Toksisitas Ekstrak Kulit Batang Kalangkala (Litsea angulata) Terhadap Larva Udang (Artemia salina) dan Identifikasi Senyawa Metabolit Sekundernya

## Toxicity of Kalangkala (Litsea Angulata) Skin Extract on Shrimp (Artemia salina) Larva and Identification of Its Secondary Metabolite Compounds
Alvindra Ramadhan, Cahya Anggita Safitri*, Endang Astuti, Nur Baiti Athiyah,
Tasya Surta Yosya, Farah Erika
Program Studi Pendidikan Kimia, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Mulawarman Samarinda, Indonesia
*E-mail: cahyaanggitasafitri@gmail.com
DOI: https://doi.org/10.26874/jkk.v4i2.84
Received : 21 Sept 2021, Revised : 30 Nov 2021, Accepted : 30 Nov 2021, O nline : 30 Nov 2021

## Abstrak
Penelitian ini  dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  organik  yang  telah  disintesis  dalam ekstrak  kulit  pohon  Kalangkala  ( Litsea  angulata )  dan  toksisitas  dari  ekstrak  terhadap  larva  udang Artemia salina Leach. Metode BST ( Brine Shrimp Lethality ) digunakan sebagai uji pendahuluan untuk memperoleh ekstrak  etanol  dan  ekstrak  n-heksan  kulit  pohon  Kalangkala  ( L.  angulata )  yang  bersifat toksik  dengan  nilai  LC50  berturut-turut  yaitu  647  ppm  dan  907  ppm.  Hasil  skrining  fitokimia  juga menunjukkan bahwa ekstrak kulit pohon Kalangkala ( L. angulata ) mengandung senyawa saponin dan steroid.
Kata Kunci : Kalangkala, Litsea angulata, skrinning fitokimia, toksisitas.

## Abstract
This study was conducted to determine the content of organic compounds that have been synthesized in the bark extract of the Kalangkala tree (Litsea angulata) and the toxicity of the extract to the larvae of Artemia salina Leach shrimp. BST (Brine Shrimp Lethality) method was used as a preliminary test to obtain ethanol extract and n-hexane extract of Kalangkala tree bark (L. angulata) which were toxic with LC 50 values of 647 ppm and 907 ppm, respectively. The results of phytochemical screening also showed that the bark extract of the Kalangkala (L. angulata) tree contains saponins and steroids.
Keywords: Kalangkala, Litsea angulata, phytochemical screening, toxicity.
1 Pendahuluan
Tanaman  Kalangkala  ( Litsea  angulata ) adalah  salah  satu  tanaman  endemi  khas Kalimantan.  Sudah  banyak  penelitian  yang dilakukan  untuk  mengetahui  bioaktivitas  dan kandungan  metabolit  sekunder  dari  tanaman kalangkala  tersebut,  mulai  dari  bagian  buah, biji, daun, hingga kulit batang dari kalangkala.
Tanaman  kalangkala  diketahui  memiliki kandungan  alkaloid  dan  tanin  serta  memiliki aktivitas antioksidan.  Tanaman  ini  sering digunakan  oleh  masyarakat  sebagai  obat
tradisional.  Misalnya  pada  bagian  biji  buah  dan daun  kalangkala  sering  dimanfaatkan  sebagai obat bisul yang disebabkan oleh bakteri.
Tumbuhan  jenis  litsea  sering  dimanfaatkan dengan  cara  meminum  air  hasil  rebusan  dari daunnya yang dijadikan sebagai jamu. Perebusan ini  merupakan  salah  satu  pengolahan  pangan dengan cara pemanasan. Proses  pemanasan akan mempengaruhi  bioaktivitas  antioksidan  serta kandungan metabolit sekunder yang ada di dalam tanaman tersebut. Proses penyimpanan juga akan mempengaruhi  bahan karena semakin lama suatu
bahan  disimpan maka kandungan bahan tersebut akan semakin banyak mengalami oksidasi.   Oleh sebab  itu  peneliti  ingin  mengetahui  tingkat toksisitas  ekstrak  kulit  pohon  dan  senyawa metabolit  sekunder  pada  ekstrak  kulit  pohon kalangkala.
Suatu  molekul  atau  atom  yang  memiliki kereaktifan  tinggi  yang  dapat  berinteraksi dengan molekul-molekul dalam tubuh dan dapat merusak  yang  disebabkan  karena  memiliki elektron  bebas  yang  tidak  berpasangan  disebut dengan  radikal  bebas.    Elektron  bebas  tersebut yang akan menangkap elektron dari senyawa lain seperti  lipid,  protein,  karbohidrat  serta  DNA sehingga  mencapai kestabilan diri [1]. Hal yang dapat  memacu  timbulnya  stres  oksidatif  yang memiliki  peran  dalam  patofisiologi  berbagai macam penyakit seperti penyakit jantung, kanker serta  penyakit  degeneratif lainnya ialah peningkatan  produksi  radikal  bebas  dalam tubuh  [2].  Senyawa  antioksidan  ialah  senyawa yang  dapat  memberikan  satu atau  lebih  elektron bebasnya  untuk  dapat  menghambat  senyawa radikal bebas,  sehingga  senyawa antioksidan  ini sangat  diperlukan  oleh  tubuh  untuk  dapat mengatasi stres oksidatif [3].
Uji toksisitas pada penelitian ini menggunakan metode BSLT keuntungan dari uji ini yaitu cepat, mudah dikerjakan,  waktu  deteksi singkat,  dapat  dipertanggung  jawabkan,  dan hasilnya dapat diulang serta  tidak  membutuhkan biaya  yang  mahal  sehingga  banyak  digunakan pada  tahap  awal  dalam penapisan ekstrak bahan aktif  [4].  Uji  BSLT  dapat  digunakan  sebagai dasar  untuk  uji  toksisitas  terhadap  sel line , aktivitas anti- tumor dan  anti-kanker.  Salah  satu metode  yang  baik digunakan  untuk  pengujian toksisitas  adalah  dengan  menggunakan  larva udang jenis Artemia salina , dalam metode ini A. salina digunakan sebagai bioindikator.
2 Metode Penelitian
2.1 Bahan
Bahan  yang  digunakan  menggunakan  kulit pohon Kalangkala  ( L.  Angulata )  yang  diperoleh di    daerah    perkebunan    Desa    Tuana    Tuha Kecamatan    Kenohan    Kabupaten    Kutai Kartanegara  Kalimantan  Timur.  Bahan  yang digunakan  untuk  menganalisis  ekstrak  kulit pohon  kalangkala  antara  lain n -heksana,  etanol, aquades,      DPPH    ( 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil ), HCl    pekat,      serbuk    Mg,  Kloroform,  H 2 SO 4 , NaOH, FeCl 3 , KI,  HgCl 2 ,  Padatan Iodin,  Timbal Asetat, dan Asam Asetat.
2.2 Preparasi Sampel
Kulit  pohon  Kalangkala  ( L.  Angulata ) dirajang  dan  dijemur  hingga  kering  kemudian ditimbang sebanyak 1000 gram dan ditambahkan dengan  pelarut  (etanol  dan n -heksana)  masing- masing  sebanyak  500  mL.  Maserasi  dilakukan selama  2  x  24  jam.  Hasil  ekstraksi  disaring  dan filtrat dengan memanaskannya  di atas waterbath pada  suhu  70 o C  untuk  menguapkan  pelarutnya sehingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Untuk mendapatkan ekstrak kental juga dapat dilakukan dengan evaporator.

## 2.3 Uji Alkaloid
Ekstrak  total,  fraksi n -heksana  dan  etanol kulit  pohon Kalangkala ( L. Angulata ) dilarutkan menggunakan  pelarut  yang  sesuai.  Lalu  H 2 SO 4 2N  ditambahkan  beberapa  tetes   dan  dikocok. Kemudian  diamati setelah penambahan pereaksi Dragendorff.  Terbentuknya  endapan  jingga sampai  merah  coklat,  membuktikan  uji  positif alkaloid.

## 2.4 Uji Flavonoid
Masing-masing    fraksi    dan    sejumlah ekstrak   kasar   dilarutkan   dalam  pelarut   yang sesuai  kemudian  ditambahkan  dengan  beberapa tetes  HCl  pekat  dan  sedikit  serbuk  Mg. Timbulnya warna jingga, merah hingga merah tua membuktikan adanya flavonoid.

## 2.5 Uji Saponin
Ekstrak  total,  fraksi n -heksana  dan  etanol kulit  pohon kalangkala  ditambahkan  air  panas, dikocok kuat, ditambahkan 1 tetes HCl pekat jika timbul busa. Jika timbul busa dengan ketinggian 1-3  cm  yang  bertahan  selama  15  menit menandakan positif uji  saponin.

## 2.6 Uji Steroid dan Triterpenoid
Pereaksi Liebermann-Burchard (asam asetat glasial  dan  H 2 SO 4 pekat)  dibutuhkan  dalam  uji steroid  dan  triterpenoid.  Masing-masing  fraksi dan  sejumlah  ekstrak  dilarutkan  dalam  pelarut yang  sesuai  ditambahkan  pereaksi  Liebermann- Burchard.  Secara  perlahan  larutan  dikocok  dan didiamkan  selama  beberapa  menit.  Timbulnya warna  merah  jingga  atau  ungu  menandakan positif  uji  triterpenoid,  jika  timbul  warna  biru hingga kehijauan dinyatakan positif uji steroid.

## 2.7 Uji Toksisitas dengan Metode BSLT
Uji toksisitas dilakukan dengan larva udang ( A.  salina Leach).  Media  yang  digunakan  untuk larva  menggunakan  air  laut  buatan.  Dibuat  air
laut  dengan  konsentrasi  2%  dengan  cara melarutkan 20 gram garam tidak beriodium setiap 1 liter air yang dialiri udara (menggunakan aerator). Telur larva undang A. salina sebanyak 8 gram  dicuci  menggunakan  air  laut,  kemudian didiamkan  selama  48  jam  hingga  telur  menetas dan menandakan siap digunakan untuk penelitian.  Pengujian  tersebut    dilakukan menggunakan  dua  pelarut  yaitu  pelarut  etanol dan n -heksana.
Masing-masing ekstrak kulit pohon kalangkala  sebanyak  0,00394  mg  dilarutkan dengan 50  ml  etanol dan 0,00327  mg dilarutkan dengan  pelarut  n-heksana.  Disiapkan  8  tabung reaksi  untuk  pengamatan  dan  diambil  larutan tersebut berturut-turut 0,5 mL, 1,25 mL, 1,5 mL, dan  2  mL  kemudian  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  yang  telah  disediakan  dan diuapkan. Setelah tabung reaksi kering dipipet 50 µL  dimetilsulfoksida ditambahkan 1  mL  air  laut untuk  mempermudah  pencampuran  larutan, kemudian  ditambahkan  air  laut  kembali  hingga volume  tabung  reaksi  menjadi  5  mL  dengan konsentrasi  secara  berturut-turut  10  ppm,  20 ppm,  30  ppm,  dan  40  ppm.  Untuk  membuat konsentrasi  0  ppm  tidak  perlu  menambahkan ekstrak.  Setelah  larutan  untuk  pengujian  siap, dimasukkan 10 ekor larva udang A. salina Leach pada  masing-masing  tabung  reaksi  lalu  ditutup dengan aluminium  foil yang  telah  diberi  lubang kecil-kecil.  Dilakukan  pengamatan  terhadap kematian  larva  udang A.  salina selama  24  jam dengan selang  waktu  6  jam,  tetapi  untuk  6  jam pertama  dilakukan  pengamatan  setiap  1  jam, dicatat jumlah kematian larva tersebut. Dilanjutkan analisis data untuk mencari konsentrasi kematian (LC 50 ).

## 3 Hasil dan Pembahasan
Pada  Tabel  1,  Skrining  fitokimia  senyawa golongan  alkaloid  menunjukkan  hasil positif  bila tampak endapan jingga hingga merah coklat. Hasil menunjukkan  ekstrak  n-heksana  dan  ekstrak etanol  tidak  mengandung  alkaloid  karena  tidak tampak  endapan  jingga.  Alkaloid  mengandung atom  nitrogen  yang  bersifat  basa  sehingga dibutuhkan  penambahan  asam  sulfat  untuk mengekstraknya. Pasangan elektron bebas nitrogen  pada  alkaloid  mengganti  ion  iod  dalam pereaksi Mayer, hal ini mengakibatkan terbentuknya  endapan  merah  pada  penambahan pereaksi  Mayer  karena  nitrogen  pada  alkaloid akan bereaksi dengan ion logam K + dari pereaksi Mayer. Alkaloid pada umumnya berbentuk kristal yang  disebut  dengan  garam-garam  alkaloid.  Di
dalam  alkaloid  terkandung    atom  nitrogen  yang bersifat    basa,  akibatnya        untuk    proses pengekstrakan    diperlukan    penambahan    asam sulfat.  Atom  nitrogen  yang  memiliki  pasangan elektron bebas  dalam alkaloid  mengubah  ion  iod pada  pereaksi  Mayer,  sehingga  terbentuknya endapan  merah  dalam  penambahan  pereaksi Mayer  lantaran  nitrogen  dalam  alkaloid  akan bereaksi  menggunakan  ion  logam  K + menurut pereaksi  Mayer.  Alkaloid  biasanya  berbentuk kristal  yang  diklaim  menggunakan  garam-garam alkaloid.
Tabel 1. Kandungan Senyawa Metabolit Sekunder Ekstrak Total dan Fraksi Ekstrak Kulit Pohon Kalangkala (L. angulata)
Jenis Senyawa Jenis Ekstrak n-heksana Etanol Alkaloid - - Flavonoid - + Saponin - + Steroid + + Triterpenoid + +
Skrining fitokimia senyawa golongan flavonoid  menunjukkan  hasil  positif  bila  tampak adanya warna  jingga,  merah  hingga  merah  tua. Hasil  menunjukkan  ekstrak n -heksana  tidak mengandung  flavonoid  karena  tidak  tampak warna  jingga  pada  larutan,  namun  pada  ekstrak etanol hasil menunjukkan  warna  jingga.  Senyawa flavonoid  memiliki  sejumlah  gugus  hidroksil sehingga  dapat, larut  dalam pelarut  polar  seperti etanol. Penambahan asam klorida pekat berfungsi untuk protonasi flavonoid hingga terbentuk garam flavonoid.  Hasil  positif  pada  penambahan  bubuk magnesium akan menghasilkan  perubahan  warna larutan    menjadi    hitam    kemerahan.    Hal    ini terjadi  karena  proses reduksi oleh magnesium dan asam klorida pekat sehingga menghasilkan warna hitam kemerahan.
Skrining fitokimia senyawa saponin menunjukkan  hasil  positif  bila  tampak  adanya busa dalam waktu yang konstan.Hasil menunjukkan ekstrak n-heksana tidak mengandung saponin karena  tidak tampak  busa pada  larutan,  namun  pada  ekstrak  etanol  hasil menunjukkan    adanya    saponin    yang  ditandai dengan    adanya    busa.    Kombinasi    struktur senyawa      penyusun      saponin    yaitu    rantai sapogenin  non  polar  dan  rantai  samping  polar
yang  larut  dalam  air  menyebabkan  timbulnya busa.
Skrining  fitokimia  steroid  dan  terpenoid menunjukkan  hasil  positif  bila  tampak  adanya warna merah jingga. Hasil menunjukkan ekstrak
n-heksana  dan  etanol  mengandung  steroid  dan triterpenoid  karena    tampak  warna  jingga  pada larutan.
Tabel  2. Nilai  LC 50 Ekstrak  Total  dan  Fraksi Ekstrak Kulit Pohon Kalangkala (L. angulata) Jenis Ekstrak LC 50 (ppm) n -heksana 32,89 Etanol 21,96
Pada  Tabel  2,  Hasil  LC 50 menunjukkan bahwa pada konsentrasi tersebut, ekstrak sampel kulit  pohon  Kalangkala  ( L.  angulata )  mampu membunuh  larva  udang A.  salina Leach  sampai 50%  populasi.  Dari  data  tersebut  menunjukkan bahwa ekstrak fraksi etanol memiliki bioaktivitas  paling  tinggi  terhadap  larva  udang A.  salina Leach  yang  ditunjukkan  dengan  nilai LC 50 paling kecil  yaitu  21,96  ppm di mana  nilai ini  menunjukkan  bahwa  pada  fraksi  etanol mampu  membunuh larva udang A. salina Leach setengah  dari  larva  udang  yang  digunakan. Semakin  besar  nilai  LC 50 dari  suatu  sampel menunjukkan semakin rendah toksisitasnya. pada ekstrak  fraksi n -heksana  diperoleh  nilai  sebesar 32,89 ppm yang berarti bioaktivitas  dari ekstrak n -heksana  lebih  rendah  dibandingkan  dengan ekstrak fraksi etanol.

## 4 Kesimpulan
Berdasarkan    hasil    penelitian    yang    telah dilakukan,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa  hasil skrining fitokimia yang telah dilakukan pada kulit
pohon  Kalangkala  ( L.  angulata )  mengandung metabolit  sekunder.  Pada  ekstrak  dengan  pelarut n -heksana    terdapat  senyawa  steroid  dan triterpenoid,  sedangkan  pada  ekstrak  dengan pelarut  etanol  terdapat    senyawa  flavonoid, saponin,  steroid  dan  triterpenoid.  Hasil  uji toksisitas dari ekstrak kulit pohon Kalangkala ( L. angulata )  terhadap  larva  udang A.  salina Leach bersifat  toksik  dengan  nilai  LC 50 berturut-turut yaitu 647 ppm dan 907 ppm.

## Daftar Pustaka
[ 1].   Regina A, Maimunah M, Yovita L. Penentuan Aktivitas Antioksidan, Kadar Fenolat Total dan Likopen pada Buah Tomat (Solanum lycopersicum  L).  J  Sains  dan  Teknol  Farm. 2008;13(1).
[2].   Fitriana  WD,  Fatmawati  S,  Ersam  T.  Uji Aktivitas  Antioksidan  terhadap  DPPH  dan ABTS dari Fraksi- fraksi Daun Kelor (Moringa oleifera).  In:  Prosiding  Simposium  Nasional Inovasi  dan  Pembelajaran  Sains.  Bandung; 2015. p. 657–60.
[3].   Lee  J,  Koo  N,  Min  DB.  Reactive  Oxygen Species, Aging, and Antioxidative
Nutraceuticals. Compr Rev Food Sci Food Saf [Internet].  2004;3(1):21–33.  Available  from: http://dx.doi.org/10.1111/j.1541- 4337.2004.tb00058.x
[4].   Rezaeizadeh A, Zuki ABZ, Abdollahi M, Goh YM,  Noordin  MM,  Hamid  M,  et  al. Determination  of  antioxidant  activity  in methanolic  and  chloroformic  extracts  of Momordica  charantia.  African  J  Biotechnol. 2011;10(24):4932–40.