https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.4.193

## Potensi Ekstrak Makroalga Watercress sebagai Anti Bakteri Aeromonas hydrophila secara in vitro
Potency of Watercress Extract as Anti-Bacterial against Aeromonas hydrophila in vitro
Qurrota A’yunin 1* , Dinarti 2 , Nurhabibah 1 , Budianto 1
1 Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya, Malang.
2 Laboratorium Mikrobiologi, Balai Pengujian Kesehatan Ikan dan Lingkungan, Serang. *Korespondensi: qurrota_ayunin@ub.ac.id

## ABSTRAK
Infeksi penyakit menjadi satu masalah yang masih sering timbul pada budidaya ikan patin. Salah satu penyakit yang sering timbul dalam budidaya ikan patin adalah penyakit Motile Aeromonas Septicemia (MAS) yang dapat menginfeksi kelompok Catfish dengan tingkat  kematian  yang  tinggi.  Ekstrak  makroalga watercress diduga  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri patogen yang menginfeksi ikan patin. Bakteri yang menginfeksi ikan patin  dikultur  dan  didentifaksi  secara  biokimia.  Pengujian  ekstrak  dilakukan  melalui  uji daya  hambat  dengan  dosis  yang  berbeda  untuk  mengetahui  aktifitas  ekstrak  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Berdasarkan  hasil  identifikasi  biokimia,  didapatkan bakteri patogen yang menginfeksi ikan patin yaitu Aeromonas hydrophila . Hasil uji daya hambat  menunjukkan  dosis  70  ppm  memiliki  respon  hambatan  tertinggi  dibandingkan dengan  dosis  lainnya.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  makroalga watercress dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen  sehingga  natinya  dapat  digunakan  sebagai alternatif obat dalam mengatasi infeksi bakteri Aeromonas hydrophila pada ikan.
Kata kunci: daya hambat; ekstrak watercress ; makroalga; mikroba

## ABSTRACT
Disease infection is a problem in catfish farming. The diseases that often arise in catfish  farming  is  Motile  Aeromonas  Septicemia  (MAS).  It  can  infect  the  catfish  group with a high mortality rate. Watercress extract is thought to inhibit the growth of pathogenic bacteria  that  infect  catfish.  Bacteria  that  infect  catfish  are  cultured  and  biochemically identified. The extracts test was carried out through an inhibition tests with different doses to determine the activity of extracts in inhibiting bacterial growth. Based on the results of biochemical  identification,  the  pathogenic  bacteria  that  infect  catfish  are Aeromonas hydrophila . The results of the inhibition test showed that a dose of 70 ppm had the highest inhibitory  response  compared  to  other  doses.  This  indicates  that  watercress  macroalgae extract  can  inhibit  the  growth  of  pathogenic  bacteria  so  it  can  be  used  as  an  alternative medicine to treat Aeromonas hydrophila infection in fish.
Keywords: inhibition; watercress extract; macroalgae; microbes
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.4.193

## PENDAHULUAN
Masih rendahnya produksi ikan patin  oleh  pembudidaya  lokal  salah satunya  disebabkan  oleh  tingginya angka kematian ikan pada saat proses budidaya.  Hal  tersebut  juga  dialami oleh  pembudidaya  ikan  patin  yang ada  di  Sidoarjo  yang  mengalami  ga- gal  panen  akibat  adanya  kematian masal  pada  ikan  patin  yang  dibuda- yakan.  Berdasarkan  laporan  peneliti- an sebelumnya A’yunin et al ., (2019) menunjukkan  bahwa  agen  penyebab kematian pada ikan patin di Sidoarjo adalah  adanya  infeksi  bakteri Aero- monas hydrophila .
Infeksi  penyakit  merupakan salah  satu  ancaman  di  bidang  keta- hanan pangan dalam budidaya perikanan. Aeromonas  hydrophila merupakan  bakteri  yang  menyebab- kan  wabah  penyakit Motile  Aeromo- nas  Septicemia (MAS)  yang  dapat menginfeksi  kelompok  Catfish  (Ba- umgartner et  al .,  2017)  dengan  ting- kat  kematian  yang  tinggi  mencapai 100% hanya dalam waktu singkat (6- 14 hari).
Tanaman  termasuk  juga  ma- krolaga  dikenal  memiliki  kemam- puan  menghasilkan  metabolit  sekun- der  yang  tinggi  dan  memiliki  ke- mampuan  mengobati  penyakit.  Me- nurut Klimek-Szczykutowicz , et al .,
(2020)  bahwa watercress termasuk tanaman  air  yang  mengandung  se- nyawa isothiocyanates yang berperan sebagai  anti-oksidan,  anti-kanker, anti-bakteri dan anti-inflamatory.
Metode  penanggulangan  pe- nyakit pada ikan air tawar yang sering digunakan  oleh  pembudidaya  adalah dengan menggunakan zat ki-mia atau antibiotika.
Pada umumnya pembudidaya sering melakukan pem- berian  berbagai  macam  antibiotik seperti ampicillin,  chloramphenicol, tetracycline dan disinfektan pada ikan
yang terserang penyakit (A’yu-nin et al .,  2019).  Akan  tetapi,  peng-gunaan antibiotik dapat menimbul-kan dampak negatif bagi lingku-ngan dan konsumen, diantaranya yaitu
timbulnya  resistensi  bakteri  patogen dan  adanya  residu  antibiotik.  Peng- gunaan antibiotik  secara  terus  mene- rus  tentunya  dapat  membahasayakan lingkungan  dan  juga  kesehatan  baik ikan  maupun  manusia  yang  meng- konsumsinya  sehingga  perlu  adanya obat  alternative  pengganti  antibiotik yang  memiliki  dampak  positif  dan ramah lingkungan.

## METODE PENELITIAN

## Ekstraksi Makroalga Watercress
Ekstraksi  sampel  dilakukan dengan  metode  maserasi  (perenda- man). Watercress yang  telah  dike- ringkan dan berbentuk serbuk ditimbang  sebanyak  150  gram.  Satu bagian  serbuk watercress dimasuk- kan  ke  dalam  maserator,  ditambah- kan  2  bagian  pelarut  metanol. Maserasi  dilakukan  selama  24  jam, kemudian  ektrak  disaring  dan  ganti dengan pelarut yang baru dan diulang sebanyak  3  kali  (Khoiriyah et  al .,
2014). Ektsrak yang diperoleh diuapkan dengan menggunakan rota-
ry evaporator hingga diperoleh pasta dan  selanjutnya  difraksinasi  dengan menggunakan  corong  pisah  dengan pelarut Etil asetat dan air (Putri et al ., 2016).  Hasil  fraksinasi  berupa  fraksi etil  asetat  dan  fraksi  air  diuapkan kembali  hingga  diperoleh  pasta  dan disimpan  dalam  kulkas  hingga  digu- nakan dalam uji selanjutnya.

## Identifikasi Bakteri
Proses  kegiatan  identifikasi bakteri  pada  penelitian  ini  dilakukan dengan  uji  morfologi  dan  uji  bioki- mia untuk mengetahui bentuk bentuk morfologi dan karakteristik dari sifat
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.4.193
biokimia  yang  dimilikinya.  Bakteri diinokulasi  dari  organ  target  pada ikan  yang  sakit  yaitu  pada  organ ginjal.  Ikan  yang  sakit  diambil  dari pembudidaya  ikan  yang  berada  di daerah Sidoarjo, Jawa Timur.

## Kultur Bakteri
TSB  ditimbang  sebanyak  30 gram  kemudian  dilarutkan  dalam 1000 ml aquades di dalam erlemeyer. Kemudian  erlenmeyer  ditutup  de- ngan  kapas  dan  aluminium  foil.  Me- dia  TSB  dididihkan  di  atas hotplate sambil  hingga  media  media  larut. Setelah  itu  media  disterilkan  dalam autoclave pada suhu 121 o C, tekanan 1 atm selama 15 menit (Huyyirnah dan Fitriyani, 2020).
Regenerasi  bakteri  uji  dilaku- kan  dengan  menginokulasikan  satu ose stok bakteri ke dalam media agar. Inkubasi  dilakukan  pada  suhu  25 o C selama  24  jam.  Selanjutnya  bakteri diinokulasikan  ke  dalam  media  cair dan di inkubasikan selama pada suhu 25 o C hingga mencapai ke-padatan 10 6 atau  setara  dengan  stan-dar  Mc Farland (Sinurat et al ., 2019).

## Uji Daya Hambat
Sebanyak 100 µL bakteri ini di inokulasikan  pada  media  agar  dan dinkubasi  selama  30  menit,  kemudi- an  cakram  uji  diletakkan  di  permu- kaan  agar.  Uji in  vitro dilakukan dengan  mengacu  Volk  and  Wheeler (1988)  yaitu  merendam  kertas  cak- ram dalam larutan ekstrak watercress selama  15  menit,  kemudian  diletak- kan di atas permukaan media bakteri dengan  pinset  dan  ditekan  sedikit kemudian  diinkubasikan  selama  24 jam  pada  suhu  25 o C  dalam  inku- bator.  Pembacaan  zona  hambat  dila- kukan  setelah  24  jam  dari  waktu inkubasi,  diameter  zona  hambatan
yang  terbentuk  kemudian  diukur dengan jangka sorong.
Uji  diameter  zona  hambatan terhadap  antibiotik  juga  dilakukan untuk  membandingkan  antara  uji efektivitas  senyawa  bioaktif water- cress dengan antibiotik. Uji diameter zona  hambatan  yakni  dengan  meng- gunakan  antiobiotik Oxytetracycline 1–8  μg/ml  (Juntarut et  al .,  2018). Cakram antiobiotik diletakkan di atas permukaan  media  bakteri  dengan pinset  dan  ditekan  sedikit  kemudian diinkubasikan  selama  24  jam  pada suhu  25 o C  dalam  inkubator.  Pemba- caan  zona  hambat  dilakukan  setelah 24 jam dari waktu inkubasi, diameter zona hambatan yang terbentuk kemudian  diukur  dengan  jangka sorong.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstrak Makroalga Watercress
Ekstrak  yang  dihasilkan  dari proses  maserasi  ini  sebanyak  28,63 gram dengan rendemen ekstrak sebe- sar  14,32%.  Rendemen  dipengaruhi oleh  kadar  air  yang  terkandung  da- lam simplisia. Semakin rendah kadar air,  maka  rendemen  yang  dihasilkan semakin  besar  nilainya  (Rahman et al .,  2017).  Ekstrak  methanol  yang dihasilkan  kemudian  difraksinasi  de- ngan  metode  partisi  cair  –  cair. Metode ini merupakan metode pemi- sahan  senyawa  kimia  berdasarkan tingkat  kepolaran  senyawa  yang terkandung  dalam  ekstrak  dengan perbandigan  konsentrasi  yang  tetap (Gu, 2000).

## Identifikasi Bakteri
Hasil pewarnaan berwarna me- rah maka menunjukkan bahwa bakte- ri  tersebut  adalah  gram  negative (Fajriani et al., 2018). Selain itu hasil uji gram menggunakan KOH 3% juga
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.4.193
menunjukkan  hasil  negative  yang ditandai  dengan  terbentuknya  lendir pada object  glass yang  di-campur dengan  bakteri.  Menurut  Waluyo (2005),  adanya  lendir  dise-babkan karena  komponen  peptidog-likan yang  tipis  pada  sel  gram  negatif sehingga  menyebabkan  sel  mudah pecah.  Tahapan  identifikasi  selanjut- nya yaitu melalui uji biokimia.  Hasil identifikasi terlihat pada tabel 1.

## Tabel 1.  Identifikasi Bakteri
Parameter Kontrol Sampel Gram: Pewarnaan KOH 3% - - - - Katalase + + Oksidase + + Motilitas + + Indol + + Ornithine - - Citrate O/F + F + F Urea - - MR + + VP + + Lysine Decarboxylas e + + Glukosa + + Maltose + + Laktosa + + Sukrosa + +
Hasil
Identifikasi Aeromona s hydrophil a Aeromona s hydrophil a
Pada  uji  oksidase,  bakteri positif  oksidasi  menunjukkan  peru- bahan  menjadi  warna  hitam  pada waktu  2  menit  karena  adanya  reaksi sitokrom oksidase yang terdapat pada bakteri A. Hydrophila (Mus-takim et al .,  2014).  Sedangkan  pada  uji  indol menunjukkan adanya perubahan
warna menjadi merah seperti membentuk  cincin  pada  permukaan
agar  miring  yang  telah  diinokulasi bakteri  didalamnya  keti-ka  diberikan pereaksi  indol  yang  menandakan reaksi indol positif (Sari et al ., 2019).
Uji  Katalase  dilakukan  guna mengetahui adanya katalase yang ada pada  bakteri.  Katalase  meru-pakan enzim  yang  digunakan  oleh  mikroba untuk  menguraikan  H 2 O 2 menjadi H 2 O  dan  O 2 .  Hasil  positif  terlihat adanya pembentukan gelem-bung gas di  atas  koloni  sedangkan  negatif berarti  tidak  terjadi  pem-bentukan gelembung  pada  sekitar  area  koloni. Menurut Mustakim et al ., (2014), hal tersebut  disebabkan  karena  larutan yang  diberikan  dapat  membentuk adanya gelembung di sekitar
pertumbuhan  koloni  bakteri,  dan Lubis et  al .,  (2014)  menyatakan bahwa  hydrogen  peroksida  bersifat toksik  terhadap  sel  karena  mengin- aktifasikan enzim dalam sel.
Uji VP dilakukan dengan meng- inokulasikan bakteri pada media MR- VP, lalu diinkubasi dan ditambahkan dengan larutan naftol dan KOH 40% dan  didiamkan  bebe-rapa  menit. Menurut Sari et al ., (2019), indikator positif yaitu dengan adanya perubahan  warna  merah  mu-da sampai  tua  dan  indikator  negatif  VP adalah  tidak  terjadinya  peruba-han warna yang berarti pada media.

## Daya Hambat Ektstrak Watercress
Perlakuan dosis pada uji cakram  di  penelitian  ini  menggu- nakan dosis 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80,  90,  100  ppm,  kontrol  positif  dan kontrol  negative.  Hasil  gambar  uji daya hambat ekstrak terhadap bakteri A.  hydrophila setelah  pembe-rian ekstrak watercress disajikan  pada Gambar 1.
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.4.193
Gambar  1.  Uji  daya  hambat  ekstrak watercress (9  mm)  dengan pelarut methanol.
Hasil pengamatan yang dilaku- kan  selama  inkubasi  24  jam  dalam inkubator  dengan  suhu  32 o C  dila- kukan  pengukuran  menggunakan jangka  sorong  (mm),  selanjutnya didapatkan  hasil  rata-rata  diameter zona  bening  perlakuan  ekstrak wa- tercress dengan  hasil  disajikan  pada gambar 2.
Gambar  2. Hasil  daya  hambat  ekstrak watercress dengan  dosis yang berbeda
Berdasarkan  hasil  uji  daya hambat  pada  dosis  70  ppm  terlihat daya  hambat  yang  paling  tinggi diantara  dosis  perlakukan  yang  lain. Ekstrak makroalga watercress memi- liki  senyawa  aktif  alkaloid  yang  da- pat menghambat pertumbuhan bakte- ri  melalui  mekanisme  kerja  dengan cara  berinteraksi  dengan  dinding  sel yang  menyebabkan  kerusakan  din- ding sel. Alkaloid juga dapat berika- tan  dengan  DNA  bakteri  yang  me-
nyebabkan kegagalan sintesis protein
(Putri et  al ., 2016).  Dikutip  dari Barodah et  al .,  (2016),  kandungan aktif  saponin  merupakan  senyawa yang  dapat  membentuk  busa  dan merusak  membran  sel  karena  bisa membentuk ikatan dengan lipida dari membran  sel.  Saponin  bekerja  seba- gai  antibakteri  dengan  mengganggu stabilitas  membran  sel  bakteri  se- hingga menyebabkan sel bakteri lisis atau  senyawa  saponin  akan  merusak membran  sitoplasma  dan  membunuh sel  membran  sitoplasma.  Pada  golo- ngan kandungan aktif fenol memiliki mekanisme  kerja  dengan  cara  me- nembus  dan  merusak  dinding  sel kemudian  mengendapkan  protein  se- hingga  menjadi  racun  dalam  proto- plasma  sel  bakteri.  Fenol  dapat  me- nyebabkan  cairan  sel  bakteri  keluar (lisis),  maka  senyawa  bahan  aktif masuk  ke  dalam  sel  bakteri,  meng- akibatkan  terjadi  kebocoran  metabo- lit esensial yang dibentuk oleh bakteri serta merusak permeabilitas membran sel (Nopandi et al ., 2019).

## KESIMPULAN
Bakteri  patogen  yang  mengin- feksi  ikan  patin  yaitu Aeromonas hydrophila . Ekstrak  makroalga wa- tercress dapat  menghambat  pertum- buhan bakteri Aeromonas hydrophila dan  ekstrak  dengan  dosis  70  ppm menunjukkan  daya  hambat  tertinggi jika  dibandingkan  dosis  lainnya.  Hal ini  menunjukkan  potensi watercress secara in vitro yang dapat mengham- bat pertumbuhan bakteri patogen dan dapat  digunakan  sebagai  alternatif obat dalam mengatasi infeksi bakte-ri pada ikan.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  kepada  Universi- tas  Brawijaya  yang  telah  memberi-
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.4.193
kan  Hibah  Penelitian  dengan  skema Hibah  Peneliti  Pemula  (HPP)  tahun 2021.

## DAFTAR PUSTAKA
A’yunin,  Q.,  Kartikaningsih,  H., Andayani,  S.,  Surantika,  M., Fani,  F.,  Soeprijanto,  A.,  & Nasrullah,  B.  A.  (2019).  Efi- kasi  Oxytetracycline  terha- dap  Kesehatan  Ikan  Lele ( Clarias  sp .)  yang  Diinfeksi Bakteri  Edwardsiella  tarda.
Journal  of  Fisheries  and Marine  Research , 3 (1),  105-
110.
Barodah,  L.  L.,  Sumardianto,  S.,  & Susanto.  (2016).  Efektivitas Serbuk Sargassum  Polycys- tum Sebagai Antibakteri Pada Ikan Lele ( Clarias Sp.) Selama Penyimpanan Dingin.
Jurnal  Pengolahan  dan  Bio- teknologi  Hasil  Perikanan , 6 ,
10-20.
Baumgartner,  W.  A.,  Ford,  L.,  & Hanson,  L.  (2017).  Lessions Caused  by  Virulent Aeromo- nas  hydrophila in  Farmed Catfish  ( Ictalurus  punctatus and I. punctatus x I. furcatus ) in  Mississippi. Journal  of Veterinary  Diagnostic  Inves- tigation , 29 (5), 747-751.
Fajriani,  B.,  Budiharjo,  A.,  Pujiyan- to,  S.  (2018).  Isolasi  dan Identifikasi  Molekular  Bakte- ri  Antagonis  terhadap Vibrio parahaemolyticus Patogen pada Udang Litopenaeus Vannamei dari  Produk  Pro-
biotik  dan  Sedimen  Mangrov di  Rembang. Jurnal  Biologi , 7(1), 52-63.
Gu, T. (2000). Liquid-Liquid Partiti- oning  Methods  for  Biose-
parations,  Academic  Press, 2,329-364.
Juntarut,  P.,  S.  Kaewnopparat,  D. Faroongsarng,  &  S.  Chiayva- reesajja.  (2018).  The  in vitro efficacy  of  oxytetracycline against  reisolated  pathogenic Aeromonas  hydrophila carry- ing  the  cytolytic  enterotoxin gene  through  hybrid  catfish, Clarias macrocephalus (Gün- ther,  1864)  × Clarias  garie- pinus (Burchell,  1822)  in Thailand. Aquaculture  Rese- arch , 49 (5). 1848-1857.
Khoiriyah,  S.,  Hanapi,  A.,  &  Fasya, A.  G.  (2014).  Uji  fitokimia dan aktivitas antibakteri frak- si  etil  asetat,  kloroform  dan petroleum  eter  ekstrak  meta- nol  alga  coklat  sargassum vulgare  dari  pantai  kapong pamekasan madura. Alchemy ,
3 (1). https://doi.org/ 10.18860/al.v0i1.2914.
Klimek-Szczykutowicz, M., Dziurka, M.,  Blazevic,  I.,  Dulovic,  A., Granica,  S.,  Korona-Glow- niak, I., Ekiert, H., dan Szopa,
A.  (2020).  Phytoche-mical And  Biochemical  Acti-vity Studies on Nasturtium Officinale (Waterceress) Microshoot Culture Grown in RITA ® Temporary  Immer- sion  Systems. Molecules ,  25,
5257.
Nopandi, H., Pratama, R. I., Suryana,
A. A. H., & Rostini, I. (2019). Penambahan  Ekstrak  Kunyit Terhadap Karakteris-tik Presto Ikan Nila yang Disimpan  Pada  Suhu  Kamar. Jurnal Perikanan Kelautan, 2 ,
50-55.
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.4.193
Putri,  R.  R.,  Hasanah,  R.,  & Kusimaningrum,  I.  (2016). Uji  aktivitas  antibakteri  dan
Uji  fitokimia  ekstrak  daun mangrove Sonneratia  alba .
Aquawarman  Jurnal  Sains Dan Teknologi Akuakultur , 2 , 43-50. Rahman, D. R., Rimbawan, Madanijah,  S.,  dan  Purwa- ningsih,  S.  (2017).  Potensi Selada  Air  ( Nasturtium  Offi- cinale R.Br)  Sebagai  Antiok- sidan dan Agen Antipoliferasi terhadap Sel MCF-7 Secara In
Vitro . Jurnal  Gizi  Pangan , 12(3), 217-224.
Sinurat,  A.  A.  P.,  Renta,  P.  P.,
Herliany, N. E., Negara, B. F.,
&  Purnama,  D.  (2019).  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Metanol  Rumput  Laut  Graci- laria  edulis  terhadap  Bakteri Aeromonas  hydrophila. Jur- nal Enggano , 4 (1), 105–114.
Volk, W. A. & M. F. Wheeler. (1988).
Mikrobiologi  Dasar .  Edisi  5. Alih Bahasa. Mark-ham. Erlangga. Jakarta. 712 hlm.
https://doi.org/10.46252/jsai-fpik-unipa.2021.Vol.5.No.4.193