## KULTUR IN VITRO RUMPUT LAUT Kappaphycus alvarezii DENGAN FORMULASI ZPT (ZAT PENGATUR TUMBUH) DAN WADAH YANG BERBEDA
(In Vitro Culture of Seaweed Kappaphycus alvarezii under Different
Formulation of Growth Stimulating Substances and Culture Media)
Mega D. Dalero 1 , Grevo S. Gerung 2 ,  Edwin L.A. Ngangi 2 , Lawrence J.L. Lumingas 3 , Markus T. Lasut 2
1 Program Studi S2 (Magister) Ilmu Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Manado.
2 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Manado.
3 Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Manado.
email : megadayatridalero@gmail.com

## ABSTRACT
This study aims at obtaining a sustainably superior seed stock following the characteristics of the parent plant, determining the best formulation of the growth stimulating substance. In general, cytokinin and auxin combination was used , but this study also added with the combination of cytokinin and giberelin and cytokinin and abscisic acid (AA) . Parameters measured were bud length, number of buds, and survival rate. Bacterial Vibrio sp test was also done as a cause of the explant mortality. Results showed that the longest bud was recorded in treatment C (S+A 1:2.5) cultured in a jar, 1.343 mm long, 38% of survival, while the highest number of buds was found in treatment B (S+A 1 : 2) 8.86. The shortest bud was recorded in treatment J (S + AA 1:2.5) cultured in a jar, 0.093 mm long, 2.64 buds, 10% of survival, while the explant cultured in the bottle had a length of 0.051 mm long, 1.50 buds, 4% of survival. As conclusion, the best growth stimulating substance was found in the treatment C for the bud length and the survival rate, while the best number of bud was recorded in the treatment B. The best culture tank was topless  bottle  ( aerated ).  In  vitro  culture  could also  use  S  +  G formulation . The explant mortality was caused by Vibrio charchariae . The use of S + AA formulation had lower growth than that of control treatment . Keywords : in vitro , growth stimulating substance, culture media, Kappaphycus alvarezii, Vibrio charchariae

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memperoleh  benih  unggul  secara berkelanjutan  yang  mengikuti  karakteristik  dari  tanaman  induk,  menentukan formulasi terbaik dari substansi pertumbuhan merangsang. Secara umum,  kombinasi  sitokinin  dan  auksin  digunakan,  tetapi  penelitian ini juga menambahkan
kombinasi sitokinin, giberelin, sitokinin dan asam absisat (AA). Parameter yang diukur  adalah  panjang  tunas,  jumlah  tunas,  dan  tingkat  kelangsungan hidup.  Bakteri Vibrio Uji sp juga  dilakukan  sebagai  penyebab  kematian eksplan  .  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  tunas  terpanjang  terdapat pada perlakuan C (S + A 1: 2,5)  kultur dalam toples, 1,343 mm, 38% hidup, sementara
jumlah  tertinggi  tunas  ditemukan  pada perlakuan  B  (S +  A 1:  2) 8.86  .  Jumlah tunas paling sedikit terdapat pada perlakuan J (S + AA 1: 2,5) yang dikultur dalam toples, 0,093 mm, 2,64 tunas, 10% hidup, sedangkan eksplan yang dikultur dalam botol  memiliki  panjang  0.051  mm,  1.  50  tunas  ,  4%  bertahan  hidup.  Sebagai kesimpulan, pertumbuhan terbaik merangsang zat ditemukan dalam perlakuan C untuk panjang  tunas  dan  tingkat  kelangsungan hidup,  sementara  jumlah tunas terbanyak  ditemukan  pada  perlakuan  B.  Penggunaan  wadah  budaya  terbaik adalah topless yang diaerasi . Kultur in vitro juga dapat menggunakan formulasi S + G. Kematian  eksplan  disebabkan  oleh Vibrio charchariae .  Penggunaan formulasi S + AA memiliki pertumbuhan yang lebih rendah dari pada pengobatan kontrol .
Kata kunci : in vitro , zat perangsang tumbuh, media kultur, Kappaphycus alvarezii , Vibrio charchariae
PENDAHULUAN Rumput laut Kappaphycus alvarezii merupakan  rumput  laut  yang komersial bagi industri, karena kandungan  kappa  karagenannya  yang tinggi  yaitu  +  20%.  Produk  yang dihasilkan  digunakan  untuk  bahan makanan, kecantikan,
pupuk,
pengendalian pencemaran logam berat serta  pakan  ternak  ( Plant  use ,  2016). Rumput laut merupakan komoditas yang memenuhi kriteria triple track : pro job, pro poor, dan pro growth (
Mulyaningrum et al. , 2012).
Ketersediaan  bibit  rumput  laut merupakan  upaya  budi  daya  untuk memenuhi  permintaan  pasar  dunia sebagai komoditas andalan. Pada tahun 2007,  kasus  manipulasi  pedagang  dan faktor lingkungan mempengaruhi kelangkaan karagenan secara tiba-tiba.
Hal ini juga didukung oleh data produksi Kappaphycus alvarezii, Indonesia berada  di  urutan  ke  tiga  dari  empat negara  penghasil  karagenan  yang didistribusikan  ke  seluruh  dunia  yaitu sekitar  25.000  ton  pada  tahun  2001 (FAO,  2013).  Target    produksi  rumput laut  tahun  2016  yaitu  11  juta  ton  dan tahun 2017 mengalami kenaikan mencapai 13,4 juta ton (KKP, 2017).
Perubahan iklim yang tak menentu menimbulkan dampak terhadap kualitas rumput  laut budi daya yaitu  :  terserang penyakit  dan  ketersediaan  stok  bibit unggul  yang  sulit  didapatkan.  Hasil survei  yang  dilakukan  untuk  daerah
Sulawesi  Utara  yaitu  Desa  Nain,  Desa Arakan  dan  Desa  Buku  ditemukan kondisi budi daya yang sangat memprihatikan. Stok rumput laut khususnya Kappaphycus alvarezii masih  didapatkan  dari  Desa  Buku Kecamatan Belang. Perkembangan produk dalam bidang  bioteknologi  diharapkan  dapat memenuhi ketersediaan rumput laut, hal ini  disebabkan  karena  kandungan senyawa  kimia  yang  dimanfaatkan dalam  industri  pangan,  farmasi  dan kosmestik  untuk  itu  para  peneliti melakukan upaya pengembangan produk. Salah satu cara dalam pengembangan bioteknologi rumput laut dengan  teknik  kultur  jaringan secara in vitro. Kultur jaringan merupakan alternatif  untuk  mengatasi  kendala ketersediaan  bibit  (Anggadiredja et  al. , 2008).  Penerapan  teknik  aseptik  harus diperhatikan  (kondisi  eksplan,  media dan laboratorium) karena mempengaruhi keberhasilan kultur jaringan.Kultur  jaringan  secara in  vitro dalam kondisi aseptik dengan
penggunaan  formulasi  zat  pengatur tumbuh  dapat  menunjang  keberhasilan pertumbuhan talus untuk bibit unggul.
Zat pengatur tumbuh (ZPT) dalam bahasa  asing  dikenal  dengan  istilah PGR  ( Plant  Growth  Regulator ).  Zat pengatur  tumbuh  tanaman  terdiri  dari pengatur tumbuh endogen (fitohormon) dan  eksogen  (sintetik).  Fitohormon dihasilkan  dalam  senyawa  tanaman
dalam kosentrasi rendah yang mempengaruhi pertumbuhan,
sedangkan  sintetik  dihasilkan  dari senyawa  yang  direkayasa  dengan kosentrasi tertentu yang mempengaruhi pertumbuhan  tanaman.  Sitokinin  (IAA) dan  auksin  (kinetin,  zeatin)  yang digunakan  dalam  formulasi  ZPT  pada rumput laut Kappaphycus alvarezii. ZPT merupakan  faktor  yang  mempengaruhi pertumbuhan  talus  yang  menentukan keberhasilan  memperoleh  bibit  unggul (Prakoeswa et  al. ,  2009).  Bibit  unggul hasil  teknik  kultur  jaringan,  dalam penerapannya di alam, dapat
menghasilkan  panen  tiga  kali  lipat (Mansyur, 2017 dalam KKP, 2017). Zat pengatur tumbuh yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu  sitokinin  (S),  auksin (A),  gibererlin  (G),  asam  absisat  (AA), hal ini didukung dari hasil pra penelitian yang  menunjukan  bahwa  dari  kelima zat, hanya etilen yang eksplannya tidak dapat  bertahan.  Media  pertumbuhan yang  digunakan  yaitu grund  medium . Wadah  yang  digunakan  yaitu  toples yang  di aerasi  ( TA)  dan  botol  yang di shaker  ( BS)  untuk  tempat  kultur in vitro .
Penelitian  ini  dilakukan  untuk menentukan  formulasi  ZPT  dan  wadah yang  berbeda  terhadap  pengaruh  laju pertumbuhan  untuk  regenerasi  talus rumput laut Kappaphycus alvarezii.

## METODE PENELITIAN.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada bulan  Februari  sampai  April  2018. Penamanan eksplan dilakukan di Laboratorium Biologi Molekuler, penanaman  bakteri  pada  media  TCBS untuk  uji bakteri Vibrio, sp  dilakukan  di Laboratorium  Farmakologi  Kelautan FPIK  UNSRAT  dan  uji  biokimia  di BPIKM Bitung.

## Tahap Pelaksanaan
Adapun tahap pelaksanaan yang
dilakukan  dalam  penelitian  yaitu  :  1)
Pengambilan eksplan yang berasal dari perairan  Desa  Buku  diaklimatisasi
selama  2  hari  dengan  menggunakan aerasi di dalam cool box, 2) Pembuatan media,  media  kultur  yang  digunakan yaitu Grund  Medium yang  komposisi senyawa  organik  dilarutkan  kedalam 500  ml  aquades  steril, 3)  Pembuatan ZPT  dibuat  sesuai  dengan  formulasi yang telah ditentukan; perlakuan A (S + A 1 : 1), B (S + A 1 : 2), C (S + A 1 : 2.5),
D (S + G 1 : 1), E (S + G 1 : 2.5), F (S + G 1 : 2.5), G (S + AA 1 : 1), H (S + AA 1
:  2),  I  (S  +  AA  1  :2.5)  dan  kontrol,  4) Sterilisasi  alat  menggunakan  autoklaf atau  etanol  dan  sterilisasi  eksplan dilakukan dengan 3 tahapan; perendaman eksplan dengan betadine 1
%,  spektrum  luas  0.1  %  dan  antibiotik mix  300  ppm,  5)  Penanaman  eksplan pada media; eksplan dipotong menjadi 1 cm    selanjutnya  ditempatkan  pada wadah toples (di aerasi on H pada siang hari  on  L  pada  malam  hari)  dan  botol (di shaker dengan  kecepatan  70-80 putaran  permenit  pada  siang  hari) sesuai  dengan  perlakuan  setelah  itu diletakan pada rak kultur, suhu ruangan 25 0 C, intensitas cahaya yang digunakan 1500 lux, lama foto periode L : D 12 :12,  6) Amati eksplan setiap hari selama  14  hari,  apabila  eskplan  dalam kondisi  segar  dan  menunjukan  adanya pertumbuhan  tunas,  maka  dilanjutkan dengan proses pengamatan, 7) Pengamatan  dilakukan  selama    7 minggu untuk melihat pertumbuhan dan perkembangan  tunas  setiap  minggu. Data hasil perhitungan rata-rata pertumbuhan  harian  dianalisis  secara statistik  dan  ditampilkan  dalam  bentuk tabel dan gambar.

## Jenis Penelitian dan Sumber Data
Jenis  penelitian  ini  ialah  eksperimen, dan  data  diperoleh  dari  hasil  uji laboratorium. Rancangan acak lengkap (RAL)  dengan  teknik  analisis  ragam multi faktor. Penambahan ZPT formulasi berbeda  pada  media  tumbuh grund dengan  menggunakan  wadah  toples yang  di aerasi (TA)  dan  botol  yang di shaker (BS),  dilakukan  9  perlakuan dengan masing-masing  5 kali ulangan.

## Analisis Data
Analisis data dalam penelitian ini, yaitu ; Analisis Ragam Perlakuan A, B, C,  D,  E,  F,  G,  H,  I,  dan  kontrol  (tanpa ZPT) yang terdiri dari dua perbandingan penggunaan wadah TA dan  BS  dengan formulasi zat pengatur tumbuh.
Perhitungan  yang  digunakan    data kuantitatif yaitu Parameter yang diamati yaitu  (1)  panjang  tunas;  (2)  jumlah tunas;  (3)  sintasan .  Mortalitas  eksplan diindikasi dengan adanya bakteri Vibrio, sp.  Mortalitas  eskplan  disajikan  secara deskriptif. Adapun rumus yang digunakan, yaitu :
1. Rumus Laju Pertumbuhan Harian
(Ditjen Perikanan Budidaya, 2007) :
𝟏 𝒏 G (%) = 𝑾𝒏 𝑾𝒐 - 1     x 100
G   = Laju pertumbuhan harian W n = Panjang tunas awal W o = Panjang tunas akhir
N   = Lama kultur
2. Rumus  Laju  Generasi  (Yokoya et al ., 2004) :
R (%) = (F r /F o ) x100
R  = Laju generasi (%)
F r = Jumlah tunas yang beregenerasi F 0 = Jumlah jumlah awal

## 3. Rumus Sintasan (Fadel, 2013)  :

## SR (%) = (Nt/No) x 100
SR   = Kemampuan hidup eksplan (sintasan) Nt    = Jumlah eksplan yang hidup pada hari ke t.
No = Jumlah eksplan pada awal pemeliharaan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pertambahan Panjang Tunas
Pada  wadah  toples  yang  di aerasi (TA) pertumbuhan panjang tunas tertinggi  pada  perlakuan  C  yaitu  rata- rata pertumbuhan 1.343  mm  , berbeda nyata  dengan  delapan  perlakuan  lain yaitu  B  (1.168  mm),  A  (0.933  mm),  F (0.833  mm),  E  (0.714  mm),  D    (0.588 mm)    dan  terendah  pada  perlakuan  G (0.350 mm), H (0.178 mm) dan  I (0.093 mm)  paling  rendah  dari  kontrol  yaitu 0.585 mm.
Gambar 1. Rata-rata Panjang Tunas K. alvarezii pada wadah TA
Hasil menunjukan penggunaan zat perangsang  tumbuh  pengaruh  nyata.
Perbandingan rata-rata laju pertumbuhan panjang tunas, perlakuan C  memperoleh  panjang  tunas  tertinggi sedangkan perlakuan ke sembilan yang terendah hanya 6.92 % laju
pertumbuhannya  dan  tanpa  perlakuan 43  %  laju  pertumbuhan  untuk  kontrol. Hal ini disebabkan karena penggunaan
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 A B C D E F G H I K
kosentrasi ZPT yang berbeda.
Berdasarkan  hasil  yang  didapat  dari gabungan  kosentrasi  sitokinin  +  auksin adalah yang terbaik, sitokinin + giberelin juga memiliki pengaruh yang baik pada pertumbuhan  eksplan  lebih  tinggi  dari kontrol  sedangkan  gabungan  sitokinin dan asam absisat berpengaruh menghambat. Pada wadah  botol  yang  di shaker (BS) p ertumbuhan panjang tunas
tertinggi  pada  perlakuan  C  yaitu  rata- rata pertumbuhan 1.120  mm  , berbeda nyata  dengan  delapan  perlakuan  lain yaitu  B  (0.961  mm),  A  (0.789  mm),  F (0.697  mm),  E  (0.619  mm),  D  (0.499 mm)    dan  terendah  pada  perlakuan  G (0.297 mm), H (0.171 mm) dan I (0.051 mm)  paling  rendah  dari  kontrol  yaitu 0.570 mm.
Gambar 2. Rata-rata Panjang Tunas K. alvarezii pada Wadah BS
Hasil  menunjukan  penggunaan zat  perangsang  tumbuh  pengaruh nyata.  Perbandingan  rata-rata  laju pertumbuhan panjang tunas, perlakuan ke  tiga  memperoleh  panjang  tunas tertinggi  sedangkan  perlakuan  I  yang terendah hanya 4.55 % laju pertumbuhannya  dan  tanpa  perlakuan 50.89 % laju pertumbuhan untuk kontrol. Hal ini disebabkan karena penggunaan kosentrasi ZPT yang berbeda. Berdasarkan  hasil  yang  didapat  dari gabungan  kosentrasi  sitokinin  +  auksin adalah yang terbaik, sitokinin + giberelin juga memiliki pengaruh yang baik pada pertumbuhan  ekplan  lebih  tinggi  dari kontrol  sedangkan  gabungan  sitokinin dan asam absisat berpengaruh menghambat pertumbuhan eksplan lebih rendah dari kontrol.
Hasil  pengamatan  pertumbuhan maksimum  panjang  tunas  yang  terbaik adalah menggunakan pada perlakuan C sedangkan  kosentrasi  pada  perlakuan G,H,I  tidak  baik  digunakan  untuk
pertumbuhan eksplan karena
menghambat pertumbuhan eksplan karena lebih rendah dari kontrol.
Perbandingan  presentase  rata- rata  panjang  tunas  TA  dan  BS, menunjukan  eksplan  tanpa  perlakuan perbandingannya terendah yaitu 2.56%, tertinggi pada eksplan perlakuan I  yaitu 45.16  %    dan  pada  perlakuan A,B,C,D,E,F,G berkisar 13.31% sampai 17.72 %, dapat dilihat pada gambar 3.
Zat pengatur tumbuh yang terbaik untuk  digunakan  adalah  sitokinin  + auksin,  sitokinin  +  giberelin  dapat  juga digunakan untuk eksplan. Namun untuk sitokinin  dan  asam  absisat  tidak  baik untuk  digunakan  karena  hasilnya  lebih rendah dari kontrol berdasarkan fungsinya  sebagai  penghambat  pada tumbuhan  tingkat  tinggi.  Kosentrasi yang  digunakan  untuk  sitokinin  pada semua  perlakuan  adalah  0.5  mg/l.  Hal ini  didukung  oleh  penelitian  Induksi
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 A B C D E F G H I K
Kalus Suryati dan Mulyaningrum (2009) dengan kosentrasi 0.4mg/l dan 0.5 mg/l pada penelitian Pengaruh Zat Pengatur Tumbuh  Fadel  (2013).  Penggunaan kosentrasi  yang  tepat  dan  didukung dengan  media  pertumbuhan  fungsinya sebagai hormon eksogen akan merangsang pertumbuhan bagian meristem apikal. Meristem apikal adalah bagian  pucuk  atau  ujung  talus  yang akan  mengeluarkan  tunas-tunas  pada bagian  tubuh  rumput  laut.  Tunas  mulai muncul  pada  masa  2  minggu  masa kultur.
Gambar 3. Perbandingan Rata-Rata Panjang Tunas TA & BS
Perbandingan  rata-rata  panjang tunas  TA dan BS  menunjukan panjang tunas  tertinggi  pada  perlakuan  dengan menggunakan  TA.  Hal  ini  disebabkan karena  pada  TA  terdapat  gelembung yang dihasilkan ( on H pada siang hari on L pada malam hari) 12 : 12 sedangkan BS hanya menggoncang 70 sampai 80 putaran  per  menit  dilakukan  sehari sekali pada siang hari.

## Jumlah Tunas
Pada wadah TA, penggunaaan zat perangsang tumbuh berpengaruh nyata, dengan  pertumbuhan  jumlah  tunas tertinggi  pada  perlakuan  B  yaitu  rata- rata pertumbuhan 8.86 , berbeda nyata dengan  delapan  perlakuan  lain  yaitu  C (8.78),  A  (8.66),  D  (7.42),  E  (7.22),  F (7.14)  dan  terendah  pada  perlakuan  G (3.94),  H  (3.44)  dan    I  (2.64)  paling rendah dari kontrol yaitu 5.08.
Gambar 4. Rata-rata Jumlah Tunas K. alvarezii pada wadah TA
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 A B C D E F G H I K Panjang Tunas (A) Panjang Tunas (S)
Perbandingan  jumlah  tunas  ,
perlakuan B memperoleh panjang tunas tertinggi  sedangkan  perlakuan  I  yang terendah hanya 29.80 % laju pertumbuhannya  dan  tanpa  perlakuan 57.34 % jumlah tunas untuk kontrol.
Pada wadah BS, penggunaaan zat perangsang tumbuh berpengaruh nyata,
dengan  pertumbuhan  jumlah  tunas tertinggi  pada  perlakuan  B  yaitu  rata- rata  pertumbuhan  7.96,  berbeda  nyata dengan  delapan  perlakuan  lain  yaitu  A 7.94, C 7.56, F 7.84,E 7.52, D 7.42 dan terendah  pada  perlakuan  G,  H  (3.62) dan    I  (1.5)  paling  rendah  dari  kontrol yaitu 4.3.
Gambar 5. Rata-rata Jumlah Tunas K. alvarezii pada Wadah BS
Perbandingan rata-rata presentase  jumlah  tunas,  perlakuan  B memperoleh  panjang  tunas  tertinggi sedangkan  perlakuan  I  yang  terendah
hanya  18.84  %  laju  pertumbuhannya dan  tanpa  perlakuan    54.02  %  jumlah tunas untuk kontrol.
Gambar 6. Perbandingan Rata-Rata Jumlah Tunas TA & BS
Perbandingan  rata-rata  jumlah tunas TA dan BS, menunjukan eskplan perlakuan  A  terendah  yaitu  8.31%  dan tertinggi pada eksplan perlakuan I yaitu 69.23 % dan pada perlakuan B,C,D,E,F,G,H berkisar 15.35 % sampai 45.85 %.

## Sintasan
Sintasan  pada  wadah  TA  (C)  22, (B)  19  ,  (A,  F)  18,  (E)  17,  (D)  11  dan terendah pada perlakuan (G,H) 8 dan (I) 5  paling  rendah  dari  kontrol  yaitu  10  . Perlakuan  C  memperoleh  sintasan
0 2 4 6 8 10 A B C D E F G H I K
Jumlah Tunas (A)
JumlahTunas (S)
tertinggi yaitu 44 % sedangkan perlakuan  I  yang  terendah  10%  dan tanpa  perlakuan    20  %  sintasan  untuk kontrol.
Gambar 7. Rata-rata Presentase Sintasan K. alvarezii pada wadah TA
Sintasan pada wadah BS, (C) 16 ,
(A)  8,  (B)  14,  (F)  11,  (D,E)  9  dan terendah  pada  perlakuan  (H)  6,  (G)  3 dan  (I) 2 paling rendah dari kontrol yaitu
7.  Perbandingan  presentase  sintasan
pada    perlakuan  C    memperoleh sintasan tertinggi yaitu 32% sedangkan perlakuan  I  yang  terendah  hanya  4% dan  tanpa  perlakuan    14  %  sintasan untuk kontrol.
Gambar 8. Rata-rata Presentase Sintasan K. alvarezii pada wadah BS
Perbandingan  rata-rata  sintasan pada  wadah  TA  dan  BS,  menunjukan eskplan  perlakuan  D  terendah  yaitu 18.18  %  dan  tertinggi  pada  eksplan
perlakuan  G  yaitu  62.50  %  dan  pada perlakuan  A,B,C,E,F,H,I  berkisar  25  % sampai 60 %.
Gambar 9. Perbandingan Rata-Rata Sintasan TA & BS
0 5 10 15 20 25 A B C D E F G H I K 0 5 10 15 20 A B C D E F G H I K 0 5 10 15 20 25 A B C D E F G H I K Sintasan TA Sintasan BS
Dari  hasil  penelitian  yang  ada  pada sintasan  keduanya  tidak  pengaruh nyata. Kematian pada eskplan disebabkan  karena  kondisi  bibit  yang kurang baik dan proses sterilisasi yang kurang  maksimal,  hal  ini  didukung dengan uji bakteri Vibrio sp , di temukan Vibrio Characariae pada eskplan yang ada.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  analisis  maka  dapat disimpulkan bahwa :
1.  Formulasi  zat  pengatur  tumbuh terbaik  pada  panjang  tunas    yaitu pada formulasi C (Sitokinin + Auksin 1 :2.5) dan pada jumlah tunas yaitu pada  perlakuan  B  (Sitokinin  +
Auksin 1 : 2)
2.  Formulasi  zat  pengatur  tumbuh antara sitokinin yang dikombinasikan  dengan  auksin, giberelin  dan  asam  absisat  yang terbaik  adalah  pada  sitokinin  + auksin,  sitokinin  +  giberelin  dapat juga digunakan sedangkan sitokinin +  asam  absisat  tidak  dianjurkan untuk digunakan karena menghambat pertumbuhan eksplan seperti  fungsinya  pada  tumbuhan tingkat tinggi
3.  Wadah  terbaik  untuk  digunakan dalam  penelitian  adalah  Toples yang di aerasi
4. Penyebab kematian eskplan, diindikasi  adanya  bakteri Vibrio
charchariae

## DAFTAR PUSTAKA
Anggadiredja, J.T., Zatnika, A., Purwoto, H. & Istini, S., 2008. Rumput laut,
pembudidayaa n, pengolahan, dan pemasaran  komoditas  perikanan potensial . Jakarta : Penebar Swadaya. Direktorat Jenderal Perikanan Budidaya., 2007. Budidaya Rumput  Laut  Gracilaria  spp  di Tambak .    Jakarta  :  Departemen Kelautan dan Perikanan.
FAO.,  2013. A  guide  to  the  seaweed industry  :  6.  Seaweed  used  as  a source of carrageenaan. Fisheries and  Aquaculture  Departemen .  [e- book],  viewed  09  May 2017, from http://www.fao.org/docrep/006/y47
65e/y4765e09.htm.
Fadel, H. A., 2013. Pengaruh Pemberian Zat Perangsang Tumbuh  Terhadap  Pertumbuhan Rumput Laut Kappaphycus alvarezii dengan  menggunakan Media Grund dan Pes .  Tesis. Manado : Universitas Sam Ratulangi. KKP.,  2017.  KKP  Naikkan  Target Produksi  Rumput  Laut  di  tahun
2017,  diunduh  20  Mei  2017,  dari http://aquaculture-
mai.org/archives/1966. Mulyaningrum,  H.R.S.,  Nursyam,  H., Risjani, Y. & Parenrengi, A., 2012. ‘Regenerasi Filamen Kalus Rumput La ut Kappaphycus alvarezii dengan  Formulasi  Zat Pengatur Tumbuh yang Berbeda’ , Jurnal Penelitian Perikanan , 1 (1),
52-60,  diunduh  29  Maret  2017,
dari  http://jpp.  ub.ac.id/index.php /jpp/article/ view/ 118. Plant use., 2016. Kappaphycus alvarezii ,  viewed  01  May  2017, from http://uses.plantnet- project.org/en/Kappaphycus%20_ alvarezii_(PROSEA). Prakoeswa,  S.,  Ribkahwati,  A.  & Suryaningsih, D, R., 2009. Teknik Kultur Jaringan Tanaman. Sidoarjo : Dian Prima Lestari. Hal. 3-29.
Suryati,  E.  &  Mulyaningrum,  S.R.H., 2009.  ‘Regenerasi  Rumput  Laut
Kappaphycus alvarezii (Doty)
melalui  Induksi  Kalus dari  Embrio dengan  Penambahan  Hormon
Perangsang secara In Vitro , Jurnal Riset  Akuakultur ,  4  (1),  39-45, diunduh  10  April  2017,  dari http://ejournal-balitbang.kkp. go.id/index.php/ jra/article/view/2407.
Yokoya, N. S., West, J. A. & Valentino., 2004.  ‘Effects  of  Plant  Growth Regulators on Callus Formation, Growth and  Regeneration  in  Axenic  Tissue Cultures of Gracilaria  tenuistipitata and Gracilaria perplexa ( Gracilariales , Rhodophyta)’, Phycological Research , 3
(52) , pp. 244 –254, viewed 09 Mei 2017, from  http://    online  library.  wiley.com /doi/10.1111/j.1440-183. 2004. 00 349.x/abstract.