ISSN 2354-6565
AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SEDIAAN NANOPARTIKEL KITOSAN EKSTRAK ETANOL KELOPAK ROSELA ( Hibiscus sabdariffa L) PADA TIKUS HIPERKOLESTEROL : PENGUKURAN KADAR MALONDIALDEHID (MDA)
Andi Wijaya, Laela Hayu Nurani, Nurkhasah
Program Pascasarjana Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta andnisa.020410@gmail.com

## ABSTRAK
Pemberian sediaan nanopartikel kitosan ekstrak rosela (NKER) dapat mencegah terjadinya stres oksidatif  karena  mengandung  flavonoid  antosianin  yang  berefek  sebagai  antioksidan.  Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh pemberian sediaan nanopartikel kitosan ekstrak etanol kelopak bunga rosela terhadap aktivitas antioksidan dengan mengukur kadar MDA. Penurunan stres oksidatif dapat diketahui dengan mengukur kadar malondealdehid (MDA) yang dihasilkan oleh  reaksi  peroksidasi  lipid. Penelitian  ini  menggunakan  25  ekor  tikus  dewasa galur  Sprague Dawley yang dibagi menjadi 5 kelompok. Kelompok I diberikan diet pakan standar sebagai base line,  kelompok  II  diinduksi  dengan  kolesterol  murni.  Kelompok  III,  IV  dan  V  diinduksi kolesterol  murni  serta  diberikan  sediaan  NKER  dengan  dosis  berturut-turut  25mg/KgBB,  50 mg/KgBB  dan  100  mg/KgBB.  Perlakuan  dilakukan  selama  30  hari.  Pada  hari  ke  -  31  setiap tikus diambil darahnya untuk pengukuran kadar kolesterol total, serta pengukuran kadar MDA menggunakan  metode  Thiobarbituric  acid  reactive  substance  (TBARS).  Hasil  penelitian menunjukan  terjadi  peningkatan  kadar  MDA  pada  tikus  yang  diinduksi  kolesterol  murni (kelompok  II)  dengan  rerata  kadar  7,13±0,22  nmol/ml  berbeda  bermakna  dengan  baseline dengan rerata kadar 0,87±0,77 nmol/ml (p≤0,05). Rerata kadar MDA pada kelompok III, IV dan V  berturut  adalah  5,49±0,18  nmol/ml;  4,18±0,37  nmol/ml;  dan  2,18±0,15  nmol/ml,  berbeda bermakna jika dibandingkan dengan kelompok baseline maupun dengan kelompok II (p≤0,05). Penurunan  kadar  MDA  pada  tikus  hiperkolesterol  yang  diberikan  sediaan  NKER  menunjukan bahwa  sediaan  NKER  memiliki  aktivitas  sebagai  antioksidan,  dimana  aktivitas  antioksidan tertinggi dimiliki oleh sediaan NKER dosis 100mg/KgBB.
Kata kunci :  Antioksidan,  Nanopartikel,  Rosela,  Malondialdehid

## ABSTRACT
Hypercholesterolemia  can  induce  oxidative  stress  and  are  associated  with  atherosclerosis  and other cardiovascular disorders. Administration of a preparation of chitosan nanoparticles roselle extract (NKER) can prevent oxidative stress because it contains flavonoids which have an effect as an antioxidant anthocyanin. Decreased oxidative stress can be determined by measuring the levels of malondealdehid (MDA) produced by the reaction of lipid peroxidation. The purpose of this  study  was  to  determine  the  effect  of  administration  of  a  preparation  of  chitosan nanoparticles  roselle  calyx  ethanol  extract  of  antioxidant  activity  by  measuring  the  levels  of MDA. This study used 25 adult rats of Sprague Dawley strain were divided into 5 groups. The first  group  was  given  a  standard  feed  diet  as  baseline,  group  II  was  induced  with  pure cholesterol.  Group  III,  IV  and  V  induced  pure  cholesterol  as  well  as  the  dosage  given  NKER with successive doses of 25 mg/kg, 50 mg/kg and 100 mg/KgBB. The treatment was done for 30 days. On day - 31 each rat blood taken for measurement of total cholesterol, as well as the measurement  of  MDA  using  thiobarbituric  acid  reactive  substance  (TBARS).  The  results showed an increase in levels of MDA in mice induced pure cholesterol (group II) with a  mean concentration  of  7.13  ±  0.22  nmol  /  ml  significantly  different  to  the  baseline  with  a  mean concentration of 0.87 ± 0.77 nmol / ml (p≤0,05). The mean levels of MDA in group III, IV and V respectively was 5.49 ± 0.18 nmol / ml; 4.18 ± 0.37 nmol / ml; and 2.18 ± 0.15 nmol / ml, significantly  different  when  compared  with  the  baseline  group  and  the  group  II  (p≤0,05).
Decreased levels of MDA in mice given dosage NKER hypercholesterolemia showed that nker preparations  have  antioxidant  activity,  which  is  owned  by  the  highest  antioxidant  activity NKER dosage dose 100mg/KgBB.
Keywords :  Antioxidant, Nanoparticles, Roselle, malondialdehyde

## PENDAHULUAN
Hiperkolesterolemia  merupakan  faktor resiko  tertinggi  terjadinya  asterosklerosis. Asterosklerosis  adalah  penumpukan  lemak disepanjang  saluran  pembuluh  darah  yang dapat menyebabkan pembuluh darah menjadi kaku atau regid dan menyepit.
Asterosklerosis  merupakan  salah  satu  faktor utama  terjadinya  penyakit  jantung  koroner (Hirunpanich, et  al ,  2005).  Menurut  data Kemenkes  tahun  2012  penumpukan  lemak merupakan  salah  satu  penyebab  terjadinya penyakit  kardiovaskuler  yang  menyebabkan kematian sebesar  39%.  Organisasi  kesehatan dunia atau WHO melaporkan bahwa hiperkolesterolemia menyumbang kasus kardiovaskuler sebesar 56% dan
menyebabkan  kematian  sebanyak  4,4  juta pertahun (Ochani dan D‘Mello, 2009).
Penanganan  hiperkolesterolemia  dapat dilakukan  dengan  cara  pengaturan  pola makan atau diet rendah kolesterol, penurunan berat  badan,  dan  menggunakan  obat-obat penurun  lemak.  Dalam  perkembangannya, terdapat  permintaan  produk  obat  penurun lemak  yang  lebih  efektif  dan  rendah  efek samping.    Sebagaimana  diketahui,  efek  atau khasiat obat-obat sintentik sebanding dengan efek  samping  yang  dihasilkan.  Artinya semakin  tinggi  efektifitas  atau  khasiat  suatu obat,  biasanya  diiringi  dengan  efek  samping yang  tinggi  pula.  Hal  ini  perlu  dicarikan alternatif pilihan untuk menjembatani adanya permintaan  akan  obat  penurun  lemak  yang lebih efektif akan tetapi rendah efek samping (Ochani dan D‘Mello, 2009).
Penelitian yang dilakukan oleh Usoh et al (2012)  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol kelopak bunga  kering Hibiscus sabdariffa L . memiliki efek sebagai antioksidan, hepatoprotektif dan hipolipidemik pada tikus yang  diinduksi  dengan  CCl 4 .  Ochani  dan D‘Mello  (2009) menyebutkan bahwa ekstrak etanol  kelopak  bunga  dan  daun  rosela mengandung senyawa polifenol dan flavonoid  yang  memiliki  aktivitas  sebagai
antioksidan  dan  antihiperlipidemia.  Ekstrak air  kelopak  rosela  memiliki  efek  antioksidan dan hipolipidemik secara in vivo
(Hirunphanich et al , 2005). Aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol bunga  rosela  diduga  dapat  ditingkatkan dengan modifikasi teknologi sediaan nanopartikel.  Menurut  Mohanraj  dan  Chen (2006)  nanopartikel  telah  digunakan  sebagai pendekatan  fisik  untuk  mengubah  dan meningkatkan  sifat  farmakokinetik  dan farmakodinamik  dari  berbagai  jenis  molekul obat.  Nanopartikel  telah  digunakan  secara in vivo  untuk  melindungi  entitas  obat  dalam sirkulasi  sistemik,  mengantarkan  pada  sel target,  serta  memungkinkan  pelepasan  obat secara berkelanjutan.

## METODE
Bahan. Kelopak  rosela  diperoleh  dari daerah  Kulonprogo  DIY,  Kitosan,  TPP, Etanol  60%  dan  reagen  untuk  pemeriksaan kadar MDA. Tikus betina galus SD diperoleh dari UPHP Universitas Gajah Mada Yogyakarta. Alat . Stirrer, rotary evaporator, ultrasonifikator,  spektrofotometer,  alat-alat gelas.  spuit  3  dan  5  cc,  micropipet,  jarum suntik  sonde,  pipet  kapiler  darah,  evendof, reagen, box pendingin
Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Kelopak Rosella. Pembuatan  ekstrak  etanol  kelopak rosella  dilakukan  di  laboratorium  Fitokimia Univeristas  Ahmad  Dahlan  Yogyakarta. Simplisia  dikeringkan  dalam  oven  dengan suhu  40  ºC  selama  7  jam.  Sebanyak  1500 gram serbuk (yang telah diayak menggunakan ayakan no. 20) kelopak bunga rosela  ( Hibiscus  sabdariffa L.)    diekstraksi dengan pelarut etanol 60% sebanyak 7,5 liter (1:5)  menggunakan  metode  maserasi  dengan pengadukan  menggunakan  stirrer  selama kurang  lebih  1  jam,  kemudian  didiamkan sampai  24  jam.  Maserat  dipisahkan  dan disaring  menggunakan  kain  flannel.  Maserat
diuapkan  dengan vacum  rotary  evaporator dengan  suhu  60 o C  dan  kecepatan  100  rpm. Ekstrak  kental  ditimbang  dan  dihitung rendemennya (Anonim, 2004).
Pembuatan Sediaan Nanopartikel.
Sediaan  nanopartikel  kitosan  ekstrak  etanol kelopak  rosella  dibuat  menggunakan  metode gelasi  ionik  yang  telah  dioptimasi  sesuai dengan cara  Rizki (2014).
Uji  Aktivitas  Antioksidan  Sediaan Nanopartikel  Kitosan  Ekstrak  Etanol Kelopak Rosella.
1. Penyiapan hewan uji
Tikus  betina  galur  SD  sebanyak  25  ekor dibagi  menjadi  5  kelompok,  masing-masing kelompok  terdiri  dari  5  ekor  tikus.  Seluruh hewan uji diadaptasi selama 1 minggu, dalam kandang  individu  dengan  siklus  gelap  dan terang masing-masing 12 jam.
Kelompok  I  adalah  kelompok base  line yaitu  tikus  hanya  diberi  pakan  standar sebanyak  20g/hari/ekor.  Kelompok  II  adalah kelompok  dengan  induksi  hiperkolesterol. Kelompok    III,  IV,  dan  V  adalah  kelompok dengan induksi hiperkelosterol serta diberikan sediaan nanopartikel kitosan ekstrak etanol kelopak bunga  rosela (NKER) dengan variasi dosis yaitu masing-masing 25 mg/Kg  BB,  50  mg/Kg  BB,  dan  100  mg/Kg BB,    diberikan  setiap  hari  selama  30  hari. Induksi  hiperkolesterol  dilakukan  dengan cara  pemberian  kolesterol  murni  2%  dan asam  kolat  1%  yang  dilarutkan  dengan aquades ad 2ml, diberikan 1 × sehari selama 30 hari secara peroral.
Tikus ditimbang pada hari ke 1, 7, 14, 21, dan  28  untuk  mengetahui  perkembangan berat  badan.  Pada  hari  ke-30  setelah perlakuan,  semua  tikus  diambil  darahnya melalui medial  canthus  sinus  orbitalis untuk pengamatan  kadar  kolesterol  total  dan aktivitas  antioksidan  dengan  pengukuran kadar MDA
2. Pengukuran kadar MDA Pengukuran  kadar  MDA  menggunakan
metode Thiobarbituric acid reactive substance (TBARs).  Pengambilan  darah melalui medial  canthus  sinus  orbitalis . Pemeriksaan  dilakukan  dilaboratorium  Pusat Antar  Universitas  (PAU)  UGM  Yogyakarta. Sebanyak  0,75  ml  asam  fosfat  dimasukkan
ke  dalam  tabung  polypropylene  yang  telah berisi  0,25  ml  larutan  (TBA).  Selanjutnya 0,05  ml  sampel  plasma  darah  ditambahkan ke dalam tabung, diikuti dengan 0,45 ml air. Campuran  dikocok  selama  2  menit.  Setelah dipanaskan  dalam water  bath selama  60 menit  dengan  suhu  100°C,  campuran selanjutnya  didinginkan  selama  1-2  jam sehingga suhunya mencapai 30°C. Kemudian dimasukkan  ke  dalam sep-park C  18  dan dicuci  dengan  5  ml  methanol  dan  air.
Kedalam campuran kemudian ditambahkan 4 ml  methanol  dan  ditampung  dalam  kuvet. Kepekatan warna dibaca dengan spektrofotometer dengan panjang gelombang 532 nm (Suwandi, 2012) HASIL PENELITIAN

## DAN PEMBAHASAN

## Ekstrak Etanol Kelopak Bunga Rosella.
Maserasi  atau  perendaman  dipilih  sebagai metode  ekstraksi  kelopak  bunga  rosella. Pelarut organik yang digunakan adalah etanol 60%.  Hal  ini  karena  etanol  merupakan senyawa  yang  polar  sehingga  pigmen antosianin  dapat  mudah  larut.  Antosianin merupakan  senyawa  yang  paling  dominan terdapat  dalam  kelopak  bunga  rosela  yang merupakan  flavonoid  dan  tergolong  senyawa polifenol  yang  berperan  sebagai  antioksidan (Setiawan,  2010).  Selain  itu,  etanol  bersifat lebih  selektif,  kapang  sulit  tumbuh  dalam etanol  20%  keatas,  tidak  beracun,  netral, absorbsinya baik, dapat bercampur dengan air dalam  segala  perbandingan,  memerlukan panas  yang  lebih  sedikit  untuk  proses pemekatan  dan  zat  pengganggu  yang  larut terbatas  (Anonim,  1986).  Bobot  ekstrak kering  yang  diperoleh  sebesar  476g  dari 1500g simplisia, sehingga rendemen diperoleh sebesar 31,73%.
Sediaan  Nanopartikel  Kitosan  Ekstrak Etanol Kelopak Rosella. Pembuatan sediaan nanopartikel  kitosan  ekstrak  etanol  kelopak rosella  mengunakan  metode  gelasi  ionik . Menurut  penelitian  Rizki  (2014),  hasil optimasi formulasi terbaik sediaan nanopartikel  kitosan  ekstrak  etanol  rosella memiliki  perbandingan  penggunaan  ekstrak rosella:kitosan:tripolifosfat  adalah  2:1:0,1. Kitosan  adalah  jenis  polimer  alami  yang dihasilkan  dari  proses  deasetilasi  kitin.
Kitosan bersifat tidak larut dalam air, namun kitosan  mampu  larut  dalam  asam  dengan konsentrasi 1-3%. Kitosan bersifat biokompatibel, biodegradable , tidak bereaksi secara  kimia  dengan  senyawa  aktif  yang dibawa, dan tidak toksik (Lusianawati 2013).
Pencampuran polimer kitosan dan tripoliposfat (TPP) akan menghasilkan interaksi  antara  muatan  positif  pada  gugus amino  kitosan  dengan  muatan  tripoliposfat (Mohanraj & Chen 2006). Penambahan TTP bertujuan  untuk  membentuk  ikatan  silang ionik  antar  molekul  kitosan  sehingga  dapat digunakan sebagai bahan penjerap
(Rahmania 2011). TTP dianggap sebagai zat pengikat  silang  yang  paling  baik  (Mohanraj dan Chen 2006).
Aktivitas Antioksidan Sediaan Nanopartikel  Kitosan  Ekstrak  Etanol Kelopak Rosella. 1. Perhitungan kadar kolesterol total Perhitungan kadar kolesterol total dilakukan setelah perlakuan induksi
kolesterol  selama              30  hari.  Berdasarkan penelitian  Savitri  (2014)  Rerata  kadar kolesterol total disajikan pada   tabel 1.
Tabel 1. Rerata kadar kolesterol total setelah
perlakuaan 30 hari Kelompok Kadar kolesterol total (mg/dl) I 102,25 ± 0,44 II 223,46 ± 4,3 II 150,74 ± 0,67 *) IV 129,11 ± 0,41 *) V 112,35 ± 0,58 *) Keterangan  : *) nilai  berbeda  bermakna  jika dibandingkan dengan kelompok II
Berdasarkan  tabel  1,  diketahui  bahwa kadar  kolesterol  total  tikus  yang  diinduksi kolesterol  adalah  sebesar  223,46  ±  0,44 mg/dl.  Kadar  ini  berarti  tikus  kelompok  II mengalami hiperkolesterolemia menurut kriteria  Hirunpanich et  al (2005)  yang menyebutkan  kriteria  hiperkolesterol  pada tikus apabila kadar kolesterol totalnya > 140 mg/dl.  Pemberian  sediaan  NKER  pada kelompok III, IV dan V mampu menurunkan kadar  kolesterol  total  berbeda  bermakna  jika
dibandingkan  kelompok  II  (p=0,05).  Hal  ini dikuatkan  oleh  penelitian  yang  dilakukan oleh  Pratama  dan  Kusmiyati  (2010)  yang menyebutkan  bahwa  seduhan  kelopak  rosela menurunkan  kolesterol  darah  tikus  secara  in vivo.
Sediaan  nanopartikel  kitosan  ekstrak etanol  kelopak  rosella  memiliki  aktivitas sebagai antioksidan dengan mencegah terjadinya peroksidasi lipid. Peroksidasi lipid merupakan  proses  yang  bersifat  kompleks akibat  reaksi  asam  lemak  tak  jenuh  ganda penyusun  fosfolipid  membran  sel  dengan senyawa  oksigen  reaktif  (SOR),  membentuk hidroperoksida.  Peroksidasi  lipid  digunakan sebagai indikator dari stres oksidatif pada sel dan  jaringan.  Endoperoksida  lipid  yang berasal  dari  asam  lemak  tak  jenuh  ganda bersifat  tak  stabil  dan  terurai  membentuk beberapa senyawa komplek, termasuk senyawa karbonil reaktif, terutama malondialdehyde (MDA) sehingga pengukuran  MDA  sering  digunakan  sebagai indikator  peroksidasi  lipid  jaringan  (Kang et
al , 1998).
2. Hasil perhitungan kadar MDA Pengukuran kadar MDA dilakukan dengan  metode  TBARS.  Kadar  MDA  yang terdapat  pada  hati  dapat  terdeteksi  karena
MDA jika direaksikan dengan TBA ( Tiobarbiturat  Acid) akan  menghasilkan warna  merah  muda  yang  dapat    menyerap cahaya  pada  panjang  gelombang  532  nm.
Jumlah MDA yang
terbentuk menggambarkan  proses  peroksida  lipid. MDA  merupakan  produk  hasil  peroksidasi lipid dalam tubuh dan terdapat dalam bentuk bebas  atau  terkompleks  dengan  jaringan  di dalam tubuh. (Kang, et al ,1998).
Hasil  pengukuran  kadar  MDA  (tabel  2) menunjukkan  bahwa  rerata  kadar  MDA paling  tinggi  pada  kelompok  II  (tikus hiperkolesterolemia)  dengan  rerata  kadar 7,13±0,22 nmol/ml. Sedangkan pada kelompok base  line memiliki  kadar  paling rendah  sebesar  0,87±0,71  nmol/ml.  Kadar MDA  pada  tikus  kelompok  II  berbeda bermakna  dengan baseline (p=0,05).  Rerata kadar  MDA  pada  kelompok  III,  IV  dan  V berturut adalah 5,49±0,18 nmol/ml; 4,18±0,37  nmol/ml;  dan  2,18±0,15  nmol/ml, berbeda bermakna jika dibandingkan dengan
kelompok baseline maupun dengan kelompok  II  (p=0,05).  Penurunan  kadar MDA  pada  tikus  yang  diberikan  sediaan NKER paling tinggi terjadi pada kelompok V
(dosis NKER 100mg/BB).
Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan oleh Suwandi (2012) menyimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak kelopak  bunga  rosela  dosis  250  mg/kg  BB menurunkan malondialdehid
yang merupakan  produk  akhir  dari  peroksidasi lipid  (peroksidasi  lipid  merupakan  stres oksidasi yang timbul akibat adanya pemicuan dari radikal bebas) sebesar 28,0% pada tikus yang  diberi  minyak  goreng  jelantah  dan pemberian  ekstrak  kelopak  bunga  rosela dosis 500 mg/kg BB menurunkan malondialdehid sebesar 50,2%. Tabel 2. Rerata kadar MDA setelah perlakuan 30 hari Kelompok Kadar MDA (nmol/ml) I 0,87 ± 0,77 II 7,13 ± 0,22 III 5,49 ± 0,18 IV 4,18 ± 0,37 V 2,18 ± 0,15 Penurunan  kadar  MDA  pada  tikus hiperkolesterol yang diberikan sediaan NKER  ini  dikarenakan  kandungan  dari senyawa  antosianin  pada  kelopak  bunga rosella  yang  memiliki  aktivitas  sebagai antioksidan  (Olusola,  2011).    Kandungan antosianin menghasilkan aktivitas antioksida, antikarsinogenik serta perlindungan terhadap aterosklerosis (Sawabe, et al , 2005).

## KESIMPULAN
Pemberian  sediaan  nanopartikel  kitosan ekstrak  etanol  kelopak  rosella  (NKER)  pada tikus  hiperkolesterol  mampu  menurunkan kadar malondialdehyde (MDA).

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 1986, Sediaan Galenik , Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta
Anonim,  2004,  Ekstrak  Tumbuhan  Obat Indonesia  Volume  2,  Badan  Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia
Hirunpanich,  V.,  Anocha  U.,  Noppawan P.M.,  Nuntavan  B.,  Hitoshi  S.,  Angkana H., dan Chuthamanee S., 2005, Antioxidant  effects  of  aqueous  extracts from  dried  calyx  of Hibiscus  sabdariffa Linn.  (rosela)  in  vitro  using  rat  low- density  lipoprotein  (LDL). Biol.  Pharm. Bull. , 28(3)  481-484.
Kang  BPS,  Bansal  M,  Mehta  U,  1998,
Selenium  Supplementation  and  Diet Induced Hypercholesterolemia in the Rat: Changes in Lipid Levels, Malonyldialdehyde  Production  and  the Nitric  Oxide  Synthase  Activity,  Gen. Physiol. Biophys. 17, 71—78 Lusianawati,  2013,  Aktivitas  ekstrak  dan nanopartikel  ekstrak  kulit  kayu  mahoni sebagai inhibitor enzim hmg-koa reduktase : Skripsi, Departemen Biokimia, FMIPA, IPB, Bogor Mohanraj  VJ,  Chen  Y.  2006.  Nanoparticles- A review. J Pharm Res 5:561-573.
Ochani  PC,  and  D‘Mello  P,  2009, Antioxidant and antihiperlipidemic
axtivity of Hibiscus sabdariffa, L. Leaves and calyces extract in rats. Indian Journal of  Experimental  Biology  Vol  47  April
2009 pp 276-282
Olusola  AO,  2011,  Evaluation  of  the Antioxidant Effects of Hibiscus Sabdariffa  Calyx  Extracts  on  2,4- Dinitrophenylhydrazine-Induced Oxidative Damage in Rabbits, http://www.webmedcentral.com/article_vi ew/2283 Pratama,  M.,  F.,  R.  2010,  Pengaruh pemberian seduhan kelopak kering bunga rosela  (Hibiscus  sabdariffa)  terhadap kadar  kolesterol  HDL  tikus  Sprague Dawley hiperkolesterolemik, Skripsi , Pendidikan Kedokteran UNDIP.
Rahmania  D.  2011.  Karakterisasi  nano kitosan  cangkang  udang  vanamei  dengan metode  gelasi  ionic:  Skipsi,  Fakultas
Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB,  Bogor
Rizki.I, 2014, Formulasi nanopartikel kitosan ekstrak bunga rosella ( Hibiscus sabdariffa , L) dan uji aktivitas antioksidan pada sel darah  merah domba, Thesis  :  Fakultas  Farmasi  Universitas
Ahmad Dahlan Yogyakarta
Safitri,M. 2014, Pengaruh pemberian sediaan nanopartikel kitosan ekstrak etanol rosella pada  tikus  hiperkolesterol  terhadap  profil lipid. Thesis: Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta Sawabe,  A.,  Nesumi.  C.,  Morita.  M., Matsumoto. S., Matsubara. Y., Komemushi.  S.,  2005,  Glycosides  in African Dietary Leaves, Hibiscus sabdariffa,  J.  Olei.  Sci ,  Vol.  54,  No.  3,
185-191.
Setiawan,  R.,  2010,  Pengaruh  pemberian ekstrak  kelopak  bunga  rosela  ( Hibiscus sabdariffa L.)  terhadap  penurunan  kadar gula darah tikus putih ( Rattus norvegicus ) yang  diinduksi  aloksan, Skripsi ,  Fakultas Kedokteran  Universitas  Sebelas  Maret,
Surakarta
Suwandi T, 2012, Pemberian ekstrak kelopak bunga rosella menurunkan malondialdehid  pada  tikus  yang  diberi minyak  jelantah,  Thesis  :  Program Pascasarjana Universitas Udayana, Bali Usoh  I.F,  Akpan  E.J.,  Etim  E.O,  Farombi E.O, 2012, Antioxidant and Hepatoprotective Effects of Dried Flower Extracts of Hibiscus sabdariffa L. on Rats Treated with Carbon Tetrachloride, Journal of Applied Pharmaceutical Science 02 (08); 2012: 156-159