## KEBERADAAN BAKTERI PENGHASIL FITASE UNTUK PERBAIKAN KESUBURAN TANAH VERTISOL PADA BERBAGAI SISTEM BUDIDAYA TANAM DI KECAMATAN GONDANGREJO KABUPATEN KARANGANYAR
Slamet Santoso, Sajidan Pendidikan Biologi FKIP UNS E-mail: slametsantosa_bio@yahoo.co.id
Diterima 02 Desember 2012, Disetujui 21 Januari 2013
ABSTRAK -  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  apakah  bakteri-bakteri  yang diisolasi  dari  tanah  vertisol  daerah  Kecamatan  Gondangrejo  mempunyai  keragaman bakteri  dan  kemampuan  untuk  menghasilkan  fitase.    Penelitian  ini  bersifat  ekploratif, pengumpulan data dari eksperimen laboratorium. Bakteri perakaran padi (PJ2, PJ3, PP2, PP8,  PU2,  dan  PU+1)  memiliki  kemampuan  tumbuh    pada  suhu  70°C,  dan  aktivitas enzimnya masih aktif suhu 80°C serta pH 4 – 8.  Bakteri perakaran jagung (JP1, JW1, JPJ1, JPS1) pertumbuhannya masih aktif suhu 60°C, dan aktivitas enzimnya aktif suhu 60°C  serta  pH  4  –  8.    Perakaran  kacang  (KPTU4,  KPJW1,  KPTU3,  KTJ2) pertumbuhannya  masih  aktif  suhu  60°C,  dan  aktivitas  enzimnya  aktif  suhu  60°C  serta pH  4  –  7.    Perakaran    tebu  (TS1,  TS2,  TU1,  TJ4)  pertumbuhannya  masih  aktif  suhu 60°C  dan  aktivitas  enzimnya  aktif  suhu  60°C  serta  pH  4  –  8.    Perakaran  singkong (SW2) pertumbuhannya  masih aktif suhu 60°C, dan aktivitas enzimnya aktif pada suhu 90°C serta pH 4  – 8. Perakaran waluh (WP1, WP3) pertumbuhannya masih aktif suhu 60°C, dan aktivitas enzimnya aktif suhu 60°C serta pH 5 – 8.  Perakaran gambas (GPP2, OU1,OU2) pertumbuhannya masih aktif pada suhu 60°C, dan  aktivitas enzimnya aktif suhu  60°C  serta  pH  4  –  8.    Ekstrak  enzim  kasar  dari  isolat  terpilih  untuk  daerah perakaran  padi  yang  paling  bagus  PU+2  dan  PU+1,  perakaran  kacang  KTJ2  dan KPJW1,    perakaran  tebu  TU1  dan  TU2,  perakaran  jagung  JP1  dan  JPJ1,  perakaran gambas  GPP2  dan  OU2  keseluruhan  ekstrak  enzim  stabil  sampai  suhu  80 o C.    Isolat terpilih  aktif  pada  kondisi  pH  6-8  PJ3,  OU  2,  WP1,  WP4,  JW1,  JP1,  KPtU2,  KJP1, KPtU4, TJ2, sedangkan pH 6-9 PJ2 dan TU1.
Kata kunci : Fitase, vertisol, kesuburan, pengaruh suhu, pengaruh pH.
ABSTRACT -  This  experiment  aimed  to  investigate  whether  phytase-producing bacteria  isolated  from  vertisol  soil  in  Gondangrejo  have  bacterial  diversity  and  the ability  to  fertilize  the  soil.    This  research  is  exploratif  and  laboratory  experiments. Bacteria in the rice roots (PJ2, PJ3, PP2, PP8, PU2, and PU +1) has the ability to grow at 70°C, and its enzyme activity is stable at 80°C and pH 4-8. Bacteria in the corn roots still grow (JP1, JW1, JPJ1, JPS1) and still active at 60°C, and the enzyme still active at 60°C  and  pH  4-8.    Bacteria  on  the  beans  roots  grew  well  (KPTU4,  KPJW1,  KPTU3, KTJ2) and still active at 60°C, and the enzyme activity at 60°C and pH 4-7. Bacteria on the  sugar  cane  roots  grew well (TS1, TS2, TU1, TJ4),  active  at  60°C  and the  enzyme activity at 60°C and pH 4-8.  Bacteria on the cassava roots were good (SW2)  and still active grow at 60°C, and at 90°C and pH 4-8, the enzyme still active. Bacteria on the great pumpkin roots were good (WP1, WP3), still active at 60°C, and the active enzyme activity at 60°C and pH 5-8.  Bacteria  on the “gambas” roots  grow well (GPP2, OU1, OU2) and still active at 60°C, and the enzyme still active at 60°C and pH 4-8.  Rough of extracted  enzyme  from  isolates  of  the  best  area  of  rice  roots  PU+2  and  PU+1,  beans
BIOEDUKASI Volume 6, Nomor 1 Halaman 1-11
KTJ2 and KPJW, sugar cane TU1 and TU2, corn JP1 and JPJ1, “gambas”  GPP2 and OU2,  were  stable  at  80°C.    Selected  isolates  actived  at  pH  6-8  are  PJ3,  OU  2,  WP1, WP4, JW1, JP1, KPtU 2, KJP1, KPtU4, TJ2, while PJ2 and TU1 were active in pH 6-9.
Key Words : Phytase, vertisol, fertility, temperature, acid degree

## Pendahuluan
Fitase  telah  dimanfaatkan  sebagai probiotik  pada  hewan  ternak  monogastrik, sebagai  campuran wheat  pollard pakan ternak  unggas  (Sajidan,  2004),  sebagai sumber phosphat organik pada pakan ayam broiler  (Yunus,  2004).  Fitase  dihasilkan oleh mikroorganisme (bakteri, jamur, yaest) dan  jaringan  tubuh  ternak.    Fitase  dapat juga  dihasilkan  dari  proses  cloning  dan dicirikan  berasal  dari  fungi Aspergillus
ficum (Ullah,  1998a).  Mikroorganisme antara  lain  bakteri  sebagai  salah  satu penghasil  enzim  yang  potensial  menjadi faktor penting dalam produksi enzim. Oleh karena  itu  diperlukan  usaha  penggalian galur galur bakteri penghasil fitase.
Indonesia  sebagai  negara  tropis mempunyai potensi keanekaragaman bakteri yang tinggi. Karakteristik wilayah Indonesia yang  mempunyai  banyak  area  vulkanik menambah potensi diversitas bakteri.
Aktifitas  bakteri  fitase  telah  berhasil diidentifikasi  pada  beberapa  daerah  dengan karakteristik yang berbeda, antara lain; pada suhu  tinggi  dari  sumber  air  panas  di Sumatera  Barat  (Guzmanizar,  et  al.  2009),
pada ekosistem sawah, pada ladang gandum (Shobirin,  2009).  Sampai  saat  ini  beberapa fitase  dari  strain  bakteria  berhasil  diisolasi, dikloning,  di- sequensing dan  diekspresikan, misalnya Escherichia  coli (Greiner et  al .,
1993  dan  Rodriguez et  al .,  1999), Bacillus
sp. (Kim et  al .,  1998;  Idriss et  al .,  2002);
Selenomonas  ruminantium (Yanke et  al .,
1999), Bacillus Substilis TS16-111 (Youn-Je
Park,  2001)  dan Klebsiellapneumoniae
(Sajidan, 2002).
Kecamatan  Gondangrejo,  Kabupaten Karanganyar  termasuk  daerah  yang  kondisi tanahnya  termasuk  kurang  subur,  apalagi pada  kondisi  tanah  yang  bersifat  Vertisol. Kondisi  fisik,  kimia  dan  biologis  sangat menentukan  produksi  pangan  dan  memiliki kesanggupan untuk menjaga kualitas ekosistem  yang  mencakup  air  dan  tanah.
Sifat  tanah  dikemukakan  dalam  sistem klasifikasi  nasional    terutama  memiliki tekstur  kasar  hingga  agak  kasar  dari  bahan endapan  muda  (bahan  induk  alluvium). Berdasarkan  sistem  klasifikasi  taksonomi tanah  (USDA,  1992)  sifat-sifat  tanah tersebut sepadan dengan jenis tanah.
Berbagai  sistem  budidaya  tanam yang  dilakukan  oleh  petani  Gondangrejo  di tanah  vertisol  untuk  memenuhi  kebutuhan hidup. Kandungan tanah vertisol yaitu  kapur lebih  dari  10%  dan  merupakan  tanah  yang kandungan  liat  tinggi  (lebih  dari  30%), mempunyai sifat mengembang dan mengkerut.  Kalau  kering  tanah  mengkerut sehingga  tanah  pecah-pecah  dan  keras. Kalau  basah  mengembang  dan  lengket.
Penerapan  tindakan  budidaya  pertanian  di tanah  vertisol  diharapkan  berwawasan lingkungan  agar  pengaruh    negatif  terhadap yang  membuat  tanah  menjadi  subur  hilang. Tanah  vertisol  menggambarkan  penyebaran tanah-tanah  dengan  tekstur  liat  dan mempunyai  warna  gelap,  pH  yang  relatif tinggi  serta  kapasitas  tukar  kation  dan kejenuhan  basa  yang  juga  relatif  tinggi. Umumnya  berwarna  hitam  legam  atau abu-abu  kehitaman  yang  mempunyai  ciri fisik mudah membentuk rekahan lebar dan dalam  di  musim  kemarau  dan  mengalami pembalikan alami di musim hujan. Vertisol adalah tanah-tanah mineral yang mempunyai warna abu kehitaman, bertekstur  liat  dengan  kandungan  30% pada horizon permukaan sampai kedalaman  50  cm  dan  didominasi  jenis lempung  montmorillonit.  Faktor  dominan yang  mempengaruhi  pembentukan  tanah ini adalah iklim utamanya iklim kering dan batuan  tanah  yang  kaya  terhadap  kation.
Jenis tanah vertisol bila digunakan sebagai lahan  pertanian  akan  memberikan  banyak masalah terutama kesuburan yang cenderung rendah.
Bakteri  mempunyai  kemampuan untuk  beradaptasi  dengan  lingkungan  dan merupakan  salah  satu  faktor  penyelamat yang melestarikan suatu spesies dari seleksi alamiah (Hanafiah et al ., 2005).  Penggunaan lahan yang memiliki keanekaragaman tanaman  tinggi  adalah  sistem  agroforestri yang  lebih  bermakna  terhadap  kehidupan biota  tanah(Wardani,  2004).    Hale et  al .
(2006)  perubahan  struktur  kimia  tanah  dan dinamika  hara  akan  mempengaruhi  invasi mikroba  tanah.  Pengelolaan  lahan  dengan menggunakan  sistem  pertanian  organik memberikan kontribusi rata rata 50 % untuk kelimpahan  organisme  (Bengtsson et  al .,
2005).  Dekomposer    mikroba  dalam  tanah akan  mempengaruhi kinerja  tanaman
(Partsch et al ., 2006).
Tempat  seperti  dalam  tanah  selalu dijumpai  mikroba,  bahkan  jumlah  dan jenisnya berbeda. Umumnya jumlah mikroba  dalam  tanah  lebih  banyak daripada  dalam  air  ataupun  udara.  Bahan organik  dan  senyawa  anorganik  dalam tanah  yang  tinggi  lebih  cocok  untuk pertumbuhan  mikroba  heterotrof  maupun autotrof  serta  sumber  energi  utama  bagi
kehidupan  biota  tanah  (Sugiyarto  et  al., 2007).
Berkaitan dengan pemanfaatan mikroba  pada  sektor  pertanian  untuk kesuburan tanah, maka diperlukan mikroba isolat  lokal  yang  potensial.    Pemakaian enzim termofilik pertanian lebih menguntungkan  dibanding  yang  mesofilik karena  lebih  stabil  dan  aktivitasnya maksimum  serta  tidak  menurun.  Mikroba penghasil  fitase  dapat  diperoleh  dari berbagai  macam  kondisi  tanah,  walaupun perbedaan  tempat  secara  geo  morfologi juga  menentukan  jenis  bakteri  yang ditemukan.  Asam  fitat  dan  garamnya menyimpan  mineral  fosfor  dari  dalam tanaman  (Greiner  and  Konietzny,  2006). Adiyoga et  al. (2004)  berpendapat  bahwa polikultur  sebuah  upaya  pemadatan  areal dengan berbagai tanaman untuk perbaikan kondisi tanah (konservasi) sekaligus
menciptakan nilai tambah ekonomi.
Mikroba  tanah  berperan  di  dalam penyediaan  unsur  hara  adalah  mikroba pelarut  fosfat  (P)  dan  kalium  (K).  Di sinilah  peranan  mikroba  pelarut  phosphat karena  mikroba  ini  akan  melepaskan ikatan P dari mineral liat dan
menyediakannya  bagi  tanaman.  Banyak sekali mikroba yang mampu melarutkan P, antara lain: Aspergillus sp, Penicillium sp,
Pseudomonas sp dan Bacillus
megatherium. Mikroba  yang  berkemampuan tinggi  melarutkan  phosphat  umumnya  juga berkemampuan  tinggi  dalam  melarutkan kalium.
Fitase  (mio-inositol  heksakisfosfat fosfohidrolase)  merupakan  enzim  yang mengkatalisis  reaksi  hidrolisis  ikatan fosfoester  pada  asam  fitat  (mio-inositol heksakisfosfat) dengan menghasilkan fosfat  anorganik  dan  ester-ester  fosfat (Wyss, 1999).  Fitase yang sudah diisolasi dari  Aspergillus  niger  (Nagashima,  1999), Escherichia  coli  (Greiner  et  al.,  1993), Bacillus  subtilis  (Kerovuo  et  al.,  1998), Klebsiella  pneumoniae  (Sajidan  et  al., 2004).    Beberapa  mikroba  tanah  mampu menghasilkan hormon tanaman yang dapat merangsang pertumbuhan tanaman.
Hormon  yang  dihasilkan  oleh  mikroba akan  diserap  oleh  tanaman  sehingga tanaman  akan  tumbuh  lebih  cepat  atau lebih  besar.  Kelompok  mikroba  yang mampu  menghasilkan  hormon  tanaman, antara lain: Pseudomonas sp dan Azotobacter sp. Mikroba-mikroba bermanfaat tersebut diformulasikan dalam bahan  pembawa  khusus  dan  digunakan sebagai biofertilizer.
Struktur  tanah  apapun  dapat  dijumpai berbagai  mikrokoloni  seperti  mikroba heterotrof  pengguna  bahan  organik  maupun bakteri  autotrof,  dan  bakteri  aerob  maupun
anaerob. Kehidupannya, setiap jenis mikroba mempunyai  kemampuan  untuk  merubah satu  senyawa  menjadi  senyawa  lain  dalam rangka mendapatkan energi dan nutrien.
Tujuan penelitian ini untuk memperoleh  isolat  bakteri  dari  pertanian di daerah kecamatan Gondangrejo
Karanganyar  yang  potensial  menghasilkan enzim fitase.

## Metode Penelitian
A. Alat dan Bahan Penelitian
Alat: Laminar  air  flow,  inkubator,  oven, shaker  inkubator,  sentrifuge,  magnetik stirer,  vorteks,  spektrofotometer  UV-VIS, autoklaf,  neraca  analitik,  almari  es, freezer. Bahan: luria  bertani  (LB)  cair,
Nutrien  agar  (NA),  Nutrien  cair  (NB), bacto-triptone  1%,  yeast  ekstrak  0,5%, NaCl 1%, bactoagar 2%, glukosa 2%, Na- fitat  0,4%,  CaCl2  0,2%,  NH4NO3  0,5%, KCl 0,05%, MgSO4.7 H2O 0,05%, bacto- triptone 1,5%, FeSO4.7 H2O 0,001%, Mn SO4. H2O 0,001%,
Amonium metavanadat,  H3PO4,  alkohol  70%, spirtus, NaH2PO4, HCl.

## B. Pengambilan  Sampel  dan  Isolasi bakteri
Sampel  tanah  diambil  dari  sekitar perakaran  tanaman  di  daerah  5  kalurahan berdasarkan  peta  tanah  vertisol.    Lokasi:
Jati  Uwung,  Plesungan,  Selokaton,  Jeruk Sawit,  dan  Wonorejo.    Penanaman  pada
media  padat  (NA)  dengan  penambahan Na-fitat,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu ruang selama 24 jam.

## C. Screening bakteri
Masing-masing koloni yang terpilih, digores pada media padat lagi agar lebih banyak.Koloni-koloni  tunggal  ditumbuhkan pada  media  cair  dengan  ditambah  Na-fitat, dan diinkubasi pada suhu ruang, 37ºC, 42°C, 50°C, 60°C, dan 70°C.

## D.Isolasi  enzim  ekstrak  kasar  dan Penentuan aktivitas fitase.
Menumbuhkan  koloni  tunggal,  di inkubasi pada  suhu  ruang  (28°C).
Pemanenan  ekstrak  enzim  kasar  dengan cara  di  sentrifugasi  dengan  kecepatan 4000  rpm  dengan  waktu  5  menit, supernatan  diambil  atau  cairan.  Suhu  28, 37,  40,  50,  60,  70,  80,  90°C    Dilakukan preparasi  dengan  penambahan  Na-Fitat 2mM  yang  dicampur  dengan  CaCl2. Selanjutnya larutan tersebut ditambah 425 µl  filtrat  diinkubasi  selama  15  menit. Penambahan  Amonium  Molibdat-fanadat untuk  menghentikan  aktivitas.  Di  ukur absorbansinya  spektrofotometer  UV-Vis dengan panjang gelombang 415 nm.

## Hasil Dan Pembahasan

## 1).  Pemilihan Sampel (screening).
Sampel  yang  diambil  diinokulasikan pada  nutrien  cair  ditambah  Na-fitate  dan diinkubasi  pada  variasi  suhu,  sreening
yang  potensial  (Tabel  1)  dan  Pengujian beberapa  sampel  terpilih  dapat  dilihat pada Tabel 2.
2).  Pengujian Aktivitas Enzim.
Uji  aktivitas  enzim  fitase  sampel  pilihan dari tanah sekitar perakaran padi (Gambar
1a)  dan  sampel  tanah  sekitar  perakaran kacang (Gambar 1b).
Tabel 1. Sampel Yang Terpilih Terhadap Kemampuan Suhu
No Jenis Tanaman Nama Sampel Yang Dipilih 1. Padi PJ2, PJ3, PP2, PP8, PU2, dan PU+1 2. Jagung JP1, JW1, JPJ1, JPS1 3. Kacang KPTU4, KPJW1, KPTU3, KTJ2 4. Tebu TS1, TS2, TU1, TJ4 5. Singkong SW2 6. Waluh WP1, WP3 7. Gambas GPP2, OU1,OU2
Tabel 2. Hasil Pewarnaan Gram
No  Nama Sampel Hasil Pewarnaan Gram No  Nama Sampel Hasil Pewarnaan Gram No  Nama Sampel Hasil Pewarnaan Gram 1. PJ2 - 9 JPJ1 - 17 TU1 - 2. PJ3 - 10 JPS1 - 18 TJ4 - 3. PP2 - 11 KPTU4 - 19 SW2 - 4. PP8 - 12 KPJW1 - 20 WP1 + 5. PU2 - 13 KPTU3 - 21 WP3 - 6. PU+1 + 14 KTJ2 - 22 GPP2 + 7. JP1 - 15 TS1 - 23 OU1 + 8 JW1 - 16 TS2 - 24 OU2 -
Uji  aktivitas  enzim  fitase  dari
pilihan sampel tanah
sekitar
perakarantebu  di  dapatkan  data  seperti pada  Gambar  2a  dan  sekitar  perakaran jagung  dan  singkong  di  dapatkan  data seperti pada Gambar 2b.
Uji  aktivitas  enzim  fitase  dari pilihan  sampel  tanah  sekitar  perakaran gambas  dan  waluh  di  dapatkan  data seperti  pada  Gambar  3a.  Uji  aktivitas enzim  fitase  terhadap  pH  di  dapatkan data seperti pada Gambar 3b.

## (1a)
(1a)                                                                 (1b)

## Gambar 1a  Aktivitas Fitase Perakaran Padi dan 1b Kacang
(2a)
(2a) (2a)
(2b)
Gambar 2a Aktivitas Fitase Perakaran Tebu dan 2b Jagung (3a)                                                              (3b)
Gambar 3a. Aktivitas Fitase Perakaran Gambas dan Waluh dan 3b.Aktivitas Fitase pada
Perakaran Padi 0,235 0,245 0,255 0,265 28  40  60  80 A k ti v it a s F it a se (U /m l) Suhu (°C) Pengaruh Suhu terhadap Aktivitas Fitase
WP1 WP4 GPP2
OU1 OU2 0,24 0,245 0,25 0,255 0,26 0,265 p H 3 p H
5 p H 7 p H 9 A k ti v it a s F it a se (U /m l) pH Pengaruh pH terhadap

## Aktivitas Fitase
PJ3
PP+8 PU+2 PP+2
PU+1 PJ2 0,225 0,245 0,265 28  40  60  80 A k ti v it a s F it a se (U /m l) Suhu (°C) Pengaruh Suhu terhadap Aktivitas Fitase PP2
PP+8
PJ3 PJ2 PU+1 0,235 0,245 0,255 0,265 28  40  60  80 Ak tiv ita s Fi ta se (U/m l) Suhu (°C) Pengaruh Suhu terhadap Aktivitas Fitase KJP1 KPtU4 KPJW1 KPtU3 KTJ2 0,24 0,245 0,25 0,255 0,26 28  40  60  80 Ak tiv ita s Fi ta se (U/m l) Suhu (°C) Pengaruh Suhu terhadap Aktivitas Fitase TS1
TS2
TU1 TJ4 TJ2 0,24 0,25 0,26 0,27 28  40  60  80 Ak tiv ita s Fi ta se (U/m l) Suhu (°C) Pengaruh Suhu terhadap  Aktivitas Fitase JW1
JP1
JPS1 JPJ1 SW2
Uji  aktivitas  enzim  fitase  dari pilihan  sampel  tanah  sekitar  perakaran gambas  dan  waluh  terhadap  pH  di dapatkan  data  seperti  pada  Gambar  4a dan  4b  sekitar  perakaran  jagung  dan singkong  terhadap  pH.  Uji  aktivitas
enzim  fitase  dari  pilihan  sampel  tanah sekitar  perakaran  kacang  terhadap  pH  di dapatkan  data  Gambar  5a  dan  5b  enzim fitase  dari  pilihan  sampel  tanah  sekitar perakaran tebu.
(a) (b)
Gambar 4a. Aktivitas Fitase Perakaran Gambas dan Waluh dan 4b Aktivitas Fitase Perakaran Jagung dan Singkong (5a)                                                               (5b) Gambar 5a Aktivitas Fitase Perakaran Kacang dan 5b Perakaran Tebu 0,23 0,235 0,24 0,245 0,25 0,255 pH3  pH5  pH7  pH9 A kt iv it as Fi tase (U /m l) pH Pengaruh pH terhadap Aktivitas Fitase OU 1 GPP2
OU2
WP1 WP4 0,235 0,24 0,245 0,25 0,255 pH3  pH5  pH7  pH9 A kt iv it as Fi tase (U /m l) pH Pengaruh pH terhadap Aktivitas Fitase JPJ1 JP1
JW1
JPS1 SW2 0,235 0,245 0,255 0,265 A kt iv it as Fi tase (U /m l) pH Pengaruh pH terhadap

## Aktivitas Fitase
KPJW1 KPTU3
KJP1
KPTU4 KTJ2 0,23 0,24 0,25 0,26 p H 3 p H 4 p H 5 p H 6 p H 7 p H 8 p H9 A kt iv it as Fi tase (U /m l) pH Pengaruh pH terhadap

## Aktivitas Fitase
TJ2 TS2
TU1
TJ4 TS1

## Pembahasan
Aktivitas  bakteri  sampel  terpilih mempunyai  kemampuan  untuk  tumbuh pada  suhu  28 o C,  60 o C  dan  70 o C.  Oleh karena itu, bakteri sampel terpilih mampu hidup  pada  kondisi  suhu  60°C  dan  70 o C walaupun  diisolasi  bukan  dari  kondisi daerah  panas.  Sesuai  dengan  Vielle  and Zeikus.  (2001),  mikroba  hidup  pada kondisi 40-80 o C termasuk mikroba termofilik.
Aktivitas sampel terpilih termasuk jenis  fitase  yang  mempunyai  range double domain aktif pada suhu ruang dan suhu 60-80 o C. Aktivitas tertinggi rata-rata pada  suhu  60 o C,  setelah  pada  suhu  90 o C
mengalami  penurunan  aktivitas.  Hal  ini disebabkan  oleh  kurangnya  ikatan-ikatan kovalen terputus sehingga terjadi kerusakan enzim (Bulati et al. 2007).
Hasil  pengujian  aktivitas  fitase pada  pH  2-3  rendah,  sedangkan  pada  pH 4-8  kondisinya  stabilitas,  pada  pH  9 menurun.  PH  berpengaruh  terhadap enzim,  karena  jika  kondisi  ekstrim menyebabkan  denaturasi  (Nelson  and Cox.  2000).  Aktivitas  enzim  fitase tertinggi ada pada pH 4 dan ada pula pada pH 7.

## Kesimpulan
Isolat  terpilih  aktif  pada  kondisi suhu sampai 70˚C ada sebanyak 22 isolat seperti pada tabel 1.  Ekstrak enzim kasar
dari  isolat  terpilih  daerah  perakaran  padi PU+2  dan  PU+1,  daerah  perakaran kacang  KTJ2  dan  KPJW1,  daerah perakaran  tebu  TU1  dan  TU2,  daerah perakaran  jagung  JP1  dan  JPJ1,  daerah perakaran  gambas  GPP2  dan  OU2 keseluruhan  ekstrak  enzim  stabil  sampai suhu  80 o C.    Isolat  terpilih  aktif  pada kondisi  pH  6-8  PJ3,  OU  2,  WP1,  WP4, JW1,  JP1,  KPtU2,  KJP1,  KPtU4,  TJ2, sedangkan pH 6-9 PJ2 dan TU1.
Perlu  diuji  penghambat  enzim fitase  pada  masing-masing  isolat,  uji lapangan dan produksi enzim.

## Daftar Pustaka
Adiyoga,  W.,  R.  Suherman,  N.  Gunadi, dan A. Hidayat. (2004). Karakteristik Teknis Sistem Pertanaman Polikultur Sayuran
Dataran Tinggi. J. Hort. 14(4):287- 301.
Ansyori.  (2004). Potensi  Cacing  Tanah Sebagai  Alternatif  Bio-Indikator Pertanian  Berkelanjutan. Makalah pribadi. S3 Institut Pertanian Bogor.
Bengtsson, J., Ahnstrom, J.,  and Weibull, A-C.  2005.  The  effects  of  organic agriculture  on  biodiversy\ity  and abundance:  meta-analysis. Journal of  applied  Ecology.2005.42,261- 269.
Finzi,  A.C.,    Breemen.N.V,  Canham
C.D,.  (1998).  Canopy  Tree-Soil Interactions Within Temperate Forest:  Species  Effects  on  Soil Carbon  and  Nitrogen. Ecological Applications, Vol.8, No.2 (May,1998),pp.440-446.
Greiner,  R.,  Konietny,  U.  (2006). Phytase  for  Food Applicaton . Food Technol.  Biotechnol .,  44  (2):  125-
140.
Greiner, R., Konietny, U. And Jany, K.D. (1993).Purification
and
Characterization  of  two  Phytases from  Escherichia  coli,  Archives  of Bio  Chemistry  and  Biophysics,
303:  107 – 113.
Gulati,  H.  K.,  Chadha,  B.  S.,  and  Saini, H.  S.  (2007).  Production  and
Characterization  of  Thermostable Alkaline Phytase from Bacilluslaevolacticus Isolated  from
Rhizosphere Soil, J . Ind . Microbiol .
Biotechnol ., 34 : 91-98
Gusmanizar.  N,  Shukor.M.Y.P.  (2009).
Isolasi  Dan  Identifikasi  Bakteri Penghasil Enzim Fitase Dari Sumber  Air  Panas  Di  Sumatera Barat. Artikel Penelitian
Fundamental. TA.
Hanafiah,    K.A.,  Anas,  I.,  Napoleon,  A.,
Ghoffar,  N.  (2005). Biologi  Tanah . Ekologi dan Makrobiologi
Tanah. Jakarta:  PT  Raja  Grafindo Persada.
Kerovuo, J., Lauraeus, M., Nurminen, P., Kalkinen,  N.  And  Apajalahti,  J.
(1998).  Isolation, Characterization, Molecular Gene Cloning and Sequencing  of  a  Novel  Phytase from  Bacillus  subtilis,  Applied  and Environmental  Microbiology,  64: 2079-2085.
Nagashima,  T., Tange,  T. And Anazawa, H.  (1999).  Dephosphorylation  of Phytate  by  using  The  Aspergillus niger Phytase with A High  Affinity for Phytate. Applied and
Environmental  Microbiology ,  65: 4682-4688.
Sajidan,  A.,  Farouk,  A.,  Greiner,  R., Jungblut,  P.  Muller,  E.C.  and Borriss, R.  (2004).  Molecular and
Physiological Characterization of A 3-Phytase  from  Soil  Bacterium Klebsiella sp.  ASR 1. Applied and Environmental  Microbiology ,  65:
110-118.
Sajidan,  A.  Ratriyanto  dan  A.  M.  P. Nuhriawangsa,  (2004).  Pengaruh Bakteri  Penghasil  Fitase  pada Pakan  Campuran Wheat  Pollard terhadap  Performan  Ayam  Broiler.
Buletin Peternakan . Fakultas Peternakan  UGM.  Volume  28  (3): 105-114.
Shobirin.  K,  A.  Farouk,  R.  Greiner. (2009).  Potential  phytate-degrading enzyme  producing  bacteria  isolated from  Malaysian  maize  plantation. African  Journal  of  Biotechnology Vol. 8 (15), pp. 3540-3546,
Sugiyarto,  Effendi.M.,  Mahajoeno,  E., Sugito,
Y., Handayanto, E.
Agustina,  L.  (2007).  Preferensi Berbagai  Jenis  Makrofauna  Tanah Terhadap  Sisa  Bahan  Organik Tanaman  Pada  Intensitas  Cahaya Berbeda. Biodiversitas,  Vol.  7,No.
4. Pp. 96-100.
Ullah,  A.  H.  J.  (1988a)  Aspergillus ficuum  phytase:  partial  primary structure,  substrate  selectivity,  and kinetic characterization.
Prep.Biochem. 18, 459-471.
Vielle,  C .,  and Zeikus,  G.  (2001). Hyperthermophilic Enzymes: Source, Uses, and Molecular Mechanisms  for  Thermostability,
Microbiol. And Mol. Biol. Rev., 65: 1-43 Youn-Je Park. (2001). Expression, Characterization,  and  Antifungal Activity  of  Phytase  from  Bacillus subtilis TS16-111. Disertation. Department of Agricultural Biology Graduate  School  of  Seoul  National University
Yunus.A,Nuhriawangsa.A.M.P,Swastike. W.  (2004).  Pemanfaatan  Bakteri Penghasil  Fitase  Asli  Indonesia
Untuk  Meningkatkan  Ketersediaan Sumber  Phosphat  Organik  Pada Pakan Ayam Broiler Ramah Lingkungan. Laporan Penelitian. Wardani,  E.T.  (2004). Intersepsi  Air Hujan  Pada  Beberapa  Sistem Agroforestri . Malang: Jurusan Tanah. Fakultas Pertanian Universitas  Brawijaya.  Serial:  on line.
Wyss, M., Brugger, R., Kronenberger, A., Remmy, R., Fimbel, R., Oesterhelt, G.,  Lehman,  M.  And  van  Loon, A.P.G.M.,  (1999b).    Bi°Chemical Characterization of Fungal Phytases (myo-inositol hexakisphosphatephosphohidrolase s):CatalyticProperties,  Applied  and Environmental  Microbiology,  65: 367-373.