## Efek Diuretik Ekstrak Air Kelopak Bunga Rosela ( Hibiscus sab- dariffa Linn.) pada Tikus Wistar Jantan

## The Diuretic Effect of Water Extract of Roselle (Hibiscus sabdariffa Linn) Calix in Male Wistar Rats
Diuretic effect test of water extract of roselle (Hibiscus sabdariffa Linn.) calix have been conducted in male Wistar rats using modified Lipschitz method. The doses of water extract of roselle calyx were 25 mg/kgBW, 50  mg/kgBW  and  100  mg/kgBW  orally.  Furosemide  at  a  dose  of  3.6  mg/kgBW  was  used  as  comparison. Parameters observed were the cumulative urine volume released every 30 minutes for 6 hours and for 24 hours after the administration of the test extract and the measurement electrolyte contents of sodium ions and potassium in rats’s urine to determine saluretic effect. The result showed that water extract of Roselle calyx    have  significantly  diuretic  effect  at  a  dose  50  mg/kgBW  (p≤0.05).  It  has  properties  saluretic  with cumulative urine volume for 24 hour  271.406% where as furosemide dose of 3.6 mg/kgBW of 263.018%; excretion  of  sodium  and  potassium  ions  was  higher  than  the  control  or  comparison.  The  water  extract  of Roselle  calyx  at  a  dose  of  50  mg/kgBW  showed  saluretic  effect  which  was  significantly  different  if  it compared to control group (p≤0.05) and had similar effect with furosemide (p≥0.05).
Keywords: diuretic, calyx of Roselle, water extract,  Hibiscus sabdariffa Linn.
Elin Yulinah S (a)* , Sri Wahyuningsih (a,b) , Kenah Ratna P (b)
(a) Sekolah Farmasi  Institut Teknologi Bandung
Telah  diteliti  efek  diuretik  ekstrak  air  kelopak  bunga  rosela  ( Hibiscus  sabdariffa Linn.)  pada  tikus  jantan Wistar menggunakan metode Lipschitz dengan modifikasi. Dosis yang digunakan untuk ekstrak air  kelopak bunga rosela 25, 50, dan 100 mg/kgBB yang diberikan secara oral. Sebagai pembanding adalah furosemid dosis 3,6 mg/kgBB . Parameter yang diamati adalah volume urin kumulatif selama 6 jam dan 24 jam. Hasil penelitian    menunjukkan  bahwa  semua  dosis  ekstrak  air  kelopak  bunga  rosela  mempunyai  efek  diuretik dibandingkan dengan kontrol berbeda bermakna (P≤0,05). Ekstrak air kelopak bunga rosela dosis 50 mg/ kgBB juga  memiliki  sifat  saluretik  dengan  volume  urin  kumulatif  selama  24  jam  sebesar  271,406%, sedangkan  furosemid dosis 3,6 mg/kgBB sebesar 263,018%; ekskresi  ion natrium dan  kalium lebih  tinggi dibandingkan  dengan  kontrol  maupun  pembanding.  Ekstrak  air  kelopak  bunga  rosela  dosis  50  mg/ kgBBmenunjukkan  efek  diuretik  yang  bersifat  saluretik  berbeda  bermakna  terhadap  kontrol  dan  setara dengan pembanding furosemid.
Kata kunci : diuretik, ekstrak air, kelopak bunga rosela, Hibiscus sabdariffa Linn .
(a) Fakultas Farmasi UNJANI

## PENDAHULUAN
Diuretik merupakan obat yang meningkatkan laju aliran urin dan sekresi natrium serta digunakan untuk mengatur volume dan atau komposisi cairan tubuh pada  berbagai keadaan klinis (Mutcshler, 1999). Penggunaan klinis diuretika yang paling penting adalah edema dengan cara mengeluarkan cairan edema (dan elektrolit). Penggunaan ini diharapkan mampu memobilisasi cairan intestisinal edema  tanpa  penurunan  volume  plasma  yang bermakna  sehingga  volume  cairan  ekstraseluler kembali normal, sedangkan untuk keadaan tanpa edema, diuretik diharapkan mampu menurunkan tekanan darah dengan cara mengosongkan natrium tubuh dan menurunkan volume darah (Katzung, 2001; Mutschler, 1999).
Rosela  ( Hibiscus  sabdariffa Linn.)  pada awalnya  merupakan  tanaman  hias  yang tumbuh di pekarangan rumah, berpotensi untuk dikembangkan  sebagai  bahan  baku  makanan, minuman,  kosmetik,  pewarna  alami  maupun sebagai pengobatan atau bahan obat. Dilihat dari kandungan  nutrisi  yang  tinggi  yang  terkandung dalam  tumbuhan  rosela,  seperti  kandungan antosianin  yang  terdapat  pada  kelopak  bunga rosela yang bermanfaat sebagai antioksidan serta secara empiris bagian daun dari tanaman rosela digunakan  sebagai  pencahar,  diuretik  dan  anti- hipertensi; bagian biji digunakan untuk mengobati penyakit kulit dan kekurangan darah; sedangkan bagian kelopak digunakan sebagai diuretik, anti- hipertensi, dan antiskorbut (Mardiyah dkk., 2009; Maryani, 2008).
Penelitian  secara  ilmiah  tentang  khasiat ekstrak  etanol  kelopak  bunga  rosela  ( Hibiscus sabdariffa Linn.)  untuk  pengobatan  diuretik sudah pernah dilakukan (Effti, 2013). Berdasarkan hal  tersebut  yang  mendorong  penulis  untuk melakukan  penelitian  secara  ilmiah  mengenai ekstrak air kelopak bunga rosela ( Hibiscus sabdariffa Linn.) sebagai obat yang berkhasiat untuk diuretik.

## METODE PENELITIAN
Metode uji diuretik yang digunakan adalah metode  Lipschitz  1943  dengan  modifikasi.  Pada metode ini hewan uji dipuasakan selama 12 jam sebelum dilakukan pengujian dengan tetap diberikan air minum. Hewan terdiri atas 5 kelompok yang masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor tikus jantan, dimana satu kelompok sebagai kelompok kontrol yang hanya diberi suspensi CMC Na 0,5% 10 mL/kgBB,  satu  kelompok  sebagai  kelompok pembanding  yang  diberi  suspensi  furosemid dosis 3,6 mg/kgBB, tiga kelompok sebagai kelompok uji ekstrak air kelopak bunga rosela dosis 25, 50, dan 100 mg/kgBB.
Semua tikus pada kelompok percobaan diberi NaCl fisiologis 0,9% sebanyak 20 mL/kgBB sebagai loading dose secara oral. Setelah 30 menit masing- masing kelompok diberikan sediaan uji sesuai dengan kelompoknya. Setelah pemberian larutan uji, tikus ditempatkan ke dalam kandang metabolisme individual  dan  volume  urin  yang  diekskresikan
dicatat setiap 30 menit selama 6 jam dan 24 jam (Vogel,  2008).  Setelah  itu  dihitung  persentase urin kumulatif. Perhitungan persentase urin kumulatif dilakukan dengan menggunakan rumus sebagai berikut:
Kriteria  penilaian  aktifitas  diuretik  apabila  nilai volume  urin  kumulatif  yang  diperoleh  sebesar >80%  dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol dari masing-masing perlakuan. Hasilnya kemudian diolah secara statistika menggunakan uji Student-t . Untuk  mengetahui  pengaruh  sediaan  uji terhadap ekskresi elektrolit, dilakukan penentuan kadar elektrolit ion natrium dan ion kalium dalam urin tikus menggunakan Spektrofotometri Serapan Atom (SSA). Dibuat larutan elektrolit standar dengan berbagai  konsentrasi  kemudian  masing-masing larutan diukur serapannya pada panjang gelombang 589,0  nm  untuk  natrium  dan  766,5  nm  untuk kalium. Dari hasil pengukuran tersebut dibuat kurva kalibrasi yang menggambarkan hubungan antara serapan dengan konsentrasi masing-masing unsur. Konsentrasi  unsur  dari  larutan  sampel  dapat ditentukan dari kurva kalibrasi yang diperoleh.

## Alat
Timbangan  analitik,  kandang  tikus,  kandang metabolisme,  timbangan  tikus,  cawan  penguap, krus porselen, tanur, desikator, seperangkat alat dekok, sonde oral, mortir dan stamper, alat gelas, alat penggiling, mikroskop, penangas air, pemanas atau hot plate, alat freeze dryer ( Eyela FDU 1200 Japan ) dan Spektrofotometer Serapan Atom (Shimadzu AA 6200) .
Bahan
Kelopak bunga rosela ( Hibiscus sabdariffa Linn.), CMC Na, larutan NaCl fisiologis 0,9%,  furosemid, kloroform, asam nitrat, asam klorida 0,1 N, asam klorida 2 N, perekasi Mayer, pereaksi Dragendorff, serbuk magnesium, amil alkohol, larutan besi (III) klorida, larutan gelatin 1%, eter, perekasi vanilin 10% dalam asam sulfat, pereaksi Liebermann-Burchrad, larutan kalium hidroksida (KOH) 5%, etanol 96%, amonia encer 10%, pakan tikus, etil asetat, dan asam asetat 15%.

## Hewan Percobaan
Tikus jantan galur wistar berumur ±8-10 minggu dengan bobot antara 200 sampai 300 gram sebanyak 50 ekor yang diperoleh dari KPP Ilmu Hayati Institut Teknologi Bandung.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil karakteristik ekstrak air kelopak bunga rosela menunjukkan ekstrak memenuhi standar dimana susut pengeringan 3,25 % (tidak lebih dari 10%), kadar abu total 2,39 % (tidak lebih dari 2,6%), kadar abu larut air 1,35% dan kadar abu larut asam sebesar 0,08% tidak lebih dari 0,1% (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995). Hasil penapisan fitokimia ekstrak air kelopak bunga
TABEL 1. Persentase Volume Urin Kumulatif (%) Setelah Pemberian Sediaan Uji Ekstrak Air Kelopak Bunga Rosela
Keterangan : angka  yang  tercantum  adalah  rata-rata  hasil pengukuran 5 ekor tikus beserta simpangan bakunya (X±S); * menunjukkan perbedaan berbeda bermakna terhadap kontrol; ...* menunjukkan onset dimulainya efek diuretik.
TABEL 2. Hasil Penentuan Jumlah Ion Natrium dalam Urin 24 Jam Setelah Pemberian Sediaan Uji Ekstrak Air Kelopak Bunga Rosela
Keterangan : * menunjukkan efek berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol, jumlah  natrium  (µg) = konsentrasi  natrium (µg/mL) x volume urin 24 jam (mL).
rosela  mengandung  favonoid,  polifenol,  quinon, saponin (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995).
Metode uji diuretik yang digunakan adalah metode Lipschitz dengan modifikasi. Sebelum diberi larutan  uji,  tikus  diberikan  NaCl  fisiologis  0,9% dengan  volume  pemberian  20  mL/kgBB  sebagai loading dose untuk menghindari terjadinya dehidrasi dan  juga  meningkatkan  kecepatan  urinasi  pada
tikus.  Parameter  yang  digunakan  untuk  melihat efek  diuretik  adalah  persentase  volume  urin kumulatif yang diperoleh dari perhitungan volume urin total yang diekskresikan  dibandingkan dengan volume pemberian loading dose (NaCl fisiologis 0,9%), dinyatakan memiliki efek diuretik apabila persentase  volume  urin  kumulatif  lebih  besar dari 80%. Berdasarkan hasil penelitian menunjukkan bahwa data hasil perhitungan persentase volume urin kumulatif pada kelompok kontrol menunjukkan onset  dimulainya  efek  diuretik  pada  menit  ke- 1440  dengan  persentase  volume  urin  kumulatif selama 24 jam sebesar 132,919. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  ekstrak  air  kelopak  bunga rosela dosis 25 mg/kgBB, 50 mg/kgBB, dan 100 mg/kgBB  menunjukkan  onset  dimulainya  efek diuretik  berturut-turut  pada  menit  ke-330,  210, dan 210 dengan persentase urin kumulatif selama 24 jam yang diperoleh berturut-turut sebesar sebesar 167,470%,  271,406%,  dan  198,998%.  Dari  data tersebut, hanya kelompok ekstrak air kelopak bunga rosela dosis 50 mg/kgBB mempunyai efek diuretik sebesar 271,406% yang setara dengan kelompok pembanding  furosemid  sebesar  263,018%  pada menit ke-1440 ( Tabel 1 ).
Hasil analisis statistik student-t menunjukkan volume urin kumulatif (mL) pada ekstrak air kelopak bunga rosela dosis 25 mg/kgBB memberikan efek diuretik berbeda bermakna terhadap kontrol dimulai dari  menit  240  sampai  menit  1440,  sedangkan ekstrak  air  kelopak  bunga  rosela  dosis  50  mg/ kgBB dimulai dari menit 210 sampai menit 1440 dan dosis 100 mg/kgBB memberikan efek diuretik berbeda bermakna terhadap kontrol dimulai dari menit  30  sampai  menit  1440  (P≤0,05).  Hal  ini menunjukkan sediaan uji ekstrak air kelopak bunga rosela  mempunyai  efek  diuretik  dibandingkan dengan kontrol.
Hasil analisis statistik student-t sediaan uji bila dibandingkan dengan kelompok pembanding, ekstrak air kelopak bunga rosela dosis 25 mg/kgBB memberikan efek diuretik tidak berbeda bermakna dibandingkan dengan kelompok pembanding dimulai pada menit 30 sampai 90 dan pada menit 210 sampai menit 240 (P≥0,05), namun pada menit 120 sampai menit 180 dan pada menit 270 sampai menit 1440 memberikan efek diuretik berbeda bermakna dibandingkan dengan kelompok pembanding. Hal ini berarti sediaan uji mempunyai efek diuretik lebih rendah  dibandingkan  dengan  pembanding.  Ekstrak air  kelopak  bunga  rosela  dosis  50  mg/kgBB memberikan efek diuretik yang tidak berbeda bermakna terhadap kelompok pembanding dimulai pada menit 30 sampai 60 dan pada menit 120 sampai menit 1440 (P≥0,05). Hal ini menunjukkan bahwa sediaan uji mempunyai efek diuretik setara dengan pembanding dan ekstrak air kelopak bunga rosela dosis 100 mg/kgBB memberikan efek diuretik tidak berbeda bermakna terhadap kelompok pembanding dimulai pada menit 30 sampai menit 360 (P≥0,05). Hal ini berarti sediaan uji mempunyai efek diuretik lebih rendah dibandingkan dengan pembanding. Dari  hasil  tersebut  hanya  ekstrak  air  kelopak rosela  rosela dosis 50 mg/kgBB yang mempunyai
Waktu Perlakuan (menit) % Volume Urin Kumulatif Kontrol CMC Na 0,5% 10 mL/kgBB Pembanding Furosemid Dosis 3,6 mg/kgBB Kelopak Bunga Rosela Dosis25 mg/kg BB Dosis50 mg/kg BB Dosis 100 mg/kg BB 30’ 12,230 ±13,917 37,586 ±24,998 21,699 ±9,886 13,687 ±3,272 39,271 ±18,813* 60’ 20,456 ±17,552 60,148 ±34,522* 32,626 ±15,705 24,937 ±8,748 53,586 ±21,389* 90’ 28,824 ±20,432 73,428 ±30,845* 39,805 ±18,860 33,869 ±16,734 58,089 ±22,165* 120’ 32,573 ±19,645 92,968 ±43,021* 42,655 ±18,863 43,875 ±23,315 61,423 ±18,336* 150’ 35,500 ±23,011 101,592 ±48,515* 46,550 ±16,776 61,234 ±26,210 66,309 ±19,962* 180’ 39,223 ±19,911 104,092 ±45,272* 48,899 ±14,938 68,832 ±26,273 72,131 ±22,961* 210’ 47,349 ±15,160 110,660 ±45,681* 63,889 ±27,340 81,836 ±23,266* 90,344 ±21,992* 240’ 49,256 ±14,306 117,061 ±50,079* 71,401 ±20,743* 92,772 ±24,060* 91,594 ±20,905* 270’ 54,819 ±9,857 126,248 ±45,019* 74,262 ±18,865* 96,933 ±23,903* 95,441 ±16,932* 300’ 56,282 ±11,419 132,948 ±51,577* 77,940 ±17,986* 100,489 ±28,655* 97,713 ±20,394* 330’ 58,143 ±10,254 139,096 ±57,378* 81,731 ±17,601* 124,451 ±19,084* 103,963 ±19,661* 360’ 68,241 ±13,438 146,514 ±61,705* 84,231 ±16,883* 128,996 ±21,765* 108,530 ±25,111* 1440’ 132,919 ±18,016 263,018 ±42,567* 167,470 ±29,512* 271,406 ±57,233* 198,998 ±17,278* Kelompok Volume Urin 24 jam (mL) Konsentrasi Natrium (µg/mL) Jumlah Natrium (µg) Jumlah Natrium (mg) Kontrol (CMC 0,5%) 4,97 ±0,503 974,018 ±17,214 4842,798 ±567,259 4,843 ±0,567* Furosemid Dosis 3,6 mg/kgBB 14,27 ±0,473 1115,607 ±19,564 15912,723 ±441,678 15,913 ±0,442 Ekstrak Air Kelopak Bunga Rosela Dosis 25mg/kgBB 7,27 ±0,416 1173,994 ±13,857 8527,775 ±410,440 8,528 ±0,410* Ekstrak Air Kelopak Bunga Rosela Dosis 50 mg/kgBB 13,50 ±1,744 1127,284 ±14,453 15201,757 ±1760,343 15,202 ±1,760* Ekstrak Air Kelopak Bunga Rosela Dosis 100mg/kgBB 8,80 ±0,100 1077,071 ±11,182 9478,724 ±188,747 9,479 ±0,189*
TABEL  3.  Hasil  Penentuan  Jumlah  Ion  Kalium  dalam Urin 24 Jam Setelah Pemberian Sediaan Uji Ekstrak  Air Kelopak Bunga Rosela
Keterangan : * menunjukkan efek berbeda bermakna terhadap kelompok  kontrol,  jumlah  kalium  (µg)  =  konsentrasi  natrium (µg/mL) x volume urin 24 jam (mL).
efek setara dengan pembanding.
Pengukuran elektrolit ion natrium dan ion kalium dalam urin tikus bertujuan untuk mengetahui apakah  sediaan  uji  bersifat  saluretik.  Hasil menunjukkan  kandungan  rata-rata  ion  natrium pada  kelompok  kontrol  sebesar  4,843  mg,  pada ekstrak  air  kelopak  bunga  rosela  dosis  25  mg/ kgBB, 50 mg/kgBB, dan 100 mg/kgBB secara berturut- turut sebesar 8,528 mg, 15,202 mg dan 9,479 mg ( Tabel  2 ). Hasil pengukuran kandungan ion kalium terhadap kelompok kontrol diperoleh hasil sebesar 26,992 mg. Kandungan ion kalium pada ekstrak air kelopak bunga rosela dosis 25, 50, dan 100 mg/ kgBB secara berturut-turut sebesar 34,713 mg, 59,595 mg, dan 55,091 mg ( Tabel  3 ). Hasil tersebut menunjukkan  bahwa  semua  dosis  pada  sediaan uji bersifat saluretik dibandingkan kelompok kontrol dengan ditunjukkan hasil ekskresi ion natrium dan kalium  yang  tinggi  berarti  sediaan  uji  tersebut tidak  menahan  pengeluaran  ion  lewat  urin  baik ion  natrium  maupun  kalium.  Hasil  pengukuran kadar ion natrium kelompok pembanding sebesar 15,913 mg, menunjukan bahwa ekstrak air kelopak bunga rosela pada semua dosis uji bersifat saluretik yang lebih rendah dibandingkan dengan kelompok pembanding. Hasil pengukuran ion kalium pada kelompok  pembanding  sebesar  41,705  mg.  Dari hasil tersebut terlihat pada ekstrak air kelopak bunga
rosela dosis 50 dan 100 mg/kgBB menunjukkan ekskresi ion kalium lebih besar dibandingkan dengan kelompok pembanding, sedangkan pada dosis yang lain memiliki kandungan kalium yang lebih rendah dibandingkan dengan kelompok pembanding.
Hasil analisis statistik student-t menunjukkan kadar ion natrium kelompok pembanding memberikan hasil yang berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol  (P≤0,05).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak air kelopak bunga rosela bersifat saluretik karena dilihat dari pengeluaran ion natrium dan kalium  tinggi.  Ekstrak  air  kelopak  bunga  rosela dosis 25, 50, dan 100 mg/kg BB memberikan hasil yang berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol (P≤0,05), menunjukkan bahwa sediaan uji bersifat saluretik yang lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol. Namun ekstrak air kelopak bunga rosela dosis 25  dan 100 mg/kgBB memberikan hasil yang berbeda bermakna dengan pembanding yang bersifat saluretik, yaitu lebih rendah dibandingkan dengan pembanding. Hanya pada kelompok dosis 50 mg/ kgBB yang memberikan hasil yang tidak berbeda bermakna (P≥0,05) terhadap kelompok pembanding. Hal ini menunjukkan bahwa pada ekstrak air kelopak bunga rosela dosis 50 mg/kgBB mempunyai efek diuretik yang bersifat saluretik yang setara dengan pembanding. Pada ekstrak air kelopak bunga rosela dosis 50 dan dosis 100 mg/kgBB memberikan hasil yang berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol (P≤0,05) dan tidak berbeda bermakna terhadap kelompok  pembanding  (P≥0,05).  Hal  ini menunjukkan bahwa sediaan uji bersifat saluretik yang lebih tinggi terhadap kontrol dan pembanding.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  uji  efek  diuretik  menunjukkan bahwa semua dosis ekstrak air kelopak bunga rosela mempunyai  efek  diuretik  dibandingkan  dengan kontrol berbeda bermakna (P≤0,05). Untuk melihat kesetaraan dengan pembanding, hanya ekstrak air kelopak  bunga  rosela  dosis  50  mg/kgBB  secara statistik  menunjukkan  hasil  yang  tidak  berbeda bermakna terhadap pembanding (P≥0,05). Ekstrak air kelopak bunga rosela dosis 50 mg/kgBB juga memiliki sifat saluretik dengan volume urin kumulatif selama 24 jam sebesar 271,406% dan furosemid dosis 3,6 mg/kgBB sebesar 263,018% serta ekskresi ion natrium dan kalium lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol dan pembanding furosemid.
Kelompok Volume Urin 24 jam (mL) Konsentrasi Kalium (µg/mL) Jumlah Kalium (µg) Jumlah Kalium (mg) Kontrol (CMC 0,5%) 4,97 ±0,503 5368,116 ±1034,466 26992,464 ±7985,340 26,992 ±7,985 Furosemid Dosis 3,6 mg/kgBB 14,27 ±0,473 2907,246 ±951,661 41704,927 ±14546,110 41,705 ±14,546 Ekstrak Air Kelopak Bunga Rosela Dosis 25mg/kgBB 7,27 ±0,416 4791,304 ±596,080 34713,043 ±3446,439 34,713 ±3,446 Ekstrak Air Kelopak Bunga Rosela Dosis 50 mg/kgBB 13,50 ±1,744 4475,362 ±1028,601 59595,358± 9979,833 59,595 ±9,979* Ekstrak Air Kelopak Bunga Rosela Dosis 100mg/kgBB 8,80 ±0,100 6257,971 ±616,407 55091,014 ±5808,417 55,091 ±5,808*

## DAFTAR PUSTAKA
Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia,  1995, Materia Medika Indonesia, Jilid VI, Jakarta, 322-327.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995, Parameter Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat, Cetakan Pertama, Jakarta, 17,31.
Effti S, 2013, Uji Efek Diuretik Ekstrak Etanol Buah Mahkota Dewa (Phaleria  macrocarpa  (Scheff.)  Boerl.) dan  Kelopak Bunga Rosela (Hibiscus sabdariffa Linn. ) pada Tikus Jantan Wistar , Skripsi, Sekolah  Farmasi  Institut  Teknologi Bandung, Bandung.
Katzung BG, 2001, Farmakologi Dasar dan Klinik , Jilid 1, Salemba Medika , Jakarta, 273, 429-461.
Mutschler E, 1999, Dinamika Obat , Edisi V, ITB, Bandung, 551-552, 567-575.
Mardiah  S,  Ashadi  RW,  dan  Rahayu  A,  2009, Budidaya dan  Pengolahan  Rosela ,  Agromedia  Pustaka,  Jakarta,  1- 2,13-14,23.
Maryani  H  dan  Kristiana  L,  2008, Khasiat  dan  Manfaat Rosela , ed. revisi, Agromedia Pustaka, Jakarta, 1-12.
Vogel  H.G.,  2008, Drug  Discovery  and  Evaluation Pharmacological  Assays ,  3 rd ed.,  Springer-Verlag  Berlin Heideberg, 323-324.