Majalah Farmaseutik Vol. 14 No. 1: 42-48
ISSN-p : 1410-590x
ISSN-e : 2614-0063
Potensi Antikoagulan Sari Bawang Putih ( Allium sativum) Menggunakan Metode Lee-White dan Apusan Darah
Potential  of  Anticoagulan  Garlic  Estract  ( Allium  sativum )  Using Lee-White Method and Blood Destruction
Rahmawati * , Muammar Fawwas, Rais Razak, Utami Islamiati Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia Corresponding author: Rahmawati: Email: rahmawati.rahmawati@umi.ac.id
ABSTRAK
Bawang putih ( Allium sativum L.) mengandung minyak atsiri, senyawa allicin, alliin dan  senyawa  organosulfur  lainnya  seperti  ajoene  yang  berperan  dalam  antikoagulan. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  aktivitas  antikoagulan  sari  bawang  putih menggunakan  metode Lee - White dan  apusan  darah . Pengujian  aktivitas  antikoagulan dilakukan  dengan  melihat  waktu  yang  diperlukan  darah  untuk  membeku  (Lee-White) setelah penambahan sari bawang putih, etanol 96% (kontrol negatif) dan EDTA (kontrol positif) serta melihat profil sel darah merah di bawah mikroskop (apusan darah). Dari hasil pengujian menunjukan bahwa sari bawang putih memiliki aktivitas antikoagulan di mana pada  metode Lee - White , pembekuan  darah  kontrol  untuk  tiga  probandus  berturut-turut terjadi pada waktu 4 menit, 3 menit 30 detik dan 3 menit 30 detik;untuk kontrol negatif pembekuan terjadi pada waktu 4 menit 30 detik, 2 menit 30 detik dan 2 menit 30 detik  serta penambahan  EDTA  dan  sari  bawang  putih  tidak  mengalami  pembekuan  darah  (sampai lebih dari 24 jam). Kemudian pada metode apusan darah , preparat darah yang ditambahkan sari bawang putih terlihat sel-selnya berbentuk bulat dan tidak berkelompok.
Kata kunci : Bawang putih, antikoagulan, Lee-White , apusan darah.

## ABSTRACT
Garlic (Allium sativum L.) contains essential oils, allicin compounds, alliin and other organosulfur  compounds  such  as  ajoene  which  play  a  role  in  anticoagulants.  This  study aimed to examine the anticoagulant activity of garlic extract using the Lee-White method and blood smear. Anticoagulant activity testing was carried out by looking at the time it took for the blood to freeze after adding garlic juice, 96% ethanol (negative control) and EDTA (positive  control)  and  looking  at  the  red  blood  cell  profile  under  a  microscope  (blood smear). From the test results showed that garlic extract had anticoagulant activity in which the Lee-White method, blood control freezing for three consecutive probes occurred at 4 minutes, 3 minutes 30 seconds and 3 minutes 30 seconds; addition of 96% ethanol occurred at 4 minutes 30 seconds, 2 minutes 30 seconds and 2 minutes 30 seconds and the addition of EDTA and garlic extract did not experience blood clots. Then in the blood smear method, the red blood cells added with garlic juice look round and not in groups.
Keyword : Garlic, anticoagulant, Lee-White , blood smear.

## PENDAHULUAN
Antikoagulan  adalah  zat  untuk mencegah  terjadinya  pembekuan  darah. Antikogulan  dapat  pula  digunakan  pada penderita serangan jantung yang disebabkan oleh  trombosis atau  gumpalan
di  arteri  koroner  (Tangkery et  al., 2013). Selama  lebih  dari  lima  dekade  obat antikoagulan  yang  terdiri  dari  heparin, antagonis  vitamin  K  dan  turunannya memiliki  peran  utama  dalam  pengobatan klinis  (Al-Saadi,  2013).  Walaupun  heparin menunjukan  aktivitas  antikoagulan  yang kuat  dan  sudah  luas  digunakan  untuk antikoagulan, bukti-bukti klinis menunjukan bahwa terdapat efek samping dari  pemakaian  heparain  antara  lain pendarahan  dan  berpotensi  membawa resiko kontaminan virus yang berasal dari hewan (Sinurat et al., 2011). Penelitian  ini  bertujuan  untuk mencari tumbuhan yang berpotensi sebagai antikoagulan. Bawang putih ( Allium sativum
L.)  merupakan  salah  satu  tanaman  yang turun  temurun  telah  digunakan  sebagai obat  tradisional  dan  bumbu  dapur  di Indonesia. Bagian utama dan paling penting dari bawang putih adalah umbinya. Dalam industri  makanan,  umbi  bawang  putih dijadikan  ekstrak,  bubuk  atau  tepung. Bawang  putih  mengandung  minyak  atsiri yang  sangat  mudah  menguap  di  udara bebas. Minyak atsiri ini diduga mempunyai kemampuan  sebagai  antibakteri  dan antiseptik.  Sementara  itu,  zat  yang  diduga berperan  memberi  aroma  bawang  putih yang  khas  adalah  alisin  (hasil  penguraian alliin  oleh  enzim  ellinase)  yang  dapat menurunkan  kadar  kolesterol,  mencegah penyakit jantung dan hipertensi (Srihari et al., 2015). Alisin mengandung sulfur dengan struktur  tidak  jenuh  dan  dalam  beberapa detik dapat terurai menjadi senyawa dialil- disulfida  (Cantwell,  2000;  Purwaningsih, 2007). Bawang  putih  juga  mengandung senyawa  fenolik  yang  berguna  sebagai antioksidan (Prasonto et al., 2017); kalsium yang  dapat  mencegah  hipertensi,  ajoene yang  membantu  menurunkan  kadar kolesterol dalam darah (Untari, 2010), dan sebagai antikoagulan (Davison et al., 2012), serta protein, sulfur dan saltivin (Purwaningsih, 2007). Ajoene menurunkan
kecepatan  pembekuan  darah  karena bersifat  antikoagulasi.  Hal  ini  secara langsung  dapat  mengurangi  resiko  strok dan penyakit kardiovaskuler (Hernawan et al., 2003)  Bawang  putih  juga    bermanfaat membantu    mengecilkan    sumbatan    pada arteri  jantung  sehingga  meminimalkan terjadinya serangan jantung (Untari, 2010).
Ada  dua  metode  yang  dapat digunakan  dalam  menentukan  aktivitas antikoagulan yaitu metode Lee - White dan apusan darah. Metode Lee - White digunakan untuk  menentukan  lamanya  waktu  yang diperlukan darah untuk membeku, sedangkan  metode  apusan  darah  untuk membantu  melihat  profil  sel  darah  merah yang  mengalami  koagulasi  maupun  yang tidak  mengalami  koagulasi.  Kedua  metode ini dianggap lebih mudah untuk dilakukan dan  mendapatkan  hasil  yang  lebih  cepat (Yayuningsih et al., 2015). Kandungan  minyak  dalam  bawang putih berkhasiat membersihkan darah dan mengurangi  rasa  sakit  pada  bagian  tubuh. Bawang putih sering dijadikan ramuan obat asma, menurunkan berat badan, mengontrol  kolesterol,  gangguan  suara serak,  nyeri  haid,  flu,  kencing  sedikit, demam, batuk rejan, tuberkulosis dan lain- lain.  Bawang  putih  banyak  digunakan sebagai  bumbu  utama  pada  berbagai masakan  karena  aromanya  yang  khas. Aroma  khas  tersebut  karena  adanya komponen aktif allicin pada bawang putih. Allicin  juga  berguna  untuk  daya  anti kolesterol  yang  dapat  mencegah  penyakit jantung,  tekanan  darah  tinggi  dan  lain sebagainya.  Komponen  allicin  bersifat volatil  sehingga  bila  penanganannya  salah maka  dapat  menyebabkan  kerusakan (Srihari et al., 2015). Pada bawang putih setelah dikonsumsi  komponen  allicin  (didapatkan setelah  allicin  berinetraksi  dengan  enzim allinase) dilepas ke pembuluh darah; pada beberapa studi manusia dan hewan, allicin mampu  mencetuskan  sel  darah  merah untuk menghasilkan  H 2 S  yang  mempunyai
efek vasodilator (Imelda et al., 2013). Selain itu,  hasil  penelitian  juga  menunjukan  efek bawang putih dalam menurunkan agregasi platelet  yang  signifikan  dibandingkan plasebo.  Bawang  putih  mempunyai  cara kerja seperti asam asetilsalisilat yaitu dapat mengurangi kemampuan pembekuan darah (Imelda et al., 2013).

## METODOLOGI
Alat dan Bahan Alat , deck glass , mikropipet (Eppendorf ® ), mikroskop binokuler
(Olympus  CX23), object  glass ,  spoit  5  mL ( Onemed ® ), stopwatch , tabung vaculab plain 3  mL,  timbangan  analitik  ( Ohaus ® ),
torniquet  dan vortex portable  mixer
(Ika ® Vortex Genius 3). Bahan, alkohol 70%, aquades, darah, EDTA,  etanol  96%,  kapas,  larutan  giemsa, minyak  imersi  dan  sari  bawang  putih ( Allium sativum L.).

## Prosedur penelitian
Penyiapan sampel Umbi  bawang  putih  ( Allium  sativum L.)  dikupas,  dicuci,  dipotong  keci-kecil, dihaluskan  menggunakan  juicer  dan diambil sarinya.
Penyiapan sampel uji darah
Tiga  orang  probandus  sehat  diambil darahnya  dari  vena  kubiti  menggunakan alat suntik disposible  5 mL. Jumlah darah yang diambil pada tiap probandus sebanyak 3 mL.
Penentuan volume sampel untuk pengujian Disiapkan  5  tabung vaculab  plain 3 mL  yang  diisi  masing-masing  1  mL  darah. Setiap tabung ditambahkan sampel dengan variasi volume, yaitu 20, 40, 60, 80 dan 100 μ l, diinkubasi selama 3 menit untuk melihat terjadinya  koagulasi.  Hasilnya,  hanya tabung  yang  ditambahkan  80 μ l  sampel yang tidak mengalami koagulasi (Tangkery et al., 2013).
Pengujian  aktivitas  antikoagulasi  Sari Bawang  Putih Pada  Sampel  Uji  Darah (Tangkery et al., 2013)
Metode  yang  digunakan  dalam pengujian ini ada 2 yaitu, metode Lee-White metode  ini  digunakan  untuk  menentukan waktu  pembekuan  darah  yang  diamati secara visual (berdasarkan masa pembekuan  darah  normal)  dan  metode apusan  darah,  dengan  berbagai  perlakuan yaitu sampel darah sebagai kontrol, etanol 96% sebagai kontrol negatif, EDTA sebagai kontrol  positif,  sari  bawang  putih  sebagai perlakuan  pertama  dan  sari  bawang  putih dan EDTA sebagai perlakuan kedua.
Prosedur metode Lee-White Pada  tabung  (1)  :  1  mL  darah,  lalu stopwatch dijalankan untuk melihat waktu pembekuan darah (darah kontrol).
Pada tabung (2) : 1 mL darah dan 100
μ l etanol 96% (kontrol negatif).
Pada  tabung  (3)  :  1  mL  darah  dan  1  mg EDTA (kontrol positif).
EDTA merupakan antikoagulan yang dapat  mengikat  kalsium  sehingga  tidak dapat  berperan  dalam  proses  pembekuan. EDTA  yang  dibutuhkan  untuk  mengikat kalsium yaitu 1 - 2 mg/1 mL darah.
Pada tabung (4) : 1 mL darah dan 100 μ l sari bawang putih (perlakuan pertama). Pada  tabung  (5)  :  dimasukkan  1  mL darah dan ditambahkan 100 μ l sari bawang putih dan 1 mg EDTA (perlakuan kedua).
Stopwatch dijalankan untuk menentukan  waktu  pembekuan  darah Setelah  3  menit  tabung  diangkat  dan masing-masing  tabung  reaksi  dimiringkan untuk  melihat  apakah  sudah  terjadi pembekuan atau belum. Bila belum terjadi pembekuan,  letakkan  kembali  pada  rak tabung  dan  dilakukan  pengamatan  setiap 30 detik.
Metode Apusan Darah Efek  pembekuan  darah  juga  dapat dilihat   secara   mikrosokopik.    Metode   ini
dilakukan untuk melihat keadaan sel darah secara mikroskopik. Sampel yang digunakan pada pengujian ini diambil dari tabung pada metode Lee-White di atas. Disiapkan  5  buah object  glass yang bersih  dan  tidak  berlemak  dan  masing- masing  diberi  label  nomor  1  sampai  5. Dipipet darah pada masing-masing  tabung reaksi sebanyak 20 μ l dan ditotolkan pada 5 buah object glass secara berurutan.Tetesan darah  pada object  glass disentuh  dengan deck glass dengan posisi miring, kemudian digeser  ke  arah  berlawanan.  Preparat difiksasi  dalam  larutan  metanol  sampai menutupi bagian permukaannya selama 15 menit dan diangin-anginkan sampai kering. Preparat  kemudian  direndam  dalam larutan giemsa selama 30 menit dan dibilas dengan  air,  selanjutnya  diangin-anginkan sampai  mengering.  Preparat  ditetesi dengan  minyak  imersi  dan  ditutup menggunakan deck  glass .Hasilnya  diamati di  bawah  mikroskop  dengan  pembesaran 400x  dan  didokumentasikan  dengan kamera.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  uji  aktivitas  antikoagulan  sari bawang  putih (Allium  sativum L.)  dengan menggunakan  metode Lee-White dan hapusan darah (Tabel I).
Metode Lee – White Berdasarkan  tabel  hasil  pengamatan di  atas,  waktu  koagulasi  darah  ketiga probandus tersebut agak berbeda. Menurut (Corwin,  2009)  waktu  pembekuan  darah
(koagulasi)  tidak  lebih  dari  15  menit, normalnya 3 – 9,5 menit  untuk  penusukan lengan.  Sampel  darah  kontrol  dari  ketiga probandus  masih  dalam  waktu  koagulasi normal  begitupun  dengan  sampel  darah yang  ditambahkan  etanol  96%.  Di  mana etanol  96%    tidak  mempengaruhi  proses koagulasi  darah  normal.  Hasil  darah  yang mengalami pembekuan (koagulasi) (Gambar 1). Proses pembekuan darah (koagulasi) tidak terjadi pada tabung ketiga (T3) yang berisi  darah  ditambahkan  EDTA  sebagai kontrol  positif,  tabung  keempat  (T4)  yang berisi  darah  ditambahkan  sari  bawang putih sebagai perlakuan pertama (P1) dan tabung kelima yang berisi darah ditambahkan sari bawang putih dan EDTA sebagai  perlakuan  kedua  (P2).  Hal  ini menunjukan  bahwa  sari  bawang  putih dapat dijadikan sebagai antikoagulan. Tidak terjadinya  proses  koagulasi  pada  darah yang ditambahkan  sari bawang putih  dan
EDTA (Gambar 2).
Menurut Imelda & Kurniawan (2013) komponen allicin pada bawang putih akan dilepas ke pembuluh darah, allicin mampu mencetuskan  sel  darah  merah  untuk menghasilkan  H 2 S  yang  mempunyai  efek vasodilator.    Senyawa  aktif  umbi  bawang putih  seperti  kelompok  ajoene  akan menghambat ion Ca
2+ yang berperan dalam kontraksi  otot  jantung  dan  otot  polos pembuluh darah, sehingga cairan intraseluler menurun dan terjadi relaksasi yang menyebabkan ruangan dalam pembuluh  darah  melebar  (Hernawan  & Tabel I. Hasil pengamatan waktu koagulasi Probandus Waktu pengamatan T1 T2 T3 T4 T5 I (A) 4 menit 4 menit 30 detik - - - II (B) 3 menit 30 detik  2 menit 30 detik - - - III (C) 3 menit 30 detik  2 menit 30 detik - - -
Keterangan: T1: Darah (control); T2: Darah ditambah Etanol 96% (kontrol negatif); T3: Darah  ditambah  EDTA  (control  positif);  T4:  Darah  ditambah  sari  bawang  putih (perlakuan  pertama);  T5:  Data  ditambah  EDTA  dan  sari  bawang  putih  (perlakuan kedua); ( - ): Tidak jadi perlakuan.
Setyawan,    2003).  EDTA  bekerja  dengan cara  mengikat  ion  Ca 2+ yang  dibutuhkan untuk proses pembekuan darah (koagulasi) (Fitria, 2013).
Metode apusan darah Aktivitas  pembekuan  darah  juga dapat dilihat dengan metode hapusan darah dengan  melihat  profil  sel  darah  merah  di bawah  mikroskop.  Berdasarkan  Gambar  3 yaitu  preparat  darah  kontrol  probandus pertama tabung pertama (AT1), probandus kedua  tabung  pertama  (BT1)  dan probandus  ketiga  tabung  pertama  (CT1) sera yaitu preparat darah (kontrol negatif)
probandus  pertama  tabung  kedua  (AT2), probandus kedua tabung kedua (BT2) dan probandus  ketiga  tabung  kedua  (CT2), tampak sel darah merah yang tidak terpisah satu sama lain karena mengalami koagulasi. Sel  darah  yang  mengalami  koagulasi  akan tampak padat dan berkelompok. Preparat darah kontrol positif ketiga probandus (Gambar 4), perlakuan pertama dan  perlakuan  kedua  (Gambar  5),  terlihat pada  masing-masing  gambar  bentuk  sel darah  merah  yang  tidak  mengalami koagulasi  tampak  berbentuk  bulat,    tidak saling   berkaitan dan berdiri sendiri dengan ukuran  yang  sama  satu  dengan  lainnya.
Gambar  1.  Darah  kontrol  dan  kontrol  negatif:  probandus  I  (A);  probandus  II  (B); probandus III (C)
Gambar 2. Kontrol Positif, perlakuan pertama dan kedua: probandus I (A); probandus II (B); probandus III (C)
(kontrol positif)
(kontrol negatif)
Gambar 3. Preparat darah kontrol positif dan kontrol negatif: AT1, BT1, CT1 dan AT2, BT2, CT2
Bentuk  sel  darah  merah  yang  tidak membeku tampak  berbentuk  bulat, memiliki  inti  yang  kosong  dan  tidak berkelompok.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh, dapat  disimpulkan  bahwa  sari  bawang putih ( Allium sativum L.) memiliki aktivitas sebagai antikoagulan yang dapat mencegah pembentukan bekuan darah (koagulasi).

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Saadi, NHM 2013, ' In Vitro study Of The
Anticoagulant Activity Of Some Plant
Extracts', Indian  Journal  Applied Research , vol. 3, no 7. Cantwell,,M  2000,  Alliin  in  garlic, Department of vegetable crops, UCD,
Perishables handling quarterly issue,
No.102 Corwin,  EJ  2009, Buku  saku  patofisiologi , 3rd edn, EGC, Jakarta. Davison  C,  Levendal,  RA,  Frost,  CL,  2012, Cardiovascular benefits of an organic extract  of  Thulbaghia  violacea:  Its anticoagulant and anti-platelet properties, Journalof medicine plants research, vol.6 (33), pp.4815-4824. Hernawan,  UE  &  Setyawan,  AD  2003, Review: ‘Senyawa Organosulfur
Bawang Putih ( Allium sativum L.) dan Aktivitas Biologinya’, Biofarmasi , vol. 1, no. 2, hal 65-76. Imelda,  M  &  Kurniawan,  S  2013,  ‘Peranan Garlic (Bawang Putih) pada Pengelolaan  Hipertensi’, CDK -209/
vol. 40, no. 1.
Prasonto,  E,  Riyanti,  E  &  Meirina,  G  2017, ‘Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Bawang Putih’, Odonto Dental Journal , vol. 4, no. 2.
Purwaningsih, E 2007, Bawang Putih , Edisi Pertama,  Ina  Parawita  Sari,  Ganeca Exact. Srihari, E, Lingganinggrum, FS, Damaiyanti, D  &  Fanggih,  N  2015,  'Ekstrak Bawang Putih Bubuk Dengan Menggunakan  Proses  Spray  drying', Jurnal Teknik Kimia , vol. 9, no. 2.
Sinurat,  E,  Peranginangin,  R,  Saepudin,  E 2011,  'Ekstraksi  dan  Uji  Aktivitas Fukoidan  Dari  Rumput  Laut  Coklat ( Sargassum  crassifoilium )  Sebagai Antikoagulan' Jurnal Pascapanen dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan , vol. 6, no. 2.
Tangkery,  RAB,  Paransa,  DS  &  Rumengan, A   2013, ‘Uji Aktivitas Antikoagulan Ekstrak Mangrove ( Aegiceras corniculatum )’, Jurnal Pesisir dan Laut Tropis , vol. 1, no. 1.
Gambar 4. Preparat kontrol positif: AT3, BT3, CT3
(Perlakuan Pertama)
(Perlakuan Kedua)
Gambar 5. Preparat perlakuan pertama dan kedua: AT4, BT4, CT4 dan AT5, BT5, CT5
Untari, I 2010, ‘Bawang Putih Sebagai Obat
Paling  Mujarab  Bagi  Kesehatan’, Gaster , vol. 7, no. 1. Yayuningsih, D, Farihatun, A,  Fitria,  Melhax 2015, Perbedaan  Waktu  pembekuan Metode  Lee  and  White  Dan  Metode hapusan darah , STIKES Muhammadiyah, Ciamis.