## UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK ETANOL DAUN BULIAN
( Eusideroxylon zwageri ) TERHADAP FUNGSI GINJAL MENCIT
PUTIH BETINA ( Mus musculus Linn.)
Amalia Sakinah 1 , Muhaimin 2 , Yuliawati 1*
1 Jurusan Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Jambi, Jambi, Indonesia
2 Jurusan Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Padjajaran, Bandung, Indonesia *Email: yuliawati.saputra@gmail.com

## INTISARI
Eusideroxylon  zwageri memiliki  manfaat  secara  empiris  yang  dapat  digunakan  untuk  mengobati demam,  sakit  perut,  dan  alergi.  Dalam  menjadikan  obat  tradisional  sebagai  fitofarmaka  perlu dilakukan  pengembangan  obat  melalui  tahap  uji  praklinik  dengan  melakukan  uji  toksisitas  untuk memperkirakan  munculnya  efek  toksik  sesudah  dilakukan  pemberian  sediaan  uji  dalam  waktu singkat. Tujuan penelitian untuk mengetahui toksisitas akut ekstrak etanol Eusideroxylon zwageri terhadap fungsi ginjal mencit putih betina yang dinilai dengan kadar kreatinin serum darah mencit dan  histologi  organ  ginjal.  Penelitian  ini  menggunakan  metode  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dan posttest control group design terdiri dari kontrol negatif (Na CMC 0,5%), P1 (250 mg/kgBB), P2 (500 mg/kgBB), P3 (1.000 mg.kg/BB) dan P4 (2.000 mg.kg/BB) ekstrak etanol Eusideroxylon zwageri . Parameter yang diamati nilai LD 50 , kadar kreatinin serum, berat organ ginjal dan histologi ginjal dengan penetuan nilai skoring kerusakan ginjal menggunakan metode skoring vanient. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol Eusideroxylon zwageri sampai dosis 2.000 mg/kgBB tidak  menunjukkan  adanya  kematian  terhadap  hewan  uji  sehingga  nilai  LD 50 semu  yaitu  >2.000 mg/kgBB. Namun pemberian ekstrak etanol Eusideroxylon zwageri ini dapat meningkatkan kadar kreatinin  serum  di  atas  normal  dan  berpengaruh  secara  nyata  terhadap  gambaran  histologi  ginjal mencit yang menyebabkan kerusakan organ ginjal.
Kata kunci: Eusideroxylon zwageri , Histologi ginjal, Kreatinin serum, Toksisitas akut

## ABSTRACT
Eusideroxylon  zwageri  has  empirical  benefits  that  can  be  used  to  treat  fever,  stomach  pain,  and allergies.  Purpose  of  this  study  was  to  determine  acute  toxicity  the  ethanolic  extract  of Eusideroxylon zwageri on kidney function of female white mice which was assessed by looking at serum  creatinine  level  of  the  mice  blood  and  the  histology  of  kidney  organs.  This  study  used  a completely randomized design and posttest control group design consisting of negative control (Na CMC  0.5%),  P1  (250  mg/kgBB),  P2  (500  mg/kgBB),  P3  (1,000  mg.  kg/BB)  and  P4  (2,000 mg.kg/BB) ethanol extract Eusideroxylon zwageri.  Parameters observed were LD 50 values, serum creatinine  levels,  kidney  weight  and  kidney  histology  by  determining  tvalue  scoring  for  kidney damage  using  vanient  scoring  method.  Results  showed  that  ethanol  extract  of  Eusideroxylon zwageri up to a dose of 2,000 mg/kgBB did not show any death in test animals so that the pseudo LD 50 value was >2,000 mg/kgBB. However, the administration ethanolic extract of Eusideroxylon zwageri can increase serum creatinine levels above normal and significantly affect the histology of the mice kidney which causes kidney damage.
Key words: Acute toxicity , Eusideroxylon zwageri, Kidney histology, Serum creatinine

## PENDAHULUAN
Tanaman  bulian  yang  memiliki  nama  ilmiah Eusideroxylon  zwageri merupakan  salah  satu komoditas hutan  yang termasuk famili Lauraceae. Tanaman ini tersebar  pada beberapa daerah di Indonesia yaitu di provinsi Jambi, Sumatera Selatan dan Kalimantan.  Tanaman bulian ini terdapat beberapa  perbedaan  nama  pada  masing-masing  daerah  diantaranya  bulian  (Jambi),  bulian  rambai onglen (Sumatera Selatan), telian, belian, tulian, tubulin dan ulin (Kalimantan). Habitat asli bulian di  Provinsi  Jambi  terdapat  di  Taman  Hutan  Raya  Sultan  Thaha  Senami    yang  terletak  pada Kecamatan Muaro Bulian, Kabupaten Batanghari (Daulay, 2013).
E.  zwageri secara    empiris  digunakan  sebagai  obat  sakit  perut,  alergi  dan  demam  (Mariani dkk.,  2020).    Kandungan  senyawa  aktif  ekstrak E.  zwageri terdiri  atas  alkaloid,  tanin,  saponin, flavonoid  serta  steroid  (Khairunnisa,  2017).  Dalam E.  zwageri juga  terdapat  kandungan  senyawa alkaloid jenis aporfin (Afrida, 2014). Berdasarkan penelitian sebelumnya mengenai E. zwageri oleh Mariani  dkk  (2020)  tentang  ekstrak  metanol E.  zwageri dengan  respon  hambatan  pertumbuhan bakteri  sedang  hingga  kuat  sehingga  bisa  menghambat  perkembangan  bakteri Enterococcus faecalis,  Staphylococcus  aureus,  Salmonella  typhi dan Escherichia  coli .  Selanjutnya  penelitian terdahulu  oleh  Sandra  (2021)  mengenai  ekstrak  etanol E.  zwageri dapat  menurunkan  kadar  gula darah    pada  mencit  putih  jantan  dengan  dosis  paling  efektif  yaitu  100  mg/kgBB. Penelitian  lain oleh  Muhaimin dkk (2016)  berhasil  melakukan  isolasi  senyawa  eusiderin  A  yang  terdapat  pada kayu E.  zwageri dengan  melakukan  pengujian  aktivitas  antijamur  patogen  tanaman Rhizoctonia solani dengan hasil daya hambat paling efektif yaitu 5 ppm .
Dalam  proses  menjadikan  obat  tradisional  sebagai  fitofarmaka  perlu  dilakukan pengembangan obat meliputi tahap seleksi, uji praklinik dan uji klinik. Pengujian toksisitas dan uji aktivitas dilakukan sebagai bentuk pengujian praklinik (Pradono dkk . , 2019). Pengujian toksisitas ini  berguna  untuk  mendeteksi  tingkat    kerusakan  yang  disebabkan  oleh  suatu  senyawa  terhadap materil  biologi  maupun  nonbiologik  serta  sangat  penting  dalam  perkembangan  obat  baru  untuk mengetahui  potensi  terapi  yang  dimiliki  oleh  molekul  suatu  obat  (Sasmito  dkk . ,  2015).  Uji toksisitas praklinik terdapat beberapa macam pengujian, salah satunya dengan pengujian toksisitas akut  oral.  Untuk  memperkirakan  munculnya  efek  toksik  sesudah  diberikan  sediaan  uji  secara singkat  dengan  dosis  tunggal  maupun    dosis  berulang  dalam  waktu  24  jam    secara  oral  maka dilakukan  uji  toksisitas  akut  oral  (BPOM,  2014).  Uji  LD 50 merupakan  penentuan  dosis  yang menyebabkan kematian 50% populasi hewan percobaan yang terpapar senyawa kimia dari sediaan uji dan dinyatakan dengan satuan mg/kgBB.
Ginjal  merupakan  organ  utama  yang  menjadi  sasaran  efek  toksik  yang  memiliki  peranan untuk  membawa  toksikan  melewati  tubulus,  mengkonsentrasi  toksikan  pada  filtrate  serta mengaktifkan  beberapa  toksikan  tertentu  (Lu,  1995).  Ketika  suatu  zat  toksik  masuk  ke  dalam tubuh,  ginjal  juga  rentan  terkena  efek  toksisitas.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  perlu  dilakukan untuk  bisa  mengetahui  efek  toksik  ekstrak  etanol E.  zwageri terhadap  fungsi  ginjal  mencit  putih betina.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Peralatan  yang    digunakan  dalam  penelitian  ini  diantaranya  gelas  beker  (Pyrex®), Erlenmeyer  (Pyrex®),  batang  pengaduk,  tabung  reaksi,  alat  bedah,  gelas  ukur,  botol  maserasi, kertas  saring,  grinder,  cawan  porselin,  mortir  dan  stamfer,  timbangan  digital,  rotary  evaporator, sonde  oral,  spuit  1  CC,  neraca  analitik,  corong,  stopwatch,  oven,  kandang  mencit,  kawat,  tempat pakan dan minum hewan, waterbath, hot plate , Mikrotom, Mikroskop Olympus CX43, cover glass, object glass, mikropipet, vacuum tube plain , sentrifuge, kuvet dan spektrofotometer. Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  daun  bulian  ( Eusideroxylon  zwageri) , etanol  70%,  Na-CMC,  Aquadest,  HCl,  serbuk  Mg,  pereaksi  dragendroff,  pereaksi  mayer,  FeCl 3, asam  asetat,  asam  sulfat,  reagen  kit  kreatinin,  NaCl  0,9  %,  larutan  NBF  (Neutral  Buffered Formaline)  10%,  alkohol  bertingkat  (70%,  80%,  90%,  96%  dan  absolut),  paraffin,  xylol  dan
Haemotoksilin Eosin (HE), mencit putih betina ( Mus musculus ) galur Swiss Webster umur berkisar 3-4 bulan dengan  bobot antara 20-30 gram.
Pembuatan Simplisia dan Ekstrak Etanol E. zwageri Sampel E.  zwageri diambil  di  Kecamatan  Mandiangin,  Kabupaten  Sarolangun,  Provinsi Jambi.  Sampel  dideterminasi  di  Herbarium  Universitas  Andalas  Padang.  Pembuatan  simplisia menggunakan daun segar sebanyak 5 kg, lalu dilakukan proses pembersihan dengan sortasi basah, pencucian,  perajangan,  pengeringan,  penghalusan  sehingga  didapatkan  serbuk  simplisia  yang selanjutnya dilakukan pembuatan ekstrak etanol daun bulian menggunakan metode maserasi.
Proses  maserasi  dilakukan  dengan  melarutkan  serbuk  simplisia  daun E.  zwageri sebanyak 500  gram  ke  dalam  5  liter  etanol  70%  selama  6  jam  pertama  sembari  sesekali  dilakukan pengadukan, kemudian  didiamkan selama  18 jam. Larutan filtrat (maserat) dan ampas  dipisahkan melalui penyaringan. Proses maserasi diulangi 2 kali dengan etanol 70% sebanyak 2,5 liter. Ekstrak yang  diperoleh  dikumpulkan  dan  dipekatkan  dengan rotary  evaporator suhu  60ºC  sehingga didapatkan  ekstrak  etanol  daun E.  zwageri .  Rendemen  ekstrak  yang  diperoleh  dihitung  untuk mengetahui  efisiensi  proses  ekstraksi.  Selanjutnya  dilakukan  uji  karakteristik  ekstrak  yaitu parameter spesifik yang terdiri dari pemeriksaan identitas, organoleptis ekstrak dan parameter non spesifik terdiri dari kadar air, kadar abu. Pengujian kandungan senyawa metabolit sekunder ekstrak etanol  daun E.  zwageri dilakukan  terhadap  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  tannin,  saponin  dan steroid.
Pengujian Toksisitas Akut
Larutan  suspensi  Na  CMC  0,5%  dibuat  sebanyak  100  mL,  dilanjutkan  dengan  membuat suspensi ekstrak etanol daun E. zwageri dengan cara  ditimbang ekstrak sesuai dosis 250 mg/kgBB, 500 mg/kgBB, 1000 mg/kgBB dan 2000 mg/kgBB. Masing-masing ekstrak dimasukkan ke dalam lumpang  dan  ditambahkan  Na  CMC  0,5%  sebanyak  10  mL  lalu  digerus  hingga  homogen. Pengujian  toksisitas  akut  mengacu  pada  (BPOM,  2014)  yaitu  mencit  dibagi  menjadi  5  kelompok perlakuan dengan setiap kelompok terdiri dari 7 ekor hewan uji. Mencit dipuasakan terlebih dahulu sebelum  dilakukan  perlakuan  dalam  waktu  3-4  jam,  akan  tetapi  pemberian  air  minum  tetap  bisa dilakukan.  Setelah  selesai  dipuasakan,  mencit  ditimbang  lalu  diberikan  sediaan  uji.  Pemberian sediaan uji dosis tunggal menggunakan sonde. Selanjutnya gejala toksisitas tertunda diamati secara sistematis pada menit ke 5, 30, 60, 120 dan secara periodik selama 4 jam serta 24 jam dan 14 hari setelah  sediaan  uji  diberikan.  Pengamatan  toksisitas  tertunda  meliputi  pengamatan  pada  kondisi penurunan  aktivitas  gerak,  diare,  salivasi,  agresif,  grooming,  tidur  dan  kematian.  Setelah pengamatan selama 14 hari maka dihitung jumlah mencit yang mengalami kematian untuk dihitung nilai  LD 50 .  Darah  mencit  diambil  untuk  pemeriksaan  kreatinin  serum  darah  lalu  dilakukan pembedahan pada hewan uji untuk diambil organ ginjal dan dilakukan pemeriksaan histologi organ tersebut.

## Penentuan Kadar Kreatinin Serum dan Berat Organ Ginjal
Penentuan  kadar  kreatinin  serum  dilakukan  dengan  cara  darah  mencit  diambil  lalu dimasukkan  ke  dalam vacuum  tube plain dan  didiamkan  selama  30  menit  pada  suhu  kamar, kemudian disentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 3000 rpm sehingga didapatkan serum (cairan  bening  di  bagian  atas).  Serum  darah  diambil  sejumlah  50  mikroliter  direaksikan  dengan 1000  mikroliter  reagen  kreatinin  dalam  kuvet.  Absorbansi  diukur  dengan  spektrofotometer  pada suhu 37ºC dan panjang gelombang 492 nm, sehingga didapatkan kadar kreatinin serum.
Organ  ginjal  mencit  diambil  kemudian  ditimbang  dan  dihitung  berat  organ  relatif  dengan rumus:
Berat organ relatif=     Berat organ (g)          x 100 Berat badan hewan (g)

## Histologi Ginjal
Pembuatan preparat histologi ginjal mengacu pada Widodo (2018) meliputi tahapan fictation , dehidration , clearing , infiltrasion,  embedding,  sectioning,  staining dan mounting .  Organ  ginjal mencit  dibersihkan  dengan  NaCl  0,9%  dan  berat  organ  dilakukan  penimbangan.  Sampel  organ difiksasi  dalam  larutan  NBF  (Neutral  Buffered  Formaline)  10%  selama  24-48  jam.  Selanjutnya sampel  organ  didehidrasi  menggunakan  alkohol  bertingkat  (70,  80,  90  dan  96%  dan  alkohol absolut), lalu dijernihkan dalam xylol ( clearing ), selanjutnya diinfiltrasi dengan parafin I, parafin II dan  parafin  III.  Proses  selanjutnya embedding yaitu  pembuatan  blok  paraffin  dan  dilakukan sectioning yaitu  memotongan  ginjal  menggunakan  mikrotom  dengan  ukuran  3-4  μm  dan dipindahkan  pada incubator  ( water  bath )  suhu  37-40ºC  hingga  mengembang  lalu  diletakkan  pada gelas  objek,  dimasukkan  dalam  incubator  ( hot  plate )  suhu  40-45ºC  sampai  jaringan  melekat sempurna.  Hasil  sayatan  dilakukan staining dengan  pewarnaan  baku  Hematoksilin  Eosin  (HE). Jaringan selanjutnya diambil dan diberi enthelan sebelum ditutup dengan cover glass ( mounting ). Pengamatan  histologi  ginjal  secara  mikroskopis  menggunakan  mikroskop  dengan  kamera digital  Leica  ICC50  dengan  cara  preparat  diamati  melalui  perbesaran  40  x 10  dengan  5  lapangan pandang.  Penentuan  kriteria  penilaian  derajat  kerusakan  tubulus  ginjal  menggunakan  metode skoring Venient (Widodo, 2018). Kriteria penilaian derajat kerusakan ginjal tampak pada tabel I.
Tabel I. Kriteria penilaian derajat kerusakan organ ginjal metode skoring
Tingkat Perubahan Nilai Tidak ada sel yang terdapat nekrotik 0 <50% sel nekrotik 1 51-70% sel nekrotik 2 71-100% sel nekrotik 3 Keterangan: 0 = Normal 1= Kerusakan rendah
2= Kerusakan sedang 3= Kerusakan tinggi

## Analisis data
Data  toksisitas  tertunda  dan  histologi  dianalisis  secara  deskriptif.  Pengamatan  toksisitas tertunda ini termasuk kondisi penurunan aktivitas gerak, diare, salivasi, agresif, grooming , tidur dan kematian.  Data  gambaran  histologi  ginjal  dianalisis  tentang  kerusakan  sel  tubulus  ginjal dibandingkan  dengan  normal.  Data  kreatinin  serum  dan  skoring  histologi  ginjal dianalisis  dengan One Way Anova ( Analysis of Variance ) menggunakan SPSS, kemudian dilakukan uji lanjut dengan uji Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  uji  skirining  fitokima  ekstrak  etanol  daun E.  zwageri terdapat  kandungan  senyawa metabolit  sekunder  diantaranya  tanin,  flavonoid,  saponin,  alkaloid  dan  steroid  (Tabel  II).  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  Khairunnisa  (2017)  bahwa  ekstrak  etanol  daun E.  zwageri mengandung senyawa  metabolit  sekunder  yaitu  tanin,  alkaloid,  flavonoid,    steroid  serta  saponin.  Potensi ketoksikan  yang  teramati  dari  ekstrak E.  zwageri terkait  dengan  kandungan  salah  satu  atau beberapa senyawa metabolit sekunder tersebut.
Penentuan nilai LD 50 Tabel III  menunjukkan bahwa melalui pemberian sediaan uji yaitu ekstrak etanol E. zwageri secara  peroral  pada  mencit  ternyata  tidak  menimbulkan  kematian,  maka  tidak  didapatkan  nilai LD 50 . Namun didapatkan nilai LD 50 semu yaitu >2.000 mg/kgBB yang artinya di atas dosis tersebut (dosis tertinggi yang digunakan) kemungkinan dapat menyebabkan kematian.
Tabel II. Skrining fitokimia ekstrak etanol daun E. zwageri Jenis Senyawa Hasil Skrining Tanin + Flavonoid + Alkaloid + Steroid + Saponin + Ket: +(positif)= terdapat senyawa dalam ekstrak etanol daun bulian Tabel III. Hasil persentase kematian hewan uji Kelompok Jumlah Hewan Dosis (mg/kgBB) Jumlah Hewan Mati %Kematian Kontrol 5 0 0 0 P1 5 250 0 0 P2 5 500 0 0 P3 5 1.000 0 0 P4 5 2.000 0 0

## Pengamatan toksisitas tertunda
Berdasarkan  tabel  IV  hasil  pengamatan  toksisitas  tertunda  atau  gejala  toksik  terdapat  dua gejala  toksik  yang  teramati,  meliputi  kondisi  penurunan  aktivitas  gerak,  diare,  salivasi,  agresif, grooming dan tidur. Namun yang terlihat pada penelitian ini yaitu agresifitas dan grooming .
Tabel IV. Hasil pengamatan toksisitas tertunda Kelompok Menit ke- 5 30 60 120 24 0 24 Jam 48 Jam 14 Hari Kontrol - - - - - - - - P1 - - - - - - - - P2 + + - - - - - - P3 +, ++ - + - - - - - P4 +, ++ +, ++ + - - - - -
Ket: K- =Na CMC 0,5%; P1= Ekstrak etanol daun bulian 250 mg/kgBB; P2= Ekstrak etanol daun bulian 500 mg/kgBB; P3= Ekstrak etanol daun bulian 1.000 mg/kgBB;P4= Ekstrak etanol daun bulian 2.000 mg/kgBB. (-)= Tidak terlihat gejala toksik, (+)=Gejala toksik terlihat yaitu agresifitas, (++)=Gejaka toksik terlihat dengan adanya grooming
Agresif  disebabkan  oleh  stimulasi  sistem  saraf  pusat  atau  saraf  simpatik  (Efriyendi  dkk., 2017).  Agresifitas  ditandai  dengan  mencit  memanjat-manjat  sisi  kandang  dan  bekelahi  antar sesamanya.  Berdasarkan  percobaan  ini  munculnya  agresif  pada  pemberian  dosis  500,  1.000  dan 2.000 mg/kgBB yang terlihat pada menit ke 5, 30 dan 60. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak  etanol  daun E.  zwageri dengan  salah  satu  kandungan  kimia  yaitu  alkaloid  mampu mempengaruhi stimulasi sistem saraf pusat (Febrianasar dkk., 2016).
Grooming adalah  reaksi  umum  mencit  jika  mengalami  alergi  terhadap  benda  asing  dan penurunanan persentase reaksi tersebut menunjukkan bahwa mencit mampu segera menyesuaikan diri  (Dewi  dkk.,  2015).  Efek grooming juga  menandakan  terjadinya  perangsangan  sistem  saraf pusat  pada  mencit  karena  pengaruh  saraf  simpatis  (Sujana  dkk.,  2020).  Munculnya grooming terlihat  pada  pemberian  dosis    1.000  mg/kgBB  dan  2.000  mg/kgBB  pada  menit  ke  5  dan  10. Intensitas grooming yang  muncul  hanya  terhitung  1  sampai  2  kali  pada  hewan  percobaan  selama waktu  pengamatan.  Setelah  60  menit  pengamatan  aktivitas grooming tidak  terlihat  lagi,  mencit sudah beraktivitas normal seperti biasa. Munculnya  gejala grooming ini dikarenakan penyesuaian hewan uji terhadap ekstrak etanol E. zwageri yang masuk ke dalam tubuh. Selain itu ekstrak etanol E. zwageri juga mengandung alkaloid yang mampu menghambat kerja sistem saraf pusat (Sulastra dkk., 2020).

## Kadar Kreatinin Serum dan Berat Organ Ginjal
Hasil Tabel V menunjukkan kadar kreatinin serum darah setelah diberikan ekstrak etanol E. zwageri mengalami  perubahan  dari  kelompok  kontrol  yang  memiliki  kadar  kreatinin  serum  0,31 mg/dL.  Kelompok  P1  memiliki  kadar  kreatinin  serum  1,2  mg/dL,  kelompok  P2  memiliki  kadar kreatinin serum 1,88 mg/ddL, kelompok P3 memiliki kadar kreatinin 2,32 mg/dL dan kelompok P4 memiliki  kadar  kreatinin  2,66  mg/dL.  Kadar  kreatinin  yang  didapatkan  dari  penelitian  ini  sudah mengalami  peningkatan  dari  nilai  kreatinin    normal  mencit  yaitu  0,2    mg/dL-  0,9  mg/dL.  Kadar kreatinin  serum  mengalami  peningkatan  merupakan  salah  satu  parameter  kerusakan  fungsi  ginjal (Arifin, 2018).
Tabel V. Kadar kreatinin serum darah mencit Kelompok Kadar  Kreatinin(mg/dL) ± SEM Nilai Rujukan K- 0.31 ± 0.01 0.2 mg/dL-0.9 mg/dL P1 1.20 ± 0.09 P2 1.88 ± 0.08 P3 2.32 ± 0.09 P4 2.66 ± 0.08
Ket:  K-  =Na  CMC  0,5%;  P1=  Ekstrak  etanol  daun  bulian  250  mg/kgBB;  P2=  Ekstrak  etanol  daun  bulian  500 mg/kgBB; P3= Ekstrak etanol daun bulian 1.000 mg/kgBB;P4= Ekstrak etanol daun bulian 2.000 mg/kgBB. SEM = Standar Error of Mean.
Hasil uji normalitas dan homogenitas varian data kadar kreatinin serum menghasilkan nilai sig  >0,05  maka  dari  itu    dilakukan  uji  Anova.  Hasil  uji  Anova  pada  kadar  kreatinin  memberikan nilai  sig  <0,05  yang  berarti  terdapat  perbedaan  bermakna  antara  hewan  uji  kelompok  uji  dan kelompok  kontrol.  Nilai  signifikan  dari  uji  Anova  sig<0,05  sehingga  H o ditolak,  yang  berarti ekstrak  etanol  daun E.  zwageri menunjukkan  adanya  tanda-tanda  toksisitas  jika  dilihat  dari peningkatan nilai kreatinin serum darah mencit.

## Histologi Ginjal
Hasil penelitian pada Tabel VI menunjukkan terdapat rata-rata skor yang berbeda diantara kelompok  perlakuan  dan  kontrol  yang  dilihat  dari  kerusakan  sel  tubulus  proksimal  ginjal. Kelompok kontrol menggunakan Na-CMC 0,5%, juga memiliki gambaran inti piknosis, karioreksi bahkan  kariolisis. Terjadinya  hal ini  dikarenakan   seluruh sel  normal  secara fisiologis  mengalami proses  yang  disebut  apoptosis  (Mitchell  dan  Cotran,  2007).  Kelompok  P1  menunjukkan  hasil
pemeriksaan  histologi  sel  ginjal  mencit  dengan  rata-rata  skor  57,5  yang  tergolong  ke  dalam kategori  skor  2  yang  berarti  sel  ginjal  mengalami  kerusakan  sedang.  Kelompok  P2,  P3  dan  P4 menunjukkan  hasil  pemeriksaan  histologi  sel  ginjal  dengan  rata-rata  71,8,  80,8  dan  93,5  yang tergolong ke dalam kategori skor 3 yang berarti sel ginjal mengalami kerusakan tinggi.
Tabel VI. Skor tingkat kerusakan ginjal mencit Kelompok Derajat Kerusakan Ginjal ± SEM Skor K- 8.86 ± 1.797 a 1 P1 57.6 ± 5.196 b 2 P2 71.8 ± 1.708 c 3 P3 80.8 ± 1.156 c 3 P4 93.5 ± 5.677 d 3 Keterangan: K- = Kontrol Negatif Skor 0 = Normal P1 = Perlakuan dosis 250 mg/kgBB Skor 1 = Kerusakan rendah ( <50%) P2 = Perlakuan dosis 500 mg/kgBB Skor 2 = Kerusakan sedang(51-70%) P3 = Perlakuan dosis 1.000 mg/kgBB Skor 3 = Kerusakan tinggi(71-100%)
P4 = Perlakuan dosis 2.0000 mg/kgBB
Gambar 1 memperlihatkan sel tubulus ginjal mencit kelompok kontrol yang diberi perlakuan Na-CMC  0,5%  masih  banyak  terlihat  sel-sel  tubulus  normal.  Namun  pada  kelompok  kontrol  ini sudah  terdapat  beberapa  kerusakan  dikarenakan  secara  fisiologi  sel  mengalami  proses  apoptosis (Purwaningsih, 2014).
Gambar 1. Gambaran histologi ginjal (perbesaran 400x dengan pewarnaan HE). Ket: A. sel tubulus normal
Gambar 2 menunjukkan kelompok perlakuan yang diberikan ekstrak etanol daun E. zwageri diantaranya  kelompok  P1dengan  dosis  250  mg/kgBB,  kelompok  P2  dengan  dosis  500  mg/kgBB, kelompok  P3  dengan  dosis  1.000  mg/kgBB,  dan  kelompok  P4  dengan  dosis  2.000  mg/kgBB, terlihat  pada  gambaran  histologi  ginjal  mencit  sudah  mengalami  nekrosis  yang  ditandai  dengan perubahan nuklear (inti sel) melalui tiga tahapan yaitu piknosis, karioreksis dan kariolisis.
Piknosis  ditandai  dengan  inti  sel  mengalami  penyusutan,  memiliki  batas  yang  tidak beraturan,  terjadi  pengumpalan  dan  berwarna  gelap  (Fahmi  dkk.,  2015).  Karioreksis  ditandai dengan    inti  sel  hancur  meninggalkan  pecahan-pecahan  zat  kromatin  yang  tersebar  di  dalam  sel (Maulana  dkk.,  2018).  Kariolisis  ditandai  dengan  inti  sel  yang  memudar  atau  inti  tidak  lagi berwarna jelas (pucat)(Susilowati dkk., 2016).
(a) (b)
(c)
(d)
Gambar 2 . Gambaran histologi ginjal kelompok perlakuan (a) P1 dosis 250 mg/kgBB (b) P2 dosis  500  mg/kgBB  (c)  P3  dosis  1.000  mg/kgBB  (d)  P4  dosis  2.000  mg/kgBB Keterangan A.Piknosis,B.Karioreksis dan C. Kariolisis
Perlakuan berupa pemberian ekstrak etanol daun E. zwageri memberikan gambaran nekrosis pada sel  mencit. Tahapan nekrosis  yang  terjadi  sudah  sampai  ke tahapan  tertinggi  yaitu  kariolisis sehingga dapat mempengaruhi fungsi fisiologis organ ginjal mencit ditandai dengan kadar kreatinin serum darah mencit di atas normal. Selain itu kerusakan sel yang terjadi juga dimungkinkan akibat pemberian pakan yang kurang bervariasi dan pengaruh penyakit penyerta lain serta kekuatan tubuh hewan  uji  yang  merupakan  faktor  internal  yang  juga  merupakan  faktor  pendukung  terjadinya kerusakan sel ginjal mencit.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun E. zwageri sampai dosis 2.000 mg/kgBB tidak menunjukkan adanya kematian terhadap hewan uji sehingga nilai LD 50 semu yaitu >2.000 mg/kgBB dan termasuk dalam rentang toksisitas sedang. Selanjutnya ekstrak etanol daun E. zwageri pada dosis 250, 500, 1.000 dan 2.000 mg/kgBB dapat meningkatkan kadar kreatinin serum darah mencit di atas normal serta berpengaruh secara nyata terhadap gambaran histologi ginjal mencit.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  penulis  ucapkan  kepada  laboran  laboratorium  di  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu Kesehatan serta pihak perpustakaan yang telah membantu dalam penyediaan literatur.

## DAFTAR PUSTAKA
Afrida, 2014, Isolasi Senyawa Alkaloid Pendahuluan Bulian ( Eusideroxylon zwagery ), Journal of The Indonesian Society of Integrated Chemistry , 6, 20–24.
Arifin, H., 2018, Kajian Efek Analgetik dan Toksisitas Subakut Dari Ekstrak Etanol Daun Kitolod (Isotoma longiflora L.) Pada Mencit Putih Jantan, Jurnal Sains Farmasi & Klinis , 5 (2). BPOM, 2014, Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat Dan Makanan Republik Indonesia Nomor 7 Tahun 2014 Tentang Pedoman Uji Toksisitas Nonklinik Secara In Vivo, Badan Pengawas Obat dan Makanan, Jakarta
Daulay,  A.,  2013,  Dinamika  Pemanfaatan  Hutan  oleh  Suku  Anak  Dalam  Bathin  IX  di  Dusun Senami Kabupaten Batanghari, Jurnal Bina Praja , 05(01), 35–42.
Efriyendi,  R.,  Rinidar,  dan  T.R.,  2017,  Uji Toksisitas  Akut  Konsentrasi  Ekstrak  Air  Daun  Sernai ( Wedelia  biflora )  yang  diberikan  Per  Oral  pada  Mencit  ( Mus  musculus ), Jimvet ,  01(3), 540–546.
Fahmi,  M.,Fahrimal,  Y.,  Aliza,  D.,  Budiman,  H.,  Aisyah,  S.,  dan  Hambal,  M.,  2015,  Gambaran Histopatologis Hati Tikus ( Rattus novergicus ) Yang Diinfeksi Trypanosoma Evansi Setelah Pemberian  Ekstrak  Kulit  Batang  Jaloh  ( Salix  tetrasperma Roxb), Jurnal  Medika Veterinaria , 9(2),  141–145.
Febrianasar,  N.,  Wijayanti,  R.,  Apriadi,  A.,  2016,  Uji  Stimulansia  Ekstrak  Kulit  Umbi  Bawang (Allium  sativum  L)  pada  Mencit  Galur  Swiss/Stimulantia  Test  of  Garlic  Bulb  ( Allium sativum L.) Extract on Swiss Webster Mice , Jurnal Farmasi Sains dan Praktis , I(2),42–49 Khairunnisa,  2017,  Karakterisasi  Ekstrak  Etanol  Daun  Ulin  ( Eusideroxylon  zwageri Teijsm  & Binned.), Akademi Farmasi Samarinda.
Lu, F.C.,1995, Toksikologi Dasar, Asas, Organ Sasaran dan Penilaian Resiko, edisi II, Universitas Indonesia press, Jakarta
Mariani, Y., Yusro, F., Wardenaar, E., 2020, Aktivitas Ekstrak Metanol Daun Ulin ( Eusideroxylon zwageri Teijsm  &  Binn)  Terhadap  Empat  Jenis  Bakteri  Patogen, Jurnal  Biologi  Tropis , 20(1).
Maulana,  A.M.,  Perdana, A.G.,  Soesilowati,  R.,  Romdhoni,  M.H.,  Putra,  R.A.N.,  2018,  Pengaruh Aspartam  terhadap  Struktur  Histologi  Hepar  Tikus  ( Rattus  norvegicus )  Jantan  Galur Wistar Model Diabetes Melitus, Ibnu Sina Biomedika , 2(1). Muhaimin , S.,  Harizon,  M.S.,  Syamsurizal,  Afrida,  2016,  Aktivitas  Antijamur  Eusiderin  A  ( Eusideroxylon zwagery ) Terhadap Rhizoctonia solani dan Gliocladium fimbriatum, 22–24. Pradono,  J.  Sampurno  O.D.,  Halim.,  Widowati  L,  Manningsih  dan  Handayani . ,  2019 Bunga Rampai Uji Klinik . Lembaga Penerbit Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan.
Purwaningsih,  E.,  2014,  Pemendekan  Telomer  dan  Apoptosis  Telomere  Shorthening  And Apoptosis, Jurnal Kedokteran Yarsi , 22(2), 132–141. Sandra, I., 2021, Uji Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Etanol Daun Bulian ( Eusideroxylon zwageri ) pada Mencit Putih ( Mus muscullus Linn) Jantan Yang Diinduksi dengan Aloksan, Skripsi . Sasmito, W.A., Wijayanti , A.D, Fitriana , I, Sari, P.W. 2015, Pengujian Toksisitas Akut Obat Herbal Pada  Mencit  Berdasarkan  Organization  for  Economic  Co-operation  and  Development (OECD), Indonesian Journal of Veterinary Science , 33(2), 234–239.
Sulastra,  C.S., Khaerati, K.K.K.,  Ihwan.,  2020, Toksisitas  Akut  Dan  Lethal  Dosis  (LD 50 )  Ekstrak Etanol  Uwi  Banggai  Ungu  ( Dioscorea  alata L.)  Pada  Tikus  Putih  ( Rattus  norvegicus ), Jurnal Ilmiah Medicamento , 6(1), 10–14. Suryani , H.,  Kasmawati,  Ruslin.,  G.Y.P.,  Wardana.,  V.,  Aspadiah,  2020,  Kajian  in  Vitro  Khasiat Ekstrak Etanol Dari Minuman Teh Lansau Khas Suku Muna, 5(3),2967–2982.
Susilowati,  S.,  Hardijanto,  Triana,  I.N.,  2016,  Protein  Kasar  Plasma  Seminalis  Sapi  Menurunkan Kejadian  Nekrosis  Spermatozoa  Kambing  Yang  Disimpan  Pada  Suhu  Dingin, Jurnal Veteriner , 17(1),  57–63.
Widodo, I.P., 2018, Pengaruh Pemberian High Temperature Roasted Kopi Liberika ( Coffea liberica ) Terhadap Fisiologi dan Histologi Ginjal Mencit Putih Jantan ( Mus musculus L.), Skripsi .