Perbedaan Hasil Pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE) Pada Histologi Kulit Mencit ( Mus Musculus ) Berdasarkan Ketebalan Pemotongan 3 Μ m, 6 Μ m Dan 9 Μ m
Differences in Hematoxylin Eosin (HE) Staining Results in Mice (Mus musculus) Skin Histology Based on Cutting Thickness of 3 μ m, 6 μ m and 9 μ m
Tristania Shofi Nazhiifah 1*
Eko Naning Sofyanita 2
*1 Prodi Sarjana Terapan Teknologi Laboratorium Medik, Poltekkes Kemenkes Semarang 2 Prodi Sarjana Terapan Teknologi Laboratorium Medik, Poltekkes Kemenkes Semarang
*email : tristaniashofin@gmail.com

## Abstrak
Sectioning merupakan  tahap  yang  harus  dilewati  sebelum  pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE).  Tujuan  penelitian  ini  mengetahui  perbedaan  hasil  pewarnaan Hematoxylin  Eosin (HE)  pada  histologi  kulit  mencit (Mus  musculus )  berdasarkan ketebalan  pemotongan  mikrotom  3 μ m,  6 μ m,  dan  9 μ m.  Penelitian eksperimental,  desain  penelitian true  eksperimental  post  test  only  control  group design. Sampel  penelitian  ini  preparat  sediaan  kulit  mencit  ( Mus  musculus ). Pengumpulan data primer, melakukan pemotongan sediaan kulit menggunakan alat mikrotom  dan  dilakukan  pewarnaan Hematoxylin  Eosin (HE).  Pembacaan  lapang preparat dilakukan di  perbesaran 400x (objektif 40x). Data diolah menggunakan Kruskal Wallis dan Man Whitney. Nilai rata-rata pemotongan inti sel 6 μ m adalah 1,44, sitoplasma 1,15 dan keseragaman warna dengan nilai 3. Hasil menunjukkan sebaran  tidak  normal,  uji Kruskal  Wallis ( p= 0,008)  ada  perbedaan  kualitas pewarnaan pada kelompok pemotongan 3 μ m, 6 μ m dan 9 μ m. Uji Man Whitney kelompok pemotongan mikrotom 3 μ m dan 6 μ m ( p= 0,412) tidak ada perbedaan pada  kelompok  tersebut,  kelompok  pemotongan  mikrotom  6 μ m  dan  9 μ m ( p= 0,004) ada perbedaan pada kelompok tersebut, kelompok pemotongan 3 μ m dan  9 μ m  ( p= 0,004)  ada  perbedaan  pada  kelompok  pemotongan  tersebut. Kesimpulan  penelitian  ini  yaitu  pemotongan  mikrotom  6 μ m  menghasilkan preparat dengan kualitas pewarnaan baik dibandingkan pemotongan mikrotom 3 μ m dan 9 μ m.
Kata Kunci: Mikrotom , Pewarnaan, Sectioning
Keywords :
Microtome, Staining, Sectioning

## Abstract
Sectioning is a step that must be passed before staining Hematoxylin Eosin (HE). The aim of this study was to determine differences in the results of Hematoxylin Eosin (HE) staining in mice skin histology (Mus musculus) based on the thickness of the microtome sections of 3 μ m, 6 μ m, and 9 μ m. Experimental research, true experimental research design  post  test  only  control  group  design.  The  research  sample  was  mice  skin preparations (Mus musculus). Primary data collection, cutting of skin preparations using a microtome and staining  Hematoxylin Eosin (HE). Field  readings were carried  out at 400x magnification (40x objective). Data was processed using Kruskal Wallis and Man Whitney. The average value of 6 μ m nuclear cutting was 1.44, cytoplasm was 1.15 and color uniformity was 3. The results showed an abnormal distribution, the Kruskal Wallis test (p=0.008) there was a difference in the quality of staining in the 3 μ m, 6 μ m and 9 μ m.  The  Man  Whitney  test  for  the  3 μ m  and  6 μ m  microtome  cutting  groups (p=0.412) showed no difference in the group, the 6 μ m and 9 μ m microtome cutting groups  (p=0.004)  there  were  differences  in  the  group,  the  3 μ m  and  9 μ m  cutting groups ( p=0.004) there was a difference in the cutting group. The conclusion of this study  was  that  6 μ m  microtome  cutting  produced  preparations  with  better  staining quality compared to 3 μm and 9 μm microtome cutting.

## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology
Tristania Shofi Nazhiifah 1* , Eko Naning Sofyanita 2 . 2023. Differences in Hematoxylin Eosin (He) Staining Results in Mice ( Mus musculus ) Skin Histology Based on Cutting Thickness of 3 μ m, 6 μ m and 9 μ m.

## PENDAHULUAN
Teknik  pembuatan  sediaan  histologi  (histoteknik)
merupakan proses yang diawali dengan pemotonganhingga  pengamatan  di  bawah  mikroskop (Prahanarendra, 2015). Tujuan utama  dari histoteknik adalah menanamkan jaringan  dalam media yang padat, sehingga  didapatkan  potongan  tipis  dari  bagian  yang akan  dipotong  (Sofyanita et  al .,  2022).  Sediaan  yang baik adalah suatu sediaan yang mampu meggambarkan kondisi  sel  atau  jaringan  layaknya  ketika  sel  atau jaringan  tersebut  masih  di  dalam  tubuh.  Proses pembuatan  sediaan  jaringan  diawali  dengan  proses fiksasi,  dehidrasi,  penjernihan  ( clearing ),  pembenaman ( embedding ),  pengeblokan  ( blocking ),  pemotongan ( sectioning ) , hingga  proses  pewarnaan  (Rahmadani, 2018).
Pemotongan ( sectioning ) merupakan bagian dari salah satu  tahap  yang  harus  dilewati  sebelum  pewarnaan Hematoxylin  Eosin (HE).  Keuntungan  menggunakan mikrotom  sebagai  alat  pemotongan  sampel  biologis adalah  dapat  memotong  menjadi  segmen  tipis  untuk pemeriksaan  mikroskopis,  dan  tembus  cahaya. Kekurangan  mikrotom  yaitu  jika  penggunaan ketebalan  yang  digunakan  tidak  tepat,  yang  terjadi adalah  difusi  dan  terjadinya  penetrasi  cahaya  yang buruk  oleh  mikroskop  cahaya  (Mohammed et  al., 2012).
Salah  satu  organ  yang  dapat  digunakan  untuk pembuatan  sediaan  jaringan  di  dalam  Laboratorium Patologi  Anatomi  adalah  kulit  punggung  mencit. Peneliti menggunakan mencit dalam penelitian karena mencit  memiliki  siklus  hidup  pendek,  mudah berkembangbiak,  serta  struktur  anatomi,  genetik serta  fisiologi  mirip  dengan  manusia  (Mutiarahmi et al .,  2021).  Kulit  mencit  memiliki  kemiripan  struktur kulit  dengan  kulit  manusia,  mudah  dalam penangananya, jaringan yang lebih fleksibel dibandingkan  organ  lain,  tidak  mahal,  serta  mudah didapatkan (Cintika, 2020).
Peneliti  menemukan  kesenjangan  terkait  dengan
pengaturan  mikrotom  untuk  pemotongan  histologi jaringan karena ketebalan yang digunakan setiap jurnal masih  berbeda.  Sehingga  peneliti  ingin  menemukan perbedaan  hasil  pewarnaan  HE  dengan  ukuran ketebalan pemotongan mikrotom 3 μ m, 6 μ m, 9 μ m terhadap sediaan histologi kulit mencit.

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  ini  adalah  Eksperimental  dengan desain  penelitian true  eksperimental  post  test  only control  group  design karena  penelitian  ini  bertujuan untuk  mencari  perbedaan  hasil  pewarnaan.  Waktu penelitian dilakukan pada bulan Agustus 2022 sampai dengan April 2023. Penelitian ini akan dilaksanakan di Laboratorium  Hewan  Coba  Fakultas  Kedokteran Universitas Diponegoro.
Populasi  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah sediaan  kulit  mencit  ( Mus  musculus ).  Sampel  yang digunakan pada penelitian ini adalah preparat sediaan kulit  mencit  ( Mus  musculus ).  Terdapat  3  kelompok perlakuan,  yaitu  ukuran  ketebalan  pemotongan mikrotom 3 μ m, 6 μ m dan 9 μ m. Jumlah sampel yang digunakan sebanyak  27  preparat  berdasarkan  rumus Federer.

## HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL
Penelitian  ini  menggunakan  sampel  kulit  yang  berasal dari  hewan  coba  mencit  ( Mus  musculus ),  yang kemudian  dilakukan  pembedahan  dan  dilanjutkan dengan tahapan mikroteknik hingga menjadi preparat sediaan  siap  baca  untuk  selanjutnya  dilakukan pengamatan  secara  mikroskopis  oleh  validator  dan penulis.  Masing-masing  pembaca  menilai  5  lapang pandang pada tiap preparat. Dapat dilihat pada tabel 1 dan gambar 1.
Tabel  1. Tabulasi  Data  Hasil  Penilaian  Lapang Pandang Preparat Sediaan Jaringan Kulit Mencit ( Mus musculus ) Vari abel Kode Prep arat Lapang Pandang Rat a- rat a Sko r Kualita s Prepar at 1  2 3 4 5 Pem oton gan 3µm K3A 5,5  5 5  5,5 5 5,2 KURA NG BAIK K3B 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K3C 6  6 5,5  5,5 6 5,6 KURA NG BAIK K3D 6  6 6  5,5 6 5,6 KURA NG BAIK K3E 5  5,5 5,5  5,5 5 5,2 KURA NG BAIK K3F 7  5 5,5  5 5 5,6 KURA NG BAIK K3G 5  5,5 5 5 5 5,2  KURAN G BAIK K3H 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K3I 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK Pem oton gan 6µm K6A 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K6B 5 5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K6C 6  5,5  5,5 6 5 5,6 KURA NG BAIK K6D  5 5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K6E 6 6  5,5  5,5 5 5,6 KURA NG BAIK K6F  5,5  6,5 6  5,5 5 5,4 KURA NG BAIK K6G 6 7  5,5  5,5  6 6 KURA NG BAIK K6H 7 7 7 7 7 7 BAIK
K6I 5  5,5  5,5  5,5 7 5,6 KURA NG BAIK Pem oton gan 9µm K9A 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K9B 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K9C 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K9D 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K9E 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K9F 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K9G 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K9H 5  5 5 5 5 5 KURA NG BAIK K9I 5  5 5 5 5 5 KURA
NG BAIK
Gambar  1. Perhitungan  Rata-Rata  Kriteria Penelitian Preparat Sediaan
Berdasarkan  gambar  1  didapatkan  hasil  Kriteria penilaian  inti  sel  di  preparat  dengan  pemotongan  3 μ m  mendapatkan  hasil  tidak  baik  dengan  nilai  rata- rata  1,24,    pemotongan  6 μ m  mendapatkan  hasil tidak  baik  dengan  rata-rata  nilai  1,44,  sedangkan pemotongan  9 μ m  mendapatkan  hasil  tidak  baik
1.24 1.03 3 1.44 1.15 3 1 1 3 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Inti Sel Sitoplasma Keseragaman Warna
Rata-Rata Kriteria Preparat Sediaan
3 µm 6 µm 9 µm
Tristania Shofi Nazhiifah 1* , Eko Naning Sofyanita 2 . 2023. Differences in Hematoxylin Eosin (He) Staining Results in Mice ( Mus musculus ) Skin Histology Based on Cutting Thickness of 3 μ m, 6 μ m and 9 μ m.
dengan  nilai  rata-rata  nilai  1.  Penilaian  sitoplasma dengan  pemotongan  3 μ m  mendapatkan  hasil  tidak baik  dengan  rata-rata  nilai  1,03,  pemotongan  6 μ m mendapatkan  hasil  tidak  baik  dengan  nilai  rata-rata nilai 1,15, pemotongan 9 μ m mendapatkan hasil tidak baik  dengan  rata-rata  nilai  1.  Penilaian  keseragaman warna  dengan  pemotongan  3 μ m,  6 μ m  dan  9 μ m mendapatkan hasil baik dengan rata-rata nilai 3.
Tabel 2. Data Kelompok Kualitas Preparat Sediaan
Variabel Skor Kualitas Preparat Pemotonga n 3 μ m Pemotong an 6 μ m Pemoto ngan 9 μ m n (%) n (%) n (%) Tidak Baik 1-3 0 (0%) 0 (0%) 0 (0 %) Kurang Baik 4-6 9 (100%) 8 (88,9%) 9 (100%) Baik 7-9 0 (0%) 1 (11,1%) 0 (0%) Total (%) 9 (100%) 9 (100%) 9 (100%)
Berdasarkan tabel 2 data kelompok kualitas preparat sediaan,  kelompok  preparat  pemotongan  3 μ m didapatkan  kualitas  kurang  baik  9  preparat  (100%). Kelompok  preparat  pemotongan  6 μ m  didapatkan kualitas  kurang  baik  8  preparat  (88,9%)  dan  baik preparat 1 (11,1%). Kelompok preparat pemotongan 9 μ m  didapatkan  kualitas  kurang  baik  9  preparat (100%).  Hasil  presentase  tersebut  diperoleh berdasarkan rata-rata penilaian parameter tiap lapang pandang  mikroskopis  oleh  dua  pembaca  dan dikategorikan  berdasarkan  skoring  penilaian  kualitas preparat.  Data  tersebut  selanjutnya  dilakukan  uji normalitas  menggunakan Statistical  Program  for  Social Science (SPSS) versi 25.
Kemudian  data  yang  diperoleh  dilakukan  uji normalitas Shapiro-Wilk dengan melihat tabel 3.
Tabel 3. Hasil Uji Normalitas Data
Kualitas Preparat Shapiro-Wilk Sig. Pemotongan 3 μ m
0.000
Pemotongan 6 μ m Pemotongan 9 μ m
Berdasarkan  tabel  3  pada  uji  normalitas  data menggunakan Shapiro-Wilk untuk  ketiga  kelompok kualitas  pewarnaan  preparat  didapatkan  signifikasi hasil  ketiganya P =0.000  yang  berarti  seluruh  variabel memiliki sebaran tidak normal ( p< 0.05), karena sudah diketahui  distribusi  data  tidak  normal,  maka dilanjutkan  dengan  uji  hipotesis  non-parametrik Kruskal-Wallis yang dapat diamati pada tabel 4 .
Tabel 4. Hasil Uji Hipotesis Kruskal-Wallis Variabel Mean Asymp Sig. Kualitas Preparat Pemotongan 3 μ m
0.008
Pemotongan 6 μ m Pemotongan 9 μ m
Berdasarkan tabel 4 pada hasil statistik Kruskal-Wallis di atas, diperoleh nilai signifikasi 0.008 ( p <0.05) maka hipotesis  penelitian  ini  diterima,  atau  dapat  diartikan bahwa  terdapat  perbedaan  hasil  kelompok  kualitas pewarnaan  preparat  sediaan  kulit  mencit  ( Mus musculus )  pada  pemotongan  3 μ m,  6 μ m  dan  9 μ m. Penilaian  kualitas  preparat  kemudian  dilanjutkan dengan  uji  statistik Man  Whitney yang  dapat  diamati pada tabel 5.
Tabel 5. Hasil Uji Hipotesis Man Whitney
Variabel  Kelompok Mean p Kualitas Preparat 1 Pemotongan 3 μ m 0.412 Pemotongan 6 μ m
2 Pemotongan 6 μ m 0.004 Pemotongan 9 μ m
3 Pemotongan 3 μ m 0.004 Pemotongan 9 μ m
Berdasarkan tabel 5 pada hasil statistik Man Whitney di  atas,  dibagi  menjadi  3  kelompok  untuk membandingkan hasil antar pemotongan mikrotom 3 μ m  dan  6 μ m,  6 μ m  dan  9 μ m,  3 μ m  dan  9 μ m. Kelompok  pemotongan  3 μ m  dan  6 μ m  diperoleh
nilai  signifikasi  0.412  ( p >0.05)  tidak  terdapat perbedaan  hasil  yang  signifikan  pada  kelompok pewarnaan  preparat  sediaan  kulit  mencit  ( Mus musculus )  tersebut.  Sedangkan  nilai  signifikasi  0.004 ( p <0.05) pada pemotongan  6 μ m dan 9 μ m serta 3 μ m  dan  9 μ m,  dapat  diartikan  bahwa  terdapat perbedaan  hasil  kedua  kelompok  pewarnaan preparat sediaan kulit mencit ( Mus musculus ).
Hasil pengamatan mikroskopis preparat sediaan kulit mencit yang dilakukan pemotongan mikrotom 3 μ m, 6 μ m dan 9 μ m dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar  2. Mikrotom  pemotongan  (a)  3 μ m  (b)  6 μ m (c) 9 μ m perbesaran 400x
Berdasarkan  gambar  2  pemotongan  mikrotom dengan  ketebalan  3 μ m  terlihat  inti  sel  yang  tidak tampak  jelas  warna  biru,  sitoplasma  kurang  jelas warna  merah  muda  dan  keseragaman  warna  yang sergam.  Pemotongan  mikrotom  dengan  ketebalan  6 μ m  terlihat  inti  sel  yang  tampak  jelas  warna  biru, sitoplasma  kurang  jelas  warna  merah  muda  dan keseragaman  warna  yang  seragam.  Sedangkan pemotongan  mikrotom  dengan  ketebalan  9 μ m terlihat  inti  sel  tidak  tampak  jelas  warna  biru, sitoplasma  yang  tidak  tampak  jelas  warna  merah muda dan keseragaman warna yang seragam.

## PEMBAHASAN
Hasil  yang  didapatkan  dari  tabel  1  dan  2  terlihat bahwa  pemotongan  6 μ m  mendapatkan  hasil  yang baik dibanding pemotongan 3 μ m dan 9 μ m. Hal itu
dapat  dilihat  dari  rata-rata  nilai  inti,  sitoplasma  dan keseragaman  warna  pemotongan  6 μ m  yang memperoleh  nilai  lebih  tinggi  dibandingkan  preparat pemotongan 3 μ m dan 9 μ m.  Hal itu sesuai dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Akyun,  Fajariyah  & Mahriani (2019), yang melakukan penelitiannya pada jaringan  kulit  mencit  ( Mus  musculus )  yang  dilakukan pemotongan  6 μ m  menghasilkan  pengamatan gambaran histologis kulit dengan inti dan sitoplasma yang  terlihat  jelas  (Akyun et  al .,  2019).  Preparat dengan  pemotongan  3 μ m  mendapatkan  kualitas pewarnaan  HE  kurang  baik  karena  inti  sel  tidak tampak  warna  biru  dan  sitoplasma  kurang  jelas warna  merah  muda,  namun  masih  dapat  dibedakan antara  inti  dan  sitoplasma.  Preparat  dengan pemotongan 9 μ m mendapatkan kualitas kurang baik dikarenakan hasil inti tidak tampak warna biru serta sitoplasma  yang  tidak  menunjukkan  warna  merah muda  sehingga  batas  sel  pada  preparat  kurang  baik dibandingkan preparat dengan pemotongan 6 μ m.
Hasil  pemotongan  yang  kurang  baik  dapat dipengaruhi oleh pengkalibrasian mikrotom (kurangnya  ketajaman  pisau  dan  konsistensi  dalam kecepatan  pemotongan  dapat  menimbulkan  artefak pada  pita  jaringan) (Khristian  &  Inderiati,  2017).
Selain  itu,  suhu  blok  jaringan  harus  dingin  agar mempermudah  dalam  pemotongan,  pemotongan mikrotom  yang  terlalu  tebal  menyebabkan  lipatan pada pita parafin kulit akibat panas dari gesekan blok jaringan dan pisau mikrotom pada pemotongan yang dilakukan lebih dari satu kali. Serta proses embedding yang  tidak  maksimal  (jaringan  belum  terbebas  dari cairan  penjernih),  akan  mengakibatkan  pengkristalan dan  memudahkan  jaringan  menjadi  sobek    (Alwi, 2016).
Hasil yang kurang baik juga dapat disebabkan karena faktor  pewarnaan Hematoxylin  Eosin (HE)  yang berperan  sebagai  pewarna  dasar.  Pewarnaan komponen  jaringan  terjadi  karena  proses  reaksi asam  basa.  Inti  sel  yang  bersifat  asam  akan  menarik
b a

## c
Tristania Shofi Nazhiifah 1* , Eko Naning Sofyanita 2 . 2023. Differences in Hematoxylin Eosin (He) Staining Results in Mice ( Mus musculus ) Skin Histology Based on Cutting Thickness of 3 μ m, 6 μ m and 9 μ m.
zat  yang  bersifat  basa,  maka  inti  akan  tampak berwarna  ungu  atau  biru  dari Hematoxylin (Annisa and  Sofyanita,  2022).  Sedangkan  sitoplasma  bersifat basa  akan  menarik  zat  yang  bersifat  asam,  maka sitoplasma  akan  berwarna  merah  dari Eosin (Halim, 2018).
Pada penelitian ini, parameter inti sel pada kelompok pemotongan  6 μ m  diperoleh  hasil  yang  terbaik dibandingkan  dengan  kelompok  pemotongan  3 μ m dan  9 μ m.  Inti  terlihat  tampak  jelas  warna  biru keunguan pada kelompok pemotongan 6 μ m. Hal ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Akyun, Fajariyah & Mahriani (2019) bahwa pemotongan kulit punggung  mencit  ( Mus  musculus )  pemotongan  6 μ m inti sel terlihat jelas (Akyun et al ., 2019). Sedangkan inti  sel  pada  kelompok  pemotongan  3 μ m  terlihat samar  atau  tidak  tampak  warna  biru  keunguan  dan pemotongan  9 μ m  inti  sel  terlihat  bertumpuk sehingga  tidak  tampak  warna  biru  keunguan.  Faktor yang  menyebabkan  kurang  nampaknya  warna  biru keunguan  pada  inti  sel  preparat  disebabkan  karena kurang  adekuatnya hematoxylin ,  bisa  terjadi  karena fiksasi terlalu lama yang berdampak pada pengerasan jaringan  sehingga  kurang  dalam  penyerapan  warna, penghilangan parafin yang tidak sempurna (deparafinisasi),  waktu  pewarnaan  yang  tidak  tepat, pemotongan pita parafin yang terlalu tipis (Trianto et al., 2020).
Pada  penelitian  ini,  parameter  sitoplasma  pada kelompok  pemotongan  6 μ m  memperoleh  nilai tertinggi dibandingkan dengan kelompok pemotongan 3 μ m dan 9 μ m. Hal ini sejalan dengan penelitian  Stewart  (2013)  bahwa  sitoplasma  pada pemotongan  kulit  punggung  mencit  ( Mus  musculus ) pemotongan  6 μ m    terlihat  jelas  (Stewart et  al ., 2013). Sitoplasma terlihat kurang jelas warna merah muda pada pemotongan 3 μ m dan tidak tampak jelas warna merah muda pada pemotongan 9 μ m. Kurang nampaknya  warna  merah  muda  pada  preparat
disebabkan  karena  kurang  adekuatnya eosin ,  bisa terjadi  karena  pH  eosin  terlalu  tinggi,  dehidrasi alkohol  yang  terlalu  lama,  pemotongan  yang  terlalu tipis,  serta  kurangnya  dalam  waktu  pewarnaan (Ariyadi & Suryono, 2017).
Pada  penelitian  ini,  parameter  keseragaman  warna pada kelompok pemotongan 3 μ m, 6 μ m dan 9 μ m memperoleh rata-rata hasil baik yaitu dengan nilai 3. Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  Trianto,  Ilmiawan, Pratiwi  &  Suprianto  (2019),  bahwa  preparat  yang memiliki keseragaman warna yang baik menunjukkan intensitas  warna  yang  merata  pada  seluruh  lapang pandang.  Keseragaman  warna  dipengaruhi  oleh proses  fiksasi  jaringan,  sehingga  fiksasi  yang  adekuat akan  menghasilkan  warna  yang  merata  pada  seluruh lapang pandang, dan dipengaruhi kebersihan air pada waterbath sehingga  tidak  menimbulkan  artefak  pada pita jaringan (Trianto et al ., 2020).
Hasil seluruh skoring lapang pandang kemudian diuji normalitas  datanya  menggunakan  uji Shapiro-Wilk . Berdasarkan tabel 4.3 didapatkan hasil p =0.000 yang berarti  variabel  memiliki  sebaran  tidak  normal ( p <0,05).  Maka  dilanjutkan  dengan  uji  statistik  non parametrik  yaitu Kruskal-Wallis dan Man  Whitney . Berdasarkan  tabel  4.4  diperoleh  nilai  signifikasi  dari uji kruskall-wallis 0,008 ( p <0,05) yang dapat diartikan bahwa  terdapat  perbedaan  secara  statistik  hasil kelompok pewarnaan pada pemotongan 3 μ m, 6 μ m dan  9 μ m.  Serta  tabel  4.5  diperoleh  nilai  signifikasi dari uji Man Whitney pada kelompok pemotongan 3 μ m  dan  6 μ m  yaitu  0,412  ( p <0,05)  bahwa  secara statistik diartikan tidak terdapat perbedaan hasil yang signifikan  pada  kelompok  tersebut  karena  rentang hasil  rata-rata  yang  tidak  jauh  berbeda  antara kelompok  pemotongan  3 μ m  dan  6 μ m.    Pada kelompok pemotongan 6 μ m dan 9 μ m, 3 μ m dan 9 μ m  diperoleh  nilai  signifikasi  0,004  ( p <0,05)  yang dapat  diartikan  terdapat  perbedaan  hasil  yang signifikan pada kelompok tersebut.
Pada  penelitian  ini,  pemotongan  3 μ m  dan  6 μ m
secara statistika menujukkan tidak adanya perbedaan yang  signifikan,  tetapi  jika  dilihat  dari  perhitungan pada  tabel  4.1  mengenai  kualitas  preparat  secara mikroskopis  menujukkan  pemotongan  6 μ m  lebih baik  dibandingkan  pemotongan  3 μ m  dan  9 μ m.
Dapat  disimpulkan  bahwa  pemotongan  dengan ketebalan  6 μ m  adalah  pemotongan  terbaik  untuk organ kulit mencit ( Mus musculus ).

## KESIMPULAN
Kualitas  pewarnaan  preparat  sediaan  kulit  mencit ( Mus  musculus )  pada  pewarnaan Hematoxylin  Eosin (HE) berdasarkan ketebalan pemotongan mikrotom 3
μ m,  6 μ m  dan  9 μ m  yang  terbaik  adalah  pada pemotongan 6 μ m yaitu dengan rata-rata inti sel 1,44, sitoplasma 1,15, dan keseragaman warna dengan nilai 3.  Hasil  uji  statistik  pemotongan  3 μ m,  6 μ m  dan  9 μ m  menunjukkan  adanya  perbedaan  hasil  kualitas pewarnaan Hematoxylin  Eosin (HE)  sediaan  kulit mencit  ( Mus  musculus )  ( p= 0.008).  Maka,  dapat disimpulkan bahwa pemotongan ketebalan mikrotom yang terbaik untuk organ kulit mencit ( Mus musculus ) adalah pemotongan 6 μ m .

## DAFTAR PUSTAKA
Akyun, I. K., Fajariyah, S., & Mahriani, M. (2019). Efek ekstrak etanol kedelai hitam (Glycine soja) terhadap ketebalan  dermis  mencit  (Mus  musculus  L.)  pasca unilateral  ovariektomi. Jurnal  Biologi  Udayana , 23 (2). https://doi.org/10.24843/jbiounud.2019.v23.i02.p05
Alwi,  M.  A.  (2016). Studi  Awal  Histoteknik :  Fiksasi  2 Minggu  pada  Gambaran  Histologi  Organ  Ginjal,  Hepar dan Pankreas Tikus .
Annisa, A.S. dan and Sofyanita, E.N. (2022) ‘Pengaruh Penggunaan  Minyak  Zaitun  Dengan  Pemanasan Sebagai  Larutan  Penjernih  (Clearing)  Terhadap Kualitas  Sediaan  Hepar  Mencit  (Mus  musculus’,  7, pp. 6 – 12.
Ariyadi,  T.,  &  Suryono,  H.  (2017).  Kualitas  Sediaan Jaringan  Kulit  Metode  Microwave  Dan  Convetional
Histoprocessing  Pewarnaan  Hematoxylin  Eosin. Jurnal Labora Medika , 1 (1).
Cintika, K. D. (2020). Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Trengguli (Cassia fistula L.) pada Edema Punggung  Mencit  Terinduksi  Karagenin. Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Halim,  R.  (2018). Asam  Cuka  Sebagai  Agen Deparafinisasi  Pada  Pengecatan  Hematoxylin  Eosin (HE) . 1 (1). Khristian, E., & Inderiati, D. (2017). Sitohostologi. In BPPSDMK .
Mohammed,  F.,  Arishiya,  T.  F.,  &  Mohamed,  S. (2012).  Microtomes  and  Microtome  Knives – A Review and Proposed Classification. Annal Dent Univ Malaya , 19 (2).
Mutiarahmi,  C.  N.,  Hartady,  T.,  &  Lesmana,  R. (2021).  Penggunaan  Mencit  Sebagai  Hewan  Coba  di Laboratorium yang Mengacu pada Prinsip Kesejahteraan  Hewan. Indonesia  Medicus  Veterinus , 10 (1).
Prahanarendra,  G.  (2015).  Gambaran  Histologi Organ  Ginjal,  Hepar,  Dan  Pankreas  Tikus  Sprague Dawley  Dengan  Pewarnaan  He  Dengan  Fiksasi  3 Minggu. Studi Awal Histoteknik .
Rahmadani, A. F. (2018). Pengaruh Lama Fiksasi BNF 10% Dan Metanol Terhadap Gambaran Mikroskopis Jaringan  Dengan  Pewarnaan  HE  (Hematoxylin- Eosin). Universitas Muhammadiah Semarang .
Sofyanita,  E.  N.,  Iswara,  A.,  &  Priyatno,  D.  (2022). Minyak  Zaitun  Sebagai  Pengganti  xylene  pada Prosesing Jaringan Histologis Untuk Pewarnaan Kulit dan  Hepar  Mencit  dengan  Hematoxylin  Eosin: Sebuah  Studi  Perbandingan. Jaringan  Laboratorium Medis , 4 (2). https://doi.org/10.31983/jlm.v4i2.8688
Stewart,  E.,  Ajao,  M.  S.,  &  Ihunwo,  A.  O.  (2013). Histology  and  ultrastructure  of  transitional  changes in  skin  morphology  in  the  juvenile  and  adult  four- striped  mouse  (Rhabdomys  pumilio). The  Scientific World Journal , 2013 .
https://doi.org/10.1155/2013/259680
Trianto,  H.  F.,  Ilmiawan,  M.  I.,  Pratiwi,  S.  E.,  & Suprianto,  A.  (2020).  Perbandingan  kualitas pewarnaan  histologis  jaringan  testis  dan  hepar menggunakan  fiksasi  formalin  metode  intravital  dan konvensional. Jurnal  Kesehatan  Khatulistiwa , 1 (1). https://doi.org/10.26418/jurkeswa.v1i1.42968