## PENDAHULUAN
Perubahan  gaya  dan  pola  hidup  di  masyarakat  saat  ini sebagai  salah  satu  dampak  perubahan  pola  konsumsi menyebabkan terjadinya peningkatan berbagai penyakit
degeneratif  (Andriani,  2007).  Radikal  bebas  terlibat dalam penyakit degeneratif seperti diabetes, kerusakan hati,  inflamasi,  kanker,  gangguan  jantung,  gangguan syaraf dan proses penuaan (Onkar et al., 2012 )
IDENTIFIKASI KANDUNGAN METABOLIT SEKUNDER   DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK n- HEKSANA KULIT JERUK BALI  ( Citrus maxima Merr .).
Identification of Secondary Metabolite Content and Antioxidant Activity Tests N- Hexan Extract Of Grapefruit Peel ( Citrus maxima Merr.).
Elisabeth Oriana Jawa La 1*
Repining Tiyas Sawiji 2
Ni Made Rai Yuliani 3
*1 Sekolah Tinggi Farmasi Mahaganesha, Denpasar,Bali, Indonesia
2 Sekolah Tinggi Farmasi Mahaganesha, Denpasar,Bali, Indonesia
3 Sekolah Tinggi Farmasi Mahaganesha, Denpasar,Bali, Indonesia
*email: echaoriana07@gmail.com

## Abstrak
Latar  belakang: Penyakit  degeneratif  disebabkan  karena  antioksidan  yang  ada didalam  tubuh  tidak  mampu  menetralisir  peningkatan  konsentrasi  radikal  bebas, sehingga perlu adanya antioksidan dari luar untuk menghancurkan radikal bebas yang dapat  menyebabkan  kerusakan  sel.  Kulit  buah  jeruk  bali  ( Citrus  Maxima  Merr.) merupakan  salah  satu  tanaman  yang  diketahui  memiliki  kandungan  metabolit sekunder namun pemanfaatan kulit jeruk bali belum sepenuhnya dimaksimalkan.
Tujuan: Menganalisis  kandungan  senyawa  kimia  dan  efek  antioksidan  ekstrak  n- heksana kulit buah jeruk bali ( Citrus maxima Merr .). Metode : Identifikasi kandungan senyawa kimia dilakukan dengan skrining fitokimia dan dipertegas dengan analisis profil kromatografi lapis tipis ekstrak, sedangkan uji aktivitas antioksidan dilakukan menggunakan metode penangkapan radikal 2,2-difenil- 1-pikrilhidrazil (DPPH) dengan trolox sebagai pembanding. Hasil  : Hasil  identifikasi    ekstrak  kulit  buah  jeruk  bali  ( Citrus  maxima  Merr .) mengandung  metabolit  sekunder  berupa  flavanoid,  alkaloid,  triterpenoid/steroid, dan tanin. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak kulit buah jeruk bali ( Citrus maxima Merr .) dan trolox masing-masing menunjukkan nilai IC 50 111,69 ppm dan 17,04 ppm. Dari hasil pengujian ini ekstrak kulit buah jeruk bali ( Citrus maxima Merr .) memiliki aktivitas antioksidan yang sedang jika dibandingkan trolox.

## Kata Kunci:
Aktivitas antioksidan
DPPH IC 50 Kulit Jeruk Bali Skrining Fitokimia
Keywords :
Antioxidant activity DPPH
IC 50
Grapefruit peel,
phytochemical screening

## Abstract
Background :Degenerative diseases triggered by antioxidants in the body are unable to neutralize the increased concentration of free radicals that can cause cell damage, so to destroy free radicals it is necessary to have antioxidants from outside the body. Grapefruit peel  (Citrus  Maxima  Merr)  is  one  plant  that  is  known  to  have  a  lot  of  secondary metabolite content however it is not fully utilized.
Objective: To analyze the content of chemical compounds and the antioxidant effect of n-hexane extract of Grapefruit peel (Citrus maxima Merr.)
Method: Identification  of  chemical  compounds  was  carried  out  by  phytochemical screening and confirmed by the analysis of the extract thin layer chromatography profile, whereas the antioxidant activity test was carried out using the radical capture method of 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) with Trolox as a comparison.
Results: The results of the identification of Grapefruit peel (Citrus maxima Merr) extracts is  containing  secondary  metabolites  in  the  form  of  flavonoids,  alkaloids, triterpenoids/steroids,  and  tannins.  The  results  of  antioxidant  activity  test  extracts  of grapefruit  peel  (Citrus  maxima  Merr)  and  Trolox  each  showed  values  that:  IC 50 111.69 ppm and 17,04 ppm. From the results of this test, the extract of grapefruit peel (Citrus maxima Merr) has moderate antioxidant activity when compared to Trolox.
©  year  The  Authors.  Published  by  Institute  for  Research  and  Community  Services  Universitas  Muhammadiyah Palangkaraya.  This  is  Open Access article under  the  CC-BY-SA  License (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/). DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.vxix.xxx .
Radikal  bebas  merupakan  atom  atau  gugus  atom  apa saja  yang  memiliki  satu  atau  lebih  elektron  tidak berpasangan  sehingga  bersifat  sangat  reaktif  dimana akan  secara  terus  menerus  terbentuk  didalam  tubuh dan  jika  jumlah  dalam  tubuh  semakin  banyak  dapat berpotensi menonaktifkan berbagai enzim pengoksidasi    lemak  dan  mengganggu  DNA  tubuh sehingga  terjadi  mutasi  sel  yang  merupakan  awal timbulnya kanker (Kuntorini & Asuti, 2010 ).
Radikal  bebas  terbentuk  ketika  molekul  terpecah menjadi  elektron  tidak  berpasangan  atau  dikenal dengan  reaksi  oksidatif  .  Antioksidan  merupakan senyawa  yang  dapat  menghambat  reaksi  oksidasi, dengan  cara mengikat radikal bebas dan molekul  yang sangat  reaktif.  Salah  satu  bentuk  senyawa  oksigen reaktif  adalah  radikal  bebas,  senyawa  ini  terbentuk  di dalam  tubuh  dan  dipicu  berbagai  faktor  (Winarsi, 2007).  Ketersediaan  antioksidan  pada  tubuh  haruslah memenuhi  jumlah yang memadai, sebab dalam kondisi tertentu  seperti  pada  keadaan  patogenik  akibat terbentuknya jumlah radikal bebas yang berlebih dapat memicu penurunan fungsi kerja dari enzim-enzim yang memiliki peranan sebagai antioksidan endogen  (Astuti, 2012).
Menurut sumbernya antioksidan dapat dikelompokkan menjadi  2  yaitu  antioksidan  alami  dimana  senyawa antioksidan  ini  secara  alami  terdapat  dalam  tubuh sebagai  mekanisme  pertahanan  tubuh  normal  maupun berasal dari asupan luar tubuh dan antioksidan sintesis yang merupakan hasil sintesis secara kimia  (Tristantini et  al.,  2016 ).  Antioksidan  mampu  mencegah  reaksi berantai radikal bebas dengan mekanisme menyumbangkan  elektron  sehingga  dapat  menghindari kerusakan  oksidatif  pada  molekul  target,  seperti protein, lipida dan DNA (Halliwell, 1994)
Tumbuhan  memiliki  kandungan  metabolit  primer  dan metabolit  sekunder.  Tumbuhan  dapat  menghasilkan produk  organik  sekunder  (metabolit  sekunder)  yang merupakan  hasil  akhir  dari  suatu  proses  metabolisme (Ergina et  al.,  2014 ).  Metabolit  sekunder  berperan
dalam  mempertahankan  diri  dilingkungan  tempatnya tumbuh  dan  merupakan  biomolekul  yang  digunakan sebagai lead  coumpound dalam  penemuan  dan perkembangan  obat  baru  (Atun,  2005).  Antioksidan yang  berasal  dari  sumber  tanaman  umumnya  berupa metabolit  sekunder  salah  satunya  adalah  senyawa fenolik  yang  dapat  berupa  golongan  flavonoid. Flavonoid  memiliki  kemampuan  untuk  meredam  atau mereduksi  radikal  bebas  dan  juga  sebagai  anti  radikal bebas (Zuhra et al., 2008).
Saat  ini  limbah  kulit  jeruk  bali  belum  sepenuhnya termanfaat  dengan  baik  dimana  jumlah  produksi  jeruk bali  di  Indonesia  mencapai  511  kg/ton  pertahunnya dengan  limbah  kulit  jeruk  bali  sebesar  208  kg/ton (Rafsanjani  &  Putri,  2014).  Jeruk  bali  mengandung banyak  komponen  nutrisi  dimana  sebagian  besar komponen  tersebut  terletak  pada  kulitnya  antara  lain terdapat  kandungan  senyawa  alkaloid,  flavonoid, likopen,  vitamin  C,  serta  yang  paling  dominan  adalah pektin  dan  tanin.  Komponen  fenolik  yang  terbanyak pada kulit buah jeruk bali ialah pektin dan tanin sebesar 23%.  Kulit  buah  jeruk  bali  ( Citrus  maxima  Merr. ) mengandung  senyawa  flavonoid  yaitu  naringin  dan hesperidin  (Choi et  al., 2007).  Hal  ini  dibuktikan berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  terhadap kandungan  ekstrak  etanol  kulit  jeruk  bali  dengan metode  Kromatografi  Lapis  Tipis,  terlihat  bahwa kandungan  senyawa  flavonoid  yang  terkandung  dalam ekstrak  kulit  jeruk  bali  ( Citrus  maxima  Merr. )  yaitu rutin, naringin, dan hesperidin (Dianingati et al., 2013 ). Penelitian terkait kandungan senyawa  aktif dalam  kulit jeruk  bali  sudah  banyak  dilakukan,  namun  terdapat perbedaan  tempat  pengambilan  sampel,  jenis  pelarut yang  digunakan  untuk  ekstraksi  juga  ada  perbedaan perlakuan  dan  pengujian  sehingga  perlu  dikonfirmasi kembali  melalui  penelitian  ini  untuk  menganalisis kandungan  zat  aktif  dari  ekstrak  n-heksana  kulit  buah jeruk  bali  ( Citrus  maxima  Merr .)  dan  aktivitas antioksidan n- hexan  ekstrak  kulit  jeruk  bali  yang diperoleh dari daerah Klungkung, Bali.

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitan  adalah  blender serbuk, oven, tabung reaksi, kuvet, pipet tetes, batang pengaduk,  corong  kaca  , beaker  glass 100  ml  dan  250 ml,  cawan  porselen, erlenmayer 250  ml,  gelas  ukur  10 ml, 50 ml dan 100 ml, timbangan analitik, termometer, spatula  logam,  labu  tentukur  10  ml  dan  100  ml , spektrofotometer UV-Vis, aluminium foil, Silica Gel 60 F 254 , kertas saring, pipet ukur.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitan  adalah  kulit buah jeruk bali, n-heksana, serbuk DPPH (2,2-difenil-1- pikrilhidrazil), aquadest,  serbuk  Mg,  HCl  pekat, kloroform,  larutan  NH 3 ,  amil  alkohol,  eter,  pereaksi Mayer ,  pereaksi Dragendroff, pereaksi Lieberman Burchard, larutan  FeCl 3 1%,H 2 SO 4 ,  etil  asetat, klorofom,  methanol,  butanol,  asam  asetat  glasial, H 2 SO 4 10 %.

## Metode Penelitian dan Jalannya Penelitian
Metode  yang  digunakan  beserta  alur  kerja  sebagai berikut:
1. Determinasi Tanaman
Determinasi  tanaman  dilakukan  di  Balai  Konservasi Tumbuhan Kebun Raya “Eka Karya” Bali Lembaga Ilmu Penelitian Indonesia, Candikuning, Baturiti, Tabanan.
2. Pembuatan Simplisia
Buah  Jeruk  Bali  dicuci  di  air  mengalir,  kemudian dikupas  untuk  dipisahkan  dari  kulitnya.  Pada  saat pengupasan  untuk  memisahkan  kulitnya  diusahakan pengirisan  kulit  tidak  terlalu  tebal  sehingga  didapat bagian  kulit  terluarnya.  Kulit  jeruk  bali  yang  sudah dikupas   dicuci diair mengalir dan ditiriskan kemudian ditimbang  untuk  mendapatkan  berat  basah  dari simplisia. Tahap selanjutnya dilakukan perajangan untuk mempercepat  proses  pengeringan.  Simplisia  kemudian di oven dengan menggunakan suhu 50 0 C selama 3 hari hingga  diperoleh  simplisia  kering.  Simplisia  kering kemudian  ditimbang  dan  dihitung  %  LOD.  Simplisia kering  dihaluskan  dengan  cara  diblender  dan  diayak dengan  ayakan mess 80  hingga  diperoleh  serbuk  halus
kemudian dihitung persentase kadar air dan dilanjutkan dengan  pemeriksaan  organoleptis  yang  meliputi  bau, warna dan rasa.
3. Ekstraksi
Sebanyak 250 gram serbuk halus kulit jeruk bali (Citrus maxima  Merr.) dimaserasi  dengan  pelarut  n-heksana dengan  perbandingan  1  :  8  dalam  wadah  kedap  dan tertutup rapat. Proses maserasi berlangsung selama 5 hari  dengan  sesekali  dilakukan  penggojokan  atau pengadukan  untuk  memaksimalkan  proses  penyarian. Maserasi  dilakukan  sebanyak  2  kali  replikasi  dengan perlakuan  yang  sama.  Hasil  maserasi  kemudian disaring  menggunakan  kain  flanel  dan  filtratnya dievaporasi  dengan  menggunakan rotary  evaporator untuk  mendapatkan  ekstrak  kental.  Ekstrak  kental kemudian  ditimbang  dan  dihitung  %  rendemen ekstrak.

## 4. Skrining Fitokimia
Pembuatan  larutan  uji  untuk skrining  fitokimia  dengan melarutkan  500  mg  ekstrak  dalam  50  ml  larutan  yang sesuai,  kemudian  larutan  sampel  tersebut  digunakan untuk pengujian selanjutnya.
a. Alkaloid
Sebanyak 2 ml larutan uji diuapkan diatas penganas air, hingga diperoleh residu. Residu ditambahkan dengan 5 ml  HCl  2N.  Setelah  dingin,  larutan  disaring.  Larutan dibagi ke dalam 3 tabung reaksi.
Tabung ke-1: Blanko
Tabung ke-2: ditambahkan 3 tetes pereaksi dragendroff Tabung  ke-3:  ditambahkan  3  tetes  pereaksi mayer (melalui dinding tabung). Terbentuknya endapan jingga pada  tabung  kedua  dan  endapan  kuning  pada  tabung ketiga menunjukan adanya alkaloid ( Farnsworth ,1966)
b. Flavonoid
Sebanyak 1 ml larutan uji dimasukan kedalam 3 tabung reaksi yaitu :
Tabung ke-1 : Larutan blanko
Tabung  ke-2  :  Ditambahkan  1  ml  larutan  Pb  Asetat 10%
Tabung  ke-3  :  Penambahan  beberapa  tetes  NaOH 20%.  Reaksi  positif  flavonoid  jika  terbentuk  endapan berwarna kuning pada tabung 2. Pada tabung  3 positif flavonoid  terbentuk  larutan  berwarna  kuning (Ugochukwu et al., 2013).
c. Saponin
Sebanyak  5  ml  larutan  uji  dimasukan  kedalam  tabung reaksi Tabung ke-1 : Blanko
Tabung  ke  2  :  Ditambahkan  aquadest  5  ml  dikocok selama  30  detik.  Reaksi  positif  yang  terbentuk  pada tabung 2 terbentuk busa selama 10 menit setinggi 1-10 cm dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes larutan HCL 2N  (Marliana et al., 2005).
d. Triterpenoid/Steroid
Sebanyak 2  mL  zat  ditambahkan  2  mL kloroform,  kemudian  ditambahkan  2  mL  asam asetat  anhidrat  dan  di  tambahkan  2  mL  asam sulfat  pekat  melalui  dinding  tabung.  Terbentuk cincin  berwarna  hijau  kebiruan  menunjukkan adanya  sterol,  sedangkan  jika  terbentuk  cincin kecoklatan  atau  violet  pada  perbatasan  dua pelarut  menunjukkan  adanya  triterpenoid (Jones dan Kinghom, 2006; Evans 2009)
e. Tanin
Sebanyak 1 ml larutan uji ditambahkan dengan larutan besi  (III)  klorida  10%  diaduk  dan  ditambahkan  1  ml asam  sulfat  pekat.  Jika  mengandung  tanin  maka  akan terbentuk  larutan  berwarna  hitam  kehijauan  atau hitam ( Putri et al., 2013)
5. Kromatografi Lapis Tipis
Pada KLT ini meggunakan fase diam Silica G 60 F 254 . Plat KLT dibuat dengan Panjang 10 cm dan lebar 3 cm. a. Identifikasi Senyawa Flavonoid KLT  senyawa  golongan  flavonoid  menggunakan  fase gerak n- butanol : asam asetat : air dengan perbandingan (4:1:5) dan untuk penampakan noda menggunakan uap ammonia.  Pengamatan  akan  di  lakukan  di  UV  254  nm dan  UV  365  nm.  Hasil  menunjukkan  positif  flavonoid
jika  sebelum  diuapkan  dengan  amnonia  memberikan penampakah  noda  berwarna  ungu  gelap,  fluoresensi biru muda, dan tidak tampak. Setelah diuapkan dengan ammonia  akan  memberikan  penampakan  noda berwarna kuning, hijau kuning  atau coklat, biru muda, merah  atau  jingga,  fluoresensi  hijau  kuning,  atau  hijau biru  fluoresensi  biru  muda  terang,  fluoresensi  biru muda  terang  hingga  muda  sesuai  dengan  jenis flavonoidnya (Hanani, 2014)
b. Identifikasi senyawa Tanin
Fase  gerak  yang  digunakan  untuk  mengidentifikasi senyawa  tannin  adalah  methanol  :  air  (6:4)  dengan penampakan noda FeCl 3 5 %, dimana reaksi positif yang terbentuk  adalah  noda  berwarna  hitam  (Banu  & Nagarajan, 2014)
c. Identifikasi Senyawa triterpenoid
Fase  gerak  yang  digunakan  untuk  identifikasi  senyawa triterpenoid  adalah n -hexan  :  etil  asetat  dengan penampakan  noda  menggunakan  pereaksi  anisaldehid asam sulfat (Kristanti,2008 )
d. Identifikasi Senyawa Saponin
Fase  gerak  yang  digunakan  untuk  identifikasi  saponin adalah kloroform ; methanol ; air dengan perbandingan (6,2  ;  4,8;  0,97)  dengan  reaksi  penyemprot  untuk penampakan noda adalah anisaldehida asam sulfat.
6. Pengujian  aktivitas  antioksidan  dengan DPPH (2,2-difenil-1-pikrihidraazil)
a. Pembuatan larutan induk ekstrak kulit buah jeruk bali  konsentrasi  1000  ppm.  Dibuat  larutan  induk ekstrak kulit buah jeruk bali konsentrasi1000 ppm dengan  menimbang  0,050  gram  ekstrak  kental dimasukkan  kedalam  labu  terukur  kemudian ditambahkan  dengan  n-heksan  sampai  50  ml,  lalu dikocok hingga homogen. Dari larutan induk 1000 ppm dipipet 5 ml dimasukkan dalam labu terukur 50  ml,  kemudian  tambahkan  denga  n-heksana sampai  tanda  batas  sehingga  diperoleh  larutan baku 100 ppm.
b. Pembuatan larutan ekstrak n- hexan kulit jeruk bali dengan konsentrasi 5, 15, 30, 40,50 ppm
c. Pembuatan larutan baku induk DPPH konsentrasi 100  ppm.  Ditimbang  sebanyak  10  mg  serbuk DPPH dimasukkan kedalam labu tentukur 100 ml ditambahkan n -heksana    hingga  100  ml,  dikocok hingga homogen.
d. Pembuatan larutan DPPH konsentrasi 40ppm Dari  larutan  baku  DPPH  100  ppm  dipipet sebanyak 20 ml dimasukkan kedalam labu terukur 50  ml  dan  ditambahkan  n-heksana  sampai  tanda batas, dikocok hingga homogen
e. Pengukuran absorbansi DPPH Larutan  DPPH  40  ppm  dipipet  sebanyak  2  ml dimasukkan  kedalam  botol  vial  yang  sudah dibungkus dengan alumunium foil dan ditambahkan  2  ml  n-heksana,  dikocok  dan didiamkan  selama  30  menit  selanjutnya, dimasukkan  kedalam  kuvet,  kemudian  diamati dengan  spektrofotometer  UV-Vis  absorbansinya pada panjang gelombang maksimum
f. Pengukuran aktivitas peredaman radikal bebas Larutan  DPPH  40  ppm  dipipet  sebanyak  2  ml dimasukkan  kedalam  botol  vial  yang  sudah dibungkus dengan alumunium foil dan ditambahkan  2  ml  larutan  uji  dari  masing-masing konsentrasi,  dikocok  hingga  homogen,  kemudian didiamkan  selama  30  menit.  Setelah  itu  diamati absorbansinya pada gelombang maksimum dengan spektrofotometer  UV-Vis.  Hasil  absorbansi tersebut  dilakukan  perhitungan  presentase peredaman dengan rumus :
% Inhibisi =
x 100%
Keterangan : Absorbansi kontrol = absorbansi DPPH Absorbansi sampel = absorbansi ekstrak uji + DPPH

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Determinasi Tanaman
Hasil  determinasi  tanaman  yang  dilakukan  di  Balai Konservasi Tumbuhan Kebun Raya “Eka Karya” Bali Lembaga  Ilmu  Penelitian  Indonesia,  Candikuning, Baturiti,  Tabanan  membuktikan  bahwa  benar tanaman yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah tumbuhan  Jeruk  Bali  dengan  nama  latin Citrus maxima (Burm.) Merr . berasal dari suku Rutaceae dan termasuk ke dalam keluarga Citrus.
2. Pembuatan Simplisia
Sebanyak  3100  gram  kulit  buah  jeruk  bali  segar setelah  dilakukan  pengeringan  menghasilkan  simplisia kering dengan berat 889 gram.
3. Ekstraksi
Ekstraksi dilakukan dengan menggunakan metode maserasi selama 5 hari. Dari hasil maserasi  sebanyak 250 gram serbuk simplisia kulit buah jeruk bali  dalam beberapa  kali  replikasi  diperoleh  ekstrak  kental sebanyak  1,5  gram  dengan  persentase  rendemen sebanyak 0,6 %.
4. Pemeriksaan organoleptis
Serbuk:  bau  khas  kulit  jeruk warna  coklat  muda rasanya pahit dan ekstrak kental, berwarna coklat tua, bau khas.
5. Skrining fitokimia
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Senyawa Pereaksi Hasil Pengamatan Flavonoid Serbuk  Mg  dan HCl Pekat Terbentuk larutan berwarna merah (Positif) Alkaloid Dragendrof Mayer Endapan jingga (positif) Endapan Putih (positif) Triterpenoid dan steroid Kloroform + asam asetat  anhidrat  + asam  sulfat  pekat melalui dinding tabung Steroid    Terbentuk Cincin  berwarna  hijau kebiruan (positif) Triterpenoid terbentuk cincin kecoklatan (positif) Tanin FeCl 3 10% Terbentuk warna hitam kehijauan (positif) Saponin Aquadest Timbul  busa  saat  di kocok  tetapi  perlahan mengilang (negatif)

## 6. Hasil analisis Kromatografi Lapis Tipis
a. Flavonoid
Keterangan    gambar  1 :  (a)  pengamatan  pada  sinar  tampak,  (b) pengamatan pada  sinar  UV  365  nm, (c) pengamatan pada  sinar  UV 254 nm, (d) pengamatan pada sinar tampak setelah diuapkan dengan ammonia(e)  pengamatan  pada  sinar  UV  365  nm  setelah  diuapkan dengan  ammonia,  (f)  pengamatan  pada  sinar  UV  254  nm  setelah diuapkan denganammonia.
Tabel 2. Nilai Rf Hasil Elusi Ekstrak dengan Fase gerak BAA (4:1:5)
Rf Sesudah Elusi Sesudah Diuapkan Ammonia Visual UV (nm) Visual UV (nm) 365 254 365 254 0,662  Kuning  Biru  Hitam Kuning kehitaman Fluorens i Biru Hitam 0,875  Kuning  Merah Kuning kehitaman Kuning Kemera han b. Tanin
Keterangan  gambar 2 : (a) pengamatan pada sinartampak, (b) pengamatan pada sinar UV 365 nm, (c) pengamatan pada sinar UV 254  nm,  (d)  pengamatan  pada  sinar  tampak  setelah  disemprot denganFeCl 3, (e)  pengamatan  pada  sinar  UV  365  nm  setelah disemprot  dengan  FeCl 3 ,  (f)  pengamatan  pada  sinar  UV  254  nm setelah disemprot denganFeCl 3.
Tabel 3. Nilai Rf Hasil Elusi Ekstrak dengan Fase Gerak
Metanol dan Air dengan Perbandingan (6:4)
Rf Sesudah Elusi Sesudah Diuapkan Ammonia Visual UV (nm) Visual UV (nm) 365 254 365 254 0,375  Tidak tampak Fluore sensi Biru muda Hitam Tidak tampak Fluorens i Biru Hitam 0,712 Fluores ensi hijau kebirua n

## c. Steroid
Keterangan  gambar 3 : (a) pengamatan pada sinartampak, (b) pengamatan pada sinar UV 365 nm, (c) pengamatan pada sinar UV 254  nm,  (d)  pengamatan  pada  sinar  tampak  setelah  disemprot dengan  disemprot Liebermen  Burchard ,  (e)  pengamatan  pada  sinar UV 365 nm setelah disemprot Liebermen Burchard , (f) pengamatan pada sinar UV 254 nm setelah disemprot Liebermen Burchard . Tabel 4. Nilai Rf Hasil Elusi Ekstrak dengan Fase Gerak Kloroform dan Methanol dengan Perbandingan (9:1)
Rf Sesudah Elusi Sesudah Diuapkan Ammonia Visual UV (nm) Visual UV (nm) 365 254 365 254 0,5 kuning Biru kemer ahan Hitam Kuning Biru muda Hitam 0,637 - biru - - - - 0,787 - Biru muda - - - - 0,875 - Biru muda Hitam - - - 1,0 - Merah kebiru an Hitam - - -

## d. Saponin
Keterangan  gambar 4 : (a) pengamatan pada sinartampak, (b) pengamatan  pada  sinar  UV  365nm,  (c)  pengamatan  pada  sinar UV254nm,  (d)  pengamatan  pada  sinar  tampak  setelah  disemprot dengan anisaldehid-asam sulfat (e) pengamatan pada sinar UV 365 nm setelah disemprot anisaldehid-asam sulfat, (f) pengamatan pada sinar UV 254 nm setelah disemprot anisaldehid-asam sulfat Tabel.  5.  Nilai  Rf  Hasil  Elusi  Ekstrak  Dengan  Fase  Gerak Kloroform,  Methanol,  Dan  Air  Dengan  Perbandingan (6,2:4,8:0,97)
Rf Sesudah Elusi Sesudah Diuapkan Ammonia Visual UV (nm) Visual UV (nm) 365 254 365 254 0,85  Kuning  Biru muda Hitam Kuning Biru muda Hitam 0,93 Biru muda Biru muda

## e. Triterpenoid
Keterangan    gambar  5 :  (a)  pengamatan  pada  sinar  tampak,  (b) pengamatan  pada  sinar  UV  365nm,  (c)  pengamatan  pada  sinar UV254nm,  (d)  pengamatan  pada  sinar  tampak  setelah  disemprot dengan anisaldehid-asam sulfat (e) pengamatan pada sinar UV 365 nm setelah disemprot anisaldehid-asam sulfat, (f) pengamatan pada sinar UV 254 nm setelah disemprot anisaldehid-asam sulfat.
Tabel 6. Nilai Rf Hasil Elusi Ekstrak Dengan Fase Gerak N- Heksana Dan Etil Asetat Dengan Perbandingan (16:4)
Rf Sesudah Elusi Sesudah Diuapkan Ammonia Visual UV (nm) Visual UV (nm) 365 254 365 254 0,037  Kuni ng Biru muda -  Kuni ng Biru muda Hitam 0,087 - Biru keunguan - - Biru muda - 0,112 - Biru keunguan - - Biru Kehijauan - 0,2 - Biru muda  Hitam - Biru muda - 0,262 - Ungu - - Ungu Kekuninga n - 0,337 - Ungu kekuninga n - - Ungu - 0,412 - Merah - - Ungu muda - 0,462 - Ungu Hitam - Biru muda - 0,537 - Hitam - - Ungu - 0,587 - Ungu - - Biru Kemeraha n 0,675 - Hitam - Ungu Kemeraha n T abel 7. Hasil pengujian  menggunakan metode DPPH Sample Konsentrasi ( ppm ) Absorbansi % Peredaman Ekstrak kulit buah jeruk bali 5 0,418 4,35 15 0,397 9,15 30 0,366 16,25 40 0,346 20,82 50 0,338 22,65 IC50 = 111,69 ppm Trolox 5 0,306 29,98 15 0,229 47,60 30 0,120 72,54 40 0,062 85,81 50 0,035 91,99 IC50 = 17,04 ppm
Dari data presentase peredaman dibuat kurva regresi linier yang dapat dilihat pada gambar berikut :

## Gambar 6. Kurva Hasil Pengujian Antioksidan Trolox dan Ekstrak n-Hexan Kulit Jeruk Bali Menggunakan Metode DPPH
Sesuai dengan kurva  diatas, terdapat hubungan antara konsentrasi  sampel  uji  dengan  presentase  peredaman yaitu  didapatkan  persamaan  regresi  ekstrak  y  = 0,4224x + 2.8183, dengan nilai R² = 0,9848 dan trolox y  =  1,4212x  +  25.789  dengan  nilai  R²  =  0,9784.  Dari persamaan tersebut dilakukan perhitungan IC 50 dengan mengganti nilai y = 50. Hasil yang diperoleh yaitu nilai IC 50 ekstrak  kulit  jeruk  bali  adalah  111,69  ppm  dan IC 50 trolox  sebagai  pembanding  atau  kontrol  positif adalah 17,04 ppm.

## PEMBAHASAN
Pemanfaatan  kulit  jeruk  bali  masih  sangat  terbatas  di Indonesia  sehingga  perlu  dilakukan  kajian  terkait  cara pemanfaatan  limbah  kulit  jeruk  bali  baik  sebagai  obat tradisional  maupun  sebagai  kosmetik  dan  bahan makanan.  Spesies  genus  citrus  yang  paling  banyak tumbuh di daerah Bali adalah Citrus maxima atau jeruk bali.  Jumlah  limbah  kulit  jeruk  bali  saat  ini  semakin banyak namun tidak diimbangi dengan cara pengolahan dan pemanfaatannya.
Determinasi  tanaman  dilakukan  untuk  membuktikan kebenaran  bahan  yang  digunakan  pada  penelitian. Identifikasi  tanaman  dilakukan  di  Balai  Konservasi Tumbuhan Kebun Raya “Eka Karya” Bali Lembaga Ilmu Penelitian  Indonesia,  Candikuning,  Baturiti,  Tabanan. Hasil  identifikasi  diketahui  bahwa  tanaman  yang digunakan  adalah  tumbuhan  jeruk  bali  dengan  nama latin Citrus  maxima  (Burm.)  Merr berasal  dari  suku Rutaceae dan termasuk ke dalam keluarga Citrus. Kulit buah  jeruk  bali  yang  digunakan  diperoleh  dari  kebun warga  di  Kabupaten  Klungkung,  dengan  buah
berbentuk  bulat,  warna  hijau  kekuningan.  Simplisia hasil  pengeringan  dihaluskan  untuk  proses  ekstraksi menggunakan  metode  maserasi.  Metode  maserasi merupakan metode penyarian yang sederhana, mudah, dan  tanpa  melalui  proses  pemanasan,  sehingga kemungkinan  rusaknya  komponen  senyawa  kimia dapat  diminimalisir.  Pemilihan  metode  maserasi dikarenakan  terdapat  kandungan  kimia  yang  ada didalam kulit buah jeruk bali (Citrus maxima Merr.) yang mudah  rusak  jika  dilakukan  pemanasan.  Pada  saat maserasi,  konsentrasi  lingkungan  luar  sel  lebih  tinggi daripada  konsentrasi  dalam  sel,  sehingga  isi  sel termasuk  zat  aktif  atau  metabolit  sekunder  yang terkandung di dalamnya akan keluar dan terlarut dalam pelarut  (Yulianti et  al., 2011).  Keuntungan  cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan dan peralatan  yang  digunakan  sederhana  serta  mudah diperoleh.  Proses  penyarian  dilakukan  dengan  cara merendam  sejumlah  serbuk  simplisia  dalam  cairan penyari.  Cairan  penyari  akan  menembus  dinding  sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif.  Zat  aktif  akan  terlarut  dalam  cairan  penyari kemudian akan terdesak keluar sel dikarenakan adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif dengan cairan di luar sel. Peristiwa tersebut berlangsung terus menerus hingga terjadi keseimbangan antara larutan di luar sel dan di dalam sel (Dianingati et al., 2013).
Ekstraksi  menggunakan  pelarut n- hexan  dengan mempertimbangkan  apakah  dengan  menggunakan pelarut  non  polar  senyawa  aktif  yang  terkandung dalam kulit jeruk bali dapat tersari. Selain itu n -heksana dimanfaatkan  sebagai  pelarut  karena  sifatnya  yang inert,  tidak  bereaksi  dengan  komponen  yang  akan diekstraksi  (Kristanti,  2008).  Pelarut n -heksana  biasa digunakan untuk mengekstrak minyak dan lemak yang memiliki  kepolaran  yang  sama  (Aziz et  al., 2015). Pelarut n -heksana  merupakan  salah  satu  pelarut  yang baik  untuk  mengekstraksi  senyawa-senyawa  yang bersifat  non  polar.  Hasil  rendemen  ekstrak  yang dihasilkan  sebesar  0,6%.  Beberapa  faktor  yang
diperkirakan  mempengaruhi  hasil  rendemen  adalah metode  ekstraksi  yang  digunakan,  ukuran  partikel sampel,  kondisi  dan  waktu  penyimpanan,  lama  waktu ekstraksi,  perbandingan  jumlah  sampel  terhadap jumlah  pelarut  yang  digunakan  dan  jenis  pelarut  yang digunakan  (Salamah et  al., 2008).  Proses  penarikan bahan  (ekstraksi)  terjadi  dengan  mengalirnya  bahan pelarut  ke  dalam  sel  yang  menyebabkan  protoplasma membengkak,  dan  bahan  yang  terkandung  dalam  sel akan terlarut sesuai dengan kelarutannya (Voight, 1995 ). Daya melarutkan yang tinggi ini berhubungan dengan kepolaran  pelarut  dan  kepolaran  senyawa  yang diekstraksi.  Tumbuhan  mengandung  banyak  senyawa fenolik,  senyawa  fenolik  ini  memiliki  sifat  yang cenderung larut dalam pelarut polar (Harbone, 1987). Hasil pemeriksaan organoleptik dari serbuk kulit buah jeruk  bali  diperoleh  serbuk  kulit  buah  jeruk  bali berbentuk  serbuk,  berwarna  coklat  muda,  rasa  pahit dan  berbau  khas  jeruk.  Ekstrak  yang  diperoleh berbentuk  kental  biasanya  disebabkan  karena  adanya kandungan air antara 20-25% pada ekstrak (Depkes RI, 1995).  Warna coklat tua pada ekstrak kulit buah jeruk bali  dikarenakan  kulit  buah  jeruk  bali  mengandung senyawa flavonoid. Flavonoid teroksidasi oleh oksigen sehingga  warna  produk  menjadi  coklat  (Rejeki et  al., 2012).  Rasa  pahit  pada  ekstrak  kulit  buah  jeruk  bali dikarenakan  adanya  kandungan  senyawa  tanin. Senyawa  tanin  menyebabkan  rasa  sepat  ketika dikonsumsi  karena  terbentuknya  ikatan  silang  antara tanin  dan  protein  di  rongga  mulut  (Ajeng  &  Asngad, 2016).  Bau  khas  dari  ekstrak  kulit  buah  jeruk  bali berasal dari senyawa limonen dan minyak aktsiri yang memberikan  bau  khas  pada  ekstrak  kulit  buah    jeruk bali (Yustinah, 2016).
Pada  identifikasi  flavonoid  menggunakan  uji  wilstater yaitu  penambahan  serbuk  magnesium  dan  HCl  pekat pada  ekstrak.  Penambahan  serbuk  magnesium  dan asam  klorida  pada  pengujian  flavonoid  akan menyebabkan  tereduksinya  senyawa  flavonoid  yang ada  sehingga  menimbulkan  reaksi  warna  merah  yang
merupakan  ciri  adanya  flavonoid  (Robinson,  1983). Magnesium  dan  asam  klorida  bereaksi  membentuk gelembung-gelembung  yang  merupakan  gas  H 2 , sedangkan  logam  Mg  dan  HCl  pekat  pada  uji  ini berfungsi  untuk  mereduksi  inti  benzopiron  yang terdapat  pada  struktur  flavonoid  sehingga  terbentuk perubahan  warna  menjadi  hijau  (Prashant,  2011). Flavonoid  merupakan  senyawa  polifenol  yang  banyak terdapat  dalam tumbuh-tumbuhan. Untuk mengetahui kandungan  flavonoid  maka  dilakukan  Uji  wilstater sianidin,  jika  terjadi  perubahan  warna  maka  positif mengandung flavonoid (Harbone, 1987). Pada skrining identifikasi  saponin  menggunakan  uji  forth  dengan melihat terbentuknya busa dan dapat bertahan selama 10 menit. Timbulnya busa pada uji forth menunjukkan adanya  saponin  yang  mempunyai  kemampuan membentuk  buih  dalam  air  yang  terhidrolisis  menjadi glukosa  dan  senyawa  lainnya  (Marliana et  al., 2005).
Hasil pada pengujian saponin tidak terbentuk busa. Pada  identifikasi  kandungan  senyawa  alkaloid  melalui reaksi  tabung  ekstrak  dan  serbuk  kulit  jeruk  bali memberikan hasil positif. Prinsip dasar reaksi ini adalah reaksi  pengendapan  dimana  terjadi  pergantian  ligan. Atom  nitrogen  yang  mempunyai  pasangan  elektron bebas  pada  alkaloid  dapat  mengganti  ion  iodo  dalam pereaksi-pereaksi.  Pereaksi dragendorff mengandung bismut  nitrat  dan  kalium  iodida  dalam  larutan  asam asetat glasial (kalium tetraiodobismutat (III)) sedangkan pereaksi mayer mengandung kalium iodida dan merkuri klorida  (kalium  tetraiodomerkurat  (II)).  Hasil  positif alkaloid  pada  uji mayer ditandai  dengan  terbentuknya endapan  putih.  Diperkirakan  endapan  tersebut  adalah kompleks  kalium-alkaloid.  Pada  pembuatan  pereaksi mayer ,  larutan  mercuri  (II)  klorida  ditambah  kalium iodida  akan  membentuk  endapan  merah  mercuri  (II) iodida.  Jika  kalium  iodida  yang  ditambahkan  berlebih maka  akan  terbentuk  kalium  tetraiodomerkurat(II) (Shevla,  1985  ).  Alkaloid  mengandung  atom  nitrogen yang  mempunyai  pasangan  elektron  bebas  sehingga dapat  digunakan  untuk  membentuk  ikatan  kovalen
koordinat  dengan  ion  logam  (Malangingi et  al., 2012 )(Sangi et  al., 2019).  Pada  uji  alkaloid  dengan pereaksi  Mayer,  diperkirakan  nitrogen  pada  alkaloid akan  bereaksi  dengan  ion  logam  K+  dari  kalium tetraiodomerkurat  (II)  membentuk  kompleks  kalium- alkaloid yang mengendap.
Pada  pengujian  steroid  dan  triterpenoid,  analisis senyawa  didasarkan  pada  kemampuan  senyawa tersebut  membentuk  warna  dengan  H 2 SO 4 pekat dalam pelarut anhidirid asam asetat (Sangi et al. , 2019). Hasil yang diperoleh menunjukkan hasil positif dengan terbentuknya  cincin  berwarna  biru  kehijauan mengandung  senyawa  steroid  dan  cincin  berwarna kecoklatan yang menunjukkan kandungan triterpenoid. Pada  skrining  tanin,  pereaksi  besi  (III)  klorida digunakan  secara  luas  untuk  mengidentifikasi  senyawa tanin.  Pengujian  tanin  dilakukan  dengan  melakukan penambahan FeCl 3 10% diperkirakan akan menimbulkan  warna  biru  tua,  biru  kehitaman  atau hitam  kehijauan  (Malangngi et  al., 2012).  Hasil  yang diperoleh  pada  ekstrak  kulit  jeruk  Bali  adalah terbentuknya  warna  hijau  kehitaman.  Terbentuknya warna hijau pada ekstrak setelah ditambah FeCl 3 10% karena  tannin  akan  bereaksi  dengan  ion  Fe 3+ membentuk senyawa kompleks (Harbone, 1987). Saponin  merupakan  senyawa  yang  mempunyai  gugus hidrofilik  dan  hidrofobik.  Saponin  pada  saat  digojok terbentuk  buih  karena  adanya  gugus  hidrofil  yang berikatan  dengan  air  sedangkan  hidrofob  akan berikatan  dengan  udara.  Pada  struktur  misel,  gugus polar  menghadap  ke  luar  sedangkan  gugus  non-polar menghadap  ke  dalam.  Keadaan  ini  yang  membentuk busa,  namun  dalam  analisis  ini  sampel  tidak  memiliki saponin  karena  tidak  memiliki  kemampuan  untuk membentuk busa (Sangi et al., 2019).
Untuk  mempertegas  hasil  skrining  pengujian dilanjutkan  dengan  analisis  kromatografi  lapis  tipis (KLT),  meliputi  senyawa  ﬂavonoid,  tannin,  saponin, dan  terpenoid/steroid.  Deteksi  bercak  KLT  dapat diihat secara ﬁsika pada lampu UV 254 nm dan 365 nm
dan  secara  kimia  dengan  menggunakan  pereaksi semprot.  Pada  lampu  UV  254  nm,  lempeng  akan berﬂuoresensi  sedangkan  sampel  akan  tampak berwarna  gelap/hitam.  Penampakan  noda  pada  lampu UV  254  nm  dan  365  nm  adalah  karena  adanya  daya interaksi antara sinar UV dengan indikator fluoresensi yang  terdapat  pada  lempeng.  Fluoresensi  cahaya  yang tampak  merupakan  emisi  cahaya  yang  dipancarkan oleh  komponen  tersebut  ketika  elektron  yang tereksitasi  dari  tingkat  energi  dasar  ke  tingkat  energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke keadaan semula sambil  melepaskan  energi.  Selain  itu,  nilai  Rf  juga ditentukan, dimana nilai Rf dapat dijadikan bukti dalam identiﬁkasi  senyawa.  Bila  nilai  Rf  memiliki  nilai  yang sama maka senyawa tersebut dapat dikatakan memiliki karakteristik  yang  sama  atau  mirip    dengan pembandingnya.  Namun  pada  penelitian  ini  tidak menggunakan  pembanding  sehingga  pembuktiannya berdasarkan  kajian  literature.  Nilai    Rf    merupakan perbandingan  jarak  yang  ditempuh  eluen  dan  fase gerak   pada   plat   KLT.  Nilai  Rf   digunakan  sebagai nilai    perbandingan    relatif    antar    sampel.    Senyawa yang  memiliki  Rf  yang  lebih  besar  berarti  memiliki kepolaran  yang  rendah,  begitu  juga  sebaliknya.  Jika  Rf terlalu  tinggi,  maka  kepolaran  eluen  harus  dikurangi. Sebaliknya  jika  Rf  terlalu  rendah  maka  kepolaran eluen  harus  ditambah  (Gandjar  &  Rohman,  2007). Identifikasi  suatu  senyawa  dapat  dilihat  dari  nilai  Rf dimana jika suatu senyawa polar akan mempunyai hRf kecil  dan  senyawa  non-polar  akan  menghasilkan  hRf besar
Uji  KLT  pada  senyawa  flavonoid  menggunakan  fase diam  Silika  G 60 F 254 dengan  fase  gerak  menggunakan fase  gerak  n-butanol  :  asam  asetat  glasial  :  air  (4:1:5) terdapat  2  spot  warna  pada  Rf  0,662,  0,875. Berdasarkan  hubungan  antara  bercak  warna  dengan senyawa  flavonoid  dapat  dilihat  pada  warna  yang dihasilkan  yang  terlihat  pada  sinar  UV  dan  diperkuat dengan  reaksi  penyemprot  menggunakan  uap ammonia.  Pada  umumnya  jika  diamati  menggunakan
sinar  UV  senyawa  flavonoid  akan  memberikan  warna ungu  gelap,  fluorensi  biru  muda,  dan  tidak  nampak. Pada  sinar    UV  365  nm  terdapat  spot  warna  merah pada  Rf  0,875.  Setelah  penguapan  dengan  amonia dengan  sinar  UV  pada  panjang  gelombang  365  nm terbentuk noda yang berwarna kuning kemerahan. Hal ini    sesuai    dengan    penelitian    Ghosal  dan  Mandal (2012)  yang  menyatakan  bahwa  nilai  Rf  0,85-0,87 diasumsikan    sebagai    senyawa    flavonoid    karena menunjukkan warna merah dan berﬂuoresensi kuning setelah  dihidrolisis,  senyawa  yang  diduga  adalah flavonol.  Aktivitas  sebagai  antioksidan  dimiliki  oleh sebagian besar ﬂavonoid karena adanya gugus hidroksi fenolik  dalam  struktur  molekulnya  (Hakim et  al., 2017).  Senyawa  flavonoid  jenis  flavonol  akan berfluoresensi kuning, kuning redup atau jingga apabila diamati pada sinar UV 365 nm (Marliana et al., 2005). Hal  ini  menunjukan  adanya  senyawa  flavonoid  dalam ekstrak kulit buah jeruk bali.
Identifikasi    tanin  pada  ekstrak  kulit  buah  jeruk  bali dengan  menggunakan  fase  gerak  metanol  dan  air dengan  perbandingan  (6:4)  diperoleh  2  spot  yaitu dengan  Rf 0,375, 0,7125. Pada UV 365 nm terbentuk noda berwarna fluorensi hijau kebiruan, dengan nilai Rf 0,7125  setelah  disemprot  FeCl 3 3  %  dalam  etanol terbentuk spot noda fluorensi biru pada UV 365 nm, hal ini menunjukkan adanya senyawa  golongan tannin. Senyawa  tannin  dapat  dilihat  dari  bercak  biru kehitaman  yang  dihasilkan  setelah  disemprot dengan FeCl3  5%.  Tannin  merupakan  senyawa  yang berpotensi  sebagai  antioksidan  (Banu  &  Nagarajan, 2014).
KLT  triterpenoid ekstrak kulit buah jeruk bali dengan menggunakan  fase  gerak  n-heksana  dan  etil  asetat dengan  perbandingan  (16:4)  diperoleh  5  spot  noda dengan  kemungkinan  Rf  0,5  merupakan  golongan triterpeoind  karena  setelah  penyemprotan  dengan pereaksi Liebermann burchard memberikan warna biru muda  agak  kehijauan  di  sinar  UV  365  dan  UV  254 membentuk  warna  kuning.    Reaksi  positif  ditandai
Elisabeth  Oriana  Jawa  La,  Repining  Tiyas  Sawiji,  Ni  Made  Rai  Yuliani.  2021. Identification  Of  Secondary  Metabolite  Content  And Antioxidant Activity Tests Of N-Hexan Extract Of Grapefruit Peel (Citrus maxima Merr.).
dengan  adanya  noda  berwarna  hijau  biru  (Kristanti, 2008 ).
Pada  identifikasi  senyawa  saponin  ekstrak  kulit  buah jeruk bali dengan menggunakan fase gerak kloroform, methanol,  dan  air  dengan  perbandingan  (6,2  :  4,8  : 0,97).    Pada  sinar  UV  365  nm  terbentuk  spot  noda berwarna  biru  muda,  dengan  nilai  Rf  0,85  disemprot penampak  noda  Anisaldehid-asam  sulfat  terbentuk spot  noda  biru  muda  pada  sinar  UV  dengan  panjang gelombang  365  nm.  Saponin  jika  dideteksi  dengan pereaksi  semprot  anisaldehid-asam  sulfat  akan memberikan  warna  biru  sampai  biru  violet  terkadang berupa  bercak  warna  merah,  kuning,  biru  tua,  ungu, hijau,  atau  berupa  kuning  coklat  pada  sinar  tampak. Saponin  tanpa  perlakuan  kimia  (pereaksi  semprot)  di bawah  sinar  UV  254  nm  tidak  terjadi  pemadaman bercak  dan  di  bawah  sinar  UV  365  nm  bercak  tidak berfluorosensi (Wagner & Bladt, 1996). Dari hasl KLT yang  nampak  adalah  bercak  biru  agak  muda  sehingga kemungkinan tidak mengandung saponin.
Uji aktivitas antioksidan secara kuantitatif menggunakan  metode  DPPH  dipilih  karena  ujinya sederhana,  mudah,  cepat  dan  peka  serta  hanya memerlukan sedikit sampel (Hanani, 2014). Kelemahan dari metode ini adalah radikal DPPH hanya dapat  dilarutkan  dalam  media  organik,  tidak  pada media  yang  bersifat  air  sehingga  membatasi kemampuannya  dalam  penentuan  peran  antioksidan hidrofilik. Prinsip dari metode ini adalah adanya donasi atom  hidrogen  (H+)  dari  substansi  yang  diujikan kepada  radikal  DPPH  menjadi  senyawa  non  radikal difenil  pikril  hidrazin  yang  akan  ditunjukkan  oleh perubahan  warna.  Perubahan  warna  yang  terjadi adalah  perubahan  warna  dari  ungu  menjadi  kuning,  di mana  intensitas  perubahan  warna  DPPH  berbanding lurus  dengan  aktivitas  antioksidan  untuk  meredam radikal  bebas  tersebut  (Molyneux,  2004).  Pengukuran aktivitas  antioksidan  sampel  dilakukan  pada  panjang gelombang  508  nm  yang  merupakan  panjang gelombang  maksimum  DPPH.  Adanya  aktivitas
antioksidan  dari  sampel  mengakibatkan  terjadinya perubahan  warna  pada  larutan  DPPH  dalam  metanol yang  semula  berwarna  ungu  pekat  menjadi  kuning pucat  (Permana et  al .,2003). Pengujian  dilakukan  pada panjang  gelombang  maksimum,  karena  pada  panjang gelombang  maksimum  kepekaanya  juga  maksimal  dan perubahan absorbansi untuk setiap satuan konsentrasi adalah  paling  besar  dan  disekitar  panjang  gelombang maksimal,  bentuk  kurva  absorbansi  datar  dan  pada kondisi  tersebut  hukum Lambert-Berr akan  terpenuhi (Gandjar  &  Rohman,  2007).  Persamaan  regresi  yang diperoleh  dari  grafik  hubungan  antara  konsentrasi ekstrak n-heksana kulit buah jeruk bali dengan persen penghambatan  DPPH  digunakan  untuk  mencari  nilai IC 50 .
Besarnya  aktivitas  antioksidan  ditandai  dengan  nilai IC 50 , yaitu konsentrasi larutan sampel yang dibutuhkan untuk  menghambat  50%  radikal  bebas  DPPH  (Regina et  al., 2008).  Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka  aktivitas peredaman  radikal  bebas  semakin  baik  (Molyneux, 2004).  Uji  aktivitas  antioksidan  atau  penghambatan terhadap  radikal  bebas  menggunakan  metode  DPPH menunjukkan  bahwa  ekstrak n- hexan  kulit  buah  jeruk bali  ( Citrus  maxima  Merr.) memiliki  aktivitas  sebagai antioksidan  kategori  sedang.  Adanya  aktivitas antioksidan  pada  kulit  buah  jeruk  bali  karena  kaya adanya  kandungan  senyawa  flavonoid,  alkaloid, terpenoid/steroid, saponin dan tannin (Suryanita et al ., 2019).  Kontrol  positif  yang  digunakan  pada  penelitian ini adalah trolox.Trolox  merupakan antioksidan yang larut  dalam  air.  Penggunaan  kontrol  positif  pada pengujian  aktivitas  antioksidan  ini  adalah  untuk mengetahui  seberapa  kuat  potensi  antioksidan  yang ada pada ekstrak kulit buah jeruk bali jika dibandingkan dengan  trolox.  Apabila  nilai  IC 50 sampel  sama  atau mendekati  nilai  IC 50 kontrol  positif  maka  dapat dikatakan bahwa sampel berpotensi sebagai salah satu alternatif antioksidan yang sangat kuat.
Berdasarkan grafik dapat dilihat bahwa kurva kalibrasi dengan persamaan regresi untuk serapan pembanding
troloks  pada  konsentrasi  5,  15,  30,  40  dan  50  ppm sebesar  y  =  1,4212x  +  25,78  dan  pada  ekstrak  kulit buah  jeruk  bali  diperoleh  persamaan  regresi  y  = 0,4224x + 2,8183 dan diperoleh hubungan yang linier antara serapan dengan konsentrasi. Persamaan regresi linear  nilai  b  yang  positif,  menunjukkan  bahwa  kurva nilai  penghambatan  antioksidan  terjadi  peningkatan. Koefisien  b  merupakan  koefisien  arah  regresi  linear dan menyatakan perubahan rata- rata variabel y untuk setiap perubahan variabel x sebesar satu unit (Sudjana, 1996).  Pada  pengukuran  serapan  pembanding  troloks yang  ditunjukkan  dengan  nilai  koefisien  korelasi  (R) sebesar  0,9784  dan  serapan  ekstrak  kulit  buah  jeruk bali  ditunjukkan  dengan  nilai  koefisien  (R)  sebesar 0,9843  (R)  ini  mendekati  angka  1  yang  menunjukkan bahwa persamaan regresi tersebut adalah linier. Berdasarkan  persamaan  regresi  linier  tersebut  dapat ditentukan  nilai  IC 50 sebesar  111,69  ppm.  Nilai-nilai IC 50 ini menunjukkan bahwa ekstrak tersebut memiliki aktivitas  antioksidan  kategori  sedang,  karena  memiliki nilai  IC 50 antara  100-150  µg/ml(Blois,  1958).  Menurut Cockell  dan  Knowland  (1999)  suatu  senyawa dikatakan  sebagai  peredam  radikal  bebas  atau antioksidan yang sangat kuat jika nilai IC 50 kurang dari 50 ppm kuat (50 ppm-100 ppm), sedang (100 ppm-150 ppm),  dan  lemah  (150  ppm-200  ppm).  Berdasarkan hasil  yang  diperoleh,  ekstrak  kulit  buah  jeruk  bali ( Citrus  maxima  Merr.) menunjukkan  aktivitas antioksidan  kategori  sedang.  Akan  tetapi  apabila dibandingkan  dengan  aktivitas  antioksidan  senyawa pembanding yaitu Trolox yang memiliki nilai IC 50 17,04 ppm, aktivitas antioksidan ekstrak kulit buah jeruk bali ( Citrus maxima Merr.) masih lebih rendah.
Aktivitas penghambatan radikal bebas DPPH ekstrak n- hexan kulit jeruk bali ( Citrus maxima Merr.) ditentukan oleh berbagai senyawa antioksidan yang terdapat pada tumbuhan  tersebut.  Berdasarkan  skrining  fitokimia menunjukkan  bahwa  ekstrak  kulit  buah  jeruk  bali ( Citrus  maxima  Merr.) mengandung  flavonoid  yang diduga memiliki aktivitas antioksidan. Kulit buah jeruk
bali  ( Citrus  maxima  Merr .)  mengandung  senyawa flavonoid  yaitu  naringin  dan  hesperidin  (Choi et  al. , 2007).  Hal  ini  dibuktikan  berdasarkan  penelitian  yang dilakukan  terhadap  kandungan  ekstrak  kulit  jeruk  bali dengan metode kromatografi lapis tipis, terlihat bahwa kandungan  senyawa  flavonoid  yang  terkandung  dalam ekstrak  kulit  buah  jeruk  bali  ( Citrus  maxima  Merr.) yaitu  rutin,  naringin,  dan  hesperidin  (Dianingati et  al., 2013).
Senyawa  flavonoid  pada  strukturnya  mengandung gugus  hidroksil  yang  dapat  mendonorkan  atom hidrogennya  kepada  radikal  bebas,  sehingga  senyawa flavonoid  berpotensi  sebagai  antioksidan.  Flavonoid merupakan senyawa pereduksi yang dapat menghambat  banyak  reaksi  oksidasi.  Flavonoid memiliki  kemampuan  sebagai  antioksidan  karena mampu mentransfer sebuah elektron kepada senyawa radikal  bebas,  dimana  R•  merupakan  senyawa  radikal bebas, Fl-OH merupakan senyawa flavonoid sedangkan Fl-OH•  merupakan  radikal  flavonoid  (Middleton et  al, 2000) . Antioksidan flavonoid bekerja dengan menekan pembentukan  spesies  oksigen  reaktif  dengan menghambat  kerja  enzim  maupun  dengan  mengikat unsur-unsur  yang  terlibat  dalam  produksi  radikal bebas,  peredaman  spesies  oksigen  reaktif,  melindungi antioksidan tubuh(Kumar & Pandey, 2013).
Ekstrak  kulit  buah  jeruk  bali  ( Citrus  maxima  Merr.) menunjukkan  aktivitas  antioksidan  kategori  sedang. Beberapa  faktor  yang  mempengaruhi  peranan  ekstrak sebagai  antioksidan  salah  satunya  adalah  jenis  pelarut yang  digunakan  saat  ekstraksi.  Pelarut  non  polar cenderung  menarik  senyawa  yang  memiliki  sifat  non polar  sehingga  kemungkinan  senyawa  polar  yang terkandung didalam kulit jeruk bali tidak dapat tersari secara maksimal.
Faktor  kedua  yang  menyebabkan  aktivitas  antioksidan kategori  sedang,  karena  senyawa  flavonoid  dalam ekstrak kulit buah jeruk bali adalah senyawa flavonoid masih  dalam  bentuk  ekstrak  murni  dan  bukan  dalam bentuk  isolatnya  sehingga  senyawa  flavonoid  yang
terdapat  dalam  ekstrak  kemungkinan  masih  berikatan dengan  gugus  glikosida  dimana  gugus  glikosida  yang berikatan  dengan  flavonoid  dapat  menurunkan aktivitas  antioksidan.  Aktivitas  antioksidan  akan meningkat  dengan  bertambahnya  gugus  hidroksil  dan akan  menurun  dengan  adanya  gugus  glikosida (Fukumoto & Mazza, 2000). Senyawa flavonoid di alam umumnya  sangat  jarang  ditemukan  dalam  bentuk aglikon  flavonoid.  Flavonoid  dalam  tumbuhan  sering terdapat  sebagai  glikosida  (flavonoid  glikosida)  dan jarang sekali ditemukan dalam bentuk tunggal/ aglikon flavonoid, oleh karena itu untuk menganalisis flavonoid lebih  baik  untuk  menghidrolisis  glikosida  yang  terikat pada  flavonoid  tersebut  sebelum  memperhatikan kerumitan  glikosida  yang  mungkin  terdapat  dalam ekstrak asal (Harbone, 1987). Berdasarkan hasil reaksi skrining  fitokimia,  dimana  setelah  dilakukan  pengujian wilstater  dengan  menggunakan  HCl  dan  Mg,  ekstrak yang semula berwarna ungu kemudian berubah warna menjadi  warna  merah  tua  setelah  pengujian  wilstater tersebut.Warna  asal  ekstrak  yang  semula  berwarna ungu  diduga  masih  mengandung  gugus  glikosida sedangkan  warna  merah  ekstrak  setelah  dilakukan  uji wilstater menandakan bahwa senyawa flavonoid dalam ekstrak  sudah  berada  dalam  bentuk  aglikonnya. Adanya gugus OH yang termetilasi atau terikat dengan glikosida,  menyebabkan    flavonoid    tersebut  tidak dapat teridentifikasi dengan pereaksi yang bersifat basa seperti  Mg,  amoniak,  NaOH,  AlCl3,  dan  sitroborat (Robinson, 1983). Untuk itu perlu dilakukan hidrolisis glikosida  dari  flavonoid  glikosida.  Mekanisme  reaksi hidrolisis glikosida dari flavonoid yang mungkin terjadi pada  pengujian  wilstater  dengan  menggunakan  reagen HCl  dan  Mg.  Penambahan  HCl  bertujuan  untuk menghidrolisis  flavonoid  menjadi  aglikon  flavonoid dengan  cara  menghidrolisis  o-glikosil.  Glikosil  yang terhidrolisis ini akan tergantikan dengan atom H+ dari asam yang memiliki sifat ke-elektronegatifan yang kuat. Serbuk  Mg  yang  ditambahkan  menghasilkan  senyawa kompleks  yang  berwarna  merah.  Ion  magnesium  ini
diduga akan berikatan dengan senyawa flavonoid  yang terdapat  pada  ekstrak  sehingga  muncul  larutan  yang berwarna merah.
Faktor  ketiga  yang  menyebabkan  aktivitas  antioksidan ekstrak  kulit  buah  jeruk  bali  dalam  kategori  sedang yaitu diduga senyawa yang terkandung didalam ekstrak kulit  buah  jeruk  bali  kemungkinan  adalah  flavonoid golongan  flavonon.  Dugaan  bahwa  terdapat  senyawa flavonon  didalam  ekstrak  kulit  buah  jeruk  bali  ini berdasarkan  hasil  skrining  fitokimia  dari  ekstrak  kulit buah  jeruk  bali.  Senyawa  flavonon  memiliki  ciri  khas berwarna merah kuat bila direaksikan dengan Mg/HCl (Harbone,  1987).  Senyawa  flavonon  pada  umumnya memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  lemah  (Burda  & Olezek,  2001).  Faktor  yang  menyebabkan  lemahnya aktivitas  antioksidan  pada  senyawa  flavonon  pada umumnya  disebabkan  oleh  gugus  hidroksil  yang terdapat pada struktur senyawa flavonon hanya sedikit dan pada cincin C flavonon tidak memiliki ikatan ganda pada  ikatan  2-3  gugus  4-okso,  sehingga  kemungkinan besar  untuk  menstabilkan  struktur  senyawanya  yang kehilangan  elektron  dari  proses  donor    hidrogen dalam struktur senyawa flavonon tidak terjadi dengan demikian senyawa golongan  flavonon  pada  umumnya memiliki  potensi aktivitas antioksidan yang lemah.

## KESIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian diatas adalah: Ekstrak n- hexan  kulit  buah  jeruk  bali  ( Citrus  Maxima Merr. )  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder berupa  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  steroid  dan triterpenoid.
Ekstrak n- hexan  kulit  buah  jeruk  bali  ( Citrus  Maxima Merr. ) memiliki aktivitas antioksidan secara spektrofotometri  UV-Vis  dengan  nilai  IC 50 sebesar 111,69  ppm  dan  pada  trolox  17,04  ppm  sebagai pembanding. Ekstrak kulit buah jeruk bali dikategorikan sebagai antioksidan sedang.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kepada seluruh sivitas akademika STF  Mahaganesha  ,  laboran  dan  seluruh  pihak  yang turut  serta  terlibat  aktif  dalam  membantu  proses penelitian dari awal hingga selesainya penelitian ini.

## REFERENSI
1. Andriani  Y.  2007.  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak Betaglukan Dari Saccharomyces Cerevisiae. Gradien [Internet]. 3(1):226–30.
2. Onkar, P., Bangar, J., & Karodi, R. 2012. Evaluation of  Antioxidant  activity  of  traditional  formulation Giloy  satva  and  hydroalcoholic  extract  of  the Curculigo  orchioides  Gaertn. Journal  of  Applied Pharmaceutical Science , 2 (7), 29.
3. Kuntorini,  E.  M.,  Astuti  M.  D.  2010.  Penentuan Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Bulbus Bawang  Dayak  (Eleutherine  americana  Merr.). Sains Dan Terapan Kimia. Volume. 4(1), 15–22.
4. Winarsi,  H.  2007. Antioksidan  alami  dan  radikal . Kanisius.
5. Astuti,  S.  2012.  Isoflavon  kedelai  dan  potensinya sebagai penangkap radikal bebas. Jurnal Teknologi & Industri Hasil Pertanian , 13 (2), 126-136.
6. Tristantini,  D.,  Ismawati,  A.,  Pradana,  B.  T.,  & Jonathan,  J.  G.  2016.  Pengujian  aktivitas antioksidan  menggunakan  metode  DPPH  pada daun  tanjung  (Mimusops  elengi  L).  In Seminar Nasional Teknik Kimia Kejuangan (p. 1).
7. Halliwell, B. 1994. Free radicals and antioxidants: a personal view. Nutrition reviews , 52 (8), 253-265.
8. Ergina,  E.,  Nuryanti,  S.,  &  Pursitasari,  I.  D.  2014. Uji  kualitatif  senyawa  metabolit  sekunder  pada daun  palado  (Agave  angustifolia)  yang  diekstraksi dengan  pelarut  air  dan  etanol. Jurnal  Akademika Kimia , 3 (3), 165-172.
9. Atun, S. 2005. Pengembangan Potensi Bahan Alam sebagai  Sumber  Penemuan  Obat  Baru.  Makalah disajikan  dalam  Seminar  Nasional  Kimia, Universitas  Negeri  Yogyakarta,  Yogyakarta,  24 September
10. Zuhra,  C.  F.,  Tarigan,  J.  B.,  &  Sihotang,  H.  2008. Aktivitas antioksidan senyawa flavonoid  dari daun katuk  (Sauropus  androgunus  (L)  Merr.). Jurnal
Biologi Sumatera , 3 (1), 7-10.
11. Rafsanjani,  M.  K.,  &  Putri,  W.  D.  R.  2014.
Karakterisasi Ekstrak Kulit Jeruk Bali Menggunakan  Metode  Ultrasonic  Bath  (Kajian Perbedaan  Pelarut  Dan  Lama  Ekstraksi)  [In  Press September 2015]. Jurnal Pangan dan Agroindustri ,
3 (4).
12. Choi,  S.  Y.,  Ko,  H.  C.,  Ko,  S.  Y.,  Hwang,  J.  H., Park,  J.  G.,  Kang,  S.  H.,  ...  &  Kim,  S.  J.  2007. Correlation  between  flavonoid  content  and  the NO production inhibitory activity of peel extracts from various citrus fruits. Biological and Pharmaceutical Bulletin , 30 (4), 772-778.
13. Dianingati,  R.  S.,  Novarina,  A.,  Hana,  A.  K.,  & Muntafi’ah, L. 2013. December). Fortifikasi Ekstrak Kulit  Jeruk  Bali  Pada  Susu  Tinggi  Kalsium: Terobosan  Baru  Dalam  Pengatasan  Osteoporosis Pada  Wanita  Menopause,  Teruji  in  Vivo  Dan Molecular  Docking.  In Pekan  Ilmiah  Mahasiswa Nasional  Program  Kreativitas  Mahasiswa-Penelitian 2013 . Indonesian Ministry of Research, Technology and Higher Education.
14. Farnsworth,
N. R.1966. Biological and phytochemical  screening  of  plants. Journal  of pharmaceutical sciences , 55 (3), 225-276.
15. Marliana,  S.  D.,  Suryanti,  V.,  Suyono.  2005, Skrining Fitiokimia dan Analisis Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Buah  Labu Siam (Sechium edule jacq. Swartz.) dalam Ekstrak Etanol, FMIPA, Universitas Sebelas Maret (UNS), Surakarta
16. Putri, W. S.,  Warditiani, N.  K., & Larasanty, L. P. F. 2013. Skrining fitokimia ekstrak etil asetat kulit buah  manggis  (Garcinia  mangostana  L.). Jurnal Farmasi Udayana .
17. Hanani  E.  2014.  Analisis  Fitokimia.  Penerbit  Buku Kedokteran. ECG ., editor. Jakarta
18. Banu, R., & Nagarajan, N. 2014. TLC and HPTLC fingerprinting of leaf extracts of Wedelia chinensis (Osbeck)  Merrill. Journal  of  Pharmacognosy  and Phytochemistry , 2 (6).
19. Kristanti, A.N., Aminah, N. S., Tanjung, M.B. 2008. Buku Ajar Fitokimia : Airlangga. Surabaya
20. Yulianty, R., Rante, H., Alam, G., & Tahir, A. 2011. Skrining  dan  Analisis  KLT-Bioautografi  Senyawa Antimikroba  Beberapa  Ekstrak  Spons  Asal Perairan  Laut  Pulau  Barrang  Lompo,  Sulawesi Selatan. Majalah Obat Tradisional , 16 (02), 88-94.
21. Azis,  A.,  Prayitno,  T.  A.,  Lukmandaru,  G.,  & Listyanto,  T.  2015.  Aktivitas  Antirayap  Ekstrak Daun  Orthosiphon  sp.,  Morinda  sp.,  dan  Carica sp. Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi  Kayu  Tropis , 13 (2),
161-174.
22. Salamah,  E.,  Ayuningrat,  E.,  &  Purwaningsih,  S. 2008.  Penapisan  awal  komponen  bioaktif  dari kijing  taiwan  (Anadonta  woodiana  Lea.)  sebagai senyawa  antioksidan. Buletin  Teknologi  Hasil Perikanan , 11 (2), 119-132
23. Voight, R. 1995, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi Edisi  5,  diterjemahkan  dari  Bahasa  Inggris  oleh Soendadi  Noerono  Soewandhi,  Gadjah  Mada University Press, Yogyakarta.
24. Harbone, J. B. 1987. Metode Fitokimia : Penuntun Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan.  Bandung: Institusi Teknologi Bandung.
25. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995, Farmakope  Indonesia,  Edisi  IV,  606,  Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
26. Rejeki, D., Pratiwi, A., Ardita, D., Kusumawati, H. N., Wulandari, D., & Maulida, A. 2012. Penentuan kualitas  pangan  dan  uji  organoleptik. Makalah,
Universitas  Diponegoro,  Fakultas  Kedokteran, Semarang .
27. Ajeng,  R.  G.,  &  Asngad,  A.  2016. Uji  Organoleptik dan antioksidan teh daun kelor dan kulit jeruk purut dengan variasi suhu pengeringan (Doctoral dissertation, Universitas Muhammadiyah
Surakarta).
28. Yustinah,  Y.  2016.  Ekstraksi  Minyak  Atsiri  Dari Kulit  Jeruk  Sebagai  Bahan  Tambahan  Pada Pembuatan Sabun. JURNAL KONVERSI , 5 (1), 25-30.
29. Robinson,  T.  1983.  The  Organic  Constituents  of Higher Plants Their Chemistry and Interrelationships,.  5th  Ed.,  2.  Cordus  Press.,
North Amherst.;
30. Prashant .2011. Pytochemical Screening and Extrac t . Internationale Pharmaceutica Science , 1 ( 1 )  : 1 - 9 .
31. Svehla,  G.  (1985).  Analisis  anorganik  kualitatif makro  dan  semimikro. Edisi  kelima,  bagian  I. Jakarta: Kalman Media Pustaka .
32. Malangngi,  L.,  Sangi,  M.,  &  Paendong,  J.  (2012). Penentuan  kandungan  tanin  dan  uji  aktivitas antioksidan  ekstrak  biji  buah  alpukat  (Persea americana Mill.). Jurnal Mipa , 1 (1), 5-10.
33. Sangi,  M.,  Runtuwene,  M.  R.,  Simbala,  H.  E.,  & Makang,  V.  M.  2019.  Analisis  fitokimia  tumbuhan obat  di  Kabupaten  Minahasa  Utara. Chemistry Progress , 1 (1), 47-53.
34. Gandjar,  I.  G.  dan  Rohman,  A.  2007.  Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar
35. Hakim,  A.,  Liliasari,  L.,  Kadarohman,  A.,  Syah,  Y. M.,  &  Musthapa,  I.  2017.  Pembelajaran  Kimia Bahan  Alam  Inovatif  Melalui  Praktikum. Procedia Kimia , 1 (1).
36. Wagner, H., & Bladt, S. 1996. Plant drug analysis: a thin layer chromatography atlas . Springer Science & Business Media.
37. Molyneux,  P.  2004.  The  use  of  the  stable  free radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity. Songklanakarin J. sci. technol , 26 (2), 211-219.
38. Regina,  A.,  Maimunah,  M.,  &  Yovita,  L.  2008. Penentuan  Aktivitas  Antioksidan,  Kadar  Fenolat Total  dan  Likopen  pada  Buah  Tomat  (Solanum lycopersicum L). J. Sains dan Teknol. Farm .
39. Blois,  M.  S.  1958.  Antioxidant  determinations  by the use of a stable free radical. Nature , 181 (4617), 1199-1200.
40. Middleton, E., Kandaswami, C., & Theoharides, T. C.  2000.  The  effects  of  plant  flavonoids  on mammalian  cells:  implications  for  inflammation, heart disease, and cancer. Pharmacological reviews , 52 (4), 673-751.
41. Fukumoto,  L.  R.,  &  Mazza,  G.  2000.  Assessing antioxidant  and  prooxidant  activities  of  phenolic compounds. Journal  of  agricultural  and  food chemistry , 48 (8), 3597-3604.
42. Burda,  S.,  &  Oleszek,  W.  2001.  Antioxidant  and antiradical  activities  of  flavonoids. Journal  of agricultural and food chemistry , 49 (6), 2774-2779.