Perbandingan Teknik Penyimpanan Menggunakan Medium Yang Berbeda Terhadap Viabilitas Kapang Colletotrichum capsici dan Prycularia oryzae
Rasyidah a , Rini Fariani b
a Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan
b Laboratorium Anatomi dan Fisiologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan Corresponding Author : rasyidah@ulm.ac.id
Received: 18 th February  2021; Revised: 4 th April  2021; Accepted: 23 rd June2021;
Available online: 27 th July 2021; Published regularly: July  2021

## Abstract
Laboratory of Microbiology which is part of Basic Laboratory System in Faculty of Mathematics and Natural Sciences  University  of  Lambung  Mangkurat  have  commonly  used  as  a  place  of  various  activities  both  science academic  practice  and  research.  This  laboratory  also  provides  analysis  for  samples  and  production.  Microbial culture plays important rule in practical science of microorganism. Thus,  continuous culture and preservation are highly required. Preservation and re-culture of microbes in the  laboratory recently  using short-term preservation and  periodic  re-culture  to  a  new  medium,  so  it  is  necessary  to  conduct  research  on  microbial  preservation, especially molds with certain preservation techniques using different media. Colletotrichum capsici and Prycularia oryzae isolates were used in this study. The two molds were stored using different mediums: tapioca, 50% PDB + glycerol, and 50% PDB + liquid paraffin with a preservation period up to 1-3 months. The preserved mold was then cultured onto PDA medium to see its viability. The results of preservation of Colletotrichum capsici for 1-3 months using 3 different types of medium showed that 50% of liquid PDB-paraffin medium had the best viability compared to tapioca medium and 50% PDB-glycerol. Prycularia oryzae preserved for 1-3 months using tapioca medium, 50% PDB-glycerol, and 50% liquid PDB-paraffin cannot grow back.
Key Words : Reculture, Preservation, Viability

## Abstrak
Laboratorium  Mikrobiologi  merupakan  bagian  dari  Laboratorium  Dasar  FMIPA  ULM  yang  digunakan untuk kegiatan praktikum, penelitian, jasa analisis sampel, dan layanan jasa produksi. Kegiatan ini menggunakan berbagai jenis kultur mikroba, antara lain adalah kapang,. Kultur mikroba merupakan kunci penting dalam bidang mikrobiologi,  sehingga  diperlukan  rekultur  dan  preservasi  secara  kontinyu.  Preservasi  dan  rekultur  mikroba  di Laboratorium  Mikrobiologi  yaitu  dengan  menggunakan  preservasi  jangka  pendek  dan  rekultur  secara  berkala  ke medium yang baru, sehingga perlu dilakukan penelitian tentang preservasi mikroba khusunya kapang dengan teknik preservasi  menggunakan  medium  yang  berbeda.  Preservasi  kapang  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini menggunakan  isolat  Colletotrichum  capsici  dan  Prycularia  oryzae,  dimana  kedua  kapang  ini  disimpan menggunakan  medium  yang  berbeda  yaitu  tapioka,  PDB  +  gliserol  50%,  dan  PDB  +  parafin  cair  50%  dengan jangka  waktu  preservasi  yaitu  1-3  bulan.  Kapang  yang  dipreservasi  kemudian  direkultur  ke  medium  PDA  untuk melihat viabilitasnya. Hasil preservasi Colletotrichum capsici selama 1-3 bulan menggunakan 3 jenis medium yang berbeda menunjukkan bahwa pada medium PDB-parafin cair 50% viabilitasnya paling baik dibandingkan medium
tapioka dan PDB-gliserol 50%. Prycularia oryzae yg dipreservasi selama 1-3 bulan menggunakan medium tapioka, PDB-gliserol 50%, dan PDB-parafin cair 50% tidak dapat tumbuh kembali.
Kata kunci : Rekultur, Preservasi, Viabilitas

## PENDAHULUAN
Pemeliharaan  mikroba  merupakan  kunci  penting  dalam  bidang  mikrobiologi  (Kusmiati  &  Priadi, 2003)  sehingga  perlu  pengetahuan  tentang  sifat  biokimiawi  dan  aktivitas  metabolik  mikroba  tersebut (Susilawati  &  Purnomo,  2016)  agar  dapat  dieksplorasi  manfaatnya  (Canovas  &  Iborra,  2003).  Sifat biokimiawi  mempunyai  keterkaitan  dengan  koleksi  kultur  ( culture  collection ).  Keberadaan culture collection dapat  membantu  dalam  kegiatan  praktikum  dan  penelitian,  sehingga  proses  kegiatan  belajar lancar. Koleksi kultur yang digunakan dalam kegiatan tersebut, perlu pemeliharaan menggunakan teknik penyimpanan  yang  sesuai  dengan  sarana  dan  prasarana  yang  tersedia  di  laboratorium  (Susilawati  & Purnomo, 2016).
Pemeliharaan mikroba untuk  keperluan tahap jangka  pendek maupun panjang  merupakan tahapan penting  untuk  mempelajari  bidang  mikrobiologi  dalam  rangka  menjaga  aktiitas  metaboliknya  tidak berubah (Susilawati & Purnomo, 2016). Machmud (2001) menyebutkan bahwa pemeliharaan (preservasi) bertujuan  untuk  menahan  laju  aktivitas  mikroba,  sehingga  daya  tumbuh  (viabilitas)  dapat  dipertahankan dan untuk memelihara isolat agar daya tumbuh ( recovery ) dan kelangsungan hidupnya tidak mengalami perubahan  yang  signifikan.  Metode  preservasi  ditentukan  oleh  sifat  mikroba,  antara  lain  adalah  ciri morfologi, ciri fisiologis, biokimia, dan kemampuan untuk tumbuh di lingkungan alami maupun buatan ( Machmud, 2001).
Tujuan  preservasi  jangka  pendek  atau  jangka  panjang  disesuaikan  dengan  tujuan  program    yang akan  dirancang.  Pemeliharaan  jangka  pendek  digunakan  untuk  kegiatan  rutin  seperti  penelitian  atau proyek  yang  sudah  terprogram.  Pemeliharaan  jangka  panjang  berhubungan  dengan  koleksi  dan  upaya konservasi,  apabila  suatu  saat  mikroba  tersebut  diperlukan  sudah  tersedia.  Koleksi  dan  pemeliharaan mikroba  bertujuan  untuk  keperluan  pribadi  atau  lembaga  non  komersial  dan  swasta  atau  lembaga komersial. Pembuatan koleksi mikroba, keberhasilannya ditentukan oleh teknologi, fasilitas yang tersedia, dan tenaga yang terampil, tekun serta rutin dikerjakan  ( Machmud, 2001).
Teknik penyimpanan dan pengawetan mikroba menurut (Machmud, 2001) memerlukan waktu yang lama,  panjang,  dan  rumit.  Hal  ini  berhubungan  dengan  tujuan  utama  preservasi  yaitu  mengurangi  laju metabolisme  mikroorganisme,  agar  daya  hidup  (viabilitas)  dapat  dipertahankan  dan  memelihara  isolat dengan  baik  sehingga  tidak  terjadi    perubahan  sifat  morfologinya.  Teknik  penyimpanan  untuk  jangka pendek  yaitu  dengan  memindahkan  kultur  secara  rutin  (berkala).  Penyimpanan  isolat  dalam    jangka pendek dan menengah antara lain penyimpanan dalam minyak mineral, parafin cair, tanah steril, akuades steril, manik-manik poreselin, lempengan gelatin, dan P 2 O 5 dalam keadaan vakum. Metode penyimpanan ini  dapat  bermanfaat  bagi  lembaga  yang  belum  memiliki  peralatan  canggih  (Skerman,  1973).  Metode penyimpanan  jangka  panjang  yang  paling  efektif  adalah  menggunakan  penyimpanan  liofilisasi  ataua kering  beku  dan  kriopreservasi.  Teknik  jangka  panjang  ini  menurut  (Clark,  1976;  Ashwood  Smith  & Farrant, 1980) merupakan teknik yang paling efektif digunakan, tetapi tidak semua laboratorium memiliki alat tersebut.
Tepung  tapioka  merupakan  salah  satu  medium  organik  yang  dapat  digunakan  untuk  preservasi mikroba,  diantaranya  bakteri Pseudomonas  flouresen .  Tapioka  merupakan  bahan  yang  murah,  praktis, tahan  lama,  dan  mudah  diperoleh  (Susanti,  2013).  Media  ini  mempunyai  kandungan  nutrisi  yang diperlukan  oleh  bakteri,  diantaranya  kalori,  air,  protein  dan  lemak  (Suprapti,  2005).  Tepung  beras  juga merupakan bahan organik yang dapat digunakan untuk preservasi mikroorganisme. Kandungan pati yang tinggi pada tepung beras menjadi sumber karbon dan nutrisi bagi bakteri (Sulistiani, 2009).
Laboratorium  Mikrobiologi  yang  merupakan  bagian  dari  Laboratorium  Dasar  FMIPA  ULM melayani  kegiatan  praktikum,  penelitian,  jasa  analisis  sampel,  jasa  produksi  (penyedia  kultur  mikroba untuk kalangan luar). Kultur mikroorganisme yang ada di Laboratorium Mikrobiologi antara lain adalah beberapa jenis  kapang  endofit  dan  patogen,  bakteri serta  khamir.  Penyimpanan  dan  pemeliharaan  kultur berupa  kapang  yang  dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  saat  ini  lebih  banyak  menggunakan  cara penyimpanan jangka pendek, yaitu dengan memindahkan kultur secara berkala ke media yang baru. Hal ini  masih  terkendala  karena  tidak  semua  dapat  ditangani  oleh  tenaga  yang  terbatas,  serta  memerlukan media  yang  banyak  karena  dilakukan  secara  rutin.  Penyimpanan  kultur  dalam  jangka  pendek  biasanya dilakukan  untuk  kegiatan  yang  bersifat  rutin  yaitu  pendidikan  dan  penelitian  yang  sedang  berlangsung. Kendala  yang  sering  dihadapi  pada  saat  kegiatan  sudah  selesai  adalah    kultur  harus  dipertahankan  agar tetap hidup dan tidak menurun kemampuan viabilitasnya, sehingga perlu dilakukan penyimpanan jangka menengah  atau  panjang  dengan  metode  yang  mudah,  murah,  serta  mampu  mempertahankan  viabilitas kapang.

## BAHAN DAN METODE
Desain  penelitian  adalah  eksperimen  laboratorium  menggunakan  koleksi  isolat  kapang  di Laboratorium Mikrobiologi FMIPA ULM yaitu Colletotrichum capsici dan Prycularia oryzae . Penelitian dilaksanakan  dari    bulan  Mei-  September  2019  di  Laboratorium  Mikrobiologi Fakultas Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Lambung Mangkurat Banjarbaru Kalimantan Selatan.

## Rekultur Isolat
Rekultur  isolat Colletotrichum  capsici dan Prycularia  oryzae menggunakan  medium  Potato Dekstrosa Agar (PDA) yang sudah steril dan diinkubasi pada suhu 25 o C selama 5-7 hari. Preparasi Cryprotectant Agents
Penelitian  ini  menggunakan  tiga  agensia Cryprotectant yaitu  tepung  tapioka,  parafin  cair  dan gliserol. Cryprotectant tepung tapioka dibuat dengan komposisi 4 gr tapioka ditambahkan 2  ml akuades steril  (Ahmad,  2018).  Pembuatan cryprotectant parafin  cair  dan  gliserol  menggunakan  metode  dari Machmud (2001) yang telah dimodifikasi. Parafin cair dan gliserol masing-masing ditambahkan ke dalam medium PotatoDekstrosa Broth (PDB) dengan konsentrasi parafin cair dan gliserol masing-masing 50%. Medium kemudian dimasukkan dalam tabung Falcon dan disterilisasi menggunakan autoclave.

## Preparasi Isolat
Isolat Colletotrichum  capsici dan Prycularia  oryzae yang  sudah  diinkubasi  selama  5-7  hari dipotong  menggunakan cock  boorer ukuran  6  mm  secara  aseptik  dan  dimasukkan  dalam  tabung  Falcon yang sudah berisi cryprotectant steril. Preservasi Isolat dalam Refrigerator
Preservasi kapang dilakukan selama 1-3 bulan dan masing –masing ulangan sebanyak 3 kali dengan perlakuan sebagai berikut:
1. Tabung 1 : medium tapioka + Colletotrichum capsici 6 mm.
2. Tabung 2 : PDB + parafin cair 50% + Colletotrichum capsici 6 mm.
3. Tabung 3 : PDB + gliserol 50% + Colletotrichum capsici 6 mm
4. Tabung 1 : medium tapioka + Prycularia oryzae 6 mm.
5. Tabung 2 : PDB + parafin cair 50% + Prycularia oryzae 6 mm.
6. Tabung 3 : PDB + gliserol 50% + Prycularia oryzae 6 mm.
Tabung Falcon yang sudah berisi potongan isolat dan cryprotectant selanjutnya disimpan dalam refrigerator suhu -3 o C selama 1-3 bulan. Secara periodik setiap bulan dilakukan uji viabilitas.

## Uji Viabilitas
Uji viabilitas secara periodik dilakukan dengan mengambil secara aseptik isolat kapang yang telah disimpan dan direkultur menggunakan medium PDA dalam cawan petri, kemudian diinkubasi pada suhu 25 o C  selama  5-7  hari  untuk  melihat  kemampuan  daya  hidupnya    (Ahmad,  2018). Pengamatan mikroskopik isolat kapang, dilakukan untuk memastikan morfologinya tidak berubah. Pengamatan secara
mikroskopis dapat dilakukan dengan metode slide culture (Budi et al ., 2010; Rosana et al. , 2014) untuk mengamati  bentuk  karakteristik  konidia  dan  konidiofor.  Pengamatan slide  culture di  bawah  mikroskop dilakukan  setelah  inkubasi  selama  24-72  jam.  Identifikasi  isolat    mengacu  pada  buku  identifikasi The Genera of Hyphomycetes (Seifert et al ., 2011).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Teknik  preservasi  kapang Colletotrichum  capsici dan Prycularia  oryzae selama  1-3  bulan  pada perlakuan 3 cryprotectant menunjukkan hasil yang berbeda. Preservasi kapang selama 1 bulan (Tabel 1) setelah  dilakukan  rekultur  pada  medium  PDA  menunjukkan Colletotrichum  capsici mempunyai kemampuan  tumbuh  pada  semua  medium  penyimpanan  sedangkan Prycularia  oryzae tidak  dapat tumbuh. Colletotrichum capsici pada medium PDB+gliserol 50% dapat tumbuh pada ketiga ulangan
Tabel 1. Pertumbuhan isolat kapang yang disimpan selama 1 bulan
Cryprotectant Agents Kapang Colletotrichum capsici Prycularia oryzae Ulangan ke- 1 2 3 1 2 3 Tapioka √ x x x x x PDB + gliserol 50% √ √ √ x x x PDB + parafin cair 50% √ √ x x x x
Hasil preservasi selama 2 bulan (Tabel 2) menunjukkan setelah isolat Colletotrichum capsici dan Prycularia oryzae direkultur pada media PDA, yang dapat tumbuh hanya Colletotrichum capsici pada perlakuan medium PDB+parafin cair 50%.
Tabel 2. Pertumbuhan isolat kapang yang disimpan selama 2 bulan
Cryprotectant Agents Kapang Colletotrichum capsici Prycularia oryzae Ulangan ke- 1 2 3 1 2 3 Tapioka x x x x x x PDB + gliserol 50% x x x x x x PDB + parafin cair 50% √ x x x x x
Isolat Colletotrichum capsici dan Prycularia oryzae setelah preservasi selama 3 bulan (Tabel 3) menunjukkan hasil rekultur pada medium PDA yang dapat tumbuh hanya Colletotrichum capsici pada perlakuan medium PDB+parafin cair 50%.
Tabel 3. Pertumbuhan isolat kapang yang disimpan selama 3 bulan
Cryprotectant Agents Kapang Colletotrichum capsici Prycularia oryzae Ulangan ke- 1 2 3 1 2 3 Tapioka x x x x x x PDB + gliserol 50% x x x x x x PDB + parafin cair 50% √ √ √ x x x
Isolat Colletotrichum  capsici menggunakan  medium  tapioka    hanya  dapat  dipreservasi selama  1  bulan  (Tabel  1).  Preservasi Colletotrichum  capsici selama  2-3  bulan,  pada  saat direkultur di  medium  PDA tidak mampu untuk  tumbuh kembali.  Isolat Prycularia oryzae yang dipreservasi  selama  1-3  bulan  di  medium  tapioka,  pada  saat  direkultur  ke  medium  PDA  tidak dapat  tumbuh. Hal  ini dapat  terjadi  karena perbedaan morfologi, struktur spora, dan hifa kedua isolat kapang yang digunakan. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian Ahmad (2018) menyebutkan bahwa  kapang D.  flagrans dapat  dipreservasi  selama  12  bulan  menggunakan  medium  tapioka, sedangkan P. lilacinum hanya dapat dipreservasi selama 8 bulan.
Preservasi selama 1-3 bulan menggunakan medium PDB-gliserol 50% menunjukkan hasil isolat Colletotrichum  capsici hanya  dapat  dipreservasi  selama  1  bulan,  sedangkan  preservasi selama  2  bulan  dan  3  bulan  tidak  dapat  tumbuh  kembali  di  medium  PDA.  Hasil  preservasi Prycularia oryzae selama 1-3 bulan dan direkultur ke media PDA tidak mampu tumbuh kembali. Penggunaan  medium  PDB-gliserol  50%  diduga  kurang  sesuai  dengan  jenis  kapang  yang digunakan,  karena  mempengaruhi  viabilitasnya.  Simanjuntak et  al .  (2008)  menyebutkan  bahwa gliserol  merupakan  bahan  preservasi  yang  baik,  tetapi  dapat  menyebabkan  masalah  tekanan osmosis.  Tekanan  osmosis  merupakan  faktor  pengendali  mikroorganisme  (Waluyo,  2012). Penggunaan gliserol secara umum digunakan untuk preservasi bakteri yaitu mencampur gliserol dengan berbagai medium cair. Setaji et al . (2015) dalam penelitiannya menyebutkan gliserol 15% yang dicampurkan di medium Tryptic soya broth (TSB) merupakan konsentrasi  yang paling baik untuk mempertahankan viabilitas Aeromonas hydrophila selama 5 bulan preservasi.
Morfologi  makroskopis    kapang  setelah  preservasi  1-3  bulan  (Gambar  1)  menunjukkan hanya Colletotrichum  capsici yang  dapat  tumbuh.  Perlakuan  medium  menunjukkan  bahwa ketiga medium dapat digunakan untuk preservasi kapang, dan medium PDB + parafin cair 50% yang mempunyai kemampuan lebih baik dibandingkan medium tapioka dan PDB+gliserol 50%
Gambar  1.  Morfologi Colletotrichum  capsici (A)  kontrol  tanpa  perlakuan  preservasi.  Perlakuan  preservasi  (B) medium tapioka (C) medium PDB- gliserol 50% (D) medium PDB- parafin cair 50%.
Isolat hasil rekultur yang dapat tumbuh diamati untuk melihat morfologi mikroskopisnya (Gambar 2). Morfologi mikroskopis Colletotrichum capsici hasil preservasi  selama 3 bulan menunjukkan tidak ada perubahan morfologinya.
A B C D
Copyright © 2021, JPLP, e ISSN 2654-251X
Gambar 2. Mikroskopis Colletotrichum capsici (perbesaran 400x) (A) konidia (B) setae (C) konidiofor
Colletotrichum  capsici yang  dipreservasi  menggunakan  medium  PDB-parafin  cair  50% mempunyai  viabilitas  yang  lebih  baik,  karena  pada  preservasi  1-3  bulan  mampu  tumbuh  pada saat rekultur di medium PDA. Prycularia oryzae tidak mampu tumbuh saat rekultur di medium PDA.  Penggunaan  parafin  cair  pada  preservasi  kapang  merupakan  teknik  penyimpanan  untuk mempertahankan  viabilitasnya  dan  mencegah  pengeringan  medium.  Kapang  yang  dipresevasi menggunakan  parafin  cair  dapat  bertahan  sampai  20  tahun  apabila  disimpan  pada  suhu  4 o C (Machmud,  2001).  Parafin  cair  memiliki  kelemahan  yaitu  toksisitasnya  relatif  tinggi  (Setiaji  et al., 2015) dan mengakibatkan pada saat rekultur menjadi kotor (Machmud, 2001).
Hasil  preservasi  kapang  selama  1-3  bulan  menggunakan  medium  tapioka,  PDB-gliserol 50%,  dan  PDB-parafin  cair  50%  menunjukkan  bahwa  viabilitas Colletotrichum  capsici mempunyai  kesesuaian  dengan  medium  preservasi  yang  digunakan,  sedangkan Prycularia oryzae tidak  mampu  untuk  tumbuh  kembali  pada  penggunaan  3  medium  ini. Colletotrichum capsici mempunyai  viabilitas  yang  baik  selama  3  bulan  preservasi  pada  medium  PDB-parafin cair  50%.  Hal  ini  menunjukkan  bahawa  penggunaan  parafin  cair  sesuai  untuk  preservasi  isolat Colletotrichum  capsici jangka  pendek  dan  menengah.  Skerman  (1973)  menyebutkan  teknik penyimpanan  sederhana  yang  efektif  untuk  jangka  pendek  atau  menengah  antara  lain menggunakan  parafin  cair,  minyak  mineral,  akuades  steril,  manik-manik  porselin,  lempengan gelatin, dan P 2 O 2 dalam keadaan vakum.
Keberhasilan preservasi memiliki tingkat yang berbeda-beda pada setiap jenis kapang, hal ini  dapat  dilihat  dari  hasil  preservasi  selama  1-3  bulan  menggunakan  3  jenis  medium  berbeda, dimana Prycularia  oryzae tidak  mampu  tumbuh  pada  saat  dilakukan  rekultur  di  medium  PDA. Situmorang  (2012)  menyebutkan  bahwa  kemampuan  spora  atau  konidia  pada  kapang  berbeda dalam  bertahan  hidup  pada  media.  Tingkat  kematangan  konidia  juga  mempengaruhi  pada  saat perbanyakan  kultur.  Viabilitas  mikroba  dipengaruhi  oleh  beberapa  hal,  yaitu  tekanan  osmosis, nutrisi, penurunan suhu dan proses thawing (pencairan isi tube) (Setiaji et al ., 2015). Kultur sel yang disimpan harus melalui proses bertahap, tahapan penurunan suhu sekitar -1 o C – -3 o C untuk mencegah  dehidrasi  sel.  Penurunan  suhu  secara  drastis  menyebabkan  terjadinya  pembekuan dalam  sel  sehingga  proses  difusi  atau  osmosis  tidak  terjadi  dengan  sempurna  dan  akibatnya masih ada sisa air dalam sel (Simanjuntak et al ., 2008).
Suhu  preservasi  yang  digunakan  dapat  mempengaruhi  viabilitas,  hal  ini  berhubungan dengan  laju  metabolisme  mikroba.  Penelitian  ini  masih  menggunakan  refrigerator  dengan  suhu 3 o C  sebagai  alat  untuk  menyimpan  medium  yang  berisi  kapang.  Laju  metabolisme mempengaruhi ketersediaan nutrisi medium. Hal ini sesuai dengan penelitian Setiaji et al. (2015)
A B C
dimana daya tumbuh bakteri yang disimpan dalam gliserol 25% menurun pada hari ke-14, statis pada hari ke-42 dan mengalami kematian pada hari ke-56. Simajuntak et al . (2008) menyatakan bahwa suhu yang belum optimal belum dapat mengurangi laju metabolisme secara total sehingga energi  yang  ada  di  dalam  sel  digunakan  untuk  metabolisme,  akibatnya  sebagian  mikroba kehabisan  nutrisi  dan  akhirnya  mati,  sehingga  viabilitasnya  berkurang.  Proses thawing dapat mempengaruhi  viabilitas  mikroba,  pada  penelitian  ini  isolat  kapang  yang  disimpan  dalam refrigerator  dikeluarkan  dan  dibiarkan  pada  suhu  ruang  hingga  mencair,  sehingga  waktu  yang diperlukan  untuk  mencairkan  es  menjadi  lebih  lama  dan  dapat  merusak  sel.  Proses thawing sebaiknya dilakukan dengan merendam tabung dalam air hangat 37 o C selama 60-90 detik

## KESIMPULAN
Preservasi Colletotrichum  capsici selama  1-3  bulan  menggunakan  3  jenis cryprotectant yang berbeda menunjukkan bahwa pada medium PDB-parafin cair 50% viabilitasnya paling baik dibandingkan medium tapioka dan PDB-gliserol 50% setelah dilakukan rekultur di medium PDA. Prycularia oryzae yg dipreservasi  selama  1-3  bulan  menggunakan  medium  tapioka,  PDB-gliserol  50%,  dan  PDB-parafin  cair 50% tidak dapat tumbuh pada saat dilakukan rekultur di medium PDA

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Unit Pelaksana Teknis Laboratorium Terpadu Universitas Lambung Mangkurat atas pendanaan penelitian ini untuk anggaran pada tahun 2019 dan  Witiyasti  Imaningsih,  S.  Si.,  M.  Si  sebagai  Kepala  Bagian  Laboratorium  Mikrobiologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru Kalimantan Selatan.
.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad, R. Z. 2018. Medium Tapioka untuk Preservasi Kapang yang Bermanfaat untuk Veteriner. Jurnal Mikologi. 2 (1) : 1-6. Ashwood-Smith,  M.J.  and  J.  Farrant.  1980. Low  temperature  preservation  in  medicine  and  biology . Tunbridge Wells, UK Pitman.
Budi,  S.  W.,  E.  Santoso  &  A.  Wahyudi.  2010.  Identifikasi  Jenis-Jenis  Fungi  yang  Potensial  Terhadap Pembentukan Gaharu dari Batang Aquilaria spp. Jurnal Silvikultur Tropika. 1(1) : 1-5. Clark, W.A. 1976. Selected bibliography of literature on preservation of microorganisms, blood, tissues, and  vaccines  with  emphasis  on  freezing  and  freeze-drying  (19681976) .  US  Department  of  Health Education and Welfare, Center for Disease Control, Atlanta.
Kusmiati  &  D.  Priadi.  2003.  Kriopreservasi  Bakteri  Selulolitik Bacillus  pumilus dengan  Krioprotektan Berbeda. Biosmart. 5(1): 1-6
Machmud, M. 2001. Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan Mikroba. Buletin Agrobio. 4(1): 24-32. Rosana, Y., T. Matsuzawa,  T. Gonoi & A.Karuniawati. 2014. Modified Slide Culture Methode for Faster and Easier Identification of Dermatophytes. Microbiology Indonesia. 8(3) : 135-139. Setiaji,  J.,  T.  I.  Johan  &  M.  Widantari.  2015.  Pengaruh  Gliserol  Pada  Media Tryptic  Soy  Broth (TSB) Terhadap Viabilitas Bakteri Aeromonas hydrophila . Jurnal Dinamika Pertanian. 30(1 ): 83-91 Shivas,  R  &  D.  Beasley.  2005. Plant  Pathology  Herbarium .  Queensland  Department  of  Primary Industries and Fisheries, Australia.
Simanjuntak,  R.,  S.  Baddu.,  T.  S.  Ekawati.,  M.  Widantari  &  M.  M.  As’adi.  2008.  Preservasi  Beku Aeromonas  salmonicida  Dengan  Gliserol  dala  TSB  Selama  6  Bulan.  Prosiding  Hasil  Uji  Coba Preservasi.Vol 3. Pusat Karantina Ikan, Jakarta.
Situmorang,  E.  C.  2012.  Penyimpanan  Spora Trichoderma  asperellum T13  dan Aspergillus  niger A1 dalam Bahan Pembawa Padat dan Cair. Disertasi. Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor. Sulistiani.  2009.  Formulasi  spora Bacillus  subtilis Sebagai  Agen  Hayati  dan  PGPR  ( Plant  Growth Promoting Rhizobacteria ) pada Berbagai Bahan Pembawa. Departemen Proteksi Tanaman Fakultas Pertanian IPB.
Suprapti, M.L. 2005. Tepung Tapioka. Kanisius. Yogyakarta. Susanti,  R.  R.  2013.  Viabilitas Pseudomonas  flouresen Formula  Tapioka  dengan  Penambahan  Laktosa Sebagai Senyawa Penstabil. Skripsi. Jurusan Biologi, Universitas Negeri Padang. Padang. Skerman,  V.B.D.  1973. The  organization  of  a  small  general  culture  collection.  In  Pestana  de  Castro, A.F.,  E.J.  Da  Silva,  V.B.D.  Skerman,  and  W.W.  Leveritt  (Eds.).  Proceedings  of  the  Second International  Conference  on  Culture  Collections .  Brisbane:  Unesco/  UNEP/ICRO/WFCC/Word Data Center for Microorganisms.
Seifert, K., G. M. Jones., W. Gams., & B. Kendrick. 2011. The Genera of Hyphomycetes . CBS-KNAW Fungal Biodiversity Centre. Netherlands.
Susilawati,  L  &  E.  S.  Purnomo.  2016.  Viabilitas  Sel  Bakteri  dengan  Cryoprotectans  Agents  Berbeda (Sebagai  Acuan  dalam  Preservasi  Culture  Collection  di  Laboratorium  Mikrobiologi). Biogenesis. 4(1 ): 34-40.
Waluyo, L. 2012. Mikrobiologi Umum. UMM Press. Malang