UJI EFEK ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN JAMBU BIJI (Psidium guajava Linn. ) TERHADAP PERTUMBUHAN KOLONI Streptococcus mutans
Ayu A.D Tampedje 1) , Josef S.B Tuda 1) , Michael, A.Leman 1)
1) Program Studi Pendidikan Dokter Gigi Fakultas Kedokteran UNSRAT Manado,  95115

## ABSTRACT
Dental  caries  is  a  dental  disease  which  caused  by  Streptococcus  mutans.  Dental  caries  can  be avoid by inhibit growth of cariogenic  bacteria. Guava leaves can become a good choice because it has active compound which has attribute that inhibit growth and kill bacteria. The purpose of this study is to find out antibacterial efficacy of guava leaf extract against growth of Streptococcus mutans. This was a  laboratory  experimental  study  with  concentration  of  guava  leaf  extract  was  30%,  50%,  and  100%, and ciprofloxasin  as a positive control. Minimum concentration of guava leaf extract that can inhibit Streptococcus mutans growth was 30%, while maximum concentration was  100%. Blocking zone which was  formed  from  guava  leaf  extract  can  inhibit  growth  of  Streptococcus  mutans.  The  higher concentration  of  the  extract,  the  bigger  blocking  zone  was  formed  against  Streptococcus  mutans’s growth.
Keywords : Streptococcus mutans, guava leaf extract, blocking zone

## ABSTRAK
Karies merupakan penyakit gigi yang disebabkan oleh bakteri Streptococcus mutans . Karies gigi dapat  dicegah  dengan  cara  menghambat  pertumbuhan  dari  bakteri  karsiogenik.  Daun  jambu  biji  bias dijadikan  pilihan  karena  mengandung  senyawa  aktif  yang  bersifat  menghambat  pertumbuhan  dan membunuh bakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektivitas antibakteri ekstrak daun jambu biji  terhadap  pertumbuhan  bakteri Streptococcus  mutans .  Penelitian  ini  merupakan  eksperimental laboratories dimana konsentrasi ekstrak  daun  jambu   biji   yang  diuji   yaitu  30%,  50%,   dan  100%, dengan ciprofloksasin sebagai  control  positif.  Konsentrasi  minimal  ekstrak  daun  biji  yang  dapat menghambat  pertumbuhan Streptococcus  mutans ialah  30%,  sedangkan  konsentrasi  maksimal  ekstrak daun biji yang dapat pertumbuhan Streptococcus mutans ialah 100%. Zona hambat yang terbentuk dari ekstrak daun jambu biji diketahui dapat menghambat pertumbuhan Steptococcusmutans. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun jambu biji semakin besar daya hambat yang terbentuk terhadap pertumbuhan Streptococcus mutans .
Kata kunci : Streptococcus mutans, ekstrak daun jambu biji, daya hambat

## PENDAHULUAN
Kesehatan  gigi  merupakan  hal    yang penting  bagi  masyarakat.  Untuk  menjaga kesehatan  gigi,  kebersihan  mulut  perlu dijaga  karena  pada  daerah  mulut  terdapat berbagai  macam    bakteri  yang  dapat menyebabkan  karies  dan  radang  pada jaringan  periodonsium.  Penyakit  gigi  dan mulut merupakan penyakit tertinggi keenam yang  dikeluhkan  masyarakat  Indonesia  dan menempati peringkat keempat dalam penyakit  termahal  dalam  pengobatan.  Di negara-negara  maju  prevalensi  karies  gigi terus menurun, sedangkan di  negara-negara berkembang  seperti  Indonesia  cenderung meningkat (Susi dkk, 2012).
Upaya pencegahan karies dan penyakit periodontal disertai dengan
peningkatan    kesehatan    gigi      menjadi perhatian  utama  dalam  dunia  kedokteran gigi.
Streptococcus mutans merupakan
bakteri gram positif yang dapat memetabolisme karbohidrat, terutama sukrosa,  dan  menciptakan  suasana  asam  di dalam rongga mulut, sehingga menyebabkan karies  pada  gigi  (Lamont  &  Jenkinson, 2010) . Salah satu cara yang dapat dilakukan untuk  mencegah  karies  gigi  yaitu  dengan menghambat        pertumbuhan        bakteri kariogenik,  sehingga  pertumbuhan  koloni bakteri yang semakin banyak dan produksiasam  dapat  dikurangi  (Nugraha, 2008). Penggunaan  bahan  yang  berasal  dari alam dijadikan pilihan karena bahan tersebut dapat  bersifat  menghambat  pertumbuhan (bakteriostatik)  maupun  membunuh  bakteri (bakterisid).
Tanaman  jambu  biji  sudah  dikenal oleh  masyarakat  daerah  Sulawesi Utara  dan  sering  digunakan  untuk mengobati penyakit demam berdarah dengan  cara  dibuat  jus,  akan  tetapi daun jambu biji  jarang dimanfaatkan sebagai  tanaman  yang  berkhasiat obat  padahal  daunnya  telah  terbukti dapat  mengobati  berbagai  penyakit seperti diare, disentri, demam berdarah, gusi bengkak,     sariawan, jantung        dan        diabetes (Rakhmanda, 2008).
Menurut  Soedibyo  yang  dikutip oleh  Oktiarna,  Manaf,  dan  Suripno, daun  jambu  biji  dapat  dimanfaatkan sebagai antiinflamasi, hemostatik dan astringensia. Daun jambu biji (Psidium guajava Linn.) mengandung  bahan  aktif,  antara laintanin  yang  bersifat  antibakteri (mempresipitasi protein dari bakteri),
kuersetin, polifenolat, kuinon, saponin, alkaloid dan        flavonoid yang                dapat    menghambat pertumbuhan  bakteri,  guayaverin, leukosianidin,  minyak  atsiri,  asam malat,  damar  dan  asam  oksalat (Oktiarni  dkk,  2012;  Sukardi  dkk, 2007). Penelitian ini bertujuan mengetahui  efektivitas  antibakteri ekstrak  daun  jambu  biji (Psidium guajava Linn.) terhadap pertumbuhan  bakteri Streptococcus mutans dan  mengetahui  besar  zona hambat  ekstrak  daun  jambu  biji terhadap  pertumbuhan Streptococcus mutans.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian
eksperimental laboratoris dengan menggunakan  rancangan post  test  only control group design . Penelitian ini dilaksanakan  di  Laboratorium  Farmasi Fakultas  MIPA  Universitas  Sam  Ratulangi Manado pada bulan Oktober 2015. Variabel pada  penelitian  ini  ialah  variabel    bebas yaitu  Ekstrak  daun  jambu  biji  ( Psidium guajava  Linn )  dan  variabel  terikat  yaitu Pertumbuhan Streptococcus mutans.
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  ialah  cawan  petri , tabung reaksi, pinset, kapas lidi steril, kertas saring, oven,  gelas  ukur,  inkubator,  blender, anaerobic  jar ,  api  bunsen,  o bject  glass , mikroskop,  jangka  sorong,  sendok  plastik, timbangan,  tabung  erlenmeyer,  kompor listrik,  kamera,  spidol, perforator ,  c orong bucher , vacuum  evaporator ,  masker,  dan handscoen .
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  ialah  daun  jambu  biji, Streptococcus    mutans ,    etanol  96%,  NaCl 0,9%,  kristal  violet,  lugol,  safranin,  alkohol 96%, BHI-B, MHA, dan aquades.

## Pembuatan Ekstrak
Ekstrak  daun  jambu  biji  dibuat dengan  cara  maserasi.  Daun  jambu  biji dibersihkan  lalu  dimasukkan  ke  dalam oven  untuk  dikeringkan,  setelah  itu diblender hingga berbentuk serbuk. Serbuk tersebut  kemudian  ditimbang  volumenya sampai seberat 20 gr dan dilarutkan dengan etanol  96%  sebanyak  200  mL  selama  24 jam. Hasil yang diperoleh disaring menggunakan corong  Bucher,  setelah  itu diuapkan  dari  sisa  pelarutnya  dengan evaporator  selama  tiga  jam  dengan  suhu 70 o C.
Ekstrak murni yang didapat dimasukkan  ke  dalam  oven  dengan suhu  40 o C  selama  dua  jam    lalu dituang  ke  dalam  botol  kaca  steril tertutup  dan  disimpan  di  lemari pendingin.
Pembuatan Larutan Ciproflixacin
Ciprofloxacin 500 mg dilarutkan  dengan  aquades  50  mL kemudiaan  larutan  tersebut  dipipet menggunakan  pipet  volum  sebanyak 1  mL.  arutan ciprofloxacin 1  mL diteteskan  ke    dalam  masing-masing cawan petri.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  ini  disterilkan  terlebih dahulu.  Alat-alat  gelas  disterilkan dalam oven pada suhu 170ºC selama ±  2        jam.        Media        disterilkan dalam autoclave pada  suhu  121ºC selama 15 menit.
Pembutan Media Brain Heart Infusion Broth (BHI-B)
BHI-B  ditimbang  sebanyak  9,3 gram  lalu  dicampur  dengan  aquades sebanyak  250  mL  dalam  tabung erlenmeyer dan dipanaskan di kompor listrik  selama  15  menit.  Setelah  itu, dimasukkan ke dalam inkubator selama  15  menit.  Kemudian    dituang ke  botol  steril  lalu  didinginkan  pada suhu ruangan.
Pembuatan  Standar  Kekeruhan  Larutan McFarland
Larutan  baku  McFarland  terdiri  atas dua komponen yaitu larutan BaCl2  1%  dan H2SO4    1%.      Lautan  BaCl2  1%  sebanyak 0,05  mL  dicampur  dengan  larutan  H2SO4 1%  sebanyak  9,95  mL  dan  dikocok homogen  sampai  terbentuk  larutan  yang keruh.  Nilai  absorban  larutan  baku  harus berada  di  kisaran  0,08  sampai  dengan  0,13. Larutan  baku  McFarland  0,5    ekuivalen dengan suspensi sel bakteri dengan konsentrasi  1,5x108  CFU/mL.  Kekeruhan ini  yang  akan  dipakai  sebagai  standar suspensi bakteri uji.

## Penanaman  Bakteri  pada  Media  MHA
(Muller Hinton Agar)
Sebelum bakteri ditanam pada media MHA,  bagian  belakang  cawan  petri  dibagi menjadi lima bagian dengan menggunakan spidol.  Bakteri  yang  sudah  diinkubasi diambil  dengan  kapas  lidi  steril  lalu dioleskan        secara  merata  pada  media MHA.  Langkah  berikutnya  yaitu  cakram kertas saring dicelupkan pada ekstrak daun jambu biji dengan menggunakan pinset lalu diletakkan  pada  tiga  bagian  cawan  petri, satu  bagian  lain  diletakkan  kertas  saring yang  diberi  antibiotik ciprofloxacin ,  dan satu  bagian  lain  diletakan  kertas  saring yang  tidak  diberi  ekstrak  daun  jambu  biji. Setiap pekerjaan laboratorium dilakukan di dekat  api  bunsen  agar    sterilitas  terjaga. Cawan petri masukkan ke dalam inkubator dan  diinkubasi  pada  suhu  37ºC  selama  24 jam.

## Metode Pengujian
Metode pengujian yang digunakan ialah metode difusi lempeng agar. MHA disediakan sebanyak  empat  cawan  petri.  Kertas saring dibentuk seperti cakram dengan menggunakan perforator sebanyak 20 buah.  Pada  masing-masing  cawan petri,  diletakkan  empat  cakram  diberi ekstrak  daun  jambu  biji  dengan konsentrasi 30%, empat cakram diberi ekstrak  daun  jambu  biji  dengan konsentrasi 50%, empat cakram diberi ekstrak  daun  jambu  biji  dengan konsentrasi  100%,  empat  cakram diberi  antibiotik ciprofloxacin sebagai kelompok  kontrol  positif  dan  empat cakram diberi aquades sebagai kelompok  negatif.  Masing-masing konsentrasi  dibuat  dengan  volume  10 mL dengan menggunakan rumus.:
M 1. V 1 = M 2. V 2
Penelitian  ini  dibagi  menjadi  lima kelompok,  yaitu  kelompok  perlakuan satu  3  mL  ekstrak  daun  jambu  biji dengan  konsentrasi  sampel  100% ditambah  dengan  7  mL  aquades menghasilkan daun jambu biji dengan konsentrasi 30%, kelompok perlakuan dua  5  mL  ekstrak  daun  jambu  biji dengan  konsentrasi  sampel  100% ditambah  dengan  5  mL  aquades menghasilkan  daun  jambu  bji  dengan konsentrasi 50%, kelompok perlakuan tiga  10  mL  ekstrak  daun  jambu  biji dengan  konsentrasi  sampel  100%,
serta kelompok kontrol positif antibiotik ciprofloxacin dan kelompok control negatif aquades.
Cakram  yang  telah  diberi  ekstrak daun jambu biji dengan berbagai konsentrasi diletakkan  di  media  MHA  lalu  dimasukkan ke  dalam  inkubator  dan  diinkubasi  selama 24  jam.  Diameter  zona  hambat  lalu  diukur dengan  jangka  sorong  dan  dihitung  dengan rumus:
( 𝐷𝑣 − 𝐷𝑠 )+ ( 𝐷ℎ − 𝐷𝑠 )
2 HASIL PENELITIAN Daya hambat ekstrak daun jambu biji terhadap pertumbuhan Streptococcus mutans terlihat dari zona bening yang terbentuk di sekitar cakram kertas saring (Gambar 1). Berdasarkan Gambar 1, ekstrak daun jambu biji pada konsentrasi 30% dan
50% memiliki besar zona  hambat yang lebih kecil dibandingkan konsentrasi 100%. Zona hambat yang terbentuk disekitar  cakram  kertas  saring  diukur dengan  menggunakan  jangka  sorong dalam satuan milimeter (mm).
Tabel 1 . Luas zona hambat terhadap Streptococcus mutans
Gambar 1. Zona hambat ekstrak daun jambu biji
Keterangan:
(1) Konsentrasi 30%
(2) Konsentrasi 50%
(3) Konsentrasi 100%
(4) Antibiotik ciprofloxacin
Berdasarkan Tabel 1, ekstrak daun jambu  biji  dengan  konsentrasi 30%  menunjukkan  diameter  zona hambat  yang            relatif            lebih kecil        bila  dibandingkan  dengan diameter  zona  hambat  ekstrak daun  jambu  biji  pada  konsentrasi
50% dan 100%. Hal ini menunjukkan bahwa semakin
besar  konsentrasi  ekstrak  daun
jambu biji, semakin rendah pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans . Pada kelompok kontrol positif ( ciprofloxacin ) terlihat bahwa diameter  zona  hambat  lebih  besar bila dibandingkan dengan diameter  zona  hambat  ekstrak daun  jambu  biji  pada  konsentrasi 30, 50 dan 100%.
3 1 4 2 Kelompok Konsentrsi
(mm 2 ) Luas zona hambat Rata-rata±SD Intervensi Kontrol 30%
50% Ciprofloxacin
61,32 ±3,1 243,12 ±5,7 100%343,91±3,7 358,75±1,3

## PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan  terlihat  bahwa  ekstrak  daun jambu  biji  pada  berbagai  konsentrasi  dapat menghambat pertumbuhan
bakteri
Streptococcus mutans , dimana setiap konsentrasi  memiliki diameter zona hambat yang  berbeda.  Menurut  Bell  (1984),  jika diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  lebih besar atau sama dengan 6 mm, maka ekstrak dikategorikan  memiliki  aktivitas  antibakteri dan  bila  diameter  zona  hambat  yang terbentuk  lebih  kecil  dari  6  mm  atau  tidak terbentuk,  maka  dikategorikan  ekstrak tersebut  tidak  memiliki  aktivitas  antibakteri (Sukardi  dkk,  2007). Berdasarkan  hal tersebut,  ekstrak  daun  jambu  biji  pada konsentrasi  30%,  50%,      dan      100% terbukti    memiliki  aktivitas  antibakteri. Ekstrak daun jambu biji dengan konsentrasi 30%  dan  50%  memiliki  diameter  zona hambat  yang  lebih  kecil  dibandingkan dengan  ekstrak  daun  jambu  biji  dengan konsentrasi    100%.  Perbedaan  konsentrasi ekstrak  daun  jambu  biji  memengaruhi besarnya daya hambat terhadap pertumbuhan koloni Streptococcus mutans.
Uji  efektivitas  ekstrak  daun  jambu  biji terhadap  bakteri Streptococcus  mutans sudah pernah dilakukan sebelumnya tentang ekstrak  daun  jambu  biji  muda  dengan konsentrasi 20%,   40%,   60%,   80%,   dan 100%  terhadap  pertumbuhan Streptococcus mutans ,  dan  didasarkan  bahwa  konsentrasi yang  dapat  menghambat  pertumbuhan Streptococcus mutans yaitu pada konsentrasi 80% dan 100% (Intifada, 2014). Pada penelitian ini konsentrasi ekstrak daun jambu  biji  30%,  50%,  dan  100%  mampu menghambat  pertumbuhan Streptococcus mutans. Perbedaan  ini  dipengaruhi  oleh lokasi  daerah  yang  berbeda,  konsentrasi pelarut  yang  digunakan  dalam  pembuatan
ekstrak, serta  bobot ekstrak daun jambu biji yang  digunakan.  Penelitian  sebelumnya menggunakan  daun  jambu  biji  yang  lebih muda  dengan  bobot  ekstrak  seberat  300gr, sedangkan pada penelitian ini menggunakan semua  jenis  daun  jambu  biji  baik  daun jambu  biji  muda  maupun  daun  jambu  biji tua dengan bobot seberat 20gr. Daun jambu biji  muda  memiliki  kandungan  zat  aktif yang  lebih  sedikit  apabila  dilihat  secara mikroskopik, sedangkan daun jambu biji tua menunjukkan  hasil  yang  lebih  signifikan dan  terlihat  jelas  secara  mikroskopik  (Sari, 2005).
Antibiotik ciprofloxacin sebagai  kontrol positif  memiliki  daya      hambat  yang  lebih besar  dibandingkan  dengan  ekstrak  daun jambu  biji.  Faktor  yang  memengaruhi terbentuknya  daya  hambat ciprofloxacin yang  lebih  besar  karena  memiliki  efek antibakteri  (spektrum  luas)  dan  merupakan golongan  kuinolon  yang  bersifat  bakterisid (membunuh  bakteri)  serta  cukup      efektif untuk   bakteri    gram positif (Syukrinawati, 2013).

## KESIMPULAN
1. Ekstrak  daun  jambu  biji  memiliki efek antibakteri terhadap
pertumbuhan  koloni Streptococcus mutans.
2. Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak daun jambu biji, semakin besar daya hambatnya  terhadap  pertumbuhan koloni Streptococcus mutans.

## SARAN
1. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  mengenai  efektivitas  daun jambu  biji  terhadap  bakteri  atau jamur lain yang dapat  menimbulkan masalah  bagi  kesehatan  gigi  dan mulut.
2. Perlu  dilakukan  penelitian  secara in  vivo untuk  membuktikan  efek  antibakteri  ekstrak  daun jambu  biji  agar  menjadi  obat  alternatif  di  bidang  kedokteran  gigi  dan  masyarakat  luas.

## DAFTAR PUSTAKA
Intifada,  F.  2014. Ekstrak  Daun  Jambu Biji  (Psidii  folium)  menghambat pertumbuhan Streptococcus mutans secara in vitro, Denpasar.Skripsi. Universitas Mahasaraswati. Lamont RJ, Jenkinson HF. 2010. Oral Microbiology at a Glance . Wiley-
Blackwell; 2010. p 25-39
Nugraha AW. 2008. Streptococcus mutans Si Plak Dimana – mana . Yogyakarta. Fakultas Farmasi
USD;. h 1-3
Oktiarni  D,  Manaf  S,  Suripno.  2012.
Pengujian  Ekstrak  Daun  Jambu
Biji (Psidium guajava linn) Terhadap Penyembuhan  Luka Bakar pada Menci t ( Mus musculus ).Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam. Bengkulu; 8(1) Rakhmanda  AP.  2008. Perbandingan Efek Antibakteri Jus Nanas (Anaras  comusus  l.merr)  pada Berbagai  Konsentrasi  terhadap Streptococcus mutans . Semarang. Universitas Diponegoro. Sari A. 2005. Uji Perbandingan Makroskopik, Mikroskopik, Kandungan Kimia dan Pola Kromatografi Lapis Tipis Terhadap Daun Muda dan Daun tua Jambu Biji . Jakarta.
Sukardi,    Mulyarto    AR,    Safera  W.
2012.  Optimasi  Waktu  Ekstraksi terhadap Kandungan Tanin pada Bubuk  Ekstrak  Daun  Jambu  Biji
( Psidii        folium )      serta  biaya produksi. Jurnal Teknologi Pertanian. 2(8). Susi, Bachtiar H, Azmi. 2012. Hubungan Status Sosial Ekonomi Orang  Tuadengan  Karies  Pada Gigi Sulung Anak Umur 4 Dan 5 Tahun. Majalah Kedokteran Andalas.; 3(1): 99. Syukrinawati RP. 2014. Tingkat pengetahuan antibiotik oleh mahasiswa kepaniteraan klinik departemen  bedah  mulut  RSGM  P FKG  USU  periode  September  2013- Maret 2014 . Medan