Khikmah et al.

## Seleksi Bakteri dengan Aktivitas Fibrinolitik yang Diisolasi dari Tanah Rumah Potong Ayam

## Selection of Bacteria With  Fibrinolytic Activity Isolated from Chicken Slaughter House Soil
Nur Khikmah 1 *, Nuri Rizky Astrika 2 , dan Barinta Widaryanti 1
1 Program Studi DIII Teknologi Laboratorium Medis, Akademi Analis Kesehatan Manggala, Yogyakarta, Indonesia
2 UPT Puskesmas Sialang, Bangun Purba, Deli Serdang, Sumatera Utara, Indonesia
Abstrak
Bakteri fibrinolitik mampu melisiskan fibrin suatu bekuan darah yang terbentuk dari fibrinogen melalui proses penghancuran protein oleh trombin.  Akumulasi fibrin yang berlebihan tanpa keseimbangan hemostatis dapat menyebabkan trombosis sehingga mengakibatkan kelainan pada serebrovaskular dan kardiovaskular. Enzim fibrinolitik dari bakteri mempunyai potensi sebagai agen obat trombosis. Tujuan penelitian ini mendapatkan bakteri yang unggul dalam menghasilkan enzim fibrinolitik. Isolat bakteri diseleksi berdasarkan Indeks Aktivitas Enzim (IAE) proteolitik pada skim milk agar dan IAE fibrinolitik pada fibrin plate agar . IAE diperoleh dengan membagi diameter zona jernih di sekeliling koloni bakteri dengan diameter koloni bakteri. Dua puluh delapan isolat bakteri mempunyai aktivitas proteolitik, empat belas isolat diantaranya mempunyai aktivitas fibrinolitik. Lima isolat bakteri mempunyai IAE fibrinolitik ≥4,0.  Isolat tersebut teridentifikasi sebagai anggota Bacillus .
Kata kunci : bakteri fibrinolitik, proteolitik, fibrin, trombosis, protease
Abstract
Fibrinolytic bacteria are able to lyse fibrin a blood clot formed from fibrinogen through the process of destroying proteins by thrombin. Excessive accumulation of fibrin without hemostatic balance can cause thrombosis resulting in cerebrovascular and cardiovascular disorders. Fibrinolytic enzymes from bacteria have the potential as thrombosis drug agents. The research aim was to obtain fibrinolytic bacteria that can produce high fibrinolytic enzymes.  Bacterial isolates were selected based on Enzyme Activity Index (IAE) of proteolytic on skim milk agar and fibrinolytic IAE on fibrin plate agar. IAE is obtained by comparing clear zone around the bacterial colony with bacterial colony diameter.  Twenty eight bacterial isolates had proteolytic activity, fourteen among 28 isolates had fibrinolytic activity. Five bacterial isolates had fibrinolytic IAE ≥4.0. The isolate was identified as Bacillus.
Keywords: fibrinolytic bacteria, proteolytic, fibrin, thrombosis, protease
* Corresponding author:

## Nur Khikmah
Program Studi DIII Teknologi Laboratorium Medis,  Akademi Analis Kesehatan Manggala Yogyakarta. Jl. Bratajaya 25 Sokowaten, Banguntapan, Bantul, Indonesia Email: khikmahnr@gmail.com
Vol. 5, No. 1: 1-9
Khikmah et al.
Pendahuluan Bakteri dengan aktivititas fibrinolitik mempunyai kemampuan untuk melisiskan fibrin, suatu bekuan darah yang terbentuk dari fibrinogen melalui proses penghancuran protein oleh trombin. Fibrin akan dihancurkan oleh enzim fibrinolitik yang dihasilkan bakteri (Raju & Divakar, 2013). Akumulasi fibrin yang berlebihan di dalam pembuluh darah tanpa adanya keseimbangan homeostatis dari faktor pembekuan darah dan plasmin akan menyebabkan trombosis (Setiabudy, 2012). Trombosis mengarah pada kelainan serebrovaskular dan kardiovaskular, seperti infark miokard, stroke dan gagal jantung yang dapat menyebabkan kematian (Kim & Choi, 2000). Hasil Rikesda tahun 2018 berdasarkan diagnosis gejalanya, prevalensi stroke di Indonesia mengalami peningkatan sebanyak 56% dari 7 per 1000 penduduk pada tahun 2013, menjadi 10,9 per 1000 penduduk pada tahun 2018 (Kemenkes, 2019).
Kelainan yang disebabkan oleh trombosis dapat ditangani dengan terapi obat trombosis (trombolitik). Terapi obat trombolitik utama yang telah dilakukan saat ini adalah pemberian tissue plasminogen activator (tPA), streptokinase (SK) dan urokinase (UK). Penggunaan obat tersebut mempunyai  beberapa  kekurangan diantaranya harga relatif mahal, waktu paruh pendek, reaksi di dalam tubuh relatif lama, hanya cocok diberikan melalui injeksi dan menimbulkan pendarahan pada usus apabila diberikan secara oral (Peng et al ., 2005).  Adanya kekurangan tersebut, maka dikembangkan agen trombolitik yang bersumber dari mikroba, khususnya bakteri. Bakteri mempunyai peranan penting dalam produksi enzim fibrinolitik (Kotb, 2013). Keragaman metabolik bakteri dapat menghasilkan protease fibrinolitik yang lebih baik dan meningkatkan spesifisitas target dari protease fibrinolitik.  Bakteri juga mudah ditumbuhkan dan dapat diperoleh dalam waktu yang lebih singkat dibandingkan sumber agen trombolitik lainnya (Bajaj et al ., 2013). Keberadaan bakteri fibrinolitik dapat diperoleh pada substrat yang mengandung protein.  Beberapa penelitian telah dilaporkan
mendapatkan bakteri fibrinolitik dari tanah yang mengandung protein, diantaranya Bacillus sp. diisolasi   dari tanah pembuangan limbah tahu (Madaniyah, 2013), Bacillus cereus NS-2 dari tanah pembuangan sampah rumah tangga di India (Bajaj et al ., 2013). Staphylococcus sp. pada tanah pemerahan susu sapi di kawasan Vellore India (Srinivasan et al ., 2013), Bacillus cereus , B. circulans , Pseudomonas aeruginosa , P. fluorescens dan Escherichia coli diisolasi dari tanah rumah potong sapi dan ayam di Bangalore India (Raju & Divakar, 2013). Serratia sp. KG-2- 1 dari tanah tempat pembuangan sampah (Taneja et al ., 2017).
Tanah Rumah Potong Ayam (RPA) Condongcatur  merupakan  tanah  yang berada di sekitar RPA.  RPA Condongcatur rata-rata memotong 75 ekor ayam/hari. Aktivitas dari RPA tersebut menghasilkan limbah padat dan cair.  Limbah  padat berupa darah yang dibuang akan mengendap pada tanah,  sehingga  dapat  menjadi  nutrien untuk  bakteri fibrinolitik.
Bakteri fibrinolitik dari tanah dapat diperoleh dengan cara menumbuhkannya dalam medium yang mengandung fibrin. Kemampuan  bakteri  dalam  melisiskan fibrin dapat dideteksi dengan adanya zona jernih di sekitar koloni bakteri. Strategi seleksi membantu mendapatkan bakteri yang unggul dalam menghasilkan enzim fibrinolitik.  Indeks aktivitas enzim fibrinolitik secara kualitatif merupakan parameter yang digunakan dalam seleksi.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mendapatkan isolat bakteri yang unggul dalam menghasilkan enzim fibrinolitik. Hasil yang diperoleh digunakan sebagai dasar pemilihan isolat yang akan digunakan sebagai obat trombosis.

## Materi Dan Metode
Sumber Isolat Sumber isolat fibrinolitik berasal dari tanah pembuangan limbah Rumah Potong Ayam (RPA) di Condongcatur, Sleman.  Isolat fibrinolitik diperoleh dengan melakukan isolasi  dan  seleksi  bakteri  proteolitik, selanjutnya seleksi bakteri fibrinolitik, dan identifikasi  genus bakteri fibrinolitik.
Khikmah et al.
Isolasi Bakteri Proteolitik Isolasi bakteri proteolitik dari tanah RPA dilakukan pada media Skim Milk Agar (SMA)  1%, yang dibuat dengan komposisi: 10 g susu skim dan 20 g agar dalam 1000 mL medium minimal. Komposisi medium minimal menurut Jholapara et al. (2013) dengan modifikasi: KH 2 PO 4 0.3 g, K 2 HPO 4 0.7 g, MgSO 4 .7H 2 O 0.5 g, FeSO 4 .7H 2 O 0.01 g, MnCl 2 .4H 2 O 0.001 g, ZnSO 4 .7H 2 O 0.001 g dalam 1000 mL akuades.
Serbuk agar sebanyak 20 g ditambahkan dalam 800 mL medium minimal, kemudian disterilkan menggunakan autoklaf pada 15 psi, suhu 121°C selama 15 menit. Serbuk susu skim sebanyak 10 g dilarutkan dalam 200  mL  akuades,  kemudian disterilkan menggunakan autoklaf pada 15 psi, suhu 110°C selama 10 menit. Larutan susu skim yang telah steril dibiarkan sampai suhunya menjadi 50°C, kemudian dimasukkan ke dalam medium minimal dan dituang pada cawan petri.
Sampel  tanah    sebanyak  10  gram dilarutkan dalam 90 mL NaCl 0,85% steril dan dilakukan pengenceran berseri sampai 10 -7 . Pada pengenceran 10 -6 dan 10 -7 dilakukan spread plating duplo pada SMA 1%, kemudian diinkubasi 30°C selama 24 jam.  Isolat bakteri yang menghasilkan zona jernih di sekitar koloni merupakan bakteri proteolitik. Isolat proteolitik selanjutnya dihitung Indeks Aktivitas Enzim (IAE), dengan cara membandingkan diameter zona jernih di sekeliling koloni bakteri dengan diameter koloni  bakteri  (Setiawan et  al .,  2016). Diameter zona jernih dan diameter koloni bakteri diukur sebanyak 3 kali pada tempat yang berbeda menggunakan mistar standard (millimeter), kemudian dihitung rata-rata diameternya. Isolat terpilih digunakan untuk tahap seleksi bakteri fibrinolitik.

## Seleksi Bakteri Fibrinolitik
Seleksi bakteri fibrinolitik dilakukan pada media fibrin plate agar , yang dibuat dengan komposisi: 0,3 g fibrin dan 1,7 g agarosa dilarutkan dalam 100 mL buffer asam borat pH 7,8.  Setelah agarosa larut dengan pemanasan, medium disterilisasi menggunakan autoklaf pada 121°C, selama 20
menit. Cat warna methilen blue 0,02% dengan volume 200 µL ditambahkan pada cawan petri steril, kemudian ditambahkan medium fibrin agar (Modifikasi dari Muisristanto et al ., 2015).  Isolat bakteri yang menghasilkan zona jernih di sekitar koloni merupakan bakteri fibrinolitik  . Seleksi bakteri fibrinolitik berdasarkan IAE, yang dihitung dengan membandingkan diameter zona jernih di sekeliling koloni bakteri dengan diameter koloni bakteri (Setiawan et  al .,  2016).  Diameter  zona jernih dan diameter koloni bakteri diukur sebanyak 3 kali pada tempat yang berbeda menggunakan mistar standard (millimeter), kemudian dihitung rata-rata diameternya. Isolat  terpilih  digunakan  untuk  tahap identifikasi bakteri fibrinolitik.
Identifikasi Bakteri Fibrinolitik Genus isolat bakteri fibrinolitik terpilih diidentifikasi berdasarkan karakter morfologi koloni, morfologi sel dan biokimia mengacu pada Bergey’s  Manual  of  Determinative Bacteriology (Holt et al ., 1994).

## Hasil
Isolat  Bakteri Proteolitik Isolat  bakteri  proteolitik  yang diperoleh dari tanah RPA berjumlah  28. Aktivitas proteolitik isolat ditandai dengan terbentuknya zona jernih di sekeliling koloni pada media SMA 1% (Gambar 1).
Gambar 1. Pertumbuhan isolat bakteri pada media SMA 1% dengan aktivitas proteolitik yang ditunjukkan oleh tanda panah (       )
Dua  puluh  delapan  isolat  bakteri proteolitik mempunyai Indeks Aktivitas
Khikmah et al.
Enzim (IAE)≥ 1,3 (Tabel 1).  Isolat bakteri P15 memiliki IAE tertinggi yaitu  4,2.
Tabel 1. Indeks Aktivitas Enzim (IAE) proteolitik bakteri dari tanah RPA Condongcatur,  Sleman
No Kode isolat Diameter zona jernih (mm) Diameter koloni bakteri (mm) IAE proteolitik 1 P1 28 18 1,6 2 P2 16 5,0 3,2 3 P3 17 11 1,5 4 P4 8,0 6,0 1,3 5 P5 5,0 4,0 1,3 6 P6 8,0 3,0 2,7 7 P7 14 7,0 2,0 8 P8 19 13 1,5 9 P9 17 9,0 1,9 10 P10 7,0 4,0 1,8 11 P11 14 6,0 2,3 12 P12 8,0 3,0 2,7 13 P13 13 6,0 2,2 14 P14 9,0 6,0 1,5 15 P15 25 6,0 4,2 16 P16 15 5,0 3,0 17 P17 8,0 4,0 2,0 18 P18 15 7,0 2,1 19 P19 14 11 1,3 20 P20 13 5,0 2,6 21 P21 7,0 4,0 1,8 22 P22 19 10 1,9 23 P23 22 11 2,0 24 P24 6,0 3,0 2,0 25 P25 12 8,0 1,5 26 P26 6,0 4,0 1,5 27 P27 11 8,0 1,4 28 P28 15 7,0 2,1
Seleksi Bakteri Fibrinolitik Dua  puluh  delapan  isolat  bakteri proteolitik kemudian diseleksi aktivitas fibrinolitik secara kualitatif dan hasilnya diperoleh  14  isolat  dengan  aktivitas fibrinolitik. Hasil tersebut menunjukkan bahwa tidak semua isolat bakteri proteolitik mempunyai aktivitas fibrinolitik. Aktivitas fibrinolitik ditandai dengan adanya zona jernih di sekeliling koloni yang tumbuh pada media fibrin agar (Gambar 2). Hasil perhitungan IAE fibrinolitik terhadap  14  isolat  bakteri  proteolitik mendapatkan  4 isolat mempunyai IAE <3,0 dan 10 isolat mempunyai IAE ≥3,0 (Tabel 2). Tabel 2. Indeks Aktivitas Enzim (IAE) fibrinolitik bakteri dari tanah RPA Condongcatur, Sleman
No Kode isolat Diameter zona jernih (mm) Diameter koloni bakteri (mm) IAE fibrinolitik 1 P3 11 4,0 2,8 2 P6 10 2,0 5,0 3 P7 10 3,0 3,3 4 P8 13 3,0 4,3 5 P9 14 3,0 4,7 6 P10 6,0 3,0 2,0 7 P11 10 3,0 3,0 8 P13 9,0 3,0 3,0 9 P15 13 4,0 3,3 10 P16 12 3,0 4,0 11 P17 15 3,0 5,0 12 P18 9,0 3,0 3,0 13 P19 15 11 1,4 14 P20 8,0 3,0 2,7
Hasil perhitungan juga menunjukkan isolat bakteri dengan IAE proteolitik tinggi tidak selalu mempunyai IAE fibrinolitik tinggi. Hasil tersebut ditunjukkan oleh isolat P15.  IAE fibrinolitik tertinggi yaitu 5,0 didapatkan pada isolat P6 dan P17.  Lima isolat bakteri dengan IAE fibrinolitik ≥4,0 (isolat P6, P8, P9, P16, dan P17) dipilih untuk dilakukan identifikasi genus.
Identifikasi Bakteri Fibrinolitik Lima isolat bakteri terpilih (isolat P6, P8, P9, P16, dan P17) dengan IAE fibrinolitik ≥4,0 diidentifikasi berdasarkan karakter morfologi makroskopis (koloni), morfologi mikroskopis  (sel)  dan  biokimia.  Hasil karakterisasi makroskopis bakteri fibrinolitik pada media SMA 1% disajikan pada Tabel 3. Pengamatan morfologi sel dilakukan melalui  pewarnaan  Gram  dan  spora, menunjukkan lima isolat bakteri mempuyai
Gambar 2. Pertumbuhan isolat bakteri pada media fibrin agar dengan aktivitas fibrinolitik yang ditunjukkan oleh tanda panah (      )
Khikmah et al.
bentuk sel bacil ,  bersifat  Gram  Positif, mempunyai  spora oval yang letaknya central .  Isolat bakteri selanjutnya diuji untuk beberapa karakter biokimia dan hasilnya ditunjukkan pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil uji biokimia isolat bakteri fibrinolitik dari tanah RPA di Condongcatur, Sleman
No Karakter uji biokimia Isolat bakteri P6 P8 P9 P16 P17 1 Fermentasi karbohidrat: Glukosa + + + + + Laktosa - - - - - Manitol - - - + - Maltosa + + + + + Sukrosa + + + + + 2 Gas - - - - - 3 Sulfit - - - - - 4 Indol - - - - - 5 Motilitas + + + + + 6 Katalase + + + + +
Berdasarkan hasil karakterisasi morfologi koloni, morfologi sel, dan uji biokimia bakteri yang mengacu pada Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology (Holt et al ., 1994), kelima isolat bakteri fibrinolitik dari tanah RPA di Condongcatur, Depok, Sleman teridentifikasi sebagai anggota genus Bacillus .
Pembahasan Isolat Bakteri Proteolitik Aktivitas  proteolitik  28  isolat bakteri dari tanah rumah potong ayam terlihat dari terbentuknya zona jernih di sekeliling koloni bakteri pada media SMA 1%.  Bakteri mampu menghasilkan enzim protease yang melisiskan kasein sebagai sumber protein dalam media SMA.  Enzim tersebut dilepaskan ekstraseluler, sehingga kemampuan melisiskan kasein ditunjukkan dengan terbentuknya zona jernih.
Muisristanto et al . (2015), menyatakan kasein  merupakan  salah  satu  jenis protein.  Hidrolisis kasein menunjukkan adanya aktivitas hidrolitik protease yang memutuskan  ikatan  peptida  CO-NH. Poernomo et al . (2014), juga menyatakan bahwa kasein merupakan protein yang terdiri dari fosfoprotein yang berikatan dengan kalsium membentuk garam kaseinat yang tidak larut dalam air. Molekul tersebut membentuk koloidal berwarna putih yang dapat diamati secara langsung saat dicampur dengan media agar.  Enzim proteolitik yang dihasilkan bakteri menyebabkan kasein terhidrolisis menjadi peptida dan asam amino,  ditandai dengan terbentuknya zona jernih pada media SMA 1%.
Penelitian  Panicker et al . (2022), juga menggunakan kasein sebagai sumber protein dalam media casein agar plate .  Media tersebut digunakan untuk skrining awal bakteri fibrinolitik yang diisolasi dari tanah rumah potong hewan dan tempat pembuangan sampah makanan. Hasil skrining memperoleh enam isolat yang mempunyai aktivitas kaseinolitik.
C h a n d r a m o h a n e t   a l .   ( 2 0 1 9 ) , mendapatkan  23  isolat  bakteri  yang mempunyai aktivitas protease dari tanah rumah  potong  unggas  menggunakan media skim milk agar . Penelitian Sompalli & Malaviya. (2024), juga mendapatkan 61 isolat bakteri penghasil protease dari sedimen tanah  mangrove  berdasarkan  skrining kualitatif menggunakan media skim milk agar . Skrining dilakukan secara kuantitatif berdasarkan aktivitas protease (U/mL) menggunakan crude enzim dan didapatkan 12 isolat bakteri.
Indeks aktivitas enzim (IAE) proteolitik dari 28 isolat bakteri berbeda-beda (Tabel 1).  IAE  proteolitik  menggambarkan
Tabel 3. Hasil karakterisasi makroskopis koloni bakteri fibrinolitik dari tanah RPA di Condongcatur, Sleman
No Karakter makroskopis koloni Isolat bakteri P6 P8 P9 P16 P17 1 Bentuk Circular Irregulair Circular Circular Irregulair 2 Elevasi Cembung Datar Cembung Cembung Cembung 3 Tepi Rata Bergerigi Rata Rata Bergerigi 4 Warna Putih Putih Putih Putih Putih 5 Konsistensi Mucoid Kering Mucoid Mucoid Mucoid
Khikmah et al.
kemampuan secara kualitatif isolat bakteri dalam meliliskan skim sebagai sumber protein pada media. Perbedaaan IAE dari 28 isolat dapat dikarenakan jumlah enzim yang dihasilkan berbeda, sehingga aktivitas dalam perombakan subsrat juga berbeda Isolat bakteri P15 memiliki indeks aktivitas enzim proteolitik tertinggi, yaitu 4,2. Indeks tersebut lebih rendah dari hasil penelitian Setiawan et al .,(2016) , yaitu 4,3 untuk isolat bakteri  dari air laut, akan tetapi lebih tinggi dari penelitian Baehaki et al . (2011),  yaitu  2,0 untuk isolat dari  tanah rawa di Indralaya.
Seleksi Bakteri Fibrinolitik Seleksi bakteri fibrinolitik dilakukan pada 28 isolat bakteri yang mempunyai aktivitas proteolitik untuk memastikan bahwa bakteri proteolitik juga mempunyai aktivitas fibrinolitik.   Hal tersebut didasarkan bahwa enzim fibrinolitik merupakan kelompok enzim protease, yaitu salah satu sub-class dari proteinase yang dapat mendegradasi fibrin.
Beberapa isolat bakteri proteolitik yang memiliki aktivitas fibrinolitik diantaranya Bacillus (Ulfa et al ., 2017), Mycrobacterium testaceum (Pananjung et  al .,  2016) dan beberapa kelompok Bakteri Asam Laktat Vagococcus , Pediococcus , dan Enterococcus (Singh et al ., 2014). Panicker et al . (2022), mendapatkan 3 isolat bakteri fibrinolitik protease dari 6 isolat kaseinolitik. Isolat C4 mempunyai kemampuan melisikan bekuan fibrin  dan  bekuan  darah  utuh  dengan maksimal,  sehingga  berpotensi  untuk dikembangkan lebih lanjut dalam produksi enzim fibrinolitik protease.
Chandramohan et al. (2019), melakukan seleksi awal kemampuan fibrinolitik 23 isolat bakteri proteolitik pada media fibrin plate agar , dilanjutkan seleksi aktivitas fibrinolitik protease berdasarkan uji degradasi fibrin. Didapatkan 11 isolat bakteri yang mampu menghasilkan enzim fibrinolitik protease, dengan  aktivitas  enzim  5,33-79,83  FU/ mL.  Isolat  PW  7  mempunyai  aktivitas fibrinolitik protease tertinggi, yaitu 79,83 FU/mL.  Sompalli  &  Malaviya.  (2024), juga menyeleksi kemampuan fibrinolitik dari 12 isolat bakteri penghasil protease.
Hasil seleksi mendapatkan 4 isolat positif fibrinolitik, ditandai dengan terbentuknya zona jernih di sekitar koloni pada media fibrin agar plate. Isolat CO2-10 merupakan isolat potensial fibrinolitik, ditunjukkan dari diameter zona jernih tertinggi (0,48±0,03 cm). Dua  puluh  delapan  isolat  bakteri proteolitik  yang  diseleksi  berdasarkan aktivitas  fibrinolitiknya,  diperoleh  14 isolat fibrinolitik. Aktivitas fibrinolitik ditandai dengan terbentuknya zona jernih di sekeliling koloni bakteri pada media fibrin agar . Fibrin akan dipecah menjadi protein yang lebih sederhana. Menurut Setiawan et al . (2016) , jumlah enzim yang dihasilkan oleh bakteri fibrinolitik hanya sedikit, tetapi akan meningkat apabila digunakan substrat fibrin sebagai satu-satunya sumber karbon bagi bakteri.
Berdasarkan nilai IAE fibriolitik (Tabel 2)  dapat  diketahui  bahwa  kemampuan 14 isolat bakteri dalam melisiskan fibrin berbeda-beda, yaitu 4 isolat mempunyai IAE <3,0 dan 10 isolat mempunyai IAE ≥3,0. IAE fibrinolitik tertinggi 5,0 didapatkan dari isolat bakteri P6 dan P17. Indeks tersebut lebih rendah dibandingkan dengan penelitian Madaniyah (2013), yaitu 5,2 dari sampel tanah pada pembuangan limbah tahu. Hasil IAE isolat bakteri P6 dan P17 lebih tinggi dari hasil penelitian Poernomo et al. (2014), yaitu 3,4 dari kontrol natokinase dan penelitian Rajendran et al . (2016), yaitu 2,4 dari sampel makanan fermentasi kacang kedelai. Perbandingan  indeks  aktivitas proteolitik (Tabel 1) dan fibrinolitik (Tabel 2) menunjukkan bahwa isolat P6 memiliki indeks proteolitik tinggi juga memiliki indeks fibrinolitik tinggi. Indeks fibrinolitik dari isolat tersebut lebih tinggi dibandingkan dengan  indeks  proteolitik  pada  media SMA 1%. Berbeda dengan isolat bakteri P2, memiliki indeks proteolitik tinggi tetapi tidak memiliki aktivitas fibrinolitik. Hasil ini menunjukkan bahwa enzim protease isolat P6 bersifat spesifik terhadap substrat fibrin, sedangkan isolat P2 tidak spesifik terhadap fibrin. Setiawan et al . (2016), juga mendapatkan hasil yang sama, yaitu terdapat perbedaan aktivitas proteolitik dan fibrinolitik isolat bakteri perairan Pantai Papuma Jember.  Tiga
Khikmah et al.
isolat bakteri mempunyai indeks proteolitik dan fibrinolitik tinggi.  Isolat WU 021004 mempunyai indeks proteolitik tinggi (4,2), tetapi tidak mempunyai aktivitas fibrinolitik.
Identifikasi Bakteri Fibrinolitik Lima isolat bakteri fibrinolitik terpilih dengan IAE fibrinolitik ≥4,0 berdasarkan karakter morfologi koloni, morfologi sel, dan uji biokimia teridentifikasi sebagai anggota Bacillus. Identifikasi yang dilakukan dalam penelitian ini ini masih dilakukan secara konvensional, yaitu membandingkan karakter isolat terpilih dengan karakter bakteri  yang  sudah  teridentifikasi sebelumnya. Identifikasi secara konvensional juga dilakukan oleh peneliti sebelumnya. Holt et  al .  (1994),  genus Bacillus dapat ditemukan  pada  berbagai  habitat.  Sel berbentuk bacil tersusun  berpasangan, Gram positif, mempunyai endospora oval, motil,  mampu  memfermentasi  glukosa menghasilkan asam, katalase positif, dan tidak menghasilkan sulfid.
Bacillus menunjukkan bentuk koloni yang berbeda-beda pada medium agar, memiliki  tepi  yang  bermacam-macam tetapi umumnya tidak rata, permukaan kasar dan berlendir. Pananjung et al . (2016), karakter koloni isolat bakteri fibrinolitik WU 021055 adalah bulat, bergerigi, dan putih.  Rajendran et al . (2016), tiga isolat bakteri fibrinolitik mempunyai karakter koloni besar, halus, opaque , irregular , flat dan undulate .  Raju & Divakar (2013), lima isolat bakteri fibrinolitik protease mempunyai karakter koloni berwarna putih dan krem, opaque dan translucent , irregular dan circular , serta raised dan flat . Karakter  mikroskopis  sel Bacillus pada  penelitian  ini  menunjukkan  hasil yang sama dengan penelitian sebelumnya, yaitu bacil , Gram positif, dan mempunyai endospora.   Hasil uji biokimia Bacillus untuk fermentasi karbohidrat menunjukkan hasil yang berbeda dengan penelitian sebelumnya. Hasil uji biokimia untuk sulfid negatif, indol negatif, motilitas positif, sitrat positif, dan katalase positif menunjukkan hasil yang sama (Pananjung et al ., 2016; Rajendran et al ., 2016; Raju & Divakar., 2013; Gad et al ., 2014)
Pada penelitian sebelumnya, identifikasi secara konvensional isolat Bacillus yang mempunyai aktivitas fibrinolitik dilanjutkan dengan identifikasi molekuler menggunakan sekuens  DNA  sehingga  teridentifikasi spesies bakteri. Pananjung et al . (2016), isolat bakteri WU 021055 dari perairan Pantai Papuma Jember teridentifikasi B. aerius .
Rajendran et al . (2016), isolat bakteri dari tanah teridentifikasi B. cereus , B. subtilis , dan B. pulminus . Raju & Divakar (2013), isolat bakteri dari tanah rumah potong hewan teridentifikasi B. cereus dan B. circulans . Gad et al . (2014), isolat bakteri dari susu busuk dan tepung kedelai teridentifikasi B. amyloliquefaciens dan B. licheniformis . Penelitian Chandramohan et al . (2019), mendapatkan satu isolat bakteri dengan aktivitas fibrinolitik tertinggi teridentifikasi Bacillus  pseudomycoides MA02,  dengan berat molekul enzim 35 kDA. Sompalli & Malaviya. (2024), strain bakteri penghasil enzim fibrinolitik (AIBL_AMSB2) tertinggi teridentifikasi sebagai Bacillus subtilis subsp. Inaquosorum  berdasarkan  analisis  16S rRNA. Bakteri tersebut diisolasi dari sedimen tanah mangrove.
Lima isolat Bacillus hasil penelitian ini memiliki IAE fibrinolitik lebih tinggi dibandingkan dengan penelitian sebelumnya, sehingga  dapat digunakan sebagai dasar pemilihan  isolat  yang  akan  digunakan sebagai agen trombolitik.   Menurut Weng et al . (2017), agen trombolitik yang saat ini digunakan adalah nattokinase yang dari Bacillus subtilis . Nattokinase dapat secara  langsung  menghidrolisis  fibrin, mengubah prourokinase menjadi urokinase, mendegradasi  plasminogen  activator inhibitor-1  dan  meningkatkan  tissue plasminogen activator sehingga pemecahan bekuan darah terjadi lebih cepat. Nattokinase juga memiliki aktivitas fibrinolitik yang kuat setelah terserap di saluran pencernaan
Kesimpulan Seleksi dari tanah RPA Condongcatur, Sleman memperoleh empat belas isolat bakteri yang mempunyai aktivitas fibrinolitik. Lima isolat bakteri dengan IAE fibrinolitik ≥4,0 teridentifikasi sebagai anggota Bacillus .
Khikmah et al.
Daftar Pustaka Baehaki, A., Rinto, & Budiman, A. (2011). Isolasi dan Karakterisasi Protease Dari bakteri Tanah Rawa Indralaya, Sumatera Selatan. J. Teknol. Dan Indrustri Pangan , XXII (1), 37–42. Bajaj, B. K., Sharma, N., & Singh, S. (2013). Enhanced Production of Fibrinolytic Protease  from Bacillus  cereus NS-2 using Cotton Seed Cake as Nitrogen Source. Biocatalysis and Agricultural Biotechnology , 2 , 204–209. https://doi. org/10.1016/j.bcab.2013.04.003
Chandramohan, M., Yee, C. Y., Kei Beatrice,
P. H., Ponnaiah, P., Narendrakumar, & Samrot, A. V. (2019). Production, Characterization and Optimization of Fibrinolytic Protease from Bacillus pseudomycoides Strain MA02 isolated from  Poultry  Slaughter  House Soils. Biocatalysis  and  Agricultural Biotechnology , 22, 101371. https://doi. org/10.1016/j.bcab.2019.101371.
Gad, R. G., Nirmala, S., & Sivvaswamy, S. N. (2014). Studies on a Fibrinolytic Enzyme from Bacillus species . Indian Journal of Science and Technology , 7 (10), 1632–1642. https://doi.org/10.17485/ijst/2014/ v7i10.12
Holt, J. G., Krieg, N. R., Sneath, P. H. A., Staley, J. T., & Williams, S. T. (1994). Bergey’s
Manual of Determinative Bacteriology .
Ninth Edition. Philadelphia: Lippncott Williams & Wilkins.
Jholapara, R. J., Mehta, R. S., Bhagwat, A. M., & Sawant, C. S. (2013). Exploring and Optimizing the Potential of Chitinase Production by Isolated Bacillus spp . International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 5 (4), 412–418. Kemenkes, R. (2019). Laporan Nasional RISKESDA 2018.
Kim, S.-H., & Choi, N.-S. (2000). Purification and Characterization of Subtilisin DJ-4 Secreted by Bacillus sp . Strain DJ-4 Screened from Doen-Jang. In Bioscience, Biotechnology and Biochemistry , 64 (8), 1722–1725. https://doi.org/10.1271/ bbb.64.1722
Kotb,  E.  (2013).  Activity  assessment  of microbial fibrinolytic enzymes. Applied
Microbiology and Biotechnology , 97 (15),
6647–6665. https://doi.org/10.1007/ s00253-013-5052-1 Madaniyah. (2013). Skrining Bakteri Fibrinolitik Asal Tanah pada Pembuangan Limbah Tahu . [skripsi]. Universitas Jember, Jember, Indonesia. Muisristanto,  D.,  Poernomo,  A.  T.,  & Sugijanto. (2015). Isolasi Dan Penapisan Fibrinolitik  Jamur  Tanah  Hutan Mangrove Wonorejo Surabaya. Berkala
Ilmiah Kimia Farmasi, 4 (2), 11–17. Pananjung, A. M. S., Ulfa, E. U., Senjarini, K., & Arimurti, S. (2016). Karakterisasi Isolat Bakteri Fibrinolitik Wu 021055* Asal Perairan Pantai Papuma, Jember. Jurnal Bioteknologi & Biosains Indonesia ,
2 (1), 1–8. https://doi.org/10.29122/ jbbi.v2i1.528
Panicker, S. G., Lendave, A., & Sabale, A. (2022). Soil Bacterial Isolates Showing Promising Fibrinolytic Activity. Journal of Advanced Scientific Research , 13 (10), 36–40.  https://doi.org/10.55218/ jasr.2022131006
Peng, Y., Yang, X., & Zhang, Y. (2005).
Microbial Fibrinolytic Enzymes : an Overview of Source , Production , Properties , and Thrombolytic Activity In Vivo. Appl Microbiol Biotechnol , 69 , 126–132. https://doi.org/10.1007/
s00253-005-0159-7 Poernomo, A. T., Isnaeni, & Purwanto. (2014). Aktivitas Invitro Enzim Fibrinolitik Ekstrak  Tempe  Hasil  Fermentasi Rhizopus  oligosporus  ATCC  6010 Pada Substrat Kedelai Hitam. Berkala Ilmiah  Kimia  Farmasi , 4 (2),  18–24. http://journal.unair.ac.id/download- fullpapers-bikf2b8862565bfull.pdf
Rajendran, P, S., Liji, L., Jayachandran,
K., & Anie, Y. (2016). Bacteria from South Indian Fermented Foods and Food-Waste Dump Sites as Sources of  Fibrinolytic  Enzymes. Imperial Journal of Interdisciplinary Research ,
2 (7), 528–536. Raju, E. V. N., & Divakar, G. (2013). Screening and Isolation of Fibrinolytic Protease Producing Mesophilic Bacteria From Slaughter  Houses  in  Bangalore.
Khikmah et al.
International Journal Pharmaceutical Sciences  and  Research , 4 (9),  3625–
3629.  https://doi.org/10.13040/ IJPSR.0975-8232.4(9).3625-29 Setiabudy, R. D. (2012). Hemostasis dan Trombosis. In R. D. Setiabudy (Ed.), Hemostatis Dan Trombosis . Edisi Kelima.
Badan Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Indonesia, pp.
34–47.
Setiawan, A., Arimurti, S., Senjarini, K., & Sutoyo. (2016). Aktivitas Proteolitik Dan Fibrinolitik Isolat Bakteri Dari Perairan Pantai Papuma Kabupaten Jember. Berkala Sainstek , 4 (1), 1–4.
Singh, T. A., Devi, K. R., Ahmed, G., & Jeyaram,  K.  (2014).  Microbial  and Endogenous Origin of Fibrinolytic Activity  in  Traditional  Fermented Foods of Northeast India. Food Research International , 55 , 356–362. https://doi. org/10.1016/j.foodres.2013.11.028
Sompalli, B., & Malaviya, A. (2024). A Novel Fibrinolytc Enzyme Producer from Mangrove Soil Sediments: Screening, Isolation, Strain Sediments: Screening, Isolation, Strain Improvement, and Fermentation. Journal of Applied Biology & Biotechnology , X(XX), 1-9. https://doi. org/10.7324/JABB.2024.161429.
Srinivasan, V. M., Devi, C. S., Saha, A., Mondal, M., Dhar, S., Suganthi, V., & Selvarajan, E. (2013). Screening for Staphylokinase Producing Staphylococcus spp . from Bovine  Milk  Sample. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical
Sciences , 5 (2), 601–604.
Taneja, K., Bajaj, B. K., Kumar, S., & Dilbaghi, N. (2017). Production, Purification and Characterization of Fibrinolytic Enzyme from Serratia sp. KG-2-1 using Optimized Media. In 3 Biotech (Vol.
7, Issue 184, pp. 1–15). https://doi. org/10.1007/s13205-017-0808-4
Ulfa, E. U., Utarti, E., Afkarina, I., Arimurti, S.,  &  Senjarini,  K.  (2017).  Deteksi Aktivitas Fibrinolitik Isolat Bakteri WU 021055* Asal Perairan Pantai Papuma Jember Menggunakan Zimografi. Global Medical and Health Communication , 5 (2),
97–102. https://doi.org/10.29313/ gmhc.v5i2.1914 Weng,  Y.,  Yao,  J.,  Sparks,  S.,  &  Wang, K. Y. (2017). Nattokinase: An Oral Antithrombotic Agent for the Prevention of Cardiovascular Disease. International Journal of Molecular Sciences , 18 , 1–13. https://doi.org/10.3390/ijms18030523