D
DETEKSI  KOI HARPES  VIRUS  (KHV)  PADA  IKAN   MAS KOI ( Cyprinus  carpio  L ) DENGAN  MENGGUNAKAN
METODE  APLIKASI Polym  erase Chain  Reaction (PCR)

## Mashuri Masri1), Arfan Arifuddin2)
1) Dosen Pada Jurusan Biologi; 2) Mahasiswa Pada Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi UIN Alauddin Makassar
ABSTRACT: This  thesis  discusses  the detection  of koi harpes  virus (KHV)  in koi  carp  (Cyprinus   carpio  L)  Application   Method   Using   the  Polymerase Chain  Reaction  (PCR).  The  purpose  of  this  study  is  to  determine  the  level of  virus  attacks  causing  harpesviridae   group  KHV  Koi  carp   (Cyprinus carpio   L.)   using   PCR   applications    in   the   Central   Fish   Karantian Hasanuddin   Makassar.   The  research   method  used  is  descriptive   with pictures   PCR   of  Polaroid   photographs.   The  results  obtained   with  the results  of  attacks  lightly  infected  290  bp,  the  attack  was  infected  with  the results of 290 bp and 440 bp, with the result of severe infection  attack 290 bp 440 bp and 630 bp.
Keywords :  Koi  Harpes  Virus  (KHV),  Koi  carp  (Cyprinus  carpio  L)  and PCR.

## PENDAHULUAN

## Latar Belakang
i Indonesia  budidaya  ikan  air  tawar  berperan  penting  sebagai  salah  satu sumber  protein  bagi  masyarakat.   Budidaya  laut  merupakan   salah  satu yang  penting   untuk  pendapatan   luar  negeri.   Budidaya   ikan  air  tawar terutama  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio ),  ikan  nila  ( Oreochromis   niloticus )  dan  ikan patin  ( Pegassius    sp )  mengalami   peningkatan    produksi    disemua    Negara,   karena ikan-ikan   ini  memiliki   nilai   jual   bagi   petani   untuk   mendapatkan   keuntungan dengan  teknik  sederhana  dan investasi  kecil.
Koi  Harpes  Virus  (KHV)  adalah  salah  satu  penyakit  yang  digolongkan sebagai   penyakit   utama  di  Indonesia   oleh  Komisi   Nasional   Kesehatan   Ikan. Selain  itu,  KHV   merupakan   Hama   Penyakit   Ikan  Golongan   I  sesuai   Surat Keputusan    Menteri    kelautan    dan    Perikanan    Nomor    KEP.03/MEN/2010 tentang  penetapan   "Jenis-Jenis   Hama  dan  Penyakit   Ikan  Karantina,   Golongan, Media  Pembawa  dan Sebarannya".
Mengingat   dampak  yang  ditimbulkan   oleh  serangan  KHV  mengakibatkan kerugian  yang  sangat  besar  dalam  kegiatan  produksi  ikan  mas,  maka  diperukan diagnosis  secara  cepat  dan  akurat  dalam  penanganan  masalah  diagnosis  penyakit. Perkembangan   iptek  dalam   bidang  biologi   molekuler   dengan   teknik   polymerase
chain reaction  (PCR)  dapat  membantu  untuk  mendeteksi  virus  secara  cepat  dan tepat.  Teknik  PCR  pertama   kali  diperkenalkan   oleh  DR.  Kary  Banks  Mullis pada  tahun  1985 dan meraih  hadiah  nobel pada tahun  1993.
Berdasarkan   uraian  diatas,  maka  penelitian  ini  difokuskan  pada  aplikasi metode  PCR,  dengan  judul  Deteksi   Koi  Harpes  Virus  (KHV)   Pada  Ikan  Mas Koi ( Cyprinus  carpio L) Dengan  Menggunakan  Aplikasi  Metode  PCR.

## Rumusan  Masalah
Berdasarkan   latar  belakang,  maka  rumusan  masalah  pada  penelitian  ini adalah  bagaimana  metode  aplikasi  PCR  (Polymerase   Chain  Reaction)  dapat mendeteksi    tingkat    serangan    KHV    yang    termasuk    dalam    golongan    virus harpesviridae  pada ikan mas koi (Cyprinus  carpio L).

## Tujuan
Tujuan   pada   penelitian   ini  adalah   untuk   mendeteksi   tingkat   serangan dari  virus  golongan   harpesviridae   yang  menyebabkan   KHV  pada  ikan  mas  koi ( Cyprinus   carpio L)  dengan  menggunakan   metode  aplikasi  PCR  di  Balai  Besar Karantina  Ikan Hasanuddin  Makassar.

## Manfaat  Penelitian
1.  Sebagai   pilihan   alternatif   dalam   mendeteksi    virus   secara   dini   dengan sensivitas  dan spesifitas  dengan  kecepatan  tinggi.
2.  Sebagai      sumber      informasi      kepada      masyarakat       khususnya masyarakat   pembudidaya   ikan  mas  koi  tentang  bahaya  penularan   virus  KHV, sehingga   virus  dapat  dideteksi   sedini  mungkin   dan  juga  dapat  mengantisipasi kerugian  yang akan ditimbulkan  sebelumnya.
3.  Sebagai   bekal   pengetahuan    dan   pengalaman    tambahan   kepada   penulis dalam  rangka  pengembangan  potensi  diri.
4.  Sebagai  acuan  dasar  untuk  rujukan  penelitian  selanjutnya.
Tabel.  1. Jenis  Primer  Pada  KHV
Primer  IQ 2000 Amplicon Reference F :5´-GATGAGCCAGGGCCATCGGGA-3`
R: 5 ´-GTGTCGCCCGGGAGACGTACCA-3`
F :5´-CGGAGGCGACCACAAACTGAA-3`
R:5´-CTATCGTAGCAGCGGGAGTACG -3`
F :5´-CTCCCCGAGCAGGCCGATGACC-3`
R :5´-CTACCAGTGCTCCTGGGTCGGC-3`
270-290  bp 330-352  bp 420-440  bp 491-5 12 bp
610-630bp
721-  742bp
Gilda  Lio 2009.

## METODOLOGI  PENELITIAN

## Jenis  Penelitian
Penelitian  ini merupakan  penelitian  yang bersifat  deskriptif.

## Variabel  Penelitian
Variabel  Penelitian  ini adalah KHV (Koi Harpes  Virus)  Pada Ikan Mas  Koi ( Cyprinus  carpio L).

## Defenisi  Operasional
KHV  adalah   virus  dalam   golongan   Harpesviridae   yang  menginfeksi ikan  mas  koi,  di  deteksi  dengan  menggunakan    metode  aplikasi  Polymerase    Chain Reaction  (PCR),  dengan  melalui  tahap denaturasi,  annealing  dan elongasi.

## Waktu  Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan   dari  bulan  Juni  sampai  dengan  Juli  2010,  di lakukan   di   Laboratorium    Balai   Besar   Karantina   Ikan   Hasanuddin    Makassar. Jalan.  Landak  Baru No. 7.

## PROSEDUR  KERJA
Alat dan Bahan a.  Alat
Alat    yang    digunakan    dalam    melakukan    penelitian    ini    adalah centrifuge,  micropipete,    pastle,  mesin  elektroforesis,    mesin  PCR,  gel dokumentasi,   timer,   dissecting   set,   nampan   bedah,   laminary   air  flow   vertical cabinet,   block   heater,   Analitikal    balance,   microwave,    vortex,   aquarium, Blower,   batu   aerasi,   selang   aerasi,   filter   aquarium,    serok,   Thermometer, sarung  tangan,  masker  dan kamera.
b.  Bahan
Bahan  yang  digunakan   dalam  melakukan   penelitian  ini  adalah  ikan  mas koi  ( Cyprinus  carpio L)sebanyak   5  ekor,  aquadest  steril  bebas  pyrogen,  agarose, PCR   kit   untuk   KHV   (primer   Kit   IQ   ),   l ysis   Buffer,   etanol,   ethidium bromide,  TAE  Buffer,  tissue,  microtube  (1,5  ml,  1 ml,  0,5  ml),  microtipe  (putih, kuning,  biru), EDTA  40x, es batu, almunium  foil.
Kriteria  Sampel  Yang Terinfeksi  :
1.  Serangan  Infeksi  Ringan
a.  Insang  Tidak  Berwarna  Putih
b.  Mata  Tidak  Cekung  Ke  dalam
c.  Kepala  Tidak  Mengalami  lesi
d.  Kulit  Tubuh  tidak mengalami  hemoragik  dan lesi
e.  Hasil  Uji PCR menunjukkan  satu pita yaitu  290
2. Serangan  Infeksi  Sedang a.  Insang  Berwarna  Putih b.  Mata  Tidak  Cekung  ke dalam c.  Kepala  Tidak  mengalami  lesi
d.  Kulit  Tubuh  mengalami  hemoragik  atau lunturnya  warna  kulit
e.  Hasil Uji menunnjukkan  dua pita yaitu 290 bp dan 440 bp Serangan
3. Serangan  Infeksi  Berat
a.  Insang  Berwarna  Putih
b.  Mata  Cekung  Ke  Dalam
c.  Kepala  Mengalami  Lesi
d.  Kulit  Tubuh  Mengalami  hemoragik  atau lunturnya  warna  kulit e.  Hasil Uji menunnjukkan  tiga pita yaitu 290 bp, 440 bp dan 630 bp.

## Cara Kerja
a.  Ekstraksi    Dengan    Menggunakan    Metode    IQ   2000   (Metode    Standar Pemeriksaan    HPIK    Golongan    Virus    (KHV),    Pusat    Karantina    Ikan Departemen  Perikanan  dan Kelautan).
Mengambil   bagian   insang   sampel   ikan  yang  akan  diuji  sebanyak   0,04 gram,  memasukkan   ke  dalam  mikrotube  sebanyak  1,5  ml.  Menambahkan   500  µl Lysis  buffer  ke  dalam  mikrotube   kemudian   menghancurkannya  dengan  pastle. Memasukkan  mikrotube  ke dalam  heating  block  pada  suhu  95°C  selama  10  menit kemudian  disentrifuge  dengan  kecepatan  12.000  rpm.  Memindahkan  200  µl supernatan    ke   dalam   mikrotube    1,5   yang   baru   dan   menambahkan    400 µldengan   95%   etanol.   Vortex,   kemudian   disentrifuge   dengan   kecepatan 12.000   rpm  selama   5  menit  kemudian   membuang   etanol  dan  mengeringkan pellet.   Melarutkan    pellet   dengan   TAE   buffer.   Jika   ingin   mengimplikasi langsung,   menginkubasi    sampel   pada   suhu   56°C   selama   15   menit.   Vortex hingga  bercampur.
b.  Amplifikasi  Virus  DNA (IQ Detection  and Prevention  System).
Menyiapkan  Reagen  First  PCR  dan  Nasted  PCR,  sampel  DNA  yang diperlukan   pada  proses  percampuran   reaksi.  Menyiapkan   kontrol  positif   dan negatif   kontrol   (  O  atau   yeast   tRNA).   Membuat   campuran   8µl   reagent first PCR sebagai  berikut  :
First PCR Pre Mix                                               : 7,5 µl. IQ Zygme  DNA Polymerase  2 unit/µl               : 0,5 µl
Pipet  8  µl  RT-PCR   reaksi   ke  dalam  tube  0,2  ml.  Menambahkan   2  µl sampel   DNA   atau   larutan   standar   ke   dalam   campuran    reaksi.   Kemudian menyiapkan  nested  PCR  mengamplifikasi  seperti  pada  langkah  pertama. Menambahkan  15 µl untuk setiap tube dengan  komposisi  sebagai  berikut:
Nasted  Pre Mixed reagent                                     : 14 µl IQ DNA  Polymerse  2 unit/  µl                           : 1,0 µl Vortex             larutan             hingga             bercanpur.
c.  Electrophoresis
Menambahkan    5-10   µl  “Campuran   produksi   amplifikasi-loading  dye   ke dalam  satu persatu  sumuran  agarose.
Mengambil  5  µl  DNA  marker,  memasukkan  ke  dalam  sumuran  agarose. Menghubungkan    gel   box   dengan    power    supply    sebelum    dinyalakan. Memeriksa   kembali   electrode   dan   menggunakan    100-150   voltage   (tidak boleh  lebih  dari 150 voltage).
Menghentikan     electrophoresis    ketika    proses    running    memperlihatkan warna   biru   gelap   telah   mencapai   1/2   atau   2/3   dari   gel.   Staining   dan Observasi    GelRendam    agarose    hasil    electrophoresis   dengan    larutan Ethidium   Bromide   (50µ/100   ml)  ke  dalam  nampan  plastic  selama  10  menit pada suhu ruang.
Kemudian   mengeluarkan   agarose   dan  merendam   dengan  aquadest   ke dalam    nampan    plastic    selama    10   menit.    Membaca    hasil   akhir    dengan meletakkan  gel  UV  trans-illuminor   dan  mengamati  berat  molekul  DNA  target yang  terlihat  dengan  jelas  dan  berpandar   berupa  pita  dengan  membandingkan berat      molekul       target      dengan       berat      molekul       yang      digunakan. Mendokumentasikan dengan  gel  dokumentasi.

## HASIL  DAN PEMBAHASAN
A. Hasil  Penelitian
1. Pengamatan  Morfologi
Gambar  6. Ikan Dalam  Aquarium
1           2            3                          4

## Keterangan  Ciri
1. Kepala  No rma l 2. Mata  Normal
3. InsangNormal 4. Kulit Tubuh Mengalami Pendarahan.
Gambar  7. Serangan  Infeksi  Ringan

## 1       2         3                 4
Keterangan  Ciri 1.  Kepala  Normal 2.  Mata  Normal
3.  Insang  berwarna  putih
4.  Kulit Tubuh hemoragik.
Gambar  8. Serangan  Infeksi  Sedang
1                     2                     3           4 290
333     484   888                                  440 290 440   630
Gambar  11. Terinfeksi  Sedang
Keterangan 1.  Marker (333, 484, 888)bp. 2.  Kontrol Positif (290, 440 dan 630)bp 3.  Kontrol  Negatif
4.  Sampel(290,  440)bp
Keterangan 1.  Marker (333, 484,  888)bp. 2.  Kontrol Positif (290, 440 dan 630)bp 3.  Kontrol  Negatif 4.  Sampel (290, 440, 630)bp 333 1          2                3                4 Gambar 12. Terinfeksi Berat 888                                             630 484               440  630              440
290                       290

## PEMBAHASAN
Berdasarkan   hasil   pengamatan   pada   ikan   yang   terinfeksi   KHV   dari hari  pertama  pengambilan  sampel  hingga  hari  ke  sepuluh  dan  disesuaikan  dengan hasil  uji  PCR,  maka  dapat  dikatakan  bahwa  ikan  yang  terlihat  pada  gambar  7  yang mengalami   kematian   pada   hari   kedua   tidak   memperlihatkan    ciri-ciri    KHV dimana   ciri  tersebut   yaitu  lembar-lembar   insang   yang  berwarna   putih   pucat, tidak  mengalami   lesi  dan  hemoragik  tetapi  mengalami   sedikit  pendarahan   pada bagian  sirip,  pendarahan    pada  sirip  tersebut  diperkirakan    adanya  infeksi  sekunder yang  terjadi  yang  disebabkan   oleh  bakteri  dan  selama   masa  pengamatan   dalam aquarium   memperlihatkan   pergerakan   yang  tidak  normal  yaitu  bergerak   miring sejak   hari   pertama   pengambilan   sampel   dan   sering   berenang   ke   permukaan seperti   yang  ditunjukkan   pada  gambar.   Dan  hasil  foto  PCR  yang  ditunjukkan pada  gambar  10  menunjukkan   hasil  positif  terinfeksi,   hal  ini  dapat  dilihat  dari terbentuknya   band  di  290  bp  berdasarkan   marker  (333,  484,  888)  yang  dipakai serta   kontrol   positif   (290,   440,  630).   Hal   ini  berarti   bahwa   ikan   tersebut terinfeksi   ringan.   Ikan   yang   tidak   memperlihatkan   ciri   yang   jelas  terinfeksi KHV  namun  dari  hasil  PCR  terbentuk  pada  band  290  bp maka  dapat  diindikasikan ikan    tersebut    adalah    positif    carrier    (pembawa    yang    dapat    menulari). Terbentuknya   pita   pada   posisi   290  bp  mengindikasikan   bahwa   adanya   virion yang   terdapat   di  sampel   dan   adanya   kesesuaian   basa   oligonukleotida   yang dihasilkan  berdasarkan  primer  yang  digunakan  dan  sequencing  DNA  virus  yang terdapat  pada  ikan  yang  terinfeksi,  hanya  saja  virion  tersebut  dalam  jumlah  yang sedikit        sehingga         tidak        terlalu        memperlihatkan         ciri        infeksi.
Koi  dan  ikan  mas  yang  terserang   KHV  pada  umumnya   menunjukkan tanda  putih  pada  selaput  insang.  Ikan  seringkali  berenang  ke  permukaan  dan menunjukkan   gangguan   pernapasan.   Tanda  lainnya  seperti  mata  tenggelam   atau masuk,  luka  pada  sekujur  tubuh,  lendir,  yang  berlebihan   dan  kulit  yang  pucat. Namun  beberapa   ikan  yang  terinfeksi  bisa  saja  tidak  menunjukkan   tanda-tanda terlihat   dengan   kasat  mata.  Infeksi  KHV  ditandai   terutama   oleh  adanya  bercak merah  atau  kerusakan  insang  serta  kematian  massal  ikan  yang  terserang.  Selain  itu biasanya  diikuti  oleh  adanya  infeksi  sekunder   berupa  luka  atau  bercak  putih  di permukaan    tubuh   yang   diinfeksi    oleh   bakteri   bakteri   seperti Aeromonas hydrophilia ataupun Flexibacter  columunaris (Mudjiutami,  2007). Bakteri Aeromonas      hydrophilia dan Flexibacter      columnaris merupakan    bakteri    yang   bersifat    gram   negative,    berbentuk    batang,    motil. Merupakan    agensia    penyebab    hemoragik    septicemia    ( Bacterial    Hemoragik Septicemia ,   BHS)   atau   MAS   ( Motile   Aeromonas   Septicemia )   pada   beragam spesies   ikan   air  tawar.   Pada   dasarnya   kedua   bakteri   ini  merupakan   opertunis karena  penyakit   yang  disebabkannya   mewabah   pada  ikan-ikan   yang  mengalami strees  atau  pada  pemeliharaan   dengan  padat  tebaran  tinggi.  Tanda-tanda   klinis infeksinya   berupa   adanya   hemoragik   pada   kulit,   insang,   rongga   mulut   dan pendarahan  pada  bagian  jaringan  otot(Agus  Irianto,  2006).
Sampel   dikatakan    terinfeksi    positif   ringan   KHV   tatkala   pada   sampel tersebut  menunjukkan   pita  290  pada  foto  hasil  PCR.  Hal  ini  berarti  bahwa  pada ikan  tersebut  terdapat  virion  didalam  organ  yang  terinfeksi,  namun  dalam  jumlah yang  sedikit,  para  peneliti  sering  menggolongkan  ikan  tersebut  sebagai  carrier, yang  artinya  dapat  menulari  ikan  yang  lain  apabila  berada  dalam  satu  wadah yang  sama  dengan  ikan  yang sehat (tidak  terinfeksi)  (Agus  Irianto,  2006)
Sampel     yang    terdapat     pada    gambar     8    adalah    sampel     yang mengalami   kematian   pada   hari   ke  sepuluh.   Pada   sampel   tersebut   terlihat ikan  mengalami   hemoragik  yaitu  lunturnya  warna  pada  kulit  dan  dibagian  insang berwarna  putih  pada  hampir  pada  semua  lembar  insangnya.  Dan  hasil  dari  PCR pada   gambar1   1  memperlihatkan   ikan   tersebut   positif   sedang,   hal  ini  dapat dilihat   dari   tebentuknya   dua   pita   yang  muncul   yaitu   290  bp  dan  440  bp. Sebenarnya   pada   hasil   foto   PCR   terbentuk   3  band  namun   band   yang   ketiga tersebut  tidak  sejajar  dengan  pontrol  positif  yaitu  pada  posisi  630  bp  hanya  sejajar dengan  marker,  dipastikan  bahwa  terbentuknya  band  ini  dikarenakan  oleh  adanya kontaminasi  pada  alat  atau  kurang  sterilnya  alat  yang  digunakan  dan  teknik pengerjaannya    yang  kurang  kehati-hatian.  Tetapi  tetap  dapat  diartikan  bahwa terbentuknya   dua  pita  mengindikasikan   bahwa   sampel   tersebut   terserang   virion yang  jumlahnya   sedikit   lebih  banyak   dari  sampel   yang  pertama,   dan  adanya kesesuaian  basa  oligonukleotida   yang  dihasilkan  pada  primer  dengan  DNA  virus pada  ikan  terinfeksi   sehingga   terbentuk   dua  band.   Berbeda   halnya   dengan sampel   pada  gambar   9  yang  mengalami   kematian   pada  hari  ke  sembilan   .pada sampel  tersebut  terlihat  ikan  mengalami   hemoragik,   dan  insang  memiliki   warna putih  pucat  disemua  bagian  lembar  insangnya,   mata  tenggelam   atau  masuk  dan terjadi   lesi   atau   luka   pada   bagian   kepala,   dan   hasil   PCR   pada   gambar   12
menunjukkan   terbentuknya   tiga  pita  yaitu  290  bp,  440  bp  dan  630bp.  Secara kasat  mata  terlihat  band  yang  terbentuk  adalah  5 band  namun  band  yang  sesuai dengan   kontrol   positif   yaitu   3  pita,dipastikan    dua   pita   lain   yang   terbentuk tersebut  akibat  dari  kontaminasi    alat  yang  digunakan    atau  dalam  hal  ini  kurang sterilnya  peralatan  yang  digunakan  dan  juga  teknik  pengerjaan  yang  kurang  hati- hati,  tetapi  tetap  dapat  dipastikan  bahwa  tingkat  serangan   tersebut   berat,  hal  ini berarti  jumlah  virion  yang  menyerang    jauh  lebih  banyak  dari  pada  virion  yang menyerang  pada  ikan  yang  terinfeksi  ringan  maupun  sedang,  sehingga memperlihatkan  ciri infeksinya.
Sampel  yang  diidentifikasi    sebagai  infeksi  positif  sedang  KHV  adalah sampel    yang    secara    morfologi    memperlihatkan    kondisi    ikan    mengalami hemoragik   pada  bagian   kulit  berupa  lunturnya   zat  warna  kulit,  dan  pada  hasil pengujian  PCR  memperlihatkan   pita  290  bp  dan  440  bp,  posisi  band  tersebut telah  menandakan   bahwa  adanya  virion  yang  menginfeksi   insang  lebih  banyak dari  pada   ikan   yang  terinfeksi   ringan   dan  dibuktikan   dengan   adanya   lembar- lembar  insang  yang  berwarna  putih  pucat  hampir  disemua  lembar  insangnya. Sedangkan   untuk  tingkat  serangan  infeksi  berat  berupa  hemoragik,   adanya  lesi ataupun  luka,  lendir  kering  disekitar  bagian  tubuh  ikan.dan   mata  tengge  lam atau   masuk.   Timbulnya    hal   tersebut   kemungkinan    diindikasikan    adanya serangan  bakteri  pada  ikan  tersebut  sebagai  manifestasi   infeksi  sekunder,  hasil uji  PCR  memperlihatkan   tiga  pita  yaitu  290  bp,  440  bp,  630  bp.  Terbentuknya band  tersebut  menandakan  bahwa  terdapatnya  virion  dalam  jumlah  yang  sangat banyak   menyerang   sampel   tersebut   dan   kemudian   teramplifikasi.   Hal  lain yang   dapat   ditandai   juga   sebelum   melakukan    uji   PCR   adalah   insang   yang seluruhnya   berwarna   putih  dan  mengalami   kematian   kurang  dari  delapan   atau sepuluh   hari  setelah   terinfeksi   (Gilda   Lio,  2006).   Timbulnya   suatu   penyakit pada  ikan  dapat  disebabkan   tiga  faktor,  yaitu  kondisi  tubuh  ikan  yang  kurang baik,   lingkungan    kolam   yang   kurang   baik   dan   patogen   atau   hewan   lain pembawa   penyakit.   Ketiga   factor   tersebut   mempunyai    hubungan   yang   erat sekali  sebab  bila  salah  satu  faktor  terjadi  maka  serangan   penyakit   pasti  terjadi.
Sakit  pada  ikan  yaitu  suatu  keadaan  yang  abnormal  yang  ditandai  dengan penurunan  kemampuan   ikan  secara  gradual  dalam  mempertahankan   fungsifungsi fisiologik  normal.  Pada  keadaan  tersebut  ikan  dalam  kondisi  tidak  seimbang fisiologisnya    serta   tidak   mampu   beradaptasi   atau   menyesuaikan    diri   dengan kondisi  lingkungan.   Timbulnya   kondisi  tersebut  disebabkan   oleh  adanya  stress yang  terjadi,   strees   yang  terjadi   karena   belum   adanya   proses   adaptasi   ikan dengan   lingkungan   barunya,   dapat   juga   akibat   infeksi   patogen   yang   dapat berupa  virus,  bakteri,  fungi  atau  parasit.   Sakit  pula  dapat  pula  di  defesiensi atau  mal  nutrisi  dan  keadaan   lingkungan   kolam  ataupun  aquarium   yang  tidak bersih (Agus  irianto,  2006)
Penularan   KHV  terjadi  secara   horizontal   diantara   ikan  mas  dan  ikan koi  dengan  masa  inkubasi  4  –  5  hari  atau  lebih  dari  hari  tersebut  dan  lamanya sakit  24-48  jam  (perakut).   Tertularnya   ikan  tersebut   diakibatkan   oleh  adanya kontak  individu  yang  terkena  penyakit  dengan  individu  yang  sehat  dalam  satu
tempat,  sehingga   mengakibatkan   individu   yang  sehat  terinfeksi,   penularan  juga dapat  terjadi  melalui  air  yang  memang   mengandung   banyak  bibit  penyakit   dan kondisi  lemah  yang  terjadi  pada  ikan.  Dinamika  infeksi  penyakit  pada  ikan  lebih disebabkan    karena   lingkungan    air   yang   memfasilitasi    penyebaran    agensia penyebab  penyakit  (Farida  Indrawati,  2010).
PCR   adalah   metode   pendeteteksian   virus   yang  banyak   dipakai   baik untuk   virus   pada   manusia,    hewan   maupun   tumbuhan.    Keunggulan    PCR terletak  pada  kecepatan,  spesivitas  dan  sensivitasnya dalam  mendeteksi mikroorganisme   patogen,   menjadikan   teknik   ini   sebagai   pilhan   untuk   deteksi ataupun   diagnose   penyakit.    Selain   itu   PCR   begitu   spesifik    karena   dapat mendeteksi   mikroorganisme   pada  tingkat  DNAnya.  Selain  itu  PCR  juga  sangat sensitif   karena   mampu   mendeteksi    satu   partikel   virus   di   dalam   sel   yang terinfeksi   dengan   cara   meningkatkan    jumlah   DNA-nya   sa m pa i   (N a tsir, 2002).
Marker   adalah   sebuah   penanda   genetik   berupa   gen   atau   DNA   urutan dengan   lokasi   yang   dikenal   pada   kromosom    yang   dapat   digunakan    untuk mengidentifikasi   sel-sel,   individu   atau  spesies.   Hal   ini  dapat   digambarkan sebagai   variasi   (yang   mungkin   timbul   karena  adanya   mutasi  atau  perubahan dalam   lokus   genomik)   yang   dapat   diamati.   Sebuah   penanda   genetik   mungkin menjadi  urutan  DNA  pendek,  seperti  urutan  yang  mengelilingi    sebuah  perubahan pasangan   basa  tunggal   (polimorfisme   nukleotida   tunggal,   SNP),   atau  panjang, seperti   minisatellites.   Fungi   marker   adalah   memainkan   peran   dalam   rekayasa genetik,  karena  mereka  dapat  digunakan  untuk  memproduksi  normal,  protein berfungsi  untuk  menggantikan   yang  rusak.  Bagian   yang  rusak  atau  cacat  DNA akan  dihapus  dan  diganti  dengan  identik,  tetapi  berfungsi,  urutan  gen  dari  sumber lain.  (Wikipedia,  2010).  Timbulnya   suatu  penyakit  pada  ikan  dapat  disebabkan tiga  faktor,   yaitu  kondisi   tubuh  ikan  yang  kurang   baik,  lingkungan   kolam yang  kurang   baik  dan  patogen   atau  hewan   lain  pembawa   penyakit.   Ketiga factor  tersebut  mempunyai   hubungan  yang  erat sekali  sebab  bila salah  satu  faktor terjadi   maka   serangan   penyakit   pasti   terjadi.   Sakit   pada   ikan   yaitu   suatu keadaan   yang   abnormal   yang   ditandai   dengan   penurunan   kemampuan   ikan secara   gradual   dalam   mempertahankan    fungsifungsi    fisiologik   normal.   Pada keadaan   tersebut   ikan   dalam   kondisi   tidak   seimbang   fisiologisnya   serta   tidak mampu    beradaptasi     atau    menyesuaikan     diri    dengan    kondisi    lingkungan. Timbulnya   kondisi   tersebut   disebabkan   oleh  adanya   stress   yang  terjadi,   strees yang  terjadi   karena   belum   adanya   proses   adaptasi   ikan  dengan   lingkungan barunya,   dapat  juga  akibat  infeksi  patogen   yang  dapat  berupa   virus,  bakteri, fungi  atau  parasit.   Sakit  pula  dapat  pula  di  defesiensi   atau  mal  nutrisi  dan keadaan  lingkungan   kolam  ataupun  aquarium   yang  tidak  bersih  (Agus  irianto, 2006)
Penularan   KHV  terjadi  secara   horizontal   diantara   ikan  mas  dan  ikan koi  dengan  masa  inkubasi  4  –  5  hari  atau  lebih  dari  hari  tersebut  dan  lamanya sakit  24-48  jam  (perakut).   Tertularnya   ikan  tersebut   diakibatkan   oleh  adanya kontak  individu  yang  terkena  penyakit  dengan  individu  yang  sehat  dalam  satu
tempat,  sehingga   mengakibatkan   individu   yang  sehat  terinfeksi,   penularan   juga dapat  terjadi  melalui  air  yang  memang  mengandung   banyak  bibit  penyakit   dan kondisi  lemah  yang  terjadi  pada  ikan.  Dinamika  infeksi  penyakit  pada  ikan  lebih disebabkan    karena   lingkungan    air   yang   memfasilitasi    penyebaran    agensia penyebab  penyakit  (Farida  Indrawati,  2010).
PCR   adalah   metode   pendeteteksian   virus   yang  banyak   dipakai   baik untuk   virus   pada   manusia,    hewan   maupun   tumbuhan.    Keunggulan    PCR terletak  pada  kecepatan,  spesivitas  dan  sensivitasnya dalam  mendeteksi mikroorganisme   patogen,   menjadikan   teknik   ini   sebagai   pilhan   untuk   deteksi ataupun   diagnose   penyakit.    Selain   itu   PCR   begitu   spesifik    karena   dapat mendeteksi   mikroorganisme   pada  tingkat  DNAnya.  Selain  itu  PCR  juga  sangat sensitif   karena   mampu   mendeteksi    satu   partikel   virus   di   dalam   sel   yang terinfeksi   dengan   cara   meningkatkan    jumlah   DNA-nya   sa m pa i   (N a tsi r, 2002) .
Marker   adalah   sebuah   penanda   genetik   berupa   gen  atau  DNA   urutan dengan  lokasi  yang  dikenal  pada  kromosom  yang  dapat  digunakan  untuk mengidentifikasi   sel-sel,   individu   atau  spesies.   Hal   ini  dapat   digambarkan sebagai   variasi   (yang   mungkin   timbul   karena  adanya   mutasi   atau  perubahan dalam   lokus   genomik)   yang   dapat   diamati.   Sebuah   penanda   genetik   mungkin menjadi  urutan  DNA  pendek,  seperti  urutan  yang  mengelilingi    sebuah  perubahan pasangan   basa  tunggal   (polimorfisme   nukleotida   tunggal,   SNP),   atau  panjang, seperti   minisatellites.   Fungi   marker   adalah   memainkan   peran   dalam   rekayasa genetik,  karena  mereka  dapat  digunakan  untuk  memproduksi  normal,  protein berfungsi  untuk  menggantikan   yang  rusak.  Bagian   yang  rusak  atau  cacat  DNA akan  dihapus  dan  diganti  dengan  identik,  tetapi  berfungsi,  urutan  gen  dari  sumber lain. (Wikipedia,  2010).

## PENUTUP

## Kesimpulan
Berdasarkan  penelitian  yang telah dilaksanakan,  maka  dapat  disimpulkan:
1.  Tingkat  serangan  infeksi  ringan  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  satu pita di 290  bp.
2.  Tingkat   serangan   infeksi   sedang  ditunjukkan   dengan   terbentuknya   dua  pita yaitu 290 bp dan 440 bp.
3.  Tingkat  serangan  infeksi  berat  ditunjukkan   dengan  munculnya   tiga  pita  yaitu 290 bp, 440 bp, dan 630 bp.
Saran
Sebaiknya   diadakan   uji  lanjutan   pada  sampel   yang  terinfeksi   ringan  agar dapat  dipastikan  bahwa  bakteri  yang  menginfeksi   ikan  yang  menyebabkan   luka tersebut    atau  pendarahan    dapat    diketahui    dengan    tepat    sesuai    analisa laboratorium,                sehingga         dapat         diisolasi         dan        diidentifikasi.

## DAFTAR  RUJUKAN
Agus  Darmawan . 2007. Koi  Harpes  Virus  Penyebab  Kematian  Massal  Ikan  Mas dan Koi . Http// www.juraganindor.com . Diakses  : 5 Desember  2009.
Agus   Irianto   2005. Patologi   Ikan   Teleostei .   Gadjah   Mada   University   Press.
Yogyakarta.
Campbell,  Reece  and Mitchee.  2005 .  Biologi .  Erlangga.  Jakarta.
Gilda    Lio   2009. Diagnosa,    Pencegahan    dan   Pengendalian .    Departement    A Aquaculture  Asia Tenggara,  Tigbauan  Iloho.  Filipina.
Heru  Susanto.  2008. Panduan  Memelihara  Koi . Swadaya.  Jakarta.
Kei Yuasa  dkk.  2003. Panduan  Diagnosa  Penyakit  Pada  Ikan .  Balai  Budidaya  Air Tawar.  Jambi.
Maskoeri  Jasin .1992. Zoologi  Vertebrata .  Sinar Wijaya.  Surabaya.
Mudjiutami   E,  dkk.  2007. Pengendalian   Penyakit   Pada  Ikan  Mas .  Departemen Perikanan  dan Kelautan.  Jakarta.
Perelberg  A.  2005. Epidemiological    Descreption  of  A  New  Viral  Disease AffliccingCultured   Cyprinus   carpio   in  Israel .   California   State  University . Amerika.
Silvia  T. Pratiwi.  2008. Mikrobiologi  Farmasi .  Erlangga.  Jakarta.
Sri Sulandari  S.pi,.M.Si  dan M.Syamsul  Arifin  Zein  Ir,.M.Si.  2003. Panduan  Praktis Laboratorium   DNA. Bidang   Zoologi   Pusat  Penelitian   Biologi   Lembaga Ilmu Pengetahuan  Indonesia.
Septiana,   dkk.   2008. Metode   Standar   pemeriksaan   HPIK   Golongan   Virus   Koi Harpes  Virus  (KHV). Pusat  Karantina  Ikan. Jakarta.
Sunarto   A.   2005. Prosedur   pemeriksaan   Virus   Ikan   Karantina .   Departemen Perikanan  dan Kelautan.  Jakarta.
Syahriani.  2008. Laporan  Penelitian  Ikan  Mas .  Http// www.ugm.ac.id . Diakses  : 24 Januari  2010.
Syekh  Saleh  Ibn  Abdul  Asiz  Ibn  Muhammad  Muhammad  Al  Syekh.  1971. Tafsir AlQuran  dan Terjemahannya .  Departemen  Agama  RI. Jakarta.
Triwibowo  Yuwono.  2005. Biologi  Molekuler .  Eralngga.  Jakarta.
Triwibowo  Yuwono.  2006. Teori  dan  Aplikasi  Polymerase  Chain  Reaction .  Andi. Yogyakarta.