Uji efek antibakteri ekstrak daun leilem (Clerodendrum
minahassae l.) terhadap bakteri streptococcus mutans
Susriyani Bontjura 1) , Olivia Amelia Waworuntu 2) , Krista Veronica Siagian 1)
1) Program Studi Pendidikan Dokter Gigi Fakultas Kedokteran UNSRAT
2) Fakultas Kedokteran Universitas Sam Ratulangi

## ABSTRACT
Dental caries is one of the most prevalent oral health problems in Indonesia. The main bacterial  cause  of  dental  caries  is  Streptococcus  mutans.  Leilem  leaves (Clerodendrum minahassae  L.) used  as  vegetables  and  often  used  as  traditional  medicine in  Minahasa. Leilem  leaves  (Clerodendrum  minahassae  L.)  consisted  of  active  compounds  that function  as  an  antibacterial.  They  are  flavonoids,  phenols,  steroids  and  terpenoids.  The aim  of  this  study  to  determine  the  antibacterial  effects  of  Leilem  leaves  extract (Clerodendrum  minahassae  L.)  against  Streptococcus mutans  bacteria.This  experimental study  used  post  test  only  control  group  design  with  Kirby-bauer  modification  method used  paper  disk.  The  Leilem  leaves (Clerodendrum  minahassae  L.) were  taken  from Manado City and then they were extracted with maceration method using  ethanol 96% solution.  Streptococcus  mutans  bacteria  taken  from  a  pure  stock  Microbiology Laboratories, Faculty of Medical Sam Ratulangi University Manado. The result showed the  average  diameter  of  inhibition  zone  of  leilem  leaves  extract  against  Streptococcus mutans bacteria was 6,20mm and smaller than the averge diameter of inhibition zone of antibiotic  erythromycin.  The  conclusion  are  leilem  leaves  extract  has  an  antibacterial effect against Streptococcus mutans bacteria.
Key word: leilem leaves (Clerodendrum minahassae L.) , Streptococcus mutans

## ABSTRAK
Karies  gigi  merupakan  salah  satu  masalah  kesehatan  gigi  dan  mulut  yang  paling menonjol di Indonesia. Bakteri utama penyebab karies gigi adalah bakteri Streptococcus mutans. Daun leilem ( Clerodendrum minahassae L. ) digunakan sebagai tanaman sayuran dan  sering  digunakan  dalam  pengobatan  tradisional  di  daerah  Minahasa.  Daun  leilem ( Clerodendrum  minahassae  L. )  mengandung  senyawa  aktif  yang  berfungsi  sebagai antibakteri  yaitu, flavonoid,  fenol,  steroid  dan  terpenoid. Tujuan  penelitian  ini  untuk mengetahui efek antibakteri  ekstrak daun leilem ( Clerodendrum minahassae L. ) terhadap bakteri Streptococcus  mutans .  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental menggunakan  desain post  test  only  control  group  design dengan  menggunakan  metode modifikasi  Kirby-bauer  menggunakan  kertas  saring.  Daun  leilem  ( Clerodendrum minahassae  L. )  diambil  dari  Kota  Manado  dan  diekstraksi  dengan  metode  maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Bakteri Streptococcus mutans diambil dari stok bakteri murni  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Sam  Ratulangi
Manado.Hasil  penelitian  ini  menunjukan  bahwa  rata-rata  diameter  zona  hambat  ekstrak daun  leilem  terhadap  bakteri Streptococcus  mutans sebesar  6,20mm  dan  lebih  kecil dibandingkan  dengan  rata-rata  diameter  zona  hambat  antibiotik  eritromisin. Kesimpulannya  ekstrak  daun  leilem  ( Clerodendrum  minahassae  L. )  memiliki  efek antibakteri terhadap bakteri Streptococcus mutans .
Kata kunci: daun leilem ( Clerodendrum minahassae L. ), Streptococcus mutans

## Pendahuluan
Indonesia  merupakan  negara yang  kaya  akan  keanekaragaman hayati  dengan jenis tumbuhan  yang bervariasi    dan    memiliki    peranan penting  dalam  perkembangan  ilmu pengetahuan dan
teknologi.
Keanekaragaman    hayati    ini termasuk  dalam  sumber  daya  alam yang  menghasilkan    senyawa    kimia yang    tidak    terbatas  jenis    dan jumlahnya,  salah  satunya  tanaman leilem. Tanaman leilem ( Clerodendrum    minahassae  L. ) merupakan  tanaman  yang  banyak tumbuh  dan    dimanfaatkan    sebagai makanan  dan  obat  tradisional  di daerah  Minahasa.  (Devis  Kepel,  dkk
2014). Tanaman  leilem  merupakan  bagian dari genus Clerodendrum L . (keluarga: Lamiacea e) yang mengandung  senyawa  kimia  aktif seperti  fenol,  flavonoid,  terpenoid dan  steroid.  (Shrivastava  dan  Patel, 2007) Senyawa aktif seperti
flavonoid  disintesis  oleh  tanaman sebagai sistem pertahanan dan dalam responsnya  terhadap  infeksi  oleh mokroorganisme sehingga  senyawa ini efektif sebagai senyawa antimikroba terhadap sejumlah
mikroorganisme  (Parubak  dan  Sulu, 2013).  Salah  satu  bakteri  gram positif  yang  sering  dijumpai  dalam rongga  mulut  adalah Streptococcus mutans. Streptococcus mutans
merupakan  salah  satu  mikroflora normal  di  dalam    rongga    mulut
manusia.  Bakteri    ini    berperan penting  dalam    metabolisme  sukrosa menjadi    asam    laktat,  yang menyebabkan    demineralisasi    email gigi.  Bakteri  ini  merupakan    bakteri yang    paling  utama    sebagai penyebab    karies    gigi  (Gartika  dan Satari, 2013).
Berdasarkan  Laporan  Hasil  Riset Kesehatan  Dasar  Nasional  tahun 2013,  prevalensi  nasional  masalah gigi  dan  mulut  mencapai  25,9% dengan  index  DMF-T  mencapai 4,6%  (anonim,  2013). Berdasarkan data  tersebut  dapat  diketahui  bahwa karies  gigi  merupakan  salah  satu masalah gigi dan mulut yang banyak terjadi. Belum ada penelitian mengenai  efek  antibakteri  dari  daun leilem  ( Clerodendrum  minahassae L .)  terhadap  bakteri Streptococcus mutans . Tujuan penelitaian ini untuk mengetahui bagaimana efek antibaktri ekstrak daun leilem ( Clerodendrum minahassae L. ) terhadap bakteri Streptococcus mutans .

## METODOLOGI  PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium, menggunakan rancangan eksperimental murni (true experimental design) dengan rancangan  penelitian post  test  only control design. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakologi  Fakultas  MIPA  dan Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran Universitas Sam
Ratulangi  Manado  pada  Februari- Agustus 2015 .

## Alat dan Bahan Penelitian
Alat-  alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu:  tabung  reaksi, petridish, jarum ose, kapas lidi steril, pinset pipet, oven, a utoclave, incubator, kamera, batang pengaduk, timbangan, api bunsen, jangka sorong, sarung tangan, vacum evaporator, tabung Erlenmeyer, masker.
Bahan  penelitian  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu:  Daun leilem  ( Clerodendrum  minahassae L.), paper disk, bakteri streptococcus mutans, etanol  96%,  Nutrient  Agar (NA), Muller-Hinton Agar (MHA), Brain Heart Infusion Broth (BHI-B), disk eritromisin 15µg, larutan BaCl2 1%, larutan H2SO4 1%, akuades.
Pembuatan Ekstrak Daun leilem ( Clerodendrum minahassae  L .)    dibersihkan  dengan
mencuci  di  bawah  air  mengalir sampai bersih, ditiriskan, lalu dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan  dengan  suhu  ruangan. Daun  yang  telah  kering  diblender.
Serbuk daun leilem ditimbang seberat  100  gram,  dimasukan  dalam wadah dan di tambahkan etanol 96%
sampai  terendam  lalu  diaduk  hingga homogen,  tutup  segera  kemudian disimpan dalam ruangan yang terhindar dari cahaya matahari selama  5  hari.  Selama  perendaman,
setiap  hari  diaduk  selama  15  menit. Setelah  direndam  selama  5  hari, disaring dengan menggunakan kertas saring  lalu  diuapkan  dengan rotary vacum  evaporator pada  temperatur 40 o C.  Bagian  sisa  dari  penguapan etanol disebut ekstrak pekat.  Ekstrak inilah  yang  akan  dipakai  dalam penelitian.

## Uji Efek Antibakteri
Metode  pengujian  yang  digunakan adalah  metode  modifikasi  Kirby- Bauer  dengan  menggunakan paper disk .  Bakteri Streptococcus  mutans yang  disimpan  di  media  agar  yang diambil dari stok bakteri murni yang diperoleh dari Laboratorium
Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran Universitas  Sam  Ratulangi  Manado, diambil  dengan  jarum  ose,  lalu ditanamkan  pada  media  agar  miring dengan  cara  menggores.  Bakteri yang  telah  digores  pada  media  agar diinkubasi  dalam  inkubator  pada suhu 37 0 C selama 1x24 jam. Bakteri yang telah diinkubasi diambil koloninya  dari  media  agar  miring dengan  menggunakan  jarum  ose steril  kemudian  dimasukkan  ke dalam media BHI-B sampai kekeruhannya  sama  dengan  standar McFarland. Lidi kapas steril dicelupkan ke dalam suspensi bakteri hingga  basah.  Lidi  kapas  diperas dengan  menekankan  pada  dinding tabung reaksi bagian dalam, kemudian digores merata pada media MHA sampai permukaannya tertutupi.    Selanjutnya  diletakkan
disk eritromisin, kertas saring
pertama dicelupkan ke  dalam etanol 96%  dan  kertas  saring  kedua dicelupkan  dalam  larutan  ekstrak daun  leilem  (ekstrak  daun  leilem diencerkan
dalam aquades).
Selanjutnya  cawan  petri  diinkubasi dalam  inkubator  dengan  suhu  37 o C selama 1x24 jam. Zona hambat yang terbentuk di sekitar paper disk diukur diameter vertikal dan diameter horizontalnya dalam satuan millimeter (mm) menggunakan jangka sorong.
(D V – D C ) + (D H – D C )
Gambar 1. Pengukuran diameter zona hamba

## HASIL PENELITIAN
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  cara membiakkan  bakteri Streptococcus mutans dalam  media  MHA  pada cawan petri disertai dengan peletakan  cakram  kertas  saring  yang diberi ekstrak daun leilem ( Clerodendrum  mihassae  L) .  Cawan petri  yang  sudah  diinkubasi  selama 24  jam  pada  suhu  37°C  diambil  lalu dilihat  zona  hambat  yang  terbentuk. Zona  hambat  yang  terbentuk  dalam penelitian  ini  dapat  dilihat  pada gambar 1.
Gambar 1. Zona hambat yang terbentuk pada media MHA (A) ekstrak daun leilem (B) zona hambat  ekstrak daun leilem (C) cakram etanol 96%
(D) antibiotik eritromisin (E) zona hambat antibiotik eritromisin
2 D C D H D V Keterangan: D V : Diameter vertikal D H : Diameter horizontal D C : Diameter cakram
A C E D B
Tabel 1. Hasil pengukuran diameter zona hambat bakteri Streptococcus mutans
Diameter zona hambat (mm) Pengulangan Ekstrak daun leilem ( Clerodendrum minahassae L.) Kontrol positif (eritromisin) Kontrol negatif (etanol 96%) 1 6,85 11,00 0 2 6,95 10,25 0 3 5,45 10,50 0 4 6,00 10,85 0 5 5,75 10,50 0 Rerata 6,20 10,62 0 Tabel 1 menunjukan bahwa diameter rerata zona hambat ekstrak daun gedi sebesar  6,20  mm,  sedangkan  zona hambat  kontrol  positif  antibiotik
eritromisin  sebesar  10,62  mm  dan kontrol negatif etanol tidak
menunjukan adanya zona hambat.
Gambar 2. Diagram diameter zona hambat terhadap bakteri Streptococus mutans

## PEMBAHASAN
Penelitian ini menunjukkan pengamatan  yang  dilakukan  dengan lima  kali  pengujian  menggunakan cakram  kertas  saring  yang  diberi
ekstrak  daun  leilem,  dan  semua pengujian tersebut menunjukkan adanya  zona  hambat  di  sekeliling cakram  tersebut.  Rerata  diameter zona  hambat  ekstrak  daun  leilem
6,85  6,95 5,45 6,00  5,75 11,00 10,25  10,50 10,85  10,50 0 2 4 6 8 10 12 1 2 3 4 5 D iam et er z ona ha m bat Pengulangan Diagram Diameter Zona Hambat ekstrak daun leilem antibiotik eritromisin
sebesar 6,20 mm, apabila dibandingkan dengan rerata diameter zona hambat yang berada di sekeliling antibiotik eritromisin sebesar  10,62  mm,  diameter  zona hambat  ekstrak  daun  leilem  lebih kecil,  sedangkan  kertas  saring  yang dicelupkan  kedalam  etanol  96% sebagai kontrol negatif tidak membentuk zona hambat. Hasil  dari  penelitian  ini menunjukan bahwa terdapat perbedaan  diameter  zona  hambat yang dibentuk sampel pada lima kali pengulangan.  Hal  ini  dikarenakan metode  kertas  saring  ( paper  disk ) yang digunakan memiliki kekurangan yaitu tidak bisa mengontrol  banyaknya  ekstrak  yang terserap  pada  masing-masing  kertas saring , sehingga  membuat  hasil diameter  zona  hambat  berbeda-beda walaupun diambil dari suspensi yang sama. Antibiotik eritromisin
dijadikan  sebagai  kontrol  positif karena  memiliki  efek  yang  baik untuk  melawan  bakteri  penyebab infeksi  rongga  mulut.  Eritromisin merupakan  antibiotik  pilihan  untuk infeksi  rongga  mulut  pada  pasien yang alergi terhadap penisilin. Eritromisin  merupakan  antibiotik golongan  makrolid  yang  memiliki cincin  lakton  besar  dalam  rumus molekulnya. Golongan makrolid menghambat  sintesis  protein  kuman dengan jalan berikatan secara reversible  dengan  ribosom  sub  unit 50S, dan umumnya bersifat
bakteriostatik,  walaupun  terkadang dapat  bersifat  bakterisidal  untuk kuman  yang  sangat  peka.  Efek terbesar  eritromisin  terhadap  kokus gram-positif, seperti S. pyogenes dan S. pneumoniae . S. viridians mempunyai kepekaan yang bervariasi terhadap eritromisin (Setiabudy dan Rianto, 2007). Penelitian  menujukan  bahwa genus  C lerodendrum mengandung senyawa kimia aktif seperti flavonoid,  fenol,  terpenoid  dan steroid (Shrivastava dan Patel, 2007). Flavonoid merupakan senyawa metabolit  sekunder  yang  terdapat pada  tanaman  hijau,  kecuali  alga. Flavonoid  termasuk  senyawa  fenolik alam yang potensial sebagai antioksidan dan mempunyai bioaktifitas  sebagai  obat.  Senyawa flavonoid  terdapat  dalam  semua bagian  tumbuhan  tinggi,  seperti bunga,  daun,  ranting,  buah,  kayu, kulit  kayu  dan  akar.  Akan  tetapi senyawa  flavonoid  tertentu  sering terkonsentrasi  dalam  suatu  jaringan tertentu,  seperti  daun,  bunga  dan buah.  Sebagian  beasar  flavonoid alam ditemukan dalam bentuk glukosa.  Falvonoid  dalam  tubuh manusia berfungsi sebagai
antioksidan  sehingga  sangat  baik untuk  pencegahan  kanker.  Manfaat flavonoid antara lain untuk melindungi struktur sel,
meningkatkan  efektivitas  vitamin  C, anti  inflamasi,  mencegah  keropos tulang dan sebagai antibiotik.  Dalam beberapa  kasus  flavonoid  dapat
berperan  secara  langsung  sebagai antibiotik dengan mengganggu fungsi  dari  mikroorganisme  seperti bakteri  atau  virus  (Dwyana  dkk, 2011).
Mekanisme  kerja  flavonoid sebagai  antimikroba  dapat  dibagi menjadi  tiga  yaitu  menghambat sintesis  asam  nukleat,  menghambat fungsi membran sel dan menghambat metabolisme  energi  (  Hendra  dkk,
2011). Flavonoid menyebabkan terjadinya  kerusakan  permeabilitas dinding  sel  bakteri,  mikrosom,  dan lisosom sebagai hasil interaksi antara flavonoid  dengan  DNA  bakteri (Cushnie  dkk,  2005).  Mekanisme kerja  flavonoid  menghambat  fungsi membrane  sel  adalah  membentuk senyawa  kompleks  dengan  protein ekstraseluler  dan  terlarut  sehingga dapat  merusak  membran  sel  bakteri
dan diikuti dengan keluarnya senyawa  intraseluler  (Nuria  dkk, 2009).  Flavonoid  dapat  menghambat metabolisme  energi  dengan  cara menghambat  penggunaan  oksigen oleh  bakteri.  Flavonoid  menghambat pada  sitikrom  C  reduktase  sehingga pembentukan metabolisme terhambat (Cushnie dkk, 2005).
Mekanisme antibakteri senyawa  fenol  dalam  membunuh mikroorganisme yaitu dengan mendenaturasi  protein  sel.  Ikatan hidrogen yang terbentuk antara fenol dan  protein  mengakibatkan  struktur protein menjadi rusak. Ikatan hidrogen tersebut akan mempengaruhi permeabilitas dinding
sel  dan  membrane  sitoplasam  sebab keduanya  tersususun  atas  protein.
Permeabilitas dinding sel dan membrane sitoplasma yang terganggu dapat meyebabkan ketidakseimbangan makromolekul dan  ion  dalam  sel,  sehingga  sel menjadi  lisis  (Palczar  dan  Chan, 1988).
Mekanisme  steroid  sebagai antibakteri berhubungan dengan membran lipid dan sensitivitas terhadap  komponen  steroid  yang menyebabkan kebocoran pada liposom  (Madduluri  dkk,  2013). Steroid  dapat  berinteraksi  dengan membran fosfolipid sel  yang bersifat permeabel terhadap senyawa- senyawa lipofilik sehingga menyebabkan  integritas  membran menurun  serta  morfologi  membran sel  berubah  yang  menyebabkan  sel rapuh dan lisis (Ahmed, 2007).
Daun  leilem  juga  mengandung senyawa  terpenoid  yang  mempunyai daya polaritas sama dengan golongan fenol. Mekanisme kerja dari senyawa terpenoid  sama  dengan  mekanisme kerja  dari  senyawa  fenol  yaitu mengganggu  proses  transportasi  ion penting  ke  dalam  sel  bakteri. Terpenoid  mampu  berikatan  dengan lemak  dan  karbohidrat  yang  akan menyebabkan  permeabilitas  dinding sel  bakteri  terganggu  (Rachmawati dkk,
Penelitian  ini  menunjukkan
bahwa ekstrak daun leilem ( Clerodendrum minahassae L. )
memiliki  efek  antibakteri  terhadap
bakteri Streptococcus mutans (Gambar 11) , namun kemampuan ini
kurang  efisien  apabila  dibandingkan dengan  antibiotik  eritromisin.  Rerata diameter zona hambat yang terbentuk  pada  ekstrak  daun  leilem lebih  kecil  dibandingkan  dengan antibiotik eritromisin. Hal ini mungkin  disebabkan  karena  ekstrak daun leilem diencerkan dalam aquades  serta  belum  diketahuinya
Minimal Inhibitor Consentration
ekstrak  daun  leilem  terhadap  bakteri Streptococcus  mutans .  Selain  itu, konsentrasi  dari  jenis  senyawa  aktif yang bertanggung jawab memberikan  efek  antibakteri  dari ekstrak  daun  leilem  ( Clerodendrum mihahassae L. ) belum diketahui.

## SIMPULAN
1. Ekstrak  daun  leilem  memiliki efek  antibakteri  terhadap  bakteri Streptococcus mutans.
2. Rerata  diameter  zona  hambat dari  ekstrak  daun  leilem  adalah 6,20  mm  dan  lebih  kecil
dibandingkan dengan rerata diameter  zona  hambat  dari antibiotik eritromisin. SARAN 1. Diharapkan dapat dilakukan penelitian  lebih  lanjut  mengenai efek  antibakteri  ekstrak  daun leilem terhadap bakteri Streptococcus mutans pada berbagai  konsentrasi  kepekatan ekstrak, sehingga dapat diketahui Minimal  Inhibitory Concentration ekstrak daun
leilem terhadap bakteri Streptococcus mutans. 2. Diharapkan dapat dilakukan penelitian  lanjut  menggunakan pelarut  selain  etanol  96%,  efek antibakteri  ekstrak  daun  leilem terhadap  bakteri  lain  yang  dapat menimbulkan masalah kesehatan gigi  dan  mulut,  efek  antibakteri daun leilem agar menjadi alternatif obat dibidang kedokteran  gigi  dan  masyarakat luas  dalam  pencegahan  karies dan  penyakit  infeksi  rongga mulut, karena daun leilem banyak  didapatkan  di  Manado, aman dan relatif murah.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Kalangi C, Kamu VS, Kumaunang  M.  Barcode  DNA Tanaman Leilem  ( Clerodendrum minahassae L. ) Berdasarkan Gen matK. Tersedia dalam :
http://ejournal.unsrat.ac.id/index/ php/jmuo . 3(2) 108-112.
2. Kepel  D,  Gugule  S,  Wurarah  M. Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Daun Leilem ( Clerodendrum minahassae  Teijsm.  &  Binn.) pada  Pertumbuhan  Bakteri  Gram
Positif Staphylococcus  aureus strain ATCC 25923. Vol 1, No 1
(2015).
3. Shrivastava N, Patel T. Clerodendrum  and  Heathcare:  an Overview. Medicinal and Aromatic  Plant  Science  and Biotechnology.  Gujarat,  India. Tersediadalam:www.globalscien
cebook.info/JournalsSup/image/s ample/MAPSB_1(1)142-150.pdf . 4. Parubak, Apriani  Sulu. Senyawa Flavonoid yang Bersifat Antbaktri  dari  Akway  ( Drimys becariana.  Gibbs). Chem.  Prog. Vol. 6, No.1.Mei 2013. Tersedia dalam  :  download.portalguruda. org/article.php?article=80872&v al= 1039.
5. Gartika  M,  Satari  MH.  Beberapa bahan  Alam  Sebagai  Alternatif
Bahan Pencegah Karies. Tersedia dalam : pustaka. unpad.ac.id/wp_content/uplads/2 013/08/pustaka_unpad_beberapa _bahan_alam_pdf.
6. Anonim.  Badan  penelitian  dan
Pengembangan Kesehatan Departemen Kesehatan RI Laporan  Hasil  Riset  Kesehatan Dasar (Riskesdas) Nasional. Jakarta; 2013 p. 113-118.
7. Setiabudy,  Rianto.  Farmakologi dan  Terapi  Edisi  5.  Jakarta  : Departemen  Farmakologi  dan Terapeutik  Fakultas  Kedokteran Universitas  Indonesia;  2007.  p. 585-586, 723724.
8. Dwyana Z, Johanes Eva, Saerong
W.  uji  ekstrak  kasar  alga  merah Eucheuma cottonii sebagai antibakteri terhadap bakteri pathogen. 2011.
9. Hendra  R,    Ahmad  S,  Sukari  A,
Shukor MY, Oskoueian E. Flavonoid analyses and antimicrobial    activity    of various    parts    of    Phaleria macrocarpa  (Scheff.)  Boerl  fruit.
Int  J  Mol  Sci.  2011;12:  3422- 3431.
10. Cushnie, T.P.Tim. Lamb, AndrewJ.  Antimicrobial  Activity of  Flavonoids.    International Journal    of    Antimicrobial AgentsI.  2005;26:343-356.
11. Nuria,  Maulita  cut,  Faizaitun,
Arvin,  Sumantri,  Uji  Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol  Daun Jarak    Pagar    (Jatropha    Curcas L) Terhadap Bakteri Staphylococcus    Aureus    Atcc 25923,      Escherichia    Coli    Atcc 25922,  Dan  Salmonella  Typhi
Atcc 1408,Mediagro.2009;5(2):26–37.
12. Palczar,J.M    dan    Chan,    E.C.S. Dasar-dasar    Mikrobiologi    2. Jakarta: Penerbit UI Press. 1988.
13. Madduluri,    Suresh.    Rao, K.Babu.    Sitaram,    B.    In    Vitro Evaluation    of  Antibacterial Activity    of    Five    Indegenous Plants    Extract    Against    Five
Bacterial  Pathogens  of  Human. International Journal of Pharmacy  and  Pharmaceutical Sciences.2013:5(4): 679-684. 14. Ahmed,    Bahar.    Chemistry    Of Natural   Products.     New  Delhi: Department    of    Pharmaceutical
Chemistry    Faculty    of    Science Jamia Hamdard. 2007.
15. Rachmawati F, Nuria MC, Sumantri. Uji Aktivitas Antibakteri  Fraksi  Kloroform Ekstrak Etanol Pegagan ( Centella asiatica ( L. ) Urb) Serta Identifikasi  Senyawa  Aktifnya. Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada. 2011. Yogyakarta.