Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, Vol 4.No.1 Juni 2018 Avaiable online at www.jurnal-pharmaconmw.com/jmpi p-ISSN : 2442-6032 e-ISSN : 2598-9979

## Uji Daya Hambat Antibakteri Fungi Endofit Daun Beluntas (Pluchea indica (L.) Less.) Terhadap Bakteri Streptococcus mutans

## Muhammad Azdar Setiawan, Musdalipah
Politeknik Bina Husada Kendari, Program Studi D-III Farmasi

## ABSTRAK
Karies  gigi  atau  dikenal  dengan  gigi  berlubang merupakan suatu penyakit pada jaringan keras gigi akibat bakteri S. mutans. Salah satu tanaman yang memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  S.  mutans yang  telah  banyak  diteliti  adalah  daun  beluntas. Usaha  untuk  mengurangi  eksploitasi  alam  adalah dengan  mengisolasi  jamur  endofit  pada  bagian tanaman yang dapat memproduksi senyawa aktif. Jamur endofit merupakan jamur yang hidup pada sistem jaringan tanaman yang tidak menyebabkan gejala penyakit pada tanaman inangnya serta dapat menghasilkan senyawa metabolit sekunder seperti antibakteri,  antivirus,  antifungi  dan  sebagainya. Tujuan penelitian ialah untuk mengetahui seberapa besar  daya  hambat  jamur  endofit  daun  beluntas terhadap  pertumbuhan  bakteri  S. mutans .  Metode penelitian  yang  digunakan  adalah  metode  Paper disk.  Hasil  penelitian  diperoleh  2  isolat  jamur
endofit  daun  beluntas yaitu  jamur  endofit  putih dan  jamur  endofit  hitam. Jamur  endofit  putih menghasilkan  zona  hambat  terhadap  bakteri  S. mutans  rata-rata  10%  =  1,15  mm,  20%  =  1,51  mm, 30% = 2,55 mm, kontol positif sebesar 1,28 mm dan kontrol  negatif  tidak  memberikan  zona  hambat. Sedangkan  jamur  endofit  hitam  daun  beluntas tidak memberikan zona hambat.
Kata  kunci  :  Jamur  Endofit,  Daun  Beluntas, Antibakteri.

## Penulis Korespondensi:
Muhammad Azdar Setiawan Program Studi D-III Farmasi Politeknik Bina Husada Kendari,
E-mail : musdalipahapt@gmail.com

## PENDAHULUAN
Dewasa ini, biaya masalah kesehatan  semakin  meningkat  sejalan dengan
perkembangan penyakit.
(Musdalipah,  dkk,  2018).  Salah  satunya ialah karies gigi. Karies gigi atau dikenal dengan  gigi  berlubang  adalah  suatu penyakit  pada  jaringan  keras  gigi  yang sudah dikenal umum oleh masyarakat.(Nahak,  M.  2012).  Karies terjadi  akibat  proses  demineralisasi
permukaan  email  yang  disebabkan  oleh asam yang diproduksi oleh bakteri dalam plak utamanya yaitu Streptococcus mutans dan mungkin juga oleh Lactobacillus.(Lewis dkk, M. 2012 ).
Penyebab  utama  dari  karies  gigi adalah  penumpukan  plak  gigi  yang banyak mengandung bakteri (Daud, dkk, 2016).  Beragam  cara  dilakukan  untuk mencegah  penyebab  dasar  pembentuk
Setiawan dan musdalipah/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 4(1);2018 : 53-60
karies gigi.  Munculnya fenomena  back to nature  mengisyaratkan  bahwa  tanaman maupun  tumbuhan  di  alam  semakin penting  peranannya.  Perkembangan peranan tersebut perlu diperkuat dengan penelitian, baik secara kualitatif maupun kuantitatif untuk keamanan dan penggunaannya (Setiawan, dkk, 2016).
Salah satu tanaman yang memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  S.  mutans yang  telah  banyak  diteliti  adalah  daun beluntas.  Beluntas  (Pluchea  indica  (L.) LESS.  ).  Flavonoid  dalam  daun  beluntas memiliki  aktivitas  antibakteri,  demikian juga  senyawa  fenol  yang  terkandung  di dalamnya merupakan suatu alkohol yang bersifat asam sehingga disebut juga asam karbolat, yang mempunyai sifat
antibakteri yakni menghambat
pertumbuhan  sel  bakteri  E.  coli  (Susanti, 2006).
Selain itu, penelitian yang dilakukan  oleh  Nahak  Maria  (2012) mendapatkan  hasil bahwa ekstrak etanol daun  beluntas  dengan  konsentrasi  25%, telah  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri S. mutans.
Akhi-akhir ini telah banyak terjadi eksploitasi  bagian  tanaman  sebagai tanaman  obat  yang  terus  meningkat menyebabkan  semakin  berkurangnya sumber daya alam. Salah satu usaha untuk
mengurangi  eksploitasi  tersebut  adalah dengan  mengisolasi  jamur  endofit  pada bagian tanaman yang dapat memproduksi senyawa aktif.
Fungi  endofit  merupakan  fungi yang hidup di dalam jaringan tumbuhan tanpa menimbulkan gejala penyakit pada tumbuhan  inangnya.  Fungi  endofit mampu  menghasilkan  senyawa-senyawa bioaktif  misalnya  senyawa  antibakteri, antifungi, antivirus, antikanker, antimalaria dan sebagainya (Strobel, 2003 dalam Prihatiningtias dkk, 2011).

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  yang  digunakan adalah  penelitian  eksperimen,  dengan desain  penelitian  (RAL)  rancangan  acak lengkap.  Penelitian  ini  dilaksanakan  di laboratorium Mikrobiologi dan Parasitologi  Akademi  Farmasi  Bina Husada  Kendari.  Sampel  penelitian diperoleh dari Kota Kendari
ALAT DAN BAHAN
Alat  yang  digunakan  Autoklaf (Mammert),  Batang  pengaduk,  Cawan petri,  Gelas  kimia  (Pyrex),  Gelas  ukur (Pyrex),  Inkubator  (Yenaco),  Jangka sorong,  Jarum  ose,  Kain  flannel,  LAF (laminar  air  flow),  Lampu  spiritus, Magnetic  stirrer  (HMS-79)    Mikroskop, Mikropipet, Oven (Yenaco), Pingset, Piper disk,  Centifuge  (80-1),  Shaker  incubator
Setiawan dan musdalipah/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 4(1);2018 : 53-60
(Health),  Tabung  reaksi  (Pyrex)  dan Timbangan analitik.
Bahan  yang  digunakan  adalah
Aquadest, Minosep (Chlorhexidine gluconate 0,1%), Etanol 70%,
Kloramfenikol,    Larutan  NaCl  0,9  %, media PDA (Potato Dextrose Agar)(Oxoid), Media  PDY  (Potato  Dextrose  Yeast) (Oxoid) media NA (Nutrient Agar)(Oxoid), NaOCl 5,25 % dan Daun beluntas.
PROSEDUR KERJA
1.  Pembuatan  jamur  endofit  daun beluntas (Pluchea indica (L.) LESS.)
Pengerjaan ini dilakukan di dalam LAF  (Laminar  Air  Flow),  pertama dilakukan  Sterilisasi  permukaan  sampel dengan  cara  direndam  di  dalam  etanol 70%,  dilanjutkan  dengan  (NaOCl  5,25%) selama  3  menit  lalu  dibilas  dengan aquadest steril. Dikecilkan ukurannya 1x1 cm  lalu  ditanam  pada  medium  (PDA  + Kloramfenikol) di dalam cawan petri steril lalu  diinkubasi pada suhu kamar (25°C) selama  7-14  hari.  Setelah  terjadi pertumbuhan  fungi,  lalu  dipisahkan jamur hitam dan putih untuk mendapatkan  biakan  murni.  Biakan murni  fungi  endofit  ditumbuhkan  pada media PDA dalam cawan petri.
2.  Pembuatan  metabolit  antibakteri jamur endofit daun beluntas
Diambil  satu  ose  jamur  endofit  dan ditumbuhkan  pada  medium  PDY
(Potato Dextrose Yeast) dalam erlenmeyer sambil digoyang - goyangkan menggunakan shaker inkubator selama 14 hari lalu disentrifugasi  dengan  kecepatan  3800 rpm  selama  20  menit.  Supernatan diambil  untuk  digunakan  dalam pengujian daya hambat.
3.  Pengujian  Diameter  Zona  Hambatan Jamur Endofit daun beluntas
Pengujian  diameter  zona  menggunakan metode Paper disk. Media kombinasi (PDA + NA) dipipet sebanyak 20 mL yang telah dicampur  dengan  suspensi  bakteri  uji  S. mutans kemudian dituang kedalam cawan petri  dibiarkan  memadat.  Dicelupkan masing-masing  Paper  disk  ke  dalam sampel  pengenceran  jamur  endofit  daun beluntas  10%,  20%  dan  30%  lalu diletakkan  pada  permukaan  media  dan diatur  jaraknya  dan  diinkubasi  selama 1x24 jam pada suhu 37 ̊ C dalam incubator dan  diukur  luas  daerah  hambatan pertumbuhan  bakterinya  (Fauziah,  dkk, 2018)

## 4.  Analisis Data
Pengolahan  data  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah uji anova dilanjutkan uji  BNT  pada  tingkat  kepercayaan  95  ( =0,05) dengan menggunakan SPSS 20.
Setiawan dan musdalipah/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 4(1);2018 : 53-60

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Penyiapan  sampel  dan  Isolasi  Jamur

## Endofit
Daun  beluntas  dicuci  bersih
dengan  air  mengalir,  agar  semua kotorannya hilang. Sterilisasi permukaan sampel dengan cara merendam  sampel  dalam  alkohol  70%, kemudian  NaOCl  5,25%  dan  dibilas dengan  aquadest  steril.  Penggunaan alkohol  70%  dan  NaOCl  5,25%  karena dengan  konsentrasi  tersebut  efektif menghambat  pertumbuhan  bakteri. Medium  yang  digunakan  saat  isolasi
yaitu  medium PDA, karena medium ini berisi  nutrisi  yang  dibutuhkan  oleh jamur. Lalu ditambahkan kloramfenikol (PDAC),  hal  ini  dilakukan  untuk menekan  pertumbuhan  bakteri  yang kemungkinan  ikut  tumbuh  saat  isolasi. Hasil  dari  isolasi  jamur  endofit  pada ketiga replika setelah dilakukan pengamatan selama 14 hari dapat dilihat pada Gambar 1
Gambar 1. Jamur endofit dari daun beluntas (Pluchea indica (L.) Less.) setelah inkubasi selama 2 minggu, (a) Replika pertama, (b) Replika kedua, (c) Replika ketiga.

## Karakterisasi Isolat Jamur Endofit
Jamur  endofit  yang  tumbuh  di sekeliling  daun  beluntas  dimurnikan (dipisahkan) hingga memperoleh isolat jamur endofit. Pemisahan ini berdasarkan warna dan pola pertumbuhan  koloni  jamur.  Jamur endofit yang didapatkan hanya 2 jenis yaitu jamur endofit hitam dan endofit
putih.  Isolat  jamur  endofit  dari  daun beluntas yang telah murni selanjutnya dikarakterisasi  untuk  melihat  ciri-ciri jamur secara makroskopik dan mikroskopik.  Hasil  isolasi  jamur endofit  dari  daun  beluntas  dapat dilihat pada Gambar 7
c b a
Setiawan dan musdalipah/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 4(1);2018 : 53-60
Gambar 1. Isolat Jamur Endofit daun beluntas (Pluchea indica (L.) Less.). Diperoleh duaisolat jamur endofit, yaitu (a1) Isolat Jamur Endofit Putih, (a2) Hasil pengamatan Mikroskopik Isolat Jamur Endofit Putih, (b1) Isolat Jamur Endofit Hitam, (b2) Hasil Pengamatan Mikroskopik Isolat Jamur Endofit Hitam.
Berdasarkan  Gambar  7  dapat dilihat  hasil  isolasi  jamur  endofit  dari daun beluntas (Pluchea indica (L.) Less.). Pengamatan  makroskopik  pada  isolat jamur  endofit  putih  terlihat  koloni berwarna  putih  seperti  kapas  dan seperti serabut halus. Hasil pengamatan  mikroskopik  isolat  jamur endofit  putih  memiliki  hifa  tidak bersekat  (aseptat),  konidiofor  pendek dan  konodia  bersel  satu.  berdasarkan ciri-ciri  tersebut  jamur  endofit  putih diduga  masuk  kedalam  spesies
Articulospora. Pada isolat jamur endofit hitam, koloni awalnya berwarna putih, lama-kelamaan  bagian  dasar  koloni berubah  warna  menjadi  hitam  dan terlihat  koloni  berbentuk  bulat.  Hasil pengamatan  mikroskopik  isolat  jamur endofit  hitam  memiliki  bentuk  hifa bersekat  (septat)  konidiofor  bersel banyak  dan  konodia  berbentuk  bulat. ciri-ciri  tersebut  diduga  menunjukkan jamur  endofit  hitam  masuk  kedalam spesies Geniculosporium, seperti gambar 2.
Gambar 2.  (a) Articulospora , (b) Geniculosporium
a1 b2
b a a1 a2 b1 b2

## Metabolit sekunder antibakteri

## Jamur endofit daun beluntas
Setelah  dipisahkan  antara  jamur endofit putih dan jamur endofit hitam, kemudian dilakukan proses fermentasi. Fermentasi dilakukan untuk memperoleh  senyawa    metabolit sekunder  dari  isolat  jamur  endofit. Media  yang  digunakan  adalah  media cair PDY (Potato Dextrose Yeast). Media PDY  digunakan  karena  mengandung nutrisi  yang  dibutuhkan  oleh  jamur
endofit.
Jamur endofit yang difermentasi di dalam media cair PDY diaduk  menggunakan  shaker  incubator selama  14  hari  bertujuan  agar  media tersebar merata sehingga jamur endofit mendapatkan  nutrisi  yang  cukup. Kemudian disentrifugasi agar endapan (pelet)  dan  supernatannya  terpisah. Setelah  terpisah  supernatan  ini  yang akan digunakan dalam pengujian daya hambat.

## Hasil pengukuran zona hambat metabolit sekunder jamur endofit daun beluntas
terhadap bakteri   S. mutans.
Tabel 1. Data hasil penelitian jamur endofit putih
Perlakuan Hasil zona hambat (mm) terhadap bakteri S. mutans Total (mm) Rata-rata (mm) I II III 10% 0,91 1,30 1,26 3,47 1,15 20% 1,16 1,70 1,68 4,45 1,51 30% 2,70 2,35 2,60 7,65 2,55 Kontrol (+) 1,13 1,33 1,38 3,84 1,28 Kontrol (-) - - - - -

## Tabel 2. Data hasil penelitian jamur endofit hitam
Perlakuan Hasil zona hambat (mm) terhadap bakteri S. mutans Total (mm) Rata-rata (mm) I II III 10% - - - - - 20% - - - - - 30% - - - - - Kontrol (+) 0,70 1,20 1,65 3,55 1,18 Kontrol (-) - - - - -
Berdasarkan  tabel  1.  Jamur endofit  putih  memiliki  daya  hambat rata-rata  pada  konsentrasi  10  %  yaitu 1,15  mm,  20%  yaitu  1,51  mm  dan
konsentrasi  30%  yaitu  2,55  mm sedangkan kontrol positifnya 1,28 mm. Menurut  (Pan,  dkk  2009)  konsentrasi 10%,  20%  dan  30%    masih  termasuk
Setiawan dan musdalipah/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 4(1);2018 : 53-60
daya  hambat  dalam  kategori  lemah karena      3  mm  dan  konsentrasi  20% dan  30%  mempunyai  daya  hambat lebih  tinggi  dibandingkan  kontrol positifnya.  Sedangkan  berdasarkan tabel  2.  jamur  endofit  hitam  tidak mempunyai  daya  hambat,  hal  ini diduga karena metabolit sekunder yang dihasilkan  oleh  jamur  endofit  hitam tidak  sebanyak  jamur  endofit  putih yang  dapat  menghambat  bakteri  S.
mutans.

## KESIMPULAN
Jamur endofit  dari daun beluntas dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri S. mutans. dengan zona hambat konsentrasi  10%  yaitu  1,15  mm,  20% yaitu 1,51 mm, 30% yaitu 2,55 mm dan kontrol positifnya 1,28 mm. Sedangkan isolat jamur endofit hitam tidak dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  S. mutans  sedangkan  rata-  rata    kontrol positifnya  yaitu 1,18 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Daud,  S,  N,  Desi,  A,S,  Ifaya,  M,  2016, Formulasi Pasta Gigi Infusa Daun Jambu Biji (Psidium Guajava Linn)
dengan Variasi Konsentrasi Na.CMC Sebagai Pengikat, Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 1(1) : 42 – 49
Fauziah,  Y.,  Setiawan,  M.A,  Fitriani, 2018, Uji Daya Hambat Ekstrak Kerang  Tahu  (Meretrix  meretrix)
Terhadap  Bakteri  Staphylococcus aureus,  Jurnal  Ilmiah  Ibnu  Sina, 3(1) : 19 – 27.
Lewis,  D.W.,  dan  Ismail,  A.I.  1993, Dental Caris, Diagnosis, Risk Factors and Prevention. Can Med Assoc J. p.408-417.
Musdalipah,  Setiawan,  M,  A,  Santi, E.,2018, Analisis Efektivitas Biaya Antibiotik
Sefotaxime dan Gentamisin Penderita Pneumonia pada  Balita  di  RSUD  Kabupaten Bombana Provinsi Sulawesi
Tenggara, Jurnal Ilmiah Ibnu Sina,
3(1) : 1 – 11.
Nahak,  M.M.  2012,  Ekstrak  Etanol Daun Beluntas (Pluchea indica. L.) dapat Menghambat Pertumbuhan Bakteri  S.  mutans.  Laporan  Tesis. Program Pasca Sarjana
Universitas  Udayana  Denpasar.
Metodologi  Penelitian  Kesehatan, Rineka Cipta, Jakarta.
Susanti,  A.  2006,  Daya  Anti  Bakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Beluntas (Pluchea  indica.  Less)  Terhadap Escherichia  coli  Secara  in  vitro.
Fakultas  Kedokteran  Hewan
Universitas Airlangga. Surabaya. p. 1-2. Prihatiningtias,W.,  Widyastuti  S.M., dan Wahyono, S. 2011, Aktivitas
Antibakteri Fungi Endofit
Thievalia  polygonoperda,  Isolat Dari  Tumbuhan  Akar  Kuning (Fibraurea  chloroleuca,  Miers), Fakultas farmasi UGM.
Strobel  G.A.,  and  Daisy  B.  2003, Bioprospecting  for  Microbial Endophytes  and  Their  Natural Products.  Microbiol.  and  Mol. Biology Rev. 67(4):491-502.
Setiawan dan musdalipah/Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 4(1);2018 : 28-35
Setiawan,  A,  M,  Hasnawati,  Sernita, Sulistia,  L.,  2016,  Uji  Daya Hambat
Antibakteri
Fungi Endofit  Kulit  Jeruk  (Citrus Aurantifolia)  terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus,  Jurnal Sains Farmasi dan Klinis, 3(1) : 14 – 18
Pan, X., Chen, F., Wu, T., Tang, H., and Zhao, Z. 2009. The acid, Bile Tolerance  and  Antimicrobial property
of
Lactobacillus
acidophilus NIT. J. Food Kontrol 20 : 598-602