How to cite: Anas Dzikri Imanullah, Hajrah Hajrah, Vita Olivia Siregar (2024t) Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Kombinasi Ekstrak Bunga Mawar (Rosa Damascena Mill) Dengan Fraksi Umbi Bengkuang (Pachyrizus Erosus), (06) 06, https://doi.org/10.36418/syntax-idea.v3i6.1227 E-ISSN: 2684-883X
Published by: Ridwan Institute

## UJI  AKTIVITAS  INHIBITOR  ENZIM  TIROSINASE  KOMBINASI  EKSTRAK BUNGA  MAWAR  (ROSA  DAMASCENA  MILL)  DENGAN  FRAKSI  UMBI BENGKUANG (PACHYRIZUS EROSUS)
Anas Dzikri Imanullah, Hajrah Hajrah, Vita Olivia Siregar Universitas Mulawarman, Indonesia Email: Anas.dzikir@gmail.com, hajrah@farmasi.unmul.ac.id, vitaolivia@farmasi.unmul.ac.id
Abstrak
Enzim  tirosinase  adalah  enzim  yang  bertanggung  jawab  atas  terjadinya  biosintesis  melanin dalam pembentukan warna pigmen kulit dan penyebab hiperpigmentasi. Bunga mawar ( Rosa damascena  mill )  dan  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus )  mengandung  senyawa  yang memiliki  aktivitas  inhibitor  enzim  tirosinase.  Tujuan  dilakukannya  penelitian  ini  untuk mengetahui berapa besar aktivitas inhibitor enzim tirosinase dari ekstrak bunga mawar, fraksi umbi bengkuang, dan kombinasinya dengan perbandingan 1:1, 1:2, 2:1, 1:3 dan 3:1. Metode penelitian  dilakukan  dengan  ekstraksi  maserasi  bunga  mawar  dengan  etanol  70%  dan ekstraksi umbi bengkuang dengan metode sokletasi dengan petroleum eter dan metanol, lalu difraksinasi cair-cair dengan etil asetat. Dari hasil ekstraksi diperoleh rendemen ekstrak bunga mawar  15,17%  dan  fraksi  umbi  bengkuang  12,5%.  Hasil  skrining  fitokimia  menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  bunga  mawar  mengandung  alkaloid,  flavonoid,  kuinon  dan  fenol, sedangkan  fraksi  umbi  bengkuang  mengandung  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  fenol  dan steroid.  Pengujian  aktivitas  inhibitor  enzim  tirosinase  menggunakan  substrat  L-tirosin  dan kontrol positif asam kojak dengan pengukuran serapan menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 492 nm. Hasil penelitian aktivitas inhibitor enzim tirosinase menunjukkan bahwa  ekstrak  bunga  mawar  memiliki  nilai  IC50  262,882  ppm  dan  fraksi  umbi  bengkuang dengan nilai IC50 43,148 ppm. Hasil penelitian inhibitor enzim tirosinase kombinasi ekstrak bunga mawar dengan fraksi umbi bengkuang dengan perbandingan 1:1; 1:2; 2:1; 1:3 dan 3:1 memiliki  nilai  IC50  secara  berurutan  yakni  sebesar  26,598  ppm;  23,348  ppm;  29,880  ppm; 20,305 ppm dan 34,742 ppm.
Kata kunci : Inhibitor, Enzim Tirosinase, Ekstrak Mawar, Fraksi Bengkuang

## Abstract
The tyrosinase enzyme is an enzyme that is responsible for the biosynthesis of melanin in the formation  of  skin  pigment  color  and  causes  of  hyperpigmentation.  Rose  flowers  (Rosa damascena mill) and yam bean (Pachyrhizus erosus) contain compounds that have tyrosinase enzyme  inhibitor  activity.  The  aim  of  this  research  was  to  determine  the  value  of  the tyrosinase  enzyme  inhibitor  activity  of  rose  flower  extract,  yam  bean  fraction,  and  their combination at a ratio of 1:1, 1:2, 2:1, 1:3 and 3:1. The research method was carried out by maceration extraction of rose flowers with 70% ethanol and extraction of yam bean using the soxhletation method with petroleum ether and methanol, then liquid-liquid fractionation with ethyl acetate. From the extraction results, the yield of rose flower extract was 15.17% and the
JOURNAL SYNTAX IDEA p–ISSN: 2723-4339 e-ISSN: 2548-1398 Vol. 6, No. 06, Juni 2024
yam  bean  fraction  was  12,5%.  The  results  of  phytochemical  screening  showed  that  the ethanol extract of roses contained alkaloids, flavonoids, quinones and phenols, while the yam bean  fraction  contained  alkaloids,  flavonoids,  saponins,  phenols  and  steroids.  Tyrosinase enzyme inhibitor activity assay used the substrate L-tyrosine and positive control kojic acid by measuring  absorption  using  a  microplate  reader  at  a  wavelength  of  492  nm.  The  results  of research  on  the  activity  of  tyrosinase  enzyme  inhibitors  showed  that  the  rose  flower  extract had an IC50 value of 262,882 ppm and the yam bean fraction had an IC50 value of 43,148 ppm.  The  results  of  the  research  on  the  tyrosinase  enzyme  inhibitor  were  a  combination  of rose flower extract and yam bean fraction in a ratio of 1:1; 1:2; 2:1; 1:3 and 3:1 have IC50 values respectively of 26,598 ppm; 23,348 ppm; 29,880 ppm; 20,305 ppm and 34,742 ppm Keywords: Inhibitor, Tyrosinase Enzyme, Rose Extract, Yam Bean Fraction

## PENDAHULUAN
Enzim  tirosinase  adalah  enzim  yang  bertanggung  jawab  atas  terjadinya  biosintesis melanin  dalam  pembentukan  warna  pigmen  kulit.  Akumulasi  dari  melanin  yang  berlebihan dapat  menyebabkan  berbagai  gangguan  dermatologis  termasuk,  melasma  dan  bintik-bintik penuaan. Enzim tirosinase ini pengatur utama dalam peran melanogenesis pada sel melanosit. Sintesis melanin diprekursor oleh quinone yang dikatalis oleh enzim tirosinase (Mukherjee et al.,  2018).    Hiperpigmentasi  merupakan  dampak  akibat  produksi  melanin  yang  berlebihan, yang dipengaruhi oleh faktor intrinsik seperti genetik dan ekstrinsik yang merupakan dampak radiasi UV dan senyawa kimia tertentu (Hidayat, 2021). Hiperpigmentasi sudah lama menjadi masalah  estetika  dan  juga  masalah  dermatologi.  Salah  satu  agen  penyebab  hiperpigmentasi adalah adanya paparan radiasi UV (Gazali, Zamani, & Batubara, 2014). Hiperpigmentasi pada kulit  dapat  dicegah  dengan  senyawa-senyawa  yang  memiliki  fungsi  sebagai  inhibitor tirosinase, diantaranya merkuri, hidrokuinon, arbutin, alpha-hydroxy acid (AHA), asam kojak, asam askorbat dan senyawa alami dengan turunan fenol (Westerhof & Kooyers, 2005).
Senyawa-senyawa  alami  dapat  diperoleh  dari  metabolit  sekunder  yang  terkandung dalam tumbuhan. Senyawa-senyawa metabolit sekunder dapat dikelompokkan menjadi empat kelompok utama, yaitu flavonoid, fenol, terpenoid dan alkaloid (RIPALDO, 2020). Flavonoid dan turunannya, mampu bertindak sebagai inhibitor tirosinase alami ((Chang, 2009). Senyawa dengan  kemampuan  antioksidan  tinggi  seperti  polifenol  dan  flavonoid  mampu  menurunkan aktivitas dari reactive oxygen species (ROS) pada kulit. ROS di kulit seperti oksigen singlet dan anion superoksida, meningkatkan kerusakan biologis pada jaringan yang terpapar melalui reaksi  oksidatif  yang  dikatalisis  besi.  Radikal  ini  memainkan  peran  penting  dalam  aktivasi tirosinase  pada  kulit  manusia  dan  karenanya  meningkatkan  biosintesis  melanin  melalui induksi proliferasi melanosit (Wang et al., 2006).
Bunga  mawar  ( Rosa  damascena  mill .)  dalam  beberapa  penelitian  dinyatakan  bahwa petal  bunga  mawar  memiliki  kandungan  metabolit  sekunder  yang  dilaporkan  memiliki aktivitas antioksidan, metabolit sekunder pada petal bunga mawar ini diketahui mengandung vitamin  C  yang  tinggi  yang  berpotensi  sebagai  antioksidan  (Sengui,  Sener,  &  Ercisli,  2017; Zawiślak  &  Michalczyk,  2018).  Penelitian  tersebut  menyebutkan  bahwa  antosianin  mayor yang  terdapat  pada  petal  bunga  mawar  merah  adalah  senyawa  Cyanidin  3,5-di-O-glucoside yang  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  DPPH  tinggi  dengan  kadar  nilai  IC50  55,2  µg/mL (Choiriyah,  2020).  Antosianin  pada  petal  bunga  mawar  merupakan  salah  satu  turunan  dari
turunan  flavonoid.  Flavonoid  maupun  beberapa  turunannya  dilaporkan  dapat  menghambat enzim  tirosinase.  Ini  kemungkinan  besar  karena  kemampuan  flavonoid  dan  polifenol  untuk membentuk  kompleks  dengan  tembaga,  sehingga  menghambat  oksidasi  enzimatik  L-DOPA (Kim & Uyama, 2005).
Bengkuang (Pachyrhizus  erosus) dilaporkan  memiliki  senyawa  isoflavon,  yaitu daidzein,  daidzein-n-7-o-β-glukopiranosa,  5-OH-daidzei  n-7-o-β-glukopiranosa  dan  8,9- furanyl-pteroc  arpan-3-ol.  Senyawa  tersebut  memiliki  aktivitas  yang  baik  terhadap penyerapan  sinar  UV,  dan  telah  diteliti  aktivitasnya  pada  antioksidan  dan  enzim  tirosinase. Hasil fraksi umbi bengkuang dengan etil  asetat  mampu mengekstraksi  daidzen dengan baik, dengan nilai inhibitor enzim tirosinase IC50 sebesar 158,13 ppm (Lukitaningsih, 2014).
Berdasarkan latar belakang yang telah dipaparkan pada paragraf-paragraf sebelumnya, maka  didapatkan  rumusan  masalah  dari  penelitian  ini,  sebagai  berikut  :  (a)  berapa  berat rendemen  yang  diperoleh  dari  ekstrak  bunga  mawar  ( Rosa  damascena  mill )  dan  umbi bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus)? (b)  apa  kandungan  metabolit  sekunder  yang  terkandung dalam ekstrak bunga mawar ( Rosa damascena mill ) dan fraksi umbi bengkuang ( Pachyrhizus erosus )?  (c)  berapa  besar  aktivitas  penghambatan  enzim  tirosinase  ekstrak  bunga  mawar ( Rosa  damascena  mill )  dan  fraksi  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus )?  (d)  berapa  besar aktivitas  penghambatan  enzim  tirosinase  kombinasi  ekstrak  bunga  mawar  ( Rosa  damascena mill )  dan  fraksi  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus )?  (e)  berapa  besar  potensi  kombinasi ekstrak  bunga  mawar  ( Rosa  damascena  mill )  dengan  fraksi  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus erosus ) dibandingkan dengan kontrol positif asam kojak?
Berdasarkan  rumusan  masalah  yang  didapat,  dapat  disimpulkan  bahwa  tujuan  yang ingin dicapai dalam penelitian ini adalah (a) mengetahui berat rendemen yang diperoleh dari ekstrak  bunga  mawar  ( Rosa  damascena  mill )  dan  fraksi  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus erosus ),  (b)  mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder  yang  terdapat  pada  ekstrak  bunga mawar  ( Rosa  damascena  mill )  dan  fraksi  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus ),  (c) mengetahui  berapa  besar  aktivitas  penghambatan  enzim  tirosinase  ekstrak  bunga  mawar ( Rosa  damascena  mill )  dan  fraksi  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus ),  (d)  mengetahui berapa besar aktivitas penghambatan enzim tirosinase kombinasi ekstrak bunga mawar ( Rosa damascena  mill )  dan  fraksi  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus )  (e)  mengetahui  berapa besar  potensi  kombinasi  ekstrak  bunga  mawar  ( Rosa  damascena  mill )  dengan  fraksi  umbi bengkuang ( Pachyrhizus erosus ) dibandingkan dengan kontrol positif asam kojak.
Berdasarkan rumusan masalah yang telah ditentukan, penelitian ini diharapkan memiliki beberapa  manfaat,  berupa  dapat  memberikan  informasi  tentang  keterbaharuan  produk  bahan alam  secara  kombinasi  yang  menghasilkan  sebuah  sediaan  atau  produk  dengan  efikasi  yang sangat  baik  serta  melengkapi  data  ilmiah  tentang  manfaat  bunga  mawar  ( Rosa  damascena mill ),  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus )  dan  kombinasinya  terhadap  aktivitas  inhibitor tirosinase.
Metode  penelitian  ini  diawali  dengan  proses  ekstraksi  petal  bunga  mawar  ( Rosa damascena  mill )  dan  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus ),  kemudian  dilanjutkan  dengan penentuan  hasil  rendemen  ekstrak  dan  fraksi.  Pengujian  metabolit  sekunder  adalah  proses selanjutnya  yang  dilakukan  pada  ekstrak  bunga  mawar  dan  fraksi  umbi  bengkuang
menggunakan  pereaksi  tertentu.  Pengujian  aktivitas  inhibitor  tirosinase  dilakukan  terhadap masing-masing ekstrak, yaitu ekstrak bunga mawar dan fraksi umbi bengkuang dengan variasi konsentrasi.  Pengujian  selanjutnya  uji  aktivitas  inhibitor  enzim  tirosinase  kombinasi  ekstrak bunga mawar dengan fraksi umbi bengkuang dengan berbagai variasi perbandingan berat per berat.  Pengujian  ini  menggunakan  asam  kojak  sebagai  pembanding  atau  kontrol  positif. Langkah  selanjutnya  adalah  identifikasi  penghambatan  tirosinase  pada  instrument  ELISA dengan panjang gelombang tertentu. Sehingga didapatkan nilai absorbansi yang nantinya akan dikalkulasikan  dengan  %  penghambatan  tirosinase  dan  IC50,  lalu  diperoleh  hasil  terbaik inhibitor tirosinase. Selanjutnya pengukuran potensi dengan program SPSS.
Hasil  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini,  berupa  nilai  rendemen  ekstrak  bunga  mawar sebesar  15,17%,  sedangkan  pada  fraksi  umbi  bengkuang  sebesar  12,5%.  Pengujian identifikasi  senyawa  kandungan  metabolit  sekunder,  pada  ekstrak  bunga  mawar  positif mengandung  alkaloid,  flavonoid,  kuinon  dan  fenol,  sedangkan  pada  fraksi  umbi  bengkuang mengandung  alkaloid,  flavonoid,  fenol,  saponin  dan  steroid.  Selanjutnya  pengujian  aktivitas inhibitor  enzim  tirosinase  untuk  ekstrak  bunga  mawar  dengan  varian  konsentrasi  150,  200, 250, 300 dan 350 ppm diperoleh nilai IC50 sebesar 262,882 ppm yang masuk dalam kategori sedang,  pada  fraksi  umbi  bengkuang  dengan  variasi  konsentrasi  10,  20,  30,  40  dan  50  ppm diperoleh nilai IC50 sebesar 43,148 yang masuk dalam kategori kuat, sesangkan pada kontrol positif asam kojak, dengan variasi konsentrasi 10, 20, 30, 40 dan 50 ppm diperoleh nilai IC50 sebesar  13,688  yang  masuk  dalam  kategori  kuat.  Pada  pengujian  inhibitor  enzim  tirosinase kombinasi  ekstrak  bunga  mawar  dengan  fraksi  umbi  bengkuang,  dengan  perbandingan  1:1; 1:2; 2:1; 1:3; dan 3:1 dengan masing-masing variasi konsentrasi 20, 40, 60, 80 dan 100 ppm secara  berat  per  berat,  diperoleh  nilai  IC50  berturut-turut  sebesar  26,598  ppm,  23,348  ppm, 29,880  ppm,  20,305  ppm  dan  34,742  ppm,  yang  menunjukkan  kekuatan  inhibitor  enzim tirosinase  dalam  semua  variasi  kombinasi  termasuk  dalam  kategori  kuat.  Pada  pengujian potensi  aktivitas  inhibitor  enzim  tirosinase  menggunakan  uji  hipotesis  independent  t  test diperoleh  nilai  kombinasi  1:3  yang  dibandingkan  dengan  asam  kojak  memiliki  nilai  sig.  (2- tailed),  sebesar  0,256  yang  melebihi  nilai  >0,05,  sehingga  sampel  kombinasi  ekstrak  bunga mawar dengan fraksi umbi bengkuang memiliki potensi yang mirip.
Implikasi  atau  dampak  yang  diharapkan  dari  penelitian  ini  adalah  agar  mendorong motivasi  penelitian  selanjutnya,  khususnya  pada  pembuatan  produk  bahan  alam  terbaru terutama  dalam  hal-hal  yang  berhubungan  dengan  inhibitor  tirosinase  agar  meningkatkan minat produsen kosmetik untuk menggunakan bahan-bahan dari alam

## METODE PENELITIAN
Metode  penelitian  ini  diawali  dengan  ekstraksi  bunga  mawar  ( Rosa  damascena  mill ) dan  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus ),  lalu  dilanjutkan  dengan  penentuan  rendemen. Selanjutnya penentuan metabolit  sekunder ekstrak bunga mawar ( Rosa  damascena mill ) dan fraksi  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus )  menggunakan  reagen  tertentu.  Proses selanjutnya  pengujian  aktivitas  inhibitor  tirosinase  masing-masing  ekstrak,  yaitu  ekstrak bunga  mawar  ( Rosa  damascena  mill )  dan  fraksi  umbi  bengkuang  ( Pachyrhizus  erosus ). Proses  pengujian  dilakukan  dari  berbagai  konsentrasi,  sehingga  akan  diketahui  konsentrasi
terbaik  penghambatan  tirosinase.  Proses  selanjutnya  pengujian  aktivitas  inhibitor  tirosinase dengan  kombinasi  kedua  ekstrak,  konsentrasinya  ditentukan  dari  hasil  konsentrasi  terbaik masing-masing  ekstrak.  Sehingga  dapat  ditentukan  perbandingan  yang  akan  digunakan. Pengujian  ini  menggunakan  asam  kojak  sebagai  pembanding.  Setelah  dilakukan  penentuan konsentrasi  dan  perbandingan  kedua  ekstrak,  langkah  selanjutnya  identifikasi  penghambatan tirosinase  pada  instrumen  ELISA.  Sehingga  didapatkan  nilai  absorbansi  yang  akan dikalkulasikan  dengan  %  penghambatan  tirosinase  dan  IC50,  lalu  diperoleh  hasil  terbaik inhibitor  tirosinase.  Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimental  kuantitatif  dengan pengamatan terhadap aktivitas inhibitor enzim tirosinase dan didukung dengan peralatan atau instrumen laboratorium

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  terdapat  perbedaan  proses  dalam  pemerolehan  metabolit  sekunder  pada bunga  mawar  dan  umbi  bengkuang.  Ekstraksi  pada  bunga  mawar  dilakukan  dengan  metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  70%.  Etanol  dipilih  karena  merupakan  pelarut  yang bersifat  polar,  sehingga  dapat  melarutkan  senyawa  polar.  Selain  itu  etanol  juga  merupakan pelarut  yang  aman,  tidak  mudah  terbakar,  bersifat  inert,  aman  dikonsumsi  manusia  sebagai pelarut  bahan  alami  baik  untuk  keperluan  pangan  maupun  pengobatan  alami  (Sinambela, 2003).  Etanol  digunakan  untuk  mengekstraksi  senyawa  turunan  fenolik  dari  bahan  alami dengan  hasil  yang  baik.  Pelarut  etanol  dengan  polaritas  tinggi,  seperti  etanol  70%  memiliki kemampuan  mengekstrak  golongan  senyawa  dengan  polaritas  yang  lebih  luas.  Hal  ini  dapat memungkinkan  senyawa  polar  non-fenolik  seperti  karbohidrat  dan  protein  dapat  terlarut selama  proses  ekstraksi,  sehingga  menghasilkan  peningkatan  hasil  ekstraksi  (Do,  Strathe, Ostersen, Pant, & Kadarmideen, 2014).
Senyawa-senyawa  fenolik  seperti  flavonoid  terekstrak  lebih  baik  dengan  etanol  70% dibandingkan  etanol  50%  dan  96%,  sehingga  dapat  meningkatkan  hasil  dari  rendemen.  Hal tersebut serupa dengan penelitian yang dilakukan oleh Nugraheni dkk, pada tahun 2021, pada bunga  mawar  yang  cenderung  memiliki  nilai  rendemen  yang  lebih  tinggi  bila  diekstraksi dengan  pelarut  etanol  70%  dibandingkan  dengan  konsentrasi  etanol  50%  dan  96%,  hal tersebut  serupa  dengan  penelitian  Wu et  al ,  pada  tahun  2022  bahwa  kandungan  flavonoid paling  banyak  terekstraksi  menggunakan  etanol  70%.  Hal  ini  dikarenakan,  adanya  gugus hidroksil  pada  molekul  etanol  dan  air  yang  telah  tercampur  dalam  konsentrasi  etanol  70%. Gugus  hidroksil  pada  etanol  70%  akan  menyebabkan  terbentuknya  ikatan  hidrogen  dengan komponen zat aktif (Chayati, Hariati, Alimuddin, Taqwa, & Ilham, 2022).
Metode  pemerolehan  ekstrak  pada  penelitian  ini  menggunakan  metode  maserasi  pada mawar.  Maserasi  merupakan  salah  satu  jenis  proses  ekstraksi  padat  cair  yang  paling sederhana.  Metode maserasi adalah metode ekstraksi cara dingin dan metode ini yang paling sederhana  dimana  cairan  penyari  akan  menembus  dinding  sel  tanaman  dan  akan  masuk  ke rongga  sel  yang  mengandung  zat  aktif,  sehingga  zat  aktif  yang  merupakan  larutan  terpekat akan didesak keluar dari sel karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif yang didalam sel dengan yang diluar sel  (Wahyulianingsih, Handayani, & Malik, 2016).
Proses  maserasi  dilakukan  menggunakan  pelarut  etanol  70%  sebanyak  4  liter  dan dilakukan  perendaman  selama  72  jam  yang  dilakukan  pengadukan  setiap  12  jam,  hingga diperoleh  larutan  bening.  Semakin  banyak  pelarut  yang  digunakan  dalam  maserasi  akan semakin  besar  keterkaitan  senyawa  dalam  ekstrak.  Hal  ini  dikarenakan  semakin  tinggi  rasio pelarut,  semakin  besar  perbedaan  konsentrasi  antara  pelarut  dan  senyawa  dalam  sampel, akibatnya rendemen akan semakin meningkat  (Hasbullah & Nofriati, 2006). Proses maserasi dengan  waktu  yang  lama  dapat  meningkatkan  jumlah  senyawa  dalam  ekstrak,  karena  bahan dengan  pelarut  akan  terus  berinteraksi  hingga  mencapai  titik  jenuh  pelarut.  Namun,  waktu maserasi yang melewati waktu optimum (72 jam), dapat menyebabkan penurunan kandungan senyawa yang diekstrak, akibatnya meskipun waktu  maserasi  tetap dilanjutkan, pelarut  yang digunakan  dalam  bahan  sudah  tidak  maksimum.  Hal  ini  disebabkan  bahan  dan  pelarut  yang digunakan  memiliki  kemampuan  yang  terbatas  dalam  menarik  kandungan  senyawa  (Subakti & Prasetya, 2021; Yulianti, Djatmika, & Santoso, 2016).
Ekstraksi terhadap umbi bengkuang berbeda dengan ekstraksi yang dilakukan terhadap bunga  mawar  pada  penelitian  ini.  Umbi  bengkuang  diekstraksi  menggunakan  metode sokletasi  hingga  dilanjutkan  ke  tahap  fraksinasi  cair-cair.  Proses  sokletasi  menggunakan pelarut petroleum eter yang dilanjutkan dengan metanol, fraksinasi cair-cair menggunakan etil asetat  dan  aquades.  Penggunaan  petroleum  eter  karena  sifatnya  non-polar  yang  dapat melarutkan  senyawa-senyawa  yang  mempunyai  tingkat  kepolaran  yang  rendah.  Petroleum eter  juga  dilaporkan  memiliki  selektivitas  yang  tinggi,  yang  mana  dapat  mengekstraksi komponen-komponen  tertentu  dari  campuran  dengan  tingkat  keberhasilan  yang  tinggi dibandingkan  dengan  pelarut  non-polar  lainnya  (Andriana  &  Broto,  2023).  Petroleum  eter dapat melarutkan senyawa-senyawa yang bersifat kurang polar pada selubung sel dan dinding sel  seperti,  lemak-lemak  hingga  klorofil  (Lifton,  2007).  Petroleum  eter  juga  cepat  menguap dengan  titik  didih  30-70 o C  sehingga  dapat  mempercepat  waktu  ekstraksi  (Malasari, Sutamihardja,  &  Syawaalz,  2017).  Pelarut  yang  digunakan  selanjutnya  adalah  metanol. Metanol  adalah  pelarut  yang  bersifat  semi-polar  yang  dapat  melarutkan  senyawa  polar maupun  non-polar.  Metanol  dapat  menarik  daidzein  yang  ada  pada  bengkuang,  yang dilaporkan memiliki sifat inhibitor enzim tirosinase (Lukitaningsih, 2014).
Fraksinasi cair-cair merupakan teknik untuk memisahkan senyawa berdasarkan tingkat kepolaran  berbeda  dalam  dua  pelarut  yang  memiliki  tingkat  kepolaran  yang  berbeda  pula. Fraksinasi  cair-cair  dilakukan  dengan  pengocokan  pada  corong  pemisah.  Prinsip  pemisahan proses  fraksinasi  didasarkan  pada  perbedaan  tingkat  kepolaran  dan  perbedaan  bobot  jenis antara  dua  fraksi  Etil  asetat  yang  digunakan  dalam  fraksinasi  memiliki  sifat  semi-polar  dan diharapkan mampu menyari daidzein  (Pratiwi, Nuryanti, Fera, Warsinah,  &  Sholihat, 2016). Daidzein  adalah  senyawa  aglikon  isoflavon  yang  telah  dilaporkan  dan  diteliti  memiliki aktivitas  inhibitor  enzim  tyrosinase  (Lukitaningsih,  2014;  Ningsih,  Wardhani,  Nuryuanda, Puspitasari,  &  Hidayat,  2022).  Aglikon  dari  isoflavon,  atau  daidzein  dapat  diekstrak menggunakan pelarut semi polar (Herbert, 1995).
Hasil  rendemen  dari  suatu  sampel  diperlukan  untuk  mengetahui  seberapa  banyak ekstrak  yang  diperoleh  saat  ekstraksi.  Hasil  rendemen  juga  dapat  berhubungan  dengan senyawa  aktif  dari  suatu  sampel.  Apabila  nilai  rendemen  tinggi  maka  senyawa  aktif  yang
terkandung  dalam  ekstrak  juga  tinggi  (Hasnaeni  &  Wisdawati,  2019).  Rendemen  yang dikatakan  baik  jika  nilainya  lebih  dari  10%  (Wardaningrum,  dkk.,  2019).  Rendemen  bunga mawar 15,17% dan fraksi umbi bengkuang 12,5%. Perbedaan jumlah rendemen dari ekstrak kasar  dan  fraksinya  disebabkan  oleh  perbedaan  kandungan  dan  komposisi  kimia  senyawa yang terlarut.  Berdasarkan prinsip like dissolves like , senyawa bersifat  polar cenderung larut dalam  pelarut  polar  dan  sebaliknya  senyawa  non  polar  akan  larut  dalam  pelarut  non  polar (Cikita et al ., 2016 ).
Berdasarkan  hasil  penyarian  sampel  yang  telah  didapatkan  dan  diolah,  maka  dapat disimpulkan  bahwa  nilai  rendemen  ekstrak  bunga  mawar  ( Rosa  damascena  mill )  sebesar 15,17% dan rendemen fraksi umbi bengkuang ( Pachyrhizus erosus ) sebesar 12,5%. Saran dari penelitian  ini  adalah  perlunya  dilakukan  pengolahan  kembali  terhadap  ekstraksi  senyawa bunga  mawar  dan  fraksi  umbi  bengkuang  dengan  sampel  yang  banyak  untuk  memperoleh hasil yang lebih tinggi.
Uji Skrining Fitokimia Metabolit Sekunder
Tabel 1 Identifikasi Metabolit Sekunder No Golongan Metabolit Sekunder Ekstrak bunga mawar (Rosa damascena mill) Fraksi umbi bengkuang (Pachyrhizus erosus) 1 Alkaloid + + 2 Flavonoid + + 3 Kuinon + - 4 Saponin - + 5 Fenol + + 6 Steroid - + 7 Terpenoid - -
Ket : (+) mengandung metabolit sekunder, (-) tidak mengandung metabolit sekunder

## Proses Analisis Data Setiap Tujuan Khusus
Data  dalam  Tabel  1  analisis  data  yang  dilakukan  dengan  cara  menggunakan  analisis visual  dengan  melihat  perubahan  warna  dan  pembentukan  endapan  melalui  penambahan reagen-reagen  tertentu.  Reagen  yang  digunakan  dalam  pengujian  alkaloid  menggunakan Mayer dan  Dragendorf,  flavonoid  menggunakan  Mg dan  HCl, kuinon  menggunakan  NaOH, saponin  menggunakan  air  panas  dengan  HCl,  fenol  menggunakan  FeCl  5%  dan  steroid  atau terpenoid menggunakan Liebermen Bouchardad.

## Pembahasan Hasil Penelitian Setiap Tujuan Khusus
Pengujian  uji  skrining  metabolit  sekunder  merupakan  suatu  metode  yang dilakukan untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  kimia  yang  terkandung  dalam  ekstrak tanaman.  Skrining  fitokimia  dilakukan  dengan  menggunakan  reagen  pendeteksi  golongan senyawa seperti flavonoid, alkaloid, tanin, saponin, terpenoid, dan lain-lain (Putri dkk. 2013). Ekstrak dan fraksi yang mengandung alkaloid, flavonoid dan senyawa dengan gugus fenolik (alkaloid, flavonoid, kuinon, saponin, glikon dan aglikon dari isoflavon) dilaporkan memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase (Montes & Wilkomirsky, 1980 ; Munoz et al ., 2001).
Pengujian  alkaloid  dilakukan  dengan  tiga  pereaksi,  yaitu  mayer,  dragendorff  dan bouchardat. Hasil positif pada mayer ditandai dengan terbentuknya endapan putih atau lapisan putih,  senyawa  alkaloid  dapat  berinteraksi  dengan  ion  tetraiodomerkurat  (II)  sehingga membentuk senyawa kompleks dan mengendap. Hal ini dikarenakan ion merkuri merupakan ion  logam  berat  yang  mampu  mengendapkan  senyawa  alkaloid  yang  bersifat  basa.  Pada dragendorf,  senyawa  alkaloid  dapat  membentuk  endapan  coklat,  hingga  oranye  karena berinteraksi  pada  ion  tetraiodobismutat  (III).  Hasil  positif  pada  bouchardad  jika  terbentuk endapan coklat karena terjadi ikatan kovalen koordinasi antara ion logam K+ dengan alkaloid sehingga  terbentuk  kompleks  kalium  dengan  alkaloid  yang  dapat  mengedap  (Sulistyarini, dkk., 2020).
Pengujian  flavonoid  menggunakan  Mg  dan  HCl  pekat.  Senyawa  flavonoid  dapat tereduksi  dengan  Mg  dan  HCl  sehingga  menghasilkan  warna  merah,  kuning,  jingga, sedangkan  pada  kuinon  hasil  positif  menunjukkan  perubahan  warna  merah  yang menggunakan  pereaksi  NaOH  1  N  yang  berfungsi  mendeprotonasi  gugus  fenol  pada  kuinon sehingga  terbentuk  ion  fenolat  yang  menyerap  cahaya  dan  menimbulkan  warna  merah (Harborne, 1987).
Pengujian  saponin  positif  jika  terbentuk  busa.  Penambahan  HCl  pada  pengujian  ini dapat  membuat  busa  akan  lebih  mantap  terbentuk  dan  stabil.  Busa  yang  timbul  diakibatkan karena senyawa saponin mengandung senyawa yang sebagian larut dalam air (hidrofilik) dan senyawa  yang  larut  dalam  pelarut  nonpolar  (hidrofobik)  sebagai  surfaktan  yang  dapat menurunkan  tegangan  permukaan.  Saat  akan  digojok,  gugus  hidrofil  akan  berikatan  dengan air  sedangkan  gugus  hidrofobik  akan  berikatan  dengan  udara  sehingga  membentuk  buih (Sulistyarini, dkk., 2020).
Pengujian  fenolik  akan  terbentuk  warna  hijau,  hijau  kehitaman  atau  biru  kuat  jika sampel  diberikan  FeCl  5%.  Perubahan  warna  disebabkan  karena  reaksi  FeCl  dengan  salah satu  gugus  hidroksil  yang  mengandung  tannin  yang  merupakan  polifenol.  Perubahan  yang disebabkan  FeCl  akan  menunjukkan  adanya  tannin  yang  terkondensasi  (Manongko,  dkk., 2020).
Pengujian  steroid  atau  terpenoid  dilakukan  dengan  pereaksi  liebermen-bouchardad, yang menghasilkan terpenoid jika terbentuk warna merah atau ungu. Sedangkan pada steroid hasil  positif  dihasilkan  bila  muncul  warna  hijau.  Liebermen  bouchardad  berisi  asam  asetat anhidrat dengan H 2 SO 4. Perubahan warna terbentuk karena terjadinya oksidasi pada senyawa steroid/terpenoid  melalui  pembentukan  ikatan  rangkap  terkonjugasi.  Reaksi  yang  terjadi adalah  ketika  steroid  dengan  asam  asetat  anhidrat  terjadi  asetilasi  pada  gugus  OH - (Sulistyarini, dkk., 2020).
Berdasarkan hasil uji fitokimia metabolit sekunder bunga mawar menghasilkan adanya metabolit  sekunder  jenis  alkaloid,  flavonoid,  kuinon  dan  fenol,  hasil  tersebut  serupa  dengan penelitian  Simatupang et  al (2021),  yang  menyatakan  bahwa  bahwa  bunga  mawar mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid  dan  senyawa  fenol  lainnya.  Kandungan  flavonoid pada  bunga  mawar  dilaporkan  memiliki  sejumlah  manfaat  dan  aktivitas  farmakologi,  salah satunya, adalah aktivitas penghambat enzim tirosinase (Solimine et al ., 2015), sebagai sumber antioksidan alami (Baydar & Hasan, 2013), dan aktivitas antibakteri (Windi, 2014). Alkaloid
dilaporkan memiliki aktivitas farmakologi berupa pelindung dari radiasi UV, antioksidan dan aktivitas  antibakteri.  Sedangkan  senyawa  fenol  merupakan  gugus  yang  dimiliki  metabolit- metabolit  sekunder  seperti  flavonoid,  alkaloid,  kuinon  dan  lainnya  (Dai  &  Mumper,  2010). Senyawa-senyawa  fenolik  pada  bunga  mawar  dilaporkan  memiliki  sejumlah  aktivitas farmakologi,  diantaranya,  penghambatan  terhadap  enzim,  efek  antioksidan  dan  efek antiinflamasi pasca paparan sinar UV (Bella, 2016).
Berdasarkan  hasil  uji  fitokimia  metabolit  sekunder  fraksi  etil  asetat  umbi  bengkuang menghasilkan  adanya  metabolit  sekunder  jenis  alkaloid,  flavonoid,  fenol  dan  steroid.  Hasil tersebut serupa dengan penelitian yang dilakukan oleh Chandra dkk, (2023), yang melaporkan hasil  positif  pada  alkaloid,  flavonoid,  fenol,  saponin  dan  steroid.  Umbi  bengkuang  telah diteliti terhadap aktivitas antioksidan, dan memiliki aktivitas antioksidan yang kuat. Senyawa- senyawa  yang  dilaporkan  memiliki  aktivitas  antioksidan  tersebut,  yaitu  flavonoid  dan saponin.  Umbi  bengkuang  juga  dilaporkan  memiliki  kandungan  saponin  yang  dapat menghambat  pembentukan  dari  melanin  (Rukmana  &  Yudirachman,  2014  ;  Asben,  dkk., 2018).  Kandungan  saponin  pada  umbi  bengkuang  dilaporkan  merupakan  tabir  surya  alami dalam  mencegah  kerusakan  kulit  akibat  paparan  radikal  bebas  akibat  penyerapan  sinar  ultra violet  (Sandler,  2005).  Bengkuang  mengandung  86-90%  air  dan  senyawa  fenolik (Lukitaningsih,  2009).  Senyawa  fenolik  dapat  digunakan  sebagai  agen  depigmentasi,  karena struktur kimia yang mirip dengan tirosin (Wang et al ., 2006).
Berdasarkan hasil dari pengujian metabolit sekunder yang dilakukan terhadap ekstrak bunga  mawar  dan  fraksi  umbi  bengkuang,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa  bunga  mawar positif  memiliki  kandungan  metabolit  sekunder  alkaloid,  flavonoid,  kuinon  dan  fenol, sedangkan  pada  fraksi  umbi  bengkuang  positif  memiliki  metabolit  sekunder  alkaloid, flavonoid, saponin, fenol dan steroid.
Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Ekstrak Bunga Mawar (Rosa damascena mill), Fraksi Umbi Bengkuang (Pachyrhizus erosus) dan Asam Kojak
Tabel 2 Pengujian Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Ekstrak Bunga Mawar
Konsentrasi (ppm)  Ln Konsentrasi  Absorbansi  % Inhibisi  IC 50 Blanko - 0,337 - 262,882 Dapar fosfat - 0,066 - 350 5,857 0,143 57% 300 5,703 0,155 54% 250 5,521 0,183 45% 200 5,298 0,189 44% 150 5,010 0,209 37%
Tabel 3 Pengujian Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Fraksi Umbi Bengkuang Konsentrasi (ppm)  Ln Konsentrasi  Absorbansi  % Inhibisi  IC 50 Blanko - 0,380 - 43,148 Dapar fosfat - 0,022 - 50 3,912 0,185 51% 40 3,688 0,192 49% 30 3,401 0,202 46% 20 2,995 0,216 43% 10 2,302 0,231 39% Tabel 4 Pengujian Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Asam Kojak Konsentrasi (ppm)  Ln Konsentrasi  Absorbansi  % Inhibisi  IC 50 Blanko - 0,380 - 13,688 Dapar fosfat - 0,022 - 50 3,912 0,065 82% 40 3,688 0,091 75% 30 3,401 0,132 65% 20 2,995 0,143 62% 10 2,302 0,221 41%
Gambar 2 Grafik Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Bunga Mawar

## Gambar 3 Grafik Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Umbi Bengkuang

## Gambar 4 Grafik Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Asam Kojak
Pengujian aktivitas inhibitor enzim tirosinase ekstrak bunga mawar dilakukan dengan menggunakan seri konsentrasi 150, 200, 250, 300 dan 350 ppm. Sedangkan, untuk pengujian aktivitas inhibitor enzim tirosinase fraksi umbi bengkuang menggunakan seri konsentrasi 10, 20, 30, 40 dan 50 ppm. Sampel yang diuji diinkubasi selama 40 menit dalam suhu ruang. Hal ini dilakukan agar enzim tirosinase dapat bereaksi dengan sampel maupun substrat L-tirosin. Jika  sampel  dapat  menduduki  atau  menginhibisi  enzim  tirosinase,  maka  larutan  campuran tidak akan menampakkan warna atau bening. Jika enzim tirosinase dapat berinteraksi dengan substrat  L-tirosin  maka  campuran  larutan  dapat  berubah  warna  menjadi  kecoklatan  atau keunguan,  atau  dapat  disebut  terbentuknya  dopakrom  (Sagala  &  Telaumbanua,  2020). Pengujian  ini  menggunakan  microplate  reader  karena  relatif  sederhana  dan  memiliki sensitivitas  yang  cukup  tinggi  dengan  sampel  yang  sedikit.  Pemilihan  substrat  L-tirosin karena  enzim  tirosinase  dapat  mengkatalis  tirosin  menjadi  dopakrom  yang  menghasilkan warna  coklat  (Rina,  dkk.,  2020  ;  Zolghadri et  al .,  2019).  Dari  hasil  yang  diperoleh  dapat diketahui  bahwa  nilai  %  inhibisi  berbanding  lurus,  namun  berbanding  terbalik  dengan  nilai absorbansinya. Hal tersebut dikarenakan semakin tinggi konsentrasi sampel yang digunakan, maka  semakin  besar  juga  sampel  dapat  menghambat  enzim,  sehingga  nilai  absorbansi  akan
semakin kecil, dan nilai absorbansi yang tinggi dapat dikatakan bahwa enzim tirosinase telah bereaksi dengan tirosin membentuk dopakrom (Furi et al., 2022).
Penggunaan  kontrol  positif  atau  pembanding,  yaitu  asam  kojak  karena  merupakan inhibitor enzim tirosinase yang sangat baik, dengan menginhibisi sisi enzim tirosinase secara kompetitif  dan  membentuk  kelat  tembaga  pada  sisi  aktif  enzim  (Chang,  2009).  Asam  kojak mengkelat ion logam transisi, seperti Fe 2+ dan Cu 2+ . Dengan kemampuan tersebut, asam kojak dapat  menghambat  enzim  tirosinase  dengan  berikatan  atau  mengkelat  sisi  aktif  enzim tirosinase  yang  terdapat  ion  Cu 2+ ,  sehingga  menghalangi  kedudukan  tirosin  (Burdock et  al ., 2001).  Dalam  sebagian  besar  penelitian  yang  dilakukan  untuk  menemukan  inhibitor  enzim tirosinase  yang  baru,  inhibitor  tirosinase  yang  terkenal  seperti  asam  kojak  sering  digunakan sebagai  standar  positif  (Chang,  2009).  Asam  kojak  sangat  disarankan  sebagai  pembanding karena kekuatan inhibisi tirosinase yang baik, dan dengan kestabilan yang tinggi (Kurniasari, 2018).
Berdasarkan nilai  IC 50 yang mana menunjukkan  besarnya konsentrasi  bahan uji yang dapat menginhibisi aktivitas enzim tirosinase sebesar 50%. Nilai IC 50 dibawah nilai 100 ppm menunjukkan  potensi  penghambatan  enzim  tirosinase  yang  paling  kuat,  nilai  IC 50 100-450 menunjukkan  potensi  inhibitor  enzim  tirosinase  yang  sedang,  nilai  450-700  ppm menunjukkan  potensi  aktivitas  inhibitor  enzim  tirosinase  yang  lemah,  nilai  >700  ppm menunjukkan  tidak  adanya  aktivitas  (Furi  et  al.,  2022).  Semakin  kecil  nilai  IC 50 yang diperoleh, maka semakin kuat aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang dimiliki.
Penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  Lukitaningsih  dan  Holzgrabe,  (2014), diperoleh nilai IC 50 pada fraksi umbi bengkuang sebesar 158,13 ppm yang termasuk kategori yang  sedang,  sedangkan  pada  empat  senyawa  yang  diisolasi  dari  fraksi  etil  asetat  umbi bengkuang, yaitu 8,9-Furanyl-pterocarpan3-ol, daidzein, Daidzein-7-O-ß-glucopyranose dan 5-Hydroxy-daidzein-7-O-ßglucopyranose memiliki  nilai  IC 50 berturut-turut  sebesar  22,20 ppm,  7,19  ppm,  5,35  ppm  dan  4,38  ppm  yang  merukapan  kategori  kuat.  Penelitian  tersebut menggunakan L-Dopa sebagai  susbtrat  dan menggunakan konsentrasi  dan metode penelitian yang berbeda.
Penelitian  mengenai  ekstrak  bunga  mawar  yang  diteliti  oleh  Husna,  (2019), melaporkan bahwa ekstrak bunga mawar memiliki nilai IC 50 antioksidan sebesar 39,810 ppm yang  merupakan  kategori  kuat,  sedangkan  pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Baydar  dan Hasan,  (2013),  ekstrak  bunga  mawar  melaporkan  memiliki  nilai  IC50  antioksidan  sebesar 75,51 yang merupakan kategori kuat.
Antioksidan  berkaitan  dengan  aktivitas  enzim  tirosinase.  Kerja  enzim  tirosinase tergantung  pada  intensitas  sinar  UV  yang  masuk.  Semakin  banyak    paparan  sinar  UV  terus menerus  mengenai  kulit,  semakin  besar  juga  kemampuan  dan  intensitas  enzim  tirosinase dalam memproduksi melanin  dengan pigmen coklat, dalam proses pembentukan melanin  ini terdapat beberapa proses, salah satunya proses oksidasi, antioksidan dapat menangkap radikal bebas  dan  dapat  menghentikan  reaksi  oksidasi  pada  enzim  tirosinase  (Andriana  &  Broto, 2023; Elisabet Yunaeti Anggraeni, 2017; Fitriani, 2015; Nugrahaeni, 2020).
Berdasarkan  pengujian  yang  telah  dilakukan  maka  didapatkan  nilai  IC 50 inhibitor enzim  tirosinase  ekstrak  bunga  mawar  sebesar  262,882  ppm  yang  masuk  dalam  kategori
sedang,  nilai  %inhibisi  yang  didapatkan  dari  seri  konsentrasi  150  ppm,  200  ppm,  250  ppm, 300  ppm  dan  350  ppm  berturut-turut  sebesar  37%,  44%,  45%,  54%  dan  57%.  Sedangkan, pada fraksi etil asetat umbi bengkuang didapatkan nilai IC 50 inhibitor enzim tirosinase sebesar 43,148  ppm,  yang  masuk  dalam  kategori  kuat,  nilai  %inhibisi  yang  didapatkan  dari  seri konsentrasi 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm dan 50 ppm berturut-turut sebesar 39%, 43%, 46%,  49%  dan  51%.  Kontrol  positif  atau  kontrol  pembanding  yang  dilakukan  dengan  asam kojak  menyatakan  hasil  IC 50 inhibitor  enzim  tirosinase  berada  pada  nilai  13,688  ppm  yang masuk dalam kategori kuat, nilai %inhibisi yang didapatkan dari seri konsentrasi 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm dan 50 ppm berturut-turut sebesar 41%, 62%, 65%, 75% dan 82%.
Efek  inhibisi  enzim  tirosinase  ini  dapat  disebabkan  oleh  adanya  senyawa  alam  yang memiliki  kemampuan  dalam  menghambat  enzim  tirosinase,  salah  satunya  ialah  senyawa flavonoid  dan  senyawa  lain  dengan  gugus  fenolik.  Kemampuan  senyawa  flavonoid  dalam dipegmentasi  kulit  dengan  cara  menghambat  secara  langsung  aktivitas  enzim  tirosinase. Senyawa  flavonoid  dapat  menghambat  enzim  tirosinase  dengan  mekanisme  inhibitor kompetitif  yang  dapat  meniru  substrat  tirosinase  dengan  cara  mengkelat  sisi  aktif  enzim tirosinase  (Kim  &  Uyama,  2005).  Sedangkan  senyawa  lain  dengan  gugus  fenol,  seperti alkaloid, kuinon dan steroid juga memiliki kemampuan mengkelat sisi tembaga Cu 2+ atau Fe 2+ yang  merupakan  sisi  aktif  pada  enzim  tirosinase  yang  mana  sebagai  kofaktor  dalam membantu  enzim  tirosinase  berikatan  dengan  substrat.  Hilangnya  kofaktor  enzim mengarahkan hilangnya kemampuan enzim tirosinase berikatan dengan substratnya sehingga tidak terbentuk melanin (Furi et al., 2022; Rina Mustika, Hindun, & Auliasari, 2020).
Jumlah  gugus  hidroksil  juga  berperan  penting  dalam  proses  penghambatan  enzim tirosinase,  struktur  kimia,  jumlah,  posisi  gugus  hidroksi  dan  metil  pada  cincin  juga  dapat berpengaruh  pada  penghambatan  enzim  tirosinase.  Semakin  banyak  gugus  hidroksil  yang tersubtitusi dalam molekul, maka kemampuan penangkapan radikal bebas juga semakin kuat pada  aktivitas  antioksidan  terhadap  penghambatan  enzim  tirosinase  karena  semakin  banyak atom hidrogen yang dapat  didonorkan pada radikal  bebas  (Dea Mustika &  Ain, 2020). Oleh sebab  itu,  hasil  aktivitas  inhibitor  enzim  tirosinase  pada  umbi  bengkuang  lebih  kuat dibandingkan ekstrak bunga mawar. Berdasarkan hasil uji fitokimia metabolit sekunder yang dilakukan, fraksi umbi bengkuang memiliki keunggulan dalam banyaknya jenis senyawa yang diperoleh,  yaitu  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  fenol  hingga  steroid,  dibandingkan  dengan bunga mawar yang positif terhadap alkaloid, flavonoid, kuinon dan fenolik.
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh,  Muhtadi,  (2019)  menyatakan  bahwa turunan  flavonoid,  yaitu  sisi  glikon  dan  aglikon  isoflavon,  yang  berupa  daidzein  dapat menghambat  sisi  aktif  enzim  tirosinase,  yaitu  Cu 2+ secara  irreversible.  Hal  tersebut dibenarkan  dengan  pengujian  in  silico  yang  dilakukan  oleh  penelitian  Lukitaningsih  dkk., (2015),  yang  melakukan  docking  dengan  sisi  aktif  enzim  tirosinase Aspergillus  oryzae (TyrAo). Sisi aktif enzim yang dilakukan docking adalah pada bagian Cu 2+ . Nilai score pada in  silico  dinyatakan  sebagai energy  based  score yang  mana  semakin  rendah  nilainya menandakan  semakin  stabil  interaksi  ligan  dengan  reseptor,  sehingga  afinitas  ligan  dengan reseptor  dikatakan  semakin  kuat.  Interaksi  yang  terjadi  antara  sisi  aktif  enzim  dan  senyawa aktif  umbi  bengkuang,  yaitu  ikatan  logam,  hydrogen  dan  hidrofobik.  Sedangkan  nilai  score
pada  percobaan  tersebut  bernilai  -0,8366,  yang  merupakan  korelasi  yang  baik  (Buda  & Jarynowski,  2010;  Miller,  Kim,  &  Roberts,  2010).  Hasil  tersebut  menandakan  bahwa penelitian  secara  in  vitro  memberikan  korelasi  yang  baik  dan  sesuai  dengan  penelitian  in silico  pada  percobaan  uji  aktivitas  inhibitor  enzim  tirosinase  dengan  umbi  bengkuang, sehingga  akan  memiliki  hasil  yang  serupa  (Lukitaningsih,  2014).  Dengan  hasil  penelitian tersebut, maka dapat dikatakan umbi bengkuang memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang  lebih  kuat  dibandingkan  dengan  ekstrak  bunga  mawar.  Selain  itu,  menurut  (Dhita Wahyu Anggraeni, Mustika, Widyastuti, & Devi, 2020), perbedaan terhadap wilayah tumbuh mengakibatkan  kandungan  senyawa  serta  aktivitas  farmakologi  yang  berbeda.  Oleh  karena itu, aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang peneliti peroleh dapat berbeda dengan penelitian- penelitian sebelumnya. Hal ini dapat disebabkan adanya perbedaan jumlah senyawa metabolit sekunder dari sampel yang di uj i.
Uji  Aktivitas  Inhibitor  Enzim  Tirosinase  Kombinasi  Ekstrak  Bunga  Mawar  (Rosa damascena mill) dengan Fraksi Umbi Bengkuang (Pachyrhizus erosus)
Tabel 7 Pengujian Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Kombinasi Ekstrak Bunga Mawar : Umbi Bengkuang (1:1)
Konsentrasi (ppm)  Ln Konsentrasi  Absorbansi  % Inhibisi  IC 50 Blanko - 0,337 - 26,598 Dapar fosfat - 0,066 - 100 4,605170186 0,026 92% 80 4,382026635 0,064 80% 60 4,094344562 0,086 74% 40 3,688879454 0,149 55% 20 2,995732274 0,185 45%
Tabel 8  Pengujian Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Kombinasi Ekstrak Bunga
Mawar : Umbi Bengkuang (1:2) Konsentrasi (ppm) Ln Konsentrasi Absorbansi % Inhibisi IC 50 Blanko - 0,337 - 23,348 Dapar fosfat - 0,066 - 100 4,605170186 0,014 95% 80 4,382026635 0,057 82% 60 4,094344562 0,078 76% 40 3,688879454 0,139 58% 20 2,995732274 0,170 49%
Tabel 9  Pengujian Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Kombinasi Ekstrak Bunga
Mawar : Umbi Bengkuang (2:1) Konsentrasi (ppm) Ln Konsentrasi Absorbansi % Inhibisi IC 50
Blanko - 0,337 - 29,880 Dapar fosfat - 0,066 - 100 4,605170186 0,018 94% 80 4,382026635 0,044 86% 60 4,094344562 0,080 76% 40 3,688879454 0,144 57% 20 2,995732274 0,213 36%

## KESIMPULAN
Implikasi  pada  penelitian  yang  telah  dilakukan  yaitu,  penelitian  ini  dapat  digunakan sebagai  bahan  informasi,  bahwa  ekstrak  bunga  mawar,  fraksi  umbi  bengkuang  dan kombinasinya memiliki potensi dalam inhibitor enzim tirosinase. Kita ketahui bahwa inhibitor enzim  tirosinase  dari  luar  atau  alam  sangat  bermanfaat  bagi  tubuh  dalam  proses  membantu melawan hiperpigmentasi akibat sinar UV yang merugikan. Sehingga, diharapkan masyarakat dapat membudidayakan tanaman bunga mawar dan umbi bengkuang.
Selain  itu,  implikasi  dari  penelitian  ini  terhadap  ilmu  pengetahuan  secara  umum adalah  dapat  digunakan  sebagai  bahan  informasi  bahwa  kombinasi  ekstrak  bunga  mawar dengan fraksi umbi bengkuang memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang kuat, hal ini dapat  digunakan  sebagai  acuan  dalam  pengembangan  formulasi  sediaan  farmasi  khususnya kosmetik  dengan  menggunakan  konsentrasi  perbandingan  terbaik  dari  kombinasi  ekstrak bunga mawar dengan fraksi  umbi bengkuang. Oleh sebab itu, diharapkan kombinasi  ekstrak bunga  mawar  dengan  fraksi  umbi  bengkuang  dapat  dimanfaatkan  sebagai  bahan  untuk formulasi  farmasi  yang  mengandung  senyawa  inhibitor  enzim  tirosinase  yang  berasal  dari alam, sehingga aman untuk digunakan dan mengurangi efek samping yang ditimbulkan.

## BIBLIOGRAFI
Andriana, Riski, & Broto, R. T. D. Wisnu. (2023). Optimization of Soxhlet Extraction Papaya Seed  Oil  (Carica  papaya  L.)  with  Petroleum  Ether. Journal  of  Vocational  Studies  on Applied Research , 5 (1), 17–22.
Anggraeni,  Dhita  Wahyu,  Mustika,  Suzzana  Winda  Artha,  Widyastuti,  Theresia,  &  Devi, Natalia  Regina.  (2020).  Pembekalan  Bagi  Anak  Para  Migran  Dari  Timor  Leste. Jurnal Abdimas Musi Charitas , 4 (1), 13–17. Anggraeni, Elisabet Yunaeti. (2017). Pengantar sistem informasi . Penerbit Andi.
Buda, Andrzej, & Jarynowski, Andrzej. (2010). Life time of correlations and its applications . Andrzej Buda Wydawnictwo NiezaleĹĽne.
Chang, Te Sheng. (2009). An updated  review of  tyrosinase inhibitors. International Journal of Molecular Sciences , 10 (6), 2440–2475.
Chayati, Nurul, Hariati, Feril, Alimuddin, Alimuddin, Taqwa, Fadhila Muhammad Libasut, & Ilham,  Muhammad.  (2022).  Perencanaan  Stabilitas  Lereng  Timbunan  untuk  Perbaikan Saluran  Irigasi  Sugih,  Desa  Cibedug,  Kecamatan  Ciawi,  Kab.  Bogor. Rona  Teknik Pertanian , 15 (1), 1–12.
Choiriyah,  Nurul  Azizah.  (2020).  Kandungan  antioksidan  pada  berbagai  bunga  edible  di Indonesia. AGRISAINTIFIKA: Jurnal Ilmu-Ilmu Pertanian , 4 (2), 136–143.
Do, Duy N., Strathe, Anders B., Ostersen, Tage,  Pant,  Sameer D., &  Kadarmideen, Haja N. (2014). Genome-wide association and pathway analysis of feed efficiency in pigs reveal candidate genes and pathways for residual feed intake. Frontiers in Genetics , 5 , 307.
Fitriani,  Furi  Kamalia.  (2015). Pengaruh  penyuluhan  media  lembar  balik  gizi  terhadap peningkatan  pengetahuan  ibu  balita  gizi  kurang  di  Puskesmas  Pamulang,  Tangerang Selatan Tahun 2015 .
Furi,  Mustika,  Alfatma,  Ainun,  Dona,  Rahma,  Fernando,  Armon,  Aryani,  Fina,  Utami, Rahayu,  Muharni,  Septi,  Suhery,  Wira  Noviana,  &  Octaviani,  Melzi.  (2022).  Uji Inhibitor Enzim Tirosinase Ekstrak dan Fraksi Daun Kedabu (Sonneratia ovata Backer) Secara In-Vitro. Jurnal Ilmiah Manuntung , 8 (2), 201–214.
Gazali,  Mohamad,  Zamani,  Neviaty  P.,  &  Batubara,  Irmanida.  (2014).  Potensi  limbah  kulit buah nyirih Xylocarpus granatum sebagai inhibitor tirosinase. Depik , 3 (3).
Hasbullah,  Rokhani,  &  Nofriati,  Desy.  (2006).  Kajian  Sistem  Pengemasan  Bunga  Mawar Potong  (Rosa  Hybrida)  Selama  Penyimpanan  untuk  Memperpanjang  Masa  Pajangan. Jurnal Keteknikan Pertanian , 20 (1).
Hidayat, Rahmat Nur. (2021). Bawang tiwai (Eleutherine americana) sebagai krim tabir surya mencegah melanogenesis. OISAA Journal of Indonesia Emas , 4 (2), 54–58.
Kim,  Y.  J.,  &  Uyama,  H.  (2005).  Tyrosinase  inhibitors  from  natural  and  synthetic  sources: structure,  inhibition  mechanism  and  perspective  for  the  future. Cellular  and  Molecular Life Sciences CMLS , 62 , 1707–1723.
Lukitaningsih,  Endang.  (2014).  Bioactive  compounds  in  bengkoang  (Pachyrhizus  erosus)  as antioxidant and tyrosinase inhibiting agents. Indonesian Journal of Pharmacy , 25 (2), 68. Malasari,  Nur,  Sutamihardja,  R.  T.  M.,  &  Syawaalz,  Amry.  (2017).  Uji  Sifat  Fisika-Kimia Dan Identifikasi Fenil Etil Alkohol Minyak Atsiri Bunga Mawar Hasil Ekstraksi Pelarut. Jurnal Sains Natural , 7 (2), 91–103. Miller, Terry, Kim, Anthony B., & Roberts, James. (2010). 2010 index of economic freedom . Wall Street Journal.
Muhtadi,  Burhanuddin.  (2019).  Politik  Uang  dan  New  Normal  dalam  Pemilu  Paska-Orde Baru. Jurnal Antikorupsi INTEGRITAS , 5 (1), 55–74.
Mukherjee,  Pulok  K.,  Biswas,  Rajarshi,  Sharma,  Akanksha,  Banerjee,  Subhodip,  Biswas, Sayan,  &  Katiyar,  C.  K.  (2018).  Validation  of  medicinal  herbs  for  anti-tyrosinase potential. Journal of Herbal Medicine , 14 , 1–16.
Mustika, Dea, & Ain, Siti Quratul. (2020). Peningkatan Kreativitas Mahasiswa Menggunakan Model  Project  Based  Learning  dalam  Pembuatan  Media  IPA  Berbentuk  Pop  Up  Book. Jurnal Basicedu , 4 (4), 1167–1175.
Mustika,  Rina,  Hindun,  Siti,  &  Auliasari,  Nurul.  (2020).  Potensi  tanaman  sebagai  pencerah wajah alami. Jurnal Sains Dan Kesehatan , 2 (4), 558–562.
Ningsih, Indah Yulia, Wardhani, Lisa Kusuma, Nuryuanda, Annisa Ragdha Eka, Puspitasari, Endah,  &  Hidayat,  Mochammad  Amrun.  (2022).  Genistein  Content  and  Tyrosinase Inhibitory Activity of Edamame (Glycine max) Extracts. Journal of Tropical Pharmacy and Chemistry , 6 (2), 92–100.
Nugrahaeni, Ardhina. (2020). Pengantar anatomi fisiologi manusia . Anak Hebat Indonesia. Pratiwi,  Hening,  Nuryanti,  Nuryanti,  Fera,  Vitis  Vini,  Warsinah,  Warsinah,  &  Sholihat,  Nia Kurnia.  (2016).  Pengaruh  edukasi  terhadap  pengetahuan,  sikap,  dan  kemampuan berkomunikasi atas informasi obat. Kartika: Jurnal Ilmiah Farmasi , 4 (1), 10–15.
RIPALDO,  FIRGANTA.  (2020).  Uji  Aktivitas  Inhibitor  Enzim  Tirosinase  Dan  Uji Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Buah  Harendong  (Melastoma  malabathricum  L.)  Secara  In Vitro. Indonesia Natural Research Pharmaceutical Journal , 5 (1), 341712.
Sengui,  M.,  Sener,  Derya,  &  Ercisli,  Sezai.  (2017).  The  determination  of  antioxidant capacities  and  chemical  properties  of  rosa  (Rosa  damascena  Mill.)  products. Acta Scientiarum Polonorum. Hortorum Cultus , 16 (4), 63–72.
Sinambela,  Elizar.  (2003). Pengaruh  Partisipasi  Dalam  Penyusunan  Anggaran  Terhadap Kinerja Manajerial . Universitas Sumatera Utara.
Subakti,  Hani,  &  Prasetya,  Kiftian  Hady.  (2021).  Analisis  pembelajaran  daring  bahasa Indonesia  melalui  pemberian  tugas  pada  siswa  kelas  tinggi  SDN  024  Samarinda  Utara. Jurnal Basataka (JBT) , 4 (1), 46–53.
Wahyulianingsih,  Wahyulianingsih,  Handayani,  Selpida,  &  Malik,  Abd.  (2016).  Penetapan kadar flavonoid total ekstrak daun cengkeh (Syzygium aromaticum (L.) Merr & Perry). Jurnal Fitofarmaka Indonesia , 3 (2), 188–193.
Wang,  Kuo  Hsien,  Lin,  Rong  Dih,  Hsu,  Feng  Lin,  Huang,  Yen  Hua,  Chang,  Hsien  Chang, Huang,  Ching  Yi,  &  Lee,  Mei  Hsien.  (2006).  Cosmetic  applications  of  selected traditional Chinese herbal medicines. Journal of Ethnopharmacology , 106 (3), 353–359. Westerhof, Wiete, & Kooyers, T. J. (2005). Hydroquinone and its analogues in dermatology– a potential health risk. Journal of Cosmetic Dermatology , 4 (2), 55–59. Yulianti, Silvy Dwi, Djatmika, Ery Tri, & Santoso, Anang. (2016). Pendidikan karakter kerja sama dalam pembelajaran siswa sekolah dasar pada kurikulum 2013. Jurnal Teori  Dan Praksis Pembelajaran IPS , 1 (1), 33–38.
Zawiślak,  Agnieszka,  &  Michalczyk,  Magdalena.  (2018).  Changes  in  quality  indicators  of minimally  processed  wrinkled  rose  (Rosa  rugosa  Thunb.)  petals  during  storage. Acta Scientiarum Polonorum. Hortorum Cultus , 17 (5), 167–178.

## Copyright holder:
Anas Dzikri Imanullah, Hajrah Hajrah, Vita Olivia Siregar (2024)
First publication right:

## Syntax Idea
This article is licensed under: