## ISOLASI, KARAKTERISASI, DAN IDENTIFIKASI BAKTERI ENDOFIT

## Sargassum polycystum PENGHASIL ENZIM ALGINAT LYASE

## ISOLATION, CHARACTERIZATION, AND IDENTIFICATION OF ENDOPHYTE BACTERIA OF Sargassum polycystum PRODUCING ALGINATE LYASE ENZYME
Yesica Bella Safitri 1 , Agus Setyawan 1,2* , Ni Luh Gede Ratna Juliasih 1,3 , Endang Linirin Widiasuti 1,4 , Gregorius Nugroho Susanto 1,4
1 Magister Manajemen Wilayah Pesisir dan Laut, Universitas Lampung
2 Jurusan Perikanan dan Kelautan, Universitas Lampung,
3 Jurusan Kimia, Universitas Lampung,
4 Jurusan Biologi, Universitas Lampung Jl. Soemantri Brodjonegoro, Gd. Meneng, Bandar Lampung, 35145, Lampung, Indonesia Email: agus.setyawan@fp.unila.ac.id

## ABSTRAK
Alginat, polisakarida dari alga cokelat laut, banyak dimanfaatkan untuk antitumor, antiinflamasi, dan juga antivirus.  Namun,  alginat  memiliki  berat  molekul  yang  besar  yang  membuatnya  sulit  dicerna  oleh beberapa  organsime.  Oleh  akrena  itu,  penting  untuk  mencari  enzim  alginate  lyase  untuk  memotong alginate  secara  enzimatis.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  mendapatkan  isolat  bakteri  yang  menghasilkan enzim alginat lyase dari Sargassum polycystum . Isolasi bakteri penghasil alginat lyase dilakukan dengan mengkoleksi  rumput  laut Sargassum  polycystum .  dari  Pantai  Sebalang,  Tarahan,  Lampung  Selatan kemudian  bakteri  diisolasi  dengan  metode  pengenceran.  Koloni  yang  didapat  dimurnikan  dan  diseleksi dengan menggunakan uji aktivitas Aktivitas alginat lyase ditandai dengan adanya zona bening di sekitar koloni  setelah  ditetesi  dengan  larutan  10%  setil  piridinium  klorida,  serta  diidentifikasi  secara  morfologi, biokimia  dan  molekuler  menggunakan  gen  16S-rDNA.  Pada  penelitian  ini  diperoleh  empat  isolat  yang mempunyai aktivitas alginat lyase, yaitu PTF, PTE, PTH dan PTG dengan indeks alginolitik tertinggi adalah isolat PTF dan PTH. Hasil uji biokimia dan karakterisasi secara molekuler menunjukkan isolat PTH dan PTF memiliki kemiripan dengan jenis bakteri Bacillus cereus .
Kata kunci : Alginat, Enzim Alginat Lyase, Bacillus cereus, Rumput Laut Coklat

## ABSTRACT
Alginate, polysaccharide from marine brown algae, is widely used for antitumor, anti-inflammatory, and also  antiviral.  However,  alginate  has  large  molecular  weight  that  difficult  to  digest  in  some  organsims. Therefore, it is important to look for the alginate lyase enzyme to break down the alginate. The purpose of  this  study  was  to  obtain  bacterial  isolates  that  produce  alginate  lyase  enzymes  from  Sargassum polycystum.  Isolation  of  alginate  lyase-producing  bacteria  was  carried  out  by  collecting  Sargassum polycystum.  from  Sebalang  Beach,  Tarahan,  South  Lampung  then  the  bacteria  were  isolated  by  the dilution method. The colonies obtained were purified and selected using qualitative (clear zone) and semi- quantitative  activity  tests,  and  identified  morphologically,  biochemically  and  molecularly  using  the  16S- rDNA gene. In this study, 20 pure bacterial isolates were obtained with one isolate having alginate lyase activity, namely PTF and PTH. The results of biochemical tests and molecular characterization showed that the isolate was Bacillus cereus.
Keywords : Alginate, Alginate Lyase Enzyme, Bacillus cereus, Brown Algae

## PENDAHULUAN
Sargassum polycystum merupakan salah  satu  jenis  alga  coklat  yang  memiliki kandungan  alginat  yang  tinggi.  Rumput  laut
coklat  memiliki  kandungan  senyawa  aktif yaitu alginat dengan rendeman dari berbagai jenis  alga  coklat  berkisar  antara  10-40% (Sinurat  &  Merliani,  2017;  Laksanawati, 2017).  Alginat  merupakanan    salah  satu
senyawa  yang  banyak  dimanfaatkan  untuk antitumor,  antiinflamasi,  dan  juga  antivirus (Fernando et  al ,  2019;  Dousip et  al .,  2014;) serta imunostimulan (Setyawan et al ., 2020; 2021), selain itu alginat bersifat biodegradasi karena dapat menurunkan konsentrasi tembaga  secara  adsorptif  dari  dalam  air (Pratama et al ., 2022)  dan ammonia melalui imobilisasi bakteri (Setyawan et al ., 2022). Alginat  merupakan  hidrokoloid  alami suatu polimer panjang yang disusun oleh dua unit  monomerik,  yaitu  β -D-  mannuronic  acid dan  α -L-guluronic  acid.  Alginat  memiliki berbagai kelemahan sehingga penggunaannya  menjadi  terbatas  karena berat  molekul  yang  besar  yakni  500-1000 kDa  (Sinurat  &  Marliani,  2017)  maka  untuk mengatasinya  adalah  dengan  pemecahan molekul  pendegradasi  alginat  pada  proses enzimatik, yaitu enzim alginat lyase.
Enzim alginat lyase dapat mengkatalisis pemecahan  alginat  dengan  mekanisme elimina si  β  dari  ikatan  glikosil  4 -O  dan menghasilkan 4-deoxy-L-erythro-hex-4- enepiranosi  luronat  pada  ujung  gugus  non reduksi  dari  oligosakarida  yang  dihasilkan (Gacesa,  1992).  Pemanfaatan  enzim  alginat lyase yaitu produksi oligosakarida, pengaturan  sifat  polisakarida,  dan  analisis struktur  polisakarida  (Surbaryono et  al ., 2013).
Bakteri  penghasil  alginat  lyse  yang didapatkan dari rumput laut dalam penelitian Subaryono,  2015  penghasil  enzim  alginat lyase dari alga coklat Sargassum crassifolium adalah  isolat  S245  yang  teridentifikasi sebagai Bacillus  megaterium ,  isolat  S235 yang teridentifikasi sebagai Bacillus thuringiensis, isolat  S155  yang  teridentifikasi sebagai Bacillus cereus, dan isolat S215 yang teridentifikasi
sebagai
Bacillus pseudomycoides .  Penelitian  Wang et  al ., 2017  menyatakan  bakteri  penghasil  alginat lyase  dengan  aktivitas  enzim  tertinggi  dari alga Laminaria    Japonica adalah  LJ-3  yakni genus  Bacillus  sp.  Berdasarkan  berbagai uraian diatas, dapat diketahui bahwa potensi rumput  laut  ini  cukup  besar  karena pertumbuhannya  yang  cepat  dan  tersebar hampir  di  semua  Perairan  Indonesia  karena indonesia memiliki gelombang kuat dan dasar berkarang,  namun  pemanfaatan  rumput  laut masih  terbatas  sehingga  perlu  adanya pengelolaan wilayah pesisir secara maksimal, maka dalam penelitian ini dilakukan penapisan  (screening),  identifikasi  dan  uji aktivitas  alginat  lyase  dari  bakteri  yang bersimbion  dengan  Sargassum  polycystum yang dikoleksi dari perairan Lampung dengan
harapan  mampu  menghasilkan  enzim  alginat lyase sebagai pendegradasi alginat. Berdasarkan  uraian  diatas  maka  perlu dilakukan  penelitian  untuk  mendapatkan isolat  bakteri  yang  menghasilkan  enzim alginat  lyase  dari  Sargassum  polycystum yang dikoleksi dari perairan Lampung.

## METODE PENELITIAN
Rumput  laut  Sargassum  polycystum diperoleh  dari  perairan  Tarahan  Lampung Selatan, Provinsi
Lampung.
Media pertumbuhan  bakteri  seperti  Nutrien  Agar diperoleh  dari  Oxoid,  Co  Ltd.  Bahan  kimia untuk  pengujian  aktivitas  enzim  seperti Cetylpyridinium chloride, H 2 O 2 , dan KOH 3%. Isolasi  bakteri  penghasil  alginat  lyase Sargasssum  polycystum .  dibilas  dengan menggunakan air laut steril pada cawan petri steril.  Setelah  itu Sargasssum  polycystum . dipotong  kemudian  digerus  menggunakan mortar  kemudian  diambil  1  g.  Pengenceran sampel  dilakukan  dengan  menggunakan  air laut  steril  agar  mendapatkan  koloni  bebas. Pengenceran dilakukan hingga 103 selanjutnya,  diambil  150  µl  sampel  hasil pengenceran  dan  masing-masing  dituang  di atas media NA (nutrien agar) dan disebarkan menggunakan  L-glass.  Inkubasi  dilakukan pada  suhu  30 o C  selama  72  jam.  Koloni bakteri  yang  tumbuh  kemudian  diisolasi kembali  pada  media  baru  dengan  komposisi yang  sama  dan  di  inkubasi  selama  24  jam pada  suhu  37 o C  sampai  mendapat  isolat murni.
Uji  aktivitas  alginat  lyase  dengan  cara isolasi  bakteri  kedalam  media  miring  selama 24  jam  lalu  diberi  NaCl  setengah  dari kapasitas  media  miring  lalu  ambil  100  µl bakteri,  dikultur  pada  media  NA  yang mengandung 1 mg/ml natrium alginat. Kertas cakram  yang  sudah  diberi  larutan  CPC (Cetylpyridinium chloride) kemudian di tempelkan  di  media  NA  yang  sudah disebarkan  bakteri.  Inkubasi  dilakukan  pada suhu  37 o C  selama  24  jam.  Terbentuknya zona bening disekeliling bakteri menunjukkan adanya aktivitas alginat lyase. Kemudian diuji semi  kuantitatif  dengan  melakukan  hal  yang sama  namun  dengan  tiga  kali  ulangan  dan dihitung  diameter  zona  bening  dan  diameter koloni diukur dengan rumus sebagai berikut:
𝐼𝑛𝑑𝑒𝑘𝑠 𝐴𝑙𝑔𝑖𝑛𝑜𝑙𝑖𝑡𝑖𝑘 = Ø 𝑍𝑜𝑛𝑎 𝐵𝑒𝑛𝑖𝑛𝑔 −  Ø 𝐾𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 𝐵𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖 Ø 𝐾𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 𝐵𝑎𝑘𝑡𝑒𝑟𝑖
× 100%
Identifikasi  bakteri  dilakukan  terhadap bakteri  yang  memiliki  indeks  aktiviatas alginat  lyase  yakni  dilakukan  dengan
pengamatan  secara  morfologi,  biokimia  dan genetik. Pengamatan secara morfologi terhadap  koloni  bakteri  yang  tumbuh  pada media  agar  dilakukan  Untuk  pengamatan makroskopik  dilakukan  secara  langsung dengan  melihat  morfologi  koloni  bakteri yaitu: bentuk koloni (bulat, seperti akar, atau tidak  beraturan),  warna,  ukuran,  bentuk, tepian  (mulus,  bergelombang,  bergerigi,  dan filamentus),  dan  elevasi  koloni  (datar,  naik, dan  cembung)    (Suryani  &  A’yun,  2022). Identifikasi secara biokimia dilakukan dengan melihatkemampuan bakteri dalam uji katalase,  uji  gram  dan  uji  oksidatif/ fermentatif isolat dengan umur isolat yaitu 24 jam.  Selanjutnya  identifikasi  secara  genetik dilakukan  dengan  uji  sequencing  16S  rDNA terhadap  isolat  bakteri  yang  sudah  berumur 24  jam.  Primer  yang  digunakan  untuk amplifikasi 16S rDNA adalah fragment  27F 5' (AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG) dan 1492R 5'  (TAC  GGY  TAC  CTT  GTT  ACG  ACT  T)  dan kemudian  dibuat  pohon  filogenetik  yang diperoleh dari program tersebut.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik  Isolat  Bakteri  yang  Positif Memproduksi Alginat Lyase
Isolat  bakteri  murni  yang  diperoleh adalah  20  isolat  yang  mana  terdapat  empat di  antaranya  positif  yang  ditunjukkan  oleh adanya  zona  bening  di  sekeliling  koloni setelah  ditetesi  larutan  10% Cetylpyridinium chloride atau  teridentifikasi  sebagai  bakteri yang positif menghasilkan alginat lyase yang dapat dilihat pada Gambar 1.
Nilai indeks alginolitik isolat bakteri PTF adalah  5,8  ±0,16,  isolat  PTH  adalah 5,98±0,21,  PTE  1,31±0,67,  dan  PTG 0,95±0,13. Dua isolat yang positif menghasilkan  alginat  lyase  ini  memiliki  nilai indek  alginolitik  yang  cukup  besar  (indek alginolitik  >2),  sedangkan  dua  isolat  lainnya memiliki  indeks  alginolitik  yang  kecil  (Tabel 1).  Hasil  pengamatan  morfologi  bakteri penghasil  alginat  lyase  secara  makrokospir ditampilkan  pada  Tabel  1  terlihat  bahwa untuk  keempat  isolat  tersebut  memiliki kesamaan  baik  segi  warna  maupun  bentuk serta elevasinya.
Berdasarkan perbedaan sifat biokimianya, bakteri  dapat  diidentifikasi  dengan  cara membandingkan hasil pengujian dengan data isolat yakni PTE, PTF, PTH dan PTG (Tabel 2). Keempat  isolat  merupakan  golongan  bakteri gram positif, hal ini terlihat dari hasil uji bahwa tidak terbentuknya lendir dari  pencampuran
Tabel 1. Karakteristik  koloni  bakteri  yang positif menghasilkan alginat lyase
Jenis isolat Karakteristik Isolat Bakteri Karakteristik Indek alginolitik* PTE Warna koloni krem, bentuk koloni bulat, tepian mulus dengan elevasi datar 1,31±0,67 PTF Warna koloni krem, bentuk koloni bulat, tepian  bergerigi  dengan elevasi cembung 5,31±0,16 PTH Warna koloni krem, bentuk koloni bulat, tepian  bergerigi  dengan elevasi cembung 5,98±0,21 PTG Warna koloni krem, bentuk koloni tidak beraturan, tepian bergerigi  dengan  elevasi cembung 0,95±0,13
* Nilai  merupakan  rerata  dari  tiga  kali ulangan dengan standar deviasinya
Gambar  1. Isolasi  bakteri  dari Sargassum polycystum .  yang  menunjukkan  aktivitas alginat lyase. Keterangan: Gambar merupakan  hasil  uji  kualitatif  yang  mana tanda  panah  merah  merupakan  zona  bening yang terbentuk.
bakteri  dan  KOH  3%  sedangkan  hasil  uji katalase  yang  telah  dilakukan  menunjukan bahwa  dari  empat  isolat  tersebut  positif
terhadap  H 2 O 2 3 %, hal ini terlihat dari hasil uji  bahwa  terbentuknya  gelembung  dari pencampuran bakteri dan H 2 O 2 3 %. Hasil uji oksidasi  fermentatif  yang  telah  dilakukan menunjukkan  bahwa  dari  empat  isolat  yakni bersifat  fermentatif,  hal  ini  terlihat  dari  hasil uji  bahwa  adanya  perubahan  warna  pada kedua  media  yang  awalnya  berwarna  hijau kini berubah menjadi kuning.
Hasil  pengamatan  biokimia  lalu  diuji sequensing  16S  rRNA  dengan  melihat kemiripan isolat PTF dan PTH dengan bakteri Bacillus cereus dengan menunjukan nilai 99%
yang dapat dilihat pada Gambar 2.
Hasil  uji  kualitatif  mempunyai  aktivitas alginolitik  dengan  kisaran  antara  0,95  mm sampai  5,98  mm.  Dua  dari  empat  isolat memiliki  aktivitas  tertinggi  yakni  isolat  PTH dengan nilai 5,98 mm diikuti oleh PTF senilai 5,31  mm.  Adanya  indeks  aktivitas  alginolitik ini  adalah  gambaran  perbandingan  dari besarnya  diameter  koloni  bakteri  dengan besarnya  zona  bening  disekitar  koloni  yang terbentuk, hal ini dilakukan untuk mengetahui  atau  memprediksi  jumlah  enzim yang  di  produksi.  Subaryono et  al  ( 2015)
Tabel 2. Hasil uji biokimia bakteri penghasil alginat
Isolat Jenis uji Uji gram KOH 3% Uji katalase H 2 O 2 3% Uji O/F PTF + + Fermentatif
PTH
+ + Fermentatif
Gambar  2. Pohon  Filogenetik  Berdasarkan  Sekuen  Gen  16S  rRNA  dari  Isolat  Bakteri  PTF Endofit Sargassum Polycystum
Gambar  3. Pohon  Filogenetik  Berdasarkan  Sekuen  Gen  16S  rRNA  dari  Isolat  Bakteri      PTH Endofit Sargassum Polycystum
menyatakan  bahwa  jika  zona  bening  yang terbentuk  >  2  mm  maka  dapat  dikatakan bakteri  tersebut  memiliki  aktivitas  alginolitik yang  besar.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Sawant et  al (2015)  dan  Subaryono et  al ( 2015)  yang  menguji  aktivitas  alginolitik menggunakan  zona  bening  dengan  larutan Cetylpyridinium  chloride  (CPC)  didapatkan hasil  alginolitik  tertinggi  2,78  mm  sampai 3,93 mm. Maka dalam  penelitian ini hasil uji kualitatif termasuk besar karena lebih dari 2 mm.
Morfologi pada isolat PTH, PTF, PTE dan PTG  menunjukan  bahwa  kempat  isolat memiliki beberapa kesamaan yakni berwarna krem  dengan  bulat  dan  tidak  beraturan, elevasi  yakni  ketinggian  bakteri  tumbuh adalah rata dan cembung serta tepian mulus dan  bergerigi.  Hasil  uji  morfologi  ini  sesuai dengan beberapa penelitian juga melaporkan hasil  isolasi  bakteri  dari  rumput  laut mempunyai  morfologi  warna  berwarna  krem dengan  bentuk  yang  berbeda-beda  yakni bulat  maupun  tidak  beraturan  elevasi  yang datar  dan  serta  tepian  mulus  dan  bergerigi (Wang et al ., 2017; Nguyen et al ., 2021) Hasil  uji  biokimia  menunjukkan  bahwa keempat bakteri ini memiliki sifat yang sama yaitu  Gram  positif,  katalase  positif  dan fermentatif  positif.  Pengamatan  sifat  gram menggunakan  KOH    3%  menunjukkan adanya  bakteri  gram  positif  karena  dinding selnya  memiliki  lapisan  peptidoglikan  yang tebal  sehingga  tidak  dapat  mendestruksi dinding  sel  bakteri  akibat  berada  dalam larutan alkali tinggi.
Adanya sifat katalase positif menunjukkan  bahwa  keempat  bakteri  ini memiliki  kemampuan  memecah  hidrogen peroksida  menjadi  oksigen  dan  air.  Hidrogen peroksida  termasuk  racun  bagi  bakteri karena  bersifat  toksik  untuk  susunan  sel bakteri  dan  dapat  menginaktivasikan  suatu enzim (Pratiwi & Asri, 2022).
Berdasarkan  hasil  oksidatif/  fermentatif bahwa keempat isolat bersifat fermentatif hal ini  dikarenakan  media  O/F  berubah  warna hijau  menjadi  kuning.  Media  tersebut berwarna  kuning  maka  bakteri  bersifat anerob  fakultatif  yang  mana  dapat  tumbuh baik ada oksigen maupun minim oksigen atau bahkan  tidak  ada  oksigen  hal  ini  terjadi karena  bakteri  mampu  memetabolisme  gula, terlihat  bahwa  beberapa  bakteri  ini  mampu memanfaatkan glukosa pada kondisi anaerob melalui  proses  fermentasi  (Sinubu et  al ., 2022).
Hasil  16S  rDNA  disajikan  pada  Gambar 2  dan  3  bahwa  isolat  PTF  dan  PTH  memiliki kemiripan  dengan  jenis  bakteri Bacillus cereus. adanya  kesamaan  ini  dikarenakan
dari hasil biokimia terdapat persamaan yakni dari  uji  Gram,  katalase  dan  O/F  untuk meningkatkan  spesifisitas  terhadap  bakteri yang diujikan. Isolat PTF dan PTH ini memiliki kemiripan  dengan  Bacillus  cereus  ID  99%, sehingga kemungkinan besar isolat ini adalah dari  jenis Bacillus  cereus .  Pernyataan  ini didukung  oleh  Subaryono et  al .,  2015  dan Moritania et al ., 2019 bahwa Bacillus cereus . merupakan bakteri yang bersifat gram positif dengan  morfologi  berbentuk  bulat  berwarna putih  susu  dengan  tepian  mulus  dan  elevasi datar. Bacillus cereus bersifat aerobik sampai anaerobik  fakultatif  yang  artinya  adalah bakteri  tersebut  mampu  respirasi  secara aerob  maupun  fermentatif  serta  katalase mendapatkan  hasil  positif.  Bakteri  ini  hidup dalam rumput laut Sargassum polycystum hal ini  terjadi  karena  kondisi  lingkungan  tempat rumput  laut  tersebut  tumbuh  memiliki kesamaan  yaitu  di  laut  serta  bakteri  jenis Bacillus  cereus mampu  bertahan  pada lingkungan  dengan  kandungan  NaCl  yang tinggi  yakni  2-25%  (Bhaktinagara., et  al 2015; Tripathi et al ., 2022).
Beberapa  alga  memerlukan  vitamin tertentu  yang  sering  disuplai  oleh  bakteri yang tumbuh menempel dan berasosiasi pada rumput laut hal ini disebabkan karena adanya simbiosis  mutualisme  antara keduanya (Subaryono et al ., 2015). Hal ini terlihat pada penelitian Mulyasari et al (2015) bahwa hasil isolasi bakteri dari rumput laut Sargassum sp menghasilkan aktivitas enzim selulase dengan  memanfaatkan  selulosa  sebagai komponen  selulernya  dan  pada  penelitian juga  terlihat  bahwa  isolasi  dari  rumput  laut Eucheuma  cottonii menghasilkan  Enzim karagenase  yang  mendegradasi  karagenan (Zelvi et al ., 2017).
Dalam  penelitian  ini  alginat  dalam rumput laut Sargassum polycystum dimanfaatkan  sebagai  sumber  karbon  oleh jenis-jenis  bakteri  yang  memiliki  aktivitas alginat  lyase  untuk  menghasikan  enzim alginat lyase.

## KESIMPULAN
Dari  penelitian  ini  dapat  disimpulkan bahwa  bakteri  penghasil  alginat  lyase berhasil diisolasi dari rumput laut Sargassum polycystum .  Bakteri  yang  memiliki  nilai indeks alginolitik tinggi adalah isolat PTF dan PTH yang teridentifikasi Bacillus cereus .

## REFERENSI
Bhaktinagara,  R.A.,  Suprihadi,  A.  &  Raharjo,
B. 2015. Biodegradasi Senyawa
Hidrokarbon Oleh Strain Bacillus cereus (VIC)  Pada  Kondisi  Salinitas  Yang Berbeda. Jurnal Biologi , 4: 62-71.
Dousip,  A.,  Matanjun,  P.,  Sulaiman,  M.R., Tan, T.S., Ooi, Y.B.H. & Lim, T.P., 2014. Effect  of  seaweed  mixture  intake  on plasma  lipid  and  antioxidant  profile  of hyperholesterolaemic rats. Journal  of Applied Phycology, 26: 999 – 1008. DOI: 10.1007/ s10811-013-0128-y Fernando, I., Kim, K.N., Kim, D. & Jeon, Y.J., 2019.  Algal  polysaccharides:  potential bioactive  substances  for  cosmeceutical applications. Critical Reviews in
Biotechnology, 39: 99 – 113. DOI: 10.10 80/07388551.2018.150399 5
Gacesa.,  P.  1992.  Enzymatic  degradation  of alginates. International  Journal  of Biochemistry ,  24:545-552.  DOI:  10.10 16/0020-711X9290325-U
Moritania,  R.,  Efendi  I.  &  Feliatra,  F.  2019. Isolation  And  Antagonism  Of  Bacteria Test  Of  Biota  In  The  Mangrove Ecosystem  Kayu  Ara  River  Siak Regency.  A sian  Journal  of  Aquatic Sciences , 2(3):190-196
Mulyasari,  M.,  Melati,  I.  &  Sunarno,  M.T.D., 2015.  Isolasi,  Seleksi,  Dan  Identifikasi Bakteri  Selulolitik  Dari  Rumput  Laut Turbinaria Sp.  Dan Sargassum Sp. Sebagai  Kandidat  Pendegradasi  Serat Kasar Pakan Ikan. Jurnal Riset
Akuakultur, 10:51-60.  DOI:  10.15578/ jra.10.1.2015.51-60
Nguyen,  T.N.T.,  Chataway,  T.,  Araujo,  R., Puri,  M.  &  Franco,  C.M.M.,  2021. Purification  and  Characterization  of  a Novel  Alginate  Lyase  from  a  Marine Streptomyces Species  Isolated  from Seaweed. Marine Drugs , 19(11): p.590. DOI: 10.3390/md19110590 Pratama,  B.S.,  Hambali,  E.,  Yani,  M.  & Matsue,  N.,  2022.  Pemanfaatan  film alginat dan alginat/montmorillonite sebagai  adsorben  cu(ii). Jurnal  Sains Dasar ,  11:  70 – 77.  DOI:  10.21831/jsd. v11i2.51544 Pratiwi,  W.M.  &  Asri,  M.T.,  2022.  Isolasi  dan Identifikasi Bakteri Indigenous Pendegradasi  Pestisida  Profenofos  dan Klorantraniliprol di Jombang Jawa Timur.
Lentera  Bio  Berkala  Ilmu  Biologi ,  11,
300 – 309.  DOI:  10.26740/lenterabio. v11n2
Sawant,  S.S.,  Salunke,  B.K.  &  Kim,  B.S., 2015.  A  rapid,  sensitive,  simple  plate assay for detection of microbial alginate lyase  activity  Enzyme Microbiology Technology ,  77:  8 – 13.  DOI:  10.1016/j. enzmictec.2015.05.003
Setyawan, A., Supono., Wijayanti, A.  & Anti, U.T.  2022.  Effectiveness  of  using  of brown  algae  alginate  to  immobilize  the indigenous  bioremediation  bacteria  for reducing  waste  water  from  shrimp culture. IOP  Conference  Series:  Earth and Environmental Science , 1027(1): p.
012010.  DOI:10.1088/17551315/1027/ 1/012010
Setyawan, A., Hudaidah, S. & Fidyandini, H.P. 2021.  Non-specific  immune  response  of Pacific white shrimp
Litopenaeus vannamei by  supplementation  of  sodium alginate  of Sargassum collected  from Lampung  Indonesia. IOP  Conference Series:  Earth  and  Environmental .  DOI: 10.1088/1755-1315/890/1/012015 Setyawan, A., Supono, Safitri, Y.B., Hudaidah,  S.  &  Fidyandini,  H.P.2020 Suplementasi kalsium alginat
Sargassum  sp.  dari  Perairan  Lampung untuk  memicu  respon  imun  Penaeus vannamei.  In:  Isnansetyo  A,  editor. Semnaskan  UGM  XVII.  Yogayakarta : Jurusan Perikanan UGM, p.1-9.
Sinubu,  W.V.,  Tumbol,  R.A.,  Undap,  S.L.,
Manoppo,  H.  &  Kreckhoff,  R.L.,  2021. Identifikasi  bakteri  patogen  Aeromonas sp.  pada  ikan  Nila  ( Oreochromis niloticu s) di Desa Matungkas, Kecamatan Dimembe,  Kabupaten  Minahasa  Utara. Jurnal  Budidaya  Perairan ,  10(2):  109- 120.  DOI:  10.35800/bdp.10.2.2022.36 633
Sinurat,  E.  &  Marliani,  R.  2017.  Karakteristik natrium alginat dari rumput laut cokelat Sargassum crassifolium dengan perbedaan alat  penyaring. Jurnal  Pengolahan  Hasil Perikanan  Indonesia, 20(2):  351-361. DOI: 10.17844/jphpi.v20i2.18103
Subaryono, S., Peranginangin, R., Suhartono, M.T.  &  Zakaria,  F.R.,  2015.  Isolasi  dan Identifikasi  Bakteri  Penghasil  Alginat Lyase  dari  Rumput  Laut Sargassum crassifolium . Jurnal  Pascapanen  Dan Bioteknologi Kelaututan Dan Perikananan , 10(1):  1-9.  DOI:  10.15578/jpbkp.v10 i1.239
Suryani, S. & A’yun,  Q. 2022. Isolasi bakteri endofit  dari  mangrove Sonneratia  alba asal  pondok  2  pantai  Harapan  Jaya Muara Gebong, Bekasi. Bio sains: Jurnal Imliah biologi. 1(2):12-18. Tripathi, S., Yadav, S., Sharma, P., Purchase, D., Syed, A. & Chandra, R. 2022. Plant growth promoting strain Bacillus cereus
(RCS-4 MZ520573.1)
enhances phytoremediation potential  of Cynodon dactylon L. in distillery sludge.
Environmental Research, 208: p.112709. DOI: 10.1016/j.envres.2022. 112709
Zelvi,  M.,  Suryani,  A.,  &  Setyaningsih,  D.
2017.  Hidrolisis  eucheuma  cottonii
dengan  enzim  k-karagenase  dalam menghasilkan gula reduksi untuk produksi  bioetanol. Jurnal  Teknologi Industri  Pertanian. 27:33 – 42.    DOI:
10.24961/j.tek.ind.pert.2017.27.1.33