@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 3 (2): 132–141 (2017)
Sainawal,  dkk
KULTUR EMBRIO MERBAU ( Intsia bijuga OK.) PADA MEDIA MURASHIGE & SKOOG (MS) DIPERKAYA DENGAN ZAT PENGATUR TUMBUH  BAP, GA 3 dan IBA
(Embryo Culture in Merbau [Intsia bijuga OK.] towards Murashige & Skoog [MS]
Media that Enriched by BAP, GA 3 , and IBA Plant Growth Substances)
Samuel Bram Sainawal 1 Julius D. Nugroho 1  dan Francina F. Kesaulija 1
Jurusan Kehutanan, Fakultas Kehutanan Universitas Papua Manokwari, Papua Barat, 98314. Tlp/Fax: +62986211065.
 Penulis Korespondensi: Email: jd_nugroho2004@yahoo.com Diterima: 21 Oct 2017 | Disetujui: 25 Nov 2017

## Abstrak
Tujuan penelitian ini untuk mencari konsentrasi dan kombinasi zat pengatur tumbuh (IBA, BAP dan GA 3 ) yang cocok guna pertumbuhan embrio dari tanaman Merbau ( Intsia bijuga OK.) pada media Murashige & Skoog (MS) untuk mendapatkan tanaman yang sempurna melalui teknik kultur jaringan. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode eksperimen  dengan  teknik  observasi  menggunakan  perhitungan  statistik  deskriptif.  Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa penggunaan eksplan embrio merbau ( Intsia bijuga OK.) yang  terbaik  adalah  menggunakan  media  dengan  zat  pengatur  tumbuh  pada media  MS  + GA 3 2  ppm  dengan  persen    hidup  100%  dan  memiliki  persen  eksplan  kontaminasi  0%. Pertumbuhan  tunas  pada  perlakuan  ini  terjadi  pada  umur  86  hari  dengan  rata-rata pertumbuhan  tunas  sebesar  ±  0,2  cm,  persen  eksplan  bertunas  0%,  pada  pertumbuhan terbentuknya akar pada minggu ketujuh dari pengamatan.
Kata kunci: Intsia bijuga, embrio, zat pengatur tumbuh, media tanam, eksplan

## Abstract
This study is focusing on determining an appropriate concentration as well as combination from plant growth substances (IBA, BAP dan GA 3 ) for growing an embryo of Intsia bijuga tree species on media of Murashige & Skoog (MS) through plant tissue isolation technique. Method  used  in  this  study  was  experiment  by  way  of  observation  and  simple  descriptive statistic analysis to generate better solution from the analysis. The results noticed that the best use of Intsia bijuga explant embryo was by using  media and plant growth substance of MS + GA 3 2 ppm with a life percentage of 100% and had a 0% of explant contamination. The growth of bud in this treatment was occurred in 86 days with the average growth of ± 0.2 cm, bud explant percentage of 0%, and the initiation of root growth at the seventh week of observation.
Keywords: Intsia bijuga, embryo, plant growth substances, growth media, explant

## PENDAHULUAN
Merbau ( Intsia bijuga OK.) merupakan salah satu jenis kayu niagawi asli  Papua  yang  menghasilkan  kayu  dari Hutan Produksi. Kayu merbau memiliki nilai  komersial  yang  tinggi  karena  sifat keawetan  dan  kualitas  yang  sangat  baik. Saat  ini  merbau  didorong  untuk dikembangkan  dalam  skema  hutan tanaman industri. Kultur jaringan
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 3 (2): 132–141 (2017)
Sainawal,  dkk
merupakan  teknik  perbanyakan  tanaman dengan  cara  mengisolasi  bagian  tanaman seperti daun, mata tunas, serta menumbuhkan  bagian-bagian  tersebut dalam  media  buatan  secara  aseptik  yang kaya  nutrisi  dan  zat  pengatur  tumbuh dalam  wadah  tertutup  yang  tembus cahaya  sehingga  bagian  tanaman  dapat memperbanyak  diri  dan  bergenerasi menjadi  tanaman  lengkap.  Prinsip  utama dari  teknik  kultur  jaringan  adalah perbayakan tanaman dengan menggunakan  bagian  vegetatif  tanaman menggunakan media buatan yang dilakukan  di  tempat  steril  (Muhiklaten 2011). Metode  kultur  jaringan  dikembangkan untuk membantu memperbanyak tanaman, khususnya untuk tanaman yang sulit  dikembangbiakkan  secara  generatif. Bibit yang dihasilkan dari kultur jaringan mempunyai  beberapa  keunggulan,  antara lain:  mempunyai  sifat  yang  identik dengan  induknya,  dapat  diperbanyak dalam  jumlah  yang  besar  sehingga  tidak terlalu  membutuhkan  tempat  yang  luas, mampu  menghasilkan  bibit  dengan jumlah  besar  dalam  waktu  yang  singkat, kesehatan  dan  mutu  bibit  lebih  terjamin, kecepatan  tumbuh  bibit  lebih  cepat dibandingkan dengan perbanyakan konvensional (Muhiklaten 2011). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mencari konsentrasi  dan  kombinasi  zat  pengatur tumbuh (IBA, BAP dan GA 3 ) yang cocok untuk  pertumbuhan  embrio  Merbau ( Intsia bijuga Ok.) pada media Murashige
&  Skoog (MS)  dengan  menggunakan teknik kultur jaringan.

## METODE PENELITIAN
Lokasi  penelitian  ini  dilaksanakan pada  Laboratorium  Silvikultur  yang bertempat di Kampus Fakultas Kehutanan
Unipa  Manokwari  Provinsi  Papua  Barat dengan  durasi  waktu  penelitian  selama  ± 3 bulan.

## Metode Penelitian
Metode yang dipakai dalam penelitian ini  adalah  metode  eksperimen  dengan teknik observasi menggunakan perhitungan statistik deskriptif. Penelitian ini menggunakan embrio merbau.
Perlakuan  dari  penelitian  ini  adalah sebagai berikut : A : Media MS 0 (Kontrol) B : Media MS + GA 3 2 ppm C : Media MS + BAP 4 ppm D  :  Media  MS  +  GA 3 2  ppm  +  BAP  2 ppm + IBA 1 ppm
Penelitian ini terdiri dari 4 perlakuan dan 7  ulangan  sehingga  diperoleh  28  satuan percobaan.

## Pelaksanaan Penelitian
Pelaksanaan Penelitian yang dilakukan dalam  perbanyakan  tanaman  dengan teknik kultur jaringan adalah:

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat dan bahan yang digunakan dalam melakukan  kultur  jaringan  harus  dalam keadaan  bersih  dan  steril.  Sterilisasi dilakukan dengan menggunakan autoclave dengan tekanan berkisar antara
15  psi  –  20  psi.  Sterilisasi  dilakukan dengan  cara autoclave diisi  air  sampai dengan  batas  yang  ditentukan  kemudian masukkan  botol-botol  kultur,  botol  berisi air  aquades  100  ml,  yang  sebelumnya telah  dibungkus  dengan  kertas  kedalam autoclave kemudian  tutup  rapat  dan nyalakan autoclave .  Tunggu  sampai  air yang  didalamnya  mendidih  dan  tekanan yang  ditentukan  lalu  atur  waktunya selama  20  menit.  Setelah  itu autoclave dimatikan lalu tunggu sampai tekanannya turun ke angka nol (0) dan biarkan sampai
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 3 (2): 132–141 (2017)
Sainawal,  dkk
agak  dingin.  Buka autoclave dan keluarkan  botol-botol  kultur  dan  botol berisi  air  aquades  100  ml  tersebut kemudian  disimpan  di  ruang  kultur sampai saat akan digunakan nanti.
Sterilisasi Laminar  Air  Flow  Cabinet (LAFC)  dilakukan sesaat  sebelum melakukan pengkulturan eksplan. Caranya  yaitu  dengan  menyemprotkan alkohol  70%  kemudian  dikeringkan dengan tisu. Nyalakan lampu UV selama 30 menit dalam keadaan tertutup. Lampu UV  dimatikan  kemudian  nyalakan blower ,  lampu  TL  dan  api  bunsen  yang menandakan bahwa LAFC siap digunakan.

## Pembuatan Media
Media  yang  digunakan  adalah  media dasar Murashige  &  Skoog (MS),  dengan perlakuan  MS  0  (kontrol),  Media  MS  + GA3  2  ppm,  Media  MS  +  BAP  4  ppm, Media MS + GA3 2 ppm + BAP 2 ppm + IBA  1  ppm    dan  dibuat  masing-masing sebanyak  500  ml.  Tahapan  pembuatan media Murashige  &  Skoog (MS)  yaitu pertama-tama  masukan  aquades  kedalam gelas  piala  sebanyak  200  ml  lalu masukkan larutan stok media MS (larutan stok  A  20  ml,  larutan  stok  B 20  ml, larutan  stok  C  10  ml,  larutan  stok  D  10 ml, larutan stok E 5 ml, larutan stok F 5 ml), larutan stok vitamin 0,5 ppm, gula 15 g  lalu  diaduk  dengan    menggunakan magnetik stirrer sampai larut.
Kemudian  masukkan  zat  pengatur tumbuh  pada  masing-masing  media tanam  yaitu Indole  Butiric  Acid (IBA), Benzil  Amino  Purin (BAP), Gibberelic Acid (GA 3 )  dengan  konsentrasi  yang ditetapkan.  Tambahkan  aquades  sampai mendekati  batas  tera  kemudian  ukur  pH dengan  kertas  lakmus.  pH  yang diharapkan adalah 5,5 – 5,8 jika pH < 5,8 maka ditambahkan larutan NaOH dan jika
pH > 5,8 maka ditambahkan larutan HCl. Tambahkan  aquades  sampai  batas  tera lalu masukkan agar-agar 8 gr/l dan diaduk sampai larut sambil dipanaskan diatas hot plate sampai mendidih. Media dituangkan ke  dalam  botol  kultur  masing-masing  20 ml,  tutup  dengan  plastik  transparan  lalu diikat  dengan  karet  gelang  kemudian disterilkan menggunakan autoclave dengan  tekanan  berkisar  antara  15  psi  – 20 psi selama 25 – 30 menit.

## Pengambilan Eksplan
Eksplan  yang  digunakan  adalah embrio Intsia  bijuga ,  biji  diperoleh  dari hutan  tanaman  di  Taman  Wisata  Alam Gunung Meja.
Sterilisasi Eksplan Dalam pelaksanaannya proses
sterilisasi  merupakan  tahapan  yang menentukan  keberhasilan  dari  kultur jaringan. Eksplan yang  digunakan adalah embrio  merbau.  Tahapannya  adalah  biji Intsia  bijuga dicuci  bersih  dengan  air untuk  menghilangkan  kotoran  yang melekat  pada  biji  tersebut  setelah  bersih biji dikocok dengan klorox 100% selama 20 menit. Kulit biji dilukai atau dipotong dengan pisau cutter lalu direndam dengan air  panas  dengan  suhu  70-80 0 C  hingga kulit  merbau  yang  keras  menjadi  lebih lunak.  Biji  dikocok  kembali  dengan klorox  30%  selama  10  menit  lalu  bilas dengan  air  steril.  Biji  yang  sudah  steril dibelah  dengan  pisau  steril  guna mengambil  embrio  yang  terdapat  pada biji.  Embrio  yang  sudah  diperoleh kemudian  dikocok  dengan  betadine  lalu ditiriskan dengan kertas saring steril.

## Penanaman Eksplan
Eksplan  yang  sudah  steril  diambil dengan  pingset  dan  dimasukkan  pada media  tanam  yang  telah  disiapkan.  Buka tutup plastik botol yang sudah disterilkan
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 3 (2): 132–141 (2017)
Sainawal,  dkk
dengan autoclave lalu  dipanaskan  pada lubang botol dengan tujuan agar terhindar dari  kontaminasi  yang  diperoleh  dari bakteri  maupun  fungi.  Pingset  yang digunakan  terlebih  dahulu  dicelupkan pada  alkohol  lalu  ujung  pingset dipanaskan  oleh  api  bunsen  agar  pingset lebih steril. Setelah eksplan ditanam pada media  lalu  botol  kembali  ditutup  dengan plastik transparan dan diikat dengan karet gelang serta dililit kembali dengan plastik wrap .  Setelah  itu  diberi  label  kemudian diletakkan pada rak kultur dalam ruangan kultur bersuhu ± 25 o C.

## Pengamatan dan Evaluasi
Pengamatan  dilakukan  setiap  hari untuk melihat perkembangan dari eksplan.  Namun  pengambilan  data eksplan  yang  hidup,  eksplan  yang terkontaminasi,  eksplan  yang  berkalus dan jumlah akar dilakukan setiap minggu setelah  inokulasi.  Sedangkan  persen hidup eksplan, panjang akar, jumlah tunas dan  tinggi  tanaman  diukur  pada  hasil penelitian.

## Variabel Pengamatan
Variabel  yang  diamati  adalah  sebagai berikut :
1. Persen Eksplan Hidup Eksplan hidup (%) =
2. Persen Eksplan Kontaminasi Eksplan Kontaminasi (%) =
3. Persen Eksplan Browning
Eksplan Browning (%) =
4. Persen Eksplan Memanjang Eksplan Memanjang (%) =
5. Persen Eksplan Berakar Eksplan Berakar (%) =
6. Persen Eksplan Bertunas Eksplan Bertunas (%) =
7. Waktu Terbentuknya Akar
8. Waktu Terbentuknya Tunas

## Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan  perhitungan  merata  dan hasilnya  ditampilkan  dalam  bentuk  tabel dan gambar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Berdasarkan hasil penelitian pertumbuhan  embrio Intsia  bijuga secara in  vitro dalam  media  MS  yang  telah diamati disajikan pada tabel 1.
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 3 (2): 132–141 (2017)
Sainawal,  dkk
Tabel  1.  Respon  kultur  embrio Intsia  bijuga yang  dikulturkan  pada  media  MS  terhadap kombinasi zat pengatur tumbuh Perlakuan EH (%) EK (%) EB (%) EM (%) EA (%) ET (%) Waktu terbentuknya akar Waktu terbentuknya tunas A 85 15 57 85 42 28 Minggu ke 5  Minggu ke 6 B 100 0 42 100 71 57 Minggu ke 4  Minggu ke 5 C 71 29 14 71 28 14 Minggu ke 7  Minggu ke 8 D 42 58 71 14 28 0 Minggu ke 7 -
Keterangan : A = MS 0, B = MS + GA 3 2 ppm, C = MS + BAP 4 ppm, D = MS + GA 3 2 ppm + BAP  2  ppm  +  IBA  1  ppm,  EH  =  Eksplan  Hidup,  EK  =  Eksplan  Kontaminasi,  EB  =  Eksplan Browning, EM = Eksplan Memanjang, EA = Eksplan Berakar, ET = Eksplan Bertunas.
Persen Eksplan Hidup
Dari  tabel  1  di  atas,  dapat  dilihat bahwa pada perlakuan MS + GA 3 2 ppm memiliki  persen  hidup  100%,  pada perlakuan ini tidak terdapat eksplan yang terkontaminasi.  media  MS  0  (kontrol) memiliki  persen  hidup  85%,  pada perlakuan  ini  terdapat  1  eksplan  yang terkontaminasi. media MS + BAP 4 ppm memiliki  persen  hidup  71%,  pada perakuan  ini  terdapat  2  eksplan  yang terkontaminasi  dan  pada  media  MS  + GA 3 2 ppm + BAP 2 ppm + IBA 1 ppm memiliki  persen  hidup  42%,  pada perlakuan  ini  terdapat  4  eksplan  yang terkontaminasi.

## Persen Eksplan Kontaminasi
Berdasarkan pengamatan yang dilakukan sampai akhir penelitian menunjukkan bahwa tidak semua eksplan dapat bertumbuh dengan baik dikarenakan kontaminasi. Dalam penelitian  ini  kontaminasi  terjadi  pada eksplan,  juga  terjadi  pada  media.  Media yang  telah  terkontaminasi  akan  menjadi penghambat  untuk  pertumbuhan  embrio hingga embrio mati.
Pada media MS + GA 3 2 ppm + BAP 2 ppm  +  IBA  1  ppm  memiliki  persen kontaminasi  58%,  pada  perlakuan  ini terjadi  pada  eksplan  kontaminasi  yang paling  tinggi  dibandingkan  dengan perlakuan  lainnya.  media  MS  +  BAP  4 ppm  memiliki  persen  kontaminasi  29%, media  MS  0  (kontrol)  memiliki  persen kontaminasi  15%  dan  pada  media  MS  + GA 3 2 ppm memiliki persen kontaminasi 0%,  pada  perlakuan  ini  tidak  terdapat eksplan yang terkontaminasi.
Gambar 1. Penampilan eksplan yang terkontaminasi. (A) kontaminasi  karena bakteri,  (B) kontaminasi karena jamur. A
A B A
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 3 (2): 132–141 (2017)
Sainawal,  dkk
Persen Eksplan Browning Pencoklatan  ( browning )  merupakan proses  pembentukan  pigmen  berwarna kuning yang akan segara berubah menjadi coklat  gelap  yang  dipicu  oleh  reaksi oksidasi yang dikatalisis oleh enzim fenol oksidase  atau  polifenol  oksidase.  Dari hasil  pengamatan  persen browning pada tiap  perlakuan  pada  media  MS  +  GA 3 2 ppm  +  BAP  2  ppm  +  IBA  1  ppm memiliki  persen  eksplan browning 71%,
pada  perlakuan  ini  terdapat  eksplan browning yang paling tinggi dibandingkan  dengan  perlakuan  yang lain.  pada  media  MS  +  GA 3 2  ppm memiliki  persen  eksplan browning 57%, pada  media  MS  +  GA 3 2  ppm  memiliki persen  eksplan browning 42%,  dan  pada media MS + BAP 4 ppm memiliki persen eksplan browning 14%,  pada  perlakuan ini  terdapat  eksplan browning yang persentasinya  rendah yaitu terjadi pada  1 eksplan yang browning. Persen Eksplan Memanjang Dari hasil pengamatan, embrio sebelum membentuk akan terlebih dahulu memanjang  ukurannya.  Pada  perlakuan media  MS  +  GA 3 2  ppm  rata-rata pertumbuhan  embrio  adalah  ±  2,5  cm. ppm umur tanam pada saat embrio Media
tanam  pada  perlakuan  MS  +  GA 3 2 memanjang  adalah  tumbuh  pada  minggu ketiga.  Pada  perlakuan  media  MS  0 (kontrol)  rata-rata  pertumbuhan  embrio adalah  ±  1,5  cm.  media  tanam  pada perlakuan  MS  0  (kontrol)  umur  tanam pada  saat  embrio  memanjang  adalah tumbuh  pada  minggu  kelima.  Pada perlakuan media MS + BAP 4 ppm rata- rata  pertumbuhan  embrio  adalah  ±  0,8 cm.  media  tanam  pada  perlakuan  MS  + BAP 4 ppm umur tanam pada saat embrio memanjang  adalah  tumbuh  pada  minggu kedelapan.  Pada  perlakuan  media  MS  + GA 3 2 ppm + BAP 2 ppm + IBA 1 ppm rata-rata  pertumbuhan  embrio  ±  0,5  cm, media tanam pada perlakuan  MS + GA 3 2 ppm + BAP 2 ppm + IBA 1 ppm umur tanam  pada  saat  embrio  memanjang adalah tumbuh pada minggu ketujuh. Dari hasil pengamatan presentasi pemanjangan embrio  pada  media  MS  +  GA 3 2  ppm persen  pemanjangan  embrio  100%,  pada media MS 0 (kontrol) persen
pemanjangan  embrio  85%,  pada  media MS  +  BAP  4  ppm  persen  pemanjangan embrio 71%, dan pada media MS + GA 3 2 ppm + BAP 2 ppm + IBA 1 ppm persen pemanjangan embrio 14%.
Gambar 2. Penampilan Pertumbuhan dari embrio Intsia bijuga (A) MS 0, (B) MS + GA 3 2 ppm
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 3 (2): 132–141 (2017)
Sainawal,  dkk
Persen Eksplan Berakar Pada  media  MS  +  GA 3 2  ppm memiliki  rata–rata  pemanjangan  akar adalah  ±  0,8  –  2  cm,  dan  akar  terlihat memanjang. persen eksplan berakar pada media  MS  +  GA 3 2  ppm  lebih  banyak menginduksi  akar  yang  persentase sebesar  71%  dibandingkan  dengan perlakuan  yang  lainnya.  Pembentukan akar  pada  perlakuan  MS  +  GA 3 2  ppm pada  umur  tanam  adalah  ±  60  hari  (Gbr. 2B). Pada media MS 0 (kontrol) memiliki rata-rata pemanjangan akar adalah ± 0,5– 0,8  cm,  persen  eksplan  berakar  pada media  MS  0  (kontrol)  sebesar  42%  dan juga  pada  media  MS  0  (kontrol)  umur tanam  adalah  ±  80  hari  (Gbr.  2A).  Pada media  MS  +  BAP  4  ppm  belum mengalami perkembangan akar secara
baik  karena  akar  masih  terjadi  proses inisiasi  akar,  pada  akar  belum  terdapat cabang-cabang  akar  yang  muncul.  Pada media MS + BAP 4 ppm tanaman dengan umur  tanam  ±  43  hari,  rata-rata pemanjangan  akar  adalah  0,1–0,5  cm. pada  media  MS  +  GA 3 2  ppm  +  BAP  2 ppm  +  IBA  1  ppm,  perlakuan  ini  juga belum  mengalami  perkembangan  akar secara  baik  karena  akar  masih  terjadi proses  inisiasi  akar,  belum  terdapat cabang-cabang  akar  yang  muncul,  dan juga  terdapat  kalus  pada  eksplan.  Pada kedua perlakuan yaitu MS + BAP 4 ppm dan  MS  +  GA 3 2  ppm  +  BAP  2  ppm  + IBA  1  ppm  menginduksi  akar  dengan persentasi 28 % (Gbr. 2C).
Gambar 3. Penampilan Eksplan Berakar dari embrio Intsia bijuga (A) MS 0, (B) MS + GA 3 2 ppm, (C) MS +  GA 3 2 ppm + BAP 2 ppm + IBA 1 ppm

## Persen Eksplan Bertunas
Pengamatan  yang  dilakukan  dari minggu  pertama  hingga  minggu  ketujuh, pada perlakuan media MS + GA 3 2 ppm
pertumbuhan  tunas  terjadi  pada  umur  65 hari  dengan  rata-rata  pertumbuhan  tunas sebesar  ±  2  cm.  Selain  munculnya  akar, A
B C
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 3 (2): 132–141 (2017)
Sainawal,  dkk
pada  eksplan  tersebut  terdapat  daun. Pertumbuhan  tunas  yang  mulai  tumbuh dan  berkembang  pada  Perlakuan  MS  + GA 3 2 ppm mencapai 57% (Gbr. 4B). Pada  perlakuan  media  MS  0  (kontrol) pertumbuhan  tunas  terjadi  pada  umur  70 hari  dengan  rata-rata  pertumbuhan  tunas sebesar  ±  0,2  cm.  Dari  Eksplan  embrio merbau  yang  ditanam  pada  media  MS  0 mampu  menumbuhkan  tunas  dengan persen  eksplan  bertunas  sebesar  28%, walaupun  tunas  yang  tumbuh  tidak berkembang dengan baik (Gbr. 4A).
Pada  media  MS  +  BAP  4  ppm pengamatan  yang  dilakukan  dari  minggu pertama  hingga  minggu  ke  tujuh,  pada
perlakuan  MS  + BAP 4 ppm
pertumbuhan  tunas  terjadi  pada  umur  80 hari  dengan  rata-rata  pertumbuhan  tunas sebesar ± 0,3 cm dilihat pada (Gbr. 4C).
Pada media MS + GA 3 2 ppm + BAP 2 ppm  +  IBA  1  ppm  pengamatan  yang dilakukan  dari  minggu  pertama  hingga minggu  ke  tujuh,  pada  perlakuan MS  + GA 3 2 ppm + BAP 2 ppm + IBA 1 ppm pertumbuhan  tunas  terjadi  pada  umur  86 hari  dengan  rata-rata  pertumbuhan  tunas sebesar  ±  0,2  cm,    pertumbuhan  tunas belum muncul secara baik ke permukaan media,  hanya  terdapat  eksplan  yang mengalami tumbuh kalus pada permukaan media dilihat pada (Gbr. 4D).
Gambar 4. Penampilan pertumbuhan tunas pada embrio Intsia bijuga (A) MS 0 (Kontrol), (B) MS + GA 3 2 ppm, (C) MS + BAP 4 ppm, (D) MS + GA 3 2 ppm + BAP 2 ppm +  IBA 1 ppm.

## PEMBAHASAN
Kontaminasi  dan  browning  masih merupakan kendala dalam penelitian ini. Kontaminasi  tetap  terjadi  walaupun prosedur sterilisasi telah dilakukan secara
C
D
A A B
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 3 (2): 132–141 (2017)
Sainawal,  dkk
benar.  Kemungkinan  dapat  disebabkan oleh  adanya  mikroorganisme  yang terbawa  dalam  jaringan  eksplan  tanaman yang  digunakan.  Browning  terjadi  pada semua  perlakuan  yang  diamati  yaitu media MS 0 (kontrol), MS + GA 3 2 ppm, MS + BAP 4 ppm dan media MS + GA 3 2 ppm  +  BAP  2  ppm  +  IBA  1  ppm.
Browning atau  pencoklatan  terjadi  akibat reaksi oksidasi fenol. Kehadiran senyawa fenolik ini akan menghambat pertumbuhan dari eksplan. Untuk mengatasi  terjadinya browning dapat dilakukan dengan menambahkan senyawa arang  aktif  kedalam  media  yang digunakan,  namun  pada  penelitian  ini tidak  menggunakan  senyawa  arang  aktif yang  bertujuan  untuk  terhindar  dari browning pada  media  tumbuh  maupun eksplan.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  yang diperoleh  pada  percobaan  MS  +  GA 3 2 ppm,  embrio  merbau  menghasilkan panjang  akar  dengan  rata–rata  adalah  2 cm. Hasil dari kontrol dan juga pemberian zat pengatur tumbuh MS 0, MS + BAP 4 ppm, dan MS + GA 3 2 ppm + BAP 2 ppm + IBA 1 ppm belum menghasilkan tunas yang  signifikan.  Hal  ini  terjadi  karena konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  yang diberikan masih kecil. Pada perlakuan ini tidak menggunakan kinetin, jika sitokinin diberikan dengan konsentrasi yang tinggi pada  tumbuhan  maka  akan  banyak tumbuh tunas (Budiyanto 2013).
Konsentrasi pada perlakuan MS + GA 3 2  ppm  telah  menghasilkan  pertumbuhan tunas.  Kinetin  merupakan  zat  pengatur tumbuh  golongan  sitokinin.  Sitokinin merupakan  hormon  tumbuhan  turunan adenin yang berfungsi untuk merangsang pembelahan  sel  dan  diferensiasi  mitosis, disitensis pada ujung akar dan ditranslokasi  melalui  pembuluh  xylem.
Aplikasi  untuk  merangsang  tumbuhnya tunas  pada  kultur  jaringan  atau  pada tanaman  induk,  namun  sering  tidak optimal pada tanaman dewasa (Budiyanto 2013). Kalus adalah sekumpulan sel amorphous  (tidak  terbentuk  atau  belum terdiferensiasi) yang terbentuk dari sel-sel yang  membelah  secara  terus  menerus. Kalus  dapat  diperoleh  dari  bagian tanaman  seperti  akar,  batang  dan  daun (Wikipedia  2010).  Pembentukan  kalus tidak  selalu  diharapkan  bila  diferensiasi untuk  membentuk  akar  dan  tunas  tidak terjadi.
Disamping membentuk kalus, pemberian  BAP  pada  kultur  biji  juga menyebabkan  terjadinya  tunas  dan  akar, walaupun  pertumbuhan  akar  baik  dalam jumlah, panjang akar maupun
pemanjangan  tunas  tidak  sebaik  seperti pada  perlakuan  GA 3 .  Berbeda  yang ditampakkan  pada  kulur  embrio  tanaman merbau,  pemberian  BAP  menyebabkan pertumbuhan  akar  dapat  terjadi  walau tidak  sebaik  pada  pemberian  GA 3 . Demikian  juga  pembentukan  tunas  tidak terjadi,  baik  pada  pemberian  BAP,  IBA maupun  GA 3 .  Pada  pertumbuhan  kultur yang  lebih  cepat  tumbuh  umumnya adalah  kultur  biji  dibandingkan  dengan kultur  embrio  karena  biji  memiliki cadangan  makanan  yang  terdapat  pada kotiledon  sedangkan  pada  embrio  tidak kotiledon.
Sitokinin  berfungsi  meningkatkan pembelahan  sel,  pertumbuhan  sel  dan perkembangan kultur sel tanaman terutama  pada  pembentukan  tunas (Wattimena 1987). Peran sitokinin dalam pembelahan  sel  dan  pembentukan  tunas ditunjukkan juga pada penelitian (Ardiana 2009),  dimana  penambahan  BAP  4  ppm pada  MS  memberikan  hasil  yang  terbaik
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Jurnal Kehutanan Papuasia 3 (2): 132–141 (2017)
Sainawal,  dkk
dalam pembentukan kalus dan tunas pada eksplan kotiledon melon. Pada penelitian yang  digunakan  memperlihatkan  bahwa pemberian  BAP  4  ppm  memberikan respon yang nyata terhadap pemanjangan embrio,  respon  yang  digunakan  belum nampak  pada  pertumbuhan  tunas  secara in  vitro  yang  menggunakan  eksplan embrio merbau ( Intsia bijuga ).
Giberelin terdapat pada berbagai organ dan  jaringan  tumbuhan  seperti  akar, tunas, mata tunas, daun, bunga, bintil akar dan  buah  (Wattimena  1987).  Giberelin berpengaruh  terhadap  sifat  genetik  pada perkecambahan yaitu merangsang pembelahan  sel  dan  pembesaran  sel. Peran  giberelin  dalam  perpanjangan  sel tanaman  sangat  ditampakkan  pada  kultur embrio tanaman merbau. Hasil yang sama didapatkan  pada  penelitian  Syafii  dan Sutrisna (2006), bahwa penambahan GA 3 2  ppm  sangat  efektif  mendorong pertumbuhan  tunas  pada  eksplan  biji Anggrek  Bulan  ( Phalaenopsis  amabilis BL).
Pada  kultur  embrio  kombinasi  antara zat pengatur tumbuh sitokinin, auksin dan giberelin  membentuk  hasil  terbaik  dalam pembentukan  tunas  maupun  daun, sedangkan  pembentukan  akar  menjadi agak  terhambat  dibandingkan  dengan pemberian  GA 3 tunggal.  Sebaliknya
pembentukan  tunas  pada  pemberian sitokinin  tunggal  maupun  tidak  sebaik apabila  keduanya  digabungkan  dengan IBA.

## DAFTAR PUSTAKA
Ardiana  DW.  2009.  Pemberian Benzil Amino  Purin (BAP)  untuk  memacu pertumbuhan kalus dan tunas kotiledon melon. Buletin Teknik Pertanian 14 (2) 50 – 53.
Budiyanto.  2013.  Teknik  kultur  jaringan pada tanaman induk. Kanisius. Jakarta. Muhiklaten.  2011.  Pengertian  kultur jaringan  dan  metode  kultur  jaringan. PAU Bioteknologi. Universitas Indonesia. Jakarta.
Syafii  B  dan  Sutrisna.  2006.  Pengaruh pemberian  giberelin  (GA 3 )  dan  air kelapa terhadap perkecambahan bahan biji  anggrek  bulan  ( Phalaenopsis amabilis BL)  secara in  vitro .  Jurnal Biogenensis 2 (2) : 41 – 46.
Wattimena  G  A.  1987.  Zat  pengatur tumbuh  tanaman.  PAU  Bioteknologi
IPB. Bogor. Wikipedia.  2010.  Wikipedia  bahasa indonesia Ensiklopedia Bebas. (Diambil  dari http://wikipedia.org .  29
Juni 2011).