## Isolasi, Identifikasi, dan Uji Potensi Bakteri Laut sebagai Agen Bioremediasi Logam Berat Kromium (Cr)
Isolation, Identification, and Potential Test of Marine Bacteria as Chromium (Cr) Heavy Metal Bioremediation Agent
Nasywa Fajriatun Nisa Suparman 1 , Endah Retnaningrum 2*
1 Program Studi Sarjana Biologi, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada, Jl. Teknika Selatan, Sekip Utara, Yogyakarta, Indonesia 55281
2 Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada, Jl. Teknika Selatan, Sekip Utara, Yogyakarta. Indonesia 55281
*Email korespondensi : endahr@ugm.ac.id

## ABSTRAK
Pencemaran  air  oleh  logam  berat  terjadi  akibat  perkembangan  industri  seperti  tekstil, electroplating ,  dan  penyamakan  kulit.  Kromium  (Cr)  merupakan  salah  satu  logam  berat  yang dihasilkan  dengan  tingkat  toksisitas  tinggi  bagi  makhluk  hidup  bahkan  dalam  konsentrasi rendah. Upaya penanggulangan yang ramah lingkungan dilakukan dengan metode bioremediasi dapat memanfaatkan kemampuan bakteri resisten logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi,  mengidentifikasi,  dan  melakukan  uji  potensi  reduksi  logam  berat  kromium  oleh bakteri laut resisten kromium. Penelitian ini menggunakan bahan sampel air laut, pasir Pantai Samas dan Pantai Pandansimo, media kultur Zobell marine broth 2216, serta logam berat K 2 Cr 2 O 7 . Langkah  awal  penelitian  dilakukan  dengan  pengambilan  sampel  air  laut  dan  pasir  pantai. Selanjutnya dilakukan isolasi, seleksi, karakterisasi morfologi sel dan biokimia serta identifikasi bakteri  resisten  kromium  untuk  diuji  potensi  reduksinya.  Hasil  tiga  isolat  terseleksi  memiliki kemampuan resistensi tertinggi terhadap kromium. Proses identifikasi menunjukkan bahwa dua isolat,  yaitu  PSAA1  dan  SMCS21  diduga  merupakan  anggota  genus Proteus ,  sedangkan  satu isolat  PSAA8  diduga  merupakan  anggota  genus Micrococcus .  Ketiga  isolat  bakteri  PSAA8, SMCS21,  dan  PSAA1  menunjukkan  kemampuan  reduksi  kromium  dengan  efisiensi  reduksi secara  berurutan  sebesar  22.54%,  21.54%,  dan  18.44%.  Sehingga  ketiga  isolat  bakteri  laut disimpulkan memiliki potensi sebagai agen bioremediasi untuk mengurangi konsentrasi logam berat kromium dari lingkungan perairan.
Kata kunci: bakteri laut, bioremediasi, kromium, Micrococcus , Proteus

## ABSTRACT
Water  pollution  by  heavy  metals  occurs  as  a  result  of  industrial  developments  such  as  textiles, electroplating and leather tanning. Chromium (Cr) is one of the heavy metals that is produced with a high level of toxicity to living things even in low concentrations. Environmentally friendly countermeasures carried out by the bioremediation method can utilize the ability of heavy metal resistant bacteria. This study aims to isolate, identify, and test the potential reduction of chromium heavy metal by chromium-resistant marine bacteria. This study used seawater samples, sand from Samas Beach and Pandansimo Beach, culture media Zobell marine broth 2216, and heavy metal K 2 Cr 2 O 7 solution. The initial step of the research was carried out by taking samples of seawater and beach sand. Furthermore, isolation, selection, morphological, cell  and  biochemical  characterization  were  carried  out  as  well  as  identification  of  chromium  resistant bacteria to test their reduction potential. The results of the three selected isolates had the highest resistance ability to chromium. The identification process showed that two isolates, namely PSAA1 and SMCS21 were suspected to be members of the genus Proteus, while one isolate PSAA8 was suspected to be a member of the genus Micrococcus. The three bacterial isolates PSAA8, SMCS21, and PSAA1 showed the ability to reduce chromium with reduction efficiencies of 22.54%, 21.54%, and 18.44% respectively. So that the three
marine  bacterial  isolates  were  concluded  to  have  potential  as  bioremediation  agents  to  reduce  the concentration of the heavy metal chromium from the aquatic environment.
Keywords: bioremediation, chromium, marine bacteria, Micrococcus, Proteus

## PENDAHULUAN
Pertumbuhan  populasi,  perkembangan industrialisasi,  dan  peningkatan  urbanisasi memberikan dampak
negatif
bagi lingkungan (Marzan et al., 2017). Pencemaran  air  merupakan  salah  satu permasalahan lingkungan yang disebabkan oleh  fenomena  tersebut.  Peningkatan aktivitas  perindustrian  seperti  industri tekstil, electroplating ,  penyamakan  kulit, pembuatan cat, percetakan, dan penyulingan  menjadi  salah  satu  sumber utama  penyumbang  polutan  ke  dalam ekosistem air (Jeyakumar et al., 2023). Salah satu  logam  berat  yang  termasuk  ke  dalam priority pollutants oleh US EPA ( United State Environmental  Protection  Agency )  adalah kromium  (Cr)  (Sparling,  2016).  Kromium merupakan  salah  satu  logam  berat  dengan toksisitas  tinggi  jika  sedikit  saja  melebihi konsentrasi
seharusnya di
dalam lingkungan.
Konsentrasi
kontaminan maksimum  ( Maximum  Contaminant  Level (MCL))  logam  kromium  dalam  air  minum menurut US EPA adalah 0.1 ppm (Sparling, 2016).  Begitupula  menurut  SK  Menteri Negara  LH  Kep  03/MENKLH/11/1991 disebutkan  bahwa  konsentrasi  maksimum kromium  total  yang  diperbolehkan  dalam perairan adalah 0.1 ppm dan untuk kadar Cr (VI)  adalah  0.05  ppm  (Adhani  &  Husaini, 2017).
Kromium  merupakan  unsur  logam transisi dan terletak di golongan VI-B dalam tabel periodik yang dapat ditemukan dalam sembilan  keadaan  valensi  mulai  dari  -2 hingga +6 (Cervantes et al., 2001; Chug et al., 2016).  Keadaan  valensi  kromium  yang sering  ditemukan  dialam  adalah  dalam bentuk  kromium  trivalen  Cr  (III)  dan kromium  heksavalen  Cr  (VI)  (Chug  et  al., 2016).  Kromium  merupakan  mikronutrien esensial  yang  dibutuhkan  oleh  berbagai organisme  untuk  tumbuh,  seperti  Cr  (III) yang berperan dalam metabolisme glukosa dan  lipid.  Berdasarkan  perkiraan  asupan makanan  harian  yang  aman  dan  memadai ( Estimated  Safe  and  Adequate  Daily  Dietary
Intake /  ESADDI)  untuk  kromium  adalah 50-200  µg  (Anderson,  1997).  Namun,  jika kromium  dikonsumsi  dalam  jumlah konsentrasi  yang  tinggi  maka  dapat memberikan efek toksik, karsinogenik, dan teratogenik  (Nguema  &  Luo,  2012). Kromium  dapat  menyebabkan  kerusakan oksidatif bagi sel. Cr (III) merupakan unsur kation yang dapat berikatan dengan gugus fungsional  seperti  karboksil  dan  tiol  dari enzim  sehingga  dapat  menyebabkan perubahan  pada  struktur  dan  aktivitasnya. Selain  itu,  muatan  positif  yang  dimiliki  Cr (III)  dapat  bereaksi  dengan  gugus  fosfat DNA  yang  bermuatan  negatif  sehingga akan  mengganggu  proses  transkripsi, replikasi serta menyebabkan mutasi (Igiri et al.,  2018).  Keadaan  kromium  lainnya  yang banyak ditemukan dialam adalah kromium heksavalen  (Cr  (VI)).  Cr  (VI)  adalah  unsur kromium  dengan  keadaan  valensi  yang paling berbahaya dan paling toksik dengan estimasi  10-100  kali  lebih  berbahaya dibandingkan Cr (III) (Kanmani et al., 2012). Hal  ini  dikarenakan  Cr  (VI)  memiliki kemampuan  mobilisasi  dan  penetrasi  sel yang  lebih  tinggi  dibandingkan  Cr  (III). Sedangkan sebagian besar sel impermeabel terhadap  Cr  (III)  karena  membentuk senyawa  yang  tidak  larut  dalam  air  dalam lingkungan  yang  tidak  asam  (Cervantes  et al., 2001). Keberadaan  polutan  kromium  dalam lingkungan
dapat diatasi dengan
bioremediasi menggunakan mikroorganisme,  meliputi  bakteri,  archaea, dan  jamur.    Proses  bioremediasi  tersebut sangat  aman  bagi  lingkungan  karena bersifat eco-friendly (Abatenh  et  al.,  2017). Selama  terpapar  logam  pada  lingkungan, mikroorganisme    berusaha  bertahan  hidup dari  paparan  logam  berbahaya  tersebut dengan  cara  mengubah  polutan  logam menjadi  tidak  atau  kurang  berbahaya  bagi sel, sehingga polutan logam sekaligus dapat dihilangkan  dari  lingkungan    (Luka  et  al., 2018).
Lingkungan laut merupakan lingkungan unik  dengan  variasi  kondisi  fisiko-kimia
yang  berfluktuasi.  Sehingga  di  lingkungan laut  potensial  diperoleh  mikroorganisme, khususnya bakteri laut dengan kemampuan adaptasi yang lebih tinggi, serta mekanisme pertahanan  lainnya  yang  dapat  membantu bertahan hidup (Kulkarni & Bee, 2015). Oleh karena  itu,  pada  lingkungan  laut  potensial diperoleh  bakteri  laut  yang  berfungsi sebagai  bioremediator  pencemaran  logam berat.  Berdasarkan  penelitian  terdahulu beberapa  bakteri  laut  dengan  kemampuan resistensi  dan  reduksi  logam  berat diantaranya  adalah Corynebacterium sp.,
Streptomyces sp., Salinobacter sp., Micromonospora sp., Saccharomonospora sp., Micrococcus sp. Escherichia sp. Pseudomonas sp., Alteromonas sp., Aeromonas sp.,
Flavobacterium
sp.,
Moraxella
sp., Pseudochrobactrum sp., dan Proteus sp. (Ge et al., 2013; Iyer et al., 2005; Naik et al., 2012). Penelitian ini dilakukan untuk mendapatkan  isolat  bakteri  dari  Pantai Samas dan Pantai Pandansimo yang resisten terhadap  kromium.      Isolat  bakteri  yang diperoleh  selanjutanya  diidentifikasi  dan diuji efisiensi dalam mereduksi konsentrasi kromium.

## BAHAN DAN METODE

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini antara lain yaitu timbangan analitik digital (OHAUS model: PA413 dan AD-600i ACIS, Changzhou), magnetic  stirrer , hot  plate (IKA®C-MAG  HS  7  dan  HI-COOK),  pH meter (Eutech Instrument  pH700), autoklaf (HICLAVE  HVE-50),  mikropipet  100- 1000µL dan 10-100 µL (OHAUS dan Dragon Lab),  vortex  mixer  (Gemmy  model:  VM- 300),  OptiLab,  mikroskop  (BOECO  model number: BM-180), haemocytometer (Neubauer),  Oven  pengering  (Despatch), inkubator 30 ℃ dan 37 ℃ (Memmert), shaker water  bath  (Memmert), class II Biological Safety  Cabinet (ESCO  StreamLine  model: SC2-4S1), Atomic Absorption
Spectrophotometer  (PerkinElmer  AAnalyst 600_,  spektrofotometer  Uv-Vis  (thermo scientific Genesys 150).
Bahan yang digunakan dalam penelitian antara lain sampel air laut dan pasir pantai. Bahan berupa medium meliputi zobell marine broth 2216 ( ZMB 2216), H ugh and Leifson ’s OF
basal  medium ,  medium  nitrat,  medium  cair, tryphtophan broth,  medium methyl  red-voges proskauer ( MR-VP ), methyl  red .  Selain  itu medium Simmon’s citrate  agar ( SCA ), medium sulfide  indole  motility ( SIM ), medium  pati  agar,  medium skim  milk agar dan  media christensen  urea  agar juga digunakan.  Bahan  lain  yang  digunakan berupa glukosa, laktosa, sukrosa, mannitol, K 2 Cr 2 O 7 , bromthymol  blue (BTB),  minyak paraffin α -naftilamin, asam sulfanilat, zinc, kovac’s  reagent ,  larutan  iod,  larutan  Gram malachite green , H 2 O 2 , phenol red , alkohol 70% akuades dan spirtus.
Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian dilaksanakan pada bulan Februari  hingga  Juli  2023.  Sampel  diambil dari Pantai Samas dan Pantai Pandansimo, Bantul,  D.I  Yogyakarta.  Masing-masing lokasi  diambil  tiga  titik  sampling  sehingga total  titik  sampling  adalah  enam  titik. Selanjutnya  isolasi,  identifikasi,  dan  uji potensi  reduksi  bakteri  dilakukan  di Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Biologi  dan  Laboratorium  Kimia  Analitik, Fakultas MIPA, Universitas Gadjah Mada.

## Pengambilan Sampel
Sampel air laut dan pasir pantai diambil dari zona intertidal. Setiap titik sampling diambil sampel air laut diambil sebanyak ±50 mL ke dalam conical  tube secara  steril  saat gelombang ombak mendekat ke arah pantai. Sampel pasir pantai dengan kedalaman ±10 cm diambil sebanyak ±50 g ke dalam conical tube secara  steril.  Sampel  dimasukkan  ke dalam cool  box dengan  suhu  ±4 ℃ untuk menjaga kualitas sampel.

## Isolasi Bakteri Resisten Kromium
Isolasi bakteri dilakukan enrichment terlebih dahulu  untuk  memberikan  kondisi  yang mendukung  organisme  target  tumbuh dengan  baik,  sekaligus  menghambat pertumbuhan organisme non-target (Madhuri  et  al.,  2019).  Sampel  air  laut dimasukkan  ke  dalam  media Zobell  marine broth 2216 steril yang ditambahkan dengan larutan  K 2 Cr 2 O 7 2  ppm  steril.  Sterilisasi larutan  K 2 Cr 2 O 7 dilakukan  dengan syringe filter nylon 25 mm 0,45 µm, karena sterilisasi menggunakan  autoklaf  pada  larutan  yang mengandung  Cr  (VI)  dapat  mengurangi
toksisitasnya  (Srinath  et  al.,  2002). Selanjutnya  untuk  sampel  pasir  pantai dibuat suspensi terlebih dahulu, kemudian dimasukkan  ke  dalam  media  kultur  cair yang  sama.  Proses  inkubasi  dilakukan selama  tujuh  hari  pada  suhu  ruang,  dan dilakukan resubculturing sebanyak dua kali. Tahapan  selanjutnya  dilakukan plating dengan  teknik spread  plate pada  media marine agar yang telah ditambahkan larutan K 2 Cr 2 O 7 2  ppm. Serial  dilution dilakukan terlebih  dahulu  hingga  10 -6 untuk mengurangi  konsentrasi  bakteri  dalam media  kultur  cair  dan  didapatkan  koloni bakteri  tunggal.  Proses  plating  dilakukan pada  seri  pengenceran  10 -4 ,  10 -5 ,  dan  10 -6 kemudian diinkubasi di suhu ruang selama 48  jam.  Selanjutnya  dilakukan  pemurnian koloni  tunggal  yang  memiliki  morfologi koloni  berbeda  dari mix  culture hasil inkubasi  dengan  teknik quadrant  streak . Setelah itu dilakukan seleksi bertahap untuk mendapatkan  tiga  isolat  bakteri  dengan kemampuan  resistensi  kromium  tertinggi. Isolat-isolat  tunggal  hasil  pemurnian diseleksi berdasarkan kemampuannya untuk  tumbuh  dalam  media Zobell  marine broth 2216  dengan  penambahan  berbagai konsentrasi  larutan  K 2 Cr 2 O 7 mulai  dari  20, 40,  60,  80,  100,  120,  140,  160,  180,  200,  220, 240, 260, 280, hingga 300 ppm.

## Identifikasi Bakteri
Identifikasi  bakteri  dilakukan  dengan karakterisasi morfologi koloni, morfologi sel dan  uji  biokimia.  Karakterisasi  morfologi koloni  dilakukan  dengan  pengamatan bentuk koloni pada media kultur petri agar, media miring, media tegak, dan media cair. Karakterisasi  morfologi  sel  dilakukan dengan pengamatan pewarnaan diferensial yaitu  pewarnaan  gram  dan  endospora. Pewarnaan gram dilakukan untuk menentukan  bentuk  sel  bakteri  dan mengelompokkannya menjadi bakteri gram positif  atau  negatif.  Sedangkan  pewarnaan endospora  dilakukan  untuk  mengamati keberadaan  endospora  yang  dihasilkan bakteri  dengan  menggunakan  teknik Schaeffer-Fulton  stain .  Kedua  pewarnaan diferensial  tersebut  dilakukan  sesuai dengan  metode  dalam Microbiology:  A Laboratory  Manual (Cappuccino  &  Welsh, 2017).
Serangkaian uji biokimia yang dilakukan adalah  uji  katalase,  uji  fermentasi karbohidrat,  uji  oksidatif-fermentatif,  uji reduksi  nitrat  dan  nitrit,  uji  pembentukan indol,  uji methyl  red ,  uji  sitrat,  uji pembentukan  hidrogen  sulfida  (H 2 S)  dan motilitas, triple  sugar  iron  agar (TSIA),  uji hidrolisis  urea,  uji  hidrolisis  pati,  dan  uji hidrolisis  kasein.  Pengujian  tersebut menggunakan metode sebagai berikut:
1. Uji  katalase  dilakukan  dengan  dengan menggunakan H 2 O 2 3%.
2. Uji  fermentasi  karbohidrat  dilakukan dengan menggunakan media kultur cair  dengan  sumber  gula  yang berbeda-beda  dan  diberi  indikator phenol red .
3. Uji  oksidatif-fermentatif  dilakukan dengan  menggunakan  media  agar tegak  Hugh  and  Leifson  yang mengandung indikator brom thymol blue (BTB)  dengan  penambahan minyak parafin
4. Uji  reduksi  nitrat  dan  nitrit  dilakukan menggunakan  media  kultur  cair masing-masing  mengandung  0,1% KNO 3 dan KNO 2 .
5. Uji  pembentukan  indol  dilakukan dengan  menggunakan  medium tryptone broth
6. Uji methyl  red dilakukan  dengan mrnggunakan    media  cair Methyl Red-Voges Proskauer (MV-RP)
7. Uji sitrat dilakukan dengan
menggunakan media kultur miring Simmons citrate agar (SCA). 8. Uji pembentukan hidrogen sulfida (H 2 S) dan  motilitas  dilakukan  dengan menggunakan  medium  agar  tegak semisolid Sulfide  Indole  Motility (SIM)
9. Uji Triple  Sugar  Iron  Agar (TSIA) dilakukan  menggunakan  media mengandung  glukosa,  sukrosa, laktosa dan Fe 10. Uji
hidrolisis
urea
dilakukan menggunakan  media Christensen’s urea slant agar
11. Uji  hidrolisis  pati  dilakukan  media mengandung 1% pati
12. Uji hidrolisis
kasein dilakukan menggunakan media skim milk agar

## Pembuatan Kurva Pertumbuhan Bakteri
Pembuatan  kurva  pertumbuhan  bakteri pada  media  kultur  dengan  dan  tanpa penambahan  kromium  dilakukan  untuk mengetahui  pengaruh  kromium  terhadap pertumbuhan bakteri. Penyetaraan konsentrasi  bakteri  berumur  24  jam dilakukan dengan menggunakan
spektrofotometer  UV-Vis  (thermo  scientific Genesys  150)  dengan  metode McFarland standard .  Skala  standar  yang  biasa digunakan untuk bakteri adalah 0.5 dengan nilai  OD 625 sebesar  0.08  -  0,1.  Sehingga jumlah  bakteri  dalam  suspensi  dapat diestimasi  sebanyak  1.5×10 8 sel/mL  (Yanti et  al.,  2021).  Suspensi  bakteri  yang  setara kemudian  dimasukkan  ke  dalam  media kultur  cair Zobell  marine  broth 2216  dengan dan tanpa penambahan larutan K 2 Cr 2 O 7 100 ppm. Selanjutnya dilakukan inkubasi dalam Memmert water bath shaker incubator selama 48 jam pada suhu 30 ℃ 160spm. Pengukuran pertumbuhan bakteri dilakukan setiap 6 jam dengan  mengambil  sampel  kultur  cair untuk diukur nilai OD 625 dengan spektrofotometer  UV-Vis  dan  jumlah  sel dengan haemocytometer (Neubauer)
diamati  dibawah mikroskop cahaya
(BOECO model number: BM-180). Selanjutnya  dilakukan  perhitungan  laju pertumbuhan  spesifik  ( specific  growth  rate ) menggunakan  Persamaan  1  (Maier  et  al., 2009)
.
𝜇 = (ln N2−ln N1)
t2−t1 (1)
Keterangan: µ  =  laju  pertumbuhan  spesifik  ( specific growth rate ) (generasi/jam) N 1 =  jumlah  bakteri  mula-mula  pada  fase eksponensial (sel/mL)
N 2 = jumlah bakteri setelah tumbuh selama waktu t (sel/mL) t 1 = waktu pertumbuhan bakteri pada N 1 (jam) t 2 = waktu pertumbuhan bakteri pada N 2 (jam)

## Uji Potensi Reduksi Kromium
Uji reduksi konsentrasi kromium dilakukan menggunakan Zobell  marine  broth 2216 dengan  penambahan  larutan  K 2 Cr 2 O 7 100
ppm  yang  telah  diinkubasi  selama  48  jam. Konsentrasi  kromium  yang  tersisa  dalam media  cair  diukur  dengan  menggunakan Atomic  Absorption  Spectrophotometer (AAS) PerkinElmer  AAnalyst  600  pada  panjang gelombang  357.9  nm  (Singh  et  al.,  2013). Setelah  itu  dilakukan  pengukuran  efisiensi reduksi  konsentrasi  kromium  oleh  bakteri dengan menggunakan Persamaan 2
(Nguema & Luo, 2012).
𝐸(%) = [ 𝐶𝑟0−𝐶𝑟𝑓 𝐶𝑟0 ] × 100 (2)
Keterangan: E  = efisiensi reduksi (%) Cr 0 = konsentrasi awal kromium (ppm) Cr f = konsentrasi akhir kromium (ppm)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Identifikasi  Isolat  Bakteri  Laut  Resisten Kromium Hasil plating dan  pemurnian  isolat  pada media marine  agar yang  ditambahkan dengan  larutan  K 2 Cr 2 O 7 2 ppm  didapatkan 14  isolat  dengan  karakter  morfologi  koloni yang  berbeda.  Isolat-isolat  bakteri  tersebut kemudian diseleksi secara bertahap dengan penambahan  larutan  K 2 Cr 2 O 7 berbagai konsentrasi yaitu 20, 40, 60, 80, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 220, 240, 260, 280, hingga 300 ppm. Hasil seleksi bertahap didapatkan tiga isolat bakteri dengan kemampuan resistensi kromium  tertinggi  yaitu  PSAA1,  PSAA8, dan  SMCS21.  Isolat  PSAA1  dan  PSAA8 merupakan isolat yang berasal dari sampel air  laut  Pantai  Pandansimo,  sedangkan isolat  SMCS21  merupakan  isolat  yang berasal dari sampel Pasir Pantai Samas.
Karakter  morfologi  koloni  ketiga  isolat dapat  dilihat  pada  Tabel  1  dan  Gambar  1. Berdasarkan  karakterisasi  morfologi  koloni isolat  PSAA1  dan  SMCS21  memiliki kemiripan  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  isolat  PSAA8.  Ketiga  isolat menunjukkan bentuk koloni yang menyebar ( spreading )  mengindikasikan  kemampuan motilitas.  Menurut  Penttinen  et  al.  (2018) bentuk  koloni  yang  menyebar  ( spreading ) disebabkan  oleh  kemampuan  motilitas secara gliding diatas  permukaan  agar. Karakteristik pada media kultur cair semua isolat  bakteri  tumbuh  secara  merata  dan
tersebar halus di seluruh bagian media cair. Tipe pertumbuhan demikian menunjukkan bahwa  ketiga  isolat  merupakan  bakteri facultative anaerobic , dimana bakteri mampu tumbuh  pada  kondisi  lingkungan  dengan dan  tanpa  O 2 (Cappuccino  &  Welsh,  2017).
Bakteri  tersebut  cenderung  menggunakan
O 2 saat  melakukan  respirasi  aerob  untuk mendapatkan  energi  lebih  tinggi.  Namun jika  tidak  ada  O 2 maka  bakteri  bisa menggunakan  senyawa  lain  sebagai penerima elektron akhir seperti NO 3- , SO 42- atau  melalui  jalur  fermentatif  (Cappuccino & Welsh, 2017).
(a)
(b) (c)
Gambar 1. Morfologi koloni isolat PSAA1 (a), PSAA8 (b), dan SMCS21 (c)
Karakter morfologi sel ketiga isolat dapat dilihat  pada  Tabel  2.  Berdasarkan karakterisasi morfologi sel isolat PSAA1 dan SMCS21 memiliki kemiripan karakter yang termasuk ke dalam kelompok bakteri gram negatif  dengan  bentuk  sel bacillus . Sedangkan  isolat  PSAA8  masuk  ke  dalam kelompok  bakteri  gram  positif  berbentuk coccus .  Berdasarkan  hasil  pewarnaan endospora  diperoleh  hasil  bahwa  ketiga isolat  tidak  memproduksi  endospora.
Selanjutnya untuk karakter biokimia ketiga isolat dapat dilihat pada Tabel 3. Tabel 2. Morfologi sel isolat bakteri PSAA1,
PSAA8, dan SMCS21 Karakter Isolat Bakteri PSAA1  PSAA8  SMCS21 Sifat Gram  Negatif  Positif Negatif Bentuk Sel Bacillus  Coccus Bacillus Endospora  Negatif  Negatif Negatif Jenis Media
Karakter
Isolat Bakteri
PSAA1 PSAA8 SMCS21 Agar Petri Bentuk Koloni Concentric Irregular with raised center Irregular Tepi Koloni Lobate Undulate / Wavy Lobate Elevasi Koloni Flat Low umbonate Flat Warna Koloni Krem Krem Krem Agar Miring Bentuk Pertumbuhan Beaded Arborescent Filiform Opacity Translucent Translucent Translucent Warna Pertumbuhan Krem Krem Krem Agar Tegak Bentuk pertumbuhan Filiform Villous Filiform Cair Penampakan media Uniform fine turbidity Uniform fine turbidity Uniform fine turbidity
Tabel 1. Morfologi koloni isolat bakteri PSAA1, PSAA8, dan SMCS21
Berdasarkan karakter-karakter morfologi koloni,  morfologi  sel,  dan  biokimia  serta sumber acuan Bergey’s Manual
of Determinative  Bacteriology  9th isolat  PSAA1 dan  SMCS21  memiliki  kemiripan  karakter dengan  genus Proteus .  Sedangkan  isolat PSAA8  memiliki  karakteristik  yang  mirip dengan genus Micrococcus . Genus Proteus yang  termasuk  kedalam bakteri gram negatif memiliki karakteristik utama  yang  membedakannya  dengan genus-genus
non-lactose fermenting Enterobacteriaceae lainnya adalah kemampuannya  untuk  menggunakan  urea sebagai sumber nitrogen dan memproduksi
hidrogen sulfida (Holt et al., 1994; Willey et al.,  2009).  Selain  itu,  genus  ini  memiliki kemampuan  motilitas  yang  didukung  oleh flagela  dengan  jumlah  banyak  dan  acak disekeliling sel bakteri ( peritrichous ) (Holt et al.,  1994).  Sedangkan  Genus Micrococcus merupakan  bakteri  gram  negatif  dengan karakteristik  pembeda  dimana  sebagian besar  anggotanya  tidak  bisa  menghasilkan asam  dari  berbagai  macam  karbohidrat (Holt  et  al.,  1994).  Karakter  ini  kemudian menjadi  pembeda  dengan  genus  lainnya dari family Micrococcaceae (Holt et al., 1994).
Tabel 3. Karakter biokimia isolat bakteri PSAA1, PSAA8, dan SMCS21
Uji Biokimia Isolat Bakteri PSAA1 PSAA8 SMCS21 Uji Katalase + + + Uji Fermentasi Karbohidrat a. Glukosa + - + b. Laktosa - - - c. Sukrosa + - + d. Manitol - - - Uji Oksidatif-Fermentatif F - F Uji Reduksi Nitrat + + + Uji Reduksi Nitrit - - - Uji Pembentukan Indol + - + Uji Methyl Red + - + Uji Sitrat - + - Uji Pembentukan Hidrogen Sulfida (H 2 S) dan Motilitas + - + Triple Sugar Iron Agar + - + Uji Hidrolisis Urea + + + Uji Hidrolisis Pati - - - Uji Hidrolisis Kasein - - +
Keterangan: + = Reaksi Positif, - = Reaksi Negatif, F = Fermentatif
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 0 6 12 18
24
30 36 42 48 Jum la h B akter i 1 0 ⁹ (S el/m L ) Waktu (jam) PsAa.1 PsAa.8 SmCs.21
Gambar 2. Kurva pertumbuhan isolat bakteri PSAA1, PSAA8, dan SMCS21 pada media kultur tanpa penambahan kromium

## Analisis Pertumbuhan Bakteri pada Media
Kultur dengan dan Tanpa Kromium (Cr) Hasil kurva pertumbuhan ketiga isolat pada media  kultur  tanpa  penambahan  kromium disajikan  dalam  Gambar  2.  Berdasarkan kurva tersebut  menunjukkan bahwa ketiga isolat  PSAA1,  PSAA8,  dan  SMCS21 memiliki pola kurva pertumbuhan fase lag, fase  log,  dan  fase  kematian  yang  cukup mirip satu sama lain. Fase lag dimana sel-sel bakteri  melakukan  adaptasi  terhadap lingkungan  baru  terjadi  pada  jam  ke-0 hingga  jam  ke-24.  Selanjutnya  memasuki fase  log  yang  merupakan  tahapan pertumbuhan  bakteri  dengan  tingkat pembelahan  tertinggi  hingga  tercapai jumlah maksimal sel (Cappuccino & Welsh, 2017)  terjadi  setelah  jam  ke-24  hingga mencapai jumlah sel tertinggi pada jam ke- 42.  Isolat  SMCS21,  PSAA1,  dan  PSAA8 memiliki  jumlah  sel  terbanyak  masing- masing  sebesar  9.23x10 9 ,  8.40x10 9 ,  dan 7.60x10 9 sel/mL.  Setelah  jam  ke-42  semua isolat  bakteri  mengalami  fase  kematian akibat sumber nutrisi di dalam kultur terus menurun  dan  akumulasi  produk  akhir metabolisme yang semakin menumpuk. Hal tersebut  yang  menyebabkan  kondisi lingkungan tidak mendukung bakteri untuk terus  berkembangbiak  dan  bertahan (Cappuccino & Welsh, 2017). Pengukuran  laju  pertumbuhan  bakteri dapat dihitung dari fase log (eksponensial), karena  pembelahan  sel  terjadi  dengan interval  waktu  yang  konstan  (Willey  et  al., 2009).  Laju  pertumbuhan  dari  masing- masing  isolat  dapat  dilihat  pada  Tabel  4. Laju pertumbuhan tercepat secara berurutan  adalah  SMCS21,  PSAA1,  dan PSAA8  dengan  nilai  laju  pertumbuhan masing-masing  6.57x10 -2 ,  6.27x10 -2 ,  dan 4.78x10 -2 generasi/jam.  Perbedaan  laju pertumbuhan  jenis  bakteri  satu  dengan lainnya dapat dikarenakan perbedaan pada properti  sel  seperti  jenis  dan  kandungan enzim  yang  dimiliki  dapat  mempengaruhi proses  metabolisme  bakteri  (Imron  & Purwanti, 2016). Selain  itu,  pertumbuhan  masing-masing isolat  dibandingkan  dalam  media  kultur dengan  dan  tanpa  penambahan  larutan K 2 Cr 2 O 7 100  ppm  untuk  mengetahui  efek kromium pada pertumbuhan bakteri. Kurva pertumbuhan  masing-masing  isolat  bakteri
pada media kultur dengan tanpa penambahan  kromium  disajikan  dalam Gambar  3.  Berdasarkan  kurva  tersebut dapat  diketahui  bahwa  penambahan kromium  ke  dalam  media  kultur  dapat menghambat  pertumbuhan  ketiga  isolat bakteri.  Hasil  yang  sama  diperoleh  dari penelitian  sebelumnya  pada  pertumbuhan Pseudomonas  aeruginosa , Bacillus  cereus , Ochrobactrum  intermedium , Clostridium sp., Staphylococcus sp., Bacillus  megaterium dan Bacillus  circulans yang  menunjukkan pertumbuhan bakteri yang semakin terhambat  seiring  dengan  bertambah tingginya  konsentrasi  kromium  dalam media  kultur  (Mistry  et  al.,  2010; Munawaroh  et  al.,  2017;  Nguema  &  Luo, 2012;  Rida  et  al.,  2012;  Singh  et  al.,  2013; Srinath  et  al.,  2002).  Hal  tersebut menunjukkan  toksisitas  logam  berat kromium yang merupakan
agen
pengoksidasi  kuat  dapat  mempengaruhi metabolisme  bakteri  dan  menyebabkan terhambatnya
pertumbuhan
bakteri, elongasi pada fase lag, hingga menghambat pengambilan
oksigen
untuk sel (Ayangbenro & Babalola, 2017; Cervantes et al., 2001).
Tabel  4.  Laju  pertumbuhan  isolat  bakteri
PSAA1, PSAA8, dan SMCS2 Isolat Bakteri N 1 (sel/mL) N 2 (sel/mL) µ (generasi/ jam) PSAA1 2.72x10 9 8.40x10 9 6.27x10 -2 PSAA8 3.22x10 9 7.60x10 9 4.78x10 -2 SMCS21  2.83x10 9 9.23x10 9 6.57x10 -2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 0 6 12 18 24 30 36 42 48 Opti ca l Den si ty (OD ) Waktu (Jam) 0 ppm 100 ppm (a)
Gambar  3.  Kurva  pertumbuhan  isolat bakteri  (a)  PSAA1,  (b)  PSAA8,  dan  (c) SMCS21  pada  media  kultur  dengan  dan tanpa penambahan kromium 100 ppm

## Uji  Potensi  Reduksi  Kromium  (Cr)  oleh Bakteri
Hasil  pengukuran  uji  potensi  reduksi kromium  dengan  menggunakan Atomic Absorption  Spectrophotometer (AAS)  pada panjang  gelombang  357.9  nm  disajikan dalam Tabel 5.
Tabel  5.  Konsentrasi  dan  efisiensi  reduksi kromium  (Cr)  isolat  PSAA1, PSAA8, dan SMCS21
Isolat Bakteri Konsentrasi Kromium (ppm) Efisiensi Reduksi (%) Awal (0 Jam) Akhir (48 Jam) PSAA1 100 81.56 18.44 PSAA8 100 77.16 22.84 SMCS21 100 78.46 21.54
Berdasarkan  Tabel  5  efisiensi  reduksi kromium  tertinggi  dilakukan  oleh  isolat PSAA8  sebesar  22.84%,  kemudian  isolat SMCS21 sebesar 21.54%, dan terakhir isolat PSAA1  sebesar  18.44%.  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  ketiga  isolat  bakteri memiliki  kemampuan  untuk  mereduksi kromium.  Hasil  yang  diperoleh  sesuai dengan  penelitian-penelitian  sebelumnya yang  membuktikan bahwa bakteri anggota Micrococcus sp.  dan Proteus sp.  memiliki kapasitas degradasi logam kromium (Ge et al.,  2013;  Marzan  et  al.,  2017).  Perbedaan kemampuan reduksi logam berat ini dapat dipengaruhi  oleh  berbagai  properti  yang dimiliki oleh masing-masing isolat. Yamina et  al.  (2012)  menunjukkan  bahwa  anggota bakteri  genus Micrococcus sp.  memiliki kemampuan  resistensi  terhadap  logam kromium  dengan  konsentrasi  yang  lebih tinggi dibandingkan Proteus
sp. Kemampuan  resistensi  terhadap  logam berat yang tinggi dapat berkorelasi dengan kemampuan  degradasi  logam  berat  yang lebih  tinggi  pula.  Selain  itu,  kemampuan reduksi  logam  salah  satunya  dipengaruhi oleh struktur dinding sel bakteri (Priyadarshanee & Das, 2021). Bakteri gram positif  memiliki  dinding  sel  yang  tersusun dari  peptidoglikan  yang  lebih  tebal dibandingkan  bakteri  gram  negatif  yang tersusun  dari  monolayer  peptidoglikan. Peptidoglikan  tebal  pada  bakteri  gram positif  seringkali  dilengkapi  asam  teikoat yang  saling  berikatan  fosfodiester  dan menjadikan  dinding  sel  bermuatan  lebih negatif.  Muatan  negatif  ini  menyebabkan penyerapan  kation  logam  berat  menjadi lebih kuat. Kation-kation logam berat akan bereaksi  dan  berikatan  dengan  grup  fosfat pada  lipopolisakarida  membran  fosfolipid dan membentuk grup fungsional di dinding sel yang selanjutnya akan masuk ke dalam sel dan mengalami metabolisme intraseluler (Priyadarshanee & Das, 2021).
Micrococcus sp. adalah salah satu bakteri yang  memiliki  kemampuan  resisten  logam berat  dan  banyak  ditemukan  di  ekosistem air  dan  sedimen  laut  (Naik  et  al.,  2012). Kemampuan  reduksi  logam  berat  oleh Micrococcus sp. salah satunya terjadi dengan mekanisme  bioakumulasi  yang  dilakukan oleh  sel  bakteri  hidup  secara  aktif mengambil logam berat dari lingkungannya
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 0 6 12 18 24 30 36 42 48 Opti ca l Den si ty (OD ) Waktu (Jam) 0 ppm 100 ppm 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 0 6 12 18 24 30 36 42 48 Opti ca l Den si ty (OD ) Waktu (Jam) 0 ppm 100 ppm (b) (c)
(Jeyakumar  et  al.,  2023).  Sedangkan kemampuan reduksi logam berat kromium oleh Proteus sp.  salah  satunya  difasilitasi secara  enzimatik.  Dinding  sel  bakteri  yang tersusun atas polisakarida dan protein dapat berinteraksi dengan logam berat. Penelitian Jhunjhunwala  et  al.  (2016)  menunjukkan bahwa  aktivitas  reduksi  bakteri Proteus sp. terjadi  karena  beberapa  interaksi  berupa ikatan  langsung  antara  gugus  OH  (grup hidroksil),  gugus  C=O,  dan  gugus  fosfat dengan logam berat kromium pada dinding sel yang menyebabkan reduksi konsentrasi kromium  pada  media.  Selain  itu,  dalam penelitian  tersebut  menyebutkan  bahwa teramatinya chromium  reductase dengan NADH reductase sebagai coenzyme -nya dalam  aktivitas  reduksi  logam  berat kromium.
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan,  didapatkan  tiga  isolat  bakteri laut  resisten  logam  berat  kromium  dari sampel air laut Pantai Pandansimo dan Pasir Pantai  Samas.  Isolat  bakteri  PSAA1  dan SMCS21 teridentifikasi merupakan anggota genus Proteus ,  sedangkan  isolat  PSAA8 teridentifikasi  merupakan  anggota  genus Micrococcus .  Kemampuan  efisiensi  reduksi kromium  tertinggi  adalah  isolat  PSAA8 sebesar  22.54%,  kemudian  isolat  SMCS21 sebesar  21.54%,  dan  isolat  PSAA1  sebesar 18.44%.  Sehingga  ketiga  isolat  tersebut berpotensi  menjadi  agen  bioremediasi ekosistem  perairan  yang  tercemar  logam berat kromium.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima kasih kepada Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Biologi  dan  Laboratorium  Kimia  Analitik, Fakultas  MIPA  UGM  yang  telah  memberi fasilitas selama penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Abatenh,  E.,  Gizaw,  B.,  Tsegaye,  Z.,  & Wassie,  M.  (2017).  The  Role  of Microorganisms  in  Bioremediation-A Review. Open  Journal  of  Environmental Biology , 1 (1), 38 – 46. https://doi.org/10.17352/ojeb.000007.
Anderson,  R.  A.  (1997).  Chromium  as  an Essential  Nutrient  for  Humans.
Regulatory Toxicology and Pharmacology ,
26 , S35 – S41. https://doi.org/10.1006/rtph.1997.113
6. Ayangbenro, A. S., & Babalola, O. O. (2017). A  New  Strategy  for  Heavy  Metal Polluted  Environments:  A  Review  of Microbial  Biosorbents. International Journal  of  Environmental  Research  and Public Health , 14 (1), 94. https://doi.org/10.3390/ijerph140100
94.
Cappuccino,  J.  G.,  &  Welsh,  C.  (2017).
Microbiology:  A  Laboratory  Manual (Eleventh edition). Pearson. Cervantes, C., Campos-García, J., Devars, S., Gutiérrez-Corona, F., Loza-Tavera, H., Torres-Guzmán,  J.  C.,  &  Moreno- Sánchez,  R.  (2001).  Interactions  of Chromium  with  Microorganisms  and Plants. FEMS  Microbiology  Reviews , 25 (3), 335 – 347.
https://doi.org/10.1111/j.1574- 6976.2001.tb00581.x.
Chug, R., Gour, V. S., Mathur, S., & Kothari,
S. L. (2016). Optimization of Extracellular  Polymeric  Substances Production Using Azotobacter
beijreinckii and Bacillus  subtilis and  Its Application in Chromium (VI)
Removal. Bioresource  Technology , 214 , 604 – 608. https://doi.org/10.1016/j.biortech.201 6.05.010.
Ge,  S.,  Dong,  X.,  Zhou,  J.,  &  Ge,  S.  (2013). Comparative  Evaluations  on  Bio- Treatment of Hexavalent Chromate by Resting  Cells  of Pseudochrobactrum sp. And Proteus sp. In Wastewater. Journal of Environmental Management , 126 , 7 – 12. https://doi.org/10.1016/j.jenvman.20 13.04.011.
Holt,  J.  G.,  Krieg,  N.  R.,  Sneath,  P.  H.  A., Staley,  J.  T.,  &  Williams,  S.  T.  (1994). Bergey’s  Manual  of  Determinative Bacteriology  Ninth  edition (Ninth Edition).  Lippincott  Williams  & Wilkins.
Igiri, B. E., Okoduwa, S. I. R., Idoko, G. O., Akabuogu,  E.  P.,  Adeyi,  A.  O.,  & Ejiogu,  I.  K.  (2018).  Toxicity  and Bioremediation  of  Heavy  Metals Contaminated Ecosystem
from Tannery Wastewater: A Review. Journal
of Toxicology , 2018, e2568038.
https://doi.org/10.1155/2018/256803 8.
Imron,  M.  F.,  &  Purwanti,  I.  F.  (2016).  Uji Kemampuan Bakteri Azotobacter S8 dan Bacillus  subtilis untuk  Menyisihkan Trivalent  Chromium  (Cr 3+ )  pada Limbah  Cair. Jurnal  Teknik  ITS , 5 (1). https://doi.org/10.12962/j23373539.v 5i1.14854.
Iyer,  A.,  Mody,  K.,  &  Jha,  B.  (2005). Biosorption  of  Heavy  Metals  by  a
Marine  Bacterium. Marine  Pollution Bulletin , 50 (3), 340 – 343.
https://doi.org/10.1016/j.marpolbul.2 004.11.012.
Jeyakumar, P., Debnath, C., Vijayaraghavan, R.,  &  Muthuraj,  M.  (2023).  Trends  in Bioremediation  of  Heavy  Metal
Contaminations. Environmental
Engineering  Research , 28 (4),  220631. https://doi.org/10.4491/eer.2021.631.
Jhunjhunwala,  P.,  Roy,  R.,  Roy,  S.,  &
Chaudhuri, A. N. (2016).
Bioremediation  of  Chromium  by Unique Chromium Reductase Activity in Proteus sp.  Isolated  from  Waste Water. International  Journal  of  Applied Research , 2 (11), 249 – 256.
Kanmani,  P.,  Aravind,  J.,  &  Preston,  D. (2012).  Remediation  of  Chromium
Contaminants Using Bacteria. International  Journal  of  Environmental Science  and  Technology , 9 ,  183 – 193. https://doi.org/10.1007/s13762-011- 0013-7.
Kulkarni,  P.,  &  Bee,  H.  (2015).  Marine- Bacteria  Actinomycetes:  A  Case  Study for  Their  Potential  in  Bioremediation. Biotechnological  Research , 1 (3),  171-174. http://br.biomedpress.org/index.php /br/article/view/704. Luka,  Y.,  Highina,  B.  K.,  &  Zubairu,  A.
(2018).  Bioremediation-  A  Solution  to Environmental  Pollution-A  Review. American Journal of Engineering Research ,
7 (2), 101 – 109.
Madhuri,  R.  J.,  Saraswathi,  M.,  Gowthami,
K., Bhargavi, M., Divya, Y., & Deepika, V. (2019). Chapter 19 — Recent Approaches in the Production of Novel
Enzymes from Environmental Samples by Enrichment Culture and Metagenomic Approach. In V.
Buddolla  (Ed.), Recent  Developments  in Applied  Microbiology  and  Biochemistry (pp. 251 – 262). Academic Press.
https://doi.org/10.1016/B978-0-12-
816328-3.00019-2. Maier,  R.  M.,  Pepper,  I.  L.,  &  Gerba,  C.  P. (Eds.). (2009). Environmental microbiology (second ed). Elsevier/Academic Press. Marzan,  L.  W.,  Hossain,  M.,  Mina,  S.  A., Akter, Y., & Chowdhury, A. M. M. A.
(2017).  Isolation  and  Biochemical Characterization of Heavy-Metal Resistant  Bacteria  from  Tannery Effluent in Chittagong City, Bangladesh: Bioremediation Viewpoint. The  Egyptian  Journal  of Aquatic Research , 43 , 65 – 74. https://doi.org/10.1016/j.ejar.2016.11.
002.
Mistry,  K.,  Desai,  C.,  Lal,  S.,  Patel,  K.,  & Patel, B. (2010). Hexavalent Chromium Reduction  by Staphylococcus sp. Isolated  from  Cr  (VI)  Contaminated Land  Fill. International  Journal  of Biotechnology  and  Biochemistry , 6 (1), 117 – 129. https://www.researchgate.net/public ation/52006736_Hexavalent_Chromiu m_Reduction_by_Staphylococcus_Sp_I solated_From_Cr_Vi_Contaminated_L and_Fill.
Munawaroh,  H.  S.  H.,  Gumilar,  G.  G., Nandiyanto,  A.  B.  D.,  Kartikasari,  S., Kusumawaty, D., & Hasanah, L. (2017). Microbial Reduction of Cr (VI) in to Cr (III)  by  Locally  Isolated Pseudomonas aeruginosa . IOP  Conference  Series: Materials  Science  and  Engineering , 180 , 012296.  https://doi.org/10.1088/1757- 899X/180/1/012296.
Naik,  M.  M.,  Pandey,  A.,  &  Dubey,  S.  K.
(2012).  Bioremediation  of  Metals Mediated  by  Marine  Bacteria.  In  Anil Prakash,  T.  Satyanarayana,  &  B.  N.
Johri (Eds.), Microorganisms in Environmental  Management (pp.  665 – 682). Springer Netherlands. https://doi.org/10.1007/978-94-007- 2229-3_29. Nguema,  P.  F.,  &  Luo,  Z.  (2012).  Aerobic Chromium (VI) Reduction
by Chromium-Resistant  Bacteria  Isolated from  Activated  Sludge. Annals  of
Microbiology , 62 , 41 – 47. https://doi.org/10.1007/s13213-011-
0224-7.
Penttinen, R., Hoikkala, V., & Sundberg, L.- R.  (2018).  Gliding  Motility  and
Expression of Motility-Related Genes in Spreading and Non-spreading Colonies  of Flavobacterium columnare . Frontiers  in  Microbiology , 9 ,  525. https://doi.org/10.3389/fmicb.2018.0 0525.
Priyadarshanee,  M.,  &  Das,  S.  (2021). Biosorption  and  Removal  of  Toxic Heavy  Metals  by  Metal  Tolerating Bacteria  for  Bioremediation  of  Metal Contamination:  A  Comprehensive Review. Journal  of  Environmental Chemical  Engineering , 9 (1),  104686. https://doi.org/10.1016/j.jece.2020.10 4686. Rida,  B.,  Yrjälä,  K.,  &  Hasnain,  S.  (2012). Hexavalent  Chromium  Reduction  by Bacteria from Tannery Effluent. Journal of Microbiology and Biotechnology , 22 (4), 547 – 554. https://doi.org/10.4014/jmb.1108.080 29. Singh,  N.,  Verma,  T.,  &  Gaur,  R.  (2013).
Detoxification of Hexavalent Chromium by An Indigenous
Facultative  Anaerobic Bacillus Cereus Strain  Isolated  from  Tannery  Effluent. African  Journal  of  Biotechnology , 12 (10), 1091 – 1103. https://doi.org/10.5897/AJB12.1636 Sparling,  D.  W.  (2016). Ecotoxicology Essentials:  Environmental  Contaminants and  Their  Biological  Effects  on  Animals and Plants . Elsevier/Academic Press. Srinath,  T.,  Verma,  T.,  Ramteke,  P.  W.,  & Garg,  S.  K.  (2002).  Chromium  (VI) Biosorption  and  Bioaccumulation  by
Chromate Resistant Bacteria. Chemosphere , 48 (4), 427 – 435. https://doi.org/10.1016/S0045- 6535(02)00089-9. Willey, J. M., Sherwood, L., Woolverton, C. J.,  &  Prescott,  L.  M.  (2009). Prescott’s principles  of  microbiology (1st  ed).
McGraw-Hill Higher Education. Yamina,  B.,  Tahar,  B.,  &  Marie  Laure,  F. (2012).  Isolation  and  Screening  of Heavy  Metal  Resistant  Bacteria  from Wastewater:  A  Study  of  Heavy  Metal
Co-Resistance and Antibiotics Resistance. Water Science and Technology , 66 (10), 2041 – 2048.
https://doi.org/10.2166/wst.2012.355.
Yanti, D. H., Nursyirwani, N., & Yoswaty, D.
(2021).  Isolation  and  Identification  of Bacteria  from  Dumai  Marine  Waters that Have Potencial as Lead
Bioremediation  Agents. Journal  of
Coastal and Ocean Sciences , 2 (3), 217 – 222.
https://doi.org/10.31258/jocos.2.3.217 -222.