Jurnal Keperawatan dan Kebidanan ISSN : 2621-0231 (Online) ISSN : 2580-1929 (Print) Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Merdeka Surabaya Jl. Ketintang Madya VII/2, Surabaya » Tel / fax : (031) 828 8902 / (031) 828 7317
Toksisitas Ekstrak Daun Kopasanda (Chromolaena Odorata) Terhadap Larva Artemia Salina Leach Sumardi, Dadang Irfan Husori, Taufit Julianto, Raihanil Fauza, Edita Eliska

## Toksisitas Ekstrak Daun Kopasanda  (Chromolaena Odorata) Terhadap Larva Artemia Salina Leach
Sumardi 1* , Dadang Irfan Husori 2 , Taufit Julianto 1 , Raihanil Fauza 1 , Edita Eliska 1
1 Farmasi Universitas Tjut Nyak Dhien
2 Farmasi Universitas Sumatera Utara Corresponden author*: (mardisaad@utnd.ac.id; mardisaad@gmail.com)

## ABSTRACT
Leaf kopasanda (Chromolaena odorata L. King & H.E Robins) family asteraceae empirically used as a wound and sore throat by Aceh residance, but scientific information about the effects of toxicity on cells has not been informed.  The  method  used  is  phytochemical  screening  by  using  appropriate  chemical detection  reagents and continued  with  the  search  profile for  extract using  thin  layer  chromatography  (TLC) as  well  as  toxicity  test  of crude extract and its partition to shrimp larvae (Artemia salina Leach). Chemical content of extracts showed the presence of flavonoids, saponins, triterpenoids, alkaloids and tannins. The stain profile on TLC plate with silica gel GF254 as stationary phase showed the best stain by using the mobile phase on crude extract ethanol and its partition  ethyl  acetate,  n-hexane  and water  were  respectively n-heksan  :  etil  asetat  (3:7), n-heksan  :  etil  asetat (7:3); n-heksan  :  etil  asetat  (2:8). their  toxicity  effects  showed  a  low  toxic  category.  C.  odorata  extracts  have potentially safe and can be developed in aspects of biological activity.
Keywords: kopasanda (Chromolaena odorata), Brine Shrime Letality Test, larva udang (Artemia salina Leach), stain profile on TLC

## ABSTRAK
Leaf  kopasanda (Chromolaena  odorata L.  King  &  HE  Robins)  asteraceae  keluarga secara  empiris  digunakan sebagai luka dan sakit tenggorokan oleh residensi Aceh, tetapi informasi ilmiah tentang efek toksisitas pada sel belum  diinformasikan.  Metode  yang  digunakan  adalah  skrining  fitokimia  dengan  menggunakan  reagen  deteksi kimia  yang sesuai dan dilanjutkan dengan profil pencarian untuk ekstrak  menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT)  serta  uji  toksisitas  ekstrak  kasar  dan  partisi  untuk  larva  udang (Artemia  salina Leach). Kandungan kimianya  menunjukkan adanya flavonoid, saponin, triterpenoid, alkaloid dan tanin. Profil noda pada pelat TLC dengan  silika  gel  GF254  sebagai  fase  diam  menunjukkan  pewarnaan  terbaik  dengan  menggunakan  fase  gerak pada ekstrak kasar etanol dan partisi etil asetat, n-heksana dan air masing-masing n-heksan: etil asetat (3: 7) , n- heksan:  etil  asetat  (7:  3); n-heksan:  etil  asetat  (2:  8). efek  toksisitas  mereka  menunjukkan  kategori  beracun rendah. Ekstrak C. odorata berpotensi aman dan dapat dikembangkan dalam aspek aktivitas biologis.
Kata kunci: kopasanda (Chromolaena odorata), Uji Letaritas Brine Shrime, larva udang (Artemia salina Leach), profil noda pada TLC

## 1. PENDAHULUAN
Uji toksisitas suatu bahan dengan menggunakan larva udang (Artemia salina L.) lebih dikenal dengan metode Brine Shrime Letality Test (BSLT) merupakan metode yang sederhana dan digunakan sebagai  model uji  pendahuluan  tingkat  keamanan terhadap  mamalia.  Metode  ini  berdasarkan  pada
Jurnal Keperawatan dan Kebidanan ISSN : 2621-0231 (Online) ISSN : 2580-1929 (Print) Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Merdeka Surabaya Jl. Ketintang Madya VII/2, Surabaya » Tel / fax : (031) 828 8902 / (031) 828 7317
Toksisitas Ekstrak Daun Kopasanda (Chromolaena Odorata) Terhadap Larva Artemia Salina Leach Sumardi, Dadang Irfan Husori, Taufit Julianto, Raihanil Fauza, Edita Eliska
prinsif pengaruh bahan aktif terhadap jumlah kematian organisme larva udang (Artemia salina Leach) (Wu C. 2014). Metode ini juga dapat dihubungkan dengan pengujian aktivitas anti kanker ( Vida E, Maria  B,  Bambang  2016). Tumbuhan  kopasanda telah  dikenal  menjadi tanaman  obat  dan tersebar di Amerika Utara, Asia, Afrika Barat dan Australia (José LC, Zaira LHI, 2012). Di Indonesia, khususnya masyarakat  Aceh  menggunakan  daun  kopasanda  yang  telah  dilumatkan  kemudian  ditempelkan  pada bagian luka secara topikal (Schmidt GJ, 2000). Tumbuhan herba ini memiliki tinggi antara 1,5 – 6 m dengan  membentuk  cabang  secara  bebas dan  ranting  berkembang  dari  kuncup  secara  berpasang – pasangan.    Batang  berwarna  coklat  dan  berkayu  pada  bagian  pangkal  sedangkan  pada  bagian  ujung berwarna hijau. Akar tumbuhan semak ini serabut dengan kedalaman tembus ke tanah sektira 20 – 30 cm (Colin W, 2006).
Skrining  fitokimia  merupakan  salah  satu  upaya  untuk  mengetahui  keberadaan  golongan senyawa  kimia  di  dalam tumbuhan  sehingga  dapat  dijadikan  acuan  pengujian  selanjutnya  baik identifikasi  senyawa  aktif  maupun  aktivitas  biologinya. Sinergitas  keduanya  akan  menghasilkan metode terapi yang terstandard (Ali P,  Elmira S,  Amir RJ ).
Metode  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  merupakan  teknik  yang  efisien  dan  efektif  analisis suatu  campuran  senyawa  termasuk  ekstrak  tumbuhan.  Noda  yang  muncul  dengan  fase  gerak  yang sesuai dapat dijadikan sebagai karakteristik dan acuan preparatif isolasi senyawa (Libretext, 2017).

## 2. BAHAN DAN METODE
Daun kopasanda (Chromolaena odorata) yang diperoleh dari Desa Samuti Kecamatan Ganda Pura  Kabupaten  Bireun,  Nanggroe  Aceh  Darussalam.  Identifikasi  tumbuhan  dilakukan  di Lembaga Ilmu  Pengetahuan  Indonesia  (Indonesian  Institute  of  Sciences)  Pusat  Penelitian  Biologi  (Research Center for Biology) (LIPI).

## Ekstraksi dan Partisi
Serbuk kering daun C. odorata dipanaskan dengan menggunakan air pada suhu 90 o C selama  15  menit  kemudian  dipekatkan  di  atas  waterbath sehingga  diperoleh  ekstrak  air. Sebahagian  serbuk  lainnya dimaserasi dengan  etanol  80%  selanjutnya  maserat  di  uapkan dengan  rotary  evaporator  sehingga  diperoleh  maserat  kental.  Partisi  padat  cair  dilakukan dengan menggunakan n-heksan, etil asetat secara berturut-turut sehingga diperoleh crude sari
Jurnal Keperawatan dan Kebidanan ISSN : 2621-0231 (Online) ISSN : 2580-1929 (Print) Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Merdeka Surabaya Jl. Ketintang Madya VII/2, Surabaya » Tel / fax : (031) 828 8902 / (031) 828 7317
Toksisitas Ekstrak Daun Kopasanda (Chromolaena Odorata) Terhadap Larva Artemia Salina Leach Sumardi, Dadang Irfan Husori, Taufit Julianto, Raihanil Fauza, Edita Eliska
etanol  (CSE),  sari  larut n-heksan  (SLH),  sari  larut  etil  asetat  (SLE)  dan  sari  tidak  larut n- heksan dan etil asetat (sari sisa).

## Profil Kandungan Kimia dengan Kromatografi Lapis Tipis
Ekstrak  ditotolkan  pada  fase  diam  silika  gel  GF254  kemudian  dielusi  dengan  variasi fase  gerak  sehingga  diperoleh  noda  noda  yang  terpisah  dengan  baik  dan  digunakan  reagen penanda H 2 SO 4 dalam metanol 50% dan Asam asetat anhidirid dalam H 2 SO 4 .

## Skrining Fitokimia
Metode  skrining  fitokimia  mengacu  pada  buku  Materia  Medika  Indonesia  jilid  VI  yang  telah dimodifikasi (Anonim,1982).
Uji Flavonoid. ekstrak ditambahakan 2-4 tetes HCl pekat dan 2-3 potong kecil logam Mg. Perubahan warna terjadi diamati dari kuning tua menjadi orange.
Uji  Saponin.  Ekstrak  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  kemudian  ditambahkan  akuades  panas hingga  seluruh sampel terendam,  selanjutnya  didinginkan,  kemudian  dikocok  kuat-kuat.  Hasil  positif ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil.
Uji  Alkaloid.  Ekstrak  dilarutkan  dengan  5  ml  HCl  2N.  Larutan  yang  diperoleh  dibagi  ke  dalam  3 tabung  reaksi.  Tabung  pertama  ditambah  dengan  3  tetes  HCl  2N,  tabung  kedua  ditambah  dengan  3 tetes  pereaksi Dragendorff,  sedangkan  pereaksi  ketiga  ditambah  dengan  3  tetes  pereaksi Mayer. Terbentuknya endapan menunjukkan bahwa sampel tersebut mengandung alkaloid.
Uji  Polifenol  dan  Tanin.  Ekstrak  ditambah  akuades  sampai  sampel  terendam  semuanya.  Kemudian ditambahkan 2-3 tetes larutan FeCl3 1%. Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya warna hitam kebiruan atau hijau.
Uji  Triterpenoid/steroid.  ekstrak  yang  telah  dilarutkan  dalam  pelarutnya.  Kemudian  diuapkan  di dalam cawan porselen. Residu dilarutkan dengan 0,5 ml  kloroform dan ditambahkan 0,5 asam asetat pekat anhidrad. Asam sulfat pekat sebanyak 2 ml ditambahkan melalui dinding tabung reaksi. Reaksi positif  triterpenoid  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  violet  sedangkan  positif  steroid  menghasilkan warna hijau sampai biru pada perbatasan larutan.

## Toksisitas  Brine Shrimp Lethality Test
Pengujian  toksisitas  ini  dimodifikasi  dari  metode  yang  dibuat  oleh  Meyer el  al., (1982). Wadah plastik yang berbentuk persegi panjang disiapkan untuk penetasan telur udang. Wadah dibagi
Jurnal Keperawatan dan Kebidanan ISSN : 2621-0231 (Online) ISSN : 2580-1929 (Print) Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Merdeka Surabaya Jl. Ketintang Madya VII/2, Surabaya » Tel / fax : (031) 828 8902 / (031) 828 7317
Toksisitas Ekstrak Daun Kopasanda (Chromolaena Odorata) Terhadap Larva Artemia Salina Leach Sumardi, Dadang Irfan Husori, Taufit Julianto, Raihanil Fauza, Edita Eliska
menjadi  dua  bagian,  yaitu  bagian  dengan  ruangan  gelap  dan  ruangan  terang.  Kedua  bagian  tersebut dibatasi dengan sekat plastik yang beberapa bagian sudah dilubangi ± 2 mm, sebagai tempat keluarnya telur yang telah menetas.
Dimasukkan ±  1  liter  air  laut  ke dalam  wadah  hingga  kedua  lubang  pada  sekat  plastik terendam. Salah satu ruang dalam wadah tersebut diberi penerangan dengan cahaya lampu pijar/neon untuk  menghangatkan  suhu  dalam  penetasan  dan  merangsang  proses  penetasan.  Untuk  ruangan  yang gelap  tanpa  penyinaran  ditutup  dengan  aluminium  foil.  Setelah  48  jam,  telur  akan  menetas menjadi larva dan akan bergerak  secara  alamiah menuju  ruang terang.  Larva  yang bersifat fototropik dan dapat dijadikan hewan uji pada metode BSLT.
Larva udang diambil masing-masing 10 ekor untuk vial yang berisi bahan uji dengan konsentrasi 1000,  500, 200,  100,  dan  10  ppm.  Kemudian  semua  vial  diletakkan  di  bawah cahaya lampu selama 24 jam, selanjutnya dihitung jumlah persentase kematian larva. Masing- masing konsentrasi dilakukan pengulangan sebanyak 5 kali.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  skrining fitokimia ekstrak  air  dan  etanol daun  C.  odorata menunjukkan keberadaan  golongan  senyawa flavonoid, saponin,  triterpenoid,  alkaloid  dan tanin. Persen randemen  sari  yang  diperoleh  dengan  menggunakan  pelarut  etanol  80%  dan  air  masing - masing adalah 16,90 dan 16,19%. Sedangkan pemilihan fase gerak untuk sari dan partisinya diperoleh n-heksan  dan  etil  asetat  dengan  perbandingan  yang  bervariasi,  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1. Nilai LC 50 ekstrak daun C. odorata terhadap larva udang
Sampel Nilai LC 50 (ppm) Randemen (%) Fase Gerak KLT Terpilih Sari Air 291.23 ± 111.09 16,19 n-heksan: etil asetat (2:8) Crude Ekstrak Etanol 326.8371 ± 264.09 16,9 n-heksan: etil asetat (3:7) Sari Larut Etil Asetat 287.9561 ± 116.64 8,06 n-heksan: etil asetat (7:3) Sari Larut n-heksan 196,11 ± 51,47 7,9 n-heksan: etil asetat (2:8)
Jurnal Keperawatan dan Kebidanan
ISSN : 2621-0231 (Online) ISSN : 2580-1929 (Print)
Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Merdeka Surabaya Jl. Ketintang Madya VII/2, Surabaya » Tel / fax : (031) 828 8902 / (031) 828 7317
Toksisitas Ekstrak Daun Kopasanda (Chromolaena Odorata) Terhadap Larva Artemia Salina Leach Sumardi, Dadang Irfan Husori, Taufit Julianto, Raihanil Fauza, Edita Eliska
Untuk  melihat  hubungan  antara  kelarutan  senyawa  yang  tertarik  dalam  pelarut  yang berbeda kepolarannya, maka sari dan partisinya diplot antara nilai angka kematian larva udang dengan  nilai  indeks  kepolaran  pelarut  yang  digunakan. Pada  Gambar  1  dapat  dilihat nilai koefisien diterminasi diperoleh 0,765.

## Gambar 1. Hubungan indeks kepolaran pelarut dengan angka kematian larva udang
Kandungan  di  dalam  daun  C.  odorata  sebagaimana dilaporkan  mengandung  flavonoid, saponin, triterpenoid, alkaloid dan tanin. Flavonoid dan senyawa fenol merupakan senyawa metabolit sekunder yang banyak dilaporkan memiliki banyak aktivitas biologi diantaranya adalah general toksik terhadap  larva  udang,  seperti kandungan  flavonoid yang  terdapat  dalam  ekstrak  metanol  daun Ficus carica sebesar 40,729  mg/g  ekivalen  dengan  kuersetin memiliki  LD 50 sebesar 0,158  mg/ml 10. (Saeideh  A,  Abbas  D,  Moslem  N,  2014).  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  senyawa  flavonoid  dan fenol memiliki peran penting dalam toksisitas sel.
Penelitian  yang  terkait  dengan  pengujian  pendahuluan  antikanker  banyak  menyertakan  uji Brine Shrimp Letality Toxicity (BSLT) sebagai penelitian pendukung, seperti yang dilaporkan pada beberapa tumbuhan  obat seperti Kaempferia  galanga (Zingiberaceae), Clerodendrum  viscosum (Verbenaceae), Jatropa  curcus (Euphorbiaceaae), Lens  culinaris (Fabaceae)  dan Ranunculus  arvensis
y = 10,494x + 211,56 R² = 0,765 0 50 100 150 200 250 300 350 0 2 4 6
8 10 Nila i L C5 0 ( p p m ) indek kepolaran pelarut
Jurnal Keperawatan dan Kebidanan ISSN : 2621-0231 (Online) ISSN : 2580-1929 (Print) Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Merdeka Surabaya Jl. Ketintang Madya VII/2, Surabaya » Tel / fax : (031) 828 8902 / (031) 828 7317
Toksisitas Ekstrak Daun Kopasanda (Chromolaena Odorata) Terhadap Larva Artemia Salina Leach Sumardi, Dadang Irfan Husori, Taufit Julianto, Raihanil Fauza, Edita Eliska
(Ranunculaceae) menunjukkan  adanya  hubungan  aktivitas  antikanker  dengan efek  toksis  terhadap larva Artemia salina (Bagya SK, Rajashree PV, Sam KG, 2011) dan (12. Bhatti MZ , Ali A, 2015).
Koefisien  determinasi  (R 2 ) dapat  dijadikan suatu  indikator  yang  digunakan  untuk menggambarkan berapa banyak variasi yang dijelaskan dalam model. Nilai R 2 dapat diketahui tingkat signifikansi atau kesesuaian hubungan antara variabel bebas dan variabel tak bebas dalam regresi linier (Sinambela SD, Suwarno A, Henry RS, 2014).
Laman online Penn  State  Science  (2018)  menjelaskan  variasi  nilai  R 2 ,  dimana  semakin mendekati  nilai  1  atau  100%  menunjukkan  semakin  sempurna  hubungan  pengaruh  variabel  terikat dengan variabel bebas (Anonim, 2018).
Hasil  penelitian  ini diperoleh  nilai  R 2 sebesar  0,765 atau  76,5%,  hal  tersebut  menunjukkan  bahwa indeks kepolaran  penyari  yang  digunakan  menarik  atau  mempartisi  ekstrak  daun  C.  odorata mempengaruhi  sebesar  76,5%  terhadap  kematian  larva  A.  salina.  Semakin  rendah  indeks  kepolaran pelarut memiliki kecendrungan meningkat aktivitas toksis terhadap sel .
Senyawa triterpenoid, saponin dan alkaloid yang terkandung dalam ekstrak daun C. odorata cendrung tertarik oleh pelarut yang indeks kepolarannya rendah.
Saponin merupakan  senyawa  yang  tersusun  dari  aglikon  triterpenoid, steroid atau  stereodal glikoalkaloid yang bersifat non polar serta senyawa glikon yang bersifat polar, oleh sebab itu saponin memiliki  kemampuan  amfipatik (Tessa  M,  2014). Diantara  aktivitas  biologi  senyawa  tersebut  yang tersebar  di  tumbuhan  obat  adalah  antikanker  dan  antiinflamasi . Sedangkan  senyawa  alkaloid  juga beberapa  diantaranya  memiliki  efek  sitotoksis  dan  dapat  menginduksi  apoptosis sel  kanker (Diah  R, 2017). Diperkirakan senyawa  aglikon triterpenoid dan  alkaloid tersebut  terdistribusi  ke  pelarut n- heksan dan yang bertanggung jawab dalam kematian larva A. salina.
Profil noda KLT yang diperoleh berdasarkan fase gerak yang digunakan, dapat menjadi acuan pemilihan  fase  gerak  dalam  kromatografi  preparatif  selanjutnya (Ali  &  Wulan,  2018). Pendekatan tersebut sesuai dengan senyawa yang polar akan cendrung mudah terelusi oleh fase gerak yang polar pula dengan fase diam non polar begitu pula sebaliknya.

## 4. KESIMPULAN
Ekstrak  C.  odorata  dan  partisinya  dengan konsentrasi 1000,  500,  200,  100,  dan  10  ppm tergolong  dalam  rendah  toksik.  Kandungan  metabolit  sekunder  flavonoid, saponin,  triterpenoid,
Jurnal Keperawatan dan Kebidanan ISSN : 2621-0231 (Online) ISSN : 2580-1929 (Print) Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Merdeka Surabaya Jl. Ketintang Madya VII/2, Surabaya » Tel / fax : (031) 828 8902 / (031) 828 7317
Toksisitas Ekstrak Daun Kopasanda (Chromolaena Odorata) Terhadap Larva Artemia Salina Leach Sumardi, Dadang Irfan Husori, Taufit Julianto, Raihanil Fauza, Edita Eliska Page 64
alkaloid dan tanin diduga memiliki peran dalam memberikan efek toksik terhadap larva udang Artemia salina.  Metabolit  sekunder  yang  tertarik  dalam  pelarut  non  polar  memiliki  kecendrungan  aktivitas toksik yang lebih tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali, M., & Wulan, W. (2018). EFFECTS OF SAND AND SUGAR CONSENTRATION ROSELLA (Hisbiscus sabdariffaLinn) AGAINST QUALITY OF JELLY CANDY. Teknoboyo, 2(1).
Ali P, Elmira S, Amir RJ. Perspectives and Key Factors Affecting the Use of Herbal Extracts against
Multidrug-Resistant Gram-Negative Bacteria. Available from:https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123985392000124 Anonim. Materia Medika Indonesia Jilid VI. Jakarta: Departemen Kesehatan RI
Anonim, (2018). The Coefficient of Determination, r-squared. Available from: https://onlinecourses.science.psu.edu/stat501/print/book/export/html/255
Bagya  SK,  Rajashree  PV,  Sam  KG.  Preliminary  Anticancer  Screening  and  Standardization  of  some Indigenous  Medical  Plants  using  Cell-biology  and  Molecular  Biotechnology  Based  Models. Research Journal of Medical Plant. 2011; 5(6):728-737
Bhatti MZ , Ali A , Saeed A , Saeed A , Malik SA. Antimicrobial, antitumor and brine shrimp lethality assay of Ranunculus arvensis L. extracts. Pak J Pharm Sci. 2015 May; 28(3):945-949
Colin  W,  Parks.  Wildlife  Commission  of  the  Northern  Territory,  Australia.  Northern  Department  of
Primary Industry
and Fisheries,
Australia. 2006. Available from: http://www.iucngisd.org/gisd/speciesname/Chromolaena+odorata
D iah R. Alkaloids in Plant Cell Cultures. Technology & Medicine Open Access book publisher; 2017.
Available from: https://www.intechopen.com/books/alkaloids-alternatives-in-synthesis- modification-and-application/alkaloids-in-plant-cell-cultures.
José LC, Zaira LHI, Pilar P, María DGG. A comparison between two brine shrimp assays to detect in vitrocytotoxicity  in  marine  natural  products. Methodology  Article.  2012. Available  from: https://bmcbiotechnol.biomedcentral.com/articles/10.1186/1472-6750-2-17
Jurnal Keperawatan dan Kebidanan ISSN : 2621-0231 (Online) ISSN : 2580-1929 (Print) Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Merdeka Surabaya Jl. Ketintang Madya VII/2, Surabaya » Tel / fax : (031) 828 8902 / (031) 828 7317
Toksisitas Ekstrak Daun Kopasanda (Chromolaena Odorata) Terhadap Larva Artemia Salina Leach Sumardi, Dadang Irfan Husori, Taufit Julianto, Raihanil Fauza, Edita Eliska
Libretext. Thin Layer Chromatography. 2017. Available from:
https://chem.libretexts.org/Demonstrations_and_Experiments/Basic_Lab_Techniques/Thin_Layer _Chromatography.
Meyer  BN,  Ferrigni  NR,  Putman  JE,  Jacsben  LB,  Nicols  DE,  McLaughlin  JL.  Brine  Shrimp  :  A Convinient General Bioassay For Active Plant Constituen. Plant Medica. 1982; 45:31-34
Schmidt  GJ,  Schilling  EE.  Phylogeny  and  Biogeography  of  Eupatorium  (Asteraceae:  Eupatorieae)
Based on Nuclear ITS Sequence. American Journal of Botany. 2000 May; 87(5): 716 – 726.
Saeideh A, Abbas D, Moslem N. Evaluation of General Toxicity, Anti-Oxidant Activity and Effects of Ficus  Carica Leaves  Extract  on  Ischemia/Reperfusion  Injuries  in  Isolated  Heart  of  Rat.  Adv Pharm Bull. 2014 Dec; 4(2): 577 – 582
Sinambela SD, Suwarno A, Henry RS. Menentukan Koefisien Determinasi Antara Estimasi M Dengan Type  Welsch  Dengan  Least  Trimmed  Square  Dalam  Data  Yang  Mempunyai  Pencilan.  Saintia Matematika. 2014; 2(3):225 – 235.
Tessa  M,  Kalliope  KP,  and  Anne  O.  Metabolic  and  functional  diversity  of  saponins,  biosynthetic intermediates and semi-synthetic derivatives. Crit Rev Biochem Mol Biol. 2014 Nov; 49(6): 439 – 462.
Vida E, Maria B, Bambang PP. Cytotoxicity and Antiproliferative Activity Assay of Clove Mistletoe (Dendrophthoe  pentandra (L.)  Miq.)  Leaves  Extracts. Advances  in  Pharmacological  Sciences. 2016 . Available from: http://dx.doi.org/10.1155/2016/3242698.