Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOLIK UMBI AKAR BATU ( Coccinia grandis
L.Voight)  TERHADAP BAKTERI

## SALMONELLA SP
Rizal Maarif Rukmana 1* , Rahmat Budi Nugroho 2 , Dwi Admani Wisnumurti 1
1 Program Studi DIV Analis Kesehatan, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Setia Budi Surakarta, Jl. Letjend Sutoyo, Mojosongo, Surakarta, Central Java 57127, Indonesia
2 Program Studi DIII Analis Kesehatan, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Setia Budi Surakarta, Jl. Letjend Sutoyo, Mojosongo, Surakarta, Central Java 57127, Indonesia
* E-mail: rizal.nerazuri@gmail.com Paper submit: 3 Juli 2019, Paper publish: September 2020
Abstrak- Bakteri Salmonella sp merupakan salah satu bakteri yang sering menginfeksi manusia dan hewan. Bakteri Salmonella sp dapat mengakibatkan penyakit Salmonellosis pada manusia. Akhir-akhir ini, penelitian tentang metabolit sekunder tanaman sebagai bahan obat telah banyak dilakukan. Salah satu tanaman yang memiliki potensi sebagai obat adalah umbi Akar Batu (Coccinia grandis L Voight). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menguji aktivitas antibakteri dari ekstrak etanolik umbi Akar Batu terhadap bakteri Salmonella sp. Metode ekstraksi dilakukan dengan maserasi dan pelarut yang dipakai adalah etanol 96%. Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi. Identifikasi golongan senyawa dari ekstrak dilakukan dengan mereaksikan ekstrak dengan berbagai reagen kimia. Hasil penelitian menunjukkan bahwa serbuk Umbi Akar Batu memiliki kadar air 5,99% dan rendemen 1,76%. Hasil identifikasi golongan senyawa ekstrak etanolik Umbi Akar Batu menunjukkan bahwa ekstrak mengandung flavonoid, alkaloid, saponin dan tanin. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanolik Umbi Akar Batu dapat menghambat bakteri Salmonella sp.
Kata kunci: Ekstrak etanolik, umbi Akar Batu, Antibakteri, Salmonella

## Pendahuluan
Bakteri Salmonella sp merupakan bakteri yang berbentuk batang, gram negatif, mempunyai flagel, anaerob fakultatif dan biasanya sering ditemukan pada saluran usus manusia maupun hewan. Bakteri Salmonella sp dapat tumbuh pada suhu 5-47 o C, dengan suhu pertumbuhan optimum adalah 35-37 o C. Bakteri Salmonella sp tumbuh pada pH 4-9 dan pH optimum untuk pertumbuhannya
6,5-7,5 (Pui et al , 2011). Bakteri Salmonella sp dapat mengakibatkan penyakit Salmonellosis pada manusia. Penyakit Salmonellosis dapat terjadi jika manusia memakan makanan yang terkontaminasi bakteri Salmonella sp, kontak dengan hewan yang terinfeksi dan kondisi lingkungan yang tercemar bakteri (Maka et al ., 2015).
Kasus Salmonellosis yang tinggi terjadi pada anak di bawah umur 5 tahun. Menurut Muvhali et al , (2017) kasus Salmonellosis pada anak usia dibawah 5 tahun mencapai 93,8 juta di seluruh Dunia dan 155 ribu diantaranya menyebabkan kematian. Pada Benua Eropa, kasus Salmonellosis merupakan kasus infeksi saluran pencernaan tertinggi kedua. Terdapat lebih dari 100.000 kasus telah dilaporkan di tahun 2010. Pada tahun 2011, kasus ini dilaporkan masih tinggi dan mencapai 95.548 kasus (Maka et al ., 2015). Infeksi oleh bakteri Salmonella sp dapat diobati dengan berbagai macam cara. Salah satunya adalah dengan penemuan obat antibakteri melalui eksplorasi senyawa aktif yang ada pada tumbuhan. Indonesia mempunyai keanekaragaman tumbuhan yang melimpah. Banyak spesies tumbuhan telah teridentifikasi
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut.
Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020) ISSN 2460-1365
sebagai tumbuhan berkhasiat obat. Di Indonesia telah teridentifikasi terdapat 7000 spesies tumbuhan dari 30.000 spesies  berkhasiat obat (Jumiarni dan Komalasari, 2017). Metabolit sekunder dari tumbuhan menjadi salah satu penemuan yang menarik dalam pengembangan obat. Salah satu tumbuhan yang mempunyai potensi dalam pengobatan adalah tumbuhan Akar Batu ( Coccinia grandis L.Voight). Tumbuhan Akar Batu merupakan anggota dari family Cucurbitaceae. Tumbuhan Akar Batu merupakan tumbuhan yang ada di Nusa Tenggara Timur dan merupakan tumbuhan hias. Tumbuhan ini memiliki keunikan yaitu umbi yang muncul diatas permukaan tanah (Haryanti et al ., 2018). Tumbuhan Akar Batu mempunyai potensi dalam pengobatan karena adanya kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam metabolit sekundernya. Ekstrak etanolik daun Coccinia grandis L mengandung golongan senyawa saponin, alkaloid (Hossain et al , 2014), fitosterol, tanin, glikosida, gula reduksi (Mala et al , 2016), steroid, flavonoid, protein, asam amino, dan fenol (Hussain et al , 2010). Senyawa metabolit sekuder dari ekstrak air dan etanol daun Coccinia grandis L.Voight telah diuji aktivitas antibakterinya pada bakteri Bacillus cereus, Corynebacterium diptheriae, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli (ETEC), Klebsiella pneumonia, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi dan Shigella boydii . Hasil uji antibakteri tersebut menunjukkan menunjukkan ekstrak air dan etanolik daun Coccinia grandis L mempunyai potensi dalam menghambat pertumbuhan bakteri Shigella boydii dan Pseudomonas aeruginosa (Farrukh et al ., 2008). Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanolik daun Coccinia grandis L sudah banyak dilakukan. Akan tetapi, belum ada publikasi tentang uji aktivitas ekstrak etanolik Umbi Akar Batu ( Coccinia grandis L.Voight) pada bakteri Salmonella sp. Pada penelitian ini akan dilakukan uji kandungan golongan senyawa ekstrak etanolik Umbi Akar Batu ( Coccinia grandis L.Voight) dan aktivitas antibakterinya terhadap bakteri Salmonella sp.

## Metode Penelitian

## 1.   Subjek Penelitian
Subjek pada penelitian ini adalah Umbi Akar Batu ( Coccinia grandis L.Voight) yang dilakukan ekstraksi dengan menggunakan etanol 96%. Umbi Akar Batu kemudian dilakukan identifikasi golongan senyawa diantaranya: golongan flavonoid, alkaloid, saponin dan tanin. Ekstrak etanolik Umbi Akar Batu kemudian dilakukan uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Salmonella sp.
2.   Alat dan Bahan Penelitian
Alat yang digunakan untuk penelitian yaitu: tabung reaksi kecil, beaker glass, ayakan nomor 40 mesh, evaporator, oven, kertas saring, batang pengaduk, cawan petri steril, kapas lidi steril, lampu spirtus, label, inkubator, erlenmeyer, ose, penggaris, kertas disk, timbangan elektrik, pipet tetes, inkas, korek api, pipet volume, rak pengecatan, gelas objek, autoklaf, mikroskop, boorprof, pinset steril, dan alat pelindung diri (APD) lengkap.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu: Umbi Akar Batu, isolat bakteri Salmonella sp yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Universitas Setia Budi Surakarta, media Brain Heart Infusion (BHI), media Mueller-Hilton Agar (MHA), etamol 96%, kloramfenikol, DMSO 2%, Aquadest steril, HCl pekat, FeCl 3 dan kloroform.

## 3.   Desain Penelitian
Penelitian ini termasuk penelitian eksperimental. Rancangan penelitian yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL). Ekstrak etanolik Umbi Akar Batu dibuat dalam kosentrasi 1 g/ml, 2 g/ml, 3 g/ml dan 4 g/ ml, kemudian diuji daya hambat antibakterinya terhadap bakteri Salmonella sp.

## 4.   Teknik Pengumpulan Data 4.1  Pembuatan Serbuk
Umbi Akar Batu yang telah diperoleh dicuci bersih hingga kotoran dan debu yang menempel pada umbi hilang. Umbi Akar Batu dipotong atau dirajang kecil-kecil dan dioven
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
pada suhu 40 0 C. Umbi Akar Batu yang telah kering dihaluskan dengan menggunakan alat penggilingan. Serbuk dari Umbi Akar Batu tersebut diayak menggunakan ayakan ukuran 40 mesh. Serbuk di simpan dalam wadah bersih, kering, dan tertutup.

## 4.2   Penentuan Nilai Kadar Air Serbuk Umbi
Akar Batu Penentuan kadar air dilakukan dengan metode thermovolumetri. Serbuk Umbi Akar Batu masing-masing ditimbang sebanyak 20,005 gram. Serbuk yang telah ditimbang dimasukkan ke dalam labu ukur dan ditambahkan xylen sebanyak 125 ml atau hingga seluruh bahan terendam. Rangkaian alat destilasi Bidwell– Sterling dipasang dan api dinyalakan untuk memanaskan. Pemanasan dihentikan jika sudah tidak ada lagi air yang mengalir ke dalam tabung receiver . Kemudian membaca skala volume air yang telah terdestilasi.

## 4.3  Pembuatan Ekstrak Etanolik Umbi Akar
Batu Pembuatan ekstrak etanolik dilakukan dengan metode maserasi. Seratus gram serbuk dimasukkan ke dalam erlenmeyer kemudian ditambahkan 1liter etanol 96%. Erlenmeyer ditutup kemudian dikocok dan didiamkan selama 2 hari. Maserat yang didapat disaring dengan menggunakan kain flannel dan kertas saring sehingga diperoleh filtrat. Filtrat yang didapatkan kemudian dipekatkan dengan Rotary evaporator sampai terbentuk ekstrak kental. Ekstrak kental yang diperoleh kemudian dibuat konsentrasi dengan beberapa seri konsentrasi 1 g/ml, 2 g/ml, 3 g/ml dan 4 g/ml dilakukan dengan cara dilarutkan dengan DMSO 2%.

## 4.4 Identifikasi Kandungan Golongan Senyawa Ekstrak Etanolik Umbi Akar Batu
a.  Identifikasi Flavonoid
Lima ml ekstrak ditambah 5 tetes HCl 2N, kemudian ditambah 5 tetes Amil Alkohol dan 1 sendok sudip serbuk Magnesium. Lalu dikocok dan
didiamkan. Reaksi positif ditandai dengan terbentuknya warna merah.
b.  Identifikasi Alkaloid Lima ml ekstrak ditambahkan 5 ml kloroform secukupnya. Kemudian ditambahkan 3 tetes amoniak dan dipanaskan. Lalu tambahkan 5 tetes asam sulfat 2N dan 2,5 ml pereaksi Mayer. Terbentuknya endapan putih dengan pereaksi Mayer menunjukan adanya senyawa golongan alkaloid.
c.  Identifikasi Tanin Lima ml ekstrak ditambah dengan 5 ml FeCl 3 . Kemudian kocok dan didiamkan 15 menit. Terbentuknya warna hijau kehitaman menunjukan adanya senyawa tannin.
d.  Identifikasi Saponin Lima ml ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi, dipanaskan sampai mendidih, kemudian didinginkan.
Lalu ditambah 1 tetes HCl 2N, kocok kuat-kuat dan diamkan beberapa saat. Terbentuknya buih yang stabil menunjukan hasil positif.

## 4.5 Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik Umbi Akar Batu
Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanolik Umbi Akar Batu dilakukan dengan tahapan: (1) Media Mueller Hilton Agar steril dituang ke dalam cawan petri dengan ketebalan 0,5 cm dibiarkan memadat pada suhu kamar. (2) Kapas lidi steril dicelupkan pada suspensi bakteri uji lalu diinokulasikan secara merata pada media Mueller Hinton Agar (MHA) yang telah memadat. (3) Ditunggu 15 menit sampai kering. (4) Dibuat 6 lubang sumuran dengan menggunakan boorprof. (5) Dimasukkan dalam sumuran yaitu: 50 µl kontrol positif (kloramfenikol),  50 µl kontrol negatif (DMSO 2%), 50 µl ekstrak kosentrasi 1 g/ml, 2 g/ml, 3 g/ml dan 4 g/ml. (6) Dilakukan pengulangan sebanyak 3 kali. (7) Dilakukan inkubasi pada inkubator dengan suhu 37 0 C selama 24 jam. (8) Dilakukan pengukuran terhadap zona hambat yang tumbuh disekitar sumuran.
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020) ISSN 2460-1365
4.6  Analisis Data Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan One-way ANOVA . Apabila terdapat perbedaan antara perlakuan dilakukan uji lanjut dengan menggunakan uji Duncan .

## Hasil dan Pembahasan
1.   Hasil Penetuan Kadar Air Serbuk Umbi Akar Batu
Penetapan kadar air serbuk Umbi Akar Batu dilakukan menggunakan metode destilasi dengan alat Bidwell-sterling . Serbuk Umbi Akar Batu ditimbang sebanyak 20,005 gram ditambah dengan 125 ml xylen, didapatkan volume air yang telah terdestilasi pada skala receiver yaitu 1,2 ml. Hasil penetapan kadar air dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Penetapan Kadar Air Serbuk Umbi Akar Batu Berat Bahan (gram) Skala (ml) Kadar air (%) 20,0055 1,2 5,99
Kadar air yang diperoleh yaitu 5,99 % yang artinya, kadar air serbuk Umbi Akar Batu memenuhi persyaratan kadar air suatu serbuk simplisia yaitu tidak lebih dari 10%. Kadar air yang tinggi dapat menyebabkan perubahan kerja enzim dan perubahan kimia zat aktif sehingga menurunkan mutu serbuk dan akan mudah ditumbuhi oleh jamur (Gunawan dan Mulyadi, 2004).

## 2.   Hasil Pembuatan Ekstrak Etanolik Umbi
Akar Batu Pembuatan ekstrak etanolik Umbi Akar Batu dilakukan dengan metode maserasi dengan pelarut etanol 96%. Perhitungan rendemen ekstrak (Tabel 2).
Metode ekstraksi maserasi merupakan metode ekstraksi yang umum dilakukan
pada bahan alam. Metode maserasi tidak menggunakan panas sehingga diharapkan senyawa metabolit sekunder tanaman tidak mengalami kerusakan (Leba, 2017). Proses maserasi juga disertai dengan pengadukan beberapa kali guna membantu kontak pelarut pada rongga sel tumbuhan, sehingga senyawa-senyawa tumbuhan yang terkandung didalamnya dapat ditarik keluar oleh pelarut (Sutikno, 2010).
Tabel 2. Rendemen Ekstrak Etanolik Umbi Akar Batu
Serbuk Umbi Akar Batu (gram) Berat ekstrak (gram) Rendemen (%) 100 1,76 1,76
Pelarut yang dipakai adalah etanol 96%. Pelarut etanol merupakan pelarut organik yang bersifat polar. Pelarut etanol baik dalam melarutkan senyawa yang bersifat semi polar sampai polar.
Rendemen ekstrak yang diperoleh dari ekstraksi Umbi Akar Batu adalah 1,76%. Rendemen merupakan prosentase hasil ekstrak dari jumlah serbuk. Rendemen dari masing- masing tanaman sangat bervariasi. Hal tersebut sangat tergantung dari spesies tanaman, masa pengambilan tanaman, metode ekstraksi, dan pelarut yang digunakan saat ekstraksi (Rukmana et al ., 2016).

## 3.   Hasil Identifikasi Golongan Senyawa Ekstrak Etanolik Umbi Akar Batu
Identifikasi kandungan golongan senyawa pada ekstrak etanolik Umbi Akar Batu dilakukan dengan mereaksikan ekstrak dengan berbagai senyawa kimia. Identifikasi ini meliputi identifikasi flavonoid, alkaloid, saponin dan tanin. Hasil identifikasi kandungan senyawa kimia ekstrak etanolik Umbi Akar Batu dapat dilihat pada tabel 3.
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795
UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Tabel 3. Hasil Identifikasi Kandungan Senyawa Pada Ekstrak Umbi Akar Batu Uji Prosedur Pustaka Hasil Keterangan Flavonoid Ekstrak + 5 tetes HCl 2N + 5 tetes Amil Alkohol + 1 sundip Magnesium Reaksi positif jika terbentuk warna merah/ungu/jingga Merah + Alkaloid Ekstrak + 5 ml kloroform + 3 tetes amoniak + 5 tetes asam sulfat + 2,5 ml pereaksi meyer Reaksi positif jika terbentuk endapan warna putih Jingga + Saponin Ekstrak + panaskan, dinginkan + 1 tetes HCl 2N, kocok Reaksi positif jika terbentuk busa stabil Te r b e n t u k busa stabil + Tanin Ekstrak + 5 ml FeCl 3 Reaksi positif jika terbentuk warna biru kehitaman B i r u - kehitaman +
Ekstrak etanolik Umbi Akar Batu ( Coccinia grandis L.Vight)  pada penelitian ini mengandung golongan senyawa: flavonoid, alkaloid, saponin dan tanin. Hasil identifikasi senyawa dari Umbi Akar Batu ( Coccinia grandis L Vight) masih sangat jarang dipublikasikan.
Publikasi yang telah banyak dilakukan adalah tentang metabolit sekunder dari ekstrak daun Coccinia grandis L. Menurut penelitian dari Hossain et al , (2014) ekstrak etanolik daun Coccinia grandis L yang berasal dari India mengandung golongan senyawa Saponin dan alkaloid. Pada penelitian tersebut ekstrak etanolik daun Coccinia grandis L tidak mengandung golongan senyawa flavonoid dan tanin. Hasil penelitian dari Mala et al , (2016) ekstrak etanolik daun Coccinia grandis L dari berbagai varietas mengandung golongan senyawa alkaloid, fitosterol, tanin, glikosida, dan gula reduksi. Berbagai publikasi yang telah banyak ditemukan yaitu tentang skrening fitokimia dari daun Coccinia indica L. Menurut Hussain et al , (2010) ekstrak etanolik daun Coccinia indica
L yang diperoleh dari daerah Prandish (India) mengandung golongan senyawa: steroid, tanin, flavonoid, protein, asam amino, glikosida, fenol, saponin dan alkaloid.

## 4.   Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Etanolik Umbi Akar Batu
Hasil uji antibakteri ekstrak etanolik Umbi Akar Batu pada bakteri Salmonella sp dilakukan dengan menggunakan metode difusi sumuran.
Hasil uji antibakteri ekstrak etanolik Umbi Akar Batu dengan metode sumuran dapat dilihat pada Tabel 4 dan Gambar 1.
Tabel 4. Hasil uji antibakteri ekstrak etanolik Umbi
Akar Batu dengan metode sumuran Kosentrasi ekstrak Bakteri uji Diameter zona hambat ekstrak terhadap bakteri Salmonella sp (mm) Ul-1 Ul-2 Ul-3 Rata-rata 1 gr/ml 11 10 10 10,33 b 2 gr/ml 13 11 11 11,66 c 3 gr/ml 15 13 13 13,66 d 4 gr/ml 17 15 15 15,66 f Kontrol + 14 13 15 14 e Kontrol - 0 0 0 0 a

## Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf yang berbeda menunjukkan bahwa hasil yang  berbeda nyata
Gambar 1. Uji antibakteri ekstrak etanolik Umbi Akar Batu pada Salmonella sp metode sumuran
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020) ISSN 2460-1365
Penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak etanolik Umbi Akar Batu ( Coccinia grandis L Vight) dapat menghambat pertumbuhan dari bakteri Salmonella sp. Aktivitas antibakteri ekstrak etanolik Umbi Akar Batu dapat terlihat dengan adanya zona bening (zona hambat) pada bakteri uji dan berbeda nyata dibandingkan dengan kontrol negatif (Tabel 4). Ekstrak etanolik Umbi Akar Batu ( Coccinia grandis L Vight) dapat menghambat bakteri tersebut karena adanya senyawa metabolit sekunder yang ada pada ekstrak. Hasil identifikasi golongan senyawa ekstrak etanolik Umbi Akar Batu mengandung senyawa flavonoid, tanin, saponin dan alkaloid. Golongan senyawa flavonoid berfungsi sebagai antibakteri dengan cara mendenaturasi protein sel dan merusak membran sel tanpa dapat memperbaiki lagi. Tanin memiliki aktivitas antibakteri dengan mekanisme kerja mengkerutkan dinding sel atau membran sel sehingga mrngganggu permeabilitas sel itu sendiri akibatnya sel tidak dapat melakukan aktivitas hidup sehingga pertumbuhannya terhambat dan mati (Nobakht et al., 2017). Senyawa saponin dapat berdifusi melalui membran luar dan dinding sel yang rentan kemudian mengikat membran sitoplasma sehingga mengganggu dan mengurangi kestabilan sel menyebabkan sitoplasma bocor keluar dari sel yang mengakibatkan kematian sel (Maatalah et al ., 2012). Golongan senyawa alkaloid dapat berperan sebagai antibakteri dengan cara mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel. Alkaloid juga dapat mengganggu komponen penyusun peptidoglikan dan menghambat enzim topoisomerase yang berperan dalam proses replikasi, transkripsi dan rekombinasi DNA dengan cara memotong dan menyambungkan rantai tunggal atau untai ganda DNA (Campbell et al ., 2010; Maatalah et al ., 2012).
Hasil penelitian terdahulu juga telah menunjukkan bahwa bagian tanaman Coccinia grandis L (daunnya) memiliki aktivitas antibakteri. Menurut Farrukh et al , (2008) ekstrak air dan etanolik daun Coccinia grandis L diujikan pada bakteri Bacillus cereus, Corynebacterium diptheriae,
Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli (ETEC), Klebsiella pneumonia, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi dan Shigella boydii . Hasil penelitian tersebut menunjukkan ekstrak air dan etanolik daun Coccinia grandis L mempunyai potensi dalam menghambat pertumbuhan bakteri Shigella boydii dan Pseudomonas aeruginosa . Hasil penelitian Poovendran et at , (2011) menunjukkan bahwa ekstrak etanolik daun Coccinia grandis L dapat menghambat bakteri Escherichia coli (patogen pada saluran kencing). Hasil penelitan Rukmana dan Mulyowati (2015) menunjukkan bahwa bakteri Salmonella sp dapat dihambat pertumbuhannya oleh golongan senyawa fenol yang diekstrak dari daun Kumis Kucing. Golongan fenol dapat menghambat pertumbuhan Salmonella sp dengan cara mengubah permeabilitas membran sitoplasma yang menyebabkan kebocoran nutrient dari dalam sel. Kebocoran tersebut dapat menyebabkan sel bakteri mati atau terhambat pertumbuhannya.
Pada penelitian ini menunjukkan bahwa semakin tinggi kosentrasi ekstrak yang diberikan pada bakteri uji maka zona hambat akan semakin membesar. Hal tersebut dapat dilihat dari uji lanjut duncan yang menunjukkan bahwa: terdapat perbedaan antara berbagai kosentrasi ekstrak yang diberikan.

## Simpulan
Ekstrak etanolik Umbi Akar Batu mengandung golongan senyawa flavonoid, alkaloid, tanin dan saponin. Ekstrak etanolik Umbi Akar. Batu dapat menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella sp.

## Ucapan Terimakasih
Kami mengucapkan terimakasih kepada LPPM (Lembaga Penelitian dan Pengabdian Pada Masyarakat) Universitas Setia Budi Surakarta atas dana hibah penelitian mandiri yang telah diberikan dengan nomor kontrak 12/LPPM/ USB/PD/III/2019, sehingga penelitian ini dapat terlaksana dengan baik.
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795
UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)

## Daftar Pustaka
Campbell, Neil A., Jane B. Teece., Lisa A. Urry., Michale B. Cain., Steven A. Wasserman., Peter V. Minorsky and Robert B. Jackson. 2010. Biologi Jilid 1. Edisi 8. Erlangga, Jakarta.
Farrukh, Umbreen. Huma, shareef., Shaukat, Mahmud., Syed, Ayub, Ali. Ghazala h. Rizwani.
2008. Antibacterial Activities of Coccinia grandis L. Pak. J. Bot ., 40(3): 1259-1262.
Gunawan, D. dan Mulyani, S. 2004. Ilmu Obat Alami (Farmakognosi) Jilid 1. Bogor: Penerbit Swadaya.
Haryanti, S.,  Widiyastuti, Y.,  and Wahyono, S. 2018. The aqueous extract of Gerrardanthus macrorhizus caudex enhanced doxorubicin activity in MCF-7 human breast cancer cells. IJBIOTECH : 23 (1): 7-13.
Hossain, Amir., Sr. N. Uddin. , Md. Abu, Salim., Razaul, Haque. 2014. Phytochemical and Pharmacological screening of Coccinia grandis Linn. Journal of Scientific and Innovative Research ; 3 (1): 65-71.
Hussain, Arshad., Shadma. Wahab., Iffat.  Zarin., M.D. Sarfara.  Hussain. 2010. Antibacterial Activity of the Leaves of Coccinia indica (W. and A) Wof India. Advances in Biological Research 4 (5): 241-248.
Jumiarni, Wa Ode dan  Komalasari, Oom. Eksplorasi Jenis dan Pemanfaatan Tumbuhan Obat Pada Masyarakat Suku Muna di Permukiman Kota Wuna. Trad. Med. J . Vol. 22(1), 45-56.
Leba, Maria A.U. 2017. Ekstraksi dan Real Kromatografi . Yogyakarta: Deepublish.
Maatalah, M. Benziane., N. Kambuche Bouzidi., S. Bellahouel., B. Merah., Z. Fortas., R. Soulimani., S. Saidi., A. Derdour. 2012. Antimicrobial activity of the alkaloids and saponin extracts of Anabasis articulata . E3 Journal of Biotechnology and Pharmaceutical Research . Vol. 3(3): 54-57.
Mąka, Lukasz., Elżbieta, Maćkiw., Halina, Ścieżyńska., Magdalena, Popowska. 2015. Occurrence and antimicrobial resistance of Salmonella spp. isolated from food other than meat in Poland. Annals of Agricultural and Environmental Medicine . Vol. 22 (3): 403–408.
Mala, P ., Arpita, G., And Sunita. 2016. Coccinia grandis (l.) Voigt : A Chemo Profile Study. Bionano Frontier. Vol. 7 (2): 108-113.
Muvhali, Munyadziwa.,  Anthony, Marius, Smith., Andronica, Moipone Rakgantso.,  dan Karen, Helena, Keddy. 2017. Investigation of Salmonella Enteritidis outbreaks in South Africa using multi-locus variable-number tandem-repeats analysis, 2013-2015. BMC Infectious Diseases . Vol 17: 1-9.
Nobakht, Motahareh., Stephen, J. Trueman., Helen, M. Wallace., Peter, R. Brooks., Klrissa, J. Streeter., dan Mohammad, Katouli. 2017. Antibacterial Properties of Flavonoids from Kino of the Eucalypt Tree, Corymbia torelliana. Plants . Vol.  39 (6): 1-15.
Poovendran. P., N. Vidhya., S. Murugan. 2011. Antimicrobial Activity of Coccinia grandis Against Biofilm and ESBL Producing Uropathogenic E. coli . Global Journal of Pharmacology 5 (1): 23-26.
Pui, C. F., Wong, W. C., Chai, L. C., Tunung, R., Jeyaletchumi, P., Noor Hidayah, M. S., Ubong, A., Farinazleen, M. G., Cheah, Y. K. dan Son, R. 2011. Review Article Salmonella : A foodborne pathogen. International Food Research Journal 18: 465-473 .
Rukmana, R.M, Soesilo N.P, Rumiyati, Pratiwi R. 2016. The Effect of Ethanolic Extract of
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020) ISSN 2460-1365
Black and White Rice Bran ( Oryza sativa L.) on Cancer Cells. IJBiotech ., 21: 63-69. DOI: 10.22146/ijbiotech.26814
Rukmana, Rizal, Maarif dan Mulyowati, Tri. 2015. Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak Etanolik Daun Kumis Kucing ( Orthosiphon stamineus ) pada Bakteri Streptococcus pyogenes dan Salmonella thypi . J-Biomedika., 8 (2): 15-18. DOI: https://doi.org/10.31001/biomedika.v8i2.199 Sutikno, 2010. Uji Aktivitas Antimikroba Senyawa Bioaktif Ekstrak Metanol Daun Senggani ( Melastoma candidum D. Don) Terhadap Shigella flexneri dan Micrococcus luteus serta Profil Kromatografi Lapis Tipisnya. Skripsi. Surakarta: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret.