## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN JATI ( Tectona grandis)

## TERHADAP BAKTERI Coliform PADA PRODUK IKAN NILA
( Oreochromis niloticus)
Erna Febriana 1 , Riri Rimbun Anggih Chaidir 1*
1 Fakultas Ilmu dan Teknologi Hayati, Universitas Teknologi Sumbawa *Corresponding Author email: riri.rimbun@uts.ac.id

## Diterima
Mei 2023 Diterbitkan Juli 2023

## Keyword:
Antibakteri, Coliform, Ekstrak daun jati, Ikan nila

## Abstrak
Ikan nila ( Oreochromis niloticus ) termasuk salah satu hasil perikanan yang sering dikonsumsi oleh masyarakat Indonesia karena memiliki kandungan gizi tinggi. Namun, penanganan  yang  tidak  baik  dapat  menyebabkan  kerusakan  produk  perikanan  karena aktivitas  mikroorganisme,  sehingga  diperlukan  bahan  pengawet  alami.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  jati  ( Tectona  grandis ) terhadap bakteri coliform pada produk ikan nila ( Oreochromis niloticus ). Penelitian ini dilakukan dengan mengisolasi bakteri coliform dari sampel ikan nila dengan media Lauryl Tryptose Broth (LTB), Brilliant Green Lactose Broth (BGLB), dan Eosin Methylene Blue (EMB).  Ekstraksi  daun  jati  menggunakan  metode  infundasi  (1:10)  dan  diuji  terhadap isolat coliform dari  sample  ikan  nila  dengan  konsentrasi  5%,  10%,  15%,  20%  yang dibandingkan dengan kontrol negatif (aquades) dan kontrol positif (formalin). Data yang diamati  adalah  zona  hambat  terhadap  isolat  bakteri coliform yang  terbentuk  di  sekitar kertas cakram. Penelitian dilakukan dengan Rancangan Acak Lengkap dengan 3 ulangan setiap  perlakuan,  kemudian  data  dianalisis  menggunakan  ANOVA  dan  Duncan. Berdasarkan hasil penelitian  menunjukkan bahwa ekstrak daun jati dengan konsentrasi 5% - 20% memiliki aktivitas antibakteri dengan diameter zona hambat sebesar 9,3 mm - 17,6 mm. Konsentrasi ekstrak daun jati 20% merupakan konsentrasi terbaik, dengan zona hambat terbesar yaitu 17,6 mm sehingga memiliki potensi antimikroba terhadap coliform , serta berpotensi sebagai pengganti formalin dalam mengawetkan produk ikan nila.

## PENDAHULUAN
Ikan nila termasuk salah satu bahan pangan hewani  yang  banyak  dikonsumsi  oleh  masyarakat Indonesia  karena  harganya  terjangkau  dan  mudah didapatkan.  Selain  itu,  ikan  nila  memiliki kandungan  gizi  yang  sangat  tinggi  seperti  protein, lemak,  kalsium,  karbohidrat,  fosfor,  dan  omega  3 yang sangat dibutuhkan oleh tubuh manusia. Dalam 100 g ikan nila mengandung protein sekitar 20,09 g (Sulistijowaty et  al .,  2020),  lemak  sekitar  3  g (Setiawan  dan  Hamzah,  2020),  kalsium  4,782  mg, karbohidrat  0,32  g,  fosfor  610  mg  (Ramlah et  al ., 2016), dan omega 3 sekitar 0,407 g  (Sukmawati et al .,  2020).  Namun,  kandungan  gizi  tersebut  dapat juga menjadi media yang disukai bakteri pembusuk dan  mikroorganisme  lain  yang  dapat  mempercepat proses  kemunduran  mutu  pada  produk  perikanan (Hardianti et al ., 2019).
Ikan  nila  akan  mengalami  penurunan kualitas  organoleptik  yang  disebabkan  karena adanya  aktivitas  enzim,  perubahan  biokimia  dan pertumbuhan  mikroorganisme  (Lemae  dan  Lasmi, 2019).  Setelah  ikan  nila  mati,  enzim  yang  terdapat pada ikan mulai aktif mendegradasi daging, molekul ikan  menjadi  lebih  sederhana  dan  mikroorganisme yang  terdapat  pada perut,  kulit,  dan  insang  dengan cepat berkembang biak (Ariyani et al ., 2007).  Selain
bakteri  normal  pada  ikan  nila,  bakteri  penyebab kerusakan  dapat  terjadi  karena  penanganan, peralatan,  kondisi  penyimpanan,  kemasan  yang digunakan sebelum dan sesudah panen tidak bersih dan kontaminasi silang dari para pekerja (Maruka et al .,  2017).  Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan pengawetan pada produk perikanan.
Pengawetan dilakukan untuk menghambat pertumbuhan mikroorganisme pada produk perikanan sehingga masa simpannya dapat bertahan dalam jangka waktu yang lama (Ladja et al ., 2019). Biasanya pengawetan produk perikanan menggunakan  teknik  pembekuan,  pengeringan, pengasapan, penggaraman, pengalengan dan penambahan formalin (Rahmi et al ., 2021). BPOM RI  Tahun  2016  menemukan  sebanyak  221  sampel produk  perikanan  yang  mengandung  formalin. Penelitian Maruf et al ., (2017) menemukan ikan nila di  Pasar Manado  mengandung  formalin.  Formalin juga dilaporkan ditemukan pada berbagai ikan segar (Mardiana et al. , 2020; Simanjutak & Silalahi, 2022) dan  ikan  asin  (Suseno,  2021)  yang  diperoleh  dari pasar tradisional di beberapa wilayah Indonesia. Hal ini  terjadi  bahkan  setelah  adanya  pelarangan penggunaan formalin sebagai bahan pengawet pada berbagai produk pangan melalui  Peraturan Menteri Kesehatan Indonesia No. 1168/Menkes/Per/X/1999.
Penggunaan formalin pada produk perikanan dipilih karena  mudah  didapatkan  di  toko  kimia  dan harganya  lebih  murah  dibandingkan  dengan pengawet  makanan  yang  diperbolehkan  seperti natrium  benzoat  (Rovita  &  Wulandari,  2022). Adapun  ciri-ciri  ikan  yang  mengandung  formalin yaitu  tekstur  daging kenyal, warnanya  putih  cerah, tidak  dikerubungi  lalat,  baunya  menyengat  khas formalin,  tidak  berbau  amis  khas  ikan,  tidak berlendir,  insang  berwarna  merah  tua,  dan  dapat bertahan  dalam  jangka  waktu  lama  (Simanjutak  & Silalahi,  2022).  Berdasarkan  standar  Otoritas Keamanan Pangan Eropa (EFSA), batas maksimum formalin  yang  diperbolehkan  dikonsumsi  dalam makanan  yaitu  100  mg/kg  makanan  per  orang  per hari. Apabila dikonsumsi melebihi batas maksimum dapat  menyebabkan  keracunan,  kanker,  kerusakan hati,  ginjal  dan  gangguan  fungsi  otak  (Hassanah, 2018). Adapun alternatif untuk mengatasi permasalahan  tersebut  adalah  dengan  penggunaan bahan  pengawet  alami  dari  ekstrak  tumbuhan. Beberapa  tanaman  seperti  daun  jati  (Abdillah, 2021),  daun  mangrove  api-api  (Sumartini et  al .,
2021), daun mangga (Santoso et al ., 2017), dan daun matoa  (Ladja et  al .,  2019)  telah  dilaporkan  dapat mengawetkan produk perikanan.
Rizky  dan  Soegandi  (2018)  menyatakan bahwa  ekstrak  etanol  daun  jati  mengandung senyawa  tanin,  saponin,  flavonoid,  steroid  dan kunion yang dapat menghambat bakteri Escherichia coli .  Herawati et  al .,  (2020)  menyatakan  bahwa kandungan fenol pada daun jati dengan konsentrasi 5%  dapat  mempertahankan  mutu  udang  putih selama 9 hari.  Selain itu, penambahan ekstrak daun jati  dengan  metode  infundasi  pada  ikan  bandeng dapat memperpanjang umur simpan dan menghambat  pertumbuhan  bakteri Salmonella  sp . (Abdillah, 2021). Hal tersebut menunjukkan potensi daun jati sebagai bahan pengawet produk perikanan khususnya  ikan  nila.  Sehingga  penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri ekstrak daun jati ( Tectona grandis ) terhadap bakteri coliform pada  produk  perikanan  ( Oreochromis niloticus ).

## MATODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan di Balai Karantina Ikan  Pengendalian  Mutu  dan  Keamanan  Hasil Perikanan (BKIPM), Mataram pada bulan Februari - Maret 2023.

## Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan yaitu laminar air flow ,  inkubator, autoclave ,  cawan  petri,  tabung reaksi, rak tabung reaksi, gelas ukur, gelas beaker , erlenmeyer ,  mikro  pipet, cutton  swab ,  bunsen, timbangan  analitik,  pisau,  stirer,  kertas  cakram, cawan  petri,  panci,  kompor  gas,  dan  saringan  teh.
Adapun  bahan  yang  digunakan  yaitu  ikan  nila diperoleh dari kolam di Mataram, daun jati berasal
dari  Sumbawa  Besar,  dan  formalin.  Media  yang digunakan  yaitu,  larutan Butterfields  Phosphate Buffered (BPB), Lauryl  Tryptose  Broth (LTB), Brilliant  Green  Lactose  Broth (BGLB), Eosin Methylen  Blue (EMB), Nutrient  Agar (NA)  dan spritus.

## Ekstraksi Daun jati
Daun jati muda dicuci dengan air mengalir lalu  dikeringanginkan  selama  5  hari.  Setelah  itu dipotong  kecil-kecil  lalu dihaluskan  hingga berupa serbuk.  Ekstraksi  daun  jati  menggunakan  metode infundasi,  merujuk  pada  metode  Abdillah  (2021). Infundasi  dilakukan  dengan  mengambil  10  g simplisia daun jati dilarutkan dalam 100 ml aquades, lalu  dipanaskan  dengan  api  kecil  selama  15  menit. Setelah itu dilakukan penyaringan ekstrak. Kemudian, dilakukan pengenceran dengan konsentrasi 5% - 20% dengan pelarut aquades.
Isolasi Bakteri Coliform dari Sampel Ikan Nila
Isolasi bakteri coliform bertujuan  untuk mengetahui ada atau tidaknya bakteri coliform pada sampel ikan nila yang diuji. Adapun tahapan isolasi coliform sebagai  berikut: 25  g  sampel  ikan  nila dimasukkan  ke  dalam  225  ml  larutan Butterfields Phosphate Buffered (BPB), kemudian dihomogenkan  selama  1  menit.  1  ml  larutan  yang telah dihomogenkan diambil dan diinokulasikan ke dalam 9 tabung Lauryl Tryptose Broth (LTB), lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35 ᴼC. Tabung positif  yang  ditandai  dengan  timbulnya  kekeruhan dan  gas  pada  tabung  durham  dan  dihitung jumlahnya.  Total coliform dihitung berdasarkan jumlah  tabung  positif  sesuai  dengan  tabel  Angka Paling Memungkinkan (APM) pada SNI 01-2332.1- 2015.  Isolat coliform kemudian  dimurnikan  pada media  EMB  sebagai  media  selektif coliform dan dimurnikan  kembali  pada  media  NA  sebelum pengujian aktivitas antimikroba.

## Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Jati
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dengan ekstrak  daun  jati  menggunakan  metode  difusi cakram  pada  media  NA.  Kertas  cakram  yang digunakan  berdiameter  6  mm.  Kertas  cakram direndam  selama  15  menit  ke  masing-masing larutan  ekstrak  daun  jati  dengan  konsentrasi  5%, 10%,  15%,  20%,  aquades  dan  larutan  formalin. Larutan  formalin  dengan  konsentrasi  0,75% digunakan  sebagai  kontrol  positif  dan  aquades sebagai  kontrol  negatif.  Selanjutnya,  cawan  petri berisi  NA  disiapkan  dan  disapukan  dengan inokulum isolat coliform dan dilabeli. Kertas cakram yang  sudah  direndam  diletakkan  ke  media  tanam sesuai dengan kodenya. Masing – masing perlakuan dilakukan  pengulangan  sebanyak  3  kali  dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35 ᴼC.  Setelah itu,  diamati  ada  atau  tidaknya  zona  hambat  yang
terbentuk  di  sekitar  kertas  cakram  dan  diukur menggunakan penggaris.

## Analisa data
Untuk uji coliform data diolah menggunakan  tabel  indeks  APM  (Angka  Paling Memungkinkan)  dengan  kepercayaan  95  %  untuk berbagai  kombinasi  hasil  positif  dari  3  seri  tabung pada pengenceran 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 . Sedangkan, untuk mengetahui pengaruh perbedaan konsentrasi ekstrak daun jati terhadap isolat bakteri coliform dari sampel ikan  nila,  dilakukan  uji  ANOVA  dan  Duncan menggunakan aplikasi SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Hasil Uji Praduga ( Presumptive test ) pada media Lauryl Tryptose Broth (LTB) Pengenceran Tabung positif Nilai APM/g Keterangan 10 -1 3 >1100 Melebihi ambang batas 10 -2 3 10 -3 3
Tabel 1 menunjukkan jumlah tabung positif uji praduga dan nilai APM setelah inkubasi 24 jam pada  sampel  ikan  nila.  Pada  pengujian  ini menunjukkan  nilai  Angka  Paling  Mungkin  (APM) sampel  ikan  nila  sebesar  >1100  APM/g.  Hal  ini menunjukkan bahwa sampel ikan nila tersebut tidak memenuhi  syarat  mutu  ikan  segar  sesuai  SNI 2332.1-2015  yaitu  ambang  batas  maksimum  total coliform untuk  ikan  segar  sebesar  <  3  APM/g. Namun,  pada  pengujian  ini  harus  dilakukan  uji penegasan  yang  akan  digunakan  sebagai  penentu nilai APM yang akan dibandingkan dengan standar SNI  01-2332.1-2015.  Selanjutnya  dari  tabung positif LTB dilakukan uji penegasan coliform pada media Brilliant Green Lactose Broth (BGLB).
Tabel 2. Hasil Uji Penegasan ( Confirmed test ) pada media Brilliant Green Lactose Broth (BGLB) Pengenceran Tabung positif Nilai APM/g Keterangan 10 -1 3 Melebihi ambang batas (SNI 01-2332 .1-2015)
10 -2 2 210
10 -3 2
Tabel 2 menunjukkan jumlah tabung positif pada uji penegasan dan nilai APM setelah inkubasi 24  jam  pada  sampel  ikan  nila.  Pada  pengujian  ini menunjukkan  nilai  APM  sampel  ikan  nila  sebesar 210  APM/g.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  sampel ikan nila tersebut tidak memenuhi syarat mutu ikan segar  sesuai  SNI  2332.1-2015  yaitu  melebihi ambang batas maksimum total coliform untuk ikan segar,  sebesar  <  3  APM/g.  Berdasarkan  standar tersebut, sampel ikan nila tersebut tidak layak untuk
dikonsumsi. Hasil yang sama juga ditunjukkan pada penelitian Puspitasari et al ., (2017) pada ikan sapu- sapu  yaitu  terdapat coliform sebesar  210  APM/g. Selanjutnya dari tabung positif BGLB dilakukan uji konfirmasi coliform pada  media Eosin  Methylene Blue (EMB)  da  dimurnikan  pada  media Nutrient Agar (NA), seperti gambar berikut:
Gambar 1 . Isolat Coliform pada a. media Eosin Methylene Blue (EMB), dan b. media Nutrient Agar (NA).
Gambar  1.a  menunjukkan  pertumbuhan koloni dari isolat bakteri dari sampel ikan nila pada media Eosin Methylene Blue (EMB). Pertumbuhan isolat  bakteri  tersebut  menunjukkan  adanya  koloni berwarna hijau metalik dengan inti hitam. Ciri – ciri isolat tersebut mengarah ke bakteri coliform . Media EMB  merupakan  media  spesifik  untuk  mendeteksi coliform karena  mengandung  laktosa, eosin, methylene  blue .  Bakteri coliform dengan  cepat memfermentasi  laktosa  dan  dapat  menghasilkan asam  untuk  menghasilkan  koloni  yang  berwarna hijau  metalik  karena  reaksinya  dengan Eosin dan methylene  blue (Brooks et  al .,  2013). Eosin dan methylene blue juga berfungsi untuk menumbuhkan bakteri gram negatif dan menghambat pertumbuhan bakteri  gram  positif.  Ciri  morfologi  isolat  yang diperoleh ini mengarah pada Escherichia coli yaitu berbentuk bulat dan berwarna hijau metalik dengan inti hitam pada media EMB (Mahulette et al ., 2022). Pertumbuhan isolat bakteri pada media NA tersebut menunjukkan  ciri-ciri  morfologi  berwarna  putih tulang  dan  bentuk  permukaan  koloninya  rata. Morfologi  koloni  isolate  tersebut  mengarah  ke E. coli (Sari et  al .,  2019).  Selanjutnya  pengujian aktivitas antibakteri pada ekstrak daun jati dilakukan pada isolat coliform dari media NA.
Uji  Aktivitas  Ekstrak  Daun  Jati  terhadap Bakteri Coliform pada Ikan Nila Secara In Vitro
Gambar 2. Uji aktivitas ekstrak daun jati terhadap coliform
Gambar 2 menunjukkan aktivitas antibakteri  ekstrak  daun  jati  ( Tectona  grandis )
b.
a.
terhadap isolat bakteri dari sampel ikan nila dengan konsentrasi 5%, 10%, 15% dan 20%. Dapat dilihat pula  kontrol  positif  (formalin),  dan  kontrol  negatif (aquades  steril)  digunakan  sebagai  pembanding. Adapun  data  hasil  pengukuran  diameter  zona hambat bakteri dapat dilihat pada tabel di bawah ini.
Tabel 3 . Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak daun jati terhadap bakteri coliform Konsentrasi Rerata Diameter (mm) Kategori zona hambat Surdowardojo et al ., (2015) 5% 9,3  0,3 a Sedang 10% 11,8  0,7 b Kuat 15% 13,4  0,7 bc Kuat 20% 17,6  0,33 c Kuat K + 18,9  0,9 cd Kuat K - 0,00 Lemah
Tabel  3  menunjukkan  hasil  uji  aktivitas antibakteri  ekstrak  daun  jati  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri coliform pada sampel ikan nila. Rata-rata  diameter  zona  hambat  yang  terbentuk berkisar antara 9,3 mm  – 17,6 mm. Diameter zona hambat  terbesar  terdapat  pada  perlakuan  dengan konsentrasi 20% yaitu sebesar 17,6 mm, sedangkan zona  hambat  terkecil  terdapat  pada  konsentrasi ekstrak daun jati 5% yaitu sebesar 9,3 mm. Menurut Surjowardojo et  al .,  (2015)  bahwa  terdapat  4 klasifikasi  diameter  zona  hambat  bakteri  yaitu respon lemah (diameter < 5 mm), sedang (diameter 5-10  mm),  kuat  (diameter  10-20  mm),  dan  sangat kuat  (diameter  >20  mm).  Sehingga  kemampuan antimikroba  ekstrak  daun  jati  telah  digolongkan berdasarkan  klasifikasi  Surjowardojo et  al .,  (2015) (Tabel  3).  Penelitian  Risky  dan  Soegandi  (2018) memperoleh  bahwa  ekstrak  etanol  daun  jati  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  coli dengan rata  –  rata  zona  hambat  sebesar  16,92  mm. Sedangkan Zahra, (2015) dengan metode infundasi ekstrak  daun  jati  belanda  ( Guazuma  ulmifolia ) memperoleh  bahwa  konsentrasi  terbaik  dalam menghambat E.  coli adalah  15%  dengan  rata-rata zona  hambat  sebesar 13  mm,  hampir  sama  dengan perlakuan 15% pada penelitian ini. Pada penelitian ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  jati  dengan metode  infundasi  lebih  baik  dibandingkan  dengan metode lainnya untuk aktivitas antimikroba terhadap coliform yang  disolasi,  karena  tidak  memerlukan pelarut  dan  persiapan  ekstrak  mudah  dan  singkat. Namun,  kemampuan  antimikroba  suatu  tanaman dipengaruhi oleh jenis dan umur tanaman, jenis dan konsentrasi  pelarut,  metode  ekstraksi,  konsentrasi ekstraksi dan mikroba yang diuji (Sambodo, 2022).
Pada  penelitian  ini,  perlakuan  konsentrasi 20% adalah konsentrasi terbaik karena menghasilkan  diameter  zona  hambat  ekstrak  daun jati  terbesar  yaitu  17,6  mm  dan  masuk  ke  dalam kategori zona kuat. Perlakuan ini juga menunjukkan
potensinya  sebagai  alternatif  formalin  karena menunjukkan kemampuan antimikroba yang berbeda nyata dengan perlakuan lainnya dan berada pada  kategori  antimikroba  yang  sama  dengan formalin  (Tabel  3).  Kemampuan  daun  jati  sebagai antimikroba  tidak  luput  dari  kandungan  senyawa aktif  di  dalamnya.  Daun  jati  ( Tectona  gandris ) memiliki  aktivitas  antibakteri  karena  terkandung senyawa-senyawa antibakteri seperti saponin, tanin, flavonoid,  steroid  dan  triterpenoid  (Rizky,  2018). Senyawa  aktif  tersebut  memiliki  potensi  untuk melisiskan  atau  merusak  membran  plasma  sel bakteri  sehingga  pertumbuhan  bakteri  tersebut menjadi terhambat.
Flavonoid yang berfungsi sebagai antibakteri memiliki kemampuan dalam mengganggu  integritas  membran  dan  dinding  sel dan  dapat  menyebabkan  kerusakan  struktur  DNA bakteri  sehingga  menyebabkan  kematian  pada bakteri  tersebut  (Hamid,  2011).  Mekanisme  kerja dari  flavonoid  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri yaitu dengan membuat kerusakan permeabilitas pada dinding sel bakteri, lisosom dan mikrosom  sebagai  hasil  dari  interaksi  antara flavonoid  dan  DNA  bakteri  (Yunikawati,  2013). Saponin berperan penting dalam degradasi dinding sel  bakteri  dengan  menurunkan  tegangan  pada permukaan dinding sel bakteri sehingga menyebabkan  kebocoran  pad  dinding  sel  yang berdampak  pada  keluarnya  senyawa  intraseluler (Rizky,  2018).  Selain  itu  daun  jati  mengandung triterpenoid  yang  dapat  menyebabkan  kerusakan pada  protein  transmembran  yang  merupakan  pintu masuk keluarnya senyawa sehingga sangat berpengaruh  pada  permeabilitas  sel  bakteri  (Lee, 2015).  Berdasarkan  hasil  penelitian  ini,  diketahui bahwa daun jati memiliki kemampuan antimikroba terhadap coliform dari  sampel  ikan  nila  dan kemampuan  antimikroba  tersebut  dapat  diperoleh dengan  ekstraksi  infundasi.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  jati  berpotensi  digunakan sebagai  pengawet  alami,  khususnya  pada  produk perikanan.

## PENUTUP

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  jati  ( Tectona grandis )  berpotensi  sebagai  kandidat  dalam pengawetan  ikan  nila  dan  mempunyai  aktivitas antibakteri  terhadap coliform yang  diisolasi  dari sampel ikan nila. Aktivitas antibakteri ekstrak daun jati  dengan  konsentrasi  5%  -  20%  mempunyai diameter  zona  hambat  sebesar  9,3  mm  -  17,6  mm. Konsentrasi  ekstrak  daun  jati  20%  merupakan konsentrasi  terbaik,  dengan  zona  hambat  terbesar yaitu  17,6  mm,  sehingga  memiliki  potensi  sebagai pengganti  formalin  dalam  mengawetkan  produk ikan  nila.  Pengembangan  selanjutnya  perlu dilakukan,  seperti  pembuatan  bioformalin  dalam
bentuk cair untuk dapat mengoptimalkan penggunaan  ekstrak  daun  jati  sebagai  bahan pengawet  produk  perikanan  khususnya  ikan  nila. Hal tersebut dapat dikembangkan agar memudahkan penggunaan  dan  agar  dapat  menjaga  parameter organoleotik,  sehingga  pengaplikasiannya  lebih luas.

## REFERENSI
Abdillah,  M.F.,  2021,  Pengaruh  Ekstrak  Daun  Jati
(Tectona grandis) Terhadap Mutu
Mikrobiologi  dan  Nilai  Organoleptik Produk Ikan Bandeng. Skripsi. Universitas Islam Negeri Sunan Ampel. Surabaya.
Badan  Standar  Nasional  Indonesia  (BSNI).  2015.
Penentuan  koliform  dan  Escherichia  coli
Pada Produk Perikanan (SNI 01- 2332.1.2015).
Hassanah,  N.  2018.  Identifikasi  Kandungan
Formalin  Pada  Ikan  Asin  yang  Dijual  Di Kota  Kendari  Sulawesi  Tenggara.  Karya Tulis Ilmiah Politeknik Kesehatan Kemenkes Kendari, 1-34.
Herawati, D., Purnamayati, L., Kurniasih, R.A. 2020 Perubahan Kualitas Udang Putih ( Penaeus merguiensis ) Selama Penyimpanan Dingin Dengan  Penambahan  Ekstrak  Daun  Jati ( Tectona  Grandis ).  Julnal  Ilmu  dan Teknologi Perikanan. Vol 2. No 2.
Ladja, T.J., Sulistijowati, R., Harmain, R.M. 2019. Mutu  Ikan  Nila  ( Oreochromis  niloticus ) Segar Secara Organoleptik yang Diawetkan  Menggunakan  Larutan  Daun
Matoa  ( Pometia  pinnata ).  Journal  Fish Processing. Vol.1.No.2.
Lee,  Y.Y.,  Park.J.  2015.  Anti-Inflammatory
Mechanism Of Ginseng Saponin Metabolite  Rh3  In  Lipopolysaccharide
Stimulated Microglia : Critical Role Of 5- Adenosine  Monophosphate  –Activited Protein Kinase Signaling Pathway. Journal
Of  Agricultural  and  Food  Chemistry 63:3472-3480. DOI: 10.1021/jf506110y.
Lemae., Lasmi, L. 2019. Studi Pengaruh
Kemunduran  Mutu  Terhadap  Kandungan Gizi Ikan Betok (Anabas testudineus) Dari Daerah  Mandor.  Octopus  Jurnal  Ilmu Perikanan. Vol.8. N0.1.
Mardiana, R., Lidyawati, L., & Zulfikri, M. (2020). Identifikasi  Formalin  Pada  Ikan  Segar  di
Pelabuhan  Pendaratan  Ikan  Idi  Rayeuk Kabupaten  Aceh  Timur.  Journal  of Pharmaceutical and Health Research, 1(3), 77-82.
Maruka, S.S., Siswohutomo, G., Rahmatu, R. 2017.
Identifikasi  cemaran  bakteri  Escherichia coli  Pada  Ikan  Layang  Segar Di  Berbagai Pasar Kota Palu. E-Jurnal Mitra Sains, Vol
5. No 1.
Rizky,  T.A.,  Soegandi.  2018.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi  Daun  Jati (Tectona  grandis)  Dalam  Menghambat
Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus  Secara  Invitro. Indonesia Natural Research
Pharmacheutical Journal. 3(1):93-104.
Rovia,  F.  M.,  Wulandari,  W.  2022.  Identifikasi Kandungan  Formalin  Pada  Ikan  Asin  Di Pasar  Tradisional  Kedungprahu  Ngawi. Darusalam  Nutrission  Journal.  Vol.  6. No.2.
Sambodo, D.K., Marsel, F., Sambodo, H.P., Arlesia,
N.  2022.  Pengaruh  Perbedaan  Metode Ekstraksi  Daun  Jati  (Tectona  grandis) Terhadap  Aktivitas  Antibakteri  Pada Escherichia coli. Jurnal Riset Kefarmasian Indonesia. Vol.4. No.2.
Simanjuntak, H., Silalahi, M. V. 2022. Kandungan Formalin  Pada  Beberapa  Ikan  Segar  Di Pasar Tradisional Parluasan Kota Pematangsiantar. Jurnal Sains dan Teknologi. Vol. 11, No 1.
Surjowardojo, P., Susilorini, T. E., Sirait., G. R. B. 2015.  Daya  Hambat  Dekok  Kulit  Apel Manalagi (Malus sylvestrs Mill) Terhadap Pertumbuhan  Staphylococcus Aureus Dan Pseudomonas Sp. Penyebab Mastitis Pada Sapi Perah. Jurnal Ternak Tropika. Vo. 16, No.2: 40-48.
Suseno,  D.  (2021).  Validasi  metode  analisis formalin  dan  aplikasinya  pada  ikan  asin. Jurnal Agroindustri Halal, 7(2), 173-182.
Yunikawati,  M,P.  H.Mahatmi.  2013.  Efektifitas Perasan  Daun  Srikaya  terhadap  Daya Hambat  Pertumbuhan  Eschericia  coli. Indonesia  Medicus  Veterinus,  2(2):  170- 179.