## INDUKSI  POLIPLOID  PADA  KULTUR  ANTERA  Lilium  longiflorum THUNB.
POLYPLOID INDUCTION ON ANTHER CULTURE OF Lilium longiflorum THUNB.
Anggraeni * 1 , Iriawati 2
1 Program  Studi  Biologi,  Fakultas  Pertanian  Perikanan  dan  Biologi  Universitas  Bangka  Belitung,  Bangka Belitung - Indonesia
2 Program Studi Biologi, Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati Institut Teknologi Bandung, Bandung – Indonesia * Corresponding Author e-mail : s anggieib@gmail.com

## ABSTRACT
Keywords:
Lilium longiflorum Thunb ., Antera,
Colchicine,
Poliploid
Poliploidisasi  memiliki  peranan  penting  dalam  upaya  pemuliaan  beberapa  tanaman  hias, seperti  pada  bunga  lili  (Lilium  sp.),  dengan  tujuan  untuk  menghasilkan  bunga  yang berukuran  lebih  besar  dengan  tangkai  perbungaan  yang  lebih  kokoh.  Poliploid  dapat diinduksi  dengan  senyawa  colchicine  pada  waktu  perendaman  tertentu.  Penelitian  ini bertujuan untuk menentukan konsentrasi colchicine dan waktu perendaman yang optimum untuk  menginduksi  poliploidisasi.  Eksplan  yang  digunakan  berupa  antera  dari  kuncup bunga L. longiflorum Thunb. yang berukuran 0,6-2,0 cm dan ditanam pada media inisiasi MS  +  7,5  M  NAA  +  0,75  M  BAP.  Konsentrasi  perlakuan  colchicine  yaitu  0,  100,  200, 400  ppm,  dan  perlakuan  waktu  perendaman  yaitu  12,  24,  48,  72  jam.  Hasil  penelitian menunjukkan persentase pertumbuhan tunas dan akar terbaik pada perlakuan 100 ppm 12 jam dengan nilai persentase masing-masing (60,00 ± 7,30)% dan (100,00 ± 0,00)% dengan rata-rata  partumbuhan  tunas  sebesar  1,40  ±  0,83  dan  akar  5,13  ±  0,30.  Konsentrasi colchicine  optimum  untuk  menginduksi  tanaman  L.  longiflorum  poliploid  adalah  200  ppm dan lamanya waktu perendaman 12 jam dengan menghasilkan tanaman tetraploid sebanyak 20%.  Colchicine  menyebabkan  terbentuknya  tanaman  L.  longiflorum  tetraploid  dengan menginduksi  peningkatan  jumlah  kromosom  (2n=4x=48),  ukuran  sel  stomata,  dan perubahan karakter fenotip.

## Article History:
Dikirim: 07 November 2023 Diterima: 26 November 2023 Disetujui: 30 November 2023 © 2023 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Pattimura
Copyright © 2023 Biofaal Journal Homepage: https://ojs3.unpatti.ac.id/index.php/biofaal/index E-mail: biofaaljournal@gmail.com
This  article  is  an  open  access  article  distributed a  Creative  Commons  Attribution-NonCommercial-ShareAlike  4.0 International License
How to cite:
Anggraeni,  Iriawati. 2023. Induksi Poliploid Pada Kultur Antera Lilium longiflorum Thunb.. Biofaal Journal. 4(2): 128-136.

## BIOFAAL Journal Desember 2023   Volume 4 Nomor 2   Halaman 128-136 E-ISSN: 2723-4959
https://doi.org/10.30598/biofaal.v4i2pp128-136

## A. PENDAHULUAN
Lilium  longiflorum atau  dikenal  dengan  bunga Easter  Lily merupakan  salah  satu komoditas  tanaman  hias  yang  memiliki  nilai  jual  cukup  tinggi.  Perbanyakan  bunga  lili umumnya  dilakukan  secara  vegetatif  dengan  menggunakan  umbi  dan  penyilangan,  namun upaya pemuliaan ini memiliki kendala karena L. longiflorum memiliki sifat self-incompatible (Kamenetsky  dan  Okubo,  2013).  Salah  satu  alternatif  yang  digunakan  untuk  menghasilkan bibit  tanaman  lili  dalam  jumlah  banyak  dalam  waktu  yang  relatif  singkat  adalah  melalui kultur in vitro . Propagasi tanaman lili melalui kultur in vitro umumnya menggunakan eksplan berupa umbi (Dhyani dkk., 2014) dan daun (Saetiew dan Umamanit, 2015). Upaya pemuliaan tanaman  secara in  vitro dapat  juga  dilakukan  melalui  kultur  antera.  Teknik  kultur  antera merupakan metode yang paling efisien untuk  menghasilkan tanaman poliploid dalam waktu singkat (Ali dkk., 2021).
Induksi  tanaman  poliploid  dapat  dilakukan  melalui  penggandaan  kromosom  atau poliploidisasi  (Dhooghe  dkk.,  2011),  dengan  memberikan  senyawa  mutagenik,  antara  lain dengan menggunakan senyawa colchicine (Jeloudar dkk., 2019). Colchicine merupakan agen antimitosis  yang  efektif  dalam  penggunaannya  karena  menghasilkan  persentase  tanaman poliploid  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  senyawa  lain,  pada  konsentrasi  nontoksik  untuk tanaman (Heo dkk., 2016).
Poliploidisasi pada tanaman lili telah dilakukan oleh Han dkk. (1999) pada lili Asiatic hybrid ‘Connecticut King’ pada konsentrasi colchicine 0,25-0,5 mM pada waktu perendaman selama  48-72  jam  dengan  menginduksi  tanaman  ‘double  haploid’.  Induksi  tanaman L. formosanum ‘double  haploid’  dan  tetraploid  juga  telah  berhasil  dilakukan  pada  konsentrasi colchicine 0,5 mM dengan waktu perendaman 72 jam (Han dan Nimi, 2005). Hasil penelitian Jeloudar  dkk.  (2019)  menunjukkan  konsentrasi  colchicine  0,01%  selama  24  jam  adalah perlakukan  paling  efektif  menginduksi  poliploidi  pada  planlet L.  Regale yang  berasal  dari eksplan  umbi.  Konsentrasi  colchicine  0,05%  selama  9  jam  perendaman  juga  mampu menginduksi  poliploid  sekitar  50%  dari  total  jumlah  umbi L.  leichtlinii var. maximowiczii (Heo dkk., 2016).
Hasil  penelitian-penelitian  sebelumnya  terlihat  bahwa  terjadi  perbedaan  konsentrasi colchicine dan waktu perendaman pada jenis lili yang berbeda dalam menginduksi poliploid, dan  sebagian  besar  eksplan  yang  digunakan  berasal  dari  bagian  umbi.  Selain  itu,  publikasi mengenai  induksi  tanaman  poliploid  pada L.  longiflorum melalui  kultur  antera  dengan induksi  colchicine  belum  ada,  oleh  sebab  itu  penelitian  dilakukan  untuk  mendapatkan tanaman poliploid dari eksplan antera setelah diberi perlakuan colchicine.

## B. METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Pelaksanaan  penelitian in  vitro dan  uji  sitologi  dilakukan  di  Laboratorium  Analisis Struktur dan Perkembangan Tumbuhan SITH ITB. Determinasi tingkat ploidi menggunakan flowcytometry dilakukan di Laboratorium Bioteknologi PT. East West Seed Indonesia.

## Alat dan Bahan
Peralatan  laboratorium  yang  digunakan  dalam  proses  penelitian  yaitu  botol  kultur, gelas ukur, erlenmeyer, cawan petri, mikropipet, timbangan digital, pH meter, pinset, scalple , gunting, hand  sprayer ,  bunsen, magnetic  stirer , hotplate , autoclave , laminar  air  flow cabinet ,  rak  kultur, incubator  shaker , microfilter , refrigerator ,  lemari  asam,  gelas  objek, cover  glass, clickcounter , slide  micrometer ,  kuvet,  mikroskop  cahaya,  mikroskop  stereo, mikroskop inverted, kamera dan Cell Counter Analysis (CCA Partec).
Eksplan  yang  digunakan  dan  komposisi  media  inisasi  dalam  penelitian  ini  mengacu pada Anggraeni  Iriawati (2017), yaitu kuncup bunga L. longiflorum Thunb. (2n = 2x = 24) dengan  panjang  kuncup  0,6-2,0  cm  dan  media  NAA  7,5  µM  +  BAP  0,75  µM  untuk menginduksi kalus. Media untuk regenerasi setelah perlakuan perendaman berdasarkan Han dan Niimi (2005) yaitu MS + 0,1 ppm NAA + 0,01 ppm BAP. Sumber sukrosa adalah 30 g/L gula,  selain  itu  8  g/L  agar-agar,  pH  larutan  media  sebelum  autoclave  adalah  5,7.  Pada  uji sitologi  bahan  tanaman  yang  digunakan  adalah  antera  untuk  pengamatan  mikrospora,  daun dan akar untuk pengamatan stomata dan kromosom, akuades, asam asetat glasial, etanol 96%, HCl  1  N,  aceto-orcein  2%,  dan  cat  kuku  yang  bening.  Determinasi  tingkat  ploidi menggunakan flowcytometry menggunakan buffer Otto’s dan DAPI.

## Prosedur Penelitian

## 1. Perendaman kalus dalam larutan colchicine dan penanaman
Perlakuan konsentrasi colchicine dan lama waktu perendaman berdasarkan pada hasil optimasi  pada  uji  pendahuluan  yang  mengacu  pada  Fernandez  dkk.  (1997)  dan  Han  dan Niimi (2005) dengan perbandingan:
Konsentrasi colchicine
: 0, 100, 200 dan 400 ppm dalam media MS cair
Lamanya waktu perendaman  : 12, 24, 48 dan 72 jam
Eksplan yang digunakan untuk perlakuan ini berupa kalus hasil inisiasi kultur antera. Selama perendaman, erlenmeyer berisi kalus diagitasi menggunakan incubator shaker dengan kecepatan  100  rpm  pada  suhu  25 0 C  dengan  waktu  perendaman  sesuai  dengan  perlakuan. Setelah perendaman, kalus dibilas dengan akuades steril sebanyak 3x, kemudian dipindahkan pada media regenerasi yang mengacu pada Han dan Niimi (2005) yaitu MS + 0,1 ppm NAA +  0,01  ppm  BAP  untuk  menginduksi  tunas  dan  akar.  Pengamatan  dimulai  1  MSP  (minggu setelah  perlakuan)  dengan  interval  waktu  pengamatan  2  minggu  sekali.  Parameter  yang diamati adalah persentase dan rata-rata kalus menginduksi pertumbuhan tunas dan akar.

## 2. Determinasi tingkat ploidi
Determinasi  tingkat  ploidi  dilakukan  dengan  menggunakan  analisis flowcytometry yang  mengacu  dari  XiQing  dkk.  (2017).  Sampel  yang  diuji  adalah  daun  dari  tunas  yang berumur 10 MSP.  Sekitar 0,5 cm 2 daun dicacah dengan pisau silet tajam dalam cawan petri yang telah dibasahi dengan 1000  L larutan buffer Otto’s I (100 mM asam sitrat monohidrat; 0,5%  v/v  Tween  20  pH  2-3)  (Otto,  1990;  Dolezel  dan  Gohde,  1995).  Selanjutnya,  250  L cairan  tersebut  disaring  dengan  Celltrix  berukuran  40  mesh nylon  filter dan  ditampung dalam cuvette . Cairan hasil isolasi ditambahkan buffer Otto’s II (400 mM Na 2 PO 4 .12 H 2 O pH 8-9  dan  DAPI  2  mg/L)  sebanyak  750  L.  Analisis flowcytometry dilakukan  dengan menggunakan  alat Cell  Counter  Analysis (CCA  Partec)  dan  divisualisasi  menggunakan
software Partec  Flowmax.  Pembacaan peak dilakukan  pada Gain 382.  Analisis  dilakukan pada masing-masing perlakuan dengan 5 ulangan. Parameter yang diamati adalah perbedaan ukuran peak pada histogram yang mengindikasikan tingkat ploidi sampel.

## 3. Analisis jumlah kromosom
Analisis  jumlah  kromosom  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  squash  yang diaplikasi  dari  Zhang  dkk.  (2017).  Sampel  yang  diamati  kromosomnya  berasal  dari  setiap perlakuan,  masing-masing  perlakuan  dengan  5  ulangan.  Pengamatan  pada  setiap  ulangan dilakukan  pada  10  bidang  pandang  mikroskop  dan  diulang  minimal  tiga  kali  untuk  setiap ulangan. Parameter yang diamati adalah jumlah kromosom.

## 4. Analisis ukuran dan kerapatan stomata
Pengamatan  stomata  menggunakan  metode  modifikasi  dari  Asri  dkk.  (2015). Potongan  daun  dioleskan  cat  kuku  bening  pada  bagian  abaksial  daun,  selanjutnya ditempelkan selotip pada bagian daun yang telah diolesi cat kuku bening tersebut. Daun yang diamati  stomatanya  berasal  dari  setiap  perlakuan,  masing-masing  perlakuan  dengan  3 ulangan. Parameter yang diukur adalah panjang serta lebar stomata menggunakan micrometer pada pembesaran mikroskop 400x dan dihitung kerapatan stomatanya. Pengamatan kerapatan stomata  pada  setiap  ulangan  dilakukan  pada  20  bidang  pandang  mikroskop  dan  diulang minimal  tiga  kali  untuk  setiap  ulangan.  Pengamatan  dilakukan  menggunakan  mikroskop cahaya dengan perbesaran 200x. Luas bidang pandang yang digunakan adalah 1,05 mm 2 .

## Analisis Data
Data  dianalisis  menggunakan  ANOVA  dengan  uji  lanjut  LSD  pada  taraf  nyata  5% untuk  mengetahui  pengaruh  beda  antar  perlakuan.  Pada  data  yang  tidak  normal  dianalisis menggunakan  Kruskal  Wallis  dan  dilanjutkan  dengan  uji  Mann  Whitney.  Pengolahan  data menggunakan program SPSS 16.0. Penghitungan persentase rasio perkembangan mikrospora, persentase  dan  rata-rata  pertumbuhan,  jumlah  kromosom,  ukuran  stomata  dan  kerapatan stomata dengan menggunakan microsoft office excel .

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengaruh Colchicine terhadap Respon Pertumbuhan Tunas dan Akar
Pertumbuhan  tunas  dan  akar  tertinggi  juga  terjadi  pada  perlakuan  100  ppm  12  jam dengan nilai persentase masing-masing (60,00 ± 7,30)% dan (100,00 ± 0,00)% dengan rata- rata partumbuhan tunas  sebesar 1,40 ± 0,83 dan akar 5,13 ± 0,30 (Tabel  1). Analisis ragam pada  persentase  dan  rata-rata  pertumbuhan  tunas  sebagian  besar  menunjukkan  nilai  yang tidak berbeda nyata antar perlakuan.
Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  kalus  merespon  pertumbuhan  tunas  dan  akar  pada konsentrasi  colchicine  terendah  dan  waktu  perendaman  tersingkat,  walaupun  hasil  respon tersebut masih lebih rendah bila dibandingkan dengan kontrol (tanpa perlakukan colchicine). Hasil ini diperkuat oleh penelitian yang pernah dilakukan oleh Sajjad dkk. (2013) pada Lilium leichtlinii var. maximowiczii bahwa  perlakuan  colchicine  pada  konsentrasi  terendah  dan durasi  perendaman  tersingkat  cenderung  memberikan  pertumbuhan  dan  kesintasan  yang tinggi pada eksplan. Hal ini disebabkan karena tingginya konsentrasi colchicine menginduksi
kerusakan  pada  beberapa  bagian  sel  penyusun  troposom  dan  memberikan  efek  negatif  bagi sel-sel meristematik (Heo dkk., 2016).
Tabel  1.  Respon  pertumbuhan  tunas  dan  akar  pada  kombinasi  konsentrasi  colchicine  dan waktu perendaman
Konsentrasi Colchicine (ppm) Waktu Perendaman (jam) Respon Pertumbuhan Tunas (%) Rata-rata Tunas Akar (%) Rata-rata Akar 0 12 73.33 ± 5.57 de 1.93 ± 0.64 ef 100.00 ± 0.00 b 5.27 ± 0.37 f 24 66.67 ± 6.66 cde 2.53 ± 1.76 def 93.33 ± 2.98 b 4.53 ± 2.02 def 48 93.33 ± 2.98 e 3.53 ± 1.63 f 93.33 ± 2.98 b 6.80 ± 1.22 g 72 53.33 ± 3.65 cd 1.13 ± 0.45 de 100.00 ± 0.00 b 5.27 ± 0.60 fg 100 12 60.00 ± 7.30 cde * 1.40 ± 0.83 de * 100.00 ± 0.00 b * 5.13 ± 0.30 f * 24 26.66 ± 5.57 abc 0.73 ± 0.43 bcd 80.00 ± 3.65 b 3.07 ± 0.86 de 48 53.33 ± 5.96 cd 1.33 ± 0.53 de 73.33 ± 5.57 b 1.93 ± 0.72 bcd 72 40.00 ± 8.69 abcd 1.13 ± 0.87 cde 80.00 ± 3.65 b 1.47 ± 0.84 abc 200 12 33.33 ± 8.16 abcd 0.73 ± 0.43 cd 93.33 ± 2.98 b 1.73 ± 0.49 bc 24 20.00 ± 5.96 abc 0.67 ± 0.62 abcd 80.00 ± 3.65 b 2.60 ± 0.76 cd 48 26.66 ± 5.57 abc 0.93 ± 0.55 cde 73.33 ± 5.57 b 1.67 ± 0.53 bc 72 6.66 ± 2.98 ab 0.20 ± 0.45 abc 33.33 ± 4.71 a 0.87 ± 0.90 ab 400 12 46.66 ± 7.60 bcd 1.07 ± 0.55 de 93.33 ± 2.98 b 2.73 ± 0.28 de 24 13.33 ± 3.65 ab 0.53 ± 0.77 abcd 60.00 ± 8.69 ab 1.47 ± 1.07 abcd 48 0.00 ± 0.00 a 0.00 ± 0.00 a 20.00 ± 5.96 a 0.40 ± 0.60 a 72 6.66 ± 2.98 ab 0.13 ± 0.30 ab 26.66 ± 5.57 a 0.40 ± 0.28 a
Ket.  Asterisk:  respon  pertumbuhan  tertinggi.  Angka-angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama  menunjukkan perbedaan yang tidak nyata menurut uji Kruskal-Wallis yang dilanjutkan uji Mann-Whitney pada taraf α =5 %.

## Pengaruh Colchicine terhadap Tingkat Ploidi
Berdasarkan hasil pengamatan, 3 dari 15 (20%) regeneran pada perlakuan 200 ppm 12 jam didapatkan memiliki tingkat  ploidi  tetraploid dengan jumlah kromosom  2n=4x=48, dan sebanyak 4 regeneran teridentifikasi memiliki tingkat ploidi mixoploid, yaitu pada perlakuan 100 ppm 72 jam sebanyak 6,66% , 200 ppm 48 jam sebanyak 6,66%, dan pada perlakuan 200 ppm 72 jam sebanyak 13,33% (Tabel 2).
Hasil  ini  didukung  juga  oleh  hasil  determinasi  tingkat  ploidi  menggunakan flowcytometry (Gambar  1).  Pada  regeneran  yang  mengandung  sel  dengan  tingkat  ploidi tetraploid menghasilkan histogram dengan puncak tunggal pada kolom  400 ppm, sedangkan pada  regeneran  yang  mengandung  sel  dengan  tingkat  ploidi  mixoploid  terdeteksi  dengan menghasilkan histogram 2 puncak pada kolom 200 ppm dan 400 ppm. Puncak tunggal yang dihasilkan  menunjukkan  bahwa  sampel  daun  dan  kalus  yang  digunakan  mempunyai komposisi  genetik  yang  relatif  sama  sehingga  tidak  mengindikasikan  terjadinya  variasi somaklonal, seperti yang dilaporkan oleh Roostika dkk. (2013).

## Tabel  2.  Determinasi  tingkat  ploidi  regeneran  pasca-perlakuan  pada  kombinasi  konsentrasi colchicine dan lamanya waktu perendaman yang berbeda
Konsentrasi Colchicine (ppm) Waktu Perendaman (Jam) Tingkat Ploidi (%) Diploid Tetraploid Mixoploid 0 12 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 24 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 48 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 72 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 100 12 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 24 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 48 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 72 93.33 ± 2.98 0.00 ± 0.00 6.66 ± 2.98 200 12 80.00 ± 8.94 20.00 ± 8.94 0.00 ± 0.00 24 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 48 93.33 ± 2.98 0.00 ± 0.00 6.66 ± 2.98 72 86.66 ± 5.96 0.00 ± 0.00 13.33 ± 5.96 400 12 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 24 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 48 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 72 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
Pada  regeneran  tetraploid  terjadi  penggandaan  kromosom  dari  kromosom  dasarnya. Penggandaan  kromosom  ini  mengindikasikan  terjadinya  proses  depolimerisasi  tubulin sehingga  mencegah  pembentukan  benang-benang  kumparan  mitosis  (XiQing  dkk.,  2017). Colchicine  menghambat  terbentuknya  polimerisasi  tubulin  menjadi  mikrotubula  dan menyebabkan  depolimerisasi  mikrotubula  dengan  bergabungnya  colchicine  pada  ujung perakitan polimer mikrotubula. Pengikatan colchicine pada tubulin akan membentuk komplek colchicine-tubulin  (C-tubulin)  dan  menghentikan  penambahan  sub  unit  tubulin  selanjutnya (Fernandes dkk., 2013).
Gambar  1.  Histogram  tingkat  ploidi  pada  daun  dan  kalus L.  longiflorum pasca-perlakuan  colchicine menggunakan flowcytometry .  (A)    0  ppm  48  jam  (diploid:  2n=2x=24),  (B)  200  ppm  12  jam (tetrapolid:  2n=4x=48),  (C)  200  ppm  72  jam  (mixoploid).  X- axes :  tingkat  pendaran  DAPI;  Y- axes : jumlah nukleus. RN1: haploid; RN2: diploid; RN3: triploid; RN4: tetraploid.
▪ Sel yang terdeteksi
RN2 : 56,16 %
RN4 : 40,02 %
▪ Sel yang terdeteksi
RN2 : 68,69 %
RN4 : 1,40 %
▪ Sel yang terdeteksi RN2 : 7,88 % RN4 : 28,22 % A B C
Pada  pengamatan  sitologi  juga  menunjukkan,  regeneran  tetraploid  memiliki  ukuran sel yang lebih besar dari regeneran diploid dan mixoploid, namun ukuran kromosomnya lebih kecil (Gambar 2). Doyle dan Coatet (2019) menyatakan dalam penelitiannya bahwa semakin tinggi  tingkat  ploidi,  maka  ukuran  luas  sel  semakin  besar  dan  ukuran  panjang  kromosom semakin kecil, sejalan dengan bertambahnya jumlah kromosom.
Gambar 2.  Determinasi tingkat ploidi berdasarkan jumlah kromosom pada akar L. longiflorum pasca-perlakuan colchicine.  (A)  sel  diploid  (2n=2x=24),  (B)  sel  tetraploid  (2n=4x=48),  (C)  sel  aneuploid  (2n=30).
Pembesaran: 400x. Bar: 10  m .
Pada tanaman diploid (Gambar 2A) memiliki jumlah 24 kromosom, sedangkan pada tanaman  tetraploid  (Gambar  2B)  memiliki  koromosom  dua  kali  lebih  banyak  dari  tanaman diploid,  yaitu  48  kromosom.  Regeneran  aneuploid  juga  ditemukan  penelitian  ini  dengan jumlah 30 kromosom. Peristiwa aneuploid pada ploidisasi tidak merugikan pertumbuhan sel, sebab keseluruhan set dari gen tetap terdapat dalam genom (Perwati, 2009).

## Pengaruh Colchicine terhadap Ukuran dan Kerapatan Stomata
Interaksi  konsentrasi  colchicine  dan  lamanya  waktu  perendaman  juga  memberikan korelasi  positif  antara  panjang  dan  lebar  stomata,  namun  berkorelasi  negatif    terhadap  rata- rata kerapatan stomata (Tabel 3). Regeneran diploid memiliki panjang stomata berkisar antara 68,80-100,00  m  dan  lebar  stomata  berkisar  antara  42,80-58,50  m.  Regeneran  mixoploid memiliki  panjang  stomata  berkisar  antara  106,80-127,60  m  dan  lebar  stomata  berkisar antara 58,80-74,80  m. Regeneran tetraploid memiliki panjang stomata 125,20  m dan lebar stomata 73,20  m.
Rata-rata  panjang  dan  lebar  stomata  pada  regeneran  mixoploid  (200  ppm  72  jam) menunjukkan hasil yang paling tinggi, tetapi hasil analisis ragam menunjukkan panjang, lebar dan  kerapatan  stomata  antara  regeneran  tetraploid  dan  mixploid  tidak  berbeda  nyata.  Pada penelitian  ini,  rata-rata  kerapatan  stomata  pada  regeneran  diploid  antara  12-28  stomata  per mm 2 ,  sedangkan  pada  regeneran  mixoploid  dan  tetraploid  berkisar  antara  4-5  stomata  per mm 2 .  Doyle  dan  Coatet  (2019)  mengungkapkan  bahwa  tunas  yang  memiliki  set  kromosom lebih  banyak  dari  biasanya  menyebabkan  peningkatan  ukuran  sel  dan  stomata.  Sel  pada regeneran  dengan  tingkat  ploidi  yang  lebih  tinggi  memiliki  vakuola  yang  lebih  besar  yang berperan  penting  dalam  regulasi  tekanan  osmotik  pada  sel  (Jeloudar  dkk.,  2019).  Hasil  ini mengindikasikan  bahwa  penambahan  jumlah  kromosom  berdampak  pada  penambahan ukuran  sel  penjaga  stomata,  sehingga  berkorelasi  positif  terhadap  penambahan  panjang  dan lebar stomata.
A B C
Tabel  3.  Pengaruh  kombinasi  perlakuan  konsentrasi  colchicine  dan  lamanya  waktu perendaman  pada  kultur  M3K4  terhadap  rata-rata  panjang,  lebar  dan  kerapatan stomata.

## D. KESIMPULAN
Colchicine  menyebabkan  terbentuknya  tanaman  L.  longiflorum  tetraploid  dengan menginduksi peningkatan jumlah kromosom (2n=4x=48), ukuran sel stomata, dan perubahan karakter fenotip. Konsentrasi colchicine optimum untuk menginduksi tanaman L. longiflorum poliploid  adalah  200  ppm  dan  lamanya  waktu  perendaman  12  jam  dengan  menghasilkan tanaman tetraploid sebanyak 20%.

## E. DAFTAR PUSTAKA
Ali J, Nicolas KLC, Akther S, Tobari A, Ebadi AA,  Nazarea CMM, and Mahender A. 2021. Improved anther culture media for enhanced callus formation and plant regeneration in rice ( Oryza sativa L.). Plant . 10:1- 16.
Anggraeni dan Iriawati. 2017. Respon antera Lilium longiflorum Thunb dengan berbagai stadium perkembangan mikrospora pada kombinasi konsentrasi zat pengatur tumbuh. Agrosainstek . 1(2): 1-7
Asri  A.  W,  Sulistyaningsih  E  dan  Murti  RH.  2015.  Karakter  dan  sitologi  tanaman  bawang  daun  ( Allium fistulosum L.) hasil induksi kolkisin pada generasi vegetatif kedua. Vegetalika , 4(1): 37-45.
Dhooghe E, Laere KV, Eeckhaut LL, dan Huylenbroeck JV. 2011. Mitotic chromosome doubling of plant tissue in vitro. Plant Cell Tissue Organ Culture . 104: 359-373. Dhyani A, Sharma G, Nautiyal BP, and Nautiyal MC. 2014. Propagation and conservation of Lilium polyplyllum D. Don ex Royle. Journal of Applied Research on Medicinal and Aromatic Plants . 1(4): 144-147. Dolezel J dan Gohde W. 1995. Sex determination in dioecious plants Melandrium album and M. rubrum using high-resolution flow cytometry. Cytometry . 19: 103-106.
Doyle JJ and Coatet JE. 2019. Polyploidy, the nucleotype, and novelty: The impact of genome doubling in the biology of the cell. Int. J. Plant Sci. 180(1): 1-52. Fernandes TCC, Pizano MA dan Maria MAM. 2013. Chapter 19: Characterization, Modes of Action and Effet of Trifluralin: A Review . Agriculture and Biological Sciences, CC by 30 Licence.
Konsentrasi Colchicine (ppm) Waktu Perendaman (Jam) Rata-rata Rata-rata Kerapatan Stomata (mm 2 ) Panjang Stomata (  m) Lebar Stomata (  m) 0 12 68.80 ± 4.13 a 42.80 ± 2.70 a 28.15 ± 2.64 de 24 70.40 ± 7.35 ab 43.60 ± 2.27 ab 23.56 ± 3.81 k 48 71.60 ± 6.91 ab 44.80 ± 3.67 b 23.18 ± 3.64 j 72 74.40 ± 6.58 b 44.80 ± 4.54 ab 20.25 ± 3.42 j 100 12 85.20 ± 9.24 cd 51.60 ± 6.65 c 17.19 ± 1.72 i 24 100.00 ± 12.50 f 58.00 ± 4.32 def 12.86 ± 1.84 h 48 96.40 ± 5.14 f 56.40 ± 3.50 def 12.61 ± 1.74 d 72 124.40 ± 11.38 h 70.80 ± 10.33 g 4.96 ± 1.26 ef 200 12 125.20 ± 11.93 h 73.20 ± 11.32 g 4.33 ± 1.36 a 24 98.80 ± 8.65 f 58.40 ± 7.58 def 7.89 ± 1.00 a 48 106.80 ± 7.55 g 58.80 ± 4.63 ef 5.09 ± 1.47 c 72 127.60 ± 10.05 h 74.80 ± 3.79 g 4.20 ± 1.90 b 400 12 83.20 ± 7.00 cd 50.80 ± 7.31 c 15.66 ± 1.04 a 24 90.00 ± 3.88 de 55.60 ± 3.50 def 12.99 ± 1.56 g 48 93.60 ± 7.35 def 56.80 ± 4.13 def 12.22 ± 1.91 f 72 94.40 ± 7.10 f 58.50 ± 3.17 f 12.10 ± 1.92 def
Fernandez    AMA,  Nakazaki  T,  Yamagata  H,  dan  Tanisaka  T.  1997.  production  of  double-haploid  plant  from Lilium longiflorum Thunb. anther culture. Plant Science . 123: 179-187.
Han  DS  dan  Niimi  Y.  2005.  production  of  haploid  and  double  haploid  plants  from  anther-derived  callus  of Lilium formosanum. Proc. IX Intl Symp. on Flower Bulbs , 389-393.
Han DS, Niimi Y, dan Nakano M. 1999. Production of double haploid through colchicine treatment of anther- derived haploid calli in The Asiatic Hybrid Lily ‘Connecticut King’. J. Japan. Soc. Hort. Sci . 68(5): 979- 983.
Heo  JY,  Jeong  SH  and  Park  SM.  2016.  Polyploidy  production  in Lilium  leichtlinii var.  maximowiczii  using colchicine. Anim. Plant Sci. 26: 1111-16.
Jeloudar NI, Chamani E, Shokouhian AA, and Zakaria RA. 2019. Induction and identification of polyploidy by colchicine treatment in Lilium regale . Cytologia . 84(3): 271-276. Kamenetsky  R  dan  Okubo  H.  2013. Ornamental  Geophytes:  From  Basic  Science  to  Sustainable  Production . CRC Press Taylor and Francis Group. Hal 94-100.
Otto FJ. 1990. DAPI Staining of Fixed Cells for High-resolution Flow Cytometry of Nuclear DNA. In: Methods in Cell Biology . Darzynkiewickz., Z. and H.A. Crissman (Eds.), Academic Press, San Diego. 33: 105-110. Perwati  LK.  2009.  Analisis  Derajat  Ploidi  dan  Pengaruhya  terhadap  Variasi  Ukuran  Stomata  dan  Spora  pada
Adiantum radianum . BIOMA . 11(2): 39-44. Roostika  I,  Darwati  I,  dan  Megia  R.  2013.  Optimasi  dan  evaluasi  metode  kriopreservasi  purwoceng. Jurnal Littri . 19(3): 147-157.
Sajjad  Y,  Jaskani  MJ,  Mehmood  A,  Ahmad  I  and  Abbas H.  2013.  Effect of  colchicine  on  in vitro  polyploidy induction in African Marigold (Tagetes erecta). Pakistan J. Bot. 45(3): 1255- 1258.
XiQing Z, Juan WL, Zheng CQ, and Xia JG. 2017. Polyploidy induction and identification in Lilium concolor var, pulchellum . Journal of Beijing Forestry University . 39(7): 96-102. Zhang  TX,  Guo  YH,  Xie  XH  and  Sun  M.  2016.  Studies  on  root  tip  chromosome  squashes  in Lilium and karyotype analysis of four Lilium species. ISHS Acta Horticulture. 1171: XII Internasional Symposium on Flower Bulb and Herbaceous Perennial.

## BIOFAAL JOURNAL
E-ISSN 2723-4959 Volume 4 Number 2 | Desember 2024

## EDITOR IN CHIEF
Laury Marcia Ch. Huwae, S.Si., M.Si

## Associate Editor
Dr. Windi Mose, S.Pd D. E. Sahertian, S.Si., M.Si E. Samson, S.Si., M.Si Veince B. Silahooy, S.Si., M.Si

## Expert Editor Board
Prof. Dr. Pieter Kakisina, S.Pd., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon) Dr. dr. Ermita I. Ibrahim Ilyas, M.S., AIFO (Universitas Indonesia, Jakarta) Sri Sumartiningsih, S.Si., M.Kes., Ph.D., AIFO (Universitas Negeri Semarang, Semarang)
Dr. Ir. Alfred O. M. Dima, M.Si (Universitas Nusa Cendana, Kupang)
Dr. Safrida, S.Pd., M.Si (Universitas Syiah Kuala, Aceh)
Dr. dr. Yetty Machrina, M.Kes, AIFO-K (Universitas Sumatera Utara, Medan) Dr. Saidah Rauf, S.Kep., M.Sc (Politeknik Kesehatan Kemenkes Maluku, Masohi)
Dr. Jusak Syaranamual, M.Pd., AIFO (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. Theopilus W. Watuguly, M.Kes., AIFO (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. Maria Nindatu, M.Kes (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. Martha Kaihena, M.Kes (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. La Eddy, S.Pd., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. Drs. Amos Killay, M.Kes (Universitas Pattimura, Ambon) Dr. Ch. D. Umi Baszary, S.Si., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon) Dr. Meilissa C. Mainassy, S.Si., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon)

## Asistant Editorial
Dr. Adrien Jems Akiles Unitly, S.Si., M.Si E. T. Apituley, S.Si., M.Si

## Publisher
Jurusan Biologi FMIPA Universitas Pattimura, bekerja sama dengan Ikatan Ahli Ilmu Faal Indonesia (IAIFI)

## Editorial Address
Jurusan Biologi - Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Pattimura
Jl. Ir. M. Putuhena, Kampus Poka, Ambon, 97234, Maluku, Indonesia E- mail : biofaaljournal@gmail.com