Efek Hepatoprotektor Air Kelapa ( Cocos nucifera L. ) dan Asam Folat terhadap Gambaran Histopatologi Hati Tikus Wistar Betina Hamil ( Rattus norvegicus ) yang Diinduksi Karbamat
Hepatoprotector Effect of Coconut Water (Cocos nucifera L.) and Folic Acid to the Liver Histopathology of Pregnant Wistar Female Rats (Rattus norvegicus)  Induced by Carbamate
Muhammad Rosyid Ridho 1 , Aris Prasetyo 2 , Hairrudin 3
1 Progam Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran, 2 Laboratorium Fisiologi, Fakultas Kedokteran, 3 Laboratorium Biokimia, Fakultas Kedokteran, Universitas Jember Jalan Kalimantan No. 37 Kampus Tegalboto, Jember, Indonesia 68121 Email korespondensi: rosyid.ruhama@gmail.com

## Abstrak
Karbamat  adalah  insektisida    dengan  mekanisme  kerja  menghambat  enzim asetilkolinestrase (AChE).  Ibu  hamil memiliki  perubahan  aktivitas  detoksifikasi  pada  hati  akibat  paparan  zat  xenobiotik  selama  kehamilan  yang  akan menyebabkan  peningkatan  radikal  bebas  dan  dapat  merusak  sel  hati.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  efek  hepatoprotektor  air  kelapa  dan  asam  folat  terhadap  gambaran  histopatologi  hati  tikus  wistar betina hamil yang diinduksi karbamat. Desain penelitian ini merupakan true experimental dengan rancangan post test only control group design . Jumlah sampel pada penilitian ini adalah 28 ekor tikus terbagi dalam 4 kelompok K (akuades), P1 (karbamat), P2 (karbamat dan air kelapa), dan P3 (karbamat dan asam folat).  Pada akhir penelitian hati  tikus  diambil  untuk  kemudian  menjadi  preparat  histologi.  Hasil  uji One  Way  ANOVA menunjukkan  adanya perbedaan  signifikan  antar  kelompok  yang  dibandingkan  (p  <  0,05).  Hasil  uji Post  hoc  LSD menunjukan  bahwa kelompok  P1  memiliki  gambaran  histopatologi  hati  yang  mengalami  kerusakan,  terdapat  perbedaan  signifikan dengan kelompok K dan P3 (p < 0,05), akan tetapi tidak terdapat perbedaan signifikan ketika dibandingkan dengan kelompok  P2  (p=0,826).  Sementara,  kelompok  P3  terdapat  perbedaan  signifikan  ketika  dibandingkan  dengan semua  kelompok  (p  <  0,05).  Kesimpulan  dari  penelitian  ini  yaitu  pemberian  air  kelapa  tidak  dapat  mencegah kerusakan  hati  akibat  induksi  karbamat,  sementara  asam  folat  terbukti  dapat  mencegah  kerusakan  hati  akibat induksi karbamat, ditinjau dari histopatologi hati.
Kata kunci: karbamat, air kelapa, asam folat, histopatologi hati

## Abstract
Carbamate  is  an  insecticide  with  a  working  mechanism  that  inhibits  the  enzyme  acetylcholineestrase  (AChE). Pregnant  women  have  a  change  in  detoxification  activity  in  the  liver  due  to  exposure  to  xenobiotic  substances during pregnancy which will cause an increase in free radicals and can damage liver cells. The purpose of this study was to determine the hepatoprotector effect of coconut water and folic acid on the histopathology of the liver of pregnant female wistar rats induced by carbamate. The design of this study was true experimental with a post test only control group design. The number of samples in this study were 28 rats divided into 4 groups K (aquades), P1 (carbamate), P2 (carbamate and coconut water), and P3 (carbamate and folic acid). At the end of the study the rat liver was taken to then become histological preparations. The One Way ANOVA test results showed a significant difference between groups compared (p <0.05). Post hoc LSD test results showed that group P1 had damaged liver histopathology,  there  was  a  significant  differences  with  group  K  and  P3  (p  <0.05),  but  there  was  no  significant differences when compared with group P2 (p = 0.826). Meanwhile, the P3 group had significant differences when compared with all groups (p <0.05). The conclusion of this study was that giving coconut water cannot prevent liver damage due to carbamate induction, while folic acid has been shown to prevent liver damage due to carbamate induction, from liver histopathology.
Keywords : carbamate, coconut water, folic acid, liver histopathology

## Pendahuluan
Penggunaan  pestisida  secara  berlebihan  dan  tidak terkendali  pada  lahan  pertanian  memberikan  risiko keracunan pestisida bagi petani (Runia, 2008). Kasus keracunan  pestisida  yang  terjadi  di  Indonesia  pada tahun  2016  sejumlah  771  kasus  (BPOM  RI).  World Health  Organization  (WHO)  pada  tahun  2010  yang menyatakan  bahwa,  telah  terjadi  1–5  juta  kasus keracunan pestisida  yang menimpa  para  petani dan masyarakat  daerah  sekitar  menyebabkan  kematian sebanyak  220.000  orang  setiap  tahun,  dan  telah dilaporkan sekitar 80% merupakan kasus keracunan yang  terjadi  di  negara-negara  berkembang  (Komisi Pestisida,  2014).  Korban  paparan  pestisida  juga dialami  oleh  ibu-ibu  hamil,  paparan  pestisida  pada ibu  hamil  telah  banyak  menjadi  topik  berbagai penelitian  (Winnoto  et  al,  2016),  seperti  telah dilaporkannya  keberadaan  metabolit  pestisida dalam sampel urin dari wanita hamil (Whyatt et al ., 2003) dan  laporan biomonitoring data pada wanita hamil dari 2003-2004 menemukan bahwa  lebih dari 40%  wanita  memiliki  peningkatan  metabolit insektisida  (Eskenazi et  al .,  2004).  Kerusakan  organ metabolit  seperti    hati  oleh  ibu  hamil  dapat  terjadi akibat  paparan  tersebut.  Kerusakan  hati  akibat paparan  pestisida  juga  tetap  perlu  menjadi perhatian  karena  dampaknya  akan  secara  langsung berakibat  buruk  pada  ibu  hamil  (Winnoto et  al ., 2016)
Pestisida  golongan  karbamat  adalah  pestisida  yang sering  digunakan  di  Indonesia  (Indraningsih,  2008), setelah dikeluarkannya peraturan tentang pelarangan menggunakan pestisida golongan organoklorin (MENTAN, 2001). Keracunan karbamat dapat  terjadi  melalui  inhalasi,  gastrointestinal  (oral) atau  kontak  kulit  (Gupta,  2014).  Karbamat  dapat menimbulkan  efek  toksik  melalui  hambatan  enzim asetilkolinesterase  (AChE)  pada  sinapsis  syaraf  dan myoneural  junctions  yang  bersifat  reversibel (Holovska et al ., 2014). Selain menghambat aktivitas AChE,  karbamat  juga  telah  dilaporkan  dapat menyebabkan  perubahan  fungsional  dan  histologis setelah  pajanan  jangka  panjang  dan  dosis  tinggi pada kulit, mata, hemoepoitik, ginjal, testis, dan hati (Gupta,  2014).  Karbamat  dapat  menghambat  AChE sehingga  akan  menyebabkan  pembentukan  radikal bebas  yang  berlebihan  dalam  tubuh  sehingga menimbulkan  stres  oksidatif  dan  menyebabkan peroksidasi  lipid  pada  sel-sel  tubuh,  termasuk  sel hepatosit  pada  hati.  Pemeriksaan  histopatologi  hati dapat  mendeteksi  kerusakan  organ  hati  akibat paparan bahan kimia (Colovic et al ., 2013).
Maka  dari  itu  dibutuhkan  suatu  hepatoprotektor untuk mencegah kerusakan yang lebih parah. Kelapa (Cocos nucifera L.) merupakan salah satu tumbuhan yang  mudah  dijumpai  di  daerah  tropis,  terutama Indonesia.  Masyarakat  seringkali  menggunakan  air kelapa untuk menangani keracunan akut. Salah satu kandungan  dalam  air  kelapa  adalah  tanin,  yaitu bioenzim  yang  dapat  menjadi  zat  anti  racun,  yang dapat  menguraikan  dan  mengeluarkan  racun  dari tubuh,  tanin  juga  memiliki  fungsi sebagai antioksidan  yang  dapat  menangkal  terjadinya penumpukan  Reactive  oxygen  spesies  (ROS)  yang dapat  merusak  jaringan  tubuh  (Sanctawati,  2016). Asam  folat  atau  dapat  disebut  juga  vitamin  B9 sangat  penting  untuk  berbagai  fungsi  tubuh  mulai dari  replikasi  DNA,  perbaikan,  dan  metilasi (Marsillach,  2007).  Vitamin  ini  memiliki  peran penting  terutama  pada  periode  pembelahan  dan pertumbuhan  sel  (Rohma,  2015).  Asam  folat  biasa digunakan  sebagai  obat  pada  pasien  penyakit  hati kronis  (Buckman,  2006),  sebagai  dukungan  nutrisi, seperti  diet  modifikasi  dan  suplemen  gizi  untuk pasien (Stratton dan Smith, 2006).
Pada kasus metabolisme zat kimia beracun pada ibu hamil  diketahui  terdapat  perubahan  pada  aktivitas detoksifikasi  hati,  yaitu  terjadinya  penurunan sitokrom  P450  1A2  (CYP1A2),  hal  tersebut  akan menyebabkan  peningkatan  radikal  bebas  dalam tubuh. Mengenai penurunan CYP1A2 pada metabolisme  di  hati  menunjukkan  bahwa  paparan zat  xenobiotik  selama  kehamilan  juga  dapat mengakibatkan  kerusakan  pada  hati  (Tracy et  al ., 2005).  Setelah  mengetahui  efek  pestisida  karbamat dan  efek  kehamilan  pada  metabolismenya  maka pengujian mengenai fungsi asam folat dan kebiasaan masyarakat menggunakan air kelapa untuk keracunan  diperlukan  untuk  mengetahui  efeknya sebagai hepatoprotektor terhadap gambaran histopatologi hati tikus yang diinduksi karbamat.

## Metode Penelitian
Jenis rancangan yang digunakan dalam penelitian ini ialah post  test  only  control  group  design .  Penelitian ini menggunakan 28 ekor tikus wistar betina ( Rattus novergicus )  berusia  12-15  minggu  dengan  berat badan 150-250 gram. Selama penelitian berlangsung tikus  dirawat  dan  diberi  perlakuan  di  Laboratorium Fisiologi  dan  Farmakologi  Fakultas  Kedokteran Universitas  Jember. Tikus  wistar  betina  diacak  dan dibagi menjadi 4 kelompok, yakni kelompok kontrol normal  (K),  kelompok  karbamat  (P1),  kelompok
karbamat  dan  air  kelapa  (P2),  dan  kelompok karbamat dan asam folat (P3). Kelompok K diberikan akuades  sehari  sebanyak  10  mg/kgBB  selama  14 hari.  Kelompok  P1    diberikan  karbamat  sehari sebanyak 10 mg/kgBB (Barfield dan Burlinson, 2015) selama 14 hari, kelompok P2 diberikan karbamat 10 mg/kgBB sehari sekali dan air kelapa 15-30 mg/kgBB sepanjang  hari,  dan  kelompok  P3  diberikan karbamat  10  mg/kgBB  dan  asam  folat  sediaan  400 mg  yang  dikonversi  ke  tikus  sehari  sekali.  Semua perlakuan  pada  hewan  coba  dilakukan  secara  oral menggunakan  sonde  lambung.  Setelah  selesai seluruh perlakuan, hewan coba diterminasi menggunakan  eter  dan  dilakukan  laparotomi  untuk mengambil  organ  hati.  Hati  selanjutnya  difiksasi dalam  BNF 10% dan dilakukan pembuatan preparat histopatologi dengan teknik pewarnaan Hematoksilin-Eosin  (Swarayana et  al .,  2012) Pengamatan histopatologi dilakukan oleh dua orang pengamat  dengan  metode double  blind. Preparat histopatologi  hati  tikus  diamati  dengan  perbesaran 400x,  masing-masing  preparat  diambil  5  lapang pandang  secara  acak  untuk  diamati  struktur mikroanatominya. Metode skoring histopatologi hati yang digunakan adalah Manja Roenigk Nilai masing- masing  skor  histopatologi  hati  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1. Skoring penilaian Manja Roenigk No Tingkat Kerusakan Skor 1 Normal 1 2 Degenerasi Parenkimatosa 2 3 Degenerasi Hidropik 3 4 Nekrosis 4 Sumber: Tamad et al ., 2011; Berendz et al , 2007
Hasil  skoring  histopatologi  hati  yang  didapatkan kemudian  dilakukan  analisis  data    menggunakan  uji One Way Anova .

## Hasil Penelitian
Penilaian preparat hati dilakukan secara mikroanatomi  dengan  menggunakan  sistem  skoring Manja  Roenigk  dengan  melihat  lesi  pada  hati  yaitu degenerasi parenkimetosa, degenerasi hidropik, dan nekrosis.  Penampakan  preparat  histologi  dapat dilihat pada Gambar 1.
Normal Degenerasi parenkimetosa Degenerasi Hidropik : Nekrosis
Gambar 1. Gambaran histopatologi hati tikus kelompok K, P1, P2, dan P3 dengan perbesaran 400x
Skoring  histopatologi  hati  tikus  dilakukan  oleh  dua orang,  sehingga  didapatkan  dua  data  dari  masing- masing sampel. Hasil perhitungan skoring histopatologi  hati  tikus  pada  masing-masing  sampel didapatkan  data  dalam  bentuk  data  rasio,  setelah pengamatan didapatkan rata-rata skoring histopatalogi hati tikus. Rata-rata skoring histopatologi hati tikus dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Rata-rata hasil skoring histopatologi hasil tikus
Kelompok Perlakuan Rata-rata Skoring Histopatologi hati Tikus (Rata-rata + Standar Deviasi) (n=6) K 1,0 + 0,020 P1 2,8 + 0,207 P2 2.8 + 0,194 P3 2,6 + 0,257
Berdasarkan  data  rata-rata  nilai  histopatologi  hati pada  setiap  kelompok,  diketahui  bahwa  terdapat perbedaan  rata-rata  kerusakan  jaringan  hati  hewan coba.  Semakin  tinggi  nilainya  semakin  berat  pula kerusakan  jaringan  hati  yang  terjadi.  Nilai histopatologi  hati  tikus  terendah  berada  pada kelompok  K  pemberian  akuades  yaitu  1,0  +  0,020, menunjukkan  kerusakan  jaringan  hati  tikus  paling ringan.  Sedangkan  rata-rata  nilai  histopatologi  hati
K P1 P2 P3
tikus tertinggi berada pada kelompok P1 pemberian karbamat  10  mg/kgBB  yaitu  2.8  +  0,207, menunjukkan  derajat  kerusakan  jaringan  hati  tikus paling  berat.Hasil  perhitungan  skoring  histopatologi hati  tikus  didapatkan  nilai  rata-rata    kemudian dilakukan  uji  analisis  statistik  dengan  tingkat kepercayaan  95%  (ɑ=  0,05).  Analisis  data  statistik didahului  dengan  uji  normalitas  menggunakan  uji Shapiro  Wilk karena  sampel  dalam  penelitian  ini jumlahnya < 50, kemudian dilakukan uji homogenitas menggunakan uji Lavene .
Hasil  uji  normalitas  menunjukkan  bahwa  data terdistribusi  normal  (p  >  0,05)  dan  hasil  uji homogenitas menunjukkan bahwa  varian data  tidak homogen  (p=0,05),  karena  data  tersebut  tidak homogen  maka  peneliti  melakukan  transformasi data  sehingga  didapatkan  data  yang  homogen  (p  > 0,05).  Maka  kemudian  peneliti  melanjutkan  dengan uji  komparasi  menggunakan  uji One  Way  ANOVA. Hasil  uji  komparasi  menggunakan  uji One  Way ANOVA menunjukkan nilai signifikansi (p) 0,000 (p < 0,05)  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  terdapat perbedaan  yang  signifikan  pada  minimal  dua kelompok.  Setelah  dilakukan  uji One  Way  ANOVA kemudian dilanjutkan dengan uji post hoc LSD untuk mengetahui nilai signifikansi antar kelompok.
Data  hasil  uji post  hoc  LSD p  <  0,05  menunjukkan terdapat  perbedaan  signifikan  terhadap  rata-rata skoring histopatologi  hati tikus antarkelompok  yang dibandingkan. Kelompok K menunjukkan perbedaan yang  signifikan  ketika  dibandingkan  dengan kelompok  P1,  P2,  dan  P3  (p  <  0,05).  Kelompok  P1 menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  ketika dibandingkan  dengan  kelompok  K  dan  P3,  tetapi ketika  dibandingkan  dengan  kelompok  P2  tidak terdapat  perbedaan  yang  signifikan  (p=0,826). Kelompok  P2  menunjukkan  perbedaan  yang signifikan  ketika  dibandingkan  dengan  kelompok  K dan  P3,  tetapi  ketika  dibandingkan  dengan kelompok  P1  tidak  terdapat  perbedaan  yang signifikan  (p=0,826).  Kelompok  P3  menunjukkan perbedaan  yang  signifikan  ketika  dibandingkan dengan semua kelompok (p < 0,05).

## Pembahasan
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  efek hepatoprotektor  air  kelapa  ( Cocos  nucifera  L .)  dan asam  folat  terhadap  kerusakan  hati  tikus  betina hamil  yang  diinduksi  karbamat  ditinjau  dari gambaran histopatologinya. Adanya kerusakan pada
suatu  organ  dapat  dideteksi  dengan  melakukan pemeriksaan histopatologi (Colovic et al., 2013). Dari hasil  pengamatan  yang  dilakukan  pada  kelompok kontrol  akuades  (K)  dan  kelompok  yang  diinduksi karbamat  (P1)  terdapat  perbedaan  yang  bermakna (p  <  0,05).  Hal  ini  membuktikan  bahwa  pemberian karbamat  secara  oral  dengan  dosis  10  mg/kgBB selama  14 hari dapat menimbulkan kerusakan pada jaringan  hati  tikus.  Temuan  ini  sesuai  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Barfield-Burlinson (2015)  dan  Holovska  (2014)  bahwa  karbamat  dapat menyebabkan  kerusakan  pada  jaringan  hati. Penghambatan  AChE  yang  diakibatkan  oleh karbamat akan menyebabkan penumpukan asetilkolin,  dan  menyebabkan  pembetukan  NO menjadi  tidak  terkontrol,  kemudian  NO  akan menyebabkan kerusakan  sel  melalui beberapa  cara, yaitu,  NO  yang  berlebih  tidak  seimbang  dengan antioksidan tubuh sehingga masih banyak NO dalam bentuk bebas, dan cenderung berikatan dengan O2- membentuk  ONOO-,  ONOO-  memiliki  sifat  senyawa radikal  yang  sangat  kuat  yang  dapat  menimbulkan lipid  peroksidasi  (Radi et  al., 1991;  Cross et  al., 1998).  Selain  dapat  membentuk  ONOO-,  NO  juga dapat  merusak  sel  melalui  cara  pengrusakan mitokondria.  Menurut  Murphy  (1999),  NO  dapat dengan  mudah  berdifusi  ke  dalam  sel,  yang  akan berinteraksi  dengan  mitokondria  dan  meningkatkan permeabilitas  transisi  membran  dalam  mitokondria (mPT). Meningkatnya permeabilitas membran dalam mitokondria  akan  menimbulkan  senyawa-senyawa yang  berukuran  lebih  besar  dapat  masuk  ke  dalam mitokondria  sehingga  menyebabkan  kerusakan dalam mitokondria (Mukhopadpay, 2009)
Proliferasi  peroksisom  juga  terjadi  pada  sel  hati akibat  terpapar  oleh  karbamat,  akan  menyebabkan gangguan  pada  produksi  dan  degenerasi  dari  H 2 O 2 yang merupakan radikal bebas dan akan menyebabkan  peroksidasi  lipid  (Holovska,  2014). Kemudian, kondisi selama masa kehamilan juga akan menyebabkan  penurunan  dari  CYP1A2  sehingga meningkatkan  risiko  kerusakan  hati  akibat  dari paparan zat xenobiotik yang berlebihan, yang dalam penelitian  ini  adalah  karbamat  (Tracy et  al .,  2005). Hal  tersebut  juga  akan  menyebabkan    peningkatan radikal  bebas  dalam  tubuh.  Secara  teori  beberapa mekanisme  tersebut  akan  memicu  terjadinya kerusakan  pada  jaringan  hati.  Pada  penelitian  ini pemberian karbamat dilakukan selama 14 hari untuk mengetahui  terjadi  kerusakan  atau  tidak,  dan  telah terbukti  bahwa  pemberian  karbamat  secara  oral dengan  dosis  10  mg/kgBB  selama  14  hari  dapat
menghasilkan  kerusakan  pada  jaringan  hati  tikus. Pengamatan  histopatologi  hati  pada  penelitian  ini menunjukkan  bahwa  hati  yang  terpapar  karbamat mengalami perubahan struktur. Induksi karbamat 10 mg/kgBB selama 14 hari menyebabkan peningkatan signifikan  rata-rata  skoring  histopatologi  hati  pada kelompok  P1  jika  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol  normal.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa karbamat  dapat  menyebabkan  kerusakan  hati  yang ditandai dengan adanya dilatasi degenerasi parenkim,  degenerasi  hidropis,  dan  nekrosis. Perubahan  struktur  ini  disebabkan  oleh  karbamat yang  menyebabkan  meningkatnya  radikal  bebas dalam  tubuh,  yang  dapat  menimbulkan  destruksi struktur  dan  gangguan  fungsi  membran  sel,  bahkan kematian sel (Gbagedesin et al. , 2014).
Degenerasi  parenkimatosa  yang  terjadi  pada penelitian  ini  ditandai  dengan  pembengkakan  dan kekeruhan sitoplasma. Kerusakan ini mengakibatkan oksidasi sel terganggu  sehingga  sel yang mengalami kerusakan  tidak  dapat  mengeliminasi  air,  sehingga pada  akhirnya  air  banyak  tertimbun  di  dalam  sel. Degenerasi  hidropis  terjadi  karena  hidrasi  ion natrium  akibat  permeabilitas  dinding  sel  yang terganggu  akibat  toksisitas  senyawa  karbamat. Degenerasi  hidropis  terjadi  karena  terdapatnya gangguan  pada  metabolisme  energi  di  dalam  sel, terutama  mekanisme  transpor  aktif  pada  Na+/K+- ATPase, sehingga hepatosit tidak mampu memompa ion natrium ke luar dari sel, sehingga pada sebagian organel  sitoplasma  terdapat  kantong-kantong  yang berisi  air.  Steatosis  yang  parah  akan  terbentuk vakuola lemak dalam sel sehingga mendesak inti sel ke  arah  tepi.  Steatosis  dapat  terjadi  karena terganggunya  metabolisme  lemak,  seperti  adanya gangguan  terhadap  fungsi  mitokondria,  hipoksia yang menghambat oksidasi asam lemak yang masuk ke  dalam  sel.  Jika  degenerasi  lemak  terus berlangsung,  maka  hepatosit  dapat  mengalami nekrosis (Kumar et al ., 2015).
Hasil  skoring  histopatologi  hati  pada  kelompok  K memiliki  nilai  rata-rata  1,0  +  0,020,  yang menandakan  bahwa  pada  kelompok  K  tidak ditemukan  adanya  kerusakan  sel  hati.  Hasil penelitian  pada  kelompok  perlakuan  menunjukkan terjadi  peningkatan  rata-rata  skoring  histopatologi hati yang diberikan dosis karbamat 10 mg/kgBB (P1: 2,8  +  0,207),  karbamat  dan  air  kelapa  (P2:  2.8  + 0,194),  serta  karbamat  dan  asam  folat  (P3:  2,6  + 0,257),  menunjukkan  telah  terjadi  kerusakan jaringan  hati  pada  3  kelompok  perlakuan  tersebut. Pada  uji  analisis LSD diketahui  terdapat  perbedaan
yang  signifikan  setelah  dibandingkan  antara kelompok  K  dengan  kelompok    P1,  P2,  dan  P3  (P  < 0,05)  data  tersebut  menunjukkan  kelompok  K  tidak terjadi  kerusakan  sel  hati.  Pada  kelompok  P1 terdapat perbedaan signifikan setelah dibandingkan dengan  kelompok  K  dan  P3,  tetapi  tidak  terdapat perbedaan  signifikan  ketika  dibandingkan  dengan kelompok  P2  (p=0,826),  hal  tersebut  menunjukkan kerusakan  sel  hati  yang  terjadi  pada  kelompok  P1 dan  P2  lebih  berat  dibandingkan  yang  terjadi  pada kelompok  P3.  Pada  kelompok  P3  terdapat perbedaan  signifikan  dengan  setiap  kelompok  (p  < 0,05),  menunjukkan  perlakuan  P3  (karbamat  dan asam  folat)    dapat  mencegah  kerusakan  sel  pada hati, dibandingkan perlakuan kelompok P2 (karbamat dan air kelapa).
Menurut  Barlina  (2004)  air  kelapa  memiliki antioksidan  yang  dapat  menetralisir  radikal  bebas dalam tubuh, dalam kasus akibat paparan karbamat radikal  bebas  yang  terbentuk  dapat  menurunkan jumlah antioksidan alami seperti SOD, katalase , dan GSH.  Antioksidan  di  dalam  air  kelapa  diketahui adalah  tanin,      cara  kerja  dari  tanin  yaitu  mampu menjadi  antioksidan  dengan  mengurangi  radikal bebas  dalam  tubuh  dan  mencegah  agar  karbamat tidak  terabsorbsi  oleh  saluran  pencernaan.  Peran utama  tanin dalam ROS-scavenging  activity yaitu dengan  menghambat  enzim-enzim  prooksidatif (NOS, xanthine  oxidase, dan lipoxygenase )  sehingga proses  pembentukan  ROS  menjadi  terhambat (Shibata et  al., 2003;  Fogliani et  al., 2005).  Dengan dihambatnya  enzim-enzim  yang  memproduksi radikal bebas, keseimbangan antioksidan dan radikal bebas  dalam  tubuh  akan  tetap  terjaga  sehingga dapat  meminimalisir  terjadinya  kerusakan  akibat stres  oksidatif.  Akan  tetapi  dalam  penelitian  ini didapatkan  rata-rata  skoring  dari  kelompok  P2 (karbamat  dan  air  kelapa)  yaitu  2,8  +  0,194 menunjukkan  terjadinya  kerusakan  pada  sel  hati. Kemudian,  pada  uji  analisis LSD tidak  terdapat perbedaan signifikan antara kelompok P2 dengan P1 (p=0,826)  menunjukkan  pemberian  air  kelapa  tidak terbukti efektif untuk memberikan efek hepatoprotektor pada hati tikus wistar betina hamil. Air  kelapa  pada  penelitian  Sulistya et  al., (2016) telah  memberikan  efek  pemulihan  hati  pada  tikus yang diinduksi oleh kalium sianida, akan tetapi hasil pemulihan  tersebut  tidak  dapat  mendekati  kondisi tikus  dari  kelompok  normal.  Hal  tersebut menunjukkan  kandungan  dalam  air  kelapa  hanya mampu  meredakan  dari  paparan  sianida  tersebut akan tetapi tidak cukup kuat efeknya untuk menjadi
penawar  dari  suatu  racun  kimiawi  yang  masuk  ke dalam  tubuh.  Kemudian,  penelitian  Loki  dan Rajamohan  (2003)  pada  tikus  wistar  betina  yang diinduksi  CCl 4 -  menunjukkan  bahwa  terdapat perubahan  pemulihan  dari  organ  hati  setelah pemberian  29  hari,  yaitu  menurunnya  terjadinya peroksidasi  lipid  pada  sel  hati.  Sementara  pada penelitiaan  ini  pemberian  air  kelapa  hanya  selama 14  hari,  hal  tersebut  menunjukkan  lama  pemberian air  kelapa  juga  menentukan  efek  pencegahan  dari kerusakan hati, yang menandakan dalam peneilitian ini pemberian air kelapa secara ad libitum sebanyak 15-30  mg/kgBB  selama  14  hari  tidak  terbukti  dapat mencegah  kerusakan  hati  akibat  paparan  pestisida karbamat.
Kelompok  P3  (karbamat  dan  asam  folat)  memiliki hasil  skoring  histopatologi  hati  rata-rata  yaitu  2,6  + 0,257  yang  menunjukkan  terjadinya  kerusakan  sel hati, akan tetapi lebih ringan dibanding kelompok P1 dan  P2.  Pada  uji  analisis LSD terdapat  perbedaan signifikan  dengan  kelompok  lain,  terutama  pada kelompok  P1  dan  P2  (p  <  0,05),  hasil  tersebut menunjukkan  perlakuan  P3  dapat  mencegah kerusakan  hati,  hal  tersebut  sesuai  dengan penelitian  Roncales et  al. pada  tahun  2004,  yaitu pemberian  asam  folat  dapat  mendorong  perbaikan dari  sel  hepatosit  dari  tikus  yang  mengalami penuaan.  Hal  tersebut  menunjukkan  asam  folat memberikan  efek  hepatoprotektor  secara  signifikan pada  tikus  betina  hamil  yang  diinduksi  karbamat. Asam  folat  akan  baik  jika  dosisnya  tepat  (Guan  dan He,  2013).  Jika  dosis  kurang  maka  asam  folat  tidak memberikan  efek  perbaikan  sel  yang  cukup, sementara  jika  dosis  terlalu  besar  juga  dapat menyebabkan  kerusakan  pada  jaringan  hati.  Pada penelitian  ini  menunjukkan  pemberian  asam  folat terbukti lebih efektif memberikan efek hepatoprotektor dibandingkan pemberian air kelapa. Asam folat adalah vitamin B yang larut dalam air  dan  telah  terbukti  mempengaruhi  metabolisme stres  oksidatif  (Sarna et  al .,  2012).  defisiensi  folat dapat  mengakibatkan  terjadinya  steatosis  hati (Christensen et  al .,  2010).  Asam  folat  juga menunjukkan  fungsi  sebagai  antioksidan,  dikaitkan dengan  kemampuannya  untuk  menangkap  spesies oksigen  reaktif  (ROS),  menghambat  aktivitas penghasil ROS dan mengurangi akumulasi lipid pada tikus yang diberi makan oleh HFD (Sarna et al., 2012; Sid et  al ., 2015). Asam folat juga  dapat mengurangi tingkat sirkulasi mediator proinflamasi pada individu yang  kelebihan  berat  badan  dan  pada  pasien hiperhomosisteinemia  (Solini et  al .,  2006;  Wang et
al .,  2005).  Pada  penelitian  pemberian  asam  folat oleh  Sid et  al. (2018)  pada  tikus  yang  diberi  makan HFD (High Fat Diet) yang dapat mengakibatkan fatty liver ,  mengungkapkan  bahwa  suplemen  asam  folat mengurangi peradangan hati pada tikus tersebut.
Asam  folat  juga  diketahui  memiliki  efek  anti- inflamasi  melalui  penghambatan  ekspresi  sitokin proinflamasi  yang  diinduksi  NF-κB  di  hati. Kemampuan  asam  folat  untuk  menekan  respons radang  hati  menunjukkan  mikronutrien  tersebut memiliki potensi terapi untuk manajemen fatty liver . Penelitian  Sid et  al. (2018)  menguatkan  hasil  pada pelitian  ini  bahwa  pemberian  asam  folat  mampu menekan stres oksidatif yang terjadi akibat pestisida karbamat,  akan  tetapi  hasilnya  tidak  dapat mendekati  kelompok  normal  walaupun  telah berbeda  signifikan  jika  dibandingkan  dengan kelompok  P1  induksi  karbamat.  Pemberian  asam folat  pada  penelitian  Sid et  al .  (2018)  diketahui selama  8  minggu  atau  selama  minimal  56  hari, sementara  dalam  penelitian  ini  hanya  dilakukan pemberian  asam  folat  selama  14  hari.  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  perbedaan  lama  pemberian berpengaruh  pada  efek  antioksidan  sebagai pencegahan  terjadinya  kerusakan  pada  hati,  dalam penelitian  ini  pemberian  asam  folat  selama  14  hari terbukti  dapat mencegah kerusakan pada hati yang diinduksi karabamat akan tetapi pemulihannya tidak dapat mendekati kelompok normal.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan  di  atas kesimpulan  dalam  penelitian  ini  ialah  sebagai berikut,  yaitu  induksi  karbamat  secara  oral    pada tikus  wistar  betina  hamil  terbukti  menyebabkan kerusakan pada sel hati. Pemberian air kelapa ( Cocos nucifera  L .)  pada  tikus  wistar  betina  hamil  yang diinduksi  karbamat    terbukti  tidak  dapat  mencegah kerusakan pada sel hati. Pemberian asam folat pada tikus  wistar  betina  hamil  yang  diinduksi  karbamat terbukti dapat mencegah kerusakan sel hati.

## Daftar Pustaka
Alswat,  K.  A.,  Mumtaz,  K.,  &  Jafri,  W.  2010.  Liver Biopsy  for  Histological  Assessment:  The  Case in  Favor. Saudi  Journal  of  Gastroenterology  : Official Journal of the Saudi Gastroenterology Association , 16(2), 133–139.
Arifuddin,  Asri,  A.,  dan  Elmatris.  2016.  Efek Pemberian  Vitamin  C  terhadap  Gambaran Histopatologi Hati Tikus Wistar yang Terpapar Timbal  Asetat. Jurnal  Kesehatan  Andalas. http://jurnal.fk.unand.ac.id
Barlina,  R.  2004.  Potensi  Buah  Kelapa  Muda  Untuk Kesehatan  dan  Pengolahannya. Indonesian Coconut and Palmae Research Institute. Vol: 3 No: 46-60, Manado.
Berends,  M.A.,  Van-Oijen,  M.G.,  Snoek,  J.,  Van-de-
Kerkhof,  P.C.,  Drenth,  J.P.,  Han-Van  K.J.,  de- Jong,  E.M.  2007.  Reliability  of  the  Roenigk Classification of Liver Damage after Methotrexate  Treatment  for  Psoriasis:  A Clinicopathologic  Study  of  160  Liver  Biopsy Specimens. Arch Dermatol . Doi:
10.1001/archderm.143.12.1515
Barfield, W., and Burlinson, B. 2015. p-Chloroaniline, t-butylhydroquinone,  and  methyl  carbamate: Rat  in  vivo  comet  test,  JaCVAM  trial  phase 4.2. Mutat  Res  Genet  Toxicol  Environ Mutagen . 786-788:98-103.
doi: 10.1016/j.mrgentox.2015.05.007.
Buchman,  A.L.  2006.  Total  Parenteral  Nutrition:
Challenges and Practice in the Cirrhotic Patient. Transplant Proc . doi:10.1016/j.transproceed.2006.05.030.
Black, A., L., Chiu, Y.,C., Fahmy, M., A. H., & Fukuto, T.R.  1973.  Selective  toxicity  of N - sulfenylated derivatives of insecticidal methylcarbamate  esters. J.  agric.  food Chem., 21: 743-747.
Christensen,  K.  E.,  Wu,  Q.,  Wang,  X.,  Deng,  L., Caudill, M. A., & Rozen, R.  2010. Steatosis in mice is associated with gender, folate intake, and  expression  of  genes  of  one-carbon metabolism.  The  Journal  of  Nutrition, 140:1736–1741.
Colovic, M. B., D. Z. Krstic, T. D. Lazarevic-Pasti, A. M.
Bondzic, dan V. M. Vasic. 2013. Acetylcholinesterase Inhibitors: Pharmacology and Toxicology. Current
Neuropharmacology , 11 (3), 315–335.
Contran,  R.,S.  Kumar,  V.,  and  Robbins,  S.,  L.  1994. Chemical  injury.  In  Robbins  Pathologic  Basis of  Disease,  5th  Ed.;  Schoen,  F.J.,  Ed.;  W.B. Saunders Company: Philadelphia, PA, 13–15.
Eskenazi,  B.,  Harley,  K.,  Bradman,  A.,  Weltzien,  E.,
Jewell, N.P., Barr, D.B., et al. Association of in Utero  Organophosphate  Pesticide  Exposure and Fetal Growth and Length  of Gestation in an  Agricultural  Population.  Environ  Health Perspect. 2004;112:1116–1124
Fogliani,  B.,  P.  Raharivelomanana,  J.  P.  Bianchini,  S. Bouraimamadjebi,  dan  E.  Hnawia.  2005.
Bioactive Ellagitannins from Cunonia Macrophylla  an  Endemic  Cunoniaceae  from
New  Caledonia. Phytochemistry ,  66(2):  241- 247.
Gbadegesin,  M.  A.,  Owumi,  S.  E.,  Akinseye,  V.,  and Odunola,  O.  A.  2014.  Evaluation  of
Hepatotoxicity and Clastogenicity of Carbofuran  in  Male  Wistar  Rats. Food  and Chemical Toxicology , 65, 115–119. doi:10.1016/j.fct.2013.12.034
Goncalves, C., T. Dinis, dan M. T. Batista. Antioxidant properties  of  Proanthocyanidins  of  Uncaria Tomentosa Bark Decoction: A Mechanism for Anti-inflammatory Activity.2005.
Phytochemistry , 66(1): 89-98.
Guan,  Y.S.,  and  He,  Q.  2013.    A  Current  Update  on the Rule of Alternative and
Complementary  Medicine  in  the  Treatment of  Liver  Diseases. Hindawi  Publishing Corporation .
http://dx.doi.org/10.1155/2013/321234
Gupta,  R.C.  2014.  Carbamate  Pesticides. Breathitt Veterinary Center. pp. 661-664
Ho, K.  Y., J. S. Huang, C. C. Tsai,  T. C. Lin,  Y.  F. Hsu, dan  C.  C.  J.  Lin.  1999.  Antioxidant  activity  of tannin component from vaccinium vitis-idaea L. J Pharm. Pharmacol , 51: 1075-1078.
Holovska,  K.,  Almasiovaa,  V.,  and  Cigankovaa,  V. 2014.  Ultrastructural  Changes  in  the  Rabbit Liver  Induced  by  Carbamate  Insecticide Bendiocarb. Journal of Environmental Science and  Health,  Part  B:  Pesticides,  Food Contaminants,  and  Agricultural  Wastes ,  doi:
10.1080/03601234.2014.911593 Indraningsih. 2008. Pengaruh Penggunaan
Insektisida  Karbamat  Terhadap  Kesehatan Ternak dan Produknya. Wartazoa Vol. 18 No.
2.
Komisi  Pestisida.  2014.  Pedoman  Teknis  Kajian Pestisida  Terdaftar  dan  Beredar  TA.  2014
Direktorat  Jendral  Prasarana  dan  Sarana
Pertanian .
Kumar ,V., A., K. Abbas, dan N. Fauso. 2015. Robbins and Cotran: Dasar Patologi Penyakit, 7th ED,
Jakarta: EGC.
Loki, A. L., and Rajamohan, T. 2003. Hepatoprotective  and  Antioxidant  Effect  of Tender Coconut Water on Carbon
Tetrachloride  Induced  Liver  Injury  in  Rats.
Indian  Journal  of  biochemistry  &  Biophysics,
Vol 40. PMID: 22900330
Marsillach, J., Ferre, N. L., Camps, J., Riu, F., A. Rull,
A.,and  Joven,  J.  2007.  Moderately  High  Folic Acid Supplementation
Exacerbates
Experimentally Induced Liver Fibrosis in Rats. Centre  de  Recerca  Biome`dica,  Hospital Universitari de Sant Joan. doi: 10.3181/0703- RM-59
Metodiewa, D. A., A. K. C. Jaiswal, N. B. Cenas, E. B.
Dickancaite,  dan  J.  A.  Segura-Aguilar.  1999.
Quercetin  may  Act  as  a  Cytotoxic  Prooxidant after Its Metabolite Activation to Semiquinone  and  Quinoidal  Product. Free Radic. Biol. Med ., 26(1-2): 107-116
Murphy,  M.  P.  1998.  Nitric  Oxide  and  Cell  Death.
Biochimica et Biophysica Acta, 1411: 401-414.
Mukhopadhyay,  P.,  M.  Rajesh,  S.  Batkay,  Y. Kashiwaya, G. Hasko, L. Liaudet, C. Szabo, dan P.  Pacher.  2009.  Role  of  Superoxide,  Nitric Oxide,  and  Peroxynitrite  in  Doxorubicin- induced Cell Death in  vivo and in vitro. Am J Physiol  Heart  Circ  Physiol., 296:  1466-1483. doi:10.1152/ajpheart.00795.2008
Menteri  Pertanian  Republik  Indonesia  (MENTAN). 2001.  Keputusan  Menteri  Pertanian  Nomor 434.1/Kpts/TP.270/7/2001  tentang  Syarat dan Tatacara Pendaftaran Pestisida.
Nelson,  D.R.,  Zeldin,  D.C.,  Hoffman,  S.M.,  Maltais L.J., Wain H.M., Nebert DW 2004. Comparison of cytochrome P450 (CYP) genes from  the  mouse  and  human  genomes, including nomenclature recommendations for genes,  pseudogenes  and  alternative-splice variants". Pharmacogenetics . 14 (1): 1– 18. doi:10.1097/00008571-200401000- 00001. PMID 15128046.
Rohma,  A.  N.  2015.  Makalah  Asam  Folat. www.scribd.com
Roncales,  M.,  Achon,  M.,  Manzarbeitia,  F.,  Delas-
Casas, C. M.,  Ramırez, C. Varela-Moreiras, G., Perez-Miguelsanz,  J.  2004.  Folic  Acid Supplementation  for  4  Weeks  Affects  Liver Morphology  in  Aged  Rats. American  Society for Nutritional Sciences. 134: 1130–1133
Runia,  Y.A.  2008.    Faktor-Fartor  yang  Berhubungan dengan  Keracunan  Pestisida  Organofosfat, Karbamat  dan  Kejadian  Anemia  pada  Petani Horticulrura  di  Desa  Tejosari  Kecamatan Ngablak  Kabupaten  Magelang.  Thesis  FKM- UNDIP. Semarang.
Santcawarti,  B.  F.,  Setiani,  O.,  dan  Hanani,  Y.  2016. Gangguan  Keseimbangan  Sebelum  dan Setelah  Pemberian  Air  Kelapa  Hijau  ( Cocos nucifera  L )  pada  Pekerja  Pengecatan  yang Terpapar  Timbal  (Pb)  di  Industri  Karoseri Semarang. Jurnal    Kesehatan  Masyarakat  (e- Journal). Jurnal FKM-UNDIP, Semarang.
Sarna, L. K., Wu, N., Wang, P., Hwang, S. Y., Siow, Y.
L., & Karin, O. 2012. Folic acid
supplementation  attenuates  high  fat  diet induced hepatic oxidative stress via regulation  of  NADPH  oxidase.  Canadian Journal  of  Physiology  and  Pharmacology, 90:155–165.
Sid, V., Shang, Y., Siow, Y. L., Hewage, S. M., House, J.  D.,  &  Karmin,  O..  2018. Folic  Acid Supplementation  Attenuates  Chronic  Hepatic Inflammation  in  High-Fat  Diet  Fed  Mice. Lipids. doi:10.1002/lipd.12084
Sid, V., N. Wu, L. K. Sarna, Y. L. Siow, J. D. House and K. O. 2015. Folic acid supplementation during high-fat diet feeding restores AMPK activation  via  an  AMP-LKB1-dependent mechanism.  American  Journal  of  Physiology. Regulatory,  Integrative  and  Comparative Physiology 309: R1215–1225.
Shibata, T., K. Nagayama, R. Tanaka, K. Yamaguchi, T. dan  Nakamura.  2003.  Inhibitory  Effects  of Brown  Algal  Phlorotannins  on  Secretory Phospholipase A2s, Lipoxygenases and Cyclooxygenases. J.  Appl.  Phycol. ,  15(1):  61- 66
Sobekova, A., Holovska, K., Lenartova, V., Flesarova, S.,  and  Javorsky,  P.  2009  The  other  toxic effect  of  carbamate  insecticides.  Acta  Biol. Hung. 60(1), 45–54.
Solini, A., Santini, E., & Ferrannini, E. (2006) Effect of short-term  folic  acid  supplementation  on
insulin  sensitivity  and  inflammatory  markers in  overweight  subjects.  International  Journal of Obesity, 30:1197–1202.
Stratton, R. J., dan Smith, T. R. 2006. Role of Enteral and  Parenteral  Nutrition  in  the  Patient  with Gastrointestinal and Liver Disease. Best Pract Res Clin Gastroenterol.doi:10.1016/j.bpg.2005.11.004 .
Sulistia,  A.,  Sulistiarini,  R.,  dan  Amir  M.M.  2016. Aktivitas  Antidotum  Air  Kelapa  Hijau  ( Cocos nucifera L .) terhadap Keracunan Sianida Pada
Mencit  ( Mus  musculus  L .). J.  Trop.  Pharm. Chem . Vol 3. No. 3 191 p-ISSN: 2087-7099; e- ISSN: 2407-6090
Swarayana  I.  M.  I.,  I.  W.  Sudira,  dan  I.  K.  Berata, 2012.  Perubahan  Histopatologi  Hati  Mencit (Mus musculus) yang Diberikan Ekstrak Daun Ashitaba  (Angelica  keiskei). Buletin  Veteriner Udayana . 4 (2): 119-125.
Tamad, F. S. U., Hidayat, Z. S., dan Sulistyo, H. 2011. Gambaran  Histopatologi  Tikus  Putih  setelah Pemberian  Jinten  Hitam  Dosis  500mg/kg  BB, 1000mg/kgBB  dan  1500mg/kgBB  selama  21 hari  (subkronik),  Jurnal  Mandala  of  Health,  5 (III).
Tracy,  T.S.,  Venkataramanan,  R.,  Glover,  D.D.,  &
Caritis, S.N. 2005. National  Institute for Child Health  and  Human  Development  Network  of Maternal-Fetal-Medicine Units Temporal changes  in  drug  metabolism  (CYP1A2, CYP2D6 and CYP3A activity) during
pregnancy. Am  J  Obstet  Gynecol 192:633– 639
Wang, G., Dai, J., Mao, J., Zeng, X., Yang, X., & Wang, X.  2005.  Folic  acid  reverses  hyper- responsiveness  of  LPS-induced  chemokine secretion  from  monocytes  in  patients  with hyperhomocysteinemia. Atherosclerosis, 179:395–402.
Winnoto,  Yusniar  H.  D.,  dan  Onny,  S.  2016. Hubungan Pajanan Pestisida Masa Kehamilan dengan  Gangguan  Perkembangan  Anak PraSekolah  (4-5  Tahun)  Di  Desa  Sumberrejo Kecamatan  Ngablak  Kabupaten  Magelang. Jurnal  Kesehatan    Masyarakat  (e-Journal) Volume  4,  Nomor  3, (ISSN:  2356-3346) , http://ejournal-s1.undip.ac.id/index.php/jkm
World  Health  Organization.  2009. The  WHO Recommended  Classificaton  of  Pesticides  by Hazard. Switzerland: IPCS .
World  Health  Organization  (WHO).  2010.  Pesticide Evaluation  Scheme  50  Years  Of  Global Leadership. Who/Htm/Ntd/Whopes/2010.2 , 68.
Whyatt,  R.M.,  Barr,  D.B.,  Camann,  D.E.,  Kinney,  P.L. Barr,  J.R,  Andrews,  H.F.  Hoepner,  L.A., Garfinkel,  R.,  Hazi,Y.,  Reyes,  A.,  Ramirez,  J., Cosme, Y., and Frederica P Perera, F.P. 2003. Contemporary-use  Pesticides  in  Personal  Air Samples  During  Pregnancy  and  Blood Samples  at  Delivery  Among  Urban  Minority Mothers  and  Newborns.  Environ  Health Perspect. 111(5): 749–756. doi: 10.1289/ehp.5768