PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
ANTHELMINTIC ACTIVITY TEST OF BETEL LEAVES ETHANOL EXTRACT (Piper betle L .) AGAINST ROUNDWORMS (Ascaris lumbricoides) BY IN VITRO
UJI AKTIVITAS ANTELMINTIK EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH ( Piper betle L.) TERHADAP CACING GELANG ( Ascaris lumbricoides ) SECARA IN VITRO
Priskila Feicy Sumual 1)* , Widdhi Bodhi 1) , Julianri Sari Lebang 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT, 95115 *priskilafeicy@gmail.com

## ABSTRACT
Green betel leaves are one of the native plants in Indonesia which are widespread in Manado, North Sulawesi. In  green  betel  leaves  plants,  there  are  tannin  compounds  that  can  inhibit  enzymes  and  interfere  with  the digestive metabolic processes of worms which can cause the death of worms. This study aims to determine the effect  of  green  betel  leaves  ethanol  extract  on Ascaris  lumbricoides worms.  This  research  is  a  laboratory experiment with The post-test only with controlled group design. The tests used the betel leaves ethanol extract with concentrations of 5%, 10%, and 15% respectively. Worms was observed for 12 hours with intervals of 3 hours. The number of worm deaths was recorded every 3 hours and further, it was analysed with using the Kruskal  Wallis  test  and  it  was  continued  with  using  the  Mann  Whitney  test . Result  showed  that  extract  at concentration of 5% the number of worm deaths was 4 worms, a concentration of 10% was 7 worms, and at a concentration of 15% 9 worms. The statistical results showed that there was no significant difference between the number of worm deaths in the treatment group and negative control at p <0.05. The concentrations of 10 and 15 showed no significant difference with the positive control. It can be concluded that concentrations of 10% and 15% have the same anthelmintic activity but the best concentration is at a concentration of 10%.
Keywords : Anthelmintic, Piper betle L ., Ascaris lumbricoides

## ABSTRAK
Daun sirih hijau merupakan salah satu tanaman asli di Indonesia yang tersebar luas di kota Manado, Sulawesi Utara.  Pada  tumbuhan  daun  sirih  hijau  terdapat  senyawa  tanin  yang  mampu  menghambat  kerja  enzim  dan mengganggu  proses  metabolisme  pencernaan  pada  cacing  yang  dapat  menyebabkan  kematian  cacing. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol daun sirih hijau terhadap cacing Ascaris lumbricoides . Penelitian ini ialah eksperimental laboratorium dengan rancangan penelitian The post-test only with controlled group design . Pengujian dilakukan menggunakan ekstrak etanol daun sirih dengan konsentrasi 5%, 10%, dan 15%. Aktivitas cacing diamati selama 12 jam dengan interval waktu 3 jam. Jumlah cacing yang mati dicatat setiap 3 jam dan selanjutnya dianalisis menggunakan uji Kruskal Wallis dan dilanjutkan dengan uji Mann Whitney . Hasil pengujian menunjukkan pada konsentrasi 5% jumlah kematian cacing sebanyak 4 ekor,  konsentrasi  10%  sebanyak  7  ekor  dan  pada  konsentrasi  15%  sebanyak  9  ekor.  Hasil  statistik menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan antara jumlah kematian cacing pada kelompok perlakuan dengan kontrol  negatif  pada  p<0.05.  Konsentrasi  10  dan  15  menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  signifikan  dengan kontrol positif. Dapat disimpulkan bahwa pada konsentrasi 10% dan 15% memiliki aktivitas antelmintik yang sama namun konsentrasi yang paling baik terdapat pada konsentrasi 10%.
Kata kunci : Antelmintik, Piper betle L., Ascaris lumbricoides
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Infeksi  cacing  merupakan  salah  satu infeksi  yang  paling  umum  tersebar  di  dunia, terutama  di  negara-negara  berkembang  termasuk Indonesia. Diperkirakan lebih dari 60% anak-anak di  Indonesia  menderita  penyakit  infeksi  cacing. Masalah  kesehatan  yang  ditimbulkan  akibat cacingan adalah anemia, obstruksi saluran empedu, radang  pankreas,  usus  buntu,  alergi,  diare, penurunan fungsi kognitif (kecerdasan), mal nutrisi (kurang  gizi),  gangguan  pertumbuhan  dan  radang paru-paru  (Widjaja et  al. ,  2014).  Menurut World Health  Organization (2016)  cacingan  adalah infeksi cacing parasit usus dari golongan nematoda usus  yang  ditularkan  melalui  tanah  atau  disebut Soil  Transmitted  Helminths (STH).  STH  yang sering  ditemukan  pada  manusia  adalah Ascaris lumbricoides,  Necator  americanus,  Ancylostoma duodenale,  Trichuris  trichiura dan Strongiloides stercoralis.
Antelmintik  adalah  obat  yang  digunakan untuk  memberantas  dan  mengurangi  cacing  dari dalam  tubuh  manusia  atau  hewan  (Tan  dan Rahardja, 2002). Obat-obat yang digunakan selama ini  untuk  penyakit  cacing  adalah  obat-obat  kimia yang  memiliki  efek  samping  tidak  baik  bagi kesehatan.  Obat  tradisional  merupakan  salah  satu alternatif  untuk  mengobati  infeksi  cacing  karena dinilai lebih aman, lebih murah, mudah diperoleh dan efek sampingnya relatif lebih ringan dibanding dengan obat sintetik (Ningsih, 2016).
Daun  sirih  hijau  merupakan  salah  satu tanaman asli di Indonesia dan tersebar luas di kota Manado. Pada tumbuhan daun sirih hijau terdapat senyawa  tanin  yang  bersifat  antelmintik.  Tanin menghambat kerja enzim dan mengganggu proses metabolisme  pencernaan  pada  cacing  sehingga cacing akan kekurangan nutrisi akhirnya menyebabkan  kematian  (Hamzah et  al .,  2016). Daun  sirih  hijau  mengandung  tanin  kira-kira  0,1- 1,3% (Pradhan et al, 2013). Dalam penelitian lain yang  dilakukan  oleh  Serlahwaty, et  al., (2011) diperoleh  hasil  skrining  fitokimia  daun  sirih menggunakan  pelarut  etanol  70%,  mengandung senyawa flavonoid, saponin, tanin, terpenoid/steroid  dan  alkaloid  yang  merupakan metabolit  sekunder  dan  memiliki  aktivitas antioksidan yaitu senyawa eksogen dari tumbuhan yaitu  senyawa  metabolitnya.  Pada  penelitian  Min dan  Hart  (2003)  menunjukkan  bahwa  kambing yang  mengonsumsi L. cuneata yang  mengandung tanin  signifikan  menurunkan  jumlah  telur  cacing dibandingkan dengan kambing yang mengonsumsi pakan  yang  tidak  mengandung  tanin.  Diperoleh
hasil  penelitian  tersebut,  bahwa  tanaman  yang mengandung  5%  ekstrak  tanin  dapat  mengurangi kontaminasi  larva  dan  dapat  digunakan  sebagai antelmintik.
Dalam  penelitian  Tiwow, et  al .,  (2013) mengenai  uji  efek  antelmintik  ekstrak  etanol  biji pinang  ( Areca  catechu )  terhadap  cacing Ascaris lumbricoides dan Ascaridia  galli secara  in  vitro. Dalam ekstrak etanol biji pinang, diduga senyawa tanin yang berfungsi sebagai efek antelmintik pada konsentrasi 10%, 20% dan 30% dan diperoleh hasil dalam konsentrasi tertinggi memiliki aktivitas anti cacing. Dalam penelitian yang lain juga dilakukan oleh  Kursia  (2016)  mengenai  uji  aktivitas antibakteri ekstrak etilasetat daun sirih hijau (Piper betle L. ) terhadap  bakteri S.  epidermidis dan senyawa yang diperoleh dalam ekstrak menggunakan  etilasetat  yaitu  tanin  dan  fenol didalamnya  yang  mampu  menghambat  bakteri S. epidermidis pada konsentrasi 3% dan 5% memiliki daya hambat sebesar 9,8 mm dan 15 mm (kategori sedang dan kuat). Daun sirih memiliki kandungan tanin  yang  menurut  teori  bisa  membunuh  cacing dan hal inilah yang membuat penulis tertarik untuk mengetahui  seberapa  besar  efek  antelmintik  yang dimiliki daun sirih dengan menggunakan konsentrasi  ekstrak  sebesar  5%,  10%  dan  15%. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui apakah ada pengaruh pemberian ekstrak etanol daun sirih hijau (Piper  betle L. ) terhadap  cacing  gelang (Ascaris lumbricoides) secara in vitro.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilakukan di Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam
Ratulangi Manado di laboratorium penelitian Program Studi Farmasi dan di  laboratorium  Biologi  selama  bulan  Desember 2020 hingga bulan Maret 2021.

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini yaitu  gelas  ukur,  batang  pengaduk,  wadah pengujian,  toples  kaca,  corong,  pinset  plastik, ember kecil, timbangan analitik, timbangan biasa, ayakan, oven, blender, sendok takar, kertas saring, gunting,  tissue,  masker,  sarung  tangan,  plastik wrap, alumunium foil dan kertas label.

## Bahan
Bahan-bahan yang digunakan yaitu ekstrak etanol  daun  sirih  hijau (Piper  betle L. ) ,  cacing
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
gelang (Ascaris  lumbricoides), aquades,  etanol 70%, NaCl 0,9% dan tablet pirantel pamoat 250 mg

## Prosedur Penelitian Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  daun  sirih  yang  diambil  dari  kelurahan winangun.  Selanjutnya  dilakukan  identifikasi tanaman  di  Laboratorium  Taksonomi  Tumbuhan, Jurusan  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam  Ratulangi Manado.  Sampel  yang  diperoleh  sebanyak  5  kg sampel (berat basah) dan dibersihkan dari kotoran dan  dicuci  dibawah  air  mengalir  sampai  bersih. Setelah itu sampel dikeringkan dalam oven dengan suhu 50ºC selama 1 hari. Selanjutnya, sampel yang telah  kering  dihaluskan  sampai  menjadi  serbuk simplisia  dan  diayak  kemudian  simpan  dalam wadah yang bersih dan tertutup rapat.

## Ekstraksi Sampel
Ekstraksi  daun  sirih  hijau  dibuat  dengan cara maserasi. Sebanyak 850 gram serbuk simplisia daun  sirih  yang  telah  disimpan,  dimasukkan  ke dalam 2 bejana dengan masing-masing berisi 450 gram  dan  400  gram,  kemudian  direndam  sampai sampel  terendam  semua  dan  dibiarkan  selama  3 hari  dalam  2  liter  pelarut  etanol  70%  dan  ditutup dengan alumunium foil sesekali diaduk. Setelah 3 hari,  sampel  yang  direndam  tersebut  disaring menggunakan  kertas  saring  dan  diremaserasi sebanyak  1,2  liter  pelarut  etanol  70%  sampai sampel  terendam  semua  dan  dibiarkan  selama  3 hari  dan  sesekali  diaduk.  Sampel  disaring menggunakan  kertas  saring.  Sampel  dipekatkan menggunakan  evaporator  pada  suhu  50ºC  sampai diperoleh ekstrak kental dan selanjutnya ditimbang menggunakan  timbangan  analitik.  Hitung  nilai rendemen ekstrak dengan rumus:
%Rendemen = 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑝𝑒𝑟𝑜𝑙𝑒ℎ (𝑔) 𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑎𝑤𝑎𝑙 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑖𝑚𝑏𝑎𝑛𝑔 (𝑔) × 100%

## Pengambilan dan Penyiapan Hewan Uji
Cacing  gelang  ( Ascaris  lumbricoides ) diperoleh  di  tempat  penyembelihan  babi  di  Kota Tomohon dan di kelurahan Winangun. Hewan uji digunakan  sebanyak  45  sampel  cacing Ascaris lumbricoides dengan  kriteria  cacing  yang  masih aktif  bergerak.  Cacing  dimasukkan  ke  dalam wadah  yang  berisi  larutan  NaCl  0,9%.  Kemudian cacing akan dibersihkan hingga tidak ada kotoran yang terlihat menggunakan larutan NaCl 0,9%.

## Uji Aktivitas Antelmintik Hewan Uji secara In Vitro
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental laboratorium  dengan  rancangan  penelitian The post-test  only  with  controlled  group  design . Replikasi  percobaan  sebanyak  3  kali.  Sampel dibagi  menjadi  5  kelompok.  Masing-masing kelompok terdapat 3 ekor cacing yang direndam di dalamnya. Kelompok perlakuan tersebut yaitu:
a) Kelompok perlakuan I: Ascaris lumbricoides + Kontrol negatif dengan NaCl 0,9%
b) Kelompok perlakuan II: Ascaris lumbricoides + Kontrol positif dengan pirantel pamoat 5 mg/ml
c) Kelompok perlakuan III: Ascaris lumbricoides + ekstrak Piper betle L. 5%
d) Kelompok perlakuan IV: Ascaris lumbricoides + ekstrak Piper betle L. 10%
e) Kelompok perlakuan V: Ascaris lumbricoides + ekstrak Piper betle L. 15%
Prosedur  percobaannya  adalah  sebagai  berikut, Hewan  uji  disiapkan  sebanyak  45  ekor  cacing dimana  tiap  replikasi  digunakan  15  hewan  uji dengan  melakukan  pengukuran  terlebih  dahulu pada  hewan  uji.  Wadah  pengujian  disiapkan. Wadah  pertama  diisi  50  mL  NaCl  0,9%,  wadah kedua  diisi  larutan  pirantel  pamoat  5  mg/ml. Wadah selanjutnya diisi ekstrak daun sirih ( Piper betle L.)  konsentrasi  5%,  10%  dan  15%  dalam masing-masing  50  ml  larutan  NaCl  0,9%. Selanjutnya cacing Ascaris lumbricoides sebanyak 3  ekor  dimasukkan  dalam  wadah  pengujian.  Beri label percobaan dan diamati selama 12 jam dengan interval  waktu  pengecekkan  3  jam.  Untuk pengamatan apakah cacing mati di sentuh dengan menggunakan batang pengaduk. Jika cacing hanya diam setelah diusik, dipastikan cacing mati.

## Analisis Data
Pengamatan dilakukan pada waktu cacing mati  dan  hasilnya  berupa  data  kematian  cacing pada interval waktu yang ditentukan dan dianalisis dengan  menggunakan  uji  Kruskal  Wallis  untuk melihat  perbedaan efek  dari  kelompok  perlakuan, kontrol positif, dan kontrol negatif dan dilanjutkan dengan uji Mann Whitney, untuk membandingkan perbedaan  efek  antara  kelompok  perlakuan  dan kelompok kontrol.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Hasil  rendemen  yang  diperoleh  yaitu 6,12%.  Pada  pengujian  ini  dilakukan  untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak daun sirih hijau  ( Piper  betle L.)  terhadap  kematian  cacing
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
gelang ( Ascaris lumbricoides ) dengan pengamatan selama 12 jam dengan interval waktu 3 jam untuk mengetahui  efek  antelmintik  dari  ekstrak  etanol daun  sirih  pada  konsentrasi  5%,  10%,  dan  15%. Kelompok  kontrol  positif  digunakan  pirantel pamoat 5 mg/ml dan kontrol negatif yaitu larutan NaCl  0,9%.  Penggunaan  hewan  uji  disetiap kelompok  sebanyak  tiga  ekor  cacing Ascaris lumbricoides .  Jumlah  cacing  yang  diambil  dari rumah potong hewan (babi) dilebihkan dari jumlah hewan  uji  karena  untuk  membantu  proses pemilihan ukuran tubuh cacing yang hampir sama, karena ukuran panjang tubuh cacing yang berbeda akan  mempengaruhi  hasil  pengamatan  efek
antelmintik  dalam  larutan uji.  Dalam  memastikan kondisi dari cacing mati atau tidak, diusik dengan menggunakan  batang  pengaduk  apakah  masih bergerak  atau  hanya  diam  disetiap  interval  waktu pengamatan. Jika cacing yang diamati terlihat diam atau  tidak  ada  pergerakan  maka  cacing  tersebut dinyatakan  mati  namun  jika  cacing  masih  tetap bergerak  maka  dinyatakan  cacing  tetap  hidup. Pengamatan  dilakukan  pada  aktivitas  dari  cacing apakah  terjadi  kematian  atau  tidak  dimana  data tersebut  akan  digunakan  sebagai  data  jumlah kematian  cacing.  Hasil  jumlah  kematian  cacing setiap interval waktu disajikan dalam bentuk tabel dibawah ini:
Tabel 1 . Hasil jumlah kematian cacing Ascaris lumbricoides setiap kelompok perlakuan
Keterangan: n=Jumlah cacing di setiap perlakuan 0= Tidak ada cacing yang mati 1= Satu cacing yang mati 2= Dua cacing yang mati 3= Tiga cacing yang mati
Data hasil kematian cacing yang tertera pada Tabel 1,  dibuat  rata-rata  lama  waktu  kematian  cacing sesuai  dengan  waktu  pengamatan  selama  12  jam. Hasil yang diperoleh disajikan dalam bentuk data tabel dan diagram sebagai berikut:
Tabel  2 .  Lama  waktu  kematian  cacing Ascaris lumbricoides
Gambar  1 .  Diagram  rata-rata  waktu  kematian cacing Ascaris  lumbricoides pada masing - masing kelompok percobaan
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Hasil  jumlah  kematian  cacing  setiap  kelompok yang  ditunjukkan  pada  Tabel  1  dianalisis menggunakan analisis statistik dengan menggunakan  uji  parametrik  yaitu  uji  ANOVA. Dalam  pengujian  normalitas,  terdapat  data  yang tidak  terdistribusi  normal  maka  dilakukan pengganti uji ANOVA yaitu uji Kruskal Wallis.
Tabel 3 . Hasil Uji Kruskal Wallis Test Sig Independent-Samples 0,012 Kruskal wallis Test
Data dalam uji Kruskal Wallis menunjukkan 0,000 yang  berarti  p<0,05  dimana  terjadi  perbedaan bermakna  dalam  setiap  kelompok  percobaan aktivitas  antelmintik  ekstrak  etanol  daun  sirih terhadap  cacing Ascaris  lumbricoides .  Dalam  uji ini  ditemukan  perbedaan  bermakna  dalam kelompok  maka  dilanjutkan  dengan  uji  Mann Whitney  untuk  mengetahui  kelompok  ekstrak mana  yang  mampu  memberikan  efek  antelmintik yang  baik.  Rangkuman  uji  Mann  Whitney disajikan dalam bentuk tabel dibawah ini:
Tabel  4 .  Uji  Mann  Whitney  terhadap  kematian cacing  pada  kelompok  perlakuan  uji aktivitas antelmintik ekstrak etanol daun sirih hijau ( Piper betle L.)
Keterangan: P1: NaCl 0,9% (Kontrol negatif) P2: Pirantel Pamoat 5 mg/ml (Kontrol positif) P3: Ekstrak etanol daun sirih ( Piper betle L.) konsentrasi 5%
P4: Ekstrak etanol daun sirih ( Piper betle L.) konsentrasi 10%
P5: Ekstrak etanol daun sirih ( Piper betle L.)
konsentrasi 15%
*: Terdapat perbedaan bermakna (p<0,05)

## Pembahasan
Ekstrak etanol daun sirih hijau ( Piper betle L.)  yang  digunakan  dalam  pengujian  melalui beberapa  tahap  salah  satunya  yaitu  proses ekstraksi.  Keringkan  menggunakan  oven  untuk mengurangi  kadar  air  yang  terkandung  sehingga
simplisia  tidak  ditumbuhi  kapang  dan  jamur  dan dihaluskan untuk memperluas permukaan sampel, sehingga  luas  permukaan  kontak  antara  pelarut dengan  sampel  menjadi  lebih  besar  dan  proses ekstraksi  akan  lebih  sempurna.  Sampel  diayak untuk memperoleh keseragaman ukuran. Simplisia diperoleh  sebanyak  850  gram.  Proses  ekstraksi yang digunakan dalam penelitian ini yaitu maserasi dimana  menggunakan  pelarut  etanol  70%  karena memiliki  kemampuan  menyari  dengan  polaritas yang  lebar  mulai  dari  senyawa  nonpolar  sampai dengan  polar  dan  sudah  mampu  mengambil senyawa  metabolit  yang  diinginkan  selanjutnya dilakukan remaserasi untuk menyari senyawa yang masih  tertinggal  dan  tidak  tersari.  Sampel dipekatkan menggunakan evaporator untuk memisahkan  senyawa  aktif  dan  pelarut  agar diperoleh  senyawa  metabolit  yang  dibutuhkan karena pelarut dapat mempengaruhi hasil pengujian  terhadap  cacing  yang  akan  diteliti. Ekstrak  kental  yang  diperoleh  sebanyak  52,10 gram.  Rendemen  yang  dihasilkan  adalah  6,12% dimana  semakin  tinggi  nilai  rendemen  yang dihasilkan  menandakan  nilai  ekstrak  yang dihasilkan juga semakin banyak dan juga nilainya dapat  dipengaruhi  oleh  metode  ekstraksi  yang digunakan.
Kontrol  negatif  yang  digunakan  adalah NaCl 0,9% dimana kelompok ini tidak memberikan  efek  atau  pengaruh  terhadap  hewan uji.  Kontrol  positif  digunakan  pirantel  pamoat  5 mg/ml  sebagai  kelompok  pembanding  atau kelompok  yang  memberikan  efek  antelmintik. Pirantel pamoat tidak diserap oleh usus maka tidak diketahui kadarnya dalam darah dan diekskresikan dalam  tinja  dan  urine  dalam  bentuk  utuh  dan metabolitnya (Katzung 2004) maka dari itu pirantel pamoat 5 mg/ml diperoleh dengan cara melarutkan 1 tablet pirantel pamoat dalam 50 mL larutan NaCl 0,9%. Pengujian dilakukan sesuai dengan interval waktu yang ditentukan. Untuk menjaga reliabilitas dari  pengujian  maka  dilakukan  pengulangan  atau replikasi.
Dapat  dilihat  data  kematian  cacing  pada Tabel  1,  bahwa  pada  jam  ke-3  tidak  ada  cacing yang mati dari setiap konsentrasi ekstrak. Pada jam ke-6  untuk  konsentrasi  15%  sudah  menunjukkan kematian  cacing  dan  diikuti  pada  jam  ke-9  untuk konsentrasi 10% dan 5% yang telah menunjukkan kematian  cacing.  Hal  tersebut  memperlihatkan bahwa  zat  dalam  ekstrak  etanol  daun  sirih  yang berkhasiat  sebagai  antelmintik  sudah  mulai mempengaruhi  cacing  tersebut.  Pada  hasil pengamatan setiap pengulangan menunjukkan data
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
yang  tidak  konsisten  seperti  pada  pengulangan ketiga  konsentrasi  ekstrak  5%  pada  jam  ke-9, terdapat  1  cacing  yang  mati.  Berbeda  dengan pengulangan  pertama  dan  ketiga  tidak  terdapat cacing  yang  mati.  Perbedaan  lainnya  juga  terjadi pada  konsentrasi  ekstrak  10%  pada  jam  ke-12 pengulangan  ketiga  terdapat  2  cacing  yang  mati dan  pada  pengulangan  pertama  dan  kedua  hanya terdapat 1 cacing yang mati. Perbedaan lainnya pun terjadi pada konsentrasi 15% yaitu pada jam ke-9 pengulangan  kedua  yang  menunjukkan  kematian cacing sebanyak 1 ekor yang mati dan pengulangan pertama  dan  ketiga  terdapat  2  cacing  yang  mati. Perbedaan  tersebut,  masih  diduga  karena  adanya pengaruh  berat  dari  hewan  uji  yang  digunakan dengan  jumlah  kematian  cacing  (Roring et  al, 2019).  Kelompok  pirantel  pamoat  5  mg/ml  pada jam ke-3 menunjukkan kematian cacing sebanyak 3  ekor  cacing  hal  ini  menunjukkan  bahwa  zat aktifnya sudah bekerja.
Data pada Tabel 2 untuk kelompok NaCl 0,9% memiliki rata-rata waktu kematian keseluruhan  cacing  pada  jam  ke-12  sedangkan pada kelompok pirantel pamoat 5 mg/ml memiliki rata-rata waktu kematian keseluruhan cacing pada jam ke-3. Pada kelompok perlakuan ekstrak etanol daun  sirih  konsentrasi  5%  menunjukkan  rata-rata waktu kematian cacing keseluruhan pada pada jam ke-11,  konsentrasi  10%  menunjukkan  rata-rata waktu kematian cacing keseluruhan pada jam ke-9 dan konsentrasi 15% menunjukkan rata-rata waktu kematian  cacing  keseluruhan  pada  jam  ke-6.  Hal ini menunjukkan bahwa efek antelmintik terhadap Ascaris  lumbricoides secara  in  vitro  meningkat seiring  dengan  meningkatnya  konsentrasi  ekstrak yang digunakan karena semakin tinggi konsentrasi ekstrak  semakin  tinggi  pula  metabolit  sekunder yang  terkandung  di  dalamnya  (Ariffah,  2017) sehingga  akan  terlihat  perbedaan  waktu  dari kematian cacing tiap kelompok ekstrak daun sirih yang juga tertera pada Gambar 4, dimana semakin tinggi  konsentrasi  maka  semakin  cepat  cacing Ascaris  lumbricoides mati.  Pada  kontrol  negatif menggunakan larutan NaCl 0,9% yang merupakan larutan  yang  bersifat  isotonis  sehingga  menjaga membran  sel  tubuh  tanpa  merusak  cacing  agar tetap  hidup.  Waktu  kematian  cacing  pada  kontrol negatif menunjukkan waktu kematian cacing yang paling  lama  yaitu  hingga  jam  ke-12  cacing  tetap hidup  karena  menurut  penelitian  Adli  dan Surandari  (2008),  rata-rata  hidup  cacing  dalam larutan garam fisiologis adalah selama 17,33 ± 0,58 jam, sehingga waktu pengamatan daya antelmintik dilakukan maksimal 18 jam.
Berdasarkan  data  hasil  uji  aktivitas antelmintik  cacing  gelang  yang  diperoleh  dalam kelompok perlakuan ekstrak etanol daun sirih dan kelompok  pirantel  pamoat  5  mg/ml  memiliki perbedaan  waktu  dan  jumlah  kematian  cacing terhadap  kelompok  NaCl  0,9%  hal  ini  akan dilanjutkan  dengan  analisis  data  menggunakan aplikasi  SPSS  versi  24,00.  Data  jumlah  hasil kematian  cacing  setiap  kelompok  selanjutnya dilakukan pengujian normalitas untuk mengetahui data terdistribusi normal atau tidak. Uji normalitas yang ada pada lampiran 6, menunjukkan data 0,000 (p≤0,05)  pada  konsentrasi  ekstrak  5%  dan  10% yang  berarti terdapat  data yang  tidak  terdistribusi normal  dimana  hasil  uji  normalitas  tidak memenuhi  syarat  untuk  pengujian  statistik ANOVA  maka  dilakukan  pengganti  uji  yaitu  uji Kruskal  Wallis.  Data  kematian  cacing  yang diperoleh  disetiap  kelompok  perlakuan  di  uji Kruskal  Wallis  untuk  mengetahui  perbedaan jumlah  kematian  cacing  pada  masing-masing kelompok  perlakuan.  Data  statistik  menunjukkan bahwa terdapat perbedaan pengaruh ekstrak etanol daun  sirih  sebagai  antelmintik  terhadap  cacing Ascaris  lumbricoides secara  bermakna  terhadap kelompok  pengujian  dengan  nilai  p=0,012 (p≤0,05). Dimana dalam hal ini perlu dilanjutkan pengujian  statistik  lanjutan  untuk  mengetahui konsentrasi  ekstrak  mana  yang  memberikan  efek antelmintik  yaitu  dengan  menggunakan  uji  Mann Whitney.
Hasil  uji  Mann  Whitney  yang  dirangkum dalam Tabel 4, terdapat perbedaan yang bermakna (p≤0,05) antara kelompok  kontrol negatif dengan setiap konsentrasi ekstrak 5%, 10% dan 15% serta kontrol  positif  terhadap  kontrol  negatif.  Hal  ini dapat  membuktikan  bahwa  kelompok  kontrol negatif  yang  menggunakan  larutan  NaCl  0,9% tidak  memberikan  efek  antelmintik  dan  tetap mempertahankan  hidup  dari  cacing Ascaris lumbricoides sesuai  dengan  waktu  hidup  cacing diluar hospesnya menunjukkan hasil bahwa setiap konsentrasi  ekstrak  dan  pada  kontrol  positif memiliki efek antelmintik.
Penentuan  perbedaan  efek  antelmintik antara kelompok perlakuan mana yang lebih baik, maka  dibandingkan  ekstrak  etanol  daun  sirih dengan  kelompok  kontrol  positif  yang  diberikan pirantel pamoat 5 mg/ml sebagai obat pembanding dimana menunjukkan hasil berbeda bermakna pada konsentrasi  5%  dengan  nilai  p=0,034  (p≤0,05) sedangkan  pada  konsentrasi  10%  dan  15% menunjukkan  hasil  yang  tidak  signifikan  dengan nilai p=0,114 dan p=1,000 dimana semakin tinggi
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
konsentrasi  yang  digunakan  maka  semakin  tinggi senyawa  aktif  yang  terkandung  didalamnya  dan semakin  cepat  waktu  kematian  cacing  (Asih, 2014).  Hasil  uji  Mann  Whitney  menunjukkan bahwa pada konsentrasi 10% dan 15% menunjukkan  hasil  yang  tidak  berbeda  bermakna yaitu p=0,114 dan p=1,000 (p≤0,05) atau dengan kata  lain  mampu  memberikan  efek  antelmintik yang  sama  dengan  kelompok  pembanding  dalam hal ini kelompok kontrol positif. Kelompok kontrol positif menggunakan pirantel pamoat dimana cara kerja obat ini yaitu menimbulkan efek depolarisasi pada  otot  cacing  dan  meningkatkan  frekuensi impuls,  sehingga  cacing  mati  dalam  keadaan spastik dan menghambat kerja enzim kolinesterase (Syarif et al , 2007).
Ekstrak  etanol  daun  sirih  konsentrasi  5% berbeda  tidak  bermakna  dengan  konsentrasi  10% nilai p=0,099 (p≤0,05) dan pada konsentrasi 10% dan  15%  menunjukkan  hasil  yang  tidak  berbeda bermakna dengan nilai p=0,114 atau menunjukkan kedua  perbandingan  memiliki  efek  yang  sama sedangkan  pada  konsentrasi  5%  dengan  15% menunjukkan  hasil  yang  berbeda  bermakna  atau memiliki efek antelmintik yang tidak sama.
Kematian  cacing  gelang  dalam  ekstrak etanol  daun  sirih  diduga  disebabkan  oleh kandungan kimia yang terdapat di dalamnya yaitu senyawa metabolit berupa tanin dimana daun sirih memiliki  kandungan  tanin  kira-kira  0,1-1,3% (Pradhan et  al, 2013).  Senyawa  tanin  yang  ada pada daun sirih sudah masuk dalam tubuh cacing dan  secara  langsung  mempengaruhi  proses pembentukan  protein  yang  dibutuhkan  sehingga zat  aktif  ini  akan  menggumpalkan  protein  pada dinding  dari  cacing  dan  senyawa  tanin  ini  juga menyebabkan terikatnya enzim-enzim yang dihasilkan  oleh  cacing  untuk  penyerapan  nutrisi sehingga  proses  penyerapan  terganggu  dan  dapat menyebabkan  defisiensi  nutrisi  (Faradila,  2013) sehingga cacing yang diuji terjadi kematian. Hal ini juga  menunjukkan  pada  penelitian  Min  dan  Hart (2003)  yang  dilakukan  bahwa  kambing  yang mengonsumsi L. cuneata yang mengandung tanin signifikan  menurunkan  jumlah  telur  cacing dibandingkan dengan kambing yang mengonsumsi pakan  kontrol  yang  tidak  mengandung  tanin  dan didapatkan  bahwa  tanaman  yang  diberikan mengandung  5%  ekstrak  tanin  dapat  mengurangi kontaminasi  larva  dan  juga  dapat  digunakan sebagai  anti  cacing.  Hal  ini  berarti  ekstrak  etanol daun  sirih  mengandung  tanin  yang  cukup  untuk membunuh cacing.
Kematian cacing juga diperkirakan karena senyawa  metabolit  lain  yaitu  alkaloid.  Dalam penelitian Serlahwaty et al. (2011), diperoleh hasil skrining  fitokimia  daun  sirih  selain  tanin  yaitu, alkaloid  dan  menurut  penelitian  Tjandra, et  al. (2019)  hasil  analisis  senyawa  alkaloid  pada  daun sirih  memiliki  kandungan  alkaloid  kira-kira sebanyak  0,275%-0,6%.  Pada  senyawa  alkaloid memiliki  efek  analgesik  dan  sedatif  berkontribusi dalam  proses  menurunnya  pergerakan  dan kematian  cacing.  Alkaloid  bersifat  toksik  karena efeknya dalam menstimulasi kebocoran isi sel dan disfungsi  neurologis  (Nalule et  al ,  2013). Mekanisme  kerja  alkaloid  sebagai  antelmintik adalah  dengan  cara  menghambat  kerja  enzim kolinesterase (Kuntari, 2008). Enzim kolinesterase merupakan enzim yang berfungsi untuk menghidrolisis asetilkolin. Inhibisi enzim kolinesterase menyebabkan  tidak  terbentuknya asetilkolin  dari  sinaps.  Asetilkolin  merupakan  zat yang  dilepaskan  dari  ujung  saraf  motorik  untuk mengaktivasi reseptor sehingga mengawali serangkaian kontraksi. Pada penelitian Kursia et al. (2016)  menggunakan  ekstrak  daun  sirih  hijau ( Piper  betle L.)  untuk  pengujian  antibakteri tehadap  bakteri Staphylococcus  epidermidis dimana memberikan zona hambat sebesar 9,8 mm dan  15  mm  (kategori  sedang  dan  kuat)  pada konsentrasi 3% dan 5% yang berarti ekstrak daun sirih  juga  dapat  digunakan  untuk  aktivitas antibakteri sekaligus.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan,  ekstrak  etanol  daun  sirih  hijau  ( Piper betle L.) menunjukkan adanya aktivitas antelmintik  terhadap Ascaris  lumbricoides pada konsentrasi  5%,  10%  dan  15%. Pada  konsentrasi 5%  menunjukkan  hasil  yang  berbeda  bermakna dengan kontrol positif tetapi pada konsentrasi 10% dan  15%  menunjukkan  hasil  yang  tidak  berbeda bermakna  menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi tersebut memiliki aktivitas antelmintik yang sama namun konsentrasi yang paling baik terdapat pada konsentrasi 10% karena sudah mampu memberikan  efek  yang  tidak  signifikan  dengan kontrol positif.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  konsentrasi  ekstrak  daun  sirih  ( Piper betle L.)  dalam  hal  ini  konsentrasi  yang  efektif untuk  membunuh Ascaris  lumbricoides dan  perlu dilakukan  penentuan  dosis  yang  tepat  pada
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
tanaman  ini  agar  dapat  digunakan  dimasyarakat sebagai  obat  cacing.  Dan  juga  perlu  dilakukan pengujian secara in vivo.

## DAFTAR PUSTAKA
Adli,  J.  dan  Surandari,  S.  2008.  Daya Antihelmintik  Nanas (Ananas  comocus) terhadap Ascaris  lumbricoides secara  In Vitro. Mutiara Medika . 8(2) : 107-112.
Ariffah,  N.  2017.  Uji  Efek  Antelmintik  Ekstrak Etanol  Umbi  Wortel  ( Daucus  carota  L .) Terhadap Ascardia  Sp Secara  In  Vitro. [Skripsi].  FMIPA  Universitas  Al-Ghifari,
Bandung.
Asih,  A.  2014.  Antihelminthik  Infusa  Daun Andong  ( Cordyline  fruticosa )  Terhadap Ascaridia  galli Secara  In  Vitro.  Fakultas Teknobiologi  Program  Studi  Biologi Universitas Atmajaya, Yogyakarta.
Faradila, A. 2013. Uji Daya Anthelmintik Ekstrak Etanol  Daun  Beluntas  ( Pluchea  indica Less )  Terhadap  Cacing  Gelang  ( Ascaris suum. ) Secara In Vitro. [Skripsi].
Universitas Brawijaya, Malang.
Hamzah,  A.,  M.,  Hambal,  U.,  Balqis,  Darmawi, Maryam  dan  Rasmaidar.  2016.  Aktivitas Anthelmintik Biji Veitchia  Merrillii
Terhadap Ascaridia Galli Secara In Vitro. Trad Med J . 21(22) : 55-62.
Katzung,  B.  G.  2004 . Farmakologi  Dasar  dan
Klinik.  Edisi  ke-13.  Alih  bahasa  oleh Bagian Farmakologi Universitas
Airlangga. Salemba medika, Jakarta.
Kuntari,  T.  2008.  Daya  Antihelminthik  Air Rebusan  Daun  Ketepeng. Jurnal  Logika . 5(1) : 2-8.
Kursia,  S.,  Lebang,  S.  J.,  Taebe,  B.  Burhan,  A., Rahim,  R.O.  dan  Nursamsiar.  2016.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etilasetat Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis . Jurnal UNPAD. 3(2) : 73-76.
Min,  B.R.D.,  dan  S.P.  Hart.  2003.  Tanins  for suppression of internal parasites. J. Anim. Sci. 81(2) :102-109.
Nalule,  A.S.,  Mbaria,  J.  M.,  Kimenju,  dan  J.W. 2013. In  vitro  anthelmintic  potential  and phytochemical  composition  of  ethanolic and  water  crude  extracts  of  Euphorbia
heterophylla Linn. Journal  of  Medicinal Plants Research . 7(43) : 3202-3210.
Ningsih,  I.Y.  2016.  Studi  farmasi  penggunaan tumbuhan  obat  oleh  suku  tengger  di Kabupaten  Lumajang dan  Malang,  Jawa Timur. Pharmacy. 13(1) : 10-20.
Pradhan,  D.,  Suri,  A.K.  Dr.,  Pradhan,  K.D.  dan
Biswasroy. 2013. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry . Phytojournal. 1(6) : 152.
Roring,  E.  T.,  Herny,  E.  I.  S.,  dan  Edwin,  D.  Q. (2019).  Uji  Efek  Antelmintik  Ekstrak Etanol Daun Pinang Yaki ( Areca vestiaria ) Terhadap Cacing Gelang ( Ascaris lumbricoides )  Secara  In  Vitro, Jurnal Ilmiah Farmasi . 8(3) : 458-461.
Serlahwaty,  D.,  Sugiastuti,  S.  dan  Ningrum,  R.C. 2011.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Air dan  Etanol  70%  Daun  Sirih  Hijau  ( Piper betle L.)  dan  Sirih  Merah  ( Pipercf. fragileBenth .)  dengan  Metode  Peredaman Radikal  Bebas  DPPH.  [Skripsi].  Fakultas Farmasi Universitas Pancasila, Jakarta.
Syarif,  A.,  P.  Ascobat,  E.  Estuningtyas,  R.
Setiabudy, A. Setiawati, A. Muchtar. 2007. Farmakologi dan Terapi. Edisi ke-5. Gaya Baru, Jakarta.
Tan,  T.H.  dan  Rahardja  K.  2002.  Obat-Obat Penting,  Khasiat,  Penggunaan  dan  Efek Sampingnya . Edisi  Ke-5.  Efek  Media Komputindo, Jakarta.
Tiwow,  D.,  W.  Bodhi  dan  N.  Kojong.  2013.  Uji Efek  Antelmintik  Ekstrak  Etanol  Biji Pinang (Areca cathechu) terhadap Cacing Ascaris  lumbricoides dan Ascaridia  galli secara in  vitro . Pharmacon  Jurnal  Ilmiah Farmasi UNSRAT. 2(2) : 76-80.
Tjandra, F. R., Fatimawali, dan Datu, S. O. 2020.
Analisis  Senyawa  Alkaloid  dan  Uji  Daya Hambat  Ekstrak  Buah  Sirih  ( Piper  betle L.)  terhadap  Bakteri Staphylococcus epidermidis . eBiomedik . 8(2) :173-179.
Widodo,  H.  2013.  Parasitologi  Kedokteran.  D- Medika, Yogyakarta.
World  Health  Organization .  2016. Weekly
Epidemiological Record . WHO, Switzerland.