## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol.21, No.1, Juni 2024, Hal. 12-21 ISSN: 1693-7899 e-ISSN: 2716-3814
Studi In-Silico Senyawa Flavonoid Herba Kumis Kucing ( Orthosiphon stamineus B.) sebagai Penghambat Enzim Siklooksigenase-2
Dandy Rifaldy 1*) , Rosario Trijuliamos Manalu 2)
1 Program Studi Farmasi, Institut Sains dan Teknologi Nasional, Jakarta Selatan, Indonesia
2 Departemen Bioteknologi, Institut Sains dan Teknologi Nasional, Jakarta Selatan, Indonesia *Email: rio@istn.ac.id
Received: 15-04-2023 Accepted:13-09-2023 Published:30-06-2024

## INTISARI
Inflamasi  adalah  respons  tubuh  terhadap  rangsangan  yang  dianggap  berbahaya,  namun inflamasi  yang  tidak  tertangani  akan  menyebabkan  inflamasi  semakin  memburuk. Penghambatan enzim siklooksigenase-2 (COX-2) oleh Non Steroidal Anti Inflammatory Drug (NSAID) dapat mengurangi proses inflamasi, namun NSAID  memiliki banyak efek samping negatif. Penelitian ini bertujuan menguji senyawa flavonoid herba kumis kucing ( Orthosiphon stamineus B.) sebagai kandidat alternatif antiinflamasi, dengan melakukan studi in silico yang meliputi identifikasi sifat mirip obat, molecular docking , dan prediksi sifat farmakokinetik. Dari hasil  analisis  didapatkan  dua  senyawa  flavonoid  herba  kumis  kucing  yang  memiliki  afinitas lebih kuat dan stabil dalam pengikatan enzim siklooksigenase-2, yaitu cirsimaritin dan pilloin dengan skor molecular docking -79,64 dan -80,61, dibandingkan ligan alami IMN skor -78,46 dan ligan pembanding ibuprofen skor -78,05, dengan memiliki pengikatan situs aktif yang mirip yakni pada residu asam amino Ser 530. Senyawa tersebut juga memenuhi kriteria sifat mirip obat dan diprediksi >90% molekulnya dapat diabsorpsi di usus, dimetabolisme oleh CYP3A4 di hati, dan tidak menyebabkan hepatotoxic. Cirsimaritin dan pilloin berpotensi dikembangkan lebih lanjut untuk dijadikan kandidat antiinflamasi.
Kata kunci : Antiinflamasi, COX-2, Flavonoid, Herba kumis kucing, In-silico.

## ABSTRACT
Inflammation is the body's response to stimuli considered harmful, but untreated inflammation would get worse. Inhibition of the cyclooxygenase-2 enzyme ( COX-2 ) by Non-Steroidal Anti- Inflammatory Drugs ( NSAIDs ) can reduce the inflammatory process, but NSAIDs have many negative side effects. This study aimed to test flavonoid compounds from the kumis kucing herb ( Orthosiphon stamineus B. ) as a candidate alternative anti-inflammatory drug, by conducting in silico studies including drug-likeness identification, molecular docking, and pharmacokinetic property  prediction.  The  analysis  results  identified  two  flavonoid  compounds  from kumis kucing herb  that  had  strength  and  more  stable  affinities  in  binding  the  cyclooxygenase-2 enzyme,  namely  cirsimaritin  and  pilloin  with  molecular  docking  scores  -79.64  and  -80.61, compared to the native ligand IMN score of -78.46 and the reference ligand ibuprofen score - 78.05, with a similar binding site on the Ser 530 amino acid residue. These compounds also met drug-like criteria and were predicted to be >90% absorbable in the intestine, metabolized by CYP3A4  in  the  liver,  and  not  hepatotoxic,  suggesting  that  cirsimaritin  and  pilloin  have  the potential to be further developed as anti-inflammatory drug candidates.
Keywords : Anti Inflammatory, COX-2, Flavonoid, Herb. kumis kucing, In-silico .
* corresponding author:
Nama : Rosario Trijuliamos Manalu
Institusi
: Institut Sains dan Teknologi Nasional
Alamat institusi  : Jl. Moch. Kahfi II, Srengseng Sawah, Jakarta Selatan, DKI Jakarta, 12630.
E-mail
: rio@istn.ac.id

## PENDAHULUAN
Inflamasi merupakan respons tubuh terhadap rangsangan yang dianggap merugikan, seperti adanya patogen, senyawa beracun, dan terdeteksinya sel atau jaringan yang rusak (Chen dkk . , 2018). Inflamasi  terjadi  pada  saat  adanya  stimulus  yang  berpotensi  merusak  sel  atau  jaringan,  sehingga tubuh merespon dengan melepaskan mediator inflamasi yaitu prostaglandin yang dibentuk dari asam arakidonat dengan bantuan enzim siklooksigenase (COX) (Narasukma dan Setyopuspito, 2016). Jika enzim siklooksigenase dihambat, maka akan mengakibatkan asam arakidonat tidak dapat terkonversi menjadi prostaglandin, sehingga proses inflamasi akan berkurang (Zahra dan Carolia, 2017).
Penghambatan  enzim  siklooksigenase  salah  satunya  dengan  menggunakan  obat-obat golongan Non-Steroidal Anti Inflammatory Drug (NSAID). Penggunaan obat-obat NSAID memiliki beberapa efek samping yang merugikan yaitu meningkatnya risiko perdarahan pada gastrointestinal, hipertensi, gagal jantung, gagal ginjal akut, dan kerusakan pada hati apabila penggunaan obat NSAID tidak tepat (Soleha dkk . , 2018). Diperlukan alternatif lain yang memiliki efek samping negatif lebih rendah sebagai kandidat antiinflamasi.
Penggunaan bahan alam menjadi alternatif utama yang dikembangkan untuk menggantikan obat-obat kimia sintetis, karena bahan alam dianggap lebih aman dan dinilai memiliki efek samping negatif  yang  relatif  lebih  rendah  (Pratiwi  dan  Husni,  2017).  Bahan  alam  yang  telah  diketahui khasiatnya sebagai antiinflamasi adalah bahan alam yang mengandung senyawa flavonoid (Audina dkk, 2018). Salah satu bahan alam yang mengandung banyak senyawa flavonoid adalah herba kumis kucing  ( Orthosiphon  stamineus  B ),  yaitu  sinensetin,  eupatorin,  tetramethyl  scutellarin,  pilloin, ladanein cirsimaritin, salvigenin, trimethylapigenin, dan tetramethyl luteolin (Guo dkk., 2019).
Herba kumis kucing tumbuh di daerah beriklim sedang dan tropis seperti Malaysia, Indonesia, Australia, dan negara pasifik lainnya. Tanaman ini digunakan secara empiris oleh masyarakat dunia untuk mengatasi berbagai masalah kesehatan, diantaranya digunakan sebagai radang amandel, rematik, batu empedu, gangguan menstruasi, dan influenza (Faramayuda dkk . , 2021).
Diperlukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui efektivitas dari senyawa flavonoid kumis kucing  sebagai  kandidat  obat  antiinflamasi  dengan  mekanisme  kerja  sebagai  penghambat  enzim siklooksigenase-2. Salah satu cara yang dapat digunakan untuk mengetahui efektivitas dari senyawa adalah  pengujian  secara in  silico .  Pengujian  secara in  silico ini merupakan  uji  yang  dilakukan menggunakan  perangkat  komputer.  Uji  ini  memiliki  berbagai  keunggulan,  diantaranya  yaitu  biaya yang  dikeluarkan  relatif  lebih  rendah,  dan  waktu  yang  dibutuhkan  untuk  pengujian  cukup  singkat (Sivakumar  dkk . ,  2020).  Metode in  silico yang  dapat  digunakan  untuk  menganalisis  afinitas  suatu senyawa adalah molecular docking. Metode ini dimanfaatkan untuk memberikan gambaran interaksi, ikatan, dan afinitas suatu ligan (senyawa) dengan reseptornya (protein), maupun enzim dengan substrat atau  inhibitornya  (Agistia  dkk . ,  2013).  Selain  itu  diperlukan  juga  uji  sifat  mirip  obat,  uji  sifat farmakokinetik  dan  toksisitas  senyawa  dengan  metode in  silico guna  mengetahui  nilai  absorpsi, distribusi, metabolisme, ekskresi dan keamanan senyawa yang diuji (Manalu dkk . , 2021). Berdasarkan uraian di atas maka peneliti tertarik untuk melakukan pengujian secara in silico terhadap  senyawa-senyawa  flavonoid  herba  kumis  kucing  sebagai  penghambat  enzim siklooksigenase-2  (COX-2)  untuk  mengetahui  efektivitas  senyawa-senyawa  tersebut  sebagai kandidat obat antiinflamasi.

## METODE PENELITIAN

## Alat
Peralatan yang digunakan dalam penelitian adalah Perangkat keras Laptop Asus X441S dengan spesifikasi prosesor Intel Dual Core N3060 dengan kecepatan 2.48 GHz RAM 2 GB SSD 256 GB
dengan sistem operasi Windows 10 32-bit. Perangkat lunak yang digunakan yaitu PLANTS ( Protein Ligand Ant System ), MarvinSketch, YASARA View, Ligplot + dan PyMol. Sedangkan web server yang digunakan RCSB Protein Data Bank, PubChem, SwissADME, dan pkCSM .

## Bahan
Struktur Protein Siklooksigenase-2 yang diperoleh melalui website RCSB Protein Data Bank ( https://www.rcsb.org )  dengan  PDB  ID:  4COX.  Selain  itu  diperlukan  juga  data  struktur  senyawa- senyawa  flavonoid  dari  herba  kumis  kucing  dan  senyawa  obat  NSAID  (ibuprofen)  sebagai  ligan pembanding yang diperoleh melalui web server Pubchem ( https://www.pubchem.ncbi.nlm.nih.gov ).

## Posedur Penelitian Preparasi Protein dan Ligan Alami
Pemisahan  protein  dan  native  ligan  melalui software YASARA  View  dilakukan  dengan mengunggah  protein  4COX  (file>load>pdb  file),  selanjutnya  dilakukan  penghilangan  molekul  air (edit>delete>water), kemudian dilakukan penghilangan residu yang tidak dibutuhkan dalam protokol docking  (edit>delete>residu),  setelah  protein  dan  native  ligan  terpisah,  selanjutnya  dilakukan penambahan hidrogen (edit>add>hydrogen to all). Hasil tersebut disimpan dalam dengan nama protein dan ref_ligand dalam format.mol2.

## Validasi Docking Molekuler
Validasi  dilakukan  untuk  menentukan  nilai  root  mean  square  deviation  (RMSD)  dengan menambatkan kembali ligan alami dengan reseptor. Program YASARA digunakan untuk menghitung nilai RMSD dengan cara (Analyze> RMSD> Molecule> OK). Sebuah protocol dapat diterima apabila RMSD heavy atom kurang dari 2.0 Å.

## Preparasi Ligan Uji dan Ligan Pembanding
Preparasi  ligan  menggunakan software MarvinSketch  dengan  mengunggah  file  senyawa (file>open),  selanjutnya  dilakukan  penyesuaian  pH  senyawa  menjadi  7.4  sesuai  dengan  pH  dalam darah manusia yaitu dengan cara  (tools> protonation> major microscopies> pH 7.4). Selanjutnya file disimpan dalam bentuk Marvin file (*mrv). Setelah itu file dalam bentuk mrv diunggah kembali untuk dilakukan  pencarian  konformasi  senyawa  untuk  mendapatkan  10  senyawa  dengan  energi  terbaik dengan  cara    (tools>conformation>conformer>maxi-mum  conformer  10),  kemudian  10  konformasi senyawa tersebut disimpan dengan nama ligand dalam format Tripos mol2 (*mol.2).

## Uji Sifat Mirip Obat
Prediksi  mirip  obat  dilakukan  dengan  menggunakan  web  server  SwissADME ( http://www.swissadme.ch/ ) dengan cara mengunggah senyawa dalam bentuk canonical smiles pada kolom input senyawa kemudian pilih running .

## Molecular Docking
Docking dilakukan  pada  sistem  operasi Windows dengan software PLANTS,  Pada langkah pertama untuk mencari sisi pengikatan ligan pada sisi aktif protein dapat dilakukan dengan perintah “plants-- mode bind ref_ligand.mol2 5 protein.mol2”. Selanjutnya untuk menjalankan proses docking dimasukkan perintah “plants –mode screen pc_4cox.txt”.
Visualisasi Hasil Molecular Docking Pertama  menyatukan  ligan  hasil docking dengan  protein  target  menggunakan  YASARA (edit>join>  object)  disimpan  dengan  nama  ligand_protein.  Visualisasi  dengan  ligplot  dilakukan dengan  mengunggah  ligand_protein.pdb.  Secara  otomatis  ligplot  menampilkan  2D  interaksi  ligan protein. selanjutnya dilakukan visualisasi 3D dengan memilih ikon PyMol.

## Prediksi Sifat Farmakokinetik dan Toksisitas
Prediksi sifat farmakokinetik dilakukan menggunakan web server pkCSM ( http://biosig.unimelb.edu.au/pkcsm/prediction ) dengan  menginput  senyawa dalam bentuk canonical smiles pada kemudian pilih running.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Preparasi Protein dan Ligan Alami
Interaksi yang diamati pada docking adalah interaksi langsung antara ligan dengan protein, sehingga  pada  preparasi  protein  target  dan  native  ligand,  dilakukan  penghilangan  molekul  air, dikarenakan  air  banyak  terdapat  di  sekitar  tempat ligand dan  protein  berinteraksi,  sehingga  dapat berpotensi    menghalangi  berlangsungnya  proses molecular  docking (Susanti  dkk . ,  2019). Native ligand dan protein yang telah dipreparasi disimpan dalam format *mol.2. Berdasarkan preparasi protein dan native ligand didapatkan dua hasil preparasi yaitu struktur protein tunggal  dan  struktur  native  ligan tunggal  yang  telah  dilakukan  penghilangan  molekul  air  dan  sudah ditambahkan  atom  hidrogen  dalam    format  (*mol2), software yang  digunakan  dalam  preparasi  ini adalah YASARA, adapun hasil preparasi protein dan native ligan tersaji pada gambar 1 (a) dan (b).
(a)
(b)

## Gambar 1. Hasil Preparasi (a) Protein (b) Ligan Alami

## Validasi Molecular Docking
Protein  dan  ligan  alami  dilakukan  validasi  untuk  menentukan  nilai  root  mean  square deviation  (RMSD),  dimana  RMSD  adalah  parameter  yang  menggambarkan  seberapa  besar perubahan  interaksi  protein  dan  ligan  pada  struktur  kristal  sebelum  dan  sesudah  di docking untuk mengetahui nilai penyimpangannya, sebuah protocol dapat diterima apabila RMSD kurang dari 2.0 Å (Nadhiefa dkk., 2022). Validasi protein 4COX didapatkan hasil RMSD 0,9154 Å. Gambar hasil validasi disajikan pada gambar 2.

## Gambar 2. Hasil Validasi dengan Nilai RMSD 0,9154 Å

## Preparasi Ligan Uji dan Ligan Alami
Proses  selanjutnya  setelah  validasi  yaitu  dilakukan  penyiapan  ligan  uji  dan  ligan pembanding. Ligan uji yang digunakan adalah senyawa-senyawa flavonoid herba kumis kucing yaitu
eupatorin,  sinensetin,  5-hidroksi-6,7,3’,4’-tetrametoksiflavon,  6-hidroksi-5,7,3-trimetoksiflavon, 3’,5,6,7-tetramethoxy-4’-hydroxy-8-c-prenylflavon,  salvigenin,  ladanein,  tetramethyl  luteolin, cirsimaritin,  pilloin,  trimethylapigenin,  tetramethyl  scutellarin,  sedangkan  ligan  pembanding  yang digunakan adalah obat NSAIDs yaitu ibuprofen.
Pemilihan  ibuprofen  sebagai  ligan  pembanding  dikarenakan  ibuprofen  merupakan  obat dengan  mekanisme  kerja  penghambat  COX-2.  Keduanya  didapat  dari  web  server https://www.pubchem.ncbi.nlm.nih.gov dan  diunduh  dalam  format  *sdf.  Selanjutnya  dilakukan preparasi  terhadap  ligan  uji  dan  ligan  pembanding  menggunakan software MarvinSketch,  untuk mengkondisikan senyawa menjadi dalam kesesuaian pH darah dalam tubuh manusia yaitu pH 7,4. Preparasi  dilakukan  dengan  membuat  konformasi  pada  senyawa-senyawa  flavonoid  herba  kumis kucing  dan  ibuprofen  masing-masing  senyawa  dibuat  dalam  10  konformasi,  pengkonformasian senyawa ini ditujukan untuk mendapatkan 10 model senyawa dengan energi terbaik. Kemudian 10 konformasi senyawa tersebut disimpan dengan nama ligand dalam format Tripos mol2 (*mol.2).

## Uji Sifat Mirip Obat
Hasil prediksi sifat mirip obat terhadap senyawa flavonoid herba kumis kucing, didapatkan hasil semua senyawa yang diuji memenuhi kriteria Lipinski . Kriteria Lipinski yaitu senyawa dengan Bobot Molekul (BM) kurang dari 500, Log P kurang dari 4,15, Hydrogen Bond Donor (HBD) kurang dari  5,  dan  Hydrogen  Bond  Acceptor  (HBA)  kurang  dari  10  (Zain  dan  Anna,  2023).  Hasil  dari prediksi sifat mirip obat disajikan pada tabel I.
Ligan  uji  terlebih  dahulu  dilakukan  prediksi  sifat  mirip  obat  sebelum  dilakukan docking menggunakan web server SwissADME.  Sifat mirip obat diprediksi dengan mengikuti aturan Lipinski rule of five, yaitu dengan mengukur bobot molekul, Log P , hydrogen bond donor, hydrogen bond acceptor ,  dan  nilai  m olar  refractivity .  Hasil  pada  tabel  I,  menunjukkan  bahwa  semua  senyawa- senyawa  flavonoid  herba  kumis  kucing  yang  diprediksi  memiliki  nilai  yang  memenuhi  kriteria Lipinski , sehingga diprediksi memiliki tingkat absorpsi atau permeabilitas yang baik terhadap lipid bilayer yang terdapat di dalam tubuh manusia, dapat dengan mudah berdifusi menembus ke dalam membran sel, dan berpotensi untuk dikembangkan menjadi obat per oral (Pires dkk., 2015). Senyawa yang  memenuhi  kriteria Lipinski selanjutnya  dapat  dilakukan  pengujian docking molekuler  untuk mendapatkan  skor docking ,  sehingga  dapat  diketahui  afinitasnya  terhadap  protein  enzim siklooksigenase-2.
Tabel I. Hasil Uji Sifat Mirip Obat Senyawa Flavonoid Herba Kumis Kucing
No Senyawa BM Log P HBD HBA 1 Eupatorin 344.32 2.53 2 7 2 Sinensetin 372.37 3.10 0 7 3 5-Hidroksi-6,7,3’,4’-Tetrametoksiflavon 358.34 2.89 1 7 4 6-hidroksi-5,7,3-Trimetoksiflavon 314.29 2.52 2 6 5 3’,5,6,7-Tetramethoxy-4’-hydroxy-8-C-prenylflavon 314.29 2.59 2 6 6 Salvigenin 328.32 2.88 1 6 7 Ladanein 314.29 2.52 2 6 8 Tetramethyl Luteolin 342.34 3.10 0 6 9 Cirsimaritin 314.29 2.46 2 6 10 Pilloin 314.29 2.57 2 6 11 Trimethylapigenin 312.32 3.10 0 5 12 Tetramethyl Scutellarin 342.34 3.01 0 6

## Molecular Docking
Sistem akan mencari sisi pengikatan ( binding site ) antara ligan dengan protein dalam docking molekuler  dengan  PLANTS,  yaitu  berdasarkan  posisi  ikatan  native  ligan  dengan  protein  yang nantinya akan diduduki oleh ligan uji (Manalu dkk . , 2021). PLANTS selanjutnya menghitung skor docking untuk menentukan afinitas antara ligan dengan reseptor. Skor docking adalah nilai afinitas yang menentukan kualitas ligan yang diuji. Skor docking yang rendah merepresentasikan interaksi antara ligan dengan reseptor semakin kuat dan stabil (Aziz, dkk., 2022). Hasil pencarian posisi sisi pengikatan antara native ligan dengan protein target, PLANTS mendeteksi native ligan berada pada koordinat  x:  24,8487,  y:  22,2946,  z:  15,1256,  dan  berada  pada  radius  11,725. Hasil  skor docking antara ligan terhadap protein disajikan dalam tabel II.
Tabel II. Hasil Skor Molecular Docking Senyawa Flavonoid Herba Kumis Kucing terhadap
Reseptor COX-2 No Nama Senyawa Skor Docking 1 Pilloin - 80,61 2 Cirsimaritin -79,64 3 Native ligand (IMN) - 78,46 4 Ibuprofen - 78,05 5 Trimethylapigenin - 77,83 6 Tetramethyl Luteolin -76,71 7 Ladanein -76,33 8 Eupatorin - 76,03 9 Salvigenin - 73,02 10 6-hidroksi-5,7,3-Trimetoksiflavon - 70,90 11 3’,5,6,7-Tetramethoxy-4’-hydroxy-8-C-prenylflavon - 70,89 12 5-Hidroksi-6,7,3’,4’-Tetrametoksiflavon - 67,20 13 Tetramethyl Scutellarin - 66,25 14 Sinensetin - 64,72
Berdasarkan  hasil molecular  docking pada  tabel  II,  didapatkan  hasil  beberapa  senyawa flavonoid herba kumis kucing memiliki skor yang lebih baik jika dibandingkan skor native ligand (IMN) dan ligan pembanding (ibuprofen), senyawa tersebut adalah cirsimaritin dan pillion dengan nilai  -79,64  dan  -80,61.  Beberapa  senyawa  memiliki  skor  yang  hanya  sedikit  terpaut  dari  native ligand  dan  ligan  pembanding,  diantaranya  yaitu  senyawa  trimethyl  apigenin,  tetramethyl  luteolin, ladan- ein, dan eupatorin. Beberapa senyawa lainnya memiliki skor yang terpaut cukup jauh dari skor native ligand dan ligan pembanding.
Skor docking dari  senyawa  cirsimaritin  dan  pilloin  mengindikasikan  bahwa  senyawa  tersebut memiliki  afinitas  yang  lebih  kuat  dan  stabil      dalam      berikatan  dengan  enzim  siklooksigenase-2, dibandingkan dengan afinitas dari native ligan (IMN) dan ligan pembanding (ibuprofen). Hasil ini juga dapat menggambarkan bahwa senyawa cirsimaritin dan pilloin berpotensi untuk dikembangkan sebagai kandidat obat antiinflamasi melalui penghambatan enzim siklooksigenase-2.

## Visualisasi Hasil Molecular Docking
Tahap  selanjutnya  yaitu  visualisasi  hasil molecular  docking antara  ligan  dengan  protein target.  Visualisasi  bertujuan  untuk  mengamati  residu  asam  amino  yang  berinteraksi  dan  jenis interaksi apa saja yang terjadi antara ligan dengan protein target (Yeni dkk., 2021). Hasil visualisasi disajikan dalam gambar 2.
Enzim siklooksigenase-2 memiliki sisi aktif yang terletak di ujung molekul yaitu pada residu asam  amino  Ser  530  dan  Tyr  385.  Asam  amino  tersebut  berperan  dalam  penghambatan  enzim siklooksigenase-2 (Gimenez dkk., 2019). Hasil penelitian ditemukan ikatan hidrogen pada senyawa pilloin  dan  cirsimaritin  terhadap  residu  asam  amino  Ser  530,  hal  ini  sesuai  dengan  literatur  yang menyebutkan bahwa sisi aktif enzim siklooksigenase-2 berada pada residu asam amino Ser 530.
(a)
(b)
Gambar 2. Visualisasi Hasil Molecular Docking Senyawa (a) Cirsimaritin (b) Pilloin terhadap Enzim Siklooksigenase-2.
Selain itu ditemukan juga ikatan lain pada senyawa cirsimaritin yakni ikatan hidrofobik pada residu asam amino Leu 352, Leu 534, Trp 387, Phe 381, Phe 205, Thr 206, Val 344, dan Val 349, juga  terdapat  interaksi  van  der  waals  pada  residu  asam  amino  Phe  209.  Pada  senyawa  pilloin ditemukan juga interaksi hidrofobik pada residu asam amino Thr 206, Phe 205, Tyr 348, Phe 518, Leu 352, dan Phe 381, serta ditemukan interaksi van der waals pada residu asam amino Trp 387, dan Phe 209. Berdasarkan skor docking yang lebih rendah dan hasil visualisasi yang menunjukkan adanya ikatan  terhadap  sisi  aktif  reseptor,  menandakan  bahwa  senyawa  cirsimaritin  dan  pilloin  tertambat dengan  baik  dan  dapat  berperan  dalam  penghambatan  enzim  siklooksigenase-2,  sehingga menguatkan  prediksi  senyawa  cirsimaritin  dan  pilloin  untuk  dapat  dijadikan  sebagai  kandidat senyawa inhibitor enzim siklooksigenase-2.

## Prediksi Sifat Farmakokinetik dan Toksisitas
Cirsimaritin  dan  pilloin  diprediksi  sifat  farmakokinetiknya,  untuk  memprediksi  absorpsi, distribusi,  metabolisme,  ekskresi  dan  toksisitasnya.  Data  hasil  sifat  farmakokinetik  dan  toksisitas senyawa cirsimaritin dan pilloin disajikan dalam tabel III.
Prediksi  sifat  farmakokinetik  dan  toksisitas  dilakukan  dengan  menggunakan web  server  pkCSM.  Prediksi  sifat  farmakokinetik  yaitu  meliputi  absorpsi,  distribusi, metabolisme, dan ekskresi. Sifat tersebut dapat mempengaruhi tingkat paparan obat ke jaringan, serta pengikatan untuk  sampai  di  tempat kerja dan menimbulkan efek  yang diinginkan (Nursanti, 2019).
Prediksi absorpsi dari senyawa cirsimaritin dan pilloin memiliki kelarutan tinggi dalam  air,  dikarenakan  nilai  kelarutan  air  >-6  menunjukkan  kelarutan  yang  tinggi (Abdullah dkk . , 2021). Pilloin dan cirsimaritin diprediksi dapat menembus sel Caco-2 dengan nilai permeabilitas >0,90, dan juga >90% molekulnya dapat diserap di usus.
serta memiliki permeabilitas kulit yang tinggi, sehingga berpotensi untuk dapat dijadikan sebagai sediaan topikal (Nursanti, 2019).
Kedua  senyawa  tersebut  diprediksi  memiliki  nilai  distribusi  yang  tinggi  yaitu >0,71 L/kg, nilai VD yang tinggi maka menunjukkan semakin banyak jumlah obat yang didistribusikan di jaringan (Nursanti, 2019). Keduanya juga menunjukkan nilai fraksi tidak terikat yang sangat rendah, sehingga lebih banyak yang berada terikat pada protein serum.

## Tabel III Hasil Prediksi Sifat Farmakokinetik dan Toksisitas  Senyawa Cirsimaritin dan Pilloin
Prediksi Parameter Nilai Prediksi Cirsimaritin Pilloin Kelarutan dalam air (log mol/L) -3.481 -3.215 Permeabilitas Caco-2 (log Papp 1.022 1.055 x 10 -6 cm/s) Absorpsi Penyerapan pada Intestinal (%) 93.987 93.383 Permeabilitas Kulit (log Kp) -2.745 -2.771 Substrat P-glikoprotein Yes Yes Inhibitor I & II P-glikoprotein No No VDss (log L/kg) 0.001 0.019 Distribusi Fraksi tanpa ikatan (Fu) Permeabilitas BBB (log BB) 0.093 -0.59 0.098 -0.551 Permeabilitas CNS (log PS) -2.234 -2.312 CYP2D6 substrat No No CYP3A4 substrat Yes Yes Metabolisme CYP2C9 inhibitor Yes No CYP2D6 inhibitor No No CYP3A4 inhibitor No No Eksresi Klirens total (log ml/min/kg) Substrat Renal OTC2 0.587 No 0.672 No Toksisitas AMES toxicity Max. tolerated dose (human) (log mg/kg/day) hERG I inhibitor hERG II inhibitor Oral Rat Acute Toxicity (LD50)    (log mol/kg) Hepatotoxicity No 0.033 No No 2.254 No No 0.251
No No 2.13 No
Metabolisme  senyawa  cirsimaritin  dan  pilloin  cenderung  oleh  sitokrom CYP3A4 di hati, dengan kecepatan ekskresi (CLtotal) cirsimaritin = 0,587, dan pilloin =  0,672  (log  ml/min/kg)  tanpa  melali  dan  tanpa  mempengaruhi Organic  Cation Transporter 2.  Pada  prediksi  toksisitas  diketahui  bahwa  cirsimaritin  dan  pilloin memiliki nilai toleransi maksimum dosis  sebesar 0,003 dan 0,251 (log mg/kg/hari) dan diketahui nilai LD 50 untuk senyawa Cirsimaritin = 2,254 dan Pilloin = 2,13 (log mol/kg), serta diprediksi  tidak menimbulkan efek mutagenik, tidak menjadi penghambat hERG I/II, dan tidak menyebabkan hepatotoksik.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  studi in-silico pada  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  cirsimaritin  dan pilloin  adalah  senyawa  flavonoid  dari  herba  kumis  kucing  yang  memiliki  potensi  untuk dikembangkan menjadi kandidat antiinflamasi dengan kerja penghambatan enzim siklooksigenase-2 sebagai alternatif pengganti NSAIDs.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah, S. S., Putra, P. P., Antasionasti, I., Rundengan, G., Suoth, E. J., Abdullah, R., dan Abdullah, F . 2021 ‘Analisis  Sifat  Fisikokimia,  Farmakokinetik  Dan  Toksikologi  Pada  Pericarpium  Pala  ( Myristica fragransa ) Secara Artificial Intelligence’, Chemistry Progress , 14(2), 81.
Agistia, D. D., Purnomo, H., Tegar, M., dan Nugroho, A. E. 2013 ‘Interaction Between Active Compounds from Aegle Marmelos Correa As Anti Inflammation Agent With Cox-1 And Cox-2 Receptor’, Trad. Med. J. 18(2), 80–87.
Audina, M., Yuliet dan Khaerati, K. 2018, ‘Efektivitas AntiinflamasiI Ekstrak Etanol Daun Sumambu ( Hyptis capitata Jacq.) pada Tikus Jantan ( Rattus norvegicus L.)’, Biocebeles , 12(2), 17–23.
Aziz,  A.,  Andrianto,  D.  dan  Safithri,  M.  2022,  ‘Penambatan  Molekuler  Senyawa  Bioaktif  Daun  Wungu ( Graptophyllum Pictum (L) Griff) sebagai Inhibitor Tirosinase’, Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology , 9(2), hal. 94.
Chen, L., Deng, H., Cui, H., Fang, J., Zuo, Z., Deng, J., Li, Y., Wang, X., dan Zhao, L. 2018 ‘Inflammatory Responses and Inflammation-Associated Diseases in Organs’, Oncotarget , 9(6), 7204–7218. Faramayuda,  F.,  Totik  S.  M.,  Elfahmi,  dan  Sukrasno  (2021)  ‘Orthosiphon  Stamineus  Benth  As  A  Potential Herbal Medicine’, Seminar Nasional Riset Kedokteran (SENSORIK II) 2021 , 79–87.
Gimenez-Bastida,  J.  A.,  Boeglin,  W.  E.,  Boutaud,  O.,  Malkowski,  M.  G.,  Schneider,  C ., 2019  ‘Residual Cyclooxygenase Activity of Aspirin-Acetylated COX-2 Forms 15R-Prostaglandins That Inhibit Platelet Aggregation’, FASEB Journal , 33(1), 1033–1041.
Guo, Z., Liang, X. dan Xie, Y. 2019 ‘Qualitative And Quantitative Analysis On The Chemical Constituents In Orthosiphon stamineus Benth. Using Ultra High-Performance Liquid Chromatography Coupled With Electrospray  Ionization  Tandem  Mass  Spectrometry’, Journal  of  Pharmaceutical  and  Biomedical Analysis , 164, 135–147.
Manalu, R. T., Safitri, H., Sari, H. P., Devina, R., Irnawati, I., dan Liliwana, E. A.  2021 ‘Analisis In-Silico Penghambatan  Main  Protease  (MPRO)  Pada  Sars-Cov-2  Oleh  Senyawa  Aktif  Teh  Hijau  ( Camelia sinensis )’, Jurnal Farmagazine , 8(2), 1.
Nadhiefa,  R.  H.,  Rosario  T. M.,  dan  Subaryanti  2022  ‘Molecular  Docking  of  Turmeric  Active  Compounds (Curcuma  longa  L.)  against  Main  Protease  in  Covid-19  Disease’, East  Asian  Journal  of Multidisciplinary Research , 1(3), 353–364.
Narasukma, A. E., dan Setyopuspito, P. A. 2016 ‘Uji Daya Antiinflamasi dan Antipiretik Ekstrak Etanol Daun Lengkeng  ( Dimocarpus  longan Lour)  pada  Tikus  Putih  Jantan  ( Rattus  Norvegicus )  Galur  Wistar’, Jurnal Ilmiah Farmasi , 12(2), 1–14.
Nursanti,  O.  (2019)  ‘Validasi  Penambatan  Molekul  Untuk  Mendapatkan  Ligan  Aktif  Pada  Reseptor Cyclooxygenase 2’, Prosiding Seminar Informasi Kesehatan Nasional
Pires, D. E. V., Blundell, T. L. dan Ascher, D. B. 2015 ‘pkCSM: Predicting Small-Molecule Pharmacokinetic and Toxicity Properties Using Graph-Based Signatures’, Journal of Medicinal Chemistry , 58(9), 4066– 4072.
Pratiwi,  S.  dan  Husni,  P.  2017  ‘Artikel  Tinjauan:  Potensi  Penggunaan  Fitokonstituen  Tanaman  Indonesia Sebagai Bahan Aktif Tabir Surya’, J. Farmaka , 15(4), 18–25.
Sivakumar, K. C., Haixiao, J., Naman, C. B., Sajeevan, T. P. 2020, ‘Prospects of Multitarget Drug Designing Strategies by  Linking Molecular Docking and Molecular Dynamics To Explore The Protein–Ligand Recognition Process’, Drug Development Research , 81(6), 685–699.
Soleha,  M.,  Isnawati,  A.,  Fitri,  N.,  Adelina,  R.,  dan  Soblia,  H.  2018  ‘The  Profile  of  Nonsteroidal Antiinflammatory  Drugs  Use  in  Indonesia,’ Puslitbang  Biomedis  dan  Teknologi  Dasar  Kesehatan, Kementerian Kesehatan, Jakarta, Indonesia 2 , 8(2), 109–117.
Susanti, N. M. P., Laksmini, N. P. L., Noviyanti, N. K. M., Arianti, K. M., Duantara, I, K, 2019  ‘Molecular Docking  Terpinen-4-Ol  Sebagai  Antiinflamasi  Pada  Aterosklerosis  Secara  in  Silico’, Jurnal  Kimia , 221.
Yeni, Y., Rachmania, R. dan Yanuar, M.D. 2021 ‘In Silico Study of Compounds Contained in Hemigraphis alternata  Leaves  against  5-LOX  for  Anti-Inflammatory’, Indonesian  Journal  of  Pharmaceutical Science and Technology , 8(1), 34.
Zahra,  A.P.  dan  Carolia,  N.  2017  ‘Obat  Anti-inflamasi  Non-steroid  (OAINS):  Gastroprotective  vs Kardiotoksik, Majority’ , 6, 153–158.
Zain, D.N. dan Anna, Y. 2023 ‘In Silico Study of Monascus sp . Pigment Derivatives as Anti Cardiovascular Candidate’, Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik, 19(1), 1–14.