## EKSTRAKSI, PEMISAHAN SENYAWA, DAN IDENTIFIKASI SENYAWA AKTIF
Mukhriani*
* Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan UIN Alauddin Makassar
PENDAHULUAN I ndonesia  merupakan  salah  satu negara  dengan  kekayaan  hayati terbesar    yang  memiliki  lebih  dari 30.000  spesies  tanaman  tingkat  tinggi. Hingga saat ini tercatat 7000 spesies tana- man telah diketahui khasiatnya namun ku- rang dari 300 tanaman yang digunakan se- bagai  bahan  baku  industri  farmasi  secara reguler.  WHO  pada  tahun  2008  mencatat bahwa  68%  penduduk  dunia  masih  meng- gantungkan  sistem  pengobatan  tradisional yang  mayoritas  melibatkan  tumbuhan  un- tuk menyembuhkan penyakit dan lebih dari 80%  penduduk  dunia  menggunakan  obat herbal untuk mendukung kesehatan mereka (Saifuddin, dkk., 2011).
Untuk mendukung hal tersebut maka
dilakukan  pengembangan  obat  tradisional melalui  penelitian-penelitian  ilmiah  terba- ru dan diproduksi secara modern agar bisa dimanfaatkan  sebagai  obat  untuk  kepent- ingan kesehatan dan kesejahteraan masyarakat.  Proses  saintifikasi  tersebut sangat penting agar penggunaan obat tradi- sional  tidak  berdasarkan  pengalaman  saja tetapi memiliki bukti ilmiah sehingga bisa digunakan dalam sistem pelayanan kesehatan formal yang modern.
Salah  satu  metode  yang  digunakan untuk  penemuan  obat  tradisional  adalah metode  ekstraksi.  Pemilihan  metode ekstraksi  tergantung  pada  sifat  bahan  dan senyawa  yang  akan  diisolasi.  Sebelum memilih  suatu  metode,  target  ekstraksi perlu  ditentukan  terlebih  dahulu.  Ada  be-

## Abstrak
Ekstraksi  merupakan  proses  pemisahan  bahan  dari  campurannya  dengan menggunakan  pelarut  yang  sesuai.  Proses  ekstraksi  dihentikan  ketika  tercapai  kesetim- bangan antara konsentrasi senyawa dalam pelarut dengan konsentrasi dalam sel tanaman. Setelah proses ekstraksi, pelarut dipisahkan dari sampel dengan penyaringan. Ekstrak awal sulit dipisahkan melalui teknik pemisahan tunggal untuk mengisolasi senyawa tunggal. Oleh karena itu, ekstrak awal perlu dipisahkan ke dalam fraksi yang memiliki polaritas dan uku- ran molekul yang sama.
Identifikasi  golongan  senyawa  dilakukan dengan  uji  warna,  penentuan  kelarutan, bilangan  Rf  dan  ciri  spectrum  UV.  Identifikasi  yang  paling  penting  dan  digunakan  secara luas ialah pengukuran spektrum serapan dengan menggunakan spektrofotometer.
Kata Kunci : Ekstraksi, Identifikasi Senyawa
berapa target ekstraksi, diantaranya (Sarker SD, dkk., 2006):
1. Senyawa bioaktif yang tidak diketahui 2. Senyawa  yang  diketahui  ada  pada suatu organisme
3. Sekelompok  senyawa  dalam  suatu organisme  yang  berhubungan  secara struktural.
Semua  senyawa  metabolit  sekunder yang  dihasilkan  oleh  suatu  sumber  tetapi tidak  dihasilkan  oleh  sumber  lain  dengan kontrol  yang  berbeda,  misalnya  dua  jenis dalam  marga  yang  sama  atau  jenis  yang sama tetapi berada dalam kondisi yang ber- beda.  Identifikasi  seluruh  metabolit sekunder  yang  ada  pada  suatu  organisme untuk  studi  sidik  jari  kimiawi  dan  studi metabolomik.
Proses  ekstraksi  khususnya  untuk bahan  yang  berasal  dari  tumbuhan  adalah sebagai berikut :
1. Pengelompokan  bagian  tumbuhan (daun,  bunga,  dll),  pengeringan  dan penggilingan bagian tumbuhan.
2. Pemilihan pelarut
3. Pelarut  polar:  air,  etanol,  metanol, dan sebagainya.
4. Pelarut semipolar: etil asetat, diklorometan, dan sebagainya.
5. Pelarut  nonpolar:  n-heksan,  petrole- um eter, kloroform, dan sebagainya.

## Ekstraksi
Jenis-jenis  metode  ekstraksi  yang
dapat digunakan adalah sebagai berikut :

## Maserasi
Maserasi  merupakan  metode  seder- hana  yang paling banyak digunakan. Cara ini  sesuai,  baik  untuk  skala  kecil  maupun skala  industri.(Agoes,2007).  Metode  ini dilakukan  dengan  memasukkan  serbuk tanaman dan pelarut yang sesuai ke dalam wadah inert  yang tertutup rapat pada suhu kamar.  Proses  ekstraksi  dihentikan  ketika tercapai  kesetimbangan  antara  konsentrasi senyawa dalam pelarut dengan konsentrasi dalam  sel  tanaman.  Setelah  proses ekstraksi,  pelarut  dipisahkan  dari  sampel dengan  penyaringan.  Kerugian  utama  dari metode maserasi ini adalah memakan ban- yak  waktu,  pelarut  yang  digunakan  cukup banyak,  dan  besar  kemungkinan  beberapa senyawa  hilang.  Selain  itu,  beberapa  sen- yawa  mungkin  saja  sulit  diekstraksi  pada suhu  kamar.  Namun  di  sisi  lain,  metode maserasi dapat menghindari rusaknya sen- yawa-senyawa yang bersifat termolabil.
Ultrasound - Assisted Solvent Extraction Merupakan  metode  maserasi  yang dimodifikasi  dengan  menggunakan  bantu- an ultrasound (sinyal  dengan  frekuensi tinggi, 20 kHz). Wadah yang berisi serbuk sampel  ditempatkan  dalam  wadah ultra- sonic dan ultrasound. Hal  ini  dilakukan untuk  memberikan  tekanan  mekanik  pada sel hingga menghasilkan rongga pada sam- pel.  Kerusakan  sel  dapat  menyebabkan peningkatan kelarutan senyawa dalam pel-
arut dan meningkatkan hasil ekstraksi.

## Perkolasi
Pada  metode  perkolasi,  serbuk  sam- pel dibasahi secara perlahan dalam sebuah perkolator (wadah silinder yang dilengkapi dengan kran pada bagian bawahnya). Pela- rut  ditambahkan  pada  bagian  atas  serbuk sampel  dan  dibiarkan  menetes  perlahan pada bagian bawah. Kelebihan dari metode ini  adalah  sampel  senantiasa  dialiri  oleh pelarut  baru.  Sedangkan  kerugiannya  ada- lah jika sampel dalam perkolator tidak ho- mogen maka pelarut akan sulit menjangkau seluruh  area.  Selain  itu,  metode  ini  juga membutuhkan  banyak  pelarut  dan  me- makan banyak waktu.
Soxhlet
Metode ini dilakukan dengan
menempatkan serbuk sampel dalam sarung selulosa  (dapat  digunakan  kertas  saring) dalam  klonsong  yang  ditempatkan  di  atas labu dan di bawah kondensor. Pelarut yang sesuai dimasukkan ke dalam labu dan suhu penangas diatur di bawah suhu reflux. Ke- untungan  dari  metode  ini  adalah  proses ektraksi yang kontinyu, sampel terekstraksi oleh pelarut murni hasil kondensasi sehing- ga tidak membutuhkan banyak pelarut dan tidak memakan banyak waktu. Kerugiann- ya adalah senyawa yang bersifat termolabil dapat terdegradasi karena ekstrak  yang di- peroleh  terus-menerus  berada  pada  titik didih.

## Reflux dan Destilasi Uap
Pada  metode  reflux,  sampel  di- masukkan  bersama  pelarut  ke  dalam  labu yang dihubungkan dengan kondensor. Pel- arut dipanaskan hingga mencapai titik did- ih.  Uap  terkondensasi  dan  kembali  ke  da- lam labu.
Destilasi  uap  memiliki  proses  yang sama  dan  biasanya  digunakan  untuk mengekstraksi  minyak  esensial (campuran berbagai  senyawa  menguap).  Selama pemanasan, uap terkondensasi dan destilat (terpisah  sebagai  2  bagian  yang  tidak  sal- ing  bercampur)  ditampung  dalam  wadah yang  terhubung  dengan  kondensor.  Keru- gian dari kedua metode ini adalah senyawa yang bersifat termolabil dapat terdegradasi (Seidel V 2006).

## Pemisahan Senyawa
Kromatografi  Lapis  Tipis  (Thin  Layer Chromatography)
Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT) dan  kromatograsi  kolom  pada  prinsipnya sama.  Apabila  suatu  cuplikan  yang  meru- pakan  campuran  dari  beberapa  komponen yang  diserap  lemah  oleh  adsorben  akan keluar  lebih  cepat  bersama  eluen,  se- dangkan komponen yang diserap kuat akan keluar lebih lama (Hostettman,1995). KLT merupakan suatu teknik pemisahan dengan menggunakan  adsorben  (fase  stasioner) berupa lapisan tipis seragam  yang disalut- kan  pada  permukaan  bidang  datar  berupa
lempeng kaca, pelat aluminium, atau pelat plastik.  Pengembangan  kromatografi  ter- jadi ketika fase gerak tertapis melewati ad- sorben (Deinstrop, Elke H,2007 ).
KLT dapat digunakan jika :
1. Senyawa tidak menguap atau tingkat penguapannya rendah.
2. Senyawa  bersifat  polar,  semi  polar, non polar, atau ionik.
3. Sampel  dalam  jumlah  banyak  harus dianalisis  secara  simultan,  hemat biaya,  dan  dalam  jangka  waktu  ter- tentu.
4. Sampel  yang  akan  dianalisis  akan merusak  kolom  pada  Kromatografi Cair (KC) ataupun Kromatografi Gas (KG).
5. Pelarut  yang  digunakan  akan  meng- ganggu  penjerap  dalam  kolom  Kro- matografi Cair.
6. Senyawa  dalam  sampel  yang  akan dianalisis  tidak  dapat  dideteksi dengan metode KC ataupun KG atau memiliki tingkat kesulitan yang ting- gi.
7. Setelah  proses  kromatografi,  semua komponen  dalam  sampel  perlu dideteksi (berkaitan dengan nilai Rf).
8. Komponen  dari  suatu  campuran  dari suatu  senyawa  akan  dideteksi terpisah setelah pemisahan atau akan dideteksi  dengan  berbagai  metode secara  bergantian  (misalnya  pada drug screening ).
9. Tidak ada sumber listrik.
KLT  digunakan  secara  luas  untuk analisis solute-solute organic terutama da- lam  bidang  biokimia,  farmasi,  klinis,  fo- rensic,  baik  untuk  analisis  kualitatif dengan cara membandingkan nilai Rf solut dengan  nilai  Rf  senyawa  baku  atau  untuk analisis  kualitatif  (Gandjar  IG.,  2008). Penggunaan  umum  KLT  adalah  untuk menentukan  banyaknya  komponen  dalam campuran, identifikasi senyawa, memantau berjalannya  suatu  reaksi,  menentukan efektifitas pemurnian, menentukan kondisi yang  sesuai  untuk  kromatografi  kolom, serta  untuk  memantau  kromatografi  ko- lom,  melakukan screening sampel  untuk obat (Gandjar IG, 2008).
Flash Chromatography Column
(Sepacore ® )
Flash  Chromatography  Column dipopulerkan oleh Clark W. Still dari Uni- versitas  Columbia  pada  tahun  1978,  se- bagai  alternatif  lain  dari  kromatografi gravitasi  yang  lambat  dan  sering  tidak efisien. Flash  chromatography berbeda dari  teknik  konvensional,  yaitu  partikel silika  gel  yang  digunakan  sedikit  lebih kecil yaitu silica gel 60, 70-230 mesh (63- 200  µm),  aliran  pelarut  terbatas  yang disebabkan  oleh  partikel  silika  gel  kecil, dan menggunakan tekanan gasnitrogen (ca. 10-15  psi)  untuk  mendorong  pelarut  me- lalui kolom dari fase diam. Hasil akhirnya cepat dengan kromatografi yang beresolusi
tinggi.  Sepacore ® flash  chromatography menjawab  keterbatasan  dalam flash  chro- matography column dengan  meningkatkan tekanan sampai dengan 10 bar/145 psi atau 50  bar/725  psi.  Sistem  kromatografi  ini sepenuhnya otomatis termasuk deteksi UV, kolektor fraksi  dan perangkat  lunak di  an- tara  banyak  fitur  dapat  diatur  sesuai dengan  kebutuhan  spesifik  pemisahan. Flash  chromatography merupakan  sistem pemisahan  yang  sangat  populer  sekarang ini, karena sangat mudah untuk dilakukan, fleksibel, dan dapat  dikerjakan secara uni- versal (Talamona, 2005).

## c. Fraksinasi
Ekstrak  awal  merupakan  campuran dari  berbagai  senyawa.  Ekstrak  awal  sulit dipisahkan melalui teknik pemisahan tung- gal  untuk  mengisolasi  senyawa  tunggal. Oleh  karena  itu,  ekstrak  awal  perlu dipisahkan  ke  dalam  fraksi  yang  memiliki polaritas  dan  ukuran  molekul  yang  sama. Fraksinasi dapat dilakukan dengan metode ektraksi cair-cair atau dengan kromatografi cair  vakum  (KCV),  kromatografi  kolom (KK), size-exclution chromatography (SEC), solid-phase  extraction (SPE) ( Sarker SD, dkk., 2006).
Isolasi Senyawa
Faktor  yang perlu diperhatikan sebe- lum  melakukan  isolasi  adalah  sifat  dari senyawa  target  yang  ada  dalam  ekstrak awal  atau dalam fraksi.  Sifat  umum mole- kul  yang  dapat  membantu  proses  isolasi
yaitu  kelarutan  (hidrofilisitas  atau  hi- dofobisitas),  sifat  asam-basa,  muatan,  sta- bilitas,  dan  ukuran  molekul.  Sifat  ekstrak juga  dapat  membantu  dalam  pemilihan metode isolasi yang tepat. Misalnya, suatu ekstrak  metanol  atau  fraksi  dari  suatu ekstrak  mengandung  senyawa  polar  lebih baik dilakukan reversed-phase HPLC (RP- HPLC). Berbagai  sifat  fisika  dari  ekstrak juga  dapat  ditentukan  dengan  beberapa percobaan berikut (Sarker SD, dkk., 2006):
Hidrofobisitas atau hidofilisitas. Sua- tu indikasi polaritas ekstrak sesuai dengan senyawa  yang  ada  dalam  ekstrak  dapat dideterminasi  dengan  mengeringkan  ali- quot dari campuran dan mencoba melarut- kannya kembali dalam variasi pelarut pada beberapa tingkatan polaritas.
Sifat  asam-basa.  Sifat  ini  membawa partisi  dalam  pelarut  air  pada  range  pH, khususnya  3,  7,  dan  11  dapat  membantu determinasi  sifat  asam-basa  dari  senyawa dalam ekstrak.
Muatan.  Informasi  nilai  muatan  dari senyawa  dapat  diiperoleh  dengan  pen- gujian  pada  sejumlah  kondisi,  efek  dari penambahan  beberapa  penukar  ion  ke  da- lam  campuran.  Informasi  ini  dapat digunakan  untuk  merancang  metode  iso- lasi yang melibatkan kromatografi penukar ion.
Stabilitas terhadap panas. Tes stabili- tas  terhadap  panas  dilakukan  dengan menginkubasi  sampel  pada  suhu  90˚C
selama 11 menit dalam penangas air diikuti dengan  pengujian  terhadap  senyawa  yang tidak terpengaruh.
Ukuran.  Tabung  dialisis  dapat digunakan untuk pengujian adanya makromolekul seperti protein yang ada da- lam ekstrak.
1. Droplet  Countercurrent  Chromatog- raphy (DCCC)
2. Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi (KCKT/HPLC)
3. Hyphenated techniques (HPLC-

## PDA,  LC-MS,  LC-NMR,  LC-MS NMR)

## Metode Identifikasi
Identifikasi  golongan  senyawa  dapat dilakukan dengan  uji  warna,  penentuan kelarutan,  bilangan  Rf  dan  ciri  spectrum UV  (Harborne,  1998).  Identifikasi  yang paling  penting  dan  digunakan  secara  luas ialah pengukuran spektrum serapan dengan menggunakan spektrofotometer.
Pengukuran ini tidak merusak senyawa dan senyawa  dapat  dipakai  lagi  untuk  uji-uji yang lain. Seringkali
gabungan
kromatografi dan spektrofotometri memungkinkan
fraksinasi menjadi sempurna  terhadap  campuran  alami  yang sangat  kecil  jumlahnya  dan  identifikasi setiap komponennya secara pasti.
Tiga  jenis  spektrum  serapan  telah dikenal  yaitu sinar tampak, ultraviolet  dan inframerah.
Kesamaan spektrum
inframerah  suatu  senyawa  murni  yang
tidak diketahui dengan senyawa pembanding  dapat  dianggap  sebagai  bukti bahwa kedua senyawa itu sama. Spektrum serapan ultraviolet-visibel tidak didasarkan pada  getaran  atom  dalam  molekul  akan tetapi pada kenyataannya elektron tertentu yang terikat longgar dapat ditingkatkan ke arah  energi  yang  lebih  tinggi  dengan menyerap radiasi dengan panjang gelombang tertentu.
Spektra  UV  digunakan  untuk mengetahui  keberadaan  ikatan  rangkap terkonjugasi  pendek  misalnya  aromatik dan panjang misalnya karotenoida. Spektra IR  digunakan  untuk  mengetahui  gugus fungsi  dan  perkiraan  jenis  senyawa (Harborne, 1998).

## Spektrofotometer UV
Daerah  pengukuran  spektrofoto  me- ter  UV  adalah  pada  panjang  gelombang 200-400  nm.  Spektrum  UV  disebut  juga spektrum elektronik karena terjadi sebagai hasil  interaksi  radiasi  UV  terhadap  mole- kul  yang  mengakibatkan  molekul  tersebut mengalami transisi elektronik. Apabila ra- diasi elektromagnetik dikenakan pada sua- tu  molekul  atau  atom  maka  sebagian  dari radiasi  tersebut  diserap  oleh  molekul  atau atom  tersebut  sesuai  dengan  strukturnya yang  mempunyai  gugus  kromofor  (Mulja, 1990).

## Spektrofotometer IR
Radiasi infrared (IR)  atau  infrared merupakan  bagian  dari  spektrum  elektro-
magnetik antara daerah gelombang cahaya tampak  dan  gelombang  mikrowafe. Penggunaan terbesar terhadap kimia organ- ik  adalah  pada  panjang  gelombang  4000- 400 cm -1 . Frekuensi radiasi IR kurang dari 100  cm -1 diabsorbsi dan diubah oleh mole- kul organik menjadi energi rotasi molekul. Serapan ini diukur. Radiasi  IR dalam dae- rah  panjang  gelombang  10000-100  cm -1 diabsorbsi dan diubah oleh sebuah molekul organik  ke  dalam  energi  vibrasi  molekul. Serapan  ini  juga  dihitung.  Tapi,  spektrum vibrasi  muncul  sebagai  tanda  lebih  baik karena  sebuah  perubahan  energi  vibra tunggal  diikuti  oleh  sejumlah  perubahan energi rotasi. Absorbsi frekuensi atau pan- jang  gelombang  tergantung  pada  massa relatif  atom,  gaya  konstan  ikatan  dan  ge- ometri atom.
Posisi  tanda  dalam  spektrum  IR disajikan  dalam  jumlah  gelombang  yang memiliki  satuan  cm -1 .  Jenis  ikatan  yang dapat  ditunjukkan  pada  daerah  serapan 1300-800  cm -1 (C-C,  C-O,  C-N),  1900- 1500 cm -1 (C═O, C═N, N═O), 2300-2000 cm -1 (C≡C, C≡N), dan 3000-2200 (C-H, O- H, N-H) (Silverstain, 1998).

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes.G.2007. Teknologi  Bahan  Alam,
ITB Press Bandung. Deinstrop, Elke. 2007. Applied Thin-Layer Chromatography . 2 nd ed. Weinheim:
Wiley-VCA hal. 1-2.
Gandjar IG & Abdul R. 2008. Kimia Far- masi  Analisis. Yogyakarta.  Pustaka Pelajar.
Hostettman, 1995.Cara Kromatografi Preparatif”Penggunaan  pada  Isolasi
Senyawa Alam” ITB, Bandung Harborne  JB.  1998. Phytochemical  Meth- ods:  A  guide  to  modern  techniques of  plant  analysis  3 rd Edition. Chap- man and Hall, London.
Saifuddin A, Rahayu, Yuda Hilwan. 2011.
Standarisasi  Bahan  Obat  Alam . Graha Ilmu. Yogyakarta. hal. 1-22. Seidel  V.  Initial  and  ulkextraction.  In:
Sarker SD,  Latif Z & Gray Al, edi- tors. Natural  product  Isolation , 2nd ed.  Totowa  ()Ney  Jersey).  Humana Press Inc. 2006. hal. 31-5 Sarker SD, Latif Z, & Gray AI. 2006. Nat- ural  products  isolation.  In:  Sarker SD,  Latif  Z,  &  Gray  AI,  editors. Natural  Products  Isolation .  2nd  ed. Totowa  (New  Jersey).  Humana Press Inc. hal. 6-10, 18.
Seidel  V.,  2006.  Initial  and  bulk  extrac- tion. In: Sarker SD, Latif Z, & Gray AI, editors. Natural Products Isola- tion .  2nd  ed.  Totowa  (New  Jersey). Humana Press Inc. hal. 31-5. Silverstain,R.M.,  Webster,F.X.,  (1998),
Spectrometric  Identification  Of  Or- ganic Compound, sixth edition, John Wiley & Sons,Inc,US, hal 71-74. Talamona  A.  2005. Laboratory  Chroma- tography  Guide. Büchi  Labortech- nik AG.. Switzerland. hal 12. Mulja M. 1990. Aplikasi Spektrofotometer UV-VIS .  Mecphiso.  Surabaya.    Hal 3.