Jurnal Perikanan dan Kelautan
Volume 9 Nomor 2. Desember 2019
Halaman :  137 – 150
Identifikasi Bakteri Penghasil Antibiotik dari Mikrohabitat Ekstrim di Ekosistem Mangrove Secara Molekuler dan Aktivitasnya Terhadap Bakteri Patogen ( Vibrio Alginolyticus )
( Identification of Antibiotic-Producing Bacteria from Extreme Microhabitat in Molecular Mangrove Ecosystems and Their Activity on
Pathogenic Bacteria ( Vibrio alginolyticus ))
1*) Desy Mutia Sari, 2) Irwan Effendi, 3) Nursyirwani
1) Mahasiswa Pascasarjana, Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Riau, Kampus Bina Widya Km 12,5. Panam Pekanbaru – Riau 28293, Indonesia
2) Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Riau
3) Ilmu Kelautan, Mikrobiologi dan Bioteknologi, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Riau, Pekanbaru, Riau, Indonesia
*) Korespondensi: desy_mutiasari@ymail.com
Diterima : 15 Oktober 2019 / Disetujui : 5 November 2019

## ABSTRAK
Kemampuan bakteri penghasil antibiotik dari mikrohabitat di ekosistem mangrove dapat dimanfaatkan  untuk  menghasilkan  antibiotik  baru  untuk  keperluan  industri  maupun konservasi  lingkungan.  Ekosistem  mangrove  di  Dumai  memiliki  potensi  sebagai  bakteri penghasil  antibiotik  yang  belum  banyak  diteliti.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk memperoleh  bakteri  penghasil  antibiotik  dari  mikrohabitat  ekstrim  di  ekosistem mangrove  dalam  menekan  pertumbuhan  bakteri  patogen  patogen  ( Vibrio  alginolyticus ). Sampel  diambil  dari  beberapa  mikrohabitat  kawasan  mangrove  di  Dumai  (Kelurahan Purnama  Dumai),  Provinsi  Riau.  Metode  survei  digunakan  untuk  identifikasi,  uji antibakteri  terhadap  bakteri  patogen  ( Vibrio  alginolyticus ).  Isolasi  bakteri  dilakukan dengan menggunakan metode cawan tuang ( pour plate ) dan purifikasi dilakukan dengan menggunakan metode gores ( streak kuadran). Identifikasi dilakukan melalui pengamatan morfologi  makroskopis,  mikroskopis,  uji  biokimia,  uji  antagonisme  (metode  difusi  agar pada  media Nutrient agar)  dan  analisis  DNA.  Hasil  sekuensing  16S  rDNA  dari  isolat bakteri  penghasil  antibiotik  terbaik  yang  diidentifikasi  secara  molekuler  terdiri  dari bakteri Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus cereus, Enterobacter hormaechei, Klebsiella pneumonia, dan Enterococcus  gallinarum. Bakteri  penghasil  antibiotik  yang  ditemukan dapat menghambat pertumbuhan bakteri patogen V. alginolyticus .
Kata kunci : bakteri  penghasil  antibiotik,  bakteri  patogen,  identifikasi,  mikrohabitat ekstrim

## ABSTRACT
The presence of antibiotic-producing bacteria from microhabitat in mangrove ecosystems can be useful to produce new antibiotics for  industrial and environmental conservation. Mangrove  ecosystems  in  Dumai  have  the  potential  to  possess  antibiotic-producing bacteria  that  have  not  been  much  studied.  The  objective  of  this  research  was  to  obtain antibiotic-producing bacteria  from  extreme  microhabitats  in  the  mangrove  ecosystem  in
suppressing the growth of pathogenic bacterial pathogens (Vibrio alginolyticus). Samples were  taken  from  several  microhabitat  mangrove  areas  in  Dumai  (Kelurahan  Purnama Dumai),  Riau  Province.  The  survey  method  is  used  for  identification,  antibacterial  test against pathogenic bacteria (V. alginolyticus). Bacterial isolation  was carried out using the pour plate method and purification was carried out using the quadrant streak method. Identification  is  carried  out  through  observations  of  macroscopic,  microscopic morphology, biochemical tests, antagonism tests (agar diffusion method on agar nutrient media)  and  DNA  analysis.  Sequencing  of  16S  rDNA  from  the  best  antibiotic-producing bacterial  isolates  indicated  that  molecularly  identified  of  Bacillus  amyloliquefaciens, Bacillus  cereus,  Enterobacter  hormaechei,  Klebsiella  pneumonia,  and  Enterococcus gallinarum. All bacteria were able to inhibit the growth of V. alginolyticus.
Keywords :    antibiotic producing bacteria, pathogenic bacteria, identification, extreme microhabitat

## PENDAHULUAN
Penggunaan  antibiotik  dilakukan  karena  adanya  permasalahan  terhadap daya tahan tubuh dan penyakit dari udang budidaya.  Antibiotik digunakan untuk pengobatan  dan  pencegahan  penyakit  di  bidang  perikanan.  Secara  lebih  luas antibiotik  digunakan  sebagai  kontrol  infeksi  maupun  suplemen  makanan  untuk meningkatkan  pertumbuhan  dan  hasil  produksi  ikan.  Pada  saat  ini  banyak  obat antimikroba baru yang telah dikembangkan yang mampu menyembuhkan hampir semua infeksi antimikroba (Tjay dan Rahardja, 2010). Namun seiring berjalannya waktu, satu demi satu bakteri mulai resisten terhadap pemberian antibiotik. Pada saat  ini  banyak  ilmuan  yang  berhasil  mengembangkan  antibiotik  baru,  tetapi sudah semakin banyak bakteri yang resisten terhadap antibiotik (Borong,2012).
Mikrohabitat  di  ekosistem  mangrove  di  kawasan  Dumai  Provinsi  Riau berupa  bagian  dalam  komuditas  mangrove  (jenis Acanthus  ilicafilis,  Nipah sp , Rhyzopora  apiculata,  Xylocarpus  granatum) ,  ikan  tembakul  ( Periophthalmus modestus ),  kepiting  uka  ( Uca sp),  semut  ( Oecophylla sp),  semut  hitam ( Dolichoderus sp),  kerang  ( Geloina  Erosa )  dan  Siput  bakau  ( Cerithidea djadjariensisi )  pada  kawasan  mangrove  di  Dumai).  Mikrohabitat  diekosistem mangrove  di  Dumai  memiliki  potensi  sebagai  bakteri  penghasil  antibiotik  baru yang  belum  banyak  diteliti  untuk  keperluan  industri  maupun  konservasi lingkungan,  kesehatan  maupun  perikanan.    Penyediaan  sumber  antibiotik  baru bagi masyarakat pesisir juga merupakan salah satu alternatif pemecahan masalah ekonomi  masyarakat  pesisir.  Keberadaan  mikroorganisme  pada  ekosistem mangrove  sangat  erat  kaitannya  dengan  kestabilan  ekosistem.  Hutan  mangrove memiliki  keragaman  mikroba  yang  signifikan,  yang  memainkan  peran  penting dalam berbagai proses dan aplikasi lingkungan (Auta et al. , 2017).
Kemampuan  bakteri  penghasil  antibiotik  dari  mikrohabitat  ekstrim  di ekosistem  mangrove  yang  diperoleh  dapat  bermanfaat  untuk  menghasilkan antibiotik  baru.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memperoleh  bakteri  penghasil antibiotik  dari  mikrohabitat  ekstrim  diekosistem  mangrove  dalam  menekan pertumbuhan  bakteri  patogen  patogen  ( Vibrio  alginolyticus ).  Bakteri  patogen Vibrio  alginolyticus dapat  menyebabkan  penyakit  pada  ikan  budidaya  sehingga perlu  diantisipasi  untuk  pencegahannya.  Untuk  mengatasi  masalah  tersebut  telah banyak  dilakukan  penelitian  untuk  mencegah  bakteri  patogen  menginfeksi  ikan
yang dibudidayakan yaitu dengan menggunakan senyawa antimikroba (Feliatra, et al ., 2012).
Menurut Utami, (2011) Resistensi mikroorganisme terhadap antibiotik dapat terjadi  karena  beberapa  hal,  antara  lain:  (1)  Adanya  mikroorganisme  yang menghasilkan enzim yang dapat merusak aktivitas obat. (2) Terjadinya perubahan kondisi  permeabilitas  dari  mikroorganisme.  (3)  Terjadinya  perubahan  kondisi permeabilitas  dari  mikroorganisme  Adanya  modifikasi  reseptor  site  pada  bakteri sehingga  menyebabkan  afinitas  obat  berkurang.  (4)  Terjadi  mutasi  dan  transfer genetik.
Ekosistem  mangrove  di  Dumai  memiliki  kawasan  yang  sangat  luas  dan sangat  berpotensi  akan  senyawa  bioaktif  yang  dapat  dijadikan  sebagai antimikroba  dan  tentunya  potensi  bakteri  penghasil  antibiotik  di  daerah  tersebut akan cenderung lebih besar di bandingkan dengan daerah lainnya. Oleh karena itu, peneliti  tertarik  meneliti Identifikasi  Bakteri  Penghasil  Antibiotik  dari  Mikrohabitat Ekstrim  di  Ekosistem  Mangrove  Secara  Molekuler  dan  Aktivitasnya  terhadap  Bakteri Patogen ( V. alginolyticus).

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Mei  sampai  Agustus  2019 . Identifikasi Bakteri  dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  dan  Bioteknologi  Laut  Jurusan Ilmu  Kelautan  Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan  Universitas  Riau.  Identifikasi DNA  bakteri  dan  proses  PCR  dilakukan  di  Laboratorium  Biologi  FMIPA Universitas  Riau.  Identifikasi  DNA  bakteri  dan  proses  PCR  dilakukan  di Laboratorium Biologi FMIPA Universitas Riau. Selanjutnya proses purifikasi dan sekuensing  dilakukan  oleh  pihak First  Base Malaysia  yang  dikirim  oleh  PT. Genetika Science Indonesia, Jakarta Barat.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah  Erlenmeyer,  Gelas  ukur, Timbangan  analitik,  Tabung  reaksi,  Cawan  petri,  Jarum  ose,  Lampu  Bunsen, Autoclave, Mikropipet,  Inkubator,  Mikroskop  binokuler,  Sentrifus, Vortex  mixer, Waterbath, Mikropipet,  Mikro  tip, Tube, GD  column,  UV  spektrofotometer,  UV transiluminator,  Thermal  cycler  (PCR), Elektroforesis,  Sisir well  comb, dan kamera digital.
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  sampel  berupa  mangrove  (jenis Acanthus  ilicafilis,  Nipah sp ,  Rhyzopora  apiculata,  Xylocarpus  granatum) ,  ikan tembakul  ( Periophthalmus  modestus ),  kepiting  uka  ( Uca sp),  semut  ( Oecophylla sp),  semut  hitam  ( Dolichoderus sp),  kerang  ( Geloina  Erosa )  dan  Siput  bakau ( Cerithidea djadjariensisi ) pada ekosistem mangrove di kawasan Dumai dan Siak Provinsi  Riau.  Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  adalah  bakter  patogen ( V.alginolyticus ), media Nutrient agar (NA), larutan fisiologis, larutan pewarnaan Gram  (Crystal  Violet,  aquades,  larutan  Iodine,  Etil  Alkohol  95%,  dan  larutan Safranin),  larutan  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 3%,  media  SIM  ( Sulfide-Indol- Motility ),  media  MR-VP  dan  indikator  metil  merah,  media Simmon’s  Citrate Agar ,  media  TSIA  ( Triple  Sugar  Iron  Agar ),  media Tryptone  Soy  Broth (TSB), alkohol 70%, reagen kovacks , W1 Buffer, Gel DNA Binding (GB Buffer), Wash buffer, Elution buffer, Etanol absolut, Master Mix (10x buffer PCR, 2πm dNTP,
Jurnal Perikanan dan Kelautan Volume 9 Nomor 2 : 137 – 150. Desember 2019
Taq,  dH 2 O,  DNA, 10πm primer), 1 set primer: 24F: 5’  –  AGA  GTT TGA TCC TGG  CT  –  3’  1541R:  5’  –  AAG  GAG  GTG  ATC  CAG  CCG  CA  –  3’,  gel agarose, larutan Tris Acetate (TAE), Marker, dan Loading Dye .

## Metode Penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode survey dengan mengisolasi  bakteri  dari  beberapa  microhabitat  kawasan  mangrove  di  Dumai. Metode  survei  digunakan  untuk  identifikasi,  uji  antibakteri  terhadap  bakteri patogen ( Vibrio alginolyticus ) dan analisis DNA. Isolasi bakteri dilakukan dengan menggunakan  metode  cawan  tuang  ( pour  plate )  dan  purifikasi  dilakukan  dengan menggunakan  metode  gores  ( streak kuadran).  Identifikasi  dilakukan  melalui pengamatan  morfologi  makroskopis  (warna,  bentuk,  tepi  dan elevasi  koloni)  dan mikroskopis (dengan melakukan pewarnaan Gram, uji motilitas, uji oksidase, uji indol,  uji  katalase,  uji  sitrat,  uji  gula,  uji  aktivitas  terhadap  bakteri  patogen  dan analisis DNA). Data yang diperoleh disajikan dalam bentuk tabel dan gambar dan dibahas  secara  deskriptif,  didukung  dengan  studi  literatur  dan  hasil-hasil penelitian terdahulu sebagai pembanding

## Prosedur Penelitian

## Pengambilan dan penangan sampel
Sampel  diperoleh  dari  kawasan  ekosistem  mangrove  di  Dumai  Provinsi Riau berupa mangrove (jenis Acanthus ilicafilis, Nipah sp , Rhyzopora apiculata, Xylocarpus  granatum) ,  ikan  tembakul  ( Periophthalmus  modestus ),  kepiting  uka ( Uca sp), semut ( Oecophylla sp), semut hitam ( Dolichoderus sp), kerang ( Geloina Erosa )  dan  Siput  bakau  ( Cerithidea  djadjariensisi )  pada  kawasan  mangrove  di Dumai.  Sampel  yang  sudah  diambil  dimasukkan  ke  dalam  plastik  sampel  dan dibawa ke laboratorium untuk dianalisis.

## Prosedur penelitian
Sebanyak  1  gr  sampel  yang  diperoleh  diisolasi  pada  media Nutrient  Agar (NA)  dan  dilakukan  proses  pengenceran  (Nacl  fisiologis).  Koloni  yang  tumbuh diamati  secara  makroskopis  (pengamatan  morfologi  warna,  bentuk,  tepi  dan elevasi  koloni)  dan  mikroskopis  (pewarnaan  gram  dan  pengamatan  bentuk  sel bakteri)  pada  media  NA.    Identifikasi  bakteri  dilakukan  secara  fisiologis  dan biokimiawi  berupa  uji  katalase,  uji  sulfida  (H 2 S),  uji  penggunaan  gula,  uji motilitas,  uji  citrat,  dan  uji  metil  merah.  Uji  aktivitas  terhadap  bakteri  patogen ( Vibrio  alginolyticus ) dilakukan  dengan  menggunakan  metode  difusi  agar  pada media Nutrient agar ( NA). Adanya zona bening pada kertas cakram menunjukkan hasil  sensitivitas  positif  dan  tidak  ada  nya  zona  bening  pada  kertas  cakram menunjukkan tidak ada sensitivitas negatif.
Isolat  bakteri  penghasil  antibiotik  potensial  dilakukan  uji  molekuler menggunakan  Metode  Sekuens  16s  rRNA.  Ekstraksi  DNA  menggunakan  kolom mini  DNA.  Amplifikasi  DNA  dilakukan  dengan  menggunakan  PCR  dengan primer 24F dan1541R sebanyak 1 μl. Hasil PCR dianalisis pada gel agarosa 1,5% dalam  Tris-acetat-EDTA  (TAE).  Proses  elektroforesis  dilakukan  selama  ± 40menit  pada  sekitar  60  mA  (100-120  v)  dibaca  oleh  UV  Transilluminator. Purifikasi  (pencucian)  DNA  hasil  PCR  dari  gel  agarose  dilakukan  dengan menggunakan  Geneaid®  Gel/PCR  DNA Fragments  Extraction  Kit .  Hasil sekuensing  dari  isolat  bakteri  dianalisis  dengan  sistem  BLAST.  Hasil  analisis
hubungan  kekerabatan  isolat  bakteri  dengan  pohon  filogenetik  menggunakan metode Maximum Parsimony dan Neighbor Bergabung dengan 1000 kali bootamp booting .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi Bakteri Penghasil Antibiotik
Beberapa sampel bakteri penghasil antibiotik dari mikrohabitat di ekosistem mangrove  Dumai  (Desa  Purnama)  diisolasi  pada  media  NA.  Sampel  berupa mangrove  (jenis Acanthus  ilicafilis,  Nipah sp ,  Rhyzopora  apiculata,  Xylocarpus granatum) ,  ikan  tembakul,  kepiting  uka,  semut,  semut  hitam,  dan  Siput  bakau.
Sejumlah  410  isolat  bakteri  yang  diperoleh  dilakukan  diuji  penapisan  dengan isolat  bakteri  patogen (Vibrio  alginolyticus). Hasil  isolasi  bakteri  pada  media Nutrient agar ditemukan sebanyak 31 isolat bakteri terbaik dengan bentuk, warna, tepian, elevasi dan ukuran yang berbeda.
Penapisan  dalam  mikrobiologi  adalah  sejenis  tes  yang  bertujuan  untuk mengidentifikasi  adanya  mikroorganisme  tertentu  (misalnya  bakteri)  dalam sejumlah  besar  spesimen.  Uji  penapisan  ini  relatif  mudah  karena  peralatan  yang dibutuhkan  tidak  terlalu  mahal  dan  dalam  pengerjaan  pun  tidak  terlalu  rumit. Akan  tetapi,  pada  uji  ini  sangat  diperlukan  ketelitian  khusus  dan  perlakuan  yang harus  selalu  steril  karena  setiap  pengujian  yang  berhubungan  dengan  bakteri dipengaruhi oleh banyak faktor salah satunya kontaminan. Beberapa tes penapisan masih  dapat  dilanjutkan  dengan  tes  lain  yang  lebih  spesifik  (Singleton,  2001). Hasil  Penelitian  pada  pengamatan  morfologi  isolat  bakteri  memiliki  bentuk, ukuran,  elevsi,  tepian,  dan  warna  yang  berbeda.  Wijayanto et  al .  (2015)  dan Adithya et  al. (2017)  menemukan,  bakteri  memiliki  bentuk  koloni  bundar  dan menyebar, serta berwarna putih.
Hasil penelitian Krismawati et al ., (2015) Berdasarkan hasil uji pendahuluan potensi  isolat  sebagai  penghasil  antibiotik,  didapatkan  16  isolat  terseleksi  yang dapat menghambat bakteri uji. Terdapat 10 isolat yang menunjukkan kemampuan menghambat pada grup A, sedangkan pada grup B sebanyak 5 isolat dan dari grup C sebanyak 1 isolat. Selanjutnya ke 16 isolat tersebut diuji kembali pada bakteri uji  yang  sama  dengan  pengulangan  sebanyak  tiga  kali.  Menurut  Romero et  al . (2012)  budidaya  ikan  intensif  telah  menyebabkan  munculnya  beberapa  penyakit bakteri,  yang  telah  menyebabkan  peningkatan  penggunaan  antibiotik.  Pada dasarnya  penggunaan  obat-obatan  ini  ditujukan  untuk  pengobatan  penyakit  dan meningkatkan status kesehatan ikan dan meningkatkan kualitas lingkungan.
Hasil  uji  pewarnan  Gram  dalam  penelitian  ini  didapatkan  27  isolat  bakteri bersifat Gram positif dan 4 isolat bakteri bersifat Gram negatif. Hasil uji katalase pada penelitian menunjukkan 27 isolat bakteri bersifat katalase positif dan 4 isolat bakteri bersifat katalase negatif. Hasil uji indol pada penelitian ini menunjukkan 4 isolat  bakteri  bersifat  indol  positif  dan  27  isolat  bakteri  bersifat  indol  negatif.
Jurnal Perikanan dan Kelautan Volume 9 Nomor 2 : 137 – 150. Desember 2019
Hasil pada uji citrat pada penelitian menunjukkan bahwa 18 isolat bakteri bersifat cirat  positif  dan  13  isolat  bakteri  bersifat  citrat  negatif.  Hasil  uji  motilitas menunjukkan bahwa 8 isolat bersifat inmotil dan 23 isolat bersifat motil. Hasil uji sulfida  menunjukkan  3  isolat  bakteri  mampu  menghasilkan  sulfida  dan  28  isolat bakteri  tidak  mampu  menghasilkan  sulfida.  Hasil  pada  uji  penggunaan  gula menunjukkan  25  isolat  bakteri  mampu  memfermentasi  glukosa,  laktosa  dan sukrosa  sedangkan  6  isolat  bakteri  tidak  mampu  memfermentasi  laktosa  dan sukrosa  tetapi  mampu  memfermentasi  glukosa.  Hasil  pengamatan  morfologi bakteri penghasil antibiotik dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil pengamatan morfologi bakteri penghasil antibiotik.
Isolat Bentuk Koloni Warna Tepian Elevasi Ukuran A.1 3 Bulat Putih Susu Licin
Datar Sedang B.5 1 Bulat Putih Susu Licin
Timbul Kecil C.2 1 Tidak Beraturan
Putih Susu
Berombak
Timbul Kecil C.2 2 Bulat Putih Susu Licin
Datar Kecil C.5 1 Tidak Beraturan
Putih Susu
Tak Beraturan
Datar Kecil D.1 1 Bulat
Putih Kekuningan
Berombak
Datar Kecil D.3 1 Bulat
Putih Kekuningan
Licin
Datar Kecil D.5 1 Tidak Beraturan
Putih Susu
Tak Beraturan
Datar Kecil E.2 2 Bulat Putih Susu Licin Timbul Kecil E.2 3 Bulat Kuning Licin Timbul Kecil F.1 3 Bulat Putih Susu Licin Datar Kecil F.1 3 Bulat Putih Susu Tidak Beraturan
Datar Kecil G.1 2 Bulat Putih Susu Licin Timbul Sedang G.2 2 Bulat Putih Susu Licin Timbul Kecil G.2 2 Bulat Putih Susu Licin
Datar Kecil H.1 1 Bulat Putih Susu Licin
Datar Sedang I.2 0 Rizoid Putih Kekuningan Tidak Beraturan Berbukit Sedang I.4 0 Kompleks Putih Kekuningan Berlekuk Berbukit Sedang I.5 0 Konsentris PutihKekuningan
Licin
Datar Sedang J.8 0 Bulat PutihKekuningan
Licin
Datar Kecil J.7 0 Tidak Beraturan
Putih Susu
Berombak
Datar Kecil J.5 0 Bulat Putih Susu
Tidak Beraturan
Datar Kecil K.3 0 Bulat Putih Susu Licin
Seperti kawah Kecil K.2 0 Tidak Beraturan
Putih
Berlekuk
Datar Kecil K.4 0 Bentuk L Putih
Berombak
Timbul Kecil K.4 0 Bentuk L Putih
Berombak
Timbul Kecil L.1 0 Kompleks
Putih kekuningan
Berlekuk
Datar Kecil L.4 0 Kompleks Putihsusu Licin Berbukit Kecil L.9 0 Tidak Beraturan
Putih Tidak Beraturan Berbukit Kecil M.7 0 Bulat Putih Berombak Timbul Kecil M.6 0 Bentuk L Putih Susu Licin Seperti kawah Sedang M.5 0 Tidak Beraturan Putih kekuningan Tidak Beraturan Datar
Kecil
Hasil  penelitian  berdasarkan  uji  biokimia  menunjukkan  31  isolat  bakteri memiliki karakteristik yang berbeda-beda.  Hasil uji biokimia isolat bakteri dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil uji biokimia bakteri penghasil antibiotik
Isolat Uji Biokimia Uji Penggunaan Gula Gram Katalase Motilitas Indol H 2 S Citrat Glukosa Laktosa Sukrosa A.1 3 + + - - - +
+ + + B.5 1 + + + - - - + + + C.2 1 + + + - - - + + + C.2 2 + + + - - -
+ + + C.5 1 + + + - - - + + +
D.1 1 + + + - - - + + + D.3 1 + + + - - - + + + D.5 1 + + + - - -
+ + + E.2 2 + + + - - + +
+ + E.2 3 + + + - - +
+ + + F.1 3 + + + - - -
+ + + F.1 3 + + - - - + +
+ + G.1 2 + + + - - + +
+ + G.2 2 + + - - - + +
+ + G.2 2 + + + - - +
+ + + H.1 1 + + + - - - + + + I.2 0 + - - + - + + - - I.4 0 + + - + - + + - - I.5 0 + + + -
- - + + + J.8 0 + + + + - - + - - J.7 0 + + + - + + + - - J.5 0 + + + - - +
+ + +
K.3 0 + +
- - - - + + + K.2 0 - +
- -
- + + + + K.4 0 - - + - - + + - - L.1 0 + +
+ -
- - + + + L.4 0 + +
- -
+ + + - - L.4 0 + +
- -
+ + + - - L.9 0 + - + - - +
+ + + M.7 0 - +
+ - + +
+ + + M.6 0 + - + -
- + + + +
M.5 0 - + + + - +
+ + + Keterangan : Isolat A : Acanthus ilicafilius Isolat I  : Kepiting Isolat B : Nypa fruticans Isolat J  : Kepiting Isolat C : Rhyzopora apiculata Isolat K  : Siput Isolat D : Xylocarpus granatum Isolat L  : Ikan Tembakul Isolat E : Kerang Isolat M : Ikan Tembakul Isolat F : Ikan Tembakul + : Uji Positif Isolat G : Kepiting - : Uji Negatif Isolat H : Semut
Hasil  penelitian  Wijayanto et  al .  (2014)  menunjukkan  bahwa  27  isolat bakteri  bersifat  Gram  positif  dan  4  isolat  bakteri  bersifat  Gram  negatif.  Adanya
gelembung  gas  pada  uji  katalase  membuktikan  bahwa  bakteri  bersifat  katalase positif.    Gram  positif adalah  bakteri  yang  dinding  selnya  menyerap  warna  violet dan  memiliki  membran  plasma  tunggal  yang  dikelilingi  lapisan  peptidoglikan yang  tebal,  kandungan  lipidnya  rendah,  menghambat  warna  basa  dengan kebutuhan  nutrient  kompleks.  Hasil  penelitian  Holderman et  al .  (2017) berdasarkan  hasil  pengamatan  diketahui  bahwa  isolat  A,  C,  dan  D  merupakan bakteri  Gram  positif  coccus,  isolat  B,  E,  F,  G,  H,  I,  J  merupakan  bakteri  Gram positif basil.
Aktivitasnya Bakteri Penghasil Antibiotik terhadap Bakteri V. alginolyticus Akivitas  bakteri  penghasil  antibiotik  terhadap  bakteri  patogen  dapat  dilihat dari zona bening yang terbentuk disekeliling kertas cakram yang diletakkan pada permukaan  media  NA  yang  berisi  bakteri  patogen  menunjukkan  zona  hambatan pertumbuhan  bakteri.  Pengukuran  zona  bening  pada  uji  sensitivitas  bakteri dilakukan  sebanyak  3  kali  pengukuran  dan  hasil  dari  pengukuran  sensitivitas dirata-ratakan.  Hasil  uji  aktivitas  bakteri  terhadap  bakteri  pathogen  ( V. alginolyticus ) dapat dilihat pada Tabel 3.
Hasil  penenelitian  menunjukkan  nilai  nilai  rata-rata  daya  hambat  isolat bakteri  penghasil  antibiotik  terhadap  bakteri V.  alginolyticus berkisar  antara  1,0 mm  sampai  7,5  mm.  Isolat  G.2 2 memiliki  nilai  daya  hambat  tinggi  terhadap bakteri V.    alginolyticus dan  isolat  C.5 1 memiliki  nilai  daya  hambat  rendah terhadap  bakteri V.    alginolyticus .  Isolat  G.2 2 memiliki  respon  hambat  yang tergolong  sedang  dengan  nilai  rata-rata  sebesar  7,5  mm  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri V.    alginolyticus. Klasifikasi  Respon  Hambat  Bakteri menurut Rita (2010) jika diameter zona bening berukuran <5 mm memiliki respon hambat  tergolong  lemah.  Diameter  zona  bening  berukuran  5-10  mm  memiliki respon  hambat  tergolong  sedang.  Diameter  zona  bening  berukuran  10-19  mm memiliki respon hambat tergolong kuat. Diameter zona bening berukuran >20 mm memiliki respon hambat tergolong sangat kuat.
Terbentuknya  zona  bening  dikarenakan  adanya  penghambatan  senyawa antimikroba  terhadap  sel-sel  mikroba.  Mekanisme  kerja  dari  suatu  senyawa antimikroba  dapat  dilakukan  dengan  cara  menganggu  atau  merusak  penyusun dinding  sel,  bereaksi  dengan  membran  sel  yang  menyebabkan  peningkatan permeabilitas seluler, inaktifasi enzim-enzim essensial dan destruksiatau inaktifasi fungsi dan materi genetik (Sari et al . 2013).
Diameter  hambat  tidak  selalu  naik  sebanding  dengan  naiknya  konsentrasi antibakteri.  Hal  ini  terjadi  karena  adanya  perbedaan  kecepatan  difusi senyawaantibakteri  pada  media  agar,  jenis  dan  konsentrasi  senyawa  antibakteri dari metabolik sekunderyang dihasilkan. Secara umum kemampuan  menghambat pertumbuhan  bakteri  disebabkan  faktor;  produksi  antibiotik,  bakteriosin, siderphores,  lisosom,  protease  dan  hidrogen  peroksidaatau  mempengaruhi  pH media dengan menghasilkan asam organik tertentu (Elifah, 2010).
Noaman et  al .  (2014),  menjelaskan  bahwa  beberapa  faktor  yang  dapat mempengaruhi besar kecilnya aktivitas penghambatan zat antibakteri antara lain: 1) jenis, umur dari bakteri penghasil bakteriosin dan bakteri uji; 2) konsentrasi zat antimikroba  dan  jumlah  inokulum  atau  kepadatan  bakteri  uji;  3)  resistensi  dari bakteri  terhadap  substansi  zat  antimikroba  terkait  dengan  perbedaan  dinding  sel
dari  bakteri  uji;  dan  4)  kadar  substansi  aktif  atau  gugus  fungsi  dari substansimsenyawa antimikroba.
Tabel 3. Aktivitas bakteri terhadap bakteri patogen
Isolat V.  alginolyticus (+) R (mm) ± SD A.1 3 2,2 2,0 ± 0,3 B.5 1 2,5 4,7 ± 1,4 C.2 1 2,3 1,3 ± 0,,5 C.2 2 1,5 2,0 ± 0,3 C.5 1 1,8 1,0 ± 0,5 D.1 1 2,0 2,2 ± 0,5 D.3 1 2,7 2,3 ± 0,5 D.5 1 1,5 2,6 ± 2,0 E.2 2 2,8 2,3 ± 0,5 E.2 3 1,4 2,3 ± 0,6 F.1 3 2,5 2,4 ± 0,9 F.1 3 1,6 2 ,0 ± 1,1 G.1 2 1,5 1,3 ± 0,5 G.2 2 1,3 7,5 ± 4,5 G.2 2 2,3 2,4 ± 0,9 H.1 1 2,3 4,3 ± 0,5 I.2 0 2,5 2,0 ± 1,1 I.4 0 2,8 2,4 ± 0,9 I.5 0 1,6 2,3 ± 0,6 J.8 0 1,7 2,0 ± 0,3 J.7 0 1,4 1,3 ± 0,5 J.5 0 1,8 2,4 ± 0,9 K.3 0 2,1 2,3 ± 0,5 K.2 0 2,5 2,0  ± 1,1 K.4 0 2,3 2,0 ± 0,3 L.1 0 1,4 2,4 ± 0,9 L.4 0 1,6 2,3 ± 0,6 L.9 0 1,8 1,3 ± 0,5 M.7 0 2,1 4,6 ± 0,5 M.6 0 2,4 2,4 ± 0,9 M.5 0 1,7 2,6 ± 1,1 Nguyen et al . (2014) dan Sahoo et al . (2014) menjelaskan bahwa senyawa antibakteri  yang  dihasilkan  dari  perairan umumnya  memiliki  sifat  penghambatan spektrum  sempit  yang  artinya  kemampuan  penghambatan  hanya  terjadi  pada tingkat  kekerabatan  yang  dekat  dengan  bakteri  penghasil  antibakteri  sendiri  dan beberapa  senyawa  antibakteri  dari  golongan  Gram  positif  perairan  memiliki aktivitas  penghambatan  spektrum  luas  dan  dapat  digunakan  untuk  mengatasi patogen pada budiaya perikanan.
Jurnal Perikanan dan Kelautan Volume 9 Nomor 2 : 137 – 150. Desember 2019

## Identifikasi Bakteri Penghasil Secara Molekuler
Hasil  ekstraksi  DNA  total  yang  dielektroforesis  dengan  1  % Gel  Agarose menunjukkan  DNA  total  dari  bakteri  penghasil  antibiotik  yang  berpotensi  menghambat pertumbuhan bakteri patogen telah berhasil didapat melalui proses isolasi DNA, Lisis sel, DNA binding dan  pencucian. Hasil  sampel  DNA  yang  sudah  diamplifikasi  yang dielektroforesis  dengan  1  %  gel  agarose  dari  6  isolat  bakteri  (Gambar  1). Berdasarkan  Gambar  1  menunjukkan  besarnya  produk  PCR  yang  menghasilkan pita  tunggal  adalah  mendekati  1500  bp  ( base  pair )  sesuai  dengan  perbandingan menggunakan  marker  DNA.  Besarnya  ukuran  ini  sesuai  dengan  ukuran  yang diharapkan dari gen-gen 16S rDNA bakteri yaitu 1500-1600 bp. Sekuensing DNA 6 isolat Bakteri menggunakan primer 24F: 5’-AGA GTT TGA TCC TGG CT-3’ dan  1541R:  5’-AAG  GAG  GTG  ATC  CAG  CCG  CA-3’.  Bentuk  dari  hasil sekuensing  dari  masing-masing  isolat  dalam  bentuk  elektroforegram  dengan siklus  yang  terpisah  ( forward dan reverse ).  Pasangan  basa  (bp)  yang  diperoleh setelah  digabung  antara  fasta forward dan reverse dengan  program seqmen pada DN  Astar dengan total panjang untuk isolat bakteri B.5 1 , D.5 1 ,  H.1 1 ,  G.2 2 ,  M.7 0 , M..5 0 .
Gambar  1.  Produk  PCR  yang  di  Elektroforesis  pada  1  % Gel  Agarose (Keterangan:  M  (Fragmen  marker  DNA  1  kb  ladder);  A  (Bakteri B.5 1 );  C  (Bakteri  H.1 1 );  D  (Bakteri  G.2 2 );  PB  (Bakteri  M.7 0 );  BB (Bakteri M.5 0 )
Hasil  sekuen  masing-masing  isolat  bakteri  dengan  sistem  BLAST  dapat dilihat  bahwa  jenis  bakteri  yang  berhasil  ditelusuri  dengan  sistem  BLAST  yaitu bakteri B.  amyloliquefaciens dengan  tingkat  homologi  99%,  2  bakteri B.  cereus dengan tingkat homologi 100 %, bakteri E. hormaechei dengan tingkat homologi 97  %,  bakteri K.  pneumoniae dengan  tingkat  homologi  99  %  dan  bakteri E. gallinarum dengan tingkat homologi 99 %. Isolat B.5 1 , D.5 1 dan M.7 0 merupakan isolat  yang  memiliki  genus  yang  sama  tetapi  berbeda  spesies,  sedangkan  isolat B.5 1 dan M.7 0 merupakan isolat bakteri yang memiliki spesies sama. Isolat H.1 1 , G.2 2 dan  M.5 0 merupakan  isolat  bakteri  yang  memiliki  genus  yang  berbeda  dan berbeda spesies.
Skrining bakteri menggunakan teknik sekuens 16S rDNA merupakan suatu teknik  modern  dalam  mengidentifikasi  suatu  spesies  organisme.  Teknik  ini
dilakukan dengan menganalisa struktur atau susunan basa DNA  yang terdapat di daerah 16S rDNA. Amplifikasi gen 16S rDNA dapat menentukan spesies bakteri dalam ekologi bakteri secara metagenom (Vetrovsky and Baldrian, 2013).
Isolat yang mempunyai persamaan sekuen 16S rDNA lebih dari 97% dapat mewakili  pada  tingkat  spesies  yang  sama.  Persamaan  sekuen  16S  rDNA  antara 93-97%  dapat  mewakili  identitas  pada  tingkat  genus  tetapi  berbeda  pada  tingkat spesies. Sedangkan jika dibawah 93% kemungkinan spesies baru yang urutan basa nitrogennya  belum  masuk  dalam  data  base  gen  bank  (Hagstrom dalam Lusiano, 2007).
B. amyloliquefacien merupakan salah satu bakteri yang dapat menghasilkan amilase.  Alpha  amilase  dapat  disolasi  dari  bakteri B.  amyloliquefaciens yang mempunyai  berat  molekul  kira-kira  50  kDa. B.  amyloliquefaciens merupakan bakteri  yang  termasuk  dalam  golongan  spesies Bacillus . B.  amyloliquefaciens banyak  dikenal  karena  memiliki  sifat  katabolik  dan  kemampuannya  dalam mendegradasi  makromolekul  yang  komplek  (Gangadharan et  al, 2006).  Bakteri ini mempunyai sifat yang termofilik (tahan terhadap suhu yang tinggi).
Susana  (2017),  bakteri B.  cereus mampu  menghasilkan  senyawa antimikroba  dan  dapat  menghambat  bakteri  patogen  yaitu V.  algynolyticus,  A. hydrophila dan Pseudomonas sp. yang ditandai dengan terbentuknya  zonabening pada  saat  uji  antagonis.  Kemampuan  ini  diduga  karena  bakteri  dari  jenis  ini menghasilkansenyawa antibiotik. Senyawa ini merupakan kumpulan zat-zat kimia yang  diproduksi  olehmikroorganisme  diantaranya  oleh  fungi  dan  bakteri  yang memiliki fungsi menghambatpertumbuhan atau membunuh mikroorganisme lain. Bakteri B.  cereus digunakansebagai  probiotik  pada  budidaya  perikanan  yang diambil dari saluran pencernaan karena bakteriini memiliki zat antimikroba yaitu bakteriosin (Umoro, 2016).
Kebanyakan bakteri dengan genus Enterobacter memiliki hasil positif untuk pemeriksaan sitrat, motil, dan memproduksi gas dari glukosa namun banyak dari bakteri ini juga memiliki hasil negatif pada uji H 2 S. Organisme ini diketahui dapat mengakibatkan infeksi nosokomial, seperti pneumonia, infeksi pada luka, infeksi saluran  kemih,  dan  infeksi  yang  diperantarai  alat      (Brooks et  al., 2010),  oleh karena  itu,  penggunaan  bakteri  ini  sebagai  penghasil  enzim  untuk  keperluan proses produksi gelatinase perlu untuk dipertimbangkan.
Enterobacter  hormaechi dan Klebsiella  pneumonia bisa  digunakan  sebagai antibiotik. Namun penelitian ini cukup menarik, karena berdasarkan literatur yang dibaca bahwa isolat yang ditemukan merupakan bakteri patogen yang menyerang manusia.  Akan  tetapi  tidak  mustahil  bahwa  bakteri  patogen  ini  memiliki  sistem pertahankan  diri  yang  dimiliki  oleh  bakteri  secara  umum,  dengan  memproduksi metabolit  yang  ada  pada  bakteri  itu  sendiri.  Dengan  cara  mengekstraksi  seluler sebagai hasil metabolit sekunder yang dapat menghambat bakteri patogen lainnya. Spesies Enterococcus  gallinarum ini  diketahui  menyebabkan  kelompok infeksi,  meskipun  dianggap  sangat  langka  (Fluit et  al.  2001). Menurut  Gilmore dan Clewell    (2002) Enterococcus  gallinarum adalah  satu-satunya  spesies enterococcal  yang  diketahui  selain E.  faecium dan E.  faecalis  yang diketahui menyebabkan wabah dan menyebar di rumah sakit (Bennett et al. 2014).

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa mikrohabitat ekstrim dari ekosistem  mangrove  dapat  menghasilkan  enam  bakteri  penghasil  antibiotik terbaik  yaitu  bakteri Bacillus  amyloliquefaciens,  Bacillus  cereus,  Enterobacter hormaechei,  Klebsiella  pneumonia,  dan  Enterococcus  gallinarum. Bakteri penghasil  antibiotik  yang  ditemukan  dapat  menghambat  bakteri  patogen  ( V. alginolyticus) pada  ikan.  Sebaiknya  dilakukan  penelitian  lanjut  tentang identifikasi  senyawa  penyusun  metabolit  primer  dan  sekunder  serta  optimalisasi pertumbuhan metabolit primer dan sekunder yang dituju.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  merupakan bagian  dari  Penelitian  Guru  Besar Universitas  Riau TA 2018. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Universitas Riau atas dukungan dana penelitian ini sehingga telah selesai dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Adithiya  DS,  Feliatra  F,  Afrizal  T.  2017.  Using  of  Bacteria  Heterotrophic  as  an Anti-Bacterial  Againts  Pathogenic  Bacteria  Isolated  from  Sea  Water  in Dumai  City,  Riau  Province. Jurnal  Online  Mahasiswa  Fakultas  Perikanan dan Kelautan Universitas Riau 4(2) : 1-17.
Auta HS, Emenike CU, Fauziah SH. 2017. Screening of Bacillus Strains Isolated from  Mangrove  Ecosystems  in  Peninsular  Malaysia  for  Microplastic Degradation. Jurnal  Environmental  Pollution 231:  1552  (Abstr.).
Environmental Pollution : DOI 10.1016/j.envpol.2017.09.043.
Bennett  LR,  Budi  W,  Auky  H,  Adnyana  IBP,  Mulyoto  P.  2012.  Indonesian infertility  patients’  health  seeking  behaviour  and  patterns  of  access  to biomedical infertility care: an interviewer administered survey conducted in three clinics. Jurnal Reproductive Health 9(24): 1-7 http://www.reproductive-health-journal.com/content/9/1/24.
Borong,  MF. 2012.  Kerasionalan Penggunaan Antibiotik Pada Pasien RawatInap Anak Rumah Sakit M.M Dunda Limboto Tahun 2011. [Skripsi]. Gorontalo: Program  Studi  D-III  Farmasi  Fakultas  Ilmu-ilmu  Kesehatan  dan Keolahragaan Universitas Negeri Gorontalo.
Brooks  GT,  Butel  JS,  Morse  SA,  Jawetz  E,  Melnick  JL,  Adelberg  EA.  2004. Medical Microbiology 23 rd edition . Mc Graw Hill Companies Inc.
Elifah.  E.  2010.  Uji  Antibakteri  Fraksi  Aktif  Ekstrak  Metanol  Daun  Senggani
( Melastoma  candidum,  D.  Don )  Terhadap Escherichia  coli dan Bacilus subtilis Serta  Profil  Kromatografi  Lapis  Tipisnya . [Skripsi].  Surakarta: UNS.
Feliatra  F,  Fitria  Y,  Nursyirwani  N.  2012.  Antagonis  bakteri  probiotik  yang diisolasi  dari  usus  dan  lambung  ikan  kerapu  bebek  ( Cromileptes  altivelis ) terhadap bakteri patogen. Jurnal Perikanan dan Kelautan 17(1): 16 – 25.
Fluit ADC, Visser MR, Schmitz  FJ. 2001.  Molecular Detection  of Antimicrobial Resistance. Clinical Microbiology Reviews 14(4):836-71.
Gangadharan  D,  Sivaramakrishnan  S,  Nampoothiri  KM,  Pandey  A.  2006.  Solid Culturing  of  Bacillus  amyloliquefaciens  for  Alpha  Amylase  Production. Jurnal Biotechnol 44(2): 269–274.
Gilmore  MS,  Coburn  PS,  Nallapareddy  SR,  Murray  BE.  2002.  Enterococcal Virulence. In M. S. Gilmore, D. B. Clewell, P. Courvalin, G.M. Dunny, B. E. Murray, and  L.B. Rice (Eds). The Enterococci: Pathogenesis Molecular Biology,  and  Antibiotic Resistance .  Asm  Press.  Washington,  DC.  301-354. ISBN: 1-55581-234-1
Hagstrom,  Pinhassi  AJF,  Zweiefel  UL.  2000.  Biogeoghraphycal  Marine DiversityAmong Bacretioplankton. Aquatic Microbial Technology 21: 231- 244.
Holderman  MV,  Queljoe  ED,  Rondonuwu  SB.  2017.  Identifikasi  Bakteri  Pada Pegangan  Eskalator  di  Salah  Satu  Pusat  Perbelanjaan  di  Kota  Manado. Jurnal Ilmiah Sains 17(1): 1-6.
Krismawati  H,  Sembiring  L,  Wahyuono  S.  2015. Streptomycetes Penghasil Antibiotik  yang  Berasosiasi  dengan  rhizosfer  beberapa  Spesies  Mangrove. Jurnal PLASMA 1(2): 59-70.
Nguyen  DV,  Pham  T,  Nguyen  TH,  Nguyen  TT.  2014.  Screening  of  Marine Bacteria with Bacteriocin like Activities and Probiotic Potential for Ornate SpinyL  obster  (Panulirus  ornatus)  Juveniles. Journal  Fish  Shell  Immun 40(1) : 49-60.
Noaman NH, Fattah A, Khaleata M, Zaky SH. 2004. Factor Affecting Antimicrob Activity of Synechococus leopoliensis. Journal Microbiol Research 159(4): 395-402.
Rola AC, Narvaez TA, Naguit MRA, Elazegui DD, Brillo BBC, Paunlagui MM, Jalotjot HC, Cervantes CP. 2018. Impact of the closed fishing season policy for sardines in Zamboanga Peninsula, Philippines. Marine Policy (87): 40– 50. DOI: 10.1016/j.marpol.2017.09.029.
Romanengko LA, Naoto T, Masataka U, Natalia IK, Valery VM. 2008. Diversity and antagonistic activity of sea ice bacteria isolated from the Sea of Japan. Microbiol Environ 2(3): 209-214.
Romero J, Feijoó CG, Navarrete P. 2012. Antibiotics in aquaculture – use, Abuse and  Alternatives .  Chile:  Universidad  de  Chile,  Biotechnology  Laboratory (INTA) Sara Savic. 43 hlm.
Sahoo  TK,  Jena  PK,  Patel  AK,  Seshadri  S.  2014.  Bacteriocin  and  their Application  for  The  Treatment  of  Bacterial  Diseases  in  Aquaculture: Journal Aquacult Research 47(4): 1013-1027.
Sari  YNM.  2013.  Isolasi,  Karakterisasi  dan  Identifikasi  DNA  Bakteri  Asam Laktat  (BAL)  yang  Berpotensi  Sebagai  Antimikroba  dari  Fermentasi Markisa  Kuning  ( Passiflora  edulis  var.  flavicarfa )  [Skripsi].  Padang:
Diploma Thesis, Universitas Andalas
Singleton  P  dan  Sainbury  D.  2001. Dictionary  of  Microbiology  and  Molecular
Biologi , 3 rd Edition .
Susana M. 2017. Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Heterotrofik pada Perairan Laut Kawasan  Pemukiman  dan  Perairan  Bersalinitas  Rendah  di  Kelurahan Purnama Dumai Provinsi [Skripsi]. Pekanbaru: Universitas Riau.
The European Commission. 2010. Commission Regulation (EU) No37/2010 of 22 December  2009  on  pharmacologically  active  substances  andtheir classification  regarding  maximum  residue  limits  in  foodstuffs  of  animal origin. Official  Journal  of  the  European  Union 15(2377):  1–72. http://doi.org/2004R0726 - v.7 of 05.06.2013.
Umoro  A.  2016.  Isolasi Bacillus Sp.  Penghasil  Bakteriosin  dan  Peningkatan Aktivitasnya  sebagai  Penghambat Vibrio  harveyi [Tesis].  Bogor:  Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Utami ER. 2011. Antibiotika, resistensi, dan rasionalitas terapi. Jurnal SAINSTIS 1(1): 191–198.
Utami  RA.  2011. Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Alkaloid  Ageratum  conyzoides  L Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri  Staphylococcus  aureus  Secara  in  Vitro. [Skripsi]. Bandung: Jurusan Pendidikan Biologi FMIPA UPI Bandung
Vazquez  DE,  Duarte  CM,  Agusti  S,  Jurgen  K,  Vangue  D,  Gasol  JM.  2008.
Microbial  plankton  abundance and  heterotrophic activity  across  the  central Atlantic Ocean . Journal Progress in Oceanography 79(1): 83  94.
Větrovský  T,  Baldrian  P.  2013.  The  Variability  of  the  16S  rRNA  Gene  in Bacterial  Genomes  and  Its  Consequences  for  Bacterial  Community Analyses. Journal PloS ONE 8(2): 1-10.
Wijayanto  N,  Feliatra,  Nedi  S.  2015.  Antagonism  Test  of  Probiotics  Bacteria Isolated  from  Black  Tiger  Shrimp  (Penaeus  monodon)  Against  Pathogens (Aeromonas hydrophila, Pseudomonas sp and Vibrio alginolyticus). Jurnal Online Mahasiswa Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Riau 2(1): 1-8.