## PEKTIN HIDROLASE EKSTRASELULER BAKTERI PEKTINOLITIK DALAM KLARIFIKASI JUS JERUK
ISOLATION AND CHARACTERIZATION EXTRACELLULER PECTIN HYDROLASE OF PECTINOLYTIC BACTERIA FOR CITRUS JUICE CLARIFICATION
Esti Widowati 1) , Harijono 2) , Aji Sutrisno 2)
1) Staf Pengajar Program Studi ilmu dan Teknologi Pangan Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret
2) Staf Pengajar Jurusan Teknologi Hasil Pertanian Universitas Brawijaya

## ABSTRACT
The aims of this research were to obtain and characterize pectinolytic bacteria isolate from vegetable waste,  citrus  peel  and  soil,  determine  enzyme  characters  (optimum  pH  and  temperature,  K M and  V maks )  and reveal  the  influence  of  enzyme  in  the  citrus  juice  clarification.  The  research  was  conducted  in  two  stages. Isolation and characterization of isolate from vegetable waste, citrus peel and soil and screening isolate were the  first  stage of  the  research. Isolation, presipitation,  dialysis  and  determination  of  pectin  hydrolase  enzyme characters (optimum pH and temperature, K M and V maks ) were the second stage of the research. Isolate 15 was the isolate from dari citrus peel with incubation temperature at 37°C and isolate 19 and 21 from mix of citrus peel  and  soil  with  incubation  temperature  in  part  50°C  and  55°C.  Screening  isolates  results  came  out  with isolates  15,  19  and  21  responded  with  rod-shaped,  Gram  positive,  positive  catalase  and  motile.  Isolate  15 responded  positive  to  MR-VP  test,  positive  to  Simmon`s  Citrate  test  and  nonsporing.  Isolate  19  responded positive  to  VP  test,  negative  to  Simmon`s  Citrate  test  and  sporing  with  terminal  type.  Isolate  21  responded positive to VP test, negative to Simmon`s Citrate test and non sporing. Isolate 19 was proven to be Bacillus sp. Pectic hydrolase extracelluler enzyme of isolate 15 had optimum pH at 4,0 whereas isolate 19 and 21 optimum at pH 5,0. Enzyme from isolates 15, 19 and 21 had optimum temperature at 50 C. K M value of isolate 15, 19 and 21 were 0,121; 0,126 and 0,182 mg/ml. V maks value of isolate 15, 19 and 21 were 0,550; 0,541 and 0,601 U/ml. Enzymes from isolate  15, 19 and 21 was able to reduce citrus juice  viscosity, increased citrus  juice clearness and increased total soluble solute of citrus juice and 1% pectin broth.
Keywords : Clarification, Extracellular pectin hydrolase, Pectinolytic

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memperoleh  dan  mengkarakterisasi  isolat  bakteri  pektinolitik  dari sampah  sayuran,  kulit  buah  jeruk  dan  tanah;  menentukan  karakter  enzim  pektin  hidrolase  ekstraseluler  (pH optimum, suhu optimum, K M dan V maks ) dan mengetahui pengaruh enzim pektin hidrolase ekstraseluler dalam klarifikasi  jus  jeruk.  Penelitian  tahap  I  dilakukan  isolasi  dan  karakterisasi  bakteri  dan  seleksi  bakteri  uji. Penelitian tahap II dilakukan ekstraksi, presipitasi, dialisis dan karakterisasi enzim pektin hidrolase ekstraseluler (pH  dan suhu optimum, V maks dan K M ). Hasil seleksi isolat uji  diperoleh isolat 15 hasil isolasi dari kulit buah jeruk yang dibusukkan suhu inkubasi 37°C dan isolat 19 dan 21 dari sampel kulit jeruk dicampur tanah dengan suhu inkubasi masing-masing 50°C dan 55°C. Isolat 15 berbentuk batang pendek, Gram positif,  katalase positif dan motil. Isolat 15 positif uji MR-VP, positif uji Simmon`s Citrate dan tidak membentuk endospora. Isolat 19 positif uji VP, negatif uji Simmon`s Citrate dan membentuk endospora dengan tipe terminal. Isolat 21 positif uji VP, negatif uji Simmon`s Citrate dan tidak membentuk endospora. Isolat 19 diduga merupakan genus Bacillus . Enzim pektin hidrolase ekstraseluler isolat 15 memiliki pH optimum 4,0 sedangkan pH optimum enzim isolat 19 dan 21 adalah 5,0. Ketiga isolat memiliki suhu optimum enzim 50 C. Nilai K M enzim isolat 15, 19 dan 21 adalah 0,121;  0,126  dan  0,182 mg/ml  dengan nilai  V maks enzim  isolat  15,  19  dan  21  sebesar  0,550;  0,541  dan  0,601 (U/ml).  Enzim  isolat  15,  19  dan  21  mampu  menurunkan  viskositas,  meningkatkan  kecerahan  jus  melalui peningkatan nilai transmitansi dan meningkatkan nilai total padatan terlarut pada jus jeruk dan pektin cair 1%.
Kata Kunci : klarifikasi, pektin hidrolase ekstraseluler, pektinolitik

## PENDAHULUAN
Jus  jeruk  merupakan  suspensi koloid dari pektin,  gula,  protein  dan  mineral.  Molekul- molekul  tersebut  menyebabkan  kekeruhan dan  viskositas  yang  tinggi  pada  jus  jeruk (Benitez and Lozano, 2006).
Klarifikasi  jus  jeruk  dapat  dilakukan dengan  filtrasi  atau  sentrifugasi  untuk mengendapkan  pulp.  Pektin  larut  air  dalam jus jeruk masih menyebabkan kekeruhan dan dapat  menyumbat  pori  membran  filter sehingga  menghambat  proses  klarifikasi
(Pilnik and Voragen, 1993). Oleh karena  itu diperlukan enzim pektinase.
Mekanisme  klarifikasi  jus  jeruk  dengan keterlibatan enzim dilakukan dengan memperkecil molekul pektin menjadi senyawa  pektat  yang  larut  air  sehingga viskositas  jus  menurun (Pilnik and Voragen, 1993).  Selain  itu  melalui  mekanisme pengendapan agregat (de Man, 1997). Enzim  pektinase  yang  berperan  dalam klarifikasi  jus  dapat  diperoleh  dari  tanaman maupun mikroorganisme. Keunggulan bakteri  antara  lain  bakteri  memiliki  laju pertumbuhan  sel  yang  cepat,  mudah dibiakkan pada kondisi  nutrisi, suhu dan pH yang bervariasi dan kemampuan membentuk endospora. Eksplorasi bakteri sebagai sumber enzim  pektinase  terutama  dari  daerah  tropis belum banyak dilakukan.
Sumber  pektin  yang  melimpah  seperti sampah  sayuran  dan  kulit  buah  jeruk  belum dimanfaatkan secara maksimal untuk memperoleh isolat pektinolitik yang mensekresikan  enzim  pektin  hidrolase ekstraseluler yang optimum dan stabil dalam proses  klarifikasi  jus  jeruk.  Berdasarkan asumsi  tersebut  maka  penelitian  ini memanfaatkan  sampah  organik  pasar  untuk seleksi  isolat  pektinolitik  yang  mampu berperan dalam klarifikasi jus jeruk. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh  dan  mengkarakterisasi  isolat bakteri  pektinolitik  dari  sampah  sayuran, kulit  buah  jeruk  dan  tanah;  menentukan karakter enzim pektin hidrolase ekstraseluler (pH optimum, suhu optimum, K M dan V maks ) dan    mengetahui  pengaruh  enzim  pektin hidrolase  ekstraseluler  dalam  klarifikasi  jus jeruk.

## METODE PENELITIAN
Penelitian Tahap I Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Pektinolitik (Holt et al , 1994; Yuwono dan Susanto,  2001;  Benson,  2002)  dan  Seleksi Isolat  Uji  (Fonseca  dan  Said,  1994; Ordonez et al , 1998; Barense et al , 2001)
Sampel  yang  digunakan  adalah  kulit jeruk dicampur tanah kebun didekat tanaman lapuk yang selalu tersinari matahari langsung
(1:1)  (sampel  I),  sayuran  (sampel  II)  dan kulit  jeruk  (sampel  III).  Seluruh  sampel didiamkan  selama  5  hari  dalam  kantung plastik  hitam  terbuka  di  dalam  ruangan. Sampel kemudian dihaluskan dengan blender steril.  Sampel  masing-masing  ditimbang tepat  sebanyak  5  g.  Seri  pengenceran dilakukan dari 10 -1 -10 -6 menggunakan media pektin agar (ekstrak khamir 1,0 g; Na 2 HPO 4 0,9  g;  KH 2 PO 4 1,0  g;  MgSO 4 .7H 2 O  0,5  g; KCl  0,2  g;  pektin  citrus  1,0  g  dan bacteriological agar 15 g dalam 1 L) sebagai media  selektif  bakteri  pektinolitik.    Inkubasi dilakukan  pada  suhu  37 C,  40 C,  50 C  dan 55 C  selama  24  jam.  Morfologi  koloni bakteri  diamati  berdasarkan  bentuk,  tepian, elevasi,  struktur  dalam,  warna  dan  diameter. Koloni  yang  tumbuh  kemudian  dimurnikan. Preservasi  isolat  dilakukan  dalam  media pektin  agar  miring  dan  dalam  gliserol  12% pada suhu 4 C.
Karakterisasi  isolat  bakteri  dilakukan berdasarkan  morfologi  koloni  dan  morfologi sel  meliputi  pewarnaan  Gram,  pewarnaan endospora dan pengukuran sel. Uji fisiologis dilakukan  dengan  uji  motilitas.  Uji  biokimia dilakukan  dengan  uji  katalase,  uji  MR-VP dan uji Simmon`s citrate.
Seleksi  isolat  uji  dilakukan  berdasarkan jumlah  sel/ml,  aktivitas  enzim  (U/ml) menggunakan  metode  DNS  berdasarkan kurva standar asam D-galakturonat 100 ppm dan  klarifikasi  jus  jeruk  keprok  (viskositas, %T  dan  Total  Padatan  Terlarut  (TPT))  dan depolimerisasi pektin cair 1% (%T dan TPT).

## Penelitian Tahap II
Produksi,  Ekstraksi  dan  Pemurnian Enzim  Pektin  Hidrolase  Ekstraseluler (Salvador et al , 2002; Rolinek, 2003) Produksi  enzim  ditentukan  pada  fase logaritma isolat. Penentuan kurva
pertumbuhan  bakteri  dilakukan  dengan penentuan  panjang  gelombang  maksimum dan kurva standar  isolat dalam  media pektin cair.  Kurva  pertumbuhan  dilakukan  pada media  pektin  cair  dengan  agitasi  144  rpm sesuai  dengan  suhu  masing-masing  isolat. Aktivitas  enzim  kasar  diuji  dengan  metode DNS  pada  setiap  titik  pengambilan  sampel kurva  pertumbuhan.  Kurva  pertumbuhan
isolat  dan  kurva  aktivitas  enzim  kemudian digabungkan  untuk  penentuan  hubungan antara  jumlah  sel  dan  fase  pertumbuhan  sel dengan aktivitas enzim.
Isolat  bakteri  yang  telah  mencapai  fase logaritma  kemudian  diekstraksi  dengan sentrifugasi  pada  kecepatan  6000  rpm  4 C selama  15  menit.  Supernatan  dipresipitasi dengan fraksinasi ammonium sulfat 10-90%. Sentrifugasi dilakukan pada kecepatan 12000 rpm  selama  10  menit  4 C.  Pellet  ditambah dengan buffer asetat 0,05 M pH 5,2 (1:1). Uji aktivitas  enzim  kemudian  dilakukan  dengan metode DNS pada fase supernatan dan pellet. Fase  dengan  aktivitas  enzim  tertinggi dimasukkan  dalam kantung membran selophan  untuk  prosedur  dialisis.  Membran tersebut  direndam  selama  24  jam  pada  suhu 4 C dalam gelas beaker 600 ml berisi 300 ml buffer asetat 0,05 M pH 5,2 yang dilengkapi magnetic stirer.
Karakterisasi  Enzim  Pektin  Hidrolase (Van  Rijssel et  al ,  1993;  Munoz  and  Ros, 1996; Wilson and Walker, 2004)
Metode  pengukuran  aktivitas  enzim pektin hidrolase didasarkan pada pengukuran gula reduksi yang dilepaskan. Penentuan gula reduksi  dilakukan  dengan  metode  DNS dengan asam D-galakturonat sebagai standar. Satu unit aktivitas enzim pektin hidrolase dinyatakan  sebagai  1  mol  gugus  reduksi yang  mampu  dihidrolisis  oleh  enzim  per menit  pada  kondisi  yang  sesuai  atau banyaknya  enzim  yang  melepaskan  1  mol gugus gula reduksi per  menit pada suhu dan pH tertentu.
Penentuan aktivitas enzim dengan metode DNS  adalah  enzim  sebanyak  0,1  ml dicampur  dengan  0,9  ml  media  pereaksi (0,7%  pektin  citrus  ditambah  buffer  sodium asetat  0,025  M  pH  4,8)  dan  diinkubasi  pada suhu  37 C  selama  30  menit.  Sampel ditambah  1  ml  DNS  kemudian  dipanaskan selama 10 menit dalam air mendidih bersuhu 90 C.  Seluruh  tabung  reaksi  didinginkan. Larutan  K-Na-Tartrat  40%  ditambahkan sebanyak 0,5 ml dan dihomogenkan. Masing- masing  sampel  ditera  pada  panjang gelombang  540  nm.  Aktivitas  enzim ditentukan  dengan  mengkonversikan  nilai absorbansi  asam  D-galakturonat  dengan
persamaan  regresi  linier  kurva  standar  asam D-galakturonat 100 ppm.
1. pH optimum enzim Enzim  0,1  ml  ditambah  0,9  ml  media pereaksi  (0,7%  pektin  citrus  dalam  buffer sodium  asetat 0,025 M) dengan pH 4,0; 4,5; 5,0;  5,5  dan  6,0.  Larutan  diinkubasi  pada suhu  37 C  selama  30  menit.  Sampel dianalisis dengan metode DNS.

## 2. Suhu Optimum enzim
Enzim  0,1  ml  ditambah  0,9  ml  media pereaksi  (0,7%  pektin  citrus  dalam  buffer sodium  asetat  0,025  M  pH  4,8)  pada  suhu inkubasi 35,40,45,50,55 dan 60 C selama 30 menit.  Sampel  dianalisis  dengan  metode DNS.
3. [S], K M dan V maks
Enzim  0,1  ml  ditambah  0,9  ml  media pereaksi  (0,7% (w/v) pektin citrus, [S] sesuai perlakuan  yaitu  0,05;  0,1;  0,2;  0,4  dan  0,8 mg/ml  dan  larutan  buffer  sodium  asetat 0,025M  pH  4,8).  Larutan  diinkubasi  pada suhu  37 C  selama  30  menit.  Sampel dianalisis dengan metode DNS.
Nilai  K M dan  V maks ditentukan  dengan kurva  1/[S]  terhadap  1/aktivitas  enzim sehingga  diperoleh  garis  linier  dengan hubungan  1/v  =  1/V maks +  K M /V maks .  1/[S] atau y = a+ bx dengan
Y = 1/aktivitas enzim atau 1/kecepatan enzim (1/v) X = 1/konsentrasi substrat (1/[S]) Sehingga  untuk  menentukan  V maks dan  K M (1/2 V maks ) adalah a = 1/V maks maka V maks = 1/a b = K M /V maks maka K M = b.V maks

## Analisis Data
Karakter morfologi koloni dan sel bakteri, fisiologis  dan  biokimia  dianalisis  secara kualitatif. Kurva standar asam D- galakturonat,  kurva  standar  isolat,  aktivitas enzim pektin hidrolase dan konstanta kinetik K M dan  V maks ditentukan  dengan  regresi linier.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Bakteri  pektinolitik  sebanyak  11  isolat diperoleh  dari  sampel  kulit  jeruk  dan  tanah
kebun,  sampah  sayuran  dan  kulit  jeruk  pada suhu  inkubasi  37 C.  Bakteri  pektinolitik sebanyak 8 isolat diperoleh dari sampel yang sama  pada  suhu  inkubasi  40 C.  Bakteri pektinolitik  yang  diisolasi  dari  kulit  jeruk dicampur  tanah  kebun  pada  suhu  inkubasi 50 C diperoleh 2 isolat dan 6 isolat diperoleh dari suhu inkubasi 55 C.
Seleksi  isolat  uji  berdasarkan  jumlah sel/ml.  diameter  zona  jernih  (mm),  aktivitas enzim  (U/ml),  kemampuan  dalam  klarifikasi jus  jeruk  dan  depolimerisasi  pektin  cair  1% maka diperoleh isolat 15, 19 dan 21.
Isolat  15  diisolasi  dari  sampel  kulit jeruk pada suhu inkubasi 37 C. Isolat 19 dan 21 diisolasi dari sampel kulit jeruk dicampur tanah  kebun  dengan  suhu  inkubasi  masing- masing 50 C dan 55 C.
Bakteri pektinolitik isolat 15, 19 dan 21 berbentuk  batang  pendek,  Gram  positif, katalase positif dan motil. Isolat 15 positif uji MR-VP,  positif  uji  Simmon`s  Citrate  dan tidak membentuk endospora. Isolat 19 positif uji  VP,  negatif  uji  Simmon`s  Citrate  dan membentuk  endospora  dengan  tipe  terminal. Isolat 21 positif uji VP, negatif uji Simmon`s Citrate  dan  tidak  membentuk  endospora. Isolat 19 diduga merupakan genus Bacillus . Fase  logaritma  isolat  15 dimulai  pada jam ke 8 (8 jam setelah inokulasi). Isolat 19 memulai  fase  logaritma  pada  jam  ke  12  (12 jam  setelah  inokulasi)  sedangkan  fase logaritma isolat 21 dimulai pada jam ke 4 (4 jam  setelah  inokulasi).  Peningkatan  jumlah sel/ml  setiap  isolat  mempengaruhi  produksi dan aktivitas enzim.
Aktivitas enzim isolat 15 tertinggi pada fraksi  kejenuhan  ammonium  sulfat  60  % yaitu  0,916  U/ml.  Enzim  isolat  19  memiliki aktivitas  sebesar  0,832  U/ml  pada  fraksi kejenuhan  ammonium  sulfat  50%.  Enzim isolat  21  memiliki  aktivitas  tertinggi  pada fraksi  kejenuhan  ammonium  sulfat  80% sebesar 0.683 U/ml. Aktivitas enzim terdapat pada fase pellet.
Konsentrasi  protein  enzim  isolat  15 adalah 0,109 mg/ml. Enzim isolat 19 dan 21 masing-masing  memiliki  konsentrasi  protein enzim sebesar 0,087 dan 0,065 mg/ml.
Isolat  15  optimum  pada  pH  4,0 sedangkan isolat 19 dan 21 optimum pada pH 5,0.  Isolat  15  dimungkinkan  memiliki  dua
enzim  karena  memiliki  nilai  pH  optimum pada  4,0  dan  5,0.  Ketiga  enzim  isolat  uji dapat diterapkan dalam proses klarifikasi jus jeruk karena optimum pada pH jus jeruk (pH 4,0-5,0).  Perubahan  pH  yang  menurun  akan menyebabkan  kelebihan  ion  H + di  sekitar protein dan akan menyerang sisi aktif enzim. Protein  menjadi  lebih  bersifat  negatif daripada  enzim.  Jika  pH  meningkat  maka semakin  banyak  ion  OH - sehingga  protein akan  bermuatan  positif.  Perbedaan  muatan positif  atau  negatif  pada  sisi  aktif  enzim dapat  merubah  bentuk  enzim  sehingga mempengaruhi interaksi enzim-substrat yang spesifik.
(a) (b) (c)
Gambar  1. Hubungan  antara  pH  dengan Aktivitas Enzim Isolat 15 (a), 19 (b) dan 21 (c)
Ketiga  enzim  isolat  uji  optimum  pada suhu  50 C  sehingga  dapat  diaplikasikan dalam proses klarifikasi jus jeruk. Peningkatan  suhu  reaksi  akan  menyebabkan peningkatan  reaksi  antarmolekul  dan  jumlah produk enzim. Suhu reaksi yang terlalu tinggi akan  menyebabkan  perubahan  konformasi struktur  pada  enzim  dan  perubahan  sifat alami  pada  substrat  sehingga  substrat  tidak
0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 1.200 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 pH 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 1.200 1.400 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 pH 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 1.200 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 pH
dapat  memasuki  sisi  aktif  enzim.  Energi aktivasi  akan  mengalami  penurunan  jika reaksi berlangsung pada suhu rendah.
(a) (b) (c)
Gambar  2. Hubungan  antara  Suhu  dengan Aktivitas Enzim Isolat 15 (a), 19 (b) dan 21 (c)
Analisis  kinetika  reaksi  enzimatis  adalah laju  reaksi  maksimum  (V maks )  dan  konstanta Michaelis-Menten  (K M ).  V maks adalah  batas secara  teori  laju  reaksi  yang  tercapai  jika konsentrasi substrat tinggi sehingga sisi aktif enzim  secara  tetap  selalu  ditempati  oleh substrat  dan  nilainya  tergantung  pada konsentrasi  enzim  pada  larutan.  Reaksi enzim akan meningkat dengan meningkatnya konsentrasi  substrat  tetapi  jika  konsentrasi substrat  kembali  dinaikkan  maka  kecepatan reaksi mencapai maksimum. Kondisi kecepatan  reaksi enzim  tidak  dapat meningkat dengan meningkatnya konsentrasi substrat  disebut  Kecepatan  maksimum
(V maks ). Nilai V maks dapat menentukan nilai ½ V maks yaitu  kondisi  substrat  yang  diperlukan untuk  mencapai  kecepatan  reaksi  enzimatis ½  dari  kecepatan  maksimum  atau  K M (McGilvery and Goldstein, 1996).
Tabel 1. Nilai K M (mg/ml) dan V maks (U/ml) Enzim Murni Parsial Isolat 15, 19 dan 21
Isolat  K M (mg/ml) V maks (U/ml) 15 0.121 0.550 19 0.126 0.541 21 0.182 0.601
Nilai K M dan V maks tertinggi adalah isolat 21  sebesar  0,182  mg/ml  dan  0,601  Unit/ml. Enzim  isolat  21  memiliki  nilai  K M yang terbesar  sehingga  memiliki  afinitas  yang lebih  rendah  terhadap  substrat  pektin.  Isolat 15  memiliki  nilai  K M yang terkecil  sehingga memiliki  afinitas  yang  tinggi  terhadap substrat  pektin.  Isolat  15  lebih  berperan dalam klarifikasi jus jeruk. Menurut  Patil  and  Dayanand  (2006), aktivitas enzim endopektinase dapat diketahui  dari  penurunan  viskositas  larutan pektin dengan viscometer Ostwald. Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai banyaknya  enzim  yang  mereduksi  viskositas spesifik  dalam  larutan  (20%  atau  50%) selama  waktu  dan  suhu  tertentu.  Aktivitas enzim eksopektinase dapat diketahui berdasarkan  pengukuran  gula  reduksi.  Satu unit  aktivitas  enzim  dinyatakan  sebagai  1 mol gugus reduksi yang mampu dihidrolisis oleh  enzim  per  menit  pada  kondisi  yang sesuai atau banyaknya enzim yang melepaskan  1  mol  gugus  gula  reduksi  per menit  pada  suhu  dan  pH  tertentu. Berdasarkan pernyataan diatas dapat diketahui  bahwa  aktivitas  enzim  dalam penelitian ini merupakan
enzim eksopektinase.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
1.  Bakteri  pektinolitik  sebanyak  11  isolat diperoleh  dari  sampel  kulit  jeruk  dan tanah  kebun,  sampah  sayuran  dan  kulit jeruk  pada  suhu  inkubasi  37 C.  Bakteri pektinolitik  sebanyak  8  isolat  diperoleh dari sampel yang sama pada suhu inkubasi 40 C.  Bakteri  pektinolitik  yang  diisolasi dari  kulit  jeruk  dicampur  tanah  kebun pada  suhu  inkubasi    50 C  diperoleh  2 isolat  dan  6  isolat  diperoleh  dari  suhu
0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 1.200 1.400 30 35 40 45 50 55 60 65 Suhu 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 1.200 1.400 30 35 40 45 50 55 60 65 Suhu
inkubasi  55 C.  Isolat  uji  yang  digunakan adalah  isolat  15,  19  dan  21  dengan karakter  batang  pendek,  Gram  positif, katalase positif dan motil. Isolat 15 positif uji  MR-VP,  positif  uji  Simmon`s  Citrate dan tidak membentuk endospora. Isolat 19 positif  uji  VP,  negatif  uji  Simmon`s Citrate dan membentuk endospora dengan tipe  terminal.  Isolat  21  positif  uji  VP, negatif  uji  Simmon`s  Citrate  dan  tidak membentuk  endospora.  Isolat  19  diduga merupakan genus Bacillus .
2. Enzim pektin hidrolase ekstraseluler isolat 15  memiliki  pH  optimum  4,0  sedangkan pH  optimum  enzim  isolat  19  dan  21 adalah  5,0.  Ketiga  isolat  memiliki  suhu optimum  enzim  50 C.  Nilai  K M enzim isolat  15,  19  dan  21  adalah  0,121;  0,126 dan 0,182 mg/ml dengan nilai V maks enzim isolat 15, 19 dan 21  sebesar 0,550; 0,541 dan  0,601  (U/ml).  Berdasarkan  analisis diatas terdapat aktivitas enzim poligalakturonase. 3. Ketiga enzim tersebut mampu menurunkan viskositas,  meningkatkan  kecerahan  jus berdasarkan peningkatan nilai transmitansi dan  meningkatkan  nilai  total  padatan terlarut pada jus jeruk dan pektin cair 1%.

## Saran
Penelitian  ini  memerlukan  eksplorasi lebih lanjut mengenai
1. Sumber pektin yang lebih bervariasi untuk memperoleh bakteri pektonilitik
2. Isolasi perlu dilakukan untuk memperoleh isolat termofilik
3.  Uji  biokimia  perlu  diperkuat  dengan menggunakan API System
4.  Purifikasi  enzim  dilanjutkan  dengan kromatografi  (kromatografi  penukar  ion, afinitas atau filtrasi gel)
5.  Uji aktivitas enzim pada kondisi optimum dan  kestabilan  enzim  perlu  dilanjutkan dengan  interval  pH  atau  suhu  yang  lebih pendek

## DAFTAR PUSTAKA
Barense,  R.I.,  M.A.  Chellegati.,  M.J.V.
Fonseca  and  S.  Said.  2001.  Partial
Purification  and  Characterization  of Exoplygalacturonase  II  and  III  of
Penicillium
frequentans ,
Braz.J.Microbiology . 32 (4) : 5-8
Benitez, E.I and J.E. Lozano. 2006. Influence of The Soluble Solids on Zeta Potential of a Cloudy Apple Juice, Lat.Am.Appl.Res. Scielo . 36 (3) Benson, H.J. 2002. Microbiological Applications  Laboratory  Manual  In General  Microbiology ,  Eighth  Edition. Mc Graw Hill. Boston. p. 64-68, 72-74, 130-131, 157-175
deMan,  J.M.  1997.  Kimia  Makanan,  Edisi Kedua.  K.  Padmawinata  (Penerjemah). Penerbit  ITB.  Bandung.  p.  201-205, 438-446, 457-461, 472
Fonseca,  M.J.V  and  S.  Said.  1994.  The Pectinase  Produced  by Tubercularia vulgaris in  Submerged  Culture  Using Pectin  or  Orange  Pulp  Pellets  as Inducer, J. Appl. Microbiol. Biotechnol .
42 : 32-35
Holt,  J.G.,  N.R.  Krieg.,  P.H.A.  Sneath.,  J.T. Staley., S.T. Williams., L. Wlliams and Wilkins.  1994.
Determinative  Bacteriology ,  Ninth Edition.  A  Wolters  Kluwer  Company. Philadelphia. p. 559, 562, 566, 568, 570
McGilvery, R.W  and G.W. Goldstein.  1996. Biokimia Suatu Pendekatan Fungsional .  Edisi  Ketiga.  Toyibhi (Penerjemah). Erlangga. Jakarta. 10 p
Munoz,  R  and  A.B.  Ros.  1996.  Enzymes  in M.L.  Leo  (Ed.). Handbook  of  Food Analysis , Volume I. Physical Characterization and Nutrient Analysis, Marcel Dekker. New York. 10 p
Ordonez,  R.G.,  J.  Morlon-Guyot.,  S.
Casparian  and  J.P.  Guyot.  1998. Occurrence  of  a  Thermoacidophilic Cell Bound Exo-pectinase in Alicyclobacillus  Acidoceldarius . Folia
Microbiology . 43 (6) : 657-660
Patil,  S.R  and  A.  Dayanand.  2006. Production of Pectinase from Deseeded Sunflower Heed by Aspergillus niger in Submerged and Solid-State Conditions. Biosource Technology . 97 : 2054-2058
Enzymes  in  Fruit  and  Vegetable.  Juice Manufacture. Enzymes in Food Processing .  Academic  Press  Limited. London. Third Edition. p. 363-392
Rolinek,  R.  2003.  Separation  of  Three Isoforms  of  Polygalacturonase  from Fermentation Supernatant of Sclerotium rolfsii with Pro Team FFE Compared to Chromatography. http://www.tecan.com/com-pdf.  April, 04, 2008
Salvador, L.D., T. Singanuma., K. Kitahara., Y.  Fukusage  and  H.  Tanoue.  2002. Degradation  of  Cell  Wall  Materials from Sweet Potato, Cassava and Potato by  A  Bacterial  Protopectinase  and Terminal  Sugar  Analysis  of  The Resulting Solubilized Products, Journal of  Bioscience  and  Bioengineering . 93
(1) : 64-72 Van  Rijssel,  M.,  G.J.  Gerwig  and  T.A. Hansen. 1993. Isolation and Characterization  of  an  Extracellular Glycosylated  Protein  Complex  from Clostridium thermosaccharolyticum with  Polygalacturonase  and  Pectin Methyl  Esterase  Hydrolase  Activity, J . Applied and Enviromental Microbiology. 59 (3) : 828-836 Wilson,  K  and  J.  Walker.  2004.  Principles and Techniques of Practical Biochemistry. Fourth Edition. Cambridge University Press. Cambridge. 15 p Yuwono, S dan T. Susanto. 2001. Pengujian Fisik  Pangan.  Penerbit  UNESA.
Surabaya. P. 49-53