Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 6(2), Oktober 2021, 223-231 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902

## AKTIVITAS INHIBISI ENZIM α-GLUKOSIDASE DARI EKSTRAK KULIT BATANG BUNGA KUPU-KUPU
( Bauhinia semibifida Roxb) SECARA IN VITRO
Haiyul Fadhli * , Ainun Nurain Nurdin, Nofri Hendri Sandi Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau
*Email: haiyulfadhli@stifar-riau.ac.id
Artikel diterima: 24 Mei 2021; Disetujui: 29 September 2021 DOI: https://doi.org/10.36387/jiis.v6i2.701

## ABSTRAK
Telah dilakukan penelitian tentang uji aktivitas inhibisi enzim α-glukosidase dari ekstrak kulit batang bunga kupu-kupu ( Bauhinia semibifida Roxb) secara in vitro . Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas inhibisi dari ekstrak kulit batang B.  semibifida terhadap  enzim  α-glukosidase  secara in  vitro. Pengujian aktivitas inhibisi enzim α-glukosidase menggunakan ekstrak n -heksana, etil asetat, dan  metanol  dari  kulit  batang  bunga  kupu-kupu  dan  akarbose  sebagai  kontrol positif.  Pengujian  secara in  vitro dilakukan  menggunakan  instrument microplate reader dengan panjang gelombang 410 nm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak  ekstrak n -heksana  kulit  batang B.  semibifida memilki  nilai  IC 50 sebesar 15,625  µg/mL,  ekstrak  etil  asetat  memilki  nilai  IC 50 sebesar  35,495  µg/mL,  dan ekstrak  metanol  memilki  nilai  IC 50 sebesar  34,279  µg/mL,  berdasarkan  kategori, ketiga ekstrak kulit batang B. semibifida memiliki kemampuan aktif menghambat enzim α-glukosidase, sedangkan akarbose memiliki nilai IC 50 sebesar 0,384 µg/mL sebagai  kontrol  positif  memiliki  kemampuan  sangat  aktif  sebagai  antidiabetes melalui  inhibisi  enzim  α-glukosidase.  Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa ekstraksi senyawa inhibitor α-glukosidase dengan n -heksana menghasilkan ekstrak dengan aktivitas inhibitor tertinggi.
Kata kunci: α-glukosidase , Bauhinia semibifida Roxb, In vitro

## ABSTRACT
Research  on  the  activity  of  α-glucosidase  inhibition  of  Bunga  Kupu-Kupu stem bark extract (Bauhinia semibifida Roxb) has been carried out in vitro. This study aims to determine the inhibitory activity of the extracts of B. semibifida Roxb. stem bark against the α-glucosidase enzyme in vitro. Testing the inhibitory activity of the α-glucosidase enzyme using extracts of n-hexane, ethyl acetate, and methanol from the stem bark of the Bunga Kupu-Kupu and the Akarbose as a positive control. In  vitro  testing  was  carried  out  using  a  microplate  reader  instrument  with  a wavelength of 410 nm. The results showed that the extract of n-hexane extract of the B. semibifida stem bark had an IC 50 value 15,625 µg/mL, ethyl acetate extract had an IC 50 value 35,495 µg/mL, and the methanol extract had an IC 50 value 34,279 µg/mL.  By  category,  the  three  B.  semibifida  stem  bark  extracts  have  the  active ability to inhibit the α-glucosidase enzyme, while the Akarbose had an IC 50 value
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 6(2), Oktober 2021, 223-231 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
0,384  µg/mL  as  a  positive  control  has  a  very  active  ability  as  an  antidiabetic through  the  inhibition  of  the  α-glucosidase  enzyme.  The  results  showed  that extraction of α-glucosidase inhibitor compound with n-hexane yielded extract with highest inhibitor activity.
Keywords: α-glukosidase, Bauhinia semibifida Roxb, In vitro

## PENDAHULUAN
Bauhinia merupakan  genus  dari famili  Leguminosae  yang  terdiri  dari 300  spesies  dapat  tumbuh  di  daerah tropis  dan  subtropis,  walaupun  di Indonesia  hanya  terdapat  10  spesies (Heyne,  1987).  Genus Bauhinia telah diketahui mengandung senyawa- senyawa yang aktif memiliki aktivitas sebagai antikanker, antidiabetes, antitumor dan antioksidan  (Fitmawati et  al. ,  2017).  Senyawa  flavonoid  dan stilbenoid dilaporkan mempunyai aktivitas antikanker, antimalaria,
antidiabetes, antimikroba, antiinflamasi, dan antioksidan (Boonphong et  al. ,  2007;  Yadava  & Tripathi, 2000). Berdasarkan penelitian Tanjung  and  Tjahjandarie  (2014) terdapat  dua  jenis  flavonoid  yang berhasil  diisolasi  dari  kulit  batang Bauhinia  semibifida yaitu  6C-7O- dimethylaromadendrin  dan  phlorizin. Penelitian lainnya menunjukkan bahwa ekstrak metanol akar tumbuhan Bauhinia semibifida memiliki aktivitas
antioksidan sangat  tinggi dengan IC 50 sebesar  6,6247  µg/mL  (Fitmawati et al. , 2017)
Pada penelitian ini ekstrak kulit batang  pohon  kupu-kupu  ( Bauhinia semibifida Roxb)  didapat  dengan metode  maserasi  bertingkat  dibantu dengan ultrasonikasi. Cara ini diharapkan  menghasilkan  rendemen yang  lebih  banyak  karena  tidak memerlukan peralatan khusus, pengerjaan  yang  sederhana,  dan ekstrak yang didapatkan berbeda sifat kepolarannya  dengan  pelarut  yang digunakan.  Ekstrak n -heksana,  etil asetat  dan  metanol  yang  didapat  diuji aktivitas inhibisi enzim α-glukosidase dengan menggunakan instrumen microplate  reader (Epoch),  karena sensitifitasnya  cukup  tinggi,  waktu yang  diperlukan  dalam  pengujian lebih cepat,  dapat  mendeteksi  banyak sampel secara bersamaan, dan jumlah (volume)  sampel  yang  digunakan lebih  sedikit.  Akarbose  digunakan
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 6(2), Oktober 2021, 223-231 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
sebagai inhibitor enzim α-glukosidase pembanding (Soelistijo et al. , 2015).

## METODOLOGI PENELITIAN Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  adalah kulit  batang  pohon  kupu-kupu  yang diperoleh  dari  KHDTK  Bukit  Suligi, Kabupaten Rokan Hulu Provinsi Riau, n- heksana, etil asetat, metanol, etanol 70%, kloroform, amoniak 0,05N, asam sulfat, pereaksi Mayer, asam klorida p, pereaksi  FeCl3,  asam  asetat  anhidrat,
aquadest, enzim α-glukosidase,
substrat p -nitrofenil-α-D-
glukopiranosida,  akarbose,  larutan buffer  fosfat  pH  7, Bovin  Serum Albumin (BSA) larutan Na 2 CO 3 .
Peralatan  yang  digunakan  yaitu satu set alat destilasi, rotary evaporator (Buchi), timbangan analitik, ultrasonikator (Kery
Pulsatro),  pipet  micro  (Dragon  Med), microplate  reader (Epoch ® ),  dan  alat laboratorium yang umum digunakan.
Pengambilan dan Persiapan Sampel
Kulit  batang  pohon  kupu-kupu ( Bauhinia semibifida Roxb) diperoleh dari KHDTK  Bukit Suligi  Kabupaten Rokan Hulu. Sampel diambil dari kulit batang  pohon  kupu-kupu  ( Bauhinia
semibifida Roxb) yang tidak terlalu tua dan  berwarna  coklat.  Kulit  batang dibersihkan dan dikeringkan, kemudian dihaluskan

## Ekstraksi Kulit Batang
Sampel  0,2  kg  yang  telah  halus diproses  secara  maserasi  bertingkat dengan  dimasukan  ke  dalam  botol gelap,  terlindung  dari  sinar  matahari langsung  dan  direndam  dengan n- heksana selama 24 jam dengan 3 kali pengulangan, lalu diultrasonikasi selama 30 menit, selanjutnya di saring. Maserat  cair  kemudian  dikeringkan dengan rotary  evaporator sehingga didapat ekstrak n- heksana. Selanjutnya ampas dimaserasi kembali dengan  cara  yang  sama  untuk mendapatkan  ekstrak  etil  asetat  dan ekstrak metanol. Ekstrak yang diperoleh  kemudian  diuji  fitokimia untuk mengetahui kandungan metabolit sekundernya sebelum dilakukan uji aktivitas antidiabetes. Pengujian  Aktivitas  Inhibisi  Enzim α-glukosidase
Uji  aktivitas  inhibisi  enzim  α- glukosidase  dilakukan  menggunakan metode in vitro dengan alat microplate reader ( 96  well  plate )  yang  diukur pada  panjang  gelombang  410  nm
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 6(2), Oktober 2021, 223-231 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
(Sancheti,  2009).  Larutan  uji  untuk tiap-tiap  ekstrak  dari  kulit  batang pohon  kupu-kupu  diencerkan  dengan metode two  fold  dilution sehingga diperoleh  konsentrasi  500  -  31,25 µg/mL.  DMSO  sebanyak  5  µL  (B 0 ) dan 5 µL larutan uji (S 1 ) ditambahkan dengan dapar fosfat pH 7 sebanyak 50 µL,  25 µL p -NPG 20 mM dan 25 µL enzim  α-glukosidase  0,2  U/mL.  Lalu diinkubasi  kembali  selama  30  menit.
Reaksi dihentikan
dengan penambahan  larutan  Na 2 CO 3 dengan konsentrasi  0,1  M  sebanyak  100  µL. Sedangkan untuk blanko 5 µL DMSO ditambah  45  µL  buffer  fosfat  pH  7, dan  ditambahkan  25  µL  larutan p - NPG.  Perlakuan  yang  sama  untuk larutan  pembanding  akarbose  dengan konsentrasi  10  -  0,3125  µg/mL. Selanjutnya  nilai  %  inhibisi  dihitung dengan persamaan sebagai berikut :
% inhibisi = (𝐁𝟏−𝐁𝟎) − (𝐒𝟏−𝐒𝟎) (𝐁𝟏−𝐁𝟎)
Keterangan : (B1-B0) = Absorbansi tanpa sampel (B1-B0) = Absorbansi sampel
Nilai  IC 50 kemudian  dihitung menggunakan  kurva  kalibrasi  dan persaman  (Y  =  a  lnX  ±  b)  dengan memplot  Ln  Konsentrasi  sampel
(sumbu  X)  dengan  nilai  persentase inhibisinya (sumbu Y).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Penyiapan Sampel
Berdasarkan  hasil  penelitian diperoleh ekstrak n-heksana sebanyak 0,7742  g  (0,39%),  ekstrak  etil  asetat 3,9729  g  (1,99%) dan ekstrak  metanol 7,3086 g (3,65%). Hasil pengujian dari skrining fitokimia ekstrak kulit batang pohon  kupu-kupu  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Uji Skrining Fitokimia
Ekstrak Kandungan Kimia Hasil Pengamatan Ekstrak n- Heksana Ekstrak Etil asetat Ekstrak Metanol Alkaloid (-) (+) (+) Flavonoid (-) (+) (+) Fenolik (-) (+) (+) Saponin (-) (+) (+) Steroid (-) (-) (-) Terpenoid (+) (+) (-) Hasil pengujian aktivitas
inhibisi  enzim  α-glukosidase  dari ekstrak kulit batang bunga kupu–kupu ( Bauhinia semibifida Roxb) menggunakan microplate reader menunjukkan bahwa nilai IC 50 ekstrak n -heksana  sebesar  15,625  µg/mL, ekstrak  etil  asetat  memiliki  IC 50 sebesar  35,495  µg/mL,  dan  ekstrak metanol  memilki  nilai  IC 50 sebesar 34,279.
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 6(2), Oktober 2021, 223-231 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Kulit  batang  Pohon  Kupu-kupu ( Bauhinia semibifida Roxb) yang telah didapat dilakukan proses sortasi basah, dicuci, dikeringkan pada suhu ruangan, dirajang, dan  disortasi kering.  Sortasi  basah dilakukan  untuk memisahkan  sampel dengan pengotor seperti  tanah,  lumut,  dan  benalu. Sampel  dikeringkan  pada suhu ruang untuk  mengurangi  kandungan  airnya sehingga menghentikan reaksi
enzimatik yang memungkinkan terjadinya  penguraian  senyawa  aktif sampel (Hanani, 2015). Sortasi kering dilakukan  untuk  memisahkan  benda- benda  asing  yang  tidak  dibutuhkan dalam  pengujian. Sampel  dihaluskan untuk  mempermudah  proses  penetrasi pelarut ke dalam sel dan mengoptimalkan  proses  penarikan senyawa  yang  terkandung  di  dalam sampel  dengan  cara  memperluas permukaan sampel pada  saat ekstraksi (Harborne, 1987).
Untuk  mendapatkan  ekstrak
dilakukan  penyarian  menggunakan metode maserasi bertingkat
menggunakan  pelarut n- heksana,  etil asetat,  dan  metanol.  Proses  awal penyarian  dengan  merendam  sampel menggunakan  pelarut n -heksana  lalu
pelarut etil asetat dan terakhir pelarut metanol  dengan  3  kali  pengulangan. Ekstrak cair dipekatkan untuk memisahkan  pelarut  yang  terdapat dalam  ekstrak  sehingga  diperoleh ekstrak kental. Proses ini menggunakan alat rotary evaporator . Pengukuran  aktivitas  inhibisi enzim  α-glukosidase  dilakukan  pada panjang  gelombang  410  nm  karena serapan  maksimal p -nitrofenol  pada panjang  gelombang  400-410  nm. Parameter  analisa  data  uji  aktivitas inhibisi  enzim  α-glukosidase  dengan metode in  vitro adalah  dengan inhibition  concentration (IC 50 ),  yaitu konsentrasi  yang  dapat  menghambat 50% aktivitas enzim α-glukosidase.
Pengujian  aktivitas  inhibisi  ini melalui in vitro dengan mengahambat enzim  α-glukosidase  menggunakan substrat p -NPG dan  enzim  α- glukosidase dimana enzim α- glukosidase akan menghidrolisis substrat p -NPG  menjadi  α-D  glukosa dan p -nitrofenol  (berwarna  kuning), sampel uji masing-masing ditambahkan  ke  dalam  campuran substrat  dan  enzim.  Aktivitas  inhibisi enzim  ini  diamati  berdasarkan  warna kuning  yang  timbul  dari  hasil  reaksi
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 6(2), Oktober 2021, 223-231 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
menggunakan microplate reader (Sancheti,  2009).  Jika  warna  kuning pada  larutan  yang  dihasilkan  lebih pudar  dibandingkan  dengan  larutan tanpa inhibitor, maka hal itu menunjukkan  kemampuan  inhibitor menghambat reaksi enzim α- glukosidase semakin besar.
Kemampuan  aktivitas  inhibisi  enzim
α-glukosidase  suatu  ekstrak  dapat diketahui  melalui  nilai  IC 50 sampel
terhadap enzim α-glukosidase.
Menurut Lee dan Lee (2001)
menyatakan  bahwa  suatu  ekstrak dikatakan sangat aktif sebagai penghambat enzim α-glukosidase jika nilai  IC 50 <10  µg/mL,  selanjutnya aktivitas sebagai penghambat enzim α- glukosidase  dikatakan  aktif  jika  nilai IC 50 10  -  100  µg/mL,  dan  dikatakan tidak aktif jika IC 50 >100 µg/mL.
Tabel 2. Data Hasil Uji Aktivitas Inhibisi Enzim α-Glukosidase dari Ekstrak
Kulit Batang Bauhinia semibifida Roxb dan Akarbose Ekstrak Konsentrasi (µg/mL) Ln Konsentrasi Absorbansi Sampel * % Inhibisi IC 50 (μg/mL) Aktivitas n- heksana 500 6,215 0,006 99,17 15,625 Aktif 250 5,521 0,088 88,36 125 4,828 0,126 83,31 62,5 4,135 0,210 72,24 31,25 3,442 0,320 57,84 15,625 2,749 0,383 49,49 Etil asetat 500 6,215 0,011 98,51 35,49 Aktif 250 5,521 0,061 91,92 125 4,828 0,215 71,72 62,5 4,135 0,317 58,19 31,25 3,442 0,386 49,10 15,625 2,749 0,496 34,65 Metanol 500 6,215 0,024 96,79 34,279 Aktif 250 5,521 0,125 83,49 125 4,828 0,220 70,97 62,5 4,135 0,304 59,99 31,25 3,442 0,400 47,34 15,625 2,749 0,466 38,60 Akarbose 10 2,303 0,0873 88,494 0,384 Sangat Aktif 5 1,609 0,1690 77,734 2,5 0,916 0,2117 72,112 1,25 0,223 0,2620 65,481 0,625 -0,470 0,3233 57,400 0,3125 -1,163 0,4137 45,498 *Hasil dinyatakan dalam rata-rata (n=3)
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 6(2), Oktober 2021, 223-231 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Gambar 1. Grafik Inhibisi Enzim α-Glukosidase dari Ekstrak Kulit Batang Bunga Kupu-Kupu ( Bauhinia semibifida Roxb) dan Akarbose
Berdasarkan  nilai  IC 50 dari masing-masing  ekstrak  menunjukkan adanya kemampuan aktivitas antidiabetes melalui inhibisi enzim α- glukosidase. Ekstrak n -heksana
memiliki  nilai  IC 50 paling  kecil diantara  ketiga  ekstrak.  Pada  ekstrak n- heksana yang memiliki kemampuan menghambat  enzim  α-glukosidase paling  baik  diantara  ketiga  ekstrak memiliki kandungan senyawa terpenoid,  yang  mana  terpenoid memiliki  efek  untuk  menghambat kerja  enzim  α-gukosidase  sehingga dapat  menganggu  serta  menurunkan proses  penyerapan  glukosa  pada  usus halus (Kumar et al. , 2013).
Efektivitas  ini  kemungkinan terjadi karena beberapa terpenoid yang aktif  sebagai  antidiabetes  dengan mekanisme  kerja  menghambat  enzim α-glukosidase  pada  sampel  kulit batang  bunga  kupu-kupu  larut  dalam pelarut n -heksana.  Akarbose  dipilih sebagai  pembanding  karena  akarbose merupakan  obat  antidiabetes  yang bekerja  dalam  menghambat  enzim  α- glukosidase yang beredar di Indonesia dan  juga  akarbose  sudah  menjadi pembanding yang  diakui  secara internasional.  Selain  itu,  dalam  hal struktur,  akarbose  memiliki  struktur yang hampir sama dengan substrat p - nitrofenil-α-D-glukopiranosida .
Berdasar-kan hasil pengujian akarbose
y = 14,468x + 10,229 R² = 0,9864 0,00 20,00 40,00 60,00 80,00 100,00 120,00 0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 % I n h ib is i ln konsentrasi Ekstrak n- heksana y = 16,915x - 9,7868 R² = 0,9969 0,0 50,0 100,0 150,0 0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 % I n h ib is i ln konsentrasi Ekstrak Metanol y = 19,013x - 17,865 R² = 0,987 0,0 20,0 40,0 60,0 80,0 100,0 120,0 0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 % I n h ib is i ln konsentrasi Etil Asetat y = 11,649x + 61,15 R² = 0,9867 0,0 50,0 100,0 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 % I n h ib is i ln Konsentrasi Akarbose
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 6(2), Oktober 2021, 223-231 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
sebagai  pembanding  memiliki  nilai IC 50 sebesar  0,384  µg/mL  yang berpotensi sangat aktif sebagai inhibitor enzim α-glukosidase.

## KESIMPULAN
Hasil penelitian aktivitas inhibisi  enzim  α-glukosidase  dari ekstrak kulit batang bunga kupu–kupu ( Bauhinia semibifida Roxb)
menggunakan microplate reader menunjukkan bahwa ekstrak n - heksana, etil asetat, dan metanol kulit batang  bunga  kupu–kupu  ( Bauhinia semibifida Roxb)  berpotensi  aktif sebagai inhibitor enzim α-glukosidase secara in  vitro dengan  nilai  IC 50
sebesar  15,625  µg/mL,  ekstrak  etil asetat  memilki  nilai  IC 50 sebesar 35,495  µg/mL,  dan  ekstrak  metanol memilki  nilai  IC 50 sebesar  34,279 µg/mL.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Peneliti mengucapkan
terimakasih  kepada  STIFAR  Riau
yang telah memberikan dana
Penelitian Dosen Pemula 2020 sehingga penelitian ini dapat
terlaksana dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Boonphong,  S.,  Puangsombat,  P., Baramee,  A.,  Mahidol,  C., Ruchirawat,  S.  &  Kittakoop,  P.
2007.  Bioactive  Compounds From Bauhinia purpurea Possessing Antimalarial, Antimycobacterial,  Antifungal, Anti-Inflammatory, and Cytotoxic Activities. Journal of
Natural  Products ,  70(5):  795– 801.
Fitmawati,  F.,  Sofiyanti,  N.,  Roza, R.M.,  Isnaini,  I.,  Irawan,  Y.R., Winata,  D.R.  &  Dewi,  A.P.K.
2017.  Antioxidant  Activity  of Dominant Plants Species in Obat Pahit from Lingga Malay Ethnic in Riau Archipelago. Biosaintifika: Journal of Biology  &  Biology  Education ,
9(2): 325–331.
Heyne,  K.  1987. Tumbuhan  Berguna
Indonesia . 3 ed. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Kumar,  D.,  Ghosh,  R.  &  Pal,  B.C. 2013.  a  -Glucosidase  inhibitory terpenoids from Potentilla fulgens and  their  quantitative estimation  by  Validated  Hplc
Method. Journal  Of  Functional
Foods , 1–7.
Lee,  D.  &  lee,  S.  2001.  Genistein,  a soy  iso£avone,  is  a  potent  u- glucosidase inhibitor. Federation of European Biochemical  Societies  Letters , 501: 84–86.
Sancheti, S.; S.S. 2009. Chaenomeles Sinensis :  A  Potent  α-  and  β- Glucosidase Inhibitor. American
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 6(2), Oktober 2021, 223-231 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
Journal  of  Pharmacology  and Toxicology , 4.
Soelistijo, S., Novida, H. & Rudijanto, A. 2015. Konsensus Pengolahan dan Pencegahan Diabetes Melitus  Tipe  2  Di  Indonesia . Jakarta: PB Perkeni. Yadava,  R.N.  &  Tripathi,  P.  2000.  A
Novel  Flavone  Glycoside  From The Stem of Bauhinia purpurea.
Fitoterapia , 71(1): 88–90.