Jurnal Pharmascience, Vol. 9, No. 1, Februari 2022, hal: 29-39 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article

## Efektivitas Ekstrak Etanol Kulit Batang Pakan Banyu (Croton argyratus Blume) terhadap Kualitas dan Kuantitas Spermatozoa sebagai Antifertilitas
Nurlely 1 *, Anika Iktishad Aslama 2 , Noor Cahaya 1 , Valentina Meta Srikartika 1
1 Program Pendidikan Profesi Apoteker, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan, Indonesia
2 Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan, Indonesia
Email: nurlely@ulm.ac.id

## ABSTRAK
Kulit  batang  pakan  banyu  (Croton  argyratus  Blume)  secara  empiris  digunakan sebagai  obat  kontrasepsi  tradisional.  Penelitian  ini  bertujuan  mengevaluasi  pengaruh ekstrak  etanol  kulit  batang  pakan  banyu  terhadap  perubahan  kualitas  dan  kuantitas spermatozoa  pada  tikus  putih  (Rattus  norvegicus)  jantan.  Desain  penelitian  ini menggunakan rancangan post test only control group design. Kulit batang pakan banyu dimaserasi  menggunakan  etanol  70%.  Pada  bagian  kulit  batang  terdapat  zat  aktif steroid,  saponin,  tanin,  dan  alkaloid.  Uji  pengaruh  gambaran  mikroskopik  terhadap kualitas dan kuantitas spermatozoa menggunakan dua puluh ekor tikus jantan dengan 4 kelompok perlakuan yang diberi perlakuan secara oral selama 15 hari yaitu Kontrol negatif  (Na  CMC  0,5%),  dan  kelompok  perlakuan  (ekstrak  dosis  100  mg/kgBB,  200 mg/kgBB,  500  mg/kgBB).  Setelah  15  hari  hewan  uji  dinekropsi  untuk  mengamati jumlah  spermatozoa  menggunakan  improved  neubauer  hemositometer,  motilitas spermatozoa,  viabilitas  dan  abnormalitas  spermatozoa  menggunakan  eosin  negrosin sebagai  pewarna.  One  way  ANOVA  digunakan  untuk  menganalisa  data  kuantitatif yang  didapatkan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  dosis  100  mg/kgBB,  200 mg/kgBB,  dan  500  mg/kgBB  memberikan  perbedaan  bermakna  terhadap  kelompok kontrol  negatif  (p  <  0,05).  Berdasarkan  hasil  penelitian  tersebut  dapat  disimpulkan bahwa  dosis  100  mg/kgBB,  200  mg/kgBB,  dan  500  mg/kgBB  memberikan  pengaruh terhadap perubahan motilitas, abnormalitas, viabilitas, dan jumlah spermatozoa.
Kata Kunci: Pakan Banyu, Kontrasepsi Pria, Spermatozoa

## ABSTRACT
Stem  Bark  of  pakan  banyu  (Croton  argyratus  Blume)  empirically  is  used  as  a traditional  contraception  method.  This  study  aimed  to  evaluate  the  effect  of  the  ethanol extract of the pakan banyu stem bark to change in the quality and quantity of spermatozoa in  albino  male  rats  (Rattus  norvegicus).  This  research  is  an  experimental  research  with posttest  only  control  group  design.  Pakan  Banyu  stem  bark  was  macerated  using  70% ethanol.  The  extract  contained  the  active  substances  such  as  steroids,  saponins,  tannins, and alkaloids. This study used twenty male rats which were divided into 4 groups: negative control  (CMC  Na  0,5%),  and  treatment  groups  (extract  dose  of  100,  200  and  500  mg/kg body weight). The treatment was orally administered for 15 days.  After 15 days, the testis was  isolated    to  observe  the  number  of  spermatozoa  using  improved  Neubauer hemocytometer,  motility,  viability  and  sperm  abnormalities  using  eosin  nigrosin. Quantitative data were analyzed using one-way ANOVA. The results showed  that  dose of 100,  200,  and  500  mg/kg  body  weight  possessed  a  significant  difference  to  the  negative control  group  (p  <0.05).  Thus,  it  can  be  conclude  that    ethanol  extract  of  Pakan  Banyu stem  bark  (C.  argyratus  Blume)  possesses  an  effect  in  changing  of  motility,  abnormality, viability, and number of spermatozoa.
Keywords: Pakan Banyu, Male Contraception, Spermatozoa

## I. PENDAHULUAN
Penggunaan obat tradisional sebagai  suatu  pengobatan  di  Indonesia telah  diterapkan  secara  luas  dimana terdapat  180  spesies  tumbuhan  yang digunakan  sebagai  bahan  baku  untuk pengobatan secara  tradisional (Widyawati, 2007).  Provinsi  Kalimantan  Selatan  kaya akan  keanekaragaman  jenis  tanaman  yang berkhasiat  obat  yang  salah  satunya  adalah pakan  banyu  ( Croton  argyratus Blume).
Tanaman  ini  secara  empiris  digunakan oleh  masyarakat  di  desa  Riam  Adungan daerah  Kintap  sebagai  obat  kontrasepsi wanita  dengan  menggunakan  batang  yang direbus  sehingga  dapat  digunakan  sebagai kontrasepsi.
Penggunaan  metode  kontrasepsi banyak  ditujukan  kepada  wanita  sehingga
partisipasi  pria  cukup  rendah.  Hal  ini dikarenakan    metode  kontrasepsi  yang dapat  digunakan  oleh  pria  cukup  terbatas seperti  vasektomi  dan  kondom.  Oleh karena  itu  penggunaan  bahan  obat  alami dapat  dijadikan  alternatif  untuk  obat kontrasepsi pria yang berasal dari tanaman
(Sihabuddin et al , 2011).
Tanaman Pakan Banyu yang digunakan  masyarakat  daerah  Kintap sebagai  kontrasepsi  wanita  mengandung saponin  triterpenoid.  Senyawa  ini  dapat menghambat  pertumbuhan  sel  folikel  dan ketebalan uterus pada mencit betina (Fauzi
et  al ,  2014)  sehingga  menyebabkan ovulasi  tidak  terjadi.  Triterpenoid  juga dapat mempengaruhi spermatogenesis melalui penghambatan aktivitas enzim 5α- reduktase.  Hal  ini  diketahui  bahwa
senyawa  metabolit  sekunder  yang  dapat mempengaruhi  sistem  reroduksi  pada hewan betina juga dapat memiliki
pengaruh  pada  system  reproduksi  hewan jantan  (Yeboah  et  al,  2013;  Liu,  2005;
Mycek  2001).  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengevaluasi  efek  antifertilitas tanaman  pakan  banyu  terhadap  peruahan kualitas dan kuantitas spermatozoa.

## II. METODE

## A. Persiapan Bahan Baku
Kulit  batang  pakan  banyu  ( C.
argyratus Blume)  diperoleh  di  desa  Riam
Adungan, Kintap, Kalimantan Selatan dan dideterminasi  di  Lembaga  Herbarium
Bogoriense LIPI Bogor
Np.
251/IPH.1.01/If.8/II/2015.  Kulit  batang yang  diperoleh  disortas,  dicuci,  diiris  dan dikeringkan. Setelah itu dibuat serbuk dan diayak  dengan  menggunakan  ayakan  40 mesh.

## B. Persiapan Ekstraksi
Lima  puluh  gram  serbuk  kulit batang pakan banyu ( C.  argyratus Blume) diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan  menambahkan  etanol  70%  (1:10) dan  direndam  3x24  jam.  Setiap  24  jam diaduk  dengan  kecepatan  50  rpm  selama
30 menit  untuk mendapatkan ekstrak cair.
Vacuum  rotary  evaporator digunakan untuk  pemekatan  dengan  suhu 45-50° untuk  mendapatkan  ekstrak  kental  yang
kemudian  diuapkan  di  atas waterbath dan ditimbang . (Astuti, 2011; Muhgni, 3013).

## C. Uji Skrining Fitokimia
Identifikasi  Senyawa  kimia  yang terdapat  pada  ekstrak  etanol  kulit  batang pakan  banyu  ( C.  argyratus Blume) dilakukan  dengan  sedikit  perubahan  dari metode  sebelumnya  (Harborne,  1998; Evans, 2009). Senyawa yang diuji meliputi alkaloid,  steroid  dan  triterpenoid,  tannin, flavonoid dan saponin.

## D. Perlakuan Hewan Uji
Sebanyak  20  ekor  tikus  jantan galur  wistar  (300-400  g)  digunakan  pada penelitian ini  dan diaklimatisasi 1 minggu sebelum penelitian dengan kondisi lingkungan dan pemberian diet yang sesuai.
Etika  penelitian  telah  disetujui  oleh
Komisi Etik Fakultas Kedokteran
Universitas  Lambung  Mangkurat  No.
014/KEPK-FK UNLAM/EC/IV/2015.
Hewan  uji  dibagi  menjadi  4  kelompok yaitu  control  normal  (Na  CMC  0.5%), kelompok  1,  2  dan  3  diberikan  ekstrak etanol  kulit  batang  pakan  banyu  ( Croton argyratus Blume)  dengan  dosis  berturut- turut  yaitu  100,  200  dan  500  mg/kg  BB. Bahan uji diberikan 1 kali sehari selama 15 hari  secara  peroral.  Semua  hewan  uji dieutanasi dengan dislokasi leher pada hari ke  16  dan  dilakukan  isolasi  pada  organ testis  dan  kauda  epididimis.  Bagian  ini
kemudian  dipotong  dan  dimasukkan  ke cawan  petri  yang  berisi  2  ml  NaCl  0.9% (pH  7,2)  dengan  suhu  37°C  selama  10 menit.  Selanjutnya  dilakukan  analisa kualitass dan kuantitas spermatozoa
(Fauziyah, 2013;  Hasanah, 2009;  Iriandini
et  al .,  2013  &  Rekha et  al .,  2014;  Ghosal
et al ., 2013; Oyedeji et al ., 2013).

## E. Pengamatan Kualitas dan Kuantitas

## Spermatozoa

## 1. Motilitas Spermatozoa
Motilitas  spermatozoa  dievaluasi
dengan  meletakkan  suspense  spermatozoa pada improved  neubeur dan  dilakukan penilaian berdasarkan Tabel I di bawah ini.
Tabel I. Penilaian motilitas spermatozoa Nilai Gerakan spermatozoa Gerakan massa spermatozoa 0 Spermatozoa imotil atau tidak bergerak
- 1 Berputar di
tempat - 2 Berayun  atau melingkar kurang  dari  50% bergerak progresif dan tidak ada gelombang 3 Progresif Gerakan massa (50-80%) 4 Progresif, gesit dan segera membentuk gelombang 90% sperma motil 5 Sangat progresif, gelombang sangat cepat spermatozoa
menunjukkan 100% motil aktif
Spermatozoa dengan motilitas baik dapat  dihitung  dari  100  spermatozoa secara  berurutan  dan  diperiksa  dalam  4-7 lapangan  pandang.  Setelah  itu  dilakukan klasifikasi untuk menentukan setiap kategori  motilitas  dan  dinyatakan  dalam persentase  spermatozoa  dengan  motilitas baik, yaitu jika spermatozoa bergerak lurus ke depan, cepat, lincah dan aktif (Iriandini et  al .,  2013;  Ghosal et  al ,  2013;
Alagammal et  al ,  2013;  Kurniati et  al .,
2011).

## 2. Jumlah Spermatozoa
Suspensi  spermatozoa  dari  kauda epididymis  dimasukkan  ke  dalam  kamar hitung improved neubeur dan  konsentrasi spermatozoa  dihitung  pada  5  bilik  dengan menggunakan rumus berikut :
Y x x = Y x 10.000/mm 3 =

## Y x 10 Juta/mL
Keterangan:
Y =  Jumlah  spermatozoa  pengamatan
dalam 5 kotak besar
400  =  Total  kotak  kecil  dalam  kamar hitung
80 =  Jumlah  kotak  kecil  dalam  5  kotak besar
200  = Pengenceran 200 kali
0,1  = Volume kotak hitung (mm3)
(Iriandini et al ., 2013; Dethan et al ., 2010; Ghosal et  al .,  2013;  Fatimah,  2012; Hongbao et al ., 2006).

## 3. Abnormalitas Spermatozoa
Satu  tetes  suspensi  spermatozoa diapus  di  atas  gelas  objek  dengan pewarnaan  eosin  negrosin  dan  diamati  di bawah mikroskop. Jumlah  spermatozoa
yang abnormal  (D) dilakukan  dengan  cara melihat  kriteria-kriteria  spermatozoa  yang abnormal,  dan  dapat  dihitung  dari  100 spermatozoa. Persentase abnormalitas dihitung menggunakan rumus:
Keterangan:  D  =  Jumlah  spermatozoa abnormal  (Julaeha et  al ,  2013;  Ghosal et al ., 2013; Nair et al ., 2014).

## 4. Viabilitas Spermatozoa
Empat puluh suspensi spermatozoa diletakkan  di  atas  kaca  objek  dan  diberi pewarna  eosin  negrosin.    Persentase didapatkan dengan menghitung
spermatozoa  mati  dari  100  spermatozoa dan  diperiksa  dalam  10  lapangan  pandang yangkemudian dihitung dengan rumus :
Keterangan: C = Jumlah spermatozoa yang mati (terwarnai eosin) (Julaeha et al ., 2013; Ghosal et al , 2013; Asadi et al , 2014).

## F. Analisa Data
Analisa  data  penelitian  dilakukan
dengan  secara  deskritif  untuk  melihat perbedaan motilitas, abnormalitas,
viabilitas dan jumlah spermatozoa terhadap semua kelompok perlakuan. Data
yang  diperoleh  dianalisa  menggunakan SPSS  21  yang  meliputi  uji  homogenitas, uji  kenormalan,  uji  parametrik  (Anova) atau non parametrik ( Kruskall Wallis )

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Uji Skrining Fitokimia
Hasil  uji  skrining  fitokimia  kulit batang pakan banyu ( C. argyratus Blume) dapat dilihat pada Tabel II di bawah ini.
Tabel II. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Kulit batang Pakan Banyu ( C.
argyratus Blume) Identifikasi Hasil Tanin Pereaksi FeCl 3 (+) Flavonoid Pereaksi HCl pekat + Mg (-) Alkaloid Pereaksi Meyer (+) Pereaksi Wagner (+) Steroid
Pereaksi  kloroform  +  asam  asetat anhidrat + H 2 SO 4 (p) (+)

## Saponin
- Uji busa + 2 mL air (+)

## B. Kualitas dan Kuantitas Spermatozoa

## 1. Motilitas Spermatozoa
Ekstrak  etanol  kulit  batang  pakan banyu  ( C.  argyratus Blume)  memberikan perbedaan bermakna ( p <0,05)
dibandingkan  dengan  kelompok  control normal  yang  menunjukkan  penurunan motilitas spermatozoa dengan dose- dependent . Hasil rerata motilitas
spermatozoa  tiap  kelompok  perlakuan terdapat pada Gambar 1 berikut ini.
Gambar 1. Grafik  rerata  motilitas spermatozoa tiap kelompok data dalam bentuk mean±SEM
Keterangan: * menunjukkan perbedaan bermakna dengan kelompok kontrol normal ( p <0,05, n=5)
Pada  Gambar  1  terlihat  bahwa semakin tinggi dosis ekstrak yag diberikan maka  menurun  jumlah  spermatozoa  yang motil.  Penurunan  ini  dapat  disebabkan karena adanya kandungan tanin yang dapat menggumpalkan  sperma  dengan  mengikat enzim  kunci untuk sintesis  protein
sehingga menurunkan kualitas nutrisi yang dibutuhkan  oleh  semen.  Aktivitas  protein dinein  yang  terdapat  pada  ekor  sperma akan  terhambat  dengan  adanya  tannin sehingga megganggu motilitas spermatozoa.  (Hartini,  2011;  Muslichah et al , 2014)

## 2. Jumlah Spermatozoa
Hasil  uji  jumlah  spermatozoa
menunjukkan perbedaan bermakna
( p <0,05) dengan kelompok kontrol normal.
Hal  ini  dapat  diamati  pada  Gambar  2 berikut ini.
Gambar 2. Grafik rerata jumlah spermatozoa tiap kelompok  data  dalam bentuk mean±SEM Keterangan: * menunjukkan perbedaan bermakna dengan kelompok kontrol normal ( p <0,05, n=5)
Jumlah spermatozoa yang menurun ini  dapat  disebabkan  adanya  senyawa antifertilitas saponin yang dapat menghambat  terjadinya  spermatogenesis. Proses  penghambatan  ini  terjadi  saat diferensiasi transformasi morfologik spermatid membentuk spermatozoa melalui  penghambatan  suplai  senyawa yang  dibutuhkan  saat  proses  tersebut. Selain  itu  senyawa  aktif  pada  ekstrak  ini juga  bersifat  sititoksik  terhadap  sel-sel sertoli  yang  menyebabkan  keruskaan  sel tersebut sehingga terjadi degenerasi sel-sel spermatogenik.  Sel  sertoli  berperan  dalam memberikan nutrisi sehingga ketika terjadi kerusakan  sel  ini  maka  pemberian  nutrisi akan terganggu sehingga sel-sel
spermatogenik  tidak  dapat  berkembang (Nurcholidah et  al ,  2013;  Siswanti et  al , 2003).

## 3. Abnormalitas Spermatozoa
Hasil uji statistic terhadap abnormalitas  spermatozoa  menunjukkan
perbedaan bermakna( p <0,05) dengan kelompok  kontrol  normal  yang  dapat dilihat pada Gambar 3 berikut ini.
Gambar  3. Grafik  rerata  abnormalitas spermatozoa  tiap  kelompok data dalam bentuk mean±SEM Keterangan  : * menunjukkan  perbedaan bermakna dengan kelompok kontrol normal ( p <0,05, n=5)
Berdasarkan data kualitatif
menunjukkan penurunan persentase morfologi  normal  spermatozoa.  Bentuk yang  abnormal  tersebut  yakni  adanya kepala  putus,  ekor  menggulung,  kepala pipih,  bagian  tengah  melekuk,  kepala pecah, ekor putus seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4.
Peningkatan  persentase  morfologi spermatozoa yang didsebabkan oleh abnormalitas  primer  dan  sekunder  (Harlis,
2011). Abnormalitas primer yang
ditemukan  dalam  penelitian  ini  meliputi kepala pipih, kepala putus, ekor
menggulung,  kepala  pecah,  bagian  tengah melengkuk, sedangkan abnormalitas sekunder  yang  ditemukan  pada  penelitian ini meliputi ekor putus.
Gambar  4. Morfologi  spermatozoa  tikus dengan pewarnaan eosin negrosin  (perbesaran  400x) (a)  Kepala  putus;  (b)  ekor menggulung; (c) Kepala pipih; (d)  Kepala  pecah;  (e)  bagian tengah  melekuk;  (f)  ekor putus
Abnormalitas  spermatozoa  primer dapat terjadi disebabkan karena kandungan dari  zat  alkaloid  yang  diduga  memiliki sifat  antifertilitas.  Senyawa  antifertilitas memiliki  mekanisme  kerja  melalui  efek sitotoksik  dan  efek  hormonal  sehingga menghambat laju metabolisme sel spermatogenik akibat gangguan keseimbangan sistem hormon (Susetyarini,
2003).  Beberapa  organel  penyusun  sel target  seperti  sel  leydig  juga  rusak  akibat adanya  alkaloid.  Selain  itu  alkaloid menyebabkan vakuolisasi
pada
mitokondria, yang disebabkan ketidakcukupan dari suplai hormon.
Apabila  kadar  hormon  tidak  mencukupi kebutuhan  sel,  maka  dapat  menyebabkan timbulnya gagal testis.
Selain itu senyawa sterol dan tanin yang  terdapat  pada  ekstrak  etanol  kulit batang pakan banyu ( C.  argyratus Blume)
juga mengakibatkan pembentukan
spermatozoa  yang  abnormal.  Sterol  dapat mengubah  metabolisme  hormon  androgen yang dapat menurunkan testosteron sehingga terjadi penurunan kadar dihidrotestosteron (DHT)
dan
mengakibatkan  penurunan  ketebalan  sel epitel  dan  berat  kalenjar  prostat  (Winarto et  al., 2011;  Harlis,  2011;  Ravika,  2014).
Tanin juga dapat menyebabkan pengerutan sel  sehingga  terjadi  kerusakan  membran plasma yang akan mengakibatkan peningkatan  permeabilitas  membran  sel pada kepala spermatozoa.  Kerusakan pada kepala spermatozoa juga merusak membran akrosom yang akan mengeluarkan enzim-enzim hidrolitik
sehingga  tudung  yang  dimiliki  akrosom tidak utuh (Amarudin, 2012; Muslichah et
al , 2014).

## 4. Viabilitas Spermatozoa
Pemberian  ekstrak  etanol  kulit
batang pakan banyu ( C.  argyratus Blume)
dapat  meningkatkan  persentase  kematian spermatozoa dan data statistik menunjukkan persentase kematian berbeda
bermakna dengan kelompok control ( p <0,05) seperti pada Gambar 5 berikut ini.
Gambar  5. Grafik  rerata  viabilitas spermatozoa tiap kelompok data dalam bentuk mean±SEM
Keterangan  : * menunjukkan  perbedaan bermakna dengan kelompok kontrol normal ( p <0,05, n=5)
Viabilitas merupakan proporsi daya hidup  spermatozoa  dalam  cairan  semen. Pembuahan  tidak  terjadi  jika  viabilitas rendah sebab spermatozoa yang telah mati sebelum  membuahi  sel  telur.  Penurunan viabilitas yang ditandai dengan peningkaan  spermatozoa yang  mati terjadi karena adanya hambatan di dalam epididimis  sebagai  tempat  pematangan spermatozoa karena berkurangnya hormon testosterone (Muslichah et al ., 2014).
Tumbuhan yang mengandung golongan  senyawa  saponin,  alkaloid, steroid,  dan  tanin  dapat  memberikan  efek antifertilitas  dengan  mekanisme  yang berbeda-beda.  Salah  satu  senyawa  yang memiliki aktifitas antifertilitas yaitu senyawa  tanin.  Senyawa  tersebut  dapat berefek  toksik  terhadap  spermatozoa
karena  sifat  astringent  dari  tannin  akan mengerutkan sel dan menganggu permeabilitas membran sel sperma. Hal ini mempengaruhi  viabilitas  sperma  karena kebutuhan  nutrisi  terganggu  yang  akan membuat sel sperma mati (Muslichah et al ,
2014).

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  ini  dapat disimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol  kulit  batang  pakan  banyu  ( C.
argyratus Blume).memberikan efek
antifertilitas  denganmenurnkan  jumlah, viabilitas  dan  motilitas  erta  meningkatkan jumlah  abnormalitas  spermatozoa  pada dosis 100, 200 dan 500 mg/kg BB

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan terima kasih atas Universitas Lambung Mangkurat yang telah  membiayai  penelitian  ini  dari  DIPA Universitas  Lambung  Mangkurat  tahun
2020  No.  02317.2.6777518/2020  dengan
No SP. 212.252/UN8.2/PL/2020.

## DAFTAR PUSTAKA
Alagammal,  M.,  G.  Sakthidevi,  &  V.  R. Mohan.  2013. Anti-fertility  activity of whole plant extracts of Polygala rosmarinifolia Wight & Arn against male albino rats . Journal of Advanced Pharmaceutical Sciences. Research Article 3 (1): 385 – 393.
Amarudin.  2012.  Pengaruh  Merokok Terhadap  Kualitas  Sperma  pada Pria  dengan  Masalah  Infertilitas
Studi  Kasus  Kontrol  di  Jakarta Tahun  2011.  Skripsi.  Universitas Indonesia. Jakarta.
Asadi, M. H., F. Zafari., A. Sarveazad., M.
Abbasi.,  M.  Safa.,  M.  Koruji.,  A.
Yari, & R. A. Miran. 2014. Saffron Improves Epididymal Sperm Parameters  in  Rats  Exposed  to Cadmium . Nephro Urol Mon 6 (1):
1 – 6 Astuti, S. M. 2011. Skrining Fitokimia dan Uji  Aktifitas  Antibiotika  Ekstrak Etanol  Daun,  Batang,  Bunga  dan Umbi Tanaman Binahong ( Anredera cordifolia (Ten) Steenis). 3: 1-12.
Evans  WC,  2009.  Trease  and  Evans' pharmacognosy:  Elsevier  Health Sciences.
Dethan,  A.  A.,  Kustono,  &  H.  Hartadi. 2010.  Kualitas  dan  Kuantitas Sperma  Kambing  Bligon  Jantan yang  diberi  Pakan  Rumput  Gajah dengan Suplementasi Tepung Darah. Buletin Peternakan 34(3):145-153, Oktober 2010 Fatimah.  2012.  Pembuatan  dan  Uji
Sitotoksisitas  Nanopartikel  emas  – Dendrimer Poliamidoamin (Pamam) Generasi  4  Terhadap  Sel  kanker.
Skripsi. Universitas Indonesia.
Fauzi,  R.,  K.B.  Nugroho,  A.H.  Azhari,  &
K. Nisa. 2014. Uji  Potensi  Ekstrak Tumbuhan Pakan Banyu ( Oriocnide sp.)  sebagai  Obat  KB Khas  Kal-Sel.  PKM  Penelitian Universitas  Lambung  Mangkurat. Banjarbaru
Fauziyah, A. 2013. Pengaruh Radiasi Sinar X Terhadap Motilitas Sperma pada Mencit  ( Mus  Muculus ).  Skripsi. Universitas Negeri Semarang
Ghosal,  S.,  I.  Chakraborty,  &  N.  K. Pradhan.  2013. Jussiaea  repens  L Induced Morphological Alterations in Epididymal Spermatozoa of Rat. Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res 22 (2): 288-295.
Harborne JB, 1998. Phytochemical
methods  A  Guide  to  modern
techniques of plant analysis : springer.
Harlis,
W. O. 2011. Morfologi Spermatozoa  Epididymis  Tikus
( Rattus  norvegicus ,  L.)  Setelah Diperlakukan Ekstrak Herba Maniran  ( Phyllanthus  niruri ,  L.). Wa  ode  harlis//paradigma,  15  (1):
39-44.
Hartini.  2011.  Pengaruh  Dekok  Daun Jambu Biji Merah ( Psidium guajava .L.) Terhadap Jumlah Kecepatan dan Morfologi Spermatozoa  Tikus  Putih  Jantan ( Rattus norvegicus ). Program Studi Ilmu Biomedik.
Hasanah,  I.  W.  2009.  Pengaruh  Ekstrak
Daun  Pegagan  ( Centella  asiatica )
Terhadap  Spematogenesis  Mencit (Mus  musculus).  Skripsi.  UIN.
Malang.
Hongbao, M. A., K. J. Shieh, & S. L. Lee. 2006.  Study  of  ELISA  Technique. Nature and Science 4(2): 36 - 37.
Iriandini,  J.,  L,  Tendean  &  Benny,  W.
2013.  Pengaruh  Aplikasi  Cahaya
Terhadap Spermatozoa Mencit Jantan ( Mus Musculus L.). Skripsi. Universitas Sam Ratulang. Manado. Julaeha  E.,  D.  M.  Marlini,  &  O.  S. Sondang.
2013. Pengaruh Pemberian  Senyawa  C30  Sterol yang di Isolasi dari Daun Clerodendron  serratum Terhadap Kualitas  Sperma  Mus  musculus Secara  in  vivo.  Prosiding  Seminar
Nasional  Sains  dan  Teknologi Nuklir. Bandung.
Kurniati,  R.,  R.  Aryani,  &  S.  Ibrahim.
2011. Jumlah dan Motilitas Spermatozoa Mencit ( Mus musculus L)  yang  di  Papari  Obat
Nyamuk  Elektrik  Berbahan  Aktif D-Allethrin.
Mulawarman Scientifie 10 (2): 133 – 138. Liu,  J.  2005. Oleanolic  acid  and  ursolic acid: Research perspectives . Journal  of  Ethnopharmacology.
(100): 92-94.
Muhgni,  A.  I.  2013.  Uji  Aktifitas  Ekstrak Etanol  70%  Kulit  Batang  Kapuk
Randu  ( Ceiba  pentandra (L.) Gaertn) Sebagai Penghambat Pembentukan  Batu  Ginjal  pada Tikus Putih Jantan. Skripsi.UniversitasSyarif Hidayatullah. Jakarta. Muslichah, S., Wiratmo., D. Holidah, & F. A.  Fajrin.  2014.  Potensi  Biji  Saga ( Abrus precatorius ) Sebagai Kontraksi Pria.  Pharmacy, 11 (2).
Mycek, M. J., Harvey, R. A, & Champe, P.
C.  2001.  Farmakologi  Ulasan Bergambar Edisi 2. Penerbit Widya Medika. Jakarta.
Nair, S.V. G, & T. Rajamohan. 2014. The
Role of Coconut Water on
Nicotine-Induced Reproductive
Dysfunction  in  Experimental  Male
Rat  Model .  Food  and  Nutrition
Sciences 5: 1121-1130.
Nurcholidah,  S.,  B.  Purwantara.,  I.
Supriatna,  &  A,  Winarto.  2013. Perkembangan Sel-Sel Spermatogenik dan Kualitas
Sperma  Pascapemberian  Ekstrak Pegagan  ( Centella  asiatica ).  JITV 18 (3).
Oyedeji,  K.O.,  A.  F.  Bolarinwa,  &  A.  A. Azeez.  2013. Effect  of  Methanolic Extract of Vernonia Amygdalina on Reproductive  Parameters  in  Male Albino  Rats .  Asian  Journal  of Pharmaceutical and Clinical Research 6 (2): 234 - 236.
Ravika, M. 2014. Uji Aktifitas Ekstrak Etil Asetat  Lumut  Hati Mastigophora diclados (Bird.  Ex  Web)  Nees terhadap  Kualitas  Sperma  dan Dentitas  Sel  Spermatogenik  pada Tikus  Putih  ( Rattus  norvegicus )
Jantan    Galur Sprague  dawley Secara in Vivo.
Skripsi. Universitas  Islam  Negeri  Syarif Hidayatullah. Jakarta
Rekha.  S,  &  S.  Chandrashekhara.  2014.
Antifertility  Effect  Ziziphus  jujuba mill.  World Journal  Pharmacy  and
Pharmaceutical  Sciences  3  (3): 1363-1370.
Sihabuddin, M., A. Maria., J.  S. Flourisa., B.  Pramesti.,  S.  Musta’ina.,  A. Radjaram.,  H.  Aucky,  &  E.  W.  B. Prajogo.  2011. Pharmacokinetic Parameters Determination of Gendarusin a in Men Subject Urine After  Administration  of  Ethanol
Extract  of    Justicia  gendarussa Burm.  f.  Leaf  (Ethno  Medicine Research). Jurnal  Medika  Planta  1 (4): 59-68.
Siswanti, T., O. P. Astirin, & T. Widiyani. 2003.  Pengaruh  Ekstrak  Temu Putih  ( Curcuma  zedoaria Rosc.) terhadap Spermatogenesis dan Kualitas Spermatozoa Mencit ( Mus musculus L.).  Bio  SMART.  5  (1): 38-42. Susetyarini, E. 2003. Jumlah Spermatogenesis  Tikus  Putih  yang diberi  Tanin  Daun  Beluntas  ( )
Sebagai Sumber Belajar. 2: 16-159 A. Widyawati,  T.  2007.  Aspek  Farmakologi Sambiloto ( Andrographis paniculata Nees). Majalah Kedokteran  Nusantara  40  (3):  216
– 222.
Winarto, M, W., B. Nuratmi, & Y, Astuti. 2011.  Pengaruh  Infus  Buah  Pare ( Momordica charantia L.) terhadap
Kelenjar  Prostat Tikus Putih.
Media  Litbang  Kesehatan  11  (2):
41-44.
Yeboah, A. A., H. Lambrechts., D. Brink., F.  Hiten,  &  E.  A.  Gyawu.  2013. Analysis  of  Oleanolic  Acid  and Ursolic Acid, Potential Antifertility Agents in Moringa (Moringa oleifera) Seed . Journal of Agricultural Science and Technology A (3): 989-999.