Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air Kombinasi Kulit Pisang Kepok ( Musa paradisiaca L.) dan Nanas ( Ananas comosus L.)

## dengan Metode DPPH dan FRAP
Vivian Fu 1* , Pratiwi Apridamayanti 2 , Sri Luliana 3
1,2,3 Jurusan Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura, Kota Pontianak, Indonesia.
* E-mail: vivian.fu1010@gmail.com
Article Info: Received:  23  Februari 2023 in revised form: 19 April 2023 Accepted: 28 April 2023
Available Online: 15  Mei  2023

## ABSTRACT
Banana  kepok  (Musa  paradisiaca  L.)  and  pineapple  (Ananas comosus L.) are types of fruit that are widely consumed by the community.  However,  the  skin  is  only  disposed  of  as  waste, where the waste of the fruit skin reaches 30% of the whole fruit. Kepok  banana  peels  and  pineapples  contain  phenols  and flavonoids which are proven to function as antioxidants. This study aims to determine the IC50 value of the combined sample using the DPPH and FRAP methods. The extract samples were divided  into  2  groups,  namely  the  combination  of  kepok banana peel extract and pineapple with a ratio of 1:1 and 1:3. Extraction is done by infusion method. Analysis of the content of phenolic and flavonoid compounds was carried out by the TLC  method  on  single  samples  of  kepok  banana  peels  and pineapple peels. Antioxidant activity test was carried out by 2 methods, namely DPPH and FRAP. The yield of the extract in the  1:1  combination  was  found  to  be  48%  and  the  1:3 combination was 47%. The chromatogram profile showed that each  single  sample  was  positive  for  phenols  and  flavonoids. The  results  of  the  analysis  of  the  antioxidant  activity  of  the DPPH method showed the IC50 value in the 1:1 combination group was 1188.27 ppm while in the 1:3 combination group it was 740.98 ppm. In the FRAP method, the IC50 value in the 1:1 combination  group  was  1251.85  ppm,  while  in  the  1:3
combination group it was 2218.94 ppm. Based on the results of the test, there are differences in the measurement of antioxidant activity  with  2  different  methods  based  on  the  antioxidants action  that  contains  in  the  sample,  so  that  the  more recommended  method  is  DPPH  based  on  the  type  of antioxidant compounds contained in the sample.
Keywords : Musa paradisiaca L;
Ananas comosus L; DPPH; FRAP; IC 50
Corresponding Author: Vivian Fu Jurusan Farmasi
Fakultas Kedokteran
Universitas Tanjungpura Kota Pontianak Indonesia E-mail:
vivian.fu1010@gmail.com
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
How to cite (APA 6 th Style): Fu, V., Apridamayanti,P., Luliana,S. (2023). Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air Kombinasi Kulit Pisang Kepok (Musa paradisiaca L.) dan Nanas (Ananas comosus L.) dengan Metode DPPH dan FRAP. Indonesian Journal of Pharmaceutical  (e-Journal), 3 (2), 235-246.
Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal) 2023; 3 (2): 235 – 246 ISSN : 2775- 3670 (electronic) Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/ijpe/index DOI: 10.37311/ijpe.v3i2.19466
Fu  et al., 2023; Indonesian Journal of Pharmacetical Education (e-Journal); 3(2): 235-246

## ABSTRAK
Pisang kepok ( Musa paradisiaca L.) dan nanas ( Ananas comosus L.) merupakan salah satu jenis buah  yang  sering  dikonsumsi  oleh  masyarakat.  Namun  bagian  kulitnya  hanya  dibuang menjadi limbah, yang mana limbah kulit buah jumlahnya mencapai 30% dari buah utuh. Kulit pisang  kepok  dan  nanas  memiliki  kandungan  fenol  dan  flavonoid  yang  terbukti  berfungsi sebagai  antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  nilai  IC 50 dari  sampel kombinasi dengan metode DPPH dan FRAP. Sampel ekstrak dibuat dalam 2 kelompok yaitu ekstrak kombinasi kulit pisang kepok dan nanas dengan perbandingan 1:1 dan 1:3. Ekstraksi dilakukan  dengan  metode  infusa.  Analisis  kandungan  senyawa  fenolik  dan  flavonoid dilakukan dengan metode KLT terhadap sampel tunggal kulit pisang kepok dan kulit nanas. Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  2  metode  yaitu  DPPH  dan  FRAP.  Rendemen ekstrak pada kombinasi 1:1 didapati sebesar 48% dan kombinasi 1:3 sebesar 47%. Profil hasil kromatogram  menunjukkan  masing-masing  sampel  tunggal  positif  mengandung  fenol  dan flavonoid.  Hasil  analisis  aktivitas  antioksidan  metode  DPPH  menunjukkan  nilai  IC 50 pada kelompok  kombinasi  1:1  sebesar  1188,27  ppm  sedangkan  pada  kelompok  kombinasi  1:3 sebesar 740,98 ppm. Pada metode FRAP menunjukkan nilai IC 50 pada kelompok kombinasi 1:1 sebesar  1251,85  ppm,  sedangkan  pada  kelompok  kombinasi  1:3  sebesar  2218,94  ppm. Berdasarkan hasil uji terdapat perbedaan terhadap pengukuran aktivitas antioksidan dengan 2  metode  berbeda  berdasarkan pada  mekanisme  menangkal  radikal  bebas  senyawa antioksidan yang terkandung dalam sampel , sehingga metode yang lebih direkomendasikan adalah DPPH berdasarkan pada jenis senyawa antioksidan yang terdapat dalam sampel.
Kata Kunci: Musa paradisiaca L; Ananas comosus L; DPPH; FRAP; IC 50

## 1. Pendahuluan
Negara  tropis  kaya  akan  sumber  daya  alam  yang  bermanfaat  salah  satunya sebagai antioksidan adalah Indonesia [1]. Antioksidan dikenal sebagai senyawa yang dapat menghilangkan, memurnikan, dan melawan radikal bebas [2]. Salah satu sumber antioksidan adalah buah pisang kepok (Musa paradisiaca L.) dan nanas (Ananas comosus L.) [3].
Pemanfaatan  buah  pisang  dan  nanas  terutama  daging  buah  nya  di  tengah masyarakat sangatlah beragam, di antara nya sebagai bahan baku pangan dan sajian kue-kue tradisional. Namun bagian buah lainnya seperti kulit buah nya sering dijadikan bahan buangan atau limbah [4]. Konsumsi buah nanas dapat menghasilkan limbah kulit nanas sebesar 34,61% [5]. Padahal kulit buah pisang kepok dan nanas memiliki banyak manfaat,  salah  satu  nya  adalah  sebagai  antioksidan.  Berdasarkan  penelitian  Saputri sejak tahun 2020 [6], aktivitas antioksidan kulit pisang kepok tunggal menghasilkan nilai IC 50 yang  kecil  yaitu  sebesar  95,85  ppm.  Nilai  IC 50 ini  menunjukkan  bahwa  aktivitas antioksidan  kulit  pisang  memiliki  kemampuan  menangkal  radikal  bebas  yang  tinggi sehingga dapat bermanfaat bagi tubuh. Berdasarkan penelitian Hatam et al. sejak tahun 2013 [7], aktivitas antioksidan kulit nanas menunjukkan nilai IC 50 sebesar 2,78 ppm. Kombinasi  dari  dua  antioksidan  dapat  menghasilkan  potensi  aktivitas  total antioksidan yang lebih tinggi ataupun dapat menghasilkan potensi aktivitas antioksidan yang lebih rendah [8]. Beberapa penelitian telah menujukkan adanya potensi terhadap aktivitas  antioksidan  dari  kombinasi  tanaman.  Salah  satunya  adalah  penelitian  yang dilakukan  oleh  Pusmarani  pada  tahun  2020  [9],  dikatakan  bahwa  kombinasi  ekstrak kulit  pisang  dan  daun  sambiloto  memiliki  efek  antioksidan  yang  berbeda  pada kombinasi yang berbeda.
Aktivitas  senyawa  antioksidan  dalam  suatu  sampel  dapat  diidentifikasi menggunakan berbagai metode, seperti metode DPPH (2,2-Difenil-1-pikrilhidrazil) dan FRAP  ( Ferric  Reducing  Antioxidant  Power ) .  Kedua  metode  identifikasi  ini  dapat berpotensi menghasilkan hasil pengukuran yang berbeda terhadap sampel yang sama. Beberapa  penelitian  menunjukkan  adanya  perbedaan  pengukuran  dengan menggunakan  metode  DPPH  dan  FRAP,  seperti  penelitian  yang  dilakukan  oleh Fidrianny  pada  tahun  2018  [10],  dikatakan  bahwa  aktivitas  antioksidan  ekstrak  kulit nanas  dengan  metode  DPPH  menghasilkan  nilai  IC 50 sebesar  0,13  ppm.  Sedangkan dengan menggunakan metode FRAP menghasilkan nilai IC 50 sebesar 259,08 ppm. Hal ini  menunjukkan  bahwa  terjadi  perbedaan  pengukuran  aktivitas  antioksidan  antara metode DPPH dan FRAP [11].
Berdasarkan latar belakang di atas maka penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk menganalisis aktivitas antioksidan dari kombinasi kulit buah pisang dan nanas untuk  melihat  perbandingan  aktivitas  antioksidan  nya.  Selain  itu  penelitian  ini  juga menggunakan 2 metode analisis yaitu dengan menggunakan metode DPPH dan FRAP dengan tujuan untuk membandingkan hasil dari kedua metode terhadap mekanisme aktivitas antioksidan, serta menentukan metode yang lebih di rekomendasikan dalam analisis.

## 2.  Metode
Metode  penelitian  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  penelitian eksperimental . Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah aquadest, kulit buah pisang (Musa paradisiaca L.) , kulit buah nanas (Ananas comosus L.) , metanol p.a. (Merck ® ), plat KLT silika gel GF254 (Merck ® ), AlCl 3 10% (Merck ® ), n-butanol (Merck ® ), asam asetat (Merck ® ), larutan pereaksi DPPH 40 ppm (Sigma ® ), TPTZ (Sigma ® ) 1 mM dalam 0,05 M HCl,  dan FeCl 3 3 mM dalam 5 mM asam sitrat.

## Ekstraksi
Ekstraksi dilakukan dengan metode infusa dengan menimbang masing-masing kelompok  simplisia  kering  kulit  pisang  kepok  dan  nanas  seberat  total  20  gram. Kemudian  dimasukkan  ke  dalam  panci  infusa  masing-masing  ditambahkan  pelarut aquadest dengan perbandingan 1:10. Kemudian dipanaskan menggunakan pemanas air selama 15 menit setelah suhu mencapai 90ºC. Kemudian dilakukan evaporasi dengan food dehydrator untuk menghilangkan pelarut dari hasil infusa menjadi ekstrak kental [12].

## Identifikasi Senyawa Fenolik dan Flavonoid dengan KLT
Analisis  profil  kromatogram  dilakukan  dengan  menggunakan  KLT  terhadap masing-masing  sampel  tunggal  kulit  pisang  kepok  dan  kulit  nanas.  Masing-masing sampel tunggal diambil 1 g dan dilarutkan dalam 10 mL metanol p.a. Selanjutnya dielusi dengan menggunakan eluen Butanol : Asam asetat : air (BAA) dengan perbandingan 4:1:5 dan di semprot AlCl 3 10% untuk identifikasi senyawa flavonoid. Eluen toluene : etil asetat : asam asetat dengan perbandingan 2:3:0,1 dan di semprot dengan FeCl 3 5% untuk identifikasi senyawa fenolik. Setelah terelusi lempeng diangkat dan dikeringkan setelah  itu  diamati  pada  sinar  tampak,  lampu  UV  254  nm  dan  UV  366.  Hasil kromatogram di dokumentasikan dan dihitung nilai Rf dari bercak yang tampak [13].

## Pembuatan Larutan Induk
Sebanyak  5  g  ekstrak  kental  kelompok  kombinasi  1:1  dan  1:3  ditimbang, dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL, dilarutkan dan volume nya dicukupkan dengan metanol p.a. sampai tanda garis batas [14].

## Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPH
Analisis aktivitas antioksidan metode DPPH dilakukan dengan pembuatan seri larutan uji masing-masing kelompok sampel kombinasi 1:1 dan 1:3 dalam konsentrasi (ppm). Kelompok seri dibuat dengan volume 5 mL sesuai dengan penjabaran sebagai berikut [15] :
Larutan induk kelompok kombinasi 1:1 diambil sebanyak 20 µg, 25 µg, 30 µg, 35 µg, 40 µg, dan 50 µg untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 800 ppm, 1000 ppm, 1200 ppm, 1400 ppm, 1600 ppm, dan 2000 ppm. Larutan induk kelompok kombinasi 1:3 di ambil sebanyak 10 µg, 15 µg, 20 µg, 25 µg, 30 µg, dan 35 µg untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 400 ppm, 600 ppm, 800 ppm, 1000 ppm, 1200 ppm, dan 1400 ppm. Masing- masing konsentrasi dari kelompok kombinasi 1:1 dan 1:3 diambil sebanyak 1 mL dan dimasukkan ke dalam botol vial hitam. Setiap vial ditambahkan larutan DPPH 40 ppm sebanyak 3 mL. Kemudian dihomogenkan dan diinkubasi pada suhu ruang dan gelap selama 30 menit. Hasil dibaca memakai spektrofotometer UV-Vis. Kemudian dilakukan perhitungan  %  inhibisi  dan  nilai  IC 50 .  Nilai  IC 50 dapat  dihitung  dengan  rumus persamaan regresi dari nilai persen inhibisi yang didapatkan [16].

## Uji Aktivitas Antioksidan Metode FRAP
Analisis  aktivitas  antioksidan  metode  FRAP  dilakukan  dengan  pembuatan  seri larutan uji masing-masing kelompok sampel kombinasi 1:1 dan 1:3 dalam konsentrasi (ppm). Kelompok seri dibuat dengan volume 1 mL sesuai dengan penjabaran sebagai berikut [15] :
Larutan induk kelompok kombinasi 1:1 diambil sebanyak 10 µg, 12,5 µg, 15 µg, 17,5 µg, 20 µg, dan 22,5 µg untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 2000 ppm, 2500 ppm, 3000 ppm, 3500 ppm, 4000 ppm, dan 4500 ppm. Larutan induk kelompok kombinasi 1:3 di ambil sebanyak 10 µg, 12,5 µg, 15 µg, 17,5 µg, 20 µg, dan 22,5 µg untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 2000 ppm, 2500 ppm, 3000 ppm, 3500 ppm, 4000 ppm, dan 4500 ppm.  Masing-masing  seri  larutan  konsentrasi  di  ambil  sebanyak  30  µL  kemudian ditambahkan dengan 30 µL larutan FeCl 3 dan 240 µL larutan TPTZ dalam microplate 96 well [17]. Campuran diinkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit di tempat gelap pada suhu ruang. Diukur serapannya pada panjang gelombang 615 nm menggunakan ELISA yang diamati selama 15-30 menit [18].

## Analisis Data
Data absorbansi diukur dengan menggunakan instrument Spektrofotometri UV- Vis  dan  ELISA  menggunakan rumus persamaan regresi linier (y = bx +  a) sehingga diperoleh  aktivitas  antioksidan  dengan  parameter  %  inhibisi.  Nilai  %  inhibisi  dapat dihitung menggunakan rumus  :
% inhibisi = 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐷𝑃𝑃𝐻−𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐷𝑃𝑃𝐻 𝑥 100 %
Selanjutnya  dilakukan  perhitungan  IC50  yang  merupakan  konsentrasi  sampel  untuk dapat  meredam  50%  aktivitas  radikal  DPPH.  Nilai  IC50  diperoleh  dari  perpotongan garis  antara  50%  daya  inhibisi  dengan  konsentrasi  sampel.  Hasil  perhitungan
dimasukkan ke dalam persamaan regresi (y = a + bx) dengan konsentrasi ekstrak (ppm) sebagai absis (sumbu x) dan nilai % inhibisi sebagai kordinatnya (sumbu y). Persamaan tersebut digunakan untuk menentukan IC50 masing-masing sampel dinyatakan dengan nilai y sebesar 50 dan nilai x yang diperoleh sebagai IC50 [47].

## 3.  Hasil dan Pembahasan

## Hasil Ekstraksi
Hasil ekstraksi sampel kombinasi 1:1 dan 1:3 di nyatakan dalam nilai %rendemen. Rendemen ekstrak yaitu perbandingan hasil dari berat ekstrak yang diperoleh setelah dilakukan  proses  pengentalan  dengan  berat  dari  simplisia  awal.  Perhitungan  persen rendemen  ini  dilakukan  dengan  tujuan  untuk  mengetahui  jumlah  kira-kira  simplisia yang  dibutuhkan  untuk  membuat  sejumlah  tertentu  ekstrak  kental  [19].  Nilai  % rendemen dapat di lihat pada Tabel 1.
Tabel 1 . Rendemen Sampel Ekstrak Sampel Jumlah Ekstrak Kental (g) Rendemen Ekstrak (%) Organoleptis Kulit Kombinasi 1:1 9,6 48 Warna : coklat Bau : bau khas Tekstur : lengket Kulit Kombinasi 1:3 9,4 47 Warna : coklat kehitaman Bau : bau khas Tekstur : lengket dan kental
Organoleptis ekstrak dapat dilihat pada Tabel 1 . Ekstrak kombinasi 1:1 dan 1:3 masing-masing memiliki organoleptis yang hampir sama yaitu berwarna coklat hingga coklat kehitaman pekat, berbau khas campuran pisang dan nanas, serta tekstur kental dan lengket. Hasil organoleptis ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Sari pada tahun 2017 dan Maulida pada tahun 2021, dimana dikatakan bahwa ekstrak kulit pisang kepok dan nanas yang didapat juga berbentuk cairan kental, berwarna coklat kehitaman dan berbau khas [20][21].

## Identifikasi Senyawa Fenolik dengan KLT
KLT dilakukan bertujuan untuk mengetahui ada  tidaknya senyawa fenolik dan flavonoid secara kualitatif sebagai agen antioksidan dalam ekstrak sampel. Penampak bercak  yang  digunakan  untuk  mengidentifikasi  senyawa  fenolik  adalah  FeCl 3 , sedangkan  untuk  senyawa  flavonoid  menggunakan  penampak  bercak  AlCl 3 [22]. Sampel  yang  digunakan  adalah  sampel  tunggal  kulit  pisang  kepok  dan  kulit  nanas. Identifikasi senyawa fenolik di lakukan dengan menggunakan fase gerak toluen : etil asetat  :  asam  asetat  dengan  perbandingan  2:3:0,1.  Pemilihan  eluen  campuran  ini didasarkan  pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Susanti  pada  tahun  2017  yang menyatakan bahwa  fase  gerak  yang  paling  baik  untuk  memisahkan  senyawa fenolik adalah toluen : etil asetat [23][24]. Hasil profil kromatogram senyawa fenolik dapat di lihat pada Tabel 2.
Tabel 2 . Hasil Identifikasi Senyawa Fenolik Sampel UV 254 nm UV 366 nm FeCl 3 5% Rf Kesimpulan Kulit Pisang Hitam Merah pucat Biru kehitaman 0,55 (+) fenol Kulit Nanas Hitam Merah Biru kehitaman 0,54 (+) fenol
Berdasarkan  pada  hasil  profil  kromatogram  masing-masing  sampel menunjukkan spot noda berwarna biru kehitaman dan ungu kehitaman pada Rf 0,55 dan 0,56 pada sampel setelah di semprot dengan pereaksi FeCl 3 . Hal ini menandakan bahwa sampel positif mengandung fenol. Suatu sampel dikatakan positif mengandung senyawa fenol apabila setelah di semprot dengan pereaksi FeCl 3 menunjukkan adanya perubahan warna bercak menjadi biru, ungu, hijau kehitaman [25]. Warna yang terjadi karena adanya ikatan antara gugus hidroksil pada fenol dengan Fe. Senyawa fenolik menyerap sinar di daerah UV pendek dan dapat dideteksi pada lempeng silika gel yang mengandung indikator fluorosensi pada 254 nm, terlihat sebagai bercak gelap dengan latar belakang berfluorosensi [26].

## Identifikasi Senyawa Flavonoid dengan KLT
Identifikasi  senyawa  dilanjutkan  pada  uji  penegasan  yaitu  uji  identifikasi senyawa  flavonoid.  Fase  gerak  yang  umum  digunakan  pada  identifikasi  senyawa flavonoid yaitu butanol : asam asetat : air dengan perbandingan 6:1:3. Pemilihan eluen campuran n-butanol : asam asetat : air (BAA) dikarenakan jenis campuran eluen ini yang mampu memberikan pemisahan senyawa yang terbaik [27].
Tabel 3 . Hasil Identifikasi Senyawa Flavonoid Sampel UV 254 nm UV 366 nm Rf Kesimpulan Kulit Pisang - - - - Hijau kekuningan Merah Biru pucat Hijau pudar 0,63 0,69 0,82 0,88* (+) flavonoid Kulit Nanas - - - - Kuning Biru pudar Hijau kuning Merah 0,46 0,71 0,83* 0,92 (+) flavonoid
Keterangan : (*) Rf senyawa flavonoid
Hasil  profil  kromatogram  dapat  dilihat  pada Tabel  3 .  Pada Tabel  3 setelah disemprot  dengan  penampak  bercak  AlCl 3 10%,  masing-masing  memiliki  spot berfluorosensi hijau pudar dan kuning pada UV 366 nm dengan Rf mendekati 0,88 yaitu Rf 0,88 dan Rf 0,83 menunjukkan adanya flavonoid. Hal ini sejalan dengan penelitian yang  dilakukan  oleh  Lumowa  pada  tahun  2018  [28]  yang  menyatakan  bahwa  kulit pisang  kepok  mengandung  flavonoid.  Selain  itu  nilai  Rf  0,88  merupakan  nilai  Rf flavonoid sehingga ekstrak kulit pisang dan nanas positif mengandung flavonoid [29]. Sedangkan spot fluorosensi  berwarna merah pada  Rf 0,69  pada sampel kulit pisang menunjukkan adanya klorofil. Identifikasi kandungan klorofil pada kulit pisang kepok sebelumnya  dilakukan  oleh  Kusuma  pada  tahun  2018,  yang  mengidentifikasi  spot berwarna merah merupakan adanya klorofil [30]. Selain flavonoid, terdapat spot noda fluorosensi yang berwarna biru pucat, di duga senyawa tersebut merupakan katekin, salah  satu  golongan  flavonoid  [31].  Kandungan  katekin  pada  kulit  pisang  kepok
sebelumnya  telah  di  teliti  secara  kuantitatif  oleh  Rezeki  pada  tahun  2020  [32]  yang menyatakan bahwa pada kulit pisang kepok terdapat kandungan katekin dengan kadar sebesar 17,10%.
Pada  sampel  kulit  nanas  dengan  Rf  0,46  didapati  bercak  berwarna  kuning, diduga senyawa tersebut adalah salah satu senyawa golongan flavonoid yaitu flavonol. Senyawa  flavonol  ketika  di  reaksikan  dengan  penampak  bercak  akan  menunjukkan fluorosensi  berwarna  kuning  [31].  Penelitian  Setiawan  pada  tahun  2016  [33]  juga menunjukkan  bahwa  ekstrak  kulit  nanas  mengandung  golongan  flavonoid  yaitu flavonol.

## Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPH
Tahap  selanjutnya  dilanjutkan  dengan  analisis  aktivitas  antioksidan  sampel dengan menggunakan metode DPPH. Hasil uji aktivitas antioksidan sampel kombinasi 1:1 dan 1:3 pada metode DPPH dinyatakan dengan nilai IC 50 yang telah dihitung dengan menggunakan regresi linear antara %inhibisi dan konsentrasi sampel. Hasil uji aktivitas antioksidan metode DPPH dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4 . Hasil analisis aktivitas antioksidan metode DPPH Sampel Nilai IC50 (ppm) Rata-rata Nilai IC50 ± RSD Kombinasi kulit pisang : nanas (1:1) 1236,71 1160,81 1167,29 1188,27 ± 3,54 Kombinasi kulit pisang : nanas (1:3) 737,14 724,61 761,18 740,98 ± 2,49
Pada kelompok kombinasi 1:1 dan 1:3 menunjukkan kelompok yang memiliki nilai IC 50 lebih kecil adalah kelompok kombinasi 1:3 yaitu sebesar 740,98 ppm. Adanya kandungan  senyawa  flavonoid  pada  ekstrak  kulit  nanas  maupun  kulit pisang  kepok menyebabkan ekstrak tersebut memiliki aktivitas antioksidan. Hal ini terutama nampak secara  nyata  pada  ekstrak  kulit  nanas  yang  mampu  memberikan  efek  peningkatan aktivitas antioksidan terhadap ekstrak kulit pisang kepok pada sampel kombinasi 1:3, dimana  jumlah  perbandingan  kulit  nanas  lebih  banyak  di  bandingkan  dengan  kulit pisang kepok. Penelitian yang dilakukan oleh Rini pada tahun 2017 [35] menyatakan bahwa  senyawa  flavonoid  yang  terkandung  dalam  kulit  buah  nanas  merupakan senyawa  turunan  flavonoid  yaitu  dihidroflavonol.  Senyawa  flavonoid  merupakan senyawa golongan polifenol yang memiliki banyak gugus hidroksi (OH) [36]. Flavonoid pada  ekstrak  kulit nanas  bertindak  sebagai free  radical  scavengers dengan  melepaskan atom  hidrogen  dari  gugus  hidroksilnya  [37].  Atom  hidrogen  yang  dilepaskan  ini memiliki kemampuan untuk berikatan dengan radikal bebas DPPH, hingga bermuatan netral. Flavonoid yang kehilangan atom hidrogen kemudian mengalami resonansi dari gugus hidroksil yang menyebabkan energi aktivitasnya berkurang dan tetap stabil [38]. Aktivitas  antioksidan  pada  sampel  akan  berbanding  lurus  dengan  jumlah  senyawa bioaktif seperti flavonoid, dimana semakin banyak senyawa flavonoid maka aktivitas antioksidan akan semakin meningkat [39]. Maka dapat dikatakan bahwa kelompok 1:3 memiliki  kandungan  senyawa  flavonoid  yang  yang  lebih  banyak  di  bandingkan kelompok kombinasi lainnya.

## Uji Aktivitas Antioksidan Metode FRAP
Uji  aktivitas  antioksidan  selanjutnya  dilakukan  dengan  metode  FRAP. Kemampuan  aktivitas  antioksidan  pada  masing-masing  seri  konsentrasi  di  lakukan
Fu  et al., 2023; Indonesian Journal of Pharmacetical Education (e-Journal); 3(2): 235-246
secara triplo dan di ambil data nilai rata-rata nya. Hasil dinyatakan dalam nilai IC 50 yang dihitung  dengan  persamaan  regresi  linear  antara  %inhibisi  dan  konsentrasi  sampel. Hasil uji aktivitas antioksidan metode FRAP dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5 . Hasil analisis aktivitas antioksidan metode FRAP Sampel Nilai IC50 (ppm) Rata-rata Nilai IC50 ± RSD Kombinasi kulit pisang : nanas (1:1) 1262,22 1222,14 1271,20 1251,85 ± 2,09 Kombinasi kulit pisang : nanas (1:3) 2201,05 2187,90 2267,86 2218,94 ± 1,93
Aktivitas  antioksidan  pada  metode  FRAP  dipengaruhi  oleh  kandungan senyawa  pada  ekstrak  kulit  nanas  dan  kulit  pisang  kepok  yaitu  senyawa  flavonoid. Senyawa  flavonoid  sampel  mampu  untuk  mereduksi  Fe 3+ menjadi  Fe 2+ dengan mekanisme mereduksi FeCl 3 . Daya reduksi ekstrak sering digunakan sebagai indikator aktivitas  antioksidan  yang  potensial.  Ekstrak  yang  memiliki  kemampuan  reduksi mengindikasikan  bahwa  ekstrak  tersebut  merupakan  pendonor  elektron  yang  dapat mereduksi ion-ion metal yang mempercepat proses oksidasi sehingga dapat berfungsi sebagai  antioksidan  sekunder  [40].  Sehingga  dari  hasil  penelitian,  kelompok  sampel yang dapat menghasilkan daya reduksi yang paling baik adalah kelompok kombinasi 1:1.
Namun hal ini tidak sejalan dengan hasil pada metode DPPH, dimana kelompok yang menghasilkan aktivitas antioksidan yang paling baik adalah kelompok 1:3. Hal ini dapat disebabkan oleh penurunan kemampuan daya reduksi dari senyawa antioksidan yang  disebabkan  oleh  kondisi  asam  pada  uji  FRAP  yang  secara  umum  dapat menurunkan kemampuan reduksi senyawa antioksidan  akibat dari  protonasi  asam [41].  Kemampuan  senyawa  antioksidan  mereduksi  Fe 3+ pada    kondisi  asam diperkirakan berkurang akibat pada atom oksigen yang  terionisasi terstabilkan dengan lebih baik oleh asam [42].

## 4.  Kesimpulan
Jenis kombinasi yang menunjukkan aktivitas antioksidan yang lebih baik dari metode DPPH adalah pada kelompok sampel kombinasi pisang : nanas sebesar 1:3, pada metode FRAP aktivitas antioksidan yang lebih baik adalah kelompok perbandingan 1:1. Metode  DPPH  lebih  efektif  di  bandingkan  dengan  metode  FRAP  berdasarkan  pada mekanisme  menangkal  radikal  bebas  senyawa  antioksidan  yang  terkandung  dalam sampel.

## Referensi
[1] Hani,  R.C., Milanda, T. Review : Manfaat Antioksidan pada Tanaman Buah di Indonesia. Jurnal Farmaka . 2016;14:184-190.
[2] Pratiwi,  D., Wahdaningsih,  S., Isnindar.  The  Test  of  Antioxidant  Activity  from Bawang  Mekah  Leaves  (Eleutherine  americana  Merr.)  Using  DPPH  (2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl) Method . Journal Trad Med . 2013;18:9-16.
[3] Widya,  Max,  Gayatri.  Kandungan  Flavonoid  dan  Kapasitas  Antioksidan  Total Ekstrak Etanol  Daun Binahong ( Anredera cordifolio (Ten.) Steenis.). Jurnal Ilmiah Farmasi . 2013;2:30-36.
[4]   Zuhrina.  Pengaruh  Penambahan  Tepung  Kulit  Pisang  Raja  ( Musa  paradisiaca ) terhadap Daya Terima Kue Donat. Skripsi, Universitas Sumatera Utara; 2011.
[5]      Syauqi,  A.,  Inasari,  S.S.  Pemanfaatan  Limbah  Kulit  Nanas  ( Ananas  comosus L.) menjadi  Bioetanol  dengan  Penambahan  Ragi  (Saccharomyces  cerevisiae)  yang Berbeda. Jurnal LOUPE . 2020;16:67-73.
[6]   Saputri, A.P., Augustina, I., Fatmaria. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air Kulit Pisang Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana (ABB cv )) dengan Metode ABTS (2,2  azinobis  (3-etilbenzotiazolin)-6-asam  ethanol)  pada  Berbagai  Tingkat Kematangan. Jurnal Kedokteran . 2020;8:973-980.
[7]   Hatam, S.F., Suryanto, E., Abidjulu, J. Aktivitas Antioksidan Dari Ekstrak Kulit Nanas ( Ananas comosus (L.) Merr). Jurnal Ilmiah Farmasi Pharmacon . 2013;2:8-11.
[8]   Lingga,  L. The  Healing  Power  of  Anti-oxidant .  Jakarta:  Elex  Media  Komputindo; 2012.
[9]   Pusmarani, J., et al . Antioxidant Activity Assay of Combination of Purified Extract of Banana Peel (Musa paradisiaca Sapientum) and Andrographis Paniculata Leaves. Journal of Global Pharma Technology . 2020;12:98-104.
[10]   Fidrianny,  I.,  Virna,  V.,  Insanu,  M.  Antioxidant  Potential  of  Different  Parts  of Bogor  Pineapple (Ananas  comosus  L.) Cultivated  in  West  Java  Indonesia. Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research . 2018;11:129-133.
[11]   Pridatama,  Y.  (2021).  Studi  Komparatif  Metode  DPPH  dan  FRAP  terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Telur Keong Mas ( Pomaceae cannaliculata ). Jurnal Perikanan dan Kelautan . 2021;1:30-45.
[12]   Nurulainia.  Uji  Fitokimia  Infusa  Pekat  Buah  Pare  ( Momordicacharantia L.)  dan Pengaruh Lama Terapi dengan Variasi Dosis terhadap Penurunan Kadar Glukosa Tikus  ( Rattus  Norvegicus )  yang  Diinduksi  Aloksan.  Skripsi,  Universitas  Negeri Islam Malang; 2017.
[13]   Husna,  F.,  Mita,  S.R.  Identifikasi  Bahan  Kimia  Obat  dalam  Obat  Tradisional Stamina  Pria  dengan  Metode  Kromatografi  Lapis  Tipis. Jurnal  Farmaka . 2020;18:16-25.
[14]   Purwanto,  D.,  Bahri,  S.,  Ridhay,  A.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Buah Purnajiwa  ( Kopsia  arborea Blume.)  dengan  Berbagai  Pelarut. Jurnal  Riset  Kimia Kovalen . 2017;3:24-32.
[15]   Marianne, Patilaya, P., Barus, B.T. Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak Etanol  Rimpang  Temu  Giring  ( Curcuma  Heyneana )  dan  Daun  Pugun  Tanoh (Curanga  Fel-Terrae )  Menggunakan  Metode  Diphenyl  Picrylhydrazil  (DPPH). Jurnal Tropical Medicine . 2018;2:398-404.
[16]   Erianto,  V.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  The  Fermentasi  Daun  Cengkodok ( Melastoma  malabathricum  L. )  dan  Daun  Gaharu  ( Aquilaria  malaccensis Lamk.)
Fu  et al., 2023; Indonesian Journal of Pharmacetical Education (e-Journal); 3(2): 235-246
menggunakan  Starter Lactobacillus  casei .  Skripsi,  Universitas  Tanjungpura Pontianak; 2019.
[17]   Wahyuni,  R.,  Guswandi,  Rivai,  H.  Pengaruh  Cara  Pengeringan  dengan  Oven, Kering Angin, dan Cahaya Matahari Langsung terhadap Mutu Simplisia Herba Sambiloto. Jurnal Farmasi Higea . 2014;6:126-133.
[18] Maryam,  S.T.,  Baits,  M.,  Nadia,  A.  Pengukuran  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Daun  Kelor  ( Moringa  oleifera Lam.)  menggunakan  Metode  FRAP  ( Ferric Reducing Antioxidant Power ). Jurnal Fitofarmaka Indonesia . 2016;2:115-118.
[19]   Kartikasari,  D.,  Nurkhasanah, Pramono,  S. Karakterisasi  Simplisia  dan Ekstrak Etanol Daun Bertoni (Stevia rebaudiana ) dari Tiga Tempat Tumbuh. Jurnal Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan . 2017;15:145-151.
[20]   Sari,  R.,  Riyanta,  A.,  Wibawa,  A.  Formulasi  dan  Evaluasi  Sabun  Padat Antioksidan Ekstrak Maserasi Kulit Buah Pisang Kepok (Musa normalis L.). Jurnal Para Pemikir . 2017;6:151-155.
[21]   Maulida,  R.,  Rahmawati,  I.,  Aisyah,  S. Potensi  Antibakteri  Sediaan  Sabun  Cair Ekstrak Kulit Nanas ( Ananas comosus L.) terhadap bakteri Staphylococcus aureus
ATC 25923. Jurnal Farmasi & Sains Indonesia . 2021;4:1-11.
[22]  Wagner,  H.,  Bladt,  S.,  Zgainski,  E.M. Plant  Drug  Analysis  A  Thin  Layer Chromatography Atlas . Berlin : Springer-Verlag Berlin Heidelberg; 1984.
[23]   Susanti, N., et al . Identifikasi Senyawa Golongan Fenol dari Ekstrak Etanol Daun Sirih Hijau ( Piper bettle Linn) dengan Metode KLT-Spektrofotodensitometri. Jurnal Metamorfosa . 2017;4:108-113.
[24]   Markham, K.R. Cara Mengidentifikasi Flavonoid . Bandung : Penerbit ITB; 1988.
[25]  Puspitowati, O.H., Ulfah, M., Sasmito, E. Uji Aktivitas Imunostimulator Fraksi Air dari  Ekstrak  Etanol  Kelopak  Bunga  Rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  terhadap Proliferasi  Sel  Limfosit  Mencit  Galur  Swiss  secara in  vitro beserta  Identifikasi Kandungan Kimia nya. Jurnal Kimia Farmasi . 2018;3:23-31.
[26]   Harborne, J.B. The Flavonoids . London : Chapman and Hall; 1975.
[27]   Rahmaheni,  R.A.,  Pratiwi,  L.,  Apridamayanti,  P.  Uji  Identifikasi  Senyawa Kuersetin Dalam Ekstrak N-Heksan Daun Senggani ( Melastoma malabathricum L.) Menggunakan Metode Kromatogafi Lapis Tipis. Jurnal UNTAN . 2017;2:1-6.
[28]   Lumowa, S., Bardin, S. Uji Fitokimia Kulit Pisang Kepok (Musa paradisiaca L.) Bahan  Alam  sebagai  Pestisida  Nabati  Berpotensi  Menekan  Serangga  Hama Tanaman Umur Pendek. Jurnal Sains dan Kesehatan . 2018;1:465-469.
[29]   Putri,  M.A.,  Purwati,  E.,  Safitri,  C.  Formulasi  dan  Uji  Mutu  Fisik  Sabun  Padat Ekstrak Kulit Nanas ( Ananas comosus L.). Jurnal Mulawarman Pharm . 2021;4:275- 281.
[30]   Kusuma, S.A., Febrianti, M., Saraswati, A. Comparison of Unripe Banana Peel of Kepok ( Musa paradisiaca L.) and Klutuk ( Musa balbisiana Colla) : Phytochemical and  Anti-dysenteriae  Activity. Journal  of  Pharmaceutical  Sciences  and  Research . 2018;10:911-914.
[31]   Robinson,  T.,  Kosasih,  P. Kandungan  Organik  Tumbuhan  Tinggi .  Bandung  :  ITB; 1995.
[32]   Rezeki,  D.S.,  Solikhati,  D.,  Azizah,  H.  Penentuan  Kadar  Katekin  Ekstrak  Kulit Pisang  Kepok  Kuning  ( Musa  balbisiana )  dan  Putih  ( Musa  paradisiaca L.)  secara Spektrofotometri UV-Vis. Jurnal SEMNAS LPPM . 2020;6:130-135.
[33]   Setiawan,  M.H.,  Mursiti,  S.,  Kusumo,  E.  Aisolasi  dan  Uji  Daya  Antimikroba Ekstrak Kulit Nanas ( Ananas comosus L.). Jurnal MIPA . 2016;39:128-134.
[34]   Utomo,  A.,  Suprijono,  A.,  Risdianto,  A.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Kombinasi Ekstrak  Sarang  Semut  (Myrmecodia  pendans)  &  Ekstrak  The  Hitam  (Camellia sinensis)  dengan  Metode  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Jurnal  Farmasi Indonesia . 2020;7:1-10.
[35]   Rini, A.R.S., Supartono, Wijayati, N. Hand Sanitizer Ekstrak Kulit Nanas sebagai Antibakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia coli . Indonesian Journal of Chemical Science . 2017;6:61-66.
[36]   Latifah. Identifikasi Senyawa Golongan Flavonoid dan Uji Aktivitas Antioksidan pada  Ekstrak  Rimpang  Kencur Kaempheria  galanga L.  dengan  Metode  DPPH. Skripsi, Universitas Islam Negeri Malang; 2015.
[37]   Geissman, T.A. The Chemistry of Flavonoid Counpound . Oxford : Pergamon Press; 1962.
[38]   Pambudi,  A., et  al .  Identifikasi  Bioaktif  Golongan  Flavonoid  Tanaman  Anting- anting  ( Acalypha  indica L.). Jurnal  Al-Azhar  Indonesia  Seri  Sains  dan  Teknologi . 2014;2:178-187.
[39]   Fadhilah, Z.H., Perdana, F., Syamsudin, R. Review : Telaah Kandungan Katekin dan Epigalokatekin Galat (EGCG) sebagai Antioksidan pada Berbagai Jenis Teh. Jurnal Pharmascience . 2021;8:31-44.
[40]   Cepeda,  G.N., et  al .  Aktivitas  Penangkalan  Radikal  Bebas  dan  Kemampuan Reduksi  Ekstrak  Kulit  Kayu  Akway  ( Drimys  piperita ). Jurnal  Aplikasi  Teknologi Pangan . 2018;7:168-173.
[41]   Sharma,  O.P.,  Bhat,  T.K.  DPPH  antioxidant  assay    revisited. Journal  Food Chemistry . 2009;11:1202-1205.
[42]   Maesaroh,  K.,  Kurnia,  D.,  Anshori,  J.A.  Perbandingan    Metode    Uji    Aktivitas Antioksidan  DPPH, FRAP  dan  FIC Terhadap Asam Askorbat, Asam Galat dan Kuersetin. Jurnal Chemica et Natura Acta . 2018;6:93-100.
[43]   Purnomo, H., Syamsul, E.S. Statistika Farmasi. Yogyakarta : Grafika Indah; 2017.
[44]   Setiawan, V., et al .  Rapid Screening Analysis of Antioxidants Activities in Green Tea  Products  Using  DPPH  and  FRAP.  Pharmaceutical  Journal  of  Indonesia. 2021;7:9-14.
[45]   Cahyani,  A.I.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  dari  Ekstrak  Kulit  Batang  Kayu  Jawa (Lannea  coromandelica)  dengan  Metode  DPPH  (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil). Skripsi, Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah; 2017.
Fu  et al., 2023; Indonesian Journal of Pharmacetical Education (e-Journal); 3(2): 235-246
[46]   Shian, T.E., et al . Antioxidants Properties of Three Banana Cultivars (Berangan, Mas, and Raja) Extracts. Journal Sains Malaysiana. 2012;41:319-324.
[47]   Zahra Shafirany, M., Indawati, I., & Singgih, I. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kelopak  Bunga  Rosela  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  Asal  Daerah  Sukabumi  Provinsi Jawa Barat. Medical Sains. 2021;6(1):35-44.