Syntax Literate : Jurnal Ilmiah Indonesia – ISSN : 2541-0849 e-ISSN : 2548-1398 Vol. 2, No 2 Februari 2017
KAJIAN  AKTIVITAS  ANTIMIKROBA  MONOASILGLISEROL  (MAG)  DAN MONO-DIASILGLISEROL (MDAG) DARI MINYAK KELAPA DAN MINYAK INTI SAWIT
Indriana Satya Mintarti 1 dan Slamet Hadi Kusumah 2
Universitas Islam Al-Ihya Kuningan Email : imintarti@gmail.com 1 , slamet.hadi@student.upi.edu 2

## Abstrak
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengevaluasi  aktivitas  antimikroba  MAG  dan MDAG  dari  minyak  kelapa  (CNO)  dan  minyak  inti  sawit  (PKO)  terhadap  bakteri patogen. Bakteri yang digunakan untuk mengevaluasi aktivitas antimikroba adalah Salmonella  typhimurium,  Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus,    dan    Bacillus cereus.  Penelitian  ini  juga  mencakup  evaluasi  aktivitas  antimikroba  MDAG-CNO terhadap    E.  coli  pada  berbagai  pH  yang  berbeda  dan  kombinasinya  dengan EDTA. Hasil penelitian menunjukkan bahwa MAG, MDAG-CNO dan MDAG-PKO lebih potensial menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif daripada terhadap bakteri Gram negatif. Aktivitas antimikroba MAG lebih potensial daripada MDAG. Peningkatan  konsentrasi  MAG  dan  MDAG  sampai  200  mg/ml  meningkatkan aktivitas  antimikroba  terhadap    B.  cereus  dan  S.    aureus.  Tetapi,  peningkatan konsentrasi  di  atas  200  mg/ml  tidak  meningkatkan  zona  hambat,  bahkan menurunkan  zona  hambat.  Zona  hambat  pada  S.    typhimurium    dapat    diamati sampai  konsentrasi  100  mg/ml  untuk  MDAG  dan  200  mg/ml  untuk  MAG.  Di  atas konsentrasi  tersebut,  tidak  ada  penghambatan  yang  teramati.  Tidak  ada penghambatan  pada    E.  coli  pada  semua  konsentrasi  MAG  dan  MDAG  yang digunakan yaitu antara 12.5 - 400 mg/ml. Penurunan zona hambat seiring dengan peningkatan  konsentrasi  MAG  dan  MDAG  mungkin  terjadi  karena  kemampuan difusi  pada  media  agar  yang  rendah  pada  konsentrasi  tinggi.  Penelitian  lebih lanjut pada MDAG-CNO menunjukkan bahwa minimum  inhibitory  concentration (MIC)  dari  MDAG-CNO  untuk    B.  cereus  dan  S.    aureus    adalah    17.5    mg/ml. Aktivitas  antimikroba  MDAG-CNO  terhadap  E.  coli  meningkat  dengan menurunnya pH dan penambahan EDTA. Pada pH 3 dan konsentrasi  MDAG 400 mg/ml, E. coli dapat diinaktivasi. Dengan penambahan EDTA, konsentrasi MDAG yang sama dapat menginaktivasi E. coli pada pH 4.
Kata kunci : MAG, MDAG, CNO, PKO, aktivitas antimikroba

## Pendahuluan
Mono-asil gliserol (MAG) adalah sebutan untuk monogliserida yang diproduksi dengan gliserolisis atau  dengan  esterifikasi  antara gliserol dengan  asam  lemak.
Sementara  mono-digliserida  (MDAG)  adalah  sebutan  untuk  campuran monogliserida dan digliserida ,  yang  diproduksi  dengan  cara  yang  sama.  Berdasarkan  rasio gliserol /lemak  dalam  campuran  reaksi,  jumlah monogliserida yang  diperoleh  setelah proses gliserolisis adalah antara 10-60%. MDAG komersial biasanya mengandung 45- 55% monogliserida ,  38-45% digliserida ,  dan  8-12% trigliserida (Gunstone  et  al.: 1994).  MAG  dan  MDAG  banyak  digunakan    sebagai emulsifaier dalam  es  krim, mentega  kacang,  puding,  dan  lainnya.  Batas  penggunaannya  berkisar  antara  0.05  - 0.40% (Igoe dan Hui, 1995).
Indonesia  memiliki  sumber  MAG  dan  MDAG  yang  sangat  berlimpah diantaranya  adalah  minyak  inti  sawit  (PKO)  dan  minyak  kelapa  (CNO).  Kandungan asam lemak yang dominan pada CNO adalah asam lemak rantai sedang ( medium chain triglycerides ),  dengan  86.5%  asam  lemak  jenuh,  5.8%  asam  lemak  tak  jenuh  rantai tunggal, dan 1.8% polyunsaturated fatty acid (PUFA).  Asam  lemak  yang dominan terkandung dalam PKO yaitu asam laurat (40-52%), asam miristat (14- 18%), dan asam oleat (11-19%) (Orthoeter: 1996).
Beberapa  hasil  penelitian  menunjukkan  MAG  dan  MDAG  sangat  berpotensi sebagai  pengawet.  Penelitian  Wang  et  al.    (1993)  menunjukkan  MAG  dari  minyak kelapa  yang  diproduksi  dengan gliserolisis menggunakan lipase PS-30  dari Pseudomonas  sp. mampu  menghambat  pertumbuhan Listeria    monocytogenes .  MAG dari  minyak  kelapa  juga  lebih  efektif  daripada lauril  gliserol .  Indriyati  (2003) menunjukkan  bahwa  MDAG  dari  minyak  kelapa  memiliki  aktivitas  antimikroba terhadap  bakteri  Gram  positif    ( Staphylococcus  aureus,  Bacillus  subtilis,  dan  Bacillus cereus ), khamir  ( Sacharomyces cerevisiae, Candida utilis,  kapang, Aspergillus oryzae dan  Rhizopus  stolonifer ).  Akan    tetapi  MDAG    tersebut  tidak  menunjukkan  aktivitas antimikroba terhadap bakteri Gram negatif ( Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, dan    Salmonella  thypimurium ).  Aktivitas  antibakteri  MDAG  lebih  kuat  dibandingkan aktivitas  antikapang  dan  khamir.  Aplikasi  MDAG  sebagai  antimikroba  dalam  santan kelapa  menunjukkan  bahwa  kombinasi  dari  penambahan  MDAG  dan  pasteurisasi mampu  menghambat  pertumbuhan  total  mikroba  alami  yang  terdapat  dalam  santan kelapa.
Aktivitas  antimikroba  MAG  dan  MDAG  dipengaruhi  oleh  kemurniannya  dan komposisi  asam  lemak  di  dalamnya  serta  kondisi  dimana  bakteri  hidup.  Ketersediaan
MAG  dan  MDAG  yang  berbeda  akan  menunjukkan  efektivitas  yang  berbeda.  Pada penelitian  ini  dilakukan  evaluasi  terhadap  sifat  antimikroba  MAG  dan  MDAG  yang dibuat  dari  minyak  kelapa  (MDAG-CNO)  dan  MDAG  yang  dibuat  dari  minyak  inti sawit (MDAG-PKO) terhadap bakteri patogen , serta evaluasi terhadap pengaruh pH dan EDTA terhadap aktivitas MDAG-CNO.

## Metodologi Penelitian

## A. Bahan Dan Alat
Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah Bacillus  cereus , Staphylococcus  aureus, Salmonella  typhimurium, dan Escherichia  coli .  Bahan  yang  digunakan  adalah  MAG, MDAG dari minyak kelapa (MDAG-CNO) dan MDAG dari minyak inti sawit (MDAG- PKO). Bahan untuk analisa mencakup media nutrient agar  (NA), nutrient broth (NB), alkohol  absolut  99,9%,  HCI  1%,  NaOH  1%  dan akuades .  Alat-alat  yang  digunakan adalah alat-alat standar untuk pengujian mikrobiologi.
B. Prosedur Pelaksanaan Penelitian

## 1. Pengujian Aktivitas Antimikroba MAG dan MDAG
Metode  ini  merupakan  uji  pendahuluan  untuk  mengetahui  potensi  antimikroba MAG,  MDAG-CNO  dan  MDAG-PKO.  Tahap  ini  dimulai  dengan  menginokulasikan sebanyak  0.5  ml  mikroba  uji  berumur  24  jam  ke  dalam  50  ml  NA.  Kemudian  NA tersebut dituang ke dalam dua cawan petri sebanyak masing-masing 25 ml. Setelah NA padat, dibuat sumur dengan diameter 6 mm dan ke dalamnya dimasukkan larutan MAG atau  MDAG  sebanyak  60  pl.  Setelah  itu  diinkubasi  selama  48  jam  dan  diukur  zona hambatnya,  yaitu  area  di  sekeliling  sumur  yang  menunjukkan  tidak  adanya pertumbuhan  bakteri.  MAG  dan  MDAG  yang  akan  digunakan  dilarutkan  dahulu  ke dalam  alkohol  absolut  agar  mampu  berdifusi  ke  dalam  media  agar.  Konsentrasi  MAG dan MDAG yang digunakan adalah 12.5 mg/ml, 25 mg/ml, 50 mg/ml, 100 mg/ml, 200 mg/ml, dan 400 mg/ml.
2. Penentuan Minimum Inhibitory Concentration (MIC) MDAG-CNO terhadap B. cereus dan S. Aureus
Minimum  Inhibitory  Concentration (MIC)  adalah  konsentrasi    terkecil  dari senyawa  antimikroba  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  mikroorganisme  pada periode  inkubasi  tertentu.  Penentuan  MIC  dilakukan  dengan  metode  Wang    et    al.
(1992) yang menggunakan serial pengenceran dari bahan yang diuji. Medium disiapkan dengan  melarutkan  sejumlah  MDAG-CNO  dalam  alkohol  absolut.  Selanjutnya  larutan MDAG-CNO  ditambahkan  pada  NB  steril  dalam  tabung  reaksi  dengan  jumlah  yang berbeda,  sehingga  diperoleh  suatu  serial  pengenceran  MDAG-CNO.  Konsentrasi MDAG-CNO  yang  digunakan  dari  0-20  mg/ml.  Ke  dalam  masing-masing  tabung diinokulasi sebanyak 1 ml kultur. Sebagai kontrol adalah tabung dengan perlakuan sama namun  tanpa  penambahan  MDAG-CNO.  Tabung  kemudian  diinkubasi  selama  24  jam pada suhu  optimum untuk masing-masing mikroba uji. Jumlah bakteri  pada 0 jam dan 24 jam inkubasi dihitung dengan menggunakan metode tuang dengan media NA. Nilai MIC ditentukan pada konsentrasi MDAG-CNO terendah yang dapat membunuh seluruh bakteri yang ditunjukkan dengan tidak terbentuknya koloni pada agar cawan.

## 3. Pengaruh pH terhadap aktivitas antimikroba MDAG-CNO
Tahap ini bertujuan untuk  mengetahui  pengaruh  pH terhadap  aktivitas MDAG- CNO pada pertumbuhan E. Coli . Kultur bakteri ditumbuhkan dalam media NB selama 24  jam.  Kemudian  dimasukkan  sejumlah  1  ml  kultur  ke  dalam  10  ml  media  NB  yang telah ditambah MDAG dengan berbagai konsentrasi dan diatur pada pH 3 sampai pH 9. Kontrol  yang  digunakan  disini  adalah  media  NB  tanpa  penambahan  MDAG.  Jumlah bakteri  pada  0  jam  dan  24  jam  inkubasi  dihitung  menggunakan  metode  tuang  dengan media NA.

## 4. Pengaruh EDTA terhadap aktivitas antimikroba MDAG-CNO
Tahap  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  penambahan  EDTA  ( ethylene diamine  tetraacetic  acid )  terhadap  aktivitas  antimikroba  MDAG-CNO.  Kultur E.  Coli berumur 24 jam diinokulasikan pada NB steril yang berisi 400 mg/ml MDAG-CNO dan EDTA dengan konsentrasi 1 mM, 3 mM, 5 mM, 7.5 mM, dan 10 mM pada pH 8, serta pada NB berisi  EDTA saja dengan konsentrasi  yang sama. Jumlah bakteri  pada 0 jam dan  setelah  24  jam  inkubasi  dihitung  menggunakan  metode  tuang  dengan  media  NA. Pengujian  juga  dilakukan  terhadap  campuran  MDAG-  CNO  400  mg/ml  dan  EDTA  (5 mM) pada pH 3 sampai pH 9.

## Hasil Dan Pembahasan

## A. Aktivitas Antimikroba MAG dan MDAG
Hasil  penelitian  (Gambar  1)  menunjukkan  bahwa  MAG,  MDAG-CNO  dan MDAG-PKO  memiliki  aktivitas  antimikroba  terhadap S.    aureus,  B.  cereus dan S. typmimurium .  Aktivitas  antimikroba  terhadap  bakteri  Gram  positif  ( S.  aureus dan B. cereus ), lebih tinggi dibandingkan dengan aktivitas antimikroba terhadap bakteri Gram negatif    ( S.    typhimurium ).  Namun  demikian,  MAG,  MDAG-CNO  dan  MDAG-  PKO tidak memberikan penghambatan terhadap E. Coli .
Menurut  Kabara    et  al.    (1972)  alkohol  dan ester  gliserol hanya  aktif  pada bakteri  Gram  positif  sehingga  tidak  dapat  menghambat E.  Coli .  Penambahan monokaprin pada kondisi asam dapat membunuh Salmonella  sp .  dan E.  Coli tetapi bakteri  Gram  negatif  ini  resisten  pada  pH  netral.  Penelitian  Schlievert    et  al.    (1992) menunjukkan  bahwa  penambahan gliserol  monolaurat sampai  konsentrasi  1000  dan 2000  pg/ml  tidak  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan E.  Coli karena  adanya  lapisan lipopolisakarida yang menghambat penetrasi gliserol monolaurat ke dalam sel.
Mekanisme  penghambatan  dan  kerusakan  mikroba  oleh  senyawa  antimikroba secara  umum  disebabkan  oleh  gangguan  pada  komponen  penyusun  sel,  terutama komponen penyusun dinding sel, reaksi dengan membran sel yang dapat mengakibatkan perubahan  permeabilitas  dan  kehilangan  komponen  penyusun  sel,  penghambatan terhadap  sintesis  protein,  dan  gangguan  fungsi  material  genetik  (Davidson,  2001). Monolaurin dilaporkan  dapat  mengakibatkan  kerusakan  membran,  menyebabkan kebocoran  protein  intraselular  dan  asam  nukleat  sehingga  menurunkan  aktivitas  enzim yang berperan dalam metabolisme (Vadehra dan Wahl 1985 diacu dalam Kabara 1993). Sifat  lipolitik dari MAG memungkinkan untuk  menembus plasma dan bekerja  sebagai antimikroba.
Secara umum, MAG yang digunakan memiliki aktivitas antimikroba yang lebih tinggi dibandingkan kedua jenis MDAG. Hal ini disebabkan oleh kemurnian MAG pada sediaan MAG yang digunakan pada penelitian ini lebih tinggi dibandingkan konsentrasi MAG pada sediaan MDAG-CNO dan MDAG-PKO. MAG yang disintesis dari minyak kelapa  sebagian  besar  merupakan monolaurin (MC12)  yang  mempunyai  aktivitas antimikroba  yang  cukup  tinggi  (Mappiratu,1999;  August,  2000).  MAG  dari  minyak
kelapa juga mengandung monokaprilin (MC8), monokaprin (MC10), dan monomeristin (MC14) yang mempunyai aktivitas antimikroba (Wang et al., 1993).
Konsentrasi  MAG  dan  MDAG  terendah  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini (12,5  mg/ml)  memberikan  efek  penghambatan  terhadap S.  aureus dan B.  cereus .  Efek penghambatan  MDAG  terhadap S.  typhimurium baru  dapat  diamati  pada  penggunaan MDAG  25  mg/ml,  namun  penghambatan  oleh  MAG  sudah  dapat  diamati  pada konsentrasi 12,5 mg/ml.

## Gambar 1
Penghambatan Pertumbuhan Staphylococcus Aureus , Bacillus Cereus Dan
Salmonella Typmimurium Oleh MDG Dan MDAG .
Peningkatan  konsentrasi  MAG  dan  MDAG  sampai  dengan  200  mg/ml meningkatkan  aktivitas  antimikroba  terhadap B.    cereus dan S.    aureus .    Tetapi, peningkatan  konsentrasi  di  atas  200  mg/ml  tidak  meningkatkan  zona  hambat,  bahkan menurunkan  zona  hambat.  Zona  hambat  pada S.    typhimurium dapat  diamati  sampai konsentrasi 100 mg/ml untuk MDAG dan 200 mg/ml untuk MAG. Di atas konsentrasi tersebut, tidak ada penghambatan yang teramati. Penurunan zona penghambatan seiring dengan peningkatan konsentrasi MAG dan MDAG mungkin terjadi karena kemampuan difusi pada media agar yang rendah pada konsentrasi MAG dan MDAG tinggi.

## B. Minimum Inhibitory Concentration (MIC)
Hasil pengujian pertumbuhan S. aureus dan B. cereus pada berbagai konsentrasi MDAG-CNO (Gambar 2) menunjukkan bahwa konsentrasi terendah untuk menghambat pertumbuhan atau MIC untuk S. aureus dan B. cereus adalah 17,5 mg/ml.

## Gambar 2
Pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Bacillus cereus pada berbagai konsentrasi MDAG-CNO
MIC  dan  MDAG  yang  dibuat  dari  hasil  pemanfaatan  destilat  asam  lemak minyak  kelapa  untuk B.  cereus adalah  20  mg/ml  dan  17.5  mg/ml  untuk S.    aureus (Indriyati:  2003).  Sementara  itu,  MIC  dari  asam  laurat  terhadap S.  aureus adalah  2.49 jmol/ml (0.498 mg/ml) (Kabara  et al.: 1972).  MIC  dari  MDAG  lebih  tinggi daripada asam laurat karena konsentrasi asam laurat dalam MDAG lebih rendah.

## C. Pengaruh pH terhadap aktivitas MDAG-CNO
Kemampuan  senyawa  antimikroba  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri dipengaruhi  oleh  kestabilannya  terhadap  protein,  lipid,  garam,  dan  tingkat  keasaman (pH)  dalam  medium  pertumbuhan  (Nychas  dan  Tassou:  2000  diacu  dalam  Naufalin: 2005).  Pada  penelitian  ini  dilakukan  pengujian  pengaruh  pH  terhadap  aktivitas antimikroba  MDAG-CNO  terhadap E.  Coli .    Bakteri    ini    dapat  tumbuh pada kisaran pH yang cukup luas antara 4.4 - 9 (Jay: 1996). Gambar 3 menunjukkan bahwa aktivitas MDAG meningkat dengan menurunnya pH. Tanpa penambahan MDAG, E. Coli masih dapat    tumbuh  pada  pH  3.  Dengan  penambahan  MDAG  400  mg/ml, E.  Coli dapat diinaktivasi pada pH 3. Pada pH 4, penambahan MDAG dengan konsentrasi yang sama menurunkan  3  log  cfu/ml  dibandingkan  dengan  kontrol.  Penelitian  Thormar    et  al. (2005),  menunjukkan  bahwa Salmonella  sp .  dan E.  Coli tidak  dihambat  oleh  asam
lemak  dan monogliserida pada  pH  netral.  Akan  tetapi, E.    Coli dapat  diinaktivasi dengan  penambahan  asam  sitrat.  Penambahan  1.25  mM monokaprin pada  pH  4,1,  4,5 dan  5,0  dapat  membunuh Salmonella  sp .  dan E.  Coli. Tetapi    tanpa  penambahan monokaprin pada  pH  4.1  atau  penambahan  5  mM monokaprin pada  pH  netral  tidak dapat membunuh keduanya.
Gambar 3

## Pengaruh penambahan MDAG-CNO pada berbagai pH
terhadap pertumbuhan E. Coli
Pada umumnya, asam lemak berfungsi sebagai surfaktan anionik yang masuk ke dalam plasma membran bakteri dan mengubah permeabilitas membran sehingga terjadi disintegrasi  membran.  Asam  lemak  rantai  pendek    ( Short  Chain    Fatty    Acid )    dan sedang    ( Medium  Chain  Fatty  Acid )  berdifusi  ke  dalam  sel  dalam  bentuk  tidak terdisosiasi  dan  kemudian  akan  terdisosiasi  di  dalam  sitoplasma  sehingga  membuat kondisi intraselular menjadi asam. Nilai pH intraselular yang lebih rendah menyebabkan inaktivasi enzim-enzim intraselular dan mengganggu transpor asama amino (Nair et al.: 2005).
Penelitian  Holland    et  al.  (1994),  menunjukkan  bahwa  pH  lingkungan  sangat mempengaruhi sensitivitas S.  aureus  terhadap gliserol monolaurat, di mana S. aureus lebih sensitif pada pH di bawah 7.  Penelitian Wang dan Jonhson (1992)  menunjukkan penghambatan  asam  lemak  dan  monolaurin  terhadap  L  monocytogenes  lebih  tinggi pada pH 5 daripada pH 6, karena meningkatnya sensitivitas L. monocytogenes pada pH rendah (Wang dan Johnson, 1992).

## D. Pengaruh EDTA terhadap aktivitas antimikroba MDAG-CNO
Gambar 4 menunjukkan bahwa EDTA dapat menghambat pertumbuhan E. Coli mulai konsentrasi 3 mM dan penghambatan semakin besar dengan naiknya konsentrasi
EDTA. Sementara itu, kombinasi antara MDAG 400 mg/ml dan EDTA 7.5 mM mampu membunuh E. Coli .
EDTA  ( ethylene diamine tetraacetic acid ) merupakan pengkelat logam. EDTA bereaksi  dengan  alkali  dan  logam  berat  membentuk  kompleks.  Menurut  Gray  dan Wilkinson  (1965),  EDTA  aktif  melawan P.  aeruginosa melalui  mekanisme pengkelatan.  EDTA  mengikat  kation  logam  yang  penting  bagi  integritas  dinding  sel yaitu kalsium, magnesium, dan kation divalen lainnya yang penting dalam pembentukan lipopolisakarida dan menyebabkan kebocoran dinding sel.

## Gambar 4
Pengaruh EDTA dan kombinasi MDAG-CNO 400 mg/ml dan EDTA terhadap pertumbuhan E. Coli
Kato  dan  Shibasaki  (1976)  menunjukkan  bahwa  penambahan  bahan  pengkelat ( citric  dan  polyphosphoric  acid )  dibutuhkan  untuk  memperkuat  efek monogliserida untuk  melawan  bakteri  Gram  negatif.  Pengkelat  asam  tersebut  akan  mengeluarkan lapisan lipopolisakarida dari dinding bakteri dan menyebabkan bakteri bereaksi seperti Gram positif. Peningkatan aktivitas antibakteri monolaurin dengan penambahan EDTA adalah karena peningkatan penyerapan monogliserida ke dalam sel.
Kombinasi  antara  EDTA  dengan  MDAG  dapat  meningkatkan  aktivitas antimikroba  MDAG  (Gambar  5).  Efektivitas  meningkat  dengan  menurunnya  pH. Konsentrasi EDTA 5 mM dan MDAG 400 mg/ml mampu membunuh E.  Coli pada  pH 4, sementara tanpa penambahan MDAG, E.  Coli baru  dapat  diinaktivasi  total  pada pH  3.  Pada  pH  4,  penambahan  EDTA  5mM  atau  MDAG-CNO  400  mg/ml  saja  tidak mampu membunuh E. Coli.

## Gambar 5
Pengaruh penambahan EDTA terhadap aktivitas antimikroba MDAG- CNO terhadap pertumbuhan E. coli pada berbagai pH

## Kesimpulan
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  MAG,  MDAG-CNO  dan  MDAG-PKO lebih  potensial  menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram  positif  daripada  bakteri  Gram negatif.  MAG  lebih  potensial  daripada  MDAG  untuk  menghambat  pertumbuhan bakteri.  Tidak  ada  penghambatan  pada E.  Coli pada  semua  konsentrasi  MAG  dan MDAG  yang  digunakan  yaitu  antara  12,5  -  400  mg/ml.  Akan  tetapi,  aktivitas antimikroba  MDAG-CNO  terhadap E.  Coli meningkat  dengan  menurunnya  pH  dan penambahan  EDTA,  sehingga  untuk  aplikasi  disarankan  penggunaan  MDAG  sebagai pengawet  dikombinasikan  dengan  pH  rendah  atau  penambahan  EDTA Minimum inhibitory concentration (MIC) dari MDAG-CNO untuk B. cereus dan S. aureus adalah 17.5 mg/ml.

## BIBLIOGRAFI
August, E. G. 2000. Kajian lipase amobil dari Aspergillus niger pada pembuatan MAG yang  bersifat  antibakteri  dati  minyak  kelapa .  Tesis.  Program  Pasca  Sarjana. Institut Pertanian Bogor
Blaszyk,  M.,  Holley,  R.  A.  1998. Interaction  of  Monolaurin,  Eugenol,  dan  Sodium Citrate on Growth of Common Meat Spoilage and Pathogenic Organisms . Int. J of Food Microbiol. 39:175-183
Davidson, P. M. dan Branen, A. L. Antimicrobials in Foods 2nd  Edition . , New York : Marcel Dekker Inc
Gunstone, F. D., J. L. Harwood, dan F. B. Padley. 1994. The Lipid Handbook . , London: Chapman and Hall
Holland, K. T., Taylor, D., dan Farrel, A. M. 1994. The effect of glycerol monolaurat on growth  of,  and  production  of  Toxic  Shock  Syndrome  Toxin-1  and  lipase  by, Staphylacoccus aureus. J of Antimicrobial Chemotherapy 33 : 41-55 Igoe, R. S. dan Hui, Y. H. 1996. Dictionary of Food Ingredients. , New York: Chapman and Hall
Indriyati,  W.  2003. Kajian  Aktivitas  Antimikroba  Campuran  Mono  dan  Diasilgliserol Hasil Pemanfaatan Destilat Asam Lemak Minyak Kelapa . Tesis. Program Pasca Sarjana. Institut Pertanian Bogor
Jay,  M.  J.  1996. Modem  Food  Microbiology  5th  Edition .  ,  New  York:  Chapman  and Hall
Kabara, J. J. 1993. Medium-Chan Fatty Acids and Esters . Di Dalam: Antimicrobials in Foods . Alfred L. B. dan P. M. Davidson (eds)., New York: Marcel Dekker, Inc.
Mappiratu.  1999. Penggunaan  Biokatalis  Dedak  Padi  Dalam  Biosintesis  Antimikroba Monoasil  Gliserol  dari  Minyak  Kelapa .  Disertasi.  Program  Pasca  Sarjana. Institut Pertanian Bogor
Nair,  M.  K.  M.,  Joy,  J.,  Vasudevan,  P.,  Hinckey,  L.,  Hoagland,  T.  A.,  dan Venkitanarayanan,  K.  S.  2005. Antibacterial  effect  of  caprylic  acid  and monocaprylin  on  major  bacterial  mastitis  pathogens .  J.  Dairy  Sci.  88:  3488- 3495
Naufalin,  R.  2005. Kajian  sifat  Antimikroba  Ekstrak  Bunga  Kecombrang    (Nicolaia speciosa  Horan)  terhadap  Berbagai  Mikroba  Patogen  dan  Perusak  Pangan . Disertasi. Sekolah Pasca Sarjana. Institut Pertanian Bogor, Bogor
Orthoeter,  F.  T.  1996. Vegetable  Oils .  Di  Dalam: Bailey’s  Industrial  Oil  and  Fat Products . Volume 1, 5th Edition. Editor: Y. H. Hui.  Jon Willey  and Son, New York
Shclievert,  P.  M.,  J.  R.  Deringer,  M.  H.  Kim,  S.  J.  Projan,  dan  R.  P.  Novick.  1992.
Effect of glycerol monolaurate on bacterial growth and toxin production . Int. J of Food Microbiol. Vol 36. no 3. p. 626-631
Wang,  L.  L.  dan  Johnson,  E.  A.  1992. Inhibition  of  Listeria  monocytogenes  by  fatty acids  and  monoglycerides .  Applied  and  Environmental  Microbiology,  Vol.  58, No. 2 : 624-629
Wang, L. L., Yang, B. L.,Parkin, K. L., dan Johnson, E. A. 1993. Inhibition of Listeria monocytogenes  by monoacylglycerol  synthetized  from coconut  oil and milk fat by lipase-catalized glycerolisis . J. Agric. Food Chem, 41 : 1000-1005