Agro Bali : Agricultural Journal                                                                                     e-ISSN 2655-853X Vol. 7 No. 2: 559-567, July 2024 https://doi.org/10.37637/ab.v7i2.1729

## Imobilisasi Crude Enzyme Dari Limbah Buah dan Sayur Menggunakan Material Berbasis Cangkang Telur

## Immobilization of Crude Enzyme from Fruit and Vegetable Waste Using Eggshell-Based Material
Ery Susiany Retnoningtyas 1  , Adriana Anteng Anggorowati 2 , Shella Permatasari Santoso 1 , Debora Ayuningtyas 3 , Kevina Tomiko Juanda 3
1 Chemical Engineering Master Program, Widya Mandala Surabaya Catholic University, Surabaya, Indonesia 2 Professional Engineer Study Program, Widya Mandala Surabaya Catholic University, Surabaya, Indonesia
3 Department of Chemical Engineering, Widya Mandala Surabaya Catholic University, Surabaya, Indonesia
 Corresponding author email: ery@ukwms.ac.id
Article history : submitted: February 11, 2024; accepted: July 20, 2024; available online: July 31, 2024 Abstract. The  abundance  of  agricultural  waste  such  as  fruit  peels,  vegetable  waste  and  egg  shells  has  the opportunity  to  be  processed  into  valuable  products  such  as  enzymes  and  biomaterials.  The  shift  in  industrial processes towards a more environmentally friendly direction has gradually given rise to the need for enzymes as reaction  biocatalysts.  This  research  aims  to  study  the  potential  of  egg  shell  waste  as  a  support  material  for immobilizing crude enzymes produced from fermentation of dragon fruit peels, orange peels, avocado peels and vegetable  waste,  namely  water  spinach  rootstock. The  research  was  carried  out  on  a  laboratory  scale.  The experimental method is divided into several stages, namely: synthesis of crude enzyme from fruit and vegetable waste,  purification  of  enzyme  by  concentration,  synthesis  of  eggshell-based  material,  and  the  final  stage  is immobilization of crude enzyme into the material. The results of this study indicate that egg shell membrane (MCT) and processed egg shell into hydroxyapatite (HA) material have the potential to  be materials for immobilizing crude enzyme respectively: 33.05 ± 3.62 U.mL -1 and 46.73 ± 0.27 U.mL -1 for MCT and HA. These results indicate that HA material has more potential than MCT for use as enzyme immobilization. HA material from egg shells which is able to immobilize crude enzymes provides an illustration of the benefits of waste into products that can be used to develop processes in industries that are environmentally conscious.

## Keywords: crude enzyme; egg shell; immobilization
Abstrak. Berlimpahnya  sisa hasil pertanian seperti  kulit  buah, sisa sayur dan cangkang telur  berpeluang untuk diolah menjadi produk yang berharga seperti enzim maupun biomaterial. Beralihnya proses industri ke arah yang lebih ramah lingkungan berangsur-angsur memunculkan kebutuhan enzim sebagai biokatalis reaksi. Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari potensi limbah cangkang telur sebagai material support untuk mengimobilisasi crude enzyme yang dihasilkan dari fermentasi kulit buah naga, kulit jeruk, kulit alpukat dan sisa sayur yaitu sisa batang bawah  kangkung.  Penelitian  dilakukan  dalam  lingkup  skala  laboratorium.  Metode  percobaan  terbagi  menjadi beberapa tahapan yaitu: sintesa crude enzyme dari  limbah buah dan sayur, purifikasi  enzim dengan pemekatan, sintesa  material  berbahan  dasar  cangkang  telur,  dan  tahap  terakhir  adalah  imobilisasi crude  enzyme ke  dalam material.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  membran  cangkang  telur  (MCT)  dan  olahan  cangkang  telur menjadi material hydroxyapatite (HA) berpotensi menjadi material untuk mengimobilisasi crude enzyme berturut- turut: 33,05 ± 3,62 U.mL -1 dan 46,73 ± 0,27 U.mL -1 untuk MCT dan HA. Dari hasil ini mengindikasikan bahwa material  HA  lebih  berpotensi  daripada  MCT  untuk  digunakan  sebagai  imobilisasi  enzim.  Material  HA  dari cangkang  telur  yang  mampu  mengimobilisasi crude  enzyme ini  memberikan  gambaran  akan  manfaat  limbah menjadi produk yang dapat digunakan untuk pengembangan proses di industri yang konsen terhadap lingkungan.
Kata kunci: cangkang telur; crude enzyme ; imobilisasi

## PENDAHULUAN
Produksi  telur  ayam  di  Indonesia mengalami  kenaikan  tiap  tahunnya.  Bahkan kenaikannya  hingga  9,9%  untuk  tahun  2023 yaitu sebesar  6.117.905,40 ton (BPS, 2023). Keadaan  ini  menunjukkan  bahwa  tingkat konsumsi  telur  di  Indonesia  cukup  tinggi,
tentunya  limbah  cangkang  telur  yang dihasilkan juga meningkat. Limbah cangkang telur  ini  harus  dikendalikan  agar  tidak menimbulkan pencemaran lingkungan. Komposisi kimia dari cangkang telur adalah 94%  berupa  kalsium  karbonat  dan  sisanya adalah mineral seperti P, Mg, Na, K, Zn, Mn sedangkan bagian membran cangkang
Agro Bali : Agricultural Journal                                                                                     e-ISSN 2655-853X Vol. 7 No. 2: 559-567, July 2024 https://doi.org/10.37637/ab.v7i2.1729
telurnya banyak mengandung protein sekitar 90%, lemak 3%, gula 2% dan sisanya mineral 5  %  (Han  et  al.,  2023).  Oleh  karena  itu apabila  tidak  diolah  dengan  baik  akan menjadi  tempat  hidupnya  mikroorganisme yang  dapat  mencemari  lingkungan , berupa bau  yang  kurang  sedap  hasil  degradasi protein yang berasal dari membran cangkang telur  yang  banyak  mengandung  protein, lemak  dan  gula  tempat  yang  subur  bagi mikroba pembusuk.
Pemanfaatan  limbah  cangkang  telur menjadi suatu material yang mempunyai nilai yang tinggi telah banyak dilakukan seperti di bidang pertanian menjadi pupuk tanaman (Vu et  al.,  2022),  bidang  farmasi  menjadi komponen  produk  kosmetik,  (Baláž  et  al., 2021),  bidang  industri  menjadi  material calcite (Cree & Rutter, 2015) , dan imobilisasi biomassa  ataupun  enzim  (Rasheed  et  al., 2020;  Shahrin  et  al.,  2020).  Pemanfaatan cangkang  telur  sebagai  material  untuk mengimobilisasi enzim, saat ini berkembang seiring dengan maraknya proses hijau. Proses hijau  lebih  diminati  karena  lebih  ramah terhadap  lingkungan.  Penggunaan  enzim dalam  industri  merupakan  alternatif  proses yang potensial dikembangkan.
Produksi enzim dapat dilakukan melalui proses  fermentasi  limbah  buah  dan  sayur seperti  nenas,  jeruk,  mangga,  tomat  dan kembang  kol  (Arun  &  Sivashanmugam, 2015).  Tetapi  harga  enzim  yang  mahal menjadi  kendala  untuk  diaplikasikan  di industri,  sehingga  metode  imobilisasi  enzim merupakan  salah  satu  alternatif  untuk menyelesaikan  permasalahan  ini.  Beberapa keunggulan  dari  enzim  yang  diimobilisasi adalah meningkatkan kestabilan, memudahkan  pemeliharaan,  mempermudah pemisahan  dengan  produk,  serta  dapat digunakan  kembali  ( reuse )  (Shahrin  et  al., 2020).
Tujuan penelitian ini adalah mempelajari kinerja limbah cangkang telur sebagai media untuk  mengimobilisasi  enzim  selulase  kasar ( crude )  yang  dibuat  dari  limbah  sisa  hasil pertanian.  Enzim  selulase  sering  digunakan dalam  industri pulp dan  kertas, biofuel
maupun industri bahan kimia etanol (Imran et al., 2019; Hamzah et al., 2019; Pardeny et al., 2023; Widyaningrum & Rizqiyah, 2023).

## METODE
Penelitian ini dilakukan di  laboratorium Biomaterial,  Universitas  Katolik  Widya Mandala  Surabaya  dengan  waktu  selama  12 bulan.  Pada  penelitian  ini  terbagi  dalam  4 tahap: (1) sintesa enzim, (2) purifikasi crude enzyme, (3)  sintesa  material  dan  (4) imobilisasi  enzim  ke  dalam  material. Tahapan  ini  berdasarkan  metode  yang  telah dilakukan  oleh  Ainiyah  tetapi  dengan modifikasi (Ainiyah, 2017).
Tahap  (1):  Dimulai  dengan  pemilihan sisa  hasil  pertanian  yang  akan  digunakan sebagai  bahan  baku  dalam  sintesis  enzim berdasarkan kandungan makro nutrisi (karakterisasi  bahan  baku).  Hasil  pertanian yang mengandung makro nutrisi karbohidrat, lemak,  protein,  dan  serat  seperti  kulit  buah naga,  kulit  jeruk,  kulit  alpukat  serta  batang kangkung dipilih untuk substrat bagi mikroba untuk produksi enzim dengan menambahkan molase  sebagai  sumber  karbon.  Setelah  itu dilakukan  proses  fermentasi  untuk  masing- masing  jenis  substrat  kulit  buah  dan  sisa sayur tersebut, dengan menggunakan beberapa  jenis  mikroba  yaitu  bakteri  dan fungi  yang  biasa  digunakan  untuk  pangan. Untuk  bakteri  dipilih mixed  culture spesies konsorsium bakteri probiotik yaitu Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus dan Lactobacillus  plantarum sedangkan  fungi dipilih  khamir Saccharomyces  cereviceae . Proses  fermentasi  berlangsung  selama  2 bulan dengan suhu fermentasi 30 o C.
Pemilihan  suhu  fermentasi  ini  agar mendekati  suhu  ruang  dan  supaya  kinerja optimal maka durasi waktu fermentasi selama 2  bulan.  Kondisi  ini  untuk  mendapatkan aktivitas  enzim  yang  paling  tinggi  sehingga dapat  diaplikasikan  pada  produksi  skala industri  dengan  meminimalkan  kebutuhan energi.    Proses  fermentasi  dilakukan  dalam fermentor  yang  dibuat  dari  botol  plastik bertutup  volume  1,5  Liter  yang  dilengkapi
Agro Bali : Agricultural Journal                                                                                     e-ISSN 2655-853X Vol. 7 No. 2: 559-567, July 2024 https://doi.org/10.37637/ab.v7i2.1729
dengan  selang  yang  dihubungkan  dengan botol  plastik  volume  600  mL  tanpa  tutup yang  berisi  200  mL  etanol  untuk  menjaga agar  kondisi  tetap  steril  dan  gas  yang terbentuk  selama  proses  fermentasi  dapat keluar  dari  fermentor.  Untuk  pengukuran aktivitas crude enzyme dipilih kondisi pH dan suhu optimum masing-masing aktivitas crude enzyme .  Tahap  (2):  Proses  pemurnian crude enzyme dipilih  proses  pemekatan  dengan metode  evaporasi  dengan  menggunakan rotary evaporator.
Tahap  (3):  Sintesa  material  berbahan dasar  cangkang  telur  yaitu  membran cangkang  telur  (MCT)  dan hydroxyapatite (HA) yang dibuat dari cangkang telur. Proses pembuatan ke-2 material ini akan dijelaskan lebih lanjut. Tahap (4) Imobilisasi enzim ke dalam  material,  dilakukan  dengan  metode adsorpsi  selama  24  jam  dengan  suhu  30 o C sambil  di -shaker 145  rpm  di  dalam  alat Shaker  Memmerth .  Selanjutnya  dilakukan analisis  untuk  mengukur  banyaknya  enzim yang  terimobilisasi  ke  dalam  material. Analisis  yang  dilakukan  adalah  analisis aktivitas enzim terimobilisasi dengan metode CMCase dan analisis kandungan protein yang terimobilisasi dengan metode Bradford.
Metode pembuatan material MCT dapat dijelaskan sebagai berikut: mula-mula limbah cangkang  telur  ayam  dibersihkan  terlebih dahulu  dengan  air.  Membran  kemudian secara perlahan dipisahkan dari cangkangnya dan dibersihkan dengan aquades selanjutnya dikeringkan  pada  suhu  kamar.  Untuk menghomogenkan  kondisi  maka  dilanjutkan dengan  proses  pengeringan  menggunakan Oven Memmert pada  suhu  70°C  selama  3 jam.  Setelah  kering,  MCT  dihaluskan menggunakan blender dan diayak hingga 140 mesh dan siap digunakan.
Persiapan  sintesis  material  HA  dari cangkang telur dimodifikasi dari  (Sanosh et al., 2009). Serbuk cangkang telur dikalsinasi pada suhu 900 °C selama 5 jam. Serbuk CaO yang  dihasilkan  dari  proses  kalsinasi kemudian  dilarutkan  dengan  cairan  asam nitrat  pekat  (HNO 3 ) 65%. CaO  yang  telah larut  kemudian  diencerkan  dengan  aquades
sehingga  didapatkan  larutan  kalsium  nitrat (Ca(NO 3 ) 2 1  M.  Secara  perlahan,  larutan kalium  dihidrogen  fosfat  (KH 2 PO 4 )  0,6  M ditambahkan ke dalam larutan kalsium nitrat (Ca(NO 3 ) 2 )  sambil  diaduk.  Kedua  larutan tersebut ditambahkan amonia untuk mempertahankan  pH  10  sambil  diaduk menggunakan magnetic stirrer selama 1 jam. Kemudian larutan tersebut didiamkan selama 24  jam.  Selama  24  jam,  larutan  terbentuk  2 bagian  dimana  amonia  berada  di  atas sedangkan  endapan  putih  berada  di  bagian bawah.  Larutan  ammonia  di  bagian  atas dibuang dan endapan dicuci dengan aquades untuk  menghilangkan  keberadaan  ion  NH 4 + dan  NO 3 - ,  kemudian  disaring  dengan menggunakan  kertas  saring  dan  dikeringkan menggunakan Oven  Memmerth pada  suhu 65 °C selama  5  jam  dan  dilanjutkan  dengan pemanasan  di  dalam furnace pada  suhu 700 °C selama  30  menit.  Setelah  dingin, serbuk  putih  material  HA  siap  untuk digunakan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemanfaatan produk fermentasi dari sisa hasil  pertanian  seperti  kulit  buah,  menjadi pupuk  organik  cair,  telah  dimanfaatkan sebagai campuran media tanam untuk produk tomat dan cabai rawit (Assadiyah et al., 2023; Azzahra  et  al.,  2023) . Selain  sebagai  pupuk organik cair, fermentasi kulit buah juga dapat digunakan  sebagai  media  untuk  sintesa enzim.
Sisa  hasil  pertanian  yang  digunakan sebagai  bahan  baku  untuk  sintesa  enzim, dipilih  kulit  jeruk,  kulit  buah  naga,  kulit alpukat dan batang kangkung. Proses sintesa enzim dapat dilihat pada Gambar 1 . Selanjutnya crude enzyme yang dihasilkan, dilakukan analisis untuk menentukan  aktivitas  enzim  amilase,  lipase, protease  dan  selulase.  Penentuan  aktivitas enzim amilase, menggunakan metode Dinitrosalicylic  acid  (DNS)  dengan  amilum sebagai  substrat,  metode  titrimetri  untuk aktivitas  lipase  dengan  menggunakan  virgin olive oil sebagai substrat, dan aktivitas enzim
protease  menggunakan  metode  Casein Digestion  Unit  (CDU)  dengan  substrat casein, sedangkan aktivitas selulase menggunakan  metode  CMCase  dengan substrat Carboxy Methyl Cellulose (Arun & Sivashanmugam, 2015).
Berdasarkan Gambar  2 dan Tabel  1 , menunjukkan  bahwa  ke-4  jenis  sisa  hasil pertanian tersebut dapat menghasilkan 4 jenis enzim  yaitu  amilase,  lipase,  protease  dan selulase.  Data  yang  tercantum  dalam Gambar  2 ,  dipilih  hasil  analisis  kandungan enzim yang tertinggi. Jika dicermati dari ke- 4 jenis enzim yang dihasilkan maka aktivitas enzim selulase adalah yang tertinggi berturut- turut:  427,31  U.mL -1 ;  146,76  U.mL -1 dan
71,46 U.mL -1 untuk kulit alpukat, kulit jeruk dan  batang  kangkung.  Hasil  ini  selaras dengan kandungan nutrisi yang terdapat pada sisa sayur dan buah tersebut yaitu didominasi oleh  komponen  selulosa  (karbohidrat), setelah  komponen  air  (dapat  dilihat  pada Gambar  3 dan Tabel  2 ).  Oleh  sebab  itu, dipilih enzim selulase yang digunakan untuk mempelajari  karakteristik  imobilisasi  enzim di dalam material support.
Gambar 2. Kandungan enzim pada berbagai limbah sayur dan buah
Selanjutnya enzim selulase hasil fermentasi  ini  disebut crude  enzyme .  Proses purifikasi crude  enzyme yang  digunakan adalah  metode  pemekatan.  Mekanisme  dari metode  ini  adalah  dengan  menguapkan sebagian  kandungan  air  yang  terdapat  di dalam crude enzyme . Proses pemekatan dapat dilihat  pada Gambar  1(g) yaitu  dilakukan
dengan  kondisi  operasi  tekanan  dibawah  1 atm agar enzim tidak mengalami kerusakan.
Pada penelitian dipilih tekanan 70 mbar dan suhu 50 o C. Hasil analisis aktivitas crude enzyme ini  adalah  104,20  ±  0,87  U.mL -1 dengan  pH=5. Crude  enzyme selanjutnya diimobilisasi ke dalam material support.
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 Kulit jeruk manis Kulit buah naga Kulit alpukat Batang kangkung K ons ent ra si (U .m L -1 ) Jenis Sayur/Buah Amilase Lipase Protease Selulase (a) (b) (c) (d) (e)
(f) (g) Gambar 1 . Rangkaian sintesa enzim: (a) batang bawah kangkung, (b) kulit jeruk, (c) kulit buah naga, (d) kulit alpukat, (e) proses fermentasi, (f) proses filtrasi vakum crude enzyme , (g) proses pemekatan crude enzyme
Tabel 1. Hasil analisis aktivitas enzim yang terkandung pada beberapa jenis kulit buah dan batang kangkung Jenis sayur/buah Amilase (U.mL -1 ) Lipase (U.mL -1 ) Protease (U.mL -1 ) Selulase (U.mL -1 ) Kulit jeruk 1,06 ±0,48 64,18 ±0,62 0,42 ±0,71 146,76 ±0,28 Kulit buah naga 1,28 ±0,58 46,94 ±0,97 1,59 ±0,07 38,51 ±0,30 Kulit alpukat 4,19 ±0,24 12,73 ±0,33 9,09 ±0,21 427,31 ±0,51 Batang kangkung 1,35 ±0,52 7,89 ±0,49 3,14 ±0,97 71,46 ±0,19
Gambar 3 . Komposisi nutrisi pada berbagai limbah sayur dan buah
Tabel 2. Hasil analisis proksimat nutrisi pada berbagai jenis kulit buah dan batang kangkung
Komponen Komposisi (%) Kulit jeruk Kulit buah naga Kulit alpukat Batang kangkung Karbohidrat 32,04 ± 0,00 67,29 ± 0,00 7,35 ± 0,00 2,86 ± 0,00 Lemak 4,13 ± 0,55 7,70 ± 0,15 3,84 ± 0,04 1,40 ± 0,18 Protein 0,56 ± 0,41 2,38 ± 0,25 3,07 ± 0,13 0,15 ± 0,00 Abu 2,17 ± 0,35 0,25 ± 0,58 0,91 ± 0,06 0,89 ± 0,00 Air 61,10 ± 0,72 22,38 ± 0,03 84,83 ± 0,07 94,70 ± 0,08
Pembuatan material support ini dilakukan dengan memanfaatkan bahan baku limbah  cangkang  telur.  Bagian  cangkang telur yang dimanfaatkan adalah membran dan cangkangnya, dapat dilihat pada Gambar 4. Bahan  dasar  material  dipilih  cangkang  telur karena  limbah  ini  sangat  berlimpah,  oleh karena  konsumsi  telur  di  Indonesia  juga besar.  Material  yang  digunakan  dipilih membran  cangkang  telur  yang  banyak
mengandung protein dan cangkang telur yang diolah  lebih  lanjut  menjadi  material  HA karena    banyak  mengandung  mineral kalsium.  Sudah  banyak  penelitian  yang memanfaatkan  MCT  dan  HA  sebagai material  untuk  imobilisasi  enzim,  tetapi semuanya  menggunakan  enzim  murni  pada skala  laboratorium  (Girelli  et  al.,  2020; Girelli  &  Scuto,  2021;  Zdarta  et  al.,  2022). Hal  ini  tentunya  kurang  ekonomis  apabila
0 20 40 60 80 100 Karbohidrat Lemak Protein Abu Air K o m po si si ( % ) Kandungan nutrisi Kulit jeruk manis
Kulit buah naga
Kulit alpukat
Batang kangkung
Agro Bali : Agricultural Journal                                                                                     e-ISSN 2655-853X Vol. 7 No. 2: 559-567, July 2024 https://doi.org/10.37637/ab.v7i2.1729
diaplikasikan dalam jumlah yang besar skala industri.  Oleh  karena  inilah  perlu  dilakukan penelitian  terkait  kedua  material  tersebut
dalam kemampuannya mengimobilisasi crude  enzyme yang  disintesa  melalui  proses fermentasi limbah buah dan sayur.
Pada Tabel  3 ,  disajikan  data  penelitian yaitu parameter pH point zero charge (pH pzc ) dari material MCT dan HA. Dari data tersebut dapat dijelaskan bahwa untuk material MCT saat  pH larutan  di  bawah  pH pzc (7,36)  maka permukaan  material  MCT  akan  bermuatan positif  sebaliknya  saat  pH  larutan  di  atas
pH pzc (7,36) maka permukaan material MCT akan cenderung bermuatan negatif.  Hal yang sama  juga  terjadi  pada  material  HA  akan tetapi  pada  pH pzc  = 8,41.  Oleh  karena crude enzyme yang  akan  diimobilisasi mempunyai pH=5, maka baik material MCT maupun HA akan bermuatan positif.
Tabel 3. pH pzc pada material MCT dan HA Jenis Material pH pzc MCT 7,36 HA 8,41 Keberadaan crude  enzyme yang  dapat terimobilisasi ke dalam material diindikasikan  dengan  parameter  aktivitas enzim  dan  konsentrasi  protein.  Data  hasil penelitian kedua parameter ini disajikan pada Gambar 5 . Pada Gambar 5(a) menunjukkan bahwa  aktivitas crude enzyme terimobilisasi pada  material  berturut-turut  adalah 33,05 ±3,62 dan 46,73  ±0,27 U.mL -1 untuk  MCT dan HA, sedangkan Gambar 5(b) menunjukkan  konsentrasi  protein  yang terimobilisasi  pada  material  berturut-turut adalah 270,17 ± 3,88 dan 375,13 ± 3,01 ppm untuk  MCT  dan  HA.  Dari  kedua  data  ini dapat  dilaporkan  bahwa  material  HA mempunyai  kemampuan  untuk  mengimobil crude  enzyme lebih  baik  daripada  MCT.
Material HA mempunyai kemampuan aktivitas  enzim  terimobilisasi  41,4%  lebih baik daripada MCT.
Berdasarkan  data  yang  disajikan  pada Tabel 4 dan Gambar 5 , menunjukkan bahwa aktivitas crude  enzyme setelah  diimobilisasi ke  dalam  material,  mengalami  penurunan baik  di  material  MCT  maupun  HA dibandingkan  saat  dalam  keadaan  bebas. Keadaan  ini  serupa  dengan  penelitian  yang dilakukan peneliti yang lain (Chattopadhyay &  Sen,  2012;  Cheng  et  al.,  2023).  Hal  ini disebabkan  sisi  aktif  dari crude  enzyme mengalami  perubahan  saat  terimobilisasi  ke dalam  material  akibatnya  afinitas  antara crude  enzyme dan  substrat  mengalami penurunan.

## MCT
(a) (b)
Gambar 4 . Material support : (a) membran cangkang telur (MCT) dan (b) cangkang telur yang diolah lebih lanjut menjadi hydroxyapatite (HA) HA
Tabel 4 Aktivitas crude enzyme pada pH 5 dan suhu 30 o C, sebelum dan sesudah imobilisasi
Enzim Aktivitas enzim (U.mL -1 ) Retensi aktivitas (%) Crude enzyme bebas 104,20 ± 0,87 100 Crude enzyme terimobilisasi dalam material MCT 33,05 ± 3,62 32 Crude enzyme terimobilisasi dalam material HA 46,73 ± 0,27 45

## SIMPULAN
Olahan  cangkang  telur  yang  banyak mengandung  kalsium  menjadi  material  baru seperti hydroxyapatite mampu  digunakan sebagai imobilisasi crude enzyme. Selain itu fermentasi  limbah  buah  dan  sayur  seperti kulit buah naga, kulit jeruk, kulit alpukat dan sisa batang bagian bawah kangkung memberikan  gambaran  potensinya  sebagai sumber  bahan  baku  untuk  sintesa crude enzyme selulase. Peningkatan retensi aktivitas  enzim  yang  lebih  baik  dapat dilakukan  dengan  pencarian  material  yang lain tentunya dicari yang lebih sesuai dengan karakteristik dari crude enzyme selulase .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih kepada  Lembaga  Penelitian  dan  Pengabdian kepada  Masyarakat  (LPPM),  Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya (UKWMS)  yang  telah  mendanai  kegiatan
penelitian  ini  sehingga  terlaksana  dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Ainiyah, S. (2017). Imobilisasi Selulase dan Xylanase pada Magnetic Kitosan untuk Produksi Gula Reduksi . [Tesis]:
Surabaya:  Institut  Teknologi  Sepuluh Nopember. https://repository.its.ac.id/50916/1/File %20Rep.pdf [10 April 2024]
Arun,  C.,  &  Sivashanmugam,  P.  (2015). Investigation of biocatalytic potential of garbage  enzyme  and  its  influence  on stabilization of industrial waste activated  sludge. Process  Safety  and Environmental  Protection , 94 (C),  471– 478.
https://doi.org/10.1016/j.psep.2014.10.0 08
Assadiyah,  A.  N.,  Dewanti,  F.  D.,  &
Sulistyono,  A.  (2023).  Respon  Hasil Tanaman Tomat (Solanum
0 20 40 60 80 100 120 MCT HA Crude enzyme bebas A kt iv it as E nz im (U .m L -1 ) Jenis material 0 200 400 600 800 1000 1200 MCT HA Crude enzyme bebas K ons ent ra si prot ei n (ppm ) Jenis material (a) (b)
Gambar 5 . Performa material support dibandingkan dengan crude enzyme bebas:
(a) aktivitas enzim terimobilisasi dalam material, (b) konsentrasi protein terimobilisasi dalam material
lycopersicum  L.)  terhadap  Macam Media  Tanam  dan  Konsentrasi  Pupuk Organik Cair Limbah Kulit Buah. Agro Bali :  Agricultural  Journal , 6 (1),  93– 104.
https://doi.org/10.37637/ab.v6i1.1079 Azzahra, A., Guniarti, G., & Dewanti, F. D.
(2023).  Pengaruh  Komposisi  Media Tanam dan Konsentrasi Pupuk Organik Cair  Kulit  Pisang  Kepok  terhadap Produksi  Cabai  Rawit  (Capsicum frutescens  L.). Agro Bali : Agricultural
Journal , 6 (1),
82–92. https://doi.org/10.37637/ab.v6i1.1076
Baláž,  M.,  Boldyreva,  E.  V.,  Rybin,  D.,
Pavlović,  S.,  Rodríguez-Padrón,  D., Mudrinić, T., & Luque, R. (2021). State- of-the-Art  of  Eggshell  Waste  in Materials  Science:  Recent  Advances  in Catalysis, Pharmaceutical Applications, and  Mechanochemistry. Frontiers  in Bioengineering  and  Biotechnology. 8. 612567. https://doi.org/10.3389/fbioe.2020.6125 67
BPS.  (2023). Produksi  telur  ayam  petelur menurut  propinsi  (Ton),  2021-2022 . https://www.bps.go.id/id/statistics- table/2/NDkxIzI=/produksi-telur-ayam- petelur- menurut-provinsi.html [11 Februari 2024]
Chattopadhyay,  S.,  &  Sen,  R.  (2012).  A comparative  performance  evaluation  of jute and eggshell matrices to immobilize pancreatic lipase. Process Biochemistry , 47 (5),
749–757. https://doi.org/10.1016/j.procbio.2012.0
2.003
Cheng, Z., Sun, Z., Wei, F., Yu, J., Zhao, J., Chen, J., Wang, J., & Zhang, Y. (2023). Immobilization  of  the  crude  enzyme extracted  from  Stenotrophomonas  sp.
GYH within modified zeolitic imidazolate  framework  (ZIF-8-NH2) and  its  application  in  trichloromethane removal. Environmental  Functional
Materials ,
2 (1), 36–45. https://doi.org/10.1016/j.efmat.2023.02. 001
Cree,  D.,  &  Rutter,  A.  (2015).  Sustainable Bio-Inspired Limestone Eggshell Powder  for  Potential  Industrialized Applications. ACS Sustainable Chemistry and Engineering , 3 (5), 941– 949. https://doi.org/10.1021/acssuschemeng.
5b00035
Girelli, A. M., Astolfi, M. L., & Scuto, F. R. (2020). Agro-industrial wastes as potential carriers for enzyme
immobilization:
A review. Chemosphere , 244 , 125368.
https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2 019.125368
Girelli,  A.  M.,  &  Scuto,  F.  R.  (2021). Eggshell  membrane  as  feedstock  in enzyme  immobilization. Journal  of Biotechnology , 325 , 241–249. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2020.1
0.016
Hamzah,  A.,  Ainiyah,  S.,  Ramadhani,  D., Parwita,  G.  E.  K.,  Rahmawati,  Y., Soeprijanto,  Ogino,  H.,  &  Widjaja,  A. (2019). Cellulase and xylanase immobilized  on  chitosan  magnetic particles for application in coconut husk hydrolysis. International  Journal  of Technology , 10 (3), 613–623. https://doi.org/10.14716/ijtech.v10i3.29
05
Han, C., Chen, Y., Shi, L., Chen, H., Li, L.,
Ning, Z., Zeng, D., & Wang, D. (2023). Advances in eggshell membrane separation and solubilization technologies. Frontiers  in  Veterinary Science. 10 . 1116126.
https://doi.org/10.3389/fvets.2023.1116 126
Imran,  M.,  Bano,  S.,  Nazir,  S.,  Javid,  A., Asad,  M.  J.,  &  Yaseen,  A.  (2019). Cellulases  Production  and  Application of Cellulases and Accessory Enzymes in Pulp  and  Paper  Industry:  A  Review. Biological  Research , 4 (1),  29–39. https://journals.psmpublishers.org/inde x.php/biolres
Pardeny,  V.  I.,  Nurfadiya,  A.,  Hidayatulloh, I., Haq, M. U. U., & Permanasari, A. R.
(2023).  Reducing  Sugar  Production  by Cellulose  Immobilized  Enzyme  from the  Oil  Palm  Empty  Fruit  Brunch (OPEFB) Treated by Organosolv
Pretreatment. Jurnal Teknik Kimia Dan
Lingkungan , 7 (2), 58–66.
https://doi.org/10.33795/jtkl.v7i2.2437 Rasheed,  A.,  Ghous,  T.,  Mumtaz,  S.,  Zafar, M. N., Akhter, K., Shabir, R., Abdin, Z. U., & Shafqat, S. S. (2020).
Immobilization of Pseudomonas aeruginosa  static  biomass  on  eggshell powder for on-line preconcentration and determination  of  Cr  (VI). Open Chemistry ,
18 (1), 303–313.
https://doi.org/10.1515/chem-2020- 0031
Sanosh, K. P., Chu, M.-C., Balakrishnan, A., Kim,  T.  N.,  &  Cho,  S.-J.  (2009). Utilization  of  biowaste  eggshells  to synthesize nanocrystalline hydroxyapatite powders. Materials Letters , 63 (24–25), 2100–2102. https://doi.org/10.1016/j.matlet.2009.06 .062
Shahrin, N. A., Yong, G. G., & Serri, N. A. (2020).  Fructose  stearate  esterify  in packed  bed  reactor  using  immobilized lipase. IOP Conference Series: Materials  Science  and  Engineering , 716 (1). https://doi.org/10.1088/1757- 899X/716/1/012017
Vu, N. T., Dinh, T. H., Le, T. T. C., Vu, T. T. H., Nguyen, T. T. T., Pham, T. A., Vu, N.  L.,  Koji,  S.,  Hama,  S.,  Kim,  I.  S., Jang, D. C., Kim, D. H., & Tran, A. T. (2022).  Eggshell  powder  as  calcium source on growth and yield of groundnut (Arachis hypogaea L.). Plant Production  Science , 25 (4),  413–420. https://doi.org/10.1080/1343943X.2022 .2120506
Widyaningrum, T., & Rizqiyah, A. A. (2023).
Pengaruh  Rasio  Crude  Enzim  Selulase Trichoderma  reesei  dan  Aspergillus niger terhadap Kadar Gula dan
Bioetanol  Fermentasi  Kulit  Kacang Tanah (Arachis hypogaea L.) Menggunakan  Zymomonas  mobilis. Bioscientist :  Jurnal  Ilmiah  Biologi , 11 (2),
1615. https://doi.org/10.33394/bioscientist.v1
1i2.9487
Zdarta,  J.,  Jesionowski,  T.,  Pinelo,  M., Meyer, A. S., Iqbal, H. M. N., Bilal, M.,  Nguyen,  L.  N.,  &  Nghiem,  L. D.  (2022).  Free  and  immobilized biocatalysts for removing micropollutants  from  water  and wastewater:  Recent  progress  and challenges. Bioresource Technology, 344 . 126201.
https://doi.org/10.1016/j.biortech.2
021.126201