BERKALA SAINSTEK 2021 9(2): 86-94 doi: 10.19184/bst.v9i2.19034 https://jurnal.unej.ac.id/index.php/BST/article/view/19034

## RESEARCH ARTICLE
Growth of Lactobacillus casei FNCC0900 in Media Based Umbi Porang Plant ( Amorphophallus muelleri BI.)
(Pertumbuhan Lactobacillus casei FNCC0900 Pada Media Berbasis Umbi Tanaman Porang ( Amorphophallus muelleri BI.))
Fitri Azhari *) , Rudju Winarsa, Siswanto, Kahar Muzakhar, Esti Utarti, Sutoyo, Sattya Arimurti Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Jember Jl. Kalimantan 37, Jember 68121

## ABSTRACT
Porang tuber ( Amorphophallus muellerii BI.) Is a type of tuber that has a high enough glucomannan content of 67%. Glucomannan is very difficult to digest by humans directly so it takes the role of probiotics. L. casei bacteria FNCC0900 as a probiotic agent capable of utilizing glucomannan as a carbon source for growth. The purpose of this study was to determine the growth pattern and changes in environmental factors, namely the pH value of the probiotic bacteria L. casei FNCC0900 growth medium. The parameters in this study consisted of the highest cell density, generation time and pH value changes in Glucose Yeast Peptone Liquid Media, Porang Boiled Water Media and Porang Flour Liquid Media using the drop plate method which had 4 repeated calculations. Porang Boiled Water Liquid Media has a faster log phase period with a higher cell density than Porang Flour Liquid Media, but the shortest generation time is found in Porang Flour Liquid Media with the highest number of generations. L. casei FNCC0900 bacteria are more able to reduce the pH of Glucose Yeast Peptone Liquid Media compared to porang tuber-based media, so in this case L. casei FNCC0900 can be stated to be able to grow on porang tuber-based media with growth patterns, generation time, cell density and pH value. which varies.
Umbi porang ( Amorphophallus muellerii BI.) merupakan salah satu jenis umbi yang memiliki kandungan glukomannan cukup tinggi sebesar 67% . Glukomannan sangat sulit dicerna oleh manusia secara langsung sehingga dibutuhkan peran probiotik. Bakteri L. casei FNCC0900 sebagai  agen  probiotik  yang  mampu  memanfaatkan  glukomannan  sebagai  sumber  karbon  untuk  pertumbuhannya. Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk  mengetahui pola  pertumbuhan  dan  perubahan  faktor  lingkungan  yaitu  nilai  pH  pada  media pertumbuhan bakteri probiotik L. casei FNCC0900. Parameter dalam penelitian ini terdiri atas kepadatan sel tertinggi, waktu generasi dan perubahan nilai pH pada Media Cair Glucose Yeast Peptone , Media Air Rebusan Porang dan Media Cair Tepung Porang dengan metode drop plate yang memiliki 4 kali ulangan perhitungan. Media Cair Air Rebusan Porang memiliki periode fase log yang lebih cepat dengan kepadatan sel lebih tinggi dibandingkan Media Cair Tepung Porang, namun waktu generasi paling singkat terdapat pada Media Cair Tepung Porang dengan jumlah generasi paling tinggi. Bakteri L. casei FNCC0900 lebih mampu menurunkan pH Media Cair Glucose Yeast Peptone dibandingkan pada media berbasis umbi porang, sehingga dalam hal ini L.  casei FNCC0900 dapat dinyatakan mampu  tumbuh pada media berbasis umbi porang dengan pola pertumbuhan, waktu generasi, kepadatan sel serta nilai pH yang bervariasi.
Keywords: Lactobacillus casei , Growth, pH, Porang tubers.

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara  yang memiliki  berbagai  macam  jenis umbi-umbian  yang dapat berpotensi sebagai bahan pangan fungsional [1]. Umbi-umbian  sangat  cocok  digunakan  sebagai
medium  fermentasi,  karena  memiliki  kandungan nutrisi  yang  tinggi  seperti  karbohidrat  berupa oligosakarida  serta  serat  pangan  yang  berpotensi sebagai prebiotik [2]. Prebiotik adalah bahan pangan dengan  kandungan  oligosakarida  yang  sulit  dicerna
*)Corresponding author: Fitri Azhari E-mail: fitriazhari86@gmail.com
Azhari et al, Growth of Lactobacillus casei …
oleh  manusia  namun  dapat  memiliki  manfaat  bagi pertumbuhan mikrobiota pada saluran pencernaan [3].
Oligosakarida  disebut  sebagai  prebiotik  karena dapat  berperan  sebagai  media  yang  baik  untuk pertumbuhan bakteri yang menguntungkan di dalam saluran pencernaan [4]. Umbi porang ( Amorphophallus muelleri BI.)  merupakan  salah  satu  jenis  umbi  yang banyak tumbuh di Indonesia, namun pemanfaatannya masih kurang optimal oleh masyarakat. Umbi porang memiliki  potensi  sebagai  pangan  fungsional  dengan nilai indeks glikemik yang rendah yaitu 16,9% [1].
Pangan dengan nilai indeks glikemik yang rendah (<55)  mampu  menurunkan  kadar  gula  darah  dalam tubuh  sehingga  umbi  porang  dapat  dimanfaatkan sebagai  bahan  pangan  fungsional  yang  memiliki manfaat  bagi  kesehatan,  terutama  bagi  penderita diabetes [5].  Pangan  fungsional  adalah  pangan  segar atau  yang  diolah  dalam  bentuk  apapun  untuk memenuhi  kebutuhan  nutrisi  dalam  tubuh  dan bermanfaat  bagi kesehatan [6].  Umbi  porang  juga termasuk dalam salah satu pangan prebiotik [7].
Komposisi kimia pada tepung umbi porang terdiri atas  air  (6,8%),  abu  (7,9%),  pati  (10,2%),  protein (3,4%), lemak (3%) dan kalsium oksalat (22,7%) [8]. Umbi  porang juga  mengandung  glukomannan  yang cukup  tinggi  yaitu  sebesar  67%.  Protein  pada  umbi porang yang berikatan dengan glukomannan disebut dengan lektin,  lektin  memiliki  sifat antibakteri terhadap bakteri Eschericia coli dan Staphylococcus aureus [9]. Kandungan glukomannan pada umbi  porang mampu  dimanfaatkan oleh bakteri L.  casei sebagai sumber
karbon. Glukomannan merupakan polisakarida dengan ikatan  glukosa  dan  mannosa sebagai  rantai  utama.  Glukomannan  sangat sulit dicerna  oleh  manusia  secara  langsung  sehingga membutuhkan peran  bakteri  probiotik  salah  satunya L.  casei untuk  mempermudah  proses  pencernaan Glukomannan di dalam tubuh manusia [7].
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pola pertumbuhan dan perubahan faktor lingkungan yaitu nilai pH pada media pertumbuhan bakteri probiotik L. casei FNCC0900. Pemanfaatan bakteri L. casei sebagai agen probiotik pada penelitian ini dikarenakan bakteri L.  casei mampu  memanfaatkan  komponen  gula,  pati dan  serat  pada  umbi  sebagai  sumber  karbon  untuk mendukung pertumbuhannya dengan cara memecah oligosakarida  menjadi  asam  laktat  [10]. Keunggulan lain  dari  pemanfaatan  bakteri L.  casei sebagai  agen
probiotik  yaitu L. casei mampu  tahan  pada  pH  yang rendah,  mampu  tumbuh  pada  media  pertumbuhan alami baik pada biji, sayuran dan umbi [11].
Probiotik  merupakan  sel  mikroba  hidup  yang memiliki  manfaat  bagi  kesehatan  dengan cara menyeimbangkan  aktivitas  mikroba  pada  saluran pencernaan serta memiliki aktivitas pertumbuhan yang tinggi  pada  saluran  pencernaan [10].  Media pertumbuhan  berbasis  umbi  porang  yang  digunakan sangat  mempengaruhi  pola  pertumbuhan L.  casei dalam memanfaatkan beberapa komposisi kimia pada umbi  porang  terutama  glukomannan.  Pola pertumbuhan L.  casei pada  media  berbasis  umbi porang  diharapkan  jauh  lebih  optimal  dibandingkan pada media kontrol.

## METODE PENELITIAN
Bahan Penelitian Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah kultur  murni  bakteri  asam  laktat Lactobacillus  casei FNCC 0900 dari Universitas Gadjah Mada Yogyakarta dan umbi  porang  ( A . muelleri ) yang  didapatkan  dari Jember. Tahapan Persiapan Penelitian Pembuatan  Media  Padat  GYP  ( Glucose  Yeast Pepton ) Pembuatan  Media  Padat  GYP  dilakukan  dengan cara memasukkan 1 gram glukosa, 1 gram yeast extract , 0.2 gram beef  extract , 0.5 pepton, Na-Asetat sebanyak 0.14 gram, Salt solution sebanyak 0.5 mL dan Tween 80 sebanyak  1 mL dalam Beaker  Glass 100 mL.  CaCO 3 sebanyak 0,5 gram dan Bacto Agar sebanyak 1,2 gram juga  ditambahkan  ke  dalam Beaker  Glass 100  mL. Bahan-bahan  yang  telah  homogen  kemudian dipanaskan  dengan hot  plate hingga  mendidih, selanjutnya dituang dalam tabung reaksi sebanyak 10 mL dan disterilkan ke dalam autoklaf selama 25 menit dengan  suhu  121 o C.  Media  yang  telah  steril  akan dituang ke dalam cawan petri steril jika sudah hangat, kemudian disimpan pada suhu ruang.
Pembuatan  Media  Cair  GYP  ( Glucose  Yeast Pepton ) Pembuatan  Media  Cair  GYP  dilakukan  dengan memasukkan 1 gram glukosa, 1 gram yeast extract , 0.2 gram beef  extract , 0.5 pepton, Na-Asetat sebanyak 0.14 gram, Salt  solution sebanyak  0.5 mL dan  Tween  80 sebanyak  1 mL dalam Beaker  Glass 100 mL.  Bahan-
Azhari et al, Growth of Lactobacillus casei …
bahan  yang  telah  homogen,  kemudian  dipanaskan dengan hot  plate hingga  mendidih,  kemudian  Media Cair  GYP  yang  telah  mendidih  akan  dituang  dalam labu Erlenmeyer 200 mL untuk disterilkan ke dalam autoklaf selama 25 menit dengan suhu 121 o C. Media Cair GYP yang telah steril, kemudian disimpan pada suhu ruang.
Pembuatan Media Cair Air Rebusan Porang Pembuatan  Media  Cair  Air  Rebusan  Porang dilakukan  dengan merebus 10  gram  umbi  porang dengan 50 mL akuades di dalam Beaker glass . Proses perebusan  dilakukan dengan menggunakan hot  plate sampai mendidih, kemudian Media Cair Air Rebusan Porang yang telah mendidih akan dituang dalam labu Erlenmeyer  200 mL untuk  disterilkan  ke  dalam autoklaf selama 25 menit dengan suhu 121 o C. Media Cair Air Rebusan Porang yang telah steril, kemudian disimpan pada suhu ruang.
Pembuatan Tepung Porang Pembuatan  tepung  porang  diawali  dengan pengupasan  umbi  porang  segar  dan  pencucian yang kemudian  diiris  dan  direndam  dalam  air  yang  telah ditambah  CaCO 3 dengan  perbandingan  1:1.  Umbi porang  diiris  tipis  dengan  ketebalan  1-2  mm. Pengirisan umbi dilakukan untuk mempercepat proses pengeringan.  Irisan  umbi  dikeringkan  dengan  oven pada suhu sekitar 50 °C hingga berat umbi konstan. Hasil  pengeringan  berupa  serpihan  kering  porang yang  kemudian  digiling  dan  disaring  dengan menggunakan  saringan  ukuran 100-120  mesh  untuk menghasilkan tepung porang yang halus.
Pembuatan Media Cair Tepung Porang Pembuatan Media Cair Tepung Porang dilakukan dengan merebus 0,5 gram tepung porang dengan 50 mL akuades ke dalam Beaker glass . Proses perebusan dilakukan dengan menggunakan hot  plate sampai mendidih selanjutnya, Media Cair Tepung Porang yang telah mendidih akan dituang dalam labu Erlenmeyer 200 mL untuk disterilkan ke dalam autoklaf selama 25 menit dengan suhu 121 o C. Media Cair Tepung Porang yang telah steril, kemudian disimpan pada suhu ruang.
Tahapan Pembuatan Suspensi Inokulum Bakteri L. casei FNCC0900 Peremajaan bakteri L. casei FNCC0900 Peremajaan
bakteri dilakukan dengan
menginokulasikan  1  ose L.  casei FNCC0900 pada Media  Padat  GYP  dengan  metode  gores  kemudian
diinkubasi  pada  suhu  37ºC  selama  24  jam. Pertumbuhan L.  casei FNCC0900 ditandai  dengan adanya  zona  bening  di  sekitar  koloni.  Bakteri  yang tumbuh kemudian diambil 1 ose dan digoreskan pada Media  Padat  GYP  miring  dan  diinkubasi  pada  suhu 37ºC selama 24 jam.
Pembuatan suspensi inokulum Pembuatan  suspensi  inokulum  dilakukan  dengan mengambil 1 ose dari stok bakteri L. casei FNCC0900 pada  50 mL  Media  Cair Glucose  Yeast kemudian diinkubasi pada shaker 100 rpm selama 18 jam pada suhu 37ºC. Kepadatan sel  yang  diinginkan  yaitu sebesar 10 7 (CFU/mL).
Kepadatan  sel  diperoleh  dengan  melakukan pembuatan  kurva standart.  Kurva  standart  dibentuk berdasarkan hasil perhitungan nilai absorbansi (OD) dan perhitungan jumlah koloni bakteri dengan metode Total  Plate  Count (TPC)  dari  sampel  suspense inokulum.  Data  hasil  perhitungan  nilai  absorbansi (OD)  dan Total  Plate  Count (TPC) yang  telah didapatkan  kemudian  diolah  untuk  menjadi  kurva standart dengan rumus sebagai berikut:
y=0.3302x-2.4905 Antilog x= …………..
Keterangan : x =  Jumlah  sel  yang  akan  diinokulasikan (CFU/mL)
y =  Nilai  absorbansi  dari  masing-masing  media perlakuan  yang  telah  diinokulasikan  kultur bakteri L. casei FNCC0900
Hasil perhitungan yang telah diperoleh kemudian dimasukkan  ke  dalam  rumus  perhitungan  sebagai berikut:
n1 . v1=n2 . v2
Keterangan: n1 : Jumlah kepadatan sel (CFU/mL) v1 :  Volume  Starter  yang  diinokulasikan  pada media perlakuan n2 : Ketentuan jumlah kepadatan sel (umumnya untuk peluang tumbuh yaitu 10 6 -10 7 ) v2 : 10% dari volume starter (5 mL)
Berdasarkan hasil perhitungan tersebut, maka akan diperoleh kepadatan sel dan volume starter yang akan diinokulasikan pada media perlakuan.
Azhari et al, Growth of Lactobacillus casei …
Tahapan  Uji  Pertumbuhan L.  casei FNCC0900 pada Media Pertumbuhan Pengukuran perubahan nilai pH awal dan akhir pada media pertumbuan Pengukuran  nilai  pH  pada  masing-masing  media pertumbuhan  dilakukan  dengan  menyiapkan  Media Cair GYP, Media Cair Air Rebusan Porang, dan Media Cair  Tepung  Porang  steril.  Masing-masing  media pertumbuhan diambil 1 mL untuk dimasukkan ke dalam Eppendorf dengan  cara  yang  aseptis  di  dalam Laminar Air Flow . Pengukuran nilai pH awal masing- masing  media  pertumbuhan  dilakukan  dengan mencelupkan  kertas pH ke  dalam  masing-masing media  pertumbuhan,  kemudian  pembacaan  nilai  pH dilakukan  dengan  mencocokkan  perubahan  warna pada  kertas pH dengan  nilai  pH. Hal  tersebut  juga dilakukan  untuk  pengukuran  nilai  pH  akhir  pada masing-masing media pertumbuhan.
Inokulasi bakteri L. casei FNCC0900 pada media pertumbuhan Langkah pertama untuk menumbuhkan bakteri L. casei FNCC0900 adalah  menyiapkan  masing-masing media  pertumbuhan  yang  akan  digunakan.  Kultur bakteri L. casei FNCC0900 sebanyak 5 mL (10% dari 50 mL volume starter) dengan kepadatan sel dari hasil pembuatan  kurva  standart sebesar  10 7 (CFU/mL) diinokulasikan ke dalam 3 jenis media pertumbuhan (masing-masing  1  kali sampling ).  Kultur L.  casei FNCC0900 kemudian diinkubasi pada shaker 100 rpm selama 24 jam pada suhu ruang.
Pembuatan  pola  pertumbuhan  bakteri L.  casei FNCC0900 FNCC0900 Pembuatan  pola  pertumbuhan  bakteri  dilakukan dengan menginokulasikan bakteri L. casei FNCC0900 pada Media Cair GYP, Media Cair Air Rebusan Porang dan Media Cair Tepung Porang dengan kepadatan sel sebesar  10 7 (CFU/mL)  dan  diinkubasi  pada  shaker dengan kecepatan 100 rpm pada suhu ruang selama 48 jam. Setiap interval 4 jam, dilakukan sampling dengan mengambil  1  mL  inokulum  untuk  dimasukkan  ke dalam  9  mL  garam  fisiologis  0,85%  NaCl  sebagai pengenceran  10 -1 ,  kemudian  dimasukkan  100  µl  ke
dalam eppendorf yang berisi 900 µl garam fisiologis sebagai  pengenceran  10 -2 dan  dilakukan  sampai pengenceran  10 -8 .  Masing-masing  seri  pengenceran diambil  10  µl  untuk  diinokulasikan  dengan  metode tetes ( drop plate ) pada Media Padat Glucose Yeast Peptone , kemudian diinkubasi pada suhu 37ºC selama 48 jam dan diulangi hingga 4 kali ulangan perlakuan.
Perhitungan  jumlah  sel  bakteri  dilakukan menggunakan  SPC  ( Standart  Plate  Count )  dengan rumus:
∑Koloni ( CFU/ mL)= ∑koloni per cawan× 1000 10 × 1
faktor pengenceran
Analisis Data Analisis data dilakukan dengan cara deskriptif yang disajikan  melalui  tabel  dan  gambar. Data  diperoleh berdasarkan  perhitungan kepadatan  sel, waktu generasi bakteri L. casei FNCC0900 yang tumbuh pada Media  Cair  GYP  dan  media  berbasis  umbi  porang serta perubahan nilai pH pada Media Cair GYP dan media berbasis umbi porang. Waktu generasi bakteri L. casei FNCC0900 dihitung 1 kali yang diperoleh dari kepadatan  sel L.  casei FNCC0900 pada fase eksponensial (log).
Rumus  perhitungan  jumlah  generasi  sebagai berikut:
n= Log Nt-Log No Log 2 Keterangan: n : Jumlah generasi Nt : Jumlah sel akhir (CFU/mL) No : Jumlah sel awal (CFU/mL)
Waktu generasi dapat dihitung dengan rumus:
G= n t Keterangan: G : Waktu generasi (generasi/menit) n : Jumlah generasi t : Waktu pertumbuhan (menit).
Azhari et al, Growth of Lactobacillus casei …

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pola Pertumbuhan Lactobacillus
casei
FNCC0900
Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan,  bakteri L.  casei FNCC0900 memiliki  empat  fase  pada  pola pertumbuhannya yang terdiri atas fase lag (adaptasi), fase eksponensial (logaritmik), fase stasioner dan fase kematian yang memiliki lama fase berbeda-beda pada masing-masing media pertumbuhan. Media pertumbuhan yang digunakan terdiri atas Media Cair GYP, Media Cair Air Rebusan Porang dan Media Cair Tepung Porang, pola pertumbuhan L. casei FNCC0900 disajikan pada Gambar 1.
Gambar  1.  Pola  pertumbuhan L.  casei FNCC0900 pada media pertumbuhan
Pola  pertumbuhan L.  casei FNCC0900 pada Gambar  1.  menunjukkan  adanya  fase  adaptasi  (lag) yang diduga terjadi pada waktu inkubasi ke-0 hingga ke-4  (4  jam)  baik  pada  Media  Cair  GYP  dan  media berbasis  umbi  porang.  Hal  tersebut  berbeda  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh Mardalena yang menyatakan  bahwa fase  log L.  casei yang diinokulasikan pada Media Cair MRS terjadi selama 4 jam [12]. Panjang  atau  pendeknya  waktu  adaptasi ditentukan  oleh jumlah sel  yang  diinokulasikan, kondisi  fisiologis  dan  morfologis  yang  sesuai  serta media pertumbuhan yang dibutuhkan, sedangkan fase adaptasi pada penelitian ini dipengaruhi oleh adanya jenis  media  pertumbuhan  yaitu  media  pertumbuhan sintetis (buatan) berupa Media Cair GYP dan media
pertumbuhan alami berupa Media Cair Air Rebusan Porang  dan  Media  Cair  Tepung Porang    dengan kepadatan  sel  yang  diinokulasikan  pada  masing- masing  jenis  media  sama [13].  Jenis  media pertumbuhan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini mampu mempengaruhi kepadatan sel dan lama waktu setiap fase yang akan mempengaruhi juga pada waktu generasi.
Fase  kedua  dari  pola  pertumbuhan  adalah  fase eksponensial  (log),  pada  Gambar 1 menunjukkan bahwa diduga  fase  eksponensial  (log)  terjadi  pada waktu inkubasi ke-8  hingga  ke-16  untuk  Media  Cair GYP,  pada  Media  Cair  Air  Rebusan  Porang  terjadi pada waktu  inkubasi ke-8  hingga  ke-12,  sedangkan pada  Media  Cair  Tepung  Porang  fase  eksponensial diduga terjadi pada waktu inkubasi ke-4 hingga ke-8. Fase eksponensial (log) pada Media Cair Air Rebusan Porang  dan  Media  Cair  Tepung  Porang  memiliki periode waktu fase eksponensial (log) yang sama yaitu 4  jam,  hal  ini  diduga  disebabkan  oleh  adanya kemampuan L.  casei untuk  menghidrolisis glukomannan  pada  umbi  porang  menjadi manooligosakarida dengan bantuan enzim mananase dan menghidrolisis pati dengan bantuan enzim amilase yang dihasilkan oleh L. casei .  Manooligosakarida dapat berperan  sebagai  nutrisi  untuk  pertumbuhan  bakteri probiotik salah satunya L.casei [14]. Fase berikutnya adalah fase stasioner, pada Gambar 1  diduga  fase  ini  terjadi  pada waktu  inkubasi ke-20 hingga ke-24 untuk Media Cair GYP, pada Media Cair Air Rebusan Porang fase stasioner terjadi pada waktu inkubasi ke-16  hingga ke-24,  sedangkan  pada  Media Cair Tepung Porang terjadi pada waktu inkubasi ke-12 hingga ke-28. Berdasarkan penelitian yang dilakukan Mardalena[12], fase stasioner L. casei FNCC0900 yang diinokulasikan pada Media Cair MRS memiliki periode fase  stasioner  selama  16  jam,  hal  tersebut  sesuai dengan lama fase stasioner L. casei FNCC0900 pada Media  Cair  Tepung  Porang.  Kondisi  mikroba  pada fase  stasioner  mengalami  penurunan  aktivitas  yang disebabkan  oleh  faktor  lingkungan  yang  mulai  tidak menguntungkan,  berkurangnya  faktor  pertumbuhan seperti  vitamin,  unsur  mineral,  dan  nutrisi  dalam media  pertumbuhan,  dan  terjadinya  akumulasi autotoksin  atau  senyawa penghambat  dalam  media pertumbuhan [13].
Fase terakhir adalah fase kematian yang merupakan fase mulai berhentinya segala aktivitas sel. Berdasarkan pada Gambar 1, fase kematian ditandai dengan adanya
0 4 8 12 2 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 Lo g ju m la h se l ( CF U/m L) Waktu inkubasi (jam) Media Cair GYP Media Cair Air Rebusan Porang Media Cair Tepung Porang
Azhari et al, Growth of Lactobacillus casei …
penurunan  grafik  kurva  pertumbuhan L.  casei FNCC0900 yang  terjadi  pada waktu  inkubasi ke-28 untuk Media Cair GYP dan Media Cair Air Rebusan Porang, sedangkan untuk Media Cair Tepung Porang fase kematian terjadi pada waktu inkubasi ke- 32. Fase kematian  menunjukkan jumlah populasi  yang  mati lebih  banyak  daripada jumlah populasi  sel  yang tumbuh, dalam kondisi ini cadangan makanan sudah sangat  menipis  sehingga  kurang  mendukung  untuk pertumbuhan populasi sel [15].
Perubahan pH pada Media Pertumbuhan Faktor  yang  mempengaruhi  laju  pertumbuhan bakteri salah satunya adalah pH. Asam organik yang dihasilkan  oleh  adanya  pertumbuhan L. casei seperti asam  laktat,  asam  asetat,  dan  asam  piruvat mengakibatkan  terjadinya  akumulasi  produk  akhir asam  dan  penurunan  pH  pada  media  pertumbuhan [16].  Berdasarkan  pengukuran  nilai  pH yang  telah dilakukan,  didapatkan  hasil  bahwa  pada  ketiga  jenis media pertumbuhan telah mengalami penurunan pH dalam waktu 48 jam yang dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar  2. Perubahan  nilai  pH  pada  media pertumbuhan.  (1)  Media Cair  GYP  (2) Media  Cair  Air Rebusan  Porang  (3) Media Cair Tepung Porang.
Berdasarkan  Gambar  2,  diketahui  bahwa  Media Cair  GYP  mengalami  penurunan  nilai  pH  dari  7 menjadi 4, kemudian Media Cair Air Rebusan Porang dari 6 menjadi 4, dan pada Media Cair Tepung Porang penurunan pH terjadi dari 7 menjadi 5. Bakteri L. casei FNCC0900 yang tumbuh pada Media Cair GYP lebih aktif  melakukan  metabolisme  terutama  dalam meningkatkan  produksi  asam  organik  yang  dapat menurunkan nilai pH pada media. Hal tersebut diduga L. casei FNCC0900 lebih mampu memanfaatkan gula- gula  sederhana  yang  terkandung  dalam  Media  Cair
GYP sebagai sumber energi dibandingkan kelompok gula pada media berbasis umbi porang.
Faktor lain yang menyebabkan adanya penurunan nilai  pH  pada  media  yaitu  waktu  inkubasi,  semakin lama  waktu  inkubasi  maka  akan  semakin  asam  pH media  pertumbuhan [17].  Penurunan  nilai  pH  pada media  pertumbuhan  terjadi  disebabkan  oleh  adanya peningkatan kadar asam organik yang dihasilkan oleh isolat L.  casei FNCC0900.  Tingginya  kadar  asam organik  yang  dihasilkan dapat  mengindikasikan tingginya  aktivitas  metabolisme  yang  berlangsung sehingga  kemampuan L.  casei FNCC0900 untuk menurunkan nilai pH juga semakin optimal.
Kepadatan Sel dan Waktu Generasi Lactobacillus casei FNCC0900 Perhitungan kepadatan sel L. casei FNCC0900 pada masing-masing media pertumbuhan dilakukan dengan menginokulasikan  bakteri L.  casei FNCC0900 pada Media Cair GYP, Media Cair Air Rebusan Porang dan Media Cair Tepung Porang. Bakteri L. casei FNCC0900 yang  diinokulasikan  berumur  18  jam, kepadatan sel tertinggi  diambil  pada  saat  awal  terjadinya  fase eksponensial (log). Kepadatan sel L. casei FNCC0900 yang  tumbuh  pada  Media  Cair  GYP  dan  media berbasis umbi porang disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Kepadatan Sel L. casei FNCC0900 pada Awal Fase Eksponensial (Log)
Berdasarkan  Tabel  1  dapat  diketahui  bahwa kepadatan sel L. casei FNCC0900 yang tumbuh pada masing-masing  jenis  media  pertumbuhan  berbeda- beda.  Media  Cair  Tepung  Porang  memiliki  rata-rata jumlah sel  yang  sangat  rendah  dibandingkan  pada Media Cair Air Rebusan Porang dan Media Cair GYP. Hal tersebut diduga dikarenakan oleh kurang larutnya protein  yang  terikat  pada  tepung sehingga mampu menyebabkan kurang melimpahnya kandungan nutrisi yang  dibutuhkan  untuk  pertumbuhan L.  casei FNCC0900. Protein  berperan  sebagai  sumber nitrogen  utama  yang  mampu  meningkatkan  laju pertumbuhan dan aktivitas mikroorganisme [18].
7
6 7 4 4 5 0 2 4 6 8 1 2 3 pH awal pH akhir Jenis media pertumbuhan Rata-rata jumlah sel bakteri (CFU/mL) Media Cair GYP 5,3×10 10 Media Cair Air Rebusan Porang 3,0×10 10 Media Cair Tepung Porang 8,0×10 9
Azhari et al, Growth of Lactobacillus casei …
Kepadatan sel L.  casei FNCC0900 tertinggi  terdapat pada Media Cair GYP, hal tersebut dikarenakan adanya komposisi  kimia  yang  terkandung  dalam  Media  Cair GYP seperti yeast extract dan beef  extract yang memiliki kandungan  asam  amino,  peptida  dan  vitamin  B kompleks  sehingga  mampu  meningkatkan  laju pertumbuhan mikroorganisme serta berfungsi sebagai sumber nitrogen utama yang berperan dalam produksi asam  laktat.  Ketersediaan  nutrisi  pada  media pertumbuhan  menjadi  faktor  yang penting  untuk meningkatkan laju pertumbuhan bakteri (Wardani dan Rudiana)[18]. Kepadatan sel  tertinggi  pada  media berbasis  umbi  porang  terdapat  pada  Media  Cair  Air Rebusan  Porang,  tingginya kepadatan sel L.  casei FNCC0900 yang  tumbuh  pada  Media  Cair  Air Rebusan  Porang  disebabkan  oleh  adanya  proses perebusan yang mampu melarutkan kandungan nutrisi pada  umbi  ke  dalam  air  rebusan,  kandungan  nutrisi yang  terlarut  dalam  air  rebusan  meliputi  garam mineral, vitamin C, protein yang larut dalam air, dan vitamin  B  kompleks  yang  berperan  untuk meningkatkan laju pertumbuhan L. casei FNCC0900. Proses  perebusan  juga  sangat  berpengaruh  pada karbohidrat,  sehingga  kandungan  pati  pada  umbi dapat larut dengan baik [19].
Proses  pertumbuhan  sel bakteri  membutuhkan waktu untuk membelah diri dari satu sel menjadi dua sel, waktu yang diperlukan untuk memperbanyak diri tersebut  disebut  dengan  waktu  generasi.  Waktu generasi L.  casei FNCC0900 dihitung  pada  saat  sel sedang aktif membelah yaitu pada fase eksponensial (log)  (Sutrisna,  dkk)[20].  Waktu  generasi L.  casei FNCC0900 yang  diinokulasikan  pada  Media  Cair GYP, Media Cair Air Rebusan Porang dan Media Cair Tepung  Porang  memiliki  hasil  yang  berbeda-beda, hasil perhitungan waktu generasi L. casei dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel  2  Waktu  Generasi L.  casei FNCC0900 pada Media Cair GYP dan Media Berbasis Umbi
Porang Jenis media pertumbuhan Jumlah generasi (n) Waktu generasi (menit) Media Cair GYP 5,51 87,04 Media Cair Air Rebusan Porang 5,05 47,53 Media Cair Tepung Porang 6,78 35,42
Berdasarkan hasil perhitungan waktu generasi pada Tabel 2, L. casei FNCC0900 yang tumbuh pada Media Cair  GYP  memiliki  waktu  generasi  paling  lama dibandingkan media berbasis umbi porang yaitu 87,04 menit.  Hasil  perhitungan  waktu  generasi  bakteri L. casei FNCC0900 pada  Media  Cair  GYP  sebanding dengan  pola  pertumbuhannya.  Berdasarkan Gambar 4.1,  dapat  diketahui  bahwa L. casei FNCC0900 yang tumbuh pada Media Cair GYP memiliki periode fase eksponensial (log) yang lebih lama yaitu selama 8 jam dibandingkan  media  berbasis  umbi  porang,  namun memiliki kepadatan sel tertinggi dibandingkan media berbasis umbi porang.
Bakteri L.  casei FNCC0900 yang  tumbuh  pada media  berbasis  umbi  porang  memiliki  lama  fase eksponensial  (log)  yang  sama  yaitu  selama  4  jam, namun memiliki waktu generasi yang berbeda. Waktu generasi L. casei FNCC0900 yang tumbuh pada Media Cair  Air  Rebusan  Porang  sebesar  47,53  menit sedangkan  waktu  generasi L.  casei FNCC0900 yang tumbuh pada Media Cair Tepung Porang terjadi lebih singkat yaitu 35,42 menit dengan kepadatan sel yang lebih  rendah.  Menurut  Fauziah,  dkk[21],  waktu generasi yang telah dihitung dari masing-masing jenis media  pertumbuhan  dapat  digunakan  untuk menentukan  tingkat  keaktifan L.  casei FNCC0900 dalam melakukan proses metabolisme, semakin cepat waktu  generasi  yang  terjadi,  maka  semakin  aktif mikroba  tersebut  dalam  melakukan  proses metabolisme.
Berdasarkan  perhitungan  waktu  generasi  pada Tabel 2, bakteri L. casei FNCC0900 yang tumbuh pada Media  Cair  GYP  mampu  menghasilkan  rata-rata  6 generasi selama  87,04  menit.  Pertumbuhan L.  casei FNCC0900 pada  Media  Cair  Air  Rebusan  Porang mampu  menghasilkan  rata-rata  5  generasi  selama 47,53  menit  sedangkan  pada  Media  Cair  Tepung Porang L. casei FNCC0900 mampu menghasilkan rata- rata 7 generasi selama 35,42 menit. Perbedaan waktu generasi  dan jumlah generasi  yang  dihasilkan  dari masing-masing media pertumbuhan dapat menunjukkan bahwa bakteri L. casei FNCC0900 lebih aktif  dalam  melakukan  aktivitas  metabolisme  pada media berbasis umbi porang dibandingkan pada Media Cair GYP.
Azhari et al, Growth of Lactobacillus casei …

## KESIMPULAN
Bakteri L. casei FNCC0900 mampu tumbuh pada media  berbasis  umbi  porang,  terutama  pada  Media Cair  Air  Rebusan  Porang. Periode  fase  eksponensial (log)  yang terjadi lebih  singkat pada  Media  Air Rebusan Porang dengan kepadatan sel yang dihasilkan lebih tinggi yaitu sebesar 3,0×10 10 dibandingkan pada Media  Cair  Tepung  Porang.  Waktu  generasi  pada Media  Cair  Air  Rebusan  Porang terjadi lebih  lama dengan  kepadatan sel  yang  dihasilkan  lebih  sedikit dibandingkan  pada  Media  Cair  Tepung  Porang. Bakteri L. casei FNCC0900 lebih mampu menurunkan nilai pH pada Media Cair GYP dibandingkan media berbasis  umbi  porang  dan kepadatan sel L.  casei FNCC0900 pada Media Cair GYP lebih tinggi dengan waktu  generasi  yang  lebih  lama  dibandingkan  pada media berbasis umbi porang.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Sari, Ika Puspita., E. Lukitaningsih., Rumiyati dan I. M. Setiawan.  2013.  Indek  Glikemik  Uwi,  Gadung  dan Talas yang Diberikan pada Tikus. Traditional Medical Journal. 18 (3): 127-131.
[2] Suskovic, J, B. Kos, J. Goreta, dan S. Matosic. 2001. Role of   Lactic  Acid Bacteria  and  Bifidobacteria  in Symbiotic Effect. Food Technology Biotechnology. 39 (3): 227 – 235.
[3]  Prastyaharasti,  L.M  dan  E.  Zubaidah.  2014.  Evaluasi Pertumbuhan Lactobacillus casei dalam Medium Susu Skim  yang  Disubstitusi  Tepung  Beras  Merah.  Jurnal Pangan dan Agroindustri.2 (4): 285-296.
[4] Yunus, Y. dan E. Zubaidah. 2015. Pengaruh Konsentrasi Sukrosa  dan  Lama  Fermentasi  Terhadap  Viabilitas Lactobacillus  casei  Selama  Penyimpanan  Beku  Velva Pisang Ambon. Jurnal Pangan dan Agroindustri. 3 (2): 303-312.
[5]  Supriati,  Yati.  2016.  Keanekaragaman  Iles-Iles (Amorphophallus spp.) dan Potensinya untuk Industri Pangan  Fungsional,  Kosmetik,  dan  Bioetanol.  Jurnal Litbang Pertanian. 35 (2): 69-80.
[6] Betoret, E., N. Betoret., D. Vidal., dan P. Foto. 2011. Functional  Foods  Development:  Trends  and Technologies.  Trends  Food  Science  &  Technology. (22): 498-508.
[7] Wigoeno, Y. A., R. Azrianingsih dan A. Roosdiana. 2013.
Analisis  Kadar  Glukomanan  Pada  Umbi  Porang (Amorphophallus  muelleri  Blume)  Menggunakan Refluks Kondensor. Jurnal Biotropika. 1 (5): 231-234.
[8] Sari, R dan Suhartati. 2015. Tumbuhan Porang: Prospek Budidaya sebagai Salah Satu Sistem Agroforestry. Info Teknis EBONI. 12 (2): 97 – 110.
[9]  Aryanti,  N  dan  K.Y.  Abidin.  2015.  Ekstraksi Glukomanan  Dari  Porang  Lokal  (Amorphophallus oncophyllus  dan  Amorphophallus  muelleri  Blume). Metana. 11 (1): 21-30.
[10] Rahmawati, I. S., E. Zubaida dan E. Saparianti. 2015. Evaluasi Pertumbuhan Isolat Probiotik (Lactobacillus casei  dan  Lactobacillus  plantarum)  dalam Medium Fermentasi  Berbasis  Ubi  Jalar  (Ipomoea  batatas  L.) selama Proses Fermentasi (Kajian Jenis Isolat dan Jenis Tepung Ubi Jalar). Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan. 4 (4): 133-140.
[11]  Najgebauer-Lejko,  DE.,  M.  Sady.,T.  Grega  dan  M. Walczycka. 2011. The impact of  tea supplementation on  microflora,  pH  and  antioxidant  capacity  of yoghurt. International Journal of  Dairy Science. (21): 568-574.
[12]  Mardalena.  2016.  Fase  Pertumbuhan  Isolat  Bakteri Asam  Laktat  (BAL)  Tempoyak  Asal  Jambi  yang Disimpan Pada Suhu Kamar. Jurnal Sains Peternakan Indonesia.  11 (1): 58-64.
[13] Yuliana, N. 2008. Kinetika Pertumbuhan Bakteri Asam Laktat Isolat T5 yang Berasal dari Tempoyak. Jurnal Teknologi  Industri  dan  Hasil  Pertanian.  13(2):  108- 114.
[14]  Sigres,  D.P  dan  A.  Sutrisno. 2015.  Enzim  Mananase dan Aplikasi di Bidang Industri: Kajian Pustaka. Jurnal Pangan dan Agroindustri. 3 (3): 899-908.
[15]  Nurhajati,  T.  K.  Soepranianondo  dan  W.  P. Lokapirnasari.  2014.  Uji  Aktivitas  Pertumbuhan Enterobacter cloacae Selulolitik Aerob Rumen-1 Isolat Asal Limbah Cairan Rumen Sapi Peranakan Ongole. Jurnal Veteriner. 17(3): 383-388.
[16] Imron, M. F. dan I. F. Purwanti. 2016. Uji kemampuan bakteri  Azotobacter  S8  dan  Bacillus  subtilis  untuk menyisihkan trivalent chromium (Cr3+) pada limbah cair. Jurnal Teknik ITS. 5 (1): 1-7.
[17]  Khoiriyah,  H  dan  P.  Ardiningsih.  2014.  Penentuan Waktu  Inkubasi  Optimum  Terhadap  Aktivitas Bakteriosin  Lactobacillus  sp.  RED4.  Jurnal  Kimia Khatulistiwa.      3 (4):  52-56.
[18]  Wardani,  R.Y  dan  R.  Agustini.  2017. Pengaruh konsentrasi  Yeast  Hydrolysate  Enzimatic  (YHE) sebagai  suplemen  media  kultur  untuk  pertumbuhan Lactobacillus bulgaricus. Journal of  Chemistry. 6 (1): 25-30.
[19] Sundari, D., Almasyhuri dan A. Lamid. 2015. Pengaruh proses pemasakan terhadap komposisi zat gizi bahan pangan sumber protein. Media Litbangkes. 25 (4): 235 – 242.
Azhari et al, Growth of Lactobacillus casei …
[20] Sutrisna, R., N. Ekowati dan D. Rahmawati. 2013. Uji daya hambat isolat bakteri asam laktat usus itik (Anas domestica)  pada  bakteri  gram  positif   dan  pola pertumbuhan isolat bakteri usus itik pada media MRS Broth. Jurnal Penelitian Pertanian Terapan. 13 (1): 52- 59.
[21]  Fauziah,  P.  N.,  J.  Nurhajati  dan  Chrysanti.  2018. Pengaruh  laju  pertumbuhan  dan  waktu  generasi terhadap  penghambatan  pertumbuhan  koloni Klebsiella pneumoniae strain ATCC 700603, CTL538 dan  S941  oleh  Lactobacillus  bulgaricus  KS1  dalam soyghurt. Jurnal Kesehatan Kartika. 08 (1): 1-14.