## OPTIMASI PRODUKSI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA ANTIMIKROB DARI JAMUR ENDOFIT Sporothrix sp LBKURCC43 TANAMAN DAHLIA (Dahlia
variabilis)
Paslun, Saryono, Chiristine Jose
Laboratorium Riset Enzim, Fermentasi dan Biomolekuler Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Riau Jln. Raya Bangkinang KM 12,5 Pekanbaru 28193 Penulis korespondensi. E-mail: paslunbahar@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Dahlia tubers contain fungus S porothrix sp which have antimicrobial activity.The objective of this research was to determine the agitation that effect the activity of antimicrobial in malt extract broth (MEB). The result showed that agitation of 150 rpm have the antimicrobial activity against Staphylococcus aureus with 21.0 mm and Escherichia colii with 12.8 mm. The identification of function group showed the extract contained O-H, C=O and Amide with UV and IR spectroscopy.
Key Words : Antimikrobial activity, Dahlia plant, agitation, Sporothrix sp
1. PENDAHULUAN
Dahlia merupakan tanaman yang berbunga indah dan banyak ditemui di seluruh Indonesia terutama daerah yang beriklim dingin. Tanaman banyak  manfaatnya  selain  sebagai  tanaman hias, menuru Didik Widyatmoko Peneliti LIPI Inulin  үang  terkandung  dаlam  umbi  bunga dahlіa,  merupakan  polimer  darі  unit-unit fruktosa. Inulin ini merupakan salah ѕatu kom- ponen bahan pangаn yang memiliki ĸandungan serat sаngat tinggi.
Salah  satu  manfaat  umbi  dahlia  dapat digunakan  sebagai  sumber  senyawa  bioaktif. Hasil  uji  fitokimia  yang  telah  dilakukan  oleh Saryono  et  all  dalam  artikelnya  menunjukkan bahwa  secara  umum  sampel  mengandung metabolit  sekunder  flavonoid,  terpenoid,  dan fenol.  Ekstrak  metanol  umbi  dahlia  berbunga merah menunjukkan keaktivan dalam menghambat  pertumbuhan Escherichia  coli, Basillus  subutilis,  Staphylococcus  aereus, Candida utilis dan Penicillium sp.
Dan  telah  ditemukan  adanya  jamur
Spongotrix  sp yang  berwarna  ungu  terdapat pada  umbi  dahlia  melalui  penelitian  Dina fitriyah(2012),  dengan  adanya  penemuan  ini maka  akan  dilanjutkan  lagi  penelitian  tentang senyawa  bioaktif  anti  jamur  dan  anti  bakteri yang terkandung pada umbi dahlia dengan cara isolasi  dan  identifikasi  .  Penelitian  ini  juga
melibatkan pengaruh agitasi terhadap fermentasi  untuk  menghasilkan  S porothrix  sp . Adapun  fungsi  agitasi  dalam  fermentasi  ini adalah Untuk mensuspensikan mikroorganisme dan  nutrient  secara  merata  selama  kultivasi serta  meningkatkan  laju  perpindahan  panas antara permukaan kultivasi dengan permukaan dingin.

## 2. METODOLOGI PENELITIAN

## 2.1. Sampel
Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah  jamur Sporothrix  sp yang  telah diekstraksi  dan  difraksinasi  dari  umbi  dahlia ( Dahlia variabilis ) berbunga merah yang sudah berumur  ±  1  tahun  yang  diambil  dari  daerah Payakumbuh, Sumatera Barat.

## 2.2. Fermentasi
Sampel  dari  penelitian  sebelumnya diinokulasi  dalam  media  malt  extract  broth (MEB)  sebanyak  25  ml  selama  2  hari. Kemudian diambil 5 ml inokulum dimasukkan dalam  fermentor  yang  berisi  900  ml  media MEB dan difermentasi selama 20 hari dengan variasi agitasi 75,100,125 dan 150 rpm. Setiap variasi  kecepatan  agitasi  hasil  fermentasi  duji aktivitasnya dengan Candida Albicans ,
S.Aureus dan E.Coli.

## 2.3. Ekstraksi
Hasil  fermentasi  dengan  kecepatan  agitasi yang  yang  sudah  mempunyai  activitas  pada Candida  albicans,  S.  Aureus  dan  E.Coli kemudian  di  ekstraksi  Setelah  20  hari  miselia dan  media  dipisahkan  dengan  cara  dekantasi. Masing  –  masing  dari  1  liter  filtrate  hasil fermentasi  diekstraksi  dua  kali  dengan  etil asetat  bervolume  1  liter.  Ekstrak  dikentalkan dengan  evaporator  pada  suhu  kamar  yang sebelumnya  diberi  penambahan  Na 2 SO 4 anhidrat. Residu yang diperoleh dari evaporasi dilarutkan  kembali  dengan  metanol,  dalam perbandingan  1  ml  metanol  untuk  setiap  1  L ekstrak  etil  asetat.  Ekstrak  kasar  ini  dapat disimpan pada suhu -20 o C sebelum dipergunakan.
2.4. Deteksi Saponin dengan KLT
Ekstrak kasar dari miselia jamur Sporothrix sp dalam metanol dianalisis dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) pada plat KLT SiO 2 dan digunakan DCM: metanol 80:20 (v/v) sebagai eluen. Ekstrak diambil sebanyak 10 μL kemudian  ditotolkan  ±1  cm  dari  bawah  plat KLT  dengan  menggunakan  pipa  kapiler. Selanjutnya  dibiarkan  beberapa  saat  hingga pelarutnya menguap dan dimasukkan ke dalam bejana  pengembang  ( chamber ).  Setelah  eluen naik  sampai  batas  garis  atas,  plat  dikeluarkan dan  dikeringkan.  Noda  dideteksi  dengan penyemprotan reagensia yakni larutan 0,5% 4- metoksibenzaldehid
dalam
larutan metanol/H 2 SO 4 /asam  asetat  90:5:5  (v/v/v)  dan
dikeringkan pada suhu 110 o C selama 20 menit Pemaparan  dengan  sinar  UV  (254  nm)  akan meningkatkan visualitas selain reagen tersebut digunakan juga serium sulfat.
Sebanyak  0,245  g  sampel  yang  telah diimpregnasi  dengan  3  g  silika  adsorp dipisahkan  lebih  lanjut  dengan  kromatografi flash berdiameter  kolom  1  inch  menggunakan eluen metanol: etil asetat (5:5) masing-masing sebanyak  50  ml.  Fraksi  yang  dihasilkan selanjutnya  diuapkan  pelarutnya  dengan  suhu ruangan kemudian  ditimbang  beratnya.  Hasil yang  diperoleh  diuji  kemurniannya  dengan HPLC. Kemudian dilanjutkan dengan penentuan gugus fungsi dengan UV dan IR.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Satu  Liter  filtrate  dari  hasil  fermentasi jamur Sporothrix sp pada kecepatan agitasi 75 dan 100 rpm yang dilakukan selama 20 hari di uji  aktivitasnya  dengan  antimikrobial.  Dari hasil penelitian pada kecepatan agitasi tersebut jamur sporothrix sp belum dapat menghambat pertumbuhan  jamur Candida  albicans, S. auereus dan E. coli . Hal ini disebabkan karena pada kecepatan agitasi 75 dan 100 rpm belum dapat  mendistribusikan  udara  dan  nutrient secara  optimal.  Agitasi  merupakan  factor penentu  keberhasilan  proses  kultivasi  dimana tujuan proses tersebut adalah untuk mendispersikan  udara  di  dalam  larutan  media dan  menyeragamkan  suhu  dan  konsentrasi nutrient di dalam fermentor.
Tabel 1. Aktivitas antimikrobial Ekstrak Jamur Sporothrix sp Kecepat an Agitasi Zona Hambat (mm) Ekstrak Jamur Kontrol positif Kontrol negatif Sa Ec Ca Sa Ec Ca Sa Ec Ca 75 - - - 9,8±0,8 10,2±0,2 17,6±0,2 - - - 100 - - - 11,6±0,8 10,8±0,7 20,1±0,9 - - - 125 - - - 11,4±0,4 10,6±0,5 18,4±0,2 - - - 150 21,0±0,6 12,8±0,5 - 12,1±0.4 10,3±0,7 19,6±0,8 - - - 175 - - - 9,7±0,7 10,2±0,2 17,6±0,2 - - -
(a) (b) (C)
Gambar 1. Aktivitas antimikrobial jamur endofit Sporothrix sp pada bakteri patogen (a) Aspergillus aureus (b) Escherichia colli dan jamur patogen (c) Candida albicans dengan kecepatan agitasi 150 rpm.
Skrining  aktivitas  antimikrobial  jamur endofit tanaman dahlia (Dahlia variabilis)
Diantara lima perlakuan agitasi 75,100,125,150,175  rpm  didapatkan  bahwa aktivitas antimikrobial berada pada agitasi 150 rpm  dengan  zona  hambat  pada Aspergillus aureus sebesar 21,0 mm pada Escherichia colii sebesar  12,8  mm.  Pada  kecepatan  agitasi  150 rpm  merupakan  kecepatan  agitasi  yang  bisa menghasilkan aktivitas antimikrobial.
Uji  antijamur  terhadap Candida  albicans menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar  jamur endofit Sporothrix sp yang di fermentasi dalam media  produksi  MEB  pada  agitasi  75,100,125 dan  175  rpm  tidak  menunjukkan  adanya aktivitas antimikrobial.
Pada  kecepatan  75,100,125rpm  proses fermentasi terjadi dalam kondisi agitasi terlalu rendah  sehingga  berakibat  tidak  optimalnya proses  distribusi  oksigen,  nutrisi  dan  enzim keseluruh bagian media sehingga pertumbuhan jamur  tidak  optimal  hal  ini  disebabkan  juga karena  Sporothrix  adalah  mikroorganisme aerob sehingga perlakuan agitasi
mendistribusikan  oksigen  yang  dibutuhkan dalam pertumbuhan Sporothrix sp.
Pada  kecepatan  175rpm,  fermentasi berjalan  dalam  kondisi  agitasi  terlalu  tinggi, sehingga menyebabkan proses metabolisme sel terganggu Kecepatan agitasi terlalu tinggi akan menyebabkan sebagian sel mengalami kerusakan fisik kemudian mati. Pada penelitian ini diperoleh bahwa ekstrak Sporothrix sp lebih sensitif terhadap  bakteri  gram  positif  daripada gram  negatif.  Diameter  zona  hambat  yang dihasilkan oleh bakteri gram positif lebih besar dari pada gram negatif. Aktivitas zona hambat pada S.Aureus sebesar  21,0  mm  diduga
memiliki aktivitas antibakteri berkekuatan kuat karena  memiliki  zona  hambat  10-20  mm.  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  bakteri  gram positif  tersebut  lebih  peka  terhadap  senyawa aktif yang ada pada jamur sporothrix sp .

## 4. KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  terhadap  senyawa bioaktif jamur Sporothrix sp pada umbi dahlia diambil kesimpulan bahwa:
Pada  fermentasi  jamur  endofit Sporothrix sp umbi dahlia diperoleh aktivitas antimikrobial pada media MEB dengan agitasi pada 150 rpm dengan  zona  hambat  maksimum  pada  sebesar 21,0  mm  dan  pada Escherichia  Colli sebesar 12,8  mm.  Hasil  karakterisasi  gugus  fungsi dengan  data  UV  dan  IR  dapat  disimpulkan bahwa  senyawa  endofit  mempunyai  gugus OH,  C=O,  Amida,  dan  adanya  ikatan rangkap

## Daftar Pustaka
Asahiko  Hayashi,et  al,  1995,  The  Journal antibiotic, vol.49 no.7
Fitriyah  D,  Penentuan  Media  Optimum Senyawa  Anti  Mikroba  dari  senyawa endofit  tanaman  Dahlia,  Kimia  FMIPA UNRI, 2012
Fardiaz,  S,  1988,  Fisiologi  Fermentasi,  Pusat Antar Universitas, IPB Bogor.
Saryono, Chainulfiffah, Devi, S., Monalisa,  & Dasli.  1998.  Pemanfaatan  Ubi Dahlia variabilis untuk Produksi Sirup Fruktosa (HFS)  Dan  Fruktooligosakarida  (FOS). Seminar Nasional PBBMI XIV . Bandung Strobel,  G.  &  Daisy,  B.  2003.  Bioprospecting for  Microbial  Endophytes  and  Their
Natural  Products. Microbiology  and Molecular Biology Reviews 67:491-502
Sinaga, E., Noverita, & Fitria, D., 2003. Daya Antibakteri Jamur Endofit yang Diisolasi dari  Daun  dan  Rimpang  Lengkuas (Alpinia  Galanga  SW). FMIPA  Biologi. Universitas Nasional
Suciatmih.  2010.  Pengaruh  Konsentrasi Antimikroorganisme, Media Fermentasi, dan Waktu Inkubasi Terhadap Pertumbuhan Absidia corymbifera (Cohn) Sacc. & Trotter dari jamur
Endofit Fusarium nivale (Fr.) Ces. Media Litbang Kesehatan Volume XX:1 . Suryadi, A.E. 2007. Ekstraksi dan Uji Aktivitas Antimikroba  Ekstrak  Umbi  Dahlia (Dahlia  variabilis) .  Skripsi  FMIPA Universitas Riau. Pekanbaru.
Turk, F.M. 2006. Saponins versus plant fungal pathogens. Journal of Cell and Molecular Biology 5:13-17.
Yuwono, T. 2010. Biologi Molekuler . Penerbit Erlangga: Jakarta.