## GAMBARAN HISTOPATOLOGI EKSPRESI INTERFERON GAMMA (IFNγ) PADA FIBROADENOMA MAMMAE (FAM) DAN INVASIVE NO SPECIAL TYPE (NST) BREAST CARCINOMA
INTERFERON GAMMA EXPRESSION PROFILE (IFNγ) ON FIBROADENOMA MAMMAE (FAM) AND INVASIVE BREAST CARCINOMA OF NO SPECIAL TYPE (NST)
Yuni Prastyo K, Siti Amarwati, Udadi Sadhana, Dik Puspasari Bagian Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro/ RSUP Kariadi Semarang Korespondensi: dr. Yuni Prastyo K, Sp. PA. Email : unique_pathologist@yahoo.co.id
ABSTRAK
International Agency for Research Cancer tahun 2012 melaporkan bahwa 1,7 juta wanita menderita kanker payudara. Penyakit ini masih menjadi penyebab utama kematian kanker pada wanita. Fibroadenoma merupakan lesi jinak payudara yang sering ditemukan. Terdapat 50% dari seluruh biopsi payudara.. Morfologi terbanyak pada keganasan payudara adalah Invasive NST breast carcinoma sebanyak 70%-80%. Berbagai faktor terlibat dalam pertumbuhan tumor payudara, antara lain genetika, diet, faktor reproduksi, hormon dan imunitas. Gangguan mekanisme imun memiliki peran penting pada patogenesis terjadinya tumor. Wanita dengan tumor payudara memperlihatkan adanya kekacauan pada sistem imun tubuh. Hal ini ditandai dengan rendahnya kadar Interferon ᵧ dan peningkatan IL4, IL6 serta IL10. Murine melaporkan tentang peran penting Interferon ᵧ dalam kekebalan tumor. Ketika terjadi penurunan kadarnya, secara spontan akan memicu tumbuhnya tumor. Interferon ᵧ sitotoksik pada beberapa sel-sel ganas dan memiliki aktivitas anti-angiogenik. Namun, penggunaannya di klinis masih terbatas. Tujuan penelitian adalah untuk membuktikan adanya perbedaan ekspresi Interferon ᵧ pada sediaan histopatologi. yang terdiagnosis sebagai fibroadenoma mammae intrakanalikular dan perikanalikular variant (FAM) dan Invasive No Special Type (NST) breast carcinoma. Penelitian ini merupakan jenis penelitian analitik observasional dengan desain case control. Sampel terbagi 2 yaitu kelompok dengan diagnosa  fibroadenoma mammae intrakanalikular dan perikanalikular variant  sebanyak 10 sampel dan kelompok Invasive NST breast carcinoma  sebanyak 27 sampel. kemudian dilanjutkan pemeriksaan imunohistokimia interferon γ. Data yang terkumpul tidak terdistribusi normal, sehingga dilakukan uji non-parametrik dengan menggunakan uji Fishers exact dan hipotesis satu arah (one-sided). Data hasil Penelitian diolah menggunakan uji Fisher’s exact dan hipotesis satu arah (one sided) dan didapatkan tingkat signifikansi p = 0.036 (p < 0.05). Terdapat perbedaan proporsi ekspresi Interferon γ yang positif antara FAM intrakanalikular dan perikanalikular variant dan NST, di mana proporsi ekspresi positif Interferon γ pada FAM intrakanalikular dan perikanalikular variant lebih besar dari pada NST. Secara statistik perbedaan ini bermakna (p < 0.05). Dapat disimpulan bahwa terdapat perbedaan bermakna tentang ekspresi interferon ᵧ pada sediaan histopatologi fibroadenoma mammae intrakanalikular dan perikanalikular variant dibanding pada sediaan Invasive NST breast carcinoma
Kata Kunci: Interferon γ, fibroadenoma mammae, Invasive breast carcinoma of No Special Type

## ABSTRACT
International Agency for Cancer Research in 2012 reported that 1.7 million women suffer from breast cancer. The disease is still the leading cause of death of cancer in women. Fibroadenoma mammae is a benign lesion that are often found.  There are 50% of all mamae biopsies. The most common type in breast cancer is invasive breast carcinoma of no special type (70%-80%). Various factors are involved in the growth of breast tumors,  like  genetics,  diet,  reproductive  factors,  hormones  and  immunity.  Impaired  immune  mechanisms  have an important role in the pathogenesis of tumors. Women with breast tumors showed havoc on the body’s immune system. It is characterized by low levels of interferon ᵧ and an increase in IL4, IL6 and IL-10. Murine report that Interferon ᵧ an important role in tumor immunity. When there is a drop in levels, will spontaneously trigger the growth of tumors. Interferon ᵧ cytotoxic in several malignant cells and have anti-angiogenic activity. However, in clinical use is still limited. Aim of research : to prove the existence of differences the expression of interferon
ᵧ  on  histopathology  preparation.  diagnosed  as  fibroadenoma  mammae  intrakanalikular  dan  perikanalikular variant and Invasive breast carcinoma of no special type. This study is observational analytic with case control design. Samples were divided into 2 groups with the diagnosis of fibroadenoma mammae intrakanalikular dan perikanalikular variant (FAM) as many as 10 samples and Invasive breast carcinoma of No Special Type (NST) as many as 27 samples. then continued interferon ᵧ immunohistochemical examination. The collected data were not normally distributed, so that a non-parametric tests using Fishers exact test and a hypothesis one direction (one-sided).  Research  result:  Using  Fisher’s  exact  test  and  a  hypothesis  one  direction  (one  sided)  obtained a  significance  level  of  p  =  0.036  (p<  0.05).  There  are  differences  in  the  proportion  of  positive  expression  of interferon γ between FAM intrakanalikular and perikanalikular variant, and NST, where the proportion of positive expression  of  interferon  γ  in  FAM  intrakanalikular  and  perikanalikular  variant  is  greater  than  the  NST.  This difference was statistically significant (p <0.05). There is a significant difference on the expression of interferon ᵧ on histopathologi preparation betwen fibroadenoma mammae intrakanalikular and perikanalikular variant, and Invasive breast carcinoma of No Special Type
Keywords: Interferon γ, fibroadenoma mammae, Invasive breast carcinoma of No Special Type
PENDAHULUAN
International Agency for Research Cancer (IARC) tahun 2012 melaporkan bahwa 1,7 juta wanita menderita kanker payudara, bahkan 5 tahun kedepan diperkirakan 6,3 juta manusia akan mengalami kelainan yang sama (WHO,2013; IARC,2012). Penyakit ini pada tahun 2012 masih menjadi penyebab utama kematian kanker pada wanita dengan jumlah kematian 522.000 per tahun (Larsen et al , 2013). Tumor payudara terbagi menjadi dua yaitu lesi jinak dan ganas. Fibroadenoma mammae merupakan lesi jinak payudara yang paling sering ditemukan (Robbins dan Kumar, 2014; Rosai dan Ackerman, 2004). Breast  Cancer  Institute melaporkan bahwa insidensi fibroadenoma  mammae sekitar 9% dari populasi wanita (NSW, 2005). Literatur lain menyebutkan FAM ditemukan sekitar 50% dari seluruh biopsi payudara (Greenberg et al ; 1998). Invasive  breast  cancer merupakan karsinoma terbanyak pada wanita. Gambaran morfologi invasive terbesar adalah Invasive breast carcinoma of  no  special  type sebanyak 70%-80% (Robbins dan Kumar 2014). WHO menyebutkan bahwa kasus NST tersebut terdapat 40%-75% dari kasus- kasus yang dipublikasikan (WHO,2013).
Setelah dilakukan operasi pengambilan tumor FAM, klinisi tetap melakukan pemantauan dan evaluasi secara berkala (Greenberg et al ; 1998). Studi dengan skala luas mempresentasikan bahwa  fibroadenoma  mammae  memiliki  resiko dalam jangka panjang berubah menjadi breast carcinoma ( a  low  long-term  risk ) (Rosai dan Ackerman; 2004). Transformasi keganasan pada komponen epithelial FAM dilaporkan sebanyak 0,002%-0,0125% (Rosai dan Ackerman, 2004;
Greenberg et al , 1998). Penelitian lain yang dilakukan memperlihatkan adanya peningkatan resiko keganasan payudara sebanyak 1,3-2,1x pada wanita dengan FAM dan menyebutkan bahwa setelah dilakukan pengambilan tumor,  terdapat pembesaran kembali sekitar 25% selama follow up (Greenberg et al ; 1998).
Tumor payudara, seperti juga tumor lainnya, tumbuh melewati berbagai tahapan mulai dari jinak, bertransformasi menjadi ganas dan invasive kemudian bermetastasis. Predisposisi genetik ditambah dengan lingkungan tertentu mengubah sel lebih rentan terhadap paparan karsinogenik. Proses ini membutuhkan waktu yang sangat lama. Berbagai faktor terlibat dalam pertumbuhan tumor payudara, antara lain genetika, diet, faktor reproduksi, hormon dan imunitas (Robbins dan Kumar, 2014; Rosai dan Ackerman, 2004; WHO, 2012; Suresh et al , 2011).
Postulat Virchow menyebutkan bahwa cancer bermula  pada  lokasi  terjadinya  inflamasi kronik. Proses inflamasi menyebabkan juga proses proliferasi sel. Jaringan yang terkena jejas, akan menghasilkan proses nekrotik atau kematian sel. Sel-sel yang telah nekrotik ini akan merilis sinyal-sinyal  pro-inflamasi  ke  lingkungan  mikro jaringan disekitarnya. Sinyal-sinyal ini akan mensekresikan bioaktif untuk menstimulasi sel- sel disekitarnya untuk berproliferasi (De Nardo dan Coussens, 2007) . Proses proliferasi dan inflamasi  akan  berhenti  ketika  agen  penyebab berhasil dihilangkan dan proses regenerasi jaringan telah selesai. Namun sebaliknya, ketika sebab jejas masih ada, produk sel-sel yang mati terus berguliran, maka siklus proliferasi sel juga terus akan berjalan. Sinyal mitogenik yang terus
menerus ini akan memfasilitasi tumbuhnya tumor yang ‘ insipiens ’ (Hanahan dan Weinberg, 2011).  Sebagai  tambahan,  sel-sel  inflamasi juga me- release oksigen  radikal  spesifik  (ROS) yang merupakan mutagen aktif sehingga terjadi instability gen yang mempercepat berkembangnya tumor (Hanahan dan Weinberg, 2011; NSW, 2005). Saat homeostasis jaringan berubah, makrofag dan sel mast akan mengeluarkan sitokin, kemokin dan mediator bioaktif lainnya untuk merekrut leukosit dari sirkulasi ke dalam jaringan yang rusak. Rekruiting ini akan mengeliminasi agen patogen in situ. Namun pada saat yang bersamaan, sel dendritik akan mengambil antigen asing (termasuk antigen tumor) dan bermigrasi ke organ limfoid. Dalam organ tersebut, sel dendritik akan mempresentasikan antigen ke sel- sel imun adaptif. Pada  inflamasi  kronik,  yang  terjadi  kemudian adalah limfosit Treg, sel limfosit Thelper2 dan sel B yang teraktifasi akan terakumulasi. Sel-sel ini akan mensekresikan pro-growth faktor sitokin IL4,  IL6,  IL10,  dan  TGFβ  yang  memperbesar respon sel-sel imun pro-tumor dan menghentikan aktifitas sel T sitotoksik (Hanahan dan Weinberg, 2011).  Bagaimana  mekanisme  inflamasi  kronik mempromosikan tumor dapat dilihat pada gambar I.1. Sel tumor yang telah terbentuk juga memiliki kemampuan untuk mempertahankan sinyal proliferatif. Sel tumor dapat menghasilkan faktor pertumbuhan sendiri dan merangsang sel normal disekitarnya  untuk mensuplai faktor-faktor pertumbuhan (Hanahan dan Weinberg, 2011).
Gangguan mekanisme imun memiliki peran penting pada patogenesis terjadinya tumor. Penurunan jumlah dan fungsi limfosit, kelainan proliferasi limfoid dilaporkan pada banyak studi tentang tumor (Luiz et al , 2012). Berbagai penelitian menunjukkan bahwa sitokin memiliki aktivitas anti-tumor yang luas dan telah diaplikasikan ke berbagai terapi tumor (Sylvia dan Kim, 2011). Sebagai contoh, FDA mengesahkan dua sitokin untuk pengobatan tumor yaitu Interleukin 2 (IL2) dan Interferon α (IFNα). Hellenic Oncology Group melaporkan berkurangnya fenomena autoimun di antara pasien melanoma selama atau setelah terapi  ajuvan  Interferon  α.  Selain  itu  digunakan pula untuk pengobatan beberapa keganasan hematologi, sarkoma kaposi dan tumor ginjal. Penelitian lain melaporkan efektif juga sebagai terapi untuk hairy  cell  leukemia dan leukemia myelogenous kronis (Sylvia dan Kim, 2011). IL10
sendiri dilaporkan berfungsi menghambat sitokin Th1 pada penderita tumor vesica urinaria (Luo et al. , 2012). Penderita dengan tumor laring dan supraglotis  memperlihatkan  adanya  defisiensi Interferon  ᵧ  dan  menunjukkan  perbaikan  setelah keadaan ini diperbaiki pasca operasi (Luiz et al. , 2012). Biomarker  pro-inflamasi  dan  respon imun terkait dengan resiko tumor payudara dan prognosisnya (NIH, 2014). Wanita dengan tumor payudara memperlihatkan adanya kekacauan pada sistem imun tubuh. Hal ini ditandai dengan rendahnya kadar Interferon ᵧ dan peningkatan IL4, IL6 serta IL10. Regulasi imun dapat menjelaskan seberapa besar kekacauan yang terjadi dalam sistem tubuh akibat tumor dan pengaruhnya pada survival outcomes (Cecile et al ., 2011) . Penelitian sebelumnya melaporkan adanya korelasi antara breast cancer dengan faktor polimorfisme gen yang mengontrol sitokin Interferon ᵧ dan IL-10 (Julie et al. , 2005). Murine melaporkan juga tentang peran penting Interferon ᵧ dalam kekebalan tumor. Ketika terjadi penurunan kadarnya, secara spontan akan memicu tumbuhnya tumor. Interferon ᵧ memiliki aktivitas anti-angiogenik sehingga sitotoksik pada beberapa sel-sel ganas. Namun, penggunaannya di klinis masih terbatas (Sylvia dan Kim, 2011).
Dari latar belakang diatas maka penulis berkeinginan  untuk mengadakan penelitian tentang apakah ada perbedaan ekspresi Interferon ᵧ pada sediaan histopatologi tumor payudara baik yang di diagnosis sebagai Fibroadenoma mammae intrakanalikular dan perikanalikular  variant maupun pada sediaan Invasive  breast  carcinoma of no special type.

## METODE
Ruang lingkup disiplin ilmu penelitian ini meliputi bidang ilmu Patologi Anatomi, dan Patobiologi. Penelitian ini merupakan jenis penelitian analitik observasional, dengan desain case  control. Tujuan penggunaan desain ini adalah membedakan variabel ukur interferon γ pada dua kelompok. Pemeriksaan histopatologi dilakukan di Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro dan RSUP Dr Kariadi Semarang serta pengecatan imunohistokimia interferon γ dilakukan di  Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Gajah Mada. Kemudian, ekspresi interferon γ dibaca oleh 2 orang ahli
patologi anatomi di Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang.
Penelitian dilakukan Juli sampai Desember 2015. Populasi adalah slide HE (Hematoxillin Eosin)  dan  blok  parafin  yang  telah  di  diagnosa Fibroadenoma  mammae , dan Invasive  breast carcinoma  of  No  special  Type di Laboratorium Patologi Anatomi RSUP dr. Kariadi Semarang pada 2 Januari 2012 sampai 31 Desember 2014. Sampel penelitian adalah slide HE dan blok parafin yang memenuhi kriteria inklusi dan eksklusi. Kemudian memperhatikan hal-hal berikut ini: gambaran morfologi histopatologi yang memperlihatkan minimal 500 sel tumor, sedikit area nekrosis, serta bukan dari sediaan Frozen  Section (FS). Sampel terbagi menjadi 2 kelompok yaitu : Kelompok dengan diagnosis Fibroadenoma mammae , intrakanalikular dan perikanalikular variant sebanyak 10 sampel, serta kelompok Invasive  carcinoma of  No Special Type sebanyak 27 sampel. Variabel bebas yang diteliti adalah ekspresi  Interferon  γ  pada  blok  histopatologi. sedangkan variabel  tergantung adalah jenis tumor payudara dengan lesi jinak diwakili oleh sampel dengan diagnosis Fibroadenoma mammae intrakanalikular dan perikanalikular  variant (skala ordinal) sedangkan lesi ganas yang diwakili oleh sampel dengan diagnosis Invasive  breast carcinoma of No Special Type . Ekpresi Interferon
γ adalah data primer hasil penghitungan skor sel- sel tumor  yang tercat positif terhadap antibodi
Interferon γ pada sampel, dengan hasil positif apabila sitoplasma sel tercat coklat (Tunon et al , 2007) dan dilakukan skoring semi kuantitatif. Data hasil pengecatan Interferon γ kemudian dibaca oleh dua orang ahli patologi menggunakan metode semi kuantitatif dengan penetapan skor seperti pada tabel 4.1. Penilaian setiap slide dilakukan sebanyak 10x / lapang pandang besar (400X) secara acak/ random . Kemudian dilakukan rerata hasil per-kelompok. Hasil positif adalah jika rerata ekspresi pengecatan interferon γ lebih dari nol dari 10 lapang pandang besar (LPB). Sedangkan hasil negatif jika rerata ekspresi pengecatan Interferon γ sama dengan  nol dari 10 lapang pandang besar. Skala yang digunakan pada variabel ini adalah skala ordinal.
Data yang terkumpul akan melalui proses editing,  coding,  entrying , dan cleaning data, kemudian dilakukan analisa statistik deskriptif dan analitik. Data yang terkumpul tidak terdistribusi normal, sehingga dilakukan uji non- parametrik dengan menggunakan uji Fishers exact dan hipotesis satu arah (one-sided). Analisis histopatologi  dimulai  dengan  blok  parafin  yang dipotong tipis, dilanjutkan dengan pengecatan imunohistokimia Interferon γ. Hasilnya diperiksa oleh dua orang ahli patologi anatomi. Penelitian ini telah mendapat ethical clearance dari komisi Etik Penelitian Kesehatan dan Kedokteran Universitas Diponegoro dan RSUP dr. Kariadi dengan nomor 279/EC/FK-RSDK/2015 dan surat ijin penelitian dengan nomor DL.00.02/1.11/1810/2015.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 5.1. Distribusi frekuensi jenis tumor payudara Jenis tumor payudara Frekuensi (n) Persentase (%) FAM 10 27 NST (grade I, II, III) 27 73 Total 37 100
Gambar 1. Skoring ekspresi Interferon γ. A. Skor 0. B. Skor 1. C. Skor 2. D. Skor 3. Perbesaran mikroskop cahaya 400 x  dengan pewarnaan imunohistokimia (Sumber Foto: Data Primer, 2015).
Tabel 5.2. Distribusi frekuensi ekspresi interferon γ Ekspresi interferon γ Frekuensi (n) Persentase (%) Negatif** 14 37.8 Positif* 23 62.2 Total 37 100 Keterangan :
*Positif:  rerata ekspresi pengecatan interferon γ lebih besar dari nol dari 10 lapang pandang besar **Negatif:  rerata ekspresi pengecatan interferon γ sama dengan nol dari 10 lapang pandang besar
Tabel 5.3 Crosstab perbandingan proporsi ekspresi interferon γ antara FAM dan NST
Ekspresi interferon γ Jenis tumor payudara Positif* Negatif** Total Frekuensi (n) Persentase (%) Frekuensi (n) Persentase (%) Frekuensi (n) Persentase (%) FAM 9 90 1 10 10 100 NST 14 51.8 13 48.2 27 100 Keterangan :
*Positif:  rerata ekspresi pengecatan interferon γ dari 10 lapang pandang besar lebih dari nol
**Negatif: rerata ekspresi pengecatan interferon γ sama dengan nol dari 10 lapang pandang besar
Diagram 5.1. Perbandingan ekspresi interferon γ antara FAM dan NST Tabel 5.4. Uji Hipotesis Value Df Asymp. Sig. (2-sided) Exact Sig. (2-sided) Exact Sig. (1-sided) Pearson Chi-Square 4.515 a 1 .034 Continuity Correction b 3.039 1 .081 Likelihood Ratio 5.187 1 .023 Fisher’s Exact Test .056 .036 N of Valid Cases 37
Tabel 5.4. adalah tabel uji hipotesis untuk menguji  tingkat  signifikansi  perbedaan  proporsi ekspresi Interferon γ antara FAM intrakanalikular dan perikanalikular  variant dengan NST, menggunakan uji Chi  Square didapatkan 1 sel yang nilai expected  count- nya kurang dari 5, maka tidak memenuhi syarat menggunakan uji Chi  Square. Sebagai alternatif menggunakan uji Fisher’s  exact dan hipotesis satu arah ( one sided )  didapatkan  tingkat  signifikansi  p  =  0.036 (p < 0.05). Terdapat perbedaan proporsi ekspresi Interferon  γ  yang  positif  antara  FAM  dan  NST, di  mana  proporsi  ekspresi  positif  Interferon  γ pada FAM intracanalicular dan pericanalicular variant lebih besar dari pada NST. Secara statistik perbedaan ini bermakna (p < 0.05).
Sistem kekebalan tubuh memiliki tiga peran utama dalam pencegahan tumor. Pertama, sistem kekebalan tubuh dapat melindungi host
dari virus yang menstimulasi tumbuhnya tumor dengan menghilangkan atau menekan infeksi virus tersebut. Kedua, waktu yang lebih cepat untuk menghapus patogen dan resolusi dari proses  inflamasi,  dapat  mencegah  pembentukan inflammatory environment tumor genesis . Ketiga, sistem kekebalan tubuh dapat mengidentifikasi dan menghilangkan sel-sel tumor berdasarkan ekspresi antigen tumor. Proses ketiga ini disebut tumor immune  surveillance , di mana sistem kekebalan tubuh mengidentifikasi sel-sel kanker dan atau pra- kanker dan kemudian berusaha menghilangkannya sebelum menyebabkan kerusakan (Swan dan Smith, 2007; Pardoll, 2003). Implikasi dari pengawasan sistem imun dan mekanisme kekebalan untuk pertahanan tumor. Jika sistem imun berhasil mendeteksi tumor berdasarkan neo antigen mereka dalam perubahan genetik, tumor akan hilang sebelum jelas secara
keberadaan sel tumor (Pardoll, 2003) (Gambar 6.2)
klinis. Mekanisme resistensi dari pengamatan sistem imun harus diaktifkan agar tumor dapat bertahan hidup. Sistem imun dapat mendeteksi
Gambar 6.2. Mekanisme sistem imun mendeteksi keberadaan sel tumor.
Inisiasi respon imun melibatkan strategi yang meningkatkan targeting dan presentasi antigen oleh sel-sel dendritik. Batasan peran dari STAT3 (Signal Transducer and Activator of Transcriptor) dalam memblok surveillance imun menunjukkan bahwa blokade STAT3 meningkatkan peran sel dendritik dalam mempresentasikan antigen
tumor. Sekali teraktivasi, respons anti-tumor secara  signifikan  ditingkatkan  melalui  blokade check  point imunologik. Akhirnya, terjadi peningkatan lalu lintas aktivasi sel-sel T ke dalam deposit metastasis. Hal ini berperan penting dalam membangkitkan respon anti-tumor secara maksimal (Pardoll, 2003).
Tabel 6.1. Perbedaan antara sel normal dan sel kanker Sel normal Sel kanker Implikasi pada imunitas terhadap kanker Genom stabil Perubahan genetik multipel Munculnya neoantigen multipel Transkriptom stabil Instabilitas epigenetik mayor Perubahan kadar densitas antigen Tidak ada invasi jaringan Invasi dan metastasis merupakan gambaran utama Berpotensi menginduksi aktivasi inflamasi imunitas alamiah dan adaptif Pola ekspresi sitokin dan faktor pertumbuhan yang stabil Ekspresi faktor pertumbuhan seperti sitokin dan VEGF dan TGF- β yang abnormal Berpotensi mempunyai efek inhibitori lokal pada imunitas alamiah dan adaptif Tabel 6.1 memperlihatkan, terdapat perbedaan  yang  spesifik  antara  sel  yang  normal dengan sel tumor baik dari komposisi antigen maupun perilaku biologis yang menyebabkan reaksi pada sistem imun. Karakteristik tersebut terkait langsung dengan kerusakan dalam jaringan yang merupakan elaborasi dari pro-inflammatory signal . Signal ini berasal dari berbagai sitokin dan kemokin yang menjadi inisiator sentral respon imun alamiah dan adaptif (Pardoll, 2003).
Neoplasia terjadi sebagai akibat dari perubahan seluler yang mengganggu keseimbangan antara pertumbuhan sel dan kematian sel. Perubahan
ini bisa disebabkan oleh ekspresi yang berubah dari beberapa faktor termasuk Interferon γ. Sitokin ini merupakan peptide dengan BM (berat molekul) 17 kDa yang disekresikan oleh limfosit dan Sel NK sebagai respon terhadap tantangan antigen, yang memiliki aktivitas antivirus, menghambat pertumbuhan sel, dan memodulasi diferensiasi sel. Interferon γ bekerja melalui aktivasi reseptor pada membran sel. 24,25 Kemampuan Interferon γ untuk menghambat pertumbuhan beberapa sel tumor, termasuk sel-sel tumor payudara, telah dibuktikan dalam berbagai studi. Pada beberapa literatur dikatakan bahwa Interferon γ mengobati berbagai
macam tumor dengan memperantarai efek anti proliferasi epitel tumor dan sel tumor payudara (Tunon et al , 2007; Stang et al , 2007; Hong et al , 2013). Penulis lain berpendapat bahwa pada sel- sel epitel payudara, efek anti proliferasi Interferon γ  terjadi  melalui  upregulasi  anggota  keluarga molekul apoptosis lewat penekanan ekspresi bcl-2 (Tunon et al , 2007). Penelitian Ghavami et al (2009)  menyebutkan  bahwa  Interferon  γ  juga menginduksi apoptosis melalui reseptor pada IRF- 1 (reseptor interferon 1) sel tumor payudara yang dimediasi oleh caspase (Ghavami et al , 2009; Gao et al , 2009 ) . Jalur aktivasi Interferon γ  memainkan peran kunci dalam anti-proliferasi pada 13C (Indole- 3-carbinol). Pada tingkat sel, menyebabkan hambatan pertumbuhan sel pada fase G1 dari siklus sel. Jalur aktivasi interferon γ dalam anti-
proliferasi (Chatterji et al , 2004). 13C (indole- 3-carbinol) berpotensi memediasi efek melalui protein sel target dan merangsang ekspresi IFNγ-R1. Peningkatan IFNγ-R1 membuat sel-sel lebih responsif terhadap efek yang diakibatkan dari sinyal Interferon γ, yaitu menghambat pertumbuhan sel dan meningkatkan induksi dari STAT1 ( Signal Transducer  and Activator  of  Transcriptor ). Jalur 13C  dan  Interferon  γ  akhirnya  berkumpul  untuk mengistirahatkan secara efektif siklus sel G1 dan meningkatkan regulasi inhibisi CDK ( Cyclin Dependent  Kinase ) pada sel tumor payudara (Chatterji et al , 2004). Penelitian yang ditunjukkan oleh Tunon et al (2007) memperlihatkan bahwa ada perbedaan prosentase sampel positif Interferon γ pada beberapa kelompok tumor payudara seperti yang ditunjukkan pada tabel 6.2.
Tabel 6.2. Perbedaan intensitas pengecatan dan sampel yang positif pada beberapa kelompok tumor payudara.
Interferon γ Interferon γ-Rα Interferon γ-Rβ % positif sample Optical density % positif samples Optical density % positif samples Optical density Cytoplasm nucleus Benign lesions 70,6% 11,4±2,5 a 88,2% 14,9%±2,3 a 41,17% 19,4±2,8 a 42,8% 57,14% In situ carcinoma 35% 30,7±8,1 b 41,4% 18,2±2,7 a 55,1% 17,6±4,1 a 6,25% 93,75% Infiltrating carcinoma 40% 18,9±2,1 a 28,9% 9,9±2,1 b 22,2% 18,6±2,9 a 20% 80%
Persentase tertinggi sampel positif (70.6%) pada  Interferon  γ  ditemukan  pada  kelompok lesi jinak, sedangkan pada kasus infiltrating tumor jumlah sampel positif lebih rendah. Immunoreactions paling intens ditemukan pada tumor in situ . Persentase positif pada infiltrating tumor sama seperti yang ditemukan dalam kasus in  situ dengan intesitas immunoreactions sedikit menurun (Tunon et al, 2007). Hasil di atas sesuai dengan temuan pada penelitian ini, bahwa ekspresi interferon γ pada lesi jinak yang pada penelitian ini diwakili oleh sampel dengan diagnosis FAM intracanalicular dan pericanalicular  variant positif sebesar 90% dan negatif sebesar 10%. Sedangkan untuk infiltrating tumor yang pada penelitian ini menggunakan sampel dengan diagnosa No  special  Type (NST) Invasive  breast  carcinoma dengan hasil positif,
menurun sebesar 51,80%, sementara di sisi lain hasil negatif meningkat sebesar 48,20%. Dengan menggunakan uji Fisher’s exact dan hipotesis satu arah ( one  sided ) didapatkan kesimpulan bahwa perbedaan ini bermakna secara statistik dengan nilai p = 0.036 (p < 0.05).

## SIMPULAN
Terdapat perbedaan yang bermakna tentang ekspresi  interferon  γ  pada  sediaan  histopatologi Fibroadenoma  mammae  intracanalicular dan pericanalicular  variant (FAM) dibanding  pada sediaan Invasive  no  special  Type ( NST) breast carcinoma. Ekspresi  positif  interferon  γ  pada sediaan fibroadenoma  mammae  intracanalicular dan pericanalicular  variant,. lebih besar dibandingkan pada jenis sediaan Invasive  no special Type ( NST) breast carcinoma.
Kadar  ekspresi  interferon  γ fibroadenoma mammae intracanalicular dan pericanalicular variant. positif sebesar 90% dan negatif sebanyak 10%. Sedangkan kadar interferon γ untuk sediaan Invasive no special Type ( NST) breast carcinoma yang positif  menurun sebesar 51,80% dan yang negatif meningkat sebesar 48,20%.
Terdapat  penurunan  ekspresi  interferon  γ yang positif pada sediaan infiltrating tumor. Pada penelitian ini digunakan blok histopatologi dengan
diagnosis Invasive  no  special  Type ( NST) breast carcinoma . I nterferon  γ  dapat  menghambat  proliferasi sel-sel tumor dengan menginduksi STAT1 sehingga siklus  sel  pada  tahap  G1  berhenti.  Interferon  γ juga menginduksi apoptosis sel-sel tumor dengan cara penekanan pada Bcl-2. Kedua hal tersebut merupakan  mekanisme  kerja  interferon  γ  untuk dapat menghambat proses keganasan.

## DAFTAR PUSTAKA
Cecile AL , Kevin EK, 2011; Janice Post-White, Shirley F, Cathy N. Lymphocyte Recovery After Breast Cancer Treatment and Mindfulness-Based Stress Reduction (MBSR) Therapy MS3 Biological Research for Nursing. http://brn.sagepub.com.
Chatterji U, Riby JE, Taniguchi T. 2004; Indole-3-carbinol stimulates transcription of the interferon gamma receptor 1 gene and augments interferon responsiveness in human breast cancer cells. Department of Molecular and Cell Biology and the Cancer Research Laboratory. Berkeley.. 25: 1119-1128
De Nardo, Coussens ML, 2007; Inflammation and Breast Cancer, Balancing immune response : Crostalk between adaptive immune cells during breast cancer progression. Breast Cancer Research. 15 August 2007
Gao J, Senthil M, Ren B, 2009; IRF-1 transcriptionally upregulates PUMA, which mediates the mitochondrial apoptotic pathway in IRF-1-induced apoptosis in cancer cells. Department of Surgery, Union Hospital, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, Hubei. China. Oct 23;17: 699-709
Ghavami S, Hashemi M, Ande SR, 2009 ; Apoptosis and Cancer: mutations and within caspase genes. Department of Physiology, University of Manitoba. Canada. July 31;46: 497-510 Greenberg R, Skornick Y, Kaplan O, 1998; Management of Breast Fibroadenomas.  J Gern Inttern Med. Hanahan D, Weinberg NA, 2011; Hallmark of Cancer : The Next Generation. Elsevier.
Hong CC, Yao S, McCann SE, 2013; Pretreatment levels of circulating Th1 and Th2 cytokines, and their ratios, are associated with ER-negative and triple negative breast cancers. Department of Cancer Prevention and Control, Roswell Park Cancer Institute. New York. Jun; 139(2): 477- 488
IARC, 2013; Latest world cancer statistic. International Agency pro Research on Cancer,  2013; Latest World Cancer Statistic. WHO. 12 des 2013
Julie MW, Debra Bensen-Kennedy, Yuji M, Christopher J. Thoburn, Deborah A, Georgia BV, Allan DH, 2005; Biology of Blood and Marrow Transplantation ; American Society for Blood and Marrow Transplantation The School of Medicine and the Sidney Kimmel Comprehensive Cancer Center, The Johns Hopkins University, Baltimore, Maryland,
Larsen MJ, Kruse TA, Tan Q, Lænkholm A-V, Bak M, 2013; Classifications within Molecular Subtypes Enables  Identification  of  BRCA1/BRCA2  Mutation  Carriers  by  RNA  Tumor  Profiling; Classifications within Molecular Subtypes Enables Identification of BRCA1/BRCA2; PLoS ONE.
Luiz CC, Maria C. Foss-Freitas, Rui CM. Mamede, Norma TF, 2012; Interferon-gamma and interleukin-10 production by mononuclear cells from patients with advanced head and neck cancer. CLINICS. Universidade de Sa ˜o Paulo (USP), Medical School of Ribeira ˜o Preto,

## Ribeira ˜, Brazil.
Luo Y, Eric J. Askeland, Mark RN , Michael AO, 2012; Role of IL-10 in Urinary Bladder Carcinoma and Bacillus Calmette-Guerin Immunotherapy. Department of Urology, University of Iowa, Iowa City, USA. American Journal of Immunology.
NIH Public Access, 2014; Breast Cancer Res Treat. Breast Cancer Res Treat. ; Department of Cancer Prevention and Control, Roswell Park Cancer Institute, Buffalo, USA. Author manuscript; available in PMC 2014 February 04.
NSW Breast Cancer Institute, 2005; Fibroadenoma of The Breast. http://www.bci.org.au.
Pardoll D, 2003; Does The Immune System See Tumors As Foreign or Self? Sidney Kimmel Cancer Centre, John Hopkins University School of Medicine. Maryland.; 21: 807-839 Robins, Kumar, 2014; Pathologic basic of disease, 9 edition.
Rosai, Ackermann, 2004; Surgical pathology, tenth edition, Elsevier.
Stang MT, Armstrong MJ, Watson GA . 2007; Interferon regulatory factor-1-induced apoptosis mediated by a ligand-independent fas-associated eath domain pathway in breast cancer cells. Department of Surgery, University of Pittsburgh Cancer Institute. Korea. Apr 23;26: 6420-6430
Suresh HUK , Showket H, Shirish S, Shailja P, 2011; Breast cancer and human papilloma virus infection:
No evidence of HPV etiology of breast cancer in Indian women. BMC Cancer.
Sylvia L, Kim M, 2011; Cancers Cytokines in Cancer Immunotherapy. Division of Medical Oncology, Department of Medicine, University of Washington, Seattle, WA, USA. Fred Hutchinson Cancer Research Center. www.mdpi.com/journal/cancers.
Tunon IG, Ricote M, Ruiz A. 2007; Influence of IFN-gamma and its receptors in human breast cancer. Department of Cell Biology and Genetic, University of Alcala and Department of Pathology, Hospital Principe de Asturias, Alcala de Henares. Spain. Aug 14;7(158):1-11
WHO, 2012; Classification of tumours of the breast. 4th edition, lyon