang murbei  ( Morus alba L.) yang dilakukan  diantaranya  uji  fenol,  alkaloid, flavanoid  tanin  dan  saponin.  Hasil  skrining fitokimia ekstrak batang murbei (Morus alba L.) dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1.   Hasil Skrining fitokimia ekstrak batang murbei (Morus alba L.) Kandungan Kimia Ekstrak Batang Murbei Alkaloid + Fenol + Flavonoid + Tanin - Saponin + Keterangan : +  =  Mengandung senyawa yang dilakukan pengujian
-    =  Tidak  mengandung  senyawa  yang  dilakukan pengujian
Dari  hasil  skrining  fitokimia  ekstrak batang murbei mengandung senyawa
flavanoid,  alkaloid,  fenol  dan  saponin. Adanya  kandungan  senyawa  flavonoid menyebabkan ekstrak batang murbei ( Morus alba L.)  memiliki  potensi  antioksidan.  Hal ini  dikarenakan  senyawa  flavanoid  memiliki banyak  gugus  hidroksi  (OH),  atom  hidroksi dapat didonorkan pada senyawa radikal yang tidak  stabil  sehingga  senyawa  radikal  dapat stabil.  Senyawa  alkoloid  juga  memiliki gugus OH sehingga dapat juga mendonorkan kepada  senyawa  radikal  begitu  pula  dengan senyawa fenol.
Uji  total  fenolik dilakukan  engan  uji kuantitatif  menggunakan  metode  Folin– Ciocalteu dan pembanding asam galat. Asam galat digunakan karena asam galat merupakan turunan dari asam hidrosibenzoad  yang  tergolong  asam  fenolik sederhana  dan  juga  sebagai  standar  yang stabil dan murni (Rahmawati, 2009). Dari uji total  fenolik  didapatkan  ekstrak  batang murbei ( Morus alba L.) sebesar 35,9%. Hasil ini  sesuai  dengan  penelitian  yang  dilakukan oleh Radojkovic et al. (2012), bahwa murbei memiliki  kadar  fenol  yang  besar.  Semakin besar  total  fenol  yang  ditunjukkan  maka semakin besar potensi sebagai antioksidan.
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dengan metode
ABTS (2,2
Azinobis (3-
Etilbenzotiazolin)-6-Asam Sulfonat), dimana aktivitas antioksidan diketahui dengan melihat  seberapa  besar  IC 50 yang  dihasilkan oleh  ekstrak  batang  murbei  ( Morus  alba L.) dalam  meredam  seyawa  radikal  bebas ABTS.  IC 50 menunjukan  peredaman  50% terhadap  radikal  bebas,  semakin  kecil  IC 50 yang didapatkan maka semakin besar potensi ekstrak tersebut sebagai antioksidan. Pembanding  yang  digunakan  adalah  vitamin C  sebagai  mana  diketahui  bahwa  vitamin  C adalah  senyawa  yang  digunakan  sebagai salah satu antioksidan alami.
Tabel 2.   Hasil  uji  aktivitas  sitotoksik  ekstrak  batang  murbei  ( Morus  alba L.)  terhadap  sel  kanker WIDR dan sel normal vero.
Konsentrasi (ppm) % kematian Nilai IC 50 (µg/ml) Sel WIDR Sel normal vero Sel WIDR Sel normal vero 7,8125 22,89744266 1,7337
71,24044 154,24106 15,625 30,49037701 8,3576 31,25 36,07962035 18,3033 62,5 44,04165568 35,2965 125 58,41022937 43,8393 250 75,03295544 66,2123 500 93,45504877 70,2157 1000 97,66016346 88,3536
Pengukuran Vitamin C mendapatkan hasil IC 50 sebesar  1,02  µg/mL.  Pengukuran  IC 50 ekstrak  batang  murbei  ( Morus  alba L.) didapatkan  hasil  sebesar  83,18  µg/mL. Menurut  Blois  (1985),  suatu  senyawa memiliki  antioksidan  yang  sangat  kuat  bila nilai IC 50 < 50 ppm, kuat bila  IC 50 bernilai 50 - 100 ppm, sedang bila IC 50 bernilai 101 - 150 ppm, dan lemah bila IC 50 bernilai 151 – 200 ppm. Berdasarkan klasifikasi  diatas,  ekstrak  etanol  batang murbei  ( Morus  alba L.)  memiliki  aktivitas antioksidan yang tergolong sedang.
Uji  aktivitas  antikanker  ekstrak  batang murbei  dilakukan  dengan  metode  MTT  (3- (4,5- dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolium  bromida)  dengan  menggunakan sel WIDR dan sel Vero. Aktivitas antikanker diketahui  dengan  melihat  nilai  IC 50. IC 50 diperoleh  dengan  menggunakan  analisis probit  dan  regresi  linear,  analisis  probit biasanya digunakan untuk mengetahui respon subjek yang diteliti. Hasil perhitungan yang didapatkan dalam pengujian aktivitas antikanker ekstrak murbei  ( Morus  alba L.)  dengan  sel  WIDR dan sel Vero dapat dilihat pada Tabel 2.
Hasil  uji  toksistas  ekstrak  batang  murbei ( Morus  alba L.)  terhadap  sel  WIDR  dan  sel vero  menunjukkan  nilai  IC 50 untuk  sel WIDR  71,24  µg/ml  dan  untuk  sel  vero memiliki nilai IC 50 154,241 µg/ml. Penetapan  batas  toksik  penelitian  ini menggunakan  kriteria National  Cancer Institute (NCI)    2009  yang  menyebutkan bahwa  suatu  ekstrak  dinyatakan  aktif memiliki aktivitas apabila memiliki nilai IC 50 <  30  µg/ml,  moderate  aktif  apabila  memilki
nilai  IC 50 ≥  30  µg/ml  dan  dikatakan  tidak aktif  apabila  IC 50 >100  µg/ml.  Hasil perhitungan  nilai  IC 50 didapatkan  ekstrak batang  murbei  ( Morus  alba L.)  terhadap  sel kanker  WIDR  menunjukkan  moderate  aktif terhadap  sel  kanker  WIDR  dan  ekstrak batang  murbei  ( Morus  alba L.)  tidak  aktif tehadap  sel  vero  karena  memilki  nilai  IC 50 >100  µg/ml.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  batang  murbei  ( morus  alba L.) bekerja selektif pada sel WIDR.

## Kesimpulan
Dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  batang murbei  ( Morus  alba L.)  mengandung senyawa  alkaloid,  fenol,  flavanoid  dan saponin. Ekstrak batang murbei ( Morus alba L.)  berpotensi  sebagai  antioksidan  dan sebagai  antikanker  yang  bekerja  selektif terhadap sel kanker.

## Daftar Pustaka
Ahmad, H., Suprianto., Marhamah., Rasmidar.,  2014,  Aktivitas  Antikanker dan  Antiproliferasi  fraksi  etanol  sarang semut(Myrmecodya  pendans)  pada  sel kanker lidah manusia SP-C1, Dentofasial,
Vol. 13, No.1, 1-6
Anam,  S.,  Yuliet.,  Agus,    R.,  Firmanita, D.,Dewi,  R.,  Muhammad,  S.Z.,  2014, Aktivitas  Sitotoksik  Ekstrak  Metanol Benalu Batu (Begonia sp.): ethnomedicine Suku Wana Sulawesi Tengah, Jurnal Ilmu Kefarmasian  Indonesia,  Vol.12  No.1,  10- 16
Blois,
M.S., 1958.
Antioxidant determinations  by the use of a stable free radical, Nature, 181 : 199-1200
Burhan  A.,  Aisyah  N.A.  ,  2018,  skrining fitokimia  dan  penentuan  LC50  dengan metode bslt ( Brine Shrimp Lethality Test ) ekstrak  batang  murbei  ( Morus  alba l.) dengan  variasi  pelarut  sebagai  kandidat antikanker.  Jurnal  ilmiah  pharmacy,  5(2), 159-167.
Gupita,  C.M,  Rahayuni,  A.,  2012,  Pengaruh berbagai  ph  Sari  Buah  Dan  Suhu Pasteurisasi Terhadap Aktivitas
Antioksidan Dan Tingkat Penerimaan Sari Kulit Buah Manggis, Journal of Nutrition College, Volume 1 No. 1
Kemenkes  RI.,  2016,  Pusat  data  dan Informasi  Kementerian  Kesehatan  RI.
Kanker Payudara, Kemenkes RI, Jakarta.
Kuntorini,  E.M.,  Astuti,  M.D.,  2010,
Penentuan  Aktivitas  Antioksi  dan  Dari Ekstrak  Etanol  Bulbus  Bawang  Dayak, fmipa.unlam.ac.id/.../vol-4-  No-1_pp,-15- 22
Mallaleng, H.R., Purwaningtyas, U., Hermawati,  R.,  Solichah,  N.,  &  Syah, F.Z.N.  2011.  Tanaman  Obat  untuk Penyakit Sindrom Metabolisme
(Metabolic  Syndrome  Disease).  Malang: Penerbit  Universitas  Negeri  Malang  (UM Press).
Natioanal  Cancer  Institute    (NCI),  2009,
Measuring  cancer  death,Cited.  (Online), (http://www.cancer.gov/csr),  diakses  21 mei 2017.
Radojkovic,  M.M.,  Zekovic,  Z.P.,  Vidovic,
S.S.,  Kocar,  D.D.,&  Maskovic,  P.Z., 2012,  Free  Radical  Scavenging  Activity and  Total  Phenolic  and  Flavanoid Contents  of  Mullberry  (  Morus  spp.  L., Moraceae  )  Ekstracts,  Hemijska  Insdusija Impact Factor