## PENENTUAN PARAMETER KINETIK ENZIM XANTIN OKSIDASE TERINHIBISI EKSTRAK SELEDRI BERDASARKAN METODE GRAFIK LINEWEAVER-BURK DAN LANGMUIR
DETERMINATION OF KINETIC PARAMETERS OF XANTHINE OXIDASE ENZYME INHIBITED CELERY EXTRACT BASED ON LINEWEAVER-BURK

## AND LANGMUIR GRAPH METHODS
Atiqoh Zummah (1) , Rahma Diyan Martha (2)
(1) Universitas Islam Negeri Sunan Ampel Surabaya, (2) STIKES Karya Putra Bangsa Info Artikel

## Abstrak
Sejarah Artikel : Latar  belakang: Seledri  merupakan  tanaman  obat  yang  diketahui  mampu  menghambat aktivitas  enzim  xantin  oksidase  yang  berperan  dalam  pembentukan  asam  urat.  Prevalensi penyakit  asam  urat  (gout)  yang  tinggi  di  Indonesia,  yaitu  1,6-13,6%  per  seribu  penduduk membuat  penelitian  tentang  sifat  penghambatan  terbentuknya  produk  asam  urat  dalam  tubuh sangat diperlukan. Tujuan : mengetahui nilai parameter kinetik enzim xantin oksidase dengan adanya penambahan ekstrak seledri. Metode : Ekstrak seledri  dari daun dan batang  diperoleh menggunakan  metode soxhletasi dan pelarut hidroetanol. Penentuan parameter kinetik enzim dilakukan  dengan  metode  grafik  linear  Lineweaver-Burk  dan  Langmuir. Hasil :  Ekstrak hidroetanol daun seledri menunjukkan inhibisi terbaik sebesar 86.86%  (konsentrasi 30%) dan ekstrak  hidroetanol batang seledri  menunjukkan inhibisi terbaik sebesar 87.71%  (konsentrasi 40%). Penambahan ekstrak daun seledri pada enzim memberikan nilai Km sebesar 27.74 ppm dan Vmaks sebesar 3,55 U/mL pada metode grafik Lineweaver-Burk, sedangkan pada metode grafik Langmuir nilai Km mencapai 327.66 ppm dan Vmax sebesar 6.45 U/mL. Penambahan ekstrak  batang  seledri  menghasilkan  nilai  Km  sebesar  145.24  ppm  dan  Vmax  sebesar  4,55 U/mL  pada  metode  grafik  Lineweaver-Burk,  sementara  pada  metode  grafik  Langmuir  nilai Km  sebesar  321,09  ppm  dan  Vmaks  sebesar  5.21  U/mL. Kesimpulan :  Metode  grafik Langmuir  lebih  sesuai  digunakan  untuk  penentuan  parameter  kinetik  dalam  inhibisi  enzim xantin oksidase oleh ekstrak seledri.
Submitted:25 November 2018
Accepted : 6 Juni
2020
Publish Online : 8 Juni 2020
Kata Kunci: Asam urat, seledri, inhibitor, ekstrak hidroetanol

## Keywords:
Uric  acid,  celery, inhibitors, hydroethanol extract

## Abstract
Background:  Celery  is  a  medicinal  plant  that  is  known  to  inhibit  xanthine  oxidase  enzyme activity  in  uric  acid  formation.  The  high  prevalence  of  gout  in  Indonesia,  about  1.6-13.6%  per thousand  population  makes  the  study  of  the  inhibiting  properties  of  the  formation  of  uric  acid products  in  the  body  is  very  necessary. Objective:  determine  the  kinetic  parameters  value  of xanthine oxidase enzyme in the presence of celery extract. Celery extract from leaves and stem in this  research  was  obtained  using  the  Soxhletation  method  and  hydroethanol  solvent. Determination  of  enzyme  kinetic  parameters  was  carried  out  using  Lineweaver-Burk  and Langmuir  linear  graph  method.  Results:  hydroethanol  extract  of  celery  leaves  showed  the  best inhibition of 86.86% (concentration 30%) and the hydroetanol extract of celery stems showed the best inhibition of 87.71% (concentration 40%). Enzyme with the addition of celery leaves extract resulted in Km value of 27.74 ppm and Vmax value of 3.55 U / mL in the Lineweaver-Burk graph method,  while  according  to  Langmuir  graph  method  the  Km  value  reached  327.66  ppm  and Vmax value of 6.45 U/mL. Addition of celery stems extract resulted in Km value of 145.24 ppm and Vmax value of 4.55 U/mL in the Lineweaver-Burk graph method, while this extract resulted in  Km  value  of  321.09  ppm  and  Vmax  value  of  5.21  U/mL  in  the  Langmuir  graph  method. Conclusion: Langmuir graphic method was more suitable to determine kinetic parameters in the inhibition reaction of xanthine oxidase enzyme by celery extract .
Atiqoh Zummah | Penentuan Parameter Kinetik Enzim ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun ...

## PENDAHULUAN
Seledri merupakan tanaman obat yang diketahui mempunyai banyak manfaat. Salah satu manfaat  seledri  adalah  untuk  menghambat  aktivitas  enzim  xantin  oksidase.  Enzim  xantin oksidase merupakan enzim yang berperan dalam reaksi katalisis hipoxantin menjadi xantin dan selanjutnya menjadi asam urat (Patcher et al ., 2006). Asam urat disebut juga artritis gout yang merupakan penyakit degeneratif. Prevalensi penyakit gout di Indonesia sendiri sudah mencapai 1,6-13,6%  per  seribu  penduduk.  tingginya  prevalensi  penyakit  gout  di  indonesia  membuat penelitian  tentang  sifat  penghambatan  terbentuknya  produk  asam  urat  dalam  tubuh  sangat diperlukan. Iswantini  (2012)  melakukan  penelitian  tentang  pengujian  penghambatan  enzim xantin oksidase dengan esktrak seledri secara in vitro dan hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak  seledri  mampu  menghambat  aktivitas  dari  enzim  xantin  oksidase,  sehingga penghambatan  aktivitas  enzim  xantin  oksidase  ini  mampu  menghambat  reaksi  terbentuknya asam  urat.  Deviandra  (2013)  juga  melakukan  penelitian  pemberian  seduhan  seledri  pada  tikus putih jantan strain wistar dan hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian seduhan tersebut mampu menurunkan kadar asam urat serum pada tikus putih jantan.
Aktivitas  seledri  yang  mampu  menurunkan  kadar  asam  urat  ini  diduga  karena  adanya kandungan  flavonoid  dalam  seledri.  Daun  seledri  memang  diketahui  mengandung  banyak senyawa metabolit sekunder diantaranya senyawa golongan flavonoid (Nadinah, 2008). Dengan adanya  aktivitas  senyawa  flavonoid  diduga  akan  mempengaruhi  kinetika  dari  enzim  xantin oksidase. Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi aktivitas dari enzim selain konsentrasi enzim, suhu,  pH  substrat,  dan  activator  adalah  inhibitor  (Lehninger,  1997).  Karena  kemampuan penghambatan  terhadap  aktivitas enzim  xantin  oksidase inilah  flavonoid  dapat  disebut sebagai inhibitor enzim xantin oksidase (Iswantini, 2012).
Penelitian tentang kinetika penghambatan ekstrak seledri terhadap enzim xantin oksidase pernah diteliti oleh Iswantini (2012), dalam penelitiannya parameter kinetik enzim berupa Km dan  Vmaks  ditentukan  berdasarkan  grafik  Lineweaver-Burk  dan  pengujian  dilakukan  dengan menentukan  parameter  kinetik  enzim  tanpa  penambahan  ekstrak  etanol  seledri  serta  dengan penambahan  ekstrak  etanol  seledri.  Selain  dengan  menggunakan  grafik  Lineweaver-Burk, penentuan  parameter  kinetik  enzim  juga  dapat  ditentukan  dengan  metode  grafik  Langmuir (Emmanuel,  2006).  Penentuan  parameter  kinetik  enzim  xantin  oksidase  terinhibisi  ekstrak seledri  sudah  pernah  dilakukan  dengan  dengan  metode  grafik  Lineweaver-Burk,  namun menggunakan  metode  grafik  Langmuir  belum  pernah  dilakukan  (Zummah,  2018),  sehingga dalam  penelitian  ini  akan  dilakukan  penentuan  parameter  kinetik  enzim  berdasarkan  grafik Lineweaver-Burk dan Langmuir.

## METODE PENELITIAN

## Bahan Uji
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  tanaman  seledri  bagian  daun  dan batang. Sebelum tanaman seedri dibuat simplisia, tanaman seledri dipisahkan dari bagian daun dan batang selanjutnya dicuci bersih, dikeringkan, dan dibuat serbuk.
Atiqoh Zummah | Penentuan Parameter Kinetik Enzim ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun ...

## Bahan pembuatan Ekstrak dan Uji Aktivitas
Pelarut  yang  digunakan untuk  pembuatan  ekstrak  adalah  pelarut  hidroetanol.  Pelarut hidroetanol dibuat dengan perbandingan etanol dan air 7:3. Untuk pengujian aktivitas digunakan enzim xantin oksidase, substrat xantin, buffer fosfat pH 7,5, dan larutan HCl 0,5 M.

## Metode Pembuatan Ekstrak
Serbuk  kering  daun dan  batang  seledri  masing-masing  ditimbang  seberat 10  gram  dan dimasukkan  kertas  saring  dan  diikat  rapat.  Masing-masing  kertas  saring  yang  sudah  berisi serbuk  kering  daun  dan  batang  seledri  dimasukkan  kedalam  rangkaian  alat  soxhlet  untuk dilakukan  soxhletasi.  Proses  soxhletasi  dilakukan  sampai  sekitar  7  siklus.  Ekstrak  hasil soxhletasi dimasukkan dalam botol gelap dan disimpan dalam lemari es.

## Metode Pengujian Aktivitas
Aktivitas  enzim  xantin  oksidase  diuji  tanpa  dan  dengan  adanya  penambahan  ekstrak hidroetanol  daun  dan  batang  seledri.  Metode  pengujian  yang  digunakan  dengan  menggunakan prosedur dari sigma yang telah dimodifikasi. Ekstrak hidroetanol daun dan batang seledri yang digunakan  masing-masing  sebesar  10,  20,  30,  40,  dan  50%.  Masing-masing  ekstrak  sebanyak 0,4 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dicampur 1,5 mL larutan buffer fosfat PH 7,5. Campuran  ditambah  larutan  subtract  xantin  oksidase  0,15  mM  sebanyak  1  mL  dan  larutan enzim xantin oksidase sebanyak 0,1 mL. Campuran larutan diinkubasi pada suhu 25 ºC selama kurang  lebih  45  menit.  Untuk  menghentikan  reaksi campuran  larutan  ditambah  1  mL  HCl  0,5 M. Campuran larutan diukur dengan spektrofotometer UV pada panjang gelombang 290 nm.
Persamaan  yang  digunakan  untuk  menentukan  persen  inhibisi  dari  ekstrak  hidroetanol daun dan batang seledri adalah:
% 100 ) tan tan ( ) tan tan ( ) tan tan ( tan x blanko laru A kontrol laru A sampel laru A enzim dan sampel laru A blanko laru A kontrol laru A penghamba Persen
    
Larutan  kontrol  merupakan  larutan  tanpa  adanya  penambahan  ekstrak,  larutan  blanko merupakan  larutan  tanpa  adanya  penambahan  ekstrak  dan  enzim,  larutan  sampel  dan  enzim merupakan  larutan  dengan  adanya  penambahan  sampel  dan  enzim,  dan  larutan  sampel merupakan larutan dengan adanya penambahan ekstrak tanpa adanya enzim.
Untuk perhitungan aktivitas enzim digunakan persamaan berikut:
Pada  persamaan  tersebut  angka  3  merupakan  volume  campuran  reaksi  dan  symbol  df merupakan faktor pengenceran. Angka 12,2 merupakan koefisien estingsi milimolar asam urat pada serapan 290 nm dan 0,1 merupakan volume enzim yang dipakai.
Metode Penentuan Nilai K m dan V maks
Nilai parameter kinetik Km dan Vmaks ditentukan dengan menggunakan metode grafik Lineweaver-Burk dan Langmuir. Pengujian ini dilakukan dengan variasi substrat xantin 10, 20, 40,  80,  160,  320,  640,  1280,  2560,  dan  5120  ppm.  Grafik  Lineweaver-Burk  dihasilkan  dari hubungan 1/[S] terhadap 1/V. Grafik Langmuir dihasilkan dari hubungan [S] terhadap [S]/V.
) 1 , 0 )( 2 , 12 ( ) )( 3 ( tan tan ) / ( 290 290 df blanko laru Absorbansi uji laru Absorbansi mL unit enzim Aktivitas  
Atiqoh Zummah | Penentuan Parameter Kinetik Enzim ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun ...

## HASIL PENELITIAN
Hasil  pengujian  penghambatan  ekstrak  hidroetanol  daun  dan  batang  seledri  pada beberapa konsentrasi dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Profil persentase penghambatan ekstrak hidroetanol daun dan batang seledri
Interpretasi grafik lineweaver-Burk enzim dengan penambahan ekstrak daun seledri dan tanpa penambahan ekstrak daun seledri dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Grafik Lineweaver-Burk tanpa dan dengan penambahan ekstrak daun
Atiqoh Zummah | Penentuan Parameter Kinetik Enzim ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun ...
Interpretasi  grafik  lineweaver-Burk  enzim  dengan  penambahan  ekstrak  batang  seledri dan tanpa penambahan ekstrak batang seledri dapat dilihat pada Gambar 3.

## Gambar 3. Grafik Lineweaver-Burk tanpa dan dengan penambahan ekstrak batang
Interpretasi grafik Langmuir enzim dengan penambahan ekstrak daun seledri dan tanpa penambahan ekstrak daun seledri dapat dilihat pada Gambar 4.

## Gambar 4. Grafik Langmuir tanpa dan dengan penambahan ekstrak daun
Atiqoh Zummah | Penentuan Parameter Kinetik Enzim ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun ...
Interpretasi  grafik  Langmuir  enzim  dengan  penambahan  ekstrak  batang  seledri  dan tanpa penambahan ekstrak batang seledri dapat dilihat pada Gambar 5.

## Gambar 5. Grafik Langmuir tanpa dan dengan penambahan ekstrak batang

## PEMBAHASAN
Penelitian ini  menggunakan  ekstrak  hidroetanol  daun  dan  batang  seledri  yang  diperoleh dari metode soxhletasi. Masing-masing ekstrak diuji persentase penghambatan terhadap enzim oksidase.  Konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan  untuk  pengujian  penghambatan  sebesar  10,  20, 30,  40,  dan  50  %.  Pengujian  persentase  penghambatan  dilakukan  pada  serapan  290  nm.  Hasil pengujian  persen  penghambatan  menunjukkan  bahwa  aktivitas  penghambatan  ekstrak  daun seledri terbesar adalah 86.86% pada konsentrasi ekstrak 30% dan penghambatan ekstrak batang seledri  terbesar  adalah  87.71%  pada  konsentrasi  ekstrak  40%.  Keseluruhan  hasil  pengujian persen penghambatan dapat dilihat pada Gambar 1.
Hasil pada Gambar 1 juga menunjukkan bahwa dari konsentrasi ekstrak daun 10 sampai 30 % menunjukkan persen penghambatan yang semakin meningkat dan selanjutnya mengalami penurunan  dari  konsentrasi  30  sampai  50%.  Hal  ini  menunjukkan  aktivitas  penghambatan ekstrak  daun  optimum  adalah  pada  konsentrasi  30%.  Pola  yang  sama  juga  ditunjukkan  pada penghambatan oleh ekstrak batang seledri. Pada konsentrasi ekstrak seledri 10 sampai 40% menunjukkan  persen  penghambatan  yang  semakin  meningkat  dan  selanjutnya  menunjukkan penurunan  dari  konsentrasi  40  ke  50%,  berdasarkan  data  ini  aktivitas  penghambatan  ekstrak batang optimum adalah pada konsentrasi 40%.
Pengujian  untuk  menentukan  nilai  parameter  kinetik  enzim  berupa  Km  dan  Vmaks dilakukan  lebih  lanjut  dengan  menggunakan  metode  grafik  Lineweaver-Burk  dan  Langmuir. Pengujian  ini  dilakukan  dengan  menggunakan  beberapa  variasi  konsnetrasi  substrat.  Nilai parameter  kinetik  Km  dan  Vmaks  pada  metode  grafik  Lineweaver-Burk  diperoleh  dari  grafik hubungan  1/[S]  terhadap  1/V  dan  nilai  parameter  kinetik  Km  dan  Vmaks  pada  metode Langmuir diperoleh dari grafik hubungan [S] terhadap [S]/V.
Atiqoh Zummah | Penentuan Parameter Kinetik Enzim ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun ...
Grafik Lineweaver-Burk enzim tanpa dan dengan penambahan ekstrak hidroetanol daun seledri  dapat  dilihat  pada  Gambar  2  dan  grafik  Lineweaver-Burk  enzim  tanpa  dan  dengan penambahan  ekstrak  hidroetanol  batang  seledri  dapat  dilihat  pada  Gambar  3.  Penambahan ekstrak  daun  seledri  memberikan  nilai Km  sebesar 27.74  ppm  dan  Vmaks  sebesar  3,55  U/mL pada  metode  grafik  Lineweaver-Burk,  sedangkan  Penambahan  ekstrak  batang  seledri memberikan  nilai  Km  sebesar  145.24  ppm  dan  Vmaks  sebesar  4,55  U/mL.  Grafik  Langmuir enzim  tanpa  dan  dengan  penambahan  ekstrak  hidroetanol  daun  seledri  dapat  dilihat  pada Gambar 4 dan grafik Langmuir enzim tanpa dan dengan penambahan ekstrak hidroetanol batang seledri dapat dilihat pada Gambar 5. Penambahan ekstrak daun seledri memberikan nilai sebesar 327.66  ppm  dan  Vmaks  sebesar  6.45  U/mL  pada  metode  grafik  Langmuir,  sedangkan Penambahan  ekstrak  batang  seledri  memberikan  nilai  Km  sebesar  321,09  ppm  dan  Vmaks sebesar 5.21 U/mL. Berdasarkan data penelitian ini, metode penentuan parameter kinetik yang lebih dianggap sesuai dalam inhibisi enzim xantin oksidase oleh ekstrak seledri  adalah metode Langmuir,  hal  ini  dapat  dilihat  pada  nilai  regresi  linear  dari  metode  Langmuir  lebih  tinggi dibandingkan  metode  Lineweaver-Burk.  Pada  Grafik  Lineweaver-Burk  juga  terlihat  adanya distorsi v yang lebih  terlihat pada konsentrasi [S] kecil.
Menurut Lai (2014) metode grafik langmuir lebih akurat digunakan untuk menentukan parameter kinetik enzim berupa Km dan Vmaks, hal ini karena metode grafik Lineweaver-Burk diketahui  dapat  mendistorsi v dalam  kesalahan  eksperimen.  Kesalahan  juga  semakin  terlihat pada konsentrasi substrat yang kecil sehingga memberikan hasil yang tidak akurat. Pernyataan tersebut juga sesuai dengan yang dikemukakan oleh Wilkinson (1961) dan Moser (1985) yaitu metode  grafik  Langmuir  hanya  mempengaruhi  kemiringan  ( slope )  dalam  derajat  yang  sangat kecil  sehingga  lebih  akurat  untuk  digunakan  dalam  menentukan  nilai  parameter  enzim  berupa Km dan Vmaks, selain itu Doran (1995) juga menyatakan bahwa metode grafik Langmuir lebih sesuai digunakan dalam penentuan nilai Km dan Vmaks enzim untuk metode linearisasi.

## SIMPULAN
Berdasarkan  data  penelitian  dapat  disimpulkan  persentase  penghambatan  ekstrak  daun seledri terbesar adalah 86.86% pada konsentrasi ekstrak 30% dan penghambatan ekstrak batang seledri terbesar adalah 87.71% pada konsentrasi ekstrak 40%. Penambahan ekstrak daun seledri memberikan  nilai  Km  sebesar  27.74  ppm  dan  Vmaks  sebesar  3,55  U/mL  pada  metode  grafik Lineweaver-Burk,  sedangkan  memberikan  nilai  Km  sebesar  327.66  ppm  dan  Vmaks  sebesar 6.45 U/mL pada metode grafik Langmuir. Penambahan ekstrak batang seledri memberikan nilai Km sebesar 145.24 ppm dan Vmaks sebesar 4,55 U/mL pada metode grafik Lineweaver-Burk, sedangkan  memberikan  nilai  Km  sebesar  321,09  ppm  dan  Vmaks  sebesar  5.21  U/mL  pada metode  grafik  Langmuir.  Berdasarkan  hasil,  metode  penentuan  parameter  kinetik  yang  lebih dianggap sesuai dalam inhibisi ekstrak adalah metode Langmuir, hal ini dapat dilihat pada nilai regresi linear dari metode Langmuir lebih tinggi dibandingkan metode Lineweaver-Burk. Pada Grafik  Lineweaver-Burk    juga  terlihat  adanya  distorsi  V  yang  lebih    terlihat  pada  konsentrasi [S] kecil.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Atiqoh Zummah | Penentuan Parameter Kinetik Enzim ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun ...
Ucapan  terima  kasih  ditujukan  kepada  semua  pihak  yang  telah  membantu  dan berkontribusi dalam penelitian ini, sehingga penelitian ini dapat terlaksana dengan baik.

## REFERENSI
Deviandra,  R.,  Safitri,  F.,  &  Handaja,  D.  2013.  Efek  Pemberian  Seduhan  Seledri  (Apium graveolens L.) Terhadap Kadar Asam Urat Pada Tikus Jantan Strain Wistar (Rattus norvegicus)  Hiperurisemia.  Fakultas  Kedokteran  Universeitas  Muhammadiyah Malang, 9(2):75-81
Doran, P.M. 1995. Bioprocess Engineering Principle . London: Academic Press Ltd.
Emmanuel,.  M.  Papamichael,  dan  Leonidas,  G.T.  2006.  Enzyme  Kinetics  And  Modeling  Of Enzymatic  System.  In:  Ashok,  P.  Colin,  W.  Carlos,  R.S.  dan  Christian,  L.  (ed),
Enzyme technology , India: Springer .
Iswantini, D.  Ramdhani, T.H. dan Darusman, L.K. 2012. In Vitro Inhibition Of Celery (Apium graveolens L.) Extract on The Activity of Xanthine Oxidase And Determination of Its Active Compound. Indo. J. Chem ., 12(3), 247-254.
Iswantini,  D.  Nadinah,  Darusman,  L.K.  dan  Trivadila.  2012.  Inhibition  Kinetic  of Apium graveolens L. Ethanol Extract and Its Fraction on the Activity of Xnthine Oxidase and Its ctive Compound. J. Biol. Sci .
Lai, L.W. Teo, C.L. Wahidin, S. dan Annuar, M.S.M. 2014. Determination of Enzyme Kinetic Parameters  on  Sago  Starch  Hydrolysis  By  Linearized  Graphical  Methods. The Malaysian Journal of Analytical Sciences . 18(3) 527-533.
Lehninger, A. L. 1997. Biochemistry . New York: Worth Publisher Inc.
Moser,  A.  1985.  Rate  Equation  of  Enzyme  Kinetics. In:  Lai,  L.W. Teo,  C.L.  Wahidin,  S.  dan Annuar,  M.S.M.  2014.  Determination  of  Enzyme  Kinetic  Parameters  on  Sago Starch  Hydrolysis  By  Linearized  Graphical  Methods. The  Malaysian  Journal  of Analytical Sciences . 18(3) 527-533.
Nadinah.  2008.  Kinetika  Inhibisi  Ekstrak  Etanol  Seledri  ( Apium  graveolens L.)  dan  fraksinya Terhadap  Enzim  Xantin  oksidase  Serta  Penentuan  Senyawa  Aktifnya. Tesis . Bogor: Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Pacher,  P.  Nivorozhkin,  A.  dan  Szabe,  C.  2006.  Therapeutic  Effects  of  Xanthine  Oxidase Inhibitors:  Renaissance  Half  A  Century  After  The  Discovery  of  Allopurinol .
Pharmacological Reviews . 58 (1) 87-11 .
Wilkinson, G.N. 1961. Statistical Estimations In Enzyme Kinetics. Biochem. J . 80:324-332. Zummah, A & Martha, R.D. 2018. Antihyperurisemic Activity of Aqueous Celery Infusion by Xanthine Oxidase Enzyme Inhibition. Trad.Med.J . 23(3)131-136.