## PATHOGENICITY OF HYDROLYTIC BACTERIA ISOLATED FROM BIOMEDICAL WASTEWATER AT DR. SLAMET HOSPITAL
Mamay 1* , N. Ai Erlinawati 1 , Zahara Farhan 1 , Rina Herlina 2 , Ranti Nurwantika 2 , Elsa Zalfa Agustin 1
1 STIKes Karsa Husada Garut, Jl. Nusa Indah No.24, Jayaraga, Kec. Tarogong Kidul, Kabupaten Garut, Jawa Barat 44151, Indonesia
2 RSUD dr. Slamet Garut, Jl. RSU dr. Slamet No. 12, Sukakarya, Kec. Tarogong Kidul, Kabupaten Garut, Jawa Barat 44151, Indonesia
*Corresponding author: Mamay (mamay@stikeskhg.ac.id)

## ARTICLE HISTORY
Received:  28 January 2023                            Revised:  14 July 2023                                         Accepted: 22 July 2023

## Abstract
Low pathogenic to non-pathogenic are the criteria for bacteria as bioremediation agents for  biomedical  wastewater.  Indigenous  bacteria  produce  enzymes  that  degrade components contained in liquid biomedical waste, such as carbohydrates, proteins, and fats.  Bacteria  metabolize  organic  substances  to  reduce  the  growth  of  pathogenic microorganisms.  In  addition,  bioremediation  with  indigenous  bacteria  with  low pathogenicity  can  reduce  the  danger  of  contamination  and  infection  from  pathogenic microorganisms.  The  purpose  of  this  study  was  to  describe  the  pathogenicity  of hydrolytic bacteria isolated from biomedical wastewater. The research is descriptive that using samples of biomedical  wastewater from RSUD dr. Slamet Garut. Sampling was carried out using the Cluster Random Sampling technique at the shelter, inlet, and outlet. Isolation of protease and lipase bacteria using skimmed milk agar and rhodamine agar screening  media.  Bacterial  pathogenicity  testing  by  growing  bacteria  on  mac  conkey agar,  blood  agar,  and  chocolate  agar.  On  isolated  screening  media,  89  colonies  of protease-producing bacteria and 76 colonies of lipase were isolated. Pathogenicity test showed  protease-producing  bacteria  with  low  pathogenicity  of  21,3%,  moderate 27%, high  36%,  very  high  4,5%,  extra  high  11,2%,  and  lipase-producing  bacteria  with  low pathogenicity of 20%, moderate 45%, high 30%, very high 4% and extra high 1%. The research  found  that  some  of  the  bacteria  producing  protease  and  lipase  had  low pathogenicity as candidates for bioremediation agents.
Keywords: biomedical wastewater, hydrolytic bacteria, lipase, pathogenicity, protease

## PATOGENITAS BAKTERI HIDROLITIK YANG DI ISOLASI DARI LIMBAH CAIR BIOMEDIS DI RSUD DR. SLAMET

## Abstrak
Bakteri patogen rendah sampai non patogen merupakan kriteria bakteri sebagai agen bioremediasi  limbah cair biomedis. Bakteri  indigen menghasilkan enzim pendegradasi komponen yang terkandung limbah biomedis cair seperti karbohidrat, protein dan lemak. Bakteri  yang  memetabolisme  zat-zat  organik  dapat  mengurangi  berkembang  biaknya mikroorganisme patogen. Selain itu, bioremediasi dengan bakteri indigen dengan bakteri patogenitas  rendah  dapat  mengurangi  bahaya  kontaminasi  dan  infeksi  dari mikroorganisme patogen. Tujuan penelitian ini mengetahui patogenitas bakteri hidrolitik yang diisolasi dari  limbah cair biomedis di RSUD dr. Slamet Garut. Penelitian bersifat deskriptif  menggunakan  sampel  limbah  cair  biomedis  dari  RSUD  dr.  Slamet  Garut. Pengambilan  sampel  dilakukan  dengan  teknik Cluster  Random  Sampling pada penampungan,  inlet  dan  outlet.    Isolasi  bakteri  protease  dan  lipase  dengan  media skrining  susu  skim  agar  dan  rhodamin  agar.  Pengujian    patogenitas  bakteri  dengan menumbuhkan bakteri pada agar mac conkey, agar darah dan agar coklat. Pada media skrining  terisolasi bakteri penghasil protease sebanyak 89 koloni dan lipase sebanyak 76 koloni. Uji patogenitas menunjukan bakteri penghasil protease dengan patogenitas rendah 21,3%, sedang 27%, tinggi 36%, sangat tinggi 4,5%, ekstra tinggi 11,2%  dan bakteri  penghasil  lipase  dengan  patogenitas  rendah  20%,  sedang  45%,  tinggi  30%, sangat  tinggi  4%  dan  ekstra  tinggi  1%.  Dari  penelitian  diperoleh  bakteri  penghasil protease  dan  lipase  dengan  sebagian  kecil  memiliki  patogenitas  rendah  sebagai kandidat agen bioremediasi.
Kata kunci: bakteri hidrolitik, limbah cair biomedis, lipase, patogenitas, protease

## Pendahuluan
Kegiatan di rumah sakit menghasilkan limbah cukup banyak. Limbah rumah sakit dikategorikan sebagai limbah berbahaya dapat berupa limbah patologis seperti darah, urin,  cairan  tubuh,  organ  tubuh,  limbah  farmasi,  limbah  kimia  dan  limbah  radioaktif. Diperkirakan  Indonesia  memproduksi  limbah  biomedis  cair  dari  rumah  sakit  sebesar 48.985  ton/hari. 1 Limbah  lain  juga  dihasilkan  berasal  dari  dapur,  air  bekas  pencucian pakaian,  air  bekas  cucian  luka,  cucian  darah. 2 Selain  itu  juga  limbah  cair  biomedis mengandung kadar BOD, COD, amoniak (NH 3 ), dan  kadar bakteri koliform yang tinggi. 3 Pengelolaan limbah cair medis diperlukan untuk menyelamatkan lingkungan hidup dari  gangguan  zat  pencemar  yang  berasal  dari  buangan  limbah  tersebut.  Dengan pengelolaan yang baik, sisa limbah jika dibuang ke lingkungan dapat diminimalkan dan tidak  menimbulkan  dampak  negatif  bagi  lingkungan  rumah  sakit  maupun  ekosistem lingkungan  sekitar  rumah  sakit  tersebut. 4 Akumulasi  limbah  domestik  dan  limbah biomedis  cair  yang  dihasilkan  dari  air  limbah  rumah  sakit  memiliki  polutan  organik dengan konsentrasi tinggi, sehingga limbah cair tersebut  dapat diolah secara biologis. 3 Di  Indonesia,  pengolahan  limbah  biomedis  seringkali  diolah  oleh  Instalasi Pengolahan  Air  Limbah  (IPAL)  di  masing-masing  rumah  sakit.  Akan  tetapi, pembangunan  IPAL  diperlukan  biaya  yang  tidak  sedikit.  Oleh  sebab  itu,  diperlukan metode lain untuk pengelolaan limbah cair biomedis yang efektif, ramah lingkungan, dan lebih ekonomis yaitu dengan proses bioremediasi yang memanfaatkan aktivitas mikroba seperti bakteri indigen yang tumbuh dalam polutan. 5 Penumbuhan bakteri  indigen pada polutan tertentu merupakan langkah untuk menurunkan kadar polutan limbah tersebut. 6
Bioremediasi merupakan teknik remediasi dengan pemanfaatan mikroorganisme untuk pemulihan kondisi lingkungan. Proses ini  dipandang jauh lebih  murah dan efektif dibandingkan  teknik  remediasi  dengan  cara  fisika  ataupun  kimia.  Pada  saat  proses bioremediasi,  enzim  yang  diproduksi  oleh  bakteri  akan  memetabolisme  zat-zat  dalam limbah sehingga dapat memodifikasi struktur yang menjadi tidak kompleks . Hal tersebut akan merubah metabolit yang awalnya berbahaya menjadi metabolit yang tidak beracun dan tidak berbahaya. 6 Mikroorganisme dan enzim merupakan agen biologis utama pada proses  bioremediasi.  Enzim  yang  dikenal  luas  penggunaannya  dalam  proses bioremediasi limbah cair adalah enzim lipase dan protease. 7 Enzim protease dan lipase yang  diproduksi  dalam  bakteri  indigen    berperan  penting  dalam  pendegradasian biomassa dan bahan organik. 8 Enzim protease menghidrolisis ikatan polipeptida protein menghasilkan peptide dan asam amino. Enzim lipase menghidrolisis lemak dan minyak menjadi senyawa yang lebih sederhana yaitu asam lemak.
Kriteria  bakteri  agen  bioremediasi  dapat  menggunakan  bakteri  indigen  limbah dengan patogenitas dan non patogen. Selain itu, bakteri mampu menghasilkan enzim pendegradasi  bahan  limbah  yang  terdapat  dalam  limbah  biomedis  cair  seperti karbohidrat,  protein  dan  lemak. 9 Bakteri  hidrolitik    dengan  tingkat  patogenitas  yang rendah hingga non patogen, juga dapat memetabolisme zat-zat organik. Melalui proses pendegradasi  zat  dalam  limbah  dapat  mengurangi  kemungkinan  mikroorganisme patogen dapat berkembang biak. Selain itu, proses pendegradasian ini juga mengurangi resiko bahaya kontaminasi dan infeksi akibat dari  mikroorganisme patogen tersebut. 10 Pengolahan  limbah cair  biomedis  di  RSUD  dr.  Slamet  Garut menggunakan alat IPAL.  Berdasarkan  data  laporan bulanan  IPAL,  diperoleh  data mengenai  kadar  COD, BOD  dan  amoniak  didapatkan  kadar  limbah  cair  biomedis  sedikit  melebihi  dari  kadar maksimum, sehingga diperlukan  langkah pengolahan tambahan untuk memaksimalkan prosesnya. Berdasarkan uraian latar belakang di atas, peneliti tertarik untuk melakukan penelitian mengenai patogenitas bakteri hidrolitik dari limbah cair biomedis di RSUD dr. Slamet  Garut.  Setelah  mengetahui  gambaran    patogenitas    bakteri  hidrolitik,  ke depannya memungkinkan untuk melakukan karakterisasi bakteri  dengan  patogenitas rendah dan mengaplikasikan dalam proses bioremediasi limbah medis.

## Metode

## Alat
Peralatan  yang  diperlukan  dalam  penelitian  ini  antara  lain laminar  air  flow , timbangan  analitik,  erlenmeyer  100ml,  oven,  ose  bulat,  cawan  petri,  tabung  reaksi, lampu UV, autoclave, bunsen, inkubator, aluminium foil, parafilm, label, dan tisu.

## Bahan dan Media
Bahan sampel yang digunakan adalah limbah cair biomedis di RSUD dr Slamet. Media yang digunakan pada penelitian ini yaitu Mac Conkey Agar Plate (MCP), Blood Agar Plate (BAP) , Chocolate Agar Plate (CAP) , dan Nutrient Agar , aquades, susu skim, NaCl fisiologis 0,85%, olive oil , rhodamin B.

## Prosedur Sterilisasi Alat dan Media
Alat  gelas  yang  digunakan  seperti  cawan  petri,  botol  sampel,  dicuci  bersih, dikeringkan dan dibungkus kertas coklat. Proses sterilisasi alat menggunakan oven pada suhu 180 o C selama 1,5 jam. Sterilisasi media agar dilakukan dalam autoclave pada suhu 121 o C selama 15 menit.

## Pembuatan Media Skrining
Pembuatan media skrining lipase, media rhodamin agar dibuat dengan komposisi campuran 2,5% nutrient agar, 2,5 % olive oil (w/v) ditambah 1 tetes Rhodamin B 0,1 %. Media skrining protease, susu skim agar dibuat dengan komposisi  2,5 % nutrient agar, 2,5 % susu skim (w/v). Penambahan rhodamin dan susu skim steril dilakukan setelah media selesai disterilisasi.

## Pembuatan Media Uji Patogenitas
Untuk uji patogenitas menggunakan media agar darah (BAP), mac conkey  (MCP) dan agar coklat (CAP). Masing-masing media BAP, MCP dan CAP ditimbang sebanyak 4,05  gr,  5,50  gr  dan  44  gr,  kemudian  dilarutkan  dengan  100  ml  aquades.  Media dihomogenkan  dengan  pengadukan  dan  pemanasan.  Media  agar  disterilisasi  dengan autoclave. Sebelum penuangan ke dalam cawan petri, pada suhu 40-50 o C media BAP ditambah  5  ml  darah,  sedangkan  CAP  ditambah  5  ml  darah  yang  tidak  mengandung fibrin.

## Pengenceran Sampel
Jumlah  bakteri  pada  limbah  cair  biomedis  sangatlah  tinggi,  untuk  memudahkan mendapatkan koloni tunggal dilakukan pengenceran sampel dilakukan sampai dengan pengenceran  10 -11 .  Pengenceran  10 -1 dibuat  dengan    cara  sampel  sebanyak  1  ml dimasukan ke tabung reaksi yang berisi 9 ml NaCl Fisiologis dan homogenkan. Larutan dengan  konsentrasi  10 -11 diambil  1  ml  dimasukan  ke  dalam  9  ml  NaCl  fisiologis  dan diperoleh pengenceran 10 -2 . Hal yang serupa dilakukan pengenceran sampai diperoleh konsentrasi 10 -11 .

## Isolasi Bakteri Penghasil Lipase
Siapkan  cawan    petri  yang  sudah  diberi  label,  pipet  1  ml  sampel  yang  sudah dilakukan  pengenceran  10 -11 kedalam  cawan    petri,  lalu  tuang  12-15  ml    media  agar Rhodamin  B    yang  sudah  dibuat    dan  cawan  diputar  untuk  proses  homogenisasi, diinkubasi selama 24-48 jam pada suhu 37 o C. Bakteri penghasil lipase tumbuh dengan adanya pendar berwarna orange pada koloni di bawah lampu sinar UV.

## Isolasi Bakteri Penghasil Protease
Sebanyak 1 ml sampel hasil pengenceran 10 -11 dimasukan kedalam cawan petri, lalu tuang 12-15 ml  media susu skim agar  dan dihomogenkan, diinkubasi selama 24- 48 jam pada suhu 37 o C. Bakteri penghasil protease tumbuh dengan adanya zona bening di sekitar koloni.

## Uji Patogenitas
Uji patogenitas dilakukan pada media MCP, BAP, dan CAP.  Media dibagi  menjadi sembilan bagian dengan ditandai pada cawan petri. Setelah itu,  diambil satu ose bakteri hidrolitik yang tumbuh lalu di goreskan pada media dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu  37 o C.  Pada  Media  MCP.  bakteri  yang  memfermentasikan  laktosa  akan  tumbuh dengan  koloni  yang  berwarna  pink.  Aktivitas  yang  terjadi  pada  media  BAP  ditandai dengan  adanya  zona  bening  keemasan    disekitar  koloni  (β  hemolisis),  kehijauan  (α hemolisis) dan tidak ada zona bening di sekeliling koloni bakteri  (γ hemolisis atau non hemolisis).  Pada  media  CAP  akan  menunjukan  koloni Neisseria  meningitidis dan Haemophilus influenza koloninya besar, bulat, halus, cembung, tidak berwarna hingga abu-abu,  buram  koloni  tanpa  perubahan  warna  pada  media,  lalu  pada  koloni Streptococcus  pneumoniae akan terbentuk koloni kecil berwarna abu-abu sampai hijau dengan  zona hemolisis  (hanya  agak  hijau)  sedangkan  Koloni Neisseria  gonorrhoeae berwarna  coklat  kemerah-merahan  dan  tembus  cahaya,  konsistensi  halus  dan  batas tegas, dan biasanya berdiameter 0,5-1 mm. Untuk menentukan hasil patogenitas bakteri
hidrolitik sebagai kandidat agen bioremediasi  diperoleh  berdasarkan penetapan skor patogenitas 11 seperti  pada Tabel 1
Tabel 1. Penetapan Skor Patogenisitas 11
No Hasil Mac conkey plate (MCP) Hasil Blood agar plate (BAP) Hasil Chocolate Agar plate (CAP) Tingkat Patogenitas 1 + β - Tinggi 2 + α - Sedang 3 + γ - Rendah 4 - β - Sangat tinggi 5 - α - Tinggi 6 - γ - Sedang 7 + β + Ekstra tinggi

## Hasil
Penelitian ini dilakukan di laboratorium mikrobiologi STIKes Karsa  Husada Garut dan  di  instansi  sanitasi  RSUD  dr.  Slamet  Garut  sebagai  tempat  pengambilan  sampel limbah  cair  biomedis.    Sampel  limbah  cair  medis  yang  diambil  dari  alat  pembuangan limbah cair yang menggunakan alat IPAL yaitu pada bagian penampungan, inlet, dan outlet    yang  diisolasi  pada  media  skrining  lipase  dan  protease.  Pertumbuhan  bakteri pada media skrining protease dan lipase dapat dilihat pada Gambar 1.  Semua sampel yang telah dilakukan pengamatan didapatkan jumlah koloni total yang tumbuh dan koloni yang berpotensi menghasilkan protease dan lipase dapat dilihat pada  Tabel 2.
(a) (b)
Gambar 1. Pertumbuhan bakteri pada media skrining protease yang menggunakan SMA (a) dan media skrining lipase pada media rhodamin B (b)
Tabel 2. Jumlah Koloni yang Tumbuh pada Media Skrining Protease
Tempat Sampling Media susu skim agar Media rhodamin agar ∑ Koloni total Koloni protease ∑ Koloni total Koloni lipase Penampungan 53 47 70 63 Inlet 38 32 14 8 Outlet 15 10 10 5 Jumlah 106 89 94 76
Setelah dilakukan penanaman pada media skrining lipase dan juga media skrining SMA  selanjutnya  koloni  yang  dinyatakan  positif  mempunyai  enzim  lipase  dan  enzim protease dilanjutkan dengan uji patogenitas yang ditanam pada media MCP,CAP dan BAP (Gambar 2).  Hasil uji patogenitas bakteri hidrolitik  protease dan lipase dapat dilihat pada Tabel  3.
(a) (b) (c)
Gambar 2. Pertumbuhan  bakteri pada uji patogenitas pada meda MCP (a), CAP (b), dan BAP (c)
Tabel 3. Patogenitas Bakteri Penghasil Protease dan Lipase
Tempat Sampling Jumlah bakteri yang berpatogen Total Rendah Sedang Tinggi Sangat tinggi Ekstra tinggi Protease Penampungan 7 8 24 1 7 47 Inlet 10 11 8 0 3 32 Outlet 2 5 0 3 0 10 Jumlah 19 24 32 4 10 89 Persentase 21,3% 27% 36% 4,5% 11,2% 100% Lipase Penampungan 10 32 18 2 1 63 Inlet 4 1 2 1 0 8 Outlet 1 1 3 0 0 5 Jumlah 15 34 23 3 1 76 Persentase 20% 45% 30% 4% 1% 100%

## Pembahasan
Pada  penelitian  ini  sampel  yang  diambil  dari  3  titik  alat  IPAL  yaitu  dari penampungan, inlet dan outlet limbah cair biomedis RSUD dr.Slamet Garut. Pengujian sampel  diawali  dengan  dengan  pengenceran  terlebih  dahulu.  Pengenceran  yang dilakukan  dalam  penelitian  ini  sampai  dengan  pengenceran  dengan  konsentrasi  10 -11 dengan menggunakan NaCl fisiologis karena pada pengenceran ini dapat memudahkan koloni –koloni untuk dapat berpisah pada saat diisolasi pada media skrining lipase dan juga media untuk skrining protease.
Berdasarkan Tabel 2, pada titik penampungan dan inlet didapatkan koloni bakteri lebih banyak karena pada titik  ini merupakan  buangan pertama dari kegiatan rumah sakit.  Limbah cair ini belum masuk pengolahan IPAL dan baru di bak pertama screening untuk  equalisasi  penampungan  dan  pengendapan  sehingga  belum  mendapat pengolahan  khusus.  Penelitian  lain  menyebutkan  tingginya  bakteri  koliform  pada  titik inlet  dan  penampungan  merupakan  indikasi  adanya  bakteri  patogen  dari  spesimen sampel  makhluk  hidup  yang  tercampur  dalam  penampungan.  Hal  tersebut  sejalan dengan  ditemukannya  bakteri  yang  teridentifikasi  sebagai lactosa  fermenter (terlihat koloni  pink)  pada  media  MCP.  Pada  daerah  outlet  terjadi  penurunan    mikrobiologi dikarenakan titik sampling outlet merupakan titik akhir dalam proses IPAL dimana limbah cair  medis  tersebut  sudah  melalui  serangkaian  treatment  ataupun  pengolahan  untuk menurunkan  jumlah bakteri. 12
Pada isolasi bakteri uji skrining enzim protease dengan menggunakan media susu skim  agar    mengandung  protein  susu  kasein  yang  menjadi  sumber  nutrisi  yang  akan dimetabolisme  oleh    bakteri  proteolitik.  Pada  proses  degradasi  kasein  oleh  bakteri, aktivitas  enzim  protease  ekstraseluler  yang  disekresi  bakteri  sehingga  terlihat  zona bening  disekitar  koloni    pada  media.  Zona  bening  yang  terbentuk  karena  adanya protease  yang  menghidrolisis  atau  memutus  ikatan  peptida  pada  protein  unit  peptida yang lebih kecil, yaitu asam amino. 13 Hasil penelitian memperlihatkan dari 89 koloni yang mempunyai  enzim  protease  mempunyai  skor  patogenitas  rendah  sebanyak  19  koloni sebagai kandidat agen bioremediasi.
Isolasi bakteri untuk skrining enzim lipase menggunakan nutrient agar di tambah dengan olive oil , setelah di sterilisasi dan ditambahkan rhodamin B, dimana isolasi ini dilakukan untuk memastikan aktivitas lipase dilakukan uji secara kualitatif dengan cara melihat  pendaran  koloni  di  bawah  sinar  UV.  Besarnya  pendaranan  orange  yang terbentuk di sekitar koloni menandakan banyaknya gliserol hasil reaksi hidrolisis asam lemak olive  oil oleh  lipase. 13 Hasil  penelitian  memperlihatkan  dari  76  koloni  yang mempunyai  enzim  lipase  mempunyai  skor  patogenitas  rendah  sebanyak  16  koloni sebagai kandidat agen bioremediasi.
Untuk  uji  patogenitas  menggunakan  media  MCP,  BAP,  dan  juga  CAP  untuk menentukan  skor  patogenitas.  Pada  media  MCP  bakteri  yang  memfermentasikan laktosa  akan  tumbuh  dengan  koloni  yang  berwarna  pink,  media  MCP  mengandung garam  empedu  ( bile  salts )  dan  kristal  violet  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri gram positif sehingga dapat dijadikan sebagai media selektif. Media MCP juga dapat  menjadi  media  diferensial  karena  kemampuannya  dapat  membedakan  bakteri berdasarkan  kemampuan  memfermentasikan  laktosa.  Patogenitas  yang  dilakukan dengan MCP menunjukan sebagian besar koloni yang diperoleh mampu tumbuh pada media.  Hal  ini  menunjukkan  kemungkinan  bahwa  semua  koloni  tersebut  merupakan kelompok  bakteri  Gram-negatif.  Hal  ini  dikarenakan  media  MCP  menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dengan adanya garam empedu yang akan membentuk kristal  violet,  yang  tidak  menunjukan  koloni  berwarna  pink  hanya  pada  koloni  bakteri protease (P12 dan P30) dan koloni bakteri lipase (L7,L9,L64,L66,L72).
Pengamatan pada media BAP menunjukan pada koloni yang tumbuh pada media skrining protease tumbuh 29 koloni deng an α hemolisis, 40 koloni dengan β hemolisis, dan  20  koloni  dengan  γ  hemolisis.  BAP  merupakan  media  diferensial  untuk membedakan  bakteri  dari  kemampuan  melisiskan  darah.  Bakteri  dengan  penghasil enzim ekstraseluler hemolisin dapat melisiskan sel darah merah pada agar (hemolisis), aktivitas  yang  ini  ditandai  dengan  adanya  zona  jernih  keemasan  di  sekitar  koloni  (β hemolisis), kehijauan (α hemolisis) dan non hemolisis (γ hemolisis).
Penggunaan  CAP  merupakan  bagian  dari  penggunaan  3  media  utama  untuk sistem  skoring  patogenisitas.  Media  CAP  berfungsi  untuk  mengetahui  apakah  isolat bakteri  terpilih  menunjukkan  karakteristik  koloni  bakteri Streptococcus  pneumoniae, Neisseria  meningitidis,  N.  gonorrhoeae dan Haemophilus    influenza .  Hasil  penelitian menunjukan be berapa isolat bakteri yang menunjukkan diameter besar, dan α  hemolisis pada isolat P (2, 10, 13, 17, 21, 22, 33, 56, 62, 63) dan L18. Oleh karena itu, isolat bakteri hidrolitik  tersebut  dikategorikan  dalam  kelompok  tingkat  patogen  ekstra  tinggi. Berdasarkan  ciri-ciri  koloni  yang  tumbuh  pada  media  CAP,  spesies  bakteri  terduga sebagai Streptococcus pneumoniae .
Dari hasil penelitian ini dapat diperoleh bakteri penghasil enzim lipase dan enzim protease dengan sebagian kecil memiliki patogenitas rendah dari limbah cair biomedis RSUD  dr.Slamet  Garut  sebagai  kandidat  agen  bioremediasi  tetapi  harus  dilakukan pemeriksaan  lebih  lanjut.  Bakteri  dengan  karakteristik  tersebut  berpotensi  untuk dijadikan  agen  bioremediasi  limbah  biomedis  cair. 9 Namun  sebelum  dapat  digunakan sebagai  agen  bioremediasi,  diperlukan    uji  lanjutan  karakterisasi  penentuan  spesies bakteri,  sejauh  mana  aktivitas  protease  dan  lipase  dapat  digunakan  dalam  proses
bioremediasi,  dan    pengukuran  mana  kemampuan  bakteri  dalam  memperbaiki parameter limbah cair seperti pH, COD, BOD, TSS, TDS dan lain-lain.

## Kesimpulan
Dari limbah cair RSUD dr.Slamet Garut diperoleh bakteri penghasil protease dan lipase  dengan  sebagian  kecil  memiliki  patogenitas  rendah  sebagai  kandidat  agen bioremediasi.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan terima kasih kepada pihak yang telah membantu dan mendanai penelitian dari LP4M STIKes Karsa Husada Garut

## Daftar Pustaka
1.   Ola-Adisa EO, Mangden YPE, Sati YC, Adisa JO. Knowledge, attitudes/beliefs and practices  in  medical  waste  management-an  appraisal  of  Jos  North  LGA,  Plateau State, Nigeria. Int J Res Humanit Soc Stud [Internet]. 2015;2(12):43 –56. Available from: https://www.ijrhss.org/pdf/v2-i12/5.pdf
2.   Adhani  R.  Pengelolaan  limbah  medis  pelayanan  kesehatan  [Internet].  1st  ed. Lambung Mangkurat University Press. Banjarmasin: Lambung Mangkurat University Press;  2018.  122  p.  Available  from:  http://eprints.ulm.ac.id/2939/1/Buku Pengelolaan limbah medis pelayanan kesehatan_final_26feb2018.pdf.
3.   Mora  YS.  Evaluasi  dimensi  unit  istalasi  pengolahan  air  limbah  domestik  Rumah Sakit dr. Ernaldi Bahar Kota Palembang. J Dampak [Internet]. 2015;12(2):127 –36.
Available from: http://jurnaldampak.ft.unand.ac.id/index.php/Dampak/article/view/53 4.   Naini I, Dahlan H, Mohadi R. Kajian pengolahan limbah cair Rumah Sakit dr. Rivai Abdullah dan analisis resiko terhadap kesehatan lingkungan. Biosci Fak MIPA Univ Sriwij [Internet]. 2015;12(1):60 –77. Available from:
https://repository.unsri.ac.id/13537/1/42_Kajian_Pengolahan_Limbah_Cair_Ruma h_Sakit_Kusta_Dr._Rivai_Abdullah_dan_Analisis_Risiko_terhadap_Kesehatan_Li ngkungan.pdf.
5.   Aliyanta  B,  Sumarlin  LO,  Mujab  AS.  Penggunaan  biokompos  dalam bioremediasi lahan  tercemar  limbah  minyak  bumi.  J  Kim  Val  [Internet].  2012;2(3):430 –42. Available from: https://journal.uinjkt.ac.id/index.php/valensi/article/view/114
6.   Priadie  B.  Teknik  bioremediasi  sebagai  alternatif  dalam  upaya  pengendalian pencemaran  air.  J  Ilmu  Lingkung  [Internet].  2012;10(1):38 –48.  Available  from: https://ejournal.undip.ac.id/index.php/ilmulingkungan/article/view/4094
7.   Supriyatna A, Ukit U. Screening and isolation of cellulolytic bacteria from gut of black soldier flays  larvae (Hermetia  illucens) feeding with  rice straw. Biosaintifika J Biol Biol Educ [Internet]. 2016;8(3):314 –20. Available from: https://journal.unnes.ac.id/nju/index.php/biosaintifika/article/view/6762 8.   Ethica  SN,  Muchlissin  SI,  Saptaningtyas  R,  Sabdono  A.  Sampling  mikrobiologi limbah biomedis Rumah Sakit di Kota Semarang Jawa Tengah. Pros Nas dan Int [Internet]. 2017;1(1). Available from: https://jurnal.unimus.ac.id/index.php/psn12012010/article/view/2889 9.   Ethica SN, Saptaningtyas R, Muchlissin SI, Sabdono A. The development method of  bioremediation  of  hospital  biomedical  waste  using  hydrolytic  bacteria.  Health Technol (Berl) [Internet]. 2018;8(4). Available from:
https://link.springer.com/article/10.1007/s12553-018-0232-8
10.  A  E,  G  G,  R  P,  Et.al.  Screening  of  microbes  producing  extracellular  hydrolytic enzyme  from  corporation  waste  dumping  site  and  house  hold  waste  for  the
enhancement  of  bioremediation  methods.  IOSR  J  Pharm  Biol  Sci  [Internet].
2012;4(1):54 –60. Available
from: https://www.iosrjournals.org/iosr- jpbs/papers/Vol4-issue1/K0415456.pdf
11.  Darmawati  S,  Muchlissin  SI,  Ernanto  AR,  Sulistyaningtyas  AR,  Fuad  H,  Rahman KMZ,  et  al.  Pathogenicity  scoring  system  for  selection  of  bacterial  consortium formulated as bioremediation agent of Hospital Wastewater in Central Java. In: IOP Conference  Series:  Earth  and  Environmental  Science  [Internet].  China:  IOP Conference  Series:  Earth  and  Environmental  Science;  2021.  p.  28 –30.  Available from: https://iopscience.iop.org/article/10.1088/1755-1315/707/1/012003
12.  Sulistiyawati I. Kuantitas total bakteri Coliform pada instalasi pengolahan limbah cair medis laboratorium klinik. J Ilm Univ Batanghari Jambi [Internet]. 2019;19(3):675 –7.
Available from: http://ji.unbari.ac.id/index.php/ilmiah/article/view/718/608
13.  Pricilia S, Astuti W, Marliana E. Skrining bakteri endofit penghasil amilase, lipase dan protease dari daun Macaranga hullettii King ex Hook.f. J At [Internet]. 2018;3(2). Available from: http://jurnal.kimia.fmipa.unmul.ac.id/index.php/JA/article/view/634