Jurnal Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati Vol. 5 No. 2 Juni 2019: hal. 47 - 54 ISSN : 2338-4344
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL JAHE MERAH ( Zingiber Officinale Roxb var Rubrum) TERHADAP KUANTITAS DAN KUALITAS SPERMATOZOA MENCIT JANTAN ( Mus musculus L.) YANG DIINDUKSI PARAQUAT DIKLORIDA
Dian Anggraini 1)* , Sutyarso 1) , Mohammad Kanedi 1) , Hendri Busman 1) .
1) Jurusan Biologi, FakultasMatematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lampung.
*E-mail :diananggraini1995.da@gmail.com

## ABSTRACT
Paraquat  is  one  of  the  chemicals  that  contributes  to  increasing  pollution  Indonesia.  The careless use of paraquat can increase production of ROS (Reactive Oxygen Species), resulting in damage to a wide range of vital organs and reproductive system disorders such as infertility. ROS  in  the  body  can  be  captured  by  antioxidants.  Red  Ginger  contains  high  antioxidants because there are active phenolic compounds such as gingerol, shagaol, zingeron, ginggerdiol, and zingibren which are proven to protect body cells from damage caused by ROS. This study was  aimed  to  test  the  effectiveness  of  red  ginger  extract  (Zingiber  officinale  Roxb.  Var. Rubrum)  on  the  quantity  and  quality  of  sperm  in  male  mice  (Mus  musculus  L.)  induced  by paraquat dichloride.This research uses a completely randomized design and is divided into six treatment  groups  with  each  four  replications:  K1  as  the  control  group  (only  given  H2O);  K2 (paraquat induced a dose of 20 mg/kg Body Weight (BW) without the administration of the test substances);  K3;  K4;  K5  (paraquat  induced  a  dose  of  20  mg/kg  Body  Weight  (BW)  and  was given a red ginger extract at a dose of consecutive succession 6 mg / ml, 12 mg / ml, 18 mg / ml) and K6 (Only given a test material the red ginger extract as much as 18 mg / ml). Paraquat was given 2 times a week for 21 days and the red ginger  extract was given for 35 days. The results  of  analysis  by  One-way  ANOVA  followed  LSD  at  5%  significance  level  showed  the ethanolic extract of red ginger can increase the sperm count, motility, viability and Morphology sperm of mice induced by the paraquat diklorida.
Keywords :  Zingiber  officinale  Roxb.  rubrum  var,  Paraquat,  Sperm  count,  motility,  Viabiltity, Morphology, Mus musculus L.

## PENDAHULUAN
Tingkat pencemaran lingkungan di Indonesia  semakin  tinggi  dan  kompleks. Pencemaran ini diakibatkan oleh maraknya penggunaan  bahan  kimia  berbahaya  di tengah-tengah masyarakat maupun industri,  serta  belum  baiknya  sistem pengelolaan terhadap limbah yang dihasilkan.  Salah  satu  bahan  kimia  yang memberikan kontribusi cukup besar sebagai sumber pencemaran adalah herbisida. Herbisida adalah salah satu jenis pestisida yang mengandung senyawa kimia beracun dan digunakan untuk mengendalikan  gulma  atau  tumbuhan penggangu  yang  tidak  dikehendaki  (Ledoh
dkk.,  2010).  Adanya  paparan  herbisida yang berulang dapat menyebabkan meningkatnya  produksi  Reactive  oxygen spesies ( ROS) yang menghasilkan molekul oksigen sangat reaktif, salah satu herbisida yang  meningkatkan  produksi  ROS  adalah paraquat (Ortiz dkk,2016). Paraquat adalah herbisida golongan bypiridium yang digunakan diseluruh dunia (Fukushima dkk, 2002).    Di  negara  berkembang,  paraquat sering  digunakan  secara  bebas,  tidak memperhatikan bahaya dan label peringatan  sehingga  menyebabkan  angka keterpaparan yang tinggi(Sriyani dan salam 2008).  Studi  terbaru  menunjukan  senyawa sintetik  tertentu  termasuk  pestisida  dapat
mengganggu  fungsi  sistem  endokrin  dan memiliki kemampuan menginduksi kelainan perkembangan dan reproduksi pada manusia  dan  hewan.  (Afaf  dkk.,2009  ) melaporkan  bahwa  pestisida  dan  herbisida kelompok organofosfat –dicofol terbukti menyebabkan meningkatnya produksi radikal  bebas  baik  melalui  intraseluler maupun
ekstraseluler sehingga mengakibatkan  penurunan  jumlah  sperma dan  infertilitas.  Sistem  pertahanan  tubuh yang  dapat  digunakan  untuk  melawan radikal  bebas  dipengaruhi  oleh  tersedianya zat-zat yang berasal dari bahan alami yang memiliki potensi sebagai antioksidan.  Hasil penelitian  Kikuzaki  dan  Nakatani  (1993), menunjukkan  bahwa  jahe  merah  ( Zingiber officinale Roxb.  Var.  Rubrum  )  memiliki senyawa  aktif  fenolik  seperti,  gingerol, shagaol, zingeron, ginggerdiol, dan zingibren  yang  terbukti  memiliki  aktifitas antioksidan.   Jahe juga dilaporkan memiliki aktifitas androgenik karena mampu meningkatkan konsentrasi hormon testosteron  dalam  serum  (Kamtchouing  et al,2002).    Hormon  testosterone  berfungsi untuk mengontrol  proses  spermatogenesis, memelihara  sel  sertoli  dan  berperan  dalam menentukan kualitas spermatozoa. Menurut Srivastava  dkk.,  (2006),  kandungan  aktif rimpang  jahe  merah  yang  berpengaruh terhadap aktivitas reproduksi adalah arginin.    Arginin  merupakan  asam  amino non - esensial yang berperan dalam sistem ketahanan  tubuh  dan  imunitas  seluler. Selain itu, arginin juga berperan aktif dalam proses pembentukan spermatozoa.

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah rimpang jahe merah ( Zingiber officinale Rosc. var. Rubrum) sebanyak 1 kg yang diperoleh dari pembudidaya jahe merah di Bataranila Lampung.
Pembuatan Ekstrak Pembuatan ekstrak jahe merah menggunakan  metode  ekstraksi  basah. Rimpang  jahe  merah  dicuci  bersih  dengan
aquades  lalu  dikering  anginkan  kemudian jahe  merah  ditimbang  dan  dipotong  tipis- tipis,  jahe  yang  telah  dipotong  dibuat serbuk  dengan  menggunakan  blender. Etanol teknis dengan kadar 96% ditambahkan  untuk  melakukan  ekstraksi dari  serbuk  ini  selama  24  jam.  Setelah  itu masuk  ke  tahap  filtrasi,  akan  diperoleh filtrat  dan  residu.  Filtrat  yang  didapat diteruskan  ke  tahap  evaporasi  dengan Rotary evaporator pada suhu 40 o C sehingga diperoleh ekstrak etanol kental.

## Penyedian Paraquat
Dosis  paraquat  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah 20 mg/kgBB. Paraqua t atau  dipasaran  dikenal  dengan  merk dagang gramoxone diperoleh  dari  toko pertanian  di  Jalan  Teuku  Umar  Lampung, gramoxone mengandung paraquat sebesar 276mg/ml.

## 1.  Hewan uji dan Rancangan percobaan
Hewan  uji  adalah  24  ekor  mencit  jantan dengan  berat  badan  antara  30-40  gram yang  berumur  2-3  bulan.  Hewan  uji diperoleh  dari  Balai  Veteriner  Lampung  ( BVet).Penelitian ini menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  yang  terbagi dalam  6  kelompok  perlakuan  dengan masing-  masing  4  ulangan.  Kelompok  K1 sebagai  kontrol  (diberi  H 2 O),  K2  (diinduksi paraquat dengan dosis 20 mg/kg BB tanpa pemberian bahan uji), K3, K4, K5 (diinduksi paraquat dengan  dosis  20  mg/kg  BB  dan diberi  ekstrak  jahe  merah  dengan  dosis berturut-turut 6 mg/ml, 12 mg/ml, 18 mg/ml) dan K6 (Hanya diberi bahan uji ekstrak jahe merah  sebanyak  18  mg/ml). Paraquat dan ekstrak etanol jahe merah diberikan secara oral, paraquat diberikan  2  kali  dalam seminggu  selama  21  hari  dan  ekstrak  jahe merah diberikan selama 35 hari.
2.  Pembuatan Suspensi Spermatozoa Pembuatan
suspensi
spermatozoa dilakukan sehari setelah perlakuan berakhir dengan cara hewan uji dinarkose selanjutnya dibedah kemudianspermatozoa diambil  dari cauda epididimis. Cauda epididimis  dimasukkan  ke  dalam  cawan
petri  yang  berisi  1,0  ml  garam  fisiologis 0,9%,  kemudian  dipotong  dengan  gunting kecil  sampai  halus  dan  diaduk  dengan gelas pengaduk sehingga diperoleh suspensi spermatozoa yang homogen.
3.  Analisis Kuantitas dan Kualitas Spermatozoa a.  Konsentrasi Spermatozoa Jumlah spermatozoa dihitung dengan menggunakan  bilik  hitung improved Neubauer (hemositometer).  Suspensi spermatozoa  yang  telah  diencerkan dengan  1  mL  larutan garam  fisiologis (NaCl  0,9%)  diambil  10  μL kemudian diletakkan  ke  dalam  bilik  hitung (hemositometer),  setelah  itu  ditutup dengan  gelas  penutup.  kemudian diamati  dibawah  mikroskop  cahaya dengan  perbesaran  400.  jumlah spermatozoa dihitung dengan rumus : jumlah  sel/mL  =  jumlah  spermatozoa (n)  x  10 4 x  pengenceran.  (Bijanti et al ., 2002; Soehadi dan Arsyad, 1982; Wirawan et al .,1988)
b.  Viabilitas Spermatozoa
Pengamatan  viabilitas  spermatozoa dilakukan  dengan  mengambil  1  tetes suspense sperma, kemudian diteteskan pada gelas objek kemudian  dicampurkan  larutan  eosin negrosin.  Apusan  tipis  dibuat  secara merata,  kemudian  dikering  anginkan. Viabilitas sperma dihitung menggunakan mikroskop cahaya dengan  perbesaran  400xberdasarkan jumlah  sperma  utuh  yang  tidak menyerap warna (jernih) dibagijumlah
total sperma lalu dikali 100% (Astuti,2009).
c.  Motilitas Spermatozoa Pemeriksaan  motilitas  spermatozoa dilakukan  menggunakan  mikroskop perbesaran 400×, motilitas spermatozoa dikelompokkan kedalam kategorisel spermatozoa (A), bergerak  dan  (B)  tidak  bergerak, Persentase  motilitas  itu  dihitung berdasarkan rumus perhitungan sebagaiberikut: d.  Morfologi Spermatozoa Satu tetes suspensi sperma
diteteskan  pada  kaca  objek,  lalu dibuat sediaan oles dengan menggeserkan  kaca  objek  lain  di atasnya, setelah itu dikeringanginkan, lalu  difiksasi  dengan  metanol  96% selama  5  menit  dan  diwarnai  dengan larutan  giemsa  selama  30  menit  dan dibilas dengan air mengalir. Penghitungan  dilakukan  di  bawah mikroskop  dengan  pembesaran  400 kali. Morfologi spermatozoa abnormal dapat  diketahui  dengan  menghitung 100 spermatozoa.
Spermatozoa mencit  normal  terdiri  atas  bagian kepala ( caput ) yang bentuknya bengkok  seperti  kait,  bagian  tengah ( middle  piece )  yang  pendek,  dan bagian  ekor  ( cauda )  yang  sangat panjang.  (Astuti,2009).  Persentase morfologi spermatozoa:

## Keterangan:
A: jumlah morfologi abnormal
B: jumlah morfologi normal

## ANALISIS DATA
Data hasil pengamatan diuji homogenitasnya  dengan  tes  Levene . Hasil analisis menunjukkan
Bahwa  sebaran  data  homogen  sehingga data  pengamatan  diuji  menggunakan  uji one  way ANOVA  dilanjutkan  dengan  uji post  hoc LSD (least  significant  different) dengan nilai signifikasi p<0,05.

## HASIL
Hasil analisis perhitungan jumlah, viabilitas, motilitas dan morfologi abnormal spermatozoa disajikan pada grafik di bawah ini :
Gambar 7 . Grafik Hasil Perhitungan Jumlah Spermatozoa (juta/ml )
Hasil analisa dengan Anova dan dilanjutkan dengan  uji  lanjut  BNT  dengan  taraf  5% menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol  jahe  merah  mempunyai  pengaruh yang  bermakna  secara  statistik  dalam meningkatkan  jumlah  spermatozoa  mencit jantan  yang  diinduksi paraquat  diklorida . Perbedaan  nyata  terlihat  pada  kelompok perlakuan  yang  diberi  ekstrak  etanol  jahe merah  K4,  K5  dan  K6  (400  mg/kgBB,  600
mg/kgBB  dan  dosis  tunggal  600  mg/kgBB) terhadap  kontrol  negatif  (K2),  namun  pada kelompok  K3  (dosis  200  mg/kgBB)  tidak berbeda  nyata  dengan  kelompok  kontrol negatif (K2).
Gambar 8 . Grafik Hasil Perhitungan Viabilitas Spermatozoa (%)
Hasil analisa dengan Anova dan dilanjutkan dengan  uji  lanjut  BNT  dengan  taraf  5% menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol  jahe  merah  mempunyai  pengaruh yang  bermakna  secara  statistik  dalam meningkatkan viabilitas spermatozoa mencit  jantan  yang  diinduksi paraquat diklorida .  Perbedaan  nyata  terlihat  pada kelompok  perlakuan  yang  diberi  ekstrak etanol  jaahe  merah  K3  ,K4,  K5  dan  K6 (dosis  200  mg/kgBB,  400  mg/kgBB,  600 mg/kgBB  dan  dosis  tunggal  600  mg/kgBB) terhadap kontrol negatif (K2) .
Hasil analisa dengan Anova dan dilanjutkan dengan  uji  lanjut  BNT  dengan  taraf  5% menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol  jahe  merah  mempunyai  pengaruh yang  bermakna  secara  statistik  dalam meningkatkan motilitas spermatozoa mencit jantan  yang  diinduksi paraquat  diklorida . Perbedaan  nyata  terlihat  pada  kelompok perlakuan  yang  diberi  ekstrak  etanol  jahe merah K4 (400 mg/kgBB,) terhadap kontrol negatif (K2) namun pada kelompok perlakuan  K3,  K5  dan  K6  (dosis  200
mg/kgBB,  600  mg/kgBB  dan  dosis  tunggal 600  mg/kgBB)  tidak  ada  perbedaan  nyata terhadap kontrol negatif (K2).
Gambar 9 . Grafik Hasil Perhitungan Motilitas Spermatozoa (%)
Gambar 10. Grafik Hasil Perhitungan Morfologi Spermatozoa (%)
Hasil analisa dengan Anova dan dilanjutkan dengan  uji  lanjut  BNT  dengan  taraf  5% menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol  jahe  merah  mempunyai  pengaruh yang  bermakna  secara  statistik  dalam
meningkatkan morfologi normal spermatozoa  mencit  jantan  yang  diinduksi paraquat diklorida . Perbedaan nyata terlihat pada  kelompok  perlakuan  yang  diberi ekstrak etanol jaahe merah K3, K4 dan K5 (dosis 200 mg/kgBB, 400 mg/kgBB dan 600 mg/kgBB,)  terhadap  kontrol  negatif  (K2) namun  tidak  ada  perbedaan  nyata  antara kelompok  perlakuan  K6  (dosis  tunggal  600 mg/kgBB) terhadap kontrol negatif (K2).

## PEMBAHASAN
Penurunan  jumlah,  viabilitas,  motilitas  dan morfologi spermatozoa terjadi karena adanya radikal bebas yang terbentuk akibat pemberian  herbisida  paraquat.  Radikal bebas  yang  terbentuk  antara  lain  antara lain seperti
superoxide , hydrogen peroksida,  dan  hidroksil  radikal  yang menyebabkan  kerusakan  oksidatif  pada lemak,  protein  dan  DNA.  Paraquat  terbukti dapat  menginduksi  lipid  peroksidase  yang menyebabkan gangguan fungsi sel membran dan dapat menyebabkan apoptosis.  (Indika  dan  Buckley,  2011). Pemaparan  pestisida  maupun  herbisida dapat  menyebabkan  gangguan  reproduksi. Gangguan  reproduksi  yang  dapat  terjadi berupa  disfungsi  seksual,  abnormalitas sperma (jumlah, motilitas, bentuk), subfekunditas  (gonad  abnormal,  gangguan prepubertas,  infertilitas  dan  gangguan perkembangan janin (Levine ,1991). Menurut (Sukmaningsih A, 2009 ; Karim D, 2013),  adanya  peningkatan  radikal  bebas akan  merusak  membran  dari  sel-sel spermatogenik, merusak DNA spermatozoa dan  menyebabkan  menurunnya  produksi hormon  LH  dan  FSH  yang  merangsang terbentuknya  hormon  testosteron.    Hal  ini mengakibatkan jumlah testosteron menurun dan  kegagalan  proses  spermatogenesis sehingga  terjadi  penurunan  jumlah  sperma (Sanocka  &  Kurpisz,  2004).  Radikal  bebas juga dapat menyerang membran mitokondria sel leydig dan mikrotubulus sel sertoli,  bila  kerusakan  terjadi  pada  kedua sel  tersebut  akan  mengganggu  proses pematangan  sel  germinal  dalam  tubulus
seminiferus  sehingga  spermatozoa  yang dihasilkan  tidak  sempurna.  Selain  itu kerusakan membran mitokondria sel sperma menyebabkan penurunanjumlahATP yang diperlukan untuk  pergerakan  sperma  dan  merusak struktur  DNA  sehingga akan menyebabkan kematian  pada  sel  sperma.  Menurunnya viabilitas spermatozoa dapat pula disebabkan  oleh  berkurangnya  cairan  bagi spermatozoa sehingga
maturasi spermatozoa di epididimis terganggu, fungsi  epididimis  terganggu  disebabkan oleh  menurunnya  testosteron(Raji et  al ., 2003).  Jahe  merah  digunakan  sebagai antioksidan  untuk  menangkal  kadar  ROS meningkat.  Kandungan  aktif  jahe  merah yang berfungsi sebagai antioksidan diantaranya adalah gingerol, shogaol, zingibrene,  gingerdiol,  dan  zingerone .  Zat- zat  ini  mampu  mencegah  terjadinya peroksidasi  lipid  dengan  cara  membatu aktivitas  enzim-enzim  antioksidan  endogen seperti superoxide  dismutase,  catalase, dan  gluthtione  peroxides pada  tikus  (Khaki dkk.,  2009).  Selain  sebagai  antioksidan jehe merah juga memiliki aktivitas androgenik. Menurut penelitian yang dilakukan  oleh  Kamtchouing et  al. (2002) bahwa,  pemberian  ekstrak  jahe  merah pada  tikus  dapat  meningkatkan  jumlah hormon testosteron dalam serum.  Hormon testosteron berperan dalam proses spermatogenesis sehingga
dapat meningkatkaan kualitas spermatozoa termasuk  peningkatan  konsentrasi  sperma (Guyton,  1994).  Kandungan  aktif  rimpang jahe  merah  yang  berpengaruh  terhadap aktivitas  reproduksi  adalah  arginin.  Arginin merupakan asam amino non-esensial yang berperan  dalam  sistem  ketahanan  tubuh dan  imunitas  seluler.  Selain  itu,  arginin jugaberperan aktif dalam proses pembentukan spermatozoa (spermatogenesis). Arginin merupakan precursor  dari Nitrit  Oxide (NO)  endogen.
Arginin  dipecah  oleh  suatu  enzim  bernama Nitrit  Oxide  Synthases (NOS)  menjadi citrulline dan  NO. Nitrit  Oxide yang dihasilkan  arginin  ini  mempunyai  dua
peranan  penting  terhadap  spermatozoa. Yang  pertama,  meningkatkan  motilitas spermatozoa  dengan  cara  meningkatkan metabolism rate serta kadar kalsium dalam mitokondria  dan  menghasilkan  ATP  lebih banyak.    Pada  akhirnya  ATP  ini  digunakan sebagai sumber energi motilitas spermatozoa. Yang kedua yaitu melindungi membran aksonema dari proses peroksidasi  lipid  karena  keadaan  stres oksidatif  (Srivastava  dkk.,  2006).  Hasil penelitian  menunjukan  bahwa,  pemberian ekstrak  etanol  jahe  merah  dengan  dosis 200 mg/kgBB, 400 mg/kgBB, 600 mg/kgBB dan  dosis  tunggal  600  mg/kgBB  mampu memperbaiki  jumlah,  viabilitas,  motilitas dan  morfologi  spermatozoa  dari  kerusakan akibat pemberian herbisida paraquat .  Akan tetapi pemberian ekstrak etanol jahe merah pada  dosis  600  mg/bb  selama  35  hari menyebabkan  penurunan  motilitas  dan morfologi  normal  spermatozoa  sehingga efek  yang  dihasilkan  tidak  berbeda  nyata dengan dosis 200 mg/kgBB dan 400mg/kgBB bahkan dengan kontrol negatif atau dapat dikatakan pada dosis 600 mg/kg BB  tidak  berfungsi  sebagai  antioksidan. Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Fitriana  (2015)  bahwa, pemberian ekstrak jahe merah 600 mg//kgBB selama 21 hari ternyata menyebabkan motilitas dan morfologi normal  spermatozoa  menurun.  Menurut penelitian  Srivastava  dkk.,  (2006)  didalam jahe  merah  terdapat  kandungan  kusus arginin  yang  merupakan  prekursor  dari Nitrit  Oxide (NO)  endogen.  Sifat  dasar  NO bukan  hanya  sebagai  imunomodulator, vasodilator,  atau  neurotransmitter,  tetapi juga  sebagai  zat  oksidan.  Maka  ketika kadarnya  berlebih  dalam  tubuh  dan  sudah tidak  dapat  dikompensasi  maka  fungsinya berbalik  menjadi  membahayakan  sel-sel tubuh termasuk spermatozoa.

## KESIMPULAN
a)  Ekstrak  etanol  jahe  merah  ( Zingiber officinale roxb Var. Rubrum) mengandung antioksidan dengan memperlihatkan efektivitas dalam
meningkatkan jumlah, motilitas, viabilitas  dan  morfologi  spermatozoa mencit ( Musmusculus L.) dari
kerusakan  akibat  induksi paraquat diklorida .
b)  Pemberian  ekstrak  etanol  jahe  merah ( Zingiber  officinale roxb  Var.  Rubrum) dosis  400  mg/BB  merupakan  dosis yang efektif dalam meningkatkan
motilitas spermatozoa mencit
( Musmusculus L.) dari kerusakan akibat induksi paraquat diklorida .
c)  Pemberian  ekstrak  etanol  jahe  merah ( Zingiber  officinale roxb  Var.  Rubrum) dosis  600  mg/BB    tidak  dapat memperbaiki  motilitas  dan  morfologi spermatozoa  yang  induksi paraquat diklorida .

## DAFTAR PUSTAKA
Afaf  A,  El-Kashoury  F,  Afrah  SI,  Adel  S, Rania  A.  2009.  Animal  model study of reproductive toxicity of the chronic  exposure  of  dicofol.  Life Sci. 6(3):33-41
Astusti,  A.  2009. Profil  Antioxidant  Copper,
Zinc-Superoxide  Dismutase  (Cu, Zn, dan SOD) Pada tubuli
Seminiferi Testis Tikus Yang Diberi .Tepung  Kedelai  Kaya  Isoflavon, Seng  (  Zn),  dan  Vitamin  E . http://lemlit.  Unila.ac.id/file  arsip 2010.  Prossiding  Dies  Natalis Sussi  Astuti  FP.  Pdf.  Diakses September 2017.
Bijanti, R., Partosoewignjo, S., Wahyuni, R.
S., danUtomo,  B., 2002, Penuntun Praktik Laboratorium Klinik Veteriner , cetakan ke-3, Laboratorium Patologi Klinik Veteriner Kedokteran Hewan Universitas Airlangga. Surabaya. Fitriana,  R.  2015.Pengaruh  Pemberian Ekstrak Etanol Jahe Merah ( Zingiber Officinale Roxb var
Rubrum)  terhadap  Motilitas  dan Morfologi Spermatozoa Tikus Putih ( Rattus  Norvegicus )  Jantan  Strain Sprague  Dawley  yang  Dipapar Asap Rokok. Artikel Ilmiah. Universitas Lampung. Lampung. Fukushima,  T.,  k.  Tanaka,  H.  Lim,  M. Moriyama.  2002.  Mechanism  of cytotoxicity of paraquat. Environmental Healt and Preventive Medicine . 7: 89:94 Guyton, Arthur. 1994. Fisiologi Kedokteran . Terjemahan  Dharma  Adji  dan Lukmanto. EGC. Jakarta
Indika  G  and  Buckley.  2011.  Medical management of paraquat ingestion. British Journal of Clinical Pharmacology:  University  of  New South  Wales,  Sydney,  Australia. Tersedia dari :http//www.nebi.nlm.noh.gov/. Diakses tanggal 02 februari 2018.
Kamtchouing,  P.,  Mbongue,  G.Y.,  Dimo,  T. dan  Jatsa,  H.B.  2002.  Evaluation of  androgenic  activity  of Zingiber officinale and Pentadiplandra brazzeana in  male  rats. Asian  J. Androl . 4(4): 299
Karim  D.2013.  Pengaruh  paparan  asap rokok  elektrik  terhadap  motilitas, jumlah  sperma  dan  kadar  MDA testismencit  (Mus  musculus  L.) [tesis]. Universitas Sumatera
Utara. Medan. 1: 60-1.
Khaki,  A.,  Fathiazad  F.,  Nouri  M.,  Khaki
AA.,  Ozanci  CC.,  Novin  MG.,  dkk.
2009.  The  Effect  of  ginger  on spermatogenesis and sperm parameters  of  rat. Iranian  Journal of  Reproductive  Medicine (7)  (1) pp 7 – 12.
Kikuzaki,
H.K dan Nakatani, N. 1993.Antioxodant  Effects  of  Some
Ginger  Constituents .  Journal  of Food Sciens. 58(6): 1407-1410
Ledoh,  S.M.F.,  Hermania,  E.W.  dan  Siti,
A.S.A,  2010,Laju  Adsorpsi  dan Desorpsi  Paraquat  pada  Tanah Pertanian Desa Oesao Kecamatan Kupang Timur,Jurusan Kimia, Fakultas Sain dan Teknik Universitas Nusa Cendana, Kupang-NTT, Molekul , 5 (1): 1 – 9.
Levine,  R.  1991  Recognized  and  Possible Effects of Pesticides in Human. In: Handbook of Pesticides Toxicology . Hayes, JW ed & Laws, ER  ed.  Pp  318-  343.  Academic
Press Inc. California.
Ortiz, M.S., KM, Forti, E.B.S. Martinez, L.G. Munoz,k.  Husain,  W.H.  Muniz. 2016.  Effectts  of  antioksidant  N- acetylcysteine  against  paraquat induced  oxidative  stress  in  vital tissues  of  mice. Int  J    Sci  Basic Appl Res . 26 (1): 26-46
Raji  Y,  Udoh  US,  Mewoyaka  OO,  Ononye FC, Bolarinwa AF. 2003. Implication of reproductive
endocrine  malfunction  in  male antifertility  efficacy  of Azadirachta indica extract  in  rats. Afri.  J.
Med.Med.Sci 32:159-165.
Sanocka,  D.  &  M.  Kurpisz.  2004.  Reactive oxygen  species  and  sperm  cells.
Reprod. Biol. Endocrinol. 2:12.
Soehadi, K danArsyad, K.M., 1982, Analisis Sperma , Airlangga University Press. Surabaya
Srivastava,  S.,  Desai,  P.,  Coutinho,  E.  and Govil,  G.  2006.  Mechanism  Of Action  Of  Arginine  On  The  Vitality Of Spermatozoa Is Primarily
Through  Increased  Biosynthesis Of  Nitric  Oxide. Tata  Institute  of Fundamental  Research.India .(74) hal 954 –958.
Sriyani ,N. and Salam, A.K.2008.
Penggunaan metode bioassay untuk mendeteksi pergerakan herbisida  pascatumbuh  paraquat dan  2,4-D  dalam  tanah.  J.  Tanah Trop 13(3):199-208
Sukmaningsih  A.2009.  Penurunan  jumlah spermatosit  pakiten  dan  spermatid tubulus  seminiferus  testis  mencit (Mus  musculus)  yang  dipaparkan asap  rokok.  Jurnal  Biologi.  12:31- 2.
Wirawan, R., Setiabudi R., Satyawirarawan F.  S.,  Silman,  E.,  Loho  T., danPitono  I.,  1988, Pemeriksaan Laboratorium
Hematologi
Sederhana ,  Fakultas  Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta.