Uji Aktivitas Wound Healing Ekstrak Etanol Buah Averrhoa bilimbi L. (Belimbing Wuluh) Pada Mencit Putih Jantan (Mus musculus)
Wound Healing Activity Test Averrhoa bilimbi L. Fruit Ethanol Extract in Male White Mice (Mus musculus)
Rahmayati Rusnedy 1* , Mira Febrina 1 , Cindy Patika Sari 1
1 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru, Indonesia *E-mail: rahmayatirusnedy@stifar-riau.ac.id
Received: 29 Mei 2023; Accepted: 27 Juni 2023; Published: 30 Juni 2023

## Abstrak
Penyembuhan  luka  adalah  proses  yang  kompleks,  keterlambatan  penyembuhan  luka  meningkatkan terjadinya  infeksi,  dan  terbentuknya  bekas  luka  yang  tidak  menyenangkan.  Tujuan  penelitian  ini  untuk menggali  potensi  senyawa  aktif  dari  Buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  yang  dapat dikembangkan sebagai sediaan obat untuk penyembuhan luka. Metode yang digunakan dengan membuat luka  sayatan  pada  kulit  area  punggung  mencit  yang  terlebih  dahulu  dibersihkan  dan  dicukur  bulunya, kemudian dianestesi  lokal  dengan  menggunakan  cream  lidocaine  dan prilocaine  (Emla®).  Luka  sayatan linear-paravertebral sepanjang 1 cm dibuat dengan pisau bedah steril melalui ketebalan ke dalam lapisan kulit 0,3 cm di sisi punggung hewan uji. Sediaan uji ekstrak etanol buah belimbing wuluh (EBW) dengan konsentrasi  2,5%,  5%  dan  10%  diberikan  sesuai pengelompokkan  hewan  uji.  Pengamatan  panjang  luka sayat pada setiap kelompok perlakuan dilakukan setiap hari selama 12 hari dengan menggunakan jangka sorong. Aktivitas penyembuhan luka ( wound healing ) yang signifikan diamati dari pemberian EBW dengan konsentrasi 10%  yang  memiliki kandungan kimia berupa flavonoid,  saponin,  tanin  dan triterpenoid serta mineral, salah satunya yakni zinc (seng) dan juga vitamin c terbukti dapat membantu mempercepat proses penyembuhan  luka  sayatan  dengan  persentase  penyembuhan  luka  pada  hari  ke  12  yaitu  100%,  nilai persentase  yang  sama  dengan  kelompok  hewan  uji  yang  diberikan povidone  iodine 10%  (Betadine®) sebagai  obat  pembanding.  Penelitian  ini  menunjukkan  manfaat  pemberian  EBW  konsentrasi  10%  yang berpotensi dikembangkan sebagai sediaan obat topikal untuk penyembuhan luka.
Kata  Kunci :  Ekstrak  etanol  buah Averrhoa  bilimbi L.,  Flavonoid,  Saponin,  Tanin,  Triterpenoid,  Zinc, Vitamin C, Luka sayat ( wound healing )

## Abstract
Wound  healing  is  a  complex  process,  delays  in  wound  healing  increase  the  risk  of  infection,  and  the formation of unpleasant scars. The purpose of this study was to explore the potential of active compounds from star fruit (Averrhoa bilimbi L.) which can be developed as medicinal preparations for wound healing. The method used is to make an incision in the skin of the back area of the mice which is cleaned and shaved first,  then  local  anesthetic  is  used  using  lidocaine  and  prilocaine  cream  (Emla®).  A  1  cm  long  linear- paravertebral incision was made with a sterile scalpel through a 0.3 cm thickness of the skin on the dorsal side of the animal. Test preparations of ethanol extract of star fruit with concentrations of 2.5%, 5% and 10% were given according to the grouping of the test animals. Observation of the length of the incision in each treatment  group was carried out  every day for 12 days using a caliper. Significant  wound healing activity was observed from the administration of 10% ethanol extract which contains chemicals in the form of flavonoids, saponins, tannins and triterpenoids as well as minerals, one of which is zinc and vitamin C which has been shown to help speed up the healing process. incision wounds with the percentage of wound healing on day 12, namely 100%, the same percentage value as the group of test animals given Povidone iodine10%  (Betadine®)  as  a  comparison  drug.  This  study  shows  the  benefits  of  administering  a  test preparation  of  starfruit  fruit  ethanol  extract  at  a concentration  of  10%  which  has  the  potential  to  be developed as a topical drug preparation for wound healing.
Keywords: Ethanol extract of  Averrhoa bilimbi L., Flavonoids, Saponins, Tannin, Triterpenoid, Zinc and Vitamin, Wound healing

## PENDAHULUAN
Buah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.). merupakan salah satu tanaman indonesia yang dapat digunakan sebagai obat tradisional.  Tanaman  ini  sengaja  ditanam ataupun  tumbuh  liar  pada  lingkungan  yang cukup  lembab  dan  menghasilkan  buah  yang banyak  digunakan  masyarakat    (Orwa et al. , 2009).  Secara  tradisional  belimbing wuluh digunakan untuk pengobatan demam, rematik,  kencing  manis,  sifilis,  batuk  rejan, sakit  perut,  maag,  sariawan  dan  sebagai minuman  penyejuk,  serta  digunakan  untuk mengobati  gangguan  pada  kulit  seperti radang/inflamasi,  jerawat,  bisul,  dan  gatal- gatal  serta infeksi (Kumar et al. , 2013).
Luka  adalah  gangguan  anatomi  dan fungsional  kulit  setelah  terjadinya  cedera (Sharma et al., 2021). Akibat luka yang serius menjadi  peradangan  dan,  akibatnya  terjadi stres  oksidatif  yang  dapat  menyebabkan keterlambatan  atau  sulit  sembuh,  infeksi, amputasi,  atau  bahkan  septikemia  yang mematikan (Han dan Ceilley, 2017).
Luka  hampir  selalu  dikaitkan  dengan risiko  infeksi  yang  tinggi,  sehingga  untuk penyembuhan  luka memerlukan  proses  yang kompleks, adanya keterlambatan penyembuhan  luka juga meningkatkan terjadinya  infeksi,  dan  terbentuknya  bekas luka  yang  tidak  menyenangkan.  Setiap perubahan yang mengganggu proses
penyembuhan akan  memperburuk  kerusakan jaringan dan memperpanjang proses perbaikan.  Karenanya,  jika  agen  yang  aktif melawan  mikroorganisme  penyebab  infeksi digunakan  dalam  proses  penyembuhan  luka, itu akan membantu mengurangi risiko infeksi. Waktu keseluruhan untuk penyembuhan luka juga  dapat  dikurangi  secara  signifikan (Ibrahim et al., 2018; Samah et al., 2016). Proses penyembuhan luka kulit mencakup  kaskade  peristiwa  terkoordinasi setelah  cedera  kulit,  trauma,  atau  laserasi, yang diikuti oleh regenerasi alami pelindung kulit.  Pada  luka  yang  kompleks,  proses penyembuhan ditandai dengan fase inflamasi yang berkepanjangan dan berkelanjutan yang
mengganggu sel dermal dan epidermis untuk merespons  sinyal  kimia  (Han  dan  Ceilley, 2017).    Proses  penyembuhan  luka  dengan pemberian  ekstrak  tanaman  dari  bahan  alam dipromosikan melalui beberapa konstituennya  yang  termasuk  senyawa  aktif seperti  flavonoid,  saponin  dan  triterpen (Sharma et  al., 1990).  Mineral  penting terutama  zinc  (seng)  dan  vitamin  C  juga mempengaruhi proses perbaikan luka sebagai kofaktor atau koenzim dalam sejumlah fungsi metabolisme yang terlibat dalam penyembuhan luka (Bhar et al., 2003).
Tujuan dari penelitian ini untuk menyelidiki  secara  ilmiah  potensi  senyawa aktif  dari  belimbing  wuluh  yang  dapat dikembangkan  sebagai  sediaan  obat  untuk penyembuhan  luka  yang  diujikan  secara  in vivo pada kulit mencit yang luka. Luka dibuat dengan menggunakan sayatan sepanjang 1 cm dengan  kedalaman  0,3  cm  secara  linier sebagai  model  luka  sayatan,  yang  telah banyak digunakan untuk konfirmasi aktivitas penyembuhan  luka  (Suntar et  al., 2011 b ). Selain  itu,  adanya  senyawa  aktif  seperti flavonoid, saponin, tanin, triterpenoid (Kumar et  al., 2013),  vitamin  C  dan  zinc (seng)  dalam  ekstrak  etanol  buah  belimbing wuluh  (Yan et  al., 2013;  Patil et  al., 2013; Bhaskar  dan  Shantaram,  2013)  dieksplorasi hubungannya dengan aktivitas penyembuhan luka yang terjadi.

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Sampel buah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.)  diperoleh  dari  desa  Lenggopan, Kecamatan Rambah, Kabupaten Rokan Hulu. Buah  yang  diambil  adalah  buah  yang matang/masih  hijau,  segar,  dan  tidak  busuk. Identifikasi dilakukan di Laboratorium Botani Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam  (FMIPA)  Jurusan  Biologi  Universitas Riau dengan
No.
identifikasi 568/UN19.5.1.1.3-4 1/EP/2021.

## Persiapan Pembuatan Ekstrak
Bahan    yang  digunakan  adalah  buah belimbing wuluh matang dengan biji dipotong
menjadi potongan-potongan kecil. Setiap 50 g bagian  buah  belimbing  wuluh  cincang dimaserasi  dalam  etanol  96%  sebanyak  500 mL  pada  suhu  kamar  selama  5  hari.  Ekstrak hasil penyaringan yang diperoleh dikentalkan menggunakan alat vaccum rotary evaporator yang diatur pada suhu 50° C dengan tekanan 175  mbar  (0,172  atm)  sehingga  diperoleh ekstrak  kental  (Muhammad  and  Veronique, 2015).

## Skrining Fitokimia
Analisis  fitokimia  dari  ekstrak  yang digunakan  pada  pengujian  ini,  direaksikan menggunakan metode sederhana dan reagen- reagen Untuk setiap reaksi, digunakan 100 mg EBW. Skrining fitokimia flavonoid dilakukan dengan  cara  beberapa  tetes  lapisan  air dimasukkan ke dalam plat tetes, dimasukkan 2  butir  logam  Mg  dan  2  tetes  asam  klorida pekat. Terbentuk warna jingga sampai merah menunjukkan  adanya  flavonoid.  Untuk memeriksa  adanya  tanin,  ekstrak  kering dilarutkan  air  dan  menggunakan  natrium klorida 10% dan larutan gelatin 1%. Saponin diidentifikasi  dengan  cara  lapisan  air dimasukkan ke dalam tabung reaksi dikocok kuat, bila terbentuk busa yang tetap selama 5 menit menandakan adanya saponin. Skrining triterpenoid  dengan  cara mencampur ekstrak dengan  kloroform  dihangatkan  ditambahkan asam sulfat pekat, terbentuknya warna merah menunjukkan  adanya  senyawa  triterpenoid (Sakar et al., 1991).

## Uji Aktivitas Penyembuhan Luka
Mencit Putih (Mus musculus) jantan (18– 20 gram) diperoleh dari Laboratorium Hewan Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau. Hewan uji diaklimatisasi  selama  5  hari  pada  kondisi kandang  yang  tepat.  Mencit  diberikan  pelet standar dan air ad libitum selama percobaan. Jumlah  hewan  yang  digunakan  dalam  setiap kelompok  5-6  ekor.  Protokol  uji  telah dinyatakan  layak  etik  oleh  Unit  Etik penelitian Kedokteran dan Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas Riau dengan
Nomor
Surat
B/055/UN19.5.1.1.8/UEPKK/2022.

## Persiapan untuk Pengujian
Model  luka  sayatan  insisi  digunakan untuk  mengevaluasi  luka  melalui  aktivitas penyembuhan. Pada pengujian secara in vivo ini,  sampel  uji  EBW  disiapkan  dengan konsentrasi  2,5%,  5%  dan  10%,  masing- masing  sebanyak  5  mL,  yang  sebelum ditambahkan  Triethanolamine (TEA  3%) beberapa  tetes  mendapatkan  pH  sediaan  uji yang  sesuai  dengan  pH  kulit  normal  yakni diantara  4,5-7.  Sebanyak  0,2 mL  sediaan  uji yang telah disiapkan, dioleskan merata secara topikal  pada  bagian  yang  terluka  segera setelah  masing-masing  luka  dibuat  dengan pisau  bedah,  seperti  yang  dijelaskan  dalam penelitian Kupeli et al., 2011. Pada kelompok kontrol  negatif/-,  hewan  uji  diperlakukan dengan  pemberian  basis  sediaan  uji  topikal yang digunakan saja yakni NaCMC 4% yang dioleskan sebanyak 0,2 mL, sedangkan untuk kelompok obat pembanding (kontrol positif/+) luka sayat pada hewan uji diberi 0,2 mL povidone iodine 10%.

## Model Luka Sayatan
Area punggung semua hewan uji dicukur bulunya  terlebih  dahulu  dan  dibersihkan dengan alkohol 70%. Hewan dianestesi lokal dengan  menggunakan  cream  lidocaine  dan prilocaine (Emla®). Sayatan linear- paravertebral  sepanjang  1  cm  dibuat  dengan pisau  bedah  steril  dan  ketebalan  ke  dalam lapisan kulit 0,3 cm di sisi punggung (Ehrlich et  al., 1969).  Hewan-hewan  uji  dibagi menjadi  lima  kelompok:  kelompok  kontrol negatif,  kelompok  kontrol  positif  (diberikan povidone  iodine 10%  (Betadine®)  dan kelompok  yang  diberikan  sediaan  uji  sesuai konsentrasi 2,5%, 5% dan 10% pada masing- masing kelompoknya. Luka pada tiap hewan uji dioleskan sediaan sebanyak 0,2 mL secara topikal  satu  kali  sehari  selama  12  hari. Evaluasi terhadap penyembuhan luka dilakukan  dengan  cara  mengukur  panjang
luka  sayatan  Luka  sayatan  diukur  dengan menggunakan jangka sorong, dan model luka sayatan memanjang digunakan untuk menilai aktivitas penyembuhan luka in vivo menentukan  persentase  penyembuhan  luka (Cukjati et al., 2001).

## Analisis Statistik
Data  persentase  panjang  penyembuhan luka  yang  diperoleh  dari  data  panjang  luka awal  dibagi  panjang  luka  setelah  diberikan perlakuan, lalu persentase panjang penyembuhan  luka  dianalisis  secara  statistik menggunakan One-Way Analysis Of Variance (ANOVA)  uji  Statistik Friedman .  Ada perbedaan
signifikan persentase
penyembuhan luka antara hari yang dibandingkan ditandai dengan nilai signifikan <0.05

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Studi ini dilakukan untuk memperkirakan efek  penyembuhan  luka  dari  EBW  secara eksperimental dengan pemberian rute topikal. Luka  sayatan  diukur  dengan  menggunakan jangka sorong, dan model luka  sayatan yang memanjang digunakan untuk menilai aktivitas  penyembuhan  luka  in  vivo  dari tanaman obat ini ( Gambar 1).
Dari  data  makroskopik  panjang  luka sayatan  setelah  12  hari  pemberiaan  sediaan uji,  diperoleh  rata-rata  panjang  luka  untuk kelompok  kontrol  negatif  2,24  mm  ±  0,041, kelompok  kontrol  positif  yang  diberikan povidone  iodine 10% (Betadine®) diperoleh panjang luka 0 mm ± 0,000 sedangkan untuk kelompok uji yang diberikan EBW konsentrasi  2,5%,  5%  dan  10%  diperoleh rata-rata  hasil  berturut-turut  sebagai  berikut: 1,19 mm ± 0,188, 0,20 mm ± 0,057 dan 0,03 mm ± 0,067.
Hasil  pengamatan  juga  menunjukkan bahwa  persentase  penyembuhan  luka  pada mencit  yang  diobati  EBW  konsentrasi  2,5% secara topikal diperoleh 36%±0,022 pada hari ke  6  hingga  88%±0,019  pada  hari  ke  12, sementara pada pemberian EBW konsentrasi 5%  diperoleh  persentase  penyembuhan  luka 39%±0,011  pada  hari  ke-6  dan  95%±0,005 pada hari ke-12. Pemberian sediaan uji EBW
konsentrasi  10  %    diperoleh  persentase penyembuhan luka 45%±0,056 pada hari ke 6 hingga  100%±0,000  pada  hari  ke  12. Sementara itu, mencit pada kelompok kontrol positif  yang  diberikan povidone  iodine 10% menunjukkan penutupan luka pada hari ke 6 dengan persentase penyembuhan luka 48%±0,008 dan menunjukkan penutupan luka sempurna  pada  hari  ke  12  yakni  dengan persentase  100%±0,000.  Di  sisi  lain, terjadinya  penutupan  luka  pada  mencit kelompok  kontrol  negatif  yang  hanya diberikan  NaCMC  4%  sebagai  pembawa untuk  sediaan  uji  ekstrak  etanol  ditemukan hasil  pada  hari  ke  12  hanya  memperoleh persentase penyembuhan luka 57 % (Gambar 2).
Dari grafik Gambar 2 di atas terlihat % penyembuhan  luka  pada  hari  ke  12  untuk kelompok kontrol positif dan kelompok yang diberikan sediaan uji dengan konsentrasi 10% mendapatkan  persentase  penyembuhan  luka 100%.  Selain  itu  berdasarkan  hasil  uji Statistik Friedman, ada perbedaan signifikan persentase  penyembuhan  luka  antara  hari
Gambar 1. Gambaran panjang luka sayat pada proses penyembuhan luka hari ke-1, ke-6 dan ke-12
yang  dibandingkan  ditandai  dengan  hasil yang  diperoleh  terdapat  perbedaan  yang signifikan  yakni  p<0,05.  Hal  ini  sesuai dengan  hasil  pada  uji  yang  dilakukan  oleh Hartini  (2012)  mengenai  aplikasi  topikal ekstrak  etanol  daun  belimbing  wuluh  yang mengandung  senyawa  flavonoid,  tanin, saponin, alkaloid dan antioksidan yang dapat meningkatkan jumlah fibroblas pada penyembuhan luka gingiva tikus putih jantan pada konsentrasi 10%. Hal ini mengungkapkan  bahwa  ekstrak  etanol  ini dapat  meningkatkan  penyembuhan  luka dengan  meningkatkan  kekuatan  tarik  dan epitelisasi luka.
Aktivitas penyembuhan luka yang paling efektif  biasa  diamati  dengan  pemberian sediaan  uji  ekstrak  etanol  buah  belimbing wuluh  pada  konsentrasi  10%  pada  hewan model luka yang diterapkan. Pada model luka sayatan,  kelompok  hewan  yang  diobati dengan EBW konsentrasi 10% pada hari ke- 12 menunjukkan hasil persentase penyembuhan  luka  yang  sama  dengan  obat yang  digunakan  pada  kelompok  kontrol positif yaitu povidone iodine 10% (Betadine®) . Povidone iodine umum digunakan  dalam  terapi  modern  untuk sterilisasi, terutama untuk preparasi kulit dan pembalut luka. Hal ini juga dipercaya bahwa povidone  iodine dapat  mengurangi  waktu
perdarahan dan edema. Selain itu, sediaan ini mempengaruhi tahap awal penyembuhan luka dengan  memodifikasi  sintesis  prostaglandin (Teixeira et  al., 2019). Povidone  iodine adalah  agen  antimikroba  melawan  infeksi lokal yang dapat menyebabkan keterlambatan perbaikan jaringan (Bigliardi et al., 2017). Demikian pula, pada kelompok uji yang diberikan  EBW  dengan  variasi  konsentrasi 2,5%, 5% dan 10% pada model luka sayatan menunjukkan  peningkatan  kekuatan  tarik pada  penutupan  luka  sempurna  yang signifikan pada Hari ke-12 dengan persentase berturut-turut sebagai berikut: 88%, 95% dan 100% ( Gambar 3).
Dalam penelitian ini, aktivitas penyembuhan  luka  yang  diamati  dengan pemberian EBW konsentrasi 10% pada model luka  insisi/sayatan,  dimana  pada  proses penyembuhan  luka  terdapat  fase  alami penyembuhan  luka  meliputi  hemostasis, inflamasi, proliferasi, dan remodeling. Setiap langkah penyembuhan luka berbeda, tumpang tindih  dengan  yang  terjadi  berikutnya  dan melibatkan  serangkaian  interaksi  antara berbagai kelas sel di dalam tubuh ( Gurtner et al., 2008).  Keberhasilan  penyembuhan  luka juga tergantung pada nutrisi yang cukup yang dipasok  ke  lokasi  luka  ( Guo  dan  Dipietro 2010).
Gambar 2. Persentase penyembuhan luka tiap kelompok pengujian mulai hari ke 1-12
0% 20% 40% 60% 80% 100% 120% 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Hari kontrol - kontrol + 2,5% 5% 10% P er se n tas e p en y em b u h an lu k a (% )
Selain  itu,  tujuan  penyembuhan  luka adalah untuk mempercepat waktu penyembuhan dengan rasa sakit yang minimal dan  mencegah  jaringan  parut  pada  bagian tersebut  (Meyer , 1993).  Bekas  luka  yang fleksibel  dan  halus  dengan  kekuatan  tarik tinggi diinginkan untuk penutupan luka yang sempurna ( Suntar et al., 2011 b ).
Fitokimia  yang  diperoleh  dari  EBW meliputi  komponen  diantaranya  adalah flavonoid,  saponin,  tanin  dan  triterpenoid. Selain itu telah diperoleh data dari penelitian Bhaskar  dan  Shantaram  (2013),  buah Belimbing  wuluh  mengandung  mineral  zinc (seng) dan kaya akan vitamin C ( Tabel 1).
Flavonoid  dinyatakan  sebagai  zat  yang meningkatkan kesehatan yang memiliki sifat antiinflamasi,  antimikroba  dan  antioksidan memiliki peran penting dalam penyembuhan luka  (Gomathi et  al. ,  2003).  Flavonoid  dan turunannya  diketahui  dapat  menurunkan peroksidasi  lipid  dengan  meningkatkan
vaskularisasi dan mencegah atau memperlambat  perkembangan  nekrosis  sel.
Oleh karena itu, setiap obat yang menghambat peroksidasi  lipid  seharusnya  meningkatkan viabilitas fibril kolagen dengan meningkatkan sirkulasi  dan  kekuatan  serat  kolagen, mendorong  sintesis  DNA  dan  mencegah kerusakan sel ( Getie et al., 2002; Shetty et al., 2008 ).  Flavonoid  juga  diketahui  mendukung proses  penyembuhan  luka  terutama  karena sifat antimikroba dan juga sifat astringennya, yang bertanggung jawab untuk kontraksi luka dan peningkatan laju epitelisasi (Suntar et al., 2011 a ).
Saponin  bertindak  sebagai  antibakteri dan  tanin  bertindak  sebagai  astringen  luka. Senyawa-senyawa  tersebut  memiliki  peran penting dalam proses penyembuhan luka (Su et  al., 2017;  Men et  al., 2020  ).  Saponin memiliki beberapa manfaat seperti hemolitik, antibakteri,  anti  virus,  fungsi  anti  oksidatif, aktivitas  anti  inflamasi  yang  mengurangi edema dan peradangan kulit (Just et al., 1998, Kim et  al., 2011,  Navarro et  al., 2001). Faktanya,  saponin  membantu  mempercepat neovaskularisasi  pada  area  luka  pada  kulit tikus. Selanjutnya, saponin juga berhubungan dengan faktor pertumbuhan endotel vaskular dan  interleukin  (IL)-1β,  keduanya  berada dikelompok  sitokin  inflamasi  yang  memicu akumulasi  makrofag  pada  area  luka  kulit, meningkatkan penyembuhan luka (Kimura et al., 2006).
Analisis  yang  dilakukan  oleh  Ansari et al., (2004).  menunjukkan  bahwa  EBW memiliki  kandungan  zinc  (seng)  yang  tinggi daripada kebanyakan tanaman obat yang lain. Zinc  adalah  salah  satu  elemen  penting,  dan berfungsi  sebagai  co-faktor  dalam  berbagai sistem enzim, termasuk matriks metaloproteinase yang bergantung pada seng, yang  meningkatkan  autodebridement  dan migrasi  keratinosit  selama  proses  perbaikan luka. Ini juga memberikan resistensi terhadap apoptosis epitel melalui sitoproteksi, mungkin  melalui  aktivitas  antioksidan  dari metallothionein kaya sistein, terhadap spesies oksigen reaktif dan racun bakteri.
Tabel 1.  Metabolit Sekunder Ekstrak Etanol Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.)
Komponen metabolit sekunder Keterangan Flavonoid + Saponin + Tannin + Triterpenoid + Zinc* + Vitamin C* +
* Bhaskar B dan Shantaram M., 2013
Gambar 3.  Persentase penyembuhan luka tiap kelompok uji pada hari ke-12 (p < 0,05) dengan kelompok kontrol negatif.
Kekurangan  seng  dalam  tubuh,  baik  secara turun  temurun  maupun  dari  makanan,  dapat menyebabkan tertundanya penyembuhan luka.
Penelitian  lain  juga  telah  menunjukkan bahwa  pemberian  zinc  (seng)  secara  topikal lebih unggul daripada pemberian oral karena efeknya  dalam  mengurangi  superinfeksi  dan nekrozis melalui peningkatan sistem pertahanan lokal dan pelepasan ion seng yang berkelanjutan, yang merangsang re-epitelisasi luka. Seng diangkut melalui kulit dari sediaan topikal  yang  melindungi  dan  menenangkan kulit yang meradang dan mengalami ulserasi ( Lansdown et al., 2007).
Oleh  karena  itu,  kandungan  seng  dari ekstrak  yang  digunakan  untuk  tujuan penyembuhan luka mungkin memiliki kontribusi yang besar dalam proses penyembuhan  luka,  dimana  seng  adalah kofaktor  kolagenase,  anggota  kelompok metaloproteinase yang membantu menghilangkan fibrinogen pada awal prosedur penyembuhan dalam fase inflamasi (MacKay  dan  Miller , 2003).    Seng  juga berkontribusi dalam sintesis DNA, pembelahan  sel  dan  sintesis  protein,  yang terjadi pada fase proliferasi sel (Suntar et al., 2011 b ).
Kandungan  vitamin  C  ekstrak  etanol buah belimbing wuluh dinilai memiliki peran sebagai  antioksidan,  meningkatkan  migrasi neutrofil  dan  transformasi  limfosit  bersama dengan sintesis kolagen pada kulit (Suntar et al., 2011 b ). Selain itu, vitamin C yang penting untuk konversi prolin menjadi hidroksiprolin, penanda  spesifik  dan  komponen  jaringan granulasi  matriks  ekstraseluler  pada  luka (Santana et  al., 2019;  Anyakudo  dan Erinfolami 2015).
Triterpenoid  yang  terkandung  dalam sediaan  uji  ekstrak  berperan  dalam  proses penyembuhan  luka,  menunjukkan  hasil bahwa  senyawa  ini  mampu  mempercepat proses  penyembuhan  dengan  mempercepat epitelisasi  dan  produksi  kolagen  serta deposisi,  terlepas  dari  jenis  lukanya;  selain itu, penggabungan triterpenoid dalam
berbagai  formulasi  obat  adalah  pilihan  yang berharga  dalam  pengelolaan  luka  karena pengiriman phytocompound aktif triterpenoid dalam jangka panjang dianggap sebagai kelas terapi  yang  tepat  dalam  pengobatan  dan pengelolaan  luka  (Agra et  al., 2015).  Selain itu,  triterpenoid  dilaporkan  terbukti  efektif untuk  mempercepat  re-epitelisasi  luka  dan diketahui  memperbaiki  pembentukan  parut untuk lesi superfisial (Metelmann et al., 2015; Metelmann et al., 2012).
Tanin  yang  juga  terkandung  dalam ekstrak ini terlibat dalam penyembuhan luka. Tanin  adalah  turunan  fenol  tanaman  dari berbagai  berat  molekul  yang  secara  alami disintesis  oleh  tanaman  sebagai  produk metabolisme ( Haslam ., 1996; Akiyama et al., 2001; Bakondi et al., 2004). Asam tanat (TA, penta-m-digalloyl  glukosa)  adalah  tanin terhidrolisis paling sederhana dan utama yang memiliki astringen, antioksidan, antimikroba, antivirus,  dan  antiinflamasi  ( Buzzini et  al., 2008). Meskipun ekstrak tanin telah digunakan untuk meningkatkan proses penyembuhan  luka  selama  bertahun-tahun, mekanisme  yang  tepat  dari  tindakan  belum sepenuhnya dijelaskan sampai saat ini. Tanin dipercaya  dapat  mempercepat  penyembuhan luka  melalui  beberapa  mekanisme:  1) menghilangkan  radikal  bebas  dan  spesies oksigen  reaktif  (ROS),  2)  mendorong kontraksi  luka,  dan  3)  meningkatkan pembentukan pembuluh kapiler dan proliferasi  fibroblas  ( Akiyama et  al., 2001). Asam  tanat  (TA,  penta-m-digalloyl  glukosa) adalah  tanin  terhidrolisis  paling  sederhana dan  utama  yang  memiliki  adstringen, antioksidan, antimikroba, antivirus, dan anti - sifat  inflamasi  ( Buzzini et  al., 2008). Meskipun  tanin  telah  digunakan  untuk meningkatkan  proses  penyembuhan  luka selama  bertahun-tahun,  mekanisme  yang tepat  dari  tindakan  belum  sepenuhnya dijelaskan sampai saat ini.
Tanin dapat mempercepat penyembuhan luka  melalui  beberapa  mekanisme:  1) menghilangkan  radikal  bebas  dan  spesies oksigen  reaktif  (ROS),  2)  mendorong
kontraksi  luka,  dan  3)  meningkatkan pembentukan pembuluh kapiler dan proliferasi  fibroblas  ( Akiyama et  al., 2001). TA  dapat  mempercepat  penyembuhan  luka, re-epitelisasi, dan pertumbuhan folikel rambut pada model tikus dengan meningkatkan  ekspresi  faktor  pertumbuhan termasuk faktor pertumbuhan fibroblast dasar (bFGF),  mengubah  faktor  pertumbuhan-beta (TGF-β),  dan  VEGF;  menurunkan  sitokin inflamasi  seperti  IL-1  dan  IL-6;  dan mengaktifkan  jalur  ERK  1/2  (Chen et  al., 2019). Telah  dilaporkan  bahwa  hidrogel komposit  agarosa  TA-karboksilasi  pH  yang sensitif menunjukkan aktivitas anti-inflamasi yang  efektif  dengan  menekan  produksi  NO dengan cara yang bergantung pada konsentrasi  dalam  makrofag  manusia  yang terstimulasi  (Ninan et  al., 2016).  Penelitian terhadap potensi terapeutik dan penyembuhan luka  cross-linked  collagen  scaffolds  (TCCs) dalam model tikus luka eksisi, yang disiapkan melalui teknik pengecoran menggunakan TA sebagai pengikat silang. Hasilnya menunjukkan bahwa TCC memiliki efek yang signifikan pada penutupan luka dan meningkatkan  tingkat  penyembuhan  luka
secara signifikan lebih dari perancah kolagen asli (Natarajan et al., 2013).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil yang diperoleh, ekstrak  etanol  buah  Belimbing  wuluh ( Averrhoa  bilimbi L.)  dengan  konsentrasi 10%  memiliki  aktivitas  penyembuhan  luka yang lebih baik, dengan persentase penyembuhan  luka  pada  hari  ke  12  yaitu 100%  yakni  nilai  persentase  yang  sama dengan  kelompok  hewan  uji  yang  diberikan Povidone  iodine 10%  (Betadine®)  sebagai obat  pembanding.  Adanya  flavonoid,  tanin, saponin  dan  triterpenoid  dari  ekstrak  inilah yang berkontribusi pada proses penyembuhan luka kulit pada hewan uji. Manfaat pemberian EBW konsentrasi 10% berpotensi dikembangkan  sebagai  sediaan  obat  topikal untuk penyembuhan luka.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Sekolah  Tinggi Ilmu  Farmasi  Riau  yang  telah  memberikan kesempatan  kepada  tim  peneliti  untuk melaksanakan semua rangkaian penelitian

## Daftar Pustaka
Agra L.C., Ferro J.N.S., Barbosa F.T., Barreto E., 2015. Triterpenes with healing activity: A systematic review. J. Dermatol. Treat . 26, pp.465–470.
Akiyama H, Fujii K, Yamasaki O, Oono T, Iwatsuki K., 2001. Antibacterial action of several tannins against Staphylococcus aureus . J Antimicrob Chemother , 48(4), pp.487–491.
Ansari T. M., N. Ikram, M. Najam-ul-Haq, I. Fayyaz, Q. Fayyaz, I. Ghafoor., 2004. Essentıal trace metal (zinc, manganese, copper and iron) levels ın plants of medicinal importance, Journal of Biological Sciences, 4, pp.95–99.
Anyakudo  M.  M.  C.  and  Erinfolami  A.  B.,  2015.  Glycemic  and  wound  healing  effects  of aqueous mesocarp extract of unripe Carica papaya (Linn) in diabetic and healthy rats, World Journal of Nutrition and Health, 3, pp.47–52.
Bakondi  E,  Bai  P, Erdelyi  K,  Szabo  C, Gergely  P,  Virag  L.,  2004,  Cytoprotective  effect  of gallotannin in oxidatively stressed HaCaT keratinocytes: the role of poly(ADP-ribose) metabolism. Exp Dermatol. 13(3), pp.170–178.
Bhar R., S. K. Maiti, T. K. Goswami, R. C. Patra, A. K. Garg, and Chhabra A. K., 2003, Effect of dietary vitamin C and zinc supplementation on wound healing, immune response and growth performance in swine, Indian Journal of Animal Sciences, 736, pp.674–677.
Bigliardi P., L. Alsagoff, S.A.L., El-Kafrawi H.Y., Pyon J.K., Wa C.T.C., Villa M, A., 2017,
Povidone iodine in wound healing: A review of current concepts and practices. Int J Surg. 44, pp 260-268.
Bhaskar  B  dan  Shantaram  M.,  2013,  Morphological  and  biochemical  characteristics  of Averrhoa  fruits .  International  Journal  of  Pharmaceutical,  Chemical  and  Biological Sciences, 3(3), pp.924-928.
Buzzini P, Arapitsas P, Goretti M., 2008, Antimicrobial and antiviral activity of hydrolysable tannins. Mini Rev Med Chem. 12, pp.1179–1187.
ChenY. , L. Tian, F. Yang, W. Tong, R. Jia, Y. Zou, L. Yin, L. Li, C. He, X. Liang, G. Ye, C. Lv, X. Song, Z. Yin., 2019, Tannic acid accelerates cutaneous wound healing in rats via activation of the ERK 1/2 signaling pathways. Adv. Wound Care, 8, pp.341-354.
Cukjati, D., Rebersek, S. and Miklavcic, D., 2001, A reliable method of determining wound healing rate. Med. Biol. Eng. Comput. 39, pp.263–271.
Ehrlich H. P. and T. K. Hunt, 1969, The effects of cortisone and anabolic steroids on the tensile strength of healing wounds, Annals of Surgery, 170(2), pp.203–206.
Getie M., M. T. Gebre, R. Reitz, and R. H. Neubert, 2002, Evaluation of the release profiles of flavonoids  from  topical  formulations  of  the  crude  extract  of  the  leaves  of Dodonea viscosa (Sapindaceae), Pharmazie, 57. pp.320–322.
Gomathi K, Gopinath D, Ahmed MR, Jayakumar R., 2003, Quercetin incorporated collagen matrices for dermal wound healing processes in rat. Biomaterials, 24, pp.2767-2772.
Guo S., Dipietro L.A., 2010, Factors affecting wound healing. J Dent Res. 89(3), pp.219-29.
Gurtner  G.C., Werner S., Barrandon Y., Longaker M.T., 2008, Wound repair and regeneration.
Nature , 453, pp.314–321.
Han G, dan Ceilley, R., 2017, Chronic Wound Healing: A review of current management and treatments. Adv. Ther. 34, pp.599–610.
Hartini  IGAA.,  2012,  Topical  application  of  ethanol  extract  of  starfruit  leaves  ( Averrhoa bilimbi L.)  increases  fibroblasts  in  gingival  wounds  healing  of  white  male  rats, Indonesia Journal of Biomedical Science, 6(1), pp.35-39.
Haslam E., 1996, Natural polyphenols (vegetable tannins) as drugs: possible modes of action. J Nat Prod. 59(2), pp205–215.
Ibrahim N. I., Sok K.W., Isa N.M., Norazlina M., Kok-Yong C., Soelaiman I-N., dan Ahmad N. S., 2018, Wound healing properties of selected natural products. Int. J. Environ. Res. Public Health, 15, 2360.
Just  MJ,  Recio  MC,  Giner  RM,  Cuéllar  MJ,  Máñez  S,  Bilia  AR,  Ríos  J-L.,  1998,  Anti- inflammatory activity of unusual lupane saponins from Bupleurum fruticescens . Planta medica, 64, pp.404-407.
Kim YS, Cho I-H, Jeong M-J, Jeong S-J, Nah SY, Cho Y-S, Kim SH, Go A, Kim SE, Kang SS,  Moon  CJ,  Kim  JC,  Kim  SH,  Bae  CS.,  2011,  Therapeutic effect  of  total  ginseng saponin on skin wound healing, Journal of ginseng research, 35, pp.360-367.
Kimura Y, Sumiyoshi M, Kawahira K, Sakanaka M., 2006, Effects of ginseng saponins isolated from  Red  Ginseng  roots  on  burn  wound  healing  in  mice.  British  journal  of Pharmacology, 148, pp.860-870.
Kumar, K.A., Gousia, S., Anupama, M. dan Latha, J.N.L., 2013, A review on phytochemical constituents  and  biological  assays  of Averrhoa  bilimbi .  International  Journal  of PHarmacy and PHarmaceutical Science Research , 3(4), pp.136-139.
Kupeli, Akkol E., U. Koca, I. S Pesin, and D. Yilmazer, 2011, Evaluation of the wound healing potential of Achillea biebersteinii Afan. (Asteraceae) by in vivo excision and incision models, Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2011:474026.
Lansdown A. B. G., U. Mirastschijski, N. Stubbs, E. Scanlon, and M. S. Agren, 2007, Zinc in wound  healing:  theoretical,  experi-mental,  and  clinical  aspects,  Wound  Repair  and Regeneration, 15(1) pp.2–16.
MacKay  D.  and  A.  L.  Miller,  2003,  Nutritional  support  for  wound  healing,  Alternative Medicine Review, 8(4), pp.359–377.
Men SY, Huo QL, Shi L, Yan Y, Yang CC, Yu W, Liu BQ., 2020, Panax notoginseng saponins promotes cutaneous wound healing and suppresses scar formation in mice. Journal of Cossmetic Dermatology, 19(2), pp.529-534.
Metelmann, H.R., Brandner, J.M., Schumann, H., Brossd, F., Hoffmannd, M., Podmelle, F., 2012,  Accelerating  the  aesthetic  benefit  of  wound  healing  by  triterpene. J. Craniomaxillofac. Surg., 40, pp.150–154.
Metelmann,  H.R..,  Brandner,  J.M.,  Schumann,  H.,  Bross,  F.,  Fimmers,  R.,  Böttger,  K., Scheffler, A., Podmelle, F., 2015, Accelerated reepithelialization by triterpenes: Proof of concept in the healing of surgical skin lesions. Skin Pharmacol. Physiol, 28.
Meyer-Ingold W., 1993, Wound therapy: growth factors as agents to promote healing, Trends in Biotechnology, 11(9), pp.387–392.
Muhammad  and  Veronique,  2015.  Isolation  of  Triterpenes  from  Propolis  (Bee  Glue),  Bio- protocol. 5(20):e1630.
NatarajanV., N. Krithica, B., Madhan, P.K., Sehgal., 2013, Preparation and properties of tannic acid  cross-linked  collagen  scaffold  and  its  application  in  wound  healing.  J.  Biomed. Mater. Res. B Appl. Biomater, 101, pp.560-567.
Navarro P, Giner RM, Recio MC, Máñez S, Cerdá-Nicolás M, Rı ́os J-L., 2001, In vivo anti- inflammatory activity of saponins from Bupleurum rotundifolium L. Life Sciences, 68, pp.1199-1206.
NinanN. , A. Forget, V.P. Shastri, N.H. Voelcker, A. Blencowe.,  2016,  Antibacterial and  anti- inflammatory pH-responsive tannic acid-carboxylated agarose composite hydrogels for wound healing, ACS Appl. Mater. Interfaces, 8, pp.28511-28521.
Orwa,  C.,  Mutua,  A.,  Kindt,  R.,  Jamnadass,  R.  dan  Anthony,  S.  2009. Averrhoa  bilimbi L.. pp.1–5. Kenya: Agroforestree Database.
Patil AG, Koli SP, Patil DA., 2013, Pharmcognostical standardization and HPTLC fingerprint of Averrhoa bilimbi (L.) Fruits. Journal of Pharmacy Research , 6(2013), pp.145-150.
Sakar  M.  K.  and  M.  Tanker.,  1991,  Phytochemical  Analysis  (Determination,  Quantitative Analysis and Isolation), Ankara University, Faculty of Pharmacy, Ankara,Turkey.
Samah A.R. , B.M.  NaserEldin , Z.A Aisha., 2016, In vivo antibacterial and wound healing activities of Acacia ehrenbergiana , Mediterr. J. Biosci. 1(4), pp.147–152.
Santana L. F., A. C. Inada, B. L. S. do Espirito., 2019, Nutraceutical potential of Carica papaya in metabolic syndrome, Nutrients, 11(7), pp.1608.
Sharma  A,  Suryamani  K,  Gaganjot  K  and  Inderbir  S.,  2021,  Medicinal  plants  and  their components  for  wound  healing  applications,  Future  Journal  of  Pharmaceutical Sciences. 7:5.
Sharma S. P, Aithal K. S., K. K. Srinivasan, A. L. Udupa, V. Kumar, D. R. Kulkarni, 1990, Anti-inflammatory  and  wound  healing  activities  of  the  crude  alcoholic  extracts  and flavonoids of Vitex leucoxylon , Fitoterapia, 61, pp.263–265.
Shetty S., S. Udupa, and L. Udupa., 2008, Evaluation of antioxidant and wound healing effects of  alcoholic  and  aqueous  extract  of Ocimum  sanctum Linn  in  rats,  Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 5(1), pp.95–101.
Su  X,  Liu  X,  Wang  S,  Li  B,  Pan  T,  Liu  D,  Wang  F,  Diao  Y,  Li  K.,  2017,  Wound-healing promoting eff ect of total tannins from Entada phaseoloides (L.) Merr. in rats. Burns. 43(4), pp.830-838.
Suntar  I.P.,  U.  Koca,  H.  Keles,  and  A.  E.  Kupeli,  2011 a ,  Wound  healing  activity  of Rubus sanctus Schreber  (Rosaceae):  preclinical  study  in  animal  models,  Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2011: 816156.
Suntar  I.P.,  Ufuk  K.,  E.K  Akkol,  Demet  Y.,  dan  Murat  A.,  2011 b .  Assessment  of  Wound Healing Activity of the Aqueous Extracts of Colutea cilicica Boiss. & Bal. Fruits and Leaves.  Hindawi  Publishing  Corporation  Evidence-Based  Complementary  and Alternative Medicine. 2011:758191.
Teixeira D.S., Maria A.Z.F., Karen C., Sílvia D.O., Fernanda G.S,. 2019. The topical effect of chlorhexidine  and  povidone-iodine  in  the  repair  of  oral  wounds.  A  review . Stomatologija. Baltic Dental and Maxillofacial Journal, 21, pp 35-41.
Yan  SW,  Ramasamy  R,  Alitheen  NBM,  Rahmat  A.,  2013,  A  Comparative  Assessment  of Nutritional Composition, Total Phenolic, Total Flavonoid, Antioxidant Capacity, and Antioxidant  Vitamins  of  Two  Types  of  Malaysian  Underutilized  Fruits  ( Averrhoa bilimbi and Averrhoa  carambola ).  International  Journal  of  Food  Properties,  16(6), pp.1231– 1244.