Volume 3,  Nomer 1,  Tahun 2021, e-ISSN:268-5912
https://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/kmj
IDENTIFIKASI ESCHERICHIA COLI PADA MAKANAN DI RUMAH MAKAN DI LINGKUNGAN KAMPUS II UNIVERSITAS KHAIRUN
Identification of Escherichia coli in food in restaurant located at campus ii khairun university
Dedana Larasati Walid 1 , Andi Sitti Nur Afiah 2 , Ismail Rahman 3
1 Program Studi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran Universitas Khairun
2 Departemen Patologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Khairun
3 Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Khairun
*Email : dedanalw@gmail.com

## ABSTRACT
According  to  a  report  from  the  World  Health  Organization  (WHO),  more  than  a  third  of  the global  population  currently  suffers  from  health  problems  due  to  biologically  contaminated  food  and water.  In  Indonesia,  based  on  the  outbreaks  report  received  by  the  Food  and  Drug  Administration  in 2016,  6,136  people  were  exposed  to  food  suspected  of  causing  poisoning,  while  according  to  Basic Health  Research  in  2018  the  prevalence  of  diarrhea  in  North  Maluku  according  to  diagnosis  by health personnel  of  4.4%.  Contaminated  food  usually  contains  bacteria,  viruses,  parasites,  or  harmful chemicals.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  presence  of E.  coli  in  one  of the  side  dishes obtained from restaurants on campus II at Khairun University. This research is a qualitative descriptive study  using  laboratory  examinations.  The  results  showed  that  in  6  samples  found  3  positive  samples  of Escherichia coli bacteria and based on the calculation of the percentage of positive samples on food was 50%.
Keywords: Escherichia coli, Khairun University Campus II, Restaurant

## ABSTRAK
Menurut  laporan  dari World  Health  Organization (WHO),  lebih  dari  sepertiga  populasi  global  saat  ini menderita masalah kesehatan akibat makanan dan air yang terkontaminasi secara biologis. Di Indonesia, berdasarkan  laporan  Kejadian  Luar  Biasa  (KLB)  yang  diterima  Badan  Pengawasan  Obat  dan  Makanan (BPOM) pada tahun 2016 sebanyak 6.136 orang terpapar pangan  yang diduga  menyebabkan keracunan, sedangkan menurut Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) pada tahun 2018 prevalensi diare di Maluku Utara menurut  diagnosis  oleh  tenaga  kesehatan  sebesar  4,4%.  Makanan  yang  terkontaminasi  biasanya mengandung  bakteri,  virus,  parasit,  atau  zat  kimia  yang  berbahaya.  Tujuan  penelitian  ini  untuk mengetahui  keberadaan  E.coli  pada  salah  satu  lauk  makanan  yang  diperoleh  dari  rumah  makan  di lingkungan  kampus  II  Universitas  Khairun.  Penelitian  ini  adalah  penelitian  deskriptif  kualitatif  dengan menggunakan pemeriksaan  laboratorium. Hasil  menunjukkan pada 6 sampel ditemukan 3 sampel positif bakteri Escherichia coli dan berdasarkan perhitugan presentase sampel positif pada makanan adalah 50%.
Kata Kunci : Escherichia coli, Kampus II Universitas Khairun, Rumah Makan

## PENDAHULUAN
Sebagai mahluk hidup, manusia tidak bisa lepas dari makanan yang merupakan kebutuhan dasar. Untuk  mendapatkan  makanan  dan  minuman  yang  memenuhi  syarat  kesehatan,  maka  harus  diadakan pengawasan terhadap  higiene dan sanitasi  makanan dan  minuman, terutama diperuntukkan untuk umum seperti  restoran,  rumah  makan,  ataupun  pedagang  kaki  lima  dan  perlu  diingat  makanan  dan  minuman adalah media atau wadah dalam proses penyebaran penyakit ( Depkes, 2004).
Menurut  laporan  dari World  Health  Organization (WHO),  lebih  dari  sepertiga  populasi  global saat  ini  menderita  masalah  kesehatan  akibat  makanan  dan  air  yang  terkontaminasi  secara  biologis  (

## Volume 3,  Nomer 1,  Tahun 2021, e-ISSN:268-5912
https://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/kmj
Djukic et al., 2016). Di Indonesia, berdasarkan Laporan Kejadian Luar Biasa (KLB) yang diterima Badan Pengawasan  Obat  dan  Makanan  (BPOM)  pada  tahun  2016  sebanyak  6.136 orang  terpapar  pangan  yang diduga menyebabkan keracunan (BPOM, 2017). Sedangkan, menurut Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) pada tahun 2018 prevalensi diare di Maluku Utara menurut diagnosis oleh tenaga kesehatan sebesar 4,4 % (Kemenkes  RI,  2018).  Oleh  karena  itu,  penyakit  bawaan  makanan  masih  menjadi  masalah  kesehatan masyarakat  di  Indonesia  termasuk  di  Maluku  Utara  karena  kurangnya  higiene  perorangan  dan  sanitasi lingkungan  sehubungan  dengan  pengolahan  dan  penyajian  makanan  (Muhammad  Hakam  Arifin,  2019). Pengawasan  terhadap  sanitasi  dan  higiene  Tempat  Pengelolahan  Makanan  (TPM)  juga  harus  gencar dilakukan,  karena  TPM  memiliki  potensi  yang  besar  untuk  menimbulkan  gangguan  kesehatan  atau penyakit  bahkan  keracunan  akibat  dari  makanan  yang  dihasilkannya  (Kemenkes  RI,  2018)  Berdasarkan data  dan  informasi  profil  kesehatan  Indonesia,  di  Maluku  Utara  untuk  presentase  TPM  yang  memenuhi syarat kesehatan sebesar 44,67 % (Kemenkes RI, 2019).
Makanan  yang  terkontaminasi  biasanya  mengandung  bakteri,  virus,  parasit,  atau  zat  kimia berbahaya yang dapat menyebabkan lebih dari 200 penyakit berbeda, mulai dari diare hingga kanker. Di seluruh  dunia,  diperkirakan  sekitar  600  juta  atau  hampir  1  dari  10  orang  jatuh  sakit  setelah  makan makanan  yang  terkontaminasi.  Setiap  tahun,  mengakibatkan  420.000  kematian  (WHO,2020).  Adapun bakteri  patogen  sebagai  agen  penyebab  terbanyak  adalah Escherichia  coli (E.coli).  E.coli  merupakan penghuni normal usus, termasuk manusia dimana ada sebagian strain E.coli yang menyebabkan penyakit pada manusia dengan cara mekanisme yang berbeda (Reni Arisanti et al., 2018 ).
Universitas Khairun (Unkhair), adalah salah satu perguruan tinggi negeri di Maluku Utara yang memiliki 2 kampus dan 8 fakultas, di kampus II terdiri dari 7 fakultas  dan mempunyai mahasiswa yang aktif  sebanyak  7.131  orang.  Sebagian  besar  mahasiswa  di  kampus  II  setelah  melakukan  progres perkuliahan biasanya  memilih untuk beristirahat dan  makan di rumah  makan yang berada di lingkungan kampus, sebagian besar mahasiswa yang tinggal di daerah kampus memilih untuk makan di rumah makan tersebut dan hampir seluruh rumah makan belum memiliki sertifikat laik sehat (BAKP UNKHAIR, 2020)
Berdasarkan  uraian  latar  belakang  di  atas,  peneliti  tertarik  untuk  mengetahui  adakah  bakteri Escherichia coli pada makanan di rumah makan di lingkungan kampus II Universitas Khairun.

## METODE

## Desain, tempat, dan waktu
Penelitian  ini  menggunakan  desain  penelitian  deskriptif  kualitatif  dengan  menggunakan pemeriksaan laboratorium . Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biologi FKIP Kampus I  Universitas Khairun pada bulan Desember 2020 - Januari 2021.

## Alat dan bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  ialah autoclave, timbangan,  inkubator, petridish (cawan petri),  laminary  air  flow,  waterbath,  lampu  spiritus,  tabung  reaksi,  rak  tabung,  micro  pipet,  kaca  objek, erlenmeyer, mikroskop, tissue, label, ose steril, korek api. Bahan  yang digunakan  ialah sampel  makanan jadi,  aquadest  steril,  ec-broth,  eosin  methylene  blue  agar  (emba),  imvic  (indol,  methyl  red,  voges proskauer, sitrat), kovac’s, aquadest steril, safranin, alcohol, iodine, kristal violet

## Prosedur Kerja
Semua  peralatan  dicuci  bersih  terlebih  dahulu,  lalu  dikeringkan,  serta  disterilisasi  menggunakan autoklaf  selanjutnya  lakukan pengambilan  sampel dilakukan dirumah  makan  dalam  lingkungan  kampus dan jumlah sampel yang diambil yaitu sebanyak 6 sampel, pada salahsatu lauk makanan jadi secara steril, sampel diperoleh dari 9 rumah makan berdasarkan kriteria yang telah ditetapkan. Sampel dimasukan ke dalam  wadah  steril,  kemudian  dibawa  ke  Lab  Biologi  yang  berada  di  kampus  I  Akehuda  Universitas Khairun  selanjutnya  dilakukan  isolasi  bakteri  E.coli  dilakukan  menggunakan  metode  pengenceran. Masing-masing, untuk sampel cair ditanam sebanyak 1 mL ke media pemupuk EC broth . Untuk sampel makanan  jadi,  dihancurkan  terlebih  dahulu  dan  dilarutkan  dengan  aquadest  steril  kemudian  ditanam sebanyak 1 ml ke media EC broth . Selanjutnya diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C. Hasil inkubasi dari EC broth , diambil menggunakan ose steril lalu digoreskan atau menggunakan streakplate method di permukaan  media  EMBA.  Media  yang  telah  digores  tersebut  selanjutnya  diinkubasikan  pada  inkubator dengan  suhu  37°C  sampai  45°C  selama  24  sampai  48  jam.  Kemudian,  lakukan  pengamatan.

## Volume 3,  Nomer 1,  Tahun 2021, e-ISSN:268-5912
https://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/kmj
Hasil  inkubasi pada EMBA  di oleskan pada kaca objek dengan ose steril, selanjutnya diteteskan kristal violet pada olesan kemudian biarkan selama satu menit, lalu bilas objek dengan akuades dan tetesi olesan dengan  iodin,  selanjutnya  kaca  objek  di  putar-putar  kemudian  miringkan  ke  kanan  dan  kiri  untuk mengeringkan.  Setelah  kering  teteskan  kembali  iodin  dan  biarkan  selama  1  menit  dan  bilas  kembali dengan akuades. Selanjutnya teteskan alkohol pada olesan secara merata, putar-putar dan miringkan kaca objek  ke  kanan  dan  kiri.  Lanjutkan  penambahan  alkohol  sampai  mengalir  dari  kaca  objek.  Proses  ini harus  dilakukan  pada  kisaran  watu  5  –  10  detik.  Setelah  itu  segera  bilas  dengan  akuades  lalu  teteskan safranin dan biarkan selama kurang lebih 30 detik. Kemudian bilas dengan akuades lalu keringkan secara sperlahan dengan menggunakan tissu. Selanjutnya di amati dengan mikroskop. Setelah melakukan isolasi bakteri dari EMBA, selanjutnya diambil hasil isolasi bakteri dengan ose streil dan masukkan ke masing- masing  media  Indol,  Sitrat,  MR  dan  VP.  Lalu  media  diinkubasikan  pada  inkubator  dengan  suhu  37°C selama  24  sampai  48  jam.  Kemudian,  melakukan  pengamatan  terhadap  reaksi  dan  pertumbuhan  pada media.

## Populasi dan sampel
Populasi  dalam  penelitian  ini  adalah  semua  makanan  yang  dijual  pada  9  rumah  makan  yang berada  di  dalam  lingkungan  kampus  II  Unkhair.  Pada  penelitian  ini,  Teknik  pengambilan  sampel menggunakan purposive  sampling pada rumah  makan  yang  menjual  makanan  jadi.  Jumlah  sampel  pada penelitian  ini adalah 6 sampel  yang  memenuhi kriteria.  Kriteria  yang telah ditetapkan  yaitu  jarak rumah makan  dari  sumber  debu,  jarak  rumah  makan  dari  tempat  sampah,  jarak  rumah  makan  dari  saluran  air atau got, kondisi penyimpanan makanan, dan penggunaan alat khusus untuk mengambil makanan seperti penjepit,  garpu  atau  sendok.  Setelah  dibandingkan  rumah  makan  yang  memiliki  menu  makanan  yang sama, dipilih rumah makan yang paling beresiko dan menurut kriteria di atas sebagai tempat pengambilan sampel.

## Teknik pengumpulan data
Data  primer  yaitu  data  dari  hasil  uji  laboratorium  pada  makananan  dan  data  sekunder  yaitu diperoleh dari jurnal dan referensi terkait.

## Analisis data
Analisis  data  pada  penelitian  ini  menggunakan  rumus  perhitungan  presentase  dengan  penyajian data dari hasil pengamatan di laboratorium dan disajikan dalam bentuk tabel dan grafik.

## HASIL
Berdasarkan penelitian  yang telah dilakukan selama 1 bulan di laboratorium biologi FKIP kampus I Unkhair yaitu pada tanggal 16 Desember 2020 sampai 11 Januari 2021 pada 6 sampel makanan yang di peroleh  dari  6  rumah  makan  berbeda  yang  menjual  makanan  jadi  di  lingkungan  kampus  II  Unkhair, pengambilan  sampel  dilakukan  bertepatan  dengan  waktu  makan  siang,  setelah  diambil  dengan menggunakan  wadah  steril  selanjutnya  sampel  dihancurkan  dan  dilarutkan  dengan  menggunakaan aquadest 90 ml  lalu diisolasikan ke dalam  media EC broth lalu di  identifikasi, setelah diperoleh sampel positif  pada  media EC  broth maka  dilanjutkan  ke  media  EMBA  untuk  diisolasi  dengan  maksud  untuk mengidentifikasi  adanya  kontaminasi  E.coli,  sampel  yang  positif  terkontaminasi  dilanjutkan  dengan pewarnaan gram dan uji biokimia. Adapun hasil yang diperoleh adalah sebagai berikut :
Tahapan penelitian dan pengamatan di mulai dari tahap pemupukan sampel dengan menggunakan media pemupuk yaitu EC broth , EC broth digunakan untuk diferensiasi fekal dan non fekal coliform serta sebagai  uji  konfirmasi  E.coli  pada  sampel.  Berdasarkan  hasil  pengamatan,  pada  media EC  broth menunjukkan  bahwa  pengujian  sampel  yang  dilakukan  sebanyak  tiga  kali  ditemukan  positif  adanya pertumbuhan  pada  sampel  1,  2,  3  dan  4,  yang  ditandai  dengan  kekeruhan  dan  gelembung  pada  tabung durham sedangkan pada sampel 5 dan 6 tidak terjadi pertumbuhan. Dengan demikian, sampel yang keruh dan bergelembung dilanjutkan untuk uji pada EMBA sebagai media selektif. Hasil pengamatan pada EC broth dapat dilihat pada tabel 1dan gambar 1 bawah ini :
Volume 3,  Nomer 1,  Tahun 2021, e-ISSN:268-5912
https://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/kmj
Tabel 1. Isolasi dan Identifikasi Sampel pada EC broth
Sampel Kekeruhan Gelembung Keterangan Sampel 1 + + Tinjau Sampel 2 + + Tinjau Sampel 3 + + Tinjau Sampel 4 + + Tinjau Sampel 5 - - Tidak dapat ditinjau Sampel 6 - - Tidak dapat ditinjau
Gambar 1. Isolasi sampel pada EC broth
Setelah  dilakukan  isolasi  dan  identifikasi  sampel  pada EC  broth selanjutnya  sampel  yang  positif dari EC  broth dilanjutkan  pada  uji  EMBA  untuk  diisolasikan.  Sampel  dikatakan  positif  adanya kontaminasi bakteri E.coli ditandai dengan warna hijau metalik atau metalic green yang mengkilat karena media  EMBA  merupakan  media  selektif  yang  digunakan  untuk  mengidentifikasi  berbagai  jenis  bakteri salahsatunya adalah E.coli. Berdasarkan hasil pengamatan, pada media EMBA menunjukkan bahwa pada sampel 2, 3 dan 4 koloninya berbentuk bulat, cembung, tepi rata, mengkilat dan berwarna hijau, temuan ini diduga sebagai kontaminasi dari bakteri E.coli, sedangkan pada sampel 1 tidak terdapat pertumbuhan pada  media  EMBA  sehingga  sampel  tidak  dapat  ditinjau.  Hasil  pengamatan  pada  EMBA  dapat  dilihat pada tabel 2 dan gambar 2 bawah ini :
Tabel 2. Isolasi dan Identifikasi E.coli pada EMBA Sampel Bentuk Warna Tepi Elevasi Aspek koloni Sampel 1 Tidak dapat ditinjau Tidak dapat ditinjau Tidak dapat ditinjau Tidak dapat ditinjau Tidak dapat ditinjau Sampel 2 Bulat Hijau Rata Cembung Mengkilat Sampel 3 Bulat Hijau Rata Cembung Mengkilat Sampel 4 Bulat Hijau Rata Cembung
Mengkilat
Gambar 2. Koloni E.coli pada EMBA
Setelah  ditemukan  adanya  kontaminasi  bakteri  E.coli  pada  media  EMBA  selanjutnya  dari masing-masing sampel dilakukan uji pewarnaan gram untuk  mengetahui sifat gram dari  bakteri. Bakteri E.coli  adalah  bakteri  gram  negatif  berbentuk  batang  dan  berwarna  pink  atau  merah  muda.  Pewarnaan gram  menggunakan  larutan  aquadest,  alcohol,  safranin,  lugol  dan  kristal  violet.  Berdasarkan  hasil pengamatan pada sampel  yang dilakukan uji  pewarnaan ditemukan pada sampel 2, 3 dan 4 tergolong ke dalam  kelompok  bakteri  gram  negatif,  sedangkan  pada  sampel  1  uji  pewarnaannya  tidak  dapat  ditinjau. Hasil  uji  pewarnaan  gram  dapat  dilihat  pada  tabel  3  dan  gambar  3  di  bawah  ini  :

## Volume 3,  Nomer 1,  Tahun 2021, e-ISSN:268-5912
https://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/kmj
Tabel 3. Morfologi Koloni Bakteri E.coli pada Pewarnaan Gram
Sampel Bentuk Warna Kelompok Bakteri Sampel 1 Tidak dapat ditinjau Tidak dapat ditinjau Tidak dapat ditinjau Sampel 2 Batang Pendek Pink Gram Negatif Sampel 3 Batang Pendek Pink Gram Negatif
Sampel 4
Batang Pendek Pink Gram Negatif
Gambar 3. Bakteri E.coli pada Pewarnaan Gram
Setelah  dilakukan  uji  pewarnaan  gram,  maka  pengujian  berikutnya  adalah  Uji  Biokimia.  Sampel yang  positif  pada  EMBA  dilanjutkan  pengujiannya  pada  uji  biokimia  untuk  mengetahui  sifat-sifat  atau karakteristik  suatu  bakteri  dengan  melakukan  inokulasi  pada  beberapa  media  tertentu.  Uji  biokimia  ini menggunakan  uji  IMVIC.  Berdasarkan  hasil  pengamatan,  pada  uji  biokimia  untuk  sampel  1,  2  dan  3 dinyatakan positif pada uji MR, indol, sitrat, sedangkan pada uji VP dinyatakan negatif. Dengan demikian berdasarkan  hasil  pengamatan  pada  beberapa  uji  biokimia  dapat  diduga  bahwa  bakteri  E.coli  dapat tumbuh pada media yang ditandai dengan adanya perubahan warna, produksi indol, produksi sitrat. Hasil pengamatan uji biokimia pada sampel dapat dilihat pada tabel 4 dan gambar 4 di bawah ini :
Tabel 4. Isolasi dan Identifikasi E.coli pada Uji Biokimia
Sampel MR VP Indol Sitrat Keterangan Sampel 2 + - + + Tinjau Sampel 3 + - + + Tinjau Sampel 4 + - + IH + Tinjau Keterangan : + :  Positif
- :  Negatif
IH :  Indole warna Hitam
(a) (b) (c)
(d)
Gambar 4. Hasil Uji Positif (a). MR, (b) VP, (c) Indol, (d) Sitrat
Untuk  mengetahui  presentase  jumlah  bakteri  positif  dan  negatif  pada  sampel  makanan  maka dilakukan  perhitungan  dengan  menggunakan  rumus  perhitungan  presentase,  hasil  yang  diperoleh  yaitu jumlah sampel positif pada sampel 2, 3, 4 didapatkan angka presentasenya sebesar 50 % dari total sampel, sedangkan  pada  sampel  negatif  yaitu  sampel  1,  5,  6  didapatkan  angka  presentasenya  sebesar  50%  dari total  sampel.  Dengan  demikian,  secara  keseluruhan  jumlah  presentase  sampel  positif  dan  negatif

## Volume 3,  Nomer 1,  Tahun 2021, e-ISSN:268-5912
https://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/kmj
Presentase Jumlah Bakteri pada Sampel
Makanan
50% 40% 30% 20% 10%
0% Sampe l Positif Sampe l Negati f Sampel Positif Sampel Negatif
berdasarkan  perhitungan  presentase  dinyatakan  sebanding  yaitu  50  %.  Hal  ini  dapat  dilihat  pada  grafik dibawah ini :

## PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  di  atas  dapat  diketahui  bahwa  pengujian  tiap  sampel  dilakukan sebanyak tiga kali dan ditemukan  bahwa pada sampel 2, 3, 4 dinyatakan positif  bakteri E.coli pada tiga kali  pengujiannya  sedangkan  pada  sampel  1,  5,  6  dinyatakaan  negatif  bakteri  E.coli  pada  tiga  kali pengujiannya.
6 sampel yang diambil dan dilakukan pemupukan selanjutnya diisolasi dengan media pemupuk yaitu EC broth dan diinkubasi selama 24 jam. Setelah diinkubasi ditemukan positif adanya pertumbuhan pada sampel 1, 2, 3, 4 yang ditandai dengan perubahan tabung reaksi menjadi keruh dan di dalam tabung durham  terdapat  gelembung.  Hal  ini  sejalan  dengan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  pada  kantin  rumah sakit,  melaporkan  bahwa sampel  yang diperoleh  dari kantin rumah sakit X ditemukan 11 sampel positif adanya  pertumbuhan  dan  sampel  dari  kantin  rumah  sakit  Y  juga  ditemukan  8  sampel  positif  adanya pertumbuhan pada EC broth (Sari Dewi et  al., 2016). Menurut  Lal & Cheepthman (2007) apabila terjadi perubahan dari  jernih  menjadi keruh dan terdapat  gas di dalam tabung  durham  maka  menunjukkan hasil positif terhadap bakteri coliform khususnya E.coli.
Setelah  dilakukan  pengujian  pada EC  broth ,  kemudian  sampel  yang  dinyatakan  positif  adanya pertumbuhan  dilanjutkan  dengan  pengujian  pada  EMBA  sebagai  media  selektif.  Berdasarkan  hasil pengujian pada sampel 1,2,3 dan 4 di temukan sampel 2, 3, 4 positif adanya pertumbuhan E.coli dengan ciri  khas  yaitu  berwarna  hijau  metalik/ metalic  green .  Hal  ini  sejalan  dengan  hasil  penelitian  yang dilakukan  di  rumah  potong  ayam  Kabupaten  Lamongan,  melaporkan  bahwa  hasil  dari  isolasi  sekunder pada 26 sampel didapatkan 6 sampel  yang positif terdapat  koloni  berwarna  hijau  metalik (Kartikasari et al .,2019).  Menurut  Sari et  al .,  (2019)  media  EMBA  mengandung  laktosa,  bila  dalam  biakan  terdapat bakteri anggota genus Escherichia maka asam yang dihasilkan dari fermentasi laktosa akan menghasilkan warna  koloni  yang  spesifik  untuk  bakteri  anggota  genus  Escherichia  yaitu  koloni  yang  berwarna  hijau dengan  kilap  logam  sedangkan  Coliform  non  fekal  lain  yang  dapat tumbuh  koloninya  berwarna  cokelat menunjukkan  adanya  Enterobacter  aerogenes  ataupun  koloni  yang  tidak  berwarna.  Hasil  deteksi menunjukkan  bahwa  koloni  berwarna  hijau  metalik,  hal  ini  berarti  bakteri  tersebut  diduga  anggota Escherichia.
Selanjutnya  setelah  diperoleh  hasil  pengamatan  dari  EMBA,  sampel  yang  positif  atau  diduga sebagai  E.coli  dilanjutkan  dengan  uji  pewarnaan  gram.  Berdasarkan  data  yang  di  peroleh  pada  tabel isolasi dan  identifikasi E.coli pada uji  biokimia, pada sampel 2, 3, 4 ditemukan bahwa bakteri termasuk golongan gram negatif yang ditandai dengan warna pink dan batang pendek. Hal ini sejalan dengan hasil penelitian yang melaporkan bahwa sampel dari rumah sakit Y menunjukkan hasil pengujian sampel pada
https://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/kmj
pewarnaan  gram  yaitu  menghasilkan  gram  negatif  (Sari  Dewi et  al. ,  2016)  dan  pada  penelitian  lainnya yang  melaporkan  bahwa  hasil  dari  pewarnaan  gram  menunjukkan  bahwa  E.coli  berwarna  merah  muda, berbentuk  batang  pendek  atau  golongan  bakteri  gram  negative  (Ulfah et  al .,2017).  Menurut  Post  dan Songer  (2005)  Escherichia  coli  adalah  bakteri  gram  negatif.  Pada  sel  bakteri  gram  negatif  alkohol meningkatkan porositas dinding sel dengan  melarutkan lipid  lapisan  luar. Oleh karenanya  larutan kristal violet  lebih  mudah  untuk  dihilangkan  dari  lapisan  peptidoglikan  yang  tidak  tertaut  silang  dengan  kuat, maka efek pencucian alkohol memfasilitasi pelepasan dari kristal violet yang tidak terikat, dan membuat sel-sel  menjadi  kehilangan  warna  karena  hanya  sel  sel  gram  negatif  yang  dapat  mengalami  kehilangan warna sehingga sel-selnya menyerap pewarna tandingan.
Kemudian setelah dilakukan uji pewarnaan gram maka dilanjutkan dengan uji biokimia, sampel yang  dinyatakan  positif  pada  uji  EMBA  yaitu  sampel  2,  3,  4  dilanjutkan  pengujiannya  ke  uji  IMVIC (Indol, MR, VP, Sitrat). Berdasarkan data yang di peroleh dari tabel isolasi dan identifikasi E.coli pada uji biokimia menunjukkan bahwa pada sampel 2, 3, 4 untuk uji MR dinyatakan positif yang ditandai dengan perubahan  warna  dari  warna  kuning  menjadi  warna  merah.  Hal  ini  sejalan  dengan  hasil  penelitian  yang melaporkan  bahwa  hasil  pengamatan  pada  uji  MR  pada  isolate  bakteri  E.coli  adalah  positif  yang ditujukan dengan larutan berwarna merah (Sari Dewi et al .,2016). Menurut Chatim dan Surahman (2002) metyl  red merupakan  indikator  yang  memperlihatkan  penurunan  dari  pH  karena  terbentuknya  asam sebagai akibat fermentasi pada medium biakan yang mengandung glukosa yang di dalamnya bakteri telah tumbuh. Bakteri yang tumbuh dan membentuk banyak asam adalah bakteri E.coli sekaligus menunjukkan hasil positif terhadap metyl red , warna merah dapat terlihat jika pH 5 atau asam. Uji  berikutnya  adalah  uji Voges  Proskauer (VP),  berdasarkan  data  yang  di  peroleh  dari  tabel isolasi  dan  identifikasi  E.coli  pada  uji  biokimia  menunjukkan  bahwa  pada  sampel  2,  3,  4  untuk  uji  VP dinyatakan  negatif  yang  ditandai  dengan  tidak  adanya  perubahan  dari  warna  larutan.  Hal  ini  sejalan dengan  hasil  penelitian  yang  melaporkan  bahwa  uji  VP  yang  dilakukan  pada  pengamatan  menunjukkan hasil negatif karena tidak adanya perubahan warna terhadap larutan (Sari Dewi et al .,2016) dan hasil ini juga  didukung  oleh  pengamatan  lainnya  yaitu  uji  VP  negatif  untuk  E.coli  karena  E.coli memfermentasikan  karbohidrat  menjadi  produk  asam  dan  tidak  menghasilkan  produk  netral  seperti asetonin (Rahayu dan Gulimar, 2017). Menurut  Hemraj (2013) uji VP  yang  merupakan pengujian untuk mendeteksi  asetoin dalam kultur bakteri. Pengujian  ini dilakukan dengan penambahan alpha-naftol pada media  VP  yang  telah  diinokulasikan  bakteri.  Hasil  positif  akan  menunjukkan  perubahan  warna  menjadi merah, sedangkan warna kuning-coklat menunjukkan hasil negatif.
Uji  berikutnya  adalah  uji  indol,  berdasarkan  data  yang  diperoleh  pada  tabel  isolasi  dan identifikasi  E.coli  pada  uji  biokimia  menunjukkan  bahwa  pada  sampel  2,  3,  4  dinyatakan  positif,  yang ditandai dengan adanya cincin berwarna merah pada media. Hal ini sejalan dengan hasil penelitian yang melaporkan  bahwa uji  indol diperoleh  hasil  berupa permukaan  medianya  berubah  menjadi warna  merah setelah  diberikan  tetesan  reagen  kovaks,  hal  ini  menunjukkan  hasil  yang  positif  serta  pada  bagian  dasar atau bagian bawah memiliki warna yang transparan (Khakim dan Rini, 2018). Menurut Hemraj (2013) uji indol  dapat  mengidentifikasi  kemampuan  bakteri  menghasilkan  indol  dengan  menggunakan  enzim tryptophanase.  Produksi  indol  di  dalam  media  kemungkinan  karena  adanya  tryptophan.  Tryptophan merupakan  asam  amino  esensial,  yang  teroksidasi  oleh  beberapa  bakteri  yang  dapat  mengakibatkan pembentukan  indol,  asam  piruvat,  dan  amonia.  Cincin  dengan  mudah  dapat  memudar  karena  gerakan yang tiba-tiba dan dapat menyebabkan pecahnya cincin sehingga menimbulkan adanya perubahan warna (Rahayu dan Gulimar, 2017).
Uji  selanjutnya  adalah  uji  sitrat,  berdasarkan  data  yang  diperoleh  pada  pada  tabel  isolasi  dan identifikasi  E.coli  pada  uji  biokimia  menunjukkan  bahwa  pada  sampel  2,  3,  4  dinyatakan  positif,  yang ditandai dengan perubahan warna pada media dari warna hijau menjadi biru. Hal ini sejalan dengan hasil penelitian  yang  melaporkan  bahwa  sampel  dari  rumah  sakit  Y  positif  terhadap  uji  sitrat  (Sari  Dewi et al .,2016).  Menurut  Chatim  dan  Surahman  (2002)  yaitu  bakteri  anggota  genus  Escherichia  akan  tetap menghasilkan  perubahan  warna  karena  anggota  spesies Escherichia tetap  dapat  tumbuh  dengan menggunakan sitrat dalam media sebagai sumber karbon
Sampel  yang  diperoleh  dari  tiap  rumah  makan  yang  berbeda  diambil  dan  di  uji  dengan  tujuan  dapat menunjukkan  keadaan  dari  suatu  rumah  makan,  setiap  rumah  makan  yang  menjual  makanan  jadi mempunyai  cara  yang  berbeda  dari  pengelolahan,  penyimpanan  sampai  dengan  penyajiannya.  Menurut Marsanti  dan  Widiarini  (2018)  tindakan  higiene  dan  sanitasi  bukan  hanya  pemilihan  bahan  baku  pangan yang  menjadi  faktor penting tetapi  bagaimana tahapan atau proses pengelolahan dan alat  yang digunakan hal  ini  untuk  memastikan  kualitas  dan  keamanan  proses  sehingga  makanan  yang  dihasilkan  aman  dan terhindar  dari  kontaminasi  baik  secara  fisik,  kimia  dan  mikrobiologis.  Berdasarkan  pengamatan  langsung
https://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/kmj
yang  dilakukan  peneliti  pada  6  rumah  makan  menunjukkan  bahwa  keadaan  rumah  makan  pada  sampe positif yaitu sampel 2, 3 dan 4 proses pengelolahannya dilakukan langsung di rumah makan, lokasi rumah makan  sampel  3  dekat  dengan  tempat  pembuangan  sampah  dan  lokasi  rumah  makan  sampel  2,  4  tidak berdekatan dengan tempat pembuangan sampah dan sampel 2 dan 4 lokasi rumah makannya berada tepat di pinggir jalan, tempat penyimpanannya menggunakan wadah dengan penutup dan ada yang tidak, serta alat yang digunakan untuk mengambil makanan ada yang digunakan bersamaan dengan menu makanan lainnya dan  ada  yang  menggunakan  tangan.  Sedangkan  keadaan  rumah  makan  pada  sampel  1,  5  dan  6  proses pengelolahannya  di  lakukan  langsung  di  rumah  makan,  lokasi  rumah  makan  tidak  berdekatan  dengan tempat  pembuangan  sampah  dan  lokasi  sampel  1  berada  di  pinggir  jalan,  tempat  penyimpanan menggunakan  wadah  dengan  penutup  dan  ada  yang  tidak  serta  alat  pengambil  makanan  ada  yang digunakan  bersamaan  dan  ada  yang  tidak.  Hasil  penelitian  ini  dapat  dikaitkan  dengan  yang  melaporkan bahwa  pengujian  sampel  yang  dilakukan  di  beberapa  rumah  makan  di  Kecamatan  Syiah  Kuala menunjukkan keadaan rumah makan pada sampel 1, 2, 4, 5, dan 6 berdekatan dengan tempat pembuangan sampah  yang  diletakkan  di  pinggir  jalan.  Selesai  pemanggangan  sampel  selanjutnya  diletakkan  pada  rak penjualan  dan  siap  untuk  dijual,  biasanya  sampel  diletakkan  dalam  waktu  yang  lama  hingga  sore  jika belum  habis dibeli oleh konsumen. Rak penjualan yang digunakan  juga terbuka dan tidak ditutup dengan rapi serta tidak terdapat alat pengusir lalat sehingga banyak dihinggapi lalat dan debu yang masuk melalui udara  sehingga  mikroba  dapat tumbuh  dan  berkembang  dengan  cepat.  Sedangkan  keadaan  rumah  makan pada sampel 3 dan 7, rak penjualan yang digunakan sebagai tempat penyimpanan ayam panggang tertutup dengan kain penutup dan terdapat kipas angin sebagai alat pengusir lalat. Kontaminasi dapat terjadi melalui lingkungan  yang  kotor,  udara,  dan  jalan  yang  banyak  dilalui  oleh  masyarakat  (Ulfah et  al., 2017)  Oleh karena itu, hasil pengamatan di atas dapat diduga menjadi sebab terjadinya kontaminasi E.coli pada sampel akibat adanya debu, atau vector seperti lalat dan kontak secara langsung melalui tangan atau tidak langsung yaitu  berupa  penggunaan  alat  pengambil  makanan  pada  makanan  lainnya  yang  digunakan  secara bersamaan.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  yang  dilakukan  oleh  peneliti  yaitu  ditemukan  bahwa  3  sampel terkontaminasi bakteri E.coli dengan presentase dari total sampel yang positif yaitu 50 %. Hal ini berbeda dengan  hasil  pengamatan  yang  dilakukan  oleh  ulfah  (2017)  melaporkan  bahwa  sampel  yang  tercemar E.coli  dengan  presentase  dari  total  sampel  yang  positif  yaitu  sekitar  71  %  (Ulfah et  al., 2017).  Hal  ini menunjukkan bahwa hasil penelitian yang dilakukan oleh peneliti tidak terlalu bermakna karena dari total sampel secara presentase sampel yang positif dan negatif dikatakan sebanding.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  diperoleh  kesimpulan  bahwa  dari  6  sampel  yang telah  di  lakukan  pengujian  di  dapatkan  3  sampel  yang  positif  terdapat  bakteri Escherichia  coli dengan presentase sebesar 50 %.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  pembahasan  dan  kesimpulan  dalam  penelitian  ini  maka  penulis  memberikan beberapa saran  yaitu diharapkan bagi semua pengelola  rumah makan  yang berada di lingkungan kampus II  Universitas  Khairun      lebih  memperhatikan  tempat  penyimpanan  makanan  dan  alat  yang  digunakan pada  saat  pengambilan  makanan,  bagi  pihak  Universitas  Khairun  diharapkan  dapat  melakukan  evaluasi terhadap  perizinan  untuk  mengelola  rumah  makan  di  lingkungan  kampus  dengan  menambahkan  salah- satu  persyaratan  seperti  sertifikat  laik  sehat,  bagi  pihak  Puskesmas  dan  Dinas  Kesehatan  Kota  Ternate diharapkan dapat melakukan pengawasan lebih terhadap TPM khususnya di seluruh kampus yang berada di Kota Ternate dan diharapkan dapat meneliti jenis dan volume bakteri coliform lainnya dalam makanan

## UCAPAN TERIMA KASIH
Dengan  selesainya  penelitian  ini  saya  ucapkan  terima  kasih  kepada  semua  pihak  yang  telah berkontribusi, sehingga penelitian dapat terlaksana dengan baik.
https://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/kmj

## DAFTAR PUSTAKA
Afrianti  Rahayu  S,  Muhammad  Hidayat Gumilar  M. (2017)  ‘ Uji Cemaran Air  Minum Masyarakat  Sekitar Margahayu  Raya  Bandung  Dengan  Identifikasi  Bakteri  Escherichia  coli’ .  Indones  J  Pharm  Sci Technol ;4(2):50.
Avicena Sakula Marsanti, S.KM., M.Kes, Retno Widiarini S.KM., M.Kes. (2018) ‘ Prinsip Higiene Sanitasi Makanan’ . Uwais Inspirasi Indonesia.
BAKP Universitas Khairun Ternate. (2020) ‘ Data Mahasiswa Aktif Universitas Khairun Ternate . 2020 BPOM. (2017) ‘ Laporan Tahunan Badan Pengawasan Obat dan Makanan tahun 2017’ . Bpom;116.
Chatim,  A.  dan  Surahman,  S.  ( 2002) ‘ Penuntun  praktikum  mikrobiologi  kedokteran ’.  Binarupa  Aksara.
Jakarta
Departemen Kesehatan RI. (2004) ‘ Higiene Sanitasi Makanan dan Minuman. Dirjen PPM dan PL . Jakarta.
Djukic D, Moracanin SV, Milijasevic M, Babic J, Me misi N, Mandic L. (2016) ‘ Food safety and food sanitation . J Hyg Eng Des;14:25–31
Hemraj,  V.  (2013)  ‘ E  review  on  commonly  used  biocemical  Tes  for  Bacteria’,  Innofare  journal  of  life science,India.
K.  Muhammad  Hakam  Arifin.  (2019)  ‘ Gambaran  Higiene  Dan  Sanitasi  Makanan  Jajanan  Di  Kantin Sekolah  Dasar  Dan  Madrasah  Ibtidaiyah (Studi  Kasus  Pada  Kantin  SD Dan  MI Di  Wilayah Kerja Puskesmas Sekaran Kota Semarang) ’, Diss. U/NNES.
Kartikasari AM, Hamid IS, Purnama MTE, Damayanti R, Fikri F, Praja RN. (2019) ‘ Isolasi dan Identifikasi Bakteri  Escherichia  coli  Kontaminan  Pada  Daging  Ayam  Broiler  Di  Rumah  Potong  Ayam Kabupaten Lamongan . J Med Vet; 2(1):66
KEMENKES  RI.  (2019)  ‘ Profil  Kesehatan  Indonesia  Tahun  2019 ’,  Vol.  42.  Kementrian  Kesehatan Repoblik Indonesia. 97–119
Kementrian Kesehatan RI. (2018) ‘ Data dan Informasi Profil Kesehatan Indonesia’ . Jakarta : Kemenkes RI.
Kementrian Kesehatan RI. (2018) ‘ Laporan Nasional Riskesdas 2018 . Jakarta : Kemenkes RI.
Khakim  L,  Rini  CS.  (2018)  ‘ Identifikasi  eschericia  coli  dan  salmonella  sp.  pada  air  kolam  renang  candi pari’, J Med Lab Sci atau Tecnol [Internet];1(2):84–93.
Lal  A,  Cheeptham  N.  (2007)  ‘ Eosin  Methylen  Blue  Agar  Protocol .  ML  Library  American  Society  for Microbiology
Post, K W. and Songer, GJ. (2005) ’Microbiology Bacterial and Fungal Agent of Animal Disease . Elsevier Saunders: Philadelphia
Reni  Arisanti  R,  Indriani  C,  Agus  Wilopo  S.  (2018)  ‘ Kontribusi  agen  dan  faktor  penyebab  kejadian  luar biasa  keracunan  pangan  di  Indonesia :  kajian  sistematis  Contribution  of  agents  and  factors  causing foodborne outbreak in Indonesia: a systematic review. Ber Kedokt Masy;34(3):99–106
Sari DP, Rahmawati, W ERP. Deteksi dan Identifikasi Genera Bakteri Coliform Hasil Isolasi dari Minuman Lidah Buaya. J Labora Med [Internet]. 2019;3(1):29–35.
Saridewi  I,  Pambudi  A,  Ningrum  YF.  analisis  bakteri  escherichia  coli  pada  makanan  siap  saji  di  kantin rumah sakit x dan kantin rumah sakit y. Bioma. 2017;12(2):90.
Ulfah N, Erina, Darniati. Isolasi dan Identifikasi Escherichia coli pada Ayam Panggang di Beberapa Rumah Makan di Kecamatan Syiah Kuala Kota Banda aAceh. J Ilm Mhs Vet. 2017;1(3):383–90
Ulfah N, Erina, Darniati. Isolasi dan Identifikasi Escherichia coli Pada Ayam Panggang di Beberapa Rumah Makan di Kecamatan Syiah Kuala Kota Banda Aceh. J Ilm Mhs Vet. 2017;1(3):383–90.
World  Health  Organization  (WHO).  Food  safety  30.  Https://WwwWhoInt/En/News-Room/Fact- Sheets/Detail/Food-Safety. 2020;(April):1–9
Volume 3,  Nomer 1,  Tahun 2021, e-ISSN:268-5912
https://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/kmj