Keefektifan Vaksin Streptococcus Agalactiae untuk Mencegah Streptococcosis pada Ikan Nila
The Effectiveness of a Streptococcus agalactiae Vaccine for the Prevention of Streptococcosis on Nile Tilapia ( Oreochromis niloticus )
Imam Taufik, Mulyana, Maria Angela Lusiastuti E-mail: mulyanamarhalymsi@gmail.com

## ABSTRACT
Streptococcosis  is  important  disease  on  Nile  Tilapia  ( Oreochromis  niloticus )  caused  by Streptococcus  agalactiae bacteria.  The  aims  of  this  study  were  to  determine  effectiveness  of  a Streptococcus  agalactiae vaccine  through  immersion  and  intraperitoneal  injection  for  the prevention  of  a  Streptococcosis  on  Nile  Tilapia  ( Oreochromis  niloticus ).  Vaccination  trial  was conducted  through  immersion  and  intraperitoneal  injection  into  fish  with  concentration 10 7 cells/ml, 10 6 cells/ml, 10 4 cells/ml, and control. Tipalia’s control was injected with Brain Heart Infusion  Broth (BHIB).  Fish  were  challenged  by  intraperitoneal  injection  with  10 3 cfu/ml  of Streptococcus  agalactiae bacteria.  The  results  of  research  showed  that  was  not  significance different between treatments to survival rate of fishes. This caused by concentration of bacteria’s challenge  were  not  caused  major  LD 50 effect.  Titer  antibody  values  were  showed  has  immunity responses  that  signed  with  blood  agglutination.  The  clinical  symptoms  that  observed  started  72 hours after challenge’s with signed by fade of body’s color and swimming in the base of aquarium. The  mortality  of  fishes  started  96  hours  after  challenge’s.  The  conclusion  is Streptococcus agalactiae vaccine through immersion and intraperitoneal injection not effective enough to prevent Nile Tilapia LARASATI against Streptococcosis.
Keywords : Streptococcus agalactiae , vaccine, immersion, intraperitoneal injection

## ABSTRAK
Streptococcosis  adalah  penyakit  penting  pada  ikan  Nila  yang  disebabkan  oleh Streptococcus agalactiae .  Tujuan  dari  penelitian  ini  ialah  untuk  menentukan  keefektifanvaksin Streptococcus agalactiae melalui perendaman dan penyuntikan intraperitoneal untuk pencegahan Streptococcosis pada ikan Nila. Percobaan vaksinasi telah dilakukan melalui perendaman dan penyuntikan secara intraperitoneal  ke  dalam  ikan  dengan  konsentrasi  10 7 cells/mL,  10 6 cells/mL,  10 4 cells/mL,  dan kontrol.  Ikan  kontrol  disuntik  dengan  BHIB  (B rain  Heart  Infusion  Broth ).  Ikan  uji  ditantang melalui  suntikan  intraperitoneal  pada  dosis  10 3 cfu/mL Streptococcus  agalactiae .  Hasil  penelitian tidak  memperlihatkan  perbedaan  nyata  diantara  perlakuan  terhadap  kelangsungan  hidup  ikan.  Ini disebabkan oleh karena konsentrasi uji tantang tidak disebabkan oleh pengaruh LD 50 utama. Nilai titer  antibodi  memperlihatkan  respon  imun  yang  ditandai  dengan  penggumpalan  darah.  Gejala klinis yang teramati dimulai 72 jam pasca uji tantang ditandai dengan perubahan waarna tubuh dan berenang  di  daras    akuarium.  Kematian  ikan  dimulai  96  jam  setelah  uji  tantang.  Vaksin Streptococcus  agalactiae melalui  perendaman  suntikan  intraperitoneal  injection  belum  cukup efektif untuk mencegah ikan Nila LARASATI terhadap Streptococcosis.
Kata kunci : Streptococcus agalactiae , vaksin, imersi, penyuntikan intraperitoneal
Taufik,  Mulyana,  Maria.  2016.  Efektivitas  Vaksin Streptococcus  agalactiae melalui  Perendaman  dan Injeksi Intraperitoneal untuk Pencegahan Streptococcosis pada Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ). Jurnal Mina Sains 2 (2): 80-86.

## PENDAHULUAN
Penyakit yang paling signifikan menyebabkan  kerugian  dalam  budidaya  ikan nila  adalah  Streptococcosis,  yang  disebabkan bakteri jenis Streptococcus . Bakteri ini bersifat patogenik,  menyebar  secara  cepat  pada  padat penebaran  tinggi  dan  dapat  mengakibatkan kematian  pada  benih  dan  ikan  dewasa.  Ikan yang  terserang  Streptococcosis  menunjukkan gejala  seperti  gerakan  renang  tidak  menentu (erratic) ,  nafsu  makan  kurang (anorexia) ,
tubuh membentuk huruf “C”, serta menyebabkan kematian (Pasnik et al . 2005).
Mengingat  ikan  nila  potensial  untuk dibudidayakan, maka upaya pencegahan Streptococcosis  secara  dini  akan  mendukung kegiatan  budidaya  karena  melalui  upaya pencegahan  ini,  diperkirakan  ikan  akan mempunyai  ketahanan  yang  tinggi  terhadap serangan  bakteri  tersebut.  Salah  satu  cara pencegahan  yang  terbaik  adalah  dengan  cara vaksinasi  (Ellis  1988).  Vaksinasi  dapat meningkatkan  kekebalan  pada  tubuh  ikan terhadap  serangan  penyakit  tertentu  selama beberapa  waktu  sehingga  angka  kematian dapat ditekan serendah mungkin.
Pada  penelitian  ini  akan  dilakukan pengukuran  efektivitas  vaksin Streptococcus agalactiae pada ikan nila melalui cara aplikasi perendaman dan injeksi intraperitoneal dengan melihat tingkat kelangsungan hidupnya setelah diberi uji tantang dengan bakteri Streptococcus agalactiae . Penelitian ini bertujuan
untuk mengetahui  efektivitas  vaksin Streptococcus agalactiae melalui  perendaman  dan  injeksi intraperitoneal dengan melihat tingkat kelangsungan  hidupnya  setelah  diberi  uji tantang dengan bakteri Streptococcus
agalactiae .

## BAHAN DAN METODE Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  pada  tanggal  03 Agustus  2010  sampai  dengan  07  September 2010. Bertempat di Laboratorium Patologi dan Laboratorium  Basah  Balai  Riset  Perikanan Budidaya  Air  Tawar  (BRPBAT), yang beralamat  di  Jl.  Sempur  No.  1  Bogor,  telp. (0251) 31320, email : brpbat@telkom.net .
Alat dan Bahan Penelitian Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  adalah  bak  tandon,  bak fiber , akuarium  ukuran  60x40x45  cm 3 ,  blower, selang  aerasi,  batu  aerasi, water  heater 350 watt ,  pompa  air,  serok  kain  kasa,  selang plastik, autoclave , refrigerator , inkubator , hot plates , stir  plates , timbangan  elektronik, tabung erlenmeyer ,  gelas  ukur, alat  suntik (spuit), m agnetic stirrer, lemari es, sentrifuga , tabung kecil ( mikro tube ), mikropipet , mikroplate, pipet Sahli , tabung Hb-meter, pipet skala  101, Haemocytometer , pipet  skala  11, thermometer , dan pH paper.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  adalah  ikan  nila  LARASATI  yang bebas  dari Streptococcus atau  SPF  ( Specific Pathogen  Free ),  memiliki  bobot  berkisar  15  – 20 g/ekor dengan jumlah sebanyak 30 ekor tiap perlakuan. Isolat bakteri Streptococcus agalactiae β-hemolitik  (N14G)  koleksi  Balai Riset  Perikanan  Budidaya  Air  Tawar  Bogor. Media Brain  Heart  Infusion  A gar  (BHIA)  dan Brain  Heart  Infusion  Broth (BHIB).  Serum darah, larutan salin steril, HCl 0,1 N, Aquades, larutan hayem , dan larutan turk.

## Rancangan Percobaan
Rancangan  percobaan  yang  digunakan adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan  perlakuan  pola  faktorial  tersarang. Faktor  pertama  adalah  cara  pemberian  vaksin melalui perendaman dan injeksi intraperitoneal.  Faktor  kedua  adalah  dosis vaksin (tersarang dalam cara) dengan konsentrasi  10 7 sel/ml,  10 6 sel/ml,  10 4 sel/ml, dan kontrol. Setiap perlakuan dilakukan 3  kali ulangan.

## Aklimatisasi ikan uji
Ikan  uji  yang  digunakan  adalah  ukuran 15 – 20 gram.  Ikan uji telah didiagnosa secara klinis negatif
Streptococcosis dan diaklimatisasi dalam bak fiber kapasitas 200 L. Ikan  uji  tersebut  diaklimatisasi  selama  satu minggu.  Ikan  uji  dipelihara  dengan  pemberian pakan  secara adlibitum dengan  frekuensi pemberian  pakan  tiga  kali  sehari  pada  pukul 08.00,  12.00,  dan  16.00  WIB.  Untuk  menjaga kualitas  air  dalam  bak  fiber,  dilakukan penyiponan dan pergantian air sesuai kebutuhan sebanyak 25-50% dari total air.

## Pembuatan Vaksin
Vaksin  dibuat  dengan  cara  mengambil 1  ose  isolat Streptococcus  agalactiae di Brain Heart Infusion Agar (BHIA) dan ditumbuhkan di  dalam  10  ml Brain  Heart  Infusion  Broth (BHIB),  kemudian  diinkubasi  selama  24  jam sehingga  diperoleh  konsentrasi Streptococcus agalactiae 10 8 sel/ml.  Hasil  biakan  tersebut dipindahkan  ke  dalam  90  ml Brain  Heart Infusion  Broth (BHIB)  sehingga  volume menjadi 100 ml lalu diinkubasi selama 24 jam. Selanjutnya  larutan  diinaktivasi  dengan  cara menambahkan  formalin  1  %  dan  di vortek selama 1 jam. Kemudian ditumbuhkan kembali dalam Brain  Heart  Infusion  Agar (BHIA)  dan diinkubasi  selama  72  jam  untuk  mengetahui inaktifasinya  (uji viabilitas ).  Jika  bakteri Streptococcus  agalactiae tidak  ada  yang tumbuh (inaktif) maka vaksin digunakan untuk perlakuan.

## Vaksinasi
Setiap  perlakuan  diberikan  pada  30  ekor ikan  nila  dengan  ulangan  3  kali.  Ikan  nila  uji direndam pada larutan vaksin selama 30 menit. Untuk  ikan  nila  kontrol  direndam  dalam  air tanpa  vaksin.  Aerasi  tetap  diberikan  selama perendaman. Untuk aplikasi injeksi intraperitoneal dilakukan terhadap 30 ekor ikan nila  uji  dengan  ulangan  3  kali  menggunakan dosis  0,1  ml  per  ikan.  Untuk  ikan  nila  kontrol dilakukan injeksi dengan Brain Heart Infusion Agar (BHIB).

## Uji Tantang Ikan Nila Uji
Setelah dua minggu pasca vaksinasi, ikan nila  uji  ditempatkan  pada  24  akuarium, masing-masing  sebanyak  30  ekor  sesuai dengan perlakuan yang diberikan. Ikan nila uji pada  masing-masing  perlakuan  diuji  tantang dengan menyuntikkan secara injeksi intraperitoneal bakteri Streptococcus
agalactiae dengan  kepadatan  10 3 cfu/ml sebanyak 0,1 ml.

## Parameter Pengamatan Kelangsungan Hidup
Kelangsungan  hidup  ( survival  rate ) diamati  setiap  hari  pada  saat  masa  induksi vaksin  dan  uji  tantang.  Kelangsungan  hidup dapat dihitung dengan rumus (Effendie 1997) :
Dimana : SR  :  Survival rate (%)
Nt  :  Jumlah ikan nila yang hidup pada akhir pengamatan
No  :  Jumlah ikan nila pada awal pengamatan

## Titer Antibodi
Pengamatan  terhadap  titer  antibodi dilakukan  untuk  mengetahui    antibodi  yang dihasilkan  oleh  ikan  setelah  diberi  perlakuan vaksinasi.  Pengukuran  titer  antibodi  dilakukan berdasarkan  metode  Anderson  (1974)  yaitu aglutinasi  langsung  dengan  menggunakan mikroplate . Pengukuran titer antibodi dilakukan sebelum vaksinasi, minggu pertama, minggu  kedua,  minggu  ketiga,  dan  minggu keempat setelah vaksinasi.

## Analisis Data
Pengaruh perlakuan terhadap
kelangsungan hidup dianalisa dengan menggunakan  analisis  sidik  ragam  atau  uji  F. Jika  terdapat  perbedaan  antar  perlakuan  diuji dengan  menggunakan  uji  Duncan  taraf  5% (Gaspersz  1991),  model  linier  dari  rancangan ini adalah sebagai berikut :
Dimana : X ij =  Nilai  pengamatan  pada  perlakuan  ke-i dan ulangan ke-j
µ =   Rata-rata pengamatan (nilai tengah)
τ i =   Pengaruh vaksinasi ke-i έ ij =  Pengaruh galat percobaan pada perlakuan ke-i dan ulangan ke-j
Untuk  data  titer  antibodi,  parameter hematologi,  gejala  klinis  dan  kualitas  air dianalisis secara deskriptif.
SR = Nt/No x 100%
X ij = µ + τ i + έ ij

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Survival Rate/ Kelangsungan Hidup Tabel 1  Nilai survival  rate (%)  pada  akhir proses  uji  tantang  terhadap  bakteri Streptococcus agalactiae Aplikasi Konsentrasi vaksin (sel/ml) 10 7 10 6 10 4 Kontrol Injeksi 85 92 84 90 Perendaman 98 91 93 91
Hasil  analisis  ragam survival  rate menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan nyata antar perlakuan cara pemberian vaksin dimana F hitung  (= 3.19)  < F tabel  (= 4.49) dan  antar dosis vaksin yang diberikan juga tidak berbeda nyata  dimana  F  hitung  (=  0.74)  <  F  tabel (=  2.74)  pada  taraf  5%,  sehingga  ikan  yang divaksinasi  secara  perendaman  maupun  secara injeksi  intraperitoneal  dengan  ikan  yang  tidak divaksinasi  atau  kontrol  tidak  ada  perbedaan nyata terhadap tingkat kelangsungan hidupnya. Demikian  juga  pada  perlakuan  pemberian berbagai  konsentrasi  vaksin  yang  berbeda menunjukkan tidak ada perbedaan yang nyata.

## Titer Antibodi
Reaksi  terhadap  vaksinasi  baru  terlihat pada  minggu  ke-2,  terutama  vaksinasi  melalui aplikasi  injeksi  intraperitoneal.  Tetapi,  titer antibodi melalui aplikasi injeksi intraperitoneal tidak  konsisten,  pada  minggu  ke-3  terjadi penurunan  dan  meningkat  kembali  pada minggu  ke-4.  Konsentrasi  10 7 sel/mL  melalui aplikasi  injeksi  intraperitoneal  memiliki  nilai titer  antibodi  yang  fluktuatif,  sedangkan vaksinasi melalui aplikasi perendaman menunjukkan  nilai  titer  antibodi  yang  lebih konsisten terutama pada konsentrasi 10 7 sel/ml dan  10 6 sel/mL.  Ikan  kontrol  yang  divaksinasi melalui  aplikasi  injeksi  intraperitoneal  nilai titer antibodinya turun drastis setelah dilakukan  uji  tantang,  sedangkan  ikan  kontrol yang  divaksinasi  melalui  aplikasi  perendaman nilai titer antibodinya justru meningkat setelah dilakukan uji tantang.

## Gejala Klinis
Gejala  klinis  ikan  nila  uji  ditandai dengan  adanya clear  operkulum ,  warna  tubuh memudar dan pucat, serta berenang lemah dan di dasar (Gambar 1).
Gambar 1 Gejala klinis ikan nila yang diinfeksi S. Agalactiae ; a) nila LARASATI sehat, b) nila LARASATI sakit: warna tubuh memudar, c) nila BEST sehat, d) nila BEST sakit: warna tubuh menghitam, e) nila LARASATI clear operculum , f) nila LARASATI berenang lemah dan di dasar

## Kualitas Air
Suhu  selama  penelitian memiliki  kisaran antara 25 0 C-26 0 C di pagi  hari dan di  sore hari memiliki kisaran antara 26 0 C-27 0 C. Sedangkan nilai  pH  yang  diukur  satu  minggu  sekali memiliki nilai antara 6,5-7,0.

## Pembahasan Kelangsungan Hidup
Ada  dua  kemungkinan  penyebab  tidak efektifnya  pemberian  vaksin Streptococcus agalactiae pada  ikan  nila  LARASATI:  yaitu (1)  berdasarkan  hasil  penelitian  vaksin Streptococcus  agalactiae di  Balai  Riset Perikanan  Budidaya  Air  Tawar  Bogor  pada tahun  2009  (Taukhid  2009;  Purwaningsih c
d e f a b

## 2009;  dan  Lusiastuti  2009)  menggunakan
Streptococcus  agalactiae isolat  2  N4M  yang bersifat  non-hemolitik  dan  berkapsul  tidak memberikan  level  protektif  yang  tinggi.  Pada tahun  2010,  diujikan  isolat  3 Streptococcus agalactiae N14G yang bersifat β-hemolitik dan tidak  berkapsul  ternyata  juga  tidak  efektif  di dalam  memberikan  level  proteksi  seperti  yang diharapkan  yang  dapat  melindungi  ikan  dari infeksi Streptococcus  agalactiae . Berdasarkan hasil  penelitian  Hardi  (2010)  faktor  produk ekstraseluler Streptococcus agalactiae berpotensi  sebagai immunogenic  properties , dan  kombinasi whole  cell dari  isolat  3  β- hemolitik Streptococcus  agalactiae ternyata memberikan  level  proteksi  yang  cukup  tinggi jika ditantang baik dengan β-hemolitik maupun non-hemolitik. (2) berdasarkan hasil penelitian Winarti  (2010),  tentang  kerentanan  ikan jelawat Leptobarbus  hoevenii Blkr.,  terhadap infeksi bakteri Streptococcus agalactiae menunjukkan  bahwa  ikan  jelawat  tahan terhadap Streptococcus agalactiae, yang diketahui  melalui  uji  tantang  lewat  injeksi intraperitoneal dan intramuskuler serta rendaman  dengan  dosis  10 9 cfu/ml.  Jadi kemungkinannya  ikan  nila  LARASATI  juga tahan terhadap infeksi Streptococcus agalactiae atau  harus  diuji  tantang  dengan dosis  yang  berbeda  dengan  ikan  nila  BEST. Dosis  uji  tantang  yang  digunakan  pada  nila BEST  adalah  10 3 cfu/mL.  Sehingga  walaupun sudah  divaksin,  tetapi  dosis  uji  tantang  yang diberikan tidak cukup kuat, proses infeksi tetap berjalan,  tetapi  lambat,  yang  dimungkinkan terminasi  akhir  penyakit  adalah  ikan  sakit  lalu mati atau kemungkinan ikan sakit dan menjadi sembuh.

## Titer Antibodi
Antibodi bereaksi spesifik dengan antigen membentuk senyawa kompleks berupa endapan  ( presipitat )  dan  gumpalan  ( aglutinat ) yang  ditunjukkan  melalui  uji imunopresipitasi ( imunodifusi ) Agar  Gel  Precipitation  Test (AGPT)  atau  uji  aglutinasi.  Antibodi  berperan sebagai presipitin dan aglutinin .  Cara  lain antibodi menghalangi efek antigen dengan cara blokade,  yaitu  bereaksi  dengan epitop antigen sehingga  antigen  tidak  mampu  mengenal reseptor sel inang yang menyebabkan kegagalan  proses  perlekatan  antigen  pada
permukaan  sel  inang  (antibodi  bertindak sebagai inhibin ).  Cara  lain  adalah  melalui antibodi  untuk  mempercepat  eliminasi  antigen dengan  proses opsonisasi (antibodi  sebagai opsonin ). Antigen dalam keadaan teropsonisasi lebih  mudah  dikenal  makrofag  dan  lebih efektif untuk dihancurkan.
Ikan nila uji  yang divaksin  tetap mampu memproduksi  antibodi  saat  diuji  aglutinasi dengan  bakteri Streptococcus  agalactiae pada minggu  ke-4  pasca  vaksinasi.  Pada  akhir pengamatan  masih  ditemukan  adanya  antibodi yang  terbentuk  pada  ikan  nila  uji  yang divaksinasi,  ini  menunjukkan  bahwa  kedua cara vaksinasi yang diberikan dengan berbagai macam  konsentrasi  mampu  membantu  tubuh untuk  mengeliminasi  bakteri  patogen  yang menginfeksi.
Nilai  titer  antibodi  juga  menunjukan adanya respon imunitas pada semua perlakuan, namun  tidak  memberikan  level  proteksi  yang berbeda  nyata.  Hal  ini  diduga  karena  tidak berfungsi  secara  efektif  perlakuan  uji  tantang yang diberikan.

## Gejala Klinis
Berdasarkan  hasil  penelitian,  gejala klinis ikan nila uji yang terinfeksi Streptococcus  agalactiae ditunjukkan  adanya clear  operculum , warna  tubuh  memudar , serta berenang  lemah  dan  di  dasar.  Walaupun bentuk  tubuh  secara  keseluruhan  masih  sama seperti ikan sehat. Berdasarkan hasil penelitian Hardi  (2010)  gejala  klinis  ikan  nila  BEST mulai  muncul  dalam  waktu  72  jam  pasca  uji tantang  ditandai  dengan  warna  tubuh  yang menghitam,  dan  kematian  mulai  terjadi  dalam waktu 24 jam pasca uji tantang.
Serangan bakteri Streptococcus
agalactiae terhadap  ikan  nila  uji  dapat dibedakan menjadi 3, yaitu: 1) ditandai adanya gejala  klinis  dan  menyebabkan  kematian,  2) tidak  adanya  gejala  klinis  tetapi  menyebabkan kematian,  3)  ditandai  adanya  gejala  klinis tetapi tidak menyebabkan kematian.

## Kualitas Air
Kualitas  air  selama  penelitian  yang meliputi  suhu dan pH air masih dalam kisaran yang  optimal  untuk  mendukung  kehidupan ikan  nila.  Data  suhu  penelitian  memiliki kisaran 25-27 0 C, nilai ini masih berada dalam
kisaran  syarat  tumbuh  normal  ikan  nila  yaitu 14-38 0 C.  Demikian  juga  data  pH  hasil penelitian  6,5-7,0  masih  dalam  kisaran  syarat tumbuh  normal  ikan  nila.  Fluktuasi  suhu  dan pH  juga  masih  dalam  kisaran  yang  tidak berbahaya bagi ikan nila.

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Vaksin Streptococcus  agalactiae yang diberikan  melalui  aplikasi  perendaman  dan injeksi intraperitoneal dengan berbagai konsentrasi  tidak  efektif  untuk  mencegah Streptococcosis pada ikan nila LARASATI.

## Saran
Perlu dilakukan penelitian dengan menggunakan  ikan  uji  dari  berbagai  varietas ikan  nila  yang  berbeda,  agar  dapat  diketahui tingkat  efektivitas  vaksin  yang  diberikan dengan  dosis  uji  tantang  sesuai  dengan  jenis ikan uji tersebut.

## DAFTAR PUSTAKA
Chinabut  S,  Limsuwan  C,  Kitsawat  P.  1991. Histology of the Walking Catfish, Clarias batrachus .  Thailand : International Development Research Centre (IDRC).
Dunham RA. 2009. Transgenic fish resistant to infectious  diseases,  their  risk  and prevention of escape into the environment  and  future  candidate  genes for  disease  transgene  manipulation . Comp  Immunol  Microbiol  Infect  Dis.
32(2):139-61. Epub 2008 Feb 4.
Effendie  MI.  1997. Biologi  Perikanan . Yayasan Pustaka Nusatama. Yogyakarta.
Ellis  AE.  1988. General  Principles  of  Fish Vaccination . di dalam: Fish Vaccination . Academic Press. New York.
Gasperz V. 1991. Metode Rancangan Percobaan . CV. Armico. Bandung.
Hardi  EH.  2010. Vaksinasi  Streptococcus agalactiae Pada Ikan Nila (Oreochromis niloticus)  Menggunakan  Dua  Isolat
Berbeda .  Disertasi  Sekolah  Pascasarjana IPB. Bogor.
Lusiastuti  AM.  2009. Potensi  Imunogenik  sel utuh (whole cell) Streptococcus agalactiae)  yang  divaksinasi  dengan formalin untuk pencegahan streptococcosis pada ikan nila (Oreochromis niloticus) . Laporan
Penelitian Hibah Penelitian Bagi Peneliti dan  Perekayasa  Departemen  Kelautan dan  Perikanan.  Balai  Riset  Perikanan Budidaya  Air  Tawar.  Pusat  Riset Perikanan Budidaya. Departemen Kelautan dan Perikanan.
Pasnik  DJ,  JJ  Evans,  PH  Klesius.  2005.
Duration  of  Protective  Antibodies  and Correlation  with  Survival  in  Nile  tilapia Oreochromis niloticus
Following Streptococcus  agalactiae  Vaccination .
Diseases  of  Aquatic  Organisms.  66:129-
134.
Purwaningsih  Uni.  2009. Potensi  imunogenik sel  utuh  (whole  cell)  Streptococcus agalactiae  yang  diinaktivasi  melalui proses  pemanasan  untuk  pencegahan penyakit  Streptococcosis  pada  ikan  nila (Oreochromis niloticus) . Laporan Penelitian Hibah Penelitian Bagi Peneliti dan  Perekayasa  Departemen  Kelautan dan  Perikanan.  Balai  Riset  Perikanan Budidaya  Air  Tawar.  Pusat  Riset Perikanan Budidaya. Departemen Kelautan dan Perikanan. Taukhid.  2009. Efekivitas  Pemberian  Vaksin Streptococcus spp. Pada Benih Ikan Nila (Oreochromis  niloticus)  Melalui  Teknik Perendaman Untuk Pencegahan Penyakit Streptococcosis . Laporan
Penelitian Hibah Penelitian Bagi Peneliti dan  Perekayasa  Departemen  Kelautan dan  Perikanan.  Balai  Riset  Perikanan Budidaya  Air  Tawar.  Pusat  Riset Perikanan Budidaya. Departemen Kelautan dan Perikanan. Wedemeyer GA, Yasutake WT. 1977. Clinical Methods for the Assessment of the Effect Environment  Stress  on  the  Fish  Health .
Technical  Paper  of  the  US  Fish  and Wildlife  Service.  US  Depart  of  the Interior  Fish  and  Wildlife  Service.  89:1- 17.
Winarti.  2010. Kerentanan  Ikan  Jelawat Leptobarbus  hoevenii  Blkr  Terhadap Infeksi  Bakteri  Patogen .  Thesis  Sekolah
Pascasarjana IPB. Bogor.