e-ISSN 2579-9479
Accredited by a Directorate General of Strengthenging for Research and Development No. 200/M/KPT/2020 Jurnal Ilmu Peternakan Terapan March 2021, 4 (2):51-59 DOI: https://doi.org/10.25047/jipt.v4i2.2515
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh aflatoksin terhadap fermentasi  rumen  secara  in  vitro  dan  untuk  mendapatkan  isolat  bakteri  rumen yang mampu mengikat aflatoksin. Percobaan terdiri dari tiga tahap, tahap pertama adalah penurunan aflatoksin didalam rumen yang dilakukan secara in vitro. Tahap kedua adalah isolasi dan karakterisasi bakteri rumen yang bisa mengikat aflatoksin , dan tahap  ketiga adalah uji daya ikat aflatoksin  oleh  bakteri  rumen. Penelitian ini menggunakan rumen sapi yang didapatkan dari rumah potong hewan (RPH) Bubulak  Bogor.  Rancangan  penelitian  menggunakan  rancangan  acak  kelompok (RAK) faktorial 2x3 dan 2 ulangan . Faktor pertama adalah kandungan aflatoksin (tanpa dan penambahan aflatoksin) , faktor kedua adalah jenis pakan (ransum dan glukosa), dan faktor ketiga adalah waktu inkubasi ( 0 dan 4 jam ). Hasil penelitian menunjukkan  kandungan aflatoksin tidak mempengaruhi kondisi rumen  (pH, Volattile Fatty Acid (VFA), dan konsentrasi asam laktat rumen), dari hasil isolasi didapatkan 6 isolat dan bakteri rumen yang dapat mengikat aflatoksin hingga 50 %.

## ARTICLE INFO A B S T R A K
Received: 18 February 2021
Accepted:
18 March 2021
Published: 31 March 2021
Kata kunci: Aflatoksin Bakteri rumen Isolasi bakteri

## A B S T R A C T
The  purpose  of  this  study  was  to  examine  the  influence  of  aflatoxins  on  rumen fermentation in vitro and obtained rumen bacterial isolates capable of binding aflatoxin.  This  trial  consisted  of  three  stages.  The  first  trial  was  a  reduction of aflatoxin in the  rumen  in vitro . The second  experiment  was the  isolation  and characterization of rumen bacteria that could bind aflatoxin. The third stage was to test the holding capacity of aflatoxin by rumen bacteria . This study used cow rumens . The Research design used a randomized complete block design (RCBD) factorial 2x3 and 2 replications . The first factor was the presence of aflatoxin (with and without the addition of aflatoxin ), the second factor was the type of feed (diet and glucose), and the third factor was the time of incubation (0 and 4 hours ). The results showed the presence of aflatoxin did not  affect  rumen  conditions  (pH, volatile fatty acid (VFA), and rumen lactic acid concentration), and the results obtained 6 isolates and isolation of rumen bacteria to bind aflatoxin up to 50 %.
Key words: Aflatoxin Rumen bacteria Bacterial isolation

## Isolasi  dan  karakterisasi  bakteri  yang  berpotensi  mengikat  aflatoksin  di rumen sapi
Isolation and characterization of the aflatoxin binding bacteria in the rumen of cattle Dwi Sisriyenni 1 , Suryahadi 2 , Komang G Wiryawan 2 , Dwierra Evvyernie 2 , Dadik Pantaya 3*
1 B alai Pengkajian Teknologi Pertanian Riau. Jl. Kaharuddin Nasution KM. 10 No. 341 Pekanbaru. Riau. Indonesia. 28284
2 Departemen Ilmu Nutrisi dan Makanan Ternak. Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor. Jl. Agatis, Kampus Darmaga. Bogor. 166680
3 Program Studi Manajemen Bisnis Unggas. Jurusan Peternakan. Politeknik Negeri Jember. Jl. Mastrip Kotak Pos 164. Jember. Jawa Timur. 68124 *Email Koresponden: dadik_pantaya@polije.ac.id

## PENDAHULUAN
Aflatoksin  adalah  produk  senyawa metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  oleh
spesies Aspergillus yaitu Aspergillus  flavus dan Aspergillus parasiticus (Yao,  Gao,  Ding,  Zhang, and  Li,  2021).  Aflatoksin  dapat  tumbuh  pada bahan  pakan  pada  masa  pertumbuhan  hingga
Jurnal Ilmu Peternakan Terapan. March 2021, 4 (2): 51-59
panen, pada proses penyimpanan dan juga pada saat  transportasi.  Secara  kimiawi,  aflatoksin adalah  kelompok  turunan  difuranocoumarin yang  menunjukkan  fluoresensi  di  bawah  sinar ultraviolet.  Berdasarkan  warna  fluoresensi aflatoksin dikelompokkan menjadi aflatoksin B1 dan B2 (AFB1, AFB2) berwarna biru, serta G1 dan G2 (AFG1, AFG2) berwarna hijau, angka 1 dan 2 menunjukkan  perbedaan  antar  senyawa  utama dan  tambahan  (Firmin,  Morgavi,  Yiannikouris, &  Boudra,  2011).  Aflatoksin  B2  merupakan derivat  dari  B1  dan  G2  merupakan  derivat  dari G1.  Aflatoksin  B1  (AFB1)  diketahui  yang  paling berbahaya  di  antara  keempat  jenis  aflatoksin lainnya,  sehingga  pengembangan  penelitian banyak difokuskan pada aflatoksin B1. Aflatoksin pada hewan dapat menyebabkan kerusakan  hati,  gangguan  saluran  pencernaan, produktivitas,  efisiensi  pemanfaatan  pakan, penurunan  kinerja  reproduksi,  mengurangi produksi  susu  atau  telur,  kematian  embrio, teratogenisitas (cacat lahir), tumor dan menekan fungsi sistem kekebalan tubuh (Park, Park, Song, & Lim, 2019). Gejala penyakit yang ditimbulkan tergantung  pada  hewan,  dosis,  lama  paparan, spesies dan diet atau status gizi.
Detoksifikasi bahan pakan yang terkontaminasi  aflatoksin  baik  secara  fisik  dan kimia  dalam  pelaksanaannya  kurang  praktis, tidak efisien dan membutuhkan biaya yang besar. Selain itu, juga memiliki keterbatasan sehubungan dengan  pertimbangan  keamanan  karena  dapat membuat  produk  tercemar  bahan  kimia  yang akan  dapat  merusak  nilai  nutrisi  produk.  Liu, Wang,  Deng,  Gu,  &  Wang  (2018)  melaporkan bahwa  detoksifikasi  secara  kimia  menggunakan arang  aktif  dan  sodium  terhidrasi  aluminium silikat  dengan  persentase  rendah  tidak  efektif untuk  mengatasi  jamur  pada  bahan  pakan, karena absorben dapat mengikat nutrisi penting sehingga dapat menyebabkan efek negatif.
Bakteri  rumen  khususnya  bakteri  asam laktat  (BAL)  bersama yeast sebagai  adsorben biologis dapat mencegah perpindahan aflatoksin kedalam saluran usus hewan. Mikroba rumen dapat mengubah  mikotoksin  menjadi  metabolik  non toksik pada saluran pencernaan hewan sebelum diserap dalam saluran pencernaan. Aflatoksin B1 oleh mikroba dirubah menjadi B2, B2a, dan M1. Carulla,  Kreuzer,  Machmüller,  and  Hess  (2005) melaporkan  biotransformasi,  pembelahan  dan detoksifikasi  molekul  mikotoksin  oleh  mikroba
atau  pun  enzim  adalah  metode  yang  efektif dan  lebih  aman  dalam  mengontrol  mikotoksin. Gallo et al. (2020) melaporkan terjadi degradasi sebanyak 42 % aflatoksin saat diinkubasi secara in vitro menggunakan  cairan  rumen.  Pendapat berbeda disampaikan oleh Pantaya et al. (2016) yang melaporkan bahwa mikroorganisme rumen mampu  mendegradasi  seluruh  mikotoksin  yang diuji kecuali AFB1.
Asam  laktat  merupakan  hasil  fermentasi karbohidrat  dari  hijauan  di  dalam  rumen. Semakin tinggi asam laktat di dalam rumen akan mengakibatkan  pH  turun  sehingga  mikroba- mikroba  rumen  yang  tidak  tahan  kondisi  asam akan  mati  dan  dapat  mengganggu  proses fermentasi di dalam rumen. Bakteri asam laktat dapat  digunakan  untuk  menghambat  produksi aflatoksin  (Jiang  et  al.,  2020).  Pengikatan aflatoksin  oleh  BAL  berlangsung  secara  cepat tidak  lebih  dari  60  menit  tergantung  pada konsentrasi aflatoksin (Gonçalves et al., 2020).
Penelitian  tentang  pengaruh  aflatoksin terhadap  kondisi  fermentasi  rumen  dan kemampuan  bakteri  rumen  dalam  mengikat aflatoksin belum pernah dilaporkan di Indonesia. Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui  pengaruh aflatoksin  terhadap  fermentasi  rumen  secara in vitro dan mendapatkan isolat bakteri rumen yang mampu mengikat aflatoksin.

## MATERI DAN METODE
Penurunan Aflatoksin di dalam Rumen secara

## In vitro
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui penurunan aflatoksin oleh bakteri rumen secara in vitro pada berbagai kondisi jenis pakan, lama inkubasi  dan  faktor  konsentrasi  aflatoksin. Sumber  bakteri  yang  digunakan  berasal  dari rumah  potong  hewan  (RPH)  Bubulak  Bogor. Cairan  rumen  sebanyak  500  ml  disaring menggunakan  saringan  polyester  ukuran  250- μm.  Teknik  isolasi  dan  inkubasi  dengan  metode Goering, H.K. and Van Soest, (1970) menggunakan 25  mL  larutan  buffer  sitrat  phosphate  dan  15 m  cairan  rumen  untuk  analisis  pengikatan aflatoksin.  Adapun  analisis  VFA  menggunakan 0,8 ml cairan rumen yang  dicampur dengan 0,5 mL  dari  0,4  mg/mL  asam  crotonic  dan  20  mg/ ml  asam  metaphosphoric  dalam  0,5  N  HCl  dan disimpan  dalam  suhu  -20°C  sampai  dilakukan dianalisis  (Pantaya  et  al.,  2016).  Larutan  asam
laktat  sebanyak  2  mL  diletakkan  dalam  tube, disimpan  sampai  dilakukan  analisis  Pakan  yang digunakan  dalam  percobaan  ini  menggunakan formulasi rumput gajah ( Pennisetum purpureum ) 8%, konsentrat 14%, dan mineral 1%. Konsentrat yang digunakan mempunyai kandungan Neutral Detergent Acid (NDF)  54,2%  BK,  a cid detergent fiber (ADF) 31,8%, dan protein kasar (PK) 8,4%. Rancangan  percobaan  yang  dilakukan adalah rancangan acak kelompok faktorial (RAK faktorial)  2x3  diulang  2  kali.  Faktor  A  adalah aflatoksin  yaitu  A1  =  tanpa  aflatoksin  dan  A2  = penambahan aflatoksin 20 ppb. Faktor B adalah pakan,  B1  =  ransum  (15%  hijauan  dan  85% konsentrat)  dan  B2  =  glukosa.  Faktor  C  adalah waktu  inkubasi  yaitu  C1  =  inkubasi  0  jam  dan C2 = inkubasi selama 4 jam. Peubah yang diukur sebelum  dan  setelah  fermentasi  rumen  adalah pH,  konsentrasi volatile fatty acid (VFA)  yang diukur dengan teknik destilasi uap (Mansfield et al., 1995), kadar asam laktat dianalisis kandungan aflatoksinnya menggunakan Thin Layer Chromatography (TLC) (Pantaya et al., 2016).

## Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Rumen Pendegradasi Aflatoksin
Sebagai  tindak  lanjut  percobaan  tahap kedua  dilakukan  isolasi  dan  karakterisasi bakteri  rumen  yang  mampu  menurunkan  kadar aflatoksin.  Prosedur  isolasi  bakteri,  pembuatan media  tumbuh  dan  media  pengencer  dilakukan berdasarkan prosedur persiapan media (Ogimoto, 1981).  Sumber  bakteri  yang  digunakan  adalah dari kultur bakteri yang menghasilkan persentase penurunan aflatoksin tertinggi.
Setelah didapatkan kultur murni. maka  dilanjutkan  dengan  karakterisasi  yaitu 1)  Pewarnaan  gram  (Cappucino,  2011),  2) Pewarnaan endospore (Lay, 1994), 3) uji katalase (Lay, 1994) dan 4) uji motilitas (Barrow, G. I. and Feltham, 1993). Data yang diperoleh dikemukakan secara deskriptif.
Pengikatan Aflatoksin oleh Bakteri Rumen Setelah  didapatkan  kultur  murni  bakteri rumen yang mampu menurunkan kadar aflatoksin didalam rumen, selanjutnya dilakukan pengujian  lebih  lanjut  tentang  kemampuannya dalam  mengikat  aflatoksin  pada  dinding  sel bakteri. Tahapan ini mengkaji kerja bakteri rumen dalam  mengikat  aflatoksin.  Prosedur  pengujian
daya  ikat  mengacu  pada  (El-Nezami,  Mykkänen, Kankaanpää,  Salminen,  &  Ahokas,  2000).  Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah dua kultur  murni  bakteri  rumen  hasil  dari  isolasi bakteri  pada  percobaan  dua,  larutan  standar aflatoksin (Sigma Aldrich).
Prosedur pelaksanaan pada tahap ini yaitu larutan kultur bakteri disentrifugasi pada putaran 3500 x g selama 10 menit. Supernatan dibuang dan endapan pelet dikultur in vitro dalam suatu media broth pada kondisi anaerob suhu 37 0 C selama 60 menit.  selanjutnya  media  tersebut  ditambahkan aflatoksin  dengan  konsentrasi  akhir  100  ppb. Setelah diinkubasikan suspensi bakteri dan AFB1, dilakukan sentrifugasi selama 3500 rpm selama 10  menit.  Endapan  dibuang  dan  supernatan dikoleksi  untuk  ditetapkan  kadar  AFB1  dengan Liquid  Chromatography  Mass  Spectrophtometer (LCMS-MS).  Sebagai  kontrol  dilakukan  prosedur yang  sama  tetapi  medium  tidak  diinokulasikan dengan bakteri. Peubah yang diukur adalah kadar aflatoksin setelah inkubasi selama 60 menit.
Daya  ikat  aflatoksin  oleh  bakteri  rumen didefinisikan sebagai berikut: [(Kadar aflatoksin kontrol  -  Kadar  aflatoksin  sampel)/Kadar aflatoksin  kontrol]  x  100%  (Kankaanpää, Tuomola, El-Nezami, Ahokas, & Salminen, 2000) . Peubah  yang  diukur  adalah  pengikatan aflatoksin  oleh  bakteri  menggunakan Liquid Chromatography Mass Spectrophtometer (LCMS- MS)  mengacu  pada  modifikasi  Silva,  Pena, Lino,  Fernández,  and  Mañes  (2010). Data yang diperoleh dikemukakan secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penurunan Aflatoksin dalam Rumen secara In vitro Untuk  menentukan  kemampuan  bakteri rumen dalam mendegradasi aflatoksin, di dalam sistem fermentasi rumen harus dilakukan dengan penambahan aflatoksin dalam rumen. Degradasi dapat  disebabkan  oleh  bakteri  itu  sendiri, mikroba rumen lainnya atau bisa juga disebabkan oleh perubahan kimia aflatoksin di dalam rumen. Kondisi  rumen  harus  ideal  untuk  pertumbuhan bakteri  rumen,  oleh  karena  itu  bakteri  rumen yang mampu mendegradasi aflatoksin dari rumen yang  memiliki  kondisi  fisikokimia  yang  ideal. Pengukuran terhadap nilai pH, VFA, asam laktat dan  kadar  aflatoksin  untuk  melihat  ideal  atau
tidaknya  kondisi  rumen  dengan  penambahan aflatoksin. Berikut ini ditampilkan data nilai pH, konsentrasi  VFA,  kadar  asam  laktat  dan  kadar aflatoksin perlakuan.
Nilai pH rumen Nilai pH rumen ditampilkan pada Tabel 1. Derajat keasaman (pH) cairan rumen merupakan salah  satu  indikator  yang  menunjukkan berlangsungnya  kegiatan  bioproses  di  dalam rumen.  Nilai  pH  rumen  berkisar  6,15  –  6,96. Konsentrasi  pH  dipengaruhi  oleh  faktor  waktu, terjadi  penurunan  pH  sebanyak  8,32%  setelah inkubasi  selama  4  jam  (P>0,05).  Penurunan  pH setelah 4 jam inkubasi terjadi karena asam yang dihasilkan.  Nilai  ini  menunjukkan  bahwa  pada waktu  itu  sudah  dihasilkan  produk  fermentasi berupa  VFA  yang  optimal.  Hal  ini  terlihat  pada konsentrasi VFA cairan rumen yang cukup tinggi dengan kisaran 122,27 – 151,58 mM. Konsentrasi VFA yang cukup tinggi ini akan mempengaruhi pH rumen  karena  produk  fermentasi  dalam  bentuk VFA terakumulasi di dalam tabung fermentor. Walaupun terjadi penurunan pH, namun pH  rumen  masih  berada  pada  kisaran  normal. Kisaran  pH  rumen  yang  normal  adalah  6  –  7 (Usman,  2013).  Nilai  ini  menunjukkan  bahwa fermentasi  dalam  rumen  berlangsung  secara optimal.  Nilai  pH  rumen  berkisar  antara  6  –  7 dan kondisi yang  paling  optimal  untuk  aktivitas bakteri rumen adalah 6,9.
Pemberian pakan dengan rasio konsentrat yang lebih tinggi dibandingkan hijauan, dan pakan glukosa  yang  fermentabel  di  rumen  juga  tidak menggertak  terjadinya  kondisi  asidosis,  karena
Tabel 1. Nilai pH rumen Faktor Perlakuan Aflatoksin Waktu Inkubasi (jam) Rataan 0 4 Ransum - 6,82 ± 0,056 6,30 ± 0,056 6,56 ± 0,303 + 6,96 ± 0,113 6,40  ± 0,092 6,68 ± 0,336 Pakan rataan 6,89 ± 0,098 6,35 ± 0,070 6,62 ± 0,381 Glukosa - 6,73 ± 0,077 6,28 ± 0,091 6,51 ± 0,268 + 6,89 ± 0,084 6,15 ± 0,148 6,52 ± 0,435 rataan 6,81 ± 0,116 6,22 ± 0,122 6,51 ± 0,417 Aflatoksin Rataan - 6,78 ± 0,078 6,29 ± 0,063 6,53 ± 0,268 + 6,93 ± 0,091 6,28 ± 0,171 6,60 ± 0,369 Waktu fermentasi rataan 6,85 a ± 0,113 6,28 b ± 0,119
6,56 ± 0,403
a, b Superskrip yang berbeda pada baris yang sama memperlihatkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
pH  rumen  masih  berada  pada  kisaran  normal. Begitu  juga  dengan  penambahan  aflatoksin tidak  mempengaruhi  kondisi  pH  rumen, dengan  demikian  penambahan  aflatoksin  tidak mengurangi pH rumen, proses fermentasi secara keseluruhan tidak berubah. Nilai pH rumen masih berada dalam kondisi normal.

## Konsentrasi VFA rumen
Konsentrasi  VFA  rumen  ditampilkan  pada Tabel  2.  VFA  merupakan  produk  fermentasi karbohidrat dalam rumen, semakin tinggi jumlah VFA, menunjukkan ketersediaan energi semakin besar.  Faktor  pakan,  aflatoksin  dan  waktu fermentasi tidak berpengaruh (P>0,05) terhadap konsentrasi VFA rumen setelah proses fermentasi selama  4  jam.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa aflatoksin, jenis pakan dan waktu inkubasi tidak mengganggu  proses  fermentasi  bahan  pakan  di dalam rumen.
Konsentrasi  VFA  merupakan  salah  satu produk  fermentasi  karbohidrat  oleh  mikroba rumen  disamping  produk  lainnya  yaitu  CO 2 dan CH 4 . Volatile Fatty Acid merupakan sumber energi utama  bagi  ternak  ruminansia,  konsentrasi  VFA hasil penelitian ini berkisar 110,24 – 165,37 mM, konsentrasi ini hampir sama dengan konsentrasi VFA yang dilaporkan oleh Gallo et al. (2020) yaitu sekitar 138,57 mM pada sapi laktasi dan 124,56 mM  pada  sapi  kering  kandang.  Konsentrasi VFA  masih  berada  pada  kisaran  normal,  berarti penambahan  aflatoksin  tidak  mempengaruhi proses  fermentasi  di  dalam  rumen  hal  ini ditunjukkan  dengan  nilai  pH  yang  normal. Selanjutnya Rahayu, Subrata, and Achmadi (2018)
Tabel 2. Konsentrasi VFA (mM) rumen Faktor Perlakuan Aflatoksin Waktu Inkubasi (jam) Rataan 0 4 Ransum - 140,31 ± 42,518 135,29 ± 21,267 137,80 ± 27,598 + 140,31 ± 42,518 120,27 ± 42,518 130,29 ± 36,593 Pakan Rataan 140,31 ± 34,716 127,78 ± 28,785 134,05 ± 30,273 Gluoksa - 160,35 ± 14,170 125,28 ± 21,267 142,82 ± 20,863 + 165,37 ± 21,267 110,24 ±14,170 137,81 ±35,079 Rataan 162,86 ± 15,033 117,76 ± 17,116 140,31 ± 25,127 Aflatoksin Rataan - 150,33 ± 28,345 130,29 ± 18,299 140,31 ± 24,548 + 152,84 ± 31,026 115,26 ± 17,116 134,05 ± 33,427 Waktu fermentasi Rataan 151,59 ± 27,544 122,77 ± 22,569 137,18 ± 28,515 Tabel 3. Konsentrasi asam laktat (mg/ml) rumen Faktor Perlakuan Aflatoksin Waktu Inkubasi (jam) Rataan 0 4 Ransum - 0,34 ± 0,310 0,72 ± 0,016 0,53 ± 0,282 + 0,68 ± 0,095 0,70 ± 0,403 0,69 ± 0,275 Pakan Rataan 0,51± 0,253 0,71 ±0,026 0,61 ± 0,258 Gluoksa - 0,34 ± 0,079 0,37 ± 0,365 0,36± 0,216 + 0,67 ± 0,079 0,56 ± 0,024 0,62  ± 0,08 Rataan 0,51± 0,205 0,47 ± 0,237 0,49 ± 0,206 Aflatoksin Rataan - 0,34 ± 0,185 0,55 ± 0,291 0,44 b ± 0,223 + 0,68 ± 0,072 0,63 ± 0,088 0,65 a ± 0,796 Waktu fermentasi Rataan 0,51 ± 0,223 0,59± 0,204 0,55 ± 0,210
a, b Superskrip yang berbeda pada kolom  yang sama memperlihatkan perbedaan yang nyata (P<0,05).
menyatakan  menunjang  pertumbuhan  mikroba yang  optimum,  konsentrasi  VFA  cairan  rumen berkisar antara 80-160 mM. Adapun Mc Donald, A., JFD., and CA. (2002) menyatakan konsentrasi VFA dalam rumen bervariasi antara 0,2-1,5 g per 100 mL atau 10-70 mmol L -1 .

## Konsentrasi asam laktat rumen
Kadar asam laktat ditampilkan pada Tabel 3.  Faktor  waktu  dan  faktor  jenis  pakan  tidak berpengaruh terhadap kadar asam laktat di dalam rumen,  namun  faktor  aflatoksin  berpengaruh nyata (P<0,05) meningkatkan kadar asam laktat rumen.  Kadar  asam  laktat  berada  pada  kisaran 0,34  –  0,72  mg/ml.  Terjadi  peningkatan  kadar asam laktat rumen 67,42% dengan penambahan aflatoksin.  Asam  laktat  dapat  menurunkan  pH rumen,  mengakibatkan  kerusakan  pada  dinding sel  bakteri  yang  terdiri  dari  polisakarida  dan peptidoglikan.
Penambahan  aflatoksin  yang  merupakan senyawa  pepton  dapat  diserap  oleh  bakteri rumen  untuk  memperbaiki  struktur  dinding  sel bakteri sehingga bakteri pembentuk asam laktat bertahan  hidup  dan  menghasilkan  asam  laktat yang  dapat  menekan  pertumbuhan  bakteri  lain. Asam laktat dijumpai didalam rumen ruminansia karena  didalam  rumen  terdapat  bakteri  bakteri pembentuk  laktat  (Lettat  et  al.,  2010).  Menurut Wulandari, Agus, Cahyanto, & Utomo (2014) asam laktat dapat menghasilkan pH yang rendah pada substrat  sehingga  dapat  menimbulkan  suasana asam.
Kadar aflatoksin rumen Rataan  kadar  aflatoksin  dalam  rumen diperlihatkan  pada  Tabel  4.  Penambahan aflatoksin  dan  jenis  pakan  tidak  berpengaruh terhadap  kadar  aflatoksin  dalam  rumen. Penambahan  waktu  inkubasi  dari  0  menjadi  4
jam  dapat  menurunkan  kadar  aflatoksin  cairan rumen (P<0,05), dimana terjadi penurunan kadar aflatoksin  sebesar  50,36%  setelah  fermentasi dilakukan selama 4 jam.
Penurunan  aflatoksin  sejalan  dengan penurunan  pH,  adanya  penurunan  pH  dapat mengakibatkan  AFB1  berubah  menjadi  turunan aflatoksin  seperti  AFB2,  AFB2a  dan  AFM1  oleh mikroba rumen, sehingga AFB1 tidak terdeteksi. Sutatdjid  (1989)  melaporkan  pada  pH  rendah, AFB1  dirubah  menjadi  AFB2a,  sedangkan Kiessling, Pettersson, Sandholm, & Olsen (1984) menyatakan cairan rumen sapi atau domba dapat mengkonversi  AFB1  menjadi  AFM1.  Aflatoksin yang terdeteksi adalah aflatoksin G1 dan G2 yang berasal  dari  pakan  yang  terbawa  oleh  cairan rumen.  El-Nezami  et  al.  (2000)  melaporkan bahwa  aflatoksin  B2,  G1  dan  G2  kurang  sensitif terhadap proses pengikatan, sehingga aflatoksin jenis ini dapat terdeteksi.
Penurunan  aflatoksin  terjadi  setelah diinkubasi  selama  4  jam . Penurunan ini diduga lebih disebabkan konversi AFB1 menjadi senyawa turunanya misalnya AFM1. Penurunan pH rumen diduga disebabkan oleh peningkatan asam laktat. Apabila  pH  rumen  turun  maka  bakteri  yang tahan  asam  (BAL)  akan  dapat  hidup  dengan baik.  Kankaanpää,  Tuomola,  El-Nezami,  Ahokas, and  Salminen  (2000)  melaporkan  penurunan kadar aflatoksin dalam cairan rumen juga sejalan dengan penurunan nilai pH karena suasana asam dapat  merusak  dinding  sel  bakteri  sehingga mengakibatkan AFB1 dengan mudah diikat oleh konstituen  membran  sitoplasma.  Mekanisme pengikatan  AFB1  oleh  bakteri  dilakukan  oleh
Tabel 4. Kadar aflatoksin total G1 dan G2 (ppb) rumen
Faktor Perlakuan Aflatoksin Waktu Inkubasi (jam) Rataan 0 4 Ransum - 8,08 ± 4,023 4,67 ± 2,771 6,38 ± 2,822 + 7,89 ± 5,741 4,08 ± 1,202 5,99 ± 3,537 Pakan rataan 7,99 ± 4,131 4,38 ± 1,746 6,18 ±  2,982 Glukosa - 9,51 ± 2,184 3,84 ± 0,233 6,68 ± 1,139 + 7,74 ± 1,018 3,90 ± 0,021 5,82 ± 0,588 rataan 8,63 ± 1,317 3,87 ± 0,170 6,25 ± 0,881 Aflatoksin rataan 8,80 ± 3,228 4,26 ± 2,725 6,53 ± 2,773 7,82 ± 4,695 3,99 ± 2,325 5,90 ± 3,461 Waktu fermentasi rataan 8,31 a ± 3,734 4,12 b ± 2,347 6,21 ± 3,030 a, b Superskrip yang berbeda pada baris yang sama memperlihatkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
polisakarida  dinding  sel  dan  peptidoglikan. Perubahan pH dapat menyebabkan peningkatan ukuran  pori-pori,  penurunan  ketebalan  dinding sel  sehingga  bakteri  dapat  mengikat  aflatoksin. Pantaya  et  al.  (2016)  menyatakan  bahwa kecepatan  bakteri  dalam  mengikat  toksin dipengaruhi oleh nilai pH.

## Isolasi dan Identifikasi Bakteri Rumen
Identifikasi dan karakteristik bakteri rumen ditampilkan pada Tabel 5. Hasil isolasi didapatkan 6 jenis bakteri. Pengujian dengan pewarnaan gram didapatkan isolat no 1 menunjukkan gram negatif dan lainnya gram positif. Uji katalase didapatkan 2  isolat  (3  dan  6)  memiliki  katalase  positif.  Uji endospora  semua  isolat  tidak  menghasilkan endospora dan uji motilitas semua isolat bersifat motil ditandai dengan pergerakan flagella.

## Uji Pengikatan Aflatoksin oleh Isolat Bakteri Rumen
Hasil  analisis  pengikatan    AFB1  oleh bakteri rumen menggunakan LCMS-MS disajikan pada  Tabel  6.  Pengikatan  AFB1  oleh  bakteri rumen  setelah  masa  inkubasi  selama  60  menit masing-masing  53,59%  dan  51,68%.  Kedua isolat  memiliki  kemampuan  yang  hampir  sama dalam  mengikat  AFB1  hanya  selisih  1,91%. Perbedaan  populasi  bakteri  yang  digunakan tidak  berpengaruh  terhadap  daya  ikat  bakteri. Persentase  pengikatan  aflatoksin  dipengaruhi oleh  pH,  suhu  inkubasi  dan  konsentrasi  AFB1. Pada  percobaan  ini  konsentrasi  aflatoksin  di dalam  media  100  ppb  dan  suhu  inkubasi  37 0 C, sehingga  pengikatan  terhadap  AFB1  nilainya
Tabel 5. Karakteristik bakteri rumen yang tumbuh pada media aflatoksin No Bentuk Pewarnaan gram Uji Katalase Endospora Motilitas Uji konfirmasi pengikatan aflatoksin 1 Coccus in cluster - - - + belum diuji 2 Coccus + - - + + 3 Curved Rod - - - + belum diuji 4 Cocci in chains + - - + + 5 Rod with square end + - - + belum diuji 6 Diplococcus + + - + belum diuji
hampir sama. El-Nezami et al. (2000) menyatakan bahwa  jumlah  aflatoksin  B1  yang  terikat  oleh bakteri meningkat seiring dengan meningkatnya konsentrasi  aflatoksin  B1.  Sejalan  dengan  hasil laporan Lee et al. (2003) yang menyatakan bahwa rata-rata kecepatan pengikatan AFB1 oleh bakteri tergantung pada konsentrasi aflatoksin. Semakin tinggi  aflatoksin  yang  tersedia  di  sekitar  sel bakteri,  maka  semakin  tinggi  pula  kesempatan aflatoksin  dan  sel  bakteri  berinteraksi  sehingga proses pengikatan berlangsung dengan cepat.
Haskard, El-Nezami, Kankaanpää, Salminen, and  Ahokas  (2001)  melaporkan  dalam  keadaan hidup bakteri memiliki pertahanan diri sehingga tidak  semua  aflatoksin  B1  akan  terikat  pada komponen  sel  dari  bakteri,  namun  demikian, ketika racun pada media tinggi maka bakteri akan mengikat lebih banyak.

## KESIMPULAN
Penambahan  aflatoksin  sampai  20  ppb  di dalam rumen tidak mempengaruhi karakteristik kimiawi  rumen,  seperti  pH,  VFA,  asam  laktat dan  aktivitas  mikroba  rumen. Bakteri rumen mampu  mengurangi  kadar  aflatoksin  dalam rumen melalui pengikatan ke dalam dinding sel bakteri  rumen  dengan  waktu  inkubasi  selama 4  jam.  Beberapa  bakteri  rumen  yang  memiliki kemampuan tersebut dapat diisolasi dan memiliki
Tabel 6. Hasil pengikatan AFB1 oleh isolat bakteri
rumen No Isolat Populasi Pengikatan AFB1 (CFU/ml) (%/jam) 1 Isolat no 2 7,1 x 108 53,59 2 Isolat no 4 2,5  x  108 51,68 kemampuan untuk menurunkan kadar aflatoksin hingga 50%.

## DAFTAR PUSTAKA
Barrow,  G.  I.;  Feltham,  R.  K.  A.  (1993). Cowan and Steel’s Manual for The Identification of Medical  Bacteria. Cambridge:  Cambridge University Press. Cappucino,  J.  G.  .  S.  N.  (2011). Microbiology: a Laboratory Manual (9th ed.). Adviso Wesley Pub. Comp. Inc. USA. Carulla,  J.  E.,  Kreuzer,  M.,  Machmüller,  A.,  & Hess,  H.  D.  (2005).  Supplementation of  Acacia  mearnsii  tannins  decreases methanogenesis  and  urinary  nitrogen  in forage-fed  sheep.  Australian  Journal  of Agricultural  Research,  56(9),  961-970. doi:https://doi.org/10.1071/AR05022
El-Nezami,  H.,  Mykkänen,  H.,  Kankaanpää,  P., Salminen,  S.,  &  Ahokas,  J.  (2000).  Ability of  Lactobacillus  and  Propionibacterium strains  to  remove  aflatoxin  B,  from  the chicken duodenum. J Food Prot, 63(4), 549- 552. doi:10.4315/0362-028x-63.4.549
Firmin, S., Morgavi, D. P., Yiannikouris, A., & Boudra, H.  (2011).  Effectiveness  of  modified  yeast cell  wall  extracts  to  reduce  aflatoxin  B1 absorption in dairy ewes. Journal of Dairy Science,  94(11),  5611-5619.  doi:https:// doi.org/10.3168/jds.2011-4446
Gallo, A., Minuti, A., Bani, P., Bertuzzi, T., Cappelli, F.  P.,  Doupovec,  B.,  .  .  .  Trevisi,  E.  (2020). A  mycotoxin-deactivating  feed  additive counteracts  the  adverse  effects  of  regular levels of Fusarium mycotoxins in dairy cows.
Journal  of  Dairy  Science,  103(12),  11314- 11331. doi:https://doi.org/10.3168/ jds.2020-18197 Goering, H.K. and Van Soest, P. J. (1970). Forage Fiber Analysis (Apparatus Reagents,
Procedures  and  Some  Applications). Agriculture  Handbook. Washington  DC: United  States  Department  of  Agriculture.
Diambil dari https://books.google. co.id/s?id=yn8wAAAAYAAJ&printse c=frontcover&hl=id&source=gbs_ge_
ummary_r&cad=0#v=onepage&q&f=false Gonçalves, B. L., Muaz, K., Coppa, C. F. S. C., Rosim,
R.  E.,  Kamimura,  E.  S.,  Oliveira,  C.  A.  F., &  Corassin,  C.  H.  (2020).  Aflatoxin  M1 absorption by non-viable cells of lactic acid bacteria  and  Saccharomyces  cerevisiae strains  in  Frescal  cheese. Food Research International, 136, 109604. doi:https://doi. org/10.1016/j.foodres.2020.109604
Haskard,  C.  A.,  El-Nezami,  H.  S.,  Kankaanpää,
P.  E.,  Salminen,  S.,  &  Ahokas,  J.  T.  (2001). Surface  binding  of  aflatoxin  B(1)  by  lactic acid bacteria. Appl Environ Microbiol , 67 (7), 3086-3091.  doi:10.1128/AEM.67.7.3086- 3091.2001
Jiang,  Y.,  Ogunade,  I.  M.,  Pech-Cervantes,  A.  A., Fan,  P.  X.,  Li,  X.,  Kim,  D.  H.,  .  .  .  Adesogan, A.  T.  (2020).  Effect  of  sequestering  agents based  on  a  Saccharomyces  cerevisiae  fer- mentation  product  and  clay  on  the  rumi- nal bacterial community of lactating dairy cows challenged with dietary aflatoxin B1. Journal of Dairy Science, 103 (2), 1431-1447. doi:https://doi.org/10.3168/jds.2019- 16851 Kankaanpää, P., Tuomola, E., El-Nezami, H., Aho- kas,  J.,  &  Salminen,  S.  J.  (2000).  Binding of  aflatoxin  B1  alters  the  adhesion  prop- erties  of  Lactobacillus  rhamnosus  strain GG  in  a  Caco-2  model. Journal of Food Protection , 63 (3),  412–414.  https://doi. org/10.4315/0362-028X-63.3.412 Kiessling,  K.  H.,  Pettersson,  H.,  Sandholm,  K.,  & Olsen,  M.  (1984).  Metabolism  of  aflatoxin, ochratoxin,  zearalenone,  and  three  tricho- thecenes by intact rumen fluid, rumen pro- tozoa,  and  rumen  bacteria. Appl Environ Microbiol, 47 (5),  1070-1073.  doi:10.1128/ aem.47.5.1070-1073.1984 Lay, B. W. (1994). Analisis Mikrobiologi di Labora- torium . Jakarta: Raja Graffindo Persada. Lee, Y. K., El-Nezami, H., Haskard, C. A., Gratz, S., Puong,  K.  Y.,  Salminen,  S.,  &  Mykkänen, H.  (2003).  Kinetics  of  adsorption  and desorption  of  aflatoxin  B1  by  viable and  nonviable  bacteria. Journal of Food Protection , 66 (3),  426–430.  https://doi. org/10.4315/0362-028X-66.3.426. Lettat, A., Nozière, P., Silberberg, M., Morgavi, D. P., Berger, C., & Martin, C. (2010). Experimental feed induction of ruminal lactic, propionic, or  butyric  acidosis  in  sheep. J Anim Sci,
88 (9),  3041-3046.  doi:10.2527/jas.2010- 2926
Liu, N., Wang, J., Deng, Q., Gu, K., & Wang, J. (2018).
Detoxification of aflatoxin B1 by lactic acid bacteria  and  hydrated  sodium  calcium aluminosilicate  in  broiler  chickens. Live- stock Science, 208 ,  28-32.  doi:https://doi. org/10.1016/j.livsci.2017.12.005
Mansfield, H. R., Endres, M. I., & Stern, M. D. (1995). Comparison  of  microbial  fermentation  in the rumen of dairy cows and dual flow con- tinuous  culture. Animal Feed Science and Technology, 55 (1),  47-66.  doi:https://doi. org/10.1016/0377-8401(95)98202-8 Mc Donald, P., A., E., JFD., G., & CA., M. (2002). Ani- mal Nutrition, 7th Ed . Edition. Longman Sci- entific and Technical Co. Published in The United States with John Willey and Sons Inc. New  York.United  States  with  John  Willey and Sons Inc. New York. Ogimoto, K. a. S. I. (1981). Atlas of Rumen Micro- biology .  Japan:  Japan  Scientific  Societies Press, Tokyo Pantaya, D., Morgavi, D. P., Silberberg, M., Martin, C.,  Suryahadi,  Wiryawan,  K.  G.,  &  Boudra, H.  (2016).  Bioavailability  of  aflatoxin  B  1 and  ochratoxin  A  ,  but  not  fumonisin  B  1 or  deoxynivalenol  ,  is  increased  in  starch- induced  low  ruminal  pH  in  nonlactating dairy cows. Journal of Dairy Science , 99 (12), 9759–9767. https://doi.org/10.3168/ jds.2016-11421. Park, W., Park, M. Y., Song, G., & Lim, W. (2019). Exposure  to  aflatoxin  B1  attenuates cell  viability  and  induces  endoplasmic reticulum-mediated  cell  death  in  a  bovine mammary  epithelial  cell  line  (MAC-T). Toxicology in Vitro, 61 , 104591. doi:https:// doi.org/10.1016/j.tiv.2019.104591. Rahayu,  R.  I.,  Subrata,  A.,  &  Achmadi,  J.  (2018). Fermentabilitas Ruminal In Vitro pada Pa- kan  Berbasis  Jerami  Padi  Amoniasi  den- gan  Suplementasi  Tepung  Bonggol  Pisang dan Molases. 2018, 20 (3), 9. doi:10.25077/ jpi.20.3.166-174.2018.
Silva, L. J., Pena, A., Lino, C. M., Fernández, M. F., &  Mañes,  J.  (2010).  Fumonisins  determi- nation  in  urine  by  LC-MS-MS. Anal Bio- anal Chem, 396 (2),  809-816.  doi:10.1007/ s00216-009-3231-9 Upadhaya,  S.  D.,  Park,  M.  A.,  &  Ha,  J.  K.  (2010). Mycotoxins  and  Their  Biotransformation in  the  Rumen:  A  Review. Asian-Australas J Anim Sci, 23 (9),  1250-1260.  doi:10.5713/ ajas.2010.r.06 Usman,  Y.  (2013).  Pemberian  Pakan  Serat  Sisa Tanaman Pertanian (Jerami Kacang Tanah, Jerami  Jagung,  Pucuk  Tebu)  Terhadap Evolusi pH, N-NH3 dan VFA Di dalam Rumen Sapi. Jurnal Agripet , 13 (2), 53–58. https:// doi.org/10.17969/agripet.v13i2.821
Wulandari, S., Agus, A., Cahyanto, M. N., & Utomo, R.  (2014).  Effect  of  fermented  cacao pod  supplementation  on  sheep  rumen microbial  fermentation. Journal of the Indonesian Tropical Animal Agriculture ,
39 (3), 167–174. https://doi.org/10.14710/ jitaa.39.3.167-174.
Yao, Y., Gao, S., Ding, X., Zhang, Q., & Li, P. (2021). Topography  effect  on  Aspergillus  flavus occurrence and aflatoxin B1 contamination associated with peanut. Current Research in Microbial Sciences , 100021. doi:https://doi. org/10.1016/j.crmicr.2021.100021