## PENGARUH APLIKASI PUPUK HAYATI TERHADAP DINAMIKA KELIMPAHAN MIKROB PADA LAHAN BEKAS TAMBANG TIMAH YANG DITANAMI TANAMAN LADA ( Piper nigrum L.)
Biofertilizer Application Influence in Dinamics of Microorganisms Abundance on Tin Mined Area planted Pepper Plant (Piper nigrum L.)

## Patimah Siti*, Inonu Ismed dan Asriani Euis
Program Studi Agoteknologi, FPPB, Universitas Bangka Belitung, Balunijuk, Kabupaten Bangka, Kepulauan Bangka Belitung

## ABSTRACT
Biofertilizer  is  a  fertilizer  containing  nine  microbial  consortia  that  useful  for  plant  growth.  The  benefits  of  using biofertilizers are to improve fertilizer efficiency, maintain fertility soil and plant health, improving yield and sustainability. The aim of this research was to know the effect of the biofertilizer dosage to the population dynamics of microbial abundance of tin mined area planted with pepper plant (Piper nigrum L.). The method used is a direct observation method in the field through soil sampling with a purposive sampling technique. Six Soil samples were taken from every level of treatment. Soil samples were isolated, PDA media for fungi, NA media for bacteria and pikovskaya media for microbes solubilazition phosphate testing for both bacteria and fungi consisting of 54 plates. Result of the research indicate that different dosage of biofertilizers did not affect the dynamics of micro-organisms abundance. Treatment of B4 (10 g L -1 plant -1 ) gave a good effect on the abundance of fungi. While the treatment  of B3  (5 g L -1 plant -1 ) gave a good effect  on bacterial abundance. The result of nitrogen-fixing test  was obtained by N inhibiting bacteria on NFB media  in the presence of a pellicle at the bottom of the test tube. The result of the phosphate solubilization test was obtained with clear zones surrounded bacteria and fungi. Analyzed six soil samples contained nitrogen-fixing bacteria and Bacillus cereus with bacteria as phosphate solubilization bacteria.
Keywords: Dosage, microbial phosphate solubilization, nitrogen-fixing microorganism

## ABSTRAK
Pupuk  hayati  ( biofertilizer )  merupakan  pupuk  yang  mengandung  9  konsorsium  mikrob  dan  bermanfaat  untuk pertumbuhan  tanaman.  Keuntungan  penggunaan  pupuk  hayati  adalah  untuk  meningkatkan  efisiensi  pemupukan,  menjaga kesuburan serta kesehatan tanah dan tanaman, sehingga  meningkatkan hasil dan berkelanjutan. Penelitian  ini  bertujuan untuk mengetahui  pengaruh  dosis  pupuk  hayati  terhadap  dinamika  kelimpahan  mikrob  tanah  di  lahan  bekas  tambang  timah  yang ditanami tanaman lada ( Piper nigrum L.) Metode yang digunakan adalah observasi langsung di lapangan melalui pengambilan sampel tanah dengan teknik purposive sampling . Sampel tanah diambil dari setiap taraf perlakuan pada lahan bekas tambang timah yang ditanami tanaman lada sebanyak 6 sampel. Seluruh sampel tanah kemudian diisolasi, media PDA untuk cendawan, media NA untuk bakteri dan  media pikovskaya untuk pengujian  mikrob pelarut fosfat baik untuk bakteri  maupun cendawan, sehingga  diperoleh  sebanyak  54  cawan.  Hasil  menunjukkan  bahPemberian  dosis  pupuk  hayati  yang  berbeda-beda  tidak berpengaruh terhadap dinamika kelimpahan mikrob. Perlakuan B4 (10 g L -1 tanaman -1 ) memberikan pengaruh yang relatif baik terhadap kelimpahan cendawan. Sedangkan perlakuan B3 (5 g L -1 tanaman -1 ) memberikan pengaruh yang relatif baik terhadap kelimpahan bakteri. Hasil dari uji fiksasi nitrogen diperoleh bakteri penambat N pada media NFB dengan adanya pellicle pada bagian bawah tabung reaksi. Hasil uji pelarut fosfat diperoleh dengan zona bening yang mengelilingi bakteri dan cendawan. Dari 6 sampel tanah yang dianalisis mengandung bakteri fiksasi nitrogen dan Bacillus cereus dengan bakteri sebagai pelarut fosfat.
Kata kunci: Dosis, mikrob pelarut fosfat, mikrob penambat nitrogen

## PENDAHULUAN
Ketersediaan mikrob di dalam tanah saat ini semakin sedikit  akibat  penggunaan  pestisida  dan  herbisida berlebihan  dalam  pertanian.  Menurut  Nunik et  al .  (2011) dampak  pemberian  pestisida  pada  tanaman  dapat mempengaruhi  populasi  mikrob  di  dalam  tanah.  Upaya mengurangi pencemaran lingkungan dan pemanasan global di lahan pertanian yang disebabkan oleh penggunaan pupuk kimia  yang  berlebihan,  maka  perlu  dicari  alternatif penggunaan pupuk yang ramah lingkungan (Sudrajat et al ., 2014).
Beberapa  teknologi  tepat  guna  untuk  mereduksi penggunaan pupuk anorganik sudah banyak dilakukan oleh petani,  salah  satunya  adalah  penggunaan  pupuk  hayati. Beberapa jenis pupuk hayati yang sering digunakan seperti bakteri  penambat  nitrogen,  bakteri  pelarut  fosfat,  bakteri perombak  kitin  (kitinolitik),  bakteri  perombak  selulosa (selulolitik),  dan  beberapa  jenis  pupuk  hayati  lain  yang mencapai  35  jenis  menurut  data  yang  terdaftar  pada Direktorat Pupuk dan Pestisida (Simangunkalit et al., 2006). Semua  jenis  pupuk  hayati  berfungsi  untuk  mereduksi penggunaan  pupuk  anorganik  untuk  satu  atau  beberapa unsur hara yang terkandung tanpa mengurangi hasil panen tanaman,  menyuburkan  dan  memperbaiki  struktur  tanah,
*) Penulis Korespondensi: Telp. +6283175775284; Email: sitifatimah12671@gmail.com
DOI: http://dx.doi.org/10.29244/jitl.21.2.51-57
Aplikasi Pupuk Hayati Terhadap Dinamika Kelimpahan Mikrob pada Lahan Bekas Tambang Timah (Patimah, S., I. Ismed dan A. Euis)
serta  membantu  tanaman  dalam  penanggulangan  penyakit tanah (Gentili dan Jumpponen, 2005).
Pupuk hayati ( biofertilizer ) merupakan pupuk  yang mengandung  9  konsorsium  mikrob  dan  bermanfaat  untuk pertumbuhan  tanaman  (Vessey,  2003).  Kelompok  mikrob yang  sering  digunakan  dalam  pupuk  hayati  adalah kelompok mikrob yang mampu menyediakan unsur makro bagi  tanaman  yaitu  unsur  N,  P,  dan  K  (Nasahi,  2010). Mikrob-mikrob  tersebut  adalah  mikrob  penambat  N  dari udara  serta  mikrob  pelarut  hara  P  dan  K  dalam  tanah. Kelompok  mikrob  tersebut  adalah Rhizobium  sp., Azospirilium sp. , dan Azotobacter sp., yang berfungsi untuk memfiksasi  nitrogen, Aspergilus  sp.,  Pseudomonas  sp., (Adesemoye et  al., 2008) dan Lactobacillus  sp. berfungsi untuk  melarutkan  fosfat  dan  kalium  (Sofatin,  2016). Keuntungan  penggunaan  pupuk  hayati  adalah  untuk meningkatkan  efisiensi  pemupukan,  menjaga  kesuburan serta kesehatan tanah dan tanaman, sehingga meningkatkan hasil dan berkelanjutan (Saraswati, 2012).
Populasi  mikrob  tanah  yang  terdiri  atas  alga  biru- hijau,  fitoplankton,  bakteri,  cendawan,  dan  aktinomiset pada permukaan dan lapisan olah tanah mencapai puluhan juta setiap gram tanah, yang merupakan bagian integral dan pembentuk  kesuburan  tanah  pertanian  (Mc  Mahon  et  al., 2011; Prajnanta, 2004). Proses daur ulang secara alamiah di permukaan dan lapisan olah tanah yang sangat penting bagi kegiatan  pertanian  tidak  terjadi  tanpa  aktivitas  mikrob (Iqbal et al, 2011). Manfaat mikrob dalam usaha pertanian belum  disadari  sepenuhnya,  bahkan  sering  diposisikan sebagai  komponen  habitat  yang  merugikan,  karena pandangan  umum  terhadap  mikrob  lebih  terfokus  secara selektif pada  mikrob  patogen  yang  menimbulkan  penyakit pada  tanaman  (Saraswati  dan  Sumarno,  2008).  Spesies mikrob  sebagian  besar  merupakan  mikroflora  yang bermanfaat,  kecuali  beberapa  jenis  spesifik  yang  dapat menyebabkan penyakit bagi tanaman (Watanabe, 1978).
Tanah  dianggap  sebagai  gudang  aktifitas  mikrob. Aktifitas  mikrob  terbatas  yaitu  pada  agregat  dengan akumulasi  bahan  organik, rhizosfer .  Komunitas  mikrob tanah seringkali sulit untuk dikarakterisasi, terutama karena fenotipnya  yang  luar  biasa  keragaman  genotip  dan heterogenitas.  Populasi  bakteri  dilapisan  atas  profil  tanah dapat menghasilkan lebih dari 10 9 sel g -1 tanah.
Penerapan  pupuk  organik  hayati  perlu  dilakukan dengan  cermat  (Suwahyono,  2011).  Hal  ini  dikarenakan kandungan  mikrob  di  dalamnya  merupakan  kumpulan makhluk hidup yang berukuran mikroskopis, sehingga perlu dijaga agar tetap hidup dan mampu berkembang biak pada areal  lahan.  Proses  perkembangbiakan  mikrob  juga membutuhkan  waktu  untuk  mencapai  populasi  yang optimum (Fadiluddin, 2009).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  penelitian  yang  sudah dilakukan  Rifal  mengenai  pemberian  bahan  pembenah tanah pada lahan bekas tambang timah untuk pertumbuhan awal  tanaman  lada  dengan  hasil  penelitian  bahwa pemberian  bahan  pembenah  tanah  berpengaruh  nyata. Kombinasi bahan pembenah tanah pupuk NPK+mikoriza+pupuk hayati merupakan perlakuan terbaik untuk  pertumbuhan  tanaman  lada  dilahan  tailing  pasca penambangan timah (Sujitno, 2007).
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah:  (i)  Mengetahui pengaruh dosis pupuk hayati terhadap dinamika kelimpahan mikrob tanah di lahan bekas tambang timah yang ditanami
tanaman lada ( P. nigrum L.), (ii) Mengetahui berapa dosis terbaik  pemberian  pupuk  hayati  terhadap  pertumbuhan optimal  mikrob  di  lahan  bekas  tambang  timah  yang ditanami tanaman lada ( P. nigrum L.).
Hipotesis penelitian ini adalah: (i) Pemberian dosis pupuk  hayati  memberikan  pengaruh  terhadap  dinamika kelimpahan  mikrob  tanah  di  lahan  bekas  tambang  timah yang ditanami tanaman  lada, (ii)  Dosis pupuk  hayati 10  g liter -1 tanaman -1 memberikan dinamika kelimpahan mikrob terbaik untuk di lahan bekas tambang timah yang ditanami tanaman lada.

## BAHAN DAN METODA

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  pelaksanaan penelitian ini adalah alkohol 70%, media JNFb, media NFb, media  PDA,  media  pikovskaya,  media  NA,  media  WA, media Azospirilum ,  media  LG,  spiritus,  tanah  dan  tissue. Sedangkan  alat-alat  yang  digunakan  dalam  pelaksanaan penelitian ini adalah alat tulis, autoklaf, bor tanah, bunsen, cawan  petri,  erlenmeyer,  gelas  beker,  gunting,  jarum  ose, kamera, laminar air flow , laptop, nampan, pH tester, plastik, pipet tetes, Soil Moisture Meter , spayer , tabung reaksi dan timbangan digital.

## Metode Penelitian
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu metode observasi langsung di lapangan melalui pengambilan  sampel  tanah.  Teknik  pengambilan  sampel yang  digunakan  adalah  teknik purposive sampling. Pengambilan  sampel  sesuai  dengan  perlakuan  yang diberikan.  Perlakuan  yang  diberikan  yaitu  dosis  pupuk hayati, yang terdiri atas 6 taraf perlakuan yaitu: B0 = 0 g liter -1 tanaman -1 B1 = 0.5 g liter -1 tanaman -1
B2 = 1 g liter -1 tanaman -1 B3 = 5 g liter -1 tanaman -1 B4 = 10 g liter -1 tanaman -1 B5 = 15 g liter -1 tanaman -1

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil pengamatan di lapangan diperoleh data pendukung pH, suhu dan kelembaban yang dilakukan setiap  pengambilan  sampel  dilapangan  (Tabel  1).  Hasil pengamatan  data  pendukung  pH,  suhu  dan  kelembaban diperoleh  hasil  yang  tidak  jauh  berbeda  pada  setiap pengamatan  di  lapangan.  Pengamatan  yang  dilakukan dengan  pengambilan  3  titik  yang  berbeda  dari  setiap pengamatan  kemudian  dirata-ratakan,  diperoleh  hasil pengamatan pH berkisar antara 6.4-6.8, suhu berkisar antara 27-34  C dan kelembaban berkisar antara 13-25%.
Tabel 1.  Pengamatan  hasil  data  pendukung  pH,  suhu  dan kelembaban
Pengamatan ke- Pengamatan pH Suhu (  C) Kelembaban (%) 1 6.8 30 25 2 6.6
27
15 3 6.4 34 13
Isolasi  cendawan  dan  bakteri  yang  diperoleh  dari penelitian  ini  berasal  dari  sampel  tanah  yang  diambil  dari tanah  lahan  bekas  tambang  timah  yang  ditanami  tanaman lada. Sampel tanah  yang diambil  yaitu sebanyak 6 sampel tanah  setiap  perlakuan.  Seluruh  sampel  tanah  kemudian ditumbuhkan pada media PDA untuk cendawan, media NA untuk  bakteri  dan  media  pikovskaya  untuk  pengujian mikrob pelarut fosfat baik untuk bakteri maupun cendawan, sehingga diperoleh sebanyak 54 cawan. Setiap cawan akan tumbuh  isolat  yang  mampu  tumbuh  pada  media  tersebut. Menurut Dewi (2008) isolasi merupakan pengambilan atau memindahkan  mikrob  dari  lingkungannya  di  alam  dan menumbuhkannya  sebagai  biakan  murni  dalam  medium buatan.  Pemurnian  isolat  bertujuan  untuk  mendapatkan biakan murni. Lay (1994) menyatakan bahwa biakan murni merupakan  biakan  yang  hanya  mengandung  satu  jenis isolat.
Hasil  identifikasi  cendawan  diperoleh  6  genus cendawan  yaitu Aspergilus spp., Bipolaris spp., Fusarium spp., Gliocladium spp., Penicillium spp., dan Trichoderma spp.  Keenam  genus  cendawan  ini  sebagian  besar  bersifat patogen  (Tabel  2).  Menurut  Gandjar et  al. (2000) Aspergillus spp.  umumnya  cendawan  yang  bersporulasi dengan  lebat  dan  bersifat  patogen. Bipolaris spp. merupakan  cendawan  yang  bersifat  patogen  yang menyebabkan  penyakit  bercak  pada  tanaman  (Shurfleff, 1980).  Cendawan Gliocladium spp.  merupakan  cendawan tanah  yang  hidupnya  bersifat  saprofit  (Collins,  1976). Menurut  Semangun  (1996)  cendawan Penicillium spp. umumnya  bersifat  saprofit  dapat  merusak  hasil-hasil pertanian.  Cendawan Trichoderma spp.  merupakan cendawan yang secara alami menyerang cendawan patogen dan  bersifat  menguntungkan  bagi  tanaman  (Purwantisari, 2009).

## Tabel 2. Enam genus cendawan dari masing-masing perlakuan
Perlakuan Pengamatan ke- 0 1 2 B0 Aspergillus sp. Aspergillus sp. - Penicillium pp. - B1 Aspergillus sp. Fusarium sp. -
Penicillium sp. Penicillium sp. - Trichoderma sp. - B2 Penicillium sp. Aspergillus sp.
Penicillium sp. Fusarium sp. Penicillium sp. B3 - Aspergillus sp. Penicillium sp. - Fusarium sp. Trichoderma sp. - Penicillium sp. B4 - Aspergillus sp. - - Bipolaris sp. - - Trichoderma sp. - B5 Penicillium sp. Fusarium sp.
Gliocladium sp.
Penicillium sp. Penicillium sp.
Hasil pengamatan genus cendawan tidak berpengaruh  terhadap  perlakuan  B2  dan  B5  karena perlakuan B2 dan B5 pada pengamatan ke-3 masih terdapat cendawan patogen yang mendominasi. Sedangkan
perlakuan  B1,  B3  dan  B4  pada  pengamatan  ke-3  tidak terdapat  cendawan  patogen  yang  mendominasi.  Hal  ini mengindikasikan pupuk hayati yang diaplikasikan mengandung bakteri, bakteri mampu menghambat pertumbuhan  cendawan  patogen.  Menurut  Mihardjo  dan Majid  (2008),  mekanisme  penghambatan  patogen  oleh mikrobia  antagonis  umumnya  disebabkan  karena  proses antibiosis,  kompetisi  nutrisi  dan  parasitisme.  Kemampuan menghambat  pertumbuhan  cendawan  patogen  tersebut adalah  karena  adanya  zat  antibiosis  yang  dihasilkan  oleh bakteri  dan  secara  difusi  melalui  medium  dapat menghambat pertumbuhan cendawan patogen. Mikrob yang menghasilkan  mekanisme  antibiosis  dianggap  lebih  tepat digunakan untuk menekan perkembangan patogen (Wibowo, 2001).
Hasil  pewarnaan  gram  diperoleh  adanya  gram negatif  dan  gram  positif.  Bakteri  gram  positif  terlihat berwarna  ungu  karena  asam-asam  ribonukleat  pada sitoplasma  sel-sel  gram  positif  membentuk  ikatan  yang lebih  kuat  dengan  kompleks  ungu  kristal  violet  sehingga ikatan  kimiawi  tersebut  tidak  mudah  dipecahkan  oleh pemucat  warna  (Hadioetomo,  1993).  Reaksi  tersebut didasarkan atas perbedaan komposisi kimiawi dinding sel. Sel  gram  positif  mempunyai  dinding  dengan  lapisan peptidoglikan  yang  tebal  (Sunatmo,  2007).  Bakteri  gram negatif terlihat berwarna merah muda. Bakteri gram negatif mengandung  lipid dan  lemak dalam persentase  yang  lebih tinggi daripada bakteri gram positif). Selain itu bakteri gram negatif  juga  memiliki  peptidoglikan  yang  lebih  tipis daripada bakteri gram positif (Sunatmo, 2007). Bentuk sel bakteri secara mikroskopis ada coccus, bacillus, coccobacillus,  diplobacillus,  diplococcus  dan  tetracoccus (Tabel 3). Keseluruhan bentuk sel bakteri yang didapatkan dari  90  isolat  bakteri  adalah  berbentuk  bacillus  (batang). Bentuk-bentuk  sel  merupakan  cara  untuk  melihat karakteristik dari suatu bakteri yaitu berbentuk bulat, batang dan  koma  (James et  al .,  2008).  Pewarnaan  gram  bakteri yang diperoleh dominan adalah gram negatif yaitu dari 90 isolat terdapat 80 isolat bakteri yang termasuk gram negatif. Hal ini sejalan dengan hasil penelitian Suryanto dan Munir (2006)  bahwa  lebih  banyak  didapat  bakteri  gram  negatif dengan bentuk sel basil dan kokus.
Pupuk  hayati  yang  digunakan  pada  penelitian  ini mengandung  mikrob penambat N, pelarut P dan penghasil fitohormon.  Adapun  mikrob  yang  terkandung  pada  pupuk hayati  yang digunakan terdiri dari  beberapa  bakteri antara lain Azotobacter vinelandii (penambat N non simbiotik dan pelarur  P  tanah), Azospirilum sp (penambat  N2  non simbiotik  dan  penghasil  fitohormon, Bacillus  cereus (pelarut  posfat  tanah,  penghasil  senyawa  anti  patogen) Bhradyrhizobium sp (penambat  N  simbiotik),  serta Methylobacterium  sp (penghasil  fitohormon).  Keberadaan bakteri penambat N bebas pada daerah perakaran tanaman menguntungkan  karena  dapat  membantu  mencukupi kebutuhan  N  tanaman  tersebut.  Hubungan  antara  bakteri penambat N seperti  ini diduga  juga terjadi pada perakaran tanaman lada ( Piper nigrum L.).
Aplikasi Pupuk Hayati Terhadap Dinamika Kelimpahan Mikrob pada Lahan Bekas Tambang Timah (Patimah, S., I. Ismed dan A. Euis)
Tabel 3. Pengamatan mikroskopis isolat bakteri Sebelum 1 Bulan Setelah Aplikasi 2 Bulan Setelah Aplikasi Bentuk Sel Gram Jumlah Isolat Bentuk Sel Gram Jumlah Isolat Bentuk Sel Gram Jumlah Isolat B0 Bacillus
Coccus Tetracoccus Tetracoccus - - + -
1 1 1 1
Bacillus - 3 B1 Bacillus - 1 Bacillus
Coccus Coccus Diplococcus - + - -
2 1 2 3
Bacillus - 3 B2 Coccus Bacillus - - 1 6 Bacillus Coccobacillus
- +
6 1 Bacillus Bacillus
- + 1 1 B3 Bacillus Coccus Coccobacillus Diplobacillus Diplococcus Tetracoccus - - - - - + 3 1 1 1 1 1 Bacillus
Bacillus Coccus Coccobacillus
- + - -
10 1 2 1 B4 Bacillus Coccus Coccobacillus - - - 6 1 2 Bacillus Diplobacillus - - 6 3 B5 Bacillus Coccus Coccus Coccobacillus Diplococcus - - + - + 1 2
1 1 1
Bacillus Bacillus Coccus Diplobacillus - + - +
6 1 1 1
Hasil  perhitungan  kelimpahan  mikrob  pada  total populasi  bakteri  dan  cendawan  bahwa  semua  perlakuan menunjukkan  hasil  yang  tidak  berpengaruh  terhadap kontrol, dari grafik dapat dilihat pola setiap perlakuan tidak konsisten.  Perbandingan  antara  total  populasi  bakteri dengan  cendawan,  bakteri  lebih  baik  dibandingkan cendawan. Hal ini disebabkan kandungan dari pupuk hayati yang  digunakan  mengandung  bakteri,  sehingga  cendawan yang tumbuh  banyak  berasal dari  mikrob  pribumi ( native ) seperti  yang  dijelaskan  oleh  Kloepper  dan  Schroth  (1978) bahwa  rizobacteria  merupakan  mikrob  kompetitor  yang paling efisien  yang  mampu  menggeser kedudukan  mikrob pribumi ( native ) di  lingkungan rizosfer sampai pada  masa pertengahan  umur  tanaman.  Perhitungan  kelimpahan  total populasi cendawan yang baik pada perlakuan B4 (10 g liter - 1 tanaman -1 )  hal  ini  di  duga  bahwa  kelimpahan  cendawan tinggi karena rendahnya kelimpahan bakteri yang tersedia, sehingga  tidak  mampu  menekan  cendawan  (Gambar  1). Sedangkan  kelimpahan  total  populasi  bakteri  yang  baik pada  perlakuan  B3  (5  g  liter -1 tanaman -1 )  hal  ini  di  duga bahwa  perlakuan  B3  (5  g  liter -1 tanaman -1 )  memiliki kemampuan  aktivitas  mikrob  yang  bisa  menghambat pertumbuhan  cendawan  patogen.  Aktivitas  mikrob  tanah berbanding  lurus  dengan  jumlah  total  mikrob  di  dalam tanah,  jika total  mikrob  tinggi  maka aktivitas  mikrob  juga semakin tinggi (Wicaksono, 2015).
Gambar 1.  Kelimpahan  bakteri  sebelum  dan  setelah  aplikasi pupuk hayati
Aktivitas mikrob tanah merupakan suatu proses yang terjadi  karena  adanya  kehidupan  mikrob  yang  melakukan aktivitas hidup dalam suatu massa tanah. Aktivitas  mikrob tanah dapat dimonitor dari karakter sifat fisika-kimia tanah meliputi:  pH (6.0-8.0), temperatur (0-90  C), kelembaban, berat volume dan  berat kering tanah),  laju respirasi tanah, aktivitas  enzim  dehidrogenase  tanah  dan  total  populasi bakteri tanah (Kapli, 2015). Hasil pengamatan menunjukkan  bahwa  pH  tanah  pada  lahan  bekas  tambang yang  ditanami  tanaman  lada  berkisar  antara  6.4-6.8, sehingga  pertumbuhan  mikrob  didalam  tanah  masih  bisa hidup  (Suwarto,  2013).  Reaksi  tanah  (pH)  mempengaruhi perkembangan  mikrob  tanah  yang  hidup  di  dalamnya. Adapun  mikrob  yang  banyak  hidup  pada  pH  ini  adalah bakteri  dan  fungi.  Menurut  Lay  (1994)  pada  umumnya bakteri dapat tumbuh dengan baik pada pH sekitar 7 (netral) meskipun  dapat  tumbuh  pada  kisaran  pH  5-8  sedangkan fungi dapat hidup pada kisaran pH yang luas. Hasibuan dan Ritonga (1981) juga  menyatakan pH tanah  mempengaruhi perkembangan  mikrob  tanah  pada  kondisi  tanah  berbeda, apalagi di air (Setiawati et al., 2016). Suhu yang diperoleh berkisar antara 27-34  C, pertumbuhan  mikrob  masih  bisa terjadi.
Pengamatan  morfologi  yang  dilakukan  terhadap isolat  bakteri  secara  makroskopis  meliputi,  bentuk  koloni, bentuk tepian koloni, warna koloni, dan pengamatan secara mikroskopis pewarnaan gram serta bentuk sel dari bakteri. Hasil pengamatan terhadap bentuk morfologi koloni bakteri maka diperoleh isolat berbentuk bulat beraturan, bulat tidak beraturan, irregular ,  berfilament,  hampir  semua  isolat memiliki bentuk tepian koloni yang rata. Menurut Hidayat et  al .  (2006)  bahwa  bentuk  koloni  dari  suatu  bakteri dipengaruhi  oleh  umur  dan  syarat  pertumbuhan  tertentu. Variasi  bentuk  bakteri  yang  terjadi  juga  dipengaruhi  oleh lingkungan  (faktor  biotik  dan  abiotik),  faktor  makanan (medium  tumbuh)  dan  suhu  (minimum,  optimum  dan maksimum)  (Ilyas,  2001).  Warna  koloni  sebagian  besar isolat berwarna putih. Warna koloni yang tampak berbeda- beda menunjukkan adanya perbedaan pigmen.
(Sebelum Aplikasi)  (1 Bulan Setelah Aplikasi) (2 Bulan Setelah Aplikasi)
K eli mpa ha n 3.4 3.45 2.05 2.85 5.7 7.45 3.65 3.05 5.05 4.5 5.65 11.6 1.75 2.8 2.9 4.6 5.4 4.2 0 5 10 15 0 1 2 B0 B1 B2 B3 B4
B5
Pemberian dosis pupuk hayati berpengaruh terhadap BPF dan CPF pada setiap perlakuan (Gambar 2). Populasi bakteri pelarut fosfat tertinggi pada perlakuan B3 (5 g liter - 1 tanaman -1 ),  sedangkan  populasi  cendawan  pelarut  fosfat tertinggi  pada  perlakuan  B2  (1  g  liter -1 tanaman -1 ). Pembentukan  zona  bening  oleh  isolat  BPF  dan  CPF mengindikasikan kemampuannya dalam melarutkan fosfat. Sumber  utama  fosfor  tanah  dapat  berasal  dari  pelapukan batuan  (proses  mineralisasi).  Pada  tanah  masam,  fosfor akan  bersenyawa  dengan  aluminium  membentuk  Al-P, sedangkan  pada  tanah  alkali,  fosfor  akan  bersenyawa dengan kalsium membentuk Ca-P yang sukar larut sehingga tidak  tersedia  untuk  tanaman  (Ilham et  al .,  2014). Pengikatan-pengikatan fosfat tersebut menyebabkan pupuk fosfat yang diberikan tidak efisien sehingga perlu diberikan dalam  takaran  tinggi.  Namun,  tanaman  hanya  dapat menyerap  sekitar  15-20%  fosfat  yang  berasal  dari pemupukan. Adapun sisanya akan terjerap di antara koloid tanah dan tinggal sebagai residu di dalam tanah. Hal ini akan menyebabkan defisiensi  fosfat bagi pertumbuhan  tanaman (Simanungkalit dan Suriadikarta, 2006).
Gambar 2.  Kelimpahan mikrob pelarut fosfat; (A) bakteri pelarut fosfat (BPF); (B) cendawan pelarut fosfat (CPF).
Berdasarkan  hasil  pengamatan  uji  penambat  N diperoleh  bahwa  perlakuan  B4  (10  g  liter -1 tanaman -1 ) memberikan  pengaruh  yang  lebih  baik  dari  perlakuan lainnya, hal ini sejalan dengan penelitian pertumbuhan yang diperoleh kandungan klorofilnya tinggi pada perlakuan B4 (10  g  liter -1 tanaman -1 ).  Diduga  dari  pengamatan  yang diperoleh bahwa bakteri penambat N ini termasuk golongan genus Azotobacter . Hal ini sesuai dengan pendapat Brock et al .  (1994)  bahwa  Genus Azotobacter dicirikan  dengan  sel berbentuk batang, gram negatif, bersifat aerobik obligat dan mempunyai  ukuran  sel  yang  lebih  panjang  dari  prokariot lainnya  dengan  diameter  sel  2-4  μm  atau  lebih.  Beberapa strain motil  dengan flagelperitrikha .  Pada  media mengandung  karbohidrat,  bakteri  ini  membentuk  kapsul yang  berfungsi  melindunginya  dari  lingkungan  luar. Penelitian ini menunjukkan bahwa tidak ada bakteri genus Azospirilum yang  ditemukan,  karena  bakteri Azospirilum tidak  tumbuh  pada  media  selektif  khusus Azospirilum . Genus bakteri Azospirilum mempunyai ciri berupa sel yang berbentuk setengah  spiral  yang padat dan bergetar dengan sebuah  flagel  polar  sehingga  bergerak  secara  berputar (Haran dan Ansori, 1992).
Hasil kelimpahan  mikrob  yang dilakukan sebanyak 3 kali pengamatan yaitu 0 (sebelum aplikasi pupuk hayati), 1 bulan (setelah aplikasi pupuk hayati) dan 2 bulan (setelah aplikasi  pupuk  hayati)  diperoleh  hasil  terlihat  dinamika
mikrob yang tumbuh pada setiap pengamatan. Pengamatan 1  bulan  (setelah  aplikasi  pupuk  hayati)  merupakan pengamatan  yang  lebih  baik  dari  pengamatan  2  bulan (setelah  aplikasi  pupuk  hayati)  baik  bakteri  maupun cendawan  mengalami  peningkatan  yang  cepat  dari pengamatan  0  (sebelum  aplikasi  pupuk  hayati).  Hal  ini mengindikasikan bahwa variabel waktu sangat menentukan untuk  mikrob  yang  dilepaskan  untuk  beradaptasi  dengan lingkungan.

## SIMPULAN
Pemberian  dosis  pupuk  hayati  tidak  berpengaruh terhadap dinamika kelimpahan mikrob tanah di lahan bekas tambang timah yang ditanami tanaman lada ( Piper nigrum L.)
Pemberian  dosis  pupuk  hayati  perlakuan  B3  (5  g liter -1 tanaman -1 ) memberikan pertumbuhan optimal mikrob di lahan bekas tambang timah yang ditanami tanaman lada ( Piper nigrum L.)

## DAFTAR PUSTAKA
Adesemoye,  A.O.,  M.  Obini  and  E.O.  Ugoji.  2008. Comparison  of  plant  growth  promotion  with Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis in three vegetables. Brazilian Journal of Microbiology, 39:423-426.
Brock,  T.D.,  M.T.  Madigan  and  J.M.  Martinko.  1994. Biology  of  Microorganism,  seventh  edition .
Prentice Hall, New Jersey.
Collins,  C.I.I.  dan  P.M.  Lyne.  1976. Microbiological Methods Foundation . Butterworths, London.
Dewi, I.M. 2008. Isolasi Bakteri dan Uji Aktifitas Kitinase Termofilik  Kasar  dari  Sumber  Air  Panas  Tinggi Raja,  Simalungun,  Sumatera  Utara  [Tesis] . Sekolah Pascasarjana Universitas Sumatera Utara, Medan.
Fadiluddin,  M.  2009.  Efektivitas  Formula  Pupuk  Hayati dalam  Memacu  Serapan  Hara,  Produksi,  dan Kualitas  Hasil  Jagung  dan  Padi  Gogo  [Tesis]. Sekolah  Pascasarjana  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor.
Gentili,  F.,  and  A.  Jumpponen.  (2005). Handbook  of Microbial Fertilizers . Rai MK, editor. The Hawort Press, Inc: New York .
Hadioetomo, R.S. 1993. Mikrobiologi Dasar dalam Praktek Teknik  dan  Prosedur  Dasar  Laboratorium . Penerbit Gramedia, Jakarta.
Haran,  S.  dan  N.  Ansori  (Eds).  1992. Bioteknologi Pertanian  Bogor .  Pusat  Antar  Universitas. Bioteknologi, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Hasibuan,  B.E.  dan  M.D.  Ritonga.  1981. Ilmu  Tanah Umum. Fakultas Pertanian, USU, Medan.
Hidayat,  N.,  M.C.  Padaga  dan  S.  Suhartini.  2006.
Mikrobiologi Industri . Penerbit ANDI, Yogyakarta.
Aplikasi Pupuk Hayati Terhadap Dinamika Kelimpahan Mikrob pada Lahan Bekas Tambang Timah (Patimah, S., I. Ismed dan A. Euis)
Ilham, I.B.G. Darmayasa, I.G.M.O. Nurjaya dan R. Kawuri.
2014.  Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri  Pelarut Fosfat  Potensial  pada  Tanah  Konvensional  dan Tanah Organik. Jurnal Simbiosis, 2(1):173-183.
Ilyas,  S.  2001. Mikrobiologi  Dasar  Diklat  Kompilasi  28 . Universitas Sumatera Utara Press, Medan.
Iqbal, A., M. Sajjad, A. Khan, F. Aqil and M. Singh. 2011. Microbial  Appliations  in  Agriculture  and  the Environment . In Ahmad  I.,  Ahmad  F.,  Pichtel  J.
(eds)  Microbes  and  Microbial  Technology. Springer, New York.
James,  J.,  C.  Baker  dan  H.  Swain.  2008 .  Prinsip-Prinsip Sains untuk Keperawatan . Erlangga, Jakarta.
Kapli,  H.  2015.  Kelimpahan  dan  Aktivitas  Mikrob  Tanah Pasca  Aplikasi  PGPR  serta  Peranannya  pada Tanaman  Jagung  ( Zea  mays .  L)  [Tesis].  Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Kloepper,  J.W.  and  M.N.  Schroth.  1978.  Plant  growth promotting  rhizobacteria  on  radishes.  In  Angers, Editor. In Proceedings  of  the  fourth  International Conference  on  Plant  Pathogenic  bacteria.  1978 september 2; INRA,p 879-882. France
Lay, W.B. 1994. Analisis Mikrob di Laboratorium . PT Raja Grafindo Persada, Jakarta.
Mc.  Mahon,  M.E.,  A.M.  Kofranek  and  V.E.  Rubatzky.
2011. Hartmann’s  Plant  Science  Growth Development  and  Utilization  of  Cultified  Plants 4th Edition . Pearson Education, inc. Upper Saddle River, New Jersey.
Mihardjo,  Ashna  dan  A.  Majid.  2008.  Pengendalian
Penyakit  Layu  pada  Pisang  dengan  Bakteri Antagonis Pseudomomas flourescens dan Bacillus subtilis . Jurnal Pengendalian Hayati, 1(12):26-31.
Nasahi,  H.C.  2010. Peran  Mikrob  dalam  Pertanian
Organik . Fakultas Pertanian, Universitas Padjadjaran, Bandung.
Nunik,  S.,  S.  Antonius  dan  R.  Maman.  2011.  Pengaruh Residu  Pestisida  Terhadap  Pola  Populasi  Bakteri dan Fungi Tanah di Rumahkaca. Jurnal Teknologi Lingkungan, 12(1):43-53.
Prajnanta,  F.  2004. Pemeliharaan  Tanaman  Budidaya Secara  Intensif  dan  Kiat  Sukses  Beragribisnis . Penebar Swadaya Press, Bogor.
Purwantisari,  S.  2009.  Isolasi  dan  Identifikasi  Cendawan Indigenous  Rhizosfer  Tanaman  Kentang  dari Lahan Pertanian  Kentang Organik di  Desa Pakis. Magelang. Jurnal BIOMA, 11(2):45.
Saraswati,  R.  dan  Sumarno.  2008.  Pemanfaatan  Mikrob Penyubur Tanah. Iptek Tanaman Pangan, 3(1):41- 58.
Saraswati R. 2012. Teknologi pupuk hayati untuk efisiensi pemupukan  dan  keberlanjutan  sistem  produksi pertanian. Dalam: Wigena P, Nurida NL, Setyorini D, Husnain, Husen E, Suryani E, editors. Seminar Nasional  Pemupukan  dan  Pemulihan  Lahan Terdegradasi;  2012  Jun  29-30.  Balai  Besar
Penelitian dan Pengembangan Sumberdaya Lahan Pertanian. hlm. 727-738. Bogor.
Semangun,  H.  1996. Ilmu  Penyakit  Tumbuhan .  Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.
Setiawati,  M.,  D.  Jusadi  and  R.  Diana.  2016.  Kecernaan Pakan  dan  Pertumbuhan  Ikan  Patin Pangasius hypopthalmus yang  diberi  Tepung  dan  Ekstrak Daun Kayu Manis Cinnamomum burmanni . Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia (JIPI) , 21(3):219-223.
Shurtleff,  M.C.  1980. Compendium  of  Corn  Disease . Second  Ed.  The  American  Phytopathological Society, Pp. 105. United State
Simanungkalit,  R.D.M.,  E.  Husein  dan  Saraswati.  2006.
Baku Mutu Pupuk Hayati dan Sistem Pengawasannya .  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Sumberdaya  Lahan  Pertanian, Bogor.
Simanungkalit, R.D.M. and D.A. Suriadikarta. 2006. Pupuk Organik dan Pupuk Hayati . Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Sumber Daya Lahan Pertanian, Bogor.
Sofatin,  S.,  B.N.  Fitria  dan  Y.  Machfud.  2016.  Pengaruh Kombinasi  Pupuk  NPK  dan  Pupuk  Hayati terhadap  Populasi  Total  Mikrob  Tanah  dan  Hasil Jagung  Manis  ( Zea  mays L. saccharata )  pada Inceptisols  Jatinangor. Jurnal Soilrens, 14(2):33- 37
Sudrajat,  D.,  N.  Mulyana  dan  A.  Adhari.  2014.  Seleksi Mikrob  Rizosfer  Lokal  untuk  Bioaktif  pada Inokulan Berbasis Kompos Iradiasi. Jurnal Ilmiah Aplikasi Isotop dan Radiasi , 10(1):23-34.
Sujitno,  S.  2007. Sejarah  Timah  di  Pulau  Bangka .  PT. Timah tbk, Pangkalpinang.
Sunatmo,  T.I.  2007. Eksperimen  Mikrobiologi  dalam Laboratorium . Ardy Agency, Bogor.
Suryanto,  D.  dan  E.  Munir.  2006.  Potensi  Pemanfaatan Isolat  Bakteri  Kitinolitik  Lokal  untuk  Pengendali Hayati  Jamur. In Prosiding  Seminar  Hasil-Hasil Penelitian USU,  Pp. 15-25. Medan
Suwahyono, U. 2011. Petunjuk Praktis Penggunaan Pupuk Organik  Secara  Efektif  dan  Efisien .  Penebar Swadaya, Jakarta.
Suwarto. 2013. Lada Produksi 2 ton/ha . Penebar Swadaya,
Jakarta.
Vessey, J.K. 2003. Plant Growth Promoting Rhizobakteria as Biofertilizers. Plant and Soil, 255:571-586.
Watanabe,  I.  1979. Biological  Nitrogen  Fixation  in  Rice Soils . In Soils  and  Rice.  IRRI.  Pp.  465-478.  Los Banos, Philippines.
Wibowo,  A.  2001.  Suppression  of  Sheath  Blight  Of  Rice With Antagonistic Bacteria. Perlindungan Tanaman Indonesia, 7 (2):21-25.
Wicaksono, T. 2015. Kajian Aktivitas Mikrob Tanah Pada Beberapa  Cara  Penggunaan  Lahan  Di  Desa  Pal
IX  Kecamatan  Sungai  Kakap  Kabupaten  Kubu Raya . Universitas Tanjungpura, Pontianak.