Juni 2024, Vol. 11 No. 1: 6 – 14
pISSN : 2355-9942, eISSN:2656-792X
Terakreditasi Nasional, Dirjen Pendidikan Tinggi, Riset, dan Teknologi
Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Riset dan Teknologi RI
S.K. No. 105/E/KPT/2022
https://ejurnal.undana.ac.id/index.php/nukleus/article/view/15411

## EVALUASI KOMPOSISI SERAT KASAR DAN KECERNAAN RUMEN IN VITRO TANDAN KOSONG KELAPA SAWIT TEKNOLOGI AMONIASI FERMENTASI DENGAN EM-4 DAN CAIRAN RUMEN SAPI
(Evaluation of crude fiber composition and in vitro rumen digestibility of empty palm bunches using the fermantation ammoniation technique with EM-4 and cattle rumen fluid)
E. Julianti, R. P. Harahap * , Y. Rohayeti Program Studi Peternakan, Fakultas Pertanian, Universitas Tanjungpura, Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Pontianak, Kalimantan Barat 78124, Indonesia
* Correspondent author, email: rakhmad@faperta.untan.ac.id

## ABSTRAK
Tandan  kosong  kelapa  sawit  (TKKS)  memiliki  potensi  sebagai  pakan  ternak  ruminansia,  namun  kualitasnya perlu  ditingkatkan.  Penelitian  ini  mengevaluasi  efektivitas  teknologi  amoniasi  fermentasi  dengan  EM-4  dan cairan  rumen  sapi  dalam  meningkatkan  kualitas  nutrisi  dan  kecernaan  TKKS  secara  in  vitro.  Penelitian menggunakan rancangan acak kelompok (RAK) dengan empat perlakuan dan enam ulangan: P0 (2 kg TKKS), P1 (2 kg TKKS + 40 g urea + 60 ml molases), P2 (2 kg TKKS + 40 g urea + 60 ml molases + 60 ml EM-4), dan P3 (2 kg TKKS + 40 g urea + 60 ml molases + 60 ml cairan rumen sapi). Analisis statistik deskriptif dilakukan pada kandungan serat kasar (SK), neutral detergent fiber (NDF), acid detergent fiber (ADF), dan hemiselulosa. Kecernaan  bahan  kering  (KCBK)  dan  kecernaan  bahan  organik  (KCBO)  dianalisis  dengan  ANOVA  dan  uji Duncan pada taraf 5%. Hasil menunjukkan bahwa perlakuan P2 menurunkan kandungan SK, NDF, ADF, dan hemiselulosa secara deskriptif. Penurunan komponen serat pada perlakuan P1, P2, dan P3 dibandingkan kontrol (P0)  menunjukkan  efektivitas  amoniasi  fermentasi  dalam  memperbaiki  kualitas  pakan.  Perlakuan  P2  secara signifikan  meningkatkan  KCBK  dan  KCBO  in  vitro  dibandingkan  perlakuan  lainnya  (P<0,05).  Perlakuan  P1 dan P3 juga meningkatkan kecernaan dibandingkan P0, meskipun tidak setinggi P2. Kesimpulannya, teknologi amoniasi fermentasi dengan EM-4 dan cairan rumen pada TKKS dapat menurunkan kandungan SK, NDF, ADF, dan hemiselulosa, serta meningkatkan KCBK dan KCBO dibandingkan dengan kontrol.
Kata-kata kunci: amoniasi fermentasi, cairan rumen sapi, EM-4, in vitro, tandan kosong kelapa sawit

## ABSTRACT
Empty oil palm fruit bunches (OPEFB) have the potential as ruminant livestock feed, but their quality needs to be improved. This study evaluated the effectiveness of fermentation ammonia technology with EM-4 and cattle rumen  fluid  in  improving  the  nutritional  quality  and  digestibility  of  OPEFB  in  vitro.  The  study  used  a randomized block design (RBD) with four treatments and six replications: P0 (2 kg OPEFB), P1 (2 kg OPEFB + 40  g  urea  +  60  ml  molasses),  P2  (2  kg  OPEFB  +  40  g  urea  +  60  ml  molasses  +  60  ml  EM-4),  and  P3  (2  kg OPEFB + 40 g urea + 60 ml molasses + 60 ml cattle rumen fluid). Descriptive statistical analysis was performed on the content of crude fiber (CF), neutral detergent fiber (NDF), acid detergent fiber (ADF), and hemicellulose. Dry  matter  digestibility  (DMDi)  and  organic  matter  digestibility  (OMDi)  were  analyzed  using  ANOVA  and Duncan's test at the 5% level. The results showed that the P2 treatment decreased the content of CF, NDF, ADF, and hemicellulose descriptively. The decrease in fiber components in treatments P1, P2, and P3 compared to the control  (P0)  showed  the  effectiveness  of  fermentation  ammoniation  in  improving  feed  quality.  Treatment  P2 significantly increased DMDi and OMDi in vitro compared to other treatments (P<0.05). Treatments P1 and P3 also  increased  digestibility  compared  to  P0,  although  not  as  high  as  P2.  In  conclusion,  fermentation ammoniation technology with EM-4 and rumen fluid in OPEFB can decrease the content of CF, NDF, ADF, and hemicellulose, and increase DFM and OMF compared to the control.
Keywords: fermented ammonia, cow rumen fluid, EM-4, in vitro, palm oil empty fruit bunches

## PENDAHULUAN
Provinsi  Kalimantan  Barat,  sebagai  salah satu  produsen  minyak  sawit  terbesar  di Indonesia,  menawarkan  peluang  yang  belum tereksplorasi dalam memanfaatkan tandan kosong  kelapa  sawit  (TKKS)  sebagai  sumber hijauan  pakan  ternak  ruminansia  berkelanjutan. Tandan kosong kelapa sawit (TKKS) merupakan produk  sampingan  yang  dihasilkan  selama pembuatan  crude  palm  oil  (CPO)  dan  crude palm  kernel  oil  (CPKO).  Menurut  Peni  et  al., (1998),  proporsi  limbah  TKKS  yang  dihasilkan sebesar  28%  berasal  dari  olahan  tandan  buah segar.  Selain  itu,  persentase  serat  dan  cangkang biji yang berasal dari tandan buah segar masing- masing sebesar 13% dan 5,5%. TKKS memiliki kandungan  serat  kasar  yang  tinggi,  terutama kandungan selulosa dan lignin, yang berkontribusi  terhadap  kecernaan  yang  rendah. Rendahnya  kecernaan  ini  menjadi  tantangan dalam  penggunaannya  sebagai  pakan  ternak, sehingga  diperlukan  teknologi  pengolahan  yang tepat untuk meningkatkan nilai nutrisinya.
Kandungan serat kasar TKKS yang tinggi dan  kecernaan  yang  rendah  menjadi  kendala utama  dalam  pemanfaatannya.  Tandan  kosong kelapa  sawit  memiliki  kandungan  serat  netral deterjen  (NDF)  sebesar  80.5%,  serat  deterjen asam  (ADF)  sebesar  47.6%,  selulosa  sebesar 15.4%,  dan  lignin  sebesar  15.1%,  serta  nilai daya  cerna  bahan  kering  in  vitro  (KCBK) sebesar  34.0%  dan  nilai  daya  cerna  bahan organik  in  vitro  (KCBO)  sebesar  30.9% (Jayanegara  et  al.,  2019).  Oleh  karena  itu, diperlukan  pengembangan  teknologi  sebagai upaya  menurunkan  kandungan  serat  kasar  dan meningkatkan  kecernaanya  sehingga  dapat meningkatkan produktivitas dan efisiensi peternakan. Teknologi pengolahan pakan amoniasi dan fermentasi dapat diterapkan untuk meningkatkan  kualitas  nutrisi  TKKS.  Proses amoniasi  dan  fermentasi  bertujuan  untuk meningkatkan  kualitas  nutrisi  pakan,  seperti daun kelapa sawit, jerami padi, dan bahan pakan lainnya,  sehingga  dapat  meningkatkan  daya
cerna pakan dan produktivitas ternak ruminansia (Hasdarini dan Nurcahyo, 2023; Prakasa, 2021). Studi  telah  menunjukkan  bahwa  teknologi amoniasi  dan  fermentasi  dapat  mengurangi jumlah  produksi  limbah  pertanian,  memberikan alternatif  pakan  saat  musim  kemarau,  serta meningkatkan  kualitas  nutrisi  dan  daya  cerna pakan (Rahman et al., 2023; Simanjuntak et al., 2015).  Penerapan  teknologi  ini  juga  dapat membantu  mengatasi  persoalan  keterbatasan pakan  ternak  dan  meningkatkan  produktivitas ternak ruminansia (Amam dan Harsita, 2021).
Pemanfaatan EM-4 dalam proses fermentasi  telah  diteliti  kemampuannya  dalam meningkatkan  kualitas  bahan  pakan  dengan mendegradasi  serat  kasar  dan  meningkatkan kualitas nutrisinya. Penelitian Iqbal et al., (2016) yang  mengevaluasi  kualitas  jerami  padi  yang difermentasi  menggunakan  kadar  EM-4  yang berbeda  sebagai  inokulan  bakteri  pada  jerami padi yang difermentasi memperoleh hasil bahwa EM-4  berpotensi  dalam  meningkatkan  kualitas nutrisi  bahan  pakan.  Sementara  itu,  keberadaan mikroorganisme  selulolitik  dalam  cairan  rumen sapi juga telah dipelajari secara luas. Mikroorganisme  tersebut  menghasilkan  enzim selulase  yang  berperan  penting  dalam memecah selulosa  sehingga  meningkatkan  pencernaan serat  kasar  pada  proses  fermentasi  di  dalam rumen  (Zubaidah  et  al.,  2019).  Beberapa penelitian  telah  menginvestigasi  efektivitas fermentasi  dengan  EM-4  dan  cairan  rumen terhadap  bahan  pakan  ruminansia  (Koni  et  al., 2022;  Yuliana  et  al.,  2022).  Namun,  sedikit penelitian  yang  secara  spesifik  mengevaluasi pengaruhnya terhadap penurunan serat kasar dan peningkatan  kecernaan  bahan  TKKS  dengan kombinasi  teknologi  amoniasi  fermentasi  dan kajian  perbandingan  efektivitas  penggunaan antara  EM-4  dan  cairan  rumen  sapi.  Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi  komposisi serat kasar dan kecernaan rumen in vitro tandan kosong  kelapa sawit  teknologi amoniasi fermentasi dengan EM-4 dan cairan rumen sapi.

## METODE PENELITIAN

## Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  Juli hingga  Agustus  2023.  Penelitian  ini  dimulai dengan  persiapan  sampel  tandan  kosong  kelapa sawit  (TKKS)  yang  diambil  dari  pabrik  kelapa sawit  yang  berlokasi  di  Dusun  Re’es,  Desa
Teluk  Bakung,  Kecamatan  Sui  Ambawang, Kalimantan  Barat.  Sampel  yang  telah  diambil dipersiapkan sesuai perlakuan penelitian dengan teknologi  amoniasi  fermentasi  di  Laboratorium Peternakan,  Fakultas  Pertanian,  Universitas Tanjungpura.  Analisis  kandungan  serat  kasar
(SK)  menggunakan  metode  AOAC  (2005). Metode Van Soest et al. (1991) digunakan untuk menganalisis  kandungan  neutral  detergent  fiber (NDF)  dan  acid  detergent  fiber  (ADF). Kandungan  hemiselulosa  diperoleh  dari  selisih NDF dengan ADF (NDF-ADF) yang dijabarkan dalam penelitian (Harahap et al., 2018). Adapun kandungan  SK,  NDF,  ADF,  dan  hemiselulosa dianalisis duplikat dan disajikan secara deskriptif.  kemudian  analisis  kecernaan  bahan kering  (KCBK)  serta  kecernaan  bahan  organik (KCBO) secara in vitro metode Tilley and Terry (1963)  dilakukan  di  Laboratorium  Nutrisi Ternak Perah, Fakultas Peternakan, IPB University.

## Materi Penelitian
Bahan  yang digunakan  dalam  penelitian adalah  tandan  kosong  kelapa  sawit  (TKKS), urea, molases, efektif mikroorganisme 4 (EM-4), cairan  rumen  sapi,  H2SO4  0,255  N,    NaOH 0,313  N,  larutan  neutral  detergent  solution (NDS),  larutan  acid  detergent  solution  (ADS), larutan  McDougall,  cairan  pepsin,  dan  HCl 0,2%. Peralatan yang digunakan dalam penelitian  yaitu  toples  HDPE  (2000  ml),  pita perekat,  plastic  sampel,  kabinet  dryer,  termos, kain  penyaring,  ANKOM  fiber  analyzer,  filter bag  dan  heat  sealer,  labu  Erlenmeyer,  oven, desikator,  shaker  waterbath,  centrifuge,  tabung fermentor,  Whatman  41  dan  pompa  vakum, cawan porselin dan tanur.

## Metode Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen  menggunakan rancangan acak lengkap  (RAL)  dengan  empat  perlakuan  dan enam  ulangan.  Perlakuan  dalam  penelitian  ini yaitu: P0= 2 kg tandan kosong kelapa sawit, P1= 2  kg  tandan  kosong kelapa  sawit  +  40  g  urea + 60  ml molases,  P2=  2  kg  tandan  kosong  kelapa sawit + 40 g urea + 60 ml molases + 60 ml EM- 4, P3= 2 kg tandan kosong kelapa sawit + 40 g urea + 60 ml molases + 60 ml cairan rumen sapi.

## Teknologi Amoniasi Fermentasi
Penelitian ini diawali dengan pengambilan sampel tandan kosong kelapa sawit (TKKS)  yang  diambil  dari  pabrik  kelapa  sawit yang  berlokasi  di  Dusun  Re’es,  Desa  Teluk Bakung, Kecamatan Sui Ambawang, Kalimantan Barat. Sebanyak 10 kg sampel segar TKKS  dengan  kadar  air  13,66%  diambil  lalu sampel  dicacah.  TKKS  diberi  perlakuan  yaitu:
P0= 2 kg tandan kosong kelapa sawit, P1= 2 kg TKKS  +  40  g  urea  +  60  ml  molases,  P2=  2  kg TKKS  +  40  g  urea  +  60  ml  molases  +  60  ml EM-4,  P3=  2  kg  TKKS  +  40  g  urea  +  60  ml molases + 60 ml cairan rumen sapi.
TKKS  yang  telah  dicacah  kemudian diamoniasi  basah  dengan  cara  menyemprotkan larutan yang terdiri dari 40 g urea dan 1 liter air pada  2  kg  TKKS.  Selanjutnya,  fermentasi dilakukan dengan menambahkan 60 ml mikroorganisme  cairan  rumen  sapi  dan  EM-4 sesuai perlakuan yang telah ditentukan. Molases ditambahkan  sebanyak  60  ml  sebagai  substrat karbohidrat  yang  mudah  larut  dalam  proses fermentasi.  Penambahan  molases  bertujuan untuk menyediakan sumber energi bagi mikroorganisme yang terlibat dalam fermentasi, sehingga  dapat  meningkatkan  aktivitas  dan pertumbuhan mikroorganisme tersebut. Kemudian, masing-masing perlakuan dihomogenkan secara merata kemudian dimasukkan  ke  dalam  toples  plastik  HDPE (2000  ml)  dengan  cara  dipadatkan  hingga  tidak ada  rongga.  Toples  kemudian  ditutup  rapat dengan  penutup  yang  direkatkan  dengan  pita perekat  untuk  menciptakan  kondisi  anaerob. Setelah  itu,  toples  diberi  label  sesuai  perlakuan yang  telah  diberikan  dan  dilakukan  inkubasi selama 21 hari.

## Persiapan Sampel
Sampel perlakuan dipanen setelah 21 hari inkubasi  lalu  masing-masing  sampel  tandan kosong kelapa sawit (TKKS) perlakuan dikeringkan menggunakan kabinet  dryer  selama 12  jam  dengan  suhu  60ºC.  Kemudian,  sampel masing-masing  perlakuan  TKKS  dihaluskan dengan  menggunakan  blender  dan  dimasukkan ke  dalam  plastik  sampel  sebanyak  100  gram untuk  dilakukan  analisis  kandungan  serat  kasar (SK)  dengan  metode  AOAC  (2005)  secara duplikat.  Kandungan  neutral  detergent  fiber (NDF) dan acid detergent fiber (ADF) dianalisis dengan  metode  Van  Soest  et  al.  (1991)  secara duplikat.  Adapun  kandungan  hemiselulosa adalah  selisih  dari  NDF  dengan  ADF  (NDF- ADF) yang dijabarkan dalam penelitian (Harahap  et  al.,  2018).  Kandungan  SK,  NDF, ADF,  dan  hemiselulosa  dianalisis  secara deskriptif kuantitatif. Selanjutnya, sampel masing-masing  perlakuan  TKKS  dianalisis kecernaan bahan kering (KCBK) dan kecernaan bahan  organik  (KCBO)  secara  in  vitro  (Tilley and Terry, 1963) dengan enam ulangan.

## Pengambilan Cairan Rumen
Lokasi  Laboratorium  Lapangan  Divisi Nutrisi  Ternak  Perah,  Fakultas  Peternakan  IPB University,  diambil  cairan  rumen  dari  dua  ekor sapi  perah  jantan  berfistula  Frisian  Holstein (FH).  Tata  cara  pengambilan  cairan  rumen meliputi penyediaan awal termos dan selanjutnya  pengisian  termos  dengan  air  panas bersuhu  39ºC.  Isi  rumen  disaring  menggunakan kain saring. Selanjutnya cairan rumen dimasukkan  ke  dalam  termos  yang  telah  sudah dikosongkan  air  panas.  Prosedur  ini  bertujuan untuk  menjaga  suhu  cairan  rumen  pada  tingkat yang  sebanding  dengan  suhu  rumen  sapi  hidup. Termos  tertutup  rapat  dan  segera  diangkut  ke Laboratorium  Analisis  Divisi  Nutrisi  Ternak Perah,  Departemen  Ilmu  Nutrisi  dan  Teknologi Pakan,  Fakultas  Peternakan,  IPB  University. Selanjutnya  dilakukan  percobaan  fermentasi secara  in vitro.

## Analisis Serat Kasar (AOAC, 2005)
Alat  ANKOM  fiber  analyzer  digunakan untuk  analisis  serat  kasar  dengan  bag  filter technique.  Filter  bag  ditimbang,  dilanjutkan dengan  penempatan  sampel  dengan berat antara 0,95 dan 1,00 g ke dalam filter bag. Selanjutnya filter  bag  disegel  menggunakan  heat  sealer. Filter  bag  kosong  ditimbang  seluruhnya. Selanjutnya,  filter  bag  berisi  sampel  dan  satu blanko dimasukkan ke dalam modul penganalisis  serat.  Selanjutnya  dimasukkan larutan  H2SO4  0,255  N  sebanyak  2  liter. Kemudian  diekstrak  durasi  40  menit.  Setelah proses ekstraksi, larutan yang diperoleh dibuang, dan sampel dibilas sebanyak dua kali menggunakan  2  liter  air  panas,  dengan  masing- masing  pencucian  berlangsung  selama  5  menit. Setelah  pembilasan  selesai,  larutan  pembilas dibuang, dilanjutkan dengan penambahan 2 liter larutan  NaOH  0,313  N,  kemudian  dilakukan ekstraksi  lagi  selama  40  menit.  Setelah  proses ekstraksi, sampel menjalani tiga kali pembilasan menggunakan volume 1.900-2.000 ml air panas, dengan  masing-masing  pencucian  berlangsung selama  5  menit.  Bahan  yang  telah  diekstraksi dan  dicuci  dipindahkan  ke  dalam  labu Erlenmeyer  250  ml  dan  selanjutnya  direndam dalam  larutan  aseton  selama  5  menit.  Sampel diekstraksi  dari  larutan  aseton  dan  dibiarkan mengering  melalui  penguapan.  Selanjutnya sampel  diberi  suhu  120 ℃ selama  4  jam. Selanjutnya  kantong  dimasukkan  ke  dalam desikator dan diukur beratnya untuk mengetahui
massanya.  Rumus  penghitungan  serat  kasar adalah sebagai berikut: Serat Kasar (%) =((W3- (W1×C1))×100)/W2.  Keterangan:  W1  :  Berat filter bag, W2 : Berat sampel, W3 : Berat akhir proses ekstraksi, C1 : Berat blanko.

## Analisis  Neutral  Detergent  Fiber  (NDF)  dan Acid Detergent Fiber (ADF)
Pengukuran  kandungan  NDF  dan  ADF menggunakan  metode  Van  Soest  et  al.  (1991). Analisis kandungan NDF dilakukan menggunakan  filter  bag  technique  dengan  alat ANKOM  fiber  analyzer.  Filter  bag  ditimbang, kemudian sebanyak 0,45-0,55 g sampel dimasukkan  ke  dalam  filter  bag  lalu  disegel menggunakan heat sealer. Satu fiter bag kosong ditimbang sebagai blanko. Selanjutnya filter bag yang  telah  diisi  sampel  dan  1  blanko dimasukkan  ke  modul  penganalisis  serat.  Lalu ditambahkan  larutan  neutral  detergent  solution (NDS) sebanyak 2 liter dan 4 ml alpha-amylase dengan lama ekstraksi selama 75 menit. Larutan hasil  ekstraksi  dibuang  kemudian  dilakukan pembilasan  dengan  air  panas  sebanyak  4-5  kali masing-masing  pembilasan  dilakukan  selama  5 menit.  Sampel  yang  telah  selesai  diekstrak  dan dibilas  dimasukkan  di  labu  Erlenmeyer  ukuran 250  ml  lalu  direndam  larutan  aseton  selama  5 menit.  Sampel  diangkat  dari  larutan  aseton  dan dibiarkan  kering  hingga  aseton  menguap, kemudian  sampel  dioven  dengan  suhu  120 ℃ selama  4  jam.  Sampel  didinginkan  di  kantong desikator dan ditimbang.
Analisis  kandungan  ADF  dilakukan menggunakan  filter  bag  technique  dengan  alat ANKOM  fiber  analyzer  mengikuti  prosedur analisis  kandungan  NDF.    Namun  perbedaanya terletak  pada  larutan  yang  digunakan,  yaitu larutan  acid  detergent  fiber  (ADS)  sebanyak  2 liter lalu diekstraksi selama 60 menit. Perhitungan kandungan NDF dan ADF dilakukan  dengan  rumus:  NDF  (%)=((W3- (W1×C1)))/W2×100%. ADF (%)=((W3- (W1×C1)))/W2×100%.  Keterangan:  W1  :  Berat filter bag, W2 : Berat sampel, W3 : Berat akhir proses ekstraksi, C1 : Berat blanko

## Analisis Hemiselulosa
Kandungan  hemiselulosa  adalah  selisih dari  kandungan  neutral  detergent  fiber  (NDF) dengan  kandungan  acid  detergent  fiber  (ADF). Perhitungan  hemiselulosa  dilakukan  dengan rumus: Hemiselulosa (%)=NDF(%)-ADF(%).

## Pengujian Kecernaan Bahan Kering (KCBK) dan Kecernaan Bahan Organik (KCBO)
Pengukuran  kecernaan  in  vitro  dilakukan dengan  menggunakan  metode  Tilley  and  Terry (1963). Sebanyak 0,5 gram diambil dari masing- masing sampel perlakuan. Kemudian ditambahkan  40  ml  larutan  McDougall  dan  10 ml  cairan  rumen.  Fase  inkubasi  in  vitro berlangsung  selama  48  jam  dan  dilakukan menggunakan waterbath shaker. Setelah inkubasi dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan  3500  rpm  selama  15  menit.  Sedimen yang  diperoleh  dari  centrifuge  dipindahkan  ke tabung  fermentor  dan  dicampur  dengan  50  ml pepsin  dan  larutan  yang  mengandung  asam klorida (HCl) 0,2%. Tabung fermentor dilakukan putaran inkubasi lagi dalam waterbath shaker selama 48 jam pada suhu 39 ºC. Analisis kecernaan bahan kering dan bahan organik dapat dilakukan  setelah  inkubasi  kedua.  Isi  tabung fermentor  disaring  menggunakan  kertas  saring Whatman  41  pada  tekanan  vakum,  kemudian residu  padat  dikumpulkan.  Residu  dimasukkan ke  dalam  cawan  porselin  dan  dipanaskan  pada suhu  105ºC  selama  24  jam  dalam  oven. Sebelumnya, cawan dan kertas saring dimasukkan  ke  dalam  oven  dan  telah  diukur beratnya.  Cawan  tersebut  akan  didinginkan menggunakan desikator dengan durasi 15 menit. Cawan yang menampung residu diukur beratnya,  dan  koefisien  kecernaan  bahan  kering (KCBK)  dihitung.  Cawan  tersebut  dimasukkan ke  dalam  tungku bersuhu 600  ºC selama  4 jam, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  desikator selama  15 menit.  Cawan  yang  berisi  sisa  bahan ditimbang  kembali  dan  ditentukan  koefisien kecernaan  bahan  organik  (KCBO).  Kecernaan
bahan  kering  dan  bahan  organik  dapat  dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut: KCBK  (%)=  (BK  Sampel  (g)-(BK  residu  (g)- BK blanko (g)))/(BK sampel (g))×100%. KCBO (%)= (BO Sampel (g)-(BO residu (g)-BO blanko (g)))/(BO  sampel (g))×100%.  Keterangan:  BK : Bahan kering, BO : Bahan organik

## Analisis Data
Analisis  statistik  deskriptif  kuantitatif dilakukan pada parameter kandungan SK, NDF, ADF,  dan  hemiselulosa.  Parameter  KCBK  dan KCBO  secara  rumen  in  vitro  dianalisis menggunakan rancangan acak kelompok (RAK) dengan  4  perlakuan  dan  6  ulangan.  Proses  in vitro  yang  berbeda  dikelompokkan  berdasarkan variasi  populasi  dan  aktivitas  mikroba  rumen pada setiap waktu pengambilan sampel. Perlakuan  yang  digunakan  adalah  P0  (2  kg tandan kosong kelapa sawit), P1 (2 kg TKKS + 40  g  urea  +  60  ml  molases),  P2  (2  kg  TKKS  + 40 g urea + 60 ml molases + 60 ml EM-4), dan P3 (2 kg TKKS + 40 g urea + 60 ml molases + 60  ml  cairan  rumen  sapi).  Data  KCBK  dan KCBO  yang  diperoleh  dianalisis  menggunakan analisis  sidik  ragam  (ANOVA)  pada  taraf  5%. Uji Duncan’s multiple range test pada taraf 5% digunakan untuk membandingkan antarperlakuan  yang  berbeda.  Analisis  data dilakukan  dengan  menggunakan  software  IBM SPSS  Statistics  versi  20.  Rancangan  Acak Kelompok  (Steel  and  Torrie,  1989)  dengan rumusan matematis sebagai berikut: Yij = μ + ηi +  βj  + Σij.  Keterangan:  i =  1,  2,  ...t (kelompok cairan rumen). j = 1, 2, ...r (perlakuan amoniasi fermentasi).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kandungan  Serat  Kasar,  NDF,  ADF,  dan Hemiselulosa
Berdasarkan data pada Tabel 1, kandungan  serat  kasar,  NDF,  ADF,  dan hemiselulosa dari setiap perlakuan menunjukkan variasi  seacar  deskriftif  kuantitatif.  Pada perlakuan  P0,  serat  kasar  (SK)  tercatat  sebesar 45,92% BK, NDF sebesar 79,85%, ADF sebesar 59,80%, dan hemiselulosa sebesar 20,05%. Pada perlakuan  P1,  kandungan  SK  menurun  menjadi 40,60%  BK,  NDF  menjadi  74,94%,  ADF menjadi  56,27%,  dan  hemiselulosa  menjadi 18,67%. Perlakuan P2  menunjukkan penurunan lebih  lanjut  dengan  serat  kasar  sebesar  37,72% BK,  NDF  sebesar  69,90%,  ADF  sebesar
54,14%,  dan  hemiselulosa  sebesar  15,76%. Sementara  itu,  pada  perlakuan  P3,  serat  kasar tercatat  sebesar  38,83%  BK,  NDF  sebesar 70,99%, ADF sebesar 55,10%, dan hemiselulosa sebesar  15,89%.  Dari  hasil  ini,  terlihat  bahwa perlakuan  P2,  yang  merupakan  kombinasi TKKS  dengan  urea,  molases,  dan  EM-4, menghasilkan penurunan tertinggi pada kandungan  serat  kasar,  NDF,  ADF,  dan hemiselulosa  dibandingkan  dengan  perlakuan lainnya. Penurunan dalam kandungan serat kasar mengindikasikan potensi peningkatan kecernaan pakan  TKKS.  Perlakuan  P1,  P2,  dan  P3  juga menghasilkan penurunan dalam kandungan NDF dan  ADF,  yang  menandakan  reduksi komponen
serat. Selain itu, penurunan kandungan hemiselulosa,  terutama  pada  perlakuan  P2,
menunjukkan  perubahan  komposisi  serat  yang lebih signifikan.
Table 1.   Kandungan serat kasar, NDF, ADF, dan hemiselulosa perlakuan
Parameter Perlakuan P0 P1 P2 P3 SK (%BK) 45,92 40,60 37,72 38,83 NDF (%) 79,85 74,94 69,90 70,99 ADF (%) 59,80 56,27 54,14 55,10 Hemiselulosa (%) 20,05 18,67 15,76 15,89
Keterangan: SK= serat kasar; NDF= neutral detergent fiber; ADF= acid detergent fiber; P0= 2 kg tandan kosong kelapa sawit; P1= 2 kg TKKS + 40 g urea + 60 ml molases; P2= 2 kg TKKS + 40 g urea + 60 ml molases + 60 ml EM-4; P3= 2 kg TKKS + 40 g urea + 60 ml molases + 60 ml cairan rumen sapi.
Urea  berperan  penting  dalam  proses amoniasi  yang  bertujuan  untuk  menurunkan kandungan  serat  kasar,  NDF,  ADF,  dan hemiselulosa  pada  TKKS.  Urea  berperan sebagai zat hidrolitik yang membantu mengganggu  struktur  dinding  sel  dan  memecah ikatan  ester  antara  lignin,  selulosa,  dan hemiselulosa sehingga meningkatkan daya cerna bahan  pakan  (Adejoro  and  Hassen,  2017). Penambahan  urea  pada  bahan  pakan  seperti jerami  gandum  terbukti  mengurangi  konsentrasi NDF  dibandingkan  dengan  jerami  yang  tidak diberi perlakuan, hal ini menunjukkan efektivitasnya dalam pengurangan serat (Sarwar et  al.,  2003).  Selain  itu,  amoniasi  serat  dengan urea  telah  terbukti  mendorong  degradasi selulosa  dan  hemiselulosa  yang  lebih  tinggi, sehingga  menyebabkan  peningkatan  kandungan protein kasar dalam pakan (Morais et al., 2020). Perlakuan  dengan  urea  juga  dikaitkan  dengan peningkatan  kecernaan  pati  dalam  makanan hewani, sehingga berkontribusi terhadap peningkatan  penguraian  pakan  dan  sintesis protein mikroba (Belanche et al., 2021).
Kehadiran molase dalam proses fermentasi  dapat  meningkatkan  kualitas  pakan fermentasi dengan meningkatkan produksi asam lemak  volatil  (VFA),  yang  merupakan  sumber energi  penting  bagi  ternak  ruminansia  (Usman, 2013). Selain itu, molase dapat mengoptimalkan proses  fermentasi  dengan  menyediakan  sumber gula  sederhana  yang  memfasilitasi  aktivitas mikroba,  sehingga  meningkatkan  kecernaan pakan  dan  pemanfaatan  nutrisi  oleh  ruminansia (Hilmi dan Prastujati, 2020).
Penelitian ini menunjukkan bahwa fermentasi  amonia  TKKS  menggunakan  starter seperti  EM-4  dapat  meningkatkan  kualitas nutrisi  pakan  dengan  menurunkan  kandungan serat  kasar,  NDF,  ADF,  dan  hemiselulosa.
Menurut Fitria et al., (2023), penggunaan starter komersial  seperti  Dekomposer  EM-4  dan  M21 dalam  proses  fermentasi  dapat  meningkatkan kadar  protein  kasar  (PK)  dan  bahan  ekstrak tanpa  nitrogen  (BETN)  sekaligus  mengurangi kandungan  lemak  kasar  (LK)  dan  serat  kasar (SK)  dari  jerami  jagung.  Hal  ini  menunjukkan adanya peningkatan kualitas nutrisi pakan secara keseluruhan.  Dalam  penelitian  terkait  yang dilakukan oleh Dewi et al., (2022), menunjukkan  bahwa  lignin  yang  terdapat  pada jerami  jagung  dapat  menghambat  degradasi selulosa dan hemiselulosa dalam rumen. Namun, melalui  fermentasi  dengan  EM-4,  nilai  nutrisi jerami  dan  tongkol  jagung  dapat  ditingkatkan, hal  ini  menunjukkan  solusi  potensial  untuk mengatasi  keterbatasan  yang  ditimbulkan  oleh lignin.  Mekanisme  kerja  EM-4  melibatkan penciptaan  lingkungan  yang  kondusif  bagi aktivitas  mikroba,  yang  membantu  memecah komponen  serat  dan  meningkatkan  kecernaan pakan.
Keberadaan  bakteri  selulolitik  dalam cairan rumen berperan penting dalam menurunkan kandungan serat kasar dan komposisi  NDF,  ADF,  dan  hemiselulosa  pada TKKS.  Studi  (Pangentasari  et  al.,  (2019)  dan Sa’o  et  al.,  (2021)  menunjukkan  bahwa  cairan rumen  mengandung  enzim,  khususnya  selulase dan  xilanase,  yang  mampu  mendegradasi selulosa,  hemiselulosa,  pati,  dan  gula.  Aktivitas enzimatik  ini  menyebabkan  pemecahan  fraksi serat,  sehingga  meningkatkan  daya  cerna  dan ketersediaan nutrisi.

## Kecernaan  Bahan  Kering  (KCBK)  dan Kecernaan Bahan Organik (KCBO) In vitro
Tabel  2  menyajikan  pengaruh  perlakuan terhadap  kecernaan  bahan  kering  (KCBK)  dan kecernaan  bahan  organik  (KCBO)  pada  empat
perlakuan  yang  berbeda.  Berdasarkan  hasil analisis sidik ragam (ANOVA) dan uji Duncan’s multiple range test pada taraf 5%, terlihat bahwa perlakuan  berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap kecernaan bahan kering (KCBK) dan kecernaan bahan organik (KCBO) rumen in vitro.
Pada  parameter  KCBK,  perlakuan  P2 menunjukkan  hasil  tertinggi  yang  secara signifikan  berbeda  dengan  perlakuan  lainnya. Perlakuan  P1  dan  P3    menunjukkan  hasil  yang serupa, namun keduanya lebih tinggi
dibandingkan  dengan  P0  (kontrol).  Parameter KCBO  juga  menunjukkan  hasil  tertinggi  pada perlakuan  P2  yang  secara  signifikan  berbeda dengan perlakuan lainnya. Perlakuan P1 dan P3 menunjukkan  nilai  masing-masing  sebesar 36,81±0,92%  dan  35,35±0,39%,  lebih  tinggi dibandingkan dengan P0. Menurut Jayanegara et al. (2019) nilai daya cerna bahan kering in vitro (KCBK)  sebesar  34,0%  dan  nilai  daya  cerna bahan organik in vitro (KCBO) sebesar 30,9%.
Table 2. Pengaruh perlakuan terhadap kecernaan bahan kering (KCBK) dan kecernaan bahan organik (KCBO) in vitro Parameter Perlakuan P0 P1 P2 P3 KCBK (%) 31,64±2,92 a 37,86±0,79 b 44,17±0,95 c 36,54±0,59 b KCBO (%) 30,55±2,87 a 36,81±0,92 b 42,78±0,84 c 35,35±0,39 b
Keterangan: Superskrip yang berbeda pada  baris yang sama menunjukkan berpengaruh nyata (P<0,05). P0= 2 kg tandan kosong kelapa sawit; P1= 2 kg TKKS + 40 g urea + 60 ml molases; P2= 2 kg TKKS + 40 g urea + 60 ml molases + 60 ml EM-4; P3= 2 kg TKKS + 40 g urea + 60  ml molases + 60 ml cairan rumen sapi; KCBK= kecernaan bahan kering; KCBO= kecernaan bahan organik.
Perbedaan  kecernaan  bahan  kering  dan organik  TKKS  yang  lebih  tinggi  pada  P1 dibandingkan  dengan  P0  menunjukkan  bahwa penambahan  urea  dan  molases  memiliki  efek positif pada peningkatan kecernaan. Penambahan EM-4 (P2) secara khusus menunjukkan  peningkatan  signifikan  dalam kecernaan  bahan  kering  dan  organik,  yang menunjukkan  bahwa  mikroorganisme  efektif yang  terkandung  dalam  EM-4  berperan  penting dalam  memperbaiki  proses  pencernaan.  Cairan rumen  mengandung  beragam  populasi  mikroba yang secara khusus beradaptasi dengan lingkungan  rumen,  memungkinkan  penguraian komponen  pakan  secara  efisien.  Sebaliknya, EM-4  mungkin tidak memiliki keanekaragaman dan adaptasi yang sama terhadap kondisi rumen, sehingga  berpotensi  menyebabkan  perbedaan efektivitas  dalam  meningkatkan  daya  cerna (Matthews et al., 2018).
Teknologi amoniasi fermentasi menunjukkan  penurunan  kandungan  serat  kasar
sehingga  menyebabkan  peningkatan  kecernaan bahan  kering  dan  bahan  organik.  Pengurangan kandungan  serat  kasar  ini  dapat  meningkatkan kecernaan bahan pakan, sebagaimana dibuktikan teknologi  amoniasi  fermentasi  pada  tongkol jagung  meningkatkan  kecernaan  in  vitro  bahan kering dan bahan organik secara signifikan, serta parameter lainnya (Prastyawan et al., 2012).
Mekanisme EM-4 dapat dikaitkan dengan aktivitas  mikroorganisme  yang  berperan  dalam memecah  selulosa,  pati,  dan  gula,  sehingga menyebabkan  penurunan  karbohidrat  secara cepat  dan  selanjutnya  meningkatkan  kandungan protein kasar (Hernaman et al., 2017). Selain itu, penggunaan  EM-4  dalam  fermentasi  ransum berbahan dasar jerami telah dilaporkan peningkatan  kecernaan  bahan  kering,  bahan organik,  dan  protein  kasar,  yang  menunjukkan dampak positif teknologi ini terhadap pemanfaatan nutrisi (Hernaman et al., 2017).

## SIMPULAN
Teknologi  amoniasi  fermentasi  dengan penambahan  EM-4  dan  cairan  rumen  sapi  pada tandan  kosong  kelapa  sawit  (TKKS)  efektif meningkatkan  kualitas  pakan  ternak  ruminansia melalui penurunan kandungan serat kasar, NDF,
ADF,  dan  hemiselulosa,  serta  meningkatkan kecernaan  bahan  kering  dan  organik.  Perlakuan dengan  EM-4  (P2)  khususnya  memberikan peningkatan  signifikan  dalam  kecernaan  bahan kering dan organik.

## SARAN
Eksplorasi  penggunaan  teknologi  amoniasi fermentasi  dengan  EM-4  dan  cairan  rumen  sapi pada  jenis  limbah  pertanian  atau  bahan  pakan
lainnya,  untuk  mengevaluasi  keuniversalan  dan adaptabilitas  teknologi  ini  dalam  meningkatkan kualitas berbagai bahan pakan.

## DAFTAR PUSTAKA
Adejoro  FA,    Hassen  A.  2017.  Effect  of supplementing  or  treating  Eragrostis curvula  hay  with  urea  or  nitrate  on  its digestibility  and  in  vitro  fermentation.
South  African  Journal  of  Animal  Science 47(2):168. https://doi.org/10.4314/sajas.v47i2.8 Amam,  Harsita  PA.  2021.  Profil  usaha peternakan  sapi  potong  rakyat.  Jami: Jurnal  Ahli  Muda  Indonesia ,  2(1):  1–12.
https://doi.org/10.46510/jami.v2i1.53
AOAC.  2005.  Official  methods  of  analysis  of
aoac international 20th edition. Association of Official Analytical Chemist, Inc.
Belanche  A,  Martín-García  AI,  Jiménez  E,
Jonsson  NN,  Yáñez-Ruíz  DR.  2021.  A novel ammoniation treatment of barley as a  strategy  to  optimize  rumen  ph,  feed degradability and microbial protein synthesis in sheep. Journal of the Science of  Food  and  Agriculture 101(13):  5541– 5549. https://doi.org/10.1002/jsfa.11205 Dewi  YL,  Ismail  A,  Akramullah  M,  Bouk  G, Kamlasi  Y,  Sinabang  MK,    Soares DCDC.  2022.  Effect  of  corn  waste fermentation  as  livestock  feed  on  fiber fraction content. International Journal of Environment Agriculture and Biotechnology 7(6): 108–112. https://doi.org/10.22161/ijeab.76.12
Fitria R, Luthfi SAC,  Hindratiningrum N. 2023.
Nutritional  quality  of  amofer  (ammonia fermentation)  corn  straw  using  EM4  and M21  decomposer. Jurnal  Sains  Dan Teknologi Peternakan 5(1): 18–24. https://doi.org/10.31605/jstp.v5i1.3160
Harahap RP, Jayanegara A, Nahrowi,  Fakhri S. 2018. Evaluation of oil palm fronds using fiber  cracking  technology  combined  with Indigofera  sp.  in  ruminant  ration  by Rusitec.  AIP  Conference Proceedings , 050008 (1-6). https://doi.org/https://doi.org/10.1063/1.5 062758 Hasdarini  M,    Nurcahyo  H.  2023.  Pengaruh penggunaan teknologi amoniasi
fermentasi  (amofer)  terhadap  perubahan fisik dan nutrien daun kelapa sawit (Elaeis guineensis).  Kingdom  (The Journal  of Biological Studies ) 9(1): 35–44. https://doi.org/10.21831/kingdom.v9i1.18 188 Hernaman  I,  Tarmidi  AR,    Dhalika  T.  2017.  In vitro  digestibility  of  rice  straw-based rations of dairy cows containing fermented  concentrate  by  Saccharomyces cerevisiae and effective microorganisms-4 (EM-4). Buletin  Peternakan 41(4):  407. https://doi.org/10.21059/buletinpeternak.v 41i4.24737
Hilmi M,  Prastujati AU. 2020. Optimasi molase dan  tibicos  sebagai  media  fermentasi dalam  memproduksi  nutraceutical  feed additive  menggunakan  response  surface methodology  (RSM). Jurnal  Ilmu  Dan Teknologi  Peternakan  Tropis 7(1):  1. https://doi.org/10.33772/jitro.v7i1.8441
Iqbal  Z,  Usman  Y,    Wajizah  S.  2016.  Evaluasi kualitas  jerami  padi  fermentasi  dengan tingkat  penggunaan  EM-4  yang  berbeda. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Pertanian 1(1): 655–664.
https://doi.org/10.17969/jimfp.v1i1.1135
Jayanegara A, Ardhisty NF, Dewi SP, Antonius,
Ridwan  R,  Laconi  EB,  Nahrowi,    Ridla M.  2019.  Enhancing  nutritional  qualityof oil  palm  empty  fruit  bunch  for  animal feed  by  using  fiber  cracking  technology. Advances  in  Animal  and  Veterinary
Sciences 7(3): 157–163. https://doi.org/http://dx.doi.org/10.17582/j ournal.aavs/2019/7.3.157.163
Koni T, Bulu H,  Badewi B. 2022. Kecernaan in vitro kulit kacang tanah (arachis hypogaea l.)  yang  difermentasi  cairan  rumen kambing. Jurnal  Ilmu  Peternakan  Dan Veteriner
Tropis 12(1): 92–98. https://doi.org/https://doi.org/10.46549/jip vet.v12i1.280
Matthews  C,  Crispie  F,  Lewis  E,  Reid  M, O’Toole  P,    Cotter  P.  2018.  The  rumen microbiome: a crucial consideration when optimising  milk  and  meat  production  and
nitrogen utilisation efficiency. Gut Microbes 10(2): 115–132. https://doi.org/https://doi.org/10.1080/194
90976.2018.1505176
Morais LF de, Almeida JC de C, Nepomuceno D de  D,  Freitas  RSX  de,  Melo  BMG  de, Silva  JF  M.  2020.  Nutritive  value  of elephant  grass  hay  ammoniated  by  urea.
Bioscience Journal 36(5). https://doi.org/10.14393/bj-v36n5a2020- 41135
Pangentasari  D,  Setiawati  M,  Utomo  NBP, Sunarno MTD. 2019. Komposisi dan nilai kecernaan  nutrien  tepung  daun  tarum (Indigofera zollingeriana)
yang difermentasi  dengan  cairan  rumen  domba pada  benih  ikan  jelawat  leptobarbus hoevenii (Bleeker, 1851). Jurnal Iktiologi Indonesia 18(2); 165. https://doi.org/10.32491/jii.v18i2.314
Peni  S,  Hendrisaan,    Croom.  1998.  Kimia
Organik I. ITB Press.
Prakasa NU. 2021. Evaluasi nutrisi pelepah daun kelapa  sawit  dengan  beberapa  teknik pengolahan sebagai pakan ternak ruminansia. Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa Pertanian 6(3): 108–116. https://doi.org/10.17969/jimfp.v6i3.17539
Prastyawan RM, Tampoebolon BIM,  Surono, S. 2012. Peningkatan kualitas tongkol jagung melalui teknologi amoniasi fermentasi  (amofer)  terhadap  kecernaan bahan  kering  dan  bahan  organik  serta protein  total  secara  in  vitro. Animal Agriculture Journal 1(1): 611–621. Rahman  FR,  Sutrisna  R,  Fathul  F,    Liman  L. 2023.  Pengaruh  pengolahan  kimia  dan biologis  pada  kelobot  jagung  terhadap kandungan  ADF  dan  NDF. Jurnal  Riset dan  Inovasi  Peternakan 7(2):  244–250 https://doi.org/10.23960/jrip.2023.7.2.244 -250
Sa’o  MT,  Foenay  TAY,    Koni  TNI.  2021.
Kandungan  nutrien  kulit  pisang  kepok (Musa  paradisiaca)  yang  difermentasi dengan  cairan  rumen  kambing. Jurnal Ilmu Peternakan Terapan 4(2): 78–83.
Sarwar  M,  Khan  MA,    Mahr-un-Nisa.  2003. Nitrogen retention and chemical composition  of  urea  treated  wheat  straw ensiled  with  organic  acids or  fermentable carbohydrates. Asian-Australasian
Journal of Animal Sciences 16(11): 1583– 1592. https://doi.org/10.5713/ajas.2003.1583 Simanjuntak  S,  Yunilas,    Tafsin  M.  2015. Fermentasi  hasil  samping  industri  dan perkebunan kelapa sawit dengan probiotik lokal  terhadap  performans  domba. Jurnal
Peternakan Integratif 4(1): 83–95. https://doi.org/10.32734/jpi.v4i1.2784
Steel,  RGD,  Torrie  JH.  1989.  Principles  and procedures  of  statistics.  Approach.  2nd ed.  Mc  Graw  Hill  International  Book Company.
Tilley  J,  Terry  R.  1963.  A  two-stage  technique for  in  vitro  digestion  of  forage  crops. Journal  of  the  British  Grassland  Society 18(1): 104–111.
https://doi.org/10.1111/j.1365- 2494.1963.tb00335.x.
Usman  Y.  2013.  Pemberian  pakan  serat  sisa tanaman  pertanian  (jerami  kacang  tanah, jerami  jagung,  pucuk  tebu)  terhadap evolusi ph, n-nh3 dan vfa di dalam rumen sapi. Jurnal  Agripet 13(2):  53–58. https://doi.org/10.17969/agripet.v13i2.821 Van  Soest  P,  Robertson  J,  Lewis  B.  1991.
Methods for dietary fiber, neutral detergent fiber, and nonstarch polysaccharides  in  relation  to  animal nutrition. Journal  of  Dairy  Science 74(10):3583-3597. https://doi.org/10.3168/jds.S0022- 0302(91)78551-2.
Yuliana  R,  Bain  A,    Napirah  A.  2022. Komposisi  kimia  kulit  kacang  tanah (Arachis  hypogea)  terfermentasi  dengan effective  microorganism  (EM-4)  dan  ragi tempe  (Rhizopus  sp.)  sebagai  bahan pakan  ternak  ruminansia. Jurnal  Ilmiah Peternakan  Halu  Oleo 4(1):  41–45. https://doi.org/https://doi.org/10.56625/jip ho.v4i1.23543
Zubaidah A, Prasetyo D, Handajani H, Rohmah SP,  Puspita DA. 2019. Screening bakteri selulolitik dan amilolitik pada rumen sapi sebagai kandidat probiotik pada budidaya ikan  secara  in  vitro. Jurnal  Riset Akuakultur 14(4): 261–271. https://doi.org/10.15578/jra.14.4.2019.261 -271 .