Kandungan Pigmen, Total Fenolik Dan Aktivitas Antioksidan

## Sargassum sp.

## Sri Sedjati*, Endang Supriyantini, Ali Ridlo, Nirwani Soenardjo dan Victorina Yulina Santi
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH. Kampus UNDIP Tembalang, Semarang 50275 E-mail : sedjati69@gmail.com

## Abstract
Pigmen content, total phenolic compound and antioxidant activity of the Seaweed Sargassum sp.
Sargassum  sp.  contains  secondary  metabolites  which  potentially  act  as  natural  source  of antioxidant.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  bioactive  contents  (pigments,  total phenolic  compounds),  and  antioxidant  activities  of  Sargassum  sp.  The  method  of  this  research  is descriptive-explorative.    Sample  was  extracted  with  methanol,  while  pigments  extraction  with aseton 80%.  Chlorophyll a and carotenoids were carried out with spectrophotometer method. The total  phenolic  compounds  were  analyzed  by  spectrophotometer  method  using  Follin-Ciocalteu reagent,  and  antioxidant  activities  were  measured  using  DPPH  (1,1-diphenyl-2-  picrylhidrazyl) method.  The  result  of  this  research  showed  that  methanol  extract  of  Sargassum  sp.  had  the presence  of  chlorophyll  a  2.84  mg/g  and  carotenoids  2.63  μmol/g  sample.  The  total  phenolic compounds of methanol extract were 57.97 mg GAE/g sample. Methanol extract of Sargassum sp. was showing a strong antioxidant activity that could be seen in IC 50 value (69,27 ppm) in less than 100 ppm concentration.
Keywords: Sargassum sp.; methanol extract; total phenolic; antioxidant; IC 50

## Abstrak
Sargassum sp. mengandung beberapa metabolit sekunder yang berpotensi sebagai sumber antioksidan  alami.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  mengkaji  komponen  bioaktif  (pigmen,  total fenolik)  dan  aktivitas  antioksidan  dari  rumput  laut Sargassum sp.  Metoda  penelitian  ini  adalah diskriptif  eksploratif.    Sampel Sargassum sp.  basah  diekstraksi  dengan  cara  maserasi  dengan pelarut    metanol,  sedangkan  ekstraksi  pigmen  menggunakan  aseton  80%.  Penentuan  kadar pigmen  (klorofil  a  dan  karotenoid  ),  total  fenolik  dan  aktivitas  antioksidan  berdasarkan  metode spektrofotometri.  Total  fenolik  diukur  berdasarkan  uji Follin-Ciocalteu,  dan aktivitas  antioksidan berdasarkan  uji  DPPH  (1,1-diphenyl-2-  picrylhidrazyl).  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  ekstrak metanol Sargassum sp.  mengandung pigmen klorofil a sebesar 2,84 mg/g dan karotenoid sebesar 2,63  μmol/g.  Kadar  total  fenolik  ekstrak  metanol  adalah  57,97  mgGAE/g,  sementara  aktivitas antioksidannya  (IC 50 ) sebesar 69,27 ppm.  Berdasarkan nilai IC 50 nya, ekstrak metanol Sargassum sp berpotensi sebagai antioksidan kuat (kurang dari 100 ppm).
Kata kunci : Sargassum sp.; ekstrak methanol; total fenolik; antioksidan; IC 50

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  dan  oksidan  lainnya semakin  meningkat  jumlahnya  di  alam kehidupan.    Radikal  bebas, reactive  oxygen species (ROS)  dan reactive  nitrogen  species
(RNS),  dihasilkan  baik  dari  sumber  endogen (mitokondria, peroxisom,
retikulum endoplasma,  sel  pagositosit,  dll.)  maupun eksogen  (polusi,  alkohol,  rokok,  logam  berat, radiasi,  dll.).    Radikal  bebas  dapat  merusak fungsi  biologis  molekul  sel  hidup,  seperti:
asam  nukleat,  lipid,  dan  protein,  demikian pula  dapat  mengacaukan  reaksi  redoks dalam  sel  yang  bisa  memicu  terjadinya oxidative stress (Lü et al ., 2010; Mohammed et al .,  2015  ;  Phaniendra et  al .,  2015). Oxidative stress adalah  suatu  kondisi  di  mana  jumlah radikal  bebas  terlalu  besar  melampaui kemampuan/kapasitas tubuh untuk meregulasi  dan  mengendalikannya.  Kondisi tersebut  menjadi  penyebab  timbulnya beberapa  penyakit  degenarif  (Mohammed et al ., 2015 ; Pizzino et al ., 2017).
Oxidative stress terjadi ketika antioksidan  internal  dari  dalam  tubuh  tidak mencukupi,  solusinya  adalah  peningkatan input antioksidan eksternal. Sumber antioksidan  bisa  berasal  dari  bahan  pangan fungsional yang mengandung di antaranya : vitamin  (A,  C  dan  E,  pigmen  karotenoid (karoten,  likopen,  lutein),  dan  senyawa golongan  fenolik  (flavonoid,  flavon,  flavonol) (Mohammed et al ., 2015 ; Pizzino et al ., 2017; Young and Lowe, 2018). Pigmen  klorofil juga bermanfaat  sebagai  antioksidan  (Hsu et  al ., 2013;  Sudhakar et  al .,  2013  ;  Rattaya et  al ., 2014).
Komponen  aktif  dari  alga  coklat  sudah banyak  diteliti.  Berkaitan  dengan  sumber antioksidan alami, alga coklat termasuk tinggi kadar  senyawa  fenolik.  Plorotanin  adalah anggota  keluarga  senyawa  fenolik  yang spesifik  ditemukan  pada  alga  coklat,  dan diketahui sangat kuat bioaktivitas antioksidannya  (Le  Lann et  al .,  2016  ; Sanjeewa et  al .,  2016).  Alga  coklat menghasilkan  senyawa  dengan  bioaktivitas antioksidan  lebih  tinggi  jika  dibandingkan dengan  alga  merah  dan  hijau  (Sudhakar et al ., 2013). Ekstrak alkoholnya lebih berpotensi daripada ekstrak asetonnya (Seenivasan and Indu  2013).  Namun,  beberapa  peneliti  lain mengungkapkan  hal  berbeda.  Ekstrak  air panas  dan  kombinasi  air  dengan  pelarut organik  menghasilkan  senyawa  yang  lebih berpotensi  sebagai  antioksidan,  disebabkan kandungan senyawa fenolik dan polisakaridanya ( Giang et al ., 2016; Sedjati et al ., 2017)
Beberapa peneliti
telah mengungkapkan  potensi Sargassum sp.  dari berbagai wilayah perairan Indonesia sebagai
sumber  antioksidan  alami.  Nurilmala et  al . (2018) meneliti Sargassum sp. dari Kepulauan Seribu,  Jakarta.  Potensi  antioksidan  esktrak metanolnya  termasuk  kuat  dengan  IC 50 sebesar 57,05 μg mL –1 , kandungan Vitamin E nya  sebesar  165.19  μg  mL –1 ,  serta mengandung  beberapa  senyawa  aktiv fenolik, flavonoid, dan triterpenoid. Bambang et al . (2013) meneliti Sargassum sp. dari  perairan  Sumenep,  dan  mengeksplorasi ekstrak  etanol S.  filipendula .    Potensi antioksidannya  juga  tergolong  kuat  dengan IC 50 sebesar  39,11    μg  mL –1 ,  serta mengandung  total  fenolik  sebesar  12,87  mg GAE/g.  Eksplorasi Sargassum sp.  dari  Pesisir Barat  Aceh  oleh  Gazali et  al .  (2018) mendeteksi  adanya  senyawa  fenol,  alkaloid dan  triterpenoid  dalam  rumput  laut  coklat tersebut.    Kadar  total  fenol  etanol  ektrak 563,22 mg GAE/g dengan IC 50 = 239,51mgL -1 . Penelitian  serupa  oleh  Septiana  and  Asnani (2013),  menyebutkan  bahwa  kadar  total fenolik  ekstrak  metanol  S. duplicatum dari Pantai Nusa Kambangan  sebesar 270,25 mg GAE/g.
Sargassum sp.  kaya  senyawa  metabolit sekunder,  seperti  fenolik,  flavonoid,tannin, sterol,  terpenoid, saponin, alkaloid (Balanquit dan  Fuentes,  2015  ;  Baleta et  al .,  2017)  dan terdapat  juga  glikosida  (Waghmode  dan Kumbar,  2015).  Senyawa  fenolik  lebih  aktiv sebagai  antioksidan  dibanding  senyawa golongan lainnya. Gugus fungsional senyawa fenolik,  O-H  memiliki  energi  dissosiasi  ikatan lebih  rendah  dibanding  ikatan  lainnya, seperti  N-H,  sehingga  fenolik  mudah melepaskan  dan  mendonorkan  hidrogennya (Bendary et al. 2013).
Senyawa golongan terpenoid juga bisa berperan sebagai antioksidan, salah satunya adalah    karotenoid.  Karotenoid  merupakan pigmen dominan di alga coklat, selain klorofil. Karotenoid  yang  banyak  ditemukan  pada alga  coklat  adalah  :  β-karoten,  dan  xantofil (fukoxantin,  zeaxantin  ,  lutein)  (Zailanie  dan Sukoso,  2014  ;  Paransa et  al .,  2014). Karotenoid  adalah  pigmen  yang  memiliki peran utama  proteksi sel tanaman terhadap proses  fotooksidatif.    Karotenoid  mampu menetralkan  molekul  oksigen  singlet  dan radikal  peroksil.    Molekul  karotenoid  juga berperan dalam sistem pertahanan
antioksidan  pada  manusia.    Karotenoid bersinergi  dengan  antioksidan  lain,  dan campuran  beragam  karotenoid  ternyata lebih  efektif  dibanding  karotenoid  tunggal (Stahl  and  Sies  2003).  Manusia  dan  hewan tidak  bisa  mensintesa  karotenoid,  tetapi keberadaannya  sangat  penting  dalam darah  dan  jaringan  sebagai  pertahanan terhadap  radikal  bebas  (Fiedor  dan  Burda 2014).
Tujuan  utama  penelitian  ini  adalah mengetahui  nilai  aktivitas  antioksidan  yang terdapat
pada ekstrak rumput laut Sargassum  sp. yang  diambil  dari  perairan Pantai  Indrayanti,  Gunung  Kidul  dengan menggunakan  metode  DPPH  (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil).    Selain  itu,  dianalisis  juga kandungan  senyawa-senyawa  pendukung bioaktivitas  antioksidan,  berupa  pigmen (klorofil a, b dan karotenoid), dan kandungan total  fenolik  yang  terdapat  pada  ekstrak rumput laut tersebut.

## MATERI DAN METODE
Materi yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  sampel  segar  rumput laut Sargassum sp. yang diperoleh dari Pantai Indrayanti, Gunung Kidul, Yogyakarta. Metode  penelitian  yang  digunakan  adalah diskriptif eksploratif.
Pengambilan  sampel Sargassum  sp. dilakukan  pada  waktu  musim  penghujan (Januari),    menggunakan  tangan  langsung pada  saat  perairan  surut.  Sampel  kemudian disimpan dalam plastik, selanjutnya dimasukan kedalam cool box yang telah diisi es.  Preparasi  sampel  dimulai  dengan pencucian dengan air tawar untuk menghilangkan kotoran, epifit dan pasir yang menempel.  Sebanyak  250  gram  sampel ditiriskan  menggunakan  kertas  saring  untuk mengurangi  kadar  air.  Sampel  dipotong- potong  kecil  berukuran  ±  1cm  dengan menggunakan  pisau,  kemudian  dihaluskan menggunakan blender .
Ekstraksi  senyawa  bioaktif  dilakukan menggunakan  metode  maserasi  (ekstraksi tunggal)  dengan  metanol  teknis  selama  24 jam  pada  suhu  ruang  (3  x  pengulangan maserasi).  Hasil  maserasi  disaring  dengan
kertas  saring  Wathman  nomor  42.  Filtrat dievaporasi  dengan rotary  evaporator pada suhu 40 o C dan tekanan rendah. Ekstrak yang diperoleh  disimpan  dalam  vial  pada  suhu rendah  (4 o C)  sebelum  digunakan  untuk analisis. Rendemen ekstrak dihitung menggunakan rumus:
( ) ( ) ( )

## Penghitungan % Inhibisi
Aktivitas
antioksidan diukur menggunakan  metode  DPPH  (Dhinakaran and  Geetha  2015)  dengan  sedikit  modifikasi. Larutan  DPPH  0,1  mM,  dibuat  dengan  cara melarutkan  4  mg  kristal  DPPH  dalam  100  ml pelarut  metanol  p.a.  96%.  Larutan  kontrol dibuat  dengan  mencampur  larutan  DPPH  1 ml  ditambah  metanol  3  ml.  Sampel  ekstrak dibuat menjadi 4 seri konsentrasi yaitu 15,625; 31,25;  62,5;  dan  125  ppm.  Sampel  ekstrak dengan konsentrasi tersebut dibuat sebanyak 3  ml,  kemudian  ditambahkan  dengan  1  ml DPPH.  Sampel  diinkubasi  selama  30  menit pada  suhu  37 o C  dan  dianalisis  serapannya terhadap DPPH menggunakan
spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang  517  nm.    Nilai  persentasi  inhibisi terhadap  radikal  bebas  DPPH  (aktivitas antioksidan) dihitung menggunakan  rumus :
Keterangan  :  Ac  =  Absorbansi  control;  As  = Absorbansi  sampel. Inhibition  Concentration (IC 50 ) ditentukan secara grafis menggunakan plot  nilai  hambatan  dan  konsentrasi  ekstrak. Bentuk  persamaan  regresi  linier  yang diperoleh  yaitu  y  =  bx  +  a  dan  persamaan garis  yang  diperoleh  digunakan  untuk menghitung Inhibitation  Concentration 50% (IC 50 ).

## Uji Total Fenol
Pengujian  kandungan  total  fenol mengacu pada metode yang dilakukan oleh Yangthong et  al .  (2009).  Ekstrak  padat Sargassum  sp. 5  mg  dilarutkan  kedalam 2  ml pelarut metanol.
Larutan kemudian
ditambahkan 5 ml akuades dan 0,5 ml Follin- Ciocalteu .  Selanjutnya  didiamkan  selama  5 menit dan ditambahkan 1 ml Na 2 CO 3 (sodium karbonat) 5%. Larutan dihomogenkan
kembali  dan  diinkubasi  selama  1  jam  di tempat  yang  terhindar  dari  sinar  matahari, kemudian  dilakukan  pengukuran  serapan kandungan total fenol menggunakan spektofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang 725 nm.
Kandungan  senyawa  fenolik  yang terdapat  dalam  sampel  ditentukan  berdasar kurva  standar  asam  galat  dan  diekspresikan dalam  satuan  mg  ekuivalen  asam  galat/g ekstrak  (mg  GAE/g  ekstrak)  dengan  rumus perhitungan :
Keterangan: C =  total  fenolik;  a  =  konsentrasi asam galat (mg/L); V  =  volume  larutan  uji (ml); G  =  massa  ekstrak  (g);  1000  =  faktor koreksi terhadap volume total larutan (ml)

## Uji Kadar Klorofil a, b dan Karotenoid
Uji  kadar  klorofil  a,  b  dan  karotenoid dilakukan menurut metode pengujian Lichtenthaler  (1987).  Prosedur  pengujiannya adalah  ekstrak  ditimbang  sebanyak  5  mg dan  dilarutkan  dalam  5  ml  aseton  p.a.  80%, sehingga  diperoleh  larutan  1000  ppm. Absorbansi  pigmen  dibaca  pada  panjang gelombang 470, 646, dan 663 dan dianalisis.
Klorofil a (mg/g) = (12,21 x A 663 ) – (2,81 x A 646 )
(      ) (             )   (          )   (        )

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  ekstraksi  250  gram  sampel  segar rumput  laut Sargassum  sp. dengan  pelarut metanol  diperoleh  ekstrak  sebanyak  6,72 gram  dengan  rendemen  sebesar  2,69  %. Ekstrak  ini  berbentuk  pasta  berwarna  coklat pekat.
Hasil  pengujian  pigmen  pada  ekstrak metanol rumput laut Sargassum
sp. menunjukan  bahwa  ekstrak  mengandung pigmen  klorofil  a  sebesar  2,84  mg/g  dan karotenoid  sebesar  2,63  μmol/g.  Kandungan pigmen pada ekstrak metanol Sargassum sp. yang  diduga  sebagai  sumber  antioksidan adalah  klorofil  dan  karotenoid.  Menurut Sudhakar et al . (2013);  Rattaya et al . (2014) , senyawa  karotenoid  dan  klorofil  termasuk golongan  senyawa  antioksidan  potensial. Penghilangan  klorofil  sebelum  pengambilan ekstrak  metanol  maupun  etanol  ternyata menurunkan  total  fenolik  dan  kemampuan antioksidannya.
Kehadiran karotenoid dan klorofi
Sargassum sp.  dapat  ditentukan  dengan menggunakan spektrofotometer UV-vis (masing-masing 420  nm  dan  672  nm)(Yip et al .,  2014).  Tampak  pada  Gambar  1,  bahwa ekstrak  pigmen Sargassum sp.  didominasi oleh karotenoid. Berdasar penelitian
Gambar 1 . Pola spektra ekstrak pigmen Sargassum sp.
terdahulu, Indrawati et al .(2015), menyatakan bahwa Sargassum sp. mengandung karotenoid  mayor, fukosantin, dan zeasantin, serta karotenoid minor β-karoten.
Senyawa    karotenoid  diduga  mampu meredam  oksigen  singlet  ( singlet  oxygen quenching )    melalui  ikatan  konjugasi  C=C pada rantai karbon kerangka dasar polyene . Pigmen  karotenoid  juga  dapat  bereaksi dengan  radikal  peroksil  ( peroxyl  radical scavenging )  membentuk  radikal  karotenoid peroksil, kemudian berubah menjadi karotenoid  peroksida  yang  bersifat  kurang radikal  dan  mudah  terurai,  sehingga  tidak berbahaya  bagi  sel  hidup  Beberapa pendapat  menyatakan  hal  yang  sama,
sepanjang rantai polyene , sehingga karotenoid  itu  sendiri  tidak  terdegradasai akibat  oksigen  singlet.      (Dutta et  al .,  2011; Young and Lowe, 2018).
Berkaitan  dengan  fungsi  karotenoid sebagai radical scavenger , menurut Martínez et  al .  (2010),  terdapat  3  kemungkinan  reaksi antara  senyawa  karotenoid  dan  radikal bebas, yaitu :
Sebuah molekul karotenoid mampu meredam  paling  sedikit  dua  radikal  bebas dan  menterminasi  reaksi  propagasinya. Molekul  karotenoid  yang  berubah  menjadi radikal  tidak  terlalu  bahaya,  karena  waktu paruhnya singkat (mudah terdegradasi).
Karotenoid  dominan  pada Sargassum s p. adalah fukosantin. Gugus fungsi fukosantin terdiri dari alkohol, alkana, alkena, metil,  ester  dan  alkena  aromatic.  Gugus alkohol  dan  aromatik  berperan  dalam mekanisme bioaktivitas antioksidannya (Renhoran et al. 2017).
Sargassum sp.  mengandung  beberapa gugus  fungsional  :  (C-halida),  (N-O),  (C=O), (N-H),  (C-H)  dan  (O-H)  (Sinjal  et  al.  2018). Senyawa  fenolik  diketahui  terdapat  di
Sargassum sp.,    minimal    mengandung  1 gugus  O-H,  dan  sebagian  besar  lebih  dari satu  (polifenol).  Peranan  senyawa  fenolik sebagai antioksidan berkaitan dengan ikatan konjugasi di cincin aromatik benzenanya dan banyaknya gugus fungsional OH.
Terdapat 2 mekanisme radical scavenging dari senyawa fenolik, yaitu donor atom  H  dan  transfer  elektron.  Golongan senyawa fenolik seperti α- tokoferol , hydroxytyrosol,  caffeic acid, dan asam galat berperan  sebagai  pendonor  H  ,  sementara kaempferol  dan  resveratrol  merupakan contoh dari pendonor elektron (Leopoldini et al . , 2004).
R• + ArOH → RH + ArO•     (donoh H + ) R• + ArOH w R- + ArOH•+  (donor e - ) Kemampuan antioksidan sebagai penangkap radikal bebas dikaitkan dengan  kemampuan  antioksidan  tersebut sebagai pendonor proton maupun  elektron. Berbagai  senyawa  fenolik  dapat  berperan terhadap  penangkapan  radikal  bebas dengan kapasitas yang berbeda-beda.
Pengukuran total fenol ekstrak metanol didasarkan pada kurva standar
menggunakan  asam  galat.    Kadar  total fenolik  ekstrak  metanol Sargassum sp.  hasil penelitian  adalah          57,97  mgGAE/g, sementara  aktivitas  antioksidannya    (IC 50 ) sebesar  69,27  ppm.    Berdasarkan  nilai IC 50 nya,  ekstrak  metanol Sargassum sp berpotensi  sebagai  antioksidan  kuat  (kurang dari  100  ppm).  Aktivitas  antioksidan  ekstrak Sargassum sp. ditentukan sesuai nilai IC 50 yang diperoleh  berdasarkan  %  inhibisi  DPPH  (1,1- diphenil-2-pikrilhidrazil). Berdasarkan penelitian  Sedjati et  al. (2017),  aktivitas antioksidan  berkorelasi  positif  dengan  total fenolik yang terkandung dalam suatu bahan.
Penentuan  potensi  antioksidan  pada penelitian  ini  berdasar  pada  uji  DPPH, sehingga  mekanisme  kerja  antioksidan  yang terukur  hanya  terbatas  sebagai radical scavenger .  Ekstrak  metanol Sargassum sp. terbukti  mampu  meredam  radikal  bebas dengan  cara  mendonorkan  elektron  untuk radikal  DPPH.  Pigmen  karotenoid  terlihat mendominasi (Gambar 1), diduga karotenoid lebih berperan sebagai antioksidan
Tabel 1. Nilai % inhibisi dan IC 50 ekstrak metanol Sargassum sp.
No. Konsentrasi ( ) % inhibisi IC50 (     ) 1. 15,625 0,19 69,274 2. 31,25 0,41 3. 4. 62,50
125 0,72
0,85
Gambar 2. Grafik hubungan konsentrasi ekstrak metanol Sargassum sp. dengan % inhibisi DPPH
dibanding  klorofilnya.    Berdasar  kepolaran aseton  yang  digunakan  sebagai  pelarut pigmen,  dapat  diprediksi  bahwa  karotenoid yang  terekstrak  adalah  golongan  xantofil. Xantofil    adalah  karotenoid  yang  gugusnya teroksigenasi dan bersifat relatif polar.
Fukoxantin merupakan karotenoid golongan xantofil yang banyak ditemukan di alga coklat, termasuk Sargassum sp.. Aktivitas antioksidan ekstrak metanolnya tidak terlepas dari  kandungan  fukoxantinnya  yang  relatif tinggi.  Berdasar hasil penelitian Merdekawati dan  Susanto  (2009), Sargassum sp. mengandung  -karoten (1,49%), dan fukoxantin(20,95 %) dari total pigmennya.
Kadar  pigmen,  total  fenolik,  maupun aktivitas  antioksidan  hasil  penelitian  ini  tidak sama dengan penelitian-penelitian lain yang sejenis.  Variasi    ini    diduga  karena  beberapa faktor : perbedaan spesies, perbedaan waktu panen,  ataupun  perbedaan  lokasi.      Faktor lain  yang  juga  mempengaruhi  adalah penentuan  metode  ekstraksi  dan  pemilihan jenis pelarut.

## KESIMPULAN
Ekstrak metanol
Sargassum sp. berpotensi  sebagai  sumber  antioksidan
alamiah. Aktivitas antioksidannya (IC 50 )  yaitu sebesar  69,27  ppm,  nilai  ini  tergolong  dalam kategori  kuat  karena  kurang  dari  100  ppm. Aktivitas antioksidan ekstrak metanol Sargassum  sp. didukung  oleh  kandungan pigmen  klorofil  a  sebesar  2,84  mg/g  dan karotenoid  sebesar  2,63  μmol/g,  serta kandungan  total  senyawa  fenolik  sebesar 57,97 mgGAE/g.

## DAFTAR PUSTAKA
Balanquit,  Brian  Jann  R.,  &  Rolly  Fuentes,  G.
2015. Preliminary Phycochemical Screening  and  Antioxidant  Activity  of Some  Brown  Algae  Sargassum  Species for  Lawaan,  Eastern  Samar. J.  Nature Stud. 14  (1):  12–21.  DOI  :  10.1017/CBO9 781107415324.004.
Baleta, Francis, N., Bolaños,J.M.,  Ruma, O.C.,
Baleta,  A.N.,  &  Cairel,  J.D.  2017. Phytochemicals Screening and Antimicrobial  Properties  of  Sargassum Oligocystum and Sargassum Crassifolium
Extracts. J. Med. Plants Stud. 5(1):382–87. Bambang,  B.S.,  Kumalaningsih,  S.,  Susinggih, W.,  &  Hardoko.  2013.  Polyphenol Content  and  Antioxidant  Activities  of Crude  Extract  from  Brown  Algae  by Various Solvents. J. Life Sci. Biomed. 3(6):
439–43.
Bendary,  E.,  Francis,  R.R.,  Ali,  H.M.G.,  Sarwat,
M.I.  &  El  Hady,  S.  2013.  Antioxidant  and Structure–activity  Relationships  (SARs)  of Some Phenolic and Anilines Compounds. Annals    Agricul.  Sci. 58  (2):
173–81. DOI : 10.1016/j.aoas.2013.07.002.
Dhinakaran,  Isaac,  D.,  &  Geetha,  P.  2015.
Antioxidant  Activities  of  Marine  Algae Valoniopsis  Pachynema  and  Sargassum Swartzii  from  the  South  East  Coast  of India. Int. J.  Fish. Aqua. Stud. 3(2):426–30. Dutta,  D.,  Chaudhuri,  U.R.  &  Chakraborty,  R.
2011. Structure, Health Benefits, Antioxidant Property and Processing and Storage  of  Carotenoids. African  J.  Food Agricul.  Nut.    Dev. 4(13):1510–20.  DOI  : 10.4314/ajfand.v4i13.71773.
Fiedor,  Joanna,  &  Burda,  K.  2014.  Potential Role  of  Carotenoids  as  Antioxidants  in Human  Health  and  Disease. Nutrients 6 (2): 466–88. DOI : 10.3390/nu6020466. Gazali,  Mohamad,  Nurjanah,  &  Zamani,  N.P. 2018.  Eksplorasi  Senyawa  Bioaktif  Alga Cokelat  Sargassum  Sp.  Agardh  Sebagai Antioksidan  Dari  Pesisir  Barat  Aceh. J. Pengolahan Hasil Perikan. Ind. 21(1):167. DOI : 10.17844/jphpi.v21i1.21543.
Hsu, C., Chao, P.Y., Hu,  S.P & Yang, C.M 2013.
The  Antioxidant  and  Free  Radical Scavenging  Activities  of  Chlorophylls and  Pheophytins. Food  Nut.  Sci. 4:1–8. DOI : 10.4236/fns.2013.48A001.
Indrawati, Renny, Sukowijoyo, H., Indriatmoko,
Wijayanti,  R.D.E  &  Limantara,  L.  2015. Encapsulation  of  Brown  Seaweed Pigment by Freeze Drying: Characterization  and  Its  Stability  during Storage. Proc.  Chem. 14:353–60.  DOI  : 10.1016/j.proche.2015.03.048.
Le Lann, K., Surget, G., Couteau, C.,  Coiffard, L.,  Cérantola,  S.,  Gaillard,  F.  &  Larnicol, M.  2016.  Sunscreen,  Antioxidant,  and Bactericide  Capacities  of  Phlorotannins from  the  Brown  Macroalga  Halidrys Siliquosa. J.  App.  Phycol. 28(6):3547–59.
DOI : 10.1007/s10811-016-0853-0.
Leopoldini,  Monica,  Marino,  T.,  Russo,  N.,  & Toscano,  M.  2004.  Antioxidant  Properties of  Phenolic  Compounds:  H-Atom  versus Electron  Transfer  Mechanism. J.  Physic. Chem. A 108 (22):4916–22. DOI : 10.1021 /jp037247d.
Lü,  J.M.,Lin,  P.H.,  Yao,  Q.,  &  Chen,  C.  2010.
Chemical and Molecular Mechanisms of
Antioxidants:  Experimental  Approaches and  Model  Systems. J.  Cell.    Mol.  Med.
14(4):840–60.    DOI  :  10.1111/j.1582-4934. 2009.00897.x.
Martínez,  A.,  Vargas,  R.,  &  Galano,  A.,  2010.
Theoretical  Study  on  the  Chemical  Fate of Adducts Formed through Free Radical Addition  Reactions  to  Carotenoids. Theoretical  Chemistry  Accounts 127  (5):
595–603. DOI: 10.1007/s00214-010-0753-3. Merdekawati,  Windu,  &  Susanto,  A.B.  2009.
Kandungan  Dan  Komposisi  Pigmen Rumput  Laut  Serta  Potensinya  Untuk Kesehatan. Squalen. 4(2):41–47. Mohammed,  T.,,  Kadhim,  S.M.,  Noori,  A.M.  &
Abbas,  S.I.,    2015.  Free  Radicals  and Human  Health. Int.  J.  Innov.  Sci.    Res. 4(6):218–23.
Nair, Beena, B., Beena, B. M. P., Sudhakar, J. S. &  Ananthalakshmi,  N.  2013.  Research Article Extraction , Purification and Study on Antioxidant Properties of Fucoxanthin from  Brown  Seaweeds. J.  Chem. Pharmaceut. Res. 5(7):169–75.
Nurjanah, Nurilmala, M., Anwar, E., Luthfiyana, N.,  &    Hidayat,  T.,  2017.  Identification  of Bioactive  Compounds  of  Seaweed Sargassum  sp.  and  Eucheuma  cottonii Doty  as  a  Raw  Sunscreen  Cream. Proc. Pakistan Academy Sci. 54:311–18.
Paransa,  Darus,  S.J.,  Kemer,  K.,  Rumengan,
A.P., & Mantiri, D.M.H. 2014. Analisis Jenis Pigmen  Dan  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Pigmen  Xantofil  Pada  Alga Coklat Sargassum Polycystum (C.Agardh). J.  LPPM  Bidang  Sains  Dan Teknol. 1(1):90–96.
Phaniendra, Alugoju, Jestadi, D.B. & Periyasamy,  L.  2015.  Free  Radicals: Properties,  Sources,  Targets,  and  Their Implication in Various Diseases. Indian J.f Clinical Biochem. 30(1):11–26. DOI : 10.10 07/s12291-014-0446-0.
Pizzino, G., Irrera, N., Cucinotta, M., Pallio, G., Mannino,  F.,  Arcoraci,  F.,  Squadrito,  F., Altavilla,  D.,  &  Bitto,  A.  2017.  Oxidative Stress:  Harms  and  Benefits  for  Human Health. Oxidative  Med.  Cell.  Longevity DOI : 10.1155/2017/8416763. pp 1-13
Kumbar,  R.  2015.  Phytochemical  Screening and  Isolation  of  Fucoxanthin  Content  of Sargassum  Ilicifolium. J.  Pure  App.  Biosci 3(6):218–22.    DOI  :  10.18782/2320-7051. 2180.
Rattaya,  S.,  Benjakul,    S.  &  Prodpran,  T.  2014. Extraction, Antioxidative, and Antimicrobial Activities of Brown
Seaweed  Extracts,  Turbinaria  Ornata and  Sargassum  Polycystum,  Grown  in Thailand. Int.  Aqua.  Res. 7(1):1–16.  DOI  :
10.1007/s40071-014-0085-3.
Renhoran, M., Noviendri, D., Setyaningsih,  I. &
Uju.  2017.  Extraction  and  Purification  of Fucoxanthin from Sargassum Sp. as  Anti- Acne. J. Pengolahan Hasil Perikanan Ind.
20(2):370–79.
Sanjeewa, K.K.A.,  Kim, E.A.,  Son, K.T., & Jeon,
Y.J.  2016.  Bioactive  Properties  and Potentials  Cosmeceutical  Applications of  Phlorotannins  Isolated  from  Brown Seaweeds:  A  Review. J.  Photochem. Photobiol.  B:  Biology .  162:100-105.  DOI  :
10.1016/j.jphotobiol.2016.06.027. Seenivasan,  R.,  &  Indu,  H.  2013.  In  Vitro Antioxidant Activity of Selected Seaweeds  From  Southeast  Coast  of India. Int.  J. Pharm. Pharm. Sci. 5(2):474– 84.
Septiana,  Aisyah  Tri,  and  Ari  Asnani.  2013.
Antioxidan Activity of Sargassum Duplicatum  Seaweed  Extract. J.  Teknol. Pertanian 14(2):79–86. Sinjal,  C.A.,  Rompas,  R.M.,  Sumilat,  D.A.  & Suryanto,  E.  2018.  Antioxidant  and Photoprotective Activity of Brown Seaweed  from  North  Sulawesi  Coast.  11
(6): 121–33.
Stahl,  W.  &  Sies,  H.  2003.  Antioxidant  Activity of  Carotenoids. Mol.  Aspects  Med. 24 (6):345–51.  DOI:  10.1016/S0098-2997(03) 00030-X.
Sudhakar,  M.P.,  Ananthalakshmi,  J.S.  &  Nair, B.B.  2013.  Extraction,  Purification  and Study  on  Antioxidant  Properties  of Fucoxanthin  from  Brown  Seaweeds. J.
Chem. Pharm. Res. 5(7):169–75. Yangthong,  Monsuang,  Nongporn  Hutadilok- Towatana, and Wutiporn Phromkunthong. 2009. Antioxidant Activities  of  Four  Edible  Seaweeds  from the  Southern  Coast  of  Thailand. Plant Foods  for  Human  Nutrition 64(3):218–23. DOI : 10.1007/s11130-009-0127-y.
Yip,  W.H.,  Lim,  S.J.,  Mustapha,  W.A.W.,
Maskat,  M.Y.  &  Said,  M.  2014. Characterisation and Stability of
Pigments  Extracted  from  Sargassum Binderi Obtained  from  Semporna, Sabah. Sains Malay. 43(9):1345–54.
Young,  A.  &  Lowe,  G.  2018.  Carotenoids— Antioxidant Properties. Antioxidants 7 (2):
28. DOI : 10.3390/antiox7020028.
Zailanie,  Kartini &  Sukoso.  2014.  Study  on  of Fucoxanthin Content and Its Identification  in  Brown  Algae  from
Padike  Vilage  Talango  District,  Madura Islands. J. Life Sci. Biomed. 4(1):1–3.