UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK KASAR ETANOL, KLOROFORM DAN N-HEKSANA ALGA COKLAT Sargassum vulgare ASAL PANTAI KAPONG PAMEKASAN TERHADAP BAKTERI Staphilococcus aureus dan Eschericia coli
Alfiyaturohmah 1 , Rachmawati Ningsih 1 , Eriyanto Yusnawan 2
(1) Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi UIN Maulana Malik Ibrahim Malang
(2) BALITKABI Corresponding author : R.alfiyatur@gmail.com

## ABSTRACT
The  antibacterial  activity  of  ethanol,  chloroform  and n -hexane  crude  extract  of  brown  algae S.  vulgare from Kapong beach Pamekasan has been conducted against S. aureus and E. coli . The purpose of this research was  to  know  the  crude  solvent  extract  showing  antibacterial  activities  against S.  aureus and E.  coli and  to identifity active compound groups content.
The extraction of brown algae S. vulgare was performed by maseration ethanol, chloroform and n- hexane solvent. The crude extract were assayed an actibacterial activity by disk diffusion methode. The extract showing the best antibacterial activities were tested phytochemicals assay and TLC to identifity active compound groups.
This  result  showed  that chloroform  crude  extract  of  brown  algae S.  vulgare inhibited S.  aureus in concentration  of  1  %  and E.  coli in  concentration  of  5%. Phytochemical  assay  showed  that  chloroform  crude extract was containing flavonoids and steroid groups. For the separation using TLC chloroform-methanol (99:1) yielded 9 spots with Rf  0,017−0,46 while chloroform-methanol (9:1) was generated 7 spots with Rf 0,17−0,91.
Keywords : Brown algae S. vulgare , antibacterial test, E. coli , S. aureus , phytochemical test, TLC

## ABSTRAK
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kasar  etanol,  kloroform  dan n -heksan  alga  coklat S.  vulgare asal  pantai Kapong  Pamekasan  dilakukan  terhadap  bakteri S.  aureus dan E.  coli .  Tujuan  penelitian  untuk  mengetahui ekstrak pelarut terbaik yang mempunyai aktivitas antibakteri serta mengidentifikasi golongan senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak yang berpotensi sebagai antibakteri.
Ekstraksi  senyawa  aktif  alga  coklat S.  vulgare dilakukan  dengan  metode  maserasi  pelarut  etanol, kloroform dan n -heksana. Ekstrak kasar diuji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi cakram. Senyawa aktif yang dikandung diuji fitokimia dan dipisahkan golongan senyawa menggunakan KLT.
Hasil penelitian menunjukkan ekstrak kloroform S. vulgare memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri S. aureus pada konsentrasi 1 % dan terhadap E. coli pada konsentrasi 5%. Hasil uji fitokimia terdeteksi golongan senyawa flavonoid dan steroid. Pemisahan menggunakan KLT eluen kloroform-metanol (99:1) menghasilkan 9 spot dengan nilai Rf 0,017−0,46. Eluen kloroform-metanol (9:1) menghasilkan 7 spot dengan nilai Rf 0,17−0,91.
Kata Kunci : Alga coklat S. vulgare , aktivitas antibakteri, E. coli , S. aureus , Uji fitokimia, KLT

## I. PENDAHULUAN
Indonesia merupakan
negara kepulauan  terbesar  di  dunia.  Secara  fisik, Indonesia  mempunyai  panjang  garis  pantai mencapai 81.000 Km 2 dengan jumlah pulau mencapai  lebih  dari  17.500  pulau.  Luas daratan  1,9  juta  Km 2 sementara  luas perairan  3,1  juta  Km 2 (Yudanto,  2010). Perbandingan  luas  wilayah  lautan  dan daratan  berbanding  3:1,  sehingga  hampir 70%  wilayah  Indonesia  terdiri  atas  lautan yang memiliki sumber daya alam laut yang
melimpah dan beragam baik hayati maupun non hayati.
Allah  telah  menciptakan  laut  dengan berbagai  biota  laut  yang  ada  di  dalamnya. Manusia bisa mengambil dan memanfaatkannya untuk kelangsungan hidupnya agar mereka senantiasa bersyukur atas nikmat-Nya. Dalam surat an Nahl ayat 14, Allah SWT berfirman:


  
 

       

    
“Dan  Dia-lah,  Allah  yang  menundukkan lautan  (untukmu),  agar  kamu  dapat memakan  daripadanya  daging  yang  segar (ikan), dan kamu mengeluarkan dari lautan itu  perhiasan  yang  kamu  pakai;  dan  kamu melihat  bahtera  berlayar  padanya,  dan supaya  kamu  mencari  (keuntungan)  dari karunia-Nya,  dan  supaya  kamu  bersyukur ” (Q.S an Nahl : 14).
Makna sakhkhara al-bahra menjelaskan bahwa Allah
telah menundukkan laut yaitu memberikan nikmat-Nya yang ada di laut kepada hamba- hamba-Nya,  sehingga  memungkinkan  bagi hamba-hamba-Nya  untuk  mengarunginya dan  mengambil  manfaat  darinya  dan memungkinkan  hamba-hamba-Nya  untuk mencapai  daerah-daerah  yang  terhalang oleh  lautan,  sehingga  dapat  memperoleh keuntungan  dalam  perdagangan  dan  lain sebagainya (Asy-Syanqithi,
2007).
Sebagaimana  dalam  kalimat  di  atas  Allah telah  memerintahkan  untuk  memakan  ( li ta’kulu ), mengeluarkan ( tastakhriju ), melihat  ( wa  taraa )  dan  mencari  ( li tabtaghu )  keuntungan  dari  karunia-Nya yang sudah ada di laut.
Salah  satu  karunia  Allah  SWT  dan merupakan  sumber  daya  hayati  kelautan yang  melimpah  di  Indonesia  adalah  alga. Kemelimpahan alga dapat diketahui dengan jumlah jenis alga yang sudah ditemukan. Di Indonesia, alga merah terdiri dari 452 jenis, alga  196  jenis  dan  alga  coklat  134  jenis (Moosa, 1999).
Alga  coklat  mengandung  senyawa bioaktif  seperti  Fucoxantin  (Ibanez et  al. , 2012),  steroid  (Ayyad et  al., 2003), phlorotannin  (Koivikko,  2008.,  Ibanez et al. , 2012), flavonoid (Cox et al ., 2010) dan saponin  (Anandhan et  al., 2011).  Senyawa bioaktif  yang  dikandung  alga  merupakan potensi  yang  sangat  bermanfaat  bagi pengembangan  bidang  farmasi,  misalnya
sebagai  senyawa  obat  seperti  antibakteri (Bactiar, 2007).
Senyawa antibakteri merupakan suatu senyawa  yang  dapat  mencegah  terjadinya pertumbuhan  dan  reproduksi  bakteri.  Salah satu  cara  untuk  mengetahui  aktivitas antibakteri  menggunakan  metode  difusi cakram  dengan  pengamatan  zona  hambat. Cristobel et  al. (2011)  melakukan  uji aktivitas  antibakteri  alga  coklat S. wightii, Padina tetrstromatica dan Dictyota dichotoma dengan  konsentrasi          0,1  %,  1
%  dan  10  %  terhadap  bakteri S.  aureus, Streptococcus sp., Bacillus subtilis, Micrococcus  luteus,  Proteus  mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella
pneumoniae dan E. coli. Ekstrak etanol dan kloroform  alga  coklat  jenis P.  gymnospora dan S.  tenerrium berturut-turut  dihasilkan zona hambat sebesar 11,3 mm dan 13,7 mm pada E.  coli dan  12,0  mm  serta  20,3  mm pada S. aureus (Mannifannan et al. , 2011).
Ekstrak n- hekana S. cristaefolium
menghasilkan zona hambat 8,2 mm pada E.
coli (Rohmah dkk., 2011).
Alga coklat jenis S. vulgare merupakan  alga  coklat  yang  satu  marga dengan T.  conoides,  P.  gymnospora, S. tenerrium dan  lain-lain.  Alga-alga  tersebut sudah  diteliti  daya  aktivitas  antibakterinya terhadap S.aureus dan E.coli yang  bersifat patogen,  sehingga  dapat  diduga  bahwa S. vulgare juga  mempunyai  potensi  sebagai antibakteri.
Menurut  Asmad  (2012),  penduduk dan  nelayan  pantai  Kapong  Kabupaten Pamekasan, keberadaan S. vulgare di pantai tersebut  melimpah.  Kemelimpahan  alga  ini dibiarkan  begitu  saja  kecuali  dijual  hanya jika ada yang pesan. Berdasarkan informasi tersebut  alga  coklat S.  vulgare perlu ditingkatkan potensinya dengan cara diteliti guna  mengetahui  kandungan  senyawa  aktif khususnya yang berpotensi sebagai senyawa obat.

## II. METODE PENELITIAN ALAT DAN BAHAN
Peralatan  yang digunakan antara lain: timbangan  analitik, Salinometer  Atago
PAL-06S, oven,  desikator,  seperangkat  alat gelas, shaker , kertas saring, corong Buchner, rotary  evaporator ,  pipet, botol vial ,  cawan  petri, Laminar  Air  Flow, inkubator,  mikropipet,  kawat  ose,  bunsen, mistar, plastik tahan panas, alumunium foil, karet,  autoklaf,  tabung  reaksi,  rak  tabung, plat tetes, pipa kapiler dan lampu UV.
Bahan  utama  yang  digunakan  alga coklat S. vulgare , aquades, etanol, kloroform, n -heksana,  asam  sulfat,  reagen Dragendorf, reagen Mayer, reagen Liberman-Burchard,  serbuk  magnesium, asam klorida, besi (III) klorida, asam asetat anhidrat,  larutan Tween ,  kertas  saring, ampicilin,  streptomicin,  alkohol  80  %,  plat KLT  GF 254 ,  kertas  Watman,  kapas,  wrap, Nutrien  Agar (NA)  ( Criterion  America ), Nutrirnt  Broth (NB)  ( Criterion  America ) dan  biakan  murni  bakteri S.  aureus dan E. coli.

## PROSEDUR PENELITIAN Preparasi Sampel
Alga  dicuci  dengan  air  dan  dibilas berulang-ulang sampai bersih.
Dikeringanginkan  selama  7  hari  (Reskika, 2010).  Dihaluskan  dengan  blender  dan diayak  dengan  ayakan  ukuran  60  -100 mesh.

## Analisa Kadar Air
Sebanyak 5 gram serbuk sampel pada cawan konstan dipanaskan dalam oven pada suhu  100-105 0 C  sekitar  15  menit.  Cawan disimpan  dalam  desikator  sekitar  10  menit selanjutnya ditimbang.
Dilakukan pengulangan sampai deperoleh berat konstan. Rumus kadar air (AOAC 1984):
% Kadar air : 𝑏−𝑐 𝑏−𝑎 x 100 %
Ket: a = berat konstan cawan kosong b = berat cawan + sampel sebelum dikerigkan c = berat konstan cawan + sampel setelah dikeringkan
Analisa Kadar Garam Sebanyak  5  gram  serbuk S.  vulgare ditimbang  kemudian  dilarutkan  aquades panas  10  mL,  diaduk  menggunakan
magnetic  stirrer dan  ditunggu  ±  30  menit sehingga  semua  garam  (NaCl)  larut (Sudarmadji,  dkk.,  2007).  Ekstrak  disaring dengan corong Buchner setelah itu uji kadar garam  menggunakan Salinometer  Atago PAL-06S .

## Ekstraksi
Maserasi  sebanyak  100  gram  serbuk sampel  kedalam  masing-masing  1000  mL pelarut  etanol,  kloroform,  dan n -heksana selama  24  jam  pada  suhu  ruang. Shaker 3 jam  dan  disaring  menggunakan  corong Buchner.  Filtrat  dipeketkan  dengan rotary evaporator .

## Pengujian Antibakteri
Pengujian  dengan  metode  difusi cakram.  Kertas  cakram  5  mm  diresapkan pada masing-masing ekstrak dengan konsentrasi  10%, 7,5%,  5%, 2,5%, 1% dan 0,5%.  Pelarut  ekstrak  digunakan  akuades dengan  sedikit tween .  Kertas  cakram  yang mengandung  ekstrak  diletakkan  diatas permukaan  media  agar  padat  yang    telah dihomogenkan dengan 50 µL bakteri biakan aktif  (OD  0,3).  Diinkubasi  selama  24  jam pada suhu 37 0 C.

## Uji Fitokimia
Ekstrak pelarut yang positif
menunjukkan  aktivitas  antibakteri  diuji fitokimia dengan uji reagen.
Uji Flavonoid
Sebanyak  0,5  gram  ekstrak alga coklat S. vulgare dimasukkan dalam tabung reaksi  kemudian  dilarutkan  dalam  1−2  mL metanol  50  %.  Setelah  itu  ditambah  logam Mg  dan  4−5  tetes  HCl  pekat.  Larutan berwarna merah atau jingga yang terbentuk menunjukkan  adanya  flavonoid  (Hayati, 2010).

## Uji Tanin
Uji dengan FeCl 3 Sebanyak 1 mL ekstrak alga coklat S. vulgare ditambahkan  dengan  2−3  tetes larutan  FeCl  1%.  Jika  dihasilkan  warna hijau  kehitaman  atau  biru  tua  pada  larutan
maka  menunjukkan  adanya  tanin  (Hayati, 2010).

## Uji dengan Larutan Gelatin
Sebanyak 1 mL ekstrak alga coklat S. vulgare dimasukkan  dalam  tabung  reaksi ditambah  dengan  larutan  gelatin.  J ika terbentuk endapan putih, menunjukkan adanya tanin (Hayati, 2010).

## Uji Alkaloid
Ekstrak  alga  coklat S.  vulgare sebanyak  3  mL  dimasukkan  dalam  tabung reaksi  dan  ditambah  1  mL  HCl  1  %. Larutan dibagi dalam dua tabung. Tabung 1 ditambah  2−3  tetes  reagen  Dragendroff, tabung II ditambah 2−3 tetes reagen Mayer. Jika tabung 1 terbentuk endapan jingga dan tabung  II  terbentuk  endapan  kekuning- kuningan  menunjukkan  adanya  alkaloid (Hayati, 2010).

## Uji Saponin
Ekstrak  alga  coklat S.  vulgare dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  ditambah air  (1:1)  sambil  dikocok  selama  1  menit, apabila  menimbulkan  busa  ditambahakan HCl  1N  sebanyak  1−2  tetes,  busa  yang terbentuk  dapat  bertahan  selama  10  menit dengan  ketinggian  1−3  cm,  maka  ekstrak positif mengandung saponin (Hayati, 2010).

## Uji Steroid/ Triterpenoid
Ekstrak  alga  coklat S.  vulgare sebanyak  1  mL  dimasukkan  dalam  tabung reaksi,  dilarutkan  dalam  0,5  mL  kloroform lalu  ditambah  dengan  0,5  mL  asam  asetat anhidrat. Campuran ini selanjutnya ditambah  dengan  1−2  mL  H 2 SO 4 pekat melalui  dinding  tabung.  Jika  hasil  yang diperoleh  berupa  cincin  kecoklatan  atau violet pada perbatasan dua pelarut
menunjukkan adanya
triterpenoid, sedangkan  jika  terbentuk  warna  hijau kebiruan  menunjukkan  adanya  steroid (Hayati, 2010).

## Pemisahan Senyawa Aktif
Ekstrak  pelarut  yang  positif  uji fitokimia  dipisahkan  golongan  senyawanya menggunakan KLT Silika GF 254 .

## Analisa data
Data  aktivitas  antibakteri  dianalisis ragam uji ANOVA satu arah untuk menguji adanya  pengaruh  atau  perbedaan  antar perlakuan  variasi  konsentrasi  ekstrak S. vulgare terhadap  pertumbuhan  bakteri. Apabila  terdapat  pengaruh  atau  perbedaan antar perlakuan, diuji lanjut uji Beda Nyata Terkecil  (BNT)  dengan  tingkat  signifikansi 5  %  untuk  mengetahui  perlakuan  yang berpengaruh  atau  berbeda  nyata  di  antara perlakuan yang lain.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Preparasi Sampel
Pencucian  sampel  dilakukan  agar kotoran  pada  alga  hilang.  Pengeringan dengan proses kering-angin untuk
menghindari  rusaknya  senyawa  aktif  pada sampel  yang  tidak  tahan  terhadap  panas. Pengeringan  untuk  mengurangi  kadar  air, mencegah  terjadinya  reaksi  enzimatis  dan tumbuhnya  jamur  sehingga  dapat  disimpan dalam jangka waktu  yang lebih lama. Hasil dari  pengeringan  berupa  alga  kering  dan berwarna hitam dengan rendemen 13,80 %. Besarnya  kadar  air  yang  diperoleh  hampir sama dengan S. prismatikum proses kering- angin yang  diteliti  oleh  Reskika  (2011) yang  besarnya  12,36  %.  Pada  proses pengeringan  yang  sama,  penelitian  Putri (2010)  menginformasikan  bahwa  kadar  air Sargassum sp.  sebesar  14,90  %.  Perbedaan kadar  air  dapat  disebabkan  oleh  perbedaan tempat dan waktu pengeringan.
Penghalusanuntuk memperluas permukaan  sampel,  sehingga  kontak  antara sampel  dengan  pelarut  semakin  besar  pada saat ekstraksi. Serbuk sampel yang dihasilkan  berwarna  coklat  kehitaman  dan berbau menyengat (gurih).

## Analisa Kadar Air
Hasil  kadar  air  serbuk S.  vulgare proses  pemanasan  dengan  oven  sebesar 11,80  %,  dengan  proses  yang  sama  kadar yang dihasilkan hampir sama dengan kadar air Sargassum sp  yang  diteliti  oleh  Putri (2010)  yang  besarnya  12,32  %.  Kadar  air mempunyai peranan penting dalam
menentukan  daya  awet  suatu  bahan (Buckle,  2006).  Menurut  Winarno  (2004), apabila kandungan air bahan berkisar 12-25 %  kira-kira  setara  dengan  a w 0,8.  Aktivitas air  ( water  activity =  a w )  merupakan  jumlah air  di  dalam  bahan  yang  tersedia  untuk pertumbuhan mikroorganisme.
Penghambatan  mikroba  secara  total  akan terjadi  pada  a w bahan    <  0,6  setara  dengan kadar air < 7 %. Kadar air S. vulgare masih tergolong  tinggi  karena  %  kadar  air  lebih besar  dari  7  %  sehingga  pertumbuhan mikroba  cenderung  dapat  terjadi,  untuk mengantisipasi  hal  tersebut  penyimpanan sampel serbuk kering pada lemari pendingin.

## Analisa Kadar Garam
Hasil  kadar  garam  yang  diperoleh sebesar  0,74  %.  Menurut  Buckle  dkk.
(2010), garam berperan sebagai penghambat selektif pada proteolitik (mikroorganisme pembusuk) dan
pembentukan spora meskipun dengan kadar rendah  6  %. S.  aureus akan  dihambat pertumbuhannya  pada  konsentrasi  garam 15–20  %  sedangkan E.  coli pada  13  %. Kadar  garam S.  vulgare tergolong  sangat rendah  sehingga  pada  saat  proses  uji aktivitas antibakteri cenderung tidak memiliki  pengaruh  penghambatan  bakteri uji.  Terhambatnya  pertumbuhan  bakteri  uji cenderung  murni  dari  senyawa  aktif  yang terkandung dalam ekstrak S. vulgare .

## Ekstraksi
Presentase ekstrak kasar alga coklat S. vulgare dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil presentase ekstrak kasar S.vulgare

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak kasar S. vulgare terhadap bakteri S. aureus
dan E.  coli dengan  3  kali  pengulangan dapat  dilihat  pada  Tabel  2  dan  Tabel  3.

## .
Tabel 2 Hasil aktivitas antibakteri ekstrak kasar S. vulgare terhadap bakteri S. aureus
Konsentrasi Zona hambat (mm) Ekstrak etanol Ekstrak kloroform Ekstrak n -heksana 10 % - - - 7,5 % - - - 5 % - c 1,0000 - 2,5 % - bc 1,6667 - 1 % - b 1,8883 - 0,5 % - cd 0,5000 - Ampicilin (0,4 mg/mL) 13,0000 a 13,0000 13,0000 Kontrol aquades - - - Kontrol pelarut organik - - - TPC (CFU/mL) 8 1,8x10 8 x10 2,5 8 x10 2,5 Ekstrak Warna filtrat Ekstrak kasar (g) Warna ekstrak kasar Ekstrak  kasar (%) Etanol hijau pekat 1,76 hijau pekat kehitaman 1,76 Kloroform hijau pekat kehitaman 1,60 coklat pekat 1,60 n- heksana hijau pekat 0,50 coklat pekat 0,50
Tabel 3 Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak kasar S. vulgare terhadap bakteri E. coli Konsentrasi Zona hambat (mm) Ekstrak etanol Ekstrak kloroform Ekstrak n -heksana 10 % - b 1,6667 - 7,5 % - bc 0,6667 - 5 % - bc 0,6667 - 2,5 % - - - 1 % - - - 0,5 % - - - Streptomocin (0,625 mg/mL) 22,1667 a 22,1667 22,16667 Kontrol aquades - - - Kontrol pelarut organik - - - TPC (CFU/mL) 8 2,7x10 8 x10 4,2 8 x10 4,2 Ekstrak kloroform S. vulgare menunjukkan aktivitas
antibakteri sedangkan  ekstrak  etanol  dan n -heksana sebaliknya,  hal  tersebut  dimungkinkan karena senyawa aktif antibakteri cenderung terdistrubusi pada pelarut semipolar. Aktivitas antibakteri pada ekstrak semipolar juga ditunjukkan pada penelitian Borbon et al . (2012), yakni mengekstrak alga coklat S. policeratum dan Dictyota  mertensii dengan pelarut etanol (polar) dan aseton (semipolar).  Ekstrak  aseton  kedua  alga menunjukkan  aktivitas  antibakteri  terhadap E.coli sedangkan ekstrak etanol sebaliknya. Ekstrak n -heksana  alga  coklat Turbinaria conoides tidak  menunjukkan  aktivitas  anti bakteri pada S. aureus (Shanmugam et  al ., 2010) kemudian ekstrak S. abbottiae dan S.  bataananse pada E.  coli (Shidarta dkk., 2008).
Ekstrak  kasar  kloroform S.  vulgare menunjukkan  aktivitas  antibakteri  yang cenderung  lemah  dibandingkan  senyawa obat  komersil  (ampicilin  dan  streptomisin), karena  zona  hambat  yang  dihasilkan  <  5 mm. Efektivitas antibakteri yang lebih baik ditunjukkan pada konsentrasi  1 % terhadap S.  aureus sedangkan  terhadap E.  coli pada
konsentrasi  5  % . Penentuan  konsentrasi terbaik  pertama-tama  melihat  perlakuan konsentrasi yang nilai rata-ratanya tertinggi. Setelah  itu  melihat  apakah  nilai  tertinggi tersebut  diikuti  oleh  huruf  yang  sama  atau tidak.  Jika  diikuti  huruf  yang  sama, dibandingkan  antara  konsentrasi  dosis tinggi  dan  dosis  rendah.  Perlakuan  dosis rendah lebih baik dari pada dosis tinggi jika direkomendasikan  sebagai  senyawa  obat, hal  tersebut  untuk  menghindari  resistensi bakteri  akibat  pemberian  antibakteri  secara berlebihan.
Pada umumnya semakin besar konsentrasi senyawa obat antibakteri menghasilkan  zona  hambat  yang  semakin besar  pula.  Konsentrasi  ekstrak  kloroform alga  coklat S.  vulgare terhadap  bakteri S. aureus menunjukkan  sebaliknya.  Hal  yang sama terjadi pada penelitian Cristobel et al., (2011)  yang  menguji  ekstrak  kasar S. wightii , ulva  fasciata (alga  hijau)  dan Gracilaria  corticata (alga  merah) terhadap bakteri  Gram  positif  ( Micrococcus  luteus ) dengan konsentrasi 0,1 %; 1 %; 10 % 50 % dan 100 %. Pada konsentrasi 50 % dan 100 % tidak menghasilkan zona hambat.

## Uji Fitokimia
Tabel 1.4 Hasil uji fitokimia ekstrak kasar kloroform S. vulgare Uji Ekstrak S. vulgare Warna Standar warna Flavonoid + Hijau Merah/ jingga/ hijau Tanin:  FeCl 3 − Coklat kekuningan Hijau kehitaman/ biru tua  Gelatin − Tidak ada endapan Endapan putih Alkaloid:  Dragendrof − Endapan merah muda Endapan kekuning-kuningan  Mayer − Tidak ada endapan Endapan jingga Saponin − Tidak terbentuk busa Terbentuk busa Steroid + Biru kehijauan Biru kehijauan Triterpenoid − Biru kehijauan Terbentuk cincin kecoklatan Flavonoid dan Steroid dapat berfungsi sebagai  antibakteri  karena  dapat  merusak dinding  sel  bakteri  (Abad et  al .,  2011). Mengganggu  permeabilitas  membran  sel, proses sintesis protein dan DNA (Volk  and Wheller, 1993). Aktivitas antibakteri senyawa  flavonoid  terdapat  pada  gugus hidroksil  bebas  pada  cincin  A,  C 5 dan  C 7 (Saleem et al ., 2010). Selain itu pada gugus hidroksil pada cincin B, 3’,4’,5’- trihydroxyflavonoids  (Bylka et  al .,  2010). Sifat  antibakteri  senyawa  steroid  terdapat
pada gugus hidroksil 3-β OH (Saleem et al ., 2010).
Pemisahan Senyawa Aktif dengan KLT Pemisahan golongan  senyawa  aktif flavonoid
menggunakan larutan pengembang  campuran  kloroform-metanol (9:  1)  yang  merujuk  penelitian  Marimuthu et  al. (2012),  yakni  memisahkan  senyawa aktif  alga S.  wightii yang  mengandung senyawa  fenol dan  flavonoid. Hasil pemisahan golongan senyawa aktif flavonoid S. vulgare pada Tabel 1.5.
Tabel  1.5  Hasil  pemisahan  golongan  senyawa  aktif  flavonoid  ekstrak  kloroform  S.vulgare menggunakan KLT
No Noda Rf (cm) Warna noda tampak
Warna noda 366 dibawah sinar UV Sebelum diuapi amoniak Setelah diuapi amoniak 1 0,17 Kuning pudar Merah muda Merah muda 2 0,41 Kuning Merah muda Merah ungu 3 0,47 Orange kuning Coklat hitam Coklat muda 4 0,53 Tak berwarna Merah muda Merah ungu 5 0,80 Tak berwarna Merah muda Biru 6 0,84 Tak berwarna Merah muda Coklat 7 0,91 Hijau biru Jinga terang Jingga Keterangan : Tanda + = Terkandung senyawa Tanda − = Tidak terkandung
Warna  noda  pada  nomor  7  dan  3 berwarna  hijau  biru  dan  kuning  orange, setelah  diuapi  amoniak  dan  dilihat  pada sinar  UV 336 berwarna  jingga/  orange  dan coklat  hitam.  perubahan  warna  yang dihasilkan  cenderung  sama  seperti  yang diteliti  Fahri  (2010)  yang  memisahkan senyawa flavonoid pada alga S. cristaefolium .  Menurut  Harborne  (2006), senyawa  flavonoid  yang  diuapi  amonik menghasilkan warna biru, coklat muda/lemah,  coklat  tua,  coklat  hitam, merah muda, merah tua, jingga, kuning dan hijau  kuning.  Berdasarkan  warna  tersebut, ekstrak  kloroform S.  vulgare yang  diduga mengandung  flavonoid  berwarna  merah muda,  coklat  muda,  biru  dan  jingga,  yakni noda pada nomor 1, 3, 6 dan 7.

## KLT Senyawa Steroid
Pemisahan  golongan  senyawa  aktif steroid  menggunakan  larutan  pengembang campuran  kloroform-metanol  (99:  1)  yang merujuk  penelitian  Kamenarska et  al. (2003),  yang  mana  memisahkan  senyawa steroid pada alga coklat Stilophora rhizodes , Punctaria  latifolia dan P. plantaginea .  Hasil  pemisahan  golongan senyawa  aktif  steroid S.  vulgare dapat dilihat padaTabel 4.7.
Pemisahan senyawa steroid
menghasilkan  9  noda.  Noda  pada  KLT terpisah  berdasarkan  tingkat  kepolarannya. Noda dengan Rf terkecil yaitu 0,017 diduga cenderung  bersifat  polar  dikarenakan  noda tersebut  lebih  terdistribusi  ke  fase  diam yang  bersifat  polar.  Noda  dengan  Rf tertinggi  0,46  cenderung  terdistribusi  ke dalam  fase  gerak  yang  kepolarannya  lebih kecil dibandingkan dengan fase diamnya.
Tabel  1.4  Hasil  pemisahan  golongan  senyawa  aktif  steroid  ekstrak  kloroform  S.  vulgare menggunakan KLT No Noda RF (cm) Warna noda tampak Warna noda dibawah sinar 256 UV
366 dibawah sinar UV
tanpa penyemprotan pereaksi L-B disemprot Pereaksi L-B 1 0,017 Kuning muda Tak berwarna Merah Biru 2 0,05 Kuning muda Hijau pudar Merah Biru 3 0,07 Kuning Hijau tua Hijau kecoklatan Biru 4 0,13 Tak berwarna Tak berwarna Merah muda Biru 5 0,21 Tak berwarna Tak berwarna Merah muda Biru 6 0,26 Tak berwarna Tak berwarna Merah muda Biru 7 0,30 Tak berwarna Tak berwarna Merah muda Biru 8 0,34 Takberwarna Tak berwarna Merah muda Biru 9 0,46 Hijau kebiruan Hijau muda Merah kecoklatan Biru –merah Kristanti  (2008)  melaporkan  bahwa senyawa  steroid  setelah  disemprot  pereaksi Liberman-Burchard pada plat KLT menghasilkan  warna  biru.  Hasil  KLT pemisahan senyawa steroid pada S. vulgare cenderung  berwarna  biru  yang  ditunjukkan pada noda nomor 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 dan 8.

## IV. KESIMPULAN
Ekstrak  alga  coklat S.  vulgare yang mempunyai  aktivitas  antibakteri  terbaik adalah  ekstrak  kloroform  pada  konsentrasi 1  %  terhadap S.  aureus dan  5  %  terhadap E. coli .
Golongan  senyawa  yang  diduga  pada ekstrak  kloroform  alga  coklat S.  vulgare adalah flavonoid dan steroid.

## Saran
Perlu  memperbesar  dan  memperkecil konsentrasi  untuk  mengetahui  efisiensi konsentrasi  ekstrak  sebagai  uji  antibakteri terhadap S. aureus dan E. coli . Ekstraksi menggunakan  variasi  pelarut  organik  lain perlu  dilakukan  untuk  mengetahui  aktivitas ekstrak pelarut sebagai antibakteri.
Hidrolisis  terhadap  ekstrak  pekat  yang didapat  juga  perlu  dilakukan  terkait senyawa  aktif  yang  berpotensi  sebagai antibakteri  dan  identifikasi  senyawa  aktif menggunakan  instrumen  perlu  dilakukan untuk  mengetahui  senyawa  aktif  yang dikandung alga coklat S. vulgare .

## V. DAFTAR PUSTAKA
Abad, M. J., Bedoya, L. M. and Bermejo P.
2011. Marine  Compounds  and  their Antimicrobial Activities . Departamento de Farmacología,
Facultad  de  Farmacia,  Universidad Complutense,  Avda.  Complutense s/n, 28040, Madrid, Spain. Anandhan, S. and Sorna K.H. Biorestraining  potentials  of  marine macroalgae collected from Rameshwaram,  Tamil  nadu. Journal research  Biology,  An  International Open Access Online Research
Journal .  385-392.  JRB.  2011  Vol  1. No 5 AOAC. 1984, Official  Methods of  Analysis of the Association of Official Analitycal  Chemist ,  Inc.  Washington
DC, p 185-189.
Asmad.2012.Wawancarakomunikasi .
Kelimpahan alga coklat jenis Sargassum vulgare di Pantai Kapong Kabupaten  Pamekasan. 17  Maret 2012 Asy-syanqithi, syaikh. 2007. Tafsir Adhwa’ul  Bayan .  Jakarta:  Pustaka
Azzam
Ayyad,  S.N.,  Sowellim,  S.Z.A.,  El-Hosini, M.S. and Abo-Atia, A. The Structural Determination  of  a  New  Steroidal Metabolite  from  the  Brown  Alga
Sargassum asperifolium . Journal
Department  of  Chemistry  Dammietta
Faculty of Science,Mansoura
University.
0939D5075/2003/0500D0333.2003
Bachtiar,  E.  2007. Penelusuran  Sumber
Daya hayati (Alga) Sebagai Biotarget Industri . Universitas Padjadjaran. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Jatitagor Bucle,  K.A,  Edwards,  R.A,  Fleet,  G.H, Wootton,  penerjemah:  Adiono  H.P. 2010. Ilmu Pangan . Jakarta: Universitas Indonesia Press
Bylka,  W.,  Matlawska,  I.,  Pilewski,  N.A.
Natural  flavonoid  as  Antimicrobial Agents. Reviev  Article Departmentof Pharmacognosy,K.Marcinkowski University  of  Medicinal  Sciences  10 Sieroca,  61-771  Poznan,  Poland. JANA Vol. 7, No. 2, 2004 Borbon,  H. et  al .,  2012.  Antimicrobial Activity  of  Most  Abundant  Marine Macroalgae of the Caribbean Coast of Costa Rica . Journal of Asian Scientific Research , Vol. 2, No. 5, pp. 292-299
Christobel,  G.J.,  Lipton,  A.P.,  Aishwarya, M.S.,  Sarika, A.R.  and Udayakumar, A.  Antibacterial  activity  of  aqueous extract  from  selected  macroalgae  of southwest  coast  of  India. Seaweed Res. Utiln., 33 (1&2) : 67 - 75, 2011 Cox,  S.,  Abu-Ghannam,  N  and  Gupta,  S. An assessment of the antioxidant and antimicrobial activity of six species of edible  Irish  seaweeds. International Food  Research  Journal 17:  205-220
(2010)
Fahri,  M.,  Risjani,  Y.  dan  Sasangka  P. 2010.  Isolation  and  Identification  of Flavonoids  Compounds  and  Toxicity Test Of Methanolextract From Brown Algae ( Sargassum cristaefolium ). Malang: UB
Hayati, E. K dan Halimah, N.
Phytochemical Test and Brine Shrimp Lethally  Test  Against  Artemia  salina Leach Anting-anting (Achalypha indica Linn.) Plant Ekstract.
ALCHEMY Vol.  No.  2Maret  2010,
hal 53-103
Ibañez, E., Herrero, M., Mendiola, J.A. and
Castro-Puyana, M. Chapter 2 Extraction  and  Characterization  of Bioactive  Compounds  with  Health Benefi  ts  from  Marine  Resources: Macro and Micro Algae, Cyanobacteria, and Invertebrates. DOI  10.1007/978-1-4614-1247-2_2,
Springer  Science  Business  Media , LLC 2012 Kamenarska,  Z.G. et  al .,  A  comparative study  on  the  sterol  composition  of some  brown  algae  from  the  Black Sea. Original scientific paper
Institute  of  Organic  Chemistry  with Centre  of  Phytochemistry,  Bulgarian
Academy  of  Sciences,  Sofia  1113, Bulgaria. J.Serb.Chem.Soc.  68 (4– 5)269–275(2003) Koivikko, R. 2008. Brown Alga Phlorotannins Improving and Applying Chemical Methods . Department  of  Chemistry  University of Turky Finland
Kristanti,  A.V,  Aminah,  N.S,  Tanjung,  M.,
Kurniadi,  B.  2008. Buku  Ajar Fitokimia . Airlangga University Press. Surabaya Manivannan,  K.,  Karthikai  devi,  G., Anantharaman,P., Balasubramanian,T. Antimicrobial potential  of  selected  brown  seaweeds from  Vedalai  coastal  waters,  Gulf  of
Mannar. Asian  Pacific  Journal  of Tropical Biomedicine (2011)114-120 Marimuthu J. et al . Phytochemical characterization  of  brown  seaweed Sargassum  wightii .  Asian  Pacific Journal of Tropical Disease (2012)S109-S113
Moosa,  M.K.  Sumberdaya  laut  nusantara,
keanekaragamanhayati laut dan pelestariannya. Loka karya Keanekaragaman Hayati Laut. Pemanfaatan  secara  lestari  dilandasi penelitian  dan  penyelamatan. Widy Graha LIPI , Jakarta 23 Pebruari 1999 Putri,  H.K.  2011.  Pemanfaatan  Rumput
Laut  Coklat  ( Sargassum sp.)  sebagai Serbuk Minuman Pelangsing
Tubuh.DepartemenTeknologi
HasilPerairanFakultas  PerikananDan
Ilmu  Kelautan,  Institut  Pertanian
Bogor Bogor Reskika, A. 2011. Skripsi Evaluasi  Potensi Rumput  Laut  Coklat  (Phaeophyceae) dan Rumput Laut Hijau (Chlorophyceae) Asal Perairan Takalar  Sebagai  Antibakteri Vibrio spp. Jurusan  Perikanan  Fakultas  Ilmu Kelautan  Dan  Perikanan  Universitas
Hasanuddin Makassar
Rohmah  W.  B.,  Budi,  S.B.  dan  Kartika,
N.H. 2001.  Daya  AntibakteriEkstrak SargassumCrystaefolium Dengan Berbagai Pelarut Terhadap Eschericia coli dan Vibrio haemoliticus . Malang: Fakultas Perikanan dan Ilmu KelautanUniversitas Brawijaya Rohmah  W.  B.,  Budi,  S.B.  dan  Kartika, N.H. 2001.  Daya  Antibakteri  Ekstrak Sargassum Crystaefolium dengan Berbagai Pelarut Terhadap Eschericia coli dan Vibrio haemoliticus . Malang: Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Brawijaya Saleem,  M.,  Nazir,  M., Ali,  M.S.,  Hussain, H.,  Lee,  Y.S.,  Riaza,  N.  and Jabbara,A. Antimicrobial Natural
Products:  an  Update  on  Future Antibiotic  Drug  Candidates.  DOI:
10.1039/b916096e. First published as an  Advance  Article  on  the  web 25th
November 2009
Shanmugam, S.K., Kumar, Y., Yar, K.M.S.,
Gupta,  V. and  De  Clercq,  E. Antimicrobial and Cytotoxic Activities  of Turbinaria  conoides (J.Agardh)  Kuetz. Iranian  Journal  of Pharmaceutical  Research (2010),  9 (4): 411-416
Sidharta  B.R.,  Atmodjo,  P.K.  dan  E. Mursyanti. Skrining Senyawa Antibakteri dari Beberapa Jenis Rumput  Laut  Coklat  (Phaeophyceae) dari  Pantai  Drini,  Daerah  Istimewa Yogyakarta. Biota  Vol.  13 (1):  1-7, Februari 2008 ISSN 0853-8670
Sudarmadji,  S.B.,  Haryono,  dan  Suhardi. 2007. Analisis  Bahan  Makanan  dan
Pertanian. Yogyakarta: Liberty.
Volk.W.A  dan  Wheeler  M.F.  1993.
Mikrobiologi  Dasar .  Jakarta:  PT.
Gelora Aksara Pratama.
Winarno, F.G. 2004. Kimia Bahan Pangan . Gramedia Pustaka Utama. Jakarta Yudanto,  H.A.  2001. Wilayah  Perairan Indonesia .  Kompas.com.  diakses  21 September 2011