ISSN 1693-3079 eISSN 2621-8356
JITEKGI 2021, 17 (2): 55-62 diterbitkan di Jakarta

## KADAR HAMBAT MINIMUM DAN KADAR BUNUH MINIMUM EKSTRAK ETANOL DAUN OREGANO TERHADAP PERTUMBUHAN Candida albicans
Bernadete Marcelianta Cantika Br. Tarigan * , Shelly Lelyana ** , Vinna Kurniawati Sugiaman *** * Program Studi Pendidikan Kedokteran Gigi Universitas Kristen Maranatha, Bandung ** Bagian Ilmu Penyakit Mulut, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Kristen Maranatha, Bandung
*** Bagian Oral Biology, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Kristen Maranatha, Bandung Korespondensi: Bernadete Marcelianta Cantika Br. Tarigan, cantikamarcelianta03@gmail.com

## ABSTRAK
Latar belakang: Candida albicans merupakan salah satu flora normal oral yang dapat menyebabkan infeksi pada rongga mulut manusia yang disebut sebagai kandidiasis. Manajemen primer yang sering digunakan dalam mengatasi kandidiasis pada rongga mulut salah satunya adalah nystatin , namun pemberian nystatin hanya terbatas pada pengobatan topikal infeksi kandidiasis kulit dan mukosa karena memiliki spektrum yang sempit dan penyerapan yang buruk pada saluran pencernaan serta memiliki efek samping pada dosis yang tinggi seperti mual ringan, diare, dan muntah. Masyarakat sering menggunakan daun oregano ( Origanum vulgare L. ) sebagai obat tradisional untuk mengobati berbagai macam penyakit seperti gangguan bronkial, gangguan pencernaan, gatal pada kulit dan flu. Sejumlah penelitian (secara in vitro dan in vivo ) juga menunjukkan bahwa daun oregano ( Origanum vulgare L. ) mengandung beragam senyawa fitokimia seperti fenolik glikosida, flavonoid, tanin, sterol dan terpenoid dalam jumlah tinggi. Tujuan: mengetahui kadar hambat minimum (KHM) dan kadar bunuh minimum (KBM) ekstrak etanol daun oregano ( Origanum vulgare L .) terhadap pertumbuhan Candida albicans secara in vitro. Metode: penelitian ini bersifat eksperimental murni laboratorium secara in vitro dengan cara membandingkan kelompok sampel yang mengandung ekstrak etanol daun oregano dengan konsentrasi 50 mg/ml; 25 mg/ml; 12,5 mg/ml; 6,25 mg/ml; 3,125 mg/ml; 1,562 mg/ml; 0,781 mg/ml; serta kontrol negatif berupa DMSO ( Dimethyl Sulfoxide ) 10% dan kontrol positif berupa nystatin . Metode yang digunakan yaitu metode broth microdilution pada 96 well plate yang diamati dengan spektofotometri dan uji kadar bunuh minimum (KBM) dengan metode spread pada agar yang dihitung menggunakan colony counter . Hasil: ekstrak etanol daun oregano ( Origanum vulgare L. ) memiliki kadar hambat minimum (KHM) pada konsentrasi 0,781 mg/ml dan kadar bunuh minimum (KBM) pada konsentrasi 50 mg/ml. Kesimpulan: ekstrak etanol daun oregano ( Origanum vulgare L .) memiliki aktivitas antijamur terhadap pertumbuhan Candida albicans .
Kata kunci: kadar Hambat Minimum (KHM), Kadar Bunuh Minimum (KBM), Ekstrak etanol daun oregano ( Origanum vulgare L.), Candida albicans

## ABSTRACT
Background: Candida albicans is one of the normal oral flora that can cause infection in the human oral cavity which is known as candidiasis. The primary management that is often used to treat oral candidiasis is nystatin, however nystatin is only limited to topical treatment of skin and mucosal candidiasis infections because it has a narrow spectrum and poor absorption in the digestive tract and has side effects when consumed such as mild nausea, diarrhea, and vomiting. Oregano leaf (Origanum vulgare L.) are often used as a traditional medicine that can treat various diseases such as bronchial disorders, indigestion, skin itching, and flu. Some studies (in vitro and in vivo) have also shown that oregano leaf (Origanum vulgare L.) contain various phytochemical compounds such as phenolic glycosides, flavonoids, tannins, sterols, and high amounts of terpenoids. Purpose: the aim of this study was to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) of the ethanol extract of oregano leaf (Origanum vulgare L.) against the growth of Candida albicans in vitro. Methods: this research is a laboratory experimental in vitro by comparing groups of samples containing oregano leaf ethanol extract with concentrations of 50 mg/ml; 25 mg/ml; 12.5 mg/ml; 6.25 mg/ml; 3.125 mg/ml; 1,562 mg/ml; 0.781 mg/ ml; and DMSO (Dimethyl Sulfoxide) 10% (negative control) and nystatin (positive control). The method used is the broth microdilution method on 96 well plates which were observed by spectophotometry and the minimum fungicidal concentration (MFC) test with the spread method on agar which was calculated using a colony counter. Results: the ethanol extract of oregano leaf (Origanum vulgare L.) had a minimum inhibitory concentration (MIC) at 0.78 mg/
Jurnal Ilmiah dan Teknologi Kedokteran Gigi FKG UPDM(B) November 2021
ml and a minimum fungicidal concentration (MFC) at 50 mg/ml. Conclusion: the ethanol extract of oregano leaf (Origanum vulgare L.) has antifungal activity against the growth of Candida albicans.
Keywords: Minimum Inhibitory Concentration (MIC), Minimum Fungicidal Concentration (MFC), Ethanol extract of oregano leaf (Origanum vulgare L.), Candida albicans

## PENDAHULUAN
C andida albicans adalah jamur dimorfik patogen pada manusia dan dapat menyebabkan penyakit mulai dari mukosa superfisial hingga infeksi sistemik yang mengancam jiwa. 1,2 Candida albicans merupakan uniseluler yeast dari famili Saccharomycetaceae yang me miliki diameter 1,5-5 µm hingga 7-17 µm. 3 Candida albicans merupakan komponen  flora  oral  normal  yang  dapat  berubah menjadi patogen jika terjadi perubahan lingkungan oral. Perubahan tersebut menyebabkan terjadinya infeksi rongga mulut yang disebut sebagai kandidiasis. 4 Kandidiasis adalah infeksi oportunistik dengan prevalensi terbanyak yang menyerang mukosa. 5 Hasil penelitian Nur’aeny dkk. (2017) pada periode tahun 2010 sampai tahun 2014, didapatkan sebanyak 49 pasien yang berkunjung ke klinik ilmu penyakit mulut RSHS Bandung menunjukkan bahwa mereka me- ngalami kandidiasis oral. Prevalensi dari 49 orang yang menderita kandidiasis oral terbanyak pada pasien pria sebanyak 34 orang (69,3%) dan wanita 15 orang (30,7%) dengan faktor predisposisi terbanyak me- nunjukkan adanya keterlibatan penyakit sistemik sebesar 40,2%. 6 Kandidiasis paling sering disebab  kan oleh Candida albicans dan dapat juga disebab kan oleh spesies Candida lainnya seperti Candida parapsilosis , Candida tropicalis , Candida glabrata , Candida krusei , Candida pseudotropicalis , dan Candida guilliermondii . 3 Sejak tahun 1868 kandidiasis memiliki konsep bahwa kandidiasis adalah "penyakit orang yang sakit" atau yang biasa disebut sebagai faktor predisposisi infeksi. 4 Faktor predisposisi kandidiasis di bagi menjadi dua faktor yaitu faktor lokal dan faktor sistemik. Faktor predisposisi lokal kandidiasis antara lain meliputi oral hygiene yang buruk, pemakaian gigi tiruan dan appliance intraoral lainnya, kuantitas dan kualitas saliva yang buruk, dan adanya lesi pada rongga mulut. Faktor predisposisi sistemik kandidiasis antara lain me liputi agen terapeutik (antibiotik spektrum luas, kortikosteroid, kemoterapi dan radioterapi), penyakit degeneratif sistemik (diabetes mellitus, HIV/AIDS), defisiensi nutrisi, defisiensi vitamin (B 2 , B 3 , B 6 , B 12 , C, dan asam folat), defisiensi mineral (Ca, Fe, Zn) dan juga usia (neonatus, bayi, lansia). 7,8
Kandidiasis yang paling umum ditemui yaitu kandidiasis pseudomembran yang memiliki gambaran klinis bercak putih hingga kuning atau plak yang memiliki bentuk seperti "tumpukan keju". Lesi tersebut
dapat dijumpai diberbagai daerah rongga mulut, tetapi paling sering dijumpai di lidah, mukosa bukal dan palatal. 7 Prevalensi orang yang menderita kandidiasis di Asia mencapai sekitar 56-81%. 8 Manajemen primer yang sering digunakan untuk mengatasi kandidiasis adalah dengan agen topikal golongan poliena seperti nystatin dan amfoterisin B. 5 Pemberian nistatin terbatas hanya pada pengobatan topikal infeksi kandidiasis kulit dan mukosa karena spektrumnya yang sempit dan penyerapan yang buruk pada saluran pencernaan serta pada dosis yang tinggi memiliki efek samping seperti mual ringan, diare, dan sesekali muntah. 9 Mekanisme kerja dari nistatin adalah merusak sel-sel jamur, dengan cara berikatan dengan sterol membran sel jamur yang akan menyebabkan ketidakseimbangan permeabilitas membran dan transpor mekanismenya. Maka sel jamur tersebut akan kehilangan banyak makromolekul dan kation, sehingga jumlah sterol pada membran sel jamur akan mengalami penurunan ataupun sifat struktur atau ikatannya berubah, sehingga resistensi dapat terjadi ber samaan dengan terganggunya fungsi. 10 Nystatin tersedia dalam berbagai sediaan seperti suspensi, krim, dan salep. Sediaan suspensi merupakan sediaan yang paling sering dipergunakan untuk mengobati infeksi kandidiasis. 11 Banyak kendala yang kemudian muncul akibat dari penggunaan berbagai jenis obat antijamur tersebut, seperti daya beli masyarakat masih rendah dikarenakan harganya yang relatif mahal dan beberapa spesies jamur sudah banyak yang menunjukkan resisten terhadap berbagai jenis obat antijamur sehingga menimbulkan efek samping yang beragam bagi tubuh manusia dan toksisitas. 12 Akibatnya masyarakat beralih untuk memilih alternatif pengobatan menggunakan tanaman herbal, dikarenakan harga yang lebih terjangkau dan efek samping yang minimal. Salah satu tanaman herbal yang berpotensi sebagai agen antijamur yaitu daun oregano ( Origanum vulgare L. ).
Daun oregano merupakan spesies tumbuhan dari famili Lamiaceae berasal dari wilayah Mediterania dan Eurasia barat, memiliki tinggi 30-50 cm. 13 Banyak petani yang membudidayakan tanaman ini di Indonesia karena manfaatnya yang sangat beragam. 14 Menurut Shafaghat dkk. (2012) bagian daun dari tanaman oregano memiliki zona hambat yang lebih besar dibandingkan pada bagian batangnya. 15 Umumnya daun oregano digunakan sebagai pe- nyedap rasa, selain itu masyarakat juga sering meng-
Jurnal Ilmiah dan Teknologi Kedokteran Gigi FKG UPDM(B) November 2021
gunakan daun ini sebagai obat tradisional yang dapat mengobati berbagai macam penyakit seperti gangguan bronkial, gangguan pencernaan, gatal pada kulit dan flu. 16,17 Sejumlah penelitian (secara in vitro dan in vivo ) menunjukkan bahwa daun oregano mengandung beragam senyawa fitokimia seperti fenolik glikosida, flavonoid,  tanin,  sterol  dan  terpenoid  dalam  jumlah tinggi.  Kandungan  senyawa  fitokimia  pada  daun oregano dapat bervariasi karena adanya beberapa faktor pembeda seperti kemotipe yang berbeda pada spesies yang sama, asal geografis, dan waktu panen. 17 Penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Manohar dkk. (2001) menunjukkan bahwa essential oil atau minyak atsiri dari daun oregano memiliki sifat fungistatik dan fungisidal terhadap pertumbuhan Candida albicans, didapatkan nilai kadar hambat minimum (KHM) 0,125 mg/ml dan nilai kadar bunuh minimum (KBM) 0,25 mg/ml menggunakan metode mikrodilusi. 18 Hasil penelitian Iuliana dkk. (2011) me  nyatakan bahwa ekstrak daun oregano memiliki aktivitas antioksidan tertinggi dan kaya akan senyawa flavonoid. 19 Dilihat dari kandungan kimianya secara kuantitatif, ekstrak etanol dari daun oregano ( Origanum vulgare L. ) mengandung 4 asam fenolat ( gentisic, chlorogenic, p-coumaric dan asam rosmarinic ) dan 6 flavonoid ( hyperoside, isoquercitrin, rutin, quercitrin, quercetin dan luteolin ). 20 Salah satu kandungan ekstrak daun oregano ( Origanum vulgare L. ) yang paling ber- potensi untuk menghambat pertumbuhan Candida albicans salah  satunya  yaitu  senyawa  flavonoid. Flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder yang di   temu kan pada tanaman dan memiliki berbagai efek bioaktif salah satunya sebagai antijamur. 21 Berdasarkan hal tersebut, ekstrak etanol daun oregano diduga dapat menghambat pertumbuhan jamur Candida albicans . Terhambatnya jamur diduga karena terdapat kandungan senyawa bioaktif yang ada pada ekstrak etanol daun oregano yang memiliki sifat antijamur.

## METODE PENELITIAN
Sampel dari penelitian ini adalah Candida albicans ATCC 10231 biakan yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi dan Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Padjajaran Bandung. Penelitian ini adalah eksperimental murni laboratorik secara in vitro dengan metode broth microdilution untuk me- nentukan KHM (kadar hambat minimum) dan KBM (kadar bunuh minimum) ekstrak etanol daun oregano terhadap pertumbuhan Candida albicans . Daun oregano yang digunakan pada penelitian ini di kirim- kan ke Laboratorium Sentral Universitas Padjadjaran untuk dilakukan ekstraksi dengan pelarut etanol 96% menggunakan metode maserasi. Setelah daun oregano selesai diekstrak, dilanjutkan dengan pengujian fitokimia ekstrak secara kualitatif.
Penelitian uji KHM dan KBM ekstrak etanol daun oregano terhadap pertumbuhan Candida albicans dilakukan di Laboratorium Biomolekuler dan Biomedis Aretha Medika Utama Bandung pada bulan Februari 2021, dengan prosedur kerja menggunakan metode CLSI ( Clinical Laboratory Standard Insitute ) tahun 2008  dengan  modifikasi.  Penelitian  ini  bersifat eksperimental murni laboratorium secara in vitro dengan cara membandingkan kelompok sampel yang me ngandung ekstrak etanol daun oregano dengan konsentrasi 50 mg/ml; 25 mg/ml; 12,5 mg/ml; 6,25 mg/ml; 3,125 mg/ml; 1,562 mg/ml; 0,781 mg/ml; serta kontrol negatif berupa DMSO ( Dimethyl Sulfoxide ) 10% dan kontrol positif berupa nystatin . Penelitian ini menggunakan metode broth microdilution untuk menentukan KHM dengan me- lihat tingkat kekeruhan larutan dalam tabung yang diukur menggunakan spektofotometri. Selanjutnya me  nentu kan KBM dengan menginokulasikan biakan ke dalam cawan petri lalu menghitung jumlah koloni meng gunakan colony counter . Dalam penelitian ini, untuk mendapatkan KHM metode yang digunakan yaitu metode broth microdilution . Hasil pengukuran kuantitatif KHM ini didapatkan dari uji spektofotometri dengan panjang gelombang 405 nm. Untuk mendapat- kan KBM metode yang digunakan yaitu metode spread pada cawan petri dilanjutkan dengan penghitungan jumlah koloni menggunakan colony counter dengan teknik total plate count (TPC). Langkah kerja yang akan dilakukan meliputi tahapan-tahapan berikut ini: Pertama-tama tambahkan 100 µl inokulum pada well sejumlah seri konsentrasi ekstrak etanol daun oregano yang digunakan, lalu tambah kan 100 µl dari working solution setiap konsentrasi ekstrak pada well yang telah berisi inokulum sehingga konsentrasi enzim mencapai konsentrasi akhir ( final  concentration) , kemudian sebanyak 200 µl inokulum ditambahkan pada well sebagai kontrol tumbuh dan kontrol negatif aktivitas penghambatan kemudian sebanyak 100 µl PDB dan 100 µl dari working solution setiap konsentrasi ekstrak etanol daun oregano ditambahkan pada well sebagai blank, selama  24  jam  dengan  suhu  28℃ plate diinkubasi pada inkubator. Setelah itu dilakukan pengukuran menggunakan spektofotometri pada panjang gelombang 405 nm. Nilai KHM ditentukan pada konsentrasi paling rendah yang dapat menurunkan viabilitas dari 100% dan konsentrasi paling rendah yang menunjukkan aktivitas inhibisi Candida albicans . Selanjutnya untuk menentukan KBM, sebanyak 20 µl dari setiap well ditumbuhkan pada media PDA dengan menggunakan metode spread kemudian setiap plate diinkubasi pada suhu 28℃ selama 24 jam. Nilai KBM (Kadar Bunuh Minimum) ditentukan pada konsentrasi ekstrak yang dapat menurunkan viabilitas sampai dibawah 1% dan konsentrasi ekstrak yang me nunjuk- kan aktivitas inhibisi Candida albicans sampai 99% dengan melakukan metode Total Plate Count (TPC).
Jurnal Ilmiah dan Teknologi Kedokteran Gigi FKG UPDM(B) November 2021

## HASIL PENELITIAN
Berdasarkan  hasil  uji  fitokimia  kualitatif, senyawa bioaktif yang terkandung dalam ekstrak etanol daun oregano terlihat pada tabel 1 dibawah ini.
Hasil pengukuran yang disajikan pada tabel 2, menunjukkan bahwa kontrol DMSO ( Dimethyl Sulfoxide ) 10% memiliki nilai rata-rata absorbansi koreksi tertinggi dengan nilai absorbansi 0,2267 dan terendah pada kontrol nystatin dengan rata-rata nilai
absorbansi 0,0218. Pada hasil pengukuran berbagai perlakuan ekstrak, menunjukkan bahwa nilai rata-rata absorbansi koreksi tertinggi terdapat pada konsentrasi ekstrak etanol daun oregano 0,781 mg/ml dengan nilai absorbansi 0,1087, sedangkan nilai rata-rata absorbansi koreksi terendah terdapat pada konsentrasi ekstrak etanol daun oregano 50 mg/ml dengan nilai absorbansi 0,0228. Hal ini menunjukkan bahwa Candida albicans dapat dihambat dengan ekstrak etanol daun oregano.
Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Oregano No. Metabolit Sekunder Metode Uji Hasil Uji 1. Fenolik Pereaksi FeCl3 5% + 2. Tanin Pereaksi FeCl3 1% + 3. Flavonoid Pereaksi HCl pekat + Mg + Pereaksi H2SO4 2N - Pereaksi NaOH 10% + 4. Saponin Dipanaskan + 5. Triterpenoid dan Steroid Pereaksi H2SO4 pekat + CH3COOH anhidrat + + 6. Alkaloid Pereaksi Dragendorff -
Tabel 2. Hasil Pengukuran Optical Density (OD) Pengaruh Ekstrak Etanol Daun Oregano terhadap Candida albicans Sampel Konsentrasi Absorbansi Blank Absorbansi Koreksi Rata- rata 1 2 3 1 2 3 Ekstrak etanol daun oregano 50 mg/mL 3,2600 3,2597 3,2597 3,2370 0,0230 0,0227 0,0227 0,0228 25 mg/mL 3,0214 3,0201 3,0200 2,9938 0,0276 0,0263 0,0262 0,0267 12.5 mg/mL 3,0098 3,0070 3,0080 2,9790 0,0308 0,0280 0,0290 0,0293 6.25 mg/mL 1,8410 1,8292 1,8306 1,7640 0,0770 0,0652 0,0666 0,0696 3.125 mg/mL 0,8420 0,8440 0,8380 0,7450 0,0970 0,0990 0,0930 0,0963 1.562 mg/mL 0,5660 0,5840 0,5760 0,4780 0,0880 0,1060 0,0980 0,0973 0.781 mg/mL 0,4350 0,4240 0,4390 0,3240 0,1110 0,1000 0,1150 0,1087 Kontrol DMSO 10% 0,4120 0,4140 0,4060 0,1840 0,2280 0,2300 0,2220 0,2267 Nystatin 5 mg/ml 1,6581 1,6584 1,6587 1,6366 0,0215 0,0218 0,0221 0,0218 Tabel 3. Jumlah Koloni Candida albicans Setelah Diinkubasi 24 Jam pada Berbagai Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Oregano Sampel Konsentrasi Jumlah Koloni (CFU/mL) Rata-rata STD RSD (%) 1 2 3 Ekstrak etanol daun oregano 50 mg/mL 0 0 0 0 0 #DIV/0! 25 mg/mL 13.643 11.043 10.843 11.843 1562 13,19 12.5 mg/mL 20.043 14.443 16.443 16.976 2838 16,72 6.25 mg/mL 112.443 88.843 91.643 97.643 12893 13,2 3.125 mg/mL 152.443 156.443 144.443 151.110 6110 4,04 1.562 mg/mL 134.443 170.443 154.443 153.110 18037 11,78 0.781 mg/mL 180.443 158.443 188.443 175.776 15535 8,84 Kontrol DMSO 10% 414.443 418.443 402.443 411.776 8327 2,02 Nystatin 5 mg/ml 0 0 0 0 0 #DIV/0!
Jurnal Ilmiah dan Teknologi Kedokteran Gigi FKG UPDM(B) November 2021
Hasil pengukuran KBM ekstrak etanol daun oregano terhadap pertumbuhan Candida albicans yang disajikan pada tabel 3 menunjukkan bahwa kontrol DMSO ( Dimethyl Sulfoxide ) 10% memiliki jumlah koloni Candida albicans tertinggi dengan rata-rata jumlah koloni 411.776 CFU/mL dan jumlah koloni terendah terdapat pada kontrol nystatin dengan rata- rata jumlah koloni 0 CFU/mL. Pada hasil pengukuran berbagai perlakuan ekstrak etanol daun oregano, menunjukkan bahwa jumlah pertumbuhan koloni Candida albicans tertinggi terdapat pada konsentrasi 0,781 mg/ml dengan rata-rata jumlah koloni 175.776 CFU/mL dan jumlah pertumbuhan koloni Candida albicans terendah terdapat pada konsentrasi 50 mg/ ml dengan rata-rata jumlah koloni 0 CFU/mL. Hasil ini menunjukkan sejalannya pengamatan KHM meng-
gunakan spektofotometri bahwa terjadi peng hambatan Candida albicans oleh ekstrak etanol daun oregano. Setelah dilakukannya uji KHM dan KBM ekstrak etanol daun oregano terhadap pertumbuhan Candida albicans maka didapatkanlah data hasil perhitungan persentase viabilitas dan inhibisi. Persentase viabilitas merupakan persentase jumlah Candida albicans yang masih tumbuh setelah diberi perlakuan dibanding- kan dengan kontrol DMSO ( Dimethyl Sulfoxide ) 10%. Nilai persentase viabilitas di dapat kan dari per hitungan: jumlah koloni (CFU/ mL) kontrol DMSO 10% X 100%. Sedangkan persentase inhibisi me rupakan persentase jumlah Candida albicans yang dihambat setelah diberi perlakuan. Nilai persentase inhibisi didapatkan dari perhitungan: 100% - nilai viabilitas dan terlihat pada tabel 4.
Tabel 4. Viabilitas dan Inhibisi Ekstrak Etanol Daun Oregano terhadap Candida albicans Sampel Viabilitas (%) Inhibisi (%) Ekstrak Etanol Daun Oregano 50 mg/mL 0.98 ± 0.08 99.02 ± 0.08 25 mg/mL 2.88 ± 0.38 97.12 ± 0.38 12.5 mg/mL 4.12 ± 0.69 95.88 ± 0.69 6.25 mg/mL 23.71 ± 3.13 76.29 ± 3.13 3.125 mg/mL 36.70 ± 1.48 63.30 ± 1.48 1.562 mg/mL 37.18 ± 4.38 62.82 ± 4.38 0.781 mg/mL 42.69 ± 3.77 57.31 ± 3.77 Kontrol DMSO 10% 100.00 ± 2.02 0.00 ± 2.02 Nystatin 5 mg/mL 0.50 ± 0.15 99.50 ± 0.15
Gambar 1. Persentase Viabilitas Ekstrak Etanol Daun Oregano terhadap Candida albicans
Dilihat dari grafik pada gambar 1 persentase nilai viabilitas tertinggi terdapat pada kontrol DMSO ( Dimethyl Sulfoxide ) 10% sebesar 100% dan pada ber bagai perlakuan konsentrasi ekstrak etanol daun oregano nilai viabilitas tertinggi ter dapat pada konsentrasi 0,781 mg/ml dengan persentase
sebesar 42,69%. Persentase nilai viabilitas terendah terdapat pada kontrol nystatin sebesar 0,50%, dan pada berbagai perlakuan konsentrasi ekstrak etanol daun oregano nilai viabilitas terendah terdapat pada konsentrasi 50 mg/ml dengan persentase sebesar 0,98%.
Jurnal Ilmiah dan Teknologi Kedokteran Gigi FKG UPDM(B) November 2021
Mengacu pada grafik dari gambar 2 persentase nilai inhibisi tertinggi terdapat pada kontrol nystatin sebesar 99,50% dan pada berbagai perlakuan konsentrasi ekstrak etanol daun oregano nilai inhibisi ter tinggi terdapat pada konsentrasi 50 mg/ml dengan persentase sebesar 99,02%. Persentase nilai inhibisi terendah terdapat pada kontrol DMSO ( Dimethyl Sulfoxide ) 10% sebesar 0% dan pada berbagai per- lakuan konsentrasi ekstrak etanol daun oregano nilai inhibisi terendah terdapat pada konsentrasi 0,781 mg/ ml dengan persentase sebesar 57,31%.
Kedua data tersebut (nilai viabilitas dan nilai inhibisi) merupakan dasar dalam menentu kan nilai KHM maupun KBM berdasarkan data hasil pe nelitian secara keseluruhan. KHM merupakan konsentrasi paling rendah yang dapat menurunkan viabilitas dari 100% dan konsentrasi paling rendah yang menunjukkan aktivitas inhibisi jamur, tabel 4 menunjukkan bahwa KHM pada penelitian ini berada pada konsentrasi 0,781 mg/ml. KBM merupakan konsentrasi yang dapat menurunkan viabilitas sampai di bawah 1% dan konsentrasi yang menunjukkan aktivitas inhibisi sampai 99%, berdasarkan tabel 4 dapat disimpulkan bahwa KBM pada penelitian ini berada pada konsentrasi 50 mg/ml. Pada penelitian ini menunjukkan bahwa nilai viabilitas jamur Candida albicans berbanding terbalik dengan nilai inhibisi (semakin tinggi jumlah Candida albicans yang di- hambat, maka jumlah Candida albicans yang masih tumbuh semakin rendah).

## PEMBAHASAN
Aktivitas antijamur yang dihasilkan oleh ekstrak etanol daun oregano diperkirakan berasal dari gabungan metabolit sekunder dalam ekstrak tersebut. Berdasarkan hasil uji fitokimia yang telah dilakukan pada penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun oregano mengandung beberapa senyawa metabolit sekunder seperti fenolik, tanin, flavonoid, saponin, triterpenoid, dan steroid dalam jumlah yang
sedikit. Hal tersebut sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Bharti dkk. (2013). Senyawa metabolit sekunder pada tanaman yang sama juga dapat me- nunjuk kan kandungan senyawa yang berbeda, hal ini dipengaruhi oleh beberapa faktor lingkungan seperti cahaya, suhu, pH dan ketinggian tempat.
Ekstrak etanol daun oregano terkandung se- nyawa metabolit sekunder yang memiliki berbagai mekanisme kerja sebagai antijamur. Mekanisme kerja dari senyawa fenolik dengan cara mendenaturasi protein sehingga struktur tersier protein akan rusak dan kehilangan sifat-sifat aslinya. Dinding sel dapat mudah ditembus oleh senyawa aktif yang bersifat fungistatik dikarenakan adanya kerapuhan dinding sel yang disebabkan oleh terdenaturasinya protein dinding sel Candida albicans . Jika yang terdenaturasi adalah protein enzim, maka proses penyerapan nutrisi dan metabolisme akan terganggu sehingga menyebabkan kerusakan pada enzim dan enzim tidak dapat bekerja. Pada kadar yang rendah senyawa fenolik akan men- denaturasi protein dan pada kadar yang tinggi senyawa fenolik menyebabkan koagulasi protein sehingga sel akan mati. 22,23
Mekanisme kerja tanin dalam menghambat per tumbuhan Candida albicans yaitu ergosterol yang merupakan sterol penyusun utama membran sel jamur dihambat biosintesisnya, sehingga akan menyebabkan permeabilitas membran sel terganggu. Permeabilitas membran sel yang terganggu tersebut akan me- nurun kan volume sel, sel-sel menjadi berlubang dan menyusut diikuti dengan fungsi metabolisme yang hilang dan pada akhirnya akan hancur. Selain itu, tanin juga dapat menghambat pertumbuhan jamur dengan kemampuannya dalam menghambat sintesis kitin yang dipergunakan dalam pembentukan dinding sel jamur dan kemampuannya dalam merusak membran sel. 9,24,25 Flavonoid juga merupakan senyawa metabolit sekunder yang memiliki aktivitas sebagai antijamur. Mekanisme  kerja  dari  flavonoid  yaitu  dengan  cara protein ekstraseluler dinding sel jamur didenaturasi sehingga dinding sel jamur akan rusak dan kerja
Gambar 2. Persentase Inhibisi Ekstrak Etanol Daun Oregano terhadap Candida albicans
Jurnal Ilmiah dan Teknologi Kedokteran Gigi FKG UPDM(B) November 2021
enzim menjadi terhambat. Protein yang terdenaturasi me nyebabkan terganggunya proses pembentukan sel sehingga akan terjadi perubahan komposisi protein dan menyebabkan peningkatan permeabilitas membran sel. Peningkatan tersebut menyebabkan terjadinya leakage bahan intrasel, defisiensi ATP pada sel, terganggunya metabolisme, terhambatnya per- tumbuhan, dan sel menjadi lisis. Rusaknya sel juga dapat menyebabkan pemisahan dari dinding sel jamur dan akan terjadi penurunan pada pembentukan germ tube dan panjang hifa, yang kemudian menyebabkan jamur tidak berkembang. 10 Perubahan komponen organik dan transpor nutrisi yang disebabkan oleh gugus hidroksil dalam flavonoid dapat menimbulkan efek toksik terhadap jamur. 12
Saponin memiliki efek sebagai antibakteri dan antijamur. Gugus monosakarida dan turunan saponin dapat mengganggu efek pada jamur. 26 Saponin me- rupakan senyawa metabolit sekunder dengan tingkat toksisitas yang tinggi terhadap jamur. Mekanisme kerja saponin dalam menghambat Candida albicans yaitu dengan cara berinteraksi dengan sterol membran. Selain itu, saponin berperan sebagai antijamur dengan menurunkan tegangan permukaan membran sterol dinding sel jamur sehingga akan terjadi peningkatan permeabilitas. Peningkatan permeabilitas tersebut akan mengakibatkan tertarik keluarnya cairan intraseluler yang lebih pekat dari sel, sehingga menyebabkan enzim, protein, nutrisi, zat-zat metabolisme dalam sel keluar dan jamur akan mengalami kematian. 27 Terpenoid (termasuk triterpenoid dan steroid) dapat menghambat pertumbuhan jamur melalui membran sitoplasma ataupun dengan mengganggu per- kembangan dan pertumbuhan spora jamur. Menurut Natta dkk. (2008), dikatakan bahwa belum di ketahui dengan jelas mekanisme senyawa terpenoid dalam meng hambat jamur, tetapi dengan adanya sifat lipofilik atau hidrofobik yang terdapat pada senyawa ter- penoid memungkinkan untuk terjadinya koagulasi sel, gangguan proton, kerusakan sitoplasmik membran pada sel jamur. 20,28
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada uji KHM ekstrak etanol daun oregano dalam menghambat pertumbuhan Candida albicans berada pada konsentrasi 0,781 mg/ml dengan persentase inhibisi sebesar 57,31% dan persentase viabilitas sebesar 42,69%. Sedangkan KBM berada pada konsentrasi 50 mg/ml, dengan persentase inhibisi sebesar 99,02%, dan persentase viabilitas sebesar 0,98%. Dilihat dari tingkat penghambatan yang ditunjukkan pada ekstrak etanol daun oregano dapat dikatakan bahwa tingkat penghambatan berbanding lurus dengan tingkat konsentrasinya, semakin tinggi konsentrasi ekstrak yang digunakan maka semakin tinggi daya hambat yang dihasilkan. Hal ini disebabkan karena sejumlah senyawa aktif yang terkandung pada ekstrak tersebut memiliki peran sebagai antijamur. Menurut Pelczar
(1988) mengatakan bahwa semakin tinggi konsentrasi suatu zat antimikroba, semakin tinggi pula daya antimikroba yang artinya semakin banyak mikroba yang akan terbunuh jika konsentrasi zat tersebut lebih tinggi, sehingga efek antijamur yang dihasilkan semakin efektif. 21 Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun oregano memiliki aktivitas antijamur ter- hadap pertumbuhan Candida albicans , yaitu dapat meng hambat (fungistatik) dan membunuh (fungisid) pertumbuhan jamur. Berdasarkan pembahasan tersebut dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol daun oregano berpotensi untuk dijadikan sebagai bahan acuan inovasi baru dalam mengembangkan pemanfaatan tanaman herbal oregano sebagai obat antijamur alternatif.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan hasil penelitian ini, diketahui bahwa nilai KHM dari ekstrak etanol daun oregano ter hadap pertumbuhan Candida albicans adalah sebesar 0,781 mg/ml, yang merupakan konsentrasi terendah yang digunakan dalam penelitian ini. Sedangkan nilai KBM dari ekstrak etanol daun oregano terhadap pertumbuhan Candida albicans adalah sebesar 50 mg/ml, yang merupakan konsentrasi tertinggi yang digunakan dalam penelitian ini. Tingkat penghambatan yang ditunjuk- kan ekstrak etanol daun oregano ( Origanum vulgare L .) berbanding lurus dengan tingkat konsentrasinya, semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka semakin tinggi pula daya hambat yang di hasilkan.
Saran yang dapat diberikan untuk penelitian selanjutnya  yaitu  perlu  dilakukannya  uji  fitokimia secara kuantitatif terhadap ekstrak etanol daun oregano. Karena penelitian ini hanya dilakukan secara in vitro maka untuk mengetahui efeknya pada sistem biologi makhluk hidup diperlukan penelitian lanjutan, seperti uji praklinik yang terdiri dari uji toksisitas dan uji farmakodinamik pada hewan coba secara in vivo efek toksik.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Kashem  SW,  Igyártó  BZ,  Gerami-Nejad  M, Kumamoto Y, Mohammed J, Jarrett E, et al. Candida Albicans Morphology and Dendritic Cell Subsets Determine  T-Helper  Cell  Differentiation.  Immunity. 2015;42(2):356–66.
2.  Tsui C, Kong EF, Jabra-Rizk MA. Pathogenesis of Candida Albicans Biofilm. Pathog Dis. 2016;74(4):1–13.
3.   Regezi J, Sciubba J, Jordan R. Oral Pathology: Clinical Pathologic Correlations. 7th ed. Oral Pathology: Clinical Pathologic Correlations. California: Elsevier; 2017. 104–107 p.
4.   Odell E. Cawson’s Essentials of Oral pathology and Oral Medicine. 9th ed. London: Elsevier; 2017. 244 p.
5.  Glick M. Burket’s Oral Medicine. 12th ed. Shelton: People’s Medical Publishing House; 2015. 93–100 p.
6.  Nur’aeny N, Hidayat W, Setiani TS, Herawati E, Wahyuni  IS.  Profil  Oral  Candidiasis  di  Bagian  Ilmu
Jurnal Ilmiah dan Teknologi Kedokteran Gigi FKG UPDM(B) November 2021
Penyakit Mulut RSHS Bandung Periode 2010-2014. Maj Kedokt Gigi Indones. 2017;3(1):23–8.
7.   Fazel N. Oral Signs of Systemic Diseases. In: Fazel N, editor. Dental Abstracts. 1st ed. Switzerland: Springer; 2019. p. 194.
8.  Hupp JR, Williams TP, Firriolo FJ. Dental Clinical Advisor. 1st ed. Louisville: Mosby; 2006. 243 p.
9.   Katzung BG. Basic and Clinical Pharmacology. 14th ed. San Francisco: McGraw-Hill Education; 2018. 1073 p.
10. Staf Pengajar Departemen Farmakologi UNSRI. Kumpulan Kuliah Farmakologi. 2nd ed. Jakarta: EGC; 2008. 228–229 p.
11.  McCuistion LE, Vuljoin-DiMaggio K, Winton MB, Yeager JJ. Pharmacology: A Patient-Centered Nursing Process Approach. 9th ed. Philadelphia: Elsevier; 2017. 748 p.
12.  Cutler SJ, Cutler HG. Biologically Active Natural Products: Pharmaceuticals. Florida: CRC Press LLC; 1999. 85 p.
13.  Pignatti S, Guarino R, La Rosa M. Flora d’Italia. 2nd ed. Bologna: Edagricole-New Business Media; 2017. 535 p.
14.  Hakim L. Rempah dan Herba Kebun-Pekarangan Rumah Masyarakat. 1st ed. Yogyakarta: Diandra Creative; 2015. 12 p.
15.  Shafaghat A, Rahbar N, Salimi F. Antimicrobial activity and constituents of the hexane extracts from leaf and stem of Origanum vulgare L. ssp. Viride (Boiss.) Hayek. growing wild in Northwest Iran. J Med Plants Res. 2012;6(13):2681–5.
16.  Fardin, Sarina. Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Oregano (Origanum vulgare) Terhadap Bioavailabilitas Tablet Diazepam Pada Mencit. Maj Farm Nas. 2017;14(1):52–8.
17.  Pezzani R, Vitalini S, Iriti M. Bioactivities of Origanum vulgare L.:an update. Phytochem Rev. 2017;16(6):1253– 1268.
18.  Manohar V, Ingram C, Gray J, Talpur NA, Echard BW, Bagchi D, et al. Antifungal Activities of Origanum Oil Against Candida Albicans. Mol Cell Biochem. 2001;228(1–2):111–7.
19.  Spiridon I, Colceru S, Anghel N, Teaca CA, Bodirlau R, Armatu A. Antioxidant Capacity and Total Phenolic Contents of Oregano (Origanum vulgare), Lavender (Lavandula angustifolia) and Lemon Balm (Melissa  officinalis)  from  Romania.  Nat  Prod  Res. 2011;25(17):1657–61.
20.  Oniga I, Pus C, Silaghi-Dumitrescu R, Olah NK, Sevastre B, Marica R, et al. Origanum Vulgare ssp.: Chemical Composition and Biological Studies. Molecules. 2018;23(8):1–14.
21.  Arifin B, Ibrahim S. Struktur, Bioaktivitas, dan Antioksidan Flavonoid. J Zarah. 2018;6(1):21–9.
22.  Mayer FL, Wilson D, Hube B. Candida Albicans Pathogenicity Mechanisms. Virulence. 2013;4(2):119–28.
23.  Toenjes KA, Stark BC, Brooks KM, Johnson DI. Inhibitors of Cellular Signalling are Cytotoxic or Block the Budded-to-Hyphal Transition in the Pathogenic Yeast Candida Albicans. J Med Microbiol. 2009;58(Part 6):779–90.
24. Tjampakasari CR. Karakteristik Candida Albicans. Cermin Dunia Kedokt. 2006;151(1):33–6.
25.  Pei Pei C, Chin VK, Wong WF, Madhavan P, Yong VC, Looi CY. Transcriptomic and Genomic Approaches for  Unravelling  Candida  albicans  Biofilm  Formation and Drug Resistance-An Update. Genes (Basel). 2018;9(11):1–19.
26.  Bharti V, Vasudeva N. Oreganum vulgare Linn. Leaf: An Extensive Pharmacognostical and Phytochemical Quality Assessment. Adv Pharm Bull. 2013;3(2):277–81.
27.  Watson DG. Pharmaceutical Analysis. 5th ed. Edinburgh: Elsevier; 2020. 387 p.
28.  Muflikhatur  R  S,  Rahayuningsih  HM.  Perbedaan Pengaruh Antara Ekstrak dan Rebusan Daun Salam (Eugenia polyantha) Dalam Pencegaham Peningkatan Kadar Kolesterol Total Pada Tikus Sprague Dawley. J Nutr Coll. 2014;3(1):142–9.