## JIFI (JURNAL ILMIAH FARMASI IMELDA)
Vol.7, No.2, Maret 2024, pp. 105-113 ISSN: 2597-7164 (Online), 2655-3147 (Print) https://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALFARMASI
 105

## UJI EFEKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI KOMBINASI
EKSTRAK DAUN STEVIA ( Stevia rebaudiana (bertoni) bertoni) DAN DAUN TEH HIJAU ( Camellia sinensis (L.) Kuntze) DENGAN MENGGUNAKAN METODE DPPH ( 1,1- Difenil-2-Pikrilhidrazil )
Sri Rezeki Samosir 1 , Novycha Auliafendri 2 , Marlina Iva Doris Naibaho 3 1,2,3 Program Studi S-1 Farmasi, Universitas Imelda Medan, Indonesia
Article Info

## ABSTRACT
Article history: Received Sep 28, 2023 Revised Mar 19, 2024 Accepted Mar 23, 2024 The stevia plant is known to have various benefits in the pharmaceutical field  and  is  used  as  a  health  medicine  because  of  its  antioxidant, antifungal and non-carcinogenic effects. Green tea is a plant that contains various antioxidant compounds that are beneficial for health. The aim of this  research  is  to  determine  whether  the  combination  of  stevia  leaf extract and green tea leaves is effective as an antioxidant. Ethanol extract of  stevia  leaves  and  green  tea  leaves  is  made  by  maceration  with  96% ethanol  solvent,  combination  extract  has  blackish  green.  The  ethanol extract  of  stevia  leaves  and  green  tea  leaves  was  screened  for phytochemical  compounds.  Antioxidant  effectiveness  was  tested  using the  DPPH  (1,1  Diphenyl-2-Picrylhydrazyl)  method,  with  varying concentrations  of  10  ppm,  20  ppm,  30  ppm,  40  ppm  and 50 ppm.  Then Antioxidant  activity  test  by  DPPH  measured  using  a  UV-Vis spectrophotometer.  The  results  of  screening  for  phytochemical compounds  show  that  stevia  leaf  extract  contains  alkaloids,  saponins, flavonoids  and  tannins.  Meanwhile,  the  results  of  screening  for phytochemical  compounds  in  green  tea  leaf  extract  contain  alkaloids, steroids,  saponins,  flavonoids  and  tannins.  The  research  results  showed that antioxidant levels in the combination of Stevia leaf extract and green tea leaves with concentrations of 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm, 50 ppm with a ratio of (1:1) had an IC 50 analysis result of 10 ppm of 19.90 mg/L,  20  ppm  is  12.90  mg/L,  30  ppm  is  9.60  mg/L.  40  ppm  is  6.80 mg/L. 50 ppm is 6.60 mg/L where a concentration of 50 ppm is classified as a very strong antioxidant. The antioxidant effect of the combination of stevia leaf extract and green tea leaves is still higher than vitamin C. The combination of stevia leaves extract and green tea leaves has antioxidant effectiveness.

## Keywords:
Stevia leaves (Stevia rebaudiana (bertoni) bertoni) Green tea leaves (Camellia sinensis (L.) Kuntze) Antioxidant
DPPH This is an open access article under the CC BY-SA license.
Corresponding Author:
Sri Rezeki Samosir Program Studi Sarjana Farmasi Universitas Imelda Medan Jl. Bilal No.52 Kelurahan Pulo Brayan Darat I Kecamatan Medan Timur, Medan-Sumatera Utara Email: sr473569@gmail.com
106

## 1. INTRODUCTION
Indonesia  merupakan  negara  yang  memiliki  lahan  luas  dengan  kondisi  alam  yang mendukung bagi pertanian dan perkebunan, serta dianugerahi keanekaragaman flora yang sebagian besar  dapat  dijadikan  sebagai  tanaman  obat  (Aryanti  et  al.,  2021).  Berbagi  bahan  alami  asli Indonesia  sebagai  antioksidan  diperlukan  untuk  meningkatkan  kualitas  kesehatan  masyarakat dengan  biaya  yang  relatif  terjangkau.  Radikal  bebas  yang  terus-menerus  dihasilkan  selama  proses metabolisme normal diduga bertanggung jawab merusak fungsi sel tubuh hingga akhirnya memicu munculnya penyakit degeneratif (Werdhasari, 2014).
Pada  penelitian  sebelumnya,  banyak  peneliti  yang  meneliti  kandungan  antioksidan  dan kandungan  total  senyawa  fenolik  pada  ekstrak  daun  stevia.  Menurut  (Putri  et  al.,  2019)  ekstrak etanol daun stevia yang dimaserasi mempunyai nilai total fenolik, nilai total flavonoid dan aktivitas antioksidan  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  proses  ekstraksi  Soxhlet.  Tanaman  Stevia (Stevia  rebaudiana  (bertoni)  bertoni)  diketahui  memiliki  beragam  manfaat  dalam  bidang  farmasi dan  digunakan  sebagai  obat  terapi  karena  efek  antioksidan,  antijamur  dan  non-karsinogeniknya. Selain itu, stevia juga mengandung  metabolit lain yang berpotensi bioaktif, alkaloid, klorofil yang larut  dalam  air,  lutein,  asam  amino,  lemak,  flavonoid,  senyawa  fenolik,  tanin  dan  asam  askorbat. Beberapa  senyawa  aktif  seperti  flavonoid,  fenol,  tanin,  antrakuinon,  sinamat,  dan  kurkumin dilaporkan  memiliki  kemampuan  melindungi  dari  sinar  UV  (Putri  et  al.,  2019).  Pada  beberapa penelitian  terkait  potensi  antioksidan  ekstrak  daun  stevia  hasilnya  menunjukan  bahwa  aktivitas antioksidan daun stevia memiliki aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% stevia (daun, batang, dan akar)  yang  dikeringkan  dengan  berbagai  metode  pengeringan  dan  diekstraksi  dengan  MAE ( Microwave assisted extraction ). Ekstrak dengan nilai IC 50 diperoleh dari ekstrak daun stevia yang dikeringkan dengan dehidrator sebesar 363,49 mg/L. Rendahnya aktivitas antioksidan pada ekstrak stevia  kemungkinan  terjadi  akibat  adanya  degradasi  senyawa  aktif  seperti  flavonoid  dan  polifenol (Darmawan,  2023). Aktivitas  antioksidan  bubuk  stevia  termasuk  ke  dalam  kategori  lemah  yaitu  berkisar antara 200-600 ppm. Lemahnya aktivitas antioksidan bubuk stevia dipengaruhi oleh adanya bahan pengikat gum arab dan maltodekstrin (Zain et al., 2020).
Teh hijau (Camellia sinensis (L.) Kuntze) merupakan tanaman yang mengandung berbagai senyawa  antioksidan  yang  bermanfaat  bagi  kesehatan  dan  jenis  tanaman  berkhasiat  yang  paling banyak dibudidayakan dengan baik di Indonesia (Fajar et al., 2018). Teh hijau banyak diminati dan dikonsumsi hampir setiap hari sebagai minuman penyegar atau kesehatan karena efek relaksasinya yang  ditimbulkan  serta  dipercaya  memiliki  segudang  manfaat  bagi  kesehatan  tubuh  diantaranya sebagai  antikanker,  antioksidan,  antijamur,  antibakteri,  dan  mencegah  penuaan.  Teh  hijau ( Camellia sinensis (L.) Kuntze) merupakan minuman herbal yang banyak diminati karena memiliki banyak  manfaat  salah  satunya  sebagai  antioksidan.  Menurut  (Kusmiyati  et  al.,  2015),  teh  hijau memiliki  kandungan flavonoid yang tinggi terutama katekin (20–30% dari berat kering). Senyawa katekin  dari  golongan  flavonoid  (polifenol)  dalam  teh  hijau  diketahui  bertanggung  jawab  dalam menentukan sifat antioksidan pada teh hijau (Aryanti et al., 2021). Mengingat adanya potensi daun teh  hijau  sebagai  antioksidan,  maka  perlu  dikumpulkan  bukti  ilmiah  tentang  daun  teh  hijau  yang terkait  dengan  kemampuan  sebagai  antioksidan  terutama  dibagian  ekstrak  daun  teh  hijau. Berdasarkan penelitian dari (Malik et al., 2017) nilai IC 50 dari ekstrak daum teh hijau sebesar 31,13 mg/L.  Aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 paling  kecil  yaitu  IC 50 <50  µg/mL  termasuk  dalam kategori antioksidan sangat kuat.
Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  dapat  menunda,  memperlambat  dan  mencegah terjadinya  reaksi  oksidasi  dari  radikal  bebas  (Varian,  n.d.  2023).  Berdasarkan  sumbernya, antioksidan dibedakan menjadi antioksidan sintetik dan antioksidan alami. Penggunaan antioksidan sintetik  semakin  berkurang  karena  dapat  menimbulkan  dampak  negatif  terhadap  kesehatan (kerusakan  hati)  dan  dapat  menimbulkan  karsinogen,  sehingga  penggunaannya  digantikan  dengan antioksidan  alami.  Antioksidan  alami  merupakan  senyawa  yang  terdapat  pada  bahan  alami  yang dapat  menghasilkan  potensi  aktivitas  antioksidan  lebih  tinggi  bila  digunakan  secara  kombinasi (Rikantara et al., 2022).
Untuk  menguji adanya aktivitas antioksidan dapat digunakan  metode DPPH ( 1,1 Diphenyl- 2-Picrylhydrazyl)  p enangkapan  radikal  DPPH  dapat  diamati  dengan  mengamati  penurunan serapannya.  Hal  ini  mungkin  terjadi  akibat  reduksi  radikal  bebas  antioksidan  atau  reaksi  dengan
senyawa radikal bebas lainnya  (Anang Budi  Utomo  et al 2011). Antioksidan bereaksi  dengan 1,1- difenil-2 pikrilhidrazil (DPPH) yang  menstabilkan radikal bebas dan mereduksi DPPH. Kemudian DPPH  akan  bereaksi  dengan  atom  hidrogen  dari  senyawa  peredam  radikal  bebas  membentuk  1,1- difenil-2 pikrilhidrazin (DPPH) yang lebih stabil (Bahriul et al., 2014).
Berdasarkan  uraian  diatas  nilai  IC 50 diperoleh  dari  ekstrak  daun  stevia  yang  dikeringkan dengan  dehidrator  sebesar  363,49  mg/L.  Rendahnya  aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak  stevia kemungkinan  terjadi  akibat  adanya  degradasi  senyawa aktif  seperti  flavonoid  dan  polifenol.  Daun Stevia  termasuk  dalam  kategori  sangat  lemah,  dan  nilai  IC 50 dari  ekstrak  daun  teh  hijau  sebesar 31,13  mg/L  termasuk  dalam  kategori  antioksidan  sangat  kuat. Menurut  Suranto  (2011),  kombinasi beberapa  jenis  antioksidan  sering  kali  memberikan  perlindungan  yang  lebih  baik  terhadap  radikal  bebas dibandingkan  dengan  satu  jenis  antioksidan  saja. Oleh  karena  itu,  peneliti  tertarik  untuk mengkombinasikan kedua tanaman dengan pengengkstrakan menggunakan metode maserasi untuk melihat  seberapa  besar  efektivitas  nya  setelah  dikombinasikan  dengan  menggunakan  metode DPPH.  Jika  digunakan  dalam  kombinasi,  antioksidan  alami  dapat  menghasilkan  manfaat antioksidan yang lebih besar.

## 2. RESEARCH METHOD Alat
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  diantaranya  gunting,  pisau,  blender  ( Turbo EHM-8099 ),  timbangan  analitik  ( Fujitsu  FS-AR210 ),  (botol  ekstrak,  gelas  beker,  gelas  ukur, erlenmeyer, corong kaca) ( Glassco ), pipet tetes, toples kaca ( TPS ), kertas saring, batang pengaduk, tabung  reaksi, rotary  evaporator  vakum ( Heidolph  vv  2000 ), waterbath ( mummert )  plastik  wrap, rak  tabung  reaksi,  lampu  UV,  spektrofotometer  UV-Vis  ( Thermo-  Genesys  10S  UV-Vis ),  kuvet, mikropipet ( Dragon Med ).

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu daun stevia ( Stevia rebaudiana (bertoni) bertoni),  daun  teh  hijau  ( Camellia  sinensis (L.)  Kuntze),  etanol  96%,  akuades,  HCL,  reagen Lieberman-Burchard,  Larutan  DPPH,  vitamin  C,  H 2 SO 4 ,  reagen  Mayer,  FeCl 3 1%,  FeCl 3 5% metanol p.a., reagen Dragendroff, Alkohol 96%, reagen salkowsky.

## Prosedur Kerja Determinasi Tanaman
Determinasi  tanaman  stevia  dan  teh  hijau  dilakukan  dengan  melakukan  herbarium  di Universitas Sumatera Utara.

## Pembuatan Simplisia
Bagian yang diambil adalah daun yang berwarna hijau dan masih muda, dipilih yang bagus dan masih utuh. Kemudian di timbang sebelum dilakukan pencucian di air yang mengalir, pada saat pencucian benda lain yang menempel di daun di buang, selanjutnya daun yang sudah selesai proses penyucian di tiriskan dan di jemur hingga kering. Prosedur pembuatan serbuk simplisia daun stevia dan daun teh hijau yaitu daun yang sudah dikeringkan kemudian di rajang terlebih dahulu sebelum di blender.

## Pembuatan Ekstrak
Ditimbang  512  g  daun  stevia  dan  610  g  daun  teh  hijau,  kemudian  dimasukan  kedalam toples  kaca untuk  maserasi. Dituang secara perlahan pelarut etanol 96%  kedalam tempat  maserasi yang  berisi  serbuk  daun  stevia  dan  teh  hijau.  Kemudian  biarkan  pelarut  etanol  merendam  serbuk simplisia. Selama 3 hari sesekali dilakukan pengadukan. Selanjutnya disaring ke dalam wadah baru sehingga diperoleh ekstrak cair. Hasil penyarian dari ekstrak diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator dibawah  titik  didih  hingga  diperoleh  ekstrak  kental  (Najib  et  al.,  2017).  Rendemen ekstrak pada daun stevia 25,39% dan rendeman pada daun teh hijau 32,78%.
108

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  bertujuan  untuk  mengetahui  zat-zat  kimia  yang  terkandung  dalam ekstrak daun stevia dan daun teh hijau.

## a. Alkaloid
Ekstrak  sampel  dimasukan  ke  dalam  tabung  reaksi  sebanyak  1  gram,  kemudian  ditambahkan beberapa  tetes  reagen  dragendroff.  Bila  terdapat  senyawa  alkaloid,  maka  akan  terbentuk  endapan berwarna merah bata, merah, jingga pada reagen Dragendroff (Varian, N.D.2023).

## b. Steroid/Triterpenoid
Ekstrak  sampel  dimasukan  ke  dalam  tabung  reaksi  sebanyak  0,5  gram,  kemudian  tambahkan dengan  H 2 SO 4 .  Apabila  terjadi  perubahan  warna  larutan  menjadi  coklat  kemerahan  menunjukkan adanya senyawa terpenoid (Varian, N.D.2023).
c. Saponin
Ekstrak sampel dimasukan ke dalam tabung reaksi sebanyak 0,5 gram, kemudianditambahkan dengan 10 ml aquades dan dikocok selama 30 detik, bila terdapat buih pada larutan, maka ekstrak menunjukan adanya kandungan senyawa saponin (Varian, N.D.2023).

## d. Flavonoid
Ekstrak  sampel  dimasukan  ke  dalam  tabung  reaksi  sebanyak  1  gram,  kemudian  ditambahkan dengan  0,5  gram  serbuk  magnesium  dan  10  tetes  HCl  pekat.  Jika  terbentuk  larutan  berwarna jingga,  merah  muda  atau  medah,  maka  terdapat  senyawa  flavonoid  dalam  ekstrak  (Varian, N.D.2023).

## e. Tanin
Ekstrak  sampel  dimasukan  ke  dalam  tabung  reaksi  sebanyak  0,5  gram,  kemudian  tambahkan beberapa tetes larutan FeCl 3 1%. Adanya kandungan tanin ditandai dengan timbulnya warna hijau gelap atau hijau kebiruan (Varian, N.D.2023).
Uji Antioksidan dengan DPPH ( 1,1-difenil- 2-pikrilhidrazil )

## Pembuatan Larutan DPPH 0,2 mM
Sejumlah  20  mg  DPPH  ditimbang  dan  dilarutkan  dalam  100  ml  metanol  p.a  didapatkan konsentrasi 100 ppm (Ghozaly & Herdiyamti, 2020).

## Pembuatan Larutan Blanko
Pembuatan  larutan  blanko  Pembuatan  larutan  blanko  adalah  dengan  memindahkan  1,0  ml metanol ke dalam tabung reaksi, tambahkan, lalu ditambahkan 2,0 ml  metanol, kemudian  dikocok sampai  homogen.  Selanjutnya  larutan  diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu  37 ⁰ C  (Ghozaly  & Herdiyamti, 2020).

## Optimasi Panjang Gelombang DPPH
Optimasi panjang gelombang DPPH Solusi DPPH 100 ppm. Simpan larutan DPPH dalam wadah  kedap  cahaya  yang  dilapisi  aluminium  foil.  Solusi  DPPH  harus  segar  untuk  setiap pengujian.  Spektrum  serapan  larutan  diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-visibel  pada panjang  gelombang  400  nm  hingga  700  nm  serta  ditemukan  panjang  gelombang  optimumnya (Ghozaly & Herdiyamti, 2020).

## Pembuatan Larutan Uji
Kombinasi    ekstrak  dibuat  dengan  perbandingan    (1:1)  yaitu  sebanyak  1  mg  masing  diambil  dari ekstrak  stevia ( Stevia  rebaudiana  (bertoni)  bertoni )  dan  Teh  hijau  ( Camellia  sinensis (L.)  Kuntze) ditambahkan  1  mL  metanol  p.a  sehingga  di  peroleh  1000  ppm.  Dari  larutan  induk  tersebut  dibuat konsentrasi  10  ppm  (1  mg/100  ml),  20  ppm  (2  mg/100  ml),  30  ppm  (3  mg/100  ml),  40  ppm  (4 mg/100  ml),  50  ppm  (5  mg/100  ml).  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  dibandingkan  dengan antioksidan vitamin C (Ghozaly & Herdiyamti, 2020).

## Pembuatan Larutan Pembanding
Sebanyak  5  mg  Vitamin  C  p.a  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  50  ml,  kemudian ditambahkan  methanol  p.a  hingga  tanda  batas  sebagai  larutan  induk.  Dari  larutan  induk  tersebut dibuat konsentrasi 10 ppm (1 mg/100 ml), 20 ppm (2 mg/100 ml), 30 ppm (3 mg/100 ml), 40 ppm (4  mg/100  ml),  50  ppm  (5  mg/100  ml)  Kemudian  dibuat  variasi  konsentrasi  yang  sama  dengan sampel uji (Ghozaly & Herdiyamti, 2020).

## Pengujian Aktivitas Antioksidan Ekstrak
a. Absorbansi kontrol: Larutan DPPH 0,2 mM sebanyak 1,5 mL dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambahkan  methanol  p.a  sebanyak  4,5  mL,  Larutan  diinkubasi  pada  suhu  37ºC,  larutan dimasukkan dalam kuvet dan diukur absorbansinya.
b.  Sampel:  Sebanyak  1  mg  kombinasi  ekstrak  daun  Stevia  ( Stevia  rebaudiana  (bertoni)  bertoni ) dan Teh hijau ( Camellia sinensis (L.) Kuntze) (1:1) ditambahkan 1 mL metanol p.a sehingga di peroleh  1000  ppm.  Dari  larutan  induk  tersebut  dibuat  konsentrasi  10  ppm  (1  mg/100  ml),  20 ppm  (2  mg/100  ml),  30  ppm  (3  mg/100  ml),  40  ppm  (4  mg/100  ml),  50  ppm  (5  mg/100  ml). Aktivitas  antioksidan  ekstrak  dibandingkan  dengan  antioksidan  vitamin  C.  Sebanyak  5  mg Vitamin  C  p.a  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  50  ml,  kemudian  ditambahkan  methanol  p.a hingga tanda batas sebagai larutan induk. Dari larutan induk tersebut dibuat konsentrasi 10 ppm (1 mg/100 ml), 20 ppm (2 mg/100 ml), 30 ppm (3 mg/100 ml), 40 ppm (4 mg/100 ml), 50 ppm (5 mg/100 ml)Kemudian dibuat variasi konsentrasi yang sama dengan sampel uji. Tabung reaksi disiapkan untuk masing-masing konsentrasi, kemudian setiap tabung reaksi diisi dengan 4,5 ml ekstrak dan ditambahkan DPPH 0,2 mM sebanyak 1,5 mL (perbandingan larutan DPPH dengan isolat  yang  dilarutkan  pada  konsentrasi  tertentu  1:3).  Serapan  kemudian  diukur  dengan  alat Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 516 nm (Ghozaly & Herdiyamti, 2020).

## Analisis Data
Pada  penelitian  ini,  data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  menggunakan  rumus  sebagai berikut:
% 𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖  = (𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙) 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 X 100%

## Keterangan:
Absorban blanko   : Serapan radikal DPPH 50 µM pada panjang gelombang maksimal. Absorban sampel  : Serapan sampel dalam radikal DPPH50 µM pada panjang gelombang maksimal
Dari % penangkap radikal dihitung persamaan garis regresi menggunakan Microsoft Excel, untuk  dicari  menentukan  harga  konsentrasi  efek  50%-nya  (IC 50 )  (Orpa  dan  Subchan,  2018).  Nilai IC 50 masing-masing  konsentrasi  sampel  sirup  dihitung  dengan  menggunakan  rumus  persamaan regresi  linier.  Konsentrasi  sampel  sebagai  sumbu  x  dan  %  inhibisi  sebagai  sumbu  y.  Dari persamaan: Y = ax+ b. Untuk penentuan nilai IC 50 dapat dihitung dengan menggunakan rumus:
IC 50 = (50−𝑎) 𝑏
Keterangan: Y = % Inhibisi (50) a = Intercept (perpotongan garis di sumbu Y) b = Slope (kemiringan) X = Konsentrasi
Tingkat  kekuatan  senyawa  antioksidan  menggunakan  metode  DPPH  dapat  digolongkan sebagai berikut:
110
Tabel 1. Tingkat Kekuatan Aktivitas Antioksidan (Varian, n.d.2023) Intensitas Nilai IC 50 Sangat Kuat < 50 mg/L Kuat 50-100 mg/L Sedang 101-150 mg/L Lemah > 150 mg/L
Selanjutnya,  dilakukan  uji  perbedaan  antar  nilai  aktivitas  antioksidan  ekstrak  kombinasi dan Vitamin C dengan uji one-way ANOVA pada software SPSS versi 24.

## 3. RESULTS AND ANALYSIS Identifikasi Daun Stevia dan Daun Teh Hijau
Hasil  determinasi  sampel  yang  diproleh  dari  Laboratorium  Biologi  (Herbarium Medanense) Universitas Sumatera Utara menyatakan bahwa sampel yang dilakukan pada penelitian ini adalah benar Daun Stevia ( Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni) dan Daun Teh Hijau ( Camelia sinensis (L.) Kuntze).

## Hasil Pembuatan Simplisia
Sebelum  dilakukan  ekstraksi, daun  stevia  dan  daun  teh  hijau  segar  dibuat  menjadi simpilisia. Selanjutnya  daun  dipotong  menjadi  ukuran  kecil  untuk  dikeringkan  dengan  cara diangin-anginkan dibawah sinar matahari. Simplisia yang sudah  kering ditandai  dengan irisan bila diremas  mudah  patah, tidak  berjamur, berbau  khas  menyerupai  bahan  bahan  segarnya, dan  pada simplisia tidak memiliki kadar air.

## Hasil Ekstraksi Daun Stevia dan Daun Teh Hijau
Sampel  yang  telah  dihaluskan  kemudian  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  dengan pelarut  etanol  96%.  Hasil  rendemen  simplisia  daun  Stevia  ( Stevia  rebaudiana (Bertoni)  Bertoni) dan daun Teh Hijau ( Camelia sinensis (L.) Kuntze) ditunjukkan pada tabel dibawah ini:
Tabel 2. Hasil Rendeman Daun Stevia dan Daun Teh Hijau
No Simplisia Serbuk Hasil Ekstrak Rendeman (%) Warna Kombinasi Ekstrak 1 Daun Stevia 512 g 130 g 25,39% Hijau Kehitaman 2 Daun Teh Hijau 610 g 200 g 32,78%

## Hasil Skrining Fitokimia Daun Stevia dan Daun Teh Hijau
Skrining  Fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui  senyawa  kimia  yang  terkandung  dalam ekstrak daun Stevia dan daun teh hijau. Hasil skrining fitokimia ekstrak daun Stevia dan daun teh hijau dapat dilihat pada tabel di bawah ini:

## Tabel 3. Hasil Skrining Fitokimia
No Nama Senyawa Pereaksi Hasil daun Stevia   Hasil daun Teh Hijau 1 Alkaloid Bouchardart + + Maeyer - - Dragendroff - - Wagner + + 2 Steroida dan Triterpenoid Salkowsky - - Lieberman- Burchad - + 3 Saponin Aquadest+ Alkohol 96% + + 4 Flavonoida FeCl 3 5% - + Mg (s) + HCl (p) + + NaOH 10% + - H 2 SO 4(P) - - 5 Tanin FeCl 3 1% + +

## Hasil Pengujian Aktivitas Antioksidan
Hasil  Uji  Efektivitas  Antioksidan  Terhadap  Kombinasi  ekstrak  daun  Stevia  ( Stevia rebaudiana (Bertoni)  Bertoni)  dan  Daun  Teh  Hijau  ( Camelia sinensis (L.)  Kuntze)  Dengan Perbandingan (1:1)
Adapun  hasil  dari absorbansi  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  stevia  ( Stevia  rebaudiana (Bertoni)  Bertoni)  dan  daun  teh  hijau  ( Camelia sinensis (L.)  Kuntze)  dengan  perbandingan  (1:1) dapat dilihat pada tabel dibawah ini.
Tabel 4. Hasil Uji Efektivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak daun Stevia Perbandingan
(1:1) No Konsentrasi Ln konsentrasi Pengulangan Rata- rata Absorbansi IC 50 (ppm) 1 2 3 1 10 ppm 2,303 0,331 0,331 0,33 0,331 0,331 19,90 2 20 ppm 2,995 0,299 0,3 0,3 0,300 0,300 12,90 3 30 ppm 3,401 0,268 0,268 0,269 0,268 0,268 9,60 4 40 ppm 3,688 0,205 0,205 0,205 0,205 0,205 6.80 5 50 ppm 3,912 0,197 0,197 0,197 0,197 0,197 6.60
Tabel 5. Persen Inhibisi Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Stevia Dan Daun Teh Hijau
Dengan Perbandingan (1:1) No Konsentrasi (ppm) Absorbansi (abs) Inhibisi (%) Persamaan Linear 1 Blanko 0,449 - - 2 10 ppm 0,331 26,28 y= 23,978x-21.675 3 20 ppm 0,300 33,21 y=30,214x-27,218 4 30 ppm 0,268 40,31 y=36,911x-33,509 5 40 ppm 0,205 54,34 y=50,654x-46,965 6 50 ppm 0,197 56,12 yaitu y=52,213x-48,301
Semakin  besar  %  efektivitas  antioksidan  maka  semakin  berpotensi  sebagai  antioksidan. Konsentrasi  50  ppm  merupakan  konsentrasi  maksimum  dalam  meredam  radikal  bebas  DPPH, karena pada konsentrasi tersebut ekstrak memiliki nilai persen aktivitas antioksidan tertinggi yakni 56,12%.  Berdasarkan  literatur  dapat  dinyatakan  bahwa  jika  nilai  IC 50 yang  dihasilkan  berada dibawah  50  mg/L  yang  artinya  kombinasi  daun  Stevia  ( Stevia  rebaudiana (Bertoni)  Bertoni)  dan daun teh hijau ( Camelia sinensis (L.) Kuntze) tergolong dengan sifat antioksidan yang sangat kuat.

## Senyawa Pembanding Vitamin C
Adapun hasil uji  efektivitas antioksidan dari senyawa pembanding vitamin C dapat dilihat pada tabel dibawah ini.

## Tabel 6. Hasil Uji Efektivitas Senyawa Pembanding Vitamin C
No Konsentrasi Ln konsentrasi Pengulangan Rata- rata Absorbansi IC 50 (ppm) 1 2 3 1 10 2,303 0,098 0,098  0,098 0,098 0,098 11,62 2 20 2,995 0,2 0,2 0,2 0,200 0,200 3 30 3,401 0,178 0,179  0,178 0,178 0,178 4 40 3,689 0,136 0,136  0,136 0,136 0,136 5 50 3,912 0,221 0,22 0,22 0,22 0,22
Hasil  dari  persen  inhibisi  senyawa  pembanding  vitamin  C  (asam  askorbat)  dapat  dilihat pada tabel dibawah ini.
112
Tabel 7. Persen Inhibisi Senyawa Pembanding Vitamin C (Asam Askorbat) No   Konsentrasi (mg/L) Absorbansi (abs) Inhibisi (%) Persamaan Linear 1 Blanko 0,449 - y= 16,032x + 10,666 2 10 ppm 0,22 50,92 3 20 ppm 0,200 55,46 4 30 ppm 0,178 60,35 5 40 ppm 0,136 69,71 6 50 ppm 0,098 78,17
Hasil  dari  tabel  di  atas  nilai  persen  aktivitas  antioksidan  vitamin  C  tidak  mengalami perubahan  yang  signifikan  dengan  naiknya  konsentrasi,  hal  ini  disebabkan  oleh  sifatnya  yang sangat  stabil.  Dari  persamaan  linear  di  atas  diperoleh  nilai  IC 50 yaitu  11,62  mg/L.  Berdasarkan literatur  dapat  dinyatakan  bahwa  jika  nilai  IC 50 yang  dihasilkan  berada  disekitar  ˂50  mg/L  yang artinya memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
Berdasarkan hasil uji pada SPSS dapat dilihat dari tabel one sample kolmogrov smirnov test menunjukkan  bahwa  hasil  aktivitas  antioksidan  kombinasi  pada  konsentrasi  10  ppm,  20  ppm,  30 ppm,  40  ppm  dan  50  ppm  berdistribusi  normal.  Tabel test  of  homogeneity  of  variances terlihat bahwa hasil aktivitas antioksidan kombinasi per konsentrasi menunjukkan bahwa varian kelompok tersebut  homogen  (P-value=0,637)  sehingga  uji  Anova  valid  untuk  menguji  hubungan  ini. Selanjutnya tabel  Anova dari tabel itu pada kolom Sig diperoleh 0,25 dengan demikian pada taraf nyata  0,05  dapat  dikatakan  P-value  yaitu  0,25>0,05  yang  berarti  hasil  dari  kombinasi  daun  stevia dan  daun  teh  hijau  signifikan  artinya  memiliki  perbedaan  yang  nyata  pada  variasi  konsentrasi ekstrak daun Stevia dan daun teh hijau dalam aktivitas antioksidannya, dimana pada konsentrasi 50 ppm lebih efektif.

## 4. CONCLUSION
Berdasarkan hasil penelitian  uji  efektivitas antioksidan dari kombinasi  ekstrak daun stevia dan  daun  teh  hijau  dengan  menggunakan  metode  DPPH (1,1-  difenil-2-pikrilhidrazil )  dapat disimpulkan bahwa:
a. Kombinasi ekstrak etanol 96% Daun Stevia ( Stevia rebaudiana (bertoni) bertoni) dan Daun Teh Hijau  ( Camellia  sinensis (L.)  Kuntze)  dengan  menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1-  difenil-2- pikrilhidrazil )  memiliki  hasil  analisis  IC 50 10  ppm  sebesar  19,90  mg/L,  20  ppm  sebesar  12,90 mg/L,  30  ppm  sebesar  9,60  mg/L,  40  ppm  sebesar  6,80  mg/L,  50  ppm  sebesar  6,60  mg/L. Berdasarkan literatur dapat dinyatakan bahwa jika nilai IC 50 yang dihasilkan berada dibawah 50 mg/L  yang artinya kombinasi daun Stevia ( Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni)  dan daun Teh Hijau  ( Camelia  sinensis (L.)  Kuntze)  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  sangat  kuat  karena berada disekitar < 50 mg/L yang artinya memiliki efektivitas antioksidan yang sangat kuat.
b. Kombinasi  ekstrak  Daun  Stevia  ( Stevia  rebaudiana (bertoni)  bertoni)  dan  Daun  Teh  Hijau ( Camellia  sinensis (L.)  Kuntze)  dengan  menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1-  difenil-2- pikrilhidrazil ) memiliki persen efektifitas antioksidan tertinggi pada konsentrasi 50 ppm sebesar 56,12%.

## REFERENCES
Anang  Budi  Utomo,  Agus  Suprijono,  A.  R.  (2011). Sekolah  Tinggi  Ilmu  Farmasi  Yayasan Pharmasi Semarang . 1–9.
Aryanti,  R.,  Perdana,  F.,  &  Syamsudin,  R.  A.  M.  R.  (2021).  Telaah  Metode  Pengujian  Aktivitas Antioksidan pada Teh Hijau (Camellia sinensis (L.) Kuntze). Jurnal Surya Medika , 7 (1), 15– 24. https://doi.org/10.33084/jsm.v7i1.2024
BAHRIUL,  P.,  RAHMAN,  N.,  &  DIAH,  A.  W.  M.  (2014).  UJI  AKTIVITAS  ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAUN SALAM (Syzygium polyanthum) DENGAN MENGGUNANAKAN 1,1- DIFENIL-2-PIKRILHIDRAZIL. Jurnal Akademika Kimia , 3 (August), 143–149. Darmawan,  W.  (2023). Pengaruh  Metode  Pengeringan  terhadap  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Stevia rebaudiana Bertoni melalui Ekstraksi Berbantuan Gelombang Mikro . 1 (3).
Fajar, R. I., Wrasiati, L. P., & Suhendra, L. (2018). Kandungan Senyawa Flavonoid Dan Aktivitas
113
Antioksidan  Ekstrak  Teh  Hijau  Pada  Perlakuan  Suhu  Awal  Dan  Lama  Penyeduhan. Jurnal Rekayasa Dan Manajemen Agroindustri , 6 (3), 196.
https://doi.org/10.24843/jrma.2018.v06.i03.p02 Ghozaly,  M.  R.,  &  Herdiyamti,  E.  (2020).  Uji  aktivitas  Antioksidan  Kombinasi  Ekstrak  Etanol Daun  Kersen  (Mutingia  calabura  L.)  dan  Daun  Katuk  (Sauropus  androgynus  (L.)  Merr.) dengan Metode DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil). Archvies Pharmacia , 2 (2), 82–91.
Kusmiyati,  M.,  Sudaryat,  Y.,  Lutfiah,  I.  A.,  Rustamsyah,  A.,  &  Rohdiana,  D.  (2015).  ktivitas antioksidan,  kadar  fenol  total,  dan  flavonoid  total  dalam  teh  hijau  (Camellia  sinensis  (L.)  O. Kuntze) asal tiga perkebunan Jawa Barat. Jurnal Penelitian Teh Dan Kina , 8 (2), 101–106.
Malik,  A.,  Ahmad,  A.  R.,  &  Najib,  A.  (2017).  Pengujian  Aktivitas  Antiokidan  Ekstrak Terpurifikasi Daun Teh Hijau Dan Jati Belanda. Jurnal Fitofarmaka Indonesia , 4 (2), 238–240. https://doi.org/10.33096/jffi.v4i2.267
Najib, A., Malik, A., Ahmad, A. R., Handayani, V., Syarif, R. A., & Waris, R. (2017). Standarisasi Ekstrak Air Daun Jati Belanda Dan Teh Hijau. Jurnal Fitofarmaka Indonesia , 4 (2), 241–245. https://doi.org/10.33096/jffi.v4i2.268
Orpa, A., & Subchan, B. (2018). Aktivitas Antioksidan Minuman Fungsional Campuran Daun Teh (Camellia sinensis), Kayu Secang (Caesalpinia sappan L) Dan Daun Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni M). Artikel Ilmiah .
Putri,  Y.  D.,  Kartamihardja,  H.,  &  Lisna,  I.  (2019).  Yola  et  al  2019. Formulasi  Dan  Evaluasi Losion Tabir Surya Ekstrak Daun Stevia (Stevia Rebaudiana Bertoni M) , 6 (1), 32–36. Rikantara,  F.  S.,  Utami,  M.  R.,  &  Kasasiah,  A.  (2022).  Aktivitas  antioksidan  kombinasi  ekstrak daun sirsak (Annona muricata L.)  dan ekstrak daun pepaya (Carica papaya L.) dengan metode DPPH. Lumbung Farmasi , 3 (2), 124–133. Varian,  M.  (n.d.). Uji  Aktivitas  Penyembuhan  Luka  Bakar  Kombinasi  Kurkumin-  β  -Siklodekstrin Dan Ekstrak Daun Sirih ( Piper Betle L ) Dengan Metode Motahhare Akhoondinasab . 1–9. Werdhasari, A. (2014). Peran Antioksidan Bagi Kesehatan. Jurnal Biomedik Medisiana Indonesia , 3 (2), 59–68.
Zain,  A.  N.  A.,  Nurhadi,  B.,  &  Mahani.  (2020).  PENGARUH  PENAMBAHAN  RASIO  BAHAN PENGIKAT  TERHADAP  AKTIVITAS  ANTIOKSIDAN  BUBUK  STEVIA  (Stevia rebaudiana  Bertoni).  In Prosiding  Seminar  Nasional  Agribisnis  2020 .  Fakultas  Pertanian
Universitas Khairun. https://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/semnasagribisnis/article/viewFile/2440/1656