## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 e-ISSN: 2355-7931 Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj Journal E-mail: current.biochemistry@gmail.com

## Antioxidant and α-glucosidase-inhibitory activities of gayo arabica coffee skin
( Coffe arabica L)
(Aktivitas antioksidan dan penghambatan α-glukosidase kulit kopi arabika Gayo ( Coffe arabica L))
Baharuddin Yusuf Habiby Harahap 1* ,Hasim 1 , Didah Nur Faridah 2
1 Department of Biochemistry, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia 2 Department of Food Sience and Technology, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia
Received: 14 April 2021 ; Accepted: 7 June 2021
Corresponding author : Baharuddin Yusuf Habiby Harahap, Depatemen Biokimia IPB: e-mail: baharuddinyusufhabibyharahap@gmail.com

## ABSTRACT
The objectives of this research were to determine antioxidant and α-glucosidase-inhibitory activities of 96 % ethanol extract, n-hexane fraction, ethyl acetate fraction, and water fraction of gayo arabica coffee skin. Gayo arabica coffee skin was extracted by ethanol using maceration technique and fractionated using n-hexane,  ethyl  acetate,  and  water.  Quercetin  and  gallic  acid  were  respectively  used  as  standards  to determine total flavonoid and phenolic content. Test of antioxidant activity was carried out using the DPPH method.  The  ethanol  extract,  n-hexane  fraction,  ethyl  acetate  fraction,  and  water  fractions  were  then subjected  to  α-glucosidase  IC 50 inhibitory  test.  The  total  flavonoids  of  96%  ethanol  extract,  n-hexane fraction,  ethyl  acetate,  and  water  fraction  respectively  were  76.74,  99.07,  73.55,  50.24  mg  QE/g  extract  . Total  phenolics  of  96%  ethanol  extract,  n-hexane  fraction,  ethyl  acetate,  and  water  fraction  were respectively  211.85,  136.67,  145.19,  127.41  mg  GAE/  g  extract.  Antioxidant  activity  of  ethanol  extract,  n- hexane  fraction,  ethyl  acetate  fraction,  and  water  fraction  were  IC 50 12.03  ppm,  36.08  ppm,  30.27  ppm, 11.62 ppm respectively and activity to inhibit α-glucosidase was 588.85 ppm, 341.81 ppm, 591.61 ppm, and 798.78 ppm respectively. These showed that the ethanol extract and water fraction had the best antioxidant activities  and  the  ethanol  extract  and  ethyl  acetate  fraction  were  the  best  in  inhibiting  the  α-glucosidase activity. These results indicate that gayo arabica coffee skin extract has the potential to be developed as an antidiabetic agents.
Keywords: Antidiabetic, Antioxidant, flavonoids, phenolics, α-glucosidase

## ABSTRAK
Penelitian ini  bertujuan  untuk  menentukan  aktivitas antioksidan  dan  penghambatan  α-glukosidase dari ekstrak etanol 96 % , fraksi n-heksana, fraksi etil asetat, dan fraksi air kulit kopi Arabika Gayo. Kulit kopi arabika gayo diekstrak dengan etanol menggunakan metode maserasi dan difraksinasi menggunakan n- heksana,  etil  asetat,  dan  air.  Kuersetin  dan  asam  galat  masing-masing  digunakan  sebagai  standar  untuk mengetahui  total  flavonoid  dan  fenolik.  Uji  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  DPPH.  Kemudian dilakukan uji daya penghambatan α-glukosidase IC 50 dari ekstrak etanol 96 %, fraksi n-heksana, fraksi etil asetat, dan fraksi air. Total flavonoid yang diperoleh dari ekstrak etanol 96 % , fraksi n-heksana, fraksi etil
asetat,  dan  fraksi  air  berturut-turut  adalah  76.74,  99.07,  73.55,  50.24  mg  QE/g  ekstrak  .  Total  fenolik ekstrak etanol 96 % , fraksi n-heksana, fraksi etil asetat, dan fraksi air berturut-turut adalah 211.85, 136.67, 145.19, 127.41 mg GAE/ g ekstrak. Aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96 % , fraksi n-heksana, fraksi etil asetat, dan fraksi air IC 50 12.03 ppm, 36.08 ppm, 30.27 ppm, 11.62 ppm. Aktivitas penghambatan enzim α- glukosidase  ekstrak  etanol  96  %  ,  fraksi  n-heksana,  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  air  berturut-turut  588.85 ppm,  341.81  ppm,  591.61  ppm,  and  798.78  ppm.  Ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  dan  fraksi  air memiliki  aktivitas  antioksidan  terbaik  dan  ekstrak  etanol  dan  fraksi  etil  asetat  paling  baik  dalam penghambatan  enzim  α-glukosidase.  Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kulit  kopi  arabika  gayo berpotensi untuk dikembangkan sebagai bahan antidiabetes.
Kata kunci : Antidiabetes, antioksidan, fenol, flavonoid, α-glukosidase

## 1. PENDAHULUAN
Kulit  kopi  merupakan  limbah  dari produksi  biji  kopi.  Limbah  kopi  yang dihasilkan  mencapai  50-60  %  dari  buah  kopi (Efendi  and  Harta  2014).  Sekitar  305,200 sampai  366,240  ton.  Adapun  yang  dinyatakan sebagai  bagian  dari  limbah  kulit  kopi  adalah bagian mesokarp, bagian eksokarp, dan bagian endokarp (Esquivel dan Jimenez 2012).
Limbah  tersebut  akan  menjadi  polusi jika  tidak  diproses  dengan  baik.  Maka dibutuhkan pengolahan dan perlakuan terhadap kulit kopi. Beberapa diantara manfaat kulit  kopi  yang  sudah  diteliti  yakni  sebagai pakan  ternak  alternatif,  pupuk  kompos,  dan bioetanol.  Pada  penelitian  kulit  kopi  arabika ( Coffe  arabica L.)  dari  Situbondo  dinyatakan bahwa  ada  kandungan  senyawa  fenol  yang memiliki  aktivitas  antioksidan  ditunjukkan dengan  persen  penghambatan  melalui  metode uji  DPPH  tanpa  maserasi  (51.19%)  (Ariadi  et al. 2015).
Diduga perbedaan wilayah
mempengaruhi kandungan polifenol kulit kopi. Penelitian Dacosta (2017) menunjukkan bahwa  perbedaan  wilayah,  iklim,  ketinggian dan  kesuburan  tanah  berpengaruh  terhadap kandungan metabolit sekunder. Polifenol yang terkandung  dalam  kulit  kopi  (Esquivel  and Jimenez  2012),  meliputi  flavan-3-ol,  asam hidroksinamat,  flavonol,  antosianidin, katekin, epikatekin,  rutin,  tanin,  asam  ferulat.  Pada berbagai penelitian dinyatakan bahwa senyawa polifenol  merupakan  antioksidan  (Wulandari et  al.  2013)  dan  dapat  menghambat  kerja
enzim  α-glukosidase  (Kim  et  al  2000; Febrinda  et  al.    2013).  Berdasarkan  hasil penelitian  tersebut  diduga  ekstrak  kulit  kopi arabika  gayo  ( Coffe arabica L.)  dapat menurunkan hiperglikemia dengan menghambat kerja enzim α-glukosidase. Menurut American Diabetes
Association  (ADA  2018),  DM  merupakan salah  satu  kelompok  penyakit  metabolik dengan  kondisi  hiperglikemia  yang  terjadi karena  kelainan  sekresi  insulin,  kerja  insulin, atau  kedua-duanya.  Penderita  DM  memiliki gejala  umum,  yaitu  poliuria,  polifagia, polidipsia.  Klasifikasi  dari  diabetes  mellitus yaitu  DM  Tipe  1,  DM  Tipe  2,  DM  Tipe Gestasional, dan DM Tipe lainnya. DM tipe 2 merupakan  jenis  penyakit  yang  paling  banyak diderita, yaitu sekitar 90 sampai 95%.
Penyakit  DM  tipe  2  bukan  penyakit yang mengakibatkan kematian secara langsung. Namun akan fatal jika tidak dikelola dengan tepat. Pengobatan yang telah dilakukan adalah  terapi  obat  dan  terapi  non-obat.  Terapi obat  dilakukan  dengan  pemberian  insulin  atau obat-obatan  sintesis  yang  dijual  komersial, antara lain obat golongan sulfonilurea (merangsang  sekresi  insulin  di  kalenjar pankreas);  golongan  biguanida  (menurunkan produksi glukosa di hati); golongan tioazolidindion  (bekerja  dengan  berikatan bersama  PPARγ  untuk  menurunkan  resistensi insulin); dan golongan inhibitor α-glukosidase (bekerja menghambat enzim pencerna karbohidrat  sehingga  memperlambat  absorpsi glukosa ke dalam darah). Namun, penggunaan
obat-obatan  ini  menimbulkan  beberapa  efek samping  seperti  perut  kembung,  nyeri  perut, diare  dan  hepatotoksik  (ADA  2018).  Oleh sebab  itu,  industri  obat-obatan  mulai  beralih untuk mengembangkan antidiabetes menggunakan  bahan  herbal  sebagai  alternatif pengobatan DM.
Analisis  penghambatan  α-glukosidase dari  ekstrak  dan  fraksi  ekstrak  kulit  kopi arabika gayo ( Coffe arabica L.) belum pernah dilakukan. Fraksinasi dilakukan untuk memaksimalkan  pemisahan  senyawa  bioaktif berdasarkan  perbedaan  tingkat  kepolaran pelarut  yang  digunakan.  Kulit  kopi  arabika gayo  ( Coffe  arabica L.)  terlebih  dahulu diekstrak dengan pelarut etanol yang kemudian difraksinasi cair-cair secara bertahap dengan  tiga  jenis  pelarut  yaitu  n-heksana,  etil asetat  dan  air.  Berdasarkan  kandungan senyawa bioaktif yang terdapat pada kulit kopi arabika  gayo  ( Coffe  arabica L.)  diharapkan dapat  dihasilkan  aktivitas  antioksidan  dan aktivitas  penghambatan  α-glukosidase  yang tinggi  sehingga  dapat  digunakan  untuk pengobatan antidiabetes.
Tujuan penelitian ini untuk mengetahui potensi  ekstrak  dan  fraksi  kulit  kopi  arabika gayo  sebagai  antioksidan  dan  penghambat enzim α-glukosidase.

## 2. METODOLOGI
Bahan  yang  digunakan  adalah  kulit kopi  arabika  Gayo  yang  diperoleh  dari Kabupaten    Aceh  Tengah,  DPPH,  enzim  α- glukosidase, substrat
4-nitrofenil-α-D-
glukopiranosida (p-NPG) dan akarbose.
Bahan-bahan  lain  yang  digunakan  dalam pengujian antara lain etanol 96%, etanol 30 %, n-heksana, etil asetat, akuades, metanol, enzim α-glukosidase  (Sigma  Aldrich,  USA.  N1377),
Na 2 CO 3 (Merck, Jerman),  larutan bufer fosfat pH  7.0,  reagen Folin-Ciocalteu ,  AlCl 3 ,  asam galat,  vitamin  C,  dimetil  sulfoksida  (DMSO), bufer  2-(-N-morfolino)  asam  etenasulfonat (MES)  dan  kuersetin.  Alat  yang  digunakan
adalah desikator, oven, corong pisah, evaporator,  blender,  ayakan,  spektrofotometer (Hitachi  tipe  U-2800),  pH  meter  (Eutech Instruments), vortex  mixer (BI  type  37600 mixer), dan microplate reader (Biotek Epoch)

## Preparasi Sampel Kulit Kopi Arabika
Kulit  kopi  arabika  yang  diperoleh  dari Kabupaten Aceh Tengah dikeringkan menggunakan  oven  selama  2  jam  (Saisa  dan Syabriana  2018)  pada  suhu  50 o C  (Zubaidah dan Sari 2015) kemudian dihaluskan menggunakan  blender  dan  disaring  dengan ayakan berukuran 100 mesh hingga berbentuk bubuk.

## Penentuan Kadar Air Kulit Kopi Arabika
Penentuan  kadar  air  sampel  dilakukan dengan pengeringan didalam oven. Mula-mula cawan  porselin  dikeringkan  pada  suhu  105 o C selama 30 menit  kemudian didinginkan dalam desikator  dan  ditimbang  menggunakan  neraca analitik. Sebanyak 3 gram simplisia dimasukkan  kedalam  cawan  porselin  yang telah  dikeringkan  lalu  dipanaskan  pada  suhu 105 o C  selama  2  jam  lalu  didinginkan  dalam desikator  kemudian  ditimbang.  Pemanasan dilakukan  secara  berulang  sampai  diperoleh bobot konstan dengan interval 2 jam (Kusuma 2015)
Kadar air dihitung dengan persamaan:
Kadar air A A 100
Keterangan:
A = Bobot simplisia sebelum pemanasan (g) B = Bobot simplisia setelah pemanasan (g)

## Ekstraksi Kulit Kopi Arabika
Ekstraksi simplisia menggunakan metode maserasi dilakukan dengan perendaman sampel dalam pelarut etanol 96%. Sebanyak  100  gram  serbuk  kulit  kopi  arabika dimasukkan  kedalam  400  mL  pelarut  (1:4). Campuran  kemudian  di shaker selama  3  jam dengan  kecepatan  130  rpm.  Campuran dipisahkan dengan menggunakan kertas
saring.  Filtrat  yang  diperoleh  dimasukkan  ke dalam  erlenmeyer  dan  dibungkus  dengan alumunium  foil  kemudian  ditempatkan  dalam lemari pendingin sedangkan residunya diekstrak kembali sebanyak 2 kali (Arab et al. 2011).  Filtrat  dikumpulkan  dan  diuapkan menggunakan rotary  evaporator pada  suhu 40°C (Ariadi et al. 2015) dengan kecepatan 75 rpm  (±45  menit)  sehingga  diperoleh  sampel ekstrak  etanol  96%  kulit  kopi  arabika. Rendemen  ekstrak  etanol  kulit  kopi  arabika yang diperoleh dihitung menggunakan persamaan berikut:
Rendemen ekstrak (%)(Ismail 2017) = erat Ekstrak  ang diperoleh erat  ampel  ji  ang di Ekstrak × 100%

## Fraksinasi secara Ekstraksi Cair-Cair
Ekstrak etanol kulit kopi arabika  yang diperoleh pada tahap sebelumnya, difraksinasi dengan  corong  pisah  untuk  mengelompokkan senyawa-senyawa  bioaktif  yang  terdapat  pada ekstrak  berdasarkan  tingkat  kepolarannya. Fraksinasi  dilakukan  secara  ekstraksi  cair-cair dengan  pelarut  n-heksana  dan  etil  asetat. Fraksinasi pertama dilakukan dengan melarutkan  0.5  gram  ekstrak  etanol  kulit  kopi arabika dalam pelarut n-heksana:air (perbandingan  1:1)  dengan  bantuan  sonikator lalu  dipisahkan  dengan  menggunakan  corong pisah.  Larutan  ekstrak  yang  akan  dipisahkan dikocok  dan  didiamkan  selama  30  menit  di dalam  corong  pisah  hingga  terbentuk  dua lapisan yaitu lapisan n-heksana dan lapisan air. Lapisan  n-heksana  dipisahkan  dari  lapisan  air dan  disimpan  sebagai  fraksi  n-heksana. Lapisan air difraksinasi kembali menggunakan pelarut  etilasetat  sehingga  diperoleh  lapisan etilasetat  dan  air.  Proses  fraksinasi  masing- masing  pelarut  diulang  sebanyak  tiga  kali. Fraksi n-heksana, etil asetat dan air dipekatkan dengan rotary  evaporator pada  suhu  50 o C. Fraksi  yang  diperoleh  disimpan  pada  suhu  4 o C (Ismail 2017).
Analisis Total Fenolik (Vongsak et al. 2013) Metode  yang  digunakan  untuk  analisis total  fenolik  adalah Folin-Ciocalteu dengan prinsip  kemampuan  senyawa  fenolik  untuk mereduksi fosfomolibdat dalam Folin- Ciocalteu membentuk  molibdenum  berwarna biru  (Dai  dan  Mumper  2010).  Sebanyak  0.1 mL  ekstrak  kulit  kopi  konsentrasi  200  μg/mL ditambahkan  dengan  1  mL  Na 2 CO 3 7.5%.
Sebanyak 1.25 mL Folin-Ciocalteu
ditambahkan kedalam larutan dan dihomogenkan.  Dilakukan  inkubasi  dalam penangas air pada suhu 45 o C selama 15 menit.
Absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer  sinar  tampak  pada  panjang gelombang 765 nm (triplo) dengan asam galat digunakan sebagai standar.

## Analisis Total Flavonoid
Metode yang digunakan adalah kolorimetri aluminium klorida (AlCl 3 ). Metode  ini  memiliki  prinsip  berdasarkan reaksi  antara  AlCl 3 dengan  gugus  hidroksil pada  senyawa  flavonoid  yang  membentuk senyawa kompleks berwarna kuning. Sebanyak  0.5  mL  ekstrak  kulit  kopi  (dalam metanol)  konsentrasi 500 μg/mL ditambahkan dengan 0.5 mL AlCl 3 2%. Larutan
dihomogenkan  dan  diinkubasi  selama  10 menit. Absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer  sinar  tampak  pada  panjang gelombang  415  nm  (triplo)  dengan  kuersetin digunakan  sebagai  standar  (Vongsak  et  al. 2013).

## Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPH
Ke  dalam  10  mL  metanol  (0.4  mM) dilarutkan 1.6 mg DPPH dan selama 30 menit dihomogenkan  dengan  stirer.  Larutan  DPPH yang  homogen  ditambahkan  10  mL  0.1  M bufer   MES  pH  7  dan  10  mL  metanol  20% (Modifikasi Andrianto et al . 2015).
Stok ekstrak kulit kopi (dalam metanol)  ditambahkan  metanol  80%  untuk membuat  larutan  dengan  konsentrasi  akhir  0,
1.25,  2.50,  3.75,  5,  6.25  μg/mL.   etiap  1  mL larutan  ditambahkan  dengan  1  mL  campuran DPPH,  dihomogenkan  dan  diinkubasi  selama 30  menit  lalu  absorbansi  diukur  pada  panjang gelombang 520 nm. Senyawa standar digunakan dalam pengujian aktivitas antioksidan  dengan  metode  DPPH  adalah asam askorbat.
Persentase  inhibisi  terhadap  DPPH (persentase  “scavenging  effect”)  dihitung dengan menggunakan rumus:
nhibisi ( ) Ab As Ab 100
Keterangan:
Ab : absorbansi blanko As : absorbansi senyawa uji

## Uji Aktivitas Inhibisi α-Glukosidase
ji  aktivitas  inhibisi  enzim  α- Glukosidase  dilakukan  dengan  menggunakan microplate  reader dengan  substrat  berupa  p- nitrofenil-α-D-glukopiranosida  (p-NPG)  dan enzim α-glukosidase larut dalam 50 μL buffer
fosfat  0.1  M.  Campuran  reaksi  terdiri  dari blanko,  kontrol  blanko,  sampel  dan  kontrol sampel  seban ak  10  μL.   eban ak  25  μL substrat  p-nitrofenil-α-D-glukopiranosida  (p- NPG)  10  mM  ditambahkan  lalu  diinkubasi pada  suhu  37 o C  selama  30  menit.  Reaksi dihentikan  dengan  penambahan  100  μL Na 2 CO 3 2  M  kemudian  diukur  pada  panjang gelombang 410 nm. Larutan akarbose digunakan  sebagai  kontrol  positif  dengan sistem reaksi sama seperti sampel (Sancheti et al. 2009). Percobaan dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan. Selanjutnya dilakukan perhitungan persentase inhibisi untuk menentukan  nilai  IC 50 .  Sistem  reaksi  dapat diketahui pada Tabel 1.
Perhitungan  persentase  inhibisi  terhadap  α- glukosidase yaitu:
nhibisi ( 1 Absorbansi sampel Absorbansi kontrol ) 100
Tabel 1 istem Reaksi  nhibisi α-Glukosidase Reagen Volume (μl) Blanko Kontrol Blanko Kontrol Sampel Sampel Pelarut Sampel Buffer Substrat Enzim Buffer 10 - 50 25 25 - 10 - 50 25 - 25 - 10 50 25 - 25 - 10 50 25 25 - Inkubasi 37ᵒC 30 menit Na 2 CO 3 100 100 100 100
Analisis LCMS (Blazics et al. 2011)
Sampel  teraktif  pada  uji  aktivitas inhibisi α-glukosidase dianalisis menggunakan LC-MS/MS dengan Liquid Chromatoghraphy- Mass Spectrometry  (LC-MS)  tipe Qmicro QAA 842 dan detektor MS-MS Waters Quatro Micro. Jenis kolom C18, diameter 4.6 panjang 150  mm,  ukuran  partikel  5  µm,  ukuran  pori 130  Ǻ,  fase  gerak  campuran  air  dan  metanol (10:90),  tekanan  maksimal  300  Bar.  Sampel berupa  cairan  dimasukkan  ke  fase  gerak  pada kolom  LC  dengan  lajur  alir  0.800  mL/menit.
Suhu  yang  digunakan  pada  kolom  adalah 40 o C,  suhu  sampel  20 o C  dan  waktu  akhir  35 menit.  Jenis  analisis massa pada penelitian ini adalah quadrupole dengan modus scan selama 5 detik. Spektrum yang diperoleh menunjukkan  rasio  massa  dengan  muatan (m/z).

## Analisis Data
Data  dianalisis  dengan  menggunakan Ms.  Excell  (Mattjik  dan  Sumertajaya  2002), Analyses  of  Variance (ANOVA)  dan  diuji lanjut  dengan Duncan’s  Multiple  Range  Test
(DMRT) menggunakan SPSS Statistics 16.0. (trial).

## 3. HASIL

## Kadar Air dan Ekstrak Kulit Kopi
Kadar  air  diukur    menggunakan metode  BSN  (1992)  yaitu  tiga  kali  ulangan. Dalam  penelitian  ini  diperoleh  kadar  air  2.89 %  yang  menunjukkan  bahwa  terdapat  2.89 gram  air  dalam  setiap  100  gram  kulit  kopi. Hasil  rendemen  ekstrak  kulit  kopi  dan  fraksi dengan  berbagai  pelarut  dapat  dilihat  pada Tabel 2.

## Total Fenolik dan Flavonoid
Dengan  menggunakan  metode  Folin- Ciocalteu  dilakukan  penentuan  total  fenolik, asam  galat  sebagai  standar (fenolat alam  yang stabil).  Asam  galat  bereaksi  dengan  pereaksi Folin-Ciocalteu  menghasilkan  warna  kuning,
hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak/  fraksi mengandung  fenolik.  Kemudian  ditambahkan Na 2 CO 3 sebagai  pemberi  suasana  basa. Pengukuran  absorbansi  dilakukan  dengan panjang gelombang 765 nm. Hasil pengukuran standar  asam  galat  diperoleh  persamaan regresi  linier  y  =  0.0045x  +  0.003  dengan koefisien regresi (R) sebesar 0.975.
Dengan menggunakan metode
kolorimetri aluminium klorida (AlCl 3 ) dilakukan  penentuan  total  flavonoid,  dengan kuersetin sebagai standar. Pengukuran absorbansi dilakukan dengan panjang gelombang 415 nm.  Hasil pengukuran standar kuarsetin  diperoleh  persamaan  regresi  linier  y =  0.0094x  +  0.049  dengan  koefisien  regresi (R)  0.993.  Penentuan  total  fenolik  dan flavonoid  dari  ekstrak  dan  fraksi-fraksi dilakukan triplo (Gambar 1).
Gambar 1 Total Fenolik dan Flavonoid
Gambar  2 Konsentrasi  penghambatan  ekstrak  etanol  96%    dan  fraksi  kulit  kopi  ditunjukkan  dengan  nilai IC 50. Huruf  yang  berbeda  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  penghambatan  antioksidan  berbeda nyata secara signifikan dari uji Duncan pada alfa = 0.05
Aktivitas  Antioksidan  Dengan  Metode DPPH
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa nilai IC 50 dari askorbat (kontrol positif) adalah 5.83  μg/mL.   emua  ekstrak  dan  fraksi   ang diuji  tergolong  aktif  dan  sangat  kuat  dengan nilai  IC 50 <50  µg/mL  dapat  dilihat  pada Gambar  2.  Sementara  nilai  IC 50 yang bervariasi mengilustrasikan distribusi kandungan  senyawa  kimia  pada  tiap  fraksi yang diuji.

## Aktivitas Inhibisi Enzim α-Glukosidase
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  nilai  IC 50 pada  akarbose  (kontrol
positif)  adalah  2.87  μg/mL.  Aktivitas  inhibisi α-glukosidase  akarbose,  ekstrak  etanol  96% kulit  kopi  dan  fraksinya  ditunjukkan  dalam Gambar 3.

## Kandungan Senyawa Aktif Kulit Kopi
Ekstrak  etanol  dan  fraksi  kulit  kopi memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi dan fraksi  n-heksana  yang  memiliki  aktivitas inhibisi enzim α-glukosidase terbaik dianalisis menggunakan  LC-MS/MS  untuk  mengetahui kandungan  senyawa  aktif  yang  terkandung dalam fraksi n-heksana kulit kopi (Gambar 4).
Gambar 3 Aktivitas inhibisi Akarbose, ekstrak etanol 96%  kulit kopi dan fraksinya dinyatakan dengan nilai IC 50 .  Huruf   ang  berbeda  menunjukkan  bahwa  aktivitas  inhibisi  α-glukosidase  berbeda  nyata secara signifikan dari uji Duncan pada alfa = 0.05

## 4. PEMBAHASAN
Kadar  Air  dan  Rendemen  Ekstrak  Kulit Kopi
Kulit  kopi  memiliki  kadar  air  rendah yaitu  2.89%.  Kadar  air  yang  baik  untuk  suatu penelitian  adalah  dibawah  10%.    Kadar  air rendah    menunjukkan  bahwa  simplisia  dapat disimpan  dalam  waktu  yang  lama.  Proses pengeringan  dilakukan  untuk  menghambat pertumbuhan  mikroorganisme  sehingga  dapat menjaga kualitas simplisia (BPOM 2014).
Rendemen  ekstrak  kulit  kopi  yang diperoleh adalah 7.85% artinya ada 7.85 gram untuk  setiap  100  gram  simplisia.  Rendemen ekstrak  yang  diperoleh  lebih  rendah  daripada rendemen  ekstrak  kulit  kopi  Marcelinda  et  al. (2016)  yaitu  8.66%.    Rendemen  yang  lebih
rendah  diduga  karena  waktu  maserasi  yang terlalu  singkat.  Pada  penelitian  Marcelinda  et al.  (2016)  dengan  waktu  maserasi  3  x  24  jam menghasilkan  rendemen  ekstrak  yang  lebih tinggi,  namun  antioksidan  yang  dihasilkan pada  penelitian  tersebut  tergolong  lemah, dengan  nilai  IC 50 diatas  100.  Proses  ekstraksi dengan  cara  maserasi  dipilih  karena  mudah dan  biasa  dilakukan.  Jumlah  pelarut  dalam proses  ekstraksi  merupakan  salah  satu  faktor yang  menentukan  persentasi  hasil,  karena semakin  besar  jumlah  pelarut  yang  digunakan dalam  ekstraksi,  maka  semakin  besar  kontak antara bahan dan pelarut sehingga ini memiliki potensi  untuk  meningkatkan  persentase  hasil (Teh et al. 2014).
Tabel 2 Ekstrak dan Fraksi Kulit Kopi Sampel Rendemen (%) Ekstrak etanol 96% 7.85 Fraksi n-Heksana 2.51 Fraksi Etil Asetat 2.67 Fraksi Air 2.04
Fraksinasi Kulit Kopi .
Fraksinasi  dilakukan  menggunakan pelarut dengan polaritas yang berbeda, yaitu n- heksana,  etil  asetat  dan  air.  Tingkat  kepolaran menentukan  jenis  dan  jumlah  senyawa  yang dapat  diekstrak  dari  sampel.  Pelarut  akan mengekstrak senyawa yang mempunyai kepolaran  yang  sama  atau  mirip  dengan kepolaran pelarut yang digunakan (Arifianti et al.  2014).  Pemilihan  jenis  pelarut  ini didasarkan pada kemampuannya dalam melarutkan senyawa-senyawa metabolit sekunder dengan optimal. Hasil
fraksinasi yang masih mengandung  pelarut  selanjutnya  dievaporasi sehingga diperoleh fraksi murni yang dinyatakan  dalam  %  rendemen.  Persentasi rendemen  fraksi  kulit  kopi  berturut-turut  dari fraksi  n-heksana,  etil  asetat,  dan  fraksi  air
adalah  2.51%,  2.67%,  dan  2.04%  yang  mana fraksi  etil  asetat  semi  polar  dan  fraksi  air merupakan  polar  (Tabel  2),  hal  tersebut menunjukkan  bahwa  sebagian  besar  senyawa kandungan  fitokimia  dalam  ekstrak  etanol 96% adalah polar.
Total Fenolik dan Flavonoid.
Metode Folin-Ciocalteu digunakan dalam  penentuan  total  fenolik.  Asam  galat digunakan  sebagai  standar,  karena  asam  galat adalah  fenolik  alami  yang  stabil.  Asam  galat direaksikan  dengan  reagen  Folin-Ciocalteu untuk  menghasilkan  warna  kuning,  hal  ini menandakan bahwa ekstrak kulit kopi mengandung  fenolik  setelah  itu  ditambahkan larutan Na 2 CO 3 sebagai pemberi suasana basa. Gugus  hidroksil  pada  senyawa  fenolik bereaksi dengan reagen Folin-Ciocalteu
membentuk  kompleks  molibdenumtungsten berwarna  biru  dengan  struktur  yang  belum diketahui dan dapat dideteksi dengan spektrofotometer  yang  diukur  absorbansinya panjang  gelombang  765  nm.  Semakin  pekat warna  yang  dihasilkan  maka  semakin  banyak pula  senyawa  fenolik  yang  ada  di  dalam sampel.  Pengukuran  absorbansi  dilakukan dengan  panjang  gelombang  765  nm.  Hasil pengukuran  standar  asam  galat  diperoleh persamaan  regresi  linier  y  =  0.0045x  +  0.003 dengan koefisien Regresi (R) sebesar 0.975.
Metode yang digunakan dalam penentuan kadar total flavonoid adalah metode kolorimetri aluminium klorida (AlCl 3 ). Kuersetin  digunakan  sebagai  standar,  karena kuersetin merupakan senyawa flavonoid golongan flavonol  yang memiliki gugus  keton pada  atom  C-4  dan  juga  gugus  hidroksil  pada atom C-3 dan C-5 yang berdekatan. Penambahan  pereaksi  AlCl3  digunakan  untuk membentuk  reaksi  antara  AlCl 3 dengan golongan  flavonoid  menghasilkan  senyawa kompleks  antara  gugus  hidroksil  dan  keton yang  berdekatan.  Senyawa  AlCl 3 akan bereaksi  dengan  gugus  keton  pada  C4  dan gugus  OH  pada  C3  atau  C5  pada  senyawa flavon  atau  flavonol  membentuk  senyawa kompleks  yang  stabil  berwarna  kuning. Absorbansi  diukur  pada  panjang  gelombang 415  nm.  Hasil  pengukuran  standar  kuarsetin diperoleh persamaan regresi linier y = 0.0094x + 0.049 dengan koefisien Regresi (R) 0.993.
Secara  kuantitatif,  ekstrak  etanol  96% dari  kulit  kopi  memiliki  kandungan  total fenolik  tertinggi  yaitu  211.85  mgGAE/g ekstrak.  Diduga  senyawa  fenolik  yang  ada  di dalam  kulit  kopi  merupakan  senyawa  yang bersifat  polar  (Romadanu  et  al.  2014). Sementara  itu  fraksi  n-heksana  kulit  kopi memiliki  kandungan  total  flavonoid  tertinggi yaitu  99.07  mgQE/g  ekstrak  dibandingkan dengan ekstrak/fraksi lainnya. Hal ini disebabkan diduga senyawa-senyawa flavonoid  yang  ada  di  dalam  kulit  kopi  lebih
larut  di  dalam  pelarut  yang  bersifat  non  polar (Pratiwi  et  al.  2016).  Penggunaan  pelarut dalam  proses  ekstraksi  sangat  mempengaruhi total  kandungan  fenol  pada sampel (Teh  et  al. 2014).
Aktivitas  Antioksidan  Dengan  Metode DPPH.  Metode  yang  digunakan  dalam  uji aktivitas  antioksidan  ekstrak  adalah  metode DPPH.  Dalam  metode  DPPH  digunakan  2,2 difenil-1-pikrilhidrazil  sebagai  sumber  radikal bebas. Aktivitas antioksidan dinyatakan dengan  IC 50 ( inhibitory  concentration ).  IC 50 adalah  bilangan  konsentrasi  ekstrak  yang mampu  menghambat  aktivitas  DPPH  sebesar 50%.  Semua  ekstrak  dan  fraksi  yang  diuji tergolong  aktif  dan  sangat  kuat  dengan  nilai IC 50 <50  µg/mL  sementara  nilai  IC 50 yang bervariasi mengilustrasikan distribusi kandungan  senyawa  kimia  pada  tiap  fraksi yang  diuji.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 ,  semakin tinggi  aktivitas  antioksidan.  Suatu  senyawa dinyatakan  sebagai  antioksidan  yang  sangat kuat  jika  IC 50 lebih  kecil  dari  50,  kuat    (50- 100),  sedang  (100-150)  dan  lemah  (151-200) (Badarinath et al. 2010).
Gambar  2  menunjukkan  bahwa  nilai IC 50 pada  semua  ekstrak  dan  fraksi  kulit  kopi dibawah  50  yang  menunjukkan  bahwa aktivitas  antioksidan  kulit  kopi  termasuk antioksidan  sangat  kuat.  Kemampuan  pelarut dalam  mengekstrak  metabolit  sekunder  pada setiap  sampel  mendasari  aktivitas  masing- masing  ekstrak  (Teh  et  al.  2014).  Senyawa antioksidan  baik  sintetis  maupun  alami  (dari berbagai  jenis  tumbuhan)  dapat  mengontrol tingkat glukosa darah dan mencegah komplikasi  diabetes  dengan  cara  mengurangi kerusakan  oksidatif  pada  diabetes  (Widowati 2008).
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa aktivitas  antioksidan  ekstrak  dan  fraksi  kulit kopi sangat kuat dan berbeda secara signifikan pada  uji  α   0,05.  Nilai   C 50 ekstrak  etanol 96%,  fraksi  n-heksana,  fraksi  etil  asetat,  dan fraksi  air  adalah  12.03  µg/mL,  36.08  µg/mL,
30.27  µg/mL,  dan  11.62  µg/mL.  Antioksidan terbaik  diperoleh  dari  fraksi  air,  hal  ini menunjukkan bahwa kulit kopi dapat dikonsumsi  sebagai  seduhan  dengan  pelarut air.
Widyawati  et  al.  (2010)  menyatakan bahwa adanya perbedaan nilai IC 50 pada setiap sampel  tanaman  disebabkan  beberapa  faktor, yaitu  kemampuan  dalam  mentransfer  atom hidrogen  ke  radikal  bebas  DPPH,  struktur senyawa  kimia  antioksidan  pada  sampel,  dan jumlah  gugus  hidroksil.  Jumlah  kandungan
total  fenol  dan  flavonoid  juga  berpengaruh terhadap aktivitas antioksidan. Aktivitas antioksidan  pada  penelitian  ini  lebih  baik dibandingkan dengan penelitian yang dilakukan  oleh  Budiana  et  al.  (2018),  yang menunjukkan  aktivitas  antioksidan  ekstrak etanol kulit buah kacang gude dan kulit kacang kratok adalah 22.07 µg/mL dan 358.66 µg/mL.
Aktivitas nhibisi Enzim α-
Glukosidase.  Aktivitas  anti  diabetes  dalam penelitian ini dilakukan dengan penghambatan enzim α-glukosidase.
Gambar 5 Reaksi Hidrolisis  ubstrat oleh Enzim α-Glukosidase (Pratama et al. 2015)
Enzim  α-glukosidase  adalah  yang mengkatalisis  reaksi  akhir  dari  karbohidrat  di dalam  usus.  Digunakan  larutan  enzim  dengan konsentrasi  0.04  U  /  mL  dalam  uji penghambatan aktivitas α-glukosidase, larutan substrat  dengan  konsentrasi  10  mM.    Uji  ini dilakukan  untuk  menentukan  daya  hambat ektrak  etanol  96%  dan  fraksi  kulit  kopi terhadap  α-glukosidase  dengan  melihat  nilai IC 50 .  IC 50 adalah konsentrasi  yang  dibutuhkan untuk  menghambat  50%  aktivitas  enzim. Prinsip  kerja  dari  uji  ini  adalah  reaksi hidrolisis substrat p-nitrofenil-α-D- glukopiranosida  menghasilkan  α-D-glucose and  p-nitrophenol  berwarna  kuning,  dapat dilihat  pada  Gambar  5.  Warna  kuning  yang dihasilkan  oleh  p-nitrofenol  menjadi  indikator aktivitas inhibisi  α-glukosidase, warna kuning yang memudar, menunjukkan aktivitas inhibisi yang tinggi (Sugiwati et al. 2009).
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa aktivitas inhibisi α-glukosidase akarbose,  ekstrak  etanol  96%  kulit  kopi  dan fraksinya  ditunjukkan  dalam  Gambar  3. Gambar  3  menunjukkan  bahwa  konsentrasi
inhibisi  aktivitas  α-glukosidase  pada  akarbose sebagai pembanding sangat tinggi dengan nilai IC 50 2.87 μg/mL. Ekstrak etanol 96 , fraksi n- heksana,  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  air memiliki  konsentrasi  inhibisi  aktivitas  α- glukosidase  yang  lemah  diatas  100  berturut- turut  adalah  588.85  μg/mL,  341.81  μg/mL, 591.61 μg/mL, dan 798.78 μg/mL.
Perbedaan  aktivitas  inhibisi  pada sampel  disebabkan  oleh  fraksinasi  dengan pelarut  yang  berbeda.  Jika  dibandingkan dengan IC 50 dari ekstrak etanol dan ekstrak air umbi  bawang  dayak  (Early  et  al.  2013) berturut-turut  sebesar  241  μg/mL  dan  505 μg/mL,   C 50 >  100  menunjukkan  masih lemahnya  aktivitas  inhibisi  dari  suatu  ekstrak. Namun  kulit  kopi  masih  mempunyai  potensi dalam inhibisi aktivitas α-glukosidase. Kemampuan  ekstrak  menghambat  enzim hidrolisis  karbohidrat  yang  disebabkan  oleh keberadaan  senyawa  fenolik  yang  dapat mengikat  protein  enzim  (Zhang  et  al.  2015). Jika dibandingkan dengan total flavonoid pada Gambar  1,  terlihat  ada  hubungan  antara inhibisi  α-glukosidase  dan  total  flavonoid
untuk  ekstrak  dan  semua  fraksi.  Semakin tinggi  total  flavonoid,  semakin  rendah  IC 50 dari  inhibisi  α-glukosidase.  Berdasarkan penelitian Zhu et al. (2019) menyatakan bahwa senyawa flavonoid mempunyai potensi sebagai inhibitor  enzim  α-glukosidase.  Flavonoid merupakan  bagian  dari  senyawa  fenolik (Redha  2010)  yang  diduga  berperan  dalam aktivitas inhibisi enzim α-glukosidase.
Kandungan  Senyawa  Aktif  Fraksi  n- Heksana Kulit Kopi .
Identifikasi  senyawa  aktif  berdasarkan hasil  terbaik  dari  aktivitas  inhibisi  α- glukosidase menggunakan LC-MS/MS. Hal ini
dilakukan untuk mengetahui kandungan senyawa kimia yang berperan sebagai inhibitor α-glukosidase.  Hasil  identifikasi  fraksi  n- heksana  menggunakan  LC-MS/MS  pada Gambar 4 memperlihatkan sejumlah kromatogram  dengan  waktu  retensi  yang berbeda-beda  sebagai  penciri  dari  suatu senyawa.  Berdasarkan  penelusuran  senyawa dari kromatogram fraksi n-heksana menggunakan  bank    data  senyawa  kimia “Pubchem” dan “Chemspider”, diperoleh data bahwa ada 6 senyawa aktif yang kemungkinan berperan  sebagai  inhibitor  α-glukosidase (Tabel 3).
Tabel 3 Senyawa Aktif Fraksi n-Heksana Kulit Kopi Peak Formula Kemungkinan Senyawa Senyawa dengan formula yang sama Pubchem Chemspider 0.937 C 3 H 6 O Propionaldehyde 106 12 5.536 C 12 H 8 O 7 Ancistroquinone E 44 16 6.470 C 19 H 12 O 8 Diacerein 37 11 11.410 C 19 H 24 O 7 Cedronin 776 3 13.712 C 28 H 32 O 16 Rhamnetin-3-O-neohesperidoside 281 148 17.033 C 15 H 20 O Ar-Turmeron 4 266 2 110 17.970 C 15 H 16 O 4 Hemigossipol 3 303 23 19.670 C 26 H 18 O 10 Madurahydroxylactone 38 2 20.610 C 6 H 16 O 8 Myo-inositol dihidrat 5 - 20.870 C 14 H 10 O 9-Phenanthro 293 1 21.800 C 28 H 40 O 11 Picrasinode B 67 37 23.680 C 29 H 46 O 5 18-acetoxy-1alpha,25-dihydroxyvitamin D3 410 110 23.680 C 31 H 22 O 5 Nordracorubin 39 17 24.700 C 38 H 46 O 11 Tetronolida 31 17 25.550 C 21 H 40 O 10 Octyl 2-O-(2-O-methyl-alpha-L- fucopyranosyl)-beta-D-galactopyranoside 26 8 26.400 C 37 H 40 O 6 1-O,2-O,4-O,6-O-Tetrabenzyl-3-O-[(Z)-1- propenyl]-D-myo-inositol 162 51 26.830 C 33 H 36 O 23 Luteolin 7,4'-diglukuronida-3'-glukosida - 1 26.910 C 33 H 24 O 8 1,5-Bis(4,5-dihydroxy-10-oxo-9H- anthracen-9-yl)pentane-1,5 dione 34 3 27.340 C 18 H 28 O 16 Ascorbyl Lactoside 10 3 27.850 C 26 H 32 O 11 Brusatol 168 79 28.190 C 31 H 34 O 17 Kaempferol 3-(4'',6''-diasetilglukosida)-7- rhamnosida 9 4 28.360 C 18 H 8 O 2 1,5-dietinilanthrakuinone 18 3 31.430 C 34 H 36 O 8 Phorbol-12,13-dibenzoate 106 32 38.750 C 17 H 24 O 3 Terallethrin 4977 3319 40.540 C 17 H 26 O 11 Ipolamiide 201 1 44.880 C 38 H 22 O 6 Anigorootin 11 3 46.330 C 17 H 20 O 5 Balduilin 1757 31
Senyawa-senyawa  hasil  identifikasi LC-MS/MS  yang  kemungkinan  berkontribusi sebagai  inhibitor  α-glukosidase  dari  data kromatogram adalah senyawa Diacerein (C 19 H 12 O 8 )  yang  muncul  pada  waktu  retensi 6.47 menit yang merupakan golongan antrakuinon, Rhamnetin-3-O-neohesperidoside (C 28 H 32 O 16 )  waktu  retensi  13.712  menit merupakan  golongan  flavonoid,  Ar-Tumeron (C 15 H 20 O) waktu retensi 17.033 menit merupakan  golongan  seskuiterpen,  Luteolin 7,4'-diglucuronide-3'-glucoside (C 33 H 36 O 23 ) waktu retensi 26.830 menit flavonoid,
Kaempferol 3-(4'',6''-diacetylglucoside)-7- rhamnoside  (C 31 H 34 O 17 )  waktu  retensi  28.190 menit merupakan golongan flavonoid, dan 1,5- diethynylanthraquinone (C 18 H 8 O 2 ) waktu retensi  28.360  menit    merupakan  golongan antrakuinon.  Dari  hasil  penelitian  ini  dapat dilihat bahwa ada tiga golongan senyawa yaitu Antrakuinon,  Flavonoid,  dan  Seskuiterpen. Berdasarkan penelitian sebelumnya dinyatakan bahwa Flavonoid (Zhu et al. 2019; Ghani et al. 2019),  Antrakuinon  (Alam  et  al.  2019),  dan Seskuiterpen  (Ying    et  al.  2014)    bertindak sebagai inhibitor α-glukosidase.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  syukur  kepada Allah  yang  telah  memberikan  kesempatan kepada  penulis  untuk  menyelesaikan  karya tulis ini. Terima kasih penulis ucapkan kepada Departemen Biokimia dan pranata laboratorium  Penelitian  Departemen  Biokimia FMIPA  IPB  dan  laboratorium  Pusat  Studi Biofarmaka  IPB.  Penulis  menyampaikan terima  kasih  kepada  Ariza  Saputra  yang  telah membantu  dalam  pengadaan  dan  pengiriman sampel  kulit  kopi  dari  Kabupaten  Aceh Tengah. Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.

## DAFTAR PUSTAKA
[ADA]  American  Diabetes  Association.  2018.
Standards  of  medical  care  in  diabetes. Diabetes Care . 41(1): 13.
[BSN]  Badan  Standarisasi  Nasional.  1992. SNI  01-2891-1992 Cara  Uji  Makanan dan  Minuman. Jakarta  (ID)  :  Badan Standardisasi Nasional.
Alam  MB, Bajpai  VK, Ra JS, Lim JY, An H,
Shukla  S,  Kuan  KT,  Khan  I,  Han  YK, Na  M,  Lee  SH.2019.  Anthraquinone- t pe inhibitor of α-glucosidase enhances glucose  uptake  by  activating  an  insulin- like  signaling  pathway  in  C2C12 myotubes. Food  Chem.  Toxicol .129:
337-343
Andrianto  D,  Katayama  T,  Suzuki  T.  2015.
Screening of antioxidant and antihyperlipidemic
potencies of
Indonesian underutilized fruits. J. Forest Biomass Utilization Soc. 10(1):19-25.
Arab  F,  Alemzadeh  I,  Maghsoudi  V.  2011. Determination of antioxidant component and activity of rice bran extract. Scientia Iranica . 18(6): 1402-1406.
Ariadi  HP,  Sukatiningsih,  Windrati  WS.2015. Ekstraksi  senyawa  antioksidan  kulit buah  kopi  :  kajian  jenis  kopi  dan  lama maserasi. Berk. ilm. pertan. 1(1) : 1-5.
Arifianti L, Oktarina RD, Kusumawati I. 2014. Pengaruh  jenis  pelarut  pengektraksi terhadap  kadar  sinensetin  dalam  ekstrak daun Orthosiphon  stamineus . EJPH . 2(1): 1-4.
Badarinath A, Rao K, Chetty CS, Ramkanth S, Rajan  T,  &  Gnanaprakash  K.  2010.  A review on in-vitro antioxidant methods :
comparisons, correlations, and considerations. Int.  J.  Pharmtech  Res .  2 (2) : 1276-1285.
Blazics  B,  Alberti  A,  Beni  S,  Kursinszki  L, Tölgyesi L, Kery A. 2011. Identification and LC-MS-MS determination of acteoside, the main antioxidant compound  of Euphrasia  rostkoviana ,
using  the  isolated  target  analyte  as
external  standard. J.  Chromatogr.  Sci . 49(3) : 203-208.
Budiana  W,  Suhardiman  A,  Kirana  O.2018.
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  kulit  buah kacang  kratok  ( Phaseolus  lunatus )  dan kulit  buah  kacang  gude  ( Cajanus  cajan ) dengan  metode  dpph  serta  penetapan kadar  total  flavonoid  dan  fenol. J. Pharmacopolium. 1 (3) : 162-169.
Dacosta  M,  Sudirga  SK,  Muksin  IK  (2017) Perbandingan  kandungan  minyak  atsiri tanaman  sereh  wangi  ( Cymbopogon nardus L.  Rendle)  yang  ditanam  di lokasi berbeda. Simbiosis . 5(1) : 25-31.
Dai  J,  Mumper  RJ.  2010.  Plant  phenolics:
Extraction, analysis and their antioxidant and anticancer properties. Molecules. 15: 7313-7352.
Early  AF,  Astawan  M,  Wresdiyati  T,  Dewi NY.  2013.  Kapasitas  antioksidan  dan inhibitor  alfa  glukosidase  ekstrak  umbi bawang dayak. JTIP. 24 (2) : 161-167.
Efendi  Z,  Harta  L.  2014. Kandungan  Nutrisi Hasil  Fermentasi  Kulit  Kopi  (Studi
Kasus Desa Air Meles Bawah
Kecamatan  Curup  Timur) .  Bengkulu
(ID) : BTBP Bengkulu.
Esquivel  P,  Jimenez  VM.2012.  Functional properties  of  coffee  and  coffee  by- products. Food  Res.  Int. 46  (2012)  : 488–495.
Febrinda  AE,  Astawan  M,  Wresdiyati  T, Yuliana ND. 2013. Kapasitas antioksidan dan inhibitor alfa
glukosidase ekstrak umbi bawang dayak.
JTIP. 24 (2) : 161-167
Ghani U, Alam MN, Yousaf M, Ul-Haq Z, Al- Rehail   AJ.2019.  Natural  flavonoid  α- glucosidase  inhibitors  from Retama
raetam : enzyme inhibition and molecular  docking  reveal  important interactions  with  the  enzyme  active site. Bioorg.
Chem. doi:https://doi.org/10.1016/j.bioor g.2019.03.079.
Ismail  AI.  2017. Aktivitas  Antioksidan  dan Inhibisi α-Glukosidase Formulasi
Ekstrak  Angkak  (Red  Yeast  Rice)  dan Bekatul (Rice Bran) Sebagai
Antidiabetes Secara In Vitro. Bogor (ID)
: IPB.
Kim  JS,  Kwon  CS,  Son  KH.2000.  Inhibition of  alpha  glucosidase  and  amylase  by luteolin, a flavonoid. Biosci. Biotechnol.
Biochem. 64 (11): 2458-2461.
Kusuma  A.2015.  Penelitian  pengukuran  kadar air buah. Seminar Nasional
Cendikiawan. (2015) : 12-27.
Marcelinda  A,  Ridhay  A,  Prismawiryanti. 2016.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak limbah  kulit  ari  biji  kopi  ( Coffea  sp ) berdasarkan tingkat kepolaran pelarut. J. Nat. Sci . 5(1) : 21- 30.
Mattjik AA, Sumertajaya IM. 2002 . Perancangan Percobaan dengan
Aplikasi  SAS  dan  Minitab .  Bogor  (ID)  :
IPB Press.
Pratama  Y,  Sarjono  PR,  Mulyani  NS.  2015. Skrining  Metabolit  Sekunder  Bakteri
Endofit yang Berfungsi sebagai Antidiabetes dari Daun Mimba
( Azadirachta  Indica ). J.  Kim.  Sains  Apl . 18 (2): 73 – 78.
Pratiwi  L,  Fudholi  A,  Martien  R,  Pramono  S. 2016.  Ekstrak  etanol,  ekstrak  etil  asetat, fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  n-heksan kulit manggis ( Garcinia mangostana L.) sebagai  sumber  zat  bioaktif  penangkal radikal bebas. JPSCR. 1 : 71-82.
Redha  A.  2010.  Flavonoid:  struktur,  sifat antioksidatif  dan  peranannya  dalam sistem  biologis. Jurnal  Belian. 9  (2)  : 196-202.
Romadanu,  Rachmawati  SH,  Lestari  SD.
2014.  Pengujian  aktivitas  antioksidan ekstrak  bunga  lotus  ( Nelumbo  nucifera) . Fishtech. 3 (1) :1-7.
Saisa  dan  Syabriana  M.  2018.  Produksi bioetanol dari limbah kulit kopi menggunakan enzim Zymomonas Mobilis dan Saccharomyces cereviseae.Serambi  Engineering. 3  (1)  :
271-278.
Sancheti S, Sancheti S, Sung
YS.2009.Chaenomeles  sinensis  :  A potent  α-and  β-glucosidase  inhibitor.
American Journal of  Pharmacology and Toxicology. 4 (1): 8-11.
Sugiwati  S,  Setiasih  S,  Afifah  E.  2009. Antihyperglycemic activity of the mahkota  dewa [Phaleria  macrocarpa (scheff.) Boerl.] leaf extracts as an alpha glucosidase
inhibitor.
Makara Kesehatan . 13: 74-78.
Teh  SS,  Bekhit  AED,  Birch  J.  2014. Antioxidative polyphenols from defatted oilseed cakes: effect of solvent.
Antioxidants . 3 (2014) : 67-80. doi:10.3390/antiox3010067.
Vongsak  B,  Sithisarn  P,  Mangmool  S, Thongpradichote  S,  Wongkrajang  Y, Gritsanapan  W.  2013.  Maximizing  total phenoloncs, total flavonoids comtent and antioxidant  activity  of  Moriga  oleifera leaf  extract  by  the  appropriate  extration method. Ind. Crops Prod . 44: 566-571.
Widowati  W.  2008.  Potensi  antioksidan sebagai  antidiabetes. Jurnal  Kesehatan Masyarakat. 7 (2) : 1-10.
Widyawati  PS,  Wijaya  CH,  Harjosworo  PS, Sajuthi  D. 2010. Pengaruh ekstraksi  dan fraksinasi terhadap kemampuan
menangkap  radikal  bebas  DPPH (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil) ekstrak dan fraksi  daun  beluntas (Pluchea  indica Less) .  Seminar  Rekayasa  Kimia  dan
Proses. ISSN: 1411-4216.
Wulandari ET, Elya B, Hanani E, Pawitan JA.
2013. In vitro antioxidant and
cytotoxicity  activity  of    extract  and fraction Pyrrosia    piloselloides (L)  m.g price. Int.  J.  Pharmtech  Res .5  (1):  119- 125.
Ying YM, Zhang LY, Zhang X, Bai HB, Liang DE,  Ma  LF,  Shan  WG,  Zhan  ZJ.2014. Terpenoids with
alpha-glucosidase
inhibitory  activity  from  the  submerged culture of Inonotus obliquss.Phytochemistry. 108:171-176.
Zhang  H,  Wang  G,  Beta  T,  Dong  J.  2015. Inhibitory  properties  of  aqueous  ethanol
extracts of propolis on alpha- glucosidase.
J. Evid. Based Complementary Altern. Med . DOI:10.1144/2015/587383.
Zhu  J,  Zhang  B,  Wanga  B,  Lia  C,  Fua  X, Huanga  Q.2019.  In-vitro  inhibitory eﬀects  of  ﬂavonoids  in Rosa  roxburghii and R.  sterilis fruits  on  α-glucosidase: eﬀect of stomach digestion on ﬂavonoids alone and in combination with acarbose. J. Funct. Foods . 54 :13–21
Zubaidah  E  dan  Sari  DP.  2015.  Pengaruh penambahan  kacang  hijau  pada  media beras IR36  terhadap  pigmen  dan lovastatin angkak. JPA . 3(3): 962-971.