## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN AFRIKA
( Vernonia amygdalina Del.) TERHADAP BAKTERI Escherichia coli ATCC 25922 SECARA In Vitro
Iklila Zahra 1 , Susanti Erikania 2 , Oktaviarika Dewi H 3 1,2,3) STIKES Bhakti Husada Mulia
e-mail: 1) iklilazhr21@gmail.com

## ABSTRAK
Obat tradisional merupakan bahan atau ramuan berupa tumbuhan, bahan hewan atau  bahan  lainnya.  Salah  satu  contoh  obat  tradisional  adalah  Tanaman  Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.). Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.) memiliki beberapa  kandungan  kimia  seperti  Flavanoid,  alkaloid,  tanin  dan  kandungan kimia  lainnya  yang  diyakini  berkhasiat  untuk  pengobatan  beberapa  penyakit seperti  diabetes,  hipertensi,  asam  urat  dan  antibakteri. Tujuan: Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  antibakteri  pada Escherichia  coli dengan menggunakan metode difusi cakram. Hasil Penelitian : Zona hambat antibakteri pada ekstrak etanol Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.) didapatkan hasil yaitu pada  konsentrasi  20%  sebesar  7,48±017  mm;  40%  sebesar  11,67±0,13  mm;  60% sebesar  14,18±0,21  mm  dan  80%  sebesar  16,60±0,17  mm.  Daya  hambat  terbesar didapatkan pada konsentrasi ekstrak 80% yaitu sebesar 16,60±0,17 mm.
Kata kunci : Ekstrak Daun Afrika, Antibakteri, Difusi, Escherichia coli

## ABSTRACT
Traditional medicine is an ingredient or herb in the form of plants, animal ingredients or other ingredients. One example of traditional medicine is the African Leaf Plant (Vernonia amygdalina  Del.).  African  leaves  (Vernonia  amygdalina  Del.)  have  several  chemical contents  such  as  flavonoids,  alkaloids,  tannins  and  other  chemical  contents  that  are believed  to  be  efficacious  for  the  treatment  of  several  diseases  such  as  diabetes, hypertension, gout and antibacterial. Purpose: This study aims to as well as to determine the antibacterial potential of Escherichia coli by using the disc diffusion method. Result : The results of the antibacterial inhibition on ethanol extracts of African Leaves (Vernonia amygdalina Del.) are at a concentration of 20% of 7.48 ± 017 mm;  40% of 11.67 ± 0.13 mm; 60% of 14.18 ± 0.21 mm and 80% of 16.60 ± 0.17 mm. The greatest inhibitory power was obtained at 80% extract concentration which was 16.60 ± 0.17 mm.
Keywords: African Leaf Extract, Antibacterial, Difusion, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  keanekaragaman  hayati  tertinggi  kedua  di  dunia setelah Brazil dengan kekayaan flora lebih dari 56.000 spesies tumbuhan, hampir
19%  dari  flora  didunia.  Flora  di  Indonesia  banyak  yang  dapat  dimanfaatkan untuk kehidupan sehari-hari, salah satunya dimanfaatkan untuk obat tradisional (Ferry, 2015).  Obat tradisional adalah bahan atau ramuan bahan berupa bahan tumbuhan,  bahan  hewan,  bahan  mineral,  sediaan  cairan  atau  campuran  dari bahan  tersebut,  yang  secara  turun  temurun  telah  digunakan  untuk  pengobatan berdasarkan pengalaman (BPOM RI, 2005). Salah satu obat tradisional yang biasa digunakan  adalah  Daun  Afrika  ( Vernonia  amygdalina Del.).  Daun  tersebut digunakan  sebagai  obat  sakit  perut  oleh  masyarakat  di  sekitar  daerah  tempat tinggal peneliti. Penggunaan Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.) sebagai obat sakit perut telah lama digunakan secara turun temurun. Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.)  merupakan  salah  satu  jenis  tumbuhan  yang  ada  di  Indonesia.
Beberapa kandungan Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.) saponin, terpenoid, flavonoid,  asam  fenolat,  terpen,  dan  tanin  (Ijeh,  2010).  Daun  afrika  ( Vernonia amygdalina Del.)  juga  dikenal  dengan  nama  daun  seribu  penyakit  diyakini berhasiat  untuk  pengobatan  diabetes,  hipertensi,  mengurangi  kolesterol,  asam urat,  pembuangan  racun  dalam  tubuh  (detoksifikasi),  rematik,  usah  tidur, kesemutan,  demam,  sakit  kepala,  infeksi  tenggorokan,  menghilangkan  dahak, melancarkan buang air seni, menguatkan fungsi lambung, batuk dan gangguan pencernaan.  (Dedy  Muzaki,  2015).  Manfaat  lain  dari  Daun  Afrika  ( Vernonia amygdalina Del.) adalah sebagai antibakteri.
Antibakteri  adalah  zat  yang  dapat  membunuh  atau  menekan pertumbuhan  atau  reproduksi  bakteri  (Madigan,  2005).  Senyawa  kimia  yang terkandung  dalam  Daun  Afrika  ( Vernonia  amygdalina Del.)  terdapat  antibakteri berupa  flavonoid , saponin,  tannin,  alkaloid,  steroid  dan  triterpenoid.  Senyawa kimia  tersebut  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri  dengan  mekanisme  yang berbeda.  peneliti  melakukan  penelitian  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etanol Daun  Afrika  ( Vernonia  amygdalina Del.)  pada  bakteri Escherichia  coli karena bakteri  ini  merupakan  bakteri  yang  sering  berhubungan  dengan  manusia. Bakteri  ini  merupakan  bakteri  bagian  dari  mikroflora  yang  secara  normal  ada dalam  saluran  pencernaan  manusia  (Kusuma,  2010).  Bakteri Escherichia  coli menjadi  patogen  jika  jumlah  bakteri  ini  dalam  saluran  pencernaan  meningkat atau  berada  di  luar  usus.  Beberapa  macam  penyakit  yang  disebabkan  oleh bakteri Escherichia  coli antara  lain  adalah  infeksi  saluran  kemih,  infeksi
meningitis,  diare,  kejang  perut,  demam,  gangguan  pada  ginjal  dan  infeksi intestine (Radji, 2010).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  peneliti  akan  meneliti  tentang  aktivitas antibakteri ektrak etanol Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.) terhadap bakteri Escherichia coli secara In Vitro

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium  dengan melakukan  percobaan  aktivitas  antibakteri  daun  Afrika  ( Vernonia  amygdalina Del.) terhadap bakteri Escherichia coli.
Alat
Cawan  petri  (Normax),  erlenmeyer  (Pyrex),  pipet  volume  (Pyrex),  batang pengaduk  (Lokal),  tabung  reaksi  (Pyrex),  Lampu  Spirtus  (Lokal),  Rak  tabung (Lokal), Inkas (local), Incubator (Memert), Autoclave (SG41 46 280A), Oven besar (Binder), Oven kecil (Binder), Timbangan (SCA 301), Obyek glass (Slides), Beaker Glass  (Pyrex,  Duran),  Mikroskop  (13A),  Gelas  Ukur  (Pyrex),  Labu  destilasi (Pyrex)

## Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini meliputi : Media  Nutrient Agar (NA), Pelarut DMSO, Antibiotik Kloramfenikol Aquadest steril, Etanol, Gram A (kristal violet),  B  (KI  dan  I2),  C  (Aseton  dan  etil  Alkohol  90%)  dan  D  (Safranin), Formalin, Sampel Ekstrak Etanol Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.)

## Pembuatan Ekstrak
Menggunakan metode maserasi sampai didapatkan ekstrak kental, dengan 10 L pelarut etanol 96% untuk 1 kg serbuk Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.).

## Peremajaan Bakteri
Satu  ose  dari  biakan  murni  diambil,  kemudian  dimasukkan  kedalam  10  ml pepton  1%  pada  tabung  reaksi  dan  dihomogenkan  dengan  vortex  mixer,  1  ml suspensi  bakteri  uji  yang  diambil  dari  tabung  pertama,  dimasukkan  kedalam tabung kedua yang berisi 9 ml pepton 1%, dilakukan hingga tabung kelima atau hingga  pengenceran  10-5,  lalu  Sebanyak  500  µl  suspense  bakteri  diteteskan  ke dalam cawan petri berisi media NB dan diratakan menggunakan batang L steril (Sutton, 2011).

## Uji Aktivitas Antibakteri
Cakram disc kosong  direndam  dalam  larutan  uji  pada  seri  konsentrasi  ekstrak etanol  Daun  Afrika  ( Vernonia  amygdalina Del.)  konsentrasi  20%,  40%,  60%,  80% selama  30  menit.  bakteri  dengan  pengenceran  10 -5 dipipet  100  µl  kemudian dituang didalam cawan porselen, diratakan dengan arah berlawanan jarum jam. Cakram disc yang telah direndam dalam larutan uji diambil menggunakan pinset steril, kemudian diletakkan pada media yang telah berisi bakteri uji dengan cara ditekan lembut supaya menempel sempurna, Inkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Kontrol negatif (DMSO 10%) dan Kontrol positif (Kloramfenikol) 30µg/disc.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  ekstraksi  diperoleh  ekstrak  kental  sebanyak  124,9  gram.  Dengan randemen  sebesar  12,49%.  Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  di Laboratorium Mikrobiologi Kampus Akafarma Sunan Giri Ponorogo, diperoleh hasil  uji  perbandingan  aktivitas  antibakteri  ekstrak  Daun  Afrika  ( Vernonia amygdalina Del.)  dengan  kloramfenikol  30µg/disc  sebagai  kontrol  positif  dan DMSO  10%  sebagai  kontrol  negatif  terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli. Hasil  diperoleh  dari  pengukuran  zona  hambat  ekstrak  Daun  Afrika ( Vernonia amygdalina Del.), dimana zona yang diukur adalah daerah yang tampak jernih  yang  tidak  ditumbuhi  oleh  bakteri Escherichia  coli .  Konsentrasi  yang digunakan  yaitu  persen  (%).  Adapun  hasil  pengukuran  zona  hambat  bakteri terdapat pada tabel dibawah ini
Tabel 1. Data Hasil Pengukuran Zona Hambat Ekstrak Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli No. Perlakuan mg/ml Zona Hambat Ekstrak Daun Afrika (mm) Rata-rata ± SD Resspon Hambatan I II III IV 1. Kontrol + 0,03 27,1 26,9 27.3 26,8 27,1 ± 0,16 Sangat Kuat 2. Kontrol - - 0 0 0 0 0 Tidak ada 3. 20 % 200 7,3 7,4 7,7 7,5 7,48 ± 0,17 Lemah 4. 40 % 400 11,5 11,7 11,7 11,8 11,67 ± 0,13 Sedang 5. 60 % 600 14,2 13,9 14,4 14,2 14,18 ± 0,21 Sedang 6. 80 % 800 16,8 16,7 16,9 17,1 16,60 ± 0,17 Kuat

## Keterangan :
Kontrol + = kelompok yang diberi perlakuan Kloramfenikol 30µg/disc
Kontrol - = kelompok yang diberi perlakuan DMSO 10%
Uji  aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak  Daun  Afrika  ( Vernonia  amygdalina Del.)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli menggunakan  difusi  agar dengan  kertas  cakram.  Pada  penelitian  ini,  peneliti  menggunakan  pembanding kontrol  positif  berupa  paper  disk  yang  sudah  berisi  kloramfenikol  30µg/disk. Kontrol  positif  digunakan  untuk  melihat  perbandingan  diameter  pada  zona hambat bakteri dan untuk kontrol negatif yang digunakan adalah larutan DMSO 10%  yang  tidak  memiliki  daya  hambat  terhadap  bakteri.  Kontrol  positif kloramfenikol  digunakan  karena  kloramfenikol  merupakan  antibiotik berspektrum  luas  yang  aktif  terhadap  bakteri  gram  positif  dan  gram  negatif. Kloramfenikol  bekerja  dengan  menghambat  sintesis  protein  bakteri  (Pratiwi, 2019).  Pada  penelitian  yang  telah  dilakukan  sebelumnya  oleh  Suryati  (2017) menunjukkan bahwa kloremfenikol mampu menghambat bakteri Escherichia coli dengan  sangat  kuat.  Sedangkan  kontrol  negatif  menggunakan  DMSO  10%. Karena  DMSO  merupakan  pelarut  yang  dapat  melarutkan  senyawa  polar maupun  nonpolar.  Selain  itu  DMSO  tidak  memberikan  daya  hambat pertumbuhan bakteri, sehingga tidak mengganggu hasil dari pengujian aktivitas antibakteri (Utami, 2011).
Pengujian selanjutnya yaitu dilakukan analisa data yang bertujuan untuk mempermudah  data  dipahami  kemudian  dibuat  kesimpulan.  Kesimpulan  dari analisis data diperoleh dari sampel yang dibuat berdasarkan pengujian hipotesis (Ardiansyah, 2019). Pada hasil uji statistik One Way Anova, menunjukkan adanya perbedaan  yang  signifikan  antara  konsentrasi  20%,  40%,  60%  dan  80%  dengan kontrol  positif  dan  kontrol  negatif  karena  signifikansinya  <0,05.  Dari  hasil pengamatan aktivitas antibakteri pada ekstrak Daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dapat  diketahui  bahwa aktivitas  antibakteri  yang  paling  baik  dihasilkan  pada  konsentrasi  80%  dengan daya hambat sebesar 16,60 ± 0,17 mm . Dari hasil tersebut dapat dilihat bahwa perbedaan  konsentrasi  menyebabkan  zona  hambat  yang  berbeda.  Karena semakin  tinggi  konsentrasi,  semakin  tinggi  pula  kandungan  zat  aktif  yang terkandung  dalam  ekstrak,  sehingga  memiliki  aktivitas  antibakteri  lebih  tinggi (Surjowardojo dkk, 2015).

## SIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan,  dapat  disimpulkan    bahwa konsentrasi  ekstrak  etanol  Daun  Afrika  ( Vernonia  amygdalina Del.)  yang  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  Escherichia  coli  menurut  penelitian  yang sudah dilakukan yaitu paling tertinggi adalah pada kosentrasi 80% dengan daya hambat sebesar 16,60 ± 0,17 mm. Lebih besar dibandingkan dengan konsentrasi 20%, 40% dan 60%.

## DAFTAR PUSTAKA
Badan Pengawas Obat dan Makanan. 2005. Keputusan Kepala Badan Pengawas Obat  dan  Makanan  Republik  Indonesia  Nomor  HK.  00.05.1.52.0685 tahun  2005  tentang Ketentuan  Pokok  Pengawasan  Pangan  Fungsional . Jakarta: BPOM
Dedy  Muzaki,  Rekna  Wahyuni.  2015. Pengaruh  Penambahan  Gingger  Kering Zingiber officinale Terhadap Mutu dan Daya Terima Teh Herbal Daun Afrika Selatan Vernonia amygdalina Del. Jurnal Teknologi Pangan Vol. 6 Nomor 2
Ferry,  Anwar. 2015. Perbandingan Efektivitas  Daun  Mengkudu  dan  Daun Binahong Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah Mencit (Mus musculus ). Skripsi FKIP Unpas Bandung.
Ijeh I.I. and Ejike C.E.C.C. 2010. Current Perspectives on The Medicinal Potentials of
Vernonia  amygdalina ,  Journal  of  Medicinal  Plants  Research,  5  (7),  1051 – 1061
Kusuma, S.A.F., 2010. PCR, Bandung
Madigan, M. 2005. Brock Biology of Microorganism . Englewood Cliff: Prentice Hall
Pratiwi,  dkk.  2018. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Afrika  (Vernonia amygdalina  Del.)  Terhadap  Bakteri  Staphylococcus  aureus .  Universitas Cendrawasih. Jayapura.
Radji,  Maksum.  2010. Buku  Ajar  Mikrobiologi  Panduan  Mahasiswa  Farmasi  dan Kedokteran. Jakarta: EGC.
Surjowardojo, dkk. 2015. Daya Hambat Dekok Kulit Apel Manalagi (Malus Sylvestrs Mill.)  Terhadap  Pertumbuhan  Staphylococcus  Aureus  Dan  Pseudomonas  Sp. Penyebab Mastitis Pada Sapi Perah. Fak. Peternakan. Universitas Brawijaya
Suryati,  N,  dkk.  2017. Uji  Efektivitas  Antibakteri  Ekstrak  Aloe  Vera  Terhadap Pertumbuhan Escherichia coli Secara In Vitro. Fak.Kedokteran. Universitas Andalas Padang. Jurnal Kesehatan Andalas :6(3)
Sutton, S. 2011. Determination of Inoculum for Microbiological Testing . Summer Vol. 15 Number 3