ANALISIS KADAR α-TOKOFEROL (VITAMIN E) DALAM DAUN KELOR ( Moringa oleifera Lam) DARI DAERAH PESISIR DAN PEGUNUNGAN SERTA POTENSINYA SEBAGAI ANTIOKSIDAN
[Analysis of α-Tokopherol (Vitamin E) Extracted from Moringa Leaves ( Moringa oleifera Lam) Collected from Seashore and Highland Areas and Its Potencyl as Antioxidant]
Khalil Mubarak 1* , Hasnah Natsir 1 , Abd. Wahid Wahab 1 , Pasjan Satrimafitrah 2
1) Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Hasanuddin Jl. Perintis Kemerdekaan Km 10 Tamalanrea,Makassar, 90245
2) Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako Jl. Soekarno Hatta, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu, Telp. 0451- 422611
Diterima 20 Maret 2017 , Disetujui 17 April 2017

## ABSTRACT
Alpha-tocopherol, a major vitamin E component, functions as an antioxidant that neutralizes free radicals in  a  living  organism. Moringa  oleifera Lam.  leaves  are  rich  source  of  carotenoids  and  -tocopherol. This research was aimed to determine the concentration of α-tocopherol and examine the activity of moringa leaves ( Moringa  oleifera L.) crude extracts as an antioxidant. Sample used in this research were juvenile and  adult  moringa  leaves  ( Moringa  oleifera L),  which  were  taken  from  seashore  of  Barru  regency  and highland of Soppeng regency. Extraction of the leaves was carried out by reflux method using ethanol as a solvent,  and  then  evaporated  to  produce  concentrated  ethanol  extract.  Analyzes  were  detected  at wavelenght  of  510.20  nm  using  UV-Vis  Spectroscopy,  the  results  indicated  that concentration  of  α- tocopherol  extracted  from  juvenile  and  adult  moringa  leaves  from  seashore  area  were  104.52  mg/100g and  11.419  mg/100g  respectively,  whilst  the  leaves  from  highland  area  gave  a  concentration  of  134.4 mg/100g  and  114.918  mg/100g.  Next,  we  examined  the  antioxidant  activity  of  each  type  of  leaf  using DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) methods at the wavelength of 515 nm. The IC 50 results data showed that ethanol extract of juvenile and adult leaves from seashore area were 172.71 μg/mL and 258.92 μg/mL respectively, and categorized as weak antioxidant. Adversely, juvenile leaves from highland area gave a result of 97.79 μg/mL and categorized as strong antioxidant; while adult leaves from the same area gave a values of 143.14 μL/mL and categorized as medium antioxidant. Vitamin E and BHT were used as control and had higher values compared to all samples.
Keywords: α-tocopherol, antioxidant, Moringa oleifera leaves, DPPH, UV-Vis Spectrophotometer .

## ABSTRAK
Vitamin  E  atau α-tokoferol  merupakan  vitamin  yang  larut  dalam  lemak  dan  dapat  berfungsi  sebagai antioksidan  sehingga  mampu  menetralisir  radikal  bebas  dalam  tubuh  mahkluk  hidup.  Penelitian  ini bert ujuan untuk menentukan kadar α-tokoferol dan menguji aktivitas antioksidan dari daun kelor ( Moringa oleifera L).  Ekstraksi seny awa α-tokoferol dilakukan menggunakan metode refluks dengan pelarut etanol p.a,  yang  selanjutnya  dievaporasi  untuk  menghasilkan  ekstrak  etanol  kental.  Sampel  yang  digunakan adalah  daun  kelor  yang  muda  dan  tua  yang  berasal  dari  daerah  pesisir  pantai  Kabupaten  Barru  dan pegunungan  Kabupaten  Soppeng.  Hasil  analisis  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang  (λ)  510,20  nm,  menunjukkan:    kandungan    α-tokoferol  pada  daun  kelor  muda  dan  tua  dari kawasan pesisir pantai adalah 104,52 mg/100g dan 116,419 mg/100g, sedangkan daun kelor muda dan daun  kelor  tua  dari  kawasan  pegunungan  adalah  134,40  mg/100g  dan  114,92  mg/100g.  Selanjutnya, pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) pada panjang gelombang 515 nm menghasilkan data IC 50 sebagai berikut: ekstrak daun kelor muda dan daun kelor tua pesisir  masing-masing  adalah  172,71 μg/mL dan 258,92 μg/mL  yang dikategorikan sebagai antioksidan lemah;  sedangkan  daun  kelor  muda  dari  kawasan  pegunungan  adalah    97,79 μg/mL  yang  tergolong antioksidan kuat; dan daun kelor tua dari kawasan pegunungan bernilai 143,14 μg/mL yang dikategorikan sebagai  antioksidan  sedang.    Sebagai  konrol  positif  untuk  antioksidan  digunakan  Vitamin  E  dan  BHT dimana nilai IC 50 dari Vitamin E dan BHT lebih kuat dibandingkan dengan semua sampel daun kelor.
Kata kunci : α-Tokoferol, Antioksidan, Daun Kelor, DPPH, Spekrtrofotometer UV-Vis .
*)Coresponding author: barrackmubaraq@gmail.com

## LATAR BELAKANG
Penelitian  di  dunia  kesehatan  saat ini semakin berkembang, sehingga memunculkan pemahaman bahwa kerusakan  pada  sel  dan  jaringan  yang merupakan  akar  dari  sebagian  besar penyakit disebabkan oleh kelompok senyawa  ki mia  yang  disebut  ‘radikal bebas  (Youngson,  2005).  Radikal  bebas masuk  ke  dalam  tubuh  dapat  melalui pernapasan,  makanan  berlemak,  dan kondisi  lingkungan  yang  tidak  sehat (Lestario dkk, 2009). Oleh karena keberadaan  radikal  bebas,  maka  tubuh memerlukan  komponen  penting  yang menangkal serangan radikal bebas tersebut yaitu antioksidan.
Antioksidan  merupakan  senyawa yang  bekerja  dengan  menghambat  laju oksidasi  molekul  lain  atau  menetralisir radikal  bebas  (Fajriah  dkk,  2007).  Seiring dengan semakin bertambahnya pengetahuan  manusia  tentang  aktivitas radikal bebas terhadap beberapa penyakit degeneratif, maka penggunaan antioksidan  juga  semakin  berkembang (Ikhlas, 2013).
Manusia  membutuhkan  antioksidan yang dapat melindungi tubuh dari serangan radikal bebas, mengingat begitu banyaknya  radikal  bebas  yang  berasal dari  luar  tubuh,  seperti  makanan  yang banyak  mengandung  asam  lemak  tidak jenuh,  bahan  pengawet,  pestisida,  dan pewarna (Zuhra, dkk., 2008; Parwata dkk, 2010).  Oleh  karena  itu,  asupan  makanan yang mengandung antioksidan dibutuhkan
oleh tubuh agar dapat menagkal serangan radikal  bebas.  Antioksidan  alami  tersebut berupa  vitamin  C,  tokoferol  (vitamin  E), betakaroten, dan antioksidan fitokimia dari golongan  fenolik  (Ikhlas,  2013).  Sumber antioksidan  alami  ini  dapat  diperoleh  dari buah-buahan  dan  sayur-sayuran  salah satu contohnya adalah kelor.
Tumbuhan  Kelor  ( Moringa  oleifera ) merupakan  jenis  tumbuhan  yang  awalnya berasal  dari  kawasan  sekitar  Himalaya dan  India,  kemudian  menyebar  ke  Benua Asia,  Amerika,  Afrika,  dan  New  Zealand. Kelor  merupakan  pohon  sayuran  yang sangat  bergizi,  memiliki  berbagai  manfaat (Luthfiyah, 2012). Daun kelor mengandung  berbagai  zat  kimia  yang bermanfaat.  Kandungan  fitokimia  dalam daun  kelor  diantaranya  tanin,  steroid  dan triterpenoid, flavonoid, saponin, antarquinon, dan alkaloid serta mengandung mineral, asam amino esensial, antioksidan, dan vitamin (Hardiyanthi, 2015).
Salah  satu  kandungan  tanaman kelor  yang  paling  berkhasiat  adalah antioksidan, terutama pada bagian daunnya  yang  mengandung  antioksidan tinggi,  salah  satu nya  vitamin  E  (α- tokoferol). Vitamin E (α-tokoferol)
dipercaya  sebagai  sumber  antioksidan yang kerjanya mencegah lipid peroksidasi dari  asam  lemak  tak  jenuh  dalam membran  sel  dan  membantu  oksidasi vitamin A serta mempertahankan kesuburan (Rohmatussolihat, 2009).
Berdasarkan
penelitian yang dilakukan  oleh  Unigbe  dkk  (2014),  daun kelor  ( Moringa  oleifera )  dapat  digunakan sebagai antioksidan alami dengan mencegah  kerusakan  yang  ditimbulkan oleh  radikal  bebas  dengan  nilai  IC 50 berkisar 5,72-42, 56  μg/mL.  Menurut Fatchurrozak dkk (2013), ketinggian suatu tempat  dari  permukaan  laut  merupakan salah satu faktor yang sangat berpengaruh terhadap pertumbuhan tanaman.  Daerah  pesisir  dan  daerah pegunungan  memiliki  perbedaan  faktor lingkungan.  Semakin  tinggi  ketinggian tempatnya,  maka  semakin  tinggi  pula stress  terhadap  lingkungan.  Ketika  suatu tanaman mengalami stress, maka produksi  metabolit  sekunder  termasuk produksi vitamin akan mengalami peningkatan (Fatchurrozak dkk, 2013).

## METODE PENELITIAN Bahan dan Peralatan
Bahan  yang  digunakan  daun  kelor ( Moringa oleifera Lam.) berdasarkan letak pertumbuhannya,  yaitu  yang  berada  di daerah  pesisir  Kabupaten  Barru  dan pegunungan Kabupaten Soppeng, padatan  vitamin  E  (α-tokoferol),  etanol 96%,  kloroform,  Iodida  0,1%,  metanol,
DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ),Butil Hidroksi  Tuluen  (BHT),  kertas  saring whatman  no.  42, aluminium  foil ,  plastik wrap dan tissue roll .
Peralatan  berupa  labu  alas  bulat, kondensor  refluks,  corong  kaca,  Corong Buchner ,  klem,  statif, hotplate ,  selang,
cool  box,  Evaporator Rotary ,  termometer, neraca analitik, mikro pipet, cuvet, spektrofotometer  UV –Vis, vortex dan  vial.
Alat-alat  gelas  yang  biasa  digunakan  di laboratorium seperti labu ukur, gelas ukur, gelas  kimia,  buret,  pipet  tetes,  tabung reaksi dan rak tabung.

## Prosedur Kerja

## Preparasi Sampel
Daun kelor ( Moringan oleifera Lam.) yang  digunakan  adalah  daun  kelor  muda yang  dipetik  dari  dahan  pohon  yang kurang lebih dari tangkai daun pertama (di bawah  pucuk)  sampai  tangkai  daun ketujuh  yang  masih  hijau,  dan  daun  tua kecuali daun yang menguning.
Selanjutnya  daun  kelor  tersebut  dicuci dengan air bersih lalu dirunut  dari tangkai daunnya,  kemudian  dihaluskan  dengan menggunakan blender.

## Ekstraksi Sampel
Sampel  ditimbang  sebanyak  150 gram kemudian di isolasi dengan menggunakan  metode  refluks.  Refluks dilakukan dengan cara sampel daun kelor sebanyak  150  gram  tadi  dimasukkan  ke dalam  labu  alas  bulat  1  liter  dan dutambahkan  etanol  96%  sebagai  cairan penyari sebanyak 200mL. Refluks dilakukan  selama 3 jam pada suhu 80 o C.
Hasil  isolasi  kemudian  di  saring  dan selanjutnya dievaporasi untuk menguapkan  pelarut  guna  mendapatkan ekstrak  kental.  Ekstrak  kental  yang diperoleh ditimbang.
Pembuatan Larutan Standar α-tokoferol (Vitamin E)  1000 ppm
Padatan α-tokoferol  (Vitamin  E) ditimbang  sebanyak  50  mg,  kemudian dimasukkan  ke  dalam  labu  takar  50  mL lalu  dilarutkan  dengan  sedikit    kloroform. sampai tanda batas. Kemudian ditambahkan  1mL  iodida  0,1%  ke  dalam larutan  baku,  dikocok  hingga  membentuk warna  ungu.  Setelah  itu,  diimpitkan dengan  klorofrm  sampai  tanda  batas. Kocok sampai homogen
Pembuatan Larutan Standar α-tokoferol (Vitamin  E)  10  ppm;  20  ppm;  40  ppm; 80 ppm; 160 ppm dan 320 ppm
Larutan  standar  α-tokoferol  (vitamin  E) 1000 ppm masing-masing dipipet sebanyak  0,05  mL;  0,1  mL;  0,2  mL;  04 mL;  0,8  mL  dan  1,6  mL  ke  dalam  labu ukur  5  mL.  Kemudian  ditambahkan  1mL iodida  0,1%  ke  dalam  larutan  baku, dikocok  hingga  membentuk  warna  ungu. Setelah  itu,  diimpitkan  dengan  klorofrm sampai  tanda  batas.  Kocok  sampai homogen.
Penentuan Panjang Gelombang

## Maksimum (λ maks)
Penentuan    panjang    gelombang maksimum  (λ  maks) diperoleh    dengan mengukur  absorbansi  larutan  standar α-tokoferol  (vitamin  E)  pada  panjang gelombang  (λ)  550-600  nm.  Berdasarkan pengukuran  larutan  standar  tersebut diperoleh panjang gelombang maksimum.
Penetapan
Kadar α-tokoferol (Vitamin E)
Ekstrak kental yang diperoleh ditimbang  sebanyak  10  mg  kemudian
diencerkan menggunakan 9 mL kloroform.  Ditambahkan    1  mL  iodida 0,1%,  dikocok  sampai  homogen,  diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum yang didapat. Hasil absorbansi dibandingkan  dengan  kurva  linier  larutan standar α-tokoferol  (Vitamin  E)  untuk memperoleh kadar vitamin E pada ekstrak yang diperoleh.
Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
- Pembuatan larutan DPPH
Larutan  DPPH  0,4  mM  dibuat dengan cara menimbang 7,9 mg DPPH dan  dilarutkan  dengan  metanol  p.a hingga 50 mL dalam labu ukur.
- Penentuan panjang gelombang
maksimum (λ maks ) DPPH
Larutan blanko dibuat dengan cara memipet  1  mL  larutan  DPPH  0,4  mM kemudian dicukupkan volumenya hingga  5  mL  dengan  methanol  p.a. Setelah  itu  dibiarkan  selama  30  menit ditempat  gelap,  serapan  larutan  diukur dengan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang gelombang 400-600 nm.
- Pembuatan larutan pembanding
(Vitamin E dan BHT)
Vitamin E dan BHT masing-masing ditimbang sebanyak  10 mg dan dilarutkan  dalam  10  mL  metanol  p.a sehingga  diperoleh  konsentrasi  1000 ppm  sebagai  larutan  induk,  kemudian diencerkan  menjadi  100ppm.  Dari larutan  induk  dibuat  seri konsentrasi 1, 2,  3,  4  dan  5  ppm  dengan  memipet berturut-turut  50,  100,  150,  200,  dan
250 μL.  Larutan  DPPH  ditambahkan sebanyak  1  mL  dan  dicukupkan volumenya  hingga  5  mL  dengan metanol p.a.
- Pengujian Aktivitas Antioksidan
Larutan  induk  dari  ekstrak  daun kelor
yang telah diketahui
konsentrasinya  dibuat  dalam  5  seri konsentrasi yaitu 10, 20, 30, 20 dan 50 ppm.  Larutan  DPPH  ditambahkan sebanyak  1  mL,  dan  dicukupkan volumenya  hingga  5  mL  dengan metanol  p.a,  dan  sebagai  pembanding digunakan  vitamin  C  dan  BHT  (butil hidroksi toluen) dengan seri konsentrasi  1,  2,  3,  4  dan  5  ppm. Campuran tersebut dikocok dan dibiarkan  selama  30  menit  pada  suhu kamar dan pada ruangan yang terlindungi dari cahaya matahari.
Absorbansi  (A)  diukur  pada  panjang gelombang maksimum dengan
spektrofotometer  UV-Vis.  Selanjutnya dihitung persentase inhibisi (hambatan) dan IC 50 (50% Inhibition
Concentration ).  Perhitungan  kuantitatif dilakukan  dengan  menentukan  persen inhibisi  radikal  bebas  dari  masing- masing sampel yang dihitung menggunakan  persamaan  dibawah  ini
(Molyneux, 2004):
nhibisi bs  ontrol- bs  ampel bs  onrol x 100% .. (1)
Keterangan:
Abs kontrol = Absorbansi DPPH + metanol Abs sampel = Absorbansi DPPH + sampel
Selanjutnya  nilai  %  inhibisi  digunakan untuk menghitung nilai IC 50 (ppm).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Analisis Kadar α-Tokoferol
Tabel 1.  adar α-Tokoferol dalam Daun Kelor Jenis Daun Satuan Kadar α-Tokoferol per 100 gram DKMP mg 104,52 DKTP mg 117,52 DKMG mg 134,41 DKTG mg 114,92 Keterangan:
DKMP= Daun Kelor Muda Pesisir;
DKTP  = Daun Kelor Tua Pesisir; DKMG= Daun Kelor Muda Pegunungan; DKTG  = Daun Kelor Tua Pegunungan;
Pada  Tabel  1  menunjukkan  kadar α-Tokoferol (Vitamin E) daun kelor daerah pegunungan  lebih  tinggi  daripada  di daerah  pesisir.  Hasil  tersebut  sama dengan  pendapat  Karamoy  (2009),  ia mengemukakan bahwa pengaruh ketinggian tempat berkaitan dengan proses  metabolisme  suatu  tanaman, seperti  proses  biokimia  dan  sintesis senyawa metabolit sekunder seperti vitamin.  Hal  ini  akan  mempengaruhi pertumbuhan, karakter morfologi, maupun kandungan  senyawa  aktif  pada  suatu tanaman.
Tanaman yang tumbuh pada ketinggian  yang  tinggi  biasanya  memiliki ciri-ciri  morfologi  yang  khas,  termasuk pertumbuhan yang kerdil karena penyesuaian morfologi dan fisiologis yang memungkinkan  individu  untuk  bertahan dalam lingkungan tercekam yang dikaitkan dengan ketinggian tempat tumbuh (Bresson  dkk,  2011).  Semakin  tinggi ketinggian  tempatnya,  maka  semakin tinggi  pula  stress  lingkungan,  misalnya suhu semakin rendah, kelembaban
semakin tinggi, intensitas cahaya matahari semakin  kecil,  lama  penyinaran  semakin singkat. Stres suhu, cahaya, kelembaban, dan lain-lain dapat mempengaruhi produksi vitamin tanaman. Ketika tanaman mengalami  stress,  maka  vitamin E mengalami  peningkatan  (Fatchurrozak, dkk, 2013).
Khusus  untuk  daerah  pegunungan, intensitas cahaya matahari semakin berkurang seiring dengan semakin tingginya  suatu  tempat,  cahaya  matahari mempengaruhi  tumbuhan  berdaun  hijau karena cahaya matahari sangat menentukan proses fotosintesis.
Fotosintesis  merupakan  proses  pada tumbuhan  untuk  menghasilkan  makanan. Makanan yang dihasilkan akan menentukan  ketersediaan  energi  untuk pertumbuhan dan perkembangan tumbuhan  (Aryulina  dkk,  2006  dalam Artanti  dkk,  2016).  Menurut  penelitian yang  dilakukan  oleh  Ayua  dkk  (2016), daun  muda  aktif  secara  fisiologis  dari daun  tua.  Daun  muda  memerlukan  lebih banyak  vitamin,  akan  tetapi  tidak  bisa mengumpulkan cukup vitamin untuk memenuhi proses fisiologisnya.
Sebaliknya, daun tua memiliki kemampuan yang tinggi untuk mensintesis vitamin tetapi pemanfaatannya lebih rendah.  Nutrisi  selalu  disimpan  dalam daun tua dan kemudian ditransfer ke daun muda untuk pertumbuhan dan perkembangannya.  Daun  muda  tidak
memiliki bentuk organ untuk penyimpanan nutrisi.  Akibatnya,  translokasi  nutrisi  lebih banyak  pada  daun  muda  daripada  daun tua.

## Hasil  Uji  Analisis  Antioksidan  dengan Metode DPPH
Penentuan  daya  peredaman  radikal bebas  dipilih  metode  DPPH,  hal  ini didasarkan pada beberapa keunggulannya, diantaranya mudah, sederhana, cepat, reprodusibel, baik untuk sampel dengan polaritas tertentu,  sensitif, dan  hanya  membutuhkan  sedikit  sampel (Koleva  dkk.,  2002  dan  Kurniasih  dkk., 2015).  Selain  itu,  DPPH  merupakan radikal  bebas  yang  relatif  stabil  jika dibandingkan  dengan  radikal  bebas  yang lain  dan  mudah  diperoleh  dipasaran  yang siap untuk dilarutkan serta mudah direaksikan  dengan  larutan  uji  (Larson, 1997).
Ekstrak uji yang digunakan adalah ekstrak daun  kelor  dari  hasil  analisis  asam askorbat,  kemudian  dilanjutkan  pengujian antioksidan dengan metode DPPH secara kuantitatif  menggunakan  spektrofotometer UV  pada  panjang  gelombang  515  nm. Menurut Molyneux (2004), panjang gelombang  tersebut  dapat  digunakan sebab panjang gelombang dari absorbansi maksimum  yang  dapat  digunakan  untuk pengukuran  dengan  metode  DPPH  yaitu 515-520  nm.  Panjang  gelombang  yang diperoleh  selanjutnya  digunakan  untuk pengukuran kontrol dan sampel.
(a)

## (b)
Gambar 1. Grafik Aktivitas Antioksidan (a) Daun Kelor Muda dan (b) Daun Kelor Tua Daerah Pesisir dan Daerah Pegunungan
Dari  Gambar  1  dapat  dilihat  bahwa nilai  %  inhibisi  di  daerah  pegunungan lebih  tinggi  daripada  di  daerah  pesisir. Semakin  tinggi  konsentrasi  sampel  maka aktivitas  antioksidan  akan  semakin  besar pula.  Hasil  ini  didukung  oleh  penelitian Hanani  dkk  (2005)  yang  menyatakan bahwa persentase penghambatan (%  inhibisi)  terhadap  aktivitas  radikal bebas akan meningkat dengan maningkatnya  konsentrasi.  Tinggi  atau rendahnya  aktivitas  antioksidan  sampel dengan  metode  penangkapan  radikal DPPH  ini  diketahui  dari  persentase inhibisinya. Semakin besar nilai persentase  inhibisi  sampel  maka semakin
tinggi  aktivitas  antioksidannya.  Proses inhibisi  terjadi  ketika  radikal  DPPH bereaksi  dengan  senyawa  antioksidan melalui pengambilan ion hidrogen (Reynetrson,  2007  dalam  Wachidah, 2013).
Parameter  yang  dugunakan  untuk menunjukkan  aktivitas  antioksidan  adalah Inhibition Concentration (IC 50 ) yaitu konsentrasi  suatu  zat  antioksidan  yang dapat menyebabkan 50% DPPH kehilangan karakter radikal atau konsentrasi  suatu  zat  antioksidan  yang memberikan  persen  penghambatan  50%. Jika  aktivitas  antioksidannya  semakin tinggi  maka  nilai  IC 50 akan  semakin  kecil
0.00% 5.00% 10.00% 15.00% 20.00% 25.00% 30.00% 10 20 30
40 50 DKMP 2.79% 5.15% 7.44% 11.16% 14.42% DKMG 6.05% 10.69% 14.88% 19.53% 26.97% % IN H IBISI ppm 0.00% 5.00% 10.00% 15.00% 20.00% 25.00% 10 20 30 40
50 DKTP 10.23% 11.63% 12.56% 15.58% 16.28% DKTG 8.37% 14.97% 16.97% 19.30% 21.16% % IN H IBISI ppm
(Molyneux,  2004).  Persen  inhibisi  ini didapatkan dari perbedaan serapan antara absorbansi  DPPH  dengan  aborbansi sampel yang diukur menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  (Andayani  dkk,
2008).  Nilai  IC 50 ekstrak  daun  kelor ( Moringa  oleifera Lam)  dan  pembanding (kontrol  positif)  vitamin  E  dan  BHT diperoleh berdasarkan perhitungan regresi linear dari kurva absorbansi sampel.
Gambar 2. Grafik Aktivitas Antioksidan Vitamin E dan BHT
Tabel 2.  Nilai  IC 50 dan  Tingkat  Kekuatan
Antioksidan  Sampel  Daun  Kelor  dan Pembanding (Kontrol Positif) Sampel/ pembanding Nilai IC 50 Intensitas Sampel DKMP 172,71 μg/mL Lemah DKTP 258,92 μg/mL Lemah DKMG 97,79 μg/mL Kuat DKTG 143,14 μg/mL Sedang Pembanding (Kontrol Positif) Vitamin E 7,15 μg/mL Sangat Kuat BHT 6,25 μg/mL Sangat Kuat Dilihat dari Tabel
2, Jika dibandingkan  dengan  vitamin  E  dan  BHT yang merupakan antioksidan sangat kuat, sampel  DKMP  dan  DKTP  dikategorikan antioksidan  lemah,  DKMG  dikategorikan antioksidan  kuat  dan  DKTG  dikategorikan antioksidan sedang. Berdasarkan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Hasanah dkk  (2016),  nilai  IC 50 dari  ekstrak  etanol sebesar 363,75  μg/mL  sedangkan pembandingnya  yaitu  vitamin  E  sebesar 4,91  μg/mL.  Hal  ini  membuktikan  bahwa
ekstrak  etanol  daun  kelor  dikategorikan sebagai  antioksidan  lemah.  Selain  itu, dapat  dilihat  dari  perubahan  warna  yang ditimbulkan  menurut  Molyneux  (2004), pada  vitamin  E  terjadi  perubahan  warna dari ungu menjadi kuning jernih sedangkan  untuk  ekstrak  etanol  daun kelor tidak terjadi perubahan warna seperti yang  terjadi  pada  vitamin  E.  Dapat disimpulkan bahwa daya aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  daun  kelor sangat  kecil  bila  dibandingkan  dengan daya  aktivitas  antioksidan  vitamin  E,  bila dilihat dari nilai IC 50 .
Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  muda  mempunyai daya  peredam  radikal  bebas  yang  lebih besar  dibanding  ekstrak  daun  tua.  Hal  ini terjadi  karena  kandungan  vitamin  pada daun dapat berbeda-beda karena perbedaan  umur  dan  bagian  tanaman
0.00% 5.00% 10.00% 15.00% 20.00% 25.00% 30.00% 35.00% 40.00% 1 2 3
4 5 Vitamin E 14.48% 20.09% 25.93% 31.31% 37.85% BHT 9.65% 18.53% 26.39% 33.76% 39.59% % I NHI B ISI ppm
(Achakzai dkk, 2009). Daun muda umumnya memiliki kandungan vitamin dan enzim  yang  tinggi  karena  diperlukan dalam proses pertumbuhan, perkembangan,  dan  pembelahan  sel-sel daun  tersebut.  Pada  perkembangannya konsentrasi  metabolit  sekunder  tanaman akan berangsur menurun seiring penurunan  aktivitas  perkembangan  daun tersebut  (Prayitno  &  Nuryandani,  2011). Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Harahap  (2015),  bahwa aktivitas antioksidan daun gaharu ( Aquilaria  malaccensis Lamk)  dengan menggunakan spektrofotometer sinar tampak diperoleh IC 50 daun muda sebesar 39,70  ppm  dan  40,03  ppm  daun  tua  dari daerah  Langka,  sedangkan  daun  muda dan  daun  tua  dari  Arboretum  Universitas Sumatera  Utara  memiliki  IC 50 sebesar 30,65 ppm dan    43,20 ppm.
Berdasarkan hasil penelitian didapatkan  bahwa  ekstrak  daun  kelor daerah  pesisir  memiliki  nilai  IC 50 lebih tinggi  dibandingkan  daun  kelor  daerah pegunungan,  artinya  daun  kelor  daerah pegunungan memiliki aktivitas antioksidan lebih  tinggi  dibandingkan  daerah  pesisir. Perbedaan ketinggian tempat berpengaruh terhadap kelembaban,  suhu, intensitas  cahaya,  dan  curah  hujan. Semakin  tinggi  dataran/daerah,  maka semakin  rendah  suhu  udaranya,  dan intensitas  cahaya  matahai  akan  semakin berkurang, sehingga mempengaruhi proses  fisiologis  tanaman,  karena  proses fisiologi tanaman bergantung pada cahaya
matahari  (Hidayah,  2011).  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Hidayah  (2011),  pengaruh  ketinggian tempat tumbuh yang berbeda mempengaruhi  aktivitas  antioksidan  teh kombucha  rosella.  Aktivitas  antoksidan pada ketinggian tempat 21 mdpl (66,88%) lebih  tinggi  dibandingkan  ketinggian  1100 mdpl (53,60%).
Tanaman  kelor  ( Moringa  oleifera Lam) yang tumbuh di daerah pesisir (Kab. Barru)  dan  pegunungan  (Kab.  Soppeng) memiliki  kandungan  antioksidan  yang berbeda  dikarenakan  pengaruh  cahaya terhadap  fotosintesis  sebagian  besar sangat bergantung kepada intensitas yang mempengaruhi pertumbuhan. Dapat dipahami perbedaan respons dalam hal ini terletak  pada  perbedaan  stres  lingkungan yang  diperoleh  tanaman.  Fitter  &  Hay (1991)  menerangkan  bahwa  respons karakteristik pertumbuhan tanaman terhadap temperatur muncul karena tingginya temperatur mempengaruhi proses biokimia. Dengan naiknya temperatur sel tanaman, kecepatan pergerakan  (vibrasi,  rotasi,  dan  translasi dari molekul-molekul yang bereaksi bertambah), menyebabkan tabrakan antar molekul  yang  semakin  sering,  dan  laju reaksi yang semakin cepat. Semua reaksi yang  terjadi  di  dalam  sel  dipercepat  oleh enzim. Dengan naiknya temperatur,
peningkatan rangsangan molekuler cenderung  merusak  struktur,  yang  diikuti oleh  penurunan  aktivitas  enzim  dan  laju reaksi.

## KESIMPULAN
adar α-Tokoferol dalam daun kelor ( Moringa  oleifera Lam.)  muda  dan  tua pesisir  sebesar  104,52  dan  117,52 mg/100g, sedangkan daun kelor  ( Moringa oleifera Lam.)  muda  dan  tua  pegunungan memiliki kadar α-Tokoferol  sebesar 134,41 dan 114,92 mg/100g.
Hasil pengujian aktivitas antioksidan dengan  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  diperoleh  hasil  ekstrak  daun  kelor ( Moringa  oleifera Lam.)  muda  pesisir  dan pegunungan memiliki IC 50 sebesar 172,71 μg/mL yang dikategorikan sebagai antioksidan  lemah  dan  97,7 9 μg/mL  yang dikategorikan  sebagai  antioksidan  kuat serta  hasil  ekstrak  daun  kelor  ( Moringa oleifera Lam.) tua pesisir dan pegunungan memiliki  IC 50 sebesar 258,92  μg/mL  yang dikategorikan  sebagai  antioksidan  lemah dan 143,14  μg/mL  yang  dikategorikan sebagai  antioksidan  sedang.  Sebagai kontrol  positif  vitamin  E  dengan  nilai  IC 50 sebesar 7,15 μg/mL dan BHT adalah 6,25 μg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Achakzai A.K.K., Achakzai P., Masood A., Kayan  S.A.,  Tareen,  R.B.  2009. Response of Plant Parts and Age on The Distribution of Secondary Metabolites  on  Plants  Found  in Quetta. Pak  J.  Bot. 41 (5):  2129- 2135.
Andayani R., Maimunah, Lisawati Y. 2008.
Penentuan  Aktivitas  Antioksidan, Kadar  Fenolat  Total  dan  Likopen pada Buah Tomat ( Solanum lycopersicum L). Jurnal  Sains  dan Teknologi Farmasi . 13 (1).
Artanti A.N., Nikmah W.R., Setiawan D.H., Prihapsara  F.  2016. Perbedaan Kadar  Kafein  Daun  Teh  ( Camellia sinensis (L.)  Kuntze)  Berdasarkan Status  Ketinggian  Tempat  Tanam Dengan  Metode  HPLC. Journal  of Pharmaceutical Science and Clinical Research. 1: 37-44.
Ayua  E.,  Mugalavai  V.,  Simon  J.,  Weller S.,  Obura  P.,  Nyabinda  N.  2016. Ascorbic  Acid  Content  In  Leaves  Of Nightshade (Solanum sp.) and Spider  Plant  ( Cleome  gynandra )
Varieties  Grown  Under  Different
Fertilizer Regimes in Western Kenya. African Journal of Biotechnology . 15 (7): 199-206.
Bresson  C.C.,  Vitasse  Y.,  Kremer  A.,
Delzon  S.  2011.  to  What  Extent  Is Altitudinal  Variation  of  Functional Traits  Driven  by  Genetic  Adaptation in European Oak And Beech?. Tree Physiology 00 , 1 –11.
Fajriah  S.,  Darmawan  A.,  Sundowo  A., Artanti. 2007. Isolasi Senyawa Antioksidan  dari  Ekstrak  Etil  Asetat Daun Benalu ( Dendrophthoe petandra L. Miq) yang Tumbuh pada Inang Lobi-lobi. Jurnal Kimia Indonesia . 2 (1): 17-20. Fatchurrozak,  Suranto,  Sugiyarto.  2013. Pengaruh Ketinggian Tempat
Terhadap Kandungan Vitamin C dan
Zat  Antioksidan  Pada  Buah Carica pubescens di Dataran Tinggi Dieng.
El-Vivo. 1 (1): 24-31.
Fitter  A.H.,  Hay  R.K.M.  1991. Fisiologi Lingkungan  Tanaman .  Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
Hanani  E.,  Mun’im   .,   ekarini  R.  2005. Identifikasi  Senyawa  Antioksidan Dalam  Spons Callyspongia  sp. dari Kepulauan  Seribu. Majalah  Ilmu Kefarmasian . 2 (3): 127 –133.
Harahap  RH.  2015. Uji  Antioksidan  Daun Muda  dan  Daun  Tua  Gaharu (Aquilaria malaccensis Lamk )
Berdasarkan  Perbedaan  Tempat Tumbuh  Pohon .  [Skripsi].  Medan: Program  Studi  Kehutanan,  Fakultas
Kehutanan,  Universitas  Sumatera Utara. Hardiyanthi F. 2015. Pemanfaatan Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun Kelor (Moringa oleifera) dalam Sediaan  Hand  And  Body  Cream [Skrips]. Jakarta: UIN Syarif
Hidayatullah.
Hasanah  N.,  Susilo,  J.,  dan  Oktianti,  D.
2016. Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Etanol Daun Kelor  ( Moringa oleifera  Lamk )  dengan  Metode DPPH, Jurnal Gizi dan Kesehatan , 8 (17).
Hidayah  N.  2011. Pengaruh  Ketinggian Tempat  Tumbuh  Rosella  dan  Jenis Bahan  Rosella  Terhadap  Aktivitas Antioksidan Teh Kombucha Rosella , [Skripsi].  Malang:  Fakultas  Sains dan  Teknologi,  UIN  Maulana  Malik Ibrahim.
Ikhlas  N.  2013. Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Herba  Kemangi  (Ocimum americanum  Linn)  dengan  Metode
DPPH (2,2-Dofenil-1-Pikrilhidrazil) [Skripsi]. Jakarta: UIN Syarif Hidayatullah. Karamoy  L.  2009.  Hubungan  Antara  Iklim dengan pertumbuhan Kedelai
( Glicine max L. Merrill). Soil Environment , 7 (1): 65-68.
Koleva  II,  Van  Beek TA,  Linssen  JPH,  de Groot  A,  Evstatieva  LN.  2002. Screening  of  plant  extracts  for antioxidant  activity:  a  comparative study  on  three  testing  methods.
Phytochemical Analysis. 13: 8-17.
Kurniasih  N.,  Kusmiyati  M.,  Nurhasanah,
Sari  R.P.,  Wafdan  R.  2015. Potensi Daun  Sirsak  ( Annona  muricata Linn),  Daun  Binahong  ( Anredera cordifolia (Ten)  Steenis),  dan  Daun Benalu Mangga ( Dendrophthoe pentandra ) Sebagai Antioksidan Pencegah Kanker, ISSN 1979-8911,
9 (1): 162-184.
Larson,  R.  A.,  1997, Naturally  Occuring Antioxidan ,  Lewis  Publisher,  New York.
Lestario L.N., Christian, A.E., dan
Martono, Y. 2009. Aktivitas Antioksidan  Daun  Gingseng  Jawa ( Talinum paniculatum Gaertn), Agritech. 29 (2).
Luthfiyah F. 2012. Potensi Gizi Daun Kelor ( Moringa  oleifera )  Nusa  Tenggara Barat,  Media  Bina  Ilmiah . 6 (2):
1978-3787.
Molyneux P. 2004. The Use of Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH)  for  Estimating  Antioxidant Activity. Songklanakarian  J  Sci
Technol, 26 (2): 211-219.
Parwata A., Ratnayani K., Listya A.  2010. Aktivitas    Antiradikal    Bebas  Serta Kadar    Beta    Karoten    Pada    Madu Randu    ( Ceiba    pentandra )    dan Madu      Kelengkeng      ( Nephelium Longata L.). Jurnal Kimia , 4(1): 54- 62.
Prayitno  E.,  Nuryandani  E.    2011. Optimalisasi  Ekstraksi  DNA  Jarak Pagar  ( Jatropha  curcas) Melalui Pemilihan Daun yang Sesuai.
Nusantara Bioscience . 3 : 1-6.
Rohmatussolihat. 2009. Antioksidan Penyelamat Sel-Sel Tubuh Manusia, Bio Trends. 4 (1).
Wachidah L.N. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan Serta Penentuan
Kandungan  Fenolat  dan  Flavonoid Total  dari  Buah  Parijoto  (Medinilla speciosa  Blume). [Skripsi].  Jakarta: UIN Syarif Hidayatullah.
Youngson  R.  2005. Antioksidan:  Manfaat Vitamin  C  &  E  Bagi  Kesehatan ,
Terjemahan  oleh  Susi  Purwoko.
Jakarta: Penerbit Arcan 1.
Zuhra  CF.,  Tarigan  J.,  Sihotang  H.  2008.
Aktivitas Antioksidan Senyawa Flavonoid dari Daun Katuk
( Sauropus  androgunus (L)  Marr.) Jurnal Biologi Sumatera . 3(1): 7-10.