Jurnal Pharmascience, Vol. 06 , No.01, Februari 2019, hal: 68 - 73 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience

## Research Article
Isolasi Jamur Endofit Dari Akar Tumbuhan Seluang Belum ( Luvunga sarmentosa (Blume) Kurz.)
* Nashrul Wathan 1 , Witiyasti Imaningsih 2
1 Program Studi Farmasi, FMIPA ULM, Jalan A.Yani km.36, Banjarbaru, Indonesia 2 Program Studi Biologi, FMIPA ULM, Jalan A.Yani km.36, Banjarbaru, Indonesia *Email : nashrul.far@ulm.ac.id

## Abstrak
Endofit  merupakan  mikroorganisme  yang  sebagian  atau  seluruh  hidupnya berada  di  dalam  jaringan  hidup  tumbuhan  inang,  salah  satunya  dalam  akar  seluang belum  ( Luvunga  sarmentosa (Blume)  Kurz.).  Jamur  endofit  menyimpan  potensi ekonomi  tak  terbatas  terutama  dalam  bidang  farmasi  dan  pertanian  sebagai  sumber bahan baku obat, enzim dan senyawa aktif biologis. Jamur endofit yang berada dalam akar  seluang  belum  ( Luvunga  sarmentosa (Blume)  Kurz.)  telah  berhasil  diisolasi menggunakan  media  PDA,  hasilnya  didapatkan  16  isolat  jamur  yang  perlu diidentifikasi lebih lanjut.
Kata kunci: Saluang belum, Luvunga sarmentosa , jamur endofit, isolat

## Abstract
Endophytes  are  microorganisms  that  part  or  all  of  their  lives  resides  in  the  living  plant tissue, one of which is in the roots of seluang belum (Luvunga sarmentosa (Blume) Kurz.). Endophytic  fungi  have  unlimited  economic  potential  especially  in  the  fields  of pharmaceuticals  and  agriculture  as  a  source  of  medicinal  raw  materials,  enzymes  and biologically  active  compounds.  Endophytic  fungi  that  live  in  the  root  of  seluang  belum (Luvunga  sarmentosa  (Blume)  Kurz.)  have  been  successfully  isolated  using  PDA  media, the results obtained 16 fungi isolates that need to be identified further.
Keywords: Saluang belum, Luvunga sarmentosa, endophytic fungi, isolates

## I. PENDAHULUAN
Hutan  Kalimantan  merupakan  suatu ekosistem  yang kondisi  alamnya termasuk lingkungan  lahan  basah,  di  dalamnya
memiliki  kekayaan  anekaragam  hayati yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai  bahan obat,  salah  satunya  adalah  Seluang  belum ( Luvunga  sarmentosa (Blume)  Kurz.).
Bagian akar dan kayu tumbuhan ini secara empiris diolah menjadi jamu yang digunakan  masyarakat  Suku  Dayak  dan Banjar  untuk  meningkatkan  stamina, gairah seksual dan kesuburan pria (Musfirah et  al ,  2016).  Tumbuhan  ini memiliki berkas pembuluh sehingga memungkinkan adanya endofit yang hidup di dalamnya.
Endofit  merupakan  mikroorganisme yang  sebagian  atau  seluruh  hidupnya berada  di  dalam  jaringan  hidup  tumbuhan inang  (Bhore  dan  Sathisha,  2010).  Jamur endofit  menyimpan  potensi  ekonomi  tak terbatas  terutama  dalam  bidang  farmasi dan  pertanian  sebagai  sumber  bahan  baku obat, enzim dan senyawa biologis pengendali  hama  di  masa  depan.  Menurut Porras-Alfaro  dan  Bayman  (2011)  selama 20  tahun  terakhir  terjadi  peningkatan dalam penemuan paten metabolit sekunder yang memiliki aktivitas biologis bersumber  dari  endofit.  Hal  ini  didukung dengan  semakin  banyaknya  publikasi mengenai  isolasi  dan  identifikasi  senyawa aktif biologis bersumber dari
mikroorganisme  endofit  yang  berasosiasi dengan  tumbuhan  tropis  atau  dengan makhluk  laut  ( marine  organisms )  (Sarker et al. , 2012).
P enelitian  mengenai  endofit  dalam tumbuhan  seluang  belum  ( L.  sarmentosa ) saat ini belum ada yang mempublikasikan, di  lain  pihak  potensi  endofit  yang
berasosiasi  dengan  tumbuhan  tropis  di hutan  Kalimantan  diyakini  menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder  aktif  dan memiliki  variasi  yang  lebih  banyak dibandingkan  dengan  endofit  tanaman- tanaman yang ada di daerah subtropis (Aly et  al .,  2013)  sehingga  endofit  yang berasosiasi  dengan  akar  seluang  belum menarik untuk diteliti lebih lanjut.

## II. METODE

## A. Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  tumbuhan  seluang belum  yang  diperoleh  dari  wilayah  hutan di  Palangka  Raya  Kalimantan  Tengah, larutan pensteril permukaan: larutan natrium  hipoklorit  (NaOCl)  5,25%,  etanol 70%, aquades, media pertumbuhan mikroba: Potato dextrose agar/PDA (Merck) untuk menumbuhkan jamur endofit,  Nutrient  agar,  Potato  dextrose broth/PDB (Merck), Yeast extract (Merck), kertas saring Whatman,
aluminium foil, kapas, dan tisu.
B. Determinasi tumbuhan seluang belum
Determinasi  terhadap  bahan  baku tumbuhan seluang belum ( Luvunga sarmentosa (Blume.)  Kurz.)  dilakukan  di Laboratorium  Biologi  Fakultas  MIPA ULM.

## C. Sterilisasi sampel
Organ  akar  dari  tumbuhan  seluang belum  dipotong  lebih  kurang  1  cm. Potongan organ tersebut selanjutnya dicuci dengan  air  mengalir  selama  10  menit. Potongan  akar  kemudian  disterilisasi dengan  etanol  70%  selama  lebih  kurang  3 menit serta Na hipoklorit (Bayclin 5,25%) selama lebih kurang 20 menit dan kembali disterilkan  dengan  etanol  70%  (Nursanty dan Suhartono, 2012).

## D. Isolasi jamur endofit
Potongan  akar  diletakkan  di  media PDA yang mengandung kloramfenikol 100 mg/L,  dilanjut  dengan  inkubasi  selama seminggu  pada  suhu  30 ⁰ C.  Koloni  yang tumbuh kemudian dimurnikan dan diidentifikasi sampai tingkat genus (Barnett  dan  Hunter,  1998).  Pemurnian dilakukan dengan menginokulasikan isolat pada  media  PDA  baru  dan  diinkubasi selama beberapa hari pada suhu 30 ⁰ C.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi tumbuhan seluang belum
Hasil determinasi tumbuhan menunjukkan  sampel  tersebut  memiliki nama  spesies  Lavanga  sarmentosa  Kurz. dengan  sinonim  Triphasia  sarmentosa  Bl. Tumbuhan  ini  termasuk  dalam  keluarga Rutaceae.

## B. Sterilisasi Sampel
Fungi  endofit  yang  diisolasi  berasal dari akar. Bagian akar yang diambil adalah bagian  lateral  yang  dekat  dengan  rambut akar.  Pertama,  sampel  akar  dibersihkan dengan  air  mengalir,  tujuannya  untuk menghilangkan  pengotor  ataupun  tanah yang  masih  menempel  pada  bagian  akar, selanjutnya dilakukan sterilisasi permukaan  yang bertujuan menghilangkan mikroba  bukan  endofit  yang  menempel  di permukaan  sampel  sehingga  jamur  yang nantinya ditumbuhkan dan diisolasi benar- benar  merupakan  jamur  endofit  (Strobel dan  Daisy,  2003).    Strerilisasi  permukaan dilakukan dengan merendam akar selama 1 menit  dalam  alkohol  70%,  3  menit  dalam larutan  NaOCl  5,3%  dan  30  detik  dalam alkohol  70%.  Digunakan  larutan  alkohol 70%  dan  tidak  digunakan  alkohol  murni karena  dalam  proses  mematikan  mikroba diperlukan air untuk memperantarai proses denaturasi  protein  yang  dimiliki  mikroba, penggunaan  NaOCl/  natrium  hipoklorit sendiri  karena  NaOCl  memiliki  sifat germisidal dengan jalan merusak membran sel  mikroorganisme  karena  proteinnya teroksidasi  dan  menginaktivasi  enzim mikroorganisme  (Pratiwi,  2008).  Akar yang  telah  disterilisasi  ditiriskan  dengan menggunakan  tisu  steril  dan  dipotong menjadi ukuran 1 cm.

## C. Isolasi Jamur Endofit
Metode yang digunakan adalah metode  tanam  langsung.  Masing-masing potongan  akar  tersebut  diletakkan  ke dalam  cawan  Petri  berisi  medium  PDA yang telah dicampur dengan kloramfenikol.  Medium  PDA  merupakan media  yang  cocok  untuk  pertumbuhan jamur,  di  dalamnya  mengandung  ekstrak kentang sebagai sumber nutrisi pertumbuhan jamur. Pada media ditambahkan kloramfenikol untuk mencegah tumbuhnya bakteri namun tidak mengganggu  pertumbuhan  jamur  endofit. Kloramfenikol merupakan antibiotik berspektrum  luas  yang  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif maupun bakteri  Gram  negatif,  dan  antibiotik  ini dapat berpenetrasi ke dalam media dengan baik  (Fayyaz et al,  2013).  Potongan  akar tadi  diletakkan  ke  cawan  petri  dan dilakukan  replikasi  5  cawan  sehingga masing-masing  berisi  1  sampel  potongan akar, diinkubasi pada suhu ruang selama 5- 7  hari,  didapatkan  hasil  yang  ditunjukkan dalam tabel 1.
Tabel  I. Jumlah pertumbuhan koloni pada setiap  cawan  petri  yang  berisi potongan akar seluang belum.
Cawan Koloni yang tumbuh A 4 B 5 C 1 D 5 E 4
Setelah  jamur  endofit  tersebut  tumbuh kemudian  dilakukan  pemurnian  untuk memisahkan  koloni  fungi  endofit  hingga diperoleh isolat fungi endofit. Koloni fungi yang  tumbuh  di  sekeliling  sampel  akar dimurnikan berdasarkan morfologi makroskopik  yang  dapat  diamati  dari warna  serta  bentuk  pertumbuhan  koloni jamur  (Ariyono,  2014).  Hasilnya  dari  10 cawan  petri    yang  ditumbuhkan  didapat  9 koloni  murni  dan  ada  2  koloni  yang tumbuh  dalam  1  cawan  petri,  hasilnya dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1. Hasil pemurnian jamur endofit dari akar Seluang belum pada medium PDA
Isolat  jamur  endofit  yang  dimurnikan, diamati  secara  makroskopis.  Menurut Gandjar, et  al (1992),  dalam  melakukan pengamatan morfologi koloni dapat dilihat dari  warna  permukaan  koloni,  selain  itu dilihat  ada  tidaknya  garis-garis  radial  dari pusat  koloni  ke  arah  tepi  koloni  dan  juga
ada tidaknya lingkaran–lingkaran konsentris, hasilnya ditampilkan tabel 2.
Tabel  II. Hasil  pengamatan  makroskopis koloni  isolat  jamur  endofit seluang belum Kode Isolat Ciri Khusus Warna permuk aan  atas koloni Margin Elevasi Bentuk 1 Putih Filiform Umbonate Filament ous 2 Putih Entire Flat Circular 3 Putih hijau (dibagian tengah) Filiform Umbonate Filamen- tous 4 Putih keabu abuan Undulate Flat Irregular 5 Putih keabu abuan Entire Raised Circular 6 Putih kehijaua n Entire Raised Circular 7 Putih kekuning an Filiform Flat Filamen- tous 8 Abu-abu Filiform Umbonate Filamen- tous 9 Abu-abu kehitama n Filiform Flat Circular 10 Putih bening Undulate Flat Irregular 11 Coklat kekuning an Curled Crateri- form
Irregular

## IV. KESIMPULAN
Hasil  isolasi  jamur  endofit  dari  akar seluang  belum  ( Luvunga  sarmentosa (Blume) Kurz.) menggunakan media PDA sebanyak 10 cawan petri didapatkan koloni murni  jamur  endofit  sebanyak  9  isolat yang  berada  masing-masing  dalam  1
cawan  petri  dan  2  koloni  jamur  endofit tumbuh  bersama  dalam  1  cawan  petri, pengamatan makroskopis juga telah dilakukan  yang  dilihat  berdasarkan  warna permukaan koloni, ada tidaknya garis-garis radial dari pusat koloni ke arah tepi koloni dan juga ada tidaknya lingkaran–lingkaran konsentris.

## DAFTAR PUSTAKA
Aly, A.H., Debbab, A., Proksch, P., 2013.
Fungal Endophytes – Secret Producers of Bioactive Plant Metabolites.  Pharmazie,  No.  68 p.499-505 Ariyono,  R.Q.,  Syamsuddin  D.,  Lilik  S., 2014, Keanekaragaman Jamur
Endofit  Daun  Kangkung  Darat ( Ipomoea reptans Poir.) PAda Lahan Pertanian Organik dan Konvensional. Jurnal HPT 2.(1) : 19- 28
Barnett,  H.L.  and  B.B.  Hunter.  1998.
Illustrated marga of imperfect  fungi.
4th ed. USA: Prentice-Hall, Inc.
Bhore, Subhash J. and Sathisha, G., 2010.
Screening  of  endophytic  colonizing bacteria for cytokinin-like compounds:  crude  cell-free  broth  of endophytic  colonizing  bacteria  is unsuitable  in  cucumber  cotyledon bioassay. World Journal of
Agricultural  Sciences  6  (4),  p.345-
352. Fayyaz, M., Irfan A.M, Zaheer A., Shahid A.A.,  Amir  H.,  dan  Shamsad  A.,
2013,  In  Vitro  Susceptibility  of Chloramphenicol
Againts
Methicillin-Resistan Staphylococcus aureus ,  Journal  of  the  College  of Physicians  and  Surgeons  Pakistan. 23(9): 637-640
Gandjar  I, Koentjoro  IR, Mangunwardoyo W,  Soebagya  L.  1992.  Pedoman Praktikum Mikrobiologi Dasar.
Jurusan Biologi, FMIPA, UI,
Jakarta. Musfirah  Y.,  Bachri  M.S.,  Nurani.  L.H., 2016, Efek Ekstrak Etanol 70% Akar Saluang Balum ( Lavanga sarmentosa ,  Blume  kurz)  Terhadap Spermatogenesis dan Gambaran Histopatologik Testis Mencit, Pharmascience,  Vol  03  no  02,  hal
131-141
Nursanty,  R.  &  Suhartono.  2012.  Isolasi, karakterisasi  dan  uji  antimikroba bakteri  endofit  asal  tumbuhan  Johar
( Cassia  siamea Lamk.).  Jurnal
Ilmiah  Pendidikan  Biologi.  4(1):  7- 10.
Porras-Alfaro, Andrea. and Bayman, Paul.
2011.  Hidden  jamur,  emergent properties: endophytes and microbiomes, Annual Review Phytopathology 49, p. 291-315 Pratiwi, S.T., 2008, Mikrobiologi Farmasi,
Erlangga Jakarta.
Sarker,  Satyajit  D. et  al .,  2012.  Natural Products  Isolation.  New  Jersey: Humana Press
Strobel,  G.A.  2002.  Microbial  Gifts  from Rain  Forest.  Canadian  Journal  of Plant Pathology, Vol. 24, p. 14-20.