1  Staf Pengajar Departemen Teknologi Hasil Perairan FPIK IPB 2  Staf Pengajar Depertemen Ilmu dan Teknologi Pangan, FATETA-IPB 3. Alumni Departemen Teknologi Hasil Perairan FPIK IPB
1  Staf Pengajar Departemen Teknologi Hasil Perairan FPIK IPB 2  Staf Pengajar Depertemen Ilmu dan Teknologi Pangan, FATETA-IPB
3. Alumni Departemen Teknologi Hasil Perairan FPIK IPB

## MODIFIKASI MEDIA MARINE BROTH PADA PRODUKSI INHIBITOR PROTEASE DARI BAKTERI Acinetobacter baumanni YANG HIDUP BERSIMBIOSIS DENGAN SPONGE Plakortis nigra
Desniar 1 , Tati Nurhayati 1 , Maggy T. Suhartono 2 , Eko Muhammad Isa 3 ,

## Abstrak
Enzim  protease  memiliki  peranan  penting  dalam  proses  metabolisme  bakteri  patogen. Protease  bakteri  tersebut  dapat  dihambat  aktivitasnya  oleh  inhibitor  protease.  Iinhibitor  protease dapat diproduksi dari bakteri Acinetobacter baumanni yang hidup bersimbiosis dengan sponge laut ( Plakortis  nigra ).  Agar  produksi  inhibitor  protease  dapat  lebih  optimal  maka  perlu  diketahui komposisi  media marine  broth yang  baik.  Perlakuan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah modifikasi  konsentrasi peptone (0,5%  dan  1%)  dan  modifikasi  konsentrasi yeast  extract (0,1%; 0,5% dan 1%). Peningkatan konsentrasi yeast extract memperpanjang  waktu propagasi bakteri A. baumanni dan memperlambat awal produksi inhibitor. Peningkatan  konsentrasi pepton cenderung menghasilkan pertumbuhan  yang lebih  baik. Aktivitas  penghambatan  inhibitor protease tertinggi terjadi pada media dengan kombinasi konsentrasi pepton dan yeast extract masing-masing 0,5%.
Kata kunci : inhibitor protease, Acinetobacter , simbiosis sponge, produksi

## PENDAHULUAN
Enzim protease berperan sebagai faktor virulensi pada proses metabolisme berbagai  organisme  patogen.  Pada  bakteri  patogen,  enzim  ini  menyebabkan berbagai  penyakit,  seperti:  malaria,kanker,  tumor,  SARS,  bahkan  penyakit degeneratif  yaitu  Alzheimer  (Suhartono    2000).  Suatu  enzim  protease  dapat dihambat  aktivitasnya.  dengan  menggunakan  inhibitor  protease.  Melalui  adanya kemampuan  ini,  menyebabka  inhibitor  protease  memiliki  potensi  untuk dikembangkan  sebagai  komponen  bioaktif  dalam  upaya  mengurangi  penyebaran penyakit yang disebabkan oleh bakteri patogen.
Sponge  merupakan  salah  satu  sumber  alami  yang  baik  dalam menghasilkan komponen-komponen bioaktif termasuk inhibitor enzim (Munro et al. 1999 diacu dalam Lee et  al. 2001).  Beberapa  tahunterakhir eksploitasi  sponge  gencar  dilaksanakan  dan  para  peneliti  mencari  sumber  daya alternatif  pengganti  sponge  yang  lebih  mudah  untuk  memproduksi  senyawa bioaktif.  Salah  satunya  adalah  dengan  menggunakan  mikroorganisme  (bakteri) yang  hidup  bersimbiosis  dengan  sponge.  Penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan oleh  Nurhayati  dan  Suhartono  (2004)  menunjukkan  bahwa  bakteri  yang  diisolasi dari sponge Plakortis nigra memiliki aktivitas penghambatan terhadap protease bakteri Escherichia coli.
Salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi  produksi  senyawa  bioaktif  oleh bakteri adalah media pertumbuhannya. Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian produksi  inhibitor  protease  oleh A.  baumanni dengan  modifikasi  pertumbuhan terutama konsentrasi pepton dan yeast extract.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  konsentrasi peptone dan yeast extract yang  terbaik  sebagai  media  pertumbuhan A.  baumanni agar  dihasilkan inhibitor protease dengan aktivitas penghambatan.

## METODOLOGI

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  bakteri Acinetobacter baumanni , E.  coli ,  Luria    Broth  (LB),  Marine  Broth  (MB),  D-Glukose,  Bovine Serum Agar (BSA), larutan Bradford, pereaksi uji aktivitas protease dan aktivitas inhibitor  protease.  Sedangkan  alat  yang  digunakan  adalah  alat-alat  gelas, pembakar  spiritus,  jarum  ose,  kapas,  kertas  label,  pipet  mikro  beserta  tip-nya, tabung  ependorf,  pH  meter  ( Cyberscan 510),  sentrifuge,  inkubator,  waterbath shaker, spektrofotometer, magnetic stirer, neraca analitik, autoklaf dan vorteks.

## Metode Penelitian
Penelitian  dilakukan  dalam  tiga  tahap,  yaitu  tahap  penyegaran  ( refresh ), tahap  penentuan  waktu  propagasi,  dan  tahap  penentuan  waktu produksi  inhibitor protease.  Tahap  penyegaran  dilakukan  pada  agar  miring  untuk  mempersiapkan bakteri yang akan digunakan dalam penelitian.
Tahap  penentuan  waktu  propagasi  dilakukan  dengan  menumbuhkan bakteri Acinetobacter  baumanni dalam marine  broth dengan  komposisi  media yang  sesuai dengan perlakuan pada tahap produksi  inhibitor protease. Media MB sebanyak  50 ml disterilisasi  pada 121ºC  selama  15 menit.  Setelah  dingin,  bakteri Acinetobacter baumanni yang  sudah  disegarkan  pada  media  miring  diambil sebanyak  dua  ose  dan  dimasukan  ke  dalam  media  MB.  Kemudian  media  kultur diinkubasi dalam water bath shaker pada suhu 30  C dengan kecepatan agitasi 150 rpm  selama  33  jam.  Pengamatan  dilakukan  setiap  3  jam  dengan  pengukuran Optical  Density (OD)  pada  panjang  gelombang  660  nm.  Waktu  yang  ditentukan sebagai waktu propagasi diperoleh dari hasil plot nilai OD yang dihasilkan dengan
waktu  pengamatan.  Waktu  yang  dipilih  adalah  antara  pertengahan  sampai  akhir fase eksponensial.
Tahap  penentuan  waktu  produksi  inhibitor  protease  menggunakan  media MB  (100  ml)  yang  telah  dimodifikasi  yaitu  dengan  perlakuan  konsentrasi yeast extract 0,1%  (A1),  0,5%  (A2)  dan  1%  (A3)  serta  konsentrasi  pepton  0,5%  (B1) dan  1%  (B2).  Media  tersebut  ditambahkan  D-Glukose  sebanyak  0,05%  pada masing-masing perlakuan.
Pertama-tama  bakteri  yang  telah  disegarkan,  diinokulasi  ke  dalam  media propagasi. Setelah mencapai waktu propagasi, inokulum Acinetobacter baumanni diambil  sebanyak  2%  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  media  produksi  inhibitor protease  (100  ml)  (Imada  1985a).  Setelah  itu,  media  produksi  diinkubasi  dalam water  bath shaker pada  suhu  30  C  dengan  kecepatan  agitasi  150  rpm  selama 52  jam.  Pengamatan  dilakukan setiap  empat  jam  dengan  parameter  yang  diamati adalah    OD,  pH,  konsentrasi  protein,  aktivitas  protease,  dan  aktivitas  inhibitor protease. Pengukuran aktivitas inhibitor protease dilakukan dengan metode Anson (1938) diacu dalam Imada  (1985a)  yang  dimodifikasi  oleh  Nurhayati  dan Suhartono  (2004).  Protease  ekstrak  kasar  yang  digunakan  sebagai  substrat dalam pengukuran  aktivitas  inhibitor  protease  berasal  dari  bakteri E.  coli yang diproduksi  dengan  metode  Baehaqi  (2004) . Sedangkan  untuk  pengukuran  kadar protein, metode yang digunakan adalah metode Bradford (1976).

## Analisis Data
Data  yang  diperolah  dari  semua  pengamatan  dianalisis  secara  deskriptif dengan  menggunakan  grafik  hubungan  antara  waktu  pengamatan  dengan  semua parameter yang diamati.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Penentuan Waktu Propagasi
Waktu  propagasi  adalah  merupakan  lamanya  bakteri  ditumbuhkan  dalam media  inokulum  sampai  bakteri  siap  untuk  dipindahkan  ke  media  produksi. Penelitian  pada  tahap  penentuan  waktu  produksi  inhibitor  protease    ini  , menggunakan media pertumbuhan bakteri yang berbeda sehingga adaptasi bakteri
terhadap media juga berbeda. Untuk mengurangi  penyimpangan akibat perbedaan ini  maka  pada  proses  fermentasi  didahului  dengan  menentukan  waktu  propagasi bakteri  laut.  Waktu  propagasi  perlakuan  A1B1  (yeast  extract  0,1%  dan  pepton 0,5%),  A1B2  (yeast  extract  0,1%  dan  pepton  1,0%),  A2B1  (yeast  extract  0,5% dan  pepton  0,5%)  dan  A2B2  (yeast  extract  0,5%  dan  pepton  1,0%)  terjadi  pada jam  ke-12  dengan  densitas  sel  masing-masing  sebesar  0,8;  1,2;  1,0  dan  1,5. Sedangkan  waktu  propagasi  perlakuan  A3B1  (yeast  extract  1,0%  dan  pepton 0,5%)  dan  A3B2  (yeast  extract  1,0%  dan  pepton  1,0%)  terjadi  pada  jam  ke-18 dengan densitas sel masing-masing sebesar 2,0 dan 1,5.
Peningkatan  konsentrasi yeast  extract memperpanjang  waktu  propagasi yang dihasilkan.  Hal  ini disebabkan  karena peningkatan  konsentrasi yeast extract dapat memperlama kemampuan bakteri untuk melakukan aktivitas metabolik dan fisiologik.dari bakteri A. baumanni . Pada fase pertumbuhan lambat, sel melakukan aktivitas  metabolik  dan  fisiologik  untuk  mempersiapkan  pembelahan.  Sedangkan peningkatan  konsentrasi peptone tidak  banyak  mempengaruhi  lamanya  waktu propagasi  bakteri  tetapi  secara  umum  dapat  meningkatkan  jumlah  densitas  sel. Artinya pepton mendukung untuk pertumbuhan bakteri.

## Produksi inhibitor protease
Hasil  pengamatan  terhadap  parameter  OD,  perubahan  pH,  konsentrasi protein,  aktivitas protease dan aktivitas inhibitor protease  yang dihasilkan selama proses produksi dapat dilihat pada Gambar 1.
Secara  umum,  hasil  produksi  inhibitor  protease  memperlihatkan  bahwa modifikasi komposisi marine broth untuk produksi inhibitor protease memberikan hasil yang beragam. Peningkatan konsentrasi peptone dari 0,5% menjadi 1% pada setiap konsentrasi yeast extract yang sama cenderung menghasilkan pertumbuhan yang  lebih  baik,  dimana  densitas  sel  mengalami  peningkatan,  kecuali  perlakuan A2B1  (berkisar  antara  0,044 –  4,740)  terhadap  perlakuan  A2B2  (berkisar  antara 0,081  –  2,964),  densitas  sel  mengalami  penurunan  (Gambar  1).    Densitas  sel tertinggi dihasilkan pada perlakuan A2B1 yaitu berkisar antara 0,044 – 4,740.
Gambar 1.  Produksi  inhibitor  protease,  OD,  pH,  konsentrasi  protein  dan aktivitas  protease  selama  proses  fermentasi  untuk  semua perlakuan yang dicobakan
1. Peptone 0,5% Yeast Extract 0,1%
Jam 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 U ni t/ m l 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 P ro te a s e 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 [P ro te in ] 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 p H 0 2 4 6 8 10 O D 0 1 2 3 4 5 6 Unit/ml protease [protein] pH OD A1B1 2. Peptone 1% Yeast Extract 0,1% Jam 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 U ni t/ m l 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 P ro te a s e 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 [P ro te in ] 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 p H 0 2 4 6 8 10 O D 0 1 2 3 4 5 6 Unit/ml protease [protein] pH OD A1B2 5. Peptone 0,5% Yeast Extract 1% Jam 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 U n it /m l 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 P ro te a s e 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 [P ro te in ] 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 p H 0 2 4 6 8 10 O D 0 1 2 3 4 5 6 Unit/ml protease [protein] pH OD A3B1 3. Peptone 0,5% Yeast Extract 0,5% Jam 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 U n it /m l 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 P ro te a s e 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 [P ro te in ] 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 p H 0 2 4 6 8 10 O D 0 1 2 3 4 5 6 Unit/ml protease [protein] pH OD A2B1 4. Peptone 1% Yeast Extract 0,5% Jam 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 U n it /m l 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 P ro te a s e 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 [P ro te in ] 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 p H 0 2 4 6 8 10 O D 0 1 2 3 4 5 6 Unit/ml protease [protein] pH OD A2B2 6. Peptone 1% Yeast Extract 1% Jam 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 U n it /m l 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 P ro te a s e 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 [P ro te in ] 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 p H 0 2 4 6 8 10 O D 0 1 2 3 4 5 6 Unit/ml protease [protein] pH OD A3B2
Peningkatan  konsentrasi peptone dari  0,5%  menjadi  1%  pada  setiap konsentrasi yeast  extract yang  sama  juga  cenderung  mengurangi  lamanya  waktu produksi  inhibitor  protease  dari  bakteri A.  baumanni ,  kecuali  pada  perlakuan A3B1  inhibitor  protease  diproduksi  selama  24  jam  terhadap  A3B2  produksi inhibotor  protease  diproduksi  selama  28  jam  (Gambar  1  (e1  dan  f1)  Pada perlakuan  A1B1  inhibitor  protease  diproduksi  selama  36  jam  sedangkan  pada perlakuan  A1B2   selama  20  jam.  Perlakuan A2B1 produksi inhibitor protease selama  16  jam  sedangkan  pada  perlakuan  A2B2    produksi  inhibitor  protease selama  12  jam.  Aktivitas    penghambatan    tertinggi    oleh  inhibitor  protease  yang dihasilkan terjadi pada perlakuan A2B1 (Gambar 1 (c1)).
Dari  kedua  data  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  produksi  sel  atau pertumbuhan  menentukan  tingkat  aktivitas  penghambatan  dari  inhibitor  protease yang  dihasilkan.  Dengan  kata  lain  semakin  tinggi  pertumbuhan  semakin  tinggi aktivitas penghambatan yang dihasilkan oleh inhibitor protease. Produksi inhibitor protease  secara  umum  terjadi  pada  akhir  fase  eksponensial  sampai  fase  stasioner (Gambar 1).
Hal  ini  diduga  karena  adanya  batas  maksimal  dari  bakteri Acinetobacter baumanni untuk  menggunakan peptone dan yeast  exstract sebagai  faktor pertumbuhan  dalam  metabolismenya  maupun  dalam  memproduksi  inhibitor protease.  Batas  maksimal  tersebut  yaitu  pada  konsentrasi peptone dan yeast extract sebesar  0,5%  (perlakuan  A2B1). Peptone merupakan  bahan  yang mendukung   pertumbuhan    karena    mengandung    asam  amino,  N,  P, dan  S  yang digunakan  untuk  sintesis  protein  dan  sintesis  asam  nukleat  (Todar 2004).  Pepton juga  merupakan  sumber  nitrogen  yang  kaya  akan  vitamin  dan  karbohidrat (Anonymous 2005).
Sebaliknya  peningkatan  konsentrasi yeast  extract dari  0,1%  menjadi  1% pada setiap konsentrasi peptone yang sama akan  memperlambat  awal dimulainya produksi  inhibitor  protease.  Hal  ini  terlihat  dari  perlakuan  A1B1  ( yeast  extract 0,1%; peptone 0,5%), A2B1 ( yeast extract 0,5%; peptone 0,5%) dan A3B1 ( yeast extract 1%; peptone 0,5%)  memperlihatkan  dimulainya  produksi  inhibitor protease  masing-masing  terjadi  pada  jam  ke-8,  jam  ke-12,  dan  jam  ke-20. Sedangkan pada perlakuan A1B2 ( yeast extract 0,1%; peptone 1%), A2B2 ( yeast
extract 0,5%; peptone 1%)  dan  A3B2  ( yeast  extract 1%; peptone 1%),  awal permulaan produksi inhibitor protease terjadi pada jam ke-16, jam ke-16 dan jam ke-24.
Yeast extract adalah zat  yang baik untuk mendorong pertumbuhan bakteri (Anonymous  2005). Pada awal pertumbuhan, yeast extract cenderung mendorong bakteri  untuk  berkembangbiak  sehingga  densitas  sel  meningkat  cepat.  Setelah konsentrasi yeast  extract berkurang,  bakteri Acinetobacter  baumanni mulai memproduksi inhibitor protease yaitu pada akhir fase logaritmik dari pertumbuhan bakteri Acinetobacter  baumanni .  Dengan  demikian, yeast  extract cenderung mendukung  pertumbuhan  bakteri  tetapi  kurang  mendukung  produksi  inhibitor protease. Dengan kata lain semakin tinggi konsentrasi yeast extract yang ada pada media  maka  awal  produksi  inhibitor  protease  semakin  lama.  Y east  extract merupakan  faktor  pembatas  dalam  produksi  inhibitor  protease  dimana  aktivitas penghambatan  tertinggi  dari  inhibitor  protease  yang  dihasilkan  diperoleh  pada konsentrasi yeast  extract 0,5%  dengan  konsentrasi peptone 0,5%  yaitu  sebesar 2,500 unit/ml.
Peningkatan  konsentrasi protein sejalan dengan peningkatan  nilai densitas sel  bakteri.  Semakin  tinggi  nilai  densitas  sel  yang  terukur  maka  konsentrasi protein  juga  tinggi.  Pada  saat  itu,  terjadi  produksi  inhibitor  protease  sehingga senyawa inhibitor protease yang diproduksi juga merupakan protein (Gambar 1).
Selama pertumbuhan bakteri A. baumanni cenderung terjadi perubahan pH media  yang  relatif  sama  pada  semua  perlakuan  yaitu  berkisar  antara  pH  5,83  – 8,85.  Akan  tetapi  dari  sisi  produksi  inhibitornya,  terlihat  adanya  perbedaan  nilai pH pada awal produksi. Pada setiap konsentrasi peptone yang  sama, peningkatan konsentrasi yeast  extract akan  meningkatkan  pH  awal  terbentuknya  inhibitor protease. Hal  ini terlihat dari perlakuan  A1B1, A2B1  dan A3B1 dengan  nilai pH awal produksi inhibitor sebesar 7,06; 7,44  dan 7,94. Pada perlakuan A1B2, A2B2 dan A3B2 juga memperlihatkan hal yang sama dengan nilai pH sebesar 7,39; 7,95 dan  8,04.  Hal  ini  terjadi  karena peptone dan yeast  extract mengandung  nitrogen yang akan meningkatkan nilai pH ketika larut dalam air. Ketika inhibitor protease diproduksi,  pH  yang  terukur  pada  media  meningkat  secara  bertahap  antara  7,0
sampai  8,5.  Dengan  demikian,  inhibitor  protease  diproduksi  oleh  bakteri Acinetobacter baumanni pada pH normal sampai agak basa.
Peningkatan  konsentrasi yeast  extract dan peptone juga  mempengaruhi lamanya  bakteri A  baumanni memproduksi  inhibitor  protease.  Pada  perlakuan A1B1,  A2B1  dan  A3B1  produksi  inhibitor  protease  masing-masing  berlangsung selama 36 jam, 16 jam, 24 jam sedangkan pada perlakuan A1B2, A2B2 dan A3B2 produksi  inhibitor  protease  masing-masing  berlangsung  selama  20  jam,  12  jam, dan 28 jam. Semua perlakuan menunjukkan bahwa konsentrasi peptone dan yeast extract terendah  (A1B1)  menghasilkan  waktu  produksi  inhibitor  protease  yang panjang yaitu selama 36 jam dibandingkan dengan perlakuan yang lain.
Konsentrasi yeast  extract dan peptone yang  rendah  menyebabkan pertumbuhan yang lambat dimana densitas sel yang dihasilkan juga paling rendah yaitu  berkisar  antara  0,037  –  1,848.  Ddemikian  juga  dengan  aktivitas penghambatan  dari  inhibitor  yang  dihasilkan  berkisar  antara  0,7  –  1,0.  Aktivitas penghambatan  tertinggi    dari  inhibitor  protease  yang  dihasilkan  oleh A . baumnanni selama proses produksi dapat dilihat pada Gambar 2.
1.000 2.500 1.182 1.833 1.444 2.000 0.000 0.500 1.000 1.500 2.000 2.500 3.000 A k tiv ita s p e n g h a m b a ta n ( u n it/m l) A1B1 A2B1 A3B1 A1B2 A2B2 A3B2 Perlakuan
Gambar 2.  Aktivitas penghambatan tertinggi oleh inhibitor protease pada semua perlakuan ( Yeast extract : 0,1%(A1), 0,5%(A2), 1%(A3); Peptone : 0,5%(B1), 1%(B2))
Gambar 2 menunjukkan bahwa peningkatan konsentrasi yeast extract pada konsentrasi peptone 0,5%  akan  menyebabkan  aktivitas  penghambatan  tertinggi meningkat  kemudian  menurun.  Berbeda dengan  konsentrasi peptone 1%  dimana aktivitas  penghambatan  tertinggi  menurun  kemudian  meningkat.  Aktivitas penghambatan  tertinggi    dari  semua  perlakuan  yang  dicobakan  terjadi  pada perlakuan  A2B1  ( yeast  extract dan pentone masing-masing  0,5%).  Dengan  kata lain  aktivitas  penghambatan  tertinggi  dari  inhibitor  yang  dihasilkan  tergantung kepada konsentrasi yeast exract dan peptone yang digunakan.
Perlakuan  A2B1  merupakan  batas  maksimal  banyaknya  konsentrasi peptone dan yeast extract yang digunakan untuk produksi  inhibitor protease yang mempunyai  aktivitas  penghambatan  tertinggi.  Peningkatan  konsentrasi peptone dan yeast extract yang lebih besar akan menurunkan aktivitas penghambatan dari inhibitor protease  yang dihasilkan. Sumber nutrisi dan  nitrogen  kompleks berupa polypepton adalah sumber yang paling cocok untuk pertumbuhan bakteri dan juga produksi  inhibitor  protease  dengan  konsentrasi  optimal  sebesar  0,6% (Imada 1985a).

## KESIMPULAN DAN SARAN
Peningkatan konsentrasi yeast extract dapat memperlama waktu propagasi dari  bakteri A  baumanni .  Sedangkan  peningkatan  konsentrasi  peptone  tidak banyak mempengaruhi pertumbuhan bakteri A baumanni dalam penentuan waktu propagasi.
Peningkatan  konsentrasi peptone dari  0,5%  menjadi  1%  pada  setiap konsentrasi yeast  extract yang  sama  cenderung  menghasilkan  pertumbuhan  yang lebih  baik.Densitas  sel  tertinggi  dihasilkan  pada  perlakuan  A2B1  yaitu  berkisar antara 0,044 – 4,740. Sebaliknya peningkatan konsentrasi yeast extract dari 0,1% menjadi 1% pada setiap konsentrasi peptone yang sama akan memperlambat awal dimulainya produksi inhibitor protease. Peningkatan konsentrasi yeast extract dan peptone juga mempengaruhi  lamanya bakteri A.baumanni memproduksi  inhibitor protease.
Selama pertumbuhan bakteri A. baumanni cenderung terjadi perubahan pH media  yang  relatif  sama  untuk  semua  perlakuan  yaitu  berkisar  antara  pH  5,83  –
8,85. Ketika inhibitor protease diproduksi, pH yang terukur pada media meningkat secara  bertahap  antara  7,0  sampai  8,5.  Dengan  demikian,  inhibitor  protease diproduksi  oleh  bakteri Acinetobacter  baumanni pada  pH  normal  sampai  agak basa.
Konsentrasi peptone sebesar  0,5%  dan yeast  extract sebesar  0,5% merupakan  kombinasi media terbaik untuk menghasilkan aktivitas penghambatan tertinggi dari inhibitor proteses yang dihasilkan oleh A baumanni .
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk  mengamati  daya  hambat bakteri Acinetobacter baumanni terhadap protease bakteri patogen lainnya. Selain itu, perlu juga dilakukan penelitian tentang pemurnian dan  karakterisasi  inhibitor protease yang dihasilkan oleh bakteri Acinetobacter baumanni .

## DAFTAR PUSTAKA
Anonymous. 2005. Media ingredients, peptones and hydrolysates . www.neogen.com/  pdf/Acumedia/MediaIngredients.pdf [January  29, 2005].
Bradford  MM.  1976.  A  rapid  and  sensitive  methods  for  the  quantitation  of microgram  quantitites  of  protein  utilising  the  principle  of  protein  dye binding. Anal. Biochem. 72:248-254.
Baehaki  A.  2004.  Karakterisasi  protease  beberapa  bakteri  patogen.  Tesis. Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor.
Imada C, Taga N, Maeda M. 1985a. Cultivation conditions for subtilisin inhibitor- producing bacterium and general properties of the inhibitor “marinostatin” . Bull. of Jap. Soc. of Sci. Fish. 51(5): 805-810 .
Lee  YK,  LeeJH,  Lee  HK.  2001.  Microbial  symbiosis  in  marine  sponges. The Journal of Microbiology . 39: p.254 -264.
Munro  MH et  al. 1999.  The  discovery  and  development  of  marine  compounds with pharmaceutical potential. J. Biotechnol . 70: 15-25.
Nurhayati T, Suhartono MT. 2004. Pemilahan dan Karakterisasi Inhibitor Protease dari Mikroba Laut pada Bunga Karang (Sponge) Kepulauan Seribu. Bogor : LPPM, IPB.
Suhartono  MT.  2000.  Pemahaman  karakterisasi  biokimia  enzim  protease  dalam mendukung industri berbasis bioteknologi [Orasi Ilmiah]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian. Institut Pertanian Bogor.
Todar K. 2004. Nutrition and growth of bacteria. http://textbookofbacteriology.net/ nutgro.html [13 April 2005].