## UJI AKTIVITAS REPELLENT FRAKSI KLOROFORM EKSTRAK
ETANOL DAUN MIMBA ( Azadirachta indica A.Juss) TERHADAP NYAMUK Aedes aegypti
Sri Susilowati 1) , Fransiska Vita Kurniawati 1)
1) Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang

## INTISARI
Demam  berdarah  adalah  penyakit  yang  disebabkan  oleh  virus  dengue  melalui  perantara nyamuk Aedes aegypti . Upaya penanggulangan dapat dilakukan dengan mencegah gigitan nyamuk menggunakan repellent .  Ekstrak  etanol  daun  mimba  ( Azadirachta  indic a  A.Juss)  diketahui mempunyai  aktivitas repellent terhadap  nyamuk Aedes  aegypti .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  aktivitas repellent fraksi  kloroform  ekstrak  etanol  daun  mimba    (FKEM)  terhadap nyamuk Aedes aegypti .
Ekstrak etanol daun mimba dibuat dengan metode maserasi menggunakan etanol 96% dan dilanjutkan  fraksinasi  menggunakan  kloroform.  Penelitian  dilakukan  pada  5  kelompok  yaitu kontrol positif (DEET 13%), kontrol negatif (paraffin cair) dan ketiga seri konsentrasi FKEM yaitu 5%, 10% dan 20%. Data yang diperoleh berupa jumlah nyamuk yang hinggap, pengamatan selama 6  jam.  Besarnya  aktivitas repellent diperoleh  dari  nilai  daya  proteksi.  Analisa  data  digunakan Anova  2  jalan.  Nilai  EC90  diperoleh  melalui  analisa  probit  dengan  taraf  kepercayaan  95%. Identifikasi  senyawa  terpenoid  yang  terkandung  dalam  FKEM  digunakan  Kromatografi  Lapis Tipis (KLT).
Hasil penelitian menunjukkan FKEM memiliki aktivitas repellent terhadap nyamuk Aedes aegypti .  Rata-rata  daya  proteksi  selama  6  jam  pada  kelompok  kontrol  positif  dan  FKEM konsentrasi  5%,  10%  dan  20%  yaitu  92,43%,  66,76%,  76,90%  dan  88,35%.  Lamanya  perlakuan selama  6  jam  menyebabkan  penurunan  daya  proteksi  pada  semua  kelompok  perlakuan. Konsentrasi  FKEM  yang  efektif  menolak  90%  populasi  nyamuk Aedes  aegypti (EC 90 )  selama  6 jam perlakuan yaitu 26,1%. Hasil identifikasi menunjukkan FKEM mengandung terpenoid. Kata kunci: fraksi kloroform, mimba, repellent , Aedes aegypti

## ABSTRACT
Dengue haemorragic fever is a disease caused by dengue virus by mediator Aedes aegypti . The effort of overcoming this disease could be done by preventing the mosquito from bitting using repellent.  One  of  natural  repellents  is  neem  ( Azadiracta  indica A.Juss).  This  study  aimed  to determine the repellent activity of chloroform fraction of ethanolic extract neem leaf against Aedes aegypti mosquito.
Extraction  neem  leaf  done  using  ethanol  96%  by  maceration  methode  and  followed fractionation  with  chloroform.  This  study  was  conducted  in  5  groups,  positive  control  (DEET 13%), negative control (liquid paraffin)  and three series concentrations of chloroform fraction  of ethanol  extract  neem  leaf;  they  were  5%,  10%  and  20%.  Repellent  activity  was  carried  out  by counting number of mosquitoes alighted. The amount of repellent activity was obtained from the protection  value  which  was  then  analyzed  using  two-ways  Anova.  The  EC90  value  gained  from probit analysis at significance of 95%. Identification of chemical compound of chloroform fraction of ethanolic extract neem leaf was done using thin layer chromatography (TLC).
The  results  showed  that  chloroform  fraction  of  ethanolic  extract  neem  leaf  had  repellent activity  against Aedes  aegypti mosquito.  The  average  protection  value  for  6  hours  in  positive control  group  and  chloroform  fraction  of  ethanolic  extract  neem  leaf  at  5%,  10%  and  20% concentration  were  92,43%,  66,76%,  76,90%  and  88,35%.  The  6-hours  treatment  had  caused decrease in protection value in all of treatment groups. The effective concentration of chloroform fraction ethanolic extract neem leaf to repel 90% population of Aedes aegypti mosquito for 6 hours
treatment was 26,1%. The chemical compund of chloroform fraction of ethanolic extract neem leaf was terpenoid.
Keyword: repellent, chloroform fraction of ethanolic extract neem leaf, Aedes aegypti

## PENDAHULUAN
Masalah  penyakit  demam  berdarah dengue  (DBD)  di  Indonesia  merupakan masalah yang klasik, yaitu kejadiannya hampir dapat  dipastikan  setiap  tahun,  khususnya  di awal  musim  penghujan  (Hadinegoro  dan Satari,  1999).  Penyakit  ini  ditularkan  oleh suatu  vektor  yaitu  nyamuk Aedes  aegypti dan juga  oleh  nyamuk  kebun (Aedes  albopictus). Nyamuk Aedes aegypti mempunyai kebiasaan menggigit  berulang-ulang  ( multiple  bitter ), yaitu  dapat  menggigit  beberapa  orang  secara bergantian  dalam  waktu  singkat,  sehingga sangat  berpotensi  menularkan  virus  ke beberapa orang dalam waktu yang singkat.
Cara menghindari nyamuk yang paling baik  adalah  dengan  pemakaian  anti  nyamuk yang  berbentuk  lotion,  krim  ataupun  pakaian yang  dapat  melindungi  tubuh  dari  gigitan nyamuk.  Hampir  semua  lotion  anti  nyamuk yang  beredar  di  Indonesia  berbahan  aktif DEET ( diethyl metatoluamid )
yang merupakan  bahan  kimia  sintetis  beracun dalam konsentrasi 10-15% (Gunandini, 2006). DEET merupakan bahan kimia beracun yang  berbahaya  khususnya  bagi  anak-anak dan juga orang
dewasa apabila
penggunaannya kurang hati-hati. DEET menempel pada kulit selama 8 jam (tidak larut dalam  air)  serta  terserap  secara  sistemik  ke tubuh  melalui  kulit  menuju  sirkulasi  darah. Hanya  10-15%  yang  dapat  terbuang  melalui urin.  Dalam  aturannya,  pemakaian  hanya diperbolehkan  sekali  dalam  sehari  dan  tidak digunakan  pada  kulit luka  atau  di bawah baju karena  dapat  menetrasi  ke  dalam  jaringan kulit.  Suatu  penelitian  yang  dilakukan  oleh American  Academy  of  Paediatric pada  tahun 2003 menyatakan bahwa lotion yang mengandung  10%  DEET  hanya  efektif  dalam waktu  2  jam,  sedangkan  yang  mengandung 24%  DEET  hanya  dapat  bertahan  selama  5 jam.  Di  Indonesia,  lotion  anti  nyamuk  yang mengandung  DEET  10-15%  diklaim  oleh produsennya  (pada  kemasan)  dapat  bertahan selama 6-8 jam. Peraturan pemerintah melalui Komisi Pestisida Departemen Pertanian (1995)  mensyaratkan  bahwa  suatu  lotion  anti nyamuk  dapat  dikatakan  efektif  apabila  daya proteksinya  paling  sedikit  90%  dan  mampu
bertahan  selama  6  jam  (Komisi  Pestisida Departemen Pertanian, 1995).
Trend  di  dunia  saat  ini  adalah  dengan slogan back  to  nature ,  yaitu  semangat  hidup sehat dengan kembali ke alam atau menggunakan  bahan  alami,  termasuk  dalam usaha  pencegahan  penyakit  demam  berdarah. Salah satu tumbuhan yang berkhasiat obat dan dapat digunakan sebagai pencegahan penyakit demam  berdarah  yaitu  mimba.  Tanaman  dari keluarga  Meliaceae  ini  mempunyai  potensi sebagai pestisida nabati dan telah dikenal luas oleh masyarakat (Kardinan, 2003).
Kandungan bahan aktif mimba terdapat di  seluruh  bagian  tanaman,  tetapi  kandungan yang  paling  tinggi  terdapat  pada  bijinya. Mimba dapat digunakan untuk mengendalikan hama serangga, tetapi aman bagi manusia dan hewan peliharaan. Tanaman ini tidak memiliki sifat  langsung  mematikan,  tetapi  bereaksi terhadap  hama  dengan  cara  mengganggu perilaku seperti makan, berkumpul, pertumbuhan  dan  reproduksi.  Selain  sebagai pestisida  nabati,  mimba  juga dapat  digunakan untuk
penyembuhan penyakit kulit, antiinflamasi,  antibakteri,  antidiabetes  dan penyakit  kardiovaskular.  Ekstrak  etanol  daun mimba  mempunyai  aktivitas repellent yang hampir  setara  dengan  DEET  12,5%  pada konsentrasi  80%  (Laila,  2005).  Penggunaan mimba  yang  berlebihan  atau  pada  dosis  yang besar dapat menimbulkan efek toksisitas yaitu iritasi  pada  mata  dan  jaringan  lunak  serta kemungkinan sebagai penyebab konjungtivitas dan inflamasi (Sudarsono dkk, 2002).
Penyederhanaan  kandungan  senyawa aktif dapat dilakukan melalui tahapan fraksinasi  dari  ekstrak.  Senyawa  aktif  yang diduga berkontribusi terhadap aktivitas repellent adalah  senyawa  non  polar  seperti terpenoid.  Berdasarkan  informasi  tersebut maka  penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan untuk  mengetahui  apakah  FKEM  memiliki aktivitas repellent terhadap  nyamuk Aedes aegypti dan  mempunyai  efek  yang  setara dengan  DEET  pada  konsentrasi  yang  lebih kecil  daripada  ekstraknya,  sehingga  dapat dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk memperoleh  suatu  produk  yang  memiliki efektifitas  tinggi  namun  dengan  toksisitas yang  rendah  pada  manusia  sehingga  dapat
digunakan  sebagai  alternatif  yang  terbaik untuk mencegah penyakit DBD.

## METODE PENELITIAN
Bahan: Daun  mimba,  diperoleh  dari  kebun Fakultas  Farmasi  Universitas  Gadjah  Mada Yogyakarta. Nyamuk Aedes aegypti betina (3- 5  hari),diperoleh  dari  Laboratorium  Balai Penelitian  Vektor  dan  Reservoir  Penyakit Salatiga. DEET  13%  (dalam  sediaan Soffell lotion). Bahan  kimia,  jika  tidak  dinyatakan lain  berkualitas  farmasetik  yaitu  etanol  96%, kloroform,  paraffin  cair,  toluen  p.a, etil asetat p.a,  silikagel  60  F254,  terpineol  p.a,  vanilin asam sulfat p.a.
Alat : Seperangkat alat gelas, v iskotester Rion VT-043E,  timbangan  elektronik  Ohaust  AR 2140  dengan  kepekaan  0,1  mg,  kurungan nyamuk,  pengayak  serbuk  no.  40,  mortir  dan stamper.

## Jalannya Penelitian
Ekstraksi  daun  mimba  digunakan  metode maserasi. Daun  segar  sebanyak  10  kg dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  50°C
menjadi  999,5  gram  simplisia  daun  kering. Maserasi  digunakan  pelarut  etanol  96% sebanyak 5 liter. Maserasi dilakukan selama 3 hari dan dilanjutkan evaporasi hingga diperoleh ektrak kental (Depkes, 1979).
Fraksinasi  ekstrak  etanol  daun  mimba digunakan metode partisi cair-cair. Ekstrak kental  etanol  yang  diperoleh  yaitu  sebanyak 81  gram  kemudian  disuspensikan  dengan  air hingga  volume  500  ml  dan  dipartisi  dengan kloroform  sebanyak  3  kali  masing-masing sebanyak 250 ml. FKEM yang diperoleh yaitu seberat  30,56  gram  dan  diperoleh  rendemen sebesar 3,06%.
Uji  aktivitas repellent: Pengujian  aktivitas repellent FKEM  ini  menggunakan  serangga uji nyamuk Aedes aegypti betina berumur 3-5 hari  yang  telah  dipuasakan  selama  24  jam. Pada  uji  ini  digunakan  5  kelompok  perlakuan yaitu 3 kelompok untuk ketiga seri konsentrasi FKEM, satu kelompok kontrol positif dan satu kelompok  kontrol  negatif.  Masing-masing kelompok  diuji  dengan  5  kali  replikasi. Pembagian  masing-masing  kelompok  terlihat pada Tabel I
Tabel I. Pembagian kelompok uji aktivitas repellent FKEM Bahan (gram) Kontrol negatif Kontrol positif Konsentrasi I Konsentrasi II Konsentrasi III DEET 13% - 15 - - - Ekstrak - - 0,75 1,5 3 Paraffin cair 15 - 14,25 13,5 12 Keterangan: Kontrol positif : DEET 13% (dalam sediaan Soffell lotion) Konsentrasi I : FKEM konsentrasi 5% Konsentrasi II : FKEM konsentrasi 10% Konsentrasi III : FKEM konsentrasi 20%
Setiap  perlakuan  diuji  dengan  cara  dioleskan ke  salah  satu  tangan  sebanyak  3  gram, sedangkan  tangan  yang  lain  sebagai  kontrol negatif.  Secara  bergiliran  tangan  dimasukkan ke  dalam  kurungan  nyamuk  yang  berisi  50 ekor  nyamuk  betina.  Pengujian  dilakukan selama  5  menit  dan  lama  pengujian  hingga  6 jam.  Jumlah  nyamuk  yang  hinggap  dihitung pada setiap kali usikan (Kardinan, 2007).

## Analisa data
Data  yang  diperoleh  berupa  jumlah  nyamuk yang  hinggap  pada  kelompok  kontrol  negatif dan  perlakuan  kemudian  dianalisa  secara
statistik  menggunakan  Anova  2  jalan  dengan taraf  kepercayaan  95%  untuk  mengetahui perbedaan  pada  setiap  perlakuan  sehingga diketahui ada atau tidaknya aktivitas repellent pada  kelompok  perlakuan  (Uyanto,  2009). Selanjutnya  dihitung  daya  proteksi  masing- masing  perlakuan  pada  tiap-tiap  jam  untuk mengetahui  besarnya  aktivitas repellent pada setiap  perlakuan  dengan  rumus  (Komisi Pestisida, 1995):
Daya proteksi = ∑ nyamuk yang hinggap pada kontrol negatif- ∑ nyamuk yang hinggap pada perlakuan X 100 % ∑ nyamuk yang hinggap pada kontrol negatif
Selanjutnya  dihitung  EC90  yaitu  konsentrasi FKEM  yang  dapat  menolak  populasi  nyamuk sebesar  90%  selama  6  jam  perlakuan menggunakan  analisa  probit  dengan  taraf kepercayaan 95% (Prabawati, 2010).

## Identifikasi senyawa aktif daun mimba :
KLT  dilakukan  untuk  menegaskan  adanya terpenoid  dalam  FKEM.  Pada  uji  aktivitas repellent FKEM  terhadap  nyamuk Aedes aegypti ini  yang  dicurigai  sebagai  senyawa yang  berkhasiat repellent adalah  terpenoid saja,  maka  KLT  dilakukan  pada  identifikasi terpenoid saja.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Karakteristik  FKEM  yang  diperoleh  dalam penelitian  ini  yaitu  berwarna  hijau  tua kehitaman,  konsistensi  sangat  kental  dengan viskositas  600  dPaS  dan  bau  seperti  daun mimba  segar  dan  menyengat.  Sepuluh kilogram daun mimba basah setelah dikeringkan  beratnya  menjadi  999,53  gram. Setelah  diekstraksi  dan  difraksinasi  diperoleh FKEM  seberat  30,56  gram  dengan  rendemen 3,06%.

## Uji Aktivitas Repellent
Hasil  penelitian  (Tabel  II)  menunjukkan bahwa rata-rata jumlah nyamuk yang hinggap dari  jam  ke  0  sampai  dengan  jam  ke  6  pada kelompok  perlakuan  FKEM  lebih  sedikit daripada kelompok kontrol negative (p<0,05). Hal  ini  membuktikan  bahwa  FKEM  memiliki aktivitas repellent terhadap  nyamuk Aedes aegypti .  Besarnya  aktivitas repellent yang dimiliki  oleh  setiap  kelompok  perlakuan dilihat dari nilai daya proteksi masing-masing
perlakuan.  Hasil  penelitian  (Tabel  III) menunjukkan  bahwa  kelompok  perlakuan DEET  memiliki  rata-rata  daya  proteksi  yang tertinggi  dibandingkan  semua  kelompok perlakuan  dan  kelompok  FKEM  konsentrasi 20% memiliki daya proteksi yang lebih tinggi dibandingkan  kelompok  FKEM  konsentrasi 5%  dan  10%.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa semakin  besar  konsentrasi  FKEM  maka semakin  besar  pula  daya  proteksi  terhadap nyamuk Aedes  aegypti yang  berarti  semakin besar  pula  aktivitas repellent- nya.  Namun dengan lamanya perlakuan yaitu selama 6 jam terjadi  penurunan  daya  proteksi  pada  semua kelompok  perlakuan,  hal  ini  kemungkinan disebabkan  oleh  menguapnya  FKEM  oleh udara  sehingga  bau  menyengat  yang  dimiliki oleh FKEM menjadi berkurang dan mengakibatkan  terjadinya  penurunan  daya proteksi pada semua kelompok perlakuan.
Perhitungan  EC90  diperlukan  untuk mengetahui  konsentrasi  FKEM  yang  efektif menolak 90% populasi nyamuk Aedes aegypti selama 6 jam pengamatan. Hal ini disebabkan adanya  persyaratan  dari  Komisi  Pestisida, bahwa senyawa aktif atau sediaan uji dianggap poten  sebagai repellent  nyamuk jika memiliki daya proteksi sebesar 90% selama penggunaan 6 jam. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  kosentrasi  FKEM  20% mampu  memberikan  daya  proteksi  sampai dengan  90%  hanya  sampai  jam  ke  2 pengamatan saja (Tabel III). Berdasarkan hasil tersebut    tidak  ditemukan  konsentrasi  yang mampu  memberikan  daya  proteksi  hingga  90 %  selama  6  jam  pengamatan,  sehingga digunakan  analisa  probit  untuk  memperoleh EC 90 (Tabel IV dan Gambar 1).
Tabel II. Rata-rata jumlah nyamuk yang hinggap pada masing-masing perlakuan setiap jam.
Kelompok perlakuan Rata-rata jumlah nyamuk yang hinggap pada jam ke- 0 1 2 3 4 5 6 Kontrol negatif 24,40 24,40 25,80 25,20 28,40 28,20 27,80 Kontrol positif 0,40* 0,60* 1,80* 1,20* 2,60* 3,20* 4,00* CI 4,40* 9,00* 10,00* 10,60* 10,20* 9,60* 10,40* CII 4,60* 5,80* 5,40* 6,20* 6,20* 7,00* 7,20* CIII 1,00* 1,20* 2,60* 3,80* 3,60* 3,20* 4,20* Keterangan: Kontrol negatif : perlakuan dengan paraffin cair Kontrol positif : perlakuan dengan DEET 13% (dalam sediaan Soffell lotion) CI : FKEM 5% CII : FKEM 10% CIII : FKEM 20%
(*)  Hasil  uji  ANOVA  menunjukkan  adanya  perbedaan  bermakna  terhadap  kelompok  kontrol  negatif  pada taraf kepercayaan 95%.
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  probit 90%  terdapat  pada  konsentrasi  26,1%
(antilog 1,417) sehingga pada konsentrasi tersebut  FKEM  dapat  menolak  90% populasi  nyamuk Aedes  aegypti hingga  jam ke-6.
Tabel III. Rata-rata daya proteksi masing-masing perlakuan setiap jam
Perlakuan Rata-rata daya proteksi pada jam ke- (%) 0 1 2 3 4 5 6 Kontrol (+) 97,75 a 97,60 b 93,68 c 95,16 d 89,93 ab 87,92 abd 84,99 abcd CI 83,07 a 66,88 a 64,36 a 62,44 a 63,34 a 64,65 a 62,60 a CII 81,89 a 77,43 a 78,63 74,33 79,50 73,64 a 72,92 a CIII 95,93 a 91,82 b 89,76 a 84,64 a 85,35 a 87,01 a 83,98 ab Keterangan: Kontrol (+) : perlakuan dengan DEET 13% (dalam sediaan Soffel lotion) CI : FKEM 5% CII : FKEM 10% CIII : FKEM 20%
Angka yang diikuti huruf yang sama menunjukkan adanya perbedaan bermakna pada konsentrasi yang sama pada uji ANOVA dengan taraf kepercayaan 95%.

## Tabel IV. Hasil analisa probit FKEM
Konsentrasi (%) Rata-rata daya proteksi pada jam ke-6 (%) Probit Persamaan garis* EC90 5 62,580 0,636 Y = BX + A Y = 0,04X + 0,13 26,10% 10 72,920 0,715 20 83,976 0,844
*) merupakan persamaan garis antara konsentrasi terhadap rata-rata daya proteksi pada jam ke-6
Penelitian  yang  dilakukan  Laila  (2005) menyatakan  bahwa  ekstrak  etanol  daun mimba  memiliki  aktivitas repellent pada konsentrasi  80%.  Hasil  EC 90 sebesar  26,1% dalam  penelitian  ini  membuktikan  bahwa FKEM memiliki efektifitas repellent dengan
konsentrasi  yang  lebih  kecil  dari  estraknya. Hal  ini  disebabkan  senyawa  aktif  yang
terkandung  dalam  fraksi  lebih  sedikit daripada ekstrak. Ketika metoda dan pelarut yang digunakan dalam penyarian tepat maka dapat  diperoleh  senyawa  aktif  yang  tepat pula dalam  memberikan  kontribusi terhadap aktivitas repellent .
Gambar 1. Grafik log konsentrasi FKEM vs probit
Hasil  analisis  korelasi  regresi  log konsentrasi  FKEM  terhadap  probit  diperoleh persamaan  reaksi  Y  =  0,35X  +  0,39  dengan nilai  r  =  0,98.  Nilai  koefisien  korelasi  yang didapatkan positif, hal ini menunjukkan bahwa kenaikan  konsentrasi  sebanding  dengan  daya proteksi.

## Identifikasi Senyawa Aktif FKEM
Kromatografi  lapis  tipis  dilakukan untuk  menegaskan  adanya  senyawa  terpenoid
dalam  FKEM.  Fase  diam  yang  digunakan yaitu  silikagel  60  F254  dan  fase  gerak campuran  toluen  dan  etil  asetat  dengan perbandingan  93:7.  Pereaksi  vanilin  asam sulfat  digunakan  sebagai  penampak  bercak dengan pembanding terpineol yang didapatkan dari produk roth (Jerman). Hasil kromatogram dapat dilihat pada Gambar 2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 0.5 1 1.5 probi t Log Konsentrasi
UV 254 nm                                   UV 365 nm                                         Visibel
Gambar 2. Kromatogram identifikasi terpenoid FKEM
Warna spot terpenoid di visibel (S) : Merah violet Rf terpenoid terdeteksi : 0.32 dan 0.41 Pembanding (P) : Terpineol
Dari hasil kromatogram di atas tampak bahwa FKEM  memiliki  jarak  pengembangan  yang mendekati  terpineol  dengan  nilai  Rf  0,32  dan 0,41.  Hal  ini  membuktikan  bahwa  di  dalam FKEM  terdapat  senyawa  terpenoid  yang ditunjukkan dengan warna spot yang berpendar atau tampak pada sinar visibel yaitu merah violet.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan 1. FKEM    memiliki  aktivitas repellent terhadap nyamuk Aedes aegypti.
2. Konsentrasi FKEM yang efektif menolak 90%  populasi  nyamuk Aedes  aegypti hingga  6  jam  pengujian  (EC90)  yaitu sebesar 26,1%.
3. FKEM mengandung senyawa terpenoid.

## Saran
1. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  sifat  fisik  dan  kimia  senyawa terpenoid  yang  terdapat  dalam  daun mimba  sehingga  dapat  diaplikasikan dalam bentuk sediaan.
2. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  mengetahui  toksisitas  FKEM untuk  penggunaan  jangka  panjang  pada manusia.

## DAFTAR PUSTAKA
American  Academy  of  Paediatric,  2003, the insect repellent DEET, http.//www.epa.gov/pesticides/factsheets/ chemical/deet.htm,  diakses  8  Februari 2009.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia,
1979, Farmakope  Indonesia, edisi  III, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, 11, 33. Gunandini,  DJ.,  2006,  Bioekologi  dan Pengendalian  Nyamuk  Sebagai  Vektor
Penyakit, Prosiding  Seminar  Nasional Pestisida Nabati III , Balittro, Bogor. Hardinegoro, S., dan Satari, H., 1999, Demam Berdarah  Dengue ,  Fakultas  Kedoteran Universitas Indonesia, Jakarta, 17. Kardinan,  A.,  2003, Tanaman  Pengusir  Dan Pembasmi  Nyamuk ,  Agromedia  Pustaka,
Jakarta, 1-6, 23-24, 30-31. Kardinan,  A.,  2007, Potensi  Selasih  sebagai Repelletnt  terhadap  Nyamuk  Aedes Aegypti, Jurnal Litri , 13 (2).
Komisi Pestisida Departemen Pertanian, 1995,
Metode Standar Pengujian Efikasi Pestisida, Departemen Pertanian, Jakarta, 4/9-95. Laila, N., 2005, Uji Efektifitas Repelan Lotion Ekstrak Etanol Daun Mimba ( Azadirachta  indica A.Juss)  Terhadap
Nyamuk Aedes aegypti , Skripsi , Fakultas Farmasi Universitas Muhammadyah
Surakarta, Surakarta.. Prabawati,  A.,  2010, Panduan  Aplikatif  dan Solusi  Mengolah  Data  Statistik  Hasil Penelitian  dengan  SPSS  17 ,  Wahana Computer, Semarang, 203-213. Sudarsono, P.N., Gunawan, D., Wahyuono, S., Donatus,  I. A.,  2002, Tumbuhan  Obat II
(Hasil penelitian, Sifat-sifat dan Penggunaan) , UGM Jogyakarta, 19-21.
Uyanto,  S.,  2009, Pedoman  Analisis  Data dengan  SPSS ,  Edisi  Ketiga  Cetakan Pertama,  Graha  Ilmu,  Yogyakarta,  203- 217,