POTENSI Trichoderma sp. SEBAGAI AGEN PENGENDALI Fusarium sp.

## PATOGEN TANAMAN STRAWBERRY (Fragaria sp.)
Melysa, Nur Fajrin 1 , Suharjono 1 , Mutia Erti Dwiastuti 2
1 Laboraturium Mikrobiologi, Jurusan Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Brawijaya, Malang
2 Balai Penelitian Tanaman Jeruk dan Buah Subtropika, Tlekung, Kota Batu
Melysa Nur Fajrin, mely.arien@gmail.com

## ABSTRAK
Fusarium sp. merupakan salah satu patogen tanaman strawberry yang dapat menurunkan hasil panen tanaman  inang  sekitar  40  %.    Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mempelajari  potensi  Genus  Trichoderma dalam  mengendalikan  Fusarium  sp.  Trichoderma  diisolasi  dari  tanah  rhizosfer  tanaman  strawberry, sedangkan Fusarium sp. diisolasi dari tanaman strawberry yang mengalami layu Fusarium. Isolat kapang dimurnikan,  dikarakterisasi  dan  dibandingkan  dengan  isolat  kapang  acuan.  Uji  Antagonis  dilakukan secara  in  vitro  dan  in  vivo.  Uji  in  vitro  dilakukan  dengan  metode  dual  culture  dan  slide  culture.  Hasil penelitian didapatkan dua jenis  kapang  antagonis  yang mirip dengan  Genus Trichoderma dan dua jenis kapang patogen yang mirip dengan Genus Fusarium. Isolat antagonis yang diperoleh adalah Trichoderma sp.1 dan Trichoderma sp. 2, serta isolat patogen Fusarium sp. 1 dan Fusarium sp. 2. Isolat Trichoderma sp. 1  memiliki  kemampuan  antagonisme  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  isolat  Trichoderma  sp.  2.  Isolat Trichoderma  sp.  1  mampu  menghambat  pertumbuhan  Fusarium  sp.  1  dan  Fusarium  sp.  2  secara berturut-  turut  49,7  %  dan  49,6  %.  Isolat  Trichoderma  sp.  2  mampu  menghambat  pertumbuhan Fusarium sp. 1 dan Fusarium sp. 2 secara berturut-turut 45,8 % dan 43,4 %. Mekanisme antagonis yang terjadi  antara  kapang  antagonis  dan  patogen  pada  uji  in  vitro  yaitu  pembelitan  dan  intervensi  hifa. Perlakuan  paling  optimal  pada  uji  in  vivo  adalah  Trichoderma  yang  diinokulasi  terlebih  dahulu  yang dilanjutkan  dengan  penginokulasian  Fusarium  dengan  nilai  intensitas  serangan  sebesar  41,72  %  pada varietas Santung sedangkan varietas California yang relatif lebih rentan terhadap serangan patogen .
Kata Kunci : antagonisme, Fusarium sp. , strawberry, dan Trichoderma sp.

## ABSTRACT
Fusarium sp. is one of pathogen in strawberrys plant which can decreas harvest product in  host plant  around  40%.  This  research  aims  to  study  the  potential  of  Genus  Trichoderma  in  controlling Fusarium sp. Trichoderma was isolated from  rhizosfer  soil in strawberrys  plant,  while Fusarium sp. was isolated  from  strawberrys  plant  which  infected  by  Fusarium  wilt.  Fungus  isolat  were  purified, characterized and compared by reference isolat. Antagonist test was treated with in vitro test and in vivo test. In vitro test was treated by dual culture and slide culture. The result of the analysis show that it were founded  two  species  of  antagonist  fungus  having  similarity  to  Trichoderma  Genus  and  two  species  of pathogen  fungus  having  similarity  to  Fusarium  Genus.  Antagonist  isolat  succesfully  isolated  are Trichoderma  sp.  1  and  Trichoderma  sp.  2,  while  pathogen  isolat  succesfully  isolated  are  Fusarium  sp.  1 and Fusarium sp. 2. Trichoderma sp. 1 isolat has higher antagonist ability compared to Trichoderma sp. 2 isolat. Trichoderma  sp. 1 isolat can block Fusarium sp. 1 and  Fusarium sp. 2 growth serially 49,7 % and 49,6 %. Trichoderma sp. 2 isoat is able to block Fusarium sp. 1 and Fusarium sp. 2 growth serially 45,8 % and  43,4  %.  Antagonist  mechanisms  occured  in  antagonist  and  pathogen  fungus  in  in  vitro  test  are twisted  and  miselium  intervention.  The  most  optimal  treatment  in  in  vivo  test  is  by  spreading Trichoderma,  then  continued  by  spreading  Fusarium  with  intensity  value  41,72  %  in  Santung  variety whereas California variety which is sensitive to pathogen attack.
Keyword : antagonist, Fusarium sp. , strawberry , and Trichoderma sp.

## PENDAHULUAN
Fusarium adalah  salah  satu Genus kapang yang  menyebabkan  penyakit  pada  tanaman strawberry .  Tahun  2010  spesies  pada Genus Fusarium dilaporkan  dapat  menurunkan  hasil panen tanaman inang sekitar 40 % di kawasan Eropa pusat, Amerika Utara dan Asia [1] .
Trichoderma merupakan  kapang  endofit yang  mampu  mengendalikan  pertumbuhan patogen  tanaman.  Mekanisme  antagonis  yang dilakukan Trichoderma dalam  menghambat pertumbuhan  kapang  patogen  antara  lain kompetisi, parasitisme, antibiosis dan lisis [6] .
Sifat  antagonis  dari Trichoderma sp.  ini  dapat dimanfaatkan sebagai alternatif dalam pengendalian  kapang  patogen  yang  bersifat ramah lingkungan. Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari  potensi Genus  Trichoderma dalam mengendalikan Fusarium sp.  pada  tanaman strawberry.

## METODE PENELITIAN
Isolasi Trichoderma sp. Trichoderma sp.  diisolasi  dari  tanah rhizosfer  tanaman strawberry dari  dua  tempat berbeda  di  kota  batu.  Sampel  dibuat  serial  dilusi hingga 10 -6 . Suspensi diambil 0,1 ml diinokulasikan pada media Potato Dextrose Agar (PDA)  yang  mengandung Streptomycin 50  mg/L dan  ditumbuhkan  pada  suhu  27 o C  selama  48 jam. Biakan dimurnikan dengan metode monospora modifikasi  dari  metode [10] .  Konidia kapang  1  oose  disuspensikan  dengan  aquades pada object glass , di streak. Biakan ditumbuhkan  di  media  PDA  pada  suhu  27 o C selama  10-18  jam.  Konidia  yang  berkecambah dipindah  pada  media  PDA  baru.  Karakter  dari isolat Trichoderma sp. hasil isolasi dibandingkan dengan karakter Trichoderma sp. acuan.
Isolasi Fusarium sp.
Fusarium sp.  diisolasi  dari  bagian  tanaman strawberry yang mengalami gejala layu Fusarium . Sampel dipotong (1x1x1) cm meliputi 50  %  bagian  sehat  dan  50  %  bagian  gejala  layu Fusarium . Potongan tanaman dimasukkan  dalam 3  gelas  berisi  aquades;  alkohol  70  %;  aquades (@  1  menit),  ditumbuhkan  pada  PDA  dengan Streptomycin 50  mg/L,  diinkubasi  pada  suhu  27
o C. Fusarium dimurnikan  dengan  metode monospora sama  seperti  pemurnian  isolat Trichoderma sp.  Karakter  isolat  yang  didapat dibandingkan dengan karakter Fusarium acuan.

## Uji  antagonis  Trichoderma  sp.  terhadap
Fusarium sp. secara in vitro Uji in  vitro dibuat  dengan  dua  metode  yaitu metode dual kultur dan slide kultur. Metode dual kultur  modifikasi [4] biakan Trichoderma sp.  dan Fusarium sp.  diambil  dengan cork  borer diameter  5  mm  dan  jarum  enten.  Kedua  koloni ditumbuhkan  berdampingan  dengan  jarak  3  cm dalam  satu  cawan  petri.  Biakan  diinkubasi  pada suhu 27 o C dan  diukur diameter koloni selama 7 hari.  Kontrol  dibuat  dengan  cara  yang  sama, tetapi hanya ditumbuhkan satu jenis kapang saja. Masing-masing  perlakuan  dibuat  3  ulangan.
Hasil  uji dual kultur  dianalisis  dengan  uji one sample independent t-test pada program SPSS for Windows Release versi 16 .0. Pengaruh antagonisme Trichoderma sp.  terhadap  kapang patogen  dapat  diketahui  dengan  panghitungan PIRG ( Percentage Inhibition of Radial Growth ) [7] :
Keterangan : PIRG  = Percentage Inhibition of Radial Growth (% hambat) R1 = diameter patogen tanpa antagonis (kontrol) R2 = diameter patogen dengan antagonis
( dual kultur)
S lide kultur  dibuat  sama  seperti dual kultur, hanya  saja  cawan  petri  untuk  uji  ini  diberi slide glass pada  bagian  bawah  medium  PDA  dan diamati  kontak  kedua  hifa  secara  mikroskopis pada hari ke- 7.

## Uji  antagonis  Trichoderma  sp.  terhadap
Fusarium sp. secara in vivo
Uji in  vivo dilakukan  pada  pada  varietas California  dan  Santung,  masing-masing  varietas diulang  3  kali  dengan  jumlah  unit  tiap  ulangan sebanyak  4  tanaman.  Dosis  tular  suspensi Trichoderma dan Fusarium yang  dibuat  pada penelitian ini adalah dosis tular skala tinggi yaitu 10 8 konidia  ml -1 hasil  modifikasi  metode [2] . Hasil uji in vivo dianalisis dengan uji Tukey pada program SPSS for  Windows  Release  versi 16 .0. Intensitas serangan penyakit tanaman strawberry pada uji in vivo dicatat dengan skoring 0 = sehat, 1  = ≤ 10  %  gejala  layu Fusarium , 2  =  11-  25  % gejala  layu Fusarium ,  3  =  26-  50  %  gejala  layu Fusarium , 4 =  > 50 % (tanaman mati). Intensitas serangan Fusarium pada  tanaman  coba  dihitung dengan rumus perhitungan [5] :
Keterangan : I  =  intensitas serangan n   =  jumlah bagian tanaman mengalami gejala layu Fusarium
V  =  nilai skor tiap bagian tanaman yang
mengalami layu Fusarium Z  =  nilai skor tertinggi
N  =  jumlah bagian tanaman yang diamati dalam satu polybag

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Antagonisme isolat
Trichoderma sp. terhadap Fusarium sp.  dapat  diketahui  dari persentase  hambat  atau  PIRG  pada  uji dual kultur hari ke- 7 (Gambar 15) berikut.
Gambar  1. Perbandingan  persentase  hambatan Trichoderma sp.  terhadap Fusarium pada uji dual kultur hari ke- 7.
Isolat antagonis Trichoderma sp. 1 memiliki kemampuan lebih dalam menghambat pertumbuhan  kapang  patogen Fusarium sp.  1 maupun Fusarium sp.  2  dibandingan  dengan isolat  antagonis Trichoderma sp.  2.  Isolat Trichoderma sp.  1  memiliki  nilai  hambat (PIRG)  terhadap  isolat  patogen Fusarium sp.  1 dan Fusarium sp.  2  secara  berturut-turut  49,7  % dan  49,6  % Fusarium sp.  2.  Isolat  antagonis Trichoderma sp.  2  memiliki  nilai  PIRG  lebih rendah,  yaitu  45,8  %  jika  dipasangkan  dengan isolat Fusarium sp.  1  dan  43,4  %  jika dipasangkan  dengan isolat patogen Fusarium sp. 2.  Sifat  antagonis  muncul  dikarenakan  adanya persaingan  yang  terjadi  antara  dua  jenis  kapang yang ditumbuhkan berdampingan. Persaingan ini terjadi  akibat  adanya  kebutuhan  yang  sama  dari masing-masing  kapang,  yaitu  kebutuhan  tempat tumbuh  dan  nutrisi  dari  media  yang  digunakan untuk  tumbuh [8] . Trichoderma merupakan  salah satu  jenis  kapang  endofit  yang  memiliki kemampuan  dalam  menghambat  pertumbuhan kapang  patogen  dengan  menghasilkan  senyawa aktif  biologis  secara in  vitro .  Senyawa  aktif tersebut  meliputi alkaloid, paxillin, lolitrems dan tetranone steroid [9] .
Gambar  2.  Antagonisme Trichoderma sp. terhadap Fusarium sp.  pada  uji slide kultur  hari  ke-  7.  bar  =  10 µm
Mekanisme  antagonis Trichoderma sp. terhadap Fusarium sp.    yang  terlihat  pada pengamatan  hasil  uji slide kultur  (Gambar  2) antara  lain  pembelitan  hifa  dan  intervensi  hifa. Mekanisme  pembelitan  hifa  terlihat  pada  hasil pengamatan (Gambar 2a, 2c dan 2d). Tahap awal pembelitan  (Gambar  2d)  merupakan  hasil pengamatan antagonisme dari isolat Trichoderma sp.  2  terhadap Fusarium sp.  2.  Pembelitan  hifa tahap  selanjutnya  (Gambar  2c)  terlihat  pada pengamatan  antagonisme Trichoderma sp.  2 terhadap Fusarium sp.  1.  Pembelitan  kapang tahap  selanjutnya  dapat  mengintervensi  kapang patogen,  sehingga  kapang  antagonis  dapat mempenetrasi  hifa  patogen  (Gambar  2a)  seperti yang  terjadi  pada  isolat Trichoderma sp.  1 terhadap Fusarium sp. 2.
Intervensi  dan  penetrasi  terhadap  hifa patogen  mengakibatkan  perubahan  ukuran  hifa patogen  menjadi lebih  kecil  dan partikel-partikel yang  ada  didalam  hifa  berkurang  seperti pengamatan  antagonisme  isolat Trichoderma sp. 1  terhadap Fusarium sp.  1  (Gambar  2b). Intervensi  hifa oleh Trichoderma mengakibatkan adanya  perubahan  unsur  kimia  dan  partikel  pada dinding  sel,  sehingga  dapat  mempengaruhi permiabilitas dinding kapang patogen. Perubahan dinding  sel  kapang  patogen  dapat  memudahkan hifa  kapang  antagonis  masuk  ke  dalam  jaringan kapang  patogen.  Hifa  kapang  antagonis  yang berhasil  mempenetrasi  hifa  kapang  patogen menyerap  sari  makanan  dari  kapang  patogen, sehingga  hifa  kapang  patogen  dapat  mengecil dan mati [3] .
Tabel 1. Intensitas serangan tanaman strawberry
Hasil  analisis  intensitas  serangan  tanaman strawberry varietas  California  (Tabel  2a)  pada uji in  vivo menunjukkan  bahwa  nilai  intensitas serangan  paling  tinggi  terjadi  pada  tanaman strawberry yang  diinokulasikan  dengan  isolat Fusarium saja yaitu 88,44 %. Intensitas serangan paling  rendah  terjadi  pada  tanaman strawberry yang  diinokulasikan Trichoderma lebih  dahulu kemudian Fusarium (T 1 F 1 )yaitu  81,49  %. Hampir  semua  tanaman  uji  pada  perlakuan patogen  pada  varietas  ini  memiliki  intensitas serangan  >  80  %.  Kemampuan  antagonisme Trichoderma pada  uji in  vivo mengalami penurunan  dibandingkan  dengan  antagonisme yang  terjadi  pada  uji in  vitro .  Hal  ini dimungkinkan  adaya  keterkaitan  curah  hujan, kelembaban  dan  faktor  lapang  lain  yang  dapat mempengaruhi kemampuan antagonis dan viabilitas  dari  kapang Trichoderma, selain  itu dimungkinkan  tanaman strawberry varietas California  memiliki  sifat  yang  peka  terhadap penyakit.
Hasil  analisis  intensitas  serangan  tanaman strawberry varietas  Santung  (Tabel  1b)  pada  uji in  vivo menunjukkan  hampir  semua  perlakuan patogen mengalami peningkatan intensitas serangan  hingga  minggu  ke-  3.  Infeksi  tanaman yang  dilakukan  oleh Fusarium sp.  dipengaruhi oleh  kondisi  cuaca  yang  lembab  dan  umur tanaman.  Umur  tanaman  yang  lebih  muda cenderung  lebih  rentan  terserang  penyakit dibandingkan  dengan  tanaman  yang  sudah dewasa.  Penyakit  yang  disebabkan Fusarium sp. lebih  mudah  menyerang  tanaman  pada  musim hujan yang tinggi [5] .
Antagonisme Trichoderma yang diinokulasikan  setelah Fusarium kurang  efektif dalam  menghambat  pertumbuhan Fusarium sp.
Intensitas  serangan  yang  muncul  pada  perlakuan F 1 T 1 menunjukkan  nilai  yang  paling  tinggi  yaitu 46,03 %. Intensitas serangan  yang paling rendah terjadi  pada  tanaman strawberry pada  perlakuan tanaman yang diinokulasikan suspensi Trichoderma sp. lebih dahulu kemudian
Fusarium sp. (T 1 F 1 ), yaitu 41,72 %.
Hasil  analisis  intensitas  serangan  uji in  vivo pada  kedua  varietas  dapat  diketahui  bahwa tanaman strawberry varietas California  memiliki sifat  yang  lebih  peka  terhadap  penyakit dibandingkan dengan varietas Santung. Intensitas serangan  patogen  pada  varietas  California memiliki  nilai  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  varetas  Santung.  Intensitas  serangan paling  rendah  pada  kedua  jenis  varietas  terjadi pada  tanaman strawberry yang  diberi  perlakuan inokulasi  isolat Trichoderma sp.  lebih  dahulu kemudian  inokulasi  isolat Fusarium sp.  (T 1 F 1 ). Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  isolat  kapang Trichoderma sp. kurang mampu dalam menghambat  pertumbuhan  isolat Fusarium sp. yang telah hidup pada tumbuhan terlebih dahulu. Trichoderma sp.  lebih  efektif  digunakan  untuk langkah pencegahan dibandingkan dengan penanganan  penyakit  layu Fusarium yang  sudah meluas.
Gambar  3. Struktur  anatomi  akar  tanaman Strawbery varietas California dengan perbesaran 400 x, bar = 20 µm.  a)  infeksi Fusarium sp.  pada jaringan  korteks  parenkim,  b). jaringan  korteks  parenkim  yang sehat.
Gejala  Layu Fusarium pada  tanaman strawberry berumur  3  bulan  hasil  uji in  vivo dapat  terlihat  pada  beberapa  bagian  tanaman khususnya  akar.  Akar  tanaman strawberry yang mengalami  gejala  penyakit  layu Fusarium terlihat  jelas  pada  preparat  jaringan  akar  yang dibuat  (Gambar  3a).  Sel  akar  yang  terinfeksi penyakit  layu Fusarium mengalami  perubahan warna menjadi coklat pada bagian tertentu sesuai
letak  serangan Fusarium .  Preparat  akar  tanaman strawberry yang sehat (Gambar 3b) memiliki sel akar  tanaman  yang  berwarna  putih  pada  bagian korteks  parenkim.  Perubahan  warna  coklat  yang khas  pada  sel-sel  tanaman  yang  mengalami penyakit  Layu Fusarium disebabkan  adanya polimerisasi  melanin  yang  berwarna  coklat antara  senyawa  fenol  dengan  enzim fenol oksidase yang  dihasilkan  oleh  tanaman  inang sebagai  mekanisme  pertahanan  akibat  infeksi Fusarium oxysporum [4] .

## KESIMPULAN
Isolat  antagonis  yang  diperoleh  adalah Trichoderma sp.  1  dan Trichoderma sp.  2,  serta isolat  patogen Fusarium sp.  1  dan Fusarium sp. 2. Isolat Trichoderma sp. 1 mampu  menghambat pertumbuhan Fusarium sp. 1 dan Fusarium sp. 2 sebesar  49,7  %  dan  49,6  %.  Isolat Trichoderma sp. 2 mampu menghambat pertumbuhan Fusarium sp.  1  dan Fusarium sp.  2  sebesar  45,8
% dan 43,4  %. Mekanisme antagonis hasil uji in vitro adalah  pembelitan  hifa  dan  intervensi  hifa. Perlakuan  paling  optimal  pada  uji  antagonis in vivo adalah Trichoderma yang disemprot terlebih dahulu,  kemudian Fusarium dengan  nilai intensitas  serangan  41,72  %  pada  varietas Santung dibandingkan dengan varietas California yang  relatif  lebih  rentan  terhadap  serangan patogen .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada seluruh  civitas  akademika  Biologi  Universitas Brawijaya  dan  karyawan  Balitjestro  Kota  Batu yang  telah  memberikan  bantuan  fasilitas  untuk penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Chehri,  K.,  Saeed  T.J.,  Kasa  R.N.R.,  Saeed A.  dan  Baharuddin  S.  2010.  Occurrence  of Fusarium spp.  and  Fumonisins  in  Stored Wheat  Grains  Marketed  in  Iran.  Toxins 2010, Vol. 2, pp. 2816-2823.
[2] Iriarte,  L.E.,  Sosa,  M.C.  dan  Reybet,  G.E. 2011.  Effect  of  biofumigation  with  cabbage to  control Fusarium  oxysporum in  the  soil.
Argentina RIA. Vol. 37 (3), pp. 4-9.
[3]  Ismail,  N  dan  Andi  T.  2010. Potensi  Agens Hayati Trichoderma  sp. Sebagai  Agens Pengendali Hayati. Seminar Regional Inovasi  Teknologi  Pertanian,  mendukung
Program  Pembangunan  Pertanian.  Propinsi
Sulawesi Utara, pp. 177-189. [4]  Mukarlina,  Siti  K.  dan  Reny  R.  2010.  Uji Antagonis Trichoderma harzianum Terhadap Fusarium spp. Penyebab Penyakit Layu  pada  Tanaman  Cabai  ( Capsicum annum )  Secara In  vitro .  Jurnal  Fitomedika. Vol. 7, no. 2,  pp: 80 – 85.
[5] Nurhayati.  2011.  Infeksi Fusarium sp.
Patogen Lapuk Batang Pada Berbagai Umur Bibit  Karet.  Prosiding  Semirata  Bidang Ilmu-ilmu  Pertanian  BKS-PTN  Wilayah Barat Tahun 2011. ISBN: 978-979-8389-18- 4. pp. 312 -315.
[6]  Purwantisari,  S  dan  Rini  B.H.  2009.  Uji Antagonisme  Jamur  Patogen Phytophthora infestans Penyebab  Penyakit  Busuk  Daun dan  Umbi  Tanaman  Kentang  dengan Menggunakan Trichoderma spp . Isolat Lokal.  BIOMA,  Juni  2009.  Vol.  11  (1),  pp.
24-32. [7]  Singh,  P.  K.  dan  Vijay  K.  2011.  Biological Control of Fusarium wilt of Chrysanthemum with Trichoderma and Botanicals. Journal of Agricultural
Technology Vol. 7(6), pp. 1603-1613.
[8]  Soesanto,  L.  2008.  Pengantar  Pengendalian Hayati  Penyakit  Tanaman.  Rajawali  Pers. Jakarta.
[9] Sudantha,  I.  M  dan  Abdul  L.  A.  2011.  Uji Efektivitas  Beberapa  Jenis  Jamur  Endofit Trichoderma spp.  Isolat  Lokal  NTB Terhadap  Jamur Fusarium  oxysporum f.  sp. vanillae Penyebab  Penyakit  Busuk  Batang Pada  Bibit  Vanili.  Crop  Agro  Vol.  4  (2), pp.64-73.
[10]Yuliarni F. F., Suharjono, Bagyo Y. dan Otto
E. 2010. Patogenisitas Kapang Entomopatogen  Isolat  Kalimantan  Barat Terhadap Lepidoshapes  beckii Newman Hama  Tanaman  Jeruk.  Skripsi.  Universitas Brawijaya  Malang.