https ://ejour nal.uns rat.ac .id/v3/index.php/pharm ac on

## PHARMACON
ISSN (print): 2302 - 2493 ISSN (online): 2721 - 4923
Uji  Potensi  Antibakteri  Ekstrak  Spons  Stylissa  Carteri  Dari  Perairan Poopoh  Minahasa  Terhadap  Bakteri  Staphylococcus  Aureus  Dan

## Pseudomonas Aeruginosa
Chelinda Sarah Tumundo 1* , Defny Silvia Wewengkang 2 , Jumriadi 3
1,2 Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi
3 Program Studi Fisika, Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi *Corresponding author email: chelindatumundo14@gmail.com

## A R T I C L E I N F O R M A T I O N A B S T R A C T
Diterima pada 17 Juli 2023 Disetujui pada 17 Juni 2024 Dipublikasikan pada 30 Juni 2024 Hal. 529 - 539 The incidence of antibiotic resistance has an impact on the failure of treatment for infectious diseases which can lead to death. With the failure of the treatment of infection, the choice of therapy will be limited, so it is necessary to search for new compounds that have the potential as antibacterials. Indonesia has a very abundant marine biota, one of which is sponge rich in bioactive compounds that have the potential to be developed in the field of medicine, such as an  antibacterial.  This  study  aims  to  examine  the  antibacterial  potential  of Stylissa  carteri sponge extract against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa . The maceration process  uses  95%  ethanol  as  fuel.  The  results  of  macerate  are  then  evaporated  using  a temperature of 40°C. Testing the antibacterial activity using the agar diffusion method (Disc Diffusion  Kirby  Bauer  Method). The  results  showed  that  the  average  diameter  of  the inhibition  zone  measurement  of  Stylissa  carteri  sponge  extract  for Staphylococcus  aureus was 7.75 mm and for Pseudomonas aeruginosa with a value of 7.25 mm. From the results of testing  the  antibacterial  activity  of  the Stylissa  carteri sponge  extract  showed  moderate antibacterial activity against the test bacteria.
Keywords:  Stylissa carteri Sponge, Antibacterial, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa.
A B S T R A K
Kejadian resistensi antibiotik berdampak pada kegagalan pengobatan penyakit infeksi yang dapat  berujung  pada  kematian.  Dengan  adanya  kegagalan  pada  pengobatan  infeksi  maka pemilihan terapi akan terbatas, sehingga diperlukan penelusuran terhadap senyawa baru yang berpotensi  sebagai  antibakteri.  Indonesia  memiliki  biota  laut  yang  sangat  melimpah  salah satunya spons yang kaya akan senyawa bioaktif dan berpotensi dikembangkan dalam bidang pengobatan  sebagai  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  potensi  antibakteri dari ekstrak spons Stylissa carteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa .  Proses  maserasi  menggunakan  etanol  95%  sebagai  pelarut.  Hasil  maserat selanjutnya  di  evaporasi  menggunakan  suhu  40°C.  Pengujian  aktivitas  antibakteri menggunakan  metode  difusi  agar  ( Disc  Diffusion  Kirby  Bauer  Method ).  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  hasil  pengukuran  rata-rata  diameter  zona  hambat  dari  ekstrak  spons Stylissa  carteri pada  bakteri Staphylococcus  aureus adalah  7,75  mm  dan  pada  bakteri Pseudomonas  aeruginosa dengan  nilai  sebesar  7,25  mm.  Dari  hasil  pengujian  aktivitas antibakteri  ekstrak  spons Stylissa  carteri menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri  dengan kategori sedang terhadap bakteri uji.
Kata  Kunci: Spons Stylissa  carteri ,  Antibakteri ,  Staphylococcus  aureus, Pseudomonas aeruginosa.

## PENDAHULUAN
Indonesia  adalah  negara  kepulauan  terbesar  di  dunia  dengan  posisi  geografis  tepat  di  garis katulistiwa  dengan  panjang  garis  pantai  yakni  99.093  km 2 menjadikan  wilayah  Indonesia  sebagai negara  maritim  dengan  sumber  daya  alam  hayati  laut  yang  tinggi  (Badan  Informasi  Geospasial, 2015).  Luasnya  wilayah  laut  berhubungan  dengan  melimpahnya  biota  laut  yang  di  dalamnya terkandung  berbagai  senyawa  bioaktif  seperti  spons, coelenterata , echinodermata ,  moluska,  alga dan lain-lain (Hu et al ., 2011).
Spons  ( Sponge )  merupakan  organisme  laut  yang  berasal  dari  filum  porifera  juga  merupakan invertebrate laut yang menempati ekosistem terumbu karang sebagai tempat hidupnya. Kandungan senyawa bioaktif dari biota laut diketahui memiliki presentase yang lebih tinggi bila dibandingkan dengan  senyawa-senyawa  yang  terkandung  pada  tumbuhan  darat.  Beberapa  metabolit  sekunder yang  terkandung  dalam  spons  yakni    alkaloid,  tanin,  steroid,  saponin  dan  flavonoid.  Senyawa- senyawa  tersebut  diketahui  berperan  dalam  aktivitas  farmakologis  seperti  antitumor,  antioksidan, antibakteri, antijamur, antivirus dan antiinflamasi (Rhandour et al ., 2016).
Antibakteri  sangat  diperlukan  dalam  pengobatan  penyakit  infeksi  yang  disebabkan mikroorganisme  seperti  bakteri.  Contoh  bakteri  yang  dapat  menyebabkan  infeksi  diantaranya Staphylococus  aureus yang  merupakan  flora  normal  pada  tubuh  manusia  namun  dapat menyebabkan  penyakit  infeksi. Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri  Gram  positif  sebagai salah  satu  patogen  oportunistik  yang  dapat  menyebabkan  infeksi  ringan  pada  kulit,  keracunan makanan  sampai  dengan  infeksi  sistemik  dan bacteremia bisa  berujung  pada  kematian  jika  tidak diobati  dengan  benar  (Nagendra-Prasad et  al .,  2019).  Bakteri Pseudomonas  aeruginosa tergolong dalam bakteri Gram negatif dapat menyebabkan infeksi pada manusia dengan penurunan imunitas dan merupakan patogen nosokomial seperti infeksi pada luka    (Soedarto, 2015).
Infeksi  mikroorganisme  seperti  bakteri  dan  virus  telah  menjadi  satu  dari  sepuluh  penyebab kematian  tertinggi  di  dunia.  Indonesia  menjadi  negara  dengan  tingkat  infeksi  bakteri  yang  tinggi dibandingkan  negara  lain  di  Asia  (WHO,  2020).  Pengobatan  untuk  penyakit  infeksi  yakni  dengan obat antibiotik sebagai salah satu obat yang banyak beredar di masyarakat. Hanya saja penggunaan obat  yang  kurang  tepat  (irasional)  seperti  digunakan  terlalu  singkat,  dosis  yang  terlalu  rendah, diagnosa awal salah, serta penggunaan antibiotik tanpa resep hal ini dapat menjadi faktor timbulnya masalah seperti kejadian resistensi (Putra et al., 2015). Resistensi adalah suatu keadaan yang terjadi ketika  antibiotik  tidak  lagi  efektif  dalam  membunuh  bakteri  patogen  dalam  tubuh.  Kejadian resistensi  berdampak  pada  kegagalan  pengobatan  penyakit  infeksi  yang  dapat  berujung  pada kematian. Kegagalan pengobatan mengakibatkan terbatasnya penggunaan obat antibakteri yang ada, sehingga diperlukan penelusuran terhadap senyawa-senyawa yang berpotensi memberikan aktivitas antibakteri.
Spons Stylissa carteri diketahui memilliki beberapa metabolit sekunder seperti alkaloid, steroid dan terpenoid (Gozcelioglu dan Konuklugil, 2012). Dari beberapa penelitian tentang spons Stylissa carteri ,  diketahui  spons  ini  memiliki  aktivitas  antimikroba  yakni  pada  bakteri Staphylococcus aureus , Escherichia  coli , Bacillus  megaterium  DSM32T ,  dan  pada  jamur Candida  albicans (Watupongoh et  al .,  2019;  Palungan et  al .,  2019).  Biota  laut  dapat  dikembangkan  sebagai antibakteri alami karena adanya kandungan metabolit sekunder. Penggunaan obat-obatan alami juga diketahui dapat memiliki efek samping yang lebih kecil jika dibandingkan dengan obat yang dibuat
dari  bahan  sintetik  (Losung et  al .,  2022).  Oleh  karena  itu  peneliti  semakin  tertarik  untuk mengeksplor  bahan  alam  seperti  spons Stylissa  carteri untuk  dikembangkan  dalam  bidang pengobatan sebagai obat antibakteri baru.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  bersifat  eksperimental  laboratorium  dengan  melakukan  pengujian  potensi antibakteri  dari  komponen  terekstrak  dalam  spons Stylissa  carteri yang  diperoleh  dari  perairan Poopoh Minahasa terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa .

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  November  2022  sampai  Mei 2023  di  Laboratorium Farmakognosi  dan  Fitokimia,  Laboratorium  Mikrobiologi  Program  Studi  Farmasi  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, dan Laboratorium Hama dan Penyakit Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Sam Ratulangi.

## Alat dan Bahan
a. Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah Self-Contained  Underwater  Breathing Apparatus (SCUBA), cool  box ,  plastik zipper  lock  bag , handscoon ,  talenan,  gunting,  pisau,  botol air  mineral  kemasan  ukuran  600  mL,  kertas  label,  spidol  permanen,  masker,  jas  lab, rotary evaporator , erlenmeyer, spatula, pot salep, lemari pendingin, gelas ukur, gelas kimia, tabung reaksi, rak tabung reaksi, magnetic stirrer , timbangan analitik, Laminar air flow (LAF), autoklaf (autoklaf KT-30s),  cawan  petri,  pinset,  pembakar  spritus,  mikropipet,  pipet  tetes,  jarum  ose,  microtube, vortex, batang pengaduk, magnetic stirrer, inkubator, dan jangka sorong.
b. Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  Spons Stylissa  carteri ,  bakteri  uji Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa , aquades, ethanol, methanol, natrium klorida, pepton,  nutrient  agar,  ekstrak  daging  ( beef  extract ),  kertas  pH,  kertas  cakram  ( blank  paper  disc ), kertas cakram kloramfenikol ( cloramphenicol paper disc ), alumunium foil, kertas saring, kapas dan tisu.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Pengambilan  sampel  spons Stylissa  carteri dilakukan  di  perairan  pantai  Desa  Poopoh, Kecamatan  Tombariri,  Kabupaten  Minahasa  dengan  menggunakan  peralatan  selam  yakni Self- Contained  Underwater  Breathing  Apparatus (SCUBA).  Sampel  yang  didapatkan  dimasukkan  ke dalam plastik zipper lock bag dan dimasukkan ke dalam cool box . Sampel yang diperoleh dibawah ke Laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia Program Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi. Sampel diambil dokumentasi berupa foto, diberikan label sampel untuk selanjutnya dideterminasi.

## Ekstraksi sampel
Spons Stylissa carteri dibuat menjadi ekstrak dengan metode maserasi. Sampel di sortasi basah dan dipotong kecil-kecil dengan ukuran 1 cm 2 dimasukkan ke dalam wadah botol kemasan 600 ml, kemudian direndam dengan menggunakan pelarut etanol 95% hingga seluruh sampel terendam dan didiamkan  selama  24  jam.  Setelah  perendaman  selesai  sampel  disaring  dengan  kertas  saring sehingga  menghasilkan  filtrat  1  dan  debris  1.  Debris  1  kemudian  diremaserasi  selama  24  jam dengan  menggunakan  pelarut  etanol  sampai  terendam  semuanya,  kemudian  sampel  tersebut disaring  menggunakan  kertas  saring  menghasilkan  filtrat  2  dan  debris  2.  Pada  debris  2  dilakukan remaserasi  dengan  pelarut  etanol  sampai  terendam  semuanya  dan  dibiarkan  selama  24  jam, kemudian  sampel  disaring  menggunakan  kertas  saring  menghasilkan  filtrat  3  dan  debris  3.  Hasil maserasi  spons Stylissa  carteri yakni  filtrat  1,  2,  dan  3  dicampur  menjadi  satu  kemudian dimasukkan pada alat rotary evaporator untuk memperoleh larutan cair pekat. Evaporasi pada suhu 40°C  hingga  ekstrak  menjadi  kering  dan  selanjutnya  ditimbang  menggunakan  timbangan  analitik (Silap, 2020).

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  akan  digunakan  dalam  penelitian  disterilkan  terlebih  dahulu.  Alat-alat  gelas disterilisasi  pada  autoklaf  dengan  suhu  121˚C  selama  15  menit,  alat  pinset  disterilisasi  dengan pembakaran  di  atas  api  langsung  dan  media  disterilkan  di  autoklaf  pada  suhu  121˚C  selama  15 menit (Ortez,2005).

## Pembuatan Media Cair
Pepton 0,5 g, ekstrak daging ( meat extract ) 0,3 g, natrium klorida 0,3 g, dan aquades sebanyak 100  mL  diaduk  sampai  rata  kemudian  dibuat  homogen  menggunakan magnetic  stirrer lalu diautoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit, ukur pH dengan menggunakan kertas pH. Dipipet 1 mL media cair, kemudian masukkan dalam tabung reaksi dan tutup dengan aluminium foil. Media cair siap digunakan sebagai media kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri
Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa digunakan  sebagai  bakteri  uji.  Masing- masing    bakteri  dipipet  sebanyak  1000  μL  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang berisi  media  cair  sebanyak  1  ml.  Setiap  tabung  reaksi  ditutup  dengan  aluminium  foil  dan dimasukkan ke dalam inkubator selama 1x24 jam pada suhu 37 ˚C (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Positif dan Negatif
Kontrol  positif  yang  digunakan  dalam  pengujian  antibakteri  yakni  kloramfenikol paper  disc . Kontrol negatif yang digunakan yaitu pelarut metanol, dengan cara membuat larutan stok metanol dengan  mengambil  sebanyak  100  μL  metanol  kemudian  ditotolkan  pada  kertas  cakram  (Silap, 2020).

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan uji dibuat dengan cara  2 mg ekstrak kasar spons Stylissa carteri kemudian dilarutkan dalam 400 μL metanol sehingga menghasilkan konsentrasi larutan uji sebesar 250 μg/50 μL. (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar
Pepton 0,5 g, ekstrak daging ( meat extract ) 0,3 g, natrium klorida 0,3 g, agar 1,5 g dan aquades sebanyak  250  mL  diaduk  sampai  rata  kemudian  dibuat  homogen  kemudian  diautoklaf  pada  suhu 121 ˚C selama 15 menit. Media agar siap digunakan untuk uji aktivitas antibakteri (Silap, 2020).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode yang digunakan dalam penelitian ini yaitu metode difusi agar ( disc diffusion Kirby and Bauer ). Kertas cakram ( paper disc ) yang digunakan berukuran 6 mm dengan daya serap 50 μL tiap cakram. Sampel yang telah ditentukan konsentrasinya 250 μg/50 μL ditotolkan pada masing-masing cakram dengan mikropipet. Media agar yang di autoklaf pada suhu 121 °C dalam waktu 15 menit, di dinginkan hingga suhu 40°C. Sebanyak 100 μL bakteri yang telah dikultur dalam tabung reaksi, dipipet  dan  diinokulasi  pada  media  agar  lalu  diaduk  hingga  homogen.  Kemudian  pada  masing- masing  cawan  petri  dituangkan  sebanyak  30  ml  media  agar  dan  tunggu  sampai  media  agar mengeras. Setelah media agar mengeras, kertas cakram yang telah ditotolkan sampel spons Stylissa carteri ,  kontrol  positif,  kontrol  negatif  diletakkan  ke  dalam  cawan  petri  dengan  menggunakan pinset.  Selanjutnya masing-masing  cawan  petri  diberi  label  lalu  diinkubasi  selama  1x24  jam  pada suhu 37˚C (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Diameter Zona Bening
Pengamatan  aktivitas  antibakteri  dilakukan  setelah  1x24  jam  masa  inkubasi.  Daerah  zona bening  yang  terlihat  di  sekitar  kertas  cakram  menunjukkan  kepekaan  bakteri  terhadap  antibiotik. Pengukuran diameter zona bening dengan mistar berskala dengan cara diukur diameter zona bening horizontal  ditambahkan  dengan  diameter  zona  bening  vertikal  lalu  dibagi  dua.  Kemudian  zona bening yang telah diukur dikategorikan berdasarkan pedoman Davis dan Stout yakni untuk diameter ≤  5  mm  memiliki  kekuatan  daya  hambat  lemah,  5-10  mm  daya  hambat  sedang,  10-20  mm  daya hambat kuat dan ≥20 mm daya hambat sangat kuat (Davis and Stout, 1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi Spons Stylissa carteri
Sampel  spons Stylissa  carteri yang  telah  diambil  dari  perairan  Poopoh  Minahasa  dibersihkan dan  dipotong  kecil-kecil  setelah  itu  dimasukkan  ke  dalam  wadah.  Sampel  dipotong  kecil-kecil dimaksudkan  untuk  memperluas  ukuran  permukaan  sampel  yang  berinteraksi  dengan  pelarut sehingga  akan  semakin  banyak  senyawa  aktif  yang  dapat  terlarut  dalam  pelarut  (Oeiyano et  al ., 2019).
Sampel spons Stylissa carteri kemudian diekstraksi dengan menggunakan metode cara dingin yaitu  maserasi.  Pemilihan  metode  maserasi  dikarenakan  cara  pengerjaannya  yang  sederhana,  alat
mudah  untuk  di  dapat,  tidak  diperlukan  alat  khusus,  biaya  operasionalnya  yang  rendah.  Menurut Sarker  (2006),  metode  maserasi  tidak  akan  terjadi  degradasi  senyawa  termolabil  karena  proses ekstraksi  dilakukan  pada  suhu  ruangan.  Metode  maserasi  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini merupakan  metode  ekstraksi  dengan  cara  merendam  sampel  pada  pelarut  yang  sesuai  dengan senyawa  aktif  yang  akan  diambil  tanpa  terdapat  proses  pemanasan.  Pada  saat  proses  perendaman sampel, dinding sel akan pecah dikarenakan adanya keadaan  tekanan antara luar sel dengan bagian dalam sel yang berbeda sehingga metabolit sekunder yang berada pada sitoplasma akan pecah dan melarut pada pelarut organik yang digunakan (Chairunnisa et al ., 2019).
Pelarut  yang  digunakan  untuk  penyarian  zat  aktif  pada  sampel  spons Stylissa  carteri adalah etanol  95%.  Pertimbangan  penggunaan  etanol  sebagai  larutan  penyari  yaitu  bersifat  universal, selektif, tidak toksik dan ekonomis. Selain itu bahan pengganggu yang turut terlarut dalam larutan penyari hanya dalam skala kecil (Oeiyano et al ., 2019). Proses maserasi sampel dilakukan 3x24 jam dan  setiap  1x24  jam  ekstrak  yang  diperoleh  disaring  untuk  dilakukan  maserasi  kembali  bersama pelarut  yang  baru  hal  tersebut  dikenal  dengan  remaserasi.  Proses  remaserasi  ditujukan  agar  dapat mengoptimalkan  penarikan  senyawa  aktif  yang  masih  terkandung  dalam  sampel  (Huliselan et  al. , 2015).
Hasil  maserasi  spons Stylissa  carteri dengan  etanol  dievaporasi  menggunakan Rotary evaporator untuk menguapkan pelarut agar tersisa ekstrak kasar yang memiliki konsentrasi tinggi. Suhu  40°C  pada  tahap  evaporasi  bertujuan  untuk  menghindari  kerusakan  senyawa  bioaktif  yang terkandung dalam filtrat yang dapat rusak apabila digunakan suhu yang terlalu tinggi  (Aditya et al ., 2016).  Hasil  rendemen  ekstrak  dari  sampel  spons Stylissa  carteri setelah  dievaporasi  tercantum dalam tabel berikut:
Tabel 1. Rendemen Ekstrak Spons Stylissa carteri No. Sampel Massa Ekstrak (g) Rendemen (%) Warna Sampel 1. Ekstrak Etanol 20 12,26 Orange Pekat

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  spons Stylissa  carteri dengan  metode  difusi  agar dilakukan  pada  bakteri Staphylococcus  aureus yang  mewakili  Gram-positif  dan Pseudomonas aeruginosa mewakili  Gram-negatif.  Penggunaan  bakteri  ini  dimaksudkan  untuk  mengetahui spektrum  aktivitas  antibakteri  spons Stylissa  carteri tergolong  dalam  spektrum  luas  yang  dapat membunuh  beberapa  spesies  bakteri  atau  spektrum  sempit  yakni  membunuh  hanya  salah  satu bakteri  (Tunggali et  al. ,  2019).  Pemilihan  metode  difusi  agar  pada  pengujian  antibakteri  karena cepat pada pengerjaannya, relatif  murah serta tidak ada alat khusus  yang digunakan, metode yang cocok  dengan  sampel  karena  berupa  ekstrak  cair  karena  terdapat  proses  penjenuhan  sampel  di dalam  kertas  cakram  sehingga  zona  hambat  yang  terbentuk  lebih  mudah  dilakukan  pengukuran. Prinsip  dari  metode  difusi  agar  yakni  bahan  antibakteri  yang  terkandung  di  dalam  paper  disk berukuran  6  mm,  selanjutnya  diletakkan  pada  media  padat  yang  berbentuk  lempengan,  dimana media tersebut telah tercampur dengan bakteri uji (Katrin et al ., 2015).
Pada  pengujian  ini  digunakan  dua  kontrol  sebagai  pembanding.  Kontrol  positif  yaitu kloramfenikol  ( paper  disc )  sebagai  antibiotik  bakteriostatik  yang  memiliki  spektrum  kerja  luas terhadap  mikroorganisme  aerobik  dan  anaerobik,  bakteri  gram  positif  maupun  konntrol  negatif.
Pada  kontrol  negatif  digunakan  metanol  untuk  mengetahui  ada  atau  tidaknya  pengaruh  pelarut terhadap pertumbuhan mikroba uji (Mengko et al ., 2022).
Hasil  yang  didapatkan  pada  pengujian  ini  dilihat  dari  diameter  zona  hambat  di  sekitar  kertas cakram yang dapat teramati setelah media diinkubasi selama 1 x 24 jam, disimpan pada inkubator dengan suhu 37 ºC dengan 3 kali pengulangan untuk masing-masing bakteri terhadap ekstrak etanol spons Stylissa  carteri .  Hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat  ekstrak  spons Stylissa  carteri terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Aktivitas Antibakteri dari Spons Stylissa carteri terhadap pertumbuhan bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus Bakteri Ulangan (mm) Kontrol (mm) ( + ) ( − ) P. aeruginosa
I 7,00 11,25  II
7,75 III 7,00 Ʃ
21,75 X
7,25 S. aureus
I 7,00 11,75  II
8,50
III 7,75 Ʃ 23,25 X
7,75
a. Staphylococus aureus
b. Pseudomonas aeruginosa
Gambar 1. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak Spons Stylissa carteri Keterangan : ( S.A) Staphylococus aureus , (P.A) Pseudomonas aeruginosa , (U1) Ulangan
Pertama,  (U2)  Ulangan
Kedua, (U3) Ulangan Ketiga, (+) Kontrol Positif  Kloramfenikol, (-) Kontrol Negatif Metanol
Menurut  Davis  dan  Stout  (1971),  kriteria  kekuatan  daya  antibakteri  sebagai  berikut:  diameter zona hambat 5 mm atau kurang dikategorikan lemah, zona hambat 5-10 mm dikategorikan sedang, zona hambat 10-20 mm dikategorikan kuat dan zona hambat 20 mm atau lebih dikategorikan sangat kuat.
Berdasarkan hasil pengamatan yang dilakukan dapat dilihat bahwa ekstrak Stylissa carteri yang diperoleh  di  perairan  Poopoh  Minahasa  memberikan  daya  hambat  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa .  Ukuran  zona  bening  yang  diperoleh  pada bakteri Pseudomonas aeruginosa yakni 7 mm pada ulangan pertama, 7,75 mm pada ulangan kedua,
dan 7 mm pada ulangan ketiga. Hasil pengukuran rata-rata diameter zona hambat 7,25 mm sehingga termasuk  dalam  kategori  sedang.  Pada  bakteri Staphylococcus  aureus menunjukkan  zona  bening yang terbentuk yakni 7 mm pada ulangan pertama, 8,5 mm pada ulangan kedua, dan 7,75  mm pada ulangan  ketiga.  Dengan  nilai  rata-rata  zona  hambat  7,75  mm  menunjukkan  aktivitas  antibakteri kategori sedang.
Kontrol  negatif  yang  terbuat  dari  metanol  tidak  memperlihatkan  adanya  aktivitas  dan menunjukkan perbedaan yang nyata terhadap kontrol positif. Hal tersebut sesuai dengan penelitian sebelumnya  oleh  Yordan  (2022), yang  menyatakan  bahwa  kontrol  negatif  metanol  pada  uji antibakteri  tidak  menunjukkan  adanya  aktivitas  dengan  nilai  diameter  0,00  mm  sehingga  dapat dipastikan  bahwa  metanol  sebagai  pelarut  sampel tidak  berpengaruh terhadap  aktivitas  antibakteri yang terbentuk pada media. Berbeda dengan kontrol positif kloramfenikol memperlihatkan aktivitas yang cukup jauh berbeda dengan sampel uji yakni ekstrak Stylissa carteri maupun kontrol negatif. Hasil  daya  hambat  tergolong  kuat  pada  kedua  bakteri  dimana  untuk Pseudomonas  aeruginosa adalah 11,25 mm, sedangkan pada Staphylococcus aureus adalah 11,75 mm.
Aktivitas ekstrak etanol dari spons Stylissa carteri memiliki daya hambat yang lebih peka pada Staphylococcus  aureus dibandingkan Pseudomonas  aeruginosa .  Menurut  Hamidah  (2019),  daya hambat yang diperoleh dapat dipengaruhi oleh jumlah dari bakteri yang terdapat pada media, suhu, waktu, pH, dan zat atau bahan organik asing terlarut yang dapat menurunkan keefektifan zat kimia antibakteri.  Selain  itu  sensitivitas  bakteri  terhadap  antibakteri  dapat  dipengaruhi  dengan  susunan struktur  dinding  sel  bakteri.  Kemampuan  dari  bakteri  untuk  melawan  agen  lisosim  ataupun antibakteri akan bergantung pada ketebalan serta komposisi dinding sel dari bakteri.
Perbedaan  utama  dari  bakteri  gram  positif S.  aureus dan  gram  negatif P.  aeruginosa adalah bakteri  gram  positif  memiliki  dinding  peptidoglikan  yang  tebal,  lebih  toleran  terhadap  tekanan osmotik  yang  tinggi,  sedangkan  bakteri  gram  negatif  mempunyai  3  lapisan  pembungkus  sel  yang terdiri dari lapisan peptidoglikan yang tipis diantara membran luar dan membran dalam. Membran luar  merupakan  lapisan  yang  kaya  akan  lipopolisakarida  atau  lipid  yang  dapat  memberikan perlindungan (Johnston et al. , 2018).
Hasil  yang  diperoleh  pada  pengujian  didapatkan  adanya  perbedaan  nilai  daya  hambat  pada bakteri P. aeruginosa dimana nilai yang diperoleh lebih rendah dibandingkan dengan S.aureus . Hal ini terjadi karena P.aeruginosa diketahui memiliki daya survive yang kuat terhadap lingkungan fisik dan  bahan  kimia  karena  dapat  memproduksi  EPS  (eksopolisakarida)  berupa  alginat  berbentuk  gel kental di sekitar bakteri. Dengan adanya alginat bakteri dapat membentuk biofilm, yaitu kumpulan koloni  sel-sel  bakteri  yang menempel  pada  suatu  permukaan  (Mayasari,  2006).  Menurut  Johnston (2018), kemampuan bakteri dalam membentuk biofilm ekstraseluler dapat menjadi pelindung fisik dan meningkatkan resistensi dari bakteri gram negatif terhadap lisosim dan agen antibakteri lain.
Menurut  Ajizah  (2004),  adanya  perbedaan  aktivitas  hambatan  bakteri  dapat  pula  dipengaruhi oleh  kandungan  metabolit  sekunder  dan  konsentrasi  yang  tersaring.  Dari  berbagai  penelitian, diketahui  bahwa  spons Stylissa  carteri memilki  beberapa  metabolit  sekunder  seperti  alkaloid, steroid,  dan  terpenoid  (Gozcelioglu  dan  Konuklugil,  2012).  Mekanisme  penghambatan pertumbuhan  bakteri  oleh  golongan  senyawa  fitokimia  memiliki  aktivitas  yang  berbeda-beda. Mekanisme  kerja  dari  alkaloid  yakni  dengan  menghambat  enzim  topoisomerase  dan  interkelator DNA. Mekanisme lain dari alkaloid yakni menghambat sintesis dinding sel bakteri yakni penyusun
peptidoglikan  sehingga  sel  bakteri  menjadi  lisis  (Ningsih et  al., 2016).  Mekanisme  kerja  pada steroid  yakni  berinteraksi  dengan  fosfolipid  yang  memiliki  sifat  permeabel  terhadap  senyawa- senyawa  lipofilik  sehingga  akan  terjadi  kerusakan  pada  membran  lipid  yang  menyebabkan pecahnya liposom dan mengakibatkan sel bakteri menjadi rapuh dan lisis (Manu, 2013). Senyawa terpenoid sebagai senyawa antibakteri bekerja dengan merusak porin (protein transmembran) pada membran  luar  dinding  sel  bakteri.  Kerusakan  porin  akan  mengurangi  permeabilitas  dinding  sel bakteri  sehingga  sel  akan  kekurangan  nutrisi,  pertumbuhan  bakteri  terhambat  atau  bahkan  mati (Rachmawati et al., 2012).
Berdasarkan  penelitian  ini,  ekstrak  etanol  spons Stylissa  carteri memiliki  akitvitas  antibakteri yang  termasuk  dalam  kategori  sedang.  Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Watupongoh  (2019), sampel yang diambil dari perairan Selat Lembeh Bitung diketahui dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dengan kategori sedang (8,14 mm). Dibandingkan dengan penelitian oleh Tompunu (2022), sampel yang berasal dari perairan Teluk Manado tidak menunjukkan adanya aktivitas  antibakteri  (0,00  mm).  Pada  setiap  perairan  diperoleh  hasil  diameter  zona  hambat  yang berbeda-beda, hal ini disebabkan oleh faktor fisik perairan ( physical oceanography ) yang meliputi arus,  kedalaman,  suhu  air,  salinitas,  pH,  kekeruhan,  dan  kecerahan.  Dengan  adanya  perbedaan lingkungan tempat tumbuh sampel, maka dapat mempengaruhi kepadatan spons dan keseimbangan jumlah komposisi atau metabolit sekunder yang terkandung dalam spons (Haedar et al ., 2016).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  spons Stylissa carteri yang  diperoleh  dari  perairan  Poopoh  Minahasa  memiliki  aktivitas  untuk  menghambat bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa .  Pengujian  pada  bakteri Staphylococcus aureus diperoleh nilai rata-rata diameter zona hambat 7,75 mm yang dikategorikan sedang.  Sedangkan  pada  bakteri Pseudomonas  aeruginosa menunjukkan  rata-rata  diameter  zona hambat yaitu 7,25 mm sehingga memiliki aktivitas antibakteri dengan kategori sedang.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan  maka  disarankan  untuk  melakukan  penelitian  lebih  lanjut tentang  uji  potensi  aktivitas  antibakteri  spons Stylissa  carteri dengan  melanjutkan  pada  tahap fraksinasi.  Selain  itu  perlu  adanya  pengembangan  metode  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa spesifik yang berkhasiat sebagai antibakteri pada spons Stylissa carteri dan aktivitas antibakterinya terhadap bakteri patogen lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Aditya, A., A. Trianto & Santoso, A. 2016. Eksplorasi Jamur Simbion Pada Spons Demospongiae yang  Dikoleksi  dari  Perairan  Kupang  Penghasil  Bahan  Antimikroba  Multidrug  Resistent (MDR). Jurnal ilmu Kelautan . Universitas Diponegoro, 5 : 511-518.
Ajizah, A. 2004. Sensitivitas Salmonella typhimurium Terhadap Ekstrak Daun Psidium guajava L.
Biosccientiae . 1(1) : 31-38
Chairunnisa  S.,  Wartini  NM.,  Suhendra,  L.  2019.  Pengaruh  Suhu  Dan  Waktu  Maserasi  Terhadap Karakteristik  Ekstrak  Daun  Bidara  ( Ziziphus  mauritiana L.)  Sebagai  Sumber  Saponin. J urnal Rekayasa dan Manajemen Argoindustri , 7(4) :551-560.
Davis,  W.  W.,  T.R.  Stout.  1971.  Disc  plate  method  of  microbiological  assay. Journal  of microbiology , 22 : 659-665.
Gozcelioglu, B., Konuklugil, B., 2012, Qualitative Detection of Some Secondary Metabolites from Three Turkish Marine Sponges, Fabad J. Pharm . Sci., 37 : 73-78.
Haedar.,  Sadarun,  B.,  Palupi,  R.  D.  2016.  Potensi  Keanekaragaman  Jenis  dan  Sebaran  Spons  di Perairan Pulai Saponda Laut Kabupaten Konawe. Jurnal Sapa Laut , Universitas Halu Oleo, 1(1) : 1-9.
Hamidah, M. N., Rianingsih, L., Romadhon. 2019. Aktivitas Antibakteri Isolat Bakteri Asam Laktat Dari  Peda  Dengan  Jenis  Ikan  Berbeda  Terhadap E.  coli Dan S.  aureus . Jurnal  Ilmu  dan Teknologi Perikanan , 2(1) :11-21
Hu,  G.P.,  J.  Yuan,  L.  Sun,  Z.G.  She,  J.H.  Wu,  X.J.  Lan,  X.  Zhu,  Y.C.  Lin  dan  S.P.  Chen.  2011. Statistical  research  on  marine  natural  products  based  on  data  obtained  between  1985  and 2008. Marine Drugs, 9 , 514-525.
Huliselan,  Y.  M.,  M.  R.  J.  Runtuwene.,  D.  S.  Wewengkang.  2015.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol, Etil Asetat dan N-Heksan dari Daun Sesewanua ( Clerodendronsquamat um Vahl.). Jurnal Pharmacon Universitas Sam Ratulangi, 4 (3) : 155- 163.
Johnston M, McBride M, Dahiya F, Owusu-Apenten R, Singh Nigam P. 2018. Antibacterial activity of manuka honey and its components: An overview. AIMS Microbiol, 4(4) :655-64.
Katrin,  D.,  Idiawati,  N.  and  Sitorus,  B.,  2015.  Uji  Aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  daun  malek (Litsea graciae Vidal) terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Jurnal Kimia Khatulistiwa , 4(1) :7-12.
Losung, G., Losung, F., Lintang, R. A. J., Tilaar, S. O., Wullur, S.,  Manoppo, H.  2022. Aktivitas Antibakteri  Dari  Spons  Asal  Perairan  Pulau  Bantong,  Bolaang  Mongondow  Timur. Jurnal Pesisir dan Laut Tropis , Universitas Sam Ratulangi Manado, 1(10) :81-88.
Manu,  R.R.S.  2013.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Beluntas  (Pluchea  indica  L.) terhadap Staphylococcus  aureus , Bacillus  subtilis dan Pseudomonas  aeruginosa . Jurnal Ilmiah Mahasiswa, Universitas Surabaya. 1(2) : 1–10.
Mayasari,  E.  2006. Pseudomonas  aeuginosa :  Karakteristik,  Infeksi  dan  Penanganan.  Medan: Repository Universitas Sumatera Utara. 1-16. USU Repository .
Mengko,  K.  R.,Wewengkang,  D.,  Rumondor,  E.  2022.  Uji  Aktivitas  Ekstrak  Etanol  Spons Theonella  Swinhoei Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  coli Dan Staphylococus aureus . Jurnal Pharmacon , Universitas Sam Ratulangi, 1(11) : 1231-1236.
Nagendra-Prasad, H. S., Manukumar, H. M., Karthik, C. S., Mallesha, L., Mallu, P. 2019. A novel copper  (II)  PAmPiCaT  complex  (cPAmPiCaTc)  as  a  biologically  potent  candidate:  A contraption  evidence  against  methicillin-resistant Staphylococcus  aureus (MRSA)  and  a molecular docking proof. Bioorganic and Medicinal Chemistry , 27(5) : 841-850.
Ningsih, Dian R., Zusfahair dan Dwi Kartika. 2016. Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder serta Uji  Aktivitas  Ekstrak  Daun  Sirsak  sebagai  Antibakteri.  Molekul. Jurnal  Molekul , Universitas Jenderal Soedirman; 1(11) : 101-111.
Oeiyano, W. E., Simbala, H .E., Rotinsulu, H. 2019. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak dan Fraksi Spons Liosina  Paradoxa dari  Perairan  Desa  Tumbak  Minahasa  Tenggara Terhadap Pertumbuhan  Mikroba Staphylococcus  Aureus,  Escherichia  Coli, Dan Candida  Albicans. Jurnal Pharmacon , Universitas Sam Ratulangi, 3(8) :629-638.
Ortez, J. H. 2005. Disk Diffusion testing in manual of antimicrobial susceptibility testing. Marie B. Coyle (Coord. Ed). American society for Microbiology: America.
Palungan, I., Robert, A. Bara, Remy, E. P. Mangindaan, Kurniati Kemer, Stenly Wullur, Unstain, N.  W.  Rembet.  2019.  Aktivitas  Antibakteri  Spons Stylissa  carteri dari  Teluk  Manado, Sulawesi Utara. Jurnal Ilmiah Platax ,, Universitas Sam Ratulangi Manado, 1(10) :16-17.
Putra,  D.P.,  Kusmiati,  T.  2015.  Manajemen    pemberian  antibiotik  dengan  hasil  uji  kepekaan resisten. Jurnal Respirasi , 1(1) :7-14.
Rachmawati. F., Maulita Cut N., Sumantri. 2012.  Uji aktivitas antibakteri fraksi kloroform ekstrak etanol pegagan ( Cantella asiatica (L) Urb) serta identifikasi senyawa aktifnya. Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik . Unwahas.
Rhandour,  Z.,  M.  Tarbaoui,  M.  Oumam,  B.  El-Amraoui,  A.  Bennamara  &  A.  Abourriche.  2016. Extraction  and  recovery  of  bioactive  metabolites  from  marine  sponge  “ Ircinia  spinulosa ”. World Journal of Innovative Research , 1(2) :9-13.
Sarker,  S.D.,  Z.  Latif  dan  A.I.  Gray.  2006.  Natural  products  isolation.  Totowa,  New  Jersey:
Humana Press.
Silap. 2020. Uji Aktivitas Antimikroba Karang Lunak Dendronephtya Sp.,yang Dikoleksi dari Desa Tumbak  Kecamatan  Pusomaen,  Kabupaten  Minahasa  Tenggara  terhadap Escherichia  Coli , Staphylococcus  Aureus ,  dan Candida  Albicans . Jurnal  Pharmacon Universitas  Sam Ratulangi, 9(1) : 64-65.
Soedarto. 2015. Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta: Sagung Seto.
Tompunu, V. F., Wewengkang, D., Rumondor, M. E. 2022. Potensi Antibakteri Ekstrak dan Fraksi dari Organisme Laut Stylissa carteri Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus dan Eschrichia coli . Jurnal Pharmacon , Universitas Sam Ratulangi, 1 ( 11 ): 1262.
Tunggali SN., Simbala H., Rotinsulu H. 2019. Uji Daya Hambat Ekstrak Dan Fraksi Spons Aaptos aaptos Terhadap  Pertumbuhan Escherichia  coli, dan Staphylococcus  aureus.  Jurnal Pharmacon, Universitas Sam Ratulangi, 1(8): 168–177.
Watupongoh,  C.C.A.,  Wewengkang,  D.,  Rotinsulu,  H.  2019.  Aktivitas  Antimikroba  dari  Ekstrak dan  Fraksi  Organisme  Laut  Spons Stylissa  carteri yang  Dikoleksi  dari  Perairan  Selat Lembeh Kota Bitung. Jurnal Pharmacon , Universitas Sam Ratulangi, 3(8) :664-666.
WHO. 2020. World health statistics 2020: monitoring health for the SDGs, sustainable development goals. Geneva: World Health Organization.
Yordan,  G.,  Wewengkang,  D.,  Antasionasti,  I.  2022.  Ekstrak  Dan  Fraksi  Spons Stylissa  Carteri Dari  Perairan  Pulau  Manado  Tua:  AktivitasnyaTerhdap  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus  aureus Dan Escherichia  coli . Jurnal  Pharmacon ,  Universitas  Sam Ratulangi, 3(11) :1629-1636.