Jurnal Pharmascience, Vol. 10, No. 1, Februari 2023, hal: 69-81 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article
Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak Kulit Pisang Kepok (Musa paradisiaca L.) dan Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus (Weber) Britton & Rose) dengan Metode DPPH
Baiq Ridho Amalia, Handa Muliasari*, Agriana Rosmalina Hidayati
Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Mataram, Mataram, Nusa Tenggara Barat, Indonesia
Email: handamuliasari@gmail.com

## ABSTRAK
Senyawa antioksidan mampu meredam senyawa radikal bebas sehingga menjadi substansi  yang  tidak  berbahaya.  Sumber  antioksidan  dibagi  dalam  dua  kategori, antioksidan sintetis dan alami. Antioksidan alami dapat diperoleh dari bahan alam, salah satunya kulit pisang kepok (Musa paradisiaca L.) dan kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus (Weber) Britton & Rose). Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antioksidan yang dihasilkan ekstrak tunggal kulit buah pisang kepok (KPK) dan kulit naga merah (KNM) serta aktivitas antioksidan kombinasi keduanya. Kombinasi ekstrak KPK  dan  KNM  dibuat  dengan  rasio  (1:1);  (1:2);  dan  (2:1).  Ekstrak  KPK  dan  KNM mengandung  senyawa  flavonoid  yang  berperan  dalam  aktivitas  antioksidan  yang dihasilkan. Uji aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode DPPH. Nilai IC 50 ekstrak tunggal  KPK  dan  KNM  adalah  79,34  ±  1,139  ppm  dan  79,96  ±  0,899  ppm.  Nilai  IC 50 Kombinasi ekstrak KPK dan KNM dengan variasi (1:1); (1:2); dan (2:1) adalah 19,50 ± 2,552  ppm;  58,38  ±  2,338  ppm;  dan  18,76  ±  1,605  ppm.  Uji  one  way  ANOVA menunjukkan nilai IC 50 ekstrak tunggal dan kombinasinya berbeda signifikan (p < 0,05). Kombinasi ekstrak KPK dan KNM menghasilkan aktivitas antioksidan yang lebih kuat dibandingkan dengan ekstrak tunggalnya.
Kata Kunci: Sonikasi, KLT, Flavonoid, Kombinasi Ekstrak, DPPH

## ABSTRACT
Antioxidant compounds  can reduce  free radical compounds  and  become harmless substances. Antioxidants are divided into two, which are synthetic and natural antioxidants. Natural antioxidants can be obtained from natural ingredients, such as the peel of kepok banana (Musa paradisiaca L.) and the peel of the red dragon fruit (Hylocereus polyrhizus
(Weber) Britton & Rose). The goals of this study are to determine the antioxidant activity of extract kepok banana peel (KPK), red dragon fruit peel (KNM) and extract combination of both. The combination of KPK and KNM extracts was made in a ratio of (1:1); (1:2); and (2:1). KPK and KNM extracts contain flavonoid compounds which are responsible for the antioxidant activity produced. The antioxidant test was carried out using the DPPH method. The IC 50 values of the single extracts of KPK and KNM were 79.34 ± 1.139 ppm and 79.96 ± 0.899 ppm. IC 50 value combination of KPK and KNM extracts with variation (1:1); (1:2); and  (2:1)  are  19.50  ±  2.552  ppm;  58.38  ±  2.338  ppm;  and  18.76  ±  1.605  ppm.  One  way ANOVA  test  showed  that  the  IC 50 values  of  single  extracts  and  their  combinations  were significantly different (p < 0.05). The combination of KPK and KNM extracts had stronger antioxidant activity than the single extracts.
Keywords: Sonication, TLC, Flavonoids, Extract Combination, DPPH

## I. PENDAHULUAN
Antioksidan  adalah  senyawa  yang dapat  meredam  senyawa  radikal  bebas. Paparan  radikal  bebas  pada  tubuh  dapat memicu  munculnya  berbagai  masalah kesehatan yang membahayakan.
Mekanisme kerja dari senyawa antioksidan adalah dengan mendonorkan satu elektronnya  kepada  senyawa  radikal  yang tidak  stabil,  sehingga  menjadi  netral  dan tidak  mengganggu  metabolisme  tubuh (Rahmi, 2017). Senyawa antioksidan dapat dihasilkan  secara  alami  dari  tanaman maupun secara sintetis. Sumber antioksidan alami  telah  banyak  ditemukan  pada  buah- buahan (Perangin-angin et al ., 2019).
Buah  tropis  seperti  pisang  kepok ( Musa  paradisiaca L.)  dan  buah  naga merah  ( Hylocereus  polyrhizus) tumbuh subur  di  Indonesia  yang  beriklim  tropis. Berdasarkan data BPS, ekspor produk buah naga  Indonesia  terus  meningkat  selama periode  2015-2019  sebesar  7,51%.  Untuk buah  pisang,  menurut  data  BPS  provinsi
Nusa Tenggara Barat dari 2015-2019 nilai ekspor buah pisang mengalami peningkatan mencapai 9,97%. Data ekspor yang terus meningkat menunjukkan ketersediaan  buah  pisang  kepok  dan  naga merah yang melimpah. Kulit pisang kepok (KPK)  dan  kulit  naga  merah  (KNM) memiliki  potensi  untuk  dimanfaatkan sebagai  sumber  antioksidan  alami  (Zhang et al ., 2015).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa KPK mengandung metabolit sekunder  seperti  flavonoid  yang  memiliki aktivitas sebagai antioksidan. Jenis flavonoid  yang  banyak  terkandung  di dalam  kulit  pisang  kepok  adalah  katekin, gallokatekin  dan  epikatekin  (Cahyani, 2019).  KPK  dengan  tingkat  kematangan sangat matang memiliki IC 50 sebesar 68,74 ppm  yang  termasuk  dalam  kategori antioksidan  kuat  (Saputri et  al .,  2020). Kandungan metabolit sekunder KNM yang memiliki  efek  sebagai  antioksidan  adalah flavonoid. Flavonoid yang banyak
ditemukan  pada  kulit  buah  naga  merah adalah  senyawa  flavanon  (Nuari,  2017). Nilai  IC 50 ekstrak  KNM  adalah sebesar 76,19  ppm  yang  termasuk  dalam  kategori antioksidan kuat (Martati, 2016).
Ekstrak  KPK  dan  KNM  dapat dijadikan  sebagai  sumber  antioksidan alternatif.  Penelitian  terkait  antioksidan alternatif  perlu  dilakukan  untuk  menjadi alternatif  penggunaan  antioksidan  sintetis. Penelitian terhadap hewan uji menunjukkan  antioksidan  sintetis  seperti BHA,  BHT  dan  TBHQ  yang  sering ditambahkan dalam produk makanan, dapat memicu  timbulnya  karsinogenesis  dan kerusakan  hati  apabila  digunakan  dalam jangka  waktu  yang  panjang  (Lourenco et al ., 2019).
Berdasarkan  paparan studi literatur tersebut  perlu  dilakukan  uji  aktivitas antioksidan yang dihasilkan oleh kombinasi  KPK  dan  KNM.  Penggunaan kombinasi ekstrak tanaman mampu memberikan  aktivitas  antioksidan  yang lebih  baik  dibandingkan  dengan  ekstrak tunggalnya.  Uji  aktivitas  antioksidan dilakukan  dengan  metode  DPPH  ( 2,2- difenil-1-pikrilhidrazil). Metode  tersebut dipilih  karena  terbukti  akurat,  reliabel, sederhana,  cepat,  praktis,  peka  dan membutuhkan sampel yang sedikit (Sanchez,  2002).  Senyawa  antioksidan yang  memiliki  atom  hidrogen  mampu berikatan  dengan  elektron  bebas  yang  ada
pada  senyawa  DPPH,  sehingga  menjadi senyawa non-radikal yang ditandai dengan berubahnya  warna  ungu  larutan  menjadi kuning. Parameter uji yang diamati adalah nilai  IC 50 ,  yaitu  konsentrasi  senyawa antioksidan  yang  menyebabkan  hilangnya 50% aktivitas DPPH (Setiawan, 2018).

## II. METODE PENELITIAN

## A. Bahan dan Alat
Bahan  yang  diperlukan  adalah adalah  aquades,  etanol  70%,  etanol  p.a ( Merck ® ),  kulit  pisang  kepok  ( Musa paradisiaca L.),  kulit  buah  naga  merah ( Hylocereus  polyrhizus ),  reagen  DPPH ( Smart-Lab ® ),  asam  klorida  (HCl)  2N
( Merck ® ),  serbuk  magnesium  ( Merck ® ), silika  gel  60  GF 254 ( Smart-Lab ® ),  AlCl 3 10% ( Merck ® ), kuersetin ( Sigma ® ), alumunium  foil,  masker,  sarung  tangan, tisu, kertas saring.
Alat  yang  dibutuhkan  adalah  alat- alat gelas, cawan petri ( Normax ® ), blender ( Philips ® ), Accupate  analog  hotplate stirrer ( SH-2  Magnetic  Stirrer ® ), rotary evaporator dan chiller ( Heidolph ® and Huber ®
Minichiller 300), oven ( Memmert ® ), sonikator ( Elmasonic ® ), Spektrofotometer  UV/Vis Analytic Jena Specord 200 plus ® , termometer, timbangan analitik ( Ohaus ® ), vortex ( Labnet International ® ),  wadah  simplisia  sampel, wadah  ekstrak, waterbath ( Labtech ® ), mikropipet  ( Dragon Med ),  pipet  tetes
( OneMed ® ),  pisau, rubber  bulb ,  tabung reaksi ( Pyrex ® ), pipa kapiler.

## B. Pembuatan simplisia
Sampel pisang kepok dan buah naga merah  dipisahkan  antara  daging  buah  dan kulitnya. Bagian kulit dicuci sampai bersih dan dirajang agar ukurannya menjadi kecil dan  tipis.  Sampel  KPK  dan  KNM dikeringkan  dengan  cara  kering-angin selama  24  jam,  kemudian  pengeringan dilanjutkan  dengan  oven  pada  suhu  40 0 C selama  8  jam.  Sampel  diblender  sampai halus dan disimpan pada wadah tertutup.

## C. Pembuatan Ekstrak
Sampel  diekstraksi  dengan  metode sonikasi.  Pelarut  yang  digunakan  adalah etanol 70%. Masing-masing simplisia KPK dan  KNM  ditimbang  sebanyak  100  gram. Kemudian, diberikan etanol 70% sebanyak 200  mL.  Sampel  disonikasi  selama  30 menit  dengan  suhu  30 0 C.  Dilakukan  re- ekstraksi  sebanyak  2  kali.  Ekstrak  cair dipekatkan  dengan rotary  evaporator ( Heidolp ® )dan waterbath ( Labtech ® ) pada suhu 40 0 C.

## D. Skrining Fitokimia Flavonoid
Uji  tabung  fitokimia  flavonoid dilakukan  dengan  menimbang  1  gram ekstrak,  dilarutkan  dengan  5  mL  etanol 70%, masukkan ke dalam tabung reaksi dan tambahkan  0,5  mL  HCl  pekat  dan  1  mg
serbuk  magnesium  (Mg).  Selanjutnya, dipanaskan  selama  ±15  menit.  Apabila terjadi  perubahan  warna  menjadi  kuning atau  merah  maka  positif  mengandung flavonoid (Baharuddin, 2017).

## E. Identifikasi KLT Flavonoid
Identifikasi flavonoid ekstrak etanol dari kedua sampel dilakukan menggunakan Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  dengan plat silika gel 60 GF 254 (4 x 10 cm) sebagai fase  diam  dan  campuran  kloroform:etil asetat:n-butanol  (5:4:1)  sebagai  eluen. Senyawa  standar  kuersetin  dijadikan sebagai  pembanding.  Ditimbang  10  mg sampel,  larutkan  dalam  1  mL  etanol  70% lalu  ditotolkan  ekstrak  pada  plat.  Setelah dielusi,  diangkat  plat  KLT  dan  diangin- anginkan  agar  kering,  kemudian  diamati noda yang terbentuk dibawah sinar UV 254 dan  366  nm.  Selanjutnya,  disemprot  plat KLT  menggunakan  AlCl 3 10%  dan  dilihat kembali penampakan nodanya pada panjang  gelombang  366  nm.  Apabila dihasilkan noda dengan warna kuning atau hijau  lembayung  maka  sampel  positif mengandung  flavonoid.  Dihitung  nilai  Rf ( Retardation  factor )  untuk  masing-masing senyawa metabolit sekunder dengan persamaan  berikut  (Kusnadi  dan  Devi, 2017).
Rf = Jarak yang ditempuh oleh zat yang diteliti Jarak yang ditempuh oleh pelarut

## F. Pembuatan Larutan Stok DPPH dan Kuersetin
Larutan stok DPPH 0,4 mM dibuat dengan  menimbang  sebanyak  15,77  mg kristal  DPPH  (BM  394,33),  dilarutkan dengan  100  mL  etanol  p.a.  Kemudian, diencerkan  menjadi  DPPH  0,1  mM sebanyak  100  mL.  Pengerjaan  dilakukan pada  ruangan  yang  terlindung  dari  cahaya dan larutan dibuat untuk segera digunakan (Wimpy, 2017).
Dibuat larutan  stok kuersetin dengan  menimbang  10  mg  baku  kristal kuersetin dan dilarutkan pada labu ukur 100 mL  dengan  etanol  p.a.  Lalu,  dibuat  seri konsentrasi  1,  2,  3,  4,  5,  dan  6  ppm sebanyak  10  mL.  Volume  dicukupkan sampai  tanda  batas  dengan  menggunakan etanol  p.a  lalu  dihomogenkan  (Suyatmi, 2019).

## G. Penentuan Operating Time
Dimasukkan 2 mL kuersetin 4 ppm ke  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan dengan  2  mL  DPPH  0,1  mM.  Kemudian, larutan dikocok hingga homogen.
Penentuan operating  time dilakukan  pada panjang  gelombang  517  nm  selama  60 menit. Menit yang menghasilkan absorbansi paling stabil ditetapkan sebagai operating time (Mulangsri et al ., 2017).
H. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Larutan DPPH 0,1 mM sebanyak 3 mL diinkubasi selama operating time yang didapatkan  pada  ruangan  yang  gelap. Absorbansi DPPH diukur dengan spektrofotometer  UV-Vis  ( Analytic  Jena Specord  200  plus ® ) pada  rentang  panjang gelombang  500-560 nm.  Absorbansi sampel  diukur  sampai  didapatkan  panjang gelombang maksimum, yaitu Ketika diperoleh  absorbansi  tertinggi  (Molyneux, 2004).

## I. Pengukuran Absorbansi DPPH
Dimasukkan  2  mL  larutan  DPPH
0,1  mM  ke  dalam  tabung  reaksi, ditambahkan  dengan  2  mL  etanol  p.a. Kemudian,  larutan  dihomogenkan  dengan cara  divortex  selama  30  detik.  Larutan diinkubasi  pada  kondisi  terlindung  dari cahaya selama operating time . Absorbansi DPPH diukur menggunakan spektrofotometri  UV-Vis  ( Analytic  Jena Specord 200 plus ® ) pada panjang gelombang maksimum.

## J. Pengukuran Absorbansi Kuersetin
Pengukuran  absorbansi  kuersetin dilakukan untuk membandingkan nilai IC 50 senyawa  standar  kuersetin  dengan  sampel ekstrak  KPK  dan  KNM.  Masing-masing seri konsentrasi larutan kuersetin yang telah dibuat  dipipet  sebanyak  2  mL  dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang sudah  ditutupi  aluminium  foil.  Setiap
tabung  reaksi  ditambahkan  dengan  2  mL DPPH 0,1 mM. Larutan divortex selama 30 detik  agar  homogen  dan  diinkubasi  pada kondisi  terlindung  dari  cahaya  selama  OT dan  absorbansi  diukur  pada  panjang gelombang maksimum (Wulandari, 2015).

## K. Pengukuran Absorbansi Ekstrak

## Tunggal KPK dan KNM
Masing-masing  sebanyak  50  mg ekstrak KPK dan KNM dilarutkan  dengan 50  mL  etanol  70%  sebagai  larutan  induk. Diencerkan larutan induk untuk memperoleh  seri  konsentrasi  20,  40,  60, dan  80  ppm  sebanyak  10  mL.  Aktivitas antioksidan diukur dengan sebanyak 2 mL larutan  sampel  ditambahkan  2  mL  larutan DPPH 0,1 mM.

## L. Pengukuran Absorbansi Kombinasi
Ekstrak KPK dan KNM
1. Kombinasi  ekstrak  perbandingan
(1:1)
Untuk  rasio  (1:1),  dipipet  larutan induk KPK:KNM masing-masing sebanyak 0,25:0,25  mL;  0,5:0,5  mL;  0,75:0,75  mL; dan  1,0:1,0  mL  untuk  membuat  seri konsentrasi  20,  40,  60,  dan  80  ppm.  Seri konsentrasi dibuat sebanyak 25 mL dengan etanol 70%.
2. Kombinasi  ekstrak  perbandingan
(1:2)
Untuk  rasio  (1:2),  dipipet  larutan induk KPK:KNM masing-masing sebanyak 0,25:0,5 mL; 0,5:1,0 mL; 0,75:1,5 mL; dan 1,0:2,0 mL untuk membuat seri konsentrasi 30, 60, 90, dan 120  ppm. Seri  konsentrasi dibuat sebanyak 25 mL dengan etanol 70%.

## 3. Kombinasi  ekstrak  perbandingan (2:1)
Untuk  rasio  (2:1),  dipipet  larutan induk KPK:KNM masing-masing sebanyak 0,5:0,25 mL; 1,0:0,5 mL; 1,5:0,75 mL; dan 2,0:1,0 mL untuk membuat seri konsentrasi 30, 60, 90, dan 120  ppm. Seri  konsentrasi dibuat sebanyak 25 mL dengan etanol 70%.
Diukur aktivitas antioksidan dengan mengambil  masing-masing  2  mL  larutan sampel  dan  direaksikan  dengan  2  mL larutan DPPH 0,1 mM.

## M. Analisis Data
Persentase inhibisi dihitung dengan menggunakan persamaan berikut (Widianingsih, 2016).
%Inhibisi = 𝐴0−𝐴1 𝐴0 𝑥100%
Keterangan:
A0: Absorbansi DPPH A1: Absorbansi sampel
Dari persamaan grafik regresi linier antara  persentase  inhibisi  dan  konsentrasi akan  diperoleh  nilai  IC 50 (Rahmi,  2017).
Selanjutnya, dilakukan uji perbedaan antar nilai  IC50  ekstrak  tunggal  dan  kombinasi ekstrak KPK dan KNM dengan uji one-way
ANOVA  pada software SPSS  versi  26.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Antioksidan  adalah  senyawa  yang dapat meredam paparan radikal bebas pada tubuh. Antioksidan akan merubah senyawa radikal  bebas  menjadi  tidak  reaktif. Senyawa radikal bebas yang bersifat sangat reaktif  menyebabkan  senyawa  antioksidan lebih  mudah  bereaksi  terhadap  radikal bebas  dibandingkan  molekul  lainnya  di dalam tubuh (Rohman, 2013). Keberadaan radikal bebas yang berlebih di dalam tubuh dapat menyebabkan kerusakan pada berbagai  sel.  Oleh  karena  itu,  antioksidan dibutuhkan  untuk mencegah efek samping dari  paparan  radikal  bebas.  Antioksidan dapat diperoleh secara alami, salah satunya melalui buah-buahan.
Pada  penelitian  ini,  buah  pisang kepok  ( Musa  paradisiaca L.)  didapatkan dari  perkebunan  pisang  kepok  di  Desa Kembang  Kuning,  Kecamatan  Labuhan Haji,  Lombok  Timur.  Buah  naga  merah ( Hylocereus polyrhizus (Weber) Britton &
Rose)  didapatkan  dari  perkebunan  buah naga  merah  di  Desa  Sapit,  Kecamatan Suela,  Lombok Timur. Sampel dipisahkan antara  kulit  dan  daging  buahnya.  Berat basah  KPK  dan  KNM  adalah  2  kg.  Air mengalir digunakan untuk mencuci sampel sampai  bersih.  Pencucian  yang  dilakukan sebanyak  tiga  kali  dapat  menghilangkan mikroba  sampai  tersisa  hanya  42%  dari
jumlah  mikroba  awal.  Sampel  dikeringan dengan dua metode, yaitu diangin-anginkan dan  pemanansan  menggunakan  oven  pada suhu 40 0 C selama 8 jam. Hal ini dilakukan untuk  memastikan  tidak  terjadi face hardening , yaitu kondisi yang menyebabkan  hanya  bagian  luar  simplisia yang  kering,  sedangkan  bagian  dalam simplisia  masih  basah.  Hal  ini  dapat menyebabkan  simplisia  mudah  rusak bahkan membusuk (Departemen Kesehatan RI,  2017).  Didapatkan  serbuk  simplisia KPK  sebanyak  312  gram  dan  KNM sebanyak 286 gram (Gambar 1).
Gambar 1. Simplisia ekstrak KPK (a) dan KNM (b).
Ekstraksi KPK dan KNM dilakukan dengan  menggunakan  metode  sonikasi. Pada  proses  ekstraksi  digunakan  pelarut etanol  70%  karena  merupakan  pelarut universal,  artinya  bisa  digunakan  untuk mengekstraksi  senyawa  metabolit  yang bersifat  polar  sampai  non-polar.  Ekstrak cair  dipanaskan  menggunakan rotary evaporator ( Heidolph ® )  pada  suhu  40 0 C agar  menjadi  ekstrak  pekat.  Suhu  tersebut dipilih agar senyawa-senyawa yang bersifat termolabil  tidak  terdegradasi  (Yuliantari,
2017).  Dari  proses  ekstraksi  didapatkan
a b
ekstrak  KPK  sebanyak  25,14  gram  dan ekstrak KNM sebanyak 10,489 gram.
Skrining fitokimia digunakan untuk mendapatkan  gambaran  terkait  senyawa metabolit yang terkandung di dalam ekstrak KPK dan ekstrak KNM. Skrining fitokimia dilakukan menggunakan metode uji tabung dan  KLT.  Prinsip  dari  uji  tabung  adalah adanya  perubahan  warna  yang  terjadi ketika  sampel  diberikan  pereaksi  tertentu. Dari hasil skrining ekstrak KPK dan KNM diketahui  mengandung  senyawa  flavonoid karena  terjadi  perubahan  warna  larutan sampel menjadi merah. Selanjutnya, berdasarkan  identifikasi  KLT  dengan melihat bercak warna yang muncul, diduga senyawa  flavonoid  yang  terkandung  di dalam  ekstrak  KPK  adalah  katekin, sedangkan  pada  ekstrak  KNM  adalah flavanon.  Identifikasi  senyawa  tersebut dilakukan  berdasarkan  tabel  Geissman (1962),  yaitu  senyawa  katekin  akan menimbulkan  bercak  warna  kuning  dan senyawa  flavanon  akan  menghasilkan bercak berwarna biru pucat ketika disemprot  dengan  AlCl 3 10%  dan  diamati di bawah sinar UV 366 nm.
Identifikasi KLT senyawa flavonoid  ekstrak  KPK,  KNM,  dan kuersetin  dapat  dilihat  pada  Gambar  2. Silika  gel  GF 254 yang  bersifat  polar digunakan  sebagai  fase  diam.  Silika  gel GF 254 adalah  plat  yang  dapat  berpendar apabila  diamati  pada  panjang  gelombang
254  nm  (Husna,  2020).  Campuran  larutan Kloroform:Etil  Asetat:n-Butanol  (5:4:1) digunakan  sebagai  fase  gerak.  Dari  noda yang terbentuk akan dilakukan perhitungan nilai  Rf.  Apabila  dua  senyawa  memiliki nilai Rf yang sama atau hampir sama maka dapat  dikatakan  bahwa  karakteristik  dari senyawa tersebut sama atau mirip.
Gambar  2. Profil  KLT  flavonoid  dari ekstrak  KPK  (1),  KNM  (2) dan  kuersetin  (3)  dengan fase  gerak  kloroform:EA:n- butanol  (5:4:1,  v/v)  pada lampu  UV  254  nm  (a), lampu  UV  366  nm  (b), lampu putih setelah disemprot  AlCl 3 10%  (c), dan  lampu  UV  366  nm setelah  disemprot  dengan AlCl 3 10% (d)
Hasil  uji  KLT  senyawa  pembanding
kuersetin
menunjukkan adanya penampakan  spot  berwarna  hijau-kuning lembayung dengan nilai Rf sebesar 0,8125. Berdasarkan  penelitian  Mustapa  (2019), range  nilai  Rf  dari  senyawa  kuersetin adalah  0,69  –  0,81.  Hasil  identifikasi flavonoid  ekstrak  KPK  didapatkan  noda yang  terbentuk  berwana  kuning-oranye Dari perhitungan nilai Rf, didapatkan nilai Rf  untuk  flavonoid  ekstrak  kulit  pisang
1    2    3 1    2    3 1    2    3 1    2    3
kepok  adalah  0,5625.  Nilai  Rf  flavonoid kulit pisang kepok berbeda dengan standar kuersetin sehingga diduga bukan termasuk ke  dalam  golongan  senyawa  kuersetin. Bercak  noda  yang  dihasilkan  oleh  ekstrak KNM  memberikan  warna  biru  lemah  dan posisinya sejajar dengan kuersetin. Nilai Rf dari  bercak  noda  ekstrak  kulit  buah  naga merah  adalah  0,8125.  Nilai  Rf  tersebut sama  dengan  nilai  Rf  standar  kuersetin. Diduga  pada  ekstrak  KNM  mengandung senyawa  flavonoid  yang  karakteristiknya mirip atau sama dengan kuersetin.
Penentuan operating  time (OT)
digunakan untuk mengetahui waktu ketika reaksi  antara  DPPH  dengan  larutan  uji berjalan  secara  maksimal.  Penentuan panjang  gelombang  maksimum  digunakan untuk  mengetahui  daerah  serapan  dan panjang  gelombang  maksimum  dimana larutan  DPPH  memberikan  serapan  yang maksimum.  Pada  penelitian  ini, operating time DPPH  yang  didapatkan  adalah  30 menit  dan  panjang  gelombang  maksimum DPPH  yang  didapatkan  adalah  517  nm. Umumnya OT DPPH berada diantara 15-30 menit  dan  panjang  gelombang  maksimum DPPH  adalah  517  ±  2  nm  (Molyneux, 2004).  Absorbansi  larutan  DPPH  0,1  mM yang  diperoleh  adalah  0,6173.  Absorbansi DPPH  0,01  mM  digunakan  sebagai absorbansi  kontrol,  digunakan  untuk menghitung persentase inhibisi. Persentase
inhibisi digunakan untuk menghitung nilai IC 50 . Grafik regresi linear antara konsentrasi  dan  persentase  inhibisi  dari masing-masing  sampel  uji  dapat  dilihat pada Gambar 3-8. Kemudian, nilai IC 50 atau aktivitas  antioksidan  dari  masing-masing sampel dapat dilihat pada Tabel I.
Gambar 3. Grafik aktivitas antiosidan kuersetin
Gambar 4. Grafik aktivitas antioksidan ekstrak KPK
Gambar 5. Grafik aktivitas antioksidan ekstrak KNM 0. 17.5 35. 52.5 70. 0 2 3 5 6 8 % Inhibi si Konsentrasi 0. 20. 40. 60. 80. 0 20 40 60 80 100 % Inhibi si Konsentrasi 0. 15. 30. 45. 60. 0 20 40 60 80 100 % Inhibi si Konsentrasi
Tabel I. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak KPK, KNM dan kombinasi
Sampel IC 50 (ppm) Rata-rata (ppm) I II III Kuersetin 4,68 6,56 4,77 5,34±1,06 a KPK 80,58 79,10 78,32 79,34±1,139 b KNM 80,99 79,56 79,33 79,96±0.899 b KPK:KNM (1:1) 16,60 20,52 21,39 19,50±2,552 c KPK:KNM (1:2) 60, 94 56,36 57,83 58,38±2,338 d KPK:KNM (2:1) 17,47 18,26 20,56 18,76±1,605 c
Keterangan:  indeks  huruf  yang  berbeda  menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  signifikan (p<0,05),  sedangkan  indeks  huruf  yang  sama  menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  yang signifikan (p>0,05)
Gambar  6. Grafik  aktivitas  antioksidan kombinasi ekstrak (1:1)
Gambar 7. Grafik aktivitas antioksidan kombinasi ekstrak (1:2)
Kuersetin termasuk dalam golongan flavonoid,  yaitu  golongan  flavonol  yang bersifat  polar  dan  menghasilkan  aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Oleh karena itu, senyawa kuersetin biasanya digunakan sebagai senyawa standar untuk uji aktivitas
antioksidan  senyawa  golongan  flavonoid. Berdasarkan Tabel 1 . diketahui bahwa nilai IC 50 kuersetin adalah 5,34 ± 1,06 ppm yang masuk  dalam  golongan  antioksidan  yang sangat  kuat  (IC 50 <  50  ppm).  Aktivitas antioksidan  yang  dihasilkan  oleh  ekstrak KPK adalah 79,34 ± 1,139 ppm dan KNM adalah 79,96 ± 0,899 yang tergolong dalam antioksidan  kuat  (50  <  IC 50 <  100).  Pada penelitian  Saputri, et  al .  (2020),  aktivitas antioksidan  kulit  pisang  kepok  adalah 68,74 ppm dan menurut penelitian Martati (2016), aktivitas antioksidan yang dihasilkan  oleh  kulit  buah  naga  merah adalah  76,19  ppm.  Adanya  perbedaan antara nilai IC 50 pada penelitian sebelumnya  dengan  hasil  yang  diperoleh dapat  disebabkan  oleh  berbagai  faktor, misalnya  perbedaan  lingkungan  tempat tumbuh  yang  dapat  menyebabkan  adanya perbedaan kandungan senyawa kimia pada
48. 50. 52. 54. 56. 58. 0 20 40 60 80 100 % Inhibi si Konsentrasi 0. 17.5 35. 52.5 70. 87.5 0 30 60 90 120 150 % Inhibisi Konsentrasi
suatu tanaman. Perbedaan proses pembuatan ekstrak seperti metode ekstraksi,  pH,  temperatur  dan  waktu  yang digunakan dapat menyebabkan kandungan senyawa  biokimia  pada  sampel  berbeda (Yateem,  2014). Pada  Tabel  1.  nilai  IC 50 kombinasi  ekstrak  KPK  dan  KNM  yang dibuat dengan variasi (1:1); (1:2); dan (2:1) adalah  19,50  ±  2,552  ppm;  58,38  ±  2,338 ppm;  dan  18,76  ±  1,605  ppm.  Nilai  IC 50 dari  kombinasi  (1:1)  dan  (2:1)  masuk dalam  kategori  antioksidan  sangat  kuat, sedangkan  kombinasi  (1:2)  masuk  dalam kategori antioksidan kuat.
Gambar  8. Grafik  aktivitas  antioksidan kombinasi ekstrak (2:1)
Uji  statistik  SPPS  menunjukkan data  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini terdistribusi  secara  normal  dan  homogen dengan  p value lebih  dari  0,05  (p>0,05).
Dengan demikian, dilakukan uji beda one - way ANOVA. Pada uji ANOVA, suatu data memiliki perbedaan yang bermakna apabila memiliki  p value lebih  kecil  dari  0,05 (p<0,05).  Hasil  analisis  menunjukkan  p value sebesar  0,000  (p<0,05),  artinya  ada perbedaan  yang  signifikan  antara  setiap
kelompok  data.  Uji post  hoc Tukey dilakukan  untuk  mengetahui  hubungan statistik  dari  setiap  data.  Diperoleh  hasil bahwa  tidak  terdapat  perbedaan  yang signifikan antara nilai IC 50 ekstrak tunggal KPK dan KNM (p>0,05). Nilai IC 50 ekstrak tunggal dan kombinasinya didapatkan hasil yang  berbeda  signifikan  (p<0,05).  Oleh karena  itu,  berdasarkan  nilai  IC 50 sampel diketahui bahwa ekstrak kombinasi menghasilkan  aktivitas  antioksidan  yang lebih  baik  dibandingkan  dengan  ekstrak tunggalnya.
Gambar 9. Grafik nilai IC 50 sampel uji dan hubungan  statistiknya.  indeks huruf yang berbeda menunjukkan adanya
perbedaan yang signifikan (p<0,05),  sedangkan  indeks huruf yang sama menunjukkan tidak  ada  perbedaan  yang signifikan (p>0,05)

## IV. KESIMPULAN
Ekstrak KPK dan KNM mengandung  senyawa  metabolit  flavonoid yang  diduga  bertanggung  jawab  terhadap aktivitas antioksidannya. Nilai IC 50 ekstrak tunggal  KPK  dan  KNM  adalah  79,34  ± 1,139  ppm  dan  79,96  ±  0,899  ppm  yang
0. 17.5 35. 52.5 70. 0 30 60 90 120 150 % Inhibi si Konsentrasi 5.34 79.34 79.96 19.5 58.38 18.76 0. 20. 40. 60. 80. 100. Kuersetin KNM (1:2) IC50
masuk  dalam  kategori  antioksidan  kuat.
Nilai  IC 50 kombinasi  ekstrak  KPK  dan KNM dengan variasi (1:1); (1:2); dan (2:1) adalah  19,50  ±  2,552  ppm;  58,38  ±  2,338 ppm;  dan  18,76  ±  1,605  ppm.  Nilai  IC 50
ekstrak tunggal dan kombinasinya berbeda signifikan  (p<0.05).  Kombinasi  ekstrak menghasilkan  aktivitas  antioksidan  yang lebih  baik  dibandingan  dengan  ekstrak tunggalnya.  Kombinasi  (1:1)  dan  (2:1) merupakan  kombinasi  ekstrak  dengan aktivitas antioksidan yang paling baik.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Seluruh penulis menyatakan bahwa tidak  ada  konflik  kepentingan  dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Baharuddin, M. (2017). Skrining Fitokimia Senyawa  Metabolit  Sekunder  dari Ekstrak Etanol Buah Delima ( Punica granatum L.)  dengan  Metode  Uji Warna. Media Farmasi , 13(2), 1-6. Cahyani,  S.,  Tamrin.,  dan  Hermanto,  H. (2019).  Pengaruh  Lama  dan  Suhu Pengeringan  Terhadap  Karakteristik Organoleptik,  Aktivitas  Antioksidan dan Kandungan Kimia Tepung Kulit Pisang  Ambon  ( Musa  acuminata Colla). J  Sains  dan  Teknologi Pangan , 4(1), 2003-2006.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (2017). Parameter Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan Obat .  Cetakan  Pertama.  Jakarta: Departemen Kesehatan RI.
Geissman, T. A. (1962). The Chemistry of Flavonoid  Compounds .  New  York: The Macimillan Company.
Husna,  F.,  dan  Soraya,  R.  M.  (2020). Identifikasi Bahan Kimia Obat dalam
Obat Tradisional Stamina Pria dengan  Metode  Kromatografi  Lapis Tipis. Farmaka , 18(2), 16-25.
Islamiyati,  R.,  dan  Endra,  P.  (2020).
Perbandingan Uji Aktivitas
Antioksidan  Fraksi  N-Heksan,  Etil Asetat  dan  Air  Ekstrak  Etanol  Kulit Buah  Salak  Menggunakan  Metode Peredaman  Radikal  Bebas  DPPH. Cendekia Journal of Pharmacy , 4(2), 169-174.
Kusnadi, K., dan Egie, T. D. (2017). Isolasi dan  Identifikasi  Senyawa  Flavonoid pada  Ekstrak  Daun  Seledri  ( Apium graveolens L.)  dengan  Metode Refluks. Pancasakti Science Education Journal , 2(1), 59. Lourenco,  S.  C.,  Margarida,  M.  M.,  dan Vitor,  D.  A.  (2019).  Antioxidant  of Natural Plant Origins: From Sources to Food Industry Application.
Molecules , 24: 4132. Doi:
10.3390/molecules24224132. Martati, T., Devina, S. G. (2016). Aktivitas Penangkap  Radikal  Bebas  Ekstrak Etanol  Kulit  Buah  Naga  Dengan Metode DPPH (1,1-Difenil-2-
Pikrilhidrazil). Samarinda: Prosiding Seminar  Nasional  Tumbuhan  Obat Indonesia Ke-50 , 430-439.
Molyneux, P. (2004). The Use of the Stable
Free Radical Diphenyl picryl hydrazil (DPPH)  for  Estimating  Antioxidant
Activity. Journal Science of
Technology , 26(2), 211-219.
Mulangsri,  D.A.K.,  Aqnes.,  Budiarti.,  dan Endah, N.S. (2017). Aktivitas
Antioksidan  Fraksi  Dietileter  Buah Mangga Arumanis ( Mangifera indica
L.)  dengan  metode  DPPH. Jurnal Pharmascience , 4(1), 83-93. Mustapa,  M.  A.,  Taupik,  M.,  dan
Ramadhan, A. (2019). Analisis Kadar Flavanoid Total Menggunakan
Spektrofotometri Uv-Vis dalam Kulit Buah  Salak  (S alacca  zalaccz V.). Journal  Syifa  Scinces  and  Clinical Reseach , 1, 21–27.
Nuari,  S.,  Syariful,  A.,  dan  Akhmad,  K.
(2017).  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Flavonoid  Ekstrak  Etanol Buah  Naga  Merah  ( Hylocereus polyrhizus (F.A.C. Weber) Britton & Rose). Jurnal  Farmasi  Galenika , 2(2), 118-125.
Perangin-angin,  Y.,  Yayuk,  P.,  Yenni,  A.,
Murni, S. R., dan Nurhayati. (2019).
Pemanfaatan  Kandungan  Metabolit
Sekunder  yang  Dihasilkan  Tanaman pada Cekaman Biotik. Agriland , 7(1), 39-47.
Putri, A. A. S., dan Hidajati, N. (2015). Uji Aktivitas Antioksidan Senyawa Fenolik  Ekstrak  Metanol  Kulit Batang Tumbuhan Nyiri Batu ( Xylocarpus  moluccensis ). Unesa Journal of Chemistry , 4(1), 1-6. Rahmi,  H.  (2017).  Review:  Aktivitas Antioksidan  dari  Berbagai  Sumber Buah-buahan  di  Indonesia. Jurnal Agrotek Indonesia , 2(1), 34-38. Rohman,  A.  (2013). Analisis  Komponen Makanan . Yogyakarta: Graha Ilmu. Saputri,  A.  P.,  Andria,  A.,  dan  Fatmaria. (2020).  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Air  Kulit  Pisang  Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana (ABB  cv))  Dengan  Metode  ABTS
(2,2-Azinobis  (3-etilbenzotiazolin)- 6-asam  sulfonate)  Pada  Berbagai
Tingkat Kematangan.
Jurnal
Kedokteran , 8(1), 973-980.
Sanchez.,  Moreno,  C.  (2002).  Review: Methods  Used  to  Evaluate  the  Free Radical Scavenging Activity in Food and  Biological  Systems. Food  Sci. Technol. Int , 8(3), 121-137.
Setiawan, F., Oeke, Y., dan Ade, K. (2018). Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Kayu  Secang  ( Caesalpinia sappan ) Menggunakan Metode DPPH,  ABTS,  dan  FRAP. Media Pharmaceutica  Indonesiana ,  2(2), 82.
Suyatmi.,  Chairul,  S.,  dan  Djihan,  R.P. (2019).  Uji  Fitokimia  dan  Uji Aktivitas Antioksidan (Metode DPPH) dari Daun Rambai
( Baccaurea  motleyana Mull.  Arg). Jurnal Atomik, 4(2), 96-99.
Tandi,  J.,  Bella,  M.,  Anita,  P.,  dan Agustinus,  W.  (2020).  Analisis Kualitatif  dan  Kuantitatif  Metabolit Sekunder Ekstrak Etanol  Buah Okra ( Abelmoschus esculentus L. Moench) dengan  Metode  Spektrofotometri UV-Vis. Kovalen:  Jurnal  Riset Kimia , 6(1), 74-80.
Widianingsih, M. (2016). Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Metanol  Buah Naga  Merah  ( Hylocereus  polyrhizus (F.A.C. Weber) Britton&Rose) Hasil Maserasi  dan  Dipekatkan  dengan Kering  Angin. Jurnal  Wiyata ,  3(2), 148.
Wimpy., dan Tri, H. (2017). Uji Aktivitas
Antioksidan Kombinasi Ekstrak Sarang Semut ( Myrmecodia pendans )  dan  Ekstrak  Keladi  Tikus
( Typhonium  flagelliforme Lodd.)
dengan Metode DPPH (1,1- Diphenyl-2-Picrilhidrazil). Jurnal Kesehatan Kusuma Husada , 1(1), 37- 38.
Wulandari,  P.H.,  danYumita,  A.  (2015). Uji Aktivitas Antioksidan DPPH dan Aktivitas  Terhadap  Artemia  Salena Leach  Ekstrak  Etanol  96%  Daun Seledri  ( Apium  graveolens L.). Sainstech Farma, 8(2), 6-13.
Yateem, H., Afaneh, I., dan Al-Rimawi, F.
(2014).  Optimum  Condition  for Oleuropein  Extraction  from  Olive Leave. Int J Appl , 4(5), 153-157. Yuliantari,  N.W.A.,  Widarta,  I.W.R.,  dan Permana, I.D.G.M. (2017). Pengaruh Suhu dan Waktu Ekstraksi Terhadap Kandungan  Flavonoid  dan  Aktivitas Antioksidan  Daun  Sirsak  ( Annona muricata L.)
Menggunakan
Ultrasonik. Media  Ilmiah  Teknologi Pangan , 4(1), 35-42.
Zhang, Y. J., Gan, R. Y., Li, S., Zhou, Y., Li,  A.N.,  dan  Xu,  D.  P.  (2015). Antioxidant  Phytochemicals  for  the Prevention and Treatment of Chronic Diseases. Molecules , 20(12), 21138– 21156.