p-ISSN : 2442-6032 e-ISSN :  2598-9979
DOI : 10.35311/jmpi.v9i2.349
Isolasi,  Identifikasi,  dan  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Fungi  Endofit  Daun Alpukat  ( Persea  Americana Mill)  Terhadap Pseudomonas  aeruginosa dan Staphylococcus aureus

## ABSTRAK
Alpukat  ( Persea  americana Mill)  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  memiliki kandungan  zat  antibakteri,  terutama  pada  daunnya.  flavonoid,  saponin,  dan  alkaloid merupakan  senyawa  aktif  pada  daun  alpukat  yang  dapat  mencegah  beberapa pertumbuhan bakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi, mengidentifikasi dan mengetahui aktivitas antibakteri dari isolat fungi endofit daun alpukat pertumbuhan P. aeruginosa dan S. aureus. Jenis penelitian ini, yaitu penelitian eksperimental, isolasi fungi endofit  dengan  daun  alpukat  diinokulasi  pada  media  PDA  yang  telah  ditambahkan kloramfenikol 0,005% dalam cawan petri dan diinkubasi pada suhu 25 o c selama 5-7 hari. Pengujian  aktivitas  antibakteri  menggunakan papper  disk dengan  metode  difusi agar.Penelitian ini menunjukkan bahwa pada daun alpukat muda menghasilkan 3 isolat yaitu isolat 1 diduga Trichoderma sp., isolat 2 diduga Rhizoctonia sp ., dan isolat 3 diduga Fusarium  sp .  Dari  hasil  yang  diperoleh,  disimpulkan  bahwa  pada  fungi  endofit  daun alpukat dari isolat 2, dan isolat 3 memberikan zona hambatan terhadap P. aeruginosa dan isolat 1, dan isolat 3 memberikan zona hambatan terhadap S. aureus.
Kata Kunci: Daun Alpukat, Antibakteri, Fungi Endofit, P. aeroginosa, S. aureus

## ABSTRACT
Avocado  ( Persea  americana Mill)  is  a  plant  that  contains  antibacterial  substances, especially  in  its  leaves.  Flavonoids,  saponins  and  alkaloids  are  active  compounds  in avocado  leaves  which  can  prevent  some  bacterial  growth.  This  study  aims  to  isolate, identify  and  determine  the  antibacterial  activity  of  avocado  leaf  endophytic  fungal isolates growing P. aeruginosa and S. aureus . This type of research, namely experimental research,  isolates  endophytic  fungi  using  avocado  leaves  inoculated  on  PDA  media which has been added with 0.005% chloramphenicol in a petri dish and incubated at a temperature of 25oC for 5-7 days. Antibacterial activity was tested using a paper disk with  the  agar  diffusion  method.  This  research  showed  that  young  avocado  leaves produced 3 isolates, namely isolate 1 was suspected to be Trichoderma sp ., isolate 2 was suspected to be Rhizoctonia sp ., and isolate 3 was suspected to be Fusarium sp. From the results  obtained,  it  was  concluded  that  the  endophytic  fungi  of  avocado  leaves  from isolate 2, and isolate 3 provided an inhibition zone against P. aeruginosa and isolate 1, and isolate 3 provided an inhibition zone against S. aureus .
Keywords: Avocado Leaves, Antibacterial, Endophytic Fungi, P. aeroginosa , S. aureus

## PENDAHULUAN
Sumber  daya  alam  Indonesia  sangat kaya,  seperti  yang  dapat  dilihat  dari banyaknya  jenis  tanaman  yang  digunakan dalam  pengobatan  tradisionalnya.  Bahan yang  mudah  diperoleh,  harga  yang  relatif terjangkau,  dan  juga  mudah  untuk  diolah membuat  peminat  obat  tradisional  semakin meningkat  di  kalangan  masyarakat  (Aminah et  al.,  2017).  Salah  satu  metode  pengobatan tradisional  yang  berkembang  di  Indonesia
adalah pemanfaatan  tanaman  yang  beraneka ragam.  Tanaman  herbal  saat  ini  banyak peneliti  yang  menggunakannya  sebagai alternatif  dalam  bidang  pengobatan,  yang mana  diantaranya  adalah  tanaman  alpukat (Muchyar et al., 2018). Di Indonesia salah satu tanaman  yang  melimpah  adalah  tanaman alpukat.  Data  produksi  buah-buahan  di Indonesia menunjukkan bahwa buah alpukat melimpah, dapat dibuktikan pada presentase produksi buah alpukat  meningkat 9,89% dari
Sitasi: Hairani, Z., Ratnah, St., & Pakadang, S. R. (2023). Isolasi, Identifikasi, dan Uji Aktivitas Antibakteri Fungi Endofit Daun Alpukat ( Persea Americana Mill) Terhadap Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus . Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, 9(2), 543-551. https://doi.org/10.35311/jmpi. v9i2.349
*Penulis Korespondensi: Zamra Hairani Email: zamra_hairani_farmasi_2019 @poltekkes-mks.ac.id
Jurnal Mandala Pharmacon
Indonesia is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License
Submitted: 13 Juni 2023 Accepted: 23 Desember 2023 Published: 3 1 Desember 2023
Zamra Hairani * , St. Ratnah, Sesilia Rante Pakadang Jurusan Farmasi, Poltekkes Kemenkes Makassar
609.049  ton  pada  tahun  2020  dan  mencapai 669.260 ton di tahun 2021 (BPS, 2021).
Mikroba endofit merupakan mikroorganisme menguntungkan yang hidup pada tanaman inang tanpa membuat tanaman itu terganggu (Desriani et al., 2014). Metabolit sekunder  dapat  dihasilkan  dari  mikroba endofit  yang  selain  mempunyai  manfaat terhadap tanaman inangnya, juga mempunyai manfaat untuk manusia. Mikroba endofit mempunyai aktivitas sebagai antioksidan,  menghambat  mikroorganisme patogen untuk tumbuh, dan juga menghambat  tumbuhnya  sel-sel  kanker (Hidayati et al., 2017).
Mikroba yang menghasilkan senyawa bioaktif  salah  satunya,  yaitu  fungi  endofit yang  mana  tumbuh  didalam  jaringan tanaman  dan  mengkolonisasi  pada  tanaman inangnya  utamanya  pada  di  bagian  daun, batang,  dan  akar.  senyawa  bioaktif  dan metabolit sekunder yang dihasilkan dari fungi endofit  identik  dengan  inangnya  (Fitriana  & Nurshitya, 2017).
Alpukat,  juga  dikenal  sebagai Persea americana Mill,  adalah  salah  satu  tanaman yang  memiliki  kandungan  zat  antibakteri, terutama  pada  bagian  daunnya.  flavonoid, saponin,  dan  alkaloid  merupakan  senyawa aktif  pada  ekstrak  daun  alpukat  yang  dapat mencegah  beberapa  pertumbuhan  bakteri (Anggorowati  et  al.,  2016).  Pada  penelitian Anggorowati  et  al.,  (2016)  membuktikan bahwa  ekstrak  daun  alpukat  memiliki  efek mencegah pertumbuhan bakteri S. aureus dan P. aeruginosa.
Bakteri S.  aureus ,  yang  merupakan gram-positif,  dapat  ditemukan  pada  bagian tubuh manusia seperti, pada kulit dan selaput lendir.  Infeksi  kulit  yang  disebabkan  oleh mikroorganisme tersebut seperti pembentukan abses, nekrosis, dan peradangan.  Bakteri  patogen Pseudomonas aeruginosa mampu  menginfeksi  manusia  jika sistem  imunnya  menurun.  Penyakit  infeksi kulit,  saluran  kemih,  mata,  dan  pernafasan merupakan  beberapa  infeksi  bakteri  yang disebabkan oleh Pseudomonas aeruginosa yang paling umum terjadi (Larasati, 2021)
Penelitian yang dilakukan Purnomo & Azzahra (2021) dalam konsentrasi 2%, 4%, 6%, 8%  dan  10%  ekstrak  etanol  daun  alpukat menunjukkan  efek  antibakteri  terhadap Pseudomonas  aeruginosa .  Pada  penelitian lainnya  Sarinastiti  (2018)  daun  alpukat  yang diekstrak  pada  alcohol  96%  memiliki kemampuan  untuk  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus . . Sehingga kemungkinan bahwa  isolat  mikroba  endofit  daun  alpukat juga  mempunyai  potensi  sebagai  antibiotik terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus  dan  P. aeruginosa . Berdasarkan pencarian studi literature,  belum  ada  laporan  penelitian sebelumnya  yang  melakukan  isolasi  fungi endofit  pada  daun  alpukat  ( Persea  americana Mill). Oleh sebab itu, tujuan dari penelitian ini untuk  mengisolasi,  mengidentifikasi,  dan menguji  aktivitas  antibakteri  fungi  endofit pada  daun  alpukat  ( Persea  americana Mill) terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosa.

## METODE PENELITIAN
penelitian  ini  yang  menggunakan yaitu jenis penelitian eksperimental dilakukan di Labolatorium Mikrobiologi Jurusan Farmasi  Poltekkes  Kemenkes  Makassar dengan  melalui  tahapan    dari  pengambilan serta  penyiapan  sampel  daun  alpukat, pengkulturan pada fungi endofit, mengisolasi sterta  memurnikan  isolat  fungi  endofit, hingga menguji aktivitas antibakterinya.

## Alat
Alat-alat  pada  penelitian  ini  yang digunakan yaitu, Batang pengaduk, Autoklaf ( GEA ),  Cawan  petri,  Cutter,  erlemeyer,  Deck glass,  Inkubator  ( Memmert ),  Gelas  kimia ( Pyrex ),  Gelas  ukur,  Gunting,  Label,  Jarum ose, Lampu spiritus, Laminal Air Flow (LAF) ( Esco ),  Objek  glass,  Mikroskop  ( Nikon ), Pencadang,  Oven,  Pinset,  Penggaris,  Rak tabung, Pipet tetes, Tabung reaksi, Timbangan analitik, dan Spoit.

## Bahan
Bahan pada penelitian ini menggunakan,  etanol  75%,  aquadest  steril, aluminum  foil,  daun  alpukat  muda  segar,
larutan  NaOCl  5%,  kloramfenikol,  media Nutriet  Agar  (NA)  (Merck),  media  Potato Dextrose  Agar  (PDA)  (Merck),  swab  steril, tissue,  dan  spiritus. P.  aeruginosa dan Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri  uji yang digunakan dalam penelitian ini.

## Sterilisasi Alat
Sebelum disterilkan dalam oven pada suhu 160 0 C selama dua jam untuk peralatan gelas dan tahan panas, sebelumnya peralatan dicuci  dengan  menggunakan  detergen  dan kemudian  dibilas  dengan  air  mengalir. Sedangkan alat yang tidak tahan panas tinggi dalam autoklaf selama 15 menit pada tekanan 1  atmosfer  dan  suhu  121 0 C,  dan  untuk  alat logam  didesinfeksi  dengan  lampu  pijar menggunakan  lampu  spiritus  (Pakadang  et al., 2021).

## Pembuatan Media Nutrient Agar (NA)
Untuk membuat media Nutrient Agar (NA), 20 gram media NA ditimbang terlebih dahulu,  lalu  dilarutkan  dengan  aquadest sebanyak  1  L  (20  g/1000  mL)  dalam Erlenmeyer.  Kemudian  dididihkan  diatas kompor  yang  panas  hingga  menghasilkan larutan  yang  jernih,  lalu  mensterilkannya dalam  autoklaf  dan  diatrur  dengan  suhu 121 0 C dan waktu selama 15 menit. Setelah itu, medium Nutrient Agar yang telah disterilkan dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  dalam kondisi masih cair.

## Pembuatan Media Potato Agar (PDA)
Pertama,  media  PDA  sebanyak  39 gram  dilarutkan  dalam  1  liter  aquadest  (39 g/1000  mL)  dalam  erlenmeyer.  Kemudian dididihkan diatas kompor yang panas hingga menghasilkan  larutan  yang  jernih.  lalu mensterilkannya  dalam  autoklaf  dan  diatrur dengan  suhu  121 0 C  dan  waktu  selama  15 menit.Kemudian,  media  PDA  yang  telah disterilkan dimasukkan ke dalam cawan petri yang  telah  disterilkan  sebelumnya  dan ditambahkan antibiotik kloramfenikol.

## Pengambilan dan Pengolahan Bahan Uji
Daun  Alpukat  ( Persea  americana Mill) segar yang digunakan berasal dari desa Taeng di  Kecamatan  Palangga,  Kabupaten  Gowa, Provinsi  Sulawesi  Selatan.  Daun  ini  diambil
dari  masih  yang  masih  muda.  Sebelum dilakukan sterilisasi permukaan secara aseptis,  daun  alpukat  terlebih  dicuci  dengan bersih pada air mengalir selama 10 menit
Isolasi  dan  Pemurnian  Fungi  Endofit  daun alpukat
Pengolahan  daun  alpukat,  yaitu sebelum  dilakukan  sterilisasi  permukaan secara  aseptis,  daun  alpukat  terlebih  dicuci dengan  bersih  pada  air  mengalir  selama  10 menit kemudian dilakukan sterilisasi permukaan dengan merendam secara berturut-turut kedalam alkohol 75% selama 1 menit, natrium hipoklorit (NaOCI) 5% selama 5  menit,  dan  alkohol  75%  selama  30  detik. Kemudian  dikeringkan  dalam  cawan  petri steril yang diberi kertas saring steril. Dipotong dengan  ukuran  ±  1  cm  di  atas  objek  gelas steril. Lalu potongan daun tersebut diinokulasikan  pada  media Potato  Dextrose Agar (PDA) yang telah ditambahkan kloramfenikol  0,005%)  dalam  cawan  petri. Diinkubasi pada suhu 25 o C selama 5-7 hari. Hasil  isolasi  fungi  endofit  yang  telah tumbuh  pada  media  PDA,  dimurnikan dengan  cara  menginokulasi  kembali  koloni tunggal  pada  media Potato  Dextrose  Agar (PDA) dan diinkubasi pada suhu 25 o C selama 5-7  hari.  Hasil  inkubasi  ditemukan  beberapa jenis kapang murni berdasarkan pengamatan warna  dan  bentul  koloni  pada  media Potato Dextrose  Agar (PDA).  Setiap  koloni  dengan warna  atau  bentuk  yang  berbeda  dikultur kembali  berulang-ulang  hingga  diperoleh isolat koloni murni fungi endofit.
Identifikas Fungi Endofit Penghasil

## Antibakteri
Hasil  isolat  fungi  endofit  selanjutnya diidentifikasi  berdasarkan  makroskopik  dan mikroskopik. Pengamatan makroskopik terdiri  atas  bentuk  dan  warna  koloni  dan mikroskopik meliputi (spora, konidia, bentuk dan  ukuran  hifa  dengan  mikroskop).  Fungi yang  didapat  diidentifikasi  dengan  cara mencocokkan  hasil  pengamatan  dengan pustaka.

## Penyiapan Bakteri Uji
Bakteri  uji  yang  telah  disiapkan diambil  1  ose  biakan  murni Pseudomonas aeruginosa dan S.  aureus diinokulasi  pada masing-masing media NA miring, kemudian diinkubasi  sekitar  1  ×  24  jam  di  suhu  37 o C. Hasil  peremajaan  biakan bacteria yang diperoleh,  diambil  1  ose,  dan  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  yang  isinya  aquadest steril  dengan  volume  10  ml,  lalu  dikocok sampai  homogen.  Diremajakan  1x24  jam kemudian  disuspensikan  sampai  diperoleh tingkat  kekeruhan  yang  setara  dengan standar Mc Farland 0,5.
Pengujian  Diameter  Zona  Hambatan  Fungi Endofit  Daun  Alpukat  (Persea  americana Mill)  Terhadap  Pertumbuhan  dari P. aeruginosa dan S.  aureus dengan  Metode Difusi Agar Menggunakan Paper disk
Pengujian diameter zona menggunakan  metode Paper  disk .  Fungi endofit  yang  digunakan  untuk  pengujian aadalah  hasil  peremajaan  5-7  dari  biakan fungi  endofit.  Fungi  endofit  dipanen  dari kemudian ditimbang 0,1 gram lalu disuspensi dalam  1  ml  Dimetil  Sulfoksida  (DMSO).
Blanko Paper  disk direndam  dalam  suspensi fungi  endofit  selama  30  menit  kemudian ditiriskan.  Media  Nutrient  Agar  (NA)  steril dituangkan  secara  aseptik  ke  dalam  cawan petri steril dan dibiarkan memadat. Suspensi Pseudomonas  aeruginosa dan staphylococcus aureus diinokulasikan  masing-masing  pada permukaan  media  NA  menggunakan  swab steril  secara  merata. Paper  disk ditempatkan pada  media  NA  yang  telah  diinokulasi dengan  bakteri  uji  pada  jarak  yang  kurang lebih sama satu sama lain, dilakukan inkubasi selama  1x24  jam  dengan  suhu  37°C  selama 1x24  jam.  Kemudian  dilakukan  pengukuran zona hambatan dengan melihat adanya zona bening  yang  terbentuk.  Pengujian  dilakukan dengan 4 kali ulangan (Pakadang et al., 2021).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari    hasil  pemurnian  diperoleh  3 isolat fungi endofit, isolat serta karakteristiknya  secara  makroskopik  dapat dilihat pada tabel 1. dan secara mikroskopiknya  dapat  dilihat  pada  tabel  2. sebagai berikut:
Tabel 1. Karakteristik Isolat Fungi Endofit Daun Alpukat ( Persea americana Mill) Secara Makroskopik
No. Isolat Deskripsi 1 Warna koloni awal putih kemudian berubah menjadi hijau hingga hijau tua, koloni bulat sebaran memusat dan berwarna kuning kecoklatan pada bagian bawah koloni 2 Warna koloni putih, tekstur permukaan seperti kapas tipis, koloni menyebar diseluruh permukaan agar 3 Warna koloni jingga dengan pinggiran putih, tekstur koloni halus dan ketika digores koloni menjadi berair, koloni menyebar mengikuti arah goresan
Isolat 1 Isolat 3 Isolat 2
Tabel 2. Karakteristik Isolat Fungi Endofit Daun Alpukat ( Persea americana Mill) Secara Mikroskopik
Isolat Hasil pengamatam Pustaka (yang diduga) Deskriptif
1 Trichoderma sp 1. Konidiofor 2. Konidia/ phialospore 3. Fialid 4. Cabang
konidiofor
2 Rhizoctonia sp
Hifa bersekat, memiliki percabangan hifa dengan sudut lancip tidak memiliki konida a. Hifa bersekat b. Percabangan hifa
3 Fusarium sp a.  Konidiofor,
panjang dan tidak bercabang b.  Mikrokonidia lonjong c. Makrokonidia panjang
Dari  penelitian  aktivitas  isolat  fungi endofit  daun  alpukat  ( Persea  americana Mill) terhadap
pertumbuhan
Pseudomonas
aeruginosa dan Staphylococcus  aureus yang dilakukan selama 1x24 jam pada suhu 37 o C di diperoleh hasil sebagai berikut:
Tabel 3. Uji  Aktivitas  Fungi  Endofit  Daun  Alpukat  ( Persea  americana Mill)  Terhadap Pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa Sampel Perlakuan Diameter Zona Hambatan (Mm) Inkubasi 1 × 24 Jam Pada Setiap Replikasi Total Rata-rata 1 2 3 Pseudomonas aeruginosa Isolat 1 (hijau) 0 0 0 0 0 Isolat 2 (Putih) 7 8 7 22 11 Isolat 3 (jingga) 8 8 8 24 8 Kontrol negatif 0 0 0 0 0
c 3 1 4 2 3 1 4 2 a b a b b c a b a c
Tabel 4. Uji Aktivitas Fungi Endofit Daun Alpukat (Persea americana Mill) Terhadap Pertumbuhan

## Staphylococcus aureus
Sampel Perlakuan Diameter Zona Hambatan (Mm) Inkubasi 1 × 24 Jam Pada Setiap Replikasi Total Rata-rata 1 2 3 Staphylococcus aureus Isolat 1 (hijau) 7 8 7 22 7,33 Isolat 2 (Putih) 0 0 0 0 0 Isolat 3 (jingga) 7 7 8 22 7,33 Kontrol negatif 0 0 0 0 0
Tabel 5.   Hasil  Analisis  Mann  Whitney  Aktivitas  Isolat  Fungi  Endofit  Daun  Alpukat (Persea americana Mill) Terhadap Pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa Sampel Perlakuan N Zona Hambatan Pertumbuhan Bakteri Mean  Std.dev  median  Min. Max Pseudomonas aeruginosa Isolat 1 (hijau) 3 0,00 0,000 0,00 0 0 Isolat 2 (Putih) 3 7,33 0,577 7,00 7 8 Isolat 3 (jingga) 3 8,00 0,000 8,00 b 8 8 Kontrol negatif 3 0,00 0,000 0,00 a 0 0
Superscript ɑ b : menunjukkan aktifitas yang tidak berbeda nyata dalam menghambat pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa
Tabel 6.   Hasil  Analisis  Mann  Whitney  Aktivitas  Isolat  Fungi  Endofit  Daun  Alpukat  ( Persea americana Mill) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus Sampel Perlakuan N Zona Hambatan Pertumbuhan Bakteri Mean Std.dev median Min. Max Staphylococcus Aureus Isolat 1 (hijau) 3 7,33 0,577 7,00 7 8 Isolat 2 (Putih) 3 0,00 0,000 0,00 0 0 Isolat 3 (jingga) 3 7,33 0,577 7,00 a 7 8 Kontrol negatif 3 0,00 0,000 0,00 b 0 0
Superscript ɑ b : menunjukkan aktifitas yang tidak berbeda nyata dalam menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus
Fungi  endofit  daun  alpukat  ( Parsea americana Mill)  yang  diperoleh  merupakan fungi  endofit  murni  berasal  dari  dalam jaringan  daun  alpukat.  Sebelum  dilakukan penanam pada media PDA daun alpukat telah
melalui tahap sterilisasi pada bagian permukaannya.  Sterilisasi  dilakukan  untuk menghilangkan  mikroorganisme  epifit  yang melekat  pada  permukaan  daun  dengan menggunakan  Alkohol  75%  dan  Natrium
Hipoklorit  5%.  Lapisan  membran  sel  dari mikroorganisme akan dirusak oleh Alkohol . Selanjutnya  alkohol  akan  melarutkan  dan mendenaturasi  protein  yang  terdapat  pada membran  sel  mikroorganisme.  Hal  tersebut akan  menyebabkan  sel  mikroorganisme menjadi lisis karena fungsi dari membran sel dalam  mengatur  transportasi  cairan  keluar dan kedalam sel terganggu. Biasanya alkohol dikombinasikan  dengan  Natrium  hipoklorit karena  kemampuan  alkohol  yang  masih sangat  terbatas  atau  berspektrum  sempit dalam mensterilkan permukaan organ tumbuhan.  Natrium  hipoklorit  diketahui mampu untuk menghambat pertumbuhan sel mikroorganisme  dengan  cara  menganggu proses  oksidasi  dari  enzim-enzim  penting yang mengakibatkan fungsi dari sel terganggu yang menyebabkan sel mikroorganisme tidak dapat tumbuh (Slaughter et al., 2019).
Fungi endofit yang berhasil ditumbuhkan dari daun alpukat yaitu 3 isolat, karakteristik secara makroskopik pada tabel 1. dan  karakteristik  secara  mikroskopik  pada tabel 2. Berdasarkan ciri tersebut diduga isolat 1  seperti Trichoderma  sp .  Berdasarkan pengamatan yang telah dilakukan Gusnawaty et  al.  (2014),  awalnya  koloni Trichoderma sp .memiliki  warna  yang  putih,  tetapi kemudian  warnanya  mengalami  perubahan menjadi  kehijau-hijauan.  Setelah  miselium dewasa,  itu  menjadi  hijau  tua  atau  hijau kekuningan,  utamanya  pada  area  yang konidianya  banyak.  Karakterisasi  jika  dilihat berdasarkan  mikroskopisnya  yakni  bentuk konidiofor, konidia dan fiali.
Untuk  isolat    2  diduga  seperti Rhizoctonia  sp. Karakter  makroskopis  dan mikroskopis  fungi Rhizoctonia  sp. termasuk konidia dan sambungan apit yang tidak ada, miselium  pada Rhizoctonia  sp. mengalami perkembangan  menjadi  kecoklatan  yang mana tadinya berwarna putih, dan hifa yang bersekat  dengan  percabangan  yang  tegak lurus (Sari, 2017).
Isolat  3  diduga  merupakan Fusarium sp . Hal ini sejalan dengan pernyataan Minarni &  Yusuf  (2021) secara  umum  morfologi
Fusarium spp. ditemukan memiliki makrokonidia panjang/ pendek,
mikrokonidia berbentuk lonjong dan konidiofor panjang/pendek. Dari Sutejo et al. (2008) mengungkapkan bahwa isolat Fusarium sp . sebagian besar koloni berwarna putih yang disertai  warna  ungu  atau  merah  di  bagian pusat.  Isolat  yang  memiliki  sporodokium banyak akan memiliki koloni yang berwarna oranye.
Isolat  fungi  Endofit  daun  alpukat selanjutnya pada bakteri uji yaitu P. aeruginosa dan Staphylococcus aureus dilakukan pengujian aktivitas antibakteri, bertujuan untuk melihat adanya  aktivitas  yang  dihasilkan  oleh antibakteri  terhadap  bakteri  yang  diujikan dan  menyeleksi  isolat  yang  kemungkinan berpotensi sebagai antibakteri.  Terbentuknya zona hambat atau zona bening pada medium NA  disekitar paper  disk isolat  fungi  daun alpukat ditandai sebagai hasil positif.
Hasil penelitian memperlihatkan diameter  zona  hambat  yang  terdapat  pada isolat  fungi  endofit  daun  alpukat terhadap pertumbuhan P. aeruginosa dan Staphylococcus aureus, dengan  menggunakan  metode Papper disk. pada isolat 2 fungi endofit daun alpukat yang  diujikan  pada  bakteri  uji  yaitu P. aeruginosa dengan  rata-rata  diameter  zona hambat    7,33  mm,  Isolat  3  rata-rata  8  mm. Sedangkan  pada  isolat  1  dan  kontrol  negatif yaitu  DMSO  tidak  terlihat  diameter  zona hambat.  isolat  1  fungi  endofit daun  alpukat yang  diujikan  pada  bakteri  uji  yaitu Staphylococcus aureus memiliki diameter zona hambat  rata-rata  7,33  mm,  Isolat  3  rata-rata 7,33 mm. Sedangkan pada isolat 2, dan kontrol negatif,  yaitu  DMSO  tidak  terlihat  diameter zona hambat.
Analisis  statistik  untuk  data  aktivitas isolat  fungi  endofit  daun  alpukat  ( Persea americana Mill) terhadap Pseudomonas aeruginosa .  Analisis  normalitas  menunjukkan ada  data  yang  berdistribusi  normal  dan  ada data yang berdistribusi tidak normal dengan nilai  sig.  0,000 ˂ 0,05.  Uji homogenitas menunjukkan  data  tidak  homogen  dengan nilai  sig.0,000 ˃ 0,05.  Berhubung  data  tidak normal maka pengujian dilakukan dengan uji
non  parametrik  yaitu  kruskal  Wallis  dan Mann  Whitney.  Dimana Analisis  Kruskal Wallis  menunjukkan  nilai  sig.0,002 ˂ 0,05  hal ini  menyatakan  bahwa  ada  pengaruh pemberian isolat fungi endofit terhadap daya hambat pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa . Selanjutnya  dilakukan  uji  analisis  mann whitney  menunjukkan  bahwa  isolat  1  non signifikan  dengan  control  negative  yang artinya tidak memberikan aktifitas antibakteri terhadap  bakteri Pseudomonas  aeruginosa . Selanjutnya ditemukan isolat 2 terhadap isolat 3 non signifikan (nilai sig. ˃ 0,05) artinya tidak berbeda  nyata  dalam  memberikan  potensi daya hambat terhadap Pseudomonas aeruginosa . Sedangkan isolat 2 terhadap isolat 1 dan  isolat 3 terhadap isolat 1berbeda nyata dalam menghambat pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa karena memiliki (nilai sig. < 0,05)
Analisis  statistik  untuk  data  aktivitas isolat  fungi  endofit  daun  alpukat  ( Persea americana Mill) terhadap Staphylococcus aureus . Analisis  normalitas  menunjukkan  ada  data yang berdistribusi normal dan ada data yang berdistribusi  tidak  normal  dengan  nilai  sig. 0,000 -0,637 ada data dengan sig ˃ 0,05 dan nilai sig ˂ 0,05. Uji homogenitas menunjukkan data tidak  homogen  dengan  nilai  sig.0,000 ˃ 0,05. Berhubung data tidak normal maka pengujian dilakukan  dengan  uji  non  parametrik  yaitu kruskal  Wallis  dan  Mann  Whitney.  Dimana Analisis  Kruskal  Wallis  menunjukkan  nilai sig.0,002 ˂ 0,05 hal ini menyatakan bahwa ada pengaruh  pemberian  isolate  fungi  endofit terhadap daya hambat pertumbuhan Staphylococcus  aureus .  Selanjutnya  dilakukan uji Mann Whitney dilakukan untuk mengetahui  perbedaan  potensi  antibakteri isolat fungi endofit satu dengan lainnya. Hasil analisis  mann  whitney  menunjukkan  bahwa isolat  2  non  signifikan  dengan  control negative  yang  artinya  tidak  memberikan aktifitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus  aureus .  Selanjutnya  ditemukan isolat 1 terhadap isolat 3 non signifikan (nilai sig. ˃ 0,05) artinya tidak berbeda nyata dalam memberikan  potensi  daya  hambat  terhadap Staphylococcus  aureus .  Sedangkan  isolat  2
terhadap isolat 1 dan  isolat 3 terhadap isolat 2 berbeda nyata dalam menghambat pertumbuhan Staphylococcus  aureus karena memiliki (nilai sig. < 0,05)

## KESIMPULAN
Berdasarkan  data  pengamatan  yang diperoleh  dari  penelitian  maka  dapat disimpulkan bahwa isolat fungi endofit daun alpukat  muda  menghasilkan  3  isolat  yaitu isolat 1 diduga Trichoderma sp., isolat 2 diduga Rhizoctonia  sp .,  dan  isolat  3  diduga Fusarium sp. .  Uji  aktivitas  antibakteri  isolat  fungi endofit daun alpukat muda memiliki potensi aktivitas  antibakteri,  yaitu  pada  isolat  2  dan isolat  3  terhadap  pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa, serta isolat 1 dan isolat 3  terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus memberikan zona hambatan .

## DAFTAR PUSTAKA
Aminah,  A.,  Tomayahu,  N.,  &  Abidin,  Z.
(2017). Penetapan Kadar Flavonoid Total Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah  Alpukat (Persea americana Mill.) Dengan Metode
Spektrofotometri UV-Vis. Jurnal Fitofarmaka  Indonesia , 4 (2),  226–230. https://doi.org/10.33096/JFFI.V4I2.265
Anggorowati, D. A., Priandini, G., & Thufail, T.  (2016).  Potensi  Daun  Alpukat  (Persea americana  MILLER)  Sebagai  Minuman Teh  Herbal  Yang  Kaya  Antioksidan. Industri  Inovatif :  Jurnal  Teknik  Industri , 6 (1), 1–7.
Desriani, D., Safira, U. M., Bintang, M., Rivai, A.,  &  Lisdiyanti,  P.  (2014).  Isolasi  dan
Karakterisasi Bakteri Endofit dari Tanaman Binahong dan Katepeng China. Jurnal Kesehatan Andalas , 3 (2). https://doi.org/10.25077/JKA.V3I2.33
Fitriana,  F.,  &  Nurshitya,  E.  (2017).  Aktivitas Antibakteri Ekstrak Isolat Fungi Endofit Dari  Akar  Mangrove  (Rhizophora apiculata Blume) Secara Klt Bioautografi.
As-Syifaa  Jurnal  Farmasi , 9 (1),  27–36. https://doi.org/10.56711/JIFA.V9I1.234
Gusnawaty,  H.,  Taufik,  M.,  Triana,  L.,  &
Asniah, A. (2014). Karakterisasi Morfologis Trichoderma Spp. Indigenus
Sulawesi  Tenggara. Jurnal  Agroteknos , 4 (2).
Larasati, D. A. (2021). Daya hambat ekstrak buah pare  (Momordica  charantia  L.)  terhadap pertumbuhan bakteri Pseudomonas aeruginosa  berdasarkan  studi  review  jurnal periode 2010-2020 . Wijaya Kusuma Surabaya University.
Minarni,  &  Yusuf,  H.  (2021).  Morphological characteristic of Fusarium spp. in several highlands  of  North  Sumatera. IOP
Conference Series: Earth and Environmental
Science , 782 , 32070. https://doi.org/10.1088/1755-
1315/782/3/032070
Muchyar,  D.  S.  R.,  Pangemanan,  D.  H.  C.,  & Supit,  A.  S.  R.  (2018).  Uji  Daya  Hambat Perasan  Daging  Buah  Alpukat  (Persea americana Mill.) terhadap Pertumbuhan
Bakteri  Staphylococcus  aureus. E-GIGI ,
6 (1).
https://doi.org/10.35790/eg.6.1.2018.1965
3
Pakadang,  S.  R.,  Marsus,  I.,  &  Ihsanawati,  I.
(2021). Antibacterial Activity of Endophytic Fungus Isolates of Mangrove Fruit (Sonneratia alba) Against Staphylococcus  aureus  and  Esherichia coli. Jurnal  Info  Kesehatan , 19 (1),  55–63. https://doi.org/10.31965/infokes.vol19.iss 1.416
Purnomo,  H.  Y.,  &  Azzahra,  F.  (2021).  Uji
Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Daun  Alpukat  (Persea  americana  Mill.) Terhadap Bakteri Pseudomonas Aeruginosa. Jurnal Kefarmasian Akfarindo ,
7–14. https://doi.org/10.37089/JOFAR.VI0.102
Sari,  O.  Y.  (2017). Ekstraksi  Tanin  Daun Kaliandra (Calliandra calothyrsus Meissner.)  dan  Pengaruhnya  terhadap Penghambatan  Rhizoctonia  sp.  secara  In Vitro . Institut Pertanian Bogor.
Sarinastiti, N. (2018). Perbandingan Efektivitas  Ekstrak  Daun  Dan  Biji Alpukat (Persea Americana Mill.) Sebagai Penghambat Pertumbuhan Bakteri Escherichia Coli Dan Staphylococcus  Aureus  Secara  In  Vitro.
Skripsi , 23.
Slaughter, R. J., Watts, M., Vale, J. A., Grieve, J.  R.,  &  Schep,  L.  J.  (2019).  The  clinical toxicology  of  sodium  hypochlorite. Clinical  Toxicology  (Philadelphia,  Pa.) ,
57 (5),
303–311. https://doi.org/10.1080/15563650.2018.15 43889
Statistik,  B.  P.  (2021). Statistik  Holtikultura 2021 . Badan Pusat Statistik.
Sutejo,  A.  M.,  Priyatmojo,  A.,  &  Wibowo,  A. (2008).  Identifikasi  Morfologi  Beberapa Spesies Jamur Fusarium. Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia , 14 (1), 7– 13.
Wahyu  Hidayati,  W.,  Fitri  Yuniarti,  F.,  Lulu Shofaya,  L.,  Sigit  Priyo  Utomo,  S.,  & Lutfika  Munaziah,  L.  (2017).  Screening And  Identification  Endophytic  Bacteria From  Indonesian  Bay  Leaves  (Eugenia polyantha  WIGHT)  With  Antibacteria Activity. Prosiding  Seminar  Nasional Berseri , 1 (2), 167–176.