Evaluasi  Keamanan  dari  Pengembangan  Formula Nanopartikel Kurkumin pada Mencit dan Potensi Antioksidan In-Vitro

## (Safety Evaluation of Curcumin Nanoparticle Formula in Mice and Antioxidants Potency In-Vitro)

## NI MADE DWI SANDHIUTAMI*, RIKA SARI DEWI, SONDANG KHAIRANI, SANG AYU MADE WIDYADARI
Fakultas Farmasi Universitas Pancasila, Jalan Raya Lenteng Agung, Srengseng Sawah Jagakarsa, Jakarta Selatan, 12640, Indonesia
Diterima 9 Januari 2022, Disetujui  7 April 2022
JURNAL ILMU KEFARMASIAN  INDONESIA, April 2022,  hlm. 63-72 ISSN 1693-1831, E-ISSN 2614-6495
Abstract: Curcumin  has  various  activities  such  as  antioxidant,  anti-inﬂ ammatory,  antitumor,  and antibacterial. The bioavailability of curcumin is low and needs to be optimized. The manufacture of curcumin nanoparticles with several solvents is one way to increase the bioavailability of curcumin. This study aims to examine the safety of curcumin nanoparticles through acute and subchronic toxicity tests  and  the  antioxidant  activity  of  the  formula. Acute  toxicity  test  was  performed  by  OECD  425 method, using AOT425StatPgm device for the LD 50 . Subchronic toxicity test was carried out by OECD 407 method using 4 groups: normal, a dose of 50;100; and 200 mg/kg BW for 28 days, then evaluate body weight, clinical biochemistry, and hematology. An antioxidant activity test was carried out using DPPH. The results showed were the LD 50 value of curcumin nanoparticles was>5000 mg/kg BW and the results of the subchronic toxicity test (p>0.05) did not show any signiﬁ cant diﬀ erences in AST, ALT, BUN, creatinine, albumin, and hematology compare to the normal group. The IC 50 of curcumin and curcumin nanoparticles were 118.76 µg/mL and 90.87 µg/mL, respectively. It can be concluded that curcumin nanoparticles are safe and do not aﬀ ect kidney and liver function and the antioxidant activity of the curcumin nanoparticle formulation is greater than that of curcumin.
Keywords: curcumin nanoparticles, acute toxicity, subchronic toxicity, antioxidant, DPPH.
Abstrak: Kurkumin  memiliki  berbagai  aktivitas  seperti  antioksidan,  anti-inﬂ amasi,  antitumor,  dan antibakteri. Bioavaibilitas kurkumin rendah dan perlu dioptimalkan. Pembuatan nanopartikel kurkumin dengan  beberapa  pelarut  merupakan  salah  satu  cara  untuk  meningkatkan  bioavailabilitas  kurkumin. Penelitian ini bertujuan menguji keamanan nanopartikel kurkumin melalui uji toksisitas akut dan subkronis serta aktivitas antioksidan formula nanopartikel kurkumin. Uji toksisitas akut dilakukan dengan metode OECD 425, menggunakan perangkat AOT425StatPgm untuk penentuan LD 50 . Uji toksisitas subkronik dilakukan dengan metode OECD 407 menggunakan 4 kelompok dosis yaitu normal, dosis 50;100; dan 200 mg/kg  BB selama 28 hari, serta dilakukan evaluasi berat badan, parameter biokimia klinis, dan parameter hematologi. Uji aktivitas antioksidan kurkumin dan nanopartikel kurkumin secara in vitro , dilakukan  dengan  menggunakan  DPPH.  Hasil  penilitian  menunjukkan  yaitu  nilai  LD 50 nanopartikel kurkumin  >5000  mg/kgBB  dan  hasil  uji  toksisitas  subkronik  (p>0,05)  tidak  menunjukan  adanya perbedaan bermakna pada AST, ALT, BUN, kreatinin, albumin dan hematologi dibandingkan dengan kelompok kontrol. Nilai rata-rata IC 50 kurkumin dan nanopartikel kurkumin adalah 118,76µg/mL dan 90,87µg/mL. Dapat disimpulkan bahwa nanopartikel kurkumin aman dan tidak mempengaruhi fungsi ginjal dan hati serta aktivitas antioksidan formulasi nanopartikel kurkumin lebih besar dibandingkan dengan kurkumin.
Kata kunci: nanopartikel kurkumin, toksisitas akut, toksisitas subkronik, antioksidan, DPPH.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
kurkumin  juga  banyak  ditujukan  untuk  digunakan dalam bentuk suplemen ataupun sebagai obat kanker, yang dimana dalam penggunaannya digunakan untuk penggunaan secara jangka panjang. Hingga saat ini belum ada data yang mendukung informasi keamanan mengenai sediaan nanopartikel tersebut.  Oleh karena itu,  agar  sediaan  dapat  digunakan  secara  aman dibutuhkan pengujian toksisitas sediaan nanopartikel kurkumin  tersebut.  Keamanan  dalam  penggunaan obat tradisional berkaitan dengan segi toksikologi dan efek yang  tidak  dikehendaki  pada  obat  tradisional. Untuk mendapatkan obat tradisional yang aman, proﬁ l toksisitas  penting  untuk  diteliti  lebih  jauh  seperti halnya pada obat sintetik (7) .
Secara  umum  toksisitas  dibedakan  menjadi toksisitas  akut,  toksisitas  subkronik  dan  toksisitas kronik (8) .  Salah  satu  metode  yang  dapat  digunakan untuk  uji  toksisitas  adalah  metode  OECD  ( The Organisation  for  Economic  Co-operation  and Development ).  OECD  merupakan  standar  yang diterima secara internasional untuk menguji keamanan produk, meliputi bahan kimiawi, pestisida, perawatan dan  lain-lain.  Metode  ini  dipilih  untuk  menguji keamanan  dengan  memperkirakan  dosis  toksik senyawa tersebut. Metode ini dianggap sebagai metode yang lebih ideal dikarenakan metode ini menggunakan jumlah  hewan  coba  yang  sedikit  sehingga  sesuai dengan  kriteria animal  welfare yang  lebih  baik, aplikasi  metode  yang  lebih  mudah,  waktu  uji  yang relatif cepat serta dapat sekaligus memperkirakan nilai LD 50 dari suatu senyawa (9) .
Hasil  pengembangan  formula  nanopartikel kurkumin juga perlu diteliti secara ilmiah aktivitasnya, salah satunya adalah dengan membuktikan aktivitas antioksidan yang lebih baik dibandingkan kurkumin tanpa  modifikasi.  Sebagai  senyawa  antioksidan, kurkumin dapat mengurangi atau mencegah berbagai kerusakan sel. Secara umum, antioksidan merupakan senyawa  yang  dapat  menunda,  memperlambat, dan  mencegah  proses  oksidasi,  atau  secara  khusus merupakan  zat  yang  dapat  mencegah  terjadinya reaksi radikal bebas dalam oksidasi lipid. Aktivitas antioksidan kurkumin diperoleh dari gugus fenolik OH yang ditunjukkan dengan adanya penghambatan lipid peroksidasi dan penangkal radikal bebas DPPH( 1,1- diphenyl-2-picryl  hydrazyl, radikal  oksida  nitrit).
(10) Berdasarkan  uraian  tersebut,  maka  dilakukan uji  toksisitas  akut  sediaan  nanopartikel  kurkumin mengunakan  metode  OECD  425  dan  pengujian toksisitas subkronik  dengan metode OECD 407 pada hewan  coba  mencit  serta  uji  aktivitas  antioksidan hasil pengembangan formulasi nanopartikel kurkumin secara in vitro .

## PENDAHULUAN
INDONESIA  merupakan  tempat  tumbuh  bagi 80  persen  tanaman  obat  yang  ada  di  dunia  yang diantaranya sudah digunakan sebagai bahan baku obat tradisional. Salah satu bahan alam yang telah banyak diuji  memiliki  efek  farmakologi  adalah  kurkumin. Kurkumin merupakan senyawa polifenol dari Curcuma longa yang tidak larut dalam air yang bersifat lipoﬁ lik, tetapi larut dalam etanol, dimetilsulfoksida dan aseton. Dalam dua dekade terakhir, telah banyak penelitian tentang  kurkumin  dikarenakan  kemampuannya sebagai  antikanker,  antioksidan,  anti-inflamasi, antitumor dan antibakteri (1) . Hanya saja penggunaan senyawa  kurkumin  dalam  pengobatan  memiliki beberapa kekurangan seperti ketidaklarutan kurkumin dalam  air,  dapat  terdegradasi  dalam  pH  alkali  dan dapat mengalami fotodegradasi (2) . Selain itu, kurkumin memiliki  penyerapan  pada  usus  yang  rendah,  serta waktu  pencernaan  yang  terlalu  cepat  dalam  tubuh, sehingga  dalam  penggunaannya  kurkumin  menjadi terbatas (3) .
Upaya untuk meningkatkan penyerapan di saluran cerna adalah dengan modiﬁ kasi bentuk kurkumin yaitu menjadi  bentuk  nanopartikel.  Modiﬁ kasi  kurkumin menjadi  bentuk  nanopartikel  dapat  meningkatkan kelarutannya sehingga akan meningkatkan penyerapan dan bioavailabititasnya serta dapat memberikan efek terapi secara cepat dan optimal (4) .
Modifikasi  bentuk  kurkumin  menjadi  bentuk nanopartikel  telah  dikembangkan,  dievaluasi  dan dikarakterisasi oleh peneliti sebelumnya. Berdasarkan penelitian yang dilakukan Arozal dkk. (2021), sediaan nanopartikel kurkumin dibuat dengan mendispersikan kurkumin ke dalam pelarut campur serta menggunakan polimer  kitosan  dan  ditautkan  dengan  Natrium Tripolifosfat (NaTTP) (5) . Setiap pelarut campur yang digunakan memiliki tingkat toksisitas yang berbeda- beda  sehingga  perlu  diketahui  tingkat  toksisitas nanopartikel kurkumin. Dengan modiﬁ kasi tersebut, ukuran  partikel  kurkumin  menjadi  lebih  kecil. Pengubahan ukuran partikel ke dalam skala nano dapat menghasilkan  peningkatkan  bioavailabilitas  serta ketersediaan obat didalam organ. Peningkatan jumlah obat  dalam  darah  pada  penghantaran  sistemik  juga akan meningkatkan resiko munculnya efek samping maupun efek balik, hingga pada resiko tercapainya batas kadar toksik (6) .
Pengembangan formula nanopartikel kurkumin agar  dapat  digunakan  dalam  pengobatan  harus melalui berbagai pengujian, baik pengujian keamanan atau  toksisitas  dan  aktivitas.  Uji  toksisitas  penting untuk dilakukan untuk menjamin keamanan sediaan saat  digunakan.  Selain  itu,  sediaan  nanopartikel

## BAHAN DAN METODE
BAHAN. Bahan  yang  digunakan  yaitu  Kurkumin (PT.  Plamed  Green  Science  Limited);  Kitosan (Aldrich, Indonesia); Kremofor (Aldrich, Indonesia); Natrium  Tripolifosfat  (PT.  Brataco);  Tween  80; Gliserin;  Etanol  70%;  Propilen  Glikol;  DMSO; Maltodekstrin; CMC Na; Etanol 96%; Aqua Desilata; Na EDTA 10%; Pereaksi AST (Reiged Diagnostics); Pereaksi ALT  (Reiged  Diagnostics); Perekasi  BUN (Reiged  Diagnostics);  Pereaksi  Kreatinin  (Reiged Diagnostics); Perekasi Albumin (Reiged Diagnostics); Vitamin C; serbuk DPPH; Methanol pro analisis dan hewan coba mencit jenis kelamin betina dan jantan dengan galur DDY berumur 2-3 bulan dengan berat 20-30 gram.
ALAT .  Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  Timbangan Analitik AG204 (Mettler, Amerika); Alat-Alat Gelas (Pyrex, Jerman); Spektrofotometer  UV-Vis  1900-UV  (Shimadzu, Jepang); Hematology Analyzer MEK 6450 K (Nihon, Jepang); Microlab 300 & 300 LX EliTech Clinical Systems ; Spuit ; Sonde;  Botol  Coklat;  Mikropipet (Dragonlab); Pipa Kapiler Darah; Tabung Mikrotube K 3 EDTA (Vaculab); Tabung Appendorf; Sentrifugator PLC-03 (Gemmy, Taiwan). Perangkat lunak berupa AOT425StatPgm  ( Westat,  U.S  Enviromental Protection Agency ).
ME TODE.  Pe mbu at an  Nanopartikel Kurkumin. PKitosan dilarutkan dalam asam asetat glasial menggunakan magnetic stirer . Senyawa aktif kurkumin  ditambahkan  pelarut  campur  (propilen glikol,  etanol  70%,  DMSO,  tween  80,  gliserin, dan  kremofor).  Kemudian  ditambahkan  larutan kitosan 1% dan diaduk menggunakan menggunakan magnetic stirer . Selanjutnya ditetesi dengan NaTTP dalam magnetic  stirer rpm  300  hingga  terbentuk nanopartikel. Setelah itu, nanopartikel tetap distirer diatas magnetic stirer selama 15 menit agar didapat larutan nanopartikel kurkumin yang stabil. Pembuatan dan  karakterisasi  nanopartikel  kurkumin  yang digunakan pada penelitian ini, telah dilakukan pada penelitian sebelumnya (5) .
Pembuatan Serbuk Nanopartikel Kurkumin. Nanopartikel  kurkumin  dikeringkan  dengan menggunakan  pengering  semprot  ( spray  drying ) dengan  maltodekstrin  sebagai  bahan  pengisi.  Suhu inlet/outlet yang digunakan sebesar 160ºC dan 80ºC
(11) . Pengujian  Toksisitas  Akut. Penelitian  ini merupakan  penelitian  eksperimental  dan  dilakukan setelah mendapatkan persetujuan etik dari Komite Etik
Penelitian Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia-RSUPN Dr. Cipto Mangunkusumo dengan nomor:KET-65/UN2.F1/ETIK/PPM.00.02/2021. Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  Farmakologi Fakultas  Farmasi  Universitas  Pancasila,  Srengseng Sawah Jagakarsa, Jakarta Selatan. Uji toksisitas akut dilakukan untuk mengetahui adanya efek toksik yang dapat timbul setelah pemberian nanopartikel kurkumin secara  akut  serta  untuk  menentukan  nilai  LD 50 nanopartikel  kurkumin.  Hewan  uji  yang  digunakan mencit, terlebih dahulu dilakukan aklimatisasi dalam waktu  1  minggu.  Kondisi  ruangan  percobaan  juga dijaga setiap hari. Suhu ruangan diatur pada rentang 27 ± 2ºC, dengan kelembapan ruangan pada rentang 50- 70%. Pencahayaan pada mencit disesuaikan dengan aturan OECD yaitu pada 12 jam terang dan 12 jam gelap. Dosis uji diberikan secara oral menggunakan sonde lambung dengan dosis tunggal.
Pengujian toksisitas akut OECD 425 ( Up-and- Down Procedure ) dilakukan sebagai berikut: Dalam waktu 48 jam, mencit diberikan dosis secara bertahap. Respon  pada  mencit  menentukan  perlakuan  pada mencit selanjutnya. Pada pengujian pertama dilakukan pemberian  dosis  awal  pada  mencit  yaitu  dengan dosis 175 mg/kg BB. Apabila hewan tersebut hidup, maka hewan selanjutnya diberikan dosis yang lebih tinggi tetapi apabila mencit mati atau sekarat, mencit selanjutnya diberikan dengan dosis yang lebih rendah. Pemberian  dosis  dengan  cara  ini  dilakukan  secara berulang  hingga  memenuhi  kriteria  penghentian pengujian  oleh  OECD.  Pengujian  dihentikan  bila memenuhi kriteria tiga hewan hidup pada batas atas pengujian yaitu 5000 mg/kg BB. Lima pengulangan muncul  pada  6  hewan  yang  diujikan.  Ketika  dosis terendah saat ditemukan hewan uji yang hidup, setelah itu dilakukan uji pada konsentrasi diatas dosis terendah tersebut dan uji pada kedua konsentrasi ini dilakukan sebanyak  2  kali  serta  pengujian  dihentikan  apabila ditemukan  3  kali  kematian  pada  4  konsentrasi  uji yang sama. Pengamatan hewan uji pertama dilakukan secara individual minimal 30 menit sampai dengan 24  jam  kemudian  dilakukan  hingga  7  hari  kecuali jika  hewannya  mati  maka  pengamatan  dihentikan. Berdasarkan OECD 425, waktu pengamatan adalah 14  hari,  maka  dilakukan  pengamatan  dalam  waktu 14 hari sebagai data pembanding. Pengamatan pada hewan  uji  dilakukan  untuk  mendapatkan  informasi adanya  pengaruh  pemberian  sediaan  uji  terhadap aktivitas hewan uji dan gejala toksisitas yang timbul pada hewan uji. Pengamatan gejala klinis berdasarkan kriteria yang ditentukan oleh OECD 425 yang nantinya akan  menjadi  data  kualitatif.  Selain  itu  dilakukan pengamatan pada gejala toksisitas melalui observasi
66 SANDHIUTAMI ET AL.
signiﬁ cancy diﬀ erence (LSD) atau biasa disebut uji Beda Nyata Terkecil (BNT). Semua analaisis statistik dilakukan  menggunakan  program  IBM  SPSS  V.22 pada tingkat kepercayaan 95% (p=0,05).
Pengukuran Aktivitas Antioksidan Secara In Vitro . Dibuat larutan DPPH (0,4 mM) dalam metanol proanalisis hingga 100,0 mL, kemudian ditempatkan dalam botol gelap. Larutan vitamin C untuk dibuat dengan konsentrasi 2 μg/mL, 4 μg/mL, 6 μg/mL, 8 μg/ mL, 10 μg/mL. Nanopartikel kurkumin dan kurkumin dibuat dalam konsentrasi 30 μg/mL, 60 μg/mL, 90 μg/ mL,120 μg/mL dan 150 μg/mL.  Pengukuran aktivitas antioksidan  dilakukan  dengan  masing-masing konsentrasi zat uji ditambahkan 1 ml larutan DPPH 0,4  mM  kemudian  ditambahkan  metanol  sampai tanda 5,0 ml lalu dihomogenkan. Setelah homogen diinkubasi pada suhu 37ºC selama 30 menit. Serapan diukur pada panjang gelombang 515 nm. Parameter yang digunakan untuk uji penangkapan radikal DPPH ini adalah nilai IC 50 . IC 50 yaitu konsentrasi antioksidan (µg/mL)  yang  mampu  menghambat  50%  aktivitas radikal bebas DPPH. Nilai IC 50 didapatkan dengan cara membuat kurva hubungan konsentrasi (x) terhadap % hambatan (y). nilai IC 50 didapat dengan menggunakan persamaan  y  =  a  +  b  x,  dimana  y=  50  dan  nilai  x menunjukan nilai IC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji Toksisitas Akut Nanopartikel Kurkumin . Pada penelitian ini, nilai LD 50 dari nanopartikel kurkumin adalah lebih besar dari 5000 mg/kgBB. Nilai tersebut menunjukkan  nanopartikel  kurkumin  termasuk  ke dalam kategori praktis tidak toksik, baik dalam waktu 24 jam sampai dengan 14 hari pada dosis terkecil 175 mg/kg  BB  maupun  terbesar  5000  mg/kg  BB  tidak menunjukkan adanya kematian pada hewan uji. Hasil penentuan nilai LD 50 dengan menggunakan perangkat lunak AOT425StatPgm, dapat dilihat pada tabel 1.
pada tremor, konvulsi, salivasi, diare, alergi, koma, reaksi pada kulit, mata, righting reﬂ ex dan aktivitas. Data dan pelaporan hasil pengujian disajikan dalam bentuk tabel meliputi jumlah hewan, berat badan saat kematian serta parameter gejala toksisitas yang terjadi. Penentuan LD 50 dilakukan secara statistik mengikuti prinsip  maximum likehood  method .  Seluruh  dosis dan  respon  hewan  uji  yang  dihasilkan  dimasukkan ke dalam software AOT425StatPgm untuk kemudian ditentukan estimasi nilai LD 50 (12) .
Pengujian Toksisitas Subkronik. Uji Toksisitas Subkronik  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini mengacu  pada  metode  OECD  407: Acute  Oral Toxicity – Repeated Dose 28-Day Oral Toxicity Study in Rodents yang berlangsung selama 28 hari dengan menggunakan  4  kelompok  dosis  yaitu  kelompok kontrol  normal,  kelompok  dosis  50  mg/kg  BB, kelompok dosis 100 mg/kg BB, dan kelompok dosis 200 mg/kg BB. Tiap kelompok dosis menggunakan 5 ekor mencit betina dan 5 ekor mencit jantan. Sediaan uji  berupa  nanopartikel  kurkumin  diberikan  pada hewan  uji  setiap  hari  atau  minimal  5  hari  dalam  1 minggu  selama  28  hari.  Percobaan  dimulai  dengan melakukan aklimatisasi terhadap hewan uji di ruang percobaan selama kurang lebih 7 hari. Empat puluh ekor hewan uji dikelompokkan secara acak sehingga penyebaran berat badan merata untuk semua kelompok dosis dengan variasi berat badan tidak lebih dari 20% dari  rata-rata  berat  badan (13) .  Setelah  dilakukan  uji toksisitas  subkronik  dilakukan  pengambilan  darah melalui  sinus  orbitalis  menggunakan  pipa  kapiler. Sebanyak 0,5 mL darah dimasukkan kedalam tabung mikrotube  K 3 EDTA  yang  telah  diisi  antikoagulan (EDTA)  sebanyak  10μL.  Pemeriksaan  profil hematologi dilakukan secara automatic dengan prinsip electrical impedance (WBC, RBC, RDW, platelet), Kolorimetri  (Hemoglobin),  Kalkukalsi  (MCV, MHC, MCHC, Hematokrit) menggunakan alat Auto Hematology Analzer Nihon Kohden MEK 6450 K di Laboratorium Pusat Studi Satwa Bogor. Pemeriksaan biokimia  klinis  dilakukan  untuk  parameter AST ( Aspartate  aminotransferase )  atau  SGOT  ( Serum glutamic  axaloacetic  transaminase ), ALT  ( Alanine aminotransferase )  atau  SGPT  ( Serum  glutamic pyruvic transaminase ), BUN ( Blood Urea Nitrogen ),
Kreatinin, Albumin dengan mengikuti prosedur yang terdapat pada kit pengujian.
Analisis Data Pengujian Toksisitas Subkronik. Hasil  analisis  data  diberikan  dalam  bentuk  nilai rata-rata  ±  SD. Analisis  statistik  dilakukan  dengan menggunakan  metode oneway ANOVA  yang sebelumnya  data  telah  di  uji  homogenitas  dan normalitasnya. Apabila  terdapat  perbedaan  antar kelompok maka dilakukan uji dengan metode least
Tabel 1. Hasil LD 50 nanopartikel kurkumin.
Keterangan: O = hewan hidup, X= hewan mati
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia  67

## Vol 20, 2022
Pada  tabel  1.  dapat  dilihat  pada  semua  dosis pemberian  tidak  ditemukan  adanya  kematian baik  pada  pengamatan  jangka  pendek  (48  jam) ataupun  pengamatan  jangka  panjang  (14  hari). Pengujian  dihentikan  setelah  memenuhi  kriteria penghentian pengujian berdasarkan OECD, dimana tidak  ditemukan  adanya  kematian  hewan  uji  pada pemberian  dosis  tertinggi  yaitu  5000  mg/kgBB sebanyak tiga kali. Hasil pengamatan perilaku hewan uji  yang  telah  dilakukan  pada  menit  ke-30  sampai dengan 14 hari menunjukkan tidak terjadi reaksi alergi pada mencit.  Hewan uji mampu menggelantung dan membalikan badannya dengan cepat serta tidak terjadi gejala tremor, salivasi, diare, konvulsi ataupun koma serta  mata  dan  kulit  hewan  uji  masih  normal  yang ditandai  dengan  tidak  berdirinya  bulu  pada  hewan uji dan mata hewan uji berwarna jernih. Pengamatan terhadap gejala tremor dilakukan dengan mengamati terjadinya gerakan gemetar pada hewan coba dimana menurut  Grimaldi  G,  tremor  merupakan  serentetan gerakan  involunter,  ritmis,  berbentuk  getaran,  pada satu atau lebih bagian tubuh (14) .
Pengamatan terhadap gejala konvulsi dilakukan dengan  mengamati  terjadinya  kejang  pada  hewan coba  dimana  pengamatan  dilakukan  dengan membandingkan  kelompok  uji  dengan  kelompok normal. Pengamatan terhadap gejala diare dilakukan dengan mengamati feses pada hewan coba, dimana feses  normal  pada  mencit  adalah  berwarna  hitam, tidak lembek dan tidak berlendir. Pengamatan terhadap gejala  koma  dilakukan  dengan  mengamati  ada tidaknya gangguan kesadaran pada hewan uji dimana menurut  Pulm et  al .,  koma  merupakan  penurunan kesadaran  maksimal  dimana tidak  terdapat  respons ﬁ siologis terhadap stimulus eksternal atau kebutuhan dalam diri sendiri (15) . Selain itu, pada dosis 175 mg/ kgBB tidak terjadi penurunan aktivitas motorik pada hewan dibandingkan dengan hewan uji pada kelompok normal.  Hasil  tersebut  menunjukkan  tidak  adanya gejala  toksisitas  yang  terjadi  pada  pemberian  dosis 175 mg/kg BB secara akut.
Hasil pengamatan perilaku hewan uji pada dosis 550  mg/kg  BB  menunjukkan  tidak  adanya  reaksi alergi  pada  mencit  baik  pada  menit  ke-30  setelah pemberian hingga 14 hari setelah pemberian. Hewan uji mampu menggelantung dan membalikan badannya dengan cepat serta tidak terjadi gejala tremor, salivasi, diare,  konvulsi  ataupun  koma  serta  mata  dan  kulit hewan  uji  masih  normal.  Selain  itu  tidak  terjadi penurunan  aktivitas  motorik  pada  hewan.  Hasil tersebut menunjukkan tidak adanya gejala toksisitas yang  terjadi  pada  pemberian  dosis  550  mg/kg  BB secara  akut.  Hasil  pengamatan  perilaku  hewan  uji pada  dosis  1750  mg/kg  BB  dan  5000  mg/kg  BB
menunjukkan tidak adanya reaksi alergi pada mencit pada menit ke-30 setelah pemberian hingga 14 hari setelah pemberian. Hewan uji mampu menggelantung dan membalikan badannya dengan cepat serta tidak terjadi gejala tremor, salivasi, diare, konvulsi ataupun koma serta mata dan kulit hewan uji masih normal. Selain itu tidak terjadi penurunan aktivitas motorik pada hewan. Hasil tersebut menunjukkan tidak adanya gejala  toksisitas  yang  terjadi  pada  pemberian  dosis 1750 mg/kg BB dan 5000 mg/kg BB secara akut.
Uji  Toksisitas  Subkronik  Nanopartikel Kurkumin. Pada  penelitian  ini  hasil  pengujian toksisitas subkronik yang meliputi evaluasi berat badan mencit,  pemeriksaan  hematologi  dan  pemeriksaan biokimia  klinis,  menunjukkan  tidak  terdapat  gejala toksisitas  pada  hewan  coba  pada  semua  tingkatan dosis.
Evaluasi Berat Badan Mencit Selama 28 Hari. Graﬁ k pemantauan berat badan mencit jantan selama uji toksisitas subkronik dapat dilihat pada gambar 1 dan  pemantauan  berat  badan  mencit  betina  selama uji toksisitas subkronik dapat dilihat pada gambar 2.
Berdasarkan tabel dan graﬁ k diatas dapat terlihat bahwa berat badan mencit jantan rata-rata  sebelum perlakuan  hingga  hari  ke-28  perlakuan  dari  setiap kelompok  dosis  berﬂ uktuasi.  Namun  secara  umum
Gambar 1. Peningkatan berat badan mencit jantan sampai hari ke-28
Gambar 2. Peningkatan berat badan mencit betina sampai hari ke-28
terdapat peningkatan pada semua kelompok uji, hal tersebut menunjukkan tidak adanya gejala toksisitas ataupun kondisi yang dapat menyebabkan hilangnya nafsu makan pada mencit.
Berdasarkan tabel dan graﬁ k diatas dapat terlihat bahwa berat badan mencit betina rata-rata pada hari sebelum  perlakuan  hingga  hari  ke-28  perlakuan dari  setiap  kelompok  berﬂ uktuasi.  Namun  secara umum, terdapat peningkatan berat badan pada semua kelompok uji, hal tersebut menunjukkan tidak adanya gejala  toksisitas  yang  dihasilkan  zat  uji  ataupun kondisi  yang  dapat  menyebabkan  hilangnya  nafsu makan  pada  mencit.  Perubahan  berat  badan  secara nyata merupakan indikator yang paling mudah terlihat dan menjadi indikator awal dari adanya efek toksik sampel uji yang diberikan.
Parameter  Hematologi. Pada  uji  toksisitas subkronik  ini  dilakukan  pemeriksaan  parameter hematologi  sesuai  dengan  pedoman  OECD  407  : Acute Oral Toxicity –  Repeated Dose  28-Day Oral Toxicity Study in Rodents . Adapun hasil pemeriksaan hematologi pada mencit betina dan jantan dapat dilihat pada tabel 2.
Pengukuran  darah  mencit  yang  diberikan nanopartikel  kurkumin  meliputi  delapan  parameter yaitu  kadar  RBC  ( Red  Blood  Cell) ,  WBC  ( White Blood  Cell ),  HGB  (Hemoglobin),  MCV  ( Mean Corpuscular  Volume ),  HCT  (Hematokrit),  MCH ( Mean  Corpuscular  Hemoglobin ),  MCHC  ( Mean Corpuscular  Hemoglobin  Concentration ),  dan PLT  (Platelet  atau Trombosit).  Dalam  pemeriksaan hematologi,  terdapat  beberapa  hal  yang  harus diperhatikan  terutama  adalah  antikoagulan,  jeda waktu  setelah  sampel  diperoleh  hingga  dilakukan pemeriksaan dan penyimpanan. Penyimpanan sampel darah serta perbedaan antikoagulan yang digunakan dapat  menentukan  validitas  dan  reliabilitas  hasil pengujian hematologis. Penundaan pemeriksaan dapat menyebabkan perubahan hasil uji dikarenakan sifat
darah yang mudah rusak apabila dibiarkan di dalam kondisi yang tidak ideal (16) .
Sel darah merah (Eritrosit) merupakan salah satu sel darah dengan jumlah paling banyak dibandingkan dengan  sel  darah  lainnya.  Fungsi  utama  sel  darah merah  adalah  membawa  oksigen  dari  paru-paru  ke jaringan  untuk  metabolisme  dalam  tubuh.  Menurut Kusumawati dkk., nilai sel darah merah normal pada mencit adalah 6,86 – 11,7 x 106/uL (17) . Nilai sel darah merah pada kelompok uji memiliki nilai sedikit lebih rendah  dari nilai  normal. Hal tersebut dapat terjadi akibat  adanya  variasi  genetik  ataupun  perbedaan kondisi  lingkungan  yang  menyebabkan  perbedaan nilai normal pada mencit.
Leukosit  merupakan  sel  darah  putih  yang diproduksi  oleh  jaringan  hematopoetik  untuk  jenis bergranula (polimorfonuklear) dan jaringan limpatik untuk jenis tak bergranula (mononuklear), berfungsi dalam sistem pertahanan tubuh terhadap infeksi (18) . Nilai sel darah putih normal pada mencit adalah 5,1 – 11,6 x103/uL (17) . Nilai sel darah putih pada keempat kelompok uji, baik pada mencit betina maupun jantan berada  dalam  rentang  nilai  sel  darah  putih  normal pada mencit.
Hemoglobin  merupakan  protein  utama  dalam tubuh  manusia  yang  berfungsi  untuk  mengangkut oksigen  dari  paru-paru  ke  jaringan  perifer  dan mengangkut CO 2 dari jaringan perifer ke paru-paru (19) . Nilai  hemoglobin  normal  pada  mencit  adalah  10,7 –11,5  g/dL (17) .  Nilai  hemoglogin  pada  mencit  pada beberapa  kelompok  uji  memiliki  nilai  sedikit  lebih rendah dibandingkan dengan nilai normal. Hal tersebut dapat  terjadi  akibat  adanya  variasi  genetik  ataupun perbedaan  kondisi  lingkungan  yang  menyebabkan perbedaan  nilai  normal  pada  mencit.  Hematokrit adalah presentase volume seluruh eritrosit yang ada di dalam darah dan diambil dalam volume eritrosit yang dipisahkan dari plasma dengan cara pemutaran di dalam tabung khusus dalam waktu dan kecepatan
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 68 SANDHIUTAMI ET AL.
Tabel 2. Hasil pemeriksaan hematologi mencit betina dan jantan.
Parameter  Satuan
Normal Dosis 50 mg/kg BB Dosis 100 mg/kg BB Dosis 200 mg/kg BB Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan Betina Jantan WBC 10 3 /uL 7,3 ± 1,6 7,9 ± 3,2 7,9 ± 1,6 8,1 ± 3,1 8,1 ± 2,8 8,4 ± 2,1 8,3 ± 1,7 8,44± 1,8 RBC 10 6 /uL 6,4 ± 0,6 5,6 ± 0,6 5,7 ± 0,7 5,9 ± 0,7 6,1 ± 0,9 6,8 ± 1,0 5,8 ± 0,6 5,6 ± 0,7 HGB g/dL 11,4 ± 1,0 9,84± 1,1 10,5 ± 1,1 10,1 ± 1,0 10,4 ± 1,6 11,5 ± 1,8 10,3 ± 0,6 9,4± 1,2 HCT % 34,8 ± 2,6 30,0 ± 3,0 32,4 ± 2,9 31,5 ± 3,0 32,2 ± 5,2 35,2 ± 5,0 30,9 ± 2,5 30,3 ± 4,0 MCV fL 54,5 ± 1,2 53,3 ± 3,5 55,4 ± 2,0 53,6 ± 2,8 53,2 ± 3,6 51,5 ± 1,4 53,4 ± 3,8 54,5 ± 3,1 MCH Pg 17,7 ± 0,2 17,5 ± 1,3 17,9 ± 0,7 17,2 ± 0,8 17,2 ± 0,8 16,8 ± 0,8 17,8 ± 0,8 16,9 ± 0,4 MCHC g/dL 32,6 ± 0,7 32,8 ± 0,7 32,3 ± 1,1 32,0 ± 0,4 32,4 ± 0,7 32,7± 0,9 33,4 ± 2,1 31,1 ± 1,1 PLT 10 3 /uL 548,8 ± 41   579,6 ± 56   655,4 ± 44   669,0 ± 37 689,0 ± 29  683,6 ± 25  646,8 ± 39  671,4 ± 36
Vol 20, 2022
tertentu  yang  nilainya  dinyatakan  dalam  persen (20) . Nilai hematokrit normal pada mencit adalah 33,1 – 49,9% (17) .  Nilai hematokrit pada  kelompok uji  baik jantan  maupun  betina  memiliki  nilai  sedikit  lebih rendah  dari nilai  normal. Hal tersebut dapat terjadi akibat  adanya  variasi  genetik  ataupun  perbedaan kondisi  lingkungan  yang  menyebabkan  perbedaan nilai  normal  pada  mencit.  Indeks  Korpuskular  atau Mean Corpuscular Value adalah suatu nilai rata-rata yang dapat memberi keterangan mengenai rata-rata eritrosit  dan  mengenai  banyaknya  hemoglobin  per- eritrosit (21) . Menurut John Wiley et al ., nilai normal MCV; MCH; dan MCHC pada mencit masing-masing sebesar 45 – 55 ﬂ ; 15 – 18 pg; dan 30-38 g/dl (22) . Nilai MCV, MCH dan MCHC pada keempat kelompok uji baik pada mencit betina ataupun jantan berada dalam rentang nilai normal MCV, MCH serta MCHC pada mencit.
Platelet atau Trombosit adalah fragmen sitoplasma megakariosit  yang  tidak  berinti  dan  terbentuk  di sumsum  tulang. Trombosit  matang  berukuran  2-4 µm,  berbentuk  cakram  bikonveks  dengan  volume 5-8 ﬂ (23) . Fungsi utama trombosit adalah membentuk sumbat yang merupakan respons hemostatik normal terjadinya  cedera  vaskular  yang  dapat  terjadi kebocoran  spontan  darah  melalui  pembuluh  halus. Fungsi trombosit ada tiga yaitu perlekatan (adhesi), penggumpalan  (agregasi),  dan  reaksi  pelepasan (24) . Nilai  platelet  normal  pada  mencit  adalah  100-1100 x 103/uL (22) . Nilai  platelet  pada keempat  kelompok uji  baik  pada  mencit  betina  ataupun  jantan  berada dalam  rentang  nilai  normal  platelet  pada  mencit. Berdasarkan hasil pengukuran parameter hematologi yang  terdiri  dari  RBC,  WBC,  HCT,  MCH,  HGB, MCHC, MCV, dan PLT didapatkan bahwa parameter tersebut tidak memiliki perbedaan bermakna (p>0,05) antara  kelompok  normal  dengan  ketiga  kelompok dosis yaitu 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB, dan 200 mg/kg  BB.    Hasil  tersebut  menunjukan  bahwa pemberian nanopartikel kurkumin selama 28 hari tidak mempengaruhi proﬁ l hematologi.
Parameter Biokimia Klinis . Pada penelitian ini dilakukan pemeriksaan biokimia klinis pada mencit jantan  dan  betina  setelah  pemberian  nanopartikel kurkumin selama 28 hari. Pemeriksaan biokimia klinis dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian nanopartikel kurkumin selama 28 hari terhadap fungsi ginjal dan hati. Hasil pemeriksaan biokimia klinis pada mencit betina dan jantan dapat dilihat pada tabel 3.
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  kadar  BUN ( Blood  Urea  Nitrogen )  dan  Kreatinin  sebagai parameter  fungsi  ginjal  menunjukkan    nilai  kedua parameter  tersebut  tidak  berbeda  bermakna  antara kelompok  perlakuan  dengan  kelompok  kontrol (p>0,05). Hal tersebut menunjukkan jika pemberian sediaan nanopartikel kurkumin selama 28 hari pada ketiga dosis uji tidak menimbulkan  gangguan pada kadar  BUN  ( Blood  Urea  Nitrogen )  dan  Kreatinin. Menurut  Mitruka  (1977),  kadar  BUN  normal  pada mencit sebesar 13,9-28,3 mg/dl (25) , dimana nilai BUN pada keempat kelompok uji baik pada mencit jantan maupun betina berada dalam nilai normal. Menurut Kusumawati  (2004),  nilai  kreatinin  normal  pada mencit  adalah  0,3  –  1,00  mg/dL (17) .  Nilai  kreatinin pada keempat kelompok uji baik pada mencit jantan ataupun betina berada diatas nilai normal. Hal tersebut dapat  terjadi  akibat  adanya  variasi  genetik  dengan mencit  yang  digunakan  maupun  perbedaan  kondisi lingkungan.
Nitrogen urea berasal dari metabolisme protein normal dan dieksresikan melalui urin. Kemampuan ginjal untuk mengekskresikan urea dapat ditentukan melalui  jumlah  ureum  pada  darah.  Urea  akan terakumulasi dalam darah apabila ginjal mengalami kerusakan. Terjadinya peningkatan urea dalam darah dapat menunjukkan kegagalan ginjal dalam melakukan fungsi ﬁ ltrasinya. Kadar BUN juga dapat dipengaruhi oleh  kurangnya  zat  makanan  serta  hepatotoksisitas yang merupakan efek umum dari beberapa toksikan (26) . Urea terbentuk dalam jalur siklik yang dikenal hanya sebagai  siklus  urea,  dalam  siklus  ini  gugus  amino yang  disumbangkan  oleh  ammonia  dan  L-aspartat
Tabel 3. Hasil pemeriksaan biokimia klinis mencit betina.
diubah  menjadi  urea.  Urea  dilarutkan  dalam  darah (pada manusia konsentrasi 2,5 – 7,5 mmol/liter) dan dikeluarkan oleh ginjal dalam urin, selain itu sejumlah kecil  urea  diekskresikan  (bersama  dengan  natrium klorida dan air) dalam keringat (27) .
Kreatinin  adalah  suatu  bentuk  anhidrida  dari kreatin  yang  sebagian  besar  dibentuk  didalam  otot melalui  proses  dehidarsi  non  enzimatik  kreatin fosfat  yang  bersifat irreversible .  Kreatin  terdapat pada otot, otak, dan darah dalam bentuk fosfokreatin maupun bentuk bebas. Zat ini umumnya berasal dari metabolisme otot.  Kreatinin dianggap sebagai penanda fungsi  ginjal  yang  lebih  baik  dibandingkan  dengan urea dikarenakan kadarnya tidak terpengaruh secara bermakna oleh faktor non ginjal sehingga kreatinan merupakan  indikator  fungsi  ginjal  yang  spesifik. Meskipun  kreatinin  serum  merupakan  indikator fungsi ginjal yang spesiﬁ k, peningkatan kadar secara bermakna hanya dapat dilihat ketika nilai laju ﬁ ltrasi glomerolus (GFR) berkurang sekitar 50% (28) . Terdapat beberapa faktor yang dapat menyebabkan peningkatan kadar kreatinin didalam darah, antara lain dehidrasi, kelelahan  yang  berlebihan,  penggunaan  obat  yang bersifat  toksik  pada  ginjal,  gangguan  fungsi  pada ginjal disertai infeksi, penyakit hipertensi yang tidak terkontrol, dan penyakit ginjal (26) .
Pemeriksaan  kadar  kreatinin  dan  urea  didalam darah  dapat  digunakan  untuk  mengetahui  adanya disfungsi atau gangguan fungsi pada ginjal. Gangguan fungsi  ginjal  dapat  mengakibatkan  penurunan kecepatan  filtrasi  pada  ginjal  sehingga  terjadi penumpukan sisa metabolisme (ureum dan kreatinin) dalam darah. Hal tersebut menyebabkan kadar ureum dan kreatinin dalam darah dapat digunakan sebagai indikator derajat kesehatan ginjal (28) .
Selain BUN dan kreatinin, dilakukan pengukuran pada  paramater  fungsi  hati  yaitu AST, ALT  dan Albumin dimana berdasarkan hasil penelitian, tidak terdapat  perbedaan  bermakna  antara  kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol (p>0,05). Hasil tersebut menunjukkan pemberiaan sediaan uji selama 28  hari  menunjukkan  tidak  adanya  gangguan  pada parameter fungsi hati dan ginjal.
AST  ( Aspartate  aminotransferase )  dan ALT ( Alanine  aminotransferase )  berperan  dalam metabolisme asam amino alanin menjadi α-ketoglutarat dalam  siklus  asam  sitrat.  Kadar  enzim ALT  yang tinggi terdapat pada hati. Kadar AST dan ALT yang melebihi  kontrol  menunjukan  adanya  gangguan terhadap keutuhan sel hepatosit. Jika ada kerusakan hepatosit, AST dan ALT akan dikeluarkan ke dalam aliran  darah  sehingga ditemukan  kadar  yang  tinggi di dalam darah. Selain terdapat pada hati, AST juga terdapat pada otot, jantung, dan ginjal. ALT dianggap
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
70 SANDHIUTAMI ET AL.
lebih spesiﬁ k dibandingkan dengan AST dikarenakan kadar AST dapat meningkat pada kasus cedera otot jantung  atau  rangka  sementara  kadar ALT  tidak (29) . Menurut  Hall  (2007),  nilai  normal AST  dan ALT pada mencit adalah 70 – 400 u/L dan 25 – 200 u/L (30) . Berdasarkan  hasil  pengukuran,  nilai AST  dan ALT pada keempat kelompok uji baik pada mencit jantan dan betina berada dalam nilai normal.
Albumin merupakan protein plasma yang paling banyak dalam tubuh manusia, yaitu sekitar 55-60% dan disintesa pada hati. Albumin dihasilkan didalam hati  dalam  jumlah  12  gram  per  hari.  Di  dalam tubuh  albumin  berfungsi  untuk  mempertahankan keseimbangan distribusi air (tekanan osmotik koloid) selain  itu  albumin  juga  berperan  dalam  transport beberapa  komponen  darah  sepeti  ion,  hormon, bilirubin, obat, dan enzim (31) . Beberapa faktor yang dapat mempengaruhi kadar albumin antara lain status gizi  dan  gangguan  fungsi  hati.  Peningkatan  kadar albumin  berkaitan  erat  dengan  kadar  hemoglobin darah.  Oleh  karena  itu,  apabila  kadar  albumin dalam  darah  mengalami  penurunan  maka  dapat menyebabkan terjadinya penurunan kadar hemoglobin dalam  darah.  Penurunan  kadar  hemoglobin  dapat terjadi karena protein merupakan salah satu unsur yang penting dalam sintesis hemoglobin dan pembawa besi, sehingga  apabila  terjadi  penurunan  kadar  albumin dalam tubuh, maka dapat tejadi gangguan pada sintesis hemoglobin  dan  dapat  mengakibatkan  penurunan kadar hemoglobin dalam darah (32) .
Menurut  Kusumawati  (2004),  nilai  normal albumin pada mencit adalah 2,52 – 4,84 g/dl (17) . Nilai albumin pada keempat kelompok uji baik pada mencit jantan ataupun betina berada dibawah nilai normal. Hal tersebut dapat terjadi akibat adanya variasi genetik dengan  mencit  yang  digunakan  maupun  perbedaan kondisi lingkungan.
Berdasarkan  hasil  pemeriksaan  biokimia  klinis diatas  membuktikan  bahwa  sediaan  uji  selama pemberian 28 hari pada mencit betina tidak memiliki perbedaan  yang  signifikan  antar  kelompok,  dan menunjukan  bahwa  nanopartikel  kurkumin  dengan dosis 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB, dan 200 mg/kgBB aman  untuk  digunakan  dan  tidak  mempengaruhi fungsi ginjal maupun hati.
Hasil  Uji Aktivitas Antioksidan  Secara  In- Vitro Dengan Metode DPPH. Pengujian aktivitas antioksidan secara in vitro dilakukan dengan metode pengikatan radikal bebas DPPH. Metode DPPH dapat mengambarkan besarnya aktivitas suatu antioksidan dalam  meredam  radikal  bebas.  Metode  DPPH memiliki  beberapa  kelebihan  diantaranya  secara teknis cara kerjanya mudah, cepat, cukup teliti, baik digunakan untuk pengukuran aktivitas antioksidan.
Parameter yang digunakan untuk uji penangkapan radikal  DPPH  ini  adalah  nilai  IC 50 .  IC 50 yaitu konsentrasi  antioksidan  (µg/mL)  yang  mampu menghambat 50% aktivitas radikal bebas DPPH.
Uji aktivitas antioksidan dilakukan terlebih dahulu pada  vitamin  C  sebagai  kontrol  positif,  dikatakan sebagai kontrol positif karena vitamin C merupakan senyawa  yang  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang sangat  kuat  dengan  hasil  uji  yang  dilakukan  maka diperoleh nilai IC 50 sebesar 3,95 µg/mL. vitamin C dikatakan memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat karena nilai IC 50 kurang dari 50 µg/mL. Pada sampel kurkumin di dapat nilai IC 50 sebesar 118,76 µg/mL berpotensi memiliki aktivitas yang sedang dan pada sampel  nanopartikel  kurkumin  didapat  nilai  IC 50 sebesar  90,87  µg/mL  berpotensi  memiliki  aktivitas yang kuat.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan dapat  disimpulkan  bahwa  pada  uji  toksisitas  akut, semua  tingkatan  dosis  pemberian  tidak  ditemukan adanya kematian baik pada pengamatan jangka pendek (48  jam)  ataupun  pengamatan  jangka  panjang  (14 hari). Nilai LD 50 dari nanopartikel kurkumin adalah lebih  besar  dari  5000  mg/kgBB,  dan  termasuk  ke dalam kategori praktis tidak toksik. Pada uji toksisitas subkronik 28 hari, pemberian nanopartikel kurkumin dengan dosis 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB, dan 200 mg/kgBB pada mencit jantan dan betina selama 28 hari  terbukti  aman  dan  tidak  mempengaruhi  proﬁ l hematologi, fungsi ginjal serta fungsi hati. Kurkumin dan  nanopartikel  kurkumin  memiliki  aktivitas antioksidan secara in vitro dengan nilai rata-rata IC 50 kurkumin sebesar 118,76µg/mL (potensi sedang) dan nanopartikel kurkumin sebesar 90,87µg/mL (potensi kuat).
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia  71

## Vol 20, 2022

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada Universitas Pancasila atas dana Penelitian  Hibah  Internal  ( In  House )  Universitas Pancasila tahun 2021.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Aggarwal, B. B., dan Sung, B. Pharmacological Basis for  the  Role  of  Curcumin  in  Chronic  Diseases:  an Age-Old Spice with Modern Targets. Trend in Pharm. Sci. 2009;30:85-94.
2.  Bisht S et al. Polymeric nanoparticle - encapsulated curcumin (nanocurcumin): a novel strategy for human cancer therapy. J of Nanobiotechnol. 2007;5:1-18.
3.  Pan,  M.  H.,  Huang,  T.  M.,  dan  Lin,  J.  K. Biotransformation of Curcumin Through Reduction and Glucuronidation in Mice. Drug Metab. Dispos. 1999;27:486-494.
4.  Shimatsu A,  Kakeya  H,  Imaizumi A  et  al.  Clinical Application  of  “Curcumin,  a  Multi-Functional Substance. Anti Aging Medicine. 2012;9(2):75-83.
5.  Arozal,  W.  L.,  Rahmat,  D.,  Chendrana,  P.,  and Sandhiutami, N. M. D. Development, characterization and  pharmacokinetic  profile  of  chitosansodium tripolyphosphate  nanoparticles  based  drug  delivery systems  for  curcumin.  Adv.  Pharmaceut.  Bull. 2020;11(1):77–85.
6.  Donaldson  K,  Stone  V,  Tran  CL,  Kreyling  W  and Borm  PJA.  Nanotoxicology.  Occup  Environ  Med. 2004;61:727-8.
7.  Akhila  JS,  Shyamjith,  Deepa, Alwar  MC. Acute toxicity  studies  and  determination  of  median  lethal dose. Science. 2007;93(7):917-20.
8.  Lu,  F.C.  Basic  Toxicology:  Fundamentals,  Target Organs,  and  Risk  Assesment  5th  ed.  Informa Healthcare  USA,  Inc.,  New  York.  2009;85,  108, 188-190.
9.  Setzer,  R.W.  and  Kimmel,  C.,A.  Use  of  NOAEL, benchmark  dose,  and  other  models  for  human  risk assessment  of  hormonally  active  substances.  Pure Appl Chem. 2003;75:2151–8.
10.  10.  Borra SK, Gurumurthy P, Mahendra J. Antioxidant and  free  radical  scavenging  activity  of Triphala.  J. Med. Plant Res. 2013;7:2680–90.
11.  Chendrana, Priska. Karakterisasi, Uji Sifat Mukoadhesif dan Aktivitas Anti-Inﬂ amasi Nanopartikel Kurkumin. Jakarta: Fakultas Farmasi Universitas Pancasila; 2019.
12.  Organization  for  Economic  Co-operation  and Development (OECD). OECD Guidelines for Testing of Chemicals. Test No. 425: Acute Oral Toxicity: Up- and-Down  Procedure.  (http://lysander.sourceoecd. org/). Paris: OECD. 2001a;1-26.
13.  Organization  for  Economic  Co-operation  and Development (OECD). OECD Guidelines for Testing of  Chemicals.  Test  No.  407: Acute  Oral  Toxicity- Repeated  Dose  28-Day  Oral  Toxicity  Study  in Rodents. Paris: OECD; 2008; 2-5.
Gambar 3.  Graﬁ k perbandingan nilai IC 50 (µg/mL)
14. Grimaldi G, Manto M. Neurological tremor: sensors, signal processing and emerging applications. Sensors 2010;10:1399-422.
15.  Posner JB, Saper CB, Schiﬀ  ND, Plum F. Plum and Posner's Diagnosis of Stupor and Coma. New York: Oxford University Press;2007.
16.  Laksmindra F dkk. Pengaruh Antikoagulan dan waktu Penyimpanan  Terhadap  Profil  Hematologis  Tikus ( Rattus norvegicus Berkenhout , 1769) Galur Wistar. 2016;33(1):22-30.
17.  Kusumawati,  D.  Bersahabat  Dengan  Hewan  Coba. Yogyakarta: Gajah Mada University Press; 2004.
18.  Sutedjo  AY.  Mengenal  Penyakit  Melalui  Hasil Pemeriksaan  Laboratorium.  Yogyakarta:  Amara Books. 2009; 28.
19.  Maylina,  L.A.  Hubungan Antara  Konsumsi  Pangan Sumber  Protein,  Zat  Besi  dan  Vitamin  C  dengan Kejadian Anemia  Siswa  Sekolah  Dasar  [Skripsi]. Jember: Universitas Jember; 2010.
20.  Sadikin, M. Biokimia Darah. Jakarta: Widyamedika; 2008.
21.  Gandasoebrata  R.  Penuntun  Laboratorium  Klinik. Jakarta: Dian Rakyat; 2008.
22.  Wiley,  John.  Exotic Animal  Laboratory  Diagnosis. USA: John Wiley; 2020.
23.  Kosasih,  E.N  dan  A.S  Kosasih.  Tafsiran  Hasil pemeriksaan  Laboratorium  Klinik.  Edisi  Kedua. Tangerang: Karisma Publishing Group; 2008.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
72 SANDHIUTAMI ET AL.
24.  A.V.  Hoffbrand,  J.E.  Petit,  et  al.  Kapita  Selekta Hematologi.  Edisi  4.  Jakarta:  Penerbit  Buku Kedokteran EGC; 2009.
25.  Mitruka, B. M., H. M. Rawnsley and B. V. Vadehra. Clinical Biochemical and Haematological Reference Value in Normal Experimental Animals. New York: Masson Publishing, Inc; 1977.
26.  Lamb,  E.,  Newman,  D.J.,  &  Price,  C.P.  Kidney Function  Test.(in)  Bur  tis,C.A., Ashwood,  E.R.  & Br  uns,  D.E.(editors).  Tietz  Textbook  of  Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. Fourth edition. USA: Elsevier Saunders; 2008. p.797-832.
27.  Murray,  R.  K.,  Granner,  D.  K.,  &  Rodwell,  V.  W. Biokimia harper (27 ed.). Jakarta: Buku Kedokteran EGC; 2009.
28.  Kidney Failure. High creatinine level. Jakarta: EGC; 2013.
29.  Thapa  BR,  Walia A.  Liver  function  test  and  their interpretation.  Indian  Journal  of  Pediatrics.  2007; 74:663-671.
30.  Guyton A.C.  and  J.E.  Hall.  Buku  Ajar  Fisiologi Kedokteran.  Edisi 9.  Jakarta: EGC; 2007. p. 74,76, 80-81, 244, 248, 606,636,1070,1340.
31.  Hasan  I  dan  Indra  T  A.  Peran  Albumin  dalam Penatalaksanaan  Sirosis  Hati.  Jakarta:  (ID).  Divisi Hepatologi Departemen Ilmu Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia; 2008.
32.  Sutedjo,  SKM.  Mengenal  Penyakit  Melalui  Hasil Pemeriksaan Laboratorium. Yogyakarta: Aara Books; 2007.