Uji Aktivitas Antibakteri Hasil Fermentasi Kulit Buah Naga Merah ( Hylocereus polyrhizus ) terhadap Propionibacterium acnes
Merry Agustina (a) , Lisa Soegianto (a)* , Restry Sinansari (a)
(a) Fakultas Farmasi, Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya, Indonesia
Bakteri  yang  berperan  dalam  tumbuhnya  jerawat  diantaranya  adalah Propionibacterium  acnes dan Staphylococcus  epedermidis .  Pengobatan  jerawat  menggunakan  antibiotik  dalam  jangka  panjang  dapat menimbulkan  resistensi  terhadap  antibiotik.  Kulit  buah  naga  merah  ( Hylocereus  polyrhizus )  dapat  digunakan sebagai  alternatif  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  golongan  senyawa  yang  terkandung pada hasil fermentasi kulit buah naga merah dan aktivitas antibakteri terhadap Propionibacterium acnes . Pada penelitian  ini  kulit  buah  naga  merah  difermentasi  selama  12  hari  pada  suhu  kamar,  hasil  fermentasi  diuji golongan senyawa dengan cara kromatografi lapis tipis dan uji aktivitas antibakteri dengan metode difusi cakram dengan  parameter  daerah  hambat  pertumbuhan  (DHP).  Hasil  yang  diperoleh  uji  aktivitas  antibakteri  hasil fermentasi kulit buah naga merah dengan konsentrasi 10%, 20%, 40%, 60%, 80% dan 100% tidak menunjukkan adanya hambat pertumbuhan  terhadap bakteri Propionibacterium acnes . Hasil skrining golongan senyawa hasil fermentasi kulit buah naga merah memiliki kandungan flavonoid.
Kata kunci : antibakteri, Propionibacterium acnes , kulit buah naga merah, fermentasi, difusi cakram
Antibacterial Activity of The Fermented Product of Red Dragon ( Hylocereus polyrhizus ) Fruit Peel Against Propionibacterium acnes
Acnes can be caused by Propionibacterium acnes and Staphylococcus epidermidis . Long-term of antibiotic usage for the acne treatment can cause antibiotics resistance. Red dragon fruit ( Hylocereus polyrhizus ) peel can be used alternatively  as  an  antibacterial.  This  research  aimed  to  determine  the  group  of  compounds  contained  in  the fermented red dragon fruit peel and its antibacterial activity against Propionibacterium acnes . In this research, the red dragon fruit peel was fermented for 12 days at room temperature. The fermentation result was examined by thin layer chromatography to determine the group of secondary metabolite compounds. The antibacterial activity test  was  conducted  by  disc  diffusion  method,  by  using  Zone  of  Inhibition  (ZI)  as  the  parameter.  The  results obtained  show  that  the  antibacterial  activity  assay  results  of  the  fermented  red  dragon  fruit  peel  with  a concentration of 10%, 20%, 40%, 60%, 80% dan  100% didn’t show any growth  inhibition on Propionibacterium acnes .  The screening results of secondary metabolite compound groups of  the red dragon fruit peel indicate that it contains flavonoids.
Keywords : antibacterial, Propionibacterium acnes , red dragon fruit peel, fermentation, disc diffusion
*Corresponding author : Lisa Soegianto, e-mail : lisa.soegianto@yahoo.com

## PENDAHULUAN
Jerawat  merupakan  salah  satu  peradangan kronis  multifaktorial  yang  paling  umum  terjadi pada  folikel  pilosebasea  yang  melibatkan diinduksinya  hormon  androgen,  hyperplasia sebasea, ketidakseimbangan hormonal, kekebalan hipersensitivitas,  dan  bakteri  (Saptarini and Herawati,  2017).  Mikroorganisme  yang  berperan dalam
perkembangan jerawat yaitu Propionibacterium acnes , Staphylococcus aureus , Staphylococcus  epidermidis dan Pityrosporum ovale (Yusmaini dan Bahar, 2017). Mikroorganisme seperti Staphylococcus
epedermidis dan Propionibacterium  acnes ikut berperan  dalam  patogenesis  penyakit  ini  dengan cara memproduksi  metabolit yang dapat bereaksi dengan  sebum  sehingga  meningkatkan  proses inflamasi (Laianto, Sari dan Pratiwi, 2014).
Propionibacterium acnes merupakan bakteri  Gram  positif  berbentuk  batang  dan merupakan flora normal kulit yang ikut berperan dalam proses pembentukan jerawat. Propionibacterium  acnes termasuk  bakteri anaerob  yang  juga  aerotoleran  yang  terdapat  di kelenjar  sebasea  pada  kulit  manusia  (Nakase et al .,  2017). Propionibacterium  acnes mengubah asam lemak tak jenuh menjadi asam lemak jenuh yang  menyebabkan  sebum  menjadi  padat,  jika produksi  sebum  bertambah  banyak  maka  jumlah bakteri Propionibacterium  acnes juga  akan bertambah  banyak  yang  keluar  dari  kelenjar sebasea,  karena  bakteri  ini  merupakan  pemakan lemak (Rahmi dkk., 2015). Antibiotik yang paling sering digunakan untuk jerawat adalah eritromisin  topikal,  klindamisin,  dan  tetrasiklin oral  yang  bersifat  bakteriostatik  (menghambat pertumbuhan  bakteri)  daripada  bakterisida (membunuh  pertumbuhan).  Paparan  dari  agen bakteriostatik dapat mendorong
Propioni-
bacterium  acnes resisten  antibiotik  (Adler, Kornmehl and Armstrong,  2017).  Senyawa antibakteri baru yang belum mengalami resistensi menjadi  salah  satu  solusi  alternatif  untuk mengatasi  permasalahan  ini.  Senyawa  tersebut dapat  diperoleh  dari  tanaman,  dimana  tanaman yang  memiliki  kandungan  senyawa  yang berpotensi sebagai antibakteri dengan mekanisme aksi  baru  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri. Salah  satu  tanaman  yang  memiliki  daya antibakteri  adalah  buah  naga  merah  ( Hylocereus polyrhizus )  (Amalia,  Wahdaningsih  dan  Untari, 2014). Menurut  Ismail et  al. (2017)  buah  naga merah  banyak  mengandung  nutrisi  dan  mineral seperti  vitamin  B1,  vitamin  B2,  vitamin  B3  dan vitamin  C,  protein,  lemak,  karbohidrat,  serat kasar,    flavonoid,  thiamin,  niacin,  piridoksin, kobalamin, fenolik, betasianin, polifenol, karoten, dan  juga  banyak  mengandung  fitoalbumin  yang menunjukkan  aktivitas  antioksidan  yang  tinggi. Buah naga merah memiliki kandungan antioksidan  yang  tinggi  salah  satunya  adalah antosianin  yang  merupakan  golongan  flavonoid,
dimana  flavonoid  mempunyai  daya  antimikroba dengan  cara  menghambat  sintesis  asam  nukleat, menghambat fungsi membran sel dan menghambat  metabolisme  energi  (Hendra et  al ., 2011;  Sigarlaki  dan  Tjiptaningrum,  2016). Penelitian  yang  dilakukan  Suhartati  dan  Roziqin (2017)  menunjukkan  hasil  ekstrak  etanol  kulit buah  naga  merah  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap Streptococcus pyogenes , dan pada hasil fraksi n -heksana kulit buah naga merah memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap Propionibacterium acnes (Wahdaningsih  dkk,  2014).  Uji  aktivitas antibakteri  pada  buah  naga  merah  sejauh  ini masih  sebatas  pada  proses  ekstraksi  maupun fraksinasi  saja,  maka  penelitian  ini  ingin mengembangkan  kulit  buah  naga  merah  menjadi sebuah  produk  yang  akan  berguna  bagi masyarakat yaitu dengan cara membuat fermentasi  kulit  buah  naga  merah.  Menurut Suhardini  dan  Zubaidah  (2016)  bahwa  proses fermentasi kemungkinan akan terjadi
peningkatan aktivitas antioksidan yang disebabkan karena adanya fenolik bebas pada saat proses  fermentasi.  Berdasarkan  uraian  tersebut, diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  tentang  uji aktivitas  antibakteri  fermentasi  kulit  buah  naga merah.

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah  kulit  buah  naga  merah  ( Hylocereus polyrhizus )  (didapat  dari  Pasar  Pucang  Anom, Surabaya  pada  bulan  Desember  hingga  Januari 2020),  Amonium  sulfat,  diamonium  hidrogen fosfat,  yeast Saccharomyces  cerevisiae ,  akuades, klindamisin, 1 / 2 Mc Farland I .
Alat Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  timbangan  analitis  ( Sartorius  TE 214  S, Germany),  penangas  air,  cawan  petri,  tabung rekasi, gelas piala, Erlenmeyer ,  lemari pendingin ( Sanyo , Jepang), micropipette , Laminar Air Flow (LAF)  (Type  V-130,  Indonesia),  autoklaf  ( All America  Model 25x,  USA),  inkubator  ( Memmert and  Binder ,  Germany),  oven  ( Memmert , Germany),  mikroskop ( Olympus ,  Jerman), vorteks ( Labinco ,  Belanda),  kertas  cakram, chamber ,  pelat  silika  gel  60  F254, hot  plate , lampu UV, batang pengaduk.

## Bakteri Uji
Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah Propionibacterium  acnes yang  diperoleh  dari Balai Besar Laboratorium Kesehatan Surabaya.

## Media
Media  bakteri  yang  digunakan  adalah Trypticase  Soy  Agar (TSA)  ( Merck,  Germany ), dan Trypticase  Soy  Broth (TSB)  ( Merck, Germany ).

## Rancangan Penelitian
Penelitian  diawali  dengan  melakukan determinasi  buah  naga  merah,  kemudian  kulit buah  naga  merah  difermentasi  secara  anaerob dengan yeast Saccharomyces cerevisiae dilakukan selama 12 hari pada suhu kamar. Hasil fermentasi  kulit  buah  naga  merah  diuji  kadar etanol  untuk  mengetahui  kadar  etanol  hasil fermentasi. Selanjutnya diuji aktivitas antibakterinya terhadap Propionibacterium acnes menggunakan  metode  difusi  cakram  dan klindamisin digunakan sebagai antibiotik pembanding.  Konsentrasi  yang  digunakan  adalah 10%,  20%,  40%,  60%,  80%  dan  100%.  Hasil  uji diamati dan diukur Daerah Hambatan Pertumbuhan  (DHP).  Skrining  fitokimia  diuji dengan  cara  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT) untuk  mengetahui  golongan  senyawa  dalam  hasil fermentasi kulit buah naga merah.

## Pengamatan Makroskopis dan Mikroskopis Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus)
Kulit  buah  naga  merah  dipisahkan  dengan daging buahnya untuk diamati secara makroskopis dan mikroskopis.

## Pembuatan  Fermentasi  Kulit  Buah  Naga  Merah (Hylocereus polyrhizus)
Buah  naga  merah  yang  telah  matang dipisahkan  daging  buahnya  dan  diambil  kulitnya kemudian  ditimbang  sebanyak  720  gram  dan dicuci  sampai  bersih.  Kulit  buah  naga  merah dipotong  kecil-kecil  dan  ditambahkan  akuades dengan  perbandingan  1:1  (b/v)  dengan  total akuades  720  mL  dan  dihaluskan  dengan menggunakan  blender,  kemudian  ditambahkan amonium  sulfat  0,33  gram,  dan  diamonium hidrogen fosfat 0,05 gram sebagai sumber nutrisi yeast,  pH  larutan  dipertahankan  3-5.  Larutan direbus pada suhu 70 ºC - 75 ºC selama 15 menit, kemudian larutan didinginkan hingga suhu 30 ºC. Larutan  dimasukkan  ke  dalam  botol  yang  telah disterilkan  dan  menambahkan  yeast Saccharo- myces  cereviceae .  Botol  ditutup  rapat  dengan tutup  botol  yang  berisi  selang  yang  sudah dihubungkan  ke  botol  lain  yang  berisi  akuades untuk jalan keluarnya CO 2 . Fermentasi dilakukan selama  12  hari  pada  suhu  kamar  (Kwartiningsih dan  Mulyati,  2005;  Zubaidah  dan  Veronica, 2014).

## Pengamatan Makroskopis Hasil Fermentasi Kulit Buah Naga Merah
Hasil  fermentasi  kulit  buah  naga  merah diperiksa  organoleptisnya  yang  terdiri  dari tahapan warna, rasa, bau, bentuk, dan pH.
Pengamatan  Makroskopis  dan  Mikroskopis Bakteri Uji Pengamatan Makroskopis Bakteri Uji
Propionibacterium acnes dikembang- biakkan  pada  media Trypticase  Soy  Agar (TSA) dan  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37  ºC untuk melihat bentuk koloni, kenaikan permukaan,  tepi,  ukuran,  warna  dan  tekstur koloni yang terbentuk pada media TSA.
Pengamatan Mikroskopis Bakteri Uji Dilakukan  pengamatan  secara  mikroskopis yaitu  dengan  cara  pengecatan  Gram  yang kemudian diamati bentuk sel bakteri, susunan sel bakteri,  warna  sel  bakteri  dan  reaksi  pada pengecatan Gram.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  hasil  fermentasi  kulit  buah  naga merah dipipet sebanyak 1 ml, 2 ml, 4 ml, 6 ml, 8 ml  dan  10  ml.  Masing-masing  larutan  hasil fermentasi  kulit  buah  naga  merah  ditambahkan akuades  steril  hingga  10  ml  menggunakan  labu takar  steril.  Sebanyak  10  ml  larutan  hasil fermentasi  kulit  buah  naga  merah  tidak  perlu ditambah  dengan  akuades  steril,  sehingga didapatkan  konsentrasi  10%,  20%,  40%,  60%, 80% dan 100%.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri Hasil Fermentasi Kulit Buah Naga Merah
Sebanyak 0,1 ml suspensi bakteri Propionibacterium  acnes yang  setara  dengan 1 / 2 Mc Farland I ditambah dengan 10 mL media TSA 50 ºC lalu dituang ke dalam cawan petri steril dan dirotasi.  Dilakukan  pra-pengeraman  selama  1,5-2 jam  pada  suhu  37  ºC.  Kertas  cakram  yang berukuran 6 mm diletakkan ke dalam cawan petri steril  tanpa  media  kemudian  ditetesi  larutan  uji dengan  konsentrasi  10%,  20%,  40%,  60%,  80% dan  100%  sebanyak  20  μL.  Larutan  klindamisin konsentrasi  2μg/20μl  diteteskan  pada  kertas cakram  sebagai  kontrol  positif  dan  akuades  steril diteteskan  pada  cakram  sebanyak  20  μL  sebagai kontrol negatif. Kertas cakram yang telah ditetesi dengan  larutan  uji  maupun  larutan  pembanding dibiarkan  hingga  kering.  Cakram-cakram  yang telah kering diletakkan pada lempengan TSA yang telah diinokulasi dan  dilakukan  pra-pengeraman selama  1,5-2  jam  menggunakan  pinset  steril, kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 ºC,  dan  dilakukan  replikasi  sebanyak  3  kali. Diamati  dan  diukur  diameter  daerah  hambat pertumbuhan (DHP).

## Kromatografi Lapis Tipis Hasil Fermentasi Kulit Buah Naga Merah
Uji  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT) dilakukan  dengan  menotolkan  larutan  hasil fermentasi  yang  telah  diuapkan  dan  dilarutkan dengan etanol 96% : air (7:3) pada lempeng silika gel F 254 sebagai fase diam sebanyak 8 𝜇𝑙 dan fase gerak  yang  digunakan  adalah n -butanol:  asam
asetat  :  air  (4  :  1  :  5)  (Lestario,  Rahayuni  dan Timotius,  2011).  Lempeng  KLT  yang  telah ditotolkan  dimasukkan  ke  dalam chamber yang sudah  jenuh  dibiarkan  sampai  eluasi  mencapai tanda  batas.  Penampak  noda  yang  digunakan adalah  AlCl 3 ,  FeCl 3 ,  pereaksi Dragendorff dan pereaksi Liebermann-Burchard .  AlCl 3 dapat mendeteksi  senyawa  flavonoid,  hasil  positif adanya senyawa flavonoid ditandai dengan bercak berfluorosensi kuning kehijauan pada UV 366 nm (Suhaenah  dan  Nuryanti,  2017).  FeCl 3 dapat mendeteksi  fenol  yang  hasil  positif  akan menghasilkan  warna  biru  gelap  atau  hitam. Pereaksi Dragendorff
digunakan untuk mendeteksi senyawa golongan alkaloid yang hasil positif  akan  memberikan  noda  bewarna  oranye (Sugijanto  dkk.,  2014).  Pereaksi Liebermann- Burchard digunakan  untuk  mendeteksi  adanya senyawa  terpenoid  dan  steroid,  hasil  positif steroid  adanya  perubahan  warna  menjadi  biru kehijauan  dan  pada  terpenoid  akan  terjadi perubahan  warna  menjadi  merah,  ungu  atau kecoklatan (Wulandari dkk., 2016).

## Pengujian Kadar Etanol
Uji  kadar  etanol  dilakukan  dengan  cara destilasi  yaitu  dengan  mengukur  50  mL  larutan hasil  fermentasi  dan  50  mL  akuades  dan  diberi batu didih agar menghindari letupan atau gejolak pada saat destilasi lalu dimasukkan ke dalam labu destilasi. Destilasi dilakukan selama 1 jam dengan tujuan  untuk  memisahkan  etanol  dari  air  dan komponen lainnya sehingga akan diperoleh etanol murni.  Suhu  destilat  diukur  menggunakan termometer, jika suhu destilat diatas 30 ºC maka suhu  diturunkan  kira-kira  15  ºC.  destilat  (etanol) dimasukkan  ke  dalam  piknometer  yang  kering dan sudah diketahui berat piknometer. Piknometer  yang  telah  berisi  destilat  ditimbang dan  diukur  suhu  akhir  destilat  (etanol).  Akuades diukur  berat  jenisnya  menggunakan  piknometer sebagai pembanding
(Primadevi
dan
Kresnadipayana, 2016). Analisis Hasil Pengamatan Penelitian ini
adalah penelitian eksperimental,  data  yang  diperoleh  dari  uji aktivitas  antibakteri Propionibacterium  acnes merupakan  data  kuantitatif  dari  besarnya  Daya Hambatan
Pertumbuhan (DHP).
Daerah Hambatan  Pertumbuhan  (DHP)  hasil  fermentasi kulit buah  naga  merah  diukur  dengan menggunakan  jangka  sorong,  kemudian  dihitung hambatan  rata-rata  dan  menentukan  konsentrasi hasil  fermentasi  kulit  buah  naga  merah    dengan daerah  hambatan  pertumbuhan  yang  paling tinggi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Buah  naga  merah  didapat  dari  Pasar Pucang  Anom  Surabaya,  Jawa  Timur  pada  bulan Desember  hingga  Januari  2020.  Pengamatan makroskopis  buah  naga  merah  memiliki  bentuk
bulat  lonjong  yang  memiliki  sirip  seperti  sulur, warna  kulit  buahnya  berwarna  merah  jambu sedangkan  daging  buahnya  berwarna  merah keunguan,  panjang  sulur  pada  kulit  buahnya  1-2 cm dan kulit buah naga merah memiliki ketebalan 3-4 mm. Hasil pengamatan mikroskopis penampang  melintang  dan  membujur  kulit  buah naga  merah  pada  media  air,  kloralhidrat  dan fluorogusin menunjukkan adanya jaringan epidermis,  stomata,  parenkim,  papil,  kristal bentuk prisma dan berkas pumbuluh.
Fermentasi  kulit  buah  naga  merah  yaitu kulit  buah  naga  merah  ditimbang  sebanyak  720 gram,  kemudian  kulit  buah  naga  merah  dicuci bersih  dan  dihaluskan  menjadi  bubur  kulit  buah naga  merah.  Volume  air  yang  digunakan perbandingan  1:1  yaitu  sebanyak  720  ml, kemudian ditambahkan amonium sulfat sebanyak 0,33  gram  dan  diamonium  hidrogen  fosfat  0,05 gram. Penambahan amonium sulfat dan diamonium  hidrogen  fosfat  yaitu  berfungsi sebagai  sumber  nutrisi yeast (Kwartiningsih  dan Mulyati,
2005),
selanjutnya dilakukan
pengecekan pH dan didapatkan pH 5. Pengecekan pH  dilakukan  karena  ragi  memiliki  pH pertumbuhan  optimum  dalam  kisaran  3-5 (Saranraj,  Sivasakthivelan and Naveen,  2017). Bubur  kulit  buah  naga  merah  direbus  pada  suhu 70  ºC  -  75  ºC  selama  15  menit  yang  bertujuan untuk  membunuh  mikroorganisme  dan  ragi  lain. Setelah  dipanaskan  didinginkan  hingga  suhu  30 ºC  dimasukkan  ke  dalam  botol  steril  dan menambahkan  yeast Saccharomyces  cereviceae . Fermentasi  dilakukan  secara  anaerob  selama  12 hari dan disimpan pada suhu kamar (Kwartiningsih  dan  Mulyati,  2005;  Zubaidah  dan Veronica, 2014). Hasil fermentasi kulit buah naga merah selama 12 hari yaitu memiliki pH 5, larutan berwarna merah, larutan fermentasi memiliki bau yang  tidak  sedap  atau  busuk.  Bau  tidak  sedap terjadi  kemungkinan  jika  fermentasi  terlalu  lama maka Saccharomyces  cereviceae akan  mati  dan menyebabkan  terjadinya  kontaminasi,  serta produksi alkohol tidak optimal (Fatimah, Lia dan Rahmasari, 2013).
Uji  kadar  etanol  dengan  cara  destilasi bertujuan  untuk  mengetahui  kadar  etanol  yang terkandung  dalam  larutan  hasil  fermentasi  buah naga  merah.  Menurut  Kwartiningsih  dan  Mulyati (2005) etanol yang diperoleh dari hasil fermentasi maksimal  hanya  menghasilkan  kadar  etanol sekitar  15%.  Hasil  dari  uji  kadar  etanol  larutan fermentasi tidak memiliki  kandungan etanol. Hal ini  kemungkinan  disebabkan  dengan  jumlah glukosa  selama  proses  fermentasi  terlalu  sedikit sehingga Saccharomyces  cereviceae tidak  dapat menghasilkan  alkohol.  Dalam  proses  fermentasi anaerob,  glukosa  digunakan  oleh Saccharomyces cereviceae untuk menghasilkan etanol dan karbon dioksida.
Tujuan dilakukan skrining fitokimia dengan metode  KLT  adalah  untuk  mengetahui  golongan metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam
larutan  hasil  fermentasi  kulit  buah  naga  merah. Berdasarkan  hasil  orientasi  larutan  fermentasi diuapkan  terlebih  dahulu  hingga  membentuk ekstrak,  larutan  fermentasi  yang  tidak  diuapkan dan  langsung  diuji  KLT  tidak  ada  bercak  noda. Hal  ini  disebabkan  kadar  senyawa  metabolit sekunder  yang  terdapat  di  dalam  larutan fermentasi terlalu kecil, sehingga perlu dimurnikan dengan cara diuapkan dan menghasilkan  ekstrak  kering.  Ekstrak  kering dilarutkan  dengan  etanol  96% dan  air perbandingan  7:3  dengan  konsentrasi  5%  dan volume  penotolan  8 𝜇𝑙 setelah  itu  dieluasi menggunakan  fase  gerak n -butanol,  asam  asetat dan air perbandingan 4:1:5 (Gambar 1).
Gambar  1. Hasil  uji  KLT  hasil  fermentasi  kulit buah  naga  yang  telah  diuapkan  8 𝜇𝑙 dengan  fase gerak n -butanol, asam asetat dan air (4 : 1 : 5) Keterangan :
a) Secara visual, b) Pada UV 254 nm, c) Pada UV 366 nm, d) Secara visual setelah disemprot penampak noda FeCl 3 , e) Pada UV 366 nm setelah disemprot penampak noda AlCl 3 , f) Secara visual  setelah  disemprot  penampak  noda Dragendorff ,  g) Secara visual setelah disemprot penampak noda Liebermann- Burchard dan telah dipanaskan pada suhu ± 105 ºC.
Penampak  noda  yang  digunakan  AlCl 3 , FeCl 3 , Dragendorff dan Liebermann-Burchard dan  diamati  pada  sinar  UV  panjang  gelombang 254  nm  dan  366  nm.  Hasil  yang  diperoleh  noda pada  rentang R f 0,61-0,70  dengan  penampak noda  AlCl 3 dan  dilihat  pada  lampu  UV  366  nm noda  berwarna  kuning  kehijauan  dengan  nilai R f 0,65  dan  juga  pada  rentang R f 0,81-0,90  dengan penampak noda AlCl 3 dan dilihat pada lampu UV 366  nm  noda  berwarna  kuning  dengan  nilai R f 0,90.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  adanya golongan senyawa flavonoid. Fluoresensi dibawah UV  366  nm  menunjukkan  bahwa  senyawa tersebut  memiliki  gugus  kromofor  dan  memiliki gugus  auksokrom  pada  struktur  kimianya  (Alen, Agressa  dan  Yuliandra,  2017).  Flavonoid merupakan  senyawa  yang  mempunyai  gugus hidroksil  (OH)  pada  kedudukan  orto  yang  akan memberikan  fluoresensi  kuning  intensif  atau kuning  kehijauan  pada  sinar  UV  366  nm  (Dewi, Astuti  dan  Warditiani,  2013;  Suhaenah  dan Nuryanti,  2017),  sedangkan  untuk  penampak noda  FeCl 3 , Dragendorff dan Liebermann-
Burchard tidak menunjukkan adanya noda. Pada penampak  noda  FeCl 3 tidak  terdapat  noda  yang menunjukkan adanya senyawa fenolik. Seharusnya  selama  proses  fermentasi,  terjadi peningkatan  senyawa  fenol  yang  diduga  karena melibatkan  mikroba  yaitu  khamir  yang  dapat bermetabolisme  menghasilkan  senyawa  flavonoid (Suhardini  dan  Zubaidah,  2016).  Khamir  yang digunakan  pada  saat  proses  fermentasi  tidak bekerja maksimal sehingga menyebabkan kandungan  senyawa  fenol  dalam  fermentasi  kecil dan  pada  saat  penyemprotan  dengan  penampak noda FeCl 3 tidak terdapat noda pada plat KLT. Hasil  pengamatan  makroskopis  bakteri Propionibacterium acnes (Gambar 2) pada media TSA setelah diinkubasi selama 24 jam suhu 37 ºC yaitu bentuk koloni bulat, warna koloni putih, tepi koloni  filamen  bercabang,  kenaikan  permukaan cembung,  tekstur  koloni opaque ,  halus,  basah, dan  ukuran  koloni  1-2  mm.  Hasil  pengamatan makroskopis  sesuai  dengan  pustaka  Talaro and Chess  (2017).  Pengamatan  mikroskopis  bakteri Propionibacterium  acnes (Gambar  2)  dilakukan dengan  menggunakan  pengecatan  Gram  dan diamati  dibawah  mikroskopis  dengan  perbesaran 10  x  100.  Bentuk  sel  batang  dengan  ujung meruncing  atau  bulat,  susunan  sel  tidak beraturan,  warna  biru,  dan  tergolong  bakteri Gram  Positif.  Hasil  pengamatan  mikroskopis sesuai dengan pustaka Brooks et al (2013).
(a) (b)
Gambar 2. Hasil pengamatan makroskopis dan mikroskopis Propionibacterium acnes Keterangan :
a)  Pengamatan  makroskopis Propionibacterium  acnes pada media  TSA,  b)  Pengamatan  makroskopis Propionibacterium acnes dengan pengecatan Gram perbesaran 10x100
Pengujian  antibakteri  dilakukan  dengan metode  difusi  cakram.  Konsentrasi  suspensi bakteri  yang  digunakan  adalah  1,5  x  10 6 m.o/ml sebanyak  0,1  ml  dalam  10  ml  media  TSA. Konsentrasi  larutan  uji  10%,  20%,  40%,  60%, 80% dan 100%, konsentrasi antibiotik pembanding  yaitu  klindamisin  2μg/20μl  dan akuades  steril  digunakan  sebagai  blanko  negatif. Diameter  cakram  sebesar  6  mm.  Parameter  yang digunakan  adalah  hambatan  pertumbuhan  yang ditunjukkan  dengan  adanya  daerah  jernih  pada media  yang  ditumbuhi  bakteri  disekitar  cakram yang  berisi  larutan  uji.  Hasil  pengujian  yang diperoleh  dari  hasil  fermentasi  kulit  buah  naga merah  pada  konsentrasi  10%,  20%,  40%,  60%,
a b c g e d
f
80%  dan  100%  tidak  memiliki  aktivitas antibakteri (Gambar 3).
Gambar 3. Hasil uji antibakteri hasil fermentasi kulit
buah naga merah
terhadap

## Propionibacterium acnes
Keterangan : a = replikasi 1; b = replikasi 2; c = replikasi 3; F1 = Fermentasi Kulit  Buah  Naga  Merah  Konsentrasi  10%  ;  F2  =  Fermentasi Kulit  Buah  Naga  Merah  Konsentrasi  20%  ;  F3  =  Fermentasi Kulit  Buah  Naga  Merah  Konsentrasi  40%  ;  F4  =  Fermentasi Kulit  Buah  Naga  Merah  Konsentrasi  60%  ;  F5=  Fermentasi Kulit  Buah  Naga  Merah  Konsentrasi  80%  ;  F6  =  Fermentasi Kulit  Buah  Naga  Merah  Konsentrasi  100%  ;  Kp  =  Kontrol Positif Klindamisin ; N = Kontrol Negatif Akuadest Steril
Hal  ini  diduga  karena  larutan  hasil fermentasi  mempunyai  kadar  senyawa  metabolit sekunder  dalam  jumlah  kecil  sehingga  tidak mampu untuk menghambat pertumbuhan bakteri Propionibacterium acnes , selain itu kemungkinan bakteri  uji  yang  digunakan  pada  uji  antibakteri mengalami  mutasi  yang  menyebabkan  terjadi perubahan sifat yang kemungkinan menyebabkan bakteri  menjadi  lebih  resisten  terhadap  senyawa
antibakteri  dan  juga  dapat  menyebabkan permeabilitas  dinding  sel  bakteri  menurun sehingga senyawa antibakteri akan sulit masuk ke dalam sel (Hanapi dkk. , 2013) . Selain itu bisa diuji dengan  menggunakan  metode  bioautografi  untuk memastikan senyawa flavonoid memiliki aktivitas antibakteri  atau  tidak,  metode  bioautografi dilakukan  dengan  kadar  flavonoid  yang  lebih besar  daripada  uji  difusi  langsung  dengan  hasil fermentasi.  Karena  metode  bioautografi  adalah suatu  metode  pendeteksi  untuk  menemukan senyawa  antibakteri  yang  belum  teridentifikasi dengan cara melokalisir aktivitas antibakteri pada suatu  kromatogram  dan  ini  menggabungkan metode  kromatografi  lapis  tipis  dengan  respon dari  mikroorganisme  yang  diuji  berdasarkan aktivitas dari suatu analit yang berupa antibakteri (Paputungan,  Lolo  dan  Siampa,  2019). Antibiotik pembanding  yang  digunakan  yaitu  klindamisin memiliki  DHP  rata-rata  20,82  ±  0,41  mm terhadap Propionibacterium acnes .

## KESIMPULAN
Hasil  fermentasi  kulit  buah  naga  merah ( Hylocereus  polyrhizus )  memiliki  golongan senyawa  flavonoid.  Hasil  fermentasi  kulit  buah naga  merah  ( Hylocereus  polyrhizus )  tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap
Propionibacterium acnes .

## DAFTAR PUSTAKA
Adler,  B.L.,  Kornmehl,  H.  and  Armstrong,  A.W.  2017. Antibiotic  resistance  in  acne  treatment. American  Medical Association ,  153(8):  810-811  diakses  pada  01  Juli  2019, https://jamanetwork.com/journals/jamadermatology/article- abstract/2631310.
Alen,  Y.,  Agresa,  F.L.  dan  Yuliandra,  Y.  2017.  Analisis kromatografi lapis tipis (KLT) dan aktivitas antihiperurisemia ekstrak  rebung Schizostachyum  brachycladum Kurz  (Kurz) pada mencit putih jantan, Jurnal Sains Farmasi & Klinis . 3(2):
146-152.
Amalia,  S.,  Wahdaningsih,  S.  dan  Untari,  E.K.  2014.  Uji aktivitas  antibakteri  fraksi n- heksan  kulit  buah  naga  merah ( Hylocereus  polyrizhus )  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923, Jurnal Fitofarmaka Indonesia . 1(2): 61- 64.
Brooks,  G.F.,  Carroll,  K.C.,  Butel,  J.S.,  Morse,  S.A.  and Mietzner,  T.A.  2013, Jawetz,  Melnick  &  Adelberg’s Medical Microbiology ,  26 th ed,  The  McGraw  Hill,  New  York,  United States, pp 378-379.
Dewi,  I.D.A.D.Y.,  Astuti,  K.W.  dan  Warditiani,  N.K.  2013, Identifikasi  kandungan  kimia  ekstrak  kulit  buah  manggis ( Garcinia  mangostana L.), Jurnal  Farmasi  Udayana ,  2(4):
13-18.
Fatimah,  Lia,  F.  dan  Rahmasari,  L.  2013,  Kinetika  reaksi fermentasi alkohol dari buah salak, Jurnal Teknik Kimia USU , 2(2): 16-20.
Hanapi,  A.,  Fasya,  A.G.,  Mardiyah,  U.  dan  Miftahurrahmah, 2013. Uji aktivitas antioksidan dan antibakteri ekstrak metanol alga  merah Eucheuma  spinosum dari  perairan  Wongsorejo Banyuwangi, Alchemy , 2(2): 126-137.
Hendra,  R.,  Ahmad,  S.,  Sukari,  A.,  Shukor,  M.Y.  and Oskoueian,  E.  2011.  Flavonoid  analysis  and  antimicrobial activity  of  various  parts  of Phaleria  macrocarpa (Scheff.) Boerl  fruit, International  Journal  of  Molecular  Sciences .  12: 3422- 3431.
Ismail, O.M., Aziz, M.S.A., Ghareeb, M.A. and Hassan, R.Y.A. 2017.  Exploring  the  biological  activites  of  the Hylocereus polyrhizus extract, Journal of Innovations in Pharmaceutical and Biological Sciences . 4(1): 01-06.
Kwartiningsih,  E.  dan  Mulyati,  N.S.  2005.  Fermentasi  sari buah nanas menjadi vinegar, Ekuilibrium. 4(1): 8-12.
Lainto, S., Sari, R. dan Pratiwi, L. 2014. Uji efektivitas sediaan gel  anti  jerawat  ekstrak  etanol  buah  pare  ( Momordica charantia )  terhadap Staphylococcus  epidermidis dan Propionibacterium  acnes dengan  metode  difusi, Artikel Ilmiah ,  Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Tanjungpura, Pontianak.
Lestario,  L.N.,  Rahayuni,  E.  dan  Timotius,  K.H.  2011. Kandungan antosianin dan identifikasi antosianidin dari kulit buah jenitri ( Elaeocarpus angustifolius
Blume),
Agritechnology. 31(2): 93-101.
Nakase,  K.,  Nakaminami,  H.,  Takenaka,  Y.,  Hayashi,  N., Kawashima,  M.  and  Noguchi,  N.  2017, Propionibacterium acnes is  developing  gradual  increase  in  resistance  to  oral tetracyclines, Journal of Medical Microbiology , 66: 8-12.
Paputungan,  W.A.,  Lolo,  W.A.  dan  S,  J.P.  2019.  Aktivitas antibakteri  dan  analisis  KLT-bioautografi  dari  fraksi  biji  kopi robusta  ( Coffea  canephora Pierre  ex  A.  Froehner), PHARMACON Jurnal Ilmiah Farmasi . 8(3) :100-108.
F F
F F
F 5 F F F K p F N K F 1 F
F
F 4 F F F 6 N F 5 F N K p a b c
Primadevi, S.  dan Kresnadipayana,  D.  2016.  Penetapan  kadar etanol  pada  minuman  beralkohol  berbagai  merk  melalui pengukuran berat jenis, Biomedika. 9(1): 71-74.
Rahmi H, A., Cahyanto, T., Sujarwo, T. dan Lestari. R.I. 2015. Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun beluntas ( Pluchea indica (L.)  Less.)  terhadap Propionibacterium  acnes penyebab jerawat, Jurnal Istek . 9(1): 141-161.
Saptarini,  M.N.  dan  Herawati,  E.I.  2017.  Development  and evaluation of anti-acne gel containing garlic ( Allium sativum ) against Propionibacterium  acnes , Asian  Journal  of Pharmaceutical and Clinical Research . 10: 260-262.
Saranraj,  P.,  Sivasakthivelan,  P.  and  Naveen,  M.  2017. Fermentation  of  fruit  wine  and  its  quality  analysis:  a  review, Australian Journal of Science and Technology . 1(2): 85-97.
Sigarlaki,  E.D.  dan  Tjiptaningrum,  A.  2016.  Pengaruh pemberian  buah  naga  merah  ( Hylocereus  polyrhizus ) terhadap kadar kolesterol total, Majority . 5(5): 14-17.
Sugijanto,  N.E.N.,  Yodianto,  B., Kusumajaya,  M.N.  dan  Zaini, N.C.  2014.  Aktivitas  antimikroba  dan  analisis  KLT- densitometri metabolit fraksi-fraksi ekstrak endofit dari Aglaia odorata , Berkala Ilmiah Kimia Farmasi . 3(1): 20-27.
Suhaenah, A. dan Nuryanti, S. 2017. Skrining fitokimia ekstrak jamur  kancing  ( Agaricus  bisporus ), Jurnal  Fitofarmaka Indonesia . 4(1): 199-204.
Suhardini,  P.N.  dan  Zubaidah,  E.  2016.  Studi  aktivitas antioksidan  dari  berbagai  jenis  daun  selama  fermentasi, Jurnal Pangan dan Agroindustri . 4(1): 221-229.
Suhartati,  R.  dan  Roziqin,  D.A.  2017.  Aktivitas  antibakteri ekstrak etanol kulit buah naga merah ( Hylocereus polyrhizus ) terhadap  bakteri Streptococcus  pyogenes , Jurnal  Kesehatan Bakti Tunas Husada . 17(2): 513-518.
Talaro, K.P. and Chess, B. 2012. Foundations in Microbiology , 8th ed.,: The McGraw Hill Co, New York, USA.
Wahdaningsih,  S.,  Untari,  E.K.  dan  Fauziah,  Y.  201., Antibakteri  fraksi n -heksana  kulit Hylocereus  polyrhizus terhadap Staphylococcus  epidermidis dan Propionibacterium acnes , Pharmaceutical Sciences and Research . 1(3): 180-193.
Wulandari,  V.,  Husain,  D.R.,  Sartini  dan  Haedar,  N.  2016. Pengujian  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etanol  daun beluntas  ( Pluchea  indica Less.) terhadap  Staphylococcus aureus dan Pseudomonas  aeruginosa , Skripsi ,  Sarjana Farmasi, Universitas Hasanuddin, Makassar.
Yusmaini,  H.  dan  Bahar,  M.  2017.  Efek  antimikroba  ekstrak lidah buaya ( Aloe vera ) terhadap isolat bakteri penyebab Acne Vulgaris secara in vitro , Jurnal Profesi Medika . 11(2): 63-72.
Zubaidah, E. dan Veronica, C. 2014. Studi aktivitas antioksidan cuka berbasis buah anggur bali ( Vitis vinifera ) utuh dan tanpa kulit, Jurnal Teknologi Hasil Pertanian . 5(2): 95-102.