ISSN 2354-6565

## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SEDIAAN NANOPARTIKEL KITOSAN
EKSTRAK ETANOL ROSELA ( Hibiscus sabdariffa L.)  PADA TIKUS HIPERKOLESTEROL TERHADAP AKTIVITAS ENZIM SOD
Elya Zulfa 1 , Nurkhasanah 1 , Laela Hayu Nurani 1
1 Program Pascasarjana Farmasi Klinik Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta Elya_zulfa@yahoo.com

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek  sediaan  nanopartikel  kitosan  ekstrak  etanol rosela  (SNKEER)  terhadap  aktivitas  enzim  SOD  pada  tikus  hiperkolesterol.  Pembuatan SNKEER dilakukan berdasarkan hasil optimasi terbaik dengan perbandingan 2:1:1/10 (ekstrak etanol rosela : kitosan : TPP), selanjutnya dilakukan uji in vivo dengan menyiapkan tikus putih betina galur Sprague Dawley (SD) umur 6-8 minggu dengan berat badan 150-250 g sejumlah 25 ekor  dibagi  menjadi  5  kelompok,  yaitu  kelompok  I  adalah  kelompok  kontrol  diberi  pakan standar;  kelompok  II  diinduksi  hiperkolesterol  ;  kelompok  III,  IV,  dan  V  diinduksi hiperkolesterol dan SNKEER masing-masing dengan dosis 25mg/ Kg BB/ hari, 50 mg/ Kg BB/ hari, dan 100 mg/ Kg BB/ hari selama 30  hari. Pada hari ke 31 semua tikus di ambil darahnya melalui vena orbitalis mata untuk dilakukan pengukuran aktivitas SOD dengan metode Ransod Standard.  Data  yang  diperoleh  dianalisis  menggunakan  ANOVA  dilanjutkan  dengan  uji  tukey 5%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  rata-rata  pengukuran  aktivitas  SOD  pada  kelompok  I, kelompok II, kelompok III, kelompok IV, dan kelompok V berturut-turut adalah sebagai berikut : 50,96 U/ml, 6,13 U/ml, 16,09 U/ml, 21,07 U/ml, 23,75 U/ml. Hasil analisis data menunjukkan bahwa  kelompok  pemberian  terapi  SNKEER  dengan  variasi  dosis  (25,50,100)  mg/kg  BB/hari dapat  secara  signifikan  meningkatkan  aktivitas  SOD  bila  dibandingkan  dengan  kelompok hiperkolesterol  (P<0,05),  peningkatan  aktivitas  SOD  secara  signifikan  tertinggi  terlihat  pada kelompok  V,  yaitu  kelompok  hiperkolesterol  yang  diberi  SNKEER  100  mg/kg  BB/hari  bila dibandingkan  dengan    kelompok  perlakuan  SNKEER  dosis  50  mg/kgBB/hari  dan  100 mg/kgBB/hari (P<0,05).
Kata kunci  : Rosela, hiperkolesterol, nanopartikel, antioksidan, SOD

## ABSTRACT
The aim of this study is to determine the effect of chitosan nanoparticles preparation of ethanol extract  of  roselle  (SNKEER)  of  the  SOD  enzyme  activity  in  hypercholesterolemia  rats. SNKEER was prepared base on the best optimization results with a ratio of 2: 1: 1/10 (ethanol extract of roselle: chitosan: TPP), further in vivo tests to prepare female white rat strain Sprague Dawley (SD) age of 6-8 weeks with weight number 25 150-250 g were divided into 5 groups: group  I  was  the  control  group  were  fed  a  standard;  group  II  induced  hypercholesterolemia; group III, IV, and V induced hypercholesterolemia and SNKEER each with a dose of 25 mg / kg bw / day, 50 mg / kg bw / day, and 100 mg / kg bw / day for 30 days. On day 31, all rats in the  grab  of  blood  through  the  veins  to  the  eye  orbital  SOD  activity  were  measured  by  the Ransod Standard method. Data were analyzed using ANOVA followed by Tukey 5% test. The results  showed  an  average  measurement  of  SOD  activity  in  group  I,  II,  III,  IV,  and  V respectively are as follows: 50.96 U / ml, 6.13 U / ml, 16.09 U / ml, 21.07 U / ml, 23.75 U / ml. The results of data analysis showed that variation  dose of SNKEER (25,50,100) mg / kg / day can significantly increase the SOD activity when compared with hypercholesterolemia group (P <0.05),  while  increased  activity  of  SOD  was  shown  significantly  in  group  V,  namely hypercholesterolemia group who were given SNKEER 100 mg / kg / day when compared with the treatment group SNKEER with dose of 50 mg / kg / day and 100 mg / kg / day (P <0.05).
Keywords :  Roselle, hypercholesterolemia, Nanoparticles, Antioxidants, SOD

## PENDAHULUAN
Hiperkolesterol  merupakan  suatu  kondisi terjadi  peningkatan    kadar  kolesterol  dalam darah  dan    bisa  memperantarai  beberapa resiko  penyakit  kardiovaskuler  (Ambrosi et al ,  2012).  Salah  sau  penyebab  terjadinya hiperkolesterol  adalah  konsumsi  makanan berlemak secara berlebih. Makanan berlemak termasuk  dalam  jenis  radikal  bebas  yang berasal  dari  luar.  Radikal  bebas  dapat didefinisikan  sebagai  suatu  molekul  yang memiliki  elektron  yag  tidak  berpasangan pada  orbital  atom.  Kehadiran  elektron  tidak berpasangan menghasilkan sifat sangat reaktif yaitu dapat menyumbangkan elektron atau  mengambil  elektron  dari  molekul  lain (Young et al , 2013).
Adanya  radikal  bebas  yang  berlebih  di dalam  tubuh  dapat  menyebabkan  adanya stres oksidatif (Pham-Huy et al. , 2008). Teori stres oksidatif memprediksi hilangnya aktivitas enzim SOD yang disebabkan karena organisme  akan  kurang  mampu  untuk detoksifikasi ROS terutama di SOD sitoplasma  (SOD1,  Cu-ZnSOD)  dan  SOD mitokondria  (SOD2,  Mn-SOD)  (Ramsdonk et al , 2009). Longo et al (1999) menyatakan bahwa  stres  oksidatif  menurunkan  umur replikasi  SOD  dan  mempercepat  penuaan kronologis.
Untuk  mencegah  terjadinya  efek  yang tidak diinginkan dari radikal bebas diperlukan antioksidan.
Penggunaan antioksidan  mulai  banyak  digunakan  seiring dengan  semakin  meningkatnya  pemahaman pada masyarakat tentang peranan antioksidan dalam    penghambatan  penyakit-penyakit degeneratif seperti penyakit jantung, arteriosklerosis,  penyakit  kanker  dan  gejala penuaan  (Suwandi,  2012).  Antioksidan merupakan  suatu  senyawa  yang  dapat mencegah  terjadinya  oksidasi  karena  adanya radikal bebas, dimana mekanisme pencegahannya  adalah  bereaksi  dengan radikal  bebas  sehingga  radikal  bebas  tidak reaktif,  menstabilkan  radikal  bebas  dengan melengkapi kekurangan elektron yang dimiliki  radikal  bebas,  dan  menghambat terjadinya  reaksi  rantai  dari  radikal  bebas (Young et al , 2013).
Pemanfaatan tanaman herbal sebagai agen antioksidan  sudah  banyak  dilakukan,  salah
satunya adalah pemanfaatan antioksidan pada tanaman  rosela  ( Hibiscus  sabdariffa  L. ).. Dalam beberapa penelitian disebutkan bahwa zat  aktif  dalam  bunga  rosela  ( Hibiscus sabdariffa  L. )  yang  berperan  utama  sebagai antioksidan  adalah  anthosianin  (Wang et  al , 2000), asam protochatecuic (Carton, 2001), l- ascorbic acid, β-caroten, β-sitosterol, gossypetin, dan quercetin (Gaet, 1999). Hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  Suwandi (2012)  menunjukkan  bahwa,  pemberian ekstrak kelopak bunga rosela dapat menurunkan malondialdehid yang
merupakan  produk  akhir  dari  peroksidasi lipid.  Menurut  penelitian  yang  dilakukan Ariati (2012), fraksi air kelopak bunga rosela dapat  menurunkan  kadar  kolesterol  total, LDL,  serta  dapat  menurunkan  level  SGPT. Berdasarkan  penelitian  Wijayanti  (2013), ekstrak etanol kelopak bunga rosela mempunyai  kemampuan  menurunkan  kadar gula darah kolesterol, dan trigliserida.
Tingginya  kemampuan  rosela  sebagai agen  antioksidan  dan  sifatnya  yang  sangat asam  memunculkan  banyak  gagasan  untuk melakukan  modifikasi  sediaan.  Salah  satu modifikasi sediaannya yaitu dengan membuat  ukuran  ekstrak menjadi  lebih  kecil yaitu  dalam  bentuk  nanopartikel.  Pembuatan nanopartikel dapat dilakukan dengan penyalut  yang  dapat  melindungi  nutrien terutama  warna  merah  pada  rosela  yang memiliki  kandungan  antosianin  tinggi  dari sistem  pencernaan  dan  dari  kemungkinan terbuang  tanpa  proses  penyerapan.  Penyalut yang digunakan adalah kitosan yang memiliki  kemampuan  antibakteri  sehingga ekstrak yang disalut dapat dilindungi. Ukuran nanopartikel  mampu  untuk  menghantar  pada sel  target,  selain  itu  pengurangan  atau pengecilan ukuran partikel akan meningkatkan luas permukaaan yang
menyebabkan  kelarutan  tinggi  (Gupta  dan Compela, 2006).
Berdasarkan latar belakang tersebut, maka penelitian  ini  bertujuan    untuk  mengetahui efek  sediaan  nanopartikel  kitosan  ekstrak etanol  rosela  (SNKEER)  terhadap  aktivitas enzim SOD pada tikus hiperkolesterol.

## METODE PENELITIAN
Bahan .  Kelopak  rosela  diperoleh  dari daerah  Kulonprogo  DIY,  Kitosan,  TPP, Etanol  60%  dan  reagen  untuk  pemeriksaan kadar  SOD. Tikus  betina  galus  SD  diperoleh dari UPHP Universitas Gajah Mada Yogyakarta. Alat . Stirrer, rotary evaporator, ultrasonifikator,  spektrofotometer,  alat-alat gelas.  spuit  3  dan  5  cc,  micropipet,  jarum suntik sonde, pipet kapiler darah, evendof.
Desain Penelitian. Penelitian ini merupakan  penelitian  eksperimental  dengan menggunakan  rancangan  penelitian  post  test control  group  design.  Hewan  coba  yang digunakan  adalah  25  ekor  tikus  betina  galur spraguey  dawley umur  6-8  minggu  dengan berat  badan  150-250  g  yang  di  dapat  dari UPHP  UGM  Yogyakarta  yang  di  gunakan sebagai objek penelitian.
Pada  penelitian  ini  hewan  coba  di  bagi menjadi  5  kelompok  perlakuan,  yaitu kelompok  I  adalah  kelompok  kontrol  yang diberi pakan standar 20 g/hari/ekor; kelompok  II  di  beri  pakan  standar  dan diinduksi  hiperkolesterol  ; kelompok  III,  IV, dan  V  diberi  pakan  standar,  induksi kolesterol  dan  sediaan  nanopartikel  kitosan ekstrak  etanol  rosela  (SNKEER)  masing- masing dengan dosis 25mg/ Kg BB/ hari, 50 mg/  Kg  BB/  hari,  dan  100  mg/  Kg  BB/  hari selama 30  hari.
Pakan  diberikan  sebanyak  20  g/ekor/hari, dan  air  diberikan  secara  ad  libitum.  Sisa pakan  akan  di  timbang  setiap  hari,  sebelum di ganti dengan pakan yang baru. Sedangkan untuk  berat  badan  tikus  di  timbang  setiap minggunya.  Tikus  dipelihara  dalam  ruangan yang  cukup  ventilasi,  cukup  cahaya  (12  jam terang  dan  12  jam  gelap),  dan  kelembaban serta suhu ruangan dijaga. Sebelum dilakukan  pemberian  perlakuan,  25  ekor tikus  dilakukan  adaptasi  selama  7  hari,  dan setelah  itu  baru  diberikan  perlakuan  selama 30 hari. Pada hari ke 31 setelah perlakuan 30 hari,  lima  ekor  tikus  pada  masing-masing kelompok  hewan  uji  di  ambil  darahnya melalui  vena  orbitalis  untuk  dilakukan pemeriksaan aktivitas SOD.
Komposisi Pakan Standar. Pakan standar  yang  diberikan  setiap  hari  adalah
sebesar  20  gram  yang    terdiri  dari  comfeed PARS  (dengan  kandungan  air  12%,  protein 11  %,  lemak  4%,  serat  7%,  abu  8%,  Ca  1,1 %, fosfat 0,9%, antibiotik, coccidiostat 53%), dan tepung terigu 23,5%, dan air 23,5%.
Induksi  Hiperkolesterol. Setiap  tikus diberikan  induksi  hiperkolesterol  dengan komposisi  kolesterol  murni  2%  dan  asam kolat 1% dari pakan, yang dilarutkan dengan aquades sampai volume 2 ml secara per oral.

## Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Rosela.
Sebanyak  1500  gram  serbuk  simplisia diekstraksi  dengan  pelarut  etanol  60% sebanyak  7,5  liter  (1:5)  menggunakan metode maserasi dengan pengadukan menggunakan  stirrer  selama  kurang  lebih  1 jam,  kemudian  didiamkan  sampai  24  jam sembari  sesekali  di  aduk-aduk.  Maserat dipisahkan  dan  disaring  menggunakan  kain flannel.  Filtrat  hasil  penyaringan  diuapkan dengan vacum  rotary  evaporator dengan suhu  60 o C  dan  kecepatan  100  rpm  hingga diperoleh  ekstrak  kental.  Ekstrak  kental ditimbang dan dihitung rendemennya
(Anonim, 2004). Pembuatan Sediaan Nanopartikel
Kitosan  Ekstrak  Etanol  Kelopak  Bunga Rosela  ( Hibiscus  sabdariffa L.)  dengan metode  gelasi  ionik  berdasarkan  hasil optimasi hasil optimasi Riski (2014).
1. Pembuatan  dapar  asetat  PH  4,  yaitu dengan  menimbang  natrium  asetat  715,4 mg  di  larutkan  dengan  aquades  sampai volume    500    ml.  Cek  PH,  jika  PH  nya belum 4 maka di tambahkan asam asetat sampai PH 4.
2. Pembuatan  larutan  kitosan,  yaitu  dengan menimbang  1  g  kitosan  dan  dilarutkan dengan dapar asetat PH 4 sampai volume 500  ml  dan  di  stirer  ±  20  menit  pada suhu 60ºc  hingga benar-benar terlarut.
3. Pembuatan larutan ekstrak etanol
kelopak  bunga  rosela,  yaitu  dengan menimbang  2  gram  ekstrak  dan  di larutkan  dalam  etanol  70  %  sebanyak 500  ml,  stirer  ±20  menit  pada  suhu  60º hingga benar-benar terlarut, kemudian di saring.
4. Pembuatan  larutan  TPP,  yaitu  dengan menimbang  TPP  sebanyak  100  mg  dan dilarutkan  dalam  aquades  sebanyak  50
ml,  stirer  ±20  menit  pada  suhu  60º hingga benar-benar terlarut.
5. Pembuatan  sediaan  nanopartikel,  yaitu dengan  mencampur  larutan  kitosan  dan larutan ekstrak sambil di stirer pada suhu 60ºc  ±  10  menit,  setelah  itu  tambahkan larutan  TPP,  stirer  pada  suhu  60  ºc selama  5  menit  kemudian  ultrasonifikasi pada suhu 30 ºc selama 30 menit.
6. Dari  hasil  pencampuran  didapatkan larutan  sediaan  nanopartikel  yang kemudian di rotary evaporator pada suhu 60    c  dengan  kecepatan  100  rpm  selama ± 3 jam.
Pemberian Sediaan Nanopartikel Kitosan Ekstrak Etanol Rosela (SNKEER). Terapi  diberikan  dengan  cara per oral dengan dosis pada kelompok III, IV, dan V berturut-turut
adalah 25
mg/kgBB/hari,  50  mg/kgBB/hari,  dan  100 mg/kgBB/hari  selama  30  hari.  Dosis  terapi yang diberikan di sesuaikan dengan rata-rata berat  badan  tikus  yang  di  timbang  setiap harinya dengan volume pemberian 2 ml/hari.
Pemeriksaan  Aktivitas  SOD. Sentrifuge 0,5  ml  darah  yang  sudah  di  beri  heparin selama  10  menit  pada  keceptan  3000  rpm, ambil  beningannya  kemudian  di  cuci  4x dengan larutan NaCl fisiologis 0,9% kemudian  sentrifuge  selama  10  menit  3000 rpm. Beningan yang di hasilkan kemudian di addkan  dalam  air  redistilasi  dingin  sampai volume 2 ml, campur dan diamkan pada suhu 4ºc  selama    15  menit,  setelah  itu  encerkan dengan buffer phospat 0,01 mol/L PH 7.
Tabel 1. Prosedur kerja pengukuran aktivitas
enzim SOD Standar S1 Standar S2-S6 Sampel Kontrol RSD 30 µl standar 30 µl DS 30 µl DC 30 µl R1 1000 µl 1000 µl  1000 µl 1000 µl Campur dengan benar dan tambahkan R2 150 µl 150 µl 150 µl 150 µl Campur dengan benar, dan masukkan dalam kuvet, tunggu 30 detik dan baca  absorbansi pertama (A1) pada  panjang  gelombang  505  nm,  setelah  3  menit di baca absorbansi yang kedua (A2).
Dari  hasil  pembacaan  di  dapatkan  data absorbansi  A1  dan  A2,  kemudian  masukkan dalam rumus sebagai berikut : A2-A1 =  ɅA/ menit 3
100 -   ɅA/min  =  % penghambatan ɅAS1/min
( % penghambatan = unit/ml)

## Keterangan
 Mixed  substrate  (R1)  :  xanthine  0,05 mmol/L & INT 0,025 mmol/L
 Sample  diuent  (S1)  :  buffer  phosphat 0,01 mol PH 7
 DS : Diluted sample
 DC : Diluted Control
 R2 : Xanthine oxidase 80 U/I
Analisa  Data. Data  hasil  pemeriksaan aktivitas  enzim  SOD  berupa  data  numerik yang  dituangkan  dalam  nilai  mean  ±  SD, dilanjutkan dengan uji statistic menggunakan ANOVA  yang  dilanjutkan  dengan  uji  tukey dengan taraf kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh Pemberian Induksi Hiperkolesterol  Pada  Berat  Badan  Tikus dan  Kadar  Kolesterol  Tikus Spraguey
Dawley. Pengukuran  berat  badan  dilakukan setiap  harinya,  dimana  peningkatannya  tidak berbeda signifikan antar kelompok perlakuan.  Pada  hari  ke-30  dilakukan pemeriksaan  nilai  kolesterol  pada  setiap kelompok (Tabel II ). Tabel 2. Rata-rata kadar kolesterol total setelah  perlakuan 30 hari Kelompok Kadar Kolesterol total (mg/dl) I 102.25±0.44 II 223.46±4.3 III 150.74±0.67 (a) IV 129,11±0.41 (a) V 112.35±0.58 (a) Keterangan  :  (a)  adalah  nilai  signifikansi kelompok perlakuan SNKEER terhadap kelompok hiperkolesterol (P≤0.05). Hasil  pemeriksaan  menunjukkan  bahwa kelompok  II  dengan  pemberian  induksi hiperkolesterol mengalami peningkatan
kadar  kolesterol  223.46±4.3  mg/dl  (>140 mg/dl) bila dibandingkan dengan kelompok I yang  hanya  di  berikan  pakan  standar 102.25±0.44 mg/dl. Sedangkan pada kelompok  III,  IV,  dan  V  memiliki  kadar kolesterol yang lebih rendah bila dibandingkan  dengan  kelompok  II  yang  di induksi  lemak  tinggi,  adapun  penurunan kadar kolesterol berkorelasi terhadap peningkatan  dosis  pemberian  yaitu  pada kelompok  V  memiliki  penurunan  kadar kolesterol  yang  paling  signifikan  bila dibandingkan dengan
kelompok hiperkolesterol  (112.35±0.58  mg/dl  VS 223.46±4.3 mg/dl ).
Berdasarkan hasil penelitian Safitri (2014) tentang  profil  lipid  pada  sampel  yang  sama, didapatkan  hasil  bahwa  terapi  dengan SNKEER  berbagai  dosis  dapat  menurunkan kolesterol  total,  trigliserid,  dan  LDL  serta meningkatkan  kadar  HDL  secara  signifikan bila dibandingkan dengan kelompok hiperkolesterol.  Penelitian serupa juga  sudah dilakukan  oleh  Hirunpanich et  al (2006), didapatkan  hasil  bahwa  pada  kelompok pemberian  ekstrak  air  rosela  dosis  250 mg/kgBB/hari,  500  mg/kgBB/hari,  1000 mg/kgBB/hari  memiliki  penurunan  kadar kolesterol,  trigliserid  dan  LDL  serta  terjadi peningkatan kadar HDL pada tikus hiperkolesterol.  Penelitian  Hidayati  (2007) menyatakan  bahwa  ekstrak  rosela  teh  merah ( Hibiscus  Sabdariffa L.)  menurunkan  kadar LDL serum dan terbukti meningkatkan kadar HDL  pada  tikus  wistar  jantan  yang  di  beri diet  atherogenik,  adanya  aktivitas  tersebut terkait dengan kandungan senyawa flavonoid (antosianin)  dalam  rosela  yang  berperan sebagai antioksidan yaitu dengan melindungi kerusakan jaringan tubuh akibat oksidasi dan memiliki kemampuan menghambat terjadinya  oksidasi  LDL  dalam  pembuluh darah. Penyebab  terjadinya  peningkatan  LDL
dan penurunan HDL pada keadaan hiperkolesterol  adalah  adanya  penimbunan kolesterol dalam tubuh yang diakibatkan oleh induksi  hiperkolesterol.  Riesanti  (2001) menyatakan  bahwa  Adanya  penumpukan kolesterol  tersebut  di  dalam  tubuh  yang merupakan salah satu radikal bebas menyebabkan  adanya  kerusakan  oksidatif pada  beberapa  jaringan.  Kadar  kolesterol
yang  tinggi  di  dalam  darah  menyebabkan
VLDL membentuk LDL dan terjadi peningkatan. Kadar LDL yang terus meningkat, peningkatan tersebut menyebabkan kadar HDL  tertekan dan tidak bisa  membuang  kelebihan  kolesterol  dalam darah, sehingga HDL terjadi penurunan.
Pengukuran Aktivitas SOD pada Tikus Spraguey Dawley yang di Induksi
Hiperkolesterol. Penelitian  Usoh et  al (2005)  tentang  aktivitas  antioksidan  ekstrak bunga  rosela  ( Hibiscus  Sabdariffa L.)  pada tikus  yang  di  induksi  arsen  menunjukkan hasil  bahwa  pemberian  ekstrak  rosela  dosis 10  mg/kgBB/hari  secara  efektif  memiliki khasiat antioksidan
karena dapat
meningkatkan  aktivitas  SOD  dalam  darah sebesar  369%.  Pembuatan  sediaan  rosela menjadi  bentuk  nanopartikel  adalah  untuk meningkatkan  aseptibilitas  karena  akan memperbaiki  sifat  fisik  dari  senyawa  aktif rosela  yang  bersifat  asam    (Mohanrajdan Chen,  2006)  dan  daya  penetrasi  kandungan senyawa  aktif    karena  akan  meningkatkan luas  permukaan  (Gupta et  al ,  2006  ). Berdasarkan  optimasi  yang  telah  dilakukan oleh Riski (2014), menunjukkan hasil bahwa optimasi  terbaik  untuk  sediaan  nanopartikel kitosan  ekstrak  etanol  rosela  (SNKEER) adalah  pada  perbandingan  2:1:0.1  (ekstrak etanol  rosela:kitosan:TPP)  dengan  pelarutan kitosan  pada  PH  4,  Ukuran  partikel  101.7 nm,  dan  entrapment  efficiency  sebesar 80.24%, yang selanjutnya dilakukan pengukuran  kadar  MDA  secara  invitro. Pengukuran  tersebut  menunjukkan  hasil bahwa kelompok yang diberi SNKEER dapat menurunkan  kadar  MDA  bila  dibandingkan dengan  kelompok  yang  tidak  di  beri SNKEER.  Merujuk  pada  pada  penilitian  ini dilakukan  pengukuran  aktivitas  SOD  secara invivo.
Enzim  superoksida  dismutase  (SOD) merupakan  salah  satu  enzim  antioksidan yang diproduksi di dalam tubuh dan memiliki peranan  yang  sangat    penting  karena merupakan  enzim  antioksidan  pertama  yang menangkap  radikal  bebas  yang  masuk  ke dalam  tubuh  yang  mekanismenya  kerjanya yaitu  dengan  cara  mengkatalisis  radikal superoksida (O2 * ) menjadi hidrogen peroksida dan oksigen (Young et al , 2013).
Hasil  pemeriksaan  post  test  rata-rata aktivitas  SOD  pada  beberapa  kelompok perlakuan dengan hasil analisis data menggunakan  SPSS  16.0  dapat  di  lihat  pada tabel. 3. Tabel 3. Hasil pemeriksaan post test rata-rata aktivitas SOD Kelompok Rata-rata aktivitas SOD (Unit/ml) ± SD I 50.96±0.61 II 6.13±0.61 (b) III 16.09±0.54 (a) IV 21.07±0.54 (a) V 23.75±0.54 (a) Keterangan  :  (a)  adalah  nilai  signifikansi kelompok perlakuan SNKEER terhadap kelompok hiperkolesterol  (P≤0.05),  (b) adalah nilai signifikansi
terhadap  kelompok  kontrol pakan standar(P≤0.05).
Dalam  melakukan  analisa  data  langkah pertama  dilakukan  uji  homogenitas  data dengan  uji  lavene  dan  uji  normalitas  dengan kolmogrof  smirnov.  Dari  uji  tersebut didapatkan  hasil    bahwa  data  tersebut homogen  dan  normal  (>  0,05)  sehingga  uji dilanjutkan  dengan  uji  parametrik  dengan ANOVA  dan  dilanjutkan  dengan  uji  tukey dengan  taraf  kepercayaan  95%.  Dari  uji tersebut menunjukkan bahwa hasil pengukuran  aktifitas  SOD  pada  kelompok pemberian induksi hiperkolesterol (kelompok
II)  terjadi  penurunan  aktivitas  SOD  yang signifikan bila dibandingkan dengan kelompok  normal  (P≤0.05),  hal  itu kemungkinan  disebabkan  karena  adanya oksidasi  LDL  memicu  terjadinya  aktivasi jalur  fosfoinositol  3  kinase  dan  inaktivasi foxo  3a  sehingga  menyebabkan  terjadinya penurunan  enzim  SOD  (Erusalimsky  dan Kurz,  2006).    Pada  kelompok  perlakuan (kelompok  III,  IV  dan  V  )  yang  masing- masing diberikan SNKEER dosis 25
mg/kgBB/hari,  50  mg/kgBB/hari,  dan  100 mg/kgBB/ hari mampu meningkatkan aktifitas  SOD.  Peningkatan  aktifitas  SOD pada  kelompok  perlakuan  III,  IV,  dan  V menunjukkan  perbedaan  nyata  terhadap kelompok II yaitu berturut-turut dengan nilai (16.09±0.54,  21.07±0.54,  23.75±0.54  VS
6.13±0.61    ),  dan  terlihat  pada  kelompok  V dengan  dosis  SNKEER  100  mg/kgBB/hari menunjukkan  aktivitas  tertinggi  bila  di bandingkan  dengan  kelompok  perlakuan  III dan IV, untuk lebih jelasnya dapat
ditunjukkan  pada  Gambar  1  di  bawah  ini. Peningkatan  aktivitas  SOD  tersebut  seiring dengan  peningkatan  dosis  nanopartikel, peningkatan  aktivitas  tersebut  kemungkinan karena  adanya  modifikasi  sediaan  menjadi nanopartikel  sehingga  memperbaiki  sifat fisiknya  dan  memperluas  ukuran  partikel sehingga mudah untuk diabsorbsi.
Gambar 1. Diagram rata-rata aktivitas SOD tiap kelompok.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  di  atas  menunjukkan  bahwa modifikasi menjadi bentuk sediaan
nanopartikel  meningkatkan  aktivitas  enzim SOD  bila  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol.  Adapun  kelompok  yang  memiliki nilai  aktivitas  enzim  SOD  adalah  pada kelompok V pada dosis pemberian SNKEER 100 mg/kgBB/hari.

## DAFTAR PUSTAKA
Riesanti  D.G,  Masdiana  C  Padagawa, Herawati., 2004, Kadar HDL, Kadar LDL dan Gambaran Histopatologi Aorta Pada Hewan  Model  Tikus  (Rattus  Norvegicus) Hiperkolesterolemia Dengan Terapi Ekstrak  Air Ambrosil  J,  C  Silva,  JC Galofre, J Escalada, S Santos, D Milla, N Vila,  P  Iban,  MJ  Gil2,  V  Valentı,  F Rotellar,  B  Ramı´rez,  J  Salvador  and  G Fru¨hbeck.,  2012, Body  mass  index classification misses subjects with increased  cardiometabolic  risk  factors related to elevated adiposity , International Journal of Obesity 36, 286–294.
0 10 20 30 40 50 60 1 2 3 4 5 Ak tiv ita s S O D (u n it/ m l) Kelompok Perlakuan
Anonim., 2004, Ekstrak Tumbuhan Indonesia,  Volume  2 ,  Badan  Pengawasan
Obat dan Makanan Republik Indonesia.
Ariati, R., 2012, Pengaruh fraksi air kelopak bunga  rosella  (hibiscus  sabdariffa  l.) Terhadap  Kadar  Kolesterol  Darah  Tikus Putih Jantan Hiperkolesterol dan Hiperkolesterol-Disfungsi  Hati ,  Tesis,
Universitas Andalas, Padang.
Cartron,  E.,  2001. Specific  antioxidant activity  of  caffeoyl  derivative  and  other natural phenolic compounds, LDL protection against oxidation and decrease in the proinflammatory lysophosphatidylcholine production. Journal of Natural Products 64, 480–486. Erusalimsky,  JD.  Dan  Kurz,  D.J.,  2006, Endhotelial Cell Senescense . In:
Moncada,  S.  Dan  Higgs,  A,  editors.  The Vasculer  Endhotellium  II.  Nw  York: Springer. P 214-238.
Gaet,  N.,  1999. Hibiscus  sabdariffa L.  In: Ivan,  A.  (Ed.),  Medicinal  Plants  of  the World.  Human  Press,  New  York,  pp. 165–170.
Gupta,  V.  Karar,  P.  Ramesh,  S.  Misra,  S.
And  Gupta,  A.  2010. Nanoparticle Formulation for Hydrophilic & Hydrophobic  Drugs .  Int.  J.  Res.  Pharm.
Sci. Vol-1, Issue-2, 163-169.
Hidayati  S.,  2007, Efek  Pemberian  Ekstrak Rosela (Hibiscus Sabdariffa L.) Terhadap Kadar  LDL-HDL  Kolesterol  Serum  Tikus Strain  Wistar  Dengan  Diet  Atherogenik , Jurnal  Saintika,  Lembaga  Penelitian
Univsitas  Brawijaya  Malang,  Vol.  13  no. 5. Hirunpanich  V,  Anocha  Utaipat,  Noppawan Phu±mala Morales, Nuntavan Bunyapraphatsara, Hitoshi Sato, Angkana Herunsale,  Chuthamanee  Suthisisang., 2006, Hypocholesterolemic and antioxidant  effects  of  aqueous  extracts from  the  dried  calyx  of  Hibiscus sabdariffa  L.  in  hypercholesterolemic rats ,  Journal  of  Ethnopharmacology  103 (2006) 252–260.
Longo  VD,  Gralla  EB,  Valentine  JS.,  1996, Superoxide  dismutase  activity is essential
for stationary phase survival in Saccharomyces  cerevisiae.  Mitochondrial production  of  toxic  oxygen  species  in vivo ,  J Biol Chem 271: 12275–12280.
Mohanraj  and  Chen,  2006, Nanoparticles – A Review, Trop J Pharm Res, June 2006;
5 (1) : 561-573.
Pham-Huy,  L.A.P.,  He,  H.,  Pham-Huy,  C.
2008. Free  Radicals,  Antioxidants  in Disease  and  Health. Int  J  Biomed  Sci  4: 89-96.
Ramsdonk  J.M.Van,  Siegfried  Hekimi.,
2009, Deletion  of  the  Mitochondrial Superoxide Dismutase sod Extends Lifespan  in  Caenorhabditis  elegans , Department of Biology, McGill University, Canada. Benalu Mangga, Thesis, Universitas Brawijaya, Malang. Riski  I.,  2014, Formulasi  Nanopartikel Kitosan  Ekstrak  Bunga  Rosella  (Hibiscus Sabdariffa L.) Dan Uji Aktivitas Antioksidan  Pada  Sel  Darah  Merah Domba , Tesis, Universitas Ahmad
Dahlan, Yogyakarta. Safitri  M.,  2014, Aktivitas  Antioksidan
Sediaan  Nanopartikel  Kitosan  Ekstrak Etanol  Rosela  (Hibiscus  Sabdariffa  L.) Pada  Tikus  Hiperkolesterol  Terhadap Profil Lipid, Aktivitas Enzim Katalase dan Ekspresi Gen Katalase , Tesis, Universitas Ahmad Dahlan.
Suwandi,  T.,  2012, Pemberian  Ekstrak Kelopak  Bunga  Rosela  Menurunkan Malondialdehid  Pada  Tikus  Yang  Diberi Minyak  Jelantah ,  Tesis,  Universitas
Udayana, Denpasar.
Usoh  I.F,  E.J.  Akpan,  E.O.  Etim  and  E.O. Farombi.,  2005, Antioxidant  Actions  of Dried  Flower  Extracts  of  Hibiscus sabdariffa  L.  On  Sodium  Arsenite  - Induced Oxidative Stress in Rats , Pakistan Journal of Nutrition 4 (3): 135-141, 2005.
Young  J,  Siming  Dong,  Qichen  Jiang,
Tengjiao  Kuang,  Wenting  Huang,  Jiaxin Yang.,  2013, Changes  in  Expression  of Manganese Superoxide Dismutase, Copper  and  Zinc  Superoxide  Dismutase
and  Catalase  in  Brachionus  calyciflorus during  the  Aging  Process ,  Plos  one
Journal, Volume 8.
Wang,  C.J.,  Wang,  J.M.,  Lin,  W.L.,  Chu, C.Y.,  Chou,  F.P.,  Tseng,  T.H.,  2000. Protective effect of Hibiscus anthocyanins against  tert-butyl  hydroperoxide  (t-BHT) induced hepatic toxicity in rats . Food and Chemical Toxicology 38, 411–416. Wijayanti,  R.,  2013, Efek  Ekstrak  Etanol Kelopak Bunga Rosela (Hibiscus Sabdariffa  L.)  Terhadap  Penurunan Kadar Gula Darah, Kolesterol, Trigliserida Serta Histopatologi Pankreas Tikus  Putih  Galur  Sprague  Dawley  Yang diinduksi  7,12  Dimetilbenz(α)Antrasen, Tesis, Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta.