## KUALITAS MEMBRAN PLASMA UTUH DAN TUDUNG AKROSOM UTUH
0

## SPERMATOZOA SAPI BALI DIPRESERVASI SUHU 5  C DALAM PENGENCER
EKSTRAK AIR TEBU DENGAN PENAMBAHAN KUNING TELUR

## QUALITY OF MEMBRANE PLASMA AND ACROSOME INTEGRITY OF BALI BULL
0 PRESERVED AT  5 C  IN EXTENDER SUGAR CANE EXTRACT AND ADDITION
OF EGG YOLK *) **)
**) Pajri Anwar , Y. S. Ondho  dan D. Samsudewa pajri_anwar@yahoo.co.id
*) Mahasiswa Program Studi Magister Ilmu Ternak Universitas Diponegoro,
**) Dosen Fakultas Peternakan dan Pertanian Universitas Diponegoro

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kualitas    membran  plasma  utuh  (MPU)  dan tudung  akorom  utuh  (TAU)  Sapi  Bali  dalam  pengencer  ekstrak  air  tebu  dengan  Penambahan
0 kuning telur yang dipreservasi pada suhu 5 C. Semen yang digunakan dalam penelitian ini diambil dari  empat  koleksi  semen  sapi  bali  yang  telah  teruji  kualitas  semennya.  Komponen  Bahan pengencer  yang  dipergunakan  adalah  ektrak  air,  kuning  telur,  akuabides,  dan  antibiotik streptomicin dan penicillin. Hasil penelitian menunjukan bahwa, tidak ada pengaruh yang nyata (P>0,05) antara pengaruh perlakuan setelah pengenceran dan selama enam hari preservasi pada
0 suhu 5 C terhadap membran plasama utuh (MPU), tetapi mengakibatkan berbeda nyata (p<0,05) terhadap  tudung akrosom utuh (TAU) spermatozoa sapi Bali pada hari ketiga sampai hari ke enam
0 preservasi  5 C.Pengencer    terbaik    adalah  konsetrasi  25%  ekstrak  air  tebu    (T4)  dengan
0 persentase   MPU dan TAU selama enam hari perservasi 5 C masing-masing 69,00-59,75% dan 61,75-51,00%.
Kata Kunci : sapi bali, spermatozoa, ekstrak air tebu, kuning telur, MPU, TAU.

## ABSTRACT
This study aims to determine the Membrane plasma  and Acrosome integrity of the Bali bull semen with filtered sugarcane juice and the addition of egg yolk and preserved at a temperature of 0 5 C.  Semen  used  in  this  study  was  taken  from  four  tested  quality  semen  from  Bali  bull.  The components of the extender used in this study are; filtered sugarcane juice, egg yolk, distilled water and the antibiotic Streptomycin and penicillin. The results showed that there were no significant effect (P>0.05) between treatments under different extender concentration levels and preservation
0 days at a temperature of 5 C for plasma membrane integrity. On day three to six the acrosome
0 integrity  was  significantly  affected  (p<0.05)  when  preserved  at  5 C.The  best  extender concentration is the 25% aqueous extract of sugarcane (T4) with the percentage of Membrane o plasma  andAcrosome integrityfor all the storage time (1-6 d) preservationat 5 C respectively from 69.00 to 59.75% and from 61.75 to 51.00%.
Keywords: bali bull, sperm, extracts sugarcane, egg yolks, membrane plasma  and  acrosome integrity

## PENDAHULUAN
Media pengencer yang memenuhi standar  syarat-syarat  untukspermatozoa harus  menyerupai  sifat  fisik  kimia semendan  dapat  mempertahankan penurunan suhu secara mendadak yang merupakan  faktor  utamapenyebab
terjadinya  kejutan  dingin  ( cold  shock ). Kejadian    kejutandingin  kemungkinan disebabkan  fase  transisi  darimembran lipid  yang  menyebabkan  terjadinya fasepemisahan dan penurunan sifat-sifat permeabilitassecara  selektif  dari membran biologik sel.
Pengaruh  yang  ditimbulkan akibatmunculnya  faktor  ini  adalah penurunanjumlah  spermatozoa  motil, pelepasan  enzim,  hilangnyaaktivitas lesitin,  perpindahan  ion  melewati membrandan penurunan kandungan lipid y a n g   s a n g a t   b e p e r a n   d a l a m mempertahankan  integritas  struktural membran  plasma  (Leboeuf et  al, 2000). Kerusakan yang disebabakan perubahan suhu  tersebut  dapat  dicegah  dengan dimasukkanzat  krioprotektan  dalam pengencer.Salah satu krioprotektan yang p a l i n g   b a n y a k   d i g u n a k a n m e l a l u i penambahan  konsentasikuning  telur dalam  pengencer  semen  yang  dapat memiliki  efek  negatif  pada  motilitas spermatozoa (Junior et al, 2010)
Efisiensi dari kuning telur sebagai krioprotektan  yang  dikaitkan  dengan adanya  Low  Density  Lipoprotein  (LDL) y a n g   b e r i k a t a n   d a l a m   m e m b r a n spermatozoa  sehingga  membentuk selaput  antara  asam  lemak  dan  air (Bergeron et  al, 2004).  LDL  ini  akan menggatikan  fosfolipid  dan  kolesterol dalam  membran  sel  sewaktu  terjadinya k e r u s a k a n   s e h i n g g a   m e k a n i s m e membran  berfungsi  dengan  baik ( M a n j u n a t h e t   a l , 2 0 0 2 ) . L e s i t i n merupakan  bagian  dari  low  density l i p o p r o t e i n b e r f u n g s i untukmempertahankan  dan  melindungi i n t e g r i t a s   s e l u b u n g   l i p o p r o t e i n s p e r m a t o z o a . P e m b e r i a n 1 % l e s i t i n kacang kedelai dalam pengencer terbukti melindungi  membranspermatozoa dengan  menahan  hilangnya  fosfolipid pada  kondisi cold  shock (Salmani et  al , 2014). Energi  yang  dibutuhkan  oleh spermatozoa  ini  disediakan  oleh  gula sederhana  yaitu  fruktosa  dan  glukosa yang  berguna  untuk  mendukung  daya h i d u p   s p e r m a t o z o a   p a d a   t a h a p p r e s e r v a s i   d a n   k r i o p r e s e r v a s i . Kandungan ekstrak ekstrak air tebumurni mengandung  sukrosa  sebasar  18,08% dan  monodisakarida  sebesar  0,54% (Erwinda et  al, 2014),  yang  mana
kandungan  sukrosa  yang  terkandung dalam air tebu dimetabolisir melalui jalur glikolisis  atau  dilanjutkan  dengan  reaksi asam  trikarboksilat  (Siklus  Krebs), sehingga  dihasilkan  energi  berupa  ADP dan  ATPyang  akan  dimanfaatkan  oleh s p e r m a t o z o a   d a l a m   p e r g e r a k a n ( P r a m o n o   d a n   Ta s w i n ,   2 0 0 8 ) . Te r l i n d u n g n y a   m e m b r a n   p l a s m a spermatozoa  dari  pengaruh  kuning  telur e k t r a s e l u l u r,   m a k a   m e k a n i s m e semipermeabel membran dapat berfungsi d e n g a n   b a i k   s e h i n g g a   k u a l i t a s metabolisme  sukrosa  dalam  ekstrak  air tebu  dapat  berjalan  dengan  baik  dan b e r p e n g a r u h   p o s i s t i f   t e r h a d a p p e r g e r a k a n   p r o g r e s i f   y a n g   a k t i f spermatozoa.
Dilihat  dari  pemikiran  ini  maka perlu  penelitian  tetang  pengaruh perbandingan  pengencer  sukrosa  dalam e k s t r a k   a i r   t e b u d e n g a n penambahankuning  telur  terhadap kualitas  membran  plasma  utuh  dan tudung  akrosom  utuh  spermatozoa  Sapi Bali.

## MATERI DAN METODE PENELITIAN Koleksi Semen
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Maret  2014  Di  Balai  Besar Inseminasi Buatan (BBIB) Singosari Jawa Timur.  Semen  yang  digunakan  dalam penelitian ini diambil dari empat Sapi Bali terseleksi.Kualitas  spermatozoa  yang dievaluasipada tahap spermatozoa segar adalah  Volume  semen,  warna,  bau,  ph, konsentrasispermatozoa,  persentase m o t i l i t a s ,   p e r s e n t a s e   l i v a b i l i t a s , persentase  MPU  dan  Persentase  TAU, s e l a n j u t n y a   e v a l u a s i terhadapspermatozoa  yang  telah diencerkan  dan  dipreservasimeliputi: persentase  MPU,  dan  persentase  TAU spermatozoa.

## Media Pengencer
Semen  yang  telah  memenuhi  syarat pengencer  dibagi  kedalam  enam  belas buah  tabung  reaksi  dengan  konsentrasi
30 jt/ml tiap perlakuan. Semen diencerkan dengan  pengencer  sesuai  dengan perlakuan yang digunakan, yaitu T1 : 10% Air  tebu  +  Kuning  telur  20%  +  70% akuabides;T2  :  15%  Air  tebu  +  Kuning telur 20% + 65% akuabides; T3 : 20% Air tebu  +  Kuning  telur  20%  +  60% akuabides;T4  :  25%  Air  tebu  +  Kuning t e l u r   2 0 %   +   5 5 %   a k u a b i d e s , k e m u d i a n d i t a m b a h k a n   a n t i b i o t i k (penisilin  dan  streptomisin)  masing- masing  sebanyak  1.000  ug  per  mililiter pengencer  (table  1).  selanjutnya  tabung reaksi  ditutup  rapat  dan  dimasukan kedalam gelas ukur yang berisi air dengan
0 suhu  20 C  yang  bertujuan  untuk penurunan  suhu  secara  berlahan-lahan
0 dan  dipreservasi  pada  suhu  5 C  selama enam hari. Selanjutnya kualitas membran plasma  utuh  dan  tudung  akrosom  utuh diamati.

## Variabel Penelitian
Persentase  MPU  spermatozoa ditentung dengan menghitung persentase spermatozoa  yang  memiliki  membran plasma  utuh  dengan  metode  Osmotic Hypoosmotic  Swelling  Test  (HOST) (Bucak et  al ,  2008).  Komposisi  larutan hipoosmotik terdiri atas: 0,9 g fruktosa + 0,49  g  natrium  sitrat  yang  dilarutkan dengan  akuabides  hingga  mencapai
volume 100 ml. Sebanyak 300 μl larutan hipoosmotik ditambahkan ke dalam 30 μl semen,  dicampur  hingga  homogen 0 kemudian, dan diinkubasi pada suhu 37 C selama 45 menit. Setelah di inkubasi, 0,2 ul diteteskan diatas glass objek kemudian ditutup  dengan coper  glass ,  selanjutnya dievaluasi  dengan  mikroskop  cahaya pembesaran  1000x  terhadap  minimum 200  spermatozoa.  Spermatozoa  yang memiliki  membran  plasma  utuh  ditandai o l e h   e k o r   m e l i n g k a r   a t a u menggelembung, sedangkan yang rusak ditandai oleh ekor lurus.
Tudung  akrosom  utuh  (TAU) dievaluasi  dengan  metode  pewarnaan eosin 2% yaitu eosin bluis 2 g dalam 100 ml  sodium  sitrat  2,9%  (Toelihere,  1993) evaluasi  kelainan  akrosom  diambil    dari s a t u   t e t e s   s e m e n   k e m u d i a n dicampurnakan dengan eosin 2% dengan perbandingan  satu  banding  empat. Selanjutnya di buat preparat ulas tipis dan d i k e r i n g k a n   d i a t a s   m e j a pemanas.persentase    spermatosa akrosom  utuh  dengan  menghitung Sebanyak  200  spermatozoa  di  bawah m i k r o s k o p   f a s e   k o n t r a s   ( 1 0 0 0 x pembesaran).  Spermatozoa  yang memiliki  tudung  akrosom  utuh  ditandai dengan  terlihatnya  garis  pembungkus pada  bagian  kepala  dan  garis  cincin nukleus,  sedangkan  yang  rusak  tidak tedapatnya  warna  lebih  gelap  pada bagian atas kepala spermatozoa.
Kandungan Pengencer
Kadar
T1 T2 T3 T4 Kadar Sukrosa (%) 1,88 2,82 3,76 4,70 Kadar Gula Invert (%) 0,057 0,086 0,114 0,143 Lemak (%) 6,60 6,60 6,60 6,60 Protein (%) 3,48 3,48 3,48 3,48 Penisilin (1000 µg/ml) 1000,00 1000,00 1000,00 1000,00 Streptomisin (1000 µg/ml) 1000,00 1000,00 1000,00 1000,00
Sumber: Data Primer yang Diolah 2013.
Tabel 1.  Hasil Analisa Pengencer Ekstrak Air Tebu Penambahan Kuning Telur dalam 100 ml yang Digunakan sebagai Perlakuan.
Pajri Anwar*), Y. S. Ondho**) dan D. Samsudewa**) : Kualitas Membran Plasma Utuh Dan Tudung Akrosom Utuh

## Analisis data
Rancangan  yang  digunakan adalahRancangan  Acak  Lengkap  (RAL) (Steel dan Torrie, 1991). Empat perlakuan dan empat ulangan, Data yang dihasilkan dalam  penelitian  ini  dianalisis  ragam dengan uji F, jika terdapat pengaruh yang nyata, maka dilanjutkan dengan uji jarak berganda  duncan  untuk  mengetahui perbedaan  antara  perlakuan,  kriteria pengambilan  keputusan  pada  taraf kepercayaan 95% atau α = 0,05 apabila F hitung > F tabel maka Ho ditolak dan Hi diterima. Data dianalisis ini menggunakan bantuan program SPSS 16.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Kualitas Semen Segar Sapi Bali
Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa volume semen segara rata-rata diperoleh 6 . 3 0 ± 3 , 3 2 ,   s e d a n g k a n   w a r n a , konsistensi,  gerakan  massa,  dan k o n s e n t r a s i   s p e r m a t o z o a   s a l i n g b e r k a i t a n ,   k a r e n a   w a r n a   s e m e n ditentukan  oleh  kepadatan  spermatozoa dan  juga  akan  termanifestasikan  pada konsistensi  semen  dan  gerakan  massa spermatozoa. Hasil yang diperoleh warna rata-rata putih susu, konsistensi rata-rata sedang, gerakan massa rata-rata ++ (2+), d a n   k o n s e n t r a s i   s p e r m a t o z o a rataan1328.00±204,61  juta/ml  (kisaran
1.038-1.488  juta/ml).  hasil  penelitian  ini tidak jauh berbeda yang dilaporkan oleh Arifiantini  e t  al ,  (2006)  kualitas spermatozoa  sapi  bali  warna  Krem, konsistensi  rata-rata  sedang,  gerak massa rata-rata   2,7 (2+) dan konsentasi 1340±447,85  juta/ml.  selanjutnya Labetubun et  al, (2011)  melaporkan k o n s e t r a s i   s e m e n   s e g a r   k a u d a n epididimis  sapi  bali  berkisar  11.222,50 juta/ml  berkisar  antara  rataan  10.590- 11.780 juta/ml.
Rataan  persentase  motilitas spermatozoa  sapi  bali  yang  diperoleh dalam  penelitian  ini  rataan  62.50±5,0, Persentase  livabilitas  spermatozoa  yang diperoleh  rataan  74.75±3,86.  Bisanya rataan motilitas spermatozoa lebih renda dari  livabilitas  spermatozoa  hal  ini disebabkan  banyaknya  spermatozoa yang  masih  hidup  tetapi  dalam  keadaan t i d a k   b e r g e r a k   p r o g r e s i f   m a j u kedepan.Hasil  dari  beberapa  penelitian menunjukan  bahwa  persentase  rataan motilitas spermatozoa semen segar sapi bali  71,04%  (Arifiantini et  al ,  2006  ),
72,40% motil dan 86,28% hidup (Anwar,
2011  dan  Bardan et  al ,  2009),  75,00% motil,  86,00%  hidup(Risal,  2009), senjutnya  motilitas  spermatozoa  pada
Karakteristik Semen Rata-Rata Volume (ml) 6.30±3,32 Warna Putih Susu Konsistensi Kental Derajat Keasaman (pH) 6.60±0,16 Konsentrasi (10 9 /ml) 1328.00±204,61 Gerak Massa 2+ Motilitas (%) 62.50±5,00 Livabilitas (%) 74.75±3,86 MPU (%) 72.00±2,71 TAU (%) 68.25±3,20
Sumber: Data Primer yang Diolah 2013.

## Tabel 2. Karakteristik Semen Segar Sapi Bali
kaudan  epididimis  sapi  bali  75%  dan livabilitas 86,75% (Labetubun et al , 2011).
Persentase Membran Plasma Utuh ( M P U )   r a t a a n   7 2 . 0 0 ± 2 , 7 1 %   d a n Persentase Tudung Akrosom Utuh (TAU) yang  diperoleh  rataan68.25±3,20.  Hasil penelitian ini lebih tinggi yang dilaporkan oleh  Rizal,  (2009)  dan  labetubun et  al ,
2011  menunjukan  bahwa  membran plasma  utuh  semen  segar  sapi  bali berkisar 85-86% dengan rataan 86,75%. Selanjutnya  tidak  jauh  berbeda  yang dilaporkan  oleh  Bardan et  al ,  (2009) bahwa  membran  plasma  utuh  sapi  Bali berkisar  antara  rataan  77,58%.  Hasil penelitain  pada  ternak  ruminasia  besar lain  yang  dilaporkan  oleh  Amin et  al,
(2010)  bahwa    akrosom  normal  pada beberapa  jenis  semen  segar  kerbau berkisar  pada  rataan  93,28±1,66%. Perbedaan  kualitas  membran  plasma utuh  dan  tudung  akrosom  utuh  setiap penelitian  diduga  disebabkan  perlakuan pakan  yang  diberiakan,  lingkungan tempat  tinggal,  umur  ternak  yang digunakan serta disebabkan penanganan disaat  evaluasi  semen  segar  yang dilakukan.
Membaran  Plasma  Utuh  (MPU) S p e r m a t o z o a   S a p i   B a l i   P a s c a
0 Pengenceran di PreservasiSuhu 5 C.
Berdasarkana  hasil  penelitian  Membran Plasma  Utuh  (MPU)  spermatozoa  Sapi Bali pada tahap pengamatan hari pertama
hingga  hari  keempat  pengamatan  dari semua perlakuan persentase MPU masih menunjukan  rataan  yang  cukup  tinggi, yaitu diatas rataan 60%.Hasil persentase rataan  MPU  spermatozoa  Sapi  Bali disajikan pada (Tabel 3).
Berdasarakan  hasil  analisis statistik,  taraf  perlakuan  konsentrasi pengencer  yang  diberikan  dalam penelitian  tidak  berbeda  nyata  (P<0,05) terhadap  MPU  spermatozoa  Sapi  Bali
0 dipreservasi  suhu  5 C  pada  tahap . pengamatanhari  pertama  hingga  hari keenam.  Hal  ini  kemungkinan  juga disebabkan  oleh  kecilnya  selisih pemberian  perlakuan  ekstrak  air tebu.Sehingga  tidak  tampak  jelas pengaruh  MPU  spermatozoa  tiap perlakuan. Walaupun tidak berbeda yang nyata di setiap taraf perlakuan penelitian dengan  lama  penyimpanan  terhadap MPU,  diketahui  bahwa    pada  perlakuan T4 (25%) dapat mempertahan rataan 60% MPU  hingga  hari  kelima  preservasi dengan  rataan  sebesar  61,5%,  tetapi pada  perlakuan  T1  (10%),  perlakaun  T2 (15%)  dan  perlakuan  T3  (20%)hanya dapat  mempertahan  rataan  60%  MPU
0 hingga hari keempat preservasi suhu 5 C.
Berdasarkan hasil penelitian, taraf perlakuan  penggunaan  konsentrasi ekstrak  air  tebu  dengan  penambahan
57 Perlakuan Penyimpanan (Hari) Rataan Penurunan Perhari 1 2 3 4 5 6 ………………………… % ………………………….. .........%........ T1 66.00 63.75 61.00 58.50 55.50 53.23 2.57 T2 66.25 65.50 62.75 60.50 57.25 55.00 2.25 T3 67.00 65.50 63.75 62.25 59.25 57.25 2.06 T4 69.00 67.25 65.75 64.50 61.50 59.75 2.00 Rata- Rata 67.06 65.50 63.31 61.43 58.37 56.31
Sumber: Data Primer yang Diolah 2013.
Tabel 3. Pengaruh Perlakuan terhadap MPU Spermatozoa Sapi Bali Setelah  Enam Hari Preservasi.
Pajri Anwar*), Y. S. Ondho**) dan D. Samsudewa**) : Kualitas Membran Plasma Utuh Dan Tudung Akrosom Utuh
20% kuning telur yang menghasilkan nilai terbaik  dari  ke  empat  perlakuan  adalah perlakuan T4 (25%) dengan rataan MPU sebesar  59.75-69.00%,  sedangkan pesentase  MPU  nilai  terenda  pada perlakuan  T1  (10%)  dengan  rataan sebesar  53,23-66,00%.  Perlakuan  T4 adalah  perlakuan  yang  terbaik  terhadap pemberian  konsentrasi  ekstrak  air  tebu dalam  mempertahankan  kualitas  MPU spermatozoa.  Hal  ini  kemungkinan keberadaan  sukrosa  yang  terkandung dalam  ekstrak  air  tebu,  semakin ditingkatkan  pemberian  ekstrak  air  tebu maka sukrosa dalam ekstrak air tebu akan berperan  aktif  dalam  krioprotektan e k s t r a s e l u l e r   y a n g   b e r f u n g s i sebagaiperlindungan  membran  dari kerusakan  selama  penyimpanan  pada suhu  rendah.  Surachman et  al. (2008) menyatakan bahwa keberadaan sukrosa dalam  penelitianya  menghasilkan persentase  spermatozoa  hidup  lebih tinggi  dibandingkan  tidak  pemberian sukrosa dalam perlakuan.Hal ini diperkuat oleh  pernyataan  Aisen et  al. (2002) golongan disakarida seperti sukrosa dan laktosa  diketahui  lebih  baik  dalam m e m p e r t a h a n k a n   f u n g s i   s e b a g a i krioprotektan ekstraseluler membran sel.
Hasil penelitian penurunan rataan MPU  perhari  pemberian  konsentrasi ekstrak  air  tebu  tiap  taraf  perlakuan terhadap  lama  penyimpanan  selama enam  hari  pengamatan  menunjukan kerusakan  MPU  spermatozoa  terjadi penurunan  secara  bertahap  dengan rataan  sebesar  2,57%  (T1),  2,25%  (T2), 2,06%  (T3)  dan  2,00%  (T4)  nyata penurunannya  lebih  sedikit  dari  tiga perlakuan  (Tabel  2).  Dilihat  dari  hasil penyimpanan  semen  cair  penggunaan ekstrak  air  tebu  dengan  penambahan 20%  kuning  telur  cenderung  menurun dengan  lama  penyimpanan  terhadap rataan  MPU  spermatozoa  Sapi  Bali. Nalley et  al. (2007)  menjelaskan  bahwa
s e l a m a   p e n y i m p a n a n   s e m e n berlangsung  akan  terjadi  kerusakan terhadap    dekomposisi  protein  pada membran sel sehingga lapisan lipoprotein pada  sel  akan  menyebabkan  terjadinya denaturasi protein yang disebakan reaksi peroksidasi  pada  membran.  Keutuhan membran plasma spermatozoa Sapi Bali dapat  dilihat  pada  (Ilustrasi  1).Kecilnya penurunan kualitas MPU dalam penelitian ini  bisa  diminimalisir  dengan  adanya krioprotektan  sukrosa  yang  terdapat dalam ekstrak air tebu. Rizal et al. (2006) jenis  gula  yang  ditambahkan  dalam pengencer  akan  berasosiasi  dengan karbohidrat  pada  lapisan  membran p l a s m a   s e l   y a n g   r u s a k   s e l a m a penyimpanan  sehingga  karbohidrat sebagai  pengganti  struktur  selubung  sel yang rusak secara mekanis tetap utuh.
Berdasarkan  hasil  penelitian penggunaan  ekstrak  air  tebu  dengan penambahan  20%  kuning  telur    yang mengandung lipoprotein dan lesitin yang b e k e r j a   a k t i f   m e l i n d u n g i   M P U spermatozoa  yang  nyata  terbunkti mampu  mempertahankan  rataan  60% MPU spermatozoa Sapi Bali hingga  hari
0 keempat preservasi pada suhu 5 C. Hasil penelitian  ini  tidak  jauh  berbeda  dengan laporan  Bardan et  al. (2009)  bahwa penggunaan  kombinasi  air  tebu  dengan k u n i n g t e l u r d a p a t mempertahankanrataan  60%  Membran Plasma  Utuh  hingga  hari  ketiga 0 preservasi pada suhu 5 C. Labetubun et al. (2011) menjelaskan bahwa pemberian konsentrasi  20%  kuning  telur  efektif mempertahankan  dan  menstabilkan membran spermatozoa yangdipreservasi
0 pada  suhu  3-5 C.  Terjaganya  membran plasma,  maka  proses  metabolisme s p e r m a t o z o a   j u g a   a k a n   t e t a p berlangsung  dengan  baik,  yang  pada
akhirnya  berpengaruh  positif  terhadap m o t i l i t a s   s p e r m a t o z o a   s e l a m a penyimpanan berlangsung.
Tu d u n g   A k r o s o m   U t u h   ( TA U ) S p e r m a t o z o a   S a p i   B a l i   P a s c a
0 Pengenceran di Preservasi Suhu 5 C.
Berdasarkana  hasil  penelitian T u d u n g   A k r o s o m   U t u h   ( T A U ) spermatozoa  Sapi  Bali  pada  tahap
0 preservasi suhu 5 C hari pertama hingga hari  keempat  pengamatan,  menunjukan bahwa  persentase  TAU  masih  dalam rataan  yang  cukup  tinggi,  yaitu  diatas rataan  50%.  Keberhasilan  Inseminasi Buatan  (IB)  harus  diiringin  kualitas spermatozoa  yang  baik,  kualitas  yang baik  tidak  hanya  berpatokan  pada motilitas  progresif  spermatozoa  tetapi juga dilihat keutuhan tudung akrosom sel. K e u t u h a n   t u d u n g   a k r o s o m   u t u h berpengaruh  baik  terhadap  proses kapasitas dan reaksi akrosom pada saat pembuhan,  hal  ini  dapat  dijelasakan bahwa  keutuhan  tudung  akrosom berdapak  positif  terhadap  fertilitas spermatozoa  sapi  bali  pada  saat pembuahan  terjadi.  Yudi el  al .  (2008)
menjelakan  bahwa  abnormal  morpologi kepala  spermatozoa  diatas  10%  akan menurunkan fertilitas pejantan.
Berdasarkan hasil penelitian, taraf perlakuan  penggunaan  konsentrasi ekstrak  air  tebu  dengan  penambahan 20% kuning telur yang menghasilkan nilai terbaik adalah pada perlakuan T4 (25%) dengan  rataan  TAU  sebesar  51,00- 61.75%, sedangkan pesentase TAU nilai terendah  pada  perlakuan  T1  (10%) dengan  rataan  sebesar  44,00-58,25% dari  hari  pertama  hingga  hari  ke  enam preservasi.  Perlakuan  T4  adalah perlakuan  yang  terbaik  terhadap pemberian  konsentrasi  ekstrak  air  tebu dalam  mempertahankan  kualitas  TAU yang  diperoleh.Hal  ini  dapat  dijelaskan bahwa  keberadaan  sukrosa  dalam ekstrak  air  tebu  dengan  lipoprotein  dan lesitin  dalam  kuning  telur  dapat  bekerja dengan  sinergi  dalam  mempertahankan keutuhan  membran  plasma  sehingga tudung  akrosom  tudung  juga  dapat terlindungi.Junior et al. (2009) dan Jiang et  al. (2007)  melaporkan  bahwa  LDL dalam  lipoprotein  berfungsi  sebagai krioprotektan  sel  spermatozoa  terhadap
59

## 1000 Kali Pembesaran
Ilustrasi 1.    Membran Plasama Spermatozoa Sapi Bali Setelah di Preservasi (Biru :    Membran Normal ; Kuning : Membran Tidak Normal)
Pajri Anwar*), Y. S. Ondho**) dan D. Samsudewa**) : Kualitas Membran Plasma Utuh Dan Tudung Akrosom Utuh
perubahan  suhu  dengan  jalan  melapisi bagian  fosfolipid  dan  kolesterol  dari membran  sel  spermatozoa,  selanjutnya Kmenta et al. (2011) menjelaskan  bahwa lesitin berfungsi dalam membatasi reaksi oksigen  dengan  asam  lemak  tak  jenuh padafosfolipid  membran  dengan  jalan mendorong  dan  mengikat  membran plasma  spermatozoasehingga  akan m e n g u r a n g i   t e r b e n t u k n y a   a n i o n superoksidayang  terbentuk  akibat peroksidasi asam lemak.
Berdasarakan  hasil  analisis statistik,  taraf  perlakuan  konsentrasi pengencer perlakuan T4 (25%) pada hari ketiga  hingga  hari  keenam  preservasi menunjukan  rataan  TAU  spermatozoa Sapi  Bali  berbeda  nyata  (P<0,05) terhadap  taraf  konsentrasi  pelakuan  T3 (20%),  T2  (15%),  dan  T1  (10%),  tetapi tidak  berbeda  nyata  (p>0,05)  terhadap pengamatan  TAU  hari  pertama  hingga
0 hari  kedua  preservasi  5  C.  Hasil  dari penelitian  dapat  diketahui  bahwa p e r l a k u a n   T 3   d a n   T 4   d a p a t mempertahankan  TAU  spermatozoa diatas  rataan  50%  hingga  hari  kelima
0 preservasi5 C,  bahkan  pada  hari k e e n a m p e n g a m a t a n   T 4   m a s i h mempertahankan  rataan  50%dengan rataan  sebesar  51,00%.  Hal  ini
membuktikan bahwa dengan keberadaan sukrosa  yang  terkandung  dalam  ekstrak air  tebu  sekaligus  lipoprotein  dan  lesitin dalam  kuning  telur  dapat  memproteksi membran spermatozoa terhadap kejutan d i n g i n   m a u p u n   e f e k   d e n a t u r a s i glikoprotein  dan  glikolipid  penyusun membran  dengan  lamanya  preservasi. Keutuhan  MPU  spermatozoa  dapat m e m p e r p a n j a n g   m a s a   m o t i l i t a s spermatozoa  dan  kecil  kemungkinan kerusakan  TAU  spermatozoa.  Hal  lain menjelaskan  dalam  penelitian  ini  bahwa kecilnya  persentase  TAUdibandingakan dengan MPU dalam penelitian ini diduga disebabkan  faktor  tingkat  ketelitian  dari mata pengamatan harus lebih teliti dalam memakai  fokus  mikroskop  sehingga kemungkinan human  error juga  dapat terjadi  dalam  pengukuranakrosom spermatozoa.Keutuhan  tudung  akrosom utuh spermatozoa Sapi Bali dapat dilihat pada (Ilustrasi 2).
Hasil penelitian penurunan rataan TAU  perhari  pemberian  konsentrasi ekstrak  air  tebu  tiap  taraf  perlakuan terhadap  lama  penyimpanan  selama enam  hari  pengamatan  kerusakan  TAU spermatozoa  terjadi  penurunan  secara bertahap  dengan  rataan  sebesar  3,06% (10%),  2,44%  (15%),  2,69%  (20%)  dan 2,31%  (25%)  nyata  penurunannya  lebih
Perlakuan Penyimpanan (Hari) Rataan Penurunan Perhari 1 2 3 4 5 6 ........…….............................%.……………….........… ..........%........ T1 58.25 55.25 51.50 c 49.50 b 46.25 c 44.00 b 3.06 T2 58.25 57.50 55.00 b 52.50 b 49.50 b 46.00 b 2.44 T3 60.25 57.75 57.75 ab 57.00 a 52.75 a 48.75 a 2.69 T4 61.75 59.25 58.50 a 57.00 a 54.00 a 51.00 a 2.31 Rata- Rata 59.63 57.44 55.69 54.00 50.63 47.44
Sumber: Data Primer yang Diolah 2013.
a,b,c Superskrip yang berbeda pada kolomyang sama menunjukkan perbedaan yata(P<0,05).
Tabel 4. Pengaruh Perlakuan terhadap TAU Spermatozoa Sapi Bali Setelah Enam Hari Preservasi.
sedikit  dari  tiga  perlakuan.  Hasil pengamatan dapat diketahui bahwa nilai rataan TAU  spermatozoa  Sapi  Bali  lebih kecil  dibandingkan  dari  hasil  MPUpada 0 tahap  preservasi  pada  suhu  5 C berlangsung.Berdasarkan  pernyataan dari beberapa peneliti menyatakan bahwa dengan terlingdungnya membran plasma maka  tudung  akrosom  juga  terlindungi (Bucak  dan  Tekin,  2007;  Tambing et  al ., 2003).Faktor  penyebab  rendah  TAU dalam penelitian ini diduga kemungkinan karena adanya partikel-partikel tebu dari hasil  filterisasi  micron  yang  dilakukan tidak  terekstraksidari  penyaringan  20 millimicron  sehingga  menyebabkan tercampur dalam pengencer, hal ini akan menyebabkan  efek  burukterhadap keutuhan tudung akrosom dan membran plasma  utuh  spermatozoa  akibat terbeturnya  partikel-partikel  tersebut. Adanya  zat  aktif  dari  LDL  dalam lipoprotein  kuning  telurakan  berdampak efek yang baik terhadapmembran plasma sel, sehingga susunan membran plasma yang rusak cepat tergantikan. Kemudian pada  saat  pengujian  hukum  osmotik larutan  berlangsung  membran  plasma spermatozoa  dalam  keadaan  normal sehingga penilaian membran lebih tinggi.
Hal  ini  diduga  karena  pengaruh perlindungan  LDL  yang  terdapat  dalam kuning  telur  yang  berperan  sebagai perlindungan  integritas  selubung lipoprotein  membran  dan  selain  itu  juga lesitin  perperan  aktif  dalam  melindungi integritas fospolipid penyusun membran, sehingga  dapat  mengikat  susunan  dan menstabil  membran  sel  pada  saat perubahan suhu. Solihati et al. (2005) dan Tambing et al. (2008) melaporkan bahwa lipoprotein  yang  terdapat  dalam  kuning telur  sangat  berperan  aktif  dalam perlindungan  membran  plasma  sel spermatozoa  dari  kerusakan  akibat kejutan  dingin  dan  serangan  radikal bebas akibat kontak dengan oksigen saat pengolahan semen baik untuk semen cair maupun  dibekukan,  terlindungnya membran plasma maka tudung akrosom juga  akan  tetap  utuh  selama  proses preservasi berlangsung.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa pengencer  pengunaan  ekstrak  air  tebu dengan  penambahan  kuning  telur  dapat mempertahankan Membran Plasma Utuh (MPU) dan Tudung Akrosom Utuh (TAU)
61 1000 kali pembesaran 400 kali pembesaran
Ilustrasi 2. Tudung Akrosom Spermatozoa Sapi Bali Setelah di Preservasi (Biru : Akrosom Normal ; Kuning : Akrosom Tidak Normal).
Pajri Anwar*), Y. S. Ondho**) dan D. Samsudewa**) : Kualitas Membran Plasma Utuh Dan Tudung Akrosom Utuh
s p e r m a t o z o a   h i n g g a   e n a m   h a r i 0 preservasi dibawah suhu 5 C. Perlakuan terbaik dilihat dari empat perlakuan yang diujicobakan  adalah  penggunaan konsentrasi 25% ekstrak air tebu dengan penambahan 20% kuning telur (T4) yang dapat  mempertahankan  kualitas  MPU dan TAU spermatozoa Sapi Bali.

## DAFTRA PUSTAKA
Aisen.  E.G.,  H.L.  Alvarez.,  dan  A. Venturino. 2002. Cryopreservation And Post Thawed Fertility Of Ram Semen  Frozen  In  Different T r e h a l o s e   C o n c e n t r a t i o n . Theriogenology 57 : 1801-1808. Amin,  R.M.,  R.  M.  Toelihere.,  L.  Tuti,. Yusup,.dan  P.  Situmorang.  1999. Pengaru  Plasma  Semen  Sapi Terhadap  Kulitas  Semen  Beku Kerbau Lumpur ( Bubalus Bubalis ).
J. Vet. 4 (3): 143-147
Anwar,  P.  2011.  Motilitas  dan  Viabilitas Semen Sapi Bali yang Diencerkan dengan  Pengenceran  Air  Tebu yang  Berbeda.Fakultas  Pertanian Dan Peternakan Universitas Islam Negeri  Sultan  Syarif  Kasim  Riau, Pekanbaru (Skripsi Sarjana S1). Arifiantini,  RI.,  T.  Wresdiyanti.,  dan  EF. Retnani.  2006.  Kajian  Bandingan Morfometri Spermatozoa Sapi Bali ( Bos  Sondaicus )  Menggunakan Perwarnaan Williams, Eosin, Eosin Nigrosin dan Formol Saline. J.Sain Vet. 24 (1): 65-70.
Bardan,  Feradis,  dan  T.  Adelina.  2009.
Penggunaan  Air  Tebu  yang
Dikombinasikan  Dengan  Kuning Telur  Sebagai  Pengencer  Semen Sapi Bali. Jurnal Peternakan, 6(2) : 37-44.
Bergeron.A., M.H. Crete., Y. Brindle., and P.  Manjunath.  2004.  Low  Density Lipoprotein  Fraction  From  Hen's
Egg  Yolk  Decreases  The  Binding
Of  The  Major  Protein  Of  Bovine Seminal  Plasma  To  Sperm  and Prevents  Lipid  Efflux  From  The
Sperm  Membrane.  Biol.  Reprod, 70: 708–717.
Bucak.  M.  N.,  dan    N.  Tekin.  2007. Protective  effect  of  taurine, glutathione  and  trehalose  on  the liquid storage of ram semen. Small Ruminant Research 73: 103–108. Erwinda, M. D., dan Wahono. H. S. 2014. The Effect Of Lime  Concentration Additiaon And Cane Juice Ph Value On  Brown  Sugar  Quality.  Jurnal Pangan dan Agroindustri. 2 (3) : 54 - 64 Junior.  A.S.  V.,  C.D.  Corcini.,  R.R. Ulguim.,  M.V.F.  Alvarenga,  I. Bianchi,.    M.N.  Corrêa.,   T.  Lucia Jr., J.C. Deschamps.  2009.  Effect Of Low Density Lipoprotein On The Quality  Of  Cryopreserved  Dog Semen.  Animal  Reproduction Science 115 : 323–327. Labetubun  J.,  dan  I.P.  Siwa.  2007. Kualitas  Spermatozoa  Kauda Epididimis  Sapi  Bali  dengan P e n a m b a h a n   L a k t o s a   a t a u Maltosa  yang  Dipreservasi  pada suhu  3-5oC.  Jurnal  Veteriner September. 12 (3) : 200-207.
Manjunath. P., V. Nauc., A. Bergeron., and M.  Menard.  2002.  Major  Proteins Of Bovine Seminal Plasma Bind To The  Low  Density  Lipoprotein Fraction  Of  Hen's  Egg  Yolk.  Biol. Reprod, 67: 1250–1258.
Nalley.  W.  M.  M.,  R.  Hamdarini.,  dan  B. Purwantari.  2007.  Viabilitas Spermatozoa Rusa Timur ( Cervus Timorensis )  Di  Dalam  Pengencer Tr i s   K u n i n g   Te l u r   D e n g a n Penambhan  Sumber  Karbohidrat Berbeda  Yang  Disimpan  Pada Suhu Ruang.JITV. 14 (4): 311-317. Pramono.E.,  dan  T.  R.  Tagama.  2005. Pengaruh  Penambahan Adenosin Triphospat  Kedalam  Pengencer Semen    Terhadap  Kualitas S p e r m a t o z o a   D o m b a   E k o r Gemuk.  Animal  Production 10 (3):
151-156.
Risal M. 2009.Daya Tahan Spermatozoa E p i d i d i m i s   S a p i   B a l i   y a n g 0 Dipreservasi  Pada  Suhu  3-5 C dalam  Pengencer  Tris  dengan K o n s e n t r a s i   L a k t o s a   y a n g Berbeda. JITV 14 (2): 142-149.
Surachmana M., Herdisa., Yulnawati., M. Rizalc., dan H. Maheshwari. 2008. K u a l i t a s   S e m e n   C a i r   A s a l Epididimis  Kerbau  Belang  dalam Bahan Pengencer Andromed yang Mendapat  Penambahan  Sukrosa. Media Peternakan. 32 (2) : 88-94.
Tambing,  S.N.,  I.  K.  Sutama,.  dan  R.I.
Arifiantini.  2003.  Efektivitas berbagai konsentrasi laktsa dalam
pengencer  tris  terhadap  viabilitas semen  cair  kambing  saanen. JITV. 8 (2): 84-90.
Tambing,  S.N.,    K.  Sutama    dan    M.
Sariubang.  2008.  Efektivitas konsentrasi  kuning  telur  di  dalam pengencer  tris  dengan  dan  tanpa plasma  semen  terhadap  kualitas semen  beku  kambing  saanen. JITV. 13 (4): 315-322.
Toelihere, M. R. 1985. Inseminasi Buatan Pada Ternak. Angkasa, Bandung. To e l i h e r e ,   M . R .   1 9 9 3 .   F i s i o l o g i Reproduksi Pada Ternak. Angkas, Bandung.
Pajri Anwar*), Y. S. Ondho**) dan D. Samsudewa**) : Kualitas Membran Plasma Utuh Dan Tudung Akrosom Utuh