Validasi Metode dan Penetapan Kadar Nitrit (NO2) pada Hasil Rebusan Sayuran Hijau (Kangkung, Brokoli, Seledri) Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis

## Romsiah dan Tria Meidalena

## Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Bhakti Pertiwi Palembang
Intisari: Telah  dilakukan  penelitian  tentang  penetapan  kadar  nitrit  (NO2)  pada  beberapa  sayuran  yaitu kangkung,  brokoli,  dan  seledri.  Sayur  kangkung  diperoleh  dari  kebun  warga  daerah  Kenten,  Palembang, sedangkan sayur brokoli dan seledri diperoleh dari salah satu swalayan di kota Palembang. Kandungan nitrit ditentukan  dari  hasil  air  rebusan  sampel  sayuran  dengan  metode  spektrofotometer  UV-Vis.  Dari  hasil penelitian ini diperoleh nilai kandungan nitrit untuk hasil air rebusan sayuran dengan variasi waktu 5, 15, 20, 25, dan 30 menit. Untuk hasil air rebusan sayur kangkung diperoleh 0,664 mg/kg; 0,665 mg/kg; 0,685 mg/kg; 0,702  mg/kg;  0,710mg/kg.  Untuk  hasil  air  rebusan  sayur  brokoli  diperoleh  0,646  mg/kg;  0,647  mg/kg;  0,650 mg/kg; 0,680 mg/kg; 0,704 mg/kg. Untuk hasil air rebusan sayur seledri diperoleh 0,718 mg/kg; 0,730 mg/kg; 0,818 mg/kg; 0,821 mg/kg; 0,849 mg/kg. Dari hasil perebusan pada sayuran kangkung, brokoli, seledri masih aman sesuai dengan ketentuan ADI (Acceptable Daily Intake)/ jumlah asupan harian  menurut WHO (World Health Organization).
Kata kunci: Penetapan kadar, nitrit, sayuran, spektrofotometer UV-Vis
Abstract: The  research  determination  content  of  nitrite  (NO2)  in  some  vegetables  are  kale,  broccoli,  and celery. Vegetable kale were obtained from garden local residents  Kenten, Palembang. While the vegetable broccoli  and  celery  obtained  from  one  of  the  supermarkets  in  the  city  of  Palembang.  Nitrite  content  is determined from the results of water samples vegetable stew  with UV-Vis spectrophotometer method. From these results obtained value for the water content of nitrite vegetable stew with variations in time 5, 15, 20, 25 and  30  minutes.  For  the  results  obtained  kale  vegetable  cooking  water  to  0.664  mg/kg;  0.665  mg/kg;  0.685 mg/kg; 0.702 mg/kg; 0.710 mg/kg. For broccoli vegetable cooking water results obtained 0.646 mg/kg; 0.647 mg/kg;  0.650  mg/kg;  0.680  mg/kg;  0.704  mg/kg.  For  the  results  obtained  celery  vegetable  cooking  water  to 0.718  mg/kg;  0.730  mg/kg;  0.818  mg/kg;  0.821  mg/kg;  0.849  mg/kg.  Results  of  boiling  the  vegetable  kale, broccoli, celery is still safe in accordance with the ADI (Acceptable Daily Intake) / daily intake according to WHO (World Health Organization).
Keywords: Determination content, nitrite, vegetable, UV-Vis spectrophotometer
Email: romsiahchan@gmail.com

## 1 PENDAHULUAN
itrat  (NO3)  dan  nitrit  (NO2)  adalah  ion-ion anorganik alami, yang merupakan bagian dari siklus nitrogen. Nitrat dan  nitrit adalah produk dari oksidasi nitrogen oleh aktifitas mikroba di tanaman, tanah, dan air. Nitrogen bebas  berasal dari udara, unsur  nitrogen  hanya  dapat  dimanfaatkan  oleh tumbuhan seperti sayuran. Dalam sayuran mengan- dung  nitrat/  nitrit  dalam  kadar  yang  bervariasi  ter- gantung musim, tanah, dan berbagai hal yang dapat mempengaruhi  tinggi  rendahnya  kandungan  nitrat/ nitrit (Hord dkk, 2009).
Nitrat (NO3) merupakan senyawa nitrogen yang dapat  terdegradasi  menjadi  nitrit  (NO2).  Nitrit  me- rupakan senyawa yang tidak stabil dan dapat berin-
teraksi  dengan  senyawa  lain  didalam  proses  pen- cernaan  sehingga  membentuk  nitrosamine.  Nitro- samine  merupakan  zat  yang  beracun  dan  bersifat karsinogenik  (meningkatkan  resiko  terjadinya  kank- er) (Hord dkk, 2009).
Beberapa sayuran  hijau  seperti bayam, brokoli, selada,  bit,  seledri  memiliki  kandungan  nitrit  yang tinggi, tingkat kandungan nitrit pada tanaman sayu- ran akan menjadi lebih tinggi tergantung dari faktor- faktor  yang  dapat  mempengaruhinya  seperti  kan- dungan  dan  bentuk  nitrogen  dalam  tanah,  kondisi tanah, kurangnya aliran cahaya yang dapat me nye- babkan  kurangnya  keaktifan  enzim  nitrat  reduktase dimana  enzim  ini  berfungsi  untuk  mencegah  terja- dinya  penimbunan  nitrat  atau  nitrit.  Penggunaan herbisida dan pupuk juga dapat meningkatkan  dan
N
menyebabkan  penimbunan  nitrat/  nitrit  pada  tana- man sayuran, selain itu kandungan nitrit juga dapat meningkat karena adanya proses pengolahan seper- ti perebusan yang terlalu lama dan pemanasan yang berulang (Suwandi, 2005).
Nitrit (NO2) sebaiknya dihindari bagi bayi yang be- rusia kurang dari 6 bulan karena nitrit dapat meng- halan  gi kemampuan darah untuk  membawa ok- sigen  (dalam  bentuk  haemoglobin).  Nitrit  akan mengubah  haemoglobin  menjadi methaemoglobin (protein yang tidak dapat membawa oksigen), keja- dian  ini  sering  disebut  dengan  “ Blue  Baby  Syn- drome ”, (sindrom bayi biru) (Manalu, 2011).
Pada  penelitian  sebelumnya  di  Inggris,  Kolom- bia,  Chili,  Jepang,  Denmark,  Hungaria,  dan  Italia disebutkan bahwa asupan tinggi nitrit telah ditemu- kan terkait dengan kanker lambung di negara terse- but (Forman dan Shuker, 1997) dan menurut pene- litian dari Suwandi (2005) menyatakan bahwa jenis- jenis tanaman seperti kangkung, teki-tekian, spesies talas-talasan,  rumput-rumputan  berpotensi  menim- bun nitrit.
Penelitian  Manalu  (2011)  diketahui  bahwa  hasil rebusan  sayur  bayam  dengan  variasi  waktu  yang berbeda  mengalami  peningkatan  kandungan  nitrit dengan  hasil  ±  428  g.  Hasil  penelitian  Rezaei  dkk (2014)  diketahui  bahwa  rebusan  dari  seledri  me- ningkatkan  kandungan  nitrit  lebih  tinggi  dari  yang direkomendasikan WHO.
WHO  ( World  Health  Organization )  menetapkan jumlah asupan harian/ ADI ( Acceptable Daily Intake ) untuk  nitrit adalah 0- 0,07 mg/kg untuk 60 kg berat badan manusia.
Berdasarkan  hal  tersebut  diatas  maka  penulis tertarik untuk melakukan penelitian lebih lanjut ter- hadap perubahan kandungan nitrit (NO2) pada re- busan  beberapa  sayuran  yaitu  kangkung,  brokoli, dan  seledri  yang  dilakukan  dengan  menggunakan spektrofotemeter Uv-Vis.

## 2 METODE PENELITIAN

## Alat
Neraca analitik, Gelas ukur (Pyrex),  Labu ukur (Py- rex), Erlenmeyer (Pyrex), Pipet volume (Pyrex), Spa- tula,  Spektrofotometer  Uv-Vis  (Uv  shimadzu  1700), Botol  aquadest,  Mortir,  Sendok  kecil,  Pengaduk, Hotplatestrirrer  (Thermo),Penyaring  (Millipore), Stopwatch.

## Bahan
Sulfanilamide  (p.a  merck),  N-(1-naftil)  etilendiamin dihidroklorida (p.a merck), Larutan nitrite standard solution (NO2), Sayuran kangkung, seledri, brokoli, Aquabidest,    Asam  klorida  pekat  (HCl)  p,  Karbon aktif.

## 3 PROSEDUR

## Validasi Metode
validasi  Metode  Analisis  adalah  proses  pembuktian atau konfirmasi pengujian yang objektif di Laborato- rium, dan bahwa metode itu memenuhi persyaratan yang  telah  ditentukan,  yang  sesuai  dengan  tujuan penggunaannya (Ibrahim,2007).
a. Pembuatan Kurva Kalibrasi (Linieritas)
Kurva kalibrasi diperoleh dengan memplot konsen- trasi  (0,0;  0,01;  0,05;  0,1;  0,15;  0,2  ppm)  terhadap absorbansi  rata-rata  (3x  pengulangan)  hasil  pengu- kuran dari setiap konsentrasi. Persamaan garis yang diperoleh,  selanjutnya  ditentukan  derajat  linieritas melalui  penentuan  koefisien  korelasi  dan  koefisien variasi regresi.
b. Kecermatan (Akurasi)
Di ambil dari salah satu sampel, timbang 10 g sam- pel yang telah dihaluskan (rajang halus)  kemudian dimasukkan  dalam  gelas  ukur  ditambahkan  0,5  g serbuk  karbon  aktif  dan  di  tambahkan  aquabides sampai volume 100 ml dibiarkan 5 menit lalu di sar- ing  dan  dimasukkan  dalam  labu  ukur  50  ml.  Di tambahkan  1  ml  larutan  sulfanilamide  didiamkan  5 menit    dan  1  ml  larutan  N  (1-naftil)  etilendiamin dihidroklorida  didiamkan  5  menit,  dan  di  baca  ab- sorbansinya  pada  spektrofotometer    uv-vis  pada panjang gelombang 543 nm.  Kemudian, Untuk pe- nambahan larutan standar 5 ppm siapkan labu ukur 10 ml, dengan cara masukan 0,1 ml larutan standar 5 ppm  ke dalam labu ukur 10 ml dengan menggu- nakan alat mikropipet lalu  tambahkan larutan sam- pel  yang  sudah  di  siapkan  sebanyak  9,9  ml  atau sampai  tanda  batas.  Kemudian  dianalisa  dengan perlakuan yang sama seperti pada penetapan kadar sampel.
c. Presisi
Presisi  dinyatakan  dalam  koefisien  variansi  (KV) yang dapat diperoleh dari pengukuran. Pengukuran respon dilakukan sebanyak enam kali. Kriteria pene- rimaan presisi adalah KV≤5%.
Penetapan  Kadar  Nitrit  pada  Kangkung,  Bro- koli, Seledri tanpa Direbus
Ditimbang  masing-masing  10  g  sayuran  segar  yang telah dihaluskan (rajang halus)  kemudian dimasuk- kan  dalam  gelas  ukur  ditambahkan  0,5  g  serbuk karbon  aktif  dan  di  tambahkan  aquabides  sampai volume 100 ml dibiarkan 5 menit lalu di saring dan dimasukkan dalam labu ukur 50 ml. Di tambahkan 1 ml  larutan  sulfanilamide  didiamkan  5  menit    dan  1 ml  larutan  N  (1-naftil)  etilendiamin  dihidroklorida didiamkan  5  menit,  diaduk.  Kemudian  dimasukkan kedalam  kuvet  yang  bersih,  di  baca  absorbansinya pada spektrofotometer  uv-vis pada panjang gelom- bang 543 nm. Dilakukan pengulangan 3 kali. Diana- lisa data.
1. Penetapan Kadar Nitrit pada Kangkung, Brokoli,
Seledri dengan perebusan
Ditimbang  masing-masing  10  g  sayuran  yang  telah dihaluskan  (rajang  halus),  dimasukkan  dalam  gelas ukur  kemudian  ditambahkan  0,5  g  serbuk  karbon aktif  dan  di  tambahkan  aquabides  sampai  volume 100  ml  di  rebus  selama  5  menit,  lalu  dibiarkan  5 menit  dan  di  saring  dan  dimasukkan  dalam  labu ukur  50  ml.  Di  tambahkan  1  ml  larutan  sulfanila- mide didiamkan 5 menit dan 1 ml larutan N (1- naf- til)  etilendiamin  dihidroklorida  didiamkan  5  menit, diaduk. Kemudian dimasukkan kedalam kuvet yang bersih, dibaca absorbansinya pada spektrofotometer uv-vis  pada  panjang  gelombang  543  nm.    Dengan cara  yang  sama  dilakukan  pengukuran  konsentrasi nitrit terhadap rebusan sayuran (15, 20, 25, 30) me- nit. Di lakukan  pengulangan 3 kali. Dianalisa data.
2. Analisa Data
Data  yang  diperoleh  berupa  absorbansi  larutan standar nitrit yang kemudian digunakan dalam me- nentukan kurva kalibrasi, lalu data absorbansi terse- but  dicari  konsentrasi  dengan  memasukkan  nilai absorbansi  ke  persamaan  garis  linier  y  =  ax  +  b. Setelah diperoleh konsentrasi kemudian dicari nilai- nilai validasi metode sesuai dengan rumus yang te- lah  ditentukan  dengan  tujuan  untuk  memastikan bahwa persamaan yang didapat memenuhi  persya- ratan dan dapat digunakan dalam penentuan kadar sampel.  Data  absorbansi  sampel  yang  diperoleh kemudian dihitung rata-rata nya  dan  data  disajikan dalam bentuk tabel.

## 4 HASIL DAN PEMBAHASAN
Penentuan  kurva  kalibrasi  dengan  pengukuran  ab- sorbansi dilakukan pada berbagai konsentrasi nitrit, yaitu 0,0; 0,01; 0,05; 0,1; 0,15; dan 0,2 ppm, selan- jutnya data absorbansi dibuat kurva kalibrasi seperti pada Gambar 1, untuk menghubungkan antara ab- sorbansi dengan konsentrasi sehingga di dapat per- samaan regresi  y = 1,099x + 0,001, dengan korela-
si  (  r  )  =  1,000.  Sebagai  aturan  umum,  nilai  r  > 0,9900 menunjukkan kurva yang baik. Dengan kata lain hasil pengujian parameter linieritas dalam pene- litian ini sudah memenuhi persyaratan yang ada.
Gambar 1. Kurva absorbansi vs konsentrasi larutan seri standar
Pada penelitian ini digunakan karbon aktif seba- nyak  0,5  g  yang  ditambahkan  pada  masing  masing sampel,  hal  ini  bertujuan  untuk  menghilangkan warna  hijau  daun  (klorofil)  pada  saat  pengujian sampel dengan spektrofotometri Uv-vis. Karbon ak- tif  yang  digunakan  menyerap  warna  hijau  klorofil dari  masing-masing  sampel.    Selama  proses  pen- campuran diharapkan tidak ada pengaruh penyera- pan karbon aktif terhadap nitrit pada sampel, Untuk mengetahui  hal  itu  maka  dilakukan  uji  akurasi  (% recovery ).
Akurasi  merupakan  ukuran  ketelitian  metode analisis atau kedekatan nilai terukur (nilai yang dite- rima) dengan nilai sebenarnya (nilai rujukan). Pada penentuan  akurasi  (% recovery )  dilakukan  dengan mengambil  larutan  standar  konsentrasi  5  ppm  dan nilai  % recovery yang  diperoleh  menunjukkan  hasil 102,6%.  nilai  yang  ini  masih  pada  kisaran  yang  di tetapkan,  sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  metode ini  memiliki  akurasi  yang  dapat  diterima  untuk  pe- netapan kadar nitrit.
Pengujian  parameter  presisi  dilakukan  dengan tujuan  untuk  mengetahui  ukuran  ketepatan  suatu hasil analisis pada kondisi analisis yang sama. Kondi- si  analisis  ini  dapat  berupa  peralatan  yang  diguna- kan, analis yang mengerjakan, maupun tempat dan waktu dilakukannya. Menurut Harmita (2004) syarat penerimaan  parameter  presisi  ini  sebagai  berikut  : sangat teliti (% RSD <1), teliti (% RSD 1-2), Sedang (%  RSD  2-5)  dan  tidak  teliti  (%RSD  >5).  Dari  hasil yang didapatkan menunjukan nilai RSD dari 6 kon- sentrasi analit diperoleh sebesar 1,41 % (Teliti). Ber- dasarkan  dari  data  tersebut,  dapat  disimpulkan bahwa metode yang digunakan memiliki presisi baik sesuai dengan persyaratan.
Parameter  selanjutnya  yang  diuji  adalah  LD (Limit  Deteksi)  dan  LK  (Limit  Kuantitasi).  Tujuan penetapan  LD  dan  LK  adalah  untuk  menentukan batas  terendah  konsentrasi  analit,  baik  yang  dapat dianalisis  secara  kualitatif  (LD)  maupun  secara kuantitatif (Lk). Berdasarkan hasil pengukuran yang diperoleh nilai LD sebesar 0,0045 ppm dan nilai LK sebesar  0,015  ppm.  Maka  konsentrasi  analit  teren- dah  yang  dapat  diukur  antara  sinyal  derau  (limit deteksi)  adalah  0,0045  ppm  dan  konsentrasi  teren- dah  yang  dapat  ditentukan  pada  tingkat  ketelitian dan  ketepatan  (limit  kuantisasi)  yang  baik  adalah 0,015 ppm.
Dari  hasil  penelitian  yang  dilakukan  diperoleh nilai kandungan nitrit yang semakin meningkat den- gan  pertambahan  variasi  waktu  (5,  15,  20,  25,  dan 30  menit)  pada  masing-masing  sampel  rebusan (brokoli, kangkung, dan seledri). Adanya penamba- han  larutan  sulfanilamide  dan  NED  dihidroklorida pada  masing-masing  sampel  menyebabkan  Nitrat (NO3) tereduksi menjadi Nitrit (NO2) sehingga laru- tan  yang  tadinya  bening  berubah  warna  menjadi merah  muda  (Diazotasi).  Perebusan  yang  lama  da- pat  mempengaruhi  peningkatan  kadar  nitrit  dan dapat  menyebabkan  terbentuknya  senyawa  nitro- samin.  Nitrosamin  timbul  akibat  adanya  interaksi antara nitrit dan amin sekunder atau tersier. Analisis kadar  nitrit  pada  sampel  rebusan  dengan  (variasi waktu  :  5,  15,  20,  25,  dan  30  menit)  ditentukan menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  untuk  di- amati  absorbansinya  pada  panjang  gelombang  543 nm.
Berdasarkan  perhitungan  yang  telah  dilakukan untuk  hasil  rebusan  sayur  brokoli,  kangkung,  dan seledri  selama  variasi  waktu  (5,  15,  20,  25,  dan  30 menit), maka di peroleh hasil yang dapat dilihat pa- da Tabel 2
Tabel 2. Kadar Nitrit dari sampel sayuran yang direbus
Hasil  dari  masing-masing  sayuran  pada  Tabel  2 tersebut  menunjukkan  kadar  nitrit  pada  sayuran masih  dalam  batas  aman  untuk  dikonsumsi  yang
diperbolehkan  menurut  ADI  (Acceptable  daily  in- take)  atau  jumlah  asupan  harian  menurut  WHO (World  Health  Organization)  yaitu  0-0,07  mg/  kg untuk  60  kg  berat  badan  atau  setara  dengan  4,2 mg/kg berat badan.
Adanya  kandungan  nitrit  pada  sampel  sayuran kangkung, brokoli, dan seledri ini dapat di pengaru- hi  oleh  banyak  faktor  seperti  yang  telah  dijelaskan sebelumnya  bahwa  faktor  perebusan  dapat  mem- pengaruhi  peningkatan  kandungan  nitrit,  selain  itu tempat tumbuhnya, kondisi tanah di  mana  sayuran tersebut ditanam, penggunaan pupuk. Dengan kata lain untuk tiap perebusan pada sayuran disarankan agar  tidak  terlalu  lama  karena  akan  meningkatkan kadar nitrit yang terdapat dalam sayuran itu sendiri. Seperti yang kita ketahui, bahwa nitrit dapat meng- halangi  kemampuan  darah  membawa  oksigen  ke tubuh manusia dan juga dapat meningkatkan resiko terjadinya kanker karena nitrit merupakan senyawa yang tidak stabil  dan dapat berinteraksi  dengan se- nyawa  lain  didalam  proses  pencernaan  manusia sehingga dapat membentuk nitrosamine.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kandungan nitrit  yang  didapat  dari  hasil  perebusan  masing- masing sampel yaitu kangkung, brokoli, dan seledri tidak  melebihi  batas  aman  konsumsi  yang  diperbo- lehkan  sesuai  dengan  ADI  (Acceptable  Daily  In- take)/jumlah asupan harian menurut WHO.

## 5 SIMPULAN
Dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa :
1. kadar  nitrit  pada  sayuran  yang  direbus  dengan variasi  waktu  (5,  15,  20,  25,  30)  menit  ialah sebagai  berikut  :  untuk  kangkung  diperoleh kadar  nitrit  dengan  rentang  dari  0,664  mg/kg  - 0,710  mg/kg,  brokoli  diperoleh  kadar  nitrit dengan rentang dari 0,646 mg/kg - 0,704 mg/kg, seledri  diperoleh  kadar  nitrit  dengan  rentang dari 0,718 mg/kg - 0,849 mg/kg.
2. Pada  proses  perebusan  sayuran  (kangkung, brokoli  dan  seledri),  masih  aman  sesuai  ADI (jumlah  asupan  harian)  yang  ditetapkan  WHO, yaitu  0,07  mg/kg  untuk  60  kg  berat  badan  atau setara dengan 4,2 mg/ kg berat badan.
3. Metode  yang  di  gunakan  sesuai  dan tervalidasi  untuk  menetapkan  kandungan nitrit  pada  sayuran  (kangkung,  brokoli,  dan seledri).

## DAFTAR PUSTAKA  _____________________
[1] Bartsch, H., Oshima, H., Shuker. 1990. Exposure of humans to endogenous N-nitroso compounds:
implications in cancer etiology. Mutation reseacrh, 238.(3), 255-267.
[2] Dachriyanus. 2002. Analisis struktur senyawa organik secara spektrofotometri, Cetakan pertama. Padang; CV. Trianda Anugrah Pratama.
[3] Forman, D and Shuker. 1997. O XVI B.2 Helicobacter pylori and gastric cancer-a case study in moleculer epidemiology. Mutation research. 379.
[4] Harmita. 2004. Petunjuk pelaksanaan validasi metode dan cara perhitungannya. Majalah ilmu kefarmasian, 1,(3), 117-135.
[5] Hord, NG., Tang Y., Bryan NS. 2009. Food sources of nitrates and nitrites: the physiologic context for potential health benefits. the american journal of clinical nutrition, 90,(1), 1-10, Bethesda. USA.
[6] Ibrahim, S. 2007. Makalahpngembangan dan validasi metode analisis . Bandung : Sekolah Farmasi ITB.
[7] Liberatore, P.A. 2015. Spektrofotometri UV–Vis, Laboratory equipment. PT Maja Bintang Indonesia. Jakarta.
[8] Manalu, H. 2011. Analisa perubahan kandungan nitrit (no2) dalam hasil rebusan sayur bayam hijau dengan metode spektrofotometer UV-Vis (Skripsi). Medan. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatra Utara.
[9] Marderosian, A dan Beutler, J. 2004. The review of natural product. University of The Science in Philadelphia College of Pharmacy. Philadelphia. USA.
[10] Najib, A. 31 Oktober 2009. Seledri (Apium graveolans.L). Diakses 27 Februari 2016 dariwww.fitokimiaumi.files.wordpress.com.
[11] Rezaei. M., Fani, A., Moini. L., Mirzajani.P., Malekirad.A., Rafiei. M. 2014. determining nitrate and nitrite content in beverages, fruits, vegetable, and stews marketed in arak, iran (journal). Iran. Arak University of Medical Sciences.
[12] Rukmana, R. 1994. Kangkung, bertanam dan pengolahan pasca panen.Yogyakarta. Kanisius.
[13] Suwandi. 2005. Kandungan N pada hijauan pakan dan pengaruhnya terhadap kesehatan ternak.Bogor. Prosiding Temu Teknis Nasional Tenaga Fungsional Pertanian, Balai Penelitian Ternak.
[14] Vogel. 1990. Buku teks analisis anorganik kualitatif makro dan semimikro. Jilid II. (Edisi V). Jakarta: PT. Kalman Media Pusaka.  ___________________________
Lampiran:
Tabel 3. Data Perhitungan Uji Akurasi (% Recovery ) No Larutan Sampel Absorbansi (y) Konsentrasi (x) 1  Larutan sampel 0,070 0,0628 0,070 0,0628 0,070 0,0628 Jumlah rata-rata 0,070 0,0628 2 Larutan sampel dengan analit 0,125 0,1141 0,125 0,1141 0,125 0,1141 Jumlah rata-rata 0,125 0,1141 Perhitungan: Diket : C F = 0,1141 ppm C A = 0,0628 ppm
C* A = 0,05 ppm V 1 = 0,1 ml V 2 = 10 ml C* A =   x V 1 = x 0,1 ml = 0,05 ppm % recovery = x 100% = x 100%
= 102,6 %
Keterangan:  CF  =  Konsentrasi  total  sampel,  CA  = Konsentrasi sampel sebenarnya, C*A = Konsentrasi analit yang ditambahkan.
Tabel 4. Data Perhitungan Uji Presisi
No Abs Konsentrasi (x- Ẋ ) 2 (x- Ẋ ) 1 0,112 0,1019 -0,0031 0,000000961 2 0,117 0,1055 0,0005 0,00000025 3 0,119 0,1074 0,0024 0,00000576 4 0,118 0,1065 0,0015 0,00000225 5 0,116 0,1047 -0,0003 0,00000009 6 0,115 0,1037 -0,0013 0,00000169 X = 0,1050 ∑= 0,000011001 Perhitungan dengan rumus SD =
dan  RSD =   X 100%
Perolehan: SD =
RSD  =   x 100% = = x 100% = 0,001483307 = 1,41 %