## PENGARUH BATUAN FOSFAT DAN KERAPATAN INOKULUM TERHADAP KETAHANAN HIDUP ASPERGILLUS NIGER DAN KEMAMPUANNYA MELARUTKAN FOSFAT SETELAH DIPELETKAN DENGAN BATUAN FOSFAT
The Effect of Rock Phosphate And Level of Inoculums on The Survivability of Aspergillus niger and Its Solubilization Ability When Pelleted With Rock Phosphate
Yudi Sastro*, Donny Widianto, and Irfan D.  Prijambada
*Balai Pengkajian Teknologi Pertanian  Jakarta Fakultas Pertanian Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta

## ABSTRACT
The  study is intended to  examine  the  survival of Aspergillus niger and its phosphate solubilizing ability when pelleted with rock phosphate.  An A.  niger YD 17 obtainedfrom the  Laboratory of Microbiology.  Faculty of Agriculture, Gadjah Mada University was used.  The  pellet was made  by mixing rock phosphate  (80%)  with  organic matter (J 3. 9% waste of tapioca.  6% rice  bran,  and 1% starch)  and spore  of A.  niger.  The  experimental design  was  the  Complete  Randomized Design 5x4 with 3 replicatiOns.  The first factor  was  sources  of rock phosphate  (Christmas  Island.  Jordan,  China,  Ciamis,  and Madura).  The secondfactor was the number ofinoculums i.e.  control without inoculums, 10 7 • J(t and J(t cfu.g·'.  The colony of A. niger that formed at  medium  of potatoes dextrose  agar  (PDA)  and the  amount  of soluble  phosphorus  in the  Pikovskaya liquid medium were parameters.  Experimental results  indicated that sources of rock phosphate and the number of inoculums itif1uence the A. niger  survivability  and its  phosphorus  solubilizing  ability.  Rock  phosphate from  Ciamis  gave  the  best  support for fungus survival and rock phosphate from  Christmas  Island was  the  best substrate for phosphate  solubilization.  The  highest soluble phosphate was achieved by ul inoculums.
Key words: Aspergillus niger,  rock phosphate,  solubilization,  survivability

## PENDAHULUAN
Penggunaan  batuan  fosfat  yang  diberikan  secara langsung  sebagai  pupuk  fosfat  merupakan  salah  satu  cara untuk  mengatasi  mahalnya  harga  pupuk  dan  rendahnya efisiensi  pemupukan  menggunakan  pupuk  superfosfat (Bolan  et  al.,  1997;  Adiningsih  et  al.,1998;  Kasno  et  al., 1998).  Namun  demikian,  sifat  batuan  fosfat  yang  sukar terlarut  dalam  air  menyebabkan  laju  pelarutannya  tidak berimbang dengan kebutuhan fosfat (P) tanaman (Hammond  dan  Diamond,  1987;  Matunubun  et  al.,1988;. Fageria et al.,  1991).
Mikroba pelarut fosfat (MPF) telah dilaporkan mampu meningkatkan  pelarutan  batuan  fosfat  (Banik  dan  Dey, 1982;  IIImer  dan  Schinner,  1982;  Goldstein  et  ai"  1993; Goldstein,  1995;  Bar-Yosef,  1998). Untuk  menjamin proses  pelarutan  batuan  fosfat  oleh  MPF  dan  memudahkan aplikasinya ditingkat lapangan maka batuan fosfat dan  MPF harus  digabungkan  dalam  satu  formula  pupuk  fosfat. Syarat  utama  yang  harus  dipenuhi  dalam  mengembangkan formula  pupuk  fosfat  yang  terdiri  atas  gabungan  batuan fosfat  dan  MPF  adalah  inokulum  MPF  yang  disertakan harus  dapat bertahan  hidup dan  tetap  memiliki  kemampuan untuk  melarutkan  P  hingga  pupuk  terse but diaplikasikan  di lapangan.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melihat  kemampuan hidup Aspergillus niger serta kemampuannya  melarutkan  P dari  batuan  fosfat  setelah  dipeletkan  dengan  batuan  fosfat
membentuk  pupuk  fosfat  yang  disebut  dengan  nama biofosfat.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan Penelitian
Batuan  fosfat  yang  digunakan  meliputi  batuan  fosfat Kepulauan  Christmas,  China,  Yordania,  Ciamis dan Madura. Setiap  batuan  fosfat  diayak  menggunakan saringan  yang  memiliki  lubang  saring  berdiameter  2  mm. Karakteristik  kimia  masing-masing  batuan  fosfat  disajikan dalam Tabel  1.
Tabel I. Karakteristik  kimia  batuan  fosfat  yang  diglll1lkan  daIam penelitian
Larut  Larut  Aho,  Fe,o,  Mn2o,
Batuan H-H  0  Larut air sitrat HCI Fosfat p 2 (ppm) 2% 25% ------------- --% Kep. 8,2 784 8,9 32,1 1,5 4,9 n Christmas Cina 9,3 973 9,3 33,0 0,6 4,4 n Yordania 8,0 680 9,2 31,6 1,4 4,2 n Ciamis 8,8 754 7,8 31,7 1,9 6,0 0,Q3 Madura 7,8 385 0,8 17,3 3,1 5,2 0,4
It : tidak terdeteksi.
Sastro, y" D.  Widianto,  dan  1.0.  Prijambada.  2006.  Pengaruh  Batuan  Fosfat  dan  Kerapatan  Inokulu11l terluuta~ Ketalunum  Hithtp 77 Aspergillus niger dan  Kemampuannya melarutkan  Fosfat setelah dipe/etkan dengan  batuan fosfat. I· Tanah  Lrngk., 7(2): 77-BO
Bahan  organik  yang  digunakan  berupa  campuran tepung  onggok  (limbah  industri  tapioka),  tepung  sekam, dan  pati  dengan  perbandingan  berat  69,5:30:0,5.  Bahan organik  ini  digunakan sebagai  media perbanyakan  spora A. niger yang  sekaJigus  juga  digunakan  sebagai  bahan pembawa (carier) yang  disertakan  dalam  formula  pupuk pelet batuan fosfat.
Perbanyakan spora A.  niger dilakukan dalam baki-baki plastik  berukuran  30x20x5  em  yang  berisi  500  g  media yan~ sebelumnya telah  disterilkan  dalam  otoklaf pada suhu 121  C  selama  30  menit. lnokulasi A.  niger dilakukan dengan  cara  menuangkan culture  stock berkerapatan lOs spora.mr l sebanyak  300  ml  per  kilogram  media.  Setelah diinokulasi.  media diaduk secara merata, selanjutnya wadah perbanyakan  ditutup  plastik  bening  dan  diinkubasikan selama 3  minggu.  Pemanenan spora dilakukan dengan cara mencampur  rata  bagian  permukaan  media  yang  ditumbuhi sporajamur.
Pembuatan  pupuk  dilakukan  dengan  mencampur batuan  fosfat  dan  bahan  organik  yang  telah  disterilkan terlebih  dahulu  dalam  otoklaf pada suhu  121°C  selama  30 menit  dengan  perbandingan  berat  80:20. Bahan  pupuk selanjutnya  diinokulasi A.  niger secara  merata  dengan kerapatan  sesuai  perlakuan. Sebagai  bahan  perekat ditambahkan  kanji  yang  dibuat  dari  tepung  tapioka  (10  g patLr l air)  sebanyak  10  ml  per  100  g  bahan  pelet. Pemeletan  dilakukan  menggunakan  mesin  pemelet  yang memiliki  IUbang  pelet  berdiameter  3  mm. Pelet  batuan fosfat  dikeringkan  menggunakan  kipas  angin  hingga  kadar air pupuk mencapai  12%.  Pupuk pelet selanjutnya dikemas dalam plastik bening dan disimpan pada suhu kamar.

## Perancangan percobaan
Penelitian  ini  terdiri  dua  faktor  perlakuan. Faktor pertama adalah  asal  batuan fosfat yang terdiri  atas lima aras yakni batuan fosfat Kepulauan Christmas, China, Y ordania, Ciamis dan Madura.  Faktor kedua adalah tingkat kerapatan inokulum yang terdiri atas empat aras lakni tanpa inokulasi (kontrol),  kerapatan inokulum  10',  10  dan  10 9 spk (satuan pembentuk  koloni) per gram  bahan  pup uk. Penelitian ditempatkan  menurut  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) faktoriaI.  Masing-masing  perlakuan  diulang sebanyak tiga kalL Pengaruh  perlakuan  dianalisis  menggunakan  uji  F yang  dilanjutkan  dengan  Uji  Jarak  Berganda  Duncan (DMRT) pada tarafuji 5%.
Pengujian ketahanan hidup A.  Niger dan pelarutan P
Ketahanan hidup inokulum A. niger dan kemampuannya  melarutkan  P  diamati  setiap  30  hari. Pengujian ketahanan hidup  dilakukan menggunakan medium potatoes  dextrose  agar (PDA)  dengan  metode cawan  tuang (plate  count). Sementara  itu,  pengujian pelarutan  P  dilakukan  dengan  cara  menginkubasikan  1  g sampel  pupuk  dalam  erlenmeyer 250  ml  yang  berisi  50  ml medium Pikovskaya cairo  lnkubasi dilakukan di  atas  mesin kocok  berkecepatan  125  rotasi  per  menit  selama  9  harL Pada akhir inkubasi dilakukan pengukuran jumlah P terlarut menggunakan  metode Vanadat-Molybdat  Blue (Puslitanak, 1998).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  analisis  statistik  tidak  terdapat interaksi  yang  nyata  antar  perlakuan  yang  diujikan.  Oleh sebab  itu,  pembahasan  hasil  penc;litian  hanya  ditujukan pada  pengaruh  tunggal  masing-masing  perlakuan,  yakni batuan fosfat dan tingkat penyertaan inokulum.

## Ketahanan Hidup Inokulum

## Pengaruh asal batuan fosfat
Asal  batuan  fosfat  berpengaruh  nyata  terhadap kemampuan  hidup  inokulum A.  niger yang  disertakan dalam  pupuk  pelet  batuan  fosfat  (Tabel  2).  Namun demikian,  jumlah A.  niger yang  bertahan  hidup pada masing-masing  batuan  fosfat  mengalami  penurunan  yang hampir  sarna  dan  cenderung  stabil  pada  pengamatan  180 hari  setelah  pemeletan  (HSP).  Pada  pengujian  ini  terdapat penyimpangan,  yakni  adanya  peningkatan jumlah A.  niger pada  pelet  batuan  fosfat  China,  Ciamis, dan Madura masing-masing pada pengamatan 90,180, dan 60 HSP.
Tabel  2.  Pengaruh  asal  batuan  fosfat  terhadap  ketahanan  hidup Aspergillus niger dalam pupuk pelet  batuan fosfal
Batuan fosfat
Jumlah Aspergillus niger (log  10 spk.g·1 pe1et ) 30 60 90 120 180 Kep.  Christmas 8,7 a 8,2 a 7,1 ab 6,6 b  6,1  b Yordania 8,5 be 8,0 a 6,9 be 6,4 ab  6,4. China 8,2 cd 7,8. 8,1  • 6,3 b  6,3. Ciamis 8,7 ab 8,0 a 7,2 ab 5,3e 6,h Madura 7,2  d 8,0. 6,6 c 6,6 a  6,31
Angka-angka sekolom yang diikuti  huruf yang sama tidak berbeda nya1lI menurut DMRT 5%.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  yang  disajikan  di  atas terbukti  bahwa  masing-masing  batuan  fosfat  yang diujikan dapat  digabungkan  dengan A.  niger. Kandungan  logam yang  terdapat  dalam  batuan  fosfat  (Sediyarso,  1999)  yang diduga  akan dapat mempengaruhi inokulum  yang disertakan  dalam  pelet batuan  fosfat,  tidak memperlihatkan pengaruh  yang  cukup  nyata  terhadap  ketahanan  hidup A. niger.
Adapun  penurunan  jumlah A.  niger pada  masing- masing  batuan  fosfat  diduga  berasal  dari  sel  vegetatif yang diinokulasikan  dalam  pelet  batuan  fosfat.  Pada  peneJitian ini  inokulum  diperbanyak  pada  media  padat  campuran onggok,  sekam  dan  pati.  Spora  dipanen  dari permukaan media  dengan  cara  mengiris  tipis  permukaan  media. Cara demikian menyebabkan inokulum yang diperoleh merupakan  campuran  spora  dan  sel  vegetatif (miselium). Sel  vegetatif bukan  merupakan  bentuk  tahan  inokulum A. niger serta  relatif  lebih  mudah  mengalami  penunman kemampuan  hidup  pada  kondisi  Iingkungan  yang  ekstrim (Raper dan  Fennel,  1977)
Sementara  itu,  peningkatan jumlah inokulum A. niger dalam  pelet  batuan  fosfat  China,  Ciamis,  dan Madura kemungkinan  disebabkan  oleh  faktor  pengeringan  pelet yang  tidak  sempuma.  Pada  penelitian  ini  pengeringan pupuk dilakukan  menggunakan  kipas angin selama 24 jam. Metode pengeringandemikian diduga menyebabkantingkat kekeringan  pelet  tidak  merata  sehingga  mendorong terjadinya  perkecambahan  inokulum  beberapa  waktu
Jumal Tanah dan  Lingkungan,  Vol. 7 No.2,  Oktober 2005: 77-80
setelah  perlakuan  pemeletan.  Perbedaan  pada  masing- masing batuan fosfat, kaitannya dengan metode pengeringan pupuk, kemungkinan disebabkan oleh perbedaan karakteristik batuan fosfat.
Pengaruh tingkat  inokulum
Tingkat inokulum berpengaruh nyata  terhadap kemampuan  hidup  A.  niger  yang  disertakan  dalam  pupuk pelet batuan  fosfat.  Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi  jumlah  inokulum  maka  jumlah  A.  niger yang  bertahan  hidup  pada  setiap  pengamatan  semakin besar.  Namun  demikian,  secara  statistik  tidak  terdapat perbedaan  yang  nyata  antara  perlakuan  jumlah  inokulum 10 7 dan lOB. Pada pengamatan 90 hingga  180 HSP,jumlah inokulum  A.  niger  yang  bertahan  hidup  cenderung  stabil (Tabel  3).  Hasil  pengujian  ini  membuktikan  bahwa  terjadi mekanisme  peningkatan  ketahanan  hidup  inokulum  seiring dengan  semakin  tingginya  tingkat  penyertaan  inokulum dalam pelet batuan fosfat.
Tabel  3.  Pengaruh  jurnlah  inokulurn  terhadap  ketahanan  hidup Aspergillus niger dalam pupuk pelet batuan fosfat
Kerapatan Jurnlah Aspergillus niger (log 10 spk.g· 1 inokulurn ~Iet) (spk.g· 1 pelet) 30 60 90 120 180 10 7 6,3  b 6,3  b 5,6  b 5,1  b 5,5 b lOB 7,0  b 7,0  b 6,0  b  6,1  b 6,1  b 10 9 9,0  a 8,5  a 7,5  a 7,5 a 7,4 a Angka-angka sekolom yang diikuti hurufyang sarna tidak berbeda nyata menurut DMRT 5%.

## Kemampuan Pelarutan P

## Pengaruh asal batuan fosfat
Secara  statistik asal batuan  fosfat  berpengaruh  nyata terhadap  jumlah  P  yang  terlarutkan  oleh  A.  niger  dalam medium Pikoskaya  cair  (Tabel  4).  Jumlah P terlarut terbesar terdapat pada pupuk pelet batuan  fosfat  Kepulauan Christmas, diikuti oleh batuan fosfat  Madura dan Yordania sedangkan  jumlah  P  terlarut  terkecil  terdapat  pada batua~ fosfat  Ciamis  (Tabel  4).  Perbedaan  tingkat  pelarutan  P tersebut,  kaitannya  dengan  metabolit  yang  sekresikan A. niger dalam  hal  ini  adalah  asam-asam  organik,  diduga disebabkan  oleh  perbedaan  mineralogi  batuan  fosfat sebagaimana  dilaporkan  oleh  Kpomblekou  dan  Tabatabai (1994).
Tabel  4.  Pengaruh  asal  batuan  fosfat  penyusun  pupuk  pelet  batuan fosfat  terhadap  tingkat  pelarutan  P-nya  dalam  medium Pikoyskaya cairo
Fosfat (P 2 0 S) terlarut Batuan fosfat (flg. mr') 30 60 90 120 180 Kepulauan Christmas 16,44b  22,72 b  47,59 a  46,38 a  53,23 a Yordania 32,59 a  36,33 a  34,75 b  36,14 b  40,34 b China 6,58 c 31,96 a  31,85 b  34,06 b  32,41 be Ciamis 8,81  c 16,14 c21,43 c  24,80 c  28,22 c Madura 12,33 be 20,74 b  42,06 a  46,28 a  51,61  a
Angka-angka sekolom yang diikuti hurufyang sama tidak berbeda n)'ata menurut DMRT 5%.

## Pengaruh tingkat inokulum
Berdasarkan  hasil  pengamatan  terhadap  tingkat pelarutan P, terdapat tiga hal  yang menonjol yakni  inokulasi A.  niger secara statistik nyata meningkatkan jumlah P yang terlarut  dari  pupuk  batuan  fosfat  pada  saat  di  inkubasi dalam  medium  Pikovskaya cair, terjadi  penurunan jumlah P terlarut  sejalan  dengan  semakin  tinggi  jumlah  inokulum, dan  terdapat  peningkatan  jumlah  P  terlarut  pada  setiap perlakuan  tingkat  inokulum  A.  niger  seiring  semakin lamanya masa penyimpanan (Tabel  5).
Tabel  5.  Pengaruh  tingkat  inokulum  Aspergillus  niger  yang disertakan  dalam  pupuk  pelet  batuan  fosfat terhadap tingkat pelarutan fosfat dalam medium Pikovskaya air
Kerapatan Fosfat (P 2 0 S) terlarut Inokulum (Ilg.mrl) (spk.g· 1 30 60 90 pelet) Tanpa Inokulasi 10 7 10 8 10 9 120 180 5,50  c 5,88  b 5,91  e  5,76 b  5,61  b 25,32  a 32,10  a  57,25  a  51,40a  56,09a
16,37 b 32,30  a  46,45  a  53,77 a  58,03 a 9,91  be  31,52  a  32,54  b  39,21  a  44,93 a
Angka-angka sekolom yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata menurut DMRT 5%.
Sebagaimana  telah  dilaporkan  sebelumnya bahwa A. niger memiliki  kemampuan  mensekresi  asam-asam organik berberat  molekul  rendah,  khususnya  sitrat  (UI-Haq  el 01., 2002;  Ali  et 01.,  2002;  Sastro  et 01.,  2006).  Asam  organik terbukti mampu  melarutkan  P  dari batuan  fosfat (Kpomblekou  dan  Tabatabai,  1994).  Pada  penelitian  ini, tingkat  pelarutan  P  dari  pupuk  pelet  batuan  fosfat  yang telah  diinokulasi  A.  niger  dalam  medium  Pikovskaya  cair berkisar  9,91  hingga  58,03  ppm. Hasil  pengujian  ini sejalan  dengan  hasil  penelitian  yang  diIaporkan oIeh Thomas  el 01.  (1985),  Asmarlaili  el 01.  (1995),  dan  Emita (1998).
Penurunan  tingkat  pelarutan  P  seiring dengan peningkatan  jumlah  inokulum  dan  peningkatan  tingkat pelarutan  P  seiring  semakin  lama  masa  penyimpanan, sebagaimana  terjadi  pada  penelitian  ini,  berhubungan dengan  jumlah A.  niger.  Peningkatan jumlah  inokulum  A. niger menyebabkan  peningkatan pembentukan massajamur dalam  medium.  Peningkatan  massa  jamur  menyebabkan peningkatan  konsumsi  P  yang  terlarutkan  oleh A. niger sehingga  P  dalam  larutan  menjadi  berkurang (data  daJam persia pan publikasi).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian dapat disimpulkan bahwa asal  batuan  fosfat  dan  tingkat  penyertaan  inolrulum Aspergillus  niger dalam  pupuk  pelet  batuan  fosfat  nyata mempengaruhi ketahanan hidup inokulum dan kemampuannya  melarutkan  fosfat.  Tingkat  inokulum A. niger yang  paling  mendukung  ketahanan  hidup  dan

## Pengaruh Batuan Fosfat (Y.  Sastro)
kemampuannya  melarutkan  fosfat  berkisar  pada  kerapatan 10 8 hingga  10 9 spk.g· 1 pupuk, sedangkan batuan fosfat  yang paling  mendukung  kemampuan  hidup  inokulum A.  niger dan  kemampuannya  melarutkan  fosfat  masing-masing adalah  batuan  fosfat  Ciamis  dan  batuan  fosfat  Kepulauan Christmas.

## DAFT AR PUSTAKA
Adiningsih,  S., Undang,  K.  dan  S.  Rochayati.  1998.  Prospek dan kendala  penggunaan  P-alam  untuk  meningkatkan  produksi tanaman  pangan  pada  lahan  masam  marginal. Dalam Pertemuan  Pembahasan  dan  Komunikasi  Hasil  Penelitian Tanah dan Agroklimat. Bogor.  10 Februari.
Ali,  S., I.  UI-Haq  and J. Iqbal.  2002.  The  role  of Mn++ ions  for high and consistent yield of citric acid in recycling fed-batch bioreactor  system  and  its  novelty  on  kinetic  basis. www.ejbbiotechnology.infolcontentlvoI5IP DF.  13  Februari 2005.
Asmarlaili,  S.  Hanafiah,  dan  T.M.H.  Oeliem.  1995.  Keefektifan mikroorganisme  pelarut  fosfat  yang  diisolasi  dari  berbagai tanah  masam  di  Sumatera  Utara. Jurnal  Penelitian Pertanian  14(1):11-19.
Banik, S. and B.K. Dey.  1982.  Available phosphate content of an alluvial  soil  as  influenced  by  inoculation  of some  isolated phosphate-solubilizing  microorganisms. Plant  and  Soil 69:353-364.
Bar-Yosef,  B.,  R.D.  Rogers,  J.H.  Wolfram,  and  E.  Richman. 1998. Pseudomonas  capacio-mediated  rock  phosphate solubilization  in  kaolinite  and  montmorillonite  suspensions. Soil Sci.  Soc.  Am. J.  63: 1704-1708.
Bilgrami,  K.S.  and  R.N.  Verma.  1978.  Physiology  of  Fungi. Vikas Publishing House  PVT Ltd.  New Dehli.
Bolan,  N.S., J.  Elliot;  P.E.H.  Gregg and  S.  Well.  1997.  Enhanced dissolution  of  phosphate  rocks  in  the  rhizosphere. Bioi. Fertil.  Soils 24:  169-174.
Emita.  1998.  Uji  potensi  mikroorganisme  pelarut  fosfat  pada medium Pikovskaya. Jurnal Penelitian Pertanian  17:S4-S8.
Fageria,  N.K.,  V.C.  Baligar and  R.J.  Wright.  1991.  Influence of phosphate  rock  source  and  rates  on  rice  and  conunon  bean production in  an Oxisol. Plant and Soil 134:  137-144.
Goldstein,  A.H.,  R.D.  Rogers  and  G.  Mead.  1993.  Mining  by Microbe.  Separating phosphate  from  ores  via bioprocessing. Biol1hecnology II: l2S0-12S4.
Goldstein,  A.H.  1995.  Recent  progress  in  understanding  the molecular  genetics  and  biochemistry  of calcium  phosphate solubilization  by  gram  negative  bacteria. Biological Agriculture and Horticulture  12: 185-193.
Hammond, L.L. and  R.B.  Diamond. 1987.  Effectiveness  of alternative  phosphate  fertilizer  in  tropical  agriculture. Prosiding  Lokakarya  Nasional  Penggunaan  PupuJc  Fosfat. Puslitanak.  Bogor.
IIImer,  P.  and  F.  Schinner. 1982.  Solubilization  of inorganic phosphate by microorganisms  isolated from forest soil.  Soil BioI.  Biochem. 24:389-395.
Kasno,  A.,  S.  Adiningsih  dan  M.  Sediyarso.  1998.  Keefcktifan waktu  pemberian dan jenis  fosfat  alam  pada tanah plinthic kandiudults. J.  Tanah  Tropika  7:S9-73.
Kpomblekou, A.  and  M.A.Tabatabai.  1994. Effect of organic acids on  release  of phosphorus  from  phosphate  rocks.  Soil Sci. 158 : 443-4S3.
Matunubun,  H.,  B.  Radjagukguk  dan  A.  Rosmarkam.  1988. Kajian  pengaruh  peningkatan  pH  tanah  Podsolik  Merah Kuning atas pengambilan fosfor dari  batuan fosfat oIch padi gogo. BPPS-UGM 3-1.
Puslitanak.  1998. Penuntun  Analisa Kimio  Tanah dan Tanaman. Pusat Penelitian Tanah dan Agroklimat.  Bogor.
Raper,  K.B.  and  D.l.  Fennel.  1977. The  Genus  Aspergillus.
Robert E.  Krieger Publishing.  Huntington. New York.
Sediyarso,  M.  1999. Fosfat Alam Sebagai Bahan Baku dan PupuJc Fosfat.  Pusat PenelitianTanah dan Agroklimat. Bogar.
Thomas,  G.  V.,  M.  V.  Shantaram,  and  N.  Sharaswathy.  1985. Occurrence  and  activity  of  phosphate-solubilizing  fimgi from coconut plantation soils. Plant and Soil 87: 3S7-364.
Ul-Haq, I.,  S.  Ali,  M.  A.  Qadeer  and J. Iqbal.  2002.  Citric  acid fermentation  by  mutant strain of Aspergillus niger GCMC-7 using molasses based medium. www.ejbbiotechnology.in/olcontentlvoI5Ipdj.