Accredited by Ministry of Education, Culture,                                    DOI: https://doi.org/10.35799/jis.v22i2.46363 Research and Technology No: 105/E/KPT/2022        Available online at https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jis
Morphological and Biomolecular of the Atergatis floridus Crab in the Intertidal Zone of the Minanga Coast, Manado City
Tamara Angela G. Siahaan 1) , Darus Saadah J. Paransa 2*) , James J.H. Paulus 2) , Stenly Wullur 2) , Remy E.P. Mangindaan 2) , Pankie Pangemanan 3) .
1) Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado, Indonesia
2) Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu. Manado, Indonesia
3) Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado, Indonesia
*) Corresponding author: darusparansa@unsrat.ac.id

## ABSTRACT
This study examines the morphology and biomolecules of the Atergatis floridus crab found in the Intertidal  Zone  of  the  Minanga  Beach,  Manado  City.  Species  identification  was  carried  out  by morphological  and  biomolecular  analysis  of  DNA barcoding  using  the  COI gene.  Samples  were collected in February and the isolation stage was in March 2022. The method used was the roaming method, namely exploring the research location to catch samples of crabs on the coast and catching crabs directly using hands protected with gloves and a flashlight for lighting. The morphological characters of concern are the shape of the carapace color and the anterior, posterior and abdominal characters. Furthermore, muscle tissue samples were taken from the crab claws for DNA isolation and sequencing processes at the company's first base laboratories, Malaysia. Based on the results of the research, samples that have been studied morphologically and sequenced show that 99.70% of the species are Atergatis floridus .
Keywords: Atergatis floridus; DNA barcode; Manado City; morphology
Morfologi dan Biomolekuler Kepiting Atergatis floridus di Zona Intertidal Pesisir Pantai Minanga, Kota Manado

## ABSTRAK
Studi ini menelaah morfologi dan biomolekuler kepiting Atergatis floridus yang terdapat di Zona Intertidal Pesisir Pantai Minanga, Kota Manado. Identifikasi spesies dilakukan dengan pendekatan analasis  morfologi  dan biomolekuler  DNA barcoding  menggunakan  Gen  COI.  Sampel  dikoleksi pada bulan Februari dan tahapan isolasi pada bulan Maret 2022. Metode yang digunakan adalah metode  jelajah,  yakni  menjelajahi  lokasi  penelitian  untuk  menangkap  sampel  kepiting  di  pesisir pantai  dan  penangkapan  kepiting  secara  langsung  menggunakan  tangan  yang  dilindungi  dengan sarung  tangan  dan  senter  untuk  penerangan.  Karakter  morfologi  yang  menjadi  perhatian  adalah bentuk warna karapas dan karakter anterior,  posterior dan abdomen. Selanjutnya diambil sampel jaringan otot pada bagian capit kepiting untuk dilakukan isolasi DNA dan proses sekuensing pada perusahaan first  base  laboratories,  Malaysia. Berdasarkan  hasil  penelitian  sampel  yang  telah ditelaah  secara  morfologi  dan  disekuens  menunjukkan  bahwa  99.70%  spesies  tersebut  adalah Atergatis floridus.
Kata kunci: Atergatis floridus; DNA barkoding; Kota Manado; morfologi
(Article History:  Received 20-09-2022; Accepted 07-10-2022; Published 12-10-2022)

## PENDAHULUAN
Kepiting  mempunyai  warna,  bentuk, dan  ukuran  yang  beragam  dan  mempunyai kesamaan  pada  bentuk  tubuh  (Poore,  2004). Serangkaian  warna  pada  karapas  krustasea
menampilkan  pola  warna  bersifat  tetap  dan spesifik  pada  setiap  spesies  (Mcnamara  & Milograna,  2015), Kepiting  dari  ordo dekapoda, infraordo brachyura memiliki lima pasang kaki, dimana satu pasang termodifikasi menjadi  sepasang  capit  dan  pasangan  kaki
paling  belakang  berfungsi  sebagai  kaki  jalan (Poupin  &  Juncker,  2010)  atau  sebagai  kaki renang (Poore, 2004).
Di  pesisir  pantai  Teluk  Manado ditemukan Kepiting Ozius truncatus (Edwards, 1834) teridentifikasi secara morfologi  dengan  ciri  karapas  berbentuk lonjong  berwarna  coklat  kemerahan  pada bagian  bawah  anterior,  bagian  atas  anterior mempuyai  dua  buah  lobus  yang  menonjol serta  punggung  bukit  yang berada  di  sebelah kiri  dan  kanan  dari  karapas.  Memiliki  4 pasangan  kaki  jalan  kecil  dan  terdapat  setae berwarna  kuning  emas  di  masing-masing ujung  kaki  jalan  (Rustikasari et  al .,  2021). Amin et  al .  (2021)        menemukan  kepiting Sesarmops (Edwards, 1837) di pesisir pantai Malalayang  Dua,  Kota  Manado  dengan  ciri morfologi berbentuk segi empat dengan warna karapas  coklat  kehijauan  dan  kekuningan. Bagian  Merus  pada  pasangan  kaki  jalan  ke- tiga  terdapat  benjolan  berwarna  abu-abu  dan terdapat  corak  batik  kecoklatan.    Ilaria et  al .
(2022) menemukan kepiting Ozius tuberculosus (Edwards,  1834)  di  Pantai
Minanga, Perairan Teluk Manado, Kelurahan
Malalayang  Satu,  Kecamatan  Malalayang, Kota Manado. (Lepa et al . (2022), menemukan
kepiting
Ocypode ceratophthalmus (Stimpson,  1858)  di  pesisir pantai  Kelurahan Pondang dan Desa Lopana, Kecamatan  Amurang  Timur,  Kabupaten Minahasa  Selatan,  Teluk  Amurang,  dengan ciri-ciri  morfologi  karapas  berwarna  merah kecoklatan  dan  ukuran  capit  berbeda  serta ujung capit berwarna putih.
Kepiting Grapsus sp yang ditangkap di pesisir  perairan  pesisir  pantai  berbatu  desa Ranawangko  Kec.  Tombariri,  Kabupaten Minahasa  Propinsi  Sulawesi  Utara,  memiliki ciri  morfologi  yaitu  garis  garis  linier  dengan titik  warna  oranye  pada  dorsal  karapas  dan terdapat titik warna oranye pada bagian merus kepiting  ini  mengandung  jenis  pigmen karotenoid,  seperti  β-karoten,  ekinenon, kantaksantin, astaksantin dan astasen (Paransa et  al .,  2019)      spesies  yang  sama  dari  lokasi pesisir berbatu Desa Manggatasik Kecamatan Tombariri  Kabupaten  Minahasa  Provinsi Sulawesi  Utara  ditemukan  jenis  pigmen  β- karoten,  β-Kriptosantin,  astaksantin  dan  tipe astasen (Abdullah et al ., 2018).  (Paransa et al . (2019), mampu membuktikan melalui identifikasi  secara  molekuler  kepiting  yang
diambil dari lokasi Pantai Desa Ranowangko, Kecamatan  Tombariri,  Kabupaten  Minahasa teridentifikasi  sebagai  kepiting lightfoot ( Grapsus  albolineatus )  Latreille  in  Milbert 1812.
Suherman & Arsad, (2020),
menyatakan  bahwa  dalam  mengidentifikasi DNA  suatu  spesies  dapat  menggunakan Sekuens  DNA,  dimana  penanda  salah  satu molekuler dari DNA dipakai untuk menjelaskan  taksonomi  suatu  spesies  dengan cara  pengamatan  kode  batang  DNA  atau disebut DNA barcoding . Menurut  Tallei et al .
(2017), DNA barcode telah banyak digunakan oleh peneliti untuk melihat jarak genetik antar spesies  dengan  menggunakan  gen  penyandi protein  dalam  DNA  mitokondria,  yakni Gen Cythrocrome  c  Oksidase  subunit  I (COI). (Hebert et al ., 2003), menjelaskan bahwa gen COI  pada  mtDNA  mempunyai  banyak kelebihan  yaitu  sekuens  tidak  mengalami delesi  dan  insersi  yang  begitu  banyak  dan masih  mempertahankan  bagian  yang  bersifat alami.
Identifikasi  molekuler  sangat  penting dilakukan untuk mengkonfirmasi hasil analisis secara morfologi. Beragamnya bentuk, warna dan  ukuran  dari  kepiting  tidak  menutup kemungkinan  adanya  spesies  yang  belum teridentifikasi  ataupun  terjadinya  kesalahan dalam  penentuan  nama  spesies.  Mengingat pula bahwa zona intertidal merupakan wilayah pesisir  yang  banyak  menerima  gangguan, sehingga  rentan  terhadap  perubahan  yang secara  tidak  langsung  dapat  mempengaruhi adaptasi  organisme  didalamnya  termasuk kepiting. Oleh karena itu tujuan penelitian ini ialah  mengidentifikasi  berdasarkan  analisis secara  morfologi  dan  saat  ini  perlu  ditunjang dengan analisis molekuler menggunakan Gen COI supaya hasil yang dihasilkan lebih akurat khususnya  pada  kepiting  di  Pesisir  Pantai Minanga,  Kota  Manado.  Hasil  penelitian  ini dapat memberikan sumbangsih dalam pengembangan pengetahuan dalam penyediaan database biodiversitas.

## METODE PENELITIAN
Sampel  kepiting  dikoleksi  dari  Pesisir Pantai Minanga, Malalayang Satu, Kecamatan Malalayang,  Kota  Manado,  Sulawesi  utara pada titi koordinat 1°27’29”N dan 124°49’5”E (Gambar 1).
Gambar 1. Lokasi pengambilan sampel ditandai dengan garis berwarna ungu

## Teknik Pengambilan Sampel
Survei lokasi dilakukan pada siang hari untuk  menentukan  tempat  pengambilan sampel,  aksi  penangkapan  dilakukan  pada malam  hari  saat  surut  terendah.  Metode pengambilan sampel merujuk pada (Salvanes et  al .,  2018)    yaitu  menggunakan  metode dengan  target  pada  organisme  yang  sedang aktif  berpindah  tempat  dengan  berjalan  atau berenang di pesisir pantai. Tahapan penangkapan sampel mengikuti hasil penelitian  dari  (Rustikasari et  al .,  2021); (Amin et  al .,  2021);  (Lepa et  al .,  2022);  dan (Ilaria et  al .,  2022)  dengan  cara  menjelajahi lokasi  penelitian  untuk  menangkap  sampel kepiting  di  pesisir  pantai  dan  menangkap kepiting secara langsung menggunakan tangan yang  dilindungi  dengan  sarung  tangan  dan senter untuk penerangan.

## Identifikasi Secara Morfologi
Identifikasi  kepiting  dilakukan  dengan mengamati  bentuk  karapas,  bagian  anterior, bagian  posterior,  capit,  warna  dan  corak, periopod,  serta  abdomen  pada  kepiting. Telaah  morfologi  kepiting  merujuk  pada  (P. Ng, 1998); (Widyastuti, 2003);  (Poore, 2004);
(Ng  &  Davie,  2007) ; (Poupin &  Juncker, 2010) dan (Wahyudi, 2006).

## Analisis DNA Barcoding
Analisis  DNA  barcoding  dimulai dengan  isolasi  DNA  menggunakan  Genomic DNA  mini  kit Geneaid mengacu  pada protokol  yang  dikemukakan    (Sari et  al ., 2014), dengan tahapan sebagai berikut:
1.  Preparasi  sampel,  pengambilan  jaringan otot  pada  kepiting  yang  terletak  dibagian capit dan diletakkan pada tabung ependorf.
2.  Perusakan  antara  membran  sel  dan mitokondria, dilakukan dengan dua tahapan yaitu:
(a) menggunakan buffer GP1 dan dihomogenkan, setelah itu diinkubasi;
(b) menggunakan buffer GP2 dan dimasukkan didalam freezer , lalu disentrifugasi. Pellet dibuang dan supernatant dipindahkan ke tube baru.
3. Pemisahan, yaitu memisahkan DNA dengan senyawa ataupun enzim yang masih terikat dengan  menambahkan buffer GP3  pada GD  coloumn yang  sudah  dibungkus collection  tube dan  dihomogenkan  lalu disentrifugasi. Campuran yang berada pada collection  tube dibuang  dan  DNA  yang berada pada GD coloumn dimurnikan.
4. Pemurnian, dilakukan sebanyak 2 kali untuk memastikan  bahwa  sudah  tidak  ada senyawa  ataupun  enzim  yang  masih tertinggal. Pertama dengan buffer W1 dan kedua menggunakan wash buffer . Masing- masing  tahapan  pemurnian  disentrifugasi. Sampel  disentrifugasi  kembali  tanpa memasukkan cairan apapun.
5.  Tahap  akhir  proses  isolasi  dengan memasukkan elution  buffer yang  sudah diinkubasi pada thermoblock pada collection  tube baru,  lalu  disentrifugasi. DNA  murni  yang  telah  dihasilkan dimasukkan kedalam freezer untuk tahapan amplifikasi.

## Amplifikasi DNA
Setelah DNA murni didapatkan, maka dilakukan  perlipatgandaan  DNA  dengan menggunakan Polymerase  Chain  Reaction (PCR). Campurkan air murni sebanyak 15 µl, Kit  PCR  20  µl  dan  primer  LCO1490- HCO2198 (Folmer et al., 1994) sebanyak 1.5 µl  dan  Sampel  DNA  2  µl  pada  PCR tube . Sampel  dirunning  pada  PCR  diawali  dengan suhu  95°C  selama  3  menit,  dan  kemudian denaturasi 95°C 20 detik, Annealing 47°C 30 detik,  dan  elongasi  72°C  10  detik.  Proses amplifikasi  memakan  waktu  1  jam  37  menit dengan 35 siklus.

## Elektroforesis Gel
Setelah  dilakukannya  PCR,  tahap selanjutnya  ialah  elektroforesis  gel  dengan menimbang  0.8  gr  bubuk  agarose  yang dilarutkan  dengan  larutan  TBE  buffer  100ml kedalam gelas beker, panaskan menggunakan kompor  listrik  sampai  dengan  suhu  280°C selama  10  menit.  Setelah  mendidih  tuang kedalam  cetakan  agarose  dan  tunggu  hingga mengeras.  Setelah  mengeras  cetakan  agarose dipindahkan  ke  elektroforesis  chamber  yang sudah  dituangkan  larutan  TBE  buffer  dan tambahkan  etidium  bromida  10µl.  setelah  itu sampel PCR tadi dimasukkan kedalam sumur- sumur gel agarose. Kemudian diberi tegangan listrik  sebesar  130V  sekitar  30  menit.  Hasil dari  elektroforesis  dipindahkan  ke  UV- transluminator. Hasil elektroforesis gel dikirim  ke  jasa  pelayanan  sekuensing First
Base  Laboratories, Malaysia  dengan  kode (Sampel TA).

## Proses Sekuensing
Hasil amplifikasi gen COI
menggunakan primer folmer yang divisualisasikan menggunakaan elektroforesis gel agarose 0.8% melalui UV-Transluminator. Selanjutnya hasil amplifikasi disekuensing di First  Base  Laboratories,  Malaysia. Hasil sekuensing  diterbitkan  dalam  bentuk file FASTA,  dan  selanjutnya  analisis  identifikasi dengan  menggunakan  situs Basic  Local Aligment  Search  Tool (BLAST)  yang  sudah disediakan oleh GenBank (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/).  Data  yang terbaca menampilkan keragaman jenis kepiting  yang  memiliki  kecocokan  karakter DNA.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Analisis Morfologi
Hasil  analisa  morfologi  menunjukkan bahwa  sampel  yang  ditemukan  pada  lokasi penelitian  memiliki  karakteristik,  karapas berbentuk  oval  dan  cembung  pada  bagian dorsal, terdapat corak garis yang simetris pada bagian sisi kanan dan kiri dengan warna hijau kekuningan  (Gambar  2A).  Karakter  lain dicirikan oleh bagian anterior yang lebih lebar daripada  posterior,  dan  tidak  memiliki  duri pada  bagian  anterolateralnya  serta  memiliki capit  yang  sama  besar  dan  berwarna  hitam kecoklatan (Gambar 2B).
Gambar 2. Morfologi Atergatis floridus : (A) Dorsal Karapas; (B) Abdomen
Merujuk  pada  Poupin  &  Juncker (2010),  karakter  morfologi  yang  ditemukan pada  sampel  yang  dianalisis  menunjukkan spesies Atergatis
floridus. Namun,
Sukmaningrum et al . (2020) mendeskripsikan kepiting Atergatis  floridus memiliki  karapas berbentuk heksagonal, ciri ini berbeda dengan sampel kepiting yang ditemukan. Ng & Davie
B A 2,4 cm 2,4 cm Anterior Capit
(2007) menyatakan Atergatis floridus memiliki  kemiripan  dengan  kepiting  jenis Atergatis ocyroe . Perbedaan pada kedua jenis ini  terlihat  pada  bentuk  dan  corak  karapas. Kepiting Atergatis floridus mempunyai corak bunga-kekuningan,  dan  daerah  branchial karapas  lebih  menonjol,  Sementara  pada Atergatis  ocyroe memiliki  bintik-bintik  yang besar  berwarna  lebih  kuning,  dan  pola warnanya  lebih  bervariasi. Mcnamara  & Milograna  (2015), menyatakan  perbedaan tersebut  sebagai  spesies  yang  terlihat  sangat mirip ( cryptic species ). Oleh karena itu untuk meyakinkan  perbedaan  kedua  spesies  ini dilakukan analisis DNA barcoding.
Analisis DNA Barcoding
Hasil elektroforesis gel yang divisualisasikan  dengan  menggunakan  UV- Transluminator ditampilkan pada Gambar 3.
Gambar 3. Visualisasi hasil amplifikasi Gen COI kepiting yang ditangkap
Keberhasilan amplifikasi ditandai dengan  adanya  pita  DNA.  Visualisasi  pita sampel  (TA)  terbentuk  dengan  jelas  pada sekitar 710 bp, menunjukkan hasil DNA utuh. Novitasari et  al .  (2014) menyatakan bahwa DNA  utuh  dapat  terlihat  dari  pita  yang  tebal dan  jelas  dengan  tidak  menunjukkan  adanya smear .  Menurut  Ylmaz et  al. (2012)    faktor yang  mempengaruhi  penampakan  tampilan tipis  dan  tebalnya  visualisasi  elektroforesis tergantung  pada  kondisi  sampel  DNA  yang digunakan. Pengaruh tampilan hasil amplifikasi  ditentukan  oleh  beberapa  faktor:
1)  Proses  isolasi  DNA,  2)  Primer  yang digunakan,  dan  3)  faktor  kontaminan.  Pita sampel  (TA)  yang  berada  pada  urutan  DNA yang sesuai untuk proses sekuensing gen COI.
Menurut  Dhar et  al .  (2016),  pengkode  DNA hewan  pada  urutan  600-800  bp  cocok menggunakan sekuensing gen COI.
Sekuensing gen COI dilakukan dengan metode  sanger  sekuensing.  Menurut  Tasma (2016),  metode  sanger  sekuensing  yaitu metode  dengan menggunakan  DNA  template serta primer spesifik untuk reaksi dari proses sekuensing.  Proses  ini  dilakukan  dengan penjajaran dua arah, dengan arah yang berbeda yaitu  forward  (LCO1490)  dan  reverse (HCO2198).  Proses  sekuensing  ini dilakukan oleh perusahaan penyedia jasa bidang genetik First Base Laboratories, Malaysia . Penjajaran dua arah (bi-direksional) memiliki keuntungan,  dimana  sekuens  DNA  dapat saling mengkoreksi dengan sekuens komplementernya  apabila  terdapat  kesalahan jika  DNA  tidak  dapat  dibaca  (Untu et  al ., 2015).  Selanjutnya  Format  FASTA  pada penelitian ini sudah dilakukan oleh perusahaan First Base Laboratories, Malaysia dan  memiliki  pasang  basa  sebanyak  658, seperti yang tampak pada Gambar 4.
Ostell et al. (2001), menyatakan bahwa format  FASTA  bersisi  baris  definisi  dan karakter  dari  sekuens  yang  digunakan  untuk input  sebuah  variasi  dari  program  analisis. Oleh  karena  itu  format  FASTA  digunakan dalam  melihat  hasil query dalam  BLAST ( Basic  Local  Alignment  Search  Tool )  pada GenBank.  Pencarian  yang  menampilkan spesies kepiting (Sampel TA) dalam GenBank yang  memiliki  kemiripan  tertinggi,  yaitu Atergatis  floridus dengan  total score 1205, query  coverage yang  selaras  bernilai  100% dan E.Value 0.0, nilai ini menunjukkan bahwa sekuens  tersebut  identik  dengan  tingkat kemiripan  ( identity )  99.70%  seperti  pada Tabel 1.
Pada Tabel 1 tiap spesies memiliki kode aksensi  yang  digunakan  untuk  mendapatkan data pada GenBank dan juga untuk menginput penjajaran  ( alignment )  yang  memperlihatkan kemiripan dari sekuensing spesies. Penginputan penjajaran ( alignment ) menggunakan  aplikasi  Mega  11.  Menurut Saputri  (2018),  penjajaran  ( alignment )  dapat dilakukan  dalam  analisis  filogenetik  untuk melihat  jarak  genetik  serta  membantu identifikasi  pola  struktur  dan  fungsi  sekuens protein.
Jarak  genetik  Sampel  TA  dengan kepiting yang ada pada GenBank dapat dilihat melalui  alignment  yang  ada  pada  aplikasi
MEGA 11. Jarak genetik akan muncul dalam bentuk excel seperti Tabel 2.
Gambar 4. Format FASTA pada urutan nukleotida (Sampel TA)
Tabel 1. Hasil BLAST pada GenBank
Description Scientific Name Max Score Total Score Query Cover E. Value Per. Ident Accession Atergatis floridus mitochondrion, complete genome. Atergatis floridus 1205 1205 100% 0.0 99.70% NC_037201.1 Brachyura sp. LPdivOTU224 isolate 3 cytochrome oxidase subunit I (COI) gene, partial cds; mitochondrial. Brachyura sp. LPdivOTU224 1199 1199 100% 0.0 99.54% HM464283.1 Atergatis floridus voucher BIOUG<CAN>:MaXan001 COI gene, partial sequence; mitochondrial. Atergatis floridus 1195 1195 99% 0.0 99.54% DQ889081.1 Select seq HM751012.1 Lophozozymus anaglyptus voucher ZRC 2010.0145 cytochrome oxidase subunit I (COI) gene, partial cds; mitochondrial. Lophozozymus anaglyptus 1051 1051 91% 0.0 98.33% HM751012.1 Actaea semblatae isolate De173001-2-1 cytochrome c oxidase subunit I (COI) gene, partial cds; mitochondrial. Actaea semblatae 734 734 100% 0.00 86.82% JX502947.1
Berdasarkan  Tabel  2,  jarak  genetik sampel  TA  paling  dekat  dengan Atergatis floridus (PH)  yang  berasal  dari  Philipina (NC_037201.1)  sebesar  99.7  dan Atergatis floridus (DQ889081.1)  sebesar  99.5.  Dengan demikian,  sampel  kepiting  yang  ditangkap dari pesisir Pantai Minanga, Malalayang Satu, Kecamatan Malalayang, Kota Manado,
Sulawesi Utara terkonfirmasi secara molekuler sebagai kepiting Atergatis floridus .
Hal  ini  sama  dengan  hasil  identifikasi morfologi. Sampel (TA) memiliki
kekerabatan  dekat  sebesar  99.5  dengan Brachyura  sp ,  dan  juga  hal  ini  diketahui bahwa kepiting Atergatis floridus masuk pada infraordo Brachyura.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  ini  telah  menunjukkan bahwa  kepiting  yang  ditemukan  di  zona intertidal  Pesisir  Pantai  Minanga  Kota Manado  dengan  karapas  berbentuk  oval  dan cembung  pada  bagian dorsal,  memiliki  corak garis yang simetris pada bagian sisi kanan dan kirinya  serta  dengan  corak  yang  warna  hijau kekuningan  secara  morfologi  dan  presentase molekuler  99,70%  terkonfirmasi  sebagai Atergatis floridus .
Tabel 2. Jarak Genetik Spesies
No. Spesimen 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 TA 100 2 MZ559712.1_Chlorodiella spinimera (PG). 85.6 100 3 MW277770.1_Pseudoliomera speciosa (HI-US). 85.3 85.3 100 4 JX502947.1_Actaea semblatae (KR). 86.2 86.1 85.0 100 5 MT162488.1_Atergatis integerrimus (TH). 87.0 85.5 83.8 84.1 100 6 MW277946.1_Platypodia eydouxi (HI-US). 90.2 86.2 85.9 85.0 86.2 100 7 HM464282.1_Brachyura sp. (QLD-AU). 98.3 85.2 84.7 85.9 86.2 89.6 100 8 HM464283.1_Brachyura sp. (QLD-AU). 99.5 85.3 85.2 86.7 86.9 90.4 98.2 100 9 DQ889081.1_Atergatis floridus. 99.5 85.3 85.2 86.7 86.9 90.4 98.2 100 100 10 NC_037201.1_Atergatis floridus (PH). 99.7 85.3 85 86.2 86.7 90.2 98.6 99.5 99.5 100

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah,  M.R.A.,  Paransa,  D.S.J.,  Mantiri, D.M.H.,  Angkow,  E.D.,  Angmalisang,
P. A., & Mudeng, J. D.  2018. Distribusi
Pigmen  Karoitenoid  pada  kepoiting grapsus sp dengan menggunakan metode kromatografi  lapis  tipis.  Jurnal  Pesisir dan Laut Tropis. Jurnal Pesisir Dan Laut Tropis , 2 (1), 19–25.
Amin, F., Paransa, D.S.J., Ompi, M., Mantiri, D.M.H., Boneka, F.B., & Kalesaran, O.
2021. Identifikasi Morfologi dan Keanekaragaman Kepiting pada Timbunan  Berbatu  di  Pantai  Pesisir Malalayang  Dua  Kota  Manado. Jurnal Pesisir Dan Laut Tropis , 9 (3), 123–132.
https://doi.org/10.35800/jplt.9.3.2021.3
7746.
Dhar,  B.,  Ghose,  A.,  Kundu,  S.,  Malvika,  S., Neelima,  D.  N.,  Choudhury,  A.,  & Ghosh,  S.  2016. DNA barcoding: Molecular  positioning  of  living  fossils (horseshoe  crab).  In  DNA  barcoding  in marine perspectives. Spinger, Cham.
Edwards,  M.  H. 1834.  Histoire  Naturelle  des Crustaces: Vol. I (pp. 1–468).
Edwards, M. H.   1837. Histoire naturelle des Crustacés  comprenant  l’anatomie,  la physiologie  et  la  classification  de  ces animaux.  Librairie  Encyclopedique  de Roret : Vol. II (pp. 1–532).
Hebert,  P.D.N.,  Cywinska,  A.,  Ball,  S.L.,  & deWaard, J.R. 2003. Biological identifications  through  DNA  barcodes. Proceedings  of  the  Royal  Society  of London.  Series  B:  Biological  Sciences , 270 (1512),
313–321. https://doi.org/10.1098/rspb.2002.2218.
Ilaria, C.L., Paransa, D.S.J., Mantiri, D.M.H., Schaduw,  J.N.W.,  Darwisito,  S.,  & Manginsela, F.B.  2022. Morphology of Crabs  in  Minanga  Beach,  Malalayang Satu,  Manado  City. Jurnal  Ilmiah
PLATAX , 10 (2), 57–66. https://doi.org/10.35800/jip.v10i2.4168
8.
Lepa, B.G., Paransa, D.S.J., Mantiri, D.M.H., Boneka, F.B., Lumoindong, F., & Tilaar, F.F.  2022. Identification And Diversity of Crab In Pondang And Lopana Beach Waters,  South  Minahasa. Jurnal  Ilmiah
PLATAX , 10 (1), 85–91. https://doi.org/10.35800/jip.v10i1.3800 4.
Mcnamara,  J.C.,  &  Milograna,  S.  2015. Adaptive  Color  Change  and  the Molecular  Endocrinology  of  Pigment Translocation in
Crustacean Chromatophores. In The Natural History of the Crustacea (Vol. 4, pp. 68–102).
Ng, P.  1998. The Living Marine Resources of the  Western  Central  Pacific.  In  K.  E. Carpenter, Crabs (pp. 1045–1083). Food and  Agriculture  Organization  of  United Nations.
Ng,  P.K.L.,  &  Davie,  P.J.  F.  2007.  On  the identity  of  Atergatis  floridus  (Linnaeus, 1767)  and  recognition  of  Atergatis ocyroe (Herbst, 1901) as a valid species from  the  Indian  Ocean  (Crustacea: Brachyura:  Xanthidae). The  Raffles Bulletin of Zoology , 16 , 169–175.
Novitasari, D., Elvyra, R., & Roslim, D. 2014. Teknik  Isolasi  Dan  Elektroforesis  DNA
Total Pada Kryptopterus apogon (Bleeker 1851) dari Sungai Kampar Kiri Dan  Tapung  Hilir  Kabupaten  Kampar
Provinsi Riau.
Ostell, J.M., Wheelan, S.J., & Kans, J.A. 2001. The  NCBI  Data  Model.  In:  A.  D. Baxevanis  &  B.  F.  F.  Ouellette  (Eds.). Bioinformatics: A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Second Edition.
Paransa,  D.S.J.,  Mantiri,  D.M.H.,  Lumenta,
C.,  Ompi,  M.,  &  Pratasik,  S.B.  2019. Morphological and Genetic Characteristics of Lightfoot Crab Grapsus Albolineatus Latreille in Milbert, 1812 from Manado Bay, North Sulawesi. Jurnal  AACL  Bioflux , 12 (3),
804–811.
Poore, G.C. 2004. M arine decapod Crustacea of  southern  Australia:  A  guide  to identification. CSIRO Publishing.
Poupin, J., & Juncker, M.  2010. A guide to the decapod  crustaceans  of  the  south pacific/guide des crustaces decapodes du pacifique  sud.  SPC  FAME  Digital Library.
Rustikasari, I., Paransa, D. S. J., Kaligis, E. Y., Ompi, M., Pelle, W. E., & Pratasik, S. B. 2021.  Morphological  identification  of crabs in the rocky coast of Manado Bay.
Jurnal  Ilmiah  PLATAX , 9 (2),  210–216.
https://doi.org/10.35800/jip.9.2.2021.35 200.
Salvanes, A. G. V., Devine, J., Jensen, K. H., Hestetun, J. T., Sjøtun, K., & Glenner, H. 2018.  Marine Ecological Field Methods. A  Guide  for  Marine  Biologists  and Fisheries Scientists. John Wiley & Sons.
Saputri,  A.  2018.  Analisis  dan  Visualisasi DNA  Multiple  Sequence  Alignment Menggunakan  Dynamic  Programming Needleman-Wunsch Dan Neighbor- Joining  Tree.  Fakultas  Sains  dan Teknologi UIN Hidayatullah.
Sari,  S.  K.,  Dwi,  L.,  Mazieda,  M.  N.,  & Sulasmi,  E.  S.  2014.  Optimasi  Teknik Isolasi  dan  Purifikasi  DNA  pada  Daun Cabai  Rawit  (Capsicum  rutescens  cv. Cakra  Hijau)  Menggunakan  Genomic DNA  Mini  Kit  (Plant)  GENEAID.
Proceeding Biology Education Conference , 65–70.
Stimpson, W.  1858. Prodromus descriptionis animalium  evertebratorum,  quae  in Expeditione  ad  Oceanum  Pacificum Septentrionalem,  a  Republica  Federata missa, Cadwaladaro Ringgold et Johanne  Rodgers  ducibus,  observavit  et descripsit  W.  Stimpson.  Pars  IV. Crustacea  Cancroidea  et  Corystoidea, Cancridae. Proceedings of the Academy of Natural Sciences of Philadelphia , 31– 40.
Suherman,  S.  P.,  &  Arsad,  S.  2020.  Analisis
Filogenetik Dan DNA Barcode Ektoparasit Octolasmis cor Yang Terinfestasi Pada Kepiting Bakau Scylla spp. Jambura  Fish  Processing  Journal ,
2 (2),  94–100.  https://doi.org/10.37905/ jfpj.v2i2.6969.
Sukmaningrum, T., Adji, B. K., Pratiwi, E. M., Larasati, B., Sayekti, P. R., Maulana, I., &  Eprilurahman, R.   2020. Diversity  of crabs  in  the  intertidal  zone  at  Sundak Beach,  Gunungkidul,  Indonesia. AIP Conference Proceedings .
Tallei,  T.  E.,  Koneri,  R.,  &  Kolondam,  B.  J.
2017. Sequence Analysis of the Cytochrome  C  Oxidase  Subunit  I  Gene of  Pseudagrion  pilidorsum  (Odonata: Coenagrionidae). Makara  Journal  of Science , 21 (1),  43–52.  https://doi.org/ 10.7454/mss.v21i1.7536.
Tasma,  I.  M.    2016.  Pemanfaatan  Teknologi Sekuensing Genom untuk Mempercepat Program  Pemuliaan  Tanaman. Jurnal Penelitian Dan Pengembangan Pertanian , 34 (4), 159–168. https://doi.org/10.21082/jp3.v34n4.2015 .p159-168.
Untu, P., Rumengan, I. F. M., & Ginting, E. L. 2015. Identifikasi Mikroba yang Koeksis Dengan  Ascidia  Lissoclinum  patella Menggunakan Sekuens Gen 16S rRNA. Jurnal  Pesisir  Dan  Laut  Tropis , 3 (2),
23–33. https://doi.org/10.35800/
jplt.3.2.2015.10110.
Wahyudi, A. J. 2006. Kepiting Beracun Suku
Xanthidae: Kajian dan Hipotesis Faktor- Faktor  Penyebabnya. Jurnal  Oseana , XXXI (4), 31–38.
Widyastuti,  E.  2003.  Kepiting  Beracun,  Suk Xanthidae. Oseana , XXVIII (2), 11–19.
Ylmaz,  M.,  Ozic,  C.,  &  Gok,  lhami.  2012. Principles of Nucleic Acid Separation by Agarose  Gel  Electrophoresis.  In Gel Electrophoresis - Principles and Basics . InTech. https://doi.org/10.5772/38654 .