## TAHU MENGHAMBAT KEHILANGAN TULANG LUMBAR TIKUS BETINA OVARIEKTOMI

## [Tofu Attenuates Lumbar Bone Loss of Ovariectomized Female Rats]
Samsu Udayana Nurdin 1) , Deddy Muchtadi 2) , Ita Djuwita 3) , Suyanto Pawiroharsono 4)
1) Department of Agricultural Product Technology, Lampung University, Jln. Sumantri Brojonegoro No. 1Bandar Lampung, 35145;
2) Department of Food Technology and Human Nutrition, Bogor Agriculture University, Jln. Lingkar Kampus, Dramaga Bogor; 16680;
3) Laboratory of Embriology, Veteriner Faculty, Bogor Agriculture University, Jln. Agatis, Dramaga Bogor; 16680;
4) Agency for the Assesment and Application of Technology, Jln. MH. Thamrin no. 8, Jakarta 10340.

## ABSTRACT
The objectives of this research were to examine the efeects of feed containing soybean tofu and tempeh on lumbar bone density and mass  of  ovariectomized  female  rats.  Twenty  four  17  weeks-old  Sprague-Dawley  rats  were  randomly  assigned  to  four  group,  i.e.:  (1)  non- ovariectomized  rats fed casein  based diet  (NonOvx), (2) ovariectomized rats  fed casein based diet  (OvxC),  (3) ovariectomized rats fed diet containing soybean tofu (OvxH), and (4) ovariectomized rats fed diet containing soybean tempeh (OvxT); in three block based on their body weight.  The result show that body weight gram of ovariectomized rats was greater than nonovariectomized.  Ovariectomy caused atrophy of the uterus, and resulted in higher serum calcium level.  The lower lumbar vertebrae density of ovariectomized rats was observed and the decrease was prevented by tofu.
Key words : Tofu, tempeh, bone loss,  and ovariectomy

## PENDAHULUAN
Tempe dan tahu dikonsumsi oleh jutaan masyarakat di  Indonesia  dan  telah  menjadi  sumber  gizi  yang  sangat penting.  Tempe mempunyai kandungan protein yang tinggi dengan  nilai  PER  ( protein  eficiency  ratio )  yang  hampir setara dengan kasein dan susu  skim.  Tempe merupakan sumber mineral seperti kalsium, fosfor, besi, serta berbagai vitamin  (Syarief  et  al., 1999).  Sedangkan  tahu  sering disebut  sebagai  daging  tak  bertulang,  karena  tahu merupakan  produk  nabati  yang  mutu  proteinnya  setingkat dengan  produk  hewani,  yaitu  daging  dan  ayam,  dengan nilai NPU ( net protein utilization ) 65% (Shurtleff dan Aoyagi, 1979).    Selain  sebagai  sumber  gizi  yang  baik,  tempe  dan tahu  juga  merupakan  sumber  isoflavon  yang  penting karena  dapat  menyediakan  30  hingga  40  mg  setiap penyajian (Indiana Soybean Board, 1998
Isoflavon adalah salah satu senyawa yang termasuk golongan flavonoid dan merupakan bagian terbesar dalam golongan  tersebut.  Isoflavon  yang  ditemukan  pada Leguminoceae berjumlah cukup besar yaitu sekitar 0,25%. Sebanyak 99% isoflavon pada kedelai berupa glikosida dan terdiri dari 64% genistin, 23% daidzin, dan 13% glisitin 7-0- -glikosida (Naim et al., 1974).
Beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa  isoflavon kedelai  dapat  mengurangi  resiko  osteoporosis  (Messina, 1999a).  Isoflavon memiliki struktur kimia yang sangat mirip dengan  hormon  estrogen  dan  obat  osteoporosis  ipriflavon yang merupakan isoflavon sintetis.  Estrogen dan ipriflavon
telah  diketahui  dapat  melindungi  densitas  mineral  tulang wanita  postmenopouse.  Beberapa  data  menunjukkan bahwa  isoflavon  tidak  hanya  menghambat  kerusakan tulang  tetapi  juga  menstimulasi  pembentukannya (Messina, 1999b).
Tikus betina sebagai model telah banyak digunakan untuk  penelitian  osteoporosis.    Pada  penelitian  ini  tikus dibuat  kekurangan  hormon  estrogen  dengan  cara membuang  ovariumnya  ( ovariectomy ).    Varietas  yang umum digunakan adalah Sprague-Dawley (Anderson et al., 1995; Arjmandi et al., 1996; Arjmandi et al., 1998; Fanti et al., 1998). Walaupun hewan model tidak mengalami patah tulang,  kemungkinan  untuk  melakukan  uji  dengan  tulang hewan dapat menjadi cara yang akurat untuk menganalisa kerusakan  yang  dapat  mengakibatkan  patah  tulang (Tuukkanen, 2001).
Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui  pengaruh pemberian  tahu  dan  tempe  terhadap  massa (kandungan kalsium  tulang/volume  tulang)  dan  densitas  (berat tulang/volume  tulang) dan  densitas  tulang  lumbar  tikus percobaan  betina  yang  diovariektomi.  Tulang  lumbar merupakan  golongan  tulang  trabekular  yang  cepat menglami remodeling (Heaney,  1999)  sehingga  lebih responsip  terhadap  perlakuan  (Arjmandi  et  al.,  1996). Untuk melihat ada/tidaknya efek estrogenik isoflavon dalam tahu dan tempe maka diamati berat uterus tikus.  Evaluasi juga  dilakukan  terhadap  jumlah  konsumsi  pakan, pertambahan berat badan, dan efisiensi pakan tikus selama percobaan.

## METODOLOGI

## Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Biokimia Pangan  dan  Gizi  Jurusan  Teknologi  Pangan  dan  Gizi, Fakultas  Teknologi  Pertanian;  kandang  hewan  percobaan Jurusan  Teknologi  Pangan  dan  Gizi,  Fakultas  Teknologi Pertanian;  Pusat  Pengembangan  Teknologi  Pangan  IPB; Laboratorium  Teknologi  Bioindustri,  Pusat  Pengkajian  dan Penerapan Teknologi Bioindustri (P 3 TB) Badan Pengkajian dan  Penerapan  Teknologi  (BPPT)  di  kawasan  Pusat Pengembangan Ilmu dan Teknologi Serpong.

## Pakan,  Hewan  Percobaan,  dan  Pelaksanaan Percobaan
Persiapan  pakan  meliputi  pembuatan  tahu  dan tempe, tepung tahu dan tepung  tempe, dan pencampuran pakan. Kedelai yang digunakan adalah impor dari Amerika yang diperoleh dari agen kedelai di daerah Cilendek Bogor. Ragi  yang  digunakan  adalah  ragi  Hanoman  (BPPT)  . Bahan  penggumpal  yang  digunakan  dalam  pembuatan tahu  adalah  CaSO 4 .    Tahu  dan  tempe  yang  diperoleh selanjutnya  dikeringkan  dengan drum  drier (R  Simon Dryers Ltd., England) dan digiling menjadi tepung. Tepung yang dihasilkan digunakan sebagai bahan pakan tikus pada pelaksanaan penelitian.
Analisis  kandungan  isoflavon  (Siregar  dan Pawiroharsono, 1997) dilakukan terhadap tepung tahu dan tepung  tempe.  Analisis  proksimat  lengkap  dilakukan terhadap  tepung  tahu  dan  tepung  tempe  sebagai  dasar perhitungan  dalam  formulasi  pakan    tikus.    Selain  itu dianalisis  pula  kandungan  kalsium  dan  fosfor  tepung  tahu dan tepung tempe.  Selama menunggu waktu analisis dan
pemberian pakan, tepung tahu dan tepung tempe dikemas dalam kantung plastik polietilen, kemudian disimpan dalam lemari es.
Komposisi  pakan    perlakuan  yang  akan  diberikan adalah  isonitrogenous  dan  isoenergi  dengan  perhitungan yang disesuaikan dengan anjuran AOAC (1990) (Tabel 1).
Semua  bahan  pakan  diaduk  hingga  homogen  dan diukur  kadar  airnya  untuk  mengetahui  berat  kering  pakan yang  diberikan.    Kadar  air  sisa  pakan  juga  diukur  untuk mengetahui berat kering pakan  yang tersisa.  Berat kering pakan  yang  dimakan  tikus  adalah  selisih  antara  berat kering  pakan    yang  diberikan  dengan  berat  kering  pakan sisa.  Kalsium dan fosfor pada pakan  yang menggunakan tepung tahu dan tepung tempe diatur sama dengan pakan kasein  menggunakan  kalsium  karbonat  atau  potasium fosfat monobasik.
Pemberian  pakan    perlakuan  dilakukan  selama  32 hari.  Waktu  perlakuan  ini  mengacu  pada  penelitian Arjmandi et al., (1996) yang mendapatkan bahwa setelah 30  hari,  kehilangan  tulang  telah  teramati  pada  tikus  yang diovariektomi.  Tikus diberi pakan dan minum air bebas ion secara ad  libitum .    Kandang  yang  digunakan  adalah kandang plastik yang diberi lubang pada bagian bawahnya.
Ovariektomi  tikus  dilakukan  berdasarkan  prosedur Hogan et al., (1986).  Tikus yang akan diovariektomi dibius dengan ketamin (Ketavet) dengan dosis 1ml/200 gram BB. Ovariektomi    tikus  dilakukan  pada  saat  tikus  berusia  90 hari.    Kemudian  dilakukan  pemulihan    hingga  jahitan  siap dilepas (20 hari).  Sebelum percobaan dimulai, tikus normal dan  yang  diovariektomi  diadaptasikan  di  lingkungan laboratorium percobaan selama 10 hari.
Tabel 1.  Komposisi bahan untuk pembuatan 1 kg pakan
Komposisi Perlakuan NonOvx OvxC OvxH OvxT Kasein (g) 109,53 109,53 - - Tepung tahu (g) - - 230,00 Tepung tempe (g) - - 269,59 Minyak jagung (g) 79,80 79,80 32,50 33,70 Selulosa teknis (g) 20 20 8,35 2,12 Mineral mix* (g) 11,31 11,31 9,40 8,71 CaCO 3 (g) 37,56 37,56 21,99 28,69 KH 2 PO 4 (g) 19,15 19,15 16,66 18,42 Vitamin (Bekamin) (g) 10 10 10 10 Air (g) 41,30 41,30 25,73 19,42 Pati jagung (Maizena) (g) 671,35 671,35 645,37 609,35 Keterangan: * = tanpa CaCO 3 dan KH 2 PO 4 ; OvxC = Tikus yang diovariektomi yang mendapat pakan dengan  sumber protein Casein; NonOvx = Tikus yang tidak diovariektomi yang mendapat pakan dengan sumber protein Casein;  OvxH  = Tikus yang diovariektomi yang mendapat  pakan  dengan  sumber  protein  tahu;    OvxT    =  Tikus  yang  diovariektomi  yang  mendapat  pakan  dengan  sumber protein tempe.
Percobaan  menggunakan  24  (dua  puluh  empat) tikus  betina  Sprague-Dawley  yang  berusia  17  minggu. Tikus-tikus  tersebut  dibagi  menjadi  3  kelompok berdasarkan berat badan awal (Tabel 2). Setiap kelompok terdiri dari 8 ekor tikus, yaitu 2 ekor tikus betina steril yang akan diberi ransum dengan sumber protein kasein sebagai kontrol negatif (OvxC), 2 tikus betina steril yang akan diberi ransum dengan sumber protein tepung tahu (OvxH), 2 tikus betina  steril  yang  akan  diberi  ransum  dengan  sumber protein  tepung  tempe  (OvxT),    dan  2  tikus  betina  normal yang  akan  diberi  ransum  dengan  sumber  protein  kasein sebagai kontrol positif (NonOvx).
Setelah  32  hari  percobaan,  tikus  dibius  dan dimatikan,    kemudian  darah  dari  leher  ditampung  untuk diambil serumnya.  Serum dari setiap tikus ditempatkan ke dalam    botol  kecil  dan  disimpan  pada  suhu  lemari  es hingga  waktu  analisis.  Tulang  yang  dianalisis  adalah  n tulang  lumbar  keempat  ( fourth  lumbar  bones) yang dikeluarkan dari tubuh tikus melalui operasi.

## Pengamatan
Untuk  mengamati  pengaruh  perlakuan  terhadap tulang  tikus  percobaan  maka  diamati  massa  (kandungan kalsium  tulang/volume  tulang)  dan  densitas  (berat tulang/volume tulang) tulang lumbar keempat, serta kadar kalsium    serum.  Data  lain  yang  juga  diukur  adalah  berat tikus  awal  dan  setelah  percobaan,  serta  jumlah  ransum yang  dikonsumsi.    Untuk  melihat  efek  estrogenik  dari isoflavon,  maka  diamati  juga  berat  uterus  tikus  setelah selesai percobaan.
Prosedur  penentuan  densitas  dan  massa  tulang femur    dan  Tulang  lumbar  keempat  tikus (Arjmandi et al., 1996) Tulang yang diamati adalah tulang lumbar keempat . Tulang  lumbar  keempat  dipisahkan  dari  jaringan  lunak menggunakan  gunting  kecil,  jepitan,  dan cotton  gauze. Volume  dan  densitas  tulang  diukur  dengan  memasukkan setiap  tulang  ke  dalam syringe (ukuran  1  ml)  yang  tidak tertutup  yang  berisi  air  bebas  ion  yang  telah    diletakkan pada ruang vakum hingga bebas gelembung udara. Tulang dalam syringe tersebut  kemudian  dimasukkan  ke  dalam ruang  vakum  kembali  untuk  memastikan  bahwa  air  yang terperangkap  sudah  terdifusi  keluar  tulang.  Setelah pengukuran  volume,  tulang-tulang  tersebut  dipindahkan dari syringe dan dikeringkan dengan kertas tisu, kemudian ditimbang.  Densitas  tulang  dihitung  dalam  g/ml  volume tulang.    Massa  tulang  dihitung  sebagai  mg  Ca/100ml volume tulang.

## Rancangan Penelitian dan Analisis Data
Rancangan  percobaan  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah Rancangan Acak Kelompok Lengkap. Pengelompokkan  di  dasarkan  atas  berat  badan  awal. Perlakuan  yang  diberikan  adalah  tikus  betina  ovariektomi yang diberi ransum dengan sumber protein kasein (OvxC), tikus betina ovariektomi yang diberi ransum dengan sumber protein  tepung  tahu  (OvxH),  tikus  betina  ovariektomi  yang diberi  ransum  dengan  sumber  protein  tepung  tempe (OvxT),  dan  tikus  betina  normal  diberi  ransum  dengan sumber protein kasein (NonOvx).
Masing-masing  perlakuan  diulang  sebanyak  6  kali. Data  yang  diperoleh  kemudian  diolah  dengan  sidik  ragam untuk mengetahui pengaruh perlakuan terhadap parameter yang  diuji.  Untuk  mengetahui  perbedaan  antarperlakuan, data  yang  menunjukkan  pengaruh  nyata,  (Steele  and Torrie,  1993) , selanjutnya  diuji  dengan  Uji  Beda  Nyata Terkecil (BNT).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Berat Badan dan Jumlah Konsumsi Pakan
Pengaruh  perlakuan  terhadap  pertambahan  berat badan  tikus  dapat  dilihat  pada      Tabel  2.    Tikus  yang diovariektomi (OvxC, OvxH, OvxT) mengalami pertambahan  berat  badan  yang  lebih  besar  jika dibandingkan  dengan  tikus  yang  tidak  diovariektomi (NonOvx).  Arjmandi  et  al.,  (1996)  mendapatkan  data pertambahan  berat  badan  yang  sejalan  dengan  penelitian ini,  tetapi  peningkatan  berat  badan  akibat  ovariektomi tersebut  dapat  dicegah  dengan  pemberian  17-   estradiol atau konsentrat protein kedelai.
Peningkatan  berat  badan  tikus  yang  mengalami ovariektomi diduga akibat terjadinya peningkatan simpanan lemak  pada  jaringan  adiposa.  Ovariektomi  telah menyebabkan  berkurangnya  produksi  estrogen,  sehingga terjadi  penurunan  katabolisme  lemak.    Akibatnya  terjadi peningkatan  deposit  lemak  pada  jaringan  adiposa. Percobaan menggunakan mencit yang dibuat tidak mampu menghasilkan  estrogen  endogen  (Jones  et  al.,  2000)  dan mencit  yang  tidak  memiliki  reseptor  estrogen  alpa  (ER ) mendukung  dugaan    tersebut,  yaitu  bahwa  peningkatan berat  badan  tikus  disebabkan  oleh  adanya  peningkatan berat jaringan lemak putih ( White Adipose Tissue ).
Tabel  2.    Pengaruh  perlakuan  terhadap  pertambahan  berat  badan,  konsumsi  pakan  rata-rata,  dan  terhadap  perbandingan pertambahan berat badan dengan jumlah konsumsi pakan rata-rata
Parameter Perlakuan Pertambahan berat badan (g) Konsumsi pakan rata-rata (g bk) Pertambahan berat badan/konsumsi pakan rata rata NonOvx 30,00a 9,56a 3,13a OvxC 41,33b 10,91a 3,84bc OvxH 48,33b 10,67a 4,34c OvxT 38,73b 10,72a 3,62ab
Keterangan:  Huruf berbeda ke arah kolom menunjukkan perbedaan yang nyata ( =5%);  OvxC = Tikus  ovariektomi yang  mendapat  pakan dengan  sumber protein kasein; NonOvx = Tikus yang tidak diovariektomi yang mendapat pakan dengan sumber protein kasein; OvxH  = Tikus  ovariektomi yang mendapat pakan dengan sumber protein tahu;  OvxT  = Tikus ovariektomi yang mendapat pakan dengan sumber protein tempe.
Peningkatan  berat  badan  tikus  yang  mengalami ovariektomi  pada  penelitian  ini  ternyata  tanpa  disertai dengan  peningkatan  jumlah  konsumsi  pakan  (Lampiran  1 dan Tabel 8).   Wade dan Gray (1985) yang dikutip Heine et al., (2000) mendapatkan hal yang sama pada tikus dan hamster,  dan  menduga  hal  tersebut  disebabkan  oleh adanya penurunan pengeluaran energi (energy expenditure ).  Heine  et  al ., (2000)  menganggap  bahwa penurunan  pengeluaran  energi  merupakan  faktor  penting yang  menyebabkan  kegemukan  pada  tikus  yang  tidak memiliki reseptor estrogen alfa (ER ). Tetapi pada mencit yang  tidak  mampu  memproduksi  estrogen  endogen peningkatan berat badan justru disertai dengan penurunan jumlah  konsumsi  pangan.  Pada  mencit  jenis  ini peningkatan  berat  badan  diduga  disebabkan  oleh  adanya penurunan  tingkat  aktivitas  fisik  spontan,  penurunan oksidasi glukosa, dan penurunan lean body mass (Jones et al., 2000).
Berat Uterus dan Berat Uterus per Berat Badan Pengaruh  perlakuan  terhadap  berat  uterus  dan terhadap berat uterus/berat badan tikus dapat dilihat pada Tabel  3.  Ovarium  adalah  sumber  utama  estrogen  yang berperan  dalam  proliferasi  sel-sel  uterus  (Granner,  1990). Estrogen  menyebabkan  hiperemia  dan  meningkatkan penggabungan  asam  amino,  sintesis  asam  nukleat,  dan retensi  nitrogen  di  dalam  endometrium.    Estrogen  juga menstimulasi  fosforilasi,  glikolisis  aerobik  dan  anaerobik, dan deposisi glikogen (Hafez, 1970).
Ovariektomi  menyebabkan  hilangnya  ovarium, sehingga  proliferasi  sel-sel  uterus  terganggu  dan menyebabkan  terjadinya  atropi  pada  uterus  (Tabel  3). Pakan  yang  mengandung  tahu  dan  tempe  tidak  mampu mencegah  terjadinya  atropi.    Hal  ini  disebabkan  isoflavon yang    terkandung  pada  tahu  dan  tempe  tidak  mempunyai efek  estrogenik  yang  dapat  mencegah  terjadinya  atropi uterus.  Beberapa  penelitian  yang  dilakukan  pada  tikus (Arjmandi  et  al., 1996;  Arjmandi  et  al., 1998)  dan  monyet
(Anthony  et  al., 1996 ) yang  diovariektomi  menunjukkan data yang serupa.  Bahkan penelitian yang menggunakan genistein, yang memiliki efek estrogenik 100% lebih besar dibandingkan  dengan  daizin  (Zhang  et  al., 1999),  tidak mampu mencegah atropi uterus pada tikus menyusui, tikus muda  (Anderson  et  al., 1995)  atau  mencit  (Ishimi  et  al ., 1999) yang diovariektomi.
Tabel  3.  Pengaruh  perlakuan  terhadap  berat  uterus  dan terhadap  perbandingan  berat  uterus  dengan berat badan
Parameter Perlakuan Berat uterus (g) Berat uterus/berat badan NonOvx 0,392a 0,0015a OvxC 0,0667b 0,00023b OvxH 0,0709b 0,00027b OvxT 0,0761b 0,00029b
Keterangan:  Huruf  berbeda  ke  arah  kolom    menunjukkan perbedaan  yang  nyata  ( =5%);  OvxC=  Tikus  ovariektomi yang  mendapat  pakan  dengan    sumber  protein  kasein; NonOvx  =  Tikus  yang  tidak  diovariektomi  yang  mendapat pakan  dengan  sumber  protein  kasein;  OvxH    =  Tikus ovariektomi  yang  mendapat  pakan  dengan  sumber  protein tahu;  OvxT    =  Tikus  ovariektomi  yang  mendapat  pakan dengan  sumber protein tempe.
Uterus mengandung lebih banyak reseptor estrogen alfa  (ER )  bila  dibandingkan  dengan  reseptor  estrogen beta (ER ).  Isoflavon bersifat antagonis terhadap estrogen pada  ER ,  sehingga  pada  jaringan  yang  banyak mengandung  ER   senyawa  ini  menempati  reseptor estrogen dan memblok stimulasi DNA dan sintesis protein yang  diinduksi  oleh  estradiol  (Anderson,  1998).  Kuiper  et al., (1997)  sebelumnya  juga  telah  menunjukkan  bahwa genistein,  sebagai  senyawa  isoflavon  dengan  efek
estrogenik  terkuat,  mempunyai  afinitas  yang lebih  tinggi terhadap ER  bila dibandingkan dengan ER .

## Kadar Kalsium Serum
Dari Tabel 4 dapat diduga bahwa ovariektomi telah menyebabkan terjadinya peningkatan resorpsi tulang pada tikus  percobaan.  Ovariektomi  menyebabkan  peningkatan kadar kalsium serum, yang merupakan salah satu indikator terjadinya peningkatan proses resorpsi tulang (Djojosoebagio,  1996).  Pemberian  ransum  yang mengandung  tahu  dan  tempe  ternyata  tidak  mampu mencegah  terjadinya  peningkatan  resorpsi  tulang.    Hal  ini diduga disebabkan rata-rata konsumsi isoflavon oleh tikus yang  mengalami  ovariektomi  relatif  kecil  untuk  mencegah terjadinya  resorpsi  tulang  atau  untuk  meningkatkan  laju pembentukan tulang.
Estrogen  menghambat  pembentukan  interleukin-1 (IL-1), tumour  necrosis  factor (TNF)  (Gowen,  1991)  dan interleukin-6  (IL-6)  (Girasole  et  al., 1992).  Ketiga  jenis sitokin ini dapat menstimulasi aktivitas osteoklas sehingga terjadi  peningkatan  laju  resorpsi  tulang.    Kekurangan estrogen  akibat  ovariektomi  menyebabkan  peningkatan produksi ketiga jenis sitokin tersebut.
Walaupun menemukan beberapa indikator terjadinya  peningkatan  laju  remodeling    tulang  (seperti peningkatan  kadar  alkalin  fosfatase  dan tartrate-resistant acid phosphatase ) akibat ovariektomi, tetapi Arjmandi et.al (1996)  tidak  menemukan  perbedaan  kadar  kalsium  pada serum tikusnya.  Peningkatan indikator tersebut tidak dapat dicegah  oleh  pemberian  isoflavon,  walaupun  isoflavon terbukti  menghambat  kehilangan  tulang.    Berdasarkan  hal ini  maka  Arjmandi  et  al.,  (1996) berpendapat  bahwa isoflavon meningkatkan laju pembentukan tulang sehingga melampaui laju resorpsinya.
Tabel  4.    Pengaruh  perlakuan  terhadap  kadar  kalsium serum Perlakuan Kadar kalsium serum (mg/100ml) NonOvx 1,39a OvxC 2,19b OvxH 2,51b OvxT 2,29b Keterangan:  Huruf  berbeda  ke  arah  kolom  menunjukkan perbedaan  yang  nyata  ( =5%);  OvxC  =  Tikus  ovariektomi yang  mendapat  pakan  dengan  sumber  protein  kasein; NonOvx  =  Tikus  yang  tidak  diovariektomi  yang    mendapat pakan  dengan  sumber  protein  kasein;  OvxH    =  Tikus ovariektomi  yang  mendapat  pakan  dengan  sumber  protein tahu;  OvxT    =  Tikus  ovariektomi  yang  mendapat  pakan dengan sumber protein tempe.

## Massa dan Densitas Tulang Lumbar Keempat
Pada  Tabel  5  terlihat  bahwa  ovariektomi  hanya berpengaruh  nyata  pada  densitas  tulang  tetapi  tidak  pada massa  tulang  lumbar  tikus.    Ovariektomi  menyebabkan penurunan  densitas  tulang  dan  dapat  dihambat  dengan pemberian pakan yang mengandung tahu.  Tepung tempe ternyata  relatif  kurang  mampu  mencegah  penurunan densitas tulang lumbar, walaupun kandungan isoflavonnya lebih  tinggi  bila  dibandingkan  dengan  tepung  tahu, sehingga pengaruh terhadap penurunan densitas tulang ini diduga  tidak  secara  langsung  disebabkan  oleh  aktivita s isoflavon pada tulang.  Konsumsi rata-rata isoflavon relatif kecil  untuk  dapat  memberikan  efek  positif  terhadap densitas  tulang.  Isoflavon  dalam  konsentrasi  rendah  tidak berpengaruh  atau  berpengaruh  kecil  (Fanti  et  al., 1998; Anderson et al.,1996) atau terlalu tinggi (Fanti et al., 1998) tidak  mempunyai  efek  yang  nyata  pada  tulang. Berdasarkan  kadar  isoflavon  tahu  dan  tempe  (Tabel  6), maka konsumsi rata-rata isoflavon pada penelitian ini lebih rendah (3,34 mg/kg berat badan/hari untuk tahu, dan 4,703 mg/kg  berat  badan/hari  untuk  tempe)  jika  dibandingkan dengan  konsumsi  rata-rata  isoflavon  pada  penelitian Arjmandi et al. (1996) atau penelitian Arjmandi et al., (1998) yaitu 8,031 mg/kg berat badan/hari.
Tabel 5. Pengaruh perlakuan terhadap massa dan densitas tulang lumbar keempat
Parameter Perlakuan Massa (mg Ca/100ml) Densitas (mg/ml) NonOvx 10,59a 1,74a OvxC 7,83a 1,44c OvxH 7,96a 1,61ab OvxT 8,99a 1,52bc
Keterangan:  Huruf  berbeda  ke  arah  kolom  menunjukkan perbedaan  yang  nyata  ( =5%);  OvxC  =  Tikus  ovariektomi yang  mendapat  pakan  dengan  sumber  protein  kasein; NonOvx    =  Tikus  yang  tidak  diovariektomi  yang  mendapat pakan  dengan  sumber  protein  kasein;  OvxH    =  Tikus ovariektomi  yang  mendapat  pakan  dengan  sumber  protein tahu;  OvxT    =  Tikus ovariektomi  yang  mendapat  pakan dengan sumber protein tempe.
Tabel 6.  Hasil analisis kuantitatif isoflavon tepung tahu dan tepung tempe Komponen Tepung tahu Tepung tempe Tepung tahu Tepung tempe (mg/100g berat basah) (mg/100g berat kering) Faktor II 1,327 1,275 1,483 1,439 Daidzein 15,315 23,259 17,121 26,237 Glycitein 0,295 0,132 0,330 0,148 Genistein 18,661 18,661 20,862 21,050 Total 35,598 43,237 39,796 48,873
Penghambatan  penurunan  densitas  tulang  lumbar oleh  pakan  yang  mengandung  tahu  diduga  karena  pakan ini menyebabkan penumpukan lemak abdominal yang lebih besar  bila  dibandingkan  dengan  tempe,  yang  ditunjukkan oleh  efisiensi  (pertambahan  berat  badan  per  konsumsi pakan)  tahu  yang  lebih  baik  jika  dibandingkan  dengan tempe  (Tabel  2).    Walaupun  kasein  mempunyai  efisiensi pakan  yang  sama  dengan  tahu,  tetapi  sebagai  protein hewani,  kasein  dapat  meningkatkan  ekskresi  kalsium melalui urin karena kandungan asam amino sulfurnya yang tinggi (Granner, 1990).
Tempe  dengan  kandungan  isoflavon  yang  lebih tinggi  diduga  menghasilkan  timbunan  lemak  abdominal yang  lebih  sedikit.    Hal  ini  disebabkan  karena  isoflavon pada  jaringan  lemak  dapat  bersifat  proestrogen  (Arjmandi et  al.,  1996)  yang  mampu  meningkatkan  terjadinya katabolisme lemak.
Timbunan lemak abdominal memberikan keuntungan  bagi  kesehatan  tulang,  karena  jaringan  ini dapat  menghasilkan  estrogen  (Lane,  2001).    Pada  wanita usia  lanjut  yang  tidak  menggunakan  terapi  pengganti estrogen, lemak tubuh mempunyai peranan penting dalam pemeliharaan  tulang  dibandingkan  otot  (Baumgartner  et al.,1996).

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Pertambahan  berat  badan  tikus  yang  tidak diovariektomi  (NonOvx)  lebih  rendah  jika  dibandingkan dengan  berat  badan  tikus  yang  diovariektomi  yang mendapat  pakan  kasein  (OvxC),  tahu  (OvxH)  atau  tempe (OvxT)  yaitu  berturut-turut  30,00  g,  41,33  g,  48,33  g,  dan 38,73  g.    Konsumsi  pakan  rata-rata  tidak  berbeda  nyata antarperlakuan, dengan rata-rata konsumsi untuk NonOvx, OvxC,  OvxH,  dan  OvxT  masing-masing  sebesar  9,56  g, 10,91 g, 10,67 g, dan 10,72 g. Ovariektomi meningkatkan laju  resorpsi  tulang  yang  ditandai  dengan  meningkatnya kadar  kalsium  serum  (yaitu  2,19  mg/100  ml  serum  untuk OvxC,  2,51  mg/100  ml  serum  untuk  OvxH,  dan  2,29 mg/100  ml  serum  untuk  OvxT)  dibandingkan  tikus  normal
(1,39 mg/100 ml serum).  Densitas tulang lumbar keempat tikus  normal  dan  tikus  yang  diovariektomi  yang  mendapat pakan tahu tidak berbeda nyata (yaitu masing-masing 1,74 mg/100  ml  dan  1,61  mg/100  ml)  dan  lebih  baik  jika dibandingkan  dengan  tikus  yang  diovariektomi  yang mendapat  pakan  kasein  dan  tempe  (yaitu  masing-masing 1,44 mg/100 ml dan 1,52 mg/100 ml.  Atropi uterus akibat ovariektomi  tidak  dapat  dicegah  oleh  pemberian  pakan yang  mengandung  tepung  tahu  dan  tepung  tempe,  yang dibuktikan oleh berat uterus tikus yang diovariektomi yang mendapat  pakan  tahu  (0,0709  g)  atau  tempe  (0,0761  g) yang  jauh  lebih  rendah  jika  dibandingkan  dengan  tikus normal (0,392 g).
Saran Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  tentang prilaku  hormonal  yang  berkaitan  dengan  ovariektomi  dan proses  remodeling  tulang,  sehingga  pengaruh  tahu  dan tempe dapat diketahui dengan lebih baik.
Konsentrasi  isoflavon  dalam  pakan  ditingkatkan dengan  meningkatkan  kadar  proteinnya  sehingga  dapat lebih  terlihat  pengaruh  tahu  dan  tempe  dalam  proses remodeling tulang.
Meningkatkan  jumlah  tikus  percobaan,  sehingga presisi hasil penelitian dapat lebih ditingkatkan .

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson,  J.J.,  Ambrose,  W.W.,  Garner,  S.C.  1995. Orrally Dosed Genistein from Soy and Prevention of Concellous  Bone  Loss  in  Two  Ovariectimized  Rat Models. J. Nutr .  25:799S (Abstract).
Anderson, John J.B.  1998.  Dietary Phytoestrogens and Bone Health. http://www.soyohio.org/health/diet/bone.htm .  2 Maret 2001
Anthony,  M.S.,  Clarkson,  T.B.,  Hughes,  C.L.Jr.,  Morgan, T.M.,  Burke,  G.L.    1996.    Soybean  Isoflavones Improve  Cardiovascular  Risk  Factors  without
Hasil Penelitian                                                         Jurnal.Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XIII, No. 3 Th. 2002
Affecting  the  Reproductive  System  of  Peripubertal Rhesus Monkeys .  J. Nutr . 126: 43—50.
AOAC.  1990. Official Methods of Analysis of the AOAC . AOAC, Inc.  Arlington, Virginia.
Arjmandi BH.,  R. Birnbaun, NV. Goyal. MJ. Getlinger, S. Juma,  L.  Alekel.  CM.  Hasler,  ML.  Drum,  BW. Hollis, SC. Kukreja.  1998. Bone-Sparing Effect of Soy  Protein  in  Ovarian  Hormone-Deficient  Rats  is Related to Its Isoflavone Content. Am. J. Clin. Nutr . 68(suppl.):1364S-1368S.
Arjmandi,  B.H.,  Alekel,  L.,  Hollis,  B.W.,  Amin,  D., Stacewicz-Sapuntzakis,  M.,  Guo,  P.,  Kukreja, S.C.    1996 .    Dietary  Soybean  Protein  Prevents Bone  Loss  in  an  Ovariectomized  Rat  Model  of Osteoporosis. J. Nutr. 126:  161—167.
Baumgartner,  R.N.,  Stauber,  P.M.,  Koehler,  K.M., Romero, L., Garry, P.J.  1996. Associations of Fat and  Muscle  Masses  with  Bone  Mineral  in  Elderly Men and Women. Am. J. Clin. Nutr .  63:365-372.
Djojosoebagio, S.  1996 . Fisiologi Kelenjar Endokrin .  UI Press.  Jakarta.
Fanti, O., M.C. Faugere, Z. Gang, J. Schmidt, D. Cohen, H.H.  Malluche.    1998. Systemic  Administration  of Genistein  partially  Prevents  Bone  Loss  in Ovariectomized Rats in nonestrogen-like
Mechamins. Am. J. Clin. Nutr .  68(Suppl.): 1517S- 1521S.
Girasole, G., Jilka, R.L., Passeri, G., Boswell, S., Boder, G., Williams, D.C.,  Manolagas, S.C.  1992. 17 - Estradiol  Inhibits  Interleukin-6  Production  by  Bone Marrow-derived  Stromal  Cells  and  Osteoblasts in vitro :    a  Potential  Mechanism  for  the Antiosteoporotic Effect of Estrogens. The Journal of Clinical Investigation 89:883—891.
Gowen,  M.    1991 .    Cytokines  and  Skeletal  disorders.    In Cytokene Interactions and Their Control .  Baxter, A. And  Ross,  R.  (Eds.).    Jhon  Wiley  and  Son.    West Sussex.
Granner,  D.K.,  1990. Hormon  yang  mengatur metabolisme  kalsium.    Dalam Biokimia  (Harper’s Review  of  Biochemistry ).    Diterjemahkan  oleh Darmawan, I.  EGC.  Jakarta.
Hafez,  E.S.E.  1970 .    Female  Reproductive  Organs.    In Reproduction  and  Breeding  Techniques  for Laboratory Animals .  Hafez, E.E.E. (Ed.). Lea and Febriger.  Philadelphia.
Heaney, R.P.  1999 .  Bone Niology in Health and Disease. In Modern Nutrition in Health and Disease .  Shils, M.E., Olson, J.A., Shike, M., and Ross, A.C. (Eds.). Williams and Wilkins.  Maryland.
Heine,  PA.,  Taylor,  JA.,  Iwamoto,  G.A.,  Lubahn,  DB., Cooke,  PS.    2000. Increased  Adipose  Tissue  in Male  and  Female  Estrogen  Receptor-   Knockout Mice. Proc.  Natl.  Acad.  Sci .  USA.    97(23):12729- 12734.
Hogan,  B.,  Costantini,  F.,  Lacy,  E.    1986 .    Manipulating the Mouse Embryo.  Cold Spring Harbor Laboratory.
Ishimi, Y., Miyaaura, C., Ohmuro, M., Onoe, Y., Sato, T.,
Uchiyama,  Y.,  Ito,  M.,  Wang,  X.,  Suda,  T., Ikegami, S.  1999. Selective Effects of Genistein, a Soybean Isoflavone, on B-Lymphopoiesis and Bone
Loss Caused by Estrogen Deficiency. Endocrinology .  140(4):1893-1900.
Indiana soybean Board.  1998. Isoflavone concentration in soy foods.
http://www.soyfood.com/nutrition/isoflavoneconcentr ation.html .  Juni 2001.
Jones,  M.E.E.,  Thorburn,  A.W.,  Britt,  K.l.,  Hewitt,  K.N., wreford, N.G., Proietto, J., Oz, O.K., Leury, B.J., Robertson,  K.M.,  Yao,  S.,  Simpson,  E.R.    2000 .
Aromatase-Deficient (ArKO) Mice have a Phenotype of Increased Adiposity. Proc. Natl. Acad. Sci . USA. 97(23):12735-12740.
Kuiper,  G.G.J.M.,  Carlsson,  B.,  Grandien,  K.,  Enmark, E.,  Haggblod,  J.,  Nilsson,  S.,  Gustafsson,  J.A. 1997 .  Comparison of the Ligand Binding Specificity and  Transcript  Tissue  Distribution  of  Estrogen Receptors α and β. Endocrinology .  138:863-870.
Lane, N.E.  2001 . Lebih Lengkap Tentang: Osteoporosis . Diterjemahkan  oleh  Eri  D.  Nasution.    PT. Rajagrafindo Persada.  Jakarta.
Messina, M.J.  1999a .  A Close Look at Soybean (Expert Opinion ) . In  Perspective  in  Nutrition.    Fourth Edition .      G.M.  Wardlow  (Ed.).    The  Tikus  (mice) Graw-Hill Co.  USA.
Messina, M.J.  1999b .  Legumes and Soybeans: Overview of Their Nutritional Profiles and Health Effects. Am. J. Clin. Nutr .  70(suppl.)439S-450S.
Naim,  M.,  Gestetner,  B.,  Ziekal,  S.,  Bilk,  Y.,    Bondi,  A. 1974. Soybean  Isoflavone,  Characterization, Determination, and Antifungal Activity. J. Of Agric. Food Chem. 22(5):806-809.
Shurtleff,  W.,  A.  Aoyagi.    1979 . The  Book  of  Tempeh .
Harper and Row.  New York.
Siregar, E, Pawiroharsono, S.  1997 .  Inocula Formulation and  Its  Role  for  Biotransformation  of  Isoflavonoid Compounds.  In Reinventing the Hidden Miracle of Tempe .    Sudarmadji,  S.  Suparmo,  Raharjo,  S. (Eds.).  Indonesian Tempe Foundation.  Jakarta.
Syarief,  R.  Hermanianto,  J.,  Hariyadi,  P.,  Wiraatmadja. S., Suliantri, Dahrulsyah, Suyatna, N.E., Saragih, Y.P.,  Arisasmita,  J.H.,  Kuswardani,  I.,  Astuti,  M.
1999. Wacana  Tempe  Indonesia .    Universitas Katolik Widya Mandala.  Surabaya.
Tuukkanen, J.  2001. Department of Anatomy, University of Oulu, Finland. http://www.2bbc.dk/abs029.htm . April 2001.
Zhang,  Y.,  Song,  T.T.,  Cunnick,  J.E.,  Murphy,  P.A., Hendrich,  S.    1999 .    Daidzein  and  Genistein Glucuronides  in  Vitro  are  Weakly  Estrogenic  and Active  Human  Natural  Killer  Cell  at  Nutritionally Relevant Concentrations .  J. Nutr .  129:399-405.