## ISOLASI DAN KARAKTERISASI AKTIVITAS AMILOGLUKOSIDASE DARI KAPANG ASAL LIMBAH CAIR TAPIOKA
Hafsan * , Maslan, Eka Sukmawaty Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi UIN Alauddin Makassar Jl. Sultan Alauddin No. 63, Kabupaten Gowa, Sulawesi Selatan. 92113
* E-mail: hafsan.bio@uin-alauddin.ac.id
Abstrak: Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  keberadaan  isolat kapang  dari  limbah  cair  tapioka  yang  memiliki  aktivitas  amilolitik  dan amiloglikosidase  yang  dihasilkan  kapang  tersebut.  Parameter  penelitian  ini adalah  indeks  amilolitik  isolat  kapang  dengan  menggunakan  metode  pati agar, dan aktivitas amiloglukosidase yang dilakukan dengan metode Somogyi pada  suhu  dan  pH  yang  ditentukan.  Isolat  dan  aktivitas  amiloglukosidase dianalisis secara deskriptif. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada limbah cair tapioka berhasil diisolasi kapang penghidrolisis pati sekaligus penghasil amiloglukosidase  yang  diidentifikasi  sebagai Rhizopus  oryzae , Aspergillus oryzae , A. niger dan Penicillium sp. Aktivitas amiloglukosidase dari keempat isolat  memiliki  karakteristik  yang  berbeda  dengan  aktivitas  tertinggi dihasilkan oleh A. niger dengan pertumbuhan optimum pada suhu 45 o C dan eksponen ion hidrogen 4,0; R. oryzae optimum pada suhu 40 o C dengan pH 4,5  sedangkan A.  oryzae optimum  pada  suhu  40 o C  dengan  pH  4,0  dan Penicillium sp. yang optimum pada suhu 45 o C dengan dua pH optimum yaitu 4,5 dan 5,5.
Kata Kunci: amiloglukosidase, Aspergillus , kapang, Penicillium, Rhizopus

## PENDAHULUAN
bi kayu yang dihasilkan di Indonesia sebagian besar dimanfaatkan sebagai bahan baku tapioka. Proses pengolahan ubi kayu menjadi tapioka tersebut menyisakan limbah  yang  masih  kaya  akan  karbohidrat  (±50%)  dan  bahan  organik  lainnya seperti  gula  dan  protein  (Dwi,  2017;  Rahayu  et  al.,  2019).  Limbah  tersebut  berpotensi digunakan  sebagai  substrat  pertumbuhan  kapang  untuk  membentuk  biomassa  dan membentuk metabolit-metabolit seperti enzim. Kapang menghasilkan enzim intraseluler dan ekstraseluler untuk keperluan metabolisme. Enzim ekstraseluler umumnya dihasilkan untuk  melaksanakan  peran  dalam  siklus  metabolik  kapang  itu  sendiri  (asimilasi), misalnya untuk memecah polimer/makromolekul menjadi molekul yang lebih kecil agar dapat  melewati  membran  sel  mikroba  seperti  amiloglukosidase  yang  dikeluarkan  oleh kapang  untuk  memecah  substrat  pati  menjadi  monomer  glukosa  (Sopandi  &  Wardah, 2014; Adnyana et al., 2015). Di sisi lain amiloglukosidase mempunyai nilai ekonomi dan digunakan  secara  meluas  dalam  industri  makanan,  minuman,  detergen  dan  farmasi (Sunaryanto & Marasabessy, 2016).
Amiloglukosidase  dikenal  pula  dengan  nama  glukoamilase  atau  α-1,4-glukan glukohidrolase  merupakan  enzim  penghidrolisis  pati  langsung  menjadi  glukosa  yang
U
banyak digunakan dalam industri makanan dan minuman (seperti gula cair sebagai sirup glukosa)  yang  digunakan  untuk  sakarifikasi  dari  pati,  dekstrin  atau  glukosa. Amiloglukosidase mengkatalisis pemutusan ikatan glikosida α-1,4 dan α-1,6 dalam reaksi hidrolisis  amilosa,  amilopektin,  dan  glikogen  dari  bagian  ujung  gula  secara  berurutan (Nangin  &  Sutrisno,  2015;  Sutikno  et  al.,  2016).  Enzim  ini  mampu  dihasilkan  oleh berbagai jenis kapang antara lain Aspergillus niger, A. satoi, P. oxalium, Rhizopus dan beberapa jenis khamir (Melliawati et al., 2006).
Melihat  kegunaan  dari  amiloglukosidase  yang  luas,  maka  pengusahaan  serta penyediaan enzim tersebut akan sangat menguntungkan bila dapat dihasilkan dengan cara yang murah dan mudah. Mikroorganisme dalam hal ini kapang dapat digunakan sebagai inokulan sumber penghasil amiloglukosidase karena mempunyai nilai lebih yaitu dapat dihasilkan dalam jumlah yang besar dibandingkan dengan mengisolasi enzim dari hewan maupun tumbuhan. Selain itu kapang dapat tumbuh dan berkembang pada substrat yang terdiri  dari  komponen  limbah  atau  sisa  produksi  pengolahan  industri  pangan  termasuk limbah cair tapioka yang merupakan salah satu sisa dari proses pembuatan tapioka yang sangat potensial digunakan untuk produksi enzim karena masih mengandung komponen- komponen nutrisi yang diperlukan untuk suatu pertumbuhan mikroorganisme terutama kapang,  sekaligus  pemanfaatan  limbah  yang  terbuang  percuma  (Nugroho  et  al.,  2016; Karunawan et al., 2017; Indrianeu et al., 2019 ).
Potensi pemanfaatan kapang sebagai sumber enzim, yakni amiloglukosidase maka perlu  dilakukan  pencarian  informasi  mengenai  aktivitas  metabolisme  mikroorganisme, seleksi  biakan  yang  berpotensi  memproduksi  metabolit  dengan  produktivitas  tinggi, menentukan  kondisi  optimum  untuk  pertumbuhan  mikroorganisme  maupun  kondisi optimum untuk aktivitas hasil metaboliknya. Sehubungan dengan uraian tersebut, maka dilakukan  penelitian  untuk  mengungkap  karakteristik  aktivitas  amiloglukosidase  dari kapang yang diisolasi dari limbah cair tapioka, mengingat bahwa pada limbah cair tapioka kaya  akan  nutrisi  yang  diperlukan  oleh  kapang  untuk  pertumbuhan  dan  pembentukan enzim.  Prinsipnya,  penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  keberadaan  isolat-isolat kapang  asal  limbah  cair  tapioka  yang  memiliki  aktivitas  amilolitik  dan  aktivitas amiloglukosidase.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  deskriptif eksploratif  yang  dilakukan  dengan mengisolasi kapang dari limbah cair tapioka kemudian diisolasi dan ditentukan aktivitas amiloglukosidase yang dihasilkannya. Sampel limbah cair tapioka berasal dari salah satu pabrik pengolahan tapioka di Kabupaten Gowa.
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah: cawan Petri, tabung reaksi, rak  tabung,  erlenmeyer,  autoklaf,  oven,  inkubator,  corong,  penangas,  gelas  ukur,  pipet volum, spoit , sentrifuge , shaker , neraca analitik, jarum inokulasi (ose), lemari pendingin, botol pengenceran, termometer, buret, laminar air flow (LAF), gelas piala, water bath , dan pH meter. Sedangkan bahan yang digunakan adalah:  limbah cair tapioka, aquades, alkohol  70%,  PDA, soluble  starch ,  larutan  JKJ, yeast ekstrak,  H 2 SO 4 2N,  Na 2 S 2 O 3 , MgSO 4 , MgSO 4 .7H 2 O,  (NH 4 ) 2 SO 4 , KCl,  CaCl 2 , CuSO 4 , KI,  KIO 3 0,1  N,  Na 2 CO 3 , K 2 C 2 O 4 , HCl 1N, NaOH 1N, aluminium foil dan kapas.
Pengambilan data meliputi 6 tahap yaitu: 1) Sterilisasi alat dan bahan; 2) Pembuatan medium;  3)  Isolasi  dan  penapisan  kapang;  4)  Produksi  amiloglukosidase;  5)  Isolasi amiloglukosidase; dan 6) Pengukuran aktivitas amiloglukosidase.
 Sterilisasi  alat  dan  bahan :  semua  alat  yang  digunakan  dicuci  hingga  bersih, kemudian  dikeringkan.  Alat-alat  yang  tahan  panas  dibungkus  dengan  kertas  dan disterlkan  dalam  oven  pada  160-180 o C  selama  2  jam.  Medium  dan  alat-alat  yang tidak tahan suhu tinggi disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit pada  tekatan  2  atm  sesuai  prosedur  dari  Hadioetomo  (1990)  serta  Lay  &  Hastowo (1994).
 Pembuatan  medium  dan  pereaksi  uji  aktivitas  amiloglukosidase :  medium meliputi pembuatan medium Potato Dekstrosa agar (PDA), medium agar amilum, dan medium  starter,  serta  medium  produksi  enzim.  Sedangkan  pereaksi  uji  aktivitas amiloglukosidase  meliputi:  pereaksi  Shaffer  Somogyi,  larutan  iod  oksalat,  larutan standar Na tiosulfat (Na 2 S 2 O 3 ) 0,005N, dan larutan pati 2% (b/v).
 Isolasi  dan  penapisan  kapang :  Sampel  limbah  cair  tapioka  berasal  dari  pabrik tepung  tapioka  PT.  Katelindo  Tulus  Sejahtera  di  Kecamatan  Bontomarannu Kabupaten Gowa Sulawesi Selatan dimasukkan ke dalam botol steril dan langsung dibawa ke laboratorium. Isolasi kapang dilakukan dengan menggunakan media agar amilum.  Sebanyak  10  ml  sampel  limbah  cair  tapioka  dimasukkan  ke  dalam  botol pengencer berisi aquades steril 90 ml (pengenceran 10 -1 ) sampai pengenceran 10 -5 . Dari  hasil  pengenceran  terakhir,  sampel  dipipet  ke  dalam  cawan  petri  yang  berisi media  padat  kemudian  disebar  agar  sampel  merata  dengan  menggunakan  gelas bengkok. Inkubasi dilakukan pada suhu 30 o C selama 3 x 24 jam. Isolat yang tumbuh dimurnikan  pada  media  dengan  komposisi  yang  sama.  Warna,  bentuk  dan  ciri-ciri morfologi  kapang  diamati  untuk  keperluan  identifikasi.  Masing-masing  isolat kemudian  ditetesi  larutan  JKJ  di  sekitar  tepi  koloni  kapang.  Zona  bening  yang terbentuk di sekeliling koloni menunjukkan bahwa kapang tersebut memiliki aktivitas amilolitik.  Selanjutnya  kapang  tersebut  diisolasi  pada  media  PDA  miring  sebagai isolat untuk kemudian dikarakterisasi amiloglukosidasenya.
 Produksi  amiloglukosidase : Penentuan  aktivitas  amiloglukosidase  dilakukan terhadap  isolat  kapang  yang  memiliki  rasio  amilolitik  (aktivitas  amilolitik).  Isolat kapang tersebut (umur 7 hari) yang terlebih dahulu diinokulasikan ke dalam medium starter dan diinkubasi selama 24 jam, sebanyak 10 ml dimasukkan ke dalam medium produksi  steril  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  30 o C  dengan  kecepatan  180  rpm selama 3 x 24 jam (Xiao et al., 2006).
 Isolasi  amiloglukosidase :  Kultur  yang  diperoleh  dari  medium  produksi disentrifugasi  pada  kecepatan  3000  rpm  selama  15  menit.  Selanjutnya  filtrat (supernatan)  didekantasi  yang  merupakan  ekstrak  kasar  enzim  amiloglukosidase. Ekstrak enzim kasar inilah yang selanjutnya diuji aktivitasnya.
 Pengukuran  aktivitas  amiloglukosidase :  Penentuan  aktivitas  amiloglukosidase didasarkan  atas  perhitungan  gula  pereduksi  sebagai  glukosa  yang  dihasilkan  dari aktivitas enzim terhadap substrat. Filtrat (ekstrak kasar enzim amiloglukosidase) yang diperoleh dari isolasi enzim dipipet sebanyak 2,5 ml ke dalam erlenmeyer kemudian ditambahkan larutan pati 2% sebanyak 5 ml. Nilai pH diatur sesuai pH pengujian (3,0; 3,5; 4,0; 4,5; 5,0; 5,5; 6,0; 6,5; 7,0) pada suhu pengujian (20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55,  60 o C)  dengan  menggunakan water  bath selama  30  menit.  Kemudian enzimnya diinaktifkan  pada  suhu  80 o C  selama  10  menit.  Kemudian  dilakukan  analisis  gula pereduksi  dengan  metode  Shaffer  Somogyi  (Xiao  et  al.,  2006;  Vinet  &  Zhedanov, 2010;  Devitria  &  Sepriyani,  2018)  sebagai  berikut;  sebanyak  5  ml  larutan  contoh dipipet ke dalam erlenmeyer kemudian ditambahkan 5 ml larutan Shaffer Somogyi dan dikocok. Blanko disiapkan dengan menggunakan aquades dan ditambakan 5 ml
larutan Shaffer Somogyi. Labu ditutup dan dipanaskan dalam penangas air mendidih selam  15  menit.  Secara  hati-hati  labu  diangkat  dan  didinginkan  selama  4  menit  di dalam water bath , setelah itu tutup labu dibuka, melalui dinding labu ditambahkan 2 ml iod oksalat dan 3 ml H 2 SO 4 2N. Isi labu dikocok sampai endapan merah bata hilang dan didiamkan selam 5 menit di dalam bak pendingin dan selanjutnya dititrasi dengan menggunakan Na 2 S 2 O 3 0,005N dengan indikator pati.
 Teknik pengumpulan data : data diperoleh dengan cara mengisolasi dan menentukan aktivitas amiloglukosidase dari kapang asal limbah cair tapioka. Penentuan aktivitas amiloglukosidase yang yang dihasilkan oleh masing-masing isolat kapang asal limbah cair tapioka tersebut ditentukan berdasarkan persamaan berikut:
Mg dekstrosa x fp x 1000 AE =
180 x VE x t Keterangan : AE = Aktivitas enzim (unit/ml/menit) Fp = Faktor pengenceran Mg dekstrosa = 0,1099 (ml blangko - ml titran) + 0,048 VE = Volume enzim (ml) t = Waktu inkubasi (menit)
Satuan aktivitas amiloglukosidae dinyatakan dalam unit/ml ekstrak enzim. Satuan unit  aktivitas  enzim  setara  dengan  satu  μM  glukosa  yang  dihasilkan  dalam  hidrolisis substrat yang dikatalisis oleh amiloglukosidase dalam 1 ml enzim kasar permenit. Data yang diperoleh dianalisa secara deskriptif, yaitu dengan penentuan rerata dan penyajian melalui diagram hubungan antara aktivitas amiloglukosidase pada variasi suhu dan pH.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sebanyak  empat  isolat  kapang  telah  diisolasi  dari  limbah  cair  tapioka  yang merupakan penghidrolisis pati yang ditandai dengan terbentuknya zona bening di sekitar koloni  setelah  ditetesi  larutan JKJ  (Gambar  2).  Keempat  isolat  yang  tumbuh  memiliki rasio amilolitik yang berbeda-beda (Tabel 1). Rasio amilolitik dihitung berdasarkan hasil bagi diameter zona bening terhadap diameter koloni.
Gambar 2. Koloni kapang asal limbah cair tapioka yang memiliki aktivitas amilolitik yang ditandai
terbentuknya zona bening di sekitar koloni (tanda ↔ ) ↕ ↕ ↕ ↔ ↔
Tabel 1. Rasio amilolitik kapang hasil isolasi pada masa inkubasi 3 x 24 jam pada suhu 30 o C Isolat Diameter koloni (cm) Diameter zona bening (cm) Rasio amilolitik Isolat A Isolat B Isolat C Isolat D 1,9 0,3 0,4 1,1 2,6 0,7
1,5 1,4 1,37 2,25 3,75 1,27
Keberadaan  substrat  berupa  pati  tapioka  dalam  media  produksi  menginduksi sintesis  enzim  ekstraseluler  dari  kapang  berumur  7  hari.  Hal  ini  karena  substrat  yang berberat molekul tinggi seperti pati akan sulit masuk ke dalam sel, sehingga perlu dipecah terlebih dahulu oleh enzim misalnya amiloglukosidase yang menghasilkan produk akhir berupa glukosa dari aktivitasnya. Aktivitas amiloglukosidase yang terukur dari masing- masing isolat ditunjukkan pada Gambar 2.
Gambar 2. Hubungan antara aktivitas amiloglukosidase dengan variasi suhu pengujian
Gambar 3. Hubungan antara aktivitas amiloglukosidase dengan variasi pH pengujian
Keempat isolat kapang yang diperoleh dari limbah cair tapioka memiliki aktivitas amilolitik  yang  berbeda-beda.  Berdasarkan  pengamatan  warna  dan  bentuk  koloni  serta ciri-ciri morfologi kapang pada media agar dan preparat slide kultur, keempat isolat A, B,  C  dan  D  masing-masing  diidentifikasi  sebagai R.  oryzae,  A.  oryzae,  A.  niger dan Penicillium sp.
Rasio amilolitik tertinggi dimiliki oleh isolate A niger meskipun diameter koloninya lebih kecil dibandingkan dengan ketiga isolat lainnya, dimana setelah penentuan aktivitas amiloglukosidase menunjukkan aktivitas tertinggi dibandingkan isolat yang lain. Hal ini dipengaruhi  oleh  kesuburan A.  Niger yang  lebih  rendah,  sehingga  kemampuannya menghidrolisis  pati  menjadi  lebih  tinggi  karena  energi  yang  dihasilkan  dari  respirasi untuk pembentukan miselium, sebagaimana menurut Ilmi & Kuswytasari (2013), bahwa
0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12 0,14 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Suhu (  C) AE (U /m l/m en it) Rhizopus oryzae Aspergillus oryzae Aspergillus niger Penicillium sp o 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 3 5,3 4 5,4 5 5,5 6 5,6 7 pH A E ( U /m l/m e n it ) Rhiz opus oryz ae Aspergillus oryz ae
Aspergillus neger
Penicillium  sp
kesuburan  kapang  yang  tinggi  menyebabkan  produktivitas  enzim  kapang  tersebut menjadi  lebih  rendah,  karena  energi  yang  dihasilkan  dari  respirasi  lebih  banyak digunakan  untuk  pembentukan  miselium  sehingga  memengaruhi  jumlah  enzim  yang dihasilkan oleh suatu kapang (Pedersen et al., 2000). Namun ketiga isolat yang lain tidak menunjukkan keadaan yang sama dimana rasio amilolitik tidak berbanding lurus dengan aktivitas  amiloglukosidase  yang  dihasilkannya.  Hal  ini  disebabkan  oleh  faktor-faktor yang  memengaruhi  sintesis  amiloglukosidase  seperti  perbedaan  kesuburan  kapang, perbedaan komposisi media agar dengan media produksi, suhu, dan pH, dimana pada saat isolasi, sintesis enzim ekstraseluler yang dihasilkan tidak optimum karena menurut Ilmi &  Kuswytasari  (2013),  pembentukan  enzim  ekstraseluler  kapang  akan  lebih  baik pada suhu yang lebih rendah dari pada suhu optimum untuk pertumbuhannya (Zambare, 2010). Selain itu aktivitas amilolitik yang terbaca pada saat isolasi hanya merupakan praduga adanya aktivitas amiloglukosdase sebagai salah satu macam enzim amilase yang dapat melakukan  aktivitas  dengan  enzim  amilase  lainnya  (α-amilase  dan  β-amilase)  secara bersama-sama  dan  atau  sendiri-sendiri,  sehingga  tidak  menunjukkan  aktivitas amiloglukosidase secara kuantitatif (Pavezzi et al., 2008).
Berdasarkan  Gambar  1  dan  2,  masing-masing  isolat  memiliki  aktivitas amiloglukosidase  yang  berbeda-beda.  Pada  pH  4,5, R.  oryzae memiliki  aktivitas amiloglukosidase  yang  optimum  pada  suhu  40 o C,  yaitu  0,113  U/ml/menit. A.  oryzae memiliki  aktivitas  amiloglukosidase  yang  optimum  pada  suhu  40 o C,  yaitu  0,111 U/ml/menit. A. niger memiliki aktivitas amiloglukosidase yang optimum pada suhu 45 o C, yaitu  0,124  U/ml/menit,  dan Penicillium sp.  memiliki  aktivitas  amiloglukosidase  yang optimum  pada  suhu  45 o C,  yaitu  0,091  U/ml/menit.  Sedangkan  pH  optimum  aktivitas amiloglukosidase  pada  suhu  45 o C  masing-masing  isolat  yaitu R.  oryzae memiliki aktivitas amiloglukosidase yang optimum pada pH 4,5, yaitu 0,096U/ml/menit. A. oryzae optimum  pada  pH  4,0,  yaitu  0,111  U/ml/menit A.  niger optimum  pada  pH  5,0  dengan aktivitas 0,124 U/ml/menit dan Penicillium sp optimum pada pH 4,5 dan 5,5 yaitu 0,098 U/ml/menit.  Pengukuran  aktivitas  amiloglukosidase  dari  keempat  isolat  pada  suhu  di bawah suhu 20 o C dan di atas suhu 60 o C tidak menunjukkan aktivitas. Hal ini disebabkan karena pada suhu yang terlalu rendah dan terlalu tinggi menyebabkan enzim mengalami denaturasi  sebagaimana  menurut  (Ariandi,  2016)  ,  bahwa  amiloglukosidase  memiliki suhu  denaturasi  yang  lebih  tinggi  dari  60 o C.  Demikian  pula  pengukuran  aktivitas amiloglukosidase  pada  pH  dibawah  3,0  dan  di  atas  7,0  menunjukkan  aktivitas  yang terhenti. Hal ini berarti bahwa pada pH di bawah 3,0 dan di atas 7,0 amiloglukosidase menjadi  inaktif  karena mengalami  deklinasi  (Setiasih et  al.,  2006;  Nangin  &  Sutrisno, 2015), sehingga secara umum amiloglukosidase memiliki toleransi terhadap suhu antara 20 o C sampai 60 o C dan toleransi terhadap pH antara 3,0 sampai 7,0. Dari hasil pengukuran aktivitas  amiloglukosidase  yang  telah  dilakukan,  tampak  bahwa  aktivitas amiloglukosidase dari masing-masing isolat memiliki stabilitas aktivitas di sekitar pH dan suhu optimum, sebagaimana menurut Phieter et al. (2020).
Berdasarkan  pengukuran  aktivitas  amiloglukosidasae  dari  masing-masing  isolat kapang,  ada  hasil  pengukuran  yang  menunjukkan  aktivitas  yang  menyimpang  secara teoritis dimana aktivitas amiloglukosidase mengalami penurunan pada suhu maupun pH pengujian tertentu sebelum aktivitasnya menunjukkan aktvitas yang sesuai secara teoritis. Hal  ini  dipengaruhi  oleh  teknis  pengukuran  aktivitas  amiloglukosidase  dari  masing- masing isolat, misalnya pada pengukuran aktivitas dengan suhu 20 dan 25 o C digunakan air es sebagai pengontrol suhu sehingga tidak menjamin kestabilan suhu yang semestinya (Kumar & Satyanarayana, 2009; Rezaul Kar et al., 2017; Pasin et al., 2017).
Hasil penentuan aktivitas amiloglukosidase tersebut menunjukkan bahwa sumber enzim  yang  berbeda  menghasilkan  enzim  dengan  karakteristik  aktivitas  yang  berbeda pula. Pada umumnya amiloglukosidase memiliki pH optimum 4,0-5,0 dan suhu optimum 40-50 o C  (Muchtadi  et  al.,  1992).  Perbedaan  aktivitas  amiloglukosidase  dari  keempat isolat tersebut dipengaruhi oleh beberapa faktor sehingga tidak berlaku mutlak, dimana produksi  enzim  dari  kapang  yang  berbeda  juga  menghasilkan  aktivitas  yang  berbeda, meskipun diujikan pada pH dan suhu yang sama (Kanti, 2017). Hal ini disebabkan oleh respon genotipik keempat isolat yang berbeda terhadap semua faktor pH, suhu maupun komposisi medium  produksi  yang digunakan untuk semua isolat, dimana kondisi yang sama tersebut belum tentu cocok untuk keempat isolat dalam membentuk biomassa dan menghasilkan enzim ekstraseluler (amiloglukosidase) sehingga konsentrasi amiloglukosidase yang dihasilkan berbeda-beda dan hal tersebut berpengaruh terhadap kemampuannya menghidrolisis pati.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  diuraikan,  dapat  disimpulkan  sebagai berikut:  1)  Isolat  kapang  asal  limbah  cair  tapioka  yang  memiliki  aktivitas  amilolitik sekaligus aktivitas amiloglukosidase diidentifikasi sebagai R. oryzae, A. oryzae, A. niger dan Penicillium sp.;  2) Aktivitas  amiloglukosidase  dari masing-masing  isolat  berbeda- beda dimana aktivitas amiloglukosidase dari R. oryzae optimum pada pH 4,5 suhu 40 o C, A. oryzae optimum pada pH 4,0 dan suhu 40 o C, A. niger optimum pada suhu 45 o C dan Penicillium sp. optimum pada suhu 45 o C, pH 5,0 dan 5,5.

## DAFTAR PUSTAKA
Ariandi.  (2016).  Pengenalan  enzim  amilase  (alpha-amylase)  dan  reaksi  enzimatisnya  menghidrolisis amilosa pati menjadi glukosa. Jurnal Dinamika , 7(1), 74–82.
Devitria, R., & Sepriyani, H. (2018). Optimalisasi konsentrasi asam klorida pada proses hidrolisis limbah ampas  sagu  ( Metroxylon ,  sp)  terhadap  kadar  glukosa. Jurnal  Analisis  Kesehatan  Klinikal  Sains . 6(2), 37–42.
Ilmi, I. M., & Kuswytasari, N. D. (2013). Aktifitas enzim lignin peroksidase oleh Gliomastix sp. T3.7 pada limbah bonggol jagung dengan berbagai ph dan suhu. Jurnal Sains Dan Seni Pomits , 2(1), 38–42. Indrianeu, T., Elgar, & Singkawijaya, B. (2019). Pemanfaatan limbah industri rumah tangga tepung tapioka untuk mengurangi dampak lingkungan. Jurnal Geografi: Geografi Dan Pengajarannya . 17(2), 39– 50.
Kanti,  A.-.  (2017).  Potensi  dari  kapang Aspergilus niger , Rhizophus oryzae dan Neurospora  sitophila sebagai penghasil ezim fitase dan amilase pada substrat ampas tahu. Buletin Peternakan , 41(1), 26. Karunawan, J., Wati, A. L., Rahmawati, I., Sulhadi, S., Priyanto, A., & Aji, M. P. (2017).  Pemanfaatan limbah  ubi  kayu  dari  sisa  pengolahan  tepung  tapioka  di  Kecamatan  Margoyoso  Kabupaten  Pati menjadi  bahan  adsorben  untuk  penjernih  air.  Prosiding  Seminar  Nasional  Fisika,  6(Oktober), SNF2017-ERE-43- SNF2017-ERE-48.
Kumar, P., & Satyanarayana, T. (2009). Microbial glucoamylases: characteristics and applications. Critical Reviews in Biotechnology , 29(3), 225–255.
Dwi, M. A. (2017). Analisis faktor-faktor yang mempengaruhi produksi tepung tapioka pada industri skala rumah tangga di Kecamatan Nguntoronadi. Journal Agrista , 5(3), 290–301.
Melliawati, R., Suherman, R. S., & Subardjo, B. (2006). Pengkajian kapang endofit dari taman nasional gunung halimun sebagai penghasil glukoamilase. Berkala Penelitian Hayati , 12(1), 19–25. Muchtadi, Palupi, N. ., & Astawan, M. (1992). Metode Kimia Biokimia dan Biologi dalam Evaluasi Nilai Gizi Pangan Olahan. Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi. Bogor: IPB.
Nangin, D., & Sutrisno, A. (2015b). Enzim amilase pemecah pati mentah dari mikroba : kajian pustaka raw starch degrading amylase enzyme from microbes : a review. Jurnal Pangan Dan Agroindustri , 3(3), 1032–1039.
Nugroho, A., Effendi, E., & Novaria, T. (2016). Pengolahan limbah padat tapioka menjadi etanol dengan menggunakan Aspergillus niger , Bacillus licheniformis dan Saccharomyces cerevisiae . Indonesian
Journal of Urban and Environmental Technology , 7(1), 17-23.
Pasin, T. M., Benassi, V. M., Heinen, P. R., Damasio, A. R. de L., Cereia, M., Jorge, J. A., & Polizeli, M. de L. T. de M. (2017). Purification and functional properties of a novel glucoamylase activated by manganese  and  lead  produced  by Aspergillus japonicus . International  Journal  of  Biological Macromolecules , 102, 779–788.
Pavezzi, F. C., Gomes, E., & Da Silva, R. (2008). Production and characterization of glucoamylase from fungus  Aspergillus  awamori  expressed  in  yeast Saccharomyces  cerevisiae using  different  carbon sources. Brazilian Journal of Microbiology , 39(1), 108-114.
Pedersen, H., Beyer, M., & Nielsen, J. (2000). Glucoamylase production in batch, chemostat and fed-batch cultivations by an industrial strain of Aspergillus niger. Applied Microbiology and Biotechnology , 53(3), 272–277.
Phieter, A. C., Chrisnasari, R., & Pantjajani, T. (2020). Karakterisasi Enzim Pemecah Pati dari Malt Serelia.
Keluwih: Jurnal Sains Dan Teknologi , 1(1), 38–48. Putra Adnyana, I., Hartiati, A., & Arnata, I. (2015). Pengaruh suhu dan konsentrasi enzim amiloglukosidase pada  proses  sakarifikasi  produksi  gula  cair  pati  ubi  gadung  ( Dioscorea  hispida  Dennt s). Jurnal Rekayasa dan Manajemen Agroindustri , 3(2), 140–151.
Rahayu, M. A., Sulistyaningtyas, A. R., & Darmawati, S. (2019). Isolasi Bakteri Hidrolitik Penghasil Enzim Amilase dari Limbah Industri Tapioka. Prosiding Seminar Nasional , 2, 147–155.
Rezaul  Kar,  K.  M.,  Husaini,  A.,  &  Tasnim,  T.  (2017).  Production  and  Characterization  of  Crude Glucoamylase from Newly Isolated Aspergillus flavus NSH9 in Liquid Culture. American Journal of Biochemistry and Molecular Biology , 7(3), 118–126.
Setiasih, S., Wahyuntari, B., & Apriliani, D. (2006). Karakterisasi Enzim Alpha -Amilase Ekstrasel dari Isolat Bakteri Termofil SW2. Jurnal Kimia Indonesia , 1(1), 22–27.
Sopandi, T., & Wardah. (2014). Mikrobiologi Pangan. Yogyakarta: Penerbit Andi. Sunaryanto, R., & Marasabessy, A. (2016). Optimalisasi media produksi amiloglukosidase menggunakan fermentasi media padat. Jurnal Bioteknologi & Biosains Indonesia (JBBI) , 374, 1-7.
Sutikno,  Marniza,  Selviana,  &  Musita,  N.  (2016).  Pengaruh  konsetrasi  enzim  selulase,  α–amilase  dan glukoamilase  terhadap  kadar  gula  reduksi  dari  onggok. Jurnal  Teknologi  Industri  Dan  Hasill Pertanian , 21(1), 1–12.
Xiao, Z., Storms, R., & Tsang, A. (2006). A quantitative starch–iodine method for measuring alpha-amylase and glucoamylase activities. Analytical Biochemistry , 351(1), 146–148. Zambare, V. (2010). Solid-State Fermentation of Aspergillus oryzae for Glucoamylase Production on Agro residues. International Journal of Solid-State , 4, 16–25.