Copyright © 2020, JPLP, e ISSN 2654-251X
Metode Penyimpanan Bakteri Xanthomonas Oryzae pv. oryzae Penyebab Penyakit Hawar Daun Bakteri Pada Tanaman Padi Menggunakan Glycerol
Santi Sariasih a , Fitri Widiantini a , Wiwin Widiawati b
a Laboratorium Bioteknologi Proteksi Tanaman FakultasPertanian Universitas Padjadjaran, Bandung Corresponding Author E-mail : s.sariasih@unpad.ac.id
b Laboratorium Fitopatologi Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran, Bandung E-mail : wiwin.widiawati@unpad.ac.id
Received: 22 nd November 2019; Revised: 18th December 2019; Accepted: 9th January 2020;
Available online: 14th  January 2020; Published regularly: January 2020

## Abstract
The existence of Xanthomonas oryzae pv. oryzae, the bacteria which causes Bacterial  Leaf Blight of rice, is really  necessary  for  the  laboratory  to  support  the  research  activities  of  the  phytopathology  experts.  Long-term preservation by using glycerol under -20°C can be conducted to preserve the culture’s availability to stay viable in the laboratory. This research aimed to determine the glycerol concentration that is able to preserve the viability and pathogenicity of Xanthomonas oryzae pv. oryzae bacteria after being preserved for 3 and 6 months. This experiments were performed using Completely Randomized Design which comprised of six treatments and four replications, they were:  glycerol  50%,  40%,  30%,  20%,  10%,  and  control  (without  glycerol).  The  results  of  this  study  showed  that viability of Xanthomonas oryzae pv. oryzae that was preserved within 20% glycerol solution for 6 months was different compared to control group. The number of Xanthomonas oryzae pv. oryzae bacteria on 20% glycerol was 4,49 x 10 9 CFU/ml, while on control group was 1,76 x 10 9 CFU/ml. 20% glycerol concentration had significant effect on the Bacterial Leaf Blight symptoms’ length after 6-months preservation that observed on the 7 th day after incubation. The Bacterial Leaf Blight symptoms’ length on 20% glycerol treatment group was 46,2 mm and 22,7 mm on control group. Meanwhile for the 3 months preservation, the administration of glycerol did not show any significant effect on the Xanthomonas oryzae pv. oryzae’s viability and the Bacterial Leaf Blight symptoms’ length.
Key Words : Xanthomonas oryzae pv. oryzae, bacterial leaf blight, glycerol

## Abstrak
Ketersediaan  kultur  bakteri  Xanthomonas  oryzae  pv.  oryzae  penyebab  penyakit  hawar  daun  bakteri  pada tanaman padi di laboratorium sangat diperlukan untuk menunjang kegiatan riset para ahli fitopatogi. Penyimpanan jangka  panjang  menggunakan  glycerol  pada  suhu  -20°C  dapat  dilakukan  untuk  menjaga  ketersediaan  kultur  di laboratorium  tetap  dalam  keadaan  viabel.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  konsentrasi  glycerol  yang mampu mempertahankan viabilitas dan patogenisitas bakteri Xanthomonas oryzae pv. oryzae setelah penyimpanan selama 3 dan 6 bulan. Percobaan ini dilakukan dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari enam perlakuan dan empat ulangan, yaitu glycerol 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, dan kontrol (tanpa glycerol). Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  viabilitas  Xanthomonas  oryzae  pv.  oryzae  yang  disimpan  dalam  larutan glycerol 20% selama 6 bulan berbeda nyata dibandingkan dengan kontrol. Jumlah bakteri  Xanthomonas oryzae pv. oryzae pada glycerol 20% sebanyak 4,49 x 10 9 CFU/ml, sedangkan kontrol 1,76 x 10 9 CFU/ml. Konsentrasi glycerol 20% juga berpengaruh nyata terhadap panjang gejala penyakit  hawar daun bakteri setelah penyimpanan selama 6 bulan yang diamati pada hari ke-7 setelah inkubasi. Panjang gejala penyakit  hawar daun bakteri pada perlakuan glycerol 20% sebesar 46,2 mm, sedangkan kontrol sebesar 22,7 mm. Sedangkan pada penyimpanan selama 3 bulan,
pemberian glycerol tidak memberikan pengaruh yang nyata baik terhadap viabilitas Xanthomonas oryzae pv. oryzae maupun panjang gejala penyakit hawar daun bakteri .
Kata Kunci : Xanthomonas oryzae pv. oryzae, hawar daun bakteri, glycerol

## PENDAHULUAN
Xanthomonas oryzae pv. oryzae ( Xoo ) merupakan bakteri Gram negatif yang menyebabkan penyakit hawar  daun  bakteri  (HDB)  pada  tanaman  padi.  HDB  tergolong  penyakit  penting  dibeberapa  negara penghasil  padi  di  dunia,  termasuk  di  Indonesia  (Suparyono    dkk.,  2004).  Serangan  HDB  di  Indonesia menyebabkan kerugian hasil panen sebesar 21-36% pada musim hujan dan sebesar 18-28% pada musim kemarau. Luas penularan penyakit HDB pada tahun 2006 mencapai lebih dari 74 ribu ha, 16 ha diantaranya menyebabkan tanaman puso (Wahyudi dkk., 2011). Para ahli fitopatologi saat ini sedang berupaya untuk dapat mengendalikan penyakit HDB, sehingga ketersediaan isolat bakteri Xoo di laboratorium riset harus dipersiapkan sebaik mungkin agar kegiatan riset dapat berjalan dengan baik.
Ketersediaan isolat bakteri Xoo yang viabel dapat dipelihara dengan cara menyimpan kultur bakteri dalam  media  yang  sesuai  sehingga  bakteri  dapat  digunakan  dalam  jangka  waktu  yang  panjang.  Metode penyimpanan  yang  tepat  berguna  untuk  mengurangi  laju  metabolisme  dari  mikroorganisme  agar    dapat mempertahankan viabilitas (daya hidupnya), sehingga diperoleh angka perolehan (recovery) dan kehidupan (survival) yang tinggi dengan perubahan ciri-ciri minimum.
Penyimpanan  jangka  panjang  mikroorganisme  tersebut  dapat  dilakukan  dengan  cara  menyimpan kultur mikroba di dalam freezer yang bersuhu -20°C dan -70°C. Akan tetapi, penyimpanan jangka panjang dengan pendinginan tersebut menimbulkan permasalahan. Salah satunya adalah pembentukan kristal es di dalam  sel  yang  secara  fisik  dapat  merobek  atau  memecahkan  sel.  Pembentukan  kristal  es  juga  dapat menyebabkan perubahan komposisi kimia pada bahan yang masih dalam fase cair, sehingga penyimpanan jangka  panjang  dengan  pendinginan  memerlukan cryoprotectan  agent .  Menurut  Badjoeri  (2010) cryoprotectan agent yang ditambahkan pada kultur sel akan menjaga sel selama penyimpanan dalam suhu ekstrim (sangat dingin) serta dapat meminimalisir kerusakan sel selama pembekuan.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  konsentrasi  glycerol  yang  mampu    mempertahankan viabilitas dan patogenisitas bakteri Xoo setelah penyimpanan selama 3 dan 6 bulan. Dengan penelitian ini, laboratorium  dapat  membuat  koleksi  kultur  bakteri Xoo yang  viabel  untuk  kegiatan  praktikum  dan penelitian mahasiswa  serta dosen, sekaligus memenuhi permintaan masyarakat umum  yang  memerlukan kultur bakteri Xoo .

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Bioteknologi  Proteksi  Tanaman,  Departemen  Hama  dan Penyakit Tumbuhan, Fakultas Pertanian, Universitas Padjadjaran pada bulan Juli sampai Maret 2019.
Bahan yang digunakan pada percobaan ini adalah  isolat Xoo (koleksi Balai Besar Tanaman Padi, Sukamandi,  Jawa  Barat),  glycerol,  akuades,  Wakimoto  Agar  (20  g  sukrosa,  5  g  pepton,  0,5  g Ca(NO 3 ) 2 .4H 2 O, 1,82 g Na 2 HPO 4 .7H 2 O, 0,05 g FeSO 4 .7H 2 O, 18 g bakto agar, dan 1 L akuades), daun padi, tisu, alkohol 70%, dan spirtus. Alat yang digunakan pada percobaan ini adalah timbangan analitik, botol schott, petridish , autoclave, vortex mixer, laminar air flow, tabung reaksi, batang L,  tabung krio, cardbox freezer , freezer, termometer freezer, jarum ose, jarum ent, bunsen, mikropipet, pipet tip, gunting, plastik wrap, alumunium foil, mikroskop, plastik mika, sedotan, dan label.
Penelitian  ini  dilakukan  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang  terdiri  dari  enam perlakuan  dengan  empat  ulangan.  Total  percobaan  terdiri  dari  24  unit  percobaan.  Setiap  unit  percobaan dibuat tiga set. Perlakuan yang diujikan adalah konsentrasi glycerol 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, dan kontrol (tanpa  glycerol).  Pengamatan  dilakukan  terhadap  viabilitas  dan  patogenisitas  bakteri Xoo setelah penyimpanan  selama  3  dan  6  bulan.  Data  yang  diperoleh  dianalisis  menggunakan  analisis  varians.  Jika
hasilnya terdapat perbedaan, maka dilakukan uji lanjutan dengan Uji Duncan pada taraf nyata 5%. Analisis data menggunakan program SPSS versi 17.0.
Penelitian dimulai dengan menyiapkan larutan glycerol berbagai konsentrasi sesuai perlakuan yang akan diujikan. Kemudian larutan glycerol disterilisasi pada suhu 121°C tekanan 1 atm selama 15 menit. Setelah  mencapai  suhu  ruangan,  larutan  glycerol  dimasukkan  ke  dalam  tabung  krio  sebanyak  1  ml. Kemudian satu ose bakteri Xoo dimasukkan ke dalam masing-masing tabung krio yang telah berisi larutan glycerol steril. Campuran bakteri Xoo dan larutan glycerol disimpan dalam freezer –20°C selama 3 dan 6 bulan menggunakan cardbox freezer dan diberi label.
Uji viabilitas bakteri dilakukan dengan cara menghitung koloni bakteri Xoo yang tumbuh pada media Wakimoto  Agar  (WA)  menggunakan  modifikasi  metode  Miles  &  Milsra  (1938).  Sebelum  ditumbuhkan pada  media  WA,  suspensi Xoo dalam  glycerol  dicairkan  terlebih  dahulu  pada  suhu  ruangan,  kemudian dilakukan seri pengenceran dengan cara memipet 100 μl suspensi bakteri Xoo ke  dalam  900  μl akuades steril secara berseri hingga pengenceran 10 -11 . Setelah itu, masing-masing seri pengenceran diteteskan pada pola garis sebanyak 10 μl sesuai konsentrasi pengenceran. Inkubasi selama 48 jam pada suhu 27°C. Koloni yang tumbuh pada permukaan media WA diamati dan dihitung dalam satuan CFU per ml.
Uji Patogenisitas dilakukan dengan menggunakan metode detached leaf assay. Caranya adalah daun padi yang sehat dan tidak menunjukkan gejala terserang penyakit dipotong sepanjang 15 cm dan dibersihkan dengan  cara  menyelupkan  daun  ke  dalam  aquadest  steril  selama  30  detik,  kemudian  dikeringanginkan. Setelah kering, daun disimpan di dalam kotak mika  plastik yang diberi alas tisu lembab. Daun disusun di atas potongan sedotan yang disimpan secara vertikal di atas tisu lembab. Daun dilukai menggunakan jarum steril  sebanyak  tiga  tusukan  pada  setiap  helaian  daun.  Masing-masing  bekas  tusukan  kemudian  ditetesi dengan  suspensi  bakteri Xoo sebanyak  10  μl  dengan  kerapatan  10 9 CFU/mL.  Kemudian  pangkal  daun ditutup dengan tisu lembab. Pengamatan dilakukan terhadap panjang gejala hawar daun bakteri pada 3 dan 7 HSI atau setelah gejala hawar daun bakteri muncul (Akhtar et al. , 2008).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Viabilitas Bakteri Xanthomonas oryzae pv. oryzae Viabilitas  bakteri Xoo dapat  dihitung  dari  jumlah  koloni  bakteri  Xoo  yang  tumbuh  pada  media Wakimoto Agar. Viabilitas bakteri Xoo setelah penyimpanan memiliki kisaran kerapatan antara 1,26 x 10 9 CFU/ml sampai dengan  4,49 x 10 9 CFU/ml. Jumlah tersebut sudah sesuai dengan syarat jumlah bakteri untuk  uji  kepekaan/sensitivitas,  yaitu  10 5 sampai  dengan  10 8 CFU/ml  (Hermawaan  dkk.,  2007).  Data jumlah koloni bakteri Xoo setelah 3 dan 6 bulan penyimpanan disajikan pada Tabel 1. Pertumbuhan bakteri Xoo pada media WA dapat dilihat pada Gambar 1.
a b
c
Copyright © 2020, JPLP, e ISSN 2654-251X
Gambar  1.  Viabilitas  bakteri  Xoo  pada  media  Wakimoto  Agar:  a.  Kontrol,  b.  Glycerol  10%,  c.  Glycerol  20%,  d. Glycerol 30%, e. Glycerol 40%, dan f. Glycerol 50%.
Berdasarkan Tabel 1 terlihat bahwa jumlah koloni bakteri Xoo setelah 3 bulan penyimpanan tidak menunjukkan  adanya  perbedaan  antar  pelakuan.  Akan  tetapi  perlakuan  penyimpanan  menggunakan glycerol  20%  memiliki  jumlah  bakteri  yang  cenderung  lebih  banyak  dibandingkan  dengan  perlakuan lainnya.  Sedangkan  pada  penyimpanan  selama  6  bulan,  perlakuan  penyimpanan  menggunakan  glycerol 20%  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  glycerol  10%,  40%,  dan  kontrol,  tetapi  tidak  berbeda  dengan perlakuan glycerol 30% dan 50%. Hal ini sejalan dengan penelitian Setiaji (2015) yang melaporkan bahwa konsentrasi  glycerol  15-20%  merupakan  konsentrasi  yang  paling  efektif  untuk  menyimpan  biakan Aeromonas hydrophila pada suhu -20°C selama 56 hari.
Tabel 1: Jumlah koloni bakteri Xanthomonas oryzae pv. oryzae setelah  penyimpanan
Perlakuan Jumlah Koloni Bakteri (CFU/ml) 3 Bulan 6 Bulan Glycerol 50 % 1,51 x 10 9 a 2,74 x 10 9 ab Glycerol 40 % 1,40 x 10 9 a 2,16 x 10 9 a Glycerol 30 % 1,26 x 10 9 a 2,90 x 10 9 ab Glycerol 20 % 2,48 x 10 9 a 4,49 x 10 9 b Glycerol 10 % 1,74 x 10 9 a 1,69 x 10 9 a Tanpa Glycerol 1,97 x 10 9 a 1,76 x 10 9 a
Keterangan :  Angka rata-rata yang diikuti oleh huruf yang berbeda dalam satu kolom menunjukkan perbedaan yang nyata berdasarkan uji Duncan pada taraf nyata 5%.
Penelitian Hermawan dkk. (2008) juga melaporkan bahwa bakteri Streptococcus sp. dapat bertahan selama 3 bulan pada suhu -20°C apabila disimpan dalam media TSB yang dicampur dengan glycerol 15- 20%.  Hal  tersebut  diduga  karena  konsentrasi  krioprotektan  15-20%  diduga  isotonis  dengan  cairan  pada sitoplasma.  Kondisi  isotonis  memungkinkan  terjadinya  pertukaran  antara  cairan  dari  sitoplasma  dengan glycerol, sehingga cairan di dalam sel bakteri dapat digantikan oleh glycerol. Oleh sebab itu, selama proses penyimpanan dalam suhu -20°C tidak terjadi kristalisasi air di dalam sel yang menyebabkan pembengkakan dan kerusakan sel. Akibatnya daya tumbuh bakteri lebih tinggi.
Pada tabel 1 juga dapat dilihat bahwa jumlah koloni bakteri Xoo pada perlakuan kontrol tanpa glycerol cenderung mengalami penurunan setelah penyimpanan selama 6 bulan dibandingkan dengan perlakuan lain yang  menggunakan  glycerol,  kecuali  perlakuan  glycerol  10%.  Hal  tersebut  disebabkan  karena  proses pendinginan di bawah suhu titik beku air (0 °C) tanpa glycerol menyebabkan terbentuknya kristal es di luar
d e f
dan  di  dalam  sel  yang  berakibat  rusaknya  dinding  sel  mikroba  serta  keluarnya  cairan  intra  sel  akibat peningkatan konsentrasi garam dalam larutan (Najmiyati & Dominikus, 2012).
Patogenisitas Bakteri Xanthomonas oryzae pv. oryzae Patogenisitas bakteri Xoo dapat diukur dari panjang gejala penyakit Hawar Daun Bakteri (HDB) yang muncul pada daun padi sehat yang diinokulasikan bakteri Xoo . Gejala bercak penyakit HDB yang muncul pada  daun  padi  sehat  diamati  dibawah  mikrokop  lalu  panjangnya  diukur  menggunakan  jangka  sorong. Gejala  penyakit  HDB  dapat  dilihat  pada  Gambar  2.  Data  pengaruh  perlakuan  penyimpanan  bakteri Xoo pada larutan glycerol terhadap panjang gejala penyakit HDB ditampilkan pada Tabel 2.
Tabel 2: Panjang gejala hawar daun bakteri yang disebabkan oleh bakteri Xoo setelah penyimpanan Perlakuan Panjang Gejala (mm) 3 Bulan 6 Bulan 3 HSI 7 HSI 3 HIS 7 HSI Glycerol 50 % 2,175 a 12,200 a 4,200 a 32,475 ab Glycerol 40 % 2,225 a 13,900 a 1,025 a 30,025 ab Glycerol 30 % 1,175 a 8,243  a 5,975 a 34,625 ab Glycerol 20 % 5,100 a 14,583 a 2,875 a 46,200  b Glycerol 10 % 1,450 a 10,633 a 4,875 a 44,475 ab Tanpa Glycerol 2,000 a 9,750  a 2,050 a 22,700  a
Keterangan : Angka rata-rata yang diikuti oleh huruf yang berbeda dalam satu kolom menunjukkan perbedaan yang nyata berdasarkan uji Duncan pada taraf nyata 5%. HSI : Hari Setelah Inokulasi.
Dari Tabel  2  dapat  dilihat bahwa  gejala  penyakit  HDB  sudah  muncul sejak  pengamatan  hari  ke-3 setelah inokulasi baik oleh Xoo yang telah disimpan selama 3 bulan maupun 6 bulan. Hal tersebut sejalan dengan Djatmiko & Prakoso (2010) yang melaporkan bahwa masa inkubasi penyakit hawar daun bakteri adalah 3-5 hari. Pada penyimpanan Xoo 3 bulan, panjang gejala yang muncul tidak berbeda antar perlakuan. Namun,  pada  pengamatan  6  bulan  penyimpanan,  perlakuan  glycerol  20%  berpengaruh  nyata  terhadap panjang gejala penyakit HDB dibandingkan dengan kontrol pada 7 HSI. Panjang gejala penyakit HDB pada perlakuan  glycerol  20%  mencapai  46,2  mm  sedangkan  pada  kontrol  22,7  mm.  Masa  inkubasi  tersebut bergantung  pada  varietas  padi,  patotipe Xoo ,  dan  kondisi  lingkungannya  (Sudir,  2011).  Gejala  penyakit HDB pada padi dimulai saat fase vegetatif umur 1-4 minggu setelah tanam. Awalnya muncul pada bagian daun yang terluka berupa bercak kebasahan lalu berkembang meluas menjadi berwarna hijau keabu-abuan dan daun menjadi keriput, akhirnya layu seperti tersiram air panas.
Panjang gejala yang disebabkan oleh Xoo setelah penyimpanan 3 dan 6 bulan mengalami perbedaan. Hal  tersebut  disebabkan  karena  penyimpanan  dalam  glycerol  selama  3  bulan  tidak  cukup  lama  untuk memengaruhi  virulensi.  Bakteri  menimbulkan  penyakit  salah  satunya  karena  mempunyai  faktor patogenesitas  dan  tingkat  patogenesitas  dipengaruhi  oleh  faktor  virulensi  (Joko et  al .,  2014).  Beberapa faktor penentu patogenesitas bakteri patogen tanaman antara lain sistem sekresi tipe I-VI (Rakhashiya et al .,  2016),  eksopolisakarida  (EPS)  dan  lipopolisakarida  (LPS)  (Arwiyanto,  2015).  T3SS  merupakan mekanisme penting dalam patogenesitas bakteri Gram negatif patogen tanaman (Rakhashiya et al ., 2016). Keberadaan  salah  satu  atau  beberapa  faktor  penentu  patogenesitas  dapat  menyebabkan  bakteri  bersifat patogen atau deleterious terhadap inang.
Pada tabel 2 juga dapat dilihat bahwa panjang gejala penyakit HDB pada perlakuan kontrol tanpa glycerol cenderung lebih pendek dibandingkan dengan perlakuan lain yang  menggunakan  glycerol, baik setelah penyimpanan selama 3 dan 6 bulan. Hal tersebut disebabkan karena viabilitas pada perlakuan kontrol paling rendah dibandingkan dengan perlakuan lain yang menggunakan glycerol sehingga memungkinkan bakteri  pada  perlakuan  kontrol  sudah  terganggu  tingkat  patogenisitasnya.  Sedangkan  pada  perlakuan
Copyright © 2020, JPLP, e ISSN 2654-251X
glycerol 20% menunjukkan hasil yang baik disebabkan karena viabilitas pada perlakuan tersebut masih baik sehingga memungkinkan tingkat patogenisitasnya masih terjaga selama proses  penyimpanan.
a b c d e f
Gambar 2. Gejala penyakit hawar daun bakteri pada daun padi metode detached leaf assay : a. Kontrol, b. Glycerol 10%, c. Glycerol 20%, d. Glycerol 30%, e. Glycerol 40%, dan f. Glycerol 50%

## KESIMPULAN
Glycerol  dapat  digunakan  sebagai cryoprotectan  agent untuk  penyimpanan  bakteri Xanthomonas oryzae pv. oryzae sampai  dengan  6  bulan.  Konsentrasi  glycerol  20%  memberikan  hasil  terbaik  dalam mempertahankan viabilitas dan patogenisitas bakteri Xanthomonas oryzae pv. oryzae setelah penyimpanan selama 6 bulan. Jumlah bakteri Xoo pada glycerol 20% setelah 6 bulan penyimpanan sebanyak 4,49 x 10 9 CFU/ml, sedangkan kontrol (tanpa glycerol) sebanyak 1,76 x 10 9 CFU/ml. Konsentrasi glycerol 20% juga berpengaruh  nyata  terhadap  panjang  gejala  penyakit  HDB  yang  ditimbulkan  oleh  bakteri Xoo setelah  6 bulan  penyimpanan,  yang  diamati  pada  hari  ke-7  setelah  inkubasi.  Panjang  gejala  penyakit  HDB  pada perlakuan glycerol 20% sebesar 46,2 mm, sedangkan kontrol tanpa glycerol sebesar 22,7 mm. Sedangkan pada  penyimpanan  selama  3  bulan,  pemberian  glycerol  tidak  memberikan  pengaruh  yang  nyata  baik terhadap viabilitas Xoo maupun panjang gejala penyakit HDB.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  dapat  terlaksana  atas  pendanaan  yang  disediakan  oleh  Direktorat  Riset,  Pengabdian Kepada  Masyarakat,  dan  Inovasi  Universitas  Padjadjaran  Bandung  melalui  skema  Hibah  Internal  Riset Tenaga Kependidikan Unpad tahun anggaran 2018.

## DAFTAR PUSTAKA
Akhtar, M. A., A. Rafi, dan A. Hameed. 2008. Comprisoon of Methods of Inoculation of Xanthomonas oryzae pv. oryzae in Rice Cultivars. J. Bot. 40 (5) : 2171-2151.
Arwiyanto, T.  2015. Ralstonia solanacearum :  Biologi,  Penyakit  yang  Ditimbulkan  dan  Pengelolaannya. Gadjah Mada University Press.
Badjoeri, M. 2010. Preservasi Mikroba untuk Pelestarian dan Stabilitas Plasma Nutfah.  Warta Limnologi no.45  tahun xiii, Desember 2010.
Djatmiko, H.A. dan B. Prakoso, 2010. Keragaman Patotipe Xanthomonas oryzae pv. oryzae pada Tanaman Padi di Tiga Ketinggian Tempat Berdasarkan Pola RAPD. AGRIVITA Vol. 32(2) : 155 – 162. Hermawan,  A.,  W.  Hana  dan  T.  Wiwiek.  2007.  Pengaruh  Ekstrak  Daun  Sirih  ( Piper  betle L.)  terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan Metode Difusi Disk. Universitas Erlangga.
Hermawan,  T.,  A.  Syarief,  M.H.  Arisandi,  M.D.  Saptono,  N.  Destiana  dan  M.  Atmomarsono.  2008.
Viabilitas Streptococcus sp. Menggunakan Konsentrasi Gliserol yang Berbeda dalam TSB Selama Empat Bulan Preservasi Beku. Prosiding Hasil Uji Coba Preservarsi Vol 3. Pusat Karantina Ikan. Jakarta.
Joko  T,  Subandi  A,  Kusumandari  N,  Wibowo  A,  and  Priyatmojo  A.  2014.  Activities  of  Plant  Cell Walldegrading  Enzymes  by  Bacterial  Soft  Rot  Of  Orchid.  Arch.  Phytopathol.  Plant  Prot.  47(10): 1239– 1250.
Miles,  A.  A.  and  Misra  S.  S.  1938.  The  Estimation  of  The  Bactericidal  Activity  of  Blood.  Journal  Of Hygiene 38:732-749.
Najmiyati,  E.  dan  Dominikus  A.  H.  2012  Viabilitas  Konsorsium  Mikroba  Pendegradasi  Hidrokarbon Setelah Penyimpanan dalam Pendingin dan Penyimpanan Beku. Ecolab 6(2): 61-104.
Rakhashiya  P.M.,  Patel  P.P.,  Sheth  B.P.,  Tank  J.G.,  and  Thaker  V.S.  2016.  Detection  of  Virulence  and Pathogenicity Genes in Selected Phytopathovars. Arch. of Phytopathology Plant Protect. 49(1 - 4): 64–73.
Setiaji,  J.  2015.  Pengaruh  Gliserol  pada  Media  Tryptic  Soy  Broth  (TSB)  terhadap  Viabilitas  Bakteri Aeromonas hydrophila. Jurnal Dinamika Pertanian Vol.30(1):83-91.
Sudir. 2011. Pengaruh Varietas, Populasi Tanaman dan Waktu Pemberian Pupuk N terhadap Penyakit Padi.
Prosiding Seminar Ilmiah Hasil Penelitian Padi Nasional 2010. Balai Besar Penelitian Tanaman Padi: 393-604.
Suparyono, Sudir, dan Suprihanto. 2004. Pathotype Profile of Xanthomonas campestris pv. oryzae , Isolates from  The Rice Ecosystem in Java. Indonesian Jurnal of Agricultural Science 5(2): 63-69.
Wahyudi, A. T., S. Meliah, dan A. A. Nawangsih. 2011. Xanthomonas oryzae pv . oryzae Bakteri Penyebab Hawar Daun pada Padi: Isolasi, Karakterisasi, dan Telaah Mutagenesis dengan Transposon. Makara Sains 15(1): 89-96.