Efek Proteksi Ekstrak Metanol Biji Asam Jawa Terhadap Kerusakan Jaringan Testis Tikus Yang Diinduksi Aluminium Klorida (AlCl 3 )
The Protection Effect Of Methanol Extract From Asam Jawa Seed On Testicular Tissue Damage Induced By Aluminium Chloride (AlCL 3 )
Rena Normasari 1 , Muhammad Iqbal Fauzi 2 , Ayu Munawaroh Aziz 3
1 Laboratorium Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran Universitas Jember
2 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Jember 3 Laboratorium Histologi, Fakultas Kedokteran Universitas Jember Alamat email korespondensi: rena_normasari@unej.ac.id

## Abstrak
Aluminium  dikenal  memiliki  sifat  neurotoksin  yang  dapat  menimbulkan  penyakit  alzheimer,  demensia,  dan parkinson.  Ion  metal  seperti aluminium  dapat  mengganggu  homeostasis yang  berujung  pada  stres  oksidatif, meningkatkan  pembentukan reactive oxygen species (ROS) yang dapat merusak pertahanan  antioksidan dan menimbulkan kerusakan DNA, peroksidase lipid, hingga berujung pada rusaknya sel testis. Biji Tamarindus indica merupakan salah satu tanaman tradisional yang berguna sebagai antioksidan. BIji Tamarindus indica mampu melindungi sel testis dari kerusakan akibat ROS. Tujuan penelitian ini yaitu mengetahui efek biji Tamarindus indica dalam  mencegah  kerusakan  testis  tikus  yang  diinduksi  aluminium  klorida  diukur  dari  gambaran histopatologi. Jenis penelitian yang digunakan adalah quasi experimental design dengan rancangan posttest only design with non-equivalent groups . Hewan coba yang digunakan adalah tikus wistar jantan sejumlah tiga puluh ekor  terbagi  dalam  lima  kelompok,  yaitu  satu  kelompok  kontrol  dan  empat  kelompok  perlakuan.  Kelompok kontrol diberi larutan aquabides 1 mL per oral. Kelompok P1 diberi larutan aluminium dosis 300 mg/kgBB per oral. Kelompok P2, P3, dan P4 masing-masing diberi larutan aluminium dosis 300 mg/kgBB per oral dan larutan ekstrak dengan dosis 25, 50, 100 mg/kgBB per oral selama 10 minggu. Hasil pengamatan menunjukkan skor yang bervariasi antar kelompok. Analisis data menggunakan uji Kruskal Wallis mendapatkan nilai p=0,006 (p<0,05). Uji Post Hoc menggunakan Mann Whitney didapat nilai p bervariasi. Analisis Post Hoc antara kelompok K dengan P1, kelompok P1 dengan kelompok P3, kelompok P1 dengan kelompok P4 menunjukkan perbedaan bermakna dengan nilai p<0,05. Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak metanol  biji  asam  jawa  ( Tamarindus  indica )  mencegah  kerusakan  histopatologi  testis  tikus  yang  diinduksi aluminium klorida (AlCl 3 ).
Kata kunci : aluminium, sel testis, Tamarindus indica

## Abstract
Aluminum is known has neurotoxin effect that can lead to alzheimer's disease, dementia, and parkinson's. Metal ions such as aluminum can distract homeostasis and increase oxidative stress level, formation of reactive oxygen species (ROS) that can overwhelm antioxidant defenses and cause DNA damage, lipid peroxidase, leading to the destruction  of  testicular  cells.  Tamarindus  indica’s  seeds  are  one  of  the  traditional  plant  and  useful  as antioxidants. Tamarindus indica’s seeds are able to protect testicular cells from damage caused by ROS. The purpose of this study to determine the effect of methanol extract from Tamarindus indica’s seeds to prevent aluminum chloride induced testicular damage to be measured from the histopathological features. This study is a quasi experimental design with a posttest design only with non-equivalent groups using thirty male Wistar rats divided into five groups, one control group and four treatment groups. The control group was given 1 mL of aquabides solution orally. Group P1 was given a dose of aluminum solution 300 mg/kgBW orally. Groups P2, P3, and P4 were each given an aluminum solution at dose of 300 mg/kgBW orally and an extract solution at a dose of  25,  50,  100  mg/kgBW  orally  for  10  weeks.  The  results  of  the  observations  showed  that  the  scores  varied between groups. Data analysis using Kruskal-Wallis test obtained p value = 0.006 (p <0.05). Post Hoc test using Mann Whitney obtained varied p values. Post Hoc analysis between K and P1 groups, P1 and P3 groups, P1 and P4 groups showed a significant difference with p value <0.05. Based on the results of this study, methanol extract from tamarind seeds (Tamarindus indica) that was given to male wistar rats had prevented histopathological damage to the testes of rats induced by aluminum chloride (AlCl3).
Keywords : aluminium, testicular cell, Tamarindus indica

## Pendahuluan
Aluminium dikenal sebagai salah satu logam yang memiliki peranan biologis pada tubuh, namun juga dapat diklasifikasikan sebagai logam yang bersifat toksik  (Rajeswari  dan  Sailaja,  2014).  Aluminium merupakan  elemen  ketiga  paling  banyak ditemukan  di  kerak  bumi  (Gupta et  al .,  2013). Aluminium  dapat  masuk  ke  dalam  tubuh  secara oral  melalui  makanan  yang  diolah  menggunakan alat  berbahan  dasar  aluminium.  Anak-anak umumnya  memiliki  rasio  konsumsi  yang  lebih tinggi sehingga rentan terpapar aluminium secara berlebih  (Crisponi et  al .,  2013).  Konsumsi Aluminium  fosfida  pada  dosis  500  mg  dapat berakibat  fatal  pada  orang  dewasa  dan  memiliki tingkat lethal  dose hingga  lima  puluh  persen dengan  dosis  10  mg/kg.  Angka  kematian  akibat konsumsi  metal  fosfida  berada  pada  31-77%. Kebanyakan kasus kematian disebabkan oleh gagal jantung ,  refractory  shock,  severe  acidemia , kerusakan  hepar  fulminan,  hingga acute respiratory  distress  syndrome (Hoffman et  al ., 2015).
Produksi radikal bebas merupakan aktivitas katalis dari  Aluminium,  seperti  pada  kasus  penyakit alzheimer  (Yuan et  al .,  2012).  Aluminium meningkatkan  jumlah  sel  apoptosis  dibandingkan dengan  objek  coba  yang  tidak  diberi  aluminium (Akram et  al., 2010).  Gangguan  homeostasis  ion oleh aluminium dapat menginisiasi stress oksidatif, saat terbentuk reaktif oksigen spesies (ROS) dapat merusak  proteksi  antioksidan  organ  (Ige  dan Akhigbe, 2012). Penelitian sebelumnya menunjukkan  aluminium  berdampak  pada peningkatan    enzim  SOD  ( superoxide  dismutase ). Konsentrasi enzim SOD akan meningkat pada lokasi yang lebih  terdampak  oleh  ROS  ( oxygen  species ). Peningkatan  SOD  menunjukkan  terjadinya  stres oksidatif  dan  kerusakan  jaringan  (Dean et  al ., 2011).  Aluminium  memberikan  toksisitas  pada sistem  reproduksi  pria  dengan  beberapa mekanisme  seperti  menginduksi  stres  oksidatif, mengganggu spermatogenesis dan steroidonegesis, merusak cell junction , mengganggu blood-testis barrier, serta mempengaruhi sistem endokrin (Pandey dan Jain, 2013).
Keterkaitan  produk  herbal  dengan  stres  oksidatif terdapat  pada  sifat  antioksidan  sebagai  zat pereduksi  radikal  bebas  berlebih  sehingga mencegah timbulnya stres oksidatif (Gupta et al ., 2012).  Bahan  alam  yang  dapat  dimanfaatkan kandungan  antioksidannya  adalah  biji  asam  jawa ( Tamarindus  indica) .  Asam  jawa  biasa  digunakan oleh  masyarakat  sebagai  obat  tradisional
(Soemardji, 2007). Ekstrak metanol biji Tamarindus indica memiliki potensi sifat antioksidan yang lebih baik  dibandingkan  bagian  lain  dari  tanaman Tamarindus  indica (Razali et  al., 2015).  Biji Tamarindus  indica teruji  memiliki  kandungan senyawa  polifenol  lebih  tinggi  dari  biji  tanaman lainnya. Diketahui IC50 pada biji rambutan sebesar 305  μg/ml,  pada  biji  leci  135  μg/ml,  sedangkan pada  biji Tamarindus  indica sebesar  100  μg/ml . Semakin  kecil  nilai IC50, maka  semakin  besar aktivitas  antioksidannya (Chunglok et  al .,  2014). Setiap  bahan  aktif  dari  senyawa  polifenol  biji tersebut  memiliki  peran  anti  inflamasi  dan antioksidan, keduanya merupakan reduktor alami stres oksidatif dari efek patogen yang ditimbulkan zat aluminium (Spencer et al .,  2009).

## Metode Penelitian
Jenis  penelitian  yang  digunakan  ialah quasi experimental  design secara in  vivo dengan rancangan posttest only design with nonequivalent group . Populasi yang digunakan ialah tikus Wistar albino  jantan.  Sampel  diambil  tanpa  randomisasi. Sampel penelitian berjumlah 25 ekor. Sampel yang diambil berdasarkan kriteria inklusi antara lain tikus Wistar albino jantan, umur 2-3 bulan, berat badan 150-200 gram, dan tikus yang sehat dan bergerak aktif.  Kriteria  eksklusi  yaitu  tikus  yang sakit  (tidak aktif bergerak dan mengalami rambut rontok), tikus tidak  ingin  makan  minum,  dan  tikus  yang  mati sebelum  proses  pengambilan  sampel.  Sampel dibagi menjadi 5 kelompok, yaitu kelompok kontrol (K), perlakuan 1 (P1), perlakuan 2 (P2), perlakuan 3 (P3),  dan  perlakuan  4  (P4).  Kelompok  K  disonde aquabidest dan NaCl; P1 disonde larutan AlCl 3 300 mg/kgBB; P2, P3, dan P4 disonde larutan AlCl 3 300 mg/kgBB dan larutan ekstrak Tamarindus indica 25 mg/kgBB, 50 mg/kgBB, dan 100 mg/kgBB. Setelah dilakukan  penelitian  pendahuluan,  perlakuan dilakukan  selama  10  minggu  berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Chiroma et al. (2018) dengan beberapa modifikasi.
Data  diambil  melalui  pengamatan  perubahan gambaran  histopatologi  testis  tikus  menggunakan mikroskop cahaya Leica DM500 dengan perbesaran 400  kali  pada  5  lapang  pandang.  Pengamatan perubahan gambaran histopatologi pada perbesaran  400x  pada  lima  lapang  pandang menggunakan acuan pada kriteria scoring Johnsen seperti pada Tabel 1.
Tabel 1. Scoring Histopatologi Testis Skor Penilaian 10 Spermatogenesis lengkap dan tubulus tampak normal
9 Tampak banyak spermatozoa namun spermatogenesis tidak teratur
8 Hanya sedikit spermatozoa yang tampak
7 Tidak tampak spermatozoa namun banyak spermatid yang tampak
6 Hanya sedikit spermatid yang tampak
5 Tidak tampak spermatozoa atau spermatid namun banyak spermatosit
4 Tampak sedikit spermatosit
3 Hanya spermatogonia yang tampak
2 Tidak ada sel germinal yang tampak
1 Tidak ada sel germinal atau sel Sertoli yang tampak
(Sumber: Johnsen, 1970)
Data  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  adalah perubahan  gambar  histopatologi  testis  yang merupakan  data  ordinal,  oleh  karena  itu  analisis data yang digunakan adalah uji Kruskal Wallis . Jika analisis data dengan uji Kruskal Wallis di dapatkan p<0,05,  maka  uji  berlanjut  dengan  uji Post  Hoc Mann  Whitney dengan  tujuan  untuk  menentukan kelompok  yang  berbeda.  Nilai  p<0,05  berarti perbedaan antarkelompok dapat dinilai bermakna dan signifikan.

## Hasil Penelitian
Perubahan gambaran histopatologi sel testis yang diamati menggunakan mikroskop cahaya dengan perbesaran 400 kali dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1.   Gambaran sel testis tiap kelompok. (A) Kelompok kontrol: tampak epitel germinal yang terlepas (panah). (B) Kelompok P1: tampak  jumlah  spermatozoa  yang  kurang  memadai  (panah).  (C)  Kelompok  P2:  tampak  kerusakan  hingga  hilangnya  sel spermatozoa pada tubulus (panah). (D) Kelompok P3: tampak kurang terorganisirnya epitel germinal (panah). (E) Kelompok P4: tampak gambaran sel yang lengkap tanpa kerusakan.
Pengamatan  hasil  nilai  modus  skor  perubahan gambaran  histopatologi  pada  seluruh  kelompok dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Nilai modus skor perubahan gambaran histopatologi Kelompok Nilai Modus Kontrol 10 9 10 10 10 P1 7 9 7 9 7 P2 9 7 10 10 9 P3 10 10 10 10 9 P4 10 10 10 10 10
Analisis  data  menggunakan  uji Kruskal  Wallis memberikan  nilai  p=0,006  (p<0,05).  Hasil  uji tersebut  mengindikasikan  bila  data  skor  yang diperoleh  kelompok  dalam  penelitian  ini  memiliki perbedaan  yang  bermakna.  Analisis  data  lalu
berlanjut dengan uji post Hoc Mann Whitney untuk dapat  mencari  perbedaan  antara  dua  kelompok. Hasil uji post Hoc Mann Whitney menunjukkan data pada Tabel 3.
Tabel 3. Nilai Signifikansi Uji Post Hoc Mann Whitney. Kelompok K P1 P2 P3 P4 K 0,011*  0,189 1,000 0,317 P1 0,011* 0,118  0,011*  0,005* P2 0,189 0,118 0,189 0,053 P3 1,000 0,011*  0,189 0,317 P4 0,317 0,005*  0,053 0,317
Keterangan: (*) = terdapat perbedaan yang bermakna
Uji Post  Hoc  Mann  Whitney menunjukkan  hasil adanya  perbedaan  yang  beragam.  Data  yang diperoleh  melalui  uji Post  Hoc  Mann  Whitney menunjukkan  bahwa  pemberian  aluminium  300 mg/kgBB  (P1)  menyebabkan  kerusakan  struktur histopatologi  testis  secara  signifikan  dibanding kelompok  kontrol  normal  (K).  Tingkat  kerusakan histopatologi  testis  akibat  aluminium  menurun secara  signifikan  pada  pemberian  ekstrak Tamarindus indica dosis 50  mg/kgBB (P3) dan 100 mg/kgBB (P4).

## Pembahasan
Hasil  dari  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa pemberian  aluminium  dapat  menyebabkan kerusakan  struktur  histopatologi  testis  secara signifikan dibanding kelompok kontrol normal (K). Testis merupakan  organ  reproduksi  manusia  yang memiliki  fungsi  dalam  memproduksi  sperma  dan testosteron. Organ testis merupakan kesatuan dari sistem  organ  reproduksi  yang  berperan  penting pada  makhluk  hidup  (Adebayo et  al., 2012). Mekanisme  aluminium  terhadap  penurunan produksi  hormon  testosterone  pada  testis  yaitu dengan  cara  memblokade  kanal  kalsium  dan menurunkan sekresi gonadotrophin pada hipofisis (Cheragi et  al., 2017).  Aluminium  dapat menimbulkan toksisitas pada organ reproduksi pria melalui  radikal  bebas  yang  ditimbulkan  dan menyebabkan  apoptosis.  Berbagai  mekanisme yang  dapat    menimbulkan  apoptosis  dari  radikal bebas di antaranya produksi ROS, lipid peroksidase, kerusakan  membran  sel,  dan  menurunnya  kadar cyclic adenosine monophosphate (CAMP) yang akan menurunkan proses steroidogenesis pada jaringan testis  di  tubulus  seminiferus  (Gupta et  al., 2012). Aluminium  juga  dapat  mempengaruhi  gonad  pria sehingga berujung pada hipofertilitas, asthenospermia,  hipospermia,  teratospermia,  dan
berkurangnya jumlah sperma (Olawuyi et al., 2018).
Hasil pengamatan preparat histopatologi menunjukkan  ekstrak  metanol  biji Tamarindus indica dapat  mencegah  kerusakan  histopatologi testis (p<0,05). Penelitian oleh Singh et al., (2012) menunjukkan  bahwa  ekstrak Tamarindus  indica mampu  memperbaiki  aktivitas  spermatozoa  pada testis tikus wistar jantan yang diinduksi oleh sodium florida. Penelitian yang dilakukan oleh Maiti et al.,
(2017) menggunakan ekstrak  metanol Tamarindus indica memiliki  peran  proteksi  terhadap  dampak stres  oksidatif  yang  ditimbulkan  pada  penyakit diabetes.  Hipotesa  peneliti  semakin  diperkuat melalui hasil penelitian oleh Luzia dan Jorge, (2011) yang menunjukkan bahwa ekstrak biji Tamarindus indica memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi.
Penelitian ini menghasilkan data yang menunjukkan  bila larutan aluminium memberikan dampak kerusakan pada dosis (300 mg). Kerusakan tersebut  dapat  terlihat  dari  signifikannya perbedaan antara kelompok kontrol yang diberikan akuabides  terhadap  kelompok  P1  yang  hanya diberikan  aluminium.  Toksisitas  aluminium terhadap  testis  djuga  telah  dibuktikan  melalui penelitian  yang  dilakukan  oleh  Pandey  dan  Jain, (2017) yang menggunakan AlCl 3 dosis 90 mg/kgBB dan  menunjukkan  perubahan  signifikan  pada histopatologi  testis  tikus  dibandingkan  kontrol. Kelompok P2 diberikan larutan aluminium dengan dosis 300 mg/kgBB serta ekstrak dosis 25 mg/kgBB menghasilkan  data  skor  kerusakan  yang  tidak menunjukkan  perbedaan  bermakna  dengan kelompok  P1  yang  hanya  mendapatkan  larutan aluminium  300  mg/kgBB.  Data  tersebut mengindikasikan pemberian ekstrak biji Tamarindus  indica pada  dosis  25  mg/kgBB  belum memberikan  dampak  pencegahan  kerusakan  oleh aluminium.
Dampak  yang  minimal  oleh  larutan  ekstrak  pada dosis  tersebut  dapat  ditengarai  karena  kurangnya kadar  senyawa  polifenol  yang  cukup  untuk memberikan dampak pencegahan kerusakan pada testis. Hal ini juga didukung oleh observasi peneliti terhadap penelitian sebelumnya yang menggunakan  dosis  25  mg/kgBB  ekstrak  biji Tamarindus  indica dan  berdampak  kurang maksimal dalam menurunkan kadar TNF-a (sitokin inisiator  ROS)  pada  hewan  coba  yang  diinduksi arthritis dibandingkan dosis 50 mg/kgBB (Sundaram et al., 2015). Kelompok P3 dan P4 yang mendapat larutan  aluminium  dengan  dosis  300  mg/kgBB bersamaan  dengan  larutan  ekstrak  metanol  biji Tamarindus  indica dosis  50  dan  100  mg/kgBB memperlihatkan  adanya  dampak  pencegahan
terhadap  kerusakan  sel  tubulus  seminiferus  testis dengan  hasil  skor  yang  lebih  baik  dibandingkan dengan  kelompok  P1  yang  hanya  mendapatkan larutan  aluminium  dosis  300  mg/kgBB.  Data tersebut  didukung  penelitian  oleh  Maiti et  al., (2017)  dengan  administrasi  ekstrak    metanol  biji Tamarindus indica pada dosis 80 mg/kgBB mampu memproteksi  sel  testis  oleh  kerusakan  stres oksidatif  dari  keadaan  diabetes  maupun mempertahankan kadar serum normal testosteron hewan coba.
Mekanisme Tamarindus indica sebagai antioksidan dalam  mencegah  terjadinya  ROS  pada  jaringan reproduksi  mampu  mencegah  kerusakan  yang ditimbulkan.  Analisis  data  menggunakan  uji Post Hoc  Mann-Whitney antara  kelompok  perlakuan yang diberi ekstrak dengan dosis 50 mg/kgBB dan 100  mg/kgBB  dengan  kelompok  kontrol menunjukkan  tidak  adanya  perbedaan  yang signifikan  antara  ketiganya,  bahkan  kelompok  P3 dan  P4  memiliki  nilai  skor  modus  yang  lebih  baik dibandingkan  modus  skor  dari  kelompok  kontrol. Hal ini dapat disebabkan pengaruh sifat antioksidan ekstrak  mampu  mencegah  secara  maksimal dampak kerusakan yang ditimbulkan aluminium.

## Ucapan Terima Kasih
Peneliti mengucapkan terimakasih kepada dr. Rena Normasari,  M.  Biomed  dan  dr.  Ayu  Munawaroh Aziz,  M.Biomed  atas  bimbingan  yang  telah diberikan dalam penulisan artikel penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Adebayo  O.L.,  dan  G.A.  Adenuga.  2012.  Oxidative damage  on    the  testes  of  adult  rats  by sodium metabisulfite  (MBS). Int J Biol Chem. Sci;6(2):738-44.
Akram,  D.,  E.  Sharmin,  dan  S.  Ahmad.  2010. Development and characterization of boron incorporated  linseed  oil  polyurethanes. J. Appl. Polym . Sci. 116, 499–508.
Cheraghi, E., A. Golkar, K. Roshanaei, dan B. Alani. 2017. Aluminium- induced oxidative s tress, apoptosis and alterations in testicular tissue and  sperm  quality  in  Wistar  rats: Ameliorative effects of curcumin.
International  Journal  of  Fertility  &  Sterility, 11(3), 166.
Chiroma,  S.M.,  Moklas,  M.A.M.,  Taib,  C.N.M.,
Baharuldin,  M.T.H.,  Amon,  Z.,  2018.  d-
galactose and aluminium chloride induced rat model  with  cognitive  impairments. Biomed Pharmacother, 103, 1602–1608.
Chunglok,  W.,  T.  Utaipan,  N.  Somchit,  M. Lertcanawanichakul,  dan  Y.  Sudjaroen. 2014.  Antioxidant  and  Antiproliferative Activities  of  Non-Edible  Parts  of  Selected Tropical Fruits. Sains Malaysiana , 43(5), 689- 696.
Crisponi, G., D. Fanni, C. Gerosa, S. Nemolato, V. M. Nurchi, M. C. Alonso, J. I. Lachowicz, dan G. Faa.  2013.  The  meaning  of  aluminium exposure on human health and aluminium- related  diseases. Biomolecular  Concepts . 4(1): 77–87.
Dean, O.M., B. M. van den, M. Berk, D.L Copolov, C. Mavros,  dan  A.L  Bush.  2011.  N-acetyl cysteine  restores  brain  glutathione  loss  in combined  2-cyclohexene-1-one  and  d- amphetamine-treated  rats:  Relevance  to schizophrenia and bipolar disorder. Neurosci Lett 499:149-153.
Gupta,  N.,  S.S  Gaurav,  dan  A.  Kumar.  2013. Molecular  basis  of  aluminium  toxicity  in plants:  A  review. Am  J  Plant  Sci .;4:  21–37. http://dx.doi.org/10.4236/ajps.2013.412A3 004.
Gupta,  R.,  K.,  A.K  Patel,  R.  Kumari,  S.  Chugh,  C. Shrivastav, S. Mehra, dan A.N Sharma. 2012. Interactions between Oxidative Stress, Lipid Profile and Antioxidants in Breast Cancer: a Case Control Study. Asian Pac J Cancer Prev , 13(12), pp. 6295-6298.
Hoffman, R.S., M.A Howland, N.A Lewin, L.S Nelson, dan  L.R  Goldfrank.  2015.  Toxicologic Emergencies. 10th ed. New  York: McGraw- Hill Companies ;. pp. 1381–2.
Ige,  S.F.,  dan  R.E.  Akhigbe.  2012.The  role  Allium cepa  on    aluminum-induced  reproductive dysfunction  in    experimental  male  rat models. Journal  of  Human    Reproductive Sciences 5: 200-5.
Johnsen, S.G. 1970. Testicular biopsy score count-- a method for registration of spermatogenesis  in  human  testes:  normal values  and  results  in  335  hypogonadal males . Hormones . 1(1): 2-25.
Luzia,  D.  M.  M.,  dan  N.  Jorge.  2011.  “Antioxidant Activity, Fatty Acid Profile and Tocopherols of  Tamarindus indica L. Seeds .” Ciencia de Tecnologia de  Alimentos 31 (2): 497-501.
Maiti, R., P. Karak, D.S. Misra, dan D. Ghosh. 2017. Diabetes-induced  testicular  dysfuntion correction  by  hydromethanolic  extract  of Tamarindus indica Linn seed in male albino rats ,  International  Journal  of  Green Pharmarcy 11 (4).
Olawuyi,  T.  S.,  G.  S.  Oladipo,  A.  S.  Alabi,  A.  O.
Oyewopo,  dan  G.  O.  Omotoso.  2018.
Lawsonia  Inermis Leaf  Extract  Mitigates Aluminium-Induced  Testicular  Toxicity  in Wistar  Rats:  Immunohistochemical  Study. Journal of Malaria and Phytomedicine 2 (02),
1-15.
Pandey, G., dan G.C. Jain. 2013. A Review on Toxic Effects  of  Aluminium  Exposure  on  Male Reproductive System and Probable Mechanisms  of  Toxicity. International Journal  of  Toxicology  and  Applied Pharmacology 3(3): 48-57.
Pandey,  G.,  dan  G.C.  Jain.  2017.  Aluminium Chloride-Induced Testicular Effects in Rats: A Histomorphometrical  Study. Asian  J.  Appl. Sci. Technol. (AJAST) . 1(9):46-52.
Rajeswari,  T.R.,  dan  N.  Sailaja.  2014.  Impact  of heavy metals on the environment pollution. J Chem Pharm Sci 3:175-181.
Razali, N., A.A. Aziz, C.Y. Lim, dan S.M. Junit. 2015.
Investigation into the effects ofantioxidant- rich  extract  of  Tamarindus  indica  leaf  on
antioxidant  enzymeactivities,  oxidative stress and gene expression profiles in HepG2 cells . PeerJ ;3, e1292.
Singh,  P.K.,  A.D.  Feroz,  H.  Sheeba,  A.  Khalil,  dan A.M.  Samir.  2012.  Beneficial  effect  of Tamarindus indica on the testes of albino rat after fluoride intoxication. Int J Pharm Bio Sci 3:487–493.
Soemardji,  A.A.  2007. Tamarindus  indica L.  or “Asam  Jawa”:  The  Sour  but  Sweet  and Useful.  Available  from  www.inm.utoyama. ac.jp/jp/nennpo/07nennpo/07revi ew_article.pdf.
Spencer,  J.  P.  2009.  Flavonoids  and  brain  health: multiple  effects  underpinned  by  common mechanisms. Genes  &  nutrition ,  4(4),  243- 250.
Sundaram,  S.M.,  M.  Hemshekhar,  S.M.  Santhosh, M.  Paul,  K.  Sunitha,  dan  M.R.  Thushara. 2015.  Tamarind  seed  (Tamarindus  indica) extract ameliorates adjuvant-induced arthritis  via  regulating  the  mediators  of cartilage/bone  degeneration. Inﬂamm  Oxid Stress Sci Rep;5
Yuan, C.Y., Y.J. Lee, dan G.S. Hsu. 2012. Aluminum overload  increases  oxidative  stress  in  four functional  brain  areas  of  neonatal  rats .  J. Biomed. Sci. 19: 1.