ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 17 (2) (2014) : 17 – 22
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa

## Aktivitas Selulase dan Xilanase dari Komplek Enzim Lignoselulolitik Termostabil Hasil Penguraian Batang Pisang
Fatria Isrami a , Agustina L.N. Aminin a*
a Biochemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: agustina.aminin@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o A b s t r a c t
Keywords: banana stems, cellulase, xylanase, an enzyme complex lignoselulolitik
Research  on  the  degradation  of  banana  stems  using  a  thermostable  lignocellulolytic enzyme  complex  to  produce  sugars  has  been  done.  The  objective  of  this  study  was  to obtain a derivative starter (St) from a consortium of microbial compost starter (S0) on banana stem media, to obtain cellulase and partial pure xylanase with ammonium sulfate, to get cellulase and xylanase specific activity data. The result of fermentation on banana stems using a consortium of microbial compost starter (S0) produced a good derivative starter  (St)  hence  it  could  be  used  continuously  and  the  resulting  reduction  sugar  was higher.  From  this  study,  it  was  obtained  the  cellulase  and  partial  pure  xylanase ammonium. The highest specific cellulase activity was found in fraction 2 of 180 U / mg protein and for xylanase was in fraction 3 of 202 U / mg protein.

## A b s t r a k
Kata Kunci: batang pisang, selulase, xilanase, kompleks enzim lignoselulolitik Penelitian  tentang  degradasi  batang  pisang  menggunakan  komplek  enzim lignoselulolitik termostabil untuk memproduksi gula telah dilakukan. Tujuan penelitian ini mendapatkan starter turunan (St) dari konsorsium mikroba starter kompos (S0) pada media batang pisang, memperoleh selulase dan xilanase murni parsial dengan amonium sulfat, mendapatkan data aktivitas spesifik selulase dan xilanase. Hasil fermentasi pada batang  pisang  menggunakan  konsorsium  mikroba  starter  kompos  (S0)  menghasilkan starter  turunan  (St)  yang  baik  sehingga  dapat  digunakan  secara  kontinyu  serta  gula reduksi  yang  dihasilkan  lebih  tinggi.  Diperoleh  selulase  dan  xilanase  murni  parsial amonium. Didapatkan pula aktivitas spesifik selulase tertinggi pada fraksi 2 sebesar 180 U/mg protein dan untuk xilanase berada pada fraksi 3 sebesar 202 U/mg protein.

## 1. Pendahuluan
Energi  alternatif  adalah  energi  yang  digunakan dengan tujuan untuk menggantikan bahan bakar seperti minyak bumi dan batu bara sering disebut sebagai bahan bakar  fosil.  Bahan  bakar  fosil  ini  terbentuk  dari  hewan dan  tumbuhan  yang  mati  ratusan  juta  tahun  lalu. Pembentukan  bahan  bakar  ini  membutuhkan  waktu sangat  lama.  Apabila  kita  tidak  berhemat,  bahan  bakar tersebut  akan  habis.  Penggunaan  energi  alternatif merupakan salah satu cara menghemat persediaan bahan bakar  fosil.  Biomassa  dapat  menjadi  sumber  energi alternatif berupa  etanol  sebagai  pengganti bahan bakar
fosil,  karena  mengandung  selulosa  dan  hemiselulosa. Penggunaan biomassa sebagai sumber energi merupakan hal  menguntungkan  yaitu,  dapat  dimanfaatkan  secara berkelanjutan  karena  sifatnya  yang  dapat  diperbaharui ( renewable),  relatif  tidak  mengandung  unsur  sulfur sehingga tidak menyebabkan polusi udara dan juga dapat meningkatkan efisiensi pemanfaatan sumber daya hutan dan  pertanian.  Dengan  demikian  Indonesia  memiliki potensi  yang  cukup  besar  dalam  pengembangan teknologi  konversi  biomassa  menjadi  produk  yang memiliki nilai tambah. Salah satu biomassa yang cukup
melimpah  di  Indonesia  adalah  batang  pisang  yang banyak mengandung lignoselulosa.
Lignoselulosa merupakan komponen utama tanaman  yang  menggambarkan  jumlah  sumber  bahan organik  yang  dapat  diperbaharui.  Lignoselulosa  terdiri dari  selulosa,  hemiselulosa,  lignin  dan  beberapa  bahan ekstraktif  lain  [1].  Batang  pisang  merupakan  limbah industri  pertanian  mengandung  air  dan  mineral  serta serat.  Serat  batang  pisang  mengandung  63%  selulosa, 20%  hemiselulosa  dan  5%  lignin  [2].  Lignoselulosa dalam  batang  pisang  ini  dapat  didegradasi  oleh  enzim lignoselulolitik. Enzim lignoselulolitik adalah kelompok besar enzim yang merupakan protein ekstraseluler yaitu selulase,  hemiselulase,  lignin  peroksidase,  mangan peroksidase dan lakase.
Konversi  biomassa  dapat  dilakukan  secara  fisik, kimia,  mikrobiologi,  dan  enzimatis.  Secara  Fisik dilakukan  dengan  penggilingan,  iradiasi,  dan  proses termal,  namun  metode  fisik  membutuhkan  biaya  dan energi  yang  tinggi  [3].  Secara  kimia  biasanya menggunakan  larutan  alkali  dan  asam  dimana penggunaan  metode  kimia  kurang  ramah  lingkungan dan  dapat  menimbulkan  korosi.  Secara  Mikrobiologi dilakukan  dengan  memanfaatkan  aktivitas  mikroba. Penggunaan mikroba untuk mendegradasi lignoselulosa kurang  efektif  karena  produk  glukosa  yang  dihasilkan digunakan  sebagai  makanan  oleh  mikroba  itu  sendiri serta waktu yang dibutuhkan untuk mendegradasi lama.
Secara  enzimatis  cukup  efektif  tapi  memiliki kekurangan  mahalnya  harga  enzim  saat  ini,  perlu dilakukan  produksi  enzim  dengan  cara  mudah  dan murah. Pemanfaatan mikroba tunggal untuk mendegradasi lignoselulosa kurang efektif, karena hanya senyawa tertentu saja dari penyusun lignoselulosa yang dapat  diurai  oleh  mikroba,  oleh  karena  itu,  diperlukan metode lain untuk proses konversi lignoselulosa, dengan menggunakan konsorsium mikroba.  Konsorsium mikroba  mampu  menghasilkan  lebih  banyak  enzim dibandingkan dengan mikroba tunggal [4].
Produksi  kompleks  enzim  lignoselulolitik  dari subtrat batang pisang dengan menggunakan konsorsium kompos  termofilik.  Konsorsium  kompos  termofilik  ini belum spesifik mengurai batang pisang. Oleh Karena itu diperlukan  optimasi  degradasi  batang  pisang  dengan menggunakan  starter  turunan.  Starter  turunan  adalah kultur  yang  mengandung  konsorsium  mikroba  yang telah  beradaptasi  dengan  baik  pada  subtrat  batang pisang.  Jenriani  juga  telah  berhasil  mengisolasi kompleks  enzim  lignoselulolitik  dalam  bentuk  ekstrak kasar  dan  diuji  aktivitasnya  terhadap  batang  pisang, CMC,  dan  xilan,  jumlahnya  gula  pereduksi  yang dihasilkan pada subtrak batang pisang oleh ekstrak kasar sebesar 0,383 mg/mL, pada selulase 0,403 mg/mL, dan xilanase  sebesar  0,162  mg/mL.  Jumlah  gula  pereduksi yang dihasilkan rendah sehingga butuh pemurnian agar mengasilkan kadar gula pereduksi lebih tinggi.

## 2. Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  konsorsium bakteri kompos termofilik, batang pisang, pepton, yeast, K 2 HPO 4 ,  MgSO 4 .7H 2 O,  akuadest  steril,  buffer  fosfat,
amonium sulfat, EDTA, BaCl 2 , Reagen 3,5- Dinitrosalicylik  acid  (DNS),  Carboxy  Methyl  Cellulose (CMC),  Xilan,  Larutan  Glukosa,  Larutan  Xilosa,  MnSO 4 , H 2 O 2 , NaH 2 PO 4 , Na 2 HPO 4 . 2 H 2 O, Na 2 CO 3 , NaOH, CuSO 4 ,folin ciaulteu.
Preparasi Suspensi Kompos sebagai Starter Mikroba (S 0 )
Sebanyak 20 gram kompos termofilik disuspensikan ke  dalam  100  mL  akuades  steril.  Suspensi  kompos kemudian  disaring  menggunakan  kertas  saring  steril. filtrat  hasil  penyaringan  digunakan  sebagai  starter mikroba.
Pembuatan Kultur starter Tu run an (St)
Pengambilan 2 gram serat batang pisang yang telah halus.  Kemudian  dilakukan  penambahan  10  mL  media pengangaya dan 200 µL suspensi kompos. Penambahan aquadest  steril  hingga  17  mL.  Selanjutnya  dilakukan pengingkubasian pada suhu 55 o selama 140 jam. Setelah itu  dilakukan  penyaringan  dengan  kertas  saring  untuk mendapatkan filtrat.

## Isolasi dan Produksi Kompleks Enzim lignoselulolitik
Pengambilan  20  serbuk  batang  pisang.  Lalu dilakukan penambahan 125mL media pengaya dan 5 mL starter  turunan  (St).  Setelah  itu  pengingkubasian  pada suhu  55o  selama  140  jam.  Lalu  dilakukan  pengadukan dan  penyaringan  dengan  kertas  saring  untuk mendapatkan  filtrat.  Filtrat  yang  didapat  disentrifuse dengan kecepatan 5000 rpm selama 20 menit. Kemudian diperoleh filtrat merupakan ekstrak kasar dari komplek enzim lignoselulolitik.

## Fraksinasi Komplek Enzim Lignoselulolitik
Amonium sulfat yang dibutuhkan ditimbang sesuai dengan  tingkat  kejenuhan.  Selanjutnya  amonium sulfat ditambahakan  kedalam  ekstrak  kasar  komplek  enzim lignoselulolitik  sedikit  demi  sedikit  sambil  diaduk dengan mengunakan magnetik stirer. Setelah amonium sulfat  larut  maka  dilakukan  pendiaman  selama  satu malam  (24  jam)  dalam  kondisi  dingin.  Selanjutnya campuran  tersebut  disentrifuse  dengan  kecepan  5000 rpm  selama  25  menit.  Endapan  dipisahkan  disuspensi dengan  buffer  fosfat  0,05  M  pH  7.  Endapan  tersebut merupaka fraksi pemurnian amonium sulfat. Setelah itu filtrat  hasil  pemurnian  dilanjutkan  dengan  perlakukan yang  sama  untuk  mendapatkan  fraksi  berikutnya. Pengelompokan  fraksi  berdasarkan  tingkat  kejenuhan yaitu  F1(0-20%),  F2(20-40%),  F3(40-60%),  F4(60- 80%), F5(80-100%).

## Dialisis Komplek Enzim Lignoselulolitik
Pertama-tama membaran selofan direbus selama 30 menit  dengan  larutan  EDTA,  kemudian  dicuci  dengan aquadest dan bufer fosfat. Selanjutnya salah satu ujung
selofan  diikat  dengan  benang  kemudian  dalam  selofan diisi  komplek  enzim  lignoselulitik  dimasukan  ke dalam masing-masing membran selofan yang berbeda. Dialisis ini dilakukan dengan meredam kantong selofan ke dalam buffer  fosfat  (0,0005  M)  dan  diaduk  menggunakan magnetic  stirrer.  Pada  setiap  satu  jam  buffer  diganti hingga  kandungan  amonium  sulfat  tidak  lagi  ada didalam  selofan.  Uji  kandungan  amonium  sulfat  ini menggunakan BaCl2 pada buffer di luar membran tidak menghasilkan  endapan  putih  lagi,  dan  kemudian  hasil dialisis diukur aktivitasnya.

## Uji Aktivitas Selulase
Pengambilan 0,5 mL CMC dari ) 0,1 gram CMC dalam 10 mL buffer fosfat pH 7 untuk tiap fraksi (fraksi 1 hingga fraksi  5).  Kemudian  masing-masing  ditambahkan  0,5 mL  kompleks  enzim  lignoselulolitik.  Selamnjutnya penambahan 1 mL reagen DNS dan pemanasan selama 5 menit. Kemudian pengenceran larutan hingga 10 mL dan pengukuran  absorbansinya  pada  panjang  gelombangan 488nm.

## Uji Aktivitas Xilanase
Pengambilan 0,5 mL xilan dari 0,1 gram xilan dalam 10 mL buffer fosfat pH 7 untuk tiap fraksi (fraksi 1 hingga 5).  Kemudian  ditambahakan  0,5  mL  kompleks  enzim lignoselulolitik. Selanjutnya dilakukan pengingkubasian pada 50o C selama 1 jam. Selanjutnya penambahan 1 mL reagen DNS  dan  pemanasan  selama  5 menit. Kemudian pengenceran  larutan  hingga  10  mL  dan  pengukuran absorbansinya pada panjang gelombang 488 nm.

## Penentuan Kadar protein dengan Metode Lowry
Sebanyak  0,1  mL  larutan  protein  enzim  hasil fraksinasi dan dialisis ditambah dengan larutan lowry C, di  inkubasi  pada  suhu  optimum  selama  30  menit. Selanjutnya  ditambah  dengan  0,2  mL  lowry  D  dan diinkubasi selama 10 menit pada suhu kamar, kemudian diukur  absorbansinya  dengan  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gelombang optimun.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Pembuatan Kultur Starter Turunan
Pembuatan kultur ini bertujuan untuk mendapatkan starter turunan (St) dari starter mikroba kompos (S 0 ). St yang dihasilkan dari sistem fermentasi padat ini sangat bermaanfaat  karena  dapat  digunakan  secara  kontinyu. Pada  subtrat  batang  pisang  ditambah  aquadest,  media pengaya, dan suspensi kompos sebagai S 0 . Kemudian di inkubasi  pada  suhu  55 o C  selama  140  jam  dan  terakhir dilakukan penyaringan untuk mendapatkan filtrat yang akan digunakan dalam proses selanjutnya.
Kapasitas degradasi lignoselulosa dapat dilihat dari kadar  gula  pereduksi  yang  dihasilkan  selama  proses pengkulturan.  Pengukuran  kadar  gula  pereduksi  pada kultur St batang pisang diukur dengan metode DNS pada λ = 440 nm.
Tabel 1: Perbandingan kadar gula pereduksi pada kultur dengan jenis- jenis starter
Subtrat Starter Pereduksi Kadar gula (mg/mL)
KS 0 KSt S. Batang P 0,162 11,6 S. CMC 0,383 1,7 S. Xilan 0,404 3,9
Pada  tabel  1  di  atas  menunjukan  bahwa  kapasitas gula pereduksi pada kultur S 0 dan St memiliki perbedaan yang signifikan. Kadar gula pereduksi pada jam 140 untuk St  jauh  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  kadar  gula pereduksi di jam yang sama untu S 0 .
Kadar gula pereduksi yang diperoleh dihasilkan dari aktivitas  mikroba  yang  tumbuh  pada  batang  pisang, media pengaya yang terkandung dalam media berfungsi sebagai  nutrisi  awal  bagi  mikroba,  karena  lebih  mudah dicerna  oleh  mikroba  sehingga  jumlah  mikroba  yang dihasilkan  tinggi.  Sedangkan  untuk  subtrat  CMC  dan xilan  dilakukan  untuk  menguji  aktivitas  selulase  dan xilanase  dari  enzim  lignoselulolitik  mengasilkan  gula pereduksi. Kadar gula pereduksi yang dihasilkan oleh KSt lebih tinggi bila dibandingkan kadar gula pereduksi oleh KS 0 .  Hal  ini  menunjukan  bahwa  konsorsium  mikroba termofilik memproduksi enzim-enzim untuk mendegradasi batang pisang lebih tinggi.

## Isolasi dan Pemurnian Komplek Enzim Lignoselulolitik
Hasil  fermentasi  dari  media  batang  pisang  dengan starter  turunan  (St)  ditunjukan  dengan  tumbuhnya jamur  pelapuk  putihyang  tumbuh  dengan  cepat  dan banyak pada suhu 55 o C selama 140 jam. Kemudian hasil fermentasi  tersebut  diisolasi  dengan  tujuan  untuk memisahkan  komplek  enzim  lignoselulolitik  dari pengotor-pengotor.  Hasil  kultur  starter  turunan  (St) dilakukan  penambahan  buffer  fosfat  pH  7  agar mempertahankan pH. Kemudian dilakuakan pengadukan agar  larutan  homogen  dan  penyaringan  untuk mendapatkan  filtrat.  Filtrat  yang  didapat  disentrifuse yang bertujuan untuk memisahkan endapan dan filtrat. Filtrat  ini  merupakan  ekstrak  kasar  yang  mengandung komplek  enzim  lignoselulolitik  seperti  selulase  [5], Xilanase  [6],  yang  akan  digunakan  pada  proses pemurnian.
Pemurnian  bertingkat  dengan  amonium  sulfat merupakan  salah  satu  metode  pemurnian  awal  pada enzim. Keuntungan menggunaka amonium sulfat antara lain  dengan  keadaan  jenuh,  molaritasnya  yang  cukup tinggi  dapat  mengendapkan  sebagian  besar  protein, memiliki  kerapatan  yang  tinggi  sehingga  tidak  cukup besar  mengganggu  protein  yang  mengendap  karena sentrifugasi, dan dalam larutan amonium sulfat sebagian besar  protein  terlindungi  dari  denaturasi.  Filtrat  hasil sentrifuse  yang  berupa  ekstrak  kasar  komplek  enzim lignoselulolitik  diendapkan  dengan  amonium  sulfat, pengandapan  dilakukan  dengan  variasi  tingkat kejenuhan  F1(0-20%),  F2(20-40%),  F3(40-60%), F4(60-80%), F5(80-100%).
Proses  isolasi  komplek  enzim  lignoselulolitik diketahui kadar protein dari masing-masing fraksi yang ditunjukan oleh tabel 2 sebagai berikut :
Tabel 2: kadar protein pada masing-masing fraksi Fraksi kadar protein (mg/mL) F1 0,270 F2 0,257 F3 0,343 F4 0,310 F5 0,257
Berdasarkan  tabel  2  dapat  dilihat  bahwa  kadar protein  pada  F3  tertinggi  yaitu  sebesar  0,343  mg/mL dibanding  dengan  fraksi-fraksi  lainnya.  Perbedaan isoelektrik pada protein mempengaruhi perbedaan kadar protein dimana didasarkan atas perbedaan asam-amino penyusunan. Pada kondisi dibawah titik isoelektrikanya, gugus  karboksilat  dari  molekul  protein  terprotonasi sehingga  protein memiliki  muatan  positif. Hal  tersebut dapat  berakibat  pada  peningkatan  gaya  tolak  menolak antara  molekul  protein  sehingga  antar molekul  protein saling  terpisah.  Kondisi  ini  menyebabkan  interaksi anatara  molekul  protein  dengan  pelarut  terjadi peningkatan,  sehingga  kelarutan  semakin  meningkat. Sebaliknya  pada  kondisi  diatas  titik  isoelektrik  terjadi peningkatan  muatan  negatif  pada  molekul  protein.  Hal ini  berakibat  pada  penurunan  interaksi  antara  melekul protein dengan pelarut [7].
Pengendapan  dengan  garam  menggunakan  prinsip salting  out  dimana  kelarutan  protein  akan  berkurang pada konsentrasi garam yang tinggi. Konsentrasi garam yang  meningkat  mengakibatkan  air  akan  lepas  dari protein  yang  menyebabkan  terjadinya  ikatan  hidrifobik dari satu protein dengan protein yang lain menghasilkan endapan [8]. Pengendapan protein dilakukan selama 24 jam  selama  proses  ini  protein  akan  beragregasi,  tetapi tidak  semuanya  akan  langsung  mengendap.  Pemisahan supernatan  dan  endapan  protein  dilakukan  dengan sentrifugasi.  Endapan  tersebut  dilarutkan  dalam  buffer fosfat 0,05 M pH 7.
Setelah  didapatkan  hasil  fraksinasi  untuk  setiap fraksi  maka  dilakukan  dengan  proses  dialisis.  Dialisis merupakan  proses  pemisahan  atau  menghilangkan molekul garam amonium sulfat dan ion-ion pengganggu lainya  yang  berpengaruh  terhadap  kestabilan  molekul protein  enzim  selama  penyimpanan,  dimana  molekul molekul kecil (garam amonum sulfat) dan ion ion akan melewati  pori-pori  selaput  semipermeable  dan  keluar dari selofan.
Proses  dialisis  ini  dilakukan  dengan  cara memasukan  masing  masing  hasil  farksinasi  yang ditambahkan  buffer  fosfat  kedalam  kantung  selofan. Selanjutnya masing-masing kantung selofan dimasukan kedalam larutan buffer fosfat yang memiliki konsentrasi 100-1000  kali  lebih rendah  daripada  konsentrasi  buffer yang  berada  didalam  kantung  sehingga  molekul  yang berukuran kecil seperti garam ataupun ion pengganggu lainnya  akan  melewati  pori-pori  membran  selofan
sampai  konsentrasi  didalam  dan  diluarkantung mencapai nilai yang sama (kesetimbangan).
Pada  proses  dialisis  diharapkan  keberadaan amonium  sulfat  pada  hasil  tiap-tiap  fraksinasi  sudah bebas  dari  amonium  sulfat  yang  akan  mengganggu aktivitas  enzim.  Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan  uji dengan menambahkan BaCl 2 kedalam larutan baffer yang berada diluar kantung selofan.
Endapan  putih  yang  timbul  adalah  endapan  BaSO 4 yang  bewarna  putih.  Garam  BaSO 4 memiliki  tingkat kelarutan yang rendah dalam pelarut air sehingga akan tampak sebagai endapan putih. Pengujian mengguanakan  BaCl 2 ini  dilakukan  sampai  endapan putih  yang  berada  diluar  kantung  dialisi  sudah  tidak terbentuk lagi.

## Aktivitas Selulase
Selulase  adalah  enzim  yang  dapat  menghidrolisis ikatan β 1,4  glikosidik  pada  selulosa  menjadi  glukosa. Endoglukanase memotong ikatan internal rantai selulosa secara  acak,  sehingga  menghasilkan  oligo  sakarida. Eksoglukanase (selebiohidrolase) memecah rantai akhir selulosa  dan  oligosakarida  menjadi  selebiosa.  Selebiosa dihidrolisis  lebih  lanjut  oleh β -glukosidase  menjadi glukosa.
Uji  aktivitas  selulase  bertujuan  untuk  menunjukan peran  selulase  dalam  proses  degradasi  selulosa  pada batang  pisang.  CMC  digunakan  sebagai  subtrat  dari enzim  selulase.  Satu  unit  aktivitas  enzim  selulase  di definisikan  kemampuan  enzim  selulase  yang  dapat menghasilkan  1  mg/mL  glukosa  pada  kondisi  optimum [9].  Jumlah  gula  pereduksi  (glukosa)  yang  terbentuk menunukan besarnya aktivitas selulase, dan banyaknya glukosa dapat ditentukan dengan menggunakan metode DNS  (Dinitrosalicylik  acid)  berdasarkan  kurva  standar glukosa.  Prinsip  dari  metode  ini  adalah  glukosa  yang memiliki  gugus  aldehid  akan  mengalami  oksidasi  dan 3,5- Dinitrosalicylik acid (DNS) akan mengalami reduksi menjadi 3-amino-5nitrosalicylik acid [10].
Aktivitas Spesifik selulase adalah satu unit aktivitas selulase  per  miligram  protein  [11].  Penentuan  aktivitas spesifik  selulase  menggambarkan  kemurnian  dari fraksi-fraksi enzim yang dihasilkan. Fraksi enzim yang menghasilkan  aktivitas  spesifik  yang  tinggi  maka  akan memiliki  aktivitas  spesifik  yang  tinggi  maka  akan memiliki kemurnian tinggi.
Gambar 3. Aktivitas Spesifik Selulase masing-masing Fraksi
Berdasarkan gambar 3 dapat diketahui bahwa fraksi enzim  yang  memiliki  aktivitas  spesifik  tertinggi  ialah pada  F2  (20-40%)  sebesar  180  U/mg  protein.  Hasil tersebut menunjukan bahwa enzim selulase pada F2 (20- 40%)  memiliki  kemurnian  tertinggi  dibanding  fraksi- fraksi  yang  lain.  Oleh  karena  itu,  dapat  disimpulkan bahwa  protein  pada  F2  (20-40%)  sebagian  besar merupakan  enzim  selulase.  Pada  F5  memiliki  Protein total  sebesar  0,257  mg/mL,  tetapi  tidak  menunjukan adanya  aktivitas  enzim  selulase.  Hal  ini  dikarenakan komponen  yang  ada  bukan  merupakan  protein  enzim melainkan protein non enzim. Dimana protein non enzim dapat berasal dari komponen yang ada dalam media yang berasal  dari  batang  Pisang  .  Protein  kasar  pada  batang pisang kira-kira sebesar 4,81%.

## Aktivitas Xilanase
Xilanase adalah enzim yang menghidrolisis ikatan β 1,4  glikosidik  pada  xilan  menjadi  xilosa  [1].  Endo  1,4 β xilanase menghidrolisis xilan menjadi xilooligosakarida dan xilosa. Xilooligosakarida dihidrolisis lebih lanjut oleh β -xilosidase  menjadi  xilosa.  Uji  aktivitas  xilanase bertujuan  untuk  menujukan  peran  xilanase  dalam mendegradasi  xilanase.  Prinsip  penentuan  aktivitas xilanase hidrolisis xilan menjadi xilosa, sehingga jumlah xilosa menunjukan besarnya aktivitas xilanase [12].
Xilosa  yang  terbentuk  dari  rekasi  enzimatis  antara xilanase  dengan  ikatan  xilan  menunjukan  bahwa  pada komplek enzim lignoselulolitik yang diisolasi dari kultur jerami mengandung xilanase. Satu unit aktivitas xilanase didefenisikan  sebagai  aktivitas  enzim  xilanase  yang dapat membentuk 1 mg/mL xilosa pada kondisi optimum .  Jumlah  xilosa  yang  terbentuk  menunjukan  besar aktivitas  xilanase,  dan  banyaknya  xilosa  yang  dapat dihitung dengan menggunakan metode DNS berdasarkan kurva standar xilosa.
Defenisi  aktivitas  spesifik  xilanase  adalah  unit aktivitas  enzim  per  miligram  protein.  Nilai  aktivitas spesifik  ini  dapat  digunakan  sebagai  ukuran  besarnya kemurnian  enzim  hasil  isolasi  [11].  Aktivitas  spesifik enzim  dipengaruhi  oleh  besarnya  aktivitas  enzim  dan kadar protein total pada fraksi
Gambar 4. Aktivitas spesifik xilanase masing-masing fraksi
Berdasarkan  gambar  4  ditunjukan  bahwa  aktivitas spesifik  tertinggi  adalah  xilanase  pada  F3  (40-60%), yaitu  sebesar  202  U/mg  protein.  Hal  ini  menujukan bahwa tingkat kemurnian xilanase tertinggi pada F3 (40- 60%)  dibandingkan  fraksi-fraksi  lainnya.  Oleh  karena itu,  dapat  disimpulkan  bahwa  protein  F3  (40-60%)
sebagian  besar  merupakan  enzim  xilanase.  Pada  F5 memiliki Protein total sebesar 0,257 mg/mL, tetapi tidak menunjukan  adanya  aktivitas  enzim  xilanase.  Hal  ini dikarenakan  komponen  yang  ada  bukan  merupakan protein  enzim  melainkan  protein  non  enzim.  Dimana protein non enzim dapat berasal dari komponen yang ada dalam  media  yang  berasal  dari  batang  pisang.  Protein kasar pada batang pisang kira-kira sebesar 4,81%.

## 4. Kesimpulan
Fermentasi  pada  batang  pisang  menggunkan konsorsium mikroba starter kompos (S 0 ) menghasilkan starter turunan (St) yang baik sehingga dapat digunakan secara kontinyu serta gula reduksi yang dihasilkan lebih tinggi.  Didapatkan  selulase  dan  xilanase  murni  parsial dengan  amonium  sulfat  hasil  komplek  enzim lignoselulolitik dengan subtrat batang pisang. Didapatkan  aktivitas  spesifik  selulase  tertinggi  pada fraksi  2  sebesar  180  U/mg  protein  dan  untuk  xilanase berada pada fraksi 3 sebesar 202 U/mg protein.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  Mehdi  Dashtban,  Heidi  Schraft,  Wensheng  Qin, Fungal  bioconversion  of  lignocellulosic  residues; opportunities  &  perspectives, International  journal of biological sciences, 5, 6, (2009) 578
[2]  Andestian  Wijaya, Pengembangan  Teknologi Papan Komposit  Dari  Limbah  Batang  Pisang  (Musa  Sp.): Sifat Fisis Dan Mekanis Papan Pada Berbagai Tingkat Asetilasi, Fakultas Kehutanan, IPB, Bogor
[3]  Mohammad  J  Taherzadeh,  Keikhosro  Karimi, Pretreatment  of  lignocellulosic  wastes  to  improve ethanol  and  biogas  production:  a  review, International  journal  of  molecular  sciences,  9,  9,
(2008) 1621-1651 http://dx.doi.org/10.3390/ijms9091621 [4]  Sabine Peters, Stefanie Koschinsky, Frank
Schwieger,  Christoph  C  Tebbe,  Succession  of microbial  communities  during  hot  composting  as detected by PCR – single-strand-conformation polymorphism-based  genetic  profiles  of  small- subunit  rRNA  genes, Applied  and  environmental microbiology, 66, 3, (2000) 930-936 http://dx.doi.org/10.1128/AEM.66.3.930-936.2000
[5]  Vasudeo Zambare, Archana Zambare, Kasiviswanath Muthukumarappan, Lew P Christopher, Biochemical characterization  of  thermophilic  lignocellulose degrading enzymes and their potential for biomass bioprocessing, International  Journal  of  Energy  and Environment, 2, 1, (2011) 99-112
[6]  Cristóbal  Noé  Aguilar,  Antonio  Aguilera-Carbo, Armando  Robledo,  Janeth  Ventura,  Ruth  Belmares, Diego  Martinez,  Raul  Rodríguez-Herrera,  Juan Contreras, Production of antioxidant nutraceuticals by  solid-state  cultures  of  pomegranate  (Punica granatum)  peel  and  creosote  bush  (Larrea tridentata) leaves, Food Technology and Biotechnology, 46, 2, (2008) 218
[7]  Valerie  Kinsella,  Surveys  2.  Eight  State-of-the-Art Articles  on  Key  Areas  in  Language  Teaching. Cambridge Language Teaching Surveys, ERIC, 1982.
[8]  Eleanor  LV  Harris,  S  Angal,  Protein  purification methods, IRL Press at Oxford University Press, 1989.
[9]  F.  G.  Winarno,  Kimia  Pangan  dan  Gizi,  Penerbit Gramedia, Jakarta, 1992.
[10] Gail  Lorenz  Miller,  Use  of  dinitrosalicylic  acid reagent  for  determination  of  reducing  sugar, Analytical  chemistry,  31,  3,  (1959)  426-428 http://dx.doi.org/10.1021/ac60147a030
[11]  Albert  L.  Lehninger,  Dasar-dasar  biokimia, Erlangga, Jakarta, 2000.
[12] A. Sunna, G. Antranikian, Xylanolytic Enzymes from Fungi and Bacteria, Critical Reviews in Biotechnology, 17, 1, (1997) 39-67 10.3109/07388559709146606