## Karakteristik genetik ikan belida
Chitala lopis (Bleeker, 1851) asal Lampung dan Kalimantan berdasarkan gen COI
[Genetic characteristic of giant featherback, Chitala lopis (Bleeker, 1851) from Lampung and Kalimantan using COI Gene]
Alam Putra Persada 1,2 , Dedy Duryadi Solihin 2* , Ridwan Affandi 3
1) Program Magister, Sekolah Pascasarjana IPB. IPB University. Jalan Raya Dramaga, Bogor 16680
2) Departemen Biologi, Fakultas Matematikan dan Ilmu Pengetahuan Alam, IPB University.
Jalan Raya Dramaga, Bogor 16680
3) Departemen Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan IPB. IPB University. Jalan Raya Dramaga, Bogor 16680 *Korespondensi: alamputra.persada@gmail.com, dduryadi@yahoo.com, affandi_ridwan@yahoo.com
Diterima: 8 Agustus 2020; Disetujui: 5 Januari 2021

## Abstrak
Barkoding DNA berdasarkan gen parsial Cytochrome Oxidase subunit I ( COI ) mitokondria telah banyak digunakan pada identifikasi spesies dan studi biodiversitas. Penggunaan gen COI mampu memperoleh karakteristik genetik, variasi genetik, dan filogeni. Tujuan penelitian ini adalah menganalisis keragaman genetik spesies ikan belida Chitala lopis asal Lampung dan Kalimantan. Analisis yang digunakan yaitu menghitung jarak genetik dengan model Kimura two parameter (K2P), melihat variasi nukleotida, polimorfisme dan merekonstruksi pohon filogenetik menggunakan software MEGA 7.0. Sebanyak sembilan  individu ikan belida  dikoleksi dari tiga  populasi yaitu: Lampung, Kalimantan Barat dan Kalimantan Selatan. Hasil analisis urutan nukleotida yang didapat menunjukkan 689 pb situs konservatif, 18 pb situs variasi, 13 pb situs parsimoni, dan 2 pb situs singleton dari 707 pb gen parsial COI . Jarak rata- rata intraspesies, ingroup , outgroup berdasarkan K2P adalah 1,24%, 1,43% & 1,58% (Kode akses Genbank: AP008922.1; KM213054.1), 13,00%. Single Nucleotide Polymorphism (SNP) yang diperoleh sebanyak 13 situs. Sampel Kalimantan Barat memiliki dua SNP pada situs (471 dan 528). Kalimantan Selatan memiliki sembilan SNP (situs ke 120, 129, 144, 201, 306, 324, 474, 615 dan 644). Berdasarkan jarak genetik, perbedaan terbesar terletak pada sampel Kalimantan Selatan (1,58%) dibandingkan dengan Lampung dan Kalimantan Barat. Hasil rekonstruksi pohon filogenetik K2P neighbor-joining , menunjukkan bahwa sampel Kalimantan Selatan berada pada grup yang berbeda. Sampel Kalimantan Barat menunjukkan kekerabatan lebih dekat dengan grup Lampung.
Kata penting: barkoding DNA, belida, COI , SNP

## Abstract
DNA barcoding based on partial Cytochrome Oxidase subunit I (COI) gene in the mitochondrial has widely used in species identification and biodiversity studies. COI gene application is expected to obtain genetic characteristic, genetic variations and phylogeny of giant featherback. The aim of this research was to analyze genetic diversity of giant featherback Chitala lopis in Lampung and Kalimantan. To analyse genetic distance, Kimura two parameter (K2P) model was performed where to determine nucleotide variation & polymorphism and also reconstructed of phylogenetic tree was used MEGA 7.0 software. Total nine individuals were obtained from three populations, i.e. Lampung, West Kalimantan and South Kalimantan. The results showed that giant featherback  has 689 bp conserve, 18 bp variation, 13 bp parsimony- informative, and 2 bp singleton sites from 707 bp COI partial gene. The average within-species, in-group, and out-group based on K2P distances were 1.24%, 1.43% & 1.58% (AP008922.1; KM213054.1), and 13.00% respectively. The Single Nucleotide Polymorphism (SNP) was obtaining from 13 SNP sites. West Kalimantan samples have two SNP (471 and 528 site). The South Kalimantan samples showed more specific nucleotides with nine SNP (120, 129, 144, 201, 306, 324, 474, 615 and 644). Based on genetic
distance, the biggest difference was in the South Kalimantan sample (1.58%) compared with Lampung and West Kalimantan. The results of the K2P neighbour-joining phylogenetic tree reconstruction show that the South Kalimantan samples are in a different group. The West Kalimantan sample shows that it is closely related to the Lampung.
Keywords: COI, DNA barcoding, giant featherback, SNP

## Pendahuluan
Ikan belida ( Chitala lopis ) merupakan salah satu jenis ikan air tawar yang memiliki nilai ekonomis tinggi di Indonesia. Persebar- annya meliputi daerah Jawa, Lampung, Su- matra Selatan, Bengkulu, Jambi, Riau dan Kalimantan (Kottelat et al . 1993). Adanya aktivitas penangkapan berlebih ( overfishing ) dan perubahan lingkungan maupun kerusak- an lingkungan perairan, menyebabkan keles- tarian ikan ini terancam punah. Ikan belida termasuk dalam kategori ikan air tawar yang dilindungi menurut peraturan pemerintah no- mor 7 tahun 1999 tentang pengawetan jenis tumbuhan dan satwa. Pada tahun 2018  ada empat jenis ikan belida yang dilindungi pe- merintah, yaitu belida Borneo ( Chitala bor- neensis ), belida Sumatra ( Chitala hypselo- notus ), belida lopis ( Chitala lopis ), dan belida Jawa ( Notopterus notopterus ) (Men. LHK 2018). Conservation Assessment and Mana- gement Plan (CAMP) mengategorikan Chita-
la spp. terutama jenis Chitala lopis sebagai spesies langka (Sarkar et al . 2008).
Dalam menjaga kelestariannya, perlu adanya upaya konservasi ikan belida, salah satunya dengan cara konservasi genetik. Sa- lah satu upaya dalam konservasi genetik adalah dengan mengetahui karakteristik ge- netik ikan belida dengan menganalisis DNA mitokondria. Hasil analisis gen mtDNA dapat
memberikan informasi dalam melakukan identifikasi spesies, mengklarifikasi takso- nomi dan menentukan sebaran populasi he- wan yang diamati (Hebert et al . 2003). Gen mtDNA sering digunakan untuk mendapat- kan informasi keragaman genetik karena ber- evolusi sangat cepat dan dapat digunakan untuk membedakan interspesies dan intra- spesies hewan yang berkerabat dekat (Solihin 1994).
Beberapa tahun terakhir penggunaan gen mitokondria yang paling populer adalah gen Cytochrome Oxidase subunit I ( COI ). Gen COI merupakan salah satu marka molekular yang berasal dari DNA mitokondria. Gen ini banyak digunakan sebagai DNA barcoding , identifikasi spesies, karakterisasi dan penge- lompokan spesies dari berbagai taksa hewan (Solihin 1994, Hebert et al . 2003).
Penggunaan gen CO1 sebagai DNA Bar- coding, mampu untuk mengidentifikasi ikan pada berbagai stadia ikan, maupun status ikan cryptic species (Ward et al . 2005). Gen ini ju- ga banyak digunakan pada spesies ikan untuk merekonstruksi pohon filogeni, species ori- gin, maupun sebaran populasi (Page  & Hughes 2010).
Penelitian tentang ikan belida sudah ba- nyak dilakukan dengan berbagai kajian, se- perti biometrik  ikan belida  di Sumatra dan Kalimantan (Sunarno et al . 2007), keragaman
genetik dan biometrik ikan belida budidaya di Riau (Nugroho et al . 2019), struktur populasi ikan belida di Riau (Wibowo 2012),  kera- gaman genetik ikan belida di Riau (Wibowo et al . 2010),  plastisitas ikan belida di Riau
(Wibowo & Marson 2012), biologi repro- duksi (Adjie et al . 1999, Santoso 2009,
Sunarno & Syamsunarno 2015) dan eko- biologi  ikan belida di Riau  (Wibowo & Subagja 2014). Dari  beberapa  penelitian tersebut, belum banyaknya  informasi  dasar mengenai karakter genetik gen parsial COI
ikan belida dari beberapa sungai di Indonesia berdasarkan spesifik lokasi.
Tujuan penelitian ini adalah untuk meli- hat keragaman genetik ikan belida Chitala lopis (Bleeker, 1851) yang berasal dari wila- yah  Lampung,  Kalimantan  Barat, dan Kali- mantan Selatan.

## Bahan dan metode
Penelitian ini dilaksanakan dari Septem- ber 2018 hingga Desember 2019. Koleksi
sampel ikan belida berasal dari Lampung dan Kalimantan (Tabel 1), Lampung (tiga indivi- du),  Kalimantan Barat (tiga individu), dan Kalimantan Selatan (tiga  individu). Sampel Kalimantan Selatan diperoleh dari Instalasi Penelitian dan Pengembangan Teknologi Lingkungan dan Toksikologi Perikanan Bu- didaya Air Tawar Cibalagung, Bogor. Ana- lisis genetik dilaksanakan di Laboratorium Konservasi Genetik, Pusat Penelitian Sum- berdaya Hayati dan Bioteknologi (PPSHB) IPB Bogor.

## Koleksi sampel
Sampel DNA berasal dari darah. Sampel darah diambil sebanyak ± 0,5 ml menggu- nakan spuit dengan Teknik Puncturing the Caudal Vessel (Pembuluh darah Bagian Caudal) (MUAWC 2008). Darah yang diper- oleh lalu dimasukkan ke dalam mikrotube 1.5 ml yang berisi buffer EDTA 10% dengan perbandingan ± darah 7:3 EDTA dan diberi label.

## Tabel 1 Sumber sampel ikan belida yang dianalisis gen
COI No.  Kode Sampel Asal Sampel Bentuk Sampel Sumber 1 BKS 1 Kalimantan Selatan Darah Koleksi Balai Cibalagung 2 BKS 2 Kalimantan Selatan Darah 3 BKS 3 Kalimantan Selatan Darah 4 BKB 1 Kalimantan Barat Darah Pedagang 5 BKB 2 Kalimantan Barat Darah 6 BKB 3 Kalimantan Barat Darah 7 BL 1 Lampung Darah Penduduk lokal 8 BL 2 Lampung Darah 9 BL 3 Lampung Darah

## Amplifikasi DNA
Proses amplifikasi dengan teknik Poly-
merase Chain Reaction (PCR) menggunakan
primer gen COI universal yaitu COI Fish F1 dan COI Fish R1 (Ward et al. 2005):
FishF1- 5’TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC3’;
FishR1- 5’TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA3’.
Target dari primer gen COI menghasil- kan produk PCR sepanjang 707 pb. Total volume pereaksi PCR yang diperoleh adalah 25 µl, dengan komposisi DDH2O: 10,8 µl, 5x
Buffer Q5: 4 µl, 5x Enhancer Q5: 5 µl, dNTP: 1 µl, Primer COI Fish F1: 1 µl, Primer COI Fish R1: 1 µl, DNA total: 2 µl, dan Taq DNA Polymerase: 0,2 µl.
Kondisi PCR yang digunakan meliputi tahapan pradenaturasi 94 ºC selama 3 menit, denaturasi (94 ºC, 45 detik), annealing (57 ºC, 45 detik), extension (72 ºC, 1 menit)
sebanyak 35 siklus, elongasi akhir ( final extension ) pada suhu 72 °C selama 5 menit, dan pendinginan 20 ºC selama 10 menit. Produk PCR dimigrasikan pada gel agarose 1,2%.  Produk PCR yang menunjukkan pita single band akan dilanjutkan ketahap proses sekuensing di 1st BASE, Malaysia.

## Analisis data
Hasil pembacaan untai DNA diperiksa dahulu untuk memastikan tidak adanya error. Hasil dari tiap urutan DNA, disejajarkan berdasarkan sekuens forward dan reverse untuk mendapatkan sekuen utuh. Sekuen utuh tersebut kemudian dikoreksi dengan primer
forward dan reverse dari gen COI agar diperoleh sekuen sesuai target dari primer yang digunakan. Pensejajaran sekuen meng- gunakan program MEGA ( Molecular Evolu- tionary Genetics Analysis ) versi 7.0 (Kumar et al. 2016). Hasil sekuens tersebut kemudian dilakukan BLAST-n ( Basic Local Alignment Search Tool-nucleotide ) di situs National Center for Biotechnology Information (NCBI; https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast. cgi ). Jarak genetik dianalisis berdasarkan model Kimura 2-parameter dengan nilai boostrap 1000 kali. Rekonstruksi pohon filo- genetik menggunakan metode Neighbor- joining dengan model Kimura 2- parameter , serta bootstraps sebanyak 1000 kali pengu- langan (Kumar et al. 2016). Selanjutnya se-
kuen dari GenBank Chitala lopis (AP008922.1 dan KM213054.1) ditambah-
kan sebagai ingroup dan Notopterus notop- terus (AP008924.1) sebagai outgroup .

## Hasil
Hasil amplifikasi gen COI diperoleh 707 pb  (pasang basa) (Gambar  1). Pensejajaran dengan runutan gen COI utuh Chitala lopis berukuran 1.548 pb (AP008922.1), posisi urutan gen COI parsial pada penelitian ini dimulai pada basa ke 24 hingga pada basa ke 731.
Identifikasi spesies ikan belida dilakukan dengan mencocokkan sekuen gen COI de- ngan spesies terdekat yang terdapat pada GenBank . Hasil yang diperoleh disajikan pa- da Tabel 2. Nilai kemiripan ( percent identity )
berkisar 97,60 – 99,15% dengan query cover sebesar 100% dengan nilai terendah diper- oleh pada sampel yang berasal dari Kaliman- tan Selatan dengan nilai 97,60%. Tingkat kemiripan tertinggi didapat pada sampel yang berasal dari Lampung dengan nilai 99,15%
Karakterisasi gen COI pada spesies Chi- tala lopis dengan perbandingan sekuens Chi- tala lopis (AP008922.1) dari Genbank me- nunjukkan hasil situs konservatif sebesar 689 pb (97,45%), situs variasi 18  pb (2,54%), situs parsimoni 13 pb (1,84%), dan singleton
2 pb (0,28%) (Tabel 3). Komposisi basa nu- kleotida gen COI menunjukkan bahwa rata- rata tertinggi adalah Adenosin (28,4 %) dan diikuti oleh basa Sitosin (27,5%), Timin (27,2%) dan paling rendah adalah Guanin (16,8%) (Tabel 3). Pada penelitian ini diper- oleh komposisi basa AT sebesar 55,7% dan komposisi basa GC 44,3%.  Pada penelitian ini diperoleh hasil nilai analisis statistik frekuensi nukelotida subtitusi adalah ii = 700, si = 6, sv = 1, R = 4,7.
Gambar 1 Visualisasi pita hasil PCR gen COI parsial Keterangan: (1kb) Marker ukuran 1kb, (1) Kalimantan Barat, (2) Kalimantan Selatan, (3) Lampung.
Tabel 2 Hasil identifikasi gen COI ikan belida di BLAST-n NCBI No  Sampel  Spesies Terdekat Query Cover (%) Percent Identity (%)   Kode akses 1 BL 1 Chitala lopis 100 99,15 AP008922.1 2 BL 2 Chitala lopis 100 99,15 AP008922.1 3 BL 3 Chitala lopis 100 99,15 AP008922.1 4  BKB 1 Chitala lopis 100 98,59 AP008922.1 5  BKB 2 Chitala lopis 100 98,59 AP008922.1 6  BKB 3 Chitala lopis 100 98,59 AP008922.1 7 BKS1 Chitala lopis 100 97,60 AP008922.1 8  BKS 2 Chitala lopis 100 97,60 AP008922.1 9  BKS 3 Chitala lopis 100 97,60 AP008922.1
Pada hasil penelitian ini ditemukan 13 situs polimorfisme bervariasi pada populasi
Lampung  dan Kalimantan. Perbedaan pada
sampel Kalimantan dengan Lampung terletak pada nukleotida spesifik lokasi  situs ke 66 dan 273. Nukleotida spesifik pada sampel
Tabel 3 Perbandingan karakteristik nukleotida dengan gen COI Chitala lopis (AP008922.1) No Karakter Gen COI 1 Sampel Individu dan GenBank 9 sampel dan 1 Genbank 2 Situs Konservatif (%) 689 (97,45) 3 Situs Variasi (%) 18 pb (2,54) 4 Situs Parsimoni* (%) 13 pb (1,84) 5 Situs Singleton** (%) 2 pb (0,28) 6 Persentase Adenin (A) 28,4 7 Persentase Guanin (G) 16,8 8 Persentase Sitosin (C) 27,5 9 Persentase Timin (T) 27,2 10 Komposisi basa AT 55,7 11 Komposisi basa GC 44,3
* Situs parsimoni: ditemukan minimal dua jenis nukleotida, setiap jenis nukleotida dimiliki oleh minimal 2 runutan,
** Situs singleton: nukleotida yang berbeda hanya ditemukan pada satu runutan.
Tabel 4 Polimorfisme sekuen nukleotida interpopulasi Chitala lopis berdasarkan gen COI Spesies Kode Akses / Sampel Situs Nukleotida ke- 1  1  1  2 2 3  3  4  4  5  6  6 6 2  2  4  0 7 0  2  7  7  2  1  4 6 0  9  4  1 3 6  4  1  4  8  5  4 Chitala lopis * AP008922.1  C  T  C  C  C  T  G  A  T  A  C  C  T C. lopis BL 1 .  .  .  .  .  .  .  .  .  .  .  .  . C. lopis C. lopis BL 2 BL 3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . C. lopis BKB 1 T  .  .  .  .  C  .  .  C  .  T  .  . C. lopis BKB 2 T  .  .  .  .  C  .  .  C  .  T  .  . C. lopis BKB 3 T  .  .  .  .  C  .  .  C  .  T  .  . C. lopis BKS 1 T  C  T  T  T  C  A  C  .  G  .  T  C C. lopis BKS 2 T  C  T  T  T  C  A  C  .  G  .  T  C C. lopis BKS 3 T  C  T  T  T  C  A  C  .  G  .  T  C
* spesies asal GenBank
Kalimantan dapat membedakan antarlokasi. Sampel  Kalimantan Selatan menunjukkan nukleotida spesifik terdapat pada situs 120, 129, 144, 201, 306, 324, 474, 615 dan 644. Pada sampel Kalimantan Barat situs nukleo- tida spesifik ditunjukkan pada situs 471 dan 528. Berbeda dengan Kalimantan, pada sam- pel Lampung cenderung menunjukkan nukle- otida yang sama dengan sampel  pembanding
dari GenBank ( Chitala lopis AP008922.1).
Berdasarkan hasil yang diperoleh, variasi situs nukleotida pada populasi Kalimantan Selatan  lebih tinggi dibandingkan populasi Kalimantan Barat dan populasi Lampung. Perbedaan situs nukleotida antar sampel, hal ini dapat dilihat pada Tabel 4. Hasil frekuensi subtitusi nukleotida terjadi pada posisi kodon ketiga sebesar 94,4% dan posisi kodon
Tabel 5 Rata-rata jarak genetik intra dan inter spesies berdasarkan gen COI (%) Lokasi [1] [2] [3] [4] [5] [6] [1] BL 1 0,00* [2] BKS 1 1,58 1 0,00* [3] BKB 1 0,57 1 1,58 1 0,00* [4] C. lopis 1 1 0,71 1 2,30 1 1,28 1 0,00* [5] C. lopis 2 1 0,85 1 2,45 1 1,43
1 0,43 1 0,00* [6] N. notopterus 3 13,19 12,99 12,83 12,50 12,65 1 0,00*
* jarak genetik antarindividu dalam populasi (intrapopulasi). 1 Spesies Asal GenBank (AP008922.1). 2 Spesies Asal GenBank (KM213054.1). 3 Spesies Asal GenBank (AP008924.1). Keterangan: BL:
Belida Lampung ; BKS: Belida Kalimantan Selatan ; BKB: Belida Kalimantan Barat.
Gambar 2 Rekonstruksi pohon filogenetik Chitala lopis berdasarkan gen COI BL 2 BL 3 BL 1 Chitala lopis (AP008922.1)
Chitala lopis (KM213054.1) BKB 1 BKB 2
BKB 3 BKS 1 BKS 2 BKS 3 Notopterus notopterus (AP008924.1) 100 78 97 52 37 93 0.0100
pertama maupun kodon kedua sebesar 5,6%.
Perbedaan terlihat pada jarak genetik in- terpopulasi antara Kalimantan Selatan dan Kalimantan Barat dengan nilai 1,58%. Sam- pel Lampung dengan populasi Kalimantan memiliki jarak genetik sebesar 1,07%. Pada perbedaan jarak genetik intraspesies didapat nilai sebesar 0,006 – 0,016 dengan rata-rata
0,012  (1,24%). Persentase perbedaan jarak genetik intraspesies Chitala lopis dari  tiga
lokasi dengan Chitala lopis dari  GenBank
(AP008922.1) sebesar 0,71% - 2,30% dengan rata-rata 1,43%.  Perbandingan  seluruh sam- pel dengan data GenBank Chitala lopis (KM213054.1) terdapat perbedaan sebesar
0,85% - 2,45 dengan rata-rata 1,58%. Jarak genetik interspesies dengan outgroup No- topterus notopterus (AP008924.1) 12,83  –
13,19% (Tabel 5) dengan rata-rata 13,00%.
Rekonstruksi pohon filogenetik gen COI
menunjukkan dua group utama yaitu group I yang terdiri dari Chitala lopis asal tiga lokasi dan dua data spesies pembanding Chitala lopis (AP008922.1; KM213054.1) ( ingroup ), group II berisi outgroup Notopterus notop- terus (AP008924.1) (Gambar 2). Pada group
I terbagi lagi menjadi dua group , yaitu group Ia terdiri dari Lampung dan Kalimantan Barat dengan nilai bootstrap 52 dan group Ib yang terdiri dari sampel asal Kalimantan selatan dengan nilai bootstrap 100. Pada group Ia terbagi menjadi beberapa sub-group , yaitu sub-group Ia1 1 (Lampung), sub-group Ia1 2
( ingroup ) dan sub-group Ia2 (Kalimantan Barat).

## Pembahasan
Hasil yang diperoleh menunjukkan bah- wa tidak terdapat nukleotida yang mengalami insersi dan delesi, namun ditemukan nukleo- tida yang mengalami subtitusi. Pada gen COI sangat jarang terjadinya insersi, delesi dan variasi, dikarenakan gen ini bersifat konser- vatif dan digunakan sebagai standar DNA Barkoding (Hebert et al . 2003).
Persentase komposisi basa nukleotida GC pada ikan belida adalah 44,3%. Hal ini tidak berbeda jauh pada beberapa taksa, komposisi basa GC berada dibawah 50%, seperti pada spesies C. chitala 43,5% & N. notopterus
43,85% (Sengupta & Homechaudhuri 2013),
genus Kryptopterus 46,40% (Jusmaldi et al .
2014), kelompok Teleostei 47,06% (Ward et al . 2005), kelompok Elasmobranchs 41,78%
& kelompok Actinopterygii 47,12% (Ward & Holmes 2007).
Karakteristik nukleotida pada gen COI ikan belida, terdapat nukleotida yang meng- alami subtitusi transisi dan transversi. Dilihat dari subtitusi nukleotidanya, frekuensi peru- bahan paling sering terjadi pada posisi kodon ketiga (94,4%) dibandingkan dengan posisi kodon pertama ataupun kodon kedua (5,6%). Menurut Bofkin & Goldman (2007), subtitusi nukleotida yang terjadi pada posisi kodon ketiga banyak yang bersifat sinonim, yaitu subtitusi yang tidak menyebabkan perubahan aktivitas pada produk yang dikode oleh gen. Sebaliknya dengan subtitusi pada kodon keti- ga, subtitusi pada kodon pertama dan kodon kedua bersifat non-sinonim. Hasil ini menun- jukkan bahwa frekuensi subtitusi sinonim
pada gen COI ikan belida lebih banyak yang bersifat sinonim, hal ini didukung juga oleh penelitian Ward & Holmes (2007) bahwa subtitusi sinonim lebih tinggi dibanding sub- titusi non-sinonim pada gen parsial COI dengan panjang 655 pb.
Berdasarkan hasil yang diperoleh, subti- tusi nukleotida yang terjadi pada gen parsial COI lebih banyak terjadi subtitusi transisi dibandingkan transversi. Jumlah basa nukleo- tida yang mengalami subtitusi transisi dengan nilai si = 6, sv = 1, R = 4,7. Hasil ini didukung penelitian Sengupta & Homechaudhuri (2013), yaitu hasil subtitusi nukleotida transi- si lebih banyak terjadi dibanding subtitusi nukleotida transversi. Hasil tersebut terjadi pada famili Notopteridae, yang mana subtitu- si transisi yang diperoleh yaitu, si = 28, dan sv = 11 dengan nilai R = 2,6.
Hasil analisis dari sampel Lampung me- miliki kemiripan dengan spesies pembanding asal GenBank (AP008922.1), diduga spesies pembanding GenBank diperoleh dari Su- matra (Indonesia). Wibowo (2014) melapor- kan berdasarkan gen COI bahwa C. lopis asal Indonesia memiliki 14 situs nukleotida spesi- fik lokasi, yang tiap populasinya memiliki ciri situs nukleotida spesifik lokasi tersendiri.
Berdasarkan analisis perhitungan jarak genetik, perbedaan terbesar yang diperoleh pada sampel penelitian ini dengan spesies in- group tidak lebih dari 3%. Pada sistem identifikasi COI, suatu spesies dapat dibeda- kan jenisnya apabila perbedaan jarak genetik- nya melebihi 3% (Hebert et al . 2003), dan
3,5% pada ikan (Ward et al . 2009). Perbedaan
ditunjukkan pada spesies pembanding N. notopterus ( outgroup ), dengan jarak sebesar 12,83% - 13,19% pada sampel asal Lampung dan Kalimantan, lalu  12,50% pada spesies Chitala lopis (AP008922.1) sebagai ingroup .
Pada hasil penelitian Sengupta & Home- chaudhuri (2013), spesies C. chitala dan N. notopterus memliki jarak genetik intraspesies 0% dan interspesies 11%.
Berdasarkan hasil jarak genetik, populasi belida Kalimantan Barat memiliki perbedaan jarak genetik yang dekat dengan belida Lam- pung. Pada zaman Pleistocene, pulau Suma- tra, Kalimantan dan Asia merupakan suatu daratan besar yang disebut paparan Sunda. Aliran sungai besar Sunda Utara mengalir ke sungai Indragiri, Musi (utara – timur Suma- tra) hingga menuju sungai Kapuas (Kaliman- tan Barat) (Voris 2000) sehingga memiliki pengaruh pada persebaran  ikan air tawar (Inger & Chin 1962). Hal ini dapat dilihat dari populasi ikan botia ( Chromobotia macracan- thus ), bahwa populasi ikan botia di Kaliman- tan dan Sumatra memiliki keragaman genetik dan morfologi yang mirip (Sudarto & Rizal 2007, Sudarto et al . 2008). Begitu pula de- ngan sampel ikan belida  dari populasi Lampung, menunjukkan jarak genetik 0%, dikarenakan  beberapa  sungai  di Sumatra terhubung dengan sistem aliran sungai Sunda Utara (Voris 2000). Perbedaan jarak genetik ditunjukkan antara populasi Kalimantan Sela- tan dengan Kalimantan Barat sebesar 1,58%. Hal ini diduga bahwa aliran sungai di Kali- mantan Selatan tidak terhubung dengan su- ngai Sunda Utara. Hasil ini diperkuat oleh
hasil penelitian Sudarto & Rizal (2007), bahwa morfologi ikan Botia dari Kalimantan Selatan berbeda dengan ikan Botia yang ber- asal dari Sumatra.
Berdasarkan hasil rekonstruksi pohon filogeni ikan belida (Gambar 2) terdapat dua group utama. Masing-masing populasi mengelompok berdasarkan lokasi. Sampel yang berasal dari Lampung dan Kalimantan Barat mengelompok dengan spesies pem- banding Chitala lopis (AP008922.1 dan KM213054.1) pada satu group . Terlihat pada sub-group Ib, spesies Chitala lopis
(AP008922.1) berada satu sub-group dengan
Chitala lopis (KM213054.1) yang berasal dari sungai Kampar, Riau. Berdasarkan per- hitungan jarak genetik, perbedaan antara sampel yang berasal dari Lampung  dengan Chitala lopis (AP008922.1) tidak berbeda jauh dengan nilai sebesar 0,71%. Begitu pula dengan hasil analisis jarak genetik antara Chitala lopis (AP008922.1) dan Chitala lopis (KM213054.1) yang hanya memiliki perbe- daan sebesar 0,43%. Berdasarkan hasil terse- but, spesies pembanding Chitala lopis (AP008922.1) diduga berasal dari Indonesia, khususnya populasi Sumatra. Pada group Ia, populasi Kalimantan Barat memiliki kekera- batan lebih dekat dengan populasi Lampung. Hasil ini ditunjang oleh nilai Jarak genetik perbedaan populasi Kalimantan Barat dengan Lampung  sebesar 0,57% dan sejarah aliran sungai Sunda besar pada zaman Pleistocene (Voris 2000). Pada spesies outgroup , terlihat memiliki group terpisah yang berarti spesies tersebut berbeda atau memiliki kekerabatan
yang jauh yaitu rata-rata jarak genetik sebesar 13,00%. Namun demikian pada penelitian Wibowo (2014), C. lopis yang berasal dari sungai Indragiri dan sungai Mahakam dalam rekonstruksi pohon filogeninya berada pada klaster yang berbeda. Berdasarkan hasil pene- litian ini dan hasil penelitian lain rekonstruksi pohon filogeni berdasarkan gen COI mampu memisahkan kelompok populasi ikan belida dengan memiliki jumlah situs spesifik ber- variasi. Cabang pada pohon filogenetik me- wakili hubungan antar  unit yang meng- gambarkan hubungan keturunan dengan lelu- hurnya, sedangkan panjang cabang meng- gambarkan jumlah perubahan evolusioner yang terjadi antara dua nodus (Li & Graur 2000). Menurut Kottelat et al . (1993) di Indonesia memiliki empat jenis ikan belida, namun demikian dari hasil penelitian ini jarak genetik antara Lampung dengan Kalimantan Barat sebesar 0,57%, sedangkan perbanding- an dengan Kalimantan Selatan sebesar 1,58%. Hal ini belum memberikan bukti adanya empat spesies tersebut karena perbe- daan jarak genetik tidak melebihi ambang batas sebesar >3% (Hebert et al . 2003, Ward et al . 2009).

## Simpulan
Populasi  Lampung  dan Kalimantan terpisahkan secara baik dan jelas dengan jarak genetik rata-rata sebesar 1,07%. Ikan belida asal Lampung dan Kalimantan memi- liki 13 situs nukleotida polimorfisme sedang- kan situs nukleotida spesifik lokasi hanya dua situs (66 dan 273). Sampel yang berasal dari
populasi Kalimantan Selatan memiliki sem- bilan situs nukleotida spesifik. Hasil ini juga ditunjang dengan data dari hasil analisis jarak genetik dan rekonstruksi pohon filogenetik. Belida Kalimantan Barat memiliki kekera- batan lebih dekat dengan belida  Lampung (0,57%) dibandingkan dengan belida Kali- mantan Selatan (1,58%).

## Persantunan
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Eri Setiadi M.Sc. kepala Instalasi Pe- nelitian Lingkungan Perikanan Budidaya dan Toksikologi, Cibalagung, Bogor  dan terima kasih kepada Dr. Arif Wibowo, SP., M.Si sebagai kepala Balai Riset Perikanan dan Perairan Umum, Palembang yang telah mem- bantu dalam penelitian ini.

## Daftar pustaka
Adjie S,  Husnah,  Gaffar  AK. 1999. Studi biologi ikan belida ( Notopterus chitala ) di daerah aliran Sungai Batanghari. Provinsi Jambi. Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia , 1: 38-43.
Bofkin L,  Goldman N. 2007. Variation in evolutionary processes at different codon positions. Molecular Biology and Evolution . 24(2): 513-521.
Hebert PDN, Cywinska A, Ball SL, deWard
JR. 2003. Biological identifications through DNA barcodes. Proceedings of the Royal Society B , 270: 313-322.
Inger RF,  Chin PK. 1962. The fresh-water fishes of North Borneo. Fieldiana Zoology, 45: 1-268.
Jusmaldi,  Solihin DD,  Affandi R,  Rahardjo MF,  Gustiano R. 2014. Kode batang DNA ikan lais genus Kryptopterus asal Sungai Mahakam Kalimantan Timur.
Jurnal Iktiologi Indonesia ,  14(3): 191-
199.
Kottelat M,  Whitten JA,  Kartikasari N,
Wiryoatmojo S. 1993. Freshwater fishes of Western Indonesia and Sulawesi. Periplus Edition and Emdi Project Indonesia. Jakarta Kumar S,  Stecher G,  Tamura K. 2016. MEGA7: Molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for Bigger Datasets. Molecular Biology and Evolution , 33(7): 1870-1874.
Li WH, Graur D. 2000. Fundamental of Molecular Evolution . Second edition. Sinauer Associates Inc. Sunderland (US). 481 p.
Menteri LHK. 2018. Peraturan Lingkungan Hidup dan Kehutanan Republik Indonesia. Nomor: P.20/ MENLHK/SETJEN/KUM.1/6/2018 tentang jenis tumbuhan dan satwa yang dilindungi.
MUAWC. 2008. Blood Collection Guidelines . Monash University Animal Welfare Committee (MUAWC). 1-10.
Nugroho E, Dewi RRSPN. Subagja J. Priono B. 2019. Keragaman genetik dan karakter biometrik ikan belida ( Chitala lopis . Bleeker 1851) budidaya asal Sungai Kampar. Riau. Jurnal Riset Akuakultur , 14(1): 1-8.
Page TJ,  Hughes JM. 2010. Comparing the performance of multiple mitochondrial genes in the analysis of Australian freshwater fishes. Journal of Fish Biology , 77(9): 2093-2122.
Santoso L. 2009. Biologi reproduksi ikan belida ( Chitala lopis ) di Sungai Tulang Bawang. Lampung. Berkala Perikanan Terubuk , 31(1): 38-46.
Sarkar UK, Negi RS, Deepak PK. Lakra WS. and Paul SK. 2008. Biological parameters of the endangered fish Chitala chitala (Osteoglossiformes: Notopteridae) from some Indian Rivers. Fisheries Research , 90(1): 170-177.
Sengupta S, Homechaudhuri S. 2013. DNA barcodes of some threatened freshwater indigenous fishes in India. Current Science , 105(1): 84-90. Solihin DD. 1994. Peran DNA mitokondria (mtDNA) dalam studi keragaman genetik dan biologi populasi pada hewan. Hayati , 1(1):1-4.
Sudarto,  Pouyaud L,  Kusuma RV. 2008.
Struktur populasi dan sejarah kolonisasi ikan botia ( Chromobotia macracanthus Bleeker) asal Sumatera dan Kalimantan berdasarkan sekuen intron dari Gen Aldolase-B. Jurnal Perikanan ,  9(2): 203-212.
Sudarto, Rizal M. 2007. Variasi morfometri ikan botia ( Botia macracanthus Bleeker) dari perairan Sumatera dan Kalimantan.
Jurnal Perikanan , 9(2): 214-219.
Sunarno MTD,  Syamsunarno MB. 2015.
Pengaruh naungan terhadap pematangan gonad dan pemijahan ikan belida ( Chitala lopis ) di kolam  rawa. Jurnal Ilmu Pertanian dan Perikanan , 4(1): 71- 77.
Sunarno MTD,  Wibowo A,  Subagja. 2007. Identifikasi tiga kelompok ikan belida ( Chitala lopis ) di Sungai Tulang Bawang. Kampar. dan Kapuas dengan pendekatan biometrik. Jurnal Penelitian
Perikanan Indonesia , 13(2): 87-94. Voris HK. 2000. Maps of pleistocene sea- levels in South East Asia: shorelines, river systems, time durations. Journal of Biogeography , 27(5): 1153-1167.
Ward RD, Hanner R, Hebert PDN. 2009. The campaign to DNA barcode all fishes, FISH-BOL. Journal of Fish Biology , 74(2): 329-356. Ward RD, Holmes BH. 2007. An analysis of nucleotide and amino acid variability in the barcode region of cytochrome c
oxidase I ( cox1 ) in fishes. Molecular Ecology Notes , 7(6): 899-907.
Ward RD,  Zemlak TS,  Innes BH,  Last PR,
Hebert PDN. 2005. DNA barcoding Australia’s  fish  species . Philosophical Transactions of the Royal Society B, 360: 1887-1857.
Wibowo A Subagja. 2014. Penilaian indeks kualitas lingkungan untuk menentukan wilayah konservasi ikan belida ( Chitala lopis ) di Sungai Kampar. Riau. Bawal, 6(1): 1-9.
Wibowo A,  2014. Barcoding ikan belida ( Chitala Lopis ) berdasarkan gen Cytochrome  Oxidase Subunit I ( COI ) DNA mitokondria. In : Alim Isnansetyo (editor). Prosiding Seminar Nasional Tahunan XI Hasil Penelitian Perikanan dan Kelautan Tahun 2014 Jilid II . Jurusan Perikanan dan Kelautan Fakultas Pertanian UGM. Yogyakarta, pp. 227-235.
Wibowo A, Affandi R, Soewardi K, Sudarto.
2010. Genetic differentiation of the kampar river's giant featherback ( Chitala lopis Bleeker 1851) base on mitochondrial dna analysis. Indonesian Fisheries Research Journal ,  16(2): 49-
58.
Wibowo A,  Marson. 2012. Fenomena plastisitas fenotipik ikan belida ( Chitala lopis ) di Sungai Kampar. Riau. Bawal,
4(3): 195-204.
Wibowo A. 2012. Struktur genetik populasi ikan belida ( Chitala lopis . Bleeker 1851) di Waduk Kutopanjang. Bawal , 4(1): 53- 58.