## POTENSI PRODUKSI BIOFUEL DARI BIOMASSA FITOPLANKTON LAUT SPESIES
Chlorella  vulgaris, Dunaliella salina DAN Spirulina sp. , YANG DITUMBUHKAN DALAM NUTRIEN UNGGUL “MSSIP” TERINDUKSI ION LOGAM Fe, Co, DAN Ni
[Biofuel Production Potency of Sea Phytoplankton Biomass, Chlorella  vulgaris ,
Dunaliella salina , and Spirulina sp . Cultured in Fe, Co, Ni Ion Metals Induced-Superior MSSIP Nutrient]
Syahruddin Kasim 1* , Paulina Taba 1 , Indah Raya 1 , Ruslan 2
1) Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Hasanuddin Jl. Perintis Kemerdekaan Km 10 Tamalanrea,Makassar, 90245
2) Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako Jl. Soekarno Hatta, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu, Telp. 0451- 422611
Diterima  30 Maret 2017, Disetujui 19 April 2017

## ABSTRACT
Research about composition of superior nutrients, growth parameters, and best method to maximize production of biomass sea phytoplankton, Chlorella  vulgaris, Dunaliella salina, and Spirulina sp. has been  performed. The  nutrients  was  named  as  MSSIP  which  were  consist  of  following  compositions: urea  fertilizer,  Arschat-M  nutrient,  Fe:Co:Ni  metal  ions  (6  :  3  :  9  :  6  :  3).  Methods  used  were identification  and  analysis  of  sea  phytoplankton.    Determination  of  optimum  growth  condition,  pure culture,  and  mass  culture  were  using  local  raw  materials-based  engineered  nutrients  or  MSSIP  (M. Sjahrul-Syahruddin  Kasim-Indah  Raya-Paulina  Taba).  Determination  of  product  density  of  sea phytoplankton  biomass,  analyses  of  carbohydrate  content,  and  lipid  biomass  were  done  by  using haemocytometer  and  microscope,  Luff  Schrol  method,  and  soxhlet  method  (n-hexane  as  solvent), respectively.  Morphology  of  phytoplankton  was  identified  by  using  a  digital  camera  microscope, SZ60/sZ60-61. Furthermore, to understand the effect of metal ions, Fe, Co, and Ni added into MSSIP nutrient,  identification  of  nutrient  before  and  after  culturing  process  were  done  using  XRF-Thermo- Fisher.  The results showed that Chlorella  vulgaris, Dunaliella salina, and Spirulina sp. were suitable as  raw  materials    to  produce  biofuel.  Those  three  phytoplankton  contained  0,3095  g/L,  0,3782  g/L, and 0,3325 g/L biomass, 32,49%w/w, 31,58%w/w, and 29,81%w/w carbohydrates; and  25,95%w/w, 26,82%w/w and 24,53%w/w lipid, respectively. Best optimum condition of culture were salinity of 30- 35%, temperature of 20-30 °C, pH of 8-9, initial density of 2.5 x 104 cell/mL, light exposure of 40 watt, and  continuously  aerated  with  CO2.  Based  on  our  study,  sea  phytoplankton,  Chlorella    vulgaris, Dunaliella salina, and Spirulina sp. have a high potency as source of bioethanol and biodiesel.
Keywords : mass culture, superior nutrient MSSIP, sea phytoplankton biomass, Fe, Co, Ni metal ions

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  tentang  komposisi  nutrien  unggul,  parameter  pertumbuhan  dan  metode terbaik  untuk  memaksimalkan  produksi  biomassa  fitoplankton  laut  uji  spesies Chlorella    vulgaris, Dunaliella salina, dan Spirulina sp . Nutrien tersebut diberikan nama nutrien MSSIP dengan komposisi sebagai berikut yaitu: pupuk urea : nutrien Arschat-M : ion logam Fe: Co : Ni = 6 : 3 : 9 : 6 : 3.Metode yang digunakan: Identifikasi dan analisis fitoplankton laut. Penentuan kondisi pertumbuhan optimum, kultur murni dan kultur massal menggunakan nutrien hasil rekayasa berbasis bahan baku lokal yang disingkat  ”MSSIP”  (M.  Sjahrul-Syahruddin  Kasim-Indah  Raya-Paulina  Taba).  Penentuan  kepadatan produk  biomassa  fitoplankton  laut  yang  dihasilkan  menggunakan  haemocytometer  dan  mikroskop Nicon,  analisis  kandungan  karbohidrat  dengan  metode  Luff  Schrol  dan  lemak  biomassa  dengan pelarut n-heksana metode Soxhlet (SNI 2453-90), selanjutnyaidentifikasi dilakukan dengan Mikroskop Digital  Camera  SZ60/SZ60-61terhadap  fitoplankton  untuk  melihat  penampang  morfologisnya,  dan
terakhir  identifikasi  dengan  XRF-Thermo-Fisher  terhadap  nutrien  sebelum  dan  setelah  kultur  untuk melihat pengaruh ion logam Fe, Co dan Ni yang ditambahkan dalam nutrien MSSIP yang digunakan. Hasil penelitian,fitoplankton laut spesies Chlorella  vulgaris, Dunaliella salina dan Spirulina sp. , sangat baik  digunakan  sebagai  bahan  baku  untuk  produksi  biofuel  oleh  karena  memiliki  kandungan biomassa: 0,3095 g/L, 0,3782 g/L dan 0,3325 g/L, karbohidrat: 32,49%b/b, 31,58%b/b dan 29,81%b/b dan lemak: 25,95%b/b, 26,82%b/b dan 24,53%b/b. Berdasarkan kandungan tersebut, maka Chlorella vulgaris, Dunaliella salina, dan Spirulina sp . berpotensi sebagai penghasil biofuel jenis bioetanol dan biodiesel. Kondisi optimum kultur yang terbaik adalah: salinitas 30 – 35 % o , suhu 20 – 30 O C, pH 8 – 9,  kepadatan  awal  2,5  x  10 4 sel/mL,  penyinaran  dengan  lampu  neon  40  watt  dan  laju  aerasi  CO 2 kontinyu.
Kata kunci : Kultur massal, nutrien unggul MSSIP, biomassa fitoplankton laut,ion logam Fe, Co, dan Ni .

## LATAR BELAKANG
Fitoplankton  laut  saat  ini  menjadi fenomena  yang  penting  untuk  dikaji  lebih mendalam. Hal ini oleh karena fitoplankton memiliki  kemampuan  untuk  mensintetis sendiri  bahan  organiknya  melalui  proses fotosintesis,  menyebabkan  fitoplankton menjadi  sumber  utama  pada  rantai makanan  di  ekosistem  air  laut  dan  air tawar  (Bu-Olayan et  al. ,  2011).  Selain  itu, fitoplankton  laut  merupakan  salah  satu alternatif  sebagai  sumber  bahan  baku untuk  pembuatan  Bahan  Bakar  Nabati dalam  bentuk  biofuel  karena  memiliki kandungan  karbohidrat  dan  lemak  yang cukup  tinggi  (Hedges et  al .,  2002;  Kasim dkk., 2012).
Wilayah  Indonesia  memliki  dua pertiga daerah berupa lautan dan mempunyai  garis  pantai  terpanjang  di dunia  yaitu  ±  80.791,42  Km,  memiliki kandungan  fitoplankton  yang  melimpah, sekitar  35.000  spesies  telah  diidentifikasi. Kandungan  Karbohidrat  Fitoplankton  laut Chlorella  sp .18,4 –  54,5  %  dan Chlorella vulgaris 10,3 – 44 %(Guerrero,
2010). Dunaliella  salina  32% (Becker, E.W.,  1994). Chlorella  sp .  18,4 –  54,5%
dan Tetraselmis  suecia 11 –  47  % (Ragauskas, 2006). Chlorella sp. ,
Dunaliella sp. , Tetraselmis chuii ,
Chaetoceros calcitrans , Chaetoceros gracilis , Isocrysis  aff  galbana ,  memiliki kandungan  kardohidrat  sekitar  29-31% (Kasim dkk, 2012).
Kandungan lemak fitoplankton Chlorella  vulgaris,  Spirulina  platensis,
euglena gracilis, Nitzschia palea sekitar 9 –  20  %  (Hadiyanto  dkk,  2010). Spirulina 11,2 –  20,8  %, Nannochloropsis 20,8 – 35,5  %  dan Botrycoccus 70%  (Chisti,  ,
2007). Chaetoceros  calcitrans 39,8  %
(Rodolfi et  al. ,  2008). Tetraselmis  sp. 14,7
%, Isochrysis sp . 27,4 % dan sceletonema costatum 21% (Khan et al. , 2009). Berdasarkan
informasi ini, sehinggafitoplanktonpotensil  untuk  diolah menjadi  bioetanol  dan  biodisel,  walaupun kandungan  ini  masih  dapat  berbeda apabila  kondisi  lingkungan  tumbuhnya juga berbeda.
Potensi fitoplankton sebagai sumber biofuel  sangat  menjanjikan  dan  Indonesia melalui  Pemerintah  sangat  serius  untuk itu.  Tahun  2025  berdasarkan  cetak  biru pengelolaan energi Nasional di Kementerian  Energi  dan  Sumber  Daya
Mineral Republik Indonesia, biofuel ditargetkan mengganti 5% konsumsi bahan  bakar  konvensional.  Selain  itu, pada jangka panjang akan terjadi kompetisi hebat dalam pemanfaatan lahan untuk produksi biofuel dengan pangan dan pakan sehingga fitoplankton sangat potensil (Arifin, 2010).
Memanfaatkan  fitoplankton  untuk bahan baku bioetanol dan biodisel sangat ramah lingkungan, karena tidak menyebabkan  polusi  dan  relatif  mudah pengerjaannya serta memiliki  produktifitas sebagai sumber nabati mencapai 200 kali dibanding sumber nabati yang lain (Chisti, 2007).  Keuntungan  lain  dari  fitoplankton, yaitu  memiliki  kemampuan  menyerap  gas
karbondioksida (CO 2 ) dan mengkonversikannya  menjadi  oksigen. Sebanyak 90% dari bobot kering fitoplankton  menyerap  CO 2 sehingga mampu  mengurangi  gas  tersebutsampai 1.000 ton/ha/tahun (Wu et al ., 2010).
Pertumbuhan  fitoplankton  memiliki siklus  hidup  yang  pendek  sehingga memiliki  respon  yang  cepat  terhadap perubahan  lingkungan  dan  biomassanya dapat  menjadi  sangat  banyak  dalam waktu  yang  singkat  apabila  distimulasi dengan  suatu  komposisi  nutrien  yang dibutuhkan  (Nontji,  2008).Parameter  yang berpengaruh  terhadap  akumulasi  jumlah biomassa fitoplankton dalam kultur adalah komposisi nutrien, tekanan osmosis, suhu, pH,  pencahayaan,  laju  alir  gas  CO 2 dan salinitas (Sharma et al. , 2012).
Terdapat  delapan  komponen  besar faktor media yang mempengaruhi produktivitas sel biomassa spesies fitoplankton,  antara  lain  suhu,  intensitas cahaya,  ukuran  dan  jumlah  inokulum, muatan padatan terlarut, salinitas, ketersediaan makronutrien dan mikronutrien  (C,  N,  P,  K,  S,  Mg,  Na,  Cl, Ca,  dan  Fe,  Zn,  Cu,  Ni,  Co,  dan  W) (Sanchez et  al .,  2008).  Logam-logam  ini dalam  nutrien  pembiakan,  menunjang pertumbuhan  fitoplankton  sebab  berperan menstimulasi terjadinya peningkatan jumlah  biomassa  sesuai  dengan  jumlah yang  dibutuhkan  (Sanusi,  ,  2006).  Selain itu pertumbuhan sel fitoplankton dipengaruhi oleh faktor  lingkungan  seperti komposisi  nutrien  dalam  media  dan
temperatur  (16 –  38 o C)  (Sanchez et  al .,
2008; Goksan et al .,, 2007).
Berdasarkan  hasil  orientasi  itulah, dicoba  melakukan  kajian  lebih  mendalam mengenai  beberapa  spesies  fitoplankton laut.Terutama melihat pola interaksinyadalam  nutrien  MSSIP  yang diinduksi denganion logam Fe, Co dan Ni. Ketiga  logam  tersebut  termasuk  dalam satu  golongan  VIIIB,  kana  tetapi  memiliki pola  interaksi  dan  fungsi  yang  berbeda satu sama lain (Sjahrul, 2010).
Logam  besi  (Fe)  berperan  aktif dalam reaksi enzimatik proses fotosintesis dan dalam bentuk firridoksin, juga ditemukan  bahwa  Fe  bersama  Nikel  (Ni) berperan  aktif  dalam  proses  asimilasi dengan  senyawa  lain  (Cermeno et  al. , 2010).  Logam  kobalt  (Co)  merupakan komponen utama vitamin B12 dan berperan penting dalam proses metabolisme dan pertumbuhan sel fitoplankton  (Coleman et  al. ,  2008).  Pada Jaringan  tubuh  fitoplankton,  kelarutan kedua  logam  berdasarkan  reaktifitasnya adalah Fe>Co (Sanusi, 2006).
Berdasarkan latar belakang masalah ini  terdorong  untuk  dilakukan  penelitian tentangpotensi produksi biofuel dari spesies fitoplankton laut Chlorella  vulgaris,
Dunaliella  salina dan Spirulina  sp., yang ditumbuhkan dalam nutrien unggul MSSIPterinduksi ion logam Fe, Co dan Ni. Penggunaan  tiga  jenis  ion  logam  ini diharapkan  akan  diperoleh  pemetaan yang  lebih  detail  tentang  interaksi  logam tersebut terhadap spesies fitoplankton laut
uji  yang  dipakai  dalam  penelitian  ini  oleh karena  ketiga  ion  logam  tersebut  berada pada  golongan  yang  sama  dalam  tabel periodik unsur.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dirancang  beberapa tahapan mulai penentuan lokasi pengambilan  sampel  spesies  fitoplankton laut,  kemudian  kultur  untuk  mendapatkan biomassa,  kandungan  karbohidrat  dan lemak  yang  tertinggi.  Prosedur  penelitian terdiri atas beberapa tahapan, yaitu:

## Uji Parameter Fisika-Kimia Perairan
Untuk mengetahui kondisi pertumbuhan  fitoplankton  yang  akan digunakan, dilakukan pengukuran beberapa  parameter  fisika-kimia  sampel air dari perairan laut yaitu: Suhu, salinitas, dan  pH  secara In  situ .  Data  Parameter fisika-kimia di lapangan tempat pengambilan  sampel  air  laut,  dijadikan dasar untuk kultur fitoplankton laut.
Identifikasi  Spesies  Fitoplankton  Laut Uji dan Kultur Murni
Dalam  penelitian  ini,  sampel  murni spesies  fitoplankton  uji  yang  didapatkan dari berbagai tempat, ditanam pada media agar  untuk  diseleksi  dan  diamati  dengan mikroskop dan SEM untuk diambil gambarnya. Selanjutnya penyiapan media kultur  yang  akan  digunakan,  merupakan hasil  modifikasi  beberapa  komponen media  kultur  menggunakan  air  laut buatan, dengan membuat variasi komposisi  ion  logam  Fe,  Co  dan  Ni, selanjutnya medium yang dihasilkan
dinamakan medium “MSSIP”. Konsentrasi masing-masing Ion logam yang digunakan adalah,  untuk  Fe  :  1,  2,  dan  3  ppm,  Co  : 0,1; 0,2; dan 0,3 ppm, dan Ni : 0,01 ppm. Nutrien  yang  dihasilkan  sebelum  dan sesudah kultur dianalisis dengan XRF dan spektroskopi  IR,  hasilnya  dibandingkan dengan  standar  dan  diukur  pada  kondisi yang sama.
Bibit  sel  fitoplankton  ini  kemudian ditanam  ke  dalam  medium  MSSIPpada volume  50  mL,  250  mL,  dan  500  mL  lalu dalam  botol  kultur  1000  mL.    Selanjutnya dilakukan  kultur  berdasarkan  parameter fisika-kimia  yang  ditemukan  secara  insitu dengan  mengatur  laju  alir  gas  CO 2 untuk memperbanyak bibit selain disimpan untuk kultur induk fitoplankton. Cara ini dilakukan  berulang  pada  semua  sampel spesies  fitoplankton  laut  yang  akan digunakan  dengan  membuat  perlakuan dan kondisi yang sama.
Kultur  Spesies  Fitoplankton  Laut  Uji pada Tahap Germinasi
Kultur fitoplankton pada tahap germinasi,  sama  dengan  kultur  murni namun  volume  kultur  dibuat  lebih  banyak yaitu dalam wadah 3 liter.
Untuk  kedua  botol  kultur  3  liter, setiap  hari  selama  sepuluh  hari  kultur, diamati  dengan  alat  Haemositometer melalui  mikroskop.  Pada  kultur  ini  akan diamati  laju  pertumbuhan  spesifiknya dengan menggunakan rumus:
Keterangan: t    =   Waktu (jam). N t =  Kepadatan  populasi  sel  pada  saat  t (sel/mL) N o =  Kepadatan  populasi  sel  pada  saat  awal (sel/mL)
 =  Tetapan  laju  pertumbuhan  spesifik  (jam- 1)

## Kultur  Massal  Spesies  Fitoplankton Laut Uji
Berdasarkan  pada  parameter  fisika- kimia  kondisipertumbuhanfitoplankton  di lapangan  yang  diukur  secara  insitu, spesies  fitoplankton  laut  terpilih  kemudian dikultur  secara  massal  dalam  aquarium bervolume  60  liter,  dengan  mengatur  laju alir gas CO 2 . Setelah kepadatan fitoplankton optimal, selanjutnya 1 liter dari kultur  massal  diambil,  disaring  dan dikeringkan untuk ditentukan berat biomassanya dengan menggunakan metode  gravimetri  melalui  penimbangan dengan  kertas saring yang sesuai.
Selanjutnya dilakukan pemanenan dengan
cara cahaya dan aerasi  dihentikan sekitar 3  hari  agar  terjadi  pemisahan  antara  air dan fitoplankton karena terjadi
pengendapan. Analisis Karbohidrat, Lemak dan biomassa Fitoplankton Laut
Analisis  biomassa  dilakukan  secara gravimetri, analisis kandungan karbohidrat dalam biomassa fitoplankton laut dilakukan  dengan  menggunakan  metode penentuan  gula  reduksi  dengan  cara  Luff Schoorl.Komposisi  lemak  yang  terdapat dalam  biomassa  spesies  fitoplankton  laut uji  terpilih  dilakukan  dengan  pelarut  n- heksana metode Soxhlet (SNI 2453-90).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Parameter Fisika-Kimia Perairan
Parameter fisika-kimia perairan untuk  pertumbuhan  spesies  fitoplankton laut  yang  ditemukan,  hasilnya  disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Data Parameter Fisika-Kimia Pertumbuhan Fitoplankton Laut.
Jenis Fitoplankton Parameter Fisika-Kimia Kultur Pertumbuhan Fitoplankton Laut Salinitas (%o) pH Suhu( o C) Lampu Penerangan Aerasi (Kontinyu) Kepadatan awal sel/mL Dunaliella salina 35 8,7 20-30 Neon 40 watt Udara blower 25.000 Chlorella vulgaris 30 8,5 20-30 Sda Sda 25.000 Spirulina sp. 30 8,6 20-30 Sda Sda 25.000
Berdasarkan  Tabel  1,  variabel  yang dibuat  tetap  yaitu  lampu  neon  40  watt untuk  penyinaran,  menggunakan  blower sebagai  sumber  aerasi  CO 2 .  Variabel yang  bervariasi  adalah:  Kepadatan  awal 25.000 sel/mL, pH yang digunakan berada pada kisaran 8 – 9, salinitas adalah 30% o - 35% o dan  suhu  berada  pada  rentang sekitar  20 –  30 0 C.  Berdasarkan  kondisi
sifat  fisika-kimia  yang  dihasilkan  ini menunjukkan  bahwa  fitoplankton  laut sangat selektif dalam proses
pertumbuhannya
oleh karena membutuhkan  penyinaran  dan  aerasi yang cukup dan secara terus menerus, pH pertumbuhan  yang  baik  cenderung  basa serta  kepadatan  awal,  suhu  dan  salinitas
yang  sesuai,  agar  dapat  membentuk biomassa dengan cepat dan lebih banyak.

## Hasil  Identifikasi  Spesies  Fitoplankton Laut Uji dan Nutrien Kultur
Sampel  spesies  fitoplankton  laut  uji hasil seleksi, selanjutnya dianalisis dengan  foto  mikroskop  digital  kamera SZ60/SZ60-61,  data  ini  dibandingkan dengan foto fitoplankton laut standar, hasil foto  mikroskop  yang  diperoleh  dan disajikan pada Tabel 2.
Berdasarkan data hasil foto mikroskop  fitoplankton  laut  spesies  yang diuji dalam penelitian ini, memiliki kesesuaian  yang  signifikan  sebagaimana disajikan  pada  Tabel  2.  Olehnya  itu dilakukan  kultur  lebih  lanjut  untuk  melihat potensi kandungan karbohidrat dan lemak dalam  biomassa  yang  dihasilkan  yang menjadi  dasar  untuk  diolah  lebih  lanjut menjadi  biofuel  jenis  bioetanol  dan biodisel.
Tabel 2.Hasil Foto Mikroskop Digital Kamera Spesies Fitoplankton Laut.
No. Fitoplankton Foto 1 (Hasil Kultur) Foto 2 (Standar)
1 Dunaliella salina
2 Chlorella vulgaris
3 Spirulina sp.
Peremajaan kultur murni fitoplankton laut  uji  dilakukan  berdasarkan  parameter fisika-kimia yang ditemukan dengan nutrien yang terbaik untuk memperbanyak bibit  dan  memaksimalkan  laju  kepadatan pertumbuhan sel fitoplankton laut tersebut,  selain  disimpan  untuk  kultur induk fitoplankton. Cara ini dilakukan pada semua  sampel  fitoplankton  laut  yang digunakan  dengan  membuat  perlakuan yang  sama,  serta  didukung  oleh  data kepadatan jenis pertumbuhannya.
Kepadatan  Jenis  Sel  Fitoplankton  Laut Pada Kultur Murni
Hasil penentuan kepadatan jenis sel spesies  fitoplankton  laut  uji  pada  kultur murni,  diukur  dengan Haemocytometer dan  dianalisis  pada  mikroskop  Nikon, diperoleh informasi tentang potensi kepadatan  sel  fitoplankton  laut  yang bersangkutan  sebagai  sumber  biomassa yang  potensial  kandungan  karbohidrat dan lemaknya.
Hasil  pengukuran  kepadatan  jenis pertumbuhan  sel  spesies  fitoplankton  laut yang dianalisis, diperlihatkan pada
Gambar  1 –  3  dan  data  kepadatan pertumbuhan  fitoplankton  laut  disajikan pada Tabel  3 – 5. Untuk fitoplankton laut spesies D.  salina ,  data  kepadatan  jenis
pertumbuhan  sel  dalam  nutrien  MSSIP yang  digunakan,  disajikan  pada  Tabel  3 dan  dalam  bentuk  grafik  disajikan  pada Gambar 1.
Tabel 3.Kepadatan Jenis Fitoplankton Laut Spesies D. salina. Nutrien dan Sampel Kepadatan Pertumbuhan Fitoplankton (x 10 4 sel/mL) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A dan A 2,5 13 35  105  398 825 953  1106  1245 1328 1201  1103 B dan KA 2,5 14 30  172  218 345 413 518 635 827 720 562 C dan A1 2,5  102  435  852  1117  1443  1563 1718 1525  1183 914 825 D dan A2 2,5 80  103  252  317 415 593 688 835 980 994 921 E dan A3 2,5 11 29 35 44 58 88 120 139 115 85 77 F dan A4 2,5  173  535  932  1125  1343  1518 1690 1425  1302  1034  821 F1 dan A4-1 10  231  714  1213 1545 2192 1321  917 775 701 854 816 F2 dan A4-2 10  214  595  931  1128  1305  1411  1698 1892 1620  1374  1052 G dan A5 2,5  123  335  652  917 1143  1213 1221 1095  1003 973 926 H dan A6 10  114  240  426  675 917 1045  1285  1609 2243 1821  1335 J dan A9 10 72  253  485 814 619 501 405 325 230 136 109
Gambar 1. Grafik Pertumbuhan Sel Spesies D. salina
Berdasarkan data pada Tabel 3 dan Gambar  1,  laju  tercepat  kepadatan pertumbuhan  sel  fitoplankton  laut  spesies D.  salina ,  diperoleh  dalam  nutrien  J dengan komposisi nutrien yaitu, Urea : ZA
: Arschat-M : Fe: Co : Ni = 9 : 3 : 3 : 9 : 6 :
3, yang dicapai pada awal hari ke 5 kultur yaitu  814  x  10 4 sel/mL.  Sementara  laju pertumbuhan sel dengan jumlah
terbanyak terjadi dalam nutrien F1 dengan komposisi nutrien yaitu, Urea : Arschat-M : Fe: Co : Ni = 6 : 3 : 9 : 6 : 3, yang dicapai pada  awal  hari  ke  6  kultur,  yaitu  2192  x 10 4 sel/mL.
Informasi  ini  menunjukkan  bahwa komponen  pupuk  urea  dan  pupuk  ZA berpengaruh  efektif  mempercepat  laju kepadatan  pertumbuhan  sel  fitoplankton
0 300 600 900 1200 1500 1800 2100 2400 2700 3000 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 K e p a d a ta n s e l (1 0 4 s e l / m L ) Waktu Kultur (hari) A9, Nutr. J A4-1, Nutrien F1
laut  spesies D.  salina ,  akan  tetapi  tidak secara linier mempengaruhi laju akumulasi pertumbuhan sel dengan jumlah  terbanyak.  Artinya  komponen nutrien  ion  logam  Fe,  Co  dan  Ni  yang digunakan efektif mempercepat laju kepadatan pertumbuhan sel spesies fitoplankton  laut  spesies D.  salina dalam nutrien  J  dengan  keterlibatan  komponen pupuk  urea  dan  pupuk  ZA.  Sedangkan komponen  nutrien  ion  logam  Fe,  Co  dan
Ni  efektif  meningkatkan  laju  akumulasi dengan  jumlah  terbanyak  sel  fitoplankton laut spesies D. salina dalam nutrien F1 dengan keterlibatan komponen nutrien Arschat-M.
Untuk  fitoplankton  laut  spesies C. vulgaris , data kepadatan jenis pertumbuhan  sel  dalam  nutrien  MSSIP yang  digunakan,  disajikan  pada  Tabel  4 dan  dalam  bentuk  grafik  disajikan  pada Gambar 2.
Tabel 4.Kepadatan Jenis Fitoplankton Laut Spesies C. vulgaris. Nutrien dan Sampel Kepadatan Pertumbuhan Fitoplankton (x 10 4 sel/mL) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A dan B 3,0 94 165 381 798  1047  1461  2047  2514  3170 3649 3325 C dan K1 3,0  187  502  1018  1505  2014  2362  2784 3245 2570  2127  1764 D dan B2 3,0 97  115 275  315 441 602 811 945 1025 1047 1002 E dan B3 3,0 35 69 93 212 419 638 517 374 285 194 102 F dan B4 3,0  225  890  1127  1509  1974  2562 3095 2384  1803  1327  1164 F1 dan B4-1 10  397  995  2120  3765  6854 9700 6905  4732  2606  1801  1372 F2 dan B4-2  10  385  984  1405  2951  4092  5730  7824 9290 5847  3734  2951 G dan K5 3,0  168  359 627  932  1177  1396  1537 1785 1392  1025 809 I dan B7 (x10)  1 112  291 397  688 892 1003  1021 1125 1041 980 921

## Gambar 2. Grafik Pertumbuhan Sel Spesies C. vulgaris
Berdasarkan data pada Tabel 4 dan
Gambar  2,  laju  kepadatan  pertumbuhan
sel  fitoplankton  laut  spesies C.  vulgaris , diperoleh  laju  tercepat  terjadi  dalam
0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000 11000 12000 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 K e p a d a ta n s e l (1 0 4 s e l / m L ) Waktu Kultur (hari) B7, Nutrien I B4-1, Nutrien F1
nutrien F1 dengan komposisi nutrien yaitu, Urea : Arschat-M : Fe: Co : Ni = 6 : 3 : 9 : 6  :  3,  yang  terjadi  pada  awal  hari  ke  7 kultur, yaitu 9700 x 10 4 sel/mL. Sementara laju  akumulasi  pertumbuhan  sel  dengan jumlah  terbanyak  terjadi  dalam  nutrien  I dengan komposisi nutrien yaitu, Urea : ZA : Fe: Co : Ni = 9 : 3 : 9 : 6 : 3, yang dicapai pada  awal  hari  ke  9  kultur,  yaitu  sekitar 1125 x 10 5 sel/mL.
Informasi  ini  menunjukkan  bahwa komponen  pupuk  urea  dalam  medium nutrien  F1  dengan  kehadiran  komponen Arschat-M, berpengaruh efektif mempercepat laju kepadatan pertumbuhan  sel  fitoplankton  laut  spesies C.  vulgaris .Akan  tetapi  komponen  pupuk urea  dalam  medium  nutrien  I  dengan kehadiran komponen pupuk ZA, berpengaruh efektif memperbanyak akumulasi  jumlah  sel C.  vulgaris. Artinya komponen  nutrien  ion  logam  Fe,  Co  dan Ni  yang  digunakan  efektif  mempercepat laju  kepadatan  pertumbuhan  sel  spesies fitoplankton laut spesies C. vulgaris dalam nutrien F1 dengan keterlibatan komponen pupuk  urea  dan  komponen  nutrien Arschat-M,  Sedangkan  ion  logam  Fe,  Co dan  Ni  efektif  meningkatkan  akumulasi jumlah  sel C.  vulgaris dengan  jumlah terbanyak,  dalam  nutrien  I  dengan keterlibatan komponen nutrien pupuk ZA.
Untuk  fitoplankton  laut  spesies Spirulina  sp. ,  data  kepadatan  jenis pertumbuhan  sel  dalam  nutrien  MSSIP yang  digunakan,  disajikan  pada  Tabel  5
dan  dalam  bentuk  grafik  disajikan  pada Gambar 3.
Berdasarkan data pada Tabel 5 dan Gambar  3,  laju  kepadatan  pertumbuhan sel  fitoplankton  laut  spesies Spirulina  sp. , diperoleh laju tercepat pada awal hari ke 5 kultur yaitu sekitar 5985 x 10 4 sel/mL yang terjadi dalam nutrien F1 dengan komposisi nutrien F1 yaitu, Urea : Arschat-M : Fe: Co :  Ni  =  6  :  3  :  9  :  6  :  3.  Sedangkan  laju pertumbuhan sel dengan akumulasi terbanyak yang ditemukan pada awal hari ke  10  kultur  yaitu  sekitar  1103  x  10 5 sel/mL,  terjadi  dalam  nutrien  H  dengan komposisi nutrien yaitu, Urea :     Arschat- M : Fe: Co : Ni = 9 : 3 : 9 : 6 : 3.
Informasi  ini  menunjukkan  bahwa komponen  ion  logam  Fe,  Co  dan  Ni dengan  kehadiran  komponen  nutrien  lain yaitu pupuk urea dan Archta-M membentuk medium
F1, dapat mempercepat laju kepadatan pertumbuhan  sel  fitoplankton  laut  spesies Spirulina  sp. Akan  tetapi  kondisi  berbeda pada  penambahan  konsentrasi  pupuk urea menjadi 1,5 kali ke dalam komponen ion logam Fe, Co, Ni dan nutrien Archta-M membentuk medium nutrien H, berpengaruh efektif mempertinggi akumulasi  jumlah  sel  fitoplankton  laut spesies Spirulina sp. , menjadi hampir dari
2 kali lipat yaitu pada awal hari ke 5 kultur 5985  x  10 4 sel/mL  untuk  nutrien  F1  dan untuk nutrien H sekitar          1103 x 10 5 sel/mL pada awal hari ke 10 kultur . Artinya komponen  nutrien  ion  logam  Fe,  Co  dan Ni  yang  digunakan  efektif  meningkatkan
laju  kepadatan  pertumbuhan  jumlah  sel dan  mempertinggi  akumulasi  jumlah  sel fitoplankton  laut  spesies Spirulina  sp. ,
dengan mengatur perbandingan konsentrasi komponen nutrien yaitu pupuk urea.
Tabel 5.Kepadatan Jenis Fitoplankton Laut Spesies Spirulina sp. Nutrien dan Sampel Kepadatan Pertumbuhan Fitoplankton (x 10 4 sel/mL) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A dan I 3,0 38 97 209  453  881  1305  1559  1812 2147 1970  1521 B dan OI 3,0 11 35 81 315  501 705 937 1028 1125 1109  931 C dan D1 3,0  194  725  1135  1419  1774  2142 2571 2340  1801  1604  1207 D dan D2 3,0 84  110 251  329  404 532 671 814 931 904 875 E dan K3 3,0 17 25 35 45 62 114 246 395 791 985 967 F dan I4 3,0  181  775  1085  1302  1681  1939  2390 2581 2208  1831  1591 F1 dan I4-1 10  382  991  2792 5985 3753  2871  2154  1598  1982  1431  1109 G dan D5 3,0  170  339 614  935  1226  1541 1865 1690  1302  1011  902 H dan I6 (x 10) 1 70  167 295  410  603 845 983 1052 1103 997 935 I dan I7 (x 10) 1 84  239 406  790  921  1045 1052 1017  1028  1002  959
Gambar 3.Grafik Kepadatan Pertumbuhan Sel Fitoplankton Laut Spesies Spirulina sp.
Hasil pembacaan dan analisis kondisi  pada  Tabel  3 –  Tabel  5  dan Gambar  1 –  Gambar  3,  diperoleh  bahwa spesies  fitoplankton  laut  yang  dianalisis memperlihatkan  hasil  yang  potensil  untuk dilakukan  kultur  massal  agardihasilkan jumlah  biomassa  yang  lebih  banyak.  Hal lain  adalah  ketiga  spesies  fitoplankton
tersebut  masing-masing  memperlihatkan laju kepadatan jenis pertumbuhan tercepat  dan  laju  akumulasi  biomassa terbanyak  yang  memperlihatkan  respon terbaik  fitoplankton  laut  dengan  nutrient MSSIP.
Secara  khusus  yang  dikaji  dalam tahap ini adalah melihat potensi ketiga ion
0 1200 2400 3600 4800 6000 7200 8400 9600 10800 12000 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 K e p a d a ta n s e l (1 0 4 s e l / m L ) Waktu Kultur (hari) I4-1, Nutrien F1 I6, Nutrien H
logam  Fe,  Codan  Ni  dan  sekaligus menjawab  pertanyaan  tentang  potensi ketiga  ion  logam  tersebut,  terutama  ion logam  Ni  (nikel)  sebagai  logam  berat berbahaya,  namun  jika  ion  logam  ini digunakan  pada  konsentrasi  yang  sesuai akan bermanfaat khususnya untuk pertumbuhan  fitoplankton  laut  (Nontji, 2008).  Untuk  jangka  panjang,  pengkajian tetap  terus  dilakukan  agar  ditemukan komposisi  nutrien  yang  lebih  unggul  dan lebih efisien sebagai medium pertumbuhan  fitoplankton  laut,  dengan memperhitungkan salah satu aspek penting  dalam  pengembangannya  yaitu nilai ekonomis pada nutrien yang dikaji.
Potensi  interaksi  ketiga  ion  logam Fe,  Co  dan  Ni  yang  digunakan  sebagai komponen nutrien, dianalisis pola perbandingannya  pada ketiga fitoplankton tersebut  yaitu D.  salina,  C.  vulgaris, dan Spirulina  sp. ,  menggunakan  nutrien  F1 sebagai  nutrien  yang  memperlihatkan respon  laju  akumulasi  dan  laju  kecepatan spesifik fitoplankton laut terbaik.
Konsentrasi  ketiga  ion  logam  Fe,  Co  dan Ni yang digunakan, masing-masing adalah: 3, 2 dan 1 ppm. Komposisi nutrien medium sebelum kultur ditentukan konsentrasinya, komposisi medium setelah  kultur  dianalisis  dengan  XRF, ketiga  ion  logam  Fe,  Codan  Ni  dianalisis dengan  AAS,  hasilnya  pada  Tabel  6  dan Tabel 7.
Tabel 6. Komposisi      Nutrien      Medium MSSIP Jenis Nutrien F1 sebelum kultur . No. Komponen Nutrien Medium MSSIP Konsentrasi (ppm) 1 NaCl 300 2 MgSO 4 .7H 2 O 5 3 KNO 3 2 4 KH 2 PO 4 5 5 CaCl 2 .6H 2 O 5 6 H 3 BO 3 200 7 ZnSO 4 .7H 2 O 1 8 MnSO 4 .4H 2 O 1 9 CuSO 4 .5H 2 O 0.1 10 CoCl 2 .6H 2 O 0.2 11    (NH 4 ) 6 Mo 7 O 24 .4H 2 O 0.2 12    NaFeEDTA 25 13 NaSiO 3 .9H 2 O 10 14 Campuran Vitamin 1 15 HCl 50 16 NaOH 75
Tabel 7. Komposisi  Ion  logam  Fe,  Co,  Ni dan  Komponen  Nutrien  MSSIP
Jenis F1. No. Jenis Nutrien Konsentrasi Awal (ppm) Konsentrasi Akhir XRF (%b/b) AAS (ppm) A. Fitoplankton laut D. salina 1 Cl - 84,980 - 2 Ca - 6,600 - 3 K - 5,490 - 4 Fe 3 - 0,697 5 Co 2 - 0,396 6 Ni 1 - 0,241 B. Fitoplankton laut C. vulgaris 1 Cl - 59,010 - 2 Ca - 3,190 - 3 K - 3,800 - 4 Mg 31,530 - 5 Fe 3 - 0,795 6 Co 2 - 0,498 7 Ni 1 - 0,257 C. Fitoplankton laut Spirulina sp. 1 Cl - 84,860 - 2 Ca - 6,650 - 3 K - 5,540 - 4 Fe 3 - 0,791 5 Co 2 - 0,571 6 Ni 1 - 0,202
Berdasarkan  Tabel  6  dan  Tabel  7, komponen  yang  terdeteksi  oleh  XRF  (X Ray  Fluorescence)  adalah  unsur  Cl,  K, Mg,  Ca,  dan  beberapa  unsur  lainnya, sedangkan  ion  logam  Fe,  Codan  Ni  tidak terdeteksi. Untuk melengkapi hasil analisis ion  logam  Fe,  Codan  Ni  dalam  nutrien setelah kultur, maka digunakan pengukuran  dengan  instrumen  AAS  pada sampel yang sama.
Penggunaan  ion  logam  Fe,  Co  dan Ni  pada  keenam  jenis  fitoplankton  laut yang  potensial  berdasarkan  hasil  yang diperoleh selama kultur berlangsung pada ketiga  spesies  fitoplankton  laut,  yaitu: D. salina,  C.  vulgaris, dan Spirulina  sp. , adalah: Ion logam Fe>Co>Ni dengan rata- rata  perbandingan  ion  logam  Fe :  Co  :  Ni = 9 : 3 : 1.
Kondisi  ini  menunjukkan  bahwa  ion logam  Fe,  Co  dan  Ni  dibutuhkan  dalam jumlah yang sesuai dengan jenis fitoplankton  laut  yang  digunakan.Untuk menentukan komposisi perbandingan
terbaik  ion  logam  Fe,  Co  dan  Ni  dalam nutrien, dilakukan analisis pola kepadatan jenis  pertumbuhan  fitoplankton  laut  pada beberapa  macam  nutrien  medium  MSSIP yang digunakan.
Interaksi  Ion  Logam  Fe,  Co  dan  Ni dalam  Nutrien  MSSIP  Pada  Kultur  Sel Fitoplankton Laut
Interaksi  ketiga  ion  logam  Fe,  Co dan  Ni  tersebut  pada  komposisi  nutrien MSSIP  terhadap  spesies  fitoplankton  laut dalam menstimulasi laju pertumbuhan dan tingkat  kepadatan  akumulasinya,  maka digunakan data kepadatan jenis pertumbuhan  sel  spesies  fitoplankton  laut dalam  beberapa  jenis  nutrien  MSSIP dengan  membandingkan  laju  kepadatan jenis  pertumbuhan  spesies  fitoplankton laut kedalam masing-masing nutrien MSSIP yang digunakan.
Perbandingan  laju  kepadatan  jenis spesies  fitoplankton  laut  dalam  nutrien MSSIP  Jenis  A,  B,  C  dan  nutrien  D diperlihatkan pada
Tabel 8.
Tabel 8.Kepadatan Jenis Sel Fitoplankton Laut D. salina dalam Nutrien A, Nutrien B, Nutrien
C dan Nutrien D.
JENIS FITOPLANKTON Kepadatan Pertumbuhan Fitoplankton (x 10 4 sel/mL) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Nutrien A (Urea : Fe = 3 : 9) A D. salina 2,5  13  35  105  398  825  953  1106  1245 1328 1201 1103 Nutrien B (Urea : Fe : Co = 3 : 9 : 6) KA D. salina 2,5  14  30  172  218  345  413 518 635 827 720  562 Nutrien C (Urea : Ni : Fe = 3 : 1 : 9) A1 D. salina 2,5  102 435  852  1117  1443  1563 1718 1525  1183  914  825 Nutrien D (Urea : Fe : Co = 3 : 9 : 9) A2 D. salina 2,5  80  103  252  317  415  593 688 835 980 994 921
Berdasarkan  data  pada  Tabel  8 tersebut,  ditemukan  bahwa  fitoplankton laut  spesies D.  salina pada  nutrien  A
memiliki  kepadatan tertinggi sekitar  1328 x 10 4 sel/mL, ditemukan pada awal hari ke 10  kultur.  Pada  nutrien  B  memiliki
kepadatan  tertinggi  sekitar  827  x  10 4 sel/mL,  ditemukan  pada  awal  hari  ke  10 kultur. Pada nutrien C memiliki  kepadatan tertinggi  sekitar  1718  x  10 4 sel/mL, ditemukan  pada  awal  hari  ke  8  kultur. Pada  nutrien  D  memiliki    kepadatan tertinggi  sekitar        994  x  10 4 sel/mL, ditemukan pada awal hari ke 11 kultur.
Informasi  ini  menunjukkan  bahwa ion  logam  Fe  dan  Ni  dibutuhkan  oleh D. salina dalam pertumbuhannya, oleh karena dengan penambahan ion logam Ni 1/9  bagian  dari  ion  logam  Fe  ke  dalam nutrien  A  membentuk  nutrien  C  maka akumulasi  kepadatan  selnya  meningkat. Kondisi  sebaliknya  terjadi  penurunan akumulasi sel fitoplankton laut D.
salina pada  nutrien  B  yang  ditambahkan ion  logam  Co  2/3  bagian  dari  ion  logam Featau pada nutrien D dengan penambahan  ion  logam  Cosama  dengan ion logam Fe.
Selanjutnya pada
Tabel 9, fitoplankton  laut C.  gracilis memiliki kepadatan  tertinggi  sekitar  1114  x  10 4 sel/mL dalam nutrien A pada awal hari ke 8  kultur.  Untuk  nutrien  B,  kepadatan tertinggi  pada  awal  hari  ke  11  kultur sekitar  825 x 10 4 sel/mL, dalam  nutrien C diperoleh    kepadatan  tertinggi  sekitar 1392  x  10 4 sel/mL,  pada  awal  hari  ke  8 kultur,  dan  dalam  nutrien  D  memiliki kepadatan  tertinggi  sekitar  415  x  10 4 sel/mL, pada awal hari ke 12 kultur.
Tabel 9. Kepadatan Jenis sel fitoplankton laut C. gracilis dalam nutrien A, nutrien B, nutrien C dan nutrien D.
JENIS FITOPLANKTON Kepadatan Pertumbuhan Fitoplankton (x 10 4 sel/mL) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Nutrien A (Urea : Fe = 3 : 9) E C. gracilis 2,5  32  41 85  372  703  927 1114 1018  894  635  521 Nutrien B (Urea : Fe : Co = 3 : 9 : 6) ME C. gracilis 2,5  10  25 33 72 103  227 324 418 604 825 758 Nutrien C (Urea : Ni : Fe = 3 : 1 : 9) E1 C. gracilis 25  101  405  883  1124  1201  1317 1392 1105  940  863  771 Nutrien D (Urea : Fe : Co = 3 : 9 : 9) F2 C. gracilis 2,5  40  52 80 97 128  135 184 214 382  407 415 Informasi yang diperoleh pada Tabel
9, menunjukkan  bahwa  ion  logam  Fe  dan Ni juga sangat dibutuhkan oleh fitoplankton laut C. gracilis dalam pertumbuhannya  oleh  karena  diperoleh akumulasi sel yang rata-rata lebih banyak pada nutrien C, jika dibandingkan dengan
kultur  pada  nutrien  A,  B  dan  D.  Bahkan penambahan  ion  logam  Co  kedalam nutrien B, menunjukkan penurunan akumulasi pertumbuhan sel menjadi sekitar  1/2  bagian  dan  juga  menurun  1/3 bagian dalam nutrien D.
Tabel 10. Kepadatan  Jenis  sel  fitoplankton  laut Spirulina  sp. dalam  nutrien  A,  nutrien  B, nutrien C dan nutrien D.
JENIS FITOPLANKTON Kepadatan Pertumbuhan Fitoplankton (x 10 4 sel/mL) 1 2 3 4
5 6 7 8 9 10 11 12 Nutrien A (Urea : Fe = 3 : 9) I Spirulina sp. 3,0  38  97  209  453  881  1305  1559  1812 2147 1970 1521 Nutrien B (Urea : Fe : Co = 3 : 9 : 6) OI Spirulina sp. 3,0  11  35  81  315  501 705 937  1028 1125 1109  931 Nutrien C (Urea : Ni : Fe = 3 : 1 : 9) D1 Spirulina sp. 3,0  194 725 1135 1419  1774  2142 2571 2340  1801 1604 1207 Nutrien D (Urea : Fe : Co = 3 : 9 : 9) D2 Spirulina sp. 3,0  84  110  251  329  404 532 671 814 931 904  875
Berdasarkan  data  pada  Tabel  10, ditemukan bahwa fitoplankton laut spesies Spirulina  sp., memiliki kepadatan  tertinggi masing-masing  sekitar  2147  x  10 4 sel/mL dalam  nutrien  A  pada  awal  hari  ke  10 kultur,  sekitar  1125  x  10 4 sel/mL  dalam nutrien  B  pada  awal  hari  ke  10  kultur, dalam nutrien C sekitar 2571 x 10 4 sel/mL pada  awal  hari  ke  8  kultur,  dan  dalam nutrien  D  memiliki  kepadatan  tertinggi sekitar  931  x  10 4 sel/mL,  yang  ditemukan pada awal hari ke 10 kultur.
Informasi pada Tabel 10 ini, menunjukkan bahwa ion logam Fe dan Ni sangat  dibutuhkan  oleh  fitoplankton  laut Spirulina sp. dalam pertumbuhannya, oleh karena dengan penambahan ion logam Ni 1/9  bagian  ion  logam  Fe  dalam  nutrien  C maka akumulasi kepadatan selnya meningkat pesat, jika dibandingkan dalam nutrien  A,  B  dan  D.  sebaliknya  pada nutrien  B  dan  C  yang  memperlihatkan bahwa  ion  logam  Co  yang  ditambahkan kedalam  nutrien  B  dan  C,  malah menurunkan akumulasi sel Spirulina sp . Berdasarkan informasi pada Tabel 8 - Tabel 10, menunjukkan bahwa ion logam Ni sangat dibutuhkan oleh fitoplankton laut
dalam  pertumbuhannya,  oleh  karena dengan  penambahan  1/9  bagian  dari  ion logam  Fe,  akumulasi  sel  fitoplankton  laut rata-rata  lebih  banyak  jika  dibandingkan dengan  penambahan  ion  logam  Co sebanyak 2/3 bagian dari ion logam Fe.
Kondisi  ini  menunjukan  bahwa  ke tiga  spesies  fitoplankton  laut  yaitu: Dunaliella  salina,  Chlorellavulgaris dan Spirulina  sp. ,  memperlihatkan  respon yang  berbeda  terhadap  nutrient  yang digunakan,  hal  ini  oleh  karena  adanya perbedaan  afinitasnya  dengan  ketiga  ion logam  Fe,  Co  dan  Ni  yang  dianalisis termasuk perbedaan morfologi fitoplankton  laut.  Akan  tetapi  informasi ilmiah  ini  telah  menunjukkan  bahwa  ion logam Fe, Co dan Ni pada jumlah tertentu sangat  dibutuhkan  pada  pertumbuhan fitoplankton  laut,  walaupun  pengaruhnya berbeda  satu  dengan  yang  lain.  Bahkan dengan  kehadiran  ion  logam  Ni  sebagai logam berat pada nutrien C, memperlihatkan  rata-rata  pertumbuhan sel  fitoplankton  laut  lebih  tinggi  jika dibandingkan dengan kehadiran ion logam Co pada nutrien B, dan juga dalam nutrien D,  dimana  dalam  nutrien  D  konsentrasi
ion  logam  Co  yang  digunakan  1,5  kali lebih  besar  dari  nutrien  B,  akan  tetapi rata-rata pertumbuhan sel fitoplankton laut masih  lebih  tinggi  pada  nutrien  C  yang diintegrasi dengan ion logam Ni, walaupun hanya 1/9 bagian dari ion logam Fe.
Artinya untuk keempat nutrien MSSIP yang digunakan, yaitu jenis nutrien A,  B,  C  dan  D,  memperlihatkan  rata-rata kepadatan jenis terbesar untuk pertumbuhan sel fitoplankton laut, ditemukan  pada  nutrien  C.  Namun demikian ketiga ion logam yang digunakan dalam komposisi nutrien MSSIP  yaitu  ion  logam  Fe,  Co  dan  Ni, merupakan  ion  logam  yang  dibutuhkan oleh  fitoplankton  laut,  akan  tetapi  harus dengan menggunakan perbandingan yang
sesuai.  Perbandingan  terbaik  yang  dapat digunakan pada pertumbuhan sel spesies fitoplankton  laut  untuk  ke  tiga  ion  logam yaitu:Fe:Co:Ni  adalah  9  :  6  :  1,    dengan catatan menggunakan urea sebagai komponen  tambahan  sebanyak  3  bagian. Perbandingan  ini  akan  diuji  lagi  dengan komposisi  nutrien  MSSIP  yang  berbeda yaitu  nutrien  E  dan  F  untuk  mencari komposisi terbaik perbandingan ketiga ion logam Fe, Co dan Ni.
Perbandingan  laju  kepadatan  jenis fitoplankton  laut  dalam  nutrien  MSSIP jenis nutrien E (komposisi, urea : Fe : Co : Ni = 6 : 9 : 6 : 1) dan nutrien F (komposisi, urea  :  Fe  :  Co  :  Ni  =  6  :  9  :  6  :  3), diperlihatkan pada Tabel 11.
Tabel 11. Kepadatan Jenis Sel Fitoplankton Laut dalam Nutrien E dan Nutrien F
JENIS FITOPLANKTON Kepadatan Pertumbuhan Fitoplankton (x 10 4 sel/mL) 1 2 3 4
5 6 7 8 9 10 11 12 Nutrien E A3 D. salina 2,5  11  29 35 44 58 88 120 139 115  85 77 B3 C. vulgaris 3,0  35  69 93  212  419 638 517 374  285  194  102 K3 Spirulina sp. 3,0  17  25 35 45
62 114 246 395  791 985 967 Nutrien F A4 D. salina 2,5  173  535  932  1125  1343  1518 1690 1425 1302 1034  821 B4 C. vulgaris 3,0  225  890  1127 1509  1974  2562 3095 2384 1803 1327 1164 I4 Spirulina sp. 3,0  181  775  1085 1302  1681  1939  2390 2581 2208 1831 1591
Berdasarkan  pada  Tabel  11,  laju kepadatan jenis tertinggi untuk spesies D. salina , C.  vulgaris, dan Spirulina  sp., ditemukan dalam nutrien F jika dibandingkan  dengan  ke  delapan  spesies fitoplankton laut tersebut apabila dilakukan kultur dalam nutrien E.Informasi ini  menunjukkan  bahwa  laju  kepadatan jenis  tertinggi  untuk  spesies D.  salina ditemukan  pada  nutrien  F  yaitu  sekitar
1690  x  10 4 sel/mL  awal  hari  ke  8  kultur, apabila  dibandingkan  dengan  nutrien  E hanya  sekitar  139  x  10 4 sel/mL,  yang ditemukan  pada  awal  hari  ke  9  kultur. Kondisi yang sama untuk spesies lain juga dapat  dibandingkan  dengan  hasil  yang signifikan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa penambahan  jumlah  ion  logam  Ni  dalam nutrien  E  menjadi  1/3  bagian  dari  ion logam  Fe  dalam  nutrien  F,  pertumbuhan
fitoplankton laut malah meningkat menjadi semakin  pesat.  Kondisi  ini  sesuai  dengan kepadatan  jenis  sel  fitoplankton  laut  yang diperoleh  menjadi  semakin  besar  dan bahkan mencapai akumulasi sel lebih dari 10 kali, dengan tingkat akumulasi tertinggi yang  ditemukan  lebih  cepat  1  hari  pada nutrien  F  jika  dibandingkan  dengan nutrien E.
Kondisi  ini  mengindikasikan  bahwa nutrien F lebih baik dari nutrien E dimana ion  logam  Ni  yang  digunakan  dalam nutrien F, komposisinya 3 kali lebih besar dari komposisi dalam nutrien E.
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  setelah perlakuan  kultur  dengan  nutrien  E  dan nutrien  F,  perbandingan  komposisi  ketiga ion  logam  Fe,  Co  dan  Ni  yang  terbaik untuk  digunakan  dalam  kultur  spesies fitoplankton laut uji adalah 9 : 6 : 3.
Untuk  lebih  memastikan  komposisi terbaik perbandingan ketiga ion logam Fe, Co dan Ni yaitu (9 : 6 : 3), maka dilakukan analisis  pembanding  pada  kultur  dalam nutrien  MSSIP  yang  lain  yaitu  pada nutrien  F1  dan  nutrien  F2.  Komposisi masing-masing  nutrien  F1  dan  nutrien  F2 yang  digunakan  adalah:  Nutrien  F1  (Urea : Arschat-M : Fe : Ni : Co  = 6 : 3 : 9 : 3 : 6) dan nutrien F2 (Urea : Arschat-M : Fe : Ni : Co = 6 : 3 : 9 : 3 : 12).
Komposisi nutrien F2 menggunakan ion  logam  Co,  konsentrasinya  2  kali  lebih besar  jika  dibandingkan  dengan  nutrien F1, sementara komposisi yang lain dibuat konstan.  Hasil  laju  kepadatan  jenis fitoplankton  laut  dalam  nutrien  MSSIP jenis nutrien F1 dan nutrien F2
diperlihatkan pada Tabel 12.
Tabel 12. Kepadatan Jenis sel fitoplankton laut dalam Nutrien F1 dan dalam Nutrien F2
JENIS FITOPLANKTON Kepadatan Pertumbuhan Fitoplankton (x 10 4 sel/mL) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Nutrien F1 (Urea : Arschat-M : Fe : Ni : Co = 6 : 3 : 9 : 3 : 6) A4-1 D. salina 10  231  714  1213  1545 2192 1321  917 775 701  854  816 B4-1 C. vulgaris 10  397  995  2120  3765  6854 9700 6905  4732  2606 1801 1372
I4-1 Spirulina sp. 10  382  991  2792 5985 3753  2871  2154  1598  1982 1431 1109 Nutrien F2 (Urea : Arschat-M : Fe : Ni : Co  = 6 : 3 : 9 : 3 : 12) A4-2 D. salina 10  214  595  931  1128  1305  1411  1698 1892 1620 1374 1052 B4-2 C. vulgaris 10  385  984  1405  2951  4092  5730  7824 9290 5847 3734 2951 I4-2 Spirulina sp. 10  112  390  769  1071  1191  1335 1452 1306  1104 1013  892
Berdasarkan  Tabel  12,  diperoleh perbandingan laju kepadatan jenis spesies  fitoplankton  laut  yang  digunakan pada  kultur  dengan  medium  MSSIP  jenis nutrien  F1  dan  nutrien  F2,  memiliki perbedaan  yang  jelas  dan  sangat  nyata. Laju  kepadatan  pertumbuhan  dan  laju akumulasi  sel  fitoplankton  laut  pada
kulturdengan  medium  nutrien  F1  lebih besar dibandingkan dengan menggunakan nutrien F2 terhadap spesies  fitoplankton  laut  yang  dijadikan sampel. Akumulasi kepadatan sel fitoplankton  laut D.  salina tertinggi  pada awal  hari  ke  6  yaitu    2192  x  10 4 sel/mL dalam  nutrien  F1  dan  dalam  nutrien  F2
pada  awal  hari  ke  9  kultur  hanya  sekitar 1892 x 10 4 sel/mL.
Kondisi  ini  menunjukkan  bahwa nutrien  F1  yang  digunakan  dengan komposisi  komponennya  adalah  Urea  : Arschat-M : Fe : Ni : Co = 6 : 3 : 9 : 3 : 6, lebih  baik  jika  dibandingkan  dengan nutrien  F2  dengan  komposisi  Urea  : Arschat-M : Fe : Ni : Co = 6 : 3 : 9 : 3 : 12. Kedua nutrien ini memiliki komponen yang sama,  hanya  konsentrasi  ion  logam  Co yang  digunakan  dalam  nutrien  F2  adalah 2  kali  lebih  besar  dibandingkan  dalam nutrien  F1.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa dengan peningkatan konsentrasi ion logam  Co  menjadi  2  kali  lebih  besar, menghasilkan  penurunan  laju  kepadatan pertumbuhan  dan  laju  akumulasi  sel fitoplankton laut. Berdasarkan informasi ini disimpulkan bahwa perbandingan konsentrasi ion logam Fe, Co dan Ni yang terbaik  untuk  digunakan  dalam  kultur pertumbuhan fitoplankton laut adalah:9 : 6 :  3,  dengan  catatan  tetap  diintegrasikan dengan  komponen  lain,  yaitu  pupuk  urea dan nutrien Arschat-M.
Integrasi  ion  logam  Fe,  Co  dan  Ni pada  biomassa  fitoplankton  laut  dengan perbandingan  terbaik  untuk  ion  logam Fe:Co:Ni  =  9  :  6  :  3,  yang  ditemukan dalam penelitian ini memiliki pola interaksi yang berbanding lurus dengan perbandingan yang ditemukan olehMorel(2008).  Interaksi  ion  logam  Fe 2+ relatif  lebih  besar  jika  dibandingkan dengan  ion  logam  Co 2+ dan  interaksi  ion logam  Co 2+ relatif  lebih  besar  dari  ion
logam  Ni 2+ .  Pola  interaksi  ion  logam  Fe,
Co  dan  Ni  terhadap  ligan-ligan  yang  ada dalam biomassa fitoplankton laut, disajikan pada Gambar 4, yang memperlihatkan  bahwa  urutan  kekuatan pola  interaksi  ion  logam  tersebut  secara berurutan  adalah  sebagai  berikut  yaitu: Fe>Co>Ni.
Gambar 4.  Pola  interaksi  ion  logam  Fe, Co dan Ni terhadap ligan pada biomassa fitoplankton laut (Morel, 2008, Kasim, 2016).
Hal ini dapat dijelaskan dengan baik oleh  karena  sesuai  dengan  teori  ikatan logam  ligan  dalam  deret  kekuatan  ligan dalam  berikatan  dengan  ion  logam,  yang juga  sesuai  dengan  teori  ikatan  valensi, teori  medan  ligan,  dan  teori  orbital molekul. Ion logam Fe 2+ memiliki 4 orbital, ion  logam  Co 2+ 3  orbital  dan  ion  logam Ni 2+ 2 orbital pada sub kulit 3d yang tidak berpasangan  dalam  bentuk  high  spin kompleks  yang  berikatan  dengan  ligan lemah.  Apabila  berbentuk  low  spin kompleks,  ion  logam  Fe 2+ tidak  memiliki orbital,  ion  logam  Co 2+ 1  orbital  dan  ion logam Ni 2+ 2 orbital pada sub kulit 3d yang tidak  berpasangan  apabila  berikatan
dengan ligan kuat. (Sugiarto, 2012;Sjahrul, 2010;Cotton, 1989).Berdasarkan informasi ini
menunjukkan bahwa nutrien F1 lebih baik dari nutrien F2, terhadap sampel fitoplankton  laut  yang  digunakan  yaitu D. salina, C. vulgaris, dan Spirulina sp.

## Kultur  Germinasi  dan  Penentuan  Laju Pertumbuhan Spesifik
Kultur  fitoplankton  laut  pada  tahap germinasi  sebelum  kultur  massal  yang merupakan tahap pengembangbiakan dan prakondisi  sel  fitoplankton  laut  sebelum kultur  massal.  Pada  tahap  ini  laju kepadatan  jenis  pertumbuhan  spesies fitoplankton  laut  uji  berdasarkan  jenis nutrien  yang  telah  ditemukan,  dipakai untuk menentukan laju kepadatan pertumbuhan spesifik, waktu kultur terbaik dan  akumulasi  sel  fitoplankton  laut
terbanyak.  Hasilnya  diperlihatkan  pada Tabel 13.
Artinya  ion  logam  Fe,  Co  dan  Ni berdasarkan  data  pada  Tabel  12,  dapat menstimulus  laju  akumulasi  terbanyak pada  fitoplankton  laut  spesies C.  vulgaris dengan  bantuan  komponen  pupuk  urea dan  pupuk  ZA,  yaitu  1,125  x  10 8 sel/mL.
Informasi  lain  adalah  laju  kepadatan  jenis pertumbuhan  tertinggi  sekitar  0,0667 sel/mL/Jam  yang  ditemukan  pada  hari  ke 4  kultur  pada  spesies  fitoplankton  laut spesies Spirulina sp., menggunakan nutrien  MSSIP  (nutrien  F1)  dengan komposisi  nutrien  (Urea :  Arschat-M:  Fe  : Ni  :  Co  =  6  :  3  :  9  :  3  :  6).  Hal  ini  berarti bahwa  ion  logam  Fe,  Co  dan  Ni  dalam nutrien  MSSIP  dapat  mempercepat  laju kepadatan  pertumbuhan  fitoplankton  laut dengan  keterlibatan  komponen  lain  yaitu pupuk urea dan nutrien Arschat-M.
Tabel  13.Laju  Kepadatan  Pertumbuhan  Spesifik  Tertinggi  dan  Akumulasi  Terbanyak
Biomassa Sel Fitoplankton Laut. Sampel Fitoplankton Laut Ukuran (µm) Waktu (hari) Pengamatan (sel/mL) µ (Jam -1 ) N o N t D. salina( A6 ) 5 – 8 9 100.000 22.430.000 0,0251 D. salina( A9 ) 4 100.000 8.140.000 0,0458 C. vulgaris( B7 ) 3 – 4 8 100.000 112.500.000 0,0366 C. vulgaris( B4-1 ) 6 100.000 97.000.000 0,0573 Spirulina sp. ( I6 ) 5 – 7 9 100.000 110.300.000 0,0325 Spirulina sp. (I4-1) 4 100.000 59.850.000 0,0667
Informasi  ini  memperlihatkan  fungsi ion  logam  Fe,  Co  dan  Ni,  apabila diintegrasikan  dengan  pupuk  urea  dan pupuk  ZA  akan  mampu  memperbanyak sel fitoplankton laut, sekaligus mempertegas  kemungkinan  penemuan medium yang lebih ekonomis, jika
dibandingkan  dengan  medium  yang  telah ada  dan  komposisi  komponennya  banyak serta harganya relatif lebih mahal. Kondisi ini  jelas  menjadi  informasi  penting,  agar nantinya dapat terus dilakukan pengkajian secara  lebih  serius,  terhadap  pencarian berbagai alternatif jenis komponen nutrien
yang  dapat  berfungsi  menstimulasi  laju pembentukan biomassa sel spesies fitoplankton laut yang lebih cepat pertumbuhannya dan lebih banyak akumulasi selnya.
Kultur  Massal    Spesies  Fitoplankton Laut Uji
Hasil penentuan kandungan
biomassa fitoplankton  laut, disajikan pada
Tabel 14.
Tabel 14. Kandungan Biomassa Fitoplankton Laut. No. Spesies Fitoplankton Laut Berat Kering Biomassa Fitoplankton Laut (g/L) 1 D. salina 0,3095 2 C. vulgaris 0,3782 3 Spirulina sp. 0,3325
Berdasarkan  data  pada  Tabel  14, diperoleh kandungan berat kering biomassa fitoplankton laut tertinggi adalah 0,3782  g/L  untuk  spesies Chlorella vulgaris , dan kandungan biomassa fitoplankton  laut  terendah  diperoleh  dari spesies Dunaliella  salina yaitu  sekitar 0,3095 g/L, namun ketiga spesies
fitoplankton  laut  memperlihatkan  hasil yang  relative  sama,  menunjukkan  bahwa ketiganya  berpotensi  untuk  dilakukan kultur massal.
Hasil Analisis Karbohidrat
Analisis kandungan karbohidrat dalam  biomassa  spesies  fitoplankton  laut dilakukan  dengan  menggunakan  metode penentuan  gula  reduksi  yaitu  cara  Luff Schoorl, hasilnya diperlihatkan pada Tabel 15.
Sesuai data pada Tabel 15, diperoleh akumulasi kandungan
karbohidrat  tertinggi  dalam  biomassa fitoplankton  laut  adalah  dari  spesies D. salina yaitu  sekitar  32,49  %b/b,  dan akumulasi terendah pada spesies Spirulina  sp. yaitu  sekitar  29,81  %b/b. Kondisi ini menunjukkan bahwa fitoplankton yang memiliki bentuk morfologi dan ukuran sel yang lebih besar seperti Dunaliella  salina memiliki  potensi membentuk  karbohidrat  lebih  banyak, informasi ini sesuai dengan yang
disampaikan oleh Guerrero (2010).
Tabel 15. Data  Kandungan  dan  Kadar  Karbohidrat  Fitoplankton  Laut  Hasil  Kultur  untuk volume 1000 mL.
No Jenis Fitoplankton Berat Kering (mg) Berat Karbohidrat (mg) Kadar Karbohidrat (%b/b) 1 D. salina 0,3095 0,1006 32,49 2 C. vulgaris 0,3782 0,1195 31,58 3 Spirulina sp. 0,3325 0,0991 29,81

## Hasil Analisis Lemak
Hasil kandungan lemak dalam spesies fitoplankton laut uji yang dianalisis
menggunakan metode soxhlet  (SNI 2453- 90)  dengan  pelarut  n-heksanaadalah, diperlihatkan pada Tabel 16.
Berdasarkan  Tabel  16,  diperoleh
kandungan lemak tertinggi pada fitoplankton laut spesies Chlorella vulgaris yaitu  26,82  %b/b,dan  kandungan  lemak terendah  pada  fitoplankton  laut  spesies Spirulina sp. yaitu sekitar 24,53 %b/b.
Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan bahwakompleksitas  sistim  morfologi  dan proses metabolisme
pada
fitoplanktondapat  berpengaruh  terhadap akumulasi senyawa organik hasil metabolisme  yang  lebih  besar  dalam jaringan  morfologi  fitoplankton  tersebut, khususnya  senyawa  organik  penyusun molekul  lemak  seperti  gliserol,  asam karboksilat, trigliserida dan lain-lain (Parker, 1998; Ragauskas et al. , 2006).
Tabel 16.Kandungan dan Kadar Lemak Fitoplankton Laut Hasil Kultur massal.
No. Jenis Fitoplankton Berat Kering (mg) Berat Lemak (mg) Kadar Lemak (%b/b) 1 D. salina 0,3095 0,0803 25,95 2 C. vulgaris 0,3782 0,1015 26,82 3 Spirulina sp. 0,3325 0,0816 24,53
Informasi  ini  menunjukkan  potensi kultur  massal  ketiga  spesies  fitoplankton laut  yaitu Dunaliella  salina,  Chlorella vulgaris dan Spirulina sp. , sehingga dapat dilakukan  kultur  lebih  lanjut  dalam  skala lebih besar atau kultur biomassal menggunakan nutrien MSSIP yang ditemukan  untuk  mendukung  kesiapan dan  ketersediaan  bahan  baku  produksi biofuel jenis bioetanol dan biodisel.

## KESIMPULAN
1.  Jenis  fitoplanton  laut  yang  dianalisis dengan nutrien MSSIP adalah:
Dunaliella salina, Chlorella vulgaris dan Spirulina sp.
2.  Nutrien MSSIP yang digunakan, memiliki  kemampuan  yang  baik  untuk menumbuhkan  fitoplankton  laut  pada skala kultur murni germinasi dan kultur massal, sebagaimana nutrien yang lain yang  telah  dilakukan  pada  penelitian
terdahulu  mulai  dari  Nutrien  Conway, Arschat, Arschat-M dan Syabr-1.
3.  Ion  logam  Fe,  Co  dan  Ni  merupakan logam yang dibutuhkan oleh fitoplankton
laut dalam pertumbuhannya  selama  digunakan dengan  jumlah  perbandingan  yang
tepat.
4.  Kandungan biomassa ke tiga fitoplankton laut yang dianalisis, potensil untuk dijadikan sebagai bahan bakuuntuk produksi biofuel jenis bioetanol dan biodiesel apabila diproduksi pada kultur secara kontinyu, oleh  karena  kandungan  biomassa, karbohidrat  dan  lemaknya  yang  cukup tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifin.  2010. Bioakumulasi  Ion  Logam  Cd Oleh  Fitoplankton  Laut  Tetraselmis Chuii  dan  Chaetoceros  Calcitrans . Desertasi  tak  diterbitkan.  Makassar:
Program  Studi  Kimia  Pasca  Sarjana Unhas.
Bu-Olayan  AH.,  Al-Hassan  R.,  Thomas
BV.,  Subrahmanyam  MNV.  2011. Inpact  of Trace  Metals  and  Nutriens Levels  on  Phytoplankton  from  the Kuwait Coast . Environment International . 26(4):199-203. Cermeno  P.,  de  Vargas  C.,  Abrantes  F., Flakowski  PG.  2010.  Phytoplankton Biogeography and Community
Stability in the Ocean. Plosone . 5(4):
e10037.
Chisti  Y.  2008.  Biodiesel  from  microalgae beats bioethanol. Trend in
Biotechnology . 26(3): p 126-131.
Coleman  R.  D.,    R.  L.  Coleman,  E.  L. Rice. 2008. Zinc and Cobalt
Bioconcentration  and  Toxicity  in
Selected  Algae  Species. Botanical Gazette . 139(2): 102-109. Cotton,  F.  Albert,  1989. Kimia  Anorganik
Dasar. Jakarta: Universitas Indonesia Press. 144-186. Goksan,  T.  Zekeriyaoglu,  A.  AK,  Ilknur.
2007.  The  Growth  of  Spirulina platensis in Different Culture Systems Under Greenhouse Condition. Turkish Journal of
Biology . 31(1): 47 – 52.
Guerrero  M.G.  2010. Bioethanol  from
Microalgae. Sevilla: Instituto Bioquiimica Vegetaly Fotosmica Fotosiintesisntesi. pp 26.
Hadiyanto,  Istiyanto  Samidjan,  Andri Cahyo  Kumoro  dan  Silviana.  2010. Produksi  Mikroalga  Berbiomassa Tinggi dalam Bioreaktor Pengembangan Teknologi Kimia untuk  Pengolahan  Sumber  Daya Alam  Indonesia.  Prosiding  Seminar
Nasional  Teknik  Kimia  “Kejuangan”;
Yogyakarta, 26 Januari 2010. Yogyakarta: UPN Veteran Yogyakarta. Hlm 104-112.
Hedges  JI . ,  Geinas  Y.,  Baldock  JA., Wakeham S. 2002. The biochemical and  Elemental  Compositions  of
Marine Plankton (A NMR Perspective). Marine Chemistry .
78(1): 47-63.
Kasim  S.,  M.  Sjahrul.  2012.  Isolation  and Identification of Marine Phytoplankton  for  Production  of Carbohydrate Type Biomass.
Journal  European  Chemical  Bulletin (ECB). 1(8): 311-316.
Kasim  S.,  M.  Sjahrul.  2012. Pemanfaatan Fitoplankton  Laut  untuk  Produksi
Bahan  Bakar  Nabati  Berbentuk
Bioetanol.
Makassar: Jurusan Biologi Fakultas MIPA Unhas. Kasim,  S.,  2016. The  Study  of  Marine
Phytoplankton Species as The Producer  of  Biomass  and  Biofuel Grown in Culture With The Integrated Nutrient of Metal Ions Fe,
Co and Ni . [Disertasi S3]. Makassar: Pasca Sarjana Jurusan Kimia Fakultas Mipa Unhas.
Khan  S.A.,  Rashmi,  Hussain  Mir,  Z., Prasad,  S.,  Banerjee,  U.C.,  2009. Prospects  of  Biodiesel  Production from  Microalgae  in  India. Journal  of Renew  Sust  Energy  Rev .  13:2361-
72.
Morel,  Francois  M.M.,  2008.  The  Co- Evolution  of  Phytoplankton  and Trace Element Cycles in the Oceans. J.  Compil. Geobiol. 6:  318- 324.
Wu  N.,  Fohrer  N.,  Scmalz  B.  2010. Distribution  of  Phytoplankton  in  a Germand Lowland Driver in Relation to  Environmental  Factor. Journal Plankton Res. 33: 807-820.
Nontji.  A.  2008. Plankton  Laut .  Jakarta: LIPI Press.
Parker  D.  L.  1998.  Effects  of  Cellular Metabolism  and  Viability  on  Metal Ion Accumulation by Cultured Biomass  from  a  Bloom  of  the Cyanobacterium microcystis
aeruginosa. J.  ASM.org.  App.  and Environ.Microbiol . 64(4):1545.
Ragauskas  A.J.,  Williams,  C.K.,  Davison, B.H.,  Britovsek,  G.,  Cairney,  J., Eckert, C.A., Frederick, W.J., Hallett, J.P., Leak, D.J., Liotta, C.L., Mielenz,  J.R.Murphy,  R.,  Templer,
R.,  Tschaplinski,  T.  2006.  The  Path
Forward for
biofuels and
biomaterials. Science 311: 484-489.
Rodolfi  I.,  Zittelli,  G.C.,  Bassi,  N., Padovani,  G.,  Biondi,  N.,  Bonini,  G.
et al. 2008. Microalgae for Oil: Strain
Selection,  Synthesis  and  Outdoor Mass  Cultivation  in  a  Low-Cost Photobioreactor. Biotechnologi Bioeng. 102(1):100-12.
Sanchez.  M.,  Castillo,  J.B.,  Rozo,  C.
Rodriguez, I. 2008. Spirulina (Arthrospira): An-Edible Microorganism. A
Review.
Javeriana Cra. Bogota . 7: 43-88.
Sanusi,  H.  S.  2006. Kimia  Laut.  Proses
Fisik Kimia dan Interaksinya dengan
Lingkungan . Bogor: IPB.
Sharma  K.,  Schuhmann  H.,  Schenk  PM. 2012. High Lipid Induction in
Microalgae  for  Biodiesel  Production . Energies . 5(5): 1532-1553.
Sjahrul,  M.,  2010. Dasar-Dasar  Kimia Anorganik .  Makassar:  PT.  Umitoha
Ukhuwah Grafika.
Sugiyarto,  Kristian  H.,  2012. Dasar-Dasar Kimia Anorganik Transisi . Yogyakarta;  Graha  ilmu.  pp  116- 175.