## BIOEDUSAINS:Jurnal Pendidikan Biologi dan Sains
Volume 6, No 2, Juli – Desember 2023 e-ISSN : 2598-7453 DOI : 10.31539/bioedusains.v6i2.7398

## ISOLASI BAKTERI FIKSASI NITROGEN DAN FOSFAT PADA LIMBAH
CAIR KARET ( Hevea brasiliensis )
Sartika Kumala Dalimunthe 1 , Kartika Manalu 2
Universitas Islam Negeri Sumatera Utara 1,2
sartikakumala00@gmail.com 1

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  bakteri  yang  mampu  memfiksasi nitrogen  dan  melarutkan  fosfat  pada  limbah  cair  karet  di  Desa  Perdamean, Kabupaten  Labuhanbatu.  Metode  penelitian  yang  digunakan  yaitu  metode deskripsi  dengan  teknik  isolasi  bakteri  kemudian  dilakukan  pengujian yaitu  uji kemampuan  fiksasi  nitrogen,  dan  uji  kemampuan  pelarut  fosfat.  Hasil  penelitian menunjukkan,  isolat  bakteri  yang  mampu  dalam  memfiksasi nitrogen  ditemukan isolat  yang  memiliki  nilai  absorbansi  tinggi  yaitu  1.340  ABS.  Pada  uji kemampuan pelarut fosfat terdapat 2 isolat  yang tidak mampu dalam melarutkan fosfat.  Simpulan,  melakukan  isolasi  bakteri  fiksasi  nitrogen  dan  fosfat  pada limbah  cair  karet  merupakan  cara  untuk  mencegah  pencemaran  dan  perusakan ekosistem yang ada dilingkungan.
Kata Kunci : Fiksasi Nitrogen, Limbah Cair Karet, Pelarut Fosfat

## ABSTRACT
This  research  aims  to  determine  which  bacteria  are  capable  of  fixing  nitrogen and  dissolving  phosphate  in  liquid  rubber  waste  in  Perdamean  Village, Labuhanbatu  Regency.  The  research  method  used  was  the  description  method with  bacterial  isolation  techniques,  then  testing  was  carried  out,  namely  the nitrogen fixation ability test and the phosphate solvent ability test. The results of the research showed that bacterial isolates capable of fixing nitrogen were found to have high absorbance values, namely 1,340 ABS. In the phosphate solubilizing ability  test,  there  were  2  isolates  that  were  unable  to  dissolve  phosphate.  In conclusion,  isolating  nitrogen  and  phosphate  fixing  bacteria  in  liquid  rubber waste  is  a  way  to  prevent  pollution  and  destruction  of  the  ecosystem  in  the environment.
Keywords : Nitrogen Fixation, Rubber Liquid Waste, Phosphate Solvents

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  potensi  lahan  dengan  perkebunan  karet  yang  paling luas  di  dunia,  yaitu  sekitar  3,6  juta  hektare  area  (Ha).  Sebagian  besarnya merupakan perkebunan milik rakyat dengan produksi indonesia mencapai 3,6 juta ton per tahun. Potensi karet alam cukup besar di pasar internasional dikarenakan oleh  keunggulannya  yang  memiliki  daya  elastis  sempurna,  memiliki  plastisitas yang  baik,  mempunyai  daya  aus  yang  tinggi,  tidak  mudah  panas  dan  memiliki daya tahan yang tinggi terhadap retakan (Andriani et al., 2019).
Industri  karet  dengan  bahan  baku  yang  menghasilkan  limbah  cair  yang bersumber  dari  proses  koagulasi,  penggilingan,  peremahan,  dan  pencucian. Limbah  ini  bersifat  asam  dengan  nilai  pH  4,2-6,3  (Rusdiansyah,  2018).  Industri
baru  yang  akan  dibangun  dapat  meningkatkan  kesejahteraan  bagi  masyarakat, namun  juga  dapat  berdampak  negatif  terhadap  lingkungan  hidup.  Permasalahan yang  timbul  perlu  diperhatikan  beberapa  efeknya  seperti  limbah  yang  dihasilkan salah  satunya  yaitu  industri  karet.  Industri  karet  akan  menghasilkan  limbah  cair yang mengandung senyawa organik yang relatif tinggi (Laina et al., 2018).
Limbah  akan  berpotensi  menimbulkan  pencemaran  terhadap  lingkungan salah  satunya  adalah  limbah  cair.  Limbah  cair  merupakan  campuran  atau gabungan  dari  air  dan  juga  bahan  pencemar  yang  terbawa  oleh  air,  baik  dalam keadaan  terlarut  maupun  tersuspensi  yang  terbuang  dari  sumber  domestik (perumahan,  perkantoran,  dan  perdagangan),  sumber  industri  dan  disaat  yang tertentu  akan  tercampur  dengan  air  dan  juga  tanah,  air  hujan  maupun  air permukaan (Sitorus, 2021).
Limbah cair industri karet merupakan habitat dari beberapa mikroba yang ada  pada  limbah.  Limbah  cair  karet  memiliki  beberapa  senyawa  salah  satunya nitrogen  dan  fosfat.  Metabolisme  nitrogen  mengandung  senyawa-senyawa  yang dimineralisasi  oleh  mikroorganisme  dan  nitrogen  akan  dilepas  sebagai  ammonia (Islam et al., 2019). Sama halnya dengan bakteri pelarut fosfat dapat melarutkan fosfat  dengan  melepas  senyawa  fosfat  melalui  mekanisme  pembentukan  khelat, reaksi pertukaran, dan produksi asam organik (Asril & Lisafitri, 2020).
Maka untuk mengurangi dampak negatif tersebut dilakukannya pengujian pada limbah untuk pemulihan secara biologi terhadap komponen lingkungan yang tercemar menjadi bentuk yang tidak mengandung racun. Penelitian tentang bakteri limbah  cair  industri  karet  telah  dilakukan  sebelumnya  oleh  Cheunbarn  et  al.,
(2020)  terdapat  3  bakteri  untuk  pengolahan  air  limbah  yaitu Streptomyces atrovirens,  Arthrobacter  sp., dan Streptomyces  sp. Desa  Perdamean  merupakan desa  yang  terletak  di  Kecamatan  Rantau  Selatan  Kabupaten  Labuhanbatu  yang memiliki  aliran  sungai  kecil  di  desa  tersebut.  Air  sungainya  bercampur  dengan limbah pabrik karet sehingga menyebabkan sungai di Desa Perdamean mengalami pencemaran  dan  air  tersebut  memiliki  warna  hitam  dan  berminyak.  Berdasarkan hasil  survei  lapangan dan wawancara warga Desa Perdamean  bahwa  air  tersebut tidak  lagi  digunakan  dikarenakan  air  yang  sudah  tercemar  oleh  limbah  pabrik karet.
Jika kandungan bahan organik limbah cair karet tinggi dalam sungai yang tercemar  akan  menyebabkan  rusaknya  ekosistem  yang  ada  di  sungai  Desa Perdamean.  Untuk  mengurangi  pencemaran  lingkungan  tersebut  diperlukan pengujian  pada  limbah  cair  karet  tersebut.  Di  dalam  limbah  cair  terkandung beberapa  bahan  organik  seperti  nitrogen  dan  juga  fosfat,  sehingga  untuk mengetahui  kemampuan  bakteri  dalam  fiksasi  nitrogen  dan  melarutkan  fosfat maka dilakukannya isolasi pada limbah cair karet di Desa Perdamean, Kabupaten Labuhanbatu.  Penelitian  terkait  limbah  cair  karet  belum  ada  dilakukan  di  Desa Perdamean  Kecamatan  Rantau  Selatan  Kabupaten  Labuhanbatu.  Sehingga  perlu dilakukan penelitian tentang isolasi bakteri fiksasi nitrogen dan fosfat limbah cair karet  di  sungai  Desa  Perdamean.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan  untuk mengetahui bakteri yang mampu memfiksasi nitrogen dan melarutkan fosfat pada limbah cair karet di Desa Perdamean, Kabupaten Labuhanbatu.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  akan  dilakukan  pada  bulan  November-Desember  2022.
Pengambilan sampel dilakukan pada pembuangan air limbah menuju sungai Desa Perdamean  Kabupaten  Labuhanbatu,  Rantauprapat.  Isolasi  bakteri  dilakukan di UPT.  Laboratorium  Mikrobiologi  FMIPA  USU.  Metode  penelitian  yang digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu  metode  deskripsi  yang  pengambilan sampelnya  dilakukan  dari  suatu  lingkungan  yang  akan  dideskripsikan.  Sampel yang  sudah  diambil  dari  tempat  pengambilan  aliran  limbah  menuju  sungai  akan diisolasikan  untuk  mengetahui  isolat  bakteri  yang  mampu  memfiksasi  nitrogen dan melarutkan fosfat pada limbah cair industri karet.
Peralatan  yang  digunakan  yaitu  autoklaf,  cawan  petri,  inkubator,  tabung reaksi,  gelas  ukur,  labu  ukur,  batang  pengaduk,  rak  tabung  reaksi,  lemari pendingin,  mikroskop,  spektrofotometer,  aluminium  foil,  pipet  tetes,  kamera, laminar air flow, kertas label, jarum oce, botol spesimen, kapas, tisu, spiritus, hot plate,  vortex,  cover  glass,  objek  glass,  spatula  dan  mikro  pipet.Bahan  yang digunakan  yaitu  media  NA  (Nutrinet  Agar)  sebagai  pertumbuhan  mikro- organisme,  aquades,  minyak  imersi,  safranin,  kristal  violet,  lugol,  alkohol  96%, NaCl,  Nitrat,  racikan  media  Pikovskaya,  Pepton  Broth,  dan  limbah  cair  karet diambil  dari tempat  pembuangan terakhir limbah karet menuju ke sungai tempat limbah tersebut akan dibuang.
Adapun sampel yang akan digunakan diambil dari 3 titik limbah cair karet sebelum menuju kesungai tempat limbah akan dibuang.  Kemudian dimasukkan kedalam botol sampel yang akan digunakan. Sampel diambil dengan cara  membuka  tutup  botol  yang  akan  digunakan,  setelah  itu  tenggelamkan  botol tersebut kedalam sungai pembuangan limbah karet lalu ditutup kembali dan diberi label.
Media  dibuat  dengan  dilarutkan  media  NA  sebanyak  5  gram,  lalu masukkan  aquadest  sebanyak  100  ml  ke  dalam  beaker  glass,  lalu  media dihomogenkan  sekaligus  dipanaskan  di  atas hot  plate hingga  mendidih.  Setelah itu,  media  NA dimasukkan ke dalam  autoklaf untuk disterilkan selama 15 menit pada  suhu  121 0 C.  Setelah  selesai  disterilkan,  media  agar  dituangkan  ke  dalam cawan petri.
Sampel limbah karet diencerkan sebanyak 10 ml kemudian dimasukkan ke dalam  Erlenmeyer  yang  berisi  90  ml  larutan  NaCl  yang  dihomogenkan  dengan vortex sehingga terbentuk pengenceran 10 -1 sampai 10 -7 . Diambil 1 ml suspensi pada  seri  pengenceran  terakhir  kemudian  disebar  di  atas  cawan  petri  dengan metode  tuang  pada  media  lalu  diratakan  dan  diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama 24-48  jam.  Pemurnian  isolat  bakteri  dilakukan  dengan  menggunakan  metode cawan gores ( streak plate ) yang menunjukkan morfologi dan warna yang berbeda pada  koloni  bakteri.  Pemurnian  bakteri  dilakukan  secara  berulang  dengan memisahkan  koloni  hingga  diperoleh  kultur  murni  dengan  cara  isolat  murni diambil  sebanyak  2-3  ose  kemudian  dipindahkan  ke  media  NA,  lalu  diinkubasi selama 24-48 jam dengan suhu 37 0 C.
Karakterisasi  dan  morfologi  bakteri  yang  tumbuh  secara  makroskopis meliputi bentuk, elevasi, tepian dan warna koloni. Pada pengamatan mikroskopis dilakukan  dengan  melakukan  pewarnaan  gram.  Uji  biokimia  bakteri  meliputi  uji katalase, uji sitrat, uji motilitas, dan uji TSIA (Triple Sugar Iron Agar).
Uji  katalase  dilakukan  dengan  biakan  murni  bakteri  dari  media  agar diambil  satu  ose  kemudian  dioleskan keatas  kaca  objek.  Lalu  ditetesi  larutan hidrogen peroksida 1-2 tetes. Reaksi dinyatakan positif apabila muncul gelembung
gas. Uji sitrat dengan cara yaitu bakteri diambil satu jarum ose, kemudian ditanam pada media simmon  citrate dengan cara menggoreskan jarum  ose runcing secara zig-zag. Lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0 C. Reaksi dinyatakan positif apabila timbul warna biru tua terang. Uji motilitas dilakukan dengan cara, biakan bakteri diambil menggunakan jarum ose secara aseptik dan diinokulasikan  secara vertikal  pada  media  NA  kemudian  diinkubasi  selama  24 jam  pada  suhu  37 0 C untuk  melihat  pertumbuhan  dari  bakteri.  Apabila  pertumbuhan  pada  permukaan medium  dan  tidak  ada  bekas  pada  tusukan  atau  menyebar  dikatakan  positif.  Uji TSIA  ( Triple Sugar Iron Agar ) dilakukan dengan cara, satu  koloni  isolat bakteri diinokulasikan  pada  media  TSIA  dengan  cara  ditusuk  tegak  lurus  pada  bagian ujung dan cara zig-zag pada bagian miring. Lalu biakan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0 C kemudian diamati perubahan pada media. Uji  Kemampuan  Bakteri  Fiksasi  N2  dilakukan  dengan  cara,  bakteri ditumbuhkan  pada  media  pepton  broth  sebanyak  10  ml  selama  5-6  hari. Kemudian media pepton broth dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 4.00 rpm selama  10  menit.  Tambahkan  1-2  tetes  garam  signette  dan  0,5  ml nessler pada  supernatan  hasil  sentrifugasi,  kemudian  di  spektrofotometer  dengan panjang  gelombang  425  nm  di  konvensi  menjadi  ppm  dengan  menggunakan kurva standar  NH4.  Perubahan  warna  yang  muncul  pada  sampel  dapat  menjadi acuan adanya kandungan unsur nitrogen dalam bentuk ammonium.
Uji  Kemampuan  Bakteri  Pelarut  Fosfat.  Kemampuan  melarutkan  fosfat dapat  dilakukan  dengan  metode  inokulasi.  Diambil  satu  ose  bakteri  murni,  lalu diinokulasikan membentuk titik pada media selektif Pikovskaya Agar. Kemudian dilakukan inkubasi selama 7 hari pada suhu ruang. Kemampuan melarutkan fosfat dapat  ditandai  dengan  adanya  zona  bening  yang  mengelilingi  koloni.  Kemudian dilakukan penghitungan indeks zona bening.
Pewarnaan  gram  dilakukan  untuk  memudahkan  melihat  bakteri  dengan mikroskop,  memperjelas  ukuran  dan  bentuk  bakteri,  untuk  melihat  struktur  luar dan struktur dalam bakteri, menghasilkan sifat fisik dan kimia serta meningkatkan kontras  mikroorganisme  disekitarnya.  Dioleskan  bakteri  yang  sudah  dibiakkan pada  kaca  objek  yang  sudah  di  tetesi  NaCl,  lalu  biarkan  mengering.  Kemudian preparat  ditetesi  larutan  Kristal  violet  0,5%  lalu  diamkan  selama  30  detik, bilasdengan air zat warna yang berlebih.
Tambahkan larutan lugol selama 30 detik, lalu bilas dengan air. Hilangkan warnanya menggunakan  alkohol 96% selama  10- 20  detik, lalu bilas dengan  air. Kemudian  tetesi  preparat  dengan  larutan  safranin  0,25%  selama  30  detik,  lalu bilas  dengan  air  setelah  itu  dibiarkan  mengering.  Jika  sudah  kering,  teteskan  1 tetes  minyak  imersi.  Amati  dibawah  mikroskop.  Apabila  hasil  pengamatan berwarna ungu maka dikatakan bakteri gram positif, sedangkan hasil pengamatan berwarna merah maka dikatakan bakteri gram negative.
Teknik  analisis  data  yang  digunakan  yaitu  metode  analisa  deskritif kualitatif  dan  kuantitatif.  Metode  ini  digunakan  untuk  menganalisis  data  dengan cara  mendeskripsikan  atau  menggabarkan  kondisi  yang  sudah  terkumpul melalui  pengamatan  disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan  juga  kurva  kemudian diuraikan untuk membuat kesimpulan.

## HASIL PENELITIAN Hasil Isolasi Bakteri
Hasil  isolasi  bakteri  dari  sampel  limbah  cair  karet  di  Desa  Perdamean diperoleh 10 isolat bakteri. Berikut adalah hasil isolasi bakteri pada limbah karet.
Gambar 1. (a) Sampel 1 Limbah Cair Karet, (b) Sampel 2 Limbah Cair Karet, (c) Sampel 3

## Limbah Cair Karet
Gambar  1.  diatas  dapat  dilihat  bahwa  pada  sampel  1  koloni  bakteri  yang tumbuh  ada  3  koloni.  Pada  sampel  ke  2  hanya  terdapat  1  koloni  bakteri  yang tumbuh  pada  media.  Kemudian  pada  limbah  ke  3  koloni  bakteri  yang  tumbuh melebihi  ambang  batas  sehingga  tidak  diketahui  berapa  banyak  bakteri  yang tumbuh sehingga koloni yang akan digunakan ada 6 koloni bakteri.

## Karakterisasi dan Morfologi Isolat Bakteri
Berikut  hasil  pengamatan  karakteristik  morfologi  isolat  bakteri  yang ditunjukkan pada Tabel 1 sebagai berikut:
Tabel 1. Karakteristik Morfologi Isolat Bakteri
No. Kode Isolat Karakteristik Morfologi Isolat Bentuk Tepi Elevasi Warna 1 BS1 Circular Entire Flat Putih Susu 2 BS2 Circular Entire Convex Putih Susu 3 BS3 Circular Entire Flat Putih Susu 4 BS4 Circular Entire Raised Putih Susu 5 BS5 Circular Entire Flat Putih Susu 6 BS6 Circular Entire Flat Pink 7 BS7 Circular Entire Convex Pink 8 BS8 Circular Entire Convex Pink 9 BS9 Circular Undulate Flat Putih Susu 10 BS10 Circular Entire Flat Putih Susu
Tabel  1.  diatas  menunjukkan  bentuk  yang  dominan  dari  koloni  bakteri yang  didapat  adalah  sirkular,  tepi  yang  banyak  didapatkan  adalah  entire, elevasi yang banyak didapatkan adalah flat dan warna yang dominan pada koloni bakteri adalah warna putih susu.

## Uji Biokimia
Berikut  hasil  uji  biokimia  dari  sepuluh  isolat  bakteri  pada  limbah karet  dapat dilhat pada tabel.
a
b c

## Tabel 2. Uji Biokimia
No. Kode Isolat Uji Biokimia Katalase Sitrat Motilitas TSIA 1 BS1 + +
+ K  gas + K  H2S - 2 BS2 + + +
K  gas - A  H2S - 3 BS3 + +
-
K  gas + K  H2S - 4 BS4 + +
-
K  gas + K  H2S - 5 BS5 - - - K  gas - K  H2S - 6 BS6 + + + K  gas +
K  H2S + 7 BS7 + + + K  gas + K  H2S + 8 BS8 + + + K  gas + K  H2S -
9 BS9 + + + K  gas + K  H2S -
10 BS10 + + + K  gas + K  H2S -
Tabel  2.  menunjukkan  bahwa  10  isolat  memiliki  hasil  dari  uji  biokimia yang  berbeda-beda.  Pada  uji  katalase,  9  isolat  yang  menunjukkan  reaksi  positif yaitu isolat BS1, BS2, BS3, BS4, BS6, BS7, BS8, BS9, dan BS10. Uji sitrat yang dilakukan  terdapat  9  isolat  yang  menunjukkan  reaksi  positif  yaitu  isolat  BS1, BS2, BS3, BS4, BS6, BS7, BS8, BS9, dan BS10. Pada uji motilitas didapatkan 7 isolat  yang  menunjukkan  reaksi  positif  yaitu  isolat  BS1,  BS2,  BS6,  BS7,  BS8, BS9, dan BS10. Kemudian uji TSIA didapatkan 8 isolat yang menunjukkan reaksi positif yaitu BS1, BS3, BS4, BS6, BS7, BS8, BS9, dan BS10.

## Uji Kemampuan Bakteri Bakteri Fiksasi N2
Hasil pengamatan kemapuan fiksasi N2 dapat dilihat pada tabel 3 berikut:
Tabel 3. Uji Kemampuan Bakteri Fiksasi N2
No. Kode Isolat Nilai Absorbansi (ABS) 1 BS1 0,852 2 BS2 1.112 3 BS3 1,196 4 BS4 1,305 5 BS5 1,992 6 BS6 1,340 7 BS7 1,120 8 BS8 1,103 9 BS9 1,024 10 BS10 0,947
Tabel 3. menunjukkan bahwa 10 isolat yang di uji kemampuan fiksasi N2
KURVA STANDAR FIKSASI N2 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 NILAI ABSORBANSI (ABS)
memiliki  nilai  absorbansi  yang  berbeda.  Pada  uji  kemampuan  fiksasi  N2,  nilai ABS  terkecil  terdapat  pada  isolat  BS1,  sedangkan  nilai  ABS  yang  tertinggi terdapat pada isolat BS5. Adapun kurva standar fiksasi nitrogen dapat dilihat pada Gambar 1 sebagai berikut:
Gambar 2. Kurva Standar Fiksasi N2

## Uji Kemampuan Bakteri Pelarut Fosfat
Isolat  bakteri  yang  didapatkan  melalui  pengamatan  kemampuan  pelarut fosfat  ditandai  dengan  terbentuknya  zona  bening  disekitar  koloni  kemudian selanjutnya  dilakukan  penghitungan  indeks  pelarut  fosfat.  Berikut  hasil  uji kemampuan bakteri pelarut fosfat dapat dilihat pada tabel.
Tabel 4. Uji Kemampuan Bakteri Pelarut Fosfat
No. Kode Isolat Zona Bening Diameter Koloni Indeks Pelarut Fosfat (IPF) 1 BS1 0,4 0,4 0 2 BS2 1,8 0,6 3 3 BS3 2,1 1,1 1,9 4 BS4 1,9 0,6 3,1 5 BS5 2,1 0,4 5,2 6 BS6 2,2 1,2 1,8 7 BS7 1,6 1,6 0 8 BS8 1,7 1,1 1,5 9 BS9 1 0,8 1,2 10 BS10 1,5 0,8 1,8
Tabel  4.  menunjukkan  bahwa  dari  10  isolat  yang  dilakukan  pengujian kemampuan bakteri pelarut fosfat diperoleh 8 isolat yang memiliki potensi pelarut fosfat, sedangkan 2 isolat tidak menunjukkan adanya potensi pelarut fosfat. Dari pengujian  kemampuan  pelarut  fosfat  masing-masing  isolat  mempunyai  aktivitas yang berbeda-beda.
Pada  bakteri  uji  kemampuan  pelarut  fosfat  yang  didapatkan  zona  bening pling besar pada isolat BS6, sedangkan zona bening kecil didapatkan pada isolat BS2,  BS3,  BS4,  BS5,  BS8,  BS9,  BS10  dan  2  isolat  yang  tidak  menunjukkan
adanya  potensi  pelarut  fosfat  yaitu  BS1  dan  BS7.  Berdasarkan  kemampuan pelarut  fosfat  beberapa  bakteri  uji,  maka  10  isolat  dilakukan  untuk  pewarnaan gram dan uji biokimia.

## Pewarnaan Gram
Pewarnaan gram dilakukan untuk mengidentifikasi bakteri  yang ada pada limbah cair karet, dilakukan dengan menggunakan beberapa media. Sepuluh isolat bakteri  yang  ditemukan  pada  limbah  cair  karet  dilakukan  uji  pewarnaan  gram yang  bertujuan  agar  dapat  membedakan  bakteri  kedalam  dua  kelompok  besar yaitu  gram  positif  dan  gram  negatif.  Hasil  pewarnaan  gram  dapat  dilihat  pada table 5 berikut:
Tabel 5. Pewarnaan Gram No. Kode Isolat Pewarnaan Gram Bentuk Keterangan 1 BS1 Monokokus Gram Positif 2 BS2 Monobasil Gram Negatif 3 BS3 Monobasil Gram Negatif 4 BS4 Monobasil Gram Negatif 5 BS5 Monobasil Gram Negatif 6 BS6 Streptobasil Gram Negatif 7 BS7 Streptobasil Gram Positif 8 BS8 Streptokokus Gram Positif 9 BS9 Streptobasil Gram Positif 10 BS10 Streptobasil Gram Positif
Tabel  5.  menunjukkan  bahwa  10  isolat  yang  diuji  pewarnaan  gram, didapatkan gram positif berbentuk monokokus yaitu BS1, sedangkan gram negatif berbentuk  monobasil  yaitu  BS2,  BS3,  BS4,  dan  BS5.  Isolat  bakteri  gram  positif berbentuk  streptokokus  yaitu  BS8,  lalu  gram  positif  berbentuk  streptobasil  yaitu BS9  dan  BS10,  kemudian  gram  positif  berbentuk  treptokkokus  yaitu  BS7, sedangkan  gram  negatif  berbentuk  streptobasil  yaitu  BS6.  Isolat  bakteri  gram positif  ditandai  dengan  sel  yang  berwarna  ungu  sedangkan  isolat  bakteri  gram negatif ditandai dengan sel yang berwarna merah.

## PEMBAHASAN Isolasi Bakteri
Pengambilan  sampel  limbah  cair  karet  dari  3  titik  yang  berbeda  pada pengenceran  10 -7 menghasilkan  10  isolat.  Hasil  pembiakan  bakteri  dari  ketiga sampel tumbuh dua jenis koloni yaitu koloni yang tidak memiliki warna terdapat pada  sampel  ke  1  dan  2  kemudian  koloni  berwarna  merah  muda  terdapat  pada sampel  ke  3.  Pertumbuhan  koloni  bakteri  warna  merah  menunjukkan  bahwa bakteri  tersebut  dapat  memfermentasi  laktosa  dan  memproduksi  asam  dari  hasil fermentasi  sehingga  dapat  merubah  warna  menjadi  merah. Sedangkan pertumbuhan  koloni  yang  tidak  berwarna  menunjukkan  bakteri  tersebut  tidak mampu memfermentasikan laktosa (Ginting et al., 2018).
Pada  sampel  1  memiliki  3  koloni  bakteri,  kemudian  pada  sampel  2 memiliki 1 koloni, dan sampel 3 memiliki jumlah koloni  yang memilihi ambang
batas. Sepuluh isolat yang didapatkan kemudian diberi kode BS1, BS2, BS3, BS4, BS5,  BS6,  BS7,  BS8,  BS9,  dan  BS10.  Pada  penelitian  (Cheunbarn  et  al.,  2020) didapatkan 100 isolat yang dikategorikan berdasarkan jenis sampel untuk disortir. Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  koloni  yang  tumbuh  pada  media yang  berwarna  putih,  memiliki  bentuk  yang  bulat  dan  juga  bersifat  universal sehingga  bakteri  tumbuh  baik  gram  positif  maupun  gram  negatif.  Dilakukannya isolasi  guna  untuk  mempermudah  dalam  menghitung  koloni  bakteri yang  akan tumbuh.  Koloni  dari  berbagai  konsentrasi  pengenceran  yang  tumbuh  dihitung sehingga dapat dilihat hasilnya.

## Karakteristik dan Morfologi Isolat Bakteri
Hasil karakteristik yang dilakukan pada 10 isolat limbah cair karet secara mikroskopik morfologi  yang diamati didapatkan bentuk, tepi, elevasi, dan warna yang  berbeda-beda.  Menurut  Ismail  et  al.,  (2017)  bahwa  karakteristik  dapat dilakukan  berdasarkan  sifat  morfologi  koloni,  morfologi  sel  dan  biokimia. Sepuluh  isolat  yang  didapat  memiliki  morfologi  yang  berbeda  seperti  pada  BS1 memiliki  bentuk  bulat,  margin  yang  rata,  dengan  elevasi  hampir  rata  dengan medium  dan  berwarna  putih  susu.  Pada  BS2  memiliki  bentuk  bulat,  margin yang rata, dengan elevasi cembung dan berwarna putih susu. Pada BS3 memiliki bantuk bulat, margin yang rata, dengan elevasi hampir rata dengan  medium,  dan berwarna putih susu. Pada BS4 memiliki bentuk bulat, margin yang rata, dengan elevasi rata pada seluruh permukaan, dan berwarna putih susu.
Kemudian  pada  BS5  memiliki  bentuk  bulat,  margin  yang  rata,  dengan elevasi hampir rata dengan medium, dan berwarna putih susu. Pada BS6 memiliki bentuk  bulat,  margin  yang  rata  dengan  elevasi  hampir  rata  dengan  medium,  dan berwarna  merah  muda.  Pada  BS7  memiliki  bentuk  bulat,  margin  yang  rata, kemudian  elevasi  cembung  dan  berwarna  merah  muda.  Pada  BS8  memiliki bentuk  bulat,  margin  yang  rata  kemudian  elevasi  permukaan  melengkung  dan berwarna  merah  muda.  Pada  BS9  memiliki  bentuk  bulat,  margin  bergelombang kemudian elevasi nyaris rata dengan medium dan berwarna putih susu. Pada BS10 memiliki  bentuk  bulat,  margin  yang  rata  kemudian  elevasi  nyaris  rata  dan berwarna putih susu.

## Uji Biokimia
Isolasi  bakteri  limbah  cair  karet  dilakukan  tes  uji  biokimia  yang  terdiri dari katalase,  sitrat,  motolitas,  dan  TSIA.  Hasil  uji  katalase  pada  isolat  limbah cair karet  BS1,  BS2,  BS3,  BS4,  BS6,  BS7,  BS8,  BS9,  dan  BS10  menunjukkan reaksi positif yang ditandai dengan terbentuk gelembung oksigen pada permukaan koloni  setelah  ditetesi  dengan  H2O2  menunjukkan  bahwa  organisme menghasilkan enzim katalase yang mengubah hydrogen peroksida menjadi air dan oksigen (Kosasi et al., 2019).
Pada  uji  sitrat  pada  isolat  limbah  cair  karet  pada  BS1,  BS2,  BS3,  BS4, BS6,  BS7,  BS8,  BS9,  dan  BS10  menunjukkan  reaksi  positif.  Adanya  reaksi positif  yang  ditandai  dengan  perubahan  media  bewarna  hijau  berubah  menjadi warna  biru  (Kosasi  et  al.,  2019).  Pengujian  pada  isolat  BS5  menunjukkan  hasil negatif.
Pada  uji  motilitas  terdapat  7  isolat  yang  bereaksi  positif  yaitu  BS1,  BS2, BS6,  BS7,  BS8,  BS9,  dan  BS10  sedangkan  isolat  BS3,  BS4,  dan  BS5 menunjukkan  reaksi  negatif  yang  tidak  memiliki  reaksi  uji  motilitas. Dilakukannya  uji  motilitas  agar  dapat  mengetahui  apakah  reaksi  bakteri  yang diamati bergerak atau tidak (Panjaitan et al., 2020).
Hasil  uji  TSIA  pada  isolat  BS2  menghasilkan  reaksi  kuning  atau merah.Warna merah pada agar menunjukkan reaksi basa sedangkan warna kuning pada  agar  menunjukkan  reaksi  asam.  Pada  permukaan  agar  berwarna  merah menunjukkan bahwa terjadinya fermentasi glukosa, sedangkan pada warna kuning dipermukaan  dan  bawah  tabung  menunjukkan  terjadinya  fermentasi  laktosa  dan sukrosa  (Kosasi et  al.,  2019).  Pada  isolat  BS1,  BS3,  BS4,  BS6,  BS7,  BS8, BS9,  dan  BS10 menunjukkan hasil kuning/kuning.
Hasil  uji  TSIA  yang  menunjukkan  adanya  reaksi  suatu  bakteri menghasilkan  gas  ada  pada  isolat  BS1,  BS3,  BS4,  BS6,  BS7,  BS8,  BS9,  dan BS10.  Tujuan dilakukannya uji TSIA  yaitu untuk mengetahui kemampuan suatu bakteri  dalam  memfermentasikan  gula  untuk  menghasilkan  asam  atau  gas. Kemudian  isolat  bakteri  dengan  kode  BS6  dan  BS7  menunjukkan  hasil  positif H2S. Hasil TSIA menunjukkan adanya H2S positif menunjukkan adanya endapan berwarna hitam pada bagian dasar media yang digunakan (Kosasi et al., 2019).

## Uji Kemampuan Bakteri Fiksasi N2
Uji  kemampuan  bakteri  pada  limbah  cair  karet  dengan  menggunakan fiksasi  N2  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  uv-vis  spektrofotometer kemudian dilihat nilai absorbansinya, setelah itu dibuat kurva standar isolasi yang didapatkan. Berikut ini hasil uji kemampuan bakteri fiksasi nitrogen dapat dilihat dari kurva sebagai berikut.
Pada  kurva  standar  isolasi  diatas  menunjukkan  bahwa  nilai  absorbansi yang  paling  tinggi  didapat  pada  BS6  dengan  nilai  absorbansinya  sebesar  1,340, sedangkan  nilai  yang  paling  kecil  didapat  pada  BS1  dengan  nilai  absorbansinya sebesar  0,852.  Kegunaan  dari  spektrofotometer  uv-vis  untuk  menganalisis nitrogen  pada  sedimen  melalui  interaksi  antara  cahaya  atau  sinar  pada  panjang gelombang tertentu dengan materi berupa atom atau molekul (Angraini & Yanti, 2021).

## Uji Kemapuan Bakteri Pelarut Fosfat
Uji  kemampuan  bakteri  dengan  menggunakan  pelarut  fosfat  ditandai dengan  terbentuknya  zona  bening  disekitar  koloni  kemudian  dilanjutkan  dengan penghitungan  indeks  pelarut  fosfat.  Hasil  dari  uji  tersebut  menunjukkan  hasil bahwa  terdapat  2  isolat  yang  tidak  berpotensi  dalam  pelarut  fosfat  yaitu  pada isolat  BS1  dan  BS7.  Isolat  yang  memiliki  nilai  indeks  zona  bening  tertinggi terdapat  pada  isolat  BS5  dengan  indeks  pelarut  fosfat  sebesar  5,2.  Kemudian isolat  yang  memiliki  zona  bening  terbesar  selanjutnya  terdapat  pada  isolat  BS4 dengan indeks pelarut fosfat sebesar 3,1. Terbentuknya zona bening menunjukkan bahwa  bakteri  tersebut  mampu  dalam  melarutkan  fosfat  sehingga  terbentuknya zona  bening  disekitar  koloni  bahwa  isolat  mampu  menghasilkan  asam  organik yang  mampu  berikatan  dengan  ion  Ca-  membentuk  senyawa  Ca3(PO4)2  pada media  pikovskaya  dan  mem-bebaskan  ion  H2PO4-  sehingga  membentuk  area
berwarna lebih jernih (Asril & Lisafitri, 2020).

## Pewarnaan Gram
Hasil  pengujian  pewarnaan  gram  yang  dilakukan  pada  10  isolat  limbah cair  karet  terdapat  2  jenis  isolat  berwarna  ungu  dan  juga  warna  merah.  Pada  10 isolat  yang  dilakukan  uji  pewarnaan  gram,  didapatkan  gram  positif  yang berbentuk  batang  dengan  kode  BS7,  BS9,  dan  BS10,  sedangkan  gram  negatif yang berbentuk batang dengan kode BS2, BS3, BS4, BS5, dan BS6. Gram positif yang  didapatkan  dari  pewarnaan  gram  berbentuk  bulat  yaitu  BS1  dan  BS8, sedangkan gram positif yang berbentuk bulat tidak terdapat pada hasil pewarnaan gram.  Tujuan  dilakukan  perwanaan  gram  guna  untuk  mempermudah  dalam melihat  bakteri secara mikroskopik,  melihat struktur  dalam bakteri,  memperjelas bentuk dan ukuran bakteri dan juga menghasilkan sifat fisik serta kimia yang ada pada bakteri melalui zat warna (Bulele et al., 2019).
Bakteri  yang berbentuk monobasil pada kode isolat BS2,  BS3, BS4, dan BS5  menunjukkan  hasil  gram  negatif.  Pada  bakteri  yang  berbentuk  streptobasil dengan kode isolat BS6 menunjukkan hasil gram negatif. Bakteri yang berbentuk streptobasil pada kode isolat BS7, BS9 dan BS10 menunjukkan hasil gram positif. Pada  bakteri  yang  berbentuk  monokokus  terdapat  pada  kode  isolat  BS1  yang termasuk  dalam  gram  positif,  sedangkan  streptokokus  pada  kode  isolat  BS8 termasuk  dalam  gram  positif.  Pada  hasil  pengamatan  bakteri  apabila  bakteri berwarna ungu maka dikatakan bakteri gram positif, sedangkan bakteri berwarna merah maka termasuk bakteri gram negatif (Rahmawati et al., 2021).

## SIMPULAN
Simpulan  pada  penelitian  ini  yaitu  didapatkan  hasil  isolasi  pada  limbah cair  karet  terdapat  10  isolat  bakteri  dari  3  sampel  limbah  cair  karet  di  Desa Perdamean,  Kabupaten  Labuhanbatu.  Isolat  bakteri  limbah  cair  karet  ada  yang mampu  dalam  melarutkan  fosfat,  yaitu  dari  10  isolat  yang  telah  diuji kemampuannya  dalam  melarutkan  fosfat  didapatkan  8  isolat  yaitu  BS2,  BS3, BS4,  BS5,  BS6,  BS8,  BS9,  dan  BS10.  Sedangkan  isolat  bakteri  yang  tidak mampu  dalam  melarutkan  fosfat  yaitu,  BS1  dan  BS7.  Isolat  bakteri  limbah  cair karet  yang  mampu  dalam  fiksasi  nitrogen  ada  7  isolat  yang  memiliki  nilai absorbansi  yang  tinggi  yaitu,  BS2,  BS3,  BS4,  BS6,  BS7,  BS8,  dan  BS9. Kemudian isolat yang memiliki nilai absorbansi yang rendah yaitu, BS1, BS5, dan BS10.

## DAFTAR PUSTAKA
Andriani,  Y.,  Sari,  I.  R.  J.,  Fatkhurrahman,  J.  A.,  &  Harihastuti,  N.  (2019). Potensi Cemaran  Lingkungan  di  Industri  Karet  Alam  Crumb  Rubber.
Prosiding SNPBS (Seminar Nasional Pendidikan Biologi dan Saintek) Ke- 4 , 445–451. https://publikasiilmiah.ums.ac.id/bitstream/handle/11617/11356/p.445 -
451.pdf?sequence=1&isAllowed=y
Angraini,  N.,  &  Yanti,  F.  (2021).  Penggunaan  Spektrofotometer  UV-Vis  Untuk Analisis  Nutrien  Fosfat  pada  Sedimen  dalam  Rangka  Pengembangan Modul Praktikum Oseanografi Kimia. Jurnal Penelitian Sains , 23 (2), 78-
83. https://doi.org/10.56064/jps.v23i2.620 Asril,  M.,  &  Lisafitri,  Y.  (2020).  Isolasi  Bakteri  Pelarut  Fosfat  Genus Pseudomonas  dari  Tanah  Masam  Bekas  Areal  Perkebunan  Karet  di Kawasan  Institut  Teknologi  Sumatera. Jurnal  Teknologi  Lingkungan , 21 (1), 40–48. https://doi.org/10.29122/jtl.v21i1.3743
Bulele,  T.,  Rares,  F.  E.  S.,  &  Porotu’o,  J.  (2019).  Identifikasi  Bakteri  dengan
Pewarnaan Gram pada Penderita Infeksi Mata Luar di Rumah Sakit Mata Kota Manado. Jurnal E-Biomedik , 7 (1), 30–36. https://doi.org/10.35790/ebm.7.1.2019.22820 Cheunbarn,  T.,  Cheunbarn,  S.,  &  Klayrung,  S.  (2020).  Isolation  and  Evaluation Efficiency  of  Bacteria  in  Rubber  Processing  Wastewater Treatment. The 12 th NPRU National Academic Conference , 100–106.
https://publication.npru.ac.th/handle/123456789/830
Ginting, T. S. M., Helmi, Z. T., Darmawi, Dewi, M., Hennivanda, Erina, & Daud, R.  (2018).  Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri  Gram  Negatif  pada  Ambing Kambing  Peranakan  Etawa  (PE). Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa  Veteriner ,
2 (3), 351–360. https://jim.unsyiah.ac.id/FKH/article/view/8206
Islam, H., Nelvia, N., & Zul, D. (2019). Isolasi dan Uji Potensi Bakteri Diazotrof Non Simbiotik Asal Tanah. Agroteknologi , 9 (2), 35–40. https://ejournal.uin-suska.ac.id/index.php/agroteknologi/article/view/4508
Ismail,  Y.  S.,  Yulvizar,  C.,  &  Putriani.  (2017).  Isolation,  Characterization,  and Antimicrobial Activity of Lactic Acid Bacteria From the Fermented Cacao Seed ( Theobroma cacao L.). Bioleuser , 1 (2), 45–53.
Kosasi,  C.,  Lolo,  A.  W.,  &  Sedewi,  S.  (2019).  Isolasi  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri dari Bakteri  yang Berasosiasi dengan Alga Turbinaria ornata (Turner)  J.  Agardh  serta  Identifikasi  secara  Biokimia. Pharmacon– Program  Studi  Farmasi,  Fmipa,  Universitas  Sam  Ratulangi,  8 (2),  351- 359. https://doi.org/10.35799/pha.8.2019.29301
Laina,  L.,  Mida,  M.,  Roaini,  R.,  &  Kapli,  H.  (2018).  Uji  kualitas  Air  Sungai Sekitar  Penduduk  Desa  Kebagusan  Kec.  Gedongtataan  Kab.  Pesawaran terhadap Limbah Cair di PTPN VII Way Berulu. Seminar Nasional Sains dan Teknologi Terapan , 131–135. http://semnas.radenfatah.ac.id/index.php/semnasfst/article/view/24
Panjaitan,  F.  J.,  Bachtiar,  T.,  Arsyad,  I.,  Lele,  O.  K.,  &  Indriyani,  W.  (2020).
Karakterisasi Mikroskopis dan Uji Biokimia Bakteri Pelarut Fosfat (BPF) dari  Rhizosfer  Tanaman  Jagung  Fase  Vegetatif. Jurnal  Ilmu  Pertanian dan Lingkungan , 1 (1), 9–17. https://stikessantupaulus.e-
journal.id/ciwal/article/view/93
Rahmawati,  L.  R.,  Adlina,  S.,  &  Yuliana,  A.  (2021).  Isolasi  dan  Identifikasi Bakteri  Penghasil  Protease  Ekstraseluler  dari  Limbah  Cair  Tahu  Putih. Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada: Jurnal Ilmu Keperawatan, Analis Kesehatan  dan  Farmasi , 21 (2),  187–193.  https://ejurnal.universitas- bth.ac.id/index.php/P3M_JKBTH/article/download/748/606
Rusdiansyah, A. I. (2018). Kumpulan Esai Inovatif . Jawa Barat: Guepedia
Sitorus, E. (2021). Proses Pengolahan Limbah. Medan: Yayasan Kita Menulis