## Research Articles

## Perbandingan antioksidan ekstrak etanol daun gaharu ( Aqularia malaccensis L.) dan ketiga fraksi berbagai pelarut (heksan, etil asetat, dan air)

## Mauizatul Hasanah*, Deby Apriyanti, Dewi Patmayuni
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi (STIFI) Bhakti Pertiwi, Jl. Ariodillah III No. 22A Palembang, Sumatera Selatan
Received 6 Desember 2019; Accepted 5 Januari 2020; Published 20 Januari 2020
Keyword:
Antioxidant;
Aquilaria malaccensis L.; DPPH (2,2-diphenyl picrylhydrazyl)
ABSTRACT: The  research  comparison  of  antioxidant  activity  extracts  and various fractions of Aquilaria malaccensis L. leaves had been done. Extraction had been done by maceration method of 350 grams of leaf powder used ethanol 70% solvent for 3 days to 5 repetitions, then fractionation used hexane, ethyl acetate and akuades solvents. The extraction yield obtained 3.57 (%w/w) viscous extract yield, while the fractionation results obtained hexane, ethyl acetate and water  fractions  were  43.14,  32.67,  and  22.20  (%w/w).  Antioxidant  test  was carried out used DPPH ( diphenyl-picrylhydrazyl ) method, where the inhibitory value of DPPH (% inhibition) was tested at various concentrations of sample test solutions, for thick extracts at concentrations of 80; 60; 40; 20; and 10 ppm, and fraction  samples  at  concentrations  200;  160;  120;  80;  and  40  ppm.  IC50 calculation results showed that antioxidant activity was classified as very strong in  thick  extracts  and  ethyl  acetate  fraction,  were  16.45  and  47.69  ppm,  and strong  antioxidants  were  found  in  n-hexane  fraction  and  water  fraction  were 57.24 and 76.95 ppm. @2020 Published by UP2M, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Sriwijaya University
Kata Kunci:
Antioksidan;
Aquilaria malacensis L.; DPPH (2,2- Difenil -1 Pikrilhidrazil ) ABSTRAK: Telah  dilakukan  penelitian  perbandingan  antioksidan  ekstrak etanol daun gaharu ( Aquilaria malaccensis L. ) dan ketiga fraksi-nya dari berbagai pelarut (heksan, etil asetat dan air). Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi terhadap  350  gram  serbuk  daun  gaharu  menggunakan  pelarut  etanol  70%, kemudian  dilakukan  fraksinasi  terhadap  ekstrak  kental  menggunakan  pelarut heksan,  etil  asetat  dan  akuades.  Hasil  ekstraksi  diperoleh  rendemen  ekstrak kental 3,57 (%b/b), sedangkan hasil fraksinasi diperoleh fraksi heksan, etil asetat dan  air  berturut-turut  adalah  43,14;  32,67;  22,20  (%b/b).  Uji  antioksidan dilakukan  dengan  metode  DPPH  ( Difenilpikril  hidrazil ),  dimana  nilai penghambatan DPPH (% inhibisi) di uji pada berbagai konsentrasi larutan uji sampel, untuk ekstrak kental dilakukan pada konsentrasi 80; 60; 40; 20; 10 ppm, dan sampel fraksi pada konsentrasi 200; 160; 120; 80; 40 ppm. Intensitas aktivitas antioksidan sampel ditentukan dari nilai IC50, yang diperoleh dari persamaan garis lurus antara konsentrasi sampel uji dan % inhibisi. Hasil perhitungan IC50 menunjukkan  aktivitas  antioksidan  yang  tergolong  sangat  kuat  pada  ekstrak kental  dan  fraksi  etil  asetat  yaitu  16,45  dan  47,69  ppm,  dan  antioksidan  kuat terdapat pada fraksi N-heksan dan fraksi air yaitu 57,24 dan 76, 95 ppm. @2020 Published  by  UP2M,  Faculty  of  Mathematics  and  Natural  Sciences,  Sriwijaya University

## Jurnal Penelitian Sains
Journal Home Page: http://ejurnal.mipa.unsri.ac.id/index.php/jps/index
DOI: https://doi.org/10.26554/jps.v22i1.552
ISSN:  2597-7059  Online,  1410-7058  print/  @2020  Published  by  UP2M,  Faculty  of  Mathematics  and  Natural Sciences, Sriwijaya University

## 1. PENDAHULUAN
Tumbuhan gaharu ( Aqularia malaccensis L) merupakan salah satu tumbuhan hutan yang juga dikenal  memiliki  beberapa  khasiat  pengobatan. Daun gaharu memiliki aktivitas sebagai antibakteri pada Gram positif dan Gram negatif [1], selain itu ekstrak daun gaharu dilaporkan memiliki aktivitas sebagai  antioksidan,  ekstrak  daun  gaharu  dari daerah Langkat, Sumatera Utara yang berumur 4 dan 7 tahun memiliki kekuatan antioksidan (IC50) yang sangat kuat, yaitu 27,83 ppm dan 27,76 ppm [2],  serbuk  daun  gaharu  asal  Kajang,  Selangor, Malaysia, yang dimaserasi menggunakan berbagai pelarut yaitu heksan, diklorometan, etil asetat dan metanol  memiliki  kekuatan  antioksidan  (IC50) yang juga sangat kuat pada ekstrak metanol, yaitu sebesar 30 µg/ml [3].
Aktivitas antioksidan daun gaharu, dipengaruhi  oleh  kandungan  senyawa  metabolit sekunder  yang  terdapat  di  dalamnya.  Daun gaharu  dari  Malaysia  mengandung  steroid, terpenoid,  flavonoid,  saponin,  tannin,  alkaloid, [3]. Daun gaharu dari Berau, Kalimantan Timur, Indonesia  diketahui  mengandung  alkaloid,  dan karbohidrat  [5].  Daun  gaharu  dari  daerah Tabanan,  Bali  mengandung  senyawa  golongan flavonoid,  tannin,  polifenol,  glikosida  dan triterpenoid  [5],  simplisia  daun  gaharu  dari Kalimantan Barat mengandung alkaloid, antrakuinon, flavonoid, saponin, steroid, triterpenoid  dan  tannin,  [6].  Semua  senyawa metabolit sekunder mempengaruhi efek antioksidan daun gaharu.
Penelitian  ini  melakukan  ekstraksi  daun gaharu  asal  Belitang,  Sumatera  Selatan, Indonesia,  untuk  diketahui  aktivitas  antioksidan serta  menghubungkannya  dengan  kandungan fitokimia  di  dalamnya.  Ekstrak  yang  diperoleh difraksinasi  dengan  tiga  pelarut  dengan  sifat kepolaraan  yang  berbeda,  untuk  dibandingkan aktivitas  antioksidannya  dari  ekstrak  dan  ketiga fraksi yang diperoleh.

## 2. BAHAN DAN METODE

## 2.1 Lokasi Penelitian
Penelitian  dilakukan  di  laboratorium Penelitian  Sekolah  Tinggi  Ilmu  Farmasi  Bhakti Pertiwi Palembang dan Balai Besar Laboratorium Kesehatan Palembang.

## 2.2 Alat dan Bahan
Maserator, alat destilasi, satu set alat rotary evaporator ,  corong  pisah,  pipet  mikron  0,2  ml (Socorex), alat – alat gelas, Spektrofotometer Uv- VIS (Shimidzu UV-1700).
Daun  gaharu  ( Aquilaria  malaccensis L.) , pereaksi  2,2-Diphenil-1-Picrylhydrazyl;  DPPH (Sygma Aldrich), Etanol absolute 99,9% (Merck), Etil Asetat p.a 99,5% (Merck), N-Heksan p.a 90% (Merck),  Metanol  p.a  (Merck),  akuades,  Vitamin C,  Kloroform,  Kloroform  Amoniak,  Asam  Sulfat 2N, Pereaksi Mayer, Logam Mg, HCl pekat, FeCl3, CHCl3, norit, Asam Asetat Anhidrat 10%, H2SO4 pekat, dan pasir bersih.
Sampel  penelitian  daun  gaharu ( Aquilaria malaccensis L.) , diperoleh  dari  daerah  Belitang Oku  Timur,  Sumatera  Selatan  dan  identifikasi tumbuhan uji dilakukan di Herbarium Universitas Andalas  Padang,  Sumatera  Barat.  Sampel  yang digunakan  adalah  daun  gaharu  ( Aquilaria malaccensis L.) berwarna hijau tua.

## 2.3 Prosedur Penelitian 2.3.1 Preparasi Sampel
Daun  gaharu  ( Aquilaria  malaccensis L.), disortir,  dibersihkan  terlebih  dahulu  kemudian dirajang,  dan  dikeringkan,  dihaluskan  sampel kering  hingga  menjadi  sampel  serbuk  dan ditimbang sebanyak 350 gram.

## 2.3.2 Ekstraksi Metode Maserasi
Sebanyak  350  gram  serbuk  daun  gaharu ( Aquilaria  malaccensis L.),  diekstraksi  dengaan maserasi,  menggunakan  pelarut  etanol  70% (dibuat  dari  etanol absolute )  selama  5  hari, maseratnya diambil dan ampasnya dimaserasi lagi sebanyak  3  kali  dengan  cara  yang  sama  sampai diperoleh  maserat  yang  bening.  Maserat  yang dihasilkan  dikumpulkan  dalam  satu  wadah, kemudian  pelarut  diuapkan,  ekstrak  dipekatkan sampai terbentuk ekstrak kental.

## 2.3.3 Fraksinasi
Ekstrak  kental  dilarutkan  di  dalam  gelas beaker  dengan  akuades  sebanyak  200  ml, dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  bervolume 500  ml,  difraksinasi  dengan  menggunakan  n- heksan  p.a  sebanyak  200  ml,  kemudian  dengan etil asetat p.a, kemudian dipekatkan menjadi tiga
fraksi,  yaitu  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat  dan fraksi air (akuades).
2.3.4 Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder pada Ekstrak dan Fraksi Senyawa metabolit sekunder yang diidentifikasi adalah Alkaloid, Flavonoid, Terpenoid, Steroid, Saponin, dan Senyawa Fenol.

## 2.3.5 Uji Antioksidan
a.  Persiapan  Larutan  Uji  Sampel  dan Pembanding
Pemeriksaan antioksidan dilakukan dengan membuat larutan uji sampel pada berbagai variasi konsentrasi, yaitu konsentrasi 80 ppm, 60 ppm, 40 ppm,  20  ppm,  10  ppm  (ekstrak  kental)  dan  200 ppm,160  ppm,  120  ppm,  80  ppm,  40  ppm (berbagai  fraksi).  Sedangkan  konsentrasi  untuk larutan pembanding, yaitu larutan vitamin C pada konsentrasi  25  ppm,  20  ppm,  15  ppm,  10  ppm, dan 5 ppm.
Dipipet  masing-masing  0,2  ml  larutan  uji sampel  berbagai  konsentrasi  (sampel  uji  ekstrak kental, fraksi eti asetat, fraksi n-heksan dan fraksi air) dan larutan pembanding berbagai konsentrasi dimasukkan ke dalam vial.

## b. Pembuatan Larutan DPPH
DPPH ditimbang sebanyak 5 mg dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  250  ml ditambahkan  metanol  p.a  hingga  tanda  batas dikocok  homogen,  sehingga  diperoleh  larutan DPPH  dengan  konsentrasi  0,05  mM,  ditentukan panjang gelombang maksimumnya.

## c. Pemeriksaan Aktivitas Antioksidan
Ditentukan  absorbansi  DPPH  murni, sebelum  direaksikan  dengan  masing-masing sampel  uji  dan  pembanding,  dengan  dipipet  0,2 metanol  p.a  dan  ditambahkan  DPPH  0,05  mM sebanyak  3,8  ml  dibiarkan  selama  30  menit  dan diukur absorbaninya.
Pengukuran absorbansi DPPH pada larutan uji  sampel  dan  pembanding  dilakukan  dengan dipipet  0,2  ml  larutan  uji  (sampel  uji  ekstrak kental, fraksi etil asetat, fraksi n-heksan dan fraksi air)  dan  larutan  pembandiing  yang  telah disiapkan,  secara  berurutan  masing-masing ditambahkan  dengan  3,8  ml  larutan  DPPH  0,05 mM  dan  dibiarkan  selama  30  menit  ditempat gelap yang terlindung dari cahaya.
Absorbansi diukur dengan spektrofotometer UV-Vis
pada panjang gelombang serapan maksimum DPPH. Pengujian aktivitas antioksidan dilakukans sebanyak tiga kali pengulangan  untuk  masing-masing  konsentrasi larutan  uji  dan  larutan  pembanding  secara berurutan.

## d.  Penentuan  Daya  Hambat  DPPH  (% Inhibisi)
Besarnya hambatan serapan radikal DPPH diketahui  dari  perhitungan  persentase  inhibisi serapan DPPH dengan persamaan :
% Inhibisi = 𝐴 0 −𝐴 1 𝐴 1 × 100%
Keterangan:
A1 = Absorbansi DPPH sebelum direaksikan dengan larutan sampel dan pembanding A2 = Absorbansi DPPH pada λ maksimum setelah direaksikan dengan larutan sampel dan pembanding.

## e. Penentuan Daya Antioksidan (IC50)
Nilai  IC50  diperoleh  dengan  terlebih dahulu  membuat  persamaan  garis  yang menghubungkan  antara  %  Inhibisi  terhadap konsentrasi larutan uji masing-masing sampel dan pembanding.
IC50  diperoleh  dengan  menghitung konsentrasi  larutan  uji  yang  bisa  menghasilkan hambatan  radikal  bebas  (%  inhibisi)  sebesar  50 berdasarkan  persamaan  garis  regresi  linear menggunakan rumus :
𝑦 = 𝑎𝑥 + 𝑏 Keterangan : y = Persen Inhibisi (50) x = Konsentrasi (K)

## 2.4 Analisa Data
Data yang diperoleh dari alat Spektrofotometri UV-Vis berupa absorbansi DPPH kontrol  dan  DPPH  setelah  direaksikan  dengan larutan  uji  sampel  dan  pembanding  pada berbagai konsentrasi, digunakan untuk menghitung % Inhibisi. % Inhibisi digunakan untuk memperoleh IC50. Penyajian data dalam bentuk tabulasi, hasil dianalisis dengan membandingkan nilai  IC50  yang  didapatkan  dari  pengujian antioksidan  terhadap  ekstrak  kental,  fraksi  etil asetal, fraksi n-heksan dan fraksi air.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Proses ekstraksi dilakukan dengan
menggunakan  metode  maserasi,  sampel  serbuk kering sebanyak 350 gram seperti pada Gambar 1 di bawah ini,
Gambar 1. Sampel serbuk daun gaharu ( Aquilaria malaccensis L.)
menghasilkan  ekstrak  daun  gaharu  ( Aquilaria malaccensis L.) 12, 51 g dengan rendemen sebesar
3,57%  b/b.  Persen  rendemennya  ditentukan dengan cara perhitungan sebagai berikut :
Rendemen  = 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑘𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑎𝑤𝑎𝑙 𝑥 100%
Setelah  dilakukan  proses  ekstraksi  dan fraksinasi pada daun gaharu ( Aquilaria malaccensis L.),  kemudian  dilakukan  uji pendahuluan atau yang sering disebut dengan uji fitokimia.  Uji  pendahuluan  ini  dilakukan  untuk mengetahui senyawa metabolit sekunder apa saja yang  terkandung  di  dalam  tumbuhan  tersebut. Hasil  uji  fitokimia  terhadap  ekstrak  kental  dan fraksi  daun  gaharu  ( Aquilaria  malaccensis L.) menunjukkan  bahwa  daun  gaharu  mengandung flavonoid, fenolik, dan steroid seperti ditunjukkan pada tabel berikut:
Tabel 1. Hasil uji fitokimia Kandungan Kimia Ekstrak Kental Fraksi Air Fraksi Etil Fraksi N-heksan Alkaloid - - - - Flavonoid + + + - Fenolik + + + - Saponin - - - + Terpenoid + + + + Steroid + - + -
Antioksidan  ekstrak  dan  fraksi  diperiksa dengan  menggunakan  metode  peredaman radikal  bebas  difenilpikrilhidrazil  (DPPH)  yang diperiksa  pada  panjang  gelombang  maksimum DPPH  yang  diperoleh,  yaitu  516,2  nm  dengan pada Spektrofotometer UV – Vis.
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dengan metode peredaman radikal bebas DPPH ini, reaksi DPPH  dan  sampel  dilakukan  di  tempat  gelap terlindung  cahaya,  karena  larutan  DPPH  (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil)  sangat  mudah  teroksidasi dan  peka  jika  terpapar  cahaya  sangat  peka terhadap  cahaya  dan  sangat  mudah  teroksidasi. Proses tersebut dilakukan selama 30 menit di saat perubahan absorbansi DPPH yang diredam telah cukup (Molyneux, 2003).
Senyawa  antioksidan  pada  sampel  akan bereaksi  meredam  radikal  bebeas  DPPH,  yang secara  kualitatif  ditunjukkan  dengan  terjadinya
perubahan  warna  DPPH,  dari  berwarna  ungu sebelum bereaksi dengan sampel dan pembanding lalu berubah menjadi kuning pucat setelah  bereaksi,  Pereaksi  DPPH  berwarna  ungu pekat, apabila terjadi proses reduksi antara DPPH dan  sampel  uji  maka  akan  terjadi  perubahan warna pereaksi DPPH menjadi warna ungu pudar sampai kuning, hal ini berarti sampel uji memiliki aktivitas  penangkal  radikal  bebas  (Molyneux, 2003),  seperti  pada  penelitian  ini,  ditunjukkan pada Gambar 2 berikut.

## (a) (b) (c)
Gambar  2.  Perubahan  warna  Larutan  DPPH sebelum  direaksikan  (a)  dan  setelah
direaksikan  dengan  sampel  (b)  dan dengan pembanding (c)
Hasil  pengukuran  %  inhibisi  DPPH  dari pemeriksaan  absorbasi  DPPH  sebelum  dan setelah  direaksikan  dengan  ekstrak  kental ditunjukkan pada Tabel 2 berikut.
Tabel  2.  Peresentasi  (%)  Inhibisi  sampel  ekstrak kental pada berbagai konsentrasi Konsentrasi (ppm) Inhibisi (%) 80 90,36 60 75,48 40 65,65 20 53,21 10 45,07
Hasil  pengukuran  %  inhibisi  DPPH  dari pemeriksaan  absorbasi  DPPH  sebelum  dan setelah direaksikan dengan fraksi kental n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi air pada berbagai variasi konsentrasi ditunjukkan pada Tabel 3 berikut.
Tabel 3. % Inhibisi sampel fraksi kental pada berbagai konsentrasi Konsentrasi (ppm) Inhibisi (%) Fraksi n- heksan Fraksi etil asetat Fraksi air 200 93,76 89,06 86,18 160 65,58 67,24 64,73 120 46,64 39,11 46,67 80 28,03 19,16 27,37 40 2,68 1,19 6,94
Nilai % inhibisi pada berbagai konsentrasi di buat  kurva  liniernya,  lalu  diperoleh  grafik  untuk ekstrak total pada persamaan Y = 0,624 X + 39,73 (R2  =  0,995),  untuk  fraksi  n-heksan  diperoleh persamaan  Y  =  0,549  X  +  18,57  (R2  =  0,994), untuk fraksi etil asetat diperoleh persamaan    Y =
0,556X  +  23,48  (R2  =  0,993),  untuk  fraksi  air diperoleh persamaan Y = 0,489x + 12,37 (R2 = 0,999).  Adapun  grafik  perbandingan  %  inhibisi berbagai  sampel  ditunjukkan  pada  Gambar  3 berikut.
Gambar 3. Grafik Hubungan Konsentrasi % Inhibisi terhadap Sampel, A) ekstrak kental; B) fraksi n- heksan; C) fraksi etil asetat; D) fraksi air
Hasil perhitungan IC50 dari ekstrak kental, fraksi  etil  asetat,  fraksi  n-heksan,  fraksi  air  dan pembanding  Vitamin  C  terdapat  pada  Tabel  4 berikut.
Tabel  4.  Hasil  perhitungan  tingkat  kekuatan antioksidan (IC50) Sampel Uji Nilai IC50 (ppm) Ekstrak Total 16,45 Fraksi Etil Asetat 47,69 Fraksi N-heksan 57,24 Fraksi Air 76,95 Vitamin C 26,94
Aktivitas  antioksidan  yang  diduga  dimiliki daun  gaharu  disebabkan  kandungan  flavanoid dan  fenolik,  seperti  yang  diketahui  bahwa senyawa  flavanoid  dan  fenolik  yang  termasuk dalam golongan polifenol dapat berfungsi sebagai antioksidan  yang  dapat  berfungsi  sebagai antioksidan  karena  adanya  gugus  hidroksil  yang terikat pada strukturnya. Aktivitas antioksidan itu sendiri  tergantung  pada  sifat  biologis  dan farmakologis (Majewska dkk , 2011).
Semakin  besar  kemampuan  menghambat radikal  bebas,  maka  semakin  besar  aktivitas antioksidannya,  sehingga  aktivitas  antioksidan tersebut  dapat  diketahui  melalui  persen  inhibisi. Nilai  ini  ditentukan  dengan  menggunakan  nilai absorbansi  DPPH  sebelum  dan  sesudah penambahan sampel  ekstrak dan  berbagai  fraksi yang  mana  nilai  absorban  DPPH  dikurangi  nilai absorban  sesudah  penambahan  sampel  ekstrak dan  berbagai  fraksi  dibagi  nilai  absorban  DPPH tersebut  dikali  100%.  Pengujian  aktivitas antioksidan  dilakukan  sebanyak  tiga  kali  untuk masing-masing konsentrasi sampel.
Hasil  perhitungan  IC50  ekstrak  total  dan ketiga  fraksi  pada  Tabel  4,  menunjukkan  hasil bahwa  ekstrak  kental  daun  gaharu  mempunyai IC50  yang  paling  kuat  dibandingkan  dengan  etil asetat, sedangkan pada fraksi n-heksan dan fraksi air mempunyai IC50 terendah dibanding dengan ekstrak kental dan fraksi etil asetat tetapi fraksi n- heksan dan fraksi air masih tergolong antioksidan kuat. Hal ini dikarenakan ekstrak kental dan fraksi etil asetat diduga memiliki senyawa flavonoid dan fenolik  yang  memiliki  sifat  antioksidan.  Senyawa flavonoid  dan  fenolik  yang  terkandung  dalam ekstrak dan fraksi atil asetat daun gaharu dengan gugus  hidroksil  bebas  baru  mempunyai  aktivitas penangkap  radikal  dan  berperan  untuk pencegahan  radikal  bebas  baru  dengan  cara
memutus  reaksi  berantai  dan  mengubahnya menjadi produk yang lebih stabil.

## 4. KESIMPULAN
Kesimpulan  penelitian  potensi  antioksidan dari  ekstrak  dan  berbagai  fraksi  daun  gaharu ( Aquilaria malaccensis L . ) terhadap pereaksi DPPH yang telah dilakukan adalah sebagai berikut:
1. Aktivitas antioksidan dari ekstrak kental, , fraksi n-heksan  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air  daun gaharu  ( Aquilaria  malaccensis L.)  diperoleh nilai  IC50  berturut-turut  adalah  16,45  ppm, 57,24 ppm, 47,69 ppm, dan 76,95 ppm.
2. Ekstrak  kental  daun  gaharu  ( Aquilaria malaccensis L.)  memiliki  aktivitas  antioksidan (IC50)  yang  tertinggi  dengan  intensitas  yang tergolong sangat kuat

## REFERENSI
[1] Muhani, M., Sari, R. dan Fajriaty, I. 2017. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol.
Pharmaceutical Sciences and Research. Vol. 4, No.3  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Daun  Gaharu  (Aquilaria  microcarpa  Baill.) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Proteus mirabilis.
[2]  Nugraha,  R.,  Batubara,  R.  dan  Ginting,  H. (2015). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun  Gaharu  ( Aquilaria Malaccensis,  LAMK) berdasarkan  umur  pohon.Peronema  Forestry Science. Vol. 4 No. 1
[3] Huda, A.W.N., Munira, M.A.S., Fitrya, SD. And Salmah,  M.  2009.  Anitoxidant  activity  of Aquilaria malaccensis (thymelaeaceae) leaves. Pharmacognosy Research. Vol. 1. Issue 5, hal. 270 – 273.
[4]  Maharani,  R.,  Fernandes,  A.,  Turjaman,  M., Lukmandaru, G. and Kuspradini, H. 2016. “The Characterization of Phytochemical and GC-MS Analysis  on  Borneo  Agarwood Aquilaria Malaccensis, Lamk Leaves and Its Utilization as an Anti-Browning in Apple Juice (International Journal of Pharmacognosy and Phytochemical Research. 8 (10). 1576 – 1582
[5] Yanti, I.G.A.A.D., Swastini, D.A., dan Kardena, I.M. Skrining Fitokimia Ekstrak Metanol Daun Gaharu  (Gyrinops  versteegii  (Gilg)  Domke). Jurnal Farmasi Udayana. Vol. 2. No.4
[6]  Harfinda,  E.  M.,  Normagiat,  S.,  dan Hardiansyah,  G.  2017.  Potensi  Senyawa Metabolit  Sekunder  Daun  Aquilaria  sp  Asal Kalimantan  Barat  untuk  Pembuatan  Teh
Herbal.  Seminar  Nasional  Penerapan  Ilmu Pengetahuan  dan  Teknologi,  Pontianak,  23  – 24 Mei 2017
[7]  Molyneux,  P.  2004.  The  use  of  stable  free radikal  Diphenyl-Picrylhydrazyl  (DPPH)  for estimating  antioxidan  activity. J.  Sci.  Tecnol ,
26(2), 211-219.