STRUKTUR TULANG BELAKANG FETUS MENCIT ( Mus musculus L.) SETELAH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL RIMPANG TEKI ( Cyperus rotundus L.)
SPINAL STRUCTURES OF MICE FETUS ( Mus musculus L.) AFTER TREATED BY RHIZOME ETHANOL EXTRACT ( Cyperus rotundus L.)
Etika Julitasari 1 *, Nuning Nurcahyani 1 , Hendri Busman 1
1 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung Jl. Prof. Dr. Sumantri Brojonegoro No.1, Bandar Lampung, 35145 *e-mail: etika.julita@gmail.com

## ABSTRAK
Cyperus  rotundus adalah  rumput-rumputan  yang  tumbuh  di  berbagai  habitat,  digunakan  dalam  pengobatan tradisional  karena  dapat  menormalkan  siklus  menstruasi,  menghambat  fertilisasi  dan  implantasi  sehingga proses  kehamilan  sulit  terjadi  dan  jika terjadi  akan  menyebabkan  keliainan  fetus.  Rimpang  teki  mengandung alkaloid,  flavonoid,  tanin,  glikosida,  seskuiterpen  dan  saponin.    Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  ekstrak  etanol  rimpang  teki  pada  berat  dan  panjang  fetus,  serta  struktur  tulang  belakang  fetus. Percobaan dilakukan  selama November 2015-Januari 2016 di Laboratorium Zoologi  untuk pemeliharaan dan perlakuan hewan uji  mencit ( Mus musculus L.) dan di Laboratorium  Kimia Organik  untuk pembuatan ekstrak etanol  rimpang  teki.  Penelitian  menggunakan  rancangan  acak  lengkap  dengan  4  perlakuan  dan  5  ulangan. Perlakuan pemberian  dosis ekstraks  etanol  rimpang  teki  teridiri  dari:  kontrol  diberi 0,4  ml  aquabides  (  A),  45 mg dalam 0,4 ml aquabides (B), 90 mg dalam 0,4 ml aquabides (C), dan 135 mg dalam 0,4 ml aquabides (D). Ekstrak  etanol  rimpang  teki  diberikan  pada  mencit  hamil  pada  hari  ke  6-17  kehamilan  secara  oral menggunakan  sonde  lambung.    Berat  dan  panjang  fetus  dianalisis  ragam  dan  dilanjutkan  dengan  uji  BNT pada taraf α = 5%. Struktur tulang belakang fetus dianalisis secara deskriptif.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa rata-rata berat fetus  yang diberi perlakuan menurun  dibandingkan dengan kontrol, yaitu: 1,746 gram (A),  1,599  gram  (B),  1,386  gram  (C),  dan  1,524  gram  (D).  Panjang  rata-rata  fetus  yang  diberi  perlakuan meningkat  dibandingkan  dengan  kontrol,  yaitu  :  2,84  cm  (A),  2,95  cm  (B),  3,22  cm  (C),  dan  3,13  cm  (D). Diduga ekstrak rimpang teki mengandung zat aktif yang bersifat sitotoksik  bagi fetus mencit. Ekstrak rimpang teki tidak menyebabkan kelainan pada struktur tulang belakang fetus. Hal ini diduga karena ekstrak rimpang teki juga mengandung kalsium sehingga dapat mempertahankan pertumbuhan dan perkembangan tulang.
Kata kunci: Cyperus rotundus , rimpang, Mus musculus , fetus, struktur tulang belakang

## ABSTRACT
Cyperus  rotundus is  a  nut  grass  that  grows  in  a  variety  of  habitats.  The C.  rotundus rhizome  is  used  in traditional  medicine  because  it  can  normalize  the  menstrual  cycle, inhibiting  fertilization, and  implantation  so the process of pregnancy is difficult to occur and if a pregnancy occurs will cause fetal abnormalities. The nut grass rhizomes contain alkaloids, flavonoids, tannins, glycosides, sesquiterpenes and saponins. This research was conducted to observe the  effect of C. rotundus nut grass rhizome ethanol extract on weight, length, and spinal structures of fetus.  The experiments conducted during November 2015-January 2016 at the Laboratory of Zoology for maintenance and treating the test animals,  mice ( Mus musculus L.) and in Organic Chemistry Laboratory  to  prepare  the  extract  ethanol  of C.  rotundus rhizome.    This  experiment  used  a  completely randomized design with 4 treatments and 5 replications.  The treatment dose of ethanol extract of C. rotundus rhizomes C consists of:  control (A) 0.4 ml aquabidest, 45 mg extract in 0.4 ml aquabidest (B), 90 mg extract in 0.4 ml aquabidest (C), and 135 mg extract in 0 , 4 ml aquabidest (D).  Nut grass rhizome ethanol extract was given  to  mice  pregnant  on  6-17  days  of  pregnancy  orally  using  a  stomach  sonde  The  weight  and  length  of fetuses  analyzed  using  ANOVA  and  followed  by  LSD  test  at  level  α  =  5%.  Fetal  spinal  structures  were analyzed  descriptively.  The  results  showed  that  the  average  weight  of  fetuses  treated  decreased  compared with controls, namely: 1,746 grams (A), 1.599 grams (B), 1.386 grams (C), and 1.524 gram (D). The average length of fetuses treated increased compared with controls, ie: 2.84 cm (A), 2.95 cm (B), 3.22 cm (C), and 3.13 cm (D). This is presumably C. rotundus rhizome extract contained active substances that are cytotoxic to the mice  fetus. C.  rotundus rhizome  ekstract  does  not  cause  abnormalities  in  spinal  structures  of  fetus.  This  is presumably  because C.  rotundus rhizome  extract  contain  calcium  so  that  it  can  sustain  the  growth  and development of bones.
Keyword: Cyperus rotundus , rhizome, Mus musculus , fetus, spinal structures

## PENDAHULUAN
Rumput  teki  ( Cyperus  rotundus L.)    merupakan tumbuhan  liar  yang  hidup  di  berbagai  tempat terbuka  sehingga  termasuk  sebagai  gulma (Dalimartha,  2009).  Masyarakat  di  berbagai daerah di Indonesia telah memanfaatkan rumput teki  sebagai  obat  tradisional.  Bagian  rimpang digunakan  untuk  pengobatan  karena  memiliki khasiat  sebagai    antibakteri,  obat  peluruh  haid dan  kontrasepsi,    menghambat  penetrasi sperma,  menghambat  fertilisasi  dan  implantasi, sehingga  proses  kehamilan  sulit  terjadi  dan apabila  terjadi  maka  kemungkinan  fetus  akan mengalami  kecacatan  (Winarno  dan  Sundari, 1997).
Komponen  aktif  dalam  rimpang  teki  adalah seskuiterpen dan  berbagai  bahan  kimia  yaitu alkaloid,  flavonoid,  tanin,  pati,  glikosida,  dan saponin  (Subhuti,  2005).  Dengan  adanya berbagai  zat  kimia  tersebut  maka  dilakukan penelitian  mengenai  uji  teratogenik  dari  ekstrak rimpang  teki  untuk  mengetahui  ada  atau tidaknya  kelainan  pada  fetus  hewan  uji  berupa mencit  ( Mus  musculus L.).    Pada  penelitian  ini dilakukan  pengamatan  terhadap  penurunan berat  badan  dan  panjang  fetus,  serta  kelainan pada  struktur  tulang  belakang  fetus  mencit, dimana proses pembentukan dan perkembangan  tulang  (osifikasi)  pada  fetus mencit terjadi pada hari kehamilan ke-11 sampai ke-17  sehingga  pada  masa  itu  sangat  rentan terhadap senyawa teratogen (Rugh, 1968).

## BAHAN DAN METODE Alat dan Bahan
Alat- yang digunakan dalam penelitian ini adalah kandang  mencit  beserta  penutup  yang  terbuat dari  kawat  sebanyak  20  unit,  wadah  pakan mencit,  botol  minum  mencit,  sonde  lambung yang dihubungkan dengan alat suntik, mikropipet,  tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi, erlenmeyer, gelas ukur, seperangkat alat bedah, kertas  label,  kamera  tipe  SM-J500G,  botol  film, jangka sorong, dan timbangan digital.
Bahan  yang  digunakan  adalah  20  ekor  mencit betina  dan  20  ekor  mencit    jantan  berumur  3-4 bulan  dengan  berat  sekitar  40  gram,  sekam padi,  pelet,  air  minum  mencit,  ekstrak  rimpang teki,  aquabides,  kloroform,  kapas,  alkohol  90%, larutan  KOH  1%,  larutan  Alizarin  Red,  dan alkohol 70%.
Cara Kerja

## 1.  Persiapan kandang dan hewan uji
Kandang mencit beserta penutupnya sebanyak  20  unit  dibersihkan  dengan alkohol  dan  diberi  alas  berupa  sekam  padi. Mencit  kemudian  diaklimatisasi  selama  1 minggu  dengan  diberi  pakan  berupa  pelet dan air minum setiap harinya.

## 2.  Persiapan dan Pembuatan Ekstrak Rimpang Teki
Pembuatan  ekstrak  rimpang  teki  dengan metode maserasi. Rimpang teki dibersihkan,  dicuci,  dan  dijemur  hingga kering  kemudian  digiling  hingga  menjadi serbuk.    Dilakukan  maserasi  dengan  cara merendam  500  gram  serbuk  rimpang  teki
11 / Jurnal Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati                                                                           Etika Julitasari
dalam  2  liter  larutan  etanol  selama  24  jam. Kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring.    Cairan  hasil  saringan  tersebut  lalu dipekatkan menggunakan alat rotary evaporator selama 4 jam dengan suhu 50 o C dan tekanan 120 atm.

## 3.  Pemberian Perlakuan
Satu  ekor  mencit  betina  disatukan  secara alami  dengan  satu  ekor  mencit  jantan  ke dalam  satu  kandang  dan  diberi  pakan berupa pelet dan air minum.  Pada pagi hari dilakukan  pengamatan  di  daerah  vagina pada  mencit  betina.    Apabila  ditemukan sumbat  vagina,  maka  mencit  dinyatakan telah  melakukan  kopulasi  dan  dihitung sebagai kehamilan hari ke-0 (Silvia, 2011).
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  dengan  4  perlakuan  dan  5 kali  pengulangan.    Pemberian  ekstrak rimpang teki dilakukan dengan cara dicekok (secara  oral)  menggunakan  alat  sonde lambung  mulai  dari  kehamilan  hari  ke  6 sampai ke 17 dengan dosis:
1.  Kontrol,  diperlakukan  dengan  diberi  0,4
ml aquabides (A)
2.  Dosis 45 mg dalam 0,4 ml aquabides (B)
3.  Dosis 90 mg dalam 0,4 ml aquabides (C)
4.  Dosis  135  mg  dalam  0,4  ml  aquabides
(B)

## 4.  Pengamatan
Pada  kehamilan  hari  ke  18  mencit  dibedah dan  fetus  dikeluarkan dari  uterus,  kemudian dibersihkan dengan  air mengalir dan
dilakukan  penimbangan  berat  badan  dan pengukuran  panjang  fetus.    Selanjutnya dikeluarkan organ dalam fetus dan dilakukan preparasi  tulang  belakang  fetus  dengan pewarna  Alizarin  Red.    Pembuatan  larutan Alizarin  Red  dengan  cara  menambahkan  6 mg  bubuk  Alizarin  Red  ke  dalam  1  liter larutan  KOH  1%  (Manson et  al., 1982).
Pengamatan  struktur  tulang  belakang  fetus dilakukan  secara  deskriptif  untuk  melihat ada  atau  tidaknya  kelainan  dibandingkan dengan fetus normal (kontrol).

## 5.  Analisis data
Data  hasil  penelitian  berupa  anatomi  tulang belakang  fetus  dianalisis  secara  deskriptif. Panjang dan berat fetus dianalisis menggunakan  Analisis  Ragam  (ANARA). Apabila  terdapat  perbedaan  yang  nyata, maka  akan  dilakukan  uji  lanjut  dengan  uji beda nyata terkecil (BNT) pada taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1.  Berat Badan dan Panjang Fetus
Pada  kehamilan  hari  ke  18,  induk  mencit dibedah  dan  fetus  dikeluarkan  dari  uterus. Data berat badan fetus mencit disajikan pada Gambar 1.
Gambar  1.  Penurunan  berat  badan  fetus  setelah pemberian  ekstrak  rimpang  teki.  Angka yang  diikuti  huruf superskrip berbeda menunjukkan  beda  nyata  berdasarkan  uji BNT 5%
1,746 a 1,599 ab 1,386 b 1,524 b 0 0.5 1 1.5 2 Kontrol (A) Dosis 45 mg
(B) Dosis 90 mg (C) Dosis 135 mg (D) B er at (g ram) Perlakuan
Berdasarkan  Gambar  1,  rata-rata  berat badan  fetus  mencit  yang  diberi  perlakuan mengalami  penurunan  berat  badan  apabila dibandingkan  dengan  fetus  yang  tidak  diberi perlakuan  (kontrol).    Setelah  dilakukan analisis  varian  dengan  taraf  signifikasi  5%, menunjukkan  hasil  yang  signifikan  dan  uji lanjut  menggunakan  BNT  dengan  taraf  5% menunjukkan adanya perbedaan nyata antara kontrol dengan perlakuan dosis 90 mg (C)  dan  perlakuan  dosis  135 mg  (D), namun tidak  ada  perbedaan  nyata  antara  kontrol dengan perlakuan dosis 45 mg (B) dan antar perlakuan  B,  C,  dan  D.    Data  panjang  fetus mencit disajikan pada Gambar 2.
Gambar  2.  Pertambahan  panjang  badan  fetus setelah  pemberian  ekstrak  rimpang  teki. Angka  yang  diikuti  huruf  superskrip berbeda menunjukkan beda nyata berdasarkan uji BNT 5%
Berdasarkan  Gambar  2,  rata-rata  panjang fetus mencit yang diberi perlakuan mengalami  penambahan  panjang  badan apabila  dibandingkan  dengan  fetus  yang tidak  diberi  perlakuan  (kontrol).    Setelah dilakukan  analisis  varian  dengan  taraf signifikasi  5%  dan  uji  lanjut  menggunakan BNT  dengan  taraf  5%  menunjukkan  adanya perbedaan  nyata  antara  kontrol  dengan perlakuan  C,  kontrol  dengan  perlakuan  D,
perlakuan  B  dengan  perlakuan  D,  namun tidak  ada  perbedaan  nyata  antara  kontrol dengan perlakuan B, perlakuan B dengan D, serta perlakuan C dengan D.

## 2.  Tulang Belakang Fetus
Fetus  mencit  yang  sudah  dikeluarkan  dari uterus  dan  dibersihkan  organ  dalamnya kemudian dilakukan preparasi tulang belakang fetus menggunakan larutan Alizarin Red.
(a)
(b)

## (c)
(d)
Gambar  3.  Fetus  dari  perlakuan  ekstrak  etanol  (a)
Kontrol, (b) dosis 45 mg, (c) Dosis 90 mg,
(d) Dosis 135  mg.
Berdasarkan Gambar 3, pengamatan terhadap  tulang  belakang  fetus  mencit dilakukan  dengan  cara  mengamati  struktur
2,84 a 2,95 a 3,22 b 3,13 bc 2.6 2.8 3 3.2 3.4 Kontrol (A) Dosis 45 mg (B) Dosis 90 mg (C) Dosis 135 mg (D) Pan jan g (cm) Perlakuan
13 / Jurnal Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati                                                                           Etika Julitasari
tulang  belakang  fetus  meliputi  servikalis, torakalis, dan lumbalis. Setelah dibandingkan  antara  tulang  belakang  fetus normal  dan  yang  diberi  perlakuan,  tidak ditemukan  adanya  kelainan  pada  tulang belakang pada semua tingkatan dosis.

## Pembahasan

## 1.  Berat Badan dan Panjang Fetus
Pada  penelitian  ini  dilakukan  pengamatan terhadap  berat  badan  fetus.    Berat  badan merupakan parameter penting untuk mengetahui  efek  teratogenik  suatu  senyawa terhadap  fetus  hewan  uji  yang  ditandai dengan penurunan berat badan fetus (Wilson dan  Warkany,  1965    dan  Setyawati,  2009). Pada  penelitian  ini,  berat  badan  fetus  yang tidak  diberi  perlakuan  (kontrol)  lebih  rendah dibandingkan  fetus  yang  diberi  perlakuan ekstrak rimpang teki
Penurunan  berat  badan  fetus  adalah  efek dari  pemberian    ekstrak  rimpang  teki  pada fase  organogenesis  sehingga  menyebabkan kelainan  berupa  berat  badan  yang  tidak normal.    Berat  badan  yang  tidak  normal terjadi  karena  senyawa  teratogen  pada ekstrak rimpang teki mempengaruhi proliferasi  sel,  sehingga  terjadi  hambatan pada  sintesis  asam  nukleat,  protein,  atau polisakarida  (Wilson,  1973  dan  Siburian  dan Marlinza, 2009).
Pada  saat  fetus,  sel-sel  tubuh  mampu membelah  dengan  cepat  sehingga  sangat rentan terhadap senyawa yang bersifat toksik
yang  diberikan  kepada  induk  mencit  saat kehamilan.    Hal  itu  dapat  terjadi  karena ekstrak  yang  diberikan  kepada  induk  mencit akan  berpindah  ke  fetus  melalui  plasenta, yaitu  melalui  jalan  yang  sama  yang  dilalui oleh zat gizi yang diperlukan untuk pertumbuhan dan perkembangan fetus (Suryawati, 1990 dan  Muna  dll., 2011).
Ekstrak rimpang teki mengandung komponen aktif  yaitu α-cyperone,  β-selinene,  cyperene, cyperotundone,  patchoulenone,  sugeonol, kobusone, dan isokobusone serta  berbagai bahan  kimia  yaitu  alkaloid,  flavonoid,  tanin, pati,  glikosida,  dan  saponin  (Subhuti,  2005). Berbagai  senyawa  yang  terkandung  dalam ekstrak  rimpang  teki  membuat  ekstrak rimpang  teki  memiliki  efek  sitotoksik  (Lawal dan  Adebola,  2009).    Dengan  adanya  efek sitotoksik  dari  ekstrak  rimpang  teki  ini dimungkinkan  dapat  menyebabkan  kematian beberapa  sel  sehingga  menyebabkan  berat badan  fetus  yang  diberi  perlakuan  lebih rendah dibandingkan dengan kontrol.
Pertambahan panjang fetus dipengaruhi oleh hormon pertumbuhan yang akan mempengaruhi metabolisme protein, elektrolit,  karbohidrat,  dan  lemak.  Sekresi hormon pertumbuhan dikontrol oleh hipotalamus dengan cara mensekresi Growth Hormone-Releasing Hormone (GHRH)  dan Growth  Hormone-Inhibiting  Hormone (GHIH) ke  dalam  darah  yang  akan  mempengaruhi sel-sel  tubuh  dalam  memproduksi  hormon
pertumbuhan.  Pertambahan  panjang  badan fetus  yang  diberi  perlakuan  tersebut  diduga karena  kerja  hipotalamus  dalam  mensekresi GHRH  dan  GHIH  terganggu  oleh  adanya alkaloid,  flavonoid,  dan  saponin  dalam ekstrak  rimpang  teki  yang  merupakan xenobiont (zat asing dalam tubuh) (Widyastuti  dll., 2006).

## 2.  Tulang Belakang Fetus
Pengamatan  terhadap  tulang  belakang  fetus dilakukan  secara  visual  dengan  memban- dingkan  tulang  belakang  fetus  kontrol dengan  fetus  yang  diberi  perlakuan.    Pada fetus  normal  (kontrol)  terdapat  7  tulang servik,  13  tulang  thorak,  6  tulang  lumbalis,  6 tulang  sakral,  dan  2  atau  3  tulang  kaudal (Sukandar  dll., 2008).  Setelah dibandingkan dengan  fetus  normal,  pada  fetus  yang  diberi perlakuan  tidak  ditemukan  adanya  kelainan pada  tulang  belakang  fetus  pada  tingkatan dosis.
Terdapat  3  cara  untuk  mengetahui  pertum- buhan  dan  perkembangan  skeleton,  yaitu jumlah  komponen  skeleton  dan  tingkat osifikasinya  (sempurna  atau  tidaknya  proses osifikasi),  dan  ada  atau  tidaknya  kelainan dalam  pembentukan  skeleton.    Berdasarkan hasil pengamatan pada penelitian ini menunjukan  bahwa  tidak  terdapat  kelainan pada  struktur  tulang  belakang  fetus  mencit setelah diberi perlakuan ekstrak rimpang teki. Hal  ini  diduga  karena  di  dalam  ekstrak rimpang  teki mengandung  kalsium sebanyak (16,40  ±  0,32)  mg/100  g.    Menurut  Dewoto
(2007),  nutrisi  yang  paling  penting  untuk pertumbuhan  dan  perkembangan  tulang adalah  kalsium.    Kalsium  memegang  dua peranan fisiologis penting di dalam tubuh.  Di dalam tulang, garam-garam kalsium berperan  pada  proses  kalsifikasi,  sehingga tulang  menjadi  keras.    Pengerasan  tulang berfungsi  untuk  menopang  berat  badan. Sedangkan di dalam cairan ekstraseluler dan sitosol,  kalsium  berperan  pada  berbagai proses  biokimia  tubuh  dalam  bentuk  ion-ion kalsium (Setiyohadi, 2009).
Tidak  terjadinya  kelainan  struktur  tulang belakang pada fetus setelah diberi perlakuan ekstrak  rimpang  teki  juga  disebabkan  oleh fetus  yang  sedang  tumbuh  mengambil prioritas  dari  banyaknya  jenis  nutrisi  dalam cairan  induk  sehingga  tulang  fetus  dapat terus  tumbuh  dan  berkembang.    Hal  ini berhubungan dengan fungsi plasenta sebagai  tempat  penyimpanan  nutrisi  bagi fetus.    Plasenta  menyimpan  sejumlah  besar nutrisi  seperti  kalsium,  besi,  protein,  dan glukosa  yang  digunakan  untuk  pertumbuhan fetus.    Selain  plasenta,  sebagian  kalsium juga  disimpan  dalam  tubuh  induk  seperti pada  gigi  dan  tulang.    Apabila  kebutuhan kalsium  fetus  berkurang  maka  simpanan kalsium pada tulang dan gigi inilah yang akan dimobilisasi  untuk  osifikasi  tulang  pada  fetus (Guyton, 1990).
15 / Jurnal Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati                                                                           Etika Julitasari

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  diambil kesimpulan  bahwa  pemberian  ekstrak  rimpang teki  pada  mencit  hamil  memberikan  pengaruh menurunkan  berat  badan  fetus  dan  menambah panjang fetus mencit.  Namun, tidak menyebab- kan kelainan pada struktur tulang belakang fetus mencit.

## Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai zat  atau  kandungan  spesifik  dalam  ekstrak rimpang  teki  yang  dapat  menyebabkan  efek teratogen terhadap fetus mencit.

## DAFTAR PUSTAKA
Dalimartha, S. 2009. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 6. Pustaka Bunda. Jakarta.
p 157
Dewoto, H.R. 2007. Farmakologi dan Terapi: Vitamin dan Mineral Edisi 5 . Balai Penerbit FK UI. Jakarta.
Guyton, A.C. 1990. Fisiologi Kedokteran .
Terjemahan Dharrna, A., dan P.,
Lukmanto. EGC. Jakarta.
Lawal, O.A. dan Adebola, O.O. 2009. Chemical Composition of The Essential Oils of
Cyperus rotundus L. from South Africa.
Journal Molecules. 14 (150). pp 2909- 2917.
Manson, J.M., Zenick, H., and Costlow, R.D.
1982. Teratology Test Method for Laboratory Animals . Ravent Press. New York.
Muna, L., Astirin, O.P., dan Sugiyarto. 2011. Uji Teratogenik Ekstrak Pandanus conoideus varietas buah kuning Terhadap Perkembangan Embrio Tikus Putih ( Rattus norvegicus ). Nusantara Bioscience . 2. pp 126-134.
Rugh, R. 1968. The Mouse : Its Reproduction and Development . New York. Burger Publishing Company. p 20
Setiyohadi, B. 2009 . Peran Kalsium dan Vitamin D Pada Metabolisme Tulang . Subbagian Reumatologi, Bagian Ilmu Penyakit Dalam FKUI/RSCM. Jakarta.
Setyawati, I. 2009. Penampilan Reproduksi Dan Perkembangan Skeleton Fetus Mencit Setelah Pemberian Ekstrak Buah Nanas Muda. Jurnal Veteriner . 12 (3). pp 192- 199.
Siburian, J. dan Marlinza, R. 2009. Efek Pemberian Ekstrak Akar Pasak Bumi ( Eurycoma Longifolia Jack) Pada Tahap Prakopulasi Terhadap Fertilitas Mencit ( Mus Musculus L.) Betina. Biospesies . 2
(2). pp 24-30.
Silvia, G.A. 2011. Pengaruh Pemberian Suspensi Sari Akar Manis Terhadap Perkembangan Janin Pada Mencit Bunting. (Skripsi). FMIPA Universitas Indonesia. Jakarta. p 14-15.
Subhuti, D. 2005. Cyperus Primary Oil Regulating Herb of Chinese Medicine. Institute For Traditional Medicine. Oregon Portland. p 2.
Sukandar, E.Y., Fidrianny, I., dan Garmana, A.N. 2008. Pengaruh Kombinasi Ekstrak Umbi Lapis Bawang Putih dan Ekstrak Rimpang Kunyit Tehadap Janin Mencit Swiss-Webster. JKM . 8(1). pp 36-44.
Suryawati, S. 1990. Pemakaian Obat Pada Kehamilan . Laboratorium Farmakologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta.
Widyastuti, N., Widiyani, T., dan Listyawati, S.
2006. Efek Teratogenik Ekstrak Buah Mahkota Dewa ( Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl.) pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus L.) Galur Winstar. Bioteknologi . 3 (2). pp 56-62.
Wilson, J.G. 1973. Environment and Birth Defects. Academic Press. New York. pp.6- 8.
Wilson, J.G. and Warkany, J. 1965. Teratology - Principles and Techniques . University of Chicago Press. Chicago and London. p 16-18.
Winarno, W.M. dan Sundari, M. 1997. Informasi Tanaman Obat Untuk Kontrasepsi Tradisional . Pusat Penelitian Dan Pengembangan Farmasi. Badan Penelitian Dan Pengembangan Kesehatan Departemen Kesehatan RI. Jakarta.