## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK DAUN PRASMAN
( Eupatorium triplinerve
Vahl.)
1) Liliyanti Munte, 1) Max Revolta Runtuwene, 1) Gayatri Citraningtyas
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Prasman  is  one  of  the  plants  located  in  the  eastern  of  Indonesia,  and  allegedly  contains antioxidant  compounds.  Prasman  leafs  is  often  used  as  a  herbal  medicine  in  the  treatment  of various diseases. The purpose of this study was to determine the total phenolic and determined antioxidant  activity  of  ethanol  extract  of  prasman  leafs.  Extraction  of  this  study  are  using  a maceration method with  96, 80 and 60% ethanol. Extract  obtained are determined and tested  a total  phenolic  antioxidant  activity  using  DPPH  method.  Based  on  the  results    96%  of  ethanol extract prasman leafs had the highest of total phenolic 13.47 mg/L followed by ethanol extract 80 and 60% of 11.97 mg/L and 5.45 mg/L. Based on the results of the study showed that the 96% of ethanol extract had the best antioxidant activity with activity value IC 50 122.77 mg/L, followed by 80  and 60%  ethanol extract of 162.56 mg/L and 293.95 mg/L.
Keywords :  Prasman leafs, total phenolic, antioxidant activity, DPPH.

## ABSTRAK
Prasman  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  terdapat  dibagian  timur  Indonesia  dan diduga mengandung senyawa  antioksidan. Daun  prasman sering digunakan sebagai  obat  herbal dalam penyembuhan berbagai macam penyakit. Tujuan penelitian ini adalah untuk menentukan total  fenolik  dan  menentukan  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  etanol  daun  prasman.  Metode ekstraksi  dalam  penelitian  ini  menggunakan  maserasi  dengan  pelarut  etanol  60,  80  dan  96  %. Ekstrak  yang  diperoleh  ditentukan  total  fenolik  dan  diuji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode DPPH.  Berdasarkan  hasil  yang  didapat  ekstrak  etanol  96%  daun  prasman  memilki  kandungan total fenolik paling tinggi sebesar 13,47  mg/L, dengan diikuti ekstrak etanol 80 dan 60% sebesar 11,  97  mg/L  dan  5,45  mg/L.  Berdasarkan  hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol 96%  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  paling  baik  dengan  nilai  aktivitas  IC 50 122,  77  mg/L dengan diikuti ekstrak etanol 80 dan 60% yaitu 162, 56 mg/L dan 293, 95 mg/L.
Kata kunci : daun prasman, total fenolik, aktivitas antioksidan, DPPH

## PENDAHULUAN
Beberapa  penyakit  yang  sering  dijumpai masyarakat  diantaranya  penyakit  panas, bisul,  batuk,  stroke,  katarak,  asma,  jantung, kanker  dan  sebagainya.  Pola  hidup  manusia zaman  sekarang  yang  tidak  memperhatikan makanan  yang  dimakan,  beraktivitas  di tempat  yang  berpolusi,    mengkonsumsi rokok  sehingga  merugikan  orang  lain  dan diri  sendiri,  terkena  langsung  paparan  sinar matahari,  penggunaan  obat-obatan,  dan stress  memicu  timbulnya  radikal  bebas  di dalam tubuh.
Radikal  bebas  merupakan  faktor  penyebab terjadinya berbagai macam penyakit didalam tubuh manusia. Radikal bebas  dapat merusak sel-sel didalam tubuh oleh sebab itu tubuh  kita  membutuhkan  antioksidan  untuk menangkal  radikal  bebas.  Antioksidan adalah  zat  yang  dapat  menghancurkan radikal bebas. Dengan adanya antioksidan di dalam tubuh, dapat memberikan perlindungan  dari  ancaman  radikal  bebas. Antioksidan  dapat  mengeliminasi  senyawa radikal bebas di dalam tubuh sehingga tidak menginduksi  suatu  penyakit  (Kikuzaki, 2002).  Banyak  makanan  yang  mengandung antioksidan  alami  seperti  makanan  yang mengandung  vitamin  A, C,  E  dll.  Selain itu juga ada beberapa senyawa dalam tumbuhan yang  bermanfaat  sebagai  antioksidan  salah satunya  adalah  senyawa  fenolik  yang terkandung  dalam  sayuran,  buah-buahan, rempah-rempah dan sebagainya.
Salah  satu  tanaman  yang  dapat dijadikan  sumber  antioksidan  alami  yaitu tanaman  prasman  dari  suku  Asteraceae. Menurut  Dalimartha  (1999),  daun  prasman merupakan salah satu tanaman yang terdapat dibagian  timur  Indonesia  dan  diduga mengandung  senyawa  antioksidan.  Secara empiris  rebusan  daun  prasman  sering digunakan  sebagai  obat  herbal  dalam penyembuhan  penyakit  peluruh  kencing, penambah  nafsu  makan,  pereda  demam, penghenti  perdarahan,  obat  batuk,  anti
tumor,  dan  miom.  Menurut  Chairul  dan Sutaryo  (1996),  daun  prasman  mengandung senyawa flavonoid dan polifenol.
Berdasarkan penelitian Kalay (2014), ekstrak  etanol  daun  prasman  memiliki  efek antipiretik  terhadap  tikus  galur  wistar  dan mengandung senyawa flavonoid. Berdasarkan  uraian  tersebut  telah  dilakukan penelitian mengenai bioaktivitas dari ekstrak daun prasman akan tetapi belum ada laporan penelitian  yang  mengemukakan  tentang analisis  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak etanol daun prasaman dengan menggunakan metode  DPPH  dengan  beberapa  konsentrasi pelarut etanol yaitu 60, 80 dan 96%. Tujuan penggunaan konsentrasi yang berbeda untuk mengetahui  penarikan  kandungan  terbaik dari daun prasman.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Teknologi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam Ratulangi  Manado  pada  bulan  November 2014 -  Juli 2015.

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan antara lain : pisau, alat-alat  gelas ( pyrex ), mikro pipet, blender, spatula,  vortex,  saringan,  oven  ( memmerf ),
rotary evaporator ( eyla N-1000 ), spektrofotometer ( Shimadzu 1800 ), timbangan ( A&D company limited ).
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  antara  lain:  Daun  prasman, etanol  60,  80,  dan  96  %,    reagen  Folin- Ciocalteu, DPPH, natrium karbonat, vitamin C,  besi(III)  klorida,  asam  sulfat,  reagen Mayer,  asam  klorida,  reagen  Wagner, natrium  hidroksida,  asam  asetat  anhidrat, dietil  eter,  serbuk  magnesium,  metanol, aquades, kuersetin dan asam galat.
Pengambilan Sampel
Sampel diambil di Jalan
Kampus Universitas  Sam  Ratulangi,  Kelurahan Kleak  Kecamatan  Malalayang  Manado. Bagian yang digunakan adalah daun.

## Identifikasi Tanaman
Identifikasi
tanaman
dilakukan
dilaboratorium
Taksonomi
Tumbuhan, Jurusan  Biologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi Manado.

## Persiapan Sampel
Daun  prasman  di  cuci  pada  air  mengalir kemudian  di  rajang  menjadi  bagian  yang lebih  kecil,  lalu  dikeringkan  dalam  oven dengan  suhu  40 O C.    Setelah  kering  daun prasman  dihaluskan  dengan  blender  dan  di ayak  dengan  ayakan  60  mesh  sehingga berbentuk serbuk.

## Uji Kadar Air (AOAC, 1999)
Cawan kosong dikeringkan dalam oven pada suhu  40 o C.  Setelah  dingin  berat  cawan ditimbang, sampel daun prasman sebanyak 2 g  ditimbang  dan  dimasukkan  dalam  cawan kosong  tadi.  Cawan  yang  berisi  sampel dimasukkan  dalam  oven  pada  suhu  40 o C selama  3  jam.  Setelah  kering  didinginkan. Ditimbang  kembali  cawan  yang  berisi sampel.  Kadar  air  dihitung  berdasarkan persamaan I :
% Kadar Air = X 100 %

## Ekstraksi
Ditimbang sebanyak 50 gram daun prasman untuk  masing-masing  pelarut  etanol  dengan konsentrasi  60,  80  dan  96%  sebanyak  250 ml.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara maserasi  selama  3  kali  24  jam  kemudian  di saring  sehingga  diperoleh  3  filtrat  untuk masing-masing  pelarut  etanol  60,  80  dan 96%.  Filtrat  yang  di  dapat  pada  tiap pergantian  pelarut  digabungkan  kemudian masing-masing  hasil  ekstrak  diuapkan
menggunakan  rotary  evaporator  hingga diperoleh ekstrak dari daun prasman.

## Uji Fitokimia
Pengujian  Fitokimia  sampel  daun  prasman dilakukan  mengikuti  prosedur  Harborne (1996) yang dimodifikasi.
Sebanyak  2  g  serbuk  daun  prasman dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi, kemudian diekstraksi dengan pelarut metanol  sebanyak  10  mL.  Setelah  sampel mengendap, sampel disaring dengan menggunakan  kertas  saring  dan  filtrat  yang diperoleh dipindahkan ke tabung reaksi yang lain untuk dilakukan pengujian fitokimia.

## Uji Fenolik
Sebanyak  1  mL  ekstrak  metanol  sampel daun  prasman  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi,  kemudian  ditambahkan  FeCl 3 5% sebanyak 2-3 tetes. Sampel yang mengandung fenolik atau mengalami perubahan warna menjadi biru kehitaman.

## Uji  Flavonoid  Uji  Flavonoid  dengan  HCl Pekat dan Logam Mg
Sebanyak1  mL  ekstrak  methanol sampel daun prasman dimasukkan ke dalam tabung  reaksi,  kemudian  ditambahkan  HCL pekat  sebanyak  2  tetes  dan  di  kocok  kuat. Setelah  itu  ditambahkan  serbuk  magnesium (Mg)  dan  dikocok  kuat.  Sampel  positif mengandung  flavonoid  bila  terdapat  buih dengan  intensitas  yang  banyak  dan  larutan akan  mengalami  perubahan  warna  menjadi jingga.
Uji Flavonoid dengan H 2 SO 4 Sebanyak  1  mL  ekstrak  metanol  sampel daun  prasman  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi,  kemudian  ditambahkan  H 2 SO 4 2  N sebanyak  2  tetes  dan  dikocok  kuat.  Sampel positif  mengandung  flavonoid  bila  larutan mengalami  perubahan  warna  yang  sangat mencolok  menjadi  warna  kuning,  merah atau coklat.
Uji Flavonoid dengan NaOH 10%
Sebanyak  1  mL  ekstrak  metanol  sampel daun  prasman  yang  di  masukkan  kedalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan NaOH  10%  sebanyak  2  tetes  dan  dikocok kuat.  Sampel  positif  mengandung  flavonoid bila  terdapat  warna  yang  sangat  mencolok, yaitu  warna  kuning,  merah,  coklat,  atau hijau.

## Uji Alkaloid
Disediakan  dua  buah  tabung  reaksi  untuk dimasukkan  ekstrak  metanol  sampel  daun prasman  masing-masing  sebanyak  1  mL. Setelah itu, masing-masing tabung ditambahkan  10  tetes  H 2 SO 4 2  N  dan dikocok kuat. Pada tabung pertama ditambahkan reagen Wagner. Sampel kemudian  diamati.  Hasil  positif  bila  pada tabung (perubahan reagen Wagner) menghasilkan endapan kecoklatan.

## Uji Lieberman Burchard (Uji Terpen dan Steroid)
Ekstrak  metanol  daun  prasman  diteteskan pada  plat  tetes  pada  3  titik  (  titik  pertama untuk  standard  dan  dua  titik  lainnya  untuk pengujian  terpenoid  dan  steroid)  dan dibiarkan  hingga  kering.  Setelah  kering, ditambahan  asam  sulfat  pekat  sebanyak  1 tetes, asam asetat anhidrat sebanyak 1 tetes, dan  dietil  eter  sebanyak  2  tetes,  kemudian diamati perubahan warnanya. Sampel positif bila  mengalami  perubahan  warna  menjadi merah atau coklat untuk terponoid (triterpenoid)  dan  perubahan  warna  menjadi biru, ungu, atau hijau untuk steroid.

## Uji Saponin
Sebanyak  1  mL  ekstrak  metanol  sampel daun  prasman  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi,  kemudian  ditambahakan  5  mL  air panas dan ditambahkan 2 tetes HCL 2 N dan dikocok  kuat.  Setelah  itu,  dilihat  apakah terbentuk buih setelah didiamkan selama 10 menit.  Sampel  positif  mengandung  saponin bila  terdapat  buih  dengan  intensitas  yang banyak dan konsisten selama 10 menit.

## Uji Tanin
Sebanyak 1mL ekstrak metanol sampel daun prasman dimasukkan kedalam tabung reaksi, kemudian  ditambahkan  FeCl 3 1%  sebanyak 2-3  tetes.  Sampel  positif  mengandung  tanin bila  mengalami  perubahan  warna  menjadi hijau kehitaman.
Penuntuan Kandungan Total Fenolik Pembuatan  kurva  baku  asam  galat dengan reagen
Folin-Ciocalteu
(Murtijaya dan Lim, 2007)
Sebanyak  300  μl  larutan  asam  galat konsentrasi  5,  10,  15,  20,  25,  30,  dan  35 ppm  masing-masing  dimasukkan  dalam tabung,  kemudian  ditambah  1,5  ml  reagen Folin  Ciocalteu  (1:10)  dan  digojog.  Setelah didiamkan  selama  3  menit,  masing-masing larutan ditambah 1,2 ml lartan Na 2 CO 3 7,5% digojog  homogen,  dan  didiamkan  pada range  operating  time  pada  suhu  kamar. Semua  larutan  diukur  absorbansinya  pada panjang  gelombang  absorbansi  maksimum, kemudian  dibuat  kurva  kalibrasi  hubungan antara konsentrasi asam galat (mg/L) dengan absorbansi.

## Penetapan kadar fenolik total (Murtijaya dan Lim, 2007)
Sebanyak  5  mg  ekstrak  etanol  daun prasman  dilarutkan  sampai  volume  5  ml dengan  campuran  etanol:  air  suling  (1:1). Larutan  ekstrak  yang  diperoleh  dipipet  300 μl  dan  ditambah  1,5  ml  reagen  Folin- Ciocalteu  dan  digojog.  Setelah  didiamkan selama  3  menit,  ditambah  1,2  ml  larutan Na 2 CO 3 7,5% dan didiamkanlagi pada range operating  pada  suhu  kamar.  Absorbansi larutan ekstrak diukur dengan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang
gelombang absorbansi maksimum.
Dilakukan 2 kali pengelungan.
Penentuan  Aktivitas  Antioksidan  Dengan DPPH (Burda dan Olezek, 2001)
Sebanyak  1  mL  masing-masing ekstrak  dengan  konsentrasi  50,  100,  150, 200,  250  mg/L  ditambahkan  dengan  1  mL larutan  1,1  difenil-2-pikrilhidrazil  (DPPH) dalam  etanol  dan  divortex  selama  2  menit. Berubahnya  warna  larutan  dari  ungu menjadi  kuning  menunjukkan  efisiensi penangkal radikal bebas. Selanjutnya pada 5 menit terakhir menjelang 30 menit inkubasi, absorbansi  diukur  pada  panjang  gelombang 520 nm dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis. Kemudian diamati perbandingannya  dengan  vitamin  C  sebaga standar.
Aktivitas penangkapan radikal bebas dihitung  sebagai  persentase  berkurangnya warna DPPH dengan menggunakan persamaan II:
Aktivitas  penangkal  radikal  bebas  (%)  =1-
x 100%
Penentuan Nilai IC 50
Nilai  IC 50 dihitung  dari  interpolasi pada  grafik  hubungan  antara  konsentrasi larutan  uji  dan  daya  antioksidan  pada konsentrasi  50,  100,  150,  200,  250  mg/L kemudian  dibandingkan  dengan  nilai  IC 50 larutan standar vitamin C yang dihitung dari interpolasi  pada  grafik  hubungan  antara konsentrasi vitamin C dan daya antioksidan. Nilai IC 50 merupakan konsentrasi penghambat  50%  terhadap  radikal  bebas DPPH dari senyawa ekstrak daun prasman.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Identifikasi Sampel
Identifikasi  sampel  daun  prasman dilakukan  di  Laboratorium  Taksonomi Tumbuhan  Program  Studi  Biologi  FMIPA UNSRAT Manado. Tujuan dilakukan
identifikasi sampel adalah untuk membuktikan  kebenaran  sampel  tumbuhan daun prasman.

## Persiapan Sampel
Sampel dibersihkan kemudian dirajang  sehingga  diperoleh  sampel  basah sebanyak  583  g.  Tujuan  perajangan  sampel untuk  mempercepat  proses  pengeringan  dan mempermudah penghalusan sampel.
Setelah  itu  sampel  kemudian  di keringakan  dalam  oven  dengan  suhu  40 o C. Tujuan  pengeringan  sampel  yaitu  untuk mendapatkan  kadar  air  <  10%  sehingga sampel  tidak  mudah  rusak    (Saifuddin, 2010).  Diperoleh  sampel  kering  kemudian sampel  dihaluskan  menggunakan  blender dan diayak dengan ayakan 60 mesh sehingga diperoleh serbuk kering (simplisia) sebanyak 285 g .
Tujuan  dilakukannya  pengayakan agar  ukuran  partikel  bersifat  homogen, dimana  homogenitas  partikel  ini  merupakan parameter  utama  yang  akan  mempengaruhi keseragaman  tahapan  ekstraksi  bahan  aktif, yang  tergantung  pada  kecepatan  difusi  zat aktif  serbuk  (simplisia)  menuju  pelarut (Saifuddin, 2010).

## Kadar Air
Untuk  mengetahui  berapa  banyak kandungan  air  yang  terdapat  pada  daun prasman  maka  perlu  dilakukan  penentuan kadar  air.  Berat  cawan  awal  sebelum pemanasan yaitu 24,51 g kemudian ditambahkan dengan 2  g sampel.   Kadar air ditentukan  dengan  pemanasan  oven  selama 3  jam  sehingga  diperoleh  berat  akhir  yaitu 26,47 g.
Hasil  kadar  air  tersebut  diperoleh  setelah pemanasan sehingga menghasilkan kadar air yang konstan. Hasil kadar air daun prasman sebesar  2%.    Hasil  yang  didapat    terjadi dikarenakan  proses  preparasi  sampel  tidak mengalami  proses  pemanasan  dengan  sinar matahari secara langsung.
0 2 4 6 8 10 12 14 ekstrak etanol 60% ekstrak etanol 80% ekatrak etanol 96%
5.45 11.97 13.47 T o ta l fenolik ( m g /L )

## Pembuatan Ekstrak
Serbuk  simplisia  diekstraksi  dengan metode maserasi. Digunakan metode maserasi  karena  memiliki  keunggulan  yaitu cara  pengerjaan  yang  cepat,  peralatan  yang digunakan  sederhana,  relatif  mudah  dan murah.  Selain  itu,  pemilihan  metode ekstraksi  secara  maserasi  yaitu  dengan melihat  dari  sifat  zat  aktif  flavonoid  yang akan  ditarik  yang  tidak  tahan  akan  panas
(Gandjar dan Abdul, 2008).
Pelarut  yang  digunakan  adalah  pelarut etanol  karena  merupakan  pelarut  universal, pelarut  ini  dapat  melarutkan  hampir  semua senyawa  organik  yang  ada  pada  sampel, baik  senyawa  polar  maupun  senyawa  non polar. Penggunaan varian konsentrasi pelarut  dilakukan  karena  semakin  tinggi konsentrasi  etanol  maka  semakin  rendah tingkat  kepolaran  pelarut  yang  digunakan (Shadmani dkk., 2004).
Rendemen  adalah  hasil  presentase antara  bagian  yang  dapat  terekstrak  dari bahan mentah. Hasil rendemen daun prasma yang diperoleh dapat dilihat pada Gambar 3 diatas  dimana  rendemen  dari  pelarut  etanol dengan  konsentrasi  96  %  sebesar  5,33%. rendemen  pelarut  etanol  80%  sebesar  4,40 % dan rendemen etanol 60% sebesar 3,92%.
Etanol  96  %  memiliki  rendemen paling tinggi diduga karena dapat melarutkan senyawa fitokimia secara
keseluruhan  dan  mampu    menarik  beberapa senyawa  fitokimia  yang  terlarut  dalam pelarut  polar.  Perbedaan  randemen  juga disebabkan  kadar  air  pada  perlakuan  bahan sampel  segar  relatif  masih  tinggi  dibanding bahan sampel kering yang mengalami proses penjemuran (Masuroh, 2004).

## Pengujian Fitokimia
Pengujian  fitokimia  dilakukan  untuk mengidentifikasi kandungan senyawa metabolit  sekunder  yang  terdapat  didalam sampel  daun  prasman.  Berdasarkan  hasil pengujian  fitokimia  yang  meliputi  fenolik, flavonoid,  alkaloid,  steroid,  triterpenoid, saponin, dan tanin.
Pada  pengujian  fitokimia,  golongan senyawa yang terdeteksi pada daun prasman yaitu  senyawa  fenolik,  flavonoid,  Alkaloid, dan  tanin.  Sedangkan  golongan  senyawa yang  tidak  terdeteksi  yaitu  senyawa  steroid, triterpenoid,  dan  saponin.  Adanya  senyawa metabolit sekunder dalam tumbuhan menandakan  bahwa  tumbuhan  tersebut memiliki  senyawa  antioksidan.  Penentuan kadar  senyawa  fenolik  total  dilakukan dengan  membuat  kurva  standar  asam  galat dengan konsentrasi 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 ppm  pada  panjang  gelombang  775  nm. Kurva  standar,  dibuat  sebagai  pembanding ekuivalen  senyawa  fenolik  yang  terdapat dalam daun prasman dengan demikian kurva tersebut berguna dalam membantu
menentukan kadar total fenolik.
0 1 2 3 4 5 6 ekstrak etanol 60% ekstrak etanol 80% ekstrak etanol 96% 3.92 4.4 5.33 R e n d e m e n (% )
Penetapakan  kadar  total  fenolik  dilakukan dengan menggunakan reagen Folin-
Ciocalteu. Reagen
Folin Ciocalteu
digunakan  karena  senyawa  fenolik  dapat bereaksi  dengan  folin  membentuk  larutan berwarna biru yang dapat di ukur absorbansinya.  Prinsip  dari  metode  folin coicalteu  adalah  terbentuknya  senyawa komplek  berwarna  biru  yang  dapat  diukur pada panjang gelombang 775 nm.
Senyawa-senyawa  fenolat  diduga memberi kontribusi terhadap aktivitas antioksidan  dalam  tanaman  ini,  namun memiliki  kadar  yang  berbeda  dalam  tiap ekstraknya  (Khamsah  dkk.,  2006).  Hasil total kandungan fenolik daun prasman dapat dilihat pada gambar di atas. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  total  fenolik  tertinggi terkandung  dalam  ekstrak  etanol  96, kemudian  80  dan  yang  paling  rendah  60%. Hal  ini  menunjukkan  adanya  senyawa- senyawa fenolik pada ekstrak daun prasman.

## Penentuan  Aktivitas  Antioksidan  dengan Metode DPPH
Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak daun prasman menggunakkan metode  DPPH.  Metode  DPPH  merupakan metode pengukuran antioksidan yang sederhana,  cepat  dan  tidak  membutuhkan banyak reagen seperti halnya metode lain.
Konsentrasi  ekstrak  sampel  daun prasman  yang  digunakan  adalah  50,  100, 150,  200,  250  mg/L  untuk  masing-masing pelarut.  Masing-masing  konsentrasi  dipipet 1 mL dan dicampurkan dengan 1 mL larutan DPPH 90 μM. Campuran tersebut diinkubasi selama  30  menit  pada  tempat  gelap, kemudian  diukur  absorbansinya  dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada  panjang  gelombang  maksimum  (517 nm). Untuk tiap konsentrasi dilakukan 2 kali pengulangan.
Sempurnanya  campuran  DPPH dalam ekstrak dibantu dengan vortex selama 2  menit  tiap  sampel.  Adanya  aktivitas antioksidan sampel mengakibatkan perubahan  warna  pada  larutan  DPPH  dalam etanol  yang  sebelumnya  berwarna  violet pekat  menjadi  warna  kuning.  DPPH  akan mengambil  atom  hidrogen  yang  terdapat dalam  suatu  senyawa,  misalnya  senyawa fenol.
Vitamin C (asam askorbat)
digunakan  sebagai  pembanding  karena vitamin  C  merupakan  antioksidan  alami. Konsentrasi  yang  digunakan  untuk  vitamin C yaitu 2, 4, 6, 8, 10 mg/L.
Perhitungan  yang  digunakan  untuk menghitung  besarnya  aktivitas  antioksidan yaitu  dengan  menentukan  nilai  IC 50 .  Nilai IC 50 diperoleh dengan menggunakan persamaan  regresi  linier  yang  menyatakan hubungan antara konsentrasi sampel (senyawa  uji)  dengan  aktivitas  penangkap radikal  rata-rata  (Matheos,  2014).  Untuk ekstrak  etanol  96%  daun  prasman  memiliki nilai  slope  paling  tinggi  yaitu  0,101 kemudian diikuti ekstrak etanol 80 dan 60% (Tabel  2).  Semakin  tinggi  slop  maka semakin baik pula nilai IC 50 . Hasil  perbandingan  IC 50 dapat dilihat  pada  Tabel  2  di  atas.  Hasil menunjukkan  ekstrak  etanol  96%  memiliki nilai  IC 50 122,77  mg/L,  etanol  80%  162,56 mg/L, etanol 60% 253,95 mg/L dan vitamin C  8,973  mg/L.  Menurut  Molyneux  (2014), mengemukakan bahwa senyawa mengandung  antioksidan  apabila  memilki IC 50 kurang dari 200 mg/L. Berdasarkan data tersebut nilai IC 50 ekstrak etanol 96% adalah paling  rendah  diikuti  ekstrak  etanol  80  dan 60%. Dari data tersebut terbukti bahwa daun prasman  memiliki  kandungan  aktivitas antioksidan. Hal ini sejalan dengan kandungan  total  fenolik  yang  menujukkan pada  ekstrak  etanol  96%  memiliki  total kandungan  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan ekstrak etanol 80, dan 60%.
0 10 20 30 40 50 60 70 0 100 200 300 akt iv itas (% ) Konsentrasi (mg/L) vit c 96% 80% 60% r² = 0.988 0 50 100 150 200 250 300 0  1  2  3  4  5  6  7  8  9 10 11 12 13 14 15 IC50 TOTAL FENOLIK Vitamin C sebagai senyawa pembanding memiliki nilai IC 50 8,973  mg/L dan memiliki nilai slope paling tinggi karena Nilai  IC 50 vitamin  C  lebih  kecil  dibanding dengan  nilai  IC 50 ekstrak  etanol  96%  daun prasman  karena  merupakan  senyawa  yang murni  dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol dengan  konsentrasi  96,  80  dan  60%.  Jika dibandingkan  dengan  IC 50 vitamin  C,  maka ekstrak  daun  prasman  cukup  berpotensi sebagai  antioksidan.  Vitamin  C  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  karena vitamin  C  memiliki  2  gugus  hidroksil  yang mengakibatkan lebih mudah dalam pendonoran hidrogen.
Sampel  ekstrak  etanol  96%  daun prasman  memiliki  kandungan  senyawa- senyawa  fenolat  dimana  kemungkinan semua  senyawa  dapat  tertarik  oleh  pelarut terdapat  didalam  ekstrak  96%  sehingga menghasilkan  aktivitas  antioksidan  yang
lebih  besar  dibandingkan  dengan  ekstrak lainnya.  Hasil  kandungan  total  fenolik sejalan  dengan  hasil  aktivitas  antioksidan dimana  semakin  tinggi  kandungan  total fenolik  semakin  tinggi  pula  aktivitas antoksidannya. Ekstrak etanol 96% memiliki total  kandungan  fenolik  yang  paling  tinggi dan  memilki  nilai  IC 50 yang  paling  kecil.
Hubungan  kandungan  fenolik  total  terhadap antioksidan  pada  penelitian  ini  di  tunjukkan pada  Gambar  8  di  bawah  ini.  Menurut Andayani  dkk  (2008),  menyatakan  bahwa
nilai  r  yang  mendekati  satu  menunjukkan persamaan regresi tersebut linier.

## PENUTUP 5.1 Kesimpulan
Dari  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan dapat di simpulkan :
a. Ekstrak  etanol  96%  memiliki  total kandungan  fenolik  yang  paling  tinggi yaitu  sebesar  13,47  mg/L,  diikuti ekstrak  etanol  80%  11,  97  mg/L,  dan ekstrak 60% 5,45 mg/L.
b. IC 50 ekstrak  etanol  96%  menunjukkan aktivitas antioksidan yang paling baik, diikuti nilai IC 50 ekstrak etanol 80 dan 60% .
Saran Sebaiknya dilakukan penelitian terhadap uji antibakteri dari daun prasman.

## DAFTAR PUSTAKA
Andayani, R.,Lisawati, Y., Maimunah.2008, Penentuan  Aktivitas  Antioksidan, Kadar  Fenolat  Total  dan  Likopen pada Buah
Tomat ( Solamun lycopersicum  L .). Jurnal  Sains  dan Tekhnologi Farmasi . 13 : 3-4.
Association  of  Official  Analytical  Chemist (AOAC)  925.45.  1999. Official Methods  of  Analysis  of  Assocoation of Official Analytical
Chemists. Edition  ke-15.  Kenneth Helrich, USA. 44 : 1-3.
Barberán,  T.,Cienfuegos-  J,F.A  E.,  Marín, A.,  Muguerza,  B.,  Gil-Izquierdo,  A., Cerdá,  B.,  Zafrilla,  P.,  Morillas,  J., Mulero,  J.,  Ibarra,  A.,  Pasamar,  M. A., Ramón, D., & Espín, J. C. 2007. A  New  Process  To  Developa  Cocoa Powder  with  Higher  Flavonoid Monomer  Content  and  Enhanced Bioavailability  in  Healthy  Humans. Journal Agric Food Chem . 55 : 3926- 3935.
Beu, S. 2014. Uji Efektivitas Ekstrak Etanol
Tunas Pisang Goroho (Musa acuminate  L.)  Terhadap  Penurunan
Kadar Gula Darah Tikus Putih Jantan Galur  Wistar  (Rattus  norvegicus)
Yang  Diinduksi  Sukrosa .  [Skripsi].
Fakultas  MIPA.  Universitas  Sam Ratulang, Manado.
Burda, S.,Olezek, W. 2001. Antioxidant and Antiradical  Activities  of  Flavonoids. Journal  Agric .  Food  Chem. 49 : 2774-2779.
Chairul,J.,  Sutaryo,  S.B.  1996 .  Isolasi  & Identifikasi  Kumarin  dari  daun Prasman  (Eupatorium  triplinerve Vahl). Universitas Pancasila, Jakarta.
Corwin,  E.J.2009. Buku  Saku  Patofisiologi, Edisi  ketiga. Penerjemah:  Yudha, E.K., Wahyuningsi, E., Yulyanti, D., dan  Karyuni,  P.E.  Penerbit  Buku Kedok EGC, Jakarta.
Dalimartha,  S.,  1999. Atlas  Tumbuhan  obat Indonesia Ungaran . Trubus
Agriwidya, Jakarta.
Depkes.  1995. Materia  Medica  Indonesia Jilid  6. Departemen  Kesehatan  RI, Jakarta.
Depkes RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak  Tumbuhan  Obat. Cetakan Pertama. Departemen Kesehatan RI,Jakarta.
Devasagayam  TPA,  Tilak  JC,  Boloor  KK, Sane  KS,  Ghaskadbi  SS,  Lele  R.D. 2004. Free  Radical  and  antioxidant in human health: Current status and future prospect. JAPI 52 :794- 804.
Gandjar,  I.G.,  Abdul,  R.  2008. Kimia Farmasi  Analisis. Pustaka  Pelajar, Yogyakarta.
Harbone,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia . Penerbit ITB, Bandung.
Harbone,  J.B.  1996 .  Metode  Fitokimia. Terbitan  kedua.Terjemahan  Kosasih Padmawinata  dan  Iwang  Soediro.
ITB Bandung, Bandung.
Hargono,  D.  1997.  Obat  Tradisional  dalam
Zaman Teknologi. Majalah Kesehatan Masyarakat. 56 : 3-5
Kalay, S. 2014. Uji Efek Antipiretik Ekstrak Etanol  Daun  Prasman  (Eupatorium triplinerve  Vahl.)  Pada  Tikus  Jantan Galur Wistar (Rattus Norvegicus  L.) Yang Diinduksi Vaksin DTP HB. [Skripsi] . Fakultas
MIPAUniversitas  Sam  Ratulangi,
Manado.
Khamsah,  S.M.,  Akowah,  G.,  dan  Zhari,  I.
2006.  Antioxidant  Activity  And Phenolic  Content  Of Orthosiphon stamineus B. From Different Geografical Origin . Journal of Sustainability Science and Management. 1 : 14-20.
Kikuzaki,  H.  2002.  Antioxidants  Properties of  Ferulic  Acid  and  Its  Related Compound. Journal  Agring.  Food Chemistry . 50 : 2161-2168.
Kristianti, A.N., Aminah, N.S., Tanjung, M.,
Kurniadi B. 2008. Buku Ajar Fitokimia . Jurusan Kimia Laboratorium Kimia Organik FMIPA Universitas Airlangga, Surabaya.  47-48.
Lumempuow,  L.I.,  Paendong  J.,  Momuat, L.I.,  Suryanto,  E.  2012 . Potensi Aktioksidan dari Ekstrak Etanol Tongkol Jagung ( Zea mays L.). Chemistry Progress . 5 : 49-56.
Lutfita,  D.  2012 . Pengaruh  Perbedaan Metode Ekstraksi Terhadap Kandugan  Flavonoid  Total  dan Aktivitas Antioksidan Brokoli ( Brassica  oleracea  L.  cv.  Group Broccoli ). [Skripsi]. Fakultas  MIPA Universitas Islam Bandung, Bandung. Mamonto, S.I., Aktivitas Antioksidan Ekstrak  Kulit  Biji  Buah  Pinang YakiYang Diekstraksisecara soklet. [Skripsi] . Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Masuroh,  S.  2004.Analisis  Kandungan
Antioksidan Alami Jamu GOLOHRO. [Skripsi] Fakultas Pertanian  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor.
Matheos,  H.  2014.  Aktivitas  Antioksidan dari  Ekstrak  Daun  Kayu  Bulan ( Pisonia alba Span). [Skripsi]. Fakultas  MIPA  Universitas  Sam Ratulangi, Manado.
Matthaus,  B.  2002.  Antioxidant  Activity  of Extracts Obtained from Resideues of Different  Oilseeds. J.  Agric.  Food Chem. 50 : 3444-3452.
Molyneux,  P.  2004 .  The  Use  Of  The  Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH)  For  Estimating  Antioxidant Activity. J. Sci. Technol. 2 : 211-219.