## INDONESIA
PENENTUAN KANDUNGAN METABOLIT SEKUNDER, FENOLIK TOTAL, UJI ANTIOKSIDAN, DAN TOKSISITAS DARI EKSTRAK DAUN ULIN (Eusideroxylon zwageri Teijsm. & Binn)
Adlis Santoni 1 , Suryati suryati 1 , Yayan Rabbani Kurniawan* 1
1 Natural Materials Organic Chemistry Laboratory, Department of Chemistry, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Andalas University, Padang, West Sumatra, Indonesia, 25163
*alamat email korespondensi : yayanrabbanikurniawan22@gmail.com

## Abstract
Leaf (Eusideroxylon zwageri Teijsm. & Binn) is traditional Indonesian medicine plants. The aim of this research is to carry out phytochemical tests, antioxidant activity, toxicity, and phenolic total. Maceration has been done by using hexane, ethyl acetate, and methanol as solvent. Phytochemical test  results  of  fresh  E.zwageri  leaf  samples  extracted  using  methanol  contain  alkaloid,  steroid, flavonoid,  tepenoid,  and  phenolic.  Antioxidant  activity  with  DPPH  method  (1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazil) from the highest (IC 50 ) value to the lowest are hexane extract with weak activity (IC 50 ) 368.56 mg/L, ethyl acetate extract with moderate activity (IC 50 ) 115.41 mg/L, methanol extract with very  strong  activity  (IC 50 )  10.96  mg/L.  This  result  is  correlated  with  the  total  phenolic  yield,  the higher the (IC 50 ) value, the lower the total phenolic value, methanol extract had the highest value of 162,95 mg GAE/Gram, followed by ethyl acetate extract of 96.70 mg GAE/Gram and hexane with a value of 19.85 mg GAE/Gram. Toxicity test results using the (BSLT) method from the lowest to the highest  value  (LC 50 )  were  hexane  extract  with  very  strong  toxicity  (LC 50 )  82.28  mg/L,  methanol extract  with  weak toxicity (LC 50 )  696.63  mg/L  and ethyl  acetate  with  weak  toxicity  (LC 50 )  812.46 mg/L.
Keywords: Daun ( Eusideroxylon zwageri Teijsm. & Binn), Antioxidants, Total Phenolic, Toxicity

## Abstrak
Daun  (Eusideroxylon  zwageri  Teijsm.  &  Binn)  merupakan  tanaman  obat tradisional  Indonesia. Tujuan  penelitian  ini  untuk  melakukan  uji  fitokimia,  aktivitas  antioksidan,  toksisitas,  dan  total fenolat. Maserasi dilakukan dengan pelarut heksana, etil asetat, dan metanol. Hasil uji fitokimia sampel  daun  E.zwageri  segar  yang  diekstraksi  menggunakan  metanol  mengandung  alkaloid, terpenoid, steroid, flavonoid, dan fenolat. Aktivitas antioksidan dengan metode DPPH (1,1-Difenil- 2-Pikrilhidrazil)  dari  nilai  IC 50 yang  paling  tinggi  ke  rendah  adalah  ekstrak  heksana  dengan antioksidan lemah (IC 50 ) 368,56 mg/L, ekstrak etil asetat dengan antioksidan sedang (IC 50 ) 115,41 mg/L,  ekstrak  metanol  dengan  antioksidan  sangat  kuat  (IC 50 )  10,96  mg/L.  Hasil  ini  berkorelasi dengan hasil total fenolat, semakin tinggi nilai (IC 50 ) maka akan semakin rendah nilai total fenolat,
ekstrak metanol memiliki total fenolat paling tinggi 162,95 mg GAE/Gram diikut ekstrak etil asetat 96,70  mg  GAE/Gram  dan  ekstrak  heksana  dengan  19,85  mg  GAE/Gram.  Hasil  uji  toksisitas menggunakan  metode  (BSLT)  dari  nilai  (LC 50 )  yang  paling  rendah  ke  tinggi  adalah  ekstrak heksana (LC 50 ) 82,28 mg/L dengan toksisitas yang sangat kuat, ekstrak metanol (LC 50 ) 696,63 mg/L dengan toksistas lemah dan etil asetat (LC 50 ) 812,46 mg/L dengan toksisitas lemah
Kata Kunci: Daun ( Eusideroxylon zwageri Teijsm. & Binn) , Antioksidan, Total Fenolat, Toksisitas

## I. PENDAHULUAN
Penuaan  dini  dapat  disebabakan  oleh radikal  bebas  [1],[2].  Radikal  bebas  di produksi  dari  metabolisme  tubuh  dan  juga dapat berasal dari pola hidup yang tidak sehat seperti,  konsumsi  makanan,  pencemaran lingkungan,  merokok,  air  yang  tercemar logam,  paparan  sinar  UV,  kelebihan  obat- obatan [3]–[5]. Dalam fisiologi normal, kadar radikal  bebas  dikontrol  oleh  beberapa  enzim seperti,  katalase,  glu-tathione  peroksidase, dan superoksida. Ketika jumlah radikal bebas lebih tinggi dari jumlah enzim endogen maka akan  menyebabkan  stres  oksidatif  sehingga dapat  menimbulkan  berbagai  penyakit,  salah satunya kanker [6].
Kanker  muncul  akibat  kadar  radikal bebas  berlebihan  yang  berinteraksi  dengan DNA  sehingga  menyebabkan  terjadinya mutasi pada basa-basa DNA yang mendorong terbentuknya  zat  karsinogenik  selaku  aspek utama  pemicu  kanker.  Berdasarkan  laporan data  dari Global  Cancer  Observatory (GLOBOCAN) tahun 2020 terjadi
peningkatan  kasus  pengidap  kanker  didunia sebanyak  19,3  juta  jiwa  dan  jumlah  kasus yang  meninggal  sebanyak  9,9  juta  jiwa  [7]. Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan  pengobatan dengan  mencari  langkah  preventif  dalam menangkal  radikal  bebas  dan  menghambat perkembangan kanker.
Antioksidan merupakan salah satu solusi yang  dapat  menghambat  stres  oksidatif  dan kerusakan.  Banyak  orang  mengonsumsi antioksidan  dalam  bentuk  bahan  tambahan makanan  komersial  yang  diproduksi  secara sintetis  dan  mengandung  bahan  pengawet dalam  jumlah  tinggi  [8].  Tetapi,  antioksidan sintetik  yaitu  butyl  hidroksi  touluen,  butil hidroksi anisol, dan tert-butil hidroksi quinon telah  dilaporkan  menghasilkan  racun  atau bertindak  sebagai  agen  karsinogenik  [9]. Sebaliknya,  tumbuhan  rempah-rempah  kaya akan senyawa antioksidan dapat meminimalisir efek tidak baik yang ditimbulkan terhadap tubuh. Oleh karena itu, kebutuhan akan antioksidan alami meningkat, sehingga  identifikasi  konstituen  antioksidan

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106
dalam  bahan  tumbuhan  dapat  menjadi alternatif  sumber  antioksidan  alami  [6]. Aktivitas  sitotoksik  adalah  salah  satu  cara untuk  dapat  merusak  sel  kanker.  Banyak senyawa  metabolit  sekunder  yang  terdapat dibahan  alam  mengandung  zat  aktif  yang bersifat  toksik  terhadap  sel-sel  tertentu,  atau dapat  dikatakan  memiliki  aktivitas  biologis sebagai antikanker [10].
Tumbuhan  kelompok family  Lauraceae telah terbukti menunjukkan aktivitas antioksidan  dan  sitotoksik  yang  luar  biasa  di laboratorium. Setiap bagian tumbuhan seperti biji, duan, buah, akar, dan kulit batang dapat dimanfaatkan sebagai sumber antioksidan dan sitotoksik  terhadap  sel  kanker  karena  sifat biologisnya.  Secara  tradisional,  tanaman  dan produk  herbal  sering  dimanfaatkan  sebagai langkah pencegahan dan pengobatan berbagai penyakit [11],[12]. Senyawa metabolit sekunder  yang  terkandung  pada  tumbuhan seperti  alkaloid,  steroid,  fenolik,  flavonoid dan terpenoid memiliki berbagai bioaktivitas, sehingga tumbuhan sering digunakan sebagai obat  tradisional  dalam  pertahanan  melawan radikal  bebas  dan  sebagai  upaya  pengobatan kanker [13] .
Ulin  atau iron  wood ( Eusideroxylon
zwageri Teijsm.  &  Binn)  termasuk  kedalam family  Lauraceae merupakan  tumbuhan tingkat tinggi yang tumbuh di dataran rendah. Semua  bagian  tumbuhan  dimanfaatkan  oleh
masyarakat, terutama bagian daun digunakan sebagai  obat  tradisional  diantaranya  untuk sakit  perut,  antipiretik,  demam,  masalah ginekologi,  penguat badan,  perawatan setelah melahirkan, kontra racun, dan alergi [14],[15]. Tumbuhan  ini  memiliki  bioaktivitas  seperti antidiabetes  [16],  antibakteri  [15],  [17]–[19]. Namun,  beberapa  penelitian  yang  telah dilakukan  pada  bagian  daun E.zwageri tidak ada  bukti  farmakologis  dan  kimia  secara ilmiah dari bagian daun E.zwageri atas dugaan toksisitas, aktivitas antioksidan dan kandungan  total  fenolat  terhadap  ekstrak dengan  tingkat  kepolaran  yang  berbeda menggunakan maserasi bertingkat. Sehingga, tujuan penelitian ini adalah untuk menyiapkan ekstrak  daun E.zwageri dengan  berbagai polaritas  menggunakan  pelarut  heksana bersifat  non  polar,  etil  asetat  bersifat  semi polar,  metanol  bersifat  polar  sehingga senyawa  akan  terekstrak  sesuai  dengan kepolaran dan untuk mengevaluasi kandungan metabolit  sekunder,  aktivitas  antioksidan, toksisitas  serta  total  fenolat  menggunakan metode  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil), metode (BSLT) Brine Shrimp Lethality Test , dan metode folin-ciocalteu.

## II. METODE PENELITIAN

## 2.1  Bahan dan Alat
Bahan  kimia  yang  digunakan  etil  asetat, heksana,  metanol,  1,1–difenil-2-pikrilhidrazil

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106
(DPPH),  pereaksi  Mayer  dan  Dragendroff, pereaksi  Liebermann  Burchad,  Serbuk  Mg dan HCl, Besi (III) Klorida, NaOH 1%, asam askorbat, telur Artemia salina, DMSO, air laut, reagen  Folin-Ciocalteau,  sodium  karbonat, asam galat, aqudes.
Alat  yang  dibutuhkan  yaitu  seperangkat peralatan  distilasi,  timbangan  analitik,  oven, peralatan gelas kimia, botol maserasi dan vial, spektrofotometer UV-Vis, plat tetes, aluminium voil, kaca arloji, rotary evaporator, pipet mikro.

## 2.2   Preparasi dan Ekstraksi Sampel
Tumbuhan  E.zwageri  diambil  di  Desa Selat, Kabupaten Batanghari, Provinsi Jambi. E.zwageri  dari bagian daun, kulit batang, dan buah digunakan untuk  identifikasi  taksonomi di  Herbarium,  Universitas  Andalas,  Padang. Tumbuhan  ini  diambil  serta  dibersihkan menggunakan  air.  Sampel  daun  E.zwageri dipotong  dan  digunakan  untuk  tahapan selanjutnya. Proses ekstraksi yang digunakan adalah  maserasi  bertingkat.  Sebanyak  500  g sampel dari daun E.zwageri diekstraksi secara bertahap  menggunakan  3  jenis  pelarut (heksana,  etil  asetat  dan  metanol).  Maserasi pertama  dilakukan  dengan  heksana.  Proses maserasi  dilakukan  selama  3  hari,  setiap harinya  sampel  tersebut  dikocok,  kemudian disaring.  Filtrat  di rotary evaporator  sampai dihasilkan  ekstrak  heksana.  Selanjutnya
dilakukan remaserasi sampai semua komponen  non  polar  terekstrak.  Kemudian dengan  prosedur  yang  sama  dilakukan remaserasi  pada  residu  menggunakan  pelarut etil  asetat  dan  metanol.  Ekstrak  yang  telah didapatkan  (ekstrak  heksana,  etil  asetat,  dan metanol)  yang  diperoleh  ditimbang  dan digunakan untuk pengerjaan selanjutnya.

## 2.3  Uji Fitokimia
Sebanyak  2  gram  ekstrak  metanol, heksana,  sampel  segar,  dan  etil  asetat dilarutkan dengan 50 mL didalam  botol vial, kemudian disaring, selanjutnya filtrat sebanyak  5  mL  dimasukkan  kedalam  tabung reaksi yang telah berisi 5 mL (1:1) kloroform dan  akuades,  dikocok  dan  terbentuk  dua lapisan.  Lapisan  bawah  (lapisan  kloroform) untuk  uji  steroid  dan  terpenoid.  Lapisan  atas merupakan  (lapisan  air)  untuk  uji  saponin, flavonoid dan fenolik.

## 2.3.1   Uji Flavonoid
Sebanyak 1 mL lapisan air ditambahkan beberapa  butir  serbuk  magnesium  dan  asam klorida  pekat.  Positif  flavonoid  jika  wuncul warna merah.

## 2.3.2   Uji Fenolik
Sebanyak  1  mL  lapisan  air  ditambahkan larutan FeCl 3 . Positif fenolik jika menghasilkan warna ungu tua atau biru.

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106

## 2.3.3   Uji Saponin
Lapisan  air  1  mL  dimasukkan  kedalam tabung  reaksi  dan  dikocok,  selanjutnya  dua tetes asam klorida pekat ditambahkan kedalam tabung  reaksi,  positif  saponin  apabila  tidak hilang busa selama 5 menit.

## 2.3.4   Uji Terpenoid dan Steroid
Plat  tetes  diteteskan  lapisan  kloroform sebanyak  3  tetes  dan  ditambahkan  pereaksi Liebermann  Burchad.  Positif  tepenoid  jika menghasilkan  warna  merah  ungu  atau  merah dan  positif  steroid  jika  memberikan  warna hijau biru atau hijau.

## 2.3.5   Uji Alkaloid
Daun  E.zwageri  dalam  lumpang  yang telah  berisi  10  mL  kloroform  digerus. Selanjutnya  ditambahkan  10  mL  campuran kloroform  ammonia.  Kemudian  disaring, filtrat  yang  diperoleh  ditambahkan  dua  tetes H 2 SO 4 2  N  serta  dikocok.  Terbentuk  dua lapisan. Lapisan  asam  (atas) dipipet  kedalam dua  tabung  reaksi.  Tabung  rekasi  pertama ditambahkan  2  tetes  pereaksi  Dragendroff, positif alkaloid jika terbentuk endapan orange dan  pereaksi  Mayer  dimasukkan  ke  tabung reaksi  kedua,  positif  alkaloid  terbentuk endapan putih.

## 2.3.6   Uji Kumarin
Ekstrak metanol dielusi dengan etil asetat 100%  pada  plat  KLT.  Kemudian  dilakukan
pengamatan noda dengan lampu UV panjang gelombang  365  nm  (flourisensi  biru). Selanjutnya  NaOH  1%  disemprotkan  pada klat  KLT  dan  amati  noda  pada  lampu  UV. Positif kumarin jika menununjukkan flourisensi  warna  biru  yang  semakin  terang [20].

## 2.4. Uji Aktivitas Antioksidan menggunakan metode DPPH
Sebanyak 2 mL dari kontrol positif (asam askorbat  konsentrasi  2-10  mg/L)  dan  setiap larutan uji ekstrak heksana (31,25; 62,5; 125; 250; dan 500 mg/L), ekstrak etil asetat (12,5; 25; 50; 100; dan 200 mg/L), ekstrak metanol (1,5625;  3,125;  6,25;  12,5  dan  25  mg/L) dicampurkan  dengan  3  mL  DPPH  0,1  mM. Selanjutnya  inkubasi  selama  30  menit  di tempat  gelap  dan  diukur  absorbannya  pada panjang gelombang 517 nm. Sebanyak 3 mL larutan  DPPH  yang  ditambah  dengan  2  mL metanol digunakan sebagai kontrol. Pengujian dilakukan duplo.
Nilai  %  inhibisi  dihitung  berdasarkan absorban yang didapatkan dengan rumus: "% inhibisi="  "Ak - A" /"Ak"  " x 100 %"
Keterangan:     A  = absorban larutan uji Ak = absorban kontrol Berdasarkan  nilai  %  inhibisi  yang  diperoleh, dihitung  IC50  dari  persamaan  regresi  yang didapatkan dari kurva dengan sumbu x adalah

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106
konsentrasi larutan uji dan sumbu y adalah % inhibisi [21].

## 2.5     Uji Toksisitas menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test
Uji  toksisitas  ekstrak  daun  E.zwageri pada  variasi  kepolaran  dengan  menggunakan menggunakan Metode BSLT.

## 2.5.1  Pembenihan Udang
Wadah pembiakan Larva udang Artemia salina terbagi atas 2 bagian, bagian gelap dan terang.  Air  laut  dimasukkan  pada  wadah pembiakan tersebut dan sisi gelap ditambahkan  telur  udang.  Larva  udang menetas  selama  48  jam  dalam  wadah pembiakan.

## 2.5.2  Penentuan Uji Toksisitas
Sebanyak  5  mL  larutan  dari  masing- masing ekstrak, heksana (10; 20; 40; 80; 160 dan 320 mg/L), etil asetat (400; 500; 600; 700 dan 800 mg/L), metanol (400; 500; 600; 700 dan  800  mg/L)  dimasukan  kedalam  vial  dan pelarutnya diuapkan. Kemudian, ditambahkan 2 mL air laut dan 50 µL DMSO. Kontrol yaitu air laut dan DMSO dilakukan hal yang sama. larutan  uji  dan  kontrol  ditambahkan  10  ekor larva  udang.  Kemudian  ditambah  air  laut hingga volume 5 mL. Setelah 24 jam jumlah larva yang mati dihitung, pengujian dilakukan triplo.  Nilai  LC50  diperoleh  dari  persamaan
regresi yang diplotkan antara nilai probit dan log konsentrasi [22].

## 2.6 Uji Total Fenolat menggunakan Metode Follin-Ciocalteu
Sebanyak  0,5  mL  asam  galat  (10-100) mg/L  dan  masing-masing  ekstrak  daun E.zwageri    500  mg/L  ditambahkan  ke  dalam labu ukur 10 mL. Kemudian ditambahkan 0,5 mL reagen Follin-Ciocalteau dan diinkubasi 5 menit.  Selanjutnya,  1  mL  natrium  karbonat 20%  ditambahkan  dan  diencerkan  sampai tanda  batas  dengan  akuades.  Kemudian diinkubasi  larutan  uji  selama  2  jam. Selanjutnya  diukur  absorbansi  pada = 765 nm. Kurva standar asam galat di dapatkan dari plot sumbu x adalah konsentrasi dan y adalah absorban.  Selanjutnya  nilai  Galic  Acid Equivalent  (GAE)  masing-masing  ekstrak didapatkan  berdasarakan  persaaman  regresi hasil kurva larutan asam galat [23].

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1     Hasil Herbarium Sampel
Sampel berhasil teridentifikasi berdasarkan surat dari Laboratorium Herbaruim,  Universitas  Andalas,  nomor 311/K-ID/ANDA/IX/2020  ditetapkan  sampel tersebut termasuk kelompok family Lauraceae dengan  species Eusideroxylon zwageri Teijsm. & Binn.

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106

## 3.2    Ekstraksi Daun E.zwageri
Metode  ekstraksi  yang  dilakukan  adalah maserasi, proses ini lebih diminati  dan lebih aman  karena  tidak  akan  terjadi  dekomposisi senyawa  jika  senyawa  tidak  tahan  terhadap panas  [24]  .  Maserasi  yang  digunakan bertingkat dari pelarut yang bersifat non polar
sampai polar dimulai dari heksana, etil asetat, dan metanol, sehingga akan terekstrak sesuai kepolarannya.
Heksana mengekstrak golongan nonpolar, etil asetat akan mengekstrak  golongan  semi  polar  kemudian metanol  mengekstrak  senyawa  dari  nonpolar sampai polar.

## Tabel 1. Jumlah ekstrak daun E.zwageri
Sampel (gram) Ekstrak Jumlah Ekstrak (gram) Kadar Ekstrak (%) 500 Heksana 14,00 3,11 Etil Asetat 21,65 4,81 Metanol 109,10 24,24
Berdasarkan  tabel  diatas  diperoleh  3,11% ekstrak heksana, 4,81% ekstrak etil asetat dan 24,24%  gram  ekstrak  metanol.  Ekstrak metanol menghasilkan persentase kadar yang paling  tinggi,  kemudian  diikuti  ekstrak  etil asetat dan ekstrak heksana. Berdasarkan hasil tersebut daun E.zwageri memiliki kandungan senyawa  yang  bersifat  polar  lebih  banyak dibandingkan dengan golongan senyawa non- polar dan semi polar, hasil ini mengindikasikan  banyak  golongan  senyawa flavonoid dan fenolat.

## 3.3.     Hasil Uji fitokimia
Uji  fitokimia  termasuk  uji  kualitatif  yang bertujuan menentukan jenis senyawa apa saja
yang  ada  di  dalam  suatu  tumbuhan.  Uji tersebut dilakukan pada sampel segar, ekstrak heksana,  etil  asetat  dan  metanol.  Hasil  uji fitokimia tertera pada Tabel 2.
Daun E.zwageri berdasarkan  tabel  2 mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid, terpenoid,fenolik, dan steroid sehingga tumbuhan  ini  mempunyai  aktivitas  biologis berupa aktivitas antioksidan karena mengandung senyawa alkloid, fenolik, flavonoid serta toksisitas karena mengandung senyawa  golongan  terpenoid,  alkaloid,  dan flavonoid.

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106
Tabel 2. Hasil uji fitokimia
Metabolit Sekunder Pereaksi Pengamatan Sampel Segar Ekstrak Heksana Etil asetat Metanol Kumarin NaOH 1% Fluoresensi + - - + Fenolik FeCl 3 Hijau-biru + - + + Steroid Liebermann - Burchard Hijau + + + + Saponin HCl pekat Busa - - - - Terpenoid Liebermann - Burchard Merah + + + + Flavonoid HCl + bubuk Mg Orange- merah - - - - Alkaloid Dragendrof Endapan orange + + + -
Keterangan: (-) tidak mengandung
(+) mengandung

## 3.4   Aktivitas Antioksidan Daun E.Zwageri
Penentuan aktivitas antioksidan terhadap ekstrak  heksana,  etil  asetat  dan  metanol dengan  menggunakan  metode  DPPH  secara spektrofotometri. Nilai absorban yang didapatkan  dikonversi  menjadi  nilai  IC 50 untuk mengetahui aktivitas antioksidan. Nilai IC 50 didefinisikan sebagai besarnya
konsentrasi  senyawa  uji  untuk  menangkal radikal  bebas  sebanyak  50%.  Semakin  kecil nilai IC 50 maka aktivitas penangkalan radikal bebas  semakin  kuat  dan  menunjukkan semakin kuat aktivitas antioksidannya [25]
Tabel  3. Nilai  IC 50 untuk  setiap  ekstrak E.zwageri dan kontrol positif
Ekstrak IC 50 (mg/L) Metanol 10,96 Etil Asetat 115,41 Heksana 368,56 Kontrol positif (asam askorbat) 6,56
Berdasarkan  Tabel  3,  ekstrak  metanol memiliki  nilai  IC 50 yang  sangat  kecil dibanding  dengan  ekstrak  etil  asetat  dan heksana  tetapi  jauh  lebih  besar  dari  kontrol positif  asam  askorbat.  Berikut  klasifikasi tingkat aktivitas antioksidan berdasarkan nilai

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106
(IC 50 ) jika, nilai (IC 50 ) 200-500 mg/L ekstrak tersebut  dianggap  sangat  lemah  aktivitas antioksidannya, (IC 50 ) 151-200 mg/L mempunyai  aktivitas  antioksidan  lemah, (IC 50 )  101-150  mg/L  mempunyai  aktivitas antioksidan  sedang,  (IC 50 )  50-100  mg/L mempunyai  aktivitas  kuat,    dan  (IC 50 )  <  50 mg/L  ekstrak  tersebut  mempunyai  aktivitas antioksidan  sangat  kuat  [26].  Hasil  diatas menunjukkan  ekstrak  metanol  memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat dengan nilai IC 50 10,96  mg/L.  Diikuti  ekstrak  etil  asetat memiliki aktivitas antioksidan sedang dengan nilai  IC 50 115,41  mg/L,  dan  ekstrak  heksana memiliki  aktivitas  antioksidan  sangat  lemah dengan  nilai  IC 50 368,56  mg/L.  Jika  dilihat dari penelitian sebelumnya mengenai aktivitas antioksidan kulit batang E.zwageri menggunakan metode DPPH, aktivitas antioksidan bagian daun lebih kuat dibanding dengan bagian kulit batang dengan nilai IC 50 10,96 mg/L dan 44,90 mg/L [16].
Hasil  penentuan  aktivitas  antioksidan  dari setiap  ekstrak  dapat  dihubungkan  dengan kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  dari setiap ekstrak. Ekstrak metanol daun
E.zwageri memiliki  aktivitas  sangat  kuat dengan kandungan senyawa fenolik, alkaloid, flavonoid,  steroid,  terpenoid,  dan  alkaloid. Aktivitas  antioksidan  kuat  pada  ekstrak metanol karena mengandung senyawa golongan  fenolik  dan  polifenol  (flavonoid).
Golongan  senyawa  tersebut  dapat  banyak mendonorkan atom hidrogennya untuk menetralkan  radikal  DPPH.  Sementara, ekstrak  etil  asetat  memiliki  aktivitas  sedang, hal  itu  disebabkan  ekstrak  etil  asetat  hanya mengandung senyawa golongan fenolik tetapi tidak  terdapat  golongan  senyawa  flavonoid sehingga  kurang  kemampuannya  untuk menangkal radikal bebas dibandingkan ekstrak  metanol.  Ekstrak  heksana  aktivitas antioksidannya  sangat  lemah,  karena  ekstrak heksana berdasarkan uji fitokimia mengandung  senyawa  terpenoid  dan  steroid yang  mana  senyawa  tersebut  merupakan golongan  senyawa  yang  minim  gugus  fungsi dan  tidak  memiliki  cincin  aromatis  pada kerangka  struktur  senyawanya.  Senyawa antioksidan  paling  popular  pada  tumbuhan adalah  golongan  polifenol,  polifenol  terbagi atas  dua  kelompok  yaitu  asam  fenolat  (asam hidroksibenzoat  dan  hidroksinamat)  dan flavonoid,  jika  suatu  tumbuhan  mengandung senyawa  tersebut  maka  tumbuhan  tersebut berpotensi  memiliki  aktivitas  antioksidan yang kuat [27].

## 3.5   Toksisitas Ekstrak Daun E.zwageri
Senyawa sitotoksik yang terdapat dibahan alam  mengandung  zat  aktif  yang  bersifat toksik  terhadap  sel-sel  tertentu,  atau  dapat dikatakan memiliki aktivitas biologis sebagai antikanker  [28].  Metode  (BSLT)  sering

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106
digunakan dalam penelitian awal atau sebagai uji  praskrining  dalam  mencari  sumber senyawa yang berpotensi dalam penghambatan  pertumbuhan  sel  kanker. Kelebihan  dari  metode  ini  antara  lain  tidak memerlukan teknis yang aseptis, biaya bahan murah, waktu penerapan yang cepat,
memerlukan  sampel  yang  relatif  sedikit,  dan praktis.  Berdasarkan  penelitian  sebelumnya menunjukkan adanya korelasi antara hasil uji BSLT  dengan  daya  sitotoksik  senyawa antikanker  terhadap  metode  MTT  pada  sel MCF-7, H460, dan MOLT-4 [10].
Tabel 4. Toksisitas daun E.zwageri dengan metode Brine Shrimp Lethality Test
Ekstrak Konsentrasi (mg/L) Kematian Larva ( ekor) Angka Kematian (%) Log Konsentrasi AngkaP robit LC 50 (mg/L) I II III
Heksana 10 0 1 1 7 1 3,52 82,28 20 2 1 1
13 1,30 3,87 40 3 2 4 30 1,60 4,48 80 4 5 4 47 1,90 4,92 160 9 7 6 73 2,20 5,61 320 8 8 9 83 2,51 5,95 Etil Asetat 400 2 1 1 13 2,60 3,87 812,46
500 2 2 3 23 2,60 4,23 600 4 4 3 37 2,70 4,67 700 5 3 4 40 2,84 4,75 800 5 5 4 47 2,90 4,92 Metanol 400 3 2 2 23 2,48
4,26 696,63 500 3 4 3 30 2,60 4,48 600 5 5 2 40 2,70 4,75 700 6 3 5 47 2,84 4,92 800 7 6 4 57 2,90 5,18 Kontrol 0 0 0 0 0 0 0
Ketarangan : Jumlah Larva udang tiap vial  10 ekor
Berdasarkan  tabel  diatas,  semakin  tinggi konsentrasi  larutan  uji  yang  digunakan  pada setiap  ekstrak  akan  meningkatkan  kematian larva  udang.  Parameter  hasil  uji  toksisitas
dengan  metode  (BSLT)  adalah  LC 50 yang merupakan  konsentrasi  yang  dibutuhkan untuk  membunuh  50%  A rtemia  salina ,  jika nilai LC 50 semakin kecil maka ekstrak tersebut

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106
dapat  dikatakan  semakin  toksik  terhadap hewan  uji  sebab  dengan  konsentrasi  rendah telah  bias  membunuh  50%  A rtemia  salina [29].  Berikut  klasifikasi  tingkat  toksisitas berdasarkan  nilai  (LC 50 )  jika,  ekstrak  (LC 50 ) 0-100 mg/L toksik sangat kuat, ekstrak (LC 50 ) 100- 500 mg/L bersifat toksik sedang, (LC 50 ) 500-1000  mg/L  bersifat  toksik  lemah,  dan ekstrak  dengan  (LC 50 )  >  1000  mg/L  tidak bersifat toksik [30].
Berdasarkan Nilai LC 50 yang didapatkan, ekstrak  heksana  bersifat  sangat  toksik terhadap  udang artemia  salina dibandingkan dengan  ekstrak  metanol  dan  etil  asetat memiliki  tingkat  toksik  yang  sangat  lemah dengan  nilai  LC 50 berturut-turut  82,28; 696,63;  dan  812,46  mg/L.  Hasil  tersebut menunjukkan  ekstrak  heksana  memiliki tingkat tongkik yang lebih baik dibandingkan ekstrak  lain  karena  diindikasikan  ekstrak heksana mengandung potensi senyawa metabolit sekuder yang bersifat toksik.
Tingginya  tingkat  toksiks  suatu  ekstrak disebabkan  oleh  adanya  golongan  senyawa alkaloid,  terpenoid,  tannin,  dan  steroid.  Hal tersebut  berkolerasi  dengan  hasil  yang  telah didapatkan.  Ekstrak  heksana  dan  metanol memiliki kandungan senyawa steroid, alkaloid, dan terpenoid sedangkan ekstrak etil asetat  hanya  mengandung  senyawa  steroid dan  terpenoid.  Sehingga  ekstrak  etil  asetat memiliki tingkat toksisitas paling rendah jika
dibandingkan  dengan  ekstrak  heksana  dan metanol. Selanjutnya, ekstrak heksana menghasilkan aktivitas toksisitas yang sangat kuat  dari  pada  ekstrak  metanol  meskipun kedua  ekstrak  sama-sama  memiliki  senyawa steroid, alkaloid, dan terpenoid. Hasil tersebut berbeda  dapat  diiindikasikan  bahwa  ekstrak heksana  lebih  banyak  mengandung  senyawa metabolit  sekunder  yang  aktif  baik  secara kuantitatif  dan  kualitatif  dibanding  pada ekstrak metanol [31].
Pengujian kontrol yang terdiri dari air laut dan  DMSO  tidak  mengakibatkan  kematian terhadap  larva  udang artemia  salina .  Hasil tersebut  menandakan  bahwa  kematian  larva udang  hanya  dipengaruhi  oleh  ekstrak  yang ditambahkan.  Hal  tesebut  sesuai  dengan penelitian  yang  telah  dilakukan  sebelumnya menggunakan beberapa pelarut yaitu DMSO, Tween  20,  etanol,  dan  metanol.  Hasilnya menunjukkan  DMSO  memiliki  sifat  toksik paling  rendah,  sehingga  lebih  aman  untuk digunakan  dalam  pengujian.  Selanjutnya sampel  yang  tidak  larut  sempurna  dalam DMSO  harus  ditambahkan  air  laut,  hal  ini disebabkan karena adanya sampel yang tidak bisa larut dengan DMSO. Pada pelarutan ini, DMSO  memiliki  sifat  hidrofobik  dan hidrofilik  dan  air  laut  bersifat  polar  bereaksi dengan cara menurunkan tegangan permukaan [32].

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106

## 3.6    Hasil  Total  Fenolat  Ekstrak  Daun
E.zwageri dan Hubungan dengan Antioksidan .
Hasil  kandungan  total  fenolat  ekstrak  daun E.zwageri didapatkan  dari  kurva  larutan standar asam galat pada Gambar 1.
Gambar 1. Kurva standar asam galat
Berdasarkan  Gambar  1  didapatkan  nilai  y  = 0,004x - 0,0184 dengan koefisien determinasi R = 0,985. Hasil ini menjelaskan bahwa 98,5 %  absorban  dipengaruhi  oleh  konsentrasi asam galat. Selanjutnya, nilai kandungan total
fenolat  setiap  ekstrak  daun E.zwageri ditentukan  menggunakan  persamaan  regresi tersebut. Kadar totol fenolat tertera pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil uji kandungan total fenolat
Ekstrak Konsentrasi (mg/L) Absorban Rata-rata mg GAE/ Gram ekstrak 1. Heksana 500 0,0065 19,85 2. Etil asetat 500 0,0755 96,70 3. Metanol 500 0,3075 162,95
y = 0.004x - 0.0184 R² = 0.985 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0 20 40 60 80 100 120 Ab so rb an Konsentrasi (mg/L)

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106
Berdasarkan  Tabel  5,  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  metanol  memiliki  kandungan total  fenolat  yang  tinggi  diikuti  oleh  ekstrak etil  asetat  dan  ekstrak  heksana.  Ekstrak metanol  dapat  menarik  senyawa  yang sebagian  besar  merupakan  golongan  fenolik pada  daun E.zwageri ,  sehingga  kandungan
total fenolat tertinggi terkandung pada ekstrak metanol  dan  berkorelasi  dengan  kelarutan komponen daun dalam pelarut yang sama juga mengikuti  urutan  yang  sama.  Hubungan kandungan  total fenolat  dan  aktivitas antioksidan dinyatakan dalam nilai IC 50 dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Hubungan antara nilai IC 50 terhadap kandungan total fenolat
Kandungan total fenolat ekstrak tumbuhan ini menunjukkan  sebuah  hubungan  konsentrasi- respons  pada  aktivitas  antioksidan  untuk DPPH dimana peningkatan kandungan fenolik  ekstrak,  aktivitas  antioksidan  juga meningkat. Dalam hal ini, aktivitas antioksidan  ekstrak  dinyatakan  dengan  IC 50 . Korelasi ini ditunjukkan pada Gambar 2 yang menyatakan korelasi total fenolat dan aktivitas
antioksidan (IC 50 ) ekstrak dengan persamaan regresi  y  =  -  2,52x  +  399,75  (R²  =  0,9633). Penelitian  sebelumnya  melaporkan  bahwa korelasi  antar  kandungan  total  fenolat  dari ekstrak  dengan  aktivitas  antioksidan  DPPH dimana peningkatan konsentrasi menyebabkan meningkat juga aktivitas penangkalan  radikal  bebas  [33].  Uji  dengan metode  DPPH  mengungkapkan  adanya
y = -2.52x + 399.75 R² = 0.9633 -50 0 50 100 150 200 250 300 350 400 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 Niai IC 50 Kandungan Fenolat

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106
korelasi positif antara kandungan fenolat dan aktivitas  penangkal  radikal  bebas  di  mana dinyatakan  bahwa  (IC 50 ) semakin  kecil dengan meningkatkan kandungan total fenolat.  Seperti  diketahui  bahwa  semakin tinggi  aktivitas  antioksidan  maka  akan semakin rendah nilai (IC 50 ) [34].

## KESIMPULAN
Sampel  segar  daun E.zwageri memiliki kandungan  senyawa  metabolit  sekunder berupa  fenolik,  flavonoid,  steroid,  terpenoid dan  alkaloid.  Pengujian  antioksidan  dengan metode DPPH menghasilkan, ekstrak heksana (IC 50 =  368,56  mg/L)  sangat  lemah,  ekstrak etil  asetat  sedang  (IC 50 =115,419  mg/L)  dan ekstrak  metanol  bersifat  antioksidan  sangat kuat  (IC 50 =  10,96  mg/L).  Hasil  tesebut berkorelasi  positif  terhadap  uji  total  fenolat ketiga  ekstrak  yang  mana  ekstrak  metanol memiliki kandungan total fenolat yang tinggi diikuti ekstrak etil asetat dan metanol dengan nilai  mg  GAE/  Gram  ekstrak  berturut-turut 162,95;  96,70;  19,85.  Selanjutnya  dalam  uji toksisitas  dengan  menggunakan  metode (BSLT),  ekstrak  heksana  memiliki  toksisitas yang sangat  kuat,  sementara  ekstrak metanol dan  ekstrak  etil  asetat  bersifat  lemah  dengan nilai LC 50 berturut-turut 82,28; 696,63; 812,46 mg/L, yang mana dari ketiga ekstrak tersebut ekstrak  heksana  lebih  toksik  dari  ekstrak  etil asetat dan metanol.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] S.  Venkatesan et  al. ,  “In-situ  and  ex-situ Phycoremediation Competence of Innate Scenedesmus sp . on Polluted Thirumanimuthar River Water,” Research square , 9(35), 839–852,
2020.
[2] A. Phaniendra, D. B. Jestadi, and L. Periyasamy, “Free  Radicals:  Properties,  Sources,  Targets, and  Their  Implication  in  Various  Diseases,”
Indian J. Clin. Biochem. , 30(1), 11–26, 2015.
[3] A. Mandic, S. Djilas, J. Canadanovic-Brunet, G. Cetkovic, and J. Vulic, “Antioxidant activity of white  grape  seed  extracts  on  DPPH  radicals,” Acta Period. Technol. ,  40(1), 53–61, 2009.
[4] M.  Narayanan et  al. ,  “Production  and characterization of polyhydroxyalkanoates synthesized  by  E.  Coli  Isolated  from  sludge soil,” Mater.  Today  Proc. ,33(2020),  3646– 3653, 2020.
[5] D.  MF,  “Cigarette  Smoke  Causes  Changes  in Liver  and  Spleen  of  Mice  Newborn  Exposed During Pregnancy,” J. Cytol. Histol. , 4(1), 3–8, 2013.
[6] J. Akter, M. A. Hossain, K. Takara, M. Z. Islam, and D. X. Hou, “Antioxidant activity of different species and varieties of turmeric (Curcuma spp): Isolation  of  active  compounds,” Comp. Biochem. Physiol. Part - C Toxicol. Pharmacol. , 215(9), 9–17, 2019.
[7] H. Sung et al. , “Global Cancer Statistics 2020:
GLOBOCAN  Estimates  of  Incidence  and Mortality  Worldwide  for  36  Cancers  in  185

## Adlis santoni, dkk., Akta Kimia Indonesia 7(2), 2022, 91-106
Countries,” CA.  Cancer  J.  Clin. ,  71(3),  209– 249, 2021.
[8] D.  Shasha,  “Reversed  Phase  HPLC-UV Quantitation of BHA, BHT and TBHQ in Food Items Sold in Bindura Supermarkets,
Zimbabwe,” Int. Res. J. Pure Appl. Chem. , 4(5), 578–584, 2014.
[9] H.  GRICE,  “Safety  evaluation  of  butylated hydroxyltoluene  (BHT)  in  the  liver,  lung  and gastrointestinal tract,” Food Chem Toxicol , 24, 1127–1130, 1986.
[10] H.  Niksic et  al. ,  “Cytotoxicity  screening  of Thymus vulgaris L. essential oil in brine shrimp nauplii and cancer cell lines,” Sci.  Rep. ,  11(1),
1–9, 2021.
[11] D.  Thi  Phuong  Lien,  “Effects  of  Extraction Process  on  Phenolic  Content  and  Antioxidant Activity of Soybean,” J.  Food  Nutr.  Sci. ,  3(1), 33-38, 2015.
[12] N. R. Farnsworth, O. Akerele, A. S. Bingel, D. D.  Soejarto,  and  Z.  Guo,  “Medicinal  plants  in therapy,” Bull.  World  Health  Organ. ,  63(6), 965–981, 1985.
[13] L.  R.  A.  Al-Mqbali  and  M.  A.  Hossain, “Cytotoxic  and  antimicrobial  potential  of different  varieties  of  ripe  banana  used traditionally  to  treat  ulcers,” Toxicol.  Reports , 6(9), 1086–1090, 2019,.
[14] K.  Herawan  Timotius  and  I.  Rahayu, “Qualitative Analysis of Eusideroxylon Zwageri Teijsm and Binn Seed By Gc-Ms and Lc-Ms,” Int. J. Adv. Res. , 8(5), 878–884, 2020.
[15] Y.  Mariani,  F.  Yusro,  and  E.  Wardenaar, “Aktivitas  Ekstrak  Metanol  Daun  Ulin (Eusideroxylon  Zwageri  Teijsm  &  Binn)
Terhadap Empat Jenis Bakteri Patogen,” J. Biol.
Trop. , 20(1), 94-101, 2020.
[16] I.  W.  Kusuma,  Rahmini,  R.  Ramadhan,  N. Rahmawati,  R.  A.  Suwasono,  and  N.  M.  Sari, “Phytochemicals  and  Antidiabetic  Activity  of Eusideroxylon  zwageri  Stem  Bark  Collected from  East  Kalimantan,  Indonesia,” IOP  Conf. Ser. Earth Environ. Sci. , 144(1), 1–8, 2018.
[17] A.  Ajizah,  T.  Thihana,  and  M.  Mirhanuddin, “Potensi  Ekstrak  Kayu  Ulin  (Euksideroxylon zwageri  )  dalam  Menghambat  Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus Secara in Vitro,”
Bioscientiae , 4(1), 37–42, 2007.
[18] H.  Wila,  F.  Yusro,  and  Y.  Mariani,  “Skrining Fitokimia  Dan  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Kulit Batang (Eusideroxylon zwageri) terhadap Escherichia  Coli  dan  Salmonella  Typhi,”  8(1),
38–49, 2018.
[19] H. Darussalam, “Uji Sensitivitas Ekstrak Kayu Ulin (Eusideroxylon zwageri tet b)

## TERHADAP  PERTUMBUHAN  BAKTERI
Staphylococcus Aureus  SECARA IN VITRO,”
Mahakam  Med.  Lab.  Technol.  J. ,  1(2),  21–30, 2017.
[20] A. Itam, A. Wulandari, M. M. Rahman, and N. Ferdinal, “Preliminary phytochemical
screening,  total  phenolic  content,  antioxidant and cytotoxic activities of Alstonia scholaris R.
Br leaves and stem bark extracts,” J. Pharm. Sci. Res. , 10(3), 518–522, 2018.
[21] A.  M.  Abdulsattar  and  M.  A.  Hossain,
“Antibacterial  and  antioxidant  potential  of Tetraena simplex extracts of various polarities,”
Toxicol. Reports , 7(7), 925–929, 2020.
[22] A.  Bujor et  al. , “Metabolite profiling, arginase inhibition  and  vasorelaxant  activity  of  Cornus mas,  Sorbus  aucuparia  and  Viburnum  opulus fruit extracts,” Food Chem. Toxicol. , 133(5), 1- 10, 2019.
[23] M. Z. Alam, M. S. R. Alhebsi, S. Ghnimi, and A.  Kamal-Eldin,  “Inability  of  total  antioxidant activity assays to accurately assess the phenolic compounds  of  date  palm  fruit  (Phoenix dactylifera L.),” NFS J. , 22,(12), 32–40, 2021.
[24] A.  K.  Jha  and  N.  Sit,  “Extraction  of  bioactive compounds from plant materials using combination  of  various  novel  methods:  A review,” Trends  Food  Sci.  Technol. ,  119(12), 579–591, 2022.
[25] F.  J.  Sami  and  S.  Rahimah,  “Uji  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Metanol  Bunga  Brokoli (Brassica  oleracea  L.  var.  Italica)  dengan
Metode  (2  ,2  azinobis  (3-etilbenzotiazolin)  -6- asam sulfonat),” J. Fitofarmaka Indones. , 2(2),
107–110, 2015.
[26] Molyneux  P,  “The  Use  of  The  Stable  Free Radical  Diphenylpicryl-Hydrazyl  (DPPH)  for
Estimating Anti-oxidant Activity,”
Songklanakarin  J.  Sci.  Technol. ,    26(5),  211– 219, 2004.
[27] M.  Olszowy,  “What  is  responsible  for antioxidant properties of polyphenolic
compounds  from  plants?,” Plant  Physiol.
Biochem. , 144(9), 135–143, 2019.
[28] A.  A.  El-Gamal et  al. ,  “Prenylated  flavonoids from  Commiphora  opobalsamum  stem  bark,”
Phytochemistry , 141(2017), 80–85, 2017.
[29] B. N. Meyer, N. R. Ferrigni, J. E. Putnam, L. B. Jacobsen, D. E. Nichols, and J. L. McLaughlin, “Brine  shrimp:  A  convenient  general  bioassay for  active  plant  constituents,” Planta  Med. , 45(1), 31–34, 1982.
[30] C.  Clarkson et  al. ,  “In  vitro  antiplasmodial activity  of  medicinal  plants  native  to  or naturalised in South Africa,” J. Ethnopharmacol. , 92(2), 177–191, 2004.
[31] E.  Setiawati,  S.  Bahri,  and  A.  R.  Razak, “Ekstraksi  Glukomanan  Dari  Umbi  Porang
(Amorphophallus paeniifolius (Dennst.)
Nicolson),” Kovalen , 3(3), 234, 2017.
[32] S. Geethaa, P. J. Thavamany, S. P. Chiew, and O. M. Thong, “Interference from ordinarily used solvents  in  the  outcomes  of  Artemia  salina lethality  test,” J.  Adv.  Pharm.  Technol.  Res. , 4(4), 179–182, 2013.
[33] S. Sen, B. De, N. Devanna, and R. Chakraborty, “Total  phenolic,  total  flavonoid  content,  and antioxidant  capacity  of  the  leaves  of  Meyna spinosa Roxb., an Indian medicinal plant,” Chin.
J. Nat. Med. , 11(2), 149–157, 2013.
[34] C. M. Nyein, K. M. Mya, M. Thida, and K. N. Chan,  “Detection  of  antioxidant  and  cytotoxic activites of Tectona hamiltoniana and Terminalia chebula,” J. Pharm. Sci. Res. , 9(10), 1750–1754, 2017.