DESCRIPTION OF LEUKOCYT OF SIAM PATIN FISH ( Pangasius hypophthalmus ) THAT FEED BY ADDITION OF HARUMANIS MANGO SEEDS ( Mangifera indica L.)
Mutiara Syaieba 1* , Iesje Lukistyowati 2 , Henni Syawal 2
1 Student of The Faculty of Fisheries and Marine Science University of Riau, Pekanbaru
2 Lecturer at The Faculty of Fisheries and Marine Science University of Riau, Pekanbaru *syaiebamutiara@gmail.com

## ABSTRACT
Harumanis mango  seed ( Mangifera indica L.) is a natural ingredient that can be used as an immunostimulant.  The  phytochemical  content  in  harumanis  mango  seeds  ( M.  indica L.) include tannins, flavonoids, saponins and ascorbic acid. This study aims to get the best dose of adding harumanis mango seed solution ( M. indica L.) to the feed. The method used was an experimental method with a Completely Randomized Design (CRD) consisting of one factor with four treatment levels which included P0 without the addition of harumanis mango seed solution, P1 addition of harumanis mango seed solution at a dose of 1.6 mL/Kg of feed, P2 addition harumanis mango seed solution at a dose of 1.8 mL/Kg of feed and P3 addition of harumanis mango seed solution at a dose of 2 mL/Kg of feed. Test fish used were Siamese catfish  ( P.  hypophthalmus )  measuring  8-12  cm  which  were  kept  in  cages  for  60  days.  The results  showed  that  administration  of  harumanis  mango  seed  solution  to  feed  affected  the image of leukocytes of Siamese catfish ( P. hypophthalmus ) (P < 0,05). The best dose is in the treatment  of  P3  (2  mL/Kg  of  feed)  with  an  average  total  leukocytes  9.76  x  10 4 cells/mm 3 , leukocrit  levels  of  1.67%,  lymphocytes  82.00%,  neutrophils  7.67%,  monocytes  10,  33%, phagocytic activity 31.67% and absolute weight growth of 37.70 g, and 95% survival.
Keywords: Leukocyt, Mangifera indica L, Pangasius hypophthalmus
I. PENDAHULUAN
Ikan patin siam ( Pangasius hypophthalmus) merupakan  salah  satu komoditas  andalan  di  Provinsi  Riau, sehingga  permintaan  pasar  yang  tinggi maka menuntut para pelaku usaha budidaya untuk  melakukan  sistem  budidaya  intensif agar  memperoleh  hasil  produksi  yang optimal.  Namun,  sistem  budidaya  intensif yang  tidak  ditangani  dengan  baik  dapat menimbulkan  masalah  lingkungan  dan wabah penyakit pada ikan.
Penanganan penyakit dengan pemberian  antibiotik  secara  terus  menerus dan  tidak  terkontrol  dapat  menyebabkan bakteri  patogen  menjadi  resisten,  terjadi
penimbunan residu obat-obatan di lingkungan  perairan  serta  di  dalam  tubuh ikan  yang  dapat  menimbulkan  efek berbahaya  bagi  yang  mengkonsumsinya (Lukistyowati  dan  Syawal,  2013).  Untuk itu,  upaya  pencegahan  dan  pengobatan penyakit ikan pada sistem budidaya sedang diarahkan  pada  penggunaan imunostimulan dari  bahan  alami  yang  terbukti  efektif  dan aman  untuk  manusia  dan  lingkungan (Sukenda et al ., 2008).
Salah satu bahan alami yang berpotensi  sebagai imunostimulan adalah biji  mangga  harumanis  ( Mangifera  indica L.).  Kandungan  fitokimia  dalam  biji mangga diantaranya terdapat asam askorbat
(Morales et al., 2002 dalam Widya, 2003), tanin,  flavonoid,  dan  saponin  sehingga menunjukkan adanya efektivitas biji mangga  sebagai  bakterisidal  (Prihandani et al .,  2016).  Priyanto  (2012),  menyatakan senyawa  tanin  akan  berikatan  langsung dengan  dinding  sel,  membran  dan  protein ekstrakseluler  pada  bakteri  dan  dapat menghambat  pertumbuhan  mikoorganisme atau  aktivitas  enzim.  Senyawa  flavonoid dapat berfungsi sebagai antioksidan, antikanker,  antibakteri, imunomodulator , antidiabetes, antiinflamasi (Middleton et al ., 2000).
Senyawa  yang  terkandung  dalam  biji mangga harumanis diharapkan dapat meningkatkan sistem imun dilihat dari total leukosit,  leukokrit,  diferensiasi  leukosit, dan aktivitas fagositosis.
Berdasarkan  uraian  di  atas  penulis tertarik untuk melakukan penelitian mengenai  gambaran  leukosit  ikan  patin siam ( P. hypophthalmus ) yang diberi pakan dengan  penambahan  larutan  biji  mangga harumanis  ( M.  indica L. ) .  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mendapatkan  dosis  terbaik dari  penambahan  larutan  biji  mangga harumanis ( M. indica L. ) pada pakan.

## 2. METODE PENELITIAN
Penelitian ini telah dilaksanakan pada bulan  Maret  sampai  Mei  2019  di  Kolam Percobaan  dan  Laboratorium  Parasit  dan Penyakit  Ikan  Fakultas  Perikanan  dan Kelautan Universitas Riau.
Metode  penelitian  yang  digunakan adalah metode eksperimen dengan menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  terdiri  dari  Satu  faktor  dengan empat  taraf  perlakuan,  untuk  mengurangi tingkat kekeliruan maka dilakukan  ulangan sebanyak  tiga  kali  sehingga  diperlukan  12 unit percobaan.
Adapun  perlakuan  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah:
P 0 :  Kontrol  (tanpa  penambahan  larutan biji mangga)
P 1 :  Pemberian pakan dengan
penambahan larutan biji mangga 1,6 mL/Kg pakan
P 2 :  Pemberian pakan dengan
penambahan larutan biji mangga 1,8
mL/Kg pakan P 3 :  Pemberian pakan dengan
penambahan  larutan  biji  mangga  2
mL/Kg pakan

## Persiapan Wadah
Wadah yang digunakan adalah keramba  dengan  ukuran  1  x  1  x  1  m  yang terbuat  dari  jaring  yang  ditempatkan  di Kolam  Percobaan  Fakultas  Perikanan  dan Kelautan Universitas Riau. Jumlah keramba yang digunakan sebanyak 12 unit, ikan  patin  siam  berukuran  8-12  cm dimasukkan  pada  masing-masing  keramba dengan  padat  tebar  50  ekor/m 3 .  Air  yang digunakan,  yaitu  air  aliran  dari  waduk Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Riau. Pembuatan Larutan Biji Mangga Harumanis  ( Mangifera indica L.)
Buah mangga harumanis yang digunakan  adalah  buah  mangga  yang  telah matang,  dikupas  dan  daging  buahnya disisihkan sehingga yang tertinggal hanyalah  biji  mangga.  Selanjutnya  dikupas kembali  biji  mangga  hingga  didapatkan keping  biji,  kemudian  dicuci  dengan  air mengalir  lalu  dikering  anginkan  selama  20 menit. Setelah kering diparut menggunakan parutan. Hasil parutan diperas menggunakan  kain  kasa.  Hasil  perasan disaring  kembali  menggunakan  kertas saring  Whatman  nomor  42  µm  sehingga didapatkan larutan stok 100 %.
Pembuatan  Pakan  yang  Mengandung Larutan Biji Mangga Harumanis ( Mangifera indica L.)
Terlebih  dahulu  lakukan  perhitungan formulasi pakan yang akan dibuat, diharapkan  kandungan  pakan  mengandung 35 % protein. Kemudian bahan-bahan yang digunakan  ditimbang  sesuai  formulasi.
Pencampuran  bahan  dilakukan  secara bertahap,  mulai  dari  jumlah  yang  paling sedikit  hingga  yang  paling  banyak  agar campuran  menjadi  homogen.  Sedangkan larutan biji mangga
harumanis dicampurkan  dengan  menggunakan  air hangat  dengan  suhu  30 o C  lalu  diaduk bersama bahan pakan lainnya. Pelet dicetak dengan alat pencetak pelet, kemudian pelet dikeringkan  dengan  penjemuran  di  bawah sinar matahari.
Pemeliharaan Ikan Ikan diaklimatisasi di keramba selama  3  hari  agar  tidak  stres.  Kemudian ikan  diukur  dan  ditimbang  berat  tubuhnya sebelum perlakuan. Ikan dipuasakan selama 2  hari,  pada  hari  ke  3  ikan  mulai  diberi perlakuan  dengan  memberikan  pakan mengandung larutan biji mangga harumanis sesuai  dengan  dosis  yang  telah  ditetapkan. Pakan diberikan sebanyak   10% dari bobot biomasa  pada  pukul  08.00  WIB,  12.00 WIB,  dan  17.00  WIB  selama  60  hari. Untuk  mengetahui  pertumbuhan  ikan dilakukan sampling setiap 15 hari sekali.

## Pengambilan Darah
Syringe dan  mikrotube  dibasahi dengan  EDTA  10  %.  Darah  diambil menggunakan syringe 1  mL  pada  bagian vena  caudalis dekat linea  lateralis dan dimasukkan dalam mikrotube.

## Total Leukosit
Sampel  darah  dihisap  dengan  pipet thoma  leukosit  hingga  skala  0,5  dan ditambah  larutan  Turk  hingga  garis  11. Selanjutnya  dihomogenkan  dengan  cara menggoyangkan  pipet  membentuk  angka delapan.  Kemudian  dibuang  sebanyak  dua tetes  agar  tidak  ada  gelembung  udara. Selanjutnya  diteteskan  pada  kamar  hitung haemositometer  dan  ditutup  dengan cover glass .  Selanjutnya  diamati  di  bawah mikroskop  dengan  pembesaran  10  x  40. Rumus  perhitungan  total  leukosit  sebagai berikut:
Total Leukosit = ∑ n x 50 sel/mm 3
Keterangan : ∑ n : Jumlah total leukosit pada 4 kotak besar 50     : Faktor pengenceran

## Leukokrit
Sampel  darah  dimasukkan  dalam tabung  kapiler  leukokrit  sampai  4/5  bagian tabung,  bagian  ujung  kapiler  ditutup dengan crystoseal ,  kemudian  disentrifuge selama  5  menit  dengan  kecepatan  11.000- 12.000 rpm pada sentrifuge
( microhematocrit centrifuge Model SH120-
1)  dengan  posisi  tabung  yang  bervolume sama  berhadapan  agar  putaran  sentrifuge seimbang.  Setelah  itu  diukur  persentase dari  nilai  leukokrit.  Kemudian  nilai leukokrit  yang  diperoleh  dibaca  pada  alat baca khusus yaitu microhematocrit reader .

## Diferensiasi Leukosit
Sampel darah dibuat menjadi preparat ulas  darah  pada object  glass lalu  dikering anginkan,  selanjutnya  difiksasi  dengan larutan  metanol  95  %  selama  5  menit, setelah  itu  dibilas  dengan  akuades  lalu dikering  anginkan,  dan  dilanjutkan  dengan pewarnaan  Giemsa  selama  15  menit, setelah  itu  dicuci  dengan  air  mengalir, kemudian  dikering  anginkan.  Selanjutnya preparat dapat diamati di bawah mikroskop dengan  perbesaran  1000x.  Jenis  leukosit yang  diamati  adalah  limfosit,  neutrofil  dan monosit.

## Aktivitas Fagositosis
Sampel  darah  sebanyak  50  μl dimasukan  ke  dalam  mikrotube  dan ditambahkan  sebanyak  50  μl  suspensi Staphylococcus aereus . Kemudian, suspensi tersebut dihomogenkan dan diinkubasi  dalam  inkubator  selama  20 menit. Selanjutnya suspensi tersebut dibuat menjadi preparat ulas lalu dikering anginkan,  selanjutnya  difiksasi  dengan larutan metanol selama 5 menit. Kemudian dilanjutkan  dengan  pewarnaan  Giemsa selama 15 menit, setelah itu dibilas dengan
akuades  dan  kembali  dikering  anginkan. Selanjutnya  preparat  dapat  diamati  di bawah mikroskop dengan perbesaran 1000x.  Persentase  sel  fagositik  dihitung dengan  cara  mengamati  sel-sel  yang memfagosit bakteri.

## Pertumbuhan Bobot Mutlak
Pertumbuhan  bobot  mutlak  dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut :
GR = Wt – Wo
Keterangan :
GR = Pertumbuhan mutlak (g) Wt = Bobot rata-rata ikan pada akhir penelitian (g) Wo = Bobot rata-rata ikan pada awal penelitian (g)

## Kelulushidupan Ikan
Kelulushidupan  ikan  patin  siam  yang diberi  pakan  mengandung  larutan  biji mangga harumanis selama 2 bulan dihitung dengan rumus sebagai berikut :
Keterangan :
SR = Kelulushidupan (%)
Nt = Jumlah ikan hidup pada akhir penelitian (ekor) No = Jumlah yang hidup pada awal penelitian (ekor)

## Kualitas Air
Parameter  kualitas  air  yang  diukur selama penelitian adalah suhu, pH, oksigen terlarut (DO) dan amoniak (NH 3 ). Pengukuran  dilakukan  sebanyak  dua  kali, yaitu pada awal dan akhir penelitian.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  pengukuran total leukosit, leukokrit, diferensiasi leukosit, aktivitas fagositosis, bobot mutlak dan  kelangsungan  hidup  ikan  patin  siam dianalisis  menggunakan  analisa  variansi (ANAVA) dan uji rentang Student Newman-Keuls. Data kualitas air
ditabulasikan  dalam  bentuk  tabel  secara deskriptif.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Gejala Klinis Total Leukosit
Hasil pengamatan total leukosit dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Total Leukosit (x 10 4 sel/mm 3 ) pada Ikan Patin Siam
Perlakuan Total Leukosit (x 10 4 sel/mm 3 ) Pengamatan Hari Ke-0 Pengamatan Hari Ke-60 P 0 8,59 8,95±0,07 a P 1 8,30 9,21±0,15 b P 2 8,46 9,37±0,04 b P 3 8,57 9,76±0,06 c
Keterangan : P0 : 0 mL/Kg; P1 : 1,6 mL/Kg; P2 : 1,8 mL/Kg; P3: 2 mL/Kg.
Berdasarkan Tabel 1 diketahui bahwa setelah  60  hari  pemeliharaan,  terjadi peningkatan nilai total leukosit,  yaitu 8,59- 9,76  x  10 4 sel/mm 3 .  Peningkatan  total leukosit  ini  terjadi  pada  setiap  perlakuan. Dimana  nilai  total  leukosit  tersebut  masih dalam  jumlah  normal,  hal  ini  berdasarkan Royan  (2014),  bahwa  kisaran  normal leukosit  ikan  air  tawar  adalah  2-15  x  10 4 sel/mm 3 .
Hasil  uji  statistik  analisa  variasi (ANAVA)  menunjukkan  bahwa  pemberian pakan  yang  ditambah  larutan  biji  mangga harumanis  memberikan  pengaruh  nyata terhadapat  total  leukosit  ikan  patin  siam (P<0,05).  Hasil  uji  lanjut  Newman-Keuls menunjukkan  bahwa  P0  berbeda  nyata terhadap  P1,  P2  dan  P3,  tetapi  P1  dan  P2 tidak memberikan perbedaan nyata.
Total  leukosit  tertinggi  yaitu  9,76  x 10 4 sel/mm 3 diperoleh  pada  P3  (2  mL/Kg pakan). Peningkatan  total  leukosit  pada  P0 terjadi  secara  tidak  signifikan,  hal  tersebut disebabkan  karena  tidak  ada  penambahan larutan biji mangga harumanis dalam pakan yang  diberikan.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  penambahan  larutan  biji  mangga dalam pakan dapat merangsang peningkatan  jumlah  leukosit  ikan  patin siam.  Peningkatan  jumlah  leukosit  ini diduga  karena  adanya  respons  dari  sistem pertahanan  tubuh  terhadap  masuknya senyawa asing yang berasal dari larutan biji mangga  harumanis.  Menurut  Utami et  al.,
(2013),  meningkatnya  jumlah  leukosit  di dalam  darah  menunjukkan  bahwa  leukosit berfungsi  sebagai  pertahanan  tubuh  dapat bereaksi dengan cepat terhadap benda asing atau  mikroba  yang  masuk  dalam  tubuh ikan.
Peningkatan  total  leukosit  yang terjadi  pada  P1,  P2,  P3  disebabkan  adanya kandungan senyawa
yang bersifat imunomodulator , yaitu senyawa yang dapat mengaktifkan dan meningkatkan sel pertahanan tubuh  (Pangestika et  al., 2012). Senyawa tersebut berupa flavonoid,
saponin dan asam askorbat. Menurut Angka et  al .  (2004) dalam Utami  (2009), flavonoid dapat mengaktifkan sistem limfa,
sehingga  dapat  meningkatkan  produksi  sel darah  putih  karena  masa  beredar  sel  darah putih  di  dalam  darah  sangat  singkat. Kandungan  lain  yang  dapat  meningkatkan sistem  imun  adalah  Saponin.  Menurut Francis et  al .  (2002) dalam Rosmalawati (2008),  saponin  mempunyai  kemampuan merangsang  sel  imun,  yaitu  meningkatkan pembentukan  antibodi  sehingga  dapat berperan  sebagai immunostimulator .  Asam askorbat  (vitamin  C)  juga  berperan  dalam peningkatan jumlah leukosit, dimana menurut  Sibagariang  (2010),  vitamin  C berfungsi sebagai antioksidan yang berperan dalam pemeliharaan dan pembentukkan sel-sel dalam tubuh termasuk  sel  darah. Peningkatan  total leukosit  yang  terjadi  mengindikasikan bahwa telah terbentuknya pertahanan tubuh non  spesifik  pada  ikan  patin  siam,  dimana hal  ini  akan  berperan  dalam  merespon ketika terjadi infeksi atau sebagai pencegahan terhadap serangan patogen.

## Leukokrit
Pengamatan  nilai  leukokrit  dilakukan untuk mengetahui persentase kadar leukosit dalam darah ikan patin siam. Rata-rata nilai leukokrit ikan patin siam dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Leukokrit (%) pada Ikan Patin Siam Selama Pemeliharaan
Perlakuan Total Leukokrit (%) Pengamatan Hari Ke 0 Pengamatan Hari Ke-60 P0 1,67 1,33±0,57 P1 1,33 1,67±0,57 P2 1,33 1,67±0,57 P3 1,67 1.67±0,57 Keterangan : P0 : 0 mL/Kg; P1 : 1,6 mL/Kg; P2 : 1,8 mL/Kg; P3: 2 mL/Kg .
Nilai leukokrit tertinggi ada pada P1, P2,  dan  P3  (1,67%),  namun  masih  dalam batas normal, Titrawani (2014) menyatakan bahwa  kisaran  normal  leukokrit  pada  ikan adalah 1-2 %. Anderson dan Siwicki (1995) menyatakan  bahwa  kadar  leukokrit  dapat digunakan  sebagai  dasar  untuk  mengetahui kondisi kesehatan ikan. Bila kadar leukokrit
rendah, kemungkinan terjadi infeksi kronis, kualitas nutrisi rendah, kekurangan vitamin serta  adanya  kontaminan,  bila  kadar leukokrit  tinggi,  disebabkan  terjadinya tahap awal infeksi dan stres.
Meningkatnya  kadar  leukokrit  pada P1,  P2,  dan  P3  disebabkan  karena  adanya penambahan larutan biji mangga harumanis
dalam  pakan  yang  diberikan.  Kandungan senyawa  flavonoid  dalam  biji  mangga harumanis mampu merangsang organ limfa untuk  meningkatkan  produksi  leukosit, sehingga  kadar  leukosit  dalam  darah meningkat.  Serta  senyawa  saponin  dan asam askorbat juga ikut berperan merangsang  sistem  imun  tubuh  ikan. Berbeda pada P0, dimana terjadi penurunan rata-rata  persentase  nilai  leukokrit.  Hal  ini disebabkan karena tidak adanya
penambahan larutan biji mangga harumanis dalam pakan yang diberikan.

## Diferensiasi Leukosit
Perhitungan diferensiasi leukosit dilakukan  untuk  melihat  perubahan  jumlah dari  jenis-jenis  leukosit  (limfosit,  neutrofil dan monosit) yang terjadi selama pemeliharaan. Hasil pengamatan
diferensiasi  leukosit  pada  ikan  patin  siam yang dipelihara dapat dilihat pada Tabel 3 .
Tabel 3. Diferensiasi Leukosit Ikan Patin Siam
Pengamatan Perlakuan Diferensiasi Leukosit (%) Limfosit Neutrofil Monosit Hari Ke- 0 P0 73,00 12,00 15,00 P1 71,33 13,00 15,67 P2 72,33 12,33 15,33 P3 72,00 13,00 15,00 Hari Ke-60 P0 75,00±1,00 a 11,33±1,53 b 13,67±1,15 b P1 77,67±0,57 b 10,33±0,57 ab 12,00±1,00 ab P2 81,00±1,00 c 8,00±1,00 a 11,00±1,00 a P3 82,00±1,00 c 7,67±1,52 a 10,33±0,58 a
Keterangan : P0 : 0 mL/Kg; P1 : 1,6 mL/Kg; P2 : 1,8 mL/Kg; P3: 2 mL/Kg.

## Limfosit
Persentase  limfosit  pada  60  hari pemeliharaan berkisar 75,00–82,00%. Persentase limfosit ini masih dalam kisaran normal  sesuai  pendapat  Preanger et  al . (2016)  jumlah  persentase  rata-rata  limfosit di  dalam  darah  berkisar  antara  71,12- 82,88%.  Hasil  uji  statistik  analisis  variasi (ANAVA), menunjukkan bahwa pemberian pakan  yang  ditambah  larutan  biji  mangga harumanis  memberikan  pengaruh  nyata terhadapat  persentase  limfosit  ikan  patin siam  (P<0,05).  Hasil  uji  lanjut  Newman- Keuls  menunjukkan  bahwa  P0  berbeda nyata terhadap P1, P2 dan P3, tetapi P2 dan P3 tidak memberikan perbedaan nyata.
Persentase limfosit tertinggi ada pada P3  (2  mL/Kg)  yaitu  82,00%,  sedangkan persentase  limfosit  terendah  ada  pada  P0 (tanpa  penambahan  larutan  biji  mangga harumanis). Peningkatan persentase limfosit  ini  disebabkan  karena  adanya kandungan senyawa flavonoid dalam larutan  biji  mangga  harumanis.  Flavonoid mampu memacu proliferasi limfosit
sehingga  terjadi  peningkatan  jumlah  sel limfosit.  Menurut  Asep  (2014),  flavonoid dapat  memacu proliferasi limfosit  dan meningkatkan jumlah sel T.
Meningkatnya  persentase  limfosit  ini juga  mengindikasi  adanya  patogen  atau benda  asing  di  perairan  yang  masuk  ke dalam  tubuh  ikan,  sehingga  flavonoid merangsang  aktivitas  sel  T  dan  sel  B. Limfosit  berfungsi  menyediakan  sistem pertahan  dari  serangan  benda-benda  asing yang  masuk  ke  dalam  tubuh,  jumlah limfosit  akan  mengalami  penurunan  jika sudah  terjadi  infeksi  patogen  (Alifuddin, 1999 dalam Firly et al ., 2015).

## Neutrofil
Persentase  neutrofil  pada  60  hari pemeliharaan berkisar 7,67-11,33%. Peningkatan  sel  neutrofil  dalam  darah diindikasikan  bahwa  terjadi  peradangan akibat  masuknya  agen  penyakit  maupun benda asing dalam tubuh (Brown, 2000).
Hasil  uji  statistik  analisis  variasi (ANAVA), menunjukkan bahwa pemberian
pakan  yang  ditambah  larutan  biji  mangga harumanis  memberikan  pengaruh  nyata terhadapat  persentase  neutrofil  ikan  patin siam  (P<0,05).  Hasil  uji  lanjut  Newman- Keuls  menunjukkan  bahwa  P0  berbeda nyata  terhadap  P2  dan  P3,  tetapi  tidak berbeda nyata terhadap P1.
Persentase  neutrofil  pada  P2  dan  P3 sudah berada pada kisaran jumlah neutrofil ikan  normal,  yaitu  6-8%  (Windarti,  2015). Hal ini menunjukan bahwa P2 (1,8 mL/Kg) dan  P3  (2  mL/Kg)  dapat  menghambat infeksi patogen, ditandai dengan penurunan persentase  neutrofil.  Penurunan  neutrofil terjadi  karena  mengalami autolisis setelah berhasil  menekan infeksi  dari  patogen  atau benda  asing  yang  masuk  ke  dalam  tubuh ikan (Jain, 1993 dalam Rustikawati, 2012).

## Monosit
Persentase  monosit  pada  60  hari pemeliharaan berkisar 10,33-13,67%.  Hasil uji  statistik  analisis  variasi  (ANAVA), menunjukkan bahwa pemberian pakan yang ditambah  larutan  biji  mangga  harumanis memberikan  pengaruh  nyata  terhadapat persentase monosit ikan patin siam (P<0,05).  Hasil  uji  lanjut  Newman-Keuls
menunjukkan  bahwa  P0  berbeda  nyata terhadap  P2  dan  P3,  tetapi  tidak  terhadap P1. Penurunan persentase monosit mengindikasikan  bahwa  monosit  telah berhasil mencegah terjadinya infeksi patogen.  Selain  itu,  keberadaan  senyawa flavonoid  dalam  biji  mangga  harumanis juga  membantu  kerja  monosit.  Flavonoid bersifat antiinflamasi dan antimikroba serta mampu  mendenaturasi  protein  pada  sel patogen,  sehingga  infeksi  patogen  tidak terjadi. Flavonoid berfungsi sebagai antimikroba , antivirus, dan immunostimulan (Naiborhu, 2002).
Menurut  Hartika  (2014),  penurunan  nilai monosit  disebabkan  karena  ikan  dalam kondisi  sehat  atau  kondisi  ikan  yang semakin  membaik  setelah  adanya  serangan dari  mikroba  atau  benda-benda  asing, karena monositnya aktif dalam memfagosit mikroba benda asing dan juga sistem imun tubuh  kuat  sehingga  dapat  mencegah terjadinya infeksi.

## Aktivitas Fagositosis
Hasil pengamatan aktivitas fagositosis  leukosit  ikan  patin  siam  selama penelitian dapat dilihat pada Tabel 4. Tabel 4. Aktivitas Fagositosis (%) pada Ikan Patin Siam
Perlakuan Aktivitas Fagositosis (%) Pengamatan Hari Ke-0 Pengamatan hari ke-60 P 0 21,33 24,67±1,53 a P 1 20,00 27,00±1,15 b P 2 20,67 30,67±1,00 c P 3 21,67 31,67±0,58 c
Keterangan : P0 : 0 mL/Kg; P1 : 1,6 mL/Kg; P2 : 1,8 mL/Kg; P3: 2 mL/Kg.
Berdasarkan Tabel 4, diketahui bahwa  persentase  aktivitas  fagositosis  ikan patin  siam  diawal  pemeliharaan  berkisar 20,00-21,67% dan pada 60 hari pemeliharaan persentase
aktivitas fagositosis  ikan  patin  siam  berkisar  24,67– 31,67%.  Hasil  uji  statistik  analisis  variasi (ANAVA), menunjukkan bahwa pemberian pakan  yang  ditambah  larutan  biji  mangga harumanis  memberikan  pengaruh  nyata terhadapat  persentase  aktivitas  fagositosis ikan  patin  siam  (P<0,05).  Hasil  uji  lanjut
Newman-Keuls  menunjukkan  bahwa  P0 berbeda nyata terhadap P1,   P2  dan  P3, namun  pada  P2  dan  P3  tidak  menunjukan perbedaan nyata.
Tingginya  persentase  nilai  aktivitas fagositosis  menunjukkan  bahwa  telah terbentuknya sistem pertahanan tubuh pada ikan  patin  siam.  Menurut  Utami et  al. (2013),  meningkatnya  aktivitas  sel  fagosit dari  darah  menunjukkan  bahwa  sistem kekebalan dari ikan juga meningkat. Hal ini karena senyawa flavonoid berpotensi
bekerja  terhadap  limfokin  yang  dihasilkan oleh  sel  T  sehingga  akan  merangsang  sel- sel  fagosit  untuk  melakukan  respon fagositosis  (Nugroho,  2012).  Keberadaan flavonoid semakin memudahkan sel fagosit untuk melakukan fungsinya dalam memfagositosis antigen karena  adanya fungsi  opsonin.  Opsonin  adalah  zat  yang
berfungsi  untuk  meningkatkan  aktivitas fagositosis  (Jawetz et  al. ,  2005 dalam Pangestika et al., 2012).

## Pertumbuhan Bobot Mutlak
Rata-rata  nilai  pertumbuhan  bobot mutlak  ikan  patin  siam  dapat  dilihat  pada Tabel 5.
Tabel 5. Pertumbuhan Bobot Mutlak Ikan Patin Siam Perlakuan Pengamatan Hari Ke-0 (g) Pengamatan Hari Ke-60 (g) P0 4,57 18,29±.0,84 a P1 4,51 21,82±1.07 b P2 4,94 23,12±2.10 b P3 4,77 37,70±1.50 c
Keterangan : P0 : 0 mL/Kg; P1 : 1,6 mL/Kg; P2 : 1,8 mL/Kg; P3: 2 mL/Kg .
Berdasarkan Tabel 5 diketahui bahwa nilai rata-rata pertumbuhan bobot ikan patin siam  yang  dipelihara  dengan  pemberian pakan  yang  ditambah  larutan  biji  mangga harumanis  setelah  60  hari  berkisar  22,86  – 42,47  g/ekor.  Berdasarkan  uji  statistik variasi  (ANAVA),  menunjukkan  bahwa pemberian  pakan  dengan  penambahan larutan biji mangga harumanis berpengaruh nyata  terhadap  pertumbuhan  bobot  mutlak ikan  patin  siam  (P<0,05).  Hasil  uji  lanjut Newman-Keuls diketahui bahwa P3 berbeda  nyata  berhadap  P0,  P1,  dan  P2. Namun  pada  P1  dan  P2,  tidak  menunjukan perbedaan nyata.
Pertumbuhan bobot mutlak ikan patin siam yang diberi pakan dengan
penambahan larutan biji mangga harumanis pada  15  hari  pertama  masih  relatif  sama dan  tidak  menunjukan  perbedaan  yang signifikan.  Pada  pemeliharaan  hari  ke  30, pertumbuhan bobot mutlak ikan patin siam mulai menunjukan perbedaan yang signifikan,  terutama  pada  perlakuan  yang diberi  penambahan  larutan  biji  mangga harumanis  pada  pakan  (P1,  P2,  dan  P3). Pada  pemeliharaan  hari  ke  45,  perbedaan yang signifikan semakin terlihat pada P3 (2 mL/Kg pakan) yang menunjukan perbedaan pertumbuhan  lebih  cepat  dari  P0,  P1,  dan P2,  hal  ini  terus  berlanjut  hingga  akhir pemeliharaan.
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 HARI KE-0 HARI KE-15 HARI KE-30 HARI KE-45 HARI KE-60 P er tu m b u h an B o b o t (g) Hari Ke- P0 P1 P2 P3
Berdasarkan  Tabel  4  dan  Gambar  1 dapat  dilihat  bahwa  Pemberian  larutan  biji mangga  harumanis  dalam  pakan  diketahui dapat  meningkatkan  pertumbuhan  bobot mutlak  ikan  patin  siam.  Diketahui  bahwa pertumbuhan bobot mutlak tertinggi adalah 37,70  g/ekor  terjadi  pada  P3,  hal  ini disebabkan  oleh  kandungan  biji  mangga harumanis berupa vitamin C juga memberikan pengaruh terhadap
pertumbuhan bobot mutlak ikan patin siam, dimana  vitamin  C  berperan  sebagai katalisator  proses  metabolisme  dalam tubuh.  Nutrisi  yang  diserap  oleh  tubuh haruslah  dimetabolisme  terlebih  dahulu.
Hal ini sesuai dengan pernyataan Listianingrum  (2015)  bahwa  vitamin  C merupakan senyawa organik yang berperan dalam  proses  metabolisme  makanan  dan fisiologis  ikan,  meskipun  bukan  sebagai sumber tenaga tetapi vitamin C dibutuhkan sebagai  katalisator  terjadinya  metabolisme di dalam tubuh.

## Keluluhidupan Ikan
Kelulushidupan  ikan  patin  siam  yang dipelihara  selama  60  hari  dengan  diberi pakan  yang  ditambah  larutan  biji  mangga harumanis dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel 6. Rata-rata Nilai Kelulushidupan Ikan Patin Siam ( Pangasius hypophthalmus ) Perlakuan Pengamatan Hari Ke-0 (%) Pengamatan Hari Ke-60 (%) P0 100 63,33 P1 100 83,33 P2 100 90,67 P3 100 95,33 Keterangan : P0 : 0 mL/Kg; P1 : 1,6 mL/Kg; P2 : 1,8 mL/Kg; P3: 2 mL/Kg Berdasarkan Tabel 6, diketahui bahwa kelulushidupan ikan patin siam yang diberi  pakan  mengandung  larutan  biji mangga  harumanis  (P1,  P2,  dan  P3)  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  yang  tidak diberi perlakuan (P0). Rendahnya
persentase kelulushidupan pada P0
diperkirakan  salah  satunya  karena  proses pengambilan darah yang menyebabkan luka pada  tubuh  ikan  patin  siam  sehingga meningkatkan potensi terjadi infeksi sekunder oleh patogen yang ada di perairan. Berbeda  pada  P1,  P2,  dan  P3  yang memiliki  sistem  pertahanan  tubuh  yang lebih  baik.  Hal  ini  dikerenakan  adanya senyawa  flavonoid,  tanin  dan  saponin dalam  biji  mangga  harumanis,  yang  mana senyawa-senyawa tersebut bersifat antibakteri , antiinflamasi ,
dan imunostimulan . Kandungan fitokimia dalam  biji  mangga  harumanis  diantaranya terdapat  tanin,  flavonoid,  dan  saponin sehingga  menunjukkan  adanya  efektivitas biji mangga harumanis sebagai bakterisidal (Prihandani et al ., 2016).
Vitamin  C  yang  terkandung  dalam biji  mangga  harumanis  berperan  dalam mempercepat  proses  penyembuhan  luka pada  ikan.  Menurut  Rachimi  (2014) vitamin  C  berperan  membantu  dalam pembentukan  kolagen  dan  mempercepat proses  penyembuhan  luka  pada  ikan. Tingginya nilai kelulushidupan pada perlakuan  P 3, hal  ini  dikarenakan  adanya penambahan larutan biji mangga harumanis dalam  pakan  yang  mampu  menghambat serangan  benda-benda  asing  atau  patogen yang ada di perairan dan dapat meningkatkan sistem pertahan tubuh ikan.

## Kualitas Air
Air  sebagai  media  hidup  ikan memegang peranan penting dalam kelangsungan  hidup  organisme  yang  ada didalamnya, termasuk ikan. Sehingga perlu diperhatikan  beberapa  parameter  kualitas air. Hasil pengukuran parameter kualitas air ikan patin siam selama pemeliharaan dapat dilihat pada Tabel 7.
Tabel 7. Kisaran Parameter Kualitas Air Parameter Kisaran Parameter Kualitas Air Awal Akhir Baku Mutu SNI Suhu ( o C) 27-30 28-30 25 – 30 Ph 5,2-6,5 6,2-7 6,5 – 8,5 DO (mg/L) 3,4-3,8 3,6-3,9 > 4 NH 3 (ppm) 0,017-0,019 0,020-0,024 < 0,01 Keterangan : SNI 01-6483.5-2002 Ikan Patin Siam ( Pangasius hypophthalmus )

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan bahwa ada pengaruh
penambahan larutan biji mangga harumanis  pada  pakan  terhadap  gambaran leukosit ikan patin siam ( P. hypophthalmus) dilihat dari adanya peningkatan total leukosit, leukokrit, diferensiasi leukosit, dan aktivitas fagositosis. Dosis terbaik terdapat  pada P3 (2  mL/Kg)  dengan  rata-rata  total  leukosit 9,76  x10 4 sel/mm 3 ,  kadar  leukokrit  sebesar 1,67%,  limfosit  82,00%,  neutrofil  7,67%,
monosit  10,33%,  aktivitas  fagositosis 31,67%, pertumbuhan bobot mutlak sebesar 37.70 g, dan kelangsungan hidup 95%.

## Saran
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disarankan  perlunya  dilakukan  penelitian lanjutan untuk melihat gambaran histopatologi ikan patin siam ( P. hypopthalmus )  yang  diberi  pakan  yang mengandung larutan biji mangga harumanis ( M. indica L.).

## DAFTAR PUSTAKA
1. Anderson,  D.  P.,  and  A.  K.  Siwicki.  (1993).  Basic  Hematology  and  Serology  for  Fish Health.  Programs.  Second  Symposium  on  Diseases  in  Asian  Aquaculture  Aquatic Animal Health and the Enviroment. Phuket, Thailand, Volume : 2, Pages : 185-202.
2. Asep,  E.  S.,  S.  A.  Sumiwi.,  M.  I.  Barliana.,  A.  D.  Aryanti.  (2014).  Aktivitas Imunomodulator Ekstrak Etanol Daun Tempuyung ( Sonchus arvensis Linn.). Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology , Volume : 1(2), Pages : 65-72.
3. Brown  K.  M.  T.  (2000). Applied  fish  pharmacology .  Kluwer  Academic  Publisher,  The Netherland.
4. Firly, W. R., G. Mahasri., L. Sumartiwi. (2015). Pengaruh Pemberian Ekstrak Sargassum sp.  dengan  Pelarut  Metanol  pada  Pakan  Terhadap  Jumlah  Erittrosit  dan  Diferensiasi Leukosit Ikan  Lele Dumbo ( Clarias gariepinus ). Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan, Volume : 7(2), Pages : 213-218.
5. Hartika,  R.,  Mustahal.,  A.  N.  Putra.  (2014).    Gambaran  Darah  Ikan  Nila  ( Oreochromis niloticus )  dengan  Penambahan  Dosis  Probiotik  yang  Berbeda  dalam  Pakan.  Jurnal Perikanan dan Kelautan, Volume: 4 (4), Pages : 256-267.
6. Handayani,  I.,  E.  Nofyan,  M.  Wijayanti.  (2014).  Optimasi  tingkat  pemberian  pakan buatan  terhadap  pertumbuhan  dan  kelansungan  hidup  ikan  patin  jambal  ( Pangasius djambal). Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia, Volume : 2 (2), Pages : 175-187.
7. Listianingrum,  N.  (2015).  Pengaruh  Penambahan  Vitamin  C  dalam  Pakan  Terhadap Gambaran  Darah  Ikan  Gurami  ( Osphronemus  gouramy). Skripsi . Universitas Muhammadiah Purwokerto, Purwokerto.
8. Lukistyowati,  I.,  dan  Syawal,  H.  (2013).  Potensi  Pakan  yang  Mengandung  Sambiloto ( Andrographis  paniculata )  dan  Daun  Jambu  Biji  ( Psidium  guajava )  untuk
Menanggulangi  Bakteri Aeromonas  hydrophila pada  Ikan  Baung  ( Mystus  nemurus ). Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia, Volume : 1(2), Pages :135-147.
9. Middleton  E.  C,  Kandaswami  C,  Theoharides  TC.  (2000).  The  Effects  of  Plant Flavonoids  on  Mammalian  Cells:  Implications  for  Inflammation,  Heart  Disease,  and Cancer. Pharmacological Reviews, Volume : 52, Pages : 673-751.
10. Naiborhu  P.  E.  (2002).  Ektraksi  dan  Manfaat  Ekstrak  Mangrove  ( Sonneratiaalba dan Sonneratiacaseolaris )  sebagai  Bahan  Alami  Antibakterial  pada  Patogen  Udang  Windu, Vibrio harveyi. Tesis. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
11. Nugroho  Y.  A.  (2012).  Efek  Pemberian  Kombinasi  Buah  Sirih  ( Piper  betle L)  Fruit, Daun  Miyana  ( Plectranthus  secutellariodes (L.)  R.BR)  Leaf,  Madu  dan  Kuning  Telur Terhadap  Peningkatan  Aktivitas  dan  Kapasitas  Fagosit  Sel  Magrofag.  Media  Litbang Kesehatan, Volume 22 (1), Pages : 1-5.
12. Pangestika,  D.  M,  Erna.  Mashoedi,  Imam  D.  (2012).  Pengaruh  Pemberian  Kunyit (Curcuma  domestica  Val.) Terhadap  Aktivitas  Fagositosis  Makrofag  Psada  Mencit BALB/C  Yang  Diinokulasi  Bakteri Listeria  Monocytogenes. Skripsi.  Universitas  Islam Sultan Agung Semarang, Semarang.
13. Preanger,  C.,  I.  H.  Utama.,  I.  M.  Kardena.  (2016).  Gambaran  Ulas  Darah  Ikan  Lele  di Denpasar  Bali.  Fakultas  Kedokteran  Hewan.  Universitas  Udayana.  Indonesia  Medicus Veterinus, Volume: 5 (2), Pages : 96-103.
14. Prihandani,  S.  S,  Noor.  M.  S,  Adriani,  Masniari.  P.  (2016).  Efektivitas  Ekstrak  Biji Mangga  Harumanis terhadap Staphylococcus aureus , Bacillus subtilis , Shigella sp ., dan Escherichia coli . Jurnal Veteriner, Volume :17 (1), Pages : 45-50.
15. Priyanto  R.  A.  (2012).  Aktivitas  Antioksi  dan  Komponen  Bioaktif  pada  Buah  Bakau ( Rhizophora mucronata ). Skripsi. Institut  Pertanian Bogor, Bogor.
16. Rachmi., Hambali., Sunarto. (2014). Pengaruh Vitamin C pada Pakan Buatan Terhadap Pertumbuhan  dan  Kelangsungan  Hidup  Benih  Ikan  Tengadak  ( Barbonymus schwanenfeldii). Jurnal Ruaya, Volume : 3 (1), Pages :  9-16.
17. Rustikawati, I. (2012). Efektifitas Esktrak Sargassum sp. Terhadap Diferensiasi Leukosit Ikan  Nila  ( Orechromis  niloticus )  yang  Diinfeksi S.  Iniae .  Jurnal  Akuatika,  Volume  :  3 (2), Pages : 123-134.
18. Rosmalawati,  N.  (2008).  Pengaruh  Penggunaan  Tepung  Daun  Sembung  ( Blumea balsamifera )  Dalam  Ransum  Terhadap  Profil  Ayam  Broiler  Periode  Finisher.  Skripsi. Institute Pertanian Bogor, Bogor.
19. Royan,  F.  (2014).  Pengaruh  Salinitas  yang  Berbeda  terhadap  Profil  Darah  Ikan  Nila ( Oreochromis niloticus ). Journal of Aquaculture Management and Technology. Volume : 3(2), Pages : 109-117.
20. Sibagariang, E., E, Julianie., Rismalinda., Nurzannah., S. (2010). Buku Saku Metodologi Penelitian untuk Mahasiswa Diploma Kesehatan . Jakarta: Trans Info Media.
21. Sukenda,  Jamal  S.  L,  Wahjuningrum  D,  Hasan  A.  (2008).  Penggunaan  Kitosan  Untuk Pencegahan  Infeksi Aeromonas  hydrophila Pada  Ikan  Lele  Dumbo Clarias  sp . Departemen  Budidaya  Perairan.  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan.  IPB.  Bogor. Jurnal Akuakultur Indonesia. Volume : 7(2), Pages : 159-169.
22. SNI  01-6483.5-2002  Ikan  Patin  Siam  ( Pangasius  hypophthalmus )  Bagian  5:  Produksi kelas pembesaran di kolam.
23. Utami  W.  P.  (2009).  Efektifitas  Ekstrak  Paci  Paci  ( Leucas  lavandulaefolia) Yang Diberikan Lewat Pakan Untuk Pencegahan dan Pengobatan Penyakit Motile Aeromonas Septicemia Pada Ikan Lele Dumbo Clarias sp. Skripsi. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
24. Utami,  D.  T.,  S.  B.  Prayitno.,  S.  Hastuti,  dan  Santika.  (2013).  Gambaran  Parameter Hematologis  pada  Ikan  Nila  ( Oreochromins  niloticus )  yang  Diberi  Vaksin  DNA Streptococcus  iniae dengan  Dosis  Berbeda.  Journal  of  Aquaculture  Management  and Technology, Volume : 2 (4), Pages : 7-20.
25. Windarti., C. Pulungan., N.A. Pamungkas., M.S. Riauwaty., N. Asiah., dan B. Heltonika . (2015). Buku Ajar Fisiologi Hewan Air . Ur Prees : Pekanbaru.
26. Widya,  Deasy.  (2003).  Proses  Produksi  dan  Karakteristik  Tepung  Biji  Mangga  Jenis Arumanis ( Mangifera indica L. ). Skripsi. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
27. Zaminati  NA.  (2017).  Pengaruh  Kitosan  dalam  Meningkatkan  Respon  Imun  Non- Spesifik  pada  Ikan  Patin  Siam Pangasius  hypophthalmus yang  Diinfeksi  Bakteri Aeromonas hydrophila . Tesis . . Universitas Muhammadiyah Purwokerto, Purwokerto.
28. Zulvia,  Faridatul.  M.  Aufia,  W.  Masitha,  N.  (2017).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol  Biji  Mangga  ( Mangifera  indica L.)  Terhadap Propionibacterium  acnes .  Jurnal Pharmasipha , Volume : 1(1), Pages : 31-35.