## BAKTERI PENGHASIL AMILASE YANG DIISOLASI DARI EKOENZIM LIMBAH BUAH-BUAHAN
Risky Hadi Wibowo 1,2 , Welly Darwis 1 , Sipriyadi 1,2 , Morina Adfa 2,3 , Elsi Silvia 4, , Reza Wahyuni 4 , Dhea Amelia Sari 4 , Masrukhin 5 1 Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu, Kandang Limun, Bengkulu 38112, Indonesia.
2 Program Studi Magister Biologi, Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu, Kandang Limun, Bengkulu 38112, Indonesia.
3 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu, Kandang Limun, Bengkulu 38112, Indonesia.
4 Mahasiswa , Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu, Kandang Limun, Bengkulu 38112, Indonesia.
5 Research Center for Biology, National Research and Innovation Agency Jl. Raya Bogor KM. 46 Bogor, Indonesia. 16911 *Corresponding author, email : riskyhadiwibowo80@gmail.com

## A B S T R A C T
Many  of  potential  enzymes  can  be  found  in  the  ecoenzyme,  one  of  them  is  amylase. Amylase is an enzyme that is able to hydrolize the glycoside bonds of starch or starch into dextrin,  glucose  and  maltose  which  is  widely  used  in  various  industries  such  as beverages.  This  study  aims  to  isolate  the  ecoenzyme  bacteria  and  test  their  ability  to produce  amylase.  Isolation  of  ecoenzyme  bacteria  was  carried  out  using  serial  dilution methods 10 -1 , 10 -3 , 10 -5 . A total of 0.1 ml of each dilution series was pipetted and spread on the Nutrient agar (NA) medium. The bacterial isolates that grew were then purified and identified by morphological observation, Gram staining and their enzymatic activity was tested using Starch Agar (SA) media qualitatively. The results of this study showed there  were  39  bacterial  isolates  from  ecoenzyme  with  different  morphological characteristics.  The  amylase  activity  test  were  found  that  34  isolates  had  a  positive activity to hydrolize the starch in the SA media which was indicated by the formation of a clear zone around the bacterial colonies. Each bacterial isolate had a different hydrolysis index  value,  which  ranged  from  9.45  to  23.65.  The  highest  clear  zone  diameter  index value from starch hydrolysis was EJM 15 isolate.
Keywords : Ecoenzyme, Bacteria, Amylase, Clear zone, Starch

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan salah satu negara agraris yang kaya akan sumber daya alam yang melimpah, terutama dari sektor pertanian, seperti sayur dan buah-buahan. Namun  kebanyakan  sayur  dan  buah  hanya  dikonsumsi  berupa  sayur  dan  daging buahnya saja. Sisa sayur dan kulit buah yang tidak terpakai dan tidak dimanfaatkan akan menimbulkan timbunan sampah (Damayanti et al., 2020).
Permasalahan  sampah  di  Indonesia  merupakan  salah  satu  masalah  yang belum  terselesaikan  hingga  saat  ini.  Sampah  merupakan  sisa  atau  barang  buangan yang sudah tidak digunakan dan di pakai lagi oleh pemiliknya. Dari aktivitas manusia komposisi  sampah  yang  dihasilkan  adalah  sampah  organik  sebanyak  60-70%  dan sisanya adalah sampah anorganik 30-40% (Herawati, 2016).
Sampah  organik  adalah  sampah  yang  berasal  dari  sisa  mahkluk  hidup  yang mudah  terurai  secara  alami  tanpa  proses  campur  tangan  manusia  untuk  dapat terurai.  Sampah  organik  bisa  dikatakan  sebagai  sampah  ramah  lingkungan  bahkan sampah  bisa  diolah  kembali  menjadi  sesuatu  yang  bermanfaat  bila  dikelola  dengan tepat,  tetapi  bila  sampah  tidak  dikelola  dengan  benar  maka  akan  menimbulkan penyakit dan bau yang kurang sedap, hal tersebut dikarenakan adanya pembusukan sampah  organik  yang  cepat  (Fitri  &  Yasmin,  2011).  Sedangkan  sampah  anorganik adalah sampah yang sudah tidak dipakai lagi dan sulit terurai. Sampah organik pada umumnya  berasal  dari  limbah  rumah  tangga  seperti  sampah  sayur  dan  kulit  buah- buahan,  hal  tersebut  dikarenakan  sisa  sayur  dan  kulit  buah  yang  kurang dimanfaatkan sehingga menumpuk dan menjadi sampah (Yasin et al., 2017).
Upaya pemanfaatan sampah organik salah satunya yaitu ekoenzim . Ekoenzim merupakan produk berupa cairan  yang mengandung hasil fermentasi bakteri  pada limbah  kulit  buah  dan  sayur.  Contoh  limbah  kulit  buah  yang  sering  dimanfaatkan menjadi ekoenzim seperti kulit buah nanas, pisang, jeruk manis, jeruk kalamansi dan pepaya  (Surtikanti  et  al.,  2021).  Menurut  Harahap  et  al.,  (2021)  yang  menyatakan bahwa ekoenzim di buat dengan menggunakan limbah kulit buah dan sayur yang di potong-potong,  ditambahkan  dengan  molase  dan  air  dengan  perbandingan  3:1:10, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  wadah  atau  botol  yang  kedap  udara  dan  di fermentasi  selama  3  bulan.  Setelah  3  bulan  ekoenzim  bisa  dimanfaatkan  untuk kebutuhan sehari-hari.
Cairan  ekoenzim  yang  berasal  dai  limbah  sayuran  dan  buah-buahan  seperti jeruk,  nenas,  pepaya,  pisang  dan  buah-buahan  lainnya  diketahui  memiliki  banyak aktivitas  enzim  seperti  lipase,  tripsin,  amilase,  dan  enzim  fosfatase  (Silaban  & Simamora, 2018). Menurut Yasin et al., (2017) menyatakan bahwa enzim merupakan suatu protein aktif sangat banyak dimanfaatkan dalam bidang pangan, kesehatan dan lingkungan  salah  satunya  yaitu    amilase.  Amilase  merupakan  enzim  yang  mampu mengkatalis  proses  hidrolisisis  pati  untuk  menghasilkan  molekul  lebih  sederhana seperti  glukosa,  maltosa,  dan  dekstrin.  Proses  hidrolisa  pati  tersebut  dilakukan melalui tiga tahapan yaitu gelatinisasi, likuifikasi, dan sakarifikasi. Amilase juga telah digunakan  di  berbagai  bidang  industri  seperti  industri  makanan,  alkohol,  gula, industri  tekstil  dan  sirup,  industri  kertas,  industri  deterjen  dan  industri  biodiesel. Cairan ekoenzim dari limbah organik asal kulit nanas, kulit papaya, kulit pisang dan kulit jeruk ini dilaporkan memiliki aktivitas enzim amilase, karena di dalam sampel tersebut  mengandung  karbohidrat  berupa  amilase  yang  merupakan  substrat  untuk enzim  amilase  namun  laporan  terkait  bakteri  ekoenzim  dan  potensinya  sebagai penghasil  amilase  nya  sejauh  ini  belum  dilaporkan  maka  penelitian  ini  perlu dilakukan untuk mengetahui keragaman bakteri ekoenzim pada berbagai limbah kulit buah-buahan dan aktivitas bakterinya dalam menghasilkan enzim amilase.

## METODE Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental,  dilaksanakan  pada  Juli sampai  Desember  2021,  di  Laboratorium  Mikrobiologi,  gedung Basic  Science , Program  Studi  S1  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Bengkulu.

## Isolasi dan Pemurnian Bakteri Ekoenzim
Bakteri ekoenzim diisolasi dari cairan ekoenzim yang berasal dari kulit buah- buahan yaitu kulit jeruk kalamansi, kulit jeruk manis, kulit pisang, kulit pepaya dan kulit nenas dengan campuran air dan gula merah (perbandingan 3:10:1) yang telah difermentasi  selama  3  bulan.  Isolasi  bakteri  ekoenzim  dilakukan  secara  aseptis dengan  metode  pengenceran  berseri  yang  ditumbuhkan  pada  media nutrient  agar (NA) dengan teknik cawan sebar.  Isolat bakteri ekoenzim yang diperoleh  kemudian dimurnikan  untuk  mendapatkan  koloni  tunggal  dengan  cara  memindahkan  koloni bakteri ke cawan Petri yang berisi NA dengan metode gores, kemudian diinkubasi di dalam  inkubator  pada  suhu  27-30 o C  selama  24  jam.  Biakan  murni  bisa  juga didapatkan  dengan  cara  menumbuhkan  isolat  bakteri  di  media  miring  untuk memperbanyak biakan atau sebagai persediaan (Sukmawati & Hardianti, 2018).

## Uji Identifikasi Morfologi Koloni Sel dan Pewarnaan Isolat Bakteri Ekoenzim
Bakteri  yang  tumbuh  di  atas  media,  diamati  karakteristik  morfologinya berdasarkan  bentuk,  penataan,  warna  koloni,  sifat  permukaan,  margin  dan elevasinya. Menurut Fat (2005), bentuk koloni dapat berbeda beda tiap spesies dan merupakan  karakteristik  bagi  suatu  spesies  tertentu.  Pengamatan  tentang karakteristik  morfologi  koloni  bakteri  perlu  dilakukan,  agar  mempermudah  dalam proses  identifikasi  jenis  bakteri  (Fat,  2005).  Tahap  identifikasi  selajutnya  yaitu pewarnaan Gram, menurut Nasution et al., (2017), pengecatan gram merupakan salah satu  cara  yang  bias  dilakukan  untuk  melakukan  identifiksasi  bakteri  dengan  cara melakukan  pengecatan  Gram,  diantara  berbagai  macam  bakteri  yang  dicat,  ada bakteri  yang  bias  menahan  zat  warna  ungu  (kristal  violet)  walaupun  telah didekolorisasi  dengan  alkohol.  Bakteri  yang  tetap  mempertahankan  warna  ungu tergolong  kedalam  bakteri  Gram  positif.  Sebaliknya,  bakteri  yang  telah  dilakukan dekolorisasi  dan  tidak  dapat  menahan  zat  warna  dengan  ciri  berwarna  merah termasuk kedalam keompok bakteri Gram negatif.
Pewarnaan  Gram  dilakukan  dengan  cara  satu  ose  isolat  bakteri  ekoenzim diletakkan pada kaca objek yang sudah dibersihkan menggunakan alkohol. Kemudian ditambahkan  satu  tetes  akuades  dan  difiksasi  di  atas  lampu  spiritus.  Setelah  itu, ditambahkan kristal violet dan didiamkan selama 1 menit. Kemudian diamkan selama 30-60  detik  pada  suhu  kamar  lalu  dicuci  perlahan  dengan  akuades  selama  5  detik. Kemudian  kaca  objek  yang  sudah  terlihat  berwarna  biru  ditetesi  dengan  larutan lugol,  dibiarkan  selama  1-2  menit  pada  suhu  kamar,  kemudian  dicuci  dengan  air mengalir selama 5 detik. Selanjutnya dilakukan dekolorisasi dengan setetes alkohol 95%.  Preparat  dibilas  dengan  air  selama  lima  detik  untuk  menghentikan  aktivitas penghilangan warna. Selanjutnya kaca objek ditetesi safranin dan didiamkan selama 1 menit, kemudian dibilas dengan air secara perlahan selama 5 detik dan dikeringkan di udara. Setelah itu diamati di bawah mikroskop untuk melihat bentuk bakteri pada zat  warna.  Jika  bakteri  terlihat  berwarna  ungu,  itu  menunjukkan  bahwa  bakteri tersebut  adalah  bakteri  gram  positif.  Jika  bakteri  terlihat  merah,  itu  menunjukkan bahwa bakteri tersebut gram negatif (Rahmatullah et al., 2021).

## Uji Aktivitas Enzim Amilase dari Bakteri Ekoenzim
Aktivitas  enzim  amilase  dari  bakteri  ekoenzim  diuji  dengan  menggunakan media  agar-agar  yang  ditambah  dengan  pati  1%  ( starch  agar )  yang  dibuat  secara aseptik.  Kemudian  media  agar-agar  pati  ( starch  agar )  dituangkan  ke  dalam  cawan
Petri  dan  1  lup  ose  bakteri  ekoenzim  diinokulasikan  ke  atas  media  dan  kemudian diinkubasi  selama  48  jam  pada  suhu  37 o C.  Hidrolisis  pati  divisualisasikan  sebagai zona  bening  yang  terbentuk  dari  hasil  hidrolisis  pati  di  sekitar  koloni  bakteri ekoenzim setelah ditetesi dengan dengan larutan indikator yodium (I 2 ) (Algofar et al., 2021).  Diameter  zona  bening  diukur  untuk  menentukan  indeks  hidrolisis  pati  yang idhasilkan dari tiap isolat penghasil amilase.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Bakteri Hasil Isolasi dari Cairan Fermentatif Ekoenzim
Isolasi  bakteri  dilakukan  dari  cairan  fermentatif  ekoenzim  yang  berasal  dari limbah  buah – buahan  yang  masing-masing  terdiri  dari  kulit  nanas,  kulit  jeruk kalamansi, kulit jeruk manis, kulit pisang, dan kulit pepaya dengan campuran air dan gula merah dengan perbandingan 3:10:1. Isolat bakteri yang tumbuh pada media NA setelah  masa  inkubasi  48  jam  pada  suhu  29 o C  kemudian  dilakukan  penghitungan koloni  dengan  menggunakan colony  counter .  Hasil  penghitungan  jumlah  koloni bakteri disajikan pada tabel 1.
Tabel 1. Data total koloni bakteri ekoenzim dari berbagai limbah kulit buah-buahan yang diisolasi pada media NA
No Sumber Ekoenzim Pengenceran Jumlah isolat yang diambil 10 -3 10 -5 1 Nanas TBUD 253 7 2 Jeruk manis TBUD 220 8 3 Jeruk kalamansi TBUD 265 6 4 Pisang 292 250 9 5 Pepaya 229 148 8 Total koloni yang dimurnikan 39 isolat
Keterangan TBUD: koloni bakteri terlalu banyak untuk dihitung
Dari hasil pegenceran secara bertingkat didapatkan jumlah isolat seperti pada tabel 1, sampel ekoenzim dari kulit nanas, kulit jeruk manis dan kulit jeruk kalamansi pada  pengenceran  10 -3 memiliki  perhitungan  TBUD  yaitu  terlalu  banyak  untuk dihitung  yaitu  koloni  sampel  melebihi  ambang  batas  maksimum  standar penghitungan analisis penghitungan lempeng total  atau total plate count (TPC), yang melebihi  batas  maksimumnya  yaitu  300  cfu/g,  sedangkan  pada  pengenceran  10 -5 jumlah koloni bakteri tiap sampel masih bisa dihitung karena belum mencapai batas maksimum  standar  perhitungan  analisis total  plate  count .  Koloni  mikroba  yang tumbuh  pada  tiap  cawan  sampel  dihitung  dengan  menggunakan  colony  counter, jumlah  koloni  mikroba  yang  dianalisis  ialah  rentang  jumlah  anatara  30-300  koloni cfu/g (Sukmawati and Hardianti, 2018). Jika jumlah koloni tiap sampel lebih dari 300 cfu/g dikategorikan turbidimetri (TBUD) Sebaran jumlah koloni tiap sampel dan tiap faktor pengenceran menunjukkan adanya keragaman data yang seragam dan sesuai prinsip  faktor  pengenceran,  yang  mana  semakin  tinggi  faktor  pengenceran  maka semakin rendah jumlah koloni mikroba atau faktor pengenceran berbanding terbalik dengan jumlah koloni mikroba (Sukmawati & Hardianti, 2018).

## Pemurnian isolat bakteri ekoenzim
Isolat bakteri ekoenzim yang diperoleh dari  cairan ekoenzim yaitu sebanyak 39  isolat  bakteri  yang  berasal  dari  limbah  kulit  buah – buahan  yang  terdiri  dari  7 isolat  ekoenzim  nanas,  6  isolat  ekoenzim  jeruk  kalamansi,  8  isolat  ekoenzim  jeruk manis, 9 isolat ekoenzim pisang, dan 8 isolat ekoenzim pepaya (tabel 1) . Isolat-isolat
ini dipilih berdasarkan perbedaan karakter morfologi, dominansi dan ukuran tumbuh koloni  bakteri.  Kemudian  koloni  bakteri  diremajakan  dan  dimurnikan  dengan menggunakan metode gores kuadran dan diinkubasi selama 2 x 24 jam. Peremajaan dan pemurnian isolat bakteri Ekoenzim hasil isolasi metode tanam pada gambar 1.
Gambar 1. Pemurnian isolat bakteri ekoenzim dari limbah buah – buahan, ENS: Ekoenzim Nanas,  EJK:  Ekoenzim  Jeruk  Kalamansi,  EJM:  Ekoenzim  Jeruk  Manis,  EPS: Ekoenzim Pisang, dan EPY: Ekoenzim Pepaya

## Identifikasi Morfologi Bakteri ekoenzim
Selanjutnya  isolat  bakteri  Ekoenzim  yang  tumbuh  dilakukan  pengamatan terhadap  karakter  morfologi  dengan  melihat  karakter  pada  masing-masing  koloni seperti  permukaan  koloni,  elevasi,  tepi  koloni,  penampakan  dan  warna  tiap  koloni yang  dihasilkan  dari  bakteri  ekoenzim  seperti  yang  disajikan  pada  tabel  2.  Masing- masing isolat bakteri ekoenzim memiliki karakter morfologi yang berbeda-beda.
Warna isolat bakteri yang ditemukan bervariasi yaitu dominansi warna putih sebanyak  22    isolat,  warna  krem  sebanyak  8  isolat  dan  warna  kuning  sebanyak  9 isolat.  Arun  &  Sivashanmugam  (2015)  menyatakan  bahwa  warna  bakteri  pada ekoenzim  didominasi  oleh  warna  putih.  Setelah  dilakukan  pengamatan  mofologi koloni selanjutnya dilakukan identifikasi dengan pewarnaan Gram untuk mengetahui jenis Gram bakteri ekoenzim, dari total 39 isolat ekoenzim, 19 isolat bakteri termasuk
jenis bakteri Gram positif dan 20 isolat bakteri termasuk ke dalam jenis Gram negatif.
Tabel  1. Karakter  morfologi  isolat  bakteri  ekoenzim  yang  diisoalsi  dari  cairan ekoenzim yang berasal dari limbah kulit buah-buahan.
No Pengamatan Morfologi Koloni Kode Isolat Gram  Permukaan Elevasi Penampakan Tepi Warna 1. ENS 1 + Wrinkled Umbonate Irregular Undulate Putih 2. ENS 2 - Wrinkled Umbonate Irregular Lobate Putih 3. ENS 3 + Radiated Flat Circular Lobate Putih 4. ENS 4 - Smooth Flat Irregular Lobate Putih 5. ENS 5 - Smooth Flat Pintpoint Serrated Kuning 6. ENS 6 + Wrinkled Umbonate Irregular Lobate Putih 7. ENS 7 - Smooth Flat Pinpoint Entire Kuning 8. EJK 8 - Smooth Flat Pinpoint Entire Kuning 9. EJK 9 + Wrinkled Umbonated Irregular Undulated Putih 10. EJK 10 - Smooth Flat Pintpoint Serrated Kuning 11. EJK 11 - Wrinkled Flat Circular Undulated Putih 12. EJK 12 - Smooth Flat Circular Entire Krem 13. EJM 13 + Wrinkled Umbonated Irregular Lobate Putih 14. EJM 14 + Smooth Convex Circular Entire Krem 15. EJM 15 + Wrinkled Flat Irregular Lobate Putih 16. EJM 16 + Smooth Flat Circular Entire Putih 17. EJM 17 - Smooth Flat Circular Entire Kuning 18. EJM 18 + Smooth Flat Circular Entire Putih 19. EJM 19 + Smooth Flat Circular Entire Krem 20. EJM 20 + Wrinkled Umbonated Irregular Lobate Putih 21. EPS 21 + Wrinkled Umbonated Irregular Lobate Putih 22. EPS 22 + Wrinkled Umbonated Irregular Serated Putih 23. EPS 23 - Wrinkled Umbonated Irregular Lobate Putih 24. EPS 24 - Smooth Flat Circular Entire Kuning 25. EPS 25 - Wrinkled Umbonated Irregular Serated Putih 26. EPS 26 + Smooth Flat Circular Entire Putih 27. EPS 27 - Smooth Flat Pinpoint Entire Kuning 28. EPS 28 + Smooth Flat Circular Entire Putih 29. EPS 29 - Smooth Flat Pintpoint Entire Kuning 30. EPY 30 - Smooth Flat Circular Entire Krem 31. EPY 31 - Smooth Flat Circular Entire Kuning 32. EPY 32 - Wrinkled Umbonated Circular Lobate Putih 33. EPY 33 + Smooth Convex Circular Entire Krem 34. EPY 34 + Smooth Convex Circular Entire Krem 35. EPY 35 + Wrinkled Umbonated Irregular Lobate Putih 36. EPY 36 - Smooth Convex Circular Entire Krem 37. EPY 37 + Smooth Convex Circular Entire Krem 38. EPY 38 - Wrinkled Umbonate Irregular Lobate Putih 39. EJK 39 - Smooth Flat Circular Entire Putih Keterangan : ENS : Ekoenzim Nanas                      EJM : Ekoenzim Jeruk Manis
EJK : Ekoenzim Jeruk Kalamansi      EPS : Ekoenzim Pisang EPY : Ekoenzim Pepaya

## Uji aktivitas enzim Amilase secara kualitatif
Uji  aktivitas  amilase  secara  kualitatif  dilakukan  untuk  mengetahui kemampuan  bakteri  dalam  menghasilkan  enzim  amilase,  hasil  uji  divisualisasikan dengan terbentuknya zona bening di sekitar koloni bakteri yang telah diberi larutan lugol  atau  iodin.  Dari  39  isolat  bakteri  ekoenzim  yang  diuji  total  31  bakteri menhasilkan uji positif amilase ditandai dengan terbentuknya zona bening di sekitar
isolat  bakteri  (gambar  2),  sedangkan  8  isolat  lainnya  menghasilkan  uji  negatif amilase.
Gambar  2. Zona  bening  yang  terbentuk  dari  hidrolisis  pati  pada  media  pati  ( starch  agar ) dari beberapa isolat bakteri ekoenzim penghasil amilase setelah diinkubasi 24 jam pada suhu ruang setelah ditetesi dengan larutan indikator lugol/iodin
Bakteri  ekoenzim  yang  dapat  menghasilkan  amilase  ditandai  dengan terbentuknya  zona  bening  di  sekitar  koloni  bakteri  yang  ditumbuhkan  pada  media agar pati ( starch agar ) dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu ruang setelah ditetesi dengan larutan iodin sebagai indikator (gambar 2). Setelah pengamatan secara visual selanjutnya  dilakukan  pengukuran  zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar  isolat bakteri untuk mengetahui indeks hidrolisis pati seperti yang dapat dilihat pada tabel 3.
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  terdapat  39  isolat  bakteri  yang berhasil  dimurnikan  berdasarkan  ciri  morfologinya.  Bakteri  ekoenzim  mampu menguraikan  senyawa  organik  kompleks  baik  yang  mengandung  unsur  C,  H,  dan  N menjadi  senyawa  yang  lebih  sederhana  karena  mampu  menghasilkan  enzim ekstraseluler  (Basitoh  et  al.,  2018).  Hal  tersebut  sejalan  dengan  pernyataan Mutiarahmi et al., (2021) yang menyatakan bahwa bakteri menggunakan nutrisi yang terdapat  pada  lingkungan  hidupnya  melalui  berbagai  aktivitas  biokimia.  Pati  atau amilum  merupakan  salah  satu  zat  organik  yang  terdapat  di  dalam  ekoenzim.  Pati merupakan cadangan makanan pada bagian sel tumbuhan yang berbentuk butiran di terdiri  dari  amilopektin  dan  amilosa  (Choirunnisa  et  al.  2018).  Struktur  kimia molekul pati merupakan polimer dengan ikatan -1-4 glukopiranosa dengan cabang - 1-6  (Hardi  et  al.  2018).  Pada  cairan  ekoenzim,  bakteri  amilolitik  berperan  dalam mendegradasi pati menjadi senyawa yang lebih kompleks sederhana (Idris, 2016).
Hasil  pengujian  aktivitas  amilase  menunjukkan    bahwa  34  isolat  bakteri mempunyai hasil positif menghasilkan amilase dengan kode isolat ENS 1, ENS 2, ENS 3, ENS 4, ENS 5, ENS 6, ENS 7, EJK 8, EJK 9, EJK 11,EJK 12, EJM 13, EJM 14, EJM 15, EJM 16, EJM 17, EJM 19, EPS 21, EPS 22, EPS 23, EPS 24, EPS 25, EPS 26, EPS 27, EPS 28, EPS 29, EPS 30, EPY 31, EPY 32, EPY 34, EPY 36, EPY 38 dan EJK 38.
Tabel 3. Hasil pengukuran aktivitas amilase secara kualitatif dari bakteri ekoenzim No Kode Isolat Rata-rata diameter zona bening (mm) ± SD No  Kode Isolat Rata-rata diameter zona bening (mm) ± SD 1 ENS 1 15,15 ± 0,15 21  EPS 21 16,30 ± 0,10 2 ENS 2 14,50 ± 0,40 22  EPS 22 14,70 ± 0,90 3 ENS 3 24,00 ± 1,00 23  EPS 23 19,00 ± 0,80 4 ENS 4 22,70 ± 0,10 24  EPS 24 16,30 ± 0,10 5 ENS 5 12,30 ± 0,10 25  EPS 25 13,75 ± 0,05 6 ENS 6 16,85 ± 0,25 26  EPS 26 18,00 ± 0,50 7 ENS 7 13,30 ± 0,20 27  EPS 27 12,95 ± 0,05 8 EJK 8 14,55 ± 0,05 28  EPS 28 21,45 ± 0,35 9 EJK 9 13,45 ± 0,05 29  EPS 29 15,50 ± 0,10 10 EJK 10 0,00 ± 0,00 30  EPY 30 13,35 ± 0,35 11 EJK 11 20,05 ± 0,05 31  EPY 31 9,45  ± 0,45 12 EJK 12 15,25 ± 0,05 32  EPY 32 15,80 ± 0,50 13 EJM 13 15,20 ± 0,00 33  EPY 33 0,00 ± 0,00 14 EJM 14 14,95 ± 0,05 34  EPY 34 11,80 ± 0,40 15 EJM 15 23,65 ± 0,35 35  EPY 35 0,00 ± 0,00 16 EJM 16 15,35 ± 0,05 36  EPY 36 13,35 ± 0,35 17 EJM 17 14,95 ± 0,15 37  EPY 37 0,00 ± 0,00 18 EJM 18 0,00 ± 0,00 38  EPY 38 18,15 ± 0,05 19 EJM 19 13,85 ± 0,05 39  EJK 39 22,45 ± 0,45 20 EJM 20 0,00 ± 0,00
Sedangkan uji negatif hidrolisis pati terdapat pada 5 isolat bakteri, antara  EJK 10,  EJM  20,  EPY  33,  EPY  35  dan  EPY  37  hal  tersebut  ditandai  dengan  tidak terbentuknya  zona  bening  disekitar  bakteri  ekoenzim,  hal  tersebut  menandakan bahwa bakteri tersebut tidak mampu menghidrolisis pati. Berdasarkan diameter zona bening  yang  mampu  dihasilkan  oleh  bakteri  ekoenzim,  sebanyak  34  isolat  bakteri mempunyai rata-rata diameter berbeda-beda, hak  tersebut dikarenakan, perbedaan kemampuan  bakteri  ekoenzim  dalam  menghidrolisis  pati.  Diameter  terbesar  pada bakteri  ekoenzim  dihasilkan  oleh  isolat  bakteri  dengan  kode  EJM    15  dan  diameter zona bening yang paling kecil dihasilkan oleh isolat bakteri dengan kode EPY 31.
Bakteri  amilolitik  adalah  bakteri  yang  mampu  mendegradasi  pati  menjadi senyawa hanya dengan memproduksi enzim amilase (Idris, 2016). Salah satu contoh bakteri amilolitik  yang bisa diisolasi  yaitu bakteri ekoenzim.  Enzim yang dihasilkan oleh  bakteri  amilolitik  untuk  mendegradasi  pati  umumnya  adalah  enzim ekstraseluler.  Enzim  ekstraseluler  adalah  enzim  yang  diproduksi  di  dalam  sel  dan kemudian  dilepaskan  keluar  dari  sel  (Basitoh  et  al.,  2018).  Ada  3  jenis  enzim  yang dapat  dihasilkan  oleh  bakteri  amilolitik  yaitu  α - amilase,  β - amilase  dan  γ -amilase, enzim amilase yang dihasilkan oleh bakteri amilolitik bekerja sebagai biokatalis pada hidrolisis pati menjadi glukosa, maltosa dan dekstrin (Basitoh et al. 2018). Setiap  isolat  bakteri  ekoenzim  memiliki  kemampuan  yang  berbeda  untuk menghidrolisis  pati  (Basitoh  et  al.  2018).  Untuk  mengetahui  kemampuan  indeks hidrolisis pati suatu bakteri dapat menggunakan media selektif yaitu media pati agar (Setiarto et al., 2015). Medium pati agar terdiri dari nutrient agar + 1% pati (Algofar et  al.  2021).  Isolat  bakteri  yang  telah  dimurnikan  diinokulasikan  pada  media  pati kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  1  x  24  jam.  Media starch    agar yang
telah ditumbuhi bakteri diteteskan dengan larutan iodium (Munif et al., 2016). Isolat bakteri  yang  bersifat  amilolitik  positif  akan  menghasilkan  zona  bening  di  sekitar koloni  bakteri  setelah  ditetesi  oleh  larutan  yodium,  dan  jika  media  bewarna  hitam menunjukkan  bahwa  tidak  terjadi  proses  hidrolisis  pati  (Ulfa,  Suarsini,  and  Henie 2016).  Warna  biru-hitam  pada  medium  disebabkan  oleh  molekul  yodium  yang menyerap  ke  dalam  molekul  pati  yang  membentuk  pati  beriodium  (Fitri  &  Yasmin, 2011). Apabila amilum pada media telah terhidrolisis maka tidak akan terjadi ikatan iodium-amilum sehingga akan terbentuk zona bening pada media.
Bakteri  ekoenzim  dalam  mendegradasi  pati  di  dalam  cairan  ekoenzim dilakukan  secara  bertahap.  Pati  tidak  langsung  dapat  diubah  menjadi  glukosa  oleh enzim amilase yang dihasilkan oleh bakteri. Awalnya pati akan dihidrolisis menjadi senyawa  dekstrin  berupa  polisakarida.  pembentukan  glukosa  dan  maltosa  sebagai produk akhir yang terjadi secara acak. Sedangkan cara kerja  -amilase pada molekul amilopektin  akan  menghasilkan  glukosa,  maltosa,  dan  -limit  dekstrin.  Jenis  limit dekstrin  adalah  oligosakarida  yang  terdiri  dari  4  atau  lebih  residu  gula  yang mengandung ikatan -1,6 (Risnoyatiningsih, 2011).
Salah  satu  manfaat  bakteri  amilolitik  dalam  dunia  industri,  digunakan  untuk menghasilkan enzim Amilase. Enzim amilase memiliki peran yang luas dalam bidang makanan  dan  industri.  Enzim  amilase  yang  dihasilkan  oleh  mikroba  salah  satunya bakteri mampu menggantikan berbagai proses kimia di industri yang lebih efektif dan ramah  (Setiarto  et  al.,  2015).  Enzim  amilase  di  sektor  makanan  digunakan  untuk menghasilkan sirup glukosa, sirup jagung fruktosa tinggi dan sirup maltosa  (Basitoh et al. 2018). Industri lain memanfaatkan enzim amilase dalam proses produksi tekstil, kertas dan deterjen (Silaban & Simamora, 2018).

## SIMPULAN
Total sebanyak 39 isolat bakteri ekoenzim berhasil diisolasi dan dimurnikan pada  media nutrient  agar (NA)  dan  diidentifikasi  secara  morfologi  dan  pewarnaan Gram.  34  isolat  diantaranya  menunjukkan  aktivitas  amilolitik  positif    yang  mampu menghidrolisis  pati  pada  media  pati  ( starch  agar ).  Masing-masing  isolat  bakteri memiliki nilai indeks hidrolisis  pati yang berbeda-beda yaitu berkisar antara 9.45 – 23.65. Nilai indeks diameter zona bening dari hidrolisis amilum tertinggi dimiliki oleh isolat    EJM  15.  Potensi  bakteri  ekoenzim  penghasil  amilase  ini  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  seperti  identifikasi  molekuler  dan  biokimianya  untuk mengetahui  jenis  dan  spesies  bakteri  serta  pengujian  kuantitatif  untuk  mengetahui unit aktivitas enzim amilase yang dihasilkan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Lembaga  Penelitian  dan Pengabdian  pada  Masyarakat  (LPPM)  Universitas  Bengkulu  yang  telah  mendanai penelitian  ini  melalui  pendanaan  Skema  Penelitian  MANDAT/PENUGASAN  dengan nomor kontrak: 1854/UN30.15/PG/2021 atas nama ketua Risky Hadi Wibowo.

## REFERENSI
Algofar, M. A. A., Rosmansyah, F. S., Rum, I. A., Muhsinin, S., & Fatmawati, F. (2021). “Study  Α -Amilase  Dari  Mikroba  Serta  Pemanfaatanya  Dalam  Pembuatan Maltodekstrin.” Indonesia Natural Research Pharmaceutical Journal 6(1), 102 – 17.
DOI: https://doi.org/10.52447/inrpj.v6i1.4517. Arun,  C.,  &  Sivashanmugam,  P.  (2015) .  “Investigation  of  Biocata lytic  Potential  of Garbage Enzyme and Its Influence on Stabilization of Industrial Waste Activated Sludge.” Process  Safety  and  Environmental  Protection 94(C),  471 – 78.  doi: 10.1016/j.psep.2014.10.008.
Basitoh,  Y.  K.,  Suarsini,  E.,  &  Prabaningtyas,  S.  (2018).  Eksplorasi  Bakteri  Amilolitik Potensial dari Ranu Pani, Ranu Regulo, Ranu Grati dan Telaga Ngebe.” Jurnal Ilmu Hayat 3(2), 52 – 63. http://journal2.um.ac.id/index.php/jih/article/view/22595.
Choirunnisa, H. N., Sari, R. Y., Hastuti, U. S., & Witjoro, A. W. (2018) . “Identifikasi Dan Uji Kemampuan Hidrolisis Pada Bakteri Amilolitik Dan Proteolitik Yang Diisolasi Dari  Wadi,  Makanan  Khas  Kalimantan  Tengah.” Bionature 18(2),  99 – 109.  doi: 10.35580/bionature.v18i2.6138.
Damayanti, S. S., Komala, O., & Effendi, E. M. (2020). Identifikasi Bakteri Dari Pupuk
Organik Cair Isi Rumen Sapi. Ekologia 18(2), 63 – 71. doi: 10.33751/ekol.v18i2.1627.
Fat,  A.  G.  (2005) .  “Revista  Brasileira  de  Ciências  Farmacêuticas  Publicações  Novas/ New Publications Ciência E Tecnologia De Alimentos.” 41 , 2005. Fitri,  Lenni,  &  Yasmin,  Y.  (2011).  Morfologi  Koloni  Bakteri  Kitinolitik. Ilmiah Pendidikan  Biologi 3(2),  20 – 25.  http://uilis.unsyiah.ac.id/unsyiana/items/ show/3158.
Harahap, R. G., Nurmawati, Dianiswara, A., & Putri, D. L. (2021). Pelatihan Pembuatan Eco-Enzyme  Sebagai  Alternatif  Desinfektan  Alami  Di  Masa  Pandemi  Covid-19 Bagi  Warga  Km.  15  Kelurahan  Karang  Joang. Sinar  Sang  Surya:  Jurnal  Pusat Pengabdian Kepada Masyarakat 5(1), 67 – 73. doi.org/10.24127/sss.v5i1.1505. Hardi, Handayani, E., Nugroho, R. A., Saptiani, G., Sarinah, R., Agriandini, M, & Mawardi M.  (2018).  Identification  of  Potentially  Pathogenic  Bacteria  from  Tilapia ( Oreochromis  Niloticus )  and  Channel  Catfish  ( Clarias  Batrachus )  Culture  in Samarinda,  East  Kalimantan,  Indonesia. Biodiversitas 19(2),  480 – 88.  doi: 10.13057/biodiv/d190215.
Herawati,  H.  (2016).  Potensi  Pengembangan  Produk  Pati  Tahan  Cerna  Sebagai Pangan  Fungsional. Jurnal  Penelitian  Dan  Pengembangan  Pertanian 30(1),  31 – 39. doi: http://dx.doi.org/10.21082/jp3.v30n1.2011.p31-39.
Idris,  H.  (2016).  Tanaman  Kecubung  ( Datura  Metel L.)  Sebagai  Bahan  Baku Insektisida Botanis Untuk Mengendalikan Hama Aspidomorpha Milliaris F. Jurnal Penelitian Tanaman Industri 21(1), 41. doi: 10.21082/littri.v21n1.2015.41-46.
Munif, A., Wiyono, S., &  Suwarno. (2016) . “Isolasi Bakteri Endofit Asal Padi Gogo Dan Potensinya  Sebagai  Agens  Biokontrol  Dan  Pemacu  Pertumbuhan.” Jurnal Fitopatologi Indonesia 8(3), 57 – 64. doi: 10.14692/jfi.8.3.57.
Mutiarahmi,  C.  N.,  Hartady,  T.,  &  Lesmana  R.  (2021).  Use  of  Mice  As  Experimental Animals  in  Laboratories  That  Refer  To  the  Principles  of  Animal  Welfare:  A Literature  Review.” Indonesia  Medicus  Veterinus 10(1),  134 – 45.  doi: 10.19087/imv.2020.10.1.134.
Nasution, P. A.,  Annisah & Thasmi C. N. (2017). Total Bakteri Asam Laktat (BAL) Pada Caecum Puyuh ( Coturnix Japonica ). Jimvet 01(4):774 – 79. DOI: https://doi.org/10.21157/jim%20vet..v1i4.5470.
Rahmatullah,  W.,  Novianti  E.,  &  Sari,  A.  D.  L.  (2021).  Identifikasi  Bakteri  Udara Menggunakan  Teknik  Pewarnaan  Gram. Jurnal  Ilmu  Kesehatan  Bhakti  Setya Medika 6(2),
84 – 92. https://www.poltekkes-bsi.ac.id/jurnal
/index.php/bsm/article/view/62.
Risnoyatiningsih, S. (2011) . “Hidrolisis Pati Ubi Jalar Kuning Menjadi Glukosa Secara Enzimatis.” Jurnal  Teknik  Kimia 5(2),  417 – 24.  http://ejournal.upnjatim.ac.id/ index.php/tekkim/article/view/146.
Silaban,  S.,  &  Simamora,  P.  (2018) .  “Isolasi  Dan  Karakterisasi  Bakteri  Penghasil Amilase  Dari  Sampel  Air  Tawar  Danau  Toba.” Edu  Chemia  (Jurnal  Kimia  Dan Pendidikan) 3(2), 222. doi: 10.30870/educhemia.v3i2.3438.
Sukmawati  &  Hardianti.,  F.  (2018) .  “Analisis  Total  Plate  Count  (TPC)  Mikroba  Pa da Ikan  Asin  Kakap  Di  Kota  Sorong  Papua  Barat.” Jurnal  Biodjati 3(1),  72.  doi: 10.15575/biodjati.v3i1.2368.
Ulfa,  Atiqa,  Endang  Suarsini,  and  Mimien  Henie.  (2016).  Isolation  and  Mercury Sensitivity Test of Bacterias Isolated from Waste Disposal in Gold Mining Area in West S.” Proceeding Biology Education  Conference Pendidikan Biologi FKIP UNS 13(1), 793 – 99.
Yasin,  M. N., Astuti, A., & Gunawan, R. (2017) . “Screening Bakteri Penghasil Amilase Dari  Sedimen  Sumber  Air  Panas  Dondang  Muara  Jawa  Screening  Amilase Producing  Bacteria  From  Dondang  Hot  Springs  Sediment  Muara  Jawa.” Jurnal Atomik 02(2), 213 – 15. http://jurnal.kimia.fmipa.unmul.ac.id/index.php/ JA/article/view/487/322.