PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## ANTI-INFLAMMATORY ACTIVITY TEST OF ETHANOL EXTRACT OF SESEWANUA
LEAVES (Clerodendrum squamatum Vahl. ) TOWARDS WHITE RATS (Rattus norvegicus L .)

## INDUCED BY CARRAGEENAN

## UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI EKSTRAK ETANOL DAUN SESEWANUA
( Clerodendrum squamatum Vahl.) TERHADAP TIKUS PUTIH ( Rattus norvegicus L.)

## YANG DIINDUKSI KARAGENAN
Syari Sekar Suryandari 1)* , Edwin de Queljoe 1) ,  Olvie S. Datu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT MANADO, 95115 *ssekars147@gmail.com

## ABSTRACT
Sesewanua (Clerodendrum squamatum Vahl. ) has been used empirically as a medicine for fever, to reduce swelling and fractures by the people in North Sulawesi. The content of flavonoids in sesewanua leaves can be potential as an anti-inflammatory. Inflammation is the body's response to tissue damage caused by foreign agents. This study aims to prove the anti-inflammatory activity of 96% ethanol extract of sesewanua leaves with various dose of 18 mg/kg, 36 mg/kg, and 72 mg/kg BW in term of the diameter of oedem’s decrease on the soles of rats' feet induced by 1% carrageenan. The diameter of the oedem thickness is measured by using digital calipers. The results showed that the extract of sesewanua leaves was able to reduce the diameter of oedem. The 18 mg/kg BW dose extract had the largest percentage of oedem inhibition, that is 95.04%. The extracts of various doses of 18 mg/kg, 36 mg/kg, and 72 mg/kg BW had no significant differences with positive controls, diclofenac sodium (ρ ≥ 0,05). The conclusion of this study, the ethanol extract of sesewanua leaves has been shown to have anti-inflammatory activity similar to diclofenac sodium. The extract dose of 18 mg/kg BW has the most optimal anti-inflammatory effect.
Keywords : Sesewanua (Clerodendrum squamatum Vahl. ), Anti-inflammatory, Oedem, Carrageenan

## ABSTRAK
Sesewanua ( Clerodendrum squamatum Vahl.) telah digunakan secara empiris sebagai obat demam, penurun bengkak, dan patah tulang oleh masyarakat di Sulawesi Utara. Kandungan flavonoid dalam daun sesewanua dapat berpotensi sebagai antiinflamasi. Inflamasi merupakan respon tubuh terhadap kerusakan jaringan yang disebabkan oleh agen asing. Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan aktivitas antiinflamasi ekstrak etanol 96% daun sesewanua dengan variasi dosis 18 mg/kgBB, 36 mg/kgBB, dan 72 mg/kgBB dilihat dari penurunan diameter udem pada telapak kaki tikus yang diinduksi karagenan 1%. Diameter ketebalan udem diukur dengan jangka  sorong  digital.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak  daun  sesewanua  dapat  menurunkan  diameter udem. Ekstrak dosis 18 mg/kgBB memiliki persentase penghambatan udem terbesar yaitu 95,04%. Ekstrak variasi dosis 18 mg/kgBB, 36 mg/kgBB, dan 72 mg/kgBB memiliki perbedaan tidak bermakna dengan kontrol positif (ρ ≥ 0,05) . Kesimpulan dari penelitian ini, ekstrak etanol daun sesewanua terbukti memiliki aktivitas antiinflamasi  yang  hampir  sama  dengan  natrium  diklofenak.  Ekstrak  dosis  18  mg/kgBB  memiliki  efek antiinflamasi yang paling optimal.
Kata kunci : Sesewanua ( Clerodendrum squamatum Vahl.), Antiinflamasi, Udem, Karagenan
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Inflamasi  adalah  respon  pertahanan  tubuh akibat adanya cedera atau kerusakan jaringan yang disebabkan  oleh  trauma  fisik,  zat  kimia  yang merusak  maupun  zat  mikrobiologi.  Inflamasi ditandai dengan kemerahan, panas, pembengkakan atau  udem,  nyeri,  dan  perubahan  fungsi  jaringan (Mycek et.  al .,  2001).  Inflamasi  merespon kerusakan jaringan dengan mendatangkan sel dan molekul pertahanan tubuh dari peredaran darah ke lokasi  yang  diperlukan  untuk  mengeliminasi penyebab  yang  mengganggu  (Kumar,  2017). Terjadinya reaksi inflamasi dalam tubuh berfungsi untuk  menghancurkan  dan  mengurangi  agen pencedera  maupun  jaringan  yang  mengalami cedera, serta mempersiapkan jaringan untuk proses penyembuhan (Corwin, 2008).
Antiinflamasi disebut sebagai istilah dari agen atau  obat  yang  berkhasiat  dalam  menekan  suatu proses peradangan (Dorlan, 2002). Obat antiinflamasi  non  steroid  (OAINS)  merupakan kelompok  obat  yang  banyak  diberikan  dalam pengobatan  inflamasi.  Obat  ini  bekerja  dalam menghambat  enzim  siklooksigenase-1  (COX-1) yang  dapat  menyebabkan  efek  samping  pada sistem  gastrointestinal  dan  sistem  kardiovaskular, serta menghambat enzim siklooksigenase-2 (COX- 2). Adanya efek samping tersebut yang ditimbulkan sehingga banyak dilakukan penelitian- penelitian  mengenai  bahan  alam  untuk  mencari alternatif  terhadap  obat  antiinflamasi  modern (Pountos, 2011).
Sesewanua ( Clerodendrum squamatum Vahl.) telah  digunakan  masyarakat  Sulawesi  Utara khususnya  masyarakat  Minahasa  sebagai  obat penurun  demam,  patah  tulang,  serta  penurun bengkak  (Hulisean,  2015).  Berdasarkan  analisis kandungan  fitokimia  oleh  Sangi et.  al. (2008) menunjukkan  bahwa  daun  sesewanua  positif mengandung  senyawa  alkaloid  dan  flavonoid. Menurut  penelitian  dari  Kaunang et.  al. (2017) kandungan kimia dalam sesewanua  meliputi tanin, saponin, flavonoid, dan alkaloid dengan konsentrasi yang sedang. Menurut Serafini (2010), senyawa  flavonoid  dapat  menghambat  inflamasi dengan  menghambat  enzim  pro-inflamasi  seperti siklooksigenase-2 (COX-2), lipooksigenase (LOX) dan iNOs ( Inducible Nitric Oxide Synthase ).
Berdasarkan  hal  tersebut  sehingga  peneliti ingin melakukan pengujian aktivitas antiinflamasi dari ekstrak etanol daun sesewanua ( Clerodendrum squamatum Vahl.)  pada  tikus  putih  ( Rattus norvegicus ).

## METODOLOGI PENELITIAN Jenis, Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian  yang  dilakukan  adalah  penelitian eksperimental  laboratorium.  Penelitian  dilakukan di  Laboratorium  Program  Studi  Farmasi  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Alam  Universitas  Sam Ratulangi  Manado  pada  bulan  Desember  2020 sampai Februari 2021.

## Alat dan Bahan Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini antara  lain  oven,  blender,  ayakan,  alat-alat  gelas ( Pyrex ),  wadah  maserasi  (toples),  corong  pisah, spatula, kertas saring, lumpang, sudip, sonifikator, kandang  tikus,  tempat  makan  dan  minum  tikus, spuit  injeksi,  timbangan  analitik,  timbangan hewan,  jarum  sonde  tikus,  jangka  sorong  dan stopwatch.
. Bahan Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  antara  lain  Daun  Sesewanua ( Clerodendrum  squamatum Vahl.),  Etanol  96%, Karagenan  1%,  Na-CMC  1%,  Tablet  Natrium Diklofenak, Larutan NaCl 0,9%, dan aquades.

## Penyiapan Sampel
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah daun Sesewanua yang diperoleh dari Desa Maumbi,  Kecamatan  Kalawat,  Minahasa  Utara. Daun  Sesewanua  segar  sebanyak  1,5  kg  dicuci bersih  di  air  mengalir  dan  ditiriskan.  Sampel kemudian  dikeringkan  dengan  cara  di  oven  pada suhu ± 40°C. Sampel yang telah kering selanjutnya di haluskan dengan cara diblender sampai menjadi serbuk.  Serbuk  dari  sampel  kemudian  diayak menggunakan  ayakan  hingga  didapat  simplisia yang halus dan seragam.

## Ekstraksi Sampel
Daun  Sesewanua  diekstraksi  menggunakan metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  96%. Sebanyak  200  g  simplisia  daun  sesewanua direndam  dengan  etanol  96%  1.000  ml  dengan sesekali  diaduk  selama  3 × 24  jam,  lalu  disaring dengan kertas saring sehingga menghasilkan filtrat dan residu I. Residu I kemudian direndam kembali dengan pelarut etanol 96% 750 ml dengan sesekali diaduk  selama  2 × 24  jam  lalu  disaring  dengan kertas  saring  sehingga  menghasilkan  filtrat  dan Residu  II.  Residu  II  kembali  direndam  dengan pelarut etanol 96% 500 ml dengan sesekali diaduk
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
selama  1 × 24  jam  lalu  disaring  dengan  kertas saring  sehingga  menghasilkan  filtrat  dan  Residu III.  Selanjutnya,  filtrat  I,  II,  dan  III  digabung  dan diuapkan  dalam  oven  pada  suhu  40°C  sampai didapatkan  ekstrak  kental  daun  sesewanua (Hohakay, 2019).

## Penetapan Dosis dan Penyiapan Larutan
a. Induktor Radang (Karagenan 1%)
Induktor radang dibuat dengan melarutkan  100  mg  karagenan  pada  larutan NaCl  0,9%  10  ml,  kemudian  diinkubasi selama  24  jam  pada  suhu  37°C.  Dosis karagenan sebagai induktor udem untuk kaki tikus yakni 0,1 ml dari larutan karagenan 1 % (Sativa, 2014).

## b. Kontrol negatif (Na CMC)
Suspensi  Na-CMC  1%  dibuat  dengan memasukkan  1  gram  Na-CMC  sedikit  demi sedikit  pada  100  ml  aquadest  panas  dengan suhu  70°C  sambil  diaduk  sampai  terbentuk larutan koloidal yang homogen.

## c. Kontrol positif (Natrium Diklofenak)
Natrium diklofenak yang digunakan ialah tablet  natrium  diklofenak  generik  ( Novell ®).
Dosis  natrium  diklofenak  sebagai  kontrol positif  adalah  4,5  mg/kg  BB  tikus.  Untuk membuat larutan natrium diklofenak, dilakukan  uji  kesetaraan  bobot,  kemudian tablet  natrium  diklofenak  digerus  lalu ditimbang sesuai serbuk setara dan dilarutkan dalam  larutan  suspensi  Na-CMC  selanjutnya diaduk sampai homogen.

## d. Ekstrak Daun Sesewanua
Dosis  ekstrak  daun  sesewanua  yang
digunakan  adalah  18  mg/kg  BB  tikus,  36 mg/kg  BB  tikus,  dan  72  mg/kg  BB  tikus. Untuk  membuat  larutan  dari  ekstrak  daun sesewanua,  masing-masing  dosis  dilarutkan dalam  larutan  suspensi  Na  CMC,  kemudian dilakukan sonifikasi sampai homogen.

## Perlakuan Hewan Uji
Hewan uji yang digunakan pada penelitian ini adalah tikus putih ( Rattus norvegicus L.) sebanyak 15  ekor  tikus  yang  dibagi  menjadi  5  kelompok dengan 3 ekor tikus di setiap kelompok. Dilakukan adaptasi  pada  hewan  uji  terhadap  lingkungan laboratorium  selama  1  minggu  dalam  kandang yang dijaga kebersihannya. Hewan uji yang sehat
ditandai  dengan  gerakan  yang  lincah.  Hewan  uji dipuasakan terlebih dahulu selama ±18 jam dengan tetap  diberi  minum  sebelum  dilakukan  perlakuan (Angreani, 2020).

## Pengujian Aktivitas Antiinflamasi
Masing-masing hewan uji ditimbang, telapak kaki  kanan  belakang  tikus  diukur  diameter ketebalannya sebagai diameter awal. Setiap hewan uji  diinjeksi  dengan  larutan  karagenan  1% sebanyak 0,1 ml secara subplantar pada kaki kanan belakang.  Setelah  30  menit  dari  penginjeksian, diameter  ketebalan  kaki  tikus  diukur  kembali. Setiap  kelompok  hewan  uji  kemudian  diberi perlakuan secara peroral dengan ketentuan sebagai berikut:
Kontrol Negatif   : diberikan larutan suspensi Na CMC 1% sebanyak 1 ml. Kontrol Positif : diberikan    larutan    suspensi natrium  diklofenak  dengan dosis 4,5 mg/kg BB tikus. Ekstrak Dosis I :  diberikan        ekstrak        daun sesewanua dengan dosis 18 mg/kg BB tikus.
Ekstrak Dosis II   :  diberikan        ekstrak  daun sesewanua dengan dosis
36 mg/kg BB tikus.
Ekstrak Dosis III  :  diberikan        ekstrak        daun
sesewanua dengan dosis
72 mg/kg BB tikus.
Setelah  diberi  perlakuan  dilakukan  kembali pengukuran  diameter  ketebalan  kaki  tikus. Pengukuran  diameter  ketebalan  kaki  tikus dilakukan pada jam ke-1, 2, 3, 4, 5, dan 6 setelah diberi  injeksi.  Pengukuran  diameter  kaki  tikus dilakukan dengan menggunakan jangka sorong dan dicatat hasilnya.

## Analisis Data
Data  diameter  telapak  kaki  tikus  yang diperoleh  kemudian  diolah  dengan    menghitung persentase  penghambatan  udemnya.  Persentase inflamasi  dan  persentase  penghambatan  inflamasi dapat  dihitung  menggunakan  rumus  sebagai berikut :
Persentase Inflamasi = Dt−Do Do x 100%
Persentase Inhibisi Inflamasi = a−b a x 100%
Dimana :
Dt  = Diameter kaki tikus setelah waktu t Do  = Diameter awal kaki tikus a = Persen inflamasi kelompok kontrol negatif
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
b   = Persen perlakuan bahan uji atau obat pembanding Data  diameter  telapak  kaki  tikus  yang diperoleh  kemudian  dianalisis  secara  statistik dengan menggunakan program Statistical Package for  the  Social  Sciences (SPSS).  Untuk  melihat normalitas  data  dilakukan  uji Shapiro-Wilk dan untuk  melihat  homogenitas  data  dilakukan  uji Levene .  Data  yang  diperoleh  tidak  terdistribusi normal  dan  tidak  bervariasi  homogen  sehingga digunakan uji non parametrik Kruskal Wallis untuk mengetahui  adanya  perbedaan  pada  data,  lalu dilanjutkan  dengan  melakukan  uji Mann  Whitney untuk  melihat  adanya  perbedaan  yang  bermakna antar tiap kelompok (Ramadhiani, 2019).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Identifikasi Tanaman
Identifikasi tanaman dilakukan untuk mengetahui  kebenaran  dari  identitas  sampel. Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah tanaman  Sesewanua  yang  diperoleh  dari  Desa Maumbi,  Kecamatan  Kalawat,  Minahasa  Utara. Identifikasi  dilakukan  di  Laboratorium  Biologi Dasar  FMIPA  Universitas  Sam  Ratulangi.  Hasil determinasi  menyatakan  bahwa  dapat  dipastikan sampel yang digunakan benar merupakan tanaman Sesewanua ( Clerodendrum squamatum Vahl.).

## Ekstraksi Sampel
Ekstraksi  dilakukan  terhadap  200  gram simplisia daun Sesewanua dengan metode maserasi dan  menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Metode maserasi  digunakan  karena  tidak  melalui  proses pemanasan  sehingga  tidak  merusak  kandungan bahan aktif yang akan disari yakni flavonoid, selain itu  metode  ini  cukup  sederhana  karena  hanya memerlukan  alat  berupa  toples  sebagai  bejana maserasi. Etanol  96%  merupakan  pelarut  yang bersifat  polar  sehingga  dapat  menarik  senyawa flavonoid  yang  ada  di  dalam  sampel  yang  juga bersifat  polar,  selain  itu  pelarut  etanol  96%  juga mudah menguap sehingga sangat cocok digunakan sebagai pelarut untuk proses ekstraksi . Filtrat dari hasil  ekstraksi  dipekatkan  dan  mendapatkan  hasil ekstrak  kental  dengan  berat  18,42  gram.  Persen rendemen yang didapat adalah sebesar 9,21%.

## Uji Antiinflamasi
Pengujian  antiinflamasi  dilakukan  dengan menggunakan  metode  pembuatan  udem  pada telapak  kaki  tikus.  Metode  ini  digunakan  karena
sederhana  dan  cepat  dalam  pengerjaannya,  udem yang  dihasilkan  dapat  terlihat  dengan  jelas,  serta tidak memerlukan pembunuhan hewan. Selain itu, metode  ini  merupakan  metode  yang  umum digunakan untuk pengujian antiinflamasi.
Pembuatan udem dilakukan pada telapak kaki kanan belakang tikus dengan menginduksi 0,1 ml larutan karagenan 1% secara subplantar. Karagenan melepaskan mediator inflamasi seperti histamin dan serotonin, sehingga dapat menimbulkan udem karena adanya antibodi hewan uji yang bereaksi terhadap antigen untuk melawan pengaruh  dari  antigen  tersebut  (Necas,  2013). Karagenan  dipilih  sebagai  bahan  iritan  untuk membuat  udem  karena  memiliki  beberapa keuntungan, yaitu tidak meninggalkan bekas, tidak menimbulkan  kerusakan  jaringan,  serta  dapat memberikan respon yang lebih peka terhadap obat antiinflamasi  daripada  bahan  iritan  lainnya sehingga  cocok  dipilih  sebagai  induktor  pembuat udem (Rifaldy, 2019).
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah tikus putih jantan, pada setiap kelompok perlakuan  digunakan  3  ekor  tikus.  Adaptasi dilakukan  terhadap  tikus  pada  lingkungan laboratorium  selama  ±  1  minggu.  Selain  itu sebelum  dilakukan  perlakuan,  tikus  dipuasakan terlebih dahulu selama ± 18 jam dengan tetap diberi minum.  Zat  uji  diberikan  secara  peroral  sehingga hewan  uji  perlu  dipuasakan  terlebih  dahulu  agar saluran  pencernaan  dari  hewan  uji  bersih  dari makanan  dan  zat-zat  kimia  lainnya.  Adanya makanan dan zat kimia lain yang berada di dalam saluran  pencernaan  dikhawatirkan  dapat  terjadi reaksi  senyawa  dengan  zat  uji  yang  diberikan (Jothy et.al. , 2011).
Penelitian  ini  menggunakan  Na  CMC  1% sebagai  kontrol  negatif  serta  natrium  diklofenak sebagai  kontrol  positif.  Natrium  diklofenak digunakan sebagai kontrol positif karena merupakan  salah  satu obat  yang  mempunyai  efek antiinflamasi dan kerap digunakan sebagai kontrol pembanding dalam penelitian-penelitian mengenai uji  antiinflamasi.  Selain  itu,  natrium  diklofenak mempunyai  kemampuan  absorbsi  yang  cepat dalam  tubuh,  serta  memiliki  efek  samping  yang rendah dibandingkan dengan obat-obat antiinflamasi  lainnya  seperti  piroxicam,  dan indometasin  (Tjay  dan  Raharja,  2002).  Selama proses  pembuatan  larutan  ekstrak  kental  daun sesewanua  tidak  dapat  larut  dengan  sempurna dalam suspensi Na CMC 1%, sehingga dilakukan
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
sonifikasi  untuk  memecah  partikel  ekstrak  agar ekstrak dapat larut sempurna dalam suspensi.
Parameter  pengukuran  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  diameter  atau  ketebalan  dari udem  yang  terbentuk  pada  telapak  kaki  tikus. Pengukuran udem dilakukan menggunakan jangka sorong digital dengan cara mengukur diameter atau ketebalan  dari  udem  pada  telapak  kaki  tikus. Pengukuran  udem  dengan  jangka  sorong  sering digunakan  dalam  pengujian  antiinflamasi  dan
relatif  sederhana.  Menurut  Corsini et.  al. (2005), udem  yang  dibentuk  oleh  induksi  bahan  iritan karagenan dapat bertahan selama 6 jam setelah itu berkurang  secara  berangsur-angsur  dalam  waktu 24  jam.  Berdasarkan  hal  tersebut  sehingga pengukuran diameter udem dilakukan selama 6 jam ketika  udem  masih  bertahan.  Grafik  hasil pengukuran  rata-rata  diameter  telapak  kaki  tikus dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1 . Grafik rata-rata diameter telapak kaki tikus pada masing-masing kelompok perlakuan Berdasarkan  data  grafik  pada  Gambar  1, dapat  dilihat  pada  menit  ke  30  setelah penginduksian karagenan 1% terjadi kenaikan rata- rata diameter atau ketebalan telapak kaki tikus pada masing-masing  kelompok  perlakuan.  Hal  ini menandakan  telah  terbentuk  udem  pada  telapak kaki  tikus  akibat  adanya  penginduksian  bahan iritan yaitu karagenan 1% 0,1 ml. Semua kelompok
perlakuan menunjukkan adanya penurunan diameter  udem  pada  telapak  kaki  tikus.  Pada kelompok  kontrol  negatif  terjadi  penurunan diameter udem namun tidak signifikan seperti pada kelompok  perlakuan  lainnya,  dan  udem  masih bertahan  hingga  pada  jam  ke-6.  Hal  ini menandakan  benar  bahwa  udem  yang  terbentuk oleh karagenan dapat bertahan selama 6 jam.
Tabel 1. Rata-rata persentase inflamasi pada setiap kelompok perlakuan
Tabel 2. Rata-rata persentase inhibisi inflamasi pada setiap kelompok perlakuan
0 1 2 3 4 5 6 7 0 0.5 1 2 3 4 5 6 R ata -rat a Di amet er Ud em (mm) Waktu (Jam) Rata-rata Diameter Telapak Kaki Tikus Kontrol negatif Kontrol posistif Dosis I Dosis II Dosis III
Kelompok Perlakuan Presentase Inflamasi (%) SI* Menit ke-30 Jam ke-1 Jam ke-2 Jam ke-3 Jam ke-4 Jam ke-5 Jam ke-6 Kontrol negatif 0 72,77 70,63 67,44 60,08 62,13 60,01 57,93 Kontrol positif 0 73,98 63,99 55,02 50,00 37,99 30,95 19,01 Dosis I (18 mg/kg BB tikus) 0 64,88 52,51 44,04 34,47 30,75 17,73 3,01 Dosis II (36 mg/kg BB tikus) 0 59,11 51,95 43,71 36,40 28,26 19,20 8,27 Dosis III (72 mg/kg BB tikus) 0 67,86 60,99 53,75 45,19 37,33 25,51 10,85 *SI = Sebelum Injeksi Kelompok Perlakuan Presentase Inhibisi Inflamasi (%) SI* Menit ke-30 Jam ke-1 Jam ke-2 Jam ke-3 Jam ke-4 Jam ke-5 Jam ke-6 Kontrol negatif 0 0 0 0 0 0 0 0 Kontrol positif 0 -3,2 8,01 17,44 16,11 38,69 48,39 65,7
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Gambar 2 . Grafik rata-rata persentase inflamasi (%) Gambar 3 . Grafik rata-rata persentase inhibisi inflamasi (%)
Begitu  juga  pada  data  persentase  inflamasi pada  setiap  kelompok  (Tabel  1  dan  Gambar  2), terjadi  penurunan  presentase  inflamasi  yang signifikan kecuali pada kelompok kontrol negatif. Hal  ini  dikarenakan  kelompok  kontrol  negatif hanya diberikan suspensi Na CMC 1 % yang tidak mampu  menghambat  udem  yang  terbentuk. Adanya  penurunan  persentase  inflamasi  yang terjadi pada kelompok kontrol negatif adalah dari imunitas  hewan  uji  dan  bukan  karena  pemberian Na CMC 1%.
Suatu  bahan  obat  dikatakan  mempunyai aktivitas antiinflamasi apabila mampu menginhibisi atau menghambat derajat udem yang terbentuk  akibat  induksi  pada  hewan  uji. Berdasarkan  data  presentase  inhibisi  inflamasi (Tabel 2 dan Gambar 3), kelompok kontrol positif dan  kelompok  ekstrak  mempunyai  aktivitas antiinflamasi karena mampu menghambat persentase  udem  yang  terbentuk  pada  hewan  uji setelah  diberi  perlakuan. Pada  kelompok  ekstrak dosis 18 mg/kg BB tikus dapat dikatakan memiliki kemampuan  dalam  menghambat  inflamasi  yang paling  besar  dibandingkan  kelompok  kontrol positif  dan  kelompok  dengan  dua  dosis  lainnya. Hal  ini  berarti  ekstrak  dosis  18  mg/kg  BB  tikus merupakan  dosis  yang  paling  optimal  dalam menghambat  inflamasi  dibandingkan  dengan kelompok dosis 36 mg/kg BB tikus dan 72 mg/kg BB tikus.
Seharusnya peningkatan dosis akan menunjukkan  terjadinya  peningkatan  aktivitas antiinflamasi, namun pada penelitian ini didapatkan bahwa dosis 36 mg/kg BB tikus dan 72 mg/kg BB tikus memiliki aktivitas inflamasi yang lebih rendah dari dosis 18 mg/kg BB tikus. Hal ini dapat  disebabkan  karena  ada  beberapa  jenis  obat yang  justru  menyebabkan  pelepasan  histamin secara  langsung  dari  sel  mast  apabila  diberikan dalam  dosis  tinggi,  sehingga  mengakibatkan peningkatan permeabilitas pembuluh darah terhadap  cairan  plasma  dan  menimbulkan  proses peradangan  (Fitriyani et.  al .,  2011).  Dengan demikian,  diduga  pada  ekstrak  etanol  daun sesewanua  mengandung  senyawa  yang  dapat mengakibatkan hal tersebut.
Hasil  analisis  statistik  dengan  uji Kruskal Wallis yang dilanjutkan dengan uji Mann Whitney diperoleh  bahwa  antar  kelompok  kontrol  negatif dan  kelompok  perlakuan  lainnya  memiliki perbedaan yang bermakna (ρ ≤ 0,05), kecuali antar kelompok  kontrol  negatif  dan  ekstrak dosis 36 mg/kg BB tikus yang  tidak  memiliki  perbedaan yang  bermakna  (ρ  ≥  0,05).  Artinya,  kelompok ekstrak dosis 18 mg/kg BB tikus dan ekstrak dosis 72  mg/kg  BB  tikus  terbukti  memiliki  aktivitas antiinflamasi.  Berdasarkan  uji  tersebut  juga diperoleh  bahwa  kelompok  kontrol  positif  dan kelompok    ekstrak  dosis  18  mg/kg  BB  tikus,  36 mg/kg  BB  tikus,  dan  72  mg/kg  BB  tikus  tidak memiliki  perbedaan  yang  bermakna  (ρ  ≥  0,05).
0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 0.5 1 2 3 4 5 6 Pers en ta se In flamas i (% ) Waktu (Jam) Persentase Inflamasi (%) Kontrol negatif Kontrol posistif
Dosis I Dosis II Dosis III -20 0 20 40 60 80 100 0 0.5 1 2 3 4 5 6 Pers en ta se In h ib is i In flamas i (% ) Waktu (Jam) Persentase Inhibisi Inflamasi (%) Kontrol posistif Dosis I Dosis II
Dosis III Dosis I (18 mg/kg BB tikus) 0 11,24 26,18 35,32 43,09 51,17 71,00 95,04 Dosis II (36 mg/kg BB tikus) 0 17,55 26,29 35,17 39,44 52,97 68,27 85,80 Dosis III (72 mg/kg BB tikus) 0 6,84 13,59 20,78 24,81 39,57 57,18 81,29
*SI = Sebelum Injeksi
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Dengan demikian, dapat diartikan bahwa kelompok  ekstrak  dosis  18  mg/kg  BB  tikus,  36 mg/kg BB tikus, dan 72 mg/kg BB tikus memiliki efek  yang  hampir  sama  dengan  kontrol  positif natrium diklofenak.
Pada  kelompok  ekstrak  dosis  36  mg/kg  BB tikus  meskipun  pada  uji Mann  Whitney tidak memiliki  perbedaan  yang  bermakna  dengan kontrol  negatif,  namun  dapat  dilihat  secara  nyata bahwa kelompok ekstrak dosis 36 mg/kg BB tikus dapat  menurunkan  diameter  udem  pada  telapak kaki  tikus  lebih  baik  jika  dibandingkan  dengan kontrol  negatif.  Selain  itu,  dapat  dilihat  dari  data persentasi  inhibisi  inflamasi,  bahwa  kelompok ekstrak  dosis  36  mg/kg  BB  tikus  mampu menghambat  udem  yang  terbentuk.  Dalam  uji Mann Whitney juga menyatakan bahwa kelompok ekstrak  dosis  36  mg/kg  BB  tikus  tidak  berbeda bermakna  dengan  kontrol  positif  yang  artinya memiliki efek hampir sama dengan kontrol positif, sehingga dapat dikatakan dosis 36 mg/kg BB tikus juga memiliki aktivitas antiinflamasi.
Adanya  aktivitas  antiinflamasi  dari  ekstrak etanol daun sesewanua karena terdapat kandungan senyawa  aktif  flavonoid  pada  daun  sesewanua ( Clerodendrum  squamatum Vahl.).  Berdasarkan penelitian  oleh  Hohakay  (2019),  dalam  daun sesewanua segar, daun sesewanua yang dikeringkan dengan cara diangin-anginkan, dikeringkan dalam oven pada suhu 40°C dan 60°C berturut-turut  mengandung  flavonoid  sebesar 1.2%,  0.72%,  0.78%  and  0.62%.  Berdasarkan penelitian oleh Sapiun (2020), dalam ekstrak etanol daun  sesewanua  terdapat  kandungan  flavonoid sebesar 134,79 ppm atau sebesar 13,47 %.
Flavonoid  menginhibisi  inflamasi  dengan menghambat enzim pro-inflamasi seperti siklooksigenase (COX) dan lipooksigenase (LOX). Ketika suatu jaringan cedera maka asam arakidonat akan  melepaskan  prostaglandin  dengan  adanya bantuan dari enzim siklooksigenase dan lipooksigenase,  apabila  kedua  enzim  tersebut terhambat  maka  asam  arakidonat  tidak  dapat melepaskan  prostaglandin  dan  leukotrien  yang merupakan mediator-mediator inflamasi.
Flavonoid  juga  dapat  menghambat  degranulasi neutrofil  sehingga  mengurangi  pelepasan  asam arakidonat  oleh  neutrofil  sehingga  prostaglandin dan  leukotrien  yang  dihasilkan  pun  berkurang. Selain  itu,  flavonoid  juga  dapat  menghambat pelepasan histamin oleh sel mast dan menurunkan jumlah  leukosit  (Serafini,  2010;  Nijveldt et  al. , 2001).
Ketika  inflamasi  terjadi  mediator-mediator inflamasi  seperti  prostaglandin  dan  leukotrien dapat  menyebabkan  terjadinya  permeabilitas kapiler dan peningkatan adhesi antara leukosit dan sel endotel dari pembuluh kapiler (Corwin, 2008). Flavonoid dapat menghambat enzim siklooksigenase dan lipooksigenase yang membantu  proses  biosintesis  prostaglandin  dan leukotrien, serta dapat menurunkan jumlah leukosit sehingga  adhesi  antara  leukosit  dan  sel  endotel berkurang  dan  mengakibatkan  turunnya  respon inflamasi pada tubuh (Nijveldt et al. , 2001).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  didapatkan bahwa ekstrak etanol daun Sesewanua ( Clerodendrum squamatum Vahl.) dengan pemberian dosis 18 mg/kg BB tikus, 36 mg/kg BB tikus,  dan  72  mg/kg  BB  tikus  terbukti  memiliki aktivitas  antiinflamasi  terhadap  tikus  putih  jantan ( Rattus  norvegicus L.)  dengan  efek  yang  hampir sama  dengan  natrium  diklofenak.  Dosis  dengan efek antiinflamasi paling optimal adalah pada dosis 18  mg/kg  BB  tikus  dengan  persentase  inhibisi inflamasi yang mencapai 95,04%.

## SARAN
Perlu dilakukan uji fitokimia untuk mengetahui  dengan  pasti  jenis  flavonoid  yang terkandung dalam daun Sesewanua ( Clerodendrum squamatum Vahl.)  yang  berperan  menghambat inflamasi  serta  uji  toksisitas  untuk  mengetahui dosis  toksik  dari  ekstrak  daun  Sesewanua.  Selain itu, diperlukan penelitian lanjut mengenai potensi antiinflamasi  ekstrak  daun  Sesewanua  dalam berbagai bentuk sediaan dengan variasi konsentrasi.

## DAFTAR PUSTAKA
Angreani,  D.,  Sangi,  M.,  Fatimah,  F.  2020. Aktivitas  Anti-inflamasi  Ekstrak  Etanol Tepung  Pelepah  Aren  ( Arenga pinnanta ). Chem. Prog. 13(2): 123-127. Corsini,  Raymond  J.  2005. The  Dictionary  of Psychology . Brunner-Routledge, United States of America.
Corwin, E.J. 2008. Handbook Of Pathophysiology, 3th Edition . Lippincort Williams and Wilkins, Philadelphia.
Dorland,  W.A.N.  2002.  Kamus  Kedokteran Dorland Edisi 29. EGC, Jakarta.
Fitriyani,  A.,  Muslichah,  S.,  dan  Nuri.  2011.  Uji Antiinflamasi  Ekstrak  Metanol  Daun  Sirih
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Merah  ( Piper  crocatum Ruiz  &  Pav  )  pada Tikus  Putih. Majalah  Obat  Tradisional . 16(1): 34 – 42.
Hohakay,  J.J.,  Pontoh,  J.,  Yudistira,  A.  2019.
Pengaruh  Metode  Pengeringan  Terhadap  Ka dar Flavonoid Daun Sesewanua ( Clerodendrum squamatum
Vahl.).
Pharmacon, 8(3): 748-757.
Hulisean,  Y.,  Runtunewe,  M.R.J.,  Wewengkang,
D.  2015.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol,  Etil  Asetat,  dan n -Heksan  dari
Sesewanua ( Clerodendrum squamatum Vahl.). Jurnal Ilmiah Farmasi . 4(3): 155-156. Jothy, et.  al. 2011.  Acute  Oral  Toxicity  of Methanolic  Seed  Extract  of  Cassia  fistula  in Mice. Molecules . 16(6): 5268-5282.
Kaunang,  E.N.S.,  and  Semuel,  M.Y.  2017.
Botanical and Phytochemical Constituents of Several Medicinal Plants From Mount Klabat North  Minahasa. Journal  of  Medical  Plants Studies . 5(2): 29-35.
Kumar,  V.,  Abbas,  A.  K.,  Aster,  J.  C.  2017. Robbins  Basic  Pathology  10 th Edition . Terjemahan  :  Maria  Fransisca  Ham  dan Meilania Saraswati. Elsevier, Singapura.
Mycek,  M.J.,  Harvey,  R.A.,  Champe,  P.C.  2001. Farmakologi  Ulasan  Bergambar.  Widya Media, Jakarta.
Necas,  J.L.  2013.  Carrageenan:  a  review.
Veterinarni Medicina. 58(4): 187-205.
Nijveldt, R.J., Nood, E.V., Hoorn, D.E.C., Boelens
P.G.,  Norren,  K.V.,  dan  Leeuwen,  P.A.M. 2001.  Flavonoids  :  A  Review  of  Probable Mechanisms of Action and Potential
Application. Am J Clin Nutr . 74: 418-425. Pountos, I., Georgouli, T., Howard, B., Giannoudis, P.V. 2011. Nonsteroidal
Antiinflammatory  Drugs:  Prostaglandins,
Indications,  and  Side  Effects. International Journal of Interferon , Cytokine and Mediator Research . 3: 19-27.
Ramadhiani,  A.R.,  Tari,  M.,  dan  Zalia,  M.  2019. Uji  Aktivitas  Antiinflamasi  Ekstrak  Etanol Daun  Karamunting  ( Rhodomyrtus  tomentosa (Aiton.)  Hassk)  terhadap  Tikus  Putih  Jantan Galur  Wistar  yang  Diinduksi  Karagenan. Jurnal ‘Aisyiyah Medika . 4(3): 398-406. Rifaldy, M.R., Suwendar, dan Yuniarni, U. 2019. Uji Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Mengkudu ( Morinda Citrifolia L.) sebagai Antiinflamasi terhadap  Tikus  Wistar  Jantan. Prosiding Farmasi . 5(2): 241-248.
Sangi,  M.,  Runtunewe,  M.R.J.,  Simbala,  H.E.I., Makang,  V.M.A.  2008.  Analisis  Fitokimia Tumbuhan  Obat  di  Kabupaten  Minahasa Utara. Chemistry Progress . 1: 47-53.
Sapiun, Z., Pangalo, P., Imran, A.K., Wicita, P.S., Daud,  R.P.A.  2020.  Determination  of  Total Flavonoid Levels of Ethanol Extract
Sesewanua  Leaf  ( Fragrans Wild)  With Maceration Method Using UV-Vis
Spectrophotometry. Pharmacognosy Journal . 12(2): 356-360.
Sativa, O., Yuliet, Sulastri, E. 2014. Uji Aktivitas Antiinflamasi  Gel  Ekstrak  Buah  Kaktus ( Opuntia  elatior Mill.)  Pada  Tikus  ( Rattus norvegicus L.)  Yang  Diinduksi  Lamda Karagenan. Online Journal of Nature Science . 3(2): 79-94. Serafini,  M.,  Peluso,  I.,  Raguzzini,  A.  2010.
Session  1  :  Antioxidant  and  the  immune system  Flavonoids  as  anti-inflammatory agents. Proceedings of the  Nutrition  Society . 69: 273-278.
Tjay, T. H., dan Raharja. 2002. Obat-Obat Penting.
Khasiat, Penggunaan dan Efek-Efek
Sampingnya Edisi V. Penerbit PT. Elex Media Komputindo Kelompok Gramedia, Jakarta.