## Kadar Hb dan Perubahan Berat Badan Tikus Wistar Model Anemia Defisiensi Besi Setelah Pemberian Minyak Ikan Patin
1 Hersanti Sulistyaningrum*, 1 Addina Rizky Fitriyanti
1 Program Studi Gizi, Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Semarang
Jl. Kedungmundu No.18, Kedungmundu, Kec. Tembalang, Kota Semarang, Jawa Tengah 50273, Indonesia
*Correspondence: E-mail: hersanti@unimus.ac.id,  Phone/Mobile.087.808.725.458 ORCID ID: https://orcid.org/0000-0002-1480-7337

## ABSTRACT
Anemia is a health problem with little progress in its management, even though the global prevalence of anemia is relatively high. Anemia due to iron deficiency affects weight gain in children. Giving catfish oil to anemic rats was done to see the effect on Hb levels and body weight.
This research is a true experiment with a randomized pre-post-test design with a control group. Male Wistar rats were divided into four groups, namely K- (rats fed standard),  K+  (rats  fed  standard  without  iron),  P1  (rats  fed  standard  without  iron, getting catfish oil 0.039 ml/day), P2 (rats fed standard without iron, supplemented with ferrous sulfate 0.126 mg/day) for 14 days. Hb levels were measured before and after treatment using the ELISA method. The rats were weighed every day.
Paired t-test was conducted to determine differences in Hb levels and changes in body weight before and after the intervention. In addition, the Anova test followed by Post Hoc Bonferroni was carried out to analyze the difference in effect on the four groups.
There were significant differences in body weight changes before treatment and after treatment (p=0.00, p<0.05) on K-(13 gram ± 0.81), K+(5.5 gram ± 1.04), P1 (12 grams ± 0.7), P2 (13 grams ± 0.63). In addition, the study showed a significant increase in Hb  levels  before  and  after  treatment  (p=0.00,  p<0.05)  at  P1(4.7  g/dL  ±  0.76)  and P2(5.13 g/dL ± 0.15 ), as well as a decrease in K- (0.09 g/dL ± 0.19) and K+ (0.37 g/dL ± 0.18).
There  was  an  effect  of  giving  catfish  oil  on  Hb  levels  and  changes  in  body weight, which increased significantly in iron deficiency anemia Wistar rats.

## Keyword: body weight, catfish oil, Hb levels iron deficiency anemia
Submitted : 2022-10-25 Accepted : 2022-12-19 Published : 2023-01-30 Page : 77-84

## PENDAHULUAN
Prevalensi anemia pada anak-anak menurut  WHO  tahun  2011  yaitu    42,6% dan  Asia  merupakan  wilayah  tertinggi kedua  yang  cukup  besar  prevalensinya yaitu  42%  (TW  health  O,  2011).  WHO memperkirakan  50%  dari  penderita anemia  disebabkan  oleh  defisiensi  zat besi  (Children,  no  date).  Data  Riskesdas (Riset Kesehatan Dasar) Indonesia tahun 2013 anemia pada anak 12-59 bulan, yaitu 28,1% dan 70% anemia pada anak di Jawa Tengah  merupakan  anemia  microcytic hypochromic yang timbul akibat kekurangan  zat  besi  (Badan  Penelitian dan  Pengembangan  Kesehatan,  2013). Anemia  akibat  kekurangan  zat  besi berpengaruh  terhadap  kenaikan  berat badan (Burke, Leon and Suchdev, 2014).
Anemia  defisiensi  besi  dapat mengakibatkan  antara  lain:  berat  badan lahir rendah (BBLR) pada bayi, cadangan zat besi bayi berkurang, bayi lahir dalam keadaan anemia, proses pertumbuhan dan perkembangan  otak  terganggu,  produksi dan pemecahan senyawa transmiter yang diperlukan  untuk  mengantar  rangsang pesan  dari  satu  sel  neuron  ke  sel  neuron lain juga terhambat sehingga
memengaruhi  kerja  otak  (Soetjiningsih, 1995;  Falkingham et  al. ,  2010).  Anemia defisiensi besi dapat dicegah dengan cara mengonsumsi makanan kaya zat besi dan suplemen  zat  besi.    Beberapa  penelitian melihat  penggunaan  sirup  suplementasi zat  besi  efektif  menurunkan  angka anemia,  tetapi  memiliki  kelemahan seperti menimbulkan masalah pencernaan dan  overdosis(Janus  and  Moerschel, 2010;  Goddard et  al. ,  2011;  Short  and Domagalski,  2013;  Athe,  Rao  and  Nair, 2014).
Potensi  penggalian  sumber  zat besi alami melalui bahan makanan tinggi besi  seperti  pada  ikan  masih  terus dilakukan  (Athe,  Rao  and  Nair,  2014). Ikan  patin  ( Pangasius  hipophthalmus ) merupakan  salah  satu  bahan  makanan yang  mengandung  berbagai  macam  zat gizi  dan  harganya  ekonomis  sehingga banyak  dibudidaya.  Kandungan  zat  besi dalam ikan patin ( Pangasius hipophthalmus )  tinggi  jika  dibandingkan ikan  air  tawar  lainnya  (Djariah,  2001; Kementerian  RI,  2018).  Salah  satu  hasil olahan ikan patin ( Pangasius hipophthalmus ) yang mengandung banyak zat gizi berupa minyak ikan patin
( Pangasius hipophthalmus ). Minyak ikan patin ( Pangasius
hipophthalmus ) merupakan  minyak  yang  didapat  dari ekstraksi  daging  ikan  patin  ( Pangasius hipophthalmus ).  Hasil  penelitian  yang telah  ada  menyebutkan di  dalam  minyak ikan  patin  ( Pangasius  hipophthalmus ) terkandung  senyawa-senyawa  penting bagi  proses  sintesis  jaringan  seperti albumin, seng (Zn), tembaga (Cu) dan zat besi  (Fe)  (Dewi et  al. ,  2017).  Penelitian ini  bertujuan  untuk  melihat  pengaruh pemberian minyak ikan patin ( Pangasius hipophthalmus )  terhadap  kadar  Hb  dan perubahan  berat  badan  yang  dilakukan pada  tikus  wistar  jantan  model  anemia defisiensi besi.
METODE Penelitian ini merupakan penelitian true experiment dengan rancangan randomized pre-post-test with control  group pada  tikus  putih  galur wistar ( Rattus novergicus ). Sampel dalam penelitian  ini  dibagi  menjadi  empat kelompok secara acak, yaitu kelompok K- (kontrol negatif), K+ (kontrol positif), P1 (kelompok  perlakuan  1),  P2  (kelompok perlakuan 2) dan masing-masing kelompok  berjumlah  6  ekor  (World
Health  Organization,  2000).  Kelompok K-  mendapatkan  pakan  standar  berupa AIN  93M,  kelompok  K+  mendapatkan pakan standar yang dihilangkan kandungan  zat  besi,  kelompok  P1 mendapatkan pakan standar yang dihilangkan  zat  besi  dan  tambahan minyak ikan patin ( Pangasius hipophthalmus )  sebanyak  0,0039  ml  per hari,  dan  kelompok  P2  mendapatkan pakan  standar  yang  dihilangkan  zat  besi dan suplemen ferro sulfat sebanyak 0,126 mg per hari. Semua tikus minum secara ad libitum (Lyden, 2016).
Pembuatan  minyak  ikan  patin ( Pangasius  hipophthalmus )  dilakukan  di
Laboratorium Teknologi
Pangan Departemen Gizi Universitas Diponegoro Semarang  dengan  metode  wet  rendering (Hastarini  and  Fardiaz,  2012).  Minyak ikan  patin  ( Pangasius  hipophthalmus ) dibuat dari ikan patin segar yang diambil dagingnya lalu  dikukus selama 30 menit pada  suhu  95 ͦ  C.20  Daging  yang digunakan  harus  segar dan segera  diolah karena  ikan  yang  sudah  tidak  segar memiliki  enzim  cathepsin  yang  dapat mempercepat pembusukan sehingga kualitas  minyak  ikan  akan  terpengaruh.
Lalu dilakukan pengepresan di Laboratorium  Metalurgi  Fisik  Teknik Mesin Universitas Diponegoro Semarang dengan menggunakan hidrolik press. Air dan  minyak  ikan  patin  ( Pangasius hipophthalmus ) dipisahkan dengan menggunakan  corong  pisah.  Pemurnian minyak ikan patin ( Pangasius hipophthalmus )  menggunakan  metode Suseno,  yaitu  dengan  menambahkan adsorben  berupa  bentonite  sebanyak  3% dari jumlah minyak ikan patin ( Pangasius hipophthalmus )  yang  akan  dimurnikan
(Suseno et al. , 2014). Minyak ikan patin ( Pangasius  hipophthalmus )  kemudian disentrifuse  6500  rpm,  10 ͦ  C  selama  10 menit  sehingga  didapatkan  minyak  ikan patin ( Pangasius hipophthalmus ) murni.
Penelitian  pada  hewan  coba dilakukan  setelah  mendapat  ijin  dari
Komisi Etik Penelitian
Kesehatan (KEPK) Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro  Semarang  yaitu  pada  bulan Maret  2020  selama  21  hari.  Pelaksanaan intervensi terhadap hewan coba dilakukan di  Laboratorium  PSPG  PAU  UGM Yogyakarta  yaitu  tujuh  hari  dilakukan induksi pada tikus kelompok K+, P1, dan P2  agar  menjadi  tikus  anemia  defisiensi
besi  dengan  cara  diberi  pakan  standar yang  dihilangkan  zat  besi  kemudian dilanjutkan  intervensi  selama  14  hari (Saito,  2014).  Pakan  standar  yang digunakan  adalah  AIN  93  M  dengan komposisi  (%  berat  badan):  tepung jagung  46,75%,  kasein  14%,  dextrin 15,5%,  vitamin  mix  1%,  gula  5%,  solca floc-40  3,5%,  minyak  kedelai  1%, mineral  mix  0,3%,  L-Cystine  0,25%, choline  bitartrate  7%.  Kadar  Hb  diukur sebelum dan sesudah intervensi dan berat badan  ditimbang  setiap  hari  dari  awal hingga  akhir  penelitian.  Pengukuran kadar Hb menggunakan ELISA kit model Elx  800  ELISA  reader  dengan  panjang gelombang  450  nm  dan  unit  mg/mL (Astuti, Subagyo and Muis, 2016). Berat badan  diukur  dengan  timbangan  digital dengan ketelitian 0,00.
Analisis  data  dilakukan  melalui program  SPSS  versi  22  yaitu  dengan  uji Saphiro-wilk untuk mengetahui normalitas distribusi data dan Paired t-test untuk  mengetahui  perbedaan  kadar  hb dan  perubahan  berat  badan  sebelum  dan sesudah intervensi. Uji Anova dilanjutkan Post  Hoc  Bonferroni  dilakukan  untuk
analisis  perbedaan  pengaruh  pada  empat kelompok.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Data dalam penelitian ini merupakan data primer yang diambil dari tikus  wistar  jantan  normal  berjumlah  24 ekor  yang  diinduksi  menjadi  anemia
defisiensi  besi  kecuali  kelompok  K-. Penginduksian  dilakukan  dengan  cara diberi pakan standar yang dihilangkan zat besinya  selama  7  hari.  Pakan  standar yang digunakan  adalah AIN  93M.  Tikus menjadi anemia defisiensi besi jika kadar Hb ≤ 12 g/dL.
Kadar Hb
Tabel 1. Kadar Hb sebelum dan sesudah pemberian minyak ikan patin
Kadar Hb K- K+ P1 P2 p 1 Pre 14,24 ± 0,55 8,64 ± 0,22 8,67 ± 0,3 8,79 ± 0,13 0.001 Post 14,15 ± 0,38 b, c 8,27 ± 0,14 a, c, d 13,37 ± 0,18 a, b, d 13,92 ± 0,12 b, c 0.001 Δ -0.09 ± 0,19 -0,37 ± 0,18 4,7 ± 0.76 5,13 ± 0,15 0.001 p 0.001 0.001 0.001 0.001
a = p<0.05 dibandingkan dengan K-, b = p<0.05 dibandingkan dengan K+, c = p<0.05 dibandingkan dengan P1, d = p<0.05 dibandingkan dengan P2. Δ perubahan nilai pre dan post. Signifikan jika p < 0.05
Perubahan kadar hemoglobin sebelum  dan  sesudah  perlakuan  berbeda secara  signifikan  setelah  diuji  T-Test dengan p<0,05; p=0,00. Terdapat penurunan  rata-rata  kadar  hemoglobin pada  kelompok  K-  dan  K+  serta peningkatan  rata-rata  kadar  hemoglobin pada  kelompok  P1  dan  P2.  Penurunan kadar  hemoglobin  terjadi  karena  pakan standar  yang  digunakan  dalam  tiap kelompok (kecuali K-) tidak mengandung zat besi, namun ada penambahan zat besi berupa  minyak  ikan  patin  pada  P1  dan ferro sulfat pada P2. Hal ini menunjukkan
bahwa terdapat pengaruh yang signifikan pada  kadar  hb  tikus  yang  diberi suplementasi  berupa  minyak  ikan  patin (P1)  dan  ferro  sulfat  (P2).  Perubahan kadar  hb  dari  terendah  hingga  tertinggi adalah kelompok K+, K-, P1, dan P2.
Fu-Rong  Wang  et  al  tahun  2014 dalam  penelitiannya  melakukan  hal serupa dengan  cara  mengintervensi tikus model anemia defisiensi besi menggunakan melanin Fe dari tinta cumi- cumi.  Hasilnya  kadar  Hb  tikus  sebelum dan sesudah mendapat intervensi melanin Fe  meningkat,  yaitu  85,09  g/L±4,17
menjadi 127,95 g/L±6,68. Sejalan dengan penelitian  ini,  penelitian  Fu-Rong  Wang et  al  tahun  2014    juga  menunjukkan bahwa  tikus  kelompok  kontrol  positif
mengalami penurunan kadar Hb sehingga memperkuat  potensi  pemanfaatan  ikan dan hasil  laut  dalam  mengatasi masalah- masalah gizi mikro (Wang et al. , 2014). Perubahan Berat Badan
Tabel 2.  Perubahan berat badan sebelum dan sesudah pemberian minyak  ikan patin
Perubahan berat badan K- K+ P1 P2 p 1 Pre 183±6,43 1,83 ± 7,3 176 ± 3,09 181 ± 6,44 0.001 Post 197 ± 5,64 188 ± 8,11 188 ± 2,78 194 ± 6,38 0.001 Δ 13 ± 0,81 5,5 ± 1,04 12 ± 0,7 13 ± 0,63 0.001 p 0.001 0.001 0.001 0.001
a = p<0.05 dibandingkan dengan K-, b = p<0.05 dibandingkan dengan K+, c = p<0.05 dibandingkan dengan P1, d = p<0.05 dibandingkan dengan P2. Δ perubahan nilai pre dan post. Signifikan jika p < 0.05
Perubahan  berat  badan  tikus  sebelum perlakuan  dan  setelah  perlakuan  memiliki distribusi  data  normal  setelah  diuji  dengan menggunakan Saphiro Wilk dengan nilai p = 0,752.  Terdapat  perbedaan  perubahan  berat badan  yang  signifikan  antara  sebelum perlakuan dengan sesudah perlakuan setelah dilakukan uji menggunakan T-Test (P=0,00; P  <  0,05).  Semua  kelompok  mengalami peningkatan berat badan, namun yang paling rendah adalah peningkatan berat badan pada kelompok K+, yaitu sebesar 5,5 g ± 1,04. Hal ini menunjukkan bahwa keadaan kekurangan zat  besi  memiliki  pengaruh  terhadap perubahan berat badan. Kekurangan zat besi pada  dua  tahun  pertama  kehidupan,  dapat
mempengaruhi  pertumbuhan  ke  atas  dan kenaikan  berat  badan  sebab  zat  besi mempengaruhi  kadar  IGF-1  dalam  tubuh. IGF-1  diproduksi  sebagai  respon  terhadap stimulasi  hormon  pertumbuhan  (GH)  yang berperan  penting  dalam  tumbuh  kembang baik secara linier maupun peningkatan berat badan  (Soliman et  al. ,  2009;  Soliman,  De Sanctis and Kalra, 2014).
Hasil  uji  lanjutan  post  hoc  bonferroni menunjukkan  bahwa  perbedaan  rata-rata perubahan  berat  badan  tikus  sebelum  dan sesudah  perlakuan  tiap  kelompok  tidak mencapai  nilai  signifikan  karena  nilai p>0,05.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa perubahan  berat  badan  tikus  tiap  kelompok
tidak  ada  beda,  meskipun  berat  badan  tikus tiap  kelompok  sebelum  dan  sesudah perlakuan berbeda secara signifikan.
Kekurangan  zat  besi  dapat  menyebabkan ganguan  pertumbuhan  melalui  mekanisme IGF-1. Kadar IGF-1 penting dalam metabolisme zat besi dan sintesis protoporphyrin pada anak dan orang dewasa (Soliman et al. , 2009).

## SIMPULAN
Terdapat  pengaruh  secara  signifikan pemberian  minyak  ikan  patin  ( Pangasius hipophthalmus )  terhadap  kadar  Hb  dan perubahan  berat  badan  tikus  wistar  jantan model  anemia  defisiensi  besi  yang  telah diberi  minyak  ikan  patin  ( Pangasius hipophthalmus ).

## DAFTAR PUSTAKA
Astuti,  R.,  Subagyo,  H.  W.  and  Muis,  S.  F.
(2016) ‘Serum Transferrin Receptors of
Iron  Deficiency  Anemic  Rats  That Feeding Tempe Fortification Combination  Iron  and  Vitamin  A’,
Proceeding of International Seminar on Education Technology (IET) , pp. 293– 299.
Athe,  R.,  Rao,  M.  V.  V.  and  Nair,  K.  M. (2014)  ‘Impact  of  iron-fortified  foods on  Hb  concentration  in  children  (<10 years): A systematic review and meta- analysis  of  randomized  controlled trials’, Public  Health  Nutrition ,  17(3), pp.
579–586. doi: 10.1017/S1368980013000062. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan  (2013) Riset  Kesehatan Dasar  (RISKESDAS  2013) .  Jakarta:
Kementerian Kesehatan RI.
Burke, R. M., Leon, J. S. and Suchdev, P. S. (2014)  ‘Identification,  prevention  and treatment of iron deficiency during the first  1000  days’, Nutrients ,  6(10),  pp. 4093–4114. doi: 10.3390/nu6104093. Children,  U.  N.  (no  date)  ‘Focusing  on anaemia’.
Dewi, I. S. et al. (2017) ‘The effects of kinds of lumus and the storage period on the quality  of  patin  Wadi  based  on  the results  of  nutrient  tests’, AIP Conference  Proceedings ,  1844(May),
pp. 1–8. doi: 10.1063/1.4983430.
Djariah,  A.  S.  (2001) Pakan  Ikan  Alami . Yogyakarta: Kanisius.
Falkingham, M. et al. (2010) ‘The effects of oral iron supplementation on cognition in  older  children  and  adults:  A systematic  review  and  meta-analysis’,
Nutrition  Journal ,  9(1),  pp.  1–16.  doi:
10.1186/1475-2891-9-4.
Goddard, A. F. et al. (2011) ‘Guidelines for the  management  of  iron  deficiency anaemia’, Gut , 60(10), pp. 1309–1316. doi: 10.1136/gut.2010.228874.
Hastarini,  E.  and  Fardiaz,  D.  (2012) ‘Karakteristik  Minyak  Ikan  Dari Limbah  Pengolahan  Filet  Ikan  Patin’,
Agritech , 32(4), pp. 403–410.
Janus,  J.  and  Moerschel,  S.  K.  (2010) ‘Evaluation  of  anemia  in  children’, American  Family  Physician ,  81(12), pp. 1463–1471.
Kementerian  RI  (2018) Tabel  Komposisi Pangan Indonesia . Jakarta: Kementerian Kesehatan RI.
Lyden,  F.  (2016) Handling  Methods  of Laboratory Mice and Rats , Saint Louis University Biology Department . Swedish.
Saito, H. (2014) ‘Metabolism of iron stores’,
Nagoya  Journal  of  Medical  Science , 76(3–4), pp. 235–254. doi: 10.18999/nagjms.76.3-4.235.
Short,  M.  W.  and  Domagalski,  J.  E.  (2013)
‘Iron  deficiency  anemia:  Evaluation and  management’, American  Family Physician , 87(2), pp. 98–104. Soekirman (1995) Ilmu Gizi dan Aplikasinya Untuk  Keluarga  dan  Masyarakat . Jakarta:  Dirjen  Dikti  Departemen Pendidikan Nasional. Soetjiningsih  (1995) Tumbuh  Kembang
Anak . Jakarta: Buku Kedokteran.
Soliman,  A.,  De  Sanctis,  V.  and  Kalra,  S.
(2014)  ‘Anemia  and  growth’, Indian
Journal of Endocrinology and
Metabolism ,  18(Suppl  1),  p.  S1.  doi:
10.4103/2230-8210.145038.
Soliman, A.  T. et al. (2009)  ‘Linear  growth in children with iron deficiency anemia before and after treatment’, Journal of tropical pediatrics , 55(5), pp. 324–327. doi: 10.1093/TROPEJ/FMP011. Suseno,  S.  H. et  al. (2014)  ‘Purification  of Sardinella sp., oil: Centrifugation and bentonite adsorbent’, Advance Journal of Food Science and Technology , 6(1), pp. 60–67. doi: 10.19026/ajfst.6.3031. TW health O (2011) ‘The global prevalence of  anaemia  in  2011’, Who ,  pp.  1–48.
Available at: www.who.int. Wang,  F.  R. et  al. (2014)  ‘Effectiveness  of Treatment  of  Iron  Deficiency  Anemia in  Rats  with  Squid  Ink  Melanin-Fe’,
Royal Society of Chemistry , 5, pp. 123– 128. World Health Organization (2000) ‘General Guidelines  for  Methodologies  on Research and Evaluation of Traditional Medicine’, Geneva:  World  Health Ornganization .