## Optimasi Amobilisasi Bromelin Menggunakan Matriks Pendukung Kitosan
Maliha Sya’bana dan Refdinal Nawfa Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail : refnawfa@chem.its.ac.id
Abstrak —Optimasi  amobilisasi  bromelin  dengan matriks  pendukung  kitosan  telah  diteliti.  Enzim  bromelin yang  diisolasi  dari  buah  nanas  mentah  maupun  matang diperoleh  aktivitas  tertinggi  pada  pengendapan  40% dengan  ammonium  sulfat  jenuh.  Kondisi  optimum amobilisasi  enzim  bromelin  didapatkan  pada  konsentrasi kitosan 240,4 mg dan bromelin 10 mg dengan jumlah enzim teramobil    9,5417  mg  dan  aktivitas  dalam  10  mg  enzim amobil  yang  diuji  adalah  86,2067  Unit.  Uji  aktivitas  enzim amobil  terhadap  pengaruh  substrat  kasein  didapatkan aktivitas  tertinggi  pada  kasein  3000  ppm.  Uji  perulangan enzim  amobil  dapat  digunakan  hingga  enam  kali  dengan efisiensi 57,69%.
Kata  Kunci —Bromelin;  amobilisasi;  kitosan;  kasein; aktivitas; efisiensi.

## I. PENDAHULUAN
nzim bromelin merupakan kelompok enzim pemecah protein atau disebut juga sebagai enzim protease atau proteolitik  yang  ditemukan  dalam  jaringan  tumbuhan famili  Bromeliceae  (Chaurasiya  dan  Hebbar,  2013). Enzim  bromelin  dapat  mengkatalisis  penguraian  protein menjadi  asam  amino  melalui  reaksi  hidrolisis,  yaitu penguraian  dari  molekul  besar  menjadi  molekul  yang lebih  kecil  dengan  kombinasi  air  (Maryam,  2009). Kemampuan  enzim  bromelin  dalam  memecah  protein, diaplikasikan  dalam  berbagai  industri  seperti  industri makanan  dan  farmasi,  seperti  digunakan  untuk melunakkan  daging,  membantu  proses  pencernaan maupun sebagai agen antibiotik.
Enzim bromelin paling banyak ditemukan dalam buah nanas  ( Ananas  comosus ),  meskipun  terdapat  juga  dalam buah  pisang  dengan  jumlah  yang  lebih  sedikit.  Untuk mengisolasi  enzim  bromelin  ini  dapat  dilakukan  dengan salah  satu  cara  yaitu  pengendapan  menggunakan ammonium sulfat jenuh. Hal ini dikarenakan ammonium sulfat memiliki kelarutan yang tinggi dalam air dan tidak bereaksi dengan protein dan polisakarida, sehingga dapat mengendapkan  enzim  bromelin.  Penelitian  Salahudin (2011) menyebutkan enzim bromelin yang diperoleh dari pengendapan ammonium sulfat masih memiliki aktivitas katalitiknya.  Hasil isolat  enzim  bromelin  yang diperoleh serta  nilai  aktivitasnya  dipengaruhi  dari  konsentrasi penambahan ammonium sulfat.
Penelitian  mengenai  amobilisasi  enzim  bromelin  yang membuat enzim  menjadi  inaktif  telah  banyak  dilakukan. Amobilisasi  enzim  ini  digunakan  karena  lebih  banyak keuntungan yang diperoleh. Dibandingkan dengan enzim bebas,  enzim  amobil  lebih  kuat  dan  tahan  terhadap perubahan  lingkungan,  bersifat  heterogen  terhadap substrat  sehingga  enzim  dapat  diperoleh  kembali,  dapat digunakan secara berulang serta penghentian reaksi dapat
dilakukan  secara  cepat  dengan  pemisahan  enzim  amobil dari larutan reaksi (Krajewska, 2004). Salah satu metode amobilisasi  enzim  yang  digunakan  yaitu  metode cross linking (ikat silang). Metode ini sering digunakan karena ikatan  enzim  dengan  matriks  pendukung  stabil  sehingga enzim tidak mudah lepas. Enzim akan terjebak di dalam matriks  pendukung  dengan  mencampurkannya  terlebih dahulu  sebelum  disilangkan  menggunakan  glutaraldehid sebagai  pereaksi  bifungsional  yaitu  pengaktivasi  dan pengikatsilang.
Turunan senyawa kitin dapat digunakan sebagai bahan pengamobil enzim. Cara memperoleh kitin relatif mudah dengan  mengisolasinya  dari  kulit  udang  yang  dilakukan dua  tahap  proses  demineralisasi  dan  deproteinasi. Penghilangan  gugus  asetil  (deasetilasi)  pada  kitin mengubahnya  menjadi  kitosan.  Kitosan  bersifat  tidak beracun  dan  mudah  didegradasi.  Selain  itu,  kitosan mempunyai  gugus  amina  hasil  deasetilasi  yang  dapat berikatan dengan pereaksi bifungsional, sehingga kitosan mampu  dijadikan  matriks  pendukung  amobilisasi  enzim yang baik.
Besarnya  penambahan  kitosan  yang  digunakan  dalam amobilisasi  enzim  bromelin  untuk  mencapai  aktivitas enzim optimum belum sepenuhnya diketahui. Sebaliknya,  besarnya  enzim  bromelin  yang  teramobil untuk  mencapai  aktivitas  optimumnya  belum  ada keterangan dari penelitian sebelumnya. Apabila diketahui kadar  optimum  enzim  bromelin  teramobil,  maka  dapat diketahui  pula  bahwa  dengan  sejumlah  tertentu penggunaan  kitosan  mampu  mengamobilisasi  sejumlah tertentu  enzim  bromelin.  Dengan  demikian,  dapat diketahui  perbandingan  yang  sesuai  untuk  melakukan amobilisasi  enzim  bromelin  dengan  matriks  pendukung kitosan.

## II. METODOLOGI PENELITIAN

## Isolasi Kitin
Kitin diisolasi dari kulit udang yang dikuliti dan dicuci hingga  bersih.  Kulit  udang  dikeringkan  dibawah  sinar matahari  dan  dihaluskan  menggunakan  blender  hingga diperoleh  bentuk  serbuk.  Kitin  diperoleh  melalui  dua tahap demineralisasi dan deproteinasi yang mengacu dari penelitian  Kumari,  dkk.  (2015)  dengan  beberapa modifikasi.

## 1) Demineralisasi
Serbuk  kulit  udang  direndam  dalam  HCl  1  M  dengan perbandingan  1:15  (b/v)  selama  2  jam.  Residu  disaring dan  dicuci  dengan  aquades  hingga  pH  netral,  kemudian dikeringkan dalam oven pada suhu 105  C selama 4 jam.
E

## 2) Deproteinasi
Serbuk  kulit  udang  hasil  demineralisasi,  direndam dalam  NaOH  1  M  dengan  perbandingan  1:10  (b/v) selama  18  jam  pada  suhu  ruang.  Perendaman  dengan NaOH  1  M  dilakukan  hingga  larutan  tidak  berwarna. Residu  disaring  dan  dicuci  dengan  aquades  hingga  pH netral,  kemudian  dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu 105  C selama 4 jam.

## Transformasi Kitin menjadi Kitosan
Kitin  ditambahkan  NaOH  50%  dengan  perbandingan 1:10  (b/v),  kemudian  diaduk  sambil  dipanaskan  dalam 100  C selama  4 jam.  Residu  disaring dan dicuci dengan aquades  hingga  pH  netral  kemudian  dikeringkan  dalam oven pada suhu 105  C selama 4 jam.

## Penentuan Kadar Protein
1) Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Kadar protein ditentukan menggunakan metode biuret. Larutan  stok  kasein  5000  ppm  yang  dibuat  dari  500  mg kasein  dilarutkan  dalam  campuran  larutan  NaOH  0,4  M sebanyak  25  mL  dan  aquades  75  mL.  Pengukuran absorbansi  menggunakan  Spektrofotometer  UV-Vis dilakukan  dengan  cara  6  mL  kasein  5000  ppm ditambahkan  dengan  4  mL  reagen  biuret,  kemudian diaduk dan didiamkan selama 20 menit pada suhu 37  C. Larutan  standar  kasein  diukur  absorbansinya  pada  range panjang gelombang antara 500-600 nm dengan interval 5 nm. Pengukuran absorbansi larutan kasein didahului oleh blanko.

## 2) Pembuatan Kurva Standr Kasein
Kurva  standar  kasein  dibuat  dari  larutan  stok  kasein 5000 ppm yang dibuat menjadi konsentrasi larutan kasein secara  berturut-turut  250,  500,  750,  1000,  1250,  1500, 1750,  2000,  2250,  2500,  2750  dan  3000  ppm.  Larutan diaduk dan didiamkan selama 20 menit pada suhu 37  C. Larutan  diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum  yang  telah  diperoleh  sebelumnya.  Data pengukuran  absorbansi  dibuat  kurva  antara  konsentrasi terhadap absorbansi dan ditentukan persamaan garis dari regresi linier.

## Isolasi Enzim Bromelin
Enzim  Bromelin  diisolasi  dari  buah  nanas  yang dihaluskan menggunakan blender, kemudian disaring dan diperas menggunakan kain hingga diperoleh sarinya. Sari buah  nanas  disentrifugasi  selama  25  menit  dengan kecepatan  3000  rpm.  Supernatan  diambil  sebanyak  160 mL  dan  diendapkan  dengan  menambahkan  larutan (NH 4 ) 2 SO 4 jenuh  sebanyak  40  mL  (untuk  memperoleh fraksi pengendapan 20%), kemudian didingingkan dalam lemari es semalam. Setelah terbentuk endapan, dilakukan sentrifugasi  selama  25  menit  dengan  kecepatan  3000 rpm.  Endapan  diambil  dan  dikeringkan  menggunakan freeze  dryer .  Pengendapan  diulangi  untuk  memperoleh fraksi  pengendapan  30%,  40%,  50%  dan  60%.  Enzim ditentukan aktivitas katalitiknya dengan melarutkan 5 mg dalam  10  mL  substrat  kasein  3000  ppm,  kemudian dihomogenkan  dengan shaker kecepatan  120  rpm  pada suhu  ruang  selama  2  jam.  Selanjutnya  ditentukan  kadar protein menggunakan metode.

## Amobilisasi Enzim Bromelin

## 1) Pengaruh  Konsentrasi  Kitosan  terhadap  Aktivitas Enzim
Amobilisasi  bromelin  dilakukan  dengan  variasi  pada kitosan mulai dari 50, 100, 150, 200 dan 250 mg. Enzim bromelin sebanyak 50 mg dimasukkan ke dalam 3,6  mL larutan  buffer  fosfat  pH  6  dan  ditambahkan  kitosan dengan  lima  variasi,  kemudian  didiamkan  selama  15 menit  dalam  lemari  es.  Campuran  ditambahkan  0,4  mL glutaraldehid  5%  dan  didiamkan  30  menit  pada  suhu ruang.  Campuran  disimpan  dalam  lemari  es  selama  18 jam.  Enzim  amobil  yang  terbentuk  disaring  dan  dicuci dengan  30  mL  aquades.  Filtrat  air  cucian  enzim diencerkan  hingga  50  mL  dan  ditentukan  kandungan proteinnya  (jumlah  enzim  yang  tidak  teramobil). Selanjutnya,  enzim  amobil  diambil  10  mg  setiap  variasi dan diuji aktivitasnya dengan substrat kasein 3000 ppm. 2) Pengaruh  Konsentrasi  Bromelin  terhadap  Aktivitas Enzim
Prosedur  dilakukan  sama  seperti  pada  amobilisasi variasi kitosan dengan menggunakan konsentrasi kitosan optimum yang diperoleh dari percobaan. Enzim bromelin yang ditambahkan mulai dari 10,  30, 50,  70 dan 90 mg. Setelah  enzim  amobil  terbentuk,  kemudian  disaring  dan dicuci  dengan  larutan  30  mL  aquades.  Filtrat  air  cucian enzim  diencerkan  hingga  50  mL  dan  ditentukan kandungan  proteinnya  (jumlah  enzim  yang  tidak teramobil).  Kemudian  enzim  amobil  diambil  10  mg setiap  variasi  dan  diuji  aktivitasnya  dengan  substrat kasein 3000 ppm.

## Pengaruh  Konsentrasi  Substrat  terhadap  Aktivitas Enzim Bromelin Amobil
Enzim  bromelin  yang  telah  diamobilisasi  ditentukan aktivitasnya  terhadap  pengaruh  konsentrasi  substrat. Substrat kasein yang ditambahkan  yaitu dari 1000, 2000 dan  3000  ppm  dan  diambil  masing-masing  sebanyak  10 mL.  Enzim  bromelin  amobil  10  mg  dimasukkan  ke dalam larutan substrat dan dihomogenkan dengan shaker kecepatan 120 rpm pada suhu ruang selama 2 jam. Enzim bromelin  amobil  dipisahkan  dari  larutan  substrat.  Filtrat yang  telah  dipisahkan  ditentukan  kadar  protein menggunakan metode biuret.

## Pengaruh Perulangan Penggunaan Enzim Bromelin Amobil terhadap Aktivitas Enzim
Enzim bromelin amobil ditentukan aktivitas katalitiknya terhaadap perulangan penggunaannya dengan  substrat  kasein  3000  ppm  10  mL  dengan  waktu inkubasi  2  jam.  Enzim  bromelin  amobil  20  mg dimasukkan  ke  dalam  larutan  uji  pertama  kemudian disaring  dan  dibilas  dengan  aquades  sekali,  kemudian dimasukkan ke dalam larutan uji kedua hingga larutan uji keenam  dengan  perlakuan  yang  sama.  Selanjutnya ditentukan kadar protein terdegradasi dan aktivitas enzim pada setiap perulangan.

## III. HASIL DAN DISKUSI

## Isolasi Kitin
Kitin diisolasi dari kulit udang laut yang dikeringkan dibawah sinar matahari dan dihaluskan hingga diperoleh bentuk serbuk, kemudian dilakukan tahapan selanjutnya.
1) Demineralisasi
Demineralisasi  dilakukan  untuk  memisahkan  kitin dalam  kulit  udang  dari  mineral  utamanya  yaitu  CaCO 3 dan  Ca 3 (PO 4 ) 2 dalam  jumlah  kecil.  Mineral-mineral tersebut akan bereaksi dengan HCl sehingga terlepas dari kulit  udang.  Pada  saat  HCl  dicampurkan  dengan  serbuk kulit udang terbentuk gelembung gas seperti busa, karena hasil reaksi diperoleh CO 2 seperti pada persamaan reaksi 3.1.
CaCO 3(s) + 2HCl (aq)  CaCl 2(aq) + CO 2(g) + H 2 O (l) (3.1)
Hasil  demineralisasi  kulit  udang  yang  telah  kering diperoleh  serbuk  coklat.  Setelah  dilakukan  proses demineralisasi, terjadi pengurangan massa serbuk dari 15 gram menjadi 3 gram.
2) Deproteinasi
Deproteinasi  dilakukan  untuk  memisahkan  protein yang  masih  bercampur  dengan  kitin.  Protein  dipisahkan dengan  melarutkannya  menggunakan  basa  NaOH, sehingga protein akan berikatan membentuk Na-proteinat yang  dapat  larut.  Perendaman  dengan  NaOH  diulangi hingga  larutan  rendaman  bening.  Hal  ini  berfungsi sebagai  penghilang  warna  untuk  memperoleh  serbuk kitin  meskipun  terlihat  sedikit  kecoklatan.  Dengan perulangan perendaman NaOH tersebut, maka tidak perlu dilakukan  untuk  tahap bleaching .  Proses  deproteinasi menyebabkan  pengurangan  massa  serbuk  kitin  dari  3 gram menjadi 2,5 gram.

## Transformasi Kitin menjadi Kitosan
Hasil  uji  IR  kitin  yang  telah  ditransformasi  menjadi kitosan ditunjukkan pada Gambar 3.1.
Gambar 3.1. Spektra kitosan hasil perulangan deasetilasi dengan panjang DF 1 = 6,7 cm; DE = 4,7 cm; AC = 4,9 cm dan AB = 0,5 cm.
Perhitungan  derajat  deasetilasi  menggunakan  metode baseline .  Berdasarkan  spektra  IR  pada  Gambar  3.1 diperoleh  %DD  sebesar  88,32%.  Hasil  ini  telah mencukupi untuk dikatakan sebagai kitosan karena lebih dari 70%.

## Isolasi Bromelin
Enzim  bromelin  dari  buah  nanas  diisolasi  dari  nanas mentah  dan  nanas  matang.  Kedua nanas  diekstrak  untuk diambil  enzim  bromelinnya  dan  dibandingkan  nanas mana  yang  memiliki  aktivitas  enzim  lebih  baik. Pengendapan  dengan  amonium  sulfat  jenuh  dilakukan secara bertingkat dari 20%, 30%, 40%, 50% hingga 60% dalam  ekstrak  nanas.  Dari  pengendapan  bertingkat didapatkan  beberapa  endapan  fraksi  enzim  bromelin yang  masih  basah.  Fraksi  enzim  bromelin  dikeringkan menggunakan freeze  dryer .  Masing-masing  fraksi  enzim bromelin  ditentukan  kadar  protein  enzim  dan  aktivitas proteolitiknya  dalam  larutan  substrat  menggunakan metode biuret.
Besarnya  aktivitas  enzim  dihitung  dalam  satuan  Unit. Pada penelitian ini, definisi untuk 1 Unit aktivitas enzim
yaitu banyaknya  g protein yang terdegradasi/ menit/ mg enzim.  Aktivitas  dari  fraksi  enzim  hasil  pegendapan ammonium sulfat jenuh baik dari nanas  mentah maupun nanas matang disajikan dalam Gambar 3.2.
Gambar 3.2. Aktivitas fraksi enzim hasil pengendapan ammonium sulfat jenuh.
Pada  Gambar  3.2,  aktivitas  enzim  tertinggi  diamati pada  pengendapan  ammonium  sulfat  jenuh  40%  nanas mentah  maupun  nanas  matang.  Dalam  penelitian  ini aktivitas  bromelin  dari  kedua  jenis  nanas  tersebut  tidak berbeda jauh. Keduanya mempunyai aktivitas maksimum pada  pengendapan  ammonium  sulfat  jenuh  40%.  Maka dari  itu,  untuk  melakukan  percobaan  selanjutnya digunakan  enzim  dari  pengendapan  ammonium  sulfat jenuh 40%.

## Amobilisasi Enzim Bromelin
1) Pengaruh  Konsentrasi  Kitosan  terhadap  Aktivitas Enzim
Amobilisasi enzim bromelin dilakukan dengan metode cross  linking .  Enzim  akan  berikatan  silang  dengan matriks pendukung kitosan yang diaktifkan oleh pereaksi cross  linking yaitu  glutaraldehid.  Gugus  aldehid  pada glutaraldehid  akan  berikatan  dengan  gugus  amina  pada kitosan  dan  gugus  amino  pada  enzim,  sehingga membentuk formasi kitosan-glutaraldehid-enzim. Kitosan  dilakukan  lima  variasi  dengan  penambahan jumlah  enzim  yang  sama  besar  yaitu  50  mg.  Dengan dilakukannya  variasi  tersebut,  dapat  diketahui  pengaruh konsentrasi  kitosan  terhadap  jumlah  enzim  yang teramobil.  Hasil  amobilisasi  enzim  dengan  variasi kitosan dilihat pada Gambar 3.3.
Gambar 3.3. Pengaruh konsentrasi kitosan terhadap enzim yang teramobil.
Berdasarkan  Gambar  3.3,  dapat  diketahui  semakin banyak kitosan yang diberikan maka semakin meningkat jumlah  enzim  yang  teramobil.  Jumlah  enzim  yang teramobil  tersebut  merupakan  enzim  terdapat  dalam massa  total  (dengan  matriks  kitosan)  yang  diperoleh, dimana semakin banyak kitosan maka massa total enzim amobil  diperoleh  semakin  besar.  Untuk  itu  pengukuran aktivitas  enzim  dilakukan  dengan  menggunakan  massa enzim amobil yang sama besar.
Masing-masing enzim amobil variasi kitosan diambil 10  mg  massa totalnya,  sehingga diketahui jumlah  enzim teramobil  per  10  mg  seperti  ditunjukkan  pada  Gambar 3.4.
Gambar 3.4. Jumlah enzim teramobil dalam 10 mg massa total total enzim amobil variasi kitosan.
Jumlah  enzim  teramobil  dalam  10  mg  massa  totalnya didapatkan  hasil  yang  paling  rendah  pada  kitosan  250,4 mg. Hal ini dikarenakan perlakuan kitosan yang semakin meningkat menghasilkan massa total enzim amobil yang semakin  meningkat  dengan  enzim  yang  ditambahkan berjumlah  sama,  sehingga  dalam  10  mg  massa  totalnya jumlah enzim teramobil akan semakin menurun.
Aktivitas  enzim  diukur  dari  10  mg  massa  total  enzim amobil  variasi  kitosan  yang  dimasukkan  ke  dalam substrat.  Hasil  pengujian  aktivitas  enzim  amobil  yang diambil  sama  banyak  10  mg  dapat  dilihat  pada  Gambar 3.5.
Gambar 3.5. Aktivitas enzim amobil variasi konsentrasi kitosan.
Aktivitas tertinggi enzim amobil terdapat pada perlakuan kitosan 250,4 mg, dimana jumlah enzim teramobil adalah yang  paling  rendah  (dalam  10  mg  massa  total  enzim amobil  yang  diuji).  Sebaliknya  pada  perlakuan  kitosan 50,2 mg diperoleh aktivitas paling rendah. Jumlah enzim teramobil dan aktivitas enzim dapat dihubungkan bahwa semakin  tinggi  jumlah  enzim  teramobil  maka  semakin rendah  aktivitasnya.  Dalam  penelitian  Zhu  dan  Sun (2012)  didapatkan  jumlah  enzim  teramobil  tinggi menghasilkan  aktivitas  rendah  yang  dipengaruhi  oleh pereaksi  glutaraldehid.  Hal  tersebut  dikarenakan  enzim melekat  erat  dengan  konformasi  yang  tepat  sehingga kehilangan fleksibilitas fungsi katalitiknya.
2) Pengaruh  Konsentrasi  Bromelin  terhadap  Aktivitas Enzim
Amobilisasi  dipengaruhi  oleh  konsentrasi  enzim, semakin  tinggi  jumlah  enzim  yang  ditambahkan,  maka akan semakin banyak enzim yang teramobil. Amobilisasi enzim  dilakukan  dengan  kitosan  dalam  jumlah  sama sebanyak  250  mg  setiap  variasi  konsentrasi  bromelin. Jumlah  enzim  teramobil  variasi  konsentrasi  bromelin ditunjukkan pada Gambar 3.6.
Gambar 3.6. Pengaruh konsentrasi bromelin terhadap enzim yang teramobil pada 250 mg kitosan.
Pada Gambar 3.6 menunjukkan bahwa semakin banyak enzim  yang  ditambahkan  maka  akan  semakin  banyak jumlah  enzim  yang  teramobil.  Jumlah  enzim  yang teramobil  tersebut  merupakan  enzim  terdapat  dalam massa total (dengan matriks kitosan).
Seperti  pada  variasi  kitosan,  pengukuran  aktivitas enzim  amobil  variasi  konsentrasi  bromelin  dilakukan dengan cara mengambil 10 mg massa total enzim amobil dari  setiap  variasi.  Besarnya  jumlah  enzim  teramobil dalam  10  mg  massa  totalnya  disampaikan  pada  Gambar 3.7.
Gambar 3.7. Jumlah enzim teramobil dalam 10 mg massa total enzim amobil variasi bromelin.
Pada  Gambar  3.7,  jumlah  enzim  teramobil  dalam  10 mg  massa  totalnya  diketahui  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi  bromelin  akan  diperoleh  jumlah  enzim teramobil juga semakin tinggi. Pada konsentrasi bromelin 90  mg  diperoleh  jumlah  enzim  teramobil  paling  tinggi. Untuk hasil uji aktivitasnya diperoleh pada Gambar 3.8.
Gambar 3.8. Aktivitas enzim amobil variasi konsentrasi bromelin.
Hasil  uji  aktivitas  enzim  pada  Gambar  3.8 menunjukkan  semakin  banyaknya  konsentrasi  bromelin maka  aktivitasnya  akan  semakin  menturun.  Aktivitas enzim paling tinggi ditunjukan oleh konsentrasi bromelin 10  mg.  Aktivitas  enzim  amobil  dengan  perlakuan konsentrasi  bromelin  10  mg  diperoleh  sebesar  86,2607 Unit, sedangkan jumlah enzim yang teramobil didapatkan  9,5417  mg  yang paling rendah  dibandingkan dengan perlakuan yang lain. Jika aktivitas enzim amobil dikaitkan  dengan  jumlah  enzim  teramobil,  menunjukkan bahwa semakin rendah enzim yang teramobil maka akan menghasilkan  aktivitas  yang  semakin  besar.  Dalam
penelitian  ini,  variasi  konsentrasi  bromelin  yang dilakukan  belum  mencapai  optimal,  karena  dengan semakin  rendahnya  konsentrasi  bromelin  menunjukkan peningkatan aktivitas.

## Pengaruh Perulangan Penggunaan Enzim Bromelin Amobil terhadap Aktivitas Enzim
Keuntungan  penggunaan  enzim  amobil  adalah  dapat digunakan  berulang  hingga  beberapa  kali.  Hal  ini dikarenakan  enzim  amobil  mudah  dipisahkan  kembali dari  larutan  produknya.  Enzim  bromelin  amobil  pada penelitian  ini  digunakan  hingga  enam  kali.  Kondisi penggunaan  enzim  dapat  diketahui  dengan  menentukan efisiensi perulangan sebagaimana Tabel 3.1.
T ABEL 3.1 . E FISIENSI PERULANGAN PENGGUNAAN ENZIM AMOBIL .
Perulangan ke- Aktivitas (Unit) Efisiensi (%) 1 74,7327 100 2 71,5705 95,77 3 70,5165 94,36 4 69,4624 92,95 5 46,2731 61,92 6 43,1109 57,69
Berdasarkan  Tabel  3.1,  enzim  bromelin  amobil  masih baik  digunakan  hingga  enam  kali  perulangan.  Pada perulangan  keenam  diperoleh  aktivitas  sebesar  43,1109 Unit  dengan  efisiensi  penggunaannya  sebesar  57,69%. Hal  ini  didasarkan  pada  penelitian  Roosdiana,  dkk. (2009)  yang  menyatakan  bahwa  perulangan  penggunaan enzim amobil dikatakan baik apabila efisiensi penggunaan masih di atas 50%.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan, dapat  disimpulkan  bahwa  konsentrasi  kitosan  dan konsentrasi bromelin berpengaruh terhadap jumlah enzim yang teramobil serta aktivitasnya. Kondisi optimum dari variabel  yang  dilakukan  pada  amobilisasi  enzim bromelin  didapatkan  pada  konsentrasi  kitosan  250,4  mg dan  konsentrasi  enzim  10  mg  dengan  total  enzim teramobil    9,5417  mg  dan  aktivitas  enzim  dalam  10  mg enzim  amobil  sebesar  86,2067  Unit.  Uji  aktivitas  enzim amobil  maksimum  pada  konsentrasi  substrat  3000  ppm dan  perulangan  penggunaan  enzim  amobil  dapat digunakan hingga enam kali dengan efisiensi 57,69%.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  berterima  kasih  kepada  Bapak  Drs.  Refdinal Nawfa,  M.S.  selaku  dosen  pembimbing  serta  Kepala Laboratorium Mikroorganisme ITS dan Bapak Adi Setyo Purnomo,  M.Sc.,  Ph.D.  yang  telah  memberikan  izin menggunakan  sarana  dan  prasarana  laboratorium sehingga penelitian ini bisa terlaksana dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Chaurasiya,  R.S.  dan  Hebbar,  H.U.  (2013).  Extraction  of Bromelain  from  Pineapple  Core  and  Purification  by  RME  and Precipitation  Methods. Separation  and  Purification  Technology 111: 90-97.
[2] Ferdiansyah,  V.  (2005).  Pemanfaatan  Kitosan  dari  Cangkang Udang  sebagai  Matriks  Penyangga  pada  Imobilisasi  Enzim Protease. Skripsi. Institut Pertanian Bogor.
[3] Goldstein,  L.  dan  Menecke,  G.  (1976).  The  Chemistry  of Enzyme Immobilization. Applied Biochemistry and Bioengineering Vol.1 . New York: Academi Press.
[4] Krajewska, B. (2004). Application of Chitin-and Chitosan-based Material  for  Enzyme  Immobilizations:  a  Review.  Enzyme  and Microbial  Technology. Enzyme  and  Microbial  Technology 35: 126-139.
[5] Kumari,  S.,  Rath,  P.,  Kumar,  A.S.H.  dan  Tiwari,  T.N.  (2015). Extraction  and  Characterization  of  Chitin  and  Chitosan  from Fishery Waste by Chemical Method. Environmental Technology & Innovation. Environmental Technology & Innovation 3: 77-85.
[6] Maryam,  S.  (2009).  Ekstrak  Enzim  Bromelin  dari  Buah  Nanas ( Ananas sativus Schult .) dan Pemanfaatannya pada Isolasi DNA. Skripsi . Universitas Negeri Semarang.
[7] Roosdiana,  A.,  Setianingsih,  T.,  Mardiana,  D.  dan  Suratmo. (2009). Characterization of Immobilized Lipase in
Aluminosilicate  for  Lactosyl  Palmitate  Synthesis. Indonesia Journal Chemical 9: 201-205.
[8] Salahudin,  F.  (2011).  Pengaruh  Bahan  Pengendap  pada  Isolasi Enzim Bromelin dari Bonggol Nanas. Biopropal Industri Vol.02, No.01 .
[9] Thate,  M.R.  (2004).  Synthesis  and  Antibacterial  Assessment  of Water-Solube  Hydrophobic  Chitosan  Derivatives  Bearing Quaternary Ammonium Functionality. Disertasi . Louisiana.
[10] Zhu,  J.  dan  Sun,  G.  (2012).  Lipase  Immobilization  on Glutaraldehyde-Activated Nanofibrous Membranes for Improved Enzyme  Stabilities  and  Activities. Reactive  &  Functional Polymers 72: 839-845.