## UJI EFEK ANTIBAKTERI EKSTRAK KULIT BIJI KAKAO
( Theobroma cacao L )TERHADAP BAKTERI Streptococcus mutans
Armiati 1) , Michael A. Leman 1) , Olivia Amelia Waworuntu 1)
1) Program Studi Pendidikan Dokter Gigi Fakultas Kedokteran UNSTRAT

## ABSTRACT
Dental caries is an oral disease that has a large enough of incidents in the society and one of the dental  and  oral  healty  problems  are  most  prominent  in  Indonesia.  The  main  bacterial  cause  of dental caries is Streptococcus mutans. The skin is part of the cocoa beans cocoa fruit  cocoa bean wraps  and  is  a  waste  of  the  chocolate  industry.  Skin  cocoa  beans  contains  antibacterial compounds  such  as  polyphenols,  flavonoid.  The  objectives  of  this  research  is  to  determine  the effect of antibacterial skin extract cocoa (Theobroma cacao L) against Streptococcus mutans. This research is experimental research with modified Kirby-bauer method using filter paper. Skin samples of cocoa (Theobroma cacao L) were taken from the city of Manado then ethanol 96%. Streptococcus  mutans  bacteria  taken  from  a  pure  stock  Microbiology  Laboratory,  Faculty  of Medicene  Sam  Ratulangi  university.The  result  of  this  research  say  that  the  total  diameter  of inhibition  zone  bark  extract  of  cocoa  beans  against  Streptococcus  mutans  of  97,27  mm  with  a mean value of 19, 46 mm. That skin extract cocoa beans have an antibacterial effect in inhibiting the growth of Streptococcus mutans bacteria. Inhibition zone bark extract of cocoa beans against the bacteria Streptococcus mutans 19, 46 mm.
Key words : Skin cocoa (Theobroma cacao L ), Streptococcus mutans, Inhibition zone

## ABSTRAK
Karies  gigi    merupakan  penyakit  gigi  dan  mulut  yang  memiliki  angka  kejadian  cukup  besar  di masyarakat dan salah satu masalah kesehatan gigi dan mulut yang paling menonjol di Indonesia. Bakteri utama penyebab karies gigi adalah bakteri Streptococcus mutans. Kulit biji kakao adalah bagian dari buah kakao yang membungkus biji kakao dan merupakan limbah dari industri coklat. Kulit biji kakao mengandung senyawa yang bersifat antibakteri seperti polifenol, dan falavonoid. Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  efek  antibakteri    ekstrak  kulit  biji  kakao  ( Theobroma cacao  L .)  terhadap  bakteri Streptococcus  mutans .  Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental dengan metode modifikasi Kirby-bauer menggunakan kertas saring. Sampel Kulit biji kakao ( Theobroma cacao L. ) diambil dari Kota Manado kemudian diekstraksi dengan metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Bakteri Streptococcus  mutans diambil  dari  stok bakteri  murni  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Sam  Ratulangi Manado.Hasil  penelitian  ini  didapatkan  total  diameter  zona  hambat  ekstrak  kulit  biji  kakao terhadap streptococcus  mutans sebesar  97,27  mm  dengan  nilai  rerata  sebesar  19,46  mm.  Dari penelitian  ini  disimpulkan  bahwa  ekstrak  kulit  biji  kakao  memiliki  efek  antibakteri  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri streptococcus  mutans .  Zona  hambat  ekstrak  kulit  biji  kakao terhadap bakteri streptococcus mutans 19,46 mm.
Kata kunci : kulit biji kakao ( Theobroma cacao L. ), Streptococcus mutans , zona hambat.

## PENDAHULUAN
Kesehatan  gigi  dan  mulut  telah berkembang  menjadi  masalah  yang serius. Hal ini disebabkan karena tingkat pengetahuan masyarakat akan
pentingnya  menjaga  kesehatan  gigi  dan mulut  masih  kurang.  Dampak  dari rendahnya  pengetahuan  tersebut  yaitu masalah  penyakit  gigi  dan  mulut  di masyarakat  meningkat.  Karies  gigi  dan penyakit periodontal merupakan penyakit  gigi  dan  mulut  yang  memiliki angka kejadian cukup besar di masyarakat (Zaenab dkk, 2004). Berdasarkan  Riset  Kesehatan  Dasar (Riskesdas) Nasional tahun 2013,
prevalensi  nasional  masalah  kesehatan gigi  dan  mulut  mencapai  25,  9%  dan sebanyak  14  provinsi  di  Indonesia memiliki  prevalensi  masalah  kesehatan gigi  dan  mulut    diatas  prevalensi nasional  dan  index  DMF-T  mencapai 4,6%  yang  artinya  kerusakan  gigi penduduk  Indonesia  mencapai  460  buah gigi per 100 orang (Anonim, 2013).
Salah satu faktor penyebab terjadinya karies gigi ialah Streptococcus mutans. Streptococcus mutans merupakan bakteri patogen yang pertama  kali  berkolonisasi  pada  awal erupsi gigi, hidup, dan beradaptasi dalam suasana lingkungan yang asam. Streptococcus mutans menghasilkan asam, sehingga dengan mudah membentuk  plak  dan  menyebabkan terjadinya  karies  gigi.  Saat  ini,  prosedur pemeliharaan  kebersihan  rongga  mulut dengan  menyikat  gigi  saja  tidak  cukup, sehingga    penambahan  zat  antimikroba pada  produk  kesehatan  gigi  dan  mulut juga dinilai penting (Roeslan, 2002).
Indonesia merupakan produsen kakao  terbesar  dan  mencapai  urutan ketiga  di  dunia.  Hasil  panen  kakao
mengalami  kemajuan  yang  sangat  pesat dalam  25  tahun  terakhir  dan  Sulawesi merupakan  daerah  yang  paling  banyak menghasilkan kakao di Indonesia. Namun, masyarakat umumnya seringkali menganggap  bahwa  hanya  biji  kakao yang  memiliki  manfaat  dan  kulit  biji kakao  hanya  sebagai  limbah  dan  bahan pakan  ternak. Beberapa  tahun  terakhir ini terjadi peningkatan ketertarikan pada kakao,  dimana  telah  ditunjukan  adanya efek  antikariogenik  dari  percobaan    in vivo  dan  in  vitro  dari  tanaman  tersebut. Sebelumnya  telah  dilakukan  penelitian biji  kakao  sebagai  antibakteri  dalam menghambat Streptococcus  mutans ,  dan penelitian  yang  dilakukan  Agustin  Sri Mulyatni  pada  tahun  2012  didapatkan bahwa flavonoid yang terkandung dalam kulit  buah  kakao  memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri Escherichia coli,
Bacillus subtilis dan Staphylococcus aureus (Mulyatni, 2012). Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui efektivitas antibakteri
ekstrak kulit biji kakao dalam menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental laboratorium, menggunakan  rancangan  eksperimental murni ( true experimental design ) dengan rancangan  penelitian post  test  only control design. Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium
Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  dan Laboratorium  Farmasi  Fakultas  M-IPA Universitas Sam Ratulangi Manado pada bulan April - November 2015.
Alat dan Bahan Alat-alat yang digunakan dalam penelitian yaitu:
Tabung  reaksi,  jarum  ose,  cawan  petri, pinset,  kapas  lidi  steril,  pipet,  oven, autoklaf, inkubator, tabung reaksi, spidol, kamera, batang pengaduk, timbangan,  api  Bunsen,  jangka  sorong, kompor,  sendok  plastik,  sarung  tangan, vacuum rotary evaporator , tabung erleymenyer, masker, dan jas lab .
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini yaitu: Ekstrak kulit biji kakao, bakteri
Streptococcus mutans , Nutrient Agar(NA), Agar Muller-Hinton (MHA),brain  heart  infusion  broth  (BHI- B),  etanol  96%,  antibiotik  eritromisin,
kertas  saring  larutan  BaCI2  1%,  larutan H 2 SO 4 1%, akuades.
Pembuatan  ekstrak  kulit  biji  kakao ( Theobroma cacao L )
Pembuatan  ekstrak  kulit  biji kakao dilakukan di Laboratorium farmasi MIPA Universitas Sam Ratulangi. Kulit biji kakao diperoleh dari daerah kabupaten Buton Sulawesi Tenggara. Kulit biji kakao diambil  1 kg lalu  dibersihkan  dengan  mencuci  di bawah  air  mengalir  sampai  bersih, ditiriskan,  lalu  dikeringkan  dengan  cara diangin-anginkan selama tiga hari dengan suhu ruangan dilanjutkan pengeringan  dengan  oven  dengan  suhu 40 o C  selama  dua  hari.  Kulit  biji  kakao yang telah kering diblender. Serbuk kulit biji  kakao  ditimbang  seberat  100  gram, dimasukan dalam wadah dan di tambahkan etanol 96% sampai terendam lalu  diaduk  hingga  homogen,  tutup segera kemudian disimpan dalam ruangan  yang  terhindar  dari  cahaya matahari  selama  lima  hari.  Selama perendaman,  setiap  hari  diaduk  selama 15 menit.  Setelah direndam  selama lima hari,  disaring  dengan  menggunakan kertas  saring  lalu  diuapkan  dengan rotary vacum evaporator pada
temperatur  40 o C  selama  3  jam.  Setelah itu ekstrak murni yang didapat dimasukkan  kedalam  oven  dengan  suhu 40 o C selama 2 jam lalu dituang ke dalam botol  steril  tertutup  dan  disimpan  di dalam lemari pendingin.

## Uji Efek Antibakteri
Metode pengujian yang digunakan  adalah  metode  modifikasi Kirby-Bauer dengan menggunakan paper disc. Bakteri Streptococcus mutans yang  disimpan  di  media  agar yang  diambil  dari  stok  bakteri  murni yang diperoleh dari laboratorium mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas  Sam  Ratulangi  Manado, diambil dengan jarum ose, lalu ditanamkan  pada  media  agar  miring dengan  cara  menggores.  Bakteri  yang telah digores pada media agar diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 0 C selama 1 x 24 jam. Bakteri yang telah diinkubasi diambil  koloninya  dari  media  agar miring  dengan  menggunakan  jarum  ose steril  kemudian  dimasukkan  ke  dalam media  BHI-B  sampai  kekeruhannya sama  dengan  standar  McFarland.  Lidi kapas  steril  dicelupkan  ke  dalam suspensi  bakteri  hingga  basah.  Lidi kapas  diperas  dengan  menekankan  pada dinding  tabung  reaksi  bagian  dalam, kemudian  digores  merata  pada  media MHA  sampai  permukaannya  tertutupi. Selanjutnya  diletakkan  disk  eritromisin, kertas  saring  pertama  dicelupkan  ke dalam  etanol  96%  dan  kertas  saring kedua  dicelupkan  dalam  larutan  ekstrak kulit biji kakao. Selanjutnya cawan petri di inkubasi dalam inkubator dengan suhu 37 o selama 1x24 jam. Zona hambat yang terbentuk  disekitar paper  disk diukur diameter vertikal dan diameter
horizontal dalam satuan millimeter (mm) menggunakan jangka sorong.
( ) ( )
Gambar 1. Pengukuran diameter zona hambat zat antibakteri. Keterangan :
: Zona hambat. D v
: Diameter Vertikal D h : Diameter Horizontal D c : Diameter Cakram

## HASIL PENELITIAN
Pada penelitian ini zona hambat yang terbentuk  pada  lima  cawan  petri  yang
sudah  diinkubasi  selama  24  jam  pada suhu 37º C dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Gambar zona hambat yang terbentuk pada media MHA (A) zona hambat ekstrak kulit biji kakao (B) zona hambat eritromisin (C) cakram etanol 96%.
Diameter  zona  hambat  yang  diukur dengan  menggunakan  jangka  sorong, dihitung  luas  zona  hambatnya  dengan
menggunakan  rumus  lalu  dimasukan  ke dalam Tabel 1.
D h D c D v A B C
Tabel 1. Hasil pengukuran diameter zona hambat bakteri Streptococcus mutans
Diameter zona hambat (mm) Selisih diameter pelarut kontrol (+) dengan ekstrak kulit biji kakao Pengulangan Ekstrak kulit biji kakao ( Theobroma cacao L.) Kontrol positif (eritromisin) Kontrol negatif (etanol 96%) 1 17,7 33,1 0 15,4 2 19,75 32,42 0 12,67 3 19,15 35,45 0 16,3 4 22,22 28,08 0 5,86 5 18,45 33,15 0 14,7 Rerata 19,46 32,44 0 12.98 Tabel  1  menunjukkan  bahwa  rerata diameter  zona  hambat  yang  terdapat pada  kulit  biji  kakao  lebih  kecil  jika dibandingkan dengan eritromisin. Diameter  zona  hambat  terkecil  ekstrak kulit biji kakao terdapat pada pengulangan pertama, sedangkan
diameter  zona  hambat  terbesar  terdapat pada  pengulangan  keempat.  Selisih diameter  zona  hambat  pada  kelompok kontrol  positif  (eritromisin)  dengan ekstrak  kulit  biji  kakao  cukup  besar tetapi  tidak  terjadi  pada  pengulangan keempat. Pada kelompok kontrol negatif etanol  96%  tidak  menunjukkan  adanya zona  hambat  yang  dihasilkan  disekitar cakram kertas saring.

## PEMBAHASAN
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  kulit  biji  kakao    ( Theobroma cacao  L. )  memiliki  efek  antibakteri terhadap  bakteri Streptococcus  mutans. Hasil  dari  penelitian  ini  menunjukkan bahwa terdapat perbedaan diameter zona hambat yang dibentuk sampel pada lima kali  pengulangan  .  Hal  ini  dikarenakan metode  kertas  saring  ( paper  disk )  yang digunakan  memiliki  kekurangan  yaitu
tidak bisa mengontrol banyaknya ekstrak yang terserap pada masing-masing kertas saring , sehingga membuat hasil diameter zona  hambat  berbeda-beda  walaupun diambil dari suspensi yang sama.  Selisih zona  hambat  ekstrak  kulit  biji  kakao dengan  eritromisin  pada  pengulangan keempat  lebih  kecil  dikarenakan  jumlah bakteri  pada  cawan  petri  eritromisin pada pengulangan keempat lebih sedikit.
Ekstrak  kulit  biji  kakao  menunjukan zona  hambat.  Hal  ini  membuktikan bahwa  ekstrak  kulit  biji  kakao  memiliki kemampuan untuk menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans. walaupun  lebih  kecil  jika dibandingkankan  dengan  eritromisin.
Hal  ini  disebabkan  mekanisme  kerja daya hambat pertumbuhan bakteri berbeda . Menurut  Setiabudy,  suatu bahan  antibakteri  tertentu  aktivitasnya dapat meningkat bila kadar antibakterinya  ditingkatkan  melebihi kadar  hambat  minimumnya.  Dengan demikian  ekstrak  kulit  biji  kakao  dapat menghasilkan  zona  hambat  yang  lebih besar  apabila  kadarnya  ditingkatkan melebihi  kadar  hambat  minimumnya (Setiabudy,  2007).  Zona  hambat  yang
terbentuk di sekitar cakram kertas saring yang  diberi  ekstrak  kulit  biji  kakao menunjukkan kandungan flavonoid yaitu katekin  dan  epikatekin  yang  terdapat pada  ekstrak  kulit  biji  kakao  mampu menghambat Streptococcus mutans . Penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan oleh  Annisa  Wicita  Mustain.  Hasil penelitian tersebut menunjukkan
efektivitas  dari  larutan  ekstrak  etanol kulit  biji  kakao  0,1%  yang  digunakan sebagai  larutan  kumur  dalam  intervensi pada  penelitian  ini,  telah  terbukti menunjukkan  penurunan  jumlah  bakteri Streptococcus  mutans (Mustain,  2012). Penelitian yang dilakukan oleh Ooshima, ekstrak  kulit  biji  kakao  selain  memiliki aktivitas antibakteri juga memiliki aktivitas  antiglukosiltransfelase  yang dapat menghambat pertumbuhan
Streptococcus  mutans sebagai  bakteri patogen penyebab karies  gigi  (Ooshima, 2000).

## KESIMPULAN
Ekstrak kulit biji kakao memiliki efek antibakteri dalam menghambat bakteri Streptococcus mutans.

## SARAN
1. Diharapkan  penelitian  lanjut  mengenai efek antibakteri ekstrak kulit biji kakao terhadap  bakteri  lain  yang  dapat menimbulkan  masalah  kesehatan  gigi dan mulut.
2. Diharapkan  penelitian  lanjut  tentang antibakteri  kulit  biji  kakao  dengan metode lain

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim  2013. Riset  kesehatan  dasar riskesdas  2013 .  Badan  Penelitian dan  Pengembangan  Kesehatan.
Jakarta  :  Kementrian  Kesehatan RI.h.147-54. Mulyatni AS. 2012. Antibacterial activity of cacao pod husk extract ( Theobroma  cacao  L )  against Escherichia choli, Bacillus subtillis and Staphylococcus
aureus . In-vitro and  experiments. 80(2), 77-84.
Mustain  WA.  2012. Efektivitas  Larutan etanol  ekstrak  kulit  biji  kakao 0,1%  terhadap  penurunan  jumlah koloni  Streptococcus  mutans  pada saliva  anak  usia  12-14  tahun . [skripsi].  Makasar:  Universitas Hasanudin.  Makasar.
Ooshima  T.  2000.  Caries  inhibitory activity of cacao bean husk extract in in-vitro and animal experiments. Arch Oral Biol .:45(8).
Roeslan    B.  2002. Imunologi    Oral . Jakarta:    Fakultas  Kedokteran Universitas Indonesia. hal.141-5.
Setiabudy  R.  2007. Antimikroba. In: Tanu  I.  Farmakologi  dan  terapi edisi 5. Jakarta: EGC..h.585.
Zaenab,  Mardiastuti  H,  Anny      V, Logawa  B.  2004.  Uji  antibakteri siwak  (Salvadira  persica  linn) terhadap Streptococcus mutans dan
Bacteroides melaninogenicus.
Makalah kesehatan .. 8(2):37-40.