## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 e-ISSN: 2355-7931 Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj Journal E-mail: current.biochemistry@gmail.com
Karakterisasi  Dan  Uji  Bioaktivitas  Pektin  Dari Kulit Pisang Kepok ( Musa balbisiana ) Hasil Ekstraksi Dengan Berbagai Pelarut Asam
(Characterization and Bioactivity Test of Pectin from Musa balbisiana Peel Extracted using Various Acid Solvents)
Husnawati Husnawati 1 *, Ika Yuni Astutik 1 , Laksmi Ambarsari 1
1 Department of Biochemistry, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia
Received: 18 March 2019 ; Accepted: 27 May 2019
Corresponding author : dr. Husnawati, Departemen Biokimia IPB; e-mail: dr.husnawati1983@gmail.com

## ABSTRACT
Banana  (Musaceae)  is  one  of  the  most  produced  fruits  in  Indonesia,  with  7,162,685  tons  in  2017. Banana peel waste produced can reach 40% of the total production of fresh bananas. Kepok banana peel is rich in nutrients and pectin. Pectin levels in banana peel ranged from 1.92% to 3.25% of dry weight. This study  aims  to  characterize  pectin  from  kepok  banana  peel  (Musa  balbisiana)  extracted  using  nitric  acid, citric acid, and HCl and screening potential of pectin bioactivity based on LC 50 values. The highest pectin yield  was  obtained  from  extraction  using  pH  4  citrate  buffer  which  was  3.68  ±  1.23%.  In  general,  the characteristics  of  the  best  pectin  from  kepok  banana  peel  are  pectin  extracted  with  HNO 3 pH  4  with methoxyl degree of 3.74 ± 0.34%, galacturonate content of 87.64 ± 8.36%, and esterification degree of 24.24 ±  0.098%.  Based  on  the  LC 50 value  the  pectin  extraction  results  can  be  classified  into  two,  namely commercial  pectin  and  pectin  HCl  pH  1.5  which  is  of  low  bioactivity  (LC 50 >  100  ppm),  and  pH  4  HNO 3 pectin and pH 4 citrate buffer pectin which has high bioactivity (LC 50 ≤ 30 ppm).
Keywords: Cytotoxicity, Galakturonat, Kepok banana pectin, Methoxyl

## ABSTRAK
Pisang  (Musaceaea)  merupakan  salah  satu  buah  dengan  produksi  tertinggi  di  Indonesia,  yaitu sebesar 7,162,685 ton pada tahun 2017. Limbah kulit pisang yang dihasilkan dapat mencapai 40% dari total produksi buah pisang segar. Kulit pisang kepok masih mengandung banyak nutrisi dan pektin. Kadar pektin pada  kulit  pisang  berkisar  antara  1.92%  hingga  3.25%  dari  berat  kering.  Penelitian  ini  bertujuan melakukan  karakterisasi  pektin  dari  kulit  pisang  kepok  (Musa  balbisiana)  yang  diekstrak  menggunakan asam  nitrat,  asam  sitrat,  dan  HCl  serta  penapisan  potensi  bioaktivitas  pektin  hasil  ekstraksi.  Rendemen pektin tertinggi diperoleh pada ekstraksi menggunakan buffer sitrat pH 4 yaitu 3.68 ± 1.23 %. Secara umum karakteristik  pektin  kulit  pisang  kepok  terbaik  yaitu  pektin  yang  diekstrak  dengan  HNO 3 pH  4  dengan derajat metoksil 3.74 ± 0.34 %, kadar galakturonat 87.64 ± 8.36%, dan derajat esterifikasi 24.24 ± 0.098%. Berdasarkan nilai LC 50 nya pektin hasil ekstraksi dapat digolongkan menjadi dua yaitu pektin komersil dan pektin  HCl  pH  1.5  yang  mempunyai  bioaktivitas  rendah  (LC 50 >  100  ppm),  serta  pektin  HNO 3 pH  4  dan pektin buffer sitrat pH 4 yang mempunyai bioaktivitas tinggi (LC 50 ≤ 30 ppm).
Kata kunci : Galakturonat, Metoksil, Pektin pisang kepok, Sitotoksisitas

## 1. PENDAHULUAN
Pisang  ( Musaceae )  merupakan  salah satu  komoditas  buah  yang  mempunyai  nilai ekspor  tinggi.  Produksi  pisang  di  Indonesia pada  tahun  2017  lebih  dari  7  juta  ton  (BPS 2017). Pengolahan buah pisang dapat menghasilkan  limbah  kulit  pisang  sebesar 40%.  Limbah  kulit  pisang  dapat  diolah menjadi  bahan  baku  bioetanol  dan  pupuk organik  (Imam  2011).  Selain  itu,  limbah  kulit pisang  juga  dapat  diolah  menjadi  tepung  kulit pisang (Hastuti dan Tumion 2017).
Pisang kepok ( Musa balbisiana ) merupakan  salah  satu  pisang  kultivar  hibrida triploid  (Imam  2011).  Limbah  kulit  pisang kepok  mengandung  banyak  nutrisi  seperti protein,  lemak,  pati,  dan  selulosa  (Wardani et al .  2018).  Limbah  kulit  pisang  kepok  juga mengandung  pektin.  minimal  0.9%  dari  berat kering  simplisia  (Ariesti et  al. 2015). Penggunaan limbah kulit pisang kepok sebagai bahan  ekstraksi  pektin  merupakan  sumber bahan baku yang melimpah.
Pektin  adalah  senyawa  polisakarida kompleks  yang  tersusun  atas  asam  pektat, asam pektinat, dan protopektin. Pektin disusun oleh unit-unit D-galakturonat yang terikat oleh ikatan  α-1,4-glikosidik  sehingga  membentuk poligalaturonat.  Gugus  karboksil  pada  asam galakturonat saling berikatan dengan ion Ca2 + atau  Mg 2+ (Aji et  al .  2017).  Pektin  komersil banyak  diekstrak  dari  kulit  jeruk  (Kistiyani et al . 2016); dan kulit apel (Nurman et al . 2017), karena  kandungan  pektinnya  yang  cukup tinggi. Namun, dewasa ini limbah kulit pisang juga  dapat  digunakan  sebagai  alternatif  bahan baku  ekstraksi  pektin,  karena  mempunyai kadar  pektin  yang  relatif  cukup  tinggi (Nurhayati et al . 2016).
Karakteristik utama pektin yaitu kemampuan  pektin  yang  dapat  membentuk gel,  membuat  pektin  banyak  dimanfaatkan pada  bidang  industri  pangan  ataupun  industri farmasi.  Karakterisitik  dan  sifat  fisik  pektin dipengaruhi  oleh  metode  ekstraksi  (Kacem et
al . 2008). Karakteristik pektin dari kulit pisang kepok  yang  diekstrak  menggunakan  HCl  pH 1.5 dengan suhu 90 o C menghasilkan nilai berat ekivalen  4094.47  –  9534.7  mg ek dengan  nilai derajat metoksil 1.01- 2.70% (Fitria 2013).
Penelitian  ini  bertujuan  melakukan karakterisasi  pektin  dari  kulit  pisang  kepok ( Musa balbisiana ) yang diekstrak menggunakan  asam  nitrat,  bufer  sitrat,  dan HCl,  serta  menentukan  potensi  bioaktivitas pektin berdasarkan nilai LC 50 .

## 2. METODOLOGI
Sampel  kulit  pisang  kepok  ( Musa balbisiana )  dengan  tingkat  kematangan  2 (50%  kulit  pisang  masih  berwarna  hijau) berasal  dari  limbah  usaha  pisang  di  daerah Bogor,  Jawa  Barat.  Bahan-bahan  uji  yang digunakan  yaitu  akuades,  HNO 3 ,  HCl,  asam sitrat, Na-sitrat, pektin komersil (P-K) sebagai kontrol,  etanol  96%,  NaOH,  NaCl,  indikator fenolftalein,  indikator  fenol  merah.  Uji sitotoksisitas  menggunakan  telur  Artemia salina dan air laut sebagai media hidup larva.
Penyiapan  Simplisia  Kulit  Pisang  Kepok (Syahputra 2019)
Pengeringan kulit pisang kepok menggunakan oven dengan suhu 45 o C selama 48  jam.  Kulit  pisang  lalu  dihaluskan menggunakan  blender  dan  disaring  dengan ayakan  ukuran  60  mesh,  sehingga  dihasilkan simplisia  kulit  pisang  kepok.  Kadar  Air Simplisia  diukur  menggunakan  cara  AOAC (2006).
Ekstraksi  Pektin  (Modifikasi  Nurhayati et al . 2016)
Ekstraksi  dilakukan  menggunakan  3 pelarut yaitu HCl (pH 1.5), HNO 3 (pH 1.5, pH 2.5,  dan  pH  4),  dan  bufer  sitrat  (pH  4). Simplisia kulit pisang kepok dicampur dengan pelarut  menggunakan  perbandingan  simplisia dan  pelarut  yaitu  1:20  (b/v).  Campuran dipanaskan  pada  suhu  90 o C  selama  90  menit
dengan  pengadukan  terus  menerus  pada kecepatan 800 rpm. Filtrat kemudian disentrifus dengan kecepatan 6000 rpm selama 15  menit.  Supernatan  yang  didapat  ditambah etanol 96% dengan perbandingan 1:2 (v/v) dan dibiarkan  selama  satu  malam.  Endapan  yang didapat  kemudian  disaring  dan  dilarutkan kembali  dengan  menggunakan  etanol  96% dengan  perbandingan  volume  1:2  (b/v). Campuran disentrifus kembali dengan kecepatan  6000  rpm  selama  15  menit. Endapan yang didapat dipisahkan dari supernatan.  Pektin  basah  dikeringkan  dengan menggunakan oven pada suhu 45 o C selama 24 jam.
Uji Kualitatif Tanin (Andriyani et al . 2010) Ekstrak pektin sebesar 250 mg dimasukkan  ke  dalam  5  mL  akuades. Campuran  kemudian  dipanaskan  pada  suhu 100 o C selama 15 menit. Campuran ditambahkan  dengan  1  tetes  feriklorida  dan diamati perubahan warna yang terjadi.

## Bobot Ekivalen (BE)
Ekstrak  pektin  kulit  pisang  sebanyak 100  mg  dibasahi  dengan  1  mL  etanol  dan dilarutkan  dalam  20  mL  larutan  NaCl  1000 ppm.  Larutan  dititrasi  dengan  NaOH  0.1  M, sebelum  dititrasi  sampel  ditetesi  dengan indikator fenol merah. Bobot ekivalen ditentukan berdasarkan rumus berikut:
o ot  amp l p ktin  m
m   a        a

## Derajat Metoksil (DM)
Larutan  netral  hasil  titrasi  pada penentuan BE ditambah dengan 25 mL larutan NaOH  0.25  M.  Larutan  didiamkan  selama  30 menit  pada  suhu  ruang  dalam  keadaan tertutup.  Larutan  kemudian  ditambahkan dengan 25 mL larutan HCl 0.25 M dan dititrasi dengan larutan NaOH 0.1 M, sebelum dititrasi larutan  ditetesi  dengan  indikator  fenol  merah.
Nilai  DM  ditentukan  berdasarkan  rumus berikut:

## ( ) m   a             a o ot  amp l p ktin  m

## Kadar Galakturonat (KG) dan Derajat Esterifikasi (DE)
Kadar galakturonat dihitung dari miliekivalen  (µek)  NaOH  yang  diperoleh  dari penentuan  BE  dan  DM.  Derajat  esterifikasi ditentukan  berdasarkan  BE  dan  KM.  Rumus penentuan nilai KG dan DE sebagai berikut:
( ) k ( m tok il ) o ot  amp l   ktin  m
( ) ajat   tok il a a   alakt  onat
Uji Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT) (Setyowati dan Cahyanto 2016)
Telur  dari  larva Artemia  salina Leach sebanyak  0.5  g  ditetaskan  dalam  wadah  berisi air  laut  dan  diberi  penerangan  dengan  lampu pijar  60  watt  serta  diaerasi  selama  48  jam. Larutan  uji  dibuat  dengan  melarutkan  sampel ke  dalam  air  laut  dengan  konsentrasi  2500 ppm  sampai  dengan  7500  ppm  untuk  pektin komersil  dan  pektin  HCl  pH  1.5.  Sampel pektin asam sitrat pH 4 dilarutkan ke dalam air laut dengan konsentrasi 250 ppm sampai 5000 ppm Sampel pektin HNO3 pH 4 dilarutkan ke dalam  air  laut  dengan  konsentrasi  62.5  ppm sampai  1875  ppm.  Sebanyak  10  ekor  larva Artemia salina dan sampel pektin sebanyak 0.5 mL dimasukkan ke dalam setiap sumuran pada Well plate . Pengulangan dilakukan sebanyak 3 kali.  Pengamatan  kematian  larva  udang dilakukan  pada  jam  ke-24.  Jumlah  larva  yang mati  digunakan  untuk  menghitung  %  daya hambat,  sedangkan  LC 50 dihitung  dari  antilog nilai X yang didapatkan dengan menggunakan persamaan y = ax + b.
matian la  a mati la  a total

## 3. HASIL

## Rendemen dan Kadar Air Simplisia Kulit Pisang Kepok
Rendemen  simplisia  kulit  pisang  kepok yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini  sebesar 12.89%  dengan  rerata  kadar  air  sebesar  5.4 ±0.48  %.  Nilai  kadar  air  yang  diperoleh  pada penelitian  ini  sudah  memenuhi  standar  yang ditetapkan oleh International Pectin Producers Association yaitu  kurang  dari  12%  (IPPA 2006).  Kadar  air  yang  tinggi  pada  simplisia dapat  menghambat  proses  ekstraksi  pektin, karena  kandungan  air  pada  bahan  dapat menghambat  laju  difusi  larutan  asam  dalam mengesktrak  pektin.  Pengeringan  kulit  pisang kepok  pada  suhu  45 o C  dapat  meminimalkan degradasi  pektin  selama  proses  pengeringan (Megawati dan Machsunah 2016).
Rendemen  Pektin  Kulit  Pisang  Kepok (KPK) dengan Variasi Pelarut
Perbedaan jenis pelarut bertujuan untuk mengetahui efekitifitas pelarut dalam menghasilkan  rendemen  pektin.  Mekanisme ekstraksi pektin terjadi ketika ion H + dari asam memecah ikatan protopektin dengan senyawa- senyawa dalam dinding sel tanaman (Kaban et al. 2012).  Rendemen  pektin  KPK  terbesar yaitu  3,68%  diperoleh  dengan  ekstraksi menggunakan bufer sitrat pH 4, sedangkan pH optimum  untuk  ekstraksi  pektin  KPK  dengan pelarut  HNO 3 adalah  pada  pH  2.5  dengan rendemen sebesar 2.91 ±0.75% (Gambar 1).

## Karakteristik Fisik Pektin
Pektin  dari  kulit  pisang  kepok  yang diekstrak pada berbagai pelarut asam menghasilkan  warna  yang  berbeda.  Warna pektin  yang  diekstrak  pada  HCl  (pH  1.5), HNO3  (pH  2.5  dan  pH  4)  berwarna  coklat kemerahan,  pektin  yang  diekstrak  dengan larutan  HNO3  pH  1.5  berwarna  coklat  muda, sedangkan pektin yang diekstrak dengan bufer sitrat  pH  4  berwarna  coklat  kekuningan. Warna  pektin  yang  mendekati  dengan  warna
pektin  komersil  yaitu  pektin  yang  diekstrak dengan  menggunakan  bufer  sitrat  pH  4. Tekstur  pektin  yang  diekstrak  pada  berbagai pelarut  asam  mempunyai  tekstur  yang  sama dengan pektin komersil yaitu berbentuk serbuk sedikit kasar (Tabel 1).

## Bobot Ekivalen (BE)
Bobot  ekivalen  menunjukkan  jumlah kandungan  gugus  asam  galakturonat  bebas dalam  rantai  molekul  pektin.  Prinsip  reaksi pada penentuan bobot ekivalen yaitu terjadinya  reaksi  penyabunan  gugus  karboksil oleh  NaOH.  Semakin  besar  volume  NaOH yang  digunakan,  maka  nilai  bobot  ekivalen akan  semakin  kecil.  Nilai  BE  pada  pektin komersil  (P-K)  memenuhi  standar  dari International  Pectin  Producers  Association (IPPA)  yaitu  600-800  mg ek .  BE  pada  pektin yang  diekstrak  dengan  menggunakan  larutan asam  nitrat  mengalami  peningkatan  seiring dengan  peningkatan  pH  larutan.  Nilai  BE tertinggi didapat pada pektin HNO 3 pH 4 yaitu sebesar  lebih  dari  20  ribu  mg ek dan  nilai  BE terkecil  adalah  pada  pektin  HCl  pH  1.5  yaitu 876 mg ek (Gambar 2).

## Derajat Metoksil (DM)
Derajat  metoksil  menyatakan  jumlah mol  metanol  yang  terdapat  di  dalam  100  mol asam  galakturonat.  Berdasarkan  kandungan gugus  metoksilnya  pektin  dapat  dibedakan menjadi  dua  yaitu low  metoxyl  pectin (LMP) dengan kadar metoksil kurang dari 7.12% dan high  metoxyl  pectin (HMP)  dengan  kadar metoksil lebih dari 7.12% (IPPA 2006). Kadar metoksil pada pektin komersil dan pektin hasil ekstraksi  termasuk  ke  dalam  kelompok  pektin metoksil  rendah,  karena  kadarnya  kurang  dari 7.12%  (Gambar  3).  Derajat  metoksil  tertinggi didapat  pada pektin HNO 3 pH 4  yaitu sebesar 3.74%, dan nilai terendah terdapat pada pektin HNO 3 pH 1.5 yaitu sebesar 2.33%. Kedua nilai tersebut tidak jauh dari derajat metoksil pektin komersial yaitu 2.63%.
Tabel 1. Karateristik fisik pektin
Sampel Warna Tekstur Tanin Gambar Pektin Komersil Putih kekuningan Serbuk - Pektin HCl pH 1.5 Coklat kemerahan Serbuk + Pektin HNO 3 pH 1.5 Coklat muda Serbuk + Pektin HNO 3 pH 2.5 Coklat kemerahan Serbuk ++ Pektin HNO 3 pH 4 Coklat kemerahan Serbuk +++ Pektin As. Sitrat pH 4 Coklat kekuningan Serbuk -
Keterangan : (+) Mengandung tanin; (-) Tidak mengandung tanin
3,33
2,71 2,91 2,79 3,68 0 1 2 3 4 R ende men (% ) P-HCl pH 1.5 P-Sitrat pH 4 P-HNO 3 pH 1.5 P-HNO 3 pH 2.5 P-HNO 3 pH 4 795,23 876,02 3397,76 10193,28 20434.05 2210,41 0 5000 10000 15000 20000 25000 B o b o t ek iv alen ( m g ek ) P-HCL pH 1.5 P-K P-HNO 3 pH 1.5 P-HNO 3 pH 2.5 P-HNO 3 pH 4 P-sitrat pH 4
Gambar 1. Rendemen hasil ekstraksi pektin pada variasi pelarut
Gambar 2. Bobot ekivalen pektin

## Kadar Galakturonat (KG)
Menurut  IPPA,  kadar  galakturonat minimum  pada  pektin  yaitu  35%.  Nilai  KG yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  sudah memenuhi  standar  IPPA,  dengan  kadar  pektin terendah  adalah  pada  pektin  yang  diekstraksi dengan  HNO 3 pH  1.5  yaitu  sebesar  69.55% (Gambar  4).  Nilai  KG  pektin  yang  diekstrak dengan  HNO 3 pH  4  mengalami  penurunan dibandingkan  dengan  pektin  yang  diekstrak pada pH 2.5. Perbedaan kandungan galakturonat  pada  pektin  hasil  ekstraksi  juga terlihat pada pektin yang diekstrak dengan pH sama tetapi jenis asamnya berbeda. Pektin HCl pH  1.5  memiliki  nilai  KG  tertinggi  yang mendekati KG pektin komersial yaitu 146.5%. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pH  dan  jenis pelarut  yang  berbeda  dapat  mempengaruhi kadar galakturonat pada pektin.

## Derajat Esterifikasi (DE)
Derajat esterifikasi merupakan persentase  jumlah  residu  asam  D-galakturonat yang  mengalami  esterifikasi  oleh  etanol  pada gugus karboksilnya. Menurut IPPA, berdasarkan  kandungan  metil  ester  pektin dapat dibedakan menjadi dua yaitu pektin ester tinggi  dengan  kadar  ester  lebih  dari  50%  dan pektin  ester  rendah  dengan  kadar  metil  ester kurang  dari  50%.  Nilai  DE  yang  diperoleh pada pektin komersil yaitu 10.02%, sedangkan nilai DE pektin tertinggi adalah yang diekstrak dalam  pelarut  HNO3  pH  1.5  yaitu  19.02%, 13.12%,  dan  24.24%  (Gambar  5).  Persentase DE  pada  pektin  komersil  dan  pektin  hasil ekstraksi  pada  penelitian  ini  termasuk  ke dalam  pektin  ester  rendah,  karena  nilai  DE kurang dari 50% (IPPA 2006).
Bioaktivitas  Pektin  KPK  pada  Uji  BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test )
Uji  BSLT  merupakan  uji  awal  yang digunakan  untuk  mengetahui  potensi  hayati dari  suatu  senyawa  untuk  dikatakan  memiliki aktivitas bioaktif seperti antioksidan,
antikanker,  antimikrobial  dan  lain  sebagainya berdasarkan  nilai  LC 50 yang  diperoleh.  Nilai Letal  Concentration 50%  (LC 50 )  merupakan nilai  yang  menunjukkan  konsentrasi  suatu  zat yang  dapat  menyebabkan  kematian  organisme hingga  50%.  Tingkat  bioaktivitas  suatu  zat berdasarkan  nilai  LC 50 dapat  digolongkan menjadi  tiga  yaitu  mempunyai  bioaktitivitas tinggi dengan nilai LC 50 ≤   ppm,  ioakti ita n ah  jika  nilai    ≤   C 50 ≥      ppm, sedangkan suatu bahan dinilai tidak mempunyai  aktivitas  bioaktif  apabila  nilai LC 50 ≥      ppm    y    982  alam T kha et al .  2015).  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa pektin komersil dan pektin HCl pH 1.5 mempunyai bioaktivitas rendah, karena mempunyai nilai  LC 50 pada  rentang  31–1000 ppm,  sedangkan  pektin  asam  sitrat  pH  4  dan pektin  HNO 3 pH  4  mempunyai  bioaktivitas tinggi karena nilai LC 50 ≤    ppm  Ta  l 2 .
Tabel 2. Nilai LC 50 pektin

## 4. PEMBAHASAN
Ekstraksi  pektin  dilakukan  dengan menggunakan  pelarut  asam.  Pelarut  yang digunakan untuk ekstraksi harus bersifat stabil tetapi inert ,  tidak  beracun,  mempunyai selektivitas  tinggi,  dan  dapat  didaur  ulang. Pelarut  asam  yang  digunakan  berfungsi  untuk menghidrolisis  protopektin  menjadi  pektin (Sukaryo  2016).  Penelitian  ini  menggunakan tiga  variasi  pelarut  yaitu  akuades  yang diasamkan  dengan  HCl  (pH  1.5),  bufer  sitrat (pH 4), HNO 3 (pH 1.5, pH 2.5, dan pH 4). Hal tersebut  bertujuan  untuk  membandingkan efektifitas  pelarut  HNO 3 dalam  menghasilkan rendemen pektin.
Sampel
LC 50 (ppm) Pektin komersil 602.55 Pektin HCl pH 1.5 588.84 Pektin HNO 3 pH 4 19.09 Pektin Asam sitrat pH 4 30.88
2,63 2,93 2,33 3,14 3,74 3.03 0 1 2 3 4 Der aj at Me to k sil (%) P-HNO 3 pH 1.5 P-HNO 3 pH 2.5 P-HNO 3 pH 4 P-HCl pH 1.5 P-Sitrat pH 4 P-K 148,58 146,45 69,55 135,27 87,64 101,06 0 30 60 90 120 150 180 K ada r G al ak tur onat ( % ) P-HNO 3 pH 1.5 P-HNO 3 pH 2.5 P-HNO 3 pH 4 P-HCl pH 1.5 P-Sitrat pH 4 P-K 10,02 11,34 19,02 13,12 24,24 17,05 0 5 10 15 20 25 D er aj at Est er if ik as i (% ) P-HNO 3 pH 1.5 P-HNO 3 pH 2.5 P-HNO 3 pH 4 P-HCl pH 1.5 P-Sitrat pH 4 P-K
Gambar 3. Derajat metoksil pektin
Gambar 4. Kadar galakturonat pektin
Gambar 5. Derajat esterifikasi pektin
Penelitian  Hanum et  al. (2012)  telah berhasil mengekstraksi pektin dari kulit pisang kepok  menggunakan  pelarut  HCl  dengan rendemen  tertinggi  pada  pH  1,5  dan  suhu  90 o C. HCl dan HNO 3 merupakan golongan asam kuat,  karena  itu  perlu  dibandingkan  dengan pelarut  asam  lemah  yaitu  bufer  sitrat  pH  4 berdasarkan  optimasi  yang  telah  dilakukan Syahputra (2019) dengan ekstraksi pektin kulit kakao  yang  menghasilkan  pektin  dengan karakteristik cukup baik.
Pektin
KPK yang diekstrak menggunakan
HNO 3 menunjukkan peningkatan  rendemen  pada  pH  2,5  dan mengalami  penurunan  di  pH  4  (Gambar  1). Asam  nitrat  merupakan  asam  mineral  yang tergolong  ke  dalam  asam  kuat  karena mempunyai  konstanta  keasaman  2  x  10 1 . Menurut  Pagan et  al. (2001),  asam  mineral memberikan  keuntungan  lebih  untuk  ekstraksi pektin  dibandingkan  dengan  asam  organik, karena  asam  mineral  dapat  menghasilkan rendemen pektin yang lebih tinggi dibandingkan dengan ekstraksi pektin menggunakan asam organik.
Menurut  Roikah et  al .  (2016),  warna pada  pektin  dapat  dipengaruhi  oleh  suhu ekstraksi. Semakin tinggi suhu ekstraksi maka pektin  yang  dihasilkan  akan  semakin  gelap. Selain itu warna pektin juga dapat dipengaruhi oleh  senyawa  metabolit  yang  turut  terekstrak saat  proses  ekstraksi  pektin.  Marsiglia et  al . (2016)  menyebutkan  bahwa  warna  kemerahan pada  pektin  disebabkan  oleh  kandungan  tanin pada  pektin  akibat  ekstraksi  pada  tingkat keasaman  rendah  atau  pH  tinggi.  Kondisi tersebut  sesuai  dengan  hasil  uji  kualitaif  tanin yang  menunjukkan  bahwa  pektin  yang diekstrak  menggunakan  larutan  asam  nitrat mengalami  peningkatan  kandungan  tanin seiring dengan kenaikan pH larutan (Tabel 1). Pektin  hasil  ekstraksi  yang  mengandung  tanin dengan  kadar  tinggi  yaitu  pektin  yang diekstrak  menggunakan  HNO 3 pH  4  dan
HNO 3 pH  2.5,  sedangkan  pektin  yang diekstrak  menggunakan  bufer  sitrat  pH  4 menunjukkan kandungan tanin negatif.
Peningkatan nilai BE pada pektin KPK yang  diekstrak  dengan  menggunakan  larutan HNO 3 (Gambar  2)  dapat  disebabkan  oleh semakin  rendah  kandungan  gugus  asam  bebas (Roikah et al . 2016). Nilai BE dari pektin yang diekstrak  pada  pH  yang  sama  namun  berbeda jenis asam yang digunakan menunjukkan hasil yang  berbeda.  Pektin  yang  diekstrak  dengan asam  sitrat  pH  4  menunjukkan  nilai  BE  yang lebih rendah dibandingkan dengan pektin yang diekstrak dengan HNO 3 pH 4. Perbedaan nilai BE  juga  dapat  dilihat  pada  pektin  yang diekstrak  dengan  HCl  pH  1.5  lebih  rendah dibandingkan  dengan  pektin  yang  diekstrak dengan  HNO 3 pH  1.5.  Nilai  BE  dapat dipengaruhi  oleh  jenis  asam  yang  digunakan untuk  ekstraksi.  Semakin  kuat  asam  dan semakin  pekat  asam  cenderung  menyebabkan reaksi  polimerisasi  rantai  pektin.  Reaksi tersebut  menyebabkan  rantai  pektin  yang terbentuk akan panjang dan jumlah asam bebas dalam  larutan  akan  menurun.  Penurunan jumlah asam bebas pada larutan menyebabkan nilai  BE  pektin  akan  meningkat  (Yadav et  al. 2015).  Kenaikan  nilai  BE  yang  sangat  tinggi pada  pektin  dari  KPK  yang  diekstrak  dengan HNO 3 (pH  2.5  dan  pH  4)  dapat  juga disebabkan oleh adanya kandungan tanin yang terdapat di dalam pektin hasil ekstraksi (Tabel 1).
Persentase  gugus  metoksil  pada  pektin yang  diekstrak  dengan  menggunakan  larutan asam  nitrat  mengalami  peningkatan  seiring meningkatnya  pH  larutan  (Gambar  3).  Selain itu nilai DM juga dipengaruhi oleh jenis asam yang  digunakan.  Penurunan  tingkat  keasaman larutan  ekstraksi  menyebabkan  penurunan reaksi  penguraian  gugus  metil  ester.  Semakin sedikit  gugus  metil  ester  yang  terurai,  maka nilai  DM  pektin  akan  semakin  meningkat (Ojeda et  al .  2016).  Nilai  DM  yang  diperoleh
pada  penelitian  ini  lebih  tinggi  dibandingkan penelitian  yang  telah  dilakukan  Fitria  (2013) menggunakan  pelarut  dan  suhu  yang  sama yaitu  HCl  pH  1,5  dan  suhu  90 o C.  Kadar  DM pektin  pada  penelitian  ini  dengan  ekstraksi selama  90  menit  adalah  2.63%,  sedangkan nilai  DM  pektin  Fitria  (2013)  yang  diekstrak selama  80  menit  adalah  sebesar  1.01%.  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  penambahan waktu  ekstraksi  dapat  meningkatkan  nilai  DM yang diperoleh.
Kadar  galakturonat  merupakan  nilai yang menunjukkan kandungan asam galakturonat  yang  terdapat  di  dalam  rantai pektin. Menurut Constela dan Lanzano (2006), kadar galakturonat suatu pektin dapat mempengaruhi struktur dan tekstur dari pektin, serta tingkat kemurnian pektin. Nilai KG dapat dipengaruhi  oleh  konsentrasi  asam  dalam pelarut. Pektin yang diekstrak dengan pH sama tetapi  jenis  asamnya  berbeda  menunjukkan kandungan galakturonat yang berbeda (Gambar  4).  Asam  sitrat  merupakan  asam lemah  dibandingkan  dengan  asam  nitrat  yang termasuk  asam  kuat,  menunjukkan  kadar galakturonat  yang  berbeda  walaupun  berada pada  pH  yang  sama  (pH  4).  Semakin  tinggi konsentrasi asam maka nilai KG akan semakin meningkat.  Peningkatan  konsentrasi  asam dalam  pelarut  dapat  menyebabkan  reaksi hidrolisis  protopektin  menjadi  pektin  semakin tinggi.  pH  dan  jenis  pelarut  yang  berbeda dapat  mempengaruhi  kadar  galakturonat  pada pektin.
Pektin  pada  dasarnya  merupakan biopolimer  yang  bersifat  tidak  toksik.  Pektin banyak  dimanfaatkan  pada  bidang  industri makanan  dan  farmasi.  Pada  industri  makanan pektin  digunakan  sebagai  bahan  pengental untuk selai, jeli, jus buah, dan produk permen. Pada  bidang  farmasi  pektin  bermanfaat sebagai  pengkelat  logam  berat  pada  saluran pencernaan, serta berpotensi sebagai antikanker (Glinsky dan Raz 2009).
Tingginya  kemampuan  bioaktivitas pada pektin KPK yang diekstrak dengan HNO 3 pH  4  diduga  karena  adanya  kandungan  tanin yang  merupakan  senyawa  fitokimia  turunan polifenol  yang  mampu  membentuk  kompleks dengan protein (Baud et al . 2014). Faktor lain yang dapat menyebabkan peningkatan bioaktivitas pektin yaitu nilai kadar galakturonat  dan  derajat  metoksil.  Kadar galakturonat  menunjukkan  persen  kandungan gugus  asam  galakturonat  yang  terdapat  dalam pektin. Kandungan metoksil yang cukup tinggi dan galakturonat yang tinggi dapat mempengaruhi  rendahnya  nilai  LC 50 pada sampel  pektin,  yang  menunjukkan  adanya bioaktivitas dari pektin.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
[AOAC]  Association  of  Official  Analytical Chemist.  2006. Official  Methods  of Analysis  18th  Edition .  Washington  DC (US):  Association  of  Official  Analytical Chemist.
[BPS]  Badan  Pusat  Statistik.  2017.  Statistik tanaman buah-buahan dan sayuran tahunan  Indonesia  [diakses  pada  2018 November 10]. Tersedia di https://www.bps.go.id . [IPPA] International Pectin Producers Association.  2006.  Pectin  Commercil Production  [diakses  pada  2018  10 November]. Tersedia di http://www.google.com/IPPA.info.html.
Aji  A,  Bahri  S,  Tantalia.  2017.  Pengaruh waktu ekstraksi dan konsentrasi HCluntuk pembuatan  pektin  dari  kulit  jeruk  bali ( Citrus  maxima ). Jurnal Teknologi  Kimia Unimal . 6(1): 33-44.
Ariesti  LK,  Waharina  F,  Ristianingsih  Y. 2015.  Pengaruh  konsentrasi  HCl  dan komposisi  campuran  kulit  pisang  dan aplikasinya  pada  proses  pengentalan karet.  Prosiding  SemNas  Teknik  Kimia Indonesia 12-13 Oktober 2015.
Baud  GS,  Sangi  MS,  Koleangan  HSJ.  2014.
Analisis  senyawa  metabolit  sekunder  dan
uji  toksisitas  ekstrak  etanol  batang tanaman patah tulang ( Euphorbia tirucalli L.) dengan metode Brine Shrimp Lethality
Test (BSLT). Jurnal  Ilmiah  Sains .  14(2):
106-112.
Constela  D,  Lozano  JE.  2006.  Kinetic  Model of  Pectin  Demethylation. Latin  American Applied Research . 33: 91-96.
Fitria  V.  2013.  Karakterisasi  pektin  hasil ekstraksi  dari  limbah  kulit  pisang  kepok ( Musa  balbisiana ABB)  [skripsi].  Jakarta (ID): UIN Syarif Hidayatullah.
Hanum  F,  Tarigan  MA,  Kaban  IMD.  2012.
Ekstraksi  pektin  dari  kulit  buah  pisang kepok  ( Musa  paradisiaca ). Jurnal  Teknik Kimia USU . 1(2) : 31-35.
Hastuti  ND,  Tumion  FF.  2017.  Kajian  variasi penambahan tepung terigu dan
penambahan  air  pada  pembuatan  donat dari  limbah  kulit  pisang  kepok  ( Musa paradisiaca ). Jurnal  Teknologi  Pangan . 8(1): 57-65.
Imam  M.  2011.  Antioxidant  activities  of different  parts  of Musa  sapientum L.  ssp.
Sylvestris fruit. Journal Applied Pharmaceutical Science . 17.
Kaban,  Deviliany  IM,  Tarigan,  Angelina  M, Hanum,  Farida.  2012.  Ekstraksi  pektin dari  kulit  pisang  raja  ( Musa  sapientum ).
Jurnal Teknik Kimia . 1: 26-31.
Kacem  I,  Majdoub  H,  Roudesli  S.  2008. Physicochemical properties of pectin from retama  raetam  obtained  using  sequential estraction. Journal  of  Aplied  Science . 8(9): 1713-1719.
Marsiglia  DE,  Ojeda  KA,  Ramirez  MC,
Sanches  E.  2016.  Pectin  extraction  from cocoa pod husk  ( Theobroma cocoa L) by hydrolysis  with  citric  and  acetic  acid. International  Journal  of  Chem  Tech Research . 9(7): 497-507.
Megawati,  Machsunah  EL.  2016.  Ekstraksi pektin  dari  kulit  pisang  kepok  ( Musa paradisiaca )  menggunakan  pelarut  HCl sebagai Edible  film . Jurnal  Bahan  Alam Terbarukan . 5(1): 14-21.
Nurhayati N, Maryanto M, Tafrikhah R. 2016. Ekstraksi  pektin  dari  kulit  dan  tandan pisang  dengan  variasi  suhu  dan  metode.
Agritech . 36(3): 327-334.
Nurman  Z,  Masrul,  Sastri  S.  2017.  Pengaruh pektin  buah  apel  ( Malus  sylvestris Mill) terhadap kadar LDL kolesterol pada tikus putih jantan ( Rattus novergicus ) hiperkolesterolemia. Jurnal  Kesehatan Andalas . 6(3): 679-685.
Ojeda  KA,  Marsiglia  DE,  Rmirez  MC, Shanchez E. 2016. Pectin extraction  from cocoa pod husk ( Theobroma cocoa L.) by hydrolysis with citric acid and acetit acid. International Journal of Chemtech Research . 9(7): 497-507.
Roikah S, Rengga WDP. Latifah, Kusumastuti E.  2016.  Ekstraksi  dan  karakterisasi pektin  dari  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi ). Jurnal Bahan Alam Terbarukan . 5(1): 29-36.
Syahputra  KL.  2019.  Sintesis  dan  uji sitotoksisitas  nanopartikel  Zn-pektin  dari kulit  buah  kakao  ( Theobrama  cacao L.) [skripsi].  Bogor  (ID):  Intstitut  Pertanian Bogor.
Tekha  HN,  Akkas  E,  Kartika  R.  2015.  Uji toksisitas  ekstrak  kelopak  jantung  pisang kepok  ( Musa  paradisiacal Linn)  dengan metode  BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality Test ). Jurnal  Kimia  Mulawarman .  13(1): 19-22.
Wardani S, Elvitriana, Viena V. 2018. Potensi karbon  aktif  kulit  pisang  kepok  ( Musa acuminata L.)  dalam  menyerap  gas  CO dan  SO 2 pada  emisi  kendaraan  bermotor. Jurnal  Serambi  Engginering .  3(1):  262- 270.
Yadav  SR,  Khan  ZH,  Kunjwani  SS,  Mular
SM. 2015. Extraction and characterization of pectin from different fruits.
International Journal of Apllied Research . 1(9): 91-94.