## UJI EFEK ANTIINFLAMASI EKSTRAK ETANOL BIJI LAMTORO (Leucaena leucocephala L.) TERHADAP UDEM TELAPAK KAKI MENCIT YANG DIINDUKSI KARAGENIN

## STUDY ON ANTI-INFLAMMATORY ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT OF WILD
TAMARIND SEED
(Leucaena leucocephala L.) IN CARRAGEENAN INDUCED MICE PAW EDEMA
Triswanto Sentat 1 , Fitri Handayani 1 1 Akademi Farmasi Samarinda Samarinda, Kalimantan Timur *email: acuan3s@gmail.com , sausanrukan@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  mengenai  uji  aktivitas  antiinflamasi  ekstrak  etanol  biji  lamtoro ( Leucaena  leucocephala L.)  pada  mencit  ( Mus  musculus ).  Lamtoro  telah  dikenal  oleh  masyarakat Indonesia secara turun-temurun dapat mengobati bengkak. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui apakah  ekstrak  etanol  biji  lamtoro  dapat  berkhasiat  sebagai  antiinflamasi  serta  mengetahui  dosis optimum ekstrak biji lamtoro yang dapat berkhasiat sebagai antiinflamasi. Uji aktivitas antiinflamasi dilakukan  dengan  metode  pembentukan  radang  buatan  pada  telapak  kaki  mencit  putih  jantan. Dilakukan penelitian dengan menggunakan 15 ekor mencit yang dibagi menjadi 5 kelompok perlakuan dengan kriteria berumur 2-3 bulan dengan berat 20-30 g. Pengujian dilakukan menggunakan 3 dosis yang berbeda dari ekstrak biji lamtoro yaitu 200 mg/20 g BB, 400 mg/20 g BB dan 600 mg/20 g BB. Berdasarkan  penelitian  di  dapatkan  persen  radang  terbesar  berada  pada  dosis  200  mg/20  g  BB  dan persen radang terkecil pada dosis 600 mg/20 g BB. Data hasil pengukuran besar radang diuji statistik dengan  metode  LSD  dengan  hasil  kelompok  dosis  200  mg/20  g  BB  tidak  memiliki  potensi  khasiat sebagai antiinflamasi dan kelompok dosis 400 mg/20 g BB serta dosis 600 mg/20 g BB  mempunyai potensi khasiat sebagai antiinflamasi.
Kata Kunci : biji lamtoro, antiinflamasi, persen radang

## ABSTRACT
A  study  on  antiinflammatory  activity  of  ethanol  extract  of  wild  tamarind  (Leucaena leucocephala L.) was done on mice (Mus musculus). Wild tamarind has been known by the Indonesian people for generations to treat swelling. This study was conducted to determine whether the ethanol extract of wild tamarind seeds can be efficacious as anti-inflammatory and to know the optimum dose of extract that can be efficacious as anti-inflammatory. Antiinflammatory activity test was performed by the method of formation of artificial inflammation on the soles of male white mice. The study was conducted  using  15  mice  divided  into  5  groups  of  treatment  with  the  criterion  aged  2-3  months weighing 20-30 g. The test was performed using 3 different doses of wild tamarind seed extract which were  200  mg  /  20  g  BW,  400  mg  /  20  g  BW  and  600  mg  /  20  g  BW.  Based  on  research,  the  largest percentage  of  inflammation  is  at  a  dose  of  200  mg  /  20  g  BW  and  the  smallest  inflammatory inflammation  at  a  dose  of  600  mg  /  20  g  BW.  Data  from  inflammatory  measurements  were  tested statistically using LSD method with group dose result 200 mg / 20 g BW did not have potency potency as antiinflammatory agent and group dose 400 mg / 20 g BW and dose 600 mg / 20 g BW has potential benefits as anti-inflammatory.
Key Words : wild tamarind seed, anti-inflammatory, inflamatory perccentage

## PENDAHULUAN
Masalah  kesehatan  yang  sering  timbul  di  masyarakat  adalah  radang  atau  inflamasi  yang merupakan  satu  dari  respon  utama  sistem  kekebalan  terhadap  infeksi  dan  iritasi,  dan  merupakan gangguan yang sering terjadi pada manusia serta hewan, yang ditandai dengan timbulnya kemerahan, panas, pembengkakan, rasa nyeri yang mengganggu dan hilangnya fungsi dari  jaringan 1 .Pengobatan
terhadap  inflamasi  pada  umumnya  menggunakan  obat-obatan  sintetik,  tetapi  pemakaian  obat-obatan tersebut  selain  dapat  menghilangkan  inflamasi  juga  memiliki  banyak  efek  samping  dan  harganya relatif mahal. Cara pengobatan alternatif yang digunakan untuk mengatasi hal tersebut adalah dengan terapi herba, yaitu memanfaatkan tanaman-tanaman yang berkhasiat obat. Pengobatan herba tersebut umumnya menggunakan bahan-bahan yang relatif mudah didapatkan sehingga masyarakat juga lebih mudah memanfaatkannya 2 .
Penggunaan  tanaman  obat  untuk  penyembuhan  suatu  penyakit  dan  pemilihan  bahan-bahan alami untuk pengobatan didasarkan pada pengalaman dan bukti penelitian. Selain lebih ekonomis, efek samping  tanaman  berkhasiat  obat  relatif  kecil  dibandingkan  dengan  obat-obat  sintetik,  maka penggunaan tumbuhan obat dengan formulasi yang tepat sangat penting dan tentunya lebih aman dan efektif.  Salah  satu  tanaman  yang  memiliki  efek  sebagai  antiinflamasi  adalah  tumbuhan  lamtoro ( Leucaena leucocephala L). Selain sebagai antiinflamasi tumbuhan lamtoro memiliki banyak manfaat seperti  peluruh  kencing,  cacingan,  susah  tidur  karena gelisah,  bengkak,  patah tulang,  asbes  paru  dan bisul 3 .
Lamtoro  mengandung  beberapa  senyawa  kimia  seperti  protein,  lemak,  kalsium,  fosfor,  besi, vitamin A, vitamin B1 dan vitamin C.  Lamtoro juga mengandung zat aktif berupa alkaloid, saponin, flavonoid  dan  tanin.  Sementara  bijinya  mengandung  mimosin,  leukanin,  protein,  leukanol  dan flavonoid 4 .  Zat  aktif  yang  diduga  dapat  berkhasiat  sebagai  antiinflamasi  adalah  senyawa  flavonoid. Hal  ini  didasarkan  pada  penelitian  Deliyana et  all (2012)  tentang  efek  antiinflamasi  ekstrak  etanol kulit batang pohon jambu biji terhadap edema kaki tikus jantan dengan hasil senyawa aktif yang dapat menghambat edema adalah senyawa flavonoid 5 .
Berdasarkan uraian di atas maka akan dilakukan penelitian mengenai uji efek antiinflamasi pada ekstrak etanol biji lamtoro yang diberikan secara per oral pada hewan uji mencit ( Mus musculus ) yang telah diinjeksi karagenin secara intraplanar.

## METODE PENELITIAN
Penelitian pengujian aktivitas antiinflamasi ekstrak etanol biji lamtoro ( Leucaena leucocephala L).  dosis  I  (200  mg/20  g  BB),  dosis  II  (400  mg/20  g  BB)  dan  dosis  III  (600  mg/20  g  BB)  bersifat eksperimental.  Tahap  penelitian  ini  dimulai  dengan  determinasi  tanaman  di  Laboratorium  Fisiologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Mulawarman Samarinda, pengumpulan biji  lamtoro  di Kecamatan Palaran.  Pengolahan sampel,  pembuatan  ekstrak,  pembuatan  bahan-bahan uji, serta pengujian aktifitas antiinflamasi ekstrak etanol biji lamtoro pada mencit jantan.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  yaitu  biji  lamtoro,  bahan-bahan  kimia  yang  digunakan  adalah,  etanol  70%, karagenin, kalium diklofenak, natrium karboksimetilselulosa, natrium klorida, dan air suling.

## Hewan Uji
Hewan uji yang digunakan adalah mencit putih ( Mus muculus ) galur swiss webster, berjenis kelamin jantan dengan berat badan antara 20-30 gram, berumur 2-3 bulan dalam kondisi sehat.

## Peralatan
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  beaker  glass,  gelas  ukur,  batang  pengaduk,  blender,  nampan,  kain hitam,  kandang  mencit,  mortir  dan  stamper,  cawan  porselen,  pengangas  air,  maserator,  sonde  oral, spuit injeksi 1ml dan 5ml, pletismometer ari raksa dan timbangan analitik,.

## Prosedur
1. Determinasi tumbuhan dilakukan terlebih dahulu sebelum dilakukan penelitian untuk memastikan jenis dan kebenaran tumbuhan lamtoro. Determinasi dilakukan di Laboratorium Fisiologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Mulawarman Samarinda.
2. Simplisia  biji  lamtoro  dipisahkan  antara  kulit  dan  bijinya.  Kemudian  bagian  biji  yang  telah dipisahkan  dicuci  bersih  dengan  menggunakan  air  mengalir  untuk  membersihkan  pengotoran.
Selanjutnya,  biji  lamtoro  yang  telah  dicuci  ditiriskan  hingga  kadar  airnya  sedikit  berkurang, kemudian  dikeringkan  dengan  cara  dijemur  dengan  nampan  dan  ditutup  dengan  menggunakan kain  hitam  lalu  dijemur  di  bawah  sinar  matahari.  Selanjutnya,  biji  yang  telah  kering  diserbuk dengan  menggunakan  blender.  Serbuk  biji  lamtoro  yang  dihasilkan  disimpan  pada  wadah  kaca tertutup dan terlindung dari panas
3. Proses  pembuatan  ekstraksi  biji  lamtoro  dilakukan  pada  penelitian  ini  menggunakan  metode remaserasi. Serbuk kering biji lamtoro ditimbang sebanyak 200 gram dimasukkan ke dalam wadah kaca lalu direndam dengan
2  liter  pelarut  etanol  70%,  direndam  selama  2  x  24  jam.  Setiap  1  x  24  jam  pelarut  diganti  dan dilakukan  pengadukan  sesering  mungkin.  Lalu  disaring  untuk  memisahkan  filtrat  dan  ampas.
Filtrat yang diperoleh kemudian diuapkan di penangas air dan hingga diperoleh ekstrak kental.
4. Pemeriksaan organoleptis terhadap ekstrak meliputi pemeriksaan bentuk, warna, bau dan rasa dari ekstrak simplisa biji lamtoro.
5. Prosedur Pengujian Inflamasi
a. Sebelum pengujian, mencit dipuasakan selama 18 jam dengan tetap diberi air minum.
b. Mencit dipisahkan sesuai dengan 5 kelompok uji.
c. Ditimbang hewan uji dan diberi tanda pada kaki kirinya.
d. Dimasukkan kaki kiri mencit ke dalam sel yang berisi cairan air raksa hingga naik pada garis batas atas.
e. Dicatat angka pergerakan air raksa setelah dimasukkan kaki mencit sebagai volume awal kaki mencit (Vo).
f. Diberikan suspensi 5 kelompok uji secara per oral pada masing-masing kelompoknya.
g. Setelah  30  menit  disuntikkan  0,1  ml  larutan  karagenin  1%  secara  intraplantar  pada masing-masing kaki mencit.
h. Dilakukan pengamatan dimulai dari menit ke-30 hingga menit ke 300 setelah penyuntikan.
i. Dicatat volume telapak kaki mencit (Vt).
V t ).
6. Perhitungan Persentase Radang dan Persen Inhibisi Radang
Persen radang dapat dihitung dengan rumus di bawah ini:
Persentase Radang =
Dimana :  Vt = Volume radang setelah waktu t Vo = Volume awal kaki mencit
Persen inhibisi radang dihitung dengan rumus di bawah ini:
Persen Inhibisi Radang =
Dimana : a =  Persen radang rata-rata kelompok kontrol b =  Persen radang rata-rata kelompok perlakuan bahan uji atau obat pembanding 6

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tumbuhan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  lamtoro  yang  telah  dinyatakan berdasarkan hasil determinasi di Laboratorium Fisiologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam  Universitas  Mulawarman  Samarinda.  Hasil  determinasi  menunjukkan  bahwa  sampel  yang digunakan adalah Lamtoro ( Leucaena leucocephala L.) dari genus Leucaena dan famili Fabaceae. Biji  lamtoro  diperoleh  dari  Tumbuhan  lamtoro  yang  tumbuh  di  sekitar  daerah  Kecamatan
Palaran.  Sampel  yang  digunakan  adalah  biji  lamtoro yang  segar  berwarna hijau  tua  pekat  serta pada umur tumbuhan sekitar 5 bulan. Dilakukan pemanenan pada sore hari untuk memaksimalkan zat aktif yang terdapat di dalam biji lamtoro. Lalu biji lamtoro segar dikupas terlebih dahulu untuk memisahkan kulit  dan  bijinya  kemudian  dicuci  dan  ditiriskan.  Setelah  itu  dikeringkan  dengan  penjemuran  pada panas matahari dan ditutupi kain hitam untuk  menghindari menguapnya  zat aktif yang terdapat pada tumbuhan.  Biji  lamtoro  segar  yang  digunakan  sebanyak  2300  gram  kemudian  saat  kering  menyusut hingga  menjadi  225  gram.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kadar  air  yang  hilang  pada  simplisia  biji lamtoro  sebesar  90,21%.  Susut  pengeringan  ini  menyatakan  bahwa  sisa  air  yang  terdapat  pada simplisia  kering  hanya  9,79%.  Bila  kandungan  air  dalam  simplisia  masih  besar,  maka  dapat mengakibatkan tumbuhnya jamur sehingga mutu simplisia turun dan tidak memenuhi syarat.
Proses penghalusan simplisia biji lamtoro kering dilakukan dengan blender untuk memperkecil ukuran  simplisia  sehingga  luas  permukaan  yang  kontak  dengan  cairan  penyari  lebih  luas  dan  proses penarikan  kandungan  kimia  yang  terdapat  di  dalam  simplisia  lebih  optimal.  Biji  lamtoro  yang  telah menjadi serbuk kemudian diekstraksi secara maserasi menggunakan pelarut etanol 70%. Penggunaan pelarut  ini  didasarkan  pada  kandungan  flavonoid  yang  terdapat  pada  biji  lamtoro.  Selain  itu,  etanol 70% tidak menyebabkan pembengkakan membran sel dan memperbaiki stabilitas dalam obat terlarut 7 . Pengadukan  yang  dilakukan  sesekali  secara  teratur  juga  membantu  agar  semua  bagian  simplisia terendam dan kontak dengan cairan penyari merata. Ekstrak kental yang diperoleh dari 200 g simplisia dengan 2000 ml campuran cairan penyari adalah sebesar 28,64 g, sehingga rendemen yang diperoleh sebesar 14,32%.
Pengamatan organoleptis ekstrak menunjukkan bahwa ekstrak yang diperoleh berbentuk kental mengkilat,  berwarna  coklat  kehitaman  dengan  rasa  sangat  pahit  dan  berbau  pedas.  Pengamatan organoleptis ini dapat memberikan pengenalan kualitatif awal dari ekstrak etanol biji lamtoro.
Pengujian  inflamasi  menggunakan  metode  pembentukan  radang  buatan  pada  telapak  kaki belakang mencit putih jantan. Potensi antiinflamasi diukur berdasarkan kemampuan senyawa tersebut dalam menghambat dan mengurangi terjadinya radang. Pada penelitian ini mencit diberikan perlakuan secara oral, untuk kontrol positif dengan kalium diklofenak 0,13 mg/20 g BB, kontrol negatif dengan Na.CMC  0,5%,  ekstrak  etanol  biji  lamtoro  dengan  dosis  1  (200  mg/20  g  BB),  ekstrak  etanol  biji lamtoro (400 mg/20 g BB) dan ekstrak etanol biji lamtoro dengan dosis 3 (600 mg/20 g BB). Setelah diberikan  perlakuan  secara  oral,  kaki  mencit  diukur  untuk  mengetahui  volume  awal  kaki  mencit.  30 menit  kemudian  mencit  diinduksi  karagenin  1%  sebanyak  0,1  ml  untuk  setiap  mencit.  Pengukuran dilakukan setiap 30 menit selama 5 jam (300 menit).
Karagenin  dipilih  karena  dapat  menimbulkan  radang  dalam  waktu  yang  relatif  singkat,  tidak meninggalkan  bekas,  memberikan  respon  yang  lebih  peka  terhadap  obat  antiinflamasi  dibanding dengan senyawa iritan lain dan radang yang terbentuk berkembang lambat dan dapat kembali normal dalam  waktu  1-2  hari.  Pembentukan  radang  oleh  karagenin  dapat  diamati  dengan  jelas  dan  tidak menyebabkan  kerusakan  permanen  pada  jaringan  disekitar  inflamasi.  Mekanisme  aksi  karagenin dalam  menimbulkan  radang  yaitu  dengan  merangsang  lisisnya  sel  mast  dan  melepaskan mediator-mediator  radang  yang  dapat  mengakibatkan  vasodilatasi  sehingga  menimbulkan  eksudasi dinding  kapiler  dan  migrasi  fagosit  ke  daerah  radang  akibatnya  terjadi  pembengkakan  pada  daerah tersebut 8 .
Alat yang digunakan untuk mengukur volume radang pada kaki mencit adalah pletismometer air raksa.  Digunakan  air  raksa  sebagai  cairannya  karena  air  raksa  memiliki  sifat  yang  sensitif  jika  ada pergerakan atau sedikit guncangan, sehingga akurasi data dapat tercapai. Selain itu, air raksa memiliki sifat kohesi yang besar sehingga tidak menempel pada kulit kaki mencit. Pada saat pengukuran hal-hal yang  harus  diperhatikan  adalah  volume  air  raksa  harus  sama  setiap  kali  pengukuran,  tanda  pada pergelangan kaki mencit harus jelas dan dipastikan pada saat mencelupkan kaki mencit harus tercelup sempurna  sampai tanda  batas  yang  ditentukan.  Hal ini  bertujuan agar  mendapatkan  data  pengukuran
yang  selalu  konstan  pada tiap  waktu  dan  dalam  kondisi  yang  sama.  Untuk  meminimalkan  kesalahan pada  pengukuran  volume  edema,  faktor-faktor  seperti  posisi  kaki  mencit  saat  pengukuran,  cara pembacaan  skala  pada  alat  pletismograf,  dan  mengusahakan  agar  mencit  selalu  tenang  saat pengukuran.
Kelompok persentase radang pada kaki  mencit yang  lebih kecil dari kelompok  kontrol  negatif menunjukkan  bahwa  bahan  uji  mampu  menekan  radang  yang  disebabkan  oleh  karagenin.  Hasil
pengukuran persentase radang yang terjadi dapat dilihat pada gambar berikut
Gambar 1. Grafik Persentase Radang
Berdasarkan  pengukuran  dari  menit  ke-30  hingga  menit  ke-300  didapatkan  hasil  kelompok kontrol positif memiliki persen radang yang paling kecil, diikuti Dosis 1, lalu Dosis 2, kemudian Dosis 3 dan persen radang terbesar berada pada kontrol negatif. Setelah didapatkan hasil diatas dilanjutkan dengan  melakukan  uji  analisis  statistik  menggunakan  program  SPSS.  Berdasarkan  analisis  distribusi normal  melalui  uji One-Sample  Kolmogorov-Smirnov  Test ,  dimulai  pada  menit  ke-30  hingga  menit ke-300 didapatkan bahwa sampel telah terdistribusi secara normal. Kemudian dilanjutkan dengan uji ANOVA  ( Analysis  of  Variance )  untuk  mengetahui  adanya  perbedaan  pada  masing-masing  kelompok uji.    Hasil uji ANOVA melalui uji LSD ( Least Significant Differences ) dari menit ke-30 hingga menit ke-300 didapatkan dosis 1 tidak berbeda bermakna dengan kontrol negatif yang berarti bahwa dosis 1 tidak mempunyai efek sebagai antiinflamasi. Sedangkan dosis 2 dan dosis 3 tidak berbeda bermakna dengan  kontrol  positif  yang  berarti  bahwa  dosis  2  dan  dosis  3  memiliki  potensi  khasiat  sebagai antiinflamasi.  Hal  ini  berarti,  bahwa  ekstrak  etanol  biji  lamtoro  dosis  2  dan  dosis  3  mampu menghambat pembentukan radang yang diakibatkan oleh karagenin.
Efek  antiinflamasi  dapat  dilihat  dari  besarnya  persen  hambatan  radang  (inhibisi)  rata-rata  tiap waktu pengukuran, yang dapat dilihat pada gambar berikut:
Gambar 2. Grafik Persen Inhibisi Radang
Berdasarkan  grafik  di  atas,  pengukuran  persen  inhibisi  radang  dari  menit  ke-30  hingga  menit ke-300  disimpulkan  bahwa  dosis  1  memiliki  persen  hambatan  radang  yang  terendah  yaitu  sebesar 15,44%, dosis 2 sebesar 46,67%, dosis 3 sebesar 54,43% dan kontrol positif sebesar 65,30% dimana memiliki persen hambatan radang tertinggi. Hal ini berarti, persen hambatan radang yang baik terdapat pada  dosis  3,  karena  semakin  besar  nilai  daya  hambatnya  maka  semakin  besar  pula  dapat  menekan radang yang disebabkan oleh karagenin.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol biji lamtoro dapat berpotensi sebagai antiinflamasi pada dosis 2 (400 mg/20 g BB)  dan  dosis  3(600  mg/20  g  BB),  dan  pada  dosis  3  ekstrak  etanol  biji  lamtoro  memiliki  aktivitas yang optimum sebagai antiinflamasi pada peradangan kaki mencit yang disebabkan oleh karagenin.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Kee,  J.  L.,  Evelyn.  H.  R.  1996. Farmakologi;  Pendekatan  Proses  Keperawatan .  Cetakan Pertama. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
2. Heyne,  K.  2007. Tumbuhan  Berguna  Indonesia  III .  Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Kehutanan, Departemen Kehutanan. Jakarta: Yayasan Sarana Wana Jaya.
3. Dalimartha,  S.  2000. Atlas  Tumbuhan  Obat  Indonesia .  Jilid  2.  Cetakan  Pertama.  Jakarta: Trubus Agriwidya.
4. Hariana,  A.  2008. Tumbuhan  Obat  dan  Khasiatnya .  Seri  kedua.  Cetakan  Kelima.  Jakarta: Penebar Swadaya.
5. Deliyana,  L.,  Fatimawali., dan  Wullur,  A.  2012. Uji Efek  Antiinflamasi  Ekstrak  Etanol  Kulit Batang  Jambu  Biji  (Psidium  guajava)  Terhadap  Edema  Kaki  Tikus  Jantan  Galur  Wistar . Manado: Poltekes.
6. Mansjoer, S. 1999. Mekanisme Kerja Obat Antiradang . Jakarta. Media Farmasi Indonesia.
7. Harborne, J.  B.  1987. Fitokimia  Penuntun  Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan .  Bandung. ITB.
8. Hamor, G.H. 1996.    Zat Antiradang Non Steroid. Yogyakarta: Gajah Mada University Press.