EVALUASI PENGGUNAAN EKSTRAK LAMUN SEBAGAI BAHAN AKTIF ANTIFOULING TERHADAP PRODUSEN PERAIRAN
Rachma Puspitasari 1)

## ABSTRAK
Penggunaan TBT sebagai cat antifouling telah dilarang di dunia, oleh karena itu diperlukan bahan alternatif yang dapat menggantikannya.  Fase  awal  dari  fouling  adalah  pembentukan  biofilm  yang  melibatkan  bakteri. Cymodocea serrulata dan Syringodium isoetifolium diketahui berpotensi antibakteri terhadap Vibrio harveyii dan Bacillus subtilis . Sebelum dikembangkan lebih jauh sebagai bahan aktif cat antifouling, perlu diteliti keamanan dari lamun tersebut terhadap produsen primer perairan, salah satunya Chaetoceros graclis . Ekstrak kedua jenis lamun tersebut dipaparkan terhadap diatom selama 96 jam pada kondisi laboratorium dan dianalisis pengaruhnya terhadap pertumbuhan fitoplankton. Ternyata, S. isoetofolium menunjukkan penghambatan pertumbuhan diatom. Hasil dari uji anti bakteri dan bioassay menunjukkan bahwa lamun C. serrulata lebih potensial untuk dikembangkan sebagai bahan aktif cat antifouling daripada S. isoetifolium .
Kata kunci: diatomae , fouling , C. serrulata, S. isoetifolium

## ABSTRACT
The use of TBT as antifouling paints had been banned in the world, so it is necessary to develop alternative materials that can replace it. Initial phase of fouling is biofilm, involving bacteria. Cymodocea serrulata and Syringodium isoetifolium known had antibacterial activity against Vibrio harveyii and Bacillus subtilis. Before developed further as an active ingredient antifouling paint, they need to be examined about the security of the seagrass to aquatic primary producer, Chaetoceros gracilis. Extract from both seagrass were exposed to diatoms for 96-h and analyzed its influence to phytoplankton growth. Apparently, S.isoetofolium showed inhibition of growth of diatoms. Results of anti-bacterial and bioassay test showed that C. serrulata were more potential to be developed as an active ingredient antifouling paints than S. isoetifolium.
Keywords: diatom, fouling, C. serrulata, S. isoetifolium
1) Pusat Penelitian Oseanografi – LIPI
Diterima tanggal: 15 Januari 2016; Diterima setelah perbaikan: 10 Februari 2016; Disetujui terbit tanggal 5 Maret 2016
Korespondensi Penulis:

## PENDAHULUAN
Biofouling umum terjadi pada benda-benda yang sering mengalami kontak dengan air laut seperti bagian bawah kapal dan bangunan-bangunan yang terendam di bawah laut. Beberapa kerugian dari adanya organisme penempel ini adalah meningkatnya konsumsi bahan bakar yang akan berdampak pada meningkatnya polusi karbondioksida dan polusi udara lainnya, meningkatnya beban kerja mesin untuk mempertahankan kecepatan, meningkatnya pembersihan dock dalam keadaan kering dan meningkatnya biaya perawatan ketika kapal tidak beroperasi, hilangnya kemampuan manuver ( maneuverability ) dari kapal, serta meningkatnya resiko kontaminan ekologis dari spesies asing (Bellas, 2006). Oleh karena itu, penggunaan cat antifouling banyak digunakan dalam industri perkapalan. Dahulu, cat antifouling berbahan dasar tributiltin (TBT) banyak digunakan pada pertengahan 1960an karena terbukti sangat efektif untuk menanggulangi organisme target penyebab  fouling.  Lebih  dari  30  tahun,  senyawa organotin ini digunakan sebagai senyawa antifoulant hampir di 70% dunia pelayaran (Bellas, 2006). Namun
kemudian, ditemukan efek lingkungan berupa toksisitas akut yang disebabkan oleh TBT pada organisme nontarget dan akhirnya TBT dilarang digunakan di berbagai negara. Menurut Wang et al . (2008), penelitian mengenai efek TBT pada tiram dan kerang-kerangan pada konsentrasi nanomol yang rendah telah dilakukan. TBT mengganggu sistem endokrin di sejumlah kerang laut yang mengakibatkan perkembangan karakteristik organ kelamin jantan pada siput laut betina. TBT juga menyebabkan gangguan sistem imun pada organisme membentuk perubahan formasi ( malformation ) cangkang setelah pelepasan TBT pada level yang sangat rendah di air (Sudaryanto, 2001). Pada November 1999, International Maritime Organization mengeluarkan resolusi mengenai pembatasan penggunaan cat berbahan dasar TBT pada kapal yang berlaku sejak Januari  2003,  sedangkan  pelarangan  diberlakukan penuh sejak Januari 2008 (IMO RESOLUTION A. 895 21, 25/11/1999 dalam Bellas, 2006). Sejak pelarangan penggunaan cat berbahan dasar TBT, penggunaan biosida alternatif pengganti meningkat karena dianggap aman secara ekologis dan memiliki nilai ekonomis yang tinggi. Hal yang perlu diperhatikan
adalah bagaimana efek ekologis dari biosida-biosida tersebut pada ekosistem akuatik, baik pada organisme target maupun pada organisme nontarget.
Di dalam lingkungan laut, semua permukaan benda bawah air dipengaruhi oleh penempelan organisme fouling seperti bakteri, alga dan invertebrata khususnya  remis  dan  teritip.  Biofilm  merupakan sekelompok sel yang dihasilkan oleh bakteri tertentu yang bersifat irreversible dan menutupi permukaan dengan bahan utamanya berupa polisakarida. Bakteri laut diduga turut menyebabkan terjadinya fouling . Menurut Zobell & Allen dalam Sidharta (2000), bakteri berperan dalam terjadinya fouling dengan cara: 1. memberikan tempat perlekatan untuk larva planktonik berbagai organisme fouling , 2. menyuramkan permukaan  benda-benda  yang  cerah  dan  terang,  3. menyediakan sumber makanan bagi teritip, tiram, tunicate  dan  lainnya,  4.  menyediakan  pengendapan bahan-bahan berkapur bagi oganisme sesil, dan 5. Meningkatkan kandungan CO 2 dan amonia yang dibutuhkan tumbuhan laut.
Arlyza  (2008)  melaporkan  bahwa  ada  delapan jenis  lamun  yang  menunjukkan  aktifitas  sebagai antibakteri. Jenis lamun yang paling berpotensi sebagai antibakteri secara berurutan diantaranya adalah Thalassia hemprichii , Halodule pinnifolia , Syringodium isoetifolium , Cymodocea serrulata dan Cymodocea rotundata . Bila potensi ekstrak lamun ini dapat dikembangkan tentu akan membawa manfaat ekonomi dan aman bagi lingkungan.
Untuk  membuktikan  bahwa  ekstrak  lamun  ini aman bagi lingkungan khususnya produsen perairan yaitu mikroalga, perlu dilakukan penelitian untuk mempelajari efek dari biosida alami berbahan dasar ekstrak lamun terhadap pertumbuhan mikroalga. Mikroalga adalah komponen esensial dari ekosistem akuatik yang memproduksi oksigen dan substansi organik melalui proses fotosintesis yang sangat dibutuhkan bagi organisme lainnya seperti ikan dan invertebrata. Mikroalga berperan penting dalam keseimbangan ekosistem akuatik karena berada di tingkat pertama dalam rantai makanan yang memproduksi bahan organik dan oksigen melalui fotosintesis (Berard, 1996).
Pada penelitian ini digunakan mikroalga Diatomae, Chaetoceros gracilis . Diatom planktonik C. gracilis adalah spesies yang dapat digunakan sebagai biota uji dalam bioassay karena memenuhi beberapa persyaratan sebagai biota uji yaitu pertumbuhannya yang cepat, sensitivitas dan penanganannya mudah di laboratorium (Hindarti, 2008). Chaetoceros gracilis merupakan spesies dari kelas Bacillariophyceae dan merupakan salah satu genus diatom penting dalam plankton laut karena merupakan genus terbesar dan
J. Segara Vol. 12 No. 1 April 2016: 45-51
berperan sebagai produsen primer serta merupakan makanan penting bagi biota lain terutama udang (Panggabean, 1997). Dalam uji toksisitas, beberapa parameter yang umum dilihat untuk memperkirakan efek dari toksikan terhadap mikroalga antara lain pertumbuhan dan aktivitas fotosintetik (Campanella et al., 2000).
Tujuan khusus dari penelitian ini adalah membandingkan keamanan dari ekstrak dari dua jenis lamun yang berbeda yaitu C. serrulata dan S. isoetifolium terhadap mikroalga C. gracilis. Pemilihan kedua jenis lamun ini berdasarkan pada ketersediaan lamun di lokasi penelitian karena tidak semua jenis lamun dapat ditemui di lokasi dan mempertimbangkan faktor kecukupan lamun untuk memenuhi berat ekstrak. Informasi dari penelitian ini bermanfaat untuk mengkaji resiko keamanan penggunaan senyawa biosida berbahan dasar ekstrak lamun terhadap mikroalga, C. gracilis .

## METODE PENELITIAN

## Larutan uji
Larutan uji yang digunakan diperoleh dari ekstrak lamun yaitu Cymodocea serrulata dan Syringodium isoetifolium . Ekstrak diperoleh dari maserasi lamun segar  selama  24  jam  dalam  pelarut  polar  metanol pekat dengan menggunakan magnetic stirrer pada kecepatan konstan. Setelah itu, ekstrak disaring dan filtratnya  dievaporasi  pada  suhu  di  bawah  titik  didih pelarut organik (40-50º C). Ekstrak lamun C. serrulata dalam metanol menunjukkan aktivitas antibakteri yang kuat terhadap Vibrio harveyii dan Bacillus subtilis sedangkan S. isoetifolium terhadap B. subtilis saja (Arlyza,  2008).  Tiap  ekstrak  dibuat  larutan  stok konsentrasi  10.000  ppb  (0,01  g  ekstrak  dalam  1  L akuades) dengan menambahkan 0,5 ml metanol kemudian ditambah akuades hingga 1 L. Larutan stok kemudian diencerkan dengan air laut saring 0,45 μm untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji yang diinginkan. Setiap 1 liter air laut saring ditambahkan 1 mL media Walne non EDTA. Komposisi media Walne dapat dilihat dalam Tabel 1.
Setelah larutan stok siap, larutan stok diletakkan di tempat gelap dan pada suhu kamar untuk menghindari fotodegradasi.  Konsentrasi yang dipakai adalah kontrol negatif dan seri konsentrasi uji yaitu 1, 10, 100 dan 1000 ppb ekstrak senyawa uji. Tiap konsentrasi dibuat tiga ulangan dan diletakkan secara acak di rak perlakuan.
Secara umum, kondisi pengujian ini mengacu pada  CPMS-II,  1995  seperti  yang  tercantum  dalam Tabel 2.

## Bioassay terhadap mikroalga
Kultur murni C. gracilis berumur empat hari diperoleh dari laboratorium Marikultur-Pusat Penelitian Oseanografi LIPI. Satu mililiter larutan kultur C. gracilis dengan kepadatan satu juta sel/ml diinokulasikan ke dalam erlenmeyer berisi 100 ml larutan uji, sehingga kepadatan sel menjadi 10,000 sel/ml. Masing-masing perlakuan memiliki 3 ulangan. Titik akhir pengamatan adalah pertumbuhan (jumlah sel) diatom pada perlakuan lamun dibandingkan dengan kontrol setelah 96 jam yang dihitung dengan haemocytometer .  Uji dianggap valid apabila jumlah sel pada kontrol mencapai 2 x 10 5 sel/ml (CPMS-II, 1995, ASTM, 2006).
Nilai persentase penghambatan/ inhibition (I) dan stimulasi (S) dari rata-rata jumlah sel tiap perlakuan lamun (P) dibandingkan dengan rata-rata jumlah sel pada kontrol air laut (K) setelah 96 jam pemaparan
dihitung berdasarkan persamaan berikut :
Parameter kualitas air yang dipantau selama uji adalah oksigen terlarut yang diukur menggunakan DOmeter YSI 55, salinitas menggunakan refraktometer, pH dan suhu menggunakan pH meter Eijkelkamp.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  toksisitas  pertumbuhan  mikroalga  dianggap valid bila jumlah sel pada kontrol negatif setelah 96 jam  adalah  ≥  2  x  10 5 sel/mL  (ASTM,  2006).  Jumlah
Evaluasi Penggunaan Ekstrak Lamun...Perairan (Puspitasari, R.)
Komposisi bahan-bahan media Walne bagi pemeliharaan C. gracilis (CPMS II, 1995)
Tabel 1.
Komponen Komposisi Jumlah terlarut dalam 100 mL akuades NaNO 3 10,0 g Na 2 EDTA 4,5 g H 3 BO 3 3,36 g Stok 1 NaH 2 PO 4 .H 2 O 2,0 g FeCl 3 .6H 2 O 0,13 g MnCl 2 .4H 2 O 0,036 g Stok Vitamin Primer Vitamin B1 100 mg Vitamin B2  5 mg ZnCl 2 2,1 g CoCl 2 .H 2 O  2,0 g Stok Trace Metal (NH 4 ) 6 Mo 7 O 2 .4H 2 O 0,9 g
CuSO 4 .5H 2 O 2,0 g 01. Tipe uji Statis, tidak diperbarui 02. Suhu:    27+
1 o C 03. Intensitas cahaya 400 + 40 foot candles 04  Fotoperiodisasi: pencahayaan terus menerus 05. Volume botol uji Erlenmeyer 250-mL 06. Volume larutan uji: 100 mL 07. Umur kultur saat inokulasi: 4-7  hari 08. Kepadatan awal sel: 10,000 sel/mL 09. Jumlah ulangan: 3 10. Periode homogenisasi Sehari dua kali dengan tangan 11. Pelarut: Media pertumbuhan alga tanpa EDTA 12. Faktor pengenceran: 0.5 13. Lama uji 96 jam 14. Efek yang dilihat Pertumbuhan (jumlah sel) 15. Titik akhir pengamatan IC50, NOEC and LOEC untuk penghambatan pertumbuhan 16. Kriteria penerimaan uji: Rata-rata sel dalam kontrol  mencapai 2 x 10
5 sel/mL
Komposisi bahan-bahan media Walne bagi pemeliharaan C. gracilis (CPMS II, 1995) Tabel 2.
sel pada masing-masing kontrol pada pengujian kali ini memenuhi persyaratan tersebut sehingga uji dinyatakan valid.
Hasil pengukuran kualitas air untuk uji ekstrak lamun S. isoetifolium dan C. serrulata disajikan dalam Tabel  3. Tampak  dari Tabel  3  bahwa  kualitas  air  laut selama uji ekstrak adalah baik dan memenuhi kondisi hidup/pertumbuhan diatom C. gracilis .
Uji  ekstrak  lamun  terhadap  pertumbuhan mikroalga mengikuti panduan yang direkomendasikan CPMS-II,  1995  dengan  modifikasi  pada  suhu  dan salinitas.  Modifikasi  yang  dimaksud  adalah  kondisi suhu pengujian pada 25 o C  dan  salinitas  34  ppt  atau mengacu pada kondisi tropis sedangkan panduan yang tercantum dalam CPMS-II, 1995 mengacu pada kondisi subtropis.
J. Segara Vol. 12 No. 1 April 2016: 45-51

## Pemaparan ekstrak lamun terhadap diatom
Hasil pemaparan ekstrak lamun terhadap diatom selama 96 jam disajikan pada Gambar 1. Dari gambar tampak bahwa pertambahan jumlah sel diatom yang dipaparkan dengan ekstrak lamun S. isoetifolium lebih lambat dari pemaparan C. serrulata . Larutan  kontrol  pada  penelitian  ini  hanya  berisi media  pertumbuhan  fitoplankton  (media  Walne)  dan kultur C . gracilis tanpa penambahan ekstrak lamun sehingga perbedaan jumlah sel  yang terlihat pada Gambar 1 disebabkan oleh variasi individu dari jenis C. gracilis itu sendiri. Variasi antar individu dalam satu spesies/jenis yang sama akan berpengaruh pada sistem metabolisme sehingga rerata jumlah sel yang dihasilkan juga berbeda.
Jenis Konsentrasi DO pH Temp.   Salinitas Lamun (μg/L) (mg/L) ( o C) (ppt) Kontrol 5,88 7,94 25,7 34 1 5,77 8,01 25,6 34 S. 10 5,84 8,10 25,3 34 Isoetifilum 100 5,88 8,14 25,4 34 1000 5,95 8,14 25,5 34 Kontrol 5,88 7,94 25,7 34 C. 1 5,91 8,05 25,3 34 Serrulata 10 5,89 8,08 25,4 34 100 5,87 8,11 25,3 34 1000 5,76 8,16 25,2 34
Hasil pengukuran kualitas air laut selama uji ekstrak lamun S. isoetifolium dan C. serrulata terhadap diatom, C. gracilis
Tabel 3.
Rata-rata jumlah sel diatom setelah 96 jam pemaparan dengan ekstrak C. serrulata dan S. isoetifolium .
Gambar 1.
Pengaruh berbeda yang terjadi pada pertumbuhan diatom kemungkinan terjadi karena kandungan bahan aktif dari masing-masing ekstrak lamun yang terlarut dalam pelarut polar yaitu metanol. Zat-zat  polar  yang  terkandung  dalam  lamun  hanya larut pada pelarut polar, yaitu air, etanol, metanol dan butanol, sedangkan zat-zat yang nonpolar akan larut dalam pelarut nonpolar, antara lain kloroform, heksan, dan eter (Arlyza, 2008). Metanol merupakan salah satu pelarut yang paling luas digunakan dalam ekstraksi senyawa metabolit sekunder, meskipun metanol merupakan pelarut golongan polar, tetapi metanol dapat mengekstraksi/menarik senyawa-senyawa yang non polar seperti asam-asam lemak, klorofil dan lain.
Perbandingan pemberian ekstrak C. serrulata dan S. isoetifolium terhadap stimulasi ataupun penghambatan yang ditunjukkan oleh diatom disajikan berturut-turut pada Gambar 2.
Dari hasil pengujian ekstrak C. serrulata diperoleh bahwa kondisi optimum dimana pemberian ekstrak yang masih menstimulasi pertumbuhan diatom adalah pada 10 dan 100 ppb. Dapat pula dikatakan bahwa pemberian ekstrak C. serrulata konsentrasi 10 ppb sudah cukup untuk menstimulasi pertumbuhan diatom. Sedangkan pada pemberian ekstrak S. isoetifolium , penghambatan pertumbuhan optimum terjadi di 100 ppb. Penggunaan senyawa antifouling diharapkan tidak mengganggu  kesinambungan  populasi  fitoplankton, oleh karena itu informasi dasar mengenai konsentrasi optimum dari tiap ekstrak terhadap penghambatan pertumbuhan menjadi penting. Penghambatan pertumbuhan dari ekstrak S. isoetifolium menunjukkan
bahwa senyawa aktif yang terkandung dari lamun ini berpotensi mengganggu pertumbuhan diatom. Ekstrak S. isoetifolium dilaporkan mengandung senyawa kimia golongan fenol dan alkaloid (Mani et al ., 2012a), dan ekstrak Cymodocea rotundata mengandung senyawa kimia golongan alkaloid (Mani et al ., 2012b). Uji fitokimia secara kualitatif dari ekstrak methanol terhadap Syringodium isoetifolium menunjukkan aktivitas positif terhadap fitokonstituen seperti saponin, resin, protein, karbohidrat, glikosida, senyawa-senyawa asam, gula tereduksi, fenol dan alkaloid namun negatif terhadap tannin, sterol, dan flavanoid (Mani et al ., 2012a). Untuk analisis fitokimia terhadap C. serrulata belum ditemukan data penelitian ilmiahnya, namun bila mengacu pada kesamaan genus, maka (Mani et al ., 2012b) pernah menganalisis kandungan fitokimia C. rotundata dalam ekstrak methanol. C. rotundata positif mengandung fitokonstituen  seperti  tannin,  saponin,  resin,  protein, senyawa asam, gula tereduksi, terpenoid, dan alkaloid serta negatif terhadap keberadaan fenol, steroid, katakol dan flavanoid.
Robinson  (1995)  memaparkan  senyawa golongan alkaloid potensial dimanfaatkan sebagai antibakteri dan bahan obat obatan analgesik. Senyawa pada golongan alkaloid diduga mampu mengganggu komponen penyusun peptidoglikan, sehingga dinding sel bakteri tidak tersusun dengan utuh, kemudian menyebabkan kematian. Ekstrak yang mengandung senyawa golongan steroid diketahui memiliki potensi sebagai antibakteri dan antifungi, dengan mekanisme merusak membran sel bakteri, sehingga menghambat pertumbuhan bakteri (Dewi et al., 2012). Kemungkinan yang terjadi adalah kedua jenis ekstrak lamun tersebut
Stimulasi ekstrak lamun C. serrulata dan S. isoetifolium terhadap pertumbuhan diatom, C. gracilis . Grafik ke bawah menunjukkan penghambatan pertumbuhan dan grafik ke atas menunjukkan stimulasi pertumbuhan.
Gambar 2.

## J. Segara Vol. 12 No. 1 April 2016: 45-51
mengandung alkaloid yang berbahaya bagi sel organisme dengan kadar yang berbeda. Kandungan bahan aktif alkaloid dalam ekstrak metanol S. isoetifolium lebih tinggi daripada C. serrulata sehingga ekstrak S. isoetifolium cenderung menghambat pembelahan sel diatom dan menurunkan jumlah selnya. Dengan demikian dapat dikatakan bahwa ekstrak C. serrulata lebih aman bagi populasi diatom. Selain itu, hasil penelitian aktivitas uji antibakteri yang dilakukan oleh Arlyza (2008), menunjukkan bahwa C. serrulata mampu menghambat bakteri B. subtilis dan V. harveyii sedangkan S. isoetifolium hanya menghambat terhadap B. subtilis saja, sehingga C. serrulata lebih potensial dikembangkan lebih lanjut sebagai bahan antifouling.

## KESIMPULAN
Hasil bioassay menunjukkan bahwa ekstrak C. serrulata lebih aman bagi populasi diatom, C. gracilis dilihat dari adanya aktivitas stimulasi pada konsentrasi optimum ekstrak yaitu 10 dan 100 ppb dalam kondisi laboratorium. Selain itu, informasi sekunder mengenai kemampuan penghambatan terhadap B. subtilis dan V. harveyii dapat menguatkan potensi C. serrulata sebagai alternatif bahan antifouling yang lebih potensial dibanding S. isoetifolium .

## PERSANTUNAN
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Sdr. Arifin  dan  Sdr. Triyoni  Purbonegoro  atas  bantuannya selama penelitian di laboratorium dan di lapangan.

## DAFTAR PUSTAKA
Arlyza, I. S. (2008). Ekstrak Lamun Sebagai Sumber Alternatif  Antibakteri  Penghambat  Bakteri Pembentuk Biofilm. Oseanologi dan Limnologi di Indonesia. Vol. 34 (2). Hal. 207-225
ASTM. (2006). Standard Guide for Conducting Static 96-h Toxicity Testing  with  Marine Algae  method E  12  18-19  in  : Annual  Book  of  Standards.  Vol.
11.06 Biological Effects and Environmental Fate; Biotechnology; Water and Environmental Technology. ASTM International, West Conshohocken, PA. pp. 58-78 Bellas, J. (2006). Comparative toxicity of alternative antifouling biocides on embryosan d larvae of marine invertebrates. Science of the Total Environment, 367: pp. 573-585.
Berard,  A.  (1996).  Effect  of  Organic  Four  Solvents on  Natural  Phytoplankton  Assemblages: Consequences for Ecotoxicological Experiments on Herbicides”. Bull. Environ. Contam. Toxicol.
57: 183–190.
Campanella,  L.,  F.  Cubadda,  M.  P.  Sammartino  & A.    Saoncella.  (2000).  An  Algal  Biosensor  for the Monitoring of Water Toxicity in Estuarine Environments. Water Res. 25: 69–76.
CPMS-II. (1995). Draft Protocol for Sub lethal Toxicity Tests Using Tropical Marine Organisms. ASEAN- Canada Cooperative Programme on Marine Science  –  Phase  II.  Regional  Workshop  on Chronic  Toxicity  Testing,  Burapha  University, Institute of Marine Science, Thailand.pp.14-19
Dewi, C. S. U.,  D, Soedharma. & M. Kawaroe. (2012). Komponen Fitokimia dan Toksisitas Senyawa Bioaktif  dari  Lamun  Enhalus  acoroides  dan Thalassia  hemprichii  dari  Pulau  Pramuka,  DKI Jakarta. Jurnal Teknologi Perikanan dan Kelautan. Vol. 3(1) : 23-28
Hindarti,  D.  (2008).  Uji  Toksisitas  Sedimen  Dengan Diatom Planktonik, Chaetoceros gracilis. Oseanologi dan Limnologi di Indonesia Vol.34 (3) : 461-478.
Panggabean,  L.  M.  G.  (1997). Toxicity  of  Hexavalent Chromium and Cadmium to Green Mussels (Perna viridis) Embryo. Pp X-38-43. In : Vigers, G. A,K.S.Ong,  C.  McPherson,  N.  Millson,I.  Watson and A. Tang (eds.).ASEAN Marine Environmental Management : Quality Criteria and Monitoring for  Aquatic  Life  and  Human  Health  Protection. Proceedings of the ASEAN – Canada Technical Conference  on  Marine  Science  (24-28  June 1996), Penang, Malaysia. EVS Environment Consultants, North Vancouver and Departement of Fisheries Malaysia. p. 817.
Mani  A.E,  V.  Aiyamperumal  &  J.  Petterson.  (2012a). Phytochemical of the seagrass Syringodium isoetifolium and its antibacterial and insecticidal activities. European Journal of Biological Science, Vol. 4(3): 63 – 67.
Mani  A.E,  V.  Bharathi  &  J.  Patterson.  (2012b). Antibacterial activity and preliminary phytochemical analysis of seagrass Cymodocea rotundata. International Journal of Microbiological research. Vol. 2(2): 99 – 103.
Robinson  T.  (1995).  Kandungan  Organik  Tumbuhan Tinggi. Bandung: ITB Press. hal. 191
Sudaryanto, A. 2001. Pencemaran Laut oleh Senyawa
Organotin.  Jurnal  Teknologi  Lingkungan,  Vol.  2 (3) : 241-246
Sidharta,  B.  R.  (2000).  Sifat-sifat  Bakteri  Laut; Pengantar Mikrobiologi Kelautan. Yogyakarta. Universitas Atmajaya : hal.1-13
Wang,  X.,  H.  Hong,  D.  Zhao  &  L.  Hong.  (2008). Environmental Behavior of Organotin Compounds in the Coastal Environment of Xiamen, China. Marine Pollution Bulletin 57 : 419–424