## Original Article
Received December 2023 / Revised December 2023 / Accepted December 2023

## Spizaetus: Jurnal Biologi dan Pendidikan Biologi
p-ISSN: 2716-151X
e-ISSN: 2722-869X
Efektivitas Penyinaran dan ZPT (2,4-D dengan BAP) terhadap Induksi Kalus Daun Jambu Air ( Syzygium aqueum ) var. Cincalo Weha secara in Vitro
Effectiveness of Photoperiod and PGR (2,4-D with BAP) on Callus Induction of Water Apple Leaves (Syzygium aqueum) var. Cincalo Weha in Vitro
Saripah*, Susiyanti, Sulastri Isminingsih, Zahratul Millah
1 Universitas Sultan Ageng Tirtayasa, Serang, 42121, Indonesia *Corresponding author: saripah0223@gmail.com
Abstrak. Jambu air var. Cincalo Weha merupakan plasma nutfah tanaman lokal yang berasal dari Desa Gondrong,  Provinsi  Banten.  Jambu  ini  memiliki  potensi  ekonomi  untuk  dikembangkan,  namun  tidak diimbangi dengan ketersediaan bibit jambu air yang berkualitas. Kultur jaringan merupakan salah satu alternatif  penyediaan  bibit  yang  seragam,  bebas  penyakit  dan  dalam  jumlah  besar.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui efektivitas penyinaran dan ZPT (2,4-D dengan BAP) dalam menginduksi kalus  daun  jambu  air  var.  Cincalo  Weha  secara in  vitro .  Rancangan  percobaan  yang  digunakan Rancangan Petak Terbagi dengan Rancangan Acak Kelompok sebagai rancangan dasar, ulangan 4 blok dan terdiri dari 2 faktor. Faktor pertama adalah penyinaran: 16 jam (L 1 ) dan 24 jam (L 2 ). Faktor kedua adalah ZPT (2,4-D dan BAP): (tanpa 2,4-D dan BAP) (K 0 ); (2,4-D 1 mg/L + BAP 0,5 mg/L) (K 1 ); (2,4-D 2 mg/L  + BAP  0,5  mg/L)  (K 2 );  dan  (2,4-D  3  mg/L  + BAP 0,5  mg/L)  (K 3 ).  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa perlakuan penyinaran tidak berpengaruh terhadap diameter kalus dan luasan kalus. Sedangkan, perlakuan ZPT (2,4-D 2 mg/L + BAP 0,5 mg/L) memberikan hasil terbaik pada parameter diameter kalus umur 8 MST (1,05 cm) dan 10 MST (1,24 cm), serta luasan kalus umur 8 MST (1,16 cm 2 ) dan 10 MST (1,47 cm 2 ).
Kata Kunci : 2,4-D; BAP; Penyinaran; Syzygium aqueum
DOI: https://dx.doi.org/10.55241/spibio.v5i1.343

## 1.  Pendahuluan
Tanaman  jambu  air  ( Syzygium aqueum ) berasal dari daerah Indonesia,
Kamboja,  Laos,  Vietnam,  tersebar  ke Malaysia,  dan  pulau-pulau  di  Pasifik. Beberapa  jenis  jambu  air  manis diantaranya  adalah  varietas  Lilin, King Rose , Apple  Rose ,  Cincalo,  Madura, Citra,  Bangkok,  Semarang,  Merah Delima, dan Kaget. [1]
Produksi  jambu  air  di  Kota Tangerang  mengalami  peningkatan secara berturut-turut pada tahun 2018, 2019  dan  2020  mencapai  133,8  ton, 175,7  ton  dan  396  ton. [2] Pemenuhan kebutuhan untuk menghasilkan kualitas buah  jambu  air  yang  unggul  sangat dipengaruhi  oleh  kualitas  bibit,  karena bibit  yang  bebas  penyakit  dapat
meningkatkan  produksi  tanaman [3] . Permasalahan  penyediaan  bibit  dapat diatasi  dengan  metode  induksi  kalus melalui kultur jaringan.
Salah satu faktor yang mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan  tanaman  dalam  kultur jaringan adalah cahaya. [4] Kuantitas dan kualitas  cahaya,  yaitu  intensitas  dan lama penyinaran mempengaruhi pertumbuhan  eksplan  dalam  kultur jaringan. [5] Penelitian  yang  dilakukan oleh  Kumar et  al. [6] menyatakan  lama penyinaran  16  jam  terang  dan  8  jam gelap  pada  eksplan  daun  delima ( Pomegranate cv. Sindhuri) memberikan  pengaruh  terhadap  hari muncul  kalus,  yaitu  26,8  hari  setelah tanam (HST).
Faktor  utama  yang  menunjang keberhasilan  kultur  jaringan  adalah kombinasi  zat  pengatur  tumbuh  (ZPT) yang  ditambahkan  ke  dalam  medium. Pemberian  ZPT  golongan  auksin mampu  menginduksi  terjadinya  kalus,
mendorong
pembentukan embriogenesis, dan membentuk tunas. Golongan auksin 2,4- Dichlorophenoxyacetic  acid (2,4-D) memiliki  sifat  lebih  stabil,  karena  tidak mudah  terurai  oleh  enzim  atau pemanasan  pada  proses  sterilisasi. [7]
Pemberian  hormon  sitokinin  dapat memicu pembelahan dan pemanjangan sel,  sehingga  dapat  mempercepat perkembangan dan pertumbuhan kalus. Golongan sitokinin 6-
Benzylaminopurine (BAP) memiliki sifat stabil,  relatif  lebih  murah  dan  mudah diperoleh. [8] Hasil penelitian Ummah et al. [9] melaporkan  kombinasi  2,4-D  2 mg/L  dan  BAP  0,5  mg/L  memberikan pengaruh  terhadap  hari  muncul  kalus Syzygium cumini , yaitu 27 HST.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui efektivitas penyinaran dan ZPT (2,4-D dengan 6- Benzylaminopurine ) dalam
menginduksi kalus daun jambu air var. Cincalo Weha secara in vitro .

## 2.  Metode
Penelitian ini menggunakan
metode eksperimental yang dilaksanakan pada bulan April − Agustus 2023  di  Laboratorium  Fisiologi  dan Bioteknologi Tanaman, Fakultas Pertanian,  Universitas  Sultan  Ageng Tirtayasa.
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  LAF  ( Laminar  Air Flow ),  autoklaf,  botol  kultur, shaker, cawan  petri, scalpel ,  pinset,  spatula, bunsen, rak kultur dengan tubular lamp (36  watt),  stop  kontak timer ,  dan  kain hitam. Sedangkan, bahan yang digunakan adalah daun muda jambu air var.  Cincalo  Weha  dari  bibit  umur  1 tahun  5  bulan  asal  Tangerang , media MS,  aquades,  alkohol  70%,  ZPT  2,4-D dan  BAP, polyvinylpyrrolidone (PVP), Plant  Preservative  Mixture (PPM),
detergen cair, povidone-iodine , bakterisida, fungisida, antibiotik, ascorbic  acid, tween-20,  dan  SDIC
( Sodium dichloroisocyanurate ).
Rancangan  Petak  Terbagi  ( Split- Plot  Design )  dengan  Rancangan  Acak Kelompok  sebagai  rancangan  dasar yang diulang empat kali dan terdiri dari dua  faktor.  Faktor  pertama  sebagai petak  utama  adalah  penyinaran  (L) terdiri  dari  dua  taraf  (16  jam  dan  24 jam). Faktor kedua sebagai anak petak adalah ZPT (2,4-D dan BAP) (K) terdiri dari 4 taraf (tanpa 2,4-D dan BAP; 2,4- D 1 mg/L + BAP 0,5 mg/L; 2,4-D 2 mg/L +  BAP  0,5  mg/L;  dan  2,4-D  3  mg/L  + BAP 0,5 mg/L).
Pelaksanaan  penelitian  dimulai dengan  membuat  media  MS  yang diberi penambahan ZPT 2,4-D dan BAP
sesuai  perlakuan,  volume  media  di dalam botol kultur  25 ml. Media serta alat  kultur  disterilisasi  menggunakan autoklaf  pada  suhu  121°C  dengan tekanan 15 psi selama 15 menit.
Sterilisasi eksplan dilakukan dengan  cara  mencuci  eksplan  dengan air  mengalir  selama  15 – 30  menit, detergen  cair  selama  15  menit,  lalu dibilas dengan aquades steril sebanyak 3 – 4  kali.  Kemudian,  eksplan  dikocok menggunakan  larutan  bakterisida, fungisida,  antibiotik  dengan  Tween-20 sebanyak  3  tetes  selama  1  jam. Kemudian,  eksplan  dibawa  ke  dalam LAF. Lalu, eskplan dibilas aquades steril sebanyak  3 – 4  kali  (5  menit).  Eksplan dikocok  dengan  larutan  SDIC  1  g/L dengan Tween-20 (15 menit), kemudian  dibilas  aquades  steril sebanyak 3 – 4 kali (5 menit). Selanjutnya, eksplan daun diletakkan di cawan  petri  yang  telah  ditetesi povidone-iodine sebanyak  3 – 5  tetes, lalu  dipotong  ukuran  1  cm  1  cm dengan scalpel dan  setiap  botol  diisi sebanyak 2 eksplan.
Selanjutnya, botol kultur diinkubasi dalam kondisi gelap selama 2  minggu,  sebelum  dipindahkan  ke kondisi  perlakuan  penyinaran  16  jam dan  24  jam  terang.  Penyinaran menggunakan  dua  buah tubular  lamp (36 watt) yang diatur menggunakan alat stop  kontak timer selama  10  minggu.
Ruang    inkubasi  dibersihkan  dengan cara  mengepel  lantai.  Rak  dan  botol kultur  disemprot  alkohol  70%  untuk mencegah  kontaminasi.  Suhu  ruang kultur dipertahankan pada 22 – 26 °C. Parameter  yang  diamati  meliputi:
1)  Waktu  muncul  kalus  (HST),  diamati setiap hari hingga 10 MST; 2) Diameter kalus  (cm),  diukur  menggunakan ImageJ ;  3)  Luasan  kalus  (cm 2 ),  diukur menggunakan ImageJ ;  4)  Tekstur  dan warna kalus, diamati secara visual pada 10  MST;  5)  Persentase  eksplan berkalus (%), dihitung dengan rumus  eksplan  berkalus  dibagi  total  eksplan dikali  100%;  6)  Persentase  kalus embriogenik  (%),  dihitung  dengan rumus  kalus embriogenik dibagi total eksplan  dikali  100%;  7)  Persentase kalus membentuk embrio somatik (%), dihitung  dengan  rumus  fase  dibagi total eksplan dikali 100%; 8) Persentase browning (%), dihitung dengan rumus  eksplan  yang browning dibagi  total eksplan dikali 100%; dan 9) Persentase kontaminasi (%),  eksplan terkontaminasi  dibagi  total  eksplan dikali 100%.
Analisis  sidik  ragam  (ANOVA) menggunakan software DSAASTAT versi  1.514.  Apabila  hasil  sidik  ragam berpengaruh  nyata,  maka  dilanjutkan dengan  uji  lanjut Duncan  Multiple Range Test (DMRT) pada taraf 5%.

## 3.  Hasil dan Pembahasan

## Waktu Muncul Kalus (HST)
Data waktu muncul kalus dengan kombinasi  perlakuan  penyinaran  dan ZPT  (2,4-D  +  BAP)  dapat  dilihat  pada grafik  berikut.  Eksplan  yang  ditanam dapat menunjukkan pertumbuhan kalus,  akan  tetapi  waktu  muncul  kalus
setiap perlakuan berbeda-beda. Waktu muncul kalus pada kombinasi perlakuan penyinaran 16 jam dan ZPT (2,4-D  2  mg/L  +  BAP  0,5  mg/L)  (L 1 K 2 ) dan  kombinasi  perlakuan  penyinaran 24 jam dan ZPT (2,4-D 3 mg/L + BAP 0,5 mg/L) (L 2 K 3 ) dimulai 32,25 HST.
Gambar 1. Grafik waktu muncul kalus dengan kombinasi perlakuan penyinaran dan ZPT (2,4-D + BAP)
Hal ini diduga karena pada kedua perlakuan ini, kondisi penyinaran yang dikombinasikan  dengan  penambahan ZPT  (2,4-D  +  BAP)  yang  sesuai  pada media  memicu  munculnya  kalus. Konsentrasi  hormon  auksin  eksogen yang  berinteraksi  dengan  auksin endogen  dalam  jaringan  menstimulasi pemanjangan sel dan hormon sitokinin eksogen mampu
merangsang pembelahan sel.
[10] Sehingga,
konsentrasi  2,4-D  dan  BAP  yang optimal dapat menghasilkan peningkatan pembentukan kalus.
Sedangkan,  waktu  muncul  kalus berakhir  pada  kombinasi  perlakuan penyinaran 16 jam dan tanpa ZPT (2,4- D + BAP) (L 1 K 0 ), yaitu 46,38 HST. Hal ini diduga  karena  pada  perlakuan  tanpa ZPT  (2,4-D  +  BAP)  menghambat
pertumbuhan  kalus.  Kalus  yang  tidak muncul disebabkan oleh kombinasi ZPT pada  media  yang  belum  mampu menginduksi  kalus  dan  eksplan memiliki  kandungan  auksin  dan sitokinin  endogen  yang  rendah, sehingga  media  kultur  membutuhkan lebih  banyak  auksin  dan  sitokinin eksogen. [11]

## Diameter Kalus (cm)
Diameter  kalus  merupakan  salah satu  parameter  yang  diamati  dengan tujuan untuk mengetahui pertumbuhan kalus dari awal hingga akhir pengamatan. Hasil sidik ragam menunjukkan  bahwa  perlakuan  ZPT (2,4-D  dengan  BAP)  berpengaruh sangat  nyata  terhadap  diameter  kalus (Tabel 1).
Tabel 1. Pengaruh penyinaran dan ZPT (2,4-D dengan BAP) terhadap rata-rata diameter kalus (cm)
Keterangan: Angka-angka yang diikuti huruf yang sama pada baris yang sama menunjukkan berbeda tidak nyata pada uji lanjut DMRT 5%.
Berdasarkan Tabel 1,
menunjukkan bahwa perlakuan
penyinaran  berpengaruh  tidak  nyata terhadap diameter kalus. Pada umur 8
MST
kondisi penyinaran L 1 menghasilkan  diameter  kalus  dengan nilai rerata 0,76 cm dan penyinaran L 2 dengan nilai rerata 0,82 cm.
46.38 39.50
32.25 33.88 35.00 38.38 39.38 32.25 28.00 35.00 42.00 49.00 L1K0 L1K1 L1K2 L1K3 L2K0 L2K1 L2K2 L2K3 W aktu Mu ncu l Kalu s (HST )
Kombinasi Penyinaran dan ZPT (2,4-D + BAP)
Umur Tanaman Penyinaran ZPT (2,4-D+BAP) (mg/L)
Rata-rata 0 (K 0 ) 1+0,5 (K 1 ) 2+0,5 (K 2 ) 3+0,5 (K 3 ) -----------------------------(cm)--------------------------- 8 MST 16 jam (L 1 ) 0,33 0,87 0,97 0,86 0,76 24 jam (L 2 ) 0,11 0,96 1,13 1,09 0,82 Rata-rata 0,22b 0,92a 1,05a 0,98a 0,79 10 MST 16 jam (L 1 ) 0,41 1,10 1,17 0,96 0,91 24 jam (L 2 ) 0,13 1,06 1,32 1,26 0,94 Rata-rata 0,27b 1,08a 1,24a 1,11a 0,93
Sedangkan, pada umur 10 MST kondisi penyinaran  L 1 menghasilkan  diameter kalus dengan nilai rerata sebesar 0,91 cm  dan  penyinaran  L 2 dengan  nilai rerata  0,94  cm.  Pengkondisian  faktor lingkungan, terutama lingkungan cahaya  dan  kesesuaian  zat  pengatur tumbuh auksin  yang  digunakan memengaruhi  pertumbuhan  kalus  dan morfologi kalus yang terbentuk. [12]
Berdasarkan  hasil  uji  lanjut diperoleh perlakuan ZPT (2,4-D dengan BAP)  bepengaruh  sangat  nyata terhadap  diameter  kalus,  dengan  hasil rerata tertinggi pada perlakuan ZPT K 2 , yaitu 1,05 cm (8 MST) dan 1,24 cm (10 MST).  Lalu,  diikuti  dengan  perlakuan ZPT K 3 dengan nilai rerata sebesar 0,98 cm  (8  MST)  dan  1,11  cm  (10  MST).
Kemudian,  diikuti  perlakuan  ZPT  K 1 dengan  nilai  rerata  0,92  cm  (8  MST) dan 1,08 cm (10 MST). Sedangkan, nilai rerata  terkecil  diperoleh  perlakuan tanpa ZPT K 0 , sebesar 0,22 cm (8 MST) dan  0,27  cm  (10  MST).  Penambahan zat  pengatur  tumbuh  2,4-D  dan  BAP pada media kultur memacu penambahan  diameter  kalus  pada eksplan daun melon var. Mai 119. [13]
Luasan Kalus (cm 2 ) Hasil  sidik  ragam  menunjukkan bahwa  perlakuan  ZPT  (2,4-D  dengan BAP)  menunjukkan  hasil  berpengaruh sangat  nyata  terhadap  luasan  kalus. Pengaruh  penyinaran  dan  ZPT  (2,4-D dengan BAP) terhadap rata-rata luasan kalus (Tabel 2).
Tabel 2. Pengaruh penyinaran dan ZPT (2,4-D dengan BAP) terhadap rata-rata luasan kalus (cm 2 )
Keterangan: Angka-angka yang diikuti huruf yang sama pada baris yang sama menunjukkan berbeda tidak nyata pada uji lanjut DMRT 5%.
Berdasarkan Tabel 2,
menunjukkan bahwa perlakuan
penyinaran  berpengaruh  tidak  nyata terhadap  luasan  kalus.  Pada  umur  8 MST kondisi penyinaran L 1 menghasilkan  luas  kalus  dengan  nilai rerata  0,73  cm 2 dan  penyinaran  L 2 dengan  luas  rerata  0,83  cm 2 . Sedangkan, pada umur 10 MST kondisi penyinaran L 1 menghasilkan rerata luas kalus  0,89  cm 2 dan  penyinaran  L 2 dengan  luas  rerata  1,02  cm 2 .  Cahaya memberikan pengaruh terhadap pertumbuhan kalus gandarusa. [14] Berdasarkan  hasil  uji  lanjut diperoleh perlakuan ZPT (2,4-D dengan
BAP)  bepengaruh  sangat  nyata terhadap  luasan  kalus,  dengan  hasil rerata  terluas  pada  perlakuan  ZPT  K 2 , yaitu  1,16  cm 2 (8  MST)  dan  1,36  cm 2
(10  MST).  Lalu,  diikuti  dengan perlakuan  ZPT  K 1 ,  dengan  nilai  rerata 0,99  cm 2 (8  MST)  dan  perlakuan  ZPT K 3 ,  dengan  nilai  rerata  1,08  cm 2 (10 MST). Kemudian, diikuti perlakuan ZPT K 3 , dengan nilai rerata 0,93 cm 2 (8 MST) dan  perlakuan  ZPT  K 1 ,  dengan  nilai rerata 1,05 cm 2 (10 MST). Sedangkan, nilai rerata terkecil diperoleh perlakuan tanpa ZPT K 0, sebesar 0,04 cm 2 (8 MST) dan 0,09 cm 2 (10 MST). Hal ini diduga pada konsentrasi ZPT (2,4-D 2 mg/L +
Umur Tanaman Penyinaran ZPT (2,4-D+BAP) (mg/L) Rata-rata 0 (K 0 ) 1+0,5 (K 1 ) 2+0,5 (K 2 ) 3+0,5 (K 3 ) -----------------------------(cm 2 )-------------------------- 8 MST 16 jam (L 1 ) 0,06 1,03 0,99 0,85 0,73 24 jam (L 2 ) 0,03 0,95 1,32 1,01 0,83 Rata-rata 0,04b 0,99a 1,16a 0,93a 0,78 10 MST 16 jam (L 1 ) 0,14 1,13 1,30 0,99 0,89 24 jam (L 2 ) 0,04 1,07 1,64 1,32 1,02 Rata-rata 0,09b 1,10a 1,47a 1,16a 0,96
BAP  0,5  mg/L)  optimal  untuk  luasan kalus.  Hasil  penelitian  Rofiqoh  (2018) interaksi ZPT 2,4-D dan 0,5 mg/L BAP mampu  membentuk  persen  luasan kalus  eksplan C.  pubescens sebesar 99%. [15]

## Tekstur dan Warna Kalus
Tekstur  kalus  dapat  dibedakan menjadi  tiga  macam,  yaitu:  kompak ( compact ),  intermediet  dan  remah ( friable ). [16] Pada penelitian ini diperoleh kalus dengan  tekstur  bervariasi didominasi  dengan  jumlah  kalus  yang
bertekstur remah sebanyak 42, intermediet  sebanyak  2  dan  kompak sebanyak 10.
Secara  visual,  kalus  remah memiliki  tekstur  lunak  dan  terdiri  dari sel-sel dengan banyak ruang antar sel, sedangkan  kalus  kompak  terdiri  dari sel-sel kecil yang sangat rapat, memiliki terkstur padat dan keras.
Massa  kalus  yang  terdiri  dari kelompok  sel-sel  yang  sebagian kompak  dan  lainnya  remah  disebut kalus intermediet. [16]
Gambar 2. Tekstur dan warna kalus. a) Remah-kuning, b) Intermediet-kuning, dan c) Kompak-hijau
Warna kalus menunjukkan tampilan  visual  sel-sel  kalus,  sehingga dapat  diketahui  tingkat  keaktifan pembelahan sel-selnya.
Hasil
pengamatan menunjukkan warna kalus dari kondisi penyinaran 16 jam dominan berwarna kuning keputihan dan kuning kecoklatan, dikarenakan masa penggelapan  8  jam  untuk  perlakuan tersebut.  Sedangkan,  kondisi  24  jam
terang  dominan  berwarna  hijau kekuningan,  warna  hijau  pada  kalus menunjukkan kalus mengandung klorofil.
Kondisi  lama  penyinaran  yang terus  menerus  selama  24  jam  kalus akan berwarna hijau. [17] Berikut gambar pertumbuhan  kalus  daun  jambu  air Cincalo Weha pada berbagai perlakuan.
Gambar 3. Pertumbuhan kalus daun jambu air Cincalo Weha pada umur 8 MST
Persentase eksplan berkalus (%)
Pembentukan  kalus  merupakan salah satu indikator adanya pertumbuhan  dalam  kultur  jaringan yang ditandai dengan
adanya pembengkakan  pada  potongan  akibat
pelukaan pada eksplan. Pada penelitian ini persentase eksplan berkalus diamati secara visual pada 10 MST. Persentase eksplan  berkalus  dapat  dilihat  pada grafik berikut.
b a c L 1 K 0
L 1 K 1 L 1 K 2 L 1 K 3 L 2 K 0 L 2 K 1
L 2 K 2 L 2 K 3
Gambar 4. Grafik persentase eksplan berkalus dengan kombinasi perlakuan penyinaran dan ZPT (2,4- D + BAP)
Pada  Gambar  4,  menunjukkan hasil  bahwa  eksplan  yang  membentuk kalus sebesar 84,38%. Pada kombinasi perlakuan  L 1 K 1 ,  L 1 K 2 ,  L 1 K 3 ,  L 2 K 1 ,  L 2 K 2 , dan  L 2 K 3 menghasilkan  persentase eksplan  berkalus  sebesar  100%. Kemudian,  diikuti  kombinasi  perlakuan L 1 K 0 dengan  persentase  sebesar 62,50%.  Kombinasi  perlakuan  L 2 K 0
menghasilkan  persentase  eksplan berkalus rendah, yakni 12,50%.

## Persentase Kalus Embriogenik (%)
Pada penelitian ini terdapat kalus berwarna  putih  atau  krem  dengan tekstur kalus remah yang menunjukkan kalus embriogenik.
Gambar 5. Kalus. a) Kalus embriogenik dan b) indikasi pertunasan pada kalus
Kalus embriogenik memiliki
karakteristik  struktur  kalus  kering, mengkilat,  berwarna  putih  kekuningan
dan  bertekstur  remah  ( friable ). [18] Data persentase  kalus  embriogenik  yang disajikan dalam (Tabel 3).
Tabel 3. Persentase kalus embriogenik Perlakuan Persentase Kalus Embriogenik (%) L 1 K 0
0%
L 1 K 1
37,5% L 1 K 2 25% L 1 K 3 0% L 2 K 0 0% L 2 K 1 12,5% L 2 K 2 25% L 2 K 3 12,5% Total 14,06% Berdasarkan  Tabel  3,  eksplan yang  membentuk  kalus  embriogenik
sebanyak  9  dari  64  eksplan,  sehingga didapatkan persentase
kalus
62.50% 100% 100% 100% 12.50% 100% 100% 100% 0% 25% 50% 75% 100% L1K0 L1K1 L1K2 L1K3 L2K0 L2K1 L2K2 L2K3 Kombinasi Penyinaran dan ZPT (2,4-D + BAP) Persentase Eksplan Berkalus (%) a b
embriogenik sebesar 14,06%. Terbentuknya kalus embriogenik dipengaruhi oleh zat pengatur tumbuh (ZPT) 2,4-D dan BAP pada media MS. Media  MS  dengan  penambahan kombinasi ZPT 2,4-D dan BAP mampu menghasilkan kalus embriogenik. [19]
Persentase
Kalus Membentuk

## Embrio Somatik (%)
Perkembangan  kalus  embrio somatik  pada  tanaman  dikotil  melalui beberapa fase, yaitu fase globular, fase hati, fase torpedo dan fase kotiledonari.

## Persentase Fase Globular
Embrio  somatik  fase  globular dicirikan  massa  sel  dengan  bentuk bulat.  Pada  penelitian  ini,  kalus  yang mengalami  fase  globular  memiliki warna  bening  dan  krem  kekuningan. Kalus yang berbentuk globular (nodul- nodul)  dan  berwarna  bening  memiliki kemampuan lebih tinggi untuk membentuk tunas. [20]
Berdasarkan  Tabel  4,  eksplan yang membentuk fase globular sebanyak  5  dari  64  eksplan,  sehingga didapatkan  persentase  fase  globular mencapai 7,81%.
Tabel 4. Persentase kalus membentuk embrio somatik Perlakuan Persentase Fase Globular (%) Persentase Fase Hati (%) Persentase Fase Kotiledonari (%) Persentase Fase Torpedo (%) L 1 K 0 0% 0% 0% 0% L 1 K 1 25% 0% 0% 12,5% L 1 K 2 12,5% 0% 0% 12,5% L 1 K 3 12,5% 12,5% 25% 12,5% L 2 K 0 0% 0% 0% 0% L 2 K 1 0% 0% 0% 0% L 2 K 2 12,5% 0% 12,5% 0% L 2 K 3 0% 0% 0% 0% Total 7,81% 1,56% 4,69% 4,69%

## Persentase Fase Hati
Fase  hati  merupakan  fase  yang akan  terbentuk  setelah  fase  globular. Fase heart-shaped adalah ketika terlihat pendataran dan penonjolan pada kedua sisi  daerah  terminal,  sehingga  massa sel  membentuk  struktur  mirip  dengan jantung. [20]
Berdasarkan  Tabel  4,  eksplan yang membentuk fase hati hanya 1 dari 64  eksplan,  sehingga  didapatkan persentase  fase  hati  sebesar  1,56%. Pada  penelitian  ini  fase  hati  memiliki warna  krem  kekuningan  dengan adanya penonjolan di sisi kanan dan sisi kiri,  serta  terlihat  pembelahan  pada bagian tengahnya.

## Persentase Fase Torpedo
Fase  torpedo  adalah  salah  satu fase  yang  akan  terbentuk  setelah  fase
hati. Fase torpedo merupakan fase hati yang  mengalami  pemanjangan  embrio dengan  pola  jaringan  yang  sama dengan fase hati. [21]
Pada  Tabel  4,  eksplan  yang membentuk  fase  torpedo  sebanyak  3 dari  64  eksplan,  sehingga  didapatkan persentase  fase  torpedo  mencapai 4,69%.  Kalus  yang  membentuk  fase torpedo  pada  penelitian  ini  memiliki warna  krem  kekuningan  dengan adanya penonjolan di sisi kanan dan sisi kiri,  seperti  embrio  fase  hati  dengan pertumbuhan memanjang.

## Persentase Fase Kotiledonari
Fase  kotiledonari  adalah  fase yang  terbentuk  setelah  melewati  fase torpedo.
Pada fase kotiledon pertumbuhan embrio somatik
memanjang  dan  polaritas  embrio somatik dapat dilihat dengan jelas. [21] Pada  Tabel  4,  eksplan  yang membentuk fase kotiledonari sebanyak 3 dari 64 eksplan, sehingga didapatkan
persentase  fase  kotiledonari  4,69%. Kalus yang membentuk fase kotiledonari pada penelitian ini berwarna hijau kekuningan.
Gambar 6. Embrio somatik (a) fase globular, (b) fase hati, (c) fase torpedo, (d) fase kotiledonari
Persentase Browning (%)
Pencoklatan
( browning ) merupakan  salah  satu  karakteristik pada eksplan dengan munculnya warna coklat atau hitam yang  mengakibatkan kemunduran fisiologis eksplan.
Berdasarkan  data  yang  disajikan  pada Tabel  5,  jumlah  eksplan  yang mengalami browning sebanyak  23 eksplan  dengan  nilai  total  persentase eksplan browning sebesar 35,94%.
Tabel 5. Persentase eksplan browning Perlakuan Persentase Eksplan Browning (%) L 1 K 0
62,5% L 1 K 1
50% L 1 K 2
12,5%
L 1 K 3
37,5% L 2 K 0
50%
L 2 K 1 37,5%
L 2 K 2 12,5%
L 2 K 3 25% Total 35,94% Pencoklatan diduga
karena pelukaan  berlebihan  yang  dilakukan saat  melakukan  pemotongan  eksplan dan  spesies  tanaman  berkayu  yang memiliki  senyawa  fenolik. Browning dapat  disebabkan  karena  faktor  teknis dari cara pengkulturan, karena senyawa  fenolik  biasanya  muncul  dan
terakumulasi  ketika  eksplan  dilukai. [22] Eksplan  yang  diambil  dari  tanaman dewasa  dan  spesies  tanaman  berkayu juga  sering  mengalami  masalah browning (pencoklatan). [23] Berikut contoh  eksplan  daun  yang  mengalami browning pada penyinaran 16 jam dan tanpa ZPT (2,4-D + BAP) (L 1 K 0 ).
Gambar 7. Penampilan eksplan yang mengalami browning
Browning pada  penelitian  ini hanya  terjadi  pada  eksplan,  namun tidak  pada  media  tanam.  Hal  tersebut
dikarenakan  pada  media  tanam ditambahkan ascorbic  acid sebanyak 100 mg/L untuk meminimalisir
MST 2 MST 8 a b a
c d
terjadinya browning .  Metode  lain  yang dilakukan  untuk  mengurangi  senyawa fenol  pada  eksplan  yaitu  dengan penambahan antioksidan
PVP
sebanyak 300 mg/L.
Penambahan ascorbic  acid dan antioksidan  PVP  dapat  meminimalisir pencoklatan pada media dan mengurangi  senyawa  fenol  pada eksplan dalam kultur jaringan. [24]
Persentase Kontaminasi (%) Salah satu faktor pembatas dalam keberhasilan  kultur  jaringan  adalah kontaminasi  yang  dapat  terjadi  pada setiap  saat  dalam  masa  kultur.  Pada penelitian  ini  menunjukkan  bahwa tingkat kontaminasi yang terjadi adalah 0%.  Hasil  ini  didapatkan  dari  tidak adanya jumlah kontaminasi yang terjadi
pada 64  eksplan  yang  ditanam.  Media dan  eksplan  yang  diamati  tidak mengalami tanda-tanda adanya mikroorganisme yang tumbuh.
Pencegahan  kontaminasi  dapat dilakukan  dengan  cara  melakukan teknik  sterilisasi  yang  tepat,  baik terhadap eksplan yang digunakan, alat, media,  serta  lingkungan  kerja. [25] Penggunaan  PPM  pada  media  kultur digunakan  dalam  penelitian  ini  untuk meminimalisir  terjadinya  kontaminasi. Penambahan  PPM  sebanyak  0,5  ml/L pada media mampu mencegah terjadinya  kontaminasi  pada  media maupun eksplan. Pemberian 0,5 – 1 ml/L PPM efektif untuk  mensterilkan  media  MS  dari pengaruh kontaminan. [26]

## 4.  Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat  disimpulkan  bahwa  perlakuan penyinaran tidak berpengaruh terhadap parameter  diameter  kalus  umur  8  dan 10 MST dan luasan kalus umur 8 dan 10 MST  pada  eksplan  daun  jambu  air ( Syzygium aqueum ) var. Cincalo Weha. Perlakuan  ZPT  (2,4-D  dengan  BAP) sangat berpengaruh
terhadap parameter diameter kalus umur (8 dan 10 MST) dan luasan kalus umur (8 dan
10 MST). ZPT (2,4-D 2 mg/L + BAP 0,5 mg/L) memberikan pertumbuhan optimal  dengan  rata-rata  terluas diameter  kalus  8  MST  (1,05  cm),  10 MST (1,24 cm) dan luasan kalus 8 MST (1,16 cm 2 ) dan 10 MST (1,47 cm 2 ). Eksplan yang telah memasuki usia 6  MST  sebaiknya  dilakukan  subkultur untuk dapat memaksimalkan pertumbuhan kalus pada eksplan.

## Daftar Pustaka
[1] M. B. Sibuea, M. Thamrin, and J. Tarigan, “Kajian Efisiensi Pemasaran Jambu Air King Rose  Apple ,” Jurnal  Ilmu  pertanian  Agrium ,  vol.  18,  no.  2,  pp.  162 – 168,  2013,  doi: https://doi.org/10.30596/agrium.v18i2.359.
[2] BPS (Badan Pusat Statistik), “Produksi Buah– buahan dan Sayuran Tahunan Menurut Jenis Tanaman di Kota Tangerang (Ton), 2018 –2020. Tangerang.” Accessed: Sep. 22, 2022.  [Online].  Available:  https://tangerangkota.bps.go.id/indicator/55/203/1/produksi- buah-buahan-dan-sayuran-tahunan-menurut-jenis-tanaman-di-kota-tangerang.html
[3] M.  Rizki,  M.  Syaifuddin,  and  Z.  Panjaitan,  “Sistem  Pendukung  Keputusan untuk Menentukan Bibit Jambu Air Terunggul Pada UPT.BIH Gedung Johor dengan Metode Visekriterijumsko I Optimizacija Kompromisno Rangiranje (VIKOR),” Jurnal CyberTech , vol. 3, no. 11, pp. 1648 – 1659, 2020, doi: https://doi.org/10.53513/jct.v3i11.3407.
[4] M. A. Ramírez-Mosqueda, L. G. Iglesias-Andreu, and I. J. Luna- Sánchez, “Light Quality Affects Growth and Development of in Vitro Plantlet of Vanilla planifolia Jacks,” South African  Journal  of  Botany ,  vol.  109,  pp.  288 – 293,  Mar.  2017,  doi: 10.1016/j.sajb.2017.01.205.
[5] F.  Yuniardi,  “Aplikasi Dimmer  Switch pada  Rak  Kultur  sebagai  Pengatur  Kebutuhan Intesitas Cahaya Optimum bagi Tanaman in Vitro .,” Indonesian Journal of Laboratory , vol. 2, no. 1, pp. 8 – 13, 2019, doi: https://doi.org/10.22146/ijl.v1i4.52991.
[6] R. Kumar, R. Verma, R. Choudhary, and M. L. Jakhar, “Effect of Photoperiod on in Vitro Culture of Pomegranate cv. Sindhuri,” Res J.  Chem. Environ. Sci. , vol. 6, no. 3, pp. 50 – 54, 2018, [Online]. Available: www.aelsindia.com/rjces.htm
[7] P. Kartikasari et al. , “Pengaruh Zat Pengatur Tumbuh 2,4 -D (2,4- Dichlorophenoxyacetic acid )  dan  Kinetin  (6- Furfurylaminopurine )  untuk  Pertumbuhan  Tunas  Eksplan  Pucuk Tanaman  Jabon  ( Anthocephalus  cadamba Miq.  ex  Roxb.)  secara in  Vitro ,” Jurnal LenteraBio , vol. 2, no. 1, pp. 75 – 80, 2013, [Online]. Available: http://ejournal.unesa.ac.id/index.php/lenterabio
[8] E.  G.  Lestari et  al. ,  “Peranan  Zat  Pengatur  Tumbuh  dalam  Perbanyakan  Tanaman melalui  Kultur  Jaringan,” Jurnal  AgroBiogen ,  vol.  7,  no.  1,  pp.  63 – 68,  2011,  doi: 10.21082/jbio.v7n1.2011.p63-68.
[9] M.  Ummah,  K.  Mashluhah,  and  R.  S.  Resmisari,  “Conservation of  Juwet  ( Syzygium cumini ) Plant Using i n Vitro Culture Techniques,” Jurnal Biologi El-Hayah , vol. 7, no. 3, pp. 106 – 112, Jul. 2020, doi: 10.18860/elha.v7i3.10056.
[10] M. Sari and M. N. Isda, “The Response of Callus Formation from Tacca chantrieri Leaves with Various Concentrations of 2,4-D and BAP by i n Vitro,” Jurnal Biologi UNAND , vol. 9, no. 1, pp. 8 – 17, Jun. 2021, doi: 10.25077/jbioua.9.1.8-17.2021.
[11] P.  I.  Indah  and  D.  Ermavitalini,  “Induksi  Kalus  Daun  Nyamplung ( Calophyllum   inophyllum Linn.)  pada  Beberapa  Kombinasi   Konsentrasi  6- Benzylaminopurine (BAP) dan  2,4- Dichlorophenoxyacetic Acid (2,4- D),” Jurnal Sains dan Seni POMITS , vol. 2, no. 1, pp. 1 – 6, 2013, doi:
https://dx.doi.org/10.12962/j23373520.v2i1.2571.
[12] A.  Shofiyani,  “Pengembangan  Kultur  Kalus  Kencur  ( Kaempferia  galanga Linn)  dan Metode Elisitasi Ultraviolet- B untuk Produksi Senyawa Bioaktif Fenol.,” Doctoral thesis, Universitas  Jenderal  Soedirman,  Purwokerto,  2023.  [Online].  Available: https://repository.unsoed.ac.id/23460/
[13] N. I. Toharah, D. Soelistya, D. Jekti, and L. Zulkifli, “Pertumbuhan Kalus Daun Melon ( Cucumis melo ) Varietas Mai 119 dengan Pemberian BAP ( Benzyl Amino Purine ) dan 2,4-D (2,4 Dichlorophenoxyacetic Acid ).,” Jurnal  Penelitian Pendidikan IPA , vol. 1, no. 2, pp. 38 – 48, 2015, doi: 10.29303/jppipa.v1i2.17.
[14] D. K. Wahyuni, A. Huda, S. Faizah, H. Purnobasuki, and B. P. E. Wardojo, “Effects of Light,  Sucrose  Concentration  and  Repetitive  Subculture  on  Callus  Growth  and Medically Important Production in Justicia gendarussa Burm.f.,” Biotechnology Reports , vol. 27, pp. 1 – 9, Sep. 2020, doi: 10.1016/j.btre.2020.e00473.
[15] I.  Rofiqoh,  “Induksi  Kalus  Embriogenik Carica  pubescens Lenne  &  K.   Koch menggunakan 2,4- Dichlorophenoxy Acetic Acid (2,4-D) dan BAP (6-Benzylaminopurin) secara in Vitro ,” Skripsi, UIN Maulana Malik Ibrahim., Malang, 2018.
[16] Y. Rasud and B. Bustaman, “Induksi Kalus secara in Vitro dari Daun Cengkeh ( Syzygium aromaticum L.)  dalam  Media  dengan  Berbagai  Konsentrasi  Auksin.,” Jurnal  Ilmu Pertanian Indonesia , vol. 25, no. 1, pp. 67 – 72, Jan. 2020, doi: 10.18343/jipi.25.1.67.
[17] I. Kristanti, N. Aini Habibah, and L. Herlina, “Optimasi Konsentrasi 2,4 -D, Ba, dan Lama Penyinaran untuk Memacu Regenerasi Tunas dari Kalus Kedelai,” Jurnal Biosaintifika , vol. 5, no. 1, pp. 50 – 57, 2013, doi: 10.15294/biosaintifika.v5i1.3923.
[18] V. N. Hidayah and P. Dewanti, “Pengaruh Kombinasi BAP (6 - Benzylaminopurine ) dan 2,4-D  ( Dichlorophenoxy  acetic  acid )  untuk   Pembentukan  Kalus  Tebu  ( Saccharum
officinarum L.) Melalui Metode Thin Cell Layer ,” Jurnal Agrotek Tropika , vol. 11, no. 1, pp. 89 – 95, Jan. 2023, doi: 10.23960/jat.v11i1.5141.
[19] I.  Mahadi,  W.  Syafi’i,  and  Y.  Sari,  “Induksi  Kalus  Jeruk  Kasturi  ( Citrus   microcarpa ) Menggunakan Hormon 2,4-D dan BAP dengan Metode in  Vitro ,” Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia , vol. 21, no. 2, pp. 84 – 89, Aug. 2016, doi: 10.18343/jipi.21.2.84.
[20] Hartati, H. Agani, N. S. Hartati, and E. Sudarmonowati, “Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik Embriogenik Terung Pada Beberapa Media Maturasi,” Jurnal Ilmu Dasar , vol. 19, no. 2, pp. 125 – 134, 2018, [Online]. Available:
https://jurnal.unej.ac.id/index.php/JID/article/download/6260/5700/
[21] Yelnititis, “Induksi Embrio Somatik Shorea pinanga Scheff. Pada Kondisi  Fisik Media Berbeda,” Jurnal  Pemuliaan  Tanaman  Hutan ,  vol.  7,  no.  2,  pp.  73 – 84,  2013,  doi: 10.20886/jpth.2013.7.2.73-84.
[22] L.  Admojo  and  A.  Indrianto,  “Pencegahan  Browning  Fase  Inisiasi  Kalus  Pada  Kultur Midrib  Daun  Klon  Karet  ( Hevea  brasiliensis Muell.  ARG)  PB  330,” Jurnal  Penelitian Karet , vol. 34, no. 1, pp. 25 – 34, 2016, doi: 10.22302/ppk.jpk.v34i1.220.
[23] S. B. Sainawal, J. D. Nugroho, and F. F. Kesaulija, “Kultur Embrio Merbau ( Intsia bijuga OK.) pada Media Murashige and Skoog (MS) diperkaya dengan Zat Pengatur Tumbuh BAP, GA3 dan IBA,” Jurnal Kehutanan Papuasia , vol. 3, no. 2, pp. 132 – 141, 2017, doi: 10.46703/jurnalpapuasia.Vol3.Iss2.168.
[24] G. Akhtar, M. J. Jaskani, Y. Sajjad, and A. Akram, “Effect of Antioxidants, Amino Acids and  Plant  Growth  Regulators  on  in  Vitro  Propagation  of Rosa  centifolia ,” Iran  J Biotechnol , vol. 14, no. 1, pp. 51 – 55, Dec. 2016, doi: 10.15171/ijb.1152.
[25]  R.  H.  Sulistiyo et  al. ,  “Pengaruh  Teknik  Sterilisasi  dan Komposisi  Medium  terhadap Pertumbuhan Tunas Eksplan Sirsak Ratu,” BIOEDUKASI: Jurnal Pendidikan Biologi , vol. 11, no. 1, pp. 1 – 5, 2018, doi: 10.20961/bioedukasi-uns.v11i1.19726.
[26] N.  Syatria,  “Penggunaan Plant  Preservative  Mixture (PPM)  untuk  Sterilisasi   Eksplan dan  Media  pada  Kultur in  Vitro ,”  in Prosiding  Seminar  Nasional   Bioteknologi  IV Universitas Gadjah Mada. Program Studi S2/S3 Sekolah  Pascasarjana UGM. , 2017, pp. 257 – 272. [Online]. Available: http://pasca.ugm.ac.id