ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 16 (3) (2013) : 69 – 72
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Isolasi Senyawa Antioksidan dari Fraksi Etil Asetat Daun Tempuyung ( Sonchus arvensis L )
Buyung Rukmantara Susena Putra a , Dewi Kusrini a* , Enny Fachriyah a
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: dewi.kusrini@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords: Sonchus arvensis L ., ethyl acetate fraction, antioxidant, chalcone
Isolation of active antioxidants compounds from ethyl acetate fraction of tempuyung and activity of ethyl acetate as an antioxidant have been conducted. The identification of the structure  of  the  active antioxidant  isolates  was  performed  by  UV-VIS and  antioxidants activity  was  determined  by  the  DPPH  (1,1-diphenyl-2-pikril-hidrazil)  method.  The isolated active compound derived antioxidant was a flavonoids class of chalcone. Form the antioxidant  activity  test,  it  was  quantitatively  known  that  the  ethyl  acetate  fraction  of tempuyung Sonchus arvensis L leaves did not have a potential as an antioxidant with IC 50 level were 353,41 ppm.

## A b s t r a k
Kata Kunci:
Sonchus  arvensis  L., fraksi  etil  asetat, antioksidan, khalkon Telah  dilakukan  penelitian  isolasi  senyawa  antioksidan  dari  fraksi  etil  asetat  daun tempuyung serta uji aktivitas fraksi etil asetat sebagai antioksidan. Identifikasi struktur isolat  aktif  antioksidan  dilakukan  dengan  spektrofotometer UV-Vis ,  serta  aktivitas antioksidan  ditentukan  dengan  dengan  metode  DPPH  (1,1-difenil-2-pikril-hidrazil). Hasil isolasi senyawa aktif antioksidan diperoleh isolat A1 dan A2 yang diduga merupakan senyawa flavonoid golongan khalkon. Uji aktivitas antioksidan diketahui bahwa fraksi etil asetat memiliki potensi yang kurang bagus sebagai antioksidan dengan harga IC 50 353,41
ppm.

## 1. Pendahuluan
Tempuyung  ( Sonchus  arvensis L)  adalah  salah  satu tanaman  obat  tradisional  yang  termasuk  dalam  famili asteraceae .  Tempuyung  memiliki  banyak  khasiat,  di antaranya untuk mengobati asam urat, diuretik [1], batu ginjal, kencing batu, bengkak, batuk, asma [2], demam, inflamasi,  detoksikasi,  sirkulasi  darah  [3].  Dalam farmakologi  Cina  tanaman  ini  memiliki  rasa  pahit, dingin,  menurunkan  panas,  dan  menghilangkan  racun. Unsur  kalium  yang  terkandung  dalam  tempuyung mampu mengikis batu ginjal. Kelarutan batu ginjal oleh tempuyung  diduga  melalui  efek  diuretiknya  yaitu memperbanyak  ekskresi  urin.  Tempuyung  juga digunakan sebagai obat memar akibat benturan dengan cara menempelkan di bagian yang bengkak, menghilangkan rasa lesu dan pegal. Penelitian mengenai khasiat tempuyung juga dilakukan oleh Wadekar dkk. [4]
mengenai  khasiat  tempuyung  sebagai  obat  cacing, diarrhoea , leucorrhoea , dan disentri.
Kandungan senyawa dalam tempuyung yang pernah dianalisis diantaranya golongan senyawa flavonoid yaitu 7,4-dihidroksi  flavon,  sesquiterpen  dari  golongan terpenoid  [3],  turunan asam  kuinat  yaitu  1,3,4,5-tetra- (p-hidroksifenilasetil  dan  sesquiterpen  [2].  Penelitian yang pernah dilakukan oleh Radulović dkk. [5] mengenai identifikasi  komponen-komponen  minyak  atsiri  dari Sonchus  arvensis L  adalah  heniokosan,  trikosan,  dan terpenoid.
Penelitian mengenai isolasi dan identifikasi senyawa metabolit  sekunder  telah  dilakukan  pada  tahun  2012 yaitu flavonoid, alkaloid [6], triterpenoid [7], dan asam fenolat  [8].  Berdasarkan  informasi  dari  penelitian tersebut, penelitian ini dilakukan untuk mengisolasi dan
mengidentifikasi  senyawa  aktif  antioksidan  fraksi  etil asetat daun tempuyung ( Sonchus Arvensis L) menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan menentukan potensi  fraksi  etil  asetat  sebagai  antioksidan  dengan metode  DPPH.  Perbedaan  penelitian  ini  dengan penelitian sebelumnya terletak pada fraksi yang diisolasi dan metode untuk menganalisis senyawanya. Pemilihan etil  asetat  sebagai  pelarut  karena  diharapkan  banyak senyawa antioksidan yang berupa senyawa fenolik dapat terekstrak  sehingga  dapat  meningkatkan  aktivitas antioksidan.

## 2. Metode Penelitian

## Alat dan bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  gelas  beaker, erlenmeyer,  gelas  ukur,  pipet  tetes,  corong  pisah, chamber  KLT,  lampu UV ,  alumunium  foil,  pipa  kapiler, rotary vaporator , botol vial, serta seperangkat alat analisis UV-Vis .  Bahan  yang digunakan  adalah daun  tempuyung dari  Tawangmangu, n -heksana  96%, n -heksana  p.a, etanol  96  %,  etanol  p.a,  aseton  96%,  kloroform  p.a, benzena p.a, diklorometana, etil asetat p.a, metanol p.a, akuades, silika gel, serbuk Mg, amil alkohol p.a, HCl 10 %, NaOH,  AlCl 3, eter,  DPPH,  Dragendroff,  Meyer, Libermann-Burchard, plat KLT Merck.
Serbuk  daun  tempuyung  sebanyak  700  gram dimaserasi  dengan  pelarut n- heksana  96%.  Maserasi menggunakan n- heksana  96%  bertujuan  untuk mengikat  semua  senyawa  metabolit  sekunder  daun tempuyung  yang  bersifat  non  polar  seperti  lemak, steroid,  dan  triterpenoid.  Filtrat  yang  didapatkan berwarna hijau pekat. Residu n -heksana dikeringkan dan dimaserasi dengan pelarut aseton. Filtrat hasil maserasi diuapkan  dengan rotary  evaporator sehingga  diperoleh ekstrak aseton yang berwarna hijau pekat. Ekstrak aseton ditambahkan  akuades  dengan  perbandingan  1:1 kemudian  didiamkan  selama  24  jam.  Selanjutnya dilakukan  penyaringan  untuk  memisahkan  filtrat  dan klorofil. Ekstrak aseton difraksinasi dengan pelarut amil alkohol,  selanjutnya  amil  alkohol  difraksinasi  dengan pelarut  etil  asetat  kemudian  diuapkan  sehingga diperoleh  fraksi  etil  asetat.  Simpilisa  dan  ekstrak  yang didapatkan dilakukan analisis penapisan fitokimia yang meliputi tanin, alkaloid, flavonoid, kuinon, saponin, dan steroid/  triterpenoid.  Fraksi  etil  asetat  dilakukan pemisahan menggunakan KLT sebagai fase diam berupa silika  gel  GF 254 dan  fase  gerak  berupa  n- heksana:kloroform:etil  asetat  (2:5:5).  Selanjutnya  diuji antioksidan  secara  kualitatif  dan  kuantitatif  dengan metode  DPPH.  Noda  yang  terbentuk  dilakukan  uji flavonoid dengan reagen penampak bercak uap amonia. Noda positif flavonoid dan positif antioksidan dilakukan pemisahan menggunakan KLT Preparatif.

## Analisis
Isolat  yang  diperoleh  dari  hasil  isolasi  selanjutnya diidentifikasi
menggunakan spektrofotometer
ultraviolet – cahaya  tampak  untuk  mengetahui  panjang gelombang serapan maksimum isolat.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Penapisan  fitokimia  berfungsi  untuk  mengetahui keberadaan golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung di dalam simplisia serbuk maupun di dalam ekstrak  etanol.  Penapisan  fitokimia  yang  dilakukan secara  kualitatif  dengan  mengidentifikasi  keberadaan suatu  senyawa  tanpa  menentukan  kadarnya.  Prinsip penapisan  fitokimia  ialah  analisis  golongan  kimia tumbuhan  dengan  uji  spesifik  dengan  reagen  yang memberikan  uji  spesifik  terhadap  golongan  kimia tertentu. Golongan yang diidentifikasi pada penelitian ini antara  lain  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  steroid  dan triterpenoid. Hasil penapisan fitokimia dapat dilihat pada Tabel 1.

## Tabel 1: Hasil uji fitokimia Tempuyung
Hasil uji fitokimia terhadap serbuk daun tempuyung menunjukkan reaksi positif golongan alkaloid, flavonoid, saponin,  steroid,  dan  triterpenoid.  Hasil  uji  fitokimia terhadap ekstrak n -heksana hanya menunjukkan reaksi positif  golongan  steroid  dan  triterpenoid.  Hasil  uji fitokimia  terhadap  ekstrak  aseton  menunjukkan  reaksi positif  golongan  alkaloid,  flavonoid,  saponin  dan  pada fraksi  etil  asetat  menunjukan  reaksi  positif  golongan alkaloid  dan  flavonoid.  Fraksi  etil  asetat  dilakukan identifikasi lebih lanjut menggunakan KLT dengan eluen terbaik  n-heksana:  kloroform:etil  asetat  (2:5:5)  yang menghasilkan 4 noda (Gambar 1).
Gambar 1. Harga Rf dan warna noda KLT fraksi etil asetat menggunakan campuran eluen n- heksana : kloroform : etil asetat (2:5:5) pada lampu UV λ 365 nm (a) sebelum diuji dengan amonia (b) setelah diuji dengan amonia
Terjadi perubahan warna dari kuning menjadi merah setelah diberi uap amonia. Menurut Markham [9], diduga noda A1 dan A2 merupakan senyawa flavonoid golongan khalkon.  Metode  yang  digunakan  untuk  mengetahui adanya senyawa antioksidan dalam fraksi etil asetat daun Sonchus arvensis L. adalah metode DPPH. Hasil KLT fraksi etil asetat dengan eluen n – heksana: kloroform:etil asetat (2:5:5) disemprot menggunakan DPPH yang
menghasilkan 2 noda (Gambar 2)
Gambar 2. Hasil KLT fraksi etil asetat setelah disemprot menggunakan eluen campuran n – heksana : kloroform:etil asetat (2:5:5) pada lampu UV λ 254 nm dan UV λ 365 nm
Gambar 3. Grafik hasil pengukuran hubungan antara (a) % inhibisi dan konsentrasi larutan pembanding kuersetin (b) % inhibisi dan konsentrasi larutan fraksi etil asetat.
Pada  hasil  KLT  fraksi  etil  asetat  diperoleh  7  noda, tetapi setelah disemprot menggunakan DPPH diperoleh 3 noda  yang  berwarna  kuning  yang  artinya  terdapat  3 komponen  yang  terpisah  yang  bersifat  antioksidan.  Uji kuantitatif aktivitas antioksidan pada sampel (fraksi etil asetat)  dilakukan  menggunakan  metode  DPPH  (1,1- difenil-2-pikrilhidrasil)  dengan  senyawa  kuersetin sebagai  pembanding.  Uji  DPPH  dilakukan  dengan mengukur  absorbansi  dan  panjang  golombang  larutan DPPH dalam metanol pada panjang gelombang 515 nm. Uji  DPPH  digunakan  untuk  menentukan  konsentrasi inhibisi  (IC 50 )  yang  dinyatakan  dalam  total  antioksidan yang  digunakan  untuk  meredam  50%  aktivitas  radikal DPPH.  Pengukuran  dilakukan  dengan  spektrofotometer UV-Vis ,  pengukuran  berupa  absorbansi  dari  masing- masing konsentrasi sampel (20; 40; 60; 80; 100 mg/mL) sehingga diperoleh grafik % inhibisi vs konsentrasi.
Dari  grafik  di  atas  diperoleh  persamaan  regresi larutan pembanding kuersetin y = 0,679x + 32,73 dengan
nilai  R  =  0,907.  Persamaan  tersebut  menunjukkan hubungan matematis antara konsentrasi dan % inhibisi, sedangkan  nilai  r  menunjukkan  korelasi  antara konsentrasi (sumbu x) dengan % inhibisi (sumbu y). Dari data tersebut diperoleh nilai IC 50 25,43 mg L -1 . Fraksi etil asetat  menunjukkan  persamaan  regresi  y  =  0,135x  + 2,289  dengan  nilai  R  0,971.  Dari  data  di  atas  dapat diketahui nilai IC 50 sebesar 353,41mg L -1 .
Identifikasi  isolat  A1  dan  A2  menggunakan spektrofotometer UV-Vis ditunjukkan pada (Gambar 3).
Gambar 4. Hasil analisis isolat menggunakan spektrofotometer UV-Vis 365,2 nm (pita I) dan 232,8 nm (pita II) (isolat A1), 364,4 nm (pita I) dan 245,6 nm (pita II) (isolat A2).
Menurut  Markham  [9],  spektrum  khas  flavonoid terdiri dari dua pita, pada panjang gelombang (230 nm – 270  nm)  pita  I,  dan  pada  (340  nm – 390  nm)  pita  II termasuk  dalam  senyawa  flavonoid  golongan  khalkon. Isolat A1 dan A2 mempunyai serapan panjang gelombang yang  termasuk  dalam  rentang  serapan  panjang gelombang  senyawa  khalkon.  Sesuai  dengan  hasil  pada pemisahan senyawa fraksi etil asetat menggunakan KLT yang menunjukan noda A1 dan A2 berfluorosensi kuning dan  menunjukan  perubahan  warna  menjadi  merah setelah  ditambahkan  penampak  bercak  amonia  yang menunjukan  bahwa  isolat  A1  dan  A2  termasuk  dalam senyawa flavonoid golongan khalkon.

## 4. Kesimpulan
Tanaman tempuyung mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, triterpen, dan steroid. Hasil identifikasi  menggunakan  spektrofotometer UV - Vis menunjukkan  bahwa  isolat  flavonoid  yang  didapatkan termasuk  dalam  golongan  khalkon.  Diperoleh  nilai  IC 50 fraksi  etil  asetat  sebesar  353,41  mg  L -1 ,  sedangkan senyawa antioksidan yang bagus menunjukkan aktivitas antioksidan yang memiliki harga IC 50 yang lebih rendah
dari 200 ppm (Blois, 1958). Sehingga dapat disimpulkan bahwa  fraksi  etil  asetat  tidak  berpotensi  menjadi antioksidan yang baik.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  LO  Brandsæter,  M  Goul  Thomsen,  K  Wærnhus,  H Fykse,  Effects  of  repeated  clover  undersowing  in spring cereals and stubble treatments in autumn on Elymus  repens,  Sonchus  arvensis  and  Cirsium arvense, Crop  Protection ,  32,  (2012)  104-110 http://dx.doi.org/10.1016/j.cropro.2011.09.022
[2]  Yang-Jun Xu, Shao-Bo Sun, Li-Mei Sun, Dong-Feng Qiu,  Xiu-Jin  Liu,  Zhi-Bo  Jiang,  Cheng-Shan  Yuan, Quinic acid esters and sesquiterpenes from Sonchus arvensis, Food  chemistry ,  111,  1,  (2008)  92-97 http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2008.03.028
[3]  Zhengxiang Xia, Wei Qu, Haiying Lu, Juqin Fu, Yanli Ren,  Jingyu  Liang,  Sesquiterpene  lactones  from Sonchus  arvensis  L.  and  their  antibacterial  activity against  Streptococcus  mutans  ATCC  25175,
Fitoterapia , 81, 5, (2010) 424-428 http://dx.doi.org/10.1016/j.fitote.2009.12.001
[4]  J Wadekar, R Sawant, R Naik, B Amruta, Anthelmintic and  Antibacterial  Potential  of  Sonchus  arvensis Leaves, International  Journal  of  Pharmaceutical Frontier Research, IJPFR, April-June , 2, 2, (2012) 50-55
[5] N Radulović, P Blagojević, R Palić, Fatty acid derived compounds--the  dominant  volatile  class  of  the essential oil poor Sonchus arvensis subsp. uliginosus (Bieb.) Nyman, Natural product communications , 4, 3,
(2009) 405-410
[6]  Yazid  Murtadlo,  Isolasi,  identifikasi  senyawa alkaloid  total  daun  tempuyung  (Sonchus  arvensis linn) dan uji sitotoksik dengan metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test), Chem Info Journal , 1, 1, (2013) 379-385
[7]  Meutia  Rumondang,  Isolasi,  Identifikasi  Dan  Uji Antibakteri  Senyawa  Triterpenoid  Dari  Ekstrak  n- Heksana  Daun  Tempuyung  (Sonchus  arvensis  L.), Chem Info Journal , 1, 1, (2012) 156-164
[8]  Wulan  Yuliarti,  Isolasi,  Identifikasi  dan  Uji Antioksidan Asam Fenolat dalam Daun Tempuyung (Sonchus Arvensis L.) dengan Metode 1, 1-Difenil-2- Pikrilhidrasil (DPPH), Chem Info Journal , 1, 1, (2012) 294-304
[9]  KR Markham, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, ITB, Bandung, 1988.