AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL 70% DAUN BIDURI ( Calotropis gigantea ) TERHADAP Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC 29523
ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF 70% ETHANOL EXTRACT OF LEAF BIDURI ( Calotropis gigantea ) AGAINST Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC 29523
Zulfan M Alibasyah, Diana Setya Ningsih, Maya Putri Sinda Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Syiah Kuala Corresponding Author: ufanraiz@yahoo.com

## Abstrak
Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC 29523 merupakan bakteri biakan murni yang bersifat anaerob  fakultatif  Gram-negatif.  Bakteri  ini  dominan  pada  periodontitis  agresif  lokalisata  dan berperan  penting  dalam  patogenesisnya.  Daun  biduri  ( Calotropis  gigantea )  mengandung  flavonoid, fenol, tanin, saponin, terpenoid, dan alkaloid  yang  merupakan senyawa antibakteri. Metode  maserasi dilakukan  untuk  pembuatan  ekstrak Calotropis  gigantea dengan  menggunakan  etanol  70%  sebagai bahan pelarut. Penelitian ini termasuk eksperimental laboratoris menggunakan metode difusi sumuran dalam  pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  70%  daun Calotropis  gigantea terhadap Aggregatibacter  actinomycetemcomitans ATCC  29523  pada  konsentrasi  5%,  10%,  15%, 20%,  25%, dan 30%. Setiap konsentrasi menunjukkan  hasil zona hambat sebesar 3,3 mm, 9,6 mm, 11 mm, 12,7 mm, 14,4 mm, dan 16,6 mm. Didapatkan hasil zona hambat yang berbeda pada berbagai konsentrasi, dan hasil hambatan semakin besar pada konsentrasi yang semakin tinggi. Analisis  dengan uji one way Anova menunjukkan  nilai  signifikansi p <0,05  yang  menyatakan  semua  hasil  penelitian  ini  memiliki perbedaan  bermakna.  Berarti  bahwa  ekstrak  etanol  70%  daun  biduri  ( Calotropis  gigantea )  dalam berbagai konsentrasi di atas dapat menghambat pertumbuhan Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC 29523. Kata Kunci: Aggregatibacter actinomycetemcomitans , Daun biduri, Difusi Sumuran

## Abstract
Aggregatibacter  actinomycetemcomitans ATCC  29523  is  a  purely  culture  of  Gram-negative facultative  anaerobes.  This  bacterium  is  dominant  in  localized  aggressive  periodontitis  and  plays  an important  role  in  its  pathogenesis.  Biduri  leaves  ( Calotropis  gigantea )  contain  flavonoids,  phenols, tannins,  saponins,  terpenoids,  and  alkaloids  which  are  antibacterial  compounds.  The  maceration method  was  carried  out  for  the  production  of  Calotropis  gigantea  extract  using  70%  ethanol  as  a solvent.  This  research  is  an  experimental  laboratory  using  diffusion  well  method  in  testing antibacterial  activity  of  70%  ethanol  extract  of Calotropis  gigantea leaves  against Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC 29523 at concentrations of 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, and 30%. Each concentration showed inhibition zone results of 3.3 mm, 9.6 mm, 11 mm, 12.7 mm, 14.4 mm and 16.6 mm. There are different inhibitory zone results at various concentrations, where the inhibition results will  be  greater  at  higher  concentrations.  Analysis  with  one  way  ANOVA  test  showed  a  significance value of p <0.05 which means that this study had significant differences. It can be concluded that 70% ethanol extract of the leaves of biduri ( Calotropis gigantea ) in various concentrations as written above can inhibit the growth of Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC 29523. Keyword: Aggregatibacter actinomycetemcomitans , biduri leaves, well diffusion

## PENDAHULUAN
Bakteri Aggregatibacter  actinomycetem comitans ( A.
actinomycetemcomitans )
merupakan Gram-negatif anaerob yang bersifat fakultatif, dengan bentuk cocobacillus , dan  non-motil.  Bakteri  ini  tidak  bercabang, berukuran  sekitar  0,4x1,0  µm  dengan  suhu pertumbuhan  optimum  37°C,  dan  kolonisasi utamanya  berada  dalam  plak  subgingiva. 1,2 A. actinomycetemcomitans ditemukan  sebagai patogen  utama  pada  periodontitis  agresif lokalisata,  yang  dikarakteristikkan  dengan kerusakan  ligamen  periodontal  dan  tulang alveolar secara cepat. 2,3
Terapi  utama  periodontitis  agresif  dapat dilakukan dengan terapi mekanis ( scaling dan root  planing )  serta  terapi  penunjang  berupa terapi  kimiawi  (antibiotik  dan  obat  kumur) untuk  menghilangkan  bakteri  yang  masih tersisa. Dewasa ini masyarakat telah meminimalisir penggunaan obat-obatan sebagai bahan terapi, karena dapat menimbulkan  efek  samping  berupa  resistensi bakteri  terhadap  antibiotika  serta  gangguan pengecapan  dan  perubahan  warna  gigi. 4 Masyarakat telah beralih memanfaatkan tumbuhan  herbal  sebagai  bahan  terapi,  salah satunya  adalah  tumbuhan  biduri  ( Calotropis gigantea ). 5 Tumbuhan  biduri  ( Calotropis gigantea )  di  Provinsi  Aceh  biasa  dikenal sebagai tumbuhan rubik. Berbagai bagian pada tumbuhan  biduri  ( Calotropis  gigantea )  seperti getah,  batang,  akar,  daun,  dan  bunganya  telah teridentifikasi mengandung senyawa bioaktif. 5
Beberapa penelitian telah dikembangkan untuk  meneliti  tumbuhan  biduri  ( Calotropis gigantea ).  Penelitian  Ishnava et  al .  (2011) 6 menggunakan  ekstrak getah biduri ( Calotropis gigantea )  ditemukan  dapat  menghambat S. mutans dan L.  acidophilus dengan  aktivitas sebesar  19  mm.  Penelitian  Radhakrishnan et al .  (2014) 7 dengan  ekstrak  batang  dan  akar biduri  ( Calotropis  gigantea )  menunjukkan aktivitas  antibakteri  yang  efektif  terhadap bakteri S.  aureus , E.  coli , V.  chloerae , P. aeruginosa , dan S. Typhi. Pada ekstrak batang didapatkan  jangkauan  hambat  9-12  mm, sedangkan  pada  ekstrak  akar  didapatkan  zona hambat sebesar 8-11 mm. Selain itu, penelitian Dutta et al . (2014) 8 yang menggunakan ekstrak etanol  daun  biduri  ( Calotropis  gigantea )  juga menemukan  daya  antibakteri  yang  signifikan terhadap E. coli dengan luas hambat 2,8 cm.
Seluruh  bagian  pada  tumbuhan  biduri ( Calotropis  gigantea )  dapat  digunakan  untuk menghambat  pertumbuhan  berbagai  bakteria. Beberapa penelitian sebelumnya yang membandingkan  ekstrak  daun,  bunga,  dan buah biduri ( Calotropis gigantea ) , mendapatkan  hasil  bahwa  ekstrak  daun mengandung  sifat  antibakteri  yang  paling tinggi. 5,9,10 Penelitian  Dutta et  al .  (2014) 8 terhadap  uji  fitokimiawi  ekstrak  etanol  daun biduri ( Calotropis gigantea ) berhasil mengidentifikasi  kandungan  flavonoid  yang menghasilkan warna hijau, fenol berwarna biru kehitaman, alkaloid berwarna merah kecoklatan,  terpenoid  berwarna  oranye,  tanin berwarna  biru  kehitaman,  serta  pada  tes karbohidrat  terbentuk  cincin  berwarna  ungu. Penelitian  Dewi  dkk.  (2018) 11 menggunakan ekstrak etanol daun biduri ( Calotropis gigantea ) dengan berbagai konsentrasi sebagai antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus menunjukkan  bahwa  konsentrasi  terkecil  20% dapat menghambat pertumbuhan bakteri sebesar  26,2  mm;  sedangkan  konsentrasi tertinggi  100%  menghambat  perumbuhan bakteri  sebesar  31,5  mm.  Perbedaan  zona hambat dapat disebabkan oleh adanya pengenceran pada setiap konsentrasi. 11
Berdasarkan  uraian  latar  belakang  di  atas, maka  akan  dilakukan  penelitian  mengenai aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  70%  daun biduri  ( Calotropis  gigantea )  terhadap A. actinomycetemcomitans ATCC 29523 .

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini adalah penelitian eksperimental  laboratoris  menggunakan post test  design  only  control  group dan  dikerjakan pada bulan Desember 2018. Sampel penelitian ini  adalah  daun  biduri  ( Calotropis  gigantea ) dengan  karakteristik  berwarna  hijau  segar yang didapat dari pantai Ulelheu, Banda Aceh.
Bakteri biakan murni
A.
Actinomycetemcomitans ATCC 29523 didapat dari  Laboratorium Oral  Biology FKG  UI. Pembuatan  ekstrak  dilakukan  dengan  metode maserasi, digunakan untuk menguji antibakteri dari  ekstrak  yang  dihasilkan  menggunakan metode difusi sumuran.
Untuk  pembuatan  ekstrak  etanol  70% daun biduri ( Calotropis gigantean ) dibutuhkan sebanyak 2 kg daun dan di cuci terlebih dahulu di  bawah  air  mengalir,  ditiriskan,  dipisahkan dengan  tulang  daun,  dan  dibiarkan  selama
tujuh    hari  pada  suhu  ruangan  hingga  kering. Simplisia  daun  yang  sudah  kering  di  potong kecil-kecil dan di blender, kemudian dimasukkan  ke  dalam  larutan  etanol  70%  dan dimaserasi  selama  3x24  jam  pada  suhu ruangan.  Hasil  maserasi  disaring  dengan corong bucher dan  kertas Whatmann no.1 untuk  memisahkan  filtrat  dan  residu.  Filtrat ditampung  ke  dalam  tabung Erlenmeyer . Kemudian  dilakukan  pemekatan  filtrat  dengan rotary  evapotary untuk  mendapatkan  ekstrak yang kental. Selanjutnya dilakukan uji fitokimia  untuk  mengidentifikasi  kandungan kimiawi  pada  ekstrak  etanol  70%  daun  biduri ( Calotropis  gigantea ).  Kandungan  kimia  yang diuji  adalah  flavonoid,  fenol,  tanin,  saponin, terpenoid, dan alkaloid.
Ekstrak  murni  (100%)  daun  biduri ( Calotropis  gigantea )  yang  telah  didapat diencerkan  dengan  akuades  agar  didapatkan konsentrasi  5%,  10%,  15%,  20%,  25%,  dan 30% kemudian dihomogenkan dengan menggunakan vortex. Rumus  yang  digunakan untuk mengencerkan ekstrak adalah
Keterangan: C 1  konsentrasi awal C 2  konsentrasi akhir V 1  volume awal V 2  volume akhir
Selanjutnya  ekstrak  diencerkan  untuk mendapatkan  volume  menggunakan  rumus sebagai berikut:
Dilanjutkan  dengan  uji k onfirmasi A. actinomycetemcomitans ATCC  29523  dengan pewarnaan  Gram.  Langkah  pertama  yang dilakukan  pada  pewarnaan  Gram  dengan jarum  ose  yang  telah  dipijarkan  untuk mengambil  bakteri  dari  media,  kemudian dioleskan  pada  permukaan  kaca  preparat, lalukan  di  atas  lampu  spiritus  agar  terfiksasi. Tetesi  kaca  preparat  dengan crystal  violet dan biarkan  selama  60  detik,  lalu  cuci  di  bawah aliran  akuades.  Selanjutnya  teteskan  lugol  di atas kaca preparat dan biarkan selama 60 detik, dicuci        kembali        menggunakan        akuades mengalir.  Tetesi  dengan  alkohol  96%  hingga berwarna  jernih,  kemudian  ditetesi  safranin dan  tunggu  45  detik  lalu  gunakan  kembali
akuades mengalir untuk pencucian. Selanjutnya teteskan minyak emersi pada kaca preparat yang sudah kering, kemudian  diamati di  bawah  mikroskop  cahaya.  Hasil  yang terlihat pada morfologi A. actinomycetemcomitans ATCC  29523  adalah berwarna  merah  karena  termasuk  bakteri Gram-negatif yang tidak mampu
mempertahankan zat warna crystal violet.
Selanjutnya  dilakukan  peremajaan  pada bakteri  dengan  mengambil  sebanyak  1-3 goresan  ose A.  actinomycetemcomitans pada media, kemudian Mueller Hinton Agar (MHA) dalam petri  dish digunakan  sebagai  media untuk  inokulasi  bakteri  dengan  metode streak T. Petri  dish dimasukkan  ke  dalam anaerobic jar lalu  dimasukkan  ke  dalam  inkubator  CO 2 dengan suhu 37°C selama 24 jam untuk proses inkubasi. Pekerjaan dilanjutkan dengan pembuatan suspensi A. Actionmycetem comitans dengan  menggunakan  jarum  ose yang  telah  dipijarkan  untuk  mengambil bakteri, lalu bakteri di ose dimasukkan ke 5ml larutan  NaCl  0,85%  dalam  tabung  reaksi. Kemudian  larutan  dalam  tabung  reaksi dihomogenkan  menggunakan vortex. Larutan Mc.Farland 0,5  (5  x  10 8 CFU/ml)  dapat digunakan  untuk  menyetarakan  kekeruhan larutan.
Uji  aktivitas  antibakteri  yang  diperoleh dari ekstrak etanol 70% daun biduri
( Calotropis
gigantea ) terhadap A.
actinomycetemcomitans ATCC  29523  pada media Mueller  Hilton  Agar (MHA)  diuji menggunakan  metode  difusi  sumuran.  Pada pengujian  dilakukan  replika  sebanyak  3  kali. Sumuran berdiameter 6 mm dengan kedalaman  4  mm  dibuat  menggunakan perforator  sebanyak  6  lubang  pada  media MHA yang telah diinokulasi
A. actinomycetemcomitans ATCC 29523,
kemudian ekstrak etanol daun biduri ( Calotropis  gigantea )  dengan  konsentrasi kelipatan  5  dari  5%  hingga  30%  dimasukkan masing-masing  0,5  µl  dalam  lubang  sumuran yang  telah  ditandai.  Digunakan  metronidazol sebagai  kontrol  positif  dan  akuades  sebagai kontrol  negatif. Petri  dish yang  sudah  diisi media,  bakteri,  dan  ekstrak  dimasukkan  ke dalam  inkubator  CO 2 dengan  suhu  37°C selama  1  hari  untuk  proses  inkubasi. Selanjutnya  digunakan  alat  ukur  (jangka sorong)  untuk  mengukur  diameter  dari  zona hambat  yang  diperoleh.  Hasil  pengukuran
C 1 . V 1 = C 2 . V 2
V pengencer = V 2 – V 1
yang  diperoleh  diinterpretasikan  berdasarkan tabel klasifikasi Davis dan Stout (Tabel 1).
Tabel 1. Klasifikasi Davis dan Stout . 12
Diameter Zona Terang (mm) Kemampuan Daya Hambat Pertumbuhan Bakteri > 20 Sangat Kuat 11-20 Kuat 5-10 Sedang <5 Lemah
Perangkat  lunak  SPSS  digunakan  untuk menganalisis  data.  Uji  yang  dilakukan  adalah One  Way  Analysis  of  Variance (ANOVA) untuk  melihat  antibakteri  yang  diperoleh  dari ekstrak  etanol  70%  daun  biduri  ( Calotropis gigantea ) terhadap
Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC 29523.

## HASIL
Hasil  ekstraksi  daun  biduri  ( Calotropis gigantea ) dengan  pelarut  etanol  didapatkan sebanyak  40  ml  ekstrak  murni  100%  dengan warna  hijau  kehitaman  seperti  yang  terlihat pada Gambar 1.
Gambar  1.  Hasil  ekstrak  etanol  70%  daun  biduri ( Calotropis gigantea )
Uji fitokimiawi ekstrak etanol 70% daun Calotropis  gigantea menunjukkan  flavonoid, tanin,  saponin,  terpenoid,  dan  alkaloid  positif terkandung  dalam  ekstrak  yang  dapat  dilihat dalam Tabel 2.
Tabel  2.   Hasil  uji  fitokimiawi  ekstrak  etanol  70% daun Calotropis gigantea . Uji Fitokimia Hasil Uji Flavonoid + Fenol + Tanin + Saponin + Terpenoid + Alkaloid + Keterangan : (+) ada kandungan
Hasil  ekstrak  murni  100%  diencerkan dengan  akuades  untuk  menghasilkan  beberapa
variabel konsentrasi yaitu 5, 10, 15 20, 25, dan 30 (%) yang terlihat dalam Gambar 2.
Gambar  2.  Ekstrak  etanol  70%  daun  biduri ( Calotropis gigantea ) yang telah diencerkan

## Aggregatibacterctinomycetemcomitans
ATCC 29523 yang telah di kultur dalam media Mueller  Hinton  Agar (MHA)  dan  diinkubasi pada  suhu  37°C  selama  1  hari  menunjukkan adanya koloni Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC 29523
berwarna  putih  kekuningan  dan  memiliki permukaan  yang  cembung.  Morfologi  koloni Aggregatibacter
actinomycetemcomitans
ATCC  29523  pada  media  MHA  terlihat  pada Gambar 3.
Gambar 3. Hasil kultur Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC  29523  pada  media MHA.
Uji  antibakteri  yang  diperoleh  dari ekstrak  etanol  70%  daun  biduri  ( Calotropis gigantea ) terhadap Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC 29523
dilakukan  dengan  tiga  kali  pengulangan (triplo).  Hasil  yang  didapat  menunjukkan adanya  daya  hambat  yang  dinyatakan  dengan adanya  zona  bening  ( clear  zone )  di  sekitar lubang/sumuran yang telah berisi ekstrak daun biduri ( Calotropis gigantea ) .
Rata-rata  zona  hambat  yang  didapat dikelompokkan mengikuti klasifikasi kemampuan  daya  hambat  menurut  Davis  dan Stout seperti yang terlihat dalam Tabel 3.
Tabel 3. Hasil pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol  70%  daun Calotropis  gigantea terhadap Agggregatibacter actinomycetem comitans
Konsetrasi bahan uji Rata-rata zona hambat (mm) Kemampuan daya hambat 5% 3,3 Lemah 10% 9,6 Sedang 15% 11,0 Kuat 20% 12,7 Kuat 25% 14,4 Kuat 30% 16,6 Kuat Kontrol negatif (akuades) 0 Tidak Ada Kontrol positif (metronidazole) 30,5 Sangat Kuat
Berdasarkan klasifikasi kemampuan daya hambat David dan Stout, didapatkan hasil zona  hambat  yang  bervariasi  pada  setiap konsentrasi  ekstrak.  Pada  tabel  di  atas  dapat disimpulkan  konsentrasi  yang  semakin  tinggi menghasilkan  zona  hambat  yang  semakin besar.  Pada  kontrol  negatif  menggunakan akuades  tidak  didapatkan  zona  hambat, sedangkan  hasil  pengamatan  pada  kontrol positif menggunakan metronidazol menunjukkan  zona  hambat  paling  besar  di antara setiap konsentrasi yang di uji.
Uji One  way  Anova digunakan  sebagai uji  statistik  pada  penelitian  ini,  dengan  syarat kelompoknya  lebih  dari  dua  dan  data  harus terdistribusi normal serta homogen. Terdapat 8 kelompok  perlakuan  pada  penelitian  ini. Didapatkan  hasil  yang  normal  pada  uji normalitas  dan  homogenitas  terhadap  varian data dengan nilai p >0,05. Tabel 4
Tabel 4. Hasil Least Significant Difference (LSD)
K 5% K 10% K 15% K 20% K 25% K 30% K   5% - .014*   .004*   .001*   .000*    .000* K 10%    .014 - .545  .187  .049     .008* K 15%    .004*  .545 - .453  .143    .024* K 20%    .001*  .187  .453 - .445  .096 K 25%    .000*   .049*  .143  .445 - .329 K 30%    .000*   .008*   .024*  .096  .329 -
*= p <0,05 : memiliki perbedaan yang bermakna
Uji one  way  Anova juga  menunjukkan bahwa  kelompok  uji  berpengaruh  terhadap pertumbuhan Aggregatibacter  actinomycetem comitans ATCC  29523  dengan  nilai p <0,05. Kemudian hasil uji statistik pada penelitian ini dianalisis  menggunakan Least  Significant
Difference (LSD).  Hasil  LSD  menunjukkan adanya  perbedaan  bermakna  pada  beberapa konsentrasi  yang  diuji  dengan  menghasilkan nilai p <0,05 yang tertera dalam Tabel 4.

## PEMBAHASAN
Penelitian  dilakukan  terhadap  bakteri yang  dinyatakan  sebagai  patogen  utama  pada periodontitis agresif lokal. Salah satu penyakit yang  mengenai  jaringan  periodontal  gigi adalah  periodontitis  agresif,  ditandai  oleh terjadinya kerusakan dengan sangat cepat pada tulang  alveolar  dan  ligamentum  periodontal. 2 Bakteri yang berperan penting dalam periodontitis agresif lokal adalah
Aggregatibacteractinomycetemcomitans yang merupakan  bakteri  fakultatif  anaerob  Gram- negatif  yang  berbentuk coccobacillus . 1 Hasil kultur Aggregatibacteractinomycetemcomitans ATCC  29523  pada  media Mueller  Hinton Agar (MHA)  menunjukkan  pertumbuhan bakteri berbentuk bulat dan cembung berwarna putih  kekuningan.  Uji  konfirmasi  bakteri Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC  29523  dengan  pewarnaan  Gram  yang diamati  dengan  mikroskop  cahaya  pada pembesaran  100  kali  memperlihatkan  koloni berbentuk coccobacillus dan  berwarna  merah muda.  Koloni  yang  tampak  berwarna  merah muda  membuktikan  bahwa Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC  29523  adalah bakteri  yang  memiliki  senyawa  lipid  tinggi pada  dinding  sel  dengan  susunan  yang  tipis sehingga  berpengaruh  pada  saat  proses pewarnaan  Gram,  bakteri  ini  tidak  dapat berupaya  mempertahankan  zat  warna crystal violet . 13
Penelitian ini dilakukan dengan menguji efek  antibakteri  yang  diperoleh  dari  ekstrak etanol  70%  daun  biduri  ( Calotropis  gigantea ) terhadap  bakteri A.  actinomycetemcomitans ATCC  29523.  Daun  biduri  ( Calotropis gigantea )  adalah  tumbuhan  yang  biasa digunakan sebagai bahan dasar untuk pengobatan tradisional. Daun biduri ( Calotropis  gigantea )  mengandung  senyawa metabolit  sekunder  yang  memiliki  kegunaan sebagai  antibakteri  seperti  senyawa  flavonoid, fenol,  tanin,  saponin,  terpenoid,  dan  senyawa alkaloid.  Kandungan  antibakteri  pada  ekstrak daun  biduri  ( Calotropis  gigantea )  sangat mudah  didapat  dengan  menggunakan  pelarut etanol.  Penggunaan  pelarut  etanol  dapat bereaksi  dengan  baik  karena  pelarut  etanol
memiliki  toksisitas  rendah,  titik  didih  rendah, dan  tidak  berbahaya,  serta  memiliki  sifat  non polar  yang  mampu  melarutkan  lebih  banyak senyawa antibakteri pada daun biduri ( Calotropis  gigantea ) yang  bersifat  sitotoksik . Berdasarkan  pengujian  fitokimiawi  yang dilakukan,  didapatkan  hasil  bahwa  ekstrak etanol  70%  daun  biduri  ( Calotropis  gigantea ) positif mengandung senyawa-senyawa antibakteri  yaitu  flavonoid,  fenol,  tanin, saponin,  terpenoid,  serta  senyawa  alkaloid yang merupakan kandungan metabolit sekunder.  Uji  fitokimiawi  pada  penelitian  ini memiliki  hasil  yang  sama  dengan  penelitian Dutta et  al. (2014) 8 terhadap  kandungan ekstrak etanol daun biduri ( Calotropis gigantea ).  Dinyatakan  bahwa  ekstrak  tersebut juga  memiliki  senyawa  flavonoid,  saponin, tanin, alkaloid, dan terpenoid.
Kandungan  metabolit  sekunder  ekstrak etanol  70%  daun  biduri  ( Calotropis  gigantea ) pada  penelitian  ini  berhasil  menghambat pertumbuhan bakteri
Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC 29523. Kemampuan  ekstrak  daun  biduri  ( Calotropis gigantea )  untuk  menghambat  pertumbuhan bakteri A.  actinomycetemcomitans ATCC 29523  terlihat  mulai  dari  konsentrasi  rendah (5%) hingga konsentrasi tinggi (30%), kemampuan  ini  disebabkan  karena  setiap konsentrasi  yang  digunakan  mengandung senyawa  antibakteri  dan  memiliki  aktivitas bakteriostatik yang mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri.  Senyawa  flavonoid dapat  menonaktifkan  adhesin  mikroba,  enzim, dan  protein  pembawa  sel  untuk  menghambat pertumbuhan  bakteri. 14 Senyawa  flavonoid juga  dapat  menghambat  replikasi  DNA. 11 Senyawa saponin bekerja dengan menghancurkan  sifat  permeabilitas  bakteri sehingga  menyebabkan  kematian  sel    bakteri. Saponin  juga  dapat  menyebar  dari  membran luar  dan  mengakibatkan  terganggu  serta berkurangnya  kestabilan  dari  membran  sel. 15 Senyawa  tanin  dapat  membentuk  ikatan kompleks  dengan  protein  polipeptida  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri,  sehingga terganggunya  proses  sintesis  protein  dan akibatnya  terjadi  kerusakan  pada  sel  bakteri. 11 Senyawa alkaloid memiliki kemampuan mensistesis  dinding  dari  sel  bakteri  dan  juga dapat menghancurkan DNA. 16 Besar  kemampuan  antibakteri  yang diperoleh  dari  ekstrak  etanol  70%  daun  biduri
( Calotropis gigantea ) berupa dapat
menghambat  pertumbuhan  bakteri,  berbeda- beda tergantung pada penggunaan konsentrasinya.  Penelitian  ini  menunjukkan daya  hambat  paling  besar  terdapat  pada konsentrasi  tertinggi  yaitu  30%.  Knsentrasi yang  semakin  tinggi  dari  ekstrak  etanol  70% daun  biduri  ( Calotropis  gigantea )  yang digunakan,  menghasilkan  kemampuan  hambat yang lebih besar terhadap bakteri Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC  29523  (Tabel  5.1).  Semakin  banyak kandungan  metabolit  sekunder  maka  semakin tinggi  kemampuan  antibakteri  dari  ekstrak etanol 70% daun biduri ( Calotropis gigantea ) . Semakin tinggi konsentrasi ekstrak etanol 70% daun  biduri  ( Calotropis  gigantea )  akan semakin  baik  digunakan  sebagai  antibakteri, hal  ini  disebabkan  karena  akan  semakin banyak  jumlah  kandungan  metabolit  sekunder pada  konsentrasi  yang  semakin  tinggi.  Hasil dalam  penelitian  ini  sejalan  dengan  penelitian Majundar  (2014) 17 yang  juga  menggunakan ekstrak tumbuhan biduri ( Calotropis gigantea ) sebagai antibakteri. Hasil penelitian Alluri dan Majumdar  menunjukkan  ekstrak  tumbuhan biduri ( Calotropis gigantea )
dapat menghambat pertumbuhan bakteri pada konsentrasi  0.125  mg/ml,  0.25  mg/ml,  0.5 mg/ml,  1.0  mg/ml,  dan  2.0  mg/ml  yang digunakan,  berdasarkan  hasil  diperoleh  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  tumbuhan biduri  ( Calotropis  gigantea )  maka  efek antibakteri  yang  didapatkan  akan  semakin besar  pula. 17 Konsentrasi  hambat  minimal yang  diperoleh  dari  ekstrak  etanol  70%  daun biduri ( Calotropis gigantea ) terhadap Aggregatibacter actinomycetemcomitans
ATCC  29523  juga  dipengaruhi  oleh  banyak atau  sedikitnya  tingkat  pengenceran  ekstrak yang  dilakukan.    Semakin  sedikit  akuades yang digunakan untuk pengenceran maka akan semakin banyak kandungan metabolit sekunder  yang  didapat,  sebaliknya  jika semakin  banyak  akuades  yang  digunakan untuk pengenceran maka akan semakin sedikit kandungan  metabolit  sekundernya.  Banyak atau  sedikitnya  kandungan  metabolit  sekunder pada ekstrak daun biduri ( Calotropis gigantea ) yang  dihasilkan  oleh  tingkat  pengenceran ekstrak  daun  biduri  ( Calotropis  gigantea ) sesuai  dengan  penelitian  Dewi  (2018) 11 yang menyatakan  bahwa  perbedaan  ekstrak  daun biduri ( Calotropis
gigantea ) dalam
menghambat  pertumbuhan  bakteri  pada  setiap konsentrasi disebabkan oleh pengenceran yang dilakukan. Semakin rendah pengenceran  maka semakin banyak dan semakin besar kemampuan senyawa antibakteri dalam menghambat pertumbuhan bakteri. 11 Analisis  data  terhadap  diameter  zona hambat  bakteri A.  actinomycetemcomitans ATCC  29523  menggunakan one-way Anova menghasilkan nilai p <0.05 (Lampiran 8). Nilai p <0,05 berarti memiliki kesimpulan perbedaan bermakna  dari  daya  hambat  bakteri  pada berbagai  kelompok  konsentrasi  ekstrak  daun biduri ( Calotropis gigantea ). Berbagai konsentrasi  ekstrak  etanol  70%  daun  biduri ( Calotropis  gigantea ) yang  digunakan  dapat menghambat pertumbuhan bakteri Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC  29523,  namun  daya  hambat  bakteri yang  dihasilkan  berbeda.  Perbedaan  besarnya daya  hambat  bakteri  yang  dihasilkan  oleh berbagai  konsentrasi  pada  ekstrak  etanol  70% daun  biduri  ( Calotropis  gigantea )  ini  terjadi karena perbedaan jumlah kandungan metabolit sekunder  sebagai  antibakteri  pada  masing- masing  konsentrasi.  Konsentrasi  yang  paling tinggi menghasilkan daya hambat bakteri yang lebih besar terhadap A actinomycetemcomitans ATCC  29523  karena  memiliki  lebih  banyak komponen senyawa antibakteri.
Hasil  uji  lanjut Least  Significant Difference (LSD)  terhadap  diameter  zona hambat  bakteri A.  actinomycetemcomitans ATCC  29523 berdasarkan  Tabel  5.2  memiliki kesimpulan  perbedaan  bermakna  dengan  nilai p<0.05 yang diperoleh dari setiap konsentrasi, kontrol  negatif  ( aquades ),  dan  kontrol  positif ( metronidazole ) dalam menghambat pertumbuhan  bakteri.  Perbedaan  bermakna nilai  signifikansi  pada  diameter  zona  hambat bakteri A.  actinomycetemcomitans ATCC 29523 disebabkan oleh pengaruh dari berbagai konsentrasi  ekstrak  etanol  70%  daun  biduri ( Calotropis  gigantea )  serta  kontrol  positif (metronidazol)  dan  kontrol  negatif  (akuades). Aktivitas  antibakteri  pada  masing-masing konsentrasi  ekstrak  etanol  70%  daun  biduri ( Calotropis  gigantea )  memberikan  efek  yang berbeda.  Perbedaan  zona  hambat  bakteri  pada tiap  kelompok  perlakuan  dapat  disebabkan oleh  setiap  peningkatan  konsentrasi  yang berpengaruh  terhadap  peningkatan  efektifitas antibakteri yang terkandung dalam daun biduri ( Calotropis gigantea ), sehingga setiap
konsentrasi  akan  menghasilkan  perbedaan pada  zona  hambatnya. 18 Metronidazol  sebagai kontrol  positif  dalam  penelitian  ini  dapat menghambat
pertumbuhan bakteri Aggregatibacter
actinomycetemcomitans
ATCC  29523  sangat  lebih  baik  dari  pada berbagai  konsentrasi  ekstrak  etanol  70%  daun biduri  ( Calotropis  gigantea ) . Kontrol  positif menghasilkan  zona  hambat  bekteri  yang  lebih besar dibandingkan dengan berbagai konsentrasi  ekstrak  etanol  70%  daun  biduri ( Calotropis gigantea ) yang digunakan.
Keadaan  ini  terjadi  karena  kontrol  positif (metronidazol)  termasuk  dalam  obat  golongan antibiotika  yang  memiliki  spektrum  luas  serta juga  efektif  melawan  bakteri  anaerob  Gram negatif, salah satunya adalah bakteri Aggregatibacter actinomycetemcomitans . Selain  itu  antibiotik metronidazol  juga memiliki  kandungan  bahan  aktif  yang  bersifat murni.  Metronidazol  dapat  merusak  DNA, mengakibatkan  terhambatnya  sintesis  asam nukleat sehingga dapat mengganggu pertumbuhan  bakteri.  Konsentrasi  ekstrak etanol  70%  daun  biduri  ( Calotropis  gigantea ) yang  tinggi  akan  lebih  banyak  mengandung senyawa antibakteri dan semakin efektif dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Berbeda dengan  metronidazol  sebagai  kontrol  positif, hasil dari akuades sebagai kontrol negatif tidak memiliki  kemampuan  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri Aggregatibacter actinomycetemcomitans ATCC  29523.  Hal  ini terbukti dengan tidak terdapatnya zona hambat bakteri  di  sekitar  akuades.  Tidak  adanya  zona hambat  bakteri  yang  dapat  diamati  karena akuades sebagai kontrol negatif tidak memiliki sifat  antibakteri,  hanya  bekerja  secara short acting dan  tidak  persistens,  sehingga  tidak efektif  menjadi  salah  satu  bahan  penghambat dalam pertumbuhan bakteri.
Berdasarkan  uraian  di  atas  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  yang  diperoleh dari  etanol  70%  daun  biduri  ( Calotropis gigantea ) dapat  menghambat  pertumbuhan Aggregatibacter  actinomycetecomitans ATCC 29523  dengan  kemampuan  hambat  yang berbeda-beda pada setiap konsentrasi.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol 70% daun biduri ( Calotropis  gigantea )  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri A. actinomycetemcomitans ATCC 29523.
Berdasarkan  klasifikasi  kemampuan  daya hambat  David  dan  Stout,  ekstrak Calotropis gigantea pada konsentrasi 5% dapat menghambat pertumbuhan A.
actinomycetemcomitans ATCC  29523  dengan kemampuan  daya  hambat  lemah  yaitu  3,3mm, konsentrasi  10%  memiliki  kemampuan  daya hambat  sedang  yaitu  9,6mm,  sedangkan konsentrasi  15%,  20%,  25%,  dan  30% memiliki  kemampuan  daya  hambat  dengan kategori  kuat  yaitu  masing-masing  12,7mm, 14,4mm, dan 16,6mm.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Zhou  X,  Lie  Y.  Atlas  of  Oral Microbiology  From  Healthy  Microflora to  Disease.  London,  UK:  Academic press; 2015.p.67-93
2. Sriraman  P,  Mohanraj  R,  Neelakantan P.  Research  Journal  of  Pharmaceutical  , Biological  and  Chemical  Sciences

## Aggregatibacter  actinomyctemcomitans
In  Periodontal  Disease.  Res  J  Pharm Biol Chem Sci. 2014;5(2):406–19.
3. Nofak  KF,  Nofak  JM.  Aggressive Periodontitis. Carranza’s Clinical
Periodontology. 11th ed. Elsavier Saunders; 2012. P.169-173
4. Gunardi  I,  Wimardhani  YS.  Oral probiotik: Pendekatan baru terapi halitosis. Indones J Dent.
2009;16(1):64–71.
5. Kumar  PS,  E  S,  Kalavanthy  S.  Review on A Potential Herb Calotropis gigantea (L.)  R.  Br  Sch  Acad  J  Pharm 2013;2(2):135–43.
6. Ishnava  KB,  Chauhan  JB,  Garg  AA, Thakkar AM. Antibacterial and phytochemical  studies  on Calotropis gigantea (L.)  R.  Br.  latex  against selected  cariogenic  bacteria.  Saudi  J Biol Sci 2012;19(1):87–91.
7. Radhakrishnan K, Thangamani P,
Balakrishnan V. Antibacterial and phytochemical analysis of stem and root extracts  of Calotropis  gigantea against selected  pathogens.  Malaya  J  Biosci 2014;1(1):49–55.
8. Dutta  M,  Rej  S,  Jamal  S,  Das  S, Chatterjee  S.  Study  of  phytochemical constituents  and  antibacterial  activity  of
Calotropis gigantea . Int Sci J 2014;1(4):15–28.
9. Singh  M,  Javed  K.  Comparative  study
of  chemical  composition  of Calotropis Gigantea flower,  leaf  and  fruit  essential oil. Eur Chem  Bull 2015;4(10–12):477– 80.
10. Kumar G, Karthik L, Venkata K, Rao B. Antibacterial activity  of aqueous  extract of Calotropis  gigantea leaves  -  an in vitro study.  Int  J  of  Pharm  Sci 2010;4(2):141–4.
11. Dewi  DGDP,  Mastra  N,  Jirna  IN. Perbedaan  Zona  Hambat  Pertumbuhan
Staphylococcus  aureus Pada  Berbagai Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Biduri Secara In Vitro . meditory. 2018;6(5):39–45.
12. Davis  W,  Stout  T.  Disc  Plate  Methode of  Microbiological  Antibiotic  Assay.  J Microbiol. 1997;22(4)(4):666–70.
13. Karachewski NO, Busch EL, Wells CL. Comparison  of  PRAS  II,  RapID  ANA, and  API  20A  systems  for  identification of  anaerobic  bacteria.  J  Clin  Microbiol 1985;21(1):122–6.
14. Kumar  S,  Pandey  AK.  Chemistry  and Biological  Activities  of  Flavonoids:  An Overview. Sci World J 2013; ID:162730
15. Ernawati,  Sari  K.  Kandungan  Senyawa Kimia dan Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Kulit  Buah  Alpukat  ( Persea  americana P.Mill ) Terhadap Bakteri Vibrio alginolyticus . J Kaji Vet 2015;3(2):203–
11. 16. Ningsih  DR,  Zusfahair,  Kartika  D.
Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder  Serta  Uji  Aktivitas  Ekstrak Daun Sirsak Sebagai Antibakteri. Molekul, UJS 2016;12(2):114–24.
17. Alluri  N,  Majumdar  M.  Phytochemical analysis  and  in  vitro  antimicrobial activity  of calotropis  gigantea , inermis and trigonella foecum- lawsonia graecum .  Int  J  of Pharm  and  Pharm  Sci 2014;6(4):10–3.
18. Nuria  MC,  Arvin  F,  Sumantri.  Uji aktvitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun Jarak  Pagar  ( Jatropha  curcas  L ) terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923, Escherichia  coli ATCC 25922,  dan Salmonella  typhi ATCC 1408. J Ilmu-Ilmu Pertan 2009;5(2):26– 37.