## AKTIVITAS SITOTOKSIK  SENYAWA GOLONGAN FENOLIK DARI EKSTRAK DAUN SIRIH (Piper betle L.)
Abdul Malik ,2 ,  Lamek Marpaung 2 , Partomuan Simanjuntak 3 , Pandapotan Nasution 4
1) Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Almuslim, Jl. Almuslim No. 1, Bireuen 24261 Aceh
2) Fakultas MIPA, Universitas Sumatera Utara Jl. Bioteknologi No.1, Padang Bulan, Medan Baru, Kota Medan, Sumatera Utara 20155
3) Puslit Bioteknologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI), Jl. Raya Bogor Km 46 Cibinong 16911
4) Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara Jl. Tri Dharma No.5, Padang Bulan, Medan Baru, Kota Medan, Sumatera Utara 20155 Email :malikmnur@gmail.com

## ABSTRAK
Senyawa  golongan  fenolik  adalah  senyawa  aktif  dari  tanaman  sirih  yang berpotensi digunakan sebagai  bahan obat  alami.  Penelitian  ini bertujuan untuk menguji aktivitas sitotoksik senyawa golongan fenolik dari daun sirih ( Piper betle L.). Aktivitas sitotoksik diuji dengan mengukur nilai LC 50 menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).  Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi  dengan  pelarut  metanol  96%. Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan Probit  Analysis .  Hasil  penelitian  menunjukan bahwa  senyawa  golongan  fenolik  dari  ekstrak  metanol  daun  sirih  memiliki  aktifitas sitotoksik yang dengan nilai LC 50 = 3,92 ppm  dengan standart error 0,42 ppm.
Kata kunci : Senyawa fenolik, sirih, Piper betle , sitotoksik

## THE CYTOTOXIC ACTIVITY OF PHENOLIC COMPOUNDS GROUP FROM THE    BETEL LEAF EXTRACT (Piper betle L.)

## ABSTRACT
The cytotoxic activity test of the  phenolic compounds group  from the  leaves of Piper  betle L.  have  been  performed  using  the  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT) method.  Maceration  methods  using  96%  methanol  was  used  to  extract  the  phenolic compounds  from  the  betel  leaves.       The  obtained  data  ware  analyzed  using  Probit Analysis  method.  The  present  results  showed  that  the  phenolic  compound  of  the  betel leaves have high cytotoxic activity with a value of LC 50 = 3.92 ppm at standard error of 0.42 ppm.
Keywords: Betel , Piper betle, cytotoxic activity, phenolic compounds

## PENDAHULUAN
Tumbuhan    sirih    sudah    sangat populer  di  kalangan  masyarakat  Asia seperti  Indonesia,  Malaysia,  India,  Cina, dan Nepal.  Sejak  beberapa abad  yang  lalu sirih  telah  digunakan  sebagai  obat  oleh bangsa  Cina  dan  India  (Pradhan et  al ., 2013).  Daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L.) biasa dikonsumsi sehari-hari oleh sebagian masyarakat  Asia  (Dinesh et  al .,  2016). Secara  tradisional,  daun  sirih  hijau dipercaya    dapat    digunakan    untuk mengatasi  bau  mulut  dan  bau  badan, sembelit,  sakit  kepala,  gangguan  saraf, gatal-gatal,   kadas,   bisul,   rematik,   luka lecet, dan lain-lain (Guha, 2006).
Penelitian  dengan  subjek  tumbuhan sirih  sudah  banyak  dilakukan  diantaranya untuk  mempelajari  potensi  antioksidan ekstrak  daun  sirih,  sifat  sitotoksik  ekstrak etanol  daun  sirih  merah,  dan  bioaktivitas antidiabetes  ekstrak  etanol  dan  ekstrak  air daun sirih  (Makpol et al. , 2013, Emrizal et al .,  2014,  dan  Arambewela et  al. ,  2005). Dari  berbagai  hasil  penelitian  daun  sirih diketahui  secara  luas  memiliki  sifat-sifat antifungi, antioksidan, antiplatelet, antipiretik,  antiinflamasi,  antitrombotik, dan sebagai depresan (Sripradha, 2014).
Potensi  daun  sirih  sebagai  obat tradisional  dan  relevansinya  sebagai  obat alternatif  untuk  beragam  penyakit  tidak lepas  dari  senyawa  aktif  yang  terkandung didalamnya. Pengembangan obat tradisional   berbahan   dasar   seperi   sirih dapat  ditingkatkan  dengan  mengetahui senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam tanaman tersebut berikut struktur kimianya (Malik,  2016).  Sejauh  ini,  belum  ada laporan  penelitian  mengenai  penggunaan tanaman sirih sebagai bahan obat tradisional  yang  melibatkan  aspek-aspek kimiawi  maupun  biologi  dari  senyawa golongan fenolik  yang diperoleh dari daun sirih.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini bertujuan  untuk  mempelajari  sifat-sifat sitotoksik kumpulan senyawa fenolik yang terdapat dalam daun sirih, khususnya sirih
hijau yang biasa dikonsumsi oleh masyarakat Indonesia.

## METODE PENELITIAN Bahan
Material  sampel  daun  sirih  diambil dari ladang sirih Desa Matangdrien, Tanah Jambo  Aye,  Aceh Utara, Aceh.  Sementara bahan   kimia   yang   digunakan   meliputi berbagai  pelarut  organik  seperti  metanol, n -heksana,  etil asetat,  FeCl 3 ,  aquades,  dan serbuk silika.

## Alat
Alat-alat    yang    digunakan    dalam penelitian   ini   adalah   peralatan   reflux, rotary evaporator (Buchi R-114), penangas air,  kolom  kromatografi,  corong  pisah, gelas  kimia,  erlenmeyer  (Pyrex),  dan pelat KLT.

## Cara Kerja Preparasi Sampel
Sebanyak 6 kg daun sirih dicuci dan dikeringkan dengan cara  diangin-anginkan kemudian  dihaluskan  sampai  menjadi serbuk  menggunakan  penggiling  daun. Serbuk  daun  sirih  selanjutnya  diekstraksi dengan cara maserasi.

## Maserasi Serbuk Daun Sirih
Serbuk daun sirih ditimbang sebanyak  1  kg  kemudian  direndam  dalam wadah kaca dengan 3000 mL metanol 96% pada  suhu  kamar  selama  24  jam.  Hasil rendaman  disaring,  filtratnya,  ampasnya diekstraksi lagi dengan volume yang sama, ekstraksi  dilakukan berulang sampai pelarut  jernih.  Filtrat  dikumpulkan  dan dipekatkan dengan rotary evaporator.

## Uji Fitokimia Daun Sirih
Sebelum          dilakukan          proses pemekatan, sejumLah filtrat  hasil maserasi diuji  kandungan  senyawa  fitokimianya menggunakan  beberapa  pereaksi  yaitu pereaksi  FeCl 3 ,   pereaksi Meyer,  pereaksi
Bouchardat, pereaksi Dragendorf/ Wagner dan aquades, dengan cara sebagai berikut:
1.  Sebanyak  10  mL   ekstrak  metanol daun sirih 10  mL ditambah   3 tetes larutan FeCl 3 5%, diamati perubahan yang terjadi.
2.  Cara  kerja  di  atas  diulang  secara berturut turut dengan menggunakan pereaksi  Meyer,  Bouchardat,  dan Dragendorf/Wagner.
3.  Larutan ekstrak metanol daun sirih 10  mL  ditambahkan  dengan  2  mL aquades  dikocok  beberapa  saat. Lalu diamati ada tidaknya pembentukan buih.

## Isolasi Senyawa Fenolik
Isolasi  senyawa  fenolik  dilakukan berdasarkan    prosedur-prosedur    yang pernah  dilakukan  sebelumnya  (Erwin et al. , 2013, Riris et al., 2014) dengan sedikit modifikasi.  Ekstrak  metanol  daun  sirih hasil  pemekatan  sebelumnya  dilarutkan dengan  aquadest,  lalu  disaring  dan  filtrat dipartisi  dengan  etil  asetat  (1:1)  secara bertahap  sampai                      fraksi  etil  asetat menunjukkan    hasil    negatif    uji    fenolik, yaitu  ketika  larutan  uji  tidak  berubah menjadi   hijau   kehitaman   ketika   ditetesi dengan pereaksi FeCl 3 .
selanjutnya  dicairkan  secara  seri  (100,  10 bpj) dengan air laut.
Larva   udang A.   salina Leach   10 nauplii yang berumur 48 jam ditambahkan kedalam  setiap  set  tabung  uji  yang mengandung  sampel  senyawa  fenolik. Larutan  yang  mengandungi  50  μl  DMSO dalam  air  laut  digunakan  sebagai  kontrol. Dua  puluh  empat  jam  kemudian,  jumLah nauplii yang  bertahan  hidup  dihitung  dan jumLah  yang  mati  dicatat.  Percobaan dilakukan    pada    berbagai    variasi konsentrasi larutan ekstrak dan dilakukan 3 kali  pengulangan  (triplo)  untuk  tiap konsentrasi. Lethal  Concentration 50%
(nilai  LC 50 )  dihitung  dengan Probit Analysis (Vincent, 2008).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Skrining Fitokimia Daun Sirih
Proses   skrining   memberikan   hasil positif  dengan  pereaksi  FeCl 3 (Tabel  1) yang  menunjukkan  bahwa  sampel  daun sirih  memiliki kandungan senyawa  fenolik yang tinggi.
Tabel  1. Hasil  Skrining  Ekstrak  Metanol
Daun Sirih
No.    Pereaksi              Hasil                 Keterangan
Fraksi etil asetat selanjutnya dipekatkan  dan dilarutkan kembali dengan metanol  kemudian  dipartisi  dengan n - heksana  untuk  memisahkan  senyawa nonpolar.  Fraksi  metanol  yang  diperoleh dipekatkan   untuk    memperoleh   fenolik total.

## Uji Aktifitas Sitotoksik Senyawa

## 1.  FeCl
3 1%  (uji fenolik) 2.  Meyer        (uji alkaloid) 3.    Dragendorf (uji alkaloid) 4.    Bouchardat (uji alkaloid) 5.  Aquadest   (uji saponin) Larutan    jadi hitam Tidak ada perubahan Tidak mengendap Tidak mengendap Tidak berbuih Positif fenolik Negatif alkaloid Negatif alkaloid Negatif alkaloid Negatif saponin Fenolik
Uji    toksisitas    dilakukan    dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality  Technique (BSLT).  Sampel senyawa  fenolik  yang  akan  diuji  100  mg ditambah  DMSO  3  tetes  lalu  diencerkan dengan  air  laut  sampai100  mL  untuk mendapatkan   larutan   sampel   1000   bpj,
Senyawa   fenolik   memiliki   gugus- gugus  fungsi  –OH  yang  berinteraksi dengan ion besi Fe 3+ dari FeCl 3 menghasilkan  suatu  senyawa  kompleks yang  memberikan  warna  hijau  kehitaman dari larutan (Artini et al ., 2013). Daun sirih hijau memiliki kandungan senyawa alkaloid  yang  rendah.  Hal ini ditunjukkan oleh  hasil  negatif  dari  uji  menggunakan
Replikasi Kontrol     10 100 1000 justru         memperlihatkan        rendahnya kandungan    senyawa    tersebut.    Bahkan, 1 2 1 1 8 8 8 9 10 10 dalam hal ini tidak terdeteksi dengan uji-uji 3 0 7 9 10 yang telah dilakukan dengan menggunakan Total 2 23 26 30
pereaksi   Meyer,    Dragendrorf,    maupun Proporsi       6,67           76,67     86,67     100
y = 1.175x + 4.303 R² = 0.870 sitotoksik  senyawa  fenolik  dilakukan P rob it m o rt a lit as , y
reagen    Meyer,    Dragendrorf,    maupun reagen Bouchardat.
Tabel  2. Data  Mortalitas  Dari  10 nauplii Pada Setiap Replikasi
Berbeda   dengan  sirih  merah   yang memiliki    kadar    alkaloid    yang    tinggi (Emrizal et  al. ,  2014),  daun  sirih  hijau
Mortalitas
bpj        bpj        bpj
reagen  Bouchardat.  Senyawa  yang  aktif secara biologi dalam sirih, kadarnya sangat tergantung   pada   varietas,   musim,   dan cuaca   di  daerah   tumbuhnya   (Sripradha,
(%) Tabel    3 .    Konversi   Data    Berdasarkan Probit 2014)  Hasil  uji  negatif  dengan  aquades No. N X Y y W*
menunjukkan  bahwa  daun  sirih  memiliki
1. 30 1 5,740 5,478 0,581 kandungan saponin yang juga rendah. 2. 30 2 6,130 6,653 0,223

## Aktifitas Sitotoksik Senyawa Fenolik
Total      senyawa      fenolik      yang diperoleh  dari  serangkaian  proses  isolasi sebanyak  5,36  g  (0,089  %)  dalam  bentuk liquid  berwarna  coklat  tua.  Uji  aktifitas
dengan  menggunakan  metode  BSLT, sebuah  metode  yang  mudah  dan  murah (Meyer et al. , 1982).
Dengan      menggunakan      analisis probit,  data  hasil  uji  aktifitas  sitotoksik senyawa  fenolik  dalam laporan  ini  (Tabel 2)  terlebih  dahulu  dikonversikan  kedalam variabel  X  dan  Y  (Tabel  3)  dimana,  X adalah log konsentrasi dan Y adalah probit mortalitas  larva  berdasarkan  Tabel  Nilai Probit  (Finney,  1952).  Selanjutnya,  data dianalisis  dengan  menggunakan software MS.  Excel  sehingga  diperoleh  hubungan antar variabel memenuhi persamaan 𝑦 = 1,175X + 4,303 1) Grafik    hubungan    antar    variabel (Gambar  1),  dengan  koefisien  determinasi sebesar   0.870   menunjukkan   hubungan yang    cukup    baik    dimana,    faktor konsentrasi sampel mempengaruhi mortalitas larva dengan intensitas 87% dan hanya  terdapat  13%  pengaruh dari   faktor selainnya.
3.                       30         3        8,090     7,828     0,125 JumLa h
* weighting coefficients dari y (Finney & Stevens, 1948) y = probit mortalitas berdasarkan persamaan 1)
9 8 7 6 5 0.5                1.5                2.5                3.5
log konsentrasi, X
Gambar  1 .  Regresi  Linear  Antara  Log Konsentrasi    Dengan    Nilai    Probit Mortalitas
Hasil           perhitungan Lethal Consentration dari  senyawa  fenolik  hasil ektraksi  menunjukkan  nilai  LC 50 sebesar 3.92 ± 0.42 bpj. Hasil ini mengindikasikan bahwa aktifitas sitotoksik senyawa fenolik terhadap larva udang sangat tinggi berdasarkan  pada  literatur  (Meyer et  al. , 1982),  yang  mengklasifikasi  ekstrak  dan senyawa   murni   sebagai   beracun   (nilai LC 50 <  1000   µg/mL)   dan  tidak   beracun (nilai  LC 50 >  1000  µg/mL).  Namun  masih
kurang  toksik  jika  dibandingkan  dengan ekstrak  metanol  kulit  biji  mahkota  dewa ( Phaleria  macrocarpa )  dengan  nilai  LC 50 mencapai   0.16   µg/mL   (Lisdawati et   al. , 2006).

## SIMPULAN DAN SARAN
Senyawa  fenolik  dari  sumber  daun sirih  hijau  memiliki  aktifitas  sitotoksik yang tinggi dengan nilai LC 50 sebesar 3,92 dan standard  error 0,42.  Nilai  ini  dapat dijadikan acuan untuk menjadikan kumpulan senyawa  fenolik  dari daun sirih sebagai  alternatif  obat  herbal  dengan terlebih    dahulu    diuji    bioaktivitasnya seperti
antimikroba, antioksidan, antikanker,   antidiabetes,   dan   lain-lain. Perlu  dilakukan  kajian  lebih  lanjut  untuk mengetahui  struktur      senyawa-senyawa fenolik  tanaman  sirih  serta  mempelajari lebih lanjut aktifitas biologisnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Tulisan     ini     merupakan     sebuah laporan  awal  dari  penelitian  yang  dibuat untuk melengkapkan disertasi yang sedang dipersiapkan.
Penulis menyampaikan terimakasih kepada  Kemenristekdikti yang telah  menyediakan  beasiswa,  BPP-DN Universitas  Almuslim  Bireuen  yang  telah memfasilitasi  studi  program  S3  dan Fakultas  MIPA  USU  Medan  sebagai tempat    melanjutkan studi.

## DAFTAR PUSTAKA
Arambewela, L.S.R., L.D.A.M. Arawwawala,  W.D. Ratnasooriya. 2005. Antidiabetic activities of aqueous and ethanolic extracts of Piper betle leaves in rats. Journal of Ethnopharmacology . 102: 239-245 . Artini, P.E.U.D., W. Astuti, N.K.
Warditiani. 2013. Uji Fitokimia Ekstrak Etil Asetat Rimpang Bangle
(Zingiber purpureum Roxb.). Jurnal
Farmasi Udayana . 2(4): 1-7.
Dines , M.D., Athira, P.S., Ajma, N.,
Abisha, N. dan C. Ashitha. 2016.  A short review on piper betel (betel leafs). Global Journal of Advanced
Research. 3(5):  341-344 .
Emrizal, E., A. Fernando, R. Yuliandari, K. Rullah, N.R. Indrayani, A. Susanty, R. Yerti, F. Ahmad, H.M. Sirat, dan D. Arbain. 2014. Cytotoxic activities of fractions and two isolated compounds from Sirih Merah  ( Piper crocatum Ruiz & Pav.). Procedia Chemistry . 13: 79-
84 . Erwin, E.,  D. Fitria, S. Sari, C. Saleh. 2013. Uji toksisitas dan penentuan aktivitas antioksidan dengan metode DPPH dari metabolit sekunder fraksi n -heksan, etil asetat dan metanol-air daun sisik naga ( Drymoglossum piloselloides [Linn.]
Pr.). Prosiding Seminar Nasional Kimia . Hal: 52-58.
Finney, D.J. dan W.L. Stevens. 1948. A table for the calculation of working probits and weights in probit analysis. Biometrika .  35 (1): 191-
201 .
Finney, D.J., Ed. 1952. Probit Analysis . Cambridge University Press. England.
Guha, P. 2006. Betel leaf: the neglected green gold of India. J. Hum. Ecol . 19 (2):  87-93 .
Lisdawati, V., S. Wiryowidagdo, L.B.S.
Kardono. 2006. Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dari berbagai fraksi ekstrak daging buah dan kulit biji mahkota dewa ( Phaleria Macrocarpa ). Bul. Penel. Kesehatan. 34(3): 111-118 .
Makpol, S., T. W. Yeoh, F.A.C Ruslam, K.T.  Arifin, Y.A.M Yusof. 2013. Comparative effect of Piper betle , Chlorella vulgaris and tocotrienol- rich fraction on antioxidant enzymes activity in cellular ageing of human diploid fibroblasts. BMC
Complementary and Alternative Medicine. 13: 210 .
Malik, A. 2016. Aktivitas antidiabetes ekstrak etanol daun sirih dan isolasi senyawa bioaktif. Prosiding Seminar Nasional Kimia dan Pendidikan Kimia 2016. Hal: 1-6 . Meyer, B.N., N.R. Ferrigni, J.E. Putnam, L.B. Jacobsen, D.E Nichols dan J.L. McLaughlin. 1982. Brine shrimp: a convenient general bioassay for active plant constituents. Planta Med . 45: 31–4 .
Pradhan, D., K.A.  Suri, D.K.  Pradhan dan P. Biswasroy. 2013. Golden heart of the nature: Piper betle Linn. Journal of Pharmacognosy and
Phytochemistry. 1(6) Issue: 147- 167 .
Riris, I.D., T. Barus, P. Simanjuntak dan B. Wirjosentono. 2014. Isolation and structure elucidation of bioactive compounds chemical as inhibitors of the enzyme α- glucosidase raru bark ethanol extract (Vatica pauciflora Blume). International Journal of Chemistry. 6(2): 15-21 .
Sripradha, S. 2014. Betel leaf – The green gold. J. Pharm. Sci. & Rev . 6 (1):
36-37 .
Vincent,    K.     2008.    Probit     Analysis. http://www.sfsu.edu/efc/classes/biol 710/probit/ProbitAnalysis.pdf.
Diakses pada 13-03-2017.