## Livestock and Animal Research
Accredited by Directorate General of Strengthening for Research and Development No. 10/E/KPT/2019
Open Access Livest. Anim. Res. , November 2022, 20(3): 231-242
p-ISSN 2721-5326 e-ISSN 2721-7086 https://doi.org/10.20961/lar.v20i3.58294

## Original Article
Penambahan inulin dan Lactobacillus acidophilu s dalam pakan menggunakan sumber protein mikropartikel terhadap pertumbuhan tulang broiler
Lilik Krismiyanto 1,* , Nyoman Suthama 1 , Bambang Sukamto 1 , Azki Azhari Azmi 2
1 Departemen Peternakan, Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang, 50275
2 Program Studi S1 Peternakan, Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang, 50275 * Correspondence: lilikkrismiyanto@lecturer.undip.ac.id
Received: January 10 th , 2022; Accepted: July 25 th , 2022; Published online: November 4 th , 2022

## Abstrak
Tujuan: Tujuan penelitian yaitu untuk mengkaji pengaruh kombinasi inulin dari ekstrak umbi dahlia (Dahlia  variabilis) dan Lactobacillus  acidophilus dalam  pakan  yang  memanfaatkan  sumber  protein mikropartikel  terhadap  populasi  bakteri,  pH  usus  halus,  kecernaan  protein,  retensi  kalsium  (Ca), panjang  dan  bobot  tulang,  massa  Ca  tulang,  rasio  daging-tulang  dan  pertambahan  bobot  badan broiler.
Metode: Day old chicks (DOC) broiler strain Cobb unsex sebanyak 216 ekor dengan rata – rata bobot badan 42,62 ± 0,20 g/ekor sebagai ternak percobaan. Penelitian disusun berdasarkan rancangan acak lengkap (RAL) pola faktorial 3 × 3 dengan 3 ulangan dan masing – masing 8 ekor. Faktor A inulin dari inulin ekstrak umbi dahlia/IEUD 3 level yaitu A1 (0%), A2 (0,58%), dan A3 (1,16%). Faktor B L. acidophilus 3 level yaitu B1 (0%), B2 (0,6%), dan B3 (1,2%). Parameter yang diukur meliputi populasi bakteri asalam laktat, pH usus halus, populasi coliform , retensi Ca, panjang dan bobot tulang, massa Ca tulang, rasio daging-tulang dan pertambahan bobot badan. Data terolah menggunakan uji sidik ragam pada taraf 5% dan uji beda lanjut Duncan pada taraf 5%.
Hasil: Hasil penelitian menunjukkan bahwa kombinasi IEUD dan L. acidophilus yang ditambahkan pada  pakan  mengandung  sumber  protein  mikropartikel  menunjukkan  interaksi  nyata  (P<0,05) terhadap populasi bakteri, pH usus halus, kecernaan protein, retensi Ca, massa Ca tulang, panjang tibia, bobot tulang femur dan tibia, rasio daging-tulang serta pertambahan bobot badan, tetapi tidak adanya  interaksi  terhadap  panjang  femur.  Perlakuan  pada  masing-masing  faktor  A  dan  B  tidak berpengaruh nyata (P>0,05) terhadap panjang femur.
Kesimpulan: Penambahan kombinasi inulin ekstrak umbi dahlia pada level 1,16% dan L. acidophilus sebanyak  1,2%  pada  pakan  menggunakan  sumber  protein  mikropartikel  dapat  meningkatkan populasi BAL, kecernaan protein, retensi kalsium, bobot tulang femur dan tibia, rasio daging tulang, pertambahan bobot badan broiler serta menurunkan pH usus halus dan populasi coliform , namun menghasilkan panjang tulang femur sama panjang.
Kata Kunci: Broiler; Inulin; Lactobacillus acidophilus ; Pertumbuhan tulang; Protein mikropartikel
Abstract
Objective: This  study  aimed  to  examine  the  effect  of  the  combination  of  inulin  from  dahlia  tuber extract ( Dahlia variabilis ) and Lactobacillus acidophilus in rations using microparticle protein sources on
bacteria population, pH of intestinal, protein digestibility, calcium (Ca) retention, bone length, and weight, bone Ca mass, bone-meat ratio and body weight gain in broiler chickens.
Methods: The livestock used were 216-day old chicks (DOC) Cobb strain broiler chickens with an average body weight of 42,62 ± 0,20 g. The study was arranged based on a completely randomized design (CRD) with a 3 × 3 factorial pattern with 3 replications and 8 bird each. Factor A inulin from inulin from dahlia tuber extract/IDTE 3 levels, namely A1 (0%), A2 (0,58%), and A3 (1,16%). Factor B L.  acidophilus 3  levels,  namely  B1  (0%),  B2  (0,6%),  and  B3  (1,2%).  Parameters  measured  included bacteria  population,  pH  of  intestinal,  protein  digestibility,  Ca  retention,  bone  length,  and  weight, bone Ca mass, meat-bone ratio and body weight gain, but there is no interaction with femur length. The data was processed using the variance test at the 5% level and Duncan's further difference test at the 5% level.
Results: The results showed that the combination of IDTE and L. acidophilus added to feed containing a protein source of microparticles showed a significant interaction (P<0,05) on bacteri population, pH of intestinal, protein digestibility, Ca retention, bone length, and weight, bone Ca mass, and meat-bone ratio. The treatment of each factor A and B had no significant effect (P>0,05) on the length of the femur. Conclusions: The addition of a combination of dahlia tuber extract inulin at the level of 1,16% and L. acidophilus as much as 1,2% of a diet using microparticle protein sources increased lactic acid bacteria population, protein digestibility, calcium retention, femur and tibia bone  weight, bone meat ratio, body weight gain in broiler chickens and lower the pH of the small intestine and coliform population, but resulted in long femur bones.
Keywords: Broiler chicken; Inulin; Lactobacillus acidophilus ; Bone growth ; Microparticle protein

## PENDAHULUAN
Broiler  diberi  pakan  mengandung feed additive berupa antibiotic growth promotor (AGP) agar memiliki laju pertumbuhan cepat. Namun, penggunaan antibiotik sebagai AGP dilarang oleh  pemerintah  melalui  Surat  Keputusan Peraturan Menteri Pertanian Republik Indonesia Nomor 14 tahun 2017 tentang klasifikasi obat hewan. Dampak negatif penggunaan antibiotik dapat  menimbulkan  resistensi  bakteri  dan memunculkan  residu  pada  produk  ternak yang  tidak  baik  untuk  kesehatan  konsumen [1].  Larangan  penggunaan  AGP  mendorong para ahli nutrisi untuk mencari bahan alternatif pengganti  seperti  prebiotik  dan  probiotik. Penggunaan aditif alami tersebut diharapkan dapat memperbaiki efisiensi penggunaan pakan dan meningkatkan produktivitas ternak.
Feed additive diformulasikan pada pakan yang  mengandung  berbagai  sumber  seperti energi,  protein,  mineral  dan  vitamin.  Salah satu  sumber  protein  yang  menyumbangkan biaya  bahan  pakan  tinggi  yaitu  bungkil kedelai dan tepung ikan. Bungkil kedelai dan tepung ikan merupakan bahan pakan sumber protein  yang  digunakan  sebagai  komponen penyusun pakan ayam. Penggunaan bahan pakan sumber protein yang biasanya berharga mahal,
apalagi dalam jumlah banyak dapat meningkatkan biaya pakan. Kondisi ini menyebabkan diperlukan upaya peningkatan efisiensi penggunaan bahan pakan  sumber  protein  melalui  pengolahan menjadi  mikropartikel.  Hasil  penelitian  [2] bahwa  pakan  dalam  bentuk mash dan  pellet ukuran  partikel  0,10,  0,20,  0,35  dan  0,45 ɥ m menghasilkan  ukuran  lebih  kecil,  ukuran partikel  0,56  dan  0,80 ɥ m  menghasilkan ukuran sedang, dan ukuran 1, 1,6 dan 2,5 ɥ m menghasilkan  ukuran  besar.  Ukuran  partikel diperkecil dapat meningkatkan jumlah partikel dan luas permukaan bahan pakan berdampak positif terhadap gizzard dan saluran pencernaan [3].  Kelebihan  dari  mikropartikel  yaitu meningkatkan  efisiensi  pakan,  lebih  mudah dicerna  dan  diserap  saluran  pencernaan  [4]. Penggunaan sumber protein berbentuk bungkil kedelai  serta  tepung  ikan  mikropartikel  bisa meningkatan kecernaan protein, asam amino serta retensi Ca pada broiler [5].
Aditif  serat  alami  yang  digunakan  pada penelitian ini berasal dari umbi dahlia disebut inulin  yang  ditambahkan  ke  dalam  pakan menggunakan  protein  mikropartikel.  Dahlia ( Dahlia  variabilis )  merupakan  tanaman  hias yang banyak dibudidayakan di daerah dataran tinggi di Indonesia. Tanaman dahlia dimanfaatkan sebagai  penghasil  bunga  potong,  sedangkan
umbinya  dibuang  sebagai  limbah.  Limbah umbi  dahlia  terdapat  manfaat  mengandung sumber  karbohidrat  berupa  inulin  [6]. Berdasarkan  hasil  laboratorium  Saraswanti Bogor  bahwa  kadar  inulin  dari  umbi  dahlia kering  sebesar  88,95%  dari  total  karbohidrat. Inulin digunakan sebagai substrat atau makanan untuk bakteri menguntungkan yang berdampak terhadap  kesehatan  dan  keseimbangan  bakteri di dalam saluran pencernaan. Inulin dari umbi dahlia  bisa  dimanfaatkan  sebagai  prebiotik. Umbi dahlia sebagai sumber inulin diberikan kepada ternak berupa ekstrak kering berbentuk tepung yang berwarna putih abu - abu.
Prebiotik inulin adalah polimer karbohidrat yang  tidak  di  cerna  oleh  ternak  inang,  tetapi bisa  dimanfaatkan  oleh  bakteri  baik  dalam usus.  Monomer  fruktosa  yang  dihubungkan oleh  jalinan β (2-1)  fruktosil  menimbulkan inulin  tidak  bisa  didegradasi  oleh  enzim pencernaan [7]. Inulin tidak di cerna oleh enzim dalam saluran pencernaan, sehingga tidak terjadi pergantian struktur dalam usus  namun sebagai substrat  yang  bisa  difermentasi  oleh  bakteri menguntungkan.  Pemberian  inulin  dapat meningkatkan  perkembangan  bakteri  asam laktat  (BAL)  dan  menghambat  bakteri  patogen, sehingga  berdampak  positif  pada  kesehatan saluran  pencernaan  dan  penyerapan  nutrisi lebih baik [8]. Pemberian prebiotik memberikan efek lebih baik bila disertai dengan penambahan probiotik.  Penambahan  probiotik  berupa L. acidophilus diharapkan meningkatkan keberadaan bakteri  asam  laktat  karena  prebiotik  inulin merupakan sumber  “makanan”  bagi bakteri probiotik.  Probiotik  dapat  meningkatkan kecernaan nutrisi dan menurunkan kolesterol [9]. L. acidophilus termasuk ke dalam BAL. Bakteri asam  laktat  bisa memproduksi asam organik dalam bentuk asam laktat dan short chain fatty acid (SCFA)  yang  bisa  mengubah  pH  dan menghambat pertumbuhan bakteri patogen [10].
Pemberian pakan dengan sumber protein mikropartikel (tepung ikan dan bungkil kedelai) pada  broiler  dapat  meningkatkan  efisiensi penggunaan  nutrien  bisa  didukung  dengan penambahan zat aditif dalam bentuk kombinasi IEUD  dan L.  acidophilus .  Pemberian  IEUD sebagai penyedia substrat berupa inulin untuk difermentasi,  sehingga  menambah  populasi bakteri  asam  laktat.  Pemberian L.  acidophilus mempunyai kemampuan mengubah karbohidrat
dari inulin dalam bentuk asam laktat dan SCFA sehingga  mengubah  suasana  pH  usus  halus menjadi rendah dan menghambat populasi bakteri  patogen.  Kondisi  saluran  pencernaan yang sehat mencerminkan perluasan vili usus halus  meningkat  sehingga  menghasilkan keseimbangan bakteri dan mampu meningkatkan aktivitas enzim, khususnya kecernaan protein meningkat.  Protein  berperan  penting  mengikat kalsium dalam bentuk calcium binding protein (CaBP) untuk melewati mukosa usus. Kalsium yang  diabsorsi  98%  dideposisi  pada  tulang dan hanya 2% dalam cairan ekstra seluler [11]. Kalsium yang diabsorsi didistribusikan untuk pertumbuhan tulang sebagai penyokong tubuh dan tempat melekat daging yang akhirnya berdampak positif terhadap produktivitas pada broiler.
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengevaluasi pengaruh kombinasi inulin dari ekstrak  umbi  dahlia  dan L.  acidophilus dalam pakan  yang  menggunakan  sumber  protein mikropartikel  terhadap  retensi  Ca,  panjang dan bobot tulang, massa Ca tulang dan rasio daging-tulang pada broiler.

## MATERIALS AND METHODS

## Ternak, pakan dan peralatan penelitian
Day  old  chick broiler  strain Cobb  unsex sebanyak  216  ekor  dengan  rata-rata  bobot badan  awal  42,62  ±  0,20  g  sebagai  ternak percobaan. Kombinasi IEUD dan L. acidophilus sebagai  perlakuan.  Pemeliharaan  awal menggunakan  kandang  pen  yang  berjumlah 27 buah dengan ukuran 80 × 80 cm. Kandang koloni dilengkapi tempat pakan, tempat minum dan lampu bohlam ukuran 50 watt. Alat yang dibutuhkan untuk menampung ekskreta pada saat  total  koleksi  yaitu  kardus  dan  trashbag, serta timbangan untuk menimbang ekskreta.
Ayam  pada  umur  satu  minggu  pertama diberi  pakan starter komersial  dengan  kode pakan CP 511 produksi PT Charoen Popkphand. Pakan  perlakuan  diberikan  setelah  umur  1 minggu  berupa  pakan  basal  yang  ditambah kombinasi inulin dari ekstrak umbi dahlia dan L. acidophilus . Susunan bahan pakan dan kadar nutrien tertera pada Tabel 1. Pemberian pakan dan  air  minum  diberikan  secara ad  libitum . Ayam  umur  8 – 14  hari  merupakan  periode adaptasi diberi campuran pakan komersial dan
pakan basal pada hari ke-8 dengan perbandingan pemberian  75:25,  hari  ke-9  50:50,  hari  ke-10 25:75,  dan  hari  ke-11  sampai  35  diberi  100% pakan  basal.  Selanjutnya,  perlakuan  selama masa  adaptasi  diberikan  dalam  pakan  mulai umur 8 sampai 35 hari.

## Rancangan penelitian dan perlakuan
Penelitian disusun berdasarkan rancangan acak lengkap (RAL) dengan pola faktorial 3 × 3  dengan  3  ulangan,  dan  masing – masing terdiri dari 8 ekor. Faktor A, 3 level inulin dari ekstrak  umbi  dahlia  (IEUD)  mengacu  hasil penelitian  [8],  meliputi  A1  (0%),  A2  (0,58%), dan A3 (1,16%). Faktor B, 3 level L. acidophilus berdasarkan hasil  penelitian  [16]  meliputi  B1 (0%),  B2  (0,6%),  dan  B3  (1,2%).  Kombinasi perlakuan yang diuji sebagai berikut: A1B1 = pakan tanpa IEUD dan L. acidophilus A1B2 = pakan + IEUD 0% dan L. acidophilus 0,6%
A1B3 = pakan + IEUD 0% dan L. acidophilus 1,2%
A2B1 = pakan + IEUD 0,58% dan L. acidophilus 0%
A2B2 = pakan + IEUD 0,58% dan L. acidophilus 0,6%
A2B3 = pakan + IEUD 0,58% dan L. acidophilus 1,2%
A3B1 = pakan + IEUD 1,16% dan L. acidophilus 0%
A3B2 = pakan + IEUD 1,16% dan L. acidophilus 0,6%
A3B3 = pakan + IEUD 1,16% dan L. acidophilus 1,2%

## Pembuatan  ektrak  umbi  dahlia  dan  protein mikropartikel
Pembuatan  ekstrak  umbi  dahlia  diawali dengan  memotong  umbi  tipis-tipis  dengan diameter ± 1 mm, kemudian dikeringkan pada sinar  matahari  sampai  kering  udara  dan dihaluskan  menggunakan  grinder.  Metode ekstraksi  berdasarkan  penelitian  [12]  yaitu tepung  ekstrak  umbi  dahlia  sebanyak  400  g ditambahkan  2  liter  alkohol  70%  dan  2  liter aquades, kemudian direbus menggunakan suhu 80 0 C selama 30 menit. Kemudian disaring untuk memisahkan larutan dan residu, larutan ditampung dalam wadah toples dan didiamkan selama 1 hari di dalam kulkas pada suhu 4 0 C. Selanjutnya, jika supernatan dan filtrat terpisah, supernatan diambil dan dikeringkan menggunakan oven pada suhu 50 0 C selama 24 jam, kemudian sampel yang kering digrinder hingga menjadi tepung. Kadar nutrien ekstrak  umbi  dahlia  tertera  pada  Tabel  2. Penambahan  inulin  dan L.  acidophilus diberikan tiap pagi pada ransum dengan jumlah ± 20 g, jika  pakan  yang  mengandung  aditif  habis kemudian diberikan pakan tanpa aditif.
Pembuatan  sumber  protein  mikropartikel menggunakan dua bahan pakan protein yaitu tepung  ikan  dan  bungkil  kedelai.  Bungkil kedelai digrinder terlebih dahulu, kemudian diayak dengan ukuran mess 100, sedangkan
Tabel 1. Susunan  bahan  pakan  dan  kadar nutrien pakan penelitian Bahan Pakan Komposisi (%) Jagung kuning 54,48 Bekatul 15,26 Bungkil kedelai mikropartikel 20,41 Tepung ikan mikropartikel 9,00 CaCO 3 0,30 Premix 0,25 Lisin 0,10 Metionin 0,20 Total 100,00 Kandungan nutrien (%) Energi metabolis**(kkal/kg) 3.093,69 Protein* 18,30 Lemak* 4,01 Serat kasar* 5,88 Kalsium* 1,14 Fosfor* 0,60 Lisin*** 1,03 Metionin*** 0,46 Arginin*** 1,30  Hasil  analisis  pakan  di  Laboratorium  Ilmu Nutrisi  dan  Pakan,  Fakultas  Peternakan  dan Pertanian, Universitas Diponegoro (2021).
**    Perhitungan menggunakan rumus [27].
*** - Hasil analisis pakan di Laboratorium BPMSP, Bekasi (2021).
Tabel 2. Kadar nutrien eksktrak umbi dahlia Komponen nutrien Kadar nutrien (%) Air* 8,12 Abu* 0,11 Protein kasar* 2,11 Lemak kasar* 0,60 Serat kasar* 0,07 Bahan  ekstrak  tanpa nitrogen** 88,99 Karbohidrat*** 91,03 Inulin*** 88,95
 Hasil analisis eksktrak di Laboratorium Ilmu Nutrisi dan Pakan, Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro (2021).
**    Perhitungan menggunakan rumus [27].
*** .- Hasil analisis pakan di Laboratorium Saraswanti, Bogor (2021).
tepung  ikan  langsung  diayak  tidak  melalui proses grinding. Tepung bungkil kedelai dan tepung  ikan  dilarutkan  dalam.aquades.dan virgin coconut oil (VCO) dengan perbandingan 50 : 200 : 1 (50 g bahan, 200 ml aquades, dan 1 ml  VCO),  kemudian  dilakukan  ultrasonik menggunakan  alat ultrasound  transducer selama 60  menit  [5].  Kedua  sumber  protein  yang disonifikasi  kemudian  dikeringkan  di  bawah sinar  matahari.  Hasil  uji particle  size  analysis tepung  ikan  sebesar  1,78 ɥ m  dan  bungkil kedelai sebesar 0,53 ɥ m.

## Pengambilan data dan pengukuran
Parameter yang diukur adalah retensi Ca, panjang  dan  bobot  bagian  tulang  femur  dan tibia  (Ilustrasi  1),  massa  Ca  tulang  dan  rasio daging-tulang. Data retensi Ca diperoleh dengan menampung  ekskreta  melalui  metode  total koleksi ekskreta [29] selama 4 hari pada umur 32 – 35  hari  dengan  menggunakan  indikator Fe 2 O 3 ,  kemudian  dikeringkan  dan  dianalisis untuk mengetahui kandungan Ca. Daging dan tulang  dipisah  untuk  mengukur  bobot  dan panjang tulang. Tulang ditimbang menggunakan timbangan  digital  dengan  ketelitian  0,01  g untuk menentukan berat dan pita ukur untuk menentukan panjang tibia dan femur. Retensi
Ca  dihitung  menggunakan  rumus  menurut [13] sebagai berikut:
Retensi Ca (g) = Konsumsi Ca (g) – jumlah Ca Retensi Ca (g) = ekskreta (g)
Rumus  perhitungan  massa  Ca  tulang  mengacu pada penelitian [30] sebagai berikut:
Massa Ca tulang (g) = Kadar Ca tulang (%) x Massa Ca tulang (g) = bobot tulang (g)

## Analisis data
Data  yang  telah  diolah  diuji  variannya dan uji Duncan pada taraf 5% menggunakan program  Statistical  Product  and  Service Solutions (SPSS) versi 25 [14].

## HASIL
Pemberian pakan yang mengandung sumber protein  mikropartikel  yang  ditambahkan  IEUD dan L. acidophilus menunjukkan interaksi nyata (P<0,05) terhadap populasi BAL, pH dan coliform (Tabel 3). Populasi BAL pada perlakuan A3B3 nyata (P<0,05) paling tinggi dibandingkan perlakuan lainnya. Begitu sebaliknya, perlakuan A1B1 nyata paling rendah (P<0,05) dibandingkan
Tabel 3. Populasi  bakteri  dan  pH  usus  halus  pada  broiler  yang  diberi  pakan  sumber  protein mikropartikel dengan penambahan kombinasi IEUD dan L. acidophillus Perlakuan Parameter BAL (10 10 cfu/g) pH Coliform (10 5 cfu/g) Level IEUD x L. acidophillus A1B1 7,55±0,20 f 6,23±0,03 a 7,70±0,54 a A1B2 11,56±0,66 d 5,99±0,04 b 5,29±0,55 bc A1B3 14,39±0,91 c 5,85±0,05 cd 4,94±0,13 bc A2B1 9,53±0,37 e 5,99±0,06 b 5,58±0,31 b A2B2 14,68±0,76 c 5,86±0,03 cd 4,61±0,15 c A2B3 17,00±0,53 b 5,83±0,03 cd 3,57±0,25 d A3B1 11,09±0,45 d 5,91±0,04 bc 5,25±0,14 bc A3B2 15,09±0,59 c 5,79±0,04 d 3,60±0,15 d A3B3 20,32±0,55 a 5,70±0,02 e 2,76±0,21 e Level IEUD A1 11,16±2,81 c 6,02±0,14 a 6,08±1,46 a A2 13,74±3,12 b 5,89±0,08 ab 4,58±0,85 b A3 15,50±3,78 a 5,80±0,09 b 3,87±1,05 b Level L. acidophillus B1 9,39±1,45 c 6,03±0,13 a 6,29±1,09 a B2 13,77±1,58 b 5,88±0,09 ab 4,50±0,77 b B3 17,24±2,43 a 5,80±0,08 b 3,76±0,91 b
Superskrip berbeda pada kolom dan baris yang sama menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05).
perlakuan  lainnya.  Populasi coliform dan  pH usus halus pada perlakuan A3B3 paling rendah (P<0,05)  dibandingkan  perlakuan  lainnya. Sebaliknya pada perlakuan A1B1 menunjukkan hasil paling tinggi dibandingkan perlakuan lainnya.
Penambahan IEUD dan L. acidophilus dalam pakan  mengandung  protein  mikropartikel menunjukkan  interaksi  nyata  (P<0,05)  terhadap kecernaan protein dan retensi kalsium (Tabel 4).  Kecernaan  protein  dan  retensi  Ca  pada perlakuan  A3B3  nyata  (P<0,05)  paling  tinggi diikuti  oleh A3B2, meskipun keduanya tidak berbeda  dengan  A2B2  dan  A2B3  (Tabel  4). Sebaliknya, kecernaan protein dan retensi Ca pada  A1B1  paling  rendah  diikuti  oleh  A1B1, A1B2,  dan  A1B3,  dan  berbeda  nyata (P<0,05) terhadap semua kombinasi perlakuan lainnya.
Massa Ca tulang pada broiler menunjukkan interaksi  nyata  (P<0,05)  akibat  ditambahkan kombinasi  IEUD  dan L.  acidophilus dalam pakan  mengandung  protein  mikropartikel. Dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya, perlakuan  A3B3  paling  tinggi  (P<0,05), sebaliknya perlakuan A1B1 paling rendah.
Penambahan  kombinasi  IEUD  dan L. acidophilus tidak menunjukkan interaksi (P>0,05) terhadap panjang tulang femur, tetapi adanya interaksi  (P<0,05)  terhadap  panjang  tulang
tibia (Tabel 5). Kombinasi IEUD 1,16% dan L. acidophilus 1,2%  (A3B3)  pada  panjang  tulang tibia nyata paling tinggi (P<0,05) diikuti perlakuan A3B2,  A3B1,  A2B3,  dan  A1B3,  sedangkan perlakuan  A1B1  tidak  berbeda  dengan  A1B2, A1B3, A2B1, A2B3, A3B1, dan A3B2.
Hasil  pada  perlakuan  kombinasi  IEUD
1,16% dan L. acidophilus 1,2% (A3B3) menunjukkan interaksi nyata (P<0,05) terhadap bobot tulang femur dan tibia (Tabel 5). Bobot tulang femur pada  perlakuan  A3B3  nyata  (P<0,05)  paling tinggi, meskipun tidak berbeda nyata dengan A2B3 dan A3B2. Sebaliknya, perlakuan A1B1 menghasilkan  bobot  tulang  femur  nyata (P<0,05)  paling  rendah  dan  berbeda  dengan semua  perlakuan  lainnya.  Demikian  pula dengan  bobot  tulang  tibia  perlakuan  A3B3 paling  tinggi,  tetapi  tidak  berbeda  dengan perlakuan A2B3, A2B2, dan A1B3 dan paling rendah pada perlakuan A1B1.
Rasio daging-tulang memperlihatkan bahwa adanya interaksi nyata (P<0,05) akibat ditambahkan kombinasi IEUD 1,16% dan L. acidophilus 1,2% (A3B3). Perlakuan A3B3 menunjukkan pengaruh paling tinggi, walaupun sama dengan perlakuan A3B2, A2B3, dan A2B2. Sebaliknya perlakuan A1B1  dan  A1B2  paling  rendah  dan  tidak berbeda pada perlakuan A1B3 dan A2B1.
Tabel 4. Kecernaan  Protein,  Retensi  kalsium  dan  massa  Ca  tulang  pada  broiler  yang  diberi  pakan sumber protein mikropartikel dengan penambahan kombinasi IEUD dan L. acidophillus Perlakuan Perameter Kecernaan protein (%) Retensi Ca (g) Massa Ca tulang (g) Level IEUD x L. acidophillus A1B1 66,17±1,49 c 0,49±0,03 e 12,97±0,46 e A1B2 78,09±4,42 cd 0,75±0,03 c 15,64±0,43 bc A1B3 80,62±3,55 bcd 0,77±0,03 c 15,66±0,43 bc A2B1 75,29±0,05 d 0,64±0,05 d 14,16±0,59 d A2B2 75,10±4,12 bcd 0,84±0,04 abc 14,67±0,45 cd A2B3 84,88±2,53 ab 0,89±0,03 ab 16,37±0,33 b A3B1 83,42±2,28 abc 0,83±0,06 bc 15,44±0,34 bc A3B2 85,28±1,08 a 0,91±0,05 ab 15,92±0,57 b A3B3 85,64±1,53 a 0,92±0,03 a 17,95±0,51 a Level IEUD A1 74,96±4,15 b 0,67±0,13 b 14,19±1,32 b A2 79,76±4,83 ab 0,79±0,11 b 15,41±1,06 ab A3 84,78±2,54 a 0,88±0,06 a 16,66±1,27 a Level L. acidophillus B1 74,96±4,51 b 0,65±0,15 b 14,76±1,11 b B2 80,82±4,41 a 0,83±0,08 a 15,07±0,68 ab B3 83,71±3,07 a 0,86±0,07 a 16,44±1,38 a
Superskrip berbeda pada kolom dan baris yang sama menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05).
Pertambahan bobot badan pada perlakuan A3B3  tidak  berbeda  nyata  (P>0,05)  dengan A3B2,  tetapi  perlakuan  A3B3  nyata  (P<0,05) lebih tinggi dibandingkan perlakuan lainnya. Begitu  sebaliknya,  perlakuan  A1B1  nyata paling rendah (P<0,05) dibandingkan perlakuan lainnya. Perlakuan A2B3 menunjukkan hasil yang sama dengan perlakuan A2B2 dan A1B3, tetapi perlakuan tersebut lebih tinggi dibandingkan perlakuan A3B1, A2B1 dan A1B2.

## PEMBAHASAN
Perlakuan A3B2 dan A3B3 menghasilkan jumlah  BAL  tinggi  dan  pH  usus  halus  dan populasi patogen ( coliform ) rendah menandakan coliform tidak  tahan  suasana  asam  (Tabel  3). Krismiyanto et  al .  [12]  menyatakan  bahwa pemberian  inulin  dapat  meningkatkan perkembangan BAL dan menurunkan bakteri patogen,  sehingga  meningkatkan  kesehatan saluran pencernaan. Peningkatan BAL karena produksi SCFA berkaitan dengan penurunan pH saluran pencernaan. Kondisi ini mencerminkan bahwa  saluran  pencernaan  lebih  sehat,  dan didasari dengan pemberian ransum menggunakan protein mikropartikel, sehingga berdampak pada
peningkatan kecernaan protein dan retensi Ca meningkat (Tabel 4). Menurut [15], campuran inulin dan Lactobacillus meningkatkan jumlah BAL yang dapat menurunkan pH dan menekan perkembangan  bakteri  patogen.  Efek  tidak langsung  dari  kondisi  ini  berdampak  pada peningkatan aktifitas enzim, sehingga memperbaiki kecernaan dan penyerapan nutrien khususnya protein  dan  kalsium.  Protein  memiliki  peran penting dalam penyerapan Ca untuk pembentukan CaBP di dalam mukosa usus yang selanjutnya dapat ditransportasi ke jaringan target termasuk tulang. Fenomena sejenis seperti pada A3B3 juga terjadi pada perlakuan A2B2 dan A2B3 meskipun efektivitas  lebih  lemah  karena  ketersediaan inulin  dari  ekstrak  umbi  dahlia  lebih  sedikit untuk dapat difermentasi.
Sebaliknya,  pada  perlakuan  A1B1  dan A2B1 (Tabel 4) kebalikan dari kondisi diatas, apalagi  tanpa  kedua  aditif  seperti  A1B1.  Pakan tanpa  ekstrak  umbi  dahlia  dan L.  acidophilus (A1B1)  menghasilkan  retensi  Ca  paling  rendah.
Penurunan  pH  tidak  terjadi  dalam  saluran pencernaan pada perlakuan tersebut menyebabkan bakteri patogen ( E. Coli ) dapat tumbuh dengan baik.  Faradila et  al .  [16]  menyatakan  bahwa kombinasi  umbi  dahlia  dan Lactobacillus
Tabel 5. Panjang,  bobot  tulang  femur  dan  tibia  pada  broiler  yang  diberi  pakan  sumber protein . mikropartikel penambahan kombinasi IEUD dan L. acidophilus Perlakuan Parameter Panjang femur (cm) Panjang tibia (cm) Bobot femur (g) Bobot tibia (g) Level IEUD x L. acidophillus A1B1 9,75±0,2 ns 7,30±0,1 b 11,67±0,9 c 8,33±0,9 d A1B2 9,90±0,4 ns 7,57±0,2 b 17,00±0,8 b 12,00±0,8 bc A1B3 10,57±0,5 ns 7,77±0,2 ab 18,00±1,4 b 12,33±0,5 ab A2B1 10,32±0,5 ns 7,32±0,2 b 17,00±0,8 b 10,32±0,5 c A2B2 10,33±0,5 ns 7,57±0,3 b 18,33±1,2 b 12,33±0,5 ab A2B3 10,38±0,4 ns 7,83±0,5 ab 19,33±1,2 ab 12,67±0,5 ab A3B1 10,62±0,4 ns 7,67±0,2 ab 17,33±0,5 b 11,00±0,9 bc A3B2 10,68±0,9 ns 8,00±0,4 ab 18,67±0,9 ab 11,33±0,8 bc A3B3 10,73±0,9 ns 8,33±0,5 a 20,67±0,9 a 13,67±0,9 a Level IEUD A1 A2 A3
10,07±0,5 ns
10,34±0,5 ns 10,68±0,8 ns 7,55±0,3 b 7,74±0,4 ab 8,00±0,5 a 15,56±2,9 b 18,22±1,5 a 18,89±1,6 a 10,89±1,9 b 11,77±1,2 ab 12,00±1,4 a Level L. acidophillus B1 10,23±0,5 ns 7,43±0,2 ns 15,33±2,7 b 9,85±1,4 b B2 10,30±0,7 ns 7,71±0,4 ns 18,00±1,2 a 11,89±0,7 ab B3 10,56±0,7 ns 7,98±0,5 ns 19,33±1,6 a 12,89±1,0 a
Superskrip berbeda pada kolom dan baris yang sama menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05).
meningkatkan bakteri asam laktat yang dapat menekan  pertumbuhan E.  coli. Kesehatan saluran  pencernaan  yang  kurang  kondusif menyebabkan  terganggunya  kecernaan  dan penyerapan  protein.  Rendahnya  penyerapan protein  berbanding  lurus  dengan  retensi  Ca karena  Ca  diserap  dalam  bentuk  CaBP. Menurut  [11],  kalsium  membutuhkan  protein sebagai pengikat untuk dapat diserap ke dalam mukosa  usus  halus.  Kondisi  ini  tidak mendukung  penyerapan  atau  retensi  Ca seperti terjadi pada perlakuan A1B1 dan A2B1 (Tabel 4).
Massa Ca tulang dengan perlakuan A3B3 mempunyai nilai paling tinggi dibandingkan perlakuan  lainnya  (Tabel  4).  Perlakuan  A3B3 mempunyai  massa  Ca  tulang  yang  tinggi, karena pakan mengandung protein mikropartikel 18%, sehingga bisa diasumsikan semakin tinggi CaBP  yang  terbentuk  maka  Ca  yang  diserap juga  semakin  tinggi.  Setiawati et  al .  [17] menyatakan ketersediaan protein dalam saluran pencernaan membantu proses penyerapan Ca (CaBP)  yang  kemudian  di  deposisikan  pada tulang  dengan  baik.  Kalsium  yang  berikatan dengan protein semakin tinggi, maka deposisi kalsium pada tulang meningkat. Saputro et al . [4] menyatakan semakin banyak kalsium yang dapat diserap maka kalsium yang terdeposisi
pada  tulang  tinggi.  Selain  adanya  kontribusi protein  mikropartikel  terhadap  penyerapan Ca, perlakuan A3B3 dengan ada penambahan IEUD 1,16% dan L. acidophilus 1,2% membantu dalam peningkatan massa Ca tulang.
Pengaruh IEUD sebagai prebiotik dan L. acidophilus sebagai  probiotik  pada  pakan mengandung  protein  mikropartikel  dapat mendukung  peningkatan  populasi  BAL  dan menurunkan populasi bakteri patogen. Bakteri asam laktat dan patogen merupakan indikasi pada pencernaan yang sehat sehingga penyerapan protein  meningkat  dan  berdampak  pada pembentukan CaBP yang tinggi sehingga dapat meningkatkan  retensi  kalsium.  Hajela et  al .
[18]  menyatakan  bahwa  bakteri Lactobacillus sebagai probiotik memiliki peranan yang baik untuk  kesehatan  tubuh  terhadap  inangnya.
Perlakuan  yang  lain  (A3B2-A1B2)  dengan penambahan IEUD dan L. acidophilus pada pakan mengandung  protein  mikropartikel  memiliki dampak positif terhadap retensi kalsium, karena selain berikatan dengan protein (CaBP), kalsium juga  dipengaruhi  perubahan  pH  sehingga meningkatkan retensi kalsium dan massa kalsium tulang  lebih  tinggi.  Khan et  al . [19]  menyatakan bahwa  perubahan  pH  diakibatkan  produksi SCFA  selain  berdampak  terhadap  peningkatan populasi bakteri menguntungkan dan menghambat
Tabel 6. Rasio  daging-tulang  dan  pertambahan  bobot  badan  broiler  yang  diberi  pakan sumber . protein mikropartikel penambahan kombinasi  IEUD dan L. acidophilus Perlakuan Parameter Rasio daging tulang PBB (g/ekor) Level IEUD x L. acidophillus A1B1 2,52±0,1 c 1.158,52±13,95 f A1B2 2,59±0,1 c 1.262,48±17,79 de A1B3 2,86±0,3 bc 1.298,22±17,70 bc A2B1 3,05±0,4 bc 1.248,01±15,12 e A2B2 3,25±0,2 ab 1.282,35±15,18 cd A2B3 3,37±0,1 ab 1.313,90±16,18 bc A3B1 3,07±0,3 bc 1.248,50±13,45 e A3B2 3,31±0,1 ab 1.325,62±11,57 ab A3B3 3,45±0,1 a 1.354,57±16,41 a Level IEUD A1 A2 A3 2,66±0,3 b 3,22±0,3 a
3,27±0,3 a
1.239,74±30,84 b 1.281,42±32,74 a 1.309,56±36,08 a Level L. acidophillus B1 2,88±0,4 b 1.218,34±33,95 c B2 3,05±0,3 ab 1.290,15±33,19 b B3 3,23±0,3 a 1.322,23±25,94 a
Superskrip berbeda pada kolom dan baris yang sama menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05).
bakteri patogen, juga meningkatan  penyerapan mineral dan kepadatan tulang.
Pertumbuhan tulang dalam hal ini panjang tulang femur yang sama, disebabkan mineralisasi di daerah diafisis pada tulang femur lebih rendah dan lambat dibandingkan tulang tibia, peristiwa ini terjadi merata pada semua perlakuan. Tulang bagian femur mudah sensitif dibandingkan tulang tibia  terhadap  perubahan  yang  diberikan pada broiler [19]. Faktor yang mempengaruhi pertumbuhan tulang adalah kandungan kalsium didukung oleh komponen protein dan energi pakan.  Aurora et  al .  [20]  menyatakan  bahwa kandungan protein dan energi yang tinggi dalam pakan dapat meningkatkan pertumbuhan tulang lebih  cepat,  kaitannya  dengan  regulasi  Ca. Kondisi pada penelitian ini meskipun kombinasi IEUD dan L. acidophilus menyebabkan perbedaan asupan nutrisi,  terutama  protein dan  retensi Ca (Tabel  4),  tetapi  berpengaruh  sama  terhadap panjang femur.
Pakan dengan kandungan Ca 1,14% dan P 0,66% sudah memenuhi kebutuhan Ca dan P untuk pertumbuhan tulang. Kebutuhan Ca antara  0,98 – 1,22%  dan  P  antara  0,65 – 0,74% sudah memenuhi kebutuhan [28]. Pertumbuhan tulang  sangat  membutuhkan  suplai  mineral yang seimbang, seperti halnya Ca dan P. [20]. Peningkatan  penyerapan  Ca  terjadi  akibat pemberian kombinasi IEUD dan L. acidophilus , sebagaimana telah dibahas sebelumnya. Namun, hasil penelitiaan ini dapat diasumsikan bahwa peningkatan  penyerapan  Ca  (Tabel  4)  lebih dominan digunakan untuk pembentukan bobot tulang (Tabel 5).
Bobot  tulang  femur  lebih  tinggi dipengaruhi  oleh  peningkatan  penyerapan kalsium dan protein, karena pakan menggunakan  protein  mikropartikel  yang dikombinasi  oleh  pemberian  IEUD  dan L. acidophilus . Pemberian kombinasi IEUD pada level  1,16%  dan L.  acidophilus 1,2%  dapat meningkatkan  retensi  Ca  (Tabel  4)  dan kecernaan  protein  (85,27%  (A3B3)  vs  66,17- 83,42%  (A1B1-A3B2)).  Saputro et  al .  [4] menyatakan  bahwa  penggunaan  prebiotik dan probiotik dalam pakan dapat meningkatkan penyerapan mineral, khususnya  Ca,  melalui  penurunan  pH saluran pencernaan. Weglarz dan Angel [21] menyatakan  bahwa  protein  berperan  dalam penyerapan  Ca  dengan  mengikat  kalsium
dalam  bentuk  CaBP . Kalsium  yang  diserap dan    diedarkan  melalui  sirkulasi  darah  ke berbagai jaringan tubuh yang membutuhkan diantaranya  tulang  dan  otot  daging. Selanjutnya,  kalsium  memberi  kontribusi dalam  meningkatkan  aktivitas  Ca-ATPase yang  berkaitan  dengan  bobot  tulang  femur. Wahju  [22]  menyatakan  bahwa  konsentrasi Ca  yang  meningkat  dapat  merangsang aktivitas Ca-ATPase, sehingga proses mineralisasi matrik tulang meningkat.
Penyerapan  protein  meningkat  akibat penggunaan pakan dengan protein mikropartikel memberi kontibusi positif terhadap pembentukan matriks  kolagen.  Menurut  [19],  peningkatan kecernaan  protein  memberikan  pengaruh terhadap  pembentukan  matriks  kolagen. Pembentukan  matriks  kolagen  merupakan bagian dari proses transportasi protein pengikat Ca dan pembawa Ca, untuk dideposisikan ke dalam  tulang.  Kolagen  merupakan  indikator dari kemampuan deposisi Ca untuk pembentukan matriks  tulang.  Patriani  dan  Hafid  [25] menyatakan  bahwa  penyerapan  atau  retensi Ca yang tinggi dapat meningkatkan deposisi Ca pada bobot tulang.
Rasio daging dan tulang diartikan sebagai perbandingan bobot daging dan tulang dalam karkas.  Rasio daging  dan  tulang  dapat  menjadi indikator tinggi rendahnya daging per satuan tulang  dalam  karkas.  Faktor  lain  yang  dapat mempengaruhi rasio daging dan tulang adalah deposisi  Ca  dan  protein.  Retensi  Ca  yang ditunjukkan pada Tabel 2 pada perlakuan A3B3 mengalami peningkatan yang tinggi dan sejalan pada massa Ca tulang terjadi peningkatan pula di A3B3 (Tabel 4). Menurut [23], deposisi protein secara  kimiawi  didukung  oleh  Ca  dalam bentuk ion dan CaNP dalam daging. Kalsium memiliki peran dalam deposisi protein terutama Ca yang diserap melalui usus halus. Penyerapan kalsium  melalui  pembuluh  darah  dan ditransportasikan ke masing-masing jaringan yang  membutuhkan  (tulang  dan  daging), proses penyerapan kalsium dibagi dalam tiga bentuk yaitu ion bebas, terikat dengan protein, dan ion yang tidak dapat larut [4].
Hasil penelitian ini juga didukung bobot tulang femur dan tibia (Tabel 3) yang merupakan bagian  tulang  karkas  penompang  tubuh. Penambahan  IEUP  dan L.  acidophilus melalui proses  kompetisi  dengan  bakteri,  ketahanan
terhadap paparan enzim pencernaan, fermentasi dan  penyerapan  nutrien  mampu  menghasilkan deposisi  Ca  pada  tulang  yang  tinggi  (A3B3). Sebaliknya,  Wahyuni et  al .  [24]  menyatakan bahwa  jumlah  daging  dalam  karkas  tinggi dapat  memperlihatkan  jumlah  tulang  karkas rendah.  Perubahan  yang  terjadi  pada  tulang baik dalam bentuk maupun kepadatan, dapat disebabkan umur dan perubahan bobot badan [17]. Broiler umur lima minggu ke atas kurang sensitif  terhadap  Ca,  karena  sudah  berhentinya pertumbuhan  tulang  dibandingkan  broiler muda yang masih dalam masa pertumbuhan. Hasil  ini  dapat  dilihat  pada  perlakuan  A3B3 menghasilkan rasio paling tinggi sebesar 3,45 artinya  jumlah  daging  yang  terbentuk  dan melekat pada tulang lebih tinggi.

## KESIMPULAN
Penambahan  kombinasi  inulin  ekstrak umbi dahlia pada level 1,16% dan L. acidophilus sebanyak 1,2% pada pakan menggunakan sumber protein  mikropartikel  dapat  meningkatkan populasi  BAL,  kecernaan  protein,  retensi kalsium,  bobot  tulang  femur  dan  tibia,  rasio daging tulang, pertambahan bobot badan broiler serta  menurunkan pH usus  halus dan  populasi coliform, namun menghasilkan panjang tulang femur sama panjang.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Kami menyatakan bahwa dalam penulisan artikel ini tidak terdapat konflik kepentingan yang berkaitan dengan keuangan, pribadi, atau organisasi  lain  yang  berhubungan  dengan materi yang dituliskan dalam naskah.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Tim  peneliti  mengucapkan  terima  kasih kepada  Fakultas  Peternakan  dan  Pertanian Universitas  Diponegoro  melalui  pendanaan hibah  tahun  2021  dapat  mendukung  penelitian hingga publikasi.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Pasaribu,  T.  2019.  Peluang  zat  bioaktif tanaman sebagai alternatif imbuhan pakan antibiotik  pada  ayam.  Jurnal  Litbang
Pertanian. 38:96-104.  Doi:  10.21082/jp3.v38 n2.2019.p96-104
2. Abadi,  M.  G.,  M.  Hossein,  M.  Hossein,  S. Mahmoud, K. Torshizi, M. Amir, and K. W. Kyun. 2019. Effects of feed form and particle size, and pellet binder on performance, digestiv tract parameters, intestinal morphology, and cecal microflora populations in broilers . Poult.
Sci. 98:1432-1440. Doi: 10.3382/ps/pey488
3. Mingbin, L., L. Yan, Z. Wang, S. An, M. Wu and Lv. Zunzhou. 2015. Effects of feed form and feed particle size on growth performance, carcass  characteristics  and  digestive  tract development  of  broilers.  Anim.  Nutr.
1(3):252-256. Doi: 10.1016/j.aninu.2015.06.001
4. Saputro, C., N. Suthama, dan B. Sukamto. 2019.  Pertumbuhan  tulang  ayam  broiler diberi  pakan  dengan  protein  dan  kalsium mikropartikel ditambah Lactobacillus acidophilus atau asam sitrat. Prosiding: Seminar Nasional Sains dan Enterpeneurship. 1:1-5.
5. Suthama, N. and P. J. Wibawa. 2018. Amino acids digestibility of pelleted microparticle protein  of  fish  meal  and  soybean  meal  in broiler chicken. Journal of the Indonesian. Trop.  Anim.  Agriculture.  43:169-176.  Doi: 10.14710/JITAA.43.2.169-176
6. Fanani, A. F., N. Suthama, dan B. Sukamto. 2014. Retensi nitrogen dan konversi pakan ayam lokal persilangan yang diberi ekstrak umbi dahlia ( Dahlia variabilis ) sebagai sumber inulin.  Sains  Peternakan.  12:69-75.  Doi: 10.20961/sainspet.v12i2.4762
7. Fanani, A. F., N. Suthama, dan B. Sukamto. 2016. Efek penambahan umbi bunga dahlia sebagai sumber inulin terhadap kecernaan protein  dan  produktivitas  ayam  lokal persilangan.  Jurnal  Kedokteran  Hewan. 10:58-62. Doi: 10.21157/j.ked.hewan.v10i1.3372
8. Krismiyanto,  L.,  N.  Suthama,  dan  H.  I. Wahyuni.  2021.  Populasi  bakteri  usus halus  dan  performan  ayam  kampung silangan kampung-leghorn akibat ditambahkan  ekstrak  umbi  dahlia  dalam pakan.  Jurnal  Agripet.  21:157-164.  Doi: 10.17969/agripet.v21i2.20351
9. Ningrumsari,  I.  dan  L.  Herlinawati,  2019. Peranan Lactobacillus acidophilus dalam pakan terfermentasi  untuk  meningkatkan  kualitas daging  ayam  broiler  (protein,  kolesterol). Jurnal Pertanian. 10:93-101. Doi: 10.30997/jp.v10i2. 1954
10. Sa’diyah,  S.  N.,  N.  B.  Sukamto,  F. Wahyono,  dan  L.  Krismiyanto.  2020. Penambahan  kombinasi  ekstrak  buah noni ( Morinda citrifolia L.) dan Lactobacillus acidophilus dalam  pakan  terhadap  profil lemak  darah  ayam pedaging. Jurnal Nutrisi Ternak  Tropis.  3:81-89.  Doi:  10.21776/ ub.jnt.2020.003.02.5
11. Ain,  O.  N.,  N.  Suthama,  dan  B.  Sukamto. 2020. Pemberian pakan dengan protein dan kalsium mikropartikel ditambah Lactobacillus acidophilus atau acidifier terhadap ketahanan tubuh dan bobot karkas broiler. Jurnal Sain Peternakan Indonesia. 15:348-354. Doi: 10.3 1186/jspi.id.15.4.348-354
12. Krismiyanto,  L.,  N.  Suthama,  and  H.  I. Wahyuni.  2014.  Feeding  effect  of  inulin derived from Dahlia variabilis tuber on intestinal microbes in starter period of crossbred native chickens.  J.  Indonesian  Trop.  Anim.  Agric. 39:217-223. Doi: 10.14710/jitaa. 39.4.217-223
13. Scholz-Ahrens, K. E., P. Ade, B. Marten, P. Weber, W. Timm, Y. Asil, C. C. Gluer, and J. Schrezenmeir.  2007.  Prebiotics,  probiotics and synbiotics affect mineral absorption, bone mineral conten, and bone structure. J. Nutr. 137:838S-846S. Doi: 10.1093/jn/137.3.838S
14. Hamid, M., I. Sufi, W. Konadi, dan Y. Akmal. 2019. Analisis jalur dan aplikasi SPSS versi 25. Sefa Bumi Persada, Medan. Doi: 10.312 19/osf.io/5vpgu
15. Sari, D. R., E. Suprijatna, S. Setyaningrum, dan L. D. Mahfudz. 2016. Suplementasi inulin umbi  gembili  dengan Lactobacillus  plantarum (sinbiotik)  terhadap  nisbah  daging-tulang ayam  broiler.  Jurnal  Peternakan  Indonesia 21:284-293. Doi: 10.25077/jpi.21.3.284-293.2019
16. Faradila,  S.,  N.  Suthama,  dan  B.  Sukamto. 2016.  Kombinasi  inulin  umbi  dahlia- Lactobacillus  sp yang  mengoptimalkan perkembangan mikroflora usus dan pertumbuhan  persilangan  ayam pelung- Leghorn. Jurnal  Veteriner.  17:168-175.  Doi: 10.19087/jveteriner.2016.17.2.168
17. Setiawati, D., B. Sukamto dan H. I. Wahyuni. 2016. Pengimbuhan enzim fitase dalam pakan ayam  pedaging  meningkatkan  pemanfaatan kalsium  untuk  pertumbuhan  tulang  dan bobot  badan.  Jurnal  Veteriner.  17:468-476. Doi: 10.19 087/jveteriner.2016.17.3.476 18. Hajela, N., B. S. Ramakhrisna, G. Balakrish Nair,  P.  Abraham,  S.  Gopalan,  and  N.  K.
Ganguly. 2015. Gut microbiome, gut function, and  probiotics:  Implications  for  health. Indian J. Gastroenterol. 34:93 – 107. Doi: 10.1
007/s12664-015-0547-6
19. Khan, S., R. J. Moore, D. Stanley, and K. K. Chousalkar.  2020.  The  gut  microbiota  of laying  hens  and  its  manipulation  with prebiotics and probiotics to enhance gut health and food safety. App. Environ. Microb. 86: 1-18. Doi: 10.1128/AEM.00600-20
20. Aurora,  N.  E.,  L.  D.  Mahfudz,  dan  T.  A. Sarjana.  2020.  Potensi  bawang  putih  dan Lactobacillus  achidophilus sebagai  sinbiotik terhadap karakteristik tulang ayam broiler. Jurnal Sain Peternakan Indonesia. 15:375-382.
Doi: 10.31186/jspi.id.15.4.375-382
21. Weglarz, M. P. and R. Angel. 2013. Calcium and phosphorus metabolism in broilers: Effect of  homeostatic  mechanism  on  calcium  and phosphorus digestibility. J. App. Poult. Res. 22(3):609-627. Doi: 10.3382/japr.2012-00743
22. Wahju,  J.  2004.  Ilmu  nutrisi  unggas. Cetakan ke lima. Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.
23. Sadeghi, A. A. 2014. Bone mineralization of broiler  chicks  challenged  with Salmonella enteritidis fed diet containing probiotic ( Bacillus subtilis ).  Probiotics  and  Antimicro.  Prot.
6:136-140. Doi: 10.1007/s12602-014-91 70-6
24. Wahyuni,  H.  I.,  N.  Suthama,  I.  Mangisah, and L. Krismiyanto. 2018. Improving protein mass and cumulative body weight gain of local  chicken  fed  ration  fortified  with  a combination of Lactobacillus sp. and dahlia inulin. IOP Conf. Series: Earth and Environ. Sci. 102:1-6. Doi: 10.1088/1755-1315/102/1/0 12072
25. Patriani, P. dan H. Hafid. 2019. Persentase boneless, tulang, dan rasio daging-tulang ayam broiler  pada  berbagai  bobot  potong.  Jurnal Galung Tropika. 8:190-196. Doi: 10.31850/jgt.v8i3.511.
26. Wulandari,  A.  S.,  H.  I.  Wahyuni,  dan  N. Suthama.  2017.  Penambahan  ekstrak glukomanan dari umbi porang ( Amorphopallus onchophyllus )  dalam  pakan  ayam  broiler terhadap retensi kalsium dan kualitas tulang. Prosiding:  Seminar  Nasional  Industri Peternakan I. 1:31-35.
27. Bolton,  W.  1967.  Poultry  nutrition.  MAFF Bulletin, London.
28. Anggitasari,  S.,  O.  Sjofjan,  dan  I.  H. Djunaidi.  2016.  Pengaruh  beberapa  jenis
pakan komersil terhadap kinerja produksi kuantitatif  dan  kualitatif  ayam  pedaging. Buletin Peternakan 40:187-196. Doi: 10.210 59/buletinpeternak.v40i3.11622
29. Krismiyanto, L., N. Suthama, dan I. Mangisah. 2020. Pemanfaatan sumber minyak berbeda terhadap kecernaan lemak dan kualitas daging ayam  broiler.  Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi Peternakan  Tropis.  7(1):77-81.  Doi:  10.337 72/jitro.v7i1.9388