PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK Sargassum sp. DENGAN PELARUT METANOL PADA PAKAN TERHADAP JUMLAH ERITROSIT DAN DIFFERENSIAL LEUKOSIT IKAN LELE DUMBO ( Clarias gariepinus )
EFFECT OF EXTRACT Sargassum sp. WITH METHANOL SOLVENT IN FEED ON ERYTHROCYTHES AND DIFFERENTIAL LEUCOCYTHES OF AFRICAN CATFISH ( Clarias gariepinus )

## Firly Waliani Rahma, Gunanti Mahasri dan Laksmi Surmartiwi
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
The  main  obstacles  in  successful  production  is  the  attack  of  a  disease.  Preventive  measures  in reducing disease one of them is by means an increase in immunity the body of fish use natural compound (Parelberg et al ., 2005). One of the natural compound that can be used as obtaining the immune system fish  are  the  vitamin  C,  iodine,  tannin  (Bachtiar,  dkk.,  2012)  and  polysaccharides  and  derivatives  as fucoidan. (Castro et. al., 2006) which is in Sargassum sp. With the provision of extract Sargassum sp. in feed  is  expected  to  optimize  the  number  of  erythrocytes  and  differensial  leukocytes  (number  of neutrophils , monocytes and lymphocytes) at african catfish ( Clarias gariepinus ) so that it may optimize immunity the body of fish (Brown, 2000). The result of the observation of the blood of fish test is the use of extract Sargassum sp. wich get mixed in feed with doses 5, 10 and 15 g/kilogram feed during 21 days impact  on  the  number  of  erythrocytes  and  prosentase  lymphocytes  blood  catfishes.  In  doses  C  (15  g extract/ kilogram feed) put a value erythrocytes highest in day 21 namely 16.84 ± 1.56 x 105 cells/mm 3 , and give prosentase lymphocytes highest in day 21 than those wich others are 86.00  ± 3.81 %. But in a post  test,  B  and  C  not  seen  the  real  difference  between  treatment.  While  for  statistics  the  addition  of extract not indicates the influence of real to the percentage neutrophils and monocytes of the blood fish. So that it can be said that addition extract Sargassum sp. with doses 15 g extract/kilogram feed give the effectiveness of the optimal response immune system than second doses other.
Keywords : Feed, ekstract Sargassum sp., the number of erythrocytes,  and differential leukocytes

## Pendahuluan
Ikan  lele  merupakan  salah  satu komoditas  unggulan  air  tawar  yang  penting dalam  rangka  pemenuhan  gizi  masyarakat. Selain karena rasanya yang enak dan harga dari ikan  ini  dapat  terjangkau  oleh  seluruh  lapisan masyarakat  kandungan  protein  dari  ikan  lele sebesar 15,74
% (Ubadillah
dan Hersoelistyorini, 2010). Produksi ikan lele pada tahun 2010 sebesar 242.811 ton dan pada tahun 2013 meningkat menjadi 758.455 ton. Kenaikan rata-rata  produksi  ikan  lele  selama  tahun  2010- 2013 sebesar 47,21%. Target produksi ikan lele pada  tahun  2014  ditingkatkan  menjadi  840.000 ton.  (KKP,  2013).  Namun,  salah  satu  yang menjadi  kendala  dalam  budidaya  ikan  lele adalah rentan terhadap kondisi lingkungan yang buruk  sehingga  mudah  terinfeksi  bakteri (Murhananto, 2002).
Upaya  pencegahan  yang  paling  efektif dilakukan  dengan  meningkatkan  kekebalan tubuh  ikan  baik  kekebalan  tubuh  spesifik dengan menggunakan vaksinasi maupun
kekebalan tubuh non spesifik dengan pemberian imunostimulan (Parelberg et al ., 2005).
Salah  satu    bahan  alami  yang  mampu meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh  ikan yakni Sargassum sp.  menurut    Castro et.  al.
(2006)  mengandung  senyawa  fucoidan  yang merupakan polisakarida kompleks pada dinding sel  alga  coklat  dan  merupakan  komponen terbesar  yang  mampu  meningkatkan  imunitas dengan  merangsang  produksi  sel-sel  imun, sehingga  membantu  dalam  melawan  bakteri patogen.  Selain  itu Sargasum sp.  mengandung iodin,  tannin  dan  fenol  yang  berfungsi  untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri  (Bachtiar, dkk., 2012)
Darah  menjadi  salah  satu  cara  dalam mendiagnostik status kesehatan dari ikan. Darah mengalami  perubahan  yang  serius  khususnya apabila  terkena  penyakit  infeksi  (Amlacher 1970). Parameter darah yang dapat memperlihatkan  adanya  gangguan  adalah  nilai hematokrit,  konsentrasi  hemoglobin,  jumlah eritrosit  (sel  darah  merah)  dan  serta  perubahan
terhadap  jumlah  differensial  leukosit  (neutrofil, monosit dan limfosit) (Lagler et al., 1977).

## Materi dan Metode
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium  Pendidikan  Fakultas  Perikanan dan  Kelautan  Universitas  Airlangga  selama  21 hari dimulai pada bulan Agustus sampai dengan bulan September  2015. Metode yang digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  eksperimental dengan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL). Perlakuan yang digunakan sebanyak 4 perlakuan  dan  5  ulangan.  Pemberian  pakan dengan  perlakuan  diberikan  selama  21  hari  dan pada  hari  ke  0,  7,  14  dan  21  dilakukan pengitungan  jumlah  eritrosit  dan  differensial leukosit  (neutrofil,  limfosit  dan  monosit). Perlakuan yang diberikan yakni perbedaan dosis ekstrak Sargassum sp.  yakni  K  (Kontrol),  A  (5 gr ekstrak/kg pakan), B (10 gr ekstrak/kg pakan) dan  C  (15  gr  ekstrak/kg  pakan).  Jumlah  pakan yang diberikan sebanyak 5% dari biomassa.
Bahan Penelitian Bahan yang digunakan dalam
penelitian  ini  antar  lain  adalah  ikan  lele  dumbo ( Clarias gariepinus ) ukuran 10-12 cm, sebanyak    200  ekor. Sargassum  sp., Aquades, pakan  ikan  komersial Comfeed 781-2  dengan kandungan  protein  30  –  32 %,  formalin,  kapas, tisu, EDTA, Giemsa 10%, metil alcohol Penghitungan  Jumlah  Eritrosit  (Svobodova  & Vyukusova 1991) Jumlah eritrosit dihitung dalam volume tertentu dengan menggunakan faktor konversi. Penghitungan  dimulai  dengan  mengisi  pipet eritrosit  yakni  darah  dihisap  sampai  garis  tanda 0,5  dan  larutan  pengencer  (larutan  hayem) sampai  garis  101.  Melepaskan  tabung  aspirator kemudian  dihomogenkan  5-10  menit  untuk memastikan pencampuran dengan baik. Membuang  3-4  tetes  pertama,  berikutnya meletakkan pada bilik hitung. Bilik hitung yang telah  terisi  diletakkan  pada  mikroskop  dan lakukan pembacaan dalam pembesaran (40x).
Eritrosit = (A/N) x (1/V) x Fp
A = Σ sel terhitung V = volume kotak haemacytometer N = Σ kotak haemacytometer yang  diamati Fp = Faktor pengenceran
Penghitungan  Prosentase  Differensial  Leukosit (Svobodova & Vyukusova 1991)
Pemeriksaan dilakukan dengan membuat  preparat  ulas  darah  dan  diwarnai
dengan  pewarnaan  Giemsa  10%  selama  10-15 menit.  Sampel  darah  di  campur  homogen sebelum diambil dengan pipet kapiler, kemudian satu tetes kecil darah diletakkan dekat ujung  gelas  obyek  posisi  permukaan  datar. Gelas  obyek  yang  kedua  ditempatkan  dengan ujung  menyentuh  permukaan  gelas  obyek pertama  sehingga  membentuk  sudut  30-45 o . Gelas  obyek  kedua  ditarik  ke  samping  dan dibiarkan  darah  mengalir  dengan  daya  kapiler sehingga  mencapai  luasan  2/3  gelas  obyek pertama.  Gelas  obyek  kedua  didorong  dengan sudut  yang  sama  sehingga  membentuk  lapisan tipis.  Preparat  apus  dibiarkan  mengering  di udara terbuka.
Preparat  apus  darah  difiksasi  dengan metil  alkohol  selama  3-5  menit,  preparat diambil  dan  dibiarkan  kering  di  udara.  Setelah kering  preparat  direndam  dengan  pewarna Giemsa yang baru selama 10-15 menit. Preparat dicuci  dengan  air  berkali-kali  dan  dibiarkan mengering  di  rak.  Penghitungan  persentase limfosit  dilakukan  perbesaran  obyektif  40x, klasifikasi  leukosit  pada  beberapa  lapang pandang dan dihitung per 100 leukosit.
Presentase Limfosit  =
Presentase Monosit  =
Presentase Neutrofil =

## Hasil dan Pembahasan
Jumlah Eritrosit Pengamatan  terhadap  jumlah  total eritrosit  dalam  darah  ikan  lele  dumbo  pada perlakuan  yang  berbeda,  menunjukkan  bahwa nilai  tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  C  pada hari  ke-21  yakni  16.84  ±  1.56  x  10 5 sel/mm 3 . Nilai terendah terdapat pada kontrol  yaitu 11.6 ±  5.80  x  10 5 sel/mm 3 yakni  pada  hari  ke-14. Dari  analisa  statistic  ragam  (ANOVA)  dan  uji lanjutan  Duncan  pada  selang  kepercayaan  95% (p<0.05) diperoleh hasil pada hari ke-21 kontrol berbeda  nyata  (p<0.05)  dengan  perlakuan  A,  B dan  C  yakni  jumlah  eritrosit  lebih  rendah  dari ketiga  perlakuan.  Kisaran  jumlah  eritrosit  ini masih berada dalam kisaran normal artinya ikan berada  dalam  kondisi  sehat.    Hal  ini  sesuai dengan  pernyataan  Robert  (1978)  dalam Mulyani  (2006)  yang  menyatakan  bahwa  pada ikan  teleostei,  jumlah  normal  eritrosit  sebesar 1,05 – 3,00 x 10 6 sel/mm 3 .
Sel darah merah mengandung hemoglobin yang memungkinkan  sel  darah  merah  membawa oksigen  ke  seluruh  jaringan  tubuh.  Rendahnya eritrosit  akan  menyebabkan  ikan  tidak  mampu mengambil  oksigen  dalam  jumlah  banyak walaupun  ketersediaan  oksigen  di  perairan mencukupi.  Akibatnya  ikan  akan  mengalami anoxia  (kekurangan  oksigen)  (Fujaya,  2002). Seperti  halnya  pada  hematokrit,  kadar  eritrosit yang  rendah  menunjukkan  terjadinya  anemia sedangkan  kadar  yang  tinggi  menunjukkan bahwa  ikan  dalam  keadaan  stress  (Wedemeyer dan Yatsuke, 1977 dalam Purwanto, 2006). Differential Leukosit
Bila  dilihat  pada  Tabel  2.  jumlah prosentase limfosit di semua perlakuan dari hari ke-0  sampai  hari  ke-21  cenderung  meningkat. Peningkatan  prosentase  limfosit  di  hari  ke-21 pada  perlakuan  5,  10  dan  15  g  ekstrak  /  kg pakan menunjukkan pemberian ekstrak Sargassum sp.  memberikan  pengaruh  terhadap prosentase  limfosit  dalam  darah  ikan  lele. Pengaruh  ini  berupa  peningkatan  jumlah limfosit.  Hal  ini  dikarenakan  kandungan  kimia alami  dari  hasil  ekstraksi Sargassum sp. mengandung  vitamin  C  dimana  pemberian vitamin C dalam dosis tinggi mampu meningkatkan  ketahanan  tubuh  (Navarre  and Halve,  1989)  dan  polisakarida  yang  berfungsi
Tabel 1. Jumlah Rataan Eritrosit Pada Setiap Perlakuan (x 10 5 sel/mm 3 )   Selama   Pemberian Ekstrak
Sargassum sp. Perlakuan Hari ke-0 Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21 Normal K 14.24 ± 2.36 13.6 ± 5.80 15.18 ± 2.82 13.08 ± 0.82 a 1,05 – 3,0 ×10 6 Robert, 1978 dalam Mulyani, 2006 A 13.38 ± 4.92 13.74 ± 1.86 15.10 ± 2.50 16.10 ± 1.60 b B 12.78 ± 1.42 13.28 ± 4.52 15.50 ± 1.80 16.06 ± 1.34 b C 13.58 ± 2.72 13.98 ± 1.52 15.34 ± 2.36 16.84 ± 1.56 b
Keterangan : Huruf superscrift yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan pengaruh berbeda nyata (p<0.05)
Tabel 2. Persentase Rataan Limfosit Setiap Perlakuan (%) Selama Pemberian  Ekstrak Sargassum sp . Perlakuan Hari ke-0 Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21 Normal K 78.80 ± 4.32 81.60 ± 2.41 81.40 ± 1.67 80.80 ± 1.92 a 65,20 – 86,00 Salasia dkk., (2001) A 80.40 ± 1.14 83.00 ± 3.39 82.80 ± 3.56 85.80 ± 3.11 b B 77.60 ± 4.93 81.60 ± 2.19 84.00 ± 3.54 85.20 ± 3.11 b C 80.20 ± 2.86 81.00 ± 2.92 85.40 ± 4.04 86.00 ± 3.81 b
Tabel 3.  Jumlah  Rataan Persentase Jumlah Neutrofil Pada Setiap Perlakuan (%)  Selama Pemberian Ekstrak Sargassum sp. Perlakuan Hari ke-0 Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21 Normal K 13.00 ± 4.95 10.60 ± 2.07 10.60 ± 1.82 11.20 ± 1.58 7,75 -  14,94 Salasia dkk., (2001) A 11.40 ± 1.82 9.00 ± 2.83 8.20 ± 3.96 7.80 ± 1.10 B 13.40 ± 4.51 10.40 ± 3.05 7.20 ± 1.44 8.40 ± 1.67 C 11.40 ± 2.82 11.00 ± 3.32 8.20 ± 2.28 8.20 ± 1.92
Tabel  4.  Jumlah  Rataan  Persentase  Jumlah  Monosit  Pada  Setiap  Perlakuan  (%)  Selama  Pemberian Ekstrak Sargassum sp. Perlakuan Hari ke-0 Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21 Normal K 8.20 ± 0.84 7.80 ± 0.45 8.00 ± 0.71 8.60 ± 1.52 3,12 – 8,82 Andayani dkk., (2013) A 8.20 ± 0.84 8.00 ± 1.00 7.70 ± 0.71 7.40 ± 1.95 B 9.00 ± 0.71 7.00 ± 1.00 8.80 ± 0.45 8.20 ± 0.84 C 8.40 ± 0.36 8.20 ± 1.00 6.30 ± 0.03 7.00 ± 1.00
sebagai  peningkat  sistem  imun  pada  ikan  dan meningkatkan proteksi terhadap bakteri (Anggadiredja dkk., 2006). Selain itu kandungan  lain  dalam  ekstrak Sargassum sp. seperti  senyawa  fucoidan  juga  berfungsi meningkatkan  sel  imun  dengan  merangsang produksi  sel  imun  (Castro el  al., 2006),  yakni menginduksi  sel  pembentuk  leukosit,  untuk menghasilkan lebih banyak sel sel yang terdapat dalam  leukosit  yakni  limfosit,  monosit  dan neutrofil  (Radji,  2015).  Induksi  sel  leukosit  ini merupakan  bentuk  respon  dari  tubuh  ikan terhadap  adanya  benda  asing  yang  masuk  se dalam tubuh. Benda asing ini berupa pemberian ekstrak Sargassum sp.  yang  dicampurkan  ke dalam pakan. Peningkatan prosentase limfosit merupakan refleksi keberhasilan sistem imunitas  ikan  dalam  mengembangkan  respon imunitas  seluler  (non  spesifik)  sebagai  pemicu untuk  respon  kekebalan.  Pada  dasarnya  sel limfosit terdiri dari dua populasi : sel B dan sel T.  Sel  B  mempunyai  kemampuan  untuk bertransformasi  menjadi  sel  plasma  yaitu  sel yang  memproduksi  antibodi.  Sedangkan  sel  T sangat  berperan  dalam  kekebalan  berperantara sel  (sel  T  sitotoksik)  dan  mengontrol  respon imun (sel T supresor). Limfosit yang teraktivasi akan  berdiferensiasi  dari  sel  kognitif  yang mengenal  antigen  menjadi  sel  efektor  yang berfungsi  menyingkirkan  anti  gen  menjadi  sel efektor  yang  berfungsi  menyingkirkan  antigen (Kresno,  2001).  Setelah  terjadi  pengikatan antigen  dengan  reseptor  antigen  sel  limfosit, maka  sel  limfosit  akan  membelah  dan berdiferensiasi  menjadi  sel  efektor  dan  sel memori  (Tizard  1988).  Sel  T-sitolitik  yang berdifferensiasi mempunyai granula sitoplasmik lebih  banyak  yang  mengandung  protein  yang berfungsi  melisiskan  sasaran.  Limfosit  B berdifferensiasi  menjadi  sel  plasma  yang memproduksi antibodi (Kresno, 2001).
Pengamatan terhadap rataan persentase neutrofil  dalam  darah  ikan  lele  dumbo menunjukkan bahwa jumlah neutrofil cenderung menurun  disetiap  minggunya.  Pada  dosis kontrol,  5,  10  dan  15  g  ekstrak/  kg  pakan prosentase  neutrofil  memiliki  pola  yang  sama yakni  cenderung  menurun.  Menurut  Tizard (1988),  hal  ini  berkaitan  dengan  fungsi  utama dari  neutrofil  yaitu  penghancuran  bahan  asing melalui  proses  fagositosis  yaitu  kemotaksis dimana  sel  akan  bermigrasi  menuju  partikel, peletakan  partikel  pada  sel,  penelanan  partikel oleh  sel,  dan  penghancuran  partikel  oleh  enzim lisosim  di  dalam  fagolisosom.  Sehingga  tanpa adanya rangsangan dari benda asing baik berupa bakteri,  virus,  maupun  patogen  neutrofil  tidak
akan menunjukkan reaksi peningkatan. Pernyataan ini dikuatkan oleh pendapat Delman and  Brown  (1989)  yang  menyatakan  bahwa peningkatan jumlah sel
neutrofil mengindikasikan  adanya  peningkatan  kegiatan pengumpulan  makrofag  di  tempat  terjadinya infeksi,  sehingga  makrofag  akan  lebih  mudah untuk  menghancurkan  partikel  asing.  Namun pasca infeksi jumlah sel neutrofil dapat ditekan, sel-sel  mati  dan  jaringan  nekrotik  yang  salah satunya  mengandung  neutrofil  yang  telah  mati secara  bertahap  akan  mengalami  lisis  dalam beberapa hari (Jain, 1993).
Monosit  yang  cenderung  menurun  di setiap  minggunya  berkaitan  dengan  fungsi monosit  yaitu  sebagai  makrofag,  dimana monosit  tidak  dibutuhkan  untuk  memfagosit, dikarenakan  belum  adanya  infeksi  yang  masuk ke  dalam  tubuh  yang  merangsang  produksi monosit.  Gambar  9  dapat  dilihat  bahwa persentase  monosit di perlakuan 0, 5 10 dan 15 g  ekstrak/  kg  pakan  memiliki  pola  yang  sama yakni  akan  mengalami  penurunan  di  hari  ke-7 hingga hari ke-21. Erika (2008) yang menyatakan  hal  yang  serupa  bahwa  jumlah limfosit yang rendah dalam sirkulasi darah akan diimbangi  dengan  jumlah  neutrofil  yang  tinggi, begitupun sebaliknya.

## Kesimpulan
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah Penggunaan  ekstrak Sargassum sp.  dengan pelarut  metanol  yang  dicampurkan  pada  pakan berpengaruh  terhadap  peningkatan  jumlah eritrosit  dan  prosentase  limfosit  darah  ikan  lele dumbo  namun  tidak  berpengaruh  pada  ikan prosentase monosit dan neutrofil. Dosis pemberian  ekstrak  sebanyak  15  g  ekstrak  /kg pakan  mampu  memberikan  peningkatan  jumlah eritrosit dan limfosit paling optimal dibandingkan  dosis  5  dan  10  g  ekstrak  /  kg pakan.  Perlu  dilakukan  penelitian  lebihlanjut pula  mengenai  waktu  optimum  pemberian ekstrak    agar  penggunaannya  tepat  guna  dan dapat  memberikan  respon  yang  optimum terhadap  sistem  pertahanan  nonspesifik  ikan. Selain  itu,  perlu  dilakukan  penelitian  mengenai kemungkinan  efek  samping  dari  pemberian ekstrak  yang  dicampurkan  dalam  pakan  pada ikan.

## Daftar Pustaka
Amlacher,  E.  1970.  Textbook  of  fish  disease. Publication Nepture City . New Jersey. USA Anggadiredja, J. T., Ahmad Z, Heri P dan Sri I 2006. Rumput Laut. Penerbit Swadaya. Jakarta.
Bachtiar, S.Y., W. Tjahjaningsih dan N. Sianita.
2012.  Pengaruh  Ekstrak  Alga  Coklat ( Sargassum sp. ) Terhadap Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  coli. Journal of Marine and Coastal Science
1(1) : 53-60.
Brown,  B.A.  1980.  Hematology  Principles  and
Procedores.  Third  Edition.  Lea  and
Febiger. Philadelphia. Castro,  R.  I.  Zarrab,  &  J.  Lamas.  2004.  Water- soluble Seaweed Extracts Modulate the Pantoea agglomerans lippolysaccharide (LPS). Fish Shellfish
Immunol (10) : 555-558
Dellman H.D. dan Brown E.M. 1992. Buku Teks Histologi  Veteriner.  Edisi  3 .  Hartono
(Penerjemah). UI Press, Jakarta
Erika, Y. 2008. Gambaran Diferensiasi Leukosit
pada Ikan Mujair ( Oreochromis mossambica )  di  Daerah  Ciampea Bogor.  (Skripsi).  Institut  Pertanian Bogor.
Fujaya,  Y.  2002. Fisiologi  Ikan .  Proyek Peningkatan Penelitian Pendidikan Tinggi  Direktorat  Jendral  Pendidikan Tinggi Departemen Pendidikan Nasional. Houghton  P.J  and  Raman.  1998.  Laboratory
Handbook  for  The  Fractination  of
Natural  Etract.  Chapman  and  Hall. London. UK. 199 pp. Jain,  N.C.  1993.  Essentials  of  Veterinary Hematology. Lea and Febiger Publishing. Philadelphia. 417p. Kementrian  Kelautan  dan  Perikanan.  2013. Laporan  Tahunan  Direktorat  Produksi Tahun 2013. Direktorat Jendral Perikanan  Budidaya  Jakarta.  Diakses dari  www.djpb.kkp.go.id  (10  Juni 2015).
Kresno,  S.B.  2001.  Imunologi  :  Diagnosis  dan Prosedur  Laboratorium.  Edisi  Ketiga.
Fakultas Kedokteran. Universitas
Indonesia. Jakarta. 437 hlm.
Lagler KF, Bardach JE, RR Miller, Passino DRM. 1977. Ichthyology .  John  Willey  and Sons. Inc. new York-London. 506 hal.
Mulyani,  S.  2006.  Gambaran  Darah  Ikan Gurame Osphronemus  gouramy Yang Terinfeksi  Cendawan Achlya sp.  pada Kepadatan  320  dan  720  Sppora  per mL. Skripsi .  Program  Studi  Budidaya Perairan,  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor. Navarre,  O.  and  J.  E.  Halver.  1989.  Disease Resistence  and  Humoral  Antibody Production in Rainbow Trout Fed High Levels of Vitamin C. 79 : 207-221
Parelberg, A., A. Ronen., M. Hutoran., Y. Smith and  M.  Kotler.  2005.  Protection  of cultured Cyprinus carpio disease by an attenuated virus vaccine. J. Vaccine 23:
3396-3403.
Purwanto,  A.  2006.  Gambaran  Darah  Ikan Mas Cyprinus  carpio Yang  Terinfeksi Koi  Herpes  Virus. Skripsi. Program Studi  Budidaya  Perairan,  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan,  Institut Pertanian Bogor.
Radji,  M.  2015.  Imunologi  dan  Virologi  :  Edisi Revisi. Isfi Penerbitan. Jakarta. 354 hal. Svobodova  Z,  Vyukusova  B.  1991.  Diagnostik, Prevention  and  Therapy  of  Fish
Disease  and  Intoxication.  Research Institute of fish Culture and Hydrobiology  Vodnany  Czechoslova- kia. http//www.fao.org/fi/website/
firetriveaction.do?dom=topic&fid=160
64&lang=en  diakses  :  21  September
2015
Tizard  I.  1982. Veterinary  Immunology ,  An Introduction.  Ed  Ke-3.  W,B.  Saunders Company, Canada.