## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology

## PENDAHULUAN
Strain bakteri Staphylococcus  aureus yang  dikenal sebagai Methicillin-resistant  Staphylococcus  aureus (MRSA) mengalami  resisten  pada  semua penisilin isoxazoyl, meliputi methicillin,  oxacillin,  flucloxacillin dan cefoxitin (Turbawaty et al., 2021) .
Staphylococcus  aureus adalah  salah  satu  jenis  patogen yang  seringkali  mengalami  peningkatan  temuan  kasus
resistensinya  dan  telah  diidentifikasi  sebagai  penyebab terjadinya  infeksi  serius  di  rumah  sakit  (Erlin  et  al., 2020).
Resistensi  terhadap  bakteri  MRSA  ini  disebabkan karena  dalam  penggunaan  antibiotik  yang  kurang rasional  (Pristianingrum  et  al.,  2021).  Suatu  bakteri menjadi  resisten  dikarenakan  dalam  pemberian antibiotik  tidak  sesuai  dengan  dosis,  kesalahan
Optimasi Suhu Annealing Gen Blaz Dari Bakteri Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA) Pada Peralatan Medis
Optimization Annealing Temperature Gene blaZ of Bacterial Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Medical Equipment
Lia Listiani 1*
Kurnia Ritma Dhanti 2
Kurniawan 3
Oei Stefani Yuanita Widodo 4
*1 Universitas Muhammadiyah Purwokerto, Banyumas, Indonesia
2 Universitas Muhammadiyah Purwokerto, Banyumas, Indonesia
3 Universitas Muhammadiyah Purwokerto, Banyumas, Indonesia
4 Universitas Muhammadiyah Purwokerto, Banyumas, Indonesia
*email: kurniaritmadhanti@ump.ac.id

## Abstrak
Methicillin-resistant Staphylococcus aureus merupakan strain bakteri S. aureus yang resisten  terhadap penisilin jenis methicillin. Bakteri  MRSA  dapat  menyebabkan infeksi  nosokomial,  yang  penyebarannya  dapat  melalui  peralatan  medis.  Salah satu gen yang telah terindenifikasi penyandi sifat resistensi S. aureus adalah gen blaZ .  Pendeteksian  gen blaZ ini  membutuhkan  optimasi  suhu annealing pada primer yang digunakan untuk memperoleh band PCR yang optimal. Penelitian ini bertujuan untuk mengoptimasi suhu annealing untuk amplifikasi DNA gen blaZ dari  bakteri Methicillin-resistant  Staphylococcus  aureus (MRSA)  pada  peralatan medis. Metode pada penelitian ini menggunakan kit untuk ekstraksi bakteri dan Polymerase  Chain  Reaction (PCR).  Hasil  amplifikasi  DNA  gen blaZ pada  seluruh sampel menunjukkan band yang jelas pada suhu 52.0°C, 54.2°C, 58.7°C, 61.8°C dan  64.0°C,  tidak  ada smear yang  terbentuk  dan hasil visualisasi  elektroforesis pada  produk  PCR  menunjukkan  hasil band yang  sesuai  dengan  target,  yaitu 173bp.  Suhu annealing yang  paling  optimal  untuk  amplifikasi  gen blaZ ,  pada bakteri MRSA dari peralatan medis rumah sakit adalah suhu 61.8°C.

## Kata Kunci:
Annealing, Gen blaZ, MRSA, PCR
Keywords :
Annealing, Gene blaZ, MRSA, PCR

## Abstract
Methicillin-resistant  Staphylococcus  aureus  is  a  strain  of  S.  aureus  bacteria  that  is resistant to methicillin-type penicillins. MRSA bacteria can cause nosocomial infections, which can be spread through medical equipment. One of the genes that encodes the resistance trait of S. aureus is the blaZ gene. The detection of the blaZ gene requires optimizing the annealing temperature of the primer used to obtain the optimal PCR band. This study aims to optimize the annealing temperature for the amplification of the blaZ gene DNA from Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) bacteria on medical devices. The method used in this study used a kit for bacterial extraction and Polymerase Chain Reaction(PCR). The results of the blaZ gene DNA amplification in  all  samples  showed  clear  bands  at  temperatures  of  52.0°C,  54.2°C,  58.7°C, 61.8°C,  and  64.0°C;  no  smears  were  formed,  and  the  electrophoretic  visualization results  on  the  PCR  product  showed  the  results  of  bands  that  were  according  to  the target, namely 173 bp. The most optimal annealing temperature for amplification of the blaZ gene in MRSA bacteria from hospital medical equipment is 61.8°C.
Lia Listiani 1* , Kurnia Ritma Dhanti 2 , Kurniawan 3 , Oei Stefani Yuanita Widodo 4 . 2023. Optimization Annealing Temperature Gene blaZ of Bacterial Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Medical Equipment
diagnosis, dan tidak sesuai target bakteri yang menjadi penyebabnya.  Hal  ini,  menyebabkan  bakteri  MRSA mengalami  perubahan  genetik  (Sugireng  &  Rosdarni, 2020).
Salah  satu  gen  penyandi  sifat  resistensi Staphylococcus aureus yang telah teridentifikasi adalah blaZ (Aziz et al., 2018). blaZ merupakan  gen  produksi  betalaktamase yang  menonaktifkan  penisilin  dengan  menghidrolisis cincin beta-laktam (Okiki et al., 2020). Terdapat empat jenis  gen blaZ yang  dapat  dibedakan  dengan  analisis serotipe, tiga di antaranya (A, C, dan D) terletak pada plasmid,  sedangkan  B  terletak  pada  kromosom (Takayama et al., 2018).
Polymerase  Chain  Reaction (PCR)  adalah  suatu  metode identifikasi  molekuler  yang  dapat  digunakan  untuk mengidentifikasi  genotype  (Aulia  et  al.,  2021).  PCR berfungsi untuk memperbanyak fragmen DNA spesifik dengan  cepat  dalam  jumlah  ribuan  hingga  jutaan  kali. Teknik  ini  memanfaatkan  keberadaan  enzim  DNA Polymerase  yang  ditandai  oleh  primer  untuk mengamplifikasi  molekul  DNA  secara in  vitro (Yustinadewi et al., 2018).
Teknik  PCR  menggunakan  tiga  parameter  siklus  suhu diantaranya yaitu denaturation , annealing dan elongation (Setyawati  &  Zubaidah,  2021).  PCR  memiliki keunggulan  yang  sangat  tinggi  berdasarkan  spesifisitas, efisiensi  dan  akurasi  untuk  deteksi  gennya  (Muhamad et al., 2019). Proses pada saat PCR sangat dipengaruhi oleh  suhu  denaturasi,  suhu  penempelan  primer,  suhu pemanjangan, jumlah siklus yang digunakan, kemurnian DNA template dan konsentrasi dari komponen reaksi (primer, buffer, MgCl2, enzim DNA polimerase, DNA template, H2O dan nukleotida) (Herman et al., 2018). Sebelum  melakukan  teknik  PCR  pada  sampel penelitian,  maka  optimasi  perlu  dilakukan  agar  bisa mendapatkan  kondisi  dan  komposisi  PCR  yang  tepat untuk hasil PCR yang lebih spesifik (Yuenleni, 2019). Untuk  memperoleh  band  PCR  yang  optimal, dibutuhkan  optimasi  suhu annealing pada  primer  yang digunakan. Annealing adalah  tahap  yang  diperlukan
primer untuk menempel pada DNA target (Amanda et al., 2019). Jika suhu annealing lebih tinggi, primer yang sudah  melekat  pada  cetakan  DNA  bisa  terlepas,  dan DNA  target  tidak  akan  terbentuk.  Kemudian  apabila suhu annealing lebih rendah, primer akan melekat pada DNA  template  yang  tidak  tepat.  Hal  ini,  dapat menghasilkan produk PCR yang tidak spesifik. (Aulia et al.,  2021).  Oleh  karena  itu,  maka  perlu  menentukan suhu annealing pada proses amplifikasi PCR.
Penelitian  Pratiwi  et  al.,  (2019)  menunjukkan  bahwa suhu  optimum  untuk  gen blaZ yang  resisten  penisilin pada Staphylococcus  aureus menggunakan  primer forward ATTTGCCTATGCTTCGACTT,  dan reverse GCTTGACCACTTTTATCAGC adalah suhu 55°C. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengoptimasi  suhu annealing dalam  amplifikasi  gen blaZ pada  bakteri Methicillin-resistant  Staphylococcus  aureus (MRSA)  yang diisolasi  dari  peralatan  medis  rumah  sakit  dengan metode Polymerase Chain Reaction (PCR).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan  di Laboratorium Genetika dan Botani,  FKIP  Universitas  Muhammadiyah  Purwokerto pada bulan Januari sampai Februari 2023. Sampel pada penelitian  ini  menggunakan  isolat  bakteri Methicillin- resistant  Staphylococcus  aureus (MRSA)  dari  peralatan medis  rumah  sakit.  Metode  penelitian  yang  dilakukan menggunakan kit untuk  ekstraksi  bakteri  dan Polymerase  Chain  Reaction (PCR).  Produk  DNA  gen blaZ yang  digunakan  merupakan  sepasang  primer forward ACTTCAACACCTGCTGCTTTC, dan r everse TGACCACTTTTATCAGCAACC.

## Persiapan Esktraksi DNA MRSA
Kultur  bakteri  MRSA dalam  media Lactose  Broth (LB) sebanyak  1.5µl  dimasukkan  ke  dalam eppendrof  tube . Disentrifugasi dengan kecepatan 10.000 rpm selama 5 menit.  Supernatan  diambil  hingga  tersisa  pellet. Ditambahkan  sebanyak  200µl  NaCl  fisiologis,  dan  5µl lisozim,  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  15  menit.
Dilanjutkan  dengan  prosedur  ektraksi  menggunakan High  Pure  PCR  Template  Preparation  Kit  (Roche). Tahap  dalam  menggunakan  kit  ekstraksi  DNA  adalah terjadinya  lisis  pada  sel, binding (pengikatan), wash (pencucian), dan elusi menggunakan buffer . Selanjutnya, hasil dari ekstraksi DNA disimpan pada suhu -20˚C.
Amplifikasi Gen blaZ
Amplifikasi  pada  gen blaZ menggunakan  MyTaq™  HS Red  Mix  (Bioline  Reagents  Ltd.) . Total  volume  PCR reaction  mixes adalah  25 μ l  dengan  mencampurkan 12.5 μ l  MyTaq™  HS  Red  Mix  2x,  6.5 μ l  ddH 2 O,  2 μ l primer forward ACTTCAACACCTGCTGCTTTC, 2 μ l primer  reverse  TGACCACTTTTATCAGCAACC (Integrated  DNA  Technologies ) ,  dan  2 μ l  DNA template .  Tahapan  PCR  yang  dilakukan  dengan parameter  siklus  terdiri  dari  denaturasi  awal  94°C selama 2 menit, denaturasi pada 94°C selama 30 detik, annealing pada  52.0°C,  54.2°C,  58.7°C,  61.8°C  dan 64.0°C selama 30 detik, extension pada 72°C selama 1 menit, diikuti dengan 30 siklus dan final extension pada 72°C selama 5 menit. Suhu annealing dalam penelitian ini  divariasikan  dengan  menggunakan  program  gradien pada  mesin  PCR  (Eppendorf  Mastercyler  Nexus gradient).

## Elektroforesis
Hasil amplifikasi gen blaZ dengan PCR dianalisis dengan metode  elektroforesis  menggunakan  gel  agarosa.  Gel agarosa  dibuat  pada  konsentrasi  1%  dengan  larutan buffer TAE  1X  dan  ditambahkan  1µl pewarna gel  red . Selanjutnya,  5 μ l  sampel  elektroforesis  berupa  hasil PCR  ditambahkan  1 μ l loading  dye ,  lalu  dimasukkan  ke dalam  sumuran  gel  agarosa.  DNA ladder yang digunakan  adalah  100bp.  Elektroforesis  dijalankan selama 30 menit dengan kecepatan 100 volt . Kemudian, hasil  elektroforesis  diamati  menggunakan  UV transilluminator .

## HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL
Proses  amplifikasi  PCR  dilakukan  dengan  variasi  suhu annealing (52.0°C, 54.2°C, 58.7°C, 61.8°C dan 64.0°C) dengan jumlah siklus sebanyak 35 siklus, yang telah  di deteksi  menggunakan  elektroforesis  dengan  gel agarose konsentrasi 1% dapat diamati pada gambar 1, 2 dan 3.
Gambar 1. Hasil elektroforesis produk PCR gen blaZ dari sampel dengan kode K1.T1 pada variasi suhu annealing 52.0°C (1), 54.2°C (2), 58.7°C (3) 61.8°C (4), 64.0°C (5) dan M (Marker).
Gambar 2. Hasil elektroforesis produk PCR gen blaZ dari sampel dengan kode R1.I4 pada variasi suhu a nnealing 52.0°C (1), 54.2°C (2), 58.7°C (3) 61.8°C (4), 64.0°C (5) dan M (Marker).
Gambar 3. Hasil elektroforesis produk PCR gen blaZ dari sampel dengan kode R4.S1 pada variasi suhu annealing 52.0°C (1), 54.2°C (2), 58.7°C (3) 61.8°C (4), 64.0°C (5) dan M (Marker).

## PEMBAHASAN
Hasil  visualisasi  produk  PCR  pada  penelitian  ini menunjukkan  pola band yang  berbeda.  Setiap band terdapat  perbedaan  ketegasan  dan  intensitas  pada masing-masing  suhu annealing .  Intensitas  pita  hasil
amplifikasi DNA pada setiap primer sangat dipengaruhi oleh  konsentrasi  dan  kemurnian  DNA  template (Sitepu et al., 2019).
Berdasarkan hasil visualisasi produk PCR gen blaZ dari sampel dengan kode K1.T1, ditunjukkan pada Gambar 1. suhu annealing 61.8°C menghasilkan band yang lebih jelas,  dan  terang,  dibandingkan  pada  suhu  52.0°C, 54.2°C, 58.7°C dan 64.0°C.
Berdasarkan hasil visualisasi produk PCR gen blaZ dari sampel dengan kode R1.I4, pada Gambar 2.  pada suhu annealing 61.8°C  menghasilkan band yang  lebih  jelas, dan  terang,  dibandingkan  pada  suhu  52.0°C,  54.2°C, 58.7°C dan 64.0°C.
Produk PCR pada Gambar 2. juga menunjukkan bahwa band yang  dihasilkan  lebih  tebal,  jelas  dan  terang dibandingkan pada Gambar 1 dan Gambar 3. Menurut Aulia  et  al.,  (2021)  proses  ekstraksi  pada  sampel menentukan  tingkat  ketebalan band pada  DNA.  Jika proses  ini  tidak  tepat,  maka  dapat  menyebabkan kualitas sampel yang tidak spesifik.
Konsentrasi  DNA  yang  tinggi  akan  menunjukkan  hasil band yang  tunggal/mengumpul  dan  tebal.  Jika band tampak  menyebar,  ini  menunjukkan  bahwa  genom DNA  telah  terpotong  menjadi  bagian  kecil.  Hal  ini diakibatkan  oleh  putusnya  ikatan  yang  menyatukan molekul DNA selama proses ekstraksi. Selama proses isolasi DNA, gerakan fisik yang berlebihan dan aktivitas bahan  tertentu  dapat  menjadi  penyebab  putusnya ikatan antar molekul (Turrahmi et al., 2021).
Hasil  visualisasi  produk  PCR  gen blaZ dari  sampel dengan  kode  R4.S1,    pada  Gambar  3.  diperoleh  pola band yang  berbeda-beda. Band yang  lebih  jelas  dan terang  terlihat  pada  suhu annealing 61.8°C,  kemudian pada  suhu  58.7°C  dan  64.0°C  terlihat band yang  jelas namun  kurang  terang.  Sedangkan  pada  suhu  52.0°C dan 54.2°C band yang dihasilkan terlihat lebih tipis.
Menurut  Herman  et  al.,  (2018)  hasil band DNA  yang kurang jelas disebabkan karena konsentrasi DNA total yang  terlalu  kecil,  proses  penempelan  primer  yang kurang  optimal  pada  template,  sehingga  pada  saat
proses amplifikasi DNA mengakibatkan jumlah fragmen DNA lebih sedikit.
Hal  yang  dapat  menyebabkan  hasil  pita  DNA  tidak spesifik  juga  disebabkan  karena  primer  tidak  dapat menempel  dengan  sempurna  pada  suhu  yang  terlalu rendah dari Tm, sehingga enzim polimerase juga tidak dapat  mengkatalisasi  proses  PCR  jika  primer  tidak menempel (Rosiana dan Widhiantara, 2018). Selain itu, karena faktor penggunaan konsentrasi agarose, ukuran pori yang semakin kecil di dalam matriks agarosa, maka laju DNA akan semakin lambat (Pratomo et al., 2021). Gel  agarosa  termasuk  salah  satu  media  yang  biasa digunakan  untuk  memisah  fragmen  asam  nukleat  yang memiliki  ukuran  besar  dan  sedang  (Purnomo  et  al., 2021).  Gel  agarosa  ini  memiliki  beberapa  kelebihan diantaranya yaitu sederhana, mudah digunakan, dan laju pada  pemisahan  fragmen  DNA  yang  sangat  cepat (Harahap, 2018).
Tahapan annealing pada  penelitian  ini  dilakukan menggunakan  gradien  suhu  yang  terdapat  pada  mesin PCR,  dengan  tujuan  untuk  memperoleh  suhu  yang optimal  dan  spesifik.  Prinsip  kerja  gradien  adalah dengan  menentukan  suhu  optimal  dan  spesifik  pada rentang  suhu  tertentu  (terendah  dan  tertinggi)  yang ditentukan dari Tm pada primer yang digunakan (Aulia et al., 2021).
Suhu annealing adalah  suhu  kisaran  yang  membuat pasangan masing-masing primer menempel pada DNA yang  ditargetkan.  Sehingga  tahapan annealing sangat mempengaruhi  keberhasilan  amplifikasi  PCR  (Herman et al., 2018).
Penentuan  nilai  Tm  penting  untuk  dilakukan  karena berkaitan dengan penetapan annealing temperature (Ta), yaitu  temperatur  yang  digunakan  untuk  penempelan primer.  Apabila  terjadi  kesalahan  dalam  memilih  suhu annealing ,  maka  amplifikasi  pada  proses  PCR  tidak berjalan dengan baik. Penggunaan suhu yang berbeda di berbagai  titik  dalam  reaksi  PCR  dapat  memperoleh produk PCR dengan variasi band yang berbeda (Astari et al., 2021).
DNA total dari gen blaZ yang telah diperoleh dari hasil isolasi  dan  purifikasi  DNA  ditentukan  dengan  metode elektroforesis untuk mengetahui kualitasnya.
Elektroforesis  adalah  sebuah  metode  yang  digunakan untuk  memisahkan  molekul  DNA  berdasarkan ukurannya  melalui  sebuah  medan  listrik  (Anam  et  al., 2021).  Beberapa  faktor  yang  dapat  mempengaruhi proses  elektroforesis  yaitu  penggunaan  jumlah  DNA marker  dan  jumlah  sampel  DNA  ihasil  amplifikasi (Tilawah et al., 2018).
Menurut  Yuenleni  (2019)  ciri  hasil  PCR  dengan band yang  optimal  adalah  adanya  pita/ band yang  jelas,  tidak terdapat smear yang terbentuk, serta ukurannya sesuai dengan target DNA yang diinginkan. Berdasarkan hasil amplifikasi  PCR  pada  suhu  61.8°C,  produk  PCR  yang diperoleh  tidak  ada smear yang  terbentuk,  sehingga menunjukan DNA hasil amplifikasi tidak terkontaminasi  oleh  komponen  asing.  Hal  ini mengindikasikan  bahwa  suhu annealing 61.8°C  yang digunakan sesuai dengan primer yang digunakan.  Hasil visualisasi elektroforesis seluruh produk PCR gen blaZ juga  menunjukkan  hasil band sesuai  yang  ditargetkan, yaitu 173bp (Zehra et al., 2017).

## KESIMPULAN
Hasil  optimasi  suhu annealing yang  dapat  digunakan untuk  amplifikasi  gen blaZ ,  pada  bakteri  MRSA  dari peralatan  medis  rumah  sakit  adalah  suhu  61.8°C dimana suhu tersebut mampu menghasilkan pita DNA dengan baik pada 173bp.
Penelitian  selanjutnya  disarankan  dapat  meningkatkan jumlah  sampel  yang  digunakan,  agar  bisa  menetapkan hasil penelitian pada populasi yang lebih besar.

## DAFTAR PUSTAKA
Amanda,  K.,  Sari,  R.,  &  Apridamayanti,  P.  2019. Optimasi  Suhu Annealing Proses  PCR  Amplifikasi  Gen shv Bakteri Escherichia coli Pasien Ulkus Diabetik. Jurnal Mahasiswa  Farmasi  Fakultas  Kedokteran  UNTAN . 4 (1), 1–6.
Anam,  K.,  Cahyadi,  W.,  Azmi,  I.,  Senjarini,  K.,  & Oktarianti, R. 2021. Analisis Hasil Elektroforesis DNA dengan Image  Processing Menggunakan  Metode Gaussian  Filter. IJEIS  (Indonesian  Journal  of  Electronics and Instrumentation Systems) . 11 (1), 37.
Aulia,  S.  L.,  Suwignyo,  R.  A.,  &  Hasmeda,  M.  2021. Optimasi  Suhu Annealing untuk  Amplifikasi  Dna  Padi Hasil  Persilangan  Varietas  Tahan  Terendam  dengan Metode Polymerase  Chain  Reactio n. Sainmatika:  Jurnal Ilmiah  Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam . 18 (1),
44.
Aziz,  F.,  Budi  Lestari,  F.,  Nuraidah,  S.,  Purwati,  E., Isrina  Oktavia  Salasia,  S.  2018.  Deteksi  Gen  Penyandi Sifat Resistensi Metisilin, Penisilin dan Tetrasiklin pada Isolat Staphylococcus aureus Asal Susu Mastitis Subklinis Sapi Perah. Jurnal Sain Veteriner . 34 (1), 60–69.
Devi Astari, D., Gustiani Dewi, S., Setyaningrum, S., & Lidya,  B.  2021.  Perancangan  Primer  untuk  Deteksi Kandungan  Gen Cytochrome b  Babi  dengan  Metode Polymerase  Chain  Reaction dan  Aplikasinya  pada Berbagai  Produk  Industri. Fullerene  Journ.  Of  Chem . 6 (2), 110–117.
Erlin,  E.,  Rahmat,  A.,  Redjeki,  S.,  &  Purwianingsih,  W. 2020. Deteksi Methicilin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA)  Sebagai  Penyebab  Infeksi  Nosokomial  Pada Alat-Alat  di  Ruang  Perawatan  Bedah. Quagga:  Jurnal Pendidikan Dan Biologi . 12 (2), 137.
Harahap,  M.  R.  2018.  Elektroforesis:  Analisis Elektronika  Terhadap  Biokimia  Genetika. CIRCUIT: Jurnal Ilmiah Pendidikan Teknik Elektro . 2 (1), 21–26. Herman,  H.,  Nainggolan,  M.,  &  Roslim,  D.  I.  2018. Optimasi  Suhu Annealing Untuk  Empat  Primer  Rapd Pada  Kacang  Hijau  ( Vigna  radiata  L .). Dinamika Pertanian . 34 (1), 41–46.
Muhamad,  F.,  Rafika,  S.,  &  Pratiwi,  A.  2019.  Optimasi Suhu Annealing Gen mecA Resistensi  Antibiotik Amoksisilin  Dari  Bakteri Staphylococcus  Aureu s  Pada Pasien Ulkus Diabetik. Jurnal Kesehatan . 5 (1), 12.
Okiki, P. A., Eromosele, E. S., Ade-Ojo, P., Sobajo, O. A., Idris, O. O., & Agbana, R. D. 2020. Occurrence of mecA and blaZ genes  in  methicillin-resistant Staphylococcus aureus associated with vaginitis among pregnant  women  in  Ado-Ekiti,  Nigeria. New  Microbes and New Infections . 38 , 100772.
Pratiwi,  A.,  Sari,  R.,  &  Apridamayanti,  P.  2019. Optimasi suhu desain primer gen blaZ resistensi  pada bakteri  Staphylococcus  aureus  secara in  silico . Jurnal Mahasiswa  Farmasi  Fakultas  Kedokteran  UNTAN . 4 (1), 3–12.
Lia Listiani 1* , Kurnia Ritma Dhanti 2 , Kurniawan 3 , Oei Stefani Yuanita Widodo 4 . 2023. Optimization Annealing Temperature Gene blaZ of Bacterial Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Medical Equipment
Pratomo,  Y.  W.,  Zahida,  F.,  &  Yuda,  P.  2021. Perbandingan  Metode  Isolasi  DNA  sebagai  Templat PCR  untuk  Identifikasi  Jenis  Kelamin  Cerek  Jawa ( Charadriius  javanicus )  secara  Molekuler  Menggunakan Primer  2550F/2718R. Biota :  Jurnal  Ilmiah  Ilmu-Ilmu Hayati . 6 (2), 78–86.
Purnomo, N., Ramadhanty, D., Mansur, M., Nur, M., & Dagong,  M.  I.  A.  2021.  DNA  Quality  of  Purification from  Beef  Sausage  as  Halal  Authentication  Material Based  on  Genetic  Marker. Jurnal  Ilmu  Dan  Teknologi Peternakan. 9 (1), 44–50.
Rosiana, I. W., & Widhiantara, I. G. 2018. Optimalisasi Produk  PCR  ( Polymerase  Chain  Reaction )  Pada  Analisa Keragaman Genetik Mikrosatelit Burung Kakatua Kecil Jambul  Kuning  ( Cacatua  sulphurea ). Jurnal  Media  Sains .
2 (1), 37–42.
Santy  Pristianingrum,  N.,  Zainiati,  B.  L.,  Muttaqin,  Z., Desy Puspita, F., & Arman, R. 2021. Deteksi Metichilin Resistance  Staphylococcus  Aureus (MRSA). Jurnal  Analis Medika Biosains (JAMBS) . 8 (1), 7–12.
Setyawati,  R.,  &  Zubaidah,  S.  2021.  Optimasi Konsentrasi  Primer  dan  Suhu Annealing dalam Mendeteksi  Gen  Leptin  pada  Sapi  Peranakan  Ongole (PO) Menggunakan Polymerase Chain Reaction (PCR). Indonesian Journal of Laboratory . 4 (1), 36.
Sitepu,  A.  F.,  Sartini  Bayu,  E.,  Aziz,  L.,  &  Siregar,  M. 2019.  Analisis  Pola  Pita  Beberapa  Genotipe  Kurma ( Phoenix  dactylifera  L .)  Menggunakan  Primer  RAPD. Jurnal Online Agroekotekonogi , 7 (3), 502–507.
Sugireng,  &  Rosdarni.  2020.  Deteksi  MRSA  ( Methicilin Resistant  Staphylococccus  aureus )  dengan  Metode  PCR Pada Pasien Ulkus Diabetikum. Jurusan Biologi, Fakultas Sains Dan Teknologi, UIN Alauddin Makassar . 31–35.
Takayama,  Y.,  Tanaka,  T.,  Oikawa,  K.,  Fukano,  N., Goto,  M.,  &  Takahashi,  T.  2018.  Prevalence  of  blaZ Gene and Performance of Phenotypic Tests to Detect Penicillinase  in  Staphylococcus  aureus  Isolates  from Japan. Annals of Laboratory Medicine . 38 (2), 155–159.
Tilawah,  S.,  Sari,  R.,  &  Apridamayanti,  P.  2018. Optimasi  Volume  DNA  Marker  dan  Volume Amplifikasi  Gen  tetL  Resistensi  Antibiotik  Tetrasiklin dari Bakteri Bacillus cereus pada Pasien Ulkus Diabetik. Jurnal Farmasi . D (6), 1–7.
Turbawaty, D. K., Logito, V., & Tjandrawati, A.  2021. Methicillin-Resistant  Staphylococcus  aureus  (MRSA) Patterns  and  Antibiotic  Susceptibility  in  Surgical  and Non-Surgical  Patients  in  a  Tertiary  Hospital  in Indonesia. Majalah  Kedokteran  Bandung . 53 (3),  148– 154.
Turrahmi,  M.,  Nurhidayani,  N.,  Hasyimuddin,  H.,  & Pabendon,  M.  B.  2021.  Uji  Kualitas  Dan  Kuantitas Tanaman  Jewawut  ( Setaria  italic )  di  Balai  Penelitian Tanaman  Serealia  Kabupaten  Maros. Filogeni:  Jurnal Mahasiswa Biologi . 1 (2), 57–62. Yuenleni,  Y.  2019.  Langkah-Langkah  Optimasi  Pcr. Indonesian Journal of Laboratory . 1 (3), 51.
Yustinadewi,  P.  D.,  Yustiantara,  P.  S.,  &  Narayani,  I. 2018.  Mdr-1  Gene  1199  Variant  Primer  Design Techniques  in  Pediatric  Patient  Buffy  Coat  Samples With  LLa. Metamorfosa:  Journal  of  Biological  Sciences . 5 (1), 105. Zehra,  A.,  Singh,  R.,  Kaur,  S.,  &  Gill,  J.  P.  S.  2017. Molecular  characterization  of  antibiotic-resistant Staphylococcus  aureus  from  livestock  (bovine  and swine). Veterinary World . 10 (6), 598–604.